TW202012448A - 間皮素及cd137結合分子 - Google Patents

間皮素及cd137結合分子 Download PDF

Info

Publication number
TW202012448A
TW202012448A TW108124775A TW108124775A TW202012448A TW 202012448 A TW202012448 A TW 202012448A TW 108124775 A TW108124775 A TW 108124775A TW 108124775 A TW108124775 A TW 108124775A TW 202012448 A TW202012448 A TW 202012448A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
msln
sequence identification
identification numbers
antibody
antibody molecule
Prior art date
Application number
TW108124775A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI839365B (zh
Inventor
約瑟 蒙歐茲歐拉雅
米賀瑞班 吐納
瑞米 費庭
克萊爾 瑞德
法蘭西斯卡 沃勒湯
奈爾 布瑞威斯
Original Assignee
英商Ｆ星德爾塔有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 英商Ｆ星德爾塔有限公司 filed Critical 英商Ｆ星德爾塔有限公司
Publication of TW202012448A publication Critical patent/TW202012448A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI839365B publication Critical patent/TWI839365B/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

本發明係有關於一種會與間皮素(MSLN)及CD137二者結合的抗體分子。該抗體分子包含一種用於MSLN之CDR-為基的結合位址，及一種座落於該抗體分子的一恆定域之CD137抗原結合位址。該抗體分子可供應用於治療，例如癌症。

Description

間皮素及CD137結合分子
發明領域 本發明係有關於一種會與間皮素(MSLN)及CD137二者結合的抗體分子。該抗體分子包含一種用於MSLN之CDR-為基的結合位址，及一種座落於該抗體分子的一恆定域之CD137抗原結合位址。該抗體分子可供應用於治療，例如癌症。
發明背景 細胞訊息傳導為所有生物生命中不可或缺的一部分且通常涉及細胞表面受體與可溶性或表面表現的配體之交互作用。此交互作用導致受體、配體或二者之變化。舉例而言，配體結合能誘發受體的構形變化而造成其等簇集在一起成為二聚體或寡聚體。此簇集效應接而導致細胞內訊息傳導途徑活化。許多種受體係以此方式活化，包括腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)的成員，例如CD137。
CD137(4-1BB；TNFRSF9)是一種腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)之共刺激分子。眾所周知CD8+ T細胞上的CD137於活化後上調，且亦能表現於活化的CD4+ 輔助T細胞、B細胞、調節性T細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞及樹突細胞(DCs)上(Bartkowiak & Curran, 2015)。CD137於提升T細胞之細胞毒性的主要功能角色首次於1997(Shuford等人 ，1997)乙文描述，且不久以後抗CD137 mAbs被提議作為抗癌療法。
CD137為一種跨膜蛋白其帶有四個細胞外富含半胱胺酸域，稱為CRD1-4，及負責CD137訊息傳導的細胞質域。CD137的配體是CD137L。雖然CD137/CD137L錯合物(CD137/CD137L complex)無結晶結構存在，但據預測CD137會與CD137L形成三聚體/三聚體錯合物(CD137/CD137L complex) (Won等人 ，2010)。CD137L的銜接導致受體三聚體形成及後續的多個受體三聚體之簇集，並導致CD137訊息傳導級聯(cascade)活化。此訊息傳導級聯提供存活的訊息給T細胞對抗活化誘發的細胞死亡(Hurtado等人 ，1997)藉此於支撑有效的T細胞免疫反應及產生免疫性記憶上扮演關鍵性的角色(Bartkowiak & Curran, 2015)。
由於CD137在腫瘤免疫學背後的角色有明確的生物學基礎，一般都很好理解其於白血球生物學的角色。活化的T細胞表現CD137且已經使用作為辨識抗原專一性CD4+ 及CD8+ T細胞的指標。典型地，CD8+ T細胞上CD137的表現比CD4+ T細胞更高(Wen等人 ，2002)。就CD8+ T細胞來說，經由生產干擾素γ及介白素2而增殖、存活及細胞毒性效應子功能已被歸因於CD137交聯。CD137交聯亦有助於記憶CD8+ T細胞之分化及維持。就一些CD4+ T細胞亞群來說，CD137交聯同樣會造成增殖及活化並導致釋放細胞介素如介白素2(Makkouk等人 ，2016)。
由於活體外 及活體內 經由促效抗CD137單株抗體所致的CD137刺激，已經證明會提升經由腫瘤靶定mAbs之自然殺手(NK)媒介的抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC) (Bartkowiak & Curran, 2015)。NK細胞經由其等之Fc受體與抗體結合並且，取決於抗體同型，此能夠導致NK細胞活化、引發細胞毒性顆粒釋放及標靶細胞溶解(Kohrt等人 ，2012)。Kohrt及同事證明抗CD137促效劑抗體會透過提升ADCC而提高治療抗體利妥昔單抗(rituximab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)及西妥昔單抗(cetuximab)之抗腫瘤活性，當隨其組合用劑時(Kohrt等人 ，2014；Kohrt等人 ，2011)。此外，人類NK細胞在遭遇細胞結合的抗體後經由其等之FcγR會上調CD137的表現。隨後以抗CD137抗體刺激此等NK細胞已經證明會提升其等對抗腫瘤細胞之ADCC(Chester等人 ，2015；Chester等人 ，2016)。
B淋巴細胞活化時亦表現CD137。CD137配體與CD137結合會提升B細胞增殖、存活及細胞介素生產。正常或惡性的人類B細胞於CD40結合其配體CD154(CD40配體)後亦誘發CD137表現，設若其後活化CD137會造成B細胞存活提升。
也已經證明CD137表現於腫瘤浸潤型淋巴細胞(TILs)之腫瘤反應性亞群上。已經證明CD137單方療法於數種臨床前免疫性腫瘤模式例如MC38、CT26及B細胞淋巴瘤上是有效的。CD137銜接與其他抗癌劑例如化學療法、細胞介素與其他查核點調節劑之組合已經證明會造成強化已確立的腫瘤生長減少。具體而言，抗CD137抗體與抗CD20、抗EGFR及抗HER-2抗體之組合已經證明於各種臨床前異種移植模式內會對腫瘤生長減少造成增效性效應(Kohrt等人 ，2014；Kohrt等人 ，2012；Kohrt等人 ，2011)。
偶合腫瘤靶定的單株抗體療法與抗CD137促效劑抗體治療於淋巴瘤(Kohrt等人 ，2011)、頭頸部癌症、結腸直腸癌(Kohrt等人 ，2014)及乳癌(Kohrt等人 ，2012)之臨床前模式上已顯示出有希望的結果。然而，臨床開發已顯示由於劑量限制性高度肝發炎與CD137促效劑抗體治療相關的。烏瑞魯單抗(Urelumab) (BMS-663513)，非配體阻斷性人類IgG4同型抗體(Chester等人 ，2018)為首個進入臨床試驗的抗CD137抗體，但是此等試驗於觀察到顯著的、達目標、劑量依賴性肝毒性之後中止(Chester等人 ，2018)。最近，重新開始實性癌症的烏瑞魯單抗治療之臨床試驗，該試驗以烏瑞魯單抗治療組合放射療法(NCT03431948)或其他的治療抗體，例如利妥昔單抗(rituximab) (NCT01775631)、西妥昔單抗(cetuximab)(NCT02110082)、抗PD-1抗體納武單抗(nivolumab)(NCT02253992、NCT02534506、NCT02845323)，以及納武單抗及抗LAG-3抗體BMS986016(NCT02658981)之組合。然而，為了降低與烏瑞魯單抗治療相關的肝毒性，此等試驗中的烏瑞魯單抗用劑必須受到限制且功效結果是令人失望的(Chester等人 ，2018)。
輝瑞的抗CD137抗體烏托米單抗(utomilumab) (PF-05082566)，一種人類IgG2同型抗體，於晚期的癌症之第I期臨床試驗、於0.03 mg/kg高達10 mg/kg劑量範圍內觀察到沒有劑量限制性毒性(DLT) (Chester等人 之2016；Segal等人 ，2018)。然而，此抗體於患實性腫瘤患者的總客觀反應率(overall objective response rate)只有3.8%，可能表示烏托米單抗的效能及臨床功效比烏瑞魯單抗更弱，但具有更有利的安全性剖析(Chester等人 ，2018；Segal等人 ，2018)。已經測試烏托米單抗組合以放射療法(NCT03217747)或化學療法，以及組合以其他抗體療法，包括抗PD-L1抗體阿維魯單抗(avelumab)(NCT02554812)及抗PD-1抗體派姆單抗(pembrolizumab) (NCT02179918)，以評估不同治療組合的安全性、可耐受性、劑量限制性毒性(DLTs)、最大耐受劑量(MTD)及功效。此等試驗正在進行中且早期結果顯示烏托米單抗及派姆單抗組合於高達5 mg/kg的劑量都沒有DLTs以及患者反應率為26%。烏托米單抗連同阿維魯單抗以及其他免疫腫瘤學療法之三重組合亦受測試(NCT02554812，NCT03217747)。
健康個體的胸膜、腹膜及心包內襯裏的間皮素細胞上表現的MSLN位準相對較低(Hassan等人 ，2005)，但是於數種不同的癌症內表現很高，包括間皮瘤、鱗狀細胞癌、胰臟癌、肺、胃、乳房、內膜及卵巢癌。間皮素的正常生理功能是未知的。於癌症的情況中，高表現位準的MSLN與卵巢癌、膽管癌、肺腺癌及三陰性乳癌的預後不良相關。MSLN於正常細胞上有限的表現相對於腫瘤細胞上的高表現使其成為使用單株抗體之有吸引力的治療目標(Hassan等人 ，2016)。
MSLN係表現為69-kDa前驅蛋白(628個胺基酸)。前驅蛋白繼而由內切蛋白酶弗林(furin)裂解而釋放分泌的N端區域稱為巨核細胞-增效因子(MPF)，而40-kDa蛋白成熟MSLN仍然經由多醣磷脂肌醇(GPI)鏈接子與細胞膜附接。人類MSLN與鼠類及食蟹獼猴之MSLN異種同源物分別共享60%及87%的胺基酸同一性。
膜結合的、成熟MSLN，經過藉由創造缺少膜錨定序列的變異體之選擇式剪接、或藉由腫瘤壞死因子α-轉化酶(TACE)之蛋白酶裂解，而從細胞脫落(Sapede等人 ，2008；Zhang等人， 2011)。患者血清及腫瘤基質內發現可溶性脫落的MSLN，包括惡性的間皮瘤、卵巢癌或高度轉移的癌症。US FDA已批准測量間皮瘤患者的血液及滲出液之可溶性MSLN位準用於監控患者對治療的反應及進展(progression) (Hollevoet等人 ，2012, Creany等人 ，2015)。
已經開發數種靶定MSLN之抗體為基的療法且於臨床試驗測試，主要在間皮瘤、胰臟及非小細胞肺癌方面(Hassan等人 ，2016)。使用的策略包括通過使用有抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)活性的抗MSLN抗體，例如阿馬替單抗(amatuximab)，以及使用抗體藥物複合物(antibody drug conjugates) (ADCs)，例如SS1P-PE38及阿尼替單抗-瑞坦息(anetumab-ravtansine)，其包含與毒素複合的抗體或抗體片段，直接殺死腫瘤細胞。
靶定MSLN之未複合抗體已顯現出有利的安全性剖析但是其等之治療功效有限，而ADCs已經顯現出於抗腫瘤活性更有效力但與劑量限制性毒性相關。數種意圖要銜接免疫系統的雙專一性分子亦在開發中，包括靶定MSLN以及共刺激蛋白CD40之ABBV-428、MSLN-CD3雙專一性T細胞銜接器(BITE)，及MSLN-CD47雙專一性分子。
發明概要 如以上的背景章節所述，因為劑量限制性高度肝發炎(烏瑞魯單抗)或低的臨床功效(烏托米單抗)都與治療有相關，所以CD137促效劑分子之臨床發展一直受阻礙。
本發明人了解到本技藝對於展現出高活性但與劑量限制性肝發炎無關的CD137促效劑分子仍然有需要。此等分子能以最佳化該分子的效能及功效的劑量投予給個體，以及舉例而言，能用來治療癌症作為免疫治療藥物。
不希望受理論束縛，但一般認為肝內存在的T細胞有可能被抗CD137促效劑分子活化，導致肝發炎。已經證明CD8+ T細胞於敗血症/病毒感染之後會促進肝發炎及細胞凋亡(Wesche-Soldato等人 ，2007)。然而，此效應不是CD137專一性的。小鼠之抗CD137促效劑抗體療法已經證明會造成CD137-依賴性T細胞浸潤至肝臟內(Dubrot J等人 ，2010)。此等研究的結果，合起來表示有高活性之抗CD137促效劑抗體，例如烏瑞魯單抗，可能會造成活化的CD8+ T細胞浸潤至肝臟內，藉此導致肝發炎。
一般認為CD137配體與CD137起始的連接發起了一連串事件導致受體三聚合作用，接著受體簇集，活化及後續起始有效力的抗腫瘤免疫細胞活性。對於有效實行CD137活化的治療劑而言，因而預期需要以模擬三聚配體橋接的方式使數種受體單體橋接在一起。
本發明人已經單離出抗體分子，其包含一種用於MSLN之互補性決定區域(CDR)-為基的抗原結合位址及一種座落於該抗體分子的一恆定域之CD137抗原結合位址。本發明人已證明此等抗體分子當於 活體外 結合CD137及MSLN二者時能誘發CD137的簇集及訊息傳導。
不希望受理論束縛，但一般認為該抗體分子經由其等之CDR-為基的結合位址結合MSLN，導致腫瘤細胞表面上的數種抗體分子交聯，接著該抗體分子之CD137抗原結合位址與免疫細胞，例如腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)表面上的CD137結合，而導致CD137之簇集及活化，以及從而免疫活化。活化的免疫細胞繼而能作用於腫瘤上，導致腫瘤免疫療法。
一般認為腫瘤細胞表面存在的MSLN之濃度會影響CD137致效作用的位準。具體而言，一般認為較高濃度的MSLN導致抗體分子橫跨細胞表面的結合及交聯增高且因而CD137致效作用增高。
本發明之抗體分子的CD137促效劑活性係依賴該抗體分子同時結合MSLN。該抗體分子之CD137活化作用因而預料會受限於腫瘤微環境。本發明之抗體分子因而於本文亦稱為“有條件的促效劑”。在這種背景下，應該注意到的是該抗體分子之有條件的促效劑活性並不是該包含一CD137抗原結合位址於其等之恆定域內的抗體之內在特徵。相反地，於本發明人進行的篩選計劃期間單離的許多分子與CD137結合但針對CD137簇集及活化不需要交聯作用，或者於缺少交聯作用的情況下誘發的CD137簇集及活化有限。由於本發明的抗體分子之有條件的促效劑活性定位在腫瘤微環境內，所以不預期此等分子會造成肝發炎。
對於TNF受體例如CD137專一性的慣用抗體典型沒有或只有非常温和的內在促效劑活性，並且需要使用外部交聯劑例如蛋白A或G或二級抗體進行抗體-TNFRSF成員錯合物(antibody-TNFRSF member complexes)的二級交聯，或結合抗體與質膜定位的Fcγ受體，俾以誘發更高位準的TNF受體成員之簇集及活化(Wajant, 2015)。正常的二價抗體能最大程度地交聯二個單體TNF受體—該單體TNF受體不足以活化TNF受體—，此事實能解釋TNF受體專一性抗體在缺乏交聯的情况下之促效劑活性位準很低或缺少促效劑活性。因而，關於活體內 功效，一種靶定CD137之單專一性抗體有賴於表現Fcγ受體的細胞存在於表現CD137的T細胞的附近來完成CD137專一性抗體之交聯作用以及隨後的CD137受體之簇集及活化。然而，一般認為Fcγ受體媒介的交聯作用效率很低。此外，整個身體都存在表現Fcγ受體的細胞且因而抗體交聯及活化表現CD137的免疫細胞不被侷限於特定的位置例如腫瘤微環境，舉例而言。此外，此CD137抗體的同型必須要選擇以媒介有效的結合Fcγ受體用於交聯。然而，這樣會導致抗體引發Fcγ受體媒介的效應子功能，例如ADCC，藉此消除該抗體意圖要活化的免疫細胞。
相比之下，本發明的抗體分子能於MSLN存在之下有條件地活化CD137，而不需要例如慣用的抗體分子要求的Fcγ受體交聯作用。此外，本發明的抗體分子通過結合MSLN之交聯作用預期比Fcγ受體媒介的交聯作用效率更高。針對廢除Fcγ受體結合的突變作用為本技藝已知的且較佳含括於本發明的抗體分子之內。因而，在沒有MSLN的情況下，本發明的抗體分子不會展現出CD137促效劑活性且因而不預期會誘發肝發炎。
本發明人已進一步證明如以上詳述的包含MSLN及CD137抗原結合位址之抗體分子—其已經修飾以降低或廢除與一個或多個Fcγ受體的結合—能抑止活體內 小鼠腫瘤模式的腫瘤生長。因這些抗體分子具有廢除或降低的ADCC活性，所以一般預期該抗體分子係藉由活化表現CD137的T細胞來抑止腫瘤生長。
該抗體分子已證實與二聚體CD137結合的親和力比單體CD137更高。
如本文所述，‘親和力’可指以KD 來測量之抗體分子與其同源抗原之間結合交互作用的強度。在抗體分子能與一抗原形成多重結合交互作用的情況下(例如在抗體分子能與抗原二價地結合且選擇性地，抗原為二聚體的情況下)，以KD 來測量親和力可能也會受總結合性(avidity)影響，此對熟悉此藝者來說是顯而易見的，因此總結合性係指抗體-抗原錯合物(antibody-antigen complex)之整體強度。
T細胞於活化時會上調CD137的表現。不希望受理論束縛，但認為由於活化的T細胞上CD137的高表現，CD137於此等細胞表面上會呈二聚體、三聚體及更高階的多聚體形式。相比之下，初始的免疫細胞，例如初始的T細胞，表現低或微不足道的CD137位準於其等之細胞表面上並且任何存在的CD137因而可能是呈單體形式。因而預期以高親和力結合CD137而非以高親和力結合單體CD137之抗體分子，會優先結合活化的免疫細胞，例如活化的T細胞，而不是舉例而言，肝臟內存在的初始的免疫細胞。
此外，本發明的抗體分子已證實與固定的MSLN (immobilised MSLN)結合的親和力比在溶解狀態中(in solution)的MSLN更高。特別地，一般認為本發明的抗體分子以高總結合性結合MSLN且因而在該抗體能結合二個MSLN分子例如多重複本的抗原固定於一表面上的情況中，其與MSLN之結合比起與呈單體形式的MSLN，如在溶解狀態中MSLN預期的那樣，之結合更強大。不希望受理論束縛，但因而認為本發明的抗體分子由於該抗體分子對單體MSLN的親和力很低所以於活體內 將不會與在溶解狀態中脫落的MSLN保持結合，因而不會很快地從腫瘤位置清除，因此藉由結合腫瘤細胞表面上的MSLN將會有更長的時間來發揮其等之治療效應。
本發明的抗體分子係與MSLN上不同的表位/區域結合。從一些抗體分子能阻斷配體MUC16與MSLN之結合而其他抗體分子則沒有的事實，可以看出這一點。
已證明本發明的一些抗體分子對MSLN具有與CD137相似或更高的親和力。一般認為此點對於使抗體分子定位於表現MSLN的腫瘤是有利的。抗體分子與MSLN結合預期會導致抗體分子交聯，與免疫細胞表面上表現的CD137結合，接著CD137簇集及活化，最終導致免疫細胞活化。
亦已證明本發明的抗體分子能以高親和力與人類及食蟹獼猴MSLN以及人類及食蟹獼猴CD137二者結合。此交叉反應性是有利的，因其允許於臨床前開發期間在食蟹獼猴執行抗體分子的用劑及安全性測試。
小鼠同基因腫瘤模式之活體內 研究已證明，與同型對照抗體或雙專一性抗體分子之組成部份遞輸為單方療法或組合療法相比，含有一用於人類MSLN之Fab結合位址及小鼠CD137結合位址於CH3域內的抗體分子具有較大的抗腫瘤功效(參見實施例13 )。該等抗體分子透過展現明顯的降低腫瘤生長及存活利益以及能於表現不同位準的MSLN之腫瘤內刺激抗腫瘤反應，來顯示出有利的特徵。於此等分子之治療後亦觀察到劑量依賴式抗腫瘤反應。總的來說，該等抗體與對照分子相比，於降低腫瘤生長及增加動物的存活方面顯示出活體內 有利的特徵。
而且，以該等抗體分子治療後觀察到沒有肝臟的肝毒性(liver hepatotoxicity)。此是有利的，因其他的抗CD137促效抗體之治療已經於文獻中證明會導致肝毒性。機轉研究證明該等抗體分子刺激腫瘤微環境內的T細胞活化，而對照CD137促效劑於腫瘤微環境外部刺激更強大的T細胞活化，進一步支持此有利的特徵。
本發明人鑑定出的抗體分子另外有利的特徵是該抗體結構自身內含有MSLN及CD137二者的抗原結合位址。特別地，該抗體分子不需要經由鏈接子或其他構件來融合其他蛋白與該抗體分子而導致產生能二價結合其之二種標靶的分子。這具有許多優點。特別地，本發明人鑑定出的抗體分子能用生產標準抗體使用的方法相似的該等方法來生產，因其等不含任何額外的融合部分。該結構也預料會導致抗體穩定性改良，因鏈接子可能隨著時間降解，造成非均質的抗體分子族群。族群中只有融合一種蛋白的該等抗體可能無法優先結合細胞結合的MSLN或由於結合CD137及MSLN二者而交聯以經由CD137來簇集及訊息傳導。鏈接子之裂解/降解可在治療劑投予給個體之前或投予給個體之後發生(例如通過酵素裂解或個體之活體內 pH)，藉此導致其於個體體內循環時的效用減少。本發明人鑑定出的抗體分子內沒有鏈接子時，預料抗體分子在投予前或後會保留相同數目的結合位址。此外，本發明人鑑定出的抗體分子的結構從分子免疫原性(immunogenicity)的角度來看也是較偏好的，因該分子投予給個體時導入融合蛋白或鏈接子或二者可能誘發免疫原性，會導致治療效用降低。 因而，本發明提供：
[1] 一種會與間皮素(MSLN)及CD137結合的抗體分子，其包含 (a) 一種用於MSLN之互補性決定區域(CDR)-為基的抗原結合位址；及 (b) 一種座落於該抗體分子的一CH3域之CD137抗原結合位址； 其中該CDR-為基的抗原結合位址包含下列列出的CDRs 1-6： (i)分別為 序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 80 [FS28-256-271] ； (ii) 分別為序列辨識編號14 、16 、27 、20 、22 及24 [FS28-024-052] ； (iii) 分別為序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 40 [FS28-256-021] ； (iv) 分別為序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 37 [FS28-256-012] ； (v) 分別為序列辨識編號50 、 33 、52 、 20 、 22 及 40 [FS28-256-023] ； (vi) 分別為序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 41 [FS28-256-024] ； (vii) 分別為序列辨識編號50 、 33 、52 、 20 、 22 及 41 [FS28-256-026] ； (viii) 分別為序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 80 [FS28-256-027] ； (ix) 分別為序列辨識編號38 、 33 、35 、 20 、 22 及 40 [FS28-256-001] ； (x) 分別為序列辨識編號38 、 33 、35 、 20 、 22 及 41 [FS28-256-005] ； (xi) 分別為序列辨識編號46 、 33 、48 、 20 、 22 及 37 [FS28-256-014] ； (xii) 分別為序列辨識編號50 、 33 、52 、 20 、 22 及 37 [FS28-256-018] ； (xiii) 分別為序列辨識編號31 、 33 、35 、 20 、 22 及 37 [FS28-256] ； (xiv) 分別為序列辨識編號14 、16 、25 、20 、22 及24 [FS28-024-051] ； (xv) 分別為序列辨識編號14 、16 、29 、20 、22 及24 [FS28-024-053] ； 或 (xvi) 分別為序列辨識編號14 、16 、18 、20 、22 及24 [FS28-024] ； 其中該CDR序列係根據ImMunoGeneTics(IMGT)編號方式來定義；及 其中該CD137抗原結合位址包含一第一序列及一第二序列分別座落於該CH3域的AB及EF結構環，其中該第一及第二序列具有序列辨識編號10 及11 內分別列出的序列[FS22-172-003] 。
[2] 一種會與間皮素(MSLN)及CD137結合的抗體分子，其包含 (a)一用於MSLN之互補性決定區域(CDR)-為基的抗原結合位址；及 (b) 一種座落於該抗體分子的一CH3域之CD137抗原結合位址； 其中該CDR-為基的抗原結合位址包含下列列出的CDRs 1-6： (i)分別為 序列辨識編號43 、 5 、 45 、 21 、 23 及 80 [FS28-256-271] ； (ii) 分別為序列辨識編號15 、17 、28 、 21 、 23 及 24 [FS28-024-052] ； (iii) 分別為序列辨識編號43 、34 、 45 、 21 、 23 及 40 [FS28-256-021] ； (iv) 分別為序列辨識編號43 、34 、 45 、 21 、 23 及 37 [FS28-256-012] ； (v) 分別為序列辨識編號51 、34 、 53 、 21 、 23 及 40 [FS28-256-023] ； (vi) 分別為序列辨識編號43 、34 、 45 、 21 、 23 及 41 [FS28-256-024] ； (vii) 分別為序列辨識編號51 、34 、 53 、 21 、 23 及 41 [FS28-256-026] ； (viii) 分別為序列辨識編號43 、34 、 45 、 21 、 23 及 80 [FS28-256-027] ； (ix) 分別為序列辨識編號39 、34 、 36 、 21 、 23 及 40 [FS28-256-001] ； (x) 分別為序列辨識編號39 、34 、 36 、 21 、 23 及 41 [FS28-256-005] ； (xi) 分別為序列辨識編號47 、34 、 49 、 21 、 23 及 37 [FS28-256-014] ； (xii) 分別為序列辨識編號51 、34 、 53 、 21 、 23 及 37 [FS28-256-018] ； (xiii) 分別為序列辨識編號32 、34 、36 、 21 、 23 及 37 [FS28-256] ； (xiv) 分別為序列辨識編號15 、17 、26 、 21 、 23 及 24 [FS28-024-051] ； (xv) 分別為序列辨識編號15 、17 、30 、 21 、 23 及 24 [FS28-024-053] ；或 (xvi) 分別為序列辨識編號15 、17 、19 、 21 、 23 及 24 [FS28-024] ； 其中該CDR序列係根據Kabat來定義；及 其中該CD137抗原結合位址包含一第一序列及一第二序列分別座落於該CH3域的AB及EF結構環，其中該第一及第二序列具有序列辨識編號10 及11 內分別列出的序列[FS22-172-003] 。
[3] 如[1]或[2]之抗體分子，其中該抗體分子包含[1]或[2]之(i)列出的CDRs 1-6。
[4] 如[1]或[2]之抗體分子，其中該抗體分子包含[1]或[2]之(ii)列出的CDRs 1-6。
[5] 如[1]至[4]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含一重鏈可變異(VH)域及/或輕鏈可變異(VL)域，較佳為一VH域及一VL域。
[6] 如[1]至[5]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含一免疫球蛋白重鏈及/或一免疫球蛋白輕鏈，較佳為一免疫球蛋白重鏈及一免疫球蛋白輕鏈。
[7] 如[5]至[6]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含下列列出的該VH域及/或VL域，較佳為該VH域及該VL域： (i) 分別為序列辨識編號70 及 76 [FS28-256-271] ； (ii) 分別為序列辨識編號58 及 54 [FS28-024-052] ； (iii) 分別為序列辨識編號70 及 68 [FS28-256-021 ]； (iv) 分別為序列辨識編號70 及 64 [FS28-256-012 ]； (v) 分別為序列辨識編號74 及 68 [FS28-256-023] ； (vi) 分別為序列辨識編號70 及 78 [FS28-256-024] ； (vii) 分別為序列辨識編號74 及 78 [FS28-256-026] ； (viii) 分別為序列辨識編號70 及 76 [FS28-256-027] ； (ix) 分別為序列辨識編號66 及 68 [FS28-256-001] ； (x) 分別為序列辨識編號66 及 78 [FS28-256-005] ； (xi) 分別為序列辨識編號72 及 64 [FS28-256-014] ； (xii) 分別為序列辨識編號74 及 64 [FS28-256-018] ； (xiii) 分別為序列辨識編號62 及 64 [FS28-256] ； (xiv) 分別為序列辨識編號56 及 54 [FS28-024-051] ； (xv) 分別為序列辨識編號60 及 54 [FS28-024-053] ；或 (xvi) 分別為序列辨識編號12 及 54 [FS28-024] 。
[8] 如[7]之抗體分子，其中該抗體分子包含序列辨識編號70 及 76 內分別列出的VH域及VL域[FS28-256-271] 。
[9] 如[7]之抗體分子，其中該抗體分子包含序列辨識編號58 及 54 內分別列出的VH域及VL域[FS28-024-052] 。
[10] 如[1]至[9]中任一項之抗體分子，其中該第一序列係座落於該抗體分子的該CH3域之位置14至17之間，其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[11] 如[10]之抗體分子，其中該第一序列係座落於該抗體分子之該CH3域之位置15、16、16.5、16.4、16.3、16.2及16.1處，其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[12] 如[1]至[11]中任一項之抗體分子，其中該第二序列係座落於該抗體分子之該CH3域之位置92至98處，其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[13] 如[1]至[12]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子進一步包含一第三序列座落於該CH3域的該CD結構環。
[14] 如[13]之抗體分子，其中該第三序列係座落於該抗體分子之該CH3域的位置43至78處，其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[15] 如[13]至[14]中任一項之抗體分子，其中該第三序列具有序列辨識編號：157內列出的該序列。
[16] 如[1]至[15]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含序列辨識編號：8 內列出的CH3域序列[FS22-172-003] 。
[17] 如[1]至[16]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子為人類IgG1分子。
[18] 如[1]至[17]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含下列抗體之重鏈及輕鏈： (i)抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：3 及 84 內； (ii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024-052 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：102 及 85 內； (iii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-021 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及 82 內； (iv) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-012 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及116 內； (v) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-023 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：133 及 82 內； (vi) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-024 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及 83 內； (vii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-026 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：133 及 83 內； (viii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-027 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及 84 內； (ix) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-001 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：120 及 82 內； (x) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-005 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：120 及 83 內； (xi) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-014 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：129 及116 內； (xii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-018 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：133 及116 內； (xiii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：114 及116 內； (xiv) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024-051 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：98 及85 內； (xv) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024-053 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：106 及85 內；或 (xvi) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：94 及85 內。
[19] 如[18]之抗體分子，其中該抗體分子包含FS22-172-003-AA/FS28-256-271 之輕鏈及重鏈，其分別列於序列辨識編號：84 及 3 內。
[20] 如[18]之抗體分子，其中該抗體分子包含FS22-172-003-AA/FS28-024-052 之輕鏈及重鏈，其分別列於序列辨識編號：85 及102 內。
[21] 如[18]至[20]中任一項之抗體分子，其中該抗體之該CH2域的位置114 處之脯胺酸(P)係用丙胺酸(A)胺基酸予以取代，以及其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
[22] 如[1]至[21]中任一項之抗體分子，其中該MSLN為細胞表面結合的MSLN。
[23] 如[22]之抗體分子，其中該抗體分子與固定的MSLN結合的親和力比與可溶性MSLN的親和力更高。
[24] 如[23]之抗體分子，其中 (i) 該抗體分子係以8 nM的kD或更高的親和力與固定的MSLN結合；及/或 (ii) 該抗體分子係以15 nM的kD或更低的親和力與可溶性MSLN結合。
[25] 如[1]至[24]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子會與人類MSLN及人類CD137結合。
[26] 如[25]之抗體分子，其中該MSLN係由序列辨識編號：375 內列出之序列所組成或包含序列辨識編號：375 內列出之序列。
[27] 如[25]或[26]之抗體分子，其中該人類CD137係由序列辨識編號：373 內列出之序列所組成或包含序列辨識編號：373 內列出之序列。
[28] 如[1]至[27]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含列於[1]或[2]之(ii)或(xiv)至(xvi)中任一項之CDRs 1-6，以及其中該抗體阻斷MUC16與MSLN的結合。
[29] 如[1]至[27]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含列於[1]或[2]之(i)或(iii)至(xiii)中任一項之CDRs 1-6，以及其中該抗體不會阻斷MUC16與MSLN的結合。
[30] 如[28]或[29]之抗體分子，其中該MUC16是人類MUC16。
[31] 如[1]至[30]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子能於腫瘤細胞表面結合的MSLN存在下活化一免疫細胞上的CD137。
[32] 如[1]至[31]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子與一免疫細胞上的CD137以及與腫瘤細胞表面結合的MSLN之結合會導致該免疫細胞上的CD137簇集。
[33] 如[31]或[32]之抗體分子，其中該免疫細胞為一T細胞、B細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞或樹突細胞(DC)。
[34] 如[33]之抗體分子，其中該免疫細胞為一T細胞。
[35] 如[1]至[34]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子已被修飾以降低或廢除該抗體分子的該CH2域或該抗體分子與一個或多個Fcγ受體的結合。
[36] 如[1]至[35]中任一項之抗體分子，其中該抗體分子不會與Fcγ受體結合。
[37] 如[35]或[36]之抗體分子，其中該Fcγ受體係選自於下列所組成的群組：FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb及FcγRIII。
[38] 一種複合物(conjugate)，其包含如[1]至[37]中任一項之抗體分子及一生物活性分子。
[39] 一種複合物，其包含如[1]至[37]中任一項之抗體分子及一可偵測的標記。
[40] 一種核酸分子或多種核酸分子，其編碼如[1]至[37]中任一項之抗體分子。
[41] 一種核酸分子或多種核酸分子，其編碼如[1]至[37]中任一項之抗體分子，其中該核酸分子包含下列之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列： (I)FS22-172-003-AA/FS28-256-271 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號4 及 91 內； (ii)FS22-172-003-AA/FS28-024-052 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號103 及 86 內； (iii)FS22-172-003-AA/FS28-256-021 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號126 及 122 內； (iv)FS22-172-003-AA/FS28-256-012 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號126 及 117 內； (v)FS22-172-003-AA/FS28-256-023 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號134 及 122 內； (vi)FS22-172-003-AA/FS28-256-024 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號126 及 90 內； (vii)FS22-172-003-AA/FS28-256-026 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號134 及 90 內； (viii)FS22-172-003-AA/FS28-256-027 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號126 及 91 內； (ix)FS22-172-003-AA/FS28-256-001 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號121 及 122 內； (x)FS22-172-003-AA/FS28-256-005 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號121 及 90 內； (xi)FS22-172-003-AA/FS28-256-014 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號130 及 117 內； (xii)FS22-172-003-AA/FS28-256-018 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號134 及 117 內； (xiii)FS22-172-003-AA/FS28-256 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號115 及 117 內； (xiv)FS22-172-003-AA/FS28-024-051 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號99 及 86 內； (xv)FS22-172-003-AA/FS28-024-053 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號107 及 86 內；或 (xvi)FS22-172-003-AA/FS28-024 之該重鏈核酸序列及/或輕鏈核酸序列，其分別列於序列辨識編號95 及 86 內。
[42] 一種載體或多種載體，其包含如[40]或[41]中任一項之核酸分子或多種核酸分子。
[43] 一種重組宿主細胞，其包含如[40]至[41]中任一項之核酸分子或如[42]之載體。
[44] 一種生產如[1]至[37]中任一項之抗體分子之方法，其包含於用於生產該抗體分子的條件下培養[43]之重組宿主細胞。
[45] 如[44]之方法，其進一步包含單離及/或純化該抗體分子。
[46] 一種藥學組成物，其包含如[1]至[39]中任一項之抗體分子或複合物及一藥學上可接受的賦形劑。
[47] 如[1]至[39]中任一項之抗體分子或複合物，其供用於一種治療一個體癌症的方法。
[48] 一種治療一個體的癌症的方法，其包含投予一治療有效量的如[1]至[39]中任一項之抗體分子或複合物至該個體。
[49] 如[1]至[39]中任一項之抗體分子或複合物於製備一用於治療癌症的藥劑之用途。
[50] 如[47]至[49]中任一項之供用的抗體分子或複合物、方法或用途，其中該癌症係卵巢癌、胰臟癌、肺癌或間皮瘤。
[51] 如[47]之供用的抗體分子或複合物，其中該治療包含投予組合以一第二治療劑之該抗體分子或複合物至該個體。
[52] 如[48]之方法，其中該方法進一步包含投予一治療有效量的一第二治療劑至該個體。
較佳實施例之詳細說明 本發明係有關於會與MSLN及CD137二者結合的抗體分子。具體而言，本發明之抗體分子包含一用於MSLN之CDR-為基的抗原結合位址及一座落於該抗體分子的一恆定域之CD137抗原結合位址。
該抗體分子較佳專一地與MSLN及CD137結合。術語"專一的"可以指抗體分子與其專一的結合伙伴，於此為MSLN及CD137，以外的分子不會表現出任何明顯結合的情況。術語“專一的”也可適用於抗體分子對一些抗原所攜帶的特定表位，如MSLN及CD137上的表位為專一的情況，在這種情況下抗體分子能與攜帶該表位的各種抗原結合。於較佳的具體例中，本發明之抗體分子與OX40、GITR、CD40、CEACAM-5、E-鈣粘蛋白、凝血酶調節素(Thrombomodulin)或EpCAM不會結合，或不顯示出任何明顯結合。
術語“抗體分子”描述一種免疫球蛋白無論是天然還是部分或完全合成生產的。該抗體分子可以為人類或人化的，較佳為人類的。該抗體分子較佳為單株抗體分子。抗體的實例為免疫球蛋白同型，例如免疫球蛋白G及其等之同型亞類，例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4，以及其片段。就沒有汙染物的意義上，抗體分子可以為單離的，例如能結合其他多肽及/或血清組分的抗體。
當使用於本文中，術語“抗體分子”因而包括抗體片段，條件是該片段包含一用於MSLN之CDR-為基的抗原結合位址及一座落於一恆定域之CD137抗原結合位址。
抗體分子可以為天然或部分或完全合成生產的。舉例而言，抗體分子可以為重組抗體分子。
抗體分子包含用於MSLN之一個或多個CDR-為基的抗原結合位址以及一個或更多用於CD137之抗原結合位址於該抗體分子的一個或更多恆定域內，較佳為一個或更多CH3域內。
抗體分子可以為一種免疫球蛋白或其抗原結合片段。舉例而言，抗體分子可以為一種IgG、IgA、IgE或IgM分子，較佳為IgG分子，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4分子，更佳為IgG1或IgG2分子，最佳為IgG1分子或其片段。於較佳的具體例中，抗體分子為一種完整的免疫球蛋白分子。
在其他的具體例中，抗體分子可以為一種抗原結合片段，其包含一用於MSLN之CDR-為基的抗原結合位址及一座落於一恆定域之用於CD137的抗原結合位址。舉例而言，該抗原結合片段可以為一種scFv-Fc融合物，其中該scFv結合MSLN且Fc結合OX40或一微型抗體(minibody)，其包含連結一CH3域之scFv(Hu等人之 (1996), Cancer Res., 56(13):3055-61)。
