TW202039835A

TW202039835A - 凍乾病毒配製物

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Publication number: TW202039835A
Application number: TW108148079A
Authority: TW
Inventors: 安力克亞歷山大浮路德
Original assignee: 美商安進公司
Priority date: 2018-12-27
Filing date: 2019-12-27
Publication date: 2020-11-01
Also published as: WO2020140012A1; US20220193161A1; JP2022516077A; AU2019414450A1; EP3902529A1; CA3124690A1; MX2021007639A; AR117547A1

Abstract

本文提供了一種粉末，該粉末包含活的減毒病毒、重組人血清白蛋白（例如rHSA）、除乳糖以外的糖、糖醇、磷酸鹽的來源、氯化物的來源，其中該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。在示例性方面，該粉末係液體組成物的冷凍乾產物。本文還提供了相關的液體組成物，製備用於施用的溶瘤病毒的方法和治療黑素瘤之方法。

Description

凍乾病毒配製物

在高於-80°C的儲存溫度下，活病毒（例如單純皰疹病毒）通常會長時間不穩定。缺乏熱穩定性對此類病毒，特別是液體配製物中的治療性病毒帶來了挑戰。此類治療性病毒組成物必須冷凍保存和運輸，並在融化後立即使用，以保持其治療有效的感染性。

缺乏熱穩定性帶來了操作上的挑戰，從而增加了製造、儲存和運輸的成本。在製造操作期間，例如，冷凍/解凍循環可能導致次優製程產量，並且供應鏈缺乏必要的靈活性。儲存和運輸也具挑戰性（導致繁複的處理和複雜的供應鏈）。

缺乏熱穩定性也帶來了商業挑戰。活病毒組成物需要-80°C儲存以確保穩定保質期，導致醫療保健提供者的複雜儲存和處理方案。此類限制增加了產品損失（例如由於處理不當）和產品浪費（例如解凍後未使用整個產品）的風險。這潛在地增加客戶的成本。

凍乾係冷凍乾燥過程，該過程在將藥物產品冷凍並置於真空後將其中的水除去。在此過程中，水從冰變成蒸氣昇華（不經過液相）。凍乾被廣泛用於改善藥物和生物藥物的穩定性，包括包含化學API、多肽、寡核苷酸和蛋白質（例如膠原蛋白、酶和抗體）的那些，最終目的是增強儲存穩定性和延長保質期。然而，這個過程並非沒有挑戰。凍乾可導致藥物產品的延遲釋放和藥物批次的拒收（Roy等人, Troubleshooting During the Manufacture of Lyophilized Drug Product-Begin Prepared for the Unexpected [凍乾的藥品製造期間的故障排除-為意外情況準備], Am Pharm Rev [藥物研究進展] (2012) 在www.americanpharmaceuticalreview.com/Featured-Articles/126958-Troubleshooting-During-the-Manufacture-of-Lyophilized-Drug-Product-Being-Prepared-for-the-Unexpected/可獲得）。在病毒配製物的上下文中，凍乾過程可以破壞病毒，導致重構（reconstitution）後產生少量活性病毒（Hansen L, Daoussi R, Vervaet C, Remon J-P, De Beer T (2015) Freeze-drying of live virus vaccines: A review [活病毒疫苗的冷凍乾燥：綜述]. Vaccine [疫苗] 33:5507-5519）。同樣，美國食品和藥物管理局指出，凍乾的一些缺點包括增加的處理和加工時間、需要無菌稀釋劑進行重構、以及需要昂貴和/或複雜的設備。

本揭露提供了一種可以凍乾以產生穩定的凍乾病毒產品之活病毒配製物或組成物，該凍乾病毒產品允許在低溫和環境溫度下儲存。本文還提供了凍乾的產品或粉末。不受任何特定理論的束縛，當前揭露的配製物、產品和粉末藉由提供靈活性同時減輕病毒穩定性和/或感染性的損失而減少了在病毒的製造、運輸、儲存和使用期間的約束。本揭露的組成物還預防病毒的失活或使病毒的失活最小化。在不損失效力（或活性）的情況下，處理、儲存和運輸藥物產品或中間產品的能力具有巨大的價值，因為其允許在製造過程設計、標籤、包裝操作、最終產品的供應鏈分配、以及醫療保健提供者的處理中的靈活性。

因此，本揭露提供了液體組成物，該液體組成物包含活的減毒病毒、人血清白蛋白（例如重組人血清白蛋白「rHSA」）、除乳糖以外的糖、糖醇、磷酸鹽的來源、和氯化物的來源。在示例性方面，液體組成物包含大於約5 mg/mL以及小於約25 mg/mL rHSA，視需要，大於約10 mg/mL以及小於約25 mg/mL rHSA。在多個方面，液體組成物包含大於約15 mg/mL以及小於約25 mg/mL rHSA，視需要，其中該液體組成物包含約17.5 mg/mL至約22.5 mg/mL rHSA，視需要，約20 mg/mL ± 2 mg/mL rHSA。在多個方面，液體組成物的糖係蔗糖，並且視需要，液體組成物包含小於約15 mg/mL蔗糖、小於約10 mg/mL蔗糖或小於約5 mg/mL蔗糖。在多個方面，液體組成物包含小於約3.8 mg/mL ± 0.38 mg/mL蔗糖。在不同情況下，液體組成物的糖醇為山梨醇，並且視需要，液體組成物包含大於約10 mg/mL mg山梨醇以及小於約50 mg/mL山梨醇，視需要，大於約20 mg/mL mg山梨醇以及小於約40 mg/mL山梨醇。在一些方面，液體組成物包含小於約45 mg/mL山梨醇、小於約40 mg/mL山梨醇、小於約 35mg/mL山梨醇、或約26 mg至約32 mg/mL山梨醇。在一些方面，存在於液體組成物中的磷酸鹽的來源係磷酸鉀。在不同情況下，液體組成物包含大於約5 mg/mL以及小於約45 mg/mL磷酸鉀，視需要，小於約40 mg/mL磷酸鉀（例如，小於約30 mg/mL磷酸鉀、小於約20 mg/mL磷酸鉀）、或約13.5 mg至約16 mg/mL磷酸鉀。在一些情況下，液體組成物的氯化物的來源係氯化鈉，並且視需要，以大於約1 mg/mL以及小於約20 mg/mL氯化鈉的量存在。在一些方面，液體組成物包含小於約15 mg/mL氯化鈉或小於約10 mg/mL氯化鈉，例如，約3 mg至約7 mg/mL氯化鈉。在示例性情況下，組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。在多個方面，液體組成物基本上由以下組成或由以下組成：活的減毒病毒、rHSA、蔗糖、山梨醇、磷酸鉀和氯化鈉。在一些方面，該液體組成物具有約7.2至約7.6的pH，視需要，約7.4的pH。在多個方面，液體組成物的滲透壓濃度小於約700 mOsm/kg，視需要，小於約650 mOsm/kg（例如，滲透壓小於約600 mOsm/kg，視需要，約525 mOsm/kg至約575 mOsm/kg）。在某些方面，液體組成物包含不超過約0.01 mM的乳糖、明膠、抗生素和游離胺基酸中的任一種，視需要，不超過約0.001 mM的乳糖、明膠、抗生素和游離胺基酸中的任一種。

在一些實施方式中，活的減毒病毒係單純皰疹病毒（HSV），視需要，係單純皰疹病毒1（HSV-1）毒株。在不同情況下，HSV-1毒株選自由以下組成之群組：毒株JS1、毒株17+、毒株F、和毒株KOS。在一個實施方式中，HSV-1係拉他莫金（talimogene laherparepvec）。在不同情況下，當將液體組成物凍乾並用水重構以產生重構產品時，重構產品中的活的減毒病毒的效力係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約30%，視需要，係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約35%。在一些方面，液體組成物凍乾然後用水重構以產生重構產品時，重構產品中的活的減毒病毒的效力係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約30%，視需要，係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約40%。

本文還提供了液體組成物，該液體組成物包含活的減毒HSV-1（例如拉他莫金）、約18 mg/mL至約22 mg/mL人血清白蛋白（例如rHSA）、約3.4 mg/mL至約4.2 mg/mL蔗糖、約26 mg/mL至約31.9 mg/mL山梨醇、約13 mg/mL至約16 mg/mL磷酸鉀和約5.1 mg/mL至約6.3 mg/mL氯化鈉。進一步提供了液體組成物，該液體組成物包含活的減毒HSV-1（例如拉他莫金）、約1.0%至約3.0%（w/v）人血清白蛋白（例如rHSA）、約0.25%至約0.45（w/v）蔗糖、約2.0%至約4.0%（w/v）山梨醇、約60 mM至約100 mM磷酸鉀、和約80至約110 mM氯化鈉。

本文進一步提供了藉由凍乾或冷凍乾燥當前揭露的液體組成物的任一種而產生的產品。

本揭露提供了藉由以下方法產生的粉末，該方法包括從包含活的減毒病毒（例如HSV-1、視需要，拉他莫金）、重組人血清白蛋白（rHSA）、除乳糖以外的糖、糖醇、磷酸鹽的來源、氯化物的來源的組成物中除去水（例如，經由凍乾），其中該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素和游離胺基酸。視需要，除去水（例如，經由凍乾）的組成物包含活的減毒HSV-1（例如拉他莫金）、約18 mg/mL至約22 mg/mL人血清白蛋白（例如rHSA）、約3.4 mg/mL至約4.2 mg/mL蔗糖、約26 mg/mL至約31.9 mg/mL山梨醇、約13 mg/mL至約16 mg/mL磷酸鉀、和約5.1 mg/mL至約6.3 mg/mL氯化鈉。進一步提供了藉由包括從組成物中除去水（例如，經由凍乾）的方法產生的粉末，該組成物包含活的減毒HSV-1（例如拉他莫金）、約1.0%至約3.0%（w/v）人血清白蛋白（例如rHSA）、約0.25%至約0.45（w/v）的蔗糖、約2.0%至約4.0%（w/v）山梨醇、約60 mM至約100 mM磷酸鉀、和約80至約110 mM氯化鈉。

另外，提供了藉由包括從組成物中除去水的方法產生的粉末，該組成物包含活的減毒HSV-1、約18 mg/mL至約22 mg/mL重組人血清白蛋白（rHSA）、約3.4 mg/mL至約4.2 mg/mL蔗糖、約26 mg/mL至約31.9 mg/mL山梨醇、約13 mg/mL至約16 mg/mL磷酸鉀、和約5.1 mg/mL至約6.3 mg/mL氯化鈉。在一些方面，在除去水之前，將組成物冷凍以獲得包含冰的組成物，並且視需要，該方法進一步包括將組成物置於真空下以除去水（例如，經由凍乾）。在某些方面，該粉末在溫度低於或約為8°C下穩定儲存至少或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月。

本文提供了液體組成物，該液體組成物包含水和當前揭露的產品或當前揭露的乾燥的粉末。在一些方面，液體組成物包含約0.95 mL至約1.5 mL水，視需要，約1.0 mL水。在某些方面，液體組成物包含至少或約1 x 10⁶ PFU的活的減毒病毒（例如拉他莫金）/mL液體組成物和/或具有約7.4的pH。在其他方面，液體組成物包含至少或約1 x 10⁸ PFU的活的減毒病毒（例如拉他莫金）/mL液體組成物和/或具有約7.4的pH。

