RU2815066C2

RU2815066C2 - Молекулы, связывающие мезотелин и cd137

Info

Publication number: RU2815066C2
Application number: RU2020139923A
Authority: RU
Inventors: Хосэ МУНЬОС-ОЛАЙЯ; Михрибан ТЬЮНА; Рэми ФЕРТИН; Клэр РИДЕР; Франциска ВОЛЛЕРТОН; Нил БРЮВИС
Original assignee: Ф-Стар Тарапьютикс Лимитед
Priority date: 2018-07-12
Filing date: 2019-07-12
Publication date: 2024-03-11

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены молекулы антител, которые связывают мезотелин (MSLN) и CD137, а также включающая их фармацевтическая композиция. Указанные молекулы антител содержат сайт связывания на основе CDR для MSLN и антигенсвязывающий сайт для CD137, расположенный в константном домене молекулы антитела. Также изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим антитела, экспрессионным векторам и клеткам-хозяевам, содержащим указанные нуклеиновые кислоты, способу получения антитела. Изобретение обеспечивает более высокую аффинность связывания молекулы антитела с иммобилизованным MSLN, чем с MSLN в растворе, и может найти применение в лечении рака. 13 н. и 16 з.п. ф-лы, 14 ил., 26 табл., 14 пр.

Description

Область техники

Настоящее изобретение относится к молекулам антител, которые связывают как мезотелин (MSLN), так и CD137. Указанные молекулы антител содержат связывающий сайт на основе определяющей комплементарность области (CDR) для MSLN и антигенсвязывающий сайт для CD137, расположенный в константном домене молекулы антитела. Указанные молекулы антител находят применение, например, в лечении рака.

Уровень техники

Передача клеточного сигнала является неотъемлемой частью жизни всех организмов и в норме в нее вовлечены рецепторы клеточной поверхности, которые взаимодействуют с растворимыми или экспрессируемыми на поверхности лигандами. Это взаимодействие приводит к изменениям рецептора, лиганда или того и другого. Например, связывание лиганда может индуцировать конформационные изменения рецепторов и вызывать их кластеризацию друг с другом с образованием димеров или олигомеров. Затем этот эффект кластеризации приводит к активации внутриклеточных путей передачи сигнала. Таким путем активируется множество рецепторов, в том числе члены суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF), такие как CD137.

CD137 (4-1BB; TNFRSF9) представляет собой костимулирующую молекулу суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF). Широко известно, что после активации CD8⁺ T-клеток происходит повышающая регуляция CD137 на этих клетках и CD137 может также экспрессироваться на активированных CD4⁺ Т-клетках-хелперах, В-клетках, регуляторных Т-клетках, естественных клетках-киллерах (NK), естественных Т-клетках-киллерах (NKT) и дендритных клетках (ДК) (Bartkowiak & Curran, 2015). Основная функциональная роль CD137 в повышении Т-клеточной цитотоксичности впервые описана в 1997 году (Shuford et al., 1997) и вскоре после этого были предложены моноклональные антитела (mAb) к CD137 в качестве противораковых лекарственных средств.

CD137 представляет собой трансмембранный белок, содержащий четыре внеклеточных богатых цистеином домена, обозначаемых CRD1-4, и цитоплазматическую область, ответственную за передачу сигнала CD137. Лиганд для CD137 представляет собой CD137L. Хотя для комплекса CD137/CD137L не существует кристаллической структуры, предполагают, что CD137 образует с CD137L комплекс тример/тример (Won et al., 2010). Вовлечение CD137L приводит к образованию тримера рецептора и последующей кластеризации нескольких тримеров рецептора, и приводит к активации каскада передачи сигнала CD137. Этот каскад передачи сигнала передает Т-клеткам сигнал выживания, противодействуя гибели клеток, индуцированной активацией (Hurtado et al., 1997), и, таким образом, играет критическую роль в поддержании эффективных Т-клеточных иммунных ответов и формировании иммунологической памяти (Bartkowiak & Curran, 2015).

Роль CD137 в биологии лейкоцитов, в целом, хорошо известна и в основе его роли в иммунологии опухолей лежит четкое биологическое обоснование. CD137 экспрессируется активированными Т-клетками, и его использовали в качестве маркера для идентификации антиген-специфичных CD4⁺ и CD8⁺ Т-клеток. Как правило, экспрессия CD137 выше на CD8⁺ Т-клетках, чем на CD4⁺ Т-клетках (Wen et al., 2002). В случае CD8⁺ Т-клеток пролиферацию, выживание и цитотоксическую эффекторную функцию через выработку гамма-интерферона и интерлейкина 2 объясняли перекрестным связыванием CD137. Перекрестное связывание CD137 также вносит вклад в дифференцировку и поддержание CD8⁺ Т-клеток памяти. В некоторых субпопуляциях CD4⁺ Т-клеток перекрестное связывание CD137 подобным образом ведет к пролиферации и активации, и приводит к высвобождению цитокинов, таких как интерлейкин 2 (Makkouk et al., 2016).

Было показано, что опосредованная естественными клетками-киллерами (NK) антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность (АЗКЦ) при применении mAb, нацеленных на опухоль, усиливается в результате стимуляции CD137 агонистическими моноклональными антителами к CD137 in vitro и in vivo (Bartkowiak & Curran, 2015). NK-клетки связывают антитела через свой Fc-рецептор, и в зависимости от изотипа антитела, это может приводить к активации NK-клеток и вызывать высвобождение цитотоксических гранул и лизис клеток-мишеней (Kohrt et al., 2012). Kohrt с коллегами продемонстрировали, что агонистическое антитело к CD137 усиливало противоопухолевую активность терапевтических антител: ритуксимаба, трастузумаба и цетуксимаба путем усиления АЗКЦ при дозировании в комбинации с указанными антителами (Kohrt et al., 2014; Kohrt et al., 2011). В дополнение к этому, NK-клетки человека повышают экспрессию CD137 после взаимодействия с антителами, связанными с клетками, через свой FcγR. Было показано, что последующая стимуляция этих NK-клеток антителом к CD137 усиливает их АЗКЦ в отношении клеток опухоли (Chester et al., 2015; Chester et al., 2016).

В-лимфоциты также экспрессируют CD137 после активации. Связывание лиганда CD137 с CD137 усиливает пролиферацию, выживание В-клеток и выработку ими цитокинов. Индукция экспрессии CD137 также происходит на нормальных и злокачественных В-клетках человека после связывания CD40 с его лигандом CD154 (лиганд CD40), что приводит к увеличению выживания В-клеток, если затем происходит активация CD137.

Также было показано, что CD137 экспрессируется на опухоль-реактивных субпопуляциях лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль (TIL). Было показано, что монотерапия CD137 эффективна в нескольких доклинических моделях иммуногенных опухолей, таких как MC38, CT26 и В-клеточные лимфомы. Было показано, что комбинация вовлечения CD137 с другими противораковыми агентами, такими как химиотерапия, цитокины и другие регуляторы контрольных точек, вызывает усиленное сокращение роста развившихся опухолей. В частности, было показано, что комбинация антител к CD137 с антителами к CD20, к EGFR и к HER-2 обеспечивает синергический эффект в отношении сокращения роста опухоли в различных доклинических моделях ксенотрансплантатов (Kohrt et al., 2014; Kohrt et al., 2012; Kohrt et al., 2011).

Сочетание терапии моноклональными антителами, нацеленными на опухоль, с лечением антителом-агонистом к CD137 продемонстрировало перспективные результаты в доклинических моделях лимфомы (Kohrt et al., 2011), рака головы и шеи, рака толстой и прямой кишки (Kohrt et al., 2014), и рака молочной железы (Kohrt et al., 2012). Однако клинические исследования замедлились из-за дозолимитирующего воспаления печени тяжелой степени, связанного с лечением антителом-агонистом к CD137. Урелумаб (BMS-663513), не блокирующее лиганд антитело изотипа IgG4 человека (Chester et al., 2018), представляло собой первое антитело к CD137, включенное в клинические исследования, но указанные исследования были прекращены после наблюдения значительной дозозависимой токсичности для печени, обусловленной специфичным воздействием (Chester et al., 2018). Недавно были возобновлены клинические исследования урелумаба для лечения солидных раковых опухолей, в которых лечение урелумабом комбинировали с радиотерапией (NCT03431948) или с другими терапевтическими антителами, такими как ритуксимаб (NCT01775631), цетуксимаб (NCT02110082), антитело к PD-1 ниволумаб (NCT02253992, NCT02534506, NCT02845323) и комбинация ниволумаба и антитела к LAG-3, BMS986016 (NCT02658981). Однако для снижения токсичности для печени, связанной с лечением урелумабом, необходимо было ограничить введение доз урелумаба в этих исследованиях, и результаты эффективности оказались неутешительными (Chester et al., 2018).

Дозолимитирующей токсичности (ДЛТ) не наблюдали в случае антитела к CD137, утомилумаба, от Pfizer (PF-05082566), антитела изотипа IgG2 человека, в диапазоне доз от 0,03 мг/кг до 10 мг/кг в клинических исследованиях I фазы для рака на поздней стадии (Chester et al. 2016; Segal et al., 2018). Однако общая частота объективного ответа в случае этого антитела составляла лишь 3,8% у пациентов с солидными опухолями, что возможно указывает на то, что утомилумаб обладает меньшей активностью и клинической эффективностью, чем урелумаб, хотя демонстрирует более благоприятный профиль безопасности (Chester et al., 2018; Segal et al., 2018). Утомилумаб тестировали в комбинации с радиотерапией (NCT03217747) или химиотерапией, а также в комбинации с терапией другими антителами, включая антитело к PD-L1 авелумаб (NCT02554812) и антитело к PD-1 пембролизумаб (NCT02179918), для оценки безопасности, переносимости, дозолимитирующей токсичности (ДЛТ), максимальной переносимой дозы (MTD) и эффективности комбинаций с различными видами лечения. Эти исследования продолжаются, и первые результаты демонстрируют отсутствие ДЛТ для доз до 5 мг/кг и частоту ответа у пациентов, составляющую 26%, для комбинации утомилумаба и пембролизумаба. Также тестируют трехкомпонентные комбинации утомилумаба с авелумабом и другими видами иммуноонкологической терапии (NCT02554812, NCT03217747).

MSLN экспрессируется на относительно низких уровнях на мезотелиальных клетках, выстилающих плевру, брюшину и перикард (Hassan et al., 2005), у здоровых индивидуумов, но экспрессируется на высоком уровне в случае некоторых различных раковых заболеваний, включая мезотелиомы, плоскоклеточные карциномы, рак поджелудочной железы, рак легкого, желудка, молочной железы, эндометрия и яичников. Нормальная биологическая функция мезотелина неизвестна. В случае рака высокие уровни экспрессии MSLN коррелировали с неблагоприятным прогнозом при раке яичников, холангиокарциноме, аденокарциноме легкого и трижды негативном раке молочной железы. Ограниченная экспрессия MSLN на здоровых клетках в сравнении с высоким уровнем экспрессии на клетках опухоли делает его привлекательной мишенью для терапии с применением моноклональных антител (Hassan et al., 2016).

MSLN экспрессируется в виде белка-предшественника массой 69 кДа (628 аминокислот). Затем указанный белок-предшественник расщепляется под действием эндопротеазы фурина с высвобождением секретируемой N-концевой области, называемой мегакариоцит-потенцирующим фактором (MPF), в то время как зрелый белок MSLN массой 40 кДа остается присоединенным к клеточной мембране через гликозилфосфатидилинозитольный (GPI) линкер. Аминокислотная последовательность MSLN человека на 60% и 87% идентична аминокислотной последовательности ортологов MSLN мыши и яванского макака, соответственно.

Мембраносвязанный зрелый MSLN отделяется от клеток в результате альтернативного сплайсинга за счет образования вариантов, в которых отсутствует последовательность, представляющая собой мембранный якорь, или протеазного расщепления под действием фермента, конвертирующего фактор некроза опухоли-α (TACE) (Sapede et al., 2008; Zhang et al., 2011). Растворимый отделенный MSLN обнаруживают в сыворотке крови у пациентов и в строме опухолей, включая злокачественную мезотелиому, рак яичников или высокометастатические раковые опухоли. FDA США одобрило измерение уровней растворимого MSLN в крови и экссудатах у пациентов, страдающих мезотелиомой, для мониторинга ответа пациентов на лечение и прогрессирования (Hollevoet et al., 2012, Creany et al., 2015).

Было разработано и протестировано в клинических исследованиях несколько видов терапии на основе антител, нацеленных на MSLN, преимущественно при мезотелиоме, раке поджелудочной железы и немелкоклеточном раке легкого (Hassan et al., 2016). Применяемые стратегии включают непосредственное уничтожение клеток опухоли путем применения антител к MSLN, таких как аматуксимаб, обладающих активностью в виде антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности (АЗКЦ), а также путем применения конъюгатов антитело-лекарственное средство (ADC), таких как SS1P-PE38 и анетумаб-равтансин, содержащих антитело или фрагмент антитела, конъюгированный с токсином.

Неконъюгированные антитела, нацеленные на MSLN, продемонстрировали благоприятные профили безопасности, но их терапевтическая эффективность была ограничена, тогда как ADC продемонстрировали более высокую противоопухолевую активность, но были связаны с дозолимитирующей токсичностью. Также разрабатывают несколько биспецифичных молекул, предназначенных для вовлечения иммунной системы, включая ABBV-428, нацеленную на MSLN, а также костимулирующий белок CD40, привлекающий T-клетки MSLN-CD3-биспецифичный активатор (BITE) и MSLN-CD47-биспецифичную молекулу.

Краткое описание изобретения

Как описано в разделе «Уровень техники» выше, клинические исследования молекул-агонистов CD137 были замедлены из-за связи лечения либо с дозолимитирующим воспалением печени тяжелой степени (урелумаб), либо с низкой клинической эффективностью (утомилумаб).

Для авторов настоящего изобретения понятно, что в этой области техники существует потребность в разработке молекул-агонистов CD137, которые проявляют высокую активность, но не связаны с дозолимитирующим воспалением печени. Такие молекулы можно вводить индивидуумам в дозах, которые оптимизируют активность и, соответственно, эффективность молекулы, и их можно применять, например, в лечении рака, в качестве иммунотерапевтических агентов.

Без желания быть связанными какой-либо теорией, полагают, что Т-клетки, присутствующие в печени, могут активироваться молекулами-агонистами к CD137, что приводит к воспалению печени. Было показано, что CD8⁺ Т-клетки способствуют воспалению печени и апоптозу ее клеток после сепсиса/вирусной инфекции (Wesche-Soldato et al., 2007). Однако этот эффект не был CD137-специфичным. Было показано, что терапия антителами-агонистами к CD137 у мышей приводит к CD137-зависимой инфильтрации Т-клеток в печень (Dubrot J et al., 2010). В совокупности результаты этих исследований показывают, что антитела-агонисты к CD137, обладающие высокой активностью, такие как урелумаб, могут вызывать инфильтрацию активированных CD8⁺ Т-клеток в печень и таким образом приводить к воспалению печени.

Полагают, что первоначальное связывание лиганда CD137 с CD137 инициирует цепочку явлений, которая приводит к тримеризации рецепторов с последующей кластеризацией рецепторов, их активацией и последующей инициацией сильной противоопухолевой активности иммунных клеток. Соответственно, ожидают, что для эффективного обеспечения активации CD137 терапевтическим агентом необходимо, чтобы несколько мономеров рецептора связывались друг с другом мостиковой связью способом, имитирующим связывание мостиковой связью тримерным лигандом.

Авторы настоящего изобретения выделили молекулы антител, которые содержат антигенсвязывающий сайт на основе определяющей комплементарность области (CDR) для MSLN и антигенсвязывающий сайт для CD137, расположенный в константном домене молекулы антитела. Авторы настоящего изобретения продемонстрировали, что такие молекулы антител способны индуцировать кластеризацию и передачу сигнала CD137, когда они связаны как с CD137, так и с MSLN in vitro.

Без желания быть связанными какой-либо теорией, полагают, что указанные молекулы антител связываются с MSLN через антигенсвязывающие сайты на основе CDR, что приводит к перекрестному связыванию нескольких молекул антител на поверхности клетки опухоли, с последующим связыванием антигенсвязывающего сайта для CD137 в молекулах антител с CD137 на поверхности иммунной клетки, такой как лимфоцит, инфильтрирующий опухоль (TIL), что приводит к кластеризации и активации CD137 и таким образом к активации иммунных клеток. Затем активированные иммунные клетки могут воздействовать на опухоль и обеспечивать иммунотерапию опухоли.

Полагают, что концентрация MSLN, присутствующего на поверхности клетки опухоли, влияет на уровень агонизма в отношении CD137. В частности, полагают, что более высокая концентрация MSLN приводит к увеличению связывания и перекрестного связывания молекул антител на клеточных поверхностях и, следовательно, к усилению агонизма в отношении CD137.

Агонистическая активность молекулы антитела согласно настоящему изобретению в отношении CD137 зависит от одновременного связывания указанной молекулы антитела с MSLN. Таким образом, ожидают, что активация CD137 молекулами антител будет ограничена микроокружением опухоли. Соответственно, в настоящем описании молекулы антител согласно настоящему изобретению также называются «условными агонистами». В этом отношении следует отметить, что условная агонистическая активность молекул антител не является внутренним признаком антител, которые содержат антигенсвязывающий сайт для CD137 в константном домене. Напротив, многие молекулы, выделенные во время скрининга, проведенного авторами настоящего изобретения, связывались с CD137, но не требовали перекрестного связывания для кластеризации и активации CD137 или индуцировали ограниченную кластеризацию и активацию CD137 в отсутствии перекрестного связывания. Благодаря условной агонистической активности молекул антител согласно настоящему изобретению, локализованных в микроокружении опухоли, не ожидают, что эти молекулы будут вызывать воспаление печени.

Традиционные антитела, специфичные в отношении рецепторов TNF, таких как CD137, как правило, не обладают или обладают лишь очень умеренной внутренней агонистической активностью и требуют вторичного перекрестного связывания комплексов антитело-представитель TNFRSF с использованием внешних перекрестносвязывающих агентов, таких как белок A или G, или вторичных антител, или связывания антитела с Fcγ-рецепторами, локализованными на плазматической мембране, для индукции более высоких уровней кластеризации и активации представителей семейства рецепторов TNF (Wajant, 2015). Низкие уровни или отсутствие агонистической активности антител, специфичных в отношении рецепторов TNF, в отсутствии перекрестного связывания можно объяснить тем, что обычное двухвалентное антитело может максимально перекрестно связывать два мономерных рецептора TNF, что недостаточно для активации рецепторов TNF. Соответственно, для эффективности in vivo моноспецифичному антителу, нацеленному на CD137, необходимо присутствие клеток, экспрессирующих Fcγ-рецепторы, в непосредственной близости от Т-клеток, экспрессирующих CD137, для осуществления перекрестного связывания CD137-специфичных антител и последующей кластеризации и активации рецептора CD137. Однако перекрестное связывание, опосредованное Fcγ-рецепторами, считают неэффективным. В дополнение к этому, клетки, экспрессирующие Fcγ-рецепторы, присутствуют по всему организму и, таким образом, перекрестное связывание антитела и активация иммунных клеток, экспрессирующих CD137, не ограничиваются конкретным участком, таким как микроокружение опухоли, например. Более того, для перекрестного связывания необходимо выбрать изотип таких антител к CD137 для опосредования эффективного связывания с Fcγ-рецепторами. Однако это может привести к тому, что антитела будут индуцировать эффекторные функции, опосредуемые Fcγ-рецепторами, такие как АЗКЦ, и таким образом устранять иммунные клетки, которые предполагают активировать антителом.

Молекулы антител согласно настоящему изобретению, напротив, способны активировать CD137 при определенных условиях в присутствии MSLN без необходимости, например, в перекрестном связывании Fcγ-рецепторов, необходимом для традиционных молекул антител. Более того, ожидают, что перекрестное связывание молекул антител согласно настоящему изобретению путем связывания с MSLN будет более эффективным, чем перекрестное связывание, опосредованное Fcγ-рецепторами. Мутации для устранения связывания Fcγ-рецепторов известны в этой области техники и их предпочтительно включают в молекулы антител согласно настоящему изобретению. Таким образом, в отсутствии MSLN молекулы антител согласно настоящему изобретению не проявляют агонистической активности в отношении CD137 и, соответственно, не ожидают, что они будут индуцировать воспаление печени.

Авторы настоящего изобретения также продемонстрировали, что молекулы антител, содержащие антигенсвязывающие сайты для MSLN и CD137, подробно описанные выше, которые были модифицированы для уменьшения или устранения связывания с одним или более Fcγ-рецепторами, были способны подавлять рост опухоли в моделях опухоли у мышей in vivo. Поскольку эти молекулы антител демонстрируют нейтрализованную или сниженную активность в виде АЗКЦ, ожидают, что указанные молекулы антител будут подавлять рост опухоли путем активации Т-клеток, экспрессирующих CD137.

Было показано, что молекулы антител связываются с димерным CD137 с более высокой аффинностью, чем с мономерным CD137.

В настоящем описании термин «аффинность» может относиться к силе связывающего взаимодействия между молекулой антитела и когнатным антигеном, измеряемой по K_D. Для специалиста понятно, что когда молекула антитела способна осуществлять множественные связывающие взаимодействия с антигеном (например, когда молекула антитела способна двухвалентно связывать антиген и, необязательно, указанный антиген является димерным), на аффинность, измеряемую по K_D, может также влиять авидность, при этом термин «авидность» относится к общей прочности комплекса антитело-антиген.

Экспрессия CD137 Т-клетками повышается при активации. Без желания быть связанными какой-либо теорией полагают, что из-за высокой экспрессии CD137 на активированных Т-клетках CD137 будет иметь форму димеров, тримеров и мультимеров более высокого порядка на поверхности таких клеток. Наивные иммунные клетки, такие как наивные Т-клетки, напротив, экспрессируют на своей клеточной поверхности CD137 на низких или незначительных уровнях и, следовательно, любой присутствующий CD137, вероятно, имеет форму мономера. Соответственно, ожидают, что молекулы антител, которые связываются с CD137 с высокой аффинностью, но не связываются с мономерным CD137 с высокой аффинностью, будут предпочтительно связываться с активированными иммунными клетками, такими как активированные Т-клетки, а не с наивными иммунными клетками, присутствующими в печени, например.

Более того, было показано, что молекулы антител согласно настоящему изобретению связываются с более высокой аффинностью с иммобилизованным MSLN, чем с MSLN в растворе. В частности, полагают, что молекулы антител согласно настоящему изобретению связываются с MSLN с высокой авидностью и таким образом связывают MSLN сильнее, когда антитело способно связываться с двумя молекулами MSLN, как в случае, когда несколько копий указанного антигена иммобилизованы на поверхности, чем когда MSLN имеет форму мономера, как ожидают в случае с MSLN в растворе. Без желания быть связанными какой-либо теорией, соответственно, полагают, что молекулы антител согласно настоящему изобретению не будут оставаться связанными с отделенным MSLN в растворе in vivo из-за низкой аффинности антител к мономерному MSLN и, таким образом, не будут выводиться из места опухоли так быстро и, следовательно, будет больше времени для оказания терапевтического эффекта путем связывания MSLN на поверхности клеток опухоли.

Молекулы антител согласно настоящему изобретению связывают разные эпитопы/области MSLN. Это понятно исходя из того факта, что некоторые молекулы антител способны блокировать связывание лиганда MUC16 с MSLN, тогда как другие - нет.

Было показано, что некоторые молекулы антител согласно настоящему изобретению демонстрируют схожую или более высокую аффинность к MSLN, чем к CD137. Полагают, что это благоприятно для локализации молекулы антитела в опухолях, экспрессирующих MSLN. Ожидают, что связывание молекулы антитела с MSLN приведет к перекрестному связыванию антитела, связыванию с CD137, экспрессируемым на поверхности иммунной клетки, с последующей кластеризацией и активацией CD137, и в конечном счете приведет к активации иммунной клетки.

Также было показано, что молекулы антител согласно настоящему изобретению способны связываться с высокой аффинностью с MSLN как человека, так и яванского макака, и с CD137 как человека, так и яванского макака. Такая перекрестная реактивность является предпочтительной, поскольку позволяет проводить тестирование введения и безопасности молекул антител на яванских макаках во время доклинических исследований.

Исследования in vivo в моделях сингенных опухолей у мышей показали, что молекулы антител, содержащие сайт связывания Fab для MSLN человека и сайт связывания для CD137 мыши в CH3-домене, обладают более высокой противоопухолевой эффективностью по сравнению с антителами изотипического контроля или компонентами молекул биспецифичных антител, доставляемыми в виде монотерапии или комбинированной терапии (см. Пример 13). Молекулы антител проявляли предпочтительные свойства: они демонстрировали значительное сокращение роста опухоли и полезный эффект в отношении выживаемости, и были способны стимулировать противоопухолевый ответ в опухолях, экспрессирующих MSLN на разных уровнях. Дозозависимый противоопухолевый ответ также наблюдали после лечения этими молекулами. В целом, указанные антитела демонстрировали предпочтительные свойства in vivo по сравнению с контрольными молекулами в отношении сокращения роста опухоли и увеличения выживаемости животных.

Более того, после лечения молекулами антител не наблюдали гепатотоксичности. Это является преимуществом, поскольку в литературе описано, что лечение другими агонистическими антителами к CD137 приводит к гепатотоксичности. Механистические исследования показали, что молекулы антител стимулировали активацию Т-клеток в микроокружении опухоли, в то время как контрольный агонист CD137 стимулировал бóльшую активацию Т-клеток за пределами микроокружения опухоли, что дополнительно подтверждает это предпочтительное свойство.

Еще одним предпочтительным свойством молекул антител, определенных авторами настоящего изобретения, является то, что оба антигенсвязывающих сайта для MSLN и CD137 содержатся в самой структуре антитела. В частности, для указанных молекул антител нет необходимости в слиянии других белков с молекулой антитела через линкеры или другим способом для получения в результате молекулы, которая может двухвалентно связываться с обеими мишенями. Это имеет ряд преимуществ. В частности, молекулы антител, определенные авторами настоящего изобретения, могут быть получены с применением способов, аналогичных тем, которые применяют для получения стандартных антител, поскольку они не содержат никаких дополнительных слитых областей. Также ожидают, что такая структура обеспечит повышенную стабильность антитела, поскольку линкеры могут со временем распадаться и приводить к гетерогенной популяции молекул антител. Эти антитела в указанной популяции, содержащие только один слитый белок, могут не быть способны предпочтительно связываться со связанным с клеткой MSLN или кластером и передавать сигнал через CD137 в результате перекрестного связывания путем связывания как с CD137, так и с MSLN. Расщепление/распад линкера может происходить до введения или после введения лекарственного средства индивидууму (например, путем ферментативного расщепления или под действием pH индивидуума in vivo) и таким образом приводить к снижению его эффективности при циркуляции у индивидуума. Поскольку в молекулах антител, определенных авторами настоящего изобретения, линкеры отсутствуют, ожидают, что молекулы антител будут сохранять одинаковое количество сайтов связывания как до, так и после введения. Более того, структура молекул антител, определенных авторами настоящего изобретения, также является предпочтительной с точки зрения иммуногенности молекул, поскольку введение слитых белков или линкеров, или того и другого может индуцировать иммуногенность при введении указанных молекул индивидууму и приводить к снижению эффективности лекарственного средства.

Таким образом, согласно настоящему изобретению предложены:

[1] Молекула антитела, которая связывается с мезотелином (MSLN) и CD137, содержащая

(a) антигенсвязывающий сайт на основе определяющей комплементарность области (CDR) для MSLN; и

(b) антигенсвязывающий сайт для CD137, расположенный в CH3-домене указанной молекулы антитела;

при этом указанный антигенсвязывающий сайт на основе CDR содержит CDR 1-6, представленные в:

(i) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 80 соответственно [FS28-256-271];

(ii) SEQ ID NO 14, 16, 27, 20, 22 и 24 соответственно [FS28-024-052];

(iii) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 40 соответственно [FS28-256-021];

(iv) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 37 соответственно [FS28-256-012];

(v) SEQ ID NO 50, 33, 52, 20, 22 и 40 соответственно [FS28-256-023];

(vi) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 41 соответственно [FS28-256-024];

(vii) SEQ ID NO 50, 33, 52, 20, 22 и 41 соответственно [FS28-256-026];

(viii) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 80 соответственно [FS28-256-027];

(ix) SEQ ID NO 38, 33, 35, 20, 22 и 40 соответственно [FS28-256-001];

(x) SEQ ID NO 38, 33, 35, 20, 22 и 41 соответственно [FS28-256-005];

(xi) SEQ ID NO 46, 33, 48, 20, 22 и 37 соответственно [FS28-256-014];

(xii) SEQ ID NO 50, 33, 52, 20, 22 и 37 соответственно [FS28-256-018];

(xiii) SEQ ID NO 31, 33, 35, 20, 22 и 37 соответственно [FS28-256];

(xiv) SEQ ID NO 14, 16, 25, 20, 22 и 24 соответственно [FS28-024-051];

(xv) SEQ ID NO 14, 16, 29, 20, 22 и 24 соответственно [FS28-024-053]; или

(xvi) SEQ ID NO 14, 16, 18, 20, 22 и 24 соответственно [FS28-024];

где последовательности CDR определены в соответствии со схемой нумерации ImMunoGeneTics (IMGT); и

указанный антигенсвязывающий сайт для CD137 содержит первую последовательность и вторую последовательность, расположенные в структурных петлях AB и EF CH3-домена соответственно, причем указанная первая и вторая последовательности имеют последовательность, представленную в SEQ ID NO 10 и 11 [FS22 -172-003] соответственно.

[2] Молекула антитела, которая связывается с мезотелином (MSLN) и CD137, содержащая

(i) SEQ ID NO 43, 5, 45, 21, 23 и 80 соответственно [FS28-256-271];

(ii) SEQ ID NO 15, 17, 28, 21, 23 и 24 соответственно [FS28-024-052];

(iii) SEQ ID NO 43, 34, 45, 21, 23 и 40 соответственно [FS28-256-021];

(iv) SEQ ID NO 43, 34, 45, 21, 23 и 37 соответственно [FS28-256-012];

(v) SEQ ID NO 51, 34, 53, 21, 23 и 40 соответственно [FS28-256-023];

(vi) SEQ ID NO 43, 34, 45, 21, 23 и 41 соответственно [FS28-256-024];

(vii) SEQ ID NO 51, 34, 53, 21, 23 и 41 соответственно [FS28-256-026];

(viii) SEQ ID NO 43, 34, 45, 21, 23 и 80 соответственно [FS28-256-027];

(ix) SEQ ID NO 39, 34, 36, 21, 23 и 40 соответственно [FS28-256-001];

(x) SEQ ID NO 39, 34, 36, 21, 23 и 41 соответственно [FS28-256-005];

(xi) SEQ ID NO 47, 34, 49, 21, 23 и 37 соответственно [FS28-256-014];

(xii) SEQ ID NO 51, 34, 53, 21, 23 и 37 соответственно [FS28-256-018];

(xiii) SEQ ID NO 32, 34, 36, 21, 23 и 37 соответственно [FS28-256];

(xiv) SEQ ID NO 15, 17, 26, 21, 23 и 24 соответственно [FS28-024-051];

(xv) SEQ ID NO 15, 17, 30, 21, 23 и 24 соответственно [FS28-024-053]; или

(xvi) SEQ ID NO 15, 17, 19, 21, 23 и 24 соответственно [FS28-024];

где последовательности CDR определены согласно Кабату; и

указанный антигенсвязывающий сайт для CD137 содержит первую последовательность и вторую последовательность, расположенные в структурных петлях AB и EF CH3-домена соответственно, причем указанная первая и вторая последовательности имеют последовательность, представленную в SEQ ID NO 10 и 11 [FS22-172-003] соответственно.

[3] Молекула антитела по п. [1] или п. [2], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит CDR 1-6, указанные в (i) из п. [1] или п. [2].

[4] Молекула антитела по п. [1] или п. [2], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит CDR 1-6, указанные в (ii) из п. [1] или п. [2].

[5] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[4], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и/или вариабельный домен легкой цепи (VL), предпочтительно VH-домен и VL-домен.

[6] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[5], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит тяжелую цепь иммуноглобулина и/или легкую цепь иммуноглобулина, предпочтительно тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина.

[7] Молекула антитела по любому из пп. [5]-[6], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит VH-домен и/или VL-домен, предпочтительно VH-домен и VL-домен, представленные в:

(i) SEQ ID NO 70 и 76 соответственно [FS28-256-271];

(ii) SEQ ID NO 58 и 54 соответственно [FS28-024-052];

(iii) SEQ ID NO 70 и 68 соответственно [FS28-256-021];

(iv) SEQ ID NO 70 и 64 соответственно [FS28-256-012];

(v) SEQ ID NO 74 и 68 соответственно [FS28-256-023];

(vi) SEQ ID NO 70 и 78 соответственно [FS28-256-024];

(vii) SEQ ID NO 74 и 78 соответственно [FS28-256-026];

(viii) SEQ ID NO 70 и 76 соответственно [FS28-256-027];

(ix) SEQ ID NO 66 и 68 соответственно [FS28-256-001];

(x) SEQ ID NO 66 и 78 соответственно [FS28-256-005];

(xi) SEQ ID NO 72 и 64 соответственно [FS28-256-014];

(xii) SEQ ID NO 74 и 64 соответственно [FS28-256-018];

(xiii) SEQ ID NO 62 и 64 соответственно [FS28-256];

(xiv) SEQ ID NO 56 и 54 соответственно [FS28-024-051];

(xv) SEQ ID NO 60 и 54 соответственно [FS28-024-053]; или

(xvi) SEQ ID NO 12 и 54 соответственно [FS28-024].

[8] Молекула антитела по п. [7], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит VH-домен и VL-домен, представленные в SEQ ID NO 70 и 76 соответственно [FS28-256-271].

[9] Молекула антитела по п. [7], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит VH-домен и VL-домен, представленные в SEQ ID NO 58 и 54 соответственно [FS28-024-052].

[10] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[9], характеризующаяся тем, что первая последовательность расположена между положениями 14 и 17 CH3-домена молекулы антитела, при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует схеме нумерации IMGT.

[11] Молекула антитела по п. [10], характеризующаяся тем, что первая последовательность расположена в положениях 15, 16, 16.5, 16.4, 16.3, 16.2 и 16.1 CH3-домена молекулы антитела, при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует схеме нумерации IMGT.

[12] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[11], характеризующаяся тем, что вторая последовательность расположена в положениях 92-98 CH3-домена молекулы антитела, при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует схеме нумерации IMGT.

[13] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[12], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела дополнительно содержит третью последовательность, расположенную в структурной петле CD CH3-домена.

[14] Молекула антитела по п. [13], характеризующаяся тем, что указанная третья последовательность расположена в положениях 43-78 CH3-домена молекулы антитела, при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует схеме нумерации IMGT.

[15] Молекула антитела по любому из пп. [13]-[14], характеризующаяся тем, что указанная третья последовательность имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 157.

[16] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[15], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит последовательность CH3-домена, представленную в SEQ ID NO: 8 [FS22-172-003].

[17] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[16], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела представляет собой молекулу IgG1 человека.

[18] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[17], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит тяжелую цепь и легкую цепь антитела:

(i) FS22-172-003-AA/FS28-256-271, представленные в SEQ ID NO 3 и 84 соответственно;

(ii) FS22-172-003-AA/FS28-024-052, представленные в SEQ ID NO 102 и 85 соответственно;

(iii) FS22-172-003-AA/FS28-256-021, представленные в SEQ ID NO 125 и 82 соответственно;

(iv) FS22-172-003-AA/FS28-256-012, представленные в SEQ ID NO 125 и 116 соответственно;

(v) FS22-172-003-AA/FS28-256-023, представленные в SEQ ID NO 133 и 82 соответственно;

(vi) FS22-172-003-AA/FS28-256-024, представленные в SEQ ID NO 125 и 83 соответственно;

(vii) FS22-172-003-AA/FS28-256-026, представленные в SEQ ID NO 133 и 83 соответственно;

(viii) FS22-172-003-AA/FS28-256-027, представленные в SEQ ID NO 125 и 84 соответственно;

(ix) FS22-172-003-AA/FS28-256-001, представленные в SEQ ID NO 120 и 82 соответственно;

(x) FS22-172-003-AA/FS28-256-005, представленные в SEQ ID NO 120 и 83 соответственно;

(xi) FS22-172-003-AA/FS28-256-014, представленные в SEQ ID NO 129 и 116 соответственно;

(xii) FS22-172-003-AA/FS28-256-018, представленные в SEQ ID NO 133 и 116 соответственно;

(xiii) FS22-172-003-AA/FS28-256, представленные в SEQ ID NO 114 и 116 соответственно;

(xiv) FS22-172-003-AA/FS28-024-051, представленные в SEQ ID NO 98 и 85 соответственно;

(xv) FS22-172-003-AA/FS28-024-053, представленные в SEQ ID NO 106 и 85 соответственно; или

(xvi) FS22-172-003-AA/FS28-024, представленные в SEQ ID NO 94 и 85 соответственно.

[19] Молекула антитела по п. [18], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит легкую цепь и тяжелую цепь FS22-172-003-AA/FS28-256-271, представленные в SEQ ID NO 84 и 3 соответственно.

[20] Молекула антитела по п. [18], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит легкую цепь и тяжелую цепь FS22-172-003-AA/FS28-024-052, представленные в SEQ ID NO 85 и 102 соответственно.

[21] Молекула антитела по любому из пп. [18]-[20], характеризующаяся тем, что пролин (P) в положении 114 CH2-домена антитела заменен на аланин (A), и при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует схеме нумерации IMGT.

[22] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[21], при этом MSLN представляет собой MSLN, связанный с клеточной поверхностью.

[23] Молекула антитела по п. [22], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела связывается с иммобилизованным MSLN с более высокой аффинностью, чем с растворимым MSLN.

[24] Молекула антитела по п. [23], характеризующаяся тем, что

(i) указанная молекула антитела связывается с иммобилизованным MSLN с kD, равной 8 нМ, или с более высокой аффинностью; и/или

(ii) указанная молекула антитела связывается с растворимым MSLN с kD, равной 15 нМ, или с более низкой аффинностью.

[25] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[24], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела связывает MSLN человека и CD137 человека.

[26] Молекула антитела по п. [25], при этом MSLN состоит из или содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 375.

[27] Молекула антитела по п. [25] или п. [26], при этом CD137 человека состоит из или содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 373.

[28] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[27], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит CDR 1-6, представленные в любом из: (ii) или (xiv)-(xvi) из п. [1] или п. [2], и указанное антитело блокирует связывание MUC16 с MSLN.

[29] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[27], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела содержит CDR 1-6, представленные в любом из: (i) или (iii)-(xiii) из п. [1] или п. [2], и указанное антитело не блокирует связывание MUC16 с MSLN.

[30] Молекула антитела по п. [28] или п. [29], при этом указанный MUC16 представляет собой MUC16 человека.

[31] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[30], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела способна активировать CD137 на иммунной клетке в присутствии MSLN, связанного с поверхностью клетки опухоли.

[32] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[31], характеризующаяся тем, что связывание указанной молекулы антитела с CD137 на иммунной клетке и с MSLN, связанным с поверхностью клетки опухоли, вызывает кластеризацию CD137 на указанной иммунной клетке.

[33] Молекула антитела по п. [31] или п. [32], при этом указанная иммунная клетка представляет собой T-клетку, B-клетку, естественную клетку-киллер (NK), естественную Т-клетку-киллер (NKT) или дендритную клетку (ДК).

[34] Молекула антитела по п. [33], при этом указанная иммунная клетка представляет собой T-клетку.

[35] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[34], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела была модифицирована для уменьшения или устранения связывания CH2-домена молекулы антитела или молекулы антитела с одним или более Fcγ-рецепторами.

[36] Молекула антитела по любому из пп. [1]-[35], характеризующаяся тем, что указанная молекула антитела не связывается с Fcγ-рецепторами.

[37] Молекула антитела по п. [35] или п. [36], при этом указанный Fcγ-рецептор выбран из группы, состоящей из: FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb и FcγRIII.

[38] Конъюгат, содержащий молекулу антитела по любому из пп. [1]-[37] и биоактивную молекулу.

[39] Конъюгат, содержащий молекулу антитела по любому из пп. [1]-[37] и детектируемую метку.

[40] Молекула или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие молекулу антитела по любому из пп. [1]-[37].

[41] Молекула или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие молекулу антитела по любому из пп. [1]-[37], характеризующаяся тем, что указанная молекула (молекулы) нуклеиновой кислоты содержит (содержат) последовательность нуклеиновой кислоты для тяжелой цепи и/или последовательность нуклеиновой кислоты для легкой цепи для:

(i) FS22-172-003-AA/FS28-256-271, представленные в SEQ ID NO 4 и 91 соответственно;

(ii) FS22-172-003-AA/FS28-024-052, представленные в SEQ ID NO 103 и 86 соответственно;

(iii) FS22-172-003-AA/FS28-256-021, представленные в SEQ ID NO 126 и 122 соответственно;

(iv) FS22-172-003-AA/FS28-256-012, представленные в SEQ ID NO 126 и 117 соответственно;

(v) FS22-172-003-AA/FS28-256-023, представленные в SEQ ID NO 134 и 122 соответственно;

(vi) FS22-172-003-AA/FS28-256-024, представленные в SEQ ID NO 126 и 90 соответственно;

(vii) FS22-172-003-AA/FS28-256-026, представленные в SEQ ID NO 134 и 90 соответственно;

(viii) FS22-172-003-AA/FS28-256-027, представленные в SEQ ID NO 126 и 91 соответственно;

(ix) FS22-172-003-AA/FS28-256-001, представленные в SEQ ID NO 121 и 122 соответственно;

(x) FS22-172-003-AA/FS28-256-005, представленные в SEQ ID NO 121 и 90 соответственно;

(xi) FS22-172-003-AA/FS28-256-014, представленные в SEQ ID NO 130 и 117 соответственно;

(xii) FS22-172-003-AA/FS28-256-018, представленные в SEQ ID NO 134 и 117 соответственно;

(xiii) FS22-172-003-AA/FS28-256, представленные в SEQ ID NO 115 и 117 соответственно;

(xiv) FS22-172-003-AA/FS28-024-051, представленные в SEQ ID NO 99 и 86 соответственно;

(xv) FS22-172-003-AA/FS28-024-053, представленные в SEQ ID NO 107 и 86 соответственно; или

(xvi) FS22-172-003-AA/FS28-024, представленные в SEQ ID NO 95 и 86 соответственно.

[42] Вектор или векторы, содержащие молекулу или молекулы нуклеиновой кислоты по любому из п. [40] или п. [41].

[43] Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая молекулу (молекулы) нуклеиновой кислоты по любому из пп. [40]-[41] или вектор (векторы) по п. [42].

[44] Способ получения молекулы антитела по любому из пп. [1]-[37], включающий культивирование рекомбинантной клетки-хозяина по п. [43] в условиях, позволяющих получать молекулу антитела.

[45] Способ по п. [44], дополнительно включающий выделение и/или очистку молекулы антитела.

[46] Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу антитела или конъюгат антитела по любому из пп. [1]-[39] и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

[47] Молекула антитела или конъюгат антитела по любому из пп. [1]-[39] для применения в способе лечения рака у индивидуума.

[48] Способ лечения рака у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму терапевтически эффективного количества молекулы антитела или конъюгата антитела по любому из пп. [1]-[39].

[49] Применение молекулы антитела или конъюгата антитела по любому из пп. [1]-[39] в получении лекарственного средства для лечения рака.

[50] Молекула антитела или конъюгат антитела для применения, способ или применение по любому из пп. [47]-[49], при этом рак представляет собой рак яичников, рак поджелудочной железы, рак легкого или мезотелиому.

[51] Молекула антитела или конъюгат антитела для применения по п. [47], при этом лечение включает введение указанной молекулы антитела или конъюгата антитела индивидууму в комбинации со вторым лекарственным средством.

[52] Способ по п. [48], характеризующийся тем, что указанный способ дополнительно включает введение индивидууму терапевтически эффективного количества второго лекарственного средства.

Краткое описание фигур

На Фиг. 1 представлены результаты анализа активации Т-клеток, в котором mAb², содержащие Fab, которые связывают различные области MSLN человека, запускают CD137-опосредуемую активацию CD8⁺ Т-клеток, когда указанные mAb² перекрестно связаны MSLN-положительными клетками NCI-H226, что приводит к высвобождению IL-2 человека. Эти результаты показывают, что mAb², содержащие Fab из линии FS28-185 (B), не обладают функциональной активностью в этом анализе. Все mAb², содержащие Fab из линий FS28-024 (A) и FS28-256 (C), демонстрируют увеличение высвобождения hIL-2 в присутствии mAb² в концентрациях от субнаномолярных до 1,5 нМ.

На Фиг. 2 представлены результаты анализов активации Т-клеток в присутствии различных концентраций растворимого MSLN (sMSLN) (отсутствие sMSLN, 2 нМ и 20 нМ sMSLN). На mAb², которые демонстрировали предпочтительное связывание с мембраносвязанным MSLN (mAb², содержащие FS28-024-051, FS28-024-052, FS28-024-053, FS28-256-021 и FS28-256-023), в меньшей степени влияло присутствие растворимого MSLN (A-E), чем в случае FS22-172-003-AA/FS28-256-027 (F), для которых наблюдали значительный сдвиг значения EC₅₀ в присутствии 20 нМ sMSLN по сравнению с отсутствием sMSLN.

На Фиг. 3A и B представлен результат анализа активации Т-клеток, в котором mAb² запускают CD137-опосредуемую активацию CD8⁺ Т-клеток, когда указанные mAb² перекрестно связаны клетками OVCAR-3. Эти результаты показывают, что mAb² способны запускать CD137-опосредуемый агонизм в случае клеток, экспрессирующих MSLN в более низкой плотности на клеточных мембранах. В этом анализе также тестировали Fcab FS22-172-003 к CD137 в формате ложного mAb² (FS22-172-003/HelD1.3) и отсутствие высвобождения IL-2 указывало на то, что указанный Fcab к CD137 человека является функциональным только когда перекрестно связан через Fab-фрагменты молекулы.

На Фиг. 4 представлены результаты анализа активации CD8⁺ Т-клеток, в котором mAb² с оптимизированными последовательностями: FS22-172-003-AA/FS28-256-271 (A), FS22-172-003-AA/FS28-256-272 (B) и FS22-172-003-AA/FS28-256-273 (C) были перекрестно связаны с клетками NCI-H226, экспрессирующими MSLN человека, в отсутствии или в присутствии sMSLN в концентрации до 20 нМ. Для mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271 концентрации sMSLN до 20 нМ обуславливают минимальное снижение активности в отношении активации Т-клеток на основе наблюдаемой EC₅₀. mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-272 и FS22-172-003-AA/FS28-256-273 демонстрировали более выраженное снижение активности в отношении активации Т-клеток в присутствии 20 нМ sMSLN с уменьшением наблюдаемой ЕС₅₀ более чем в 4 раза, как и исходный клон FS22-172-003-AA/FS28-256-027 (D), который демонстрировал 6,6-кратное уменьшение ЕС₅₀.

На Фиг. 5 показано высвобождение IFNγ в анализе активации Т-клеток, когда mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 и FS22m-063-AA/FS28m-228 были перекрестно связаны с клетками CT26.G10, CT26.B2 или Panc02 в присутствии или в отсутствии 2 нМ растворимого MSLN мыши (A-D). Указанный эксперимент для mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228 включал следующие отрицательные контроли: контрольное антитело к MSLN в формате IgG1, в котором отсутствовал какой-либо Fcab, нацеленный на CD137, и ложное mAb² FS22m-063/HelD1.3 (т.е. Fcab к CD137 без нацеливания на MSLN). Результаты показали, что даже при относительно высоких концентрациях растворимого MSLN в этом анализе наблюдали незначительное влияние на активность mAb². Эти данные также продемонстрировали субнаномолярную активность (EC₅₀) во всех тестируемых линиях клеток, экспрессирующих MSLN.

На Фиг. 6 показаны индивидуальные измерения объема опухоли в модели сингенной опухоли у мышей CT26.B2 для мышей, получавших лечение G1/4420 (антитело изотипического контроля IgG1 человека) (A) или FS22m-063-AA/FS28m-228 (mAb²к CD137/MSLN мыши) (В). Лечение FS22m-063-AA/FS28m-228 приводило к сокращению роста опухоли по сравнению с изотипическим контролем.

На Фиг. 7 представлен график выживаемости Каплана-Мейера для мышей в модели сингенной опухоли у мышей CT26.B2, получавших лечение G1/4420 (антитело изотипического контроля IgG1 человека) или FS22m-063-AA/FS28m-228 (mAb²к CD137/MSLN мыши). Лечение FS22m-063-AA/FS28m-228 демонстрировало значительное увеличение выживаемости по сравнению с лечением антителом изотипического контроля IgG1 человека. (Анализ с помощью лог-рангового критерия, **p<0,01)

На Фиг. 8 показаны индивидуальные измерения объема опухоли в модели сингенной опухоли у мышей CT26.G10 для мышей, получавших лечение G1/4420 (антитело изотипического контроля IgG1 человека) (A) или FS22m-063-AA/FS28m-228 (mAb² к CD137/MSLN мыши) (В). Мыши, получавшие лечение FS22m-063-AA/FS28m-228, демонстрировали сокращение роста опухоли по сравнению с изотипическим контролем, при этом в конце исследования у 4/20 (25%) мышей отсутствовали пальпируемые опухоли по сравнению с 1/20 (5%) в группе, получавшей лечение изотипическим контролем.

