TW202206592A

TW202206592A - 用於協調產製供病患特異性免疫治療之細胞的系統和方法

Info

Publication number: TW202206592A
Application number: TW110114589A
Authority: TW
Inventors: 安妮布魯克斯; 史蒂夫麥克里德斯; 克里斯汀蘭茲
Original assignee: 美商艾歐凡斯生物治療公司
Priority date: 2020-04-22
Filing date: 2021-04-22
Publication date: 2022-02-16
Also published as: KR20230037069A; US20210407639A1; WO2021216920A1; JP2023524639A; US20220059202A1; US20220122707A1; IL297442A; US20210407640A1; US11631483B2; BR112022021020A2; US20210335467A1; CA3176356A1; AU2021258257A1; CN115997008A; MX2022013065A; EP4139440A1

Abstract

一種用於協調產製供病患之經擴增之細胞治療產物的方法，該方法可包括接受擴增供該病患之該細胞治療產物之細胞訂購需求；產生病患特異性識別符或與該細胞訂購需求相關聯之細胞訂購識別符；及自獲自該病患之實體腫瘤之至少一些起始擴增該細胞治療產物之製程。如果該擴增細胞治療產物的接受參數不符合在該擴增過程中第一時間點後續的第二時間點之某些接受標準，則基於該第二時間點的該接受參數判定自該第一時間點使用該細胞擴增技術再實施該細胞治療產物之該擴增是否可能。如果此類再實施該擴增係可能的，則再排程使用該經擴增之細胞治療產物的病患治療事件。

Description

用於協調產製供病患特異性免疫治療之細胞的系統和方法

本申請案關於用於協調產製供病患特異性免疫治療之細胞的系統和方法。相關申請案之交互參照

本申請案主張於2020年4月22日提出申請之美國臨時申請案第63/013,942號、2021年3月2日提出申請之美國臨時申請案第63/155,711號及2021年3月11日提出申請之美國臨時申請案第63/159,806號之優先權，各案出於所有目的以引用方式併入本文中。

使用過繼性轉移腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)治療大型(bulky)、難治性癌症對於預後不良病患代表一種強大的治療方案。Gattinoni,et al. ,Nat. Rev. Immunol. 2006, 6, 383-393。成功免疫療法需要大量的TIL，而商業化需要強健且可靠的製程。由於細胞擴增的技術、後勤及法規問題，要達成此是一項挑戰。基於IL-2的TIL擴增及隨後的「快速擴增過程」(REP)已因其速度及效率而成為TIL擴增的較佳方法。Dudley,et al. ,Science 2002, 298, 850-54；Dudley,et al. ,J. Clin. Oncol. 2005, 23, 2346-57；Dudley,et al. ,J. Clin. Oncol. 2008 ,26, 5233-39；Riddell,et al. ,Science 1992, 257, 238-41；Dudley,et al. ,J. Immunother. 2003 ,26, 332-42。REP可在14天期間導致1,000倍的TIL擴增，儘管其需要大量過量(例如，200倍)的經照射的通常來自多個供體之同種異體周邊血液單核細胞(PBMC，亦稱為單核細胞(MNC))作為餵養細胞，還需要抗CD3抗體(OKT3)及高劑量的IL-2。Dudley,et al., J. Immunother. 2003, 26, 332-42。經歷REP程序的TIL已在宿主免疫抑制後的黑色素瘤病患中產生成功的過繼性細胞療法。

本發明之內容將詳細說明如下。

I. 介紹

利用快速擴增規程(REP)離體(ex vivo )培養之TIL的過繼性細胞療法已在宿主免疫抑制後的黑色素瘤病患中產生成功的過繼性細胞療法。例如發現在一些情況下，在過繼性轉移腫瘤特異性T淋巴細胞之前的淋巴細胞耗盡藉由清除調節T細胞及競爭免疫系統的元件(「細胞介素匯(cytokine sinks)」)扮演增強治療療效的關鍵角色。在一些情況下，ACT之療效可藉由在輸注TIL之前(例如在TIL輸注之前28至25天)以非骨髓清除式化療預處理接受ACT之病患來增加。亦發現在TIL輸注之後的IL-2治療方案可改善療法成功的機會。這些輸注前治療及輸注後治療的時間及期間決定整個治療方案的最終療效。

因此，各種治療方案排程取決於TIL產製過程的時間及期間，該TIL產製過程本身係依賴於最終產物的接受參數。目前的輸注接受性參數依賴TIL之組成的讀數(例如，CD28、CD8或CD4陽性率)及經擴增之TIL產物(在本文中亦稱為REP產物)的擴增倍數及存活性。REP產物之擴增倍數及存活性進而取決於在擴增過程期間測量之各種參數。可接受之供輸注REP產物在產出及時間上的此類變異對運送腫瘤至產製機構的物流、轉移REP產物及在TIL產製過程期間各種病患治療事件的排程造成挑戰。

再者，各種參數諸如在TIL產製過程之不同階段期間的細胞存活性及細胞計數決定後續階段的期間，以使得在TIL產製過程結束時獲得可接受之存活性、數值倍數及最終細胞計數。

此外，從生物材料自病患移除的時間到其輸注至病患體內的時間(包括整個TIL產製過程)皆必須追蹤，以避免產製延遲、材料的錯誤標示及病患的錯誤識別，且藉此改善病患安全性。

本揭露提供基於在產製過程之不同階段期間的各種測量參數藉由動態排程各種病患治療事件用於協調供病患之經擴增之細胞治療產物的產製過程及各種病患治療事件的架構。

例如在一實施態樣中，用於協調產製供病患之經擴增之T細胞的方法可包括：藉由運算接受細胞訂購需求以擴增供該病患之T細胞；藉由該運算裝置產生病患特異性識別符或與細胞訂購需求相關聯之細胞訂購識別符；及起始擴增T細胞之製程。擴增T細胞之製程可包括在臨床機構對病患實施程序以自病患獲得T細胞且將經獲得之T細胞轉移至產製機構。在產製機構接受經獲得之T細胞之後，藉由運算裝置動態排程病患治療事件。動態排程係依賴於後續獲得之擴增T細胞的接受參數。使用細胞擴增技術自經獲得之T細胞之至少一些起始T細胞之擴增且判定擴增T細胞的接受參數。

在另一實施態樣中，用於協調產製供病患之經擴增之細胞治療產物的方法可包括：藉由運算裝置接受細胞訂購需求以擴增供該病患之細胞治療產物；藉由該運算裝置產生病患特異性識別符，該病患特異性識別符包括與細胞訂購需求相關聯之細胞訂購識別符；及起始擴增細胞治療產物之製程。擴增細胞治療產物之製程可包括在臨床機構對病患實施程序以自病患獲得實體腫瘤且將經獲得之實體腫瘤轉移至產製機構。在產製機構接受實體腫瘤之後，藉由運算裝置動態排程病患治療事件。動態排程係依賴於後續獲得之擴增細胞治療產物的接受參數。使用細胞擴增技術自該經獲得之實體腫瘤之至少一些起始該細胞治療產物之擴增，且判定在第一時間點及在該第一時間點後續的第二時間點該擴增細胞治療產物的接受參數。判定擴增細胞治療產物之接受參數是否符合在第一時間點及第二時間點之某些接受標準。如果第一時間點的接受參數符合接受標準，則繼續細胞治療產物之擴增直到第二時間點。如果擴增細胞治療產物的接受參數不符合第二時間點的接受標準，則基於第二時間點的接受參數判定自第一時間點使用細胞擴增技術再實施該細胞治療產物之擴增是否可能。如果判定再實施擴增係可能的，使用自該第一時間點之該細胞擴增技術自該第二時間點獲得之該細胞治療產物之至少一些再實施該細胞治療產物之擴增。預估自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，該細胞治療產物之擴增的完成時間。基於該細胞治療產物之擴增的預估完成時間及在輸注該病患該經擴增之細胞治療產物之前或後續的病患治療事件之時間再排程該病患治療事件。完成自該第一時間點之該細胞治療產物之後續擴增。

本揭露額外提供用於正確追蹤從生物材料自病患抽取的時間到其輸注回病患的時間之生物材料的方法及系統。特別是，在本文中揭示之方法及系統促進維持生物材料的身分識別鏈及產銷監管鏈。

例如在一實施態樣中，追蹤病患的生物材料之方法可包括接受產製供病患之生物材料的細胞訂購需求。在接受該細胞訂購需求時，運算裝置產生與該細胞訂購需求相關聯之病患特異性識別符。病患特異性識別符可包括病患識別符、細胞訂購需求識別符、訂購碼及細胞訂購批號中一或多者。接著在生物材料從臨床機構(自病患抽取生物材料之處)運輸到產製機構期間、在產製機構的產製過程期間及在經產製之生物材料從產製機構運輸到臨床機構(經產製之生物材料所在處)及回到臨床機構(經產製之生物材料經輸注至病患體內之處)期間使用病患特異性識別符追蹤病患的生物材料。追蹤可包括藉由運算裝置記錄運輸及產製過程之各步驟的追蹤事件。追蹤事件的記錄包含病患的生物材料之產銷監管鏈。

除非另行定義，此處所使用之所有技術及科學用語具有本發明所屬技術領域中具有通常知識者所通常瞭解之相同意義。所有在此處提及之專利及公開案全文以引用方式併入本文中。

用語「活體內(in vivo )」係指發生在個體身體以內的事件。

用語「活體外(in vitro )」係指發生在個體身體以外的事件。活體外測定涵蓋基於細胞的測定，其採用活細胞或死細胞，且亦可涵蓋不採用完整細胞的不含細胞測定。

用語「離體(ex vivo )」係指涉及在從個體身體移除之細胞、組織及/或器官上所進行處理或實施程序的事件。適當地，該細胞、組織及/或器官可利用手術或治療的方法回到個體體內。

用語「快速擴增(rapid expansion)」是指抗原特異性TIL於數量上在一週期間增加至少約3倍(或4、5、6、7、8、或9倍)，更佳的是在一週期間增加至少約10倍(或20、30、40、50、60、70、80、或90倍)，或最佳的是在一週期間增加至少約100倍。一些快速擴增規程概述於下。

在本文中的「腫瘤浸潤性淋巴細胞(tumor infiltrating lymphocytes)」或「TIL」是指原本獲得時是白血球但其離開個體的血流且遷移至腫瘤中的一個細胞族群。TIL包括但不限於CD8⁺ 細胞毒性T細胞(淋巴細胞)、Th1及Th17 CD4⁺ T細胞、自然殺手細胞、樹突細胞及M1巨噬細胞。TIL包括初代及繼代TIL。「初代TIL」是該些如本文概述之獲自病患組織樣本的細胞(有時稱為「新鮮獲得(freshly obtained)」或「新鮮單離(freshly isolated)」)，而「繼代TIL」是任何經本文所述之擴增或增生的TIL細胞族群，包括但不限於主體TIL (bulk TIL)及經擴增之TIL(「REP TIL」或「REP後TIL」)。TIL細胞族群可包括基因修飾的TIL。

在本文中的「細胞族群(population of cells)」(包括TIL)係指一些具有共同特質的細胞。一般來說，族群於數量上通常介於1×10⁶ 至1×10¹⁰ ，不同TIL族群包含不同數量。例如，初代TIL在IL-2存在下的初始生長導致大約1×10⁸ 個細胞的主體TIL族群。通常進行REP擴增以提供1.5×10⁹ 至1.5×10¹⁰ 個用於輸注的細胞族群。在一些實施態樣中，進行REP擴增以提供2.3×10¹⁰ 至13.7×10¹⁰ 個的族群。

在本文中的「經冷凍保存之TIL」係指在介於約-150℃至-60℃的範圍內處理及儲存的不論是初代、主體、或擴增(REP TIL)的TIL。冷凍保存的常規方法亦描述於本文他處，包括實例中。為了清晰起見，可將「經冷凍保存之TIL」與可用來作為初代TIL來源的冷凍組織樣本區別。

在本文中的「解凍的經冷凍保存之TIL (thawed cryopreserved TILs)」係指先前經冷凍保存且接著經處理以回到室溫或更高溫度下的TIL族群，包括但不限於細胞培養溫度或其中TIL可投予至病患之溫度。

TIL通常可經生物化學(使用細胞表面標誌)或功能性(藉由彼等浸潤腫瘤及致效治療的能力)定義。TIL通常可藉由表現一或多個下列生物標誌來分類：CD4、CD8、TCR αβ、CD27、CD28、CD56、CCR7、CD45Ra、CD95、PD-1及CD25。此外且替代地，TIL可藉由彼等重新導入病患體內後浸潤實體腫瘤的能力來進行功能性定義。

用語「冷凍保存培養基(cryopreservation media或cryopreservation medium)」係指任何可用於冷凍保存細胞的培養基。該培養基可包括包含7%至10% DMSO的培養基。例示性培養基包括CryoStor CS10、Hyperthermasol以及彼等之組合。用語「CS10」係指獲自Stemcell Technologies或Biolife Solutions的冷凍保存培養基。CS10培養基可以其商品名稱「CryoStor® CS10」稱呼。CS10培養基係無血清、不含動物組分之包含DMSO之培養基。

用語「中央記憶T細胞(central memory T cell)」係指T細胞子集，其在人為CD45R0+且組成性表現CCR7 (CCR7^hi )及CD62L (CD62^hi )。中央記憶T細胞的表面表型亦包括TCR、CD3、CD127 (IL-7R)及IL-15R。中央記憶T細胞的轉錄因子包括BCL-6、BCL-6B、MBD2及BMI1。中央記憶T細胞在TCR觸發後主要分泌IL-2及CD40L作為效應分子。中央記憶T細胞是主要的血中CD4細胞，且在人的淋巴結及扁桃腺中等比例富集。

用語「效應記憶T細胞(effector memory T cell)」係指人或哺乳動物T細胞子集，其就像中央記憶T細胞是CD45R0+，但已經失去組成性表現CCR7的能力(CCR7^lo )且表現CD62L的能力異質或低(CD62L^lo )。中央記憶T細胞的表面表型亦包括TCR、CD3、CD127 (IL-7R)及IL-15R。中央記憶T細胞的轉錄因子包括BLIMP1。效應記憶T細胞在抗原刺激後快速分泌高水準的發炎性細胞介素，包括干擾素γ、IL-4及IL-5。效應記憶T細胞是主要的血中CD8細胞，且在人的肺臟、肝臟及腸道中等比例富集。CD8+效應記憶T細胞攜帶大量的穿孔素。

用語「密閉系統」係指與外界環境隔離的系統。任何適用於細胞培養方法的密閉系統皆可用於本發明之方法。密閉系統包括例如但不限於密閉G容器。一旦將腫瘤區段添加至密閉系統後，該系統即與外界環境隔離，直到準備將TIL投予至病患為止。

本文中所使用之用語「碎斷(fragmenting)」、「片段(fragment)」及「碎斷的(fragmented)」描述將腫瘤破壞的製程，包括機械碎斷方法諸如破碎、切開、分割及分碎腫瘤組織以及任何其他用於破壞腫瘤組織之物理結構之方法。

用語「細針抽吸物(fine needle aspirate)」或FNA係指一種活體組織切片程序，其可用於取樣或診斷程序，包括腫瘤取樣，其中採集樣本但不移除或切除腫瘤。在細針抽吸中，將中空針頭(例如25至18號)插入腫瘤或含有腫瘤的區域，且獲得流體及細胞(包括組織)以用於進一步分析或如本文所述之擴增。進行FNA時，細胞係經移走且不保留組織細胞的組織學結構。FNA可包含TIL。在一些情況下，細針抽吸活體組織切片係使用超音波引導細針抽吸活體組織切片針頭實施。FNA針頭可購自Becton Dickinson, Covidien及類似者。

用語「粗針活體組織切片(core biopsy或core needle biopsy)」係指一種活體組織切片程序，其可用於取樣或診斷程序，包括腫瘤取樣，其中採集樣本但不移除或切除腫瘤。在粗針活體組織切片中，將中空針頭(例如16至11號)插入腫瘤或含有腫瘤的區域，且獲得流體及細胞(包括組織)以用於進一步分析或如本文所述之擴增。進行粗針活體組織切片時，細胞可在保留一些組織細胞的組織學結構下移走，因為其相較於FNA有較大的針頭大小。粗針活體組織切片針頭通常是能夠保留至少一些部分的腫瘤組織學結構的號規大小。粗針活體組織切片可包含TIL。在一些情況下，細針活體組織切片係使用可購自Bard Medical, Becton Dickinson及類似者之活體組織切片儀器、真空輔助粗針活體組織切片儀器、立體定位引導粗針活體組織切片儀器、超音波引導粗針活體組織切片儀器、MRI引導粗針活體組織切片儀器實施。

用語「周邊血液單核細胞」及「PBMC」係指具有圓形細胞核的周邊血液細胞，包括淋巴細胞(T細胞、B細胞、NK細胞)及單核球。當用作抗原呈現細胞(PBMC是一種抗原呈現細胞)時，周邊血液單核細胞係經照射的異體周邊血液單核細胞。

用語「周邊血液淋巴細胞」及「PBL」係指自周邊血液擴增的T細胞。在一些實施態樣中，PBL係自供體的全血或血球分離產物分離。在一些實施態樣中，PBL係藉由正向或負向選擇T細胞表型(諸如CD3+CD45+的T細胞表型)以自供體的全血或血球分離產物分離。

用語「抗CD3抗體」係指以成熟T細胞之T細胞抗原受體中的CD3受體為標靶的抗體或其變體，例如單株抗體，且包括人、人化、嵌合或鼠抗體。抗CD3抗體包括OKT-3，亦稱為莫羅單抗。抗CD3抗體亦包括UHCT1選殖株，亦稱為T3及CD3ε。其他抗CD3抗體包括例如，奧昔珠單抗(otelixizumab)、替利珠單抗(teplizumab)及維西珠單抗(visilizumab)。

用語「OKT-3」(在本文中亦稱為「OKT3」)係指以成熟T細胞之T細胞抗原受體中的CD3受體為標靶的單株抗體或其生物類似物或變體，包括人、人化、嵌合或鼠抗體，且包括市售形式諸如OKT-3 (30 ng/mL, MACS GMP CD3 pure, Miltenyi Biotech, Inc., San Diego, CA, USA)及莫羅單抗或其變體、保守性胺基酸取代、糖化形式或生物類似物。莫羅單抗之重鏈及輕鏈的胺基酸序列在表1中給出(SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2)。能夠產生OKT-3的融合瘤寄存於美國菌種保存中心(American Type Culture Collection)，且所指派之ATCC編號為CRL 8001。能夠產生OKT-3的融合瘤亦寄存於歐洲認證細胞培養中心(ECACC)，且所指派之目錄編號為86022706。

用語「IL-2」(在本文中亦稱為「IL2」)係指稱為介白素-2的T細胞生長因子，且包括所有形式的IL-2，包括其人及哺乳動物形式、保守性胺基酸取代、糖化形式、生物類似物及變體。IL-2係描述於例如Nelson,J. Immunol. 2004, 172, 3983-88及Malek,Annu. Rev. Immunol. 2008, 26, 453-79，彼等揭露以引用方式併入本文中。適用於本發明之重組人IL-2的胺基酸序列在表2中給出(SEQ ID NO:3)。例如，用語IL-2涵蓋人重組形式的IL-2諸如阿地介白素(PROLEUKIN，可購自多個供應商，每單次使用小瓶含22百萬IU)，以及由CellGenix, Inc., Portsmouth, NH, USA (CELLGRO GMP)或ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA(產品編號CYT-209-b)供應的重組IL-2形式及來自其他供應商的其他市售相等品。阿地介白素(去丙胺醯基-1、經絲胺酸-125取代的人IL-2)係非糖基化人重組形式的IL-2，分子量為大約15 kDa。適用於本發明之阿地介白素的胺基酸序列在表2中給出(SEQ ID NO:4)。用語IL-2亦涵蓋如本文所述之聚乙二醇化形式的IL-2，包括聚乙二醇化IL2前藥貝加德盧金(bempegaldesleukin)(NKTR-214，如SEQ ID NO:4所示之聚乙二醇化人重組IL-2，其中平均6個離胺酸殘基係經[(2,7-雙{[甲基聚(氧基伸乙基)]胺甲醯基}-9H-茀-9-基)甲氧基]羰基取代之N⁶ )，其可得自Nektar Therapeutics, South San Francisco, CA, USA或可藉由所屬技術領域中已知之方法製備，諸如國際專利申請案公開號WO 2018/132496 A1實例19所述之方法或美國專利申請公開案第US 2019/0275133 A1號實例1所述之方法，彼等揭露以引用方式併入本文中。適用於本發明之貝加德盧金(NKTR-214)及其他聚乙二醇化IL-2分子係描述於美國專利申請公開案第US 2014/0328791 A1號及國際專利申請公開案WO 2012/065086 A1，彼等揭露以引用方式併入本文中。適用於本發明之替代形式的接合IL-2係描述於美國專利第4,766,106、5,206,344、5,089,261及4,902,502號，彼等揭露以引用方式併入本文中。適用於本發明之IL-2調配物係描述於美國專利第6,706,289號，其揭露以引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係THOR-707，可得自Synthorx, Inc.。THOR-707之製備及性質及適用於本發明之額外替代形式的IL-2係描述於美國專利申請公開案第US 2020/0181220 A1號及第US 2020/0330601 A1號，彼等揭露以引用方式併入本文中。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係介白素2 (IL-2)共軛體，其包含：經單離及純化之IL-2多肽；及結合至經單離及純化之IL-2多肽的選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107之胺基酸位置的共軛部份，其中胺基酸殘基之編號對應SEQ ID NO:5。在一些實施態樣中，胺基酸位置係選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。在一些實施態樣中，胺基酸位置係選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、P65、V69、L72及Y107。在一些實施態樣中，胺基酸位置係選自T37、T41、F42、F44、Y45、P65、V69、L72及Y107。在一些實施態樣中，胺基酸位置係選自R38及K64。在一些實施態樣中，胺基酸位置係選自E61、E62及E68。在一些實施態樣中，胺基酸位置係E62。在一些實施態樣中，選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107之胺基酸殘基進一步突變成離胺酸、半胱胺酸或組胺酸。在一些實施態樣中，胺基酸殘基係突變成半胱胺酸。在一些實施態樣中，胺基酸殘基係突變成離胺酸。在一些實施態樣中，選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107之胺基酸殘基進一步突變成非天然胺基酸。在一些實施態樣中，非天然胺基酸包含N6-疊氮乙氧基-L-離胺酸(AzK)、N6-炔丙乙氧基-L-離胺酸(PraK)、BCN-L-離胺酸、降莰烯離胺酸、TCO-離胺酸、甲基四嗪離胺酸、烯丙基羰基離胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、2-胺基-8-側氧基辛酸、對乙醯基-L-苯丙胺酸、對疊氮甲基-L-苯丙胺酸(pAMF)、對碘-L-苯丙胺酸、m-乙醯苯丙胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、對炔丙基氧基苯丙胺酸、對炔丙基-苯丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、左旋多巴、氟化苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、對疊氮基-L-苯丙胺酸、對醯基-L-苯丙胺酸、對苯甲醯基-L-苯丙胺酸、對溴苯丙胺酸、對胺基-L-苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、O-烯丙基酪胺酸、O-甲基-L-酪胺酸、O-4-烯丙基-L-酪胺酸、4-丙基-L-酪胺酸、膦醯基酪胺酸、三-O-乙醯基-GlcNAcp-絲胺酸、L-磷絲胺酸、膦醯基絲胺酸、L-3-(2-萘基)丙胺酸、2-胺基-3-((2-((3-(苄氧基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)硒烷基(selanyl))丙酸、2-胺基-3-(苯硒烷基)丙酸或硒代半胱胺酸。在一些實施態樣中，IL-2共軛體相對於野生型IL-2多肽具有對IL-2受體α(IL-2Rα)次單元降低之親和力。在一些實施態樣中，降低之親和力係對IL-2Rα之結合親和力相對於野生型IL-2多肽降低約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或大於99%。在一些實施態樣中，降低之親和力係相對於野生型IL-2多肽約1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、500倍、1000倍或超過1000倍。在一些實施態樣中，共軛部份損害或阻斷IL-2與IL-2Rα之結合。在一些實施態樣中，共軛部份包含水溶性聚合物。在一些實施態樣中，額外共軛部份包含水溶性聚合物。在一些實施態樣中，水溶性聚合物之各者獨立地包含聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇) (PPG)、乙二醇及丙二醇之共聚物、聚(氧基乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣類)、聚(α-羥酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯醯基嗎啉)或彼等之組合。在一些實施態樣中，水溶性聚合物之各者獨立地包含PEG。在一些實施態樣中，PEG係線性PEG或分支PEG。在一些實施態樣中，水溶性聚合物之各者獨立地包含多醣。在一些實施態樣中，多醣包含右旋糖苷、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸(HA)、直鏈澱粉、肝素、乙醯肝素硫酸鹽(HS)、糊精或羥乙基-澱粉(HES)。在一些實施態樣中，水溶性聚合物之各者獨立地包含聚醣。在一些實施態樣中，水溶性聚合物之各者獨立地包含多胺。在一些實施態樣中，共軛部份包含蛋白質。在一些實施態樣中，額外共軛部份包含蛋白質。在一些實施態樣中，蛋白質之各者獨立地包含白蛋白、轉鐵蛋白或運甲狀腺素蛋白。在一些實施態樣中，蛋白質之各者獨立地包含Fc部分。在一些實施態樣中，蛋白質之各者獨立地包含IgG之Fc部分。在一些實施態樣中，共軛部份包含多肽。在一些實施態樣中，額外共軛部份包含多肽。在一些實施態樣中，多肽之各者獨立地包含XTEN肽、富含甘胺酸之高胺基酸聚合物(HAP)、PAS多肽、類彈性蛋白多肽(ELP)、CTP肽或明膠樣蛋白(GLK)聚合物。在一些實施態樣中，經單離及純化之IL-2多肽係經麩胺醯化(glutamylation)修飾。在一些實施態樣中，共軛部份係直接結合至經單離及純化之IL-2多肽。在一些實施態樣中，共軛部份係經由連接子間接結合至經單離及純化之IL-2多肽。在一些實施態樣中，連接子包含同型雙官能連接子。在一些實施態樣中，同型雙官能連接子包含Lomant試劑二硫雙(琥珀醯亞胺丙酸酯) (DSP)、3′3′-二硫雙(磺琥珀醯亞胺丙酸酯) (DTSSP)、辛二酸二琥珀醯亞胺酯(DSS)、雙(磺琥珀醯亞胺)辛二酸酯(BS)、二琥珀醯亞胺酒石酸酯(DST)、二磺琥珀醯亞胺酒石酸酯(磺基DST)、乙烯醣雙(琥珀醯亞胺琥珀酸酯) (EGS)、二琥珀醯亞胺戊二酸酯(DSG)、N,N′-二琥珀醯亞胺碳酸酯(DSC)、己二亞胺二甲酯(DMA)、庚二亞胺二甲酯(DMP)、辛二亞胺二甲酯(DMS)、二甲基-3,3′-二硫雙丙醯亞胺酯(DTBP)、1,4-二-(3′-(2′-吡啶基二硫)丙醯胺基)丁烷(DPDPB)、雙順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、含芳基鹵化物化合物(DFDNB)諸如例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯或1,3-二氟-4,6-二硝基苯、4,4′-二氟-3,3′-二硝基苯基碸(DFDNPS)、雙-[β-(4-疊氮柳醯胺基)乙基]二硫化物(BASED)、甲醛、戊二醛、1,4-丁二醇二環氧丙基醚、己二酸二醯肼、卡肼、鄰甲苯胺、3,3′-二甲基聯苯胺、聯苯胺、α,α′-對二胺基二苯基、二碘-對二甲苯磺酸、N,N′-乙烯-雙(碘乙醯胺)或N,N′-六亞甲基-雙(碘乙醯胺)。在一些實施態樣中，連接子包含雜雙官能連接子。在一些實施態樣中，雜雙官能連接子包含N-琥珀醯亞胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(sPDP)、長鏈N-琥珀醯亞胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(LC-sPDP)、水溶性長鏈N-琥珀醯亞胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(磺基-LC-sPDP)、琥珀醯亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯(sMPT)、磺琥珀醯亞胺-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯醯胺基]己酸酯(磺基-LC-sMPT)、琥珀醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸酯(sMCC)、磺琥珀醯亞胺-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸酯(磺基-sMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苄醯氧基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBs)、間順丁烯二醯亞胺基苄醯氧基-N-羥基磺基琥珀醯亞胺酯(磺基-MBs)、N-琥珀醯亞胺基(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸酯(sIAB)、磺琥珀醯亞胺(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸酯(磺基-sIAB)、琥珀醯亞胺基-4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸酯(sMPB)、磺琥珀醯亞胺-4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸酯(磺基-sMPB)、N-(γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯氧基)琥珀醯亞胺酯(GMBs)、N-(γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯氧基)磺基琥珀醯亞胺酯(磺基-GMBs)、琥珀醯亞胺基6-((碘乙醯基)胺基)己酸酯(sIAX)、琥珀醯亞胺基6-[6-(((碘乙醯基)胺基)己醯基)胺基]己酸酯(slAXX)、琥珀醯亞胺基4-(((碘乙醯基)胺基)甲基)環己烷-1-羧酸酯(sIAC)、琥珀醯亞胺基6-(((((4-碘乙醯基)胺基)甲基)環己烷-1-羰基)胺基)己酸酯(sIACX)、對硝基苯基碘乙酸酯(NPIA)、羰基反應性及巰基反應性交聯劑諸如4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸醯肼(MPBH)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-醯肼-8 (M2C2H)、3-(2-吡啶基二硫)丙醯基醯肼(PDPH)、N-羥基琥珀醯亞胺基-4-疊氮柳酸(NHs-AsA)、N-羥基磺基琥珀醯亞胺基-4-疊氮柳酸(磺基-NHs-AsA)、磺琥珀醯亞胺-(4-疊氮柳醯胺基)己酸酯(磺基-NHs-LC-AsA)、磺琥珀醯亞胺-2-(對疊氮柳醯胺基)乙基-1,3′-二硫丙酸酯(sAsD)、N-羥基琥珀醯亞胺基-4-疊氮苯甲酸酯(HsAB)、N-羥基磺基琥珀醯亞胺基-4-疊氮苯甲酸酯(磺基-HsAB)、N-琥珀醯亞胺基-6-(4′-疊氮基-2′-硝基苯基胺基)己酸酯(sANPAH)、磺琥珀醯亞胺-6-(4′-疊氮基-2′-硝基苯基胺基)己酸酯(磺基-sANPAH)、N-5-疊氮基-2-硝基苄醯氧基琥珀醯亞胺(ANB-NOs)、磺琥珀醯亞胺-2-(間疊氮基-鄰硝基苯甲醯胺基)-乙基-1,3′-二硫丙酸酯(sAND)、N-琥珀醯亞胺基-4(4-疊氮苯基)1,3′-二硫丙酸酯(sADP)、N-磺琥珀醯亞胺(4-疊氮苯基)-1,3′-二硫丙酸酯(磺基-sADP)、磺琥珀醯亞胺4-(對疊氮苯基)丁酸酯(磺基-sAPB)、磺琥珀醯亞胺2-(7-疊氮基-4-甲基香豆素-3-乙醯胺)乙基-1,3′-二硫丙酸酯(sAED)、磺琥珀醯亞胺7-疊氮基-4-甲基香豆素-3-乙酸酯(磺基-sAMCA)、對硝基苯基疊氮丙酮酸酯(pNPDP)、對硝基苯基-2-重氮-3,3,3-三氟丙酸酯(PNP-DTP)、1-(對疊氮柳醯胺基)-4-(碘乙醯胺基)丁烷(AsIB)、N-[4-(對疊氮柳醯胺基)丁基]-3′-(2′-吡啶基二硫)丙醯胺(APDP)、二苯基酮-4-碘乙醯胺、對疊氮基苯甲醯基醯肼(ABH)、4-(對疊氮柳醯胺基)丁胺(AsBA)或對疊氮苯基乙二醛(APG)。在一些實施態樣中，連接子包含可切割連接子，可選地包含雙肽連接子。在一些實施態樣中，雙肽連接子包含Val-Cit、Phe-Lys、Val-Ala或Val-Lys。在一些實施態樣中，連接子包含不可切割連接子。在一些實施態樣中，連接子包含順丁烯二醯亞胺基，可選地包含順丁烯二醯亞胺基己醯基(mc)、琥珀醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸酯(sMCC)或磺琥珀醯亞胺-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸酯(磺基-sMCC)。在一些實施態樣中，連接子進一步包含間隔子。在一些實施態樣中，間隔子包含對胺苄醇(PAB)、對胺苄氧羰基(PABC)、彼等之衍生物或類似物。在一些實施態樣中，共軛部份能夠延長IL-2共軛體之血清半衰期。在一些實施態樣中，額外共軛部份能夠延長IL-2共軛體之血清半衰期。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係本文所述之IL-2形式任一者之片段。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係如美國專利申請公開案第US 2020/0181220 A1號及美國專利申請公開案第US 2020/0330601 A1號所揭示之聚乙二醇化。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係IL-2共軛體，其包含：包含N6-疊氮乙氧基-L-離胺酸(AzK)之IL-2多肽共價附接至包含聚乙二醇(PEG)之共軛部份，其中：IL-2多肽包含與SEQ ID NO:5具有至少80%序列同一性之胺基酸序列；且AzK取代參照SEQ ID NO:5內之胺基酸位置胺基酸位置K35、F42、F44、K43、E62、P65、R38、T41、E68、Y45、V69或L72。在一些實施態樣中，IL-2多肽相對於SEQ ID NO:5包含N端刪除一個殘基。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式缺乏IL-2R α鏈接合但保留與中間親和力IL-2R β-γ傳訊複合物之正常結合。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係IL-2共軛體，其包含：包含N6-疊氮乙氧基-L-離胺酸(AzK)之IL-2多肽共價附接至包含聚乙二醇(PEG)之共軛部份，其中：IL-2多肽包含與SEQ ID NO:5具有至少90%序列同一性之胺基酸序列；且AzK取代參照SEQ ID NO:5內之胺基酸位置胺基酸位置K35、F42、F44、K43、E62、P65、R38、T41、E68、Y45、V69或L72。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係IL-2共軛體，其包含：包含N6-疊氮乙氧基-L-離胺酸(AzK)之IL-2多肽共價附接至包含聚乙二醇(PEG)之共軛部份，其中：IL-2多肽包含與SEQ ID NO:5具有至少95%序列同一性之胺基酸序列；且AzK取代參照SEQ ID NO:5內之胺基酸位置胺基酸位置K35、F42、F44、K43、E62、P65、R38、T41、E68、Y45、V69或L72。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係IL-2共軛體，其包含：包含N6-疊氮乙氧基-L-離胺酸(AzK)之IL-2多肽共價附接至包含聚乙二醇(PEG)之共軛部份，其中：IL-2多肽包含與SEQ ID NO:5具有至少98%序列同一性之胺基酸序列；且AzK取代參照SEQ ID NO:5內之胺基酸位置胺基酸位置K35、F42、F44、K43、E62、P65、R38、T41、E68、Y45、V69或L72。

在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係內姆瓦盧金阿法(亦稱為ALKS-4230 (SEQ ID NO:6))，其可得自Alkermes, Inc.。內姆瓦盧金阿法亦稱為人介白素2片段(1-59)變體(Cys¹²⁵ ＞Ser⁵¹ )，經由肽基連接子(⁶⁰ GG⁶¹ )融合至人介白素2片段(62-132)，經由肽基連接子(¹³³ GSGGGS¹³⁸ )融合至人介白素2受體α鏈片段(139-303)，於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中產生，糖基化；人介白素2 (IL-2) (75-133)-肽[Cys¹²⁵ (51)＞Ser]-突變體(1-59)，經由G₂ 肽連接子(60-61)融合至人介白素2 (IL-2) (4-74)-肽(62-132)且經由GSG₃ S肽連接子(133-138)融合至人介白素2受體α鏈(IL2R次單元α，IL2Rα，IL2RA)(1-165)-肽(139-303)，於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中產生，糖化形式α。內姆瓦盧金阿法之胺基酸序列在SEQ ID NO: 6給出。在一些實施態樣中，內姆瓦盧金阿法展現下列轉譯後修飾：下列位置之雙硫鍵：31-116、141-285、184-242、269-301、166-197或166-199、168-199或168-197(使用SEQ ID NO:6之編號)，及下列位置之糖基化位點：N187、N206、T212(使用SEQ ID NO:6之編號)。內姆瓦盧金阿法的製備及性質以及適用於本發明之額外替代形式的IL-2係描述於美國專利申請公開案第US 2021/0038684 A1號及美國專利第10,183,979號，彼等揭露以引用方式併入本文中。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係與SEQ ID NO:6具有至少80%、至少90%、至少95%或至少90%序列同一性之蛋白質。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式具有SEQ ID NO:6給出之胺基酸序列或其保守性胺基酸取代。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係融合蛋白，其包含SEQ ID NO:7之胺基酸24-452或其變體、片段或衍生物。在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係融合蛋白，其包含與SEQ ID NO:7之胺基酸24-452具有至少80%、至少90%、至少95%或至少90%序列同一性之胺基酸序列或其變體、片段或衍生物。其他適用於本發明之IL-2形式係描述於美國專利第10,183,979號，其揭露以引用方式併入本文中。可選地，在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式係融合蛋白，其包含藉由黏液素結構域多肽連接子連接至第二融合伴之第一融合伴，其中第一融合伴係IL-1Rα或與IL-1Rα具有至少98%胺基酸序列同一性之蛋白質且具有IL-Rα之受體拮抗劑活性，且其中第二融合伴包含所有或一部分的包含Fc區之免疫球蛋白，其中黏液素結構域多肽連接子包含SEQ ID NO:8或與SEQ ID NO:8具有至少90%序列同一性之胺基酸序列，且其中融合蛋白之半衰期相較於第一融合伴與第二融合伴在黏液素結構域多肽連接子不存在下之融合改善。

在一些實施態樣中，適用於本發明之IL-2形式包括抗體細胞介素植入蛋白，其包含重鏈可變區(V_H )、輕鏈可變區(V_L )及植入至V_H 或V_L 之CDR中之IL-2分子或其片段，該重鏈可變區包含互補決定區HCDR1、HCDR2、HCDR3，該輕鏈可變區包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中抗體細胞介素植入蛋白優先擴增T效應細胞而非調節T細胞。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含重鏈可變區(V_H )、輕鏈可變區(V_L )及植入至V_H 或V_L 之CDR中之IL-2分子或其片段，該重鏈可變區包含互補決定區HCDR1、HCDR2、HCDR3，該輕鏈可變區包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中IL-2分子係突變蛋白，且其中抗體細胞介素植入蛋白優先擴增T效應細胞而非調節T細胞。在一實施態樣中，IL-2方案包含投予美國專利申請公開案第US 2020/0270334 A1號(其揭露以引用方式併入本文中)所述之抗體。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含重鏈可變區(VH)、輕鏈可變區(VL)及植入至V_H 或V_L 之CDR中之IL-2分子或其片段，該重鏈可變區包含互補決定區HCDR1、HCDR2、HCDR3，該輕鏈可變區包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中IL-2分子係突變蛋白，其中抗體細胞介素植入蛋白優先擴增T效應細胞而非調節T細胞，且其中抗體進一步包含選自由下列所組成之群組的IgG類型重鏈及IgG類型輕鏈：包含SEQ ID NO:39之IgG類型輕鏈及包含SEQ ID NO:38之IgG 類型重鏈；包含SEQ ID NO:37之IgG類型輕鏈及包含SEQ ID NO:29之IgG類型重鏈；包含SEQ ID NO:39之IgG類型輕鏈及包含SEQ ID NO:29之IgG類型重鏈；及包含SEQ ID NO:37之IgG類型輕鏈及包含SEQ ID NO:38之IgG類型重鏈。

在一實施態樣中，IL-2分子或其片段係植入至V_H 之HCDR1中，其中IL-2分子係突變蛋白。在一實施態樣中，IL-2分子或其片段係植入至V_H 之HCDR2中，其中IL-2分子係突變蛋白。在一實施態樣中，IL-2分子或其片段係植入至V_H 之HCDR3中，其中IL-2分子係突變蛋白。在一實施態樣中，IL-2分子或其片段係植入至V_L 之LCDR1中，其中IL-2分子係突變蛋白。在一實施態樣中，IL-2分子或其片段係植入至V_L 之LCDR2中，其中IL-2分子係突變蛋白。在一實施態樣中，IL-2分子或其片段係植入至V_L 之LCDR3中，其中IL-2分子係突變蛋白。

IL-2分子之插入可為在CDR之N端區或在CDR之N端區附近、在CDR之中間區或在CDR之C端區或在CDR之C端區附近。在一些實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含併入CDR中之IL-2分子，其中IL2序列不使CDR序列讀框移位。在一些實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含併入CDR中之IL-2分子，其中IL-2序列置換全部或部分的CDR序列。IL-2分子之置換可為CDR之N端區、在CDR之中間區或在CDR之C端區或在CDR之C端區附近。IL-2分子之置換可為少至CDR序列之一或二個胺基酸或整個CDR序列。

在一些實施態樣中，IL-2分子係在無肽連接子下直接植入至CDR中，其中在CDR序列與IL-2序列之間無額外胺基酸。在一些實施態樣中，IL-2分子係藉由肽連接子間接植入至CDR中，其中在CDR序列與IL-2序列之間有一或多個額外胺基酸。

在一些實施態樣中，本文所述之IL-2分子係IL-2突變蛋白。在一些情況下，IL-2突變蛋白包含R67A取代。在一些實施態樣中，IL-2突變蛋白包含胺基酸序列SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15。在一些實施態樣中，IL-2突變蛋白包含投予美國專利申請公開案第US 2020/0270334 A1號(其揭露以引用方式併入本文中)之表1中的胺基酸序列。

在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含選自由SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22及SEQ ID NO:25所組成之群組的HCDR1。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含選自由SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13及SEQ ID NO:16所組成之群組的HCDR1。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含選自由SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23及SEQ ID NO:26所組成之群組的HCDR2。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含選自由SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24及SEQ ID NO:27所組成之群組的HCDR3。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含：包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列的V_H 區。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含：包含SEQ ID NO:29之胺基酸序列的重鏈。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含：包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列的V_L 區。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含：包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列的輕鏈。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含：包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列之V_H 區，及包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列之V_L 區。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含：包含SEQ ID NO:29之胺基酸序列之重鏈區，及包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列之輕鏈區。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含：包含SEQ ID NO:29之胺基酸序列之重鏈區，及包含SEQ ID NO:39之胺基酸序列之輕鏈區。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含：包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列之重鏈區，及包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列之輕鏈區。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含：包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列之重鏈區，及包含SEQ ID NO:39之胺基酸序列之輕鏈區。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含美國專利申請公開案第2020/0270334 A1號之IgG.IL2F71A.H1或IgG.IL2R67A.H1或其變體、衍生物或片段、或其保守性胺基酸取代或與其具有至少80%、至少90%、至少95%或至少98%序列同一性之蛋白質。在一實施態樣中，本文所述之抗體細胞介素植入蛋白之抗體組分包含帕利珠單抗之免疫球蛋白序列、架構序列或CDR序列。在一些實施態樣中，本文所述之抗體細胞介素植入蛋白具有比起野生型IL-2分子諸如但不限於阿地介白素或可相比的分子較長之血清半衰期。在一實施態樣中，本文所述之抗體細胞介素植入蛋白具有如表3所示之序列。

用語「IL-4」(在本文中亦稱為「IL4」)係指稱為介白素4的細胞介素，其係藉由Th2 T細胞及藉由嗜酸性球、嗜鹼性球及肥胖細胞產生。IL-4調節初始(naïve)輔助T細胞(Th0細胞)分化成Th2 T細胞。Steinke and Borish,Respir. Res. 2001, 2, 66-70。在IL-4的活化下，Th2 T細胞後續以正向回饋迴圈產生額外IL-4。IL-4亦刺激B細胞增生及第II型MHC表現，且誘導B細胞類型轉換至表現IgE及IgG₁ 。適用於本發明之重組人IL-4可購自多個供應商，包括ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA(產品編號CYT-211)及ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA(人IL-15重組蛋白質，產品編號Gibco CTP0043)。適用於本發明之重組人IL-4的胺基酸序列在表2中給出(SEQ ID NO:9)。

用語「IL-4」(在本文中亦稱為「IL4」)係指稱為介白素4的細胞介素，其係藉由Th2 T細胞及藉由嗜酸性球、嗜鹼性球及肥胖細胞產生。IL-4調節初始(naïve)輔助T細胞(Th0細胞)分化成Th2 T細胞。Steinke and Borish,Respir. Res. 2001, 2, 66-70。在IL-4的活化下，Th2 T細胞後續以正向回饋迴圈產生額外IL-4。IL-4亦刺激B細胞增生及第II型MHC表現，且誘導B細胞類型轉換至表現IgE及IgG₁ 。適用於本發明之重組人IL-4可購自多個供應商，包括ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA(產品編號CYT-211)及ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA(人IL-15重組蛋白質，產品編號Gibco CTP0043)。適用於本發明之重組人IL-4的胺基酸序列在表2中給出(SEQ ID NO:5)。

用語「IL-7」(在本文中亦稱為「IL7」)係指稱為介白素7的糖基化組織衍生性細胞介素，其可獲自基質細胞及上皮細胞以及樹突細胞。Fry and Mackall,Blood 2002, 99, 3892-904。IL-7可刺激T細胞的發育。IL-7與IL-7受體(由IL-7受體α及常見γ鏈受體組成的異二聚體)結合，其為對於T細胞在胸腺內的發育及在周邊內的存活而言重要的一系列信號。適用於本發明之重組人類IL-7可購自多個供應商，包括ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA(產品編號CYT-254)及ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA(人IL-15重組蛋白質，產品編號Gibco PHC0071)。適用於本發明之重組人IL-7的胺基酸序列在表2中給出(SEQ ID NO:6)。

用語「IL-15」(在本文中亦稱為「IL15」)係指稱為介白素-15的T細胞生長因子，且包括所有形式的IL-2，包括其人及哺乳動物形式、保守性胺基酸取代、糖化形式、生物類似物及變體。IL-15係描述於例如Fehniger and Caligiuri,Blood 2001, 97, 14-32，其揭露以引用方式併入本文中。IL-15與IL-2共用β及γ傳訊受體次單位。重組人IL-15係含有114個胺基酸(及一個N端甲硫胺酸)的單一、非糖基化多肽鏈，分子量為12.8 kDa。重組人IL-15可購自多個供應商，包括ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA(產品編號CYT-230-b)及ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA(人IL-15重組蛋白質，產品編號34-8159-82)。適用於本發明之重組人IL-15的胺基酸序列在表2中給出(SEQ ID NO:7)。

用語「IL-21」(在本文中亦稱為「IL21」)係指稱為介白素-21的多效性細胞介素蛋白質，且包括所有形式的IL-21，包括其人及哺乳動物形式、保守性胺基酸取代、糖化形式、生物類似物及變體。IL-21係描述於例如Spolski and Leonard,Nat. Rev. Drug.Disc. 2014, 13, 379-95，彼等揭露皆以引用方式併入本文中。IL-21主要由自然殺手T細胞及經活化之人CD4⁺ T細胞產生。重組人IL-21係含有132個胺基酸的單一、非糖基化多肽鏈，分子量為15.4 kDa。重組人IL-21可購自多個供應商，包括ProSpec-Tany TechnoGene Ltd., East Brunswick, NJ, USA(產品編號CYT-408-b)及ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA(人IL-21重組蛋白質，產品編號14-8219-80)。適用於本發明之重組人IL-21的胺基酸序列在表2中給出(SEQ ID NO:8)。

當指示「抗腫瘤有效量」、「腫瘤抑制有效量」或「治療量」時，欲投予之本發明之組成物的精確量可由醫師考慮個體之年齡、體重、腫瘤大小、感染或轉移範圍及病患(個體)病況差異判定。通常說明本文所述之包含腫瘤浸潤性淋巴細胞(例如繼代TIL或基因修飾的細胞毒性淋巴細胞)的醫藥組成物可以10⁴ 至10¹¹ 細胞/kg體重(例如10⁵ 至10⁶ 、10⁵ 至10¹⁰ 、10⁵ 至10¹¹ 、10⁶ 至10¹⁰ 、10⁶ 至10¹¹ 、10⁷ 至10¹¹ 、10⁷ 至10¹⁰ 、10⁸ 至10¹¹ 、10⁸ 至10¹⁰ 、10⁹ 至10¹¹ 或10⁹ 至10¹⁰ 細胞/kg體重)的劑量投予，包括在該些範圍內的所有整數值。腫瘤浸潤性淋巴細胞(在一些情況下包括基因修飾的細胞毒性淋巴細胞)組成物亦可以這些劑量投予多次。腫瘤浸潤性淋巴細胞(在一些情況下包括經基因修飾之細胞毒性淋巴細胞)可使用在免疫療法中所公知的輸注技術投予(見例如Rosenberg et al.,New Eng. J. of Med. 319: 1676, 1988)。對特定病患而言的最佳劑量及治療方案可輕易地由所屬醫學技術領域中具有通常知識者藉由監測病患的疾病徵候且據此調整治療加以判定。

用語「血液惡性病(hematological malignancy、hematologic malignancy)」或有相關意義之用語係指哺乳動物造血及淋巴組織(包括但不限於血液、骨髓、淋巴結及淋巴系統的組織)的癌症及腫瘤。血液惡性病亦稱為「液體腫瘤」。血液惡性病包括但不限於急性淋巴母細胞白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性淋巴瘤(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性單核球性白血病(AMoL)、何杰金氏淋巴瘤及非何杰金氏淋巴瘤。用語「B細胞血液惡性病」係指影響B細胞的血液惡性病。

用語「實體腫瘤」係指組織的異常團塊，通常不含囊腫或液體區域。實體腫瘤可為良性或惡性。用語「實體腫瘤癌」係指惡性、腫瘤性或癌性實體腫瘤。實體腫瘤癌包括但不限於肉瘤、癌(carcinoma)及淋巴瘤，諸如肺癌、乳癌、前列腺癌、結腸癌、直腸癌及膀胱癌。實體腫瘤的組織結構包括相互依賴的組織隔室，包括實質(癌細胞)及有癌細胞分散其中且可提供支持性微環境的支持性基質細胞。

用語「液體腫瘤」係指具流體本質之細胞的異常團塊。液體腫瘤癌症包括但不限於白血病、骨髓瘤及淋巴瘤以及其他血液惡性病。獲自液體腫瘤的TIL在本文中亦稱為骨髓浸潤性淋巴細胞(MIL)。獲自液體腫瘤之TIL(包括在周邊血液循環之液體腫瘤)在本文中亦稱為PBL。用語MIL、TIL及PBL在本文中可互換使用且只有細胞衍生出自之組織類型的差別。

如本文中所使用之用語「微環境」可指整個實質或血液腫瘤微環境或可指在微環境中的個別細胞子集。如本文中所使用之腫瘤微環境係指如Swartz,et al., Cancer Res., 2012, 72, 2473所描述之一種「促進腫瘤轉變、支持腫瘤生長及入侵、保護腫瘤不受宿主免疫力影響、鼓勵治療抗性且提供顯性轉移成長空間的細胞、可溶因子、傳訊分子、細胞外基質及機械刺激」的複雜混合物。雖然腫瘤表現出應被T細胞辨識的抗原，但免疫系統因為微環境的免疫抑制作用而很少進行腫瘤廓清。

如本文中所使用之用語「動態排程(dynamically scheduling/dynamic scheduling)」可指基於一或多個後續事件之後果或結果建立事件發生的彈性排程。因此，事件(諸如病患治療事件)的經排程之日期可基於在排程該經排程之日期之後但在事件之前實施之一或多個產製步驟之後果或結果動態改變。

在一實施態樣中，本發明包括使用TIL族群治療癌症之方法，其中病患在輸注根據本發明之TIL之前經非骨髓清除式化療預處理。在一些實施態樣中，可提供TIL族群，其中病患在輸注根據本發明之TIL之前經非骨髓清除式化療預處理。在一實施態樣中，非骨髓清除式化療係環磷醯胺60 mg/kg/d共2天(TIL輸注之前第27及26天)及氟達拉濱25 mg/m² /d共5天(TIL輸注之前第27至23天)。在一實施態樣中，在根據本發明之非骨髓清除式化療及TIL輸注(第0天)之後，病患每8小時接受720,000 IU/kg靜脈內IL-2的靜脈內輸注至生理耐受。

實驗發現指示在過繼性轉移腫瘤特異性T淋巴細胞之前的淋巴細胞耗盡藉由清除調節T細胞及競爭免疫系統的元件(「細胞介素匯(cytokine sinks)」)扮演增強治療療效的關鍵角色。因此，本發明之一些實施態樣在導入本發明之rTIL之前，對病患進行淋巴細胞耗盡步驟(有時亦稱為「免疫抑制性調理」)。

如本文中所使用之用語「共投」、「共同投予」、「與...組合投予」、「同時」及「併用」涵蓋投予二種或超過二種活性醫藥成分(在本發明之較佳實施態樣中，例如至少一種鉀通道促效劑與複數個TIL之組合)至個體，以使兩種活性醫藥成分及/或彼等之代謝物同時存在於個體中。共投包括同時投予分開組成物、在不同時間投予分開組成物或投予其中有二種或超過二種活性醫藥成分存在的組成物。同時投予分開組成物及投予其中有兩種藥劑存在的組成物係為較佳。

用語「有效量」或「治療有效量」係指足以致效意圖應用包括但不限於疾病治療之如本文中描述之化合物或化合物組合的量。治療有效量可依意圖應用(活體外或活體內)或所欲治療之個體及疾病病況(例如個體的體重、年齡及性別)、疾病病況的嚴重性或投予方式而異。該用語亦適用於將誘導標靶細胞中之特定反應(例如減少血小板黏著性及/或細胞遷移)的劑量。明確劑量將視所選之特定化合物、所遵循之給藥方案、化合物是否與其他化合物組合投予、投予時間、其欲投予之組織及攜帶化合物之物理遞送系統而異。

用語「治療」及類似用語係指獲得所欲藥理學及/或生理學效應。該效應可為預防性，也就是完全或部分預防疾病或其症狀，及/或該效應可為治療性，也就是部分或完全治癒疾病及/或疾病帶來的不良影響。本文所使用之「治療」涵蓋對哺乳動物(特別是人)疾病之任何治療，且包括：(a)預防疾病在個體發生，該個體可為易發生該疾病但尚未被診斷為已有該疾病者；(b)抑制疾病，即停止疾病的發展或進展；及(c)緩解疾病，即造成疾病消退及/或緩解一或多種疾病症狀。「治療」亦涵蓋遞送藥劑以提供藥理學效應，甚至在疾病或病況不存在下。例如，「治療」涵蓋遞送可在疾病病況不存在下誘發免疫反應或授予免疫力之組成物，例如以疫苗為例。

當用語「異源性」用於指稱核酸或蛋白質的部分時，指示該核酸或蛋白質包含二個或超過二個在天然中不具有相同相互關係的子序列。舉例而言，該核酸一般為重組產生且具有二個或超過二個來自不相關基因且經排列以製造新的功能性核酸的序列，例如啟動子來自一個來源且編碼區域來自另一來源，或編碼區域來自不同來源。類似地，異源性蛋白質指示該蛋白質包含二個或超過二個在天然中不具有相同相互關係的子序列(例如融合蛋白)。

在提及二或多個核酸或多肽時，用語「序列一致性(sequence identity)」、「一致性百分比(percent identity)」及「序列一致性百分比(sequence percent identity)」(或其同義用語，例如「99%一致性」)係指當二或更多個序列或子序列經比較及排比(需要時導入間格)以達最高對應性且不把任何保守性胺基酸取代當作序列一致性之部分時，該二個或超過二個序列或子序列係相同或具有相同之特定百分比之核苷酸或胺基酸殘基。一致性百分比可利用序列比較軟體或演算法測量，或藉由目視檢查測量。各種演算法及軟體係所屬技術領域中已知，可用於獲得胺基酸或核苷酸序列之排比。可判定序列一致性百分比之合適程式包括例如可得自美國政府的國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information) BLAST網站的BLAST套裝程式。兩個序列之間的比較可使用BLASTN或BLASTP演算法進行。BLASTN是用來比較核酸序列，而BLASTP是用來比較胺基酸序列。ALIGN、ALIGN-2 (Genentech, South San Francisco, California)或MegAlign(可得自DNASTAR)是其他可供大眾使用的排比序列軟體程式。所屬技術領域中具有通常知識者可判定用於特定排比軟體以求最大排比的適當參數。在某些實施態樣中，使用排比軟體的內建參數。

如本文中所使用，用語「變體」涵蓋但不限於包含與參考蛋白質、抗體或融合蛋白的胺基酸序列不同之胺基酸序列的蛋白質、抗體或融合蛋白，該不同處在於在該參考抗體、蛋白質或融合蛋白的胺基酸序列之內或相鄰的某些位置有一或多個取代、刪除及/或添加。相較於參考抗體的胺基酸序列，變體的胺基酸序列中可包含一或多個保守性取代。保守性取代可涉及例如類似地帶電或不帶電胺基酸的取代。變體保留與參考抗體、蛋白質或融合蛋白之抗原特異性結合的能力。用語變體亦包括聚乙二醇化抗體或蛋白質。

在本文中的「腫瘤浸潤性淋巴細胞(tumor infiltrating lymphocytes)」或「TIL」是指原本獲得時是白血球但其離開個體的血流且遷移至腫瘤中的一個細胞族群。TIL包括但不限於CD8⁺ 細胞毒性T細胞(淋巴細胞)、Th1及Th17 CD4⁺ T細胞、自然殺手細胞、樹突細胞及M1巨噬細胞。TIL包括初代及繼代TIL。「初代TIL」是該些如本文概述之獲自病患組織樣本(有時稱為「新鮮獲得(freshly obtained)」或「新鮮單離(freshly isolated)」)的TIL，而「繼代TIL」是任何經本文所述之擴增或增生的TIL細胞族群，包括但不限於主體TIL、經擴增之TIL(「REP TIL」)以及如此處討論的「reREP TIL」。reREP TIL可包括例如第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖2A及/或圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)。

TIL通常可經生物化學(使用細胞表面標誌)或功能性(藉由彼等浸潤腫瘤及致效治療的能力)定義。TIL通常可藉由表現一或多個下列生物標誌來分類：CD4、CD8、TCR αβ、CD27、CD28、CD56、CCR7、CD45Ra、CD95、PD-1及CD25。此外且替代地，TIL可藉由彼等重新導入病患體內後浸潤實體腫瘤的能力來進行功能性定義。TIL可進一步藉由效力表徵-例如，如果例如干擾素(IFN)釋放大於約50 pg/mL、大於約100 pg/mL、大於約150 pg/mL或大於約200 pg/mL，則TIL可被認為有效。例如，如果干擾素(IFNγ)釋放大於約50 pg/mL、大於約100 pg/mL、大於約150 pg/mL或大於約200 pg/mL、大於約300 pg/mL、大於約400 pg/mL、大於約500 pg/mL、大於約600 pg/mL、大於約700 pg/mL、大於約800 pg/mL、大於約900 pg/mL、大於約1000 pg/mL，則TIL可被認為有效。

用語「醫藥上可接受之載劑」或「醫藥上可接受之賦形劑」意圖包括任何及所有溶劑、分散培養基、包覆劑、抗菌劑、抗真菌劑、等滲劑、吸收延緩劑及惰性成分。活性醫藥成分所使用的該等醫藥上可接受之載劑或醫藥上可接受之賦形劑係所屬技術領域中廣知的。除非任何習知醫藥上可接受之載劑或醫藥上可接受之賦形劑與活性醫藥成分不相容，彼於本發明之治療組成物中之用途係經考慮。額外活性醫藥成分(諸如其他藥物)亦可併入所述之組成物及方法中。

用語「約」或「大約」係指在一數值之具統計意義之範圍內。該範圍可在給定數值或範圍之一數量級之內，較佳在50%以內，更佳在20%以內，又更佳在10%以內，甚至更佳在5%以內。用語「約」或「大約」所涵蓋之允許偏差取決於特定研究系統，且可被該領域之一般技藝人士輕易地了解。再者，如本文中所使用之用語「約」及「大約」意指尺寸、大小、調配物、參數、形狀及其他數量及特徵並不確切而且不需要確切，但可視需要為近似值及/或較大或較小值，反映出公差、轉換因子、四捨五入、測量誤差及類似值及所屬技術領域中具有通常知識者已知之其他因子。一般來說，尺寸、大小、調配物、參數、形狀或其他數量或特徵皆為「約」或「大約」，無論是否如此明白說明。已注意到非常不同大小、形狀及尺寸的實施態樣可採用所述的安排。

當轉折語「包含」、「基本上由...組成(consisting essentially of)」及「由...組成(consisting of)」以原始及修改形式用於隨附申請專利範圍中時，其就請求範圍定義有關於哪些未引述之額外請求元件或步驟(若有的話)被排除於請求項之範圍之外。用語「包含」意圖為包括性或開放式且不排除任何額外、未引述元件、方法、步驟或材料。用語「由...組成」排除任何不在請求項中指明之元件、步驟或材料，且在後者情況中排除與所指明之材料尋常相關之雜質。用語「基本上由…組成」將請求項的範圍限制在所指明的元件、步驟或材料及該些實質上不影響所主張發明之基本及新穎特徵者。本文所述之體現本發明之所有組成物、方法及套組可在替代性實施態樣中藉由任何轉折語「包含」、「基本上由...組成」及「由...組成」更具體地定義。II. TIL 產製過程 ( 第 3 代製程之實施態樣 )

在不受任何特定理論限制下，據信如本發明之方法所述之起動T細胞的活化之初始第一擴增(priming first expansion)，隨後加強T細胞的活化之快速第二擴增，允許製備保留「較年輕」表型之經擴增的T細胞，且因此預期本發明之經擴增的T細胞相較於藉由其他方法擴增之T細胞可對癌細胞展現較高細胞毒性。特別是，據信如本發明之方法所教示之藉由暴露至抗CD3抗體(例如OKT-3)、IL-2及可選地抗原呈現細胞(APC)來預備T細胞的活化且接著藉由後續暴露至額外的抗CD-3抗體(例如OKT-3)、IL-2及APC來加強，限制或避免培養中T細胞的成熟，產生具有較不成熟表型的T細胞族群，該等T細胞較不因培養擴增而耗竭且對癌細胞展現較高細胞毒性。在一些實施態樣中，快速第二擴增之步驟係分成下列複數個步驟以達成培養規模縱向擴大(scaling up)：(a)藉由在第一容器(例如G-REX 100MCS容器)的小規模培養中培養T細胞約3至4天來實施快速第二擴增，接著(b)致效小規模培養中的T細胞轉移至比第一容器大的第二容器(例如G-REX 500MCS容器)且在第二容器中的較大規模培養中培養來自小規模培養的T細胞約4至7天。在一些實施態樣中，快速擴增之步驟係分成下列複數個步驟以達成培養規模橫向擴大(scaling out)：(a)藉由在第一容器(例如G-REX 100MCS容器)的第一小規模培養中培養T細胞約3至4天來實施快速第二擴增，接著(b)致效來自第一小規模培養中的T細胞轉移及分配至至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個與第一容器大小相等的第二容器之中，其中在各第二容器中，經轉移至該第二容器之來自第一小規模培養的T細胞部分係於第二小規模培養中培養約4至7天。在一些實施態樣中，快速擴增之步驟係分成下列複數個步驟以達成培養規模橫向擴大及規模縱向擴大：(a)藉由在第一容器(例如G-REX 100MCS容器)的小規模培養中培養T細胞約3至4天來實施快速第二擴增，接著(b)致效來自小規模培養中的T細胞轉移及分配至至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個大小比第一容器較大的第二容器(例如G-REX 500MCS容器)之中，其中在各第二容器中，經轉移至該第二容器之來自小規模培養的T細胞部分係於較大規模培養中培養約4至7天。在一些實施態樣中，快速擴增之步驟係分成下列複數個步驟以達成培養規模橫向擴大及規模縱向擴大：(a)藉由在第一容器(例如G-REX 100MCS容器)的小規模培養中培養T細胞約4天來實施快速第二擴增，接著(b)致效來自小規模培養中的T細胞轉移及分配至2、3或4個大小比第一容器較大的第二容器(例如G-REX 500MCS容器)之中，其中在各第二容器中，經轉移至該第二容器之來自小規模培養的T細胞部分係於較大規模培養中培養約5天。