此外，本揭露提供了包含活的減毒病毒的粉末。在示例性實施方式中，粉末另外包含人血清白蛋白（例如rHSA）、除乳糖以外的糖、糖醇、磷酸鹽的來源、氯化物的來源，其中該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。視需要，粉末包含約24.66 wt%至約30.14 wt% rHSA。在示例性情況下，糖係蔗糖，並且視需要，以約2.5 wt%至約7.5 wt%、視需要約4.68 wt%至約5.72 wt%的量存在。在某些情況下，存在於粉末中的糖醇係山梨醇，並且視需要，以約25 wt%至約33 wt%、或約35.76 wt%至約43.7 wt%的量存在。在某些方面，磷酸鹽的來源係磷酸鉀，並且粉末包含約15 wt%至約25 wt%磷酸鉀，視需要，約17.87 wt%至約21.85 wt%。在多個方面，氯化物的來源係氯化鈉，並且粉末包含約5 wt%至約10 wt%氯化鈉，視需要，約7.0 wt%至約8.6 wt%氯化鈉。在示例性情況下，添加約1 mL水後，該粉末製成液體組成物，該液體組成物包含約80 mM至約85 mM磷酸鉀、約95 mM至約100 mM氯化鈉、約2.8%（w/v）至約3.0%（w/v）山梨醇、約0.36%（w/v）至約0.40%（w/v）蔗糖、和約1.98%（w/v）至約2.02%（w/v）重組HSA。

本揭露還提供了製備用於向人受試者施用的溶瘤病毒之方法，該方法包括向當前揭露的粉末中的任一種中添加水，視需要，其中向該粉末中添加約1.0 mL至約1.2 mL水。

進一步提供了在人受試者中治療黑素瘤之方法，該方法包括向當前揭露的粉末中任一種中添加水，視需要，其中向該粉末中添加約1.0 mL至約1.2 mL水，以獲得液體組成物並將液體組成物注射入人受試者。

本文提供了適合於凍乾或冷凍乾燥的活病毒組成物。另外提供了相關的粉末和冷凍乾燥的或凍乾的產品。此類粉末和產品係有利於穩定儲存的（由延長的保質期標記，並且特徵在於凍乾或冷凍乾燥後活病毒的效力損失最小或降低）。同樣，在多個方面，當前揭露的液體組成物足以穩定以凍乾狀態和液態的活的減毒病毒。

本揭露提供了液體組成物，該液體組成物包含活的減毒病毒、人血清白蛋白（例如，rHSA）、除乳糖以外的糖、糖醇、磷酸鹽的來源、和氯化物的來源。在多個方面，該液體組成物包含活的減毒病毒、HSA（例如，rHSA）、蔗糖、山梨醇、磷酸鉀、和氯化鈉。在示例性方面，液體組成物包含約18 mg/mL至約22 mg/mL HSA（例如，rHSA）、或約1.0%至約3.0%（w/v）HSA（例如，rHSA）。在不同情況下，液體組成物包含約3.4 mg/mL至約4.2 mg/mL蔗糖、或約0.25%至約0.45%（w/v）蔗糖。在一些方面，液體組成物包含約26 mg/mL至約31.9 mg/mL山梨醇、或約2.0%至約4.0%（w/v）山梨醇。在多個方面，液體組成物包含約13 mg/mL至約16 mg/mL磷酸鉀、或約60 mM至約100 mM磷酸鉀。在某些方面中，液體組成物包含約5.1 mg/mL至約6.3 mg/mL氯化鈉、或約80至約110 mM氯化鈉。因此，本文還提供了液體組成物，該液體組成物包含活的減毒HSV-1（例如拉他莫金）、約18 mg/mL至約22 mg/mL HSA（例如rHSA）、約3.4 mg/mL至約4.2 mg/mL蔗糖、約26 mg/mL至約31.9 mg/mL山梨醇、約13 mg/mL至約16 mg/mL磷酸鉀、和約5.1 mg/mL至約6.3 mg/mL氯化鈉。進一步提供了液體組成物，該液體組成物包含活的減毒HSV-1（例如拉他莫金）、約1.0%至約3.0%（w/v）HSA（例如rHSA）、約0.25%至約0.45（w/v）蔗糖、約2.0%至約4.0%（w/v）山梨醇、約60 mM至約100 mM磷酸鉀、和約80至約110 mM氯化鈉。如本文所用，術語「約」係指與指示值5%的變化，或者在值的範圍內，意指與該範圍的下限和上限5%的變化。

在示例性實施方式中，本揭露的液體組成物係滅菌的（例如過濾滅菌的和/或基本不含細菌和內毒素）的水溶液。

人血清白蛋白（ HSA ）

在多個方面，液體組成物包含白蛋白，視需要，人血清白蛋白（HSA）。HSA係人血漿中發現的最豐富的蛋白質。在多個方面，液體組成物包含重組HSA。如本文所用，在「HSA」的上下文中，術語「重組」意指HSA係基因工程產品或藉由重組生產方法製得。重組HSA不是從天然產品（例如人血漿）衍生（分離或純化）的。相反，基因工程細胞可以用於產生HSA。在不同情況下，該液體組成物包含rHSA，並且視需要，使用基於酵母的表現產生rHSA。在多個方面，當前揭露的液體組成物包含小於約50 mg/mL、小於約45 mg/mL、小於約40 mg/mL、小於約 35 mg/mL或小於約30 mg/mL HSA（例如，rHSA）。在多個方面，當前揭露的液體組成物包含大於約1 mg/mL、大於約2 mg/mL、大於約3 mg/mL、大於約4 mg/mL、大於約5 mg/mL、大於約10 mg/mL、大於約15 mg/mL、或大於約20 mg/mL HSA（例如，rHSA）。視需要，液體組成物包含大於約5 mg/mL以及小於約25 mg/mL HSA（例如，rHSA），視需要，大於約10 mg/mL以及小於約25 mg/mL HSA（例如，rHSA）或大於約15 mg/mL以及小於約25 mg/mL HSA（例如，rHSA）。在不同情況下，液體組成物包含約17.5 mg/mL至約22.5 mg/mL HSA（例如，rHSA），例如，約20 mg/mL ± 2 mg/mL HSA（例如，rHSA），視需要，約20 mg/mL ± 1 mg/mL HSA（例如，rHSA）。在一個實施方式中，液體組成物包含約20 mg/mL HSA（例如，rHSA）。在多個方面，當前揭露的液體組成物包含小於約20%（w/v）（例如，小於約15%（w/v）、小於約10%（w/v）小於約5%（w/v））HSA（例如，rHSA）。在一些方面，當前揭露的液體組成物包含小於3%（w/v）以及超過0.1%（w/v）、視需要約1.8%（w/v）至約2.2%（w/v）HSA（例如，rHSA）。在一些方面，當前揭露的液體組成物包含約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、或2.5%（w/v）HSA（例如，rHSA）。在一些方面，當前揭露的液體組成物包含約2.0%（w/v）HSA（例如，rHSA）。在一些方面，液體組成物包含小於約5 mM HSA（例如，rHSA）以及大於約0.001 mM HSA（例如，rHSA），例如，約0.001 mM至約4 mM、約0.001 mM至約3 mM、約0.001 mM至約2 mM、約0.001 mM至約1 mM、或約0.001至約0.5 mM。在多個方面，HSA（例如，rHSA）在液體組成物中以約0.01 mM至約1 mM或約0.05 mM至約0.5 mM的量存在，視需要，約0.3 mM HSA（例如，rHSA）。

糖

在多個方面，液體組成物包含糖並且該糖係除乳糖以外的糖。有利的是，本揭露的組成物及其相關產品適合於對患有乳糖過敏或乳糖不耐受的人施用。在一些情況下，糖係右旋糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、棉子糖、海藻糖、或蔗糖。在多個方面，液體組成物的糖係蔗糖。在多個方面，糖（例如，蔗糖）在液體組成物中以小於約50 mg/mL、小於約45 mg/mL、小於約40 mg/mL、小於約35 mg/mL、小於約30 mg/mL、小於約25 mg/mL、或小於約20 mg/mL的量存在。在一些方面，液體組成物包含小於約15 mg/mL糖（例如，蔗糖）、小於約10 mg/mL糖（例如，蔗糖）或小於約5 mg/mL糖（例如，蔗糖）。在多個方面，當前揭露的液體組成物包含大於約1 mg/mL、大於約2 mg/mL、大於約3 mg/mL糖（例如，蔗糖），視需要，液體組成物包含約2 mg/mL至約5 mg/mL糖。在一些方面，液體組成物包含小於約3.8 mg/mL ± 0.38 mg/mL蔗糖。在其他方面，液體組成物包含約3.8 mg/mL蔗糖。在多個方面，當前揭露的液體組成物包含小於約10%（w/v）（例如，小於約9%（w/v）、小於約8%（w/v）、小於約7%（w/v）、小於約6%（w/v）、小於約5%（w/v）、小於約4%（w/v）、小於約3%（w/v）、小於約2%（w/v）、小於約1%（w/v））的糖（例如，蔗糖）。在一些方面，當前揭露的液體組成物包含小於0.5%（w/v）以及超過0.1%（w/v）的糖，視需要，約0.30%（w/v）至約0.42%（w/v）的糖（例如，蔗糖）。在一些方面，當前揭露的液體組成物包含約0.38%（w/v）的糖（例如，蔗糖）。在一些方面，液體組成物包含小於約50 mM的糖（例如，蔗糖）以及大於約1 mM的糖（例如，蔗糖），例如，約1 mM至約40 mM、約1 mM至約30 mM、約1 mM至約20 mM、約1 mM至約15 mM、約5 mM至約40 mM、約5 mM至約30 mM、約5 mM至約20 mM、約5 mM至約15 mM。在多個方面，糖（例如，蔗糖）在液體組成物中以約5 mM至約15 mM或約10 mM至約15 mM，視需要，約11 mM 糖（例如，蔗糖）的量存在。

糖醇

在多個方面，液體組成物包含糖醇，例如，甘露醇、山梨醇、木糖醇、麥芽糖醇、麥芽糖醇糖漿、乳糖醇、赤蘚糖醇、異麥芽酮糖醇、和氫化的澱粉水解物。在不同情況下，液體組成物的糖醇係山梨醇。在某些方面，液體組成物包含大於約5 mg/mL mg糖醇（例如，山梨醇）以及小於約50 mg/mL糖醇（例如，山梨醇）。在某些方面，液體組成物包含大於約15 mg/mL、大於約20 mg/mL、或大於約25 mg/mL糖醇（例如，山梨醇）。在一些方面，液體組成物包含小於約45 mg/mL糖醇（例如，山梨醇）、小於約40 mg/mL糖醇（例如，山梨醇）、或小於約35 mg/mL糖醇（例如，山梨醇）。在不同情況下，液體組成物包含約26 mg/mL至約32 mg/mL糖醇（例如，山梨醇）。在某些情況下，液體組成物包含約29 mg/mL糖醇（例如，山梨醇）。在多個方面，當前揭露的液體組成物包含小於約10%（w/v）（例如，小於約9%（w/v）、小於約8%（w/v）、小於約7%（w/v）、小於約6%（w/v）、小於約5%（w/v）、小於約4%（w/v）、或小於約3%（w/v）糖醇（例如，山梨醇）。在一些方面，當前揭露的液體組成物包含小於3.5%（w/v）以及超過2.5%（w/v），視需要，約2.6%（w/v）至約3.2%（w/v）糖醇（例如，山梨醇）。在一些方面，當前揭露的液體組成物包含約2.9%（w/v）糖醇（例如，山梨醇）。在一些方面，液體組成物包含小於約500 mM糖醇（例如，山梨醇）以及大於約50 mM糖醇（例如，山梨醇），例如，約50 mM至約400 mM、約50 mM至約300 mM、約50 mM至約200 mM、約75 mM至約200 mM、約100 mM至約200 mM、約125 mM至約175 mM、約150 mM至約170 mM。在多個方面，糖醇（例如，山梨醇）在液體組成物中以約140 mM至約175 mM或約150 mM至約167 mM的量存在，視需要，約159 mM的糖醇（例如，山梨醇）。