抗體及用於建構其等的方法與用途為本技藝熟知的且描述於，舉例而言，Holliger and Hudson, 2005乙文內。取得單株及其他抗體並使用重組DNA科技技術來生產保留原始抗體專一性的其他抗體或嵌合分子是有可能的。此等技術可涉及導入一種抗體分子的CDRs或可變異區域至不同的抗體分子內(EP-A-184187、GB 2188638A及EP-A-239400)。
於較佳的具體例中，抗體分子可以為一種mAb2 (TM)雙專一性抗體。一種如本文所述之mAb2 雙專一性抗體為一種IgG免疫球蛋白，其包括一種CDR-為基的抗原結合位址於其之各個可變異區域及至少一抗原結合位址於該抗體分子的恆定域。
於較佳的具體例中，抗體為一種會與MSLN及CD137結合之抗體分子，該抗體分子包含： (i) 二個用於MSLN之CDR-為基的抗原結合位址，各者由一免疫球蛋白VH域及一免疫球蛋白VL域形成；以及(i) (ii) 座落於該抗體分子的二個CH3域內的二個結合CD137的抗原結合位址。
於更佳的具體例中，抗體為一種完整的免疫球蛋白分子，諸如一種完整的IgG1分子，其會與MSLN及CD137結合，該抗體分子包含： (i) 二個用於MSLN之CDR-為基的抗原結合位址，各者由一免疫球蛋白VH域及一免疫球蛋白VL域形成；以及 (ii) 座落於該抗體分子的二個CH3域內的二個結合CD137的抗原結合位址；及 其中該免疫球蛋白分子進一步包含CH1、CH2及CL域。
CDR-為基的抗原結合位址係一種於抗體可變異區域內之抗原結合位址。CDR-為基的抗原結合位址可由三個CDRs形成，例如三個輕鏈可變異域(VL)CDRs或三個重鏈可變異域(VH)CDRs。CDR-為基的抗原結合位址較佳由六個CDRs形成；三個VL CDRs及三個VH CDRs。不同CDRs對抗原結合之貢獻在不同的抗原結合位址可能會有所不同。
抗原結合位址的三個VH域CDRs可座落於免疫球蛋白VH域且三個VL域CDRs可座落於免疫球蛋白VL域。舉例而言，CDR-為基的抗原結合位址可座落於一抗體可變異區域。
抗體分子具有一種或較佳一種以上，舉例而言二種，用於MSLN之CDR-為基的抗原結合位址。抗體分子因而可包含一種VH及一種VL域但較佳包含二種VH及二種VL域，即二種VH/VL域對，如舉例而言天然存在的IgG分子的情況。
CDR-為基的抗原結合位址可包含下列之三種VH CDRs或三種VL CDRs，較佳為三種VH CDRs及三種VL CDRs：抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 、 FS22-172-003-AA/FS28-256 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 或FS22-172-003-AA/FS28-024 ，較佳為抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 或FS22-172-003-AA/FS28-024-052 ，最佳為抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 之三種VH CDRs或三種VL CDRs，較佳為三種VH CDRs及三種VL CDRs。
CDRs的序列可利用例行的技術而容易地從抗體分子的VH及VL域序列來判定。本文說明抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 、 FS22-172-003-AA/FS28-256 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 及FS22-172-003-AA/FS28-024 之VH及VL域序列，以及因而可從該等序列來決定該等抗體之三種VH及三種VL域CDRs。CDR序列可舉例而言，依據Kabat等人 ，1991乙文或國際ImMunoGeneTic資訊系統(IMGT) (Lefranc等人 ，2015)來判定。
含有LALA突變於CH2域之抗體的VH域及VL域序列與不含LALA突變之抗體是相同的。舉例而言，抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271的VH及VL序列與抗體FS22-172-003/FS28-256-271之VH及VL序列是相同的。同樣地，含有LALA突變於CH2域之抗體的VH域CDR1、CDR2及CDR3及VL域CDR1、CDR2及CDR3與不含LALA突變之抗體是相同的。舉例而言，抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271之VH域CDR1、CDR2及CDR3及VL域CDR1、CDR2及CDR3序列與抗體FS22-172-003/FS28-256-271之VH域CDR1、CDR2及CDR3及VL域CDR1、CDR2及CDR3序列是相同的。
根據IMGT編號之抗體分子的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以為分別座落於該抗體分子的VH域之位置27-38、56-65及105-117處的序列。
根據Kabat編號之抗體分子的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以為分別座落於該VH域之位置31-35、50-65及95-102處的序列。
根據IMGT編號之抗體分子的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以為分別座落於該VL域之位置27-38、56-65及105-117處的序列。
根據Kabat編號之抗體分子的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以為分別座落於該VL域之位置24-34、50-56及89-97處的序列。
舉例而言： (i)FS22-172-003-AA/FS28-256-271 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號42 、 33 及44 內所列者； (ii)FS22-172-003-AA/FS28-024-052 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號14 、 16 及27 內所列者； (iii)FS22-172-003-AA/FS28-256-021 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號42 、 33 及44 內所列者； (iv)FS22-172-003-AA/FS28-256-012 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號42 、 33 及44 內所列者； (v)FS22-172-003-AA/FS28-256-023 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號50 、 33 及52 內所列者； (vi)FS22-172-003-AA/FS28-256-024 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號42 、 33 及44 內所列者； (vii)FS22-172-003-AA/FS28-256-026 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號50 、 33 及52 內所列者； (viii)FS22-172-003-AA/FS28-256-027 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號42 、 33 及44 內所列者； (ix)FS22-172-003-AA/FS28-256-001 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號38 、 33 及35 內所列者； (x)FS22-172-003-AA/FS28-256-005 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號38 、 33 及35 內所列者； (xi)FS22-172-003-AA/FS28-256-014 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號46 、 33 及48 內所列者； (xii)FS22-172-003-AA/FS28-256-018 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號50 、 33 及52 內所列者； (xiii)FS22-172-003-AA/FS28-256 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號31 、 33 及35 內所列者； (xiv)FS22-172-003-AA/FS28-024-051 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號14 、 16 及25 內所列者； (xv)FS22-172-003-AA/FS28-024-053 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號14 、 16 及29 內所列者；以及 (xvi)FS22-172-003-AA/FS28-024 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號14 、 16 及18 內所列者； 其中該CDR序列係根據IMGT編號方式來定義。
(i)FS22-172-003-AA/FS28-256-271 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 及80 內所列者； (ii)FS22-172-003-AA/FS28-024-052 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 24 內所列者； (iii)FS22-172-003-AA/FS28-256-021 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 40 內所列者； (iv)FS22-172-003-AA/FS28-256-012 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 37 內所列者； (v)FS22-172-003-AA/FS28-256-023 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 40 內所列者； (vi)FS22-172-003-AA/FS28-256-024 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 41 內所列者； (vii)FS22-172-003-AA/FS28-256-026 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 41 內所列者； (viii)FS22-172-003-AA/FS28-256-027 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 80 內所列者； (ix)FS22-172-003-AA/FS28-256-001 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 40 內所列者； (x)FS22-172-003-AA/FS28-256-005 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 41 內所列者； (xi)FS22-172-003-AA/FS28-256-014 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 37 內所列者； (xii)FS22-172-003-AA/FS28-256-018 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 37 內所列者； (xiii)FS22-172-003-AA/FS28-256 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 37 內所列者； (xiv)FS22-172-003-AA/FS28-024-051 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 24 內所列者； (xv)FS22-172-003-AA/FS28-024-053 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 24 內所列者；及 (xvi)FS22-172-003-AA/FS28-024 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號20 、 22 、 24 內所列者； 其中該CDR序列係根據IMGT編號方式來定義。
舉例而言： (i)FS22-172-003-AA/FS28-256-271 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號43 、 5 及45 內所列者； (ii)FS22-172-003-AA/FS28-024-052 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號15 、 17 及 28 內所列者；; (iii)FS22-172-003-AA/FS28-256-021 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號43 、 34 、 45 內所列者； (iv)FS22-172-003-AA/FS28-256-012 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號43 、 34 及 45 內所列者； (v)FS22-172-003-AA/FS28-256-023 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號51 、 34 及 53 內所列者； (vi)FS22-172-003-AA/FS28-256-024 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號43 、 34 及 45 內所列者； (vii)FS22-172-003-AA/FS28-256-026 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號51 、 34 及 53 內所列者； (viii)FS22-172-003-AA/FS28-256-027 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號43 、 34 及 45 內所列者； (ix)FS22-172-003-AA/FS28-256-001 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號39 、 34 及 36 內所列者； (x)FS22-172-003-AA/FS28-256-005 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號39 、 34 及 36 內所列者； (xi)FS22-172-003-AA/FS28-256-014 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號47 、 34 及 49 內所列者； (xii)FS22-172-003-AA/FS28-256-018 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號51 、 34 及 53 內所列者； (xiii)FS22-172-003-AA/FS28-256 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號32 、 34 及 36 內所列者； (xiv)FS22-172-003-AA/FS28-024-051 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號15 、 17 及 26 內所列者； (xv)FS22-172-003-AA/FS28-024-053 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號15 、 17 及 30 內所列者；及 (xvi)FS22-172-003-AA/FS28-024 的VH域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號15 、 17 及 19 內所列者； 其中該CDR序列係根據Kabat編號方式來定義。
(i)FS22-172-003-AA/FS28-256-271 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及 80 內所列者； (ii)FS22-172-003-AA/FS28-024-052 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及24 內所列者； (iii)FS22-172-003-AA/FS28-256-021 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及 40 內所列者； (iv)FS22-172-003-AA/FS28-256-012 可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及37 內所列者； (v)FS22-172-003-AA/FS28-256-023 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及 40 內所列者； (vi)FS22-172-003-AA/FS28-256-024 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及 41 內所列者； (vii)FS22-172-003-AA/FS28-256-026 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及 41 內所列者； (viii)FS22-172-003-AA/FS28-256-027 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及 80 內所列者； (ix)FS22-172-003-AA/FS28-256-001 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及 40 內所列者； (x)FS22-172-003-AA/FS28-256-005 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及 41 內所列者； (xi)FS22-172-003-AA/FS28-256-014 可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及37 內所列者； (xii)FS22-172-003-AA/FS28-256-018 可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及37 內所列者； (xiii)FS22-172-003-AA/FS28-256 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及37 內所列者； (xiv)FS22-172-003-AA/FS28-024-051 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及24 內所列者； (xv)FS22-172-003-AA/FS28-024-053 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及24 內所列者；及 (xvi)FS22-172-003-AA/FS28-024 的VL域CDR1、CDR2及CDR3序列可以分別為如序列辨識編號21 、 23 及24 內所列者； 其中該CDR序列係根據Kabat編號方式來定義。
該CDR-為基的抗原結合位址可包含抗體抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 、 FS22-172-003-AA/FS28-256 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 或FS22-172-003-AA/FS28-024 ，較佳為抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 或FS22-172-003-AA/FS28-024-052 ，最佳為抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 ，的抗體之VH或VL域，較佳為VH及VL域。
抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 、 FS22-172-003-AA/FS28-256 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 及FS22-172-003-AA/FS28-024 之VH域可具有序列辨識編號3 、 58 、 70、70、74、70、74、70、66、66、72、74、62、56、60及12內分別列出的該序列。
抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 、 FS22-172-003-AA/FS28-256 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 及FS22-172-003-AA/FS28-024 之VL域可具有序列辨識編號76、54、68、64、68、78、78、76、68、78、64、64、64、54、54及54內分別列出的該序列。
該抗體分子較佳結合人類MSLN，更佳為人類及食蟹獼猴MSLN。本發明之抗體分子較佳能與細胞表面上表現的MSLN結合。細胞較佳為腫瘤細胞。
如以上的背景章節所述，成熟的MSLN係從腫瘤細胞脫落且從腫瘤位置被清除。這脫落的MSLN可作用為抗MSLN結合分子的槽，其在結合脫落的MSLN之後亦從腫瘤位置被清除。為了選擇優先結合腫瘤細胞表面上存在的MSLN之分子，本發明人選擇針對MSLN有高總結合性之抗體分子。具體而言，本發明人選擇與固定的MSLN結合的親和力比與溶解狀態中的MSLN結合的親和力更高之抗體分子。一般認為以高總結合性與MSLN結合之抗體分子在預期存在多重複本的MSLN且可用來二價結合該抗體分子的情況中，會優先結合腫瘤細胞表面上存在的MSLN之分子，而不是從腫瘤細胞脫落、預期呈單體形式的MSLN。不希望受理論束縛，但預期本發明的抗體分子因而不會很快地從腫瘤位置清除，因此有更長的時間窗口來發揮其等之治療效應。
該抗體分子較佳與固定的MSLN結合的親和力比與溶解狀態中的MSLN結合的親和力更高。固定的MSLN可以為固定於一表面的MSLN，例如供用於表面電漿子共振的晶片。在溶解狀態中的MSLN於此亦稱為可溶性MSLN且不是固定的。可溶性MSLN較佳呈單體形式，即單體間皮素。
抗體對於其之同源抗原的親和力可以該抗體與該抗原交互作用的平衡解離常數(KD )來表達。KD 值越高，該抗體分子對於該抗原的親和力越低。
該抗體分子較佳以9 nM、8 nM、7 nM或6 nM的親和力(KD )或更高的親和力與固定的MSLN結合。較佳地，該抗體分子以7 nM或6 nM的KD 或更小的KD 值與固定的MSLN結合。
該抗體分子較佳以15 nM的親和力(KD )或更低的親和力與在溶解狀態中的MSLN結合。更佳地，該抗體分子以16 nM、17 nM或18 nM的親和力(KD )或更低的親和力與固定的MSLN結合。
於較佳的具體例中，該抗體分子以6 nM的親和力(KD )或更高的親和力與固定的MSLN結合，以及以18 nM的親和力(KD )或更低的親和力與在溶解狀態中的MSLN結合。
抗體分子對於包含表面結合的MSLN的細胞之結合親和力可藉由測量該抗體分子與細胞要達到半最大結合(EC50 )所需的抗體分子濃度來判定。用於判定抗體分子與細胞要達到半最大結合所需的抗體分子濃度之合適的方法為本技藝已知的且揭示於本實施例內(參見例如實施例 7 )。如以上所述，考慮到腫瘤微環境內存在脫落的MSLN，抗體分子其與包含表面結合的MSLN的腫瘤細胞之結合不受可溶性MSLN存在影響或較不受可溶性MSLN存在影響，是較佳的。因而，於較佳的具體例中，於20nM可溶性MSLN存在下、要達到該抗體與包含表面結合的MSLN的細胞(如腫瘤細胞)之半最大結合(EC50 )所需的抗體分子濃度，比在沒有可溶性MSLN的情況下、要達到該抗體與該細胞之半最大結合(EC50 )所需的抗體分子濃度更高不到20倍、不到15倍、不到10倍、不到9倍、不到8倍、不到7倍、不到6倍、不到5倍、不到4倍或不到3倍。
不會阻斷MUC16與MSLN的結合之抗體分子與包含細胞結合的MSLN的細胞之結合作用已經證明較不受可溶性MSLN存在的影響。因而，一種不能或不會阻斷MUC16與MSLN的結合之該抗體分子可能是較佳的。
該固定的MSLN可具有序列辨識編號 ： 142 內列出的序列。該在溶解狀態中的MSLN可具有序列辨識編號 ： 142 內列出的序列。
也已證明本發明的抗體分子會結合食蟹獼猴MSLN。認為此點對於以抗體分子在食蟹獼猴進行功效及毒性研究是有利的，此可預測該抗體分子於人類的功效及毒性。
該抗體分子可以相似的親和力與固定的人類MSLN及固定的食蟹獼猴MSLN結合。此外，該抗體分子可以相似的親和力與在溶解狀態中的人類MSLN及在溶解狀態中的食蟹獼猴MSLN結合。認為此點有利於確保該抗體分子於食蟹獼猴進行之功效及毒性研究可預測該抗體分子於人類的功效及毒性。
因而，於較佳的具體例中，該抗體分子與固定的食蟹獼猴MSLN結合的親和力比抗體分子與固定的人類MSLN結合的親和力更低或更高不超過10倍，較佳為不超過5倍，更佳為不超過3倍。此外，該抗體分子與在溶解狀態中的食蟹獼猴MSLN結合的親和力比抗體分子與在溶解狀態中的人類MSLN結合的親和力更低或更高不超過10倍，較佳為不超過5倍，更佳為不超過2倍。
已證明該抗體分子於配體結合有各種各樣的活性。舉例而言，該抗體分子可能有能力阻斷，或可能沒有能力阻斷MUC16與MSLN的結合。
該抗體分子可包含抗體FS22-172-003-AA/FS28-024-051 、FS22-172-003-AA/FS28-024-052 、FS22-172-003-AA/FS28-024-053 或FS22-172-003-AA/FS28-024 的CDRs 1-6、VH域及/或VL域，或其突變體，其中該抗體分子阻斷MUC16與MSLN的結合。
任擇地，該抗體分子可包含抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、FS22-172-003-AA/FS28-256-018 或FS22-172-003-AA/FS28-256 的CDRs 1-6、VH域及/或VL域，或其突變體，其中該抗體分子不會阻斷MUC16與MSLN的結合。
適用於判定一種抗體分子阻斷MUC16與MSLN結合能力的方法為本技藝已知的且包括ELISAs及細胞為基的分析，例如該抗體與表現MSLN的細胞，例如NCI-H226細胞競爭與MUC16之結合的分析。
本發明之抗體分子包含一CD137抗原結合位址。該CD137抗原結合位址座落於抗體分子的恆定域，較佳為CH3域。CD137抗原結合位址包含一個或多個修飾的結構環於該抗體分子的恆定域。工程處理抗體恆定域的結構環來創造標靶抗原之抗原結合位址為本技藝已知的且描述於舉例而言，Wozniak-Knopp G等人 (2010) Protein Eng Des. 23 (4): 289–297；WO2006/072620及WO2009/132876之內。於大規模的選擇及親和力成熟計劃後鑑定出本發明的抗體分子所含的CD137恆定域抗原結合位址，以及優先結合二聚體而不是單體人類CD137。
該抗體分子之CD137抗原結合位址包含一第一及第二序列，其中該第一及第二序列係分別座落於該抗體分子之該恆定域，較佳為該CH3域的AB及EF結構環。第一及第二序列較佳為序列辨識編號10 及11 內分別列出的FS22-172-003 之第一及第二序列。第一及第二序列較佳分別座落於抗體分子之CH3域的位置14至17，及位置91至99之間，其中殘基編號係根據IMGT編號。
該抗體分子之CD環序列較佳為未經修飾的，即野生型。CD環序列因而較佳具有序列辨識編號：157 內列出的序列。CD環序列較佳座落於該抗體分子之CH3域的位置43至78處，其中殘基編號係根據IMGT編號。
於較佳的具體例中，該抗體分子包含一CH3域序列，其包含下列、具有下列或由下列所組成：序列辨識編號： 8 內列出的FS22-172-003 之CH3域序列。
該抗體分子之CH3域可選擇性地包含一額外的離胺酸殘基(K)於最接近該CH3域序列之C端處。
取得單株及其他抗體並使用重組DNA科技技術來生產保留原始抗體專一性的其他抗體或嵌合分子是有可能的。此等技術可涉及導入CDRs或可變異區域，至不同的免疫球蛋白之內。導入一免疫球蛋白的CDRs至另一免疫球蛋白之內係描述於，舉例而言EP-A-184187、GB 2188638A及EP-A-239400之內。可使用相似的技術導入恆定域序列以使如本發明之抗體分子的CD137抗原結合位址組合至一恆定域內，例如另一種抗體分子的CH3域，藉此產生一種抗體分子其之恆定域內包含CD137抗原結合位址。任擇地，一種抗體分子的完整恆定域序列之片段能以如本發明之抗體分子的恆定域序列來取代以製備一種抗體分子其之恆定域內包含CD137抗原結合位址。一種抗體分子的恆定域序列之片段同樣地能以如本發明之包含CD137抗原結合位址之抗體分子的恆定域序列之對應片段來取代。
該抗體分子較佳結合人類CD137，更佳為人類及食蟹獼猴CD137，再更佳為二聚體人類及食蟹獼猴CD137。該抗體分子結合的CD137部分較佳為CD137細胞外域。人類及食蟹獼猴CD137之細胞外域可以包含序列辨識編號149 及153 內分別列出之序列或由其等所組成。該抗體分子較佳能與細胞表面上表現的CD137結合。細胞較佳為免疫細胞，例如CD8+ 或CD4+ T細胞或調節性T(Treg)細胞，較佳為CD8+ T細胞或B細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞、樹突細胞(DC)或腫瘤浸潤型淋巴細胞(TIL)。
如以上的背景章節所述，以抗CD137抗體烏瑞魯單抗治療患者係與劑量限制性高度肝發炎有相關。不希望受理論束縛，但認為烏瑞魯單抗治療所見的肝發炎可能是由於肝內存在的T細胞之活化，或活化的T細胞浸潤且蓄積於患者的肝臟內。為了挑選肝發炎降低或沒有肝發炎的分子，本發明人選擇高CD137總結合性的Fcabs。具體而言，本發明人選擇與二聚體CD137結合的親和力比單體CD137更高的Fcabs。T細胞於引發(priming)及活化時會上調CD137的表現。一般認為由於活化的T細胞上CD137較高的表現，CD137於此等細胞表面上會呈二聚體、三聚體或更高階的多聚體形式。相比之下，非活性T細胞表現低甚或偵測不到的CD137表現。因而認為CD137，到此等T細胞表面上表現的全體的程度，可能是呈單體形式。因而認為以高總結合性與CD137結合之CD137/MSLN mAb2 會優先結合活化的T細胞，而不是非活性T細胞，舉例而言肝臟內存在的非活性T細胞，且因而展現出肝發炎降低或沒有肝發炎。此期望係藉由判定用抗小鼠CD137/MSLN mAb2 治療的小鼠之肝臟藥理學來確認，其證明該治療並未造成肝毒性(實施例13) 。
抗體分子較佳以60 nM、50 nM、40 nM、30 nM、20 nM、10 nM、5 nM、4 nM、3 nM或2 nM的親和力(KD )或更大的親和力與二聚體人類CD137結合。
於較佳的具體例中，抗體分子與二聚體CD137結合的親和力比單體CD137更高。於較佳的具體例中，抗體分子與二聚體CD137結合的親和力比抗體分子對於單體CD137的親和力更高至少50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、110倍、120倍、130倍、140倍、150倍、160倍、170倍或200倍。
單體人類CD137舉例而言，可具有序列辨識編號：149 內列出的序列。
也已經證明來自FS22-172譜系之抗體分子會與二聚體食蟹獼猴CD137結合。結合食蟹獼猴CD137以及人類CD137是有利的因其允許於投予人類前先在食蟹獼猴測試抗體分子的功效及毒性。
於較佳的具體例中，該抗體分子可以250 nM、200 nM、150 nM、140 nM、120 nM、100 nM、90nM、80 nM、70 nM、60 nM、50 nM、40 nM、30 nM、20 nM、10 nM、5 nM、4 nM、3 nM或2 nM的親和力(KD )或更大的親和力與二聚體食蟹獼猴CD137結合。較佳地，該抗體分子係以2 nM的親和力(KD )或更大的親和力與二聚體食蟹獼猴CD137結合。
該抗體分子可以相似的親和力與二聚體人類CD137及二聚體食蟹獼猴CD137結合。一般認為此點對於食蟹獼猴進行可預測該抗體分子於人類的功效及毒性之抗體分子之功效及毒性研究是有利的。
因而，於較佳的具體例中，該抗體分子與二聚體食蟹獼猴CD137結合的親和力比該抗體分子與二聚體人類CD137結合的親和力更低或更高不超過10倍，較佳為不超過5倍。
該抗體分子與同源抗原，諸如人類或食蟹獼猴CD137的結合親和力能由，舉例而言表面電漿子共振(SPR)，如Biacore來判定。
該抗體分子可能有能力阻斷CD137及其配體，CD137L，較佳為人類CD137及人類CD137L之間的交互作用。抗體分子阻斷CD137L與CD137結合的能力可使用ELISA來判定。
此外，該抗體分子可包含免疫球蛋白G分子之CH2域，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4分子之CH2域。該抗體分子較佳包含IgG1分子之CH2域。該CH2域可具有序列辨識編號：154 內列出的序列。已知CH2域會結合Fcγ受體及補體。抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)需要CH2域與Fcγ受體的結合，而補體依賴性細胞毒性(CDC)需要結合補體。
該抗體分子之CH2域較佳包含一個或多個突變其能減少或廢除CH2域與一個或多個Fcγ受體，例如FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIII及/或補體的結合作用。本發明人假設減少或廢除與Fcγ受體的結合作用會降低或消除該抗體分子所媒介的ADCC。相似地，減少或廢除與補體的結合作用預期會降低或消除該抗體分子所媒介的CDC。不希望受理論束縛，但預料此於投予該抗體分子給患者時會減少或避免肝發炎。減少或廢除CH2域與一個或多個Fcγ受體及/或補體之結合作用的突變為本技藝已知的(Wang等人 ，2018)。此等突變包括Bruhns等人 ，2009乙文及Hezareh等人 ，2001乙文內描述的"LALA突變"，其涉及以丙胺酸取代CH2域之位置1.3及1.2之白胺酸殘基(L1.3A及L1.2A)。任擇地，經由藉著使CH2域之位置84.4之天冬醯胺酸(N)突變為丙胺酸、甘胺酸或麩醯胺酸(N84.4A、N84.4G或N84.4Q)，而使保守的N-鍵接醣基化位址突變來產生無醣苷基(a-glycosyl)的抗體，亦已知會降低IgG1效應子功能(Wang等人 ，2018)。至於另一種選擇，已知經由使CH2域之位置114之脯胺酸突變為丙胺酸或甘胺酸(P114A或P114G)會降低補體活化(C1q結合)及ADCC(Idusogie等人 ，2000；Klein等人 ，2016)。亦可組合此等突變俾以產生具有進一步降低或沒有ADCC或CDC活性的抗體分子。
因而，該抗體分子可包含一CH2域，其中該CH2域包含： (i) 丙胺酸殘基於位置1.3及1.2處；及/或 (ii) 一丙胺酸或甘胺酸於位置114處；及/或 (iii) 一丙胺酸、麩醯胺酸或甘胺酸於位置84.4處； 其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
於較佳的具體例中，該抗體分子包含一CH2域，其中該CH2域包含： (i) 一丙胺酸殘基於位置1.3處；及 (ii) 一丙胺酸殘基於位置1.2處； 其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
舉例而言，該CH2域可具有序列辨識編號：155 內列出的序列。
於任擇較佳的具體例中，該抗體分子包含一CH2域，其中該CH2域包含： (i) 一丙胺酸殘基於位置1.3處； (ii) 一丙胺酸殘基於位置1.2處；及 (iii) 一丙胺酸殘基於位置114處； 其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
舉例而言，該CH2域可具有序列辨識編號：156 內列出的序列。
於任擇較佳的具體例中，該抗體分子包含下列抗體之重鏈及/或輕鏈，較佳為下列抗體之重鏈及輕鏈： (i) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：3 及 84 內； (ii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024-052 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：102 及 85 內； (iii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-021 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及 82 內； (iv) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-012 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及116 內； (v) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-023 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：133 及 82 內； (vi) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-024 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及 83 內； (vii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-026 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：133 及 83 內； (viii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-027 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及 84 內； (ix) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-001 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：120 及 82 內； (x) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-005 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：120 及7 8 內； (xi) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-014 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：129 及116 內； (xii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-018 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：133 及116 內； (xiii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：114 及116 內； (xiv) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024-051 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：98 及85 內； (xv) 體FS22-172-003-AA/FS28-024-053 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：106 及85 內；或 (xvi) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：94 及85 內。
於更佳的具體例中，該抗體分子包含：抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 或FS22-172-003-AA/FS28-024-052 ，最佳為抗體FS22-172-003-AA/FS28-256- 之重鏈及/或輕鏈，較佳為其之重鏈及輕鏈，其中此等抗體之重鏈及輕鏈序列係如以上所列。
本發明之抗體分子亦可包含於此所揭示的一第一、第二或第三序列、AB、CD或EF結構環序列、CH3域、CH2域、CDR、VH域、VL域、輕鏈及/或重鏈序列之變異體。可藉由序列改變或突變及篩選的方法來得到合適的變異體。於較佳的具體例中，一種包含一或多種變異體序列的抗體分子保留親代抗體分子的一或多種功能特徵，例如對於MSLN及CD137之結合專一性及/或結合親和力。舉例而言，一種包含一或多種變異體序列的抗體分子較佳以如該(親代)抗體分子相同的親和力，或比該(親代)抗體分子更高的親和力與MSLN及/或CD137結合。該親代抗體分子為一種抗體分子其不含已經併入變異體抗體分子內的胺基酸取代、缺失及/或插入。
一種包含抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、FS22-172-003-AA/FS28-256-018 或FS22-172-003-AA/FS28-256 之CDRs 1-6、VH域及/或重鏈之抗體分子，可包含一胺基酸取代於VH域的位置55或57處，其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
舉例而言，該抗體分子可包含抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-027 之CDRs 1-6、VH域及/或重鏈，其中該抗體分子包含一胺基酸取代於VH域的位置55處，以及其中該胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
舉例而言，本發明之抗體分子可包含一第一、第二或第三序列、AB、CD或EF結構環序列、CH3域、CH2域、CDR、VH域、VL域、輕鏈及/或重鏈序列，其與於此所揭示的結構環、CH3域、CH2域、CDR、VH域、VL域、輕鏈或重鏈序列，有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性。
於較佳的具體例中，本發明之抗體分子包含一CH3域序列，其與於此所揭示的CH3域序列，有至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性。
於進一步較佳的具體例中，本發明之抗體分子具有或包含一CH2域序列，其與於此所揭示的CH2域序列，有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%的序列同一性。
序列同一性一般係參考演算法GAP(Wisconsin GCG軟體包，Accelerys Inc, San Diego USA)來定義。GAP使用Needleman及Wunsch演算法來排列兩個完整序列，其使得匹配數目最大且間隙數目最小。一般而言，使用預設參數，且空格創造罰分(gap creation penalty)等於12以及空格擴展罰分等於4。使用GAP可能是較佳的，但是也可使用其他的演算法例如BLAST(其使用Altschul等人 ，1990的方法)、FASTA(其使用Pearson and Lipman，1988的方法)，或Smith-Waterman演算法(Smith and Waterman，1981)，或之前的Altschul等人 ，1990乙文之TBLASTN程式，一般使用預設參數。具體而言，可以使用psi-Blast演算法(Altschul等人 ，1997)。
本發明之抗體分子亦可包含一第一、第二或第三序列、AB、CD或EF結構環序列、CH3域、CH2域、VH域、VL域、輕鏈及/或重鏈，其與於此所揭示的第一、第二或第三序列、AB、CD或EF結構環序列、CH3域、CH2域、Fcab、CDR、VH域、VL域、輕鏈或重鏈序列相比，具有一或多個胺基酸序列改變(加入、缺失、取代及/或插入一胺基酸殘基)，較佳20個改變或更少、15個改變或更少、10個改變或更少、5個改變或更少、4個改變或更少、3個改變或更少、2個改變或更少或是1個改變。具體而言，可以於CH3域的VH及VL域序列及/或一或多個框架區域之外的該抗體分子之一或多個框架區域內進行改變。舉例而言，改變可以位於此所揭示的序列，如第一、第二及第三序列或AB、CD或EF結構環序列之外的CH3域內。
該抗體分子可包含一VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3，其與於此所揭示的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3相比，具有一或多個胺基酸序列改變(加入、缺失、取代及/或插入一胺基酸殘基)，較佳3個改變或更少、2個改變或更少或是1個改變。
於較佳的具體例中，本發明之抗體分子可包含一CH3域序列，其與於此所揭示的CH3域序列相比，具有一或多個胺基酸序列改變(加入、缺失、取代及/或插入一胺基酸殘基)，較佳20個改變或更少、15個改變或更少、10個改變或更少、5個改變或更少、4個改變或更少、3個改變或更少、2個改變或更少或是1個改變。
在一或多個胺基酸係由另一個胺基酸取代的較佳具體例中，該等取代可以為舉例而言如下表之保留式取代。在一些具體例中，中間欄位同一類別的胺基酸係彼此取代，即，舉例而言非極性胺基酸係以另一個非極性胺基酸取代。在一些具體例中，最右邊的欄位同一行的胺基酸係彼此取代。
Figure 108124775-A0304-0001
在一些具體例中，取代可以為功能上保留型。亦即，在一些具體例中包含該取代的抗體分子的一或多種功能性質(如結合親和力)與等效未經取代的抗體分子相比，可能不受該取代影響(或可能不實質影響)。
當本發明之抗體分子，例如通過與MSLN的結合作用而交聯該抗體分子時，較佳比該抗體分子未交聯時誘發的T細胞活化更高。
抗體分子活化T細胞的能力可用T細胞活化分析來測量。T細胞於活化時會釋放IL-2。因此T細胞活化分析可測量IL-2釋放來判定由該抗體分子或抗體分子所誘發的T細胞活化位準。
舉例而言，抗體分子活化T細胞的能力可藉由測量T細胞活化分析中抗體分子交聯時，要求達到T細胞之IL-2半最大釋放的抗體分子的濃度。以下稱此為抗體分子的EC50 。EC50 較低表示於T細胞活化分析中要達到T細胞之IL-2半最大釋放需要的抗體分子濃度較低，且因而該抗體分子具有較高的T細胞活化活性。該抗體分子可使用舉例而言，抗CH2抗體予以交聯。