На Фиг. 9 представлен график выживаемости Каплана-Мейера для мышей в модели сингенной опухоли у мышей CT26.G10, получавших лечение G1/4420 (антитело изотипического контроля IgG1 человека) или FS22m-063-AA/FS28m-228 (mAb²к CD137/MSLN мыши). Лечение FS22m-063-AA/FS28m-228 демонстрировало значительное увеличение выживаемости по сравнению с лечением антителом изотипического контроля IgG1 человека. (Анализ с помощью лог-рангового критерия, **p<0,01)

На Фиг. 10 показаны индивидуальные измерения объема опухоли в модели сингенной опухоли у мышей CT26.G10 для мышей, получавших лечение G1-AA/4420 (контроль IgG; 20 мкг, эквивалентно 1 мг/кг для 20 г мыши), G1/Lob12.3 (положительный контроль IgG1 человека дикого типа к CD137; 20 мкг, эквивалентно 1 мг/кг для 20 г мыши) и FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (mAb² к CD137/MSLN мыши). Лечение FS22m-063-AA/FS28m-228-010 демонстрировало дозозависимое сокращение роста опухоли по сравнению с мышами, получавшими лечение изотипическим контролем IgG1 человека.

На Фиг. 11 представлен график выживаемости Каплана-Мейера для мышей в модели сингенной опухоли у мышей CT26.G10, получавших лечение G1-AA/4420 (контроль IgG1 человека; 20 мкг, эквивалентно 1 мг/кг для 20 г мыши), G1/Lob12.3 (положительный контроль IgG1 человека дикого типа к CD137; 20 мкг, эквивалентно 1 мг/кг для 20 г мыши) и FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (mAb² к CD137/MSLN мыши). Лечение FS22m-063-AA/FS28m-228-010 на всех тестируемых уровнях доз приводило к значительному увеличению выживаемости по сравнению с контролем IgG, и указанное увеличение выживаемости было дозозависимым. (Попарный анализ с помощью лог-рангового критерия, позволяющий сравнить группы лечения с изотипическим контролем G1-AA/4420, p<0,05, **p<0,01, ***p<0,001)

На Фиг. 12 показаны индивидуальные измерения объема опухоли в модели сингенной опухоли у мышей CT26.G10 для мышей, получавших лечение (A) G1-AA/HelD1.3 (контроль IgG1 человека), (B) FS22m-063-AA/HelD1.3 (Fcab к CD137 мыши в формате «ложного» mAb²), (C) FS22m-063-AA/4420 (Fcab к CD137 мыши в формате mAb²), (D) G1-AA/FS28m-228-010 (антитело к MSLN мыши), (E) комбинацией FS22m-063-AA/HelD1.3 плюс G1-AA/FS28m-228-010 (Fcab к CD137 мыши в формате «ложного» mAb² плюс Fab к MSLN мыши) и (F) FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (mAb²к CD137/MSLN мыши). Результаты показывают, что тогда как у 7/20 (35%) мышей, получавших лечение FS22m-063-AA/FS28m-228-010, не было пальпируемых опухолей в конце исследования за исключением G1-AA/FS28m-228-010 (1/20, 5%), все мыши, которым вводили другие лекарственные средства, демонстрировали опухоли ≥62,5 мм³ в конце исследования.

На Фиг. 13 представлен график выживаемости Каплана-Мейера для мышей в модели сингенной опухоли у мышей CT26.G10, получавших лечение G1-AA/HelD1.3 (контроль IgG), FS22m-063-AA/HelD1.3 (Fcab к CD137 мыши в формате «ложного» mAb²с несвязывающим Fab, анти-HelD1.3), FS22m-063-AA/4420 (Fcab к CD137 мыши в формате «ложного» mAb² с несвязывающим Fab, анти-4420), G1-AA/FS28m-228-010 (антитело к MSLN мыши), комбинацией FS22m-063-AA/HelD1.3 плюс G1-AA/FS28m-228-010 (Fcab к CD137 мыши плюс антитело к MSLN мыши) и FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (mAb² к CD137/MSLN мыши). Результаты показывают, что тогда как мыши, получавшие лечение одним из двух Fcab к CD137 мыши в формате «ложного» mAb² или антителом к MSLN мыши, а также мыши в группе комбинированного лечения не демонстрировали никакого увеличения выживаемости по сравнению с мышами, получавшими лечение изотипическим контролем, мыши, получавшие лечение FS22m-063-AA/FS28m-228-010-, демонстрировали увеличение выживаемости по сравнению с мышами, получавшими лечение изотипическим контролем. (Попарный анализ с помощью лог-рангового критерия, позволяющий сравнить группы лечения с изотипическим контролем G1-AAHelD1.3, ****p<0,0001).

На Фиг. 14 представлен фармакокинетический профиль mAb² к CD137/MSLN человека и mAb² к CD137/MSLN мыши в модели у мышей C57BL/6, не несущих опухоли. A: показано mAb² к CD137/MSLN мыши (FS22m-063-AA/FS28m-228-010) в дозе 10 мг/кг по сравнению с 10 мг/кг изотипического контроля IgG1 человека (G1/4420) после однократной внутривенно введенной дозы (n=3 на группу). Как изотипический контроль IgG1 человека, так и mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 сохраняли высокие уровни воздействия 70,30 и 18,11 мкг/мл соответственно, через 144 часа после введения дозы. Нижний предел количественного определения (LLOQ) показан на уровне 5,48 нг/мл. В: показаны уровни mAb² к CD137/MSLN человека (FS22-172-003-AA/FS28-256-271) после внутривенно введенной дозы 6,7 мг/кг по сравнению с 6,7 мг/кг изотипического контроля IgG1 человека (G1/4420) после однократной дозы, внутривенно введенной мышам C57BL/6, не несущим опухоли. Как изотипический контроль IgG1 человека, так и mAb² к CD137/MSLN человека сохраняли высокие уровни воздействия 28,36 и 60,26 мкг/мл соответственно, через 144 часа после введения дозы. Нижний предел количественного определения (LLOQ) показан на уровне 1,82 нг/мл.

Подробное описание

Настоящее изобретение относится к молекулам антител, которые связываются как с MSLN, так и CD137. В частности, указанные молекулы антител согласно настоящему изобретению содержат антигенсвязывающий сайт на основе CDR для MSLN и антигенсвязывающий сайт для CD137, расположенный в константном домене молекулы антитела.

Молекула антитела предпочтительно специфично связывает MSLN и CD137. Термин «специфичный (специфический)» может относиться к ситуации, в которой молекула антитела не демонстрирует какого-либо значительного связывания с молекулами, отличными от ее партнера (партнеров) по специфичному связыванию, согласно настоящему изобретению - MSLN и CD137. Термин «специфичный (специфический)» также применим, когда молекула антитела специфична в отношении конкретных эпитопов, таких как эпитопы на MSLN и CD137, содержащихся в ряде антигенов, и в этом случае указанная молекула антитела способна связываться с различными антигенами, содержащими указанный эпитоп. В предпочтительном варианте реализации молекула антитела согласно настоящему изобретению не связывается или не демонстрирует какого-либо значительного связывания с OX40, GITR, CD40, CEACAM-5, E-кадгерином, тромбомодулином или молекулой клеточной адгезии эпителия (EpCAM).

Термин «молекула антитела» описывает иммуноглобулин как природный, так и частично или полностью полученный путем синтеза. Молекула антитела может представлять собой молекулу антитела человека или гуманизированную молекулу антитела, предпочтительно представляет собой молекулу антитела человека. Молекула антитела предпочтительно представляет собой молекулу моноклонального антитела. Примерами антител являются изотипы иммуноглобулина, такие как иммуноглобулин G, и подклассы изотипов, такие как IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, а также их фрагменты. Молекула антитела может быть выделенной в том смысле, что она не содержит загрязняющих примесей, таких как антитела, способные связывать другие полипептиды, и/или компоненты сыворотки.

Таким образом, в настоящем описании термин «молекула антитела» включает фрагменты антител, если указанные фрагменты содержат антигенсвязывающий сайт на основе CDR для MSLN и антигенсвязывающий сайт для CD137, расположенный в константном домене.

Молекула антитела может быть природной или частично, или полностью полученной путем синтеза. Например, молекула антитела может представлять собой рекомбинантную молекулу антитела.

Молекула антитела содержит один или более антигенсвязывающих сайтов на основе CDR для MSLN и один или более антигенсвязывающих сайтов для CD137 в одном или более константных доменах, предпочтительно в одном или более CH3-доменах молекулы антитела.

Молекула антитела может представлять собой иммуноглобулин или его антигенсвязывающий фрагмент. Например, молекула антитела может представлять собой молекулу IgG, IgA, IgE или IgM, предпочтительно молекулу IgG, такую как молекула IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, более предпочтительно молекулу IgG1 или IgG2, наиболее предпочтительно молекулу IgG1 или ее фрагмент. В предпочтительном варианте реализации молекула антитела представляет собой целую молекулу иммуноглобулина.

В других вариантах реализации молекула антитела может представлять собой антигенсвязывающий фрагмент, содержащий антигенсвязывающий сайт на основе CDR для MSLN и антигенсвязывающие сайты для CD137, расположенные в константном домене. Например, указанный антигенсвязывающий фрагмент может представлять собой слияние scFv-Fc, где scFv связывается с MSLN, и Fc связывается с OX40, или миниантитело, которое содержит scFv, присоединенный к CH3-домену (Hu et al. (1996), Cancer Res., 56(13):3055-61).

Антитела и способы их конструирования и применения хорошо известны в этой области техники и описаны, например, в Holliger and Hudson, 2005. Можно использовать моноклональные и другие антитела и применять методы рекомбинантных ДНК для получения других антител или химерных молекул, которые сохраняют специфичность исходного антитела. Такие методы могут включать введение CDR-областей или вариабельных областей молекулы антитела в другую молекулу антитела (EP-A-184187, GB 2188638A и EP-A-239400).

В предпочтительном варианте реализации молекула антитела представляет собой биспецифичное антитело mAb² (TM). Как указано в настоящем описании, биспецифичное антитело mAb² представляет собой иммуноглобулин IgG, который содержит антигенсвязывающий сайт на основе CDR в каждой из вариабельных областей и по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт в константном домене молекулы антитела.

В предпочтительном варианте реализации антитело представляет собой молекулу антитела, которая связывает MSLN и CD137, при этом указанная молекула антитела содержит:

(i) два антигенсвязывающих сайта на основе CDR для MSLN, каждый из которых образован VH-доменом иммуноглобулина и VL-доменом иммуноглобулина; и

(ii) два антигенсвязывающих сайта, которые связывают CD137, расположенные в двух CH3-доменах указанной молекулы антитела.

В более предпочтительном варианте реализации антитело представляет собой целую молекулу иммуноглобулина, например, целую молекулу IgG1, которая связывает MSLN и CD137, при этом указанная молекула антитела содержит:

(ii) два антигенсвязывающих сайта, которые связывают CD137, расположенные в двух CH3-доменах указанной молекулы антитела; и

при этом указанная молекула иммуноглобулина дополнительно содержит CH1-, CH2- и CL-домены.

Антигенсвязывающий сайт на основе CDR представляет собой антигенсвязывающий сайт в вариабельной области антитела. Антигенсвязывающий сайт на основе CDR может быть образован тремя CDR, такими как три CDR вариабельного домена легкой цепи (VL) или три CDR вариабельного домена тяжелой цепи (VH). Предпочтительно, антигенсвязывающий сайт на основе CDR образован шестью CDR: тремя CDR VL и тремя CDR VH. Вклад различных CDR в связывание антигена может варьироваться в разных антигенсвязывающих сайтах.

Три содержащиеся в VH-домене CDR антигенсвязывающего сайта могут быть расположены в пределах VH-домена иммуноглобулина, и три CDR VL-домена могут быть расположены в пределах VL-домена иммуноглобулина. Например, антигенсвязывающий сайт на основе CDR может быть расположен в вариабельной области антитела.

Молекула антитела содержит один или предпочтительно более одного, например, два антигенсвязывающих сайта на основе CDR для MSLN. Таким образом, молекула антитела может содержать один VH-домен и один VL-домен, но предпочтительно содержит два VH-домена и два VL-домена, т.е. две пары VH/VL-доменов, как, например, в случае встречающихся в природе молекул IgG.

Антигенсвязывающий сайт на основе CDR может содержать три CDR VH или три CDR VL, предпочтительно три CDR VH и три CDR VL антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018, FS22-172-003-AA/FS28-256, FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-053 или FS22-172-003-AA/FS28-024, предпочтительно антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271 или FS22-172-003-AA/FS28-024-052, наиболее предпочтительно антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271.

Последовательности CDR могут быть легко определены по последовательностям VH- и VL-доменов молекулы антитела с применением рутинных методик. В настоящей заявке описаны последовательности VH- и VL-доменов антител FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018, FS22-172-003-AA/FS28-256, FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-053 и FS22-172-003-AA/FS28-024, и по указанным последовательностям могут быть, таким образом, определены три CDR VH-домена и три CDR VL-домена указанных антител. Последовательности CDR могут быть, например, определены в соответствии с Kabat et al., 1991 или международной информационной системой ImMunoGeneTics (IMGT) (Lefranc et al., 2015).

Последовательности VH-домена и VL-домена антитела, содержащего мутацию LALA в CH2-домене, такие же как у антитела, не содержащего мутации LALA. Например, последовательности VH и VL антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271 являются такими же как последовательности VH и VL антитела FS22-172-003/FS28-256-271. Подобным образом, CDR1, CDR2 и CDR3 VH-домена и CDR1, CDR2 и CDR3 VL-домена антитела, содержащего мутацию LALA в CH2-домене, такие же как у антитела, не содержащего мутации LALA. Например, последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VH-домена и последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VL-домена антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271 являются такими же как последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VH-домена и последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VL-домена антитела FS22-172-003/FS28-256-271.

Последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VH-домена молекулы антитела в соответствии с нумерацией IMGT могут представлять собой последовательности, расположенные в положениях 27-38, 56-65 и 105-117 VH-домена молекулы антитела соответственно.

Последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VH-домена молекулы антитела в соответствии с нумерацией Кабата могут представлять собой последовательности, расположенные в положениях 31-35, 50-65 и 95-102 VH-домена соответственно.

Последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VL-домена молекулы антитела в соответствии с нумерацией IMGT могут представлять собой последовательности, расположенные в положениях 27-38, 56-65 и 105-117 VL-домена соответственно.

Последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 VL-домена молекулы антитела в соответствии с нумерацией Кабата могут представлять собой последовательности, расположенные в положениях 24-34, 50-56 и 89-97 VL-домена соответственно.

Например, последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VH-домена для:

(i) FS22-172-003-AA/FS28-256-271 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 42, 33 и 44 соответственно;

(ii) FS22-172-003-AA/FS28-024-052 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 14, 16 и 27 соответственно;

(iii) FS22-172-003-AA/FS28-256-021 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 42, 33 и 44 соответственно;

(iv) FS22-172-003-AA/FS28-256-012 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 42, 33 и 44 соответственно;

(v) FS22-172-003-AA/FS28-256-023 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 50, 33 и 52 соответственно;

(vi) FS22-172-003-AA/FS28-256-024 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 42, 33 и 44 соответственно;

(vii) FS22-172-003-AA/FS28-256-026 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 50, 33 и 52 соответственно;

(viii) FS22-172-003-AA/FS28-256-027 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 42, 33 и 44 соответственно;

(ix) FS22-172-003-AA/FS28-256-001 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 38, 33 и 35 соответственно;

(x) FS22-172-003-AA/FS28-256-005 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 38, 33 и 35 соответственно;

(xi) FS22-172-003-AA/FS28-256-014 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 46, 33 и 48 соответственно;

(xii) FS22-172-003-AA/FS28-256-018 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 50, 33 и 52 соответственно;

(xiii) FS22-172-003-AA/FS28-256 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 31, 33 и 35 соответственно;

(xiv) FS22-172-003-AA/FS28-024-051 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 14, 16 и 25 соответственно;

(xv) FS22-172-003-AA/FS28-024-053 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 14, 16 и 29 соответственно; и

(xvi) FS22-172-003-AA/FS28-024 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 14, 16 и 18 соответственно;

при этом указанные последовательности CDR определены в соответствии со схемой нумерации IMGT.

Последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VL-домена для:

(i) FS22-172-003-AA/FS28-256-271 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22 и 80 соответственно;

(ii) FS22-172-003-AA/FS28-024-052 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 24 соответственно;

(iii) FS22-172-003-AA/FS28-256-021 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 40 соответственно;

(iv) FS22-172-003-AA/FS28-256-012 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 37 соответственно;

(v) FS22-172-003-AA/FS28-256-023 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 40 соответственно;

(vi) FS22-172-003-AA/FS28-256-024 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 41 соответственно;

(vii) FS22-172-003-AA/FS28-256-026 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 41 соответственно;

(viii) FS22-172-003-AA/FS28-256-027 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 80 соответственно;

(ix) FS22-172-003-AA/FS28-256-001 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 40 соответственно;

(x) FS22-172-003-AA/FS28-256-005 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 41 соответственно;

(xi) FS22-172-003-AA/FS28-256-014 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 37 соответственно;

(xii) FS22-172-003-AA/FS28-256-018 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 37 соответственно;

(xiii) FS22-172-003-AA/FS28-256 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 37 соответственно;

(xiv) FS22-172-003-AA/FS28-024-051 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 24 соответственно;

(xv) FS22-172-003-AA/FS28-024-053 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 24 соответственно; и

(xvi) FS22-172-003-AA/FS28-024 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 20, 22, 24 соответственно;

(i) FS22-172-003-AA/FS28-256-271 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 43, 5 и 45 соответственно;

(ii) FS22-172-003-AA/FS28-024-052 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 15, 17 и 28 соответственно;

(iii) FS22-172-003-AA/FS28-256-021 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 43, 34, 45 соответственно;

(iv) FS22-172-003-AA/FS28-256-012 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 43, 34 и 45 соответственно;

(v) FS22-172-003-AA/FS28-256-023 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 51, 34 и 53 соответственно;

(vi) FS22-172-003-AA/FS28-256-024 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 43, 34 и 45 соответственно;

(vii) FS22-172-003-AA/FS28-256-026 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 51, 34 и 53 соответственно;

(viii) FS22-172-003-AA/FS28-256-027 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 43, 34 и 45 соответственно;

(ix) FS22-172-003-AA/FS28-256-001 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 39, 34 и 36 соответственно;

(x) FS22-172-003-AA/FS28-256-005 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 39, 34 и 36 соответственно;

(xi) FS22-172-003-AA/FS28-256-014 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 47, 34 и 49 соответственно;

(xii) FS22-172-003-AA/FS28-256-018 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 51, 34 и 53 соответственно;

(xiii) FS22-172-003-AA/FS28-256 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 32, 34 и 36 соответственно;

(xiv) FS22-172-003-AA/FS28-024-051 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 15, 17 и 26 соответственно;

(xv) FS22-172-003-AA/FS28-024-053 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 15, 17 и 30 соответственно; и

(xvi) FS22-172-003-AA/FS28-024 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 15, 17 и 19 соответственно;

при этом указанные последовательности CDR определены в соответствии со схемой нумерации Кабата.

Последовательность CDR1, CDR2 и CDR3 VL-домена для:

(i) FS22-172-003-AA/FS28-256-271 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 80 соответственно;

(ii) FS22-172-003-AA/FS28-024-052 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 24 соответственно;

(iii) FS22-172-003-AA/FS28-256-021 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 40 соответственно;

(iv) FS22-172-003-AA/FS28-256-012 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 37 соответственно;

(v) FS22-172-003-AA/FS28-256-023 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 40 соответственно;

(vi) FS22-172-003-AA/FS28-256-024 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 41 соответственно;

(vii) FS22-172-003-AA/FS28-256-026 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 41 соответственно;

(viii) FS22-172-003-AA/FS28-256-027 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 80 соответственно;

(ix) FS22-172-003-AA/FS28-256-001 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 40 соответственно;

(x) FS22-172-003-AA/FS28-256-005 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 41 соответственно;

(xi) FS22-172-003-AA/FS28-256-014 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 37 соответственно;

(xii) FS22-172-003-AA/FS28-256-018 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 37 соответственно;

(xiii) FS22-172-003-AA/FS28-256 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 37 соответственно;

(xiv) FS22-172-003-AA/FS28-024-051 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 24 соответственно;

(xv) FS22-172-003-AA/FS28-024-053 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 24 соответственно; и

(xvi) FS22-172-003-AA/FS28-024 может быть такой, как представлена в SEQ ID NO 21, 23 и 24 соответственно;

Антигенсвязывающий сайт на основе CDR может составлять VH- или VL-домены, предпочтительно VH- и VL-домены антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018, FS22-172-003-AA/FS28-256, FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-053 или FS22-172-003-AA/FS28-024, предпочтительно антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271 или FS22-172-003-AA/FS28-024-052, наиболее предпочтительно антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271.

VH-домен антител FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018, FS22-172-003-AA/FS28-256, FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-053 и FS22-172-003-AA/FS28-024 может иметь последовательность, представленную в SEQ ID NO 3, 58, 70, 70, 74, 70, 74, 70, 66, 66, 72, 74, 62, 56, 60 и 12 соответственно.

VL-домен антител FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018, FS22-172-003-AA/FS28-256, FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-053 и FS22-172-003-AA/FS28-024 может иметь последовательность, представленную в SEQ ID NO 76, 54, 68, 64, 68, 78, 78, 76, 68, 78, 64, 64, 64, 54, 54 и 54 соответственно.

Молекула антитела предпочтительно связывает MSLN человека, более предпочтительно MSLN человека и яванского макака. Молекула антитела согласно настоящему изобретению предпочтительно способна связываться с MSLN, экспрессируемым на поверхности клетки. Указанная клетка предпочтительно представляет собой клетку опухоли.

Как описано в разделе «Уровень техники» выше, зрелый MSLN отделяется с клеток опухоли и удаляется из места опухоли. Этот отделенный MSLN может выступать в качестве «поглотителя» связывающих молекул к MSLN, которые после связывания с отделенным MSLN также удаляются из места опухоли. Для выбора (отбора) молекул, которые предпочтительно связываются с MSLN, присутствующим на поверхности клеток опухоли, авторы настоящего изобретения выбирали молекулы антител с высокой авидностью в отношении MSLN. В частности, авторы настоящего изобретения выбирали молекулы антител, которые связывались с иммобилизованным MSLN с более высокой аффинностью, чем с MSLN в растворе. Полагают, что молекулы антител, которые связываются с MSLN с высокой авидностью, предпочтительно связываются с MSLN, присутствующим на клетках опухоли, где, как ожидают, присутствуют нескольких копий MSLN и они доступны для двухвалентного связывания молекулой антитела, в отличие от MSLN, отделенного с клеток опухоли, который, как ожидают, имеет форму мономера. Соответственно, без желания быть связанными какой-либо теорией молекулы антител согласно настоящему изобретению, как ожидают, будут медленнее удаляться из места опухоли и, следовательно, будут иметь большее временное окно для оказания терапевтического эффекта.

Молекула антитела предпочтительно связывается с иммобилизованным MSLN с более высокой аффинностью, чем с MSLN в растворе. Иммобилизованный MSLN может представлять собой MSLN, иммобилизованный на поверхности, такой как чип для применения в поверхностном плазмонном резонансе. В настоящем описании MSLN в растворе также называется растворимым MSLN и он не иммобилизован. Растворимый MSLN предпочтительно имеет форму мономера, т.е. представляет собой мономерный мезотелин.

Аффинность антитела к когнатному ему антигену может быть выражена в виде равновесной константы диссоциации (K_D), с которой указанное антитело взаимодействует с указанным антигеном. Чем выше значение K_D, тем ниже аффинность молекулы антитела к антигену.

Молекула антитела предпочтительно связывается с иммобилизованным MSLN с аффинностью (K_D), равной 9 нМ, 8 нМ, 7 нМ или 6 нМ, или с более высокой аффинностью. Предпочтительно, молекула антитела связывается с иммобилизованным MSLN с K_D, равной 7 нМ или 6 нМ, или с более низким значением K_D.

Молекула антитела предпочтительно связывается с MSLN в растворе с аффинностью (K_D), равной 15 нМ, или с более низкой аффинностью. Более предпочтительно, молекула антитела связывается с иммобилизованным MSLN с аффинностью (K_D), равной 16 нМ, 17 нМ или 18 нМ, или с более низкой аффинностью.

В предпочтительном варианте реализации молекула антитела связывает иммобилизованный MSLN с аффинностью (K_D), равной 6 нМ, или с более высокой аффинностью и связывает MSLN в растворе с аффинностью (K_D), равной 18 нМ, или с более низкой аффинностью.

Аффинность связывания молекулы антитела в отношении клеток, содержащих MSLN, связанный с поверхностью, может быть измерена путем определения концентрации указанной молекулы антитела, необходимой для достижения полумаксимального связывания (ЕС₅₀) молекулы антитела с клетками. Подходящие способы определения концентрации молекулы антитела, необходимой для достижения полумаксимального связывания молекулы антитела с клетками, известны в этой области техники и описаны в примерах в настоящей заявке (см., например, Пример 7). Как описано выше, молекулы антител, на связывание которых с клетками опухоли, содержащими MSLN, связанный с поверхностью, не влияет или в меньшей степени влияет присутствие растворимого MSLN, являются предпочтительными ввиду присутствия отделенного MSLN в окружении опухоли. Таким образом, в предпочтительном варианте реализации концентрация молекулы антитела, необходимая для достижения полумаксимального связывания (ЕС₅₀) антитела с клетками (например, клетками опухоли), содержащими MSLN, связанный с поверхностью, в присутствии 20 нМ растворимого MSLN, менее чем в 20 раз, менее чем в 15 раз, менее чем в 10 раз, менее чем в 9 раз, менее чем в 8 раз, менее чем в 7 раз, менее чем в 6 раз, менее чем в 5 раз, менее чем в 4 раза или менее чем в 3 раза выше концентрации молекулы антитела, необходимой для достижения полумаксимального связывания (ЕС₅₀) антитела с клетками в отсутствии растворимого MSLN.

Было показано, что присутствие растворимого MSLN в меньшей степени влияет на связывание молекул антител, которые не блокируют связывание MUC16 с MSLN, с клетками, содержащими MSLN, связанный с клетками. Таким образом, может быть предпочтительной молекула антитела, которая не способна или не блокирует связывание MUC16 с MSLN.

Иммобилизованный MSLN может иметь последовательность, представленную в SEQ ID NO: 142. MSLN в растворе может иметь последовательность, представленную в SEQ ID NO: 142.

Также было показано, что молекулы антител согласно настоящему изобретению связывают MSLN яванского макака. Полагают, что это позволяет проводить исследования эффективности и токсичности молекулы антитела у яванских макак, которые могут предсказать эффективность и токсичность молекулы антитела у людей.

Молекула антитела может связываться с иммобилизованным MSLN человека и иммобилизованным MSLN яванского макака со схожей аффинностью. В дополнение к этому, молекула антитела может связываться с MSLN человека в растворе и MSLN яванского макака в растворе со схожей аффинностью. Полагают, что это позволяет убедиться в том, что исследования эффективности и токсичности, проводимые у яванских макак с применением молекулы антитела, предсказывают эффективность и токсичность молекулы антитела у людей.

Таким образом, в предпочтительном варианте реализации молекула антитела связывается с иммобилизованным MSLN яванского макака с аффинностью, которая не более чем в 10 раз, предпочтительно не более чем в 5 раз, более предпочтительно не более чем в 3 раза ниже или выше аффинности, с которой указанная молекула антитела связывает иммобилизованный MSLN человека. В дополнение к этому, молекула антитела предпочтительно связывается с MSLN яванского макака в растворе с аффинностью, которая не более чем в 10 раз, предпочтительно не более чем в 5 раз, более предпочтительно не более чем в 2 раза ниже или выше аффинности, с которой указанная молекула антитела связывает MSLN человека в растворе.

Было показано, что молекулы антител демонстрируют диапазон активности в отношении связывания лиганда. Например, молекула антитела может быть способна блокировать или может не быть способна блокировать связывание MUC16 с MSLN.

Молекула антитела может содержать CDR 1-6, VH-домен и/или VL-домен антитела FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-024-053 или FS22-172-003-AA/FS28-024, или их вариант, при этом указанная молекула антитела блокирует связывание MUC16 с MSLN.

В качестве альтернативы, молекула антитела может содержать CDR 1-6, VH-домен и/или VL-домен антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018 или FS22-172-003-AA/FS28-256, или их вариант, при этом указанная молекула антитела не блокирует связывание MUC16 с MSLN.

Способы, подходящие для определения способности молекулы антитела блокировать связывание MUC16 с MSLN, известны в этой области техники и включают ELISA-анализы и анализы на основе клеток, например, анализ, в котором указанное антитело конкурирует за связывание с MUC16 за связывание с клетками, экспрессирующими MSLN, такими как клетки NCI-H226.

Молекула антитела согласно настоящему изобретению содержит антигенсвязывающий сайт для CD137. Указанный антигенсвязывающий сайт для CD137 расположен в константном домене молекулы антитела, предпочтительно в CH3-домене. Антигенсвязывающий сайт для CD137 содержит одну или более модифицированных структурных петель в константном домене молекулы антитела. Искусственное конструирование структурных петель константного домена антитела для создания антигенсвязывающих сайтов для антигенов-мишеней известно в этой области и описано, например, в Wozniak-Knopp G et al. (2010) Protein Eng Des. 23 (4): 289-297; WO2006/072620 и WO2009/132876. Антигенсвязывающий сайт константного домена для CD137, содержащийся в молекулах антител согласно настоящему изобретению, идентифицировали после проведения обширной программы по отбору и созреванию аффинности, и он предпочтительно связывается с димерным, а не мономерным CD137 человека.

Антигенсвязывающий сайт для CD137 в молекуле антитела содержит первую и вторую последовательность, при этом указанная первая и вторая последовательности расположены в структурных петлях AB и EF константного домена, предпочтительно CH3-домена, молекулы антитела соответственно. Первая последовательность и вторая последовательность предпочтительно представляют собой первую и вторую последовательности FS22-172-003, представленные в SEQ ID NO: 10 и 11 соответственно. Первая и вторая последовательности предпочтительно расположены между положениями 14 и 17 и положениями 91 и 99 CH3-домена молекулы антитела соответственно, при этом нумерация остатков соответствует нумерации IMGT.

Последовательность петли CD молекулы антитела предпочтительно является немодифицированной, т.е. относится к дикому типу. Соответственно, последовательность петли CD имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 157. Последовательность петли CD предпочтительно расположена в положениях 43-78 CH3-домена молекулы антитела, при этом нумерация остатков соответствует нумерации IMGT.

В предпочтительном варианте реализации молекула антитела содержит CH3-домен, который содержит, имеет или состоит из последовательности CH3-домена для FS22-172-003, представленной в SEQ ID NO: 8.

CH3-домен молекулы антитела может необязательно содержать дополнительный остаток лизина (К) на непосредственном С-конце последовательности CH3-домена.

Можно использовать моноклональные и другие антитела и применять методы рекомбинантных ДНК для получения других антител или химерных молекул, которые сохраняют специфичность исходного антитела. Такие методы могут включать введение CDR-областей или вариабельных областей в другой иммуноглобулин. Введение CDR-областей одного иммуноглобулина в другой иммуноглобулин описано, например, в EP-A-184187, GB 2188638A и EP-A-239400. Подобные методы можно применять для введения последовательностей константного домена, составляющих антигенсвязывающий сайт для CD137 в молекуле антитела согласно настоящему изобретению, в константный домен, например CH3-домен, другой молекулы антитела с получением таким образом молекулы антитела, содержащей антигенсвязывающий сайт для CD137 в константном домене. В качестве альтернативы, вся последовательность константного домена молекулы антитела может быть заменена последовательностью константного домена молекулы антитела согласно настоящему изобретению с получением молекулы антитела, содержащей антигенсвязывающий сайт для CD137 в константном домене. Подобным образом, фрагмент последовательности константного домена молекулы антитела может быть заменен соответствующим фрагментом последовательности константного домена молекулы антитела согласно настоящему изобретению, содержащим антигенсвязывающий сайт для CD137.

Молекула антитела предпочтительно связывает CD137 человека, более предпочтительно CD137 человека и яванского макака, еще более предпочтительно димерный CD137 человека и яванского макака. Часть CD137, связываемая молекулой антитела, предпочтительно представляет собой внеклеточный домен CD137. Внеклеточный домен CD137 человека и яванского макака может содержать или состоять из последовательности, представленной в SEQ ID NO: 149 и 153 соответственно. Молекула антитела предпочтительно способна связываться с CD137, экспрессируемым на поверхности клетки. Указанная клетка предпочтительно представляет собой иммунную клетку, такую как CD8⁺ или CD4⁺ T-клетка или регуляторная T-клетка (Treg), предпочтительно CD8⁺ T-клетка, или B-клетка, естественная клетка-киллер (NK), естественная Т-клетка-киллер (NKT), дендритная клетка (ДК) или лимфоцит, инфильтрирующий опухоль (TIL).

Как описано в разделе «Уровень техники» выше, лечение пациентов антителом к CD137 урелумабом было связано с дозолимитирующим воспалением печени тяжелой степени. Без желания быть связанными какой-либо теорией полагают, что воспаление печени, наблюдаемое при лечении урелумабом, могло возникать вследствие активации Т-клеток, присутствующих в печени, или инфильтрации и накопления активированных Т-клеток в печени пациентов. Для выбора молекул, демонстрирующих уменьшенное воспаление или отсутствие воспаления печени, авторы настоящего изобретения выбирали Fcab с высокой авидностью в отношении CD137. В частности, авторы настоящего изобретения выбирали Fcab, которые связывались с димерным CD137 с более высокой аффинностью, чем с мономерным CD137. Экспрессия CD137 Т-клетками повышается при примировании и активации. Полагают, что из-за более высокого уровня экспрессии CD137 на активированных Т-клетках CD137 будет иметь форму димеров, тримеров и мультимеров более высокого порядка на поверхности таких клеток. Экспрессия CD137 неактивными Т-клетками, напротив, является низкой или даже недетектируемой. Соответственно, полагают, что CD137, поскольку он в наименьшей степени экспрессируется на поверхности таких Т-клеток, вероятно, имеет форму мономера. Соответственно, полагают, что mAb²кCD137/MSLN, которые связываются с CD137 с высокой авидностью, предпочтительно связываются с активированными Т-клетками, а не с неактивными Т-клетками, такими как неактивные Т-клетки, присутствующие в печени, и, следовательно, демонстрируют уменьшенное воспаление или отсутствие воспаления печени. Это ожидание подтверждали путем определения фармакологических свойств в отношении печени у мышей, получавших лечение mAb² к CD137/MSLN мыши, которое показало, что указанное лечение не приводило к гепатотоксичности (Пример 13).

Молекула антитела предпочтительно связывается с димерным CD137 человека с аффинностью (K_D), равной 60 нМ, 50 нМ, 40 нМ, 30 нМ, 20 нМ, 10 нМ, 5 нМ, 4 нМ, 3 нМ или 2 нМ, или с более высокой аффинностью.

В предпочтительном варианте реализации молекула антитела связывается с димерным CD137 с более высокой аффинностью, чем с мономерным CD137. В предпочтительном варианте реализации молекула антитела связывается с димерным CD137 с аффинностью, которая по меньшей мере в 50 раз, 60 раз, 70 раз, 80 раз, 90 раз, 100 раз, 110 раз, 120 раз, 130 раз, 140 раз, 150 раз, 160 раз, 170 раз или 200 раз выше аффинности указанной молекулы антитела к мономерному CD137.

Мономерный CD137 человека может, например, иметь последовательность, представленную в SEQ ID NO: 149.

Было также показано, что молекулы антител линии FS22-172 связывают димерный CD137 яванского макака. Связывание с CD137 яванского макака, а также с CD137 человека является благоприятным, поскольку оно позволяет тестировать эффективность и токсичность молекулы антитела у яванских макак перед введением людям.

В предпочтительном варианте реализации молекула антитела может связываться с димерным CD137 яванского макака с аффинностью (K_D), равной 250 нМ, 200 нМ, 150 нМ, 140 нМ, 120 нМ, 100 нМ, 90 нМ, 80 нМ, 70 нМ, 60 нМ, 50 нМ, 40 нМ, 30 нМ, 20 нМ, 10 нМ, 5 нМ, 4 нМ, 3 нМ или 2 нМ, или с более высокой аффинностью. Предпочтительно, молекула антитела связывается с CD137 яванского макака с аффинностью (K_D), равной 2 нМ, или с более высокой аффинностью.

Молекула антитела может связываться с димерным CD137 человека и димерным CD137 яванского макака со схожей аффинностью. Полагают, что это позволяет убедиться в том, что исследования эффективности и токсичности, проводимые у яванских макак с применением молекулы антитела, предсказывают эффективность и токсичность молекулы антитела у людей.

Таким образом, в предпочтительном варианте реализации молекула антитела связывается с димерным CD137 яванского макака с аффинностью, которая не более чем в 10 раз, предпочтительно не более чем в 5 раз ниже или выше аффинности, с которой указанная молекула антитела связывает димерный CD137 человека.

Аффинность связывания молекулы антитела в отношении когнатного антигена, такого как CD137 человека или яванского макака, может быть определена посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR), такого как, например, Biacore.

Молекула антитела может быть способна блокировать взаимодействие между CD137 и его лигандом, CD137L, предпочтительно между CD137 человека и CD137L человека. Способность молекулы антитела блокировать связывание CD137L с CD137 может быть определена с применением ELISA.

В дополнение к этому, молекула антитела может содержать CH2-домен молекулы иммуноглобулина G, такой как CH2-домен молекулы IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Предпочтительно, молекула антитела содержит CH2-домен молекулы IgG1. Указанный CH2-домен может иметь последовательность, представленную в SEQ ID NO: 154. Известно, что CH2-домен связывается с Fcγ-рецепторами и комплементом. Связывание CH2-домена с Fcγ-рецепторами необходимо для антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности (АЗКЦ), тогда как связывание с комплементом необходимо для комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ).

CH2-домен молекулы антитела предпочтительно содержит одну или более мутаций, которые уменьшают или устраняют связывание CH2-домена с одним или более Fcγ-рецепторами, такими как FcγRI, FcγRlla, FcγRllb, FcγRIII, и/или с комплементом. Авторы настоящего изобретения допускают, что уменьшение или устранение связывания с Fcγ-рецепторами будет приводить к уменьшению или устранению АЗКЦ, опосредуемой молекулой антитела. Подобным образом, ожидают, что уменьшение или устранение связывания с комплементом будет приводить к уменьшению или устранению КЗЦ, опосредуемой молекулой антитела. Без желания быть связанными какой-либо теорией ожидают, что это уменьшит или позволит избежать воспаления печени при введении молекулы антитела пациенту. В этой области техники известны мутации для уменьшения или устранения связывания CH2-домена с одним или более Fcγ-рецепторами и/или комплементом (Wang et al., 2018). Эти мутации включают «мутацию LALA», описанную в Bruhns et al., 2009 и Hezareh et al., 2001, которая включает замену остатков лейцина в положениях 1.3 и 1.2 CH2-домена на аланин (L1.3A и L1.2A). В качестве альтернативы, также известно, что получение a-гликозильных антител посредством мутации консервативного сайта N-связанного гликозилирования путем осуществления мутации: замены аспарагина (N) в положении 84.4 CH2-домена на аланин, глицин или глутамин (N84.4A, N84.4G или N84.4Q) снижает эффекторную функцию IgG1 (Wang et al., 2018). Также в качестве альтернативы, известно, что активацию комплемента (связывание C1q) и АЗКЦ снижают посредством мутации: замены пролина в положении 114 CH2-домена на аланин или глицин (P114A или P114G) (Idusogie et al., 2000; Klein et al., 2016). Эти мутации можно также комбинировать для получения молекул антител с еще бóльшим снижением или отсутствием активности в виде АЗКЦ или КЗЦ.

Соответственно, молекула антитела может содержать CH2-домен, при этом указанный CH2-домен содержит:

(i) остатки аланина в положениях 1.3 и 1.2; и/или

(ii) аланин или глицин в положении 114; и/или

(iii) аланин, глутамин или глицин в положении 84.4;

при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует схеме нумерации IMGT.

В предпочтительном варианте реализации молекула антитела содержит CH2-домен, при этом указанный CH2-домен содержит:

(i) остаток аланина в положении 1.3; и

(ii) остаток аланина в положении 1.2;

Например, CH2-домен может иметь последовательность, представленную в SEQ ID NO: 155.

В альтернативном предпочтительном варианте реализации молекула антитела содержит CH2-домен, при этом указанный CH2-домен содержит:

(i) остаток аланина в положении 1.3;

(ii) остаток аланина в положении 1.2; и

(iii) аланин в положении 114;

Например, CH2-домен может иметь последовательность, представленную в SEQ ID NO: 156.

В альтернативном предпочтительном варианте реализации молекула антитела содержит тяжелую цепь и/или легкую цепь, предпочтительно тяжелую цепь и легкую цепь антитела:

(x) FS22-172-003-AA/FS28-256-005, представленные в SEQ ID NO 120 и 78 соответственно;

В более предпочтительном варианте реализации молекула антитела содержит тяжелую цепь и/или легкую цепь, предпочтительно тяжелую цепь и легкую цепь: антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271 или FS22-172-003-AA/FS28-024-052, наиболее предпочтительно антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-, при этом указанные последовательности тяжелой и легкой цепи этих антител являются такими, как указано выше.

Молекулы антител согласно настоящему изобретению могут также содержать варианты первой, второй или третьей последовательности, последовательности структурной петли AB, CD или EF, CH3-домена, CH2-домена, CDR, VH-домена, VL-домена, последовательностей легкой цепи и/или тяжелой цепи, описанных в настоящей заявке. Подходящие варианты могут быть получены способами изменения или мутации и скрининга последовательностей. В предпочтительном варианте реализации молекула антитела, содержащая одну или более вариантных последовательностей, сохраняет одну или более функциональных характеристик исходной молекулы антитела, таких как специфичность связывания и/или аффинность связывания в отношении MSLN и CD137. Например, молекула антитела, содержащая одну или более вариантных последовательностей, предпочтительно связывается с MSLN и/или CD137 с такой же аффинностью или более высокой аффинностью по сравнению с (исходной) молекулой антитела. Исходная молекула антитела представляет собой молекулу антитела, которая не содержит замены (замен), делеции (делеций) и/или встраивания (встраиваний) аминокислоты, которые были включены в вариантную молекулу антитела.

Молекула антитела, содержащая CDR 1-6, VH-домен и/или тяжелую цепь антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018 или FS22-172-003-AA/FS28-256, может содержать замену аминокислоты в положении 55 или 57 VH-домена, при этом нумерация аминокислотных остатков соответствует схеме нумерации IMGT.

Например, молекула антитела может содержать CDR 1-6, VH-домен и/или тяжелую цепь антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-027, при этом указанная молекула антитела содержит замену аминокислоты в положении 55 VH-домена и нумерация аминокислотных остатков соответствует схеме нумерации IMGT.

Например, молекула антитела согласно настоящему изобретению может содержать первую, вторую или третью последовательность, последовательность структурной петли AB, CD или EF, CH3-домен, CH2-домен, CDR, VH-домен, VL-домен, последовательность легкой цепи и/или тяжелой цепи, которая обладает по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, по меньшей мере 99,1%, по меньшей мере 99,2%, по меньшей мере 99,3%, по меньшей мере 99,4%, по меньшей мере 99,5%, по меньшей мере 99,6%, по меньшей мере 99,7%, по меньшей мере 99,8% или по меньшей мере 99,9% идентичностью последовательности по отношению к структурной петле, CH3-домену, CH2-домену, CDR, VH-домену, VL-домену, последовательности легкой цепи или тяжелой цепи, описанным в настоящей заявке.

В предпочтительном варианте реализации молекула антитела согласно настоящему изобретению содержит последовательность CH3-домена, обладающую по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, по меньшей мере 99,1%, по меньшей мере 99,2%, по меньшей мере 99,3%, по меньшей мере 99,4%, по меньшей мере 99,5%, по меньшей мере 99,6%, по меньшей мере 99,7%, по меньшей мере 99,8% или по меньшей мере 99,9% идентичностью последовательности по отношению к CH3-домену, описанному в настоящей заявке.

В другом предпочтительном варианте реализации молекула антитела согласно настоящему изобретению включает или содержит последовательность CH2-домена, обладающую по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, по меньшей мере 99,1%, по меньшей мере 99,2%, по меньшей мере 99,3%, по меньшей мере 99,4%, по меньшей мере 99,5%, по меньшей мере 99,6%, по меньшей мере 99,7%, по меньшей мере 99,8% или по меньшей мере 99,9% идентичностью последовательности по отношению к CH2-домену, описанному в настоящей заявке.

Идентичность последовательностей, как правило, определяют в соответствии с алгоритмом GAP (пакет программ Wisconsin GCG, Accelerys Inc, Сан-Диего, США). В GAP используют алгоритм Нидлмана-Вунша для выравнивания двух полных последовательностей с максимальным увеличением количества совпадений и сведением количества гэпов к минимуму. Как правило, используют параметры по умолчанию со штрафом за создание гэпа (gap creation penalty), равным 12, и штрафом за продление гэпа (gap extension penalty), равным 4. Применение GAP может быть предпочтительным, но можно применять и другие алгоритмы, например, BLAST (в котором используют способ Altschul et al., 1990), FASTA (в котором используют способ Пирсона-Липмана, 1988 г.) или алгоритм Смита-Уотермана (Смит и Уотерман, 1981 г.), или программу TBLASTN, Altschul et al., 1990 выше, как правило, с использованием параметров по умолчанию. В частности, можно применять алгоритм psi-Blast (Altschul et al., 1997).

Молекула антитела согласно настоящему изобретению может также содержать первую, вторую или третью последовательность, последовательность структурной петли AB, CD или EF, CH3-домен, CH2-домен, VH-домен, VL-домен, легкую цепь и/или тяжелую цепь, содержащую одно или более изменений аминокислотной последовательности (присоединение, делецию, замену и/или встраивание аминокислотного остатка), предпочтительно 20 изменений или меньше, 15 изменений или меньше, 10 изменений или меньше, 5 изменений или меньше, 4 изменения или меньше, 3 изменения или меньше, 2 изменения или меньше, или 1 изменение относительно первой, второй или третьей последовательности, последовательности структурной петли AB, CD или EF, CH3-домена, CH2-домена, Fcab, CDR, VH-домена, VL-домена, последовательности легкой цепи или тяжелой цепи, описанных в настоящей заявке. В частности, изменения могут быть произведены в одной или более каркасных областях молекулы антитела за пределами последовательностей VH- и VL-доменов и/или в одной или более каркасных областях CH3-домена. Например, изменения могут присутствовать в CH3-домене за пределами последовательностей, описанных в настоящей заявке как первая, вторая и третья последовательности или как последовательности структурных петель AB, CD или EF.

Молекула антитела может содержать CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL и/или CDR3 VL, содержащую одно или более изменений аминокислотной последовательности (присоединение, делецию, замену и/или встраивание аминокислотного остатка), предпочтительно 3 изменения или меньше, 2 изменения или меньше, или 1 изменение относительно CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL и/или CDR3 VL, описанных в настоящей заявке.

В предпочтительном варианте реализации молекула антитела согласно настоящему изобретению может содержать последовательность CH3-домена, содержащую одно или более изменений аминокислотной последовательности (присоединение, делецию, замену и/или встраивание аминокислотного остатка), предпочтительно 20 изменений или меньше, 15 изменений или меньше, 10 изменений или меньше, 5 изменений или меньше, 4 изменения или меньше, 3 изменения или меньше, 2 изменения или меньше, или 1 изменение относительно CH3-домена, описанного в настоящей заявке.

В предпочтительных вариантах реализации, в которых одну или более аминокислот заменяют на другую аминокислоту, указанные замены могут представлять собой консервативные замены, например, в соответствии со следующей таблицей. В некоторых вариантах реализации аминокислоты в одной категории в среднем столбце заменяют друг на друга, т.е., например, неполярную аминокислоту заменяют на другую неполярную аминокислоту. В некоторых вариантах реализации аминокислоты в одной строке в крайнем правом столбце заменяют друг на друга.

АЛИФАТИЧЕСКИЕ	Неполярные	G A P
		I L V
	Полярные - незаряженные	C S T M
		N Q

	Полярные - заряженные	D E
	Полярные - заряженные	K R
АРОМАТИЧЕСКИЕ		H F W Y

В некоторых вариантах реализации замена (замены) может быть функционально консервативной. То есть в некоторых вариантах реализации замена может не влиять (или может по существу не влиять) на одно или более функциональных свойств (например, аффинность связывания) молекулы антитела, содержащей указанную замену, относительно эквивалентной молекулы антитела, не содержащей замены.

Молекула антитела согласно настоящему изобретению предпочтительно индуцирует повышенную активацию Т-клеток, когда указанная молекула антитела перекрестно связана, например, через связывание с MSLN, по сравнению с тем, когда молекула антитела не является перекрестно связанной.

Способность молекулы антитела активировать Т-клетки может быть измерена с использованием анализа активации Т-клеток. После активации Т-клетки высвобождают IL-2. Соответственно, с помощью анализа активации Т-клеток можно измерять высвобождение IL-2 с определением уровня активации Т-клеток, индуцированной молекулой антитела, или молекулу антитела.

Например, способность молекулы антитела активировать Т-клетки может быть определена путем измерения концентрации молекулы антитела, необходимой для достижения полумаксимального высвобождения IL-2 Т-клетками в анализе активации Т-клеток, когда указанная молекула антитела перекрестно связана. Ниже ее обозначают ЕС₅₀ молекулы антитела. Более низкая EC₅₀ указывает на то, что для достижения полумаксимального высвобождения IL-2 Т-клетками в анализе активации Т-клеток необходима более низкая концентрация молекулы антитела и, таким образом, на то, что указанная молекула антитела демонстрирует более высокую активность в отношении активации Т-клеток. Молекула антитела может быть перекрестно связана, например, с применением антитела к CH2.

В предпочтительном варианте реализации молекула антитела демонстрирует ЕС₅₀ в анализе активации Т-клеток, которая находится в пределах 10-кратного, 5-кратного, 4-кратного, 3-кратного или 2-кратного значения ЕС₅₀ FS22-172-003-AA/FS28-256-271 или FS22-172-003-AA/FS28-024-052 в этом же анализе.

В альтернативном предпочтительном варианте реализации молекула антитела демонстрирует ЕС₅₀ в анализе активации Т-клеток, которая находится в пределах 10-кратного, 5-кратного, 4-кратного, 3-кратного или 2-кратного значения EC₅₀ FS22-172-003-AA/FS28-256-271 или FS22-172-003-AA/FS28-024-052 в этом же анализе.