磷酸鹽來源

在多個方面，本揭露的液體組成物包含磷酸鹽的來源。該來源可以是以下之一：磷酸鋁、骨磷（Bone Phosphate）、磷酸鈣（Calcium phosphate）、正磷酸鈣（Calcium Orthophosphate）、無水磷酸鈣二鹽基（Calcium Phosphate Dibasic Anhydrous）、磷酸鈣骨灰（Calcium Phosphate-Bone Ash）、磷酸二鈣二鹽基二水合物（Calcium Phosphate Dibasic Dihydrate）、無水二鹽基磷酸鈣（Calcium Phosphate Dibasique Anhydre）、二鹽基磷酸鈣二水合物（Calcium Phosphate Dibasique Dihydrate）、磷酸鈣三鹽基（Calcium Phosphate Tribasic）、三鹽基磷酸鈣（Calcium Phosphate Tribasique）、二鹽基磷酸鈣二水合物（Dibasic Calcium Phosphate Dihydrate）、二-磷酸鈣（Di-Calcium Phosphate）、磷酸氫鈣（Dicalcium Phosphate）、磷酸二鈣（Dicalcium Phosphates）、中性磷酸鈣、鈣的正磷酸鹽、鋁的磷酸鹽、鈣的磷酸鹽（Phosphate de Calcium）、鎂的磷酸鹽（Phosphate de Magnésium）、鈣的中性磷酸鹽（Phosphate Neutre de Calcium）、骨磷酸鹽（Phosphate d'Os）、磷酸三鈣（Phosphate Tricalcium）、沈澱磷酸鈣（Precipitated Calcium Phosphate）、鈣的磷酸鹽的沈澱（Précipitation du Phosphate de Calcium）、磷酸鈣沈澱物（Précipité de Phosphate de Calcium）、磷酸三鈣（Tertiary Calcium Phosphate）、三鈣磷酸鹽（Tricalcium Phosphate）、磷鈣礦（Whitlockite）、磷酸鎂（Magnesium Phosphate）、Merisier、磷酸鉀（Potassium phosphate）、磷酸氫鉀二鹽（Dibasic Potassium Phosphate）、氫鉀正磷酸鹽（Dipotassium Hydrogen Orthophosphate）、單磷酸氫二鉀（Dipotassium Monophosphate）、磷酸氫二鉀（Dipotassium Phosphate）、單鹼磷酸氫鉀（Monobasic Potassium Phosphate）、過磷酸氫鉀（Potassium Acid Phosphate）、磷酸二氫鉀（Potassium Biphosphate）、正磷酸二氫鉀（Potassium Dihydrogen Orthophosphate）、磷酸氫鉀（Potassium Hydrogen Phosphate）、磷酸的二鉀（Phosphate de Dipotassium）、磷酸氫鉀（Phosphate d'Hydrogène de Potassium）、磷酸的鉀鹽（Phosphate de Potassium）、磷酸的鉀鹽二鹽基（Phosphate de Potassium Dibasique）、磷酸的鉀鹽單鹽基（Phosphate de Potassium Monobasique）、磷酸鈉（Sodium phosphate）、無水磷酸鈉（Anhydrous Sodium Phosphate）、磷酸氫鈉（Dibasic Sodium Phosphate）、磷酸氫二鈉（Disodium Hydrogen Orthophosphate）、十二水合磷酸氫二鈉（Disodium Hydrogen Orthophosphate Dodecahydrate）、磷酸氫二鈉（Disodium Hydrogen Phosphate）、磷酸二鈉（Disodium Phosphate）、Phosphate of Soda、Sales de Fosfato、Sels de Phosphate、正磷酸鈉（ Sodium Orthophosphate）、Orthophosphate Disodique d'Hydrogène、Phosphate Disodique d'Hydrogène、Orthophosphate de Sodium、Phosphate de Sodium無水、Phosphate de Sodium二鹽基、以及磷（Phosphorus）。在一些方面，存在於液體組成物中的磷酸鹽的來源係磷酸鈉或磷酸鉀。在一些特定的方面，存在於液體組成物中的磷酸鹽的來源係磷酸鉀。在不同情況下，液體組成物包含大於約5 mg/mL以及小於約45 mg/mL磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀），視需要，小於約40 mg/mL磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀）（例如，小於約30 mg/mL磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀）、小於約20 mg/mL磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀）、或約13.5 mg至約16 mg/mL磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀）。在一個特定的實施方式中，液體組成物包含約14.5 mg/mL的磷酸鹽（例如，磷酸鉀）。在不同情況下，液體組成物包含大於約25 mM以及小於約500 mM磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀），例如，約25 mM至約400 mM、約25 mM至約300 mM、約25 mM至約200 mM、約25 mM至約100 mM、約50 mM至約150 mM、約50 mM至約100 mM。視需要，小於約100 mM磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀），（例如，小於約90 mM磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀）、大於約50 mM以及小於約90 mM、約60 mM至約90 mM、約70 mM至約90 mM、約80 mM至約85 mM磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀）、或約75 mM至約92 mM磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀）。在一個特定的實施方式中，液體組成物包含約83 mM的磷酸鹽的來源（例如磷酸鉀）。

氯化物來源

在多個方面，本揭露的液體組成物包含氯化物的來源（例如，氯化鈉或氯化鉀）。在一些情況下，氯化物的來源係氯化鈉。在示例性方面，氯化物的來源（例如，NaCl）以大於約1 mg/mL以及小於約20 mg/mL量的氯化物的來源（例如，NaCl）的量存在（例如，約1 mg/mL至約15 mg/mL、約1 mg/mL至約10 mg/mL、約1 mg/mL至約7.5 mg/mL、約3 mg/mL至約15 mg/mL、約3 mg/mL至約10 mg/mL、約3 mg/mL至約7.5 mg/mL。在一些方面，液體組成物包含小於約15 mg/mL氯化物的來源（例如，NaCl）或小於約10 mg/mL氯化物的來源（例如，NaCl），例如，約3 mg至約7 mg/mL氯化物的來源（例如，NaCl），視需要，約5.7 mg/mL。

在不同情況下，液體組成物包含大於約25 mM以及小於約500 mM氯化物的來源（例如，NaCl），例如，約25 mM至約400 mM、約25 mM至約300 mM、約25 mM至約200 mM、約25 mM至約150 mM、約50 mM至約150 mM、約75 mM至約125 mM。視需要，小於約150 mM氯化物的來源（例如，NaCl），（例如，小於約125 mM氯化物的來源（例如，NaCl）、大於約50 mM以及小於約125 mM、約60 mM至約120 mM、約70 mM至約110 mM、約80 mM至約110 mM氯化物的來源（例如，NaCl）、或約88 mM至約108 mM氯化物的來源（例如，NaCl），視需要，約98 mM。

不含乳糖 - 、明膠 - 、抗生素 - 、以及游離胺基酸

在示例性方面，液體組成物基本上不含添加的乳糖。在示例性方面，液體組成物基本上不含添加的明膠。在示例性方面，液體組成物基本上不含添加的抗生素（例如，新鏈絲菌素、康黴素、建它黴素、胺苄青黴素、羧苄青黴素、頭孢噻肟、膦胺黴素、放線菌素、多黏菌素、盤尼西林、鏈黴素）。在示例性方面，液體組成物基本上不含添加的游離胺基酸。例如，液體組成物不用任何乳糖、任何明膠、任何抗生素、或任何游離胺基酸製成。在某些方面，當製備當前揭露的液體組成物或粉末或冷凍乾產物時，不添加該等組分（乳糖、明膠、抗生素和游離胺基酸中的任何一個）。

如本文所用，術語「游離胺基酸」係指添加的未結合或未連接的胺基酸、或不是肽鍵合至另一胺基酸的胺基酸。在不同情況下，液體組成物基本上不含任何「游離胺基酸」，意指游離胺基酸不作為組分添加至液體組成物中。「游離胺基酸」不是指由於例如HSA（例如rHSA）的降解而存在於組成物中的任何未結合或未連接的胺基酸。在示例性方面，液體組成物基本上不含Glu或His。

如本文所用，「基本上游離」意指小於0.01 wt%或小於0.01%（w/v）或小於100 ppm。在某些方面，液體組成物包含不超過約0.01 mM的乳糖、明膠、抗生素和游離胺基酸中的任一種，視需要，不超過約0.001 mM的乳糖、明膠、抗生素和游離胺基酸中的任一種。

pH 和滲透壓

在多個方面，液體組成物（例如，重構凍乾組成物）具有約7.0至約7.8、視需要約7.2至約7.6（例如，7.2、7.3、7.4、7.5、7.6）的pH。在不同情況下，液體組成物的pH為約7.4 ± 0.05。

在多個方面，液體組成物的滲透壓濃度小於約700 mOsm/kg，視需要，小於約650 mOsm/kg（例如，滲透壓小於約600 mOsm/kg，視需要，約525 mOsm/kg至約575 mOsm/kg）。在示例性方面，液體組成物的滲透壓係約540 mOsm/kg至約560 mOsm/kg、或約550 mOsm/kg。

傳統冷凍配製物可以具有在700-900 mOsm/kg範圍內的滲透壓。然而，本發明的凍乾配製物表現出所需的特性（例如，凍乾後改善的效力和在適合於供應鏈的溫度下增加的保質期），其滲透壓（例如，在重構後）低於此類傳統的冷凍配製物的滲透壓。重構的凍乾配製物的較低滲透壓預期不會改變凍乾藥物產品的局部耐受性（在施用後）或局部生物學效應，並且可以改善關於注射後的局部耐受性，例如不適感、刺激感、熱感或疼痛感。

活病毒

皰疹病毒顆粒係由包裹在二十面體蛋白衣殼中的雙鏈DNA基因組組成的複雜的結構，該衣殼被包圍在細胞衍生的膜雙分子層中。夾在衣殼和脂質包膜之間的是一層病毒蛋白，稱為「被膜」[Roizman B (1982) The Family Herpesviridae: General Description, taxonomy and classification [皰疹病毒科：一般描述、分類法和分類]. The Viruses[病毒], 卷 A, Herpesviruses [皰疹病毒]. 紐約：出版社（New York: Plenum Press）, Mettenleiter TC (2002) Herpesvirus assembly and egress [皰疹病毒的組裝和釋放]. Journal of virology [病毒學雜誌] 76: 1537-1547.]。膜包膜的存在係許多不同類型的動物病毒的有區別的特徵。在配製穩定活病毒的組成物中，脂質包膜似乎賦予病毒顆粒顯著的物理不穩定性，使得難以穩定這類病毒，尤其是與非包膜的哺乳動物病毒（如腺病毒、呼腸孤病毒和脊髓灰質炎病毒）相比時。例如，在2°C-8°C下儲存，已顯示5型腺病毒穩定2年、並且脊髓灰質炎病毒和呼腸孤病毒穩定至少1年[Sokhey等人, (1988). Vaccine [疫苗] 6: 12-13; Berard和Coombs (2009). Current protocols in microbiology: 15C-1 [目前微生物方案：15C-1]; 以及Evans RK,等人 (2004) J Pharm Sci [藥物科學雜誌] 93: 2458-2475]。在相似溫度下，痘病毒似乎係唯一表現出相似程度的儲存穩定性的包膜動物病毒。然而，痘病毒與其他包膜動物病毒在結構上不同，因為其含有雙層包膜和其他結構差異[Condit 等人, (2006). Advances in virus research [病毒研究進展] 66: 31-124, Moss B (1987) The molecular biology of poxviruses [痘病毒的分子生物學]. The Molecular Basis of Viral Replication [病毒複製的分子基礎]. 斯普林格出版社（Springer）. 第499-516頁]。實際上，痘病毒非常地穩定，如在存檔的組織的長期儲存觀察中、環境樣本中、以及在2°C-8°C下將乾燥樣本在實驗室中儲存經60年所證明的那樣 [McCollum等人, (2014) Poxvirus viability and signatures in historical relics [痘病毒在歷史遺跡中的生存能力和的特徵]. Emerging infectious diseases [新興傳染病] 20: 177；FDA found more than smallpox vials in storage room (n.d.)[FDA在儲存室發現了更多天花病毒]. 獲得自：https://www.washingtonpost.com/national/health-science/fda-found-more-than-smallpox-vials-in-storage-room/2014/07/16/850d4b12-0d22-11e4-8341-b8072b1e7348_story.html. 日期2015年11月7日；CDC Media Statement on Newly Discovered Smallpox Specimens [CDC媒體關於新發現的天花標本的聲明] （n.d.）. 獲得自：http://www.cdc.gov/media/releases/2014/s0708-NIH.html. 日期2015年11月7日；Rheinbaben等人, (2007) Environmental resistance, disinfection, and sterilization of poxviruses [痘病毒的環境耐受性、消毒和滅菌]. Poxviruses [痘病毒]. 斯普林格出版社（Springer）. 第397-405頁；以及Essbauer等人, (2007) Long-Lasting Stability of Vaccinia Virus （Orthopoxvirus） in Food and Environmental Samples[食品和環境樣本中的痘苗病毒（正痘病毒）的長期穩定性]. Zoonoses and public health [人畜共患病與公共衛生] 54: 118-124]。