於較佳的具體例中，該抗體分子於T細胞活化分析內所具有的EC50 ，為FS22-172-003-AA/FS28-256-271或FS22-172-003-AA/FS28-024-052於相同分析內之EC50 的10倍、5倍、4倍、3倍或2倍之內。
於任擇較佳的具體例中，該抗體分子於T細胞活化分析內所具有的EC50 ，為FS22-172-003-AA/FS28-256-271或FS22-172-003-AA/FS28-024-052於相同分析內之EC50 的10倍、5倍、4倍、3倍或2倍之內。
舉例而言，該抗體分子於T細胞活化分析內可具有5 nM或更小、4 nM或更小、3 nM或更小、2 nM或更小、1 nM或更小、或0.5 nM或更小的EC50 。
此外，或任擇地，抗體分子活化T細胞的能力可藉由測量T細胞活化分析中、於該抗體分子存在下，T細胞釋放的最大IL-2的濃度來判定，其中該抗體分子為交聯的。
於較佳的具體例中，在T細胞活化分析中、於該交聯的抗體分子存在下，T細胞釋放的最大IL-2的濃度為相同分析內FS22-172-003-AA/FS28-256-271或FS22-172-003-AA/FS28-024-052存在下，T細胞釋放的最大IL-2的濃度之3倍、2倍或1.5倍之內。
T細胞活化分析可以為如本文所述之T細胞分析，例如本實施例中所述之CD8+ T細胞分析，參見例如實施例 8 。
舉例而言，T細胞活化分析可以為一種以從人類末梢血液單核細胞(PBMCs)單離的CD8+ T細胞為基的IL-2釋放分析。舉例而言，T細胞活化分析可包含從白血球耗乏椎(cones)單離人類PBMCs。單離PBMCs的方法為本技藝已知的且描述於本實施例內。繼而可從PBMCs單離CD8+ T細胞。從PBMCs單離CD8+ T細胞的方法為本技藝已知的且描述於本實施例內。
CD8+ T細胞接而可添加至塗覆抗人類CD3抗體的多孔平盤。可製備各測試抗體分子合適的稀釋並添加至孔。T細胞接而可與測試抗體於5% CO2 、37℃下孵育歷時24小時。可收集上清液且予以分析來判定上清液內的IL-2濃度。判定溶液內的IL-2濃度之方法為本技藝已知的且描述於本實施例內。可以繪製人類IL-2濃度相對於抗體分子的對數濃度的圖。產生的曲線可以使用對數(促效劑)相對反應方程式來擬合。
該抗體分子可以複合至一種生物活性分子或可偵測的標記。在這種情況下，該抗體分子可以稱為複合物。此等複合物於治療及/或診斷如本文所述的疾病方面獲得應用。
舉例而言，生物活性分子可以為免疫系統調控劑，例如細胞介素，較佳為人類細胞介素。舉例而言，細胞介素可以為刺激T細胞活化及/或增殖的細胞介素。供用於複合抗體分子之細胞介素之實例包括IL-2、IL-10、IL-12、IL-15、IL-21、GM-CSF及IFN-γ。
任擇地，生物活性分子可以為配體陷阱，例如細胞介素，如TGF-β或IL-6之配體陷阱。
至於另一種選擇，生物活性分子可以為一配體，例如CD137L、OX40L、TRAIL、CD40L、CD27L或GITRL。
至於另一種選擇，生物活性分子可以為一藥物，例如微管蛋白聚合抑制劑(如澳瑞他汀(auristatin))、微管蛋白脫聚合劑(如美登素(maytansine))、DNA股斷裂誘發劑(如卡奇黴素(calicheamicin))、DNA烷化劑(如雙卡黴素(duocarmycin))或RNA聚合酶抑制劑(如α-蠅蕈肽(alpha-amanitin))。
可與抗體分子複合的合適的可偵測的標記為本技藝已知的且包括放射性同位素，例如碘-125、碘-131、釔-90、銦-111及鎝-99；螢光染料，例如螢光素、玫瑰紅、藻紅素、紅色螢光染劑(Texas Red)及花青染料衍生物例如，Cy7及Alexa750；顯色染料，例如二胺基聯苯胺；乳膠珠；酵素標記例如辣根過氧化物酶；磷光體或具光譜隔離吸收或發射特徵之雷射染料；以及化學部分，例如生物素，其能經由結合專一性同源可偵測的部分，例如標記的抗生物素蛋白來偵測。
該抗體分子可以經由任何合適的共價或非共價鍵聯，例如雙硫鍵或胜肽鍵，與生物活性分子或可偵測的標記複合。於生物活性分子為細胞介素的情況中，細胞介素可以經由胜肽鍵接子與該抗體分子複合。合適的胜肽鍵接子係本技藝已知的且長度可以為5至25、5至20、5至15、10至25、10至20或10至15個胺基酸。
於一些具體例中，生物活性分子可以經由可切割的鏈接子而與該抗體分子複合。鏈接子能允許生物活性分子於治療位址從該抗體分子釋放。鏈接子可包括醯胺鍵(如胜肽鏈接子)、雙硫鍵或腙。胜肽鏈接子舉例而言可以藉由位址專一性蛋白酶予以切割，雙硫鍵可以藉由胞質液還原環境予以切割以及腙可以藉由酸媒介的水解予以切割。
複合物可以為一種包含抗體分子及生物活性分子之融合蛋白。在這種情況下，生物活性分子可經由胜肽鏈接子或胜肽鍵與抗體分子複合。在抗體分子是多鏈分子的情況下，諸如抗體分子是或包含Fcab或為mAb2 ，生物活性分子可與抗體分子之一或多鏈複合。舉例而言，生物活性分子可與mAb2 分子之一或二個重鏈複合。融合蛋白具有容易生產及純化的優點，促進臨床等級的材料之生產。
本發明亦提供編碼本發明之抗體分子之經單離的核酸分子或多個核酸分子。使用本技藝眾所周知的方法來製備此核酸分子對於熟悉此藝者沒有困難。
於任擇較佳的具體例中，該核酸分子編碼抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、、 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 、 FS22-172-003-AA/FS28-256 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 或FS22-172-003-AA/FS28-024 ，較佳為抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 或FS22-172-003-AA/FS28-024-052 ，最佳為抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 之重鏈及/或輕鏈，較佳為重鏈及輕鏈。
一種編碼抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 、 FS22-172-003-AA/FS28-256 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 及FS22-172-003-AA/FS28-024 ，之重鏈的核酸分子係分別列於序列辨識編號：4、103、126、126、134、126、134、126、121、121、130、134、115、99、107及95內。
一種編碼抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 、 FS22-172-003-AA/FS28-256 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 、 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 及FS22-172-003-AA/FS28-024 ，之輕鏈的核酸分子係分別列於序列辨識編號：91、86、122、117、122、90、90、91、122、90、117、117、117、86、86及86內。
於該核酸編碼本發明之抗體分子的重及輕鏈的情況下，兩種域或鏈可由兩種單獨的核酸分子所編碼。
一種經單離的核酸分子可用來表現本發明之抗體分子。一般而言會提供用於表現重組載體的形式之核酸。本發明另外的態樣因而提供包含如上所述的核酸之載體。可挑選或建構合適的載體，包含合適的調節性序列，包括啟動子序列、終止子片段、聚腺苷酸化序列、增強子序列、標記基因及其他合適的序列。較佳地，載體含有合適的調節性序列來驅動核酸於宿主細胞內之表現。載體可為合適的質體、病毒如噬菌體或噬粒(phagemid)。
本文所述之核酸分子或載體可導入宿主細胞內。核酸或載體導入宿主細胞內的技術為本技藝已確立的且可使用任何合適的技術。本技藝已知一系列適合生產重組抗體分子的宿主細胞，且包括細菌、酵母、昆蟲或哺乳動物宿主細胞。較佳的宿主細胞為哺乳動物細胞，諸如CHO、NS0或HEK細胞，舉例而言HEK293細胞。
本發明另一態樣提供一種生產本發明抗體分子之方法，其包含於宿主細胞內表現編碼該抗體分子之核酸及選擇性地單離及/或純化由此生產的抗體分子。用於培養宿主細胞之方法為本技藝眾所周知的。該方法可進一步包含單離及/或純化該抗體分子。純化重組抗體分子的技術為本技藝眾所周知的且包括，諸如HPLC、FPLC或親和力層析法，舉例而言使用蛋白A或蛋白L。在一些具體例中，可利用抗體分子上的親和力標籤來執行純化。該方法亦可包含調配該抗體分子至一藥學組成物之內，選擇性地加上一藥學上可接受的賦形劑或如以下所述之其他物質。
如以上所述，MSLN係表現於腫瘤細胞表面上且高表現位準的可溶性MSLN與數種癌症的預後不良相關。抗MSLN抗體業已研究作為抗癌療法。此等抗MSLN抗體通過其等之ADCC活性誘發直接的細胞致死作用或以ADCs的形式來使用。
本文所述之抗體分子因而預期可用於癌症治療。因而提供本發明之相關態樣： (i) 本文所述之抗體分子供用於一種治療一個體的癌症的方法， (ii) 本文所述之抗體分子於製造一藥劑之用途，該藥劑用於治療一個體的癌症；以及， (iv) 一種治療一個體的癌症的方法，其中該方法包含投予一治療有效量的如本文所述之抗體分子至該個體。
個體可以為一患者，較佳為一人類患者。
本發明的抗體分子已證明與可溶性MSLN相比之下，會優先結合癌細胞表面上存在的MSLN。使用本發明的抗體分子要治療的癌症因而較佳表現或已判定有表現MSLN。更佳地，要治療的癌症細胞包含或已判定包含MSLN於其等之細胞表面，即包含細胞表面結合的MSLN。
癌症較佳包含或已判定包含腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)其有表現CD137。具體而言，該等TILs較佳包含或已判定包含CD137於其等之細胞表面上。
用於判定一種抗原於細胞表面上的存在之方法為本技藝已知的且包括，舉例而言，流動式細胞測量術。
癌症可為原發性或繼發性癌症。因而，如本文所述之抗體分子可用於一種治療一個體癌症的方法，其中該癌症為原發性腫瘤及/或腫瘤轉移。
使用本發明之抗體分子要治療的癌症可為實性癌症。
癌症可選自於下列所組成之群組：間皮瘤、胰臟癌、卵巢癌、肺癌(譬如小細胞肺癌及非小細胞肺癌)、食道癌、乳癌、胃癌、膽管癌、結腸癌、胸腺癌、內膜癌、頭頸部癌、肉瘤(譬如雙相滑膜肉瘤(biphasic synovial sarcoma)、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、骨原性肉瘤、橫紋肌肉瘤或軟組織肉瘤)、結締組織增生性小圓細胞腫瘤、白血病(譬如急性淋巴球性白血病、慢性淋巴球性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、毛細胞白血病或骨髓性白血病)、腎上腺皮質癌、膀胱癌、腦癌、子宮頸癌、子宮頸增生、睪丸絨毛膜癌、原發性血小板增多症、生殖泌尿道癌、神經膠質瘤、神經膠質母細胞瘤、淋巴瘤(例如何杰金氏病或非何杰金氏淋巴瘤)、惡性類癌(malignant carcinoid carcinoma)、惡性高鈣血症、黑色素瘤(亦稱為惡性黑色素瘤)、惡性胰臟胰島素瘤、髓質性甲狀腺癌、多發性骨髓瘤、蕈狀肉芽腫、神經胚細胞瘤、真性紅血球過多症(polycythemia vera)、原發性腦癌、原發性巨球蛋白血症、前列腺癌、腎臟細胞癌、皮膚癌、鱗狀細胞癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌，以及威爾姆斯瘤(Wilms' tumor)。
較佳地，該癌症係選自於下列所組成之群組：間皮瘤、胰臟癌、卵巢癌、肺癌、食道癌、乳癌、胃癌、膽管癌、結腸癌、胸腺癌、內膜癌、頭頸部癌、雙相滑膜肉瘤，及結締組織增生性小圓細胞腫瘤。
更佳地，該癌症係選自於下列所組成之群組：間皮瘤、胰臟癌、卵巢癌及肺癌。
癌症係特徵在於惡性的癌症細胞之異常增殖。在提及特定類型癌症，諸如乳癌的情況下，此係指相關組織，如乳房組織的惡性細胞之異常增殖。一種繼發性癌症，其位於乳房但為另一組織諸如卵巢組織的惡性細胞之異常增殖的結果，本文不會稱為乳癌而是稱為卵巢癌。
於癌症的情況中，治療可包括抑制癌症生長，包括完全癌症緩解及/或抑制癌症轉移，以及抑制癌症復發。癌症生長一般係指表示癌症變化的一些指數中的任一者達更發展形式。因而，測量癌症生長抑制的指數包括癌細胞存活減少、腫瘤體積或形態下降(舉例而言，使用電腦斷層(CT)、超音波檢查或其他成像方法來判定)、延遲腫瘤生長、破壞腫瘤血管分佈、改善遲發性過敏反應皮膚測試的表現、增高抗癌免疫細胞的活性或其他抗癌免疫反應，以及減少腫瘤專一性抗原的位準。活化或提升個體對癌性腫瘤之免疫反應可改善個體抵抗癌症生長的能力，特別是個體內已經存在的癌症之生長及/或減少個體內癌症生長的傾向。
當抗體分子可單獨投予時，抗體分子通常會呈藥學組成物形式投予，其可包含該抗體分子以外之至少一組分。本發明的另一種態樣因而提供一種藥學組成物，其包含如本文所述之抗體分子。亦提供一種方法其包含調配一抗體分子至一藥學組成物內。
藥學組成物，除了抗體分子之外，可包含一藥學上可接受的賦形劑、載劑、緩衝液、安定劑或本技藝熟悉此藝者眾所周知的其他物質。當使用於本文中，術語“藥學上可接受的”係關於化合物、物質、組成物及/或劑量形式，其在健全的醫學判斷範圍內係適合用於接觸個體(如人類)的組織而沒有過量毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，相稱於合理的利益/風險比率。各載劑、賦形劑等在與調配物的其他成分相容的意義上也必須是“可接受的”。載體或其他物質的確切性質將依投予途徑而定，投予途徑可為經由灌注、注射或任何其他合適的途徑，如下所述。
就非經腸，如皮下或靜脈投予而言，諸如透過注射，包含該抗體分子的藥學組成物可呈一種非經腸可接受的水溶液形式，其係無熱原且具有適宜的pH值、等滲透壓性及穩定性。本技藝相關技藝者能使用，舉例而言，等滲透壓性載劑，如氯化鈉注射液、林格氏(Ringer)注射液、乳酸林格氏注射液來製備適宜的溶液。可視需要使用防腐劑、安定劑、緩衝液、抗氧化劑及/或其他添加劑，包括緩衝液例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，例如抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(例如氯化十八烷基二甲基芐基銨；氯化六烴季銨；氯化苯二甲烴銨；氯化本索寧(benzethonium chloride)；酚、丁醇或苯甲醇；羥苯甲酸烷基酯，例如羥苯甲酸甲酯或羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3’-戊醇；及間甲酚)；低分子量多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他醣類，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型界面活性劑，諸如吐溫TM (TWEENTM )、PLURONICSTM 或聚乙二醇(PEG)。
在一些具體例中，可提供呈凍乾形式之抗體分子供用於在投予前先還原(reconstitution)。舉例而言，凍乾的抗體分子可在投予至個體前先以無菌水還原且與食鹽水混合。
可按一“治療有效量”予以投予，此為足以顯示對於個體之益處之量。所投予的實際量及投予速率與時程，將取決於要被治療的病況之性質與嚴重性、所治療的特定個體、個體的臨床狀況、該障礙的肇因、組成物的遞輸部位、抗體分子的類型、投予方法、投予日程安排及執業醫師所知的其他因素而定。治療的處方，例如決定劑量等等，係在普通科醫生及其他醫生的責任範圍內，並且可能依所治療疾病的症狀嚴重性及/或進展而定。抗體分子適當的劑量係本技藝眾所周知的(Ledermann等人 ，1991；Bagshawe等人 ，1991)。可使用本文所示的特定劑量或Physician's Desk Reference (2003)中所指出之適合所投予抗體分子的特定劑量。可藉由比較其活體外 活性與在動物模式之活體內 活性而判定一抗體分子的治療有效量或適宜劑量。用於外推小鼠及其他測試動物之有效劑量至人類的方法係已知的。確切劑量將依數項因子而定，包括待治療區域的大小與位置以及該抗體分子的確切性質。
典型的抗體劑量供用於全身應用係在100 µg至1 g的範圍內，以及供用於局部應用係在1 µg至1 mg的範圍內。可投予起始較高的速效劑量，接著一或多次較低的劑量。此係成年個體單一治療的劑量，小孩及嬰兒可按比例調整劑量，並且與分子量成比例地調整其他的抗體格式。
治療可以以每天、每星期二次、每星期或每個月的間隔予以重複，由醫師自行決定。個體的治療時間表可取決於抗體組成物的藥物動力學及藥效學性質、投予途徑及所治療病況的本質。
治療可以是定期的，且介於投予之間的期間可為大約二週或更長時間，如大約三週或更長時間，大約四週或更長時間，大約一個月或更長時間一次，大約五週或更長時間，或大約六週或更長時間。舉例而言，治療可以每二至四週或每四至八週。合適的調配物及途徑係如以上所述。
於癌症治療的情況中，如本文所述之抗體分子可以組合以另一種抗癌療法或治療劑，例如已被證明是合適於，或預期合適於所談論的癌症之治療的抗癌療法或治療劑投予至該個體。舉例而言，抗體分子可以組合以一化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、授受性細胞轉移(ACT)療法例如授受性NK細胞療法或帶有嵌合抗原受體(CAR)T細胞、自體腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)或γ/δ T細胞之療法或激素療法製劑投予至該個體。
不希望受理論束縛，但認為本文所述之抗體分子，其中該抗體分子包含用於免疫細胞抗原例如TNFRSF受體之第二抗原結合位址，可以作用為抗癌療法的佐劑。具體而言，一般認為投予該抗體分子組合以，舉例而言化學療法及/或放射療法、或組合以抗腫瘤疫苗至個體，會觸發比化學療法及/或放射療法、或抗腫瘤疫苗單獨達成的免疫反應更大的對抗癌症免疫反應。
供用於組合如本文所述之抗體分子投予的一種或多種化學治療劑可以選自於下列所組成的群組：紫杉烷(taxanes)、胞毒型(cytotoxic)抗生素、酪胺酸激酶抑制劑、PARP抑制劑、B-Raf酵素抑制劑、MEK抑制劑、c-MET抑制劑、VEGFR抑制劑、PDGFR抑制劑、烷化劑、鉑類似物、核苷類似物、抗葉酸劑(antifolate)、沙利竇邁(thalidomide)衍生物、抗惡性腫瘤化學治療劑及其他。紫杉烷包括多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)及nab-紫杉醇；胞毒型抗生素包括放線菌素(actinomycin)、博萊黴素(bleomycin)，及蒽環(anthracyclines)如多柔比星(doxorubicin)、雙羥蒽醌(mitoxantrone)及戊柔比星(valrubicin)；酪胺酸激酶抑制劑包括厄洛替尼(erlotinib)、吉菲替尼(gefitinib)、阿西替尼(axitinib)、PLX3397、伊馬替尼(imatinib)、考比替尼(cobemitinib)及曲美替尼(trametinib)；PARP抑制劑包括尼拉帕尼(piraparib)；B-Raf酵素抑制劑包括維羅非尼(vemurafenib)及達拉菲尼(dabrafenib)；烷化劑包括達卡巴嗪(dacarbazine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)及替莫唑胺(temozolomide)；鉑類似物包括卡鉑(carboplatin)、順鉑(cisplatin)及奥沙利鉑(oxaliplatin)；核苷類似物包括阿扎胞苷(azacitidine)、卡培他濱(capecitabine)、氟達拉濱(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)及吉西他汀(gemcitabine)；抗葉酸劑包括胺甲喋呤(methotrexate)及培美曲塞(pemetrexed)。合適用於本發明之其他的化學治療劑包括地法替尼(defactinib)、恩替諾特(entinostat)、艾日布林(eribulin)、伊立替康(irinotecan)及長春鹼(vinblastine)。
供用和如本文所述之抗體分子一起投予的較佳的治療劑為噴司他丁(pentostatin)、環磷醯胺、順鉑、培美曲塞、紫杉醇、卡鉑、吉西他汀、多柔比星、長春瑞賓(vinorelbine)、多烯紫杉醇或依託泊苷(etoposide)。
供用於組合如本文所述之抗體分子投予的放射療法可以為體外放射治療(諸如強度調控放射治療(IMRT)、身體立體定位放射治療(SBRT)、影像導航放射治療(IGRT)、術中放射治療(IORT)、電子治療或電子射線治療(EBT)、淺層放射治療(SRT))或體內放射療法(諸如近接治療、放射性同位素或放射性核種療法，SIRT。較佳地，放射療法為傳統的體外放射治療、體外放射治療療法(EBRT)、立體定位放射治療或近接治療。
供用於組合如本文所述之抗體分子投予的免疫治療藥物可以為治療抗體分子、核酸、細胞介素或細胞介素為基的療法。舉例而言，治療抗體分子可結合免疫調節分子，諸如抑制性查核點分子或免疫共刺激分子、先天性免疫系統的受體或腫瘤抗原，諸如細胞表面腫瘤抗原或可溶性腫瘤抗原。治療抗體分子可結合的免疫調節分子之實例包括抑制性查核點分子例如CTLA-4、LAG-3、TIGIT、TIM-3、VISTA、PD-L1、PD-1或KIR，免疫共刺激分子例如OX40、CD40、GITR、CD27或ICOS，其他免疫調節分子例如CD47、CD73、CSF-1R、HVEM、TGFB或CSF-1。治療抗體分子可結合的先天性免疫系統的受體之實例包括TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9、似RIG-I受體(例如RIG-I及MDA-5)及STING。
供用於組合如本文所述之抗體分子投予的核酸可以為siRNA。
細胞介素或細胞介素為基的療法可以選自於下列所組成的群組：IL-2、複合的IL2之前驅藥、GM-CSF、IL-7、IL-12、IL-9、IL-15、IL-18、IL-21及第一型干擾素。
癌症治療的抗腫瘤疫苗已在臨床實施且於科學文獻中詳細討論(例如Rosenberg, S. 2000)。此主要涉及激起免疫系統以對自體或同種異體癌症細胞表現的各種細胞標記起反應，其係藉由使用該等細胞作為疫苗接種方法，自體或同種異體癌症細胞二者帶有或不帶有顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)。GM-CSF於抗原呈現激起強大的反應且當與該策略一起使用時運作得特別好。
化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、ACT療法或激素療法製劑較佳為用於所談論的癌症之化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、ACT療法或激素療法製劑，亦即已經證實對治療所談論的癌症有效的化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、ACT療法或激素療法製劑。已經證實對所談論的癌症有效之合適的化學治療藥物、放射療法、免疫治療藥物、抗腫瘤疫苗、溶瘤病毒、ACT療法或激素療法製劑之挑選係在本技術人員的能力範圍內。
鑑於本揭露內容，包括下列實驗例證在內，本發明另外的態樣與具體例將為本技藝熟悉此藝者所顯而易見者。
本說明書所提及之所有文件係以其等之整體併入以作為參考資料。
於本文所用之“及/或”應視為兩種指定特徵或組分中之每一者具有或不具有另一者之特定揭示內容。舉例而言，“A及/或B”應視為(i)A、(ii)B以及(iii)A及B之每一者的特定揭示內容，如同各者係在本文中個別陳述一樣。
除非上下文另有規定，以上所列特性之說明與定義並不受限於本發明的任一特定態樣或具體例且同樣適用於所述的所有態樣與具體例。
本發明的其他態樣與具體例提供用術語“由…所組成”或術語“實質上由…所組成”來代替術語“包含”之上述之態樣與具體例，除非上下文另有規定。
現在將藉由實施例且參考以上所述之圖式來說明本發明的特定態樣與具體例。實施例 實施例1：抗原選擇及特徵化
用於鑑定能結合MSLN及CD137且導致CD137致效作用的mAb2 之選擇及篩選方法必須使用各種MSLN及CD137抗原。以下更詳盡地說明此等抗原之生產。1.1 重組CD137 抗原
腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)成員，例如CD137，係以其等與其等的同源配體結合時會簇集在一起而形成多聚體的傾向而著稱(Croft, M. 2003)。其等的官能性之此種聚集傾向使得生產在溶解狀態中不會聚集的可溶性重組蛋白—供用於活體外 選擇作用例如噬菌體及酵母菌展示及選出的蛋白之特徵化—具有挑戰性。
既然認為多數可購得的抗原都不適合，所以在機構內部生產下列重組二聚體及單體CD137抗原(參見表 1 )供選擇作用使用：表1 ：CD137抗原
Figure 108124775-A0304-0002
藉由使用EcoRI-HF及BamHI-HF限制酵素以使編碼人類(如序列辨識編號：149 所示)或小鼠CD137(如序列辨識編號：150 所示)細胞外域的DNA連同Avi標誌序列及六個C端組胺酸殘基選殖至經修飾的pFUSE載體(InvivoGen, pfuse-mIgG2A-Fc2)來生產單體抗原。使載體轉染至HEK293-6E細胞(National Research Council of Canada)內，且表現的CD137係使用HisTrap™ excel鎳管柱(HisTrap™ excel nickel column) (GE Healthcare Life Sciences 29048586)及粒徑篩析層析法(SEC)予以純化以確保抗原為單一物種且不含聚集體。
將編碼融合mIgG2a Fc域之人類、小鼠或食蟹獼猴(cynomolgus)CD137細胞外域、連同Avi標誌序列之DNA建構物選殖至經修飾的pFUSE載體並轉染至HEK293-6E細胞內來生產二聚體抗原。重組CD137係使用MabSelect SuRe™蛋白A管柱(GE Healthcare Life Sciences, 11003494及粒徑篩析層析法(SEC)予以純化以確保抗原為單一物種且不含聚集體。
使用BirA生物素-蛋白連接酶反應套組(Avidity LLC, BirA500)來生物素化每種二聚體及單體抗原以生產單一生物素分子標記的單體CD137抗原以及二聚體CD137抗原，其係以二個生物素分子標記在二個單體的每一者上。3 mg抗原係與7.8 μl BirA酵素混合物混合成莫耳比率1:50之酵素與基質。繼而根據製造商的建議添加添加劑(142 μl Biomix A、142 μl Biomix B、142 μ生物素)以及使反應混合物於室溫下孵育二小時。為了維持生物素化蛋白的完整，反應混合物立即使用Amicon 30 μm濾器(Merck, UFC503096)予以緩衝液交換成DPBS(ThermoFisher Scientific 14190-169)。
藉由SEC進一步純化蛋白以確保移去BirA酵素以及生產最終高品質的單分散蛋白製備物且沒有高分子量聚集體。材料係藉由粒徑篩析高效液相層析法(SE-HPLC)、SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及多角度光散射之粒徑篩析層析法(SEC-MALS)來分析穩定性及純度。以鏈黴抗生物素(streptavidin)-位移SDS-PAGE凝膠來確認蛋白完整的生物素化。重組人類及小鼠抗原係以表面電漿子共振(SPR)來確認活體外 與抗CD137陽性對照抗體(分別為20H4.9(US專利案號7288638))及Lob12.3(南安普敦大學))之結合，以及藉由流動式細胞測量術來確認與表現人類及小鼠CD137配體之DO11.10細胞的結合。細胞以CD137抗原孵育1小時，然後使用螢光標示的抗小鼠Fc片段抗體來偵測細胞結合。為了確認盡可能高純度的材料供用於選擇程序，所以執行透徹的抗原的蛋白特徵化以確認存在的蛋白聚集體不超過2%。1.2 細胞表現的CD137 抗原
生產分別表現全長小鼠(序列辨識編號：374)或人類CD137(序列辨識編號：373)的DO11.10細胞(National Jewish Health)，稱為‘DO11.10.mCD137’及‘DO11.10.hCD137’，俾以呈現膜結合構形的抗原，大多數與天然形式相似，供用於選出的Fcabs之選擇作用及進一步特徵化，如表 2 中所列。
使用慢病毒(lentiviral)轉導來產生此等過度表現人類或小鼠CD137受體的DO11.10細胞，其係利用Lenti-X HTX包裝系統(Clontech，目錄編號631249)來進行。含人類CD137 cDNA或小鼠CD137 cDNA的Lenti-X表現載體(pLVX) (Clontech，目錄編號631253)(係與Lenti-X HTX包裝混合物共轉染至Lenti-X 293T細胞株(Clontech，目錄編號632180)之內以產生病毒。DO11.10細胞株繼而以此等慢病毒載體予以轉導。
此等細胞上的人類CD137或小鼠CD137之表現係用流動式細胞測量術、分別藉由20H4.9及Lob12.3抗CD137陽性對照抗體與細胞的結合予以確認。細胞與人類或小鼠陽性對照抗體孵育1小時然後使用螢光標示的抗人類Fc偵測抗體(Stratech Scientific Ltd，目錄編號109-546-098-JIR)來偵測細胞結合。表 2：細胞表現的CD137
Figure 108124775-A0304-0003
 1.3 人類、食蟹獼猴(cyno)及小鼠間皮素抗原
重組生物素化人類MSLN-His抗原，稱為‘hMSLN-His Acro’係得自於Acrobiosystems(目錄號 MSN-H8223)，其缺少C端18個胺基酸。全長單體人類MSLN抗原係在機構內部產生及生物素化供用於噬菌體選擇。生產食蟹獼猴及小鼠MSLN以允許單離能結合人類以及食蟹獼猴MSLN之結合者，並且也分別單離鼠類MSLN結合者。
簡言之，藉由使用EcoRI-HF及BamHI-HF限制酵素以使編碼全長人類(序列辨識編號：142 )(hMSLN-His-Avi)、食蟹獼猴(序列辨識編號：143 )(cMSLN-His-Avi)或小鼠(序列辨識編號：144 ) (mMSLN-His-Avi)MSLN的DNA連同六個C端組胺酸殘基及Avi標誌序列選殖至經修飾的pFUSE載體(InvivoGen, pfuse-mIgG2A-Fc2)來生產MSLN抗原。使載體轉染至HEK293-6E細胞(National Research Council of Canada)內，且表現的MSLN係使用HisTrap™ excel鎳管柱(GE Healthcare Life Sciences 29048586)予以純化。使用BirA生物素-蛋白連接酶反應套組(Avidity LLC, BirA500)來生物素化每種抗原以生產單一生物素分子標記的單體MSLN抗原。
隨後使用HisTrap™ excel鎳管柱以移去過量游離的生物素以純化重組人類、食蟹獼猴或小鼠MSLN。
此等抗原之SEC-HPLC顯示聚集小於10%且PAGE證實抗原為單體的。使用ELISA及表面電漿子共振(SPR)來確認生物素化的MSLN抗原能與MSLN-專一性陽性對照抗體SS1(VH SEQ NO:140 ；VL序列辨識編號：141 )結合，該MSLN-專一性陽性對照抗體SS1含有如SS1 scFv US 7,081,518 B1；Hassan等人之 2002)及MOR6626(專利公開號WO 2009/068204 A1)相同的CDRs。根據此數據，認為所有的抗原都適合用於初始的選擇。 實施例2：抗人類CD137 Fcabs之選擇及特徵化2.1 抗人類CD137 Fcabs 之初始的選擇作用
為了選擇結合人類CD137的Fcabs，所以使用酵母菌及噬菌體展示選擇活動，以使辨識的Fcabs之多樣性達到最大。細胞表面展現的人類CD137及重組二聚體人類CD137及二者均使用以提供各種抗原呈現，俾以發揮對二聚體或多聚體CD137蛋白之總結合性驅動的選擇壓力。認為獲得熱切地結合CD137錯合物而不是以高親和力結合單體CD137之Fcab是有利的，因為此種Fcab於T細胞刺激後發生CD137上調的情況下只會優先靶定活化及經引發的(primed)T細胞。不希望受理論束縛，但假設是具有低或微不足道的CD137膜表現位準的T細胞會更可能有單體狀態的CD137，不像活化的T細胞有高度上調的CD137，其中多數蛋白會呈二聚體、三聚體或更高的多聚體狀態。由於總結合性驅動的選擇，該Fcab會優先結合活化的T細胞而與初始的T細胞或呈現較低的CD137表現的其他細胞不能很好地結合。透過選擇熱切的CD137 Fcab會減少可能脫靶的T細胞活化，及伴隨降低的毒性。
使用展示人類IgG1的CH1至CH3域之初始的酵母菌庫以藉由酵母菌展示來進行選擇作用。所有的庫於CH3域都含有隨機化的AB環(包含根據IMGT編號位置14至18處之殘基)及隨機化的EF環(包含根據IMGT編號位置92至101處之殘基)。該等庫中的二者進一步含有五個胺基酸殘基插入在CH3域的AB環之位置16處(殘基在根據IMGT編號位置16.5至16.1處)。
從庫選擇作用所辨識的酵母菌單一殖株係使用流動式細胞測量術抗原結合分析來篩選抗原結合，其涉及用生物素化重組二聚體人類抗原或小鼠Fc片段孵育細胞以區別結合重組hCD137抗原的Fc部分之酵母菌殖株。用不同的抗原濃度及條件重複選擇作用，例如增高誘發溫度、減小選擇作用嚴格性或降低輪次的數目俾以增高命中者的數目。鑑定出9種具有獨特序列之Fcab殖株。2.2 呈“ 假(mock)”mAb2 格式的抗人類CD137 Fcabs 之製備
生產由IgG1分子組成的“假”mAb2 抗體，其包含85種抗人類CD137 Fcab殖株，以允許呈mAb2 格式的Fcabs之特徵化。該假mAb2 之製備係藉由以Fcab的CH3域的一部分，包含AB、CD及EF環，取代抗母雞卵白溶菌酶抗體HelD1.3的CH3域的對應區域。HelD1.3抗體的產生係描述於Tello等人之 1993乙文內。抗體HelD1.3的重鏈及輕鏈序列係分別顯示於SEQ ID138 及139 內。該假mAb2 分子係藉由暫時表現於HEK293-6E細胞來生產。且藉由蛋白A親和力層析法、使用mAb SelectSure管柱予以純化。此等mAb2 繼而依生物層干涉術(BLI)來測試與人類重組抗原(生物素化hCD137-mFc-Avi)之結合。2.3 選出的抗CD137 假mAb2 於人類NF-κB 報告基因分析之活性
多聚合(multimerisation)及簇集對於TNFR訊息傳導是必要的(Bitra等人 ，2017)。當CD137與其之同源配體，CD137L交互作用時，其會簇集及活化NF-kB訊息傳導途徑。促效劑分子模擬配體驅動CD137之簇集及活化，藉此活化NF-kB訊息傳導途徑。已知一些促效抗體一旦結合便能固有地造成CD137簇集，舉例而言烏瑞魯單抗，然而其他抗體需要抗體自身額外的交聯來誘發CD137簇集，例如烏托米單抗(Fisher等人 ，2012)。已知效應子細胞上的Fc γ受體於活體內 會誘發此種交聯，雖然此為低效率且可能發生在遠離治療感興趣的位址。既然劑量限制性毒性已經與烏瑞魯單抗有關連但與烏托米單抗(utolimumab)無關，所以決定選擇沒有固有地致效(agonise)的能力之抗CD137結合Fcabs，而只選擇需要額外的交聯俾以誘發CD137簇集之該等。因而，發展一種分析其能偵測到細胞表面上表現的CD137藉由交聯抗體而簇集時之細胞的NF-kB訊息傳導途徑之活化，但是於抗體未交聯時顯現的活性非常小。此分析繼而用於測試呈mAb2 格式的抗CD137 Fcab殖株之促效功能活性，不論依據BLI該等Fcabs是否會結合重組抗原。蛋白L於分析中係使用作為交聯劑以經由Fab部分驅動假mAb2 的交聯且測量NF-κB活化。
使用EcoRI-HF及XhoI限制酵素予以亞選殖編碼人類CD137序列之cDNA序列(SEQ ID149 至pMSCV-新黴素載體(Takara Clontech, Cat. 634401)內來生產HEK.FRT.luc.hCD137細胞。使用RetroPack PT67細胞株(Clontech, Cat. 631510)、遵循製造商的程序來生產反轉錄病毒顆粒。此反轉錄病毒隨後用來轉導HEK.FRT.luc細胞，其為以前藉由含控制螢光素酶表現的NF-κB-敏感型啟動子之Qiagen Cignal Lenti NFkB報告基因(luc) (Qiagen，目錄號336851)慢病毒屬(lentivirus)轉導Flp-In T-REx 293 HEK細胞株(Life Technologies, R780-07)所產生的。使用此等HEK.FRT.luc.hCD137細胞來篩選含選擇作用所鑑定的CD137結合者之假mAb²。
以DPBS(Life Technologies, 14190169)製備各種假mAb2 之2 µM稀釋且以報告基因細胞培養基(DMEM(Gibco, Cat. 61965-026)；10% FCS(Gibco, Cat. 10270-106)；1x青黴素鏈黴素(PennStrep) (Gibco, Cat. 15140-122)；殺稻瘟菌素15µg/ml(Melford Laboratories Ltd. Cat. B1105)；嘌呤黴素(puromycin)5µg/ml(Life technologies, Cat. A11113803)；吉歐黴素100µg/ml(InvivoGen, Cat. 11006-33-0)；遺傳黴素(Geneticin)500µg/ml(Life Technologies, Cat. 10131-027)1:3進一步稀釋。使用蛋白L(Life Technologies, 21189)作為人工交聯劑並且以莫耳比率1:4與mAb²分子混合。孵育24小時後，用100µl Promega Bio-Glo™螢光素酶分析試劑(Promega目錄號G7941)根據製造商的指示來處理細胞且用平盤讀數器及Gen5軟體，BioTek來測量積分時間0.5秒之發光。發光值為對藉由交聯的Fcabs所誘發的CD137簇集之NF-kB訊息傳導途徑活化作出反應所生產之螢光素酶作為衡量標準。繪製發光值相對於Fcab的對數濃度的圖以及產生的曲線係使用GraphPad Prism之對數(促效劑)vs反應方程式來擬合。
當以蛋白L交聯時的螢光素酶信號與未交聯時相比有至少10倍增加，則確認為命中者，因判定此等殖株能誘發CD137簇集及隨後活化下游訊息傳導途徑。於所有測試的殖株中，二者於交聯時能誘發螢光素酶10倍增加，包括FS22-172，雖然無法確定任何一者的EC50。二者均被選出供用於DO11.10 T細胞活化分析予以進一步特徵化。令人驚訝地，剩下的殖株於交聯條件下沒有觀察到活性，儘管依BLI會結合CD137標靶，但也許表示其等結合CD137上不相關的表位，或是此等殖株之親和力不足以足够强烈地結合CD137以起始NF-κB訊息傳導級聯。
總的來說，從初始的選擇鑑定出二種Fcabs(包括FS22-172)，其等於NF-κB報告基因分析中、當交聯時展現出所欲的功能且當未交聯時的活性非常小。 實施例3：抗人類CD137 Fcab之親和力成熟及後續特徵化3.1 FS22-172 之 親和力成熟
從FS22-172 Fcab殖株建構四種酵母菌展示庫。七個殘基(根據IMGT在位置15-16.1處)係使用ELLA引子於各殖株的CH3域之AB環內進行隨機化以製造庫FS22-172 AB。五個殘基(根據IMGT在位置92-94及97-98處)係使用ELLA引子於CH3域之EF環內進行隨機化而產生庫FS22-172 EF。
關於庫FS22-172 AB及FS22-172 EF，執行三或四輪酵母菌庫的選擇作用以選出親和力成熟的殖株，其係使用二聚體hCD137-mFc-Avi抗原或單體hCD137-Avi-His抗原。單體抗原與二聚體抗原交替以確保殖株保留對抗原的親和力及不會只通過總結合性來結合。使用單體或二聚體抗原，以及各輪期間流動式細胞測量術使用的抗原濃度係憑經驗來確定，其係由先前輪次是否觀察到對單體或二聚體抗原的富集作用來確定。只要可能，使用高於親代的分類圈選來單離與親代分子相比親和力成熟的殖株。選擇作用壓力增高到達1nM的二聚體抗原。於各選擇輪次期間，個別的殖株係於瓊脂平盤上塗上斑點以評估選擇作用的進展。各殖株個別地生長及誘發以及接著使用如前所述生物素化的二聚體抗原及抗CH2結構標記、由流動式細胞測量術來判定其之結合及結構參數。遵循此篩選級聯以允許根據來自選擇作用產品之殖株樣本來判定選擇作用的成功以及允許早期篩選隨後能生產為可溶性蛋白的個別殖株。
以如前所述之抗原結合流動式細胞測量術來篩選酵母菌單一殖株與生物素化重組抗原之結合作用。從FS22-172 AB庫單離出30種獨特的環序列。FS22-172 EF庫不含比起親代殖株顯示出任何結合作用改良的任何殖株。3.2 呈“ 假”mAb2 格式的抗人類CD137 Fcabs 之 建構
製備包含呈HelD1.3之抗人類CD137 Fcabs的“假”mAb2 抗體用於進一步特徵化呈mAb²格式之親和力成熟的Fcabs。此等mAb²係如實施例 2.2 中所述予以製備。藉由暫時表現於HEK293-6E細胞來生產CD137/HelD1.3“假”mAb2 且使用mAb Select SuRe蛋白A管柱予以純化。3.3 呈假mAb2 格式的人類Fcabs 於人類NF-κB 報告基因細胞分析 之活性
所列出的呈假mAb2 (HelD1.3)格式之親和力成熟的抗人類CD137 Fcabs之功能活性係以實施例 2.3 中所述相同的NF-κB螢光素酶分析予以測試。用平盤讀數器及Gen5軟體，BioTek來測量積分時間0.5秒之發光。正如所料，在無蛋白L交聯(-XL)下、Fcabs中無一者顯現出活性。所有親和力成熟的CD137 Fcabs顯現出超過親代CD137 Fcabs巨大的改良，而其等雖然於此分析中是陽性的，但計算其等之EC50 值是不可能的(見實施例 2.3 )。當以蛋白L交聯時(+XL)，FS22-172-003顯現出來自每個家族具最低EC50 (32.64 nM)之最佳的活性。3.4 藉由 表面電漿子共振(SPR) 來判定 抗 人類CD137 Fcabs 之專一性
測試抗人類CD137 Fcabs關於人類CD137與其他相關的TNFSFR家族成員相比之專一性。測試呈假mAb2 (HelD1.3)格式的Fcabs中的8種且藉由測試與其他人類TNFRSF受體：CD40、OX40與GITR之結合、透過Biacore T200(GE Healthcare)之SPR來測量。用胺偶合(胺偶合套組，GE Healthcare, BR-1000-50)塗覆人類CD40、GITR與OX40於Biacore CM5晶片(GE Healthcare，目錄號29149603)達大約1000 RU。以HBS-EP+緩衝液(BR100669)製備以1 μM開始、呈假mAb2 格式的抗人類CD137 Fcab(FS22-172-003/HelD1.3)之稀釋且以30 µl/min注射3 min，然後允許於緩衝液內解離4 min。以30 µl/min來注射10 mM甘胺酸pH 2.5歷時12 s以再生晶片。利用對不同的TNFRSF成員專一的抗體作為陽性對照以證實Biacore晶片塗覆。數據減去雙重參考且使用BIAevaluation 3.2軟體予以分析。Fcabs沒有結合任何測試的TNFRSF受體，證明其等對於CD137之專一性。結果，不預期Fcabs，或包含來自此等Fcabs的抗原結合位址之mAb2 ，會引發與CD137以外的任何東西結合。3.5 呈假mAb2 格式的抗人類CD137 Fcabs 對於人類、 食 蟹獼猴及小鼠CD137 、依SPR 之 結合 親和力
呈假mAb2 格式的抗人類CD137 Fcabs(見實施例 3.2 )對於人類、食蟹獼猴(cynomolgus) (食蟹獼猴(cyno))及小鼠CD137之親和力係依SPR來測量，以判定Fcabs是否可於動物研究中用於測試。一種抗人類Fab捕捉抗體係遵循製造商的建議(GE Healthcare，人類Fab捕捉套組，#28958325)、固定於一種CM5 S系列晶片(GE Healthcare #BR-1005-30)的全部四個流動室達6000 RU之平均表面密度。於25℃及10 μl/min的流速進行固定達成6000 RUs之平均終回應。藉由以30 µl/min注射HBS-EP+緩衝液(GE Healthcare #BR1006-69)稀釋的3 μg/ml mAb²溶液60秒以捕捉各種mAb²達大約150 RU。繼而配於HBS-EP+緩衝液內不同濃度的人類、食蟹獼猴或小鼠CD137抗原(未生物素化的人類、食蟹獼猴或小鼠CD137-mFc-Avi或人類CD137-Avi-His)係以60 μl/min從晶片上面流過3 min然後允許解離10分鐘。於各種的抗原濃度之後，以30 μl/min的流速注射10mM甘胺酸pH 2.1歷時30秒以使晶片再生。於最高濃度的抗原之前及最低濃度的抗原之後注射緩衝液HBS-EP+用於參考扣除(reference subtraction)，以及隨機重複其中一個濃度二次。用1:1朗繆(Langmuir)模型來擬合結合動力學以產生各樣本的平衡結合常數(KD )。用BiaEvaluation軟體3.2版來執行數據分析。結果顯示於表 3 內。
結果分析顯示與各自的親代分子相比之下，所有親和力成熟的殖株和人類及食蟹獼猴CD137二者之結合均有改良。對單體人類CD137抗原之結合親和力比對二聚體人類及食蟹獼猴Fc融合抗原之結合親和力更弱(達至少100倍)。如實施例 2.1 中所討論，挑選比起單體形式的會優先結合二聚體CD137之Fcabs且此資料確認了選擇策略是成功的。此動力行為使得其等較不可能與未刺激的T細胞上所表現的最小位準單體CD137結合而導致與一些抗CD137單株抗體療法相關的肝或全身毒性的風險降低。
該資料亦顯示抗人類CD137 Fcabs係以可比得上人類二聚體CD137的親和力與食蟹獼猴二聚體CD137結合。表3 ： CD137 Fcabs之動力分析
Figure 108124775-A0304-0004
 N/A-不適用因信號太低不允許判定KD
亦測試Fcabs與小鼠二聚體CD137結合的能力。該等殖株中無一者顯現出比小鼠抗原更強的結合作用(如表 3 中所示，其中N/A表示無KD 能計算出來)。3.6 抗 人類CD137 Fcabs 之親和力成熟及特徵化之總結
綜上所述，產生且製備呈mAb2 格式之親和力成熟的抗CD137 Fcabs，其繼而予以特徵化。CH3域內含此等CD137抗原結合域的mAb2 於人類NF-κB報告基因細胞分析中顯示出高位準的活性且此活性證實為交聯依賴的。
亦證實含抗人類CD137抗原結合域的mAb2 對CD137為專一的且不會結合其他的TNFRSF受體。證實比起人類單體CD137抗原，該mAb2 會優先結合人類二聚體CD137抗原。最後，證實此等mAb2 係以可比得上人類二聚體CD137的親和力與食蟹獼猴二聚體CD137結合。
已證明了含抗人類CD137抗原結合域的mAb2 需要交聯作用俾以簇集及活化CD137，下一個目標是要製備除了結合CD137以外還結合人類MSLN的mAb2 。假設是mAb2 經由Fab臂與人類MSLN結合會造成抗體分子的交聯，此又導致CD137的簇集及活化且此活化會依賴所存在的人類MSLN表現。
為了製備結合CD137以外還結合人類MSLN的mAb2 ，首先必須產生能結合MSLN的mAbs。以下說明此等mAbs之產生。 實施例4：抗人類MSLN抗體之單離：抗原、選擇及篩選
間皮素為多醣磷脂肌醇(GPI)-鏈接的醣蛋白其合成為69-kDa前驅蛋白且蛋白水解加工成30 kDa NH2-端分泌形式(稱為巨核細胞增效因子或MPF)及40 kDa膜結合的間皮素(MSLN)。患者血清內發現可溶形式的MSLN，其係從腫瘤細胞表面脫落且藉由膜結合的MSLN之選擇式剪接或腫瘤壞死因子a-轉化酶(TACE)所產生。此腫瘤脫落的抗原已知會創造一‘槽(sink)’其能作用為治療抗體的誘餌(Lee等人 ，2018)而使得必須克服這情況以允許抗體與腫瘤上的MSLN結合。為避免此種槽效應(sink effect)，要獲得新穎的抗間皮素抗體其與可溶的MSLN相比會優先結合固定的MSLN，用意是將此轉換成比起槽內可溶的MSLN會優先結合膜結合的MSLN。為此，使用不同形式的MSLN抗原於噬菌體選擇及隨後的篩選活動中。鑑定出一組與膜結合的人類及食蟹獼猴MSLN結合之抗體，有各種親和力，且能靶定MSLN的不同區域。執行一組篩選分析，包括ELISA、Biacore阻斷分析及細胞結合，以及比較MSLN的結合區域之分析。4.1 噬粒 (Phagemid) 庫 選擇
