KR20190090822A - 조합 요법 - Google Patents

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올레나 바바쉬
앤디 페도리우
수잔 코렌추크
헬라이 모하마드
크리스티안 셔크
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글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드
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Abstract

한 실시양태에서, 본 발명은 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물, 및 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 치료 유효량을 포함하는 제2 제약 조성물을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 본원에 제공된 조합물 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.

Description

조합 요법
본 발명은 포유동물에서 암을 치료하는 방법 및 이러한 치료에 유용한 조합물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제 및 면역-조정제, 예컨대 항-PD-1 및 항-OX40 항체의 조합물에 관한 것이다.
암을 포함한 과다증식성 장애의 유효 치료는 종양학 분야에서의 지속적인 목표이다. 일반적으로, 암은 세포 분열, 분화 및 아폽토시스 세포 사멸을 제어하는 정상 과정의 탈조절로부터 유발되고, 무제한적 성장, 국부 확장 및 전신 전이에 대한 잠재력을 갖는 악성 세포의 증식을 특징으로 한다. 정상 과정의 탈조절은 신호 전달 경로에서의 이상 및 정상 세포에서 발견되는 반응과는 상이한 인자에 대한 반응을 포함한다.
아르기닌 메틸화는 다양한 범위의 세포 과정, 예컨대 유전자 조절, RNA 프로세싱, DNA 손상 반응 및 신호 전달에 수반되는 단백질에 대한 중요한 번역후 변형이다. 메틸화된 아르기닌을 함유하는 단백질은 핵 및 시토졸 분획 둘 다에 존재하며, 이는 아르기닌 상으로의 메틸 기의 전달을 촉매하는 효소가 또한 이들 세포하 구획 전반에 걸쳐 존재한다는 것을 시사한다 (문헌 [Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Lee, Y. H. & Stallcup, M. R. Minireview: protein arginine methylation of nonhistone proteins in transcriptional regulation. Mol Endocrinol 23, 425-433, doi:10.1210/me.2008-0380 (2009)]에서 검토됨). 포유동물 세포에서, 메틸화된 아르기닌은 다음 3가지 주요 형태로 존재한다: ω-NG-모노메틸-아르기닌 (MMA), ω-NG,NG-비대칭 디메틸 아르기닌 (ADMA), 또는 ω-NG,N'G-대칭 디메틸 아르기닌 (SDMA). 각각의 메틸화 상태는 상이한 방식으로 단백질-단백질 상호작용에 영향을 미칠 수 있고, 따라서 기질의 생물학적 활성에 대한 별개의 기능적 결과를 부여할 잠재력을 갖는다 (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)).
아르기닌 메틸화는 대부분 글리신-, 아르기닌-풍부 (GAR) 모티프와 관련하여, S-아데노실-L-메티오닌 (SAM)으로부터 기질 아르기닌 측쇄로 메틸 기를 전달하여 S-아데노실-호모시스테인 (SAH) 및 메틸화된 아르기닌을 생성하는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (PRMT)의 패밀리의 활성을 통해 발생한다. 이러한 단백질 패밀리는 10종의 구성원으로 구성되어 있고, 이 중 9종은 효소적 활성을 갖는 것으로 제시되었다 (Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)). PRMT 패밀리는 효소적 반응의 생성물에 따라 4가지 하위유형 (유형 I-IV)으로 카테고리화된다. 유형 IV 효소는 내부 구아니디노 질소를 메틸화시키고, 단지 효모에서만 설명되었으며 (Fisk, J. C. & Read, L. K. Protein arginine methylation in parasitic protozoa. Eukaryot Cell 10, 1013-1022, doi:10.1128/EC.05103-11 (2011)); 유형 I-III 효소는 단일 메틸화 사건을 통해 모노메틸-아르기닌 (MMA, Rme1)을 생성한다. MMA 중간체는 비교적 낮은 존재비의 중간체로 간주되나, PRMT7의 주된 유형 III 활성의 선택 기질이 모노메틸화된 상태로 유지될 수 있고, 반면 유형 I 및 II 효소는 MMA로부터 각각 비대칭 디메틸-아르기닌 (ADMA, Rme2a) 또는 대칭 디메틸 아르기닌 (SDMA, Rme2s)으로의 진행을 촉매한다. 유형 II PRMT는 PRMT5 및 PRMT9를 포함하나, PRMT5가 대칭 디메틸화의 형성을 담당하는 1차 효소이다. 유형 I 효소는 PRMT1, PRMT3, PRMT4, PRMT6 및 PRMT8을 포함한다. PRMT1, PRMT3, PRMT4 및 PRMT6은 편재적으로 발현되는 반면 PRMT8은 대부분 뇌로 제한된다 (문헌 [Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)]에서 검토됨).
PRMT1의 오조절 및 과다발현은 다수의 고형 및 조혈 암과 연관되었다 (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Yoshimatsu, M. et al. Dysregulation of PRMT1 and PRMT6, Type I arginine methyltransferases, is involved in various types of human cancers. Int J Cancer 128, 562-573, doi:10.1002/ijc.25366 (2011)). PRMT1과 암 생물학 사이의 연관성은 대부분 관련 기질에서 발견된 아르기닌 잔기의 메틸화의 조절을 통한 것이었다. 여러 종양 유형에서, PRMT1은 히스톤 H4의 메틸화를 통해 (Takai, H. et al. 5-Hydroxymethylcytosine plays a critical role in glioblastomagenesis by recruiting the CHTOP-methylosome complex. Cell Rep 9, 48-60, doi:10.1016/j.celrep.2014.08.071 (2014); Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Zhao, X. et al. Methylation of RUNX1 by PRMT1 abrogates SIN3A binding and potentiates its transcriptional activity. Genes Dev 22, 640-653, doi:10.1101/gad.1632608 (2008)), 뿐만 아니라 비-히스톤 기질에 대한 그의 활성을 통해 (Wei, H., Mundade, R., Lange, K. C. & Lu, T. Protein arginine methylation of non-histone proteins and its role in diseases. Cell Cycle 13, 32-41, doi:10.4161/cc.27353 (2014)) 이상 종양원성 프로그램의 발현을 구동시킬 수 있다. 다수의 이들 실험 시스템에서, 기질의 PRMT1-의존성 ADMA 변형의 파괴는 암 세포의 증식 능력을 감소시킨다 (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)). 따라서, PRMT1의 억제제가 과다증식성 장애의 치료에 사용하기 위해 항증식제로서 둘 다 가치있다는 것이 인지되었다.
면역요법은 과다증식성 장애를 치료하기 위한 또 다른 접근법이다. 항종양 T 세포 기능을 증진시키는 것 및 T 세포 증식을 유도하는 것은 암 치료를 위한 강력하고 새로운 접근법이다. 3종의 면역-종양학 항체 (예를 들어, 면역-조정제)가 현재 시판되고 있다. 항-CTLA-4 (예르보이(YERVOY)®/이필리무맙)는 T 세포 프라이밍의 시점에 면역 반응을 증대시키는 것으로 생각되고 항-PD-1 항체 (옵디보(OPDIVO)® 및 키트루다(KEYTRUDA)®/펨브롤리주맙)는 국부 종양 미세환경에서 이미 프라이밍되고 활성화된 종양 특이적 T 세포에서 억제 체크포인트를 완화시킴으로써 작용하는 것으로 생각된다.
암의 치료에 있어서 최근 많은 진보가 있었지만, 암의 영향으로 고통받는 개체의 보다 효과적이고/거나 증진된 치료에 대한 필요가 남아있다.
도 1: 아르기닌 잔기 상에서의 메틸화 유형. 문헌 [Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)].
도 2: 암 관련 PRMT1 기질의 기능적 부류. PRMT1의 공지된 기질 및 그의 암 관련 생물학에 대한 연관성 (문헌 [Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Wei, H., Mundade, R., Lange, K. C. & Lu, T. Protein arginine methylation of non-histone proteins and its role in diseases. Cell Cycle 13, 32-41, doi:10.4161/cc.27353 (2014); Boisvert, F. M., Rhie, A., Richard, S. & Doherty, A. J. The GAR motif of 53BP1 is arginine methylated by PRMT1 and is necessary for 53BP1 DNA binding activity. Cell Cycle 4, 1834-1841, doi:10.4161/cc.4.12.2250 (2005); Boisvert, F. M., Dery, U., Masson, J. Y. & Richard, S. Arginine methylation of MRE11 by PRMT1 is required for DNA damage checkpoint control. Genes Dev 19, 671-676, doi:10.1101/gad.1279805 (2005); Zhang, L. et al. Cross-talk between PRMT1-mediated methylation and ubiquitylation on RBM15 controls RNA splicing. Elife 4, doi:10.7554/eLife.07938 (2015); Snijders, A. P. et al. Arginine methylation and citrullination of splicing factor proline- and glutamine-rich (SFPQ/PSF) regulates its association with mRNA. RNA 21, 347-359, doi:10.1261/rna.045138.114 (2015); Liao, H. W. et al. PRMT1-mediated methylation of the EGF receptor regulates signaling and cetuximab response. J Clin Invest 125, 4529-4543, doi:10.1172/JCI82826 (2015); Ng, R. K. et al. Epigenetic dysregulation of leukaemic HOX code in MLL-rearranged leukaemia mouse model. J Pathol 232, 65-74, doi:10.1002/path.4279 (2014); Bressan, G. C. et al. Arginine methylation analysis of the splicing-associated SR protein SFRS9/SRP30C. Cell Mol Biol Lett 14, 657-669, doi:10.2478/s11658-009-0024-2 (2009)]).
도 3: 화합물 D로 처리된 세포주의 메틸스캔(Methylscan) 평가. 메틸화 변화 (변화의 방향성과는 무관함)를 갖는 단백질의 퍼센트가, 나타낸 바의 기능군별로 카테고리화되어 있다.
도 4: 화합물 A에 의한 PRMT1에 대한 억제 방식. IC50 값을 18분 PRMT1 반응 후에 결정하고 데이터를 3-파라미터 용량-반응 방정식에 피팅하였다. (A) 무경쟁적 억제에 대한 방정식 IC50=Ki /(1+(Km/[S]))에 피팅된, [SAM]/ Km app의 함수로서 플롯팅된 화합물 A IC50 값을 보여주는 대표적인 실험. (B) [펩티드]/ Km app의 함수로서 플롯팅된 IC50 값을 보여주는 대표적인 실험. 삽도는 H4 1-21 기질에 관한 PRMT1의 화합물 A 억제를 평가하기 위해 혼합 억제에 대한 방정식에 피팅된 데이터를 보여준다 (v = Vmax * [S] / (Km * (1+[I]/Ki) + [S] * (1+[I]/K'))). 알파 값 (α = Ki'/Ki) >0.1 내지 <10은 혼합 억제제를 나타낸다.
도 5: PRMT1에 대한 화합물 A의 효력. SAM으로부터 H4 1-21 펩티드로의 3H의 전달을 측정하는, 평형 조건 (기질 농도가 Km app와 동일함) 하에서 실행되는 방사성 검정을 사용하여 PRMT1 활성을 모니터링하였다. 데이터를 3-파라미터 용량-반응 방정식에 피팅함으로써 IC50 값을 결정하였다. (A) PRMT1:SAM:화합물 A-트리-HCl 사전인큐베이션 시간의 함수로서 플롯팅된 IC50 값. 빈 원 및 채워진 원은 2개의 독립적인 실험을 나타낸다 (0.5 nM PRMT1). 삽도는 60분 PRMT1:SAM:화합물 A-트리-HCl 사전인큐베이션 후 PRMT1 활성의 화합물 A-트리-HCl 억제에 대한 대표적인 IC50 곡선을 보여준다. (B) 염 형태별로 카테고리화된 PRMT1의 화합물 A 억제. 60분 PRMT1:SAM:화합물 A 사전인큐베이션 및 20분 반응 후 IC50 값을 결정하였다.
도 6: 화합물 A (오렌지색) 및 SAH (보라색)와의 복합체에서의 PRMT1에 대해 2.48Å에서 분석된 결정 구조. 삽도는 화합물이 펩티드 결합 포켓에 결합되어 PRMT1 측쇄와의 주요 상호작용을 만들어낸다는 것을 드러낸다.
도 7: 화합물 A에 의한 PRMT1 오르토로그의 억제. SAM으로부터 H4 1-21 펩티드로의 3H의 전달을 측정하는, 평형 조건 (기질 농도가 Km app와 동일함) 하에서 실행되는 방사성 검정을 사용하여 PRMT1 활성을 모니터링하였다. 데이터를 3-파라미터 용량-반응 방정식에 피팅함으로써 IC50 값을 결정하였다. (A) 래트 (○) 및 개 (●) 오르토로그에 대해 PRMT1:SAM:화합물 A 사전인큐베이션 시간의 함수로서 플롯팅된 IC50 값. (B) 래트 (○), 개 (●) 또는 인간 (□) PRMT1 농도의 함수로서 플롯팅된 IC50 값. (C) 60분 PRMT1:SAM:화합물 A 사전인큐베이션 및 20분 반응 후 IC50 값을 결정하였다. 데이터는 화합물 A의 다수의 염 형태 시험으로부터의 평균이다. 무경쟁적 억제제에 대한 방정식 Ki=IC50/(1+(Km/[S])) 및 IC50 결정치가 ESI* 입체형태를 나타낸다는 가정에 기초하여 Ki *app 값을 계산하였다.
도 8: PRMT 패밀리 구성원에 대한 화합물 A의 효력. 60분 PRMT:SAM:화합물 A 사전인큐베이션 후 평형 조건 (기질 농도가 Km app와 동일함) 하에서 실행되는 방사성 검정을 사용하여 PRMT 활성을 모니터링하였다. 데이터를 3-파라미터 용량-반응 방정식에 피팅함으로써 화합물 A에 대한 IC50 값을 결정하였다. (A) 데이터는 화합물 A의 다수의 염 형태 시험으로부터의 평균이다. 무경쟁적 억제제에 대한 방정식 Ki=IC50/(1+(Km/[S])) 및 IC50 결정치가 ESI* 입체형태를 나타낸다는 가정에 기초하여 Ki *app 값을 계산하였다. (B) PRMT3 (●), PRMT4 (○), PRMT6 (■) 또는 PRMT8 (□):SAM:화합물 A 사전인큐베이션 시간의 함수로서 플롯팅된 IC50 값.
도 9: MMA 인-셀-웨스턴. RKO 세포를 화합물 A-트리-HCl ("화합물 A-A"), 화합물 A-모노-HCl ("화합물 A-B"), 화합물 A-유리-염기 ("화합물 A-C"), 및 화합물 A-디-HCl ("화합물 A-D")로 72시간 동안 처리하였다. 세포를 고정시키고, 항-Rme1GG로 염색하여 MMA 및 항-튜불린을 검출함으로써 신호를 정규화하고, 오디세이 영상화 시스템을 사용하여 영상화하였다. 튜불린 대비 MMA를 화합물 농도에 대해 플롯팅함으로써 2상 곡선 피트 방정식을 사용하는 그래프패드에서 곡선 피트 (A)를 생성하였다. EC50 (제1 변곡점), 표준 편차 및 N의 요약은 (B)에 제시되어 있다.
도 10: 종양에서의 PRMT1 발현. 씨바이오포탈 포 캔서 게노믹스(cBioPortal for Cancer Genomics)로부터 mRNA 발현 수준을 수득하였다. ACTB 수준 및 TYR은 각각 편재적으로 발현되는 유전자에 상응하는 수준의 발현 대비 제한된 발현을 갖는 유전자의 경우를 나타내기 위해 제시된다.
도 11: 세포 배양물에서의 화합물 A의 항증식 활성. 6-일 성장 검정에서 화합물 A에 대한 감수성에 대해 196종의 인간 암 세포주를 평가하였다. 각각의 세포주에 대한 gIC50 값은 (A)에서 나타낸 바의 예측 인간 노출과 함께 막대 그래프로서 제시된다. 세포독성의 척도인 Y분-T0은 (B)에서 막대-그래프로서 플롯팅되어 있으며, 여기서 각각의 세포주에 대한 gIC100 값은 적색 점으로 제시되어 있다. 래트 14-일 MTD로부터 계산된 Cave (150 mg/kg, Cave = 2.1 μM)는 적색 파선으로서 나타나 있다.
도 12: 배양된 세포에서의 아르기닌 메틸화 마크에 대한 화합물 A 효과의 시간과정. (A) 화합물 A로 처리된 Toledo DLBCL 세포에서의 ADMA, SDMA 및 MMA의 변화. 메틸화의 변화는 튜불린에 대해 정규화된 것 ± SEM (n=3)으로 제시된다. (B) 아르기닌 메틸화 마크의 대표적인 웨스턴 블롯. 정량화된 영역은 겔의 우측에 흑색 막대로 표시된다.
도 13: 아르기닌 메틸화에 대한 화합물 A의 용량 반응. (A) U2932 세포주에서의 화합물 A 용량 반응으로부터의 MMA 및 ADMA의 대표적인 웨스턴 블롯 영상. (B)에 대해 정량화된 영역은 겔의 좌측에 흑색 막대로 표시된다. (B) 72시간의 노출 후 5종의 림프종 세포주에서의 MMA 최대 유도의 50% 또는 ADMA 최대 감소의 50%에 요구되는 최소 유효 화합물 A 농도 ± 표준 편차 (n=2). 6-일 성장 사멸 검정에서 상응하는 gIC50 값은 적색으로 나타낸 바와 같다.
도 14: 림프종 세포에서의 화합물 A에 반응한 아르기닌 메틸화 마크의 지속성. (A) 화합물 A와 함께 배양한 Toledo DLBCL 세포주에서의 ADMA, SDMA 및 MMA에 대한 변화의 안정성. 메틸화의 변화는 튜불린에 대해 정규화된 것 ± SEM (n=3)으로 제시된다. (B) 아르기닌 메틸화 마크의 대표적인 웨스턴 블롯. (A)에 대해 정량화된 영역은 겔 옆에 흑색 막대로 표시된다.
도 15: 림프종 세포주의 증식 시간과정. 세포 성장을 Toledo (A) 및 Daudi (B) 세포주에서 10-일 시간과정에 걸쳐 평가하였다 (세포주당 n=2). 단일 생물학적 반복실험에 대한 대표적인 데이터가 제시된다.
도 16: 6일 및 10일에 림프종 세포주에서의 화합물 A의 항증식 효과. (A) 림프종 세포주에서의 6일 (연청색) 및 10일 (암청색) 증식 검정으로부터의 평균 gIC50 값. (B) 6일 (연청색) 및 10일 (암청색)에서의 Y분-T0과 상응하는 gIC100 (적색 점).
도 17: 하위유형에 의해 분류된 바의 림프종 세포주에서의 화합물 A의 항증식 효과. (A) 각각의 세포주에 대한 gIC50 값이 막대 그래프로서 제시된다. 세포독성의 척도인 Y분-T0은 (B)에서 막대-그래프로서 플롯팅되어 있으며, 여기서 각각의 세포주에 대한 gIC100 값은 적색 점으로 제시되어 있다. ATCC 또는 DSMZ 세포주 저장소로부터 하위유형 정보를 수집하였다.
도 18: 인간 림프종 세포주에서의 세포 주기의 아이오딘화프로피듐 FACS 분석. 3종의 림프종 세포주인 Toledo (A), U2932 (B) 및 OCI-Ly1 (C)을 10일 동안 0, 1, 10, 100, 1000 및 10,000 nM 화합물 A로 처리하였고, 샘플을 처리 후 제3일, 제5일, 제7일, 제10일에 채취하였다. 데이터는 생물학적 반복실험의 평균 ± SEM, n=2를 나타낸다.
도 19: 화합물 A로 처리된 림프종 세포주에서의 카스파제-3/7 활성화. 아폽토시스를 Toledo (A) 및 Daudi (B) 세포주에서 10-일 시간과정에 걸쳐 평가하였다. 카스파제 3/7 활성화는 DMSO-처리된 세포 대비 배수-유도로서 제시된다. 각각의 세포주에 대해 2회의 독립적인 반복실험을 수행하였다. 각각에 대해 대표적인 데이터가 제시된다.
도 20: Toledo 이종이식편을 보유하는 마우스에서의 화합물 A의 효능. 마우스를 28일 (A) 또는 24일 (B)의 기간에 걸쳐 화합물 A로 경구로 QD (37.5, 75, 150, 300, 450 또는 600 mg/kg) 처리하거나 또는 75 mg/kg로 BID (B) 처리하고, 종양 부피를 매주 2회 측정하였다.
도 21: 6일 및 10일에 AML 세포주에서의 화합물 A의 효과. (A) AML 세포주에서의 6일 (연청색) 및 10일 (암청색) 증식 검정으로부터의 평균 gIC50 값. (B) 6일 (연청색) 및 10일 (암청색)에서의 Y분-T0과 상응하는 gIC100 (적색 점).
도 22: 화합물 A를 사용한 ccRCC 세포주의 시험관내 증식 시간과정. (A) 2종의 ccRCC 세포주에 대한 대조군 (DMSO) 대비 성장. 단일 반복실험으로부터의 대표적인 곡선이 제시된다. (B) 시간과정 동안 ccRCC 세포주에 대한 gIC50 및 % 성장 억제의 요약 (평균 ± SD; 각각의 세포주에 대해 n=2).
도 23: ACHN 이종이식편에서의 화합물 A의 효능. 마우스를 28일의 기간에 걸쳐 매일 화합물 A로 경구로 처리하고, 종양 부피를 매주 2회 측정하였다.
도 24: 유방암 세포주에서 화합물 A의 항증식 효과. 6-일 증식 검정에서 화합물 A로 프로파일링된 유방암 세포주에 대한 gIC50의 막대 그래프 및 성장 억제 (%) (적색 원형). 삼중 음성 유방암 (TNBC)을 나타내는 세포주는 오렌지색으로 제시되고; 다른 하위유형은 청색으로 제시된다.
도 25: 7일 및 12일에 유방암 세포주에서의 화합물 A의 효과. 유방암 세포주에서의 7일 (연청색) 및 10일 (암청색) 증식 검정으로부터의 평균 성장 억제 (%) 값과 상응하는 gIC50 (적색 점). 유방암을 사용한 장기간 증식 검정에서 효력 및 퍼센트 억제의 증가가 관찰되었으나 림프종 또는 AML 세포주에서는 관찰되지 않았다는 것은, 특정 종양 유형은 항증식 활성을 완전히 드러내기 위해 화합물 A에 대한 보다 긴 노출을 요구한다는 것을 시사한다.
도 26: 면역요법과의 조합. 동계 클라우드만(Cloudman)S91 종양 모델에서 단일 작용제 및 조합물에 대한 평균 종양 부피 (A) 및 생존 (B). (C) 효능 연구의 각 부문에서 동물에 대한 개별 종양 성장.
도 27: 배양물 내 클라우드만S91 세포의 화합물 A 처리. 세포를 96-웰 포맷의 6-일 증식 검정에서 처리하였고, gIC50 = 9515 ± 231.8 nM이 결정되었다.
도 28: 106-222, 인간화 106-222 (Hu106) 및 인간 수용자 X61012 (진뱅크 수탁 번호) VH 서열의 아미노산 서열의 정렬.
도 29: 106-222, 인간화 106-222 (Hu106), 및 인간 수용자 AJ388641 (진뱅크 수탁 번호) VL 서열의 아미노산 서열의 정렬.
도 30: 추정 아미노산 서열을 갖는, SpeI 및 HindIII 부위가 플랭킹된 Hu106 VH 유전자의 뉴클레오티드 서열.
도 31: 추정 아미노산 서열을 갖는, NheI 및 EcoRI 부위가 플랭킹된 Hu106-222 VL 유전자의 뉴클레오티드 서열.
도 32: 119-122, 인간화 119-122 (Hu119), 및 인간 수용자 Z14189 (진뱅크 수탁 번호) VH 서열의 아미노산 서열의 정렬.
도 33: 119-122, 인간화 119-122 (Hu119), 및 인간 수용자 M29469 (진뱅크 수탁 번호) VL 서열의 아미노산 서열의 정렬.
도 34: 추정 아미노산 서열을 갖는, SpeI 및 HindIII 부위가 플랭킹된 Hu119 VH 유전자의 뉴클레오티드 서열.
도 35: 추정 아미노산 서열을 갖는, NheI 및 EcoRI 부위가 플랭킹된 Hu119 VL 유전자의 뉴클레오티드 서열.
도 36: 추정 아미노산 서열을 갖는 마우스 119-43-1 VH cDNA의 뉴클레오티드 서열.
도 37: 마우스 119-43-1 VL cDNA의 뉴클레오티드 서열 및 추정 아미노산 서열.
도 38: 추정 아미노산 서열을 갖는, Spel 및 Hindlll 부위가 플랭킹된 설계된 119-43-1 VH 유전자의 뉴클레오티드 서열.
도 39: 추정 아미노산 서열을 갖는, Nhel 및 EcoRI 부위가 플랭킹된 설계된 119-43-1 VL 유전자의 뉴클레오티드 서열.
도 40: 면역요법과의 조합. A20 종양 모델에서 단일 작용제 및 조합물에 대한 평균 생존.
도 41: 면역요법과의 조합. CT26 종양 모델에서 단일 작용제 및 조합물에 대한 평균 생존.
한 실시양태에서 본 발명은 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물을 제공한다.
한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물을 제약상 허용되는 담체 및 제약상 허용되는 희석제 중 적어도 하나와 함께 투여하여 상기 인간에서 암을 치료하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.
한 실시양태에서, 본 발명은 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물, 및 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 치료 유효량을 포함하는 제2 제약 조성물을 제공한다.
한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제를 포함하는 제약 조성물, 및 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제를 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하여 상기 인간에서 암을 치료하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.
한 실시양태에서, 본 발명은 의약의 제조를 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물의 용도를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 암의 치료를 위한, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물의 용도를 제공한다.
발명의 상세한 설명
정의
본원에 사용된 "유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 억제제" 또는 "유형 I PRMT 억제제"는 하기 중 어느 하나 이상을 억제하는 작용제를 의미한다: 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1), 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3), 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4), 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 및 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8). 일부 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 소분자 화합물이다. 일부 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 하기 중 어느 하나 이상을 선택적으로 억제한다: 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1), 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3), 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4), 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 및 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8). 일부 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 PRMT1, PRMT3, PRMT4, PRMT6 및 PRMT8의 선택적 억제제이다.
아르기닌 메틸트랜스퍼라제는 다양한 생물학적 과정의 조절에서 그의 역할을 고려할 때 조정을 위한 매력적인 표적이다. 본 발명에 이르러 본원에 기재된 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염 및 조성물은 아르기닌 메틸트랜스퍼라제의 억제제로서 효과적인 것으로 밝혀졌다.
구체적 관능기 및 화학 용어의 정의는 하기에 보다 상세히 기재된다. 화학 원소는 문헌 [Periodic Table of the Elements, CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed., inside cover]에 따라 확인되고, 구체적 관능기는 일반적으로, 상기 문헌에 기재된 바와 같이 정의된다. 추가적으로, 유기 화학의 일반적 원리, 뿐만 아니라 구체적 관능성 모이어티 및 반응성은 문헌 [Thomas Sorrell, Organic Chemistry, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry, 5th Edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989; 및 Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3rd Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 1987]에 기재되어 있다.
본원에 기재된 화합물은 1개 이상의 비대칭 중심을 포함할 수 있으며, 따라서 다양한 이성질체 형태, 예를 들어 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체로 존재할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 화합물은 개별 거울상이성질체, 부분입체이성질체 또는 기하 이성질체의 형태일 수 있거나, 또는 라세미 혼합물 및 1종 이상의 입체이성질체가 풍부한 혼합물을 포함한, 입체이성질체의 혼합물의 형태일 수 있다. 이성질체는 키랄 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC) 및 키랄 염의 형성 및 결정화를 포함한, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해 혼합물로부터 단리될 수 있거나; 또는 바람직한 이성질체는 비대칭 합성에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Jacques et ah, Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen et ah, Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw- Hill, NY, 1962); 및 Wilen, Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972)]을 참조한다. 본 개시내용은 추가적으로 본원에 기재된 화합물을 실질적으로 다른 이성질체가 없는 개별 이성질체로서, 및 대안적으로 다양한 이성질체의 혼합물로서 포괄한다.
본 발명의 화합물은 상이한 호변이성질체로서 도시될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 또한 화합물이 호변이성질체 형태를 갖는 경우에, 모든 호변이성질체 형태가 본 발명의 범주에 포함되는 것으로 의도되고, 본원에 기재된 임의의 화합물의 명칭이 어떠한 호변이성질체 형태도 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
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달리 언급되지 않는 한, 본원에 도시된 구조는 또한, 단지 1종 이상의 동위원소 농축 원자의 존재 하에 상이한 화합물을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 수소의 중수소 또는 삼중수소에 의한 대체, 19F의 18F로의 대체, 또는 탄소의 13C- 또는 14C-농축 탄소에 의한 대체를 제외한, 본 발명의 구조를 갖는 화합물이 본 개시내용의 범주 내이다. 이러한 화합물은, 예를 들어, 생물학적 검정에서 분석 도구 또는 프로브로서 유용하다.
