JP7360441B2 - メソテリン及びcd137結合分子 - Google Patents
メソテリン及びcd137結合分子 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7360441B2 JP7360441B2 JP2021500386A JP2021500386A JP7360441B2 JP 7360441 B2 JP7360441 B2 JP 7360441B2 JP 2021500386 A JP2021500386 A JP 2021500386A JP 2021500386 A JP2021500386 A JP 2021500386A JP 7360441 B2 JP7360441 B2 JP 7360441B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- nos
- msln
- antibody molecule
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/35—Valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Description
本発明は、メソテリン(MSLN)及びCD137の両方に結合する抗体分子に関する。抗体分子は、MSLNのCDRベースの結合部位と、抗体分子の定常ドメインに位置するCD137抗原結合部位とを含む。抗体分子は、例えば、癌の処置に用途が見出される。
細胞シグナル伝達は全ての生物の生命の本質的な部分であり、通常、可溶性又は表面発現リガンドと相互作用する細胞表面受容体が関与する。この相互作用により、受容体、リガンド、又はその両方が変化する。例えば、リガンド結合は、受容体の立体構造変化を誘発し、受容体を二量体又はオリゴマーにクラスター化させることができる。このクラスタリング効果は、次いで、細胞内シグナル伝達経路の活性化をもたらす。CD137などの腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー(TNFRSF)のメンバーを含め、この方法で活性化される多くの受容体が存在する。
上記の背景セクションで説明したように、CD137アゴニスト分子の臨床開発は、用量を制限する高グレードの肝臓の炎症(ウレルマブ)又は低い臨床効果(ウトミルマブ)のいずれかに関連する処置のため、阻止されてきた。
(a)MSLNの相補性決定領域(CDR)ベースの抗原結合部位;及び
(b)抗体分子のCH3ドメインに位置するCD137抗原結合部位
を含み、
CDRベースの抗原結合部位が、
(i)それぞれ配列番号42、33、44、20、22、及び80[FS28-256-271];
(ii)それぞれ配列番号14、16、27、20、22及び24[FS28-024-052];
(iii)それぞれ配列番号42、33、44、20、22、及び40[FS28-256-021];
(iv)それぞれ配列番号42、33、44、20、22、及び37[FS28-256-012];
(v)それぞれ配列番号50、33、52、20、22及び40[FS28-256-023];
(vi)それぞれ配列番号42、33、44、20、22及び41[FS28-256-024];
(vii)それぞれ配列番号50、33、52、20、22及び41[FS28-256-026];
(viii)それぞれ配列番号42、33、44、20、22、及び80[FS28-256-027];
(ix)それぞれ配列番号38、33、35、20、22、及び40[FS28-256-001];
(x)それぞれ配列番号38、33、35、20、22、及び41[FS28-256-005];
(xi)それぞれ配列番号46、33、48、20、22及び37[FS28-256-014];
(xii)それぞれ配列番号50、33、52、20、22及び37[FS28-256-018];
(xiii)それぞれ配列番号31、33、35、20、22及び37[FS28-256];
(xiv)それぞれ配列番号14、16、25、20、22及び24[FS28-024-051];
(xv)それぞれ配列番号14、16、29、20、22及び24[FS28-024-053];又は
(xvi)それぞれ配列番号14、16、18、20、22及び24[FS28-024]
に記載のCDR1~6を含み;
CDR配列が、ImMunoGeneTics(IMGT)の番号付けスキームに従って定義され;
CD137抗原結合部位が、それぞれ、CH3ドメインのAB及びEF構造ループに位置する第1の配列及び第2の配列を含み、第1及び第2の配列が、それぞれ配列番号10及び11[FS22-172-003]に記載の配列を有する、
メソテリン(MSLN)及びCD137に結合する抗体分子。
(a)MSLNの相補性決定領域(CDR)ベースの抗原結合部位;及び
(b)抗体分子のCH3ドメインに位置するCD137抗原結合部位
を含み、
CDRベースの抗原結合部位が、
(i)それぞれ配列番号43、5、45、21、23、及び80[FS28-256-271];
(ii)それぞれ配列番号15、17、28、21、23及び24[FS28-024-052];
(iii)それぞれ配列番号43、34、45、21、23及び40[FS28-256-021];
(iv)それぞれ配列番号43、34、45、21、23及び37[FS28-256-012];
(v)それぞれ配列番号51、34、53、21、23及び40[FS28-256-023];
(vi)それぞれ配列番号43、34、45、21、23及び41[FS28-256-024];
(vii)それぞれ配列番号51、34、53、21、23及び41[FS28-256-026];
(viii)それぞれ配列番号43、34、45、21、23及び80[FS28-256-027];
(ix)それぞれ配列番号39、34、36、21、23及び40[FS28-256-001];
(x)それぞれ配列番号39、34、36、21、23及び41[FS28-256-005];
(xi)それぞれ配列番号47、34、49、21、23及び37[FS28-256-014];
(xii)それぞれ配列番号51、34、53、21、23及び37[FS28-256-018];
(xiii)それぞれ配列番号32、34、36、21、23及び37[FS28-256];
(xiv)それぞれ配列番号15、17、26、21、23及び24[FS28-024-051];
(xv)それぞれ配列番号15、17、30、21、23及び24[FS28-024-053];又は
(xvi)それぞれ配列番号15、17、19、21、23及び24[FS28-024]
に記載のCDR1~6を含み;
CDR配列が、Kabatに従って定義され;
CD137抗原結合部位が、それぞれ、CH3ドメインのAB及びEF構造ループに位置する第1の配列及び第2の配列を含み、第1及び第2の配列が、それぞれ配列番号10及び11[FS22-172-003]に記載の配列を有する、
メソテリン(MSLN)及びCD137に結合する抗体分子。
(i)それぞれ配列番号70及び76[FS28-256-271];
(ii)それぞれ配列番号58及び54[FS28-024-052];
(iii)それぞれ配列番号70及び68[FS28-256-021];
(iv)それぞれ配列番号70及び64[FS28-256-012];
(v)それぞれ配列番号74及び68[FS28-256-023];
(vi)それぞれ配列番号70及び78[FS28-256-024];
(vii)それぞれ配列番号74及び78[FS28-256-026];
(viii)それぞれ配列番号70及び76[FS28-256-027];
(ix)それぞれ配列番号66及び68[FS28-256-001];
(x)それぞれ配列番号66及び78[FS28-256-005];
(xi)それぞれ配列番号72及び64[FS28-256-014];
(xii)それぞれ配列番号74及び64[FS28-256-018];
(xiii)それぞれ配列番号62及び64[FS28-256];
(xiv)それぞれ配列番号56及び54[FS28-024-051]
(xv)それぞれ配列番号60及び54[FS28-024-053];又は
(xvi)それぞれ配列番号12及び54[FS28-024]
に記載のものである、[5]から[6]のいずれか一項に記載の抗体分子。
(i)それぞれ配列番号3及び84に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-271;
(ii)それぞれ配列番号102及び85に記載のFS22-172-003-FS28-024-052;
(iii)それぞれ配列番号125及び82に記載のFS22-172-003-FS28-256-021;
(iv)それぞれ配列番号125及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-012;
(v)それぞれ配列番号125及び82に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-023;又は
(vi)それぞれ配列番号125及び83に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-024
(vii)それぞれ配列番号133及び83に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-026;
(viii)それぞれ配列番号125及び84に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-027;
(ix)それぞれ配列番号120及び82に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-001;
(x)それぞれ配列番号120及び83に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-005;
(xi)それぞれ配列番号129及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-014;
(xii)それぞれ配列番号133及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-018;
(xiii)それぞれ配列番号114及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256;
(xiv)それぞれ配列番号98及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-051;
(xv)それぞれ配列番号106及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-053;又は
(xvi)それぞれ配列番号94及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024
の重鎖及び軽鎖を含む、[1]から[17]のいずれか一項に記載の抗体分子。
(i)抗体分子が、8nMのkD又はより高い親和性で固定化されたMSLNに結合する;及び/又は
(ii)抗体分子が、15nMのkD又はより低い親和性で可溶性MSLNに結合する。
[23]に記載の抗体分子。
(I)それぞれ配列番号4及び91に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-271;
(ii)それぞれ配列番号103及び86に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-052;
(iii)それぞれ配列番号126及び122に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-021;
(iv)それぞれ配列番号126及び117に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-012;
(v)それぞれ配列番号134及び122に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-023;
(vi)それぞれ配列番号126及び90に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-024;
(vii)それぞれ配列番号134及び90に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-026;
(viii)それぞれ配列番号126及び91に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-027;
(ix)それぞれ配列番号121及び122に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-001;
(x)それぞれ配列番号121及び90に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-005;
(xi)それぞれ配列番号130及び117に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-014;
(xii)それぞれ配列番号134及び117に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-018;
(xiii)それぞれ配列番号115及び117に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256;
(xiv)それぞれ配列番号99及び86に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-051;
(xv)それぞれ配列番号107及び86に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-053;又は
(xvi)それぞれ配列番号95及び86に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024
の重鎖核酸配列及び/又は軽鎖核酸配列を含む、[1]から[37]のいずれか一項に記載の抗体分子をコードする、1つ又は複数の核酸分子。
本発明は、MSLN及びCD137の両方に結合する抗体分子に関する。具体的には、本発明の抗体分子は、MSLNのCDRベースの抗原結合部位と、抗体分子の定常ドメインに位置するCD137抗原結合部位とを含む。
(i)それぞれが免疫グロブリンVHドメイン及び免疫グロブリンVLドメインによって形成されるMSLNのための2つのCDRベースの抗原結合部位;及び
(ii)抗体分子の2つのCH3ドメインに位置するCD137に結合する2つの抗原結合部位
を含む。
(i)それぞれが免疫グロブリンVHドメイン及び免疫グロブリンVLドメインによって形成されるMSLNのための2つのCDRベースの抗原結合部位;及び
(ii)抗体分子の2つのCH3ドメインに位置するCD137に結合する2つの抗原結合部位
を含み、ここで、免疫グロブリン分子は、CH1、CH2及びCLドメインをさらに含む。
(i)FS22-172-003-AA/FS28-256-271のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号42、33、及び44に記載される通りであり得;
(ii)FS22-172-003-AA/FS28-024-052のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号14、16、及び27に記載される通りであり得;
(iii)FS22-172-003-AA/FS28-256-021のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号42、33、及び44に記載される通りであり得;
(iv)FS22-172-003-AA/FS28-256-012のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号42、33、及び44に記載される通りであり得;
(v)FS22-172-003-AA/FS28-256-023のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号50、33、及び52に記載される通りであり得;
(vi)FS22-172-003-AA/FS28-256-024のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号42、33、及び44に記載される通りであり得;
(vii)FS22-172-003-AA/FS28-256-026のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号50、33、及び52に記載される通りであり得;
(viii)FS22-172-003-AA/FS28-256-027のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号42、33、及び44に記載される通りであり得;
(ix)FS22-172-003-AA/FS28-256-001のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号38、33、及び35に記載される通りであり得;
(x)FS22-172-003-AA/FS28-256-005のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号38、33、及び35に記載される通りであり得;
(xi)FS22-172-003-AA/FS28-256-014のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号46、33、及び48に記載される通りであり得;
(xii)FS22-172-003-AA/FS28-256-018のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号50、33、及び52に記載される通りであり得;
(xiii)FS22-172-003-AA/FS28-256のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号31、33、及び35に記載される通りであり得;
(xiv)FS22-172-003-AA/FS28-024-051のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号14、16、及び25に記載される通りであり得;
(xv)FS22-172-003-AA/FS28-024-053のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号14、16、及び29に記載される通りであり得;
(xvi)FS22-172-003-AA/FS28-024のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号14、16、及び18に記載される通りであり得;
ここで、CDR配列は、IMGT番号付けスキームに従って定義される。
(ii)FS22-172-003-AA/FS28-024-052のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、24に記載される通りであり得;
(iii)FS22-172-003-AA/FS28-256-021のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、40に記載される通りであり得;
(iv)FS22-172-003-AA/FS28-256-012のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、37に記載される通りであり得;
(v)FS22-172-003-AA/FS28-256-023のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、40に記載される通りであり得;
(vi)FS22-172-003-AA/FS28-256-024のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、41に記載される通りであり得;
(vii)FS22-172-003-AA/FS28-256-026のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、41に記載される通りであり得;
(viii)FS22-172-003-AA/FS28-256-027のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、80に記載される通りであり得;
(ix)FS22-172-003-AA/FS28-256-001のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、40に記載される通りであり得;