使用展示具有CDR1、CDR2及CDR3(MSM Technologies)隨機化之人類IgG1生殖系列Fab域之合成初始的噬粒庫，供用於實施例 1.3 所述的MSLN抗原之選擇作用。
Fab庫最初以每次活動有三或四輪之多次活動來進行選擇作用，其係使用鏈黴抗生物素蛋白標記磁珠(Streptavidin Dynabeads) (Thermo Fisher, 11205D)、偶合至標記磁珠的中性親和素結合蛋白(Thermo Fisher, 31000)或抗His標記磁珠(Thermo Fisher, 10103D)來單離結合生物素化人類、食蟹獼猴或小鼠MSLN-His-Avi或hMSLN-His Acro的噬菌體。選擇活動亦使用機構內部生產的全長MSLN抗原來執行，其中人類MSLN選擇輪次係與食蟹獼猴MSLN抗原交替目標是要單離出人類及食蟹獼猴交叉反應性殖株。亦執行針對小鼠MSLN(R&D mMSLN-His 8604-MS)之結合者的選擇作用。使用標準噬菌體選擇及噬菌體回收程序。
想努力獲得結合MSLN抗原不同區域的殖株，所以採用使用來自以上所述之起始選擇活動的抗MSLN抗體進行表位遮蔽策略。簡言之，初始的Fab庫第1輪的選擇係使用500 nM之生物素化人類MSLN-His-Avi來執行。於第2及3輪中，於起始選擇活動所單離的初始抗間皮素mAb蛋白混合物存在下，測試500 nM(第2輪)或100 nM(第3輪)之生物素化食蟹獼猴MSLN-His-Avi的噬菌體結合作用。此等表位遮蔽選擇作用導致產品效價(output titers)降低，表示選擇策略是有用的因鑑定出較少的結合者，且導致鑑定出3種額外的殖株靶定MSLN額外的區域，與來自早期選擇活動的殖株相比。4.2 鑑定抗MSLN 抗體之篩選
來自所有選擇作用的第3輪及第4輪產品大約2000種殖株係藉由噬菌體ELISA來篩選與下列之結合作用：25 nM固定的生物素化hMSLN-His Acro、全長生物素化人類或食蟹獼猴MSLN-His-Avi，與選擇作用的輪次中使用的抗原一致。包括鏈黴抗生物素蛋白平盤或固定不相關的生物素化His標誌的抗原之平盤作為陰性對照。挑選具有MSLN結合信號比陰性對照的信號更高至少4倍的殖株並定序其等之可變異區，導致鑑定出156種獨特的VH/VL序列組合，隨後選擇其等用於可溶性表現。從所有選擇活動挑選殖株，包括表位遮蔽選擇。關於各殖株，VH及VL個別選殖至分別含CH1、CH2(CH2域內有LALA突變(Bruhns等人 ，2009；Hezareh等人 ，2001)及CH3域或CL域，之pTT5表現載體(National Research Council of Canada)內。所產生有LALA突變(AA)的pTT5-FS28 VH及pTT5-FS28 VL載體暫時地共轉染至HEK293-6E細胞內且殖株生產為完整的IgG1分子。使用同樣的方法，選殖SS1之VH及VL區域及抗-母雞卵白溶菌酶抗體HelD1.3且表現呈IgG1 LALA格式，產出G1-AA/SS1(序列辨識編號140 (重鏈)及141 (輕鏈))及G1-AA/HelD1.3(序列辨識編號138 (重鏈)及139 (輕鏈))，分別作為陽性及陰性對照。4.3 針對重組MSLN 之 結合作用的 篩選 4.3.1 結合ELISA
含可溶性抗MSLN結合殖株之HEK293上清液或純化的殖株係藉由ELISA來篩選與人類MSLN-His Acro、hMSLN-His-Avi以及，針對某些活動，cMSLN-His-Avi之結合。簡言之，hMSLN-His Acro、hMSLN-His-Avi、cMSLN-His-Avi或不相關的His標誌的抗原係於4 ℃下、以25 nM塗覆於maxisorp平盤過夜。隔天，用含0.05 %吐溫20及2% Marvel乳粉(Marvel乾燥乳粉)的300 µl PBS阻斷平盤。含抗MSLN mAb的上清液或純化的蛋白係在室溫下孵育1小時以及用辣根過氧化物酶(horse radish peroxidase(HRP))複合的小鼠抗人類Fc-IgG抗體來偵測其等之結合。捨棄顯現出結合不相關的抗原或與人類及食蟹獼猴抗原二者沒有交叉反應性的殖株。此外，結合截斷的MSLN抗原，hMSLN-His Acro，但不結合全長MSLN抗原，MSLN-His-Avi之殖株沒有繼續向前，因預期全長抗原會更能代表表現MSLN的細胞之細胞表面的抗原構形。
為了確保抗體對MSLN的結合有專一性，亦測試抗MSLN結合殖株對於醣基化及去糖基化的MSLN之微差結合(differential binding)。生物素化hMSLN-His-Avi係使用PNGase F酵素(NEB, P0704L)於37℃下予以去糖基化歷時24 hr，使用Amicon超離心濾器(Millipore, UFC901024)予以純化且以25 nM塗覆於maxisorp平盤。獨特的抗間皮素mAbs與MSLN之ELISA結合係使用小鼠抗人類Fc-IgG-HRP (Sigma, A0170)來偵測。去糖基化與糖基化的MSLN抗原相比，結合信號顯示超過2倍的降低之殖株被排除在該組初始的抗MSLN結合mAbs之外。4.3.2 BIAcore 篩選
使用胺偶合套組(GE Healthcare, BR10050)使人類MSLN-His-Avi固定於一種CM5 S系列Biacore感測器晶片(GE Healthcare, BR100530)的流動室2上達大約200回應單位(RU)。留下流動室1作為空白用於扣除。HEK293上清液或純化的蛋白係以HBS-EP+ (GE Healthcare)調整成大約每樣本50 nM抗MSLN mAb。以30 µl/min來注射樣本流過流動室1及2歷時2.5 min然後允許於HBS-EP緩衝液內解離2.5 min。以30 µl/min的速度注射10 mM甘胺酸pH 1.5(GE Healthcare, BR100354)歷時30秒以完成再生。經扣除的數據(流動室2–流動室1)係使用BIAevaluation 3.2軟體(GE Healthcare)來分析。從結合ELISA此分析測試的86種殖株中，39種殖株於50 nM顯現出大於10 RU的結合回應且因而挑選用於再表現、純化及進一步篩選。4.3.3 根據結合 的MSLN 區域之抗體分箱(Binning)
根據ELISA與Biacore篩選數據，繼而以分箱分析來測試殖株，該分析係藉由生物層干涉術(BLI)於Octet(ForteBio)上、於另一mAb存在下測試mAbs與人類MSLN之結合。
簡言之，生物素化hMSLN-His-Avi(5 µg/ml)結合於鏈黴抗生物素尖端上(ForteBIO, 18-5020)歷時5 min。G1-AA/SS1係以1x動力學緩衝液(FortéBIO, 18-1092)稀釋達200 nM且允許與hMSLN-His-Avi結合歷時5分鐘。接著，評估含有200 nM的測試mAb及200 nM的G1-AA/SS1之混合物之結合歷時5分鐘。將此與測試mAb在沒有結合的G1-AA/SS1的情況下與hMSLN-His-Avi之結合作比較，來判定在沒有SS1的情況下(即沒有競爭結合的情況下)最大可能的結合程度。設若二種抗體競爭結合相同的MSLN區域，則該測試抗體不會結合。
此等以G1-AA/SS1進行的分箱實驗透露測試的FS28結合者中的大多數(23種中的19種)於G1-AA/SS1存在下不能結合MSLN且因而能認為是結合G1-AA/SS1相似的區域。呈Fab格式的SS1抗體之MSLN結合位址已有報導(Ma等人 ，2012)以及定義為一種包含胺基酸7至64的N端區域，該區域亦涉及MUC16結合。額外的殖株，FS28-185及FS28-256，確定顯示與SS1部分競爭或沒有競爭結合。此等殖株對彼此之分箱透露此等殖株代表二種額外的獨立箱(bins)，即能結合另外二種不同的MSLN區域。FS28-185歸為一箱(‘第2箱’)，而FS28-256 歸於不同的一箱(‘第3箱’)。此等結果顯示章節1.2中的表位遮蔽選擇是成功的，因為鑑定出結合MSLN的多個區域之抗體。4.3.4 親和力
關於實施例 4.3.3 中所述的每種箱，除了人類或食蟹獼猴MSLN-His-Avi係固定50或100 RU之外，均使用如實施例 4.3.2 所述相同的方法來判定結合動力學。殖株係以3倍稀釋之濃度範圍81 nM至0.33 nM來測試。將結合者分級以及自每種箱挑選最好的：FS28-024來自第1箱；FS28-185來自第2箱，及第3箱之FS28-256。此等殖株全部都為食蟹獼猴交叉反應性的(資料未顯示)，但未計算於此等測試條件下的親和力。如表 4 中所示，50 RU固定的MSLN得到的親和力比100 RU固定的MSLN抗原得到的該等親和力更低，此證實較高位準的MSLN之結合作用增加。表4 ： 親代MSLN mAbs的動力學分析
Figure 108124775-A0304-0005
 4.4MUC16-MSLN 阻斷 分析
FS28-024、FS28-185及FS28-256係用阻斷分析來測試其等阻斷MUC16與間皮素結合的能力。從文獻中知道SS1會阻斷MUC16與MSLN結合(Ma等人 ，2012)。分別包括含有如SS1一樣的CDRs且亦預料會阻斷MUC16結合之G1-AA/SS1，以及對照IgG1抗體(G1AA/HelD1.3)作為陽性及陰性對照。
簡言之，重組人類MUC16(R&D Systems, 5809-MU-050)係以0.65 µg/ml配於1x PBS予以塗覆於maxisorp平盤於4 ℃下過夜。平盤係以1xPBS清洗3x且用含2%吐溫20及2% Marvel乳粉的300 µl PBS阻斷。(0.23 nM至500 nM，3倍稀釋)濃度的抗MSLN mAbs與生物素化hMSLN-His-Avi抗原(終濃度2 µg/ml)配於100 µl體積在室溫下預混合1 hr。移去阻斷溶液之後，添加mAb/MSLN混合物至平盤並在室溫下孵育1 hr。以PBST(1x PBS及0.05%吐溫20)清洗平盤3x並與鏈黴抗生物素蛋白-HRP(Thermo Scientific, 21126，以1xPBS 1:1000稀釋)在室溫下孵育1 hr。最後，用PBST清洗平盤3次以及用PBS清洗平盤3次。藉由添加100 µl TMB歷時15 min，接著100 µl 1M硫酸溶液而使與MUC16結合的MSLN顯現。讀取450-630 nm之吸光度(Gen5軟體，BioTek)。
第1箱殖株FS28-024顯示出劑量依賴式的阻斷MUC16-MSLN的交互作用，類似於G1-AA/SS1。FS28-256類似於陰性對照G1-AA/HelD1.3沒有顯示任何的阻斷活性。然而FS28-185促進MUC16與MSLN之結合。此等結果與實施例 4.3.3 的分箱數據一致，因為結合三個不同的MSLN區域的殖株才會於配體阻斷分析顯示出三種不同的行為。
總之，該結果顯示挑選出一組結合3個不同的MSLN區域的殖株(箱)；結合MSLN的一個區域之抗體阻斷MUC16與MSLN之結合，然而結合另外二個區域之抗體則不會。4.5 專一性
鑒於該組抗體結合不同的MSLN區域，所以測試其等結合MSLN的專一性。FS28-024、FS28-185及FS28-256的專一性係藉由ELISA予以測試，其係透過比較與MSLN之結合作用以及與涉及細胞黏著的其他分子之結合作用，例如CEACAM-5、E-鈣粘蛋白、凝血酶調節素及EpCAM。
使用如實施例4.3.1 中所述類似的程序，其中以1 µg/ml的重組人類MSLN-His-Avi、人類CEACAM-5-His-Fc(Sino Biological, 1077-H03H)、人類E-鈣粘蛋白(R&D systems, 8505-EC)、人類凝血酶調節素(Peprotech, 100-58)或人類EpCAM-hFc(機構內部生產)塗覆於maxisorp平盤。所測試之0.02至1000 nM濃度範圍(3倍稀釋)的抗MSLN mAbs之結合作用係使用抗人類Fab-HRP(Sigma, A0293)來偵測。FS28-024，以及FS28-185及FS28-256結合人類MSLN-His-Avi(EC50 約0.5 nM及最大結合信號為3)但是高達1000 nM都沒有觀察到與所測試的任一細胞黏著分子之結合。正如所料，陽性對照抗體與其等個別的標靶結合。因而，抗MSLN抗體顯示出高位準的專一性。4.6 細胞 結合
分析該組挑選出的抗間皮素mAbs(FS28-024、FS28-185及FS28-256)與人類肺癌細胞株NCI-H226上的內生細胞表面MSLN之結合。
簡言之，使用消化酶(Accutase) (Gibco, A11105-01)從T175細胞培養瓶收穫NCI-H226細胞(ATCC CRL-5826)。以1200 rpm離心細胞3 min且以2x106 個細胞/ml再懸浮於由DPBS(Life Technologies, 14190169)及1% BSA(Sigma-Aldrich, A7906)組成之冰冷的FACS緩衝液內，並且每孔播種50 µl於96孔V底平盤內(Costar, 3894)。所有測試的mAbs係以0.01-200 nM的濃度範圍稀釋於120 µl FACS緩衝液內(4倍稀釋)。NCI-H226細胞繼而予以離心，移去上清液及使細胞再懸浮於每mAb的100 µl稀釋物內並於4 ℃下孵育45 min。用150 µl FACS緩衝液離心來清洗細胞二次，再懸浮於100 µl含以1:1000稀釋於FACS緩衝液之山羊抗人類IgG(γ-鏈專一性) F(ab′)2片段−R-藻紅素抗體(Sigma, P8047)並且於4 ℃下孵育45 min。用150 µl FACS緩衝液清洗細胞一次然後用150 µl DPBS清洗細胞，再懸浮於含1:10.000之DAPI(Biotium, 40043)的150 µl DPBS內且以BDCantoII或iQue(Intellicyt)來讀取。使用FlowJo v10來分析數據以判斷每孔內活細胞的PE之信號的幾何平均。
mAb² FS28-024與NCI-H226細胞上的細胞表面的MSLN結合，如同陽性對照G1-AA/SS1一般。相比之下，FS28-185及FS28-256與細胞表面的MSLN展現出較弱的結合。 初始的篩選程序之總結
從初始的噬菌體庫之起始篩選所鑑定出的156種mAbs，根據一組篩選分析挑選三種抗人類MSLN mAb殖株(FS28-024、FS28-185及FS28-256)，其首先確認與全長、去糖基化的重組MSLN之結合以及與食蟹獼猴MSLN結合的能力。其次，殖株係根據其等結合的MSLN區域(箱)的多樣性及MUC16的阻斷活性予以分組以及從此等組別內選擇親和力最高的結合者。該組產生的mAb殖株FS28-024、FS28-185及FS28-256結合三個不同的MSLN區域，其等中的一者(第1箱，FS28-024)阻斷MUC16與MSLN之活體外 結合。 該組五種抗MSLN抗體顯示出對MSLN專一性的結合，對於重組及細胞表面的MSLN的親和力不同以及被選擇用於進一步特徵化及/或最佳化，如以下實施例 5 中所述。 實施例5：初始的抗MSLN mAbs之親和力成熟及序列最佳化5.1 殖株FS28-024 利用NNK 移動(NNK walk) 之親和力成熟
儘管FS28-024係以次納摩爾之親和力與人類MSLN結合，但其對於食蟹獼猴MSLN之親和力為大約低5倍。為了改良與食蟹獼猴MSLN之結合，使用VH CDR3區域內的五個殘基之NNK移動策略。
使FS28-024 VH及VL序列最佳化。藉由每次使VH CDR3的RATLF殘基(Kabat編號95-99)中的一個胺基酸殘基多樣化來產生簡約突變誘發庫，導致總計五種個別的庫。用具有低冗餘性的NNK密碼子來製作該等庫以代表感興趣的位置所有可能的胺基酸。依據Quickchange Lightning定點誘變套組(Agilent, 200518)之指導方針來設計順向及反向引子，該套組係用來創造該等庫。於HEK293細胞內小規模表現每種突變體且上清液係藉由BIAcore來篩選對於人類及食蟹獼猴MSLN-His-Avi之結合之保留或改良。篩選的84種殖株中，保留結合作用的很少，其等多數的T98殘基是經取代的。四種殖株，FS28-024-051、FS28-024-052、FS28-024-053及FS28-024-060予以再表現、純化及判定其等對於人類及食蟹獼猴MSLN之親和力。只有一種殖株，FS28-024-053於食蟹獼猴的交叉反應性上顯示出有改良，其係由單一T98V突變(Kabat編號)達成。因四種殖株可提供替代的序列及特徵所以其等全體都繼續向前。5.2 FS28-185 及FS28-256 之親和力成熟
與FS28-024相比，殖株FS28-185及FS28-256對於重組及細胞表面的MSLN二者之親和力較弱且因而經歷親和力成熟。
呈scFv格式之VH及VL CDR3區域係藉由使用NNK引子來隨機化重疊的五至六個胺基酸匣而同時進行親和力成熟。FS28-185之隨機化的區域為VH G95-M100F及VL S91-A95而在FS28-256方面其等為VH Y95-L100B及VL S91-I96(Kabat編號)。在基因庫產生(library generation)之前，於CDR1及CDR3區域內可能的甲硫胺酸氧化及脫醯胺作用位址執行簡約突變誘發(除了FS28-256 VL CDR3庫之外)。執行如初始活動所述的兩輪選擇作用，第1輪使用20 nM生物素化的人類MSLN-His-Avi且第2輪使用20或2 nM食蟹獼猴MSLN-His-Avi。繼而測試可溶性scFv(單點濃度)與卵巢癌細胞株OVCAR-3 (ATCC® HTB-161™ )的結合作用。使用StemPro Accustase (Gibco, A11105-01)收穫OVCAR-3細胞，以1200 rpm離心3 min及以2x106 個細胞/ml再懸浮於FACS緩衝液(含有2% BSA之DPS)內。添加100 μl的OVCAR-3細胞至96孔V底平盤內。以1200 rpm離心平盤3 min以及丟棄緩衝液。添加150 µl的scFv至細胞及於4 ℃下孵育1小時。包括親代殖株FS28-185及256之ScFvs作為對照。清洗之後，細胞再懸浮於100 μl的Penta His Alexa-Fluor 647(Qiagen, 109-546-098)內，以及清洗然後再懸浮於100 µl含有Sytox綠色核酸染料(Green Nucleic Acid Stain) (Invitrogen S7020，1:10000稀釋)之DPBS內。於iQue (Intellicyt Corporation, IQue Plus)運行樣本並記錄APC的幾何平均。
在FS28-185及FS28-256二者方面，鑑定出與OVCAR-3細胞的結合有改良的親和力成熟的殖株。在細胞結合(MFI大於850)及序列多樣性的基礎上，自FS28-256 VH CDR3選擇作用選出10種殖株以及自VL CDR3選擇作用選出9種殖株。於此分析測試的38種FS28-185親和力成熟的殖株之中，14種選自VH CDR3選擇作用以及一種選自VL CDR3選擇作用。挑選的殖株供用於以mAb2 雙專一性抗體格式予以進一步特徵化。5.3 FS28-185 及FS28-256 基的(based)mAb2 之產生
為了進一步特徵化抗MSLN結合者，所以生產呈mAb2 格式的FS28-024、FS28-185或256之親和力成熟的VH或VL區域，以及親代殖株。產生的mAb2 為IgG1抗體，其包含FS28-024、FS28-185或FS28-256殖株或其等衍生的親和力成熟的突變體之CDRs，包括LALA突變於CH2域內，及人類CD137受體結合位址於CH3域內。下列序列辨識編號顯示產生的mAb2 分子之重及輕鏈序列： FS22-172-003-AA/FS28-024 mAb2 ：序列辨識編號94及85 FS22-172-003-AA/FS28-024-051 mAb2 ：序列辨識編號98及85 FS22-172-003-AA/FS28-024-052 mAb2 ：序列辨識編號102及85 FS22-172-003-AA/FS28-024-053 mAb2 ：序列辨識編號106及85 FS22-172-003-AA/FS28-024-060 mAb2 ：序列辨識編號108及85 FS22-172-003-AA/FS28-026 mAb2 ：270 序列辨識編號109及87 FS22-172-003-AA/FS28-091 mAb2 ：序列辨識編號110及88 FS22-172-003-AA/FS28-185 mAb2 ：序列辨識編號111及89 FS22-172-003-AA/FS28-256 mAb2 ：序列辨識編號114及116 FS22-172-003-AA/FS28-256-001 mAb2 ：序列辨識編號120及82 FS22-172-003-AA/FS28-256-005 mAb2 ：序列辨識編號120及83 FS22-172-003-AA/FS28-256-012 mAb2 ：序列辨識編號125及116 FS22-172-003-AA/FS28-256-014 mAb2 ：序列辨識編號129及116 FS22-172-003-AA/FS28-256-018 mAb2 ：序列辨識編號133及116 FS22-172-003-AA/FS28-256-021 mAb2 ：序列辨識編號125及82 FS22-172-003-AA/FS28-256-023 mAb2 ：序列辨識編號133及82 FS22-172-003-AA/FS28-256-024 mAb2 : 序列辨識編號125及83 FS22-172-003-AA/FS28-256-026 mAb2 ：序列辨識編號133及83 FS22-172-003-AA/FS28-256-027 mAb2 ：序列辨識編號125及84 FS22-172-003-AA/FS28-256-271 mAb²：3及84 FS22-172-003-AA/FS28-256-272 mAb²：158及84 FS22-172-003-AA/FS28-256-273 mAb²：163及84
藉由暫時表現於HEK293-6E細胞來生產此等mAb2 及，如有指示，使用mAb Select SuRe蛋白A管柱予以純化。5.4 FS28-256 親和力成熟 的 殖株之 序列最佳化
所有FS28-256譜系殖株都含有一個可能的N-鍵接醣基化位址(IMGT編號N55-X-S57，其中X為任一殘基)於VH CDR2內。殖株FS28-256-027的四種突變體係藉由取代VH CDR2之N55為丙胺酸、組胺酸、絲胺酸及蘇胺酸來獲得。此等殖株分別名為FS28-256-271、FS28-256-272、FS28-256-273及FS28-256-274。該等殖株針對與固定的及在溶解狀態中(in-solution)的MSLN之結合作用、藉由SPR予以特徵化。表 5 顯示SPR結果。FS28-256-274對固定的MSLN的結合親和力比其他殖株弱得多因而沒有進行。FS28-256-272及FS28-256-273以其等結合固定的MSLN更强力或以相似的強度結合可溶性MSLN。結果，此等殖株二者與細胞表面表現的MSLN之結合很可能將受到可溶性MSLN存在的影響。相比之下，FS28-256-271與固定的MSLN的結合最強且與可溶性MSLN的結合較弱而使其比起在溶解狀態中的MSLN，會優先靶定固定的MSLN。表 1 ： 對固定的及在溶解狀態中的人類間皮素的結合作用
Figure 108124775-A0304-0006
 Fcab及mAb的選擇及篩選程序之總結
先前實施例鑑定出的抗CD137 Fcabs於NF-κB報告基因分析中、當以外部交聯劑如蛋白L交聯時，顯示出具有促效劑活性(實施例2 )。於該組鑑定出的抗人類CD137 Fcabs中，選擇FS22-172-003用於與MSLN-靶定Fabs配對，因為此殖株呈現最有利的功能及生物物理性質。
為了使此CD137驅動的促效劑活性定位在腫瘤微環境，決定要使呈mAb2 格式的Fcab與專一性地靶定腫瘤關聯性抗原，間皮素(MSLN)之Fabs配對。此可能是有益的，因為腫瘤細胞上的MSLN表現預期會導致mAb²之交聯而使得Fcab在結合CD137時將能誘發促效劑活性。
選擇出一組MSLN結合Fabs，其結合MSLN的不同區域且會比起可溶性的間皮素優先結合固定的MSLN，如先前實施例鑑定出的。 實施例6：靶定CD137及間皮素(MSLN) mAb2 的生產
生產由IgG1分子所構成的CD137/MSLN mAb2 ，其包含抗CD137 Fcab FS22-172-003和一組抗MSLN Fabs(表6 所列)以允許特徵化呈mAb2 格式的該配對。其等之製備係藉由以CH3域Fcabs的一部分，包含AB、CD及EF環，取代MSLN結合抗體之CH3域的對應區。此等CD137/MSLN mAb²含有LALA突變於CH2域(AA)。mAb2 的同型為人類IgG1，其能誘發ADCC對抗其所結合的細胞。既然CD137/MSLN mAb2 會結合表現CD137的免疫細胞，所以決定藉由含括LALA突變來減少mAb2 誘發ADCC對抗免疫細胞的可能性。而且，已知效應子細胞上的Fc γ受體於活體內 會誘發抗體交聯，雖然此為低效率且可能發生在遠離治療感興趣的位址。既然CD137抗體於臨床上已經顯示與劑量限制性毒性有關連，所以決定含括LALA突變以使得CD137/MSLN mAb2 只能通過結合MSLN之交聯來發揮選擇促效劑活性。藉由暫時表現於HEK293-6E細胞來生產全部的mAb²及對照抗體且使用mAb Select SuRe蛋白A管柱予以純化。繼而藉由SEC-HPLC來評估mAb²的純度，確保該分子的單體百分率超過98%。
表6 ： 研究其等之結合特徵及功能性的mAb2 分子清單
Figure 108124775-A0304-0007
 實施例7：CD137/MSLN mAb2 之特徵化
CD137/MSLN mAb²與CD137及MSLN之結合強度係藉由表面電漿子共振、使用Biacore儀器來測試，以及與細胞表面表現的MSLN之結合係藉由流動式細胞測量術於內生表現MSLN之相關細胞株上測試。因MSLN陽性癌症的患者血清內發現可溶形式的MSLN，其係膜結合的MSLN藉由選擇式剪接或腫瘤壞死因子a-轉化酶(TACE)產生的，據推測此可能作用為治療抗體的誘餌(Lee等人 ，2018)。吾人研究mAb²之結合特徵及總結合性(avidity)，特別是，可溶性及固定的MSLN之結合親和力差異。此係以兩種方式設置的BIAcore結合實驗來測量：首先，為了重現結合細胞表面上存在的抗原之mAb²的動力學剖析，重組抗原係以中等密度固定於SPR晶片上，接著注射不同濃度的mAb²(參見實施例 7.1 )。其次，為了模擬循環可溶性MSLN對於mAb²結合細胞表面結合的MSLN造成的可能槽效應，mAb²被捕捉於晶片上然後不同濃度的重組抗原從上面流過(參見實施例 7.2 )。此外，添加MSLN陽性的患者血清內典型存在的代表性位準之可溶性重組MSLN的效應(Onda等人， 2006, 10.1158/1078-0432.CCR-05-1477)亦於與細胞表面表現的MSLN之結合研究及CD8+ T細胞分析中予以透徹研究。7.1 CD137/MSLN mAb2 於熱切結合條件下與人類MSLN 之 結合- 抗原捕捉法
測試所有的mAb2 與BIAcore晶片上固定的MSLN之結合作用以判定於熱切結合條件下與人類MSLN之結合親和力，其中高濃度固定的抗原是可利用的而允許抗體能熱切地結合。hMSLN-His-Avi係依照製造商的指示、以大約100RU塗覆至一種CM5晶片(GE Healthcare BR-1005-30)。表 6 中所述的該組CD137/MSLN mAb2 ，以及對照抗體G1-AA/HelD1.3與G1-AA/SS1(Hassan等人之 2002)係以70 µl/min之流速、以300 nM開始之3倍稀釋系列的濃度範圍予以注射。締合時間為5 min以及解離時間為10 min。運行緩衝液為HBS-EP(GE Healthcare BR100188)。以30 µl/min的流速注射甘胺酸-HCl pH1.5歷時30秒以使流動室再生。數據係藉由雙重參考對照刻意保留空白的流動室(沒抗原塗覆)來分析。用1:1朗繆模型來擬合結合動力學以產生結合締合(ka )及解離(kd )率。平衡結合常數(KD )係藉由各樣本之解離率除以締合率來計算。用BiaEvaluation軟體3.2版本來執行數據分析。結果顯示於表 7 內。
包含FS28-185及FS28-256親代MSLN Fab臂之FS22-172-003-AA/FS28-185及FS22-172-003-AA/FS28-256 mAb²顯示出介於36與50 nM之間的結合親和力。除此以外，所有包括FS28-256的親和力成熟後代之mAb²，呈現出低於10 nM的MSLN結合親和力(KD )。甚至，含有來自譜系FS28-024之MSLN Fab臂的該等mAb²經判定有次納摩爾KD 。
關於mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271，藉由SPR、使用穩態動力學分析來判定食蟹獼猴交叉反應性。hMSLN-His-Avi或cMSLN-His-Avi係依照製造商的指示、以大約50RU塗覆至一種CM5晶片(GE Healthcare BR-1005-30)。mAb²係以10 µl/min之流速、以243 nM開始之3倍稀釋系列的濃度範圍予以注射。締合時間為1000 sec達穩態以及解離時間為30 sec。運行緩衝液為HBS-EP(GE Healthcare BR100188)。以30 µl/min的流速注射甘胺酸-HCl pH1.5歷時30秒以使流動室再生。數據係藉由雙重參考對照刻意保留空白的流動室(沒抗原塗覆)來分析。用BiaEvaluation軟體版本3.2、使用穩態親和力模式來分析動力學數據。與cMSLN-Avi-His的結合作用為與hMSLN-Avi-His的結合作用之3倍以內。7.2 CD137/MSLN mAb2 與 可溶性 人類MSLN 之結合- 抗體捕捉法
亦藉由SPR來測試表 7 中所述的CD137/MSLN mAb²以及對照抗體G1-AA/HelD1.3與G1-AA/SS1與人類MSLN及食蟹獼猴MSLN之結合，其中該等抗體被捕捉以評估其等與在溶解狀態中的MSLN之結合(在溶解狀態中的KD )。使用大約100RU之蛋白G(GE Healthcare 29179315)來捕捉mAb或mAb²樣本，之後hMSLN-His-Avi或cMSLN-His-Avi係以70 µl/min之流速、以1000 nM開始之三倍稀釋系列的濃度範圍予以注射。締合時間為5 min以及解離時間為5 min。運行緩衝液為HBS-EP(GE Healthcare BR100188)。以30 µl/min的流速注射甘胺酸-HCl pH2.1歷時15秒以使流動室再生。數據係如實施例 7.1 中所述予以分析。結果顯示於表 7 內。從抗體捕捉法，多數mAb2 具有顯著降低的結合親和力，支持用於產生針對固定的相對於可溶性MSLN有微差結合之熱切的抗MSLN抗體所實施之篩選策略。結合可溶性MSLN之KD 值係介於最佳的mAb² FS22-172-003-AA/FS28-024-060的4.27 nM和具有最低的親和力之mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256的1.2 µM之間。
全部測試的mAb²都為食蟹獼猴交叉反應性的且親和力在人類MSLN的親和力10倍之內，除了mAb² FS22-172-003-AA/FS28-024-060之外，其之交叉反應性與人類MSLN相比少了54倍所以沒有進一步繼續。表7 ：依SPR所測量之人類CD137/MSLN mAb²對固定的MSLN及在溶解狀態中的MSLN之結合作用
Figure 108124775-A0304-0008
 N/A – 未測試
全部的mAb2 的MSLN結合Fab臂(以KD 來測量)的親和力都已經藉由抗原捕捉(固定的MSLN)及抗體捕捉(在溶解狀態中的MSLN)法二者來確認。在溶解狀態中相對於固定的KD 值因每種抗體而變化。由此等KD 值計算一比率，其針對每種mAb2 之行為—就其之結合作用是否由於可溶性MSLN存在而改變而言—給出了指示(表7 )。不希望受理論束縛，但吾人推測針對mAb2 要能有效地交聯有結合親和力的閾值必須克服，但是就此的功能性可能如何受脫落的MSLN驅動的槽效應影響而言，對固定的相對於在溶解狀態中的MSLN之結合親和力差異亦起了重要作用。7.3 與CD137 之Biacore 結合作用：mAb2 格式保留的結合親和力
除了對MSLN之結合強度以外，亦測試CD137 Fcab對人類CD137之KD 以證明Fcab當與新的Fabs配對時保留了結合性質。抗人類Fab係使用人類Fab捕捉套組(GE Healthcare 28958325)、依照製造商的條件塗覆至一種Biacore CM5晶片達到大約9000 RU的表面密度。捕捉FS22-172-003-AA/FS28-024-052及FS22-172-003-AA/FS28-256-271樣本達到大約100 RU然後使人類CD137抗原(hCD137-mFc-Avi)以70 µl/min之流速、以81 nM開始之三倍稀釋系列的濃度範圍流過。締合時間為5 min以及解離時間為5 min。運行緩衝液為HBS-EP。以30 µl/min的流速注射二次重複注射之10mM甘胺酸-HCl pH2.1歷時30秒以使流動室再生。數據係如先前的實施例(見例如實施例 7.1 )中所述予以執行。表 8 內的結果顯示於含有相同的Fcab但不同的Fabs的mAb²之間對於CD137的親和力是一致的。選擇抗CD137 Fcabs而使其等比起單體CD137會經由熱切的結合交互作用而優先結合二聚體或多聚體CD137。一般假設此總結合性模式有益於優先靶定CD137表現上調的細胞，例如活化的T細胞，而不是其他表現低很多CD137位準的細胞。這點可能對於使脫靶的T細胞活化最小化是有益的，脫靶的T細胞活化會導致非所欲的效應如毒性。而且，Fcabs經設計成於交聯時具有活性使得其等不能單純地藉由結合CD137來誘發致效作用。於此等CD137/MSLN mAb²的情況中，一般認為該分子的二種專一性之動力學作用模式可導致mAb²優先與腫瘤細胞上高位準表現之上調的MSLN結合，接著與CD137表現上調的活化的T細胞結合。由於該分子的Fcab域之結合動力學，如果mAb²分子首先結合T細胞上的CD137，缺少MSLN媒介的交聯作用就會確保不觸發T細胞致效作用。表8 ：依SPR所測量之mAb²與二聚體CD137抗原的結合作用
Figure 108124775-A0304-0009
 7.4 與 細胞表面表現 的MSLN 之結合作用及可溶性MSLN 之干擾
為了確認與細胞表面的MSLN的結合作用，分析表 9 中列出的mAb²與人類肺癌細胞株NCI-H226上的內生細胞表面MSLN之結合。此外，且因為血液內可發現脫落的可溶性形式的MSLN，此循環MSLN可能影響吾人之mAb2 之暴露且最終影響效能的風險。為了確認存在的可溶性MSLN具有最小的影響力，NCI-H226細胞於20 nM可溶性MSLN存在下執行額外的結合實驗，20 nM可溶性MSLN為發現有用於界定惡性的間皮瘤及肺癌患者為MSLN陽性的診斷價值之可溶性MSLN的位準(Cui等人 ，2014)的10-20倍。簡言之，使用消化酶(Gibco, A11105-01)以從T175細胞培養瓶收穫NCI-H226細胞(ATCC CRL-5826)。當增補可溶性MSLN時略微改變抗體製備程序：以FACS緩衝液稀釋抗體以提供2X終濃度於96孔V底平盤內並繼而來自每孔的60 µl添加FACS緩衝液單獨或含有60 µl的40 nM重組hMSLN-His(R&D systems, 3265-MS-050)之FACS緩衝液(以提供20 nM hMSLN之終濃度)以及於室溫下預孵育1小時然後添加100 µl給細胞。
於兩種情況中，細胞均以1200 rpm離心3 min且以2x106 個細胞/ml再懸浮於由DPBS(Life Technologies, 14190169)及1% BSA(Sigma-Aldrich, A7906)組成之冰冷的FACS緩衝液內，並且每孔播種50 µl於96孔V底平盤內(Costar, 3894)。所有測試的抗體係以0.01-200 nM的濃度範圍稀釋於120 µl FACS緩衝液內(4倍稀釋)。NCI-H226細胞繼而予以離心，移去上清液且使細胞再懸浮於100 µl的每mAb稀釋物內並於4 ℃下孵育45 min。用150 µl FACS緩衝液離心來清洗細胞二次，再懸浮於100 µl其含有以1:1000稀釋於FACS緩衝液之山羊抗人類IgG(γ-鏈專一性) F(ab′)2片段−R-藻紅素抗體(Sigma, P8047)並且於4 ℃下孵育45 min。用150 µl FACS緩衝液一次然後用150 µl DPBS清洗細胞，再懸浮於含1:10.000之DAPI(Biotium, 40043)的150 µl DPBS內且以BDCantoII或iQue(Intellicyt)來讀取。使用FlowJo v10來分析數據以判斷每孔內活細胞的PE之信號幾何平均。
根據表9 的細胞結合結果，確認了所有的mAb2 與內生表現細胞株NCI-H226的細胞表面的MSLN之結合作用且EC50 值範圍為0.3至大於47 nM。可溶性的重組MSLN存在對於細胞結合親和力的影響一般很低且多數殖株觀察到最小的(小於3倍)EC50 增加。
於可溶性MSLN存在及不存在下，FS22-172-003-AA/FS28-256具有比所測試的多數其他的殖株更高的EC50 ，表示親代FS28-256抗體的結合作用很弱。然而，此親代抗體之親和力成熟的突變體展現出更強的結合作用。特別是，含有FS28-256衍生的殖株，例如FS28-256-001、FS28-256-005、FS28-256-012、FS28-256-014、FS28-256-018、FS28-256-023、FS28-256-024及FS28-256-026，之mAb²的細胞結合親和力比親代好很多且不受可溶性MSLN的存在影響。此證明甚至在於過量可溶性MSLN存在下，多數mAb²優先與膜結合形式的MSLN結合。含有FS28-024-060及FS28-256-027之mAb²在可溶性MSLN存在下結合細胞時受影響最大，表示對在溶解狀態中的MSLN之較高親和力的結合者更有可能受到脫落的MSLN存在影響。含有親代FS28-185殖株之mAb2 (即FS22-172-003-AA/FS28-185)也有較高的EC50 值，所以於可溶性重組MSLN存在及不存在下顯示出較弱的結合作用。亦測試親代殖株之親和力成熟的突變體。觀察到此等呈mAb2 之親和力成熟的殖株的結合作用在沒有可溶性MSLN的情況下有改良。表9 ：CD137/MSLN mAb²與NCI-H226細胞的結合作用
Figure 108124775-A0304-0010
 ND–經測試，無活性所以未判定EC50 E最大 N/A–未測試7.5 mAb² 與帶有範圍廣大的內生 間皮素 表現位準之 細胞株結合
為了證明抗MSLN Fab殖株FS28-256-271與表現一系列MSLN細胞密度的細胞之結合能力，mAb²係以實施例7.3中所述類似的分析之細胞結合流動式細胞測量術分析來測試，其中使用下列人類癌細胞：NCI-H226[H226] (ATCC® CRL-5826)、OVCAR-3[OVCAR3] (ATCC® HTB-161)及AsPC-1[AsPC-1] (ATCC® CRL-1682™)。實施例 2 中所述的MSLN陰性細胞株HEK.FRT亦用作為陰性對照。為了判定每個細胞株的MSLN相對表現，遵循製造商建議的程序來使用抗體結合能力(ABC) (Quantum™ Simply Cellular® #816 Bangs Labs)。細胞株按MSLN表現位準來分級，且H226具有測試的該等中最高的MSLN(ABC 315,478)，OVCAR3具有中間位準(ABC 103,444)，AsPC-1具有低位準(ABC 20,999)。
細胞結合分析的結果顯示於表 10 中。就表現位準而言，FS28-256-271與所測試的細胞株中MSLN表現最高的H226之結合較強。mAb²與OVCAR-3及AsPC-1細胞具有可相比的結合作用。正如所料，FS28-256-271選擇性地結合表現MSLN的細胞但不結合陰性HEK.FRT細胞株。結果，CD137/MSLN mAb²將有作用於表現一系列膜MSLN表現位準的細胞之潛力。
表10 ： CD137/MSLN mAb²對於表現範圍廣大的MSLN密度的細胞之細胞結合強度。
Figure 108124775-A0304-0011
 ND–經測試，沒有偵測到結合所以未判定EC50 實施例8 ： CD137/MSLN mAb2之功能活性
為了證明有內生位準的MSLN之細胞株能交聯CD137/MSLN mAb²而導致CD137致效作用及隨後的T細胞活化，所以發展一種使用IL-2或TNFγ細胞介素釋放作為分析終點之胞毒型CD8+ T細胞分析。此T細胞分析中使用實施例 7 中所述的NCI-H226、OVCAR-3、AsPC-1及HEK.FRT來測試CD137/MSLN mAb²。
為了單離T細胞，從血小板捐贈的副產品，白血球耗乏椎來單離末梢血液單核細胞(PBMCs)。簡言之，用PBS沖洗白血球椎內容物以及覆蓋於菲科爾(Ficoll) (Sigma-Aldrich, 1440-02)梯度上。藉由離心來單離PBMCs以及回收沒有越過菲科爾梯度的細胞。用PBS進一步沖洗PBMCs以及通過添加10 ml 1X 紅血球溶解緩衝液(eBioscience, 00-4300-54)遵循製造商的指示來溶解剩下的紅血球。使用CD8+ T細胞單離套組II(Miltenyi Biotec Ltd, 130-096-495)根據製造商的指示、從沖提劑內存在的PBMCs單離CD8+ T細胞。
使用抗CD3抗體孵育作為驅動起始的T細胞活化之第一信號。以配於PBS之8 µg/ml抗CD3抗體(殖株UCHT1, R&D Systems, MAB100-SP)於4 ℃下塗覆96孔平底組織培養平盤過夜。繼而用200 µl PBS清洗平盤3次。8.1 使用NCI-H226 用於MSLN 交聯之CD8+ T 細胞 分析
繼而如上所述從PBMCs單離胞毒型CD8+ T細胞。NCI-H226細胞係以每孔2 x 104 個細胞予以平盤培養於抗CD3抗體塗覆的(8µg/ml)96孔平底平盤上、配於100µl T細胞培養基(RPMI培養基(Life Technologies, 61870-044)加上10% FBS(Life Technologies)、1X青黴素鏈黴素(Life Technologies, 15140122)、1mM丙酮酸鈉(Gibco, 11360-070)、10mM Hepes (Sigma-Aldrich, H0887)、2mM L-麩醯胺酸(Sigma-Aldrich, G7513)以及50µM 2-巰乙醇(Gibco, M6250))內。一旦於孵育4小時後細胞已經黏著，便移去全部的T細胞培養基且以含4.0 x 105 個細胞/ml的濃度之T細胞的50µl T細胞培養基代替，其導致2.0 x 104 個細胞/孔。mAb2 係以60 nM開始、2X終濃度以T細胞培養基稀釋以及進行1:3或1:7連續稀釋。添加50µl的mAb2 滴定至細胞用於200µl的總分析體積及1X濃度的抗體。表 11 提供此分析中測試的分子之細節，使用G1-AA/20H4.9作為每個分析的陽性對照抗體(資料未顯示)。
該分析係於5% CO2 、37℃下孵育歷時72小時。收集上清液且用來自Meso Scale Discovery的V-PLEX IL-2 套組(K151QQD-4)、遵循製造商的指示予以分析。繪製人類IL-2(hIL-2)濃度vs抗體的對數濃度的圖以及產生的曲線係使用GraphPad Prism之對數(促效劑)vs反應方程式來擬合。
表 11 顯示橫跨不同重複的分析之T細胞活化分析中觀察到的EC50 值及最大IL-2釋放反應。由於執行的分析次數，所以使用來自多個供體的T細胞。在每種情況下，每個分析均使用陽性及陰性對照以確保橫跨分析和供體一致的數據集。陽性對照抗人類CD137抗體，20H4.9，顯示出hIL-2釋放增高且EC50為0.5nM。於類似於以上所述但用HEK-FRT而非MSLN陽性的NCI-H226進行的CD8+ T細胞分析中確認了沒有脫靶的CD137媒介的T細胞致效作用，HEK-FRT為未經轉導表現MSLN的細胞。避免脫靶的活化為非常需要的，尤其CD137抗體是因為在臨床上觀察到另一些CD137分子的劑量限制性毒性之例子，且因而使用此因子來決定選擇哪個mAb²組合。下列mAb²顯示出IL-2釋放增高，各者具有次納摩爾EC50：FS22-172-003-AA/FS28-024-051、FS22-172-003-AA/FS28-024-052、FS22-172-003-AA/FS28-024-053、FS22-172-003-AA/FS28-024-060、FS22-172-003-AA/FS28-256-021、FS22-172-003-AA/FS28-256-023、FS22-172-003-AA/FS28-256-026、FS22-172-003-AA/FS28-256-027。圖 1 顯示T細胞活化分析的IL-2釋放代表圖。此等結果暗示包含來自FS28-185譜系的Fabs之mAb²(圖1B )於此特定分析中沒有顯示出功能活性。令人驚訝地，全部與來自FS28-185譜系的Fabs配對之mAb²都顯示出非常有限和減少，或完全沒有IL-2釋放。此暗示雖然Fabs於該譜系內能結合MSLN，但是結合此特定MSLN區域在此分析中MSLN交聯時似乎不能以導致效能增高的方式來交聯CD137/MSLN mAb²。包含來自譜系FS28-024(圖1A )及來自譜系FS28-256的FS28-256-021、FS28-256-023、FS28-256-023、FS28-256-026和FS28-256-027之Fabs的全部mAb²(圖1C )都顯示出hIL-2釋放增高及次納摩爾EC50 。
表11 ： 與NCI-H226肺腺癌細胞共培養之CD137/MSLN mAb²於CD8+ T細胞分析中的功能篩選。
Figure 108124775-A0304-0012
 ND–經測試，無活性所以未判定EC50 E最大 N/A–未測試 於可溶性MSLN存在下、使用NCI-H226之CD8+ T細胞分析
於20 nM濃度的hMSLN-His存在下重複以上所述的CD8+ T細胞功能分析，20 nM為發現具有用於界定惡性的間皮瘤及肺癌患者為MSLN陽性的診斷價值之可溶性MSLN的位準(Cui等人 ，2014)的10-20倍。
圖 2 顯示mAb²的一亞群於可溶性MSLN存在及不存在下的活性。正如所料，相對於可溶性MSLN，與優先結合固定的MSLN之Fabs所配對的該等mAb²之效能，不會被可溶性MSLN改變。具體而言，包含MSLN Fabs FS28-024-051、FS28-024-052、FS28-024-053、FS28-256-021及FS28-256-023之mAb²不受高達20 nM的可溶性MSLN存在影響，此與實施例 7.1 及 7.2 中所述的親和力及細胞結合數據一致。
有趣的是，mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-027在與20 nM的可溶性MSLN一起孵育時表現出最大的效能損失，導致EC50 明顯的位移。此符合實施例 7.1 及 7.2 的親和力結果—FS28-256-027對固定及可溶性MSLN二者都展現出高親和力—從而支持對可溶性MSLN的高親和力不可取的理論。結果與前面描述的假設一致，該假設是優先與膜MSLN結合的殖株受到可溶性MSLN存在的干擾較小。在這種背景下，殖株FS28-256-027與固定及在溶解狀態中的MSLN二者都顯示出高親和力結合以及mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-027之功能數據在以20 nM sMSLN處理時顯示出EC50 明顯的位移。其餘包含MSLN Fabs FS28-024-051、FS28-024-052、FS28-024-053、FS28-256-021及FS28-256-023之mAb²不受存在有高達20 nM影響以及此點與以上所述的親和力及細胞結合數據一致。8.2 使用OVCAR-3 用於交聯之CD8+ T 細胞分析