소정 범위의 값이 열거되는 경우, 이는 이러한 범위 내의 각각의 값 및 하위범위를 포괄하는 것으로 의도된다. 예를 들어, "C1-6 알킬"은 C1; C2, C3, C4, C5, C6, C1-6, C1-5, C1-4, C1-3, C1-2, C2-6, C2-5, C2-4, C2-3, C3-6, C3-5, C3-4, C4-6, C4-5 및 C5-6 알킬을 포괄하는 것으로 의도된다.
"라디칼"은 특정한 기 상의 부착 지점을 지칭한다. 라디칼은 특정한 기의 2가 라디칼을 포함한다.
"알킬"은 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소 기의 라디칼을 지칭한다 ("C1-20 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-10 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 9개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-9 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-8 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 7개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-7 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-6 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 5개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-5 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-4 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-3 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 2개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-2 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1 알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 기는 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-6 알킬"). C1-6 알킬 기의 예는 메틸 (C1), 에틸 (C2), n-프로필 (C3), 이소프로필 (C3), n-부틸 (C4), tert-부틸 (C4), sec-부틸 (C4), 이소-부틸 (C4), n-펜틸 (C5), 3-펜타닐 (C5), 아밀 (C5), 네오펜틸 (C5), 3-메틸-2-부타닐 (C5), 3급 아밀 (C5), 및 n-헥실 (C6)을 포함한다. 알킬 기의 추가의 예는 n-헵틸 (C7), n-옥틸 (C8) 등을 포함한다. 특정 실시양태에서, 각 경우의 알킬 기는 독립적으로 임의로 치환되며, 예를 들어 비치환되거나 ("비치환된 알킬") 또는 1개 이상의 치환기로 치환된다 ("치환된 알킬"). 특정 실시양태에서, 알킬 기는 비치환된 C1-10 알킬 (예를 들어, -CH3)이다. 특정 실시양태에서, 알킬 기는 치환된 C1-10 알킬이다.
일부 실시양태에서, 알킬 기는 1개 이상의 할로겐으로 치환된다. "퍼할로알킬"은 모든 수소 원자가 독립적으로 할로겐, 예를 들어 플루오로, 브로모, 클로로 또는 아이오도에 의해 대체된 본원에 정의된 바와 같은 치환된 알킬 기이다. 일부 실시양태에서, 알킬 모이어티는 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-8 퍼할로알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 모이어티는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-6 퍼할로알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 모이어티는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-4 퍼할로알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 모이어티는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-3 퍼할로알킬"). 일부 실시양태에서, 알킬 모이어티는 1 내지 2개의 탄소 원자를 갖는다 ("C1-2 퍼할로알킬"). 일부 실시양태에서, 모든 수소 원자가 플루오로로 대체된다. 일부 실시양태에서, 모든 수소 원자는 클로로로 대체된다. 퍼할로알킬 기의 예는 -CF3, -CF2CF3, -CF2CF2CF3, -CCl3, -CFCl2, -CF2Cl 등을 포함한다.
"알케닐"은 2 내지 20개의 탄소 원자 및 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개의 이중 결합) 및 임의로 1개 이상의 삼중 결합 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개의 삼중 결합)을 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 기의 라디칼을 지칭한다 ("C2-20 알케닐"). 특정 실시양태에서, 알케닐은 삼중 결합을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-10 알케닐"). 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 9개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-9 알케닐"). 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-8 알케닐"). 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 7개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-7 알케닐"). 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-6 알케닐"). 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 5개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-5 알케닐"). 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-4 알케닐"). 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 3개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-3 알케닐"). 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2 알케닐"). 1개 이상의 탄소-탄소 이중 결합은 내부 (예컨대, 2-부테닐 내) 또는 말단 (예컨대, 1-부테닐 내)일 수 있다. C2-4 알케닐 기의 예는 에테닐 (C2), 1-프로페닐 (C3), 2-프로페닐 (C3), 1-부테닐 (C4), 2-부테닐 (C4), 부타디에닐 (C4) 등을 포함한다. C2-6 알케닐 기의 예는 상기 언급된 C2-4 알케닐 기뿐만 아니라 펜테닐 (C5), 펜타디에닐 (C5), 헥세닐 (C6) 등을 포함한다. 알케닐의 추가의 예는 헵테닐 (C7), 옥테닐 (C8), 옥타트리에닐 (C8) 등을 포함한다. 특정 실시양태에서, 각 경우의 알케닐 기는 독립적으로 임의로 치환되며, 즉 비치환되거나 ("비치환된 알케닐") 또는 1개 이상의 치환기로 치환된다 ("치환된 알케닐"). 특정 실시양태에서, 알케닐 기는 비치환된 C2-10 알케닐이다. 특정 실시양태에서, 알케닐 기는 치환된 C2-10 알케닐이다.
"알키닐"은 2 내지 20개의 탄소 원자 및 1개 이상의 탄소-탄소 삼중 결합 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개의 삼중 결합) 및 임의로 1개 이상의 이중 결합 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개의 이중 결합)을 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 기의 라디칼을 지칭한다 ("C2-20 알키닐"). 특정 실시양태에서, 알키닐은 이중 결합을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-10 알키닐"). 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 9개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-9 알키닐"). 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-8 알키닐"). 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 7개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-7 알키닐"). 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-6 알키닐"). 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 5개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-5 알키닐"). 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-4 알키닐"). 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 3개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2-3 알키닐"). 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2개의 탄소 원자를 갖는다 ("C2 알키닐"). 1개 이상의 탄소 탄소 삼중 결합은 내부 (예컨대, 2-부티닐 내) 또는 말단 (예컨대, 1-부티닐 내)일 수 있다. C2-4 알키닐 기의 예는, 비제한적으로, 에티닐 (C2), 1-프로피닐 (C3), 2-프로피닐 (C3), 1-부티닐 (C4), 2-부티닐 (C4) 등을 포함한다. C2-6 알케닐 기의 예는 상기 언급된 C2-4 알키닐 기뿐만 아니라 펜티닐 (C5), 헥시닐 (C6) 등을 포함한다. 알키닐의 추가의 예는 헵티닐 (C7), 옥티닐 (C8) 등을 포함한다. 특정 실시양태에서, 각 경우의 알키닐 기는 독립적으로 임의로 치환되며, 즉 비치환되거나 ("비치환된 알키닐") 또는 1개 이상의 치환기로 치환된다 ("치환된 알키닐"). 특정 실시양태에서, 알키닐 기는 비치환된 C2-10 알키닐이다. 특정 실시양태에서, 알키닐 기는 치환된 C2-10 알키닐이다.
"융합" 또는 "오르토-융합"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 공통으로 2개의 원자 및 1개의 결합을 갖는 2개의 고리, 예를 들어 하기를 지칭한다.
Figure pct00002
"가교"는 (1) 동일한 고리의 2개 이상의 비-인접 위치를 연결하는 브리지헤드 원자 또는 원자단; 또는 (2) 고리계의 상이한 고리의 2개 이상의 위치를 연결하는 브리지헤드 원자 또는 원자단을 함유하고 이에 의해 오르토-융합 고리를 형성하지 않는 고리계, 예를 들어 하기를 지칭한다.
Figure pct00003
"스피로" 또는 "스피로-융합"은 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리계의 동일한 원자에 연결되어 (같은자리 부착) 이에 의해 고리를 형성하는 원자단, 예를 들어 하기를 지칭한다.
Figure pct00004
브리지헤드 원자에서의 스피로-융합이 또한 고려된다.
"카르보시클릴" 또는 "카르보시클릭"은 비-방향족 고리계에 3 내지 14개의 고리 탄소 원자 및 0개의 헤테로원자를 갖는 비-방향족 시클릭 탄화수소 기의 라디칼을 지칭한다 ("C3-14 카르보시클릴"). 특정 실시양태에서, 카르보시클릴 기는 비-방향족 고리계에 3 내지 10개의 고리 탄소 원자 및 0개의 헤테로원자를 갖는 비-방향족 시클릭 탄화수소 기의 라디칼을 지칭한다 ("C3-10 카르보시클릴"). 일부 실시양태에서, 카르보시클릴 기는 3 내지 8개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C3-8 카르보시클릴"). 일부 실시양태에서, 카르보시클릴 기는 3 내지 6개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C3-6 카르보시클릴"). 일부 실시양태에서, 카르보시클릴 기는 3 내지 6개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C3-6 카르보시클릴"). 일부 실시양태에서, 카르보시클릴 기는 5 내지 10개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C5-10 카르보시클릴"). 예시적인 C3-6 카르보시클릴 기는, 비제한적으로, 시클로프로필 (C3), 시클로프로페닐 (C3), 시클로부틸 (C4), 시클로부테닐 (C4), 시클로펜틸 (C5), 시클로펜테닐 (C5), 시클로헥실 (C6), 시클로헥세닐 (C6), 시클로헥사디에닐 (C6) 등을 포함한다. 예시적인 C3-8 카르보시클릴 기는, 비제한적으로, 상기 언급된 C3-6 카르보시클릴 기뿐만 아니라 시클로헵틸 (C7), 시클로헵테닐 (C7), 시클로헵타디에닐 (C7), 시클로헵타트리에닐 (C7), 시클로옥틸 (C8), 시클로옥테닐 (C8), 비시클로[2.2.1]헵타닐 (C7), 비시클로[2.2.2]옥타닐 (C8) 등을 포함한다. 예시적인 C3-10 카르보시클릴 기는, 비제한적으로, 상기 언급된 C3-8 카르보시클릴 기뿐만 아니라 시클로노닐 (C9), 시클로노네닐 (C9), 시클로데실 (C10), 시클로데세닐 (C10), 옥타히드로-1H-인데닐 (C9), 데카히드로나프탈레닐 (C10), 스피로[4.5]데카닐 (C10) 등을 포함한다. 상기 예가 예시하는 바와 같이, 특정 실시양태에서, 카르보시클릴 기는 모노시클릭 ("모노시클릭 카르보시클릴")이거나, 또는 융합, 가교 또는 스피로-융합 고리계, 예컨대 비시클릭 계 ("비시클릭 카르보시클릴")이고, 포화일 수 있거나 또는 부분 불포화일 수 있다. "카르보시클릴"은 또한, 상기 정의된 바와 같은 카르보시클릴 고리가 1개 이상의 아릴 또는 헤테로아릴 기와 융합되는 고리계를 포함하며, 여기서 부착 지점은 카르보시클릴 고리 상이고, 이러한 경우에 탄소의 수는 계속해서 카르보시클릭 고리계 내의 탄소의 수를 지정한다. 특정 실시양태에서, 각 경우의 카르보시클릴 기는 독립적으로 임의로 치환되며, 즉 비치환되거나 ("비치환된 카르보시클릴") 또는 1개 이상의 치환기로 치환된다 ("치환된 카르보시클릴"). 특정 실시양태에서, 카르보시클릴 기는 비치환된 C3-10 카르보시클릴이다. 특정 실시양태에서, 카르보시클릴 기는 치환된 C3-10 카르보시클릴이다.
일부 실시양태에서, "카르보시클릴"은 3 내지 14개의 고리 탄소 원자를 갖는 모노시클릭, 포화 카르보시클릴 기이다 ("C3-14 시클로알킬"). 일부 실시양태에서, "카르보시클릴"은 3 내지 10개의 고리 탄소 원자를 갖는 모노시클릭 포화 카르보시클릴 기이다 ("C3-10 시클로알킬"). 일부 실시양태에서, 시클로알킬 기는 3 내지 8개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C3-8 시클로알킬"). 일부 실시양태에서, 시클로알킬 기는 3 내지 6개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C3-6 시클로알킬"). 일부 실시양태에서, 시클로알킬 기는 5 내지 6개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C5-6 시클로알킬"). 일부 실시양태에서, 시클로알킬 기는 5 내지 10개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C5-10 시클로알킬"). C5-6 시클로알킬 기의 예는 시클로펜틸 (C5) 및 시클로헥실 (C6)을 포함한다. C3-6 시클로알킬 기의 예는 상기 언급된 C5-6 시클로알킬 기뿐만 아니라 시클로프로필 (C3) 및 시클로부틸 (C4)을 포함한다. C3-8 시클로알킬 기의 예는 상기 언급된 C3-6 시클로알킬 기뿐만 아니라 시클로헵틸 (C7) 및 시클로옥틸 (C8)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 각 경우의 시클로알킬 기는 독립적으로 비치환되거나 ("비치환된 시클로알킬") 또는 1개 이상의 치환기로 치환된다 ("치환된 시클로알킬"). 특정 실시양태에서, 시클로알킬 기는 비치환된 C3-10 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, 시클로알킬 기는 치환된 C3-10 시클로알킬이다.
"헤테로시클릴" 또는 "헤테로시클릭"은 고리 탄소 원자 및 1 내지 4개의 고리 헤테로원자 (여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택됨)를 갖는 3- 내지 14원 비-방향족 고리계의 라디칼을 지칭한다 ("3-14원 헤테로시클릴"). 특정 실시양태에서, "헤테로시클릴" 또는 "헤테로시클릭"은 고리 탄소 원자 및 1 내지 4개의 고리 헤테로원자 (여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택됨)를 갖는 3-10원 비-방향족 고리계의 라디칼을 지칭한다 ("3-10원 헤테로시클릴"). 1개 이상의 질소 원자를 함유하는 헤테로시클릴 기에서, 부착 지점은 원자가가 허용하는 바에 따라, 탄소 또는 질소 원자일 수 있다. 헤테로시클릴 기는 모노시클릭 ("모노시클릭 헤테로시클릴") 또는 융합, 가교 또는 스피로-융합 고리계, 예컨대 비시클릭 계 ("비시클릭 헤테로시클릴")일 수 있고, 포화일 수 있거나 또는 부분 불포화일 수 있다. 헤테로시클릴 비시클릭 고리계는 하나 또는 둘 다의 고리 내에 1개 이상의 헤테로원자를 포함할 수 있다. "헤테로시클릴"은 또한, 상기 정의된 바와 같은 헤테로시클릴 고리가 1개 이상의 카르보시클릴 기와 융합되는 고리계 (여기서 부착 지점은 카르보시클릴 고리 상이거나 또는 헤테로시클릴 고리 상임); 또는 상기 정의된 바와 같은 헤테로시클릴 고리가 1개 이상의 아릴 또는 헤테로아릴 기와 융합되는 고리계 (여기서 부착 지점은 헤테로시클릴 고리 상임)를 포함하고, 이러한 경우에 고리원의 수는 계속해서 헤테로시클릴 고리계 내의 고리원의 수를 지정한다. 특정 실시양태에서, 각 경우의 헤테로시클릴은 독립적으로 임의로 치환되며, 즉 비치환되거나 ("비치환된 헤테로시클릴") 또는 1개 이상의 치환기로 치환된다 ("치환된 헤테로시클릴"). 특정 실시양태에서, 헤테로시클릴 기는 비치환된 3-10원 헤테로시클릴이다. 특정 실시양태에서, 헤테로시클릴 기는 치환된 3-10원 헤테로시클릴이다.
일부 실시양태에서, 헤테로시클릴 기는 고리 탄소 원자 및 1-4개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-10원 비-방향족 고리계이며, 여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택된다 ("5-10원 헤테로시클릴"). 일부 실시양태에서, 헤테로시클릴 기는 고리 탄소 원자 및 1-4개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-8원 비-방향족 고리계이며, 여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택된다 ("5-8원 헤테로시클릴"). 일부 실시양태에서, 헤테로시클릴 기는 고리 탄소 원자 및 1-4개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-6원 비-방향족 고리계이며, 여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택된다 ("5-6원 헤테로시클릴"). 일부 실시양태에서, 5-6원 헤테로시클릴은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1-3개의 고리 헤테로원자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 5-6원 헤테로시클릴은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1-2개의 고리 헤테로원자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 5-6원 헤테로시클릴은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1개의 고리 헤테로원자를 갖는다.
1개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 3-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 아지리디닐, 옥시라닐 및 티오레닐을 포함한다. 1개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 4-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 아제티디닐, 옥세타닐 및 티에타닐을 포함한다. 1개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 5-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 테트라히드로푸라닐, 디히드로푸라닐, 테트라히드로티오페닐, 디히드로티오페닐, 피롤리디닐, 디히드로피롤릴 및 피롤릴-2,5-디온을 포함한다. 2개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 5-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 디옥솔라닐, 옥사술푸라닐, 디술푸라닐 및 옥사졸리딘-2-온을 포함한다. 3개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 5-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 트리아졸리닐, 옥사디아졸리닐 및 티아디아졸리닐을 포함한다. 1개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 6-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 피페리디닐, 테트라히드로피라닐, 디히드로피리디닐 및 티아닐을 포함한다. 2개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 6-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 피페라지닐, 모르폴리닐, 디티아닐 및 디옥사닐을 포함한다. 3개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 6-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 트리아지나닐을 포함한다. 1개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 7-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 아제파닐, 옥세파닐 및 티에파닐을 포함한다. 1개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 8-원 헤테로시클릴 기는, 비제한적으로, 아조카닐, 옥세카닐 및 티오카닐을 포함한다. C6 아릴 고리에 융합된 예시적인 5-원 헤테로시클릴 기 (또한 본원에서 5,6-비시클릭 헤테로시클릭 고리로 지칭됨)는, 비제한적으로, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 디히드로벤조푸라닐, 디히드로벤조티에닐, 벤족사졸리노닐 등을 포함한다. 아릴 고리에 융합된 예시적인 6-원 헤테로시클릴 기 (또한 본원에서 6,6-비시클릭 헤테로시클릭 고리로 지칭됨)는, 비제한적으로, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐 등을 포함한다.
"아릴"은 방향족 고리계에 제공된 6-14개의 고리 탄소 원자 및 0개의 헤테로원자를 갖는 모노시클릭 또는 폴리시클릭 (예를 들어, 비시클릭 또는 트리시클릭) 4n+2 방향족 고리계 (예를 들어, 시클릭 어레이에 공유된 6, 10 또는 14개의 π 전자를 가짐)의 라디칼을 지칭한다 ("C6-14 아릴"). 일부 실시양태에서, 아릴 기는 6개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C6 아릴"; 예를 들어, 페닐). 일부 실시양태에서, 아릴 기는 10개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C10 아릴"; 예를 들어, 나프틸, 예컨대 1-나프틸 및 2-나프틸). 일부 실시양태에서, 아릴 기는 14개의 고리 탄소 원자를 갖는다 ("C14 아릴"; 예를 들어, 안트라실). "아릴"은 또한, 상기 정의된 바와 같은 아릴 고리가 1개 이상의 카르보시클릴 또는 헤테로시클릴 기와 융합되는 고리계를 포함하며, 여기서 부착 지점 또는 라디칼은 아릴 고리 상이고, 이러한 경우에 탄소 원자의 수는 계속해서 아릴 고리계 내의 탄소 원자의 수를 지정한다. 특정 실시양태에서, 각 경우의 아릴 기는 독립적으로 임의로 치환되며, 즉 비치환되거나 ("비치환된 아릴") 또는 1개 이상의 치환기로 치환된다 ("치환된 아릴"). 특정 실시양태에서, 아릴 기는 비치환된 C6-14 아릴이다. 특정 실시양태에서, 아릴 기는 치환된 C6-14 아릴이다.
"헤테로아릴"은 방향족 고리계 내에 제공된 고리 탄소 원자 및 1-4개의 고리 헤테로원자 (여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택됨)를 갖는 5-14원 모노시클릭 또는 폴리시클릭 (예를 들어, 비시클릭 또는 트리시클릭) 4n+2 방향족 고리계 (예를 들어, 시클릭 어레이에 공유된 6 또는 10개의 π 전자를 가짐)의 라디칼을 지칭한다 ("5-14원 헤테로아릴"). 특정 실시양태에서, 헤테로아릴은 방향족 고리계 내에 제공된 고리 탄소 원자 및 1-4개의 고리 헤테로원자 (여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택됨)를 갖는 5-10원 모노시클릭 또는 비시클릭 4n+2 방향족 고리계의 라디칼을 지칭한다 ("5-10원 헤테로아릴"). 1개 이상의 질소 원자를 함유하는 헤테로아릴 기에서, 부착 지점은 원자가가 허용하는 바에 따라, 탄소 또는 질소 원자일 수 있다. 헤테로아릴 비시클릭 고리계는 하나 또는 둘 다의 고리에 1개 이상의 헤테로원자를 포함할 수 있다. "헤테로아릴"은 상기 정의된 바와 같은 헤테로아릴 고리가 1개 이상의 카르보시클릴 또는 헤테로시클릴 기와 융합되는 고리계를 포함하며, 여기서 부착 지점은 헤테로아릴 고리 상이고, 이러한 경우에 고리원의 수는 계속해서 헤테로아릴 고리계 내의 고리원의 수를 지정한다. "헤테로아릴"은 또한 상기 정의된 바와 같은 헤테로아릴 고리가 1개 이상의 아릴 기와 융합되는 고리계를 포함하며, 여기서 부착 지점은 아릴 또는 헤테로아릴 고리 상이고, 이러한 경우에 고리원의 수는 융합된 (아릴/헤테로아릴) 고리계 내의 고리원의 수를 지정한다. 1개의 고리가 헤테로원자를 함유하지 않는 비시클릭 헤테로아릴 기 (예를 들어, 인돌릴, 퀴놀리닐, 카르바졸릴 등)에서, 부착 지점은 어느 하나의 고리, 예를 들어 헤테로원자를 보유하는 고리 (예를 들어, 2-인돌릴) 또는 헤테로원자를 함유하지 않는 고리 (예를 들어, 5-인돌릴) 상일 수 있다.
일부 실시양태에서, 헤테로아릴 기는 방향족 고리계 내에 제공된 고리 탄소 원자 및 1-4개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-14원 방향족 고리계이며, 여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택된다 ("5-14원 헤테로아릴"). 일부 실시양태에서, 헤테로아릴 기는 방향족 고리계 내에 제공된 고리 탄소 원자 및 1-4개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-10원 방향족 고리계이며, 여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택된다 ("5-10원 헤테로아릴"). 일부 실시양태에서, 헤테로아릴 기는 방향족 고리계 내에 제공된 고리 탄소 원자 및 1-4개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-8원 방향족 고리계이며, 여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택된다 ("5-8원 헤테로아릴"). 일부 실시양태에서, 헤테로아릴 기는 방향족 고리계 내에 제공된 고리 탄소 원자 및 1-4개의 고리 헤테로원자를 갖는 5-6원 방향족 고리계이며, 여기서 각각의 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택된다 ("5-6원 헤테로아릴"). 일부 실시양태에서, 5-6원 헤테로아릴은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1-3개의 고리 헤테로원자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 5-6원 헤테로아릴은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1-2개의 고리 헤테로원자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 5-6원 헤테로아릴은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1개의 고리 헤테로원자를 갖는다. 특정 실시양태에서, 각 경우의 헤테로아릴 기는 독립적으로 임의로 치환되며, 예를 들어 비치환되거나 ("비치환된 헤테로아릴") 또는 1개 이상의 치환기로 치환된다 ("치환된 헤테로아릴"). 특정 실시양태에서, 헤테로아릴 기는 비치환된 5-14원 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, 헤테로아릴 기는 치환된 5-14원 헤테로아릴이다.
1개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 5-원 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 피롤릴, 푸라닐 및 티오페닐을 포함한다. 2개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 5-원 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 이미다졸릴, 피라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴 및 이소티아졸릴을 포함한다. 3개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 5-원 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 트리아졸릴, 옥사디아졸릴 및 티아디아졸릴을 포함한다. 4개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 5-원 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 테트라졸릴을 포함한다. 1개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 6-원 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 피리디닐을 포함한다. 2개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 6-원 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 피리다지닐, 피리미디닐 및 피라지닐을 포함한다. 3 또는 4개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 6-원 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 각각 트리아지닐 및 테트라지닐을 포함한다. 1개의 헤테로원자를 함유하는 예시적인 7-원 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 아제피닐, 옥세피닐 및 티에피닐을 포함한다. 예시적인 6,6-비시클릭 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 나프티리디닐, 프테리디닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 신놀리닐, 퀴녹살리닐, 프탈라지닐 및 퀴나졸리닐을 포함한다. 예시적인 5,6-비시클릭 헤테로아릴 기는, 비제한적으로, 하기 화학식 중 어느 하나를 포함한다:
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
임의의 모노시클릭 또는 비시클릭 헤테로아릴 기에서, 부착 지점은 원자가가 허용하는 바에 따라, 탄소 또는 질소 원자일 수 있다.
"부분 불포화"는 적어도 1개의 이중 또는 삼중 결합을 포함하는 기를 지칭한다. 용어 "부분 불포화"는 다중 불포화 부위를 갖는 고리를 포괄하는 것으로 의도되지만, 본원에 정의된 바와 같은 방향족 기 (예를 들어, 아릴 또는 헤테로아릴 기)를 포함하는 것으로 의도되지는 않는다. 마찬가지로, "포화"는 이중 또는 삼중 결합을 함유하지 않는, 즉 모두 단일 결합을 함유하는 기를 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본원에 정의된 바와 같은 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴 기는 임의로 치환된다 (예를 들어, "치환된" 또는 "비치환된" 지방족, "치환된" 또는 "비치환된" 알킬, "치환된" 또는 "비치환된" 알케닐, "치환된" 또는 "비치환된" 알키닐, "치환된" 또는 "비치환된" 카르보시클릴, "치환된" 또는 "비치환된" 헤테로시클릴, "치환된" 또는 "비치환된" 아릴 또는 "치환된" 또는 "비치환된" 헤테로아릴 기). 일반적으로, 용어 "치환된"은 용어 "임의로"가 선행하든지 선행하지 않든지 간에, 기 (예를 들어, 탄소 또는 질소 원자) 상에 존재하는 적어도 1개의 수소가 허용가능한 치환기, 예를 들어 치환시에 안정한 화합물, 예를 들어 재배열, 고리화, 제거 또는 다른 반응에 의해서와 같은 변환을 자발적으로 겪지 않는 화합물을 생성시키는 치환기로 대체된 것을 의미한다. 달리 나타내지 않는 한, "치환된" 기는 이러한 기의 1개 이상의 치환가능한 위치에 치환기를 가지며, 임의의 주어진 구조에서 1개 초과의 위치가 치환되는 경우, 치환기는 각각의 위치에서 동일하거나 또는 상이하다. 용어 "치환된"은 안정한 화합물의 형성을 가져오는 본원에 기재된 임의의 치환기를 포함한, 유기 화합물의 모든 허용가능한 치환기로의 치환을 포함하는 것으로 고려된다. 본 개시내용은 안정한 화합물에 도달하기 위해 임의의 및 모든 이러한 조합을 고려한다. 본 개시내용의 목적을 위해, 헤테로원자, 예컨대 질소는 수소 치환기, 및/또는 헤테로원자의 원자가를 충족시키고 안정한 모이어티의 형성을 가져오는 본원에 기재된 바와 같은 임의의 적합한 치환기를 가질 수 있다.