溶瘤病毒已在多種腫瘤類型中顯示出抗癌活性。溶瘤免疫療法係治療方式，其使用選擇性地感染和破壞癌組織而不會對正常組織造成傷害的具有複製能力的溶瘤病毒。正在進行的研究正在使用各種工程病毒，不限於單純皰疹病毒（HSV）、痘苗、和呼腸孤病毒。

在示例性方面，溶瘤病毒衍生自單純皰疹病毒1（HSV-1）或單純皰疹2（HSV-2）毒株，或衍生自其衍生物（較佳的是HSV-1）。衍生物包括含有來自HSV-1和HSV-2毒株的DNA的類型間重組體。此類類型間的重組在本領域中已有描述，例如在Thompson等人, (1998) Virus Genes [病毒基因]1(3)；275286,以及Meignier等人, (1998) J. Infect. Dis [傳染病學雜誌].159; 602614。

單純皰疹病毒株可以源自臨床分離株。從感染的個體（如患有復發性唇皰疹的個體）分離此類毒株。可以針對所需的能力或特徵篩選臨床分離毒株，該所需的能力或特徵例如為與標準實驗室毒株相比在體外和/或體內的腫瘤和/或其他細胞中增強的複製，如美國專利案號7,063,835和7,223,593中所描述，各自藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該單純皰疹病毒係來自復發性唇皰疹的臨床分離株。另外，單純皰疹病毒1病毒株包括但不限於毒株JS1、毒株17+、毒株F和毒株KOS、和毒株Patton。

可以被修飾的HSV基因的實例包括編碼如ICP34.5（γ34.5）的蛋白質的毒力基因。ICP34.5在HSV感染期間充當毒力因子、限制了在非分裂細胞中的複製、並使得病毒呈非致病性。另一個可以被修飾的HSV基因係編碼ICP47的基因。ICP47下調受感染宿主細胞表面的主要組織相容性複合物（MHC）I類表現，以及與抗原呈遞（TAP）相關的轉運蛋白的I類MHC結合。此類作用阻斷抗原性肽在內質網中的運輸和MHC I類分子的負載。可以修飾的另一個HSV基因係參與非分裂細胞中而不是分裂細胞中的核苷酸代謝和病毒DNA合成的ICP6，即核糖核苷酸還原酶的大亞基。胸苷激酶（負責將阿昔洛韋磷酸化為阿昔洛韋一磷酸）、病毒粒子反式激活蛋白vmw65、糖蛋白H、vhs、ICP43、以及立即早期基因（編碼ICP4、ICP27、ICP22和/或ICP0）也可以進行修飾（作為以上提及基因的補充或替代）。

皰疹病毒株以及如何製備此類毒株也描述於美國專利案號US 5,824,318；6,764,675；6,770,274；7,063,835；7,223,593；7,749,745；7,744,899；8,273,568；8,420,071；和8,470,577；WIPO公開號WO 199600007；WO 199639841；WO 199907394；WO 200054795；WO 2006002394；和WO 201306795；中國專利案號CN 128303、CN 10230334和CN 10230335；Varghese和Rabkin, (2002) Cancer Gene Therapy [癌症基因療法] 9:967-97以及Cassady和Ness Parker, (2010) The Open Virology Journal [開放病毒學雜誌] 4:103-108中，將其藉由引用以其全文併入。

在一個實施方式中，溶瘤病毒係拉他莫金（IMLYGIC®），其來源於臨床毒株（HSV-1毒株JS1），保藏在歐洲細胞培養物保藏中心（ECAAC），保藏號為01010209。在拉他莫金中，編碼ICP34.5和ICP47的HSV-1病毒基因已在功能上缺失。ICP47的功能性缺失導致US11的較早表現，US11係促進腫瘤細胞中病毒生長而不降低腫瘤選擇性的基因。人GM-CSF的編碼序列已被插入到病毒基因組中以前的ICP34.5位點（參見Liu等人, Gene Ther [基因治療] 10: 292-303, 2003）。

溶瘤病毒的其他實例包括RP1（HSV-1/ICP34.5^- /ICP47^- /GM-CSF/GALV-GP R(-)；RP-2（HSV-1/ICP34.5^- /ICP47^- /GM-CSF/GALV-GP R(-)/抗CTLA-4結合物；和RP3（HSV-1/ICP34.5^- /ICP47^- /GM-CSF/GALV-GP R(-)/抗CTLA-4結合物/共刺激配位基（例如，CD40L、4-1BBL、GITRL、OX40L、ICOSL））。在此類溶瘤病毒中，GALV（長臂猿白血病病毒）已被R肽的特定缺失修飾，得到GALV-GP R(-)。此類溶瘤病毒在WO 2017118864、WO 2017118865、WO 2017118866、WO 2017118867和WO 2018127713A1中進行了討論，各自藉由引用以其全文併入。

溶瘤病毒的其他實例包括NSC-733972，HF-10，BV-2711，JX-594，Myb34.5，AE-618，Brainwel™，和Heapwel™，Cavatak®（柯薩基病毒（coxsackievirus）、CVA21），HF-10，Seprehvir®，Reolysin®，enadenotucirev，ONCR-177，以及在USP 10,105,404、WO 2018006005、WO 2018026872A1、和WO 2017181420中描述的那些，各自藉由引用以其全文併入。

另外的溶瘤病毒實例包括：

[A] G207係源自野生型HSV-1毒株F的溶瘤HSV-1，其在HSV神經毒性的主要決定簇、ICP 34.5基因二者拷貝中具有缺失，並且在UL39中失活插入編碼感染的細胞蛋白6（ICP6）的大腸桿菌lacZ基因，參見Mineta等人 (1995) Nat Med.[自然醫學] 1: 938-943。

[B] OrienX010係單純皰疹病毒，其具有γ34.5和ICP47基因二者拷貝的缺失以及ICP6基因的中斷和人GM-CSF基因的插入，參見Liu等人, (2013) World Journal of Gastroenterology [世界胃腸病學雜誌] 19(31):5138-5143。

[C] NV1020係單純皰疹病毒，其中長（L）和短（S）區的接合區（包括一個拷貝的ICP34.5、UL24和UL56.34,35）缺失。該缺失區被HSV-2 US DNA的片段（US2、US3（PK）、gJ和gG）替代，參見Todo等人 (2001) Proc Natl Acad Sci USA.[美國國家科學院院刊] 98:6396-6401。

[D] M032係單純皰疹病毒，其具有ICP34.5基因二者拷貝的缺失和白細胞介素12的插入，參見Cassady和Ness Parker, (2010) The Open Virology Journal [開放病毒學雜誌] 4:103-108。

[E] ImmunoVEX HSV2係單純皰疹病毒（HSV-2），其具有編碼vhs、ICP47、ICP34.5、UL43和US5的基因的功能性缺失。

[F] OncoVEX^GALV/CD 也源自HSV-1毒株JS1，其中編碼ICP34.5和ICP47的基因已在功能上缺失並且編碼胞嘧啶脫胺酶和長臂猿白血病病毒融膜糖蛋白的基因插入病毒基因組中以替代ICP34.5基因。

本發明的單純皰疹病毒還可以包含一種或多種異源基因。異源基因係指引入病毒的基因組中的基因（其中該基因通常不在病毒的基因組中發現）、或者係在不同物種的病毒中表現的基因的同源物，該異源基因具有不同的核酸序列並經由不同的生化機制起作用。異源基因可以編碼一種或多種蛋白，例如細胞毒素、免疫調節蛋白（即，增強或抑制宿主對抗原的免疫應答的蛋白）、腫瘤抗原、先驅藥激活劑、腫瘤抑制劑、先驅藥轉化酶、能夠引起細胞融合的蛋白質、TAP抑制劑反義RNA分子或核酶。免疫調節蛋白的實例包括，例如，細胞介素。細胞介素包括白介素，如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-20；α、β或γ干擾素，腫瘤壞死因子α（TNFα），CD40L，粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF），巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF），和粒細胞集落刺激因子（G-CSF），趨化因子（如中性粒細胞活化蛋白（NAP）、巨噬細胞趨化因子和活化因子（MCAF）、RANTES、和巨噬細胞炎性肽MIP-1a和MIP-1b），補體成分及其受體，免疫系統輔助分子（例如B7.1和B7.2），黏附分子（例如ICAM-1、2和3）、和黏附受體分子。腫瘤抗原包括人乳頭瘤病毒的E6和E7抗原、EBV衍生的蛋白、黏蛋白（例如MUC1）、黑素瘤酪胺酸酶、和MZ2-E。先驅藥激活劑包括硝基還原酶和細胞色素p450，腫瘤抑制劑包括p53，先驅藥轉化酶包括胞嘧啶脫胺酶。能夠引起細胞與細胞融合的蛋白質包括長臂猿白血病病毒融膜糖蛋白。TAP抑制劑包括牛皰疹病毒（BHV）UL49.5多肽。反義RNA分子可用於阻斷細胞或病原體mRNA表現。可以是核酶（例如錘頭狀或髮夾狀核酶）的RNA分子設計用於修復有缺陷的細胞RNA或破壞不需要的細胞或病原體編碼的RNA。

還包括將多個病毒基因插入單純皰疹基因組，如插入編碼病毒蛋白Us11的基因一個或多個的拷貝。

本文所描述的溶瘤病毒（例如拉他莫金）可用於治療多種腫瘤類型，包括但不限於黑素瘤、頭頸癌、乳癌（例如三陰性乳癌）、結直腸癌、肝細胞癌、胃食管癌（例如腺癌或鱗狀細胞癌）、非小細胞肺癌、和透明細胞腎細胞癌。在一個特定的實施方式中，腫瘤類型係黑素瘤。