間皮素陽性癌症的表現位準範圍廣大，所以希望使用其等之細胞表面上MSLN密度較低的細胞來評估實施例 8.1 內所鑑定出具有次納摩爾效力的一些mAb²之功能性。為達成此點，T細胞活化分析係如以上實施例 8.1 所述來執行，但此次使用OVCAR-3細胞株(ATCC® HTB-161)。此等為MSLN陽性卵巢癌細胞其內生表現的MSLN位準比NCI-H226細胞低。遵照如實施例 8.1 中所述顯示相同的程序及下列改變：由於細胞大小及型態的差異，OVCAR-3細胞係以每孔1 x 104 個細胞予以平盤培養於抗CD3抗體塗覆的(8µg/ml)96孔平底平盤上、配於100µl T細胞培養基內。一旦細胞在4小時孵育之後已經黏著，便移除全部T細胞培養基並且以含濃度為8.0 x 105 個細胞/ml的T細胞之50µl T細胞培養基代替，其導致4.0 x 104 個細胞/孔。該結果確認全部測試的mAb²在以OVCAR-3細胞(見圖 3 )交聯時會驅動IL-2釋放的能力。此等數據暗示此等mAb² 有橫跨不同腫瘤細胞株之範圍廣大的MSLN密度運作的潛力。亦於此分析中測試呈HelD1.3假mAb²格式的Fcab FS22-172-003(FS22-172-003/HelD1.3)，因為此Fcab不結合MSLN且缺少IL-2釋放表示該抗人類CD137 Fcab只在經由Fab臂交聯時是有功能的(於此情況中是MSLN)。8.3 序列最佳化的FS28-256 親和力成熟的 殖株 功能篩選
所有含有來自實施例 8.2 所述的FS28-256譜系之抗MSLN Fabs的mAb²於VH CDR2內都含有一個可能的N-鍵接醣基化位址，其係如實施例 5.4 中所述予以移去。生產出帶有下列取代的三種mAb²突變體：FS22-172-003-AA/FS28-256-271、FS22-172-003-AA/FS28-256-272及FS22-172-003-AA/FS28-256-273，其等分別含有依據IMGT命名法之胺基酸取代，N55A、N55H或H55S。為了證明此等序列最佳化的mAb²的效能，CD8+ T細胞活化分析係如實施例 8.1 所述、與MSLN+ NCI-H226細胞共培養來進行。mAb²亦於可溶性MSLN存在下予以測試。
表12 ： 最佳化的FS28-256殖株於可溶性MSLN存在及不存在下、使用NCI-H226細胞之功能篩選。
Figure 108124775-A0304-0013
圖4 及表 12 顯示此等mAb²的效能及可溶性MSLN對於該分子的整體效能之效應。mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271於測試的三種mAb2中顯示出效能的減少最小。與實施例 8.1 及7.2 所述的數據一致，與固定的MSLN結合的親和力比在溶解狀態中的MSLN結合的親和力更高的MSLN Fabs，較不受可溶性MSLN存在影響：mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271於可溶性MSLN存在下與可溶性MSLN不存在相比，顯示出的EC50 變化最小，且EC50 觀察到3倍減少。與實施例 7.1 報告的親和力測量是一致的，此mAb²顯示出對於固定的MSLN的親和力比在溶解狀態中的MSLN的親和力更強。亦與實施例 7.1 是一致的，mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-272及FS22-172-003-AA/FS28-256-273與在溶解狀態中的MSLN結合的親和力較強，且在此分析中於可溶性MSLN存在與可溶性MSLN不存在時相比，此點轉換成對於此等殖株之EC50 的影響很大，如圖 4 所示。因而選擇mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271供用於進一步特徵化。8.4 橫跨表現MSLN 位準 範圍廣大 的內生細胞株及橫跨多個PBMC 供體之表現依賴性CD137/MSLN mAb² 的效能
如實施例8.1及8.2所述，癌症患者表現非均質位準 的MSLN。因而希望判定FS22-172-003-AA/FS28-256-271 mAb²橫跨一系列表現不同位準的MSLN的細胞之效能。CD8+ T 細胞分析係如實施例8.1及8.2所述來執行。除了於72小時後之IL-2測量外，亦於96小時之後使用V-PLEX人類IFNγ MSD套組(Meso Scale Discovery, K151QOD-4)、遵循製造商的指示來測量IFNγ生產。
表13 ： 橫跨不同腫瘤細胞株的MSLN依賴性mAb²活性。
Figure 108124775-A0304-0014
 ND–經測試，且沒有偵測到活性所以未判定EC50 N/A–未測試
於表 13 報告的全部分析中，mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271當由表現不同位準的MSLN的細胞交聯時能誘發有效力的T細胞活化，此係由IL-2(72h)及IFNγ(96h)生產之次納摩爾的效能來證明(參見表 13 )。有趣的是，IL-2及IFNγ生產隨著交聯細胞上存在的MSLN的量而減少，例如當以表現低位準的MSLN細胞交聯時(AsPC-1)。與IL-2生產相比，此減少在測量IFNγ時不太明顯，然而在所有情况下mAb²都顯示出次納摩爾的效能。此外，當mAb²與MSLN陰性HEK.FRT細胞共培養予以測試時，該mAb²不會引發任何促效劑活性，如由缺乏細胞介素生產所證明。總的來說，此等結果暗示該mAb2 甚至在低位準的MSLN都能誘發T細胞活化以及該mAb2 所誘發的T細胞活化位準係依賴要交聯該mAb²存在的MSLN位準，且因而證明該mAb²的效能與細胞上的MSLN表現密度相關。 實施例9：抗小鼠CD137 Fcabs之生產
活體內 由於小鼠及人類CD137序列之間的序列同源性很低，所以產生專一性結合小鼠CD137的Fcabs且予以特徵化以允許於活體內 小鼠模式中測試含有一CD137抗原結合區域於恆定域之mAb2 的活性。9.1 抗小鼠CD137 Fcabs 之初始的選擇作用
為了選擇結合人類CD137的Fcabs，所以使用酵母菌展示選擇活動，類似於先前關於結合人類CD137者所述(參見實施例 2.1 )。使用重組小鼠二聚體作為抗原(參見實施例 1 )。
先前用於選擇結合人類CD137之Fcabs的四種展示人類IgG1的CH1至CH3域之初始的酵母菌庫，係用來選擇結合小鼠CD137之Fcabs。執行總共53次單獨輪次的選擇作用來鑑定抗小鼠CD137結合者。使用機構內部生產的、重組、二聚體、生物素化小鼠CD137(mCD137-mFc-Avi)抗原以從酵母菌初始庫選擇出結合者。9.2 來自初始的選擇之 抗 小鼠CD137 Fcabs 之特徵化
測試呈HelD1.3“假”mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcabs對於小鼠CD137之專一性且藉由測試Fcabs與其他小鼠TNFRSF受體(CD40、OX40、GITR)之結合、以Octet QKe系統、依BLI進行測量。鏈黴抗生物素生物感測器(PALL ForteBio 18-5021)塗覆10 ng/μl小鼠CD40、GITR、OX40受體(全部都得自於R&D Systems且使用來自Thermoscientific #21328之EZ-Link Sulfo-NHS-SS-生物素套組予以生物素化)。呈假mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcabs係以動力學緩衝液(PALL 18-1092)1:1稀釋達至少1μM的終濃度。抗原塗覆的感應器在mAb²溶液中浸180秒接著於1×動力學緩衝液180秒。使用每種TNFRSF受體的抗體作為陽性對照。Fcab殖株FS22m-055、FS22m-063、FS22m-066、FS22m-075、FS22m-135、FS22m-055、FS22m-063、FS22m-066不與任何測試的TNFRSF受體結合，因而證明其等對於小鼠CD137之專一性。
遵照如先前於實施例 2.3 中所述相同的方法論來生產表現小鼠CD137序列(序列辨識編號：150 的HEK.FRT.luc細胞。含有以前選出的抗小鼠CD137 Fcabs之mAb²係使用此細胞株，HEK.FRT.luc.mCD137，根據於實施例 2.3 中所述的方法來篩選。測試56種mAb2 ，其中29種為NF-kB活性陽性的。使用含有有LALA突變的人類IgG1 Fc的Lob12.3(G1AA/Lob12.3)作為陽性對照抗小鼠CD137 mAb且顯示出發光增加而確認了該分析的效度。HelD1.3，亦含有有LALA突變的人類IgG1 Fc，於此分析中使用作為陰性對照人類IgG同型以從人類IgG假Fab排除干擾。在可能的情況下計算EC50 且忽視活性沒有到達平台區之mAb2 以利於顯示出典型的S形活性動力學之mAb2 。按照一旦以蛋白L交聯時之EC50及活性的倍數變化(fold-change)來分級mAb2 。選出FS22m-063，根據其一旦交聯時具有最佳的EC50(1.44nM)以及一旦交聯時活性有最高的倍數變化(27倍)。 實施例10：抗小鼠MSLN抗體之選擇作用及特徵化10.1 抗 小鼠MSLN mAbs 之初始的選擇作用
小鼠與人類MSLN之間的胺基酸同一性很低(60%)。為了能進行小鼠之活體內 概念驗證(PoC)研究，本發明人著手單離具有如實施例4及5所述之抗人類MSLN mAbs相似性質的抗小鼠MSLN mAbs。
使用如章節1.2所述以生物素化的小鼠MSLN-His-Avi(序列辨識編號143 ，參見章節1.1)進行之選擇作用用於噬菌體選擇作用，噬菌體選擇作用係利用展示具有CDR1、CDR2及CDR3(MSM Technologies)隨機化之人類IgG1生殖系列Fab域之合成初始的噬粒庫。以漸減濃度的生物素化mMSLN-His-Avi執行四輪選擇作用且類似於抗人類MSLN選擇作用，於後續活動中執行表位遮蔽策略。此外，於第1輪使用重組抗原之後，產生HEK293-mMSLN細胞並於第2輪、第3輪及第4輪中使用。
簡言之，使編碼小鼠MSLN的cDNA(序列辨識編號：145 序列亞選殖至pcDNA5/FRT/TO質體(Life Technologies, V652020)內然後與Flp重組酶(recombinase)表現載體，pOG44(Life Technologies, V600520)共轉染至Flp-In TREx 293細胞株(Life Technologies, R78007)內。細胞係生長於含有10% FBS、100 µg/ml潮黴素B(Melford Laboratories Ltd, Z2475)及15 µg/ml殺稻瘟菌素(Melford Laboratories Ltd, B1105)之DMEM內3-4週直到已形成穩定轉形的細胞群落。此等群落係於1 µg/ml多西環素(Sigma Aldrich, D9891)存在下擴大以及使用抗小鼠MSLN(LS Bio, LS-C179484)來測試MSLN的表現。
來自富集族群的總共47種個別mAbs係針對抗原結合進行篩選以及使45種獨特的陽性結合者亞選殖並表現為呈IgG1 LALA格式的可溶性mAbs，如先前於實施例1.3中所述。mAbs與固定的mMSLN-His-Avi之專一性結合作用係藉由ELISA予以特徵化，以及使用Biacore分析、以動力學實驗、根據與大約50或200 RU固定的mMSLN-His-Avi之親和力予以分級。這樣鑑定出一組mAbs，包括FS28m-228，有範圍從1至25 nM的親和力。此外，與不同的MSLN區域的結合作用係如於章節2.1.3.所述予以測試。一種藉由選殖MOR6626殖株之VH及VL所產生的小鼠交叉反應性mAb G1-AA/MOR6626(專利公開號WO 2009/068204 A1)，係使用作為陽性對照。多數殖株，FS28m-228在其中，無法與已經結合MOR6626的MSLN結合，然而其他像是FS28-194或FS28-261則分別顯示出部分或完全的結合。因而，單離結合不同區域(箱(bins))的殖株。 總結：抗小鼠Fcab及mAb選擇及篩選
先前實施例鑑定出的抗小鼠CD137 Fcabs於NF-κB報告基因分析中、當以外部交聯劑如蛋白L予以交聯時，顯示出具有促效劑活性(實施例9 )。於該組鑑定出的抗人類CD137 Fcabs中，選擇FS22m-066用於與小鼠MSLN-靶定Fabs配對，因為此殖株呈現最有利的功能及生物物理性質。
噬菌體選擇作用及抗體篩選策略導致鑑定出一組抗小鼠間皮素結合殖株，其等有一系列的親和力且其等結合不同的mMSLN區域。像抗人類MSLN結合者一樣，該等殖株顯現出比起可溶性mMSLN、偏好結合固定的mMSLN之結合特徵，使得其等成為鼠類活體內 PoC研究中合適用於研究的分子。 實施例11：抗小鼠CD137/MSLN mAb²之生產
如實施例 10 中所述，發現一組初始的抗小鼠MSLN抗體且篩選有利的結合及靶定性質。一種抗小鼠CD137 Fcab係如實施例 9 中所述來選擇。使用抗小鼠CD137 Fcab(FS22m-063)及抗小鼠MSLN Fabs(FS28m-228及FS28m-228-010)來產生小鼠mAb²供用於同基因小鼠腫瘤模式中完整的活體外 特徵化以及活體內 概念驗證MSLN-靶定的CD137致效作用。挑選Fabs來調查之間結合親和力的關係、總結合性及功能活性。該mAb²於重鏈的CH2區域內有LALA突變，目的是盡量減少Fc γ受體驅動的交聯及效應子功能之作用，係如實施例 6 所述來建構且分別給予識別符號FS22m-063-AA/FS28m-228(序列辨識編號136(輕鏈)、137(重鏈))，及FS22m-063-AA/FS28m-228-010(序列辨識編號136(輕鏈)及166(重鏈)。藉由暫時表現於HEK293-6E細胞來生產該mAb2 ，並且使用mAb Select SuRe蛋白A管柱予以純化。11.1 結合 動力學
像抗人類MSLN結合者一樣，該等mAb²對於結合固定的及可溶性MSLN之親和力係藉由SPR使用Biacore儀器予以測試。
結合固定的程序係類似於實施例 7.1 及 7.2 中所述類似的方法，且mMSLN-His-Avi係以50 RU固定。為了判定對於可溶性MSLN之親和力，經由抗人類Fc來捕捉mAb2 。簡言之，25 µg/ml抗人類IgG(Fc)抗體(GE Healthcare，人類抗體捕捉套組，BR100839)係固定於Biacore感測器晶片CM5(GE Healthcare, BR100530)上達到大約750 RU的終回應。以50 nM、HBS-EP緩衝液(GE Healthcare, BR100188)稀釋的mAb2 分子係以30 µl/min個別地注射以達到大約100 RU的回應。以HBS-EP緩衝液稀釋的重組mMSLN-His-Avi抗原係以70 µl/min、以3倍稀釋之濃度範圍243 nM至0.11 nM注射歷時5分鐘然後允許於緩衝液內解離5分鐘。以30 µl/min的速度注射3 M氯化鎂(GE Healthcare，人類抗體捕捉套組，BR100839)歷時30秒以完成再生。
表14 顯示動力學數據。FS22m-063-AA/FS28m-228-010顯現出與膜結合的MSLN比可溶性脫落的MSLN之結合作用更強，可能是由於提升的熱切結合交互作用。親和力成熟的mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010與固定的MSLN及在溶解狀態中的MSLN二者的結合都顯現出改良。挑選FS28m-228-010因其優先結合固定的MSLN，其認為有益於避免血液內循環的MSLN所致的槽效應。此殖株像人類Fab FS28-256-271一樣，以個位數納摩爾(nanomolar)範圍結合固定的MSLN，比起在溶解狀態中的MSLN，會優先靶定固定的MSLN。表14 ： 依SPR所測量之小鼠CD137/MSLN mAb²與固定的MSLN及在溶解狀態中的MSLN之結合作用
Figure 108124775-A0304-0015
 11.2 小鼠 CD137/MSLN mAb2 使用小鼠MSLN 陽性細胞之功能活性
活化的胞毒型CD8+ T細胞負責直接殺死癌細胞且表現CD137於其等之細胞表面上(Ye等人 ，2014)。已知CD137之簇集對於誘發下游的訊息傳導及進一步CD8+ T細胞活化是不可缺少的。因而用一種CD8+ T細胞活化分析來評估mAb2 驅動CD137簇集及隨後的下游訊息傳導的能力。CD8+ T細胞活化之實行係藉由以單離自C57 BL/6-Tg(TcraTcrb)1100Mjb/Crl OT-I小鼠、具有對卵白蛋白肽257-264專一的T細胞受體的基因改造OT-1 T細胞(Jackson Laboratory，目錄號003831)予以抗原刺激，以及依IFNγ釋放來判定。
自新鮮的OT-1小鼠脾臟單離脾細胞來單離T細胞。簡言之，自C57Bl/6 OT-1小鼠採集每個脾臟且儲存於PBS內然後移至6孔組織培養平盤的孔內並用2根針予以機械破壞。經破壞的脾臟通經70µm細胞過濾器且用PBS沖洗過濾器。細胞懸浮液繼而藉由離心使成丸粒，移去上清液以及通過添加10 ml 1X 紅血球溶解緩衝液(eBioscience, 00-4300-54)、遵循製造商的指示來溶解紅血球。為進行T細胞活化，脾細胞係以每孔2x106 個細胞於含有10nM SIINFEKL胜肽之培養基(IMDM，5%FCS，50µM 2-巰乙醇，1X Penstrep)內予以平盤培養於6孔平盤內每孔10x106 個細胞。平盤係於5% CO2、於37 ℃孵育48小時。於48小時後藉由使用CD8+ T細胞單離套組(Milentyi Biotec, 130-104-075)、遵循製造商的指示來單離CD8 T細胞。所單離及活化的CD8 T細胞係於增補30U/ml IL-2(Peprotech, AF-200-02)之培養基(IMDM，5% FCS，50µM 2-巰乙醇，1X Penstrep)內平盤培養以及以每天分裂方式保持每ml低於1x106 再過3天。於擴增3天之後，細胞接而於下列分析中使用。
此實施例中使用的CD8+ T細胞係源自於二隻單獨的動物且脾細胞擴增之執行相隔了18個月，因此試樣A與B之間的T細胞活化的變異數是可預期的。
生產表現全長小鼠間皮素(序列辨識編號：145 )的CT26結腸癌細胞(ATCC, CRL-2638)來呈現膜結合構形的抗原。使用脂質體轉染(lipofection) (脂質體3000, Thermo Fisher Scientific，目錄號L3000008)來產生此等細胞，其係使用pcDNA3.1載體(+) (Thermo Fisher Scientific，目錄號 V79020)。遵循製造商的程序，CT26細胞係用含小鼠MSLN cDNA的pcDNA3.1載體予以轉染。繼而使用遺傳黴素作為選擇抗生素(以600 μg/ml)配於完全培養基(RPMI, 10% FBS)內來達成穩定的轉染。
CT26細胞上的小鼠MSLN之表現係藉由使用陽性對照抗體MOR6626、透過流動式細胞測量術予以確認。細胞以陽性對照抗體孵育1小時然後使用螢光標示的抗人類IgG偵測抗體(Stratech Scientific Ltd，目錄編號109-546-098-JIR)來偵測細胞結合。擴增殖株族群且隨後使用相同的流動式細胞測量術程序來分析以判定相對表現位準，之後表現不同位準的小鼠MSLN之二種殖株發展為研究抗小鼠MSLN Fabs的工具：CT26.B2(高MSLN表現)及CT26.G10(中/低MSLN表現)。為了提供具有一系列MSLN表現的細胞亦使用了內生表現MSLN的Panc02細胞NIC/NIH(Maryland, USA)。於活體外 及離體 表現較低MSLN位準的此等細胞顯示出細胞溶質的表現，如藉由IHC來判定(資料未顯示)。間皮素離體 表現隨後亦藉由IHC來確認(資料未顯示)。
CT26.B2、CT26.G10及Panc02細胞係與SIINFEKL胜肽(500 nM)一起孵育，每孔添加2 x 104 個OT-1細胞給MSLN+ 細胞於50µl培養基內。測試抗體係以60nM開始(4X終濃度)1:4滴定來製備並添加50µl抗體混合物至各孔從而導致200µl的終分析體積。該分析係於5% CO2、37℃下孵育歷時3天。於3天之後，收穫上清液並根據製造商的指示來執行mIFNγ之ELISA(eBioscience，目錄號88-7314-88)。
此T細胞分析係於可溶性小鼠MSLN不存在與存在之下篩選小鼠CD137/MSLN mAb²。可購得的小鼠mMSLN-His為Biolegend (#594008)。從帶有CT26.G10腫瘤的小鼠之血液血清分析判定血液內的MSLN中位濃度為100 pM(資料未顯示)。因而為了研究可溶性MSLN之干擾，於功能分析中使用高達2 nM。
如表 15 及圖5 中所示，mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010當以CT26.G10細胞株交聯時，具有比親代FS22m-063-AA/FS28m-228更高的效力。下列陰性對照亦於一分析中進行測試，其等如所料沒有產生任何細胞介素讀出：呈假mAb2 格式的FS22m-063 Fcab(HelD1.3)，及MSLN-靶定陽性對照(G1/MOR6626)。如圖 5 中所示，2 nM可溶性MSLN的存在對於IFNγ釋放的影響很小且所有的EC50 值都在很低的皮摩爾(picomolar)範圍內，除了Panc02細胞之外，Panc02細胞表現的膜MSLN比經工程處理的MSLN+ CT26細胞更少。類似於人類mAb2，由mAb2所誘發的T細胞活化位準係依賴交聯細胞上存在的MSLN位準。表15 ： 於OT-1 T細胞分析中小鼠CD137/MSLN mAb²對MSLN陽性細胞之效能
Figure 108124775-A0304-0016
 NM=未測量 實施例12：活體內 概念驗證
已證明mAb2 於T細胞分析中具有功能，所以希望測試mAb2 FS22m-063-AA/FS28m-228於同基因免疫活性的腫瘤模式的活體內 功能。12.1 FS22m-063-AA/FS28m-228 於CT26.B2 同基因 腫瘤模式內的活體內功效
為了判定FS22m-063-AA/FS28m-228於高MSLN表現腫瘤模式內的抗腫瘤功效，使年齡9-10週大之Balb/c雌性小鼠(Charles River)於研究開始前適應新環境一週。所有的動物都被切出微缺口且給予獨一無二的識別符號。每群包含15或20隻小鼠。擴增CT26.B2細胞且產生細胞庫，繼而使用IMPACT I程序、由IDEXX Bioresearch來預篩選病原體並且證實為無病原體。各動物於左側接受皮下注射配於100µl無血清培養基之1x105 個細胞。腫瘤細胞接種17天後，從研究中去除沒有腫瘤的小鼠。
FS22m-063-AA/FS28-228 mAb2 (序列辨識編號：360及361)或人類IgG1同型對照(G1-AA/4420)係以配於DPBS+1mM精胺酸+0.05%吐溫80之每劑量200 µg抗體的固定濃度(大約10mg/kg於20g小鼠)予以注射200 µl的抗體。小鼠於接種後第17、19及21天藉由腹膜內注射mAb2 分子來給藥，然而小鼠係於接種後第7、9及11天給藥對照人類IgG1抗體。用測徑器進行腫瘤體積測量每週三次以判定腫瘤的最長軸及最短軸的最長軸及最短軸。使用下式來計算腫瘤體積： L X (S2 ) / 2 其中L=最長軸；S=最短軸
根據腫瘤體積及狀況、依人道終點來決定研究終點。
如圖 6 所示，FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2 之治療與同型對照(G1/4420)治療的小鼠相比之下，於腫瘤生長顯示出看得見的延遲。
使用GraphPad Prism 8.0軟體來執行終點時間(Time-to-Endpoint) (存活)分析。圖 7 及表15 中所示的數據係使用對數秩(Mantel-Cox)檢定來分析。對數秩分析之數據顯示FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2 與同型對照(G1/4420)相比，誘發明顯的存活利益。IgG1對照組之中位數存活為33.5天，然而FS22m-063-AA/FS28m-228之中位數存活未能達到。表15 ： CT26.B2同基因腫瘤模式之終點時間成對統計分析(對數秩)
Figure 108124775-A0304-0017
 NS p≥0.05；* p>0.05；** p>0.01；*** p>0.001；**** p>0.000112.2 FS22m-063-AA/FS28m-228 於CT26.G10 同基因 腫瘤模式內的活體內功效
FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb²之功效亦在CT26.G10同基因腫瘤模式中予以測試。CT26.G10細胞表現的MSLN位準比CT26.B2細胞更低。遵循如實施例12.1中所述相同的程序，除了用CT26.G10細胞株來接種小鼠之外。小鼠於接種後第12、14及16天以200 µl腹膜內注射給藥FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2 ，及或於接種後第7、9及11天給藥G1/4420對照抗體。小鼠係以200 µg/小鼠的固定劑量(等效於大約10mg/kg於20g小鼠)進行投予。
如圖 8 中所示，FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2 治療的小鼠與同型對照治療的小鼠相比之下，顯示出腫瘤生長降低，且FS22m-063-AA/FS28m-228治療的小鼠與G1/4420治療組相比之下，腫瘤體積增加觀察到顯著的延遲。而且在研究的最後，儘管以G1/4420治療後的小鼠之1/20(5%)為無腫瘤的，但FS22m-063-AA/FS28m-228治療後的小鼠之4/20(20%)為無腫瘤的。此外，如圖 9 及表16 中所示，此轉換成無腫瘤存活顯著的改良，如使用成對對數秩分析來評估。具體而言，FS22m-063-AA/FS28m-228之中位數存活從25天(G1/4420)增加至29天。表16 ：CT26.G10同基因腫瘤模式在研究的最後之無腫瘤小鼠的數目及百分率(腫瘤≤ 62.5 mm3 )、中位數存活(以天數計)及成對統計分析(對數秩)
Figure 108124775-A0304-0018
 NS p≥0.05；* p>0.05；** p>0.01；*** p>0.001；**** p>0.0001
mAb²及同型對照含有LALA突變，所以觀察到的腫瘤生長抑制不可能是ADCC活性的結果，因LALA突變顯著降低抗體與Fcγ受體結合的能力。因此假設是在含有LALA突變的抗MSLN mAb單獨治療的小鼠不會看到抗腫瘤活性。然而，含有LALA突變之mAb²甚至在LALA突變存在的時候都能顯著抑制腫瘤生長，一般認為是由於mAb2 的交聯，其係藉由Fab臂與細胞表面上的MSLN結合而驅動免疫細胞上的CD137簇集及活化，導致mAb2 之抗腫瘤活性。 實施例13：親和力成熟的抗小鼠CD137/MSLN(FS22m-063-AA/FS28m-228-010)mAb2 之活體內 特徵化13.1 親和力成熟的CD137/MSLN mAb2 於CT26.G10 同基因 小鼠 腫瘤模式內的劑量- 反應活性
當以FS22m-063-AA/FS28m-228 mAb²治療時，於表現高位準的小鼠MSLN(CT26.B2)之同基因腫瘤模式內以及表現低位準的小鼠MSLN之腫瘤(CT26.G10)內觀察到顯著的抗腫瘤功效及存活改良(實施例12 )。因而希望研究一系列的劑量(6、20、60及200µg/小鼠，等效於大約0.3、1、3及10 mg/kg於20g小鼠)之親和力成熟的FS22m-063-AA/FS28m-228-010於活體內之 抗腫瘤功效。
使年齡9-11週大且各自稱重為17.0-25.2g之Balb/c雌性小鼠(Charles River)於研究開始前適應新環境一週。所有的動物都被切出微缺口且給予獨一無二的識別符號。每群有20隻小鼠。擴增實施例 11.2 中所述的CT26.G10結腸癌細胞株且產生細胞庫。各動物於左側接受皮下注射配於100µl無血清培養基之1 x 105 個細胞。腫瘤細胞接種12天後，從研究中去除沒有腫瘤的小鼠。
製備FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 且以如以上所述的劑量範圍之固定終濃度予以腹膜內(IP)注射至小鼠。包括劑量20µg(~1mg/kg於20g小鼠)的人類IgG1同型對照(G1-AA/4420)及抗CD137陽性對照抗體Lob12.3(G1/Lob12.3)在內，二者都呈人類IgG1主幹且含LALA。所有的抗體均以DPBS+1mM精胺酸+0.05%吐溫80來製備。各小鼠於腫瘤接種後第12、14及16天藉由200 µl IP注射來接受該mAb2 分子或對照抗體。如實施例12.1 中所述使用測徑器進行腫瘤體積測量每週三次，並密切監測小鼠。根據腫瘤體積及狀況、依人道終點來決定研究終點。
使用STATA/IC 15.1軟體來實施混合模型用於分析腫瘤生長率。顯示利用混合模型分析法比較所有組別，在全部研究時間的生長率之成對統計顯著性。一獨立模型與每一對感興趣的治療擬合。該模型為： 對數10(體積 )=𝐴+𝐵×(天−開始日)+𝜀A及B分別為截距與斜率；每隻小鼠的截距與斜率是不同的，且組別包括固定效應以及動物包括隨機效應： 𝐴=𝐴0+𝐴1𝑇+𝜀𝐴 𝐵=𝐵0+𝐵1𝑇+𝜀𝐵 T為代表治療組的虛擬變數且一組值為0及另一組為1。隨機效應係以常態分布來分布： 𝜀A~(0,𝜎A), 𝜀B~𝑁(0,𝜎B) 其中𝜎A及𝜎B分別為截距與斜率的動物間變異之標準差。動物間變異亦以標準差𝜎予以常態分布：ε~(0,σ)
針對每治療對，使以上的模型與數據擬合。針對𝐴1及𝐵1，計算(兩端)p-值與零的差；p-值低於0.05為治療組之間的差異之統計上顯著的證據。
如圖 10 中所示，FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 與同型對照治療的小鼠相比，降低所有劑量位準之腫瘤生長。所有動物在研究的最後測量到患有等於或低於62.5mm3 的腫瘤都被算作完全反應的動物(參見表 17 )。與抗CD137抗體，G1/Lob12.3(15%)及G1-AA/4420同型對照治療的動物(0%)相比，以10、3、1及0.3mg/kg FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 分別治療的動物之30%、20%、20%及10%視為無腫瘤的。
此外，表 17 顯示利用混合模型分析法比較所有組別與人類IgG1同型對照治療組，在全部研究過程的生長率之成對比較。小鼠中無一者顯示出明顯毒性的徵兆及不良反應，且所有的治療於小鼠都是耐受良好的。
存活分析(圖 11 及表 18 )顯示於與同型對照(G1-AA/4420)治療的小鼠相比，所有劑量位準之FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 誘發明顯的抗腫瘤反應，以及此反應似乎是劑量依賴式的。此外，表 18 顯示各組別以天數計的中位數存活之總結，其中以10mg/kg、3mg/kg、1mg/kg及0.3mg/kg的小鼠CD137/MSLN mAb2 進行之治療使中位數存活從29.5天(G1-AA/4420)分別增加到36.5、37.5、35及31天。
表17 ： CT26.G10同基因腫瘤模式中比較所有治療組與G1-AA/4420對照，在研究的最後之無腫瘤小鼠的數目及百分率(腫瘤≤ 62.5mm3 )及成對統計分析(混合模型)。
Figure 108124775-A0304-0019
 NS p≥0.05；* p>0.05；** p>0.01；*** p>0.001；**** p>0.0001
表18 ： CT26.G10同基因腫瘤模式中比較所有治療組與G1-AA/4420對照，用各化合物治療的動物之中位數存活時間及成對統計分析(對數秩)。
Figure 108124775-A0304-0020
 NS p≥0.05；* p>0.05；** p>0.01；*** p>0.001；**** p>0.0001
相似於呈CD137/MSLN mAb2 格式的FS28m-228 MSLN Fab，呈CD137/MSLN mAb2 格式的FS28m-228-010 Fab亦導致腫瘤生長明顯的降低，與同型對照相比。再者，mAb2 於存活之劑量依賴式明顯改良暗示mAb2 通過Fab臂與MSLN標靶之交聯作用驅動了CD137之致效作用，且因而驅動活體內 觀察到的抗腫瘤功效。13.2 FS22m-063-AA/FS28m-228-010 與其之個別組成部份相比，於CT26.G10 之 同基因 腫瘤模式的抗腫瘤功效
已證明FS22m-063-AA/FS28m-228-010有顯著的抗腫瘤功效並改良患腫瘤小鼠的存活，所以希望判定該mAb2 是否比其之個別組成部份展現更優異的活體內 抗腫瘤活性。用小鼠MSLN抗體(G1-AA/FS28m-228-010)、呈“假”mAb2 格式之CD137 Fcab(FS22m-063-AA/HelD1.3及FS22m-063-AA/4420)、小鼠MSLN抗體及呈假mAb2 格式的CD137 Fcab之組合(即G1-AA/FS28m-228-010加上FS22m-063-AA/HelD1.3)，以及FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 之治療係與人類同型對照抗體(G1-AA/HelD1.3)作比較。
小鼠係如實施例13.1 中所述來作準備且以CT26.G10結腸癌細胞株予以接種。除了FS22m-063-AA/4420有10隻小鼠之外，所有的群都有20隻小鼠。
FS22m-063-AA/FS28-228-010 mAb2 、G1-AA/FS28m-228-010、FS22m-063-AA/HelD1.3、FS22m-063-AA/4420及G1-AA/HelD1.3抗體全部製備成每劑量200 µg(大約10mg/kg於20g小鼠)且以固定劑量腹膜內(IP)注射至小鼠。此外，CD137假mAb2 及MSLN抗體二者都製備成每劑量200 µg(大約10mg/kg於20g小鼠)用於組合組。所有的抗體均以DPBS+1mM精胺酸+0.05%吐溫80來製備。類似於實施例 13.1 之用劑方案，各小鼠於腫瘤接種後第12、14及16天藉由200 µl腹膜內注射來接受抗體(q2dx3)。如實施例12.1 中所述使用測徑器進行腫瘤體積測量每週三次，並密切監測小鼠。根據腫瘤體積及狀況、依人道終點來決定研究終點。
如圖 12 中所示，FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 之治療與G1-AA/HelD1.3同型對照治療的小鼠相比，導致腫瘤生長顯著降低。所有動物在研究的最後測量到患有等於或低於62.5mm3 的腫瘤都被算作完全反應的動物(參見表 19 )。在研究的最後，7/20(35%)的FS22m-063-AA/FS28-228-010 mAb2 治療的動物視為對治療完全反應者，與G1-AA/FS28m-228-010治療的小鼠之1/20(5%)，及G1-AA/HelD1.3同型對照、FS22m-063-AA/HelD1.3、FS22m-063-AA/4420及FS22m-063-AA/HelD1.3加上G1-AA/FS28m-228-010-之組合治療的小鼠之0/20(0%)相比。
此外，表 19 顯示利用混合模型分析法比較所有組別與G1-AA/HelD1.3同型對照，在全部研究過程的生長率之成對比較。
存活分析(圖 13 及表 20 )顯示FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 與G1-AA/HelD1.3抗體相比誘發明顯的存活利益，然而該組分沒有產生存活的優點。此外，以FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 進行之治療導致改良的中位數存活時間42.5天，與G1-AA/HelD1.3(29天)、FS22m-063-AA/HelD1.3(30天)、FS22m-063-AA/4420(29天)、G1-AA/FS28m-228-010(30天)以及FS22m-063-AA/HelD1.3加上G1-AA/FS28m-228-010之組合(29天)相比。
表19 ： 於CT26.G10同基因腫瘤模式中比較所有治療組與G1-AA/HelD1.3對照，在研究的最後之無腫瘤小鼠的數目及百分率(腫瘤≤ 62.mm3 )及成對統計分析(混合模型)。
Figure 108124775-A0304-0021
 NS p≥0.05；* p>0.05；** p>0.01；*** p>0.001；**** p>0.0001
表 20 ： 於CT26.G10同基因腫瘤模式中比較所有治療組與G1-AA/HelD1.3對照，用各化合物治療的動物之中位數存活時間及成對統計分析(對數秩)。
Figure 108124775-A0304-0022
 NS p≥0.05；* p>0.05；** p>0.01；*** p>0.001；**** p>0.0001
此等數據證明靶定CD137及MSLN二者的雙專一性分子對於活體內 活性是必要的，因為當該mAb²的個別組份單獨投予或組合投予時，沒有觀察到該mAb²所導致的腫瘤生長抑制位準。13.3 抗小鼠CD137/MSLN mAb2 於CT26.G10 同基因患小鼠腫瘤模式中的肝臟藥理學
在研究性臨床實驗中對實性腫瘤患者的抗CD137 mAb與烏瑞魯單抗之治療已經造成了嚴重的治療相關免疫反應事件，該等事件已被證明與投予的烏瑞魯單之劑量有關。此等免疫反應事件的效應在肝臟中是以嚴重的肝毒性顯示出來(Segal, N. H.，等人 ，2017)。
類似的肝毒性已經於小鼠進行的臨床前機轉研究中顯現出來，該研究係使用CD137促效劑工具抗體來用劑。此等研究顯示T細胞和CD137在形成的肝毒性之必須性(Niu, L.等人 之2007和Dubrot J.等人 之2010)。雖然未能充分理解，但骨髓和T細胞隔室間的相互作用亦已被證明對起始發炎級聯而導致肝臟損傷和肝毒性是重要的(Bartkowiak, T等人 ，2018)。因而，此等動物模式在用於臨床上預測其他CD137促效劑如CD137/MSLN mAb2 投予後的人類患者肝毒性的風險，有平移相關性(translational relevance)。
來自實施例 13.1 及13.2 中所述的CT26.G10同源腫瘤研究之小鼠在以FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 重複用劑後沒有顯示出明顯的毒性徵兆。為了測定在此等動物中的免疫活化是否與肝毒性相關，以相似於實施例 13.1 及13.2 中所示的用劑方案對小鼠用劑，在用劑後的四個時間點撲殺小鼠且以屍體解剖取得肝臟樣本以進行組織切片評估。
小鼠係如實施例 13.1 中所述來準備，且以CT26.G10結腸癌細胞株予以接種。每群由24隻小鼠組成。FS22m-063-AA/FS28-228-010 mAb2 (CD137/MSLN)及G1-AA/4420(人類IgG1同型對照)抗體係以每劑量200 µg(大約10mg/kg於20g小鼠)製備於DPBS+1mM精胺酸+0.05%吐溫80內且以固定劑量腹膜內(IP)注射至小鼠。各小鼠於腫瘤接種後第12、14及16天)藉由200 µl腹膜內注射來接受抗體。如實施例 12.1 中所述使用測徑器進行腫瘤體積測量每週三次，並密切監測小鼠。每組六隻小鼠於最後劑量投予後的第2、5、8及11天進行屍體解剖，且對肝臟樣本進行成型固定及石蠟包埋。肝臟切片繼而經切割並以蘇木精和伊紅染色並由一個獨立、認證的獸醫病理學家對肝臟發炎和損傷評分以進行組織病理學評估。
一評分系統是用於評估蘇木精和伊紅染色切片的肝臟病理學。肝臟是以對應於下列的病變來評分：多處混合發炎細胞、多處退化肝細胞、增高的肝細胞有絲分裂和門脈區(portal)混合發炎細胞浸潤。每組小鼠顯示最小、輕度和中度效應的次數顯示於表 21 中。
FS22m-063-AA/FS28-228-010 mAb2 治療的動物呈現出最小的肝病理學，特別是： •最小多處混合發炎細胞(主要是顆粒球)位於肝實質(parenchyma)各處 •最小退化肝細胞分散在肝實質各處 •最小退化肝細胞 •最小混合發炎細胞於門脈道(portal tract)表21 ： 肝病理學結果
Figure 108124775-A0304-0023
此等發現不被視為代表肝毒性，如其他抗CD137促效劑抗體實施例觀察到的。此外，考量到該mAb2 係通過MSLN結合所媒介的交聯來致效CD137，且MSLN主要過度表現於腫瘤細胞的細胞表面上，但不是於肝臟內(Ordóñez 2003, 14576474)，一般預料CD137致效作用會局限於腫瘤微環境。13.4 抗小鼠CD137/MSLN mAb2 於CT26.G10 同基因小鼠腫瘤模式之作用機轉
由於在CD137/MSLN mAb2 重複用劑後觀察到有限的肝臟藥理學(實施例13.3 )，以及為了進一步瞭解FS22m-063-AA/FS28m-228-010觀察到的抗腫瘤反應之藥理學，於MSLN-陽性同基因腫瘤模式中研究CD137/MSLN mAb2 之作用機轉。
小鼠係如實施例 13.1 中所述來準備，且以CT26.G10結腸癌細胞株予以接種。每群由20隻小鼠組成。亦包括FS22m-063-AA/FS28-228-010(CD137/MSLN) mAb2 、人類IgG1同型對照(G1-AA/4420)及抗CD137促效劑抗體(殖株3H3；G1/3H3)在內用於比較。全部三種抗體均以DPBS+1mM精胺酸+0.05%吐溫80來製備成每劑量134µg(大約6.7mg/kg於20g小鼠)且腹膜內(IP)注射至小鼠。各小鼠於腫瘤接種後第20天藉由134µg固定劑量之一次200 µl腹膜內注射來接受抗體。如實施例 12.1 中所述使用測徑器進行腫瘤體積測量每週三次，並密切監測小鼠。
每組六隻小鼠於腫瘤接種後第20天的劑量後24、72、144及192小時進行屍體解剖。從FS22m-063-AA/FS28-228-010、G1-AA/4420或G1/3H3治療的患CT26.G10腫瘤小鼠取脾臟、血液及腫瘤組織用於分析。藉由流動式細胞測量術來研究全部樣本的T細胞豐度及增殖，因已知T細胞活化及增殖指標為CD137致效作用之下游的效應(Fisher等人 ，2012)。此外，亦採集來自血液的血清用於偵測及定量可溶性MSLN表現。透過標準的機械及酵素法使脾臟及腫瘤組織崩解成單一細胞懸浮液，以及以紅血球溶解緩衝液(Miltenyi Biotec Ltd., 130-094-183)溶解紅血球一次。藉由末端心臟出血來採血，並且將一半收集至含EDTA的管子內用於流動式細胞測量術的單一細胞分析以及一半的血收集至凝血活化劑/血清管用於可溶性MSLN的分析。含EDTA的管子收集的全血係根據製造商的指示以紅血球溶解緩衝液(Miltenyi Biotec Ltd., 130-094-183)溶解三次。血清管收集的血係藉由離心來分劃並移去血清用於分析可溶性MSLN。
接著相同地處理來自脾臟、腫瘤及血液的單一細胞，以及用PBS清洗細胞一次且以可固定成活力染色劑(eBioscience, 65-0865-14)來染色樣本。細胞隨後於Fc阻斷物(block) (eBioscience, 16-0161-85，以1:25)存在下、用表 22 中所示的抗體染色組(全部但沒有細胞內標記，Ki67及FoxP3)於4 ℃下染色細胞表面標記45分鐘。接著用eBioscience FoxP3染色套組(eBioscience, 00-5523-00)根據製造商的指示來使細胞固定及通透(permeabilised)。使細胞再懸浮於具有細胞內標記Ki67和Foxp3抗體之100 µl通透(permeabilization)緩衝液內以及於4 ℃在黑暗中孵育過夜。在BD Fortessa流式細胞儀進行擷取之前，用通透緩衝液清洗細胞一次且再懸浮於含有0.5% BSA之120 µl PBS內。使用BD FACS Diva軟體來獲取數據，且以FlowJo(V10)及Microsoft Excel來分析。數據顯示用劑後144小時之CD8+ T細胞占親代族群百分率的豐度及增殖。 表22：流動式細胞測量術組
Figure 108124775-A0304-0024
如表 23 所示，與對照治療組(G1-AA/4420)相比之下，觀察到G1/3H3及FS22m-063-AA/FS28-228-010 mAb2 用劑後144小時之腫瘤內的CD8+ T細胞百分率增高。劑量後144小時之腫瘤內的CD8+ T細胞平均百分率從32.1%(G1-AA/4420)增高到G1/3H3的56.1%以及FS22m-063-AA/FS28m-228-010的58.4%。
此外，與IgG1對照相比之下，亦觀察到血液及脾臟內CD8+ T細胞的豐度增高，但只有G1/3H3。於劑量後144小時之血液方面，CD8+ T細胞平均百分率從22.6%(G1-AA/4420)增高到57.0%(G1/3H3)，但FS22m-063-AA/FS28m-228-010未觀察到此增高(25.8%)。相似地，於脾臟方面，G1/3H3之CD8+ T細胞平均百分率從28.8%(G1-AA/4420)增高到38.0%，但FS22m-063-AA/FS28m-228-010未觀察到此增高(29%)。
此暗示FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 使表現MSLN之腫瘤內的CD8+ T細胞專一性地增高，然而CD137-靶定抗體，G1/3H3，亦展現出末梢(血液及脾臟)CD8+ T細胞之增高。
為了鑑定用劑後CD8+ T細胞的增殖是否有任何差異，所以分析腫瘤、血液及脾臟的CD8+ T細胞上的增殖標記，Ki67。如表 24 所示，對照組中高比例的CD8+ T細胞表現Ki67+ (75.1%的平均表現)，暗示CT26.G10模式中腫瘤內高位準增殖的CD8+ T細胞。此可能導致腫瘤劑量組之間的CD8+ T細胞上的Ki67表現差異不清楚。
相比之下，觀察到G1/3H3用劑後144小時之血液及脾臟的CD8+ T細胞上的Ki67表現與IgG1對照相比有明顯增加。於血液方面，儘管同型對照治療的小鼠於10.4%的CD8+ T細胞上顯現出平均Ki67+ 表現，但G1/3H3用劑後CD8+ T細胞上的平均表現Ki67於劑量後144小時顯示為86.3%。相比之下，FS22m-063-AA/FS28m-228-010未觀察到此增加，其中mAb2 用劑後於血液觀察到13.1%之CD8+ T細胞上的平均Ki67+ 表現。相似地，於脾臟方面，與同型對照用劑後觀察到8.1%以及FS22m-063-AA/FS28m-228-010用劑後觀察到11.4%的CD8+ T細胞上觀察到平均Ki67+ 表現相比之下，G1/3H3用劑後於36.1%的CD8+ T細胞上觀察到平均Ki67+ 表現。
表23 ： 於G1-AA/4420、G1/3H3或FS22m-063-AA/FS28m-228-010用劑後144小時，腫瘤、血液及脾臟的總CD3+ 細胞之CD8+ T細胞平均百分率。數據顯示總CD3+ 細胞之CD8+ T細胞平均百分率±平均的標準誤差。
Figure 108124775-A0304-0025
表24 ： 於G1-AA/4420、G1/3H3或FS22m-063-AA/FS28m-228-010用劑後144小時，腫瘤、血液及脾臟的CD8+ T細胞上表現Ki67之平均百分率。數據顯示總CD8+ T細胞之Ki67+ 的平均百分率±平均的標準誤差。
Figure 108124775-A0304-0026
從用劑FS22m-063-AA/FS28-228-010、G1-AA/4420或G1/3H3之每組六隻小鼠採集的血清使用一種間皮素小鼠SimpleStep ELISA套組(Abcam, ab204528)，根據製造商針對血清的指示來分析可溶性MSLN位準。數據係以Prism進行作圖且血清MSLN的濃度位準係隨時間來表示。如表 25 所示，G1/3H3及FS22m-063-AA/FS28m-228-010之MSLN於用劑後144小時血清的位準有增加，與同型對照G1-AA/4420相比。既然G1/3H3及FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 二者都觀察到此種類似的增加，而MSLN於CT26.G10同基因腫瘤模式中主要表現於腫瘤細胞上，此暗示腫瘤內的CD137致效作用可能會使血清內偵測到的可溶性MSLN增加。
表25 ： 於G1-AA/4420、G1/3H3或FS22m-063-AA/FS28m-228-010用劑後144小時，相對於G1-AA/4420的位準，血清的平均可溶性MSLN。數據顯示相對於G1-AA/4420位準之平均±平均的標準誤差。
Figure 108124775-A0304-0027
