CN112367996A - 使用剪接调节剂的方法 - Google Patents

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J·帕拉西诺
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L·于
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Abstract

本披露涉及用于治疗赘生性病症的方法，这些方法通过施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用、从而诱导至少一种新抗原的产生来实现。

Description

使用剪接调节剂的方法
本披露要求以下项的优先权权益：2018年6月1日提交的美国临时专利申请号62/679,696；以及2018年6月1日提交的美国临时专利申请号62/679,699。所有上述申请均通过引用以其全文并入本文。
本披露涉及治疗或诊断癌症的方法，这些癌症适合于通过施用化合物1或其药学上可接受的盐来中断RNA剪接从而得到治疗。本披露进一步涉及治疗或诊断的方法，其中，当施用化合物1或其药学上可接受的盐后诱导新抗原。
人类基因组中的大多数蛋白质编码基因是由内含子(非编码区)隔开的多个外显子(编码区)构成。基因表达产生单一前体信使RNA(pre-mRNA)。随后，通过称为剪接的方法从pre-mRNA移除内含子序列，产生成熟信使RNA(mRNA)。通过包括不同外显子组合，可变剪接产生编码不同蛋白质异形体的mRNA。
RNA剪接由剪接体催化，剪接体是由五个核内小RNA(snRNA U1、U2、U4、U5及U6)及相关蛋白构成的动态多蛋白质-RNA复合体。该剪接体组装在pre-mRNA上以建立催化内含子的切除和外显子的连接的多种RNA和蛋白质相互作用的动态级联(Matera和Wang(2014)NatRev Mol Cell Biol.[自然分子细胞生物学评论]15(2):108-21)。越来越多的证据已将人类疾病与影响许多基因的RNA剪接的调节异常联系起来(Scotti和Swanson(2016)Nat RevGenet.[遗传学自然评论]17(1):19-32)。
剪接体是癌症生物学中的重要靶标。若干研究现已证明癌细胞剪接谱以及剪接因子本身的显著变化(Agrawal等人(2018)Curr Opin Genet Dev.[遗传学与发育新见]48:67-74)。可变剪接会引起不同的外显子包含/排除、内含子保留或隐蔽剪接位点的使用(Seiler等人(2018)Cell Rep.[细胞报告]23(1)：282-296)。总而言之，这些事件造成功能变化，功能变化可引起肿瘤发生或对治疗的抗性(Siegfried和Karni(2018)Curr OpinGenet Dev.[遗传学与发育新见]48：16-21)。
某些天然产物及其衍生物可以结合SF3b剪接体复合物。(示例性天然产物及其衍生物，例如某些普拉二烯内酯B化合物和相关化合物披露于WO 2002/060890；WO 2004/011459；WO 2004/011661；WO 2004/050890；WO 2005/052152；WO 2006/009276；和WO 2008/126918)。这些小分子通过促进内含子保留和/或外显子跳跃来调节剪接(Teng等人(2017)Nat Commun.[自然通讯]8：15522)。所得的转录物中有很大一部分含有提前终止密码子，触发了无义介导的mRNA衰变(NMD)。另外，由于典型剪接受损，典型转录物大幅减少，这可能不利地影响细胞功能和活力。出于这个原因，剪接调节剂已经成为用于治疗癌症的一类颇具前景的药物(Puthenveetil等人(2016)Bioconjugate Chem.[生物共轭化学]27：1880-8)。
先前示出了具有式I的普拉二烯内酯吡啶化合物，本文称为“化合物1”，及其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002853211320000021
也称为(2S，3S，6S，7R，10R，E)-7，10-二羟基-3，7-二甲基-12-氧代-2-((R，2E，4E)-6-(吡啶-2-基)庚-2，4-二烯-2-基)氧杂环十二碳-4-烯-6-基4-甲基哌嗪-1-甲酸酯，证明了在SF3b1突变细胞系中的剪接调节剂活性和细胞致死性。参见，例如美国专利号9,481,669B2和国际申请号PCT/US 2016/062525，其全部通过引用并入。
免疫检查点阻断(ICB)最近被证明是治疗若干种不同癌症类型的范式转变。然而，并非所有患者均表现出对ICB的稳健/持久的反应。参见，例如Zappasodi,R.等人EmergingConcepts for Immune Checkpoint Blockade-Based Combination Therapies[基于免疫检查点阻断的组合疗法的新兴概念].Cancer Cell[癌细胞]33,581-598,doi:10.1016/j.ccell.2018.03.005(2018)；和Wolchok,J.D.等人Overall Survival with CombinedNivolumab and Ipilimumab in Advanced Melanoma[用纳武单抗和伊匹单抗组合治疗晚期黑色素瘤下的总体生存率].N Engl J Med[新英格兰医学杂志]377,1345-1356,doi:10.1056/NEJMoa1709684(2017)。因此，需要发现互补的治疗剂以与ICB或任何其他疗法组合施用以改善和/或最大化患者反应。
在各种实施例中，本披露部分提供了具有对抗赘生性细胞的生物活性的普拉二烯内酯吡啶化合物。这些化合物可减慢、抑制和/或逆转哺乳动物中的肿瘤生长，且可用于治疗人类癌症患者。
在各种实施例中，本披露更具体地涉及能够结合并杀伤赘生性细胞的化合物1或其药学上可接受的盐。
在各种实施例中，本披露进一步涉及能够结合并递送细胞毒性剂(例如，本文披露的化合物)的缀合物(例如，抗体-药物缀合物(ADC)、肽-药物缀合物(PDC)等)，例如以杀伤靶向的赘生性细胞。在各种实施例中，本文披露的缀合物包含将化合物1或其药学上可接受的盐连接到细胞结合剂(例如，抗体、抗原结合片段、肽、受体、受体片段等)的接头。
在一些实施例中，本文披露的缀合物可以由式II表示：
X-(L-D)p (II)
其中
X是靶向赘生性细胞或另一肿瘤学相关靶标(例如，在癌细胞上显著地、排他地、或优先表达的抗原)的细胞结合剂；
D是具有式I的化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)；
L是将X共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
在一些实施例中，用于缀合物(例如，抗体-药物缀合物)中的细胞结合剂包含抗体或其抗原结合片段，或由其组成。在一些实施例中，缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)。在一些实施例中，缀合物是具有式II(a)的抗体-药物缀合物(ADC)：
Ab-(L-D)p (II(a))
其中
Ab是靶向赘生性细胞的抗体或其抗原结合片段；
D是具有式I的化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)；
L是将Ab共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
在一些实施例中，用于缀合物(例如，肽-药物缀合物)中的细胞结合剂包含肽(例如，线性肽或环肽)，或由其组成。在一些实施例中，缀合物是肽-药物缀合物(PDC)。在一些实施例中，缀合物是具有式II(b)的肽-药物缀合物(PDC)：
P-(L-D)p(II(b))
其中
P是靶向赘生性细胞的肽；
D是具有式I的化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)；
L是将P共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
在一些实施例中，用于缀合物中的细胞结合剂包含受体或受体片段，或由其组成。
本文还提供并描述了其他用于所披露的缀合物(例如，具有式II的缀合物)中的示例性细胞结合剂。例如，在一些实施例中，该细胞结合剂可包含DARPin、duobody、双环肽、纳米抗体、centyrin、MSH(黑素细胞刺激素)、受体-Fc融合分子、T细胞受体结构、类固醇激素、生长因子、或集落刺激因子。在一些实施例中，该细胞结合剂可包含非抗体支架(例如，结构域大小的支架或约束肽)。
在一些实施例中，用于本文披露的缀合物中的接头在细胞外是稳定的，使得该缀合物在细胞外条件下存在时保持完整，但当该缀合物在内化到细胞(例如，赘生性细胞)中之后，能够例如使用在连接细胞结合剂和细胞毒性剂的接头中的可裂解部分而被裂解。在一些实施例中，当缀合物进入细胞(该细胞表达由缀合物的细胞结合剂靶向的抗原)时，化合物1或其药学上可接受的盐从细胞结合剂(例如，抗体、抗原结合片段、肽、受体、或受体片段)上裂解下来。在一些实施例中，该接头是可裂解接头。在其他实施例中，通过细胞结合剂和/或接头的降解，使化合物1或其药学上可接受的盐从缀合物中释放。在一些实施例中，该接头是不可裂解接头。
在一些实施例中，p是从1至15的整数。在一些实施例中，p是从1至10的整数。在一些实施例中，p是从1至8的整数。在一些实施例中，p是从1至4的整数。在一些实施例中，p是从1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、或1至2的整数。在一些实施例中，p是从2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4、或2至3的整数。在一些实施例中，p是从2至3的整数。在一些实施例中，p是1、2、3、4、5、6、7、或8。
在一些实施例中，本文提供了诱导至少一种新抗原的方法，该方法包括使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触。在一些实施例中，这样的接触可以诱导至少一种新抗原的产生。
在一些实施例中，本文提供了在患有或疑似患有赘生性病症的受试者中诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，本文提供了治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法。在某些实施例中，该方法包括向受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答。
在一些实施例中，本文提供的方法可进一步包括施用至少一种另外的疗法。在一些实施例中，本文提供的方法可导致较低的全身性毒性和/或改善的耐受性。
在其他实施例中，本文提供了治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法。在一些实施例中，该方法包括向受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐，其中施用可以导致诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答。在一些实施例中，该方法还可包括在施用化合物1或其药学上可接受的盐之后，在受试者中检测一种或多种新抗原和/或T细胞应答。在一些实施例中，该方法还可包括如果检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答，则继续施用化合物1或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，本文提供了治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐。
在本文提供的方法的一些实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身或作为缀合物(例如，本文披露的任何示例性缀合物)的药物部分施用。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐作为组合物进行施用，该组合物包含多个拷贝的该化合物或多个拷贝的包含该化合物的缀合物。本文中披露了此类组合物。
在一些实施例中，本文提供了包含至少一种新抗原肽的新抗原疫苗。在一些实施例中，该至少一种新抗原肽包含通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的经修饰或新颖的新抗原序列。
附图说明
图1A-1C显示了施用化合物1作为唯一单一疗法、抗CTLA4抗体作为单一疗法、以及化合物1和抗CTLA4抗体作为组合疗法的抗肿瘤作用。
具体实施方式
结合附图，通过参考以下详细描述可更容易地理解所披露的组合物和方法，这些附图形成本披露的一部分。
在全文中，这些描述是指组合物和使用这些组合物的方法。当本披露描述或要求保护与组合物相关联的特征或实施例时，此类特征或实施例同样适用于使用该组合物的方法。同样，当本披露描述或要求保护与使用组合物的方法相关联的特征或实施例时，此类特征或实施例同样适用于该组合物。
当表示值的范围时，其包括使用该范围内的任何特定值的实施例。此外，提及在范围内陈述的值包括在那个范围内的每个且所有值。所有范围均包括其端点且可组合。当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应当理解，该特定值形成另一实施例。除非上下文另外明确说明，提及特定数值至少包括该特定值。除非另外指示其使用的具体环境，否则使用“或”将意指“和/或”。出于任何目的，本文引用的所有参考均通过引用而并入。在参考文献与本说明书矛盾的情况下，将以本说明书为准。
应理解，本文中为清楚起见而在单独实施例的上下文中描述的所披露的组合物和方法的某些特征还可以单个实施例的组合形式提供。相反，为简洁起见而在单个实施例的上下文中描述的所披露的组合物和方法的各种特征还可单独或以任何子组合形式提供。
定义
在整个说明书和权利要求书使用与描述方面相关的各种术语。除非另外指明，否则此类术语将具有其在本领域中的普通含义。其他具体定义的术语应以符合本文所提供的定义的方式解释。
如本文所使用，单数形式“一种/一个(a/an)”和“该(the)”包括复数形式，除非上下文中另外明确指明。
如技术人员从本文中所包含的教导而看出的，在数值和范围的上下文中，术语“约(about/approximately)”是指近似或接近所述值或范围的值或范围，使得实施例可根据预期执行，如在反应混合物中具有所需量的核酸或多肽。在一些实施例中，约意指数字量±10％。
如本文所使用，术语“缀合物”是指与一种或多种细胞结合剂连接的一种或多种治疗性化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)，并且由以下通式定义：X-(L-D)p(式II)，其中X＝细胞结合剂，L＝接头部分，D＝药物部分(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)，以及p＝药物部分的数目/细胞结合剂。在包含化合物1或其药学上可接受的盐的药物部分的缀合物中，“p”是指与细胞结合剂连接的药物部分的数目。示例性缀合物是具有式II的缀合物：
X-(L-D)p (II)
其中
X是靶向赘生性细胞的细胞结合剂；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将X共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
在一些实施例中，接头L是可裂解接头。在一些实施例中，接头L可以包括在细胞结合剂与治疗性化合物之间的可裂解部分。在一些实施例中，接头L可以包括可通过一个或多个间隔子单元连接至细胞结合剂和治疗性化合物之一或这两者的可裂解部分。在一些实施例中，当间隔子单元将可裂解部分连接至治疗性化合物时，其是自消融型间隔子单元。在一些实施例中，接头L不包括可裂解部分，且为不可裂解接头。在一些实施例中，接头L可以包括至少一个间隔子单元，该间隔子单元可以直接地连接至细胞结合剂以及治疗性化合物。
在一些实施例中，细胞结合剂X包含抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，细胞结合剂X包含肽。在一些实施例中，细胞结合剂X包含与抗原(例如，在癌细胞上排他地、显著地、或优先表达的抗原)相互作用的受体或受体片段。
如本文所使用，术语“细胞结合剂”是指能够结合至动物(例如人)细胞并递送药物部分(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)的任何试剂。该术语涵盖抗体和抗原结合片段(例如，单克隆抗体及其片段，如Fab和scFV)。该术语进一步涵盖肽和其他示例性细胞结合剂。例如，在一些实施例中，细胞结合剂可以是抗体、抗原结合片段、肽、或多种非抗体支架(例如DARPin、duobody、双环肽、纳米抗体、centyrin、MSH(黑素细胞刺激素)、受体-Fc融合分子、T细胞受体结构、类固醇激素(如雄激素和雌激素)、生长因子以及集落刺激因子(如EGF))中的任一种。在一些实施例中，该细胞结合剂包含DARPin、duobody、双环肽、纳米抗体、centyrin、MSH(黑素细胞刺激素)、受体-Fc融合分子、T细胞受体结构、类固醇激素、生长因子、或集落刺激因子。在一些实施例中，该细胞结合剂包含非抗体支架。在一些实施例中，非抗体支架可以大致分为两个结构种类，即结构域大小的化合物(约6-20kDa)和约束肽(约2-4kDa)。示例性结构域大小的支架包括但不限于affibody、affilin、anticalin、atrimer、DARPin、FN3支架(例如adnectin和centyrin)、fynomer、库尼茨(Kunitz)结构域、pronectin、O-body和受体-Fc融合蛋白，而示例性约束肽包括avimer、双环肽和Cys结(Cys-knot)。在一些实施例中，该细胞结合剂包含结构域大小的支架。在一些实施例中，该细胞结合剂和/或结构域大小的支架是affibody、affilin、anticalin、atrimer、DARPin、FN3支架、fynomer、库尼茨结构域、pronectin、O-body、或受体-Fc融合蛋白。在一些实施例中，该细胞结合剂包含约束肽。在一些实施例中，该细胞结合剂和/或约束肽是avimer、双环肽、或Cys结。非抗体支架评述于例如Vazquez-Lombardi等人(2015)Drug Dis Today[今日药物发现]20(10):1271-83中。
术语“抗体-药物缀合物”和“ADC”可互换使用，并且是指与一种或多种抗体或抗原结合片段连接的一种或多种治疗性化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)，并且由以下通式定义：A-(L-D)p(式II(a))，其中Ab＝抗体或抗原结合片段，L＝接头部分，D＝药物部分(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)，以及p＝药物部分的数目/抗体或抗原结合片段。在包含化合物1或其药学上可接受的盐的药物部分的ADC中，“p”是指与抗体或抗原结合片段连接的药物部分的数目。示例性ADC是具有式II(a)的ADC：
Ab-(L-D)p (II(a))
其中
Ab是靶向赘生性细胞的抗体或其抗原结合片段；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将Ab共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
在一些实施例中，接头L是可裂解接头。在一些实施例中，接头L可以包括在抗体或抗原结合片段与治疗性化合物之间的可裂解部分。在一些实施例中，接头L可以包括可通过一个或多个间隔子单元连接至该抗体或抗原结合片段和治疗性化合物之一或这两者的可裂解部分。在一些实施例中，当间隔子单元将可裂解部分连接至治疗性化合物时，其是自消融型间隔子单元。在一些实施例中，接头L不包括可裂解部分，且为不可裂解接头。在一些实施例中，接头L可以包括至少一个间隔子单元，该间隔子单元可以直接地连接至抗体或抗原结合片段以及治疗性化合物。
在一些实施例中，该抗体或抗原结合片段Ab是包含两条重链和两条轻链的四链抗体(也称为免疫球蛋白或者全长或完整抗体)。在一些实施例中，该抗体或抗原结合片段Ab是双链半抗体(一条轻链和一条重链)、或免疫球蛋白的抗原结合片段。在一些实施例中，该抗体或抗原结合片段Ab是免疫球蛋白中保持结合靶标癌症抗原的能力和/或提供免疫球蛋白的功能的抗原结合片段。在一些实施例中，该抗体或抗原结合片段Ab能够以高特异性和高亲和力结合靶标癌症抗原。在一些实施例中，该抗体或抗原结合片段Ab是内化性抗体或其内化性抗原结合片段。
在一些实施例中，该内化性抗体或其内化性抗原结合片段结合至细胞表面上表达的靶标癌症抗原并在结合后进入细胞。在一些实施例中，在ADC进入表达靶标癌症抗原的细胞并存在于该细胞中之后(即，在ADC内化之后)，化合物1或其药学上可接受的盐例如通过裂解、通过降解抗体或抗原结合片段、或通过任何合适的释放机制(例如酶促作用、水解、氧化)从该ADC中的抗体或抗原结合片段释放。
术语“抗体”以最广泛的含义用来是指通过免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点识别且特异性结合于靶标，如蛋白质、多肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或前述的组合的免疫球蛋白分子。抗体的重链由重链可变结构域(VH)和重链恒定区(CH)构成。轻链由轻链可变结构域(VL)和轻链恒定结构域(CL)构成。出于本申请的目的，成熟的重链和轻链可变结构域各自包含从N-末端至C-末端排列的四个框架区(FR1、FR2、FR3和FR4)内的三个互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。“抗体”可以是天然存在的或人造的，如通过常规杂交瘤技术产生的单克隆抗体。术语“抗体”包括全长单克隆抗体和全长多克隆抗体，以及抗体片段，如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv，以及单链抗体。抗体可以是免疫球蛋白的五种主要类别中的任一种：IgA、IgD、IgE、IgG、以及IgM，或其亚类(例如，同种型IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。该术语进一步涵盖人抗体、嵌合抗体、人源化抗体和含有抗原识别位点的任何经修饰的免疫球蛋白分子，只要它展示出所希望的生物学活性(例如，结合靶抗原、在表达靶抗原的细胞内内化)即可。