예시적인 탄소 원자 치환기는 할로겐, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, -OH, -ORaa, -ON(Rbb)2, -N(Rbb)2, -N(Rbb)3 +X , -N(ORcc)Rbb, -SH, -SRaa, -SSRCC, -C(=O)Raa, -CO2H, -CHO, -C(ORcc)2, -CO2Raa, -OC(=O)Raa, -OCO2Raa, -C(=O)N(Rbb)2, -OC(=O)N(Rbb)2, -NRbbC(=O)Raa, -NRbbCO2Raa, -NRbbC(=O)N(Rbb)2, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRbb)ORaa, -OC(=NRbb)Raa, -OC(=NRbb)ORaa, -C(=NRbb)N(Rbb)2, -OC(=NRbb)N(Rbb)2, -NRbbC(=NRbb)N(Rbb)2, -C(=O)NRbbSO2Raa, -NRbbSO2Raa, -SO2N(Rbb)2, -SO2Raa, -SO2ORaa, -OSO2Raa, -S(=O)Raa, -OS(=O)Raa, -Si(Raa)3, -OSi(Raa)3 -C(=S)N(Rbb)2, -C(=O)SRaa, -C(=S)SRaa, -SC(=S)SRaa, -SC(=O)SRaa, -OC(=O)SRaa, -SC(=O)ORaa, -SC(=O)Raa, -P(=O)2Raa, -OP(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -OP(=O)(Raa)2, -OP(=O)(ORcc)2, -P(=O)2N(Rbb)2, -OP(=O)2N(Rbb)2, -P(=O)(NRbb)2, -OP(=O)(NRbb)2, -NRbbP(=O)(ORcc)2, -NRbbP(=O)(NRbb)2, -P(RCC)2, -P(RCC)3, -OP(Rcc)2, -OP(Rcc)3, -B(Raa)2, -B(ORcc)2, -BRaa(ORcc), C1-10 알킬, C1-10 퍼할로알킬, C2-10 알케닐, C2-10 알키닐, C3-10 카르보시클릴, 3-14원 헤테로시클릴, C6-14 아릴 및 5-14원 헤테로아릴을 포함하나 이에 제한되지는 않고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Rdd 기로 치환되거나;
또는 탄소 원자 상의 2개의 같은자리 수소는 기 =O, =S, =NN(Rbb)2, =NNRbbC(=O)Raa, =NNRbbC(=O)ORaa, =NNRbbS(=O)2Raa, =NRbb, 또는 =NORcc로 대체되고; 각 경우의 Raa는 독립적으로 C1-10 알킬, C1-10 퍼할로알킬, C2-10 알케닐, C2-10 알키닐, C3-10 카르보시클릴, 3-14원 헤테로시클릴, C6-14 아릴 및 5-14원 헤테로아릴로부터 선택되거나, 또는 2개의 Raa 기는 연결되어 3-14원 헤테로시클릴 또는 5-14원 헤테로아릴 고리를 형성하고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Rdd 기로 치환되고;
각 경우의 Rbb는 독립적으로 수소, -OH, -ORaa, -N(RCC)2, -CN, -C(=O)Raa, -C(=O)N(Rcc)2, -CO2Raa, -SO2Raa, -C(=NRcc)ORaa, -C(=NRCC)N(RCC)2, -SO2N(Rcc)2, -SO2Rcc, -SO2ORcc, -SORaa, -C(=S)N(RCC)2, -C(=O)SRcc, -C(=S)SRCC, -P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)2N(Rcc)2, -P(=O)(NRcc)2, C1-10 알킬, C1-10 퍼할로알킬, C2-10 알케닐, C2-10 알키닐, C3-10 카르보시클릴, 3-14원 헤테로시클릴, C6-14 아릴 및 5-14원 헤테로아릴로부터 선택되거나, 또는 2개의 Rbb 기는 연결되어 3-14원 헤테로시클릴 또는 5-14원 헤테로아릴 고리를 형성하고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Rdd 기로 치환되고;
각 경우의 Rcc는 독립적으로 수소, C1-10 알킬, C1-10 퍼할로알킬, C2-10 알케닐, C2-10 알키닐, C3-10 카르보시클릴, 3-14원 헤테로시클릴, C6-14 아릴 및 5-14원 헤테로아릴로부터 선택되거나, 또는 2개의 Rcc 기는 연결되어 3-14원 헤테로시클릴 또는 5-14원 헤테로아릴 고리를 형성하고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Rdd 기로 치환되고;
각 경우의 Rdd는 독립적으로 할로겐, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, -OH, -ORee, -ON(Rff)2, -N(Rff)2, -N(Rff)3 +X , -N(ORee)Rff, -SH, -SRee, -SSRee, -C(=O)Ree, -CO2H, -CO2Ree, -OC(=O)Ree, -OCO2Ree, -C(=O)N(Rff)2, -OC(=O)N(Rff)2, -NRffC(=O)Ree, -NRffCO2Ree, -NRffC(=O)N(Rff)2, -C(=NRff)ORee, -OC(=NRff)Ree, -OC(=NRff)ORee, -C(=NRff)N(Rff)2, -OC(=NRff)N(Rff)2, -NRffC(=NRff)N(Rff)2,-NRffSO2Ree, -SO2N(Rff)2, -SO2Ree, -SO2ORee, -OSO2Ree, -S(=O)Ree, -Si(Ree)3, -OSi(Ree)3, -C(=S)N(Rff)2, -C(=O)SRee, -C(=S)SRee, -SC(=S)SRee, -P(=O)2Ree, -P(=O)(Ree)2, -OP(=O)(Ree)2, -OP(=O)(ORee)2, C1-6 알킬, C1-6 퍼할로알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 카르보시클릴, 3-10원 헤테로시클릴, C6-10 아릴, 5-10원 헤테로아릴로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Rgg 기로 치환되거나, 또는 2개의 같은자리 Rdd 치환기는 연결되어 =O 또는 =S를 형성할 수 있고;
각 경우의 Ree는 독립적으로 C1-6 알킬, C1-6 퍼할로알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 카르보시클릴, C6-10 아릴, 3-10원 헤테로시클릴 및 3-10원 헤테로아릴로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Rgg 기로 치환되고;
각 경우의 Rff는 독립적으로 수소, C1-6 알킬, C1-6 퍼할로알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 카르보시클릴, 3-10원 헤테로시클릴, C1-6 아릴 및 5-10원 헤테로아릴로부터 선택되거나, 또는 2개의 Rff 기는 연결되어 3-14원 헤테로시클릴 또는 5-14원 헤테로아릴 고리를 형성하고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Rgg 기로 치환되고;
각 경우의 Rgg는, 독립적으로, 할로겐, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, -OH, -O1-6 알킬, -ON(C1-6 알킬)2, -N(C1-6 알킬)2, -N(C1-6 알킬)3 +X- , -NH(C1-6 알킬)2 +X- , -NH2(C1-6 알킬) +X- , -NH3 +X , -N(OC1-6 알킬)(C1-6 알킬), -N(OH)(C1-6 알킬), -NH(OH), -SH, -S1-6 알킬, -SS(C1-6 알킬), -C(=O)(C1-6 알킬), -CO2H, -CO2(C1-6 알킬), -OC(=O)(C1-6 알킬), -OCO2(C1-6 알킬), -C(=O)NH2, -C(=O)N(C1-6 알킬)2, -OC(=O)NH(C1-6 알킬), -NHC(=O)(C1-6 알킬), -N(C1-6 알킬)C(=O)(C1-6 알킬), -NHCO2(C1-6 알킬), -NHC(=O)N(C1-6 알킬)2, -NHC(=O)NH(C1-6 알킬), -NHC(=O)NH2, -C(=NH)O(C1-6 알킬) ,-OC(=NH)(C1-6 알킬), -OC(=NH)OC1-6 알킬, -C(=NH)N(C1-6 알킬)2, -C(=NH)NH(C1-6 알킬), -C(=NH)NH2, -OC(=NH)N(C1-6 알킬)2, -OC(NH)NH(C1-6 알킬), -OC(NH)NH2, -NHC(NH)N(C1-6 알킬)2, -NHC(=NH)NH2, -NHSO2(C1-6 알킬), -SO2N(C1-6 알킬)2, -SO2NH(C1-6 알킬), -SO2NH2,-SO2 C1-6 알킬, -SO2OC1-6 알킬, -OSO2C1-6 알킬, -SOC1-6 알킬, -Si(C1-6 알킬)3, -OSi(C1-6 알킬)3 -C(=S)N(C1-6 알킬)2, C(=S)NH(C1-6 알킬), C(=S)NH2, -C(=O)S(C1-6 알킬), -C(=S)SC1-6 알킬, -SC(=S)SC1-6 알킬, -P(=O)2(C1-6 알킬), -P(=O)(C1-6 알킬)2, -OP(=O)(C1-6 알킬)2, -OP(=O)(OC1-6 알킬)2, C1-6 알킬, C1-6 퍼할로알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 카르보시클릴, C6-10 아릴, 3-10원 헤테로시클릴, 5-10원 헤테로아릴이거나; 또는 2개의 같은자리 Rgg 치환기는 연결되어 =O 또는 =S를 형성할 수 있고; 여기서 X는 반대이온이다.
"반대이온" 또는 "음이온성 반대이온"은 전자 중성을 유지하기 위해 양이온성 4급 아미노 기와 회합된 음으로 하전된 기이다. 예시적인 반대이온은 할라이드 이온 (예를 들어, F-, Cl-, Br-, I-), NO3 -, ClO4 -, OH-, H2PO4 -, HSO4 -, 술포네이트 이온 (예를 들어, 메탄술포네이트, 트리플루오로메탄술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 벤젠술포네이트, 10-캄포르 술포네이트, 나프탈렌-2-술포네이트, 나프탈렌-1-술폰산-5-술포네이트, 에탄-1-술폰산-2-술포네이트 등), 및 카르복실레이트 이온 (예를 들어, 아세테이트, 에타노에이트, 프로파노에이트, 벤조에이트, 글리세레이트, 락테이트, 타르트레이트, 글리콜레이트 등)을 포함한다.
"할로" 또는 "할로겐"은 플루오린 (플루오로, -F), 염소 (클로로, -Cl), 브로민 (브로모, -Br), 또는 아이오딘 (아이오도, -I)을 지칭한다.
질소 원자는 원자가가 허용하는 바에 따라 치환 또는 비치환될 수 있으며, 1급, 2급, 3급 또는 4급 질소 원자를 포함한다. 예시적인 질소 원자 치환기는 수소, -OH, -ORaa, -N(RCC)2, -CN, -C(=O)Raa, -C(=O)N(Rcc)2, -CO2Raa, -SO2Raa, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRcc)ORaa, -C(=NRCC)N(RCC)2, -SO2N(Rcc)2, -SO2Rcc, -SO2ORcc, -SORaa, -C(=S)N(RCC)2, -C(=O)SRcc, -C(=S)SRCC, -P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)2N(Rcc)2, -P(=O)(NRcc)2, C1-10 알킬, C1-10 퍼할로알킬, C2-10 알케닐, C2-10 알키닐, C3-10 카르보시클릴, 3-14원 헤테로시클릴, C6-14 아릴 및 5-14원 헤테로아릴을 포함하나 이에 제한되지는 않거나, 또는 질소 원자에 부착된 2개의 Rcc 기는 연결되어 3-14원 헤테로시클릴 또는 5-14원 헤테로아릴 고리를 형성하고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Rdd 기로 치환되고, 여기서 Raa, Rbb, Rcc 및 Rdd는 상기에 정의된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 질소 원자 상에 존재하는 치환기는 질소 보호기 (또한 아미노 보호기로 지칭됨)이다. 질소 보호기는 -OH, -ORaa, -N(RCC)2, -C(=O)Raa, -C(=O)N(Rcc)2, -CO2Raa, -SO2Raa, -C(=NRcc)Raa, -C(=NRcc)ORaa, -C(=NRCC)N(RCC)2, -SO2N(Rcc)2, -SO2Rcc, -SO2ORcc, -SORaa, -C(=S)N(RCC)2, -C(=O)SRcc, -C(=S)SRCC, C1-10 알킬 (예를 들어, 아르알킬, 헤테로아르알킬), C2-10 알케닐, C2-10 알키닐, C3-10 카르보시클릴, 3-14원 헤테로시클릴, C6-14 아릴 및 5-14원 헤테로아릴 기를 포함하나 이에 제한되지는 않고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아르알킬, 아릴 및 헤테로아릴은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 R 기로 치환되고, 여기서 Raa, Rbb, Rcc 및 Rdd는 본원에 정의된 바와 같다. 질소 보호기는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3 rd edition, John Wiley & Sons, 1999]에 상세하게 기재된 것을 포함한다.
아미드 질소 보호기 (예를 들어, -C(=O)Raa)는 포름아미드, 아세트아미드, 클로로아세트아미드, 트리클로로아세트아미드, 트리플루오로아세트아미드, 페닐아세트아미드, 3-페닐프로판아미드, 피콜린아미드, 3-피리딜카르복스아미드, N-벤조일페닐알라닐 유도체, 벤즈아미드, p-페닐벤즈아미드, o-니트로페닐아세트아미드, o-니트로페녹시아세트아미드, 아세토아세트아미드, (N'-디티오벤질옥시아실아미노)아세트아미드, 3-(p-히드록시페닐)프로판아미드, 3-(o-니트로페닐)프로판아미드, 2-메틸-2-(o-니트로페녹시)프로판아미드, 2-메틸-2-(o-페닐아조페녹시)프로판아미드, 4-클로로부탄아미드, 3-메틸-3-니트로부탄아미드, o-니트로신나미드, N-아세틸메티오닌, o-니트로벤즈아미드 및 o-(벤조일옥시메틸)벤즈아미드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
카르바메이트 질소 보호기 (예를 들어, -C(=O)ORaa)는 메틸 카르바메이트, 에틸 카르바메이트, 9-플루오레닐메틸 카르바메이트 (Fmoc), 9-(2-술포)플루오레닐메틸 카르바메이트, 9-(2,7-디브로모)플루오로에닐메틸 카르바메이트, 2,7-디-t-부틸-[9-(10,10-디옥소-10,10,10,10-테트라히드로티오크산틸)] 메틸 카르바메이트 (DBD-Tmoc), 4-메톡시페나실 카르바메이트 (Phenoc), 2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트 (Troc), 2-트리메틸실릴에틸 카르바메이트 (Teoc), 2-페닐에틸 카르바메이트 (hZ), 1-(1-아다만틸)-1-메틸에틸 카르바메이트 (Adpoc), 1,1-디메틸-2-할로에틸 카르바메이트, 1,1-디메틸-2,2-디브로모에틸 카르바메이트 (DB-t-BOC), 1,1-디메틸-2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트 (TCBOC), 1-메틸-1-(4-비페닐릴)에틸 카르바메이트 (Bpoc), 1-(3,5-디-t-부틸페닐)-1-메틸에틸 카르바메이트 (t-Bumeoc), 2-(2'-및 4'-피리딜)에틸 카르바메이트 (Pyoc), 2-(N,N-디시클로헥실카르복스아미도)에틸 카르바메이트, t-부틸 카르바메이트 (BOC), 1-아다만틸 카르바메이트 (Adoc), 비닐 카르바메이트 (Voc), 알릴 카르바메이트 (Alloc), 1-이소프로필알릴 카르바메이트 (Ipaoc), 신나밀 카르바메이트 (Coc), 4-니트로신나밀 카르바메이트 (Noc), 8-퀴놀릴 카르바메이트, N-히드록시피페리디닐 카르바메이트, 알킬디티오 카르바메이트, 벤질 카르바메이트 (Cbz), p-메톡시벤질 카르바메이트 (Moz), p-니트로벤질 카르바메이트, p-브로모벤질 카르바메이트, p-클로로벤질 카르바메이트, 2,4-디클로로벤질 카르바메이트, 4-메틸술피닐벤질 카르바메이트 (Msz), 9-안트릴메틸 카르바메이트, 디페닐메틸 카르바메이트, 2-메틸티오에틸 카르바메이트, 2-메틸술포닐에틸 카르바메이트, 2-(p-톨루엔술포닐)에틸 카르바메이트, [2-(1,3-디티아닐)] 메틸 카르바메이트 (Dmoc), 4-메틸티오페닐 카르바메이트 (Mtpc), 2,4-디메틸티오페닐 카르바메이트 (Bmpc), 2-포스포니오에틸 카르바메이트 (Peoc), 2-트리페닐포스포니오이소프로필 카르바메이트 (Ppoc), 1,1-디메틸-2-시아노에틸 카르바메이트, m-클로로-p-아실옥시벤질 카르바메이트, p-(디히드록시보릴)벤질 카르바메이트, 5-벤즈이속사졸릴메틸 카르바메이트, 2-(트리플루오로메틸)-6-크로모닐메틸 카르바메이트 (Tcroc), m-니트로페닐 카르바메이트, 3,5-디메톡시벤질 카르바메이트, o-니트로벤질 카르바메이트, 3,4-디메톡시-6-니트로벤질 카르바메이트, 페닐(o-니트로페닐)메틸 카르바메이트, t-아밀 카르바메이트, S-벤질 티오카르바메이트, p-시아노벤질 카르바메이트, 시클로부틸 카르바메이트, 시클로헥실 카르바메이트, 시클로펜틸 카르바메이트, 시클로프로필메틸 카르바메이트, p-데실옥시벤질 카르바메이트, 2,2-디메톡시아실비닐 카르바메이트, o-(N,N-디메틸카르복스아미도)벤질 카르바메이트, 1,1-디메틸-3-(N,N-디메틸카르복스아미도)프로필 카르바메이트, 1,1-디메틸프로피닐 카르바메이트, 디(2-피리딜)메틸 카르바메이트, 2-푸라닐메틸 카르바메이트, 2-아이오도에틸 카르바메이트, 이소보르닐 카르바메이트, 이소부틸 카르바메이트, 이소니코티닐 카르바메이트, p-(p'-메톡시페닐아조)벤질 카르바메이트, 1-메틸시클로부틸 카르바메이트, 1-메틸시클로헥실 카르바메이트, 1-메틸-1-시클로프로필메틸 카르바메이트, 1-메틸-1-(3,5-디메톡시페닐)에틸 카르바메이트, 1-메틸-1-(p-페닐아조페닐)에틸 카르바메이트, 1 -메틸-1-페닐에틸 카르바메이트, 1-메틸-1-(4-피리딜)에틸 카르바메이트, 페닐 카르바메이트, p-(페닐아조)벤질 카르바메이트, 2,4,6-트리-t-부틸페닐 카르바메이트, 4-(트리메틸암모늄)벤질 카르바메이트, 및 2,4,6-트리메틸벤질 카르바메이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
술폰아미드 질소 보호기 (예를 들어, -S(=O)2Raa)는 p-톨루엔술폰아미드 (Ts), 벤젠술폰아미드, 2,3,6,-트리메틸-4-메톡시벤젠술폰아미드 (Mtr), 2,4,6-트리메톡시벤젠술폰아미드 (Mtb), 2,6-디메틸-4-메톡시벤젠술폰아미드 (Pme), 2,3,5, 6-테트라메틸-4-메톡시벤젠술폰아미드 (Mte), 4-메톡시벤젠술폰아미드 (Mbs), 2,4,6-트리메틸벤젠술폰아미드 (Mts), 2,6-디메톡시-4-메틸벤젠술폰아미드 (iMds), 2,2,5,7, 8-펜타메틸크로만-6-술폰아미드 (Pmc), 메탄술폰아미드 (Ms), β-트리메틸실릴에탄술폰아미드 (SES), 9-안트라센술폰아미드, 4-(4',8'-디메톡시나프틸메틸)벤젠술폰아미드 (DNMBS), 벤질술폰아미드, 트리플루오로메틸술폰아미드, 및 페나실술폰아미드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
다른 질소 보호기는 페노티아지닐-(10)-아실 유도체, N'-p-톨루엔술포닐아미노아실 유도체, N'-페닐아미노티오아실 유도체, N-벤조일페닐알라닐 유도체, N-아세틸메티오닌 유도체, 4,5-디페닐-3-옥사졸린-2-온, N-프탈이미드, N-디티아숙신이미드 (Dts), N-2,3-디페닐말레이미드, N-2,5-디메틸피롤, N-1,1,4,4-테트라메틸디실릴아자시클로펜탄 부가물 (STABASE), 5-치환된 1,3-디메틸-1,3,5-트리아자시클로헥산-2-온, 5-치환된 1,3-디벤질-1,3,5-트리아자시클로헥산-2-온, 1-치환된 3,5-디니트로-4-피리돈, N-메틸아민, N-알릴아민, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸아민 (SEM), N-3-아세톡시프로필아민, N-(1-이소프로필-4-니트로-2-옥소-3-프롤린-3-일)아민, 4급 암모늄 염, N-벤질아민, N-디(4-메톡시페닐)메틸아민, N-5-디벤조수베릴아민, N-트리페닐메틸아민 (Tr), N-[(4-메톡시페닐)디페닐메틸] 아민 (MMTr), N-9-페닐플루오레닐아민 (PhF), N-2,7-디클로로-9-플루오레닐메틸렌아민, N-페로세닐메틸아미노 (Fcm), N-2-피콜릴아미노 N'-옥시드, N-1,1-디메틸티오메틸렌아민, N-벤질리덴아민, N-p-메톡시벤질리덴아민, N-디페닐메틸렌아민, N-[(2-피리딜)메시틸]메틸렌아민, N-(N',N'-디메틸아미노메틸렌)아민, N,N'-이소프로필리덴디아민, N-p-니트로벤질리덴아민, N-살리실리덴아민, N-5-클로로살리실리덴아민, N-(5-클로로-2-히드록시페닐)페닐메틸렌아민, N-시클로헥실리덴아민, N-(5,5-디메틸-3-옥소-1-시클로헥세닐)아민, N-보란 유도체, N-디페닐보린산 유도체, N-[페닐(펜타아실크로뮴-또는 텅스텐)아실] 아민, N-구리 킬레이트, N-아연 킬레이트, N-니트로아민, N-니트로소아민, 아민 N-옥시드, 디페닐포스핀아미드 (Dpp), 디메틸티오포스핀아미드 (Mpt), 디페닐티오포스핀아미드 (Ppt), 디알킬 포스포르아미데이트, 디벤질 포스포르아미데이트, 디페닐 포스포르아미데이트, 벤젠술펜아미드, o-니트로벤젠술펜아미드 (Nps), 2,4-디니트로벤젠술펜아미드, 펜타클로로벤젠술펜아미드, 2-니트로-4-메톡시벤젠술펜아미드, 트리페닐메틸술펜아미드, 및 3-니트로피리딘술펜아미드 (Npys)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 산소 원자 상에 존재하는 치환기는 산소 보호기 (또한 히드록실 보호기로 지칭됨)이다. 산소 보호기는 -Raa, -N(Rbb)2, -C(=O)SRaa, -C(=O)Raa, -CO2Raa, -C(=O)N(Rbb)2, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRbb)ORaa, -C(=NRbb)N(Rbb)2, -S(=O)Raa, -SO2Raa, -Si(Raa)3, -P(RCC)2, -P(RCC)3, -P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)(ORcc)2, -P(=O)2N(Rbb)2, 및 -P(=O)(NRbb)2를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 Raa, Rbb 및 Rcc는 본원에 정의된 바와 같다. 산소 보호기는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3 edition, John Wiley & Sons, 1999]에 상세하게 기재된 것을 포함한다.
예시적인 산소 보호기는 메틸, 메톡실메틸 (MOM), 메틸티오메틸 (MTM), t-부틸티오메틸, (페닐디메틸실릴)메톡시메틸 (SMOM), 벤질옥시메틸 (BOM), p-메톡시벤질옥시메틸 (PMBM), (4-메톡시페녹시)메틸 (p-AOM), 구아이아콜메틸 (GUM), t-부톡시메틸, 4-펜테닐옥시메틸 (POM), 실록시메틸, 2-메톡시에톡시메틸 (MEM), 2,2,2-트리클로로에톡시메틸, 비스(2-클로로에톡시)메틸, 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 (SEMOR), 테트라히드로피라닐 (THP), 3-브로모테트라히드로피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 1-메톡시시클로헥실, 4-메톡시테트라히드로피라닐 (MTHP), 4-메톡시테트라히드로티오피라닐, 4-메톡시테트라히드로티오피라닐 S,S-디옥시드, 1-[(2-클로로-4-메틸)페닐]-4-메톡시피페리딘-4-일 (CTMP), 1,4-디옥산-2-일, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오푸라닐, 2,3,3a,4,5,6,7,7a-옥타히드로-7,8,8-트리메틸-4,7-메타노벤조푸란-2-일, 1-에톡시에틸, 1-(2-클로로에톡시)에틸, 1-메틸-1-메톡시에틸, 1-메틸-1-벤질옥시에틸, 1-메틸-1-벤질옥시-2-플루오로에틸, 2,2,2-트리클로로에틸, 2-트리메틸실릴에틸, 2-(페닐셀레닐)에틸, t-부틸, 알릴, p-클로로페닐, p-메톡시페닐, 2,4-디니트로페닐, 벤질 (Bn), p-메톡시벤질, 3,4-디메톡시벤질, o-니트로벤질, p-니트로벤질, p-할로벤질, 2,6-디클로로벤질, p-시아노벤질, p-페닐벤질, 2-피콜릴, 4-피콜릴, 3-메틸-2-피콜릴 N-옥시도, 디페닐메틸, p,p'-디니트로벤즈히드릴, 5-디벤조수베릴, 트리페닐메틸, α-나프틸디페닐메틸, p-메톡시페닐디페닐메틸, 디(p-메톡시페닐)페닐메틸, 트리(p-메톡시페닐)메틸, 4-(4'-브로모페나실옥시페닐)디페닐메틸, 4,4',4"-트리스(4,5-디클로로프탈이미도페닐)메틸, 4,4',4"-트리스(레불리노일옥시페닐)메틸, 4,4',4"-트리스(벤조일옥시페닐)메틸, 3-(이미다졸-1-일)비스(4',4"-디메톡시페닐)메틸, 1,1-비스(4-메톡시페닐)-1'-피레닐메틸, 9-안트릴, 9-(9-페닐)크산테닐, 9-(9-페닐-10-옥소)안트릴, 1,3-벤조디술푸란-2-일, 벤즈이소티아졸릴 S,S-디옥시도, 트리메틸실릴 (TMS), 트리에틸실릴 (TES), 트리이소프로필실릴 (TIPS), 디메틸이소프로필실릴 (IPDMS), 디에틸이소프로필실릴 (DEIPS), 디메틸텍실실릴, t-부틸디메틸실릴 (TBDMS), t-부틸디페닐실릴 (TBDPS), 트리벤질실릴, 트리-p-크실릴실릴, 트리페닐실릴, 디페닐메틸실릴 (DPMS), t-부틸메톡시페닐실릴 (TBMPS), 포르메이트, 벤조일포르메이트, 아세테이트, 클로로아세테이트, 디클로로아세테이트, 트리클로로아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 메톡시아세테이트, 트리페닐메톡시아세테이트, 페녹시아세테이트, p-클로로페녹시아세테이트, 3-페닐프로피오네이트, 4-옥소펜타노에이트 (레불리네이트), 4,4-(에틸렌디티오)펜타노에이트 (레불리노일디티오아세탈), 피발로에이트, 아다만토에이트, 크로토네이트, 4-메톡시크로토네이트, 벤조에이트, p-페닐벤조에이트, 2,4,6-트리메틸벤조에이트 (메시토에이트), t-부틸 카르보네이트 (BOC), 알킬 메틸 카르보네이트, 9-플루오레닐메틸 카르보네이트 (Fmoc), 알킬 에틸 카르보네이트, 알킬 2,2,2-트리클로로에틸 카르보네이트 (Troc), 2-(트리메틸실릴)에틸 카르보네이트 (TMSEC), 2-(페닐술포닐) 에틸 카르보네이트 (Psec), 2-(트리페닐포스포니오) 에틸 카르보네이트 (Peoc), 알킬 이소부틸 카르보네이트, 알킬 비닐 카르보네이트, 알킬 알릴 카르보네이트, 알킬 p-니트로페닐 카르보네이트, 알킬 벤질 카르보네이트, 알킬 p-메톡시벤질 카르보네이트, 알킬 3,4-디메톡시벤질 카르보네이트, 알킬 o-니트로벤질 카르보네이트, 알킬 p-니트로벤질 카르보네이트, 알킬 S-벤질 티오카르보네이트, 4-에톡시-1-나프틸 카르보네이트, 메틸 디티오카르보네이트, 2-아이오도벤조에이트, 4-아지도부티레이트, 4-니트로-4-메틸펜타노에이트, o-(디브로모메틸)벤조에이트, 2-포르밀벤젠술포네이트, 2-(메틸티오메톡시)에틸, 4-(메틸티오메톡시)부티레이트, 2-(메틸티오메톡시메틸)벤조에이트, 2,6-디클로로-4-메틸페녹시아세테이트, 2,6-디클로로-4-(1,1,3,3-테트라메틸부틸)페녹시아세테이트, 2,4-비스(1,1-디메틸프로필)페녹시아세테이트, 클로로디페닐아세테이트, 이소부티레이트, 모노숙시노에이트, (E)-2-메틸-2-부테노에이트, o-(메톡시아실)벤조에이트, a-나프토에이트, 니트레이트, 알킬 N,N,N',N'-테트라메틸포스포로디아미데이트, 알킬 N-페닐카르바메이트, 보레이트, 디메틸포스피노티오일, 알킬 2,4-디니트로페닐술페네이트, 술페이트, 메탄술포네이트 (메실레이트), 벤질술포네이트, 및 토실레이트 (Ts)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 황 원자 상에 존재하는 치환기는 황 보호기 (또한 티올 보호기로도 지칭됨)이다. 황 보호기는 -Raa, -N(Rbb)2, -C(=O)SRaa, -C(=O)Raa, -CO2Raa, -C(=O)N(Rbb)2, -C(=NRbb)Raa, -C(=NRbb)ORaa, -C(=NRbb)N(Rbb)2, -S(=O)Raa, -SO2Raa, -Si(Raa)3 -P(RCC)2, -P(RCC)3, -P(=O)2Raa, -P(=O)(Raa)2, -P(=O)(ORcc)2, -P(=O)2N(Rbb)2, 및 -P(=O)(NRbb)2를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 Raa, Rbb 및 Rcc는 본원에 정의된 바와 같다. 황 보호기는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons, 1999]에 상세하게 기재된 것을 포함한다.
"제약상 허용되는 염"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 등이 없이 인간 및 다른 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합하고 합리적인 이익/위험 비에 부합하는 그러한 염을 지칭한다. 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Berge et al. J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66: 1-19]에 제약상 허용되는 염이 상세히 기재되어 있다. 본원에 기재된 화합물의 제약상 허용되는 염은 적합한 무기 및 유기 산 및 염기로부터 유래된 것을 포함한다. 제약상 허용되는 비독성 산 부가염의 예는 무기 산, 예컨대 염산, 브로민화수소산, 인산, 황산 및 과염소산을 사용하거나 또는 유기 산, 예컨대 아세트산, 옥살산, 말레산, 타르타르산, 시트르산, 숙신산 또는 말론산을 사용하여 형성되거나, 또는 관련 기술분야에서 사용되는 다른 방법, 예컨대 이온 교환을 사용함으로써 형성된 아미노 기의 염이다. 다른 제약상 허용되는 염은 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시트레이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 글루코네이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로아이오다이드, 2-히드록시-에탄술포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, p-톨루엔술포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 등을 포함한다. 적절한 염기로부터 유래된 염은 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 암모늄 및 N+(C1-4알킬)4 염을 포함한다. 대표적인 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등을 포함한다. 추가로 적절한 경우에 제약상 허용되는 염은 4급 염을 포함한다.