總括起來，此等數據顯示FS22m-063-AA/FS28m-228-010媒介胞毒型CD8+ T細胞於腫瘤內腫瘤專一性增高。雖然G1/3H3亦觀察到此情況，但與FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb²不同，G1/3H3亦促進血液及脾臟內CD8+ T細胞之末梢增高。此外，此等CD8+ T細胞於G1/3H3用劑後亦顯示出增殖增高。CD8+ T細胞(亦稱為胞毒型淋巴細胞)的主要角色是經由三種主要的機轉殺死感染或惡性的細胞：1)釋放細胞介素如TNFα和IFN-γ，2)生產及釋放細胞毒性顆粒以及3)表現FasL配體。治療後腫瘤內的CD8+ T細胞增高因而可經由此等機轉致使細胞毒性活性來對抗腫瘤，其由於殺死腫瘤細胞因而導致間皮素釋放增高，如本實施例中所觀察到者。既然腫瘤不表現CD137，所以假設間皮素釋放是由T細胞媒介的細胞毒性所帶來的間接PD反應。 實施例14：抗小鼠CD137/MSLN mAb2 及抗人類CD137/MSLN mAb2 在小鼠中的藥物動力學14.1 抗小鼠CD137/MSLN mAb2( FS22m-063-AA/FS28-228-010) 於非罹患腫瘤小鼠 中的藥物動力學
為了判定抗小鼠CD137/MSLN mAb2 在小鼠中的藥物動力學，非罹患腫瘤C57BL/6雌性小鼠係以10mg/kg的抗小鼠CD137/MSLN mAb2 (FS22m-063-AA/FS28m-228-010)或人類IgG1對照抗體(G1/4420)靜脈內用劑一次且監測達144hrs。
在0.5、1、6、24、48、96及144小時執行大約20 µl全血的微抽樣，並且予以處理以單離大約5µl的血清供分析。使用Gyros Protein Technologies之Gyrolab xPlore系統(系統名稱XPS1055)來判定每一時間點存在的抗體的量。執行一種三明治分析，其係使用Gyrolab Bioaffy 200 CDs(Gyros Protein Technologies, P0004180)加上生物素化的山羊抗人類IgG-(重與輕鏈)猴吸附抗體(Cambridge Biosciences, A80-319B)作為捕捉抗體以及山羊抗人類IgG-AlexaFluor® 647(Cambridge Biosciences, 2040-31)作為偵測抗體。以0.1%小鼠血清(Sigma-Aldrich M5905)配於Rexxip AN緩衝液(Gyros Protein Technologies, P0004994)來製備標準曲線—於4000 ng/mL至0.0677 ng/mL的範圍內之各化合物所產生—以判定樣本濃度，且樣本以Rexxip AN(Gyros Protein Technologies, P0004994)進行1:1000稀釋。將來自個別小鼠在每一時間點(每時間點三隻小鼠)的平均樣本濃度進行作圖。
圖14 顯示抗小鼠CD137/MSLN mAb2 的藥物動力學且證實該mAb2 於用劑期間內有比非MSLN結合人類IgG1抗體略低的全身性暴露。此情況可由標靶媒介的清除(clearance)機轉來解釋。14.2 抗 人類CD137/MSLN mAb2 於非罹患腫瘤小鼠 中的藥物動力學
判定抗人類CD137/MSLN mAb2 在非罹患腫瘤C57BL/6雌性小鼠中的藥物動力學剖析用於比較。小鼠係以6.7mg/kg的抗人類CD137/MSLN(FS22-172-003-AA/FS28-256-271)mAb2 或人類IgG1對照抗體(G1-AA/4420)予以靜脈內用劑且監測達144hrs。在0.5、1、6、24、48、96及144小時執行大約20 µl全血的微抽樣，並且予以處理以單離大約5µl的血清供分析。分析係如實施例 14.1 中所述予以執行。
圖 14B 顯示抗人類CD137/MSLN mAb2 的藥物動力學且證實該mAb2 在血液中具有與不結合MSLN之標準的人類IgG1可相比的暴露(Bergman等人 ，1998)。 序列表 重鏈註解
i. 於mAb2 之重鏈的胺基酸序列方面，可變異域係以斜體顯示，根據IMGT之CDRs係以粗斜體顯示，根據Kabat之CDRs係以斜體及劃底線顯示(因此任何重疊的IMGT及Kabat CDR序列係以粗體、斜體及劃底線顯示)，CH1域劃底線，鉸鏈區劃上雙底線，CH2域係以粗體顯示(以及，適用時，LALA突變的位置係以粗體及劃底線顯示)，CH3域係以不加修飾的字體顯示，以及CH3結構環的修飾區域劃底線(設若域未改變則沒有劃底線)。
ii. 於可變異域的胺基酸序列方面，根據IMGT之CDRs係以粗斜體顯示，根據Kabat之CDRs係以斜體及劃底線顯示(因此任何重疊的IMGT及Kabat CDR序列係以粗體、斜體及劃底線顯示)。
iii. 提供根據IMGT及Kabat二者的CDR胺基酸序列。輕 鏈註解
i. 於mAb2 之輕鏈的胺基酸序列方面，可變異域係以斜體顯示，根據IMGT之CDRs係以粗斜體顯示，以及根據Kabat之CDRs係以斜體及劃底線顯示(因此任何重疊的IMGT及Kabat CDR序列係以粗體、斜體及劃底線顯示)。
ii. 於可變異域的胺基酸序列方面，根據IMGT之CDRs係以粗斜體顯示，以及根據Kabat之CDRs係以斜體及劃底線顯示(因此任何重疊的IMGT及Kabat CDR序列係以粗體、斜體及劃底線顯示)。
iii. 提供根據IMGT及Kabat二者的CDR胺基酸序列。所有的含 FS22-172-003 Fcab mAb2 殖株及 FS22-172-003 Fcab 之 CH3 域 的 胺基酸及 cDNA 序列以及 CH3 AB 及 EF 結構環的修飾區域之胺基酸序列 CH3 序列辨識編號：8 AA GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG CH3 序列辨識編號：9 DNA GGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：10 AB環 (AA) PYIIPPY 序列辨識編號：11 EF環 (AA) GADRWLEFS22-172-003-AA/FS28-024 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：92 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：93 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGACGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：94 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：95 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGACGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：12 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：13 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGACGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：14 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTLSYSS 序列辨識編號：15 HCDR1 (AA) (Kabat) YSSMS 序列辨識編號：16 HCDR2 (AA) (IMGT) ITPSTGYT 序列辨識編號：17 HCDR2 (AA) Kabat) FITPSTGYTHYADSVKG 序列辨識編號：18 HCDR3 (AA) (IMGT) ARRALTFDY 序列辨識編號：19 HCDR3 (AA) (Kabat) RALTFDYFS22-172-003-AA/FS28-024 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：85 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQASSYPLT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：86 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：54 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQASSYPLT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：55 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：24 LCDR3 (AA) (IMGT) QQASSYPLT 序列辨識編號：24 LCDR3 (AA) (Kabat) QQASSYPLTFS22-172-003-AA/FS28-024-051 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：96 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：97 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGATTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：98 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：99 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGATTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：56 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：57 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGATTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：14 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTLSYSS 序列辨識編號：15 HCDR1 (AA) (Kabat) YSSMS 序列辨識編號：16 HCDR2 (AA) (IMGT) ITPSTGYT 序列辨識編號：17 HCDR2 (AA) Kabat) FITPSTGYTHYADSVKG 序列辨識編號：25 HCDR3 (AA) (IMGT) ARRALIFDY 序列辨識編號：26 HCDR3 (AA) (Kabat) RALIFDYFS22-172-003-AA/FS28-024-051 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：85 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQASSYPLT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：86 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：54 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQASSYPLT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：55 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：24 LCDR3 (AA) (IMGT) QQASSYPLT 序列辨識編號：24 LCDR3 (AA) (Kabat) QQASSYPLTFS22-172-003-AA/FS28-024-052 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：100 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTI SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：101 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGCTTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：102 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：103 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGCTTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：58 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：59 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGCTTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCG 序列辨識編號：14 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTLSYSS 序列辨識編號：15 HCDR1 (AA) (Kabat) YSSMS 序列辨識編號：16 HCDR2 (AA) (IMGT) ITPSTGYT 序列辨識編號：17 HCDR2 (AA) Kabat) FITPSTGYTHYADSVKG 序列辨識編號：27 HCDR3 (AA) (IMGT) ARRALLFDY 序列辨識編號：28 HCDR3 (AA) (Kabat) RALLFDYFS22-172-003-AA/FS28-024-052 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：85 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQASSYPLT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：86 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：54 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQASSYPLT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：55 VL DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：24 LCDR3 (AA) (IMGT) QQASSYPLT 序列辨識編號：24 LCDR3 (AA) (Kabat) QQASSYPLTFS22-172-003-AA/FS28-024-053 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：104 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：105 重鏈DNA (無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGGTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：106 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：107 重鏈DNA (有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGGTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGTf 序列辨識編號：60 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：61 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGGCGCTGGTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCG 序列辨識編號：14 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTLSYSS 序列辨識編號：15 HCDR1 (AA) (Kabat) YSSMS 序列辨識編號：16 HCDR2 (AA) (IMGT) ITPSTGYT 序列辨識編號：17 HCDR2 (AA) Kabat) FITPSTGYTHYADSVKG 序列辨識編號：29 HCDR3 (AA) (IMGT) ARRALVFDY 序列辨識編號：30 HCDR3 (AA) (Kabat) RALVFDYFS22-172-003-AA/FS28-024-053 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：85 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQASSYPLT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：86 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：54 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQASSYPLT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：55 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：24 LCDR3 (AA) (IMGT) QQASSYPLT 序列辨識編號：24 LCDR3 (AA) (Kabat) QQASSYPLTFS22-172-003-AA/FS28-024-060 mAb2 的重及輕鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：108 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSS MS WVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYT HYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALWFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：85 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQASSYPLT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECFS22-172-003-AA/FS28-026 mAb2 的重及輕鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：109 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYA MT WVRQAPGKGLEWVSSITPYYSKT DYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNWYRFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：87 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYSSYPIT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECFS22-172-003-AA/FS28-091 mAb2 的重及輕鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：110 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNYA MS WVRQAPGKGLEWVSSIKPYDGNT YYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNRWVFDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：88 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYSSSPFT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECFS22-172-003-AA/FS28-185 mAb2 的重及輕鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：111 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTTSA MS WVRQAPGKGLEWVSRINPYEGET NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGWSIATYYKSAMDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：89 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSSYSAPVT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECFS22-172-003-AA/FS28-256 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：112 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：113 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTAACACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：114 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：115 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTAACACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：62 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：63 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTAACACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：31 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTNTY 序列辨識編號：32 HCDR1 (AA) (Kabat) NTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：35 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNSYQGGLDY 序列辨識編號：36 HCDR3 (AA) (Kabat) YNSYQGGLDYFS22-172-003-AA/FS28-256 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：116 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSYYYPIT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：117 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：64 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSYYYPIT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：65 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：37 LCDR3 (AA) (IMGT) QQSYYYPIT 序列辨識編號：37 LCDR3 (AA) (Kabat) QQSYYYPITFS22-172-003-AA/FS28-256-001 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：118 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：119 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：120 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：121 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：66 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：67 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：38 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTETY 序列辨識編號：39 HCDR1 (AA) (Kabat) ETYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：35 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNSYQGGLDY 序列辨識編號：36 HCDR3 (AA) (Kabat) YNSYQGGLDYFS22-172-003-AA/FS28-256-001 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：82 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQHNQYPNT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：122 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATCTTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAACAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCGGGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCTAGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTTACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC 序列辨識編號：68 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQHNQYPNT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：69 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：40 LCDR3 (AA) (IMGT) QQHNQYPNT 序列辨識編號：40 LCDR3 (AA) (Kabat) QQHNQYPNTFS22-172-003-AA/FS28-256-005 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：118 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：119 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：120 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：121 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：66 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：67 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：38 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTETY 序列辨識編號：39 HCDR1 (AA) (Kabat) ETYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：35 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNSYQGGLDY 序列辨識編號：36 HCDR3 (AA) (Kabat) YNSYQGGLDYFS22-172-003-AA/FS28-256-005 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：83 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQALGYPHT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：90 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATCTTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAACAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCGGGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCTAGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTTACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC 序列辨識編號：78 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQALGYPHT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：79 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：41 LCDR3 (AA) (IMGT) QQALGYPHT 序列辨識編號：41 LCDR3 (AA) (Kabat) QQALGYPHTFS22-172-003-AA/FS28-256-012 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：123 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：124 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：125 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：126 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：70 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：71 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：42 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY 序列辨識編號：43 HCDR1 (AA) (Kabat) HTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：44 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY 序列辨識編號：45 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDYFS22-172-003-AA/FS28-256-012 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：116 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSYYYPIT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：117 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：64 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSYYYPIT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：65 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：37 LCDR3 (AA) (IMGT) QQSYYYPIT 序列辨識編號：37 LCDR3 (AA) (Kabat) QQSYYYPITFS22-172-003-AA/FS28-256-014 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：127 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYAAGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：128 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATGCGGCGGGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：129 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYAAGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：130 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATGCGGCGGGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：72 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYAAGLDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：73 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATGCGGCGGGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：46 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTDTY 序列辨識編號：47 HCDR1 (AA) (Kabat) DTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：48 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYAAGLDY 序列辨識編號：49 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYAAGLDYFS22-172-003-AA/FS28-256-014 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：116 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSYYYPIT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：117 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：64 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSYYYPIT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：65 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：37 LCDR3 (AA) (IMGT) QQSYYYPIT 序列辨識編號：37 LCDR3 (AA) (Kabat) QQSYYYPITFS22-172-003-AA/FS28-256-018 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：131 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：132 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：133 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：134 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：74 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：75 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：50 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTQTY 序列辨識編號：51 HCDR1 (AA) (Kabat) QTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：52 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYQIGLDY 序列辨識編號：53 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYQIGLDYFS22-172-003-AA/FS28-256-018 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：116 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSYYYPIT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：117 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：64 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSYYYPIT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：65 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：37 LCDR3 (AA) (IMGT) QQSYYYPIT 序列辨識編號：37 LCDR3 (AA) (Kabat) QQSYYYPITFS22-172-003-AA/FS28-256-021 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：123 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：124 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：125 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：126 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：70 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：71 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：42 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY 序列辨識編號：43 HCDR1 (AA) (Kabat) HTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：44 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY 序列辨識編號：45 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDYFS22-172-003-AA/FS28-256-021 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：82 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQHNQYPNT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：122 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATCTTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAACAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCGGGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCTAGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTTACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC 序列辨識編號：68 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQHNQYPNT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：69 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：40 LCDR3 (AA) (IMGT) QQHNQYPNT 序列辨識編號：40 LCDR3 (AA) (Kabat) QQHNQYPNTFS22-172-003-AA/FS28-256-023 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：131 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：132 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：133 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：134 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：74 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：75 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：50 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTQTY 序列辨識編號：51 HCDR1 (AA) (Kabat) QTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NIS PTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：52 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYQIGLDY 序列辨識編號：53 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYQIGLDY FS22-172-003-AA/FS28-256-023 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：82 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQHNQYPNT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：122 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATCTTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAACAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCGGGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCTAGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTTACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC 序列辨識編號：68 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQHNQYPNT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：69 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：40 LCDR3 (AA) (IMGT) QQHNQYPNT 序列辨識編號：40 LCDR3 (AA) (Kabat) QQHNQYPNTFS22-172-003-AA/FS28-256-024 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：123 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：124 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：125 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：126 