Например, молекула антитела может демонстрировать ЕС₅₀ в анализе активации Т-клеток, составляющую 5 нМ или меньше, 4 нМ или меньше, 3 нМ или меньше, 2 нМ или меньше, 1 нМ или меньше, или 0,5 нМ или меньше.

В дополнение к этому или в качестве альтернативы, способность молекулы антитела активировать Т-клетки может быть определена путем измерения максимальной концентрации IL-2, высвобождаемого Т-клетками в анализе активации Т-клеток в присутствии указанной молекулы антитела, при этом указанная молекула антитела перекрестно связана.

В предпочтительном варианте реализации максимальная концентрация IL-2, высвобождаемого Т-клетками в анализе активации Т-клеток в присутствии молекулы антитела при наличии перекрестного связывания, находится в пределах 3-кратного, 2-кратного или 1,5-кратного значения максимальной концентрации IL-2, высвобождаемого Т-клетками в присутствии FS22-172-003-AA/FS28-256-271 или FS22-172-003-AA/FS28-024-052 в этом же анализе.

Анализ активации Т-клеток может представлять собой анализ Т-клеток, описанный в настоящей заявке, такой как анализ CD8⁺ T-клеток, описанный в Примерах в настоящей заявке, см., например, Пример 8.

Например, анализ активации Т-клеток может представлять собой анализ высвобождения IL-2 на основе CD8⁺ Т-клеток, выделенных из мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) человека. Например, анализ активации Т-клеток может включать выделение МКПК человека из лейкоцитарных фильтров. Способы выделения МКПК известны в этой области техники и описаны в примерах в настоящей заявке. Затем из МКПК могут быть выделены CD8⁺ Т-клетки. Способы выделения CD8⁺ Т-клеток из МКПК известны в этой области техники и описаны в примерах в настоящей заявке.

Затем CD8⁺ Т-клетки добавляют в многолуночные планшеты, покрытые антителом к CD3 человека. Готовят подходящее разведение каждой тестируемой молекулы антитела и добавляют в лунки. Затем Т-клетки инкубируют при 37°C, 5% CO₂ в течение 24 часов совместно с тестируемым антителом. Надосадочные жидкости собирают и анализируют с определением концентрации IL-2 в надосадочной жидкости. Способы определения концентрации IL-2 в растворе известны в этой области техники и описаны в примерах в настоящей заявке. Строят график зависимости концентрации IL-2 человека от логарифма концентрации молекулы антитела. Полученные кривые приводят в соответствие с использованием уравнения зависимости логарифма (агонист) и ответа.

Молекула антитела может быть конъюгирована с биоактивной молекулой или детектируемой меткой. В этом случае молекула антитела может называться «конъюгатом». Такие конъюгаты находят применение в лечении и/или диагностике заболеваний, описанных в настоящей заявке.

Например, биоактивная молекула может представлять собой модулятор иммунной системы, такой как цитокин, предпочтительно цитокин человека. Например, указанный цитокин может представлять собой цитокин, который стимулирует активацию и/или пролиферацию Т-клеток. Примеры цитокинов для конъюгации с молекулой антитела включают IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IL-21, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF) и IFN-гамма.

В качестве альтернативы, биоактивная молекула может представлять собой лигандную ловушку, такую как лигандная ловушка цитокина, например, TGF-бета или IL-6.

В качестве дополнительной альтернативы, биоактивная молекула может представлять собой лиганд, такой как CD137L, OX40L, TRAIL, CD40L, CD27L или GITRL.

В качестве дополнительной альтернативы, биоактивная молекула может представлять собой лекарственное средство, такое как ингибитор полимеризации тубулина (например, ауристатин), агент деполимеризации тубулина (например, майтансин), агент, индуцирующий разрыв цепи ДНК (например, калихеамицин), ДНК-алкилирующий агент (например, дуокармицин) или ингибитор РНК-полимеразы (такой как альфа-аманитин).

Подходящие детектируемые метки, которые могут быть конъюгированы с молекулами антител, известны в этой области техники и включают радиоизотопы, такие как йод-125, йод-131, иттрий-90, индий-111 и технеций-99; флуорохромы, такие как флуоресцеин, родамин, фикоэритрин, техасский красный и производные цианиновых красителей, например Cy7 и Alexa750; хромогенные красители, такие как диаминобензидин; латексные гранулы; ферментные метки, такие как пероксидаза хрена; люминофорные или лазерные красители со спектрально выделенными характеристиками поглощения или эмиссии; и химические вещества, такие как биотин, которые можно детектировать через связывание с специфичным когнатным детектируемым фрагментом, например меченым авидином.

Молекула антитела может быть конъюгирована с биоактивной молекулой или детектируемой меткой посредством любой подходящей ковалентной или нековалентной связи, такой как дисульфидная или пептидная связь. В случае, когда биоактивная молекула представляет собой цитокин, указанный цитокин может быть присоединен к молекуле антитела посредством пептидного линкера. Подходящие пептидные линкеры известны в этой области техники и их длина может составлять от 5 до 25, от 5 до 20, от 5 до 15, от 10 до 25, от 10 до 20 или от 10 до 15 аминокислот.

В некоторых вариантах реализации биоактивная молекула может быть конъюгирована с молекулой антитела посредством расщепляемого линкера. Указанный линкер может обеспечивать освобождение биоактивной молекулы от молекулы антитела в участке, где происходит терапия. Линкеры могут включать амидные связи (например, пептидные линкеры), дисульфидные связи или гидразоны. Пептидные линкеры, например, могут расщепляться под действием сайт-специфичных протеаз, дисульфидные связи могут расщепляться под воздействием восстановительной среды цитозоля, и гидразоны могут расщепляться в результате кислотного гидролиза.

Конъюгат может представлять собой слитый белок, содержащий молекулу антитела и биоактивную молекулу. В этом случае биоактивная молекула может быть конъюгирована с молекулой антитела посредством пептидного линкера или пептидной связи. В случае, когда молекула антитела представляет собой многоцепочечную молекулу, например, когда молекула антитела представляет собой или содержит Fcab, или представляет собой mAb², биоактивная молекула может быть конъюгирована с одной или более цепями молекулы антитела. Например, биоактивная молекула может быть конъюгирована с одной или обеими тяжелыми цепями молекулы mAb². Преимуществом слитых белков является то, что их легче получать и очищать, что облегчает получение вещества для клинического применения.

Согласно настоящему изобретению также предложена выделенная молекула или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие молекулу антитела согласно настоящему изобретению. Специалисту не составит труда получить такие молекулы нуклеиновой кислоты с применением способов, хорошо известных в этой области техники.

В альтернативном предпочтительном варианте реализации молекула (молекулы) нуклеиновой кислоты кодирует (кодируют) тяжелую цепь и/или легкую цепь, предпочтительно тяжелую цепь и легкую цепь: антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018, FS22-172-003-AA/FS28-256, FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-053 или FS22-172-003-AA/FS28-024, предпочтительно антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271 или FS22-172-003-AA/FS28-024-052, наиболее предпочтительно антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271.

Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018, FS22-172-003-AA/FS28-256, FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-053 и FS22-172-003-AA/FS28-024, представлена в SEQ ID NO: 4, 103, 126, 126, 134, 126, 134, 126, 121, 121, 130, 134, 115, 99, 107 и 95 соответственно.

Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь антитела FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-012, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-024, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027, FS22-172-003-AA/FS28-256-001, FS22-172-003-AA/FS28-256-005, FS22-172-003-AA/FS28-256-014, FS22-172-003-AA/FS28-256-018, FS22-172-003-AA/FS28-256, FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-053 и FS22-172-003-AA/FS28-024, представлена в SEQ ID NO: 91, 86, 122, 117, 122, 90, 90, 91, 122, 90, 117, 117, 117, 86, 86 и 86 соответственно.

В случае, когда нуклеиновая кислота кодирует тяжелую и легкую цепи молекулы антитела согласно настоящему изобретению, указанные два домена или цепи могут кодироваться двумя отдельными молекулами нуклеиновой кислоты.

Для экспрессии молекулы антитела согласно настоящему изобретению можно применять выделенную молекулу нуклеиновой кислоты. Нуклеиновая кислота, как правило, представлена в форме рекомбинантного вектора для экспрессии. Соответственно, согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, описанную выше. Могут быть выбраны или сконструированы подходящие векторы, содержащие соответствующие регуляторные последовательности, включая промоторные последовательности, терминаторные фрагменты, последовательности полиаденилирования, энхансерные последовательности, маркерные гены и другие последовательности при необходимости. Предпочтительно, вектор содержит соответствующие регуляторные последовательности для управления экспрессией нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине. Векторы могут представлять собой плазмиды, вирусные векторы, например, фаг или фагмиду при необходимости.

Молекула нуклеиновой кислоты или вектор, описанный в настоящей заявке, может быть введен в клетку-хозяина. Способы введения нуклеиновой кислоты или векторов в клетки-хозяева хорошо известны в этой области техники и можно применять любой подходящий способ. В этой области техники известен ряд клеток-хозяев, подходящих для получения рекомбинантных молекул антител, и он включает клетки-хозяева бактерий, дрожжей, насекомых или млекопитающих. Предпочтительная клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего, такую как клетка CHO, NS0 или HEK, например, клетка HEK293.

В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложен способ получения молекулы антитела согласно настоящему изобретению, включающий экспрессию нуклеиновой кислоты, кодирующей указанную молекулу антитела, в клетке-хозяине и необязательно выделение и/или очистку молекулы антитела, полученной таким образом. Способы культивирования клеток-хозяев хорошо известны в этой области техники. Указанный способ может дополнительно включать выделение и/или очистку молекулы антитела. Способы очистки рекомбинантных молекул антител хорошо известны в этой области техники и включают, например, ВЭЖХ, жидкостную хроматографию быстрого разрешения (FPLC) или аффинную хроматографию, например, с использованием белка A или белка L. В некоторых вариантах реализации очистку можно осуществлять с использованием аффинной метки на молекуле антитела. Способ может также включать введение молекулы антитела в состав фармацевтической композиции, необязательно совместно с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом или другим веществом, описанным ниже.

Как описано выше, MSLN экспрессируется на поверхности клеток опухоли, и высокие уровни экспрессии растворимого MSLN коррелировали с неблагоприятным прогнозом в случае некоторых раковых опухолей. Антитела к MSLN исследовали в качестве противораковых лекарственных средств. Эти антитела к MSLN либо индуцируют непосредственное уничтожение клеток за счет своей активности в виде АЗКЦ, либо их применяют в форме ADC.

Соответственно, ожидают, что молекулы антител, описанные в настоящей заявке, найдут применение в лечении рака. Соответственно, согласно родственным аспектам настоящего изобретения предложены:

(i) молекула антитела, описанная в настоящей заявке, для применения в способе лечения рака у индивидуума,

(ii) применение молекулы антитела, описанной в настоящей заявке, в изготовлении лекарственного средства для применения в лечении рака у индивидуума; и

(iv) способ лечения рака у индивидуума, при этом указанный способ включает введение указанному индивидууму терапевтически эффективного количества молекулы антитела, описанной в настоящей заявке.

Индивидуум может представлять собой пациента, предпочтительно пациента-человека.

Было показано, что молекулы антител согласно настоящему изобретению предпочтительно связываются с MSLN, присутствующим на поверхности раковой клетки, в сравнении с растворимым MSLN. Соответственно, рак, который лечат с применением молекулы антитела согласно настоящему изобретению, предпочтительно экспрессирует или, как определено, экспрессирует MSLN. Более предпочтительно, клетки рака, который лечат, содержат или, как определено, содержат MSLN на своей клеточной поверхности, т.е. содержат MSLN, связанный с клеточной поверхностью.

Рак предпочтительно содержит или, как определено, содержит лимфоциты, инфильтрирующие опухоль (TIL), которые экспрессируют CD137. В частности, указанные TIL предпочтительно содержат или, как определено, содержат CD137 на своей клеточной поверхности.

Способы определения присутствия антигена на клеточной поверхности известны в этой области техники и включают, например, проточную цитометрию.

Рак может представлять собой первичный или вторичный рак. Таким образом, молекулу антитела, описанную в настоящей заявке, можно применять в способе лечения рака у индивидуума, при этом указанный рак представляет собой первичную опухоль и/или метастаз опухоли.

Рак, который лечат с применением молекулы антитела согласно настоящему изобретению, может представлять собой солидный рак.

Рак может быть выбран из группы, состоящей из: мезотелиомы, рака поджелудочной железы, рака яичников, рака легкого (такого как мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточный рак легкого), рака пищевода, рака молочной железы, рака желудка, холангиокарциномы, рака толстой кишки, карциномы вилочковой железы, рака эндометрия, рака головы и шеи, саркомы (такой как двухфазная синовиальная саркома, саркома Капоши, остеогенная саркома, рабдомиосаркома или саркома мягких тканей), десмопластических мелкокруглоклеточных опухолей, лейкоза (такого как острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, острый гранулоцитарный лейкоз, хронический гранулоцитарный лейкоз, волосатоклеточный лейкоз или миелоидный лейкоз), рака коры надпочечников, рака мочевого пузыря, рака головного мозга, рака шейки матки, гиперплазии шейки матки, хориокарциномы яичка, эссенциального тромбоцитоза, урогенитальной карциномы, глиомы, глиобластомы, лимфомы (такой как болезнь Ходжкина или неходжкинская лимфома), злокачественной карциноидной опухоли, злокачественной гиперкальциемии, меланомы (также называемой злокачественной меланомой), злокачественной инсулиномы поджелудочной железы, медуллярной карциномы щитовидной железы, множественной миеломы, фунгоидного микоза, нейробластомы, истинной полицитемии, первичной карциномы головного мозга, первичной макроглобулинемии, рака предстательной железы, почечно-клеточного рака, рака кожи, плоскоклеточного рака, рака желудка, рака яичка, рака щитовидной железы и опухоли Вильмса.

Предпочтительно, рак выбран из группы, состоящей из: мезотелиомы, рака поджелудочной железы, рака яичников, рака легкого, рака пищевода, рака молочной железы, рака желудка, холангиокарциномы, рака толстой кишки, карциномы вилочковой железы, рака эндометрия, рака головы и шеи, двухфазных синовиальных сарком и десмопластических мелкокруглоклеточных опухолей.

Более предпочтительно, рак выбран из группы, состоящей из: мезотелиомы, рака поджелудочной железы, рака яичников и рака легкого.

Рак характеризуется аномальной пролиферацией злокачественных раковых клеток. При упоминании конкретного вида рака, такого как рак молочной железы, этот термин относится к аномальной пролиферации злокачественных клеток соответствующей ткани, такой как ткань молочной железы. Вторичная раковая опухоль, локализованная в молочной железе, но возникшая в результате аномальной пролиферации злокачественных клеток другой ткани, такой как ткань яичников, не является раком молочной железы, упомянутым в настоящем описании, а представляет собой рак яичников.

В случае рака лечение может включать подавление роста раковой опухоли, включая полную ремиссию по раку, и/или подавление метастазирования рака, а также предотвращение рецидива рака. Рост раковой опухоли, в целом, относится к любому из ряда показателей, которые указывают на переход раковой опухоли в более развитую форму. Таким образом, показатели для измерения подавления роста раковой опухоли включают уменьшение выживания раковых клеток, уменьшение объема или морфологии опухоли (например, определяемое с применением компьютерной томографии (КТ), ультразвуковой эхографии или другого метода визуализации), замедление роста опухоли, разрушение сосудистой сети опухоли, улучшение результатов кожного теста на гиперчувствительность замедленного типа, повышение активности противораковых иммунных клеток или других противораковых иммунных ответов и снижение уровней опухолеспецифических антигенов. Активация или усиление иммунных ответов на раковые опухоли у индивидуума может повышать способность указанного индивидуума противостоять росту раковой опухоли, в частности, росту раковой опухоли, уже имеющейся у субъекта, и/или снижать предрасположенность к росту раковой опухоли у указанного индивидуума.

Хотя молекулу антитела можно вводить отдельно, молекулы антител, как правило, вводят в форме фармацевтической композиции, которая может содержать по меньшей мере один компонент в дополнение к указанной молекуле антитела. Соответственно, согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая молекулу антитела, описанную в настоящей заявке. Также предложен способ, включающий введение молекулы антитела в состав фармацевтической композиции.

Фармацевтические композиции в дополнение к молекуле антитела могут содержать фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, носитель, буфер, стабилизатор или другие вещества, хорошо известные специалисту в этой области техники. В настоящем описании термин «фармацевтически приемлемый» относится к соединениям, веществам, композициям и/или лекарственным формам, которые с медицинской точки зрения подходят для применения в контакте с тканями субъекта (например, человека), не вызывая при этом чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, при разумном соотношении польза/риск. Каждый носитель, вспомогательное вещество и т.д. должен быть также «приемлемым» в смысле совместимости с другими ингредиентами состава. Точная природа носителя или другого вещества будет зависеть от пути введения, который может представлять собой путь введения посредством инфузии, инъекции или другой подходящий путь, рассмотренный ниже.

Для парентерального, например подкожного или внутривенного введения, например путем инъекции, фармацевтическая композиция, содержащая молекулу антитела, может иметь форму парентерально приемлемого водного раствора, который не содержит пирогенных веществ и имеет подходящий рН, изотоничность и стабильность. Специалист в этой области техники может приготовить подходящие растворы с применением, например, изотонических носителей, таких как хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, лактатный раствор Рингера для инъекций. При необходимости можно использовать консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки, включая буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид; бензетония хлорид; фенол; бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3’-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннитол, трегалоза или сорбитол; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как ТВИН™, ПЛЮРОНИК™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ).

В некоторых вариантах реализации молекулы антител могут быть представлены в лиофилизированной форме для восстановления перед введением. Например, лиофилизированные молекулы антител могут быть восстановлены в стерильной воде и смешаны с физиологическим раствором перед введением индивидууму.

Введение можно осуществлять в «терапевтически эффективном количестве», которого достаточно для оказания индивидууму полезного эффекта. Фактическое вводимое количество и частота, и период действия введения будут зависеть от природы и тяжести того, что лечат, конкретного индивидуума, которого лечат, клинического состояния индивидуума, причины нарушения, места доставки композиции, типа молекулы антитела, способа введения, графика введения и других факторов, известных врачам. Назначение лечения, например, решения относительно дозы и т.д., находится в рамках ответственности врачей общей практики и других врачей, и может зависеть от тяжести симптомов и/или прогрессирования заболевания, которое лечат. Подходящие дозы молекул антител хорошо известны в это области техники (Ledermann et al., 1991; Bagshawe et al., 1991). Можно использовать конкретные дозы, которые как указано в настоящем описании или в Physician's Desk Reference (2003), подходят для вводимой молекулы антитела. Терапевтически эффективное количество или подходящая доза молекулы антитела может быть определена путем сравнения активности in vitro и активности in vivo в модели у животных. Известны методы экстраполяции эффективных доз у мышей и других тестируемых животных на людей. Точная доза будет зависеть от ряда факторов, включая размер и расположение области, подлежащей лечению, и точную природу молекулы антитела.

Типичная доза антитела находится в диапазоне от 100 мкг до 1 г для системного применения и от 1 мкг до 1 мг для топического применения. Может быть введена начальная более высокая загрузочная доза с последующим введением одной или больше более низких доз. Это доза для однократного лечения взрослого индивидуума, которую можно пропорционально корректировать для детей и младенцев, а также корректировать в случае других форматов антител пропорционально молекулярной массе.

Лечение можно повторять ежедневно, два раза в неделю, раз в неделю или раз в месяц на усмотрение врача. Схема лечения для индивидуума может зависеть от фармакокинетических и фармакодинамических свойств композиции антител, пути введения и природы состояния, которое лечат.

Лечение может быть периодическим, и период между введениями может составлять приблизительно две недели или больше, например, приблизительно три недели или больше, приблизительно четыре недели или больше, приблизительно один раз в месяц или больше, приблизительно пять недель или больше, или приблизительно шесть недель или больше. Например, лечение можно осуществлять каждые две-четыре недели или каждые четыре-восемь недель. Подходящие составы и пути введения описаны выше.

В случае лечения рака молекулу антитела, описанную в настоящей заявке, можно вводить индивидууму в комбинации с другой противораковой терапией или терапевтическим агентом, таким как противораковая терапия или терапевтический агент, который, как было продемонстрировано, подходит или, как ожидают, будет подходить для лечения рассматриваемого рака. Например, молекулу антитела можно вводить индивидууму в комбинации с химиотерапевтическим агентом, радиотерапией, иммунотерапевтическим агентом, противоопухолевой вакциной, онколитическим вирусом, терапией с применением адоптивного переноса клеток (ACT) (такой как адоптивная терапия NK-клетками или терапия Т-клетками с химерными антигенными рецепторами (CAR), аутологичными лимфоцитами, инфильтрирующими опухоль (TIL), или гамма/дельта-Т-клетками, или агентом для гормональной терапии.

Без желания быть связанными какой-либо теорией, полагают, что молекула антитела, описанная в настоящей заявке, при этом указанная молекула антитела содержит второй антигенсвязывающий сайт для антигена иммунных клеток, такого как рецептор TNFRSF, может выступать в качестве адъюванта в противораковой терапии. В частности, полагают, что введение молекулы антитела индивидууму в комбинации с химиотерапией и/или радиотерапией, или в комбинации с противоопухолевой вакциной, например, будет запускать более сильный иммунный ответ на рак, чем достигаемый в случае одной химиотерапии и/или радиотерапии, или в случае одной противоопухолевой вакцины.

Один или более химиотерапевтических агентов для введения в комбинации с молекулой антитела, описанной в настоящей заявке, могут быть выбраны из группы, состоящей из: таксанов, цитотоксических антибиотиков, ингибиторов тирозинкиназы, ингибиторов PARP, ингибиторов фермента B-Raf, ингибиторов MEK, ингибиторов c-MET, ингибиторов VEGFR, ингибиторов PDGFR, алкилирующих агентов, аналогов платины, аналогов нуклеозидов, антифолатов, производных талидомида, противоопухолевых химиотерапевтических агентов и других агентов. Таксаны включают доцетаксел, паклитаксел и наб-паклитаксел; цитотоксические антибиотики включают актиномицин, блеомицин и антрациклины, такие как доксорубицин, митоксантрон и валрубицин; ингибиторы тирозинкиназы включают эрлотиниб, гефитиниб, акситиниб, PLX3397, иматиниб, кобемитиниб и траметиниб; ингибиторы PARP включают пирапариб (piraparib); ингибиторы фермента B-Raf включают вемурафениб и дабрафениб; алкилирующие агенты включают дакарбазин, циклофосфамид и темозоломид; аналоги платины включают карбоплатин, цисплатин и оксалиплатин; аналоги нуклеозидов включают азацитидин, капецитабин, флударабин, фторурацил и гемцитабин; антифолаты включают метотрексат и пеметрексед. Другие химиотерапевтические агенты, подходящие для применения согласно настоящему изобретению, включают дефактиниб, энтиностат, эрибулин, иринотекан и винбластин.

Предпочтительные терапевтические агенты для введения совместно с молекулой антитела, описанной в настоящей заявке, представляют собой пентостатин, циклофосфамид, цисплатин, пеметрексед, паклитаксел, карбоплатин, гемцитабин, доксорубицин, винорелбин, доцетаксел или этопозид.

Радиотерапия для применения в комбинации с молекулой антитела, описанной в настоящей заявке, может представлять собой дистанционную радиотерапию (такую как радиотерапия с модулированной интенсивностью (IMRT), стереотаксическая радиотерапия тела (SBRT), радиотерапия под визуальным контролем (IGRT), интраоперационная радиотерапия (IORT), электронная терапия или электронно-лучевая терапия (EBT), поверхностная радиотерапия (SRT)) или внутреннюю радиотерапию (такую как брахитерапия, радиоизотопная или радионуклидная терапия, селективная внутренняя радиотерапия (SIRT)). Предпочтительно, радиотерапия представляет собой традиционную дистанционную радиотерапию, дистанционную радиационную терапию (EBRT), стереотаксическую радиотерапию или брахитерапию.

Иммунотерапевтический агент для введения в комбинации с молекулой антитела, описанной в настоящей заявке, может представлять собой терапевтическую молекулу антитела, нуклеиновую кислоту, цитокин или терапию на основе цитокинов. Например, терапевтическая молекула антитела может связываться с иммунорегуляторной молекулой, например, молекулой-ингибитором контрольных точек или иммуно-костимулирующей молекулой, рецептором врожденной иммунной системы или опухолевым антигеном, например, опухолевым антигеном клеточной поверхности или растворимым опухолевым антигеном. Примеры иммунорегуляторных молекул, с которыми может связываться терапевтическая молекула антитела, включают молекулы-ингибиторы контрольных точек, такие как CTLA-4, LAG-3, TIGIT, TIM-3, VISTA, PD-L1, PD-1 или KIR, иммуно-костимулирующие молекулы, такие как OX40, CD40, GITR, CD27 или ICOS, другие иммунорегуляторные молекулы, такие как CD47, CD73, CSF-1R, HVEM, TGFB или CSF-1. Примеры рецепторов врожденной иммунной системы, с которыми может связываться терапевтическая молекула антитела, включают TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR7, TLR9, RIG-I-подобные рецепторы (например, RIG-I и MDA-5) и STING.

Нуклеиновая кислота для введения в комбинации с молекулой антитела, описанной в настоящей заявке, может представлять собой малую интерферирующую РНК (ми-РНК).

Цитокины или терапия на основе цитокинов может быть выбрана из группы, состоящей из: IL-2, пролекарства конъюгированного IL-2, GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-9, IL-15, IL-18, IL-21 и интерферона I типа.

Противоопухолевые вакцины для лечения рака как введены для клинического применения, так и подробно рассмотрены в научной литературе (например, Rosenberg, S. 2000). В основном включены стратегии, побуждающие иммунную систему отвечать на различные клеточные маркеры, экспрессируемые аутологичными или аллогенными раковыми клетками, путем применения этих клеток в качестве способа вакцинации, как совместно с гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором (GM-CSF), так и без него. GM-CSF вызывает сильный ответ при представлении антигена и особенно хорошо действует при применении совместно с указанными стратегиями.

Химиотерапевтический агент, радиотерапия, иммунотерапевтический агент, противоопухолевая вакцина, онколитический вирус, ACT-терапия или агент для гормональной терапии предпочтительно представляют собой химиотерапевтический агент, радиотерапию, иммунотерапевтический агент, противоопухолевую вакцину, онколитический вирус, ACT-терапию или агент для гормональной терапии для рассматриваемого рака, т.е. химиотерапевтический агент, радиотерапию, иммунотерапевтический агент, противоопухолевую вакцину, онколитический вирус, ACT-терапию или агент для гормональной терапии, которые, как было показано, являются эффективными в лечении рассматриваемого рака. Специалист может выбрать подходящий химиотерапевтический агент, радиотерапию, иммунотерапевтический агент, противоопухолевую вакцину, онколитический вирус, ACT-терапию или агент для гормональной терапии, который, как было показано, эффективен в случае рассматриваемого рака.

Другие аспекты и варианты реализации настоящего изобретения будут понятны специалисту в этой области техники в свете настоящего описания, включая следующие примеры экспериментов.

Полное содержание всех документов, упомянутых в настоящем описании, включено в настоящее описание посредством ссылки.

В настоящем описании «и/или» следует рассматривать как конкретное описание каждого из двух указанных признаков или компонентов вместе с другим или без него. Например, «А и/или В» следует рассматривать как конкретное описание каждого из: (i) A, (ii) B и (iii) A и B так, как если бы каждый был указан отдельно в настоящем описании.

Если в контексте не указано иное, описания и определения признаков, приведенные выше, не ограничиваются каким-либо конкретным аспектом или вариантом реализации настоящего изобретения и в равной степени применимы ко всем описанным аспектам и вариантам реализации.

Другие аспекты и варианты реализации настоящего изобретения предусматривают аспекты и варианты реализации, описанные выше, с заменой термина «содержащий (включающий)» на термин «состоящий из» или «по существу состоящий из», если в контексте не указано иное.

Некоторые аспекты и варианты реализации настоящего изобретения далее будут проиллюстрированы в качестве примера и со ссылкой на фигуры, описанные выше.

Примеры

Пример 1: отбор и определение характеристик антигенов

В способах отбора и скрининга, применяемых для идентификации mAb², которые способны связывать MSLN и CD137 и обеспечивать агонизм в отношении CD137, было необходимым применение различных антигенов MSLN и CD137. Получение этих антигенов более подробно описано ниже.

1.1 Рекомбинантные антигены CD137

Члены суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF), такие как CD137, известны своей склонностью образовывать мультимеры, которые кластеризуются друг с другом при связывании с когнатными лигандами (Croft, M. 2003). Эта склонность к агрегации для функциональности затрудняет получение растворимых рекомбинантных белков, которые не агрегируются в растворе, для применения в отборе in vitro, таком как фаговый и дрожжевой дисплей, и для определения характеристик отобранных белков.

Поскольку считали, что большинство коммерчески доступных антигенов являются неподходящими, самостоятельно получали следующие рекомбинантные димерные и мономерные антигены CD137 (см. Таблицу 1) для применения в отборе:

Таблица 1: антигены CD137

Тип	Обозначение	Вид	Растворимый или клеточный	Биотинилированный	Формат антигена
Рекомбинантный	mCD137-mFc-Avi	Мышь	Растворимый	Да	Димер
Рекомбинантный	mCD137-Avi-His	Мышь	Растворимый	Да	Мономер
Рекомбинантный	hCD137-mFc-Avi	Человек	Растворимый	Да	Димер
Рекомбинантный	hCD137-Avi-His	Человек	Растворимый	Да	Мономер
Рекомбинантный	cCD137-mFc-Avi	Яванский макак	Растворимый	Да	Димер

Мономерные антигены получали путем клонирования ДНК, кодирующей внеклеточный домен CD137 человека (показанный в SEQ ID NO: 149) или мыши (показанный в SEQ ID NO: 150) наряду с последовательностью Avi-метки и шестью С-концевыми остатками гистидина, в модифицированные векторы pFUSE (InvivoGen, pfuse-mIgG2A-Fc2) с использованием рестрикционных ферментов EcoRI-HF и BamHI-HF. Указанные векторы трансфицировали в клетки HEK293-6E (Национальный исследовательский совет Канады), и экспрессированный CD137 очищали с использованием колонки с никелем HisTrap™ excel (GE Healthcare Life Sciences 29048586) и эксклюзионной хроматографии (SEC), чтобы убедиться, что антиген был одного вида и не содержал агрегатов.

Для получения димерных антигенов ДНК-конструкции, кодирующие внеклеточный домен CD137 человека, мыши или яванского макака, слитый с Fc-доменом mIgG2a, наряду с последовательностью Avi-метки, клонировали в модифицированные векторы pFUSE и трансфицировали в клетки HEK293-6E. Рекомбинантный CD137 очищали с использованием колонки с белком А MabSelect SuRe™ (GE Healthcare Life Sciences, 11003494) и эксклюзионной хроматографии (SEC), чтобы убедиться, что антиген был одного вида и не содержал агрегатов.

Каждый из димерных и мономерных антигенов биотинилировали с использованием набора BirA biotin-protein ligase reaction kit (Avidity LLC, BirA500) с получением мономерных антигенов CD137, меченых одной молекулой биотина, и димерных антигенов CD137, меченых двумя молекулами биотина по одной на каждый из двух мономеров. 3 мг антигена смешивали с 7,8 мкл смеси фермента BirA до молярного соотношения фермента и субстрата, составляющего 1:50. Затем добавляли дополнительные компоненты в соответствии с рекомендациями производителя (142 мкл Biomix A, 142 мкл Biomix B, 142 мкл биотина) и реакционную смесь инкубировали в течение двух часов при комнатной температуре. Для сохранения целостности биотинилированного белка буфер реакционной смеси сразу же заменяли фосфатным буферным раствором Дульбекко (Д-ФБР) (ThermoFisher Scientific 14190-169) с использованием 30 мкм фильтров Amicon (Merck, UFC503096).

Затем белки очищали путем SEC с удалением фермента BirA и получением конечного монодисперсного белкового препарата высокого качества, не содержащего агрегатов с высокой молекулярной массой. Анализировали стабильность и чистоту веществ путем эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (SE-ВЭЖХ), электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS) (SDS-ПААГ) и эксклюзионной хроматографии с многоугловым светорассеянием (SEC-MALS). Полное биотинилирование белков подтверждали в геле SDS-ПААГ со стрептавидиновым сдвигом. Подтверждали, что рекомбинантные антигены человека и мыши связывали антитела к CD137 положительного контроля (20H4.9 (патент США №7288638)) и Lob12.3 (Саутгемптонский университет) соответственно) in vitro посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR) и клетки DO11.10, экспрессирующие лиганд CD137 человека и мыши, посредством проточной цитометрии. Клетки инкубировали совместно с антигенами CD137 в течение 1 часа, а затем использовали флуоресцентно-меченое антитело к Fc-фрагменту мыши для детектирования связывания клеток. Для обеспечения максимально высокой чистоты веществ, используемых в протоколах отбора, тщательно определяли характеристики белков антигенов, чтобы убедиться, что присутствие агрегатов белка не превышало 2%.

1.2 Антигены CD137, экспрессируемые клетками

Получали клетки DO11.10 (National Jewish Health), экспрессирующие полноразмерный CD137 мыши (SEQ ID NO: 374) или человека (SEQ ID NO: 373), обозначаемые «DO11.10.mCD137» и «DO11.10.hCD137» соответственно, для представления антигена в мембраносвязанной конформации, наиболее схожей с его природной формой, для отбора и дальнейшего определения характеристик выбранных Fcab, перечисленных в Таблице 2.

Для получения этих клеток DO11.10, сверхэкспрессирующих рецепторы CD137 человека или мыши, применяли лентивирусную трансдукцию с использованием системы Lenti-X HTX Packaging System (Clontech, номер по каталогу 631249). Вектор экспрессии Lenti-X (pLVX) (Clontech, номер по каталогу 631253), содержащий кДНК CD137 человека или кДНК CD137 мыши, котрансфицировали с использованием Lenti-X HTX Packaging Mix в линию клеток Lenti-X 293T (Clontech, номер по каталогу 632180) с получением вируса. Затем трансдуцировали линию клеток DO11.10 этими лентивирусными векторами.

Экспрессию CD137 человека или CD137 мыши на этих клетках подтверждали по связыванию антител к CD137 положительного контроля, 20H4.9 и Lob12.3 соответственно, с клетками, определяемому путем проточной цитометрии. Клетки инкубировали совместно с антителами человека или мыши положительного контроля в течение 1 часа, а затем использовали флуоресцентно-меченое детекторное антитело к Fc человека (Stratech Scientific Ltd, номер по каталогу 109-546-098-JIR) для детектирования связывания клеток.

Таблица 2: CD137, экспрессируемый клетками

42Тип	Обозначение	Вид	Представление
Клеточный	DO11.10.hCD137	Человек	Экспрессируемый клетками
Клеточный	DO11.10.mCD137	Мышь	Экспрессируемый клетками

1.3 Антигены, представляющие собой мезотелин человека, яванского макака и мыши

Рекомбинантный биотинилированный антиген MSLN-His человека, обозначаемый «hMSLN-His Acro», в котором отсутствуют 18 С-концевых аминокислот, получали у Acrobiosystems (номер по каталогу MSN-H8223). Полноразмерный мономерный антиген MSLN человека получали и биотинилировали самостоятельно для отбора на основе фагового дисплея. Получали MSLN яванского макака и мыши, позволяющие выделять связывающие агенты, способные связываться с MSLN человека, а также яванского макака, а также выделять агенты, связывающие MSLN мыши, соответственно.

Вкратце, антигены MSLN получали путем клонирования ДНК, кодирующей полноразмерный MSLN человека (SEQ ID NO: 142) (hMSLN-His-Avi), яванского макака (SEQ ID NO: 143) (cMSLN-His-Avi) или мыши (SEQ ID NO: 144) (mMSLN-His-Avi) наряду с шестью С-концевыми остатками гистидина и последовательностью Avi-метки, в модифицированные векторы pFUSE (InvivoGen, pfuse-mIgG2A-Fc2) с использованием рестрикционных ферментов EcoRI-HF и BamHI-HF. Указанные векторы трансфицировали в клетки HEK293-6E (Национальный исследовательский совет Канады), и экспрессированный MSLN очищали с использованием колонки с никелем HisTrap™ excel (GE Healthcare Life Sciences 29048586). Каждый из указанных антигенов биотинилировали с использованием набора BirA biotin-protein ligase reaction kit (Avidity LLC, BirA500) с получением мономерных антигенов MSLN, меченых одной молекулой биотина.

Затем рекомбинантный MSLN человека, яванского макака или мыши очищали с использованием колонки с никелем HisTrap™ excel с удалением избытка свободного биотина.

SEC-ВЭЖХ этих антигенов показала агрегацию менее 10%, и ПААГ подтвердил, что указанные антигены были мономерными. ELISA и поверхностный плазмонный резонанс (SPR) использовали для подтверждения того, что биотинилированные антигены MSLN могли связываться MSLN-специфичными антителами положительного контроля SS1 (VH SEQ NO: 140; VL SEQ ID NO: 141), содержащими те же CDR, что и scFv SS1 (US 7081518 B1; Hassan et al. 2002) и MOR6626 (публикация патента № WO 2009/068204 A1). На основании этих данных все антигены считали подходящими для наивного отбора.

Пример 2: отбор и определение характеристик Fcab к CD137 человека

2.1 Наивный отбор Fcab к CD137 человека

Для отбора Fcab, которые связываются с CD137 человека, применяли подходы по отбору на основе дрожжевого и фагового дисплея для максимального повышения разнообразия идентифицированных Fcab. Обе клеточные поверхности отображали CD137 человека и рекомбинантный димерный CD137 человека, и их использовали для обеспечения различного представления антигена для оказания давления управляемого авидностью отбора в отношении димерных или мультимерных белков CD137. Считали подходящим получение Fcab, который авидно связывался с комплексами CD137, а не с высокой аффинностью с мономерным CD137, поскольку такой Fcab будет предпочтительно нацелен только на активированные и примированные Т-клетки, в которых повышающая регуляция CD137 происходит после стимуляции Т-клеток. Без желания быть связанными какой-либо теорией, была предложена гипотеза, что Т-клетки с очень низкими или незначительными уровнями экспрессии CD137 в мембране с большей вероятностью будут содержать CD137 в мономерном состоянии, в отличие от активированных Т-клеток с сильной повышающей регуляцией CD137, в которых большая часть указанного белка будет находиться в димерном, тримерном состоянии или мультимерном состоянии более высокого порядка. В результате отбора, управляемого авидностью, Fcab будет предпочтительно связывать активированные Т-клетки и не будет хорошо связываться с наивными Т-клетками или другими клетками, демонстрирующими более низкий уровень экспрессией CD137. Путем выбора авидного Fcab CD137 можно уменьшать потенциальную активацию Т-клеток, не являющихся мишенью, с соответствующим снижением токсичности.

Для отбора методом дрожжевого дисплея использовали наивные дрожжевые библиотеки, отображающие CH1-CH3-домены IgG1 человека. Все библиотеки содержали рандомизированные петли AB (содержащие остатки в положениях с 14 по 18 в соответствии с нумерацией IMGT) и рандомизированные петли EF (содержащие остатки в положениях с 92 по 101 в соответствии с нумерацией IMGT) в CH3-домене. Две из указанных библиотек дополнительно содержали встраивание пяти аминокислотных остатков в положении 16 в петле AB в CH3-домене (остатки в положениях 16,5-16,1 в соответствии с нумерацией IMGT).

Единичные дрожжевые клоны, идентифицированные в результате отбора из библиотек, подвергали скринингу на предмет связывания антигена с использованием анализа связывания антигена с помощью проточной цитометрии, который включал инкубацию клеток совместно с биотинилированным рекомбинантным димерным антигеном человека или Fc-фрагментом мыши для проведения различия в отношении связывания дрожжевых клонов с Fc-областью рекомбинантного антигена hCD137. Отбор повторяли с использованием различных концентраций антигена и условий, таких как повышение температуры индукции, снижение жесткости отбора или уменьшение количества циклов для увеличения количества попаданий. Идентифицировали 9 клонов Fcab, имеющих уникальные последовательности.

2.2 Получение Fcab к CD137 человека в формате «ложных» mAb²

Получали «ложные» антитела mAb², состоящие из молекул IgG1, содержащих 85 клонов Fcab к CD137 человека, для определения характеристик Fcab в формате mAb². Ложные mAb² получали путем замены части Fcab CH3-домена, содержащих петли AB, CD и EF, на соответствующую область CH3-домена антитела HelD1.3 к лизоциму куриного яйца. Получение антитела HelD1.3 описано в Tello et al. 1993. Последовательности тяжелой и легкой цепей антитела HelD1.3 показаны в SEQ ID 138 и 139 соответственно. Ложные молекулы mAb² получали путем временной экспрессии в клетках HEK293-6E и очищали путем аффинной хроматографии на основе белка A с использованием колонок mAb SelectSure. Затем эти mAb² тестировали на предмет связывания с рекомбинантным антигеном человека (биотинилированным hCD137-mFc-Avi) посредством биослойной интерферометрии (BLI).

2.3 Активность отобранных ложных mAb² к CD137 в репортерном анализе NF-κB человека

Для передачи сигнала TNFR необходима мультимеризация и кластеризация (Bitra et al., 2017). CD137 кластеризуется и активирует путь передачи сигнала NF-κB, когда он взаимодействует с когнатным лигандом, CD137L. Молекулы агонистов имитируют лиганд при управлении кластеризацией и активацией CD137 и таким образом активируют путь передачи сигнала NF-κB. Известно, что некоторые агонистические антитела, например урелумаб, могут по своей природе вызывать кластеризацию CD137 при связывании, тогда как для других, таких как утомилумаб, необходимо дополнительное перекрестное связывание самого антитела для индукции кластеризации CD137 (Fisher et al., 2012). Известно, что Fc-гамма-рецепторы на эффекторных клетках индуцируют такое перекрестное связывание in vivo, однако это неэффективно и может происходить вдали от участка, представляющего терапевтический интерес. Поскольку дозолимитирующую токсичность ассоциировали с урелумабом, но не с утолимумабом, решили отобрать связывающие Fcab к CD137, которые по своей природе не обладают способностью оказывать агонистическое действие, и отобрать только те, для которых необходимо дополнительное перекрестное связывание для индукции кластеризации CD137. Таким образом, разрабатывали анализ, который может детектировать активацию пути передачи сигнала NF-κB в клетке при кластеризации CD137, экспрессируемого на клеточной поверхности, перекрестно связанными антителами, но который демонстрировал малую активность, когда указанные антитела не были перекрестно связаны. Затем этот анализ использовали для тестирования агонистической функциональной активности mAb² в формате клонов Fcab к CD137, независимо от того, обнаруживали ли посредством BLI, что Fcab связывают рекомбинантный антиген или нет. В указанном анализе белок L использовали в качестве перекрестно связывающего агента для управления перекрестным связыванием ложного mAb² через Fab-части и измеряли активацию NF-κB.

Получали клетки HEK.FRT.luc.hCD137 путем субклонирования последовательности кДНК, кодирующей последовательность CD137 человека (SEQ ID 149), в вектор pMSCV-неомицин (pMSCV-neomycin) (Takara Clontech, кат. 634401) с использованием рестрикционных ферментов EcoRI-HF и XhoI. Для получения ретровирусных частиц использовали линию клеток RetroPack PT67 (Clontech, кат. 631510) в соответствии с протоколом производителя. Затем этот ретровирус использовали для трансдукции клеток HEK.FRT.luc, которые предварительно получали путем трансдукции линии клеток Flp-In T-REx 293 HEK (Life Technologies, R780-07) лентивирусом Qiagen Cignal Lenti NFkB Reporter (luc) (Qiagen, номер по каталогу 336851), содержащим NF-κB-чувствительный промотор, контролирующий экспрессию люциферазы. Эти клетки HEK.FRT.luc.hCD137 использовали для скрининга ложного mAb², содержащего CD137-связывающие агенты, идентифицированные при отборе.

Готовили 2 мкМ разведение каждого ложного mAb² в Д-ФБР (Life Technologies, 14190169) и дополнительно разводили 1:3 в среде для репортерных клеток (DMEM (Gibco, кат. 61965-026); 10% FCS (Gibco, кат. 10270- 106); 1x PennStrep (Gibco, кат. 15140-122); бластицидин, 15 мкг/мл (Melford Laboratories Ltd., кат. B1105); пуромицин, 5 мкг/мл (Life technologies, кат. A11113803); зеоцин, 100 мкг/мл (InvivoGen, кат. 11006-33-0); генетицин, 500 мкг/мл (Life Technologies, кат. 10131-027)). Белок L (Life Technologies, 21189) использовали в качестве искусственного связывающего агента и смешивали с молекулами mAb² в молярном соотношении 1:4. После инкубации в течение 24 часов клетки обрабатывали 100 мкл реагента для анализа люциферазы Bio-Glo™ Promega (Promega, номер по каталогу G7941) в соответствии с инструкциями производителя и измеряли люминесценцию со временем интеграции 0,5 секунды на планшет-ридере с помощью программного обеспечения Gen5, BioTek. Значения люминесценции являются мерой продуцирования люциферазы в ответ на активацию пути передачи сигнала NF-κB в результате кластеризации CD137, индуцированной перекрестно связанными Fcab. Строили график зависимости значений люминесценции от логарифма концентрации Fcab, и полученные кривые приводили в соответствие с использованием уравнения зависимости логарифма (агонист) и ответа в GraphPad Prism.

Попадания идентифицировали по меньшей мере по 10-кратному увеличению сигнала люциферазы при перекрестном связывании с белком L по сравнению с отсутствием перекрестного связывания, поскольку определяли, что эти клоны способны индуцировать кластеризацию CD137 и последующую активацию нисходящих путей передачи сигнала. Из всех тестируемых клонов два были способны индуцировать такое 10-кратное увеличение люциферазы при перекрестном связывании, включая FS22-172, хотя EC50 нельзя было определить ни для одного из них. Оба выбирали для дальнейшего определения характеристик в анализе активации Т-клеток DO11.10. Удивительно, что для остальных клонов не наблюдали активности в условиях перекрестного связывания несмотря на связывание с мишенью CD137 по данным BLI, что, возможно, указывает на то, что они связывались в несоответствующем эпитопе на CD137, или на то, что аффинность таких клонов была недостаточной для связывания CD137, достаточно прочного для инициации сигнального каскада NF-κB.

В целом, в результате наивного отбора идентифицировали два Fcab (включая FS22-172), которые демонстрировали желаемую функцию в репортерном анализе NF-κB при перекрестном связывании и обладали низкой активностью, когда не были перекрестно связаны.

Пример 3: созревание аффинности для Fcab к CD137 человека и последующее определение характеристик

3.1 Созревание аффинности для FS22-172

Из клона Fcab FS22-172 конструировали четыре библиотеки дрожжевого дисплея. Рандомизировали семь остатков (в положениях 15-16.1 в соответствии с IMGT) с использованием праймеров ELLA в петле AB CH3-домена каждого клона с получением библиотеки AB FS22-172. Рандомизировали пять остатков (в положениях 92-94 и 97-98 в соответствии с IMGT) с использованием праймеров ELLA в петле EF CH3-домена с получением библиотеки EF FS22-172.

Для библиотек AB FS22-172 и EF FS22-172 проводили три или четыре цикла отбора на дрожжевых библиотеках с отбором клонов с созревшей аффинностью с использованием либо димерного антигена hCD137-mFc-Avi, либо мономерного антигена hCD137-Avi-His. Мономерный антиген чередовали с димерными антигенами для того, чтобы клоны сохраняли аффинность к антигену и не связывались исключительно за счет авидности. Использование мономерного или димерного антигена, а также используемую концентрацию определяли эмпирически во время каждого цикла путем проточной цитометрии, определяли, наблюдали ли обогащение относительно мономерного или димерного антигена в предыдущем цикле. По возможности использовали пороговое значение для сортировки для отделения клонов с созревшей аффинностью от исходной молекулы. Давление отбора повышали до 1 нМ димерного антигена. Во время каждого цикла отбора отдельные клоны наносили на планшеты с агаром для оценки хода отбора. Каждый клон отдельно выращивали и индуцировали, а затем определяли его параметры связывания и структурные параметры путем проточной цитометрии с использованием биотинилированного димерного антигена, а также структурных маркеров анти-CH2, описанных ранее. Следовали этому каскаду скрининга для определения успешности отбора на основе образца клонов, полученных в результате отбора, и для раннего скрининга отдельных клонов, которые затем можно получать в виде растворимых белков.

Отдельные дрожжевые клоны подвергали скринингу на предмет связывания с биотинилированным рекомбинантным антигеном в проточной цитометрии для определения связывания антигена, как описано выше. Из библиотеки AB FS22-172 выделяли 30 уникальных последовательностей петли. Библиотека EF FS22-172 не содержала никаких клонов, демонстрирующих какое-либо улучшение связывания по сравнению с исходными клонами.

3.2 Конструирование Fcab к CD137 человека в формате «ложных» mAb²

Получали «ложные» антитела mAb², содержащие Fcab к CD137 человека в HelD1.3, для дальнейшего определения характеристик Fcab с созревшей аффинностью в формате mAb². Эти mAb² получали, как описано в Примере 2.2. «Ложные» mAb² CD137/HelD1.3 получали путем временной экспрессии в клетках HEK293-6E и очищали с использованием колонок mAb SelectSure с белком А.

3.3 Активность Fcab человека в формате «ложных» mAb²в репортерном клеточном анализе NF-κB человека

Функциональную активность Fcab с созревшей аффинностью к CD137 человека в указанном формате «ложных» mAb² (HelD1.3) тестировали в том же анализе люциферазы NF-κB, описанном в Примере 2.3. Люминесценцию измеряли со временем интеграции 0,5 секунды на планшет-ридере с помощью программного обеспечения Gen5, BioTek. Как и ожидали, ни один из Fcab не демонстрировал активности в отсутствии перекрестного связывания с белком L (-XL). Все Fcab к CD137 с созревшей аффинностью демонстрировали значительное улучшение по сравнению с исходными Fcab к CD137, для которых, несмотря на положительный результат в этом анализе, расчет значения EC₅₀ не был возможен (см. Пример 2.3). FS22-172-003 демонстрировало наибольшую активность из каждого семейства с самым низким значением EC₅₀ (32,64 нМ) при перекрестном связывании с белком L (+XL).