含有一些這些特徵的例示性TIL製程(稱為製程3，在本文中亦稱為第3代)係描繪於圖2A及2C及/或圖9，且本揭露之此實施態樣的一些相較於製程2A的優點係描述於圖2B。製程3之二個實施態樣顯示於圖2C。製程2A或第2代亦描述於美國專利公開案2018/.0280436，其全文以引用方式併入本文中。製程3或第3代亦描述於國際專利申請案第PCT/US2019/059718號(其全文以引用方式併入本文中)以及本申請案中提供之圖5、6、8、9、10及11。

在一些實施態樣中，快速第二擴增係於藉由初始第一擴增所致效的T細胞活化開始降低、趨緩、衰退或消退之後實施。

在一些實施態樣中，快速第二擴增係於藉由初始第一擴增所致效的T細胞活化已降低在或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%之後實施。

在一些實施態樣中，快速第二擴增係於藉由初始第一擴增所致效的T細胞活化已降低在或約1%至100%的範圍中之百分比之後實施。

在一些實施態樣中，快速第二擴增係於藉由初始第一擴增所致效的T細胞活化已降低在或約1%至10%、10%至20%、20%至30%、30%至40%、40%至50%、50%至60%、60%至70%、70%至80%、80%至90%或90%至100%的範圍中之百分比之後實施。

在一些實施態樣中，快速第二擴增係於藉由初始第一擴增所致效的T細胞活化已降低至少在或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%之後實施。

在一些實施態樣中，快速第二擴增係於藉由初始第一擴增所致效的T細胞活化已降低至多在或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%之後實施。

在一些實施態樣中，藉由初始第一擴增所致效的T細胞活化的降低係藉由T細胞因應抗原刺激所釋放之干擾素γ的量之減少來判定。T細胞所釋放之干擾素γ的水準相較於干擾素γ之初始或對照水準減少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、45%、50%、55%、60%、65%、70%及/或75%係指示T細胞活化降低。T細胞所釋放之干擾素γ的量減少至小於200 pg/mL、小於250 pg/mL、小於300 pg/mL、小於350 pg/mL、小於400 pg/mL、小於450 pg/mL、小於500 pg/mL、小於550 pg/mL、小於600 pg/mL、小於650 pg/mL、小於700 pg/mL、小於750 pg/mL、小於800 pg/mL、小於850 pg/mL、小於900 pg/mL、小於950 pg/mL或小於1000 pg/mL係指示T細胞活化降低。

在一些實施態樣中，T細胞的初始第一擴增係於至多在或約7天或約8天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的初始第一擴增係於至多在或約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或8天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的初始第一擴增係於1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或8天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的快速第二擴增係於至多在或約11天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的快速第二擴增係於至多在或約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天或11天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的快速第二擴增係於1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天或11天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的初始第一擴增係於自在或約1天至在或約7天的期間實施且T細胞的快速第二擴增係於自在或約1天至在或約11天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的初始第一擴增係於至多在或約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或8天的期間實施且T細胞的快速第二擴增係於至多在或約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天或約11天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的初始第一擴增係於自在或約1天至在或約8天的期間實施且T細胞的快速第二擴增係於自在或約1天至在或約9天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的初始第一擴增係於8天的期間實施且T細胞的快速第二擴增係於9天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的初始第一擴增係於自在或約1天至在或約7天的期間實施且T細胞的快速第二擴增係於自在或約1天至在或約9天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞的初始第一擴增係於7天的期間實施且T細胞的快速第二擴增係於9天的期間實施。

在一些實施態樣中，T細胞係腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)。

在一些實施態樣中，T細胞係骨髓浸潤性淋巴細胞(MIL)。

在一些實施態樣中，T細胞係周邊血液淋巴細胞(PBL)。

在一些實施態樣中，T細胞係獲自罹癌供體。

在一些實施態樣中，T細胞係獲自罹癌病患所切除之腫瘤的TIL。

在一些實施態樣中，T細胞係獲自血液惡性病病患骨髓的MIL。

在一些實施態樣中，T細胞係獲自來自供體之周邊血液單核細胞(PBMC)之PBL。在一些實施態樣中，供體罹患癌症。在一些實施態樣中，癌症係選自由下列所組成之群組之癌症：黑色素瘤、卵巢癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌、結直腸癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、由人乳突瘤病毒所造成的癌症、頭頸癌(包括頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC))、神經膠質母細胞瘤(包括GBM)、胃腸道癌、腎癌及腎細胞癌。在一些實施態樣中，癌症係選自由下列所組成之群組：黑色素瘤、卵巢癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、由人乳突瘤病毒所造成的癌症、頭頸癌(包括頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC))、神經膠質母細胞瘤(包括GBM)、胃腸道癌、腎癌及腎細胞癌。在一些實施態樣中，供體罹患腫瘤。在一些實施態樣中，腫瘤係液體腫瘤。一些實施態樣中，腫瘤係實體腫瘤。在一些實施態樣中，供體罹患血液惡性病。

在本發明之某些態樣中，免疫效應細胞例如T細胞可自一單位收集自個體之血液，使用該領域之技藝人士所知之任何數量之技術諸如FICOLL分離獲得。在一較佳之態樣中，來自個體之循環血液中的細胞係藉由血球分離獲得。血球分離產物一般含有淋巴細胞包括T細胞、單核球、顆粒球、B細胞、其他有核白血球、紅血球、及血小板。在一態樣中，藉由血球分離所收集之細胞可經洗滌以去除血漿部分且可選地將細胞放置於適當緩衝液或培養基以供進行後續處理步驟。在一實施態樣中，細胞係經磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌。在一替代性實施態樣中，該洗滌溶液缺乏鈣，且可能缺乏鎂或可能缺乏許多若非所有二價陽離子。在一態樣中，T細胞係自周邊血液淋巴細胞分離，其可藉由例如離心通過PERCOLL梯度或藉由逆流離心淘析以裂解紅血球並除盡單核球。

在一些實施態樣中，T細胞係自供體的全血或富含淋巴細胞之血球分離產物分離的PBL。在一些實施態樣中，供體罹患癌症。在一些實施態樣中，癌症係選自由下列所組成之群組之癌症：黑色素瘤、卵巢癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌、結直腸癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、由人乳突瘤病毒所造成的癌症、頭頸癌(包括頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC))、神經膠質母細胞瘤(包括GBM)、胃腸道癌、腎癌及腎細胞癌。在一些實施態樣中，癌症係選自由下列所組成之群組：黑色素瘤、卵巢癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、由人乳突瘤病毒所造成的癌症、頭頸癌(包括頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC))、神經膠質母細胞瘤(包括GBM)、胃腸道癌、腎癌及腎細胞癌。在一些實施態樣中，供體罹患腫瘤。在一些實施態樣中，腫瘤係液體腫瘤。一些實施態樣中，腫瘤係實體腫瘤。在一些實施態樣中，供體罹患血液惡性病。在一些實施態樣中，PBL係單離自全血或藉由使用正向或負向選擇方法而富含淋巴細胞之血球分離產物，即，使用T細胞表型標誌例如CD3+CD45+移出PBL，或移除非T細胞表型細胞而留下PBL。在其他實施態樣中，PBL係藉由梯度離心單離。在單離來自供體組織之PBL後，PBL之初始第一擴增可根據本文所述之任何方法中之初始第一擴增步驟，藉由將合適數量的經單離之PBL(在一些實施態樣中，大約1×10⁷ 個PBL)接種於初始第一擴增培養中來起始。

如本文中所討論及大致概述的，TIL係取自病患樣本且使用本文所述之TIL擴增過程操作以在移植至病患中之前擴增彼等之數量。在一些實施態樣中，TIL可選地可經如下討論之基因操作。在一些實施態樣中，TIL可在擴增之前或之後經冷凍保存。一旦解凍後，彼等亦可經再刺激以在輸注至病患中之前增加彼等之代謝。

在一些實施態樣中，如以下及實例及圖式中所詳細討論的，初始第一擴增(包括本文中稱為快速擴增前(REP前)之過程以及圖2A步驟B所示之過程)縮短為1至8天且快速第二擴增(包括本文中稱為快速擴增規程(REP)之過程以及圖2A步驟D所示之過程)縮短為1至9天。在一些實施態樣中，如以下及實例及圖式中所詳細討論的，初始第一擴增(包括本文中稱為快速擴增前(REP前)之過程以及圖2A步驟B所示之過程)縮短為1至8天且快速第二擴增(包括本文中稱為快速擴增規程(REP)之過程以及圖2A步驟D所示之過程)縮短為1至8天。在一些實施態樣中，如以下及實例及圖式中所詳細討論的，初始第一擴增(包括本文中稱為快速擴增前(REP前)之過程以及圖2A步驟B所示之過程)縮短為1至7天且快速第二擴增(包括本文中稱為快速擴增規程(REP)之過程以及圖2A步驟D所示之過程)縮短為1至9天。在一些實施態樣中，如以下及實例及圖式中所詳細討論的，初始第一擴增(包括本文中稱為快速擴增前(REP前)之過程以及圖2A步驟B所示之過程)為1至7天且快速第二擴增(包括本文中稱為快速擴增規程(REP)之過程以及圖2A步驟D所示之過程)係1至10天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)縮短為8天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係7至9天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)係8天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係8至9天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)縮短為7天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係7至8天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)縮短為8天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係8天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)係8天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係9天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)係8天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係10天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)係7天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係7至10天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)係7天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係8至10天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)係7天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係9至10天。在一些實施態樣中，初始第一擴增(例如，圖2A步驟B所述之擴增)縮短為7天且快速第二擴增(例如，圖2A步驟D所述之擴增)係7至9天。在一些實施態樣中，如以下及實例及圖式中所詳細討論的，初始第一擴增與快速第二擴增(例如，如圖2A步驟B及步驟D所描述之擴增)之組合係14至16天。特別是，所考慮的是本發明之某些實施態樣包含初始第一擴增步驟，其中TIL藉由在IL-2存在下暴露於抗CD3抗體(例如OKT-3)或在至少IL-2及抗CD3抗體(例如OKT-3)存在下暴露於抗原來活化。在某些實施態樣中，如上述在初始第一擴增步驟中被活化的TIL係第一TIL族群，即初代細胞族群。

在一些實施態樣中，TIL在第一擴增之後且在第二擴增之前不經儲存，且TIL直接進行第二擴增(例如在一些實施態樣中，在如圖2A所示的從步驟B至步驟D的轉變期間並不經儲存)。在一些實施態樣中，轉變在如本文所述之密閉系統中發生。在一些實施態樣中，來自第一擴增的TIL(第二TIL族群)直接進行第二擴增而無轉變期。

在一些實施態樣中，第一擴增(例如根據圖2A之步驟B)係於密閉系統生物反應器中實施。在一些實施態樣中，採用密閉系統進行如本文所述之TIL擴增。在一些實施態樣中，採用單一生物反應器。在一些實施態樣中，所採用的單一生物反應器係例如G-REX -10或G-REX -100。在一些實施態樣中，密閉系統生物反應器係單一生物反應器。

本文所指稱的「步驟」代號A、B、C等參照圖2A的非限制性實例且參照本文所述之某些非限制性實施態樣。以下及圖2A中的步驟順序為例示性且步驟的任何組合或順序以及額外步驟、重複步驟及/或步驟省略皆在本申請案及在本文中揭示之方法考慮。A. 細胞存活性分析

在初始第一擴增(有時稱為初始主體擴增)之後可使用所屬技術領域中已知之標準測定實施細胞存活性測定。因此，在某些實施態樣中，方法包含在初始第一擴增後實施細胞存活性測定。在一些實施態樣中，細胞存活性測定可在第二擴增之後(例如在REP之後)以及在最終收集之後實施。例如，可在主體TIL的樣本上進行台盼藍排除測定，其選擇性標示死亡細胞且允許存活性評估。其他用於測試存活性之測定可包括但不限於阿爾瑪藍測定及MTT測定。 1. 細胞計數、存活性、流式細胞術

在一些實施態樣中，測量細胞計數及/或存活性。標誌之表現(諸如但不限於CD3、CD4、CD8及CD56以及任何其他本文揭示或描述者)可藉由流式細胞術使用FACSCanto^TM 流式細胞儀(BD Biosciences)以抗體(例如但不限於該些可購自BD Bio-sciences (BD Biosciences, San Jose, CA)者)測量。細胞可使用拋棄式c-晶片血球計(VWR, Batavia, IL)手動計數且存活性可使用任何所屬技術領域中已知之方法包括但不限於台盼藍染色評估。細胞存活性亦可基於USSN 15/863,634測定，其全文以引用方式併入本文中。細胞存活性亦可基於美國專利公開號2018/0280436或國際專利公開號WO/2018/081473測定，兩者全文皆出於所有目的併入本文中。

在一些情況下，主體TIL族群可使用以下討論之規程立即冷凍保存。替代地，主體TIL族群可如以下討論進行REP且接著冷凍保存。類似地，在其中基因修飾的TIL將用於療法中的情況中，主體或REP TIL族群可進行基因修飾以用於合適治療。III. TIL 產製過程 ( 製程 2A 之實施態樣 )

含有一些這些特徵的例示性TIL製程(稱為製程2A)係描繪於圖5，且本發明之此實施態樣的一些相較於製程1C的差異及優點係描述於圖6以及圖11。製程1C係顯示於圖6、7及10以供比較。製程2A之實施態樣係顯示於圖6以及圖5、9、10及11。圖10及11進一步提供例示性2A製程與例示性1C製程之比較。

如本文中所討論，本發明可包括關於再刺激經冷凍保存之TIL的步驟，以增加彼等的代謝活性及因此在移植至病患中之前的相對健康，以及測試該代謝健康之方法。如在本文中大致概述，TIL通常取自病患樣本且經操作以在移植至病患中之前擴增彼等之數量。在一些實施態樣中，TIL可選地可經如下討論之基因操作。

在一些實施態樣中，TIL可經冷凍保存。一旦解凍後，彼等亦可經再刺激以在輸注至病患中之前增加彼等之代謝。

在一些實施態樣中，如以下及實例及圖式中所詳細討論的，第一擴增(包括稱為REP前之過程以及圖9步驟A所示之過程)縮短至3至14天且第二擴增(包括稱為REP之過程以及圖9步驟B所示之過程)縮短至7至14天。在一些實施態樣中，第一擴增(例如，圖9步驟B所述之擴增)縮短至11天且第二擴增(例如，圖9步驟D所述之擴增)縮短至11天，如實例中所討論且顯示於圖5、6、8、9、10及11。在一些實施態樣中，如以下及實例及圖式中所詳細討論的，第一擴增與第二擴增(例如，如圖9步驟B及步驟D所描述之擴增)之組合縮短為22天。

以下的「步驟」代號A、B、C等參照圖9且參照本文所述之某些實施態樣。以下及圖9中的步驟順序為例示性且步驟的任何組合或順序以及額外步驟、重複步驟及/或步驟省略皆在本申請案及在本文中揭示之方法考慮。A. 步驟 A ：獲得病患腫瘤樣本

一般來說，TIL最初獲自病患腫瘤樣本且接著擴增成較大族群以進行如本文中描述之進一步操作，可選地冷凍保存、如本文概述之再刺激及可選地評估表型及代謝參數作為TIL健康的指標。

病患腫瘤樣本可使用所屬技術領域中已知之方法獲得，通常經由手術切除、細針活體組織切片、粗針活體組織切片、小活體組織切片或其他用於獲得含有腫瘤及TIL細胞之混合物的樣本的手段。在一些實施態樣中，使用多病灶取樣。在一些實施態樣中，手術切除、細針活體組織切片、粗針活體組織切片、小活體組織切片或其他用於獲得含有腫瘤及TIL細胞之混合物的樣本的手段包括多病灶取樣(即，自病患的一或多個腫瘤部位及/或位置以及在相同位置或近距離的一或多個腫瘤獲得樣本)。一般來說，腫瘤樣本可來自任何實體腫瘤，包括原發性腫瘤、侵入性腫瘤或轉移性腫瘤。腫瘤樣本亦可為液體腫瘤，諸如獲自血液惡性病的腫瘤。實體腫瘤可為肺部組織。在一些實施態樣中，有用的TIL獲自非小細胞肺癌(NSCLC)。

一旦獲得，腫瘤樣本通常使用銳器分割碎斷成介於1至約8 mm3之間的小片(small pieces)，且約2至3 mm3特別有用。在一些實施態樣中，TIL係自這些片段使用酶催化性腫瘤消化物培養。該等腫瘤消化物可藉由在酶性培養基(例如Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640緩衝劑、2 mM麩胺酸、10 mcg/mL建它黴素、30單位/mL的DNA酶及1.0 mg/mL的膠原酶)中培育，隨後機械解離(例如使用組織解離器)產生。腫瘤消化物可藉由將腫瘤放入酶催化性培養基中且機械解離腫瘤大約1分鐘，隨後在37℃下在5% CO2中培育30分鐘，隨後在前述條件下重複機械解離及培育循環直到只有小組織片存在而產生。在此過程結束時，如果細胞懸浮液含有大量的紅血球或死亡細胞，可使用FICOLL分支親水性多醣實施密度梯度分離以移除這些細胞。可使用所屬技術領域中已知之替代方法，諸如該些在美國專利申請公開案第2012/0244133 A1號中描述者，其揭露以引用方式併入本文中。任何前述方法可用於本文所述之任何實施態樣中之擴增TIL之方法或治療癌症之方法。

腫瘤解離酶混合物可包括一或多種解離(消化)酶，諸如但不限於膠原酶(包括任何摻合物或類型之膠原酶)、Accutase™、Accumax™、玻璃酸酶、中性蛋白酶(分散酶)、胰凝乳酶、木瓜凝乳酶、胰蛋白酶、酪蛋白酶、彈性酶、木瓜酶、第XIV型蛋白酶(鏈蛋白酶)、去氧核糖核酸酶I(DNA酶)、胰蛋白酶抑制劑、任何其他解離或蛋白分解酶及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，解離酶係自經冷凍乾燥之酶重構。在一些實施態樣中，經冷凍乾燥之酶係以一量的無菌緩衝劑(諸如HBSS)重構。

在一些情況下，膠原酶(諸如無動物第1型膠原酶)係以10 mL之無菌HBSS或另一種緩衝劑重構。經冷凍乾燥之原液酶的濃度可為2892 PZ U/小瓶。在一些實施態樣中，膠原酶係以5 mL至15 mL緩衝劑重構。在一些實施態樣中，在重構後膠原酶原液的範圍自約100 PZ U/mL至約400 PZ U/mL，例如約100 PZ U/mL至約400 PZ U/mL、約100 PZ U/mL至約350 PZ U/mL、約100 PZ U/mL至約300 PZ U/mL、約150 PZ U/mL至約400 PZ U/mL、約100 PZ U/mL、約150 PZ U/mL、約200 PZ U/mL、約210 PZ U/mL、約220 PZ U/mL、約230 PZ U/mL、約240 PZ U/mL、約250 PZ U/mL、約260 PZ U/mL、約270 PZ U/mL、約280 PZ U/mL、約289.2 PZ U/mL、約300 PZ U/mL、約350 PZ U/mL或約400 PZ U/mL。

在一些實施態樣中，中性蛋白酶係以1 mL之無菌HBSS或另一緩衝劑重構。經冷凍乾燥之原液酶的濃度可為175 DMC U/小瓶。在一些實施態樣中，在重構後中性蛋白酶原液的範圍自約100 DMC/mL至約400 DMC/mL，例如約100 DMC/mL至約400 DMC/mL、約100 DMC/mL至約350 DMC/mL、約100 DMC/mL至約300 DMC/mL、約150 DMC/mL至約400 DMC/mL、約100 DMC/mL、約110 DMC/mL、約120 DMC/mL、約130 DMC/mL、約140 DMC/mL、約150 DMC/mL、約160 DMC/mL、約170 DMC/mL、約175 DMC/mL、約180 DMC/mL、約190 DMC/mL、約200 DMC/mL、約250 DMC/mL、約300 DMC/mL、約350 DMC/mL或約400 DMC/mL。

在一些實施態樣中，DNA酶I係以1 mL之無菌HBSS或另一緩衝劑重構。經冷凍乾燥之原液酶的濃度係4 KU/小瓶。在一些實施態樣中，在重構後DNA酶I原液的範圍自約1 KU/mL至10 KU/mL，例如約1 KU/mL、約2 KU/mL、約3 KU/mL、約4 KU/mL、約5 KU/mL、約6 KU/mL、約7 KU/mL、約8 KU/mL、約9 KU/mL或約10 KU/mL。

在一些實施態樣中，酶原液係可變的且濃度可能需要測定。在一些實施態樣中，經冷凍乾燥之原液的濃度可經驗證。在一些實施態樣中，添加至消化雞尾酒之酶的最終量係基於經測定之原液濃度調整。

在一些實施態樣中，酶混合物包括約10.2-ul之中性蛋白酶(0.36 DMC U/mL)、21.3 µL之膠原酶(1.2 PZ/mL)及250-ul之DNA酶I (200 U/mL)於約4.7 mL之無菌HBSS中。

如上所指示，在一些實施態樣中，TIL係衍生自實體腫瘤。在一些實施態樣中，實體腫瘤未經碎斷。在一些實施態樣中，實體腫瘤未經碎斷且以全腫瘤進行酶催化性消化。在一些實施態樣中，腫瘤係於包含膠原酶、DNA酶及玻璃酸酶之酶混合物中消化。在一些實施態樣中，腫瘤係於包含膠原酶、DNA酶及玻璃酸酶之酶混合物中消化1至2小時。在一些實施態樣中，腫瘤係於包含膠原酶、DNA酶及玻璃酸酶之酶混合物中在37℃、5% CO2下消化1至2小時。在一些實施態樣中，腫瘤係於包含膠原酶、DNA酶及玻璃酸酶之酶混合物中在37℃、5% CO2、旋轉下消化1至2小時。在一些實施態樣中，腫瘤在恆定旋轉下消化隔夜。在一些實施態樣中，腫瘤在37℃、5% CO2、恆定旋轉下消化隔夜。在一些實施態樣中，全腫瘤與酶組合以形成腫瘤消化反應混合物。

在一些實施態樣中，腫瘤係以經冷凍乾燥之酶於無菌緩衝劑中重構。在一些實施態樣中，緩衝劑係無菌HBSS。

在一些實施態樣中，酶混合物包含膠原酶。在一些實施態樣中，膠原酶係膠原酶IV。在一些實施態樣中，膠原酶的工作原液係100 mg/mL 10X工作原液。

在一些實施態樣中，酶混合物包含DNA酶。在一些實施態樣中，DNA酶的工作原液係10,000IU/mL 10X工作原液。

在一些實施態樣中，酶混合物包含玻璃酸酶。在一些實施態樣中，玻璃酸酶的工作原液係10-mg/mL 10X工作原液。

在一些實施態樣中，酶混合物包含10 mg/mL膠原酶、1000 IU/mL DNA酶及1 mg/mL玻璃酸酶。

在一些實施態樣中，酶混合物包含10 mg/mL膠原酶、500 IU/mL DNA酶及1 mg/mL玻璃酸酶。

一般來說，將收集到的細胞懸浮液稱為「初代細胞族群」或「新鮮收集」細胞族群。

在一些實施態樣中，碎斷包括物理碎斷，包括例如分割以及消化。在一些實施態樣中，碎斷係物理碎斷。在一些實施態樣中，碎斷係分割。在一些實施態樣中，碎斷係藉由消化。在一些實施態樣中，TIL最初可自獲自病患的酶催化性腫瘤消化物及腫瘤片段培養。在一實施態樣中，TIL最初可自獲自病患的酶催化性腫瘤消化物及腫瘤片段培養。

在一些實施態樣中，當腫瘤係實體腫瘤時，在例如(如圖1中提供的)步驟A中獲得腫瘤樣本後，將腫瘤進行物理碎斷。在一些實施態樣中，碎斷發生在冷凍保存之前。在一些實施態樣中，碎斷發生在冷凍保存之後。在一些實施態樣中，碎斷發生在獲得腫瘤之後且不進行任何冷凍保存。在一些實施態樣中，將腫瘤碎斷並將10、20、30、40或更多個片段或片放入各容器進行第一擴增。在一些實施態樣中，將腫瘤碎斷並將30或40個片段或片放入各容器進行第一擴增。在一些實施態樣中，將腫瘤碎斷並將40個片段或片放入各容器進行第一擴增。在一些實施態樣中，多個片段包含約4至約50個片段，其中各片段具有約27 mm3的體積。在一些實施態樣中，多個片段包含約30至約60個片段，其總體積為約1300 mm3至約1500 mm3。在一些實施態樣中，多個片段包含約50個片段，其總體積為約1350 mm3。在一些實施態樣中，多個片段包含約50個片段，其總質量為約1克至約1.5克。在一些實施態樣中，多個片段包含約4個片段。

在一些實施態樣中，TIL係獲自腫瘤片段。在一些實施態樣中，腫瘤片段係藉由銳器分割獲得。在一些實施態樣中，腫瘤片段係介於約1 mm3與10 mm3之間。在一些實施態樣中，腫瘤片段係介於約1 mm3與8 mm3之間。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約1 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約2 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約3 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約4 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約5 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約6 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約7 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約8 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約9 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤片段係約10 mm3。在一些實施態樣中，腫瘤係1-4 mm x 1-4 mm x 1-4 mm。在一些實施態樣中，腫瘤係1 mm x 1 mm x 1 mm。在一些實施態樣中，腫瘤係2 mm x 2 mm x 2 mm。在一些實施態樣中，腫瘤係3 mm x 3 mm x 3 mm。在一些實施態樣中，腫瘤係4 mm x 4 mm x 4 mm。

在一些實施態樣中，切除腫瘤以最小化各片上出血性、壞死及/或脂肪組織的量。在一些實施態樣中，切除腫瘤以最小化各片上出血性組織的量。在一些實施態樣中，切除腫瘤以最小化各片上壞死組織的量。在一些實施態樣中，切除腫瘤以最小化各片上脂肪組織的量。

在一些實施態樣中，腫瘤碎斷的實施是為了維持腫瘤內部結構。在一些實施態樣中，腫瘤碎斷的實施不包括使用解剖刀實施鋸切動作。在一些實施態樣中，TIL係獲自腫瘤消化物。在一些實施態樣中，腫瘤消化物的產生藉由在例如但不限於RPMI 1640、2 mM GlutaMAX、10 mg/mL建它黴素、30 U/mL DNA酶及1.0 mg/mL膠原酶的酶培養基中培育，隨後機械解離(GentleMACS, Miltenyi Biotec, Auburn, CA)而成。在將腫瘤放入酶培養基後，可將腫瘤機械解離大約1分鐘。接著可將溶液在37℃下在5% CO2中培育30分鐘，且接著再次機械破壞大約1分鐘。在37℃下在5% CO2中再培育30分鐘後，可將腫瘤機械破壞第三次大約1分鐘。在一些實施態樣中，在第三次機械破壞後如果大片組織仍然存在，則施加1或2次額外機械解離至樣本，不論是否再在37℃下在5% CO2中培育30分鐘。在一些實施態樣中，在最終培育結束時，如果細胞懸浮液含有大量的紅血球或死亡細胞，可使用Ficoll實施密度梯度分離以移除這些細胞。

在一些實施態樣中，將第一擴增步驟之前收集到的細胞懸浮液稱為「初代細胞族群」或「新鮮收集」細胞族群。

在一些實施態樣中，細胞可在樣本收集後可選地冷凍且在進入步驟B描述的擴增之前冷凍儲存，該步驟B在以下進一步詳細描述且在圖9中例示。 1. 胸膜滲液T細胞及TIL

在一些實施態樣中，樣本係胸膜液樣本。在一些實施態樣中，用於根據本文所述之過程擴增之T細胞TIL的來源係胸膜液樣本。在一些實施態樣中，樣本係胸膜滲液衍生樣本。在一些實施態樣中，用於根據本文所述之過程擴增之T細胞或TIL的來源係胸膜滲液衍生樣本。見例如美國專利公開案第US 2014/0295426號中描述之方法，該案全文出於所有目的以引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，可採用任何疑似及/或含有TIL之胸膜液或胸膜滲液。此類樣本可衍生自原發性或轉移性肺癌，諸如NSCLC或SCLC。在一些實施態樣中，樣本可為源自另一器官例如乳房、卵巢、結腸或前列腺之繼發性轉移性癌細胞。在一些實施態樣中，用於本文所述之擴增方法之樣本係胸膜滲出液。在一些實施態樣中，用於本文所述之擴增方法之樣本係胸膜漏出液。其他生物樣本可包括其他含有TIL之漿液，包括例如腹部的腹水或胰囊腫液。腹水及胸膜液涉及非常類似的化學系統；腹部及肺部皆具有間皮細胞系且在惡性病中以相同情況在胸膜空間及腹部空間形成液體且此類液體在一些實施態樣中含有TIL。在一些實施態樣中，其中本揭露以胸膜液為例，可使用含有TIL之腹水或其他囊腫液實施相同方法以得到類似結果。

在一些實施態樣中，胸膜液係呈未經處理、直接如自病患移除之形式。在一些實施態樣中，在接觸步驟之前，將未經處理之胸膜液放入標準血液收集管(諸如EDTA或肝素試管)中。在一些實施態樣中，在接觸步驟之前，將未經處理之胸膜液放入標準CellSave®試管(Veridex)中。在一些實施態樣中，自病患收集之後立即將樣本放入CellSave試管以避免存活TIL之數量降低。如果留在即使在4℃下之未經處理之胸膜液中，存活TIL之數量可在24小時內降低至顯著程度。在一些實施態樣中，在自病患移除之後1小時、5小時、10小時、15小時或至多24小時內，將樣本放入適當收集管中。在一些實施態樣中，在4℃下自病患移除之後1小時、5小時、10小時、15小時或至多24小時內，將樣本放入適當收集管中。

在一些實施態樣中，可將來自所選個體胸膜液樣本稀釋。在一實施態樣中，稀釋係1:10胸膜液對稀釋劑。在另一實施態樣中，稀釋係1:9胸膜液對稀釋劑。在另一實施態樣中，稀釋係1:8胸膜液對稀釋劑。在另一實施態樣中，稀釋係1:5胸膜液對稀釋劑。在另一實施態樣中，稀釋係1:2胸膜液對稀釋劑。在另一實施態樣中，稀釋係1:1胸膜液對稀釋劑。在一些實施態樣中，稀釋劑包括鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、另一緩衝劑或生理上可接受稀釋劑。在一些實施態樣中，自病患收集及稀釋之後立即將樣本放入CellSave試管中以避免存活TIL之降低，如果留在即使在4℃下之未經處理之胸膜液中，存活TIL之降低可在24至48小時內發生至顯著程度。在一些實施態樣中，在自病患移除及稀釋之後1小時、5小時、10小時、15小時、24小時、36小時、至多48小時內，將胸膜液樣本放入適當收集管中。在一些實施態樣中，在4℃下自病患移除及稀釋之後1小時、5小時、10小時、15小時、24小時、36小時、至多48小時內，將胸膜液樣本放入適當收集管中。

在仍另一實施態樣中，在進一步處理步驟之前，將胸膜液樣本藉由習知手段濃縮。在一些實施態樣中，此胸膜液之預處理在其中胸膜液必須經冷凍保存以供運輸至實施該方法之實驗室或供稍晚分析(例如晚於收集後24至48小時)的情況下係較佳。在一些實施態樣中，胸膜液樣本係藉由自個體抽出胸膜液樣本之後將其離心且將離心分離物或團塊重懸於緩衝劑中製備。在一些實施態樣中，胸膜液樣本進行多次離心及重懸，然後經冷凍保存以供運送或稍晚分析及/或處理。

在一些實施態樣中，胸膜液樣本在進一步處理步驟之前藉由使用過濾方法濃縮。在一些實施態樣中，在接觸步驟中使用之胸膜液樣本係藉由使液體經由含有已知且基本上一致孔徑以允許胸膜液通過膜但保留腫瘤細胞之過濾器過濾製備。在一些實施態樣中，膜中之孔的直徑可為至少4 μM。在另一實施態樣中，孔直徑可為5 μM或超過5 μM，且在其他實施態樣中為6、7、8、9或10 μM中任一者。在過濾之後，可將由膜所保留之細胞(包括TIL)潤洗脫離膜至合適生理上可接受緩衝劑中。以此方式濃縮之細胞(包括TIL)接著可用於該方法之接觸步驟中。

在一些實施態樣中，使胸膜液樣本(包括例如未經處理之胸膜液)、經稀釋之胸膜液或重懸細胞團塊與差別性裂解存在於樣本中之無核紅血球之裂解試劑接觸。在一些實施態樣中，此步驟係在其中胸膜液含有大量RBC的情況下在進一步處理步驟之前實施。合適裂解試劑包括單一裂解試劑或裂解試劑及淬熄試劑或裂解劑、淬熄試劑及固定試劑。合適裂解系統係市售商品且包括BD Pharm Lyse™系統(Becton Dickenson)。其他裂解系統包括Versalyse™系統、FACSlyse™系統(Becton Dickenson)、Immunoprep™系統或Erythrolyse II系統(Beckman Coulter, Inc.)或氯化銨系統。在一些實施態樣中，裂解試劑可隨主要需求為有效裂解紅血球及保留胸膜液中之TIL及TIL之表型性質而異。除了採用單一裂解試劑之外，可用於本文所述之方法中的裂解系統可包括第二試劑，例如在該方法之剩餘步驟期間淬熄或阻滯裂解試劑之效應者，例如Stabilyse™試劑(Beckman Coulter, Inc.)。取決於裂解試劑之選擇或該方法之較佳執行，亦可採用習知固定試劑。

在一些實施態樣中，如本文上述之未經處理、經稀釋或經多次離心或處理之胸膜液樣本在經進一步處理及/或本文提供之擴增之前係在約−140℃之溫度下冷凍保存。B. 步驟 B ：第一擴增 1. 年輕TIL

在一些實施態樣中，本方法提供獲得年輕TIL，該年輕TIL在投予至個體/病患後能夠增加複製循環且因此相較於較老TIL(即在投予至個體/病患之前已進一步經歷更多次複製的TIL)可能提供額外治療好處。年輕TIL的特徵已在文獻中描述，例如Donia, at al.,Scandinavian Journal of Immunology, 75:157-167 (2012)；Dudley et al.,Clin Cancer Res, 16:6122-6131 (2010)；Huang et al.,J Immunother , 28(3):258-267 (2005)；Besser et al.,Clin Cancer Res , 19(17):OF1-OF9 (2013)；Besser et al.,J Immunother 32:415-423 (2009)；Robbins, et al.,J Immunol 2004; 173:7125-7130；Shen et al., J Immunother, 30:123-129 (2007)；Zhou, et al.,J Immunother , 28:53-62 (2005)；及Tran, et al., J Immunother, 31:742-751 (2008)，所有全文皆以引用方式併入本文中。

T及B淋巴細胞的多樣抗原受體係藉由有限但大量的基因區段的體細胞重組產生。這些基因區段：V(可變區)、D(多樣區)、J(聯結區)及C(恆定區)決定免疫球蛋白及T細胞受體(TCR)的結合特異性及下游應用。本發明提供產生展現及增加T細胞貯庫多樣性之TIL的方法。在一些實施態樣中，藉由本方法獲得之TIL展現增加的T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，藉由本方法獲得之TIL相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL，展現增加的T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，藉由本方法獲得之TIL相較於新鮮收集TIL及/或使用稱為製程1C之方法(如在圖10所例示者)製備的TIL，展現增加的T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，在第一擴增獲得之TIL展現增加的T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，增加多樣性是增加免疫球蛋白多樣性及/或T細胞受體多樣性。在一些實施態樣中，多樣性存在免疫球蛋白中、存在免疫球蛋白重鏈中。在一些實施態樣中，多樣性存在免疫球蛋白中、存在免疫球蛋白輕鏈中。在一些實施態樣中，多樣性存在T細胞受體中。在一些實施態樣中，多樣性存在選自由α、β、γ及δ受體所組成之群組的T細胞受體中之一者中。在一些實施態樣中，T細胞受體(TCR) α及/或β的表現增加。在一些實施態樣中，T細胞受體(TCR) α的表現增加。在一些實施態樣中，T細胞受體(TCR) β的表現增加。在一些實施態樣中，TCRab(即TCRα/β)的表現增加。

在例如諸如圖9步驟A所述之分割或消化腫瘤片段之後，將所得細胞在有利TIL但不利腫瘤及其他細胞生長的條件下於含有IL-2的血清中培養。在一些實施態樣中，將腫瘤消化物培育於2 mL孔中的包含去活化人AB血清及6000 IU/mL IL-2的培養基中。將此初代細胞族群培養一段數天的期間(通常3至14天)，導致通常約1×10⁸ 個主體TIL細胞的主體TIL族群。在一些實施態樣中，將此初代細胞族群培養一段7至14天的期間，導致通常約1×10⁸ 個主體TIL細胞的主體TIL族群。在一些實施態樣中，將此初代細胞族群培養一段10至14天的期間，導致通常約1×10⁸ 個主體TIL細胞的主體TIL族群。在一些實施態樣中，將此初代細胞族群培養一段約11天的期間，導致通常約1×10⁸ 主體TIL細胞的主體TIL族群。

在一較佳實施態樣中，TIL的擴增可使用如以下及本文所述的初始主體TIL擴增步驟(例如諸如該些圖9步驟B中所述者，其可包括稱為REP前的過程)實施，隨後實施如以下步驟D及本文所述的第二擴增(步驟D，包括稱為快速擴增規程(REP)步驟的過程)，隨後實施可選的冷凍保存，及隨後實施如以下及本文所述的第二步驟D(包括稱為再刺激REP步驟的過程)。獲自此過程的TIL可如本文所述之可選地以表型特徵及代謝參數鑑定。

在TIL培養起始於24孔板(例如使用Costar 24孔平底細胞培養板(Corning Incorporated, Corning, NY))的實施態樣中，各孔可接種1×10⁶ 個腫瘤消化細胞或一個腫瘤片段於含IL-2 (6000 IU/mL; Chiron Corp., Emeryville, CA)的2 mL完全培養基(CM)中。在一些實施態樣中，腫瘤片段係介於約1 mm³ 與10 mm³ 之間。

在一些實施態樣中，第一擴增培養基稱為「CM」(培養基的縮寫)。在一些實施態樣中，步驟B的CM係由補充有10%人AB血清、25 mM HEPES及10 mg/mL建它黴素之含GlutaMAX的RPMI 1640組成。在培養起始於具有40 mL容量及10 cm² 氣體可通透性矽底的氣體可通透性培養瓶(例如G-Rex10；Wilson Wolf Manufacturing, New Brighton, MN)的實施態樣中(圖1)，各培養瓶裝載10至40×10⁶ 個存活腫瘤消化物細胞或5至30個腫瘤片段於10至40 mL之含IL-2的CM中。G-Rex10及24孔板皆培育於37℃下5% CO₂ 的增濕培育箱中，在培養起始後5天，將半數培養基移除並置換成新鮮CM及IL-2，且在第5天後，每2至3天更換半數培養基。

在製備腫瘤片段後，將所得細胞(即片段)在有利TIL但不利腫瘤及其他細胞生長的條件下培養於含有IL-2的血清中。在一些實施態樣中，將腫瘤消化物培育於2 mL孔中的包含去活化人AB血清(或在一些如本文概述之情況下，在aAPC細胞族群存在下)及6000 IU/mL IL-2的培養基中。將此初代細胞族群培養一段數天的期間(通常10至14天)，導致通常約1×10⁸ 主體TIL細胞的主體TIL族群。在一些實施態樣中，在第一擴增期間的生長培養基包含IL-2或其變體。在一些實施態樣中，該IL係重組人IL-2 (rhIL-2)。在一些實施態樣中，IL-2原液的1 mg小瓶具有20至30×10⁶ IU/mg的比活性。在一些實施態樣中，IL-2原液的1 mg小瓶具有20×10⁶ IU/mg的比活性。在一些實施態樣中，IL-2原液的1 mg小瓶具有25×10⁶ IU/mg的比活性。在一些實施態樣中，IL-2原液的1 mg小瓶具有30×10⁶ IU/mg的比活性。在一些實施態樣中，IL-2原液具有4至8×10⁶ IU/mg的IL-2之最終濃度。在一些實施態樣中，IL-2原液具有5至7×10⁶ IU/mg的IL-2之最終濃度。在一些實施態樣中，IL-2原液具有6×10⁶ IU/mg的IL-2之最終濃度。在一些實施態樣中，IL-2原液係如實例4所述製備。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約10,000 IU/mL的IL-2、約9,000 IU/mL的IL-2、約8,000 IU/mL的IL-2、約7,000 IU/mL的IL-2、約6000 IU/mL的IL-2或約5,000 IU/mL的IL-2。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約9,000 IU/mL的IL-2至約5,000 IU/mL的IL-2。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約8,000 IU/mL的IL-2至約6,000 IU/mL的IL-2。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約7,000 IU/mL的IL-2至約6,000 IU/mL的IL-2。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約6,000 IU/mL的IL-2。在一實施態樣中，細胞培養基進一步包含IL-2。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約3000 IU/mL的IL-2。在一實施態樣中，細胞培養基進一步包含IL-2。在較佳實施態樣中，細胞培養基包含約3000 IU/mL的IL-2。在一實施態樣中，細胞培養基包含約1000 IU/mL、約1500 IU/mL、約2000 IU/mL、約2500 IU/mL、約3000 IU/mL、約3500 IU/mL、約4000 IU/mL、約4500 IU/mL、約5000 IU/mL、約5500 IU/mL、約6000 IU/mL、約6500 IU/mL、約7000 IU/mL、約7500 IU/mL或約8000 IU/mL的IL-2。在一實施態樣中，細胞培養基包含介於1000與2000 IU/mL之間、介於2000與3000 IU/mL之間、介於3000與4000 IU/mL之間、介於4000與5000 IU/mL之間、介於5000與6000 IU/mL之間、介於6000與7000 IU/mL之間、介於7000與8000 IU/mL之間或約8000 IU/mL的IL-2。

在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約500 IU/mL的IL-15、約400 IU/mL的IL-15、約300 IU/mL的IL-15、約200 IU/mL的IL-15、約180 IU/mL的IL-15、約160 IU/mL的IL-15、約140 IU/mL的IL-15、約120 IU/mL的IL-15或約100 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約500 IU/mL的IL-15至約100 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約400 IU/mL的IL-15至約100 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約300 IU/mL的IL-15至約100 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約200 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約180 IU/mL的IL-15。在一實施態樣中，細胞培養基進一步包含IL-15。在較佳實施態樣中，細胞培養基包含約180 IU/mL的IL-15。

在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約20 IU/mL的IL-21、約15 IU/mL的IL-21、約12 IU/mL的IL-21、約10 IU/mL的IL-21、約5 IU/mL的IL-21、約4 IU/mL的IL-21、約3 IU/mL的IL-21、約2 IU/mL的IL-21、約1 IU/mL的IL-21或約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約20 IU/mL的IL-21至約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約15 IU/mL的IL-21至約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約12 IU/mL的IL-21至約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約10 IU/mL的IL-21至約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約5 IU/mL的IL-21至約1 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第一擴增培養基包含約2 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約1 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約0.5 IU/mL的IL-21。在一實施態樣中，細胞培養基進一步包含IL-21。在較佳實施態樣中，細胞培養基包含約1 IU/mL的IL-21。

在一實施態樣中，細胞培養基包含OKT-3抗體。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約30 ng/mL的OKT-3抗體。在一實施態樣中，細胞培養基包含約0.1 ng/mL、約0.5 ng/mL、約1 ng/mL、約2.5 ng/mL、約5 ng/mL、約7.5 ng/mL、約10 ng/mL、約15 ng/mL、約20 ng/mL、約25 ng/mL、約30 ng/mL、約35 ng/mL、約40 ng/mL、約50 ng/mL、約60 ng/mL、約70 ng/mL、約80 ng/mL、約90 ng/mL、約100 ng/mL、約200 ng/mL、約500 ng/mL及約1 µg/mL的OKT-3抗體。在一實施態樣中，細胞培養基包含介於0.1 ng/mL與1 ng/mL之間、介於1 ng/mL與5 ng/mL之間、介於5 ng/mL與10 ng/mL之間、介於10 ng/mL與20 ng/mL之間、介於20 ng/mL與30 ng/mL之間、介於30 ng/mL與40 ng/mL之間、介於40 ng/mL與50 ng/mL之間及介於50 ng/mL與100 ng/mL之間的OKT-3抗體。在一些實施態樣中，細胞培養基不包含OKT-3抗體。在一些實施態樣中，OKT-3抗體係莫羅單抗。

在一些實施態樣中，細胞培養基包含一或多種TNFRSF促效劑於細胞培養基中。在一些實施態樣中，TNFRSF促效劑包含4-1BB促效劑。在一些實施態樣中，TNFRSF促效劑係4-1BB促效劑，且4-1BB促效劑係選自由烏瑞魯單抗、烏圖木單抗、EU-101、融合蛋白及彼等之片段、衍生物、變體、生物類似物及組合所組成之群組。在一些實施態樣中，TNFRSF促效劑的添加濃度足以在細胞培養基中達成介於0.1 µg/mL與100 µg/mL之間的濃度。在一些實施態樣中，TNFRSF促效劑的添加濃度足以在細胞培養基中達成介於20 µg/mL與40 µg/mL之間的濃度。

在一些實施態樣中，除了一或多種TNFRSF促效劑之外，細胞培養基進一步包含初始濃度約3000 IU/mL的IL-2及初始濃度約30 ng/mL的OKT-3抗體，且其中一或多種TNFRSF促效劑包含4-1BB促效劑。

在一些實施態樣中，第一擴增培養基稱為「CM」(培養基的縮寫)。在一些實施態樣中，其稱為CM1(培養基1)。在一些實施態樣中，CM係由補充有10%人AB血清、25 mM HEPES及10 mg/mL建它黴素之含GlutaMAX的RPMI 1640組成。在培養起始於具有40 mL容量及10 cm² 氣體可通透矽底的氣體可通透培養瓶(例如G-Rex10；Wilson Wolf Manufacturing, New Brighton, MN)的實施態樣中(圖1)，各培養瓶裝載10至40x 10⁶ 存活腫瘤消化細胞或5至30個腫瘤片段於10至40mL之含IL-2的CM中。G-Rex10及24孔板皆培育於37℃下5% CO₂ 的增濕培育箱中，在培養起始後5天，將半數培養基移除並置換成新鮮CM及IL-2，且在第5天後，每2至3天更換半數培養基。在一些實施態樣中，CM係實例中所述的CM1，見實例5。在一些實施態樣中，第一擴增在初始細胞培養基或第一細胞培養基中發生。在一些實施態樣中，初始細胞培養基或第一細胞培養基包含IL-2。

在一些實施態樣中，第一擴增(包括諸如例如該些在圖9步驟B所述之過程，其可包括該些有時稱為REP前者)過程縮短至3至14天，如實例及圖式中所討論。在一些實施態樣中，第一擴增(包括諸如例如該些在圖9步驟B所述之過程，其可包括該些有時稱為REP前者)縮短至7至14天，如圖5、6、8、9、10及11所示，以及包括例如圖9步驟B所述之擴增。在一些實施態樣中，步驟B之第一擴增縮短至10至14天，如圖5、6、8、9、10及11所示。在一些實施態樣中，第一擴增縮短至11天，如圖5、6、8、9、10及11所示，以及包括例如圖9步驟B所述之擴增。

在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行1天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行2天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行3天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行4天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行5天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行6天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行7天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行8天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行9天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行10天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行11天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行12天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行13天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行1天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行2天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行3天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行4天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行5天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行6天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行7天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行8天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行9天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行10天至11天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行11天。

在一些實施態樣中，採用IL-2、IL-7、IL-15及/或IL-21之組合作為在第一擴增期間之組合。在一些實施態樣中，IL-2、IL-7、IL-15及/或IL-21以及任何彼等之組合可被包括在第一擴增期間，包括例如在根據圖9步驟B製程期間以及如本文所述者。在一些實施態樣中，採用IL-2、IL-15及IL-21之組合作為在第一擴增期間之組合。在一些實施態樣中，IL-2、IL-15及IL-21以及任何彼等之組合可被包括在根據圖9步驟B製程期間以及如本文所述者。

在一些實施態樣中，第一擴增(包括稱為REP前的過程；例如根據圖9之步驟B)過程縮短至3至14天，如圖式中所討論。在一些實施態樣中，步驟B之第一擴增縮短至7至14天，如圖5、6、8、9、10及11所示。在一些實施態樣中，步驟B之第一擴增縮短至10至14天，如圖5、6、8、9、10及11所示。在一些實施態樣中，第一擴增縮短至11天，如圖5、6、8、9、10及11所示。

在一些實施態樣中，第一擴增(例如根據圖9之步驟B)係於密閉系統生物反應器中實施。在一些實施態樣中，採用密閉系統進行如本文所述之TIL擴增。在一些實施態樣中，採用單一生物反應器。在一些實施態樣中，所採用的單一生物反應器係例如G-REX -10或G-REX -100。在一些實施態樣中，密閉系統生物反應器係單一生物反應器。 1. 細胞介素及其他添加劑

本文所述之擴增方法通常使用具有高劑量細胞介素(特別是IL-2)的培養基，如所屬技術領域中所知。

替代地，使用細胞介素之組合以進行TIL的快速擴增及或第二擴增是額外可能的，如同美國專利申請公開案第US 2017/0107490 A1號中描述的二種或超過二種IL-2、IL-15及IL-21的組合，其揭露以引用方式併入本文中。因此，可能的組合包括IL-2及IL-15、IL-2及IL-21、IL-15及IL-21及IL-2或IL-15及IL-21，其中後者在許多實施態樣中具有特定用途。使用細胞介素之組合特別有利於淋巴細胞產生，且特別是如其中所述的T細胞。

在一實施態樣中，步驟B亦可包括添加OKT-3抗體或莫羅單抗至如本文他處所述之培養基。在一實施態樣中，步驟B亦可包括添加4-1BB促效劑至如本文他處所述之培養基。在一實施態樣中，步驟B亦可包括添加OX-40促效劑至如本文他處所述之培養基。在其他實施態樣中，添加劑諸如過氧化物酶體增生活化受體γ輔活化子I-α-促效劑包括增生活化受體(PPAR)-γ促效劑諸如四氫噻唑二酮化合物可用於步驟B期間之培養基，如美國專利申請公開案第US 2019/0307796 A1號(其揭露係以引用方式併入本文中)所述。C. 步驟 C ：第一擴增至第二擴增的轉變

在一些情況下，獲自第一擴增的主體TIL族群包括例如獲自例如圖9所示之步驟B的TIL族群可使用本文以下討論的規程立即冷凍保存。替代地，獲自第一擴增的TIL族群(稱為第二TIL族群)可進行第二擴增(其可包括有時稱為REP的擴增)且接著如以下討論進行冷凍保存。類似地，在其中基因修飾的TIL將用於療法中的情況中，第一TIL族群(有時稱為主體TIL族群)或第二TIL族群(其在一些實施態樣中可包括稱為REP TIL族群的族群)可在擴增之前或在第一擴增之後且在第二擴增之前進行基因修飾以用於合適治療。

在一些實施態樣中，獲自第一擴增(例如圖9所示之步驟B)的TIL係經儲存直到為了選擇而測定表型。在一些實施態樣中，獲自第一擴增(例如圖9所示之步驟B)的TIL不經儲存且直接進行第二擴增。在一些實施態樣中，獲自第一擴增的TIL在第一擴增之後且在第二擴增之前不經冷凍保存。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的約3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的約3天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的約4天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的約4天至10天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的約7天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的約14天。

在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的1天至14天。在一些實施態樣中，第一TIL擴增可進行2天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的3天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的4天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的5天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的6天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的7天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的8天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的9天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的10天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的11天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的12天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的13天至14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的14天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的1天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的2天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的3天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的4天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的5天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的6天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的7天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的8天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的9天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的10天至11天。在一些實施態樣中，從第一擴增轉變至第二擴增發生在當碎斷發生後的11天。

在一些實施態樣中，TIL在第一擴增之後且在第二擴增之前不經儲存，且TIL直接進行第二擴增(例如在一些實施態樣中，在如圖9所示的從步驟B至步驟D的轉變期間並不經儲存)。在一些實施態樣中，轉變在如本文所述之密閉系統中發生。在一些實施態樣中，來自第一擴增的TIL(第二TIL族群)直接進行第二擴增而無轉變期。

在一些實施態樣中，從第一擴增至第二擴增的轉變(例如根據圖9之步驟C)係於密閉系統生物反應器中實施。在一些實施態樣中，採用密閉系統進行如本文所述之TIL擴增。在一些實施態樣中，採用單一生物反應器。在一些實施態樣中，所採用的單一生物反應器係例如G-REX -10或G-REX -100。在一些實施態樣中，密閉系統生物反應器係單一生物反應器。D. 步驟 D ：第二擴增

在一些實施態樣中，TIL細胞族群在收集及初始主體處理(例如圖9所示之步驟A及步驟B)及轉變(稱為步驟C)之後於數量上擴增。此進一步擴增在本文中稱為第二擴增，其可包括在所屬技術領域中通常稱為快速擴增過程(REP；如圖9步驟D所示之過程)的擴增過程。第二擴增通常使用包含一些組分(包括餵養細胞、細胞介素來源及抗CD3抗體)的培養基在氣體可通透性容器中完成。

在一些實施態樣中，TIL的第二擴增或第二TIL擴增(其可包括有時稱為REP的擴增；以及如圖9步驟D所示之過程)可使用任何所屬技術領域中具有通常知識者所知之TIL培養瓶或容器實施。在一些實施態樣中，第二TIL擴增可進行7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。在一些實施態樣中，第二TIL擴增可進行約7天至約14天。在一些實施態樣中，第二TIL擴增可進行約8天至約14天。在一些實施態樣中，第二TIL擴增可進行約9天至約14天。在一些實施態樣中，第二TIL擴增可進行約10天至約14天。在一些實施態樣中，第二TIL擴增可進行約11天至約14天。在一些實施態樣中，第二TIL擴增可進行約12天至約14天。在一些實施態樣中，第二TIL擴增可進行約13天至約14天。在一些實施態樣中，第二TIL擴增可進行約14天。

在一實施態樣中，第二擴增可在氣體可通透性容器中使用本揭露之方法(包括例如稱為REP之擴增；以及如圖9步驟D所示之過程)實施。例如，TIL可在介白素-2 (IL-2)或介白素-15 (IL-15)存在下使用非特異性T細胞受體刺激快速擴增。非特異性T細胞受體刺激可包括例如抗CD3抗體諸如約30 ng/ml的OKT3、小鼠單株抗CD3抗體(可購自Ortho-McNeil, Raritan, NJ or Miltenyi Biotech, Auburn, CA)或UHCT-1(可購自BioLegend, San Diego, CA, USA)。TIL可藉由在第二擴增期間包括一或多種癌症的抗原(包括彼等之抗原性部分諸如表位)來擴增以誘導進一步TIL活體外刺激，該等抗原可選地在T細胞生長因子諸如300 IU/mL IL-2或IL-15存在下可選地自載體表現，諸如人白血球抗原A2 (HLA-A2)結合肽，例如0.3 μM MART-1 :26-35 (27 L)或gpl 00:209-217 (210M)。其他合適抗原可包括例如NY-ESO-1、TRP-1、TRP-2、酪胺酸酶癌症抗原、MAGE-A3、SSX-2及VEGFR2或彼等之抗原性部分。TIL亦可藉由用脈衝至HLA-A2表現性抗原呈現細胞上的相同癌症抗原再刺激來快速擴增。替代地，TIL可進一步用例如經照射的自體淋巴細胞或用經照射的HLA-A2+同種異體淋巴細胞及IL-2再刺激。在一些實施態樣中，再刺激發生為第二擴增的一部分。在一些實施態樣中，第二擴增在經照射的自體淋巴細胞或經照射的HLA-A2+同種異體淋巴細胞及IL-2的存在下發生。

在一實施態樣中，細胞培養基進一步包含IL-2。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約3000 IU/mL的IL-2。在一實施態樣中，細胞培養基包含約1000 IU/mL、約1500 IU/mL、約2000 IU/mL、約2500 IU/mL、約3000 IU/mL、約3500 IU/mL、約4000 IU/mL、約4500 IU/mL、約5000 IU/mL、約5500 IU/mL、約6000 IU/mL、約6500 IU/mL、約7000 IU/mL、約7500 IU/mL或約8000 IU/mL的IL-2。在一實施態樣中，細胞培養基包含介於1000與2000 IU/mL之間、介於2000與3000 IU/mL之間、介於3000與4000 IU/mL之間、介於4000與5000 IU/mL之間、介於5000與6000 IU/mL之間、介於6000與7000 IU/mL之間、介於7000與8000 IU/mL之間或介於8000 IU/mL的IL-2。

在一實施態樣中，細胞培養基包含OKT3抗體。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約30 ng/mL的OKT3抗體。在一實施態樣中，細胞培養基包含約0.1 ng/mL、約0.5 ng/mL、約1 ng/mL、約2.5 ng/mL、約5 ng/mL、約7.5 ng/mL、約10 ng/mL、約15 ng/mL、約20 ng/mL、約25 ng/mL、約30 ng/mL、約35 ng/mL、約40 ng/mL、約50 ng/mL、約60 ng/mL、約70 ng/mL、約80 ng/mL、約90 ng/mL、約100 ng/mL、約200 ng/mL、約500 ng/mL及約1 µg/mL的OKT3抗體。在一實施態樣中，細胞培養基包含介於0.1 ng/mL與1 ng/mL之間、介於1 ng/mL與5 ng/mL之間、介於5 ng/mL與10 ng/mL之間、介於10 ng/mL與20 ng/mL之間、介於20 ng/mL與30 ng/mL之間、介於30 ng/mL與40 ng/mL之間、介於40 ng/mL與50 ng/mL之間及介於50 ng/mL與100 ng/mL之間的OKT3抗體。

在一些實施態樣中，採用IL-2、IL-7、IL-15及/或IL-21之組合作為在第二擴增期間之組合。在一些實施態樣中，IL-2、IL-7、IL-15及/或IL-21以及任何彼等之組合可被包括在第二擴增期間，包括例如在根據圖9步驟D製程期間以及如本文所述者。在一些實施態樣中，採用IL-2、IL-15及IL-21之組合作為在第二擴增期間之組合。在一些實施態樣中，IL-2、IL-15及IL-21以及任何彼等之組合可被包括在根據圖9步驟D製程期間以及如本文所述者。

在一些實施態樣中，第二擴增可在包含IL-2、OKT-3及抗原呈現餵養細胞的經補充的細胞培養基中進行。在一些實施態樣中，第二擴增在經補充的細胞培養基中發生。在一些實施態樣中，經補充的細胞培養基包含IL-2、OKT-3及抗原呈現餵養細胞。在一些實施態樣中，第二細胞培養基包含IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC；亦稱為抗原呈現餵養細胞)。在一些實施態樣中，第二擴增在包含IL-2、OKT-3及抗原呈現餵養細胞(即抗原呈現細胞)的細胞培養基中發生。

在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約500 IU/mL的IL-15、約400 IU/mL的IL-15、約300 IU/mL的IL-15、約200 IU/mL的IL-15、約180 IU/mL的IL-15、約160 IU/mL的IL-15、約140 IU/mL的IL-15、約120 IU/mL的IL-15或約100 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約500 IU/mL的IL-15至約100 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約400 IU/mL的IL-15至約100 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約300 IU/mL的IL-15至約100 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約200 IU/mL的IL-15。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約180 IU/mL的IL-15。在一實施態樣中，細胞培養基進一步包含IL-15。在較佳實施態樣中，細胞培養基包含約180 IU/mL的IL-15。

在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約20 IU/mL的IL-21、約15 IU/mL的IL-21、約12 IU/mL的IL-21、約10 IU/mL的IL-21、約5 IU/mL的IL-21、約4 IU/mL的IL-21、約3 IU/mL的IL-21、約2 IU/mL的IL-21、約1 IU/mL的IL-21或約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約20 IU/mL的IL-21至約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約15 IU/mL的IL-21至約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約12 IU/mL的IL-21至約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約10 IU/mL的IL-21至約0.5 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約5 IU/mL的IL-21至約1 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，第二擴增培養基包含約2 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約1 IU/mL的IL-21。在一些實施態樣中，細胞培養基包含約0.5 IU/mL的IL-21。在一實施態樣中，細胞培養基進一步包含IL-21。在較佳實施態樣中，細胞培養基包含約1 IU/mL的IL-21。

在一些實施態樣中，抗原呈現餵養細胞(APC)係PBMC。在一實施態樣中，在快速擴增及/或第二擴增中TIL對PBMC及/或抗原呈現細胞的比例係約1比25、約1比50、約1比100、約1比125、約1比150、約1比175、約1比200、約1比225、約1比250、約1比275、約1比300、約1比325、約1比350、約1比375、約1比400或約1比500。在一實施態樣中，在快速擴增及/或第二擴增中TIL對PBMC的比例係介於1比50及1比300之間。在一實施態樣中，在快速擴增及/或第二擴增中TIL對PBMC的比例係介於1比100及1比200之間。

在一實施態樣中，REP及/或第二擴增係在培養瓶中實施，其中主體TIL與100或200倍過量的去活化餵養細胞、30 mg/mL OKT3抗CD3抗體及3000 IU/mL IL-2在150 ml培養基中混合。置換培養基(通常經由抽吸新鮮培養基置換2/3培養基)直到細胞轉移至替代性生長室。替代性生長室包括G-REX培養瓶及如以下更完整討論之氣體可通透容器。

在一些實施態樣中，第二擴增(其可包括稱為REP製程的過程)縮短至7至14天，如實例及圖式中所討論。在一些實施態樣中，第二擴增縮短至11天。

在一實施態樣中，REP及/或第二擴增可使用T-175培養瓶及如先前描述之氣體可通透性袋子(Tran,et al. ,J. Immunother. 2008, 31, 742-51; Dudley,et al. ,J. Immunother. 2003, 26, 332-42)或氣體可通透性培養器皿(G-Rex培養瓶)實施。在一些實施態樣中，第二擴增(包括稱為快速擴增之擴增)係於T-175培養瓶中實施，且可將懸浮於150 mL的培養基中之約1 x 10⁶ TIL添加至各T-175培養瓶中。TIL可培養於CM及AIM-V培養基的1比1混合物中，補充有每mL 3000 IU的IL-2及每ml 30 ng的抗CD3。T-175培養瓶可在37℃下在5% CO₂ 中培育。一半的培養基可在第5天使用含有每mL 3000 IU的IL-2之50/50培養基交換。在一些實施態樣中，在第7天可將來自二個T-175培養瓶的細胞組合於3 L袋子中並將300 mL含有5%人AB血清及每mL 3000 IU的IL-2之AIM V添加至300 ml的TIL懸浮液。各袋中的細胞數量每天或每二天計算一次，且添加新鮮培養基以保持細胞計數介於0.5與2.0 x 10⁶ 個細胞/mL。