(x)FS22-172-003-AA/FS28-256-005のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、41に記載される通りであり得;
(xi)FS22-172-003-AA/FS28-256-014のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、37に記載される通りであり得;
(xii)FS22-172-003-AA/FS28-256-018のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、37に記載される通りであり得;
(xiii)FS22-172-003-AA/FS28-256のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、37に記載される通りであり得;
(xiv)FS22-172-003-AA/FS28-024-051のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、24に記載される通りであり得;
(xv)FS22-172-003-AA/FS28-024-053のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、24に記載される通りであり得;
(xvi)FS22-172-003-AA/FS28-024のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号20、22、24に記載される通りであり得;
ここで、CDR配列は、IMGT番号付けスキームに従って定義される。
(i)FS22-172-003-AA/FS28-256-271のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号43、5、及び45に記載される通りであり得;
(ii)FS22-172-003-AA/FS28-024-052のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号15、17及び28に記載される通りであり得;
(iii)FS22-172-003-AA/FS28-256-021のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号43、34、45に記載される通りであり得;
(iv)FS22-172-003-AA/FS28-256-012のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号43、34及び45に記載される通りであり得;
(v)FS22-172-003-AA/FS28-256-023のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号51、34及び53に記載される通りであり得;
(vi)FS22-172-003-AA/FS28-256-024のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号43、34及び45に記載される通りであり得;
(vii)FS22-172-003-AA/FS28-256-026のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号51、34及び53に記載される通りであり得;
(viii)FS22-172-003-AA/FS28-256-027のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号43、34及び45に記載される通りであり得;
(ix)FS22-172-003-AA/FS28-256-001のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号39、34及び36に記載される通りであり得;
(x)FS22-172-003-AA/FS28-256-005のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号39、34及び36に記載される通りであり得;
(xi)FS22-172-003-AA/FS28-256-014のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号47、34及び49に記載される通りであり得;
(xii)FS22-172-003-AA/FS28-256-018のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号51、34及び53に記載される通りであり得;
(xiii)FS22-172-003-AA/FS28-256のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号32、34及び36に記載される通りであり得;
(xiv)FS22-172-003-AA/FS28-024-051のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号15、17及び26に記載される通りであり得;
(xv)FS22-172-003-AA/FS28-024-053のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号15、17及び30に記載される通りであり得;
(xvi)FS22-172-003-AA/FS28-024のVHドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号15、17及び19に記載される通りであり得;
ここで、CDR配列は、Kabat番号付けスキームに従って定義される。
(ii)FS22-172-003-AA/FS28-024-052のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び24に記載される通りであり得;
(iii)FS22-172-003-AA/FS28-256-021のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び40に記載される通りであり得;
(iv)FS22-172-003-AA/FS28-256-012のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び37に記載される通りであり得;
(v)FS22-172-003-AA/FS28-256-023のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び40に記載される通りであり得;
(vi)FS22-172-003-AA/FS28-256-024のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び41に記載される通りであり得;
(vii)FS22-172-003-AA/FS28-256-026のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び41に記載される通りであり得;
(viii)FS22-172-003-AA/FS28-256-027のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び80に記載される通りであり得;
(ix)FS22-172-003-AA/FS28-256-001のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び40に記載される通りであり得;
(x)FS22-172-003-AA/FS28-256-005のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び41に記載される通りであり得;
(xi)FS22-172-003-AA/FS28-256-014のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び37に記載される通りであり得;
(xii)FS22-172-003-AA/FS28-256-018のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び37に記載される通りであり得;
(xiii)FS22-172-003-AA/FS28-256のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び37に記載される通りであり得;
(xiv)FS22-172-003-AA/FS28-024-051のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び24に記載される通りであり得;
(xv)FS22-172-003-AA/FS28-024-053のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び24に記載される通りであり得;
(xvi)FS22-172-003-AA/FS28-024のVLドメインCDR1、CDR2及びCDR3の配列は、それぞれ配列番号21、23及び24に記載される通りであり得;
ここで、CDR配列は、Kabat番号付けスキームに従って定義される。
(i)1.3位及び1.2位のアラニン残基;及び/又は
(ii)114位のアラニン又はグリシン;及び/又は
(iii)84.4位のアラニン、グルタミン又はグリシン;
を含み、ここで、アミノ酸残基の番号付けは、IMGT番号付けスキームに従う。
(i)1.3位のアラニン残基;及び
(ii)1.2位のアラニン残基;
を含み、ここで、アミノ酸残基の番号付けは、IMGT番号付けスキームに従う。
(i)1.3位のアラニン残基;
(ii)1.2位のアラニン残基;及び
(iii)114位のアラニン;
を含み、ここで、アミノ酸残基の番号付けは、IMGT番号付けスキームに従う。
(i)それぞれ配列番号3及び84に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-271;
(ii)それぞれ配列番号102及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-052;
(iii)それぞれ配列番号125及び82に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-021;
(iv)それぞれ配列番号125及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-012;
(v)それぞれ配列番号133及び82に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-023;
(vi)それぞれ配列番号125及び83に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-024;
(vii)それぞれ配列番号133及び83に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-026;
(viii)それぞれ配列番号125及び84に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-027;
(ix)それぞれ配列番号120及び82に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-001;
(x)それぞれ配列番号120及び78に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-005;
(xi)それぞれ配列番号129及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-014;
(xii)それぞれ配列番号133及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-018;
(xiii)それぞれ配列番号114及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256;
(xiv)それぞれ配列番号98及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-051;
(xv)それぞれ配列番号106及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-053;又は
(xvi)それぞれ配列番号94及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024
の、重鎖及び/又は軽鎖、好ましくは、重鎖及び軽鎖を含み得る。
(i)個体の癌を処置する方法における使用のための本明細書に記載の抗体分子、
(ii)個体の癌の処置における使用のための医薬品の製造における本明細書に記載の抗体分子の使用;及び
(iv)個体の癌の処置方法であって、本明細書に記載の治療有効量の抗体分子を個体に投与することを含む方法
を提供する。
実施例1:抗原選択及び特性評価
MSLN及びCD137の両方に結合し、CD137のアゴニズムをもたらすことが可能なmAb2を識別するために使用される選択及びスクリーニング方法は、様々なMSLN及びCD137抗原の使用を必要とする。これらの抗原の産生については、以下でより詳細に記載される。
CD137などの腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー(TNFRSF)メンバーは、同族リガンドに結合する場合、クラスターを形成する多量体を形成する傾向があることで知られている(Croft,M.2003)。それらの機能のために凝集するこの傾向は、ファージ及び酵母ディスプレイなどのインビトロ選択で使用するため、及び選択されたタンパク質の特性評価のために、溶液中で凝集しない可溶性組換えタンパク質を産生することを困難にする。
DO11.10細胞(National Jewish Health)発現完全長マウス(配列番号374)又はヒトCD137(配列番号373)、それぞれ「DO11.10.mCD137」及び「DO11.10.hCD137」と指定され、表2に列挙されたように選択されたFcabの選択及びさらなる特性評価のために、その天然形態に最も類似した膜結合立体配座で抗原を提示するために産生された。
‘hMSLN-His Acro’と命名された組換えビオチン化ヒトMSLN-His抗原を、C末端18アミノ酸を欠くAcrobiosystems(カタログ番号MSN-H8223)から得た。完全長の単量体ヒトMSLN抗原が生成され、ファージ選択のために社内でビオチン化された。カニクイザル及びマウスのMSLNは、ヒト及びカニクイザルのMSLNに結合できる結合体の分離及びマウスのMSLN結合体の分離を可能にするためにそれぞれ製造された。
2.1 抗ヒトCD137 Fcabのナイーブ選択
ヒトCD137に結合するFcabを選択するために、酵母及びファージディスプレイ選択キャンペーンを採用して、同定されたFcabの多様性を最大化した。細胞表面は、両方ともヒトCD137及び組換え二量体ヒトCD137を表示し、二量体又は多量体CD137タンパク質に対して結合活性駆動型選択圧を発揮するために、様々な抗原提示を提供するために使用された。単量体CD137への高親和性ではなく、CD137複合体へ結合活性で結合するFcabを取得することは、そのようなFcabがT細胞刺激の後に、CD137のアップレギュレーションが生じる活性化及びプライミングされたT細胞を優先的に標的化すると考えられるため、有益であると考えられた。理論に拘束されることを望むものではないが、CD137膜発現のレベルが非常に低い又は無視できるT細胞は、タンパク質の大部分が二量体、三量体、又はそれ以上の多量体状態である高度にアップレギュレートされたCD137を有する活性化T細胞とは異なり、単量体状態のCD137を持つ可能性が高いと仮定された。結合活性駆動型選択の結果として、Fcabは優先的に活性化されたT細胞に結合し、ナイーブT細胞又はCD137の低発現を示す他の細胞にはうまく結合しないであろう。結合活性のCD137 Fcabを選択することにより、潜在的な標的外T細胞の活性化が減少し、それに伴う毒性が減少する。
85個の抗ヒトCD137 Fcabクローンを含むIgG1分子からなる「モック」mAb2抗体を作製し、mAb2形式におけるFcabの特性評価を可能にした。モックmAb2は、抗鶏卵リゾチーム抗体HelD1.3のCH3ドメインの対応する領域に対して、AB、CD及びEFループを含むCH3ドメインFcabの一部を置換することにより調製した。HelD1.3抗体の生成は、Tello et al.1993に記載されている。抗体HelD1.3の重鎖及び軽鎖配列は、それぞれ配列番号138及び139に示されている。モックmAb2分子は、HEK293-6E細胞中での一過性発現によって産生され、mAbSelectSureカラムを使用したプロテインA親和性クロマトグラフィーによって精製された。次いで、これらのmAb2を、バイオレイヤー干渉法(BLI)により、ヒト組換え抗原(ビオチン化hCD137-mFc-Avi)との結合について試験した。
TNFRシグナル伝達には多量体化及びクラスター化が必要である(Bitra et al.,2017)。CD137は、NF-κB同族のリガンドであるCD137Lと相互作用する場合、NF-κBシグナル伝達経路をクラスター化し活性化する。アゴニスト分子は、CD137のクラスター化及び活性化を促進するリガンドを模倣し、それによってNF-κBシグナル伝達経路を活性化する。一部のアゴニスト性抗体は、例えば、ウレルマブのように、結合時にCD137クラスター化を本質的に引き起こすことができ、一方で、他の抗体は、例えば、ウトミルマブのように、CD137クラスター化を誘導するために抗体自体の追加の架橋を必要とするものも知られている(Fisher et al.,2012)。エフェクター細胞上のFcガンマ受容体は、インビボでそのような架橋を誘導することが知られているが、これは非効率的であり、治療上の関心のある部位から離れて発生する可能性がある。用量制限毒性はウレルマブに関連しているがウトリムマブには関連していないため、本質的にアゴナイズする能力を持たない抗CD137結合Fcabを選択するが、CD137クラスター化を誘導するために追加の架橋を必要とするもののみを選択することにした。そこで、架橋抗体により細胞表面に発現させたCD137のクラスター化することにより、細胞内のNF-κBシグナル伝達経路の活性化を検出できるが、抗体が架橋されていない場合には、ほとんど活性を示さないアッセイを開発した。次に、このアッセイは、FcabがBLIによって組換え抗原に結合することが見出されたかどうかにかかわらず、抗CD137 FcabクローンmAb2形式のアゴニスト性機能活性を試験するために使用された。タンパク質Lを架橋剤として使用して、アッセイにおけるFab部分を介して、モックmAb2架橋を促進し、NF-κB活性化を測定した。
3.1 FS22-172の親和性成熟
FS22-172Fcabクローンから4つの酵母ディスプレイライブラリーを構築した。各クローンのCH3ドメインのABループでELLAプライマーを使用して7つの残基(IMGTによる位置15~16.1)をランダム化し、ライブラリーFS22-172ABを作成した。CH3ドメインのEFループでELLAプライマーを使用して5つの残基(IMGTによる位置92~94及び97~98)をランダム化し、ライブラリーFS22-172EFを得た。
HelD1.3における抗ヒトCD137 Fcabを含む「モック」mAb2抗体は、mAb2形式の親和性成熟Fcabのさらなる特性評価のために調製された。これらのmAb2は、実施例2.2で記載したように調製した。CD137/HelD1.3「モック」mAb2をHEK293-6E細胞中で一過性発現によって産生し、mAb Select SuReプロテインAカラムを使用して精製した。
列挙されたモックmAb2(HelD1.3)形式の親和性成熟抗ヒトCD137 Fcabの機能的活性を、実施例2.3に記載された同様のNF-κBルシフェラーゼアッセイで試験した。Gen5 Software、BioTekを備えたプレートリーダーで0.5秒の積分時間で発光を測定した。予想通り、Fcabはタンパク質L架橋(-XL)なしでは活性を示さなかった。全ての親和性成熟CD137 Fcabは、親CD137 Fcabよりも大きな改善を示し、このアッセイにおいては陽性であるが、EC50値の計算は不可能であった(実施例2.3参照)FS22-172-003は、たんぱく質L(+XL)で架橋した場合、最も低いEC50(32.64nM)で各ファミリーから最高の活性を示した。