在多個方面，液體（例如，重構）組成物包含至少約1 x 10⁵ 空斑形成單位/mL（PFU/mL）。在示例性方面，液體（例如，重構）組成物包含至少至少約2.0 x 10⁵ PFU/mL、至少約3.0 x 10⁵ PFU/mL、至少約4.0 x 10⁵ PFU/mL、至少約5.0 x 10⁵ PFU/mL、至少約6.0 x 10⁵ PFU/mL、至少約7.0 x 10⁵ PFU/mL、至少約8.0 x 10⁵ PFU/mL、或至少約9.0 x 10⁵ PFU/mL。在某些方面，液體組成物（例如，重構）包含至少約1.0 x 10⁶ PFU/mL至約1.0 x 10⁸ PFU/mL或1.0 x 10⁶ 空斑形成單位/mL（PFU/mL）至約1.0 x 10⁸ PFU/mL，視需要，約1.1 x 10⁶ PFU/mL、至少約1.2 x 10⁶ PFU/mL、至少約1.3 x 10⁶ PFU/mL、至少約1.4 x 10⁶ PFU/mL、至少約1.5 x 10⁶ PFU/mL、至少約1.6 x 10⁶ PFU/mL、至少約1.7 x 10⁶ PFU/mL、至少約1.8 x 10⁶ PFU/mL、至少約1.9 x 10⁶ PFU/mL。在特定的實施方式中，液體（例如，重構）組成物包含約1 x 10⁶ PFU/mL或1 x 10⁸ PFU/mL。

效力和穩定性

凍乾係從樣本中除去水的過程。與液態儲存相比，凍乾通常導致改善的儲存穩定性。但是，由於凍乾涉及冷凍和脫水（藉由昇華），因此這也是壓力過程，特別是對生物配製物（如包膜的病毒）而言。凍乾可以改善長期穩定性，而過程壓力也可以使大部分目的試劑失活，從而導致顯著的效能下降。令人滿意的配製物將不僅提供足夠的液體穩定性和在乾燥狀態下的穩定性，而且還將最小化由凍乾過程造成的損失。

開發同時在液態和凍乾狀態下均穩定不穩定試劑（labile agent）（如包膜病毒）的配製物係已知的挑戰，因為每種狀態的最佳組成物係互相排斥的，因此通常對於另一種狀態不是理想的。然而，對於凍乾的產品，重要的是配製物在液態和凍乾狀態下充分支持活性劑的穩定性。這係因為凍乾之前的製造過程的幾乎所有階段都以液態發生，因此必須保持活性成分的活性直至凍乾的點。類似地，在凍乾後，如果要對產品進行重構（例如，用作液體產品），則液體穩定性很重要，以確保在適當的時間內保持效能以支持後續的處理和儲存。另外，凍乾過程本身可以對生物劑（特別是包膜病毒）具有破壞性，所述生物劑對在凍乾的冷凍階段期間可以發生的滲透脅迫和低溫濃縮作用、以及在凍乾的乾燥階段期間發生的脫水作用敏感。在本揭露之前，開發在液態和凍乾狀態下足以穩定不穩定劑（例如包膜病毒）的配製物仍然是重大挑戰。不受任何特定理論的束縛，當前揭露的液體組成物克服了該等挑戰。在多個方面，以液態和凍乾狀態的液體組成物足以穩定活的減毒病毒。

在不同情況下，當液體組成物凍乾或冷凍乾燥的並且之後用水重構以產生重構產品時，重構產品中的活的減毒病毒的效力係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或100%。在一些實施方式中，重構產品中的活的減毒病毒的效力係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、或50%。在其他實施方式中，重構產品中的活的減毒病毒的效力係至少或約為30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、或40%。在又其他實施方式中，重構產品中的活的減毒病毒的效力係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約35%。在不同情況下，當液體組成物凍乾或冷凍乾燥的並且之後用水重構以產生重構產品時，重構產品中的活的減毒病毒的效力表現出小於1個對數的損失（在重構產品中的活的減毒病毒中的效力）。在一些實施方式中，重構產品在重構產品的活的減毒病毒的效力方面表現出小於約1個對數、0.9個對數、0.8個對數、0.7個對數、0.6個對數、0.5個對數、0.4個對數、0.3個對數、0.2個對數或0.1個對數的損失。在具體實施方式中，重構產品在重構產品的活的減毒病毒的效力方面表現出小於約0.6個對數、0.5個對數、或0.4個對數的損失。在具體實施方式中，重構產品在重構產品的活的減毒病毒的效力方面表現出小於約0.6個對數、0.5個對數、或0.4個對數的損失。在另一個實施方式中，重構產品在重構產品的活的減毒病毒的效力方面表現出小於約0.5個對數的損失。

在一些方面，液體組成物凍乾或冷凍乾燥的並且之後用水重構以產生重構產品，重構產品中的活的減毒病毒的效力係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或100%。在一些實施方式中，液體組成物凍乾或冷凍乾燥的並且之後用水重構以產生重構產品，重構產品中的活的減毒病毒的效力係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、或50%。在其他實施方式中，液體組成物凍乾或冷凍乾燥的並且之後用水重構以產生重構產品，重構產品中的活的減毒病毒的效力係至少或約為30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、或40%。在又其他實施方式中，液體組成物凍乾或冷凍乾燥的並且之後用水重構以產生重構產品，重構產品中的活的減毒病毒的效力係液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約35%。在不同情況下，當液體組成物凍乾或冷凍乾燥的並且之後用水重構以產生重構產品時，重構產品中的活的減毒病毒的效力表現出小於1個對數的損失（在重構產品中的活的減毒病毒中的效力）。在一些實施方式中，重構產品在重構產品的活的減毒病毒的效力方面表現出小於約1個對數、0.9個對數、0.8個對數、0.7個對數、0.6個對數、0.5個對數、0.4個對數、0.3個對數、0.2個對數或0.1個對數的損失。在具體實施方式中，重構產品在重構產品的活的減毒病毒的效力方面表現出小於約0.6個對數、0.5個對數、或0.4個對數的損失。在具體實施方式中，重構產品在重構產品的活的減毒病毒的效力方面表現出小於約0.6個對數、0.5個對數、或0.4個對數的損失。在另一個實施方式中，重構產品在重構產品的活的減毒病毒的效力方面表現出小於約0.5個對數的損失。

在不同情況下，當將液體組成物凍乾或冷凍乾燥的時，所得凍乾或冷凍乾燥的產品係耐儲藏的或儲存穩定的。在示例性方面，凍乾或冷凍乾燥的產品可以在約-25°C至約10°C、約-20°C至約8°C、約-15°C至約8°C、約-10°C至約8°C、約-10°C至約5°C、或約2°C至約8°C的溫度下長期儲存。在其他實施方式中，凍乾或冷凍乾燥的產品可以在約-25°C、-24°C、-23°C、-22°C、-21°C、-20°C、-19°C、-18°C、-17°C、-16°C、-15°C、-14°C、-13°C、-12°C、-11°C、-10°C、-9°C、-8°C、-7°C、-6°C、-5°C、-4°C、-3°C、-2°C、-1°C、0°C、1°C、2°C、3°C、4°C、5°C、6°C、7°C、8°C、9°C、或10°C的溫度下長期儲存。凍乾或冷凍乾燥的產品可以在該等溫度下儲存至少或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月。在其他實施方式中，凍乾或冷凍乾燥的產品可以在該等溫度下儲存至少或約9-24個月、約12-24個月、約12-18個月、約12-15個月、或約10-15個月。視需要，凍乾或冷凍乾燥的產品可以在約2°C至約8°C的溫度下長期儲存至少12、15、18、21、或24個月。

凍乾和冷凍乾燥的產品和粉末

當前揭露的液體組成物適合於脫水、凍乾或冷凍乾燥。當液體組成物脫水、冷凍乾燥或凍乾時，所得脫水、冷凍乾燥或凍乾的產品表現出出色的儲存穩定性和延長的保質期。重構後，該產品的特徵在於活病毒的效力損失最小或降低。因此，本揭露提供了藉由將當前揭露的任一種液體組成物脫水、冷凍乾燥或凍乾而產生的產品。在一些方面，產品係粉末。在可替代的方面，固體產品可能被描述為餅。

同樣，相關地，本揭露提供了藉由以下方法產生的粉末或餅，該方法包括從包含活的減毒病毒、HSA（例如rHSA）、除乳糖以外的糖、糖醇、磷酸鹽的來源、氯化物的來源的組成物中除去水（脫水，例如，經由凍乾）。視需要，該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。在一些方面，將組成物冷凍，並在真空下從冷凍的組成物中除去水。因此，在示例性方面，該方法包括冷凍本揭露的液體組成物，在真空下從冷凍的組成物中除去水，以使冷凍的組成物的冰變成蒸氣昇華（不經過液相）。該方法可包括另外的步驟，該步驟包括例如使液體組成物通過0.22微米的細菌保持性過濾器來滅菌和/或將滅菌的液體組成物填充到小瓶中。在多個方面，粉末或餅係冷凍乾產物或凍乾的粉末或凍乾的餅。在一些方面，液體組成物包含活的減毒HSV-1（例如拉他莫金）、約18 mg/mL至約22 mg/mL HSA（例如rHSA）、約3.4 mg/mL至約4.2 mg/mL蔗糖、約26 mg/mL至約31.9 mg/mL山梨醇、約13 mg/mL至約16 mg/mL磷酸鉀、和約5.1 mg/mL至約6.3 mg/mL氯化鈉。因此，本文另外提供了藉由以下方法產生的粉末或餅（例如，凍乾粉或凍乾餅），該方法包括從包含活的減毒HSV-1（例如拉他莫金）、約18 mg/mL至約22 mg/mL HSA（例如rHSA）、約3.4 mg/mL至約4.2 mg/mL蔗糖、約26 mg/mL至約31.9 mg/mL山梨醇、約13 mg/mL至約16 mg/mL磷酸鉀、和約5.1 mg/mL至約6.3 mg/mL氯化鈉的組成物中除去水（脫水，例如，經由凍乾）。視需要，該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。在一些方面，在除去水之前，將組成物冷凍以獲得包含冰的組成物，並且視需要，該方法進一步包括將組成物除去水之後置於真空下。在某些方面，將該粉末在溫度低於或約為8°C下穩定儲存至少或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月。在某些方面，將該粉末在溫度低於或約為8°C下穩定儲存至少或約12、15、18、21、或24個月。

此外，本揭露進一步提供了脫水產品（例如，凍乾產品、冷凍乾燥產品），其可以呈粉末或餅的形式，該脫水產品包含減毒的活病毒。在示例性實施方式中，產品另外地包含HSA（例如rHSA）、除乳糖以外的糖、糖醇、磷酸鹽的來源、氯化物的來源，視需要，其中該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。在多個方面，產品（例如，粉末或餅）包含約10 wt%至約50 wt% HSA（例如，rHSA），例如，約15 wt%至約45 wt%、20 wt%至約40 wt%、25 wt%至約35 wt%、25 wt%至約30 wt%。在多個方面，產品包含約24.66 wt%至約30.14 wt% HSA（例如，rHSA）或小於30 wt% HSA（例如，rHSA），例如，約25%、約26%、約27%、約28%、約29% HSA（例如，rHSA）。在示例性情況下，產品（例如，粉末或餅）包含小於約10%的糖，視需要，約2.5 wt%至約7.5 wt%糖（例如蔗糖），視需要，約4.68 wt%至約5.72 wt%。在示例性情況下，糖係蔗糖，並且視需要，以約2.5 wt%至約7.5 wt%的量存在，視需要，約4.68 wt%至約5.72 wt%（例如，約4.7 wt%、約4.8 wt%、約4.9 wt%、約5.0 wt%、約5.1 wt%、約5.2 wt%、約5.3 wt%、約5.4 wt%、約5.5 wt%、約5.6 wt%、約5.7 wt%）。在示例性情況下，產品（例如，粉末或餅）包含小於約50 wt%糖醇（例如，山梨醇）。在一些方面，產品包含小於約45 wt%以及視需要超過約5 wt%、超過約10 wt%、超過約15 wt%、超過約20 wt%、超過約25 wt%、或超過約30 wt%。在某些情況下，糖醇（例如，山梨醇）在產品中以約35 wt%至約45 wt%的量存在，例如，約36 wt%、約37 wt%、約38 wt%、約39 wt%、約40 wt%、約41 wt%、約42 wt%、約43 wt%、約44 wt%、約45 wt%。在示例性情況下，產品（例如，粉末或餅）包含磷酸鹽的來源（例如，磷酸鉀）（以小於約50 wt%，視需要，小於約40 wt%、小於約30 wt%、或小於約25 wt%的量）。在一些方面，產品包含約15 wt%至約25 wt%磷酸鹽的來源（例如，磷酸鉀），視需要，約17.87 wt%至約21.85 wt%。在多個方面，產品包含氯化物的來源（例如，氯化鈉）（以小於約20 wt%或小於約15 wt%的量）。在一些情況下，產品包含約5 wt%至約10 wt%氯化物的來源（例如，氯化鈉），視需要，約7.0 wt%至約8.6 wt%氯化鈉。關於當前揭露的粉末，所列舉的wt%係指指定成分的克數相對於粉末中除活病毒外所有成分的總克數，並以百分比表示。例如，rHSA的wt% = [(rHSA克數) ÷ (rHSA克數 + 糖克數 + 糖醇克數 + 磷酸鹽的來源克數 + 氯化物的來源克數)]*100。