본 발명은 유형 I PRMT 억제제를 제공한다. 한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00009
여기서
X는 N이고, Z는 NR4이고, Y는 CR5이거나; 또는
X는 NR4이고, Z는 N이고, Y는 CR5이거나; 또는
X는 CR5이고, Z는 NR4이고, Y는 N이거나; 또는
X는 CR5이고, Z는 N이고, Y는 NR4이고;
RX는 임의로 치환된 C1-4 알킬 또는 임의로 치환된 C3-4 시클로알킬이고;
L1은 결합, -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, -C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, -NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, -C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, -C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, -N(RB)SO2-, -SO2N(RB)-, 또는 임의로 치환된 C1-6 포화 또는 불포화 탄화수소 쇄이고, 여기서 탄화수소 쇄의 1개 이상의 메틸렌 단위는 -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, -C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, -NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, -C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, -C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, -N(RB)SO2-, 또는 -SO2N(RB)-로 임의로 및 독립적으로 대체되고;
각각의 RA는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 산소 원자에 부착되어 있는 경우에 산소 보호기, 및 황 원자에 부착되어 있는 경우에 황 보호기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 RB는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴 및 질소 보호기로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 동일한 질소 원자 상의 RB 및 RW는 개재 질소와 함께 임의로 치환된 헤테로시클릭 고리를 형성할 수 있고;
RW는 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이며; 단 L1이 결합인 경우, RW는 수소, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이 아니고;
R3은 수소, C1-4 알킬, 또는 C3-4 시클로알킬이고;
R4는 수소, 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C3-7 시클로알킬, 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로시클릴; 또는 임의로 치환된 C1-4 알킬-Cy이고;
Cy는 임의로 치환된 C3-7 시클로알킬, 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
R5는 수소, 할로, -CN, 임의로 치환된 C1-4 알킬, 또는 임의로 치환된 C3-4 시클로알킬이다. 한 측면에서, R3은 C1-4 알킬이다. 한 측면에서, R3은 메틸이다. 한 측면에서, R4는 수소이다. 한 측면에서, R5는 수소이다. 한 측면에서, L1은 결합이다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 -L1-RW가 임의로 치환된 카르보시클릴인 화학식 (I)의 화합물이다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 (V)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00010
여기서 고리 A는 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다. 한 측면에서, 고리 A는 임의로 치환된 카르보시클릴이다. 한 측면에서, R3은 C1-4 알킬이다. 한 측면에서, R3은 메틸이다. 한 측면에서, Rx는 비치환된 C1-4 알킬이다. 한 측면에서, Rx는 메틸이다. 한 측면에서, L1은 결합이다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 (VI)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00011
한 측면에서, 고리 A는 임의로 치환된 카르보시클릴이다. 한 측면에서, R3은 C1-4 알킬이다. 한 측면에서, R3은 메틸이다. 한 측면에서, Rx는 비치환된 C1-4 알킬이다. 한 측면에서, Rx는 메틸이다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00012
한 측면에서, -L1-RW는 임의로 치환된 카르보시클릴이다. 한 측면에서, R3은 C1-4 알킬이다. 한 측면에서, R3은 메틸이다. 한 측면에서, Rx는 비치환된 C1-4 알킬이다. 한 측면에서, Rx는 메틸이다. 한 측면에서, R4는 수소이다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00013
화합물 A 및 화합물 A의 제조 방법은 PCT/US2014/029710 내 적어도 페이지 171 (화합물 158) 및 페이지 266, 단락 [00331]에 개시되어 있다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A의 트리-HCl 염 형태인 화합물 A-트리-HCl이다. 또 다른 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A의 모노-HCl 염 형태인 화합물 A-모노-HCl이다. 또 다른 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A의 유리 염기 형태인 화합물 A-유리-염기이다. 또 다른 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A의 디-HCl 염 형태인 화합물 A-디-HCl이다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00014
유형 I PRMT 억제제는 PCT/US2014/029710에 추가로 개시되어 있고, 이는 본원에 참조로 포함된다. 예시적인 유형 I PRMT 억제제는 PCT/US2014/029710의 표 1A 및 표 1B에 개시되어 있고, 유형 I PRMT 억제제의 제조 방법은 PCT/US2014/029710의 적어도 페이지 226, 단락 [00274] 내지 페이지 328, 단락 [00050]에 기재되어 있다. "항원 결합 단백질 (ABP)"은 항체 또는 항체와 유사한 방식으로 기능하는 조작된 분자를 포함한, 항원에 결합하는 단백질을 의미한다. 이러한 대안적 항체 포맷은 트리아바디, 테트라바디, 미니안티바디 및 미니바디를 포함하고, 개시내용에 따른 임의의 분자 중 1개 이상의 CDR이 적합한 비-이뮤노글로불린 단백질 스캐폴드 또는 골격에 배열될 수 있는 대안적 스캐폴드, 예컨대 아피바디, SpA 스캐폴드, LDL 수용체 부류 A 도메인, 아비머 (예를 들어 번호 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301 참조) 또는 EGF 도메인이 또한 포함된다. ABP는 또한 이러한 항체 또는 다른 분자의 항원 결합 단편을 포함한다. 추가로, 적절한 경쇄와 쌍을 이루는 경우에, ABP는 전장 항체, (Fab')2 단편, Fab 단편, 이중특이적 또는 이중파라토픽 분자 또는 그의 등가물 (예컨대 scFV, 비- 트리- 또는 테트라-바디, Tandabs 등)로 포맷화된 본 발명의 VH 영역을 포함할 수 있다. ABP는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4; 또는 IgM; IgA, IgE 또는 IgD인 항체 또는 그의 변형된 변이체를 포함할 수 있다. 항체 중쇄의 불변 도메인은 이에 따라 선택될 수 있다. 경쇄 불변 도메인은 카파 또는 람다 불변 도메인일 수 있다. ABP는 또한 항원 결합 영역 및 비-이뮤노글로불린 영역을 포함하는 WO86/01533에 기재된 유형의 키메라 항체일 수 있다. 용어 "ABP", "항원 결합 단백질" 및 "결합 단백질"은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
단백질 프로그램화된 사멸 1 (PD-1)은 또한 CD28, CTLA-4, ICOS 및 BTLA를 포함하는 수용체의 CD28 패밀리의 억제 구성원이다. PD-1은 활성화된 B 세포, T 세포 및 골수 세포에서 발현된다 (Agata et al., supra; Okazaki et al. (2002) Curr. Opin. Immunol 14:391779-82; Bennett et al. (2003) J Immunol 170:711-8). 패밀리의 초기 구성원인, CD28 및 ICOS는 모노클로날 항체의 첨가 후 T 세포 증식의 증대에 대한 기능적 효과에 의해 발견되었다 (Hutloff et al. (1999) Nature 397:263-266; Hansen et al. (1980) Immunogenics 10:247-260). PD-1은 아포톱시스 세포에서 차등 발현에 대한 스크리닝을 통해 발견되었다 (Ishida et al. (1992) EMBO J 11:3887-95). 패밀리의 다른 구성원인, CTLA-4 및 BTLA는 각각 세포독성 T 림프구 및 TH1 세포에서의 차등 발현에 대한 스크리닝을 통해 발견되었다. CD28, ICOS 및 CTLA-4 모두는 동종이량체화를 허용하는 비-쌍형성 시스테인 잔기를 갖는다. 대조적으로, PD-1은 다른 CD28 패밀리 구성원에서 특징적인 비-쌍형성 시스테인 잔기가 결여되어, 단량체로서 존재하는 것으로 시사된다. 질환의 치료에 사용하는 PD-1 항체 및 방법은 미국 특허 번호 US 7,595,048; US 8,168,179; US 8,728,474; US 7,722,868; US 8,008,449; US 7,488,802; US 7,521,051; US 8,088,905; US 8,168,757; US 8,354,509; 및 미국 공개 번호 US20110171220; US20110171215; 및 US20110271358에 기재된다. CTLA-4 및 PD-1 항체의 조합은 미국 특허 번호 9,084,776에 기재된다.
본원에 사용된 "PD-1 길항제"는 암 세포 상에서 발현되는 PD-L1이 면역 세포 (T 세포, B 세포 또는 NKT 세포) 상에서 발현되는 PD-1에 결합하는 것을 차단하고, 바람직하게는 또한, 암 세포 상에서 발현되는 PD-L2가 면역 세포 발현된 PD-1에 결합하는 것을 차단하는 임의의 화학적 화합물 또는 생물학적 분자를 의미한다. PD-1 및 그의 리간드에 대한 대체 명칭 또는 동의어는 하기를 포함한다: PD-1의 경우 PDCD1, PD1, CD279 및 SLEB2; PD-L1의 경우 PDCD1L1, PDL1, B7H1, B7-4, CD274 및 B7-H; 및 PD-L2의 경우 PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc 및 CD273. 인간 PD-1 아미노산 서열은 NCBI 로커스 번호 NP_005009에서 찾아볼 수 있다. 인간 PD-L1 및 PD-L2 아미노산 서열은 각각 NCBI 로커스 번호 NP_054862 및 NP_079515에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 측면 중 임의의 것에서 유용한 PD-1 길항제는, PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하고 바람직하게는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 (mAb), 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 이러한 mAb는 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있으며, 인간 불변 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직한 실시양태에서, 인간 불변 영역은 IgG1 또는 IgG4 불변 영역이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab'-SH, F(ab')2, scFv 및 Fv 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 다양한 측면 및 실시양태에 유용한 인간 PD-1에 결합하는 mAb의 예가 미국 특허 번호 8,552,154; 미국 특허 번호 8,354,509; 미국 특허 번호 8,168,757; 미국 특허 번호 8,008,449; 미국 특허 번호 7,521,051; 미국 특허 번호 7,488,802; WO2004072286; WO2004056875; 및 WO2004004771에 기재된다.
본 발명의 측면 및 실시양태 중 임의의 것에서 유용한 다른 PD-1 길항제는 PD-1에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 이뮤노어드헤신, 예를 들어 불변 영역 예컨대 이뮤노글로불린 분자의 Fc 영역에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 함유하는 융합 단백질을 포함한다. PD-1에 특이적으로 결합하는 이뮤노어드헤신 분자의 예가 WO2010027827 및 WO2011066342에 기재되어 있다. 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도에서 PD-1 길항제로서 유용한 구체적 융합 단백질은, PD-L2-FC 융합 단백질이며 인간 PD-1에 결합하는 AMP-224 (B7-DCIg로도 공지됨)를 포함한다.
니볼루맙은 옵디보®로서 상업적으로 입수가능한 인간화 모노클로날 항-PD-1 항체이다. 니볼루맙은 일부 절제불가능한 또는 전이성 흑색종의 치료를 위해 권고된다. 니볼루맙은 그의 리간드 PD-L1 및 PD-L2에 의해 Ig 슈퍼패밀리 막횡단 단백질인 PD-1에 결합하고, 그의 활성화를 차단하여, T-세포의 활성화 및 종양 세포 또는 병원체에 대한 세포-매개 면역 반응을 유발한다. 활성화된 PD-1은 P13k/Akt 경로 활성화의 억제를 통해 T-세포 활성화 및 이펙터 기능을 음성적으로 조절한다. 니볼루맙에 대한 다른 명칭은 BMS-936558, MDX-1106 및 ONO-4538을 포함한다. 니볼루맙에 대한 아미노산 서열, 및 사용 및 제조 방법은 미국 특허 번호 US 8,008,449에 개시된다.
펨브롤리주맙은 키트루다®로서 상업적으로 입수가능한 인간화 모노클로날 항-PD-1 항체이다. 펨브롤리주맙은 일부 절제불가능한 또는 전이성 흑색종의 치료를 위해 권고된다. 펨브롤리주맙의 아미노산 서열 및 사용 방법은 미국 특허 번호 8,168,757에 개시된다.
PD-L1은 APC 및 활성화 T 세포를 포함한 많은 세포 유형에 발현되는 B7 패밀리 구성원이다 (Yamazaki et al. (2002) J. Immunol. 169:5538). PD-L1은 PD-1 및 B7-1 둘 다에 결합한다. PD-L1에 의한 T-세포-발현된 B7-1의 결합 및 B7-1에 의한 T-세포-발현된 PD-L1의 결합은 둘 다 T 세포 억제를 유도한다 (Butte et al. (2007) Immunity 27:111). 다른 B7 패밀리 구성원과 마찬가지로, PD-L1이 또한 공동자극 신호를 T 세포에 제공할 수 있다는 증거가 또한 존재한다 (Subudhi et al. (2004) J. Clin. Invest. 113:694; Tamura et al. (2001) Blood 97:1809). PD-1의 리간드인 PD-L1 (인간 PD-L1 cDNA는 EMBL/진뱅크 수탁 번호 AF233516에 의해 제시된 염기 서열로 이루어지고, 마우스 PD-L1 cDNA는 NM.sub.--021893에 의해 제시된 염기 서열로 이루어짐)은 소위 항원-제시 세포 예컨대 활성화된 단핵구 및 수지상 세포에서 발현된다 (Journal of Experimental Medicine (2000), vol. 19, issue 7, p 1027-1034). 이들 세포는 T 림프구에 다양한 면역-유도 신호를 유도하는 상호작용 분자를 제공하고, PD-L1은 PD-1에 의한 억제 신호를 유도하는 이들 분자 중 하나이다. PD-L1 리간드 자극이 PD-1 발현 T 림프구의 활성화 (세포 증식 및 다양한 시토카인 생산의 유도)를 억제한다는 것이 밝혀졌다. PD-L1 발현은 면역적격 세포 뿐만 아니라 특정한 종류의 종양 세포주 (단핵구성 백혈병에서 유래된 세포주, 비만 세포에서 유래된 세포주, 간 암종에서 유래된 세포주, 신경모세포에서 유래된 세포주 및 유방 암종에서 유래된 세포주)에서도 확인되었다 (Nature Immunology (2001), vol. 2, issue 3, p. 261-267).
항-PD-L1 항체 및 그의 제조 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이러한 PD-L1에 대한 항체는 폴리클로날 또는 모노클로날, 및/또는 재조합 및/또는 인간화 항체일 수 있다. PD-L1 항체는 암의 치료를 위한 면역조정제로서 개발 중이다.
예시적인 PD-L1 항체는 미국 특허 번호 9,212,224; 미국 특허 번호 8,779,108; 미국 특허 번호 8,552,154; 미국 특허 번호 8,383,796; 미국 특허 번호 8,217,149; 미국 특허 공개 20110280877; WO2013079174; 및 WO2013019906에 개시된다. PD-L1 (또한 CD274 또는 B7-H1으로도 지칭됨)에 대한 추가의 예시적인 항체 및 사용 방법은 미국 특허 번호 8,168,179; 미국 특허 번호 7,943,743; 미국 특허 번호 7,595,048; WO2014055897; WO2013019906 및 WO2010077634에 개시된다. 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도에서 PD-1 길항제로서 유용한 특이적 항-인간 PD-L1 모노클로날 항체는 MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C를 포함한다.
아테졸리주맙은 테센트릭(TECENTRIQ)™으로서 상업적으로 입수가능한 완전 인간화 모노클로날 항-PD-L1 항체이다. 아테졸리주맙은 일부 국부 진행성 또는 전이성 요로상피 암종의 치료를 위해 권고된다. 아테졸리주맙은 PD-L1과 PD-1 및 CD80의 상호작용을 차단한다.
OX40으로도 공지되어 있는 CD134는, CD28과 달리, 휴지기 나이브 T 세포 상에서 구성적으로 발현되지 않는 수용체의 TNFR-슈퍼패밀리의 구성원이다. OX40은 활성화 후 24 내지 72시간 후에 발현되는 2차 공동자극 분자이고; 그의 리간드, OX40L은 또한 휴지기 항원 제시 세포 상에서 발현되지 않지만, 그의 활성화 후에는 발현된다. OX40의 발현은 T 세포의 완전 활성화에 의존성이고; CD28의 부재 하에, OX40의 발현은 지연되고 4배 더 낮은 수준이다. OX40/OX40-리간드 (OX40 수용체)/(OX40L)는 T 세포 증식, 생존, 시토카인 생산 및 메모리 세포 생성에 대한 결정적인 한 쌍의 공동자극 분자이다. 초기 시험관내 실험은 CD4+ T 세포 상의 OX40을 통한 신호전달이 TH1 발생이 아닌 TH2로 이어지는 것을 입증하였다. 이들 결과는 OX40/OX40L 상호작용을 차단하는 것이 TH2-매개 알레르기성 면역 반응의 유도 및 유지를 방지한다는 것을 나타내는 생체내 연구에 의해 지지되었다. 그러나, OX40/OX40L 상호작용을 차단하는 것은 TH1-매개 질환을 개선하거나 또는 예방한다. 게다가, 가용성 OX40L의 투여 또는 종양으로의 OX40L의 유전자 전달이 마우스에서 항-종양 면역을 강하게 증진시킨다는 것이 제시되었다. 최근 연구는 또한 OX40/OX40L이 CD8 T 세포-매개 면역 반응을 촉진하는데 역할을 할 수 있음을 시사한다. 본원에 논의된 바와 같이, OX40 신호전달은 CD4+ CD25+ 자연 발생 조절 T 세포의 억제 기능을 차단하고, OX40/OX40L 쌍은 말초 면역 대 내성의 전체적 조절에서 결정적인 역할을 한다. OX-40 항체, OX-40 융합 단백질 및 이들의 사용 방법은 미국 특허 번호 US 7,504,101; US 7,758,852; US 7,858,765; US 7,550,140; US 7,960,515; 및 US 9,006,399 및 국제 공개: WO 2003082919; WO 2003068819; WO 2006063067; WO 2007084559; WO 2008051424; WO2012027328; 및 WO2013028231에 개시된다.
본원에서 본 발명의 항원 결합 단백질 (ABP) 또는 항-OX40 항원 결합 단백질은 OX40과 결합하는 것이고, 일부 실시양태에서, 하기 중 1종 이상을 수행한다: OX40을 통한 신호전달을 조정하거나, OX40의 기능을 조정하거나, OX40 신호전달을 효능작용하거나, OX40 기능을 자극하거나, 또는 OX40 신호전달을 공-자극한다. 미국 특허 9,006,399의 실시예 1은 OX40 결합 검정을 개시한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이러한 기능을 확립하기 위한 다양한 다른 널리 공지된 검정을 용이하게 인식할 것이다.
한 실시양태에서, OX40 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2011년 8월 23일의 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2011년 8월 23일의 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 항체의 CDR, 또는 개시된 CDR 서열과 90% 동일성을 갖는 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2011년 8월 23일의 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 항체의 VH, VL 또는 이들 둘 다, 또는 개시된 VH 또는 VL 서열과 90% 동일성을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, OX40 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2012년 2월 9일 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2012년 2월 9일의 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 항체의 CDR, 또는 개시된 CDR 서열과 90% 동일성을 갖는 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 국제 출원일 2012년 2월 9일의 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 항체의 VH, VL 또는 이들 둘 다, 또는 개시된 VH 또는 VL 서열과 90% 동일성을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 본원의 도 28 내지 39에 제시된 CDR 또는 VH 또는 VL 서열, 또는 그에 대해 90% 동일성을 갖는 서열 중 1종 이상을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 하기 CDR 중 어느 하나 또는 조합을 포함한다:
CDRH1: DYSMH (서열식별번호: 1)
CDRH2: WINTETGEPTYADDFKG (서열식별번호: 2)
CDRH3: PYYDYVSYYAMDY (서열식별번호: 3)
CDRL1: KASQDVSTAVA (서열식별번호: 7)
CDRL2: SASYLYT (서열식별번호: 8)
CDRL3: QQHYSTPRT (서열식별번호: 9)
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 적합하게는, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 5에 대해 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
인간화 중쇄 (VH) 가변 영역:
Figure pct00015
본 발명의 한 실시양태에서 OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역에서 CDRL1 (서열식별번호: 7), CDRL2 (서열식별번호: 8), 및 CDRL3 (서열식별번호: 9)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 11에 제시된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 5의 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
인간화 경쇄 (VL) 가변 영역
Figure pct00016
일부 실시양태에서, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 적합하게는, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 11에 대해 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 하기 CDR 중 어느 하나 또는 조합을 포함한다:
CDRH1: SHDMS (서열식별번호: 13)
CDRH2: AINSDGGSTYYPDTMER (서열식별번호: 14)
CDRH3: HYDDYYAWFAY (서열식별번호: 15)
CDRL1: RASKSVSTSGYSYMH (서열식별번호: 19)
CDRL2: LASNLES (서열식별번호: 20)
CDRL3: QHSRELPLT (서열식별번호: 21)
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 17에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 적합하게는, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 17에 대해 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
인간화 중쇄 (VH) 가변 영역:
Figure pct00017
본 발명의 한 실시양태에서 OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역에서 CDRL1 (서열식별번호: 19), CDRL2 (서열식별번호: 20), 및 CDRL3 (서열식별번호: 21)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 23에 제시된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 17의 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 23의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
인간화 경쇄 (VL) 가변 영역
Figure pct00018
일부 실시양태에서, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 적합하게는, 본 발명의 OX40 결합 단백질은 서열식별번호: 23에 대해 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
CDR 또는 최소 결합 단위는 적어도 1개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가에 의해 변형될 수 있고, 여기서 변이체 항원 결합 단백질은 비변형된 단백질, 예컨대 서열식별번호: 5 및 서열식별번호: 11을 포함하는 항체 또는 서열식별번호: 17 및 서열식별번호: 23을 포함하는 항체의 생물학적 특징을 실질적으로 보유한다.
각각의 CDR H1, H2, H3, L1, L2, L3은 단독으로 또는 임의의 다른 CDR과 조합되어, 임의의 순열 또는 조합으로 변형될 수 있다는 것이 인식될 것이다. 한 실시양태에서, CDR은 최대 3개의 아미노산, 예를 들어 1 또는 2개의 아미노산, 예를 들어 1개의 아미노산의 치환, 결실 또는 부가에 의해 변형된다. 전형적으로, 변형은 치환, 특히 예를 들어 하기 표 1에 제시된 바와 같은 보존적 치환이다.
표 1
Figure pct00019
한 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는, 예를 들어 본원 도 28-29의 106-222 항체의 CDR, 예를 들어 도 28에 개시된 바와 같은 서열식별번호: 1, 2 및 3에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3, 및 예를 들어 각각 서열식별번호: 7, 8 및 9에 제시된 바와 같은 서열을 갖는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2011년 8월 23일의 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 106-222, Hu106 또는 Hu106-222 항체의 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 본원 도 28-29에 제시된 바와 같은 106-222 항체의 VH 및 VL 영역, 예를 들어 서열식별번호: 4에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 10에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 도 29에서의 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 본원 도 28의 서열식별번호: 5에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VH, 및 본원 도 29의 서열식별번호: 11에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2011년 8월 23일의 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 Hu106-222 항체 또는 106-222 항체 또는 Hu106 항체의 VH 및 VL 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는, 예를 들어 국제 출원일 2011년 8월 23일의 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 106-222, Hu106-222 또는 Hu106이다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 이 단락에서의 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 CDR 또는 VH 또는 VL 또는 항체 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는, 예를 들어 본원 도 32-33의 119-122 항체의 CDR, 예를 들어 각각 서열식별번호: 13, 14 및 15에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2011년 8월 23일의 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 119-122 또는 Hu119 또는 Hu119-222 항체의 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 본원 도 32의 서열식별번호: 16에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VH 및 본원 도 33에 제시된 바와 같은 서열식별번호: 22에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 17에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 23에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2011년 8월 23일의 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 119-122 또는 Hu119 또는 Hu119-222 항체의 VH 및 VL 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는, 예를 들어 국제 출원일 2011년 8월 23일의 WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)에 개시된 바와 같은 119-222 또는 Hu119 또는 Hu119-222 항체이다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 이 단락에서의 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 CDR 또는 VH 또는 VL 또는 항체 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는, 예를 들어 본원 도 36-37에 제시된 바와 같은 119-43-1 항체의 CDR을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2012년 2월 9일의 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 바와 같은 119-43-1 항체의 CDR을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 도 36-39에 제시된 바와 같은 119-43-1 항체의 VH 영역 중 1종 및 VL 영역 중 1종을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2012년 2월 9일의 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 바와 같은 119-43-1 항체의 VH 및 VL 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 본원 도 36-39에 개시된 바와 같은 119-43-1 또는 119-43-1 키메라이다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 국제 출원일 2012년 2월 9일의 WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)에 개시된 바와 같다. 추가 실시양태에서, 이 단락에 기재된 ABP 또는 항체 중 어느 1종은 인간화된 것이다. 추가 실시양태에서, 이 단락에 기재된 ABP 또는 항체 중 어느 1종은 인간화 항체를 제조하기 위해 조작된다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 ABP 또는 항체는 이 단락에서의 서열에 대해 90% 동일성을 갖는 CDR 또는 VH 또는 VL 또는 항체 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 임의의 항-OX40 ABP 또는 항체의 임의의 마우스 또는 키메라 서열은 인간화 항체를 제조하기 위해 조작된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; (b) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; (c) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; (d) 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; (e) 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 (f) 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; (b) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; (c) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; (d) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; (e) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 (f) 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호: 1 또는 13의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열식별번호: 2 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 및/또는 서열식별번호: 3 또는 15의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3, 또는 그에 대해 90% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 CDR.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호: 7 또는 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열식별번호: 8 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2 및/또는 서열식별번호: 9 또는 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는 그에 대해 90 퍼센트 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역.
추가 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호: 10, 11, 22 또는 23의 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 10, 11, 22 또는 23의 아미노산 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 ("VL"). 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 4, 5, 16 및 17의 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 4, 5, 16 및 17의 아미노산 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 ("VH")을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 5의 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 11의 가변 경쇄 서열, 또는 그에 대해 90 퍼센트 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 17의 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 23의 가변 경쇄 서열, 또는 그에 대해 90 퍼센트 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 12 또는 24의 핵산 서열, 또는 서열식별번호: 12 또는 24의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩되는 가변 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-OX40 ABP 또는 항체는 서열식별번호: 6 또는 18의 핵산 서열, 또는 서열식별번호: 6 또는 18의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 코딩되는 가변 중쇄를 포함한다.
모노클로날 항체가 또한 본원에 제공된다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 서열식별번호: 10 또는 22의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 10 또는 22의 아미노산 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다. 추가로 서열식별번호: 4 또는 16의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 4 또는 16의 아미노산 서열에 대해 적어도 90 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는 모노클로날 항체가 추가로 제공된다.
CTLA-4는 원래 뮤린 세포용해 T 세포 cDNA 라이브러리의 시차 스크리닝에 의해 확인된 T 세포 표면 분자이다 (Brunet et al., Nature 328:267-270(1987)). 또한 CTLA-4는 이뮤노글로불린 (Ig) 슈퍼패밀리의 구성원이고; CTLA-4는 단일 세포외 Ig 도메인을 포함한다. CTLA-4 전사체는 세포독성 활성을 갖는 T 세포 집단에서 발견된 바 있고, 이는 CTLA-4가 세포용해 반응에서 기능할 수 있다는 것을 제시한다 (Brunet et al., supra; Brunet et al., Immunol. Rev. 103-(21-36 (1988)). 연구자들은 CD28과 동일한 염색체 영역 (2q33-34) (Lafage-Pochitaloff et al., Immunogenetics, 31:198-201 (1990))에 대한 CTLA-4의 인간 대응부분에 대한 유전자의 클로닝 및 맵핑 (Dariavach et al., Eur. J. Immunol., 18:1901-1905 (1988))을 보고하였다. 이 인간 CTLA-4 DNA와 CD28 단백질을 코딩하는 DNA 간의 서열 비교는 서열의 유의한 상동성을 나타내었으며 막인접 및 세포질 영역에서 가장 큰 정도의 상동성이 있었다 (Brunet et al. (1988), supra; Dariavach et al. (1988), supra). 예르보이 (이필리무맙)는 브리스톨 마이어스 스큅에 의해 시판되는 완전 인간 CTLA-4 항체이다. 이필리무맙의 단백질 구조 및 사용 방법은 미국 특허 번호 6,984,720 및 7,605,238에 기재되어 있다.