他の関連するTNFSFRファミリーメンバーと比較したヒトCD137に対する抗ヒトCD137 Fcabの特異性を試験した。Fcabのうち8つを、モックmAb2(HelD1.3)形式で試験し、他のヒトTNFRSF受容体:CD40、OX40及びGITRへの結合を試験することにより、Biacore T200(GE Healthcare)でSPRによって測定された。アミンカップリング(アミンカップリングキット、GE Healthcare、BR-1000-50)を使用して、Biacore CM5チップ(GE Healthcare、カタログ番号29149603)でヒトCD40、GITR、及びOX40を約1000RUにコーティングした。1μMから開始のモックmAb2形式での抗ヒトCD137 Fcabの希釈液(FS22-172-003/HelD1.3)を、HBS-EP+緩衝液(BR100669)で調製し、30μl/分で3分間注入した後、緩衝液中で4分間解離した。チップを、10mMグリシンpH2.5を30μl/分で12秒間注入することにより再生した。異なるTNFRSFメンバーに特異的な抗体を、Biacoreチップコーティングを検証するための陽性対照として使用した。データを、二重参照減算し、BIAevaluation3.2ソフトウェアを使用して分析した。Fcabは、試験したTNFRSF受容体のいずれにも結合せず、CD137に対する特異性を示した。結果として、Fcab、又はこれらのFcabから抗原結合部位を含むmAb2は、CD137以外のいかなるものへ結合も誘発することは期待されていない。
ヒト、カニクイザル(cyno)及びマウスCD137に対するモックmAb2形式(実施例3.2参照)における抗ヒトCD137 Fcabの親和性をSPRで測定し、Fcabが動物試験での試験に有用であり得るかどうかを決定した。抗ヒトFab捕捉抗体を、製造業者の推奨(GE Healthcare、ヒトFabキャプチャーキット、#28958325)に従って、平均表面密度6000RUになるように、CM5シリーズSチップ(GE Healthcare#BR-1005-30)の4つのフローセル全てに固定化した。25℃及び10μl/分の流速での固定化は、6000RUの平均最終応答を達成した。各mAb2は、HBS-EP+緩衝液(GE Healthcare#BR1006-69)で希釈したmAb2の3μg/ml溶液を30μl/分で60秒間注入することにより、約150RUまで捕捉した。次に、HBS-EP+緩衝液中の異なる濃度のヒト、Cyno又はマウスCD137抗原(非ビオチン化ヒト、cyno又はマウスCD137-mFc-Avi又はヒトCD137-Avi-His)を、60μl/分で3分間チップ上に流し、次いで10分間解離させた。各抗原濃度の後、10mMグリシンpH2.1を30μl/分の流速で30秒間注射することにより、チップを再生した。緩衝液HBS-EP+を、参照減算のために、最高濃度の抗原の前及び最低濃度の抗原の後に注入し、ランダムな濃度の1つを2回繰り返した。結合速度論を、1:1ラングミュアモデルに適合させて、各サンプルにつき平衡結合(KD)を生成した。データ分析は、BiaEvaluationソフトウェアバージョン3.2を使用して実行された。結果を表3に示す。
要約すると、親和性成熟抗CD137 Fcabを生成し、mAb2形式に調製され、その後特性評価された。CH3ドメインにこれらのCD137抗原結合ドメイン含有mAb2は、ヒトNF-κBリポーター細胞アッセイにおいて高いレベルの活性を示し、この活性は架橋依存性であることが示された。
メソテリンは、69kDaの前駆体として合成され、タンパク質分解的に30kDaのNH2末端分泌型(巨核球増強因子又はMPFと呼ばれる)及び40kDaの膜結合型メソテリン(MSLN)に加工されたグリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)結合型糖タンパク質である。腫瘍細胞表面からシェディングし、選択的スプライシング又は膜結合型MSLNの腫瘍壊死因子変換酵素(TACE)によって生成されたMSLNの可溶性形態が患者血清中に見られる。この腫瘍シェッド抗原は、治療用抗体のデコイとして機能することができる「シンク」を作ることが知られており(Lee et al.,2018)、これは、抗体が腫瘍上のMSLNに結合することを可能にするために克服されなければならないようなものである。このシンク効果を回避するために、可溶性MSLNと比較して、固定化されたMSLNに優先的に結合する新規抗メソテリン抗体が得られ、これは、シンク内の可溶性MSLNよりも膜結合MSLNに優先的に結合することを意味することを意図していた。この目的のために、MSLN抗原の異なる形態がファージ選択及びその後のスクリーニングキャンペーンで使用された。様々な親和性で膜結合ヒト及びcynoMSLNに結合し、MSLNの異なる領域を標的とすることができた抗体のパネルが特定された。ELISA、Biacoreブロッキングアッセイ及び細胞結合を含む一連のスクリーニングアッセイ、及びMSLNへの結合領域を比較するアッセイを実行した。
CDR1、CDR2及びCDR3(MSM Technologies)でランダム化されたヒトIgG1生殖細胞系列のFabドメインを表示する合成ナイーブファージミドライブラリを、実施例1.3に記載されたMSLN抗原を用いた選択に使用した。
全選択のラウンド3及びラウンド4のアウトプットからの約2000クローンを、25nM固定化ビオチン化hMSLN-His Acro、完全長ビオチン化ヒト又はcynoMSLN-His-Aviへの結合について、ファージELISAによってスクリーニングし、一連の選択で使用された抗原と一致する。無関係なビオチン化Hisタグ抗原で固定化したストレプトアビジンプレート又はプレートを陰性対照として含めた。陰性対照に対するシグナルよりも少なくとも4倍高いMSLN結合シグナルを有するクローンを選択し、それらの可変領域を配列決定し、156の固有VH/VL配列の組合せを同定し、次いで、可溶性発現のために選択した。クローンを、エピトープマスキング選択を含む全ての選択キャンペーンから選択した。各クローンについて、VH及びVLをそれぞれ、CH1、CH2(CH2ドメインおいてLALA変異を有する(Bruhns et al.,2009;Hezareh et al.,2001)及びCH3ドメイン又はCLドメインのいずれかを含むpTT5発現ベクター(National Research Council of Canada)に個別にクローン化した。得られたLALA変異を有するpTT5-FS28 VH(AA)及びpTT5-FS28 VLベクターをHEK293-6E細胞に一過性にコトランスフェクトし、クローンを完全なIgG1分子として産生した。同様の方法を使用して、SS1及び抗鶏卵卵白リゾチーム抗体HelD1.3のVH及びVL領域をクローニングし、IgG1 LALA形式で発現させ、G1-AA/SS1(配列番号140(重鎖)及び141(軽鎖))及びG1-AA/HelD1.3(配列番号138(重鎖)及び139(軽鎖))を生じ、それぞれ陽性及び陰性対照とした。
4.3.1 結合ELISA
可溶性抗MSLN結合クローン又は精製クローン含有HEK293上清を、ヒトMSLN-His Acro、hMSLN-His-Avi、及び一部のキャンペーンでは、cMSLN-His-Aviとの結合についてELISAによりスクリーニングした。簡単に説明すると、hMSLN-His Acro、hMSLN-His-Avi、cMSLN-His-Avi、又は無関係のHisタグ付き抗原を、25nMで、4℃で一晩maxisorpプレートにコーティングした。翌日、プレートを0.05%Tween20及び2%Marvelミルク(Marvel dried milk)含有の300μlのPBSで遮断した。上清又は精製タンパク質含有抗MSLNmAbを室温で1時間インキュベートし、それらの結合を西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)にコンジュゲートしたマウス抗ヒトFc-IgG抗体で検出した。無関係な抗原への結合、又はヒト及びカニクイザル抗原の両方と交差反応しなかったクローンを廃棄した。さらに、完全長MSLN抗原、MSLN-His-Aviではなく、短縮型MSLN抗原、hMSLN-His Acroに結合したクローンは、完全長の抗原がMSLN-発現細胞の細胞表面上に抗原立体構造をより代表するものであると予想されたので、採用されなかった。
ヒトMSLN-His-Aviは、アミンカップリングキット(GE Healthcare、BR10050)を使用して、約200応答ユニット(RU)でCM5シリーズS BIAcore sensor chip(GE Healthcare、BR100530)のフローセル2に固定化された。フローセル1は減算のためにブランクのままにした。HEK293上清又は精製タンパク質は、HBS-EP+(GE Healthcare)で、サンプルあたり約50nMのMSLNmAbに調整した。サンプルをフローセル1及び2上に2.5分間30μl/分で注入し、次いで、HBS-EPバッファー中で2.5分間解離させた。再生は、10mMグリシンpH1.5(GE Healthcare、BR100354)を30μl/分の速度で30秒間注入することにより達成された。減算したデータ(フローセル2-フローセル1)を、BIAevaluation 3.2ソフトウェア(GE Healthcare)を使用して分析した。結合ELISAからこのアッセイで試験された86のクローンのうち39のクローンは、50nMで10RUを超える結合応答を示したため、再発現、精製、及びさらなるスクリーニングのために選択された。
4.3.3 結合したMSLNの領域に基づく抗体のビニング
実施例4.3.3に記載の各ビンについて、結合動態は、ヒト又はcynoMSLN-His-Aviが50又は100RUで固定化されたことを除いて、実施例4.3.2に記載された同様の方法を使用して決定された。クローンは、3倍希釈で81nMから0.33nMの濃度範囲で試験された。結合体がランク付けされ、各ビンから最良のもの、ビン1からFS28-024;ビン2からFS28-185、及びビン3のFS28-256が選択された。これらのクローンは全てcyno交差反応性であったが(データは示さず)、これらの試験条件下では親和性は計算されなかった。表4に示されるように、固定化されたMSLNの50RUで得られた親和性は、固定化されたMSLN抗原の100RUで得られた親和性よりも低く、より高いレベルのMSLNでの結合の増加を示した。
FS28-024、FS28-185、及びFS28-256を、ブロッキングアッセイにおいて、MUC16のメソテリンへの結合を遮断する能力について試験した。SS1は、MSLNへのMUC16結合を遮断することが文献から知られている(Ma et al.,2012)。SS1と同様のCDRを含有し、MUC16結合を遮断すると予想されるG1-AA/SS1、及び対照IgG1抗体s(G1AA/HelD1.3)は、それぞれ陽性対照及び陰性対照として含まれていた。
抗体のパネルによって結合されたMSLNの異なる領域に照らして、MSLNへの結合に対するそれらの特異性が試験された。FS28-024、FS28-185、及びFS28-256の特異性は、CEACAM-5、E-カドヘリン、トロンボモジュリン及びEpCAMなどの細胞接着に関与する他の分子への結合とMSLNへの結合を比較することにより、ELISAによって試験された。
選択された抗メソテリンmAb(FS28-024、FS28-185及びFS28-256)のパネルを、ヒト肺癌細胞株NCI-H226の内因性細胞表面MSLNへの結合について分析した。
ナイーブファージライブラリの初期スクリーニングによって同定された156のmAbから、最初に完全長、脱グリコシル化された組換えMSLNへの結合並びにcynoMSLNへの結合能を確認した一連のスクリーニングアッセイに基づいて、3つの抗ヒトMSLN mAbクローン(FS28-024、FS28-185及びFS28-256)を選択した。第2に、それらが結合したMSLNの領域(ビン)の多様性及びMUC16遮断活性に基づいて、クローンをグループ化し、これらのグループ内から最も高い親和性結合体を選択した。得られたmAbクローンFS28-024、FS28-185、及びFS28-256のパネルは、MSLNの3つの異なる領域に結合し、そのうちの1つ(ビン1、FS28-024)は、インビトロでMUC16のMSLNへの結合を遮断した。5つの抗MSLN抗体のパネルは、MSLNへの特異的結合、組換え及び細胞表面MSLNに対する異なる親和性を示し、以下の実施例5に記載されるように、さらなる特性評価及び/又は最適化のために選択された。
5.1 NNKウォーク戦略を使用したクローンFS28-024の親和性成熟
FS28-024はナノモル濃度以下の親和性でヒトMSLNに結合したが、cynoMSLNに対する親和性は約5倍低かった。cyno MSLNへの結合を改善するために、VH CDR3領域の5つの残基に対するNNKウォーク戦略が使用された。
FS28-024と比較して、クローンFS28-185及びFS28-256は、組換えMSLN及び細胞表面MSLNの両方に対して弱い親和性を示したため、親和性成熟に供された。
抗MSLN結合体のさらなる特性評価のために、親クローンと同様に、FS28‐024、FS28‐185又は256の親和性成熟VH又はVL領域をmAb2形式で産生した。得られたmAb2は、CH2ドメインにおけるLALA突然変異及び、CH3ドメインにおけるヒトCD137受容体結合部位含有FS28-024、FS28-185又はFS28-256クローンのCDR、又はそれらに由来する親和性成熟変異体を含むIgG1抗体である。得られたmAb2分子の重鎖及び軽鎖配列は、以下の配列番号で示される。
FS22-172-003-AA/FS28-024mAb2:配列番号94及び85
FS22-172-003-AA/FS28-024-051mAb2:配列番号98及び85
FS22-172-003-AA/FS28-024-052mAb2:配列番号102及び85
FS22-172-003-AA/FS28-024-053mAb2:配列番号106及び85
FS22-172-003-AA/FS28-024-060mAb2:配列番号108及び85
FS22-172-003-AA/FS28-026mAb2:270配列番号109及び87
FS22-172-003-AA/FS28-091mAb2:配列番号110及び88
FS22-172-003-AA/FS28-185mAb2:配列番号111及び89
FS22-172-003-AA/FS28-256mAb2:配列番号114及び116
FS22-172-003-AA/FS28-256-001mAb2:配列番号120及び82
FS22-172-003-AA/FS28-256-005mAb2:配列番号120及び83
FS22-172-003-AA/FS28-256-012mAb2:配列番号125及び116
FS22-172-003-AA/FS28-256-014mAb2:配列番号129及び116
FS22-172-003-AA/FS28-256-018mAb2:配列番号133及び116
FS22-172-003-AA/FS28-256-021mAb2:配列番号125及び82
FS22-172-003-AA/FS28-256-023mAb2:配列番号133及び82
FS22-172-003-AA/FS28-256-024mAb2:配列番号125及び83
FS22-172-003-AA/FS28-256-026mAb2:配列番号133及び83
FS22-172-003-AA/FS28-256-027mAb2:配列番号125及び84
FS22-172-003-AA/FS28-256-271mAb2:3及び84
FS22-172-003-AA/FS28-256-272mAb2:158及び84
FS22-172-003-AA/FS28-256-273mAb2:163及び84
全てのFS28‐256系統クローンは、VH CDR2(IMGT番号付けN55-X-S57、ここでXは任意の残基である)に潜在的N‐結合グリコシル化部位を含んでいた。クローンFS28-256-027の4つの変異体は、VH CDR2のN55をアラニン、ヒスチジン、セリン、及びスレオニンに置換することによって得た。これらのクローンは、それぞれFS28-256-271、FS28-256-272、FS28-256-273、及びFS28-256-274と命名された。それらのクローンを固定化及び溶液中のMSLNへの結合についてSPRにより特徴付けした。表5にSPRの結果を示す。FS28-256-274は固定化されたMSLNに対して、他のクローンよりもはるかに弱い親和性を有し、従って進行しなかった。FS28-256-272及びFSFS28-256-273は、可溶性MSLNとより強く、又は固定化されたMSLNと類似の強度で結合した。その結果、それらの両クローンの細胞表面に発現されたMSLNへの結合は、可溶性MSLNの存在によって影響を受ける可能性が高い。対照的に、FS28-256-271は、固定化されたMSLNに対して最も強い結合及び可溶性MSLNに対してより弱い結合を有し、そのため、それはMSLNの溶液中よりも固定化されたMSLNを優先的に標的とした。
以前の実施例で同定された抗CD137 Fcabは、タンパク質L(実施例2)などの外部架橋剤のいずれかによって架橋された場合に、NF-κBレポーターアッセイにおいてアゴニスト活性を有することが示された。同定された抗ヒトCD137 Fcabのパネルのうち、このクローンが最も好ましい機能的及び生物物理的特性を示すことから、MSLN標的化FabとのペアリングのためにFS22‐172‐003が選択された。
抗CD137 FcabFS 22-172-003を含むIgG1分子からなるCD137/MSLNmAb2、及び抗MSLNFabのパネル(表6に列挙)を産生し、mAb2形式でのペアリングの特性評価を可能にした。それらは、MSLN結合抗体のCH3ドメインの対応する領域に対して、AB、CD及びEFループを含むCH3ドメインFcabの一部を置換することによって調製された。これらのCD137/MSLNmAb2は、CH2ドメイン(AA)においてLALA変異を含んでいた。mAb2のアイソタイプは、ヒトIgG1であり、これは結合する細胞に対してADCCを誘導することができる。CD137/MSLNmAb2がCD137を発現する免疫細胞に結合するため、LALA変異を含めることによって、免疫細胞に対するADCCを誘導するmAb2の可能性を低減することを決定した。さらに、エフェクター細胞上のFcγ受容体は、インビボで抗体の架橋を誘導することが知られているが、これは非効率的であり、治療対象部位から離れた場所で起こり得る。臨床におけるCD137抗体は用量制限毒性と関連しているので、CD137/MSLNmAb2がMSLNと結合して架橋することを介してのみアゴニスト活性を発揮するように、LALA変異を含めることが決定された。全てのmAb2及び対照抗体は、HEK293-6E細胞における一過性発現によって産生され、mAbSelect SureプロテインAカラムを用いて精製された。次に、mAb2をSEC-HPLCによって純度について評価し、分子の単量体割合が98%を超えることを確認した。
CD137及びMSLNに対するCD137/MSLNmAb2の結合強度は、BIAcore装置を使用して、表面プラズモン共鳴により、同様に、内因性にMSLNを発現する関連細胞株上でフローサイトメトリーによる細胞表面MSLNへの結合を試験した。膜結合したMSLNの選択的スプライシング又は腫瘍壊死因子-a変換酵素(TACE)によって生成されたMSLNの可溶性形態がMSLN陽性の癌患者の血清中に見られるので、これが療法用抗体のデコイとして作用し得ると仮定されている(Lee et al.,2018)。mAb2の結合特性及び結合活性、特に可溶性及び固定化されたMSLNへの結合親和性の違いを調査した。これは、2つの方法で設定されたBIAcore結合実験で測定された。最初に、細胞表面に存在する抗原と結合するmAb2の動態プロファイルを再現するために、組換え抗原をSPRチップ上に中程度の密度で固定し、続いてmAb2を様々な濃度(実施例7.1を参照)で注入した。次に、細胞表面に結合したMSLNへのmAb2結合に対する循環可溶性MSLNに起因する潜在的シンク効果をシミュレートするために、mAb2をチップ上に捕捉し、組換え抗原を様々な濃度(実施例7.2を参照)で流した。さらに、MSLN陽性患者血清(Onda et al.,2006、10.1158/1078-0432.CCR-05-1477)に典型的に見られる代表的なレベルで添加した可溶性組換えMSLNの効果も、細胞表面に発現したMSLNへの結合試験及びCD8+T細胞アッセイで徹底的に調べた。
BIAcoreチップ上に固定化されたMSLNに対する全てのmAb2の結合を試験して、抗体が強く結合することを可能にするために高濃度の固定化抗原が利用可能な結合活性条件下で、ヒトMSLNへの結合親和性を決定した。CM5チップ(GE Healthcare BR-1005-30)を、製造元の指示に従って、約100RUでhMSLN-His-Aviでコーティングした。表6に記載されているCD137/MSLNmAb2のパネル、及び対照抗体G1-AA/HelD1.3及びG1-AA/SS1(Hassan et al.2002)は、300nMから始まる3倍希釈系列の濃度範囲で、流速70μl/分で注入された。会合時間は5分であり、解離時間は10分であった。泳動用バッファーはHBS-EP(GE Healthcare BR100188)であった。pH1.5の塩化グリシンを流速30μl/分で30秒間注入することにより、フローセルを再生した。意図的にブランクのままにしたフローセル(抗原コーティングなし)に対して、二重参照によりデータを分析した。結合速度論を、1:1ラングミュアモデルに適合させて、結合会合(ka)及び解離(kd)速度を生成した。平衡結合定数(KD)を、解離速度を各サンプルの会合速度で割ることによって計算した。データ分析は、BiaEvaluationソフトウェアバージョン3.2を使用して実行された。結果を表7に示す。