3.4 Определение специфичности Fcab к CD137 человека посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR)

Тестировали специфичность Fcab к CD137 человека в отношении CD137 человека относительно других родственных членов семейства TNFSFR. Тестировали 8 Fcab в формате ложного mAb² (HelD1.3) и измеряли их посредством SPR в Biacore T200 (GE Healthcare) путем тестирования на предмет связывания с другими рецепторами TNFRSF человека: CD40, OX40 и GITR. Иммобилизацию по аминогруппе (набор amine coupling kit, GE Healthcare, BR-1000-50) использовали для нанесения CD40, GITR и OX40 человека до приблизительно 1000 RU на чипы Biacore CM5 (GE Healthcare, номер по каталогу 29149603). Готовили разведения Fcab к CD137 человека в формате ложного mAb² (FS22-172-003/HelD1.3), начиная с 1 мкМ, в буфере HBS-EP+ (BR100669) и вводили в течение 3 минут со скоростью 30 мкл/мин, а затем оставляли диссоциировать в буфере в течение 4 минут. Чип регенерировали путем введения 10 мМ глицина, pH 2,5, в течение 12 с со скоростью 30 мкл/мин. Антитела, специфичные в отношении различных членов TNFRSF, использовали в качестве положительных контролей для верификации покрытия чипа Biacore. Из данных вычитали два эталонных сигнала и анализировали с использованием программного обеспечения BIAevaluation 3.2. Указанные Fcab не связывались ни с одним из тестируемых рецепторов TNFRSF, что демонстрирует их специфичность в отношении CD137. Таким образом, не ожидают, что Fcab или mAb², содержащие антигенсвязывающие сайты из этих Fcab, будут индуцировать связывание с чем-либо, кроме CD137.

3.5 Аффинность связывания Fcab к CD137 человека в формате ложных mAb² к CD137 человека, яванского макака и мыши по данным SPR

Аффинность Fcab к CD137 человека в формате ложных mAb² (см. Пример 3.2) в отношении CD137 человека, яванского макака и мыши измеряли посредством SPR для определения, можно ли использовать указанные Fcab для тестирования в исследованиях у животных. Захватывающее антитело к Fab человека иммобилизовали на всех четырех проточных ячейках чипа CM5 серии S (GE Healthcare #BR-1005-30) до средней плотности на поверхности 6000 RU в соответствии с рекомендациями производителя (GE Healthcare, набор human Fab capture Kit, #28958325). Иммобилизация при 25°C и скорости потока 10 мкл/мин обеспечивала средний конечный ответ 6000 RU. Каждое mAb² захватывали до приблизительно 150 RU путем введения 3 мкг/мл раствора mAb², разведенного в буфере HBS-EP+ (GE Healthcare #BR1006-69), в течение 60 секунд со скоростью 30 мкл/мин. Затем через чип пропускали различные концентрации антигена CD137 человека, яванского макака или мыши (небиотинилированный CD137-mFc-Avi человека, яванского макака или мыши, или CD137-Avi-His человека) в буфере HBS-EP+ в течение 3 минут со скоростью 60 мкл/мин, а затем оставляли диссоциировать в течение 10 минут. После каждой концентрации антигена чип регенерировали путем введения 10 мМ глицина, pH 2,1, со скоростью потока 30 мкл/мин в течение 30 секунд. Буфер HBS-EP+ вводили перед самой высокой концентрацией антигена и после самой низкой концентрации антигена для вычитания эталонного сигнала, и дважды повторяли произвольно одну из концентраций. Кинетику связывания приводили в соответствие с моделью Ленгмюра 1:1 с получением равновесных констант связывания (K_D) для каждого образца. Проводили анализ данных с помощью программного обеспечения BiaEvaluation, версия 3.2. Результаты представлены в Таблице 3.

Анализ результатов показал улучшенное связывание CD137 как человека, так и яванского макака всеми клонами с созревшей аффинностью по сравнению с соответствующими исходными молекулами. Аффинность связывания в отношении мономерных антигенов CD137 человека была ниже (по меньшей мере в 100 раз), чем в отношении димерных Fc-слитых антигенов человека и яванского макака. Как рассмотрено в Примере 2.1, отбирали Fcab для предпочтительного связывания с димерными, а не мономерными формами CD137, и эти данные подтверждают, что указанная стратегия отбора была успешной. Такое кинетическое поведение снижает вероятность их связывания с мономерным CD137, экспрессируемым на минимальных уровнях на нестимулированных Т-клетках, что ведет к снижению риска токсичности для печени или системной токсичности, связанной с некоторыми видами терапии моноклональными антителами к CD137.

Данные также демонстрируют, что Fcab к CD137 человека связывались с димерным CD137 яванского макака с аффинностью, сравнимой с аффинностью к димерному CD137 человека.

Таблица 3: кинетический анализ Fcab к CD137

Fcab	Димерный CD137 человека, K_D (нМ)	Димерный CD137 яванского макака, K_D (нМ)	Отличие K_Dдля мономерного CD137 человека относительно K_Dдля димера человека, кратность	Димерный CD137 мыши, K_D (нМ)
FS22-172	52	203	N/A	N/A
FS22-172-003	1,5	1,3	в >200 раз	N/A

N/A - неприменимо, поскольку слабый сигнал не позволял определить K_D

Также тестировали способность Fcab связываться с димерным CD137 мыши. Ни один из клонов не демонстрировал прочного связывания с антигеном мыши (как показано в Таблице 3, где N/A означает, что K_D не может быть рассчитана).

3.6 Обобщенные результаты по созреванию аффинности и определению характеристик Fcab к CD137 человека

Таким образом, получали Fcab к CD137 с созревшей аффинностью и представляли их в формате mAb², а затем определяли их характеристики. mAb², содержащие этот антигенсвязывающий домен для CD137 в CH3-домене, демонстрировали высокие уровни активности в репортерном клеточном анализе NF-κB человека, и было показано, что эта активность зависит от перекрестного связывания.

Также было показано, что mAb², содержащие антигенсвязывающий домен к CD137 человека, специфичны в отношении CD137 и не связываются с другими рецепторами TNFRSF. Было показано, что mAb² предпочтительно связывают димерный антиген CD137 человека, а не мономерный антиген CD137 человека. Наконец, было показано, что эти mAb² связывают димерный CD137 яванского макака с аффинностью, сравнимой с аффинностью к димерному CD137 человека.

После демонстрации того, что для mAb², содержащих антигенсвязывающий домен к CD137 человека, необходимо перекрестное связывание для кластеризации и активации CD137, следующей целью являлось получение mAb², связывающего MSLN человека в дополнение к CD137. Была предложена гипотеза, что связывание mAb²с MSLN человека через Fab-фрагменты будет вызывать перекрестное связывание молекул антител, что, в свою очередь, приводит к кластеризации и активации CD137, и что эта активация будет зависеть от наличия экспрессии MSLN человека.

Для получения mAb², связывающих MSLN человека в дополнение к CD137, сначала необходимо было получить mAb, способные связывать MSLN. Получение этих mAb описано ниже.

Пример 4: Выделение антител к MSLN человека: антигены, отбор и скрининг

Мезотелин представляет собой гликозилфосфатидилинозитол (GPI)-связанный гликопротеин, синтезируемый в виде предшественника массой 69 кДа и протеолитически процессируемый в NH2-концевую секретируемую форму массой 30 кДа (называемую мегакариоцит-потенцирующим фактором или MPF) и мембраносвязанный мезотелин (MSLN) массой 40 кДа. В сыворотке у пациентов обнаруживают растворимые формы MSLN, отделенные с поверхности клеток опухоли и образованные в результате альтернативного сплайсинга или под действием ферментов, превращающих фактор некроза опухоли-α (TACE), мембраносвязанного MSLN. Известно, что этот антиген, отделенный с опухоли, формирует «поглотитель», который может выступать в качестве ловушки для терапевтических антител (Lee et al., 2018), так что это необходимо преодолеть, чтобы позволить антителам связываться с MSLN на опухоли. Чтобы избежать этого эффекта поглощения, получали новые антитела к мезотелину, которые предпочтительно связывались с иммобилизованным MSLN относительно растворимого MSLN, с тем, чтобы это приводило к предпочтительному связыванию с мембраносвязанным MSLN, а не с растворимым MSLN в поглотителе. Для этого в отборе на основе фагового дисплея и последующем скрининге использовали различные формы антигенов MSLN. Идентифицировали панель антител, которые связывались с мембраносвязанным MSLN человека и яванского макака с различной аффинностью, и которые могли быть нацелены на различные области MSLN. Проводили ряд скрининговых анализов, включая ELISA, блокирующие анализы Biacore и связывание клеток, а также анализы, в которых сравнивали области связывания с MSLN.

4.1 Отбор из фагмидных библиотек

Синтетические наивные фагмидные библиотеки, отображающие Fab-домен IgG1 зародышевой линии человека с рандомизацией по CDR1, CDR2 и CDR3 (MSM Technologies), использовали для отбора с помощью антигенов MSLN, описанных в Примере 1.3.

Вначале отбирали библиотеки Fab в несколько подходов, каждый из трех или четырех циклов, с использованием частиц со стрептавидином (Streptavidin Dynabeads) (Thermo Fisher, 11205D), нейтравидина (Neutravidin) -связывающего белка, связанного с частицами Dynabeads (Thermo Fisher, 31000) или анти-His частиц Dynabeads (Thermo Fisher, 10103D) для выделения фага, связанного с биотинилированным MSLN-His-Avi человека, яванского макака или мыши, или hMSLN-His Acro. Подходы по отбору также осуществляли с использованием полноразмерных антигенов MSLN, полученных самостоятельно, в которых циклы отбора MSLN человека чередовали с антигеном MSLN яванского макака с целью выделения перекрестно реагирующих клонов человека и яванского макака. Также проводили отбор агентов, связывающих MSLN мыши (mMSLN-His 8604-MS R&D). Применяли стандартные методики отбора на основе фагового дисплея и методики выделения фага.

Для получения клонов, которые связываются с различными областями антигена MSLN, выбирали стратегию маскирования эпитопа с использованием антител к MSLN из подходов по первоначальному отбору, описанных выше. Вкратце, первый цикл отбора наивных библиотек Fab осуществляли с использованием биотинилированного MSLN-His-Avi человека в концентрации 500 нМ. Во 2 и 3 цикле фаговое связывание биотинилированного MSLN-His-Avi яванского макака в концентрации 500 нМ (2 цикл) или 100 нМ (3 цикл) тестировали в присутствии смеси наивных белков mAb к мезотелину, выделенных при первоначальном подходе по отбору. Такой отбор на основе маскирования эпитопа приводил к снижению выходных титров, что указывает на то, что указанная стратегия отбора была действенной, поскольку идентифицировали меньшее количество связывающих агентов, и позволял идентифицировать 3 дополнительных клона, нацеленных на дополнительные области MSLN, по сравнению с клонами из предыдущего подхода по отбору.

4.2 Скрининг для идентификации антител к MSLN

Приблизительно 2000 клонов, полученных в результате 3-го и 4-го циклов всего отбора, подвергали скринингу путем фагового ELISA на предмет связывания с 25 нМ иммобилизованным биотинилированным hMSLN-His Acro, полноразмерным биотинилированным MSLN-His-Avi человека или яванского макака, соответствующим антигену, используемому в цикле отбора. Планшеты со стрептавидином или планшеты c иммобилизованными несоответствующими биотинилированными His-мечеными антигенами включали в качестве отрицательных контролей. Отбирали клоны, демонстрировавшие сигнал связывания MSLN по меньшей мере в 4 раза более сильный, чем сигнал в случае отрицательных контролей, и секвенировали их вариабельные области, в результате чего идентифицировали 156 уникальных комбинаций последовательностей VH/VL, которые затем отбирали для экспрессии растворимой формы. Клоны отбирали в результате всех подходов по отбору, включая отбор на основе маскирования эпитопа. Для каждого клона VH и VL отдельно клонировали в вектор экспрессии pTT5 (Национальный исследовательский совет Канады), содержащий либо CH1-, CH2- (с мутацией LALA в CH2-домене (Bruhns et al., 2009; Hezareh et al., 2001) и CH3-домен, либо CL-домены соответственно. Полученные векторы pTT5-FS28 VH с мутацией LALA (AA) и pTT5-FS28 VL временно котрансфицировали в клетки HEK293-6E, и получали клоны в виде полных молекул IgG1. С применением этого же способа клонировали VH- и VL-области SS1 и антитела HelD1.3 к лизоциму белка куриного яйца и экспрессировали в LALA-формате IgG1 с получением G1-AA/SS1 (SEQ ID No 140 (тяжелая цепь) и 141 (легкая цепь)) и G1-AA/HelD1.3 (SEQ ID No 138 (тяжелая цепь) и 139 (легкая цепь)), служащих в качестве положительного и отрицательного контроля соответственно.

4.3 Скрининг на предмет связывания с рекомбинантным MSLN

4.3.1 ELISA связывания

Надосадочные жидкости HEK293, содержащие растворимые связывающие клоны анти-MSLN, или очищенные клоны, подвергали скринингу на предмет связывания с MSLN-His Acro человека, hMSLN-His-Avi и, в случае некоторых подходов, cMSLN-His-Avi путем ELISA. Вкратце, hMSLN-His Acro, hMSLN-His-Avi, cMSLN-His-Avi или несоответствующий His-меченый антиген наносили на планшеты maxisorp в концентрации 25 нМ на ночь при 4°C. На следующий день планшеты блокировали 300 мкл ФБР, содержащего 0,05% Твин20 и 2% молоко Marvel (сухое молоко Marvel). Надосадочные жидкости, содержащие mAb к MSLN, или очищенные белки инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре, и их связывание детектировали с помощью антитела к Fc-IgG человека, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP). Отбрасывали клоны, которые демонстрировали связывание с несоответствующим антигеном или не реагировали перекрестно с антигенами как человека, так и яванского макака. Кроме того, клоны, которые связывались с усеченным антигеном MSLN, hMSLN-His Acro, но не с полноразмерным антигеном MSLN, MSLN-His-Avi, не использовали в дальнейшем, поскольку ожидали, что полноразмерный антиген будет больше соответствовать конформации антигена на клеточной поверхности клеток, экспрессирующих MSLN.

Чтобы убедиться в том, что антитела обладали специфичностью в отношении связывания с MSLN, связывающие клоны анти-MSLN также тестировали на предмет дифференциального связывания с гликозилированным и дегликозилированным MSLN. Биотинилированный hMSLN-His-Avi дегликозилировали с использованием фермента PNGase F (NEB, P0704L) в течение 24 часов при 37°C, очищали с использованием ультрацентрифужных фильтров Amicon (Millipore, UFC901024) и наносили на планшеты maxisorp в концентрации 25 нМ. ELISA-связывание уникальных mAb к мезотелину с MSLN детектировали с использованием антитела мыши к Fc-IgG-HRP (Sigma, A0170). Клоны, демонстрировавшие более чем 2-кратное ослабление сигнала связывания с дегликозилированным антигеном по сравнению с гликозилированным антигеном MSLN, исключали из панели наивных связывающих mAb к MSLN.

4.3.2 Скрининг BIAcore

MSLN-His-Avi человека иммобилизовали на проточной ячейке 2 на сенсорном чипе BIAcore CM5 серии S (GE Healthcare, BR100530) с использованием набора для иммобилизации по аминогруппе (GE Healthcare, BR10050) до приблизительно 200 единиц ответа (RU). Проточную ячейку 1 оставляли пустой для вычитания. Надосадочные жидкости HEK293 или очищенные белки доводили с помощью HBS-EP+ (GE Healthcare) до приблизительно 50 нМ mAb к MSLN на образец. Образцы вводили в проточную ячейку 1 и 2 в течение 2,5 минут со скоростью 30 мкл/мин, а затем оставляли диссоциировать в буфере HBS-EP в течение 2,5 минут. Регенерацию осуществляли путем введения 10 мМ глицина, pH 1,5 (GE Healthcare, BR100354) в течение 30 секунд со скоростью 30 мкл/мин. Данные, полученные после вычитания (проточная ячейка 2 - проточная ячейка 1), анализировали с применением программного обеспечения BIAevaluation 3.2 (GE Healthcare). Из 86 клонов, тестируемых в этом анализе из ELISA связывания, 39 клонов демонстрировали ответ связывания более 10 RU в случае 50 нМ и, соответственно, их отбирали для повторной экспрессии, очистки и дальнейшего скрининга.

4.3.3 Сортировка антител на основе области связываемого MSLN

Затем на основании данных ELISA и скрининга Biacore клоны тестировали в анализах с сортировкой, в которых связывание mAb с MSLN человека тестировали в присутствии другого mAb посредством биослойной интерферометрии (BLI) на Octet (ForteBio).

Вкратце, биотинилированный hMSLN-His-Avi (5 мкг/мл) связывали на покрытых стрептавидином наконечниках (ForteBIO, 18-5020) в течение 5 минут. G1-AA/SS1 разводили до 200 нМ в 1x кинетическом буфере (FortéBIO, 18-1092) и оставляли связываться с hMSLN-His-Avi в течение 5 минут. Затем оценивали связывание смеси, содержащей 200 нМ тестируемого mAb и 200 нМ G1-AA/SS1, в течение 5 минут. Сравнивали со связыванием тестируемого mAb с hMSLN-His-Avi в отсутствии связанного G1-AA/SS1 с определением максимальной степени возможного связывания в отсутствии SS1 (т.е. когда не было конкуренции за связывание). Если бы оба антитела конкурировали за связывание с одной и той же областью MSLN, тестируемое антитело было бы неспособно связываться.

Эти эксперименты с сортировкой с использованием G1-AA/SS1 показали, что большинство (19 из 23) тестируемых связывающих агентов FS28 были неспособны связывать MSLN в присутствии G1-AA/SS1 и, следовательно, им может быть приписано свойство связывать ту же область, что и G1-AA/SS1. Существуют данные о сайте связывания MSLN для антитела SS1 в формате Fab (Ma et al., 2012), и он определен как N-концевая область, содержащая аминокислоты с 7 по 64, которые также вовлечены в связывание MUC16. Идентифицировали дополнительные клоны FS28-185 и FS28-256, которые демонстрировали частичную конкуренцию или отсутствие конкуренции с SS1 за связывание. Связывание этих клонов относительно друг друга показало, что эти клоны представляли собой две дополнительные независимые группы, т.е. были способны связываться еще с двумя другими областями MSLN. FS28-185 относили к одной группе («группа 2»), тогда как FS28-256 относили к другой группе («группа 3»). Эти результаты показали, что отбор на основе маскирования эпитопа в разделе 1.2 был успешным, поскольку идентифицировали антитела, которые связывались с несколькими областями MSLN.

4.3.4 Аффинность

Для каждой группы, описанной в Примере 4.3.3, кинетику связывания определяли с применением того же способа, который описан в Примере 4.3.2, за исключением того, что MSLN-His-Avi человека или яванского макака иммобилизовали при 50 или 100 RU. Клоны тестировали в диапазоне концентраций от 81 нМ до 0,33 нМ в 3-кратных разведениях. Связывающие агенты ранжировали и выбирали лучшие из каждой группы: FS28-024 из группы 1; FS28-185 из группы 2 и FS28-256 из группы 3. Все эти клоны обладали перекрестной реактивностью с яванским макаком (данные не представлены), но значения аффинности не рассчитывали в этих условиях тестирования. Как показано в Таблице 4, значения аффинности, полученные при 50 RU иммобилизованного MSLN, были ниже значений при 100 RU иммобилизованного антигена MSLN, что демонстрирует усиление связывания при более высоких уровнях MSLN.

Таблица 4: кинетический анализ исходных mAb к MSLN

mAb (в формате G1-AA)	K_D в случае иммобилизованного MSLN-His-Avi человека (нМ)
	50 RU	100 RU
FS28-024	0,77	0,23
FS28-185	37,00	29,57
FS28-256	26,20	23,16

4.4 Анализы блокирования MUC16-MSLN

Тестировали FS28-024, FS28-185 и FS28-256 на предмет их способности блокировать связывание MUC16 с мезотелином в анализе блокирования. Из литературы известно, что SS1 блокирует связывание MUC16 с MSLN (Ma et al., 2012). G1-AA/SS1, которые содержат те же CDR, что и SS1, и, как ожидают, также будут блокировать связывание MUC16, и контрольное антитело IgG1 (G1AA/HelD1.3) включали в качестве положительного и отрицательного контроля соответственно.

Вкратце, рекомбинантный MUC16 человека (R&D Systems, 5809-MU-050) наносили на планшеты maxisorp в количестве 0,65 мкг/мл в 1x ФБР на ночь при 4°C. Планшеты 3x промывали 1хФБР и блокировали 300 мкл ФБР, содержащего 2% Твин20 и 2% молоко Marvel. mAb к MSLN в концентрации (от 0,23 нМ до 500 нМ, 3-кратные разведения) предварительно смешивали с биотинилированным антигеном hMSLN-His-Avi (конечная концентрация 2 мкг/мл) в объеме 100 мкл в течение 1 часа при комнатной температуре. После удаления блокирующего раствора в планшеты добавляли смесь mAb/MSLN и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Планшеты промывали 3x ФБР-Т (1x ФБР и 0,05% Твин20) и инкубировали совместно со стрептавидин-HRP (Thermo Scientific, 21126, разведение 1:1000 в 1хФБР) в течение 1 часа при комнатной температуре. Наконец, планшеты промывали 3 раза ФБР-Т и 3 раза ФБР. MSLN, связанный с MUC16, визуализировали путем добавления 100 мкл TMB в течение 15 минут, а затем 100 мкл 1M раствора серной кислоты. Поглощение определяли при длине волны 450-630 нм (программное обеспечение Gen5, BioTek).

Клоны FS28-024 из группы 1 демонстрировали дозозависимое блокирование взаимодействия MUC16-MSLN, схожее с блокированием в случае G1-AA/SS1. FS28-256 не демонстрировал никакой блокирующей активности подобно G1-AA/HelD1.3 отрицательного контроля. Тогда как FS28-185 способствовал связыванию MUC16 с MSLN. Эти результаты согласовывались с данными сортировки в Примере 4.3.3 в том, что клоны, которые связывались с тремя разными областями MSLN, демонстрировали три разных типа поведения в анализе блокирования лиганда.

В заключение, результаты показывают, что отбирали панель клонов, которые связываются с 3 разными областями MSLN (группы); связывание антител с одной из областей MSLN блокирует связывание MUC16 с MSLN, тогда как связывание антител с двумя другими областями - нет.

4.5 Специфичность

Ввиду присутствия разных областей MSLN, связываемых панелью антител, тестировали их специфичность в отношении связывания с MSLN. Специфичность FS28-024, FS28-185 и FS28-256 тестировали посредством ELISA путем сравнения связывания с MSLN со связыванием с другими молекулами, вовлеченными в клеточную адгезию, такими как CEACAM-5, E-кадгерин, тромбомодулин и EpCAM.

Использовали протокол, аналогичный описанному в Примере 4.3.1, в котором на планшеты maxisorp наносили 1 мкг/мл рекомбинантного MSLN-His-Avi человека, CEACAM-5-His-Fc человека (Sino Biological, 1077-H03H), E-кадгерина человека (R&D systems, 8505-EC), тромбомодулина человека (Peprotech, 100-58) или EpCAM-hFc человека (самостоятельного получения). Связывание mAb к MSLN, тестируемое в диапазоне концентраций от 0,02 до 1000 нМ (3-кратные разведения), детектировали с использованием антитела к Fab-HRP человека (Sigma, A0293). FS28-024 и FS28-185, и FS28-256 связывались с MSLN-His-Avi человека (EC₅₀ приблизительно 0,5 нМ и максимальный сигнал связывания 3), но не наблюдали связывания ни с одной из указанных молекул клеточной адгезии, тестируемого в концентрации до 1000 нМ. Как и ожидали, антитела положительного контроля связывались с соответствующими мишенями. Таким образом, антитела к MSLN демонстрировали высокий уровень специфичности.

4.6 Связывание с клеткой

Панель отобранных mAb к мезотелину (FS28-024, FS28-185 и FS28-256) анализировали на предмет связывания с эндогенным MSLN клеточной поверхности с использованием линии клеток рака легкого человека NCI-H226.

Вкратце, клетки NCI-H226 (ATCC CRL-5826) брали из колб для культивирования клеток Т175 с использованием Аккутазы (Accutase) (Gibco, A11105-01). Клетки центрифугировали при 1200 об/мин в течение 3 минут и ресуспендировали в ледяном буфере FACS, состоящем из Д-ФБР (Life Technologies, 14190169) и 1% BSA (Sigma-Aldrich, A7906), в количестве 2×10⁶ клеток/мл, и высевали по 50 мкл на лунку в 96-луночный планшет с V-образным дном (Costar, 3894). Все тестируемые mAb разводили в буфере FACS в 120 мкл в диапазоне концентраций 0,01-200 нМ (4-кратные разведения). Затем клетки NCI-H226 центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость и клетки ресуспендировали в 100 мкл каждого разведения mAb, и инкубировали при 4°C в течение 45 минут. Клетки дважды промывали 150 мкл буфера FACS путем центрифугирования, ресуспендировали в 100 мкл, содержащих фрагмент F(ab')2-R-фикоэритрин антитела козы к IgG (специфичного к γ-цепи) человека (Sigma, P8047), разведенный 1:1000 в буфере FACS, и инкубировали при 4°C в течение 45 минут. Клетки один раз промывали 150 мкл буфера FACS, а затем 150 мкл Д-ФБР, ресуспендировали в 150 мкл Д-ФБР, содержащего DAPI (Biotium, 40043) в соотношении 1:10000, и прочитывали на BDCantoII или iQue (Intellicyt). Данные анализировали с применением FlowJo v10 для определения среднего геометрического сигнала для PE для живых клеток в каждой лунке.

mAb² FS28-024 связывалось с MSLN клеточной поверхности на клетках NCI-H226, как и G1-AA/SS1 положительного контроля. FS28-185 и FS28-256, в сравнении, демонстрировали более слабое связывание с MSLN клеточной поверхности.

Обобщенные результаты по методике наивного скрининга

Из 156 mAb, идентифицированных посредством первичного скрининга наивных фаговых библиотек, отбирали три клона mAb к MSLN человека (FS28-024, FS28-185 и FS28-256) на основе ряда скрининговых анализов, которые сначала подтвердили связывание с полноразмерным дегликозилированным рекомбинантным MSLN, а также способность связываться с MSLN яванского макака. Во-вторых, клоны группировали на основе различия области MSLN, которую они связывали (группы), и блокирующей активности в отношении MUC16, и из этих групп отбирали связывающие агенты с самой высокой аффинностью. Полученная панель клонов mAb: FS28-024, FS28-185 и FS28-256 связывала три разных области MSLN, один из указанных клонов (группа 1, FS28-024) блокировал связывание MUC16 с MSLN in vitro. Панель из пяти антител к MSLN демонстрировала специфичное связывание с MSLN, различную аффинность к рекомбинантному MSLN и MSLN клеточной поверхности, и ее отбирали для дальнейшего определения характеристик и/или оптимизации, как описано в Примере 5 ниже.

Пример 5: созревание аффинности и оптимизация последовательностей наивных mAb к MSLN

5.1 Созревание аффинности для клона FS28-024 с применением стратегии NNK-мутагенеза (NNK walk strategy)

Тогда как FS28-024 связывался с MSLN человека с субнаномолярной аффинностью, его аффинность к MSLN яванского макака была приблизительно в 5 раз ниже. Для улучшения связывания с MSLN яванского макака применяли стратегию NNK-мутагенеза по пяти остаткам в CDR3-области VH.

Оптимизировали последовательность VH и VL FS28-024. Получали библиотеки на основе экономного мутагенеза путем изменения одного аминокислотного остатка за один раз в остатках RATLF (нумерация согласно Кабату: 95-99) в CDR3 VH, что приводило к получению всего пяти отдельных библиотек. Библиотеки получали с использованием кодонов NNK с низкой избыточностью, чтобы представить все возможные аминокислоты в положении, представляющем интерес. Разрабатывали прямые и обратные праймеры в соответствии с руководством из набора Quickchange Lightning Site-Directed Mutagenesis Kit (Agilent, 200518), который использовали для создания библиотек. Каждый мутант экспрессировали в малом масштабе в клетках HEK293, и надосадочные жидкости подвергали скринингу посредством BIAcore на предмет сохранения или улучшения связывания с MSLN-His-Avi человека и яванского макака. Из 84 клонов, подвергнутых скринингу, малое число клонов сохранили связывание, большинство из них были с заменой остатка Т98. Четыре клона, FS28-024-051, FS28-024-052, FS28-024-053 и FS28-024-060, повторно экспрессировали, очищали и определяли их аффинность к MSLN человека и яванского макака. Только один клон, FS28-024-053, демонстрировал улучшение перекрестной реактивности с яванским макаком, которое обеспечивали одной мутацией T98V (нумерация согласно Кабату). Все четыре клона использовали в дальнейшем, поскольку они могли обеспечивать альтернативные последовательности и характеристики.

5.2 Созревание аффинности для FS28-185 и FS28-256

По сравнению с FS28-024 клоны FS28-185 и FS28-256 демонстрировали более низкую аффинность как к рекомбинантному MSLN, так и к MSLN клеточной поверхности, и поэтому их подвергали созреванию аффинности.

CDR3-области VH и VL подвергали созреванию аффинности параллельно в формате scFv путем рандомизации перекрывающихся кассет для пяти-шести аминокислот с использованием праймеров NNK. Области, рандомизированные для FS28-185, представляли собой G95-M100F VH и S91-A95 VL, и для FS28-256 они представляли собой Y95-L100B VH и S91-I96 VL (нумерация согласно Кабату). Перед созданием библиотеки осуществляли экономный мутагенез в потенциальных сайтах окисления метионина и деамидирования в CDR1- и CDR3-областях (за исключением библиотеки CDR3 VL FS28-256). Проводили два цикла отбора, как описано для подходов по наивному отбору, с использованием 20 нМ биотинилированного MSLN-His-Avi человека в 1 цикле и либо 20, либо 2 нМ MSLN-His-Avi яванского макака во 2 цикле. Затем тестировали растворимые scFv (одноточечная концентрация) на предмет связывания с линией клеток рака яичников OVCAR-3 (ATCC^® HTB-161™). Клетки OVCAR-3 собирали с использованием Аккутазы StemPro (Gibco, A11105-01), центрифугировали при 1200 об/мин в течение 3 минут и ресуспендировали в буфере FACS (DPS, содержащий 2% BSA) в количестве 2×10⁶ клеток/мл. 100 мкл клеток OVCAR-3 добавляли в 96-луночные планшеты с V-образным дном. Планшеты центрифугировали при 1200 об/мин в течение 3 минут и отбрасывали буфер. К клеткам добавляли 150 мкл scFv и инкубировали при 4°C в течение одного часа. В качестве контролей включали scFv исходных клонов FS28-185 и 256. После промывки клетки ресуспендировали в 100 мкл Penta His Alexa-Fluor 647 (Qiagen, 109-546-098) и промывали перед ресуспендированием в 100 мкл Д-ФБР, содержащего краситель Sytox Green Nucleic Acid Stain (Invitrogen S7020, разведение 1:10000). Образцы анализировали на iQue (Intellicyt Corporation, IQue Plus) и фиксировали среднее геометрическое для APC.

Как для FS28-185, так и для FS28-256 идентифицировали клоны с созревшей аффинностью, демонстрирующие улучшенное связывание с клетками OVCAR-3. На основе связывания клеток (MFI больше 850) и разнообразия последовательностей отбирали 10 клонов из наборов CDR3 VH FS28-256 и 9 из CDR3 VL. Из 38 клонов FS28-185 с созревшей аффинностью, тестируемых в этом анализе, 14 выбирали из наборов CDR3 VH и один из наборов CDR3 VL. Затем определяли характеристики отобранных клонов в формате биспецифичного антитела mAb².

5.3 Получение mAb²на основе FS28-185 и FS28-256

Для дальнейшего определения характеристик связывающих агентов анти-MSLN получали VH- или VL-область FS28-024, FS28-185 или 256 с созревшей аффинностью, а также исходные клоны в формате mAb². Полученные mAb² представляли собой антитела IgG1, состоящие из CDR-областей клонов FS28-024, FS28-185 или FS28-256, или полученных из них вариантов с созревшей аффинностью, содержащих мутацию LALA в CH2-домене и сайт связывания рецептора CD137 человека в CH3-домене. Последовательности тяжелых и легких цепей полученных молекул mAb² представлены в следующих SEQ ID NO:

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024: SEQ ID NO 94 и 85

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-051: SEQ ID NO 98 и 85

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-052: SEQ ID NO 102 и 85

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-053: SEQ ID NO 106 и 85

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-060: SEQ ID NO 108 и 85

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-026: 270 SEQ ID NO 109 и 87

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-091: SEQ ID NO 110 и 88

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-185: SEQ ID NO 111 и 89

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256: SEQ ID NO 114 и 116

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-001: SEQ ID NO 120 и 82

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-005: SEQ ID NO 120 и 83

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-012: SEQ ID NO 125 и 116

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-014: SEQ ID NO 129 и 116

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-018: SEQ ID NO 133 и 116

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-021: SEQ ID NO 125 и 82

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-023: SEQ ID NO 133 и 82

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-024: SEQ ID NO 125 и 83

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-026: SEQ ID NO 133 и 83

mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-027: SEQ ID NO 125 и 84

mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271: 3 и 84

mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-272: 158 и 84

mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-273: 163 и 84

Эти mAb² получали путем временной экспрессии в клетках HEK293-6E и, где указано, очищали с использованием колонок mAb SelectSuRe с белком А.

5.4 Оптимизация последовательностей клонов FS28-256 с созревшей аффинностью

Все клоны линии FS28-256 содержали потенциальный сайт N-связанного гликозилирования в CDR2 VH (нумерация в соответствии с IMGT: N55-X-S57, где X представляет собой любой остаток). Получали четыре варианта клона FS28-256-027 путем замены N55 в CDR2 VH на аланин, гистидин, серин и треонин. Эти клоны обозначали FS28-256-271, FS28-256-272, FS28-256-273 и FS28-256-274 соответственно. Определяли характеристики связывания указанных клонов с иммобилизованным MSLN и MSLN в растворе посредством SPR. В Таблице 5 представлены результаты SPR. FS28-256-274 обладал гораздо более низкой аффинностью к иммобилизованному MSLN, чем другие клоны, и поэтому его не продолжали использовать. FS28-256-272 и FS28-256-273 связывались с растворимым MSLN либо сильнее, либо с силой, схожей с силой в случае иммобилизованного MSLN. Следовательно, вероятно, что на связывание обоих этих клонов с MSLN, экспрессируемым на клеточной поверхности, будет влиять присутствие растворимого MSLN. FS28-256-271, напротив, демонстрировал самое сильное связывание с иммобилизованным MSLN и более слабое связывание с растворимым MSLN, таким образом он предпочтительно нацелен на иммобилизованный MSLN, а не на MSLN в растворе.

Таблица 1: связывание с мезотелином человека, иммобилизованным и находящимся в растворе

Клон (в формате mAb²кCD137)	Мутация CDR2 тяжелой цепи	Аффинность к иммобилизованному MSLN-His-Avi человека, K_D (nM)	Аффинность к MSLN-His-Avi человека в растворе, K_D (nM)	Соотношение K_D: в растворе/иммобилизованный MSLN-His-Avi человека
FS28-256-271	N55A	5,9	18,2	3
FS28-256-272	N55H	10,7	7,6	0,7
FS28-256-273	N55S	6,0	7,4	1,2
FS28-256-274	N55T	19,8	55,9	2,8

Обобщенные результаты по отбору и скринингу Fcab и mAb

Было показано, что Fcab к CD137, идентифицированные в предыдущих примерах, обладают агонистической активностью в репортерных анализах NF-κB, когда они перекрестно связаны также внешним перекрестно связывающим агентом, таким как белок L (Пример 2). Из панели идентифицированных Fcab к CD137 человека выбирали FS22-172-003 для спаривания с Fab, нацеленными на MSLN, поскольку этот клон обладал самыми подходящими функциональными и биофизическими свойствами.

Для локализации этой CD137-управляемой агонистической активности в микроокружении опухоли решили осуществить спаривание Fcab в формате mAb² с Fab, которые специфично нацелены на опухолеассоциированный антиген, мезотелин (MSLN). Это может оказывать полезный эффект, поскольку можно ожидать, что экспрессия MSLN на клетках опухоли будет приводить к перекрестному связыванию mAb², так что Fcab будет способен индуцировать агонистическую активность при связывании с CD137.

Отбирали панель Fab, связывающих MSLN, которые связываются с различными областями MSLN и предпочтительно связывают иммобилизованный MSLN, а не растворимый мезотелин, как определено в предыдущих примерах.

Пример 6: получение mAb², нацеленного на CD137 и мезотелин (MSLN)

Получали mAb² к CD137/MSLN, состоящие из молекул IgG1, содержащих Fcab FS22-172-003 к CD137 и панель Fab к MSLN (перечислены в Таблице 6), для определения характеристик спаривания в формате mAb². Их получали путем замены части Fcab CH3-домена, содержащих петли AB, CD и EF, на соответствующую область CH3-домена антитела, связывающего MSLN. Эти mAb² к CD137/MSLN содержали мутацию LALA в CH2-домене (AA). Изотипом mAb² является IgG1 человека, способный индуцировать АЗКЦ в отношении клеток, с которыми он связывается. Поскольку mAb² к CD137/MSLN будут связывать иммунные клетки, экспрессирующие CD137, было решено снизить вероятность индукции mAb²-антителами АЗКЦ в отношении иммунных клеток путем включения мутации LALA. Кроме того, известно, что Fc-гамма-рецепторы на эффекторных клетках индуцируют такое перекрестное связывание антител in vivo, однако это неэффективно и может происходить вдали от участка, представляющего терапевтический интерес. Поскольку антитела к CD137 при клиническом применении ассоциировали с дозолимитирующей токсичностью, было решено включить мутацию LALA для того, чтобы mAb² к CD137/MSLN проявляли агонистическую активность только в результате перекрестного связывания путем связывания с MSLN. Все mAb² и контрольные антитела получали путем временной экспрессии в клетках HEK293-6E и очищали с использованием колонок mAb Select SuRe с белком А. Затем оценивали чистоту mAb² путем SEC-ВЭЖХ и подтверждали, что процент мономерных молекул превышал 98%.

Таблица 6: перечень молекул mAb², исследованных с точки зрения их характеристик связывания и функциональности

mAb²

FS22-172-003-AA/FS28-024

FS22-172-003-AA/FS28-024-051

FS22-172-003-AA/FS28-024-052

FS22-172-003-AA/FS28-024-053

FS22-172-003-AA/FS28-024-060

FS22-172-003-AA/FS28-185

FS22-172-003-AA/FS28-185-002

FS22-172-003-AA/FS28-185-003

FS22-172-003-AA/FS28-256

FS22-172-003-AA/FS28-256-012

FS22-172-003-AA/FS28-256-021

FS22-172-003-AA/FS28-256-023

FS22-172-003-AA/FS28-256-024

FS22-172-003-AA/FS28-256-026

FS22-172-003-AA/FS28-256-027

FS22-172-003-AA/FS28-256-271

FS22-172-003-AA/FS28-256-272

FS22-172-003-AA/FS28-256-273

Пример 7: определение характеристик mAb²к CD137/MSLN

Тестировали силу связывания mAb² к CD137/MSLN с CD137 и MSLN посредством поверхностного плазмонного резонанса с использованием устройства BIAcore, а также связывание с MSLN, экспрессируемым на клеточной поверхности, путем проточной цитометрии на соответствующих линиях клеток, которые эндогенно экспрессируют MSLN. Поскольку в сыворотке у MSLN-положительных пациентов обнаруживают растворимые формы MSLN, образованные в результате альтернативного сплайсинга или под действием ферментов, превращающих фактор некроза опухоли-α (TACE), мембраносвязанного MSLN, можно предположить, что это может служить ловушкой для терапевтических антител (Lee et al., 2018). Авторы настоящего изобретения исследовали характеристики связывания и авидность mAb², в частности, различие в аффинности связывания в отношении растворимого и иммобилизованного MSLN. Это измеряли в экспериментах по связыванию BIAcore, проводимых двумя способами: сначала для воспроизведения кинетического профиля mAb², связывающего антиген, присутствующий на клеточной поверхности, рекомбинантный антиген иммобилизовали с умеренной плотностью на SPR-чипе с последующим введением mAb² в различных концентрациях (см. Пример 7.1). Затем для стимуляции потенциального эффекта поглощения, вызываемого циркулирующим растворимым MSLN, в отношении связывания mAb² с MSLN, связанным с клеточной поверхностью, mAb² захватывали на чип, а затем через них пропускали рекомбинантный антиген в различных концентрациях (см. Пример 7.2). Более того, также тщательно исследовали влияние растворимого рекомбинантного MSLN, добавленного на уровне, который соответствует уровню, который, как правило, обнаруживают в сыворотке у MSLN-положительных пациентов (Onda et al., 2006, 10.1158/1078-0432.CCR-05-1477), в исследованиях связывания с MSLN, экспрессируемым на клеточной поверхности, и в анализах CD8⁺ Т-клеток.

7.1 Связывание mAb2 к CD137/MSLN с MSLN человека в «авидных» условиях - метод захвата антигена

Тестировали связывание всех mAb² с MSLN, иммобилизованным на чипе BIAcore, для определения аффинности связывания в отношении MSLN человека в «авидных» условиях, когда доступна высокая концентрация иммобилизованного антигена, позволяющая антителу авидно связываться. На чип CM5 (GE Healthcare BR-1005-30) наносили hMSLN-His-Avi при приблизительно 100RU в соответствии с инструкциями производителя. Вводили панель mAb² к CD137/MSLN, описанных в Таблице 6, а также контрольные антитела G1-AA/HelD1.3 и G1-AA/SS1 (Hassan et al. 2002) в диапазоне концентраций в серии трехкратных разведений, начиная с 300 нМ, со скоростью потока 70 мкл/мин. Время ассоциации составляло 5 минут, и время диссоциации составляло 10 минут. Подвижный буфер представлял собой HBS-EP (GE Healthcare BR100188). Проточные ячейки регенерировали путем введения Глицина-HCl, pH 1,5, со скоростью потока 30 мкл/мин в течение 30 секунд. Данные анализировали путем использования двух эталонов и сравнения с проточной ячейкой, которую намеренно оставляли пустой (без нанесения на нее антигена). Кинетику связывания приводили в соответствие с моделью Ленгмюра 1:1 с получением скоростей ассоциации (k_a) и диссоциации (k_d). Рассчитывали равновесные константы связывания (K_D) путем деления скорости диссоциации на скорость ассоциации для каждого образца. Проводили анализ данных с помощью программного обеспечения BiaEvaluation, версия 3.2. Результаты представлены в Таблице 7.

mAb² FS22-172-003-AA/FS28-185 и FS22-172-003-AA/FS28-256, содержащие исходные Fab-области MSLN, FS28-185 и FS28-256, демонстрировали аффинность связывания от 36 до 50 нМ. В ином случае все mAb², содержащие потомство FS28-256 с созревшей аффинностью, демонстрировали аффинность связывания MSLN (K_D) ниже 10 нМ. Действительно, определяли субнаномолярную K_D для тех mAb², которые содержали Fab-области MSLN из линии FS28-024.

Для mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271 перекрестную реактивность с яванским макаком определяли посредством SPR с использованием кинетического анализа для стационарного состояния. На чип CM5 (GE Healthcare BR-1005-30) наносили hMSLN-His-Avi или cMSLN-His-Avi при приблизительно 50RU в соответствии с инструкциями производителя. Вводили mAb² в диапазоне концентраций в серии трехкратных разведений, начиная с 243 нМ, со скоростью потока 10 мкл/мин. Время ассоциации составляло 1000 секунд до стационарного состояния, и время диссоциации составляло 30 секунд. Подвижный буфер представлял собой HBS-EP (GE Healthcare BR100188). Проточные ячейки регенерировали путем введения Глицина-HCl, pH 1,5, со скоростью потока 30 мкл/мин в течение 30 секунд. Данные анализировали путем использования двух эталонов и сравнения с проточной ячейкой, которую намеренно оставляли пустой (без нанесения на нее антигена). Модель аффинности в стационарном состоянии использовали для анализа кинетических данных с применением программного обеспечения BiaEvaluation, версия 3.2. Связывание с cMSLN-Avi-His было в пределах 3-кратного связывания с hMSLN-Avi-His.

7.2 Связывание mAb² к CD137/MSLN с растворимым MSLN человека - метод захвата антитела

Также тестировали mAb² к CD137/MSLN, описанные в Таблице 7, а также контрольные антитела G1-AA/HelD1.3 и G1-AA/SS1 на предмет связывания с MSLN человека и MSLN яванского макака посредством SPR, в котором осуществляли захват указанных антител для оценки их связывания с MSLN в растворе (K_Dв растворе). Использовали белок G (GE Healthcare 29179315) для захвата образцов mAb или mAb² при приблизительно 100RU, после чего вводили hMSLN-His-Avi или cMSLN-His-Avi в диапазоне концентраций в серии трехкратных разведений, начиная с 1000 нМ, со скоростью потока 70 мкл/мин. Время ассоциации составляло 5 минут, и время диссоциации составляло 5 минут. Подвижный буфер представлял собой HBS-EP (GE Healthcare BR100188). Проточные ячейки регенерировали путем введения Глицина-HCl, pH 2,1, со скоростью потока 30 мкл/мин в течение 15 секунд. Анализировали данные, как описано в Примере 7.1. Результаты представлены в Таблице 7. Как определено методом захвата антитела, большинство mAb² демонстрировали в значительной степени сниженную аффинность связывания, что подтверждает стратегию скрининга, применяемую для получения авидных антител к MSLN с отличающимся связыванием в случае иммобилизованного MSLN относительно растворимого MSLN. Значения K_D для связывания с растворимым MSLN составляли от 4,27 нМ в случае лучшего mAb² FS22-172-003-AA/FS28-024-060 до 1,2 мкМ в случае mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256, демонстрировавшего самую низкую аффинность.

Все тестируемые mAb² демонстрировали перекрестную реактивность с яванским макаком в пределах 10-кратной аффинности к MSLN человека, за исключением mAb² FS22-172-003-AA/FS28-024-060, перекрестная реактивность которого была в 54 раза ниже по сравнению с MSLN человека, и поэтому его дальше не использовали.

Таблица 7: связывание mAb² к CD137/MSLN с иммобилизованным MSLN и MSLN в растворе, измеренное посредством SPR

mAb²	K_D в случае иммобилизованного MSLN человека (нМ)	K_D в случае MSLN человека в растворе (нМ)	K_D в случае MSLN яванского макака в растворе (нМ)	Соотношение K_D: в растворе/иммобилизованный MSLN человека
FS22-172-003-AA/FS28-024	0,39	46,53	169,7	119
FS22-172-003-AA/FS28-024-051	0,40	42,35	153,4	105
FS22-172-003-AA/FS28-024-052	0,39	33,12	239,1	85
FS22-172-003-AA/FS28-024-053	0,42	46,42	165,6	111
FS22-172-003-AA/FS28-024-060	0,13	4,27	230,4	33
FS22-172-003-AA/FS28-185	50,52	247,90	294,3	5
FS22-172-003-AA/FS28-256	36,01	1212,00	848,3	34
FS22-172-003-AA/FS28-256-012	3,12	809,10	711,7	259
FS22-172-003-AA/FS28-256-021	2,30	19,55	14,17	9
FS22-172-003-AA/FS28-256-023	3,09	56,16	44,23	18
FS22-172-003-AA/FS28-256-024	4,74	86,56	57,24	18
FS22-172-003-AA/FS28-256-026	3,19	57,86	33,13	18
FS22-172-003-AA/FS28-256-027	0,78	5,84	1,057	7
FS22-172-003-AA/FS28-256-271	5,9	18,2	N/A	3
FS22-172-003-AA/FS28-256-272	10,7	7,6	N/A	0,7
FS22-172-003-AA/FS28-256-273	6,0	7,4	N/A	1,2

N/A - не тестировано

Аффинность (измеряемую K_D) MSLN-связывающих Fab-областей всех mAb² подтверждали методом как захвата антигена (иммобилизованный MSLN), так и захвата антитела (MSLN в растворе). Значения K_D в случае находящегося в растворе относительно иммобилизованного варьировались для каждого антитела. На основе этих значений K_D рассчитывали соотношение, которое указывало на поведение каждого mAb² с точки зрения того, изменяло ли присутствие растворимого MSLN его связывание (Таблица 7). Без желания быть связанными какой-либо теорией авторы настоящего изобретения предполагают, что существует порог аффинности связывания, который mAb² необходимо преодолеть, чтобы быть способными к эффективному перекрестному связыванию, но различие в аффинности связывания в отношении иммобилизованного MSLN относительно MSLN в растворе также играет важную роль с точки зрения того, как на эту функциональность может влиять эффект поглощения, управляемый отделенным MSLN.