如本文所使用，术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”是指抗体或蛋白质中保留特异性结合抗原的能力的一个或多个片段。抗原结合片段还可保持内化至表达抗原的细胞中的能力。在一些实施例中，抗原结合片段还保持免疫效应子活性。已显示，全长抗体的片段可以执行全长抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”内所涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，一种包含由铰链区处的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)dAb片段，其包含单一可变结构域，例如VH结构域(参见例如Ward等人(1989)Nature[自然]341:544-6；以及WO 1990/005144)；以及(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由独立基因编码，但可以使用重组方法通过使它们能够以单一蛋白质链形式制造的合成接头而使它们接合，其中VL与VH区域配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv))。参见例如，Bird等人,(1988)Science[科学]242:423-6；和Huston等人(1988)ProcNatl Acad Sci.USA[美国科学院院刊]85:5879-83。此类单链抗体还意欲涵盖在术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”内，且其在本领域中已知为当结合时可内化至细胞中的示例性结合片段类型(参见例如Zhu等人(2010)9:2131-41；He等人(2010)J Nucl Med.[核医学杂志]51:427-32；和Fitting等人,(2015)MAbs 7:390-402)。在某些实施例中，scFv分子可以掺入融合蛋白中。还包括其他形式的单链抗体，如双抗体。双抗体是二价双特异性抗体，其中VH和VL结构域是在单一多肽链上表达，但使用太短而不允许同一链上的两个结构域之间配对的接头，由此迫使这些结构域与另一链的互补结构域配对且产生两个抗原结合位点(参见例如Holliger等人(1993)Proc Natl Acad Sci.USA[美国科学院院刊]90:6444-8；和Poljak等人(1994)Structure[结构]2:1121-3)。抗原结合片段是使用本领域技术人员已知的常规技术获得的，且这些结合片段是以与完整抗体相同的方式进行效用(例如结合亲和力、内化)筛选。抗原结合片段可通过裂解完整蛋白质，例如通过蛋白酶或化学裂解来制备。
术语“肽-药物缀合物”和“PDC”可互换使用，并且是指与一种或多种肽连接的一种或多种治疗性化合物(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)，并且由以下通式定义：P-(L-D)p(式II(b))，其中P＝肽(例如，线性肽或环肽)，L＝接头部分，D＝药物部分(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)，以及p＝药物部分的数目/肽。在包含化合物1或其药学上可接受的盐的药物部分的PDC中，“p”是指与肽连接的药物部分的数目。示例性PDC是具有式II(b)的PDC：
P-(L-D)p(II(b))
其中
P是靶向赘生性细胞的肽；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将P共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
在一些实施例中，接头L是可裂解接头。在一些实施例中，接头L可以包括在肽与治疗性化合物之间的可裂解部分。在一些实施例中，接头L可以包括可通过一个或多个间隔子单元连接至肽和治疗性化合物之一或这两者的可裂解部分。在一些实施例中，当间隔子单元将可裂解部分连接至治疗性化合物时，其是自消融型间隔子单元。在一些实施例中，接头L不包括可裂解部分，且为不可裂解接头。在一些实施例中，接头L可以包括至少一个间隔子单元，该间隔子单元可以直接地连接至肽以及治疗性化合物。
在一些实施例中，该肽P能够以高特异性和高亲和力结合靶标癌症抗原。在一些实施例中，由该肽靶向的靶标癌症抗原在细胞表面上表达或不在胞质溶胶或核内表达。在一些实施例中，该肽P是线性肽。在一些实施例中，该肽P是环肽。在一些实施例中，该肽P长度小于约250、约200、约150、约100、约50、约30、约20、约10、或约5个氨基酸。在一些实施例中，该肽P长度小于约100、约50、约30、约20、约10、或约5个氨基酸。
如本文所使用，术语“肽”是指氨基酸残基的聚合物。该术语涵盖包含通过肽键彼此结合的两个或更多个氨基酸的氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在氨基酸的人造化学模拟物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。该术语包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚体、异源二聚体、多肽的变体、经修饰的多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等。该术语还包括天然肽、重组肽、合成肽或其组合。
如本文关于细胞结合剂(例如，抗体、抗原结合片段、肽、受体、或受体片段)所使用，“内化”是指细胞结合剂当结合至细胞时能够穿过细胞的脂质双层膜进入内部隔室(即，“内化”)，优选地进入细胞中的降解隔室中。在一些实施例中，本文披露的缀合物中使用的细胞结合剂靶向细胞表面抗原且是内化性细胞结合剂(即，缀合物在抗原结合之后转移穿过细胞膜)。在一些实施例中，该内化性细胞结合剂结合细胞表面上的受体。靶向细胞膜上的受体的内化性细胞结合剂可以诱导受体介导的内吞作用。在一些实施例中，该内化性细胞结合剂经由受体介导的内吞作用进入细胞中。
如本文关于细胞结合剂(例如，抗体、抗原结合片段、肽、受体或受体片段)所使用，“非内化”是指细胞结合剂在与细胞结合后保留在细胞表面处。在一些实施例中，本文所披露的缀合物中使用的细胞结合剂靶向细胞表面抗原且为非内化性细胞结合剂(即，缀合物在抗原结合之后保留在细胞表面处且不转移穿过细胞膜)。在一些实施例中，非内化性细胞结合剂结合非内化性受体或其他细胞表面抗原。示例性非内化性细胞表面抗原包括但不限于CA125和CEA，且结合至非内化性抗原靶标的细胞结合剂也是本领域已知的(参见例如Bast等人(1981)J Clin Invest.[临床研究杂志]68(5):1331-7；Scholler和Urban(2007)Biomark Med.[医学中的生物标志物]1(4):513-23；和Boudousq等人(2013)PLoS One[公共科学图书馆·综合]8(7):e69613)。
在本文中使用“接头”或“接头部分”用于指能够将化合物(通常为药物部分，如化合物1或其药学上可接受的盐)共价接合至另一部分(例如，细胞结合剂(如抗体、抗原结合片段、肽、受体、或受体片段))的任何化学部分。在使化合物和/或细胞结合剂保持活性的条件下，接头可易感于或基本上抵抗肽酶诱导的裂解、酸诱导的裂解、基于光的裂解、酯酶诱导的裂解和/或二硫键裂解。例如，接头可为“可裂解的”或“不可裂解的”(Ducry和Stump(2010)Bioconjugate Chem.[生物共轭化学]21:5-13)。可裂解接头被设计成当经受某些环境因素(例如当内化至靶细胞中)时释放出药物部分(例如化合物1或其药学上可接受的盐)，而不可裂解接头通常依赖于细胞结合剂本身的降解。
在一些实施例中，该接头是不可裂解接头。在一些实施例中，本文披露的缀合物的药物部分(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)通过细胞结合剂的降解而释放。当被靶细胞内化且在靶细胞内降解时，不可裂解接头往往会保持与细胞结合剂的至少一个氨基酸以及药物共价缔合。示例性不可裂解接头可包括硫醚、环己基、N-琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1甲酸酯(SMCC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、一个或多个聚乙二醇(PEG)部分、或一个或多个烷基部分。
在一些实施例中，该接头是可裂解接头。可裂解接头是指包含可裂解部分的任何接头。如本文所使用，术语“可裂解部分”是指可被裂解的任何化学键。合适的可裂解化学键是本领域熟知的且包括但不限于蛋白酶/肽酶不稳定性键、酸不稳定性键、光不稳定性键、二硫键和酯酶不稳定性键。包含可裂解部分的接头可经由在该接头的特定位点处裂解而允许药物部分(例如化合物1或其药学上可接受的盐)从缀合物释放。在一些实施例中，接头和/或可裂解部分包含可裂解肽部分，即，可以被细胞内环境中存在的试剂裂解的任何化学键连接的氨基酸(天然或合成氨基酸衍生物)。
在一些实施例中，该接头可在细胞内条件下裂解，该接头的裂解使药物部分(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)在细胞内环境中充分地从细胞结合剂释放，以激活药物和/或使药物在治疗上有效。在一些实施例中，直到缀合物进入表达对缀合物中的细胞结合剂具有特异性的抗原的细胞，药物部分才从细胞结合剂裂解，并且在进入细胞后，该药物部分从该细胞结合剂裂解。在一些实施例中，该接头包含可裂解部分，该可裂解部分被固定放置使得该接头的任何部分或该细胞结合剂在裂解后都不会与该药物部分保持结合。示例性可裂解接头包括蛋白酶/肽酶敏感性接头，pH敏感性接头(例如酸不稳定性和/或可水解接头)，光不稳定性接头，含二甲基、二硫化物或磺酰胺的接头。
在一些实施例中，接头可为树突型接头，其经由分支的多功能接头部分将超过一个药物部分(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)共价连接至细胞结合剂。参见，例如Sun等人(2002)Bioorg Med Chem Lett.[生物有机化学与药物化学快报]12:2213-5；和Sun等人(2003)Bioorg Med Chem.[生物有机化学与药物化学]11:1761-8。树突状接头可增加药物与细胞结合剂的摩尔比，即药物负载，其与缀合物的效力有关。因此，在细胞结合剂只具有一个反应性半胱氨酸硫醇基团的情况下，例如，许多药物部分可通过树突状接头连接。在一些实施例中，接头部分或接头-药物部分可以经由还原的二硫桥连化学或限制性赖氨酸利用技术连接至细胞结合剂。参见，例如WO 2013/173391和WO 2013/173393。
WO 2017/151979、US 2017/0252458和US 2018/0193478提供了所有示例性接头、连接细胞结合剂(例如抗体)的示例性接头连接点、以及示例性细胞结合剂(例如，抗体)，并且将这些文献通过引用并入本文。
在一些实施例中，在任何本文披露的缀合物中的接头可以包含至少一个间隔子单元，该间隔子单元将细胞结合剂接合至药物部分(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)。在一些实施例中，在细胞结合剂与可裂解部分之间的间隔子单元当存在时，将接头中的裂解位点(例如可裂解肽部分)接合至细胞结合剂。在一些实施例中，在药物部分与可裂解部分之间的间隔子单元当存在时，将接头中的裂解位点(例如可裂解肽部分)接合至药物部分。在一些实施例中，不存在裂解位点，且使用间隔子单元将细胞结合剂连接至药物部分。
间隔子单元可以为“自消融型”或“非自消融型”。“非自消融型”间隔子单元是在接头裂解时间隔子单元的一部分或全部仍结合至药物部分(例如，化合物1或其药学上可接受的盐)的间隔子单元。非自消融型间隔子单元的实例包括但不限于甘氨酸间隔子单元和甘氨酸-甘氨酸间隔子单元。非自消融型间隔子单元最终可随时间降解，但在细胞条件下不会容易地完全释放出所连接的原生药物部分。“自消融型”间隔子单元允许在细胞内条件下释放出原生药物部分。“原生药物”或“原生药物部分”是在间隔子单元裂解/降解之后不剩余任何间隔子单元部分或其他化学修饰的药物或药物部分。
药物负载由p表示。术语“p”或“药物负载”是指药物部分的数目/细胞结合剂，即，例如在具有式II的缀合物中，-L-D部分的数目/细胞结合剂(X)。该术语也可指例如在具有式II(a)的ADC中，L-D部分的数目/抗体或抗原结合片段(Ab)，或指在具有式II(b)的PDC中，L-D部分的数目/肽(P)。例如，在具有式II的缀合物中，如果两种化合物(例如，各自具有化合物1的结构的两种化合物，或其药学上可接受的盐)与细胞结合剂连接，则p＝2。在一些实施例中，p是从1至15的整数。在一些实施例中，p是从1至10、1至8、或1至4的整数。在一些实施例中，p是从1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、或1至2的整数。在一些实施例中，p是从2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4、或2至3的整数。在一些实施例中，p是从2至3的整数。在一些实施例中，p是1、2、3、4、5、6、7、或8。
在包含多个拷贝的缀合物(例如，具有式II的缀合物)的组合物中，“平均p”是指-L-D部分的平均数目/细胞结合剂，也称为“平均药物负载”。
在本文中使用术语“化学治疗剂”或“抗癌剂”用于指有效治疗癌症的所有试剂，不管其作用机制如何。抑制转移或血管生成通常是化学治疗剂的特性。化学治疗剂包括抗体、生物分子和小分子，且涵盖本文所述的剪接调节剂化合物。化学治疗剂可以为细胞毒性剂或细胞生长抑制剂。术语“细胞生长抑制剂”是指抑制或遏止细胞生长和/或细胞增殖的试剂。术语“细胞毒性剂”是指主要通过干扰细胞的表达活性和/或功能来引起细胞死亡的物质。
如本文所使用，术语“化合物1”或“化合物1或其药学上可接受的盐”是指选自具有式I的化合物及其药学上可接受的盐的至少一种实体。此外，除非另有说明，否则“具有式I的化合物”可以是该(这些)化合物的一种或多种对映体、非对映体和/或几何(或构象)形式；例如，每个不对称中心的R和S构型，(Z)和(E)双键异构体以及(Z)和(E)构象异构体。除非另有说明，否则本文描绘的与互变异构形式共存的化合物在本披露的范围内。另外，除非另有说明，否则本文描绘的结构还意在包括仅在一个或多个同位素富集的原子存在下不同的化合物。例如，具有所描绘结构(除了氢被氘或氚替代，或者碳被13C-或14C-富集的碳替代)的化合物在本披露的范围内。此类化合物可用作例如生物测定中的分析工具或探针。
式I可以由以下表示：
Figure BDA0002853211320000181
和/或化学名称(2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-二羟基-3,7-二甲基-12-氧代-2-((R,2E,4E)-6-(吡啶-2-基)庚-2,4-二烯-2-基)氧杂环十二碳-4-烯-6-基4-甲基哌嗪-1-甲酸酯。
如本文所使用，术语“抑制(inhibit/inhibition of)”意指减少可测量的量，且可包括但不需要完全防止或抑制。
术语“赘生性病症”和“癌症”在本文中可互换使用，是指存在具有致癌细胞特有的特征(如不受控制的增殖、不灭性、转移可能性、快速的生长和增殖速率、和/或某些形态特征)的细胞。通常，癌细胞可呈肿瘤或团块形式，但此类细胞可单独存在于受试者内，或可在血流中作为独立细胞(如白血病细胞或淋巴瘤细胞)循环。术语“赘生性病症”和“癌症”包括所有类型的癌症和癌症转移，包括血液恶性病、实体瘤、肉瘤、癌以及其他实体瘤和非实体瘤癌症。血液恶性病可以包括B细胞恶性病、血液癌症(白血病)、浆细胞癌症(骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤)或淋巴结癌症(淋巴瘤)。示例性B细胞恶性病包括慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤。白血病可以包括急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、急性单核细胞性白血病(AMoL)等。淋巴瘤可以包括霍奇氏金淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。其他血液恶性病可包括骨髓增生异常综合症(MDS)。实体瘤可以包括癌，如腺癌，例如乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌或结肠直肠癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、胆管癌、神经胶质瘤、黑色素瘤等。
术语“肿瘤”和“赘生物”是指由过量细胞生长或增殖引起的任何组织团块，可为良性或恶性的，包括癌前病变。
术语“肿瘤细胞”与“赘生性细胞”可互换使用且是指源自肿瘤或赘生物的单个细胞或总细胞群，包括非致瘤细胞和癌干细胞两种。如本文所使用，当术语“肿瘤细胞”仅指缺乏更新和分化能力的肿瘤细胞时，该术语“肿瘤细胞”将由术语“非致瘤”修饰以区分肿瘤细胞与癌干细胞。
术语“受试者”和“患者”在本文中可互换地使用，是指任何动物，如任何哺乳动物，包括但不限于人、非人灵长类动物、啮齿动物等。在一些实施例中，该哺乳动物是小鼠。在一些实施例中，该哺乳动物是人。在一些实施例中，该受试者是小鼠。在一些实施例中，该受试者是人。
术语“共施用”或“组合”施用一种或多种治疗剂包括同时施用和按任何顺序连续施用。
“药物组合物”是指以下制剂，该制剂呈允许施用一种或多种活性成分且随后提供一种或多种活性成分的预期生物活性和/或实现治疗作用的形式，且不含对将施用该配制剂的受试者具有不可接受毒性的额外组分。该药物组合物可为无菌的。
“药物赋形剂”包含例如佐剂、载体、pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、润湿剂、防腐剂等材料。
“药学上可接受的”意指由联邦或州政府的管理机构批准或可核准的、或在美国药典或其他一般公知的药典中列出的用于在动物并且更特别地在人中使用。
“药学上可接受的盐”是保留母体化合物所希望的生物学活性并且不赋予不希望的毒理学作用的盐。此类盐的实例是：(a)与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等形成的酸加成盐；以及与有机酸例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、葡萄糖酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、棕榈酸、海藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸等形成的盐；以及(b)由元素阴离子如氯、溴和碘形成的盐。参见，例如，Haynes等人,“Commentary:Occurrence of Pharmaceutically AcceptableAnions and Cations in the Cambridge Structural Database[评论：剑桥结构数据库中药学上可接受的阴离子和阳离子的存在]”,J.Pharmaceutical Sciences[药物科学杂志],第94卷,第10期(2005)，和Berge等人,“Pharmaceutical Salts[药用盐]”,J.Pharmaceutical Sciences[药物科学杂志],第66卷,第1期(1977)，将其通过引用并入本文。
如本文所使用，术语“有效量”是指足以执行特别陈述的目的，例如在施用之后产生治疗作用，如减小肿瘤生长速率或肿瘤体积、减少癌症症状、或治疗功效的某些其他指标的本文所述的化合物1或其药学上可接受的盐的量。有效量能以与所述目的相关的常规方式测定。术语“治疗有效量”是指可有效检测杀伤肿瘤细胞、减少和/或抑制肿瘤细胞的生长或扩散、肿瘤的尺寸或数目、和/或癌症的水平、分期、进展和/或严重程度的其他量度的本文所述的化合物1或其药学上可接受的盐的量。治疗有效量可根据预期应用(体外或体内)或所治疗的受试者和疾病病况，例如受试者的体重和年龄、疾病病况的严重程度、施用方式等而变化，其可由本领域普通技术人员容易地确定。该术语还适用于会在靶细胞中诱导特定响应(例如抑制细胞生长)的剂量。具体剂量可根据例如特定药物组合物、受试者及其年龄和现有健康状况或健康状况的风险、遵循的给药方案、疾病的严重程度、其是否与其他试剂组合施用、施用时间安排、其所施用的组织以及载运其的物理递送系统而变化。在癌症的情况下，治疗有效量的化合物1或其药学上可接受的盐可以减少癌细胞的数目、减小肿瘤尺寸、抑制(例如减慢或停止)肿瘤转移、抑制(例如减慢或停止)肿瘤生长、和/或缓解一种或多种症状。
“预防有效量”是指以剂量计并且持续所需的时间段以实现所希望的预防结果的有效的量。典型地，因为预防的剂量是在疾病之前或早期在受试者体内使用的，所以这种预防有效量将小于治疗有效量。
如本文所使用，“用于治疗(to treat)”或“治疗的(therapeutic)”以及语法相关术语是指疾病的任何后果的任何改善，如延长存活期、较低发病率、和/或减轻由替代性治疗模式引起的副作用。如本领域中容易理解的，治疗行为涵盖但不需要疾病的完全根除。如本文所使用，“治疗(treatment/treat)”是指将本文所述的化合物1或其药学上可接受的盐施用于受试者，例如患者。治疗可为治愈、痊愈、减轻、缓解、改变、补救、改良、缓和、改善或影响病症、病症的症状或患该病症(例如癌症)的倾向性。在一些实施例中，除治疗患有病况的受试者外，还可预防性提供本文所披露的组合物以预防或降低发展该病况的可能性。
新抗原和使用方法
在各种实施例中，本文披露了通过在肿瘤细胞中诱导新抗原而治疗患者的方法，这些肿瘤细胞可由患者的免疫系统靶向进而清除。不受理论束缚，在各种实施例中，施用单独的和/或作为缀合物或组合物的一部分的化合物1或其药学上可接受的盐可以产生诱导免疫应答、诱导双链RNA免疫应答(例如，由于重新表达的内含子保留的内源性逆转录病毒)的新抗原，和/或产生诱导免疫原性细胞死亡的新抗原。