在示例性情況下，添加約1 mL（例如，約0.9 mL、約1.0 mL、約1.1 mL、或約1.2 mL）水後，該粉末製成液體組成物，該液體組成物包含約80 mM至約85 mM（例如，約80 mM、約81 mM、約82 mM、約83 mM、約84 mM、約85 mM）磷酸鉀、約95 mM至約100 mM（例如，約95 mM、約96 mM、約97 mM、約98 mM、約99 mM、約100 mM）氯化鈉、約2.5%（w/v）至約3.0%（w/v）（例如，約2.5%（w/v）、約2.6%（w/v）、約2.7%（w/v）、約2.8%（w/v）、約2.9%（w/v）、約3.0%（w/v））山梨醇、約0.35%（w/v）至約0.40%（w/v）（例如，約0.35%（w/v）、約0.36%（w/v）、約0.37%（w/v）、約0.38%（w/v）、約0.39%（w/v）、約0.40%（w/v））蔗糖、以及約1.95%（w/v）至約2.05%（w/v）（例如，約1.95%（w/v）、約1.96%（w/v）、約1.97%（w/v）、約1.98%（w/v）、約1.99%（w/v）、約2.00%（w/v）、約2.01%（w/v）、約2.02%（w/v）、約2.03%（w/v）、約2.04%（w/v）、約2.05%（w/v））重組HSA。在其他示例性情況下，添加足夠的水以將粉末重構至約1 mL的體積。

本文提供了液體組成物，該液體組成物包含水和當前揭露的脫水產品或當前揭露的粉末或餅。在一些方面，液體組成物包含約0.95 mL至約1.5 mL水，視需要，約1.0 mL水。在某些方面，液體組成物包含至少或約10⁶ PFU活的減毒病毒/mL液體組成物，具有約7.4的pH，以及包含約80 mM至約85 mM磷酸鉀、約95 mM至約100 mM氯化鈉、約2.8%（w/v）至約3.0%（w/v）山梨醇、約0.36%（w/v）至約0.40%（w/v）蔗糖、以及約1.98%（w/v）至約2.02%（w/v）重組HSA。在其他方面，液體組成物包含至少或約10⁸ PFU活的減毒病毒/mL液體組成物，具有約7.4的pH，以及包含約80 mM至約85 mM磷酸鉀、約95 mM至約100 mM氯化鈉、約2.8%（w/v）至約3.0%（w/v）山梨醇、約0.36%（w/v）至約0.40%（w/v）蔗糖、以及約1.98%（w/v）至約2.02%（w/v）重組HSA。

製備方法

本揭露還提供了製備用於向人受試者施用的溶瘤病毒之方法，該方法包括向當前揭露的粉末中的任一種中添加水，視需要，其中向該粉末中添加約1.0 mL至約1.2 mL水。視需要，製備的藥物產品在施用於人受試者之前不超過約24、36或48小時重構。

治療方法

進一步提供了在人受試者中治療腫瘤或癌症之方法。在示例性實施方式中，該包括向受試者施用本揭露的液體組成物。在不同情況下，該方法包括將水添加至可以呈粉末或餅的任一種當前揭露的脫水產品（例如，凍乾產品、冷凍乾燥產品）中，以獲得液體組成物並向受試者施用該液體組成物。在示例性情況下，將約0.9 mL至約1.2 mL水添加至粉末中以獲得液體組成物並且該方法包括將液體組成物注射入人受試者。

當前揭露的組成物可用於治療多種腫瘤和癌症。例如，藉由當前揭露的方法治療受試者的實體瘤。例如,治療受試者的前列腺、乳腺、肺、肝、膀胱、腎、子宮頸、或結腸的癌症或腫瘤。在多個方面，癌症或腫瘤係腎細胞癌或腫瘤、子宮內膜癌或腫瘤、或係宮頸癌；腺癌；黑素瘤；淋巴瘤；或膠質瘤。在多個方面，受試者患有肉瘤，例如軟組織和骨肉瘤。在某些方面，受試者患有頭和頸部的癌症。在多個方面，受試者患有癌症、贅生物或惡性腫瘤，例如，白血病、癌、肉瘤。在一些方面，癌症係乳癌、腦癌、子宮頸癌、結腸癌、頭頸癌、肝癌、腎癌、肺癌、非小細胞肺癌、黑素瘤、間皮瘤、卵巢癌、肉瘤、胃癌、子宮癌、和神經管胚細胞瘤。以及霍奇金氏病、非霍奇金式淋巴瘤、多發性骨髓瘤、神經母細胞瘤、卵巢癌、橫紋肌肉瘤、原發性血小板增多症、原發性巨球蛋白血症、原發性腦瘤、惡性胰腺胰島素瘤、惡性類癌、膀胱癌、皮膚癌前病變、睾丸癌、淋巴瘤、甲狀腺癌、神經母細胞瘤、食管癌、泌尿生殖道癌、惡性高鈣血症、子宮內膜癌、腎上腺皮質癌、內分泌和外分泌胰腺贅生物、和前列腺癌。此類癌症和腫瘤藉由本揭露之方法治療。

如本文所用，術語「患者」或「受試者」可互換使用並且意指哺乳動物，包括但不限於人或非人哺乳動物（如牛、馬、犬、綿羊或貓）。較佳的是，該患者係人。

本文另外提供了殺死腫瘤細胞的方法。在一些方面，腫瘤細胞係星形細胞瘤細胞、寡樹突神經膠細胞瘤細胞、腦膜瘤細胞、神經纖維瘤細胞、神經膠質母細胞瘤細胞、室管膜瘤細胞、神經鞘瘤細胞、神經纖維肉瘤細胞、神經管胚細胞瘤細胞、黑素瘤細胞、胰臟癌細胞、前列腺癌細胞、乳癌細胞、肺癌細胞、結腸癌細胞、肝癌細胞、間皮瘤細胞、或表皮樣癌細胞。

組合

組成物、粉末和凍乾或冷凍乾燥的產品可以與其他治療方式（包括但不限於放射、化學療法、溫熱療法、治療性蛋白質和手術）組合使用。組成物、粉末和凍乾或冷凍乾燥的產品可以在其他治療方式之前、同時或之後施用。

治療性蛋白質包括免疫檢查點抑制劑。如本文所用，術語「免疫檢查點抑制劑」係指完全或部分地減少、抑制、干擾或調節一種或多種檢查點蛋白的分子。檢查點蛋白調節T細胞激活或功能。已知許多檢查點蛋白，如CTLA-4及其配位基CD80和CD86；以及PD1及其配位基PDL1和PDL2。該等蛋白質負責T細胞應答的共刺激或抑制相互作用。免疫檢查點蛋白調節和維持自身耐受性以及生理免疫應答的持續時間和幅度。免疫檢查點抑制劑包括抗體或衍生自抗體。檢查點抑制劑包括細胞毒性T-淋巴細胞相關的抗原4（CTLA-4）抑制劑。CTLA-4的抑制劑包括曲美利木單抗（tremelimumab）、伊匹單抗（ipilimumab）（也稱為10D1，MDX-D010），並在Yervoy™和抗CTLA-4抗體名稱下出售，其在美國專利案號5,811,097；5,811,097；5,855,887；6,051,227；6,207,157；6,682,736；6,984,720；和7,605,238中描述。其他免疫檢查點蛋白包括計劃性細胞死亡1（PD-1）和計劃性細胞死亡配位基1（PDL1）和2（PDL2）。抑制PD1以及PDL1和PDL2的分子的實例包括納武單抗（nivolumab）（MDX 1106、BMS 936558、ONO 4538）、可藉由其配位基PD-L1和PD-L2結合並阻斷PD-1激活的完全人IgG4抗體；派姆單抗（pembrolizumab、lambrolizumab、MK-3475或SCH 900475）作為KeytrudaTM出售；MPDL3280A，工程化的抗PDL1抗體（阿特朱單抗（atezolizumab））；CT-011；AMP-224；BMS-936559（MDX-1105-01）和美國專利案號7,488,802；7,943,743；8,008,449；8,168,757；8,217,149，以及PCT公開專利申請號：W003042402、WO 2008156712、W02010089411、W02010036959、WO 2011066342、WO 2011159877、WO 2011082400、和WO 2011161699中所描述的那些。其他免疫檢查點抑制劑包括淋巴細胞激活基因-3（LAG-3）抑制劑，如IMP321（可溶性Ig融合蛋白）；B7抑制劑（如抗B7-H3抗體MGA271）。還包括TIM3（T-細胞免疫球蛋白結構域和黏蛋白結構域3）抑制劑。

醫師可以施用當前揭露的組成物、粉末和凍乾或冷凍乾燥的產品，直到達到實現所需效果的劑量。因此，組成物、粉末和凍乾或冷凍乾燥的產品可以藉由直接注射或其他合適的施用方法以單劑量或隨時間推移以兩個或多個劑量（其可以含有或可以不含有相同量的所需的分子）施用。可以將本揭露的組成物、粉末和凍乾或冷凍乾燥的產品例如一次或超過一次施用，例如在一段時間內以規則間隔施用。通常，可以施用本揭露的組成物、粉末和凍乾或冷凍乾燥的產品，直到患者對於所選的一種或多種指標表現出醫學相關的改善程度（相對於基線）。

在一個實施方式中，組成物、粉末和凍乾或冷凍乾燥的產品包含拉他莫金，並且藉由瘤內注射在第1周的第1天以高達4.0 ml的10⁶ 空斑形成單位/mL（PFU/mL）的劑量，接著在第4周的第1天以4.0 ml的10⁸ PFU/mL的劑量，並且此後每2周（± 3天）施用至可注射的皮膚、皮下和結節腫瘤中。待注射入一種或多種腫瘤的拉他莫金的推薦體積取決於該一種或多種腫瘤的大小。所有合理可注射的病變（可以在有或沒有超音波引導的情況下注射的皮膚、皮下和淋巴結疾病）應在每次給藥時以最大可用體積注射。在每個治療日，建議按以下優先次序進行注射：自上次注射後已出現的任何新的可注射腫瘤；按腫瘤大小，從最大的腫瘤開始；現在可注射的任何先前無法注射的一種或多種腫瘤。

給出以下實例僅用於說明本發明，而不以任何方式限制其範圍。實例實例1

該實例描述了本揭露的示例性組成物和產品。

製得了液體組成物，該液體組成物以指定的量包含表1中列出的組分。將活病毒（1 x 10⁶ PFU或1 x 10⁸ PFU）添加至混合物中。 [表1]