7.3 Biacore-связывание с CD137: сохранение аффинности связывания в формате mAb²

В дополнение к силе связывания в отношении MSLN также тестировали K_D Fcab к CD137 в отношении к CD137 человека, чтобы продемонстрировать сохранение Fcab свойств связывания при спаривании с другими Fab. На CM5-чип Biacore наносили антитело к Fab человека с использованием набора Human Fab Capture Kit (GE Healthcare 28958325) в соответствии с условиями производителя до достижения плотности на поверхности приблизительно 9000 RU. Осуществляли захват образцов FS22-172-003-AA/FS28-024-052 и FS22-172-003-AA/FS28-256-271 до приблизительно 100 RU, а затем через них пропускали антиген CD137 человека (hCD137-mFc-Avi) в диапазоне концентраций в серии трехкратных разведений, начиная с 81 нМ, со скоростью потока 70 мкл/мин. Время ассоциации составляло 5 минут, и время диссоциации составляло 5 минут. Подвижный буфер представлял собой HBS-EP. Проточные ячейки регенерировали путем двух повторных введений 10 мМ глицина-HCl, pH 2,1, со скоростью потока 30 мкл/мин в течение 30 секунд. Проводили анализ данных, как описано в предыдущих примерах (см., например, Пример 7.1). Результаты в Таблице 8 демонстрируют согласующуюся аффинность к CD137 среди mAb², содержащих одинаковый Fcab, но разные Fab. Fcab к CD137 отбирали таким образом, чтобы они предпочтительно связывали димерный или мультимерный CD137, а не мономерный CD137, за счет авидных связывающих взаимодействий. Предложена гипотеза, что этот авидный способ действия подходит для предпочтительного нацеливания на клетки-мишени с повышенной экспрессией CD137, такие как активированные Т-клетки, по сравнению с другими клетками, которые экспрессируют CD137 на гораздо более низких уровнях. Это может подходить для минимизации активации внеопухолевых Т-клеток, которая может вызывать такие нежелательные эффекты, как токсичность. Более того, Fcab разрабатывали таким образом, чтобы они обладали активностью только при перекрестном связывании и благодаря чему были неспособны индуцировать агонизм лишь путем связывания с CD137. В случае этих mAb² CD137/MSLN полагают, что кинетический способ действия для обоих видов специфичности молекулы может приводить к предпочтительному связыванию mAb² с MSLN, экспрессируемым на высоких уровнях на клетках опухоли, с последующим связыванием с активированными Т-клетками с повышенной экспрессией CD137. Благодаря динамике связывания, характерной для Fcab-доменов молекулы, в случае, когда молекула mAb² сначала связывает CD137 на Т-клетках, отсутствие MSLN-опосредуемого перекрестного связывания обеспечивает отсутствие запуска Т-клеточного агонизма.

Таблица 8: связывание mAb² с димерными антигенами CD137, измеренное посредством SPR

mAb²	Аффинность к hCD137-mFc-Avi, K_D (нМ)
FS22-172-003-AA/FS28-024-052	1,51
FS22-172-003-AA/FS28-256-271	1,26

7.4 Связывание с MSLN, экспрессируемым клеточной поверхностью, и препятствование растворимым MSLN

Для подтверждения связывания с MSLN клеточной поверхности mAb², перечисленные в Таблице 9, анализировали на предмет связывания с эндогенным MSLN клеточной поверхности с использованием линии клеток рака легкого человека NCI-H226. Кроме того, поскольку MSLN может быть обнаружен в крови в отделенной растворимой форме, существует риск того, что этот циркулирующий MSLN может влиять на воздействие и, в конечном счете, на эффективность mAb² согласно настоящему изобретению. Для подтверждения того, что присутствие растворимого MSLN оказывает минимальное влияние, проводили дополнительные эксперименты по связыванию с использованием клеток NCI-H226 в присутствии 20 нМ растворимого MSLN, что в 10-20 раз превышает уровень растворимого MSLN, который, как было установлено, имеет диагностическое значение для определения пациентов со злокачественной мезотелиомой и раком легкого как MSLN-положительных (Cui et al., 2014). Вкратце, клетки NCI-H226 (ATCC CRL-5826) брали из колб для культивирования клеток Т175 с использованием Аккутазы (Gibco, A11105-01). Протокол получения антител немного изменяли при дополнении растворимым MSLN: антитела разводили в буфере FACS с получением 2x конечной концентрации в 96-луночном планшете с V-образным дном, а затем 60 мкл из каждой лунки добавляли либо в один буфер FACS, либо в буфер FACS, содержащий 60 мкл 40 нМ рекомбинантного hMSLN-His (R&D systems, 3265-MS-050) (с получением конечной концентрации, составляющей 20 нМ hMSLN), и предварительно инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа перед добавлением 100 мкл к клеткам.

В обоих случаях клетки центрифугировали при 1200 об/мин в течение 3 минут и ресуспендировали в ледяном буфере FACS, состоящем из Д-ФБР (Life Technologies, 14190169) и 1% BSA (Sigma-Aldrich, A7906), в количестве 2×10⁶ клеток/мл, и высевали по 50 мкл на лунку в 96-луночный планшет с V-образным дном (Costar, 3894). Все тестируемые антитела разводили в буфере FACS в 120 мкл в диапазоне концентраций 0,01-200 нМ (4-кратные разведения). Затем клетки NCI-H226 центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость и клетки ресуспендировали в 100 мкл каждого разведения mAb, и инкубировали при 4°C в течение 45 минут. Клетки дважды промывали 150 мкл буфера FACS путем центрифугирования, ресуспендировали в 100 мкл, содержащих фрагмент F(ab′)2-R-фикоэритрин антитела козы к IgG (специфичного к γ-цепи) человека (Sigma, P8047), разведенный 1:1000 в буфере FACS, и инкубировали при 4°C в течение 45 минут. Клетки один раз промывали 150 мкл буфера FACS, а затем 150 мкл Д-ФБР, ресуспендировали в 150 мкл Д-ФБР, содержащего DAPI (Biotium, 40043) в соотношении 1:10000, и прочитывали на BDCantoII или iQue (Intellicyt). Данные анализировали с применением FlowJo v10 для определения среднего геометрического сигнала для PE для живых клеток в каждой лунке.

В соответствии с результатами связывания клеток, представленными в Таблице 9, подтверждали связывание с MSLN клеточной поверхности в эндогенно экспрессирующей линии клеток NCI-H226 для всех mAb² со значениями EC₅₀в диапазоне от 0,3 до более 47 нМ. Влияние присутствия растворимого рекомбинантного MSLN на аффинность связывания клеток, в целом, было слабым с минимальным (менее чем 3-кратным) увеличением ЕС50, наблюдаемым для большинства клонов.

FS22-172-003-AA/FS28-256 демонстрировало более высокую EC₅₀ в присутствии и в отсутствии растворимого MSLN, чем большинство других тестируемых клонов, что указывает на то, что исходное антитело FS28-256 демонстрировало более слабое связывание. Однако варианты этого исходного антитела с созревшей аффинностью демонстрировали более сильное связывание. В частности, аффинность связывания клеток для mAb², содержащих клоны, полученные из FS28-256, такие как FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-012, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256-023, FS28-256-024 и FS28-256-026 была намного выше, чем у исходного, и на нее не влияло присутствие растворимого MSLN. Это демонстрирует, что даже в присутствии избытка растворимого MSLN большинство mAb² предпочтительно связывались с мембраносвязанной формой MSLN. Наибольшему влиянию подвергались mAb², содержащие FS28-024-060 и FS28-256-027, при связывании с клетками в присутствии растворимого MSLN, что указывает на то, что присутствие отделенного MSLN с большей вероятностью влияет на агенты с более высокой аффинностью, связывающие MSLN в растворе. mAb², содержащие исходный клон FS28-185 (т.е. FS22-172-003-AA/FS28-185), также демонстрировали более высокие значения EC₅₀ и, таким образом, демонстрировали более слабое связывание в присутствии и в отсутствии растворимого рекомбинантного MSLN. Также тестировали варианты исходного клона с созревшей аффинностью. Для этих клонов с созревшей аффинностью в mAb² наблюдали улучшение связывания в отсутствии растворимого MSLN.

Таблица 9: связывание mAb² к CD137/MSLN с клетками NCI-H226

mAb²	NCI-H226		NCI-H226 + 20 нМ растворимый MSLN
mAb²	EC₅₀(нМ)	E_max(MFI)	EC₅₀(нМ)	E_max(MFI)
FS22-172-003-AA/FS28-024	0,3886	772808	3,049	791715
FS22-172-003-AA/FS28-024-051	0,4774	767620	3,061	797595
FS22-172-003-AA/FS28-024-052	0,8844	752345	3,639	799055
FS22-172-003-AA/FS28-024-053	0,5789	783415	2,77	787914
FS22-172-003-AA/FS28-024-060	0,6945	840057	4,691	930443
FS22-172-003-AA/FS28-185	22,95	4926	28,43	4926
FS22-172-003-AA/FS28-256	47,07	174359	52,87	200240
FS22-172-003-AA/FS28-256-001	N/A	N/A	N/A	N/A
FS22-172-003-AA/FS28-256-005	0,7293	440704	0,8561	423827
FS22-172-003-AA/FS28-256-012	5,696	515615	6,364	485690
FS22-172-003-AA/FS28-256-014	0,727	476372	1,095	514410
FS22-172-003-AA/FS28-256-018	3,601	347878	4,09	357365
FS22-172-003-AA/FS28-256-021	4,02	689367	9,489	773900
FS22-172-003-AA/FS28-256-023	1,286	618097	2,134	624592
FS22-172-003-AA/FS28-256-024	3,405	647114	5,236	674662
FS22-172-003-AA/FS28-256-026	1,47	634311	2,683	687574
FS22-172-003-AA/FS28-256-027	0,613	800727	2,305	685895

ND - тестировали, отсутствие активности, поэтому EC50 Emax не определены
N/A - не тестировали

7.5 mAb² связывают линии клеток с широким диапазоном уровней экспрессии эндогенного мезотелина

Для демонстрации способности клона Fab к MSLN, FS28-256-271, связывать клетки, экспрессирующие MSLN в диапазоне значений плотности на клетках, тестировали mAb² в анализе связывания клеток методом проточной цитометрии, аналогичном описанному в Примере 7.3, в котором использовали следующие клетки карциномы человека: NCI-H226 [H226] (ATCC® CRL-5826), OVCAR-3 [OVCAR3] (ATCC® HTB-161) и AsPC-1 [AsPC-1] (ATCC® CRL-1682™). MSLN-отрицательную линию клеток HEK.FRT, описанную в Примере 2, также использовали в качестве отрицательного контроля. Для определения относительной экспрессии MSLN в каждой линии клеток использовали связывающую способность антитела (ABC) в соответствии с протоколом, рекомендованным производителем (Quantum™ Simply Cellular® #816 Bangs Labs). Линии клеток ранжировали в порядке уровней экспрессии MSLN: H226 имели самый высокий уровень MSLN из тестируемых (ABC 315478), OVCAR3 имели средние уровни (ABC 103444), AsPC-1 имели низкие уровни (ABC 20999).

Результаты указанного анализа связывания клеток представлены в Таблице 10. С точки зрения уровней экспрессии, FS28-256-271 сильнее связывается с H226, демонстрирующей самую высокую экспрессию MSLN из тестируемых линий клеток. mAb² демонстрировали сопоставимое связывание с клетками OVCAR-3 и AsPC-1. Как и ожидали, FS28-256-271 селективно связывается с клетками, экспрессирующими MSLN, но не с отрицательной линией клеток HEK.FRT. Следовательно, mAb² к CD137/MSLN сможет действовать на клетках, демонстрирующих диапазон уровней экспрессии мембранного MSLN.

Таблица 10: сила связывания клеток для mAb² к CD137/MSLN в случае клеток, экспрессирующих MSLN в широком диапазоне плотности

Линия клеток	Связывание, EC50 (нМ)
NCI-H226	0,3041
OVCAR-3	0,3058
AsPC-1	0,2934
HEK.FRT	ND

ND - тестировали, связывания не детектировали, поэтому EC₅₀ не определена

Пример 8: функциональная активность mAb2 к CD137/MSLN

Для демонстрации того, что линии клеток с эндогенными уровнями MSLN могут перекрестно связывать mAb² к CD137/MSLN и приводить к агонизму CD137 и последующей активации Т-клеток, разрабатывали анализ цитотоксических CD8+ Т-клеток, в котором в качестве конечной точки анализа использовали высвобождение цитокина IL-2 или TNFγ. NCI-H226, OVCAR-3, AsPC-1 и HEK.FRT, описанные в Примере 7, использовали для тестирования mAb² к CD137/MSLN в этом анализе Т-клеток.

Для выделения Т-клеток выделяли мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) из лейкоцитарных фильтров, побочного продукта донорства тромбоцитов. Вкратце, содержимое лейкоцитарных фильтров промывали ФБР и наслаивали на градиент Фиколла (Ficoll) (Sigma-Aldrich, 1440-02). Выделяли МКПК путем центрифугирования и извлекали клетки, которые не проходили через градиент Фиколла. Затем МКПК промывали ФБР и оставшиеся эритроциты лизировали путем добавления 10 мл 1X буфера для лизиса эритроцитов (eBioscience, 00-4300-54) в соответствии с инструкциями производителя. Из МКПК, присутствующих в элюенте, выделяли CD8⁺ Т-клетки с использованием набора для выделения CD8⁺Т-клеток II (CD8⁺ T cell isolation kit II) (Miltenyi Biotec Ltd, 130-096-495) в соответствии с инструкциями производителя.

Инкубацию совместно с антителом к CD3 использовали в качестве первого сигнала для запуска начальной активации Т-клеток. На 96-луночные планшеты с плоским дном для тканевых культур наносили 8 мкг/мл антитела к CD3 (клон UCHT1, R&D Systems, MAB100-SP) в ФБР на ночь при 4°C. Затем планшеты 3 раза промывали 200 мкл ФБР.

8.1 Анализ CD8⁺ T-клеток с использованием NCI-H226 на предмет перекрестного связывания MSLN

Затем из МКПК выделяли цитотоксические CD8⁺ T-клетки, как описано выше. Клетки NCI-H226 высевали по 2×10⁴ клеток на лунку в покрытые антитело к CD3 (8 мкг/мл) 96-луночные планшеты с плоским дном в 100 мкл среды для культивирования Т-клеток (среда RPMI (Life Technologies, 61870-044) с 10% FBS (Life Technologies), 1X пенициллином-стрептомицином (Life Technologies, 15140122), 1 мМ пируватом натрия (Gibco, 11360-070), 10 мМ Hepes (Sigma-Aldrich, H0887), 2 мМ L-глутамином (Sigma-Aldrich, G7513) и 50 мкМ 2-меркаптоэтанолом (Gibco, M6250)). После адгезии клеток после 4 часов инкубации всю среду для культивирования Т-клеток удаляли и заменяли 50 мкл среды для культивирования Т-клеток, содержащей Т-клетки в концентрации 4,0×10⁵ клеток/мл, в результате чего получали 2,0×10⁴ клеток/лунка. mAb² разводили в среде для Т-клеток до 2× конечной концентрации, начиная с 60 нМ, и осуществляли серийные разведения 1:3 или 1:7. К клеткам добавляли 50 мкл mAb²для титрования до общего объема образца 200 мкл и 1X концентрации антитела. Подробное описание молекул, тестируемых в этом анализе, приведено в Таблице 11, G1-AA/20H4.9 использовали в качестве положительного контроля в каждом анализе (данные не представлены).

Инкубировали образец при 37°C, 5% CO₂ в течение 72 часов. Надосадочные жидкости собирали и анализировали с помощью набора V-PLEX IL-2 kit от Meso Scale Discovery (K151QQD-4) в соответствии с инструкциями производителя. Строили график зависимости концентрации IL-2 человека (hIL-2) от логарифма концентрации антитела, и полученные кривые приводили в соответствие с использованием уравнения зависимости логарифма (агонист) и ответа в GraphPad Prism.

В Таблице 11 приведены значения ЕС₅₀ и максимальный ответ в виде высвобождения IL-2, наблюдаемый в анализе активации Т-клеток при различных повторах анализа. Из-за количества выполняемых анализов использовали Т-клетки от нескольких доноров. В каждом случае в каждом анализе использовали положительный и отрицательный контроли для обеспечения согласованных наборов данных для всех анализов и доноров. Антитело к CD137 человека положительного контроля, 20H4.9, демонстрировало увеличение высвобождения hIL-2 с ЕС50, составляющей 0,5 нМ. Отсутствие нецелевого CD137-опосредуемого Т-клеточного агонизма подтверждали в анализе CD8⁺ Т-клеток, аналогичном описанному выше, но с использованием HEK-FRT, которые не трансдуцировали для экспрессии клеток MSLN, вместо MSLN-положительных NCI-H226. Крайне желательным является избегание нецелевой активации, особенно для антител к CD137 из-за наличия случаев дозолимитирующей токсичности, наблюдаемой в случае некоторых других молекул CD137 при клиническом применении, и поэтому этот фактор использовали при определении того, какие комбинации mAb² выбирали. Следующие mAb² демонстрировали увеличение высвобождения IL-2, каждое с субнаномолярной EC50: FS22-172-003-AA/FS28-024-051, FS22-172-003-AA/FS28-024-052, FS22-172-003-AA/FS28-024-053, FS22-172-003-AA/FS28-024-060, FS22-172-003-AA/FS28-256-021, FS22-172-003-AA/FS28-256-023, FS22-172-003-AA/FS28-256-026, FS22-172-003-AA/FS28-256-027. На Фиг. 1 показаны типичные графики высвобождения IL-2 для анализа активации Т-клеток. Эти результаты позволяют предположить, что mAb², содержащие Fab из линии FS28-185 (Фиг. 1B), не демонстрировали функциональной активности в этом конкретном анализе. Удивительно, что все mAb², спаренные с Fab линии FS28-185, демонстрировали очень ограниченное и сниженное высвобождение IL-2 или оно отсутствовало вовсе. Это позволяет предположить, что хотя Fab в этой линии способны связывать MSLN, связывание с этой конкретной областью MSLN, по-видимому, неспособно к перекрестному связыванию mAb² к CD137/MSLN способом, приводящим к повышению активности при перекрестном связывании MSLN в этом анализе. Все mAb², содержащие Fab линии FS28-024 (Фиг. 1A) и FS28-256-021, FS28-256-023, FS28-256-023, FS28-256-026 и FS28-256-027 линии FS28-256 (Фиг. 1C), демонстрировали увеличение высвобождения hIL-2 при субнаномолярной EC₅₀.

Таблица 11: функциональный скрининг mAb² к CD137/MSLN в анализе CD8⁺ Т-клеток в сокультуре с клетками аденокарциномы легкого NCI-H226.

	NCI-H226 Донор А		NCI-H226 Донор В
mAb² FS22-172-003-AA/	EC₅₀(нМ)	E_max(IL-2 пг/мл)	EC₅₀(нМ)	E_max(IL-2 пг/мл)

FS28-024	0,02	1122	0,03	1381
FS28-024-051	0,08	1129	0,04	1800
FS28-024-052	0,04	1067	0,05	1689
FS28-024-053	0,07	1007	0,04	1441
FS28-024-060	0,04	1401	0,06	1942
FS28-185	ND	ND	ND	ND
FS28-185-002	ND	ND	ND	ND
FS28-185-003	ND	ND	ND	ND
FS28-256	34,01	1260	22,21	8586
FS28-256-005	1,63	1099	N/A	N/A
FS28-256-012	1,56	1550	1,67	1100
FS28-256-014	3,58	1358	N/A	N/A
FS28-256-018	3,22	1256	3,71	903
FS28-256-021	0,06	1784	0,04	1005
FS28-256-023	0,64	1964	0,23	975
FS28-256-024	1,29	2121	0,61	1086
FS28-256-026	0,67	2055	0,23	932,5
FS28-256-027	0,05	2112	N/A	N/A

ND - тестировали, отсутствие активности, поэтому EC50 Emax не определены

N/A - не тестировали

Анализ CD8⁺ T-клеток с использованием NCI-H226 в присутствии растворимого MSLN

Функциональный анализ CD8⁺ Т-клеток, описанный выше, повторяли в присутствии hMSLN-His в концентрации 20 мМ, которая в 10-20 раз превышает уровень растворимого MSLN, который, как было установлено, имеет диагностическое значение для определения пациентов со злокачественной мезотелиомой и раком легкого как MSLN-положительных (Cui et al., 2014).

На Фиг. 2 показана активность подгруппы mAb² в присутствии или в отсутствии растворимого MSLN. Как и ожидали, растворимый MSLN не изменяет активность тех mAb², спаренных с Fab, которые предпочтительно связываются с иммобилизованным, а не с растворимым MSLN. В частности, на mAb², содержащие Fab к MSLN: FS28-024-051, FS28-024-052, FS28-024-053, FS28-256-021 и FS28-256-023, не влияло присутствие растворимого MSLN в концентрации до 20 нМ, и это согласуется с данными по аффинности и связыванию клеток, описанными в Примерах 7.1 и 7.2.

Интересно, что mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-027 демонстрировали наибольшую потерю активности при инкубации совместно с 20 нМ растворимого MSLN, что приводило к значительному сдвигу EC₅₀. Это согласуется с результатами по аффинности в Примерах 7.1 и 7.2, где FS28-256-027 демонстрировал высокую аффинность как к иммобилизованному, так и к растворимому MSLN, тем самым подтверждая теорию о том, что высокая аффинность к растворимому MSLN нежелательна. Результаты согласуются с гипотезой, описанной ранее, согласно которой клонам с предпочтительным связыванием с мембранным MSLN меньше «мешает» присутствие растворимого MSLN. В этом отношении клон FS28-256-027 демонстрирует высокую аффинность связывания в отношении как иммобилизованного MSLN, так и MSLN в растворе, и функциональные данные для mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-027 демонстрируют значительный сдвиг EC₅₀ при обработке 20 нМ sMSLN. На остальные mAb², содержащие Fab к MSLN: FS28-024-051, FS28-024-052, FS28-024-053, FS28-256-021 и FS28-256-023, не влияло присутствие до 20 нМ, и это согласуется с данными по аффинности и связыванию клеток, описанными выше.

8.2 Анализ CD8⁺ T-клеток с использованием OVCAR-3 на предмет перекрестного связывания

Мезотелин-положительные раковые опухоли демонстрируют широкий диапазон уровней экспрессии, и поэтому было желательно оценить функциональность некоторых mAb², которые, как было определено, обладают субнаномолярной активностью в Примере 8.1, с использованием клеток с меньшей плотностью MSLN на клеточной поверхности. Для этого выполняли анализы активации Т-клеток, как описано в Примере 8.1 выше, но в этот раз использовали линию клеток OVCAR-3 (ATCC® HTB-161). Указанные клетки представляют собой MSLN-положительные клетки карциномы яичников, которые эндогенно экспрессируют более низкие уровни MSLN, чем клетки NCI-H226. Следовали тому же протоколу, который описан в Примере 8.1, со следующим изменением: из-за различий в размере и морфологии клеток, клетки OVCAR-3 высевали по 1×10⁴ клеток на лунку в покрытые антителами к CD3 (8 мкг/мл) 96-луночные планшеты с плоским дном в 100 мкл среды для культивирования Т-клеток. После адгезии клеток после 4 часов инкубации всю среду для культивирования Т-клеток удаляли и заменяли 50 мкл среды для культивирования Т-клеток, содержащей Т-клетки в концентрации 8,0×10⁵ клеток/мл, в результате чего получали 4,0×10⁴ клеток/лунка. Результаты подтверждают способность всех тестируемых mAb² управлять высвобождением IL-2 при перекрестном связывании с клетками OVCAR-3 (см. Фиг. 3). Эти данные позволяют предположить, что эти mAb² могут действовать в широком диапазоне плотности MSLN в различных линиях клеток опухолей. В этом анализе также тестировали Fcab FS22-172-003 в формате ложного mAb² HelD1.3 (FS22-172-003/HelD1.3), поскольку он не связывается с MSLN, и отсутствие высвобождения IL-2 указывало на то, что указанный Fcab к CD137 человека является функциональным только когда перекрестно связан через Fab-фрагменты (MSLN в этом случае).

8.3 Функциональный скрининг клонов FS28-256 с оптимизированными последовательностями и созревшей аффинностью

Все mAb², содержащие Fab к MSLN из линии FS28-256, описанной в Примере 8.2, содержат потенциальный сайт N-связанного гликозилирования в CDR2 VH, который удаляли, как описано в Примере 5.4. Получали три варианта mAb² со следующими заменами: FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-256-272 и FS22-172-003-AA/FS28-256-273, которые содержали замены аминокислот согласно номенклатуре IMGT: N55A, N55H или H55S соответственно. Для демонстрации активности этих mAb² с оптимизированными последовательностями проводили анализы активации CD8+ Т-клеток в сокультуре с MSLN+ клетками NCI-H226, как описано в Примере 8.1. mAb² также тестировали в присутствии растворимого MSLN.

Таблица 12: функциональный скрининг оптимизированных клонов FS28-256 с использованием клеток NCI-H226 в присутствии и отсутствии растворимого MSLN

mAb²	EC₅₀(нМ)
	В отсутствии sMSLN	+ 2 нМ sMSLN	+ 20 нМ sMSLN
FS22-172-003-AA/FS28-256-271	0,1166	0,1390	0,3530
FS22-172-003-AA/FS28-256-272	0,1216	0,1299	0,6840
FS22-172-003-AA/FS28-256-273	0,0791	0,0616	0,3663

На Фиг. 4 и в Таблице 12 показана активность этих mAb² и влияние растворимого MSLN на общую активность молекулы. mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271 демонстрировало наименьшее снижение активности из трех тестируемых mAb². В соответствии с данными, описанными в Примерах 8.1 и 7.2, на Fab к MSLN, которые связываются с более высокой аффинностью с иммобилизованным MSLN по сравнению с MSLN в растворе, меньше влияло присутствие растворимого MSLN: mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271 демонстрировало наименьшее изменение EC₅₀ в присутствии растворимого MSLN по сравнению с отсутствием растворимого MSLN, при этом наблюдали 3-кратное снижение EC₅₀. В соответствии с измерениями аффинности, описанными в Примере 7.1, это mAb² демонстрировало более высокую аффинность к иммобилизованному MSLN по сравнению с MSLN в растворе. Также в соответствии с Примером 7.1, mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-272 и FS22-172-003-AA/FS28-256-273 связывали MSLN в растворе с более высокой аффинностью, и это оказывало большое влияние на EC₅₀ для этих клонов в этом анализе в присутствии растворимого MSLN по сравнению с тем, когда растворимый MSLN отсутствовал, как показано на Фиг. 4. Соответственно, для дальнейшего определения характеристик выбирали mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271.

8.4 Зависимая от экспрессии активность mAb² к CD137/MSLN в линиях эндогенных клеток, экспрессирующих MSLN в широком диапазоне уровней, и у нескольких доноров МКПК

Как упомянуто в Примерах 8.1 и 8.2, пациенты, страдающие раком, экспрессируют различные уровни MSLN. Поэтому было желательным определение активности mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271 в диапазоне клеток, экспрессирующих различные уровни MSLN. Выполняли анализы CD8⁺Т-клеток, как описано в Примерах 8.1 и 8.2. В дополнение к измерению IL-2 через 72 часа, также измеряли выработку IFNγ через 96 часов с использованием набора V-PLEX human IFNγ MSD kit (Meso Scale Discovery, K151QOD-4) в соответствии с инструкциями производителя.

Таблица 13: MSLN-зависимая активность mAb² в различных линиях клеток опухолей

	Выработка IL-2 (нМ)
	NCI-H226	OVCAR-3	AsPC-1	HEK.FRT
Донор С	0,1111	N/A	0,7784	ND
Донор D	0,1122	N/A	0,8409	N/A
Донор E	0,0722	0,1453	N/A	ND
Донор F	0,0723	0,0693	N/A	ND
	Выработка IFNγ (нМ)
	NCI-H226	OVCAR-3	AsPC-1	HEK.FRT
Донор G	0,0332	N/A	0,1475	ND
Донор H	0,0732	0,0840	0,1636	N/A
Донор J	N/A	N/A	0,3443	N/A

ND - тестировали, активности не обнаруживали, поэтому ЕС₅₀ не определена

N/A - не тестировали

Во всех анализах, описанных в Таблице 13, mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271 было способно индуцировать сильную активацию Т-клеток при перекрестном связывании клетками, экспрессирующими различные уровни MSLN, о чем свидетельствует субнаномолярная активность для выработки IL-2 (72 ч) и IFNγ (96 ч) (см. Таблицу 13). Интересно, что выработка IL-2 и IFNγ снижалась с количеством MSLN, присутствующего на перекрестно связывающих клетках, например при перекрестном связывании с клетками, экспрессирующими низкие уровни MSLN (AsPC-1). Это снижение было менее выраженным при измерении выработки IFNγ по сравнению с IL-2, однако во всех случаях указанное mAb² демонстрировало субнаномолярную активность. Более того, когда mAb² тестировали в сокультуре с MSLN-отрицательными клетками HEK.FRT, указанное mAb² не вызывало никакой агонистической активности, о чем свидетельствует отсутствие выработки цитокинов. В целом, эти результаты позволяют предположить, что mAb² может индуцировать активацию Т-клеток даже при низких уровнях MSLN, и что уровень активации T-клеток, индуцируемой mAb², зависит от уровня присутствующего MSLN для перекрестного связывания mAb², и, следовательно, демонстрируют, что активность mAb² коррелирует с плотностью MSLN, экспрессируемого на клетках.

Пример 9: получение Fcab к CD137 мыши

Из-за низкой гомологии последовательностей между последовательностями CD137 мыши и человека получали и описывали Fcab, которые специфично связывались с CD137 мыши, что позволяло тестировать активность mAb², содержащих антигенсвязывающую область для CD137 в константном домене, в моделях у мышей in vivo.

9.1 Наивный отбор Fcab к CD137 мыши

Для отбора Fcab, которые связываются с CD137 человека, применяли подходы по отбору на основе дрожжевого дисплея, аналогичные тем, которые описаны для отбора Fcab, связывающих CD137 человека (см. Пример 2.1). В качестве антигена использовали рекомбинантный димер мыши (см. Пример 1).

Для отбора Fcab, связывающихся с CD137 мыши, использовали четыре наивные дрожжевые библиотеки, отображающие CH1-CH3-домены IgG1 человека, ранее используемые для отбора Fcab, связывающихся с CD137 человека. Всего проводили 53 отдельных цикла отбора для идентификации агентов, связывающих CD137 мыши. Для отбора связывающих агентов из наивных дрожжевых библиотек использовали рекомбинантный димерный биотинилированный антиген CD137 мыши (mCD137-mFc-Avi) самостоятельного получения.

9.2 Определение характеристик Fcab к CD137 мыши, полученных в результате наивного отбора

Специфичность Fcab к CD137 мыши в отношении CD137 мыши тестировали в формате «ложного» mAb² HelD1.3 и измеряли посредством BLI в системе Octet QKe путем тестирования на предмет связывания Fcab с другими рецепторами TNFRSF мыши (CD40, OX40, GITR). Покрытые стрептавидином биосенсоры (PALL ForteBio 18-5021) для нанесения на них 10 нг/мкл рецепторов CD40, GITR, OX40 мыши (все получены у R&D Systems и биотинилированы с использованием набора EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin kit от Thermoscientific #21328). Fcab к CD137 мыши в формате «ложного» mAb² разводили 1:1 в кинетическом буфере (PALL 18-1092) до конечной концентрации, составляющей по меньшей мере 1 мкМ. Покрытые антигеном сенсоры погружали в растворы mAb² на 180 секунд, а затем на 180 секунд в 1 × кинетический буфер. В качестве положительного контроля использовали антитела к каждому из указанных рецепторов TNFRSF. Клоны Fcab: FS22m-055, FS22m-063, FS22m-066, FS22m-075, FS22m-135, FS22m-055, FS22m-063, FS22m-066 не связывались ни с одним из тестируемых рецепторов TNFRSF, что таким образом демонстрирует их специфичность в отношении CD137 мыши.

Клетки HEK.FRT.luc, экспрессирующие последовательность CD137 мыши (SEQ ID NO: 150), получали в соответствии с той же методикой, которая ранее описана в Примере 2.3. mAb², содержащие предварительно отобранные Fcab к CD137 мыши, подвергали скринингу с использованием этой линии клеток, HEK.FRT.luc.mCD137, в соответствии со способом, описанным в Примере 2.3. Тестировали 56 mAb², 29 из которых были положительными по активности NF-κB. Lob12.3, содержащее Fc IgG1 человека с мутацией LALA (G1AA/Lob12.3), использовали в качестве mAb к CD137 мыши положительного контроля и оно демонстрировало усиление люминесценции, что подтверждало достоверность анализа. HelD1.3, также содержащее Fc IgG1 человека с мутацией LALA, использовали в качестве изотипа IgG человека отрицательного контроля для исключения «вмешательства» ложного Fab IgG человека в этом анализе. По возможности рассчитывали ЕС₅₀, и mAb², активность которых не достигала плато, отбрасывали в пользу mAb², которые демонстрировали классическую сигмоидальную кинетику активности. mAb² ранжировали в порядке EC50 и кратности изменения активности при перекрестном связывании белка L. Выбирали FS22m-063 на основании того, что он демонстрирует лучшую ЕС50 при перекрестном связывании (1,44 нМ) и наибольшую кратность изменения активности при перекрестном связывании (27-кратное).

Пример 10: отбор и определение характеристик антител к MSLN мыши

10.1 Наивный отбор mAb к MSLN мыши

MSLN мыши и человека демонстрируют низкую аминокислотную идентичность (60%). Для обеспечения проведения исследований для подтверждения концепции (PoC) in vivo у мышей, авторы настоящего изобретения поставили перед собой задачу выделить mAb к MSLN мыши, обладающие свойствами, схожими со свойствами mAb к MSLN человека, описанных в Примере 4 и 5.

Использовали отбор на основе фагового дисплея с использованием синтетических наивных фагмидных библиотек, отображающих Fab-домен IgG1 зародышевой линии человека с рандомизацией по CDR1, CDR2 и CDR3 (MSM Technologies), для отбора с помощью биотинилированного MSLN-His-Avi мыши (SEQ ID NO 143, см. раздел 1.1), как описано в разделе 1.2. Проводили четыре цикла отбора со снижением концентраций биотинилированного mMSLN-His-Avi и, как и в случае отбора антител к MSLN человека, осуществляли стратегии маскирования эпитопа в последующем подходе. Более того, после первого цикла использования рекомбинантного антигена получали клетки HEK293-mMSLN, которые использовали во 2, 3 и 4 цикле.

Вкратце, кДНК, кодирующую последовательность MSLN мыши (SEQ ID NO: 145), субклонировали в вектор pcDNA5/FRT/TO (Life Technologies, V652020), а затем котрансфицировали с плазмидой экспрессии рекомбиназы Flp, pOG44 (Life Technologies, V600520) в линии клеток Flp-In TREx 293 (Life Technologies, R78007). Клетки выращивали в среде DMEM, содержащей 10% FBS, 100 мкг/мл гигромицина B (Melford Laboratories Ltd, Z2475) и 15 мкг/мл бластицидина (Melford Laboratories Ltd, B1105), в течение 3-4 недель до образования колоний стабильно трансформированных клеток. Эти колонии амплифицировали в присутствии 1 мкг/мл доксициклина (Sigma Aldrich, D9891) и тестировали на предмет экспрессии MSLN с использованием антитела к MSLN мыши (LS Bio, LS-C179484).

Проводили скрининг всего 47 отдельных mAb из обогащенных популяций на предмет связывания антигена, и 45 уникальных положительно связывающих агентов субклонировали и экспрессировали в виде растворимых mAb в LALA-формате IgG1, как описано выше в Примере 1.3. Определяли характеристики mAb по специфичному связыванию с иммобилизованным mMSLN-His-Avi путем ELISA и ранжировали на основе аффинности к приблизительно 50 или 200 RU иммобилизованного mMSLN-His-Avi в кинетических экспериментах с применением анализа Biacore. В результате идентифицировали панель mAb, включая FS28m-228, с аффинностью в диапазоне от 1 до 25 нМ. Кроме того, тестировали связывание с различными областями MSLN, как описано в разделе 2.1.3. В качестве положительного контроля использовали перекрестно реагирующее mAb мыши, G1-AA/MOR6626, полученное путем клонирования VH и VL клона MOR6626 (публикация патента № WO 2009/068204 A1). Большинство клонов, среди которых FS28m-228, не могли связываться с MSLN, уже связанным с MOR6626, тогда как другие, такие как FS28-194 или FS28-261, демонстрировали частичное или полное связывание соответственно. Таким образом, выделяли клоны, связывающиеся с разными областями (группы).

Обобщенные результаты: отбор и скрининг Fcab к CD137 мыши и mAb

Было показано, что Fcab к CD137, идентифицированные в предыдущих примерах, обладают агонистической активностью в репортерных анализах NF-κB, когда они перекрестно связаны также внешним перекрестно связывающим агентом, таким как белок L (Пример 9). Из панели идентифицированных Fcab к CD137 человека выбирали FS22m-066 для спаривания с Fab, нацеленными на MSLN мыши, поскольку этот клон обладал самыми подходящими функциональными и биофизическими свойствами.

Стратегии отбора на основе фагового дисплея и скрининга антител позволили идентифицировать панель клонов, связывающих мезотелин мыши, с диапазоном значений аффинности, которые связываются с различными областями mMSLN. Подобно агентам, связывающим MSLN человека, указанные клоны демонстрировали характеристики связывания, способствующие связыванию с иммобилизованным mMSLN, а не с растворимым mMSLN, что делает их подходящими молекулами для изучения в PoC-исследованиях у мышей in vivo.

Пример 11: получение mAb² к CD137/MSLN мыши

Как описано в Примере 10, получали панель наивных антител к MSLN мыши и подвергали ее скринингу на предмет подходящих свойств связывания и нацеливания. Fcab к CD137 мыши выбирали, как описано в Примере 9. Fcab к CD137 мыши (FS22m-063) и Fab к MSLN мыши (FS28m-228 и FS28m-228-010) использовали для получения mAb² мыши для определения полных характеристик in vitro, а также для подтверждения in vivo концепции агонизма CD137, нацеленного на MSLN, в моделях сингенных опухолей у мышей. Выбирали Fab для исследования взаимосвязи между аффинностью связывания, авидностью и функциональной активностью. mAb², содержащие мутацию LALA в CH2-области тяжелой цепи с целью минимизации вклада управляемого Fc-гамма-рецептором перекрестного связывания, а также эффекторной функции, конструировали, как описано в Примере 6, и присваивали им идентификационные номера FS22m-063-AA/FS28m-228 (SEQ ID NO 136 (легкая цепь), 137 (тяжелая цепь)) и FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (SEQ ID NO 136 (легкая цепь) и 166 (тяжелая цепь)) соответственно. Указанные mAb² получали путем временной экспрессии в клетках HEK293-6E и очищали с использованием колонок mAb SelectSure с белком А.

11.1 Кинетика связывания

Подобно агентам, связывающим MSLN человека, аффинность mAb² к связыванию с иммобилизованным и растворимым MSLN тестировали посредством SPR с использованием устройства Biacore.

Методика связывания с иммобилизованным MSLN была аналогична методу, описанному в Примере 7.1 и 7.2, с использованием mMSLN-His-Avi, иммобилизованного при 50 RU. Для определения аффинности к растворимому MSLN осуществляли захват mAb² через антитело к Fc человека. Вкратце, 25 мкг/мл антитела к IgG (Fc) человека (GE Healthcare, набор Human Antibody Capture Kit, BR100839) иммобилизовали на сенсорном чипе CM5 Biacore (GE Healthcare, BR100530) с достижением конечного ответа приблизительно 750 RU. Молекулу mAb², разведенную в буфере HBS-EP (GE Healthcare, BR100188) в концентрации 50 нМ, отдельно вводили со скоростью 30 мкл/мин с достижением ответа приблизительно 100 RU. Рекомбинантный антиген mMSLN-His-Avi, разведенный в буфере HBS-EP, вводили в диапазоне концентраций от 243 нМ до 0,11 нМ с 3-кратными разведениями в течение 5 минут со скоростью 70 мкл/мин, а затем оставляли диссоциировать в буфере в течение 5 минут. Регенерацию осуществляли путем введения 3 М хлорида магния (GE Healthcare, набор Human Antibody Capture Kit, BR100839) в течение 30 секунд со скоростью 30 мкл/мин.

Кинетические данные приведены в Таблице 14. FS22m-063-AA/FS28m-228-010 демонстрировало более сильное связывание с мембраносвязанным MSLN, чем с растворимым отделенным MSLN, вероятно, благодаря усиленным авидным связывающим взаимодействиям. mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 с созревшей аффинностью демонстрировало улучшение связывания как с иммобилизованным MSLN, так и с MSLN в растворе. Выбирали FS28m-228-010, поскольку он предпочтительно связывается с иммобилизованным MSLN, что, как полагают, помогает избежать эффекта поглощения MSLN, циркулирующим в крови. Этот клон подобно Fab FS28-256-271 человека связывал иммобилизованный MSLN в однозначном наномолярном диапазоне и был предпочтительно нацелен на иммобилизованный MSLN, а не на MSLN в растворе.

Таблица 14: связывание mAb² к CD137/MSLN мыши с иммобилизованным MSLN и MSLN в растворе, измеренное посредством SPR

mAb² (FS22m-063-AA/)	Аффинность к иммобилизованному mMSLN-His-Avi, K_D (нМ)	Аффинность к mMSLN-His-Avi в растворе, K_D (нМ)	Соотношение K_D: в растворе/иммобилизованный MSLN-His-Avi человека
FS28m-228	7,90	252	31,9
FS28m-228-010	2,6	60,24	23,2

11.2 Функциональная активность mAb²к CD137/MSLN мыши с использованием MSLN-положительных клеток мыши

Активированные цитотоксические CD8⁺ Т-клетки ответственны за непосредственное уничтожение раковых клеток и экспрессируют CD137 на своей клеточной поверхности (Ye et al., 2014). Известно, что кластеризация CD137 необходима для индукции нисходящей передачи сигнала и дальнейшей активации CD8⁺ Т-клеток. Поэтому анализ активации CD8⁺ Т-клеток использовали для оценки способности mAb² управлять кластеризацией и последующей нисходящей передачей сигнала CD137. Активацию CD8⁺ Т-клеток осуществляли путем стимуляции антигеном генетически модифицированных Т-клеток ОТ-1, выделенных у мышей C57 BL/6-Tg(tcratcrb)1100Mjb/Crl OT-I (Jackson Laboratory, номер по каталогу 003831), которые содержат Т-клеточный рецептор, специфичный в отношении пептида овальбумина 257-264, и определяли по высвобождению IFNγ.

Для выделения Т-клеток спленоциты выделяли из свежеполученных селезенок мышей ОТ-1. Вкратце, каждую селезенку от мышей C57Bl/6 OT-1 собирали и хранили в ФБР перед переносом в лунку 6-луночного планшета для тканевых культур, и механически расщепляли с помощью 2 игл. Расщепленную селезенку пропускали через 70 мкм клеточное сито и указанное сито промывали ФБР. Затем суспензию клеток осаждали центрифугированием, удаляли надосадочную жидкость и лизировали эритроциты путем добавления 10 мл 1X буфера для лизиса эритроцитов (eBioscience, 00-4300-54) в соответствии с инструкциями производителя. Спленоциты высевали для активации Т-клеток по 2×10⁶ клеток на лунку в среде (IMDM, 5% FCS, 50 мкМ 2-меркаптоэтанол, 1X Penstrep), содержащей 10 нМ пептид SIINFEKL, в 6-луночные планшеты по 10×10⁶ клеток на лунку. Планшеты инкубировали в течение 48 часов при 37°С, 5% СО2. Через 48 часов выделяли CD8 Т-клетки с использованием набора CD8⁺ T cell Isolation Kit (Milentyi Biotec, 130-104-075) в соответствии с инструкциями производителя. Выделенные и активированные CD8 Т-клетки высевали в среде (IMDM, 5% FCS, 50 мкМ 2-меркаптоэтанол, 1X Penstrep) с добавлением 30 ед/мл IL-2 (Peprotech, AF-200-02) и выдерживали в количестве менее 1×10⁶ на мл и ежедневно делили в течение еще 3 дней. Затем после размножения в течение трех дней клетки использовали в следующем анализе.

CD8⁺ Т-клетки, используемые в этом примере, происходили от двух отдельных животных, и размножение спленоцитов осуществляли с интервалом в 18 месяцев, поэтому ожидают различие в активации Т-клеток между образцами А и В.

Получали клетки карциномы толстой кишки CT26 (АТСС, CRL-2638), экспрессирующие полноразмерный мезотелин мыши (SEQ ID NO: 145) для представления антигена в мембраносвязанной конформации. Для получения этих клеток применяли липофекцию (Липофектамин (Lipofectamine) 3000, Thermo Fisher Scientific, номер по каталогу L3000008) с использованием вектора pcDNA3.1 (+) (Thermo Fisher Scientific, номер по каталогу V79020). В соответствии с протоколом производителя клетки CT26 трансфицировали векторами pcDNA3.1, содержащими кДНК для MSLN мыши. Затем осуществляли стабильную трансфекцию с использованием генетицина в качестве селективного антибиотика (в количестве 600 мкг/мл) в полных средах (RPMI, 10% FBS).

Экспрессию MSLN мыши на клетках CT26 подтверждали посредством проточной цитометрии путем использования антитела MOR6626 положительного контроля. Клетки инкубировали совместно с антителом положительного контроля в течение 1 часа, а затем использовали флуоресцентно-меченое детекторное антитело к IgG человека (Stratech Scientific Ltd, номер по каталогу 109-546-098-JIR) для детектирования связывания клеток. Популяции клонов расширяли, а затем анализировали для определения относительных уровней экспрессии с применением такой же методики проточной цитометрии, после чего два клона, экспрессирующие MSLN мыши на различных уровнях, продолжали использовать в качестве средства для исследования Fab к MSLN мыши: CT26.B2 (высокая экспрессия MSLN) и CT26.G10 (средняя/низкая экспрессия MSLN). Для получения клеток с диапазоном экспрессии MSLN также использовали клетки Panc02 NIC/NIH (Мэриленд, США), которые эндогенно экспрессируют MSLN. Эти клетки экспрессировали более низкие уровни MSLN in vitro, и ex vivo демонстрировали цитозольную экспрессию, определяемую путем иммуногистохимии (ИГХ) (данные не представлены). Затем экспрессию мезотелина также подтверждали ex vivo путем ИГХ (данные не представлены).

Клетки CT26.B2, CT26.G10 и Panc02 инкубировали совместно с пептидом SIINFEKL (500 нМ), к MSLN⁺ клеткам в 50 мкл среды добавляли 2×10⁴ клеток OT-1 на лунку. Тестируемые антитела получали титрованием 1:4, начиная с 60 нМ (4× конечная концентрация), и в каждую лунку добавляли 50 мкл смеси антител соответственно с получением конечного объема образца, составляющего 200 мкл. Указанный образец инкубировали в течение 3 дней при 37°C с 5% CO2. Через 3 дня собирали надосадочные жидкости и проводили ELISA на предмет mIFNγ (eBioscience, номер по каталогу 88-7314-88) в соответствии с инструкциями производителя.

mAb²кCD137/MSLN мыши подвергали скринингу в этом анализе Т-клеток в отсутствии и в присутствии растворимого MSLN мыши. Коммерчески доступный mMSLN-His мыши (#594008). В результате анализа сыворотки крови у мышей, несущих опухоли CT26.G10, определяли, что средняя концентрация MSLN в крови составляла 100 пМ (данные не представлены). Следовательно, для исследования влияния растворимого MSLN в функциональном анализе использовали до 2 нМ.

Как показано в Таблице 15 и на Фиг. 5, mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 проявляло более высокую активность, чем исходное FS22m-063-AA/FS28m-228, при перекрестном связывании линией клеток CT26.G10. В одном из анализов также тестировали следующие отрицательные контроли, которые, как и ожидали, не приводили к считыванию цитокинов: Fcab FS22m-063 в формате ложного mAb² (HelD1.3) и положительный контроль, нацеленный на MSLN (G1/MOR6626). Как показано на Фиг. 5, присутствие 2 нМ растворимого MSLN оказывало минимальное влияние на высвобождение IFNγ, при этом все значения EC₅₀ находились в низком пикомолярном диапазоне, за исключением клеток Panc02, которые экспрессируют меньше мембранного MSLN, чем сконструированные MSLN⁺клетки CT26. Подобно mAb2 человека, уровень активации Т-клеток, индуцируемой mAb2, зависит от уровня MSLN, присутствующего на перекрестно связывающих клетках.

Таблица 15: активность mAb² к CD137/MSLN мыши в случае MSLN-положительных клеток в анализе активации Т-клеток OT-1

mAb²	CT26.G10		CT26.B2		Panc02
	- sMSLN	+ sMSLN	- sMSLN	+ sMSLN	- sMSLN	+ sMSLN
FS22m-063-AA/FS28m-228	0,0357	0,0836	NM		NM
FS22m-063-AA/FS28m-228-010	0,0010	0,0013	0,0014	0,0033	0,1034	0,1251

NM = не измерено

Пример 12: подтверждение концепции in vivo

После демонстрации того, что mAb² обладает функцией в анализе Т-клеток, было желательным тестирование функции mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228 in vivo в иммунокомпетентной модели сингенной опухоли.

12.1 Эффективность FS22m-063-AA/FS28m-228 in vivo в модели сингенной опухоли CT26.B2

Для определения противоопухолевой эффективности FS22m-063-AA/FS28m-228 в модели опухоли с высоким уровнем экспрессией MSLN самкам мышей Balb/C (Charles River) в возрасте 9-10 недель давали одну неделю для акклиматизации перед началом исследования. Всех животных микрочипировали и присваивали им уникальный идентификационный номер. Каждая когорта включала 15 или 20 мышей. Наращивали клетки CT26.B2 и создавали банки клеток, а затем проводили предварительный скрининг с помощью IDEXX Bioresearch на предмет патогенов с применением протокола IMPACT I и, как было показано, они не содержали патогенов. Каждое животное получало 1×10⁵ клеток, вводимых подкожно в левый бок в 100 мкл бессывороточных сред. Через 17 дней после инокуляции клеток опухоли мышей, у которых не было опухолей, исключали из исследования.

mAb² FS22m-063-AA/FS28-228 (SEQ ID NO: 360 и 361) или IgG1 человека изотипического контроля (G1-AA/4420) вводили по 200 мкл антител в фиксированной концентрации 200 мкг на дозу (приблизительно 10 мг/кг для мыши массой 20 г) в Д-ФБР + 1 мМ аргинин + 0,05% Твин 80. Мышам вводили дозу молекулы mAb² путем интраперитонеальной инъекции в 17, 19 и 21 дни после инокуляции, и мышам вводили дозу контрольного антитела IgG1 человека в 7, 9 и 11 дни после инокуляции. Три раза в неделю проводили измерения объема опухоли с помощью штангенциркуля с определением самой длинной оси и самой короткой оси опухоли. Для расчета объема опухоли использовали следующую формулу:

L X (S²) / 2

где L = самая длинная ось; S= самая короткая ось

Конечную точку исследования определяли по конечным точкам для человека на основе объема опухоли и состояния.