表7に記載されたCD137/MSLNmAb2並びに対照抗体G1-AA/HelD1.3及びG1-AA/SS1は、SPRによってヒトMSLN及びカニクイザルMSLNへの結合についての試験もして、そこで抗体を捕捉して溶液中のMSLNに対しての結合を評価した(溶液中のKD)。タンパク質G(GE Healthcare 29179315)を使用して、約100RUでmAb又はmAb2サンプルを捕捉し、その後、hMSLN-His-Avi又はcMSLN-His-Aviを、1000nMで開始する3倍希釈系列の濃度範囲で、流速70μl/分で注入した。会合時間は5分であり、解離時間は5分であった。泳動用バッファーはHBS-EP(GE Healthcare BR100188)であった。pH2.1の塩化グリシンを流速30μl/分で15秒間注入することにより、フローセルを再生した。実施例7.1に記載のようにデータを分析した。結果を表7に示す。抗体捕捉法から、mAb2の大部分は結合親和性を顕著に低下させ、固定化されたMSLN対可溶性MSLNに対する異なる結合を有する結合活性抗MSLN抗体を生成するために実施したスクリーニング戦略を支持した。可溶性MSLNの結合に対するKD値が、最高のmAb2FS22-172-003-AA/FS28-024-060に対して4.27nM、及び最低の親和性を有したmAb2FS22-172-003-AA/FS28-256に対して1.2μMの間であった。
MSLNに対する結合強度に加えて、ヒトCD137に対するCD137 FcabのKDはまた、新しいFabと対になった場合、Fcabの結合特性が保持されることを証明するために試験した。Biacore CM5チップをHuman Fab Capture Kit (GE Healthcare 28958325)を使用し、製造者の条件に従って、抗ヒトFabでコーティングし、表面密度を約9000RUとした。FS22-172-003-AA/FS28-024-052及びFS22-172-003-AA/FS28-256-271のサンプルを約100RUまで捕捉し、その後、ヒトCD137抗原(hCD137-mFc-Avi)を81nMで開始する3倍希釈系列の濃度範囲で流速70μl/分で流した。会合時間は5分であり、解離時間は5分であった。泳動用バッファーはHBS-EPであった。pH2.1の10mM塩化グリシンを流速30μl/分で30秒間2回繰り返し注入をすることにより、フローセルを再生した。データ分析は、以前の実施例で記載したように実行した(例えば、実施例7.1参照)。表8の結果は、同様のFcabであるが、異なるFabを含有するmAb2間のCD137に対する一貫した親和性を示す。抗CD137 Fcabは、結合活性結合相互作用を介して、単量体CD137よりも二量体又は多量体CD137に優先的に結合するように選択された。この結合活性作用機序は、CD137をはるかに低いレベルで発現する他の細胞よりも、活性化T細胞などのアップレギュレーションされたCD137発現を有する細胞を優先的に標的化するのに有益であると仮定される。これは、毒性などの望ましくない影響をもたらす可能性のある腫瘍外T細胞活性化を最小限にするのに有益であってもよい。さらに、Fcabは、CD137に結合することによってだけではアゴニスト作用を誘導することができないように、架橋された場合にのみ活性を有するように設計された。これらのCD137/MSLNmAb2との関連で、分子の両方の特異性の動的作用モードは、mAb2が腫瘍細胞上に高レベルで発現するアップレギュレーションされたMSLNに優先的に結合し、続いてアップレギュレーションされたCD137発現を伴う活性化T細胞に結合する結果となってもよいと考えられる。分子のFcabドメインの結合動態のために、mAb2分子が最初にT細胞上のCD137に結合する場合、MSLN媒介架橋の欠如は、T細胞アゴニスト作用が誘発されないことを確実にする。
細胞表面MSLNへの結合を確認するために、ヒト肺癌細胞株NCI-H226の内因性細胞表面MSLNへの結合について表9に列挙されたmAb2を分析した。加えて、MSLNは血中で、シェッド可溶性形態で見出され得るので、この循環MSLNは、我々のmAb2の曝露及び最終的には効力に影響を与え得る危険性がある。可溶性MSLNの存在が最小限の影響を与えることを確認するために、悪性中皮腫及び肺癌患者を、MSLN陽性と定義するための診断的価値があることが判明した可溶性MSLNの10~20倍のレベルである20nMの可溶性MSLN(Cui et al.,2014)の存在下で、NCI-H226細胞への追加の結合実験を実行した。簡単に説明すると、NCI-H226細胞(ATCC CRL-5826)を、Accutase(Gibco、A11105-01)を使用してT175細胞培養フラスコから回収した。可溶性MSLNで補足する際に抗体調製プロトコルをわずかに変更した:抗体を2xの最終濃度を得るために、96ウェルV底プレートで、FACSバッファー中で希釈し、次いで、各ウェルから60μlを、FACSバッファー単独又は、60μlの40nM組換えhMSLN-His(R&D systems、3265-MS-050)(最終濃度20nMのhMSLNを与える)を含有するFACSバッファーのいずれかに添加し、100μlを細胞に添加する前に、室温で1時間プレインキュベートした。
ある範囲のMSLN細胞密度を発現する細胞に結合する抗MSLNFabクローンFS28-256-271の能力を実証するために、以下のヒト癌細胞を使用した実施例7.3に記載されたものと類似の細胞結合フローサイトメトリーアッセイでmAb2を試験した:NCI-H226[H226](ATCC(登録商標)CRL-5826)、OVCAR-3[OVCAR3](ATCC(登録商標)HTB-161)、及びAsPC-1[AsPC-1](ATCC(登録商標)CRL-1682(商標))。実施例2に記載されたMSLN陰性細胞株HEK.FRTも陰性対照として使用した。各細胞株におけるMSLNの相対的発現を決定するために、抗体結合能(ABC)を、製造元が推奨するプロトコル(Quantum(商標)Simply Cellular(登録商標)#816 Bangs Labs)に従って使用した。細胞株を、試験した細胞の中で最も高いMSLNを有するH226(ABC 315,478)、中レベルを有するOVCAR3(ABC 103,444)、低レベルを有するAsPC-1(ABC 20,999)をMSLN発現レベルの順にランク付けした。
内在性レベルのMSLNを有する細胞株がCD137/MSLNmAb2を架橋し、CD137アゴニスト作用及びその後のT細胞活性化をもたらすことを実証するために、IL-2又はTNFγサイトカイン放出がこのアッセイのエンドポイントとして使用される細胞傷害性CD8+T細胞アッセイが開発された。実施例7に記載のNCI-H226、OVCAR-3、AsPC-1及びHEK.FRTは、このT細胞アッセイにおいて、CD137/MSLNmAb2を試験するために使用された。
次に、細胞傷害性CD8+T細胞を上記のようにPBMCから単離した。NCI-H226細胞を2×104細胞/ウェルで、抗CD3抗体(8μg/ml)でコーティングした96ウェル平底プレート上に100μlのT細胞培養培地(10%FBS(Life Technologies)、1Xペニシリンストレプトマイシン(Life Technologies、15140122)、1mMピルビン酸ナトリウム(Gibco、11360-070)、10mMヘペス(Sigma-Aldrich、H0887)、2mML-グルタミン(Sigma-Aldrich、G7513)及び50μM 2-メルカプトエタノール(Gibco,M6250)を含むRPMI培地(Life Technologies、61870-044))でプレーティングした。4時間のインキュベーション後に細胞を接着した後、全てのT細胞培養培地を除去し、T細胞を4.0×105細胞/mlの濃度で含有する50μlのT細胞培養培地で置換し、2.0×104細胞/ウェルを得た。mAb2を、60nMで開始する2倍の最終濃度でT細胞培地中に希釈し、1:3又は1:7の段階希釈を実行した。50μlのmAb2滴定を200μlの総アッセイ体積及び1倍の抗体濃度のために細胞に添加した。このアッセイで試験された分子の詳細は表11に提供され、各アッセイでは、G1-AA/20H4.9を陽性対照として使用した(データは示さず)。
上記のCD8+T細胞機能アッセイは、20mM濃度のhMSLN-Hisの存在下で反復され、これは、悪性中皮腫及び肺癌患者を、MSLN陽性と定義するための診断的価値があることが判明した可溶性MSLNの10~20倍のレベルである(Cui et al., 2014)。
メソテリン陽性の癌は広範囲の発現レベルを有するため、細胞表面のMSLN密度が低い細胞を使用して、実施例8.1でナノモル濃度以下の効力を有すると同定されたいくつかのmAb2の機能を評価することが望ましい。これを達成するために、上記の実施例8.1に記載されているようにT細胞活性化アッセイを実施したが、今回はOVCAR-3細胞株(ATCC(登録商標)HTB-161)を使用した。これらは、NCI-H226細胞よりも低レベルのMSLNを内因的に発現するMSLN陽性卵巣癌細胞である。実施例8.1に記載のものと同じプロトコルに従い、次の変更を加えた:細胞のサイズ及び形態の違いのため、OVCAR-3細胞を100μlのT細胞培養培地中、抗CD3抗体でコーティングされた(8μg/ml)96ウェル平底プレート上にウェル当たり1×104細胞で播種した。4時間のインキュベーション後に細胞を接着した後、全てのT細胞培養培地を除去し、T細胞を8.0×105細胞/mlの濃度で含有する50μlのT細胞培養培地で置換し、4.0×104細胞/ウェルを得た。結果は、OVCAR-3細胞と架橋した場合にIL-2放出を駆動する全ての試験済みのmAb2の能力を確認する(図3を参照)。これらのデータは、これらのmAb2が異なる腫瘍細胞株にわたる広範囲のMSLN密度にわたって機能する可能性があることを示唆している。HelD1.3モックmAb2形式(FS22-172-003/HelD1.3)のFcab FS22-172-003も、MSLNに結合しないため、このアッセイで試験され、IL-2放出の欠如は、Fabアーム(この場合はMSLN)を介して架橋された場合にのみ、抗ヒトCD137 Fcabが機能的であることを示した。
実施例8.2に記載のFS28-256系統の抗MSLN Fabを含む全てのmAb2は、実施例5.4に記載されているように除去されたVH CDR2の潜在的なN結合型グリコシル化部位を含有する。次の置換を有する3つのmAb2変異体が産生された:IMGTの命名法に従って、それぞれアミノ酸置換N55A、N55H、又はH55Sを含む、FS22-172-003-AA/FS28-256-271、FS22-172-003-AA/FS28-256-272、及びFS22-172-003-AA/FS28-256-273。これらの配列最適化mAb2の効力を実証するために、CD8+T細胞活性化アッセイを、実施例8.1に記載されているようにMSLN+NCI-H226細胞との共培養で実施した。mAb2は、可溶性MSLNの存在下でも試験された。
実施例8.1及び8.2で言及したように、癌患者は不均一なレベルのMSLNを発現する。したがって、様々なレベルのMSLNを発現する細胞の範囲にわたってFS22-172-003-AA/FS28-256-271 mAb2の効力を決定することが望ましい。CD8+T細胞アッセイは、実施例8.1及び8.2に記載されているように実施した。72時間後のIL-2測定に加え、96時間後にV-PLEXヒトIFNγMSDキット(Meso Scale Discovery、K151QOD-4)を製造元の指示に従って使用してIFNγ産生も測定した。
インビボでマウス及びヒトのCD137配列間の配列相同性が低いことから、インビボのマウスモデルにおいて試験する定常ドメインにCD137抗原結合領域を含有するmAb2の活性を可能にするために、マウスCD137に特異的に結合するFcabを生成し、特性評価した。
ヒトCD137に結合するFcabを選択するために、ヒトCD137に結合するFcabの選択について前述したものと同様に、酵母ディスプレイ選択キャンペーンを採用した(実施例2.1を参照)。組換えマウス二量体を抗原として使用した(実施例1を参照)。
マウスCD137に対する抗マウスCD137 Fcabの特異性は、HelD1.3「モック」mAb2形式で試験し、Fcabの他のマウスTNFRSF受容体(CD40、OX40、GITR)への結合を試験することにより、Octet QKeシステムのBLIによって測定した。10ng/μlのマウスCD40、GITR、OX40受容体をコーティングするためのストレプトアビジンバイオセンサー(PALL ForteBio 18-5021)(全てR&D Systemsから入手し、Thermoscientific #21328のEZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotinキットを使用してビオチン化した)。モックmAb2形式の抗マウスCD137 Fcabは、少なくとも1μMの最終濃度まで、動的バッファー(PALL 18-1092)で1:1に希釈した。抗原でコーティングされたセンサーをmAb2溶液に180秒間浸した後、1×動的バッファーに180秒間浸した。各TNFRSF受容体の抗体を陽性対照として使用した。FcabクローンFS22m-055、FS22m-063、FS22m-066、FS22m-075、FS22m-135、FS22m-055、FS22m-063、FS22m-066は、試験したTNFRSF受容体のいずれにも結合せず、したがって、そのマウスCD137に対する特異性を示した。
10.1 抗マウスMSLN mAbのナイーブ選択
マウスとヒトのMSLN間のアミノ酸同一性は低い(60%)。マウスにおけるインビボの概念証明(PoC)研究を可能にするために、本発明者らは、実施例4及び5に記載の抗ヒトMSLN mAbと同様の特性を有する抗マウスMSLN mAbを単離することに着手した。
以前の実施例で同定された抗マウスCD137 Fcabは、タンパク質L(実施例9)などの外部架橋剤のいずれかによって架橋された場合に、NF-κBレポーターアッセイにおいてアゴニスト活性を有することが示された。同定された抗ヒトCD137 Fcabのパネルのうち、このクローンが最も好ましい機能的及び生物物理的特性を示すことから、マウスMSLN標的FabとのペアリングのためにFS22m-066が選択された。
実施例10に記載されているように、ナイーブ抗マウスMSLN抗体のパネルが発見され、有益な結合及び標的化特性についてスクリーニングされた。実施例9に記載のように、抗マウスCD137 Fcabを選択した。抗マウスCD137 Fab(FS22m-063)及び抗マウスMSLN Fab(FS28m-228及びFS28m-228-010)を使用して、同系マウス腫瘍モデルにおけるMSLN標的化CD137アゴニスト作用の完全なインビトロ特性評価及びインビボ概念証明のためにマウスmAb2を生成した。Fabは、結合親和性、結合活性、及び機能的活性の間の関係を調査するために選択された。重鎖のCH2領域にLALA変異を有するmAb2は、Fcガンマ受容体駆動性の架橋及びエフェクター機能の寄与を最小限に抑えることを目的として、実施例6に記載のように構築され、識別子FS22m-063-AA/FS28m-228(配列番号136(軽鎖)、137(重鎖))、及びFS22m-063-AA/FS28m-228-010(それぞれ、配列番号136(軽鎖)及び166(重鎖))が付された。mAb2をHEK293-6E細胞中で一過性発現によって産生し、mAb Select SureプロテインAカラムを使用して精製した。
抗ヒトMSLNバインダーと同様に、固定化されたMSLN及び可溶性MSLNへの結合に対するmAb2の親和性は、Biacore装置を使用したSPRによって試験された。
活性化細胞傷害性CD8+T細胞は、癌細胞を直接殺傷するのに関与し、それらの細胞表面にCD137を発現する(Ye et al.,2014)。CD137のクラスター化は、下流のシグナル伝達及びさらなるCD8+T細胞の活性化の誘導に不可欠であることが知られている。したがって、CD8+T細胞活性化アッセイを使用して、mAb2がCD137のクラスター化及び下流シグナル伝達を駆動する能力を評価した。CD8+T細胞の活性化は、オバルブミンペプチド257-264に特異的なT細胞受容体を有するC57 BL/6-Tg(TcraTcrb)1100Mjb/Crl OT-Iマウス(Jackson Laboratory、カタログ番号003831)から単離された遺伝子改変OT-1T細胞の抗原刺激によって達成され、IFNγの放出によって決定された。
mAb2は、T細胞アッセイにおいて機能を有することが示され、同系免疫応答性腫瘍モデルにおいてインビボでのmAb2 FS22m-063-AA/FS28m-228の機能を試験することが望ましかった。
高MSLN発現腫瘍モデルにおけるFS22m-063-AA/FS28m-228の抗腫瘍効果を決定するために、9~10週齢のBalb/C雌マウス(Charles River)は、試験開始前の1週間順応させた。全ての動物は、マイクロチップを付けられ、固有の識別子が与えられた。各コホートには15匹又は20匹のマウスがいた。CT26.B2細胞を拡大培養し、細胞バンクを生成し、次に、IMPACT Iプロトコルを使用して、病原体について、IDEXX Bioresearchによって事前スクリーニングし、病原体がないことが示された。各動物は、左脇腹に100μlの無血清培地中の1×105細胞の皮下注射を受けた。腫瘍細胞接種後の17日目に、腫瘍を有しないマウスは試験から除外された。
LX(S2)/2
(ここで、L=最長軸、S=最短軸)
FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2の有効性は、CT26.G10同系腫瘍モデルでも試験された。CT26.G10細胞は、CT26.B2細胞と比較して低レベルのMSLNを発現する。CT26.G10細胞株を使用してマウスに接種したこと以外は、実施例12.1に記載したのと同じ手順に従った。マウスには、接種後12、14、及び16日目にFS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2、及び/又は接種後7、9、及び11日目にG1/4420対照抗体を、200μlの腹腔内注射で投与した。マウスに200μg/匹の固定用量を投与した(20gマウスでおよそ10mg/kgに相当)。
13.1 CT26.G10同系マウス腫瘍モデルにおける親和性成熟CD137/MSLN mAb2の用量応答活性
FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2で処置した場合、高レベルのマウスMSLN(CT26.B2)を発現する同系腫瘍モデル、及び低レベルのマウスMSLN(CT26.G10)を発現する腫瘍において、有意な抗腫瘍効果及び生存率の改善が観察された(実施例12)。したがって、親和性成熟FS22m-063-AA/FS28m-228-010の抗腫瘍効果を、ある範囲の用量(6、20、60、及び200μg/マウス、20gマウスでおよそ0.3、1、3及び10mg/kgに相当)で、インビボで調査することが望ましい。
AとBは、それぞれ切片及び傾きである。それらはマウスごとに異なり、群に対する固定効果及び動物に対する変量効果が含まれる。
A=A0+A1T+εA
B=B0+B1T+εB
Tは、一方の群に値0、もう一方の群に1の値を持つ処置群を表すダミー変数である。変量効果は正規分布で分布する。
εA~(0、σA)、εB~N(0、σB)
ここで、σA及びσBは、それぞれ切片と傾きの動物間のばらつきの標準偏差である。動物間のばらつきも、通常、標準偏差で分布する σ:ε~(0,σ)。
FS22m-063-AA/FS28m-228-010は、担癌マウスにおいて有意な抗腫瘍効果及び生存率の改善を示しており、mAb2がその個々の構成部分と比較してインビボで優れた抗腫瘍活性を示したかどうかを決定することが望ましい。マウスMSLN抗体(G1-AA/FS28m-228-010)、「モック」mAb2形式のCD137 Fcab(FS22m-063-AA/HelD1.3及びFS22m-063-AA/4420)、マウスMSLN抗体及びモックmAb2形式のCD137 Fcabの組み合わせ(すなわちG1-AA/FS28m-228-010プラスFS22m-063-AA/HelD1.3)、並びにFS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2による処置は、ヒトアイソタイプ対照抗体(G1-AA/HelD1.3)による処置と比較された。
臨床試験中のウレルマブを伴う固形腫瘍患者の抗CD137 mAb処置は、投与されたウレルマブの用量に関連することが示されている重度の処置関連免疫事象をもたらした。これらの免疫事象の影響は、重度の肝毒性として肝臓に現れた(Segal, N. H., et al., 2017)。