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：70 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：71 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：42 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY 序列辨識編號：43 HCDR1 (AA) (Kabat) HTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：44 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY 序列辨識編號：45 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDYFS22-172-003-AA/FS28-256-024 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：83 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQALGYPHT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：90 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATCTTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAACAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCGGGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCTAGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTTACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC 序列辨識編號：78 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQALGYPHT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：79 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：41 LCDR3 (AA) (IMGT) QQALGYPHT 序列辨識編號：41 LCDR3 (AA) (Kabat) QQALGYPHTFS22-172-003-AA/FS28-256-026 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：131 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：132 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：133 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：134 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：74 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：75 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：50 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTQTY 序列辨識編號：51 HCDR1 (AA) (Kabat) QTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：52 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYQIGLDY 序列辨識編號：53 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYQIGLDYFS22-172-003-AA/FS28-256-026 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：83 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQALGYPHT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：90 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATCTTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAACAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCGGGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCTAGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGTTACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC 序列辨識編號：78 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQALGYPHT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：79 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：41 LCDR3 (AA) (IMGT) QQALGYPHT 序列辨識編號：41 LCDR3 (AA) (Kabat) QQALGYPHTFS22-172-003-AA/FS28-256-027 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：123 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：124 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：125 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：126 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：70 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：71 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：42 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY 序列辨識編號：43 HCDR1 (AA) (Kabat) HTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：34 HCDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：44 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY 序列辨識編號：45 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDYFS22-172-003-AA/FS28-256-027 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：84 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQTVPYPYT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：91 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：76 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQTVPYPYT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：77 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：80 LCDR3 (AA) (IMGT) QQTVPYPYT 序列辨識編號：80 LCDR3 (AA) (Kabat) QQTVPYPYT小鼠 mAb 及 mAb2 FS28m-228 mAb 的重鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：135 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWFTPARFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS28m-228 mAb 的輕鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：136 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQPFPFSFTFGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECFS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2 的重鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：137 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWFTPARFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22m-063-AA/FS28m-228 mAb2 的輕鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：136 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQPFPFSFTFGQGTKVEIKR TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECG1AA/HelD1.3 mAb 的重鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：138 重鏈AA(有LALA)QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGG1AA/HelD1.3 mAb 的輕鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：139 輕鏈AADIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSTPRTFGGGTKLEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECG1AA/SS1 mAb 序列辨識編號：140 重鏈(有LALA) QVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASSYNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：141 輕鏈DIELTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPGRFSGSGSGNSYSLTISSVEAEDDATYYCQQWSKHPLTFGSGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECMSLN-His-Avi 間皮素(無MPF及C端) (顯示)；His及Avi標誌(未顯示) 序列辨識編號：142 人類 EVEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQEALS 序列辨識編號：143 食蟹獼猴 DVERTTCPPEKEVHEIDESLIFYKKRELEACVDAALLAAQMDRVDAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIRHLGHLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLKVSKGHEMSAQVATLIDRVVVGRGQLDKDTADTLTAFCPGCLCSLSPERLSSVPPSIIGAVRPQDLDTCGPRQLDVLYPKARLAFQNMSGSEYFVKIRPFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRREAVLPLSVAEVQKLLGPHVEGLKVEEQHSPVRDWILKQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLILDLSVREALS 序列辨識編號：144 小鼠 DAEQKACPPGKEPYKVDEDLIFYQNWELEACVDGTMLARQMDLVNEIPFTYEQLSIFKHKLDKTYPQGYPESLIQQLGHFFRYVSPEDIHQWNVTSPDTVKTLLKVSKGQKMNAQAIALVACYLRGGGQLDEDMVKALGDIPLSYLCDFSPQDLHSVPSSVMWLVGPQDLDKCSQRHLGLLYQKACSAFQNVSGLEYFEKIKTFLGGASVKDLRALSQHNVSMDIATFKRLQVDSLVGLSVAEVQKLLGPNIVDLKTEEDKSPVRDWLFRQHQKDLDRLGLGLQGGIPNGYLVLDFNVREAFSCD137-mFc-Avi 及 CD137-Avi-His ( 細胞外域CD137(顯示)；mFc，Avi標誌，His標誌(未顯示) 序列辨識編號：146 人類 SLQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQ 序列辨識編號：147 食蟹獼猴 SLQDLCSNCPAGTFCDNNRSQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFKTRKECSSTSNAECDCISGYHCLGAECSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSATPPAPAREPGHSPQ 序列辨識編號：148 小鼠 AVQNSCDNCQPGTFCRKYNPVCKSCPPSTFSSIGGQPNCNICRVCAGYFRFKKFCSSTHNAECECIEGFHCLGPQCTRCEKDCRPGQELTKQGCKTCSLGTFNDQNGTGVCRPWTNCSLDGRSVLKTGTTEKDVVCGPPVVSFSPSTTISVTPEGGPGGHSLQVL細胞表現的抗原 (CD137) (細胞外域(斜體)；跨膜及細胞內域(粗體)) 序列辨識編號：149 人類lqdpcsncpagtfcdnnrnqicspcppnsfssaggqrtcdicrqckgvfrtrkecsstsnaecdctpgfhclgagcsmceqdckqgqeltkkgckdccfgtfndqkrgicrpwtncsldgksvlvngtkerdvvcgpspadlspgassvtppaparepghspq IISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 序列辨識編號：150 小鼠vqnscdncqpgtfcrkynpvckscppstfssiggqpncnicrvcagyfrfkkfcssthnaececiegfhclgpqctrcekdcrpgqeltkqgcktcslgtfndqngtgvcrpwtncsldgrsvlktgttekdvvcgppvvsfspsttisvtpeggpgghslqvl TLFLALTSALLLALIFITLLFSVLKWIRKKFPHIFKQPFKKTTGAAQEEDACSCRCPQEEEGGGGGYEL 序列辨識編號：153 食蟹獼猴LQDLCSNCPAGTFCDNNRSQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFKTRKECSSTSNAECDCISGYHCLGAECSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSATPPAPAREPGHSPQ IIFFLALTSTVVLFLLFFLVLRFSVVKRSRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 過度表現的 細胞株 - 間皮素之 膜結合的成熟形式 (以粗斜體顯示) [N.B. MPF及前肽係以普通字體顯示於間皮素序列之前及之後。兩者皆不存在於間皮素之膜結合的成熟形式內。]人類 MPF + MSLN 序列辨識編號：151 MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISSLSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTRFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPSTWSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRR EVEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQEALS GTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA小鼠 MPF + MSLN 序列辨識編號：145 MALPTARPLLGSCGSPICSRSFLLLLLSLGWIPRLQTQTTKTSQEATLLHAVNGAADFASLPTGLFLGLTCEEVSDLSMEQAKGLAMAVRQKNITLRGHQLRCLARRLPRHLTDEELNALPLDLLLFLNPAMFPGQQACAHFFSLISKANVDVLPRRSLERQRLLMEALKCQGVYGFQVSEADVRALGGLACDLPGKFVARSSEVLLPWLAGCQGPLDQSQEKAVREVLRSGRTQYGPPSKWSVSTLDALQSLVAVLDESIVQSIPKDVKAEWLQHISRDPSRLGSKLTVIHPRFRR DAEQKACPPGKEPYKVDEDLIFYQNWELEACVDGTMLARQMDLVNEIPFTYEQLSIFKHKLDKTYPQGYPESLIQQLGHFFRYVSPEDIHQWNVTSPDTVKTLLKVSKGQKMNAQAIALVACYLRGGGQLDEDMVKALGDIPLSYLCDFSPQDLHSVPSSVMWLVGPQDLDKCSQRHLGLLYQKACSAFQNVSGLEYFEKIKTFLGGASVKDLRALSQHNVSMDIATFKRLQVDSLVGLSVAEVQKLLGPNIVDLKTEEDKSPVRDWLFRQHQKDLDRLGLGLQGGIPNGYLVLDFNVREAFS SRASLLGPGFVLIWIPALLPALRLS食 蟹獼猴 MPF + MSLN 序列辨識編號：152 MALPMARPLSGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRVLAGETRQEAAPLDGILTNAPDIASLSPRQLLGFTCVEVSGLSTELVQELAVALGQKNVKLSAEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTHFFSRVAKANVDLLPRGAPERQRLLPAALTCWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVVLPRLVRCLGPLDQDQQEAARAALQRGGPPYGPPSTWSISTLDDLQSLLPVLGQPVIHSIPQGILAAWRQRSSRDPSWQQPEQTVLRPRFRR DVERTTCPPEKEVHEIDESLIFYKKRELEACVDAALLAAQMDRVDAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIRHLGHLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLKVSKGHEMSAQVATLIDRVVVGRGQLDKDTADTLTAFCPGCLCSLSPERLSSVPPSIIGAVRPQDLDTCGPRQLDVLYPKARLAFQNMSGSEYFVKIRPFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRREAVLPLSVAEVQKLLGPHVEGLKVEEQHSPVRDWILKQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLILDLSVREALS GTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA野生型 CH2 域的胺基酸序列 序列辨識編號：154 CH2 (WT) APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK含 LALA 突變 的 CH2 域的胺基酸序列 (LALA 突變呈 粗體及 劃底線 ) 序列辨識編號：155 CH2 (LALA) APE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK含 LALA-PA 突變 的 CH2 域的胺基酸序列 (LALA-PA 突變呈 粗體 及劃底線) 序列辨識編號：156 CH2 (LALA-PA) APE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL A APIEKTISKAKFS22-172-003-AA/FS28-256-271 、 FS22-172-003-AA/FS28-256-272 及 FS22-172-003-AA/FS28-256-273 mAb2 的輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：84 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQTVPYPYT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：91 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT 序列辨識編號：76 VL域AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQTVPYPYT FGQGTKVEIK 序列辨識編號：77 VL域DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 序列辨識編號：20 LCDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY 序列辨識編號：21 LCDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA 序列辨識編號：22 LCDR2 (AA) (IMGT) GAS 序列辨識編號：23 LCDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT 序列辨識編號：80 LCDR3 (AA) (IMGT) QQTVPYPYT 序列辨識編號：80 LCDR3 (AA) (Kabat) QQTVPYPYTFS22-172-003-AA/FS28-256-271 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：1 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：2 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCGCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：3 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：4 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCGCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：70 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：71 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：42 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY 序列辨識編號：43 HCDR1 (AA) (Kabat) HTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：5 HCDR2 (AA) Kabat) AISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：44 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY 序列辨識編號：45 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDYFS22-172-003-AA/FS28-256-272 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：6 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSHISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：7 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCCATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：158 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSHISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：159 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCCATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：70 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：71 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：42 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY 序列辨識編號：43 HCDR1 (AA) (Kabat) HTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：160 HCDR2 (AA) Kabat) HISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：44 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY 序列辨識編號：45 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDYFS22-172-003-AA/FS28-256-273 mAb2 的重鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：161 重鏈AA(無LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSSISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：162 重鏈DNA(無LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：163 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSSISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：164 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：70 VH域AAEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTY MS WVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTT NYADSVKG RFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDY WGQGTLVTVSS 序列辨識編號：71 VH域DNA GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT 序列辨識編號：42 HCDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY 序列辨識編號：43 HCDR1 (AA) (Kabat) HTYMS 序列辨識編號：33 HCDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT 序列辨識編號：165 HCDR2 (AA) Kabat) SISPTYSTTNYADSVKG 序列辨識編號：44 HCDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY 序列辨識編號：45 HCDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDYFS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 的重鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：166 重鏈AA(有LALA) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYHISPRFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGFS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 的輕鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：136 輕鏈AA EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQPFPFSFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECFS22m-063-AA/HelD1.3 mAb2 的重及輕鏈之胺基酸序列 序列辨識編號：167 重鏈AA(有LALA) QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDYNSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：168 輕鏈AA DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSTPRTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECFS22-172-003-AA/FS28-185-002 mAb2 的重及輕鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：169 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTTSA MS WVRQAPGKGLEWVSRINPYEGET NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGWSSDTWFKSATDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：170 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTACATCTGCTATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAGGATTAATCCGTATGAGGGCGAGACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGTTGGTCTAGTGATACGTGGTTTAAATCTGCCACGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：171 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSSYSAPVT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：172 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTCTTATTCTGCTCCTGTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGTFS22-172-003-AA/FS28-185-003 mAb2 的重及鏈之胺基酸及 cDNA 序列 序列辨識編號：173 重鏈AA(有LALA)EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTTSA MS WVRQAPGKGLEWVSRINPYEGET NYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGWSATSYFKSATDY WGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCP APEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELPYIIPPY NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVGADRWLE GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 序列辨識編號：174 重鏈DNA(有LALA) GAAGTGCAACTGTTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCTGAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTACATCTGCTATGAGCTGGGTGCGTCAGGCTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAGGATTAATCCGTATGAGGGCGAGACCAACTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGTTGGTCTGCGACGAGTTATTTTAAATCTGCCACTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGCCATACATCATCCCACCATACAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGGCGCAGATAGGTGGCTGGAAGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGT 序列辨識編號：175 輕鏈AAEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSY LA WYQQKPGQAPRLLIY GAS SRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQSSYSAPVT FGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 序列辨識編號：176 輕鏈DNA GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACTCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAAACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTCCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTGGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTCTTATTCTGCTCCTGTCACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTTTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAACAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGGAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCTCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTGACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGTWT Fcab CH3 域的胺基酸序列 ( 序列辨識編號： 81) AB、CD及EF環劃底線 GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGWT CD 環序列 序列辨識編號：157 WT Fcab CD環– SNGQPENNY參考資料
本說明書所提及之所有文件係以其等之整體併入以作為參考資料。
Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ. Basic local alignment search tool. J. Mol. Biol. 215(3), 403-10 (1990).
Altschul SF, Madden TL, Schäffer AA, Zhang J, Zhang Z, Miller W, Lipman DJ. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res. 25(17), 3389-402 (1997).
Bagshawe KD, Sharma SK, Springer CJ, Antoniw P, Rogers GT, Burke PJ, Melton R. Antibody-enzyme conjugates can generate cytotoxic drugs from inactive precursors at tumor sites. Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4, 915-922 (1991).
Bartkowiak T, Curran MA. 4-1BB Agonists: Multi-Potent Potentiators of Tumor Immunity. Front Oncol. Jun 8;5, 117 (2015). Bergman I, Burckart GJ, Pohl CR, Venkataramanan R, Barmada MA, Griffin JA And Cheung NV. Pharmacokinetics of IgG and IgM Anti-Ganglioside Antibodies in Rats And Monkeys After Intrathecal Administration. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 284(1), 111–115 (1998)
Bitra A, Doukov T, Wang J, Picarda G, Benedict CA, Croft M, Zajonc DM. Crystal structure of murine 4-1BB and its interaction with 4-1BBL support a role for galectin-9 in 4-1BB signaling. J Biol Chem. 293(4):1317-1329 (2017).
Bruhns P, Iannascoli B, England P, Mancardi DA, Fernandez N, Jorieux S and Daëron M. Specificity and affinity of human Fcγ receptors and their polymorphic variants for human IgG subclasses. Blood 113(16), 3716-25 (2009).
Campagne O, Delmas A, Fouliard S, Chenel M, Chichili GR, Li H, Alderson R, Scherrmann JM, Mager DE. Integrated Pharmacokinetic/ Pharmacodynamic Model of a Bispecific CD3xCD123 DART Molecule in Nonhuman Primates: Evaluation of Activity and Impact of Immunogenicity. Clin Cancer Res. 2018 Jun 1;24(11):2631-2641. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-17-2265. Epub 2018 Feb 20.
Chester C, Sanmamed MF, Wang J, Melero I. Immunotherapy targeting 4-1BB: mechanistic rationale, clinical results, and future strategies. Blood. 131(1):49-57 (2018).
Chester C, Ambulkar S, Kohrt HE. 4-1BB agonism: adding the accelerator to cancer immunotherapy. Cancer Immunol Immunother. 65(10):1243-8 (2016).
Creaney J, Dick IM and Robinson BW (2015). Discovery of new biomarkers for malignant mesothelioma. Curr Pulmonol Rep. 4: 15-21.
Croft, M., 2003. Co-stimulatory members of the TNFR family: keys to effective T-cell immunity? Nat. Rev. Immunol. 3:609-620.
Cui A, Jin X0G, Zhai K, Tong Z-H and Shi H-Z (2014). Diagnostic values of soluble mesothelin-related peptides for malignant pleural mesothelioma: updated meta-analysis. BMJ Open 4: e004145.
Dubrot J, Milheiro F, Alfaro C, Palazón A, Martinez-Forero I, Perez-Gracia JL, Morales-Kastresana A, Romero-Trevejo JL, Ochoa MC, Hervás-Stubbs S, Prieto J, Jure-Kunkel M, Chen L, Melero I. Treatment with anti-CD137 mAbs causes intense accumulations of liver T cells without selective antitumor immunotherapeutic effects in this organ. Cancer Immunol Immunother. 59(8):1223-1233 (2010).
Fisher TS, Kamperschroer C, Oliphant T, Love VA, Lira PD, Doyonnas R, Bergqvist S, Baxi SM, Rohner A, Shen AC, Huang C, Sokolowski SA, Sharp LL. Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity. Cancer Immunol Immunother. 61(10):1721-33 (2012).
Grisshammer, R. and Nagai, K. (1995) Purification of overproduced proteins from E. coli cells In: DNA Cloning 2: Expression systems (Rickwood, D. and Hames, B.D., Eds.), The Practical Approach Series, pp. 59–92. IRL Press, Oxford University Press.
Hassan R, Kreitman RJ, Pastan I and Willingham MC (2005). Localization of mesothelin in epithelial ovarian cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol AIMM Off Publ Soc Appl Immunohistochem 13:243-47;
Hassan R, Thomas, A, Alewine, C, Le, DT, Jaffee, EM and Pastan I (2016). Mesothelin immunotherapy for cancer: ready for prime time? J. Clin. Onc. 34:4171-4180.