組分	量	量
拉他莫金（凍乾和重構後的活性病毒的量）	1 x 10⁶ PFU或 1 x 10⁸ PFU/mL	1 x 10⁶ PFU或 1 x 10⁸ PFU/mL
磷酸鉀	14.5（mg/mL）	83 mM
氯化鈉	5.7（mg/mL）	98 mM
山梨醇	29.0（mg/mL）	159 mM
蔗糖	3.8（mg/mL）	11 mM
重組人血清白蛋白	20.0（mg/mL）	0.3 mM
注射用水（WFI）	足以重構至約1 mL	足以重構至約1 mL
重量滲透濃度	550 mOsm/kg	550 mOsm/kg
pH	7.4	7.4

將混合物填充到玻璃小瓶中，並置於冷凍乾燥機中的預冷架上，並根據以下參數進行乾燥，將其開發以使效力損失最小化並獲得具有可接受的殘餘水分含量和可接受的視覺外觀的固體餅。

冷凍乾燥後，藉由噬菌斑檢定分析所得的冷凍乾燥或凍乾產物，以確定病毒效力（作為回收率和穩定性能的主要指標）。此外，還評估了產品的餅外觀、蛋白質含量、顆粒含量和殘留水分。實例2

本實例描述了儲存實例1中所述的冷凍乾燥或凍乾產品的方法。

實例1中所描述的冷凍乾燥或凍乾產品（包含1 x 10⁶ 或1 x 10⁸ PFU/mL的病毒）在8°C及以下的不同溫度（例如，5°C、-20°C）下儲存各種存儲時間（例如，高達60周）。另一種冷凍乾燥的或凍乾產品基本上如實例1所述製備（除了活病毒的量為1 × 10⁷ PFU/mL）。將產品的等分試樣也在8°C及以下的不同溫度（例如，5°C、-20°C）下儲存各種存儲時間（例如，高達60周）。

儲存後，將每份冷凍乾產物的等分試樣用約1.0-1.2 mL水重構。將重構材料中存在的病毒的效力藉由噬菌斑檢定進行測試，噬菌斑檢定係病毒學中的標準細胞培養方法，該方法使用培養中的允許細胞來定量該病毒的總體感染性和複製性能。

活性生物化合物的凍乾通常導致活性顯著降低，因此開發凍乾配製物的目標之一係使由凍乾引起的效力損失程度最小化。如表2所示，配製物導致大約60%的效力損失（或0.4 log₁₀ PFU/mL），對於1 x 10⁶ PFU/mL和1 x 10⁸ PFU/mL的病毒濃度兩者，表明損失程度與活性成分的濃度無關。與當傳統冷凍配製物凍乾時觀察到的損失相比，效力損失表現出顯著的改善，傳統冷凍配製物表現出的損失為1 log₁₀ PFU/mL或更大（相當於損失90%或更大）。[ 表 2] ： 凍乾造成的效力損失總結

目標強度（ PFU/mL ）	凍乾造成的效力損失（ % ）
1 x 10⁶	58
1 x 10⁸	57

表3含有針對凍乾病毒的效力數據，目標係含有1 x 10⁶ PFU/mL，並在-20°C和5°C下儲存長達60周。總體而言，在所示的儲存溫度下，凍乾病毒在60周內的效力沒有顯著變化，表明材料已成功穩定。效力的偏差在該方法的可變性之內。[ 表 3] ： 凍乾病毒的效力，目標係含有 1 x 10⁶ PFU/mL 儲存在 -20°C 和 5°C

周	效力（ Log₁₀ PFU/mL ）
-20°C	5°C
0	5.9	5.9
9	6.1	5.5
30	5.9	5.7
60	6.0	5.8

表4含有針對凍乾病毒的效力數據，目標係含有1 x 10⁸ PFU/mL，並在5°C下儲存長達13周。總體而言，在所示的儲存溫度下，凍乾病毒在13周內的效力沒有顯著變化，表明材料已成功穩定。效力的偏差在該方法的可變性之內[ 表 4] ： 凍乾病毒的效力，目標含有 1 x 10⁸ PFU/mL 儲存在 5°C

周	在 5C 下，效力（ Log₁₀ PFU/mL ）
0	8.0
4	8.1
9	8.0
13	7.9

還測試了重構材料的pH和滲透壓，得到pH 7.4和550 mOsm/kg的滲透壓的值。

產品外觀係重要的產品屬性；如果產品不符合指定的外觀標準，則可能導致拒絕或召回相關病毒批次。在所有生物製劑中，無論是在製造期間還是在以後的時間（例如，在儲存期間），顆粒的形成都是重要的問題。由於配製物的原因，重構材料（含1 x 10⁶ PFU/mL的病毒）實際上不含任何視覺上可檢測到的顆粒，且如圖1和2所示，也表現出極低水平的亞可見顆粒。用配製為含有1 x 10⁶ PFU/mL的材料獲得了相似的結果。實例3

該實例證明了與其他已知的類似組成物相比，使用糖和蛋白質穩定劑的不同組合，液體和凍乾的活病毒配製物的活性（病毒感染性）恢復和隨後的儲存穩定性得到改善。

開發同時在液態和凍乾狀態下均穩定不穩定試劑（如包膜病毒）的配製物係已知的挑戰，因為每種狀態的最佳組成物係互相排斥的，因此通常對於另一種狀態不是理想的。然而，對於凍乾的產品，重要的是配製物足以支持以液態和凍乾狀態的活性劑的穩定性，因為凍乾之前的製造過程的幾乎所有階段都以液態存在，因此必須保持活性成分的活性直至凍乾的點。類似地，在凍乾後，如果要對產品進行重構（例如，用作液體產品），則液體穩定性很重要，以確保在適當的時間內保持效能以支持後續的處理和儲存。另外，凍乾過程本身可以對生物劑（特別是包膜病毒）具有破壞性，所述生物劑對在凍乾的冷凍階段期間可以發生的滲透脅迫和低溫濃縮作用、以及在凍乾的乾燥階段期間發生的脫水作用敏感。至今，開發在液態和凍乾狀態下足以穩定不穩定劑（例如包膜病毒）的配製物仍然是重大挑戰。

蔗糖磷酸麩胺酸白蛋白（SPGA）和基於SPGA的配製物係穩定活試劑（如病毒）的領域中已知的配製物。參見例如，White等人, Vacccine [疫苗] 34(32): 3676-3683 (2016)和Yannarell等人, J Virol Methods[病毒學方法雜誌] 102(1-2): 15-25 (2002)。

配製物

此研究將本發明的配製物（F4）與兩種基於SPGA的配製物（F1和F2）以及第三種配製物（F3）進行了比較。F4配製物與基於SPGA的配製物（F1和F2）的不同之處在於，例如F4缺少麩胺酸鹽、具有有限的蔗糖數量、磷酸鹽含量增加、並且含有糖醇。人白蛋白存在於所有四種配製物中，以證明觀察到的作用並非由於此單一組分，而是由於配製物中存在的所有組分的集體作用。為了確定血清來源的人白蛋白和重組來源的人白蛋白之間是否存在差異，用血清來源的人白蛋白（HSA）製備配製物F1，並用重組人白蛋白（rHA）製備F2。還用重組人白蛋白製備配製物F3和F4以能夠與F2進行比較。每個配製物含有相同量的起始病毒（拉他莫金）。表5描述了測試的配製物（F1、F2和F3）的組成相比於本發明的配製物（F4，其也描述在表1中）的組成。[ 表 5]

藉由比較在不同溫度下液態和凍乾狀態下隨時間的病毒感染性的相對水平來評估表5中所述配製物的性能。

配製物的液態穩定性

用等量的拉他莫金製備四種配製物（F1、F2、F3、F4）中的每個，並將每種的等分試樣儲存在5°C和25°C下，並藉由噬菌斑檢定隨時間（持續9週）進行測試以評估保留的病毒活性（圖3）。如3顯示了相對於配製物F4的降解速率。藉由確定每種配製物的降解速率，然後將針對對於配製物F4觀察到的速率進行歸一化，可以得到該等值。

從圖3可以看出，在5°C下，配製物F1和F2的降解（更差）分別比F4快1.2和1.3倍，而配製物F3的性能比F4更好（降解速率係F4的0.9倍）。在25°C（指示室溫條件的受控溫度）下，配製物F4的性能優於其他三種配製物。

總體而言，配製物F4的性能相對優於其他配製物。這在25°C條件下（從製造角度來看，這係特別重要的相對溫度）尤其明顯。

配製物的凍乾狀態穩定性

將F1、F2、F3和F4裝入小瓶中，並且凍乾並藉由噬菌斑檢定隨時間推移進行測試，以評估保留的病毒活性量，如上文「配製物的也太穩定性」部分所述。凍乾後，樣本在重構後立即進行測試以確定凍乾後剩餘的活性量，或者將其置於5°C下持續10週以確定其存儲穩定性性能。基於配製物的最低玻璃化轉變溫度和觀察到的所有四種配製物在凍乾過程中表現出相似的溫度依賴性曲線，使用保守的凍乾循環將所有四種配製物一起凍乾。由於每種配製物均以可比和最佳的方式乾燥，因此可以直接比較穩定性和由於凍乾（或活性恢復）而造成的活性損失。

相對於配製物F4，每種配製物中凍乾的拉他莫金的穩定性邊角顯示在圖4中。可以看出，F4比F1和F2穩定得多，F1和F2的降解速度分別比F4快12.1和8.2倍。有趣的是，在液態下性能略好於F4的F3在凍乾狀態下降解快3.5倍。

活性恢復

除了在儲存期間中的穩定性外，凍乾產品的另一個關鍵參數係凍乾後恢復的活性量（也稱為其逆條件，凍乾導致的活性損失）。

圖5顯示了相對於配製物F4的活性恢復的量。藉由確定凍乾前後每種配製物的病毒滴度來計算活性恢復。凍乾前的滴度表示100%活性；將凍乾後確定的滴度用於計算恢復百分比。然後將恢復相對於配製物F4進行歸一化，以顯示每種配製物相對於F4的性能（F4設置為0%，因此未顯示）。可以看出，配製物F1和F2損失的活性（病毒滴度）比F4損失明顯更多活性（分別為31%和38%）。此外，F3比F4損失超過12%的活性。總體而言，該等數據表明F4保留的活性高於F1、F2和F3。

結論

總體而言，液態穩定性、凍乾狀態穩定性、和活性恢復數據揭示，配製物F1、F2、F3和F4之間的性能存在顯著變化。該等數據支持相對於配製物F1-F3，F4在凍乾後保留更多的活性、明顯更穩定並且表現相對更好（特別是在25°C條件下）。

在此所引用的所有參考文獻（包括出版物、專利申請案、和專利案、）均藉由引用在此併入，引用的程度如同每個參考文獻被個別地並且明確地指示藉由引用併入並且以其全部內容在此闡述。

除非本文另外指示或明顯地與上下文矛盾，否則在描述本揭露的上下文中（尤其是在以下申請專利範圍的上下文中），術語「一個/一種（a和an）」和「該（the）」以及相似指代詞的使用應被解釋為涵蓋單數和複數兩者。除非另外指出，否則術語「包含（comprising）」、「具有（having）」、「包括（including）」和「含有（containing）」應被解釋為開放性術語（即，意指「包括但不限於」）。

在本文引證數值的範圍僅旨在用作單獨地提及每個單獨的數值落在該範圍內和每個端點的速記的方法，除非本文另外說明，並且每個單獨的數值和端點被結合到本說明書中就像它被單獨地在本文引證一樣。

除非本文另外指示或另外明顯地與上下文矛盾，否則本文所述的所有方法能以任何合適順序進行。除非另外要求保護，否則本文提供的任何和所有實例或示例性語言（例如「如」）的使用僅旨在更好地闡明本揭露，而不對本揭露的範圍施加限制，說明。說明書中的語言不應當被解釋為指示任何未要求保護的要素為實踐本揭露所必需的。

本文描述了本揭露的較佳的實施方式，包括已知諸位發明人用於進行本揭露的最佳模式。在閱讀前面的說明書後，那些較佳的實施方式的變化對於熟悉該項技術者來說可以變得清楚。諸位發明人期望技術人員適當地採用此類變化，並且諸位發明人意圖以不同於本文具體描述的方式實踐本揭露。因此，本揭露包括如適用法律所允許的所附申請專利範圍中所述主題的所有修改和等同物。此外，除非本文另外指示或另外明顯地與上下文矛盾，否則在所有可能的變化中上述元件的任何組合都包括於本揭露中。

無

圖1係累積計數/mL的圖，該圖描繪了在配製為含有1x10⁸ PFU/mL的重構材料中＞ 10 µm的亞可見（subvisible）顆粒的量。

圖2係累積計數/mL的圖，該圖描繪了在配製為包含1x10⁸ PFU/mL的重構材料中＞ 25 µm的亞可見顆粒的量。

圖3係在5°C（圖3的左半部分）和25°C（圖3的右半部分）下以液體形式儲存持續6週，配製物F1、F2和F3（每個含有拉他莫金）相對於F4（也包含拉他莫金）的降解速率的比較。大於1的值表示相對於F4的降解速率增加（更差的穩定性），並且小於1的值表示相對於F4的降解速率提高的程度（更好的穩定性）。

圖4係在5°C下儲存10週的凍乾的配製物F1、F2、和F3，相對於F4的降解速率的比較。大於1的值表示相對於F4的降解速率的倍數增加（即，更差的穩定性），並且小於1的值（不存在）表示相對於F4的降解速率的倍數降低（即，更好的穩定性）。

圖5證明了凍乾F1、F2和F3後，相對於配製物F4的活性的恢復。對於每種配製物，藉由將凍乾後最初存在的活性的量除以液體配製物（凍乾前）中存在的活性量的量，然後歸一化為配製物F4中恢復的活性的分數來計算凍乾後恢復的活性的量。大於0%（不存在）的值指示恢復的活性比例大於（即更好）用配製物F4恢復的活性的量。小於0%的值指示恢復的活性比例小於（即更差）配製物F4恢復的活性的量。

無

Claims

一種液體組成物，該液體組成物包含：活的減毒病毒；重組人血清白蛋白（rHSA）；除乳糖以外的糖；糖醇；磷酸鹽的來源；以及氯化物的來源，其中該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。
如申請專利範圍第1項所述之液體組成物，該液體組成物包含大於約5 mg/mL以及小於約25 mg/mL rHSA。
如申請專利範圍第1項或第2項所述之液體組成物，該液體組成物包含大於約1 mg/mL以及小於約25 mg/mL rHSA。
如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之液體組成物，該液體組成物包含大於約15 mg/mL以及小於約25 mg/mL rHSA。
如申請專利範圍第1至4項中任一項所述之液體組成物，該液體組成物包含約17.5 mg/mL至約22.5 mg/mL rHSA，視需要，約20 mg/mL ± 2 mg/mL rHSA。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，其中該糖係蔗糖。
如申請專利範圍第6項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約15 mg/mL蔗糖。
如申請專利範圍第7項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約10 mg/mL蔗糖。
如申請專利範圍第8項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約5 mg/mL蔗糖。
如申請專利範圍第9項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約3.8 mg/mL ± 0.38 mg/mL蔗糖。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，其中該糖醇為山梨醇。
如申請專利範圍第11項所述之液體組成物，該液體組成物包含大於約10 mg/mL mg的山梨醇以及小於約50 mg/mL山梨醇。
如申請專利範圍第12項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約45 mg/mL山梨醇。
如申請專利範圍第13項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約40 mg/mL山梨醇。
如申請專利範圍第14項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約35 mg/mL山梨醇。
如申請專利範圍第15項所述之液體組成物，該液體組成物包含約26 mg至約32 mg/mL山梨醇。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，其中該磷酸鹽的來源係磷酸鉀。
如申請專利範圍第17項所述之液體組成物，該液體組成物包含大於約5 mg/mL以及小於約45 mg/mL磷酸鉀。
如申請專利範圍第18項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約40 mg/mL磷酸鉀。
如申請專利範圍第19項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約30 mg/mL磷酸鉀。
如申請專利範圍第20項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約20 mg/mL磷酸鉀。
如申請專利範圍第21項所述之液體組成物，該液體組成物包含約13.5 mg至約16 mg/mL磷酸鉀。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，其中該氯化物的來源係氯化鈉。
如申請專利範圍第23項所述之液體組成物，該液體組成物包含大於約1 mg/mL以及小於約20 mg/mL氯化鈉。
如申請專利範圍第24項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約15 mg/mL氯化鈉。
如申請專利範圍第25項所述之液體組成物，該液體組成物包含小於約10 mg/mL氯化鈉。
如申請專利範圍第26項所述之液體組成物，該液體組成物包含約3 mg至約7 mg/mL氯化鈉。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，該液體組成物基本上由以下組成或由以下組成：活的減毒病毒、rHSA、蔗糖、山梨醇、磷酸鉀和氯化鈉。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，該液體組成物具有約7.2至約7.6的pH。
如申請專利範圍第29項所述之液體組成物，該液體組成物具有約7.4的pH。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，該液體組成物具有小於約700 mOsm/kg、視需要小於約650 mOsm/kg的滲透壓。
如申請專利範圍第31項所述之液體組成物，該液體組成物具有小於約600 mOsm/kg、視需要約525 mOsm/kg至約575 mOsm/kg的滲透壓。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，該液體組成物包含不超過約0.01 mM的乳糖、明膠、抗生素和游離胺基酸中的任一種，視需要，不超過約0.001 mM的乳糖、明膠、抗生素和游離胺基酸中的任一種。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，其中該活的減毒病毒係單純皰疹病毒（HSV），視需要，係單純皰疹病毒1（HSV-1）毒株。
如申請專利範圍第34項所述之液體組成物，其中該HSVI-1毒株選自由以下組成之群組：毒株JS1、毒株17+、毒株F、和毒株KOS。
如申請專利範圍第34項所述之液體組成物，其中該單純皰疹病毒選自由以下組成之群組：拉他莫金、Seprehvir^TM 、G207、OrienX010、NV1020、M032、ImmunoVEX和OncoVEX^GALV/CD 。
如申請專利範圍第36項所述之液體組成物，其中該HSV係拉他莫金。
如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物，其中，當將該液體組成物凍乾然後用水重構以產生重構產品時，該重構產品中的活的減毒病毒的效力係該液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約30%，視需要，係該液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約35%。
如申請專利範圍第38項所述之液體組成物，其中，當將該液體組成物凍乾然後用水重構以產生重構產品時，該重構產品中的活的減毒病毒的效力係該液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約30%，視需要，係該液體組成物凍乾之前的活的減毒病毒的效力的至少或約40%。
一種液體組成物，該液體組成物包含：活的減毒HSV-1；約18 mg/mL至約22 mg/mL重組人血清白蛋白（rHSA）；約3.4 mg/mL至約4.2 mg/mL蔗糖；約26 mg/mL至約31.9 mg/mL山梨醇；約13 mg/mL至約16 mg/mL磷酸鉀；以及約5.1 mg/mL至約6.3 mg/mL氯化鈉，其中該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。
一種藉由凍乾如前述申請專利範圍中任一項所述之液體組成物而產生的產品。
一種藉由包括從組成物中除去水的方法產生的粉末，所述組成物包含：活的減毒病毒；重組人血清白蛋白（rHSA）；除乳糖以外的糖；糖醇；磷酸鹽的來源；以及氯化物的來源，其中該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。
一種藉由包括從組成物中除去水的方法產生的粉末，所述組成物包含：活的減毒HSV-1；約18 mg/mL至約22 mg/mL重組人血清白蛋白（rHSA）；約3.4 mg/mL至約4.2 mg/mL蔗糖；約26 mg/mL至約31.9 mg/mL山梨醇；約13 mg/mL至約16 mg/mL磷酸鉀；以及約5.1 mg/mL至約6.3 mg/mL氯化鈉，其中該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。
如申請專利範圍第42項或第43項所述之粉末，其中在除去水之前，將該組成物冷凍以獲得包含冰的組成物。
如申請專利範圍第44項所述之粉末，其中該方法進一步包括將該組成物置於受控溫度和壓力下的真空中以除去水。
如申請專利範圍第42至45項中任一項所述之粉末，其中該方法係凍乾。
如申請專利範圍第42-46項中任一項所述之粉末，該粉末包含：小於約3% w/w水。
如申請專利範圍第42-47項中任一項所述之粉末，該粉末在溫度低於或約為8°C下穩定儲存至少或約1個月、2個月、或3個月。
一種液體組成物，該液體組成物包含水和如申請專利範圍第41項所述之產品或如申請專利範圍第42-48項中任一項所述之乾燥的粉末。
如申請專利範圍第49項所述之液體組成物，該液體組成物包含約0.95 mL至約1.5 mL水。
如申請專利範圍第50項所述之液體組成物，該液體組成物包含約1.0 mL水。
如申請專利範圍第49-51項中任一項所述之液體組成物，該液體組成物包含至少或約1 x 10⁶ 或1 x 10⁸ PFU的活的減毒病毒/mL液體組成物。
如申請專利範圍第49-52項中任一項所述之液體組成物，該液體組成物具有約7.4的pH。
一種粉末，該粉末包含活的減毒病毒、重組人血清白蛋白（例如rHSA）、除乳糖以外的糖、糖醇、磷酸鹽的來源、氯化物的來源，其中該組成物基本上不含乳糖、明膠、抗生素、和游離胺基酸。
如申請專利範圍第54項所述之粉末，該粉末包含24.66 wt%至約30.14 wt% rHSA。
如申請專利範圍第54項或第55項所述之粉末，其中該糖係蔗糖。
如申請專利範圍第56項所述之粉末，該粉末包含約2.5 wt%至約7.5 wt%蔗糖，視需要，約4.68 wt%至約5.72 wt%蔗糖。
如申請專利範圍第54-57項中任一項所述之粉末，其中該糖醇為山梨醇。
如申請專利範圍第58項所述之粉末，該粉末包含約25 wt%至約33 wt%山梨醇，視需要，約35.76 wt%至約43.7 wt%。
如申請專利範圍第54-59項中任一項所述之粉末，其中該磷酸鹽的來源係磷酸鉀。
如申請專利範圍第60項所述之粉末，該粉末包含約15 wt%至約25 wt%磷酸鉀，視需要，約17.87 wt%至約21.85 wt%。
如申請專利範圍第54-61項中任一項所述之粉末，其中該氯化物的來源係氯化鈉。
如申請專利範圍第61項所述之粉末，該粉末包含約5 wt%至約10 wt%氯化鈉，視需要，約7.0 wt%至約8.6 wt%氯化鈉。
如申請專利範圍第54-63項中任一項所述之粉末，添加約1 mL水後該粉末製成液體組成物，該液體組成物包含約80 mM至約85 mM磷酸鉀、約95 mM至約100 mM氯化鈉、約2.8%（w/v）至約3.0%（w/v）山梨醇、約0.36%（w/v）至約0.40%（w/v）蔗糖、和約1.98%（w/v）至約2.02%（w/v）重組HSA。
一種製備用於向人受試者施用的溶瘤病毒之方法，該方法包括向如申請專利範圍第54-64項中任一項所述之粉末中添加水，視需要，其中向該粉末中添加約1.0 mL至約1.2 mL水。
一種在人受試者中治療黑素瘤之方法，該方法包括向如申請專利範圍第54-64項中任一項所述之粉末中添加水，視需要，其中向該粉末中添加約1.0 mL至約1.2 mL的水，以獲得液體組成物並將該液體組成物注射入該人受試者中。