・ 実質全体に位置する最小の多発性混合炎症細胞(主に顆粒球)
・ 実質全体に散在する最小の変性肝細胞
・ 最小の変性肝細胞
・ 門脈管における最小の混合炎症細胞
を示した。
CD137/MSLN mAb2(実施例13.3)の反復投与後に観察された制限された肝臓薬理により、また、FS22m-063-AA/FS28m-228-010で観察された抗腫瘍応答の薬理をさらに理解するために、MSLN陽性同系腫瘍モデルにおけるCD137/MSLN mAb2の作用機序を調査した。
14.1 非担癌マウスにおける抗マウスCD137/MSLN mAb2(FS22m-063-AA/FS28-228-010)の薬物動態
マウスにおける抗マウスCD137/MSLN mAb2の薬物動態を決定するために、非担癌C57BL/6雌マウスに10mg/kgの抗マウスCD137/MSLN mAb2(FS22m-063-AA/FS28m-228-010)又はヒトIgG1対照抗体(G1/4420)を1回静脈内投与し、144時間まで監視した。
比較のため、非担癌C57BL/6雌マウスにおける抗ヒトCD137/MSLN mAb2の薬物動態プロファイルを決定した。マウスに6.7mg/kgの抗ヒトCD137/MSLN(FS22-172-003-AA/FS28-256-271)mAb2又はヒトIgG1対照抗体(G1-AA/4420)を静脈内投与し、144時間まで監視した。およそ20μlの全血のマイクロサンプリングを0.5、1、6、24、48、96及び144時間で実施し、処理して約5μlの分析用の血清を単離した。分析は、実施例14.1で記載したように実行した。
重鎖注釈
i.mAb2の重鎖のアミノ酸配列において、可変ドメインは斜体で示され、IMGTに従うCDRは太字斜体で示され、Kabatに従うCDRは斜体下線で示され(したがって、重複するIMGT及びKabat CDR配列は太字、斜体、且つ下線で示される)、CH1ドメインには下線が付され、ヒンジ領域には二重下線が付され、CH2ドメインは太字で示され(該当する場合、LALA変異の位置は太字下線で示される)、CH3ドメインは通常フォントで示され、CH3構造ループの変更された領域には下線が付されている(ループが変更されていない場合は下線なし)。
ii.可変ドメインのアミノ酸配列において、IMGTに従うCDRは太字斜体で示され、Kabatに従うCDRは斜体下線で示される(したがって、重複するIMGT及びKabat CDR配列は太字、斜体、且つ下線で示される)。
iii.IMGT及びKabatの両方に従うCDRアミノ酸配列が提供される。
i.mAb2の軽鎖のアミノ酸配列において、可変ドメインは斜体で示され、IMGTに従うCDRは太字斜体で示され、Kabatに従うCDRは斜体下線で示される(したがって、重複するIMGT及びKabat CDR配列は太字、斜体、且つ下線で示される)。
ii.可変ドメインのアミノ酸配列において、IMGTに従うCDRは太字斜体で示され、Kabatに従うCDRは斜体下線で示される(したがって、重複するIMGT及びKabat CDR配列は太字、斜体、且つ下線で示される)。
iii.IMGT及びKabatの両方に従うCDRアミノ酸配列が提供される。
CH3ドメインのアミノ酸及びcDNA配列並びにFS22-172-003 Fcab含有mAb2クローン全て及びFS22-172-003 FcabのCH3 AB及びEF構造ループの改変領域のアミノ酸配列
CH3 配列番号9 DNA
配列番号10 ループAB(AA)PYIIPPY
配列番号11 ループEF(AA)GADRWLE
FS22-172-003-AA/FS28-024 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号92 重鎖AA(LALAなし)
配列番号93 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号94 重鎖AA(LALAあり)
配列番号95 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号12 VHドメインAA
配列番号13 VHドメインDNA
配列番号14 HCDR1(AA)(IMGT)GFTLSYSS
配列番号15 HCDR1(AA)(Kabat)YSSMS
配列番号16 HCDR2(AA)(IMGT)ITPSTGYT
配列番号17 HCDR2(AA)Kabat) FITPSTGYTHYADSVKG
配列番号18 HCDR3(AA)(IMGT)ARRALTFDY
配列番号19 HCDR3(AA)(Kabat)RALTFDY
FS22-172-003-AA/FS28-024 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号85 軽鎖AA
配列番号86 軽鎖DNA
配列番号54 VLドメインAA
配列番号55 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号24 LCDR3(AA)(IMGT)QQASSYPLT
配列番号24 LCDR3(AA)(Kabat)QQASSYPLT
FS22-172-003-AA/FS28-024-051 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号96 重鎖AA(LALAなし)
配列番号97 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号98 重鎖AA(LALAあり)
配列番号99 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号56 VHドメインAA
配列番号57 VHドメインDNA
配列番号14 HCDR1(AA)(IMGT)GFTLSYSS
配列番号15 HCDR1(AA)(Kabat)YSSMS
配列番号16 HCDR2(AA)(IMGT)ITPSTGYT
配列番号17 HCDR2(AA)Kabat)FITPSTGYTHYADSVKG
配列番号25 HCDR3(AA)(IMGT)ARRALIFDY
配列番号26 HCDR3(AA)(Kabat)RALIFDY
FS22-172-003-AA/FS28-024-051 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号85 軽鎖AA
配列番号86 軽鎖DNA
配列番号54 VLドメインAA
配列番号55 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号24 LCDR3(AA)(IMGT)QQASSYPLT
配列番号24 LCDR3(AA)(Kabat)QQASSYPLT
FS22-172-003-AA/FS28-024-052 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号100 重鎖AA(LALAなし)
配列番号101 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号102 重鎖AA(LALAあり)
配列番号103 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号58 VHドメインAA
配列番号59 VHドメインDNA
配列番号14 HCDR1(AA)(IMGT)GFTLSYSS
配列番号15 HCDR1(AA)(Kabat)YSSMS
配列番号16 HCDR2(AA)(IMGT)ITPSTGYT
配列番号17 HCDR2(AA)Kabat)FITPSTGYTHYADSVKG
配列番号27 HCDR3(AA)(IMGT)ARRALLFDY
配列番号28 HCDR3(AA)(Kabat)RALLFDY
FS22-172-003-AA/FS28-024-052 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号85 軽鎖AA
配列番号86 軽鎖DNA
配列番号54 VLドメインAA
配列番号55 VL DNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号24 LCDR3(AA)(IMGT)QQASSYPLT
配列番号24 LCDR3(AA)(Kabat)QQASSYPLT
FS22-172-003-AA/FS28-024-053 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号104 重鎖AA(LALAなし)
配列番号105 重鎖DNA
(LALAなし)
配列番号106 重鎖AA(LALAあり)
配列番号107 重鎖DNA
(LALAあり)
配列番号60 VHドメインAA
配列番号61 VHドメインDNA
配列番号14 HCDR1(AA)(IMGT)GFTLSYSS
配列番号15 HCDR1(AA)(Kabat)YSSMS
配列番号16 HCDR2(AA)(IMGT)ITPSTGYT
配列番号17 HCDR2(AA)Kabat)FITPSTGYTHYADSVKG
配列番号29 HCDR3(AA)(IMGT)ARRALVFDY
配列番号30 HCDR3(AA)(Kabat)RALVFDY
FS22-172-003-AA/FS28-024-053 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号85 軽鎖AA
配列番号86 軽鎖DNA
配列番号54 VLドメインAA
配列番号55 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号24 LCDR3(AA)(IMGT)QQASSYPLT
配列番号24 LCDR3(AA)(Kabat)QQASSYPLT
FS22-172-003-AA/FS28-024-060 mAb2の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列
配列番号108 重鎖AA(LALAあり)
配列番号85 軽鎖AA
FS22-172-003-AA/FS28-026 mAb2の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列
配列番号109 重鎖AA(LALAあり)
配列番号87 軽鎖AA
FS22-172-003-AA/FS28-091 mAb2の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列
配列番号110 重鎖AA(LALAあり)
配列番号88 軽鎖AA
FS22-172-003-AA/FS28-185 mAb2の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列
配列番号111 重鎖AA(LALAあり)
配列番号89 軽鎖AA
FS22-172-003-AA/FS28-256 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号112 重鎖AA(LALAなし)
配列番号113 重鎖DNA(lalaなし)
配列番号114 重鎖AA(LALAあり)
配列番号115 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号62 VHドメインAA
配列番号63 VHドメインDNA
配列番号31 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTNTY
配列番号32 HCDR1(AA)(Kabat)NTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号35 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNSYQGGLDY
配列番号36 HCDR3(AA)(Kabat)YNSYQGGLDY
FS22-172-003-AA/FS28-256 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号116 軽鎖AA
配列番号117 軽鎖DNA
配列番号64 VLドメインAA
配列番号65 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号37 LCDR3(AA)(IMGT)QQSYYYPIT
配列番号37 LCDR3(AA)(Kabat)QQSYYYPIT
FS22-172-003-AA/FS28-256-001 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号118 重鎖AA(LALAなし)
配列番号119 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号120 重鎖AA(LALAあり)
配列番号121 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号66 VHドメインAA
配列番号67 VHドメインDNA
配列番号38 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTETY
配列番号39 HCDR1(AA)(Kabat)ETYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号35 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNSYQGGLDY
配列番号36 HCDR3(AA)(Kabat)YNSYQGGLDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-001 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号82 軽鎖AA
配列番号122 軽鎖DNA
配列番号68 VLドメインAA
配列番号69 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号40 LCDR3(AA)(IMGT)QQHNQYPNT
配列番号40 LCDR3(AA)(Kabat)QQHNQYPNT
FS22-172-003-AA/FS28-256-005 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号118 重鎖AA(LALAなし)
配列番号119 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号120 重鎖AA(LALAあり)
配列番号121 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号66 VHドメインAA
配列番号67 VHドメインDNA
配列番号38 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTETY
配列番号39 HCDR1(AA)(Kabat)ETYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号35 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNSYQGGLDY
配列番号36 HCDR3(AA)(Kabat)YNSYQGGLDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-005 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号83 軽鎖AA
配列番号90 軽鎖DNA
配列番号78 VLドメインAA
配列番号79 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号41 LCDR3(AA)(IMGT)QQALGYPHT
配列番号41 LCDR3(AA)(Kabat)QQALGYPHT
FS22-172-003-AA/FS28-256-012 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号123 重鎖AA(LALAなし)
配列番号124 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号125 重鎖AA(LALAあり)
配列番号126 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号70 VHドメインAA
配列番号71 VHドメインDNA
配列番号42 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTHTY
配列番号43 HCDR1(AA)(Kabat)HTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号44 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYHAALDY
配列番号45 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYHAALDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-012 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号116 軽鎖AA
配列番号117 軽鎖DNA
配列番号64 VLドメインAA
配列番号65 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号37 LCDR3(AA)(IMGT)QQSYYYPIT
配列番号37 LCDR3(AA)(Kabat)QQSYYYPIT
FS22-172-003-AA/FS28-256-014 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号127 重鎖AA(LALAなし)
配列番号128 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号129 重鎖AA(LALAあり)
配列番号130 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号72 VHドメインAA
配列番号73 VHドメインDNA
配列番号46 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTDTY
配列番号47 HCDR1(AA)(Kabat)DTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号48 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYAAGLDY
配列番号49 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYAAGLDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-014 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号116 軽鎖AA
配列番号117 軽鎖DNA
配列番号64 VLドメインAA
配列番号65 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号37 LCDR3(AA)(IMGT)QQSYYYPIT
配列番号37 LCDR3(AA)(Kabat)QQSYYYPIT
FS22-172-003-AA/FS28-256-018 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号131 重鎖AA(LALAなし)
配列番号132 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号133 重鎖AA(LALAあり)
配列番号134 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号74 VHドメインAA
配列番号75 VHドメインDNA
配列番号50 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTQTY
配列番号51 HCDR1(AA)(Kabat)QTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号52 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYQIGLDY
配列番号53 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYQIGLDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-018 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号116 軽鎖AA
配列番号117 軽鎖DNA