Hassan R, Lerner MR, Benbrook D, Lightfoot SA, Brackett DJ, Wang QC and Pastan I (2002). Clin. Cancer Res.: 8: 3520-3526.
Hezareh M, Hessell AJ, Jensen RC, van de Winkel JG and Parren PW. Effector function activities of a panel of mutants of a broadly neutralizing antibody against human immunodeficiency virus type 1. J. Virol. 75(24), 12161-8 (2001).
Hinner MJ, Aiba, RSB., Wiedenmann A, Schlosser C, Allersdorfer A, Matschiner G, Rothe C, Moebius U, Kohrt HE, Olwill SA. Costimulatory T cell engagement via a novel bispecific anti-CD137 /anti-HER2 protein. J. Immunotherapy Cancer 3 (Suppl 2): P187. (2015)
Holliger P, Hudson PJ. Engineered antibody fragments and the rise of single domains. Nat Biotechnol. 23(9):1126-36 (2005).
Hollevoet K, Reitsma JB, Creaney J, Grigoriu, BD, Robinson BW, Scherpereel A, Cristaudo A, Pass HI, Nackaerts K, Rodriques Portal JA, Schneider J, Muley, T, Di Serio F, Baas P, Tomasetti M, Rai AJ and van Meerbeeck JP (2012). Serum mesothelin for diagnosing malignant pleural mesothelioma: an individual patient data meta-analysis. J Clin. Oncol. 30:1541-1549.
Hurtado JC, Kim YJ, Kwon BS. Signals through 4-1BB are costimulatory to previously activated splenic T cells and inhibit activation-induced cell death. J Immunol. 15;158(6):2600-9 (1997).
Hu S, Shively L, Raubitschek A, Sherman M, Williams LE, Wong JY, Shively JE, Wu AM. Minibody: A novel engineered anti-carcinoembryonic antigen antibody fragment (single-chain Fv-CH3) which exhibits rapid, high-level targeting of xenografts. Cancer Res. 56(13):3055-61 (1996).
Kaneko O, Gong, L, Zhang, J, Hansen, JK, Hassan, R, Lee B and Ho M (2009). A binding domain on mesothelin for CA125/MUC16. J. Biol. Chem. 284: 3739-3749.
Kohrt, H.E.et al. , 2011. CD137 stimulation enhances the antilymphoma activity of anti-CD20 antibodies. Blood, 117(8), pp.2423–2432.
Kohrt, H.E.et al. , 2014. Targeting CD137 enhances the efficacy of cetuximab. The Journal of clinical investigation, 124(6), pp.2668–2682.
Kohrt, H.E., Houot, R., Weiskopf, K.,et al. , 2012. Stimulation of natural killer cells with a CD137-specific antibody enhances trastuzumab efficacy in xenotransplant models of breast cancer. The Journal of clinical investigation, 122(3), pp.1066–1075.
Lee J-H, Kim H, Yao Z, Szajek L, Grasso L, Kim I and Paik C.H (2018). Tumour-Shed Antigen Affects Antibody Tumour Targeting: Comparison of Two89 Zr-Labeled Antibodies Directed against Shed or Nonshed Antigens. Contrast Media and Molecular Imaging. ID: 2461257.
Lefranc MP, Giudicelli V, Duroux P, Jabado-Michaloud J, Folch G, Aouinti S, Carillon E, Duvergey H, Houles A, Paysan-Lafosse T, Hadi-Saljoqi S, Sasorith S, Lefranc G, Kossida S. IMGT®, the international ImMunoGeneTics information system® 25 years on. Nucleic Acids Res. 43(Database issue):D413-22 (2015).
Lefranc MP, Pommié C, Kaas Q, Duprat E, Bosc N, Guiraudou D, Jean C, Ruiz M, Da Piédade I, Rouard M, Foulquier E, Thouvenin V, Lefranc G. IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor constant domains and Ig superfamily C-like domains. Dev. Comp. Immunol. 29(3), 185-203 (2005).
Ledermann JA, Begent RH, Massof C, Kelly AM, Adam T, Bagshawe KD. A phase-I study of repeated therapy with radiolabelled antibody to carcinoembryonic antigen using intermittent or continuous administration of cyclosporin A to supress the immune response. Int. J. Cancer 47(5), 659-64 (1991).
Link A, Hepp J, Reichen C, Schildknecht P, Tosevski I, Taylor J, Juglair L, Titz A, Matzner M, Bessey R, Zitt C, Lemaillet G, Herbst J, Dawson K, Ji H, Levitsky V, Snell D, Stumpp MT, Harsrick A, von Baur E. Preclinical pharmacology of MP0310: a 4-1BB/FAP bispecific DARPin drug candidate promoting tumor-restricted T cell co-stimulation [abstract]. In: Proceedings of the Annual Meeting of the American Association for Cancer Research; 2018 Apr 14–18; Chicago (IL) Abstract nr 3752 (2018).
Liuet al. 2017. Tumor Antigen Expression-dependent Activation of the CD137 Costimulatory Pathway by Bispecific DART® Proteins. Annual Meeting of the American Association for Cancer Research 2017, April 1–5, Washington, DC. Abstract nr 3642.
Ma J, Tang WK, Esser L, Pastan I, Xia D. (2012). Recognition of mesothelin by the therapeutic antibody MORAb-009: structural and mechanistic insights. J Biol. Chem. 287: 33123-31.
Makkouk A, Chester C, Kohrt HE. Rationale for anti-CD137 cancer immunotherapy. Eur J Cancer. 54, 112-119 (2016).
Pearson WR, Lipman DJ. Improved tools for biological sequence comparison. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85(8), 2444-8 (1988).
Reichen C, Bessey R, DePasquale C, Imobersteg S, Béhé M, Blanc A, Schibli R, Link A, Juglair L, Taylor J, Schildknecht P, Hepp J, vom Baur E, Ji H, Zitt C, Levitsky V, Dawson K, Stumpp MT, Snell D, FAP-mediated tumor accumulation of a T-cell agonistic FAP/4-1BB DARPin drug candidate analyzed by SPECT/CT and quantitative biodistribution [abstract]. In: Proceedings of the Annual Meeting of the American Association for Cancer Research; 2018 Apr 14–18; Chicago (IL) Abstract nr 3029 (2018).
Rosenberg S. Development of Cancer Vaccines. ASCO Educational Book Spring: 60-62 (2000).
Sapede, C, Gauvrit A, Barbieux I, Padieu M, Cellerin L, Sagan C, Scherpereel A, Dabouis G, Gregoire M. Abberant splicing and protease involvement in mesothelin release from epithelioid mesothelioma cells. Canc. Sci 99(3): 590-594 (2008)
Schropp J, Knot A, Shah D, Koch G. Target-mediated drug disposition model for bispecific antibodies: properties, approximation and optimal dosing strategy. CPT Pharmacometrics Systems Pharmacology 2019 8: 177-187.
Segal NH, Logan TF, Hodi FS, McDermott D, Melero I, Hamid O, Schmidt H, Robert C, Chiarion-Sileni V, Ascierto PA, Maio M, Urba WJ, Gangadhar TC, Suryawanshi S, Neely J, Jure-Kunkel M, Krishnan S, Kohrt H, Sznol M, Levy R. Results from an integrated safety analysis of urelumab, an agonist anti-CD137 monoclonal antibody. Clin Cancer Res. 23(8), 1929-1936 (2017).
Simeoni M, Magni P, Cammia C, De Nicolao G, Croci V, Pesenti E, Germani M, Poggesi I, Rocchetti M. Predictive pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling of tumor growth kinetics in xenograft models after administration of anticancer agents. Cancer Res. 2004 Feb 1;64(3):1094-101.
Smith TF, Waterman MS. Identification of common molecular subsequences. J. Mol. Biol. 147(1), 195-7 (1981).
Shuford WW, Klussman K, Tritchler DD, Loo DT, Chalupny J, Siadak AW, Brown TJ, Emswiler J, Raecho H, Larsen CP, Pearson TC, Ledbetter JA, Aruffo A, Mittler RS. 4-1BB costimulatory signals preferentially induce CD8+ T cell proliferation and lead to the amplificationin vivo of cytotoxic T cell responses. J Exp Med. 186(1), 47-55 (1997).
Tello, D, Goldbaum, FA, Mariuzza, RA, Ysern, X, Schwarz, FP, Poljak, RJ. Three-dimensional structure and thermodynamics of antigen binding by anti-lysozyme antibodies, Biochem Soc. Trans., 21(4), 943-6 (1993)
Wen T, Bukczynski J, Watts TH. 4-1BB ligand-mediated costimulation of human T cells induces CD4 and CD8 T cell expansion, cytokine production, and the development of cytolytic effector function. J Immunol. 168(10), 4897-906 (2002).
Wesche-Soldato DE, Chung CS, Gregory SH, Salazar-Mather TP, Ayala CA, Ayala A. CD8+ T cells promote inflammation and apoptosis in the liver after sepsis: role of Fas-FasL. Am J Pathol. 2007 Jul;171(1):87-96.
Won EY, Cha K, Byun JS, Kim DU, Shin S, Ahn B, Kim YH, Rice AJ, Walz T, Kwon BS, Cho HS. The structure of the trimer of human 4-1BB ligand is unique among members of the tumor necrosis factor superfamily. J Biol Chem.285(12), 9202-10 (2010).
Wozniak-Knopp G, Bartl S, Bauer A, Mostageer M, Woisetschläger M, Antes B, Ettl K, Kainer M, Weberhofer G, Wiederkum S, Himmler G, Mudde GC, Rüker F. Introducing antigen-binding sites in structural loops of immunoglobulin constant domains: Fc fragments with engineered HER2/neu-binding sites and antibody properties. Protein Eng Des Sel. 23(4), 289-97 (2010).
Wang X, Mathieu M, Brezski RJ. IgG Fc engineering to modulate antibody effector functions. Protein Cell 9(1), 63-73 (2018).
Zhang Y, Chertov O, Zhang J, Zhang J, Hassan R, Pastan I (2011). Cytotoxic activity of immunotoxin SS1P is modulated by TACE-dependent mesothelin shedding. Cancer Res 71: 5915-5922.
圖 1 顯示T細胞活化分析的結果，其中包含結合人類MSLN不同區域的Fabs之mAb²當由MSLN陽性NCI-H226細胞交聯時，mAb²驅動CD137媒介的CD8+ T細胞活化而導致人類IL-2釋放。此等結果顯示包含來自FS28-185譜系的Fabs之mAb²(B )於此特定分析中不具有功能活性。包含來自譜系FS28-024(A )及FS28-256(C )的Fabs之mAb²於次納摩爾至1.5 nM濃度的mAb2 存在下，全部都顯示出hIL-2釋放增高。
圖2 顯示於不同濃度的可溶性MSLN(sMSLN) (無sMSLN、2nM及20 nM sMSLN)存在下、T細胞活化分析的結果。顯示出優先與膜結合的MSLN結合的mAb2 (包含FS28-024-051、FS28-024-052、FS28-024-053、FS28-256-021及FS28-256-023之mAb²) (A-E ) 比起FS22-172-003-AA/FS28-256-027(F )較不受可溶性MSLN存在影響，FS22-172-003-AA/FS28-256-027於20 nM sMSLN存在下、與沒有sMSLN存在時相比，觀察到EC50 明顯的位移。
圖 3A 及B 顯示T細胞活化分析之結果，其中當mAb²由OVCAR-3細胞交聯時，mAb²驅動CD137媒介的CD8+ T細胞活化。此等結果顯示mAb²於細胞其等之細胞膜上表現的MSLN密度較低的情況中能驅動CD137媒介的致效作用。亦於此分析中測試呈假mAb²格式的抗CD137 Fcab FS22-172-003(FS22-172-003/HelD1.3)，以及缺少IL-2釋放表示該抗人類CD137 Fcab只在經由該分子的Fab臂交聯時是有功能的。
圖4 顯示CD8+ T細胞活化分析之結果，其中序列最佳化的mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271(A )、FS22-172-003-AA/FS28-256-272(B )及FS22-172-003-AA/FS28-256-273(C )係於高達20 nM的sMSLN不存在或存在下，以表現人類MSLN的NCI-H226細胞交聯。針對mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271，高達20 nM的sMSLN濃度，就觀察的EC50 而言導致了最小的T細胞活化活性降低。mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-272及FS22-172-003-AA/FS28-256-273於20 nM sMSLN存在下、顯示出T細胞活化活性更明顯的降低，且於觀察到的EC50 上有高於4倍的降低，如同親代殖株FS22-172-003-AA/FS28-256-027(D )於EC50 上顯示6.6倍的降低。
圖5 顯示一T細胞活化分析中，mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228-010及FS22m-063-AA/FS28m-228在2 nM可溶性小鼠MSLN存在與不存在之下、當以CT26.G10、CT26.B2或Panc02細胞交聯時之IFNγ的釋放(A 至D )。mAb² FS22m-063-AA/FS28m-228之實驗包括下列陰性對照：缺少任何CD137-靶定Fcab、呈IgG1格式的抗MSLN對照抗體，及假mAb² FS22m-063/HelD1.3 (即沒有MSLN靶定之CD137 Fcab)。結果顯示即使是在相對高濃度的可溶性MSLN之下，對此分析中mAb²的效能之影響是微不足道的。此數據亦顯示出橫跨所測試的全部表現MSLN的細胞株之次納摩爾(subnanomolar)的效能(EC50 )。
圖6 顯示於CT26.B2同基因小鼠腫瘤模式中用下列所治療之小鼠的個別腫瘤體積測量：G1/4420(人類IgG1同型對照抗體) (A )或FS22m-063-AA/FS28m-228(抗小鼠CD137/MSLN mAb2 ) (B )。用FS22m-063-AA/FS28m-228之治療與同型對照相比，導致腫瘤生長降低。
圖 7 顯示CT26.B2同基因小鼠腫瘤模式中用下列所治療之小鼠的卡本麥爾(Kaplan Meier)存活圖：G1/4420(人類IgG1同型對照抗體)或FS22m-063-AA/FS28m-228(抗小鼠CD137/MSLN mAb2 )。用FS22m-063-AA/FS28m-228之治療與人類IgG1同型對照抗體相比，顯示出明顯改良的存活。(對數秩分析，**p>0.01)
圖8 顯示於CT26.G10同基因小鼠腫瘤模式中用下列所治療之小鼠的個別腫瘤體積測量：G1/4420(人類IgG1同型對照抗體) (A )或FS22m-063-AA/FS28m-228(抗小鼠CD137/MSLN mAb2 ) (B )。用FS22m-063-AA/FS28m-228治療的小鼠與同型對照相比，顯示出腫瘤生長降低，在研究的最後4/20 (25%)的小鼠沒有明顯的腫瘤，與同型對照治療組(1/20, 5%)相比。圖 9 顯示CT26.G10同基因小鼠腫瘤模式中用下列所治療之小鼠的卡本麥爾存活圖：G1/4420(人類IgG1同型對照抗體)或FS22m-063-AA/FS28m-228(抗小鼠CD137/MSLN mAb2 )。用FS22m-063-AA/FS28m-228之治療與人類IgG1同型對照抗體相比，顯示出明顯改良的存活。(對數秩分析，**p>0.01)
圖10 顯示於CT26.G10同基因小鼠腫瘤模式中用下列所治療之小鼠的個別腫瘤體積測量：G1-AA/4420(IgG對照；20µg，於20g小鼠等效於1mg/kg)、G1/Lob12.3(野生型人類IgG1抗CD137陽性對照；20µg，於20g小鼠等效於1mg/kg)及FS22m-063-AA/FS28m-228-010(抗小鼠CD137/MSLN mAb2 )。用FS22m-063-AA/FS28m-228-010之治療與人類IgG1同型對照治療的小鼠相比，顯示出腫瘤生長之劑量依賴式降低。
圖 11 顯示CT26.G10同基因小鼠腫瘤模式中用下列所治療之小鼠的卡本麥爾存活圖：G1-AA/4420(人類IgG1對照；20µg，於20g小鼠等效於1mg/kg)、G1/Lob12.3(野生型人類IgG1抗CD137陽性對照；20µg，於20g小鼠等效於1mg/kg)及FS22m-063-AA/FS28m-228-010(抗小鼠CD137/MSLN mAb2 )。所測試的全部劑量位準的FS22m-063-AA/FS28m-228-010之治療與IgG對照相比，導致明顯改良的存活，以及存活改良為劑量依賴式的。(比較治療組與G1-AA/4420同型對照之對數秩成對分析，p>0.05, **p>0.01, ***p>0.001)
圖12 顯示於CT26.G10同基因小鼠腫瘤模式中用下列所治療之小鼠的個別腫瘤體積測量：(A )G1-AA/HelD1.3(人類IgG1對照)、(B )FS22m-063-AA/HelD1.3(呈‘假’mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab)、(C ) FS22m-063-AA/4420(呈mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab)、(D ) G1-AA/FS28m-228-010(抗小鼠MSLN抗體)、(E )FS22m-063-AA/HelD1.3加上G1-AA/FS28m-228-010之組合(呈‘假’mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab加上抗小鼠MSLN Fab)、及(F ) FS22m-063-AA/FS28m-228-010(抗小鼠CD137/MSLN mAb2 )。結果顯示雖然用FS22m-063-AA/FS28m-228-010來治療的小鼠中的7/20(35%)在研究的最後沒有明顯的腫瘤，但是除了G1-AA/FS28m-228-010(1/20，5%)之外，所有以其他治療給藥的小鼠在研究的最後都有≥62.5 mm3 的腫瘤。
圖 13 顯示CT26.G10同基因小鼠腫瘤模式中用下列所治療之小鼠的卡本麥爾存活圖：G1-AA/HelD1.3(IgG對照)、FS22m-063-AA/HelD1.3(呈‘假’mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab及非結合者Fab，抗HelD1.3)、FS22m-063-AA/4420(呈‘假’mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcab及非結合者Fab，抗4420)、G1-AA/FS28m-228-010(抗小鼠MSLN抗體)、FS22m-063-AA/HelD1.3加上G1-AA/FS28m-228-010之組合(抗小鼠CD137 Fcab加上抗小鼠MSLN抗體)及FS22m-063-AA/FS28m-228-010(抗小鼠CD137/MSLN mAb2 )。結果顯示，儘管用二種呈‘假’mAb2 格式的抗小鼠CD137 Fcabs中之一者來治療或抗小鼠MSLN抗體的小鼠以及組合治療組的小鼠，與同型對照治療的小鼠相比之下，於存活沒有顯示出任何改良，但是用FS22m-063-AA/FS28m-228-010-治療的小鼠與同型對照治療的小鼠相比，顯示出存活的改良。(比較治療組與G1-AAHelD1.3同型對照之對數秩成對分析，****p>0.0001)。
圖 14 顯示抗人類CD137/MSLN mAb2 及抗小鼠CD137/MSLN mAb2 在非罹患腫瘤C57BL/6小鼠模式中的藥物動力學剖析。A ： 顯示10mg/kg之抗小鼠CD137/MSLN mAb2 (FS22m-063-AA/FS28m-228-010)，與10mg/kg人類IgG1同型對照(G1/4420)作比較，於單一靜脈內劑量(每組n=3)後。人類IgG1同型對照及FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mAb2 二者於劑量後144小時都維持分別為70.30及18.11 µg/ml之高位準暴露。定量下限(LLOQ)顯示為5.48ng/mL。B ： 顯示於6.7mg/kg之靜脈內劑量後之抗人類CD137/MSLN mAb2 (FS22-172-003-AA/FS28-256-271)位準，與6.7mg/kg人類IgG1同型對照(G1/4420)以單一靜脈內劑量投予非罹患腫瘤C57BL/6小鼠之後作比較。人類IgG1同型對照及抗人類CD137/MSLN mAb2 二者於劑量後144小時都維持分別為28.36及60.26 µg/ml之高位準暴露。定量下限(LLOQ)顯示為1.82ng/mL。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037
Figure 12_A0101_SEQ_0038
Figure 12_A0101_SEQ_0039
Figure 12_A0101_SEQ_0040
Figure 12_A0101_SEQ_0041
Figure 12_A0101_SEQ_0042
Figure 12_A0101_SEQ_0043
Figure 12_A0101_SEQ_0044
Figure 12_A0101_SEQ_0045
Figure 12_A0101_SEQ_0046
Figure 12_A0101_SEQ_0047
Figure 12_A0101_SEQ_0048
Figure 12_A0101_SEQ_0049
Figure 12_A0101_SEQ_0050
Figure 12_A0101_SEQ_0051
Figure 12_A0101_SEQ_0052
Figure 12_A0101_SEQ_0053
Figure 12_A0101_SEQ_0054
Figure 12_A0101_SEQ_0055
Figure 12_A0101_SEQ_0056
Figure 12_A0101_SEQ_0057
Figure 12_A0101_SEQ_0058
Figure 12_A0101_SEQ_0059
Figure 12_A0101_SEQ_0060
Figure 12_A0101_SEQ_0061
Figure 12_A0101_SEQ_0062
Figure 12_A0101_SEQ_0063
Figure 12_A0101_SEQ_0064
Figure 12_A0101_SEQ_0065
Figure 12_A0101_SEQ_0066
Figure 12_A0101_SEQ_0067
Figure 12_A0101_SEQ_0068
Figure 12_A0101_SEQ_0069
Figure 12_A0101_SEQ_0070
Figure 12_A0101_SEQ_0071
Figure 12_A0101_SEQ_0072
Figure 12_A0101_SEQ_0073
Figure 12_A0101_SEQ_0074
Figure 12_A0101_SEQ_0075
Figure 12_A0101_SEQ_0076
Figure 12_A0101_SEQ_0077
Figure 12_A0101_SEQ_0078
Figure 12_A0101_SEQ_0079
Figure 12_A0101_SEQ_0080
Figure 12_A0101_SEQ_0081
Figure 12_A0101_SEQ_0082
Figure 12_A0101_SEQ_0083
Figure 12_A0101_SEQ_0084
Figure 12_A0101_SEQ_0085
Figure 12_A0101_SEQ_0086
Figure 12_A0101_SEQ_0087
Figure 12_A0101_SEQ_0088
Figure 12_A0101_SEQ_0089
Figure 12_A0101_SEQ_0090
Figure 12_A0101_SEQ_0091
Figure 12_A0101_SEQ_0092
Figure 12_A0101_SEQ_0093
Figure 12_A0101_SEQ_0094
Figure 12_A0101_SEQ_0095
Figure 12_A0101_SEQ_0096
Figure 12_A0101_SEQ_0097
Figure 12_A0101_SEQ_0098
Figure 12_A0101_SEQ_0099
Figure 12_A0101_SEQ_0100
Figure 12_A0101_SEQ_0101
Figure 12_A0101_SEQ_0102
Figure 12_A0101_SEQ_0103
Figure 12_A0101_SEQ_0104
Figure 12_A0101_SEQ_0105
Figure 12_A0101_SEQ_0106
Figure 12_A0101_SEQ_0107
Figure 12_A0101_SEQ_0108
Figure 12_A0101_SEQ_0109
Figure 12_A0101_SEQ_0110
Figure 12_A0101_SEQ_0111
Figure 12_A0101_SEQ_0112
Figure 12_A0101_SEQ_0113
Figure 12_A0101_SEQ_0114
Figure 12_A0101_SEQ_0115
Figure 12_A0101_SEQ_0116
Figure 12_A0101_SEQ_0117
Figure 12_A0101_SEQ_0118
Figure 12_A0101_SEQ_0119
Figure 12_A0101_SEQ_0120
Figure 12_A0101_SEQ_0121
Figure 12_A0101_SEQ_0122
Figure 12_A0101_SEQ_0123
Figure 12_A0101_SEQ_0124
Figure 12_A0101_SEQ_0125
Figure 12_A0101_SEQ_0126
Figure 12_A0101_SEQ_0127
Figure 12_A0101_SEQ_0128
Figure 12_A0101_SEQ_0129
Figure 12_A0101_SEQ_0130
Figure 12_A0101_SEQ_0131
Figure 12_A0101_SEQ_0132
Figure 12_A0101_SEQ_0133
Figure 12_A0101_SEQ_0134
Figure 12_A0101_SEQ_0135
Figure 12_A0101_SEQ_0136
Figure 12_A0101_SEQ_0137
Figure 12_A0101_SEQ_0138
Figure 12_A0101_SEQ_0139
Figure 12_A0101_SEQ_0140
Figure 12_A0101_SEQ_0141
Figure 12_A0101_SEQ_0142
Figure 12_A0101_SEQ_0143
Figure 12_A0101_SEQ_0144
Figure 12_A0101_SEQ_0145
Figure 12_A0101_SEQ_0146
Figure 12_A0101_SEQ_0147
Figure 12_A0101_SEQ_0148
Figure 12_A0101_SEQ_0149
Figure 12_A0101_SEQ_0150
Figure 12_A0101_SEQ_0151
Figure 12_A0101_SEQ_0152
Figure 12_A0101_SEQ_0153
Figure 12_A0101_SEQ_0154
Figure 12_A0101_SEQ_0155
Figure 12_A0101_SEQ_0156
Figure 12_A0101_SEQ_0157
Figure 12_A0101_SEQ_0158
Figure 12_A0101_SEQ_0159
Figure 12_A0101_SEQ_0160
Figure 12_A0101_SEQ_0161
Figure 12_A0101_SEQ_0162
Figure 12_A0101_SEQ_0163
Figure 12_A0101_SEQ_0164
Figure 12_A0101_SEQ_0165
Figure 12_A0101_SEQ_0166
Figure 12_A0101_SEQ_0167
Figure 12_A0101_SEQ_0168
Figure 12_A0101_SEQ_0169
Figure 12_A0101_SEQ_0170
Figure 12_A0101_SEQ_0171
Figure 12_A0101_SEQ_0172
Figure 12_A0101_SEQ_0173
Figure 12_A0101_SEQ_0174
Figure 12_A0101_SEQ_0175
Figure 12_A0101_SEQ_0176
Figure 12_A0101_SEQ_0177
Figure 12_A0101_SEQ_0178
Figure 12_A0101_SEQ_0179
Figure 12_A0101_SEQ_0180
Figure 12_A0101_SEQ_0181
Figure 12_A0101_SEQ_0182
Figure 12_A0101_SEQ_0183
Figure 12_A0101_SEQ_0184
Figure 12_A0101_SEQ_0185
Figure 12_A0101_SEQ_0186
Figure 12_A0101_SEQ_0187
Figure 12_A0101_SEQ_0188
Figure 12_A0101_SEQ_0189
Figure 12_A0101_SEQ_0190
Figure 12_A0101_SEQ_0191
Figure 12_A0101_SEQ_0192
Figure 12_A0101_SEQ_0193
Figure 12_A0101_SEQ_0194
Figure 12_A0101_SEQ_0195
Figure 12_A0101_SEQ_0196
Figure 12_A0101_SEQ_0197
Figure 12_A0101_SEQ_0198
Figure 12_A0101_SEQ_0199
Figure 12_A0101_SEQ_0200
Figure 12_A0101_SEQ_0201
(無)

Claims (20)

  1. 一種會與間皮素(mesothelin，MSLN)及CD137結合的抗體分子，其包含 (a) 一用於MSLN之互補性決定區域(CDR)-為基的抗原結合位址；及 (b) 一座落於該抗體分子的一CH3域之CD137抗原結合位址； 其中該CDR-為基的抗原結合位址包含下列列出的CDRs 1-6： (i)分別為 序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 80 [FS28-256-271] ； (ii) 分別為序列辨識編號14 、16 、27 、20 、22 及24 [FS28-024-052] ； (iii) 分別為序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 40 [FS28-256-021] ； (iv) 分別為序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 37 [FS28-256-012] ； (v) 分別為序列辨識編號50 、 33 、52 、 20 、 22 及 40 [FS28-256-023] ； (vi) 分別為序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 41 [FS28-256-024] ； (vii) 分別為序列辨識編號50 、 33 、52 、 20 、 22 及 41 [FS28-256-026] ； (viii) 分別為序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 80 [FS28-256-027] ； (ix) 分別為序列辨識編號38 、 33 、35 、 20 、 22 及 40 [FS28-256-001] ； (x) 分別為序列辨識編號38 、 33 、35 、 20 、 22 及 41 [FS28-256-005] ； (xi) 分別為序列辨識編號46 、 33 、48 、 20 、 22 及 37 [FS28-256-014] ； (xii) 分別為序列辨識編號50 、 33 、52 、 20 、 22 及 37 [FS28-256-018] ； (xiii) 分別為序列辨識編號31 、 33 、35 、 20 、 22 及 37 [FS28-256] ； (xiv) 分別為序列辨識編號14 、16 、25 、20 、22 及24 [FS28-024-051] ； (xv) 分別為序列辨識編號14 、16 、29 、20 、22 及24 [FS28-024-053] ； 或 (xvi) 分別為序列辨識編號14 、16 、18 、20 、22 及24 [FS28-024] ； 及 其中該CD137抗原結合位址包含一第一序列及一第二序列分別座落於該CH3域的AB及EF結構環，其中該第一及第二序列具有序列辨識編號10 及11[FS22-172-003] 內分別列出的序列。
  2. 如請求項1之抗體分子，其中該抗體分子包含下列列出的VH域及VL域： (i) 分別為序列辨識編號70 及 76 [FS28-256-271] ； (ii) 分別為序列辨識編號58 及 54 [FS28-024-052] ； (iii) 分別為序列辨識編號70 及 68 [FS28-256-021 ]； (iv) 分別為序列辨識編號70 及 64 [FS28-256-012 ]； (v) 分別為序列辨識編號74 及 68 [FS28-256-023] ； (vi) 分別為序列辨識編號70 及 78 [FS28-256-024] ； (vii) 分別為序列辨識編號74 及 78 [FS28-256-026] ； (viii) 分別為序列辨識編號70 及 76 [FS28-256-027] ； (ix) 分別為序列辨識編號66 及 68 [FS28-256-001] ； (x) 分別為序列辨識編號66 及 78 [FS28-256-005] ； (xi) 分別為序列辨識編號72 及 64 [FS28-256-014] ；; (xii) 分別為序列辨識編號74 及 64 [FS28-256-018] ； (xiii) 分別為序列辨識編號62 及 64 [FS28-256] ； (xiv) 分別為序列辨識編號56 及 54 [FS28-024-051] ； (xv) 分別為序列辨識編號60 及 54 [FS28-024-053] ；或 (xvi) 分別為序列辨識編號12 及 54 [FS28-024] 。
  3. 如請求項1或2之抗體分子，其中該抗體分子包含： (i)序列辨識編號42 、 33 、 44 、 20 、 22 及 80 內分別列出的CDRs 1-6[FS28-256-271] ；及/或 (ii) 序列辨識編號70 及 76 內分別列出的VH域及VL域[FS28-256-271] 。
  4. 如請求項1或2之抗體分子，其中該抗體分子包含： (i)序列辨識編號14 、16 、27 、20 、22 及24 內分別列出的CDRs 1-6[FS28-024-052] ； 及/或 (ii) 序列辨識編號58 及 54 內分別列出的VH域及VL域[FS28-024-052] 。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗體分子，其中 (i) 該第一序列係座落於該抗體分子之該CH3域的位置14至17之間；及/或 (ii) 其中該第二序列係座落於該抗體分子之該CH3域的91至99之間；及 其中，胺基酸殘基編號係根據IMGT編號方式。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含序列辨識編號：8內列出的CH3域序列[FS22-172-003] 。
  7. 如請求項1至6中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含下列抗體之重鏈及輕鏈： (i)抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-271 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：3 及 84 內； (ii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024-052 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：102 及 85 內； (iii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-021 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及 82 內； (iv) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-012 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及116 內； (v) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-023 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：113 及 82 內； (vi) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-024 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及 83 內； (vii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-026 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：133 及 83 內； (viii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-027 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：125 及 84 內； (ix) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-001 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：120 及 82 內； (x) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-005 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：120 及 83 內； (xi) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-014 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：129 及116 內； (xii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256-018 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：133 及116 內； (xiii) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-256 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：114 及116 內； (xiv) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024-051 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：98 及85 內； (xv) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024-053 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：106 及85 內；或 (xvi) 抗體FS22-172-003-AA/FS28-024 之重鏈及輕鏈，其分別列於序列辨識編號：94 及85 內。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含序列辨識編號3 及 84 內分別列出的重鏈及輕鏈[FS22-172-003-AA/FS28-256-271] 。
  9. 如請求項1至8中任一項之抗體分子，其中該抗體分子包含序列辨識編號102 及 85 內分別列出的重鏈及輕鏈[FS22-172-003-AA/FS28-024-052] 。
  10. 如請求項1至9中任一項之抗體分子，其中該抗體分子不會與Fcγ受體結合。
  11. 如請求項1至10中任一項之抗體分子，其中該抗體分子與固定的MSLN (immobilised MSLN)結合的親和力比與可溶性MSLN的親和力更高。
  12. 如請求項1至11中任一項之抗體分子，其中該抗體分子能於腫瘤細胞表面結合的MSLN存在下活化一免疫細胞上的CD137。
  13. 如請求項1至12中任一項之抗體分子，其中該抗體分子與一免疫細胞上的CD137以及與腫瘤細胞表面結合的MSLN之結合會導致該免疫細胞上的CD137簇集。
  14. 一種核酸分子或多種核酸分子，其編碼如請求項1至13中任一項之抗體分子。
  15. 一種載體或多種載體，其包含如請求項14之核酸分子或多種核酸分子。
  16. 一種重組宿主細胞，其包含如請求項14之核酸分子或如請求項15之載體。
  17. 一種生產如請求項1至13中任一項之抗體分子之方法，其包含於用於生產該抗體分子的條件下培養如請求項16之重組宿主細胞。
  18. 一種藥學組成物，其包含如請求項1至13中任一項之抗體分子及一藥學上可接受的賦形劑。
  19. 如請求項1至13中任一項之抗體分子，其供用於一治療一個體癌症的方法。
  20. 如請求項19之供用的抗體分子或複合物，其中該治療包含投予組合以一第二治療劑之該抗體分子或複合物至該個體。
TW108124775A 2018-07-12 2019-07-12 間皮素及cd137結合分子 TWI839365B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB1811450.4 2018-07-12
GBGB1811450.4A GB201811450D0 (en) 2018-07-12 2018-07-12 Mesothelin and CD137 binding molecules

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202012448A true TW202012448A (zh) 2020-04-01
TWI839365B TWI839365B (zh) 2024-04-21

Family

ID=

Also Published As

Publication number Publication date
JP7360441B2 (ja) 2023-10-12
GB201811450D0 (en) 2018-08-29
KR20210030925A (ko) 2021-03-18
IL280007A (en) 2021-03-01
CN112437776A (zh) 2021-03-02
EP3820894A1 (en) 2021-05-19
AR115769A1 (es) 2021-02-24
CA3103173A1 (en) 2020-01-16
SG11202011960XA (en) 2020-12-30
JP2023178323A (ja) 2023-12-14
BR112021000396A2 (pt) 2021-04-06
US20210309753A1 (en) 2021-10-07
WO2020011976A1 (en) 2020-01-16
MX2021000397A (es) 2021-05-27
AU2019303081A1 (en) 2021-03-11
JP2021524269A (ja) 2021-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107530419B (zh) 治疗疾病的组合疗法
JP7431211B2 (ja) 抗メソテリン抗体
JP7360441B2 (ja) メソテリン及びｃｄ１３７結合分子
JP7360440B2 (ja) Ｐｄ－ｌ１及びｃｄ１３７に結合する抗体分子
JP7397055B2 (ja) Ｃｄ１３７及びｏｘ４０に結合する抗体分子
TW202019475A (zh) Cd137結合分子
WO2021226289A2 (en) Compositions and methods for tcr reprogramming using cd70 specific fusion proteins
EP4291227A2 (en) Cell therapy compositions and methods for modulating tgf-b signaling
TWI839365B (zh) 間皮素及cd137結合分子
RU2815066C2 (ru) Молекулы, связывающие мезотелин и cd137
TWI840386B (zh) 抗間皮素抗體