Как показано на Фиг. 6, лечение mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228 демонстрировало визуальное замедление роста опухоли по сравнению с мышами, которых лечили изотипическим контролем (G1/4420).

Проводили анализ времени до конечной точки (выживаемости) с применением программного обеспечения GraphPad Prism 8.0. Данные, представленные на Фиг. 7 и в Таблице 15, анализировали с использованием лог-рангового критерия (критерия Мантела-Кокса). Данные показали, что mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228 обеспечивало значительное преимущество в выживаемости по сравнению с изотипическим контролем (G1/4420) по данным анализа с использованием лог-рангового критерия. Медиана выживаемости для IgG1-контрольной группы составляла 33,5 дня, тогда как медиана выживаемости в случае FS22m-063-AA/FS28m-228 не была достигнута.

Таблица 15: попарный статистический анализ (с помощью лог-рангового критерия) времени до конечной точки в модели сингенной опухоли CT26.B2

Группы	P-значения Лог-ранговый критерий
G1/4420	0,0052	**
FS22m-063-AA/FS28m-228

NS (не значимая) p≥0,05; * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001; **** p<0,0001

12.2 Эффективность FS22m-063-AA/FS28m-228 in vivo в модели сингенной опухоли CT26.G10

Эффективность mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228 также тестировали в модели сингенной опухоли CT26.G10. Клетки CT26.G10 экспрессируют более низкие уровни MSLN по сравнению с клетками CT26.B2. Следовали той же методике, которая описана в Примере 12.1, за исключением того, что для инокуляции мышей использовали линию клеток CT26.G10. Мышам вводили дозу 200 мкл mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228 путем интраперитонеальной инъекции в 12, 14 и 16 дни после инокуляции и контрольное антитело G1/4420 в 7, 9 и 11 дни после инокуляции. Мышам вводили фиксированную дозу 200 мкг/мышь (эквивалентную приблизительно 10 мг/кг для мыши массой 20 г).

Как показано на Фиг. 8, мыши, которых лечили mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228, демонстрировали сокращение роста опухоли по сравнению с мышами, которых лечили изотипическим контролем, при этом у мышей, которых лечили FS22m-063-AA/FS28m-228, наблюдали заметное замедление увеличения объема опухоли по сравнению с группой, получавшей лечение G1/4420. Более того, в то время как после лечения G1/4420 у 1/20 (5%) мышей не было опухоли, после лечения FS22m-063-AA/FS28m-228 у 4/20 (20%) мышей не было опухоли в конце исследования. Кроме того, как показано на Фиг. 9 и в Таблице 16, это приводило к значительному увеличению безопухолевой выживаемости по данным оценки с использованием попарного анализа с помощью лог-рангового критерия. В частности, медиана выживаемости увеличивалась с 25 дней (G1/4420) до 29 дней в случае FS22m-063-AA/FS28m-228.

Таблица 16: количество и процент мышей без опухоли (опухоли ≤ 62,5 мм³) к концу исследования, медиана выживаемости (в днях) и попарный статистический анализ (лог-ранговый критерий) выживаемости в модели сингенной опухоли CT26.G10

Группы	Мыши без опухоли в конце исследования	Медиана выживаемости (дни)	P-значения Лог-ранговый критерий
G1/4420	1/20 (5%)	25	0,0062	**
FS22m-063-AA/FS28m-228	4/20 (20%)	29	0,0062	**

mAb² и изотипические контроли содержали мутацию LALA, поэтому наблюдаемое подавление роста опухоли не могло являться результатом активности в виде АЗКЦ, поскольку мутация LALA значительно снижала способность указанных антител связываться с Fcγ-рецепторами. Таким образом, полагают, что у мышей, получающих лечение только mAb к MSLN, содержащим мутацию LALA, не будут наблюдать противоопухолевую активность. Однако mAb², содержащее мутацию LALA, было способно к значительному подавлению роста опухоли даже при наличии мутации LALA, которое, как полагают, обусловлено перекрестным связыванием mAb² за счет связывания Fab-областей с MSLN на клеточной поверхности с запуском кластеризации и активации CD137 на иммунных клетках, что приводит к противоопухолевой активности mAb².

Пример 13: определение характеристик in vivo для mAb² к CD137/MSLN мыши (FS22m-063-AA/FS28m-228-010) с созревшей аффинностью

13.1 Дозозависимая активность mAb² к CD137/MSLN с созревшей аффинностью в модели сингенной опухоли CT26.G10 у мышей

Наблюдали значительную противоопухолевую эффективность и увеличение выживаемости в моделях сингенных опухолей, экспрессирующих высокие уровни MSLN мыши (CT26.B2), а также в опухолях, экспрессирующих более низкие уровни MSLN мыши (CT26.G10), при лечении mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228 (Пример 12). Поэтому было желательным исследование противоопухолевой эффективности FS22m-063-AA/FS28m-228-010 с созревшей аффинностью in vivo в диапазоне доз (6, 20, 60 и 200 мкг/мышь, эквивалентны приблизительно 0,3, 1, 3 и 10 мг/кг для мыши массой 20 г).

Самкам мышей Balb/c (Charles River), каждая из которых была в возрасте 9-11 недель и массой 17,0-25,2 г, давали одну неделю для акклиматизации перед началом исследования. Всех животных микрочипировали и присваивали им уникальный идентификационный номер. Каждая когорта включала 20 мышей. Наращивали линию клеток карциномы толстой кишки CT26.G10, описанную в Примере 11.2, и создавали банки клеток. Каждое животное получало 1×10⁵ клеток, вводимых подкожно в левый бок в 100 мкл бессывороточных сред. Через 12 дней после инокуляции клеток опухоли мышей, у которых не было опухолей, исключали из исследования.

Получали mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 и вводили интраперитонеально (и/п) мышам в фиксированной конечной концентрации в соответствии с диапазоном доз, описанным выше. Изотипический контроль IgG1 человека (G1-AA/4420) и антитело к CD137, Lob12.3, положительного контроля (G1/Lob12.3) как в остове IgG1 человека, так и содержащее LALA, включали в дозе 20 мкг (~1 мг/кг у мыши массой 20 г). Все антитела получали в Д-ФБР + 1 мМ аргинин + 0,05% Твин 80. Каждая мышь получала молекулу mAb² или контрольное антитело путем интраперитонеальной инъекции 200 мкл в 12, 14 и 16 дни после инокуляции опухоли. Три раза в неделю проводили измерения объема опухоли с использованием штангенциркуля, как описано в Примере 12.1, и осуществляли тщательный мониторинг мышей. Конечную точку исследования определяли по конечным точкам для человека на основе объема опухоли и состояния.

Для обеспечения смешанной модели для анализа скорости роста опухоли применяли программное обеспечение STATA/IC 15.1. Статистическую значимость представляли попарно для скорости роста на протяжении всего исследования с использованием анализа смешанной модели, позволяющего сравнить все группы. Отдельную модель приводили в соответствие с каждой парой лечения, представляющего интерес. Указанная модель представляла собой:

log10(объем)=A+F×(день-день начала)+εA и B представляют собой точку пересечения и угловой коэффициент соответственно; они отличаются для каждой мыши и включают фиксированный эффект для группы и случайный эффект для животного:

A=A0+A1T+εA

B=B0+B1T+εB

T представляет собой фиктивную переменную, представляющую группу лечения со значением 0 в одной группе и 1 в другой. Случайные эффекты распределены по нормальному распределению:

εA~(0,σA), εB~N(0,σB)

где σA и σB представляют собой стандартные отклонения вариабельности точки пересечения и углового коэффициента соответственно среди животных. Как правило, вариабельность среди животных также нормально распределена со стандартным отклонением σ: ε~(0,σ)

Для каждой пары лечения модель, указанную выше, приводили в соответствие с данными. Для A1 и B1 рассчитывали (двустороннее) p-значение для отличия от нуля; p-значение ниже 0,05 является статистически значимым подтверждением различия между группами лечения.

Как показано на Фиг. 10, mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 сокращало рост опухоли на всех уровнях доз по сравнению с мышами, получавшими лечение изотипическим контролем. Всех животных с опухолями, размер которых в конце исследования равен или меньше 62,5 мм³, считали полностью отвечающими животными (см. Таблицу 17). 30%, 20%, 20% и 10% животных, получавших лечение mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 в дозе 10, 3, 1 и 0,3 мг/кг соответственно, считали не имеющими опухолей по сравнению с животными, получавшими лечение антителом к CD137, G1/Lob12.3 (15%) и изотипическим контролем G1-AA/4420 (0%).

Кроме того, в Таблице 17 представлено попарное сравнение скоростей роста на протяжении всего исследования с использованием анализа смешанной модели, позволяющего сравнить все группы с группой лечения изотипическим контролем IgG1 человека. Ни одна из мышей не демонстрировала признаков выраженной токсичности или побочных эффектов, и мыши хорошо переносили все виды лечения.

Анализ выживаемости (Фиг. 11 и Таблица 18) показал, что на всех уровнях доз mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 индуцировало значительный противоопухолевый ответ по сравнению с мышами, получавшими лечение изотипическим контролем (G1-AA/4420), и этот ответ оказался дозозависимым. Кроме того, в Таблице 18 представлена сводная информация о медиане выживаемости в днях для каждой группы, при этом лечение 10 мг/кг, 3 мг/кг, 1 мг/кг и 0,3 мг/кг mAb² к CD137/MSLN мыши увеличивало медиану выживаемости с 29,5 дней (G1-AA/4420) до 36,5, 37,5, 35 и 31 дня соответственно.

Таблица 17: количество и процент мышей без опухоли (опухоли ≤ 62,5 мм³) к концу исследования и попарный статистический анализ (смешанная модель), позволяющий сравнить все группы лечения с контролем G1-AA/4420 в модели сингенной опухоли CT26.G10

Группы	Мыши без опухоли в конце исследования	P-значения, анализ смешанной модели, позволяющий сравнить группы лечения с контролем G1-AA/4420
G1-AA/4420, 1 мг/кг	1/19 (0%)
G1/Lob12.3, 1 мг/кг	3/20 (15%)	<0,0001	****
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 10 мг/кг	6/20 (30%)	<0,0001	****
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 3 мг/кг	4/20 (20%)	<0,0001	****
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 1 мг/кг	4/20 (20%)	<0,0001	****
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 0,3 мг/кг	2/20 (10%)	<0,0001	****

Таблица 18: медиана времени выживаемости для животных, получавших лечение каждым соединением, и попарный статистический анализ (с помощью лог-рангового критерия), позволяющий сравнить все группы лечения с контролем G1-AA/4420 в модели сингенной опухоли CT26.G10

Группы	Медиана выживаемости (дни)	P-значения, Анализ с помощью лог-рангового критерия, позволяющий сравнить группы лечения с контролем G1-AA/4420
G1-AA/4420, 1 мг/кг	29,5
G1/Lob12.3, 1 мг/кг	31,5	0,0137	*
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 10 мг/кг	36,5	0,0007	***
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 3 мг/кг	37,5	0,0016	**
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 1 мг/кг	35	0,0019	**
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 0,3 мг/кг	31	0,0308	*

Подобно Fab FS28m-228 к MSLN в формате mAb² к CD137/MSLN, Fab FS28m-228-010 в формате mAb² к CD137/MSLN также приводило к значительному сокращению роста опухоли по сравнению с изотипическим контролем. Более того, такое дозозависимое значительное увеличение выживаемости в случае mAb² позволяет предположить, что перекрестное связывание mAb² с мишенью MSLN через Fab-области запускает агонизм в отношении CD137 и, следовательно, противоопухолевую эффективность, наблюдаемую in vivo.

13.2 Противоопухолевая эффективность FS22m-063-AA/FS28m-228-010 в сравнении с его компонентами модели сингенной опухоли CT26.G10

После демонстрации того, что FS22m-063-AA/FS28m-228-010 показывало значительную противоопухолевую эффективность и повышало выживаемость у мышей с опухолью, было желательно определить, превосходит ли противоопухолевая активность mAb² in vivo противоопухолевую активность его отдельных компонентов. Лечение антителом к MSLN мыши (G1-AA/FS28m-228-010), Fcab к CD137 в форматах «ложных» mAb² (FS22m-063-AA/HelD1.3 и FS22m-063-AA/4420), комбинациями антитела MSLN мыши и Fcab к CD137 в формате «ложного» mAb² (т.е. G1-AA/FS28m-228-010 плюс FS22m-063-AA/HelD1.3), и mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 сравнивали с лечением антителом человека изотипического контроля (G1-AA/HelD1.3).

Мышей подготавливали в соответствии с Примером 13.1 и инокулировали линией клеток карциномы толстой кишки CT26.G10. Все когорты включали 20 мышей за исключением когорты FS22m-063-AA/4420, которая включала 10 мышей.

Все антитела mAb² FS22m-063-AA/FS28-228-010, G1-AA/FS28m-228-010, FS22m-063-AA/HelD1.3, FS22m-063-AA/4420 и G1-AA/HelD1.3 получали по 200 мкг на дозу (приблизительно 10 мг/кг для мыши массой 20 г) и вводили мышам интраперитонеально (и/п) путем инъекции в фиксированной дозе. Кроме того, как ложное mAb² к CD137, так и антитело к MSLN получали по 200 мкг на дозу (приблизительно 10 мг/кг для мыши массой 20 г) для групп комбинации. Все антитела получали в Д-ФБР + 1 мМ аргинин + 0,05% Твин 80. Аналогично схеме введения доз из Примера 13.1, каждая мышь получала антитела путем интраперитонеальной инъекции 200 мкл в 12, 14 и 16 дни (q2dx3) после инокуляции опухоли. Три раза в неделю проводили измерения объема опухоли с использованием штангенциркуля, как описано в Примере 12.1, и осуществляли тщательный мониторинг мышей. Конечную точку исследования определяли по конечным точкам для человека на основе объема опухоли и состояния.

Как показано на Фиг. 12, лечение mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 приводило к значительному сокращению роста опухоли по сравнению с мышами, получавшими лечение изотипическим контролем G1-AA/HelD1.3. Всех животных с опухолями, размер которых в конце исследования равен или меньше 62,5 мм³, считали полностью отвечающими животными (см. Таблицу 19). Считали, что 7/20 (35%) животных, получавших лечение mAb² FS22m-063-AA/FS28-228-010, полностью отвечали на лечение в конце исследования по сравнению с 1/20 (5%) мышей, получавших лечение G1-AA/FS28m-228-010, и 0/20 (0%) мышей, получавших лечение изотипическим контролем G1-AA/HelD1.3, FS22m-063-AA/HelD1.3, FS22m-063-AA/4420 и комбинацией FS22m-063-AA/HelD1.3 плюс G1-AA/FS28m-228-010.

Кроме того, в Таблице 19 представлено попарное сравнение скоростей роста на протяжении всего исследования с использованием анализа смешанной модели, позволяющего сравнить все группы с изотипическим контролем G1-AA/HelD1.3.

Анализ выживаемости (Фиг. 13 и Таблица 20) показал, что mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 обуславливало значительное преимущество по выживаемости по сравнению с антителом G1-AA/HelD1.3, тогда как указанные компоненты не обеспечивали преимущество по выживаемости. Более того, лечение mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 приводило к увеличенной медиане выживаемости, составляющей 42,5 дня, по сравнению с G1-AA/HelD1.3 (29 дней), FS22m-063-AA/HelD1.3 (30 дней), FS22m-063-AA/4420 (29 дней), G1-AA/FS28m-228-010 (30 дней) и комбинацией FS22m-063-AA/HelD1.3 с G1-AA/FS28m-228-010 (29 дней).

Таблица 19: количество и процент мышей без опухоли (опухоли ≤ 62 мм³) к концу исследования и попарный статистический анализ (смешанная модель), позволяющий сравнить все группы лечения с контролем G1-AA/HelD1.3 в модели сингенной опухоли CT26.G10

Группы	Мыши без опухоли в конце исследования	P-значения, Анализ смешанной модели, позволяющий сравнить все группы лечения с контролем G1-AA/HelD1.3
G1-AA/HelD1.3 10 мг/кг	0/20 (0%)
G1-AA/FS28m-228-010, 10 мг/кг	1/20 (5%)	0,4367	NS
FS22m-063-AA/HelD1.3, 10 мг/кг	0/20 (0%)	0,0017	***
FS22m-063-AA/4420, 10 мг/кг	0/10 (0%)	0,7067	NS
G1-AA/FS28m-228-010, 10 мг/кг +FS22m-063-AA/HelD1.3, 10 мг/кг	0/20 (0%)	0,2093	NS
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 10 мг/кг	7/20 (35%)	0,0000	****

Таблица 20: медиана времени выживаемости для животных, получавших лечение каждым соединением, и попарный статистический анализ (с помощью лог-рангового критерия), позволяющий сравнить все группы лечения с контролем G1-AA/HelD1.3 в модели сингенной опухоли CT26.G10

Группы	Медиана выживаемости (дни)	P-значения, Анализ с помощью лог-рангового критерия, позволяющий сравнить все группы лечения с контролем G1-AA/HelD1.3
G1-AA/HelD1.3 10 мг/кг	29
G1-AA/FS28m-228-010, 10 мг/кг	30	0,993	NS
FS22m-063-AA/HelD1.3, 10 мг/кг	30	0,3952	NS
FS22m-063-AA/4420, 10 мг/кг	29	0,9645	NS
G1-AA/FS28m-228-010, 10 мг/кг +FS22m-063-AA/HelD1.3, 10 мг/кг	29	0,4706	NS
FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 10 мг/кг	42,5	<0,0001	****

Эти данные показывают, что биспецифичная молекула, нацеленная как на CD137, так и на MSLN, необходима для активности in vivo, поскольку указанное mAb² приводит к подавлению роста опухоли на уровне, который не наблюдают, когда отдельные компоненты mAb² вводят либо отдельно, либо в комбинации.

13.3 Фармакологические свойства mAb² к CD137/MSLN мыши в отношении печени в модели сингенной опухоли у мышей CT26.G10

Лечение пациентов с солидной опухолью mAb к CD137, урелумабом, в ходе клинических исследований привело к тяжелым иммуноопосредованным нежелательным явлениям, связанным с лечением, которые, как было показано, связаны с вводимой дозой урелумаба. Последствия этих иммуноопосредованных явлений проявлялись в печени в виде тяжелой гепатотоксичности (Segal, N. H., et al., 2017).

Доклиническая работа по исследованию механизма, проведенная у мышей, во время которой животным вводили дозу с использованием CD137-агонистических антител, продемонстрировала аналогичную гепатотоксичность. Эти исследования показали, что для итоговой гепатотоксичности были необходимы Т-клетки и CD137 (Niu, L., et al. 2007 и Dubrot J, et al. 2010). Было показано, что взаимодействие между компартментами миелоидных и Т-клеток, хотя и не до конца изучено, также играет важную роль в инициировании воспалительного каскада, ведущего к повреждению печени и гепатотоксичности (Bartkowiak, T et al., 2018). Соответственно, эти модели у животных имеют трансляционную значимость для клиники при прогнозировании риска гепатотоксичности у пациентов, представляющих собой людей, после введения других агонистов CD137, таких как mAb² к CD137/MSLN.

Мыши из исследований с сингенной опухолью CT26.G10, описанных в Примерах 13.1 и 13.2, не демонстрировали выраженных признаков токсичности после повторного введения дозы mAb²FS22m-063-AA/FS28m-228-010. Для определения того, коррелировала ли у этих животных активация иммунной системы с гепатотоксичностью, мышам вводили дозы в соответствии с аналогичной схемой введения доз, показанной в Примерах 13.1 и 13.2, мышей умерщвляли в четыре момента времени точки после введения доз и при вскрытии брали образцы печени для гистологической оценки.

Мышей подготавливали, как описано в Примере 13.1, и мышей инокулировали линией клеток карциномы толстой кишки CT26.G10. Каждая когорта состояла из 24 мышей. Антитела mAb² FS22m-063-AA/FS28-228-010 (CD137/MSLN) и G1-AA/4420 (изотипический контроль IgG1 человека) получали в Д-ФБР + 1 мМ аргинин + 0,05% Твин 80 по 200 мкг на дозу (приблизительно 10 мг/кг для мыши массой 20 г) и вводили мышам интраперитонеально (и/п) путем инъекции в фиксированной дозе. Каждая мышь получала антитела путем интраперитонеальной инъекции 200 мкл в 12, 14 и 16 дни после инокуляции опухоли. Три раза в неделю проводили измерения объема опухоли с использованием штангенциркуля, как описано в Примере 12.1, и осуществляли тщательный мониторинг мышей. Проводили вскрытие шести мышей в группе через 2, 5, 8 и 11 дней после введения последней дозы, и образцы печени фиксировали и заливали парафином. Затем делали срезы печени и подвергали их гистопатологической оценке путем окрашивания гематоксилином и эозином, и балльной оценки воспаления и повреждения печени независимым сертифицированным ветеринаром-патологом.

Для оценки патологии печени в срезах, окрашенных гематоксилином и эозином, использовали систему балльной оценки. Печень оценивали на предмет патологии, соответствующей мультифокальным смешанным воспалительным клеткам, мультифокальным дегенеративным гепатоцитам, увеличению количества митозов гепатоцитов и смешанному воспалительному клеточному инфильтрату в портальных трактах. В Таблице 21 представлена частота проявления у мышей минимальных, легких и умеренных эффектов в каждой группе.

Животные, получавшие лечение mAb²FS22m-063-AA/FS28-228-010, демонстрировали минимальную патологию печени, в частности:

минимальное количество мультифокальных смешанных воспалительных клеток (в основном гранулоцитов), расположенных по всей паренхиме

минимальное количество дегенерирующих гепатоцитов, рассредоточенных по всей паренхиме

минимальное количество дегенерирующих гепатоцитов

минимальное количество смешанных воспалительных клеток в портальных трактах

Таблица 21: результаты по фармакологическим свойствам в отношении печени

Гистопатология печени	G1-AA/4420, 10 мг/кг				FS22m-063-AA/FS28m-228-010, 10 мг/кг
	Д2	Д5	Д8	Д11	Д2	Д5	Д8	Д11
Мультифокальные смешанные воспалительные клетки (в основном гранулоциты, паренхимальная/центральная вена)
Минимальная	0	0	0	0	0	1	2	4
Легкая	0	0	0	0	0	0	0	0
Мультифокальные дегенеративные гепатоциты (паренхима)
Минимальная	0	0	0	0	0	2	2	4
Легкая	0	0	0	0	0	0	0	0
Увеличение количества митозов гепатоцитов (паренхима)
Минимальная	1	1	4	1	0	4	4	3
Легкая	0	1	1	0	1	0	1	2
Умеренная	0	0	0	0	0	1	0	1
Смешанный воспалительный клеточный инфильтрат в портальных трактах
Минимальная	0	1	0	2	1	2	1	2

Эти результаты не показывают гепатотоксичность, как наблюдали в случае других примеров антител-агонистов к CD137. Более того, поскольку mAb² оказывает агонистическое действие в отношении CD137 через перекрестное связывание, опосредуемое связыванием MSLN, а MSLN сверхэкспрессируется преимущественно на клеточной поверхности клеток опухоли, но не в печени (Ordóñez 2003, 14576474), ожидают, что агонизм в отношении CD137 будет ограничен микроокружением опухоли.

13.4 Механизм действия mAb² к CD137/MSLN мыши в модели сингенной опухоли CT26.G10 у мышей

Учитывая ограниченные фармакологические свойства в отношении печени, наблюдаемые после повторного введения дозы mAb²к CD137/MSLN (Пример 13.3), и для дальнейшего понимания фармакологии противоопухолевого ответа, наблюдаемого в случае с FS22m-063-AA/FS28m-228-010, исследовали механизм действия mAb² к CD137/MSLN в модели MSLN-положительной сингенной опухоли.

Мышей подготавливали, как описано в Примере 13.1, и инокулировали линией клеток карциномы толстой кишки CT26.G10. Каждая когорта состояла из 20 мышей. Для сравнения также включали mAb²FS22m-063-AA/FS28-228-010 (CD137/MSLN), изотипический контроль IgG1 человека (G1-AA/4420) и антитело-агонист к CD137 (клон 3H3; G1/3H3). Все три антитела получали по 134 мкг на дозу (приблизительно 6,7 мг/кг для мыши массой 20 г) в Д-ФБР + 1 мМ аргинин + 0,05% Твин 80 и вводили мышам интраперитонеально (и/п) путем инъекции. Каждая мышь получала антитела путем одной интраперитонеальной инъекции 200 мкл в фиксированной дозе 134 мкг в 20 день после инокуляции опухоли. Три раза в неделю проводили измерения объема опухоли с использованием штангенциркуля, как описано в Примере 12.1, и осуществляли тщательный мониторинг мышей.

В 20 день после инокуляции опухоли проводили вскрытие шести мышей в группе через 24, 72, 144 и 192 часа после введения дозы. У мышей с опухолью CT26.G10, получавших лечение либо FS22m-063-AA/FS28-228-010, либо G1-AA/4420, либо G1/3H3, брали селезенку, кровь и опухолевую ткань для анализа. Все образцы исследовали на предмет избытка и пролиферации Т-клеток путем проточной цитометрии, поскольку известно, что маркеры активации и пролиферации Т-клеток являются нисходящими «эффектами» агонизма в отношении CD137 (Fisher et al., 2012). Кроме того, для детектирования и количественного определения экспрессии растворимого MSLN также брали сыворотку крови. Размельчали селезенку и опухолевую ткань до суспензии отдельных клеток стандартными механическими и ферментными способами, и один раз лизировали эритроциты в буфере для лизиса эритроцитов (Miltenyi Biotec Ltd., 130-094-183). Кровь собирали путем терминального кровопускания из сердца и половину собирали в EDTA-содержащие пробирки для анализа отдельных клеток путем проточной цитометрии, а половину крови собирали в пробирки с активатором свертывания/пробирки для сыворотки для анализа растворимого MSLN. Цельную кровь, собранную в EDTA-содержащие пробирки, три раза лизировали в буфере для лизиса эритроцитов (Miltenyi Biotec Ltd., 130-094-183) в соответствии с инструкциями производителя. Кровь, собранную в пробирки для сыворотки, делили на фракции путем центрифугирования и извлекали сыворотку для анализа растворимого MSLN.

Затем таким же образом обрабатывали единичные клетки селезенки, опухоли и крови, и клетки один раз промывали ФБР, образцы окрашивали фиксируемым красителем для оценки жизнеспособности (fixable viability dye) (eBioscience, 65-0865-14). Затем клетки окрашивали для оценки маркеров клеточной поверхности с помощью панели окрашивающих антител, представленной в Таблице 22 (почти все внутриклеточные маркеры, Ki67 и FoxP3), в присутствии Fc-блока (eBioscience, 16-0161-85, 1:25) в течение 45 минут при 4°C. Затем клетки фиксировали и пермеабилизировали с помощью набора для окрашивания FoxP3 eBioscience (eBioscience, 00-5523-00) в соответствии с инструкциями производителя. Клетки ресуспендировали в 100 мкл буфера для пермеабилизации с антителами - внутриклеточными маркерами Ki67 и FoxP3, и инкубировали в течение ночи при 4°C в темноте. Перед сбором данных на проточном цитометре BD Fortessa клетки один раз промывали буфером для пермеабилизации и ресуспендировали в 120 мкл ФБР, содержащего 0,5% BSA. Данные получали с применением программного обеспечения BD FACS Diva и анализировали с помощью FlowJo (V10) и Microsoft Excel. Эти данные демонстрируют избыток и пролиферацию CD8⁺ Т-клеток через 144 часа после введения дозы в процентах от исходной популяции.

Таблица 22: панель для проточной цитометрии

Мишень	Клон	Флуорофор	Производитель	Номер по каталогу
CD45	30-F11	Alexa700	eBioscience	56-0451
CD3e	145-2C11	PE-Cy7	eBioscience	25-0031-82
CD8	53-6.7	BUV737	BD Bioscience	564297
CD4	RM4-5	BUV395	BD Bioscience	740208
FoxP3	FJK-16s	PerCP-Cy5.5	eBioscience	45-5773
CD49b	DX5	BV421	Biolegend	563063
CD103	M290	BV786	BD Bioscience	564322
CD137	17B5	APC	eBioscience	106110
CD69	H1.2F3	BV510	Biolegend	104505
PD1	29F.1A12	FITC	Biolegend	135220
Ki67	SolA15	PE	eBioscience	12-5698-82
Жизнеспособность	Неприменимо	eFluor780	eBioscience	65-0865-14

Как показано в Таблице 23, наблюдали увеличение процента CD8⁺ Т-клеток в опухоли через 144 часа после введения дозы G1/3H3 и mAb²FS22m-063-AA/FS28-228-010 по сравнению с контрольной группой лечения (G1-AA/4420). Средний процент CD8⁺ Т-клеток в опухоли увеличивался с 32,1% (G1-AA/4420) до 56,1% для G1/3H3 и 58,4% для FS22m-063-AA/FS28m-228-010 через 144 часа после введения дозы.

Кроме того, также наблюдали увеличение количества CD8⁺ Т-клеток в крови и селезенке, но только в случае G1/3H3, по сравнению с контролем IgG1. В крови через 144 часа после введения дозы средний процент CD8⁺ Т-клеток увеличивался с 22,6% (G1-AA/4420) до 57,0% (G1/3H3), однако это увеличение не наблюдали в случае FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (25,8%). Подобным образом в селезенке средний процент CD8⁺ Т-клеток увеличивался с 28,8% (G1-AA/4420) до 38,0% в случае G1/3H3, однако это увеличение не наблюдали в случае FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (29%).

Это позволяет предположить, что mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010 увеличивает количество CD8⁺ Т-клеток специфично в опухоли, где экспрессируется MSLN, тогда как антитело, нацеленное на CD137, G1/3H3, также демонстрирует периферическое (кровь и селезенка) увеличение количества CD8⁺ Т-клеток.

Для определения, были ли какие-либо различия в пролиферации CD8⁺ T-клеток после введения дозы, анализировали маркер пролиферации Ki67 на CD8⁺ T-клетках в опухоли, крови и селезенке. Как показано в Таблице 24, высокая доля CD8⁺ Т-клеток экспрессировала Ki67⁺ в контрольной группе (средняя экспрессия 75,1%), что позволяет предположить высокий уровень пролиферирующих CD8⁺ Т-клеток в опухоли в модели CT26.G10. Это может способствовать неясным различиям в экспрессии Ki67 на CD8⁺ Т-клетках между дозовыми группами в опухоли.

Для сравнения, наблюдали явное повышение экспрессии Ki67⁺ на CD8⁺ Т-клетках в крови и селезенке через 144 часа после введения дозы в случае G1/3H3 по сравнению с контролем IgG1. В крови, в то время как мыши, получавшие лечение изотипическим контролем, демонстрировали среднюю экспрессию Ki67⁺ на CD8⁺ Т-клетках, составляющую 10,4%, средняя экспрессия Ki67 на CD8⁺ Т-клетках после введения дозы в случае G1/3H3, как показано, составляла 86,3% через 144 часа после введения дозы. Для сравнения, это увеличение не наблюдали в крови для FS22m-063-AA/FS28m-228-010, когда среднюю экспрессию Ki67⁺ на CD8⁺ Т-клетках наблюдали на уровне 13,1% после введения дозы mAb². Подобным образом в селезенке наблюдали среднюю экспрессию Ki67⁺ на уровне 36,1% CD8⁺ Т-клеток после введения дозы G1/3H3 по сравнению с 8,1%, наблюдаемыми после введения дозы в случае изотипического контроля, и 11,4%, наблюдаемыми в случае FS22m-063-AA/FS28m-228-010.

Таблица 23: средний процент CD8⁺ Т-клеток от общего количества CD3⁺ клеток в опухоли, крови и селезенке через 144 часа после введения дозы G1-AA/4420, G1/3H3 или FS22m-063-AA/FS28m-228-010. Данные показывают средний процент CD8⁺ Т-клеток от общего количества CD3⁺ Т-клеток ± стандартная ошибка среднего.

	G1-AA/4420	G1/3H3	FS22m-063-AA/FS28m-228-010
	% ± SEM	% ± SEM	% ± SEM
Опухоль	32,1±5,8	56,1±2,8	58,4±5,0
Кровь	22,6±0,6	57,0±1,6	25,8±0,6
Селезенка	28,8±0,4	38,0±0,8	29,0±0,9

Таблица 24: средний процент Ki67, экспрессируемого на CD8⁺ Т-клетках в опухоли, крови и селезенке через 144 часа после введения дозы G1-AA/4420, G1/3H3 или FS22m-063-AA/FS28m-228-010. Данные показывают средний процент Ki67⁺от общего количества CD8⁺ Т-клеток ± стандартная ошибка среднего.

	G1-AA/4420	G1/3H3	FS22m-063-AA/FS28m-228-010
	% ± SEM	%±SEM	% ±SEM
Опухоль	75,1±2,9	85,1±2,8	77,6±5,0
Кровь	10,4±1,0	86,3±0,7	13,1±3,4
Селезенка	8,1±0,3	36,1±1,7	11,4±1,4

Сыворотку, полученную от шести мышей в каждой группе, которым вводили дозу FS22m-063-AA/FS28-228-010, G1-AA/4420 или G1/3H3, анализировали на предмет уровней растворимого MSLN с использованием набора Mesothelin Mouse SimpleStep ELISA Kit (Abcam, ab204528) в соответствии с инструкциями производителя для сыворотки. Наносили данные на график в Prism и показывали концентрацию уровней MSLN в сыворотке со временем. Как показано в Таблице 25, через 144 часа после введения дозы наблюдали повышение уровней MSLN в сыворотке в случае G1/3H3 и FS22m-063-AA/FS28m-228-010 по сравнению с G1-AA/4420 изотипического контроля. Поскольку подобное повышение наблюдали как для G1/3H3, так и для mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010, и MSLN экспрессируется преимущественно на клетках опухоли в сингенной модели CT26.G10 у мышей, это позволяет предположить, что CD137-агонизм в опухоли может повышать уровень растворимого MSLN, который обнаруживают в сыворотке.

Таблица 25: среднее значение растворимого MSLN в сыворотке относительно уровней при G1-AA/4420 через 144 часа после введения дозы G1-AA/4420, G1/3H3 или FS22m-063-AA/FS28m-228-010. Данные показывают среднее значение относительно уровней при G1-AA/4420 ± стандартная ошибка среднего.

	G1-AA/4420	G1/3H3	FS22m-063-AA/FS28m-228-010
sMSLN	1,0	9,5±1,6	7,6±1,2

В совокупности эти данные показывают, что FS22m-063-AA/FS28m-228-010 опосредовало опухолеспецифическое увеличение количества цитотоксических CD8⁺ Т-клеток в опухоли. Хотя это также наблюдали для G1/3H3, в отличие от mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010, G1/3H3 также способствовало периферическому увеличению количества CD8⁺ Т-клеток в крови и селезенке. Более того, эти CD8⁺Т-клетки также демонстрировали повышенную пролиферацию после введения дозы G1/3H3. Главная роль CD8⁺ Т-клеток (также называемых цитотоксическими лимфоцитами) заключается в уничтожении инфицированных или злокачественных клеток по трем основным механизмам: 1) высвобождение цитокинов, например, TNFα и IFNγ, 2) выработка и высвобождение цитотоксических гранул и 3) экспрессия FasL. Таким образом, увеличение количества CD8+ Т-клеток в опухоли после лечения может приводить к цитотоксической активности по этим механизмам, направленной против опухоли, что, следовательно, может приводить к увеличению высвобождения мезотелина в результате уничтожения клеток опухоли, как это наблюдали в этом примере. Поскольку опухоли не экспрессируют CD137, предложена гипотеза, что высвобождение мезотелина является опосредованным PD-ответом, вызванным цитотоксичностью, опосредуемой Т-клетками.

Пример 14: фармакокинетика mAb²к CD137/MSLN мыши и mAb²к CD137/MSLN человека у мышей

14.1 Фармакокинетика mAb² к CD137/MSLN мыши (FS22m-063-AA/FS28-228-010) у мышей без опухоли

Для определения фармакокинетики mAb² к CD137/MSLN мыши у мышей, самкам мышей C57BL/6 без опухоли один раз внутривенно вводили 10 мг/кг mAb² к CD137/MSLN мыши (FS22m-063-AA/FS28m-228-010) или контрольное антитело IgG1 человека (G1/4420) и осуществляли мониторинг до 144 часов.

Проводили отбор микрообразцов, представляющих собой приблизительно 20 мкл цельной крови, через 0,5, 1, 6, 24, 48, 96 и 144 часа, и обрабатывали с выделением приблизительно 5 мкл сыворотки для анализа. Количество антитела, присутствующее в каждый момент времени, определяли с использованием системы Gyrolab xPlore (название системы XPS1055) от Gyros Protein Technologies. Проводили сэндвич-анализ с использованием CD Gyrolab Bioaffy 200 (Gyros Protein Technologies, P0004180) с помощью биотинилированного антитела козы к IgG человека (тяжелая и легкая цепь), адсорбированного на иммуносорбенте обезьяны (Cambridge Biosciences, A80-319B), в качестве захватывающего антитела и меченого AlexaFluor® 647 антитела козы к IgG человека (Cambridge Biosciences, 2040-31) в качестве детекторного антитела. Получали стандартную кривую в диапазоне от 4000 нг/мл до 0,0677 нг/мл каждого соединения в 0,1% сыворотке мыши (Sigma-Aldrich M5905) в буфере Rexxip AN (Gyros Protein Technologies, P0004994) для определения концентрации образца, при этом образцы подвергали разведению 1:1000 в Rexxip AN (Gyros Protein Technologies, P0004994). На график наносили среднюю концентрацию образца от отдельных мышей в момент времени (три мыши на момент времени).

На Фиг. 14A представлена фармакокинетика mAb² к CD137/MSLN мыши и показано, что указанное mAb² оказывало чуть меньшее системное воздействие в течение периода введения доз, чем антитело IgG1 человека, не связывающее MSLN. Это можно объяснить механизмами мишень-опосредованного клиренса.

14.2 Фармакокинетика mAb² к CD137/MSLN человека у мышей без опухоли

Для сравнения определяли фармакокинетический профиль mAb² к CD137/MSLN человека у самок мышей C57BL/6 без опухоли. Мышам внутривенно вводили 6,7 мг/кг mAb² к CD137/MSLN человека (FS22-172-003-AA/FS28-256-271) или контрольного антитела IgG1 человека (G1-AA/4420) и осуществляли мониторинг до 144 часов. Проводили отбор микрообразцов, представляющих собой приблизительно 20 мкл цельной крови, через 0,5, 1, 6, 24, 48, 96 и 144 часа, и обрабатывали с выделением приблизительно 5 мкл сыворотки для анализа. Проводили анализ, как описано в Примере 14.1.

На Фиг. 14B представлена фармакокинетика mAb² к CD137/MSLN человека и показано, что указанное mAb² оказывало воздействие в крови, сопоставимое со стандартным антителом IgG1 человека, которое не связывает MSLN (Bergman et al., 1998).

Перечень последовательностей

Пояснения для тяжелой цепи

В аминокислотных последовательностях тяжелой цепи mAb² вариабельный домен выделен курсивом, CDR согласно IMGT выделены жирным курсивом, CDR согласно Кабату выделены курсивом и подчеркнуты (поэтому любые перекрывающиеся последовательности CDR согласно IMGT и Кабату выделены жирным шрифтом, курсивом и подчеркнуты), CH1-домены подчеркнуты, шарнирные области подчеркнуты дважды, CH2-домены выделены жирным шрифтом (и, где применимо, положение мутации LALA выделено жирным шрифтом и подчеркнуто), CH3-домены показаны простым шрифтом и модифицированные области структурных петель СН3 подчеркнуты (без подчеркивания, если петля не изменена).

В аминокислотных последовательностях вариабельных доменов, CDR согласно IMGT выделены жирным шрифтом и курсивом, CDR согласно Кабату выделены курсивом и подчеркнуты (поэтому любые перекрывающиеся последовательности CDR согласно IMGT и Кабату выделены жирным шрифтом, курсивом и подчеркнуты).

Приведены аминокислотные последовательности CDR согласно как IMGT, так и Кабату.

Пояснения для легкой цепи

В аминокислотной последовательности легкой цепи mAb²вариабельные домены выделены курсивом, CDR согласно IMGT выделены жирным шрифтом и курсивом, и CDR согласно Кабату выделены курсивом и подчеркнуты (поэтому любые перекрывающиеся последовательности CDR согласно IMGT и Кабату выделены жирным шрифтом, курсивом и подчеркнуты).

В аминокислотных последовательностях вариабельного домена, CDR согласно IMGT выделены жирным шрифтом и курсивом, и CDR согласно Кабату выделены курсивом и подчеркнуты (поэтому любые перекрывающиеся последовательности CDR согласно IMGT и Кабату выделены жирным шрифтом, курсивом и подчеркнуты).

Аминокислотная последовательность и последовательность кДНК для CH3-домена и аминокислотная последовательность модифицированных областей структурных петель AB и EF CH3 для всех клонов mAb², содержащих Fcab FS22-172-003, и для Fcab FS22-172-003

CH3 SEQ ID NO: 8 а/к GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

CH3 SEQ ID NO:9 ДНК GGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 10 Петля AB (а/к) PYIIPPY

SEQ ID NO: 11 Петля EF (а/к) GADRWLE

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024

SEQ ID NO: 92 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 93 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGACGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 94 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 95 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGACGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 12 VH-домен, а/к EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 13 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGACGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGT

SEQ ID NO: 14 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTLSYSS

SEQ ID NO: 15 HCDR1 (а/к) (Кабат) YSSMS

SEQ ID NO: 16 HCDR2 (а/к) (IMGT) ITPSTGYT

SEQ ID NO: 17 HCDR2 (а/к) (Кабат) FITPSTGYTHYADSVKG

SEQ ID NO: 18 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARRALTFDY

SEQ ID NO: 19 HCDR3 (а/к) (Кабат) RALTFDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024

SEQ ID NO: 85 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 86 Легкая цепь, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT

SEQ ID NO: 54 VL-домен, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIK

SEQ ID NO: 55 VL-домен, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 24 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQASSYPLT

SEQ ID NO: 24 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQASSYPLT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-051

SEQ ID NO: 96 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 97 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGATTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 98 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 99 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGATTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 56 VH-домен, а/к EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 57 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGATTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT

SEQ ID NO: 14 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTLSYSS

SEQ ID NO: 15 HCDR1 (а/к) (Кабат) YSSMS

SEQ ID NO: 16 HCDR2 (а/к) (IMGT) ITPSTGYT

SEQ ID NO: 17 HCDR2 (а/к) (Кабат) FITPSTGYTHYADSVKG

SEQ ID NO: 25 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARRALIFDY

SEQ ID NO: 26 HCDR3 (а/к) (Кабат) RALIFDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-051

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 24 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQASSYPLT

SEQ ID NO: 24 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQASSYPLT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-052

SEQ ID NO: 100 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTI

SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 101 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGCTTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 102 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 103 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGCTTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 58 VH-домен, а/к EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 59 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGCTTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCG

SEQ ID NO: 14 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTLSYSS

SEQ ID NO: 15 HCDR1 (а/к) (Кабат) YSSMS

SEQ ID NO: 16 HCDR2 (а/к) (IMGT) ITPSTGYT

SEQ ID NO: 17 HCDR2 (а/к) (Кабат) FITPSTGYTHYADSVKG

SEQ ID NO: 27 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARRALLFDY

SEQ ID NO: 28 HCDR3 (а/к) (Кабат) RALLFDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-052

SEQ ID NO: 55 VL, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 24 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQASSYPLT

SEQ ID NO: 24 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQASSYPLT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-053

SEQ ID NO: 104 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 105 Тяжелая цепь, ДНК

(без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGGTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 106 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 107 Тяжелая цепь, ДНК

(с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGGTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGTf

SEQ ID NO: 60 VH-домен, а/к EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 61 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGGTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCG

SEQ ID NO: 14 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTLSYSS

SEQ ID NO: 15 HCDR1 (а/к) (Кабат) YSSMS

SEQ ID NO: 16 HCDR2 (а/к) (IMGT) ITPSTGYT

SEQ ID NO: 17 HCDR2 (а/к) (Кабат) FITPSTGYTHYADSVKG

SEQ ID NO: 29 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARRALVFDY

SEQ ID NO: 30 HCDR3 (а/к) (Кабат) RALVFDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-024-053

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 24 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQASSYPLT

SEQ ID NO: 24 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQASSYPLT

Аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи mAb² FS22-172-003-AA/FS28-024-060

SEQ ID NO: 108 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

Аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи mAb² FS22-172-003-AA/FS28-026

SEQ ID NO: 109 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMTWVRQAPGKGLEWVSSITPYYSKTDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNWYRFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 87 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYSSYPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи mAb² FS22-172-003-AA/FS28-091

SEQ ID NO: 110 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNYAMSWVRQAPGKGLEWVSSIKPYDGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNRWVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 88 Легкая цепь, а/к

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYSSSPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи mAb² FS22-172-003-AA/FS28-185

SEQ ID NO:111 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTTSAMSWVRQAPGKGLEWVSRINPYEGETNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGWSIATYYKSAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 89 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSYSAPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256

SEQ ID NO: 112 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 113 Тяжелая цепь, ДНК (без lala) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTAACACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 114 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 115 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTAACACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 62 VH-домен, а/к

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 63 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTAACACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGT

SEQ ID NO: 31 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTNTY

SEQ ID NO: 32 HCDR1 (а/к) (Кабат) NTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 35 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNSYQGGLDY

SEQ ID NO: 36 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNSYQGGLDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256

SEQ ID NO: 116 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 117 Легкая цепь, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT

SEQ ID NO: 64 VL-домен, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIK

SEQ ID NO: 65 VL-домен, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 37 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQSYYYPIT

SEQ ID NO: 37 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQSYYYPIT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-001

SEQ ID NO: 118 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 119 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 120 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 121 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 66 VH-домен, а/к EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 67 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGT

SEQ ID NO: 38 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTETY

SEQ ID NO: 39 HCDR1 (а/к) (Кабат) ETYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO:34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 35 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNSYQGGLDY

SEQ ID NO: 36 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNSYQGGLDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-001

SEQ ID NO: 82 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHNQYPNTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 122 Легкая цепь, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATCTTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAACAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCGGGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCTAGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTTACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC

SEQ ID NO: 68 VL-домен, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHNQYPNTFGQGTKVEIK

SEQ ID NO: 69 VL-домен, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 40 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQHNQYPNT

SEQ ID NO: 40 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQHNQYPNT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-005

SEQ ID NO: 38 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTETY

SEQ ID NO: 39 HCDR1 (а/к) (Кабат) ETYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 35 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNSYQGGLDY

SEQ ID NO: 36 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNSYQGGLDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-005

SEQ ID NO: 83 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQALGYPHTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 90 Легкая цепь, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATCTTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAACAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCGGGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCTAGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTTACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC

SEQ ID NO: 78 VL-домен, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQALGYPHTFGQGTKVEIK

SEQ ID NO: 79 VL-домен, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 CDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 41 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQALGYPHT

SEQ ID NO: 41 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQALGYPHT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-012

SEQ ID NO: 123 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 124 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 125 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 126 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 70 VH-домен, а/к EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 71 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT

SEQ ID NO: 42 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTHTY

SEQ ID NO: 43 HCDR1 (а/к) (Кабат) HTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 44 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYHAALDY

SEQ ID NO: 45 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYHAALDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-012

SEQ ID NO:117 Легкая цепь, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 37 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQSYYYPIT

SEQ ID NO: 37 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQSYYYPIT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-014

SEQ ID NO: 127 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYAAGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 128 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATGCGGCGGGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 129 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYAAGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 130 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATGCGGCGGGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 72 VH-домен, а/к EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYAAGLDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 73 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATGCGGCGGGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT

SEQ ID NO: 46 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTDTY

SEQ ID NO: 47 HCDR1 (а/к) (Кабат) DTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 48 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYAAGLDY

SEQ ID NO: 49 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYAAGLDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-014

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 37 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQSYYYPIT

SEQ ID NO: 37 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQSYYYPIT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-018

SEQ ID NO: 131 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 132 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 133 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 134 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 74 VH-домен, а/к EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 75 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT

SEQ ID NO: 50 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTQTY

SEQ ID NO: 51 HCDR1 (а/к) (Кабат) QTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 52 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYQIGLDY

SEQ ID NO: 53 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYQIGLDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-018

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 37 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQSYYYPIT

SEQ ID NO: 37 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQSYYYPIT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-021

SEQ ID NO: 42 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTHTY

SEQ ID NO: 43 HCDR1 (а/к) (Кабат) HTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 44 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYHAALDY

SEQ ID NO: 45 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYHAALDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-021

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 40 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQHNQYPNT

SEQ ID NO: 40 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQHNQYPNT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-023

SEQ ID NO: 50 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTQTY

SEQ ID NO: 51 HCDR1 (а/к) (Кабат) QTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 52 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYQIGLDY

SEQ ID NO: 53 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYQIGLDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-023

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 40 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQHNQYPNT

SEQ ID NO: 40 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQHNQYPNT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-024

SEQ ID NO: 42 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTHTY

SEQ ID NO: 43 HCDR1 (а/к) (Кабат) HTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 44 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYHAALDY

SEQ ID NO: 45 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYHAALDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-024

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 41 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQALGYPHT

SEQ ID NO: 41 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQALGYPHT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-026

SEQ ID NO: 131

Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 50 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTQTY

SEQ ID NO: 51 HCDR1 (а/к) (Кабат) QTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 52 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYQIGLDY

SEQ ID NO: 53 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYQIGLDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-026

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 41 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQALGYPHT

SEQ ID NO: 41 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQALGYPHT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-027

SEQ ID NO: 42 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTHTY

SEQ ID NO: 43 HCDR1 (а/к) (Кабат) HTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 34 HCDR2 (а/к) (Кабат) NISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 44 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYHAALDY

SEQ ID NO: 45 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYHAALDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-027

SEQ ID NO: 84 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 91 Легкая цепь, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT

SEQ ID NO: 76 VL-домен, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIK

SEQ ID NO: 77 VL-домен, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 80 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQTVPYPYT

SEQ ID NO: 80 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQTVPYPYT

mAb и mAb² мыши

Аминокислотная последовательность тяжелой цепи mAb FS28m-228

SEQ ID NO: 135 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWFTPARFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

Аминокислотная последовательность легкой цепи mAb FS28m-228

SEQ ID NO: 136 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQPFPFSFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Аминокислотная последовательность тяжелой цепи mAb²FS22m-063-AA/FS28m-228

SEQ ID NO: 137 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWFTPARFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

Аминокислотная последовательность легкой цепи mAb²FS22m-063-AA/FS28m-228

Аминокислотная последовательность тяжелой цепи mAb G1AA/HelD1.3

SEQ ID NO: 138 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

Аминокислотная последовательность легкой цепи mAb G1AA/HelD1.3

SEQ ID NO: 139 Легкая цепь, а/к DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSTPRTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

mAb G1AA/SS1

SEQ ID NO: 140 Тяжелая цепь (с LALA) QVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASSYNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 141 Легкая цепь DIELTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPGRFSGSGSGNSYSLTISSVEAEDDATYYCQQWSKHPLTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

MSLN-His-Avi

Мезотелин (без MPF и С-конца) (показан); His- и Avi-метки (не показаны)

SEQ ID NO: 142 Человек EVEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQEALS

SEQ ID NO: 143 Яванский макак DVERTTCPPEKEVHEIDESLIFYKKRELEACVDAALLAAQMDRVDAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIRHLGHLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLKVSKGHEMSAQVATLIDRVVVGRGQLDKDTADTLTAFCPGCLCSLSPERLSSVPPSIIGAVRPQDLDTCGPRQLDVLYPKARLAFQNMSGSEYFVKIRPFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRREAVLPLSVAEVQKLLGPHVEGLKVEEQHSPVRDWILKQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLILDLSVREALS

SEQ ID NO: 144 Мышь DAEQKACPPGKEPYKVDEDLIFYQNWELEACVDGTMLARQMDLVNEIPFTYEQLSIFKHKLDKTYPQGYPESLIQQLGHFFRYVSPEDIHQWNVTSPDTVKTLLKVSKGQKMNAQAIALVACYLRGGGQLDEDMVKALGDIPLSYLCDFSPQDLHSVPSSVMWLVGPQDLDKCSQRHLGLLYQKACSAFQNVSGLEYFEKIKTFLGGASVKDLRALSQHNVSMDIATFKRLQVDSLVGLSVAEVQKLLGPNIVDLKTEEDKSPVRDWLFRQHQKDLDRLGLGLQGGIPNGYLVLDFNVREAFS

CD137-mFc-Avi и CD137-Avi-His

(Внеклеточный домен CD137 (показан); mFc, Avi-, His-метка (не показаны)

SEQ ID NO: 146 Человек SLQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQ

SEQ ID NO: 147 Яванский макак SLQDLCSNCPAGTFCDNNRSQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFKTRKECSSTSNAECDCISGYHCLGAECSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSATPPAPAREPGHSPQ

SEQ ID NO: 148 Мышь AVQNSCDNCQPGTFCRKYNPVCKSCPPSTFSSIGGQPNCNICRVCAGYFRFKKFCSSTHNAECECIEGFHCLGPQCTRCEKDCRPGQELTKQGCKTCSLGTFNDQNGTGVCRPWTNCSLDGRSVLKTGTTEKDVVCGPPVVSFSPSTTISVTPEGGPGGHSLQVL

Антигены, экспрессируемые клетками (CD137)

(Внеклеточный домен (курсив); трансмембранные и внутриклеточные домены (жирный шрифт))

SEQ ID NO: 149 Человек lqdpcsncpagtfcdnnrnqicspcppnsfssaggqrtcdicrqckgvfrtrkecsstsnaecdctpgfhclgagcsmceqdckqgqeltkkgckdccfgtfndqkrgicrpwtncsldgksvlvngtkerdvvcgpspadlspgassvtppaparepghspqIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL

SEQ ID NO: 150 Мышь vqnscdncqpgtfcrkynpvckscppstfssiggqpncnicrvcagyfrfkkfcssthnaececiegfhclgpqctrcekdcrpgqeltkqgcktcslgtfndqngtgvcrpwtncsldgrsvlktgttekdvvcgppvvsfspsttisvtpeggpgghslqvlTLFLALTSALLLALIFITLLFSVLKWIRKKFPHIFKQPFKKTTGAAQEEDACSCRCPQEEEGGGGGYEL

SEQ ID NO: 153 Яванский макак LQDLCSNCPAGTFCDNNRSQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFKTRKECSSTSNAECDCISGYHCLGAECSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSATPPAPAREPGHSPQIIFFLALTSTVVLFLLFFLVLRFSVVKRSRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL

Сверхэкспрессирующие линии клеток - мембраносвязанная зрелая форма мезотелина (выделена жирным курсивом)

[N.B. MPF и пропептид показаны обычным шрифтом до и после последовательности мезотелина. Ни один из них не присутствует в мембраносвязанной зрелой форме мезотелина.]

MPF + MSLN человека

SEQ ID NO: 151

MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISSLSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTRFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPSTWSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRREVEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQEALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA

MPF + MSLN мыши

SEQ ID NO: 145

MALPTARPLLGSCGSPICSRSFLLLLLSLGWIPRLQTQTTKTSQEATLLHAVNGAADFASLPTGLFLGLTCEEVSDLSMEQAKGLAMAVRQKNITLRGHQLRCLARRLPRHLTDEELNALPLDLLLFLNPAMFPGQQACAHFFSLISKANVDVLPRRSLERQRLLMEALKCQGVYGFQVSEADVRALGGLACDLPGKFVARSSEVLLPWLAGCQGPLDQSQEKAVREVLRSGRTQYGPPSKWSVSTLDALQSLVAVLDESIVQSIPKDVKAEWLQHISRDPSRLGSKLTVIHPRFRRDAEQKACPPGKEPYKVDEDLIFYQNWELEACVDGTMLARQMDLVNEIPFTYEQLSIFKHKLDKTYPQGYPESLIQQLGHFFRYVSPEDIHQWNVTSPDTVKTLLKVSKGQKMNAQAIALVACYLRGGGQLDEDMVKALGDIPLSYLCDFSPQDLHSVPSSVMWLVGPQDLDKCSQRHLGLLYQKACSAFQNVSGLEYFEKIKTFLGGASVKDLRALSQHNVSMDIATFKRLQVDSLVGLSVAEVQKLLGPNIVDLKTEEDKSPVRDWLFRQHQKDLDRLGLGLQGGIPNGYLVLDFNVREAFSSRASLLGPGFVLIWIPALLPALRLS

MPF + MSLN яванского макака

SEQ ID NO: 152

MALPMARPLSGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRVLAGETRQEAAPLDGILTNAPDIASLSPRQLLGFTCVEVSGLSTELVQELAVALGQKNVKLSAEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTHFFSRVAKANVDLLPRGAPERQRLLPAALTCWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVVLPRLVRCLGPLDQDQQEAARAALQRGGPPYGPPSTWSISTLDDLQSLLPVLGQPVIHSIPQGILAAWRQRSSRDPSWQQPEQTVLRPRFRRDVERTTCPPEKEVHEIDESLIFYKKRELEACVDAALLAAQMDRVDAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIRHLGHLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLKVSKGHEMSAQVATLIDRVVVGRGQLDKDTADTLTAFCPGCLCSLSPERLSSVPPSIIGAVRPQDLDTCGPRQLDVLYPKARLAFQNMSGSEYFVKIRPFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRREAVLPLSVAEVQKLLGPHVEGLKVEEQHSPVRDWILKQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLILDLSVREALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA

Аминокислотная последовательность CH2-домена дикого типа

SEQ ID NO: 154 CH2 (дикий тип) APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK

Аминокислотная последовательность CH2-домена, содержащего мутацию LALA (мутация LALA выделена жирным шрифтом и подчеркнута)

SEQ ID NO: 155 CH2 (LALA) APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK

Аминокислотная последовательность CH2-домена, содержащего мутацию LALA-PA (мутация LALA-PA выделена жирным шрифтом и подчеркнута)

SEQ ID NO: 156 CH2 (LALA-PA) APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAK

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-271, FS22-172-003-AA/FS28-256-272 и FS22-172-003-AA/FS28-256-273

SEQ ID NO:84 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO:91 Легкая цепь, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT

SEQ ID NO:77 VL-домен, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA

SEQ ID NO: 20 LCDR1 (а/к) (IMGT) QSVSSSY

SEQ ID NO: 21 LCDR1 (а/к) (Кабат) RASQSVSSSYLA

SEQ ID NO: 22 LCDR2 (а/к) (IMGT) GAS

SEQ ID NO: 23 LCDR2 (а/к) (Кабат) GASSRAT

SEQ ID NO: 80 LCDR3 (а/к) (IMGT) QQTVPYPYT

SEQ ID NO: 80 LCDR3 (а/к) (Кабат) QQTVPYPYT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-271

SEQ ID NO: 1 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 2 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCGCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 3 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 4 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCGCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 42 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTHTY

SEQ ID NO: 43 HCDR1 (а/к) (Кабат) HTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 5 HCDR2 (а/к) (Кабат) AISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 44 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYHAALDY

SEQ ID NO: 45 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYHAALDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-272

SEQ ID NO: 6 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSHISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 7 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCCATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 158 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSHISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 159 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCCATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO:71 VH-домен, ДНК GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT

SEQ ID NO: 42 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTHTY

SEQ ID NO: 43 HCDR1 (а/к) (Кабат) HTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 160 HCDR2 (а/к) (Кабат) HISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 44 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYHAALDY

SEQ ID NO: 45 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYHAALDY

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-256-273

SEQ ID NO: 161 Тяжелая цепь, а/к (без LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSSISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 162 Тяжелая цепь, ДНК (без LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 163 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSSISPTYSTTNYADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 164 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 42 HCDR1 (а/к) (IMGT) GFTFTHTY

SEQ ID NO: 43 HCDR1 (а/к) (Кабат) HTYMS

SEQ ID NO: 33 HCDR2 (а/к) (IMGT) ISPTYSTT

SEQ ID NO: 165 HCDR2 (а/к) (Кабат) SISPTYSTTNYADSVKG

SEQ ID NO: 44 HCDR3 (а/к) (IMGT) ARYNAYHAALDY

SEQ ID NO: 45 HCDR3 (а/к) (Кабат) YNAYHAALDY

Аминокислотная последовательность тяжелой цепи mAb²FS22m-063-AA/FS28m-228-010

SEQ ID NO: 166 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYHISPRFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

Аминокислотная последовательность легкой цепи mAb²FS22m-063-AA/FS28m-228-010

SEQ ID NO: 136 Легкая цепь, а/к

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQPFPFSFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи mAb² FS22m-063-AA/HelD1.3

SEQ ID NO:167 Тяжелая цепь, а/к (с LALA)

QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO:168 Легкая цепь, а/к

DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSTPRTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой и легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-185-002

SEQ ID NO: 169 Тяжелая цепь, а/к (с LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTTSAMSWVRQAPGKGLEWVSRINPYEGETNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGWSSDTWFKSATDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 170 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTACATCTGCTATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAGGATTAATCCGTATGAGGGCGAGACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGTTGGTCTAGTGATACGTGGTTTAAATCTGCCACGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 171 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSYSAPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 172 Легкая цепь, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTCTTATTCTGCTCCTGTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT

Аминокислотные последовательности и последовательности кДНК для тяжелой и легкой цепи mAb²FS22-172-003-AA/FS28-185-003

SEQ ID NO: 173 Тяжелая цепь, а/к (с LALA)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTTSAMSWVRQAPGKGLEWVSRINPYEGETNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGWSATSYFKSATDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

SEQ ID NO: 174 Тяжелая цепь, ДНК (с LALA) GAAGTGCAACTGTTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTACATCTGCTATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAGGATTAATCCGTATGAGGGCGAGACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGTTGGTCTGCGACGAGTTATTTTAAATCTGCCACTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT

SEQ ID NO: 175 Легкая цепь, а/к EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSYSAPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 176 Легкая цепь, ДНК GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTCTTATTCTGCTCCTGTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT

Аминокислотная последовательность CH3-домена Fcab дикого типа (SEQ ID NO: 81)

Петли AB, CD и EF подчеркнуты

GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

Последовательность петли CD дикого типа

SEQ ID NO: 157

Петля CD Fcab дикого типа - SNGQPENNY

Ссылки

Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ. Basic local alignment search tool. J. Mol. Biol. 215(3), 403-10 (1990).

Altschul SF, Madden TL, Schäffer AA, Zhang J, Zhang Z, Miller W, Lipman DJ. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res. 25(17), 3389-402 (1997).

Bagshawe KD, Sharma SK, Springer CJ, Antoniw P, Rogers GT, Burke PJ, Melton R. Antibody-enzyme conjugates can generate cytotoxic drugs from inactive precursors at tumor sites. Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4, 915-922 (1991).

Bartkowiak T, Curran MA. 4-1BB Agonists: Multi-Potent Potentiators of Tumor Immunity. Front Oncol. Jun 8;5, 117 (2015).

Bergman I, Burckart GJ, Pohl CR, Venkataramanan R, Barmada MA, Griffin JA And Cheung NV. Pharmacokinetics of IgG and IgM Anti-Ganglioside Antibodies in Rats And Monkeys After Intrathecal Administration. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 284(1), 111-115 (1998)

Bitra A, Doukov T, Wang J, Picarda G, Benedict CA, Croft M, Zajonc DM. Crystal structure of murine 4-1BB and its interaction with 4-1BBL support a role for galectin-9 in 4-1BB signaling. J Biol Chem. 293(4):1317-1329 (2017).

Bruhns P, Iannascoli B, England P, Mancardi DA, Fernandez N, Jorieux S and Daëron M. Specificity and affinity of human Fcγ receptors and their polymorphic variants for human IgG subclasses. Blood 113(16), 3716-25 (2009).

Campagne O, Delmas A, Fouliard S, Chenel M, Chichili GR, Li H, Alderson R, Scherrmann JM, Mager DE. Integrated Pharmacokinetic/ Pharmacodynamic Model of a Bispecific CD3xCD123 DART Molecule in Nonhuman Primates: Evaluation of Activity and Impact of Immunogenicity. Clin Cancer Res. 2018 Jun 1;24(11):2631-2641. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-17-2265. Электронная публикация 20 февраля, 2018 года.

Chester C, Sanmamed MF, Wang J, Melero I. Immunotherapy targeting 4-1BB: mechanistic rationale, clinical results, and future strategies. Blood. 131(1):49-57 (2018).

Chester C, Ambulkar S, Kohrt HE. 4-1BB agonism: adding the accelerator to cancer immunotherapy. Cancer Immunol Immunother. 65(10):1243-8 (2016).

Creaney J, Dick IM and Robinson BW (2015). Discovery of new biomarkers for malignant mesothelioma. Curr Pulmonol Rep. 4: 15-21.

Croft, M., 2003. Co-stimulatory members of the TNFR family: keys to effective T-cell immunity? Nat. Rev. Immunol. 3:609-620.

Cui A, Jin X0G, Zhai K, Tong Z-H and Shi H-Z (2014). Diagnostic values of soluble mesothelin-related peptides for malignant pleural mesothelioma: updated meta-analysis. BMJ Open 4: e004145.

Dubrot J, Milheiro F, Alfaro C, Palazón A, Martinez-Forero I, Perez-Gracia JL, Morales-Kastresana A, Romero-Trevejo JL, Ochoa MC, Hervás-Stubbs S, Prieto J, Jure-Kunkel M, Chen L, Melero I. Treatment with anti-CD137 mAbs causes intense accumulations of liver T cells without selective antitumor immunotherapeutic effects in this organ. Cancer Immunol Immunother. 59(8):1223-1233 (2010).

Fisher TS, Kamperschroer C, Oliphant T, Love VA, Lira PD, Doyonnas R, Bergqvist S, Baxi SM, Rohner A, Shen AC, Huang C, Sokolowski SA, Sharp LL. Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity. Cancer Immunol Immunother. 61(10):1721-33 (2012).

Grisshammer, R. and Nagai, K. (1995) Purification of overproduced proteins from E. coli cells In: DNA Cloning 2: Expression systems (Rickwood, D. and Hames, B.D., Eds.), The Practical Approach Series, pp. 59-92. IRL Press, Oxford University Press.

Hassan R, Kreitman RJ, Pastan I and Willingham MC (2005). Localization of mesothelin in epithelial ovarian cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol AIMM Off Publ Soc Appl Immunohistochem 13:243-47;

Hassan R, Thomas, A, Alewine, C, Le, DT, Jaffee, EM and Pastan I (2016). Mesothelin immunotherapy for cancer: ready for prime time? J. Clin. Onc. 34:4171-4180.

Hassan R, Lerner MR, Benbrook D, Lightfoot SA, Brackett DJ, Wang QC and Pastan I (2002). Clin. Cancer Res.: 8: 3520-3526.

Hezareh M, Hessell AJ, Jensen RC, van de Winkel JG and Parren PW. Effector function activities of a panel of mutants of a broadly neutralizing antibody against human immunodeficiency virus type 1. J. Virol. 75(24), 12161-8 (2001).

Hinner MJ, Aiba, RSB., Wiedenmann A, Schlosser C, Allersdorfer A, Matschiner G, Rothe C, Moebius U, Kohrt HE, Olwill SA. Costimulatory T cell engagement via a novel bispecific anti-CD137 /anti-HER2 protein. J. Immunotherapy Cancer 3 (Suppl 2): P187. (2015)

Holliger P, Hudson PJ. Engineered antibody fragments and the rise of single domains. Nat Biotechnol. 23(9):1126-36 (2005).

Hollevoet K, Reitsma JB, Creaney J, Grigoriu, BD, Robinson BW, Scherpereel A, Cristaudo A, Pass HI, Nackaerts K, Rodriques Portal JA, Schneider J, Muley, T, Di Serio F, Baas P, Tomasetti M, Rai AJ and van Meerbeeck JP (2012). Serum mesothelin for diagnosing malignant pleural mesothelioma: an individual patient data meta-analysis. J Clin. Oncol. 30:1541-1549.

Hurtado JC, Kim YJ, Kwon BS. Signals through 4-1BB are costimulatory to previously activated splenic T cells and inhibit activation-induced cell death. J Immunol. 15; 158(6):2600-9 (1997).

Hu S, Shively L, Raubitschek A, Sherman M, Williams LE, Wong JY, Shively JE, Wu AM. Minibody: A novel engineered anti-carcinoembryonic antigen antibody fragment (single-chain Fv-CH3) which exhibits rapid, high-level targeting of xenografts. Cancer Res. 56(13):3055-61 (1996).

Kaneko O, Gong, L, Zhang, J, Hansen, JK, Hassan, R, Lee B and Ho M (2009). A binding domain on mesothelin for CA125/MUC16. J. Biol. Chem. 284: 3739-3749.

Kohrt, H.E. et al., 2011. CD137 stimulation enhances the antilymphoma activity of anti-CD20 antibodies. Blood, 117(8), pp. 2423-2432.

Kohrt, H.E. et al., 2014. Targeting CD137 enhances the efficacy of cetuximab. The Journal of clinical investigation, 124(6), pp. 2668-2682.

Kohrt, H.E., Houot, R., Weiskopf, K., et al., 2012. Stimulation of natural killer cells with a CD137-specific antibody enhances trastuzumab efficacy in xenotransplant models of breast cancer. The Journal of clinical investigation, 122(3), pp.1066-1075.

Lee J-H, Kim H, Yao Z, Szajek L, Grasso L, Kim I and Paik C.H (2018). Tumour-Shed Antigen Affects Antibody Tumour Targeting: Comparison of Two ⁸⁹Zr-Labeled Antibodies Directed against Shed or Nonshed Antigens. Contrast Media and Molecular Imaging. ID: 2461257.

Lefranc MP, Giudicelli V, Duroux P, Jabado-Michaloud J, Folch G, Aouinti S, Carillon E, Duvergey H, Houles A, Paysan-Lafosse T, Hadi-Saljoqi S, Sasorith S, Lefranc G, Kossida S. IMGT®, the international ImMunoGeneTics information system® 25 years on. Nucleic Acids Res. 43(Database issue):D413-22 (2015).

Lefranc MP, Pommié C, Kaas Q, Duprat E, Bosc N, Guiraudou D, Jean C, Ruiz M, Da Piédade I, Rouard M, Foulquier E, Thouvenin V, Lefranc G. IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor constant domains and Ig superfamily C-like domains. Dev. Comp. Immunol. 29(3), 185-203 (2005).

Ledermann JA, Begent RH, Massof C, Kelly AM, Adam T, Bagshawe KD. A phase-I study of repeated therapy with radiolabelled antibody to carcinoembryonic antigen using intermittent or continuous administration of cyclosporin A to supress the immune response. Int. J. Cancer 47(5), 659-64 (1991).

Link A, Hepp J, Reichen C, Schildknecht P, Tosevski I, Taylor J, Juglair L, Titz A, Matzner M, Bessey R, Zitt C, Lemaillet G, Herbst J, Dawson K, Ji H, Levitsky V, Snell D, Stumpp MT, Harsrick A, von Baur E. Preclinical pharmacology of MP0310: a 4-1BB/FAP bispecific DARPin drug candidate promoting tumor-restricted T cell co-stimulation [реферат]. В: Докладах ежегодной встречи Американской ассоциации научных исследований в области раковых заболеваний (American Association for Cancer Research); 14-18 апреля 2018 года; Чикаго (Иллинойс), Реферат №3752 (2018).

Liu et al. 2017. Tumor Antigen Expression-dependent Activation of the CD137 Costimulatory Pathway by Bispecific DART® Proteins. Ежегодная встреча Американской ассоциации научных исследований в области раковых заболеваний 1-5 апреля 2017 года, Вашингтон, DC. Реферат №3642.

Ma J, Tang WK, Esser L, Pastan I, Xia D. (2012). Recognition of mesothelin by the therapeutic antibody MORAb-009: structural and mechanistic insights. J Biol. Chem. 287: 33123-31.

Makkouk A, Chester C, Kohrt HE. Rationale for anti-CD137 cancer immunotherapy. Eur J Cancer. 54, 112-119 (2016).

Pearson WR, Lipman DJ. Improved tools for biological sequence comparison. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85(8), 2444-8 (1988).

Reichen C, Bessey R, DePasquale C, Imobersteg S, Béhé M, Blanc A, Schibli R, Link A, Juglair L, Taylor J, Schildknecht P, Hepp J, vom Baur E, Ji H, Zitt C, Levitsky V, Dawson K, Stumpp MT, Snell D, FAP-mediated tumor accumulation of a T-cell agonistic FAP/4-1BB DARPin drug candidate analyzed by SPECT/CT and quantitative biodistribution [реферат]. В: Докладах ежегодной встречи Американской ассоциации научных исследований в области раковых заболеваний; 14-18 апреля 2018 года; Чикаго (Иллинойс), Реферат №3029 (2018).

Rosenberg S. Development of Cancer Vaccines. ASCO Educational Book Spring: 60-62 (2000).

Sapede, C, Gauvrit A, Barbieux I, Padieu M, Cellerin L, Sagan C, Scherpereel A, Dabouis G, Gregoire M. Abberant splicing and protease involvement in mesothelin release from epithelioid mesothelioma cells. Canc. Sci 99(3): 590-594 (2008)

Schropp J, Knot A, Shah D, Koch G. Target-mediated drug disposition model for bispecific antibodies: properties, approximation and optimal dosing strategy. CPT Pharmacometrics Systems Pharmacology 2019 8: 177-187.

Segal NH, Logan TF, Hodi FS, McDermott D, Melero I, Hamid O, Schmidt H, Robert C, Chiarion-Sileni V, Ascierto PA, Maio M, Urba WJ, Gangadhar TC, Suryawanshi S, Neely J, Jure-Kunkel M, Krishnan S, Kohrt H, Sznol M, Levy R. Results from an integrated safety analysis of urelumab, an agonist anti-CD137 monoclonal antibody. Clin Cancer Res. 23(8), 1929-1936 (2017).

Simeoni M, Magni P, Cammia C, De Nicolao G, Croci V, Pesenti E, Germani M, Poggesi I, Rocchetti M. Predictive pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling of tumor growth kinetics in xenograft models after administration of anticancer agents. Cancer Res. 2004 Feb 1; 64(3):1094-101.

Smith TF, Waterman MS. Identification of common molecular subsequences. J. Mol. Biol. 147(1), 195-7 (1981).

Shuford WW, Klussman K, Tritchler DD, Loo DT, Chalupny J, Siadak AW, Brown TJ, Emswiler J, Raecho H, Larsen CP, Pearson TC, Ledbetter JA, Aruffo A, Mittler RS. 4-1BB costimulatory signals preferentially induce CD8+ T cell proliferation and lead to the amplification in vivo of cytotoxic T cell responses. J Exp Med. 186(1), 47-55 (1997).

Tello, D, Goldbaum, FA, Mariuzza, RA, Ysern, X, Schwarz, FP, Poljak, RJ. Three-dimensional structure and thermodynamics of antigen binding by anti-lysozyme antibodies, Biochem Soc. Trans., 21(4), 943-6 (1993)

Wen T, Bukczynski J, Watts TH. 4-1BB ligand-mediated costimulation of human T cells induces CD4 and CD8 T cell expansion, cytokine production, and the development of cytolytic effector function. J Immunol. 168(10), 4897-906 (2002).

Wesche-Soldato DE, Chung CS, Gregory SH, Salazar-Mather TP, Ayala CA, Ayala A. CD8+ T cells promote inflammation and apoptosis in the liver after sepsis: role of Fas-FasL. Am J Pathol. 2007 Jul; 171(1):87-96.

Won EY, Cha K, Byun JS, Kim DU, Shin S, Ahn B, Kim YH, Rice AJ, Walz T, Kwon BS, Cho HS. The structure of the trimer of human 4-1BB ligand is unique among members of the tumor necrosis factor superfamily. J Biol Chem.285(12), 9202-10 (2010).

Wozniak-Knopp G, Bartl S, Bauer A, Mostageer M, Woisetschläger M, Antes B, Ettl K, Kainer M, Weberhofer G, Wiederkum S, Himmler G, Mudde GC, Rüker F. Introducing antigen-binding sites in structural loops of immunoglobulin constant domains: Fc fragments with engineered HER2/neu-binding sites and antibody properties. Protein Eng Des Sel. 23(4), 289-97 (2010).

Wang X, Mathieu M, Brezski RJ. IgG Fc engineering to modulate antibody effector functions. Protein Cell 9(1), 63-73 (2018).

Zhang Y, Chertov O, Zhang J, Zhang J, Hassan R, Pastan I (2011). Cytotoxic activity of immunotoxin SS1P is modulated by TACE-dependent mesothelin shedding. Cancer Res 71: 5915-5922.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Ф-СТАР ДЕЛЬТА ЛИМИТЕД

<120> МОЛЕКУЛЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ МЕЗОТЕЛИН И CD137

<130> 007508286

<140> PCT/EP2019/068817

<141> 2019-07-12

<150> GB 1811450.4

<151> 2018-07-12

<160> 176

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-271 без LALA

<400> 1

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr His Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 2

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-271 без LALA

<400> 2

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact catacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcgcg atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acaacaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatcatg ctgctctgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaactgct gggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 3

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-271 с LALA

<400> 3

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr His Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 4

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-271 с LALA

<400> 4

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact catacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcgcg atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acaacaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatcatg ctgctctgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaagctgc cggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 5

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-271 (Кабат)

<400> 5

Ala Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 6

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-272 без LALA

<400> 6

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr His Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser His Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 7

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-272 без LALA

<400> 7

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact catacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagccat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acaacaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatcatg ctgctctgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaactgct gggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 8

<211> 111

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> СН3 домен и аминокислотная последовательность модифицированных

областей структурных петель AB и EF CH3 для всех клонов mAb2,

содержащих Fcab FS22-172-003, и для Fcab FS22-172-003

<400> 8

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

1 5 10 15

Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

20 25 30

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

35 40 45

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

50 55 60

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Gly Ala Asp

65 70 75 80

Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

85 90 95

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

100 105 110

<210> 9

<211> 333

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

содержащих Fcab FS22-172-003, и для Fcab FS22-172-003

<400> 9

ggacagcctc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgccatac

60

atcatcccac catacaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc

120

gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct

180

cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt gggcgcagat

240

aggtggctgg aagggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac

300

tacactcaga agagcttgtc cctgtcgccc ggt

333

<210> 10

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

содержащих Fcab FS22-172-003, и для петли АВ Fcab FS22-172-003

<400> 10

Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr

1 5

<210> 11

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

содержащих Fcab FS22-172-003, и для петли EF Fcab FS22-172-003

<400> 11

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu

1 5

<210> 12

<211> 116

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024

<400> 12

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 13

<211> 348

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024

<400> 13

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctgacgttcg actactgggg ccagggaacc ttggtcaccg tctcgagt

348

<210> 14

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (IMGT)

<400> 14

Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser Ser

1 5

<210> 15

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (Кабат)

<400> 15

Tyr Ser Ser Met Ser

1 5

<210> 16

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (IMGT)

<400> 16

Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr

1 5

<210> 17

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (Кабат)

<400> 17

Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 18

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (IMGT)

<400> 18

Ala Arg Arg Ala Leu Thr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 19

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (Кабат)

<400> 19

Arg Ala Leu Thr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 20

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR1 легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (IMGT)

<400> 20

Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr

1 5

<210> 21

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR1 легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (Кабат)

<400> 21

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 22

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR2 легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (IMGT)

<400> 22

Gly Ala Ser

1

<210> 23

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR2 легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (Кабат)

<400> 23

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 24

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3 легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 (IMGT) и

(Кабат)

<400> 24

Gln Gln Ala Ser Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 25

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 (IMGT)

<400> 25

Ala Arg Arg Ala Leu Ile Phe Asp Tyr

1 5

<210> 26

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 (Кабат)

<400> 26

Arg Ala Leu Ile Phe Asp Tyr

1 5

<210> 27

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 (IMGT)

<400> 27

Ala Arg Arg Ala Leu Leu Phe Asp Tyr

1 5

<210> 28

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 (Кабат)

<400> 28

Arg Ala Leu Leu Phe Asp Tyr

1 5

<210> 29

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 (IMGT)

<400> 29

Ala Arg Arg Ala Leu Val Phe Asp Tyr

1 5

<210> 30

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 (Кабат)

<400> 30

Arg Ala Leu Val Phe Asp Tyr

1 5

<210> 31

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 (IMGT)

<400> 31

Gly Phe Thr Phe Thr Asn Thr Tyr

1 5

<210> 32

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 (Кабат)

<400> 32

Asn Thr Tyr Met Ser

1 5

<210> 33

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 (IMGT)

<400> 33

Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr

1 5

<210> 34

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 (Кабат)

<400> 34

Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 35

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 (IMGT)

<400> 35

Ala Arg Tyr Asn Ser Tyr Gln Gly Gly Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 36

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 (Кабат)

<400> 36

Tyr Asn Ser Tyr Gln Gly Gly Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 37

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3 легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 (IMGT) и

(Кабат)

<400> 37

Gln Gln Ser Tyr Tyr Tyr Pro Ile Thr

1 5

<210> 38

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 (IMGT)

<400> 38

Gly Phe Thr Phe Thr Glu Thr Tyr

1 5

<210> 39

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 (Кабат)

<400> 39

Glu Thr Tyr Met Ser

1 5

<210> 40

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3 легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 (IMGT) и

(Кабат)

<400> 40

Gln Gln His Asn Gln Tyr Pro Asn Thr

1 5

<210> 41

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3 легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 (IMGT) и

(Кабат)

<400> 41

Gln Gln Ala Leu Gly Tyr Pro His Thr

1 5

<210> 42

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 (IMGT)

<400> 42

Gly Phe Thr Phe Thr His Thr Tyr

1 5

<210> 43

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 (Кабат)

<400> 43

His Thr Tyr Met Ser

1 5

<210> 44

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 (IMGT)

<400> 44

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 45

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 (Кабат)

<400> 45

Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 46

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 (IMGT)

<400> 46

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Thr Tyr

1 5

<210> 47

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 (Кабат)

<400> 47

Asp Thr Tyr Met Ser

1 5

<210> 48

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 (IMGT)

<400> 48

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Gly Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 49

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 (Кабат)

<400> 49

Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Gly Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 50

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 (IMGT)

<400> 50

Gly Phe Thr Phe Thr Gln Thr Tyr

1 5

<210> 51

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 (Кабат)

<400> 51

Gln Thr Tyr Met Ser

1 5

<210> 52

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 (IMGT)

<400> 52

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr Gln Ile Gly Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 53

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 (Кабат)

<400> 53

Tyr Asn Ala Tyr Gln Ile Gly Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 54

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024

<400> 54

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Ser Tyr Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 55

<211> 324

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024

<400> 55

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caagcttctt cttatcctct cacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaa

324

<210> 56

<211> 116

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-051

<400> 56

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 57

<211> 348

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-051

<400> 57

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctgattttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcgagt

348

<210> 58

<211> 116

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-052

<400> 58

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 59

<211> 348

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-052

<400> 59

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctgcttttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcgtcg

348

<210> 60

<211> 116

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-053

<400> 60

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 61

<211> 348

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-053

<400> 61

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctggtgttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcgtcg

348

<210> 62

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256

<400> 62

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ser Tyr Gln Gly Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 63

<211> 357

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256

<400> 63

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact aacacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

tcttaccagg gtggcttgga ctactggggc cagggaacct tggtcaccgt ctcgagt

357

<210> 64

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256

<400> 64

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Tyr Tyr Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 65

<211> 324

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256

<400> 65

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caatcttatt attatcctat cacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaa

324

<210> 66

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001

<400> 66

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Glu Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ser Tyr Gln Gly Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 67

<211> 357

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001

<400> 67

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact gagacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

tcttaccagg gtggcttgga ctactggggc cagggaacct tggtcaccgt ctcgagt

357

<210> 68

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001

<400> 68

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Gln Tyr Pro

85 90 95

Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 69

<211> 324

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001

<400> 69

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caacataatc agtatccgaa tacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaa

324

<210> 70

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012

<400> 70

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr His Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 71

<211> 357

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012

<400> 71

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact catacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acaacaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatcatg ctgctctgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagt

357

<210> 72

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014

<400> 72

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 73

<211> 357

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014

<400> 73

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact gatacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatgcgg cgggtcttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagt

357

<210> 74

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018

<400> 74

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Gln Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr Gln Ile Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 75

<211> 357

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH домен тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018

<400> 75

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact cagacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcttatcaga ttgggttgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagt

357

<210> 76

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-027

<400> 76

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Val Pro Tyr Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 77

<211> 324

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-027

<400> 77

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caaactgtgc cgtatccgta tacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaa

324

<210> 78

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-005

<400> 78

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Leu Gly Tyr Pro

85 90 95

His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 79

<211> 324

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL домен легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-005

<400> 79

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caagctttgg gttatcctca tacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaa

324

<210> 80

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3легкой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 (IMGT)

и (Кабат)

<400> 80

Gln Gln Thr Val Pro Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 81

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CH3-домен Fcab дикого типа

<400> 81

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

1 5 10 15

Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

20 25 30

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

35 40 45

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

50 55 60

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

65 70 75 80

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

85 90 95

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

100 105

<210> 82

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001

<400> 82

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Gln Tyr Pro

85 90 95

Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 83

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-005

<400> 83

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Leu Gly Tyr Pro

85 90 95

His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 84

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-027

<400> 84

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Val Pro Tyr Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 85

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2FS22-172-003-AA/FS28-024

<400> 85

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ser Ser Tyr Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 86

<211> 645

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024

<400> 86

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caagcttctt cttatcctct cacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaacgtact gtggccgctc ctagcgtgtt catttttccg

360

ccatccgacg agcagctcaa gtccggcacc gcctccgtgg tctgcctgct caacaacttc

420

taccctcgcg aagctaaggt ccagtggaag gtcgacaatg ccctgcagtc cggaaactcg

480

caggaaagcg tgactgaaca ggactccaag gactccacct attcactgtc ctcgactctg

540

accctgagca aggcggatta cgaaaagcac aaagtgtacg catgcgaagt gacccaccag

600

ggtctttcgt cccccgtgac caagagcttc aacagaggag agtgt

645

<210> 87

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-026

<400> 87

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 88

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-091

<400> 88

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Ser Pro

85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 89

<211> 216

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185

<400> 89

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Tyr Ser Ala

85 90 95

Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys

115 120 125

Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg

130 135 140

Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn

145 150 155 160

Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser

165 170 175

Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys

180 185 190

Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr

195 200 205

Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 90

<211> 645

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-005

<400> 90

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caagctttgg gttatcctca tacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaacgtact gtagcagctc cttccgtgtt catctttccg

360

cccagtgatg agcagctgaa gtcaggtact gcttccgtgg tttgcctgct caacaacttt

420

taccccagag aagccaaagt ccagtggaaa gtggacaatg cgttgcaaag cgggaactct

480

caggaatccg tcacagagca ggactctaag gactccacct atagcctctc tagtacgctg

540

acactgagca aagccgatta cgagaagcac aaggtgtatg cctgtgaggt tacccatcaa

600

ggccttagct caccagtgac caagagcttc aataggggag aatgc

645

<210> 91

<211> 645

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-027

<400> 91

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caaactgtgc cgtatccgta tacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaacgtact gtggccgctc ctagcgtgtt catttttccg

360

ccatccgacg agcagctcaa gtccggcacc gcctccgtgg tctgcctgct caacaacttc

420

taccctcgcg aagctaaggt ccagtggaag gtcgacaatg ccctgcagtc cggaaactcg

480

caggaaagcg tgactgaaca ggactccaag gactccacct attcactgtc ctcgactctg

540

accctgagca aggcggatta cgaaaagcac aaagtgtacg catgcgaagt gacccaccag

600

ggtctttcgt cccccgtgac caagagcttc aacagaggag agtgt

645

<210> 92

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 без LALA

<400> 92

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 93

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 без LALA

<400> 93

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctgacgttcg actactgggg ccagggaacc ttggtcaccg tctcgagtgc tagcactaag

360

ggcccgtcgg tgttcccgct ggccccatcg tccaagagca catcaggggg taccgccgcc

420

ctgggctgcc ttgtgaagga ttactttccc gagcccgtca cagtgtcctg gaacagcgga

480

gccctgacct ccggagtgca tactttcccg gctgtgcttc agtcctctgg cctgtactca

540

ttgtcctccg tggtcaccgt cccttcgtcc tccctgggca cccagaccta tatctgtaat

600

gtcaaccata agccctcgaa caccaaggtc gacaagaagg tcgagccgaa gtcgtgcgac

660

aagactcaca cttgcccgcc ttgcccagcc ccggaactgc tgggtggtcc ttcggtgttc

720

ctcttcccgc ccaagccgaa ggataccctg atgatctcac ggacccccga agtgacctgt

780

gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccg gaagtgaaat tcaattggta cgtggatgga

840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcca cgggaagaac agtacaactc tacctaccgc

900

gtggtgtccg tgctcactgt gctgcaccaa gactggctga acgggaagga gtacaagtgc

960

aaagtgtcca acaaggcgct gcctgcccca attgagaaaa ctatctcgaa agccaaggga

1020

cagcctcgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gccatacatc

1080

atcccaccat acaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac

1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc

1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtggg cgcagatagg

1260

tggctggaag ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac

1320

actcagaaga gcttgtccct gtcgcccggt

1350

<210> 94

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 с LALA

<400> 94

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 95

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024 с LALA

<400> 95

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctgacgttcg actactgggg ccagggaacc ttggtcaccg tctcgagtgc tagcactaag

360

ggcccgtcgg tgttcccgct ggccccatcg tccaagagca catcaggggg taccgccgcc

420

ctgggctgcc ttgtgaagga ttactttccc gagcccgtca cagtgtcctg gaacagcgga

480

gccctgacct ccggagtgca tactttcccg gctgtgcttc agtcctctgg cctgtactca

540

ttgtcctccg tggtcaccgt cccttcgtcc tccctgggca cccagaccta tatctgtaat

600

gtcaaccata agccctcgaa caccaaggtc gacaagaagg tcgagccgaa gtcgtgcgac

660

aagactcaca cttgcccgcc ttgcccagcc ccggaagctg ccggtggtcc ttcggtgttc

720

ctcttcccgc ccaagccgaa ggataccctg atgatctcac ggacccccga agtgacctgt

780

gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccg gaagtgaaat tcaattggta cgtggatgga

840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcca cgggaagaac agtacaactc tacctaccgc

900

gtggtgtccg tgctcactgt gctgcaccaa gactggctga acgggaagga gtacaagtgc

960

aaagtgtcca acaaggcgct gcctgcccca attgagaaaa ctatctcgaa agccaaggga

1020

cagcctcgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gccatacatc

1080

atcccaccat acaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac

1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc

1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtggg cgcagatagg

1260

tggctggaag ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac

1320

actcagaaga gcttgtccct gtcgcccggt

1350

<210> 96

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 без LALA

<400> 96

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 97

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 без LALA

<400> 97

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctgattttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcgagtgc tagcactaag

360

ggcccgtcgg tgttcccgct ggccccatcg tccaagagca catcaggggg taccgccgcc

420

ctgggctgcc ttgtgaagga ttactttccc gagcccgtca cagtgtcctg gaacagcgga

480

gccctgacct ccggagtgca tactttcccg gctgtgcttc agtcctctgg cctgtactca

540

ttgtcctccg tggtcaccgt cccttcgtcc tccctgggca cccagaccta tatctgtaat

600

gtcaaccata agccctcgaa caccaaggtc gacaagaagg tcgagccgaa gtcgtgcgac

660

aagactcaca cttgcccgcc ttgcccagcc ccggaactgc tgggtggtcc ttcggtgttc

720

ctcttcccgc ccaagccgaa ggataccctg atgatctcac ggacccccga agtgacctgt

780

gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccg gaagtgaaat tcaattggta cgtggatgga

840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcca cgggaagaac agtacaactc tacctaccgc

900

gtggtgtccg tgctcactgt gctgcaccaa gactggctga acgggaagga gtacaagtgc

960

aaagtgtcca acaaggcgct gcctgcccca attgagaaaa ctatctcgaa agccaaggga

1020

cagcctcgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gccatacatc

1080

atcccaccat acaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac

1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc

1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtggg cgcagatagg

1260

tggctggaag ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac

1320

actcagaaga gcttgtccct gtcgcccggt

1350

<210> 98

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 с LALA

<400> 98

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 99

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 с LALA

<400> 99

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctgattttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcgagtgc tagcactaag

360

ggcccgtcgg tgttcccgct ggccccatcg tccaagagca catcaggggg taccgccgcc

420

ctgggctgcc ttgtgaagga ttactttccc gagcccgtca cagtgtcctg gaacagcgga

480

gccctgacct ccggagtgca tactttcccg gctgtgcttc agtcctctgg cctgtactca

540

ttgtcctccg tggtcaccgt cccttcgtcc tccctgggca cccagaccta tatctgtaat

600

gtcaaccata agccctcgaa caccaaggtc gacaagaagg tcgagccgaa gtcgtgcgac

660

aagactcaca cttgcccgcc ttgcccagcc ccggaagctg ccggtggtcc ttcggtgttc

720

ctcttcccgc ccaagccgaa ggataccctg atgatctcac ggacccccga agtgacctgt

780

gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccg gaagtgaaat tcaattggta cgtggatgga

840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcca cgggaagaac agtacaactc tacctaccgc

900

gtggtgtccg tgctcactgt gctgcaccaa gactggctga acgggaagga gtacaagtgc

960

aaagtgtcca acaaggcgct gcctgcccca attgagaaaa ctatctcgaa agccaaggga

1020

cagcctcgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gccatacatc

1080

atcccaccat acaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac

1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc

1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtggg cgcagatagg

1260

tggctggaag ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac

1320

actcagaaga gcttgtccct gtcgcccggt

1350

<210> 100

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 без LALA

<400> 100

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 101

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 без LALA

<400> 101

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctgcttttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcgtcggc tagcactaag

360

ggcccgtcgg tgttcccgct ggccccatcg tccaagagca catcaggggg taccgccgcc

420

ctgggctgcc ttgtgaagga ttactttccc gagcccgtca cagtgtcctg gaacagcgga

480

gccctgacct ccggagtgca tactttcccg gctgtgcttc agtcctctgg cctgtactca

540

ttgtcctccg tggtcaccgt cccttcgtcc tccctgggca cccagaccta tatctgtaat

600

gtcaaccata agccctcgaa caccaaggtc gacaagaagg tcgagccgaa gtcgtgcgac

660

aagactcaca cttgcccgcc ttgcccagcc ccggaactgc tgggtggtcc ttcggtgttc

720

ctcttcccgc ccaagccgaa ggataccctg atgatctcac ggacccccga agtgacctgt

780

gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccg gaagtgaaat tcaattggta cgtggatgga

840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcca cgggaagaac agtacaactc tacctaccgc

900

gtggtgtccg tgctcactgt gctgcaccaa gactggctga acgggaagga gtacaagtgc

960

aaagtgtcca acaaggcgct gcctgcccca attgagaaaa ctatctcgaa agccaaggga

1020

cagcctcgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gccatacatc

1080

atcccaccat acaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac

1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc

1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtggg cgcagatagg

1260

tggctggaag ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac

1320

actcagaaga gcttgtccct gtcgcccggt

1350

<210> 102

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 с LALA

<400> 102

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 103

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 с LALA

<400> 103

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctgcttttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcgtcggc tagcactaag

360

ggcccgtcgg tgttcccgct ggccccatcg tccaagagca catcaggggg taccgccgcc

420

ctgggctgcc ttgtgaagga ttactttccc gagcccgtca cagtgtcctg gaacagcgga

480

gccctgacct ccggagtgca tactttcccg gctgtgcttc agtcctctgg cctgtactca

540

ttgtcctccg tggtcaccgt cccttcgtcc tccctgggca cccagaccta tatctgtaat

600

gtcaaccata agccctcgaa caccaaggtc gacaagaagg tcgagccgaa gtcgtgcgac

660

aagactcaca cttgcccgcc ttgcccagcc ccggaagctg ccggtggtcc ttcggtgttc

720

ctcttcccgc ccaagccgaa ggataccctg atgatctcac ggacccccga agtgacctgt

780

gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccg gaagtgaaat tcaattggta cgtggatgga

840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcca cgggaagaac agtacaactc tacctaccgc

900

gtggtgtccg tgctcactgt gctgcaccaa gactggctga acgggaagga gtacaagtgc

960

aaagtgtcca acaaggcgct gcctgcccca attgagaaaa ctatctcgaa agccaaggga

1020

cagcctcgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gccatacatc

1080

atcccaccat acaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac

1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc

1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtggg cgcagatagg

1260

tggctggaag ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac

1320

actcagaaga gcttgtccct gtcgcccggt

1350

<210> 104

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 без LALA

<400> 104

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 105

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 без LALA

<400> 105

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctggtgttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcgtcggc tagcactaag

360

ggcccgtcgg tgttcccgct ggccccatcg tccaagagca catcaggggg taccgccgcc

420

ctgggctgcc ttgtgaagga ttactttccc gagcccgtca cagtgtcctg gaacagcgga

480

gccctgacct ccggagtgca tactttcccg gctgtgcttc agtcctctgg cctgtactca

540

ttgtcctccg tggtcaccgt cccttcgtcc tccctgggca cccagaccta tatctgtaat

600

gtcaaccata agccctcgaa caccaaggtc gacaagaagg tcgagccgaa gtcgtgcgac

660

aagactcaca cttgcccgcc ttgcccagcc ccggaactgc tgggtggtcc ttcggtgttc

720

ctcttcccgc ccaagccgaa ggataccctg atgatctcac ggacccccga agtgacctgt

780

gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccg gaagtgaaat tcaattggta cgtggatgga

840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcca cgggaagaac agtacaactc tacctaccgc

900

gtggtgtccg tgctcactgt gctgcaccaa gactggctga acgggaagga gtacaagtgc

960

aaagtgtcca acaaggcgct gcctgcccca attgagaaaa ctatctcgaa agccaaggga

1020

cagcctcgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gccatacatc

1080

atcccaccat acaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac

1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc

1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtggg cgcagatagg

1260

tggctggaag ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac

1320

actcagaaga gcttgtccct gtcgcccggt

1350

<210> 106

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 с LALA

<400> 106

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 107

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 с LALA

<400> 107

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccctcagt tattcttcta tgtcatgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcttt attactccgt ctactggcta tacccactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagacgggcg

300

ctggtgttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcgtcggc tagcactaag

360

ggcccgtcgg tgttcccgct ggccccatcg tccaagagca catcaggggg taccgccgcc

420

ctgggctgcc ttgtgaagga ttactttccc gagcccgtca cagtgtcctg gaacagcgga

480

gccctgacct ccggagtgca tactttcccg gctgtgcttc agtcctctgg cctgtactca

540

ttgtcctccg tggtcaccgt cccttcgtcc tccctgggca cccagaccta tatctgtaat

600

gtcaaccata agccctcgaa caccaaggtc gacaagaagg tcgagccgaa gtcgtgcgac

660

aagactcaca cttgcccgcc ttgcccagcc ccggaagctg ccggtggtcc ttcggtgttc

720

ctcttcccgc ccaagccgaa ggataccctg atgatctcac ggacccccga agtgacctgt

780

gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccg gaagtgaaat tcaattggta cgtggatgga

840

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcca cgggaagaac agtacaactc tacctaccgc

900

gtggtgtccg tgctcactgt gctgcaccaa gactggctga acgggaagga gtacaagtgc

960

aaagtgtcca acaaggcgct gcctgcccca attgagaaaa ctatctcgaa agccaaggga

1020

cagcctcgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gccatacatc

1080

atcccaccat acaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac

1140

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc

1200

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtggg cgcagatagg

1260

tggctggaag ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac

1320

actcagaaga gcttgtccct gtcgcccggt

1350

<210> 108

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-024-060 с LALA

<400> 108

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Tyr Ser

20 25 30

Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Thr Pro Ser Thr Gly Tyr Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Leu Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 109