配列番号64 VLドメインAA
配列番号65 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号37 LCDR3(AA)(IMGT)QQSYYYPIT
配列番号37 LCDR3(AA)(Kabat)QQSYYYPIT
FS22-172-003-AA/FS28-256-021 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号123 重鎖AA(LALAなし)
配列番号124 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号125 重鎖AA(LALAあり)
配列番号126 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号70 VHドメインAA
配列番号71 VHドメインDNA
配列番号42 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTHTY
配列番号43 HCDR1(AA)(Kabat)HTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号44 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYHAALDY
配列番号45 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYHAALDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-021 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号82 軽鎖AA
配列番号122 軽鎖DNA
配列番号68 VLドメインAA
配列番号69 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号40 LCDR3(AA)(IMGT)QQHNQYPNT
配列番号40 LCDR3(AA)(Kabat)QQHNQYPNT
FS22-172-003-AA/FS28-256-023 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号131 重鎖AA(LALAなし)
配列番号132 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号133 重鎖AA(LALAあり)
配列番号134 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号74 VHドメインAA
配列番号75 VHドメインDNA
FS22-172-003-AA/FS28-256-023 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号82 軽鎖AA
配列番号122 軽鎖DNA
配列番号68 VLドメインAA
配列番号69 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号40 LCDR3(AA)(IMGT)QQHNQYPNT
配列番号40 LCDR3(AA)(Kabat)QQHNQYPNT
FS22-172-003-AA/FS28-256-024 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号123 重鎖AA(LALAなし)
配列番号124 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号125 重鎖AA(LALAあり)
配列番号126 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号70 VHドメインAA
配列番号71 VHドメインDNA
配列番号42 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTHTY
配列番号43 HCDR1(AA)(Kabat)HTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号44 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYHAALDY
配列番号45 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYHAALDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-024 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号83 軽鎖AA
配列番号90 軽鎖DNA
配列番号78 VLドメインAA
配列番号79 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号41 LCDR3(AA)(IMGT)QQALGYPHT
配列番号41 LCDR3(AA)(Kabat)QQALGYPHT
FS22-172-003-AA/FS28-256-026 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号131
重鎖AA(LALAなし)
配列番号132 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号133 重鎖AA(LALAあり)
配列番号134 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号74 VHドメインAA
配列番号75 VHドメインDNA
配列番号50 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTQTY
配列番号51 HCDR1(AA)(Kabat)QTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号52 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYQIGLDY
配列番号53 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYQIGLDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-026 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号83 軽鎖AA
配列番号90 軽鎖DNA
配列番号78 VLドメインAA
配列番号79 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号41 LCDR3(AA)(IMGT)QQALGYPHT
配列番号41 LCDR3(AA)(Kabat)QQALGYPHT
FS22-172-003-AA/FS28-256-027 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号123 重鎖AA(LALAなし)
配列番号124 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号125 重鎖AA(LALAあり)
配列番号126 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号70 VHドメインAA
配列番号71 VHドメインDNA
配列番号42 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTHTY
配列番号43 HCDR1(AA)(Kabat)HTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号34 HCDR2(AA)Kabat)NISPTYSTTNYADSVKG
配列番号44 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYHAALDY
配列番号45 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYHAALDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-027 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号84 軽鎖AA
配列番号91 軽鎖DNA
配列番号76 VLドメインAA
配列番号77 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号80 LCDR3(AA)(IMGT)QQTVPYPYT
配列番号80 LCDR3(AA)(Kabat)QQTVPYPYT
マウスmAb及びmAb2
FS28m-228 mAbの重鎖のアミノ酸配列
配列番号135 重鎖AA(LALAあり)
FS28m-228 mAbの軽鎖のアミノ酸配列
配列番号136 軽鎖AA
FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2の重鎖のアミノ酸配列
配列番号137 重鎖AA(LALAあり)
FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列
配列番号136 軽鎖AA
G1AA/HelD1.3 mAbの重鎖のアミノ酸配列
配列番号138 重鎖AA(LALAあり)
G1AA/HelD1.3 mAbの軽鎖のアミノ酸配列
配列番号139 軽鎖AA
G1AA/SS1 mAb
配列番号140 重鎖(LALAあり)
配列番号141 軽鎖
MSLN-His-Avi
メソテリン(MPF及びC末端なし)(示した);His及びAviタグ(示さず)
配列番号142 ヒト
配列番号143 カニクイザル
配列番号144 マウス
CD137-mFc-Avi及びCD137-Avi-His
(細胞外ドメインCD137(示した);mFc、Aviタグ、Hisタグ(示さず)
配列番号146 ヒト
配列番号147 カニクイザル
配列番号148 マウス
細胞発現抗原(CD137)
(細胞外ドメイン(斜体);膜貫通及び細胞内ドメイン(太字))
配列番号149 ヒト
配列番号150 マウス
配列番号153 カニクイザル
過剰発現細胞株-膜結合成熟型のメソテリン(太字斜体で示す)
[N.B.MPF及びプロペプチドは、メソテリン配列の前後に通常フォントで示す。いずれも膜結合成熟型のメソテリンには存在しない。]
ヒトMPF+MSLN
配列番号151
マウスMPF+MSLN
配列番号145
カニクイザルMPF+MSLN
配列番号152
野生型CH2ドメインのアミノ酸配列
配列番号154 CH2(WT)
LALA変異を含むCH2ドメインのアミノ酸配列(LALA変異は太字下線)
配列番号155 CH2(LALA)
LALA-PA変異を含むCH2ドメインのアミノ酸配列(LALA-PA変異は太字下線)
配列番号156 CH2(LALA-PA)
FS22-172-003-AA/FS28-256-271、FS22-172-003-AA/FS28-256-272、及びFS22-172-003-AA/FS28-256-273 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号84 軽鎖AA
配列番号91 軽鎖DNA
配列番号76 VLドメインAA
配列番号77 VLドメインDNA
配列番号20 LCDR1(AA)(IMGT)QSVSSSY
配列番号21 LCDR1(AA)(Kabat)RASQSVSSSYLA
配列番号22 LCDR2(AA)(IMGT)GAS
配列番号23 LCDR2(AA)(Kabat)GASSRAT
配列番号80 LCDR3(AA)(IMGT)QQTVPYPYT
配列番号80 LCDR3(AA)(Kabat)QQTVPYPYT
FS22-172-003-AA/FS28-256-271 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号1 重鎖AA(LALAなし)
配列番号2 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号3 重鎖AA(LALAあり)
配列番号4 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号70 VHドメインAA
配列番号71 VHドメインDNA
配列番号42 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTHTY
配列番号43 HCDR1(AA)(Kabat)HTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号5 HCDR2(AA)Kabat)AISPTYSTTNYADSVKG
配列番号44 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYHAALDY
配列番号45 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYHAALDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-272 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号6 重鎖AA(LALAなし)
配列番号7 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号158 重鎖AA(LALAあり)
配列番号159 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号70 VHドメインAA
配列番号71 VHドメインDNA
配列番号42 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTHTY
配列番号43 HCDR1(AA)(Kabat)HTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号160 HCDR2(AA)Kabat)HISPTYSTTNYADSVKG
配列番号44 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYHAALDY
配列番号45 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYHAALDY
FS22-172-003-AA/FS28-256-273 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号161 重鎖AA(LALAなし)
配列番号162 重鎖DNA(LALAなし)
配列番号163 重鎖AA(LALAあり)
配列番号164 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号70 VHドメインAA
配列番号71 VHドメインDNA
配列番号42 HCDR1(AA)(IMGT)GFTFTHTY
配列番号43 HCDR1(AA)(Kabat)HTYMS
配列番号33 HCDR2(AA)(IMGT)ISPTYSTT
配列番号165 HCDR2(AA)Kabat)SISPTYSTTNYADSVKG
配列番号44 HCDR3(AA)(IMGT)ARYNAYHAALDY
配列番号45 HCDR3(AA)(Kabat)YNAYHAALDY
FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2の重鎖のアミノ酸配列
配列番号166 重鎖AA(LALAあり)
FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2の軽鎖のアミノ酸配列
配列番号136 軽鎖AA
FS22m-063-AA/HelD1.3 mAb2の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列
配列番号167 重鎖AA(LALAあり)
配列番号168 軽鎖AA
FS22-172-003-AA/FS28-185-002 mAb2の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号169 重鎖AA(LALAあり)
配列番号170 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号171 軽鎖AA
配列番号172 軽鎖DNA
FS22-172-003-AA/FS28-185-003 mAb2の重鎖のアミノ酸配列及びcDNA配列
配列番号173 重鎖AA(LALAあり)
配列番号174 重鎖DNA(LALAあり)
配列番号175 軽鎖AA
配列番号176 軽鎖DNA
WT Fcab CH3ドメインのアミノ酸配列(配列番号81)
AB、CD、EFループは下線が付されている
WT CDループ配列
配列番号157
WT Fcab CDループ-SNGQPENNY
本明細書で言及されている全ての文書は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ. Basic local alignment search tool. J. Mol. Biol. 215(3), 403-10 (1990).
Altschul SF, Madden TL, Schaeffer AA, Zhang J, Zhang Z, Miller W, Lipman DJ. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res. 25(17), 3389-402 (1997).
Bagshawe KD, Sharma SK, Springer CJ, Antoniw P, Rogers GT, Burke PJ, Melton R. Antibody-enzyme conjugates can generate cytotoxic drugs from inactive precursors at tumor sites. Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4, 915-922 (1991).
Bartkowiak T, Curran MA. 4-1BB Agonists: Multi-Potent Potentiators of Tumor Immunity. Front Oncol. Jun 8;5, 117 (2015).
Bergman I, Burckart GJ, Pohl CR, Venkataramanan R, Barmada MA, Griffin JA And Cheung NV. Pharmacokinetics of IgG and IgM Anti-Ganglioside Antibodies in Rats And Monkeys After Intrathecal Administration. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 284(1), 111-115 (1998)
Bitra A, Doukov T, Wang J, Picarda G, Benedict CA, Croft M, Zajonc DM. Crystal structure of murine 4-1BB and its interaction with 4-1BBL support a role for galectin-9 in 4-1BB signaling. J Biol Chem. 293(4):1317-1329 (2017).
Bruhns P, Iannascoli B, England P, Mancardi DA, Fernandez N, Jorieux S and Daeron M. Specificity and affinity of human Fcγ receptors and their polymorphic variants for human IgG subclasses. Blood 113(16), 3716-25 (2009).
Campagne O, Delmas A, Fouliard S, Chenel M, Chichili GR, Li H, Alderson R, Scherrmann JM, Mager DE. Integrated Pharmacokinetic/ Pharmacodynamic Model of a Bispecific CD3xCD123 DART Molecule in Nonhuman Primates: Evaluation of Activity and Impact of Immunogenicity. Clin Cancer Res. 2018 Jun 1;24(11):2631-2641. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-17-2265. Epub 2018 Feb 20.