在一實施態樣中，第二擴增(其可包括稱為REP之擴增，以及該些於圖9步驟D中指稱者)可在500 mL容量的具有100 cm氣體可通透性矽底之氣體可通透性培養瓶(G-Rex 100，可購自Wilson Wolf Manufacturing Corporation, New Brighton, MN, USA)中實施，5×10⁶ 或10×10⁶ TIL可與PBMC在400 mL的補充有5%人AB血清、每mL 3000 IU的IL-2及每ml 30 ng的抗CD3 (OKT3)之50/50培養基中培養。G-Rex 100培養瓶可在37℃下在5% CO₂ 中培育。在第5天，可將250 mL的上清液移除並放入離心瓶且在1500 rpm (491×g)下離心10分鐘。可將TIL團塊用150 mL的含有5%人AB血清、每mL 3000 IU的IL-2之新鮮培養基再懸浮，並添加回原始G-Rex 100培養瓶。當TIL在G-Rex 100培養瓶中連續擴增時，在第7天可將各G-Rex 100中之TIL懸浮於存在於各培養瓶中之300 mL的培養基中，且可將細胞懸浮液分成可用於接種3個G-Rex 100培養瓶之3個100 mL等分試樣。接著可將150 mL之含有5%人AB血清及每mL 3000 IU的IL-2的AIM-V添加至各培養瓶。G-Rex 100培養瓶可在37℃下在5% CO₂ 中培育，且在4天之後可將150 mL之含有每mL 3000 IU的IL-2的AIM-V添加至各G-REX 100培養瓶。細胞可在培養的第14天收集。

在一實施態樣中，第二擴增(包括稱為REP之擴增)係在培養瓶中實施，其中主體TIL與100或200倍過量的去活化餵養細胞、30 mg/mL OKT3抗CD3抗體及3000 IU/mL IL-2在150 ml培養基中混合。在一些實施態樣中，進行置換培養基直到細胞轉移至替代性生長室。在一些實施態樣中，藉由抽吸新鮮培養基置換掉2/3的培養基。在一些實施態樣中，替代性生長室包括G-REX培養瓶及如以下更完整討論之氣體可通透容器。

在一實施態樣中，第二擴增(包括稱為REP之擴增)係經實施且進一步包含其中選擇具有優異腫瘤反應性之TIL的步驟。可使用任何所屬技術領域中已知之選擇方法。例如，美國專利申請公開案第2016/0010058 A1號(其揭露以引用方式併入本文中)所述之方法可用於選擇優異腫瘤反應性之TIL。

可選地，在第二擴增(包括稱為REP擴增之擴增)之後可使用所屬技術領域中已知之標準測定實施細胞存活性測定。例如，可在主體TIL的樣本上進行台盼藍排除測定，其選擇性標示死亡細胞且允許存活性評估。在一些實施態樣中，TIL樣本可使用Cellometer K2自動細胞計數器(Nexcelom Bioscience, Lawrence, MA)計算及判定存活性。在一些實施態樣中，存活性係根據例如實例15所述之細胞計數器K2 Image Cytometer自動細胞計數器規程判定。

在一些實施態樣中，TIL之第二擴增(包括稱為REP之擴增)可使用如先前描述之T-175培養瓶及氣體可通透性袋子(Tran KQ, Zhou J, Durflinger KH, et al.,2008 ,J Immunother. , 31:742-751及Dudley ME, Wunderlich JR, Shelton TE, et al. 2003,J Immunother. , 26:332-342)或氣體可通透性G-Rex培養瓶實施。在一些實施態樣中，第二擴增使用培養瓶實施。在一些實施態樣中，第二擴增使用氣體可通透性G-Rex培養瓶實施。在一些實施態樣中，第二擴增係於T-175培養瓶中實施，且約1 x 10⁶ TIL懸浮於150 mL的培養基中且將其添加至各T-175培養瓶中。將TIL與作為「餵養」細胞之經照射(50 Gy)的同種異體PBMC以1比100的比例培養，且將細胞培養於補充有3000 IU/mL的IL-2及30 ng/mL的抗CD3之CM與AIM-V培養基的1比1混合物(50/50培養基)中。T-175培養瓶係在37℃下在5% CO₂ 中培育。在一些實施態樣中，一半的培養基在第5天使用含有3000 IU/mL的IL-2之50/50培養基更換。在一些實施態樣中，在第7天將來自2個T-175培養瓶的細胞組合於3 L袋子中，並將300 mL含有5%人AB血清及3000 IU/mL的IL-2之AIM-V添加至300 mL的TIL懸浮液。各袋中的細胞數量可每天或每二天計算一次，且可添加新鮮培養基以保持細胞計數介於約0.5與約2.0 x 10⁶ 個細胞/mL。

在一些實施態樣中，第二擴增(包括稱為REP之擴增)在500 mL容量的具有100 cm² 氣體可通透性矽底之培養瓶(G-Rex 100, Wilson Wolf)中實施(圖1)，將約5x10⁶ 或10x10⁶ TIL與經照射的同種異體PBMC以1至100的比例培養於400 mL的補充有3000 IU/mL的IL-2及30 ng/ mL的抗CD3之50/50培養基中。G-Rex 100培養瓶係在37℃下在5% CO₂ 中培育。在一些實施態樣中，在第5天將250 mL的上清液移除並放入離心瓶且在1500 rpm (491g)下離心10分鐘。接著可將TIL團塊用150 mL的含有3000 IU/mL的IL-2之新鮮50/50培養基再懸浮，並添加回原始G-Rex 100培養瓶。在將TIL在G-Rex 100培養瓶中連續擴增的實施態樣中，在第7天將各G-Rex 100中之TIL懸浮於存在於各培養瓶中之300 mL的培養基中，且將細胞懸浮液分成用於接種3個G-Rex 100培養瓶之三個100 mL等分試樣。接著將150 mL之含有5%人AB血清及3000 IU/mL的IL-2的AIM-V添加至各培養瓶。G-Rex 100培養瓶在37℃下在5% CO₂ 中培育，且在4天之後將150 mL之含有3000 IU/mL的IL-2的AIM-V添加至各G-Rex 100培養瓶。細胞在培養的第14天收集。

T及B淋巴細胞的多樣抗原受體係藉由有限但大量的基因區段的體細胞重組產生。這些基因區段：V(可變區)、D(多樣區)、J(聯結區)及C(恆定區)決定免疫球蛋白及T細胞受體(TCR)的結合特異性及下游應用。本發明提供產生展現及增加T細胞貯庫多樣性之TIL的方法。在一些實施態樣中，藉由本方法獲得之TIL展現增加的T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，在第二擴增獲得之TIL展現增加的T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，增加多樣性是增加免疫球蛋白多樣性及/或T細胞受體多樣性。在一些實施態樣中，多樣性存在免疫球蛋白中、存在免疫球蛋白重鏈中。在一些實施態樣中，多樣性存在免疫球蛋白中、存在免疫球蛋白輕鏈中。在一些實施態樣中，多樣性存在T細胞受體中。在一些實施態樣中，多樣性存在選自由α、β、γ及δ受體所組成之群組的T細胞受體中之一者中。在一些實施態樣中，T細胞受體(TCR) α及/或β的表現增加。在一些實施態樣中，T細胞受體(TCR) α的表現增加。在一些實施態樣中，T細胞受體(TCR) β的表現增加。在一些實施態樣中，TCRab(即TCRα/β)的表現增加。

在一些實施態樣中，第二擴增培養基(例如有時稱為CM2或第二細胞培養基)包含IL-2、OKT-3以及如以下更詳細討論之抗原呈現餵養細胞(APC)。

在一些實施態樣中，第二擴增(例如根據圖9之步驟D)係於密閉系統生物反應器中實施。在一些實施態樣中，採用密閉系統進行如本文所述之TIL擴增。在一些實施態樣中，採用單一生物反應器。在一些實施態樣中，所採用的單一生物反應器係例如G-REX -10或G-REX -100。在一些實施態樣中，密閉系統生物反應器係單一生物反應器。 1. 餵養細胞及抗原呈現細胞

在一實施態樣中，本文所述之第二擴增程序(例如包括諸如該些圖9步驟D所述以及該些稱為REP之擴增)在REP TIL擴增期間及/或在第二擴增期間需要過量的餵養細胞。在許多實施態樣中，餵養細胞係獲自健康血液供體之標準全血單位的周邊血液單核細胞(PBMC)。PBMC使用標準方法諸如Ficoll-Paque梯度分離法獲得。

一般來說，異體PBMC係經由照射或熱處理去活化，且如實例(特別是實例14)所述用於REP程序，其提供用於評估照射異體PBMC的複製不能之例示性規程。

在一些實施態樣中，如果第14天存活細胞總數小於在REP第0天及/或第二擴增第0天(即第二擴增的起始日)放入培養中的初始存活細胞數量，則認為PBMC是複製不能且接受其用於本文所述之TIL擴增程序。見例如實施態樣14。

在一些實施態樣中，如果在OKT3及IL-2存在下培養第7天及第14天的存活細胞總數並未從在REP第0天及/或第二擴增第0天(即第二擴增的起始日)放入培養中的初始存活細胞數量增加，則認為PBMC是複製不能且接受其用於本文所述之TIL擴增程序。在一些實施態樣中，PBMC在30 ng/ml OKT3抗體及3000 IU/ml IL-2存在下培養。見例如實施態樣13。

在一些實施態樣中，如果在OKT3及IL-2存在下培養第7天及第14天的存活細胞總數並未從在REP第0天及/或第二擴增第0天(即第二擴增的起始日)放入培養中的初始存活細胞數量增加，則認為PBMC是複製不能且接受其用於本文所述之TIL擴增程序。在一些實施態樣中，PBMC在5至60 ng/ml OKT3抗體及1000至6000 IU/ml IL-2存在下培養。在一些實施態樣中，PBMC在10至50 ng/ml OKT3抗體及2000至5000 IU/ml IL-2存在下培養。在一些實施態樣中，PBMC在20至40 ng/ml OKT3抗體及2000至4000 IU/ml IL-2存在下培養。在一些實施態樣中，PBMC在25至35 ng/ml OKT3抗體及2500至3500 IU/ml IL-2存在下培養。

在一些實施態樣中，抗原呈現餵養細胞係PBMC。在一些實施態樣中，抗原呈現餵養細胞係人工抗原呈現餵養細胞。在一實施態樣中，在第二擴增中TIL對抗原呈現餵養細胞的比例係約1比25、約1比50、約1比100、約1比125、約1比150、約1比175、約1比200、約1比225、約1比250、約1比275、約1比300、約1比325、約1比350、約1比375、約1比400或約1比500。在一實施態樣中，在第二擴增中TIL對抗原呈現餵養細胞的比例係介於1比50及1比300之間。在一實施態樣中，在第二擴增中TIL對抗原呈現餵養細胞的比例係介於1比100及1比200之間。

在一實施態樣中，本文所述之第二擴增程序需要約2.5x10⁹ 個餵養細胞對約100x10⁶ 個TIL的比例。在另一實施態樣中，本文所述之第二擴增程序需要約2.5x10⁹ 個餵養細胞對約50x10⁶ 個TIL的比例。在又一實施態樣中，本文所述之第二擴增程序需要約2.5x10⁹ 個餵養細胞對約25x10⁶ 個TIL。

在一實施態樣中，本文所述之第二擴增程序在第二擴增期間需要過量的餵養細胞。在許多實施態樣中，餵養細胞係獲自健康血液供體之標準全血單位的周邊血液單核細胞(PBMC)。PBMC使用標準方法諸如Ficoll-Paque梯度分離法獲得。在一實施態樣中，使用人工抗原呈現(aAPC)細胞代替PBMC。

一般來說，異體PBMC經由輻照或熱處理去活化，且用於本文所述之TIL擴增程序，包括在圖5、6、8、9、10及11中所述之例示性程序。

在一實施態樣中，在第二擴增中使用人工抗原呈現細胞來置換PBMC或與PBMC組合使用。 2. 細胞介素

替代地，使用細胞介素之組合以進行TIL的快速擴增及或第二擴增是額外可能的，如同大致上在國際專利公開號WO 2015/189356及W國際專利公開號WO 2015/189357中概述的二種或超過二種IL-2、IL-15及IL-21的組合，特此明白將全文以引用方式併入本文中。因此，可能的組合包括IL-2及IL-15、IL-2及IL-21、IL-15及IL-21及IL-2、IL-15及IL-21，其中後者在許多實施態樣中具有特定用途。使用細胞介素之組合特別有利於淋巴細胞產生，且特別是如其中所述的T細胞。 3. 抗CD3抗體

在一些實施態樣中，用於本文所述之擴增方法(包括該些稱為REP者，見例如圖9)中之培養基亦包括抗CD3抗體。抗CD3抗體與IL-2之組合誘導TIL族群中之T細胞活化及細胞分裂。此效應可見於全長抗體以及Fab及F(ab’)2片段，前者通常較佳；見例如Tsoukaset al. ,J. Immunol. 1985, 135, 1719，全文特此以引用方式併入本文中。

所屬技術領域中具有通常知識者將會理解，一些合適的抗人CD3抗體可用於本發明，包括來自各種哺乳動物的抗人CD3多株及單株抗體，包括但不限於鼠、人、靈長動物、大鼠及犬抗體。在具體實施態樣中，使用OKT3抗CD3抗體(可購自Ortho-McNeil, Raritan, NJ or Miltenyi Biotech, Auburn, CA)。E. 步驟 E ：收集 TIL

在第二擴增步驟之後，可收集細胞。在一些實施態樣中，在例如圖9所提供之一、二、三、四個或超過四個擴增步驟之後收集TIL。在一些實施態樣中，在例如圖9所提供之二個擴增步驟之後收集TIL。

TIL可以任何適當且無菌之方式收集，包括例如離心。收集TIL之方法係所屬技術領域中廣知的且本過程可採用任何該等已知之方法。在一些實施態樣中，使用自動化系統收集TIL。

細胞收集器及/或細胞處理系統可購自多個來源，包括例如Fresenius Kabi、Tomtec Life Science、Perkin Elmer及Inotech Biosystems International, Inc.。本方法可採用任何基於細胞的收集器。在一些實施態樣中，細胞收集器及/或細胞處理系統是基於膜的細胞收集器。在一些實施態樣中，細胞收集是經由細胞處理系統諸如LOVO系統(由Fresenius Kabi製造)進行。用語「LOVO細胞處理系統」亦指由任何供應商製造的任何可將包含細胞的溶液泵送通過無菌及/或密閉系統環境中的膜或過濾器諸如旋轉膜或旋轉過濾器的儀器或裝置，允許連續流動及細胞處理以在無需團塊化下移除上清液或細胞培養基。在一些實施態樣中，細胞收集器及/或細胞處理系統可在密閉無菌系統中實施細胞分離、洗滌、流體交換、濃縮及/或其他細胞處理步驟。

在一些實施態樣中，收集(例如根據圖9之步驟E)係於密閉系統生物反應器中實施。在一些實施態樣中，採用密閉系統進行如本文所述之TIL擴增。在一些實施態樣中，採用單一生物反應器。在一些實施態樣中，所採用的單一生物反應器係例如G-REX -10或G-REX -100。在一些實施態樣中，密閉系統生物反應器係單一生物反應器。F. 步驟 F ：最終調配物 / 轉移至輸注袋

在如圖9以例示性順序提供且如以上及本文詳細概述之步驟A至E完成之後，將細胞轉移至容器以用於投予至病患。在一些實施態樣中，一旦使用上述之擴增方法獲得治療足夠數量的TIL後，將彼等轉移至容器以用於投予至病患。

在一實施態樣中，使用本揭露之APC擴增之TIL係作為醫藥組成物投予至病患。在一實施態樣中，醫藥組成物係TIL於無菌緩衝劑中之懸浮液。使用本揭露之PBMC擴增之TIL可藉由所屬技術領域中已知之任何合適途徑投予。在一些實施態樣中，T細胞係作為單一動脈內或靜脈內輸注投予，其較佳地持續大約30至60分鐘。其他合適的投予途徑包括腹膜內、鞘內及淋巴內。 1. 醫藥組成物、劑量及給藥方案

在一實施態樣中，使用本揭露之方法擴增之TIL係作為醫藥組成物投予至病患。在一實施態樣中，醫藥組成物係TIL於無菌緩衝劑中之懸浮液。使用本揭露之PBMC擴增之TIL可藉由所屬技術領域中已知之任何合適途徑投予。在一些實施態樣中，T細胞係作為單一動脈內或靜脈內輸注投予，其較佳地持續大約30至60分鐘。其他合適的投予途徑包括腹膜內、鞘內及淋巴內投予。

可投予任何合適劑量的TIL。在一些實施態樣中，投予約2.3×10¹⁰ 至約13.7×10¹⁰ 個TIL，平均約7.8×10¹⁰ 個TIL，特別是如果癌症係黑色素瘤。在一實施態樣中，投予約1.2×10¹⁰ 至約4.3×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，投予約3×10¹⁰ 至約12×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，投予約4×10¹⁰ 至約10×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，投予約5×10¹⁰ 至約8×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，投予約6×10¹⁰ 至約8×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，投予約7×10¹⁰ 至約8×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，治療有效劑量係約2.3×10¹⁰ 至約13.7×10¹⁰ 個。在一些實施態樣中，治療有效劑量係約7.8×10¹⁰ 個TIL，特別是癌症係黑色素瘤。在一些實施態樣中，治療有效劑量係約1.2×10¹⁰ 至約4.3×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，治療有效劑量係約3×10¹⁰ 至約12×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，治療有效劑量係約4×10¹⁰ 至約10×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，治療有效劑量係約5×10¹⁰ 至約8×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，治療有效劑量係約6×10¹⁰ 至約8×10¹⁰ 個TIL。在一些實施態樣中，治療有效劑量係約7×10¹⁰ 至約8×10¹⁰ 個TIL。

在一些實施態樣中，提供於本發明之醫藥組成物中的TIL之數量係約1×10⁶ 、2×10⁶ 、3×10⁶ 、4×10⁶ 、5×10⁶ 、6×10⁶ 、7×10⁶ 、8×10⁶ 、9×10⁶ 、1×10⁷ 、2×10⁷ 、3×10⁷ 、4×10⁷ 、5×10⁷ 、6×10⁷ 、7×10⁷ 、8×10⁷ 、9×10⁷ 、1×10⁸ 、2×10⁸ 、3×10⁸ 、4×10⁸ 、5×10⁸ 、6×10⁸ 、7×10⁸ 、8×10⁸ 、9×10⁸ 、1×10⁹ 、2×10⁹ 、3×10⁹ 、4×10⁹ 、5×10⁹ 、6×10⁹ 、7×10⁹ 、8×10⁹ 、9×10⁹ 、1×10¹⁰ 、2×10¹⁰ 、3×10¹⁰ 、4×10¹⁰ 、5×10¹⁰ 、6×10¹⁰ 、7×10¹⁰ 、8×10¹⁰ 、9×10¹⁰ 、1×10¹¹ 、2×10¹¹ 、3×10¹¹ 、4×10¹¹ 、5×10¹¹ 、6×10¹¹ 、7×10¹¹ 、8×10¹¹ 、9×10¹¹ 、1×10¹² 、2×10¹² 、3×10¹² 、4×10¹² 、5×10¹² 、6×10¹² 、7×10¹² 、8×10¹² 、9×10¹² 、1×10¹³ 、2×10¹³ 、3×10¹³ 、4×10¹³ 、5×10¹³ 、6×10¹³ 、7×10¹³ 、8×10¹³ 及9×10¹³ 。在一實施態樣中，提供於本發明之醫藥組成物中的TIL之數量係在1×10⁶ 至5×10⁶ 、5×10⁶ 至1×10⁷ 、1×10⁷ 至5×10⁷ 、5×10⁷ 至1×10⁸ 、1×10⁸ 至5×10⁸ 、5×10⁸ 至1×10⁹ 、1×10⁹ 至5×10⁹ 、5×10⁹ 至1×10¹⁰ 、1×10¹⁰ 至5×10¹⁰ 、5×10¹⁰ 至1×10¹¹ 、5×10¹¹ 至1×10¹² 、1×10¹² 至5×10¹² 及5×10¹² 至1×10¹³ 的範圍內。

在一些實施態樣中，提供於本發明之醫藥組成物中的TIL之濃度係小於例如100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%、0.09%、0.08%、0.07%、0.06%、0.05%、0.04%、0.03%、0.02%、0.01%、0.009%、0.008%、0.007%、0.006%、0.005%、0.004%、0.003%、0.002%、0.001%、0.0009%、0.0008%、0.0007%、0.0006%、0.0005%、0.0004%、0.0003%、0.0002%或0.0001% w/w、w/v或v/v的醫藥組成物。

在一些實施態樣中，提供於本發明之醫藥組成物中的TIL之濃度係大於90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、19.75%、19.50%、19.25%、19%、18.75%、18.50%、18.25%、18%、17.75%、17.50%、17.25%、17%、16.75%、16.50%、16.25%、16%、15.75%、15.50%、15.25%、15%、14.75%、14.50%、14.25%、14%、13.75%、13.50%、13.25%、13%、12.75%、12.50%、12.25%、12%、11.75%、11.50%、11.25%、11%、10.75%、10.50%、10.25%、10%、9.75%、9.50%、9.25%、9%、8.75%、8.50%、8.25%、8%、7.75%、7.50%、7.25%、7%、6.75%、6.50%、6.25%、6%、5.75%、5.50%、5.25%、5%、4.75%、4.50%、4.25%、4%、3.75%、3.50%、3.25%、3%、2.75%、2.50%、2.25%、2%、1.75%、1.50%、125%、1%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%、0.09%、0.08%、0.07%、0.06%、0.05%、0.04%、0.03%、0.02%、0.01%、0.009%、0.008%、0.007%、0.006%、0.005%、0.004%、0.003%、0.002%、0.001%、0.0009%、0.0008%、0.0007%、0.0006%、0.0005%、0.0004%、0.0003%、0.0002%或0.0001% w/w、w/v或v/v的醫藥組成物。

在一些實施態樣中，提供於本發明之醫藥組成物中的TIL之濃度係在約0.0001%至約50%、約0.001%至約40%、約0.01%至約30%、約0.02%至約29%、約0.03%至約28%、約0.04%至約27%、約0.05%至約26%、約0.06%至約25%、約0.07%至約24%、約0.08%至約23%、約0.09%至約22%、約0.1%至約21%、約0.2%至約20%、約0.3%至約19%、約0.4%至約18%、約0.5%至約17%、約0.6%至約16%、約0.7%至約15%、約0.8%至約14%、約0.9%至約12%或約1%至約10% w/w、w/v或v/v的醫藥組成物的範圍內。

在一些實施態樣中，提供於本發明之醫藥組成物中的TIL之濃度係在約0.001%至約10%、約0.01%至約5%、約0.02%至約4.5%、約0.03%至約4%、約0.04%至約3.5%、約0.05%至約3%、約0.06%至約2.5%、約0.07%至約2%、約0.08%至約1.5%、約0.09%至約1%、約0.1%至約0.9% w/w、w/v或v/v的醫藥組成物的範圍內。

在一些實施態樣中，提供於本發明之醫藥組成物中的TIL之量等於或小於10 g、9.5 g、9.0 g、8.5 g、8.0 g、7.5 g、7.0 g、6.5 g、6.0 g、5.5 g、5.0 g、4.5 g、4.0 g、3.5 g、3.0 g、2.5 g、2.0 g、1.5 g、1.0 g、0.95 g、0.9 g、0.85 g、0.8 g、0.75 g、0.7 g、0.65 g、0.6 g、0.55 g、0.5 g、0.45 g、0.4 g、0.35 g、0.3 g、0.25 g、0.2 g、0.15 g、0.1 g、0.09 g、0.08 g、0.07 g、0.06 g、0.05 g、0.04 g、0.03 g、0.02 g、0.01 g、0.009 g、0.008 g、0.007 g、0.006 g、0.005 g、0.004 g、0.003 g、0.002 g、0.001 g、0.0009 g、0.0008 g、0.0007 g、0.0006 g、0.0005 g、0.0004 g、0.0003 g、0.0002 g或0.0001 g。

在一些實施態樣中，提供於本發明之醫藥組成物中的TIL之量大於0.0001 g、0.0002 g、0.0003 g、0.0004 g、0.0005 g、0.0006 g、0.0007 g、0.0008 g、0.0009 g、0.001 g、0.0015 g、0.002 g、0.0025 g、0.003 g、0.0035 g、0.004 g、0.0045 g、0.005 g、0.0055 g、0.006 g、0.0065 g、0.007 g、0.0075 g、0.008 g、0.0085 g、0.009 g、0.0095 g、0.01 g、0.015 g、0.02 g、0.025 g、0.03 g、0.035 g、0.04 g、0.045 g、0.05 g、0.055 g、0.06 g、0.065 g、0.07 g、0.075 g、0.08 g、0.085 g、0.09 g、0.095 g、0.1 g、0.15 g、0.2 g、0.25 g、0.3 g、0.35 g、0.4 g、0.45 g、0.5 g、0.55 g、0.6 g、0.65 g、0.7 g、0.75 g、0.8 g、0.85 g、0.9 g、0.95 g、1 g、1.5 g、2 g、2.5、3 g、3.5、4 g、4.5 g、5 g、5.5 g、6 g、6.5 g、7 g、7.5 g、8 g、8.5 g、9 g、9.5 g或10 g。

提供於本發明之醫藥組成物中的TIL在寬廣劑量範圍內有效。確切劑量將取決於投予途徑、化合物的投予形式、所欲治療之個體的性別及年齡、所欲治療之個體的體重及主治醫師的偏好及經驗。若適當亦可使用TIL的臨床建立劑量。使用在本文中之方法所投予之醫藥組成物的量(諸如TIL的劑量)將取決於所欲治療之人或哺乳動物、病症或病況的嚴重性、投予速率、活性醫藥成分的體內配置(disposition)及處方醫師的考量。

在一些實施態樣中，TIL可以單一劑量投予。該投予可為注射，例如靜脈注射。在一些實施態樣中，TIL可以多個劑量投予。給藥可為每年1次、2次、3次、4次、5次、6次或超過6次。給藥可為一個月一次、每二週一次、每週一次或每二天一次。TIL的投予可視需要繼續進行。

在一些實施態樣中，TIL的有效劑量係約1×10⁶ 、2×10⁶ 、3×10⁶ 、4×10⁶ 、5×10⁶ 、6×10⁶ 、7×10⁶ 、8×10⁶ 、9×10⁶ 、1×10⁷ 、2×10⁷ 、3×10⁷ 、4×10⁷ 、5×10⁷ 、6×10⁷ 、7×10⁷ 、8×10⁷ 、9×10⁷ 、1×10⁸ 、2×10⁸ 、3×10⁸ 、4×10⁸ 、5×10⁸ 、6×10⁸ 、7×10⁸ 、8×10⁸ 、9×10⁸ 、1×10⁹ 、2×10⁹ 、3×10⁹ 、4×10⁹ 、5×10⁹ 、6×10⁹ 、7×10⁹ 、8×10⁹ 、9×10⁹ 、1×10¹⁰ 、2×10¹⁰ 、3×10¹⁰ 、4×10¹⁰ 、5×10¹⁰ 、6×10¹⁰ 、7×10¹⁰ 、8×10¹⁰ 、9×10¹⁰ 、1×10¹¹ 、2×10¹¹ 、3×10¹¹ 、4×10¹¹ 、5×10¹¹ 、6×10¹¹ 、7×10¹¹ 、8×10¹¹ 、9×10¹¹ 、1×10¹² 、2×10¹² 、3×10¹² 、4×10¹² 、5×10¹² 、6×10¹² 、7×10¹² 、8×10¹² 、9×10¹² 、1×10¹³ 、2×10¹³ 、3×10¹³ 、4×10¹³ 、5×10¹³ 、6×10¹³ 、7×10¹³ 、8×10¹³ 及9×10¹³ 。在一些實施態樣中，TIL的有效劑量係在1×10⁶ 至5×10⁶ 、5×10⁶ 至1×10⁷ 、1×10⁷ 至5×10⁷ 、5×10⁷ 至1×10⁸ 、1×10⁸ 至5×10⁸ 、5×10⁸ 至1×10⁹ 、1×10⁹ 至5×10⁹ 、5×10⁹ 至1×10¹⁰ 、1×10¹⁰ 至5×10¹⁰ 、5×10¹⁰ 至1×10¹¹ 、5×10¹¹ 至1×10¹² 、1×10¹² 至5×10¹² 及5×10¹² 至1×10¹³ 的範圍內。

在一些實施態樣中，TIL的有效劑量係在約0.01 mg/kg至約4.3 mg/kg、約0.15 mg/kg至約3.6 mg/kg、約0.3 mg/kg至約3.2 mg/kg、約0.35 mg/kg至約2.85 mg/kg、約0.15 mg/kg至約2.85 mg/kg、約0.3 mg至約2.15 mg/kg、約0.45 mg/kg至約1.7 mg/kg、約0.15 mg/kg至約1.3 mg/kg、約0.3 mg/kg至約1.15 mg/kg、約0.45 mg/kg至約1 mg/kg、約0.55 mg/kg至約0.85 mg/kg、約0.65 mg/kg至約0.8 mg/kg、約0.7 mg/kg至約0.75 mg/kg、約0.7 mg/kg至約2.15 mg/kg、約0.85 mg/kg至約2 mg/kg、約1 mg/kg至約1.85 mg/kg、約1.15 mg/kg至約1.7 mg/kg、約1.3 mg/kg mg至約1.6 mg/kg、約1.35 mg/kg至約1.5 mg/kg、約2.15 mg/kg至約3.6 mg/kg、約2.3 mg/kg至約3.4 mg/kg、約2.4 mg/kg至約3.3 mg/kg、約2.6 mg/kg至約3.15 mg/kg、約2.7 mg/kg至約3 mg/kg、約2.8 mg/kg至約3 mg/kg或約2.85 mg/kg至約2.95 mg/kg的範圍內。

在一些實施態樣中，TIL的有效劑量係在約1 mg至約500 mg、約10 mg至約300 mg、約20 mg至約250 mg、約25 mg至約200 mg、約1 mg至約50 mg、約5 mg至約45 mg、約10 mg至約40 mg、約15 mg至約35 mg、約20 mg至約30 mg、約23 mg至約28 mg、約50 mg至約150 mg、約60 mg至約140 mg、約70 mg至約130 mg、約80 mg至約120 mg、約90 mg至約110 mg或約95 mg至約105 mg、約98 mg至約102 mg、約150 mg至約250 mg、約160 mg至約240 mg、約170 mg至約230 mg、約180 mg至約220 mg、約190 mg至約210 mg、約195 mg至約205 mg或約198至約207 mg的範圍內。

有效量的TIL可以單一或多個劑量經由任何具有類似效用的可接受的藥劑投予模式投予，包括鼻內及經皮途徑、經由動脈內注射、靜脈內、腹膜內、腸胃外、肌肉內、皮下、局部、經由移植或經由吸入。G. 可選的細胞存活性分析

可選地，在第一擴增步驟B之後可使用所屬技術領域中已知之標準測定實施細胞存活性測定。例如，可在主體TIL的樣本上進行台盼藍排除測定，其選擇性標示死亡細胞且允許存活性評估。其他用於測試存活性之測定可包括但不限於阿爾瑪藍測定及MTT測定。 1. 細胞計數、存活性、流式細胞術

在一些實施態樣中，測量細胞計數及/或存活性。標誌之表現(諸如但不限於CD3、CD4、CD8及CD56以及任何其他本文揭示或描述者)可藉由流式細胞術使用FACSCanto^TM 流式細胞儀(BD Biosciences)以抗體(例如但不限於該些可購自BD Bio-sciences (BD Biosciences, San Jose, CA)者)測量。細胞可使用拋棄式c-晶片血球計(VWR, Batavia, IL)手動計數且存活性可使用任何所屬技術領域中已知之方法包括但不限於台盼藍染色評估。

在一些情況下，主體TIL族群可使用以下討論之規程立即冷凍保存。替代地，主體TIL族群可如以下討論進行REP且接著冷凍保存。類似地，在其中基因修飾的TIL將用於療法中的情況中，主體或REP TIL族群可進行基因修飾以用於合適治療。 2. 細胞培養

在一實施態樣中，用於擴增TIL之方法可包括使用約5,000 mL至約25,000 mL的細胞介質、約5,000 mL至約10,000 mL的細胞介質或約5,800 mL至約8,700 mL的細胞介質。在一實施態樣中，擴增TIL數量使用不超過一種細胞培養基。可使用任何合適的細胞培養基，例如AIM-V細胞介質(L-麩醯胺酸、50 μM鏈黴素硫酸鹽及10 μM硫酸建它黴素)細胞培養基(Invitrogen, Carlsbad CA)。就此而言，本發明方法有利地減少擴增TIL數量所需的培養基的量及培養基類型的數量。在一實施態樣中，擴增TIL數量可包含頻繁性不超過每三或四天一次地添加新鮮細胞培養基至細胞(亦稱為餵養細胞)。在氣體可通透性容器中擴增細胞數量藉由減少擴增細胞所需的餵養頻率，簡化擴增細胞數量所需之程序。

在一實施態樣中，在第一及/或第二氣體可通透性容器中之細胞培養基係未經過濾。使用未經過濾細胞培養基可簡化擴增細胞數量所需的程序。在一實施態樣中，在第一及/或第二氣體可通透性容器中之細胞培養基缺乏β-巰乙醇(BME)。

在一實施態樣中，該方法的期間包含獲得來自哺乳動物之腫瘤組織樣本；在其中含有細胞介質之第一氣體可通透容器中培養腫瘤組織樣本；獲得來自腫瘤組織樣本之TIL；在其中含有細胞介質之第二氣體可通透容器中使用aAPC擴增TIL數量一段約14至約42天例如約28天的期間。

在一實施態樣中，TIL係在氣體可通透性容器中擴增。已使用氣體可通透性容器來擴增TIL，且使用PBMC、使用所屬技術領域中已知之方法、組成物及裝置，包括該些描述於美國專利申請公開案第2005/0106717 A1號者，其揭露以引用方式併入本文中。在一實施態樣中，TIL係在氣體可通透性袋子中擴增。在一實施態樣中，TIL使用在氣體可通透性袋子中擴增TIL的細胞擴增系統擴增，諸如Xuri細胞擴增系統W25 (GE Healthcare)。在一實施態樣中，TIL使用在氣體可通透性袋子中擴增TIL的細胞擴增系統擴增，諸如WAVE生物反應器系統，亦稱為Xuri細胞擴增系統W5 (GE Healthcare)。在一實施態樣中，細胞擴增系統包括氣體可通透細胞袋子，該袋子的體積選自由約100 mL、約200 mL、約300 mL、約400 mL、約500 mL、約600 mL、約700 mL、約800 mL、約900 mL、約1 L、約2 L、約3 L、約4 L、約5 L、約6 L、約7 L、約8 L、約9 L及約10 L所組成之群組。在一實施態樣中，TIL可在G-Rex培養瓶(可購自Wilson Wolf Manufacturing)中擴增。該等實施態樣允許細胞族群自約5x10⁵ 細胞/cm² 擴增至介於10x10⁶ 與30x10⁶ 細胞/cm² 之間。在一實施態樣中，此擴增係於不添加新鮮細胞培養基至細胞(亦稱為餵養細胞)下進行。在一實施態樣中，此係未進行餵養，只要G-Rex培養瓶中的培養基位在約10 cm的高度。在一實施態樣中，不進行餵養，但添加一或多種細胞介素。在一實施態樣中，細胞介素可為作為推注添加，不需要將細胞介素與培養基混合。該等容器、裝置及方法係所屬技術領域中已知且已用於擴增TIL，且包括該些描述於美國專利申請公開案第US 2014/0377739A1號、國際專利公開號WO 2014/210036 A1、美國專利申請公開案第 us 2013/0115617 A1號、國際專利公開號WO 2013/188427 A1、美國專利申請公開案第US 2011/0136228 A1號、美國專利第US 8,809,050 B2號、國際專利公開號WO 2011/072088 A2、美國專利申請公開案第US 2016/0208216 A1號、美國專利申請公開案第US 2012/0244133 A1號、國際專利公開號WO 2012/129201 A1、美國專利申請公開案第US 2013/0102075 A1號、美國專利第US 8,956,860 B2號、國際專利公開號WO 2013/173835 A1、美國專利申請公開案第US 2015/0175966 A1號，彼等揭露以引用方式併入本文中。該等過程亦描述於Jinet al. ,J. Immunotherapy, 2012 , 35:283-292。可選的TIL基因工程改造

在一些實施態樣中，TIL可選地經基因工程改造以包括額外功能性，包括但不限於高親和性T細胞受體(TCR)，例如靶向腫瘤相關抗原(諸如MAGE-1、HER2或NY-ESO-1)之TCR，或與腫瘤相關細胞表面分子(例如間皮素)或細胞系限制細胞表面分子(例如CD19)結合之嵌合抗原受體(CAR)。H. 可選的 TIL 冷凍保存

如上所討論且例示於如圖9中提供的步驟A至E，冷凍保存可發生在TIL擴增過程中的許多時點。在一些實施態樣中，在第二擴增(例如根據圖9步驟D所提供)後的經擴增TIL族群可經冷凍保存。冷凍保存通常可藉由將TIL族群放入冷凍溶液(例如85%補體去活化AB血清及15%二甲亞碸(DMSO))中完成。將細胞溶液放入冷凍小瓶中且儲存在-80℃下24小時，可選的轉移至氣態氮冷凍器中冷凍保存。見Sadeghi,et al., Acta Oncologica 2013, 52, 978-986。在一些實施態樣中，TIL係冷凍保存於5% DMSO中。在一些實施態樣中，TIL係冷凍保存於細胞培養基加5% DMSO中。在一些實施態樣中，TIL係根據實例8及9所提供之方法冷凍保存。

當適當時，將細胞自冷凍器移出並在37℃水浴中解凍，直到大約4/5的溶液解凍。將細胞大致上重懸於完全培養基中且可選地洗滌一或多次。在一些實施態樣中，解凍的TIL可經計數且依所屬技術領域中已知之方式評估存活性。I. 經擴增之 TIL 的表型特徵

在一些實施態樣中，分析TIL在擴增後的許多表型標誌的表現，包括該些在本文及實例中描述者。在一實施態樣中，檢查一或多個表型標誌的表現。在一些實施態樣中，TIL的表型特徵是在步驟B的第一擴增之後分析。在一些實施態樣中，TIL的表型特徵是在步驟C的轉變期間分析。在一些實施態樣中，TIL的表型特徵是在根據步驟C的轉變期間及冷凍保存之後分析。在一些實施態樣中，TIL的表型特徵是在根據步驟D的第二擴增之後分析。在一些實施態樣中，TIL的表型特徵是在根據步驟D的二次或超過二次擴增之後分析。在一些實施態樣中，標誌係選自由下列所組成之群組：TCRab(即TCRα/β)、CD57、CD28、CD4、CD27、CD56、CD8a、CD45RA、CD8a、CCR7、CD4、CD3、CD38及HLA-DR。在一些實施態樣中，標誌係選自由下列所組成之群組：TCRab(即TCRα/β)、CD57、CD28、CD4、CD27、CD56及CD8a。在一實施態樣中，標誌係選自由下列所組成之群組：CD45RA、CD8a、CCR7、CD4、CD3、CD38及HLA-DR。在一些實施態樣中，檢查一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三或十四個標誌的表現。在一些實施態樣中，檢查各組中一或多個標誌的表現。在一些實施態樣中，新鮮TIL相較於解凍的TIL維持一或多個HLA-DR、CD38及CD69表現(即不展現統計顯著差異)。在一些實施態樣中，解凍的TIL維持TIL之活化狀態。

在一實施態樣中，測量一或多個調節標誌的表現。在一些實施態樣中，調節標誌係選自由下列所組成之群組：CD137、CD8a、Lag3、CD4、CD3、PD-1、TIM-3、CD69、CD8a、TIGIT、CD4、CD3、KLRG1及CD154。在一些實施態樣中，調節標誌係選自由下列所組成之群組：CD137、CD8a、Lag3、CD4、CD3、PD-1及TIM-3。在一些實施態樣中，調節標誌係選自由下列所組成之群組：CD69、CD8a、TIGIT、CD4、CD3、KLRG1及CD154。在一些實施態樣中，解凍的TIL相較於新鮮TIL降低調節分子表現。在一些實施態樣中，解凍的TIL相較於新鮮TIL降低調節分子LAG-3及TIM-3的表現。在一些實施態樣中，CD4、CD8、NK、TCRαβ表現無顯著差異。在一些實施態樣中，新鮮TIL相較於解凍的TIL之CD4、CD8、NK、TCRαβ表現及/或記憶標誌無顯著差異。在一些實施態樣中，藉由本文提供之方法(如例如圖9所例示者)產生之TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備之TIL之間的CD4、CD8、NK、TCRαβ表現無顯著差異。

在一些實施態樣中，在任何步驟(包括該些以上討論者或如例如圖9所提供者)期間，並未實施基於CD4、CD8及/或NK、TCRαβ表現選擇第一TIL族群、第二TIL族群、第三TIL族群、經收集的TIL族群及/或治療性TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD4、CD8及/或NK、TCRαβ選擇第一TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD4、CD8及/或NK、TCRαβ表現選擇第二TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD4、CD8及/或NK、TCRαβ表現選擇第三TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD4、CD8及/或NK、TCRαβ表現選擇經收集的TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD4、CD8及/或NK、TCRαβ表現選擇治療性TIL族群。

在一實施態樣中，在用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)成治療性TIL族群之方法中的任何步驟(a)至(f)期間，並未實施基於CD4、CD8及/或NK、TCRαβ表現選擇第一TIL族群、第二TIL族群、第三TIL族群或經收集的TIL族群，該方法包含： (a) 藉由將獲自病患的腫瘤樣本處理成多個腫瘤片段而自該病患所切除的腫瘤獲得第一TIL族群； (b) 將該等腫瘤片段加入密閉系統； (c) 藉由在包含IL-2之細胞培養基中培養該第一TIL族群以實施第一擴增而產生第二TIL族群，其中該第一擴增是在提供第一氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，其中該第一擴增實施約3至14天以獲得該第二TIL族群，其中該第二TIL族群於數量上高於該第一TIL族群至少50倍，且其中自步驟(b)轉變至步驟(c)無需打開該系統而發生； (d) 藉由對該第二TIL族群的該細胞培養基補充額外的IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC)以實施第二擴增而產生第三TIL族群，其中該第二擴增實施約7至14天以獲得該第三TIL族群，其中該第三TIL族群係治療性TIL族群，該治療性TIL族群包含相對於該第二TIL族群增加的效應T細胞及/或中央記憶T細胞子族群，其中該第二擴增是在提供第二氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，且其中自步驟(c)轉變至步驟(d)無需打開該系統而發生； (e) 收集獲自步驟(d)之治療性TIL族群，其中自步驟(d)轉變至步驟(e)無需打開該系統而發生；及 (f) 將得自步驟(e)之該經收集的TIL族群轉移至輸注袋，其中自步驟(e)轉移至步驟(f)無需打開該系統而發生。

在一實施態樣中，在用於治療癌症個體之方法中的任何步驟(a)至(h)期間，並未實施基於CD4、CD8及/或NK、TCRαβ表現選擇第一TIL族群、第二TIL族群、第三TIL族群或經收集的TIL族群，該方法包含投予經擴增之腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)，該方法包含： (a) 藉由將獲自病患的腫瘤樣本處理成多個腫瘤片段而自個體所切除的腫瘤獲得第一TIL族群； (b) 將該等腫瘤片段加入密閉系統； (c) 藉由在包含IL-2之細胞培養基中培養該第一TIL族群以實施第一擴增而產生第二TIL族群，其中該第一擴增是在提供第一氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，其中該第一擴增實施約3至14天以獲得該第二TIL族群，其中該第二TIL族群於數量上高於該第一TIL族群至少50倍，且其中自步驟(b)轉變至步驟(c)無需打開該系統而發生； (d) 藉由對該第二TIL族群的該細胞培養基補充額外的IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC)以實施第二擴增而產生第三TIL族群，其中該第二擴增實施約7至14天以獲得該第三TIL族群，其中該第三TIL族群係治療性TIL族群，該治療性TIL族群包含相對於該第二TIL族群增加的效應T細胞及/或中央記憶T細胞子族群，其中該第二擴增是在提供第二氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，且其中自步驟(c)轉變至步驟(d)無需打開該系統而發生； (e) 收集獲自步驟(d)之治療性TIL族群，其中自步驟(d)轉變至步驟(e)無需打開該系統而發生；及 (f) 將得自步驟(e)之該經收集的TIL族群轉移至輸注袋，其中自步驟(e)轉移至步驟(f)無需打開該系統而發生； (g) 可選地使用冷凍保存過程將得自步驟(f)之包含該經收集的TIL族群之該輸注袋冷凍保存；及 (h) 投予治療有效劑量的來自步驟(g)之該輸注袋的該第三TIL族群至該病患。

在一些實施態樣中，記憶標誌係選自由CCR7及CD62L所組成之群組。

在一些實施態樣中，新鮮TIL相較於解凍的TIL之存活性係至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%。在一些實施態樣中，新鮮及解凍的TIL兩者之存活性係大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%、大於95%或大於98%。在一些實施態樣中，新鮮及解凍的產物兩者之存活性係大於80%、大於81%、大於82%、大於83%、大於84%、大於85%、大於86%、大於87%、大於88%、大於89%或大於90%。在一些實施態樣中，新鮮及解凍的產物兩者之存活性係大於86%。

在一實施態樣中，亦可使用細胞介素釋放測定評估再刺激的TIL的細胞介素釋放。在一些實施態樣中，可評估TIL因應OKT3或自體腫瘤消化物共培養刺激的干擾素-7 (IFN-7)分泌。例如，在採用OKT3刺激之實施態樣中，將TIL徹底洗滌，並以1 x 10⁵ 個細胞於0.2 mL CM中在96孔平底板(用經磷酸鹽緩衝鹽水稀釋之0.1或1.0 µg/mL之OKT3預塗佈)製備二重複孔。在隔夜培育之後，收集上清液並用ELISA (Pierce/Endogen, Woburn, MA)測量上清液中之IFN-7。以共培養測定而言，將1 x 10⁵ 個TIL細胞與自體腫瘤細胞(1:1比例)放入至96孔板中。在24小時培育之後，收集上清液且可藉由例如ELISA定量IFN-7釋放。

細胞表面生物標誌之流式細胞分析：將TIL樣本等分用於細胞表面標誌之流式細胞分析，見例如實例7、8及9。

在一些實施態樣中，評估TIL的各種調節標誌。在一些實施態樣中，調節標誌係選自由下列所組成之群組：TCR α/β、CD56、CD27、CD28、CD57、CD45RA、CD45RO、CD25、CD127、CD95、IL-2R-、CCR7、CD62L、KLRG1及CD122。在一些實施態樣中，調節標誌係TCR α/β。在一些實施態樣中，調節標誌係CD56。在一些實施態樣中，調節標誌係CD27。在一些實施態樣中，調節標誌係CD28。在一些實施態樣中，調節標誌係CD57。在一些實施態樣中，調節標誌係CD45RA。在一些實施態樣中，調節標誌係CD45RO。在一些實施態樣中，調節標誌係CD25。在一些實施態樣中，調節標誌係CD127。在一些實施態樣中，調節標誌係CD95。在一些實施態樣中，調節標誌係IL-2R-。在一些實施態樣中，調節標誌係CCR7。在一些實施態樣中，調節標誌係CD62L。在一些實施態樣中，調節標誌係KLRG1。在一些實施態樣中，調節標誌係CD122。

在一實施態樣中，分析經擴增之TIL的許多表型標誌的表現，包括該些在本文及實例中描述者。在一實施態樣中，檢查一或多個表型標誌的表現。在一些實施態樣中，標誌係選自由下列所組成之群組：TCRab(即TCRα/β)、CD57、CD28、CD4、CD27、CD56、CD8a、CD45RA、CD8a、CCR7、CD4、CD3、CD38及HLA-DR。在一些實施態樣中，標誌係選自由下列所組成之群組：TCRab(即TCRα/β)、CD57、CD28、CD4、CD27、CD56及CD8a。在一實施態樣中，標誌係選自由下列所組成之群組：CD45RA、CD8a、CCR7、CD4、CD3、CD38及HLA-DR。在一些實施態樣中，檢查一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三或十四個標誌的表現。在一些實施態樣中，檢查各組中一或多個標誌的表現。在一些實施態樣中，新鮮TIL相較於解凍的TIL維持一或多個HLA-DR、CD38及CD69表現(即不展現統計顯著差異)。在一些實施態樣中，解凍的TIL維持TIL之活化狀態。

在一實施態樣中，測量一或多個調節標誌的表現。在一些實施態樣中，調節標誌係選自由下列所組成之群組：CD137、CD8a、Lag3、CD4、CD3、PD1、TIM-3、CD69、CD8a、TIGIT、CD4、CD3、KLRG1及CD154。在一些實施態樣中，調節標誌係選自由下列所組成之群組：CD137、CD8a、Lag3、CD4、CD3、PD1及TIM-3。在一些實施態樣中，調節標誌係選自由下列所組成之群組：CD69、CD8a、TIGIT、CD4、CD3、KLRG1及CD154。在一些實施態樣中，解凍的TIL相較於新鮮TIL降低調節分子表現。在一些實施態樣中，解凍的TIL相較於新鮮TIL降低調節分子LAG-3及TIM-3的表現。在一些實施態樣中，CD4、CD8、NK、TCRαβ表現無顯著差異。在一些實施態樣中，新鮮TIL相較於解凍的TIL之CD4、CD8、NK、TCRαβ表現及/或記憶標誌無顯著差異。

在一些實施態樣中，展現大於3000 pg/10⁶ TIL至300000 pg/10⁶ TIL或超過300000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於3000 pg/10⁶ TIL、大於5000 pg/10⁶ TIL、大於7000 pg/10⁶ TIL、大於9000 pg/10⁶ TIL、大於11000 pg/10⁶ TIL、大於13000 pg/10⁶ TIL、大於15000 pg/10⁶ TIL、大於17000 pg/10⁶ TIL、大於19000 pg/10⁶ TIL、大於20000 pg/10⁶ TIL、大於40000 pg/10⁶ TIL、大於60000 pg/10⁶ TIL、大於80000 pg/10⁶ TIL、大於100000 pg/10⁶ TIL、大於120000 pg/10⁶ TIL、大於140000 pg/10⁶ TIL、大於160000 pg/10⁶ TIL、大於180000 pg/10⁶ TIL、大於200000 pg/10⁶ TIL、大於220000 pg/10⁶ TIL、大於240000 pg/10⁶ TIL、大於260000 pg/10⁶ TIL、大於280000 pg/10⁶ TIL、大於300000 pg/10⁶ TIL或超過300000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於3000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於5000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於7000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於9000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於11000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於13000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於15000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於17000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於19000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於20000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於40000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於60000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於80000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於100000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於120000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於140000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於160000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於180000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於200000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於220000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於240000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於260000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於280000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於300000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於3000 pg/10⁶ TIL至300000 pg/10⁶ TIL或超過300000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於3000 pg/10⁶ TIL、大於5000 pg/10⁶ TIL、大於7000 pg/10⁶ TIL、大於9000 pg/10⁶ TIL、大於11000 pg/10⁶ TIL、大於13000 pg/10⁶ TIL、大於15000 pg/10⁶ TIL、大於17000 pg/10⁶ TIL、大於19000 pg/10⁶ TIL、大於20000 pg/10⁶ TIL、大於40000 pg/10⁶ TIL、大於60000 pg/10⁶ TIL、大於80000 pg/10⁶ TIL、大於100000 pg/10⁶ TIL、大於120000 pg/10⁶ TIL、大於140000 pg/10⁶ TIL、大於160000 pg/10⁶ TIL、大於180000 pg/10⁶ TIL、大於200000 pg/10⁶ TIL、大於220000 pg/10⁶ TIL、大於240000 pg/10⁶ TIL、大於260000 pg/10⁶ TIL、大於280000 pg/10⁶ TIL、大於300000 pg/10⁶ TIL或超過300000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於3000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於5000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於7000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於9000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於11000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於13000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於15000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於17000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於19000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於20000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於40000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於60000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於80000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於100000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於120000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於140000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於160000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於180000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於200000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於220000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於240000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於260000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於280000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於300000 pg/10⁶ TIL顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。

在一些實施態樣中，展現大於1000 pg/ml至300000 pg/ml或超過300000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於1000 pg/ml、大於2000 pg/ml、大於3000 pg/ml、大於4000 pg/ml、大於5000 pg/ml、大於6000 pg/ml、大於7000 pg/ml、大於8000 pg/ml、大於9000 pg/ml、大於10000 pg/ml、大於20000 pg/ml、大於30000 pg/ml、大於40000 pg/ml、大於50000 pg/ml、大於60000 pg/ml、大於70000 pg/ml、大於80000 pg/ml、大於90000 pg/ml、大於100000 pg/ml或超過100000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於1000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於2000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於3000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於4000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於5000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於6000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於7000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於8000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於9000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於10000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於20000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於30000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於40000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於50000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於60000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於70000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於80000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於90000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於100000 pg/ml顆粒溶解酶B之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於120000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於140000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於160000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於180000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於200000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於220000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於240000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於260000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於280000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。在一些實施態樣中，展現大於300000 pg/ml顆粒溶解酶B分泌之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)產生之TIL。

在一些實施態樣中，本發明之擴增方法在活體外產生相較於非經擴增TIL族群展現增加顆粒溶解酶B分泌之經擴增TIL族群，包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9中提供之TIL。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少一倍至五十倍或超過五十倍。在一些實施態樣中，相較於非經擴增TIL族群，IFN-γ分泌增加至少一倍、至少二倍、至少三倍、至少四倍、至少五倍、至少六倍、至少七倍、至少八倍、至少九倍、至少十倍、至少二十倍、至少三十倍、至少四十倍、至少五十倍或超過五十倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少一倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少二倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少三倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少四倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少五倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少六倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少七倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少八倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少九倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少十倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少二十倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少三十倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少四十倍。在一些實施態樣中，本發明之經擴增TIL族群的顆粒溶解酶B分泌相較於非經擴增TIL族群增加至少五十倍。

在一些實施態樣中，表型特徵是在冷凍保存之後檢查。J. 擴增 TIL 的代謝健康

再刺激的TIL之特徵在於相較於新鮮收集TIL及/或解凍後TIL顯著增強之基礎醣解作用。在一實施態樣中，在任何步驟(包括該些以上討論者或如例如圖9所提供者)期間，並未實施基於CD8表現選擇第一TIL族群、第二TIL族群、第三TIL族群、經收集的TIL族群及/或治療性TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇第一TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇第二TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇第三TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇經收集的TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇治療性TIL族群。

在一實施態樣中，在用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)成治療性TIL族群之方法中的任何步驟(a)至(f)期間，並未實施基於CD8表現選擇第一TIL族群、第二TIL族群、第三TIL族群或經收集的TIL族群，該方法包含： (a) 藉由將獲自病患的腫瘤樣本處理成多個腫瘤片段而自該病患所切除的腫瘤獲得第一TIL族群； (b) 將該等腫瘤片段加入密閉系統； (c) 藉由在包含IL-2之細胞培養基中培養該第一TIL族群以實施第一擴增而產生第二TIL族群，其中該第一擴增是在提供第一氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，其中該第一擴增實施約3至14天以獲得該第二TIL族群，其中該第二TIL族群於數量上高於該第一TIL族群至少50倍，且其中自步驟(b)轉變至步驟(c)無需打開該系統而發生； (d) 藉由對該第二TIL族群的該細胞培養基補充額外的IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC)以實施第二擴增而產生第三TIL族群，其中該第二擴增實施約7至14天以獲得該第三TIL族群，其中該第三TIL族群係治療性TIL族群，該治療性TIL族群包含相對於該第二TIL族群增加的效應T細胞及/或中央記憶T細胞子族群，其中該第二擴增是在提供第二氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，且其中自步驟(c)轉變至步驟(d)無需打開該系統而發生； (e) 收集獲自步驟(d)之治療性TIL族群，其中自步驟(d)轉變至步驟(e)無需打開該系統而發生；及 (f) 將得自步驟(e)之該經收集的TIL族群轉移至輸注袋，其中自步驟(e)轉移至步驟(f)無需打開該系統而發生。

在一實施態樣中，在用於治療癌症個體之方法中的任何步驟(a)至(h)期間，並未實施基於CD8表現選擇第一TIL族群、第二TIL族群、第三TIL族群或經收集的TIL族群，該方法包含投予經擴增之腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)，該方法包含： (a) 藉由將獲自病患的腫瘤樣本處理成多個腫瘤片段而自個體所切除的腫瘤獲得第一TIL族群； (b) 將該等腫瘤片段加入密閉系統； (c) 藉由在包含IL-2之細胞培養基中培養該第一TIL族群以實施第一擴增而產生第二TIL族群，其中該第一擴增是在提供第一氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，其中該第一擴增實施約3至14天以獲得該第二TIL族群，其中該第二TIL族群於數量上高於該第一TIL族群至少50倍，且其中自步驟(b)轉變至步驟(c)無需打開該系統而發生； (d) 藉由對該第二TIL族群的該細胞培養基補充額外的IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC)以實施第二擴增而產生第三TIL族群，其中該第二擴增實施約7至14天以獲得該第三TIL族群，其中該第三TIL族群係治療性TIL族群，該治療性TIL族群包含相對於該第二TIL族群增加的效應T細胞及/或中央記憶T細胞子族群，其中該第二擴增是在提供第二氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，且其中自步驟(c)轉變至步驟(d)無需打開該系統而發生； (e) 收集獲自步驟(d)之治療性TIL族群，其中自步驟(d)轉變至步驟(e)無需打開該系統而發生；及 (f) 將得自步驟(e)之該經收集的TIL族群轉移至輸注袋，其中自步驟(e)轉移至步驟(f)無需打開該系統而發生； (g) 可選地使用冷凍保存過程將得自步驟(f)之包含該經收集的TIL族群之該輸注袋冷凍保存；及 (h) 投予治療有效劑量的來自步驟(g)之該輸注袋的該第三TIL族群至該病患。

藉由本文所述之方法製備之TIL的特徵在於相較於例如新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL顯著增強之基礎醣解作用。在一實施態樣中，在任何步驟(包括該些以上討論者或如例如圖9所提供者)期間，並未實施基於CD8表現選擇第一TIL族群、第二TIL族群、第三TIL族群、經收集的TIL族群及/或治療性TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇第一TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇第二TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇第三TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇經收集的TIL族群。在一些實施態樣中，並未實施基於CD8表現選擇治療性TIL族群。在一實施態樣中，在任何步驟(a)至(h)期間，並未實施基於CD8表現選擇第一TIL族群、第二TIL族群、第三TIL族群或經收集的TIL族群。

備用呼吸量(SRC)及醣解儲備可在用本揭露之不同方法擴增的TIL評估。海馬XF細胞粒線體壓力測試使用靶向粒線體電子傳遞鏈組分的呼吸調節劑，藉由直接測量細胞的氧消耗速率(OCR)來測量粒線體功能。連續注射測試化合物(寡黴素、FCCP及毒魚藤素與抗黴素A之混合物，描述於下)以分別測量ATP產生、最大呼吸及非粒線體呼吸。接著使用這些參數及基礎呼吸計算質子漏及備用呼吸量。各調節劑靶向電子傳遞鏈的特定組分。寡黴素抑制ATP合成酶(複合物V)且在注射寡黴素後的OCR降低與和細胞性ATP產生有關的粒線體呼吸相關。羰基氰化物-4(三氟甲氧基)苯腙(FCCP)是一種解偶劑，其瓦解質子梯度且破壞粒線體膜電位。結果，通過電子傳遞鏈的電子流未受抑制且氧被複合物IV最大限度地消耗。接著，可使用FCCP刺激之OCR來計算備用呼吸量，其被定義為最大呼吸和基礎呼吸之間的差異。備用呼吸量(SRC)為細胞對能量需求增加而作出反應之能力的測量。第三注射是毒魚藤素(複合物I抑制劑)與抗黴素A(複合物III抑制劑)之混合物。此組合關閉粒線體呼吸因而能夠計算由粒線體以外的過程驅動之非粒線體呼吸。在一些實施態樣中，比較例如新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有相等的存活性。

在一些實施態樣中，代謝測定係基礎呼吸。一般來說，第二擴增TIL具有的基礎呼吸率是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。在一些實施態樣中，基礎呼吸率是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的約50%至約99%。在一些實施態樣中，基礎呼吸率是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的約60%至約99%。在一些實施態樣中，基礎呼吸率是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的約70%至約99%。在一些實施態樣中，基礎呼吸率是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的約80%至約99%。在一些實施態樣中，基礎呼吸率是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的約90%至約99%。在一些實施態樣中，基礎呼吸率是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的約95%至約99%。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)具有的基礎呼吸率與新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率並無統計顯著差異。在一些實施態樣中，比較例如新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有相等的存活性。

在一些實施態樣中，代謝測定係備用呼吸量。一般來說，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)具有的備用呼吸量是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。在一些實施態樣中，備用呼吸量是新鮮收集TIL之基礎呼吸率 的約50%至約99%。在一些實施態樣中，備用呼吸量是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約50%至約99%。在一些實施態樣中，備用呼吸量是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約60%至約99%。在一些實施態樣中，備用呼吸量是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約70%至約99%。在一些實施態樣中，備用呼吸量是新鮮收集TIL之基礎呼吸率 的約80%至約99%。在一些實施態樣中，備用呼吸量是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約90%至約99%。在一些實施態樣中，備用呼吸量是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約95%至約99%。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)具有的備用呼吸量與新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 並無統計顯著差異。

一般來說，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)具有的備用呼吸量是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。在一些實施態樣中，所測量的代謝測定係醣解儲備。在一些實施態樣中，代謝測定係備用呼吸量。為了測量細胞性(呼吸)代謝，將細胞用粒線體呼吸及醣解作用抑制劑處理，以判定由下列測量組成的TIL的代謝輪廓：基線氧化磷酸化(藉由OCR測量)、備用呼吸量、基線醣解活性(藉由ECAR測量)及醣解儲備。代謝輪廓使用海馬組合粒線體/醣解作用壓力測試測定(包括可購自Agilent®之套組)實施，其允許在阻斷粒線體ATP產生時判定細胞實施醣解作用的能力。在一些實施態樣中，使細胞處於葡萄糖飢餓，接著注射葡萄糖，隨後注射壓力劑。在一些實施態樣中，壓力劑係選自由寡黴素、FCCP、毒魚藤素、抗黴素A及/或2-去氧葡萄糖(2-DG)所組成之群組以及彼等之組合。在一些實施態樣中，寡黴素係以10 mM添加。在一些實施態樣中，FCCP係以10 mM添加。在一些實施態樣中，毒魚藤素係以2.5 mM添加。在一些實施態樣中，抗黴素A係以2.5 mM添加。在一些實施態樣中，2-去氧葡萄糖(2-DG)係以500 mM添加。在一些實施態樣中，測量醣解能力、醣解儲備及/或非醣解酸化。一般來說，TIL具有的醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約50%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約60%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約70%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約80%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約90%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約95%至約99%。

在一些實施態樣中，代謝測定係基礎醣解作用。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有增加至少二倍、至少三倍、至少四倍、至少五倍、至少六倍、至少7倍、至少八倍、至少九倍或至少十倍的基礎醣解作用。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有增加約二倍至約十倍的基礎醣解作用。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有增加約二倍至約八倍的基礎醣解作用。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有增加約三倍至約七倍的基礎醣解作用。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有增加約二倍至約四倍的基礎醣解作用。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有增加約二倍至約三倍的基礎醣解作用。

一般來說，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)具有的醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率的至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL之基礎呼吸率 的約50%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約60%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約70%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約80%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL之基礎呼吸率 的約90%至約99%。在一些實施態樣中，醣解儲備是新鮮收集TIL之基礎呼吸率 的約95%至約99%。

顆粒溶解酶B產生：顆粒溶解酶B是TIL殺死目標細胞的能力的另一種測量。如上述使用抗CD3、CD28及CD137/4-1BB之抗體再刺激之介質上清液的顆粒溶解酶B水準亦根據產製商指示使用人顆粒溶解酶B DuoSet ELISA套組(R & D Systems, Minneapolis, MN)評估。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)具有增加的顆粒溶解酶B產生。在一些實施態樣中，第二擴增TIL或第二額外擴增TIL(諸如例如該些於圖9步驟D中描述者，包括稱為reREP TIL之TIL)具有增加的細胞毒性活性。

在一些實施態樣中，端粒長度可用來作為細胞存活性及/或細胞性功能的測量。在一些實施態樣中，在本發明所產生之TIL中的端粒相較於使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL意外地具有相同長度。端粒長度測量：多種方法已用於測量基因體DNA及細胞學製劑的端粒長度。端粒限制片段(TRF)分析是測量端粒長度的黃金標準(de Lange et al., 1990)。然而，TRF的重大限制在於需要大量DNA (1.5 ^g)。二種廣泛用於測量端粒長度的方法，也就是螢光原位雜交(FISH; Agilent Technologies, Santa Clara, CA)及定量PCR可為本發明所採用。在一些實施態樣中，如圖9中提供之步驟A最初收集的TIL與例如步驟D擴增的TIL之間並無端粒長度變化。

在一些實施態樣中，TIL表現一或多種選自由顆粒溶解酶B、穿孔素及顆粒溶解素所組成之群組的標誌。在一些實施態樣中，TIL表現顆粒溶解酶B。在一些實施態樣中，TIL表現穿孔素。在一些實施態樣中，TIL表現顆粒溶解素。

在一實施態樣中，亦可使用細胞介素釋放測定評估再刺激的TIL的細胞介素釋放。在一些實施態樣中，可評估TIL的干擾素γ(IFN-γ)分泌。在一些實施態樣中，IFN-γ分泌係藉由ELISA測定測量。在一些實施態樣中，IFN-γ分泌係藉由ELISA測定在快速第二擴增步驟之後、在例如圖2(特別是例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)提供的步驟D之後測量。在一些實施態樣中，TIL健康係藉由IFN-γ分泌測量。在一些實施態樣中，IFN-γ分泌指示活性TIL。在一些實施態樣中，採用IFN-γ產生的效力測定。IFN-γ產生是細胞毒性潛力的另一種測量。IFN-γ產生可藉由判定經抗CD3、CD28及CD137/4-1BB之抗體刺激的TIL培養基中的細胞介素IFN-γ的水準來測量。來自這些受刺激TIL之培養基中的IFN-γ水準可使用測量IFN-γ釋放來判定。在一些實施態樣中，例如在圖2(特別是例如圖2A)中提供之第3代製程之步驟D的TIL相較於例如在圖2(特別是例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9)中提供之2A製程之步驟D的IFN-γ產生增加，指示步驟D TIL的細胞毒性潛力增加。在一些實施態樣中，IFN-γ分泌增加1倍、2倍、3倍、4倍或5倍或多於5倍。在一些實施態樣中，IFN-γ分泌增加一倍。在一些實施態樣中，IFN-γ分泌增加二倍。在一些實施態樣中，IFN-γ分泌增加三倍。在一些實施態樣中，IFN-γ分泌增加四倍。在一些實施態樣中，IFN-γ分泌增加五倍。在一些實施態樣中，IFN-γ係使用Quantikine ELISA套組測量。在一些實施態樣中，測量離體TIL的IFN-γ。在一些實施態樣中，測量離體TIL的IFN-γ，包括藉由本發明之方法(包括例如圖2B方法)產生之TIL。

在一些實施態樣中，能夠分泌至少1倍、2倍、3倍、4倍或5倍或多於5倍的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少多於1倍的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少多於2倍的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少多於3倍的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少多於4倍的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少多於5倍的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。

在一些實施態樣中，能夠分泌至少100 pg/ml至約1000 pg/mL或超過1000 pg/mL的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少200 pg/ml、至少250 pg/ml、至少300 pg/ml、至少350 pg/ml、至少400 pg/ml、至少450 pg/ml、至少500 pg/ml、至少550 pg/ml、至少600 pg/ml、至少650 pg/ml、至少700 pg/ml、至少750 pg/ml、至少800 pg/ml、至少850 pg/ml、至少900 pg/ml、至少950 pg/ml或至少1000 pg/mL或超過1000 pg/mL的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少200 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少200 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少300 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少400 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少500 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少600 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少700 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少800 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少900 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少1000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少2000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少3000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少4000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少5000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少6000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少7000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少8000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少9000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少10,000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少15,000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少20,000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少25,000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少30,000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少35,000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少40,000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少45,000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少50,000 pg/ml的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。

在一些實施態樣中，能夠分泌至少100 pg/ml/5e5個細胞至約1000 pg/mL/5e5個細胞或超過1000 pg/mL/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少200 pg/ml/5e5個細胞、至少250 pg/ml/5e5個細胞、至少300 pg/ml/5e5個細胞、至少350 pg/ml/5e5個細胞、至少400 pg/ml/5e5個細胞、至少450 pg/ml/5e5個細胞、至少500 pg/ml/5e5個細胞、至少550 pg/ml/5e5個細胞、至少600 pg/ml/5e5個細胞、至少650 pg/ml/5e5個細胞、至少700 pg/ml/5e5個細胞、至少750 pg/ml/5e5個細胞、至少800 pg/ml/5e5個細胞、至少850 pg/ml/5e5個細胞、至少900 pg/ml/5e5個細胞、至少950 pg/ml/5e5個細胞或至少1000 pg/ml/5e5個細胞或超過1000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少200 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少200 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少300 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少400 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少500 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少600 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少700 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少800 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少900 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少1000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少2000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少3000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少4000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少5000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少6000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少7000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少8000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少9000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少10,000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少15,000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少20,000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少25,000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少30,000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少35,000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少40,000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少45,000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少50,000 pg/ml/5e5個細胞的IFN-γ之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。

在一些實施態樣中，相較於IFN-γ分泌能夠分泌至少1倍、2倍、3倍、4倍或5倍或超過5倍較低水準的TNF-α(即TNF-alpha)之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，相較於IFN-γ分泌能夠分泌至少1倍較低水準的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，相較於IFN-γ分泌能夠分泌至少2倍較低水準的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，相較於IFN-γ分泌能夠分泌至少3倍較低水準的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，相較於IFN-γ分泌能夠分泌至少4倍較低水準的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，相較於IFN-γ分泌能夠分泌至少5倍較低水準的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。

在一些實施態樣中，能夠分泌至少200 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α(即TNF-alpha)之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少500 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少1000 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少2000 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少3000 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少4000 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少5000 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少6000 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少7000 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少8000 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。在一些實施態樣中，能夠分泌至少9000 pg/ml/5e5個細胞至約10,000 pg/ml/5e5個細胞或超過10,000 pg/ml/5e5個細胞的TNF-α之TIL係藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL。

在一些實施態樣中，測量IFN-γ及顆粒溶解酶B水準以判定藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL的表型特徵。在一些實施態樣中，測量IFN-γ及TNF-α水準以判定藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL的表型特徵。在一些實施態樣中，測量顆粒溶解酶B及TNF-α水準以判定藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL的表型特徵。在一些實施態樣中，測量IFN-γ、顆粒溶解酶B及TNF-α水準以判定藉由本發明之擴增方法(包括例如圖2A及/或圖2B及/或圖2C及/或圖9方法)產生之TIL的表型特徵。

在一些實施態樣中，根據TIL測定的生物發光重定向裂解測定(效力測定)，使用TIL與生物發光細胞系P815(殖株G6)之共培養測定來評估TIL裂解目標細胞的細胞毒性潛力，其以高度敏感劑量依賴性方式測量TIL細胞毒性。

在一些實施態樣中，本方法提供使用上述方法用於評估TIL存活性的測定。在一些實施態樣中，TIL的擴增如上所討論，包括例如圖9所提供者。在一些實施態樣中，TIL在評估存活性之前經冷凍保存。在一些實施態樣中，存活性評估包括在實施第一擴增、第二擴增及額外第二擴增之前解凍TIL。在一些實施態樣中，本方法提供用於評估細胞增生、細胞毒性、細胞死亡及/或其他與TIL族群存活性有關之用語的測定。存活性可藉由任何上述之TIL代謝測定以及任何所屬技術領域中已知用於評估細胞存活性之方法來測量。在一些實施態樣中，本方法提供用於評估細胞增生、細胞毒性、細胞死亡及/或其他與使用本文所述之方法(包括該些例示於圖9者)擴增之TIL的存活性有關之用語的測定。

本發明亦提供用於測定TIL存活性之測定方法。在一些實施態樣中，TIL相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有相等的存活性。在一些實施態樣中，TIL相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有增加的存活性。本揭露提供藉由擴增腫瘤浸潤淋巴球(TIL)成為較大TIL族群而用於測定TIL存活性之方法，其包含： (i)獲得先前已擴增之第一TIL族群； (ii)藉由在包含IL-2之細胞培養基中培養該第一TIL族群來實施第一擴增以產生第二TIL族群；及 (iii)藉由用額外的IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC)補充該第二TIL族群之該細胞培養基來實施第二擴增以產生第三TIL族群，其中該第三TIL族群於數量上高於該第二TIL族群至少100倍，且其中該第二擴增實施至少14天以獲得該第三TIL族群，其中該第三TIL族群包含相對於該第二TIL族群增加的效應T細胞及/或中央記憶T細胞子族群，且其中該第三族群經進一步存活性測定。

在一些實施態樣中，方法進一步包含： (iv)藉由用額外的IL-2、額外的OKT-3及額外的APC補充該第三TIL族群之該細胞培養基來實施額外第二擴增，其中該額外第二擴增實施至少14天以獲得比起步驟(iii)所獲得者較大的TIL族群，其中該較大的TIL族群包含相對於該第三TIL族群增加的效應T細胞及/或中央記憶T細胞子族群，且其中該第三族群經進一步存活性測定。

在一些實施態樣中，在步驟(i)之前，細胞係經冷凍保存。

在一些實施態樣中，細胞在實施步驟(i)之前解凍。

在一些實施態樣中，重複步驟(iv)一至四次以獲得足夠的TIL以供分析。

在一些實施態樣中，步驟(i)至(iii)或(iv)在一段約40天至約50天的期間之內實施。

在一些實施態樣中，步驟(i)至(iii)或(iv)在一段約42天至約48天的期間之內實施。

在一些實施態樣中，步驟(i)至(iii)或(iv)在一段約42天至約45天的期間之內實施。

在一些實施態樣中，步驟(i)至(iii)或(iv)在約44天之內實施。

在一些實施態樣中，來自步驟(iii)或(iv)之細胞以類似於新鮮收集的細胞的水準表現CD4、CD8及TCR α β。

在一些實施態樣中，抗原呈現細胞係周邊血液單核細胞(PBMC)。

在一些實施態樣中，PBMC係於步驟(iii)之第9至17天中任一天添加至細胞培養。

在一些實施態樣中，在步驟(iv)之較大TIL族群中的效應T細胞及/或中央記憶T細胞相對於該第三細胞族群之效應T細胞及/或中央記憶T細胞展現一或多種選自由下列所組成之群組之特徵：表現CD27、表現CD28、較長端粒、增加CD57表現及降低CD56表現。

在一些實施態樣中，該等效應T細胞及/或中央記憶T細胞展現增加CD57表現及降低CD56表現。

在一些實施態樣中，APC係人工APC (aAPC)。

在一些實施態樣中，方法進一步包含用包含編碼高親和性T細胞受體之核酸之表現載體轉導第一TIL族群之步驟。

在一些實施態樣中，轉導步驟發生在步驟(i)之前。

在一些實施態樣中，方法進一步包含用包含編碼嵌合抗原受體(CAR)之核酸之表現載體轉導第一TIL族群之步驟，該嵌合抗原受體包含與T細胞傳訊分子之至少一個胞內域融合之單鏈可變片段抗體。

在一些實施態樣中，轉導步驟發生在步驟(i)之前。

在一些實施態樣中，測定TIL存活性。

在一些實施態樣中，在冷凍保存後測定TIL存活性。

在一些實施態樣中，在冷凍保存後及在步驟(iv)後測定TIL存活性。

T及B淋巴細胞的多樣抗原受體係藉由有限但大量的基因區段的體細胞重組產生。這些基因區段：V(可變區)、D(多樣區)、J(聯結區)及C(恆定區)決定免疫球蛋白及T細胞受體(TCR)的結合特異性及下游應用。本發明提供產生展現及增加T細胞貯庫多樣性(有時稱為多株性)之TIL的方法。在一些實施態樣中，T細胞貯庫多樣性的增加係相較於新鮮收集TIL及/或使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖9中體現之方法以外的方法)製備的TIL具有增加的存活性。在一些實施態樣中，藉由本方法獲得之TIL展現增加的T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，在第一擴增獲得之TIL展現增加的T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，增加多樣性是增加免疫球蛋白多樣性及/或T細胞受體多樣性。在一些實施態樣中，多樣性存在免疫球蛋白中、存在免疫球蛋白重鏈中。在一些實施態樣中，多樣性存在免疫球蛋白中、存在免疫球蛋白輕鏈中。在一些實施態樣中，多樣性存在T細胞受體中。在一些實施態樣中，多樣性存在選自由α、β、γ及δ受體所組成之群組的T細胞受體中之一者中。在一些實施態樣中，T細胞受體(TCR) α及/或β的表現增加。在一些實施態樣中，T細胞受體(TCR) α的表現增加。在一些實施態樣中，T細胞受體(TCR) β的表現增加。在一些實施態樣中，TCRab(即TCRα/β)的表現增加。

根據本揭露，一種用於測定TIL存活性及/或投予至個體之進一步用途的方法。在一些實施態樣中，用於測定腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)之方法包含： (i)獲得第一TIL族群； (ii)藉由在包含IL-2之細胞培養基中培養該第一TIL族群來實施第一擴增以產生第二TIL族群；及 (iii)藉由對第二TIL族群的細胞培養基補充額外的IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC)來實施第二擴增以產生第三TIL族群，其中該第三TIL族群於數量上高於第二TIL族群至少50倍； (iv)收集、洗滌及冷凍保存第三TIL族群； (v)將經冷凍保存之TIL儲存在冷凍溫度下； (vi)解凍第三TIL族群以提供解凍的第三TIL族群；及 (vii)藉由對第三族群的細胞培養基補充IL-2、OKT-3及APC來實施一部分解凍的第三TIL族群的額外第二擴增達一段至少3天的額外擴增期間(有時稱為reREP期間)，其中實施第三擴增以獲得第四TIL族群，其中比較第四TIL族群中的TIL數量與第三TIL族群中的TIL數量以獲得比例； (viii)基於步驟(vii)中的比例判定解凍的TIL族群是否適用於投予至病患； (ix)當步驟(viii)中之第四TIL族群中的TIL數量對第三TIL族群中的TIL數量之比例判定為大於5:1，投予治療有效劑量的解凍的第三TIL族群至病患。

在一些實施態樣中，額外擴增期間(有時稱為reREP期間)係實施直到第四TIL族群中的TIL數量對第三TIL族群中的TIL數量之比例大於50:1。

在一些實施態樣中，對治療有效劑量為足夠的TIL數量係約2.3×10¹⁰ 至約13.7×10¹⁰ 個。

在一些實施態樣中，步驟(i)至(vii)在一段約40天至約50天的期間之內實施。在一些實施態樣中，步驟(i)至(vii)在一段約42天至約48天的期間之內實施。在一些實施態樣中，步驟(i)至(vii)在一段約42天至約45天的期間之內實施。在一些實施態樣中，步驟(i)至(vii)在約44天之內實施。

在一些實施態樣中，來自步驟(iii)或(vii)之該等細胞以類似於新鮮收集的細胞的水準表現CD4、CD8及TCR α β。在一些實施態樣中，細胞是TIL。

在一些實施態樣中，抗原呈現細胞係周邊血液單核細胞(PBMC)。在一些實施態樣中，PBMC係於步驟(iii)之第9至17天中任一天添加至細胞培養。

在一些實施態樣中，在步驟(iii)或(vii)之較大TIL族群中的效應T細胞及/或中央記憶T細胞相對於該第三細胞族群之效應T細胞及/或中央記憶T細胞展現一或多種選自由下列所組成之群組之特徵：表現CD27、表現CD28、較長端粒、增加CD57表現及降低CD56表現。

在一些實施態樣中，APC係人工APC (aAPC)。

在一些實施態樣中，轉導第一TIL族群之步驟用包含編碼高親和性T細胞受體之核酸之表現載體進行。

在一些實施態樣中，轉導步驟發生在步驟(i)之前。

在一些實施態樣中，轉導第一TIL族群之步驟用包含編碼嵌合抗原受體(CAR)之核酸之表現載體進行，該嵌合抗原受體包含與T細胞傳訊分子之至少一個胞內域融合之單鏈可變片段抗體。

在一些實施態樣中，轉導步驟發生在步驟(i)之前。

在一些實施態樣中，在步驟(vii)後測定TIL存活性。

本揭露亦提供測定TIL之進一步方法。在一些實施態樣中，本揭露提供一種測定TIL之方法，其包含： (i)獲得一部分的第一經冷凍保存之TIL族群； (ii)將該部分的第一經冷凍保存之TIL族群解凍； (iii)藉由在包含IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC)之細胞培養基中培養該部分的第一TIL族群來實施第一擴增達一段至少3天的額外擴增期間(有時稱為reREP期間)以產生第二TIL族群，其中比較來自第一TIL族群的該部分與第二TIL族群以獲得TIL數量的比例，其中第二TIL族群中的TIL數量對第一TIL族群的該部分中的TIL數量的比例係大於5:1； (iv)基於步驟(iii)中的比例判定第一TIL族群是否適用於治療性投予至病患； (v)當步驟(iv)中之第二TIL族群中的TIL數量對第一TIL族群中的TIL數量之比例判定為大於5:1，判定該第一TIL族群適用於治療性投予。

在一些實施態樣中，第二TIL族群中的TIL數量對第一TIL族群的該部分中的TIL數量之比例係大於50:1。

在一些實施態樣中，該方法進一步包含根據本文提供之任何實施態樣所述之方法，實施來自步驟(i)之整個第一經冷凍保存之TIL族群的擴增。

在一些實施態樣中，該方法進一步包含投予來自步驟(i)之整個第一經冷凍保存之TIL族群至病患。K. 用於 TIL 製造的密閉系統

本發明提供在TIL培養過程期間使用密閉系統。該等密閉系統允許預防及/或減少微生物污染、允許使用較少培養瓶且允許成本降低。在一些實施態樣中，密閉系統使用二個容器。

該等密閉系統係所屬技術領域中廣為周知且可見於例如http://www.fda.gov/cber/guidelines.htm及https://www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/Blood/ucm076779.htm。

如FDA網站上所提供，使用無菌方法的密閉系統係已知且廣為描述。見https://www.fda.gov/ BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/Blood/ucm076779.htm，如上參照且提供於以下相關部分。介紹

無菌連接裝置(STCD)在二件可相容管之間產生無菌接合。此程序允許無菌連接多種容器及管直徑。此指引描述使用這些裝置的建議作業及程序。此指引並不涉及無菌連接裝置產製商必須提交給FDA以獲得上市核准或許可的資料或資訊。也很重要的是應注意，使用經核准或許可的無菌連接裝置於非標示核准之目的，可造成該裝置依據聯邦食品、藥品及化妝品法(Federal Food, Drug, and Cosmetic Act)被視為攙假及不實標示。 1. FDA建議

提案例行使用FDA許可之STCD的血液製劑產製商應將關於此類使用之資訊併入各血液製劑的標準作業程序(SOP)手冊。這些輸入應包括記錄保存、製劑追蹤、管路接合品質管制、軟體及一次性用品批號(包括待添加之元件來源)。品質管制程序應包括各接合之完整性測試。 2. STCD之應用

使用者應了解該裝置的使用可製造新製劑或顯著改變受監管製劑的組態，而其安全性及療效未經證實。以應申請許可之「新製劑」而言，除了提交SOP給FDA之外，還必須提交申請或補充申請。一般來說，涉及細胞性組分之匯合或混合代表製劑變更，需要提交上市許可申請或補充申請且需獲得核准。此類申請及補充申請應含有產製程序之資料及說明，以證實「新製劑」在整個提案期限內用於其意圖用途係安全且有效。

提供下列注解作為經FDA許可或核准之STCD的較常見用途之指引：L. 添加新針頭或較小針頭至血液收集組

在起始程序(全血收集、血小板分離或來源血漿收集)之前使用STCD添加針頭不視為打開功能密閉系統。如果在程序期間添加針頭，僅應使用經核准之STCD以接合充滿液體管路。如果接合完整性之測試滿意，使用STCD不視為打開功能密閉系統。

在開放系統中製備之分離術血小板應標示24小時過期而在功能密閉系統中製備之分離術血小板製劑應標示五天過期(見Revised Guideline for Collection of Platelets, Pheresis, October 7, 1988)。

經添加之管路及針頭的來源及規格應註明在血液中心的SOP及記錄中。使用STCD添加針頭不表示產製的主要變更，若為主要變更則被授權機構需要獲得預先核准。M. 使用 STCD 製備組分

當STCD係用於附接額外組分製備袋時，應維持適當記錄，以識別轉移包之來源及適當驗證血液單位編號及ABO/Rh。所有血液及血液組分必須經適當標示(21 CFR 606.121)。實例： ● 添加第四袋至全血收集三包以自新鮮冷凍血漿產生經冷沉澱之AHF。 ● 連接添加劑溶液至紅血球單位。 ● 添加經FDA許可用於產製組分之管線過濾器。 ● 添加第三儲存容器至血小板分離術制具。 ● 以上述用途而言，應發展程序且維持記錄，但被授權人不須得到FDA核准才能建立程序。 1.使用 STCD 匯合血液製劑

適當使用STCD匯合自全血收集製備之血小板可避免來自經常使用之穿刺針及埠口之潛在污染。在輸血之前立即實施匯合係此類適當用途之實例。經匯合之血小板應在匯合之後不超過4小時投予(見21 CFR 606.122(l)(2))。

然而，匯合及後續儲存可增加相較於投予隨機供體單位之風險；如果一個受污染單位與其他單位匯合並在投予之前儲存，則所投予之總細菌接種液可因在額外體積中複製而增加。因此，提案使用STCD匯合及儲存血小板超過4小時應有令人滿意地探討此類匯合是否與風險增加相關聯之資料支持。

此類血小板匯合構成新製劑的產製。

涉及血小板之匯合或混合被視為產製新製劑，如果儲存期超過四小時，需要提交上市許可申請或補充申請且需獲得核准。 2.使用 STCD 製備供小兒使用之等分試樣及分裝單位

使用STCD製備之全血、紅血球及新鮮冷凍血漿的小兒單位及分裝單位將不視為新製劑，若符合下列條件需要生物製劑上市許可申請(BLA)補充：產製商應具有原始(即未分裝)製劑的核准生物製劑上市許可或上市許可補充，包括核准所使用之各抗凝血劑。配送之前應提交標籤以供審查及核准。應在FDA 2567表(Transmittal of Labels and Circulars)的注解欄留下標註。應使用核准用於儲存製備組分之最終產物容器。

經授權產製之血小板必須含有至少5.5 X (10)¹⁰ 個血小板(21 CFR 640.24 (c))。經授權產製之分離術血小板應含有至少3.0 X (10)¹¹ 個血小板(見Revised Guideline for the Collection of Platelets, Pheresis, October 7, 1988)。

關於使用STCD自全血收集及自藉由自動化血液成分分離術程序所製備之血漿及血小板製備分裝產物所遵照的程序應包括下列說明： ● 血球分離制具或收集容器將如何使用經FDA許可之STCD修改； ● 分瓶血漿或全血液製劑的最小體積； ● 分瓶血小板分離術產物的體積及血小板濃度； ● 產物的儲存時間。產物應在經核准之容器中且應與該容器之標籤上的儲存時間一致； ● 用於在血液中心的記錄中標示及追蹤分裝產物的方法。

注意：用於標示等分試樣之程序應清楚陳述於程序，記錄保存應適當已允許追蹤及召回所有組分(若有需要)。 3.在自動化血漿清除術程序期間使用 STCD 連接額外鹽水或抗凝血劑管線

應發展程序且維持與儀器產製商之使用說明一致的記錄，但被授權人不須得到FDA核准才能建立程序。 4.使用 STCD 附接處理溶液

當使用STCD附接處理溶液的容器至經洗滌或冷凍之紅血球產物時，所得產物之期限係24小時，除非以上市許可申請或補充申請之形式提供資料給CBER以支持較長期限(21 CFR 610.53(c))。豁免或修改必須得到CBER主任(21 CFR 610.53(d))的書面核准。 5.使用 STCD 添加經 FDA 許可之白血球減除過濾器

一些白血球減除過濾器並未整合附接至全血收集系統。使用STCD進行儲存前過濾的程序應與過濾器產製商的使用說明一致。

在發送之前的白血球減除構成主要產製變更。因此，以使用STCD製備之新的白血球減除產物而言，產製商必須提交生物製劑上市許可申請(21 CFR 601.2)或事先核准補充申請給FDA (21 CFR 601.12)。

使用STCD自血液製劑容器移除樣本以供測試(例如使用STCD自血小板或分離術血小板之容器獲得血小板樣本以供交叉配對)。

如果樣本抽出後產物體積及/或細胞計數與原始標籤或資訊傳單所陳述者不同，則應修改產物標籤以反映新的體積及/或細胞計數。例如一單位之血小板的血小板計數減少至小於5.5 x (10)¹⁰ 個血小板的樣本不可移除(21 CFR 640.24 (c))。 6.FDA 指引的額外資訊

FDA指引提供關於向FDA提交申請及補充申請的規範以解決使用STCD之問題的常規指引以及特定資訊及實例。如果出現關於適當使用STCD之進一步問題，應向生物製劑評估研究中心的血液研究審查處(Office of Blood Research and Review, Center for Biologics Evaluation and Research)提出問題。

在一些實施態樣中，密閉系統從獲得腫瘤片段之時開始一直到TIL即將投予至病患或冷凍保存為止，僅使用一個容器。在一些使用二個容器之實施態樣中，第一容器係密閉G容器，且TIL族群在無需打開第一密閉G容器下離心及轉移至輸注袋。在一些使用二個容器之實施態樣中，輸注袋係含有HypoThermosol之輸注袋。密閉系統或密閉TIL細胞培養系統的特徵在於，一旦添加了腫瘤樣本及/或腫瘤片段，該系統即可從外面緊密密封以形成密閉環境，不受細菌、真菌及/或任何其他微生物污染入侵。

在一些實施態樣中，微生物污染減少介於約5%與約100%之間。在一些實施態樣中，微生物污染減少介於約5%與約95%之間。在一些實施態樣中，微生物污染減少介於約5%與約90%之間。在一些實施態樣中，微生物污染減少介於約10%與約90%之間。在一些實施態樣中，微生物污染減少介於約15%與約85%之間。在一些實施態樣中，微生物污染減少約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約97%、約98%、約99%或約100%。

密閉系統允許TIL在無微生物污染存在下及/或在微生物污染顯著減少下生長。

再者，TIL細胞培養環境的pH、二氧化碳分壓及氧分壓各隨細胞培養而異。因此，即使適用於細胞培養之培養基係經循環，該密閉環境仍需要持續維持為適合TIL增生的最佳環境。為達此目的，所欲的是藉由感測器監測密閉環境的培養液體內之pH、二氧化碳分壓及氧分壓物理因子，其信號用於控制安裝在培養環境入口的氣體交換器，且密閉環境的氣體分壓根據培養液體中的變化即時調整，以最佳化細胞培養環境。在一些實施態樣中，本發明提供密閉細胞培養系統，其在到密閉系統的入口處包含配備有監測裝置的氣體交換器，該監測裝置測量該密閉環境的pH、二氧化碳分壓及氧分壓，且藉由基於來自該監測裝置的信號自動調整氣體濃度來最佳化細胞培養環境。

在一些實施態樣中，在密閉環境中的壓力係經連續或間歇控制。也就是說，在密閉環境中的壓力可藉由例如壓力維持裝置而異，因此確保空間適合TIL在正壓狀態下生長，或促進流體在負壓狀態下滲出且因此促進細胞增生。再者藉由間歇性施加負壓，有可能藉由暫時性收縮密閉環境的體積而一致地且有效地置換在密閉環境中循環的液體。

在一些實施態樣中，用於TIL增生的最佳培養組分可經取代或添加，且可添加包括諸如IL-2及/或OKT3的因子以及組合。N. 細胞培養

在一實施態樣中，用於擴增TIL之方法(包括該些以上討論以及圖9例示者)可包括使用約5,000 mL至約25,000 mL的細胞培養基、約5,000 mL至約10,000 mL的細胞培養基或約5,800 mL至約8,700 mL的細胞培養基。在一些實施態樣中，介質係不含血清介質，如例如實例21中所述。在一些實施態樣中，在第一擴增中之培養基係不含血清。在一些實施態樣中，在第二擴增中之培養基係無血清。在一些實施態樣中，在第一及第二擴增中之培養基皆不含血清。在一實施態樣中，擴增TIL數量使用不超過一種細胞培養基。可使用任何合適的細胞培養基，例如AIM-V細胞培養基(L-麩醯胺酸、50 μM鏈黴素硫酸鹽及10 μM硫酸建它黴素)細胞培養基(Invitrogen, Carlsbad CA)。就此而言，本發明方法有利地減少擴增TIL數量所需的培養基的量及培養基類型的數量。在一實施態樣中，擴增TIL數量可包含頻繁性不超過每三或四天一次地餵養細胞。在氣體可通透性容器中擴增細胞數量藉由減少擴增細胞所需的餵養頻率，簡化擴增細胞數量所需之程序。

在一實施態樣中，該方法的期間包含獲得來自哺乳動物之腫瘤組織樣本；在其中含有細胞培養基之第一氣體可通透性容器中培養腫瘤組織樣本；獲得來自腫瘤組織樣本之TIL；在含有細胞培養基之第二氣體可通透性容器中擴增TIL數量一段約7至14天例如約11天的期間。在一些實施態樣中，REP前係約7至14天，例如約11天。在一些實施態樣中，REP係約7至14天，例如約11天。

在一實施態樣中，TIL係在氣體可通透性容器中擴增。已使用氣體可通透性容器來擴增TIL，且使用PBMC、使用所屬技術領域中已知之方法、組成物及裝置，包括該些描述於美國專利申請公開案第2005/0106717 A1號者，其揭露以引用方式併入本文中。在一實施態樣中，TIL係在氣體可通透性袋子中擴增。在一實施態樣中，TIL使用在氣體可通透性袋子中擴增TIL的細胞擴增系統擴增，諸如Xuri細胞擴增系統W25 (GE Healthcare)。在一實施態樣中，TIL使用在氣體可通透性袋子中擴增TIL的細胞擴增系統擴增，諸如WAVE生物反應器系統，亦稱為Xuri細胞擴增系統W5 (GE Healthcare)。在一實施態樣中，細胞擴增系統包括氣體可通透性細胞袋子，該袋子的體積選自由約100 mL、約200 mL、約300 mL、約400 mL、約500 mL、約600 mL、約700 mL、約800 mL、約900 mL、約1 L、約2 L、約3 L、約4 L、約5 L、約6 L、約7 L、約8 L、約9 L及約10 L所組成之群組。

在一實施態樣中，TIL可在G-Rex培養瓶(可購自Wilson Wolf Manufacturing)中擴增。該等實施態樣允許細胞族群自約5x10⁵ 細胞/cm² 擴增至介於10x10⁶ 與30x10⁶ 細胞/cm² 之間。在一實施態樣中，此係未進行餵養。在一實施態樣中，此係未進行餵養，只要G-Rex培養瓶中的培養基位在約10 cm的高度。在一實施態樣中，不進行餵養，但添加一或多種細胞介素。在一實施態樣中，細胞介素可為作為推注添加，不需要將細胞介素與培養基混合。該等容器、裝置及方法係所屬技術領域中已知且已用於擴增TIL，且包括該些描述於美國專利申請公開案第US 2014/0377739A1號、國際專利公開號WO 2014/210036 A1、美國專利申請公開案第 us 2013/0115617 A1號、國際專利公開號WO 2013/188427 A1、美國專利申請公開案第US 2011/0136228 A1號、美國專利第US 8,809,050 B2號、國際專利公開號WO 2011/072088 A2、美國專利申請公開案第US 2016/0208216 A1號、美國專利申請公開案第US 2012/0244133 A1號、國際專利公開號WO 2012/129201 A1、美國專利申請公開案第US 2013/0102075 A1號、美國專利第US 8,956,860 B2號、國際專利公開號WO 2013/173835 A1、美國專利申請公開案第US 2015/0175966 A1號，彼等揭露以引用方式併入本文中。該等過程亦描述於Jinet al. ,J. Immunotherapy, 2012 , 35:283-292。O. 可選的 TIL 基因工程改造

在一些實施態樣中，TIL可選地經基因工程改造以包括額外功能性，包括但不限於高親和性T細胞受體(TCR)，例如靶向腫瘤相關抗原(諸如MAGE-1、HER2或NY-ESO-1)之TCR，或與腫瘤相關細胞表面分子(例如間皮素)或細胞系限制細胞表面分子(例如CD19)結合之嵌合抗原受體(CAR)。P. 可選的 TIL 冷凍保存

主體TIL族群或經擴增TIL族群可選地可經冷凍保存。在一些實施態樣中，冷凍保存發生於治療性TIL族群。在一些實施態樣中，冷凍保存發生於在第二擴增後經收集的TIL。在一些實施態樣中，冷凍保存發生於圖9的例示性步驟F中的TIL。在一些實施態樣中，TIL係冷凍保存於輸注袋中。在一些實施態樣中，TIL係經冷凍保存然後放入輸注袋中。在一些實施態樣中，TIL係經冷凍保存且不放入輸注袋中。在一些實施態樣中，冷凍保存使用冷凍保存培養基實施。在一些實施態樣中，冷凍保存培養基含有二甲亞碸(DMSO)。此通常可藉由將TIL族群放入冷凍溶液(例如85%補體去活化AB血清及15%二甲亞碸(DMSO))中完成。將細胞溶液放入冷凍小瓶中且儲存在-80℃下24小時，可選的轉移至氣態氮冷凍器中冷凍保存。見Sadeghi,et al., Acta Oncologica 2013, 52, 978-986。

當適當時，將細胞自冷凍器移出並在37℃水浴中解凍，直到大約4/5的溶液解凍。將細胞大致上重懸於完全培養基中且可選地洗滌一或多次。在一些實施態樣中，解凍的TIL可經計數且依所屬技術領域中已知之方式評估存活性。

在一較佳實施態樣中，TIL族群係使用CS10冷凍保存培養基(CryoStor 10, BioLife Solutions)冷凍保存。在一較佳實施態樣中，TIL族群係使用含有二甲亞碸(DMSO)的冷凍保存培養基冷凍保存。在一較佳實施態樣中，TIL族群係使用1:1(體積:體積)比例的CS10及細胞培養基冷凍保存。在一較佳實施態樣中，TIL族群係使用約1:1(體積:體積)比例的CS10及細胞培養基冷凍保存，進一步包含額外的IL-2。

如上於步驟A至E所討論，冷凍保存可發生在TIL擴增過程中的許多時點。在一些實施態樣中，在根據步驟B之第一擴增後的主體TIL族群或在一或多個根據步驟D之第二擴增後的經擴增TIL族群可經冷凍保存。冷凍保存通常可藉由將TIL族群放入冷凍溶液(例如85%補體去活化AB血清及15%二甲亞碸(DMSO))中完成。將細胞溶液放入冷凍小瓶中且儲存在-80℃下24小時，可選的轉移至氣態氮冷凍器中冷凍保存。見Sadeghi,et al., Acta Oncologica 2013, 52, 978-986。

在一些情況下，步驟B的TIL族群可使用以下討論之規程立即冷凍保存。替代地，主體TIL族群可進行步驟C及步驟D且接著在步驟D後冷凍保存。類似地，在其中基因修飾的TIL將用於療法中的情況中，步驟B或步驟D的TIL族群可進行基因修飾以用於合適治療。Q. 可選的細胞存活性分析

可選地，在第一擴增(有時稱為初始主體擴增)之後可使用所屬技術領域中已知之標準測定實施細胞存活性測定。例如，可在主體TIL的樣本上進行台盼藍排除測定，其選擇性標示死亡細胞且允許存活性評估。其他用於測試存活性之測定可包括但不限於阿爾瑪藍測定及MTT測定。 1. 細胞計數、存活性、流式細胞術

在一實施態樣中，用於擴增TIL之方法可包括使用約5,000 mL至約25,000 mL的細胞介質、約5,000 mL至約10,000 mL的細胞介質或約5,800 mL至約8,700 mL的細胞介質。在一實施態樣中，擴增TIL數量使用不超過一種細胞培養基。可使用任何合適的細胞培養基，例如AIM-V細胞培養基(L-麩醯胺酸、50 μM鏈黴素硫酸鹽及10 μM硫酸建它黴素)細胞培養基(Invitrogen, Carlsbad CA)。就此而言，本發明方法有利地減少擴增TIL數量所需的培養基的量及培養基類型的數量。在一實施態樣中，擴增TIL數量可包含頻繁性不超過每三或四天一次地餵養細胞。在氣體可通透性容器中擴增細胞數量藉由減少擴增細胞所需的餵養頻率，簡化擴增細胞數量所需之程序。

在一實施態樣中，TIL可在G-Rex培養瓶(可購自Wilson Wolf Manufacturing)中擴增。該等實施態樣允許細胞族群自約5x10⁵ 細胞/cm² 擴增至介於10x10⁶ 與30x10⁶ 細胞/cm² 之間。在一實施態樣中，此係未進行餵養。在一實施態樣中，此係未進行餵養，只要G-Rex培養瓶中的培養基位在約10 cm的高度。在一實施態樣中，不進行餵養，但添加一或多種細胞介素。在一實施態樣中，細胞介素可為作為推注添加，不需要將細胞介素與培養基混合。該等容器、裝置及方法係所屬技術領域中已知且已用於擴增TIL，且包括該些描述於美國專利申請公開案第US 2014/0377739A1號、國際專利公開號WO 2014/210036 A1、美國專利申請公開案第 us 2013/0115617 A1號、國際專利公開號WO 2013/188427 A1、美國專利申請公開案第US 2011/0136228 A1號、美國專利第US 8,809,050 B2號、國際專利公開號WO 2011/072088 A2、美國專利申請公開案第US 2016/0208216 A1號、美國專利申請公開案第US 2012/0244133 A1號、國際專利公開號WO 2012/129201 A1、美國專利申請公開案第US 2013/0102075 A1號、美國專利第US 8,956,860 B2號、國際專利公開號WO 2013/173835 A1、美國專利申請公開案第US 2015/0175966 A1號，彼等揭露以引用方式併入本文中。該等過程亦描述於Jinet al. ,J. Immunotherapy, 2012 , 35:283-292。可選的TIL基因工程改造

在一些實施態樣中，TIL可選地經基因工程改造以包括額外功能性，包括但不限於高親和性T細胞受體(TCR)，例如靶向腫瘤相關抗原(諸如MAGE-1、HER2或NY-ESO-1)之TCR，或與腫瘤相關細胞表面分子(例如間皮素)或細胞系限制細胞表面分子(例如CD19)結合之嵌合抗原受體(CAR)。IV. 治療病患之方法

治療方法始於初始TIL收集及培養TIL。該等方法皆已由所屬技術領域例如Jinet al., J. Immunotherapy ,2012 , 35(3):283-292描述，其全文以引用方式併入本文中。治療方法之實施態樣係描述於以下所有章節，包括實例。

根據本文所述之方法包括例如以上步驟A至F所述或根據以上步驟A至F(亦如例如圖2A及/或圖9所示)產生的擴增TIL有治療癌症病患的具體用途(例如Goff, et al.,J. Clinical Oncology ,2016 , 34(20):2389-239以及補充內容所述)；其全文以引用方式併入本文中。在一些實施態樣中，TIL係如先前描述生長自轉移性黑色素瘤的經切除之寄存物(見Dudley, et al.,J Immunother .,2003 , 26:332-342；其全文以引用方式併入本文中)。新鮮腫瘤可在無菌條件下分割。可收集代表性樣本進行正式病理分析。可使用2 mm³ 至3 mm³ 的單一片段。在一些實施態樣中，獲得每病患5、10、15、20、25或30個樣本。在一些實施態樣中，獲得每病患20、25或30個樣本。在一些實施態樣中，獲得每病患20、22、24、26或28個樣本。在一些實施態樣中，獲得每病患24個樣本。樣本可放入24孔板之個別孔中，維持於含有高劑量IL-2 (6,000 IU/mL)之生長培養基中且監測腫瘤的破壞及/或TIL的增生。任何在處理後仍有存活細胞的腫瘤可如本文所述經酶消化成單一細胞懸浮液且經冷凍保存。

在一些實施態樣中，成功生長的TIL可經取樣進行表型分析(CD3、CD4、CD8及CD56)且當可用時在自體腫瘤測試。如果隔夜共培養產生干擾素-γ(IFN-γ)的水準˃ 200 pg/mL且為背景的二倍，則TIL可被視為反應性。(Goff, et al.,J Immunother. ,2010 , 33:840-847；其全文以引用方式併入本文中)。在一些實施態樣中，可選擇具有自體反應性或足夠生長模式證據的培養進行第二擴增(例如根據圖2A及/或圖9步驟D提供的第二擴增)，包括有時稱為快速擴增(REP)的第二擴增。在一些實施態樣中，選擇具有高自體反應性(例如在第二擴增期間高增生)的經擴增之TIL進行額外第二擴增。在一些實施態樣中，選擇具有高自體反應性(例如在圖2A及/或圖9步驟D提供的第二擴增期間的高增生)的TIL進行根據圖2A及/或圖9步驟D的額外第二擴增。

在一些實施態樣中，病患並不直接移入ACT(過繼性細胞轉移)，例如，在一些實施態樣中，不立即利用在腫瘤收集及/或第一擴增後的細胞。在一些實施態樣中，TIL可經冷凍保存且在投予至病患之前2天解凍。在一些實施態樣中，TIL可經冷凍保存且在投予至病患之前1天解凍。在一些實施態樣中，TIL可經冷凍保存且在投予至病患之前立即解凍。

經冷凍保存之輸注袋TIL樣本的細胞表型可藉由流式細胞術(例如FlowJo)分析表面標誌CD3、CD4、CD8、CCR7及CD45RA (BD BioSciences)，以及藉由本文所述之任何方法分析。可使用標準連結酶免疫吸收測定技術測量血清細胞介素。血清IFN-γ上升可定義為˃100 pg/mL且高於血清IFN-γ的基線水準至少4倍或至少3倍或至少2倍或至少1倍。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃1000 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃200 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃250 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃300 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃350 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃400 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃450 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃500 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃550 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃600 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃650 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃700 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃750 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃800 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃850 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃900 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃950 pg/mL。在一些實施態樣中，血清IFN-γ上升係定義為˃1000 pg/mL。

在一些實施態樣中，藉由本文提供之方法(例如該些在圖2A及/或圖9例示者)產生之TIL提供意外改善TIL的臨床療效。在一些實施態樣中，藉由本文提供之方法(例如該些在圖2A及/或圖9例示者)產生之TIL相較於藉由除該些在本文中描述之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9例示之方法以外的方法)產生之TIL展現增加的臨床療效。在一些實施態樣中，除該些在本文中描述之方法以外的方法包括稱為製程1C及/或第1代(Gen 1)的方法。在一些實施態樣中，增加療效係藉由DCR、ORR及/或其他臨床反應測量。在一些實施態樣中，藉由本文提供之方法(例如該些在圖2A及/或圖9例示者)產生之TIL相較於藉由除該些在本文中描述之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9例示之方法以外的方法，例如第1代製程)產生之TIL展現類似的發生反應所需時間(time to response)及安全性輪廓。

在一些實施態樣中，IFN-γ指示治療療效及/或增加臨床療效。在一些實施態樣中，TIL治療個體之血液中的IFN-γ指示活性TIL。在一些實施態樣中，採用IFN-γ產生的效力測定。IFN-γ產生是細胞毒性潛力的另一種測量。IFN-γ產生可藉由測定經藉由本發明之方法(包括例如該些在圖2A及/或圖9中描述之方法)製備之TIL治療之個體的血液、血清或離體TIL中之細胞介素IFN-γ的水準來測量。在一些實施態樣中，IFN-γ增加指示經藉由本發明之方法產生之TIL治療之病患的治療療效。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，IFN-γ增加一倍、二倍、三倍、四倍或五倍或超過五倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，IFN-γ分泌增加一倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，IFN-γ分泌增加二倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，IFN-γ分泌增加三倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，IFN-γ分泌增加四倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，IFN-γ分泌增加五倍。在一些實施態樣中，IFN-γ係使用Quantikine ELISA套組測量。在一些實施態樣中，IFN-γ係於經藉由本發明之方法(包括例如該些在圖2A及/或圖9中描述之方法)製備之TIL治療之個體的離體TIL中測量。在一些實施態樣中，IFN-γ係於經藉由本發明之方法(包括例如該些在圖2A及/或圖9中描述之方法)製備之TIL治療之個體的血液中測量。在一些實施態樣中，IFN-γ係於經藉由本發明之方法(包括例如該些在圖2A及/或圖9中描述之方法)製備之TIL治療之個體的TIL血清中測量。

在一些實施態樣中，藉由本發明之方法(包括該些在例如圖2A及/或圖9中描述之方法)製備之TIL相較於藉由其他方法(包括該些非在圖2A及/或圖9例示之方法，諸如例如稱為製程1C方法之方法)產生之TIL展現增加的多株性。在一些實施態樣中，顯著改善之多株性及/或增加之多株性指示治療療效及/或增加臨床療效。在一些實施態樣中，多株性係指T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，多株性增加可指示關於投予藉由本發明之方法產生之TIL的治療療效。在一些實施態樣中，相較於使用在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL，多株性增加一倍、二倍、十倍、100倍、500倍或1000倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加1倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加2倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加10倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加100倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加500倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖2A及/或圖9體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加1000倍。

療效的測量可包括疾病控制率(DCR)以及整體反應率(ORR)，如所屬技術領域中已知及本文中所述。A. 治療癌症之方法

本文所述之組成物及方法可用於治療疾病之方法中。在一實施態樣中，彼等用於治療成人病患或小兒病患之過度增生性病症諸如癌症。彼等亦可用於治療其他如本文及以下段落所述之病症。

在一些實施態樣中，過度增生性病症係癌症。在一些實施態樣中，過度增生性病症係實體腫瘤癌症。在一些實施態樣中，實體腫瘤癌係選自由下列所組成之群組：肛門癌、膀胱癌、乳癌(包括三陰性乳癌)、骨癌、人乳突瘤病毒(HPV)造成的癌症、中樞神經系統相關癌症(包括室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、神經胚細胞瘤、松果體母細胞瘤及原始神經外胚層腫瘤)、子宮頸癌(包括鱗狀細胞子宮頸癌、子宮頸腺鱗癌及子宮頸腺癌)、結腸癌、結直腸癌、子宮內膜癌、食道癌、食道胃接合部癌症、胃癌、胃腸道癌、胃腸道基質瘤、神經膠質母細胞瘤、神經膠質瘤、頭頸癌(包括頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)、咽下癌、喉癌、鼻咽癌、口咽癌及咽癌)、腎癌、肝癌、肺癌(包括非小細胞肺癌(NSCLC)及小細胞肺癌)、黑色素瘤(包括葡萄膜黑色素瘤、脈絡膜黑色素瘤、睫狀體黑色素瘤或虹膜黑色素瘤)、間皮瘤(包括惡性胸膜間皮瘤)、卵巢癌、胰臟癌(包括胰管腺癌)、陰莖癌、直腸癌、腎癌、腎細胞癌、肉瘤(包括Ewing氏肉瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤及其他骨及軟組織肉瘤)、甲狀腺癌(包括未分化甲狀腺癌)、子宮癌及陰道癌。

在一些實施態樣中，過度增生性病症係血液惡性病。在一些實施態樣中，血液惡性病係選自由下列所組成之群組：慢性淋巴細胞性白血病、急性淋巴母細胞白血病、瀰漫性大型B細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、外套細胞淋巴瘤及多發性骨髓瘤。在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該癌症係血液惡性病。在一些實施態樣中，本發明包括一種使用經修飾以表現一或多種CCR之TIL、MIL或PBL治療癌症病患之方法，其中該癌症係血液惡性病。在一些實施態樣中，本發明包括一種使用經修飾以表現一或多種CCR之MIL或PBL治療癌症病患之方法，其中該癌症係血液惡性病。

在一實施態樣中，癌症係前述癌症之一，包括實體腫瘤癌及血液惡性病，該癌症對至少一種先前療法(包括化學療法、放射療法或免疫治療)之治療呈現復發或難治性。在一實施態樣中，癌症係前述癌症之一，該癌症對至少二種先前療法(包括化學療法、放射療法及/或免疫治療)之治療呈現復發或難治性。在一實施態樣中，癌症係前述癌症之一，該癌症對至少三種先前療法(包括化學療法、放射療法及/或免疫治療)之治療呈現復發或難治性。

在一些實施態樣中，癌症係微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)癌症。MSI-H及dMMR癌症及測試因此已描述於Kawakami, et al., Curr. Treat. Options Oncol. 2015, 16, 30，其揭露以引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，本發明包括一種使用經修飾以表現一或多種CCR之TIL、MIL或PBL治療癌症病患之方法，其中該病患係人類。在一些實施態樣中，本發明包括一種使用經修飾以表現一或多種CCR之TIL、MIL或PBL治療癌症病患之方法，其中該病患係非人類。在一些實施態樣中，本發明包括一種使用經修飾以表現一或多種CCR之TIL、MIL或PBL治療癌症病患之方法，其中該病患係伴侶動物。在一些實施態樣中，本發明包括一種使用經修飾以表現一或多種CCR之TIL、MIL或PBL治療癌症病患之方法，其中該病患係靈長動物、馬、犬或貓科動物。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該癌症對BRAF抑制劑及/或MEK抑制劑之治療呈現難治性。在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該癌症對選自由威羅菲尼(vemurafenib)、達拉菲尼(dabrafenib)、恩考非尼(encorafenib)、索拉非尼(sorafenib)及彼等之醫藥上可接受之鹽或溶劑合物所組成之群組的BRAF抑制劑之治療呈現難治性。在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該癌症對選自由曲美替尼(trametinib)、考比替尼(cobimetinib)、畢尼替尼(binimetinib)、司美替尼(selumetinib)、匹馬司替尼(pimasertinib)、瑞法替尼(refametinib)及彼等之醫藥上可接受之鹽或溶劑合物所組成之群組的MEK抑制劑之治療呈現難治性。在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該癌症對選自由威羅菲尼、達拉菲尼、恩考非尼、索拉非尼及彼等之醫藥上可接受之鹽或溶劑合物所組成之群組的BRAF抑制劑及選自由曲美替尼、考比替尼、畢尼替尼、司美替尼、匹馬司替尼、瑞法替尼及彼等之醫藥上可接受之鹽或溶劑合物所組成之群組的MEK抑制劑之治療呈現難治性。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該癌症係小兒癌症。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該癌症係葡萄膜黑色瘤。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該葡萄膜黑色瘤係脈絡膜黑色素瘤、睫狀體黑色素瘤或虹膜黑色素瘤。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該小兒癌症係神經胚細胞瘤。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該小兒癌症係肉瘤。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該肉瘤係骨肉瘤。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該肉瘤係軟組織肉瘤。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該軟組織肉瘤係橫紋肌肉瘤、Ewing氏肉瘤或原始神經外胚層腫瘤(PNET)。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中該小兒癌症係中樞神經系統(CNS)相關癌症。在一些實施態樣中，小兒癌症對化學療法之治療呈現難治性。在一些實施態樣中，小兒癌症對放射療法之治療呈現難治性。在一些實施態樣中，小兒癌症對地努圖希單抗(dinutuximab)之治療呈現難治性。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，其中CNS相關癌症係神經管胚細胞瘤、松果體母細胞瘤、神經膠質瘤、室管膜瘤或神經膠質母細胞瘤。

本文所述之組成物及方法可用於治療癌症之方法中，其中該癌症對抗PD-1或抗PD-L1抗體之先前治療呈現難治性或抗性。在一些實施態樣中，病患係抗PD-1或抗PD-L1抗體的原發性難治性病患。在一些實施態樣中，病患對抗PD-1或抗PD-L1抗體不顯示先前反應。在一些實施態樣中，病患對抗PD-1或抗PD-L1抗體顯示先前反應，隨後病患的癌症進展。在一些實施態樣中，癌症對抗CTLA-4抗體及/或抗PD-1或抗PD-L1抗體與至少一種化學治療劑之組合呈現難治性。在一些實施態樣中，先前化學治療劑係卡鉑、太平洋紫杉醇、培美曲塞及/或順鉑。在一些先前實施態樣中，化學治療劑係鉑雙重化學治療劑。在一些實施態樣中，鉑雙重療法包含第一化學治療劑及第二化學治療劑，該第一化學治療劑選自由順鉑及卡鉑所組成之群組，該第二化學治療劑選自由長春瑞濱、吉西他濱及紫杉烷(包括例如太平洋紫杉醇、多西他賽或白蛋白結合型太平洋紫杉醇)所組成之群組。在一些實施態樣中，鉑雙重化學治療劑係與培美曲塞組合。

在一些實施態樣中，NSCLC係PD-L1陰性及/或係來自如本文他處所述之罹患以＜1%之腫瘤比例分數(TPS)表現PD-L1之癌症的病患。

在一些實施態樣中，NSCLC對包含抗PD-1或抗PD-L1抗體及鉑雙重療法之組合療法呈現難治性，其中該鉑雙重療法包含：

i)選自由順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin)所組成之群組的第一化學治療劑，及

ii)選自由長春瑞濱(vinorelbine)、吉西他濱(gemcitabine)及紫杉烷(包括例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他賽(docetaxel)或白蛋白結合型太平洋紫杉醇(nab-paclitaxel))所組成之群組的第二化學治療劑。

在一些實施態樣中，NSCLC對包含抗PD-1或抗PD-L1抗體、培美曲塞及鉑雙重療法之組合療法呈現難治性，其中該鉑雙重療法包含：

在一些實施態樣中，NSCLC已經抗PD-1抗體治療。在一些實施態樣中，NSCLC已經抗PD-L1抗體治療。在一些實施態樣中，NSCLC病患未接受過治療(treatment naïve)。在一些實施態樣中，NSCLC未曾經抗PD-1抗體治療。在一些實施態樣中，NSCLC未曾經抗PD-L1抗體治療。在一些實施態樣中，NSCLC先前已經化學治療劑治療。在一些實施態樣中，NSCLC先前已經化學治療劑治療但目前不再經該化學治療劑治療。在一些實施態樣中，NSCLC病患未接受過抗PD-1/PD-L1。在一些實施態樣中，NSCLC病患具有低表現的PD-L1。在一些實施態樣中，NSCLC病患的NSCLC未接受過治療或係化學治療劑治療後但未接受過抗PD-1/PD-L1。在一些實施態樣中，NSCLC病患未接受過治療或接受過化學治療劑治療但未接受過抗PD-1/PD-L1治療且具有低表現的PD-L1。在一些實施態樣中，NSCLC病患在基線具有大型腫瘤。在一些實施態樣中，個體在基線具有大型腫瘤且具有低表現的PD-L1。在一些實施態樣中，NSCLC病患不具有可偵測的PD-L1表現。在一些實施態樣中，NSCLC病患未接受過治療或接受過化學治療劑治療但未接受過抗PD-1/PD-L1治療且不具有可偵測的PD-L1表現。在一些實施態樣中，病患在基線具有大型腫瘤且不具有可偵測的PD-L1表現。在一些實施態樣中，NSCLC病患的NSCLC未接受過治療或係化學療法後(化學治療劑後)但未接受過抗PD-1/PD-L1且具有低表現的PD-L1及/或在基線具有大型腫瘤。在一些實施態樣中，當以橫斷面或冠狀面測量之最大腫瘤直徑大於7 cm時指示大型腫瘤。在一些實施態樣中，當腫脹淋巴結之短軸直徑為20 mm或大於20 mm時指示大型腫瘤。在一些實施態樣中，化學治療劑包括NSCLC的標準照護治療劑。

在一些實施態樣中，PD-L1表現係由腫瘤比例分數測定。在一些實施態樣中，罹患難治性NSCLC腫瘤之個體具有＜1%腫瘤比例分數(TPS)。在一些實施態樣中，罹患難治性NSCLC腫瘤之個體具有≥1% TPS。在一些實施態樣中，罹患難治性NSCLC之個體先前已經抗PD-1及/或抗PD-L1抗體治療且腫瘤比例分數係在該抗PD-1及/或抗PD-L1抗體治療之前測定。在一些實施態樣中，罹患難治性NSCLC之個體先前已經抗PD-L1抗體治療且腫瘤比例分數係在該抗PD-L1抗體治療之前測定。

在一些實施態樣中，藉由本發明之方法(包括該些在例如圖1中描述之方法)製備之TIL相較於藉由其他方法(包括該些非在圖1例示之方法，諸如例如稱為製程1C方法之方法)產生之TIL展現增加的多株性。在一些實施態樣中，顯著改善之多株性及/或增加之多株性指示治療療效及/或增加癌症治療的臨床療效。在一些實施態樣中，多株性係指T細胞貯庫多樣性。在一些實施態樣中，多株性增加可指示關於投予藉由本發明之方法產生之TIL的治療療效。在一些實施態樣中，相較於使用在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖1體現之方法以外的方法)製備之TIL，多株性增加1倍、2倍、10倍、100倍、500倍或1000倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖1體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加1倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖1體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加2倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖1體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加10倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖1體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加100倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖1體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加500倍。在一些實施態樣中，相較於未治療病患及/或相較於經使用其他在本文中提供之方法以外的方法(包括例如除該些在圖1體現之方法以外的方法)製備之TIL治療的病患，多株性增加1000倍。

在一些實施態樣中，PD-L1表現係藉由使用如本文所述之一或多種測試方法之腫瘤比例分數測定。在一些實施態樣中，罹患NSCLC腫瘤之個體或病患具有＜1%腫瘤比例分數(TPS)。在一些實施態樣中，NSCLC腫瘤具有≥1% TPS。在一些實施態樣中，罹患NSCLC之個體或病患先前已經抗PD-1及/或抗PD-L1抗體治療且腫瘤比例分數係在抗PD-1及/或抗PD-L1抗體治療之前測定。在一些實施態樣中，罹患NSCLC之個體或病患先前已經抗PD-L1抗體治療且腫瘤比例分數係在抗PD-L1抗體治療之前測定。在一些實施態樣中，罹患難治性或抗性NSCLC腫瘤之個體或病患具有＜1%腫瘤比例分數(TPS)。在一些實施態樣中，罹患難治性或抗性NSCLC腫瘤之個體或病患具有≥1% TPS。在一些實施態樣中，罹患難治性或抗性NSCLC之個體或病患先前已經抗PD-1及/或抗PD-L1抗體治療且腫瘤比例分數係在抗PD-1及/或抗PD-L1抗體治療之前測定。在一些實施態樣中，罹患難治性或抗性NSCLC之個體或病患先前已經抗PD-L1抗體治療且腫瘤比例分數係在抗PD-L1抗體治療之前測定。

在一些實施態樣中，NSCLC係展現腫瘤比例分數(TPS)或在抗PD-1或抗PD-L1療法之前自病患採集的顯示任何強度之PD-L1蛋白的部分或完全膜染色之存活腫瘤細胞百分比小於1% (TPS＜1%)的NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現選自由＜50%、＜45%、＜40%、＜35%、＜30%、＜25%、＜20%、＜15%、＜10%、＜9%、＜8%、＜7%、＜6%、＜5%、＜4%、＜3%、＜2%、＜1%、＜0.9%、＜0.8%、＜0.7%、＜0.6%、＜0.5%、＜0.4%、＜0.3%、＜0.2%、＜0.1%、＜0.09%、＜0.08%、＜0.07%、＜0.06%、＜0.05%、＜0.04%、＜0.03%、＜0.02%及＜0.01%所組成之群組的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現選自由約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%、約9%、約8%、約7%、約6%、約5%、約4%、約3%、約2%、約1%、約0.9%、約0.8%、約0.7%、約0.6%、約0.5%、約0.4%、約0.3%、約0.2%、約0.1%、約0.09%、約0.08%、約0.07%、約0.06%、約0.05%、約0.04%、約0.03%、約0.02%及約0.01%所組成之群組的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與1%之間的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與0.9%之間的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與0.8%之間的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與0.7%之間的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與0.6%之間的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與0.5%之間的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與0.4%之間的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與0.3%之間的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與0.2%之間的TPS之NSCLC。在一實施態樣中，NSCLC係展現介於0%與0.1%之間的TPS之NSCLC。TPS可藉由所屬技術領域中已知之方法測量，諸如該些描述於Hirsch, et al. J. Thorac. Oncol. 2017, 12, 208-222中者或該些在派姆單抗或其他抗PD-1或抗PD-L1療法之治療之前用於測定TPS者。亦可使用經美國食品藥物管理局核准用於測量TPS之方法。在一些實施態樣中，PD-L1係胞外體PD-L1。在一些實施態樣中，PD-L1係見於循環腫瘤細胞上。

在一些實施態樣中，部分膜染色包括1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、99%或超過99%。在一些實施態樣中，完全膜染色包括大約100%膜染色。

在一些實施態樣中，PD-L1測試可涉及測量PD-L1在病患血清中之水準。在這些實施態樣中，測量病患血清中之PD-L1移除腫瘤異質性之不確定性及連續活體組織切片之病患不適。

在一些實施態樣中，相較於基線或標準水準上升之可溶性PD-L1與NSCLC之較差預後相關。見例如Okuma, et al., Clinical Lung Cancer, 2018, 19, 410-417；Vecchiarelli, et al., Oncotarget, 2018, 9, 17554-17563。在一些實施態樣中，PD-L1係胞外體PD-L1。在一些實施態樣中，PD-L1係表現於循環腫瘤細胞上。

在一實施態樣中，本發明提供一種藉由向有治療需要之個體或病患投予腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)之族群以治療非小細胞肺癌(NSCLC)之方法，其中個體或病患具有下列至少一者：

預先測定之PD-L1腫瘤比例分數(TPS)＜1%，

PD-L1之TPS分數為1%至49%，或

預先測定之一或多個驅動突變不存在，

其中驅動突變係選自由下列所組成之群組：EGFR突變、EGFR插入、EGFR外顯子20突變、KRAS突變、BRAF突變、ALK突變、c-ROS突變(ROS1突變)、ROS1融合、RET突變、RET融合、ERBB2突變、ERBB2放大、BRCA突變、MAP2K1突變、PIK3CA、CDKN2A、PTEN突變、UMD突變、NRAS突變、KRAS突變、NF1突變、MET突變、MET剪接及/或改變MET傳訊、TP53突變、CREBBP突變、KMT2C突變、KMT2D突變、ARID1A突變、RB1突變、ATM突變、SETD2突變、FLT3突變、PTPN11突變、FGFR1突變、EP300突變、MYC突變、EZH2突變、JAK2突變、FBXW7突變、CCND3突變及GNA11突變，且其中該方法包含：

(a) 藉由將獲自個體的腫瘤樣本處理成多個腫瘤片段而獲得及/或接受來自該個體或病患所切除的腫瘤之第一TIL族群；

(b) 將該第一TIL族群加入密閉系統；

(c) 藉由在包含IL-2之細胞培養基中培養該第一TIL族群以實施第一擴增而產生第二TIL族群，其中該第一擴增是在提供第一氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，其中該第一擴增實施約3至14天以獲得該第二TIL族群，其中該第二TIL族群於數量上高於該第一TIL族群至少50倍，且其中自步驟(b)轉變至步驟(c)無需打開該系統而發生；

(d) 藉由對該第二TIL族群的該細胞培養基補充額外的IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC)來實施第二擴增以產生第三TIL族群，其中該第二擴增實施約7至14天以獲得該第三TIL族群，其中該第三TIL族群係治療性TIL族群，其中該第二擴增是在提供第二氣體可通透表面積的密閉容器中實施，且其中自步驟(c)轉變至步驟(d)無需打開該系統而發生；

(e) 收集獲自步驟(d)之治療性TIL族群，其中自步驟(d)轉變至步驟(e)無需打開該系統而發生；及

(f) 將得自步驟(e)之該經收集的TIL族群轉移至輸注袋，其中自步驟(e)轉移至步驟(f)無需打開該系統而發生；

(g) 使用冷凍保存過程將來自步驟(f)之包含該經收集的TIL族群之該輸注袋冷凍保存；及

(h) 投予來自步驟(g)之該輸注袋的治療有效劑量的該第三TIL族群至該個體或病患。

在一實施態樣中，本發明提供一種藉由向有治療需要之病患投予腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)之族群以治療非小細胞肺癌(NSCLC)之方法，其中該方法包含：

(a) 測試病患的腫瘤之PD-L1表現及PD-L1之腫瘤比例分數(TPS)，

(b) 測試病患之一或多個驅動突變不存在，其中驅動突變係選自由下列所組成之群組：EGFR突變、EGFR插入、EGFR外顯子20突變、KRAS突變、BRAF突變、ALK突變、c-ROS突變(ROS1突變)、ROS1融合、RET突變、RET融合、ERBB2突變、ERBB2放大、BRCA突變、MAP2K1突變、PIK3CA、CDKN2A、PTEN突變、UMD突變、NRAS突變、KRAS突變、NF1突變、MET突變、MET剪接及/或改變MET傳訊、TP53突變、CREBBP突變、KMT2C突變、KMT2D突變、ARID1A突變、RB1突變、ATM突變、SETD2突變、FLT3突變、PTPN11突變、FGFR1突變、EP300突變、MYC突變、EZH2突變、JAK2突變、FBXW7突變、CCND3突變及GNA11突變，

(c) 測定病患的PD-L1之TPS分數為約1%至約49%且判定病患亦不具有驅動突變，

(d) 藉由將獲自個體的腫瘤樣本處理成多個腫瘤片段而獲得及/或接受來自該個體或病患所切除的腫瘤之第一TIL族群；

(e) 將該第一TIL族群加入密閉系統；

(f) 藉由在包含IL-2之細胞培養基中培養該第一TIL族群以實施第一擴增而產生第二TIL族群，其中該第一擴增是在提供第一氣體可通透性表面區域的密閉容器中實施，其中該第一擴增實施約3至14天以獲得該第二TIL族群，其中該第二TIL族群於數量上高於該第一TIL族群至少50倍，且其中自步驟(e)轉變至步驟(f)無需打開該系統而發生；

(g)藉由對該第二TIL族群的該細胞培養基補充額外的IL-2、OKT-3及抗原呈現細胞(APC)以實施第二擴增而產生第三TIL族群，其中該第二擴增實施約7至14天以獲得該第三TIL族群，其中該第三TIL族群係治療性TIL族群，其中該第二擴增是在提供第二氣體可通透表面積的密閉容器中實施，且其中自步驟(f)轉變至步驟(g)無需打開該系統而發生；

(h) 收集獲自步驟(d)之治療性TIL族群，其中自步驟(d)轉變至步驟(e)無需打開該系統而發生；及

(i) 將得自步驟(e)之該經收集的TIL族群轉移至輸注袋，其中自步驟(e)轉移至步驟(f)無需打開該系統而發生；

(j) 使用冷凍保存過程將來自步驟(f)之包含該經收集的TIL族群之該輸注袋冷凍保存；及

(k) 投予來自步驟(g)之該輸注袋的治療有效劑量的該第三TIL族群至該個體或病患。

(a) 測試病患的腫瘤之PD-L1表現及PD-L1之腫瘤比例分數(TPS)，

(c) 測定病患的PD-L1之TPS分數為小於約1%且判定病患亦不具有驅動突變，

(e) 將該第一TIL族群加入密閉系統；

(a) 測試病患的腫瘤之PD-L1表現及PD-L1之腫瘤比例分數(TPS)，

(b) 測試病患之一或多個驅動突變不存在，其中驅動突變係選自由下列所組成之群組：EGFR突變、EGFR插入、KRAS突變、BRAF突變、ALK突變、c-ROS突變(ROS1突變)、ROS1融合、RET突變或RET融合，

(e) 將該第一TIL族群加入密閉系統；

(a) 測試病患的腫瘤之PD-L1表現及PD-L1之腫瘤比例分數(TPS)，

(e) 將該第一TIL族群加入密閉系統；

在另一實施態樣中，本發明提供一種用於治療癌症個體之方法，該方法包含向個體投予治療有效劑量之如本文所述之治療性TIL族群。

在另一實施態樣中，本發明提供一種用於治療癌症個體之方法，該方法包含向個體投予治療有效劑量之如本文所述之TIL組成物。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中在如本文所述之分別投予治療有效劑量之治療性TIL族群及TIL組成物之前，已向個體投予非骨髓清除式淋巴細胞耗盡方案。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中該非骨髓清除式淋巴細胞耗盡方案包含投予劑量為60 mg/m2/天之環磷醯胺共二天且隨後投予劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共五天的步驟。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，以進一步包含以始於向個體投予TIL細胞之後當天之高劑量IL-2方案治療個體之步驟。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中高劑量IL-2方案包含每八小時以15分鐘推注靜脈內輸液投予600,000或720,000 IU/kg直到耐受為止。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係實體腫瘤。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係黑色素瘤、卵巢癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、由人乳突瘤病毒所造成的癌症、頭頸癌(包括頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC))、神經膠質母細胞瘤(包括GBM)、胃腸道癌、腎癌或腎細胞癌。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係黑色素瘤、HNSCC、子宮頸癌、NSCLC、神經膠質母細胞瘤(包括GBM)及胃腸道癌。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係黑色素瘤。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係HNSCC。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係子宮頸癌。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係NSCLC。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係神經膠質母細胞瘤(包括GBM)。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係胃腸道癌。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係高突變癌症。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之用於治療癌症個體之方法，其中癌症係小兒高突變癌症。

在另一實施態樣中，本發明提供用於治療癌症個體之方法中之如本文所述之治療性TIL族群，該方法包含向個體投予治療有效劑量之該治療性TIL族群。

在另一實施態樣中，本發明提供用於治療癌症個體之方法中之本文所述之TIL組成物，該方法包含向個體投予治療有效劑量之該TIL組成物。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或本文所述之TIL組成物，其中在向個體投予治療有效劑量之本文所述之治療性TIL族群或本文所述之TIL組成物之前，已向個體投予非骨髓清除式淋巴細胞耗盡方案。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中該非骨髓清除式淋巴細胞耗盡方案包含投予劑量為60 mg/m2/天之環磷醯胺共二天且隨後投予劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共五天的步驟。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，以進一步包含以始於向病患投予TIL細胞之後當天之高劑量IL-2方案治療病患之步驟。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中高劑量IL-2方案包含每八小時以15分鐘推注靜脈內輸液投予600,000或720,000 IU/kg直到耐受為止。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之如本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係實體腫瘤。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係黑色素瘤、卵巢癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、由人乳突瘤病毒所造成的癌症、頭頸癌(包括頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC))、神經膠質母細胞瘤(包括GBM)、胃腸道癌、腎癌或腎細胞癌。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係黑色素瘤、HNSCC、子宮頸癌、NSCLC、神經膠質母細胞瘤(包括GBM)及胃腸道癌。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係黑色素瘤。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係HNSCC。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係子宮頸癌。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係NSCLC。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係神經膠質母細胞瘤。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係胃腸道癌。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係高突變癌症。

在另一實施態樣中，本發明提供經修飾之本文所述之治療性TIL族群或TIL組成物，其中癌症係小兒高突變癌症。

在另一實施態樣中，本發明提供本文所述之治療性TIL族群於治療個體的癌症之方法中的用途，該方法包含向個體投予治療有效劑量之該治療性TIL族群。

在另一實施態樣中，本發明提供任何前述段落描述之TIL組成物於治療個體的癌症之方法中的用途，該方法包含向個體投予治療有效劑量之該TIL組成物。

在另一實施態樣中，本發明提供本文所述之治療性TIL族群或本文所述之TIL組成物於治療病患的癌症之方法中的用途，該方法包含向個體投予非骨髓清除式淋巴細胞耗盡方案且接著向個體投予治療有效劑量之任何前述段落描述之治療性TIL族群或治療有效劑量之本文所述之TIL組成物。 1. 基於驅動突變治療癌症之方法

如本文中所使用，短語「驅動突變(driver mutation)」及/或「可作用突變(actionable mutation)」及/或「致癌性驅動突變(oncogenic driver mutation)」係指一般被視為致癌性驅動因子(即癌症驅動因子或癌症誘導物)之突變。這些突變之一或多者的存在傳統上被用來作為標靶療法之目標。通常，驅動突變係經標靶治療部份治療包括例如酪胺酸激酶抑制劑(TKI)之檢查及/或分析。此類驅動突變在一些實施態樣中可影響(impact/affect)對第一線治療性治療的反應。本文所述之TIL治療方法及組成物可有效治療不論此類驅動突變存在或不存在之病患或個體。此類驅動突變可藉由所屬技術領域中已知之任何方法測試及判定，包括全外顯子組定序或靶向特定驅動突變之偵測方法。

在一些實施態樣中，癌症係展現一或多個驅動突變存在或不存在之癌症。在一些實施態樣中，癌症展現一或多個驅動突變存在。在一些實施態樣中，癌症展現一或多個驅動突變不存在。在一些實施態樣中，分析癌症之一或多個驅動突變不存在或存在。在一些實施態樣中，一或多個驅動突變不存在。在一些實施態樣中，癌症治療與一或多個驅動突變存在或不存在無關。在一些實施態樣中，癌症展現一或多個選自由下列所組成之群組的驅動突變：EGFR突變、EGFR插入、EGFR外顯子20、KRAS突變、BRAF突變、BRAF V600E突變、BRAF V600K突變、BRAF V600突變、ALK突變、c-ROS突變(ROS1突變)、ROS1融合、RET突變、RET融合、ERBB2突變、ERBB2放大、BRCA突變、MAP2K1突變、PIK3CA、CDKN2A、PTEN突變、UMD突變、NRAS突變、KRAS突變、NF1突變、MET突變、MET剪接及/或改變MET傳訊、TP53突變、CREBBP突變、KMT2C突變、KMT2D突變、ARID1A突變、RB1突變、ATM突變、SETD2突變、FLT3突變、PTPN11突變、FGFR1突變、EP300突變、MYC突變、EZH2突變、JAK2突變、FBXW7突變、CCND3突變及GNA11突變。在一些實施態樣中，癌症展現＜1%之PD-L1 TPS且具有預先測定之一或多個驅動突變不存在。

在一些實施態樣中，癌症係不適用於藉由下列治療之癌症：EGFR抑制劑、BRAF抑制劑、ALK抑制劑、c-Ros抑制劑、RET抑制劑、ERBB2抑制劑、BRCA抑制劑、MAP2K1抑制劑、PIK3CA抑制劑、CDKN2A抑制劑、PTEN抑制劑、UMD抑制劑、NRAS抑制劑、KRAS抑制劑、NF1抑制劑、MET抑制劑、TP53抑制劑、CREBBP抑制劑、KMT2C抑制劑、KMT2D突變、ARID1A突變、RB1抑制劑、ATM抑制劑、SETD2抑制劑、FLT3抑制劑、PTPN11抑制劑、FGFR1抑制劑、EP300抑制劑、MYC抑制劑、EZH2抑制劑、JAK2抑制劑、FBXW7抑制劑、CCND3抑制劑及GNA11抑制劑。

在一些實施態樣中，癌症展現＜1%之PD-L1 TPS且係不適用於藉由下列治療之癌症：EGFR抑制劑、BRAF抑制劑、ALK抑制劑、c-Ros抑制劑、RET抑制劑、ERBB2抑制劑、BRCA抑制劑、MAP2K1抑制劑、PIK3CA抑制劑、CDKN2A抑制劑、PTEN抑制劑、UMD抑制劑、NRAS抑制劑、KRAS抑制劑、NF1抑制劑、MET抑制劑、TP53抑制劑、CREBBP抑制劑、KMT2C抑制劑、KMT2D突變、ARID1A突變、RB1抑制劑、ATM抑制劑、SETD2抑制劑、FLT3抑制劑、PTPN11抑制劑、FGFR1抑制劑、EP300抑制劑、MYC抑制劑、EZH2抑制劑、JAK2抑制劑、FBXW7抑制劑、CCND3抑制劑及GNA11抑制劑。

在一些實施態樣中，癌症係NSCLC，且EGFR突變導致腫瘤從NSCLC轉變成小細胞肺癌(SCLC)。

在一些實施態樣中，癌症(或其活體組織切片)展現高腫瘤突變負荷(高TMB；＞ 10 mut/kb)及/或微小衛星體高不穩定性(MSI-高)。在一些實施態樣中，癌症(或其活體組織切片)展現高腫瘤突變負荷(高TMB；＞ 10 mut/kb)。在一些實施態樣中，癌症(或其活體組織切片)展現微小衛星體高不穩定性(MSI-高)。用於評估腫瘤突變負荷之方法及系統係所屬技術領域中已知。此類方法及系統之例示性揭露可見美國專利第9,792,403號、美國專利申請公開案第US 2018/0363066 A1號、國際專利申請公開案號WO 2013/070634 A1及WO 2018/106884 A1，及Metzker, Nature Biotechnol. Rev. 2010, 11, 31-46(彼等之各者以引用方式併入本文中)。

在一些實施態樣中，EGFR突變包括例如但不限於T790M、Ex19Del、L858R、外顯子20插入、delE709-T710insD、I744_K745insKIPVAI、K745_E746insTPVAIK、E709X、E709K、E709A、外顯子18刪除、G719X、G719A、G719S、L861Q、S768I、L747P、A763_764insFQEA、D770_N771insNPG、A763_764insFQEA、P772_H773insDNP外顯子20插入、H773_V774insNPH外顯子20插入、S768I、D770_N771insSVD、V769_D770InsASV、p.K745_E746insIPVAIK、p.K745_E746insTPVAIK、p.I744_K745insKIPVAI、D770_N771insNPG、P772_H773insPNP、A763_Y764insFQEA及/或EGFR激酶結構域重複(EGFR-KDD)。在一些實施態樣中，EGFR突變係選自由下列所組成之群組：T790M、Ex19Del、L858R、外顯子20插入、delE709-T710insD、I744_K745insKIPVAI、K745_E746insTPVAIK、E709X、E709K、E709A、外顯子18刪除、G719X、G719A、G719S、L861Q、S768I、L747P、A763_764insFQEA、D770_N771insNPG、A763_764insFQEA、P772_H773insDNP外顯子20插入、H773_V774insNPH外顯子20插入、S768I、D770_N771insSVD、V769_D770InsASV、p.K745_E746insIPVAIK、p.K745_E746insTPVAIK、p.I744_K745insKIPVAI、D770_N771insNPG、P772_H773insPNP、A763_Y764insFQEA及EGFR激酶結構域重複(EGFR-KDD)。

在一些實施態樣中，EGFR突變係雙重突變，包括但不限於L858R/T790M、Ex19Del/T790M、G719X/L861Q、G719X/S768I(或S768I/G719X)、S768I/L858R、L858R/E709A及/或E746_T751delinsA+T790M。在一些實施態樣中，EGFR突變係選自由下列所組成之群組的雙重突變：L858R/T790M、Ex19Del/T790M、G719X/L861Q、G719X/S768I(或S768I/G719X)、S768I/L858R、L858R/E709A及E746_T751delinsA+T790M。關於EGFR突變之額外性質及方法係提供於國際專利申請案公開號WO 2010/020618 A1(其以引用方式併入本文中)。

在一些實施態樣中，ALK突變包括但不限於EML4-ALK變體1 (AB274722.1; BAF73611.1)、EML4-ALK變體2 (AB275889.1; BAF73612.1)、EML4-ALK變體3a (AB374361.1; BAG55003.1)、EML4-ALK變體3b (AB374362.1; BAG55004.1)、EML4-ALK變體4 (AB374363.1; BAG75147.1)、EML4-ALK變體5a (AB374364.1; BAG75148.1)、EML4-ALK變體5b (AB374365.1; BAG75149.1)、EML4-ALK變體6 (AB462411.1; BAH57335.1)、EML4-ALK變體7 (AB462412.1; BAH57336.1)、KIF5B-ALK (AB462413.1; BAH57337.1)、NPM-ALK、TPM3-ALK、TFGXL-ALK、TEGL-ALK、TFGS-ALK、A11C-ALK、CLTC-ALK、MSN-ALK、TPM4-ALK、MYH9-ALK、RANBP2-ALK、AL017-ALK及CARS-ALK(見例如Pulford et al., (2004) J. Cell. Physiol. 199:330-358)。此外，所屬技術領域中具有通常知識者將理解ALK激酶變體可取決於介於ALK激酶與其融合伴之間的特定融合事件(例如EML4可融合至少外顯子2、6a、6b、13、14及/或15)而產生，如於例如Horn and Pao, J. Clin. Oncol. 2009, 27, 4247-4253(其揭露以引用方式併入本文中)中所述。

ALK突變的額外實例係描述於美國專利第9,018,230及9,458,508號，彼等揭露以引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，本發明之ROS1突變係ROS1融合，其中包括ROS1蛋白之激酶結構域的ROS1多肽之一部分(或編碼彼之多核苷酸)融合至另一多肽之所有或一部分(或編碼彼之多核苷酸)且其中該第二多肽或多核苷酸的名稱係命名於融合中。在一些實施態樣中，ROS1突變係經測定為ROS1融合蛋白(例如藉由IHC)及/或ROS融合基因(例如藉由FISH)及/或ROS1 mRNA(例如藉由qRT-PCR)，較佳地指示ROS1融合蛋白選自由下列所組成之群組：SLC34A2-ROS1(SLC34A2外顯子13del2046及4融合至ROS1外顯子32及34)、CD74-ROS1(CD74外顯子6融合至ROS1外顯子32及34)、EZR-ROS1(EZR外顯子10融合至ROS1外顯子34)、TPM3-ROS1(TPM3外顯子8融合至ROS1外顯子35)、LRIG3-ROS1(LRIG3外顯子16融合至ROS1外顯子35)、SDC4-ROS1(SDC4外顯子2及4融合至ROS1外顯子32及SDC4外顯子4融合至ROS1外顯子34)、GOPC-ROS1亦稱為 FIG-ROS1(GOPC外顯子8融合至ROS1外顯子35及GOPC外顯子4融合至ROS1外顯子36)及G2032R亦稱為ROS1G2032R。

ROS1突變及ROS融合之額外揭露已提供於美國專利申請公開案第US 2010/0221737 A1號、第US 2015/0056193 A1號及第US 2010/0143918 A1號，及國際專利申請公開案第WO 2010/093928 A1號(彼等之各者以引用方式併入本文中)。在一些實施態樣中，RET突變係RET融合或點突變。

在一些實施態樣中，RET點突變包括但不限於H6650、K666E、K666M、S686N、G691S、R694Q、M700L、V706M、V706A、E713K、G736R、G748C、A750P、S765P、P766S、E768Q、E768D、L769L、R770Q、D771N、N777S、V7781、Q781R、L790F、Y791F、Y791N、V804L、V804M、V804E、E805K、E806C、Y806E、Y806F、Y806S、Y806G、Y806C、E818K、S819I、G823E、Y826M、R833C、P841L、P841P、E843D、R844W、R844Q、R844L、M848T、1852M、A866W、R873W、A876V、L881V、A883F、A883S、A883T、E884K、R886W、S891A、R8970、D898V、E901K、5904F、S904C2、K907E、K907M、R908K、G911D、R912P、R912Q、M918T、M918V、M918L6、A919V、E921K、S922P、S922Y、T930M、F961L、R972G、R982C、M1009V、D1017N、V10416及M1064T。

在一些實施態樣中，RET融合係RET與融合伴之間的融合，該融合伴係選自由下列所組成之群組：BCR、BCR、CLIP 1、KIFSB、CCDC6、PTClex9、NCOA4、TRIM33、ERC1、FGFRIOP、MBD1、RAB61P2、PRKARIA、TRIM24、KTN1、GOLGA5、HOOK3、KIAA1468、TRIM27、AKAP13、FKBP15、SPECCIL、TBL1XR1、CEP55、CUX1、ACBD5、MYH13、PIBF1、KIAA1217及MPRIP。

RET突變之額外揭露已提供於美國專利第10035789號，其全文特此以引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，BRAF突變係BRAF V600E/K突變。在其他實施態樣中，BRAF突變係非V600E/K突變。

在一些實施態樣中，非V600E/K BRAF突變係激酶活化突變、激酶損害突變或激酶未知突變及彼等之組合。在一些實施態樣中，激酶活化突變係選自由R4621、1463S、G464E、G464R、G464V、G466A、G469A、N58 is、E586K、F595L、L597Q、L597R、L5975、L597V、A598V、T599E、V600R、K601E、5602D、A728V及彼等之組合所組成之群組。在一些實施態樣中，激酶損害突變係選自由G466E、G466R、G466V、Y472C、K483M、D594A、D594E、D594G、D594H、D594N、D594V、G596R、T599A、5602A及彼等之組合所組成之群組。在一些實施態樣中，激酶未知突變係選自由T4401、5467L、G469E、G469R、G4695、G469V、L584F、L588F、V600 K6OldelinsE、56051、Q609L、E611Q及彼等之組合所組成之群組。在一些實施態樣中，非V600E/K BRAF突變係選自由D594、G469、K601E、L597、T599重複、L485W、F247L、G466V、BRAF融合、BRAF-AGAP3重排、BRAF外顯子15剪接變體及彼等之組合所組成之群組。

在一些實施態樣中，Met突變包括點突變、刪除突變、插入突變、倒位、異常剪接、錯義突變或基因放大，該Met突變造成c-Met蛋白之至少一種生物活性增加、酪胺酸激酶活性諸如改善、受體同源物二聚化配體結合形成、增強本體及異二聚體等。Met突變可位於c-Met基因之任何部分。在一實施態樣中，突變係在藉由c-MET基因編碼之c-Met蛋白的激酶結構域中。在一些實施態樣中，c-Met突變係在N375、V13、V923、R175、V136、L229、S323、R988、S1058/T1010及E168之點突變。

在一些實施態樣中，ERBB2突變係在ERBB2之胺基酸序列中之點突變。在一些實施態樣中，ERBB2之點突變係造成胺基酸取代、造成mRNA剪接之點突變或係上游區中之點突變。其中突變包含造成至少一個選自由Q568E、P601R、I628M、P885S、R143Q、R434Q及E874K所組成之群組的胺基酸取代之核苷酸突變。

在一些實施態樣中，ERBB2突變係ERBB2放大。在一些實施態樣中，ERBB2放大包括選自由V659E、G309A、G309E、S310F、D769H、D769Y、V777L、P780ins、P780-Y781insGSP、V842I、R896C、K753E、及L755S所組成之群組的點突變且可藉由聚合酶連鎖反應或其他所屬技術領域中已知之定序技術偵測，諸如該些描述於Bose, et al., Cancer Discov. 2013, 3(2), 224-237及Zuo, et al. Clin Cancer Res. 2016, 22(19), 4859-4869中者(彼等揭露以引用方式併入本文中)。

在一些實施態樣中，BRCA突變係BRCA1及/或BRCA2(較佳地BRCA1)中及/或在一或多個其他基因中之突變，該一或多個其他基因之蛋白產物與在DNA損害位點之BRCA1及/或BRCA2相關聯，包括ATM、ATR、Chk2、H2AX、53BP1、NFBD1、Mre11、Rad50、Nibrin、BRCA1相關環結構域(BARD1)、Abraxas及MSH2。在這些基因之一或多者中之突變可導致模擬在BRCA1及/或BRCA2中之突變的基因表現模式。

在某些實施態樣中，BRCA突變包含非同義突變。在一些實施態樣中，BRCA突變包含無意義突變。在一些實施態樣中，BRCA突變包含讀框移位突變。在一些實施態樣中，BRCA突變包含剪接突變。在一些實施態樣中，BRCA突變係經表現為突變體mRNA及最終突變體蛋白。在一些實施態樣中，BRCA1/2蛋白具功能性。在其他實施態樣中，BRCA1/2蛋白具有減少的活性。在其他實施態樣中，BRCA1/2蛋白不具功能性。

如本文中有關取代所使用，有關突變之「=」符號通常係指同義取代、靜默密碼子及/或靜默取代。具體而言，同義取代(亦稱為靜默取代或靜默密碼子)係指編碼蛋白質之基因的外顯子中之一個核苷酸鹼基取代另一者，其中該產生之胺基酸序列未經修飾。這是因為基因密碼係經「簡併」之事實，即一些胺基酸係由超過一個三鹼基對密碼子編碼。由於給定胺基酸之一些密碼子與編碼相同胺基酸之其他密碼子僅有一個鹼基對的差異，因此藉由一個替代鹼基取代野生型鹼基之點突變將導致在基因轉譯期間併入相同胺基酸至伸長的多肽鏈中。在一些實施態樣中，影響非編碼DNA之同義取代及突變通常被視為靜默突變；然而，這些突變並非總是靜默且無任何影響。例如，同義突變可影響轉錄、剪接、mRNA運送及轉譯，其中任一者可改變所得表型，使同義突變並非靜默。tRNA對罕見密碼子之受質特異性可影響轉譯時間(timing)，且進而影響蛋白質之共轉譯折疊。此係呈現在已在許多物種觀察到之密碼子使用偏差中。非同義取代/突變導致可被任意歸類為保守性(改變為具有類似物理化學性質之胺基酸)、半保守性(例如帶負電改變為帶正電胺基酸)或激進(極不同胺基酸)之胺基酸改變。在一些實施態樣中，BRCA突變係BRCA1突變，其包括但不限於P871L、K1183R、D693N、S1634G、E1038G、S1040N、S694=(=：靜默密碼子)、M1673I、Q356R、S1436=、L771=、K654Sfs*47、S198N、R496H、R841W、R1347G、H619N、S1533I、L30=、A622V、Y655Vfs*18、R496C、E597K、R1443*、E23Vfs*17、L30F、E111Gfs*3、K339Rfs*2、L512F、D693N、P871S、S1140G、Q1240*、P1770S、R7=、L52F、T176M、A224S、L347=、S561F、E597*、K820E、K893Rfs*107、E962K、M1014I、R1028H、E1258D、E1346K、R1347T、L1439F、H1472R、Q1488*、S1572C、E1602K、R1610C、L1621=、Q1625*、Q1625=、D1754N、R1772Q、R1856*及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，BRCA突變係BRCA2突變，其包括但不限於V2466A、N289H、N991D、S455=(=：靜默密碼子)、N372H、H743=、V1269=、S2414=、V2171=、L1521=、T3033Nfs*11、K1132=、T3033Lfs*29、R2842C、N1784Tfs*7、K3326*、K3326*、D1420Y、I605Yfs*9、I3412V、A2951T、T3085Nfs*26、R2645Nfs*3、S1013*、T1915M、F3090=、V3244I、A1393V、R2034C、L1356=、E2981Rfs*37、N1784Kfs*3、K3416Nfs*11、K1691Nfs*15、S1982Rfs*22及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，NRAS突變包括但不限於E63K、Q61R、Q61K、G12D、G13D、Q61R、Q61L、Q61K、G12S、G12C、G13R、Q61H、G12V、G12A、Q61L、G13V、Q61H、Q61H、G12R、G13C、Q61P、G13S、G12D、G13A、G13D、A18T、Q61X、G60E、G12S、Q61=(=：靜默密碼子)、Q61E、Q61R、A146T、A59T、A59D、Q61=、R68T、A146T、G12A、E62Q、G75=、A91V及彼等之任何組合。

E132K在一些實施態樣中，PIK3CA突變包括取代突變、刪除突變及插入突變。在一些實施態樣中，突變發生在PIK3CA的螺旋結構域中及其激酶中。在其他實施態樣中，在PIK3CA的P85BD結構域中。在一些實施態樣中，PIK3CA突變係在外顯子1、2、4、5、7、9、13、18及20中。在一些實施態樣中，PIK3CA突變係在外顯子9及20中。在仍其他實施態樣中，PIK3CA突變係上列任何突變之組合。這些外顯子之任何組合可經測試，可選地搭配測試其他外顯子。突變之測試可沿著整個編碼序列進行或可聚焦於已發現突變叢聚之區域。特定突變熱點發生在PIK3CA編碼序列之核苷酸位置1624、1633、1636及3140。

在一些實施態樣中，PIK3CA突變之大小係小的，範圍自1至3個核苷酸。在一些實施態樣中，PIK3CA突變包括但不限於G1624A、G1633A、C1636A、A3140G、G113A、T1258C、G3129T、C3139T、E542K、E545K、Q546R、H1047L、H1047R及G2702T。

在一些實施態樣中，MAP2K1突變係MAP2K1體突變，可選地上調MEK1水準之MAP2K1突變。在一些實施態樣中，MAP2K1突變係在與RAS/MAPK途徑相關聯之一或多個基因中之突變，包含：HRAS、KRAS、NRAS、ARAF、BRAF、RAFl、MAP2K2、MAPKl、MAPK3、MAP3K3。在某些實施態樣中，MAP2K1突變係在選自由RASA、PTEN、ENG、ACVRL1、SMAD4、GDF2或彼等之組合所組成之群組的一或多個基因中。

在一些實施態樣中，MAP2K1突變包括但不限於P124S、Q56P、K57N、E203K、G237*、P124L、G128D、D67N、K57E、E102_I103del、C121S、K57T、K57N、Q56P、P124L、K57N、G128V、Q58_E62del、F53L、I126=、I103_K104del及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，KRAS突變包含非同義突變。在一些實施態樣中，KRAS突變包含無意義突變。在一些實施態樣中，KRAS突變包含讀框移位突變。在一些實施態樣中，KRAS突變包含剪接突變。在一些實施態樣中，KRAS突變係經表現為突變體mRNA及最終突變體蛋白。在一些實施態樣中，經突變之KRAS蛋白具功能性。在其他實施態樣中，經突變之KRAS蛋白具有減少的活性。在其他實施態樣中，經突變之KRAS蛋白不具功能性。

在一些實施態樣中，KRAS突變包括但不限於G12D、G12V、G13D、G12C、G12A、G12S、G12R、G13C、Q61H、A146T、Q61R、Q61H、Q61L、G13S、A146V、Q61K、G13R、G12F、K117N、G13A、G13V、A59T、V14I、K117N、Q22K、Q61P、A146P、G13D、L19F、L19F、Q61K、G12V、G60=、G12=、G13=、A18D、T58I、Q61E、E63K、G12L、G13V、A59G、G60D、G10R、G10dup、D57N、A59E、V14G、D33E、G12I、G13dup及彼等之任何組合，其中=指示靜默編碼。

在一些實施態樣中，NF1突變包括取代突變、刪除突變、錯義突變、異常剪接突變及插入突變。在一些實施態樣中，NF1突變係功能喪失(LOF)突變。在一些實施態樣中，NF1突變係選自由下列所組成之群組：R1947X (C5839T)、R304X、外顯子37突變、外顯子4b突變、外顯子7突變、外顯子10b突變及外顯子10c突變(例如1570GàT、E524X)。

在一些實施態樣中，CDKN2A突變包括但不限於R24P、D108G、D108N、D108Y、G125R、P114L、R80*、R58*、H83Y、W110*、P114L、E88*、W110*、E120*、D108Y、D84Y、D84N、E69*、P81L、Q50*、L78Hfs*41、D108N、S12*、P48L、E61*、Y44*、E88K、R80*、D84G、L16Pfs*9、Y129*、D108H、A148T、A36G、A102V、W15*、H83R、A57V、E33*、D74Y、A76V、E153K、D74N、H83D、V82M、R58*、Y129*、E119*、Y44*、D74A、T18_A19dup、Y44Lfs*76、L32_L37del、V28_E33del、D14_L16del、A68T或彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，PTEN突變包含非同義突變。在一些實施態樣中，PTEN突變包含無意義突變。在一些實施態樣中，PTEN突變包含讀框移位突變。在一些實施態樣中，PTEN突變包含剪接突變。在一些實施態樣中，經突變之PTEN係經表現為mRNA及最終蛋白。在一些實施態樣中，經突變之PTEN蛋白具功能性。在其他實施態樣中，經突變之PTEN蛋白具有減少的活性。在其他實施態樣中，經突變之PTEN蛋白不具功能性。在一些實施態樣中，PTEN突變包括但不限於R130Q、R130G、T319*、R233*、R130*、K267Rfs*9、N323Mfs*21、N323Kfs*2、R173C、R173H、R335*、Q171*、Q245*、E7*、D268Gfs*30、R130Q、Q214*、R130L、C136R、Q298*、Q17*、H93R、P248Tfs*5、I33del、R233*、E299*、G132D、Y68H、T319Kfs*24、N329Kfs*14、V166Sfs*14、V290*、T319Nfs*6、R142W、P38S、A126T、H61R、F278L、S229*、R130P、G129R、R130Qfs*4、P246L、R130*、G165R、C136Y、R173C、I101T、Y155C、D92E、K164Rfs*3、N184Efs*6、G129E、R130G、G36R、F341V、H123Y、C124S、M35VG127E、G165E及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，TP53突變包括但不限於R175H、G245S、R248Q、R248W、R249S、R273C、R273H、R282W、C135Y、C141Y、P151S、V157F、R158L、Y163C、V173L、V173M、C176F、H179R、H179Y、H179Q、Y205C、Y220C、Y234C、M237I、C238Y、S241F、G245D、G245C、R248L、R249M、V272M、R273L、P278L、R280T、E285K、E286K、R158H、C176Y、I195T、G214R、G245V、G266R、G266E、P278S、R280K或彼等之任何組合。在一些進一步實施態樣中，TP53突變係選自由下列所組成之群組：G245S、R249S、R273C、R273H、C141Y、V157F、R158L、Y163C、V173L、V173M、Y205C、Y220C、G245C、R249M、V272M、R273L及E286K。在一些實施態樣中，TP53突變包括以上突變之一或多者。

在一些實施態樣中，CREBBP突變包括但不限於R1446C、R1446H、S1680del、I1084Sfs*15、P1948L、I1084Nfs*3、?R386*、S893L、R1341*、P1423Lfs*36、P1488L、Y1503H、R1664C、A1824T、R1173*、R1360*、Y1450C、H2228D、S71L、P928=、D1435N、W1502C、Y1503D、R483*、R601Q、S945L、R1103*、R1288W、R1392*、C1408Y、D1435G、R1446L、H1485Y、Q1491K、Q96*、L361M、L524Wfs*6、Q540*、Q1073*、A1100V、R1169C、C1237Y、R1347W、G1411E、W1472C、I1483F、P1488T、R1498*、Y1503F、Q1856*、R1985C、R2104C、S2328L、V2349=、S2377L及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，KMT2C突變包括但不限於D348N、P350=、R380L、C391*、P309S、C988F、Y987H、S990G、K2797Rfs*26、V346=、R894Q、R284Q、S806=、R1690=、P986=、A1685S、G315S、Q755*、R909K、T316S、S772L、G838S、L291F、P335=、C988F、Q2680=、E765G、K339N、Y816*、R526P、N729D、G845E、I817Nfs*11、G892R、C1103*、S3660L、F4496Lfs*21、G315C、R886C、D348N、S793=、V919L、R2481S、R2884*、R4549C、M305Dfs*28、T316S、P377=、I455M、T820I、S965=、S730Y、P860S、Q873Hfs*40、R904*、R2610Q、R4478*及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，KMT2D突變包括但不限於L1419P、E640D、E541D、E455D、T2131P、K1420R、P2354Lfs*30、G2493=、Q3612=、I942=、T1195Hfs*17、P4170=、P1194H、G1235Vfs*95、P4563=、P647Hfs*283、L449_P457del、P3557=、Q3603=、R1702*、P648Tfs*2、R5501*、R4198*、R4484*、R83Q、R1903*、,R2685*、R4282*、L5326=、R5432W、R2734*、Q2800*、R2830*、Q3745dup、S4010P、R4904*、G5182Afs*61、R5214H、R1615*、Q2380*、R2687*、R2771*、V3089Wfs*30、Q3799Gfs*212、R4536*、R5030C、R5048C、R5432Q、A221Lfs*40、A476T、A2119Lfs*25、P2557L、R2801*、Q3913*、R4420W、G4641=、R5097*及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，ARID1A突變包括但不限於例如個體具有選自由C884*(*：無意義突變)、E966K、Q1411*、F1720fs(fs：讀框移位)、G1847fs、C1874fs、D1957E、Q1430、R1721fs、G1255E、G284fs、R1722*、M274fs、G1847fs、P559fs、R1276*、Q2176fs、H203fs、A591fs、Q1322*、S2264*、Q586*、Q548fs及N756fs所組成之群組的ARID1A之突變。

在一些實施態樣中，RB1突變包括但不限於R320X、R467X、R579X、R455X、R358X、R251X、R787X、R552X、R255X、R556X、Y790X、Q575X、E323X、R661W、R579*、R455*、R556*、R787*、R661W、R445*、R467*、Q217*、Q471*、W195*、Q395*、I680T、E137*、R255*、Q344*、Q62*、E440K、A488V、P777Lfs*33、E322K、R656W、G617Rfs*36、C221*、E440*、Q93*、Q504*、E125*、S834*、E323*、Q685*、S829*、W516*、G435*、Q257*、E79*、S567L、V654M、V654Sfs*14、G100Efs*11、K715*及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，ATM突變係在ATM基因序列中之突變，包括但不限於10744A＞G；10744A＞G；11482G＞A；IVS3-558A＞T；146C＞G；381delA；IVS8-3delGT；1028delAAAA；1120C＞T；1930ins16；IVS16+2T＞C；2572T＞C；IVS21+1G＞A；3085delA；3381delTGAC；3602delTT；4052delT；4396C＞T；5188C＞T；5290delC；5546delT；5791G＞CCT；6047A＞G；IVS44-1G＞T；6672delGC/6677delTACG；6736dell 1/6749del7；7159insAGCC；7671delGTTT；7705del14；7865C＞T；7979delTGT；8177C＞T；8545C＞T；8565T＞A；IVS64+1G＞T；及9010del28。

在本發明之一些實施態樣中，當NCBI編號NM_014159之mRNA序列的轉錄起始密碼子位置設定為1，SETD2突變係編碼SETD2蛋白之基因序列的改變。在一些實施態樣中，第7558位置G(鳥嘌呤)係經T(胸腺嘧啶)取代，第4774位置C(胞嘧啶)係經T取代，第1210位置A(腺嘌呤)係經T取代，第4883位置T係經G取代，第5290位置C係置換成T，第7072位置C係置換成T，第4144位置G係經T取代，第1297位置C係置換成T，第755位置T係置換成G，第7261位置T係經G取代，第6700位置係置換成T，第2536位置C係經T取代，第7438位置C係置換成T取代或在位置3866插入A，在位置6712插入T，在位置7572插入T，刪除第913位置A，刪除第5619位置C，刪除鹼基4603-4604，刪除第1鹼基，刪除第1936位置C，刪除3094-3118鹼基，在第5289位置插入A及刪除6323-6333鹼基。

在一些實施態樣中，FLT3突變包括但不限於(Q569_E648)ins、D835X、(Q569_E648)delins、(D835_I836)、D835Y、D835V、D835Y、D835H、T227M、I836del、N676K、D835E、Y597_E598insDYVDFREY、D835E、D835del、F594_D600dup、A680V、D839G、D96=、D835H、V491L、D835E、Q989*、D835V、L561=、I836del、P986Afs*27、D7G、D324N、S451F、D835N、L576P、Y597_E598insDVDFREY、V491L、N841T、D324N、Y572C、R595_L601dup、K663R、N676K、F691L、D835A、I836H、N841K、S993L、L832F、I836M、A66V及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，PTPN11突變包括但不限於c E76K、A72V、A72T、D61Y、D61V、G60V、E69K、E76G、G507V、S506L、G507A、T73I、E76A、E76Q、S506P、D61N、F71L、E76V、F71L、A72D、V432M、T472M、P495L、N58Y、F285S、S506A、S189A、A465T、R502W、G507R、T511K、D61H、D61G、G507E、G60R、G60A、Q514L、E139D、Y197*、N308D、Q514H、Q514H、N58S、E123D、L206=、A465G、P495S、G507R及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，FGFR1突變包括但不限於N577K、K687E、N577K、D166del、T371M、R476W、T350=、E498K、N577D、D683G、R87C、A154D、N303=、A374V、D550=、S633=、V695L、G728=、R765W、P803S、W19C、P56=、R113C、V149I、S158L、D166dupR220C、N224Kfs*8、D249N、R281W、R281Q、A299S、S424L、S461F、S467F、R506Q及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，EP300突變包括但不限於D1399N、Y1414C、M1470Cfs*26、Y1111*、H2324Pfs*55、R1627W、N2209_Q2213delinsK、Q2268del、L415P、M1470Nfs*3、E1514K、C1201Y、P1452L、S952*、C1164Y、D1399Y、S507G、Q824*、D1507N、H2324Tfs*29、P925T、P1440L、W1466C、P1502L、A1629V、R1645*、N1700Tfs*9、P1869L、Q65*、A171V、R202*、R580Q、A627V、Q1082*、N1236Kfs*2、N1286S、R1312*、R1356*、C1385F、H1451L、R1462*、Y1467N、Y1467H、R1478H、R1627Q、R86*、R370H、R397*、R754C、P842S、I997V、E1014*及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，MYC突變包括但不限於E61T、E68I、R74Q、R75N、W135E、W136E、V394D、L420P、W96E、V325D、L351P、N端的41個胺基酸刪除之MYC蛋白(dN2MYC)、N26S、S161L、P74L、V7M、F153S、E54D、P246、L164V、P74S、A59V、T73I、P72T、T73A、H374R、P17S、T73N、S264N、P72S、Q52del、S21T、P74A、S107N、P75S、S77P、P261S、P74Q、S190R、A59T、F153C、P75H、T73I、S77F、N11S、S21N、P78L、P72L、N9K、S190N、S267F、T73P、P78S、G105D、S187C、L71M、Q10H、L191x、Q50x、L191F、R25K、F130L、Y27S、D195N、D2G、V20A、V6G、V20I、D2H、P75A、G152D、P74T、C40Y、E8K、Q48x及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，EZH2突變係與經改變之組蛋白甲基化模式相關聯。在一些實施態樣中，EZH2突變導致胺基酸Y641(相當於催化結構域Y646)轉化成F、N、H、S或C，導致H3K27之高三甲基化及驅動淋巴瘤生成。在一些實施態樣中，EZH2突變包括EZH2 SET結構域突變、過度表現EZH2、過度表現其他PRC2次單元、組蛋白乙醯基轉移酶(HAT)之功能喪失突變及MLL2之功能喪失。EZH2 Y646突變異型合子之細胞導致相對於EZH2蛋白野生型(WT)同型合子之細胞或相對於Y646突變同型合子之細胞H3K27之高三甲基化。

在一些實施態樣中，EZH2突變包括但不限於Y646F、Y646N、D185H、Y646F、Y646S、Y646H、R690H、Y646X、E745K、Y646C、V626M、V679M、R690H、R684H、A682G、E249K、G159R、R288Q、N322S、A692V、R690C、D730*(插入讀框移位)、S695L、R684C、M667T、R288*、S644*、D192N、K550T、Q653E、D664G、R347Q、Y646C、G660R、R213C、A255T、S538L、N693K、I55M、R561H、A692V、K515R、Y733*、R63*、Q570*、Q328*、R25Q、T467P、A656V、T573I、C571Y、E725K、R16W、P577L、F145S、V680M、G686D、G135R、K634E、S652F、R298C、G648E、R566H、L149R、R502Q、Y731D、R313W、N675K、S652C、T374Hfs*3、N152Ifs*15、E401Kfs*22、K406Mfs*17、E246*、S624C、I146T、V626M、L674S、H694R、A581S及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，JAK2突變係在JAK2基因中之突變，包括但不限於T1923C突變與G1920T突變、G1920T / C1922T突變或G1920A突變之組合。在一些實施態樣中，JAK2突變係包含一或多個取代之突變體JAK2蛋白，該一或多個取代包括但不限於V617F、V617I、R683G、N542_E543del、E543_D544del、R683S、R683X、F537_K539delinsL(符合讀框刪除)、K539L、N1108S、R1113H、R1063H、R487C、I540Mfs*3(刪除-讀框移位)、R867Q、K539L、G571S、R1113C、R938Q、R228Q、L830*、E1080*、K539L、C618R、R564Q、D1036H、L1088S、H538Nfs*4、D873N、V392M、I682F、L393V、M535I、C618R、T875N、L611V、D319N、L611S、G921S、H538Y、S1035L及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，FBXW7突變係選自由W244*(*：終止密碼子)、R222*、R278*、E192A、S282*、E113D、R465H/C、726+1 G＞A剪接、R505C、R479Q、R465C、R367*、R499Vfs*25(fs*：讀框移位)、R658*、D600Y、D520N、D520Y及彼等之任何組合所組成之群組的點突變。在進一步實施態樣中，FBXW7突變係雙突變或三突變，包括但不限於R479Q及S582L、R465H及S582L、D520N、D520Y及R14Q及R367*及S582L。

在一些實施態樣中，CCND3突變包括但不限於S259A、R271Pfs*53(插入造成讀框移位)、E51*、Q260*、P199S、T283A、T283P、V287D、D286_T288del、R271Gfs*33、Q276*、R241Q、D238G、R33P、I290K、I290T、I290R、P267fs、P284S、P284L、P100S、E253D、S262I、R14W、R114L、D238N、A266E、R167W及彼等之任何組合。

在一些實施態樣中，GNA11突變包括但不限於Q209L、R183C、T257=、R183C、G208Afs*16、Q209H、R183C、Q209P、Q209R、Q209H、?T96=、R210W、R256Q、T334=、G48D、S53G、Q209P、R213Q及彼等之任何組合。在一些實施態樣中，GNA11突變具有在外顯子4中之二個突變，例如在V182中之突變及在T175中之突變或在外顯子5中之一或多個突變。 2. 與PD-1及PD-L1抑制劑組合

在一些實施態樣中，提供給癌症病患的TIL療法可包括單獨治療性TIL族群治療或可包括組合治療，該組合治療包括TIL及一或多種PD-1及/或PD-L1抑制劑。

程序性死亡1 (PD-1)係由T細胞、B細胞、天然殺手(NK) T細胞、經活化之單核球及樹突細胞表現之288個胺基酸的跨膜免疫檢查點受體蛋白質。PD-1(亦稱為CD279)屬於CD28家族，且在人係由染色體2上之Pdcd1基因編碼。PD-1係由一個免疫球蛋白(Ig)超家族結構域、跨膜區及含有免疫受體酪胺酸基底抑制模體(ITIM)及免疫受體酪胺酸基底開關模體(ITSM)之細胞內結構域組成。已知PD-1及其配體(PD-L1及PD-L2)在免疫耐受性扮演關鍵角色，如Keir, et al., Annu. Rev. Immunol. 2008, 26, 677-704所述。PD-1提供負向調節T細胞免疫反應之抑制信號。PD-L1(亦稱為B7-H1或CD274)及PD-L2(亦稱為B7-DC或CD273)係表現在腫瘤細胞及基質細胞上，該等細胞可遭遇表現PD-1之經活化之T細胞，導致T細胞的免疫抑制。PD-L1係由人染色體9上之Cd274基因編碼之290個胺基酸的跨膜蛋白質。使用PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑及/或PD-L2抑制劑阻斷PD-1及其配體PD-L1及PD-L2之間的交互作用可克服免疫抗性，如最近諸如Topalian, et al., N. Eng. J. Med. 2012, 366, 2443-54所述之臨床研究顯示。PD-L1表現在許多腫瘤細胞系上，而PD-L2大多表現在樹突細胞及少數腫瘤細胞系上。除了T細胞(其在活化後誘導性表現PD-1)之外，PD-1亦表現在B細胞、自然殺手細胞、巨噬細胞、經活化之單核球及樹突細胞上。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑可為所屬技術領域中已知之任何PD-1抑制劑或PD-1阻斷劑。具體而言，其係下列段落詳述之PD-1抑制劑或阻斷劑之一者。參照PD-1抑制劑之用語「抑制劑(inhibitor)」、「拮抗劑(antagonist)」及「阻斷劑(blocker)」在本文中可互換使用。為了避免疑義，在本文中提及係為抗體之PD-1抑制劑可指化合物或其抗原結合片段、變體、接合物或生物類似物。為了避免疑義，在本文中提及PD-1抑制劑亦可指小分子化合物或其醫藥上可接受之鹽、酯、溶劑合物、水合物、共晶體或前藥。

在一較佳實施態樣中，PD-1抑制劑係抗體(即，抗PD-1抗體)、其片段(包括Fab片段)或其單鏈可變片段(scFv)。在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係多株抗體。在較佳實施態樣中，PD-1抑制劑係單株抗體。在一些實施態樣中，PD-1抑制劑與PD-1競爭結合及/或與PD-1上之表位結合。在一實施態樣中，抗體與PD-1競爭結合及/或與PD-1上之表位結合。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係以約100 pM或較低之KD與人PD-1結合、以約90 pM或較低之KD與人PD-1結合、以約80 pM或較低之KD與人PD-1結合、以約70 pM或較低之KD與人PD-1結合、以約60 pM或較低之KD與人PD-1結合、以約50 pM或較低之KD與人PD-1結合、以約40 pM或較低之KD與人PD-1結合、以約30 pM或較低之KD與人PD-1結合、以約20 pM或較低之KD與人PD-1結合、以約10 pM或較低之KD與人PD-1結合或以約1 pM或較低之KD與人PD-1結合者。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係以約7.5×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-1結合、以約7.5×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-1結合、以約8×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-1結合、以約8.5×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-1結合、以約9×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-1結合、以約9.5×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-1結合或以約1×106 1/M·s或更快之k締合與人PD-1結合者。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係以約2×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.1×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.2×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.3×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.4×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.5×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.6×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合或以約2.7×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.8×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.9×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合或以約3×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合者。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係以約10 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合、以約9 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合、以約8 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合、以約7 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合、以約6 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合、以約5 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合、以約4 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合、以約3 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合、以約2 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合或以約1 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合者。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑係尼沃魯單抗(Bristol-Myers Squibb Co.以OPDIVO市售)或其生物類似物、抗原結合片段、接合物或變體。尼沃魯單抗係阻斷PD-1受體之全人IgG4抗體。在一實施態樣中，抗PD-1抗體係免疫球蛋白G4 κ、抗-(人CD274)抗體。尼沃魯單抗經指派化學文摘社(CAS)登記號946414-94-4，且亦稱為5C4、BMS-936558、MDX-1106及ONO-4538。尼沃魯單抗之製備及性質係描述於美國專利第8,008,449號及國際專利公開案WO 2006/121168，彼等揭露以引用方式併入本文中。尼沃魯單抗於各種形式的癌症之臨床安全性及療效已描述於Wang, et al., Cancer Immunol. Res. 2014, 2, 846-56；Page, et al., Ann. Rev. Med., 2014, 65, 185-202；及Weber, et al., J. Clin. Oncology, 2013, 31, 4311-4318，彼等揭露以引用方式併入本文中。尼沃魯單抗之胺基酸序列係如表18所示。尼沃魯單抗具有位於22-96、140-196、254-314、360-418、22''-96''、140''-196''、254''-314''及360''-418''之重鏈內雙硫鍵；位於23'-88'、134'-194'、23'''-88'''及134'''-194'''之輕鏈內雙硫鍵；位於127-214'、127''-214'''之重鏈-輕鏈間雙硫鍵、位於219-219''及222-222''之重鏈-重鏈間雙硫鍵；及位於290、290''之N-糖基化位點(H CH2 84.4)。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含由SEQ ID NO:158給出之重鏈及由SEQ ID NO:159給出之輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含分別具有SEQ ID NO:158及SEQ ID NO:159所示序列之重鏈及輕鏈，或彼等之抗原結合片段、Fab片段、單鏈可變片段(scFv)、變體或接合物。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:158及SEQ ID NO:159所示序列具有至少99%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:158及SEQ ID NO:159所示序列具有至少98%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:158及SEQ ID NO:159所示序列具有至少97%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:158及SEQ ID NO:159所示序列具有至少96%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:158及SEQ ID NO:159所示序列具有至少95%一致性之重鏈及輕鏈。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含尼沃魯單抗之重鏈及輕鏈CDR或可變區(VR)。在一實施態樣中，PD-1抑制劑重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO:160所示之序列且PD-1抑制劑輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO:161所示之序列或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:160及SEQ ID NO:161所示序列具有至少99%一致性之VH及VL區。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:160及SEQ ID NO:161所示序列具有至少98%一致性之VH及VL區。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:160及SEQ ID NO:161所示序列具有至少97%一致性之VH及VL區。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:160及SEQ ID NO:161所示序列具有至少96%一致性之VH及VL區。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:160及SEQ ID NO:161所示序列具有至少95%一致性之VH及VL區。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含具有分別如SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:163及SEQ ID NO:164所示之序列的重鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代，及具有分別如SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166及SEQ ID NO:167所示之序列的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，抗體和任何前述抗體競爭與PD-1上之相同表位的結合及/或與任何前述抗體所結合之PD-1上的相同表位結合。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑係藥物主管機關參照尼沃魯單抗所核准的抗PD-1生物類似物單株抗體。在一實施態樣中，生物類似物包含抗PD-1抗體，該抗PD-1抗體包含與參考藥品或參考生物產品之胺基酸序列具有至少97%序列一致性(例如97%、98%、99%或100%序列一致性)之胺基酸序列，且其相較於該參考藥品或參考生物產品包含一或多個轉譯後修飾，其中該參考藥品或參考生物產品係尼沃魯單抗。在一些實施態樣中，該一或多個轉譯後修飾係選自下列一或多者：糖基化、氧化、脫醯胺及截短。在一些實施態樣中，生物類似物係獲得授權或申請授權之抗PD-1抗體，其中該抗PD-1抗體係提供於一種與參考藥品或參考生物產品之調配物不同的調配物，其中該參考藥品或參考生物產品係尼沃魯單抗。抗PD-1抗體可獲得藥物主管機關諸如美國FDA及/或歐盟的EMA授權。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係尼沃魯單抗。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係尼沃魯單抗。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係尼沃魯單抗或其生物類似物，且尼沃魯單抗係以約0.5 mg/kg至約10 mg/kg的劑量投予。在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係尼沃魯單抗或其生物類似物，且尼沃魯單抗係以約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約3.5 mg/kg、約4 mg/kg、約4.5 mg/kg、約5 mg/kg、約5.5 mg/kg、約6 mg/kg、約6.5 mg/kg、約7 mg/kg、約7.5 mg/kg、約8 mg/kg、約8.5 mg/kg、約9 mg/kg、約9.5 mg/kg或約10 mg/kg的劑量投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係尼沃魯單抗或其生物類似物，且尼沃魯單抗係以約200 mg至約500 mg的劑量投予。在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係尼沃魯單抗或其生物類似物，且尼沃魯單抗係以約200 mg、約220 mg、約240 mg、約260 mg、約280 mg、約300 mg、約320 mg、約340 mg、約360 mg、約380 mg、約400 mg、約420 mg、約440 mg、約460 mg、約480 mg或約500 mg的劑量投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係尼沃魯單抗或其生物類似物，且尼沃魯單抗係每2週、每3週、每4週、每5週或每6週投予一次。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療無法切除或轉移性黑色素瘤。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療無法切除或轉移性黑色素瘤且係以每2週約240 mg投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療無法切除或轉移性黑色素瘤且係以每4週約480 mg投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療無法切除或轉移性黑色素瘤，且係以每3週約1 mg/kg隨後在同一天3 mg/kg之伊匹單抗共4劑，接著每2週240 mg或每4週480 mg投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予用於黑色素瘤之佐劑治療。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg投予用於黑色素瘤之佐劑治療。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每4週約480 mg投予用於黑色素瘤之佐劑治療。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療轉移性非小細胞肺癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約3 mg/kg連同每6週約1 mg/kg之伊匹單抗投予以治療轉移性非小細胞肺癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每3週約360 mg連同每6週1 mg/kg之伊匹單抗及2週期的鉑雙重化學療法投予以治療轉移性非小細胞肺癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg或每4週480 mg投予以治療轉移性非小細胞肺癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療小細胞肺癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg投予以治療小細胞肺癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每3週約360 mg連同每6週1 mg/kg之伊匹單抗投予以治療惡性胸膜間皮瘤。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療晚期腎細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg投予以治療晚期腎細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每4週約480 mg投予以治療晚期腎細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每3週約3 mg/kg隨後在同一天約1 mg/kg之伊匹單抗共4劑，接著每2週240 mg投予以治療晚期腎細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每3週約3 mg/kg隨後在同一天約1 mg/kg之伊匹單抗共4劑，接著每2週240 mg每4週480 mg投予以治療晚期腎細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療典型霍奇金氏淋巴瘤。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg投予以治療典型霍奇金氏淋巴瘤。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每4週約480 mg投予以治療典型霍奇金氏淋巴瘤。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療復發或轉移性頭頸鱗狀細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg投予以治療復發或轉移性頭頸鱗狀細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每4週約480 mg投予以治療復發或轉移性頭頸鱗狀細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg投予以治療局部晚期或轉移性泌尿上皮癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每4週約480 mg投予以治療局部晚期或轉移性泌尿上皮癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療成人或小兒病患之微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg投予以治療≥40 kg之成人或小兒病患之微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每4週約480 mg投予以治療≥40 kg之成人或小兒病患之微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約3 mg/kg投予以治療＜40 kg之小兒病患之微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每3週約3 mg/kg隨後在同一天1 mg/kg之伊匹單抗共4劑，接著每2週240 mg投予以治療≥40 kg之成人或小兒病患之微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每3週約3 mg/kg隨後在同一天1 mg/kg之伊匹單抗共4劑，接著每4週480 mg投予以治療≥40 kg之成人或小兒病患之微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療肝細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg投予以治療肝細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每4週約480 mg投予以治療肝細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每3週約1 mg/kg隨後在同一天3 mg/kg之伊匹單抗共4劑，接著每2週240 mg投予以治療肝細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每3週約1 mg/kg隨後在同一天3 mg/kg之伊匹單抗共4劑，接著每4週480 mg投予以治療肝細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係經投予以治療食道鱗狀細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每2週約240 mg投予以治療食道鱗狀細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗係以每4週約480 mg投予以治療食道鱗狀細胞癌。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，尼沃魯單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在另一實施態樣中，PD-1抑制劑包含派姆單抗(Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA以KEYTRUDA市售)或其抗原結合片段、接合物或變體。派姆單抗經指派CAS登記號1374853-91-4，且亦稱為來伯里茲單抗、MK-3475及SCH-900475。派姆單抗具有免疫球蛋白G4、抗-(人蛋白質PDCD1(程序性細胞死亡1))(人-家鼷鼠單株重鏈)與人-家鼷鼠單株輕鏈二硫化物之二聚體結構。派姆單抗之結構亦可描述為免疫球蛋白G4、抗-(人程序性細胞死亡1)；人化小鼠單株[228-L-脯胺酸(H10-S＞P)]γ4重鏈(134-218')-二硫化物與人化小鼠單株κ輕鏈二聚體(226-226'':229-229'')-雙二硫化物。派姆單抗之性質、用途及製備係描述於國際專利公開號WO 2008/156712 A1、美國專利第8,354,509號及美國專利申請公開案號US 2010/0266617 A1、US 2013/0108651 A1及US 2013/0109843 A2，彼等揭露以引用方式併入本文中。派姆單抗於各種形式的癌症之臨床安全性及療效已描述於Fuerst,Oncology Times ,2014, 36 , 35-36；Robert,et al. ,Lancet ,2014 , 384, 1109-17；及Thomas,et al. ,Exp. Opin. Biol. Ther. ,2014 ,14 , 1061-1064。派姆單抗之胺基酸序列係如表19所示。派姆單抗包括下列雙硫鍵：22-96、22''-96''、23'-92'、23'''-92'''、134-218'、134''-218'''、138'-198'、138'''-198'''、147-203、147''-203''、226-226''、229-229''、261-321、261''-321''、367-425及367''-425''及下列糖基化位點(N)：Asn-297及Asn-297''。派姆單抗係IgG4/κ同型，在Fc區具有穩定性S228P突變；在IgG4鉸鏈區插入此突變防止一般在IgG4抗體觀察到之半分子的形成。派姆單抗在各重鏈Fc結構域內之Asn297經異質性糖基化，產生完整抗體大約149 kDa之分子量。派姆單抗之優勢糖化形式係經岩藻糖基化之無半乳糖雙觸角聚糖形式(G0F)。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含由SEQ ID NO:168給出之重鏈及由SEQ ID NO:169給出之輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含分別具有SEQ ID NO:168及SEQ ID NO:169所示序列之重鏈及輕鏈，或彼等之抗原結合片段、Fab片段、單鏈可變片段(scFv)、變體或接合物。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:168及SEQ ID NO:169所示序列具有至少99%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:168及SEQ ID NO:169所示序列具有至少98%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:168及SEQ ID NO:169所示序列具有至少97%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:168及SEQ ID NO:169所示序列具有至少96%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:168及SEQ ID NO:169所示序列具有至少95%一致性之重鏈及輕鏈。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含派姆單抗之重鏈及輕鏈CDR或可變區(VR)。在一實施態樣中，PD-1抑制劑重鏈可變區(V_H )包含SEQ ID NO:170所示之序列且PD-1抑制劑輕鏈可變區(V_L )包含SEQ ID NO:171所示之序列或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:170及SEQ ID NO:171所示序列具有至少99%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:170及SEQ ID NO:171所示序列具有至少98%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:170及SEQ ID NO:171所示序列具有至少97%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:170及SEQ ID NO:171所示序列具有至少96%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:170及SEQ ID NO:171所示序列具有至少95%一致性之V_H 及V_L 區。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑包含具有分別如SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173及SEQ ID NO:174所示之序列的重鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代，及具有分別如SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:176及SEQ ID NO:177所示之序列的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，抗體和任何前述抗體競爭與PD-1上之相同表位的結合及/或與任何前述抗體所結合之PD-1上的相同表位結合。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑係藥物主管機關參照派姆單抗所核准的抗PD-1生物類似物單株抗體。在一實施態樣中，生物類似物包含抗PD-1抗體，該抗PD-1抗體包含與參考藥品或參考生物產品之胺基酸序列具有至少97%序列一致性(例如97%、98%、99%或100%序列一致性)之胺基酸序列，且其相較於該參考藥品或參考生物產品包含一或多個轉譯後修飾，其中該參考藥品或參考生物產品係派姆單抗。在一些實施態樣中，該一或多個轉譯後修飾係選自下列一或多者：糖基化、氧化、脫醯胺及截短。在一些實施態樣中，生物類似物係獲得授權或申請授權之抗PD-1抗體，其中該抗PD-1抗體係提供於一種與參考藥品或參考生物產品之調配物不同的調配物，其中該參考藥品或參考生物產品係派姆單抗。抗PD-1抗體可獲得藥物主管機關諸如美國FDA及/或歐盟的EMA授權。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係派姆單抗。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係派姆單抗。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係派姆單抗或其生物類似物，且派姆單抗係以約0.5 mg/kg至約10 mg/kg的劑量投予。在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係派姆單抗或其生物類似物，且派姆單抗係以約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約3.5 mg/kg、約4 mg/kg、約4.5 mg/kg、約5 mg/kg、約5.5 mg/kg、約6 mg/kg、約6.5 mg/kg、約7 mg/kg、約7.5 mg/kg、約8 mg/kg、約8.5 mg/kg、約9 mg/kg、約9.5 mg/kg或約10 mg/kg的劑量投予。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係派姆單抗或其生物類似物，其中派姆單抗係以約200 mg至約500 mg的劑量投予。在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係派姆單抗或其生物類似物，且尼沃魯單抗係以約200 mg、約220 mg、約240 mg、約260 mg、約280 mg、約300 mg、約320 mg、約340 mg、約360 mg、約380 mg、約400 mg、約420 mg、約440 mg、約460 mg、約480 mg或約500 mg的劑量投予。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係派姆單抗或其生物類似物，其中派姆單抗係每2週、每3週、每4週、每5週或每6週投予一次。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係經投予以治療黑色素瘤。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療黑色素瘤。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療黑色素瘤。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係經投予以治療NSCLC。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療NSCLC。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療NSCLC。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係經投予以治療小細胞肺癌(SCLC)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療SCLC。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療SCLC。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係經投予以治療頭頸鱗狀細胞癌(HNSCC)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療HNSCC。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療HNSCC。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療典型霍奇金氏淋巴瘤(cHL)或原發性縱膈大B細胞淋巴瘤(PMBCL)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療成人的典型霍奇金氏淋巴瘤(cHL)或原發性縱膈大B細胞淋巴瘤(PMBCL)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約2 mg/kg(至多200 mg)投予以治療小兒的典型霍奇金氏淋巴瘤(cHL)或原發性縱膈大B細胞淋巴瘤(PMBCL)。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療泌尿上皮癌。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療泌尿上皮癌。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)癌症。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療成人的MSI-H或dMMR癌症。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約2 mg/kg(至多200 mg)投予以治療小兒的MSI-H或dMMR癌症。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷結直腸癌(dMMR CRC)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療MSI-H或dMMR CRC。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療胃癌。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療胃癌。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療食道癌。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療食道癌。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療子宮頸癌。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療子宮頸癌。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療肝細胞癌(HCC)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療HCC。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療成人的Merkel氏細胞癌(MCC)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療成人的MCC。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約2 mg/kg(至多200 mg)投予以治療小兒的MCC。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療腎細胞癌(RCC)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg連同每天兩次口服阿西替尼(axitinib) 5 mg投予以治療成人的RCC。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療子宮內膜癌。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg連同每日一次口服樂伐替尼(lenvatinib) 20 mg投予以治療不是MSI-H或dMMR之腫瘤子宮內膜癌。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療成人的高腫瘤突變負荷(TMB-H)癌症。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療成人的TMB-H癌症。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約2 mg/kg(至多200 mg)投予以治療小兒的TMB-H癌症。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療皮膚鱗狀細胞癌(cSCC)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療cSCC。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一些實施態樣中，派姆單抗係以每3週約200 mg投予以治療三陰性乳癌(TNBC)。在一些實施態樣中，派姆單抗係以每6週約400 mg投予以治療TNBC。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一實施態樣中，如果病患或個體係成人(即治療成人適應症)，可採用每6週400 mg之額外投藥方案。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2、3、4或5天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗投予係在IL-2投予後1、2或3天開始。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週投予。在一些實施態樣中，派姆單抗亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週投予。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑係市售抗PD-1單株抗體，諸如抗m-PD-1選殖株J43 (Cat # BE0033-2)及RMP1-14 (Cat # BE0146) (Bio X Cell, Inc., West Lebanon, NH, USA)。一些市售抗PD-1抗體係所屬技術領域中具有通常知識者已知。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑係揭示於美國專利第8,354,509號或美國專利申請公開案號2010/0266617 A1、2013/0108651 A1、2013/0109843 A2(彼等揭露以引用方式併入本文中)之抗體。在一實施態樣中，PD-1抑制劑係描述於美國專利第8,287,856、8,580,247及8,168,757號及美國專利申請公開案第2009/0028857 A1、2010/0285013 A1、2013/0022600 A1及2011/0008369 A1號(彼等教示藉此以引用方式併入本文中)之抗PD-1抗體。在另一實施態樣中，PD-1抑制劑係揭示於美國專利第8,735,553 B1號(其揭露以引用方式併入本文中)之抗PD-1抗體。在一實施態樣中，PD-1抑制劑係匹利珠單抗(亦稱為CT-011)，其係描述於美國專利第8,686,119號(其揭露以引用方式併入本文中)。

在一實施態樣中，PD-1抑制劑可為小分子或肽或肽衍生物(諸如該些描述於美國專利第8,907,053；9,096,642及9,044,442號及美國專利申請公開案第US 2015/0087581號者)；1,2,4-噁二唑化合物及衍生物(諸如該些描述於美國專利申請公開案第2015/0073024號者)；環狀擬肽化合物及衍生物(諸如該些描述於美國專利申請公開案第US 2015/0073042號)；環狀化合物及衍生物(諸如該些描述於美國專利申請公開案第US 2015/0125491號者)；1,3,4-噁二唑及1,3,4-噻二唑化合物及衍生物(諸如該些描述於國際專利申請案公開號WO 2015/033301者)；基於肽之化合物及衍生物(諸如該些描述於國際專利申請公開案號WO 2015/036927及WO 2015/04490者)或基於巨環肽之化合物及衍生物(諸如該些描述於美國專利申請公開案第US 2014/0294898號者)；彼等各者揭露全文特此以引用方式併入本文中。在一實施態樣中，PD-1抑制劑係賽米單抗(cemiplimab)，其可購自Regeneron, Inc.。

在一實施態樣中，PD-L1或PD-L2抑制劑可為所屬技術領域中已知之任何PD-L1或PD-L2抑制劑、抗拮劑或阻斷劑。具體而言，其係下列段落詳述之PD-L1或PD-L2抑制劑、拮抗劑或阻斷劑之一者。參照PD-L1及PD-L2抑制劑之用語「抑制劑(inhibitor)」、「拮抗劑(antagonist)」及「阻斷劑(blocker)」在本文中可互換使用。為了避免疑義，在本文中提及係為抗體之PD-L1或PD-L2抑制劑可指化合物或其抗原結合片段、變體、接合物或生物類似物。為了避免疑義，在本文中提及PD-L1或PD-L2抑制劑可指化合物或其醫藥上可接受之鹽、酯、溶劑合物、水合物、共晶體或前藥。

在一些實施態樣中，本文所述之組成物、過程及方法包括PD-L1或PD-L2抑制劑。在一些實施態樣中，PD-L1或PD-L2抑制劑係小分子。在一較佳實施態樣中，PD-L1或PD-L2抑制劑係抗體(即，抗PD-1抗體)、其片段(包括Fab片段)或其單鏈可變片段(scFv)。在一些實施態樣中，PD-L1或PD-L2抑制劑係多株抗體。在較佳實施態樣中，PD-L1或PD-L2抑制劑係單株抗體。在一些實施態樣中，PD-L1或PD-L2抑制劑與PD-L1或PD-L2競爭結合及/或與PD-L1或PD-L2上之表位結合。在一實施態樣中，抗體與PD-L1或PD-L2競爭結合及/或與PD-L1或PD-L2上之表位結合。

在一些實施態樣中，在本文中提供之PD-L1抑制劑對PD-L1具選擇性，即該化合物以實質上低於彼等與其他受體(包括PD-L2受體)結合或交互作用之濃度與PD-L1結合或交互作用。在某些實施態樣中，化合物與PD-L1受體結合之結合常數係與PD-L2受體結合之至少約2倍較高濃度、約3倍較高濃度、約5倍較高濃度、約10倍較高濃度、約20倍較高濃度、約30倍較高濃度、約50倍較高濃度、約100倍較高濃度、約200倍較高濃度、約300倍較高濃度或約500倍較高濃度。

在一些實施態樣中，在本文中提供之PD-L2抑制劑對PD-L2具選擇性，即該化合物以實質上低於彼等與其他受體(包括PD-L1受體)結合或交互作用之濃度與PD-L2結合或交互作用。在某些實施態樣中，化合物與PD-L2受體結合之結合常數係與PD-L1受體結合之至少約2倍較高濃度、約3倍較高濃度、約5倍較高濃度、約10倍較高濃度、約20倍較高濃度、約30倍較高濃度、約50倍較高濃度、約100倍較高濃度、約200倍較高濃度、約300倍較高濃度或約500倍較高濃度。

在不受任何理論束縛下，據信腫瘤細胞表現PD-L1且T細胞表現PD-1。然而，腫瘤細胞之PD-L1表現不是PD-1或PD-L1抑制劑或阻斷劑療效所必要。在一實施態樣中，腫瘤細胞表現PD-L1。在另一實施態樣中，腫瘤細胞不表現PD-L1。在一些實施態樣中，方法可包括PD-1及PD-L1抗體之組合(諸如該些在本文中描述者)與TIL之組合。PD-1及PD-L1抗體及TIL之組合可同時或依序投予。

在一些實施態樣中，PD-L1及/或PD-L2抑制劑係以約100 pM或較低之KD與人PD-L1及/或PD-L2結合、以約90 pM或較低之KD與人PD-L1及/或PD-L2結合、以約80 pM或較低之KD與人PD-L1及/或PD-L2結合、以約70 pM或較低之KD與人PD-L1及/或PD-L2結合、以約60 pM或較低之KD、以約50 pM或較低之KD與人PD-L1及/或PD-L2結合、以約40 pM或較低之KD與人PD-L1及/或PD-L2結合或以約30 pM或較低之KD與人PD-L1及/或PD-L2結合者。

在一些實施態樣中，PD-L1及/或PD-L2抑制劑係以約7.5×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-L1及/或PD-L2結合、以約8×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-L1及/或PD-L2結合、以約8.5×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-L1及/或PD-L2結合、以約9×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-L1及/或PD-L2結合、以約9.5×105 1/M·s或更快之k締合與人PD-L1及/或PD-L2結合或以約1×106 1/M·s或更快之k締合與人PD-L1及/或PD-L2結合者。

在一些實施態樣中，PD-L1及/或PD-L2抑制劑係以約2×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-L1或PD-L2結合、以約2.1×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.2×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.3×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.4×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.5×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.6×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-1結合、以約2.7×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-L1或PD-L2結合或以約3×10-5 1/s或更慢之k解離與人PD-L1或PD-L2結合者。

在一些實施態樣中，PD-L1及/或PD-L2抑制劑係以約10 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合；以約9 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合；以約8 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合；以約7 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合；以約6 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合；以約5 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合；以約4 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合；以約3 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合；以約2 nM或較低之IC50阻斷或抑制人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合；或以約1 nM或較低之IC50阻斷人PD-1或阻斷人PD-L1或人PD-L2與人PD-1結合者。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑係德瓦魯單抗，亦稱為MEDI4736(AstraZeneca plc.的子公司Medimmune, LLC, Gaithersburg, Maryland市售)或其抗原結合片段、接合物或變體。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑係揭示於美國專利第8,779,108號或美國專利申請公開案號2013/0034559(彼等揭露以引用方式併入本文中)之抗體。德瓦魯單抗之臨床療效已描述於Page, et al., Ann. Rev. Med., 2014, 65, 185-202; Brahmer, et al., J. Clin. Oncol. 2014, 32, 5s (supplement, abstract 8021)；及McDermott, et al., Cancer Treatment Rev., 2014, 40, 1056-64。德瓦魯單抗之製備及性質係描述於美國專利第8,779,108號，其揭露以引用方式併入本文中。德瓦魯單抗之胺基酸序列係如表20所示。德瓦魯單抗單株抗體包括位於22-96、22''-96''、23'-89'、23'''-89'''、135'-195'、135'''-195'''、148-204、148''-204''、215'-224、215'''-224''、230-230''、233-233''、265-325、265''-325''、371-429及371''-429'之雙硫鍵；及位於Asn-301及Asn-301''之N-糖基化位點。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含由SEQ ID NO:178給出之重鏈及由SEQ ID NO:179給出之輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含分別具有SEQ ID NO:178及SEQ ID NO:179所示序列之重鏈及輕鏈，或彼等之抗原結合片段、Fab片段、單鏈可變片段(scFv)、變體或接合物。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:178及SEQ ID NO:179所示序列具有至少99%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:178及SEQ ID NO:179所示序列具有至少98%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:178及SEQ ID NO:179所示序列具有至少97%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:178及SEQ ID NO:179所示序列具有至少96%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:178及SEQ ID NO:179所示序列具有至少95%一致性之重鏈及輕鏈。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含德瓦魯單抗之重鏈及輕鏈CDR或可變區(VR)。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑重鏈可變區(V_H )包含SEQ ID NO:180所示之序列且PD-L1抑制劑輕鏈可變區(V_L )包含SEQ ID NO:181所示之序列或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:180及SEQ ID NO:181所示序列具有至少99%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:180及SEQ ID NO:181所示序列具有至少98%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:180及SEQ ID NO:181所示序列具有至少97%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:180及SEQ ID NO:181所示序列具有至少96%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:180及SEQ ID NO:181所示序列具有至少95%一致性之V_H 及V_L 區。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含具有分別如SEQ ID NO:182、SEQ ID NO:183及SEQ ID NO:184所示之序列的重鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代，及具有分別如SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:186及SEQ ID NO:187所示之序列的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，抗體和任何前述抗體競爭與PD-L1上之相同表位的結合及/或與任何前述抗體所結合之PD-1上的相同表位結合。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑係藥物主管機關參照德瓦魯單抗所核准的抗PD-L1生物類似物單株抗體。在一實施態樣中，生物類似物包含抗PD-L1抗體，該抗PD-1抗體包含與參考藥品或參考生物產品之胺基酸序列具有至少97%序列一致性(例如97%、98%、99%或100%序列一致性)之胺基酸序列，且其相較於該參考藥品或參考生物產品包含一或多個轉譯後修飾，其中該參考藥品或參考生物產品係德瓦魯單抗。在一些實施態樣中，該一或多個轉譯後修飾係選自下列一或多者：糖基化、氧化、脫醯胺及截短。在一些實施態樣中，生物類似物係獲得授權或申請授權之抗PD-L1抗體，其中該抗PD-L1抗體係提供於一種與參考藥品或參考生物產品之調配物不同的調配物，其中該參考藥品或參考生物產品係德瓦魯單抗。抗PD-L1抗體可獲得藥物主管機關諸如美國FDA及/或歐盟的EMA授權。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係德瓦魯單抗。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係德瓦魯單抗。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑係艾維路單抗，亦稱為MSB0010718C(Merck KGaA/EMD Serono市售)或其抗原結合片段、接合物或變體。艾維路單抗之製備及性質係描述於美國專利申請公開案第US 2014/0341917 A1號，其揭露特別以引用方式併入本文中。艾維路單抗之胺基酸序列係如表21所示。艾維路單抗具有位於22-96、147-203、264-324、370-428、22''-96''、147''-203''、264''-324''及370''-428''之重鏈內雙硫鍵(C23-C104)；位於22'-90'、138'-197'、22'''-90'''及138'''-197'''之輕鏈內雙硫鍵(C23-C104)；位於223-215'及223''-215'''之重鏈-輕鏈內雙硫鍵(h 5-CL 126)；位於229-229''及232-232''之重鏈-重鏈內雙硫鍵(h 11, h 14)；位於300、300''之N-糖基化位點(H CH2 N84.4)；岩藻糖基化複合物雙觸角CHO型聚糖；及位於450及450'之H CHS K2 C端離胺酸截斷。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含由SEQ ID NO:188給出之重鏈及由SEQ ID NO:189給出之輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含分別具有SEQ ID NO:188及SEQ ID NO:189所示序列之重鏈及輕鏈，或彼等之抗原結合片段、Fab片段、單鏈可變片段(scFv)、變體或接合物。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:188及SEQ ID NO:189所示序列具有至少99%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:188及SEQ ID NO:189所示序列具有至少98%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:188及SEQ ID NO:189所示序列具有至少97%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:188及SEQ ID NO:189所示序列具有至少96%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:188及SEQ ID NO:189所示序列具有至少95%一致性之重鏈及輕鏈。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含艾維路單抗之重鏈及輕鏈CDR或可變區(VR)。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO:190所示之序列且PD-L1抑制劑輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO:191所示之序列或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:190及SEQ ID NO:191所示序列具有至少99%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:190及SEQ ID NO:191所示序列具有至少98%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:190及SEQ ID NO:191所示序列具有至少97%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:190及SEQ ID NO:191所示序列具有至少96%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:190及SEQ ID NO:191所示序列具有至少95%一致性之V_H 及V_L 區。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含具有分別如SEQ ID NO:192、SEQ ID NO:193及SEQ ID NO:194所示之序列的重鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代，及具有分別如SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:196及SEQ ID NO:197所示之序列的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，抗體和任何前述抗體競爭與PD-L1上之相同表位的結合及/或與任何前述抗體所結合之PD-1上的相同表位結合。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑係藥物主管機關參照艾維路單抗所核准的抗PD-L1生物類似物單株抗體。在一實施態樣中，生物類似物包含抗PD-L1抗體，該抗PD-1抗體包含與參考藥品或參考生物產品之胺基酸序列具有至少97%序列一致性(例如97%、98%、99%或100%序列一致性)之胺基酸序列，且其相較於該參考藥品或參考生物產品包含一或多個轉譯後修飾，其中該參考藥品或參考生物產品係艾維路單抗。在一些實施態樣中，該一或多個轉譯後修飾係選自下列一或多者：糖基化、氧化、脫醯胺及截短。在一些實施態樣中，生物類似物係獲得授權或申請授權之抗PD-L1抗體，其中該抗PD-L1抗體係提供於一種與參考藥品或參考生物產品之調配物不同的調配物，其中該參考藥品或參考生物產品係艾維路單抗。抗PD-L1抗體可獲得藥物主管機關諸如美國FDA及/或歐盟的EMA授權。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係艾維路單抗。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係艾維路單抗。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑係阿特珠單抗，亦稱為MPDL3280A或RG7446(Roche Holding AG, Basel, Switzerland的子公司Genentech, Inc.以TECENTRIQ市售)或其抗原結合片段、接合物或變體。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑係揭示於美國專利第8,217,149號(其揭露特別以引用方式併入本文中)之抗體。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑係揭示於美國專利申請公開案第2010/0203056 A1、2013/0045200 A1、2013/0045201 A1、2013/0045202 A1或2014/0065135 A1號(彼等揭露特別以引用方式併入本文中)之抗體。阿特珠單抗之製備及性質係描述於美國專利第8,217,149號，其揭露以引用方式併入本文中。阿特珠單抗之胺基酸序列係如表22所示。阿特珠單抗具有位於22-96、145-201、262-322、368-426、22''-96''、145''-201''、262''-322''及368''-426''之重鏈內雙硫鍵(C23-C104)；位於23'-88'、134'-194'、23'''-88'''及134'''-194'''之輕鏈內雙硫鍵(C23-C104)；位於221-214'及221''-214'''之重鏈-輕鏈內雙硫鍵(h 5-CL 126)；位於227-227''及230-230''之重鏈-重鏈內雙硫鍵(h 11, h 14)；及位於298及298'之N-糖基化位點(H CH2 N84.4＞A)。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含由SEQ ID NO:198給出之重鏈及由SEQ ID NO:199給出之輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含分別具有SEQ ID NO:198及SEQ ID NO:199所示序列之重鏈及輕鏈，或彼等之抗原結合片段、Fab片段、單鏈可變片段(scFv)、變體或接合物。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:198及SEQ ID NO:199所示序列具有至少99%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:198及SEQ ID NO:199所示序列具有至少98%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:198及SEQ ID NO:199所示序列具有至少97%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:198及SEQ ID NO:199所示序列具有至少96%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:198及SEQ ID NO:199所示序列具有至少95%一致性之重鏈及輕鏈。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含阿特珠單抗之重鏈及輕鏈CDR或可變區(VR)。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑重鏈可變區(V_H )包含SEQ ID NO:200所示之序列且PD-L1抑制劑輕鏈可變區(V_L )包含SEQ ID NO:201所示之序列或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:200及SEQ ID NO:201所示序列具有至少99%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:200及SEQ ID NO:201所示序列具有至少98%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:200及SEQ ID NO:201所示序列具有至少97%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:200及SEQ ID NO:201所示序列具有至少96%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:200及SEQ ID NO:201所示序列具有至少95%一致性之V_H 及V_L 區。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包含具有分別如SEQ ID NO:202、SEQ ID NO:203及SEQ ID NO:204所示之序列的重鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代，及具有分別如SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206及SEQ ID NO:207所示之序列的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，抗體和任何前述抗體競爭與PD-L1上之相同表位的結合及/或與任何前述抗體所結合之PD-1上的相同表位結合。

在一實施態樣中，抗PD-L1抗體係藥物主管機關參照阿特珠單抗所核准的抗PD-L1生物類似物單株抗體。在一實施態樣中，生物類似物包含抗PD-L1抗體，該抗PD-1抗體包含與參考藥品或參考生物產品之胺基酸序列具有至少97%序列一致性(例如97%、98%、99%或100%序列一致性)之胺基酸序列，且其相較於該參考藥品或參考生物產品包含一或多個轉譯後修飾，其中該參考藥品或參考生物產品係阿特珠單抗。在一些實施態樣中，該一或多個轉譯後修飾係選自下列一或多者：糖基化、氧化、脫醯胺及截短。在一些實施態樣中，生物類似物係獲得授權或申請授權之抗PD-L1抗體，其中該抗PD-L1抗體係提供於一種與參考藥品或參考生物產品之調配物不同的調配物，其中該參考藥品或參考生物產品係阿特珠單抗。抗PD-L1抗體可獲得藥物主管機關諸如美國FDA及/或歐盟的EMA授權。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係阿特珠單抗。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係阿特珠單抗。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑包括該些描述於美國專利申請公開案第US 2014/0341917 A1號(其揭露以引用方式併入本文中)之抗體。在另一實施態樣中，亦包括與任何這些抗體競爭與PD-L1結合之抗體。在一實施態樣中，抗PD-L1抗體係MDX-1105(亦稱為BMS-935559)，其係揭示於美國專利第US 7,943,743號(其揭露以引用方式併入本文中)。在一實施態樣中，抗PD-L1抗體係選自揭示於美國專利第US 7,943,743號(其以引用方式併入本文中)之抗PD-L1抗體。

在一實施態樣中，PD-L1抑制劑係市售單株抗體，諸如INVIVOMAB抗m-PD-L1選殖株10F.9G2(目錄# BE0101，Bio X Cell, Inc.，West Lebanon, NH, USA)。在一實施態樣中，抗PD-L1抗體係市售單株抗體，諸如AFFYMETRIX EBIOSCIENCE (MIH1)。一些市售抗PD-L1抗體係所屬技術領域中具有通常知識者已知。

在一實施態樣中，PD-L2抑制劑係市售單株抗體，諸如BIOLEGEND 24F.10C12小鼠IgG2a κ同型(目錄# 329602 Biolegend, Inc.，San Diego, CA)、σ抗-PD-L2抗體(目錄# SAB3500395，σ-Aldrich Co.，St. Louis, MO)或所屬技術領域中具有通常知識者已知之其他市售抗PD-L2抗體。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，該方法包含投予TIL方案之步驟，其中TIL方案包括經基因修飾以表現CCR之TIL產物，該方法進一步包含投予PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑之步驟。在一些實施態樣中，本發明包括一種組成物，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物及(ii) PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。在一些實施態樣中，本發明包括一種套組，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物及(ii) PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。 3. 與CTLA-4抑制劑之組合

在一些實施態樣中，提供給癌症病患的TIL療法可包括單獨治療性TIL族群治療或可包括組合治療，該組合治療包括TIL及一或多種CTLA-4抑制劑。

細胞毒性T淋巴細胞抗原4 (CTLA-4)係免疫球蛋白超家族之成員且表現在輔助T細胞之表面上。CTLA-4係CD28依賴性T細胞活化之負調節子且作用為適應性免疫反應之檢查點。與T細胞共刺激蛋白CD28類似，CTLA-4結合抗原在細胞上呈現CD80及CD86。CTLA-4遞送抑制因子信號至T細胞，而CD28遞送刺激信號。抗人CTLA-4之人抗體已被描述為在許多疾病病況中的免疫刺激調節劑，諸如治療或預防病毒及細菌感染及用於治療癌症(WO 01/14424及WO 00/37504)。一些全人抗人CTLA-4單株抗體(mAb)已於用於治療各種類型之實體腫瘤的臨床試驗中研究，包括但不限於伊匹單抗(MDX-010)及曲美木單抗(CP-675,206)。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑可為所屬技術領域中已知之任何CTLA-4抑制劑或CTLA-4阻斷劑。具體而言，其係下列段落詳述之CTLA-4抑制劑或阻斷劑之一者。參照CTLA-4抑制劑之用語「抑制劑(inhibitor)」、「拮抗劑(antagonist)」及「阻斷劑(blocker)」在本文中可互換使用。為了避免疑義，在本文中提及係為抗體之CTLA-4抑制劑可指化合物或其抗原結合片段、變體、接合物或生物類似物。為了避免疑義，在本文中提及CTLA-4抑制劑亦可指小分子化合物或其醫藥上可接受之鹽、酯、溶劑合物、水合物、共晶體或前藥。

用於本發明之方法中之合適CTLA-4抑制劑包括但不限於抗CTLA-4抗體、人抗CTLA-4抗體、小鼠抗CTLA-4抗體、哺乳動物抗CTLA-4抗體、人化抗CTLA-4抗體、單株抗CTLA-4抗體、多株抗CTLA-4抗體、嵌合抗CTLA-4抗體、MDX-010(伊匹單抗)、曲美木單抗、抗CD28抗體、抗CTLA-4黏連蛋白、抗CTLA-4結構域抗體、單鏈抗CTLA-4片段、重鏈抗CTLA-4片段、輕鏈抗CTLA-4片段、促效共刺激途徑之CTLA-4之抑制劑、PCT公開案WO 2001/014424揭示之抗體、PCT公開案WO 2004/035607揭示之抗體、美國公開號2005/0201994揭示之抗體及獲准歐洲專利第EP 1212422 B1號中揭示之抗體(彼等揭露之各者以引用方式併入本文中)。額外CTLA-4抗體係描述於美國專利第5,811,097號、第5,855,887號、第6,051,227號及第6,984,720號；PCT公開案WO 01/14424及WO 00/37504；及美國公開號2002/0039581及2002/086014(彼等揭露之各者以引用方式併入本文中)。可用於本發明之方法中的其他抗CTLA-4抗體包括例如該些揭示於下者：WO 98/42752；美國專利第6,682,736號及第6,207,156號；Hurwitz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17):10067-10071 (1998)；Camacho et al., J. Clin. Oncology, 22(145): Abstract No. 2505 (2004)(抗體CP-675206)；Mokyr et al., Cancer Res., 58:5301-5304 (1998)及美國專利第5,977,318號、第6,682,736號、第7,109,003號及第7,132,281號(彼等揭露之各者以引用方式併入本文中)。

額外CTLA-4抑制劑包括但不限於下列：任何能夠破壞CD28抗原與其同源配體結合之能力、抑制CTLA-4與其同源配體結合之能力、經由共刺激途徑放大T細胞反應、破壞B7與CD28及/或CTLA-4結合之能力、破壞B7活化共刺激途徑之能力、破壞CD80與CD28及/或CTLA-4結合之能力、破壞CD80活化共刺激途徑之能力、破壞CD86與CD28及/或CTLA-4結合之能力、破壞CD86活化共刺激途徑之能力及破壞一般共刺激途徑被活化之抑制劑。此必然包括CD28、CD80、CD86、CTLA-4等共刺激途徑之其他成員的小分子抑制劑；針對CD28、CD80、CD86、CTLA-4等共刺激途徑之其他成員的抗體；針對CD28、CD80、CD86、CTLA-4等共刺激途徑之其他成員的反義分子；針對CD28、CD80、CD86、CTLA-4等共刺激途徑之其他成員的黏連蛋白；CD28、CD80、CD86、CTLA-4等共刺激途徑之其他成員的RNAi抑制劑(單股及雙股)等其他CTLA-4抑制劑。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑以約10⁻ ⁶ M或小於10⁻ ⁶ M、10⁻ ⁷ M或小於10⁻ ⁷ M、10⁻ ⁸ M或小於10⁻ ⁸ M、10⁻ ⁹ M或小於10⁻ ⁹ M、10⁻ ¹⁰ M或小於10⁻ ¹⁰ M、10⁻ ¹¹ M或小於10⁻ ¹¹ M、10⁻ ¹² M或小於10⁻ ¹² M(例如介於10⁻ ¹³ M與10⁻ ¹⁶ M之間)或具有前述值任二者作為終點之任何範圍內的K_d 與CTLA-4結合。在一些實施態樣中，當使用相同測定比較時，CTLA-4抑制劑以不超過伊匹單抗10倍之Kd與CTLA-4結合。在一些實施態樣中，當使用相同測定比較時，CTLA-4抑制劑以約相同或小於伊匹單抗(例如至多10倍較低或至多100倍較低)之Kd與CTLA-4結合。在一些實施態樣中，當使用相同測定比較時，CTLA-4抑制劑所抑制之CTLA-4與CD80或CD86之結合的IC50值分別高於伊匹單抗所媒介之抑制CTLA-4與CD80或CD86之結合不超過10倍。在一些實施態樣中，當使用相同測定比較時，CTLA-4抑制劑所抑制之CTLA-4與CD80或CD86之結合的IC50值係分別約相同或小於(例如至多10倍較低或至多100倍較低)伊匹單抗所媒介之抑制CTLA-4與CD80或CD86之結合。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑使用的量足以抑制CTLA-4之表現及/或降低CTLA-4之生物活性達相對於合適對照至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%，例如介於50%與75%、75%與90%或90%與100%之間。在一些實施態樣中，CTLA-4途徑抑制劑使用的量藉由減少CTLA-4與CD80、CD86或兩者之結合足以降低CTLA-4之生物活性達相對於合適對照至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%，例如相對於合適對照介於50%與75%、75%與90%或90%與100%之間。在評估或定量受關注劑之效應的上下文中之合適對照一般係可相比的生物系統(例如細胞或個體)，該可相比的生物系統未經受關注劑(例如CTLA-4途徑抑制劑)暴露或處理(或已經可忽略量暴露或處理)。在一些實施態樣中，生物系統可作為其本身的對照(例如可在以該劑暴露或處理之前評估生物系統，並與在暴露或處理已開始或結束之後的狀態比較)。在一些實施態樣中，可使用歷史對照。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑係伊匹單抗(Bristol-Myers Squibb Co.以Yervoy市售)或其生物類似物、抗原結合片段、接合物或變體。如所屬技術領域中已知，伊匹單抗係指抗CTLA-4抗體，其係衍生自具有編碼重鏈及輕鏈之人基因以產生功能性人貯庫的基因轉殖小鼠之全人IgG 1κ抗體。伊匹單抗亦可以其CAS登記號477202-00-9指稱且參照PCT公開案WO 01/14424，其全文出於所有目的以引用方式併入本文中。其係揭示為抗體10DI。具體而言，伊匹單抗含有輕鏈可變區及重鏈可變區(具有包含SEQ ID NO:211之輕鏈可變區及具有包含SEQ ID NO:210之重鏈可變區)。伊匹單抗之醫藥組成物包括含有伊匹單抗及一或多種稀釋劑、媒劑或賦形劑之所有醫藥上可接受之組成物。含有伊匹單抗之醫藥組成物之實例係描述於國際專利申請案公開號WO 2007/67959。伊匹單抗可經靜脈內(IV)投予。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含由SEQ ID NO:208給出之重鏈及由SEQ ID NO:209給出之輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含分別具有SEQ ID NO:208及SEQ ID NO:209所示序列之重鏈及輕鏈，或彼等之抗原結合片段、Fab片段、單鏈可變片段(scFv)、變體或接合物。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:208及SEQ ID NO:209所示序列具有至少99%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:208及SEQ ID NO:209所示序列具有至少98%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:208及SEQ ID NO:209所示序列具有至少97%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:208及SEQ ID NO:209所示序列具有至少96%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:208及SEQ ID NO:209所示序列具有至少95%一致性之重鏈及輕鏈。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含伊匹單抗之重鏈及輕鏈CDR或可變區(VR)。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑重鏈可變區(V_H )包含SEQ ID NO:210所示之序列且CTLA-4抑制劑輕鏈可變區(V_L )包含SEQ ID NO:211所示之序列或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:210及SEQ ID NO:211所示序列具有至少99%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:210及SEQ ID NO:211所示序列具有至少98%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:210及SEQ ID NO:211所示序列具有至少97%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:210及SEQ ID NO:211所示序列具有至少96%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:210及SEQ ID NO:211所示序列具有至少95%一致性之V_H 及V_L 區。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含具有分別如SEQ ID NO:212、SEQ ID NO:213及SEQ ID NO:214所示之序列的重鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代，及具有分別如SEQ ID NO:215、SEQ ID NO:216及SEQ ID NO:217所示之序列的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，抗體和任何前述抗體競爭與CTLA-4上之相同表位結合及/或與CTLA-4上的相同表位結合。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑係藥物主管機關參照伊匹單抗所核准的CTLA-4生物類似物單株抗體。在一實施態樣中，生物類似物包含抗CTLA-4抗體，該抗PD-1抗體包含與參考藥品或參考生物產品之胺基酸序列具有至少97%序列一致性(例如97%、98%、99%或100%序列一致性)之胺基酸序列，且其相較於該參考藥品或參考生物產品包含一或多個轉譯後修飾，其中該參考藥品或參考生物產品係伊匹單抗。在一些實施態樣中，該一或多個轉譯後修飾係選自下列一或多者：糖基化、氧化、脫醯胺及截短。伊匹單抗之胺基酸序列係如表23所示。在一些實施態樣中，生物類似物係獲得授權或申請授權之抗CTLA-4抗體，其中該抗CTLA-4抗體係提供於一種與參考藥品或參考生物產品之調配物不同的調配物，其中該參考藥品或參考生物產品係伊匹單抗。抗CTLA-4抗體可獲得藥物主管機關諸如美國FDA及/或歐盟的EMA授權。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係伊匹單抗。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係伊匹單抗。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係伊匹單抗或其生物類似物，且伊匹單抗係以約0.5 mg/kg至約10 mg/kg的劑量投予。在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係伊匹單抗或其生物類似物，且伊匹單抗係以約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約3.5 mg/kg、約4 mg/kg、約4.5 mg/kg、約5 mg/kg、約5.5 mg/kg、約6 mg/kg、約6.5 mg/kg、約7 mg/kg、約7.5 mg/kg、約8 mg/kg、約8.5 mg/kg、約9 mg/kg、約9.5 mg/kg或約10 mg/kg的劑量投予。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係伊匹單抗或其生物類似物，且伊匹單抗係以約200 mg至約500 mg的劑量投予。在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係伊匹單抗或其生物類似物，且伊匹單抗係以約200 mg、約220 mg、約240 mg、約260 mg、約280 mg、約300 mg、約320 mg、約340 mg、約360 mg、約380 mg、約400 mg、約420 mg、約440 mg、約460 mg、約480 mg或約500 mg的劑量投予。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予係在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係伊匹單抗或其生物類似物，且伊匹單抗係每2週、每3週、每4週、每5週或每6週投予一次。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，伊匹單抗係經投予以治療無法切除或轉移性黑色素瘤。在一些實施態樣中，伊匹單抗係以每3週約mg/kg最多4劑投予以治療無法切除或轉移性黑色素瘤。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，伊匹單抗係經投予用於黑色素瘤之佐劑治療。在一些實施態樣中，伊匹單抗係以每3週約10 mg/kg共4劑隨後每12週10 mg/kg達至多3年投予用於黑色素瘤之佐劑治療。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，伊匹單抗係經投予以治療晚期腎細胞癌。在一些實施態樣中，伊匹單抗係以每3週約1 mg/kg及在同一天隨後立即3 mg/kg之尼沃魯單抗共4劑投予以治療晚期腎細胞癌。在一些實施態樣中，在完成4劑之該組合之後，可根據晚期腎細胞癌及/或腎細胞癌之標準投藥方案投予尼沃魯單抗作為單一劑。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，伊匹單抗係經投予以治療微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌。在一些實施態樣中，伊匹單抗係以每3週約1 mg/kg靜脈內30分鐘及在同一天隨後立即3 mg/kg之尼沃魯單抗靜脈內30分鐘共4劑投予以治療微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌。在一些實施態樣中，在完成4劑之該組合之後，根據微小衛星體高不穩定性(MSI-H)或錯配修復缺陷(dMMR)轉移性結直腸癌之標準投藥方案所建議，投予尼沃魯單抗作為單一劑。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，伊匹單抗係經投予以治療肝細胞癌。在一些實施態樣中，伊匹單抗係以每3週約3 mg/kg靜脈內30分鐘及在同一天隨後立即1 mg/kg之尼沃魯單抗靜脈內30分鐘共4劑投予以治療肝細胞癌。在一些實施態樣中，在完成4劑之該組合之後，根據肝細胞癌之標準投藥方案，投予尼沃魯單抗作為單一劑。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，伊匹單抗係經投予以治療轉移性非小細胞肺癌。在一些實施態樣中，伊匹單抗係以每6週約1 mg/kg連同每2週3 mg/kg之尼沃魯單抗投予以治療轉移性非小細胞肺癌。在一些實施態樣中，伊匹單抗係以每6週約1 mg/kg連同每3週360 mg之尼沃魯單抗及2週期的鉑雙重化學療法投予以治療轉移性非小細胞肺癌。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，伊匹單抗係經投予以治療惡性胸膜間皮瘤。在一些實施態樣中，伊匹單抗係以每6週約1 mg/kg連同每3週360 mg之尼沃魯單抗投予以治療惡性胸膜間皮瘤。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，伊匹單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

曲美木單抗(亦稱為CP-675,206)係全人IgG2單株抗體且具有CAS編號745013-59-6。美國專利第6,682,736號(以引用方式併入本文中)揭示曲美木單抗為抗體11.2.1。曲美木單抗之重鏈及輕鏈的胺基酸序列分別在SEQ ID NO:218及SEQ ID NO:219中給出。曲美木單抗已於用於治療各種腫瘤包括黑色素瘤及乳癌之臨床試驗中探討；其中曲美木單抗係以每4或12週0.01及15 mg/kg劑量範圍作為單一劑量或多個劑量靜脈內投予。在本發明提供之方案中，曲美木單抗係經局部特別是皮內或皮下投予。皮內或皮下投予之曲美木單抗的有效量一般係在每人5至200 mg/劑量範圍內。在一些實施態樣中，曲美木單抗的有效量係在每人每劑量10至150 mg/劑量範圍內。在一些具體實施態樣中，曲美木單抗的有效量係每人約10、25、37.5、40、50、75、100、125、150、175或200 mg/劑量。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含由SEQ ID NO:218給出之重鏈及由SEQ ID NO:219給出之輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含分別具有SEQ ID NO:218及SEQ ID NO:219所示序列之重鏈及輕鏈，或彼等之抗原結合片段、Fab片段、單鏈可變片段(scFv)、變體或接合物。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:218及SEQ ID NO:219所示序列具有至少99%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:218及SEQ ID NO:219所示序列具有至少98%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:218及SEQ ID NO:219所示序列具有至少97%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:218及SEQ ID NO:219所示序列具有至少96%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:218及SEQ ID NO:219所示序列具有至少95%一致性之重鏈及輕鏈。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含曲美木單抗之重鏈及輕鏈CDR或可變區(VR)。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑重鏈可變區(V_H )包含SEQ ID NO:220所示之序列且CTLA-4抑制劑輕鏈可變區(V_L )包含SEQ ID NO:221所示之序列或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:220及SEQ ID NO:221所示序列具有至少99%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:220及SEQ ID NO:221所示序列具有至少98%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:220及SEQ ID NO:221所示序列具有至少97%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:220及SEQ ID NO:221所示序列具有至少96%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:220及SEQ ID NO:221所示序列具有至少95%一致性之V_H 及V_L 區。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含具有分別如SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223及SEQ ID NO:224所示之序列的重鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代，及具有分別如SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:226及SEQ ID NO:227所示之序列的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，抗體和任何前述抗體競爭與CTLA-4上之相同表位結合及/或與CTLA-4上的相同表位結合。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑係藥物主管機關參照曲美木單抗所核准的抗CTLA-4生物類似物單株抗體。在一實施態樣中，生物類似物包含抗CTLA-4抗體，該抗PD-1抗體包含與參考藥品或參考生物產品之胺基酸序列具有至少97%序列一致性(例如97%、98%、99%或100%序列一致性)之胺基酸序列，且其相較於該參考藥品或參考生物產品包含一或多個轉譯後修飾，其中該參考藥品或參考生物產品係曲美木單抗。在一些實施態樣中，該一或多個轉譯後修飾係選自下列一或多者：糖基化、氧化、脫醯胺及截短。曲美木單抗之胺基酸序列係如表24所示。在一些實施態樣中，生物類似物係獲得授權或申請授權之抗CTLA-4抗體，其中該抗CTLA-4抗體係提供於一種與參考藥品或參考生物產品之調配物不同的調配物，其中該參考藥品或參考生物產品係曲美木單抗。抗CTLA-4抗體可獲得藥物主管機關諸如美國FDA及/或歐盟的EMA授權。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係曲美木單抗。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係曲美木單抗。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係曲美木單抗或其生物類似物，且曲美木單抗係以約0.5 mg/kg至約10 mg/kg的劑量投予。在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係曲美木單抗或其生物類似物，且曲美木單抗係以約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約3.5 mg/kg、約4 mg/kg、約4.5 mg/kg、約5 mg/kg、約5.5 mg/kg、約6 mg/kg、約6.5 mg/kg、約7 mg/kg、約7.5 mg/kg、約8 mg/kg、約8.5 mg/kg、約9 mg/kg、約9.5 mg/kg或約10 mg/kg的劑量投予。在一些實施態樣中，曲美木單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，曲美木單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係曲美木單抗或其生物類似物，且曲美木單抗係以約200 mg至約500 mg的劑量投予。在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係曲美木單抗或其生物類似物，且曲美木單抗係以約200 mg、約220 mg、約240 mg、約260 mg、約280 mg、約300 mg、約320 mg、約340 mg、約360 mg、約380 mg、約400 mg、約420 mg、約440 mg、約460 mg、約480 mg或約500 mg的劑量投予。在一些實施態樣中，曲美木單抗投予係在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，曲美木單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係曲美木單抗或其生物類似物，且曲美木單抗係每2週、每3週、每4週、每5週或每6週投予一次。在一些實施態樣中，曲美木單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2、3、4或5週開始。在一些實施態樣中，曲美木單抗投予亦可在切除前(即在自個體或病患獲得腫瘤樣本之前)1、2或3週開始。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑係來自Agenus之紮利夫利單抗或其生物類似物、抗原結合片段、接合物或變體。紮利夫利單抗係全人單株抗體。紮利夫利單抗經指派化學文摘社(CAS)登記號2148321-69-9，且亦稱為AGEN1884。紮利夫利單抗之製備及性質係描述於美國專利第10,144,779號及美國專利申請公開案US2020/0024350 A1，彼等揭露以引用方式併入本文中。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含由SEQ ID NO:228給出之重鏈及由SEQ ID NO:229給出之輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含分別具有SEQ ID NO:228及SEQ ID NO:229所示序列之重鏈及輕鏈，或彼等之抗原結合片段、Fab片段、單鏈可變片段(scFv)、變體或接合物。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:228及SEQ ID NO:229所示序列具有至少99%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:228及SEQ ID NO:229所示序列具有至少98%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:228及SEQ ID NO:229所示序列具有至少97%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:228及SEQ ID NO:229所示序列具有至少96%一致性之重鏈及輕鏈。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:228及SEQ ID NO:229所示序列具有至少95%一致性之重鏈及輕鏈。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含紮利夫利單抗之重鏈及輕鏈CDR或可變區(VR)。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑重鏈可變區(V_H )包含SEQ ID NO:230所示之序列且CTLA-4抑制劑輕鏈可變區(V_L )包含SEQ ID NO:231所示之序列或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:230及SEQ ID NO:231所示序列具有至少99%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:230及SEQ ID NO:231所示序列具有至少98%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:230及SEQ ID NO:231所示序列具有至少97%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:230及SEQ ID NO:231所示序列具有至少96%一致性之V_H 及V_L 區。在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含各自分別與SEQ ID NO:230及SEQ ID NO:231所示序列具有至少95%一致性之V_H 及V_L 區。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑包含具有分別如SEQ ID NO:231、SEQ ID NO:233及SEQ ID NO:234所示之序列的重鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代，及具有分別如SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:236及SEQ ID NO:237所示之序列的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3結構域或彼等之保守性胺基酸取代。在一實施態樣中，抗體和任何前述抗體競爭與CTLA-4上之相同表位結合及/或與CTLA-4上的相同表位結合。

在一實施態樣中，CTLA-4抑制劑係藥物主管機關參照紮利夫利單抗所核准的CTLA-4生物類似物單株抗體。在一實施態樣中，生物類似物包含抗CTLA-4抗體，該抗PD-1抗體包含與參考藥品或參考生物產品之胺基酸序列具有至少97%序列一致性(例如97%、98%、99%或100%序列一致性)之胺基酸序列，且其相較於該參考藥品或參考生物產品包含一或多個轉譯後修飾，其中該參考藥品或參考生物產品係紮利夫利單抗。在一些實施態樣中，該一或多個轉譯後修飾係選自下列一或多者：糖基化、氧化、脫醯胺及截短。紮利夫利單抗之胺基酸序列係如表25所示。在一些實施態樣中，生物類似物係獲得授權或申請授權之抗CTLA-4抗體，其中該抗CTLA-4抗體係提供於一種與參考藥品或參考生物產品之調配物不同的調配物，其中該參考藥品或參考生物產品係紮利夫利單抗。抗CTLA-4抗體可獲得藥物主管機關諸如美國FDA及/或歐盟的EMA授權。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係紮利夫利單抗。在一些實施態樣中，生物類似物係提供為進一步包含一或多種賦形劑之組成物，其中該一或多種賦形劑與參考藥品或參考生物產品中所包含之賦形劑相同或不同，其中該參考藥品或參考生物產品係紮利夫利單抗。

額外抗CTLA-4抗體之實例包括但不限於：AGEN1181、BMS-986218、BCD-145、ONC-392、CS1002、REGN4659及ADG116，彼等係所屬技術領域中具有通常知識者已知。

在一些實施態樣中，抗CTLA-4抗體係下列專利公開案中任一者揭示之抗CTLA-4抗體：US 2019/0048096 A1；US 2020/0223907；US 2019/0201334；US 2019/0201334；US 2005/0201994；EP 1212422 B1；WO 2018/204760；WO 2018/204760；WO 2001/014424；WO 2004/035607；WO 2003/086459；WO 2012/120125；WO 2000/037504；WO 2009/100140；WO 2006/09649；WO2005092380；WO 2007/123737；WO 2006/029219；WO 2010/0979597；WO 2006/12168；及WO1997020574，彼等之各者以引用方式併入本文中。額外CTLA-4抗體係描述於美國專利第5,811,097號、第5,855,887號、第6,051,227號及第6,984,720號；PCT公開案WO 01/14424及WO 00/37504；及美國公開號2002/0039581及2002/086014；及/或美國專利第5,977,318號、第6,682,736,7號、第7,109,003號及第7,132,281號(彼等之各者以引用方式併入本文中)。在一些實施態樣中，抗CTLA-4抗體係例如該些揭示於下者：WO 98/42752；美國專利第6,682,736號及第6,207,156號；Hurwitz,et al. ,Proc. Natl. Acad. Sci. USA ,1998, 95, 10067-10071 (1998)；Camacho,et al. ,J. Clin. Oncol. ,2004, 22, 145 (Abstract No. 2505 (2004)(抗體CP-675206)；或Mokyr,et al. ,Cancer Res. ,1998, 58, 5301-5304 (1998)，彼等之各者以引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係如WO 1996/040915(以引用方式併入本文中)揭示之CTLA-4配體。

在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係CTLA-4表現之核酸抑制劑。例如，抗CTLA-4 RNAi分子可呈PCT公開案WO 1999/032619及WO 2001/029058；美國公開案2003/0051263、2003/0055020、2003/0056235、2004/265839、2005/0100913、2006/0024798、2008/0050342、2008/0081373、2008/0248576及2008/055443；及/或美國專利第6,506,559號、第7,282,564號、第7,538,095號及第7,560,438號(以引用方式併入本文中)中描述之分子的形式。在一些情況下，抗CTLA-4 RNAi分子呈歐洲專利第EP 1309726號(以引用方式併入本文中)中描述之雙股RNAi分子的形式。在一些情況下，抗CTLA-4 RNAi分子呈美國專利第7,056,704號及第7,078,196號(以引用方式併入本文中)中描述之雙股RNAi分子的形式。在一些實施態樣中，CTLA-4抑制劑係國際專利申請公開案WO 2004/081021(以引用方式併入本文中)中描述之適體。

在其他實施態樣中，本發明之抗CTLA-4 RNAi分子係美國專利第5,898,031號、第6,107,094號、第7,432,249號及第7,432,250號及歐洲申請案EP 0928290(以引用方式併入本文中)中描述之RNA分子。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，該方法包含投予TIL方案之步驟，其中TIL方案包括經基因修飾以表現CCR之TIL產物，且該方法進一步包含投予CTLA-4抑制劑之步驟。在一些實施態樣中，本發明包括一種組成物，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物及(ii) CTLA-4抑制劑。在一些實施態樣中，本發明包括一種套組，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物及(ii) CTLA-4抑制劑。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，該方法包含投予TIL方案之步驟，其中TIL方案包括經基因修飾以表現CCR之TIL產物，且該方法進一步包含投予CTLA-4抑制劑及PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑之步驟。在一些實施態樣中，本發明包括一種組成物，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物、(ii) CTLA-4抑制劑及(iii) PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。在一些實施態樣中，本發明包括一種套組，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物、(ii) CTLA-4抑制劑及(iii) PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。 4. 病患淋巴細胞耗盡前處理

在一實施態樣中，本發明包括用TIL族群治療癌症之方法，其中病患在輸注根據本揭露之TIL之前經非骨髓清除式化療預處理。在一實施態樣中，本發明包括用於治療已經非骨髓清除式化療預處理之病患的癌症之TIL族群。在一實施態樣中，TIL族群係用於輸注投予。在一實施態樣中，非骨髓清除式化療係環磷醯胺60 mg/kg/d共2天(TIL輸注之前第27及26天)及氟達拉濱25 mg/m2/d共5天(TIL輸注之前第27至23天)。在一實施態樣中，在根據本揭露之非骨髓清除式化療及TIL輸注(第0天)之後，病患每8小時接受720,000 IU/kg靜脈內IL-2(阿地介白素，以PROLEUKIN市售)的靜脈內輸注至生理耐受。在某些實施態樣中，TIL族群係與IL-2組合用於治療癌症，其中IL-2在TIL族群之後投予。

實驗發現指示在過繼性轉移腫瘤特異性T淋巴細胞之前的淋巴細胞耗盡藉由清除調節T細胞及競爭免疫系統的元件(「細胞介素匯(cytokine sinks)」)扮演增強治療療效的關鍵角色。因此，本發明之一些實施態樣在導入本發明之TIL之前，對病患進行淋巴細胞耗盡步驟(有時亦稱為「免疫抑制性調理」)。

一般來說，淋巴細胞耗盡係使用氟達拉濱或環磷醯胺(活性形式稱為馬磷醯胺)及其組合的投予達成。此類方法描述於Gassner, et al., Cancer Immunol. Immunother. 2011, 60, 75-85、Muranski, et al., Nat. Clin. Pract. Oncol., 2006, 3, 668-681、Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 2008, 26, 5233-5239及Dudley, et al., J. Clin. Oncol. 2005, 23, 2346-2357中，所有全文皆以引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，氟達拉濱係以0.5 μg/mL至10 μg/mL氟達拉濱之濃度投予。在一些實施態樣中，氟達拉濱係以1 μg/mL氟達拉濱之濃度投予。在一些實施態樣中，氟達拉濱治療係投予1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天或超過7天。在一些實施態樣中，氟達拉濱係以10 mg/kg/天、15 mg/kg/天、20 mg/kg/天、25 mg/kg/天、30 mg/kg/天、35 mg/kg/天、40 mg/kg/天或45 mg/kg/天之劑量投予。在一些實施態樣中，氟達拉濱治療係以35 mg/kg/天投予2至7天。在一些實施態樣中，氟達拉濱治療係以35 mg/kg/天投予4至5天。在一些實施態樣中，氟達拉濱治療係以25 mg/kg/天投予4至5天。

在一些實施態樣中，藉由投予環磷醯胺獲得0.5 μg/mL至10 μg/mL之濃度的馬磷醯胺(環磷醯胺之活性形式)。在一些實施態樣中，藉由投予環磷醯胺獲得1 μg/mL之濃度的馬磷醯胺(環磷醯胺之活性形式)。在一些實施態樣中，環磷醯胺治療係投予1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天或超過7天。在一些實施態樣中，環磷醯胺係以100 mg/m2/天、150 mg/m2/天、175 mg/m2/天、200 mg/m2/天、225 mg/m2/天、250 mg/m2/天、275 mg/m2/天或300 mg/m2/天之劑量投予。在一些實施態樣中，環磷醯胺係經靜脈內投予(即i.v.)。在一些實施態樣中，環磷醯胺治療係以35 mg/kg/天投予2至7天。在一些實施態樣中，環磷醯胺治療係以250 mg/m2/天i.v.投予4至5天。在一些實施態樣中，環磷醯胺治療係以250 mg/m2/天i.v.投予4天。

在一些實施態樣中，淋巴細胞耗盡係藉由一起投予氟達拉濱及環磷醯胺至病患實施。在一些實施態樣中，氟達拉濱係以25 mg/m2/天i.v.投予且環磷醯胺係以250 mg/m2/天i.v.投予4天。

在一實施態樣中，淋巴細胞耗盡係藉由投予劑量為60 mg/m2/天之環磷醯胺共二天且隨後投予劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共五天實施。

在一實施態樣中，淋巴細胞耗盡係藉由投予劑量為60 mg/m2/天之環磷醯胺共二天及投予劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共五天實施，其中環磷醯胺及氟達拉濱兩者皆在前二天投予，且其中淋巴細胞耗盡總共實施五天。

在一實施態樣中，淋巴細胞耗盡係藉由投予劑量為約50 mg/m2/天之環磷醯胺共二天及投予劑量為約25 mg/m2/天之氟達拉濱共五天實施，其中環磷醯胺及氟達拉濱兩者皆在前二天投予，且其中淋巴細胞耗盡總共實施五天。

在一實施態樣中，淋巴細胞耗盡係藉由投予劑量為約50 mg/m2/天之環磷醯胺共二天及投予劑量為約20 mg/m2/天之氟達拉濱共五天實施，其中環磷醯胺及氟達拉濱兩者皆在前二天投予，且其中淋巴細胞耗盡總共實施五天。

在一實施態樣中，淋巴細胞耗盡係藉由投予劑量為約40 mg/m2/天之環磷醯胺共二天及投予劑量為約20 mg/m2/天之氟達拉濱共五天實施，其中環磷醯胺及氟達拉濱兩者皆在前二天投予，且其中淋巴細胞耗盡總共實施五天。

在一實施態樣中，淋巴細胞耗盡係藉由投予劑量為約40 mg/m2/天之環磷醯胺共二天及投予劑量為約15 mg/m2/天之氟達拉濱共五天實施，其中環磷醯胺及氟達拉濱兩者皆在前二天投予，且其中淋巴細胞耗盡總共實施五天。

在一實施態樣中，淋巴細胞耗盡係藉由投予劑量為60 mg/m2/天之環磷醯胺及劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共二天且隨後投予劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共三天實施。

在一實施態樣中，環磷醯胺係與美司鈉(mesna)一起投予。在一實施態樣中，美司鈉係以15 mg/kg投予。在一實施態樣中，當美司鈉係經輸注且如果經連續輸注時，美司鈉可與環磷醯胺在大約2小時內輸注(在第-5及/或-4天)，接著在與各環磷醯胺劑量同時開始的24小時內剩餘的22小時以3 mg/kg/小時之速率輸注。

在一實施態樣中，淋巴細胞耗盡包含始於向病患投予第三TIL族群之後當天使用IL-2療法治療病患的步驟。

在一實施態樣中，淋巴細胞耗盡包含始於向病患投予第三TIL族群當天使用IL-2療法治療病患的步驟。

在一些實施態樣中，淋巴細胞耗盡包含5天的前處理治療。在一些實施態樣中，天數指示為第-5至-1天或第0天至第4天。在一些實施態樣中，方案包含在第-5及-4天(即第0及1天)之環磷醯胺。在一些實施態樣中，方案包含在第-5及-4天(即第0及1天)之靜脈內環磷醯胺。在一些實施態樣中，方案包含在第-5及-4天(即第0及1天)之60 mg/kg靜脈內環磷醯胺。在一些實施態樣中，環磷醯胺係與美司鈉一起投予。在一些實施態樣中，方案進一步包含氟達拉濱。在一些實施態樣中，方案進一步包含靜脈內氟達拉濱。在一些實施態樣中，方案進一步包含25 mg/m2靜脈內氟達拉濱。在一些實施態樣中，方案進一步包含在第-5及-1天(即第0至4天)之25 mg/m2靜脈內氟達拉濱。在一些實施態樣中，方案進一步包含在第-5及-1天(即第0至4天)之25 mg/m2靜脈內氟達拉濱。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡方案包含投予劑量為60 mg/m2/天之環磷醯胺及劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共二天且隨後投予劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共五天的步驟。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡方案包含投予劑量為60 mg/m2/天之環磷醯胺及劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共二天且隨後投予劑量為25 mg/m2/天之氟達拉濱共三天的步驟。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡療法係根據表26投予。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡療法係根據表27投予。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡療法係根據表28投予。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡療法係根據表29投予。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡療法係根據表30投予。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡療法係根據表31投予。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡療法係根據表32投予。

在一些實施態樣中，非骨髓清除式淋巴細胞耗盡療法係根據表33投予。

在一些實施態樣中，與骨髓清除式淋巴細胞耗盡方案之前述實施態樣一起使用之TIL輸注可為本文所述之任何TIL組成物，包括如本文所述之經基因修飾以表現CCR之TIL產物，且亦可包括輸注MIL及PBL代替TIL輸注，以及添加IL-2方案及投予如本文所述之共療法(諸如PD-1及PD-L1抑制劑)。 5. IL-2方案

在一實施態樣中，IL-2方案包含高劑量IL-2方案，其中高劑量IL-2方案包含始於投予治療性TIL族群的治療有效部分之後當天靜脈內投予阿地介白素或其生物類似物或變體，其中阿地介白素或其生物類似物或變體係以0.037 mg/kg或0.044 mg/kg IU/kg(病患身體質量)之劑量每八小時使用15分鐘推注靜脈內輸液投予直到耐受為止，最多14劑。在休息9天之後，可重複此排程再投予14劑，最多總共28劑。在一些實施態樣中，IL-2係投予1、2、3、4、5或6劑。在一些實施態樣中，IL-2係以最大劑量投予至多6劑。

在一實施態樣中，IL-2方案包含漸減IL-2方案。漸減IL-2方案已描述於O’Day, et al., J. Clin. Oncol. 1999, 17, 2752-61及Eton, et al., Cancer 2000, 88, 1703-9，彼等之揭露以引用方式併入本文中。在一實施態樣中，漸減IL-2方案包含在6小時內靜脈內投予18×106 IU/m2阿地介白素或其生物類似物或變體，隨後在12小時內靜脈內投予18×106 IU/m2，隨後在24小時內靜脈內投予18×106 IU/m2，隨後在72小時內靜脈內投予 4.5×106 IU/m2。此治療週期可每28天重複一次，最多可達四個週期。在一實施態樣中，漸減IL-2方案包含第1天18,000,000 IU/m2，第2天9,000,000 IU/m2及第3及4天4,500,000 IU/m2。

在一實施態樣中，IL-2方案包含低劑量IL-2方案。可使用任何所屬技術領域中已知之低劑量IL-2方案，包括Dominguez-Villar and Hafler, Nat. Immunology 2000, 19, 665-673；Hartemann, et al., Lancet Diabetes Endocrinol. 2013, 1, 295-305；及Rosenzwaig, et al., Ann. Rheum. Dis. 2019, 78, 209-217(彼等揭露以引用方式併入本文中)中描述之低劑量IL-2方案。在一實施態樣中，低劑量IL-2方案包含每24小時投予每m2 18×106 IU之阿地介白素或其生物類似物或變體作為連續輸注共5天，隨後2至6天不使用IL-2療法，可選地隨後額外5天每24小時每m2 18 x 106 IU之靜脈內阿地介白素或其生物類似物或變體作為連續輸注，可選地隨後3週不使用IL-2療法，之後可投予額外週期。

在一實施態樣中，IL-2方案包含每1、2、4、6、7、14或21天以0.10 mg/天至50 mg/天之劑量投予聚乙二醇化IL-2。在一實施態樣中，IL-2方案包含每1、2、4、6、7、14或21天以0.10 mg/天至50 mg/天之劑量投予貝加德盧金或其片段、變體或生物類似物。

在一實施態樣中，IL-2方案包含每1、2、4、6、7、14或21天以0.10 mg/天至50 mg/天之劑量投予THOR-707或其片段、變體或生物類似物。

在一實施態樣中，IL-2方案包含每1、2、4、6、7、14或21天以0.10 mg/天至50 mg/天之劑量投予內姆瓦盧金阿法或其片段、變體或生物類似物。

在一實施態樣中，IL-2方案包含投予植入至抗體主鏈上之IL-2片段。在一實施態樣中，IL-2方案包含投予與IL-2低親和力受體結合之抗體細胞介素植入蛋白。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含重鏈可變區(VH)、輕鏈可變區(VL)及植入至VH或VL之CDR中之IL-2分子或其片段，該重鏈可變區包含互補決定區HCDR1、HCDR2、HCDR3，該輕鏈可變區包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中抗體細胞介素植入蛋白優先擴增T效應細胞而非調節T細胞。在一實施態樣中，抗體細胞介素植入蛋白包含重鏈可變區(VH)、輕鏈可變區(VL)及植入至VH或VL之CDR中之IL-2分子或其片段，該重鏈可變區包含互補決定區HCDR1、HCDR2、HCDR3，該輕鏈可變區包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中IL-2分子係突變蛋白，且其中抗體細胞介素植入蛋白優先擴增T效應細胞而非調節T細胞。在一實施態樣中，IL-2方案包含每1、2、4、6、7、14或21天以0.10 mg/天至50 mg/天的劑量投予抗體或其片段、變體或生物類似物，該抗體包含選自由SEQ ID NO:29及SEQ ID NO:38所組成之群組的重鏈及選自由SEQ ID NO:37及SEQ ID NO:39所組成之群組的輕鏈。

在一些實施態樣中，本文所述之抗體細胞介素植入蛋白具有比起野生型IL-2分子諸如但不限於阿地介白素(Proleukin®)或可相比的分子較長之血清半衰期。

在一些實施態樣中，與骨髓清除式淋巴細胞耗盡方案之前述實施態樣一起使用之TIL輸注可為本文所述之任何TIL組成物，且亦可包括輸注MIL及PBL代替TIL輸注，以及添加IL-2方案及投予如本文所述之共療法(諸如PD-1及PD-L1抑制劑)。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，該方法包含投予TIL方案之步驟，其中TIL方案包括經基因修飾以表現CCR之TIL產物，且該方法進一步包含投予IL-2方案之步驟。在一些實施態樣中，本發明包括一種組成物，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物及(ii) IL-2方案。在一些實施態樣中，本發明包括一種套組，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物及(ii) IL-2方案。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，該方法包含投予TIL方案之步驟，其中TIL方案包括經基因修飾以表現CCR之TIL產物，且該方法進一步包含投予IL-2方案及PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑之步驟。在一些實施態樣中，本發明包括一種組成物，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物、(ii) IL-2方案及(iii) PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。在一些實施態樣中，本發明包括一種套組，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物、(ii) IL-2方案及(iii) PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，該方法包含投予TIL方案之步驟，其中TIL方案包括經基因修飾以表現CCR之TIL產物，且該方法進一步包含投予CTLA-4抑制劑及IL-2方案之步驟。在一些實施態樣中，本發明包括一種組成物，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物、(ii) CTLA-4抑制劑及(iii) IL-2方案。在一些實施態樣中，本發明包括一種套組，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物、(ii) CTLA-4抑制劑及(iii) IL-2方案。

在一些實施態樣中，本發明包括一種治療癌症病患之方法，該方法包含投予TIL方案之步驟，其中TIL方案包括經基因修飾以表現CCR之TIL產物，且該方法進一步包含投予IL-2方案、CTLA-4抑制劑及PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑之步驟。在一些實施態樣中，本發明包括一種組成物，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物、(ii) IL-2方案、(iii) PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑及(iii) CTLA-4抑制劑。在一些實施態樣中，本發明包括一種套組，其包含(i)經基因修飾以表現CCR之TIL產物、(ii) IL-2方案、(iii) PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑及(iv) CTLA-4抑制劑。B. 過繼性細胞轉移

過繼性細胞轉移(ACT)是一種有效的免疫療法形式且涉及將具有抗腫瘤活性的免疫細胞轉移至癌症病患。ACT是涉及活體外識別具有抗腫瘤活性之淋巴細胞、活體外擴增這些細胞至大量及將彼等輸注至荷癌宿主的治療方式。用於過繼性轉移之淋巴細胞可衍生自經切除之腫瘤的基質(腫瘤浸潤性淋巴細胞或TIL)。用於ACT之TIL可如本文所述製備。在一些實施態樣中，TIL係根據例如圖2A及/或圖9描述之方法製備。如果彼等經基因工程改造以表現抗腫瘤T細胞受體(TCR)或嵌合抗原受體(CAR)、經混合之淋巴細胞腫瘤細胞培養(MLTC)濃化或使用自體抗原呈現細胞及腫瘤衍生肽選殖，則彼等亦可衍生自或來自血液。其中淋巴細胞源自待輸注荷癌宿主的ACT稱為自體ACT。美國專利公開號2011/0052530關於一種用於實施過繼性細胞療法以促進癌症消退之方法，主要用於治療罹患轉移性黑色素瘤的病患，該案全文以引用方式併入本文中以用於這些方法。在一些實施態樣中，TIL可如本文所述投予。在一些實施態樣中，TIL可以單一劑量投予。該投予可為注射，例如靜脈注射。在一些實施態樣中，TIL及/或細胞毒性淋巴細胞可以多個劑量投予。給藥可為每年1次、2次、3次、4次、5次、6次或超過6次。給藥可為一個月一次、每二週一次、每週一次或每二天一次。TIL及/或細胞毒性淋巴細胞的投予可視需要繼續進行。V. 協調產製細胞擴增產物及病患治療事件

如本文中所討論，從自病患腫瘤切除至完成TIL產製的時間取決於數種因子而異，包括例如可獲自病患之腫瘤的大小、在各種產製階段結束時的細胞計數、實施各種產製階段的天數等。因此，在排程各種病患治療事件上需要一定程度的彈性。在一些實施態樣中，病患治療事件包括淋巴細胞耗盡。在一些實施態樣中，病患治療事件包括TIL輸注。在一些實施態樣中，病患治療事件包括白血球分離術程序。在一些實施態樣中，病患治療事件包括投予IL-2方案。在一些實施態樣中，病患治療事件包括腫瘤切除。在一些實施態樣中，病患治療事件包括住院以進行程序後治療。

本揭露之態樣提供一種用於執行在本文中揭示之方法之系統。系統可包括病患入口、產製入口、臨床醫師入口及物流入口。病患入口使病患或與病患相關聯之人(例如照顧者、監護人或法定被授權人)(為了方便參照在本文中一起稱為「病患」)得以存取與病患治療事件之排程有關的資訊。病患入口可要求病患提供驗證資訊以存取此資訊。病患入口亦可允許病患編輯與病患有關的資訊，諸如例如地址或其他個人資訊。

臨床醫師入口(亦稱為醫院端界面)使門診(即門診人員)得以存取及/或編輯與病患、產製過程、產製機構、物流提供者有關的資訊以及與在門診實施或待實施之各種病患治療事件有關的資訊。

產製入口與醫院端界面及物流入口/物流界面溝通以判定及傳送與產製過程及/或產製槽之可用性有關的資訊。產製入口亦使產製標籤得以產生，該產製標籤包括在本文中揭示之各種產製步驟的經更新之品質資訊。

物流入口(在本文中亦稱為物流界面)與產製入口及醫院端界面溝通，交換與材料(即實體腫瘤或經產製之細胞治療產物)在門診與產製機構之間運輸之排程有關的資訊，包括例如產製排程、產製槽之可用性及病患治療事件的排排程以促進及時運輸材料。

用於執行在本文中揭示之各種方法的系統可在運算系統上藉由執行專有電腦程式或藉由合適地修改市售軟體平台(諸如例如由Vineti、Salesforce.com、Salesforce Health Cloud、IQVIA、TracSel及SAP所提供者)執行。

修改市售軟體平台以便合適地執行系統且實施一或多種在本文中揭示之方法可造成平台實施並非其原本設計用於之過程。換句話說，在一些實施態樣中，修改可基於平台提供之各種工具的非習知用途。在一些實施態樣中，用於執行在本文中揭示之各種方法的系統可包括軟體平台諸如架構程式，其整合使物流任務得以自動化之企業資源計畫(ERP)系統及使產製任務得以自動化之產製執行系統(MES)。此類架構程式之實例係描述於例如美國專利第7,343,605號，其全文係以引用方式併入本發明中。

例如，搭配MES應用，來自企業控制層級(企業資源計畫層級)及來自自動化層級(控制層級)之應用亦可經由架構程式整合且經由工作站(例如在臨床機構、產製機構或快遞機構)監測或管理。因此架構程式可形成用於整個病患治療過程之整合平台，包括病患掛號、摘取腫瘤、運輸腫瘤至產製機構、產製治療性或經擴增之細胞治療產物、運輸治療性細胞治療產物至臨床機構、向病患投予療法及後續病患治療事件。來自企業控制層級、MES層級及自動化層級之不同應用可藉由架構程式在適配器及/或包裝器之協助下簡單且具成本效益地整合。架構程式因此必須被視為中介軟體平台及產製應用整合工具。終端使用者(例如個案管理師)可經由工作站看見待監測應用之個別狀態且亦可存取應用之資料及方法。另外終端使用者可藉由此存取將應用彼此連接。

因此架構程式首先使得達成垂直整合來自不同企業層級之應用成為可能，其次架構程式使得在MES層級上之應用得以水平整合。

例如，允許資訊儲存在平台之基於軟體之個案物件係經儲存之資訊類型的整體定義。例如，在現成(off-the-shelf)平台中基於軟體之個案物件允許儲存關於客戶查詢的資訊。以此類物件而言，可有儲存有關該資料類型之具體實例的資訊的多個記錄。因此，個案記錄儲存有關個體之訓練查詢的資訊且另一個案記錄儲存有關另一個體之組態問題的資訊。這些物件可經客製化以儲存與例如病患、用於該病患之病患治療事件及對應排程有關的資訊。

類似地，在現成平台內提供的自動化行動諸如通知及警示及工作流程規則諸如商業邏輯行動可經修改以觸發排程及過程步驟之變更，諸如例如產製過程變更及基於QA測試結果之產製排程、產製槽之可用性及病患治療事件排程之後續變更。

在一些實施態樣中，在本文中揭示之系統提供用於判定在產製過程期間可能的失敗點之品質保證特徵，諸如該些於美國專利第10,747,209號及美國專利第7,799,273號(彼等全文以引用方式併入本文中)中描述者。

在一些實施態樣中，在本文中揭示之系統提供資料系統，該資料系統經組態以維持在自獲自病患之實體腫瘤(或其片段)產製最終細胞治療產物之過程期間所建立之電子批次記錄的完整性，諸如該些於美國專利第8,491,839號(其全文以引用方式併入本文中)描述者。在一些實施態樣中，在本文中揭示之系統包括經適配用於細胞產製過程之應用軟體，其中細胞產製過程產生經擴增之細胞治療產物諸如T細胞之治療性族群。應用軟體係經組態以控制包括於用於細胞產製之密閉系統中之複數個裝置諸如氣體可通透裝置。

在一些實施態樣中，在本文中揭示之系統整合應用軟體及在本文中揭示之細胞產製方法，以提供由複數個終端使用者使用之全面驗證及品質保證規程，藉此分析並使用自系統彙總之資料以判定是否達成品質保證規程及驗證規程。

在一些實施態樣中，系統將應用軟體施用至多個產品線及/或多個細胞產製機構，藉此使用相同系統監測及控制多個細胞產製線及多個產品線。

在一些實施態樣中，系統將本文所述之方法執行至細胞產製過程之細胞培養系統之批次最佳化中，藉此隨時間連續追蹤由細胞培養系統彙總之資料且使用資料分析細胞培養系統。此外，該資料係經整合且用於廣泛分析細胞產製過程之品質管制過程。

在一些實施態樣中，在本文中揭示之系統使工作站之設計得以實施產製最終細胞治療產物之過程的各種步驟。工作站可經組態以使與先前步驟相關聯之資料得以驗證以確保實施過程的完整性且使補救措施得以進行(可能的話)。此類工作站設計之實例係提供於例如美國專利第8,041,444號(其全文以引用方式併入本發明中)。

在一些實施態樣中，在本文中揭示之系統藉由提供存取各個產製商之可用產製排程使醫院機構與各個產製商之間得以進行協調，該各個產製商能夠自在醫院機構獲得之實體腫瘤產製細胞治療產物。使該協調得以進行之系統的實例係提供於例如美國專利第8,069,071號(其全文以引用方式併入本發明中)。

在一些實施態樣中，在本文中揭示之系統係基於雲端架構，該架構使與細胞治療產物的產製相關聯之各個實體得以即時存取(若有適當許可)與產製及運送細胞治療產物有關的資訊。此類雲端架構之實例係提供於例如美國專利第9,965,562號(其全文以引用方式併入本發明中)。

在一些實施態樣中，在本文中揭示之系統使與自病患獲得腫瘤、自該經獲得之腫瘤產製細胞治療產物及運送腫瘤及細胞治療產物相關聯之人員得以使用電子簽章自行識別及驗證以進行過程控制及核准，諸如於美國專利申請公開案2004/0243260(其全文以引用方式併入本文中)描述者。

在一些實施態樣中，系統可進一步包括或在其中併入客戶關係管理(CRM)子系統。CRM子系統可將與各方諸如例如醫生、醫院單位、護理師、收費員、商業聯絡人等有關的資訊歸檔。資訊係以CRM子系統維持，如此得以在一個統一漏斗中維持各方的單一觀點，允許在系統內以遵守隱私的方式分享基於平台、單一漏斗的前景及各方觀點。與各方之間的關係有關之資訊可以分散式多重主控端、多重從屬端或對等式情境藉由移除個人可識別資訊部分或完全匿名分享至一或多個分散式從屬端或對等CRM系統。此類CRM子系統之一個實例係揭示於美國專利申請公開案2014/0244351、美國專利第US 8,489,451號及美國專利第US 9,342,292號(彼等各者全文以引用方式併入本文中)。

在一些實施態樣中，本文所述之系統可經操作以提供包括中央事件處理子系統之網路，該中央事件處理子系統用於接受、處理及路由(routing)由即時醫療事件及/或產製事件所觸發之訊息。中央事件處理系統例如可識別與醫療事件相關聯之病患資訊且將病患資訊與健康計畫、臨床位置、TIL產製機構及/或物流提供者中之一或多者匹配。在將醫療及/或產製事件與利害關係人匹配後，中央事件處理子系統可在觸發事件的短時間期間內(例如幾乎即時)將關於醫療及/或產製事件之至少一部分資訊轉發至一或多個利害關係人。例如，基於與各利害關係人相關聯之規則，中央事件處理系統可轉發資訊及/或發送警示或通知給利害關係人以使利害關係人知悉醫療事件。此類中央事件處理子系統之實例係描述於美國專利申請公開案2014/0372147號及美國專利第US 10,242,060號(彼等各者全文以引用方式併入本文中)。

在一些實施態樣中，在本文中揭示之系統可經操作以選擇用於癌症治療方案之工作流程，該癌症治療方案包括病患治療事件諸如例如腫瘤切除、淋巴細胞耗盡、白血球分離術、TIL輸注及/或IL-2方案或在本文中揭示之其他病患治療事件。在選擇工作流程後，系統可代替病患產生對應細胞輸注療法之訂購單，其中對應細胞輸注療法之訂購包括細胞訂購需求及對應癌症治療之指明治療方案的需求中之至少一者。此類工作流程選擇子系統之實例係揭示於例如美國專利申請公開案US 2014/0088985(其全文以引用方式併入本發明中)。

在一些實施態樣中，系統可包括通話子系統，該通話子系統可包括服務需求驗證，包括在與病患或病患代表文字或音訊溝通之前驗證遠端存取裝置。在一些實施態樣中，驗證可藉由自動驗證遠端存取裝置或藉由向病患(或代表)詢問問題來完成。此類通話子系統及驗證方法之實例係揭示於例如美國專利申請公開案US 2019/0026747(其全文以引用方式併入本發明中)。A. 用於協調細胞擴增產物產製之系統

本揭露之實施態樣包括方法及系統，該方法及系統用於協調供病患之細胞治療產物諸如例如T細胞或TIL之產製，且基於產製過程之各種階段的進展及成功動態排程產製過程之各種階段以及各種病患治療事件。

本文所述之方法及系統進一步可經操作以提供優於既有系統之特定技術優點，包括在免疫治療程序期間提供病患特異性生物樣本之連續及自動產銷監管鏈及身分識別鏈，建立利害關係人(諸如病患、醫師、產製商及其他醫事人員)可使用之電腦化資訊入口以快速理解及追蹤免疫治療程序之現行階段及病患生物樣本在程序期間的狀態。缺乏維持產銷監管鏈及身分識別鏈之能力導致在產製過程期間的延遲，對於在對抗危及生命疾病之病患而言可能極度嚴重。

本揭露之實施態樣使生物材料在產製過程期間(包括QA、產製、釋出測試及最終運輸處理)之產銷監管鏈及生物材料在最終產物遞送過程期間(包括運輸及遞送至輸注單位)之產銷監管鏈得以維持。本揭露之實施態樣進一步使產銷監管鏈與特定病患得以連續及固定關聯，藉此確保在所有產製階段期間病患與生物材料之間的完整身分識別鏈。

COC及COI之維持係藉由將生物材料從病患經由運送、產製過程、運送及回到病患之整個旅程期間中的各事件與細胞訂購識別符及病患特異性識別符(病患所獨有)關聯及追蹤整個旅程期間中的各事件來實施。

此外，本文所述之方法及系統可經操作以整合及同步自病患獲得活組織與產製過程，以及提供稽核自獲得活組織至投予細胞治療產物之各步驟及後續治療事件的COC及COI之能力。

本文所述之方法及系統進一步可經操作以協調自病患獲得活組織、遞送活組織至經選擇之產製機構、在經選擇之產製機構產製細胞治療產物及自產製機構遞送細胞治療產物至門診以供病患治療之物流。

圖3A顯示根據本揭露之實施態樣之用於協調產製供病患之細胞治療產物之系統的方塊圖。在一些實施態樣中，由圖3A之元件實施之功能可經整合至單一元件中。此外，在一些實施態樣中，由圖3A之一或多個元件實施之功能亦可由圖3A之其他元件實施。

參照圖3A，系統300可包括醫院端界面110、事件排程器120、物流界面(在本文中亦稱為快遞入口)130及/或產製入口140。醫院端界面110、事件排程器120、物流界面130及產製入口140中之各者使用例如通訊網路諸如LAN、WAN(例如網際網路)及/或細胞性網路與其他三者溝通。

在一些實施態樣中，醫院端界面110、事件排程器120、物流界面130、產製入口140及對應模組(例如於圖3顯示)在市售軟體平台(諸如例如該些由Vineti、Salesforce.com、Salesforce Health Cloud、IQVIA、TracSel及SAP所提供者)上經合適地修改或建立。

醫院端界面110可與醫院或其他負責投予病患治療(例如提供在本文中揭示之癌症療法)之機構相關聯或與之交互作用。在一些實施態樣中，醫院端界面110係與實施自病患獲得實體腫瘤及自實體腫瘤或其片段獲得細胞治療產物之程序的臨床機構相關聯。在一些實施態樣中，臨床機構之功能僅為獲得實體腫瘤，而自實體腫瘤或其片段獲得細胞治療產物之過程可在產製機構實施。

在一些實施態樣中，醫院端界面110係與向病患實施獲自產製機構之經擴增之細胞治療產物之輸注且提供後續照護及/或任何先前或追蹤治療之醫院相關聯。醫院或門診之臨床醫師或雇員可經由醫院端界面110與系統300交互作用。

在一些實施態樣中，醫院端界面110包括一或多個運算裝置諸如例如桌上型電腦、雲端伺服器、筆記型電腦、行動裝置或任何其他運算裝置，該任何其他運算裝置包括在處理器上執行且與記憶體交互作用之硬體及軟體模組。醫院端界面110可經由有線或無線連接與運算裝置連接，該運算裝置在醫院或臨床機構處操作或與醫院或臨床機構相關聯。

在一些實施態樣中，醫院端界面110可包括追蹤模組112，該追蹤模組經組態用於從自病患抽取之時間到輸注至病患體內之時間追蹤來自病患之生物材料(例如來自病患之腫瘤、獲自病患之T細胞、在T細胞擴增過程之各個階段經擴增之T細胞等)。

在一些實施態樣中，當病患經收案以進行TIL輸注治療時，建立用於產製供病患之經擴增之細胞治療產物的細胞訂購需求且產生與細胞訂購需求相關聯之細胞訂購識別符。在一些實施態樣中，訂購單係根據細胞訂購需求產生且自醫院機構上傳至系統。在一些實施態樣中，系統可包括用於產生及/或上傳訂購單之界面。

此外產生病患所獨有之病患特異性識別符並與細胞訂購識別符相關聯。在一些實施態樣中，病患特異性識別符可包括例如帶有連續後綴之病患ID #，其中後綴係按病患依序添加之單一字母(A至Z)。病患特異性識別符在系統中係獨特的。在一些實施態樣中，只有某些身分可看見病患特異性識別符(詳細描述於本文他處)。在一些實施態樣中，病患特異性識別符係列印在病患生物材料以及經產製之生物材料之旅程中所列印的每張標籤上。在一些實施態樣中，病患特異性識別符對所有系統使用者係唯讀。換句話說，在一些實施態樣中，病患特異性識別符一旦產生就無法編輯。

在一些實施態樣中，細胞訂購識別符可包括資訊，諸如例如獨特病患識別符、細胞訂購識別符、訂購碼、細胞訂購批號、在各個時間點之一或多個接受參數的值、指示是否符合各個時間點之接受標準的一或多個指標或彼等之組合。

在一些實施態樣中，在與病患相關聯之任何生物材料(例如自病患抽取之實體腫瘤、其片段、自其中抽取之細胞治療產物或自擴增細胞治療產物所獲得之經擴增之細胞治療產物)改變監管或進行處理時之各點掃描細胞訂購識別符及病患特異性識別符。在從自病患抽取之時間到輸注至病患體內之時間的整個過程期間，各掃描可藉由追蹤模組112登入及驗證。在整個過程期間的各步驟驗證病患特異性識別符確保產物的身分識別鏈(COI)，而在整個過程期間的各步驟驗證細胞訂購識別符確保產物的產銷監管鏈(COC)。與維持COI及COC有關的細節描述於本文他處。

在一些實施態樣中，掃描資訊係經由醫院機構產生之訂購單驗證。例如，當產製機構接受運輸物時，可掃描運輸容器上的標籤且可以訂購單驗證標籤上的資訊以確保正確性。在一些實施態樣中，將驗證結果登入在系統內。

將理解的是，雖然追蹤模組112顯示於圖3A且如本文所述作為醫院端界面110之一部分，但追蹤模組112在一些實施態樣中可作為具有處理器及記憶體之獨立運算裝置。類似地，追蹤模組112在一些實施態樣中亦可作為獨立軟體模組(例如儲存在雲端伺服器)執行。

在一些實施態樣中，醫院端界面110可經由病患存取模組116提供有限存取給病患，使病患得以獲得與治療程序及對應排程有關的資訊。病患存取模組116亦可使病患得以提供與自己有關的資訊(諸如例如個人識別資訊、保險資訊及與其健康狀況有關的資訊)給臨床醫師。

醫院端界面110可進一步包括摘取模組114，該模組可經操作以使臨床機構之人員得以根據預定規程自病患獲得實體腫瘤，且輸入與用於自病患獲得實體腫瘤之程序有關的資訊。在一些實施態樣中，與用於獲得實體腫瘤之程序有關的資訊可經歸檔，如此得以進行事後稽核以確保法規遵從性。

在一些實施態樣中，摘取模組114可進一步使臨床機構之人員得以提供有關實體腫瘤及用於自病患獲得實體腫瘤之過程的資訊給產製機構。在其中臨床機構亦可經操作以自實體腫瘤獲得細胞治療產物之實施態樣中，摘取模組114可使臨床機構之人員得以提供有關經獲得之細胞治療產物之資訊給產製機構，諸如例如用於獲得細胞治療產物之過程或程序及在經獲得之細胞治療產物上實施之品質管制測定的結果。

在一些實施態樣中，醫院端界面110可進一步包括產製協調模組118。產製協調模組118可經操作以使臨床機構之使用者得以獲得與一或多個產製機構有關的資訊，諸如例如一或多個產製機構之各者的產製槽之可用性及可用的產能。產製協調模組118進一步使臨床機構之使用者得以協調保留選定產製機構之產製槽，且經由物流界面130與物流提供者協調以安排獲自病患之實體腫瘤、其片段或細胞治療產物的運送。產製協調模組118進一步使臨床機構之使用者得以經由產製入口140獲得與在產製過程期間實施之產製過程及/或品質管制測定有關的資訊。

事件排程器120可經操作以協調在臨床機構及產製機構實施之各種活動的排程。此外或替代地，事件排程器120可提供與各種活動的排程有關之資訊給物流提供者，以促進臨床機構與產製機構(用於產製細胞治療產物之機構，例如細胞治療產物擴增在其中發生的機構)之間之細胞治療產物的運送。如以下更詳細描述地，基於在細胞治療產物的產製期間所發生的不同事件，當其他事件應發生時，事件排程器係經組態以動態排程。

在一些實施態樣中，事件排程器120包括運算裝置122諸如例如桌上型電腦、伺服器、筆記型電腦、行動裝置或任何其他運算裝置，該任何其他運算裝置包括在處理器上執行且與記憶體交互作用之硬體及軟體模組。硬體及/或軟體模組包括接受判定模組123及排程模組125。在一些實施態樣中，運算裝置122可為可經由醫院界面110、產製入口140及物流界面130存取之雲端伺服器。事件排程器120可經由有線或無線連接與運算裝置連接，該運算裝置在產製機構及/或醫院機構處操作或與產製機構及/或醫院機構相關聯。

將理解的是，雖然接受判定模組123顯示於圖3A作為事件排程器120之一部分，但接受判定模組123亦可作為產製入口140之一部分執行。替代地，接受判定模組123亦可作為獨立軟體模組(例如託管在雲端伺服器上)執行。

物流界面或快遞入口130可與物流提供者(諸如例如快遞服務或包裹處理服務)相關聯或可與之交互作用。

在一些實施態樣中，物流界面130包括一或多個運算裝置諸如例如桌上型電腦、雲端伺服器、筆記型電腦、行動裝置或任何其他運算裝置，該任何其他運算裝置包括在處理器上執行且與記憶體交互作用之硬體及軟體模組。物流界面130可經由有線或無線連接經由網路諸如網際網路與運算裝置連接，該運算裝置在物流提供者處操作或與物流提供者相關聯。

產製入口140可與產製經擴增之細胞治療產物之產製機構相關聯。產製入口140可經操作以使產製機構之人員得以控制及記錄在產製經擴增之細胞產物期間的各種過程，包括例如維持身分識別鏈及產銷監管鏈、記錄與在產製期間實施之品質管制測定有關的資訊、記錄各種過程之間的轉變及在擴增過程期間提供細胞治療產物之容器的標籤。

在一些實施態樣中，產製入口140包括一或多個運算裝置諸如例如桌上型電腦、雲端伺服器、筆記型電腦、行動裝置或任何其他運算裝置，該任何其他運算裝置包括在處理器上執行且與記憶體交互作用之硬體及軟體模組。產製入口140可經由有線或無線連接與運算裝置連接，該運算裝置在產製機構處操作或與產製機構相關聯。

在一些實施態樣中，產製入口140包括標示模組142及COC/COI模組144。標示模組142可經操作以使產製機構之人員得以產生在產製經擴增之細胞治療產物之製程期間(在本文中亦稱為擴增過程)攜帶細胞治療產物之容器的標籤。該標籤可包括資訊，諸如例如病患特異性識別符、與處理容器及/或實施擴增過程之目前及/或先前步驟之人員有關的識別符、先前步驟實施之品質管制測定的結果、與產生標籤之原因有關的原因碼、以病患特異性識別符識別細胞治療產物之條碼或2D碼(例如QR碼)及其他合適資訊。

COC/COI模組144可經操作以使與產製機構相關聯之使用者得以在擴增過程期間維持產銷監管稽核鏈。COC/COI模組144進一步可經操作以使與產製機構相關聯之使用者得以維持與經擴增之細胞治療產物相關聯之病患的身分識別稽核鏈。

圖3B繪示在市售軟體平台上經合適修改或建立之系統300之元件的物件綱要(在該些平台內之該些標準者除外)。例如，市售軟體平台可具有對應病患存取(包括例如病患識別符、病患接觸資訊、病患驗證資訊等)、治療計畫(包括例如病患治療事件的初始排程)、臨床醫師存取(例如臨床醫師識別符及臨床醫師驗證資訊)及產製存取(例如產製機構之接觸資訊)之內建物件。

另一方面，物件(諸如自病患獲得實體腫瘤之程序相關聯之腫瘤摘取表、包括與用於產製經擴增之細胞治療產物之製程有關的資訊及與該經獲得之實體腫瘤如何處理有關的資訊之產製令、一或多個產製機構之產製排程、得以稽核完整製程之標籤稽核軌跡)可經客製建立以與內建物件介接以提供與系統300相關聯之特定功能。

系統300中之客製建立物件及內建物件係經組態以彼此交互作用，如此得以經由從自病患獲得實體腫瘤到將經擴增之細胞治療產物輸注至病患體內的所有事件維持及稽核COC及COI。客製建立物件連同內建物件以及排程病患治療事件及相關物流係基於產製過程如果進展。

例如，在一些實施態樣中，系統300可提供客製建立物件諸如批次記錄及標籤稽核軌跡。這些客製建立物件加上客製建立工作流程自動化及客製建立使用者設定檔提供市售軟體平台原先並未設想於市售軟體平台內之功能，諸如例如維持COC/COI、稽核能力、基於產製執行動態排程病患治療事件、基於產製執行之標籤產生及/或產製執行與摘取之間的交互作用。在產製過程期間之腫瘤摘取程序、維持COC及COI及產生標籤之客製建立物件與內建物件之間的交互作用之額外細節係提供於本文他處。B. 維持 COC 及 COI 之客製建立及內建物件之間的交互作用

圖3C至圖3E根據本揭露之一些實施態樣繪示生物材料在產製機構之產製過程中的軌跡。在一些實施態樣中，起初當在臨床機構獲自病患之腫瘤樣本經遞送至產製機構時，掃描運輸標籤且獲自該掃描之資訊係與系統上之對應基於電腦物件相關聯。資訊可包括但不限於細胞訂購識別符、病患特異性識別符、腫瘤切除之時間、用於腫瘤切除之過程、在切除之後用於儲存腫瘤之過程及待用於自腫瘤擴增細胞治療產物之預期過程。一旦獲自掃描之病患相關資訊經產製機構分開接受(例如經由產製入口140)之細胞訂購需求驗證後，系統中指示腫瘤被產製機構接受且產銷監管鏈轉移至產製機構。有關產製過程中產銷監管鏈及身分識別鏈如何維持之細節係描述於本文他處。

接著將腫瘤移至品質檢查。在品質檢查期間，從掃描接受之腫瘤相關資訊經進一步驗證以確保腫瘤樣本符合必需品質標準。在此過程中驗證之資訊包括例如與用於腫瘤切除之過程及在切除之後用於儲存及運輸腫瘤之過程有關的資訊。與用於腫瘤切除之過程有關的資訊可包括例如自腫瘤摘取表處理之各種欄位，該腫瘤摘取表於本文他處進一步詳細描述。一旦腫瘤被視為符合品質標準，掃描對應標籤並更新對應物件。物件中包括之經更新之資訊可在整個系統中存取，該系統包括例如醫院機構以及物流提供者(在本文中亦稱為快遞機構)。在一些實施態樣中，與醫院機構及快遞機構相關聯之各種過程係基於經更新之物件更新。

接著將腫瘤移至產製。接著掃描第0天批次記錄標籤以驗證適當腫瘤樣本係經移至產製且待藉由適當產製過程處理。接著將腫瘤移至適當培養瓶(該培養瓶包括用於處理病患腫瘤之擴增過程的培養基及試劑)，並掃描培養瓶之標籤。使用獲自具有適當時間戳記之掃描的資訊更新對應物件。

接著將第0天培養瓶手動移至培育室，從培育室將其移至產製室。在產製室中，再次掃描培養瓶標籤並記錄其中含有之資訊。來自培養瓶標籤之資訊亦用於確保遵守適當產製過程。

在基於所遵照之特定產製過程之第一必需時間量(例如圖3C所示之11天)之後，接種培養瓶。在接種過程期間，可能需要將培養瓶自產製室移出。在這種情況下，掃描培養瓶標籤並在培養瓶離開產製室之前及之後更新批次記錄。在實施進一步過程之前匹配之前及之後掃描的資訊。

在接種過程之後，將培養瓶再放回產製室。在接種過程之後再放回產製室之前及之後掃描培養瓶標籤並更新批次記錄。匹配之前及之後掃描的資訊以驗證使用正確培養瓶且使用適當後續過程以進一步處理細胞治療產物。

在第二必需時間量(例如圖3C所示之第16天)之後，將來自經接種之培養瓶的細胞分裝至複數個袋子(例如圖3C所示之5袋)。在再放回產製室之前及之後掃描各袋的標籤，並適當更新批次記錄及對應物件。使用之前及之後掃描的資訊以驗證來自培養瓶之細胞係根據細胞訂購需求分裝且使用適當產製過程進一步處理袋子。

在一些實施態樣中，在第一及第二必需時間實施品質測定以確保產製過程係根據細胞訂購需求進行且遵照預定排程。在該等實施態樣中，品質管制測定之結果亦可包括在掃描資訊中。在獲得來自對應掃描之此類資訊後，如果判定在對應時間點獲得之細胞治療產物的品質不符合某些品質標準，則據此更新批次記錄及對應物件。若有需要，也更新產製過程的排程。在一些實施態樣中，可向醫院機構以及快遞溝通更新排程，以使適當更新醫院機構及快遞所待實施之對應過程的排程。何時及如何更新產製排程之細節係描述於本文他處。

接著在複數個袋子中(如排程或以合適修改之排程及/或中間步驟)繼續產製過程到預定終點。在一些實施態樣中，使用來自該複數個袋子之一的細胞實施最終經擴增之細胞治療產物之品質測定。接著標示選自品質測定之袋子以及含有待釋出作為最終產物之細胞的袋子，並掃描標籤以更新批次記錄及對應物件。

接著將待釋出作為最終產物之袋子輸入至卡匣中並冷凍以供運送至醫院機構。掃描卡匣標籤並更新批次記錄以及對應物件。接著掃描待用於實施品質管制測定之袋子的標籤，更新批次記錄及對應物件，並將袋子移至品質管制站。在獲得品質管制測定之結果後，掃描結果並更新批次記錄及對應物件。

在一些實施態樣中，可釋出待釋出作為最終產物之袋子至快遞(及最終醫院機構)，但需警告袋中產物尚未經核准用於病患治療，因為尚未取得品質測定之結果。在該等實施態樣中，當獲得品質測定之結果時即時更新對應物件，藉此減少遞送最終細胞治療產物給病患的時間。

一旦品質測定之結果指示核准最終細胞治療產物用於用於病患的治療性用途，掃描卡匣並更新批次記錄及對應物件。接著製備處理卡匣以供運送、交給物流提供者(即快遞)並掃描，指示產銷監管鏈已轉移至快遞。

快遞接著將最終細胞治療產物運送至醫院機構，在該處再次掃描標籤以指示產銷監管鏈已轉移至醫院機構。更新批次記錄及對應物件以使產製機構及快遞接獲最終細胞治療產物已遞送至醫院機構的通知。C. 在產製過程期間標示細胞治療產物且維持產銷監管鏈及身分識別鏈

圖3F根據產製過程之一些實施態樣(例如第2代製程或第3代製程)繪示從獲得實體腫瘤到產製過程到輸注至病患體內之細胞治療產物之旅程中維持COC及COI的過程。在一些實施態樣中，起初醫院端界面110從醫院的雇員(例如註冊護士)接受有關病患之資訊，該醫院與醫院端界面110連接。有關病患之資訊可包括有關健康保險之資訊、個人識別資訊、健康相關資訊、病患收案資訊(例如受試者同意書)或任何其他可能有助於識別及照護病患之病患相關資訊。

在醫院的雇員(例如臨床醫師)判定病患是例如TIL輸注療法之候選者之後，病患可經由連接至醫院端界面110之電腦提供同意書以接受TIL輸注療法。

醫院的雇員接著可經由事件排程器120訂購供病患之TIL輸注療法。醫院的收費部門雇員接著可經由物流界面130立下供病患之TIL輸注療法之訂購單。可傳遞TIL輸注療法醫令及訂購單至醫院端界面110。醫院端界面110可確認接受醫令及訂購單，以及在開立細胞訂購需求至事件排程器120之前確認已完成病患收案及受試者同意。同樣地，醫院端界面可與保險提供者溝通以通知已排程各種病患治療事件且亦可提供病患治療事件之排程給保險提供者以處理付款。

接著可將病患特異性識別符與細胞訂購需求相關聯且在每個處理及/或運輸步驟附接至與病患相關聯之生物材料，如此得以如本文進一步詳述之不中斷追蹤生物材料之產銷監管鏈及身分識別鏈。亦可將病患特異性識別符與病患以及用於投予不同病患治療過程之治療設備相關聯以在整個治療方案中追蹤病患。

亦可經由醫院端界面110向保險提供者溝通病患特異性識別符，如此得以在各種病患治療事件之後處理付款。可進一步經由快遞入口130向快遞溝通病患特異性識別符以使快遞得以驗證與所運送之生物材料相關聯之病患的身分識別。

在本文中揭示之各種實施態樣中，任何排程模組125與醫院端界面110、產製入口140或物流界面130之間與產製事件及/或病患治療事件之排程有關的溝通(不論是否變更)皆伴隨與經處理及排程之細胞訂購需求相關聯的病患特異性識別符。此類包括病患特異性識別符之溝通使醫院端界面110、產製入口140及物流界面130得以正確處理、追蹤及識別生物材料，藉此避免錯誤識別生物材料或病患且改善病患安全性。

此外，如本文詳細解釋的，病患特異性識別符係用於產生在擴增過程期間使用之容器的標籤，如此得以在擴增過程中維持COC/COI且得以事後稽核法規遵從性。

在一些實施態樣中，細胞訂購識別符可包括病患特異性識別符，該細胞訂購識別符亦經結構化以用於追蹤身分識別鏈/產銷監管鏈以及用於追蹤事件歷史。在一些實施態樣中，除了病患特異性識別符以外，細胞訂購識別符可包括數個標記或欄位，各對應來自經歷處理步驟之病患之生物材料。圖3G係根據一些實施態樣之細胞治療產物之標籤的代表性影像。在一些實施態樣中，標籤包括細胞訂購識別符350、2D碼(例如QR碼)362、原因欄位370及產物欄位380。細胞訂購識別符350可包括各種欄位諸如例如病患姓名354、病患特異性識別符352、病患出生日期(例如用於額外驗證)356、醫院相關病患識別符358及產製批號360。

因此，標籤得以維持COI/COC且亦得以追蹤從在臨床治療中心切除腫瘤、運輸腫瘤材料至產製機構、產製包括測試所有製程中及成品樣本、運輸藥物產品至臨床治療中心及輸注藥物產品之材料。

在一些實施態樣中，可在從獲得實體腫瘤到產製過程到輸注至病患體內之細胞治療產物的旅程期間之不同時間點產生不同標籤，諸如該些於圖3H說明者。在不同時間點產生的標籤可包括該些圖3G繪示之標籤所包括之額外或不同資訊。例如，在一些實施態樣中，在細胞擴增過程期間產生且經例如固定至在細胞擴增過程期間使用之容器的標籤可包括對應各個時間點之欄位及在個別時間點做出之擴增細胞治療產物之接受參數是否符合某些接受標準的判定結果。

因此，在過程中之任何階段，標籤提供有關病患之資訊(經由病患特異性識別符)，藉此得以維持身分識別鏈及產銷監管鏈。標籤亦可提供有關相關生物材料所經歷之各種處理步驟之資訊，出於例如稽核目的提供產銷監管鏈以及事件歷史之記錄。

系統300因此可經組態以在整個細胞治療產物產製過程及供應鏈中維持COI及COC。此外，系統300可經組態以包括符合21 CFR Part 11, HIPAA(健康保險便利和責任法)及GDPR(一般資料保護法)規定及確保資料安全且受到保護之保護措施。

為了限制及侷限敏感資料的存取，系統300在一些實施態樣中執行基於使用者之角色及存取。在一些實施態樣中，標籤上可包括在標籤產生之時的時間戳記。

在一些實施態樣中，經由追蹤模組追蹤之細胞訂購識別符可進一步包括與例如各種運輸/運送事件、各種產製過程事件及/或治療方案中之各個步驟相關聯之標記或欄位。這些標記或欄位可不印在標籤上，但由追蹤模組產生或附加，以追蹤與病患相關聯之生物材料以及追蹤治療之進展。在該等實施態樣中，指示某一步驟之完成時間的時間戳記可相關於或附加於每一步驟之細胞訂購識別符，其中給定標記或欄位係經變更或更新。將理解的是包括於此類經更新之細胞訂購識別符中之資訊亦可用於動態再排程病患治療事件，如本文他處詳細討論。 1.在產製過程期間標示細胞治療產物

參照回圖3F，在一些實施態樣中，細胞訂購識別符係印在可讀標籤上且與條碼或QR碼(或2D碼)相關聯，以允許從腫瘤切除到輸注自體藥物產品之適當驗證身分識別。可將標籤固定至與生物材料以及治療方案相關聯之物件。例如，可將包括病患特異性識別符之標籤固定至從醫院或臨床機構攜帶經切除之腫瘤至TIL產製機構之容器、在各種產製步驟期間之TIL產製設備及容器、用於運輸擴增TIL回到醫院或臨床機構之運輸容器、與各種治療事件相關聯之設備或彼等之任何組合。

例如，在一些執行中，病患可經由醫院端界面110之病患存取模組116進入系統且經收案。在可追蹤病患資訊之系統內收案且擷取後，可由系統指派病患特異性識別符(COI編號)給病患。指派病患特異性識別符得以排程切除日期及產製槽。

排程系統內之產製槽觸發細胞訂購之產生且指派產製單位之批號。

在腫瘤切除之前，臨床機構可存取系統、確認正確病患識別且產生腫瘤瓶標籤及腫瘤運輸罐標籤。除了細胞訂購識別符以外，標籤可包括病患特異性識別符。在一些實施態樣中，病患特異性識別符可為細胞訂購識別符內之欄位。

在腫瘤切除之後，追蹤模組112起始產銷監管鏈。接著可將經標示之腫瘤瓶放入運輸罐並交給快遞以運送至產製單位。當快遞驗證運輸罐標籤上之細胞訂購編號符合整合至系統300中之快遞系統的運輸單上之細胞訂購編號時，產銷監管鏈繼續，藉此提供在治療中心與產製單位之間的腫瘤之即時追蹤。

在遞送腫瘤至產製單位後，系統內可產生遞送證明。在接受腫瘤後，產製人員經由COC/COI模組144將產製批號輸入至系統的產製模組140中。找出病患記錄(可經由產製協調模組118取得)，將腫瘤瓶標籤掃描至系統中以驗證病患特異性識別符係與產製批號相關聯。在驗證後，COC轉移至產製單位。

產製機構之人員可進入系統，其中標示模組142得以產生含有細胞訂購需求之在製品(WIP)標籤。為了促進事後記錄稽核，可將WIP標籤固定至批次記錄及細胞生長培養瓶。圖3G係根據一實施態樣之WIP標籤的代表性影像。圖3H顯示根據一實施態樣之不同WIP標籤類型及包括於各種標籤類型中之資訊。

接著產製人員可在產製過程期間的關鍵轉變點掃描標籤，以驗證細胞生長培養瓶上之細胞訂購識別符編號符合批次記錄，確保在整個產製過程維持COI。

此外，各品質管制(QC)樣本將具有其自己的具有COI編號之標籤，以確保該產生之結果接著連接至對應批次記錄。在完成產製過程後，標示模組142可產生成品標籤。圖3I及圖3J係成品標籤之實例。

如圖3I至圖3J所示，這些成品標籤含有獨特病患識別，包括姓名354、出生日期(DOB) 356及病患特異性識別符352。將成品標籤固定至最終產物，並掃描批次記錄及標籤兩者以確保在產製機構內的COI及完全產銷監管鏈。

將成品放入具有相同細胞訂購識別符(包括相符的病患特異性識別符)之運輸罐、驗證且轉移至快遞以遞送至治療中心進行輸注。接著快遞可驗證運輸容器上之細胞訂購識別符及病患特異性識別符符合快遞系統中經由物流界面130接受之細胞訂購及病患資訊，藉此提供在產製單位與治療中心之間的各藥物產品批次之幾乎即時追蹤。此時，COC從產製單位轉移至快遞。

快遞遞送成品至治療中心以供輸注至病患體內。快遞可經由物流界面130起始遞送證明(POD)，且COC從快遞轉移至治療中心。COI結束於在治療中心輸注產物至病患。

如本文中所討論，在各處理步驟之後醫院端界面110、事件排程器120、產製入口140與物流界面130之間溝通病患特異性識別符確保所有關係人(例如臨床機構、產製機構及物流提供者)接受生物材料之產銷監管鏈以及身分識別鏈之記錄，且亦接受生物材料所經歷之各種處理步驟的記錄。

因此經由標籤提供給實體腫瘤之病患特異性識別符及細胞訂購需求得以追蹤運輸，以便維持病患安全性以及法規遵從性(例如FDA稽核)所需之產銷監管鏈及身分識別鏈。 2.因應產製過程變更之標籤校正

一旦產製機構接受實體腫瘤，根據細胞訂購需求起始細胞治療產物的產製。例如可使用細胞擴增技術使用至少一部分之實體腫瘤產製細胞治療產物。

在一些實施態樣中，與產製機構相關聯之電腦子系統例如標示模組142可造成待列印之第二標籤與用於細胞擴增之一部分之實體腫瘤相關聯。第二標籤可包括病患特異性識別符及細胞需求識別符。第二標籤進一步得以追蹤細胞治療產物以維持產銷監管鏈及身分識別鏈。

後續在細胞治療產物的產製期間，判定在各個時間點經產製之細胞治療產物的接受參數。接著在接受判定模組123中比較接受參數，以判定在特定時間點判定之接受參數是否符合對應時間點之接受標準。接受參數可藉由在本文中揭示之任何合適方法或過程判定。此外，接受標準可為在本文中揭示之任何接受標準。

在一些實施態樣中，判定接受參數及接受參數是否符合接受標準之結果可附加於如本文他處所揭示之細胞訂購識別符。在一些實施態樣中，可基於判定接受參數是否符合(或不符合)接受標準之結果產生第三標籤。

例如，如果第二時間點的接受參數不符合第二時間點的接受標準，則產生在產製過程期間所使用之容器的第三標籤，該第三標籤包括「原因碼」以傳送第二時間點的接受參數不符合第二時間點的接受標準及為何不符合第二時間點的接受標準之資訊。

另外，如果判定在第二時間點獲得之細胞治療產物可自在第二時間點之前的第一時間點再處理以適當獲得符合第二時間點的接受標準之細胞治療產物，則第三標籤可包括諸如例如本文他處所揭示之新的或經更新之細胞需求識別符的資訊。在這種情況下，第三標籤可額外包括「原因碼」以傳送關於為何第二時間點的接受標準及為何自第一時間點再處理細胞治療產物係適當的之資訊。

接下來，基於接受判定模組123所判定之是否符合一或多個時間點的接受標準，用於細胞治療產物的產製之產製排程係經合適修改以產生如本文他處所討論之經更新之產製排程。此外，產製機構的產製槽之可用性亦經合適修改以反映目前細胞治療產物的產製排程之變更(若有的話)。接著可向運算裝置溝通該產製機構的產製槽之經變更或更新之可用性。另外，病患治療事件的初步排程亦可基於經更新之產製排程修改，並可向運算裝置溝通病患治療事件的更新排程。

接著根據經更新之產製排程完成細胞治療產物的產製。

在一些實施態樣中，產生對應複數個時間點之各者的產製標籤，在該複數個時間點判定接受參數。各時間點之產製標籤可包括與經產製之細胞治療產物的品質相關聯之經更新之資訊。經更新之資訊可包括在對應時間點之接受參數及/或接受參數是否符合該時間點的接受標準。

此外，在一些實施態樣中，控制產製過程之控制器可經組態以讀取經更新之產製標籤及判定後續處理步驟。例如，如果在第二時間點的QA測試之後經更新之產製標籤指示細胞治療產物不符合某些接受標準，但細胞治療產物可自第一時間點再處理，則控制器可造成產製過程的合適變更。此外，亦基於經更新之標籤上的資訊做出產製排程的合適變更、產製槽之可用性及病患治療事件的排程。所屬技術領域中具有通常知識者將理解經更新之產製標籤可包括細胞訂購識別符及病患特異性識別符加上與經產製之細胞治療產物的品質及促進身分識別鏈及產銷監管鏈的原因碼有關的資訊。

所屬技術領域中具有通常知識者將進一步理解，可向醫院端界面及物流界面溝通由讀取經更新之產製標籤所獲得之與產製排程變更、產製槽之可用性及病患治療事件排程有關的資訊，以使對應運算裝置得以做出對與該些實體相關聯之個別排程的對應變更。D. 以病患治療事件協調產製細胞治療產物

圖4A及圖4B顯示根據本揭露之實施態樣之用於協調產製供病患之TIL之方法的流程圖。在一些實施態樣中，圖4A及圖4B繪示之方法係在圖3A描繪之完整系統上執行，然而在一些實施態樣中，圖4A及圖4B繪示之方法係藉由圖3A描繪之部分系統執行。在一些實施態樣中，事件排程器120接受(例如S305)來自醫院端界面110之擴增供病患之細胞治療產物例如T細胞的細胞訂購需求及與細胞訂購需求相關聯之病患特異性識別符。

在一些實施態樣中，病患特異性識別符或替代地細胞訂購識別符係藉由事件排程器120(例如S310)而非追蹤模組112產生。

細胞訂購需求可包括資訊，諸如例如病患識別資訊、各種病患治療事件的目標日期及/或最終經擴增之TIL產製產物的目標參數。一旦接受細胞訂購需求，事件排程器120可傳遞確認至醫院端界面110，指示已接受對應病患特異性識別符之細胞訂購需求。在病患特異性識別符係由事件排程器120產生之實施態樣中，事件排程器120可傳遞指示已接受病患的細胞訂購需求之確認且提供病患特異性識別符或細胞訂購識別符至醫院端界面110。此外，事件排程器120可基於接受的細胞訂購需求傳遞病患治療事件的目標排程。

此外，事件排程器120可傳遞包括病患特異性識別符之起始請求(例如S315)至醫院端界面110例如臨床機構，以對病患實施程序以自病患獲得實體腫瘤並排程快遞取貨時間以將該經獲得之實體腫瘤轉移至產製機構。如本文中所討論，程序可包括但不限於用於自病患抽取一部分的腫瘤之腫瘤活體組織切片。在一些實施態樣中，事件排程器120可自使用醫院端界面110之雇員接受程序日期。作為反應，事件排程器120可提示雇員視需要訂購用品(例如腫瘤切除套組、腫瘤運輸容器或冷凍運輸容器)且將彼等與病患特異性識別符相關聯。

在實施獲得實體腫瘤之程序且運輸實體腫瘤之後(例如S320)，一旦產製機構接受該經獲得之實體腫瘤，排程模組125動態排程(例如S325)各種產製事件以及各種病患治療事件，並將各事件與病患特異性識別符相關聯。在一些實施態樣中，排程模組125在接受經獲得之實體腫瘤之前諸如例如在自醫院端界面110接受有關自病患獲得實體腫瘤之程序的排程資訊後判定產製事件及病患治療事件的排程，並將各事件與病患特異性識別符相關聯。

各種產製事件之排程係與病患特異性識別符相關聯且可包括實施各種產製步驟(例如圖2A、圖2B或圖2C及/或圖9所示之步驟A至F)的對應目標日期以及完成TIL產製過程的對應目標日期。如本文中所討論，各種產製步驟的目標日期可取決於因子，諸如所接受之腫瘤的大小、起始給定步驟之前的細胞計數、給定步驟結束時的數值倍數、在給定步驟期間達成某個數值倍數所需的天數及/或其他因子。

各種病患治療事件的排程可包括與病患特異性識別符相關聯之各種病患治療事件的目標日期，諸如例如目標TIL輸注日期、淋巴細胞耗盡日期、住院期、IL-2輸注方案排程及/或其他類似治療相關日期。如本文中所討論，病患治療事件之排程係依賴於產製事件之排程，且特別是TIL產製完成日期。在一些實施態樣中，可將各種病患治療事件的排程連同病患特異性識別符傳遞至醫院端界面110。

排程模組125係經組態以基於不同產製步驟之進展及成功動態變更產製事件的排程以及病患治療事件的排程。例如，取決於不同步驟之與擴增細胞治療產物相關聯之接受參數是否符合某些接受標準，後續產製步驟之起始日期需要變更，其進而改變目標完成日期，且因此需要使用例如圖4B或圖4C描繪之方法改變病患治療事件之日期。

接受判定模組123判定與擴增細胞治療產物相關聯之接受參數是否符合某些接受標準。接受參數包括但不限於細胞計數、細胞存活性、無菌性、黴漿菌計數、CD3計數、CD5計數、干擾素γ(INF-γ)產生、內毒素測定結果、革蘭氏染色測定結果等。取決於測量接受參數之步驟，這些接受參數之一些或所有可需要符合接受標準。例如在第一初始擴增結束時(在本文中亦稱為第一時間點)，例如自擴增起始開始11天，接受標準可為細胞計數應為至少5 x 10⁶ 個存活細胞。不同步驟之接受標準亦取決於用於實施擴增之過程(例如第2代、第3代、第3.1代等)。

因此，取決於用於實施擴增之過程，接受判定模組123可在擴增起始之後超過一個不同時間點判定接受參數是否符合某些接受標準。換句話說，接受判定模組123在各不同指明時間點實施品質測試(在本文中亦稱為QA測試)以判定接下來的行動方案，且排程模組125基於獲自接受判定模組123之QA測試的結果動態排程後續產製步驟及病患治療事件。

表B提供用於測試第2代、類第2代及第3代製程最終產物之接受參數及接受標準的一個實例。

參照圖4B，在一實施態樣中，在細胞治療產物之擴增起始之後，接受判定模組123判定(例如S402)第一時間點之經擴增之細胞治療產物是否通過與第一時間點(例如在圖2A及/或圖9顯示之步驟B之後)相關聯之QA測試。在判定細胞未通過第一時間點的QA測試後(例如S404)，接受判定模組123判定細胞是否因為污染而未通過QA測試。如果細胞因為污染而未通過QA測試，則檢視可能終止的個案(例如S422)。

另一方面，如果細胞因為除污染以外的原因(例如因為低細胞計數或低存活性)而未通過QA測試，取決於細胞未通過QA測試的原因，排程模組125可延長進行中步驟的時間並檢視最終收集的結果(例如S408)。在一些實施態樣中，所有後續產製步驟及病患治療事件可因延長進行中步驟的時間而經再排程。

替代地，排程模組125可僅再排程病患治療事件，以便承擔完成產製過程的潛在延緩或承擔經產製之細胞治療產物的潛在低溫冷凍，以允許完成產製及輸注細胞治療產物之間的時間差。將理解的是在一些實施態樣中，細胞治療產物包含病患的T細胞。在一些實施態樣中，細胞治療產物包含腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)。因此為了簡單起見，本文中之討論可互換地指稱細胞治療產物為T細胞或TIL。

例如在一些情況下，細胞治療產物儘管未通過第一時間點的QA測試但可通過最終QA測試。在這種情況下，審慎的做法是偏離產製事件及病患治療事件的理想排程，且延緩淋巴細胞耗盡直到實施最終QA測試以避免非必需的病患治療。因此，取決於細胞未通過第一時間點的QA測試的原因，判定(S418)病患治療事件之排程是否需要偏離病患治療事件的理想排程。在判定病患治療事件的排程需要偏離理想排程後，排程模組125可再排程(即延緩)(例如S420)淋巴細胞耗盡以及後續病患治療事件，且進一步可選地在完成產製過程之後排程低溫冷凍步驟。

參照回S402，如果細胞通過第一時間點的QA測試，則不需要變更產製過程或病患治療事件的排程。接受判定模組123接著判定(例如S406)第二時間點之經擴增之T細胞是否通過與第二時間點(例如在圖2A及/或圖9顯示之步驟C或步驟D之後)相關聯之QA測試。

如果細胞未通過第二時間點的QA測試，則接受判定模組123判定(例如S404)細胞是否因為污染而未通過QA測試。如果細胞因為污染而未通過QA測試，則檢視可能終止的個案(例如S422)。

替代地，排程模組125僅再排程病患治療事件，以便承擔完成產製過程的潛在延緩或承擔經產製之TIL的潛在低溫冷凍，以允許完成產製及輸注TIL之間的時間差。

例如在一些情況下，細胞儘管未通過第二時間點的QA測試但可通過最終QA測試。在這種情況下，審慎的做法是偏離病患治療事件的理想預先決定的排程(在本文中亦稱為黃金途徑)，且延緩淋巴細胞耗盡直到實施最終QA測試以避免非必需的病患治療。因此，取決於細胞未通過第二時間點的QA測試的原因，排程模組125可再排程(即延緩)(例如S420)淋巴細胞耗盡以及後續病患治療事件，且進一步在完成產製過程之後排程低溫冷凍步驟。

在一些實施態樣中，當細胞未通過第一或第二時間點的QA測試時，可更新病患特異性識別符以識別細胞未通過個別時間點的QA測試，且醫院端界面110及物流界面130接獲病患(與病患特異性識別符相關聯)的病患治療事件可能需要取消或延緩的通知。當病患治療事件的排程偏離預先決定的排程(例如黃金途徑排程)且病患治療事件經再排程時，醫院端界面110及物流界面130接獲已更新對應病患特異性識別符之排程的通知且向醫院端界面110及物流界面130溝通更新排程。

此類通知使臨床機構或醫院得以合適調整病患治療事件的各種排程以及做出與個別病患治療事件所需之適當人員可用性及機構和設備可用性有關的必需物流安排。通知可另外促進醫院或臨床機構告知病患有關病患治療事件之排程之變更。替代地，事件排程器120及/或醫院端界面110可與病患直接溝通以通知病患有關病患治療事件排程變更並使病患得以與醫院或臨床機構協調以根據經變更之排程安排病患治療事件。

在一些實施態樣中，醫院端界面110可另外向保險提供者溝通更新排程，以便可採取處理付款之適當措施。

類似地，通知使物流提供者得以做出再排程生物材料之運輸的必需安排，諸如例如安排適當運輸盒及處理生物材料之適當人員的可用性。

參照回S406，如果細胞通過第二時間點的QA測試，則排程模組125可維持病患治療事件的排程。例如在一些實施態樣中，排程模組125可向醫院端界面110溝通(例如S410)可基於預先決定的排程向患者投予淋巴細胞耗盡治療，但需警告產製過程仍可被延緩或可能無法產生所欲最終產物之機率極低但非絕無可能。此類溝通在圖4B中指明為「有風險的淋巴細胞耗盡」。在此狀況下不變更產製過程或病患治療事件之排程。

接受判定模組123接著判定(例如S412)第三時間點之經擴增之T細胞是否通過與第三時間點(例如在圖2A及/或圖9顯示之步驟D或步驟E之後)相關聯之QA測試。

如果細胞通過第三時間點的QA測試，則經擴增之細胞被視為在目標TIL輸注日期為釋出就緒產物。排程模組125在這種情況下通知(例如S424)醫院端界面110將以目標排程繼續病患治療事件。換句話說，不對排程做出變更。

另一方面，如果細胞未通過第三時間點的QA測試，則實施產物影響評估(例如由投予治療之醫生或首席醫療官)(例如S414)以判定經擴增之細胞是否可提供用於輸注或治療終止(取決於細胞未通過第三時間點的QA測試的原因)。如果在產物影響評估後，判定(例如S416)治療可繼續但需警告可能有與繼續以可用產物治療相關聯之某些風險，則在無病患治療事件之排程的任何變更下核准經擴增之細胞釋出(例如S424)。

參照圖4C，在一實施態樣中，在細胞治療產物之擴增起始之後，接受判定模組123在例如S402判定第一時間點之經擴增之細胞治療產物是否通過與第一時間點(例如在圖2A及/或圖9顯示之步驟B之後)相關聯之QA測試。在判定細胞未通過第一時間點的QA測試後(例如S404)，接受判定模組123判定細胞是否因為污染而未通過QA測試。如果細胞因為污染而未通過QA測試，則檢視可能終止的個案(例如S422)。

參照回S402，如果細胞通過第一時間點的QA測試，則不變更產製過程或病患治療事件的排程。接受判定模組123接著判定(例如S406)第二時間點之經擴增之T細胞是否通過與第二時間點(例如在圖2A及/或圖9顯示之步驟C或步驟D之後)相關聯之QA測試。

如果細胞未通過第二時間點的QA測試，則接受判定模組123判定(例如S404’)細胞是否因為污染而未通過QA測試。如果細胞因為污染而未通過QA測試，則檢視可能終止的個案(例如S422)。

另一方面，如果細胞因為除污染以外的原因(例如因為低細胞計數或低存活性)而未通過QA測試，則接受判定模組123判定(例如S458)在第二時間點獲得之細胞治療產物是否具有足夠品質，得以自第一時間點再實施細胞產製過程，以便導致細胞治療產物在第二時間點具有符合第二時間點的接受標準之接受參數。這種判定可基於在第二時間點獲得之細胞治療產物的接受參數做出。作為一實例，如果第二時間點的接受參數符合第二時間點除了總存活細胞計數以外的所有接受標準，則可行的做法是再實施介於第一與第二時間點之間的細胞產製過程以獲得必需存活細胞計數。

如果判定自第一時間點再實施細胞產製過程並不可行，則檢視可能終止的個案(例如S422)。

另一方面，如果判定再實施介於第一與第二時間點之間的細胞產製過程係可行的，則排程模組125預估細胞產製過程在再實施介於第一與第二時間點之間的過程之後的完成時間(例如S460)。將理解的是可基於在第二時間點獲得之細胞治療產物的接受參數預估再實施介於第一與第二時間點之間的細胞產製過程所需的時間。因此，完成用於產製細胞治療產物之細胞擴增過程包括自第一時間點再實施過程所需的時間可取決於在第二時間點獲得之細胞治療產物的接受參數。

接著排程模組125可因自第一時間點再實施細胞產製過程而基於在第二時間點獲得之細胞治療產物的接受參數再排程所有後續產製步驟及病患治療事件。例如排程模組125可再排程病患治療事件，以便承擔完成產製過程的延緩或承擔經產製之TIL的潛在低溫冷凍，以允許完成產製及輸注TIL之間的時間差。

另一方面，如果在第二時間點獲得之細胞治療產物的接受參數符合所有接受標準，則細胞產製過程可如原本排程繼續。

所屬技術領域中具有通常知識者將理解，即使在經判定此類再實施係可行而自第一時間點再實施細胞產製過程之後，仍判定在重複的第二時間點(在本文中亦稱為替代第二時間點)獲得之細胞治療產物的接受參數。接著，在繼續細胞產製過程通過第二時間點之前，再次判定重複第二時間點(其可能與細胞產製過程中的原始第二時間點不同)的接受參數是否符合第二時間點的接受標準。

在一些實施態樣中，繼續的過程接著遵照如圖4B顯示之相同途徑「B」。例如在一些情況下，細胞儘管未通過第二時間點的QA測試但可通過最終QA測試。在這種情況下，審慎的做法是偏離病患治療事件的理想預先決定的排程(在本文中亦稱為黃金途徑)，且延緩淋巴細胞耗盡直到實施最終QA測試以避免非必需的病患治療。因此，取決於細胞未通過第二時間點的QA測試的原因，排程模組125可再排程(即延緩)(例如S420)淋巴細胞耗盡以及後續病患治療事件，且進一步在完成產製過程之後排程低溫冷凍步驟。

所屬技術領域中具有通常知識者將理解當細胞產製過程具有數個用於判定接受參數及該些接受參數是否符合該些對應時間點的接受標準之時間點時，可行的做法是自緊接的之前時間點再實施細胞產製過程的步驟。因此，用語「第一時間點」及「第二時間點」不一定描述判定接受參數的數值第一及數值第二時間點。相反地，「第一時間點」係指如果後續時間點的接受參數不符合該時間點的接受標準而自細胞產製過程中之一時間點再實施細胞產製過程的步驟係可行的該時間點。例如在1C製程(見圖6)中，第一及第二時間點可分別為第27天及第30天、分別為第30天及第36天或分別為第36天及第43天。類似地在2A製程(見圖6)中，第一及第二時間點可分別為第11天及第16天或分別為第16天及第22天。

在一些實施態樣中，當細胞未通過第一或第二時間點的QA測試時，可更新病患特異性識別符以識別細胞未通過個別時間點的QA測試，且醫院端界面110及物流界面130接獲病患(與病患特異性識別符相關聯)的病患治療事件可能需要取消或延緩的通知。

由於細胞治療產物的產製排程可偏離理想排程如果自第一時間點再實施細胞產製過程係可行的，因此病患治療事件的排程亦偏離預先決定的排程(例如黃金途徑排程)。因此，排程模組再排程病患治療事件，且醫院端界面110及物流界面130接獲已更新對應病患特異性識別符之排程的通知。向醫院端界面110及物流界面130溝通更新排程。

如本文中所討論，此類有關排程變更之通知使臨床機構或醫院得以合適調整病患治療事件的各種排程。此外，可做出與個別病患治療事件所需之適當人員可用性及機構和設備可用性有關的必需物流安排。通知可進一步促進醫院或臨床機構告知病患有關病患治療事件之排程之變更。替代地，事件排程器120及/或醫院端界面110可與病患直接溝通以通知病患有關病患治療事件排程變更並使病患得以與醫院或臨床機構協調以根據經變更之排程安排病患治療事件。

在一些實施態樣中，除非治療終止，否則排程模組125與物流界面130溝通以提供基於完成日期之取貨令，該完成日期基於各個時間點的QA測試之結果判定。物流界面130接著與物流提供者(未圖示)溝通以做出及時收集及運輸經擴增之TIL至醫院或臨床機構以供後續病患治療(例如輸注)的合適安排。例如在一些實施態樣中，可要求物流提供者在排程的病患治療事件的一定天數之前運輸用於處理生物樣本之特殊容器至醫院或臨床機構。

類似地，如果判定經擴增之細胞通過QA測試，則排程模組125向醫院端界面110溝通排程的完成日期及病患治療事件的排程(即更新排程)。另一方面，如果判定治療係待終止，則排程模組125與醫院端界面110溝通治療係待終止。

在一些實施態樣中，在再排程病患治療事件後，將病患治療事件之更新排程連同相關病患特異性識別符傳遞至醫院端界面110。

在一些實施態樣中，如果判定自第一時間點再實施細胞產製過程的步驟係可行的，則可更新介於細胞訂購識別符與病患特異性識別符之間的關聯。例如在判定自第一時間點再實施細胞治療產物之擴增係可行後，將細胞訂購識別符與病患特異性識別符解關聯。可產生與細胞訂購需求相關聯之新的細胞訂購識別符且病患特異性識別符係與新的細胞訂購識別符相關聯。在一些實施態樣中，可基於在第二時間點判定之接受參數產生新的細胞訂購識別符。在一些實施態樣中，細胞訂購識別符可包括對應各時間點的欄位，在該各時間點判定細胞治療產物的接受參數。此外在一些實施態樣中，細胞訂購識別符亦可包括判定接受參數是否符合接受標準之結果，包括例如哪些接受參數符合接受標準及接受參數的值。

在一些實施態樣中，病患特異性識別符、新的細胞訂購識別符及細胞治療產物之擴增的預估完成時間係經傳遞至醫院端界面以使醫院端界面得以追蹤細胞治療產物並將細胞治療產物與病患相關聯。

細胞訂購識別符包括之各種欄位可使排程模組125得以基於在各個時間點產生之經更新或新的細胞訂購識別符判定病患治療事件的新排程以及與病患治療事件相關聯之運輸及物流事件。接著將新排程連同相關之病患特異性識別符傳遞至物流界面。亦可將病患特異性識別符及經更新或新的細胞訂購識別符連同在一些實施態樣中之新排程傳遞至物流界面，以便維持細胞治療產物的產銷監管鏈及身分識別鏈。

在一些實施態樣中，如果判定再實施細胞產製過程的步驟並不可行(例如因為第二時間點的接受參數不符合接受標準的某些臨限)，則可取消第二時間點後續的病患治療。在該等實施態樣中，向醫院端界面及物流界面溝通病患治療之取消。在一些實施態樣中，在判定再實施細胞產製過程的步驟並不可行後，可銷毀經擴增之細胞治療產物。例如，在如果無法再實施細胞產製過程的步驟則不可能獲得存活的經擴增之細胞治療產物的情形下，輸注細胞治療產物變得不可能。因此，繼續第二時間點後續的病患治療事件對病患(例如不論就健康結果或就財務結果或兩者)可能有害。此外，如果基於經判定之第二時間的接受參數判定第二時間點的經擴增之細胞治療產物無法進一步使用(例如如果第二時間點的細胞治療產物受到污染或不符合某些其他接受標準)，則可銷毀細胞治療產物。在這種情況下，將細胞訂購識別符與病患特異性識別符解關聯。E. 協調產製機構之間的產製槽

在本揭露之進一步態樣中，揭示一種產製供病患之細胞治療產物之方法。在一些實施態樣中，該方法包括接受產製供該病患之該細胞治療產物之細胞訂購需求。細胞訂購需求可由與臨床機構相關聯之運算裝置接受。細胞訂購需求可經由例如醫院端界面110接受。在一些實施態樣中，運算裝置可在接受細胞訂購需求時產生病患特異性識別符及細胞訂購識別符，並將病患特異性識別符及細胞訂購識別符與細胞訂購需求相關聯。

除了細胞訂購需求之外，運算裝置可接受用於產製細胞治療產物之複數個產製機構的產製槽。例如運算裝置可經由例如網際網路與複數個產製機構相關聯之電腦子系統溝通偶合，以使運算裝置可因應運算裝置之查詢接受與產製槽有關的資訊。個別產製機構的產製槽可指示在該產製機構之設備及人員的可用性以使該產製機構得以根據細胞訂購需求產製細胞治療產物。

運算裝置可進一步接受用於以細胞治療產物治療病患之病患治療事件的初步排程。初步排程可基於產製細胞治療產物之理想排程決定，假設細胞治療產物符合如本文他處所討論之產製過程期間的各產製步驟的QA標準。

在接受細胞訂購需求、產製槽及病患治療事件的初步排程後，運算裝置可基於病患治療事件的初步排程在排程使用者介面中判定及展示複數個用於產製細胞治療產物之可用產製槽。可用產製槽係基於因子判定，諸如例如臨床機構的位置、個別產製機構的位置、在個別產製機構與臨床機構之間運輸細胞治療產物之物流提供者之可用性、臨床機構的臨床人員可用性(以便實施與病患治療事件相關聯之必需治療程序)及任何其他可影響在個別位置之細胞治療產物的抵達時間及/或使用之因子。

接著由運算裝置之操作員或由運算裝置自動選擇一個可用產製槽。在選擇可用產製槽後，實體腫瘤可例如在醫學機構藉由實施適當程序自病患獲得。程序可根據初步排程且基於考慮到實體腫瘤至個別產製機構的運輸時間及物流提供者之可用性的可用產製槽實施。在一些實施態樣中，運算裝置可起始列印待與實體腫瘤相關聯之第一運輸罐標籤(見例如圖3H第1列)。第一運輸罐標籤可包括病患特異性識別符及細胞訂購識別符。在一些實施態樣中，第一標籤可額外包括與臨床機構、經選擇之產製機構及物流提供者有關的資訊。此外，第一產物標籤(見例如圖3H第2列)將與產物容器相關聯。第一產物標籤之實例係繪示於圖3G。

接著根據可用產製槽，將實體腫瘤轉移至經選擇之產製機構。所屬技術領域中具有通常知識者將理解，由於實體腫瘤包括活細胞，因此實體腫瘤抵達經選擇之產製機構的時間應與產製槽之可用性小心協調，以使產製步驟可在可接受之時間窗內起始。因此，從臨床機構轉移實體腫瘤至經選擇之產製應基於物流提供者之可用性以及其他可影響此類轉移之因子小心協調。例如可能有在一些情況下可預期之天氣相關或交通延遲，因此轉移排程可據此調整。在其他情況下，轉移延遲可能無法預見。然而即使在這種情況下，實體腫瘤從臨床機構到經選擇之產製機構的轉移可以其他合適方式協調。F. 腫瘤摘取規程

參照回圖3A，系統300之醫院端界面包括腫瘤摘取模組114，該模組使臨床機構之人員得以根據預定規程自病患獲得實體腫瘤，且輸入與用於自病患獲得實體腫瘤之程序有關的資訊。

在一些實施態樣中，摘取模組114包括由臨床機構的人員使用之腫瘤摘取表，以確保在自病患獲得實體腫瘤(或其片段)及製備以運送至產製機構的過程期間遵照適當程序。圖3K至圖3P係根據本揭露之一些實施態樣之腫瘤摘取表格的代表性螢幕截圖。在一些實施態樣中，腫瘤摘取表可要求自病患獲得腫瘤之技術人員輸入與所實施之程序有關的資訊。經輸入之資訊可用於更新批次記錄以供事後稽核(若有需要)。

再者，由於包括於批次記錄中的資訊可在整個系統存取(若有適當許可)，因此與獲得腫瘤所遵照之過程有關的資訊亦可供產製機構的人員使用。在一些實施態樣中，產製機構的人員可存取與獲得腫瘤之過程有關的資訊作為品質管制措施以確保產製機構接受的生物材料適合進一步處理。

在一些實施態樣中，腫瘤摘取表包括要求符合某些標準才讓技術人員繼續製程後續步驟的智慧表單特色。例如可要求技術人員輸入與製程期間所使用之細胞培養基有關的資訊諸如到期日，且如果到期日係在目前日期之前，則腫瘤摘取模組114可警示技術人員。另外，腫瘤摘取模組114不允許技術人員輸入任何與製程有關的進一步資訊，藉此迫使技術人員放棄製程。

類似地，腫瘤摘取表可要求技術人員先實施某些步驟或程序，然後才能輸入與後續步驟或程序有關的資訊。因此，摘取模組114要求技術人員遵照特定規程，不得遺漏或跳過某些步驟。

在一些實施態樣中，摘取模組114可要求腫瘤摘取表先經驗證，然後才能釋出經獲得之腫瘤給快遞以運送至產製機構。驗證要求的作用是防失敗，以確保當獲得腫瘤時遵照適當規程及程序。在一些實施態樣中，摘取模組114可要求腫瘤摘取表之驗證者與腫瘤摘取表輸入資訊者不可為同一人。此類驗證要求亦確保適當法規遵從性。G. 病患支持服務

本揭露之實施態樣進一步可經操作以使與病患或病患代表(在本文中統稱為病患)介接之病患支持服務得以支持旅行、健康管理、健康保險、給付及其他治療相關服務。在一些實施態樣中，病患支持服務可與通話界面及可存取(若有適當許可)產製過程及COC/COI過程之身分介接。如本文中所使用，用語「身分(persona)」係指使用者類型。給定身分對系統及系統內的資訊具備某種程度的存取且可存取某些功能。系統內的身分包括但不限於社區身分、組織摘取身分、產製商身分、病患支持身分、病患身分及健康系統使用者身分。

社區身分關於社區使用者，其可存取提供治療程序給病患之中心的人員。社區身分使用者可包括例如細胞療法協調者、骨髓移植護理師、醫院收費部門等。與社區身分使用者相關聯之功能包括但不限於新病患掛號、更新病患收案資料、建立及提交病患的TIL訂購需求、排程或變更切除日期、檢視黃金途徑日期、檢視最終產物遞送日期、上傳醫院訂購單、上傳病患受試者同意書、病患參加病患支持選項、檢視及更新照顧者記錄、填寫及提交腫瘤摘取表供核准、核准腫瘤摘取表、列印腫瘤摘取表、上傳腫瘤摘取表及列印培養基瓶及腫瘤運輸罐標籤。

與產製商身分相關聯之使用者包括腫瘤接受人員、品質管制人員、產製過程人員及最終產物包裝人員。與產製商身分相關聯之功能包括但不限於輸入批號、檢視可用及保留產製槽、列印及掃描製程中、最終產物及運輸標籤。

與腫瘤摘取身分相關聯之使用者包括例如外科醫師及骨髓移植護理師。與腫瘤摘取身分相關聯之功能可包括但不限於填寫腫瘤摘取表、提交腫瘤摘取表供核准、核准腫瘤摘取表、列印腫瘤摘取表及上傳腫瘤摘取表。

病患支持身分之使用者可包括但不限於病患支持人員、病患輔導員、醫院收費管理師、醫院保險管理師等。與病患支持身分相關聯之功能可包括但不限於檢視病患協助服務個案、上傳檔案至個案、標註個案、轉移個案至個案管理師等。

在系統的一些實施態樣中，某些身分可存取某些資訊類型。在一些實施態樣中，某些身分的使用者只有當實施某些類型的功能而非實施其他類型的功能時才可存取資訊。例如，在一些實施態樣中，醫院收費管理師及/或醫院保險管理師可經由病患支持身分存取COC/COI及產製過程資訊，但病患輔導員無法看見。在一些實施態樣中，實施例如排程病患治療事件、在病患治療事件排程過程協助病患及/或協助病患交通之功能的病患支持人員可看見但無法編輯產製及COC/COI資訊。

例如在一些實施態樣中，一種藉由將獲自病患的腫瘤之細胞族群擴增成細胞治療產物之產製該細胞治療產物之方法可包含：基於產製供該病患之該細胞治療產物之細胞訂購需求，在產製機構接受來自該病患之細胞族群；藉由運算裝置產生病患特異性識別符，該病患特異性識別符包括與該細胞訂購需求相關聯之細胞訂購識別符；起始產製該細胞治療產物之製程，該製程包含：在該產製機構接受該細胞族群之後，藉由該運算裝置排程病患治療事件，使用細胞擴增技術自該細胞族群之至少一些起始該細胞治療產物之擴增，且判定在第一時間點及在該第一時間點後續的第二時間點該擴增細胞治療產物的接受參數，判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合與對應時間點相關聯之接受標準，因應該擴增細胞治療產物的該接受參數符合該第一時間點的該接受標準之判定，使用該細胞擴增技術自該經獲得之細胞治療產物之該至少一些繼續該細胞治療產物的擴增直到該第二時間點，及因應該擴增細胞治療產物的該接受參數不符合該第二時間點的該接受標準之判定：基於該第二時間點的該接受參數，判定自該第一時間點使用該細胞擴增技術再實施該細胞治療產物之擴增是否可行，因應該再實施係可行之判定，使用自該第一時間點之該細胞擴增技術自該第二時間點獲得之該細胞治療產物之至少一些再實施該細胞治療產物之擴增以獲得該細胞治療產物，自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，藉由該運算裝置預估該細胞治療產物之擴增的完成時間，及藉由該運算裝置再排程該病患治療事件且完成自該第一時間點之細胞治療產物的後續擴增，其中該病患治療事件之再排程係基於該細胞治療產物之擴增的預估完成時間及在輸注該病患該經擴增之細胞治療產物之前或後續的病患治療事件之時間實施，且提供病患支持服務諸如例如支持旅行、健康管理、健康保險、給付及其他治療相關服務。

VI. 進一步考慮

上述實例係經提供以給出如何實施及使用本發明之組成物、系統及方法的實施態樣的完整揭露及說明給所屬技術領域中具有通常知識者，並非意圖限制發明人對於他們的發明之主張範圍。用於實施本發明之上述模式的修飾為該領域之技藝人士所顯見，且意圖屬於下列權利要求範圍之內。說明書中所提及的所有專利及公開案指示本發明所屬技術領域中具有通常知識者的技能水準。

所有標題及章節名稱僅用於清晰及參考目的，且不應認為以任何方式限制本發明。舉例而言，所屬技術領域中具有通常知識者應瞭解根據本文所述之本發明之精神及範疇按需要組合來自不同標題及章節之各種態樣的有用性。

本文所引證之所有參考文獻皆以引用方式且出於所有目的完整併入本文中，猶如個別公開案或專利或專利申請案係出於所有目的特別且個別明示以全文引用方式併入本文中。

如所屬技術領域中具有通常知識者顯而易見，在不背離本申請案之精神及範疇的情況下可對其進行許多修飾及變化。本文所述之特定實施態樣及實例僅以實例方式提供，且本申請案僅由隨附申請專利範圍之用語以及申請專利範圍有權主張之等效物的全部範疇限制。

本揭露之態樣之各種實例出於方便描述為編號條款(1、2、3等)。這些係提供作為實例，且不限制主題技術。提供於下之圖式及元件編號的識別僅作為實例及示範目的之用，且條款不受該些識別之限制。

條款1. 一種藉由將獲自病患的腫瘤之細胞族群擴增成細胞治療產物之產製該細胞治療產物之方法，該方法包含：基於產製供該病患之該細胞治療產物之細胞訂購需求，在產製機構接受來自該病患之細胞族群；藉由運算裝置產生病患特異性識別符，該病患特異性識別符包括與該細胞訂購需求相關聯之細胞訂購識別符；起始產製該細胞治療產物之製程，該製程包含：在該產製機構接受該細胞族群之後，藉由該運算裝置排程病患治療事件，使用細胞擴增技術自該細胞族群之至少一些起始該細胞治療產物之擴增，且判定在第一時間點及在該第一時間點後續的第二時間點該擴增細胞治療產物的接受參數，判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合與對應時間點相關聯之接受標準，因應該擴增細胞治療產物的該接受參數符合該第一時間點的該接受標準之判定，使用該細胞擴增技術自該經獲得之細胞治療產物之該至少一些繼續該細胞治療產物的擴增直到該第二時間點，及因應該擴增細胞治療產物的該接受參數不符合該第二時間點的該接受標準之判定：基於該第二時間點的該接受參數，判定自該第一時間點使用該細胞擴增技術再實施該細胞治療產物之擴增是否可行，因應該再實施係可行之判定，使用自該第一時間點之該細胞擴增技術自該第二時間點獲得之該細胞治療產物之至少一些再實施該細胞治療產物之擴增以獲得該細胞治療產物，自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，藉由該運算裝置預估該細胞治療產物之擴增的完成時間，及藉由該運算裝置再排程該病患治療事件且完成自該第一時間點之細胞治療產物的後續擴增，其中該病患治療事件之再排程係基於該細胞治療產物之擴增的預估完成時間及在輸注該病患該經擴增之細胞治療產物之前或後續的病患治療事件之時間實施。

條款2. 如條款1之方法，其中該細胞治療產物包含T細胞。

條款3. 如條款1之方法，其中該細胞治療產物包含腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)。

條款4. 如條款1之方法，其中該病患治療事件包括住院時間期間、切除日期、淋巴細胞耗盡日期、以該細胞治療產物輸注該病患之輸注日期及IL-2治療日期之一或多者。

條款5. 如條款1之方法，其中該判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合該接受標準包含在起始該經獲得之細胞治療產物之擴增之後的複數個時間點判定該擴增細胞治療產物的該接受參數，該複數個時間點包括該第一及該第二時間點。

條款6. 如條款5之方法，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數不符合該接受標準的判定而再排程該病患治療事件。

條款7. 如條款5之方法，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定而終止該病患治療事件。

條款8. 如條款5之方法，其中因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定，終止細胞治療產物之該後續擴增。

條款9. 如條款8之方法，其中判定該擴增細胞治療產物的接受參數包含判定存活性、無菌性、細胞計數、黴漿菌計數、CD3計數、內毒素測定之結果及革蘭氏染色測定之結果之一或多者。

條款10. 如條款9之方法，其中該細胞擴增技術包含快速擴增步驟，且該方法進一步包含：判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合在該快速擴增步驟之前的該接受標準；及因應該擴增細胞治療產物的該接受參數符合該接受標準的判定，在該經擴增之細胞治療產物之產製完成之前的日期排程淋巴細胞耗盡日期、在該經擴增之細胞治療產物之產製完成之後的日期排程輸注日期及在該輸注日期之後排程IL-2治療日期。

條款11. 如條款1之方法，其中該細胞擴增技術包括在單一密閉容器生物反應器中培養該細胞治療產物。

條款12. 如條款1之方法，其中預估自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，該細胞治療產物之擴增的完成時間包含基於該第二時間點的該接受參數及與用於自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增的細胞族群相關聯之該接受參數之一或二者，判定自該第一時間點完成該擴增過程所需之時間。

條款13. 如條款1之方法，其中擴增細胞治療產物之細胞訂購需求係由醫院端界面接受，且該方法進一步包含在接受該細胞訂購需求後，傳遞已接受與該病患相關聯之該細胞訂購需求之確認至該醫院端界面，該確認包括該病患特異性識別符及該細胞訂購識別符之一或二者。

條款14. 如條款13之方法，其進一步包含取決於該細胞擴增技術及何時接受該細胞訂購需求來排程用於判定該擴增細胞治療產物的接受參數是否符合在該細胞治療產物之擴增期間的該接受標準之一組對應複數個時間點之日期，該複數個時間點包括該第一及第二時間點。

條款15. 如條款13之方法，其進一步包含在再排程該病患治療事件後，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的更新排程至該醫院端界面。

條款16. 如條款15之方法，其進一步包含：基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之取貨令至物流界面；及基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的排程至醫院端界面。

條款17. 如條款16之方法，其進一步包含：因應自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增係可行的判定：藉由該運算裝置解關聯該細胞訂購識別符與該病患特異性識別符，及藉由該運算裝置產生與該細胞訂購需求相關聯之新細胞訂購識別符且使該新細胞訂購識別符與該病患特異性識別符相關聯。

條款18. 如條款17之方法，其中擴增細胞治療產物之該細胞訂購需求係自醫院端界面接受，且該方法進一步包含傳遞包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符及該細胞治療產物之擴增的預估完成時間至該醫院端界面。

條款19. 如條款17之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，基於該病患治療事件之該再排程產生與該病患治療事件相關聯之運輸及物流事件的新排程，及基於運輸及物流事件之該再排程，傳遞與包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符相關聯之運輸及物流事件的該新排程至物流界面。

條款20. 如條款17之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，使各時間點之該病患特異性識別符與該新細胞訂購識別符相關聯，在該各時間點做出接受參數是否符合該某些接受標準之判定，該新細胞訂購識別符包括對應各個別時間點及該判定之結果的欄位。

條款21. 如條款20之方法，其中該排程包含：藉由該運算裝置，基於包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符排程該病患治療事件。

條款22. 如條款21之方法，其進一步包含因應該再實施係不可能之判定，藉由該運算裝置取消排程在該第二時間點後續的該病患治療事件。

條款23. 如條款22之方法，其進一步包含傳遞該病患治療事件之取消至醫院端界面及物流界面。

條款24. 如條款23之方法，其進一步包含因應該再實施係不可行之判定，銷毀該經擴增之細胞治療產物且解關聯該病患特異性識別符與該細胞訂購識別符。

條款25. 一種藉由如條款1之方法根據該再排程病患治療事件所獲得之該擴增細胞治療產物治療該病患之方法。

條款26. 一種產製用於病患的細胞治療產物之方法，該方法包含：在運算裝置接受產製供該病患之該細胞治療產物之細胞訂購需求、在複數個產製機構製造用於產製該細胞治療產物之產製槽及用於以該細胞治療產物治療該病患之病患治療事件的初步排程，其中在來自與個別產製機構相關聯之產製商電腦子系統的該運算裝置接受該個別產製機構之產製槽；藉由該運算裝置，基於該病患治療事件的初步排程，在排程使用者介面中判定及展示複數個用於產製該細胞治療產物之可用產製槽；在選擇該可用產製槽之一者之後，根據該病患治療事件的初步排程及該可用產製槽，在醫學機構對該病患實施程序以自該病患獲得實體腫瘤；根據該可用產製槽，將該經獲得之實體腫瘤轉移至對應該可用產製槽之產製機構；在該產製機構接受該經獲得之實體腫瘤後，使用細胞擴增技術自該經獲得之實體腫瘤的至少一部分起始該細胞治療產物的產製；在該細胞治療產物的產製期間，判定在第一時間點及在該第一時間點後續的第二時間點該經產製之細胞治療產物的接受參數及該接受參數是否符合與對應時間點相關聯之接受標準，該接受參數係基於與該對應時間點相關聯之測定的結果判定；基於是否符合在該第一及第二時間點之一或二者之該接受標準，藉由該運算裝置，修改產製該細胞治療產物之產製排程、對應該產製機構之產製槽及該病患治療事件的初步排程；及如果符合在該第一及第二時間點兩者之該接受標準，根據該經修改之產製排程完成該細胞治療產物的產製。

條款27. 如條款26之方法，其進一步包含將該經產製之細胞治療產物轉移至該醫學機構。

條款28. 如條款26之方法，其進一步包含在接受該細胞訂購需求時，藉由該運算裝置產生與該病患相關聯之病患特異性識別符及該細胞訂購需求。

條款29. 如條款28之方法，其進一步包含藉由該運算裝置自動產生用於該經獲得之實體腫瘤的容器之運輸標籤，該運輸標籤包含該病患特異性識別符、該細胞訂購需求、該產製槽及對應該可用產製槽之該產製機構。

條款30. 如條款29之方法，其進一步包含藉由該運算裝置自動產生用於該經獲得之實體腫瘤的容器之產製標籤，該產製標籤包含當該產製標籤產生時對應於用於產製該細胞治療產物之產製過程的時間點、容器識別條碼、該病患特異性識別符、在該時間點完成之產製步驟、與該經完成之過程相關聯之接受參數及在該時間點實施之產製過程。

條款31. 如條款26之方法，其中該細胞治療產物包含T細胞。

條款32. 如條款26之方法，其中該細胞治療產物包含腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)。

條款33. 如條款26之方法，其中該病患治療事件包括住院時間期間、切除日期、淋巴細胞耗盡日期、以該細胞治療產物輸注該病患之輸注日期及IL-2治療日期之一或多者。

條款34. 如條款26之方法，其中該判定該經產製之細胞治療產物的該接受參數是否符合該接受標準包含在起始該經接受之細胞治療產物之擴增之後的複數個時間點判定該經產製之細胞治療產物的該接受參數，該複數個時間點包括該第一及該第二時間點。

條款35. 如條款34之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置再排程該病患治療事件且完成細胞治療產物的後續擴增，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該經產製之細胞治療產物的該接受參數不符合該接受標準的判定而再排程該病患治療事件。

條款36. 如條款34之方法，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該經產製之細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定而終止該病患治療事件。

條款37. 如條款34之方法，其中因應在該複數個時間點之任一者該經產製之細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定，終止細胞治療產物之該後續擴增。

條款38. 如條款37之方法，其中判定該經產製之細胞治療產物的接受參數包含判定存活性、無菌性、細胞計數、黴漿菌計數、CD3計數、內毒素測定之結果及革蘭氏染色測定之結果之一或多者。

條款39. 如條款38之方法，其中該細胞擴增技術包含快速擴增步驟，且該方法進一步包含：判定該經產製之細胞治療產物的該接受參數是否符合在該快速擴增步驟之前的該接受標準；及因應該經產製之細胞治療產物的該接受參數符合該接受標準的判定，在該細胞治療產物之產製完成之前的日期排程淋巴細胞耗盡日期、在該細胞治療產物之產製完成之後的日期排程輸注日期及在該輸注日期之後排程IL-2治療日期。

條款40. 如條款26之方法，其中該細胞擴增技術包括在單一密閉容器生物反應器中培養該細胞治療產物。

條款41. 如條款26之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，預估該細胞治療產物之擴增的完成時間，其中預估自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，該細胞治療產物之擴增的完成時間包含基於該第二時間點的該接受參數及與用於自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增的細胞族群相關聯之該接受參數之一或二者，判定自該第一時間點完成該擴增過程所需之時間。

條款42. 如條款29之方法，其中擴增細胞治療產物之細胞訂購需求係由醫院端界面接受，且該方法進一步包含在接受該細胞訂購需求後，傳遞已接受與該病患相關聯之該細胞訂購需求之確認至該醫院端界面，該確認包括該病患特異性識別符及該細胞訂購識別符之一或二者。

條款43. 如條款42之方法，其進一步包含根據該細胞擴增技術及何時接受該細胞訂購需求來排程用於判定該經產製之細胞治療產物的接受參數是否符合在該細胞治療產物之擴增期間的該接受標準之一組對應複數個時間點之日期，該複數個時間點包括該第一及第二時間點。

條款44. 如條款43之方法，其進一步包含在再排程該病患治療事件後，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的更新排程至該醫院端界面。

條款45. 如條款44之方法，其進一步包含：基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之取貨令至物流界面；及基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的排程至醫院端界面。

條款46. 如條款45之方法，其進一步包含：因應自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增係可行的判定：藉由該運算裝置解關聯該細胞訂購識別符與該病患特異性識別符，及藉由該運算裝置產生與該細胞訂購需求相關聯之新細胞訂購識別符且使該新細胞訂購識別符與該病患特異性識別符相關聯。

條款47. 如條款46之方法，其中擴增細胞治療產物之該細胞訂購需求係自醫院端界面接受，且該方法進一步包含傳遞包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符及該細胞治療產物之擴增的預估完成時間至該醫院端界面。

條款48. 如條款47之方法，其進一步包含：

藉由該運算裝置，基於該病患治療事件之該再排程產生與該病患治療事件相關聯之運輸及物流事件的新排程，及基於運輸及物流事件之該再排程，傳遞與包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符相關聯之運輸及物流事件的該新排程至物流界面。

條款49. 如條款48之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，使各時間點之該病患特異性識別符與該新細胞訂購識別符相關聯，在該各時間點做出接受參數是否符合該接受標準之判定，該新細胞訂購識別符包括對應各個別時間點及該判定之結果的欄位。

條款50. 如條款49之方法，其中該排程包含：藉由該運算裝置，基於包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符排程該病患治療事件。

條款51. 如條款50之方法，其進一步包含因應該再實施係不可能之判定，藉由該運算裝置取消排程在該第二時間點後續的該病患治療事件。

條款52. 如條款51之方法，其進一步包含傳遞該病患治療事件之取消至醫院端界面及物流界面。

條款53. 如條款52之方法，其進一步包含因應該再實施係不可行之判定，銷毀該經擴增之細胞治療產物且解關聯該病患特異性識別符與該細胞訂購識別符。

條款54. 一種藉由如條款26之方法根據該再排程病患治療事件所獲得之該經產製之細胞治療產物治療該病患之方法。

條款55. 一種用於產製細胞治療產物之方法，該方法包含：

在產製機構接受獲自病患之實體腫瘤；

藉由運算裝置產生用於產製容器之產製標籤，該產製容器待用於使用細胞擴增技術自該經獲得之實體腫瘤的至少一部分產製該細胞治療產物之過程，該產製標籤包含與該病患、該產製過程及經產製之細胞治療產物之品質相關聯之資訊；起始產製該細胞治療產物之製程，該製程包含：在醫學機構對該病患實施程序以自該病患獲得實體腫瘤，將該經獲得之實體腫瘤轉移至產製機構，在該產製機構接受該經獲得之實體腫瘤之後，藉由該運算裝置動態排程病患治療事件，該動態排程係取決於後續經獲得之擴增細胞治療產物的接受參數，使用細胞擴增技術自該經獲得之實體腫瘤之至少一些起始該細胞治療產物之擴增，且判定在複數個時間點該擴增細胞治療產物的接受參數，實施品質管制測定以判定該經產製之細胞治療產物在該複數個時間點的接受參數；在該運算裝置接受該經產製之細胞治療產物的該接受參數；藉由該運算裝置產生對應於該複數個時間點之各者的經更新之產製標籤，該經更新之產製標籤包含與經產製之細胞治療產物之品質相關聯之經更新之資訊，該經更新之資訊包含在對應時間點之該接受參數；藉由該運算裝置讀取在該複數個時間點之各者的該經更新之產製標籤；及

基於在該複數個時間點之各者自該經更新之產製標籤讀取的資訊，完成該細胞治療產物之擴增。

條款56. 如條款55之方法，其進一步包含如果下列發生，則藉由該運算裝置提供警告信號：在該經更新之產製標籤上與該病患之後續產製步驟有關的資訊不符合在該產製標籤上與該病患之前一產製步驟有關的資訊，或在該經更新之產製標籤上該產製過程之給定時間點的接受參數不符合該產製過程之該時間點的接受標準，其中該接受參數包含存活性、無菌性、細胞計數、黴漿菌計數、CD3計數、內毒素測定之結果及革蘭氏染色測定之結果之一或多者。

條款57. 如條款55之方法，其中與該病患有關的資訊包含病患特異性識別符及與產製供該病患之該細胞治療產物之細胞訂購需求相關聯之細胞訂購識別符。

條款58. 如條款55之方法，其中該細胞擴增技術包括在單一密閉容器生物反應器中培養該細胞治療產物。

條款59. 如條款55之方法，其中該產製標籤包含條碼，該條碼編碼與該病患、該產製過程及經產製之細胞治療產物之品質相關聯之資訊。

條款60. 如條款56之方法，其進一步包含取決於該產製機構所使用之該細胞擴增技術及何時接受細胞訂購需求來排程用於判定該經產製之細胞治療產物的接受參數是否符合在該產製過程期間的該接受標準之一組對應複數個時間點之日期，該複數個時間點包括第一時間點及在該第一時間點後續的第二時間點。

條款61. 如條款60之方法，其進一步包含與物流界面整合、經由快遞運算子系統接受快遞狀態資訊(其中快遞狀態資訊包括且因應接受該快遞狀態資訊)、基於該經判定之產製排程判定用於運輸該經產製之細胞治療產物的運輸排程及產生用於含有該經產製之細胞治療產物之運輸容器的運輸標籤。

條款62. 如條款60之方法，其進一步包含基於該經判定之運輸排程傳遞運輸需求至物流機構。

條款63. 如條款60之方法，其進一步包含在實施最終品質管制測定之前產生用於含有該經產製之細胞治療產物之運輸容器的運輸標籤，該運輸標籤指示該經產製之細胞治療產物係不可釋出，除非該最終品質管制測定之結果指示該對應接受參數符合該對應接受標準。

條款64. 如條款56之方法，其進一步包含：在判定該經產製之細胞治療產物的該接受參數符合該接受標準時，判定用於產製該細胞療法的完成日期；藉由該運算裝置，基於該完成日期，產生對應於使用該細胞治療產物以治療病患之病患治療事件的排程；基於該完成日期，傳遞取貨令至物流界面；及傳遞該病患治療事件的排程至醫院端界面。

條款65. 如條款55之方法，其中該細胞治療產物包含T細胞。

條款66. 如條款55之方法，其中該細胞治療產物包含腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)。

條款67. 如條款55之方法，其中該病患治療事件包括住院時間期間、切除日期、淋巴細胞耗盡日期、以該細胞治療產物輸注該病患之輸注日期及IL-2治療日期之一或多者。

條款68. 如條款56之方法，其中該判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合該接受標準包含在起始該經獲得之細胞治療產物之擴增之後的複數個時間點判定該擴增細胞治療產物的該接受參數，該複數個時間點包括該第一及該第二時間點。

條款69. 如條款68之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置再排程該病患治療事件且完成細胞治療產物的後續擴增，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數不符合該接受標準的判定而再排程該病患治療事件。

條款70. 如條款68之方法，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定而終止該病患治療事件。

條款71. 如條款68之方法，其中因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定，終止細胞治療產物之該後續擴增。

條款72. 如條款71之方法，其中判定該擴增細胞治療產物的接受參數包含判定存活性、無菌性、細胞計數、黴漿菌計數、CD3計數、內毒素測定之結果及革蘭氏染色測定之結果之一或多者。

條款73. 如條款72之方法，其中該細胞擴增技術包含快速擴增步驟，且該方法進一步包含：判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合在該快速擴增步驟之前的該接受標準；及因應該擴增細胞治療產物的該接受參數符合該接受標準的判定，在該細胞治療產物之產製完成之前的日期排程淋巴細胞耗盡日期、在該細胞治療產物之產製完成之後的日期排程輸注日期及在該輸注日期之後排程IL-2治療日期。

條款74. 如條款55之方法，其中該細胞擴增技術包括在單一密閉容器生物反應器中培養該細胞治療產物。

條款75. 如條款55之方法，其中預估自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，該細胞治療產物之擴增的完成時間包含基於該第二時間點的該接受參數及與用於自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增的細胞族群相關聯之該接受參數之一或二者，判定自該第一時間點完成該擴增過程所需之時間。

條款76. 如條款57之方法，其中擴增細胞治療產物之細胞訂購需求係由醫院端界面接受，且該方法進一步包含在接受該細胞訂購需求後，傳遞已接受與該病患相關聯之該細胞訂購需求之確認至該醫院端界面，該確認包括該病患特異性識別符及該細胞訂購識別符之一或二者。

條款77. 如條款76之方法，其進一步包含取決於該細胞擴增技術及何時接受該細胞訂購需求來排程用於判定該擴增細胞治療產物的接受參數是否符合在該細胞治療產物之擴增期間的該接受標準之一組對應複數個時間點之日期，該複數個時間點包括該第一及第二時間點。

條款78. 如條款76之方法，其進一步包含在再排程該病患治療事件後，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的更新排程至該醫院端界面。

條款79. 如條款78之方法，其進一步包含：基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之取貨令至物流界面；及基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的排程至醫院端界面。

條款80. 如條款79之方法，其進一步包含：因應自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增係可行的判定：藉由該運算裝置解關聯該細胞訂購識別符與該病患特異性識別符，及藉由該運算裝置產生與該細胞訂購需求相關聯之新細胞訂購識別符且使該新細胞訂購識別符與該病患特異性識別符相關聯。

條款81. 如條款80之方法，其中擴增細胞治療產物之該細胞訂購需求係自醫院端界面接受，且該方法進一步包含傳遞包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符及該細胞治療產物之擴增的預估完成時間至該醫院端界面。

條款82. 如條款80之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，基於該病患治療事件之該再排程產生與該病患治療事件相關聯之運輸及物流事件的新排程，及基於運輸及物流事件之該再排程，傳遞與包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符相關聯之運輸及物流事件的該新排程至物流界面。

條款83. 如條款80之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，使各時間點之該病患特異性識別符與該新細胞訂購識別符相關聯，在該各時間點做出接受參數是否符合該某些接受標準之判定，該新細胞訂購識別符包括對應各個別時間點及該判定之結果的欄位。

條款84. 如條款83之方法，其中該排程包含：藉由該運算裝置，基於包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符排程該病患治療事件。

條款85. 如條款84之方法，其進一步包含因應該再實施係不可能之判定，藉由該運算裝置取消排程在該第二時間點後續的該病患治療事件。

條款86. 如條款85之方法，其進一步包含傳遞該病患治療事件之取消至醫院端界面及物流界面。

條款87. 如條款86之方法，其進一步包含因應該再實施係不可行之判定，銷毀該經擴增之細胞治療產物且解關聯該病患特異性識別符與該細胞訂購識別符。

條款88. 一種藉由如條款55之方法根據該再排程病患治療事件所獲得之該擴增細胞治療產物治療該病患之方法。

110:醫院界面 112:追蹤模組 114:摘取模組 116:病患存取模組 118:產製協調模組 120:事件排程器 122:運算裝置 123:接受判定模組 125:排程模組 130:物流界面 140:產製入口 142:標示模組 144:COC/COI模組 300:系統 350:細胞訂購識別符 352:病患特異性識別符 354:病患姓名 356:病患出生日期 358:醫院相關病患識別符 360:產製批號 362:2D碼 370:原因欄位 380:產物欄位

[圖1]示意性描繪使用過繼性細胞療法(使用TIL)治療病患之各種階段，包括用於產製同種異體TIL之各種步驟。

[圖2A]顯示用於TIL產製之第3代製程的時程。

[圖2B]顯示用於TIL產製之2A製程與第3代製程實施態樣之間的比較。

[圖2C]顯示用於TIL產製之第3代實施態樣、第3.1代製程實施態樣與第3.1代製程替代實施態樣之間的比較。

[圖3A]顯示用於協調產製供病患之TIL的系統之方塊圖。

[圖3B]根據一些實施態樣繪示在市售軟體平台上經合適修改或建立之系統300之元件的物件綱要(在該些平台內之該些標準者除外)。

[圖3C至圖3E]根據一些實施態樣繪示生物材料在產製機構之產製過程中的軌跡。

[圖3F]根據產製過程之一些實施態樣(例如第3代製程)繪示從獲得實體腫瘤到產製過程到輸注至病患體內之細胞治療產物之旅程中維持COC及COI的過程。

[圖3G]係根據一些實施態樣之細胞治療產物之標籤的代表性影像。

[圖3H]之表格顯示根據一些實施態樣在產製細胞治療產物之製程期間所產生之各種類型的標籤。

[圖3I及圖3J]係根據一些實施態樣之成品標籤的代表性影像。

[圖3K至圖3P]係根據一些實施態樣之腫瘤摘取表格的代表性螢幕截圖影像。

[圖4A及圖4B]顯示基於TIL產製過程之成功判定病患治療事件之排程的流程圖。

[圖4C]顯示基於TIL產製過程之成功判定病患治療事件之排程的替代實施態樣之流程圖。

[圖5]顯示製程2A(22天TIL產製過程)之實施態樣的圖。

[圖6]顯示用於TIL製造之1C製程與2A製程實施態樣之間的比較。

[圖7]顯示1C製程時程。

[圖8]顯示2A製程實施態樣的詳細示意圖。

[圖9]顯示提供步驟A至F之概覽的例示性製程2A圖。

[圖10]顯示製程1C及製程2A之例示性實施態樣的步驟A至F之比較表。

[圖11]顯示製程1C實施態樣與製程2A實施態樣之詳細比較。序列表簡單說明

SEQ ID NO:1係莫羅單抗(muromonab)之重鏈的胺基酸序列。

SEQ ID NO:2係莫羅單抗之輕鏈的胺基酸序列。

SEQ ID NO:3係重組人IL-2蛋白質之胺基酸序列。

SEQ ID NO:4係阿地介白素(aldesleukin)之胺基酸序列。

SEQ ID NO:5係IL-2形式。

SEQ ID NO:6係內姆瓦盧金阿法(nemvaleukin alfa)之胺基酸序列。

SEQ ID NO:7係IL-2形式。

SEQ ID NO:8係黏液素結構域多肽。

SEQ ID NO:9係重組人IL-4蛋白質之胺基酸序列。

SEQ ID NO:10係重組人IL-7蛋白質之胺基酸序列。

SEQ ID NO:11係重組人IL-15蛋白質之胺基酸序列。

SEQ ID NO:12係重組人IL-21蛋白質之胺基酸序列。

SEQ ID NO:13係IL-2序列。

SEQ ID NO:14係IL-2突變蛋白序列。

SEQ ID NO:15係IL-2突變蛋白序列。

SEQ ID NO:16係IgG.IL2R67A.H1之HCDR1_IL-2。

SEQ ID NO:17係IgG.IL2R67A.H1之HCDR2。

SEQ ID NO:18係IgG.IL2R67A.H1之HCDR3。

SEQ ID NO:19係IgG.IL2R67A.H1之HCDR1_IL-2 kabat。

SEQ ID NO:20係IgG.IL2R67A.H1之HCDR2 kabat。

SEQ ID NO:21係IgG.IL2R67A.H1之HCDR3 kabat。

SEQ ID NO:22係IgG.IL2R67A.H1之HCDR1_IL-2 clothia。

SEQ ID NO:23係IgG.IL2R67A.H1之HCDR2 clothia。

SEQ ID NO:24係IgG.IL2R67A.H1之HCDR3 clothia。

SEQ ID NO:25係IgG.IL2R67A.H1之HCDR1_IL-2 IMGT。

SEQ ID NO:26係IgG.IL2R67A.H1之HCDR2 IMGT。

SEQ ID NO:27係IgG.IL2R67A.H1之HCDR3 IMGT。

SEQ ID NO:28係IgG.IL2R67A.H1之V_H 鏈。

SEQ ID NO:29係IgG.IL2R67A.H1之重鏈。

SEQ ID NO:30係IgG.IL2R67A.H1之LCDR1 kabat。

SEQ ID NO:31係IgG.IL2R67A.H1之LCDR2 kabat。

SEQ ID NO:32係IgG.IL2R67A.H1之LCDR3 kabat。

SEQ ID NO:33係IgG.IL2R67A.H1之LCDR1 chothia。

SEQ ID NO:34係IgG.IL2R67A.H1之LCDR2 chothia。

SEQ ID NO:35係IgG.IL2R67A.H1之LCDR3 chothia。

SEQ ID NO:36係V_L 鏈。

SEQ ID NO:37係輕鏈。

SEQ ID NO:38係輕鏈。

SEQ ID NO:39係輕鏈。

SEQ ID NO:40係人4-1BB之胺基酸序列。

SEQ ID NO:41係鼠4-1BB之胺基酸序列。

SEQ ID NO:42係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(utomilumab) (PF-05082566)之重鏈。

SEQ ID NO:43係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(PF-05082566)之輕鏈。

SEQ ID NO:44係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(PF-05082566)之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:45係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(PF-05082566)之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:46係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(PF-05082566)之重鏈CDR1。

SEQ ID NO:47係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(PF-05082566)之重鏈CDR2。

SEQ ID NO:48係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(PF-05082566)之重鏈CDR3。

SEQ ID NO:49係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(PF-05082566)之輕鏈CDR1。

SEQ ID NO:50係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(PF-05082566)之輕鏈CDR2。

SEQ ID NO:51係4-1BB促效劑單株抗體烏圖木單抗(PF-05082566)之輕鏈CDR3。

SEQ ID NO:52係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(urelumab) (BMS-663513)之重鏈。

SEQ ID NO:53係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(BMS-663513)之輕鏈。

SEQ ID NO:54係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(BMS-663513)之重鏈可變區(VH)。

SEQ ID NO:55係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(BMS-663513)之輕鏈可變區(VL)。

SEQ ID NO:56係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(BMS-663513)之重鏈CDR1。

SEQ ID NO:57係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(BMS-663513)之重鏈CDR2。

SEQ ID NO:58係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(BMS-663513)之重鏈CDR3。

SEQ ID NO:59係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(BMS-663513)之輕鏈CDR1。

SEQ ID NO:60係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(BMS-663513)之輕鏈CDR2。

SEQ ID NO:61係4-1BB促效劑單株抗體烏瑞魯單抗(BMS-663513)之輕鏈CDR3。

SEQ ID NO:62係TNFRSF促效劑融合蛋白之Fc結構域。

SEQ ID NO:63係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:64係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:65係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:66係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:67係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:68係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:69係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:70係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:71係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:72係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:73係TNFRSF促效劑融合蛋白之Fc結構域。

SEQ ID NO:74係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:75係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:76係TNFRSF促效劑融合蛋白之連接子。

SEQ ID NO:77係4-1BB配體(4-1BBL)胺基酸序列。

SEQ ID NO:78係4-1BBL多肽之可溶部分。

SEQ ID NO:79係4-1BB促效劑抗體4B4-1-1版本1之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:80係4-1BB促效劑抗體4B4-1-1版本1之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:81係4-1BB促效劑抗體4B4-1-1版本2之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:82係4-1BB促效劑抗體4B4-1-1版本2之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:83係4-1BB促效劑抗體H39E3-2之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:84係4-1BB促效劑抗體H39E3-2之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:85係人OX40之胺基酸序列。

SEQ ID NO:86係鼠OX40之胺基酸序列。

SEQ ID NO:87係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(tavolixizumab) (MEDI-0562)之重鏈。

SEQ ID NO:88係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(MEDI-0562)之輕鏈。

SEQ ID NO:89係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(MEDI-0562)之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:90係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(MEDI-0562)之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:91係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(MEDI-0562)之重鏈CDR1。

SEQ ID NO:92係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(MEDI-0562)之重鏈CDR2。

SEQ ID NO:93係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(MEDI-0562)之重鏈CDR3。

SEQ ID NO:94係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(MEDI-0562)之輕鏈CDR1。

SEQ ID NO:95係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(MEDI-0562)之輕鏈CDR2。

SEQ ID NO:96係OX40促效劑單株抗體塔伏利西單抗(MEDI-0562)之輕鏈CDR3。

SEQ ID NO:97係OX40促效劑單株抗體11D4之重鏈。

SEQ ID NO:98係OX40促效劑單株抗體11D4之輕鏈。

SEQ ID NO:99係OX40促效劑單株抗體11D4之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:100係OX40促效劑單株抗體11D4之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:101係OX40促效劑單株抗體11D4之重鏈CDR1。

SEQ ID NO:102係OX40促效劑單株抗體11D4之重鏈CDR2。

SEQ ID NO:103係OX40促效劑單株抗體11D4之重鏈CDR3。

SEQ ID NO:104係OX40促效劑單株抗體11D4之輕鏈CDR1。

SEQ ID NO:105係OX40促效劑單株抗體11D4之輕鏈CDR2。

SEQ ID NO:106係OX40促效劑單株抗體11D4之輕鏈CDR3。

SEQ ID NO:107係OX40促效劑單株抗體18D8之重鏈。

SEQ ID NO:108係OX40促效劑單株抗體18D8之輕鏈。

SEQ ID NO:109係OX40促效劑單株抗體18D8之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:110係OX40促效劑單株抗體18D8之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:111係OX40促效劑單株抗體18D8之重鏈CDR1。

SEQ ID NO:112係OX40促效劑單株抗體18D8之重鏈CDR2。

SEQ ID NO:113係OX40促效劑單株抗體18D8之重鏈CDR3。

SEQ ID NO:114係OX40促效劑單株抗體18D8之輕鏈CDR1。

SEQ ID NO:115係OX40促效劑單株抗體18D8之輕鏈CDR2。

SEQ ID NO:116係OX40促效劑單株抗體18D8之輕鏈CDR3。

SEQ ID NO:117係OX40促效劑單株抗體Hu119-122之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:118係OX40促效劑單株抗體Hu119-122之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:119係OX40促效劑單株抗體Hu119-122之重鏈CDR1。

SEQ ID NO:120係OX40促效劑單株抗體Hu119-122之重鏈CDR2。

SEQ ID NO:121係OX40促效劑單株抗體Hu119-122之重鏈CDR3。

SEQ ID NO:122係OX40促效劑單株抗體Hu119-122之輕鏈CDR1。

SEQ ID NO:123係OX40促效劑單株抗體Hu119-122之輕鏈CDR2。

SEQ ID NO:124係OX40促效劑單株抗體Hu119-122之輕鏈CDR3。

SEQ ID NO:125係OX40促效劑單株抗體Hu106-222之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:126係OX40促效劑單株抗體Hu106-222之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:127係OX40促效劑單株抗體Hu106-222之重鏈CDR1。

SEQ ID NO:128係OX40促效劑單株抗體Hu106-222之重鏈CDR2。

SEQ ID NO:129係OX40促效劑單株抗體Hu106-222之重鏈CDR3。

SEQ ID NO:130係OX40促效劑單株抗體Hu106-222之輕鏈CDR1。

SEQ ID NO:131係OX40促效劑單株抗體Hu106-222之輕鏈CDR2。

SEQ ID NO:132係OX40促效劑單株抗體Hu106-222之輕鏈CDR3。

SEQ ID NO:133係OX40配體(OX40L)胺基酸序列。

SEQ ID NO:134係OX40L多肽之可溶部分。

SEQ ID NO:135係OX40L多肽之替代性可溶部分。

SEQ ID NO:136係OX40促效劑單株抗體008之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:137係OX40促效劑單株抗體008之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:138係OX40促效劑單株抗體011之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:139係OX40促效劑單株抗體011之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:140係OX40促效劑單株抗體021之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:141係OX40促效劑單株抗體021之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:142係OX40促效劑單株抗體023之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:143係OX40促效劑單株抗體023之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:144係OX40促效劑單株抗體之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:145係OX40促效劑單株抗體之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:146係OX40促效劑單株抗體之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:147係OX40促效劑單株抗體之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:148係人化OX40促效劑單株抗體之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:149係人化OX40促效劑單株抗體之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:150係人化OX40促效劑單株抗體之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:151係人化OX40促效劑單株抗體之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:152係人化OX40促效劑單株抗體之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:153係人化OX40促效劑單株抗體之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:154係人化OX40促效劑單株抗體之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:155係人化OX40促效劑單株抗體之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:156係OX40促效劑單株抗體之重鏈可變區(V_H )。

SEQ ID NO:157係OX40促效劑單株抗體之輕鏈可變區(V_L )。

SEQ ID NO:158係PD-1抑制劑尼沃魯單抗(nivolumab)之重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:159係PD-1抑制劑尼沃魯單抗之輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:160係PD-1抑制劑尼沃魯單抗之重鏈可變區(V_H )胺基酸序列。

SEQ ID NO:161係PD-1抑制劑尼沃魯單抗之輕鏈可變區(V_L )胺基酸序列。

SEQ ID NO:162係PD-1抑制劑尼沃魯單抗之重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:163係PD-1抑制劑尼沃魯單抗之重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:164係PD-1抑制劑尼沃魯單抗之重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:165係PD-1抑制劑尼沃魯單抗之輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:166係PD-1抑制劑尼沃魯單抗之輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:167係PD-1抑制劑尼沃魯單抗之輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:168係PD-1抑制劑派姆單抗(pembrolizumab)之重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:169係PD-1抑制劑派姆單抗之輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:170係PD-1抑制劑派姆單抗之重鏈可變區(V_H )胺基酸序列。

SEQ ID NO:171係PD-1抑制劑派姆單抗之輕鏈可變區(V_L )胺基酸序列。

SEQ ID NO:172係PD-1抑制劑派姆單抗之重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:173係PD-1抑制劑派姆單抗之重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:174係PD-1抑制劑派姆單抗之重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:175係PD-1抑制劑派姆單抗之輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:176係PD-1抑制劑派姆單抗之輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:177係PD-1抑制劑派姆單抗之輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:178係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗(durvalumab)之重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:179係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗之輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:180係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗之重鏈可變區(V_H )胺基酸序列。

SEQ ID NO:181係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗之輕鏈可變區(V_L )胺基酸序列。

SEQ ID NO:182係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗之重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:183係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗之重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:184係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗之重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:185係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗之輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:186係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗之輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:187係PD-L1抑制劑德瓦魯單抗之輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:188係PD-L1抑制劑艾維路單抗(avelumab)之重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:189係PD-L1抑制劑艾維路單抗之輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:190係PD-L1抑制劑艾維路單抗之重鏈可變區(V_H )胺基酸序列。

SEQ ID NO:191係PD-L1抑制劑艾維路單抗之輕鏈可變區(V_L )胺基酸序列。

SEQ ID NO:192係PD-L1抑制劑艾維路單抗之重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:193係PD-L1抑制劑艾維路單抗之重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:194係PD-L1抑制劑艾維路單抗之重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:195係PD-L1抑制劑艾維路單抗之輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:196係PD-L1抑制劑艾維路單抗之輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:197係PD-L1抑制劑艾維路單抗之輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:198係PD-L1抑制劑阿特珠單抗(atezolizumab)之重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:199係PD-L1抑制劑阿特珠單抗之輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:200係PD-L1抑制劑阿特珠單抗之重鏈可變區(V_H )胺基酸序列。

SEQ ID NO:201係PD-L1抑制劑阿特珠單抗之輕鏈可變區(V_L )胺基酸序列。

SEQ ID NO:202係PD-L1抑制劑阿特珠單抗之重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:203係PD-L1抑制劑阿特珠單抗之重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:204係PD-L1抑制劑阿特珠單抗之重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:205係PD-L1抑制劑阿特珠單抗之輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:206係PD-L1抑制劑阿特珠單抗之輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:207係PD-L1抑制劑阿特珠單抗之輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:208係CTLA-4抑制劑伊匹單抗(ipilimumab)之重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:209係CTLA-4抑制劑伊匹單抗之輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:210係CTLA-4抑制劑伊匹單抗之重鏈可變區(V_H )胺基酸序列。

SEQ ID NO:211係CTLA-4抑制劑伊匹單抗之輕鏈可變區(V_L )胺基酸序列。

SEQ ID NO:212係CTLA-4抑制劑伊匹單抗之重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:213係CTLA-4抑制劑伊匹單抗之重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:214係CTLA-4抑制劑伊匹單抗之重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:215係CTLA-4抑制劑伊匹單抗之輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:216係CTLA-4抑制劑伊匹單抗之輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:217係CTLA-4抑制劑伊匹單抗之輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:218係CTLA-4抑制劑曲美木單抗(tremelimumab)之重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:219係CTLA-4抑制劑曲美木單抗之輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:220係CTLA-4抑制劑曲美木單抗之重鏈可變區(V_H )胺基酸序列。

SEQ ID NO:221係CTLA-4抑制劑曲美木單抗之輕鏈可變區(V_L )胺基酸序列。

SEQ ID NO:222係CTLA-4抑制劑曲美木單抗之重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:223係CTLA-4抑制劑曲美木單抗之重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:224係CTLA-4抑制劑曲美木單抗之重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:225係CTLA-4抑制劑曲美木單抗之輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:226係CTLA-4抑制劑曲美木單抗之輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:227係CTLA-4抑制劑曲美木單抗之輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:228係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗(zalifrelimab)之重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:229係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗之輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:230係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗之重鏈可變區(V_H )胺基酸序列。

SEQ ID NO:231係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗之輕鏈可變區(V_L )胺基酸序列。

SEQ ID NO:232係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗之重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:233係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗之重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:234係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗之重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:235係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗之輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:236係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗之輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:237係CTLA-4抑制劑紮利夫利單抗之輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:238係scFv連接子之胺基酸序列。

SEQ ID NO:239係scFv連接子之胺基酸序列。

SEQ ID NO:240係scFv連接子之胺基酸序列。

SEQ ID NO:241係scFv連接子之胺基酸序列。

SEQ ID NO:242係scFv連接子之胺基酸序列。

SEQ ID NO:243係scFv連接子之胺基酸序列。

SEQ ID NO:244係PD-1胞外結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:245係PD-1胞外及跨膜結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:246係PD-1胞外結構域及CD28跨膜結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:247係PD-1胞外及跨膜結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:248係PD-1胞外結構域及CD28跨膜結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:249係scFv-Fc抗體38A1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:250係scFv抗體38A1可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:251係scFv抗體38A1可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:252係scFv抗體38A1可變重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:253係scFv抗體38A1可變重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:254係scFv抗體38A1可變重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:255係scFv抗體38A1可變輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:256係scFv抗體38A1可變輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:257係scFv抗體38A1可變輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:258係scFv-Fc抗體19H9之胺基酸序列。

SEQ ID NO:259係scFv抗體19H9可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:260係scFv抗體19H9可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:261係scFv抗體19H9可變重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:262係scFv抗體19H9可變重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:263係scFv抗體19H9可變重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:264係scFv抗體19H9可變輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:265係scFv抗體19H9可變輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:266係scFv抗體19H9可變輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:267係抗CEA可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:268係抗CEA可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:269係抗CEA重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:270係抗CEA重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:271係抗CEA重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:272係抗CEA輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:273係抗CEA輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:274係抗CEA輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:275係抗CD73可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:276係抗CD73可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:277係抗CD73重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:278係抗CD73重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:279係抗CD73重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:280係抗CD73輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:281係抗CD73輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:282係抗CD73輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:283係抗CD73可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:284係抗CD73可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:285係抗CD73重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:286係抗CD73重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:287係抗CD73重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:288係抗CD73輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:289係抗CD73輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:290係抗CD73輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:291係抗TROP-2可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:292係抗TROP-2可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:293係抗TROP-2可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:294係抗TROP-2可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:295係抗TROP-2可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:296係抗TROP-2可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:297係抗TROP-2可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:298係抗TROP-2可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:299係抗TROP-2可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:300係抗TROP-2可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:301係抗TROP-2重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:302係抗TROP-2重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:303係抗TROP-2重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:304係抗TROP-2輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:305係抗TROP-2輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:306係抗TROP-2輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:307係抗TROP-2抗體m7E6可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:308係抗TROP-2抗體m7E6可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:309係抗TROP-2抗體h7E6可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:310係抗TROP-2抗體m7E6及h7E6_SVG可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:311係抗TROP-2抗體h7E6_SVGL及h7E6_SVG可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:312係抗TROP-2抗體h7E6_SVGL可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:313係抗TROP-2抗體m6G11可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:314係抗TROP-2抗體m6G11可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:315係抗TROP-2抗體h6G11可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:316係抗TROP-2抗體h6G11可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:317係抗TROP-2抗體h6G11-FKG_SF可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:318係抗TROP-2抗體h6G11-FKG_SF可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:319係抗TROP-2抗體可變重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:320係抗TROP-2抗體可變重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:321係抗TROP-2抗體可變重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:322係抗TROP-2抗體可變輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:323係抗TROP-2抗體可變輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:324係抗TROP-2抗體可變輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:325係編碼抗TROP-2抗體m7E6可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:326係編碼抗TROP-2抗體m7E6可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:327係編碼抗TROP-2抗體h7E6可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:328係編碼抗TROP-2抗體m7E6可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:329係編碼抗TROP-2抗體h7E6_SVGL可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:330係編碼抗TROP-2抗體h7E6_SVGL可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:331係編碼抗TROP-2抗體m6G11可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:332係編碼抗TROP-2抗體m6G11可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:333係編碼抗TROP-2抗體h6G11可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:334係編碼抗TROP-2抗體h6G11可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:335係編碼抗TROP-2抗體h6G11-FKG_SF可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:336係編碼抗TROP-2抗體h6G11-FKG_SF可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:337係抗TROP-2薩西土珠單抗(sacituzumab)可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:338係抗TROP-2薩西土珠單抗可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:339係抗TROP-2薩西土珠單抗重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:340係抗TROP-2薩西土珠單抗重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:341係抗TROP-2薩西土珠單抗重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:342係抗TROP-2薩西土珠單抗輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:343係抗TROP-2薩西土珠單抗輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:344係抗TROP-2薩西土珠單抗輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:345係抗EPCAM scFv抗體3