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-026

<400> 109

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Thr Pro Tyr Tyr Ser Lys Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Trp Tyr Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 110

<211> 450

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-091

<400> 110

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Lys Pro Tyr Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Arg Trp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly

450

<210> 111

<211> 457

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185

<400> 111

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asn Pro Tyr Glu Gly Glu Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Ser Ile Ala Thr Tyr Tyr Lys Ser Ala Met Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala

225 230 235 240

Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile

355 360 365

Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

450 455

<210> 112

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 без LALA

<400> 112

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ser Tyr Gln Gly Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 113

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 без LALA

<400> 113

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact aacacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

tcttaccagg gtggcttgga ctactggggc cagggaacct tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaactgct gggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 114

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 с LALA

<400> 114

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ser Tyr Gln Gly Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 115

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256 с LALA

<400> 115

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact aacacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

tcttaccagg gtggcttgga ctactggggc cagggaacct tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaagctgc cggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 116

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256

<400> 116

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Tyr Tyr Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 117

<211> 645

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256

<400> 117

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caatcttatt attatcctat cacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaacgtact gtggccgctc ctagcgtgtt catttttccg

360

ccatccgacg agcagctcaa gtccggcacc gcctccgtgg tctgcctgct caacaacttc

420

taccctcgcg aagctaaggt ccagtggaag gtcgacaatg ccctgcagtc cggaaactcg

480

caggaaagcg tgactgaaca ggactccaag gactccacct attcactgtc ctcgactctg

540

accctgagca aggcggatta cgaaaagcac aaagtgtacg catgcgaagt gacccaccag

600

ggtctttcgt cccccgtgac caagagcttc aacagaggag agtgt

645

<210> 118

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 без LALA

<400> 118

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Glu Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ser Tyr Gln Gly Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 119

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 без LALA

<400> 119

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact gagacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

tcttaccagg gtggcttgga ctactggggc cagggaacct tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaactgct gggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 120

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 с LALA

<400> 120

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Glu Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ser Tyr Gln Gly Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 121

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 с LALA

<400> 121

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact gagacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

tcttaccagg gtggcttgga ctactggggc cagggaacct tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaagctgc cggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 122

<211> 645

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-001

<400> 122

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caacataatc agtatccgaa tacgttcggc

300

caagggacca aggtggaaat caaacgtact gtagcagctc cttccgtgtt catctttccg

360

cccagtgatg agcagctgaa gtcaggtact gcttccgtgg tttgcctgct caacaacttt

420

taccccagag aagccaaagt ccagtggaaa gtggacaatg cgttgcaaag cgggaactct

480

caggaatccg tcacagagca ggactctaag gactccacct atagcctctc tagtacgctg

540

acactgagca aagccgatta cgagaagcac aaggtgtatg cctgtgaggt tacccatcaa

600

ggccttagct caccagtgac caagagcttc aataggggag aatgc

645

<210> 123

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 без LALA

<400> 123

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr His Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 124

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 без LALA

<400> 124

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact catacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acaacaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatcatg ctgctctgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaactgct gggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 125

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 с LALA

<400> 125

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr His Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 126

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 с LALA

<400> 126

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact catacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acaacaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatcatg ctgctctgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaagctgc cggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 127

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 без LALA

<400> 127

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 128

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 без LALA

<400> 128

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact gatacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatgcgg cgggtcttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaactgct gggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 129

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 с LALA

<400> 129

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 130

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 с LALA

<400> 130

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact gatacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatgcgg cgggtcttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaagctgc cggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 131

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 без LALA

<400> 131

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Gln Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr Gln Ile Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 132

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 без LALA

<400> 132

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact cagacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcttatcaga ttgggttgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaactgct gggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 133

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 с LALA

<400> 133

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Gln Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asn Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr Gln Ile Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 134

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 с LALA

<400> 134

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact cagacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcaat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcttatcaga ttgggttgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaagctgc cggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 135

<211> 446

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb FS28m-228

<400> 135

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Phe Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Met Ile Ser Pro Lys Ser Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Phe Thr Pro Ala Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 136

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS28m-228

<400> 136

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Pro Phe Pro Phe Ser

85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 137

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2FS22m-063-AA/FS28m-228

<400> 137

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Phe Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Met Ile Ser Pro Lys Ser Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Phe Thr Pro Ala Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Pro Tyr Trp Ser Tyr Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Met Asn Tyr

405 410 415

Arg Trp Glu Leu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 138

<211> 445

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb G1AA/HelD1.3

<400> 138

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Thr Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Glu Arg Asp Tyr Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 139

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb G1AA/HelD1.3

<400> 139

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 140

<211> 448

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb G1AA/SS1 с LALA

<400> 140

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Leu Ile Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly

100 105 110

Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 141

<211> 213

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb G1AA/SS1

<400> 141

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Lys His Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 142

<211> 303

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens MSLN-His-Avi

<400> 142

Glu Val Glu Lys Thr Ala Cys Pro Ser Gly Lys Lys Ala Arg Glu Ile

1 5 10 15

Asp Glu Ser Leu Ile Phe Tyr Lys Lys Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val

20 25 30

Asp Ala Ala Leu Leu Ala Thr Gln Met Asp Arg Val Asn Ala Ile Pro

35 40 45

Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val Leu Lys His Lys Leu Asp Glu Leu

50 55 60

Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Val Ile Gln His Leu Gly Tyr Leu

65 70 75 80

Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp Ile Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser

85 90 95

Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Glu Val Asn Lys Gly His Glu Met

100 105 110

Ser Pro Gln Val Ala Thr Leu Ile Asp Arg Phe Val Lys Gly Arg Gly

115 120 125

Gln Leu Asp Lys Asp Thr Leu Asp Thr Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly

130 135 140

Tyr Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Glu Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser

145 150 155 160

Ser Ile Trp Ala Val Arg Pro Gln Asp Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg

165 170 175

Gln Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met

180 185 190

Asn Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys Ile Gln Ser Phe Leu Gly Gly Ala

195 200 205

Pro Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser Gln Gln Asn Val Ser Met Asp

210 215 220

Leu Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Thr Asp Ala Val Leu Pro Leu Thr

225 230 235 240

Val Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly Pro His Val Glu Gly Leu Lys

245 250 255

Ala Glu Glu Arg His Arg Pro Val Arg Asp Trp Ile Leu Arg Gln Arg

260 265 270

Gln Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro

275 280 285

Asn Gly Tyr Leu Val Leu Asp Leu Ser Met Gln Glu Ala Leu Ser

290 295 300

<210> 143

<211> 303

<212> БЕЛОК

<213> MSLN-His-Avi яванского макака

<400> 143

Asp Val Glu Arg Thr Thr Cys Pro Pro Glu Lys Glu Val His Glu Ile

1 5 10 15

Asp Glu Ser Leu Ile Phe Tyr Lys Lys Arg Glu Leu Glu Ala Cys Val

20 25 30

Asp Ala Ala Leu Leu Ala Ala Gln Met Asp Arg Val Asp Ala Ile Pro

35 40 45

Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val Leu Lys His Lys Leu Asp Glu Leu

50 55 60

Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Val Ile Arg His Leu Gly His Leu

65 70 75 80

Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp Ile Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser

85 90 95

Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Lys Val Ser Lys Gly His Glu Met

100 105 110

Ser Ala Gln Val Ala Thr Leu Ile Asp Arg Val Val Val Gly Arg Gly

115 120 125

Gln Leu Asp Lys Asp Thr Ala Asp Thr Leu Thr Ala Phe Cys Pro Gly

130 135 140

Cys Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Arg Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser

145 150 155 160

Ile Ile Gly Ala Val Arg Pro Gln Asp Leu Asp Thr Cys Gly Pro Arg

165 170 175

Gln Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met

180 185 190

Ser Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys Ile Arg Pro Phe Leu Gly Gly Ala

195 200 205

Pro Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser Gln Gln Asn Val Ser Met Asp

210 215 220

Leu Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Arg Glu Ala Val Leu Pro Leu Ser

225 230 235 240

Val Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly Pro His Val Glu Gly Leu Lys

245 250 255

Val Glu Glu Gln His Ser Pro Val Arg Asp Trp Ile Leu Lys Gln Arg

260 265 270

Gln Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro

275 280 285

Asn Gly Tyr Leu Ile Leu Asp Leu Ser Val Arg Glu Ala Leu Ser

290 295 300

<210> 144

<211> 303

<212> БЕЛОК

<213> Мышиный MSLN-His-Avi

<400> 144

Asp Ala Glu Gln Lys Ala Cys Pro Pro Gly Lys Glu Pro Tyr Lys Val

1 5 10 15

Asp Glu Asp Leu Ile Phe Tyr Gln Asn Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val

20 25 30

Asp Gly Thr Met Leu Ala Arg Gln Met Asp Leu Val Asn Glu Ile Pro

35 40 45

Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Ser Ile Phe Lys His Lys Leu Asp Lys Thr

50 55 60

Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Leu Ile Gln Gln Leu Gly His Phe

65 70 75 80

Phe Arg Tyr Val Ser Pro Glu Asp Ile His Gln Trp Asn Val Thr Ser

85 90 95

Pro Asp Thr Val Lys Thr Leu Leu Lys Val Ser Lys Gly Gln Lys Met

100 105 110

Asn Ala Gln Ala Ile Ala Leu Val Ala Cys Tyr Leu Arg Gly Gly Gly

115 120 125

Gln Leu Asp Glu Asp Met Val Lys Ala Leu Gly Asp Ile Pro Leu Ser

130 135 140

Tyr Leu Cys Asp Phe Ser Pro Gln Asp Leu His Ser Val Pro Ser Ser

145 150 155 160

Val Met Trp Leu Val Gly Pro Gln Asp Leu Asp Lys Cys Ser Gln Arg

165 170 175

His Leu Gly Leu Leu Tyr Gln Lys Ala Cys Ser Ala Phe Gln Asn Val

180 185 190

Ser Gly Leu Glu Tyr Phe Glu Lys Ile Lys Thr Phe Leu Gly Gly Ala

195 200 205

Ser Val Lys Asp Leu Arg Ala Leu Ser Gln His Asn Val Ser Met Asp

210 215 220

Ile Ala Thr Phe Lys Arg Leu Gln Val Asp Ser Leu Val Gly Leu Ser

225 230 235 240

Val Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly Pro Asn Ile Val Asp Leu Lys

245 250 255

Thr Glu Glu Asp Lys Ser Pro Val Arg Asp Trp Leu Phe Arg Gln His

260 265 270

Gln Lys Asp Leu Asp Arg Leu Gly Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro

275 280 285

Asn Gly Tyr Leu Val Leu Asp Phe Asn Val Arg Glu Ala Phe Ser

290 295 300

<210> 145

<211> 625

<212> БЕЛОК

<213> Мышиный MPF + MSLN

<400> 145

Met Ala Leu Pro Thr Ala Arg Pro Leu Leu Gly Ser Cys Gly Ser Pro

1 5 10 15

Ile Cys Ser Arg Ser Phe Leu Leu Leu Leu Leu Ser Leu Gly Trp Ile

20 25 30

Pro Arg Leu Gln Thr Gln Thr Thr Lys Thr Ser Gln Glu Ala Thr Leu

35 40 45

Leu His Ala Val Asn Gly Ala Ala Asp Phe Ala Ser Leu Pro Thr Gly

50 55 60

Leu Phe Leu Gly Leu Thr Cys Glu Glu Val Ser Asp Leu Ser Met Glu

65 70 75 80

Gln Ala Lys Gly Leu Ala Met Ala Val Arg Gln Lys Asn Ile Thr Leu

85 90 95

Arg Gly His Gln Leu Arg Cys Leu Ala Arg Arg Leu Pro Arg His Leu

100 105 110

Thr Asp Glu Glu Leu Asn Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu

115 120 125

Asn Pro Ala Met Phe Pro Gly Gln Gln Ala Cys Ala His Phe Phe Ser

130 135 140

Leu Ile Ser Lys Ala Asn Val Asp Val Leu Pro Arg Arg Ser Leu Glu

145 150 155 160

Arg Gln Arg Leu Leu Met Glu Ala Leu Lys Cys Gln Gly Val Tyr Gly

165 170 175

Phe Gln Val Ser Glu Ala Asp Val Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys

180 185 190

Asp Leu Pro Gly Lys Phe Val Ala Arg Ser Ser Glu Val Leu Leu Pro

195 200 205

Trp Leu Ala Gly Cys Gln Gly Pro Leu Asp Gln Ser Gln Glu Lys Ala

210 215 220

Val Arg Glu Val Leu Arg Ser Gly Arg Thr Gln Tyr Gly Pro Pro Ser

225 230 235 240

Lys Trp Ser Val Ser Thr Leu Asp Ala Leu Gln Ser Leu Val Ala Val

245 250 255

Leu Asp Glu Ser Ile Val Gln Ser Ile Pro Lys Asp Val Lys Ala Glu

260 265 270

Trp Leu Gln His Ile Ser Arg Asp Pro Ser Arg Leu Gly Ser Lys Leu

275 280 285

Thr Val Ile His Pro Arg Phe Arg Arg Asp Ala Glu Gln Lys Ala Cys

290 295 300

Pro Pro Gly Lys Glu Pro Tyr Lys Val Asp Glu Asp Leu Ile Phe Tyr

305 310 315 320

Gln Asn Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val Asp Gly Thr Met Leu Ala Arg

325 330 335

Gln Met Asp Leu Val Asn Glu Ile Pro Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Ser

340 345 350

Ile Phe Lys His Lys Leu Asp Lys Thr Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu

355 360 365

Ser Leu Ile Gln Gln Leu Gly His Phe Phe Arg Tyr Val Ser Pro Glu

370 375 380

Asp Ile His Gln Trp Asn Val Thr Ser Pro Asp Thr Val Lys Thr Leu

385 390 395 400

Leu Lys Val Ser Lys Gly Gln Lys Met Asn Ala Gln Ala Ile Ala Leu

405 410 415

Val Ala Cys Tyr Leu Arg Gly Gly Gly Gln Leu Asp Glu Asp Met Val

420 425 430

Lys Ala Leu Gly Asp Ile Pro Leu Ser Tyr Leu Cys Asp Phe Ser Pro

435 440 445

Gln Asp Leu His Ser Val Pro Ser Ser Val Met Trp Leu Val Gly Pro

450 455 460

Gln Asp Leu Asp Lys Cys Ser Gln Arg His Leu Gly Leu Leu Tyr Gln

465 470 475 480

Lys Ala Cys Ser Ala Phe Gln Asn Val Ser Gly Leu Glu Tyr Phe Glu

485 490 495

Lys Ile Lys Thr Phe Leu Gly Gly Ala Ser Val Lys Asp Leu Arg Ala

500 505 510

Leu Ser Gln His Asn Val Ser Met Asp Ile Ala Thr Phe Lys Arg Leu

515 520 525

Gln Val Asp Ser Leu Val Gly Leu Ser Val Ala Glu Val Gln Lys Leu

530 535 540

Leu Gly Pro Asn Ile Val Asp Leu Lys Thr Glu Glu Asp Lys Ser Pro

545 550 555 560

Val Arg Asp Trp Leu Phe Arg Gln His Gln Lys Asp Leu Asp Arg Leu

565 570 575

Gly Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro Asn Gly Tyr Leu Val Leu Asp

580 585 590

Phe Asn Val Arg Glu Ala Phe Ser Ser Arg Ala Ser Leu Leu Gly Pro

595 600 605

Gly Phe Val Leu Ile Trp Ile Pro Ala Leu Leu Pro Ala Leu Arg Leu

610 615 620

Ser

625

<210> 146

<211> 164

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens CD137-mFc-Avi и CD137-Avi-His

<400> 146

Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp

1 5 10 15

Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser

20 25 30

Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly

35 40 45

Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys

50 55 60

Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly Ala Gly Cys Ser Met Cys

65 70 75 80

Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys Lys

85 90 95

Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln Lys Arg Gly Ile Cys Arg

100 105 110

Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys Ser Val Leu Val Asn Gly

115 120 125

Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro Ser Pro Ala Asp Leu Ser

130 135 140

Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala Pro Ala Arg Glu Pro Gly

145 150 155 160

His Ser Pro Gln

<210> 147

<211> 164

<212> БЕЛОК

<213> CD137-mFc-Avi и CD137-Avi-His яванского макака

<400> 147

Ser Leu Gln Asp Leu Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp

1 5 10 15

Asn Asn Arg Ser Gln Ile Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser

20 25 30

Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly

35 40 45

Val Phe Lys Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys

50 55 60

Asp Cys Ile Ser Gly Tyr His Cys Leu Gly Ala Glu Cys Ser Met Cys

65 70 75 80

Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys Lys

85 90 95

Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln Lys Arg Gly Ile Cys Arg

100 105 110

Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys Ser Val Leu Val Asn Gly

115 120 125

Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro Ser Pro Ala Asp Leu Ser

130 135 140

Pro Gly Ala Ser Ser Ala Thr Pro Pro Ala Pro Ala Arg Glu Pro Gly

145 150 155 160

His Ser Pro Gln

<210> 148

<211> 165

<212> БЕЛОК

<213> Мышиный CD137-mFc-Avi и CD137-Avi-His

<400> 148

Ala Val Gln Asn Ser Cys Asp Asn Cys Gln Pro Gly Thr Phe Cys Arg

1 5 10 15

Lys Tyr Asn Pro Val Cys Lys Ser Cys Pro Pro Ser Thr Phe Ser Ser

20 25 30

Ile Gly Gly Gln Pro Asn Cys Asn Ile Cys Arg Val Cys Ala Gly Tyr

35 40 45

Phe Arg Phe Lys Lys Phe Cys Ser Ser Thr His Asn Ala Glu Cys Glu

50 55 60

Cys Ile Glu Gly Phe His Cys Leu Gly Pro Gln Cys Thr Arg Cys Glu

65 70 75 80

Lys Asp Cys Arg Pro Gly Gln Glu Leu Thr Lys Gln Gly Cys Lys Thr

85 90 95

Cys Ser Leu Gly Thr Phe Asn Asp Gln Asn Gly Thr Gly Val Cys Arg

100 105 110

Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Arg Ser Val Leu Lys Thr Gly

115 120 125

Thr Thr Glu Lys Asp Val Val Cys Gly Pro Pro Val Val Ser Phe Ser

130 135 140

Pro Ser Thr Thr Ile Ser Val Thr Pro Glu Gly Gly Pro Gly Gly His

145 150 155 160

Ser Leu Gln Val Leu

165

<210> 149

<211> 232

<212> БЕЛОК

<213> Клеточно-экспрессируемые антигены Homo sapiens (CD137)

<400> 149

Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn

1 5 10 15

Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser

20 25 30

Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val

35 40 45

Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp

50 55 60

Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu

65 70 75 80

Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp

85 90 95

Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro

100 105 110

Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys Ser Val Leu Val Asn Gly Thr

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro

130 135 140

Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala Pro Ala Arg Glu Pro Gly His

145 150 155 160

Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu

165 170 175

Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg

180 185 190

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

195 200 205

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

210 215 220

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

225 230

<210> 150

<211> 233

<212> БЕЛОК

<213> Мышиные клеточно-экспрессируемые антигены (CD137)

<400> 150

Val Gln Asn Ser Cys Asp Asn Cys Gln Pro Gly Thr Phe Cys Arg Lys

1 5 10 15

Tyr Asn Pro Val Cys Lys Ser Cys Pro Pro Ser Thr Phe Ser Ser Ile

20 25 30

Gly Gly Gln Pro Asn Cys Asn Ile Cys Arg Val Cys Ala Gly Tyr Phe

35 40 45

Arg Phe Lys Lys Phe Cys Ser Ser Thr His Asn Ala Glu Cys Glu Cys

50 55 60

Ile Glu Gly Phe His Cys Leu Gly Pro Gln Cys Thr Arg Cys Glu Lys

65 70 75 80

Asp Cys Arg Pro Gly Gln Glu Leu Thr Lys Gln Gly Cys Lys Thr Cys

85 90 95

Ser Leu Gly Thr Phe Asn Asp Gln Asn Gly Thr Gly Val Cys Arg Pro

100 105 110

Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Arg Ser Val Leu Lys Thr Gly Thr

115 120 125

Thr Glu Lys Asp Val Val Cys Gly Pro Pro Val Val Ser Phe Ser Pro

130 135 140

Ser Thr Thr Ile Ser Val Thr Pro Glu Gly Gly Pro Gly Gly His Ser

145 150 155 160

Leu Gln Val Leu Thr Leu Phe Leu Ala Leu Thr Ser Ala Leu Leu Leu

165 170 175

Ala Leu Ile Phe Ile Thr Leu Leu Phe Ser Val Leu Lys Trp Ile Arg

180 185 190

Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly

195 200 205

Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu

210 215 220

Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu

225 230

<210> 151

<211> 622

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens MPF + MSLN

<400> 151

Met Ala Leu Pro Thr Ala Arg Pro Leu Leu Gly Ser Cys Gly Thr Pro

1 5 10 15

Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Leu Gly Trp Val Gln

20 25 30

Pro Ser Arg Thr Leu Ala Gly Glu Thr Gly Gln Glu Ala Ala Pro Leu

35 40 45

Asp Gly Val Leu Ala Asn Pro Pro Asn Ile Ser Ser Leu Ser Pro Arg

50 55 60

Gln Leu Leu Gly Phe Pro Cys Ala Glu Val Ser Gly Leu Ser Thr Glu

65 70 75 80

Arg Val Arg Glu Leu Ala Val Ala Leu Ala Gln Lys Asn Val Lys Leu

85 90 95

Ser Thr Glu Gln Leu Arg Cys Leu Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro

100 105 110

Glu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn Pro

115 120 125

Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gln Ala Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg Ile

130 135 140

Thr Lys Ala Asn Val Asp Leu Leu Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg Gln

145 150 155 160

Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala Cys Trp Gly Val Arg Gly Ser Leu

165 170 175

Leu Ser Glu Ala Asp Val Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu

180 185 190

Pro Gly Arg Phe Val Ala Glu Ser Ala Glu Val Leu Leu Pro Arg Leu

195 200 205

Val Ser Cys Pro Gly Pro Leu Asp Gln Asp Gln Gln Glu Ala Ala Arg

210 215 220

Ala Ala Leu Gln Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr Trp

225 230 235 240

Ser Val Ser Thr Met Asp Ala Leu Arg Gly Leu Leu Pro Val Leu Gly

245 250 255

Gln Pro Ile Ile Arg Ser Ile Pro Gln Gly Ile Val Ala Ala Trp Arg

260 265 270

Gln Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gln Pro Glu Arg Thr Ile

275 280 285

Leu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Glu Val Glu Lys Thr Ala Cys Pro Ser

290 295 300

Gly Lys Lys Ala Arg Glu Ile Asp Glu Ser Leu Ile Phe Tyr Lys Lys

305 310 315 320

Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val Asp Ala Ala Leu Leu Ala Thr Gln Met

325 330 335

Asp Arg Val Asn Ala Ile Pro Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val Leu

340 345 350

Lys His Lys Leu Asp Glu Leu Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Val

355 360 365

Ile Gln His Leu Gly Tyr Leu Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp Ile

370 375 380

Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Glu

385 390 395 400

Val Asn Lys Gly His Glu Met Ser Pro Gln Val Ala Thr Leu Ile Asp

405 410 415

Arg Phe Val Lys Gly Arg Gly Gln Leu Asp Lys Asp Thr Leu Asp Thr

420 425 430

Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly Tyr Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Glu

435 440 445

Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser Ser Ile Trp Ala Val Arg Pro Gln Asp

450 455 460

Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg Gln Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys Ala

465 470 475 480

Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met Asn Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys Ile

485 490 495

Gln Ser Phe Leu Gly Gly Ala Pro Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser

500 505 510

Gln Gln Asn Val Ser Met Asp Leu Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Thr

515 520 525

Asp Ala Val Leu Pro Leu Thr Val Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly

530 535 540

Pro His Val Glu Gly Leu Lys Ala Glu Glu Arg His Arg Pro Val Arg

545 550 555 560

Asp Trp Ile Leu Arg Gln Arg Gln Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu

565 570 575

Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro Asn Gly Tyr Leu Val Leu Asp Leu Ser

580 585 590

Met Gln Glu Ala Leu Ser Gly Thr Pro Cys Leu Leu Gly Pro Gly Pro

595 600 605

Val Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu Leu Ala Ser Thr Leu Ala

610 615 620

<210> 152

<211> 622

<212> БЕЛОК

<213> MPF + MSLN Яванского макака

<400> 152

Met Ala Leu Pro Met Ala Arg Pro Leu Ser Gly Ser Cys Gly Thr Pro

1 5 10 15

Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Leu Gly Trp Val Gln

20 25 30

Pro Ser Arg Val Leu Ala Gly Glu Thr Arg Gln Glu Ala Ala Pro Leu

35 40 45

Asp Gly Ile Leu Thr Asn Ala Pro Asp Ile Ala Ser Leu Ser Pro Arg

50 55 60

Gln Leu Leu Gly Phe Thr Cys Val Glu Val Ser Gly Leu Ser Thr Glu

65 70 75 80

Leu Val Gln Glu Leu Ala Val Ala Leu Gly Gln Lys Asn Val Lys Leu

85 90 95

Ser Ala Glu Gln Leu Arg Cys Leu Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro

100 105 110

Glu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn Pro

115 120 125

Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gln Ala Cys Thr His Phe Phe Ser Arg Val

130 135 140

Ala Lys Ala Asn Val Asp Leu Leu Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg Gln

145 150 155 160

Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Thr Cys Trp Gly Val Arg Gly Ser Leu

165 170 175

Leu Ser Glu Ala Asp Val Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu

180 185 190

Pro Gly Arg Phe Val Ala Glu Ser Ala Glu Val Val Leu Pro Arg Leu

195 200 205

Val Arg Cys Leu Gly Pro Leu Asp Gln Asp Gln Gln Glu Ala Ala Arg

210 215 220

Ala Ala Leu Gln Arg Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr Trp

225 230 235 240

Ser Ile Ser Thr Leu Asp Asp Leu Gln Ser Leu Leu Pro Val Leu Gly

245 250 255

Gln Pro Val Ile His Ser Ile Pro Gln Gly Ile Leu Ala Ala Trp Arg

260 265 270

Gln Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Gln Gln Pro Glu Gln Thr Val

275 280 285

Leu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Asp Val Glu Arg Thr Thr Cys Pro Pro

290 295 300

Glu Lys Glu Val His Glu Ile Asp Glu Ser Leu Ile Phe Tyr Lys Lys

305 310 315 320

Arg Glu Leu Glu Ala Cys Val Asp Ala Ala Leu Leu Ala Ala Gln Met

325 330 335

Asp Arg Val Asp Ala Ile Pro Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val Leu

340 345 350

Lys His Lys Leu Asp Glu Leu Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Val

355 360 365

Ile Arg His Leu Gly His Leu Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp Ile

370 375 380

Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Lys

385 390 395 400

Val Ser Lys Gly His Glu Met Ser Ala Gln Val Ala Thr Leu Ile Asp

405 410 415

Arg Val Val Val Gly Arg Gly Gln Leu Asp Lys Asp Thr Ala Asp Thr

420 425 430

Leu Thr Ala Phe Cys Pro Gly Cys Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Arg

435 440 445

Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser Ile Ile Gly Ala Val Arg Pro Gln Asp

450 455 460

Leu Asp Thr Cys Gly Pro Arg Gln Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys Ala

465 470 475 480

Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met Ser Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys Ile

485 490 495

Arg Pro Phe Leu Gly Gly Ala Pro Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser

500 505 510

Gln Gln Asn Val Ser Met Asp Leu Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Arg

515 520 525

Glu Ala Val Leu Pro Leu Ser Val Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly

530 535 540

Pro His Val Glu Gly Leu Lys Val Glu Glu Gln His Ser Pro Val Arg

545 550 555 560

Asp Trp Ile Leu Lys Gln Arg Gln Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu

565 570 575

Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro Asn Gly Tyr Leu Ile Leu Asp Leu Ser

580 585 590

Val Arg Glu Ala Leu Ser Gly Thr Pro Cys Leu Leu Gly Pro Gly Pro

595 600 605

Val Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu Leu Ala Ser Thr Leu Ala

610 615 620

<210> 153

<211> 231

<212> БЕЛОК

<213> Клеточно-экспрессируемые антигены яванского макака (CD137)

<400> 153

Leu Gln Asp Leu Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn

1 5 10 15

Asn Arg Ser Gln Ile Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser

20 25 30

Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val

35 40 45

Phe Lys Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp

50 55 60

Cys Ile Ser Gly Tyr His Cys Leu Gly Ala Glu Cys Ser Met Cys Glu

65 70 75 80

Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp

85 90 95

Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro

100 105 110

Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys Ser Val Leu Val Asn Gly Thr

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro

130 135 140

Gly Ala Ser Ser Ala Thr Pro Pro Ala Pro Ala Arg Glu Pro Gly His

145 150 155 160

Ser Pro Gln Ile Ile Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Val Val Leu

165 170 175

Phe Leu Leu Phe Phe Leu Val Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Ser

180 185 190

Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val

195 200 205

Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu

210 215 220

Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

225 230

<210> 154

<211> 110

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CH2 домен дикого типа

<400> 154

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1 5 10 15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

20 25 30

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

35 40 45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

50 55 60

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65 70 75 80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

85 90 95

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

100 105 110

<210> 155

<211> 110

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CH2 домен содержащий мутацию LALA

<400> 155

Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1 5 10 15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

20 25 30

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

35 40 45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

50 55 60

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65 70 75 80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

85 90 95

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

100 105 110

<210> 156

<211> 110

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CH2 домен содержащий мутацию LALA-PA

<400> 156

Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1 5 10 15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

20 25 30

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

35 40 45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

50 55 60

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65 70 75 80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

85 90 95

Ala Leu Ala Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

100 105 110

<210> 157

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CD петля Fcab дикого типа

<400> 157

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

1 5

<210> 158

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-272 с LALA

<400> 158

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr His Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser His Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 159

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-272 с LALA

<400> 159

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact catacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagccat atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acaacaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatcatg ctgctctgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaagctgc cggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 160

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-272 (Кабат)

<400> 160

His Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 161

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-273 без LALA

<400> 161

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr His Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 162

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-273 без LALA

<400> 162

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact catacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagctcg atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acaacaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatcatg ctgctctgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaactgct gggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 163

<211> 453

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-273 с LALA

<400> 163

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr His Thr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asn Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asn Ala Tyr His Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile Pro Pro Tyr Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly

450

<210> 164

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-273 с LALA

<400> 164

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact catacttata tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagctcg atttctccga cttatagcac taccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acaacaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagatacaac

300

gcgtatcatg ctgctctgga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtgct

360

agcactaagg gcccgtcggt gttcccgctg gccccatcgt ccaagagcac atcagggggt

420

accgccgccc tgggctgcct tgtgaaggat tactttcccg agcccgtcac agtgtcctgg

480

aacagcggag ccctgacctc cggagtgcat actttcccgg ctgtgcttca gtcctctggc

540

ctgtactcat tgtcctccgt ggtcaccgtc ccttcgtcct ccctgggcac ccagacctat

600

atctgtaatg tcaaccataa gccctcgaac accaaggtcg acaagaaggt cgagccgaag

660

tcgtgcgaca agactcacac ttgcccgcct tgcccagccc cggaagctgc cggtggtcct

720

tcggtgttcc tcttcccgcc caagccgaag gataccctga tgatctcacg gacccccgaa

780

gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccgg aagtgaaatt caattggtac

840

gtggatggag tggaagtgca caacgccaag accaagccac gggaagaaca gtacaactct

900

acctaccgcg tggtgtccgt gctcactgtg ctgcaccaag actggctgaa cgggaaggag

960

tacaagtgca aagtgtccaa caaggcgctg cctgccccaa ttgagaaaac tatctcgaaa

1020

gccaagggac agcctcgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg

1080

ccatacatca tcccaccata caaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat

1140

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc

1200

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtgggc

1260

gcagataggt ggctggaagg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggcgctgcac

1320

aaccactaca ctcagaagag cttgtccctg tcgcccggt

1359

<210> 165

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 тяжелой цепи mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-273 (Кабат)

<400> 165

Ser Ile Ser Pro Thr Tyr Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 166

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22m-063-AA/FS28m-228-010 с LALA

<400> 166

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Phe Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Met Ile Ser Pro Lys Ser Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr His Ile Ser Pro Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Pro Tyr Trp Ser Tyr Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Met Asn Tyr

405 410 415

Arg Trp Glu Leu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 167

<211> 445

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22m-063-AA/HelD1.3

<400> 167

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Thr Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Glu Arg Asp Tyr Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Arg Asp Glu Pro Tyr Trp Ser Tyr Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Met Asn Tyr Arg Trp

405 410 415

Glu Leu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 168

<211> 214

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2FS22m-063-AA/HelD1.3

<400> 168

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 169

<211> 457

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185-002 с LALA

<400> 169

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asn Pro Tyr Glu Gly Glu Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Ser Ser Asp Thr Trp Phe Lys Ser Ala Thr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala

225 230 235 240

Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile

355 360 365

Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

450 455

<210> 170

<211> 1371

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185-002 с LALA

<400> 170

gaagtgcaac tgctggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact acatctgcta tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcagg attaatccgt atgagggcga gaccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagaggttgg

300

tctagtgata cgtggtttaa atctgccacg gactactggg gccagggaac cctggtcacc

360

gtctcgagtg ctagcactaa gggcccgtcg gtgttcccgc tggccccatc gtccaagagc

420

acatcagggg gtaccgccgc cctgggctgc cttgtgaagg attactttcc cgagcccgtc

480

acagtgtcct ggaacagcgg agccctgacc tccggagtgc atactttccc ggctgtgctt

540

cagtcctctg gcctgtactc attgtcctcc gtggtcaccg tcccttcgtc ctccctgggc

600

acccagacct atatctgtaa tgtcaaccat aagccctcga acaccaaggt cgacaagaag

660

gtcgagccga agtcgtgcga caagactcac acttgcccgc cttgcccagc cccggaagct

720

gccggtggtc cttcggtgtt cctcttcccg cccaagccga aggataccct gatgatctca

780

cggacccccg aagtgacctg tgtggtggtg gacgtgtccc acgaggaccc ggaagtgaaa

840

ttcaattggt acgtggatgg agtggaagtg cacaacgcca agaccaagcc acgggaagaa

900

cagtacaact ctacctaccg cgtggtgtcc gtgctcactg tgctgcacca agactggctg

960

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcc aacaaggcgc tgcctgcccc aattgagaaa

1020

actatctcga aagccaaggg acagcctcga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc

1080

cgggatgagc tgccatacat catcccacca tacaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc

1140

aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac

1200

aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag

1260

ctcaccgtgg gcgcagatag gtggctggaa gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat

1320

gaggcgctgc acaaccacta cactcagaag agcttgtccc tgtcgcccgg t

1371

<210> 171

<211> 216

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185-002

<400> 171

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Tyr Ser Ala

85 90 95

Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys

115 120 125

Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg

130 135 140

Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn

145 150 155 160

Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser

165 170 175

Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys

180 185 190

Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr

195 200 205

Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 172

<211> 648

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185-002

<400> 172

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caatcttctt attctgctcc tgtcacgttc

300

ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaacgt actgtggccg ctcctagcgt gttcattttt

360

ccgccatccg acgagcagct caagtccggc accgcctccg tggtctgcct gctcaacaac

420

ttctaccctc gcgaagctaa ggtccagtgg aaggtcgaca atgccctgca gtccggaaac

480

tcgcaggaaa gcgtgactga acaggactcc aaggactcca cctattcact gtcctcgact

540

ctgaccctga gcaaggcgga ttacgaaaag cacaaagtgt acgcatgcga agtgacccac

600

cagggtcttt cgtcccccgt gaccaagagc ttcaacagag gagagtgt

648

<210> 173

<211> 457

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185-003 с LALA

<400> 173

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Ser

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Arg Ile Asn Pro Tyr Glu Gly Glu Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Trp Ser Ala Thr Ser Tyr Phe Lys Ser Ala Thr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala

225 230 235 240

Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Pro Tyr Ile Ile

355 360 365

Pro Pro Tyr Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Gly Ala Asp Arg Trp Leu Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

450 455

<210> 174

<211> 1371

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> тяжелая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185-003 с LALA

<400> 174

gaagtgcaac tgttggagtc cggtggtggt ctggtacagc cgggtggttc tctgcgtctg

60

agttgcgcgg ccagtggctt taccttcact acatctgcta tgagctgggt gcgtcaggct

120

ccgggcaaag gtctggaatg ggttagcagg attaatccgt atgagggcga gaccaactat

180

gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tctcgcgaca acagcaagaa cacgctgtac

240

ctgcagatga actcactgcg tgccgaagat acggccgtgt attactgtgc gagaggttgg

300

tctgcgacga gttattttaa atctgccact gactactggg gccagggaac cctggtcacc

360

gtctcgagtg ctagcactaa gggcccgtcg gtgttcccgc tggccccatc gtccaagagc

420

acatcagggg gtaccgccgc cctgggctgc cttgtgaagg attactttcc cgagcccgtc

480

acagtgtcct ggaacagcgg agccctgacc tccggagtgc atactttccc ggctgtgctt

540

cagtcctctg gcctgtactc attgtcctcc gtggtcaccg tcccttcgtc ctccctgggc

600

acccagacct atatctgtaa tgtcaaccat aagccctcga acaccaaggt cgacaagaag

660

gtcgagccga agtcgtgcga caagactcac acttgcccgc cttgcccagc cccggaagct

720

gccggtggtc cttcggtgtt cctcttcccg cccaagccga aggataccct gatgatctca

780

cggacccccg aagtgacctg tgtggtggtg gacgtgtccc acgaggaccc ggaagtgaaa

840

ttcaattggt acgtggatgg agtggaagtg cacaacgcca agaccaagcc acgggaagaa

900

cagtacaact ctacctaccg cgtggtgtcc gtgctcactg tgctgcacca agactggctg

960

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcc aacaaggcgc tgcctgcccc aattgagaaa

1020

actatctcga aagccaaggg acagcctcga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc

1080

cgggatgagc tgccatacat catcccacca tacaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc

1140

aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac

1200

aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag

1260

ctcaccgtgg gcgcagatag gtggctggaa gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat

1320

gaggcgctgc acaaccacta cactcagaag agcttgtccc tgtcgcccgg t

1371

<210> 175

<211> 216

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185-003

<400> 175

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Tyr Ser Ala

85 90 95

Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys

115 120 125

Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg

130 135 140

Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn

145 150 155 160

Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser

165 170 175

Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys

180 185 190

Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr

195 200 205

Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 176

<211> 648

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> легкая цепь mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-185-003

<400> 176

gaaattgtgc tgacccagtc tccgggcacg ttatctctga gccctggtga gcgcgccact

60

ctgtcatgcc gggcttctca aagtgttagc agtagctacc tggcgtggta tcagcaaaaa

120

ccgggccagg ccccgcgtct gctgatttac ggtgcatcca gccgtgccac cggcattcca

180

gatcgttttt ccggtagtgg ttctgggacg gacttcactc tgacaatctc acgcctggaa

240

ccggaggatt ttgcggtgta ttactgccag caatcttctt attctgctcc tgtcacgttc

300

ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaacgt actgtggccg ctcctagcgt gttcattttt

360

ccgccatccg acgagcagct caagtccggc accgcctccg tggtctgcct gctcaacaac

420

ttctaccctc gcgaagctaa ggtccagtgg aaggtcgaca atgccctgca gtccggaaac

480

tcgcaggaaa gcgtgactga acaggactcc aaggactcca cctattcact gtcctcgact

540

ctgaccctga gcaaggcgga ttacgaaaag cacaaagtgt acgcatgcga agtgacccac

600

cagggtcttt cgtcccccgt gaccaagagc ttcaacagag gagagtgt

648

<---

Claims

1. Молекула антитела, которая связывается с мезотелином (MSLN) и CD137, содержащая

(a) антигенсвязывающий сайт для MSLN на основе определяющей комплементарность области (CDR); и

при этом указанный антигенсвязывающий сайт на основе CDR содержит HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, LCDR3, представленные в:

(i) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 80 соответственно;

(ii) SEQ ID NO 14, 16, 27, 20, 22 и 24 соответственно;

(iii) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 40 соответственно;

(iv) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 37 соответственно;

(v) SEQ ID NO 50, 33, 52, 20, 22 и 40 соответственно;

(vi) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 41 соответственно;

(vii) SEQ ID NO 50, 33, 52, 20, 22 и 41 соответственно;

(viii) SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 80 соответственно;

(ix) SEQ ID NO 38, 33, 35, 20, 22 и 40 соответственно;

(x) SEQ ID NO 38, 33, 35, 20, 22 и 41 соответственно;

(xi) SEQ ID NO 46, 33, 48, 20, 22 и 37 соответственно;

(xii) SEQ ID NO 50, 33, 52, 20, 22 и 37 соответственно;

(xiii) SEQ ID NO 31, 33, 35, 20, 22 и 37 соответственно;

(xiv) SEQ ID NO 14, 16, 25, 20, 22 и 24 соответственно;

(xv) SEQ ID NO 14, 16, 29, 20, 22 и 24 соответственно; или

(xvi) SEQ ID NO 14, 16, 18, 20, 22 и 24 соответственно; и

где последовательности CDR определены в соответствии со схемой нумерации ImMunoGeneTics (IMGT); или

при этом указанный антигенсвязывающий сайт на основе CDR содержит HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные в:

(i) SEQ ID NO: 43, 5, 45, 21, 23, и 80 соответственно;

(ii) SEQ ID NO: 15, 17, 28, 21, 23 и 24 соответственно;

(iii) SEQ ID NO: 43, 34, 45, 21, 23 и 40 соответственно;

(iv) SEQ ID NO: 43, 34, 45, 21, 23 и 37 соответственно;

(v) SEQ ID NO: 51, 34, 53, 21, 23 и 40 соответственно;

(vi) SEQ ID NO: 43, 34, 45, 21, 23 и 41 соответственно;

(vii) SEQ ID NO: 51, 34, 53, 21, 23 и 41 соответственно;

(viii) SEQ ID NO: 43, 34, 45, 21, 23 и 80 соответственно;

(ix) SEQ ID NO: 39, 34, 36, 21, 23 и 40 соответственно;

(x) SEQ ID NO: 39, 34, 36, 21, 23 и 41 соответственно;

(xi) SEQ ID NO: 47, 34, 49, 21, 23 и 37 соответственно;

(xii) SEQ ID NO: 51, 34, 53, 21, 23 и 37 соответственно;

(xiii) SEQ ID NO: 32, 34, 36, 21, 23 и 37 соответственно;

(xiv) SEQ ID NO: 15, 17, 26, 21, 23 и 24 соответственно;

(xv) SEQ ID NO: 15, 17, 30, 21, 23 и 24 соответственно; или

(xvi) SEQ ID NO: 15, 17, 19, 21, 23 и 24 соответственно;

при этом указанный антигенсвязывающий сайт для CD137 содержит первую последовательность и вторую последовательность, расположенные в структурных петлях AB и EF CH3-домена соответственно, причем указанная первая и вторая последовательности имеют последовательность, представленную в SEQ ID NO 10 и 11 соответственно.

2. Молекула антитела по п. 1, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL), представленные в:

(i) SEQ ID NO 70 и 76 соответственно;

(ii) SEQ ID NO 58 и 54 соответственно;

(iii) SEQ ID NO 70 и 68 соответственно;

(iv) SEQ ID NO 70 и 64 соответственно;

(v) SEQ ID NO 74 и 68 соответственно;

(vi) SEQ ID NO 70 и 78 соответственно;

(vii) SEQ ID NO 74 и 78 соответственно;

(viii) SEQ ID NO 70 и 76 соответственно;

(ix) SEQ ID NO 66 и 68 соответственно;

(x) SEQ ID NO 66 и 78 соответственно;

(xi) SEQ ID NO 72 и 64 соответственно;

(xii) SEQ ID NO 74 и 64 соответственно;

(xiii) SEQ ID NO 62 и 64 соответственно;

(xiv) SEQ ID NO 56 и 54 соответственно;

(xv) SEQ ID NO 60 и 54 соответственно; или

(xvi) SEQ ID NO 12 и 54 соответственно.

3. Молекула антитела по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела содержит:

(i) HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, определенные согласно IMGT, представленные в SEQ ID NO 42, 33, 44, 20, 22 и 80 соответственно;

(ii) HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, определенные согласно Кабату, представленные в SEQ ID NO: 43, 5, 45, 21, 23 и 80 соответственно; и/или

(iii) VH-домен и VL-домен, представленные в SEQ ID NO 70 и 76 соответственно.

4. Молекула антитела по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела содержит:

(i) HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, определенные согласно IMGT, представленные в SEQ ID NO 14, 16, 27, 20, 22 и 24 соответственно;

(ii) HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, определенные согласно Кабату, представленные в SEQ ID NO: 15, 17, 28, 21, 23 и 24 соответственно; и/или

(iii) VH-домен и VL-домен, представленные в SEQ ID NO 58 и 54 соответственно.

5. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что:

(i) указанная первая последовательность расположена между положениями 14 и 17 константного домена-3 (CH3) указанной молекулы антитела; и/или

(ii) указанная вторая последовательность расположена между положениями 91 и 99 CH3-домена указанной молекулы антитела; и

6. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела содержит последовательность CH3-домена, представленную в SEQ ID NO: 8.

7. Молекула антитела по п. 6, отличающаяся тем, что указанная последовательность CH3-домена содержит дополнительный остаток лизина (К) непосредственно на С-конце последовательности CH3-домена.

8. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела содержит последовательности тяжелой цепи и легкой цепи:

(i) представленные в SEQ ID NO 3 и 84 соответственно;

(ii) представленные в SEQ ID NO 102 и 85 соответственно;

(iii) представленные в SEQ ID NO 125 и 82 соответственно;

(iv) представленные в SEQ ID NO 125 и 116 соответственно;

(v) представленные в SEQ ID NO 113 и 82 соответственно;

(vi) представленные в SEQ ID NO 125 и 83 соответственно;

(vii) представленные в SEQ ID NO 133 и 83 соответственно;

(viii) представленные в SEQ ID NO 125 и 84 соответственно;

(ix) представленные в SEQ ID NO 120 и 82 соответственно;

(x) представленные в SEQ ID NO 120 и 83 соответственно;

(xi) представленные в SEQ ID NO 129 и 116 соответственно;

(xii) представленные в SEQ ID NO 133 и 116 соответственно;

(xiii)представленные в SEQ ID NO 114 и 116 соответственно;

(xiv) представленные в SEQ ID NO 98 и 85 соответственно;

(xv) представленные в SEQ ID NO 106 и 85 соответственно; или

(xvi) представленные в SEQ ID NO 94 и 85 соответственно.

9. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела содержит тяжелую цепь и легкую цепь, представленные в SEQ ID NO 3 и 84 соответственно.

10. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, при этом указанная молекула антитела содержит тяжелую цепь и легкую цепь согласно SEQ ID NO: 3 и 84 соответственно, и причем CH3-домен в тяжелой цепи содержит дополнительный остаток лизина (К) непосредственно на С-конце последовательности CH3-домена.

11. Молекула антитела, которая связывается с мезотелином (MSLN) и CD137, содержащая тяжелую цепь и легкую цепь согласно SEQ ID NO: 3 и 84 соответственно.

12. Молекула антитела, которая связывается с мезотелином (MSLN) и CD137, содержащая тяжелую цепь и легкую цепь согласно SEQ ID NO: 3 и 84 соответственно, причем CH3-домен в тяжелой цепи содержит дополнительный остаток лизина (К) непосредственно на С-конце последовательности CH3-домена.

13. Молекула антитела по любому из пп. 1-8, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела содержит тяжелую цепь и легкую цепь, представленные в SEQ ID NO 102 и 85 соответственно.

14. Молекула антитела по любому из пп. 1-8 или 13, при этом указанная молекула антитела содержит тяжелую цепь и легкую цепь согласно SEQ ID NO: 102 и 85 соответственно, и причем CH3-домен в тяжелой цепи содержит дополнительный остаток лизина (К) непосредственно на С-конце последовательности CH3-домена.

15. Молекула антитела, которая связывается с мезотелином (MSLN) и CD137, содержащая тяжелую цепь и легкую цепь согласно SEQ ID NO: 102 и 85 соответственно.

16. Молекула антитела, которая связывается с мезотелином (MSLN) и CD137, содержащая тяжелую цепь и легкую цепь согласно SEQ ID NO: 102 и 85 соответственно, причем CH3-домен в тяжелой цепи содержит дополнительный остаток лизина (К) непосредственно на С-конце последовательности CH3-домена.

17. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела не связывается с Fcγ-рецепторами.

18. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела связывается с иммобилизованным MSLN с более высокой аффинностью, чем с растворимым MSLN.

19. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная молекула антитела способна активировать CD137 на иммунной клетке в присутствии MSLN, связанного с поверхностью клетки опухоли.

20. Молекула антитела по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что связывание указанной молекулы антитела с CD137 на иммунной клетке и с MSLN, связанным с поверхностью клетки опухоли, вызывает кластеризацию CD137 на указанной иммунной клетке.

21. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу антитела по любому из предшествующих пунктов.

22. Комбинация молекул нуклеиновой кислоты, кодирующая молекулу антитела по любому из предшествующих пунктов.

23. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 21 или комбинацию молекул нуклеиновой кислоты по п. 22 для экспрессии указанных молекул нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине.

24. Комбинация экспрессионных векторов, включающая векторы, содержащие комбинацию молекул нуклеиновой кислоты по п. 22 для экспрессии указанных молекул нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине.

25. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 21, или комбинацию молекул нуклеиновой кислоты по п. 22, или вектор по п. 23, или комбинацию векторов по п. 24 для получения молекулы антитела согласно любому из пп. 1-20.

26. Способ получения молекулы антитела по любому из пп. 1-20, включающий культивирование рекомбинантной клетки-хозяина по п. 25 в условиях, обеспечивающих получение указанной молекулы антитела.

27. Фармацевтическая композиция для применения в иммунотерапии, содержащая в эффективном количестве молекулу антитела по любому из пп. 1-20 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

28. Применение молекулы антитела по любому из пп. 1-20 для лечения рака у индивидуума.

29. Применение молекулы антитела по п. 28, при этом указанное лечение включает введение указанной молекулы антитела или конъюгата антитела индивидууму в комбинации со вторым лекарственным средством.