Chester C, Sanmamed MF, Wang J, Melero I. Immunotherapy targeting 4-1BB: mechanistic rationale, clinical results, and future strategies. Blood. 131(1):49-57 (2018).
Chester C, Ambulkar S, Kohrt HE. 4-1BB agonism: adding the accelerator to cancer immunotherapy. Cancer Immunol Immunother. 65(10):1243-8 (2016).
Creaney J, Dick IM and Robinson BW (2015). Discovery of new biomarkers for malignant mesothelioma. Curr Pulmonol Rep. 4: 15-21.
Croft, M., 2003. Co-stimulatory members of the TNFR family: keys to effective T-cell immunity? Nat. Rev. Immunol. 3:609-620.
Cui A, Jin X0G, Zhai K, Tong Z-H and Shi H-Z (2014). Diagnostic values of soluble mesothelin-related peptides for malignant pleural mesothelioma: updated meta-analysis. BMJ Open 4: e004145.
Dubrot J, Milheiro F, Alfaro C, Palazon A, Martinez-Forero I, Perez-Gracia JL, Morales-Kastresana A, Romero-Trevejo JL, Ochoa MC, Hervas-Stubbs S, Prieto J, Jure-Kunkel M, Chen L, Melero I. Treatment with anti-CD137 mAbs causes intense accumulations of liver T cells without selective antitumor immunotherapeutic effects in this organ. Cancer Immunol Immunother. 59(8):1223-1233 (2010).
Fisher TS, Kamperschroer C, Oliphant T, Love VA, Lira PD, Doyonnas R, Bergqvist S, Baxi SM, Rohner A, Shen AC, Huang C, Sokolowski SA, Sharp LL. Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity. Cancer Immunol Immunother. 61(10):1721-33 (2012).
Grisshammer, R. and Nagai, K. (1995) Purification of overproduced proteins from E. coli cells In: DNA Cloning 2: Expression systems (Rickwood, D. and Hames, B.D., Eds.), The Practical Approach Series, pp. 59-92. IRL Press, Oxford University Press.
Hassan R, Kreitman RJ, Pastan I and Willingham MC (2005). Localization of mesothelin in epithelial ovarian cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol AIMM Off Publ Soc Appl Immunohistochem 13:243-47;
Hassan R, Thomas, A, Alewine, C, Le, DT, Jaffee, EM and Pastan I (2016). Mesothelin immunotherapy for cancer: ready for prime time? J. Clin. Onc. 34:4171-4180.
Hassan R, Lerner MR, Benbrook D, Lightfoot SA, Brackett DJ, Wang QC and Pastan I (2002). Clin. Cancer Res.:8: 3520-3526.
Hezareh M, Hessell AJ, Jensen RC, van de Winkel JG and Parren PW. Effector function activities of a panel of mutants of a broadly neutralizing antibody against human immunodeficiency virus type 1. J. Virol. 75(24), 12161-8 (2001).
Hinner MJ, Aiba, RSB., Wiedenmann A, Schlosser C, Allersdorfer A, Matschiner G, Rothe C, Moebius U, Kohrt HE, Olwill SA. Costimulatory T cell engagement via a novel bispecific anti-CD137 /anti-HER2 protein. J. Immunotherapy Cancer 3 (Suppl 2): P187. (2015)
Holliger P, Hudson PJ. Engineered antibody fragments and the rise of single domains. Nat Biotechnol. 23(9):1126-36 (2005).
Hollevoet K, Reitsma JB, Creaney J, Grigoriu, BD, Robinson BW, Scherpereel A, Cristaudo A, Pass HI, Nackaerts K, Rodriques Portal JA, Schneider J, Muley, T, Di Serio F, Baas P, Tomasetti M, Rai AJ and van Meerbeeck JP (2012). Serum mesothelin for diagnosing malignant pleural mesothelioma: an individual patient data meta-analysis. J Clin. Oncol. 30:1541-1549.
Hurtado JC, Kim YJ, Kwon BS. Signals through 4-1BB are costimulatory to previously activated splenic T cells and inhibit activation-induced cell death. J Immunol. 15;158(6):2600-9 (1997).
Hu S, Shively L, Raubitschek A, Sherman M, Williams LE, Wong JY, Shively JE, Wu AM. Minibody: A novel engineered anti-carcinoembryonic antigen antibody fragment (single-chain Fv-CH3) which exhibits rapid, high-level targeting of xenografts. Cancer Res. 56(13):3055-61 (1996).
Kaneko O, Gong, L, Zhang, J, Hansen, JK, Hassan, R, Lee B and Ho M (2009). A binding domain on mesothelin for CA125/MUC16. J. Biol. Chem. 284: 3739-3749.
Kohrt, H.E. et al., 2011. CD137 stimulation enhances the antilymphoma activity of anti-CD20 antibodies. Blood, 117(8), pp.2423-2432.
Kohrt, H.E. et al., 2014. Targeting CD137 enhances the efficacy of cetuximab. The Journal of clinical investigation, 124(6), pp.2668-2682.
Kohrt, H.E., Houot, R., Weiskopf, K., et al.,2012. Stimulation of natural killer cells with a CD137-specific antibody enhances trastuzumab efficacy in xenotransplant models of breast cancer. The Journal of clinical investigation, 122(3), pp.1066-1075.
Lee J-H, Kim H, Yao Z, Szajek L, Grasso L, Kim I and Paik C.H (2018). Tumour-Shed Antigen Affects Antibody Tumour Targeting: Comparison of Two 89Zr-Labeled Antibodies Directed against Shed or Nonshed Antigens. Contrast Media and Molecular Imaging. ID: 2461257.
Lefranc MP, Giudicelli V, Duroux P, Jabado-Michaloud J, Folch G, Aouinti S, Carillon E, Duvergey H, Houles A, Paysan-Lafosse T, Hadi-Saljoqi S, Sasorith S, Lefranc G, Kossida S. IMGT(登録商標), the international ImMunoGeneTics information system(登録商標) 25 years on. Nucleic Acids Res. 43(Database issue):D413-22 (2015).
Lefranc MP, Pommie C, Kaas Q, Duprat E, Bosc N, Guiraudou D, Jean C, Ruiz M, Da Piedade I, Rouard M, Foulquier E, Thouvenin V, Lefranc G. IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor constant domains and Ig superfamily C-like domains. Dev. Comp. Immunol. 29(3), 185-203 (2005).
Ledermann JA, Begent RH, Massof C, Kelly AM, Adam T, Bagshawe KD. A phase-I study of repeated therapy with radiolabelled antibody to carcinoembryonic antigen using intermittent or continuous administration of cyclosporin A to supress the immune response. Int. J. Cancer 47(5), 659-64 (1991).
Link A, Hepp J, Reichen C, Schildknecht P, Tosevski I, Taylor J, Juglair L, Titz A, Matzner M, Bessey R, Zitt C, Lemaillet G, Herbst J, Dawson K, Ji H, Levitsky V, Snell D, Stumpp MT, Harsrick A, von Baur E. Preclinical pharmacology of MP0310: a 4-1BB/FAP bispecific DARPin drug candidate promoting tumor-restricted T cell co-stimulation [abstract]. In: Proceedings of the Annual Meeting of the American Association for Cancer Research; 2018 Apr 14-18; Chicago (IL) Abstract nr 3752 (2018).
Liu et al. 2017. Tumor Antigen Expression-dependent Activation of the CD137 Costimulatory Pathway by Bispecific DART(登録商標) Proteins. Annual Meeting of the American Association for Cancer Research 2017, April 1-5, Washington, DC. Abstract nr 3642.
Ma J, Tang WK, Esser L, Pastan I, Xia D. (2012). Recognition of mesothelin by the therapeutic antibody MORAb-009: structural and mechanistic insights. J Biol. Chem. 287: 33123-31.
Makkouk A, Chester C, Kohrt HE. Rationale for anti-CD137 cancer immunotherapy. Eur J Cancer. 54, 112-119 (2016).
Pearson WR, Lipman DJ. Improved tools for biological sequence comparison. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85(8), 2444-8 (1988).
Reichen C, Bessey R, DePasquale C, Imobersteg S, Behe M, Blanc A, Schibli R, Link A, Juglair L, Taylor J, Schildknecht P, Hepp J, vom Baur E, Ji H, Zitt C, Levitsky V, Dawson K, Stumpp MT, Snell D, FAP-mediated tumor accumulation of a T-cell agonistic FAP/4-1BB DARPin drug candidate analyzed by SPECT/CT and quantitative biodistribution [abstract]. In: Proceedings of the Annual Meeting of the American Association for Cancer Research; 2018 Apr 14-18; Chicago (IL) Abstract nr 3029 (2018).
Rosenberg S. Development of Cancer Vaccines. ASCO Educational Book Spring: 60-62 (2000).
Sapede, C, Gauvrit A, Barbieux I, Padieu M, Cellerin L, Sagan C, Scherpereel A, Dabouis G, Gregoire M. Abberant splicing and protease involvement in mesothelin release from epithelioid mesothelioma cells. Canc. Sci 99(3): 590-594 (2008)
Schropp J, Knot A, Shah D, Koch G. Target-mediated drug disposition model for bispecific antibodies: properties, approximation and optimal dosing strategy. CPT Pharmacometrics Systems Pharmacology 2019 8: 177-187.
Segal NH, Logan TF, Hodi FS, McDermott D, Melero I, Hamid O, Schmidt H, Robert C, Chiarion-Sileni V, Ascierto PA, Maio M, Urba WJ, Gangadhar TC, Suryawanshi S, Neely J, Jure-Kunkel M, Krishnan S, Kohrt H, Sznol M, Levy R. Results from an integrated safety analysis of urelumab, an agonist anti-CD137 monoclonal antibody. Clin Cancer Res. 23(8), 1929-1936 (2017).
Simeoni M, Magni P, Cammia C, De Nicolao G, Croci V, Pesenti E, Germani M, Poggesi I, Rocchetti M. Predictive pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling of tumor growth kinetics in xenograft models after administration of anticancer agents. Cancer Res. 2004 Feb 1;64(3):1094-101.
Smith TF, Waterman MS. Identification of common molecular subsequences. J. Mol. Biol. 147(1), 195-7 (1981).
Shuford WW, Klussman K, Tritchler DD, Loo DT, Chalupny J, Siadak AW, Brown TJ, Emswiler J, Raecho H, Larsen CP, Pearson TC, Ledbetter JA, Aruffo A, Mittler RS. 4-1BB costimulatory signals preferentially induce CD8+ T cell proliferation and lead to the amplification in vivo of cytotoxic T cell responses. J Exp Med. 186(1), 47-55 (1997).
Tello, D, Goldbaum, FA, Mariuzza, RA, Ysern, X, Schwarz, FP, Poljak, RJ. Three-dimensional structure and thermodynamics of antigen binding by anti-lysozyme antibodies, Biochem Soc. Trans., 21(4), 943-6 (1993)
Wen T, Bukczynski J, Watts TH. 4-1BB ligand-mediated costimulation of human T cells induces CD4 and CD8 T cell expansion, cytokine production, and the development of cytolytic effector function. J Immunol. 168(10), 4897-906 (2002).
Wesche-Soldato DE, Chung CS, Gregory SH, Salazar-Mather TP, Ayala CA, Ayala A. CD8+ T cells promote inflammation and apoptosis in the liver after sepsis: role of Fas-FasL. Am J Pathol. 2007 Jul;171(1):87-96.
Won EY, Cha K, Byun JS, Kim DU, Shin S, Ahn B, Kim YH, Rice AJ, Walz T, Kwon BS, Cho HS. The structure of the trimer of human 4-1BB ligand is unique among members of the tumor necrosis factor superfamily. J Biol Chem.285(12), 9202-10 (2010).
Wozniak-Knopp G, Bartl S, Bauer A, Mostageer M, Woisetschlaeger M, Antes B, Ettl K, Kainer M, Weberhofer G, Wiederkum S, Himmler G, Mudde GC, Rueker F. Introducing antigen-binding sites in structural loops of immunoglobulin constant domains: Fc fragments with engineered HER2/neu-binding sites and antibody properties. Protein Eng Des Sel. 23(4), 289-97 (2010).
Wang X, Mathieu M, Brezski RJ. IgG Fc engineering to modulate antibody effector functions. Protein Cell 9(1), 63-73 (2018).
Zhang Y, Chertov O, Zhang J, Zhang J, Hassan R, Pastan I (2011). Cytotoxic activity of immunotoxin SS1P is modulated by TACE-dependent mesothelin shedding. Cancer Res 71: 5915-5922.