본 발명의 방법에서 사용하기에 적합한 항-CTLA4 항체는 항-CTLA4 항체, 인간 항-CTLA4 항체, 마우스 항-CTLA4 항체, 포유동물 항-CTLA4 항체, 인간화 항-CTLA4 항체, 모노클로날 항-CTLA4 항체, 폴리클로날 항-CTLA4 항체, 키메라 항-CTLA4 항체, 이필리무맙, 트레멜리무맙, 항-CD28 항체, 항-CTLA4 애드넥틴, 항-CTLA4 도메인 항체, 단일 쇄 항-CTLA4 단편, 중쇄 항-CTLA4 단편, 경쇄 항-CTLA4 단편, 공동-자극 경로에 효능작용하는 CTLA4의 억제제, PCT 공개 번호 WO 2001/014424에 개시된 항체, PCT 공개 번호 WO 2004/035607에 개시된 항체, 미국 공개 출원 번호 US 2005/0201994에 개시된 항체, 및 승인된 유럽 특허 번호 EP1212422B1에 개시된 항체를 비제한적으로 포함한다. 추가의 CTLA-4 항체가 미국 특허 번호 5,811,097, 5,855,887, 6,051,227, 및 6,984,720; PCT 공개 번호 WO 01/14424 및 WO 00/37504; 및 미국 공개 번호 US 2002/0039581 및 US 2002/086014에 기재되어 있다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 다른 항-CTLA-4 항체는 예를 들어 WO 98/42752; 미국 특허 번호 6,682,736 및 6,207,156; 문헌 [Hurwitz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17):10067-10071 (1998); Camacho et al., J. Clin. Oncology, 22(145):Abstract number 2505 (2004) (antibody CP-675206); Mokyr et al., Cancer Res., 58:5301-5304 (1998)] 및 미국 특허 번호 5,977,318, 6,682,736, 7,109,003 및 7,132,281에 개시된 것을 포함한다.
본원에 사용된 "면역-조정제(immuno-modulator)" 또는 "면역-조정제(immuno-modulatory agent)"는 면역계에 영향을 미치는 모노클로날 항체를 포함한 임의의 물질을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 면역-조정제 또는 면역-조정제는 면역계를 상향 조절한다. 면역조정제는 암의 치료를 위한 항신생물제로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 (옵디보/니볼루맙 및 키트루다/펨브롤리주맙), 항-CTLA-4 항체 예컨대 이필리무맙 (예르보이) 및 항-OX40 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "효능제"는 공동-신호전달 수용체와 접촉 시 하기 (1) 수용체의 자극 또는 활성화, (2) 수용체의 활성, 기능 또는 존재의 증진, 증가 또는 촉진, 유도 또는 지속 및/또는 (3) 수용체의 발현의 증진, 증가, 촉진 또는 유도 중 1종 이상을 유발하는 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는 항원 결합 단백질을 지칭한다. 효능제 활성은 관련 기술분야에 공지된 다양한 검정 예컨대, 비제한적으로, 세포 신호전달, 세포 증식, 면역 세포 활성화 마커, 시토카인 생산의 측정에 의해 시험관내에서 측정될 수 있다. 효능제 활성은 또한 대용 종점 예컨대, 비제한적으로 T 세포 증식 또는 시토카인 생산의 측정을 측정하는 다양한 검정에 의해 생체내에서 측정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "길항제"는 공동-신호전달 수용체와 접촉 시에 하기 (1) 수용체의 약화, 차단 또는 불활성화 및/또는 수용체의 천연 리간드에 의한 그의 활성화의 차단; (2) 수용체의 활성, 기능 또는 존재의 감소, 축소 또는 단축, 및/또는 (3) 수용체의 발현의 감소, 축소, 폐지 중 1종 이상을 유발하는 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 항원 결합 단백질을 지칭한다. 길항제 활성은 관련 기술분야에 공지된 다양한 검정 예컨대, 비제한적으로, 세포 신호전달, 세포 증식, 면역 세포 활성화 마커, 시토카인 생산의 증가 또는 감소의 측정에 의해 시험관내에서 측정될 수 있다. 길항제 활성은 또한 대용 종점 예컨대, 비제한적으로 T 세포 증식 또는 시토카인 생산의 측정을 측정하는 다양한 검정에 의해 생체내에서 측정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "결합에 대해 교차 경쟁하다"는 본 발명의 작용제 중 임의의 것과 표적에의 결합에 대해 경쟁할 임의의 작용제 예컨대 항체를 지칭한다. 2개의 항체 사이의 결합에 대한 경쟁은 유동 세포측정법, 메소 스케일 디스커버리 및 ELISA를 포함한 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법에 의해 시험될 수 있다. 결합은 직접적으로 측정될 수 있고, 이는 2개 이상의 결합 단백질을 공동-신호전달 수용체와 접촉시켜 둘 수 있고 1개 또는 각각에 대해 결합을 측정할 수 있다는 것을 의미한다. 대안적으로, 관심 분자의 결합은 결합 또는 천연 리간드에 대해 시험될 수 있고 서로 정량적으로 비교될 수 있다.
용어 "항체"는 본원에서 가장 넓은 의미로 이뮤노글로불린-유사 도메인 (예를 들어 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE)을 갖는 분자를 지칭하는 것으로 사용되고, 모노클로날, 재조합, 폴리클로날, 키메라, 인간, 인간화, 이중특이적 항체를 포함한 다중특이적 항체, 및 이종접합체 항체; 단일 가변 도메인 (예를 들어, VH, VHH, VL, 도메인 항체 (dAb™)), 항원 결합 항체 단편, Fab, F(ab')2, Fv, 디술피드 연결된 Fv, 단일 쇄 Fv, 디술피드-연결된 scFv, 디아바디, TANDABS™ 등 및 상기 중 임의의 것의 변형된 버전을 포함한다 (대안적 "항체" 포맷의 개요의 경우, 예를 들어 문헌 [Holliger and Hudson, Nature Biotechnology, 2005, Vol 23, number 9, 1126-1136]을 참조).
대안적 항체 포맷은 항원 결합 단백질의 1개 이상의 CDR이 적합한 비-이뮤노글로불린 단백질 스캐폴드 또는 골격 상에 배열될 수 있는 대안적 스캐폴드, 예컨대 아피바디, SpA 스캐폴드, LDL 수용체 부류 A 도메인, 아비머 (예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301 참조) 또는 EGF 도메인이 또한 포함된다.
용어 "도메인"은 단백질의 나머지와 독립적으로 그의 3차 구조를 유지하는 폴딩된 단백질 구조를 지칭한다. 일반적으로, 도메인은 단백질의 개별적인 기능적 특성을 담당하고, 다수의 경우에서 단백질 및/또는 도메인의 나머지의 기능의 손실 없이 부가되거나, 제거되거나 또는 다른 단백질로 옮겨질 수 있다.
용어 "단일 가변 도메인"은 항체 가변 도메인의 서열 특징을 포함하는 폴딩된 폴리펩티드 도메인을 지칭한다. 따라서, 이는 완전 항체 가변 도메인, 예컨대 VH, VHH 및 VL, 및 예를 들어 1개 이상의 루프가 항체 가변 도메인의 특징이 아닌 서열로 대체된 변형된 항체 가변 도메인, 또는 말단절단되거나 N- 또는 C-말단 연장을 포함하는 항체 가변 도메인, 뿐만 아니라 적어도 전장 도메인의 결합 활성 및 특이성을 보유하는 가변 도메인의 폴딩된 단편을 포함한다. 단일 가변 도메인은 상이한 가변 영역 또는 도메인과 독립적으로 항원 또는 에피토프에 결합할 수 있다. "도메인 항체" 또는 "dAb(™)"는 "단일 가변 도메인"과 동일한 것으로 간주될 수 있다. 단일 가변 도메인은 인간 단일 가변 도메인일 수 있지만, 또한 다른 종 예컨대 설치류 너스 상어 및 낙타류 VHH dAb™로부터의 단일 가변 도메인을 포함한다. 낙타류 VHH는 낙타, 라마, 알파카, 단봉낙타 및 구아나코를 포함한 종으로부터 유래된 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인 폴리펩티드이고, 이는 자연적으로 경쇄가 결여된 중쇄 항체를 생산한다. 이러한 VHH 도메인은 관련 기술분야에서 이용가능한 표준 기술에 따라 인간화될 수 있고, 이러한 도메인은 "단일 가변 도메인"으로 간주된다. 본원에 사용된 VH는 낙타류 VHH 도메인을 포함한다.
항원 결합 단편은 비-항체 단백질 스캐폴드 상의 1개 이상의 CDR의 배열에 의해 제공될 수 있다. 본원에 사용된 "단백질 스캐폴드"는 4쇄 또는 2쇄 항체일 수 있거나, 또는 항체의 Fc 영역만을 포함할 수 있거나, 또는 항체로부터의 1개 이상의 불변 영역을 포함할 수 있고 불변 영역이 인간 또는 영장류 기원일 수 있거나, 또는 인간 및 영장류 불변 영역의 인공 키메라일 수 있는 이뮤노글로불린 (Ig) 스캐폴드, 예를 들어 IgG 스캐폴드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
단백질 스캐폴드는 Ig 스캐폴드, 예를 들어 IgG 또는 IgA 스캐폴드일 수 있다. IgG 스캐폴드는 항체의 도메인의 일부 또는 모두 (즉, CH1, CH2, CH3, VH, VL)를 포함할 수 있다. 항원 결합 단백질은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 IgG4PE로부터 선택된 IgG 스캐폴드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 스캐폴드는 IgG1일 수 있다. 스캐폴드는 항체의 Fc 영역으로 이루어질 수 있거나 또는 이를 포함할 수 있거나, 또는 그의 일부이다.
친화도는 하나의 분자, 예를 들어 본 발명의 항원 결합 단백질의, 또 다른 것, 예를 들어 그의 표적 항원에 대한 단일 결합 부위에서의 결합의 강도이다. 항원 결합 단백질의 그의 표적에 대한 결합 친화도는 평형 방법 (예를 들어 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA) 또는 방사선면역검정 (RIA)), 또는 동역학 (예를 들어 비아코어(BIACORE)™ 분석)에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 실시예 5에 기재된 비아코어™ 방법이 결합 친화도를 측정하는데 사용될 수 있다.
결합력은 다중 부위에서의 2종의 분자의 서로에 대한 결합 강도의 총 합계이고, 예를 들어 상호작용의 결합가가 고려된다.
"단리된"은 분자, 예컨대 항원 결합 단백질 또는 핵산이 자연에서 발견될 수 있는 환경으로부터 제거된 것을 의도한다. 예를 들어, 분자는 통상적으로 그와 함께 자연에 존재하는 물질로부터 정제될 수 있다. 예를 들어, 샘플 중 분자의 질량은 총 질량의 95%일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "발현 벡터"는 관심 핵산을 세포, 예컨대 진핵 세포 또는 원핵 세포, 또는 관심 핵산 서열이 펩티드 쇄 예컨대 단백질로서 발현되는 무세포 발현 시스템 내로 도입하는데 사용될 수 있는 단리된 핵산을 의미한다. 이러한 발현 벡터는, 예를 들어 관심 핵산을 포함하는 코스미드, 플라스미드, 바이러스 서열, 트랜스포손, 및 선형 핵산일 수 있다. 발현 벡터가 세포 또는 무세포 발현 시스템 (예를 들어, 망상적혈구 용해물) 내로 도입되면, 관심 핵산에 의해 코딩된 단백질이 전사/번역 기구에 의해 생산된다. 본 개시내용의 범주 내의 발현 벡터는 진핵 또는 원핵 발현에 필요한 요소를 제공할 수 있고, 바이러스 프로모터 구동 벡터, 예컨대 CMV 프로모터 구동 벡터, 예를 들어 pcDNA3.1, pCEP4, 및 그의 유도체, 바큘로바이러스(Baculovirus) 발현 벡터, 드로소필라(Drosophila) 발현 벡터, 및 포유동물 유전자 프로모터, 예컨대 인간 Ig 유전자 프로모터에 의해 구동되는 발현 벡터를 포함한다. 다른 예는 원핵 발현 벡터, 예컨대 T7 프로모터 구동 벡터, 예를 들어, pET41, 락토스 프로모터 구동 벡터 및 아라비노스 유전자 프로모터 구동 벡터를 포함한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 다른 많은 적합한 발현 벡터 및 발현 시스템을 인식할 것이다.
본원에 사용된 용어 "재조합 숙주 세포"는 세포 내로의 그의 도입 전에 단리된 관심 핵산 서열을 포함하는 세포를 의미한다. 예를 들어, 관심 핵산 서열은 발현 벡터에 존재할 수 있고, 세포는 원핵 또는 진핵일 수 있다. 예시적인 진핵 세포는 포유동물 세포, 예컨대 비제한적으로 COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, HepG2, 653, SP2/0, NS0, 293, HeLa, 골수종, 림프종 세포 또는 그의 임의의 유도체이다. 가장 바람직하게는, 진핵 세포는 HEK293, NS0, SP2/0, 또는 CHO 세포이다. 이. 콜라이(E. coli)는 예시적인 원핵 세포이다. 본 개시내용에 따른 재조합 세포는 형질감염, 세포 융합, 불멸화, 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 절차에 의해 생성될 수 있다. 세포 내로 형질감염되는 관심 핵산 서열, 예컨대 발현 벡터는 염색체 외에 존재하거나 또는 세포의 염색체 내로 안정하게 통합될 수 있다.
"키메라 항체"는 수용자 항체로부터 유래된 경쇄 및 중쇄 불변 영역과 회합된, 공여자 항체로부터 유래된 자연 발생 가변 영역 (경쇄 및 중쇄)을 함유하는 조작된 항체 유형을 지칭한다.
"인간화 항체"는 비-인간 공여자 이뮤노글로불린으로부터 유래된 그의 CDR을 갖고, 분자의 나머지 이뮤노글로불린-유래 부분은 1종 이상의 인간 이뮤노글로불린(들)으로부터 유래된 것인 조작된 항체의 유형을 지칭한다. 또한 프레임워크 지지 잔기는 변경되어 결합 친화도를 보존할 수 있다 (예를 들어 문헌 [Queen et al. Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson, et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)] 참조). 적합한 인간 수용자 항체는 공여자 항체의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열에 대한 상동성에 의해 통상적인 데이터베이스, 예를 들어, 카바트(KABAT)® 데이터베이스, 로스 알라모스(Los Alamos) 데이터베이스, 및 스위스 프로테인(Swiss Protein) 데이터베이스로부터 선택된 것일 수 있다. 공여자 항체의 프레임워크 영역에 대한 상동성 (아미노산에 기초함)에 의해 특징화된 인간 항체는 공여자 CDR의 삽입을 위한 중쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 가변 프레임워크 영역을 제공하기에 적합할 수 있다. 경쇄 불변 또는 가변 프레임워크 영역을 공여할 수 있는 적합한 수용자 항체는 유사한 방식으로 선택될 수 있다. 수용자 항체 중쇄 및 경쇄는 동일한 수용자 항체로부터 기원할 필요가 없다는 것이 주목되어야 한다. 선행 기술은 이러한 인간화 항체를 생산하는 여러 방식을 기재하고 - 예를 들어, EP-A-0239400 및 EP-A-054951을 참조한다.
용어 "완전 인간 항체"는 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역 (존재하는 경우에)을 갖는 항체를 포함한다. 본 발명의 인간 서열 항체는 인간 배선 이뮤노글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관내 임의적 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 완전 인간 항체는 궁극적으로 인간 기원이거나 또는 이러한 서열과 동일한 아미노산 서열인 폴리뉴클레오티드에 의해서만 코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 본원에서 의도되는 바와 같이, 트랜스제닉 마우스에서 생산된 마우스 게놈 내로 삽입된 인간 이뮤노글로불린-코딩 DNA에 의해 코딩된 항체는 그들이 궁극적으로 인간 기원의 DNA에 의해 코딩되기 때문에 완전 인간 항체이다. 이러한 상황에서, 인간 이뮤노글로불린-코딩 DNA는 마우스 내에서 (항체를 코딩하기 위해) 재배열될 수 있고, 체세포 돌연변이가 또한 발생할 수 있다. 마우스에서 이러한 변화를 거친 원래 인간 DNA에 의해 코딩된 항체는 본원에서 의도되는 바와 같은 완전 인간 항체이다. 이러한 트랜스제닉 마우스의 사용은 인간 항원에 대한 완전 인간 항체를 선택하는 것을 가능하게 한다. 관련 기술분야에서 이해되는 바와 같이, 완전 인간 항체는 파지 디스플레이 기술을 사용하여 제조될 수 있으며 여기서 인간 DNA 라이브러리는 인간 배선 DNA 서열을 포함하는 항체의 생성을 위해 파지에 삽입된다.
용어 "공여자 항체"는 제1 이뮤노글로불린 파트너에 대해 그의 가변 영역, CDR 또는 그의 다른 기능적 단편 또는 유사체의 아미노산 서열을 제공하는 항체를 지칭한다. 따라서, 공여자는 변경된 이뮤노글로불린 코딩 영역을 제공하고, 공여자 항체의 항원 특이성 및 중화 활성 특징을 갖는 변경된 항체의 발현을 발생시킨다.
용어 "수용자 항체"는 제1 이뮤노글로불린 파트너에 대해 그의 중쇄 및/또는 경쇄 프레임워크 영역 및/또는 그의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 코딩하는 아미노산 서열의 전부 (또는 임의의 일부)를 제공하는 공여자 항체에 대해 이종인 항체를 지칭한다. 인간 항체는 수용자 항체일 수 있다.
용어 "VH" 및 "VL"은 각각 항원 결합 단백질의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 지칭하는 것으로 본원에 사용된다.
"CDR"은 항원 결합 단백질의 상보성 결정 영역 아미노산 서열로 정의된다. 이들은 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역이다. 3개의 중쇄 및 3개의 경쇄 CDR (또는 CDR 영역)이 이뮤노글로불린의 가변 부분에 존재한다. 따라서, 본원에 사용된 "CDR"은 모든 3개의 중쇄 CDR, 모든 3개의 경쇄 CDR, 모든 중쇄 및 경쇄 CDR, 또는 적어도 2개의 CDR을 지칭한다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 가변 도메인 서열 및 전장 항체 서열 내 아미노산 잔기는 카바트 넘버링 규정에 따라 넘버링된다. 유사하게, 실시예에서 사용되는 용어 "CDR", "CDRL1", "CDRL2", "CDRL3", "CDRH1", "CDRH2", "CDRH3"은 카바트 넘버링 규정을 따른다. 추가의 정보에 대해서는, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1991)]을 참조한다.
가변 도메인 서열 및 전장 항체 서열 내 아미노산 잔기에 대한 대안적 넘버링 규정이 존재한다는 것은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명할 것이다. 또한 CDR 서열, 예를 들어 문헌 [Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883]에 기재된 것에 대한 대안적 넘버링 규정이 존재한다. 항체의 구조 및 단백질 폴딩은 다른 잔기가 CDR 서열의 일부로 간주된다는 것을 의미할 수 있고 통상의 기술자에 의해 그와 같이 이해될 것이다.
통상의 기술자에게 이용가능한 CDR 서열에 대한 다른 넘버링 규정은 "AbM" (유니버시티 오브 배스(University of Bath)) 및 "접촉" (유니버시티 칼리지 런던(University College London)) 방법을 포함한다. "최소 결합 단위"를 제공하기 위해, 카바트, 코티아, AbM 및 콘택트 방법 중 적어도 2종을 사용하여 최소 중첩 영역을 결정할 수 있다. 최소 결합 단위는 CDR의 하위-부분일 수 있다.
한 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물이 제공된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 OX40 효능제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D이다. 한 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 효능제 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 길항작용 항-PD1-항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 한 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 항-PD1-항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 여기서 항-PD1-항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물, 및 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 치료 유효량을 포함하는 제2 제약 조성물을 제공한다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 OX40 효능제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물 및 면역-조정제의 치료 유효량을 포함하는 제2 제약 조성물을 제공하며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 효능제 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물 및 면역-조정제의 치료 유효량을 포함하는 제2 제약 조성물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 길항작용 항-PD1-항체이다. 한 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물 및 면역-조정제의 치료 유효량을 포함하는 제2 제약 조성물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물 및 면역-조정제의 치료 유효량을 포함하는 제2 제약 조성물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제의 치료 유효량을 포함하는 제약 조성물 및 면역-조정제의 치료 유효량을 포함하는 제2 제약 조성물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 항-PD1-항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 여기서 항-PD1-항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
또 다른 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물을 제약상 허용되는 담체 및 제약상 허용되는 희석제 중 적어도 하나와 함께 투여하여 상기 인간에서 암을 치료하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 OX40 효능제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제 및 면역-조정제는 동시에, 순차적으로, 임의의 순서로, 전신으로, 경구로, 정맥내로 및 종양내로로부터 선택된 경로로 환자에게 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 경구로 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D이다. 한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A 및 효능제 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 조합물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A와 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 조합물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A와, 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 조합물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A와 길항제 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 조합물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A와 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 조합물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PD1-항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
추가 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제를 포함하는 제약 조성물 및 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제를 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하여 상기 인간에서 암을 치료하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 OX40 효능제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제 및 면역-조정제는 동시에, 순차적으로, 임의의 순서로, 전신으로, 경구로, 정맥내로 및 종양내로로부터 선택된 경로로 환자에게 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 경구로 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D이다. 한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A를 포함하는 제약 조성물 및 효능제 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A를 포함하는 제약 조성물, 및 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A를 포함하는 제약 조성물 및 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A를 포함하는 제약 조성물 및 길항제 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 화합물 A를 포함하는 제약 조성물 및 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 항-PD1-항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 의약의 제조를 위한, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 암의 치료를 위한, 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물의 용도를 제공한다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 OX40 효능제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D이다. 한 실시양태에서, 의약의 제조를 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물의 용도가 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 효능제 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 의약의 제조를 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물의 용도가 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 길항작용 항-PD1-항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 의약의 제조를 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물의 용도가 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 한 실시양태에서, 의약의 제조를 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물의 용도가 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 의약의 제조를 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물의 용도가 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 항-PD1-항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 여기서 항-PD1-항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 암의 치료에 사용하기 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물을 제공한다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 OX40 효능제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제 및 면역-조정제는 동시에, 순차적으로, 임의의 순서로, 전신으로, 경구로, 정맥내로 및 종양내로로부터 선택된 경로로 환자에게 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 경구로 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D이다. 한 실시양태에서, 암의 치료에 사용하기 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 효능제 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 암의 치료에 사용하기 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 길항작용 항-PD1-항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 암의 치료에 사용하기 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 한 실시양태에서, 암의 치료에 사용하기 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 암의 치료에 사용하기 위한 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이 제공되며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이고, 면역-조정제는 항-PD1-항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 여기서 항-PD1-항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제, 및 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편로부터 선택된 면역-조정제를 함유하는 생성물이 의약에서의 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 제공된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 OX40 효능제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제 및 면역-조정제는 동시에, 순차적으로, 임의의 순서로, 전신으로, 경구로, 정맥내로 및 종양내로로부터 선택된 경로로 환자에게 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 경구로 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D이다. 한 실시양태에서, 화합물 A 및 효능제 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 의약에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 화합물 A 및 길항제 항-PD1 항체를 함유하는 생성물이 의약에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공된다. 한 실시양태에서, 화합물 A 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 의약에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 하기 중 1종 이상을 포함한다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 한 실시양태에서, 화합물 A 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 의약에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 화합물 A 및 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 의약에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 항-PD1-항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제, 및 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제를 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 제공된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 OX40 효능제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제 및 면역-조정제는 동시에, 순차적으로, 임의의 순서로, 전신으로, 경구로, 정맥내로 및 종양내로로부터 선택된 경로로 환자에게 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 경구로 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D이다. 한 실시양태에서, 화합물 A 및 효능제 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 화합물 A 및 길항제 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공된다. 한 실시양태에서, 화합물 A 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 하기 중 1종 이상을 포함한다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 한 실시양태에서, 화합물 A 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 화합물 A 및 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 항-PD1-항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
한 실시양태에서, 유형 I PRMT 억제제, 및 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제를 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 제공되며, 여기서 암은 흑색종, 결장암 또는 림프종이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 OX40 효능제이다. 한 측면에서, 면역-조정제는 하기 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 또 다른 측면에서, 면역-조정제는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제 및 면역-조정제는 동시에, 순차적으로, 임의의 순서로, 전신으로, 경구로, 정맥내로 및 종양내로로부터 선택된 경로로 환자에게 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 경구로 투여된다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 한 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A이다. 또 다른 측면에서, 유형 I PRMT 억제제는 화합물 D이다. 한 실시양태에서, 화합물 A 및 효능제 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 암은 결장암 또는 림프종이다. 또 다른 실시양태에서, 화합물 A, 및 길항제 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 암은 흑색종이다. 한 실시양태에서, 화합물 A 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 암은 결장암 또는 림프종이며, 여기서 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 하기 중 1종 이상을 포함한다: 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물. 한 실시양태에서, 화합물 A 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 암은 결장암 또는 림프종이며, 여기서 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 화합물 A, 및 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유하는 생성물이 인간 대상체에서 암을 치료하는데 있어서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위해 제공되며, 여기서 암은 여기서 암은 흑색종이며, 여기서 항-PD1-항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다.
본원의 실시양태 중 어느 하나의 한 측면에서, 암은 고형 종양 또는 혈액암이다. 한 측면에서, 암은 흑색종, 림프종 또는 결장암이다.
한 측면에서 암은 두경부암, 유방암, 폐암, 결장암, 난소암, 전립선암, 신경교종, 교모세포종, 성상세포종, 다형성 교모세포종, 바나얀-조나나 증후군, 코우덴병, 레르미트-두크로스병, 염증성 유방암, 윌름스 종양, 유잉 육종, 횡문근육종, 상의세포종, 수모세포종, 신장암, 간암, 흑색종, 췌장암, 육종, 골육종, 골의 거대 세포 종양, 갑상선암, 림프모구성 T 세포 백혈병, 만성 골수 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 모발상-세포 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, AML, 만성 호중구성 백혈병, 급성 림프모구성 T 세포 백혈병, 형질세포종, 면역모세포성 대세포 백혈병, 외투 세포 백혈병, 다발성 골수종 거핵모구성 백혈병, 다발성 골수종, 급성 거핵구성 백혈병, 전골수구성 백혈병, 적백혈병, 악성 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 림프모구성 T 세포 림프종, 버킷 림프종, 여포성 림프종, 신경모세포종, 방광암, 요로상피암, 외음부암, 자궁경부암, 자궁내막암, 신암, 중피종, 식도암, 타액선암, 간세포성암, 위암, 비인두암, 협부암, 구강암, GIST (위장 기질 종양) 및 고환암으로부터 선택된다.
한 측면에서, 본 발명의 방법은 상기 인간에게 적어도 1종의 신생물제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
한 측면에서, 인간은 고형 종양을 갖는다. 한 측면에서, 종양은 두경부암, 위암, 흑색종, 신세포 암종 (RCC), 식도암, 비소세포 폐 암종, 전립선암, 결장직장암, 난소암 및 췌장암으로부터 선택된다. 또 다른 측면에서 인간은 액상 종양, 예컨대 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 다발성 골수종, 만성 림프모구성 백혈병 (CLL), 여포성 림프종, 급성 골수성 백혈병 및 만성 골수 백혈병을 갖는다.
본 개시내용은 또한 하기로부터 선택된 암을 치료하거나 또는 그의 중증도를 감소시키는 방법에 관한 것이다: 뇌암 (신경교종), 교모세포종, 반나얀-조나나 증후군, 코우덴병, 레르미트-두크로스병, 유방암, 염증성 유방암, 윌름스 종양, 유잉 육종, 횡문근육종, 상의세포종, 수모세포종, 결장암, 두경부암, 신장암, 폐암, 간암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 육종, 골육종, 골의 거대 세포 종양, 갑상선암, 림프모구성 T-세포 백혈병, 만성 골수 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 모발상-세포 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 호중구성 백혈병, 급성 림프모구성 T-세포 백혈병, 형질세포종, 면역모세포성 대세포 백혈병, 외투 세포 백혈병, 다발성 골수종 거핵모구성 백혈병, 다발성 골수종, 급성 거핵구성 백혈병, 전골수구성 백혈병, 적백혈병, 악성 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 림프모구성 T 세포 림프종, 버킷 림프종, 여포성 림프종, 신경모세포종, 방광암, 요로상피암, 폐암, 외음부암, 자궁경부암, 자궁내막암, 신암, 중피종, 식도암, 타액선암, 간세포성암, 위암, 비인두암, 협부암, 구강암, GIST (위장 기질 종양) 및 고환암.
본원에 사용된 용어 "치료하는" 및 그의 문법적 변형은 치료 요법을 의미한다. 특정한 상태와 관련하여, 치료하는은 다음을 의미한다: (1) 상태의 생물학적 징후 중 하나 이상의 상태를 호전시키거나 예방함, (2) (a) 상태를 야기하거나 그의 원인이 되는 생물학적 캐스케이드에서의 하나 이상의 지점 또는 (b) 상태의 생물학적 징후 중 하나 이상을 방해함, (3) 상태 또는 그의 치료와 연관된 증상, 효과 또는 부작용 중 하나 이상을 완화함, 또는 (4) 상태 또는 상태의 생물학적 징후 중 하나 이상의 진행을 늦춤. 이에 의한 예방 요법이 또한 고려된다. 통상의 기술자는 "예방"이 절대 용어가 아님을 인지할 것이다. 의약에서, "예방"은 상태 또는 그의 생물학적 징후의 가능성 또는 중증도를 실질적으로 감소시키기 위한, 또는 이러한 상태 또는 그의 생물학적 징후의 발병을 지연시키기 위한 약물의 예방적 투여를 지칭하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 대상체가 암의 발병 위험이 높은 것으로 고려되는 경우, 예컨대 대상체가 암의 강한 가족력을 갖는 경우 또는 대상체가 발암물질에 노출되었던 경우, 예방적 요법이 적절하다.
본원에 사용된 용어 "암", "신생물" 및 "종양"은 상호교환가능하게 사용되며, 단수 또는 복수 형태로, 세포를 숙주 유기체에 대해 병적으로 만드는 악성 형질전환을 겪은 세포를 지칭한다. 원발성 암 세포는 널리 확립된 기술, 특히 조직학적 검사에 의해 비-암성 세포와 용이하게 구별될 수 있다. 본원에 사용된 암 세포의 정의는, 원발성 암 세포, 뿐만 아니라 암 세포 선조로부터 유래한 임의의 세포를 포함한다. 이것은 전이된 암 세포, 및 암 세포로부터 유래된 시험관내 배양물 및 세포주를 포함한다. 통상적으로 고형 종양으로서 나타나는 암의 유형을 언급하는 경우, "임상적으로 검출가능한" 종양은 종양 덩이에 기초하여, 예를 들어 컴퓨터 단층촬영 (CT) 스캔, 자기 공명 영상화 (MRI), X선, 초음파 또는 신체 검사 시의 촉진과 같은 절차에 의해 검출가능하고/거나, 환자로부터 수득가능한 샘플 중 1종 이상의 암-특이적 항원의 발현 때문에 검출가능한 종양이다. 종양은 조혈 (또는 혈액 또는 혈액학적 또는 혈액-관련) 암, 예를 들어 혈액 세포 또는 면역 세포로부터 유래된 암일 수 있으며, 이는 "액상 종양"으로 지칭될 수 있다. 혈액 종양에 기초한 임상 상태의 구체적 예는 백혈병, 예컨대 만성 골수구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 및 급성 림프구성 백혈병; 형질 세포 악성종양, 예컨대 다발성 골수종, MGUS 및 발덴스트롬 마크로불린혈증; 림프종, 예컨대 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종 등을 포함한다.
암은, 비정상적인 수의 모세포 또는 원치않는 세포 증식이 존재하거나, 또는 림프성 및 골수성 악성종양 둘 다를 포함한 혈액암으로서 진단되는 임의의 암일 수 있다. 골수성 악성종양은 급성 골수성 (또는 골수구성 또는 골수 또는 골수모구성) 백혈병 (미분화형 또는 분화형), 급성 전골수성 (또는 전골수구성 또는 전골수 또는 전골수모구성) 백혈병, 급성 골수단핵구성 (또는 골수단핵모구성) 백혈병, 급성 단핵구성 (또는 단핵모구성) 백혈병, 적백혈병 및 거핵구성 (또는 거핵모구성) 백혈병을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이들 백혈병은 함께 급성 골수성 (또는 골수구성 또는 골수) 백혈병 (AML)으로 지칭될 수 있다. 골수성 악성종양은, 만성 골수 (또는 골수성) 백혈병 (CML), 만성 골수단핵구성 백혈병 (CMML), 본태성 혈소판혈증 (또는 혈소판증가증) 및 진성 다혈구혈증 (PCV)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 골수증식성 장애 (MPD)를 또한 포함한다. 골수성 악성종양은, 불응성 빈혈 (RA), 과다 모세포 동반 불응성 빈혈 (RAEB), 및 변환 중 과다 모세포 동반 불응성 빈혈 (RAEBT)로 지칭될 수 있는 골수이형성증 (또는 골수이형성 증후군 또는 MDS); 뿐만 아니라 원인불명 골수 화생 동반 또는 비동반 골수섬유증 (MFS)을 또한 포함한다.
조혈암은, 림프절, 비장, 골수, 말초 혈액 및/또는 결절외 부위에 이환될 수 있는 림프성 악성종양을 또한 포함한다. 림프성 암은, B-세포 비-호지킨 림프종 (B-NHL)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 B-세포 악성종양을 포함한다. B-NHL은 무통성 (또는 저등급), 중등급 (또는 공격성) 또는 고등급 (매우 공격성)일 수 있다. 무통성 B세포 림프종은 여포성 림프종 (FL); 소림프구성 림프종 (SLL); 결절성 변연부 림프종 (MZL), 결절외 MZL, 비장 MZL, 및 융모성 림프구를 갖는 비장 MZL을 포함한 MZL; 림프형질세포성 림프종 (LPL); 및 점막-연관-림프성 조직 (MALT 또는 결절외 변연부) 림프종을 포함한다. 중등급 B-NHL은 백혈병성 침범 동반 또는 비동반 외투 세포 림프종 (MCL), 미만성 대세포 림프종 (DLBCL), 여포성 대세포 (또는 등급 3 또는 등급 3B) 림프종, 및 원발성 종격 림프종 (PML)을 포함한다. 고등급 B-NHL은 버킷 림프종 (BL), 버킷-유사 림프종, 비분할 소세포 림프종 (SNCCL) 및 림프모구성 림프종을 포함한다. 다른 B-NHL은 면역모세포성 림프종 (또는 면역세포종), 원발성 삼출 림프종, HIV 연관 (또는 AIDS 관련) 림프종, 및 이식후 림프증식성 장애 (PTLD) 또는 림프종을 포함한다. B-세포 악성종양은 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 전림프구성 백혈병 (PLL), 발덴스트롬 마크로불린혈증 (WM), 모발상 세포 백혈병 (HCL), 거대 과립 림프구 (LGL) 백혈병, 급성 림프성 (또는 림프구성 또는 림프모구성) 백혈병, 및 캐슬만병을 또한 포함하나 이에 제한되지는 않는다. NHL은, 달리 명시되지 않은 (NOS) T-세포 비-호지킨 림프종, 말초 T-세포 림프종 (PTCL), 역형성 대세포 림프종 (ALCL), 혈관면역모세포성 림프성 장애 (AILD), 비강 자연 킬러 (NK) 세포 / T-세포 림프종, 감마/델타 림프종, 피부 T 세포 림프종, 균상 식육종 및 세자리 증후군을 포함하나 이에 제한되지는 않는 T-세포 비-호지킨 림프종 (T-NHL)을 또한 포함할 수 있다.
조혈암은 또한 전형적 호지킨 림프종, 결절성 경화성 호지킨 림프종, 혼합 세포충실성 호지킨 림프종, 림프구 우세형 (LP) 호지킨 림프종, 결절성 LP 호지킨 림프종 및 림프구 고갈된 호지킨 림프종을 포함한 호지킨 림프종 (또는 질환)을 포함한다. 조혈암은, 형질 세포 질환 또는 암, 예컨대 무증상 다발성 골수종 (MM)을 포함한 MM, 의미 불명 (또는 원인불명 또는 불명확)의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 형질세포종 (골, 골수외), 림프형질세포성 림프종 (LPL), 발덴스트롬 마크로불린혈증, 형질 세포 백혈병, 및 원발성 아밀로이드증 (AL)을 또한 포함한다. 조혈암은 또한 다형핵 백혈구 (또는 호중구), 호염기구, 호산구, 수지상 세포, 혈소판, 적혈구 및 자연 킬러 세포를 포함한 추가의 조혈 세포의 다른 암을 포함할 수 있다. 본원에서 "조혈 세포 조직"으로 지칭되는 조혈 세포를 포함하는 조직은, 골수; 말초 혈액; 흉선; 및 말초 림프성 조직, 예컨대 비장, 림프절, 점막과 연관된 림프성 조직 (예컨대 장-연관 림프성 조직), 편도, 파이어 판 및 충수, 및 다른 점막, 예를 들어 기관지 내층과 연관된 림프성 조직을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "화합물 A2"는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제를 의미한다. 일부 실시양태에서, 화합물 A2는 항-PD-1 항체이다. 적합하게는 화합물 A2는 니볼루맙 및 펨브롤리주맙으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물 A2는 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 서열식별번호: 11에 대해 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, OX40에 대해 지시된 효능제 항체 또는 그의 항원 결합 부분이다. 또 다른 실시양태에서, 화합물 A2는 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는, OX40에 대해 지시된 효능제 항체 또는 그의 항원 결합 부분이다.
본원에 사용된 용어 "화합물 B2"는 유형 I PRMT 억제제를 의미한다. 일부 실시양태에서, 화합물 B2는 화학식 I, II, V 또는 VI의 화합물이다. 적합하게는 화합물 B2는 화합물 A이다.
적합하게는, 본 발명의 조합물은 "명시된 기간" 이내에 투여된다.
본원에 사용된 용어 "명시된 기간" 및 그의 문법적 변형은 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나와 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것의 투여 사이의 시간 간격을 의미한다. 달리 정의되지 않는 한, 명시된 기간은 동시 투여를 포함할 수 있다. 달리 정의되지 않는 한, 명시된 기간은 하루 동안의 화합물 A2 및 화합물 B2의 투여를 지칭한다.
적합하게는, 화합물이 "명시된 기간" 이내에 투여되고 동시에 투여되지 않는 경우에, 이들은 둘 다 서로에 대해 약 24시간 이내에 투여되며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 24시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 12시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 12시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 11시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 11시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 10시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 10시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 9시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 9시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 8시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 8시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 7시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 7시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 6시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 6시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 5시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 5시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 4시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 4시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 3시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 3시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 2시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 2시간일 것이고; 적합하게는 이들은 둘 다 서로에 대해 약 1시간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 명시된 기간은 약 1시간일 것이다. 본원에 사용된 약 45분 미만 간격의 화합물 A2 및 화합물 B2의 투여는 동시 투여로 간주된다.
적합하게는, 본 발명의 조합물이 "명시된 기간" 동안 투여되는 경우에, 화합물은 "지속 기간" 동안 공-투여될 것이다.
본원에 사용된 용어 "지속 기간" 및 그의 문법적 변형은 본 발명의 화합물 둘 다가 나타낸 연속 일수 동안 투여된다는 것을 의미한다. 달리 정의되지 않는 한, 연속 일수는 치료 시작으로 개시되거나 또는 치료 종료로 종결되는 것은 아니며, 단지 연속 일수가 치료 과정 동안의 일부 시점에 이루어지는 것이 요구된다.
"명시된 기간" 투여에 관하여:
적합하게는, 둘 다의 화합물은 적어도 1일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 1일일 것이고; 적합하게는 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 3일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 3일일 것이고; 적합하게는 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 5일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 5일일 것이고; 적합하게는 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 7일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 7일일 것이고; 적합하게는 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 14일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 14일일 것이고; 적합하게는 치료 과정 동안, 둘 다의 화합물은 적어도 연속 30일 동안 명시된 기간 이내에 투여될 것이며 - 이 경우에, 지속 기간은 적어도 30일일 것이다.
적합하게는, 화합물이 "명시된 기간" 동안 투여되지 않는 경우에, 이들은 순차적으로 투여된다. 본원에 사용된 용어 "순차적 투여" 및 그의 문법적 변형은 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 2일 이상 동안 1일 1회 투여되고, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 후속적으로 연속 2일 이상 동안 1일 1회 투여되는 것을 의미한다. 또한, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나와 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것의 순차적 투여 사이에 휴약기를 이용하는 것이 본원에서 고려된다. 본원에 사용된 휴약기는 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나의 순차적 투여 후 및 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것의 투여 전에 화합물 A2 및 화합물 B2 중 어느 것도 투여되지 않는 일수의 기간일 것이다. 적합하게는 휴약기는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 및 14일로부터 선택된 일수의 기간일 것이다.
순차적 투여에 관하여:
적합하게는, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 1 내지 30일 동안 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 연속 1 내지 30일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 1 내지 21일 동안 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 연속 1 내지 21일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 1 내지 14일 동안 투여되고, 이어서 1 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 연속 1 내지 14일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 A2 및 화합물 B2 중 하나가 연속 1 내지 7일 동안 투여되고, 이어서 1 내지 10일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2 및 화합물 B2 중 다른 것이 연속 1 내지 7일 동안 투여된다.
적합하게는, 화합물 B2가 순서상 먼저 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 투여될 것이다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3 내지 21일 동안 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 3 내지 21일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3 내지 21일 동안 투여되고, 이어서 1 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 3 내지 21일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3 내지 21일 동안 투여되고, 이어서 3 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 3 내지 21일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 21일 동안 투여되고, 이어서 임의적인 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 14일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 14일 동안 투여되고, 이어서 1 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 14일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 7일 동안 투여되고, 이어서 3 내지 10일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 7일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3일 동안 투여되고, 이어서 3 내지 14일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 7일 동안 투여된다. 적합하게는, 화합물 B2가 연속 3일 동안 투여되고, 이어서 3 내지 10일의 휴약기가 후속되고, 이어서 화합물 A2가 연속 3일 동안 투여된다.
"명시된 기간" 투여 및 "순차적" 투여에 이어서 반복 투여가 후속될 수 있거나 또는 교차 투여 프로토콜이 후속될 수 있으며, 반복 투여 또는 교차 투여 프로토콜 전에 휴약기가 선행될 수 있는 것으로 이해된다.
본 발명의 방법은 또한 암 치료의 다른 치료 방법과 함께 사용될 수 있다.
화합물 A2 및 화합물 B2는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다. 적합한 경로는 경구, 직장, 비강, 국소 (협측 및 설하 포함), 종양내, 질 및 비경구 (피하, 근육내, 정맥내, 피내, 척수강내 및 경막외 포함)를 포함한다. 바람직한 경로는, 예를 들어 조합물의 수용자의 상태 및 치료될 암에 따라 달라질 수 있는 것으로 인지될 것이다. 또한 투여되는 각각의 작용제는 동일한 또는 상이한 경로에 의해 투여될 수 있으며 화합물 A2 및 화합물 B2가 제약 조성물/제제 중에 함께 배합될 수 있는 것으로 인지될 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조합물의 1종 이상의 성분은 정맥내로 투여된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 조합물의 1종 이상의 성분은 경구로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조합물의 1종 이상의 성분은 종양내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조합물의 1종 이상의 성분은 전신으로, 예를 들어 정맥내로 투여되고, 본 발명의 조합물의 1종 이상의 다른 성분은 종양내로 투여된다. 예를 들어 이 단락에서의 임의의 실시양태에서, 본 발명의 성분은 1종 이상의 제약 조성물로서 투여된다.
전형적으로, 치료될 감수성 종양에 대해 활성을 갖는 임의의 항신생물제가 본 발명에서의 암의 치료에서 공-투여될 수 있다. 이러한 작용제의 예는 문헌 [Cancer Principles and Practice of Oncology by V.T. Devita, T.S. Lawrence, and S.A. Rosenberg (editors), 10th edition (December 5, 2014), Lippincott Williams & Wilkins Publishers]에서 찾아볼 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 어떤 작용제의 조합물이 유용할 것인지를 약물 및 관련 암의 특정한 특징에 기초하여 식별할 수 있을 것이다. 본 발명에 유용한 전형적인 항신생물제는 항미세관제 또는 항유사분열제, 예컨대 디테르페노이드 및 빈카 알칼로이드; 백금 배위 착물; 알킬화제, 예컨대 질소 머스타드, 옥사자포스포린, 알킬술포네이트, 니트로소우레아, 및 트리아젠; 항생제, 예컨대 악티노마이신, 안트라시클린, 및 블레오마이신; 토포이소머라제 I 억제제, 예컨대 캄프토테신; 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대 에피포도필로톡신; 항대사물, 예컨대 퓨린 및 피리미딘 유사체 및 항-폴레이트 화합물; 호르몬 및 호르몬 유사체; 신호 전달 경로 억제제; 비-수용체 티로신 키나제 혈관신생 억제제; 면역요법제; 아폽토시스촉진제; 세포 주기 신호전달 억제제; 프로테아솜 억제제; 열 쇼크 단백질 억제제; 암 대사의 억제제; 및 암 유전자 요법제, 예컨대 유전자 변형된 T 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본 방법 또는 조합물과 조합하여 사용하거나 공-투여하기 위한 추가의 활성 성분 또는 성분들의 예는 항신생물제이다. 항신생물제의 예는 화학요법제; 면역-조정제; 면역-조정제; 및 면역자극 아주반트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 다양한 비제한적 측면을 예시한다.
실시예 1
아르기닌 메틸화 및 PRMT
아르기닌 메틸화는 다양한 범위의 세포 과정, 예컨대 유전자 조절, RNA 프로세싱, DNA 손상 반응 및 신호 전달에 수반되는 단백질에 대한 중요한 번역후 변형이다. 메틸화된 아르기닌을 함유하는 단백질은 핵 및 시토졸 분획 둘 다에 존재하며, 이는 아르기닌 상으로의 메틸 기의 전달을 촉매하는 효소가 또한 이들 세포하 구획 전반에 걸쳐 존재한다는 것을 시사한다 (문헌 [Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Lee, Y. H. & Stallcup, M. R. Minireview: protein arginine methylation of nonhistone proteins in transcriptional regulation. Mol Endocrinol 23, 425-433, doi:10.1210/me.2008-0380 (2009)]에서 검토됨). 포유동물 세포에서, 메틸화된 아르기닌은 다음 3가지 주요 형태로 존재한다: ω-NG-모노메틸-아르기닌 (MMA), ω-NG,NG-비대칭 디메틸 아르기닌 (ADMA), 또는 ω-NG,N'G-대칭 디메틸 아르기닌 (SDMA). 각각의 메틸화 상태는 상이한 방식으로 단백질-단백질 상호작용에 영향을 미칠 수 있고, 따라서 기질의 생물학적 활성에 대한 뚜렷한 기능적 결과를 부여할 잠재력을 갖는다 (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)).
아르기닌 메틸화는 대부분 글리신-, 아르기닌-풍부 (GAR) 모티프와 관련하여, S-아데노실-L-메티오닌 (SAM)으로부터 기질 아르기닌 측쇄로 메틸 기를 전달하여 S-아데노실-호모시스테인 (SAH) 및 메틸화된 아르기닌을 생성하는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (PRMT)의 패밀리의 활성을 통해 발생한다 (도 1). 이러한 단백질 패밀리는 10종의 구성원으로 구성되어 있고, 이 중 9종은 효소적 활성을 갖는 것으로 제시되었다 (Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)). PRMT 패밀리는 효소적 반응의 생성물에 따라 4가지 하위유형 (유형 I-IV)으로 카테고리화된다 (도 1). 유형 IV 효소는 내부 구아니디노 질소를 메틸화시키고, 단지 효모에서만 설명되었으며 (Fisk, J. C. & Read, L. K. Protein arginine methylation in parasitic protozoa. Eukaryot Cell 10, 1013-1022, doi:10.1128/EC.05103-11 (2011)); 유형 I-III 효소는 단일 메틸화 사건을 통해 모노메틸-아르기닌 (MMA, Rme1)을 생성한다. MMA 중간체는 비교적 낮은 존재비의 중간체로 간주되나, PRMT7의 주된 유형 III 활성의 선택 기질이 모노메틸화된 상태로 유지될 수 있고, 반면 유형 I 및 II 효소는 MMA로부터 각각 비대칭 디메틸-아르기닌 (ADMA, Rme2a) 또는 대칭 디메틸 아르기닌 (SDMA, Rme2s)으로의 진행을 촉매한다. 유형 II PRMT는 PRMT5 및 PRMT9를 포함하나, PRMT5가 대칭 디메틸화의 형성을 담당하는 1차 효소이다. 유형 I 효소는 PRMT1, PRMT3, PRMT4, PRMT6 및 PRMT8을 포함한다. PRMT1, PRMT3, PRMT4 및 PRMT6은 편재적으로 발현되는 반면 PRMT8은 대부분 뇌로 제한된다 (문헌 [Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)]에서 검토됨).
PRMT1은 다수의 세포 기질 상에서 MMA 및 ADMA의 형성을 촉매할 수 있는 1차 유형 1 효소이다 (Bedford, M. T. & Clarke, S. G. Protein arginine methylation in mammals: who, what, and why. Mol Cell 33, 1-13, doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013 (2009)). 많은 경우에, PRMT1-의존성 ADMA 변형은 그의 기질의 생물학적 활성 및 수송에 요구되고 (Nicholson, T. B., Chen, T. & Richard, S. The physiological and pathophysiological role of PRMT1-mediated protein arginine methylation. Pharmacol Res 60, 466-474, doi:10.1016/j.phrs.2009.07.006 (2009)), PRMT1의 활성은 세포 ADMA 수준의 ~85%를 차지한다 (Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine methyltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013); Pawlak, M. R., Scherer, C. A., Chen, J., Roshon, M. J. & Ruley, H. E. Arginine N-methyltransferase 1 is required for early postimplantation mouse development, but cells deficient in the enzyme are viable. Mol Cell Biol 20, 4859-4869 (2000)). PRMT1의 완전한 녹아웃은 다수의 기질에 걸쳐 MMA의 현저한 증가를 유발하며, 이는 다른 PRMT가 MMA를 확립 및 유지할 수 있는 반면 PRMT1의 주요 생물학적 기능은 MMA를 ADMA로 전환시키는 것임을 시사한다 (Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine methyltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013)). 추가로, PRMT1의 상실 시에, 가능하게는 ADMA의 상실 및 상응하게 SDMA-생성 유형 II PRMT에 대한 기질로서 작용할 수 있는 MMA의 증가의 결과로 SDMA 수준이 증가된다. 유형 I PRMT의 억제는 ADMA의 상실, MMA의 증가, 또는 대안적으로, SDMA와 연관된 별개의 메틸화 패턴으로의 전환을 통해 변경된 기질 기능을 유도할 수 있다 (Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine methyltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013)).
마우스에서의 Prmt1 유전자좌의 파괴는 초기 배아 치사를 유발하고, 동형접합 배아는 E6.5 이후로는 발생하지 못하며, 이는 정상 발생에 PRMT1이 요구된다는 것을 나타낸다 (Pawlak, M. R., Scherer, C. A., Chen, J., Roshon, M. J. & Ruley, H. E. Arginine N-methyltransferase 1 is required for early postimplantation mouse development, but cells deficient in the enzyme are viable. Mol Cell Biol 20, 4859-4869 (2000); Yu, Z., Chen, T., Hebert, J., Li, E. & Richard, S. A mouse PRMT1 null allele defines an essential role for arginine methylation in genome maintenance and cell proliferation. Mol Cell Biol 29, 2982-2996, doi:10.1128/MCB.00042-09 (2009)). 성체에서의 PRMT1에 대한 역할을 보다 잘 이해하기 위해 조건부 또는 조직 특이적 녹아웃이 요구될 것이다. Prmt1 널 마우스로부터 유래된 마우스 배아 섬유모세포는 DNA 손상 반응 단백질인 MRE11의 저메틸화와 연관된 성장 정지, 다배수성, 염색체 불안정성 및 자발적 DNA 손상을 겪으며, 이는 게놈 유지 및 세포 증식에서의 PRMT1에 대한 역할을 시사한다 (Yu, Z., Chen, T., Hebert, J., Li, E. & Richard, S. A mouse PRMT1 null allele defines an essential role for arginine methylation in genome maintenance and cell proliferation. Mol Cell Biol 29, 2982-2996, doi:10.1128/MCB.00042-09 (2009)). PRMT1 단백질 및 mRNA는 광범위한 배아 및 성체 조직에서 검출될 수 있으며, 이는 대다수의 세포 아르기닌 메틸화를 담당하는 효소로서의 그의 기능과 일치한다. PRMT는 그 자체로 번역후 변형을 겪을 수 있고 상호작용 조절 단백질과 회합되지만, PRMT1은 추가의 변형을 위한 요건 없이 기저 활성을 보유한다 (문헌 [Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)]에서 검토됨).
PRMT1 및 암
PRMT1의 오조절 및 과다발현은 다수의 고형 및 조혈 암과 연관되었다 (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013); Yoshimatsu, M. et al. Dysregulation of PRMT1 and PRMT6, Type I arginine methyltransferases, is involved in various types of human cancers. Int J Cancer 128, 562-573, doi:10.1002/ijc.25366 (2011)). PRMT1과 암 생물학 사이의 연관성은 대부분 관련 기질에서 발견된 아르기닌 잔기의 메틸화의 조절을 통한 것이었다 (도 2). 여러 종양 유형에서, PRMT1은 히스톤 H4의 메틸화를 통해 (Takai, H. et al. 5-Hydroxymethylcytosine plays a critical role in glioblastomagenesis by recruiting the CHTOP-methylosome complex. Cell Rep 9, 48-60, doi:10.1016/j.celrep.2014.08.071 (2014); Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Zhao, X. et al. Methylation of RUNX1 by PRMT1 abrogates SIN3A binding and potentiates its transcriptional activity. Genes Dev 22, 640-653, doi:10.1101/gad.1632608 (2008)), 뿐만 아니라 비-히스톤 기질에 대한 그의 활성을 통해 (Wei, H., Mundade, R., Lange, K. C. & Lu, T. Protein arginine methylation of non-histone proteins and its role in diseases. Cell Cycle 13, 32-41, doi:10.4161/cc.27353 (2014)) 이상 종양원성 프로그램의 발현을 구동시킬 수 있다. 다수의 이들 실험 시스템에서, 기질의 PRMT1-의존성 ADMA 변형의 파괴는 암 세포의 증식 능력을 감소시킨다 (Yang, Y. & Bedford, M. T. Protein arginine methyltransferases and cancer. Nat Rev Cancer 13, 37-50, doi:10.1038/nrc3409 (2013)).
여러 연구는 PRMT1을 혈액 및 고형 종양의 발생에 연관시켰다. PRMT1은 종양원성 경로의 활성화를 유도하는 MLL 및 AML1-ETO 융합체와 같은 주요 구동자의 메틸화를 통한 백혈병 발생과 연관된다 (Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012); Cheung, N. et al. Targeting Aberrant Epigenetic Networks Mediated by PRMT1 and KDM4C in Acute Myeloid Leukemia. Cancer Cell 29, 32-48, doi:10.1016/j.ccell.2015.12.007 (2016)). AML1-ETO 발현 마우스로부터 유래된 골수 세포에서의 PRMT1의 녹다운은 클론원성을 억제하였으며, 이는 상기 모델의 백혈병 표현형 유지에 있어서 PRMT1에 대한 중요한 요건을 입증한다 (Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012)). PRMT1은 또한 MLL 융합 복합체의 성분이고, H4R3 메틸화와 연관된 이상 전사 활성화를 촉진하고, PRMT1의 녹다운은 조혈 줄기 세포의 MLL-EEN 매개된 형질전환을 억제할 수 있다 (Cheung, N., Chan, L. C., Thompson, A., Cleary, M. L. & So, C. W. Protein arginine-methyltransferase-dependent oncogenesis. Nat Cell Biol 9, 1208-1215, doi:10.1038/ncb1642 (2007)). 유방암 환자에서, PRMT1의 높은 발현은 보다 짧은 무질환 생존 및 진행된 조직학적 등급의 종양과 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌다 (Mathioudaki, K. et al. Clinical evaluation of PRMT1 gene expression in breast cancer. Tumour Biol 32, 575-582, doi:10.1007/s13277-010-0153-2 (2011)). 이를 위해, PRMT1은 전이 및 암 세포 침습의 촉진에 연루되었고 (Gao, Y. et al. The dual function of PRMT1 in modulating epithelial-mesenchymal transition and cellular senescence in breast cancer cells through regulation of ZEB1. Sci Rep 6, 19874, doi:10.1038/srep19874 (2016); Avasarala, S. et al. PRMT1 Is a Novel Regulator of Epithelial-Mesenchymal-Transition in Non-small Cell Lung Cancer. J Biol Chem 290, 13479-13489, doi:10.1074/jbc.M114.636050 (2015)), 에스트로겐 수용체 α (ERα)의 PRMT1 매개된 메틸화는 성장-촉진 신호 전달 경로를 강화시킬 수 있다. 이러한 메틸화 구동 메카니즘은 항-에스트로겐의 존재 하에서도 유방암 세포에 대한 성장 이점을 제공할 수 있다 (Le Romancer, M. et al. Regulation of estrogen rapid signaling through arginine methylation by PRMT1. Mol Cell 31, 212-221, doi:10.1016/j.molcel.2008.05.025 (2008)). 추가로, PRMT1은 상동 재조합 및 비-상동 말단-연결 DNA 복구 경로 둘 다의 조절을 통해 게놈 안정성 및 DNA 손상 작용제에 대한 저항성을 촉진한다 (Boisvert, F. M., Rhie, A., Richard, S. & Doherty, A. J. The GAR motif of 53BP1 is arginine methylated by PRMT1 and is necessary for 53BP1 DNA binding activity. Cell Cycle 4, 1834-1841, doi:10.4161/cc.4.12.2250 (2005); Boisvert, F. M., Dery, U., Masson, J. Y. & Richard, S. Arginine methylation of MRE11 by PRMT1 is required for DNA damage checkpoint control. Genes Dev 19, 671-676, doi:10.1101/gad.1279805 (2005)). 따라서, PRMT1의 억제는, 특히 DNA 복구 기구 (예컨대 유방암에서의 BRCA1)가 돌연변이에 의해 손상될 수 있는 종양에서 암을 DNA 손상 작용제에 대해 감작화시킬 수 있다 (O'Donovan, P. J. & Livingston, D. M. BRCA1 and BRCA2: breast/ovarian cancer susceptibility gene products and participants in DNA double-strand break repair. Carcinogenesis 31, 961-967, doi:10.1093/carcin/bgq069 (2010)). 종합하면, 이들 관찰은 종양 생물학의 임상적으로 관련된 측면에서 PRMT1의 주요 역할을 입증하고, DNA 손상을 촉진하는 것과 같은 요법과의 조합을 탐구하기 위한 근거를 시사한다.
RNA 결합 단백질 및 스플라이싱 기구는 PRMT1 기질의 주요 부류이고, 이들의 생물학적 기능 뿐만 아니라 백혈병에서의 재발성 돌연변이를 통해 암 생물학에 연루되었다 (Bressan, G. C. et al. Arginine methylation analysis of the splicing-associated SR protein SFRS9/SRP30C. Cell Mol Biol Lett 14, 657-669, doi:10.2478/s11658-009-0024-2 (2009); Sveen, A., Kilpinen, S., Ruusulehto, A., Lothe, R. A. & Skotheim, R. I. Aberrant RNA splicing in cancer; expression changes and driver mutations of splicing factor genes. Oncogene 35, 2413-2427, doi:10.1038/onc.2015.318 (2016); Hsu, T. Y. et al. The spliceosome is a therapeutic vulnerability in MYC-driven cancer. Nature 525, 384-388, doi:10.1038/nature14985 (2015)). 최근의 연구에서, PRMT1은 급성 거핵구성 백혈병에서 RNA 결합 단백질인 RBM15를 메틸화시키는 것으로 제시되었다 (Zhang, L. et al. Cross-talk between PRMT1-mediated methylation and ubiquitylation on RBM15 controls RNA splicing. Elife 4, doi:10.7554/eLife.07938 (2015)). RBM15의 PRMT1 매개된 메틸화는 그의 발현을 조절하고; 결과적으로, AML 세포주에서의 PRMT1의 과다발현은 RBM15의 하향조절에 의해 분화를 차단하여, 분화에 중요한 유전자의 프리-mRNA 인트론 영역에 결합하는 그의 능력을 방지하는 것으로 제시되었다. 추정 PRMT1 기질을 확인하기 위해, 도구 PRMT1 억제제인 화합물 D에 반응하여 아르기닌 메틸화 상태에서의 변화를 갖는 단백질을 확인하는 프로테오믹 접근법 (메틸스캔, 셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology))을 이용하였다. 화합물 D- 및 DSMO-처리된 세포 추출물로부터의 단백질 단편을 메틸 아르기닌 특이적 항체 (ADMA, MMA, SDMA)를 사용하여 면역침전시키고, 펩티드를 질량 분광측정법에 의해 확인하였다. 많은 단백질이 아르기닌 메틸화에서의 변화를 겪지만, 대다수의 확인된 기질은 도구 화합물로 처리된 AML 세포주에서 전사 조절인자 및 RNA 프로세싱 단백질이었다 (도 3).
요약하면, 암 관련 경로에 대한 PRMT1의 영향은 억제가 항종양 활성을 유도할 수 있어서 AML, 림프종 및 고형 종양 적응증의 치료를 위한 신규 치료 메카니즘을 제공한다는 것을 시사한다. 신생 문헌에 기재된 바와 같이, 여러 메카니즘은 백혈병에서의 AML-ETO 구동 종양발생의 억제, 유방암에서의 성장 촉진 신호 전달의 억제, 및 RNA 결합 단백질 및 스플라이세오솜 기구의 메틸화를 통한 스플라이싱의 조정을 포함한, 혈액 및 고형 종양에서의 PRMT1 억제제의 사용에 대한 근거를 지지한다. PRMT1을 포함한 유형 I PRMT의 억제는 이상 암 세포 증식 및 생존을 억제하기 위한 추적가능한 전략을 나타낸다.
생화학
화합물 A를 사용하여 상세한 시험관내 생화학적 연구를 수행하여 유형 I PRMT에 대한 억제의 효력 및 메카니즘을 특징화하였다.
억제 메카니즘
기질 경쟁 실험을 통해 PRMT1에 대한 화합물 A의 억제 메카니즘을 탐구하였다. 기질 농도를 그의 Km app로 나눈 것의 함수로서 화합물 A IC50 값을 플롯팅하고, 생성된 플롯을 경쟁적, 비-경쟁적 및 무경쟁적 억제에 대한 쳉-프루소프(Cheng-Prusoff) 관계와 비교함으로써 억제제 양식을 조사하였다 (Copeland, R. A. Evaluation of enzyme inhibitors in drug discovery. A guide for medicinal chemists and pharmacologists. Methods Biochem Anal 46, 1-265 (2005)). 화합물 A IC50 값은 SAM 농도가 증가함에 따라 감소하였으며, 이는 화합물 A에 의한 PRMT1의 억제가, 무경쟁적 억제에 대한 방정식에 피팅하였을 때 Ki app 값 15 nM로 SAM에 관하여 무경쟁적이었다는 것을 나타낸다 (도 4A). 화합물 A IC50 값을 H4 1-21 펩티드의 함수로서 플롯팅하였을 때 어떠한 명확한 양식 경향도 관찰되지 않았으며 (도 4B), 이는 혼합형 억제를 시사한다. 전반적 분석을 사용하여 추가 분석을 수행함으로써 α 값 3.7을 얻어 펩티드 메카니즘이 혼합되었음을 확인하고 Ki app 값 19 nM을 얻었다 (도 4B, 삽도).
시간 의존성 및 가역성
다양한 SAM:PRMT1:화합물 A 사전인큐베이션 시간 및 20분 반응 후 IC50 값을 측정함으로써 화합물 A를 시간 의존성 억제에 대해 평가하였다. SAM과 무경쟁적인 억제 메카니즘은 화합물 A의 결합을 지지하기 위해 SAM:PRMT1 복합체의 생성이 요구된다는 것을 암시하고, 따라서 SAM (Km app에서 유지됨)을 사전인큐베이션 동안 포함시켰다. 화합물 A는 더 긴 사전인큐베이션 시간을 사용함으로써의 효력의 증가에 의해 명백해진 PRMT1 메틸화의 시간 의존성 억제를 나타냈다 (도 5A). 시간 의존성 억제가 관찰되었기 때문에, 추가의 IC50 결정은 화합물 효력의 보다 우수한 표현을 제공하기 위해 60분 SAM:PRMT1:화합물 A 사전인큐베이션 및 40분 반응 시간을 포함하였다. 이들 조건은 검정의 이론적 치밀-결합 한계 (0.25 nM)보다 >10배 높은 3.1 ± 0.4 nM의 IC50 (n=29)을 생성한다. 다양한 PRMT1 농도에서의 IC50 값 조사는 실제 치밀 결합 한계가 잠재적으로는 낮은 활성 분획으로 인해 0.25 nM보다 유의하게 더 낮다는 것을 밝혀냈다 (도 5B). 화합물 A의 염 형태는 PRMT1에 대해 결정된 IC50 값에 유의하게 영향을 미치지 않았다 (도 5B).
시간 의존성 억제에 대한 2가지 설명은 느린-결합 가역적 억제 및 비가역적 억제이다. 이들 두 메카니즘 사이를 구별하기 위해, 친화도 선택 질량 분광측정법 (ASMS)을 사용하여 PRMT1에 대한 화합물 A의 결합을 조사하였다. ASMS는 먼저 결합된 리간드를 비결합 리간드로부터 분리하고, 이어서 MS에 의해 가역적으로 결합된 리간드를 검출한다. 최대 효력이 사전인큐베이션 20분 후에 관찰된 도 5A에 제시된 프로파일을 기초로 시간 의존성 복합체 (ESI*)가 완전히 형성되는 것을 보장하도록 PRMT1:SAM과 화합물 A와의 2시간 사전인큐베이션을 사용하였다. 이들 조건 하에서, 화합물 A는 ASMS를 사용하여 검출가능하였다. 이것은 ASMS가 비가역적으로 결합된 화합물 A를 검출할 수 없을 것이기 때문에 1차 메카니즘이 사실상 가역적이라는 것을 시사한다. 오프-레이트 분석을 포함한 확정적 가역성 연구는 아직 수행되지 않았고, 메카니즘을 추가로 검증할 것이다.
결정학
억제제 결합 방식을 결정하기 위해, PRMT1 및 SAH에 결합된 화합물 A의 공-결정 구조를 결정하였다 (2.48 Å 해상도) (도 6). SAH는 PRMT1에 의한 SAM으로부터의 메틸 기의 제거시에 형성된 산물이고; 따라서, SAH 및 SAM은 유사하게 PRMT1의 동일한 포켓을 점유해야 한다. 억제제는 보통 SAH 포켓에 직접 인접한 기질 펩티드에 의해 점유된 틈새에서 결합하고, 그의 디아민 측쇄는 추정 아르기닌 기질 부위를 점유한다. 말단 메틸아민은 SAH의 티오에테르로부터 3.6 Å인 Glu162 측쇄 잔기와 수소 결합을 형성하고, SAH 결합 포켓은 Tyr57 및 Met66에 의해 화합물 A에 가교된다. 화합물 A는 화합물 A의 피라졸 질소의 양성자와 Glu65의 산성 측쇄 사이의 수소 결합의 형성을 통해 PRMT1에 결합하고; 디에톡시 분지형 시클로헥실 모이어티는 Tyr57, Ile62, Tyr166 및 Tyr170에 의해 형성된 소수성 홈에서 용매 노출된 표면을 따라 존재한다. SAH와 억제제 결합 사이의 공간적 분리, 뿐만 아니라 Tyr57과 같은 잔기와의 상호작용은 효소적 연구에서 밝혀진 SAM 무경쟁적 메카니즘을 지지할 수 있다. 화합물 A가 기질 펩티드 포켓에서 결합되고 디아민 측쇄가 기질 아르기닌 잔기의 아민을 모방할 수 있다는 발견은 억제제 양식이 펩티드와 경쟁적일 수 있다는 것을 의미한다. 억제 연구의 생화학적 방식은 화합물 A가 펩티드에 관하여 혼합된 억제제라는 것을 지지한다 (도 4B). 화합물 A의 시간-의존성 거동 뿐만 아니라 펩티드 틈새 외부의 기질 펩티드의 엑소사이트 결합에 대한 잠재력은 둘 다 펩티드와 경쟁적이지 않은 억제 방식을 유발할 수 있었으며, 이는 구조적 및 생화학적 연구에 의해 시사된 양식의 차이를 설명한다.
오르토로그
독성학 연구의 해석을 용이하게 하기 위해, PRMT1의 래트 및 개 오르토로그에 대한 화합물 A의 효력을 평가하였다. 인간 PRMT1에서와 같이, 화합물 A는 IC50 값이 사전인큐베이션 증가에 따라 감소하는, 래트 및 개 PRMT1에 대한 시간 의존성 억제를 나타냈다 (도 7A). 추가적으로, 소정 범위의 효소 농도 (0.25-32 nM)에 걸쳐 화합물 A 효력의 어떠한 이동도 관찰되지 않았으며, 이는 측정된 IC50 값이 인간, 래트 또는 개에 대한 검정의 치밀-결합 한계에 근접하지 않았다는 것을 시사한다 (도 7B). IC50 값은 인간 PRMT1을 평가하는데 사용된 것과 동등한 조건을 사용하여 결정하였고, 화합물 A 효력이 모든 종에 걸쳐 < 2배 달라졌다는 것을 밝혀냈다 (도 7C).
선택성
PRMT 패밀리 구성원의 패널에 걸쳐 화합물 A의 선택성을 평가하였다. 60분 SAM:효소:화합물 A 사전인큐베이션 후 대표적인 유형 I (PRMT3, PRMT4, PRMT6 및 PRMT8) 및 II (PRMT5/MEP50 및 PRMT9) 패밀리 구성원에 대하여 IC50 값을 결정하였다. 화합물 A는 다양한 효력으로, 시험된 모든 유형 I PRMT의 활성을 억제하였지만, 유형 II 패밀리 구성원을 억제하지는 못했다 (도 8A). 유형 I PRMT의 추가의 특징화는 화합물 A가 효소:SAM:화합물 A 사전인큐베이션 시간 증가 후 관찰된 효력의 증가로 인해 PRMT4, PRMT6 및 PRMT8의 시간 의존성 억제제였으며; 반면, PRMT3은 시간 의존성 거동을 나타내지 않았다는 것을 밝혀냈다 (도 8B).
화합물 A의 선택성을 추가로 특징화하기 위해, 단일 농도의 화합물 A에서 21종의 메틸트랜스퍼라제의 억제를 평가하였다 (10 μM, 반응 생물학). 가장 높은 억제도인 18%가 PRDM9에 대해 관찰되었다. 종합적으로, 화합물 A는 시험된 메틸트랜스퍼라제의 최소 억제를 나타냈으며, 이는 그것이 유형 I PRMT의 선택적 억제제라는 것을 시사한다 (표 2). 추가의 선택성 검정이 안전성 섹션에 기재되어 있다.
표 2 화합물 A에 의한 억제에 대해 시험된 메틸트랜스퍼라제. 효소를 SAM Km 값과 무관하게 고정 농도 (1 μM)의 SAM에서 검정하였다.
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요약하면, 화합물 A는 3-5 nM 범위의 IC50 값으로 PRMT1, PRMT6 및 PRMT8에 대해 동등한 생화학적 효력을 보여주는, 유형 I PRMT 패밀리 구성원의 강력하고 가역적이며 선택적인 억제제이다. 화합물 A와의 복합체에서의 PRMT1의 결정 구조는 화합물 A가 펩티드 포켓에서 결합한다는 것을 보여주며, 결정 구조 뿐만 아니라 효소적 연구 둘 다는 SAM 무경쟁적 메카니즘과 일치한다.
생물학
세포 메카니즘 효과
PRMT1의 억제는 히스톤 H4의 아르기닌 3 (H4R3me2a)을 포함한, 세포 PRMT1 기질 상에서의 ADMA의 감소, 이와 동시에 MMA 및 SDMA의 증가를 유발하는 것으로 예측된다 (Dhar, S. et al. Loss of the major Type I arginine methyltransferase PRMT1 causes substrate scavenging by other PRMTs. Sci Rep 3, 1311, doi:10.1038/srep01311 (2013)). 아르기닌 메틸화에 대한 화합물 A의 효과를 평가하기 위해, MMA를 검출하기 위한 항체를 사용하는 인-셀-웨스턴 검정에서 증가된 MMA와 연관된 용량 반응을 평가하고, 세포 메카니즘 EC50 10.1 ± 4.4 nM을 결정하였다 (도 9). 용량 반응은, 가능하게는 유형 I PRMT들 사이의 차등 활성 또는 기질의 특정한 하위세트에 대한 차등 효력으로 인해 2상으로 보였다. 2상 곡선을 설명하는 방정식을 사용하여 데이터를 피팅하고, 시험된 농도 범위에 걸쳐 제2 변곡점과 연관된 명백한 플래토가 없었으므로 제1 변곡점을 보고하였다. 다양한 염 형태를 이러한 검정 포맷에서 시험하였고, 이들은 모두 유사한 EC50 값을 나타냈으며, 따라서 모든 생물학 연구에 대해 상호교환가능한 것으로 간주된다 (도 9). 하기 나타낸 바와 같은 선택 종양 유형에서의 다른 메틸화 상태에 대한 시기, 지속성 및 영향을 조사하기 위해 추가의 연구를 수행하였다. MMA의 유도에 대한 화합물 A의 효력은 화합물 A가 세포에서의 유형 1 PRMT의 억제와 연관된 생물학적 메카니즘을 조사하는데 사용될 수 있다는 것을 나타낸다.
암에서의 유형 I PRMT 발현
더 캔서 게놈 아틀라스(The Cancer Genome Atlas; TCGA)를 통해 > 100개의 암 연구로부터 수집된 다중 종양 유형으로부터의 유전자 발현 데이터 및 씨바이오포탈에서 나타낸 다른 원발성 종양 데이터베이스의 분석은, PRMT1이 다른 고형 및 혈액 악성종양에 비해 림프종 (미만성 대 B-세포 림프종, DLBCL)에서 가장 높은 수준으로, 암에서 고도로 발현된다는 것을 나타낸다 (도 10). 공통 하우스키핑 유전자인 ACTB 및 피부에서 선택적으로 발현되는 유전자인 TYR의 발현을 또한 조사하여 각각 높은 편재적 발현 또는 조직 제한된 발현과 연관된 범위를 특징화하였다. 다른 암들 중 림프종에서의 높은 발현은 화합물 A 억제의 표적이 전임상 연구에서 평가된 세포주에 상응하는 원발성 종양에 존재한다는 추가의 신뢰를 제공한다. PRMT3, 4 및 6은 또한 소정 범위의 종양 유형에 걸쳐 발현되는 반면 PRMT8 발현은 그의 조직 특이적 발현을 고려하여 예측된 바와 같이 보다 제한된 것으로 보인다 (Lee, J., Sayegh, J., Daniel, J., Clarke, S. & Bedford, M. T. PRMT8, a new membrane-bound tissue-specific member of the protein arginine methyltransferase family. J Biol Chem 280, 32890-32896, doi:10.1074/jbc.M506944200 (2005)).
세포 표현형 효과
세포 수의 대용물로서 ATP를 정량화하는 셀 타이터 글로(Cell Titer Glo) (프로메가(Promega))를 사용하여 6-일 성장-사멸 검정에서 배양 종양 세포주 성장을 억제하는 능력에 대해 화합물 A를 분석하였다. 전체 6-일 검정 전반에 걸쳐 증식을 허용한 조건을 확인하기 위해 광범위한 시딩 밀도에 걸쳐 시간 과정에 따라 모든 세포주의 성장을 평가하였다. 세포를 최적 시딩 밀도로 플레이팅하고, 밤새 인큐베이션한 후, 20-지점 2배 적정의 화합물을 첨가하고, 플레이트를 6일 동안 인큐베이션하였다. 화합물 첨가 시에 세포의 반복실험 플레이트를 수거하여 이를 정량화하였다 (T0). 6일 처리 후 수득된 값을 T0 값의 함수로서 표현하고, 화합물 농도에 대해 플롯팅하였다. T0 값을 100%에 대해 정규화하였으며, 이는 화합물 첨가 시에 세포의 수를 나타낸다. 데이터를 4 파라미터 방정식에 피팅하여 농도 반응 곡선을 생성하고, 성장 IC50 (gIC50)을 결정하였다. gIC50은 화합물 첨가 시의 세포의 수 (T0)와 6일 후 세포의 수 (DMSO 대조군) 사이의 차이인, '성장 윈도우'의 중간점이다. 성장-사멸 검정을 사용하여 순 집단 변화를 정량화할 수 있으며, 이는 세포 사멸 (세포독성)을 화합물 첨가 시의 수 (T0)와 비교하여 더 적은 세포로 명확하게 정의한다. 음의 Y분-T0 값은 세포 사멸을 나타내는 반면 gIC100 값은 성장의 100% 억제에 요구되는 화합물의 농도를 나타낸다. 고형 및 혈액 악성종양을 나타내는 196종의 인간 암 세포주에서 이러한 검정을 사용하여 화합물 A의 성장 억제 효과를 평가하였다 (도 11).
화합물 A는 대부분의 세포주에서 거의 완전한 또는 완전한 성장 억제를 유도하였으며, 하위세트는 음의 Y분-T0 값에 의해 나타난 바와 같은 세포독성 반응을 보였다 (도 11B). 이러한 효과는 AML 및 림프종 암 세포주에서 가장 현저하였으며, 여기서 세포주의 50 및 54%가 각각 세포독성 반응을 보였다. 감수성 평가를 위한 화합물 A의 임상적으로 관련된 농도의 추정치로서 래트 14-일 MTD로부터 계산된 총 AUC 또는 노출 (Cave) (150 mg/kg, Cave=2.1 μM)을 사용하였다. 림프종 세포주가 2.1 μM 미만의 gIC100 값으로 세포독성을 나타냈지만, 평가된 모든 종양 유형에 걸쳐 많은 세포주는 gIC50 값 < 2.1 μM을 나타냈으며, 이는 환자에서 항종양 활성과 연관된 농도가 달성가능할 수 있다는 것을 시사한다. 개 21-일 MTD는 약간 더 높았고 (25 mg/kg; 총 AUC 또는 Cave = 3.2 μM), 따라서 래트로부터의 보다 낮은 농도는 세포주 감수성을 인지하기 위한 보다 보존적인 표적을 제공한다. 림프종 세포주는 유형 I PRMT 억제에 고도로 감수성이었고, 중앙 gIC50이 0.57 μM이었고, 세포독성이 54%에서 관찰되었다. 고형 종양 유형 중에서, 화합물 A의 강력한 항증식 활성이 흑색종 및 신장암 세포주 (주로 투명 세포 신암종을 나타냄)에서 관찰되었지만, 반응은 이러한 검정 포맷에서 우세하게 세포증식억제성이었다 (도 11, 표 3).
표 3 화합물 A 6-일 증식 요약. 래트 14-일 MTD에서 달성된 농도 (150 mg/kg, Cave=2.1 μM)에 기초하여 gIC50 < 2.1 μM을 표적으로서 사용하였다.
Figure pct00021
화합물 A의 항증식 효과의 평가는 PRMT1의 억제가 소정 범위의 고형 및 혈액 악성종양을 대표하는 세포주에 걸쳐 강력한 항종양 활성을 유발한다는 것을 나타낸다. 종합하면, 이들 데이터는 고형 및 혈액 악성종양에서의 임상 개발이 보증된다는 것을 시사한다. 우선순위 적응증은 다음을 포함한다:
Figure pct00022
림프종: 세포주의 54%에서 세포독성
Figure pct00023
AML: 세포주의 50%에서 세포독성
Figure pct00024
신세포 암종: 세포주의 60%에서 gIC50 < 2.1 μM
Figure pct00025
흑색종: 세포주의 71%에서 gIC50 < 2.1 μM
Figure pct00026
TNBC를 포함한 유방암: 세포주의 41%에서 gIC50 < 2.1 μM
림프종 생물학
세포 메카니즘 효과
림프종에서의 아르기닌 메틸화에 대한 화합물 A의 효과를 평가하기 위해, 인간 DLBCL 세포주 (Toledo)를 최대 120시간 동안 0.4 μM 화합물 A 또는 비히클로 처리하고, 이 후 단백질 용해물을 다양한 아르기닌 메틸화 상태에 대한 항체를 사용하여 웨스턴 분석에 의해 평가하였다. 예측된 바와 같이, 화합물 노출시 ADMA 메틸화는 감소한 반면 MMA는 증가하였다 (도 12). SDMA 수준의 증가가 또한 관찰되었으며, 이는 MMA의 증가가 SDMA 형성의 주요 촉매인 PRMT5에 대한 잠재적 기질의 풀의 축적을 유발할 수 있다는 것을 시사한다. 다양한 동역학에 의한 다수의 기질의 검출, 및 DMSO-처리된 샘플 사이의 ADMA 수준의 가변성을 고려하여, 전체 레인 및 현저한 45 kDa 밴드 둘 다를 특징화하여 ADMA를 평가하였다. MMA의 증가는 24시간까지 분명하였고 48시간까지 최대에 가까웠던 반면 45 kDa ADMA 밴드의 감소는 최대 효과를 달성하는데 72-96시간이 요구되었다. SDMA의 증가는 화합물 노출 48시간 후 분명하였고 120시간까지 계속 증가하였으며, 이는 MMA의 유형 I PRMT에 의한 ADMA로의 전환에서 유형 II PRMT에 의한 SDMA로의 전환으로의 잠재적 전환과 일치하였다 (도 12).
아르기닌 메틸화 (MMA, ADMA, SDMA)에 대한 화합물 A 효과와 연관된 용량 반응을 림프종 세포주의 패널에서 결정하였다 (도 13). ADMA 감소를 전체 레인에 걸쳐 측정하고, 모든 세포주에 걸쳐 검출불가능한 수준으로 감소한 단일 45 kDa 밴드를 평가하였다. 종합적으로, 최대 효과의 50%를 달성하는데 요구되는 농도는 세포주에 걸쳐 유사하였고 6-일 성장 사멸 검정에서의 gIC50에 상응하지 않았으며, 이는 감수성의 결여가 불량한 표적 결속에 의해 설명되지 않는다는 것을 시사한다.
화합물 A에 반응한 아르기닌 메틸화에서의 전반적 변화의 지속성을 결정하기 위해, 화합물 A로 처리된 세포에서 화합물 휴약 후에 ADMA, SDMA 및 MMA 수준을 평가하였다 (도 14). Toledo 세포를 72시간 동안 0.4 μM 화합물 A와 함께 배양하여 아르기닌 메틸화 마크에 대한 강건한 효과를 확립하였다. 이어서 세포를 세척하고, 화합물 A-무함유 배지에서 배양하고, 샘플을 120시간까지 매일 수집하고, 아르기닌 메틸화 수준을 웨스턴 분석에 의해 조사하였다. MMA 수준은 급속히 감소하여, 화합물 A 휴약 후 24시간까지 기준선으로 복귀하였고, 반면에 ADMA 및 SDMA는 각각 24 및 96시간까지 기준선으로 복귀하였다. 특히, 45 kDa ADMA 밴드의 회수는 ADMA 웨스턴 블롯에서 대부분의 다른 종에 비해 지연된 것으로 보였으며, 이는 화합물 A에 의한 아르기닌 메틸화 변화의 지속성이 기질에 의해 달라질 수 있다는 것을 시사한다. SDMA는 6시간의 휴약 후에도 계속 증가하는 것으로 보였다. 이것은 휴약 후 기준선으로 복귀되지 않은 MMA의 지속적인 증가와 결부된, 임의의 명백한 플래토 없이 120시간까지 관찰된 계속적인 증가 (도 12)와 일치한다. 각각의 변형의 지속성은 일반적으로 화합물 A에 의해 야기되는 아르기닌 메틸화 변화의 동역학을 반영하였으며, MMA가 가장 신속하다.
세포 표현형 효과
화합물 A에 의한 성장의 억제와 연관된 시간 과정을 평가하기 위해, 림프종 세포주의 하위세트에서 연장된 지속기간 성장-사멸 검정을 수행하였다. 이전에 기재된 6-일 증식 검정과 유사하게, 검정 지속기간 전반에 걸쳐 성장을 보장하도록 시딩 밀도를 최적화하고, 제3일-제10일에 시작하여 선택된 시점에서 CTG에 의해 세포 수를 평가하였다. 성장 억제가 Toledo 및 Daudi 림프종 세포주에서 이르게는 6일에 관찰되었고 8일까지 최대였다 (도 15).
제6일 및 제10일에 보다 큰 세트의 세포주를 평가하여, 화합물 A에 대한 장기간 노출의 효과를 측정하고, 6-일 검정에서 세포증식억제성 반응을 나타낸 세포주가 이후 시점에서 세포독성을 겪을 수 있는지 여부를 결정하였다. 화합물 A에 대한 노출 시간 연장은 평가된 림프종 세포주에 걸쳐 효력 (gIC50) 또는 세포독성 (Y분-T0)에 대해 최소 효과를 가졌으며 (도 16), 이는 6-일 증식 평가가 감수성의 평가를 위해 이용될 수 있다는 것을 나타낸다.
성장 억제가 제6일에 분명하였고 장기간 노출이 효력 또는 퍼센트 억제에 최소의 영향을 미쳤다는 것을 고려하여, 호지킨 및 비-호지킨 하위유형을 나타내는 림프종 세포주의 광범위한 패널을 6-일 성장-사멸 검정 포맷에서 평가하였다 (도 17). 모든 하위유형은 이러한 포맷에서 동등하게 감수성인 것으로 보였고, 많은 세포주는 분류와 무관하게 세포독성 (음의 Y분-T0에 의해 나타낸 바와 같음)을 겪었으며, 이는 화합물 A가 평가된 림프종의 모든 하위유형에서 항종양 효과를 갖는다는 것을 시사한다.
증식 검정 결과는 PRMT1의 억제가 림프종 세포주의 하위세트에서 분명한 세포독성을 유도한다는 것을 시사한다. 이러한 효과를 추가로 설명하기 위해, 아이오딘화프로피듐 염색에 이어서 유동 세포측정법을 사용하여 화합물 A로 처리된 림프종 세포주에서의 세포 주기 분포를 평가하였다. 6-일 증식 검정에서 소정 범위의 Y분-T0 및 gIC50 값을 나타낸 세포주를 저밀도로 시딩하여 검정 지속기간에 걸쳐 로그 성장을 가능하게 하고, 다양한 농도의 화합물 A로 처리하였다. 성장-사멸 검정 결과와 일치하게, Toledo 세포에서 화합물 A 농도 ≥ 1000 nM을 사용한 처리 3일 후에 시작하여 시간 및 용량 의존성 방식으로, 세포 사멸을 나타내는 서브-G1 (<G1)의 세포의 축적이 관찰되었다 (도 18). 제7일까지, 서브-G1 집단의 증가는 농도 ≥ 100 nM에서 분명하였다. 6-일 증식 검정에서 분명한 세포증식억제성 성장 억제를 겪은 세포주인 U2932 및 OCI-Ly1에서, 이러한 효과는 단지 10 μM 화합물 A에서만 명백하였다. 이러한 검정 포맷에서 어떠한 다른 세포 주기 단계에 있어서도 현저한 효과는 나타나지 않았다.
세포 주기의 FACS 분석을 확인하기 위해, 10-일 시간과정 동안 아폽토시스의 추가의 척도로서 카스파제 절단의 평가를 수행하였다. 검정 지속기간 전반에 걸쳐 일관된 성장을 보장하도록 시딩 밀도를 최적화하고, 발광 카스파제-글로(Caspase-Glo) 3/7 검정 (프로메가)을 사용하여 카스파제 활성화를 평가하였다. 카스파제-글로 3/7 신호를 세포 수 (CTG에 의해 평가됨)에 대해 정규화하고, 대조군 (DMSO 처리된) 세포 대비 배수-유도로서 나타냈다. 화합물 A에 대한 세포독성 (Toledo) 및 세포증식억제성 (Daudi) 반응을 나타내는 DLBCL 세포주에서 10-일 시간과정에 걸쳐 카스파제 3/7 활성을 모니터링하였다 (도 19). 성장-사멸 검정에서 관찰된 프로파일과 일치하게, Toledo 세포주는 모든 시점에서 세포 수의 감소와 동시에 강건한 카스파제 활성화를 나타냈으며, 반면 Daudi 세포주에서의 카스파제 활성의 유도는 덜 현저하였고 화합물 A의 최고 농도에 제한되었다.
세포 주기 프로파일과 함께, 이들 데이터는 화합물 A가 Toledo DLBCL 세포주에서 카스파제-매개 아폽토시스를 유도한다는 것을 나타내며, 이는 다른 림프종 세포주에서 관찰된 세포독성이 화합물 A에 의한 아폽토시스 경로의 활성화를 반영할 수 있다는 것을 시사한다.
마우스 이종이식편에서의 항종양 효과
Toledo (인간 DLBCL) 이종이식편 모델에서 종양 성장에 대한 화합물 A의 효과를 평가하였다. 피하 Toledo 종양을 보유하는 암컷 SCID 마우스를 칭량하고, 캘리퍼를 사용하여 종양을 측정하고, 마우스를 각각 10 마리 마우스의 처리군으로 종양 크기에 따라 블록 무작위화하였다. 마우스에게 비히클 또는 화합물 A (150 mg/kg-600 mg/kg)를 28일 동안 매일 경구로 투여하였다. 연구 전반에 걸쳐, 마우스를 칭량하고, 종양 측정을 매주 2회 수행하였다. 유의한 종양 성장 억제 (TGI)가 모든 용량에서 관찰되었고, 퇴행은 ≥ 300 mg/kg 용량에서 관찰되었다 (도 20, 표 5). 어떠한 용량 군에서도 유의한 체중 감소는 없었다.
평가된 모든 용량에서 완전한 TGI가 관찰되었다는 것을 고려하여, 보다 낮은 용량에서의 화합물 A의 항종양 효과를 시험할 뿐만 아니라 매일 (QD)에 비해 1일 2회 (BID) 투여를 비교하기 위해 제2 연구를 수행하였다. 이러한 제2 연구에서, 마우스에게 비히클 또는 화합물 A (37.5 mg/kg-150 mg/kg)를 24일 동안 QD로 또는 75 mg/kg BID로 경구로 투여하였다. 이러한 연구에서, 75 mg/kg의 BID 투여는 150 mg/kg과 동일한 TGI (각각 95% 및 96%)를 가져왔고, 반면에 ≤ 75 mg/kg QD는 부분 TGI (≤ 79%)를 가져왔다 (도 20, 표 5). 어떠한 용량 군에서도 유의한 체중 감소가 관찰되지 않았다. 이들 데이터는 동일한 총 1일 용량을 사용한 BID 또는 QD 투여가 유사한 효능을 가져온다는 것을 시사한다.
추가의 종양 유형
AML
림프종 세포주 이외에, 화합물 A는 6-일 증식 검정에서 조사된 AML 세포주의 하위세트에서 강력한 세포독성 활성을 가졌다 (표 3). 10종의 세포주 중 8종은 gIC50 값 < 2 μM을 가졌고, 화합물 A는 5종의 세포주에서 세포독성을 유도하였다. PRMT1이 M2 AML 하위유형에 특징적인 AML-ETO 융합체와 상호작용하지만 (Shia, W. J. et al. PRMT1 interacts with AML1-ETO to promote its transcriptional activation and progenitor cell proliferative potential. Blood 119, 4953-4962, doi:10.1182/blood-2011-04-347476 (2012)), 이러한 융합 단백질을 보유하는 세포주 (Kasumi-1 및 SKNO-1)는 gIC50에 의해 측정시 화합물 A에 대한 감수성을 나타내거나 또는 세포독성을 겪은 유일한 세포주가 아니었고 (표 4, 도 21), 따라서 이러한 종양유전자 융합 단백질의 존재는 화합물 A에 대한 AML 세포주의 감수성을 배타적으로 예측하지 않는다.
표 4 AML 세포주에서의 화합물 A 활성의 요약
Figure pct00027
림프종에서의 연구와 유사하게, 제6일 및 제10일에 세포주의 세트를 평가하여, 화합물 A에 대한 장기간 노출의 효과를 측정하고, 6-일 검정에서 세포증식억제성 반응을 나타낸 AML 세포주가 이후 시점에서 세포독성을 겪을 수 있는지 여부를 결정하였다. 림프종 결과와 일치하게, 화합물 A에 대한 노출 시간 연장은 평가된 AML 세포주에 걸쳐 효력 (gIC50) 또는 세포독성 (Y분-T0)에 대해 최소 효과를 가졌다 (도 21).
신세포 암종
신세포 암종 세포주는 다른 고형 종양 유형과 비교하여 최저 중앙 gIC50을 가졌다. 시험된 세포주 중 어떠한 것도 화합물 A로 처리시 세포독성 반응을 나타내지 않았지만, 모두 완전한 성장 억제를 나타냈고, 10종 중 6종은 gIC50 값 ≤ 2 μM을 가졌다 (표 5). 프로파일링된 10종의 세포주 중 7종은 신암의 주요 임상 하위유형인 투명 세포 신암종 (ccRCC)을 나타낸다.
표 5 신세포 암종 세포에서의 화합물 A 항증식 효과의 요약
Figure pct00028
화합물 A에 의한 신암종 세포주에서의 성장 억제의 시간 과정을 평가하기 위해, 제3일, 제4일, 제5일 및 제6일에 4종의 ccRCC 세포주의 패널에서 CTG에 의해 세포 성장을 평가하였다 (도 22). 활성의 최대 이동은 제3일 내지 제4일에 발생하였으며, 여기서 모든 세포주는 gIC50 값 감소 및 성장 억제 증가를 나타냈다. 화합물 A의 효력 (gIC50에 의해 평가됨)은 4종의 세포주 중 3종에서 4일까지 최대였고, 6일 검정 지속기간까지 추가로 변화하지 않았다. 추가적으로, 퍼센트 성장 억제는 평가된 모든 세포주에서 100%에 도달하였다. 따라서, ccRCC 세포주에서의 최대 성장 억제는 세포주 스크리닝 전략에 이용된 6-일 성장 윈도우 내에서 분명하였다.
카스파제 활성화를 증식 시간과정 동안 평가하였고, Y분-T0 값에 의해 나타난 바와 같은 명백한 세포독성의 결여와 일치하게, 카스파제 절단은 단지 최고 농도 (30 μM)에서만 발생하였으며, 이는 아폽토시스가 ccRCC 세포주에서 화합물 A에 의해 유도된 전체 성장 억제 효과에 대해 최소한의 기여를 가질 수 있다는 것을 나타낸다.
인간 신세포 암종 이종이식편 (ACHN)을 보유하는 마우스에서 종양 성장에 대한 화합물 A의 효과를 평가하였다. 피하 ACHN 세포주 종양을 보유하는 암컷 SCID 마우스를 칭량하고, 캘리퍼에 의해 종양을 측정하고, 각각 10 마리 마우스의 처리군으로 종양 크기에 따라 블록 무작위화하였다. 마우스에게 비히클 또는 화합물 A (150 mg/kg - 600 mg/kg)를 59일 이하 동안 매일 경구로 투여하였다. 연구 전반에 걸쳐, 마우스를 칭량하고, 종양 측정을 매주 2회 수행하였다. 유의한 종양 성장 억제가 모든 용량에서 관찰되었고, 퇴행은 ≥ 300 mg/kg 용량에서 관찰되었다. 600 mg/kg으로 매일 처리된 동물에서 유의한 체중 감소가 관찰되었고, 따라서 투여군은 제31일에 종결되었다 (도 23, 표 6).
표 6 생체내 화합물 A의 효능
Figure pct00029
* p<0.05, 양측 t-검정
** 600 QD 부문의 ACHN 효능 연구를 제31일에 종결하였다.
종합하면, 이들 데이터는 100% TGI가 인간 고형 및 혈액 종양의 피하 이종이식편에서 유사한 용량으로 달성될 수 있다는 것을 시사한다.
유방암
유방암 세포주는 화합물 A에 대한 소정 범위의 감수성을 나타냈고, 많은 경우에 6-일 증식 검정에서 부분 성장 억제를 나타냈다 (도 24). 삼중 음성 유방암 (TNBC)을 나타내는 세포주는 비-TNBC 세포주와 비교하여 약간 더 낮은 중앙 gIC50 값을 가졌다 (TNBC 및 비-TNBC에 대해 각각 3.6 μM 및 6.8 μM).
화합물 A에 의한 증식에 대한 효과는 세포증식억제성이었고 대다수의 유방암 세포주에서 완전한 성장 억제를 가져오지 않았기 때문에, 연장된 지속기간 성장-사멸 검정을 수행하여 화합물 A에 대한 감수성이 연장된 노출에 의해 증가하는지 여부를 결정하였다. 시험된 17종의 세포주 중 7종에서 퍼센트 최대 억제의 ≥ 10% 증가 및 gIC50의 ≥ 2배 감소가 존재하였다 (도 25). 연장된 노출 검정에서, 11종/17종의 세포주는 gIC50 ≤ 2 μM을 가졌고 (65%) 반면 7종/17종 (41%)은 7일 검정 포맷에서 이러한 기준을 충족시켰다.
흑색종
고형 종양 유형 중에서, 화합물 A는 흑색종 세포주에서 가장 강력한 항증식 효과를 가졌다 (도 11). 평가된 7종의 세포주 중 6종은 2 μM 미만의 gIC50 값을 가졌다 (표 7). gIC50 값과 관계없이, 화합물 A의 효과는 모든 흑색종 세포주에서 세포증식억제성이었다.
표 7 흑색종 세포주에서의 화합물 A 활성의 요약
Figure pct00030
실시예 2
조합물
2가지의 합리적 접근법을 수행하여 화합물 A와의 잠재적 조합을 연구하였다. 화합물 A와의 조합을 평가하기 위해 사용된 제2 접근법은 PRMT1 억제에 의한 면역요법의 조합 이익의 탐색을 포함하였다. PRMT1은 TLR 수용체 신호전달 경로의 조정을 통한 면역 조절과 연루되었으며, 이에 의해 PRMT1 녹-다운은 염증유발 분자의 증가된 발현을 유도하였다 (Tikhanovich, I. et al. Dynamic Arginine Methylation of Tumor Necrosis Factor (TNF) Receptor-associated Factor 6 Regulates Toll-like Receptor Signaling. J Biol Chem 290, 22236-22249, doi:10.1074/jbc.M115.653543 (2015)). PRMT1 억제제 도구 화합물 (화합물 D)을 사용한 예비 RNA-seq 연구는 AML 세포주에서 면역 반응 유전자 패밀리 예컨대 케모카인, 시토카인, 인터페론 및 인터류킨의 변경된 발현을 입증하였다. 면역요법과 연관된 신생 임상 효능을 고려하여, 항-PD-1과의 화합물 A의 조합 항종양 활성을 동계 면역-경쟁 마우스 모델에서 검사하였다.
피하 뮤린 흑색종 (클라우드만S91) 종양을 보유한 암컷 DBA/2N Tac 마우스에게 비히클 또는 300 mg/kg 화합물 A를 3주 동안 1일 1회 경구로 투여하였다. 마우스에게 항-PD1, IgG 또는 상응하는 비히클 10 mg/kg을 21일 동안 매주 2회 복강내로 투여하였다. 추가의 코호트에게 항-PD1을 21일 동안 투여하되, 화합물 A는 50일에 걸쳐 계속 주었다. 종양 측정을 연구의 지속기간에 걸쳐 매주 2회 수행하였다. 화합물 A는 단독으로 및 항-PD1과 조합하여, 제21일에 종양 성장 억제에 유의한 영향을 미쳤다 (도 26; 표 8). 이 효과는 화합물 A/항-PD1 조합 군에서 가장 강하였고 종양 퇴행은 거의 모든 동물에서 관찰되었다 (도 26). 체중 및 이환율에 대한 효과가 조합 처리군 중 일부 동물에서 관찰되었다.
표 8 제21일에 종양 성장 억제의 통계적 비교. p 값 (t-시험)을 각각의 비교를 위해 나타낸다.
Figure pct00031
종양 성장에 대해 관찰한 효과가 세포주의 감수성을 반영하는지를 결정하기 위해, 배양물 내의 클라우드만S91 세포의 성장에 대한 화합물 A의 효과를 평가하였다. 최적화된 6-일 검정 포맷인 96-웰에서, 화합물 A는 이 마우스 유래 세포주의 성장에 대해 약한 효과 (gIC50 = 9.5 μM)를 가지며, 이는 동계 마우스 모델에서 관찰한 항종양 활성은 세포 자율이 아니고, 무손상 면역계를 요구할 수 있음을 시사한다 (도 27). 클라우드만 S91의 면역 손상된 마우스 이종이식편 모델을 사용하는 항종양 효과에 대한 면역계의 기여를 확인하기 위한 연구가 현재 진행 중이다.
집합적으로, 이들 데이터는 화합물 A가 면역계에 관여할 수 있고 환자 뿐만 아니라 진행 중인 환자에서 사용하기 위해 현재 승인된 면역계 체크포인트 조정제와 상승작용할 수 있음을 시사한다. 이 메카니즘은 화합물 A에 의해 암 세포 증식과 생존능에 대한 어떤 직접 효과를 보충할 수 있었다.
실시예 3
조합물
단일 작용제 및 조합물로서 화합물 D 및 항-OX40를 사용하여 처리한 CT-26 (결장 암종) 종양 모델 마우스 및 A20 (림프종) 종양 모델 마우스에 대해 생존 이점을 결정하였다. 마우스에게 비히클 또는 300 mg/kg 화합물 D를 3주 동안 1일 1회 경구로 투여하였다. 마우스에게 항-OX40 (클론 OX86) 5 mg/kg 또는 상응하는 비히클을 21일 동안 매주 2회 복강내로 투여하였다. 클론 OX86은 래트 항-마우스 OX40 수용체 항체이다.
도 40은 상응하는 비히클 (군 1 및 3), 화합물 D (군 5), 항-OX40 (군 2), 및 화합물 D와 항-OX40의 조합물 (군 10)을 사용하여 처리한 A20 종양 모델에서의 평균 생존을 나타낸다.
도 41은 상응하는 비히클 (군 1 및 3), 화합물 A (군 5), 항-OX40 (군 2), 및 화합물 D와 항-OX40의 조합물 (군 10)을 사용하여 처리한 CT-26 종양 모델에서의 평균 생존을 나타낸다.
항-OX-40 항체와 화합물 D의 조합물을 사용한 CT-26 이종이식 종양의 처리에 의해, 생존이 증가되고, 이는 2종의 작용제 사이의 잠재적 상승작용적 상호작용을 강조하는 것이다.
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ccatggcttg ggtgtggacc ttgctattcc tgatggcagc tgcccaaagt 60 atccaagcac aggttcagtt ggtgcagtct ggatctgagc tgaagaagcc tggagcctca 120 gtcaaggttt cctgcaaggc ttctggttat accttcacag actattcaat gcactgggtg 180 cgacaggctc caggacaagg tttaaagtgg atgggctgga taaacactga gactggtgag 240 ccaacatatg cagatgactt caagggacgg tttgtcttct ctttggacac ctctgtcagc 300 actgcctatt tgcagatcag cagcctcaaa gctgaggaca cggctgtgta ttactgtgct 360 aatccctact atgattacgt ctcttactat gctatggact actggggtca gggaaccacg 420 gtcaccgtct cctcaggtaa gaatggcctc tcaagctt 458 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 7 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 8 Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 9 Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 1 5 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 10 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Arg 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala 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Gln Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ser Asn Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Lys Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met 50 55 60 Glu Arg Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Lys Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 17 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met 50 55 60 Glu Arg Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 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420 ctgaattc 428 <210> 25 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 25 Asp Ala Trp Met Asp 1 5 <210> 26 <211> 19 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 26 Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser 1 5 10 15 Val Asn Gly <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 27 Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 28 <211> 414 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 28 atgtacttgg gactgaacta tgtattcata gtttttctct taaatggtgt ccagagtgaa 60 gtgaagcttg aggagtctgg aggaggcttg gtgcaacctg gaggatccat gaaactctct 120 tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccagtctcca 180 gagaaggggc ttgagtgggt tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatca tgcaacatac 240 tatgctgagt ctgtgaatgg gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aagtagtgtc 300 tacctgcaaa tgaacagctt aagagctgaa gacactggca tttattactg tacgtggggg 360 gaagtgttct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 414 <210> 29 <211> 138 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 29 Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser Glu Val Lys 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gggaggttca ccatctcaag agatgattcc 300 aaaagtagtg tctacctgca aatgaacagc ttaagagctg aagacactgg catttattac 360 tgtacgtggg gggaagtgtt ctactttgac tactggggcc aaggcaccac tctcacagtc 420 tcctcaggtg agtccttaaa acaagctt 448 <210> 31 <211> 138 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 31 Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly 1 5 10 15 Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr 65 70 75 80 Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser 85 90 95 Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 100 105 110 Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 32 Lys Ser Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala 1 5 10 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 33 Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro 1 5 <210> 34 <211> 8 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 34 Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Thr 1 5 <210> 35 <211> 378 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 35 atgagaccgt ctattcagtt cctggggctc ttgttgttct ggcttcatgg tgctcagtgt 60 gacatccaga tgacacagtc tccatcctca ctgtctgcat ctctgggagg caaagtcacc 120 atcacttgca agtcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct 180 ggaaaaggtc ctaggctgct catacattac acatctacat tacagccagg catcccatca 240 aggttcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca gcatcagcaa cctggagcct 300 gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgataatc ttctcacgtt cggtgctggg 360 accaagctgg agctgaaa 378 <210> 36 <211> 126 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 36 Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His 1 5 10 15 Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp 35 40 45 Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro 50 55 60 Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser 85 90 95 Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 100 105 110 Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 115 120 125 <210> 37 <211> 413 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 37 gctagcacca ccatgagacc gtctattcag ttcctggggc tcttgttgtt ctggcttcat 60 ggtgctcagt gtgacatcca gatgacacag tctccatcct cactgtctgc atctctggga 120 ggcaaagtca ccatcacttg caagtcaagc caagacatta acaagtatat agcttggtac 180 caacacaagc ctggaaaagg tcctaggctg ctcatacatt acacatctac attacagcca 240 ggcatcccat caaggttcag tggaagtggg tctgggagag attattcctt cagcatcagc 300 aacctggagc ctgaagatat tgcaacttat tattgtctac agtatgataa tcttctcacg 360 ttcggtgctg ggaccaagct ggagctgaaa cgtaagtaca cttttctgaa ttc 413 <210> 38 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 38 Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His 1 5 10 15 Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp 35 40 45 Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro 50 55 60 Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser 85 90 95 Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 100 105 110 Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 115 120 125

Claims (37)

  1. 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 면역-조정제의 조합물.
  2. 제1항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제인 조합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 조합물.
    Figure pct00032

    여기서
    X는 N이고, Z는 NR4이고, Y는 CR5이거나; 또는
    X는 NR4이고, Z는 N이고, Y는 CR5이거나; 또는
    X는 CR5이고, Z는 NR4이고, Y는 N이거나; 또는
    X는 CR5이고, Z는 N이고, Y는 NR4이고;
    RX는 임의로 치환된 C1-4 알킬 또는 임의로 치환된 C3-4 시클로알킬이고;
    L1은 결합, -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, -C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, -NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, -C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, -C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, -N(RB)SO2-, -SO2N(RB)-, 또는 임의로 치환된 C1-6 포화 또는 불포화 탄화수소 쇄이고, 여기서 탄화수소 쇄의 1개 이상의 메틸렌 단위는 -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, -C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, -NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, -C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, -C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, -N(RB)SO2-, 또는 -SO2N(RB)-로 임의로 및 독립적으로 대체되고;
    각각의 RA는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 산소 원자에 부착되어 있는 경우에 산소 보호기, 및 황 원자에 부착되어 있는 경우에 황 보호기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 RB는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴 및 질소 보호기로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 동일한 질소 원자 상의 RB 및 RW는 개재 질소와 함께 임의로 치환된 헤테로시클릭 고리를 형성할 수 있고;
    RW는 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이며; 단 L1이 결합인 경우, RW는 수소, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이 아니고;
    R3은 수소, C1-4 알킬, 또는 C3-4 시클로알킬이고;
    R4는 수소, 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C3-7 시클로알킬, 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로시클릴; 또는 임의로 치환된 C1-4 알킬-Cy이고;
    Cy는 임의로 치환된 C3-7 시클로알킬, 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
    R5는 수소, 할로, -CN, 임의로 치환된 C1-4 알킬, 또는 임의로 치환된 C3-4 시클로알킬이다.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 조합물.
    Figure pct00033
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물이며, 여기서 -L1-RW가 임의로 치환된 카르보시클릴인 조합물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염인 조합물.
    Figure pct00034
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 항에 있어서, 면역-조정제가 길항제 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 조합물.
  8. 제7항에 있어서, 항-PD-1 항체가 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙인 조합물.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 항에 있어서, 면역-조정제가 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 조합물.
  10. 제9항에 있어서, 면역-조정제가 OX40 효능제인 조합물.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 면역-조정제가 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 조합물.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 항에 있어서, 면역-조정제가 서열식별번호: 5에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄 서열을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 조합물.
  13. 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염이고,
    Figure pct00035

    면역-조정제는 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 여기서 항-PD1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙으로부터 선택된 것인
    조합물.
  14. 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염이고,
    Figure pct00036

    면역-조정제는 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인
    조합물.
  15. 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제와 면역-조정제의 조합물이며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염이고,
    Figure pct00037

    면역-조정제는 서열식별번호: 5에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄 서열을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인
    조합물.
  16. 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 조합물을 제약상 허용되는 담체 및 제약상 허용되는 희석제 중 적어도 1종과 함께 투여하여 상기 인간에서 암을 치료하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법.
  17. 치료 유효량의 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제를 포함하는 제약 조성물 및 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택된 치료 유효량의 면역-조정제를 포함하는 제2 제약 조성물.
  18. 치료 유효량의 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제를 포함하는 제약 조성물 및 치료 유효량의 면역-조정제를 포함하는 제2 제약 조성물이며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염이고,
    Figure pct00038

    면역-조정제는 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 여기서 항-PD1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙으로부터 선택된 것인
    제약 조성물.
  19. 치료 유효량의 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제를 포함하는 제약 조성물 및 치료 유효량이 면역-조정제를 포함하는 제2 제약 조성물이며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염이고,
    Figure pct00039

    면역-조정제는 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인
    제약 조성물.
  20. 치료 유효량의 유형 I 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 (유형 I PRMT) 억제제를 포함하는 제약 조성물 및 치료 유효량의 면역-조정제를 포함하는 제2 제약 조성물이며, 여기서 유형 I PRMT 억제제는 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염이고,
    Figure pct00040

    면역-조정제는 서열식별번호: 5에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄 서열을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인
    제약 조성물.
  21. 제17항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 1 (PRMT1) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 3 (PRMT3) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 4 (PRMT4) 억제제, 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 6 (PRMT6) 억제제 또는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라제 8 (PRMT8) 억제제인 제약 조성물.
  22. 제17항 또는 제21항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제약 조성물.
    Figure pct00041

    여기서
    X는 N이고, Z는 NR4이고, Y는 CR5이거나; 또는
    X는 NR4이고, Z는 N이고, Y는 CR5이거나; 또는
    X는 CR5이고, Z는 NR4이고, Y는 N이거나; 또는
    X는 CR5이고, Z는 N이고, Y는 NR4이고;
    RX는 임의로 치환된 C1-4 알킬 또는 임의로 치환된 C3-4 시클로알킬이고;
    L1은 결합, -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, -C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, -NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, -C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, -C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, -N(RB)SO2-, -SO2N(RB)-, 또는 임의로 치환된 C1-6 포화 또는 불포화 탄화수소 쇄이고, 여기서 탄화수소 쇄의 1개 이상의 메틸렌 단위는 -O-, -N(RB)-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)S-, -C(O)N(RB)-, -C(O)N(RB)N(RB)-, -OC(O)-, -OC(O)N(RB)-, -NRBC(O)-, -NRBC(O)N(RB)-, -NRBC(O)N(RB)N(RB)-, -NRBC(O)O-, -SC(O)-, -C(=NRB)-, -C(=NNRB)-, -C(=NORA)-, -C(=NRB)N(RB)-, -NRBC(=NRB)-, -C(S)-, -C(S)N(RB)-, -NRBC(S)-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -SO2-, -N(RB)SO2-, 또는 -SO2N(RB)-로 임의로 및 독립적으로 대체되고;
    각각의 RA는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 산소 원자에 부착되어 있는 경우에 산소 보호기, 및 황 원자에 부착되어 있는 경우에 황 보호기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 RB는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴 및 질소 보호기로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 동일한 질소 원자 상의 RB 및 RW는 개재 질소와 함께 임의로 치환된 헤테로시클릭 고리를 형성할 수 있고;
    RW는 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보시클릴, 임의로 치환된 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이며; 단 L1이 결합인 경우, RW는 수소, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이 아니고;
    R3은 수소, C1-4 알킬, 또는 C3-4 시클로알킬이고;
    R4는 수소, 임의로 치환된 C1-6 알킬, 임의로 치환된 C2-6 알케닐, 임의로 치환된 C2-6 알키닐, 임의로 치환된 C3-7 시클로알킬, 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로시클릴; 또는 임의로 치환된 C1-4 알킬-Cy이고;
    Cy는 임의로 치환된 C3-7 시클로알킬, 임의로 치환된 4- 내지 7-원 헤테로시클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
    R5는 수소, 할로, -CN, 임의로 치환된 C1-4 알킬, 또는 임의로 치환된 C3-4 시클로알킬이다.
  23. 제17항, 제21항 및 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제약 조성물.
    Figure pct00042
  24. 제17항, 제21항 및 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물이며, 여기서 -L1-RW가 임의로 치환된 카르보시클릴인 제약 조성물.
  25. 제17 및 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제약 조성물.
    Figure pct00043
  26. 제17항 및 제21항 내지 25항 중 어느 항에 있어서, 면역-조정제가 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 제약 조성물.
  27. 제26항에 있어서, 항-PD-1 항체가 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙인 제약 조성물.
  28. 제17항 및 제21항 내지 25항 중 어느 항에 있어서, 면역-조정제가 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 제약 조성물.
  29. 제28항에 있어서, 면역-조정제가 OX40 효능제인 제약 조성물.
  30. 제28항 또는 제29항에 있어서, 면역-조정제가 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 CDRH1; 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 CDRH2; 서열식별번호: 3에 제시된 바와 같은 CDRH3; 서열식별번호: 7에 제시된 바와 같은 CDRL1; 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 CDRL2 및/또는 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 CDRL3, 또는 각각의 CDR의, 상기 CDR에 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 직접 등가물 중 1종 이상을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 제약 조성물.
  31. 제28항 내지 제30항 중 어느 항에 있어서, 면역-조정제가 서열식별번호: 5에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄 서열을 포함하는 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 제약 조성물.
  32. 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 치료 유효량의 제17항 내지 제31항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 투여하여 상기 인간에서 암을 치료하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제 및 면역-조정제가 동시에, 순차적으로, 임의의 순서로, 전신으로, 경구로, 정맥내로 및 종양내로로부터 선택된 경로로 환자에게 투여되는 것인 방법.
  34. 제32항 또는 제33항에 있어서, 유형 I PRMT 억제제가 경구로 투여되는 것인 방법.
  35. 제32항 내지 제34항 중 어느 항에 있어서, 암이 흑색종, 림프종 또는 결장암인 방법.
  36. 암을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제15항 중 어느 항의 조합물의 용도.
  37. 암의 치료를 위한 제1항 내지 제15항 중 어느 항의 조합물의 용도.
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