如本文所使用，术语“新抗原”是指先前未使免疫系统暴露的、由一个或多个肿瘤特异性突变产生的任何抗原。肿瘤特异性突变可包括错义突变、移码、易位和mRNA剪接变体，以及影响转译后加工(如磷酸化和糖基化)的突变。在各种实施例中，这些示例性突变可源自改变mRNA加工(例如剪接)的非同义编码变化和/或突变。在各种实施例中，所有这些示例性突变均可导致分子变化，这些分子变化可由适当T细胞受体辨别。在各种优选实施例中，示例性新抗原是通过递送单独的和/或作为缀合物或组合物的一部分的化合物1或其药学上可接受的盐所诱导的新抗原。在各种实施例中，递送单独的或作为缀合物或组合物的一部分的化合物1或其药学上可接受的盐可以诱导新的mRNA剪接，其导致翻译出免疫系统先前未暴露过的、代表新抗原的蛋白质。新抗原可以天然存在或由试剂(例如剪接调节剂)诱导。在各种实施例中，肿瘤特异性突变可以是由递送或施用单独的和/或作为缀合物或组合物的一部分的化合物1或其药学上可接受的盐而产生的mRNA剪接变体。
不受理论束缚，在各种实施例中，施用单独的或作为缀合物或组合物的一部分的化合物1或其药学上可接受的盐可以诱导mRNA剪接，其导致翻译出由免疫系统作为外来物识别的、代表新抗原的蛋白质。这些新抗原可以例如被T细胞靶向，导致针对产生新抗原的肿瘤细胞的放大的宿主应答。另外，不受理论束缚，在各种实施例中，递送单独的和/或作为缀合物或组合物的一部分的化合物1或其药学上可接受的盐可引起内含子保留的内源性逆转录病毒的重新表达，这引起双链RNA免疫应答。此外，不受理论束缚，在各种实施例中，递送单独的和/或作为缀合物或组合物的一部分的化合物1或其药学上可接受的盐可导致通过化合物1诱导的突变源性新抗原的释放所触发的免疫原性细胞死亡。在各种实施例中，递送单独的和/或作为缀合物或组合物的一部分的化合物1或其药学上可接受的盐可诱导双链RNA免疫应答。在各种实施例中，双链RNA免疫应答可由内含子保留的内源性逆转录病毒的重新表达引起。在各种实施例中，双链RNA免疫应答可导致肿瘤细胞死亡。在各种实施例中，递送单独的和/或作为缀合物或组合物的一部分的化合物1或其药学上可接受的盐可诱导免疫原性细胞死亡。在各种实施例中，免疫原性细胞死亡可由突变源性新抗原的释放和/或针对肿瘤细胞的宿主免疫应答引起。
因此，在各种实施例中，披露了治疗方法，这些治疗方法包括通过施用化合物1或其药学上可接受的盐来诱导新抗原。在各种实施例中，该方法包括施用与不诱导新抗原所需的剂量相比降低剂量的化合物1或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，该方法包括施用一个或多个初始诱导剂量以产生新抗原并诱导免疫应答(例如将初始T细胞转化成记忆细胞)，随后施用降低的剂量或施用频率(即，由于化合物1或其药学上可接受的盐的组合作用和新抗原的免疫靶向)。在一些实施例中，治疗可包括施用化合物1或其药学上可接受的盐以诱导基于新抗原的免疫应答与施用至少一种另外的疗法(例如第二抗癌疗法)的组合。例如，在一些实施例中，治疗可包括施用化合物1或其药学上可接受的盐以诱导基于新抗原的免疫应答与施用一种或多种检查点抑制剂的组合。在一些实施例中，治疗可包括施用化合物1或其药学上可接受的盐以诱导基于新抗原的免疫应答与施用一种或多种细胞因子或细胞因子类似物的组合。在一些实施例中，治疗可包括施用化合物1或其药学上可接受的盐以诱导基于新抗原的免疫应答与施用一种或多种新抗原疫苗的组合。在一些其他实施例中，治疗可包括施用化合物1或其药学上可接受的盐以诱导基于新抗原的免疫应答与施用工程化肿瘤靶向性T细胞(例如CAR-T)的组合。
在一些实施例中，新抗原可以用于监测化合物1或其药学上可接受的盐治疗的有效性。例如，在施用化合物1或其药学上可接受的盐之后，可以获得患者样品(例如肿瘤活检)并针对新抗原或针对免疫或炎症应答的标识物进行筛选。如果检测到新抗原和/或免疫应答，则可例如以降低的剂量提供进一步的治疗。
在各种实施例中，披露了治疗方法，这些治疗方法包括通过施用化合物1或其药学上可接受的盐来诱导双链RNA免疫应答。
在各种实施例中，披露了治疗方法，这些治疗方法包括通过施用化合物1或其药学上可接受的盐来诱导免疫原性细胞死亡。
在各种实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐的施用可以与任何已知抗癌疗法组合。可用于肿瘤治疗的当前免疫活化策略的实例包括但不限于用免疫检查点抑制剂(ICI)分子治疗、用细胞因子或细胞因子类似物治疗、用肿瘤相关疫苗进行疫苗接种以及工程化肿瘤靶向性T细胞(例如扩增肿瘤浸润性淋巴细胞或CAR-T)。这些技术主要集中于增强或诱导对已经存在的肿瘤抗原(细胞表面蛋白的突变或异常表达)的免疫应答。这些策略中的一种或多种可能涉及一种或多种能够诱导抗原性T细胞反应的突变。例如，患者对检查点抑制的应答可能与非同义突变负担相关。另外，可以使用依赖于先前存在的突变和这些突变的抗原性的癌症疫苗方法。
化合物1或其药学上可接受的盐可诱导发生在多个谱系中的、转录组的大范围变化。这些mRNA变化的翻译可产生稳健且可再现的蛋白质变化，这些蛋白质变化产生在多个HLA同种型中具有高亲和力的MHC1结合新肽。不受理论束缚，由于转录组和蛋白质组的大量变化，用化合物1或其药学上可接受的盐的治疗可以富集潜在反应性新抗原的数目以增强适应性免疫应答的参与。
在本文所述方法的各种实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身。在本文所述方法的各种实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐作为缀合物或组合物(例如，包含化合物1或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物)的一部分进行施用。在各种实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐作为组合物(例如，药物组合物)进行施用，该组合物包含多个拷贝的该化合物。在各种实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐作为组合物(例如，药物组合物)进行施用，该组合物包含多个拷贝的携带该化合物的一种或多种缀合物。在各种实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐作为抗体-药物缀合物、肽-药物缀合物、或本文披露的任何示例性缀合物进行施用。
在本文所述方法的各种实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐作为缀合物的一部分进行施用。
在一些实施例中，缀合物是具有式II的化合物：
X-(L-D)p (II)
其中
X是靶向赘生性细胞的细胞结合剂；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将X共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
在一些实施例中，该细胞结合剂包含抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，该缀合物是抗体-药物缀合物。在一些实施例中，该缀合物是具有式II(a)的抗体-药物缀合物：
Ab-(L-D)p (II(a))
其中
Ab是靶向赘生性细胞的抗体或其抗原结合片段；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将Ab共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
在一些实施例中，该细胞结合剂包含肽。在一些实施例中，该缀合物是肽-药物缀合物。在一些实施例中，该缀合物是具有式II(b)的肽-药物缀合物：
P-(L-D)p (II(b))
其中
P是靶向赘生性细胞的肽；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将P共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
在一些实施例中，该细胞结合剂包含DARPin、duobody、双环肽、纳米抗体、centyrin、MSH(黑素细胞刺激素)、受体-Fc融合分子、T细胞受体结构、类固醇激素、生长因子、或集落刺激因子。在一些实施例中，该细胞结合剂包含非抗体支架。在一些实施例中，该非抗体支架包含结构域大小的支架或约束肽。在一些实施例中，该结构域大小的支架是affibody、affilin、anticalin、atrimer、DARPin、FN3支架、fynomer、库尼茨结构域、pronectin、O-body、或受体-Fc融合蛋白。在一些实施例中，该约束肽是avimer、双环肽、或Cys结。
在一些实施例中，L是可裂解接头。在一些实施例中，L是不可裂解接头。在一些实施例中，p是从1至10的整数。在一些实施例中，p是从1至8的整数。在一些实施例中，p是从1至4的整数。
免疫诱导和治疗方案：
在各种实施例中，本披露提供了通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导至少一种新抗原的方法。在各种实施例中，本披露提供了通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导双链RNA免疫应答的方法。在各种实施例中，本披露提供了通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导免疫原性细胞死亡的方法。在各种实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。
在一些实施例中，赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。在一些实施例中，赘生性细胞获得自受试者。在一些实施例中，赘生性细胞存在于受试者中。在一些实施例中，赘生性细胞来源于血液恶性病或实体瘤。在一些实施例中，该血液恶性病选自B细胞恶性病、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。在一些实施例中，该血液恶性病选自急性骨髓性白血病和多发性骨髓瘤。在一些实施例中，实体瘤选自乳腺癌(例如，HER2阳性乳腺癌)、胃癌(例如，胃腺癌)、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、子宫癌、涎腺导管癌、黑色素瘤、结肠癌、以及食道癌。在一些实施例中，实体瘤选自HER2阳性乳腺癌、胃腺癌和前列腺癌。
在各种实施例中，本披露进一步提供了在患有或疑似患有赘生性病症的受试者中通过向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐来诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答的方法。在各种实施例中，本文还提供了通过向患有或疑似患有赘生性病症的受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐来治疗该受试者的方法，其中该化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答。在各种实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。
在各种其他实施例中，本披露提供了在患有或疑似患有赘生性病症的受试者中通过向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐来诱导双链RNA免疫应答的方法。在各种实施例中，本文还提供了通过向患有或疑似患有赘生性病症的受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐来治疗该受试者的方法，其中该化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导双链RNA免疫应答。在各种实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。
在还其他实施例中，本披露提供了在患有或疑似患有赘生性病症的受试者中通过向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐来诱导免疫原性细胞死亡的方法。在各种实施例中，本文进一步提供了通过向患有或疑似患有赘生性病症的受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐来治疗该受试者的方法，其中该化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导免疫原性细胞死亡。在各种实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。
在本文所述治疗方法的一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量由于至少一种新抗原和/或T细胞应答的诱导而降低。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐的标准给药方案，化合物1或其药学上可接受的盐以减少至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％的频率施用。在一些实施例中，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量和/或剂量导致较低的全身性毒性和/或改善的耐受性。
在一些实施例中，本文所述的方法可以进一步包括施用至少一种另外的疗法(例如，检查点抑制剂、新抗原疫苗、细胞因子或细胞因子类似物、CAR-T等)。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的标准剂量，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的量由于至少一种新抗原和/或T细胞应答的诱导而降低。在一些实施例中，与化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的标准剂量相比，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的量由于双链RNA免疫应答的诱导而降低。在一些实施例中，与化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的标准剂量相比，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的量由于免疫原性细胞死亡的诱导而降低。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的标准剂量，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的标准给药方案，化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法以减少至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％的频率施用。在一些实施例中，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的量和/或剂量导致较低的全身性毒性和/或改善的耐受性。
如本文所使用，术语“标准剂量”或“标准给药方案”是指治疗剂的任何常见或常规给药方案，例如由制造商提出、经监管机构批准或以其他方式在人类受试者中经测试满足平均患者需求的方案。在一些实施例中，治疗剂是化合物1或其药学上可接受的盐。
类似地，伊匹单抗(示例性抗CTLA4检查点抑制剂抗体)的标准给药方案可为每3周经90分钟静脉内施用3mg/kg，持续4次剂量(
Figure BDA0002853211320000291
(伊匹单抗)FDA标签补充，2018)。伊匹单抗的另一种标准给药方案可为每3周经90分钟静脉内施用10mg/kg，持续4次剂量，随后每12周施用10mg/kg，持续长达3年(
Figure BDA0002853211320000292
(伊匹单抗)FDA标签补充，2018)。
作为另一实例，纳武单抗(示例性抗PD1检查点抑制剂抗体)的标准给药方案可为每2周经60分钟静脉内施用3mg/kg(
Figure BDA0002853211320000293
(纳武单抗)FDA标签补充，2015)。
作为另一实例，阿特珠单抗(示例性抗PDL1检查点抑制剂抗体)的标准给药方案可为每3周经60分钟静脉内施用1200mg(
Figure BDA0002853211320000294
(阿特珠单抗)FDA标签补充，2018)。
在一些实施例中，在施用至少一种另外的疗法之前，开始施用化合物1或其药学上可接受的盐。在其他实施例中，在施用至少一种另外的疗法之后，开始施用化合物1或其药学上可接受的盐。在还其他实施例中，在施用至少一种另外的疗法的同时，开始施用化合物1或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，在初始施用之后，重复施用化合物1或其药学上可接受的盐至少一次。在一些实施例中，相对于用于初始施用的量，用于重复施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量，用于重复施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量和初始剂量，用于重复施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
在一些实施例中，在初始施用之后，重复施用至少一种另外的疗法至少一次。在一些实施例中，相对于用于初始施用的量，用于重复施用的至少一种另外的疗法的量降低。在一些实施例中，相对于至少一种另外的疗法的标准剂量，用于重复施用的至少一种另外的疗法的量降低。在一些实施例中，相对于至少一种另外的疗法的标准剂量或初始剂量，用于重复施用的至少一种另外的疗法的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
在一些实施例中，重复施用化合物1或其药学上可接受的盐与重复施用至少一种另外的疗法同时进行。在一些实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐与重复施用至少一种另外的疗法依序或错开进行。
在一些实施例中，该至少一种另外的疗法包括施用检查点抑制剂，例如本文披露的任何检查点抑制剂。在一些实施例中，该受试者对单独施用时的检查点抑制剂不耐受、无响应或响应不良。在一些实施例中，该检查点抑制剂靶向PD1/PDL1、CTLA4、OX40、CD40、LAG3、TIM3、GITR和/或KIR。在一些实施例中，该检查点抑制剂靶向CTLA4、OX40、CD40和/或GITR。在一些实施例中，检查点抑制剂是对其靶标具有抑制或激动活性的抗体。在一些实施例中，检查点抑制剂与抑制性抗体或其他类似抑制性分子一起靶向。在其他实施例中，检查点抑制剂与激动剂抗体或其他类似激动剂分子一起靶向。
在一些其他实施例中，该至少一种另外的疗法包括施用新抗原疫苗，例如本文所披露的任何新抗原疫苗。在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽。在一些实施例中，该至少一种新抗原肽的长度在约10个至约35个氨基酸范围内。在一些实施例中，该至少一种新抗原肽的长度在约15个至约25个氨基酸范围内。在一些实施例中，该至少一种新抗原肽包含已知的新抗原序列。在一些实施例中，该已知的新抗原序列是针对受试者的个性化新抗原疫苗。
术语“个性化”当用于描述新抗原疫苗时是指通过以下产生的疫苗：鉴定在患者体内产生的一种或多种新抗原，优选地更早暴露于化合物1或其药学上可接受的盐而产生的新抗原，然后使用这些新抗原中的一种或多种作为针对同一患者的疫苗的基础。因此，在一些实施例中，给予患者化合物1或其药学上可接受的盐并筛选由该治疗产生的新抗原。随后，在一些实施例中，使用这些新抗原中的一种或多种产生给予患者的个性化疫苗。在一些实施例中，可向患者施用一次或重复施用化合物1或其药学上可接受的盐、和/或肽或mRNA疫苗。
术语“通用”当用于描述新抗原疫苗时是指具有基于一种或多种常见或已知新抗原的肽或mRNA序列的疫苗，该肽或mRNA序列是通过对多个患者和/或患者组织样品中产生的新抗原(优选由于暴露于化合物1或其药学上可接受的盐而产生的)进行测序所观察到的。随后，在一些实施例中，使用该肽或mRNA序列对其他患者进行疫苗接种。在一些实施例中，给予患者化合物1或其药学上可接受的盐，然后给予已知新抗原的肽或mRNA疫苗，以增强针对由化合物1或其药学上可接受的盐产生的新抗原的免疫应答。在一些实施例中，可向患者施用一次或重复施用化合物1或其药学上可接受的盐、和/或肽或mRNA疫苗。
在一些实施例中，已通过对受试者中由施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐诱导的至少一种新抗原肽或其编码mRNA进行测序而鉴定了已知新抗原序列。在一些实施例中，该至少一种新抗原肽包含通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的经修饰或新颖的新抗原序列。在一些实施例中，赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。在一些实施例中，赘生性细胞获得自受试者。在一些实施例中，赘生性细胞存在于受试者中。
在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的载体(例如本文所述的任何示例性载体)。在一些实施例中，该至少一种新抗原肽与药学上可接受的载体连接。在一些实施例中，该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。在一些实施例中，该新抗原肽和该药学上可接受的载体经由接头共价连接。在一些实施例中，该新抗原肽和该药学上可接受的载体表达为融合蛋白。在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的稀释剂。在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的佐剂。
在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA。在一些实施例中，该至少一种新抗原mRNA编码已知的新抗原序列。在一些实施例中，该已知的新抗原序列是针对受试者的个性化新抗原疫苗。在一些实施例中，已通过对受试者中由施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐诱导的至少一种新抗原进行测序而鉴定了已知新抗原序列。在一些实施例中，该至少一种新抗原mRNA编码通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的经修饰或新颖的新抗原序列。在一些实施例中，赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。在一些实施例中，赘生性细胞获得自受试者。在一些实施例中，赘生性细胞存在于受试者中。
在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的载体(例如本文所述的任何示例性载体)。在一些实施例中，该至少一种新抗原mRNA与药学上可接受的载体连接。在一些实施例中，该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的稀释剂。在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的佐剂。在一些实施例中，该新抗原mRNA通过包封剂包封。在一些实施例中，该包封剂是脂质体。在一些实施例中，该包封剂是纳米颗粒。
在一些实施例中，该至少一种另外的疗法包括施用细胞因子或细胞因子类似物，例如本文所披露的任何细胞因子或细胞因子类似物。在一些实施例中，该受试者对单独施用时的该细胞因子或细胞因子类似物不耐受、无响应或响应不良。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含T细胞增强子。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-2、IL-10、IL-12、IL-15、IFNγ和/或TNFα。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-2、IL-10、IL-12和/或IL-15。在一些实施例中，在施用化合物1或其药学上可接受的盐之后，由于新抗原的诱导和呈递，施用该细胞因子或细胞因子类似物使T细胞致敏增强。
在一些实施例中，该至少一种另外的疗法包括施用工程化的肿瘤靶向性T细胞(即，CAR-T)，例如本文所披露的任何CAR-T疗法。
在一些实施例中，本文所述的方法可进一步包括在施用化合物1或其药学上可接受的盐之后，在受试者中检测一种或多种新抗原和/或T细胞应答，并且任选地，如果检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答，则继续施用化合物1或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，在受试者中检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答表明用化合物1或其药学上可接受的盐治疗的功效。在一些实施例中，如果检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答，则继续用该另外的疗法以及化合物1或其药学上可接受的盐进行治疗。在一些实施例中，如果检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答，则以降低的剂量和/或频率继续治疗。
在一些实施例中，本文所述的方法可进一步包括在施用化合物1或其药学上可接受的盐之后，在受试者中检测双链RNA免疫应答，并且任选地，如果检测到双链RNA免疫应答，则继续施用化合物1或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，在受试者中检测到双链RNA免疫应答表明用化合物1或其药学上可接受的盐治疗的功效。在一些实施例中，如果检测到双链RNA免疫应答，则继续用该另外的疗法以及化合物1或其药学上可接受的盐进行治疗。在一些实施例中，如果检测到双链RNA免疫应答，则以降低的剂量和/或频率继续治疗。
在一些实施例中，本文所述的方法可进一步包括在施用化合物1或其药学上可接受的盐之后，在受试者中检测免疫原性细胞死亡，并且任选地，如果检测到免疫原性细胞死亡，则继续施用化合物1或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，在受试者中检测到免疫原性细胞死亡表明用该化合物1或其药学上可接受的盐治疗的功效。在一些实施例中，如果检测到免疫原性细胞死亡，则继续用该另外的疗法以及化合物1或其药学上可接受的盐进行治疗。在一些实施例中，如果检测到免疫原性细胞死亡，则以降低的剂量和/或频率继续治疗。
在一些实施例中，该受试者具有约150个突变或更少的非同义突变负担。在一些实施例中，该受试者具有约100个突变或更少的非同义突变负担。在一些实施例中，该受试者具有约50个突变或更少的非同义突变负担。在一些实施例中，该受试者患有或疑似患有赘生性病症，例如血液恶性病或实体瘤。在一些实施例中，该血液恶性病选自B细胞恶性病、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。在一些实施例中，该血液恶性病选自急性骨髓性白血病和多发性骨髓瘤。在一些实施例中，实体瘤选自乳腺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、子宫癌、涎腺导管癌、黑色素瘤、结肠癌、以及食道癌。在一些实施例中，实体瘤选自HER2阳性乳腺癌、胃腺癌和前列腺癌。
在各种实施例中，本披露进一步提供了治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法，该方法包括：(a)向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐，其中化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答；(b)在施用化合物1或其药学上可接受的盐之后，在受试者中检测一种或多种新抗原和/或T细胞应答；以及(c)如果检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答，则继续施用化合物1或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，在受试者中检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答表明用化合物1或其药学上可接受的盐治疗的功效。在各种实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。
化合物1与免疫检查点抑制的组合：
在各种实施例中，患有如本文所述的癌症的患者可以用化合物1或其药学上可接受的盐与检查点抑制剂疗法的组合进行治疗。免疫检查点是减慢或终止免疫反应且防止免疫细胞不受控制的活性造成过度组织损伤的抑制性途径。如本文所使用，术语“检查点抑制剂”意指抑制一个或多个抑制性途径，由此允许更广泛的免疫活性的任何治疗剂，包括任何小分子化合物、抗体、核酸分子或多肽、或其任何片段。
已显示用免疫检查点抑制治疗患者在某些临床适应症中具有稳健功效。最近，FDA批准在具有展现高微卫星不稳定性、对组织谱系不可知的肿瘤的患者中使用检查点抑制剂。此批准部分基于应答率与突变负担正相关的观察结果(Rizvi等人(2015)Science[科学]348(6230)：124-8；Hellmann等人(2018)Cancer Cell[癌细胞]33(5)：853-861)。来自文献的估计值在绝对数目和谱系上有所不同，但通常都支持高于约150-250个突变的阈值，应答几率增加。TCGA数据的分析表明，大百分比成年发作型肿瘤谱系具有相对较低的非同义突变负担(Vogelstein等人(2013)Science[科学]339：1549-58)。大多数谱系的中位非同义突变率为每位患者约30-80个，远低于对检查点抑制剂的提高的应答几率的阈值。
例如，已显示HER2阳性乳腺癌具有每个患者样品约60个非同义突变的中位值。然而，如上文所提及，检查点抑制剂治疗功效的阈值估计在约150-250个非同义突变范围内，即高于此阈值的患者更可能显示完全缓解、部分缓解、和/或稳定疾病，而低于此阈值的患者更可能表现出进行性疾病。因此，提高肿瘤细胞上呈递的非同义突变和/或新抗原的表观数目的策略是希望的，并且可提高例如对检查点抑制剂疗法的总应答几率。由于细胞因子(及其类似物)经由相似的作用机制起作用，因此此类策略也可提高对基于细胞因子的疗法的总应答几率。
HER2阳性乳腺癌的当前应答率为约15％-25％(CTI NCT02129556)。在本文所披露的各种实施例中，用化合物1或其药学上可接受的盐与检查点抑制剂和/或细胞因子疗法的组合进行的治疗可以改善这种应答率。在各种实施例中，用化合物1或其药学上可接受的盐与检查点抑制剂和/或细胞因子疗法的组合进行的治疗可适用于任何成年发作型肿瘤，特别是中值非同义突变率低于所估计的约150个突变阈值的肿瘤。在各种实施例中，适用于用单独的或与另外的疗法(例如，检查点抑制剂疗法、细胞因子疗法)组合的化合物1和/或其药学上可接受的盐治疗的示例性癌症类型包括但不限于食道癌、非霍奇金氏淋巴瘤、结直肠癌、头颈癌、胃癌、子宫内膜癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、乳腺癌(例如HER2阳性乳腺癌)、肺癌(例如非小细胞肺癌)、慢性淋巴细胞性白血病和急性骨髓性白血病。其他示例性的合适的癌症类型例如在Vogelstein等人(2013)Science[科学]339:1549-58中鉴别，将该文献以其全文通过引用并入本文。
由于许多检查点抑制剂疗法均基于肿瘤相关抗原的慢性表达，因此需要定期治疗加强功效和“再加强”反应性T细胞群。化合物1或其药学上可接受的盐源性的本文所述的新抗原的可诱导性提供了治疗性给药方案，这些给药方案可设计成用于增强新抗原反应性T细胞的免疫应答，同时限制通常由慢性抗原刺激引起的T细胞耗竭。例如，在一些实施例中，将初始剂量的化合物1或其药学上可接受的盐施用于受试者以触发异常剪接和新抗原肽的产生。在允许蛋白质产生和抗原呈递一段时间之后，在一些实施例中，然后向受试者施用初始剂量的检查点抑制剂以加强和/或增强效应T细胞致敏和扩增。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐与检查点抑制剂的剂量之间的等待期是约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天。在一些实施例中，等待期是在约3天与约5天之间。在一些实施例中，该检查点抑制剂靶向CTLA4、OX40、CD40和/或GITR。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐与检查点抑制剂的组合治疗益处可为累加的或超累加的。
在一些实施例中，在允许T细胞致敏和扩增的一段时间之后，然后向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐的第二或后续剂量以触发新抗原肽的重新呈递。在一些实施例中，检查点抑制剂的初始剂量与化合物1或其药学上可接受的盐的第二或后续剂量之间的等待期是约2周、约3周、约4周或约5周。在一些实施例中，等待期是约3周。在化合物1或其药学上可接受的盐的第二或后续剂量之后，在一些实施例中，免疫系统可以与呈递新抗原的肿瘤细胞接合和/或引起肿瘤细胞杀伤。在一些实施例中，然后向受试者施用第二或后续剂量的检查点抑制剂，以在允许二次T细胞致敏和扩增之后进一步扩增记忆效应T细胞群。
在一些实施例中，在此示例性初始治疗方案之后，化合物1或其药学上可接受的盐的给药可以是脉冲式的，即化合物1或其药学上可接受的盐可以延长的时间间隔(例如，约每4周、约每5周、约每6周)给药，以允许抗原呈递、T细胞接合和/或肿瘤细胞杀伤、和/或记忆T细胞群的恢复。在稍后的时间点，在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐的治疗可以与一种或多种旨在恢复针对耗竭的T细胞群的效应子功能的检查点抑制剂组合。例如，在一些实施例中，在稍后的时间点，化合物1或其药学上可接受的盐的治疗可与一种或多种靶向PD1/PDL1、LAG3、和/或TIM3的检查点抑制剂组合。在一些实施例中，新抗原呈递和致敏的脉冲性质可允许检查点抑制剂和/或化合物1或其药学上可接受的盐以较低频率和/或较低剂量施用。在一些实施例中，相对于不与化合物1或其药学上可接受的盐的治疗同时施用时的检查点抑制剂，新抗原呈递的脉冲性质可以例如通过降低通常用检查点抑制剂的标准给药方案观察到的不良反应的潜在风险而提供检查点抑制剂(例如，抗CTLA4抗体，如伊匹单抗)的一种或多种治疗益处。
在某些实施例中，该检查点抑制剂是细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA4)途径的抑制剂。CTLA4，也称为CD152，是下调免疫应答的蛋白质受体。CTLA4在调节性T细胞中组成性表达，但在活化后仅在常规T细胞中上调。如本文所使用，术语“CTLA4抑制剂”意指CTLA4和/或CTLA4途径的任何抑制剂。示例性CTLA4抑制剂包括但不限于抗CTLA4抗体。基于在抗肿瘤免疫的小鼠模型中看到的临床前活性，开发了用于人类的CTLA4阻断抗体。示例性抗CTLA4抗体包括但不限于伊匹单抗(MDX-010)和曲美木单抗(CP-675,206)，两者均为完全人抗体。伊匹单抗是血浆半衰期为约12-14天的IgG1；曲美木单抗是血浆半衰期为约22天的IgG2。参见，例如，Phan等人(2003)Proc Natl Acad Sci USA.[美国科学院院刊]100:8372-7；Ribas等人(2005)J Clin Oncol.[临床肿瘤学杂志]23:8968-77；Weber等人(2008)JClin Oncol.[临床肿瘤学杂志]26:5950-6。在一些实施例中，该抗CTLA4抗体是伊匹单抗。
在某些实施例中，该检查点抑制剂是程序性死亡-1(PD1)途径的抑制剂。程序性细胞死亡1(PD1)途径代表了主要的免疫控制开关，其可与肿瘤细胞接合以克服活性T细胞免疫监视。PD1的配体(PDL1和PDL2)是组成性表达的或可在各种肿瘤中诱导。已发现PDL1在肿瘤细胞上的高表达(PDL2的程度较低)与各种其他实体瘤类型中的不良预后和存活相关。此外，PD1已显示可调节恶性黑色素瘤患者的肿瘤特异性T细胞扩增。这些观察结果表明，PD1/PDL1途径在肿瘤免疫逃避中起关键作用，并可被认为是治疗性干预的有吸引力的靶标。如本文所使用，术语“PD1抑制剂”意指PD1和/或PD1途径的任何抑制剂。示例性PD1抑制剂包括但不限于抗PD1和抗PDL1抗体。在某些实施例中，该检查点抑制剂是抗PD1抗体。示例性抗PD1抗体包括但不限于纳武单抗和派姆单抗(MK-3475)。例如，纳武单抗是完全人免疫球蛋白G4(IgG4)PD1免疫检查点抑制剂抗体，其破坏PD1受体与其配体PDL1和PDL2的相互作用，从而抑制细胞免疫应答(Guo等人(2017)J Cancer[癌症杂志]8(3):410-6)。在一些实施例中，该抗PD1抗体是纳武单抗。例如，派姆单抗是IgG4/κ同种型的有效且高度选择性的人源化mAb，其被设计为用于直接阻断PD1与其配体PDL1和PDL2之间的相互作用。派姆单抗强烈增强来自健康人供体、癌症患者以及灵长类动物的培养血细胞中的T淋巴细胞免疫应答。还已报导，派姆单抗调节白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、干扰素γ(IFNγ)和其他细胞因子的水平。示例性抗PDL1抗体包括但不限于阿特珠单抗、阿维鲁单抗(avelumab)和德瓦鲁单抗(durvalumab)。例如，阿特珠单抗是IgG1人源化mAb，据报导，其通过靶向多种恶性细胞上表达的PDL1来阻断PD1/PDL1相互作用。PD1/PDL1途径的这种阻断可能刺激针对肿瘤的免疫防御机制(Abdin等人(2018)Cancers[癌症](巴塞尔)10(2):32)。在一些实施例中，该抗PDL1抗体是阿特珠单抗。
在某些实施例中，该检查点抑制剂靶向PD1/PDL1、CTLA4、OX40、CD40、LAG3、TIM3、GITR和/或KIR。在某些实施例中，该检查点抑制剂靶向CTLA4、OX40、CD40和/或GITR。在某些实施例中，该检查点抑制剂与抑制性抗体或其他类似抑制性分子(例如抑制性抗CTLA4或抗PD1/PDL1抗体)一起靶向。在某些其他实施例中，检查点抑制剂与针对靶标的激动剂一起靶向；此类别的实例包括刺激性靶标OX40、CD40和/或GITR。在一些实施例中，靶向OX40、CD40和/或GITR的检查点抑制剂是激动剂抗体。针对OX40的激动剂抗体可具有双重作用，即，抑制调节性T细胞遏止作用，同时增强效应T细胞功能。也已显示，激动剂抗GITR抗体使效应T细胞对由调节性T细胞诱导的抑制更具抗性(Karaki等人(2016)Vaccines[疫苗](巴塞尔)4(4):37)。同样，激动剂CD40抗体展示出T细胞依赖性抗肿瘤活性。树突状细胞上CD40的活化增加肿瘤抗原的交叉呈递，并且因此增加活化的肿瘤定向效应T细胞的数目(Ellmark等人(2015)Oncoimmunol[肿瘤免疫学].4(7):e1011484)。
在某些实施例中，该检查点抑制剂靶向CTLA4(例如抗CTLA4抗体)。在某些实施例中，靶向CTLA4促进初始T细胞的致敏和活化。在某些实施例中，该检查点抑制剂靶向OX40(例如抗OX40抗体)。在某些实施例中，靶向OX40增强效应T细胞的扩增。在某些实施例中，该检查点抑制剂靶向CD40(例如抗CD40抗体)。在某些实施例中，靶向CD40抑制T细胞的“致耐受性”致敏和/或调节性T细胞的形成。在某些实施例中，该检查点抑制剂靶向GITR(例如抗GITR抗体)。在某些实施例中，靶向GITR抑制调节性T细胞的活性。在某些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐以及靶向CTLA4、OX40、CD40和/或GITR的药剂的组合疗法的益处(例如，对至少一种症状或疾病进展的风险/速率的作用)是累加的。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐以及靶向CTLA4、OX40、CD40和/或GITR的药剂的组合疗法的益处是超累加的(即，协同性的)。
检查点抑制剂治疗策略基于以下假设：治疗促进和/或增强针对弱或不良抗原性肿瘤(例如，CTLA4)的T细胞应答的致敏，或治疗恢复和/或再激活对肿瘤抗原有应答、但由于抗原呈递(例如，PD1、PDL1)的慢性性质已变得“耗竭”的T细胞(Chen和Mellman(2013)Immunity[免疫]39(1):1-10)。合适的检查点抑制疗法和药剂的实例，例如抗PD1、抗PDL1或抗CTLA4抗体，是本领域已知的。参见，例如，WO 2001/014424、WO 2013/173223、WO 2016/007235。
将检查点抑制剂疗法之后出现的这些致敏的T细胞应答与诱导肿瘤细胞中可与致敏的免疫系统反应的新抗原的治疗(例如，通过施用化合物1或其药学上可接受的盐)相组合可提供有益的协同作用。由于化合物1或其药学上可接受的盐源性的新抗原尚未呈现T细胞致敏，所以与CTLA4抑制剂组合可能是特别有益的。在一些实施例中，治疗包括在初始施用CTLA4抑制剂以刺激CD8 T细胞致敏之前、同时或之后，施用化合物1或其药学上可接受的盐以诱导新抗原的产生。在一些实施例中，向患者额外施用CTLA4抑制剂，例如以进一步刺激新抗原反应性CD8群体的致敏和/或活化。在一些实施例中，可向患者额外施用化合物1或其药学上可接受的盐以增加肿瘤的新抗原呈递。化合物1或其药学上可接受的盐与检查点抑制剂疗法的重复施用可以同时进行或以错开的时间间隔进行。在一些实施例中，治疗进一步包括施用PD1/PDL1抑制剂共治疗，例如以恢复肿瘤微环境内耗竭的靶向新抗原的T细胞的效应子功能。
如本文所使用，术语“组合”或“组合疗法”是指施用化合物1或其药学上可接受的盐以及额外药剂或疗法(例如，检查点抑制剂、细胞因子或细胞因子类似物、新抗原疫苗、CAR-T)，作为旨在由一种或多种所施用的药剂的共同作用提供有益(即，累加的或协同性的)作用的治疗方案的一部分。在一些实施例中，该组合还可包括一种或多种额外药剂，包括但不限于化学治疗剂、抗血管生成剂和减少免疫遏止作用的药剂(例如第二检查点抑制剂)。该组合的有益作用包括但不限于由治疗剂的组合产生的药代动力学或药效学共同作用。典型地在限定的时间段(例如，数分钟，数小时，数天或数周，取决于所选择的组合)内进行这些治疗剂的组合施用。
如本文所使用，“组合”施用或“共施用”意指在受试者罹患医学病症(例如赘生性病症)期间，将两种或更多种不同治疗递送给该受试者。例如，在一些实施例中，在受试者已诊断患有疾病或病症之后且在该疾病或病症已治愈或消除之前，或当受试者鉴定为有患病风险但在受试者出现疾病症状之前，递送该两种或更多种治疗。在一些实施例中，一种治疗的递送在第二治疗的递送开始时仍存在，于是存在重叠。在一些实施例中，第一和第二治疗同时开始。这些类型的递送在本文中有时称为“同时(simultaneous/concurrent)”或“伴随(concomitant)”递送。在其他实施例中，一种治疗的递送在第二治疗的递送开始之前结束。这种类型的递送在本文中有时称为“连续”或“依序”递送。
在一些实施例中，这两种治疗(例如化合物1或其药学上可接受的盐和检查点抑制剂)包含在同一组合物中。此类组合物可以任何适当形式且通过任何合适途径施用。在其他实施例中，这两种治疗(例如，化合物1或其药学上可接受的盐和检查点抑制剂)以独立组合物、以任何适当形式且通过任何合适途径施用。例如，在一些实施例中，包含化合物1或其药学上可接受的盐的组合物和包含检查点抑制剂的组合物可在不同时间点以任何顺序同时或依序施用；在任一情况下，它们应当在时间上充分接近地施用，以便提供所希望的治疗或预防作用。
在同时或依序递送的实施例中，由于组合施用，治疗可能更有效。在一些实施例中，第一治疗比在不存在第二治疗的情况下施用第一治疗时所观察到的作用更有效，例如在较少第一治疗(例如较低剂量)的情况下观察到等效的作用。在一些实施例中，第一治疗更有效，使得症状或与疾病或病症相关的其他参数的减少大于在不存在第二治疗的情况下递送第一治疗所观察到的。在其他实施例中，在第二治疗存在下观察到类似情况。在一些实施例中，组合疗法的益处(例如对至少一种症状或疾病进展的风险/速率的影响)是累加的。在一些实施例中，组合疗法的益处是超累加的。
在各种实施例中，本披露提供了治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法，该方法通过向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐；以及至少一种另外的疗法(例如，检查点抑制剂疗法、细胞因子或细胞因子类似物、新抗原疫苗、CAR-T)来实现。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导双链RNA免疫应答。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导免疫原性细胞死亡。在一些实施例中，该至少一种另外的疗法可包含至少一种、至少两种、至少三种、至少四种或至少五种另外的疗法。例如，在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐可与两种检查点疗法(即，使用两种不同检查点抑制剂)组合施用。在一些其他实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐可以与检查点抑制剂疗法和新抗原疫苗组合施用。在一些实施例中，可以施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。
在组合疗法的一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的标准剂量，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的标准给药方案，化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法以减少至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％的频率施用。在一些实施例中，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的量和/或剂量导致较低的全身性毒性和/或改善的耐受性。
在一些实施例中，在施用至少一种另外的疗法之前，开始施用化合物1或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，在施用至少一种另外的疗法之后，开始施用化合物1或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，在施用至少一种另外的疗法的同时，开始施用化合物1或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，在初始施用之后，重复施用化合物1或其药学上可接受的盐至少一次。在一些实施例中，相对于用于初始施用的量，用于重复施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量，用于重复施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低。在一些实施例中，相对于化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量，用于重复施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
在一些实施例中，在初始施用之后，重复施用至少一种另外的疗法至少一次。在一些实施例中，相对于用于初始施用的量，用于重复施用的至少一种另外的疗法的量降低。在一些实施例中，相对于至少一种另外的疗法的标准剂量，用于重复施用的至少一种另外的疗法的量降低。在一些实施例中，相对于至少一种另外的疗法的标准剂量，用于重复施用的至少一种另外的疗法的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
在一些实施例中，重复施用化合物1或其药学上可接受的盐与重复施用至少一种另外的疗法同时进行。在一些实施例中，重复施用化合物1或其药学上可接受的盐与重复施用至少一种另外的疗法依序或错开进行。
在各种实施例中，本披露提供了治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法，该方法通过向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐；以及检查点抑制剂疗法来实现。在一些实施例中，该检查点抑制剂疗法包括施用至少一种检查点抑制剂。在一些实施例中，该受试者对单独施用时的该至少一种检查点抑制剂不耐受、无响应或响应不良。在一些实施例中，如使用例如免疫相关应答标准(irRC)和/或实体瘤中的免疫相关应答评价标准(irRECIST)所确定的，受试者可视为对该至少一种检查点抑制剂无响应或响应不良。参见，例如，Wolchok等人(2009)Clin Cancer Res.[临床癌症研究]15(23):7412-20；Bohnsack等人“Adaptation of the Immune-Related Response Criteria:irRECIST[免疫相关应答标准：irRECIST的改编]”(摘要4958)ESMO 2014。示例性标准可包括本领域中用来定义当所评价的治疗是免疫-肿瘤学药物(例如检查点抑制剂)时，在治疗期间癌症患者的肿瘤何时改善(“应答”)、保持不变(“稳定”)或恶化(“进展”)的那些标准。在一些实施例中，如果受试者表现出针对至少一种检查点抑制剂(例如伊匹单抗)所鉴定的一种或超过一种不良(2+级)事件，则该受试者可被认为对该相应的检查点抑制剂不耐受。在一些实施例中，例如，如果受试者表现出选自小肠结肠炎、肝炎、皮炎(包括中毒性表皮坏死溶解)、神经病变和内分泌病中的一个或多个不良事件，则该受试者可被认为对伊匹单抗治疗不耐受(
Figure BDA0002853211320000441
(伊匹单抗)FDA标签补充,2018)。在一些实施例中，可以施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。
在一些实施例中，该检查点抑制剂靶向PD1/PDL1、CTLA4、OX40、CD40、LAG3、TIM3、GITR和/或KIR。在一些实施例中，该检查点抑制剂靶向CTLA4、OX40、CD40和/或GITR。在一些实施例中，该检查点抑制剂与抑制性抗体或其他类似抑制性分子一起靶向。在一些其他实施例中，该检查点抑制剂与激动剂抗体或其他类似激动剂分子一起靶向。在一些实施例中，该检查点抑制剂包含细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4途径(CTLA4)抑制剂。在一些实施例中，该CTLA4抑制剂是抗CTLA4抗体。在一些实施例中，该抗CTLA4抗体是伊匹单抗。在一些实施例中，该检查点抑制剂包含程序性死亡-1途径(PD1)抑制剂。在一些实施例中，该PD1抑制剂是抗PD1抗体。在一些实施例中，该抗PD1抗体是纳武单抗。在一些实施例中，该PD1抑制剂是抗PDL1抗体。在一些实施例中，该抗PDL1抗体是阿特珠单抗。在一些实施例中，该检查点抑制剂包含CTLA4抑制剂和PD1抑制剂。在一些实施例中，该检查点抑制剂靶向OX40。在一些实施例中，该检查点抑制剂靶向CD40。在一些实施例中，该检查点抑制剂靶向GITR。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐和检查点抑制剂(例如靶向CTLA4、PD1/PDL1、OX40、CD40和/或GITR的抗体或分子)的组合疗法的益处(例如，对至少一种症状或疾病进展的风险/速率的影响)是累加的。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐和检查点抑制剂(例如靶向CTLA4、PD1/PDL1、OX40、CD40和/或GITR的抗体或分子)的组合疗法的益处是超累加的(即，协同性的)。
在各种实施例中，本披露提供了治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法，该方法通过向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐；以及细胞因子或细胞因子类似物疗法来实现。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物疗法包括施用至少一种细胞因子或细胞因子类似物。在一些实施例中，该受试者对单独施用时的该至少一种细胞因子或细胞因子类似物不耐受、无响应或响应不良。在一些实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。
在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含T细胞增强子。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-2、IL-10、IL-12、IL-15、IFNγ和/或TNFα。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-2、IL-10、IL-12和/或IL-15。在一些实施例中，在施用化合物1或其药学上可接受的盐之后，由于新抗原的诱导和呈递，施用该细胞因子或细胞因子类似物使T细胞致敏增强。
在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-2。在一些实施例中，IL-2加强针对效应细胞的信号，从而促进其扩增(Rosenberg(2014)J Immunol.[免疫学杂志]192(12):5451-8)。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-10。在一些实施例中，IL-10加强CD8+T细胞致敏和活化(Mumm等人(2011)Cancer Cell[癌细胞]20(6):781-96)。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-12。在一些实施例中，IL-12组合先天性和适应性免疫应答以加强抗原特异性致敏和靶向(Tugues等人(2015)Cell DeathDiffer.[细胞死亡与分化]22(2):237-46)。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-15。在一些实施例中，IL-15加强T效应(CD8)细胞致敏和/或活化。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含IFNγ。在一些实施例中，IFNγ补充IFNγ的T效应细胞分泌。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物包含TNFα。在一些实施例中，TNFα补充TNFα的T效应细胞分泌。
在一些实施例中，将初始剂量的化合物1或其药学上可接受的盐施用于受试者以触发异常剪接和新抗原肽的产生。在允许蛋白质产生和抗原呈递一段时间之后，在一些实施例中，然后向受试者施用初始剂量的细胞因子或细胞因子类似物以加强和/或增强效应T细胞致敏和扩增。在一些实施例中，在化合物1或其药学上可接受的盐与细胞因子或细胞因子类似物的剂量之间的等待期是约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天。在一些实施例中，等待期是在约3天与约5天之间。在一些实施例中，该细胞因子或细胞因子类似物是IL-2、IL-10、IL-12、IL-15、IFNγ和/或TNFα。在一些实施例中，化合物1或其药学上可接受的盐与细胞因子或细胞因子类似物的组合治疗益处可为累加的或超累加的。
在一些实施例中，在允许T细胞致敏和扩增的一段时间之后，然后向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐的第二或后续剂量以触发新抗原肽的重新呈递。在一些实施例中，细胞因子或细胞因子类似物的初始剂量与化合物1或其药学上可接受的盐的第二或后续剂量之间的等待期是约2周、约3周、约4周或约5周。在一些实施例中，等待期是约3周。在一些实施例中，可例如在化合物1或其药学上可接受的盐的后续剂量之间穿插施用细胞因子或细胞因子类似物的后续剂量。在化合物1或其药学上可接受的盐的第二或后续剂量之后，在一些实施例中，免疫系统可以与呈递新抗原的肿瘤细胞接合和/或引起肿瘤细胞杀伤。在一些实施例中，在此示例性初始治疗方案之后，化合物1或其药学上可接受的盐的给药可以是脉冲式的，即化合物1或其药学上可接受的盐可以延长的时间间隔(例如，约每4周、约每5周、约每6周)给药，以允许抗原呈递、T细胞接合和/或肿瘤细胞杀伤、和/或记忆T细胞群的恢复。
在一些实施例中，该受试者具有约150个突变或更少的非同义突变负担。在一些实施例中，该受试者具有约100个突变或更少的非同义突变负担。在一些实施例中，该受试者具有约50个突变或更少的非同义突变负担。在一些实施例中，该受试者患有或疑似患有赘生性病症，例如血液恶性病或实体瘤。在一些实施例中，该血液恶性病选自B细胞恶性病、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。在一些实施例中，该血液恶性病选自急性骨髓性白血病和多发性骨髓瘤。在一些实施例中，实体瘤选自乳腺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、子宫癌、涎腺导管癌、黑色素瘤、结肠癌、以及食道癌。在一些实施例中，实体瘤选自HER2阳性乳腺癌、胃腺癌和前列腺癌。
化合物1与新抗原疫苗的组合：
在各种实施例中，患有如本文所述的癌症的患者可以用化合物1或其药学上可接受的盐与新抗原疫苗的组合进行治疗。在各种实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。
如本文所使用，术语“新抗原疫苗”是指一种或多种新抗原肽或mRNA(例如至少两种、至少三种、至少四种、至少五种或更多种新抗原肽)的汇集样品。术语“疫苗”是指用于产生免疫性以预防和/或治疗疾病(例如赘生性病症，例如血液恶性病或实体瘤)的组合物。因此，疫苗是包含免疫原性剂的药剂，且意欲用于人类或动物中以通过疫苗接种产生特异性防御和保护性物质。新抗原疫苗可另外包括药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、和/或佐剂。
如本文所使用，术语“免疫原性”是指可引起免疫应答(例如T细胞应答)的任何药剂或组合物。免疫应答可以是抗体介导的或细胞介导的，或两者皆有。
在一些实施例中，给予患者化合物1或其药学上可接受的盐，然后给予已知新抗原的肽或mRNA疫苗，以增强针对由化合物1或其药学上可接受的盐产生的新抗原的免疫应答。在一些其他实施例中，给予患者化合物1或其药学上可接受的盐并筛选由该治疗产生的新抗原。随后，使用这些新抗原中的一种或多种产生给予患者的个性化疫苗。在这些实施例的任一个中，可向患者施用一次或重复施用化合物1或其药学上可接受的盐、和/或肽或mRNA疫苗。
在各种实施例中，用于疫苗的合适新抗原可通过筛选来自患者的一个或多个组织样品(例如来自肿瘤活检)的、具有改变的剪接和稳健表达的一组转录物来鉴定。在一些实施例中，基于整个异常剪接的mRNA接合点的翻译，在筛选的样品中鉴定变异蛋白质序列，同时保留侧接跨接合点的氨基酸变化的蛋白质序列的部分(至多12个氨基酸)。在一些实施例中，例如使用如NetMHC1等工具，针对结合至MHC1等位基因的高亲和力，扫描这些跨接合点的肽片段(Nielsen等人(2003)Protein Sci[蛋白质科学]12(5):1007-17Andretta和Neilsen(2016)Bioinformatics[生物信息学]32(4):511-7)。这些结果允许过滤这些新肽以得到针对独特患者HLA等位基因组成所预测的高亲和力结合物的新肽，以及组装预测将与不同群体中以高频率存在的HLA等位基因广泛结合的新肽池(Maiers等人(2007)HumImmunol[人体免疫学]68(9):779-88)。在各种实施例中，然后例如通过与合适的载体或佐剂缀合，将所鉴定的新肽配制为疫苗(Ott等人(2017)Nature[自然]547(7662):217-21)，或以mRNA形式递送(Sahin等人(2017)Nature[自然]547(7662):222-6)。
在一些实施例中，所选新抗原基于筛选单个患者对化合物1或其药学上可接受的盐的肿瘤应答。在其他实施例中，新抗原是例如基于以下来选择的：筛选来自不同患者的一组样品以鉴别由化合物1或其药学上可接受的盐产生的共同新抗原，并且然后将该新抗原用作未来患者的通用疫苗。不受理论束缚，后一种选择将避免对每一患者的肿瘤的特有突变状态进行测序和分析的需求，因为所选新抗原不取决于肿瘤突变，而是模拟由化合物1或其药学上可接受的盐产生的新抗原，且被身体识别为外来的。这可能允许配制原液疫苗(bulk vaccine)，其在大百分比的患者中具有广泛免疫原性，从而加速治疗方案的开始。可根据以上概述的时间表对患者进行疫苗接种，并且在疫苗接种完成后，可用化合物1或其药学上可接受的盐进一步治疗，以诱导新抗原肽的表达。在一些实施例中，可在疫苗接种之前、同时或之后，向患者施用化合物1或其药学上可接受的盐。可以施用化合物1或其药学上可接受的盐和/或疫苗一次或超过一次。
在各种实施例中，疫苗可包含一种或超过一种新抗原肽或mRNA。在各种实施例中，疫苗可包含一种或超过一种长的新抗原肽。在各种实施例中，此类“长的”新抗原肽在专职抗原呈递细胞(如树突状细胞)中进行有效的内化、加工和交叉呈递，并且已经显示可在人体内诱导细胞毒性T细胞(Melief和van der Burg(2008)Nat Rev Cancer[癌症自然评论]8(5):351-60)。在各种实施例中，使新抗原肽延伸以包含该新抗原肽序列本身以及侧接氨基酸序列。在各种实施例中，延伸的肽序列促进抗原呈递细胞(例如树突状细胞)对蛋白质的吸收。在各种实施例中，延伸的肽序列能够在具有不同HLA同种型的模型中实现高效抗原呈递和T细胞致敏。
在一些实施例中，新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽。在一些实施例中，新抗原疫苗包含至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少9种、至少10种、至少12种、至少15种、或至少20种新抗原肽。在一些实施例中，该一种或多种新抗原肽的长度在约5至约50个氨基酸范围内。在一些实施例中，该一种或多种新抗原肽的长度在约10至约35个氨基酸范围内。在一些实施例中，该一种或多种新抗原肽的长度在约15至约25个氨基酸范围内。
在各种实施例中，本披露提供了治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法，该方法通过向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐；以及新抗原疫苗来实现。在各种实施例中，施用化合物1或其药学上可接受的盐本身和/或作为缀合物或组合物的一部分施用。新抗原疫苗可以是例如肽或mRNA新抗原疫苗。在各种实施例中，本文还提供了新抗原疫苗，其包含至少一种新抗原肽或至少一种新抗原mRNA。在一些实施例中，新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽。在一些其他实施例中，新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA。
在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽。在一些实施例中，该至少一种新抗原肽的长度在约10个至约35个氨基酸范围内。在一些实施例中，该至少一种新抗原肽的长度在约15个至约25个氨基酸范围内。
在一些实施例中，该至少一种新抗原肽包含已知的新抗原序列。在一些实施例中，该已知的新抗原序列是针对受试者的个性化新抗原疫苗。在一些实施例中，已通过对受试者中由施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐诱导的至少一种新抗原进行测序而鉴定了已知新抗原序列。在一些实施例中，该至少一种新抗原肽包含通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的经修饰或新颖的新抗原序列。在一些实施例中，赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。在一些实施例中，赘生性细胞获得自受试者。在一些实施例中，赘生性细胞存在于受试者中。
在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的载体。在各种实施例中，新抗原肽或mRNA可与合适的载体连接以帮助引发免疫应答。用于与免疫原性试剂(例如新抗原肽或mRNA)连接的示例性载体包括血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、破伤风类毒素或来自其他病原菌(如白喉、大肠杆菌(E.coli)、霍乱或幽门螺旋杆菌(H.pylori))的类毒素、或减毒的毒素衍生物。用于刺激或增强免疫应答的其他载体包括细胞因子，如IL-1、IL-1α和β肽、IL-2、γINF、IL-10、GM-CSF；以及趋化因子，如M1P1α和β、以及RANTES。免疫原性试剂还可与增强跨组织转运的肽连接，如例如WO 97/17613和WO 97/17614中所述。在一些实施例中，该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。
在一些实施例中，该新抗原肽可与药学上可接受的载体连接。免疫原性试剂可通过化学交联与载体连接。用于将免疫原性肽与载体连接的技术包括使用N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基-硫代)丙酸酯(SPDP)和琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)形成二硫键(如果该肽缺乏巯基基团，则其可通过添加半胱氨酸残基来提供)。这些试剂在其本身与一种蛋白质的肽半胱氨酸残基之间产生二硫键，且经由赖氨酸上的ε-氨基或其他氨基酸中的其他游离氨基基团产生酰胺键。多种此类二硫化物/酰胺形成试剂描述于Jansen等人((1982)Immun Rev.[免疫学评论]62:185)中。其他双官能偶合剂形成硫醚而非二硫键。这些硫醚形成剂中的许多是可商购的，且包括6-马来酰亚胺基己酸、2-溴乙酸和2-碘乙酸、4-(N-马来酰亚胺基-甲基)环己烷-1-甲酸的反应性酯。羧基基团可通过将其与琥珀酰亚胺或1-羟基-2-硝基-4-磺酸钠盐组合来活化。在一些实施例中，该新抗原肽和该药学上可接受的载体经由接头共价连接。
新抗原和其他此类免疫原性肽还可与载体一起表达为融合蛋白。免疫原性肽可以在氨基末端、羧基末端或肽内(内部)任何位点处与载体连接。在一些实施例中，该免疫原性肽的多个重复序列可存在于融合蛋白中。在一些实施例中，该新抗原肽和该药学上可接受的载体表达为融合蛋白。
在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的稀释剂。在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的佐剂(例如，如本文所述的佐剂)。
在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA。在一些实施例中，该至少一种新抗原mRNA编码已知的新抗原序列。在一些实施例中，该已知的新抗原序列是针对受试者的个性化新抗原疫苗。在一些实施例中，已通过对受试者中由施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐诱导的至少一种新抗原进行测序而鉴定了已知新抗原序列。在一些实施例中，该至少一种新抗原mRNA编码通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的经修饰或新颖的新抗原序列。在一些实施例中，赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。在一些实施例中，赘生性细胞获得自受试者。在一些实施例中，赘生性细胞存在于受试者中。
在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的载体。在一些实施例中，该至少一种新抗原mRNA与药学上可接受的载体连接。在一些实施例中，该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。
在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的稀释剂。在一些实施例中，该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的佐剂(例如，如本文所述的佐剂)。
在一些实施例中，该新抗原mRNA通过包封剂包封。在一些实施例中，该包封剂保护该新抗原mRNA免于降解并改善疫苗递送(McNamara等人(2015)J Immunol Res.[免疫学研究杂志]2015:794528)。在一些实施例中，该包封剂是脂质体。在一些实施例中，该脂质体是阳离子脂质体，如N-[1-(2,3-二油酰氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵1(DOTAP)。在一些实施例中，该包封剂是纳米颗粒。在一些实施例中，纳米颗粒保护新抗原mRNA免受核酸酶降解和/或增强细胞吸收和/或递送效率。在一些实施例中，纳米颗粒可被工程改造成可完全降解的。在一些实施例中，纳米颗粒是呈可生物降解核-壳结构的纳米颗粒，其中pH反应性聚-(b-氨基酯)(PBAE)核被磷脂壳包封(Su等人(2011)Mol Pharm.[分子药剂学]8(3):774-87)。在一些实施例中，此类纳米颗粒在体内递送mRNA和引发抗肿瘤免疫应答方面特别有效。
在一些实施例中，该受试者具有约150个突变或更少的非同义突变负担。在一些实施例中，该受试者具有约100个突变或更少的非同义突变负担。在一些实施例中，该受试者具有约50个突变或更少的非同义突变负担。在一些实施例中，该受试者患有或疑似患有赘生性病症，例如血液恶性病或实体瘤。在一些实施例中，该血液恶性病选自B细胞恶性病、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。在一些实施例中，该血液恶性病选自急性骨髓性白血病和多发性骨髓瘤。在一些实施例中，实体瘤选自乳腺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、子宫癌、涎腺导管癌、黑色素瘤、结肠癌、以及食道癌。在一些实施例中，实体瘤选自HER2阳性乳腺癌、胃腺癌和前列腺癌。
如本文所使用，“佐剂”是指能够增加、放大或调节针对伴随性免疫原性试剂(例如新抗原肽或mRNA)的免疫应答的物质。在某些实施例中，本披露的新抗原可与佐剂(即，本身不引起适应性免疫应答但放大或调节针对伴随性新抗原的应答的物质)组合施用。多种佐剂可与所披露的新抗原组合使用以引发免疫应答。优选的一种或多种佐剂增强对新抗原的固有应答，而不会引起新抗原的构象变化，这些构象变化将影响应答的定性形式。
在某些实施例中，佐剂是铝盐(矾)，如氢氧化铝、磷酸铝和硫酸铝。此类佐剂可与或不与其他特异性免疫刺激剂一起使用，这些免疫刺激剂例如3脱-O-酰化单磷酰基脂质A(MPL)或3-DMP、聚合的或单体的氨基酸，如聚谷氨酸或聚赖氨酸。此类佐剂可与或不与其他特异性免疫刺激剂一起使用，这些免疫刺激剂例如胞壁肽(例如，N-乙酰基胞壁酰基-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰基-去甲胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺(nor-MDP)、N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺基-L-丙氨酸-2-(1'-2'二棕榈酰基-sn-甘油基-3-羟基磷酰基氧基)-乙胺(MTP-PE)、N-乙酰基葡萄糖胺基-N-乙酰基胞壁酰基-L-Al-D-异glu-L-Ala-二棕榈酰氧基丙酰胺(DTP-DPP))或其他细菌细胞壁组分。其他佐剂是水包油乳液，且包括(a)MF59(WO 90/14837)，其含有5％角鲨烯、0.5％Tween 80和0.5％Span 85(任选地含有各种量的MTP-PE)，其使用微流化床如110Y型微流化床(Microfluidics公司)配制成亚微米颗粒，(b)SAF，其含有10％角鲨烯、0.4％Tween 80、5％pluronic嵌段聚合物L121和thr-MDP，其被微流化成亚微米乳液或被涡旋以产生较大粒度的乳液，以及(c)RibiTM佐剂系统(RAS)(Ribi ImmunoChem公司)，其含有2％角鲨烯、0.2％Tween 80以及一种或多种来自由以下组成的组的细菌细胞壁组分：单磷酰基脂质A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和细胞壁骨架(CWS)(例如MPL-FCWS(DetoxTM))。在一些实施例中，该佐剂是皂苷(如StimulonTM(QS21))或由其产生的颗粒(如ISCOM(免疫刺激复合物)和ISCOMATRIX)。其他佐剂包括完全弗氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant，CFA)和不完全弗氏佐剂(Incomplete Freund's Adjuvant，IFA)；细胞因子，如白细胞介素(IL-1、IL-2和IL-12)；巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)；以及肿瘤坏死因子(TNF)。
佐剂可与免疫原性试剂(例如新抗原肽或mRNA)一起以单一组合物施用，或可在施用免疫原性试剂之前、同时或之后施用。在一些实施例中，免疫原性试剂和佐剂可在同一小瓶中包装和供应，或可包装在独立小瓶中且在使用之前混合。在一些实施例中，免疫原性试剂和佐剂可包装有标签，指示预期的治疗应用。在一些实施例中，如果免疫原性试剂和佐剂是独立包装的，则该包装可包括有关在使用前混合的说明书。佐剂和/或载体的选择取决于含有佐剂的免疫原性配制剂的稳定性、施用途径、给药时程、佐剂对经疫苗接种的物种的功效，且对于人类而言，药学上可接受的佐剂是已获相关监管机构批准或可批准用于人类施用的佐剂。例如，完全弗氏佐剂不适合人类施用。然而，单独或任选地与矾、QS21和MPL中的任一种及其所有组合相组合的矾、MPL或不完全弗氏佐剂(Chang等人(1998)Adv DrugDeliv Rev.[先进药物递送综述]32：173-186)适合于人类施用。
实例
实例1：化合物1的合成
除了下面列出的化合物1的示例性合成以外，在美国专利号9,481,669 B2和国际申请号PCT/US2016/062525中描述了化合物1的合成，将所有这些文献通过引用而并入。
使用Biotage Emrys Liberator或Initiator微波进行微波加热。使用IscoRf200d进行柱色谱法。使用Büchi旋转式蒸发器或Genevac离心式蒸发器进行溶剂移除。使用Waters自动纯化器和19x100mm XTerra 5微米MS C18柱在酸性流动相条件下进行制备型LC/MS。使用Varian 400MHz光谱仪记录NMR光谱。
当使用术语“惰性的”来描述反应器(例如反应容器、烧瓶、玻璃反应器等)时，它是指反应器中的空气已被基本无水分或干燥的惰性气体(如氮气、氩气等)代替。
本文使用以下缩写：
MeOH： 甲醇
DMF： 二甲基甲酰胺
KHMDS： 双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾
LCMS： 液相色谱法-质谱法
TBS Cl： 叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物
THF： 四氢呋喃
TLC： 薄层色谱法
材料：以下化合物是可商购的和/或能以有机合成领域的技术人员众所周知的多种方式制备。可以使用本文所述的反应和技术来制备具有式I的化合物。在以下描述的合成方法的描述中，应当理解，所有提出的反应条件，包括溶剂、反应气氛、反应温度、实验的持续时间和处理程序的选择，都可以选择作为该反应的条件标准，除非另有说明。有机合成领域的技术人员应理解，存在于分子的不同部分上的官能团应与所提出的试剂和反应相容。与反应条件不相容的取代基对于本领域技术人员是显而易见的，并且因此指示了替代方法。实例的起始材料是可商购的，或通过标准方法由已知材料容易地制备。
LCMS信息
流动相：A(在H2O中0.1％甲酸)和B(在乙腈中0.1％甲酸)。
梯度：在1.8分钟内B从5％→95％。
柱：Acquity BEH C18柱(1.7um，2.1x50mm)。
美国专利号7,884,128和7,816,401(均标题为：Process for Total Synthesisof Pladienolide B and Pladienolide D[普拉二烯内酯B和普拉二烯内酯D的全合成方法])描述了本领域已知的普拉二烯内酯B和D的合成方法。普拉二烯内酯B和D的合成也可以使用本领域已知的并在Kanada等人，“Total Synthesis of the Potent Antitumor 20Macrolides Pladienolide B and D[有效的抗肿瘤20大环内酯普拉二烯内酯B和D的全合成]”，Angew.Chem.Int.Ed.[应用化学国际版]46：4350-4355(2007)中描述的方法进行。Kanada等人和PCT申请公开WO 2003/099813(标题为：Novel Physiologically ActiveSubstances[新颖生理活性物质])描述了本领域已知的用于由普拉二烯内酯D(WO′813的11107D)合成E7107(WO′813的化合物45)的方法。相应的美国专利是Kotake等人的7,550,503。
(S)-2-(1-((1-苯基-1H-四唑-5-基)磺酰基)丙-2-基)吡啶的合成
Figure BDA0002853211320000571
步骤1：在0℃下，向2-(吡啶-2-基)乙酸盐酸盐MMMMMM(50.0g，288.0mmol，1.0当量)在甲醇(500mL，0.5M)中的溶液中逐滴添加亚硫酰氯(31.5mL，432.0mmol，1.5当量)。将反应在0℃下搅拌60分钟，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应小心地用碳酸钠淬灭并将水层用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空中浓缩。将所得产物(NNNNNN，41.5g，275.0mmol，95％)不经进一步纯化用于下一步骤。
步骤2：在0℃下，向酯NNNNNN(41.5g，275.0mmol，1.0当量)在THF(1500mL，0.2M)中的溶液中添加2-甲基丙-2-醇钠(28.6g，288.3mmol，1.05当量)，并将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后添加碘甲烷(34.3mL，549.1mmol，2.0当量)。将反应在室温下搅拌1小时，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应用氯化铵淬灭并在真空中除去过量溶剂。然后将粗物质用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，并经硫酸镁干燥。过滤后，将混合物在真空中浓缩。无需纯化地使用所得甲基酯(OOOOOO，41.3g，250mmol，91％)。
步骤3：在0℃下，向甲基酯OOOOOO(43.0g，260.3mmol，1.0当量)在THF(1500mL，0.1M)中的溶液中逐滴添加氢化铝锂(312mL，312.4mmol，1.2当量，在THF中的溶液)。使反应逐渐加温至0℃持续30分钟并且然后至室温持续1小时，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应小心地用水、氢氧化钠和水淬灭。将混合物搅拌30分钟后，滤出白色沉淀物并在真空中除去溶剂。然后将反应用二乙醚萃取并将合并的有机级分用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空中浓缩。无需纯化地使用所得醇(PPPPPP，30.0g，219.0mmol，84％)。
步骤4：在0℃下，向醇PPPPPP(30.0g，219.0mmol，1.0当量)在二氯甲烷(700mL，0.3M)中的溶液中添加三乙胺(61.5mL，437.4mmol，2.0当量)和DMAP(2.7g，21.9mmol，0.1当量)。添加乙酸酐(24.8mL，262.4mmol，1.2当量)并将反应混合物搅拌30分钟，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应用氯化铵淬灭，将有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并过滤。然后将所得溶液蒸发并将粗乙酸酯(QQQQQQ，37.0g，206.0mmol，94％)不经进一步纯化用于下面的步骤。
步骤5：将乙酸酯QQQQQQ(39.4g，219.8mmol，1.0当量)的溶液溶解在二乙醚(100mL)中并且然后添加118g硅胶。在真空中除去过量的醚，并且然后将粗固体在pH 7的水性缓冲液(1970mL，0.1M)(氢氧化钠/磷酸二氢钠/水)中稀释。添加猪胰脂酶类型II(3.3g(15mg/mmol))并将反应在37℃下搅拌四小时，或者直到通过TLC或LCMS确定完成。(四小时后，根据ELSD确定的转化率达到40％，并且通过手性SFC确定对映体过量且示出13∶1S∶R的对映体比率)。(SFC条件：SFC研发器(Waters/Thar)；软件：Chromscope v1.2；方法：等度的15％共溶剂，即95∶5的庚烷：IPA+0.1％DEA，经10分钟；柱：Lux-Amylose-2，4.6x250mm，5μm；总流量：4ml/min(来自CO2泵的3.80mL，来自改性剂泵的0.20mL)；烘箱温度设定为35℃并且系统压力设定为100巴；保留时间：对于所希望的和主要的(S)-对映体为6.9min，对于次要的(R)-对映体为8.4min)。滤出硅胶并将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩。将产物通过硅胶柱色谱法(己烷：乙酸乙酯作为洗脱液)纯化，得到所希望的醇(RRRRRR，12.5g，91mmol，41％)。
步骤6：在室温下，向醇RRRRRR(12.5g，91.0mmol，1.00当量)在二氯甲烷(570mL，0.16M)中的溶液中添加三乙胺(13.9mL，100.1mmol，1.1当量)。将反应冷却至0℃并且然后添加甲磺酰氯(7.44mL，95.5mmol，1.05当量)。将反应在0℃下搅拌30分钟，或者直到通过TLC或LCMS确定完成。将反应用碳酸氢钠淬灭并将各层分离。然后将水层用二氯甲烷萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，并在真空中浓缩。无需另外纯化地使用所得磺酸酯SSSSSS(19.2g，89mmol，98％)。
步骤7：在室温下，向磺酸酯SSSSSS(19.2g，89mmol，1.0当量)在DMF(120mL，0.1M)中的溶液中添加碳酸铯(40.7g，125.0mmol，1.4当量)和l-苯基-1H-四唑-5-硫醇(19.1g，107.1mmol，1.2当量)。将所得混合物在50℃下搅拌48小时，或者直到通过TLC或LCMS确定完成。将混合物冷却至室温后，添加盐水并将水层用二乙醚萃取三次。将合并的有机层用水、盐水洗涤，并经硫酸镁干燥。过滤后，在真空中除去溶剂并使用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯)将残余物纯化，得到所希望的产物(TTTTTT，28.9g，88mmol，99％)。
步骤8：在-10℃下，向硫化物TTTTTT(31.5g，105.9mmol，1.0当量)在EtOH(700mL，0.1M)中的溶液中添加四水合钼酸铵(6.5g，5.3mmol，0.05当量)和过氧化氢(108mL，1060mmol，5.0当量，33％水溶液)。将反应在-10℃下搅拌四小时，或者直到通过TLC或LCMS确定完成。将反应用水和焦亚硫酸钠溶液淬灭。通过过滤收集粗产物并通过硅胶柱色谱法(己烷：乙酸乙酯作为洗脱液)纯化，得到所希望的产物(UUUUUU，23.2g，70.4mmol，66％)。1HNMR(400MHz，氯仿-d)δ：1.50(d，J＝7.03Hz，3H)1.66(br.s.，1H)3.75(m，1H)3.94(dd，J＝14.81，5.02Hz，1H)4.55(dd，J＝14.68，7.91Hz，1H)7.14-7.22(m，2H)7.29(s，1H)7.57-7.70(m，6H)8.44-8.49(m，1H)。
然后使用甲苯/庚烷(1/1)(1mL甲苯和1mL庚烷/100mg化合物)，将无色油状物进行重结晶。轻轻加热混合物以混合这两种溶剂。让混合物冷却至室温，持续12h。(如果未观察到重结晶，则向溶液中添加一个晶体。该晶体将有助于通过种晶过程获得晶体。)晶体随着时间慢慢形成。它们可以通过过滤或通过移液器除去液体层而分离。然后将晶体用庚烷洗涤，然后快速用甲苯洗涤。在重结晶之前和之后分析砜的er。(SFC条件：SFC条件：SFC研发器(Waters/Thar)；软件：Chromscope v1.2；方法：等度的10％共溶剂，即MeOH，经10分钟；柱：ChiralPak IC，4.6x250mm，5μm；总流量：4ml/min(来自CO2泵的3.80ml，来自改性剂泵的0.20ml)；烘箱温度设定为35℃并且系统压力设定为100巴；保留时间：对于所希望的和主要的(S)-对映体为3.5min，对于次要的(R)-对映体为3.8min)。
化合物1的示例性合成
Figure BDA0002853211320000611
方案I
步骤1：(2S，3S，6S，7R，10R，E)-10-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-((R，2E，4E)-7-((2R，3R)-3-((2S，3S)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-6-羟基-6-甲基庚-2，4-二烯-2-基)-7-羟基-3，7-二甲基-12-氧代氧杂环十二碳-4-烯-6-基乙酸酯的合成。在氮气下在0℃下，将普拉二烯内酯D(F，5.3g，9.7mmol，1.0当量)在DMF(80mL，0.1M)中的溶液用咪唑(4.6g，67.8mmol，7.0当量)和TBSCl(7.3g，48.4mmol，5.0当量)处理。使反应加温至室温并搅拌20小时，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应用乙酸乙酯萃取并将有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩。将所得油状物通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯作为洗脱液)纯化，得到所希望的产物(G，7.5g，9.6mmol，99％)。
步骤2：(2S，3S，6S，7R，10R，E)-10-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-((6R，E)-7-((2R，3S)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)戊-2-基)环氧乙烷-2-基)-4，5，6-三羟基-6-甲基庚-2-烯-2-基)-7-羟基-3，7-二甲基-12-氧代氧杂环十二碳-4-烯-6-基乙酸酯的合成。在氮气下在0℃下，向烯烃G(7.6g，9.7mmol，1.0当量)在脱气的TEF：H2O(210mL：21mL，0.01M)中的溶液中添加四氧化锇(24.4mL，1.9mmol，0.2当量，在叔丁醇中的2.5％溶液)，随后添加N-甲基吗啉N-氧化物(2.3g，19.5mmol，2.0当量)。使反应加温至室温并搅拌13小时，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应用亚硫酸钠淬灭，用乙酸乙酯稀释，并将有机层用水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空中浓缩。将所得油状物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇作为洗脱液)纯化，得到所希望的产物(H，6.8g，8.3mmol，86％)。
步骤3：(2S，3S，6S，7R，10R，E)-10-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-7-羟基-3，7-二甲基-12-氧代-2-((E)-4-氧代丁-2-烯-2-基)氧杂环十二碳-4-烯-6-基乙酸酯的合成。在氮气下在室温下，向二醇H(7.9g，9.7mmol，1.0当量)在苯(350mL，0.03M)中的溶液中添加四乙酸铅(8.6g，19.4mmol，2.0当量)。将反应搅拌30分钟，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应浓缩并通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯作为洗脱液)纯化，得到所希望的产物(I，2.5g，5.26mmol，54％)。
步骤4：(2S，3S，6S，7R，10R，E)-10-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-7-(1-乙氧基乙氧基)-3，7-二甲基-12-氧代-2-((E)-4-氧代丁-2-烯-2-基)氧杂环十二碳-4-烯-6-基乙酸酯的合成。在室温下，向醛I(1.4g，2.9mmol，1.0当量)在THF(9.5mL，0.5M)中的溶液中添加乙氧基乙烯(11.1mL，40.0当量)和对甲苯磺酸吡啶鎓(0.07g，0.3mmol，0.1当量)。将反应搅拌24小时，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应用碳酸氢钠淬灭并用乙酸乙酯稀释。将乙酸乙酯用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空中浓缩。将所得油状物通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯作为洗脱液)纯化，得到所希望的产物(J，1.2g，2.2mmol，75％)。
步骤5：(2S，3S，6S，7R，10R，E)-10-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-7-(1-乙氧基乙氧基)-3，7-二甲基-12-氧代-2-((R，2E，4E)-6-(吡啶-2-基)庚-2，4-二烯-2-基)氧杂环十二碳-4-烯-6-基)乙酸酯的合成。在氮气下在-78℃下，向(S)-2-(l-((l-苯基-1H-四唑-5-基)磺酰基)丙-2-基)吡啶(UUUUU)(695.0mg，2.1mmol，1.5当量)在THF(20mL，0.06M)中的溶液中逐滴添加KHMDS(4.2mL，2.1mmol，1.5当量)并将反应搅拌20分钟。然后逐滴添加在THF(1.0mL)中的醛J(780.0mg，1.4mmol，1.0当量)。将反应在-78℃下搅拌90分钟并且然后使其加温至-20℃持续1小时。将反应用氯化铵淬灭，用乙酸乙酯稀释，并加温至室温。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空中浓缩。将所得油状物通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯作为洗脱液)纯化，得到所希望的茱莉亚(Julia)产物(K，490mg，0.7mmol，53％)。
步骤6：(4R，7R，8S，11S，E)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-7-(1-乙氧基乙氧基)-8-羟基-7，11-二甲基-12-((R，2E，4E)-6-(吡啶-2-基)庚-2，4-二烯-2-基)氧杂环十二碳-9-烯-2-酮的合成。在室温下，向乙酸酯K(490mg，0.7mmol，1.0当量)在甲醇(15mL，0.05M)中的溶液中添加碳酸钾(155mg，0.4mmol，1.5当量)。反应进行24小时，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应用水淬灭，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空中浓缩。所得泡沫状固体(L，459mg，0.7mmol，100％)无需另外纯化而进入下一步骤。
步骤7：(2S，3S，6S，7R，10R，E)-10-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-7-(l-乙氧基乙氧基)-3，7-二甲基-12-氧代-2-((R，2E，4E)-6-(吡啶-2-基)庚-2，4-二烯-2-基)氧杂环十二碳-4-烯-6-基4-甲基哌嗪-1-甲酸酯的合成。在室温下，向醇L(459mg，0.7mmol，1.0当量)在二氯甲烷(0.5mL，0.1M)中的溶液中添加N，N-二甲基氨基吡啶(27.3mg，0.2mmol，0.3当量)和三乙胺(1.0mL，7.4mmol，10.0当量)，随后添加4-硝基苯基氯甲酸酯(451mg，02.2mmol，3：0当量)。将反应在室温下搅拌三小时。接着，在室温下添加N-甲基-哌嗪(299mg，2.98mmol，4.0当量)。搅拌一小时后，将反应用水淬灭并用二氯甲烷稀释。将有机层用1N氢氧化钠溶液洗涤，并将有机层浓缩。将所得油状物通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯作为洗脱液)纯化，得到所希望的产物(M，553mg，0.75mmol，100％)。
步骤8：(2S，3S，6S，7R，10R，E)-7，10-二羟基-3，7-二甲基-12-氧代-2-((R，2E，4E)-6-(吡啶-2-基)庚-2，4-二烯-2-基)氧杂环十二碳-4-烯-6-基4-甲基哌嗪-1-甲酸酯(化合物1)的合成。在室温下，向甲硅烷基醚(M，553mg，0.74mmol，1.0当量)在甲醇(20mL，0.04M)中的溶液中添加对甲氧基甲苯磺酸(425mg，2.2mmol，3.0当量)。将反应搅拌3小时，或者直到通过LCMS或TLC确定反应完成。将反应用碳酸氢钠淬灭并用乙酸乙酯稀释。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在真空中浓缩。将所得油状物通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯作为洗脱液)纯化，得到所希望的化合物1(184mg，0.33mmol，44％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ：0.82-1.00(m，3H)1.22-1.48(m，8H)1.50-1.63(m，1H)1.66-1.83(m，4H)1.97(s，1H)2.07(s，1H)2.33(s，3H)2.40(br.s.，3H)2.45-2.68(m，3H)3.44-3.61(m，5H)3.74(dd，J＝14.2，7.2Hz，2H)5.04(d，J＝9.3Hz，1H)5.17(d，J＝10.5Hz，1H)5.57-5.76(m，2H)6.02(dd，J＝15.1，7.5Hz，1H)6.13(d，J＝10.8Hz，1H)6.34(ddd，J＝15.1，10.7，1.0Hz，1H)7.14(t，J＝6.2Hz，1H)7.18(d，J＝7.4Hz，1H)7.63(t，J＝7.3Hz，1H)8.57(d，J＝5.1Hz，1H)。MS(ES+)＝556.4[M+H]。
实例2：施用化合物1与检查点抑制剂的组合
功效研究方案：小鼠结肠癌同系模型
将在100μL不含基质胶的PBS中的CT26结肠癌细胞(0.25x106；ATCC目录号CRL-2638)皮下植入八周龄雌性Balb/c小鼠(Envigo公司)的右侧腹中。在动物被纳入功效研究之前，使CT26肿瘤生长至平均约100mm3。每个治疗组包含12只小鼠。以如图1所示的施用剂量和施用途径，用化合物1、抗CTLA4抗体(Bio X Cell目录号：BE0164(αCTLA4 9D9))或其组合治疗小鼠。将化合物1配制在包含5％乙醇和95％甲基纤维素溶液(0.5％甲基纤维素)的组合物中。将抗CTLA4抗体配制在pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液中。每周测量肿瘤3次，持续长达19天。使用椭球公式计算肿瘤体积：
肿瘤体积＝(长度×宽度2)/2
功效研究结果
当将生长曲线与媒介物处理的对照的生长曲线进行比较时，用任何剂量水平或时间表的化合物1治疗具有CT26同系肿瘤的动物均未产生明显的抗肿瘤活性(图1A)。每周两次用10mg/kg的靶向免疫检查点CTLA4(“抗CTLA4”)的抗体进行的治疗导致12只动物中仅有2只出现明显的肿瘤生长延迟(图1B)。然而，出人意料地发现，在化合物1与抗CTLA4组合施用之后，观察到应答率的显著增加(图1C)。

Claims (243)

1.一种诱导至少一种新抗原的方法，该方法包括使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触，从而诱导至少一种新抗原的产生。
2.如权利要求1所述的方法，其中该赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。
3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中该赘生性细胞获得自受试者。
4.如权利要求1所述的方法，其中该赘生性细胞存在于受试者中。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中该赘生性细胞源自血液恶性病或实体瘤。
6.如权利要求5所述的方法，其中该血液恶性病选自B细胞恶性病、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。
7.如权利要求5或权利要求6所述的方法，其中该血液恶性病选自急性骨髓性白血病和多发性骨髓瘤。
8.如权利要求5所述的方法，其中该实体瘤选自乳腺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、子宫癌、涎腺导管癌、黑色素瘤、结肠癌、以及食道癌。
9.一种在患有或疑似患有赘生性病症的受试者中诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐。
10.一种治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐，其中该化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答。
11.如权利要求10所述的方法，其中相对于该化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量由于至少一种新抗原和/或T细胞应答的诱导而降低。
12.如权利要求11所述的方法，其中相对于该化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
13.如权利要求10至12中任一项所述的方法，其中相对于该化合物1或其药学上可接受的盐的标准给药方案，该化合物1或其药学上可接受的盐以减少至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％的频率施用。
14.如权利要求10至12中任一项所述的方法，其中所施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量和/或剂量导致较低的全身性毒性和/或改善的耐受性。
15.如权利要求9至14中任一项所述的方法，该方法进一步包括施用至少一种另外的疗法。
16.如权利要求15所述的方法，其中相对于该至少一种另外的疗法的标准剂量，所施用的至少一种另外的疗法的量由于通过施用该化合物1或其药学上可接受的盐诱导了至少一种新抗原和/或T细胞应答而降低。
17.如权利要求16所述的方法，其中相对于该至少一种另外的疗法的标准剂量，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐、或至少一种另外的疗法的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
18.如权利要求15至17中任一项所述的方法，其中相对于该至少一种另外的疗法的标准给药方案，该化合物1或其药学上可接受的盐、或至少一种另外的疗法以减少至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％的频率施用。
19.如权利要求15至18中任一项所述的方法，其中在施用该至少一种另外的疗法之前，开始施用该化合物1或其药学上可接受的盐。
20.如权利要求15至18中任一项所述的方法，其中在施用该至少一种另外的疗法之后，开始施用该化合物1或其药学上可接受的盐。
21.如权利要求15至18中任一项所述的方法，其中在施用该至少一种另外的疗法的同时，开始施用该化合物1或其药学上可接受的盐。
22.如权利要求10至21中任一项所述的方法，其中在初始施用之后，重复施用该化合物1或其药学上可接受的盐至少一次。
23.如权利要求22所述的方法，其中相对于用于初始施用的量，用于重复施用的该化合物1或其药学上可接受的盐的量降低。
24.如权利要求23所述的方法，其中相对于用于初始施用的量，用于重复施用的该化合物1或其药学上可接受的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
25.如权利要求15至24中任一项所述的方法，其中在初始施用之后，重复施用该至少一种另外的疗法至少一次。
26.如权利要求25所述的方法，其中相对于用于初始施用的量，用于重复施用的该至少一种另外的疗法的量降低。
27.如权利要求25所述的方法，其中相对于该至少一种另外的疗法的标准剂量，用于重复施用的该至少一种另外的疗法的量降低。
28.如权利要求26或权利要求27所述的方法，其中相对于用于初始施用的量，用于重复施用的该至少一种另外的疗法的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
29.如权利要求15至28中任一项所述的方法，其中重复施用该化合物1或其药学上可接受的盐与重复施用该至少一种另外的疗法同时进行。
30.如权利要求15至28中任一项所述的方法，其中重复施用该化合物1或其药学上可接受的盐与重复施用该至少一种另外的疗法依序或错开进行。
31.如权利要求15至30中任一项所述的方法，其中该至少一种另外的疗法包括检查点抑制剂。
32.如权利要求31所述的方法，其中该受试者对单独施用时的该检查点抑制剂不耐受、无响应或响应不良。
33.如权利要求31所述的方法，其中该检查点抑制剂靶向CTLA4、PD1、PDL1、OX40、CD40、GITR、LAG3、TIM3和/或KIR。
34.如权利要求31所述的方法，其中该检查点抑制剂靶向CTLA4、OX40、CD40和/或GITR。
35.如权利要求31至34中任一项所述的方法，其中该检查点抑制剂包含细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4途径(CTLA4)抑制剂。
36.如权利要求33或权利要求34所述的方法，其中该CTLA4抑制剂是抗CTLA4抗体。
37.如权利要求36所述的方法，其中该抗CTLA4抗体是伊匹单抗。
38.如权利要求31或权利要求32所述的方法，其中该检查点抑制剂包含程序性死亡-1途径(PD1)抑制剂。
39.如权利要求38所述的方法，其中该PD1抑制剂是抗PD1抗体。
40.如权利要求39所述的方法，其中该抗PD1抗体是纳武单抗。
41.如权利要求38所述的方法，其中该PD1抑制剂是抗PDL1抗体。
42.如权利要求41所述的方法，其中该抗PDL1抗体是阿特珠单抗。
43.如权利要求31或权利要求32所述的方法，其中该检查点抑制剂包含CTLA4抑制剂和PD1抑制剂。
44.如权利要求43所述的方法，其中该CTLA4抑制剂是抗CTLA4抗体。
45.如权利要求43或权利要求44所述的方法，其中该PD1抑制剂是抗PD1抗体。
46.如权利要求43或权利要求44所述的方法，其中该PD1抑制剂是抗PDL1抗体。
47.如权利要求15至30中任一项所述的方法，其中该至少一种另外的疗法包括施用新抗原疫苗。
48.如权利要求47所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽。
49.如权利要求48所述的方法，其中该至少一种新抗原肽的长度在约10个至约35个氨基酸范围内。
50.如权利要求48或权利要求49所述的方法，其中该至少一种新抗原肽的长度在约15个至约25个氨基酸范围内。
51.如权利要求47至50中任一项所述的方法，其中该至少一种新抗原肽包含一个或超过一个新抗原序列。
52.如权利要求51所述的方法，其中该新抗原序列是用于向受试者施用的个性化新抗原疫苗。
53.如权利要求51所述的方法，其中该新抗原序列是通用新抗原疫苗。
54.如权利要求52所述的方法，其中已通过对该受试者中由向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐诱导的至少一种新抗原进行测序而鉴定了该新抗原序列。
55.如权利要求47所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的载体。
56.如权利要求55所述的方法，其中该至少一种新抗原肽与该药学上可接受的载体连接。
57.如权利要求56所述的方法，其中该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。
58.如权利要求55所述的方法，其中该新抗原肽和该药学上可接受的载体经由接头共价连接。
59.如权利要求55所述的方法，其中该新抗原肽和该药学上可接受的载体表达为融合蛋白。
60.如权利要求47所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的稀释剂。
61.如权利要求47所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的佐剂。
62.如权利要求52所述的方法，其中该至少一种新抗原肽包含通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的新抗原序列。
63.如权利要求62所述的方法，其中该赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。
64.如权利要求62或权利要求63所述的方法，其中该赘生性细胞获得自该受试者。
65.如权利要求62所述的方法，其中该赘生性细胞存在于该受试者中。
66.如权利要求47所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA。
67.如权利要求66所述的方法，其中该至少一种新抗原mRNA编码一个或超过一个新抗原序列。
68.如权利要求67所述的方法，其中该新抗原序列是针对该受试者的个性化新抗原疫苗。
69.如权利要求67所述的方法，其中该新抗原序列是通用新抗原疫苗。
70.如权利要求67所述的方法，其中已通过对该受试者中由施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐诱导的至少一种新抗原进行测序而鉴定了该新抗原序列。
71.如权利要求66所述的方法，其中该至少一种新抗原mRNA编码通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的新抗原序列。
72.如权利要求47所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的载体。
73.如权利要求72所述的方法，其中该至少一种新抗原mRNA与该药学上可接受的载体连接。
74.如权利要求73所述的方法，其中该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。
75.如权利要求47所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的稀释剂。
76.如权利要求47所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的佐剂。
77.如权利要求47所述的方法，其中该新抗原mRNA通过包封剂包封。
78.如权利要求77所述的方法，其中该包封剂是脂质体。
79.如权利要求78所述的方法，其中该包封剂是纳米颗粒。
80.如权利要求15至30中任一项所述的方法，其中该至少一种另外的疗法包括施用细胞因子或细胞因子类似物。
81.如权利要求80所述的方法，其中该受试者对单独施用时的该细胞因子或细胞因子类似物不耐受、无响应或响应不良。
82.如权利要求80所述的方法，其中该细胞因子或细胞因子类似物包含T细胞增强子。
83.如权利要求80所述的方法，其中该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-2、IL-10、IL-12、IL-15、IFNγ和/或TNFα。
84.如权利要求15至30中任一项所述的方法，其中该至少一种另外的疗法包括施用工程化的肿瘤靶向性T细胞。
85.如权利要求9至84中任一项所述的方法，该方法进一步包括在施用化合物1或其药学上可接受的盐之后，在该受试者中检测一种或多种新抗原和/或T细胞应答。
86.如权利要求9至85中任一项所述的方法，该方法进一步包括如果检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答，则继续施用化合物1或其药学上可接受的盐。
87.如权利要求9至85中任一项所述的方法，该方法进一步包括如果检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答，则以降低的频率和/或以降低的剂量继续施用化合物1或其药学上可接受的盐。
88.如权利要求85所述的方法，其中在受试者中检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答表明用化合物1或其药学上可接受的盐治疗的功效。
89.如权利要求9至88中任一项所述的方法，其中该受试者具有约150个突变或更少的非同义突变负担。
90.如权利要求9至89中任一项所述的方法，其中该受试者具有约100个突变或更少的非同义突变负担。
91.如权利要求9至90中任一项所述的方法，其中该受试者具有约50个突变或更少的非同义突变负担。
92.如权利要求9至91中任一项所述的方法，其中该赘生性病症是血液恶性病或实体瘤。
93.如权利要求92所述的方法，其中该血液恶性病选自B细胞恶性病、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。
94.如权利要求92或权利要求93所述的方法，其中该血液恶性病选自急性骨髓性白血病和多发性骨髓瘤。
95.如权利要求92所述的方法，其中该实体瘤选自乳腺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、子宫癌、涎腺导管癌、黑色素瘤、结肠癌、以及食道癌。
96.一种治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法，该方法包括：
(a)向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐，其中该化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答；
(b)在施用该化合物1或其药学上可接受的盐之后，在该受试者中检测一种或多种新抗原和/或T细胞应答；以及
(c)如果检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答，则继续施用该化合物1或其药学上可接受的盐。
97.如权利要求96所述的方法，其中在受试者中检测到一种或多种新抗原和/或T细胞应答表明用化合物1或其药学上可接受的盐治疗的功效。
98.一种治疗患有或疑似患有赘生性病症的受试者的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐；以及至少一种另外的疗法。
99.如权利要求98所述的方法，其中该至少一种另外的疗法包括至少一种、至少两种、至少三种、至少四种或至少五种另外的疗法。
100.如权利要求98所述的方法，其中化合物1或其药学上可接受的盐的施用诱导至少一种新抗原和/或T细胞应答。
101.如权利要求98所述的方法，其中相对于化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的标准剂量，所施用的化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
102.如权利要求98至101中任一项所述的方法，其中相对于该化合物1或其药学上可接受的盐和/或该至少一种另外的疗法的标准给药方案，该化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法以减少至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％的频率施用。
103.如权利要求98至102中任一项所述的方法，其中所施用的化合物1或其药学上可接受的盐和/或至少一种另外的疗法的量和/或剂量导致较低的全身性毒性和/或改善的耐受性。
104.如权利要求98所述的方法，其中在施用该至少一种另外的疗法之前，开始施用化合物1或其药学上可接受的盐。
105.如权利要求98所述的方法，其中在施用该至少一种另外的疗法之后，开始施用化合物1或其药学上可接受的盐。
106.如权利要求98所述的方法，其中在施用该至少一种另外的疗法的同时，开始施用化合物1或其药学上可接受的盐。
107.如权利要求98至106中任一项所述的方法，其中在初始施用之后，重复施用化合物1或其药学上可接受的盐至少一次。
108.如权利要求107所述的方法，其中相对于用于初始施用的量，用于重复施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低。
109.如权利要求107所述的方法，其中相对于化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量，用于重复施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低。
110.如权利要求107所述的方法，其中相对于该化合物1或其药学上可接受的盐的标准剂量，用于重复施用的化合物1或其药学上可接受的盐的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
111.如权利要求98至110中任一项所述的方法，其中在初始施用之后，重复施用该至少一种另外的疗法至少一次。
112.如权利要求111所述的方法，其中相对于用于初始施用的量，用于重复施用的该至少一种另外的疗法的量降低。
113.如权利要求111所述的方法，其中相对于该至少一种另外的疗法的标准剂量，用于重复施用的该至少一种另外的疗法的量降低。
114.如权利要求111所述的方法，其中相对于该至少一种另外的疗法的标准剂量，用于重复施用的该至少一种另外的疗法的量降低10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、75％、或90％。
115.如权利要求98至114中任一项所述的方法，其中重复施用化合物1或其药学上可接受的盐与重复施用该至少一种另外的疗法同时进行。
116.如权利要求98至114中任一项所述的方法，其中重复施用化合物1或其药学上可接受的盐与重复施用该至少一种另外的疗法依序或错开进行。
117.如权利要求98至116中任一项所述的方法，其中该至少一种另外的疗法包括施用检查点抑制剂。
118.如权利要求117所述的方法，其中该受试者对单独施用时的该检查点抑制剂不耐受、无响应或响应不良。
119.如权利要求117所述的方法，其中该检查点抑制剂靶向CTLA4、PD1、PDL1、OX40、CD40、GITR、LAG3、TIM3和/或KIR。
120.如权利要求117所述的方法，其中该检查点抑制剂靶向CTLA4、OX40、CD40和/或GITR。
121.如权利要求119或权利要求120所述的方法，其中该检查点抑制剂包含细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4途径(CTLA4)抑制剂。
122.如权利要求121所述的方法，其中该CTLA4抑制剂是抗CTLA4抗体。
123.如权利要求122所述的方法，其中该抗CTLA4抗体是伊匹单抗。
124.如权利要求119或权利要求120所述的方法，其中该检查点抑制剂包含程序性死亡-1途径(PD1)抑制剂。
125.如权利要求124所述的方法，其中该PD1抑制剂是抗PD1抗体。
126.如权利要求125所述的方法，其中该抗PD1抗体是纳武单抗。
127.如权利要求124所述的方法，其中该PD1抑制剂是抗PDL1抗体。
128.如权利要求127所述的方法，其中该抗PDL1抗体是阿特珠单抗。
129.如权利要求119或权利要求120所述的方法，其中该检查点抑制剂包含CTLA4抑制剂和PD1抑制剂。
130.如权利要求129所述的方法，其中该CTLA4抑制剂是抗CTLA4抗体。
131.如权利要求130所述的方法，其中该抗CTLA4抗体是伊匹单抗。
132.如权利要求129或权利要求130所述的方法，其中该PD1抑制剂是抗PD1抗体。
133.如权利要求132所述的方法，其中该抗PD1抗体是纳武单抗。
134.如权利要求129或权利要求130所述的方法，其中该PD1抑制剂是抗PDL1抗体。
135.如权利要求134所述的方法，其中该抗PDL1抗体是阿特珠单抗。
136.如权利要求98至114中任一项所述的方法，其中该至少一种另外的疗法包括施用新抗原疫苗。
137.如权利要求136所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽。
138.如权利要求137所述的方法，其中该至少一种新抗原肽的长度在约10个至约35个氨基酸范围内。
139.如权利要求137或权利要求138所述的方法，其中该至少一种新抗原肽的长度在约15个至约25个氨基酸范围内。
140.如权利要求137至139中任一项所述的方法，其中该至少一种新抗原肽包含一个或超过一个新抗原序列。
141.如权利要求140所述的方法，其中该新抗原序列是针对该受试者的个性化新抗原疫苗。
142.如权利要求140所述的方法，其中该新抗原序列是通用新抗原疫苗。
143.如权利要求140所述的方法，其中已通过对该受试者中由施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐诱导的至少一种新抗原进行测序而鉴定了该新抗原序列。
144.如权利要求137至143中任一项所述的方法，其中该至少一种新抗原肽包含通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的新抗原序列。
145.如权利要求136所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的载体。
146.如权利要求145所述的方法，其中该至少一种新抗原肽与该药学上可接受的载体连接。
147.如权利要求145所述的方法，其中该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。
148.如权利要求145所述的方法，其中该新抗原肽和该药学上可接受的载体经由接头共价连接。
149.如权利要求145所述的方法，其中该新抗原肽和该药学上可接受的载体表达为融合蛋白。
150.如权利要求136所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的稀释剂。
151.如权利要求136所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原肽和药学上可接受的佐剂。
152.如权利要求144所述的方法，其中该赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。
153.如权利要求144或权利要求152所述的方法，其中该赘生性细胞获得自该受试者。
154.如权利要求153所述的方法，其中该赘生性细胞存在于该受试者中。
155.如权利要求136所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA。
156.如权利要求155所述的方法，其中该至少一种新抗原mRNA编码一个或超过一个新抗原序列。
157.如权利要求156所述的方法，其中该新抗原序列是针对该受试者的个性化新抗原疫苗。
158.如权利要求156所述的方法，其中该新抗原序列是通用新抗原疫苗。
159.如权利要求156所述的方法，其中已通过对该受试者中由施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐诱导的至少一种新抗原进行测序而鉴定了该新抗原序列。
160.如权利要求155所述的方法，其中该至少一种新抗原mRNA编码通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的新抗原序列。
161.如权利要求136所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的载体。
162.如权利要求161所述的方法，其中该至少一种新抗原mRNA与该药学上可接受的载体连接。
163.如权利要求161所述的方法，其中该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。
164.如权利要求136所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的稀释剂。
165.如权利要求136所述的方法，其中该新抗原疫苗包含至少一种新抗原mRNA和药学上可接受的佐剂。
166.如权利要求155所述的方法，其中该新抗原mRNA通过包封剂包封。
167.如权利要求166所述的方法，其中该包封剂是脂质体。
168.如权利要求166所述的方法，其中该包封剂是纳米颗粒。
169.如权利要求160所述的方法，其中该赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。
170.如权利要求160或权利要求169所述的方法，其中该赘生性细胞获得自该受试者。
171.如权利要求170所述的方法，其中该赘生性细胞存在于该受试者中。
172.如权利要求98至116中任一项所述的方法，其中该至少一种另外的疗法包括施用细胞因子或细胞因子类似物。
173.如权利要求172所述的方法，其中该受试者对单独施用时的该细胞因子或细胞因子类似物不耐受、无响应或响应不良。
174.如权利要求172所述的方法，其中该细胞因子或细胞因子类似物包含T细胞增强子。
175.如权利要求172所述的方法，其中该细胞因子或细胞因子类似物包含IL-2、IL-10、IL-12、IL-15、IFNγ和/或TNFα。
176.如权利要求98至116中任一项所述的方法，其中该至少一种另外的疗法包括施用工程化的肿瘤靶向性T细胞。
177.如权利要求98至176中任一项所述的方法，其中该受试者具有约150个突变或更少的非同义突变负担。
178.如权利要求98至177中任一项所述的方法，其中该受试者具有约100个突变或更少的非同义突变负担。
179.如权利要求98至178中任一项所述的方法，其中该受试者具有约50个突变或更少的非同义突变负担。
180.如权利要求98至179中任一项所述的方法，其中该赘生性病症是血液恶性病或实体瘤。
181.如权利要求180所述的方法，其中该血液恶性病选自B细胞恶性病、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。
182.如权利要求180或权利要求181所述的方法，其中该血液恶性病选自急性骨髓性白血病和多发性骨髓瘤。
183.如权利要求180所述的方法，其中该实体瘤选自乳腺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌、子宫癌、涎腺导管癌、黑色素瘤、结肠癌、以及食道癌。
184.如权利要求1至183中任一项所述的方法，其中化合物1或其药学上可接受的盐作为缀合物的一部分施用。
185.如权利要求184所述的方法，其中该缀合物是具有式II的缀合物：
X-(L-D)p (II)
其中
X是靶向赘生性细胞的细胞结合剂；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将X共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
186.如权利要求185所述的方法，其中该细胞结合剂包含抗体或其抗原结合片段。
187.如权利要求185或权利要求186所述的方法，其中该缀合物是抗体-药物缀合物。
188.如权利要求187所述的方法，其中该缀合物是具有式II(a)的抗体-药物缀合物：
Ab-(L-D)p (II(a))
其中
Ab是靶向赘生性细胞的抗体或其抗原结合片段；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将Ab共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
189.如权利要求185所述的方法，其中该细胞结合剂包含肽。
190.如权利要求185或权利要求189所述的方法，其中该缀合物是肽-药物缀合物。
191.如权利要求190所述的方法，其中该缀合物是具有式II(b)的肽-药物缀合物：
P-(L-D)p (II(b))
其中
P是靶向赘生性细胞的肽；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将P共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
192.如权利要求185所述的方法，其中该细胞结合剂包含DARPin、duobody、双环肽、纳米抗体、centyrin、MSH(黑素细胞刺激素)、受体-Fc融合分子、T细胞受体结构、类固醇激素、生长因子、或集落刺激因子。
193.如权利要求185或权利要求192所述的方法，其中该细胞结合剂包含非抗体支架。
194.如权利要求193所述的方法，其中该非抗体支架包含结构域大小的支架或约束肽。
195.如权利要求194所述的方法，其中该结构域大小的支架是affibody、affilin、anticalin、atrimer、DARPin、FN3支架、fynomer、库尼茨结构域、pronectin、O-body、或受体-Fc融合蛋白。
196.如权利要求194所述的方法，其中该约束肽是avimer、双环肽、或Cys结。
197.如权利要求185至196中任一项所述的方法，其中L是可裂解接头。
198.如权利要求185至196中任一项所述的方法，其中L是不可裂解接头。
199.如权利要求185至198中任一项所述的方法，其中p是从1至10的整数。
200.如权利要求185至199中任一项所述的方法，其中p是从1至8的整数。
201.如权利要求185至200中任一项所述的方法，其中p是从1至4的整数。
202.一种包含至少一种新抗原肽的新抗原疫苗，其中该至少一种新抗原肽包含通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的经修饰或新颖的新抗原序列。
203.如权利要求202所述的新抗原疫苗，其中该至少一种新抗原肽的长度在约10个至约35个氨基酸范围内。
204.如权利要求202或权利要求203所述的新抗原疫苗，其中该至少一种新抗原肽的长度在约15个至约25个氨基酸范围内。
205.如权利要求202所述的新抗原疫苗，该新抗原疫苗进一步包含药学上可接受的载体。
206.如权利要求205所述的新抗原疫苗，其中该至少一种新抗原肽与该药学上可接受的载体连接。
207.如权利要求206所述的新抗原疫苗，其中该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。
208.如权利要求205所述的新抗原疫苗，其中该新抗原肽和该药学上可接受的载体经由接头共价连接。
209.如权利要求205所述的新抗原疫苗，其中该新抗原肽和该药学上可接受的载体表达为融合蛋白。
210.如权利要求202所述的新抗原疫苗，该新抗原疫苗进一步包含药学上可接受的稀释剂。
211.如权利要求202所述的新抗原疫苗，该新抗原疫苗进一步包含药学上可接受的佐剂。
212.如权利要求202至204中任一项所述的新抗原疫苗，其中该赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。
213.如权利要求202至204、或212中任一项所述的新抗原疫苗，其中该赘生性细胞获得自受试者。
214.如权利要求202至204中任一项所述的新抗原疫苗，其中该赘生性细胞存在于受试者中。
215.一种包含至少一种新抗原mRNA的新抗原疫苗，其中该至少一种新抗原mRNA编码通过使赘生性细胞与有效量的化合物1或其药学上可接受的盐接触而诱导的经修饰或新颖的新抗原序列。
216.如权利要求215所述的新抗原疫苗，该新抗原疫苗进一步包含药学上可接受的载体。
217.如权利要求215所述的新抗原疫苗，其中该至少一种新抗原mRNA与该药学上可接受的载体连接。
218.如权利要求217所述的新抗原疫苗，其中该药学上可接受的载体选自肽、血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白、卵白蛋白、类毒素或减毒的类毒素衍生物、细胞因子和趋化因子。
219.如权利要求215所述的新抗原疫苗，该新抗原疫苗进一步包含药学上可接受的稀释剂。
220.如权利要求215所述的新抗原疫苗，该新抗原疫苗进一步包含药学上可接受的佐剂。
221.如权利要求215所述的新抗原疫苗，其中该新抗原mRNA通过包封剂包封。
222.如权利要求221所述的新抗原疫苗，其中该包封剂是脂质体。
223.如权利要求221所述的新抗原疫苗，其中该包封剂是纳米颗粒。
224.如权利要求215所述的新抗原疫苗，其中该赘生性细胞存在于体外细胞培养物中。
225.如权利要求215或权利要求224所述的新抗原疫苗，其中该赘生性细胞获得自受试者。
226.如权利要求215所述的新抗原疫苗，其中该赘生性细胞存在于受试者中。
227.一种具有式II的缀合物：
X-(L-D)p (II)
其中
X是靶向赘生性细胞的细胞结合剂；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将X共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
228.如权利要求227所述的缀合物，其中该细胞结合剂包含抗体或其抗原结合片段。
229.如权利要求227或权利要求228所述的缀合物，其中该缀合物是抗体-药物缀合物。
230.如权利要求229所述的缀合物，其中该缀合物是具有式II(a)的抗体-药物缀合物：
Ab-(L-D)p (II(a))
其中
Ab是靶向赘生性细胞的抗体或其抗原结合片段；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将Ab共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
231.如权利要求227所述的缀合物，其中该细胞结合剂包含肽。
232.如权利要求227或权利要求231所述的缀合物，其中该缀合物是肽-药物缀合物。
233.如权利要求232所述的缀合物，其中该缀合物是具有式II(b)的肽-药物缀合物：
P-(L-D)p (II(b))
其中
P是靶向赘生性细胞的肽；
D是化合物1或其药学上可接受的盐；
L是将P共价连接到D的接头；并且
p是从1至15的整数。
234.如权利要求227所述的缀合物，其中该细胞结合剂包含DARPin、duobody、双环肽、纳米抗体、centyrin、MSH(黑素细胞刺激素)、受体-Fc融合分子、T细胞受体结构、类固醇激素、生长因子、或集落刺激因子。
235.如权利要求227或权利要求234所述的缀合物，其中该细胞结合剂包含非抗体支架。
236.如权利要求235所述的缀合物，其中该非抗体支架包含结构域大小的支架或约束肽。
237.如权利要求236所述的缀合物，其中该结构域大小的支架是affibody、affilin、anticalin、atrimer、DARPin、FN3支架、fynomer、库尼茨结构域、pronectin、O-body、或受体-Fc融合蛋白。
238.如权利要求236所述的缀合物，其中该约束肽是avimer、双环肽、或Cys结。
239.如权利要求227至238中任一项所述的缀合物，其中L是可裂解接头。
240.如权利要求227至238中任一项所述的缀合物，其中L是不可裂解接头。
241.如权利要求227至240中任一项所述的缀合物，其中p是从1至10的整数。
242.如权利要求227至241中任一项所述的缀合物，其中p是从1至8的整数。
243.如权利要求227至242中任一项所述的缀合物，其中p是从1至4的整数。
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