Claims (27)
- メソテリン(MSLN)及びCD137に結合する抗体分子であって、
(a)MSLNの相補性決定領域(CDR)ベースの抗原結合部位;及び
(b)当該抗体分子のCH3ドメインに位置するCD137抗原結合部位
を含み、
前記CDRベースの抗原結合部位が、
(i)それぞれ配列番号42、33、44、20、22、及び80[FS28-256-271];
(ii)それぞれ配列番号14、16、27、20、22及び24[FS28-024-052];
(iii)それぞれ配列番号42、33、44、20、22、及び40[FS28-256-021];
(iv)それぞれ配列番号42、33、44、20、22、及び37[FS28-256-012];
(v)それぞれ配列番号50、33、52、20、22及び40[FS28-256-023];
(vi)それぞれ配列番号42、33、44、20、22及び41[FS28-256-024];
(vii)それぞれ配列番号50、33、52、20、22及び41[FS28-256-026];
(viii)それぞれ配列番号42、33、44、20、22、及び80[FS28-256-027];
(ix)それぞれ配列番号38、33、35、20、22、及び40[FS28-256-001];
(x)それぞれ配列番号38、33、35、20、22、及び41[FS28-256-005];
(xi)それぞれ配列番号46、33、48、20、22及び37[FS28-256-014];
(xii)それぞれ配列番号50、33、52、20、22及び37[FS28-256-018];
(xiii)それぞれ配列番号31、33、35、20、22及び37[FS28-256];
(xiv)それぞれ配列番号14、16、25、20、22及び24[FS28-024-051];
(xv)それぞれ配列番号14、16、29、20、22及び24[FS28-024-053];又は
(xvi)それぞれ配列番号14、16、18、20、22及び24[FS28-024]
に記載のVH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及びVL CDR3を含み;
前記CD137抗原結合部位が、それぞれ、前記CH3ドメインのAB及びEF構造ループに位置する第1の配列及び第2の配列を含み、前記第1及び第2の配列が、それぞれ配列番号10及び11[FS22-172-003]に記載の配列を有する、
MSLN及びCD137に結合する抗体分子。 - 前記抗体分子が、
(i)それぞれ配列番号70及び76[FS28-256-271];
(ii)それぞれ配列番号58及び54[FS28-024-052];
(iii)それぞれ配列番号70及び68[FS28-256-021];
(iv)それぞれ配列番号70及び64[FS28-256-012];
(v)それぞれ配列番号74及び68[FS28-256-023];
(vi)それぞれ配列番号70及び78[FS28-256-024];
(vii)それぞれ配列番号74及び78[FS28-256-026];
(viii)それぞれ配列番号70及び76[FS28-256-027];
(ix)それぞれ配列番号66及び68[FS28-256-001];
(x)それぞれ配列番号66及び78[FS28-256-005];
(xi)それぞれ配列番号72及び64[FS28-256-014];
(xii)それぞれ配列番号74及び64[FS28-256-018];
(xiii)それぞれ配列番号62及び64[FS28-256];
(xiv)それぞれ配列番号56及び54[FS28-024-051]
(xv)それぞれ配列番号60及び54[FS28-024-053];又は
(xvi)それぞれ配列番号12及び54[FS28-024]
に記載のVHドメイン及びVLドメインを含む、請求項1に記載の抗体分子。 - 前記抗体分子が、
(i)それぞれ配列番号42、33、44、20、22、及び80に記載のVH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及びVL CDR3[FS28-256-271];及び/又は
(ii)それぞれ配列番号70及び76に記載のVHドメイン及びVLドメイン[FS28-256-271]
を含む、請求項1又は2に記載の抗体分子。 - 前記抗体分子が、
(i)それぞれ配列番号14、16、27、20、22及び24に記載のVH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及びVL CDR3[FS28-024-052];及び/又は
(ii)それぞれ配列番号58及び54に記載のVHドメイン及びVLドメイン[FS28-024-052]
を含む、請求項1又は2に記載の抗体分子。 - (i)前記第1の配列が、前記抗体分子の前記CH3ドメインの14位と17位の間に位置している;及び/又は
(ii)前記第2の配列が、前記抗体分子の前記CH3ドメインの91位と99位の間に位置しており、及び
アミノ酸残基の番号付けが、IMGT番号付けスキームに従う、請求項1から4のいずれか一項に記載の抗体分子。 - 前記抗体分子が、配列番号8に記載のCH3ドメイン配列[FS22-172-003]を含む、請求項1から5のいずれか一項に記載の抗体分子。
- 前記CH3ドメイン配列が、当該CH3ドメイン配列のC末端のすぐ隣に追加のリジン残基(K)を含む、請求項6に記載の抗体分子。
- 前記抗体分子が、抗体:
(i)それぞれ配列番号3及び84に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-271;
(ii)それぞれ配列番号102及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-052;
(iii)それぞれ配列番号125及び82に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-021;
(iv)それぞれ配列番号125及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-012;
(v)それぞれ配列番号113及び82に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-023;
(vi)それぞれ配列番号125及び83に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-024;
(vii)それぞれ配列番号133及び83に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-026;
(viii)それぞれ配列番号125及び84に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-027;
(ix)それぞれ配列番号120及び82に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-001;
(x)それぞれ配列番号120及び83に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-005;
(xi)それぞれ配列番号129及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-014;
(xii)それぞれ配列番号133及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256-018;
(xiii)それぞれ配列番号114及び116に記載のFS22-172-003-AA/FS28-256;
(xiv)それぞれ配列番号98及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-051;
(xv)それぞれ配列番号106及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024-053;又は
(xvi)それぞれ配列番号94及び85に記載のFS22-172-003-AA/FS28-024
の重鎖及び軽鎖を含む、請求項1から7のいずれか一項に記載の抗体分子。 - 前記抗体分子が、それぞれ配列番号3及び84[FS22-172-003-AA/FS28-256-271]に記載の重鎖及び軽鎖を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の抗体分子。
- 前記抗体分子が、それぞれ配列番号3及び84[FS22-172-003-AA/FS28-256-271]に記載の重鎖及び軽鎖を含み、
前記重鎖配列におけるCH3ドメインが、当該CH3ドメイン配列のC末端のすぐ隣に追加のリジン残基(K)を含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の抗体分子。 - それぞれ配列番号3及び84[FS22-172-003-AA/FS28-256-271]に記載の重鎖及び軽鎖を含む、メソテリン(MSLN)及びCD137に結合する抗体分子。
- それぞれ配列番号3及び84[FS22-172-003-AA/FS28-256-271]に記載の重鎖及び軽鎖を含み、
前記重鎖配列におけるCH3ドメインが、当該CH3ドメイン配列のC末端のすぐ隣に追加のリジン残基(K)を含む、メソテリン(MSLN)及びCD137に結合する抗体分子。 - 当該抗体分子が、それぞれ配列番号102及び85[FS22-172-003-AA/FS28-024-052]に記載の重鎖及び軽鎖を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の抗体分子。
- 当該抗体分子が、それぞれ配列番号102及び85[FS22-172-003-AA/FS28-024-052]に記載の重鎖及び軽鎖を含み、
前記重鎖配列におけるCH3ドメインが、当該CH3ドメイン配列のC末端のすぐ隣に追加のリジン残基(K)を含む、請求項1から8、及び13のいずれか一項に記載の抗体分子。 - それぞれ配列番号102及び85[FS22-172-003-AA/FS28-024-052]に記載の重鎖及び軽鎖を含む、メソテリン(MSLN)及びCD137に結合する抗体分子。
- それぞれ配列番号102及び85[FS22-172-003-AA/FS28-024-052]に記載の重鎖及び軽鎖を含み、
前記重鎖配列におけるCH3ドメインが、当該CH3ドメイン配列のC末端のすぐ隣に追加のリジン残基(K)を含む、メソテリン(MSLN)及びCD137に結合する抗体分子。 - 前記抗体分子が、Fcγ受容体に結合しない、請求項1から16のいずれか一項に記載の抗体分子。
- 前記抗体分子が、可溶性MSLNより高い親和性で固定化されたMSLNに結合する、請求項1から17のいずれか一項に記載の抗体分子。
- 前記抗体分子が、腫瘍細胞表面に結合したMSLNの存在下で免疫細胞上のCD137を活性化することができる、請求項1から18のいずれか一項に記載の抗体分子。
- 免疫細胞上のCD137への、及び腫瘍細胞表面に結合したMSLNへの前記抗体分子の結合が、前記免疫細胞上のCD137のクラスター化を引き起こす、請求項1から19のいずれか一項に記載の抗体分子。
- 請求項1から20のいずれか一項に記載の抗体分子をコードする、1つ又は複数の核酸分子。
- 請求項21に記載の1つ又は複数の核酸分子を含む、1つ又は複数のベクター。
- 請求項21に記載の1つ又は複数の核酸分子、又は請求項22に記載の1つ又は複数のベクターを含む、組換え宿主細胞。
- 前記抗体分子の産生条件下で請求項23の組換え宿主細胞を培養することを含む、請求項1から20のいずれか一項に記載の抗体分子を産生する方法。
- 請求項1から20のいずれか一項に記載の抗体分子と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
- 請求項1から20のいずれか一項に記載の抗体分子を含む、個体における癌の処置のための医薬組成物。
- さらに、第2の治療剤を含む、請求項26に記載の医薬組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023169048A JP2023178323A (ja) | 2018-07-12 | 2023-09-29 | メソテリン及びcd137結合分子 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1811450.4 | 2018-07-12 | ||
GBGB1811450.4A GB201811450D0 (en) | 2018-07-12 | 2018-07-12 | Mesothelin and CD137 binding molecules |
PCT/EP2019/068817 WO2020011976A1 (en) | 2018-07-12 | 2019-07-12 | Mesothelin and cd137 binding molecules |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023169048A Division JP2023178323A (ja) | 2018-07-12 | 2023-09-29 | メソテリン及びcd137結合分子 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021524269A JP2021524269A (ja) | 2021-09-13 |
JPWO2020011976A5 JPWO2020011976A5 (ja) | 2022-07-20 |
JP7360441B2 true JP7360441B2 (ja) | 2023-10-12 |
Family
ID=63273224
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021500386A Active JP7360441B2 (ja) | 2018-07-12 | 2019-07-12 | メソテリン及びcd137結合分子 |
JP2023169048A Pending JP2023178323A (ja) | 2018-07-12 | 2023-09-29 | メソテリン及びcd137結合分子 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023169048A Pending JP2023178323A (ja) | 2018-07-12 | 2023-09-29 | メソテリン及びcd137結合分子 |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210309753A1 (ja) |
EP (1) | EP3820894A1 (ja) |
JP (2) | JP7360441B2 (ja) |
KR (1) | KR20210030925A (ja) |
CN (1) | CN112437776A (ja) |
AR (1) | AR115769A1 (ja) |
AU (1) | AU2019303081A1 (ja) |
BR (1) | BR112021000396A2 (ja) |
CA (1) | CA3103173A1 (ja) |
GB (1) | GB201811450D0 (ja) |
IL (1) | IL280007A (ja) |
MX (1) | MX2021000397A (ja) |
SG (1) | SG11202011960XA (ja) |
WO (1) | WO2020011976A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201612520D0 (en) | 2016-07-19 | 2016-08-31 | F-Star Beta Ltd | Binding molecules |
AU2018387741A1 (en) | 2017-12-19 | 2020-07-23 | F-Star Therapeutics Limited | FC binding fragments comprising a PD-L1 antigen-binding site |
CN112585165A (zh) | 2018-04-25 | 2021-03-30 | 普罗米修斯生物科学公司 | 优化的抗tl1a抗体 |
CN114901311A (zh) | 2019-10-24 | 2022-08-12 | 普罗米修斯生物科学公司 | Tnf样配体1a(tl1a)的人源化抗体及其用途 |
WO2024039672A2 (en) * | 2022-08-15 | 2024-02-22 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antibodies against msln and methods of use thereof |
WO2024042105A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Merck Patent Gmbh | Cancer treatment comprising an anti-msln/cd137 antibody and a chemotherapeutic |
WO2024042104A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Merck Patent Gmbh | Combination cancer treatment comprising an anti-msln/cd137 antibody and pd-1/pd-l1 inhibitor |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017205738A1 (en) | 2016-05-27 | 2017-11-30 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Bispecific binding proteins binding an immunomodulatory protein and a tumor antigen |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61134325A (ja) | 1984-12-04 | 1986-06-21 | Teijin Ltd | ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法 |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
ATE401348T1 (de) | 1999-05-27 | 2008-08-15 | Us Gov Health & Human Serv | Immunokonjugate mit hoher bindungsaffinität |
US7288638B2 (en) | 2003-10-10 | 2007-10-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Fully human antibodies against human 4-1BB |
ATE425186T1 (de) | 2005-01-05 | 2009-03-15 | F Star Biotech Forsch & Entw | Synthetische immunoglobulindomänen mit in regionen des moleküls, die sich von den die komplementarität bestimmenden bereichen unterscheiden, modifizierten bindeeigenschaften |
US9023351B2 (en) | 2007-11-26 | 2015-05-05 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Anti-mesothelin antibodies and uses thereof |
EP2113255A1 (en) | 2008-05-02 | 2009-11-04 | f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. | Cytotoxic immunoglobulin |
CA2885761C (en) * | 2012-09-27 | 2021-09-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Mesothelin antibodies and methods for eliciting potent antitumor activity |
KR101782487B1 (ko) * | 2015-09-24 | 2017-09-27 | 재단법인 목암생명과학연구소 | 신규 항-메소텔린 항체 및 이를 포함하는 조성물 |
MX2018012897A (es) * | 2016-04-22 | 2019-01-17 | Alligator Bioscience Ab | Nuevos polipeptidos biespecificos contra cd137. |
CN107523546A (zh) * | 2016-06-20 | 2017-12-29 | 上海细胞治疗研究院 | 一种高效稳定表达抗体的nk细胞及其用途 |
-
2018
- 2018-07-12 GB GBGB1811450.4A patent/GB201811450D0/en not_active Ceased
-
2019
- 2019-07-12 KR KR1020217000265A patent/KR20210030925A/ko unknown
- 2019-07-12 AU AU2019303081A patent/AU2019303081A1/en active Pending
- 2019-07-12 AR ARP190101973A patent/AR115769A1/es unknown
- 2019-07-12 SG SG11202011960XA patent/SG11202011960XA/en unknown
- 2019-07-12 MX MX2021000397A patent/MX2021000397A/es unknown
- 2019-07-12 BR BR112021000396-7A patent/BR112021000396A2/pt unknown
- 2019-07-12 JP JP2021500386A patent/JP7360441B2/ja active Active
- 2019-07-12 US US17/259,634 patent/US20210309753A1/en active Pending
- 2019-07-12 CA CA3103173A patent/CA3103173A1/en active Pending
- 2019-07-12 EP EP19742323.9A patent/EP3820894A1/en active Pending
- 2019-07-12 WO PCT/EP2019/068817 patent/WO2020011976A1/en active Application Filing
- 2019-07-12 CN CN201980046873.7A patent/CN112437776A/zh active Pending
-
2021
- 2021-01-07 IL IL280007A patent/IL280007A/en unknown
-
2023
- 2023-09-29 JP JP2023169048A patent/JP2023178323A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017205738A1 (en) | 2016-05-27 | 2017-11-30 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Bispecific binding proteins binding an immunomodulatory protein and a tumor antigen |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GB201811450D0 (en) | 2018-08-29 |
TW202012448A (zh) | 2020-04-01 |
AU2019303081A1 (en) | 2021-03-11 |
EP3820894A1 (en) | 2021-05-19 |
US20210309753A1 (en) | 2021-10-07 |
WO2020011976A1 (en) | 2020-01-16 |
IL280007A (en) | 2021-03-01 |
AR115769A1 (es) | 2021-02-24 |
CN112437776A (zh) | 2021-03-02 |
JP2023178323A (ja) | 2023-12-14 |
SG11202011960XA (en) | 2020-12-30 |
CA3103173A1 (en) | 2020-01-16 |
JP2021524269A (ja) | 2021-09-13 |
MX2021000397A (es) | 2021-05-27 |
KR20210030925A (ko) | 2021-03-18 |
BR112021000396A2 (pt) | 2021-04-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7360441B2 (ja) | メソテリン及びcd137結合分子 | |
JP7360440B2 (ja) | Pd-l1及びcd137に結合する抗体分子 | |
JP7431211B2 (ja) | 抗メソテリン抗体 | |
JP7397055B2 (ja) | Cd137及びox40に結合する抗体分子 | |
JP7410115B2 (ja) | CD137抗原結合部位を含むFc結合断片 | |
RU2815066C2 (ru) | Молекулы, связывающие мезотелин и cd137 | |
JP2024059643A (ja) | 抗メソテリン抗体 | |
IL305181A (en) | Cell therapy compositions and methods for modulating TGF-B signaling |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20220221 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220324 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20220711 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220711 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230517 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20230519 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230807 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230901 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230929 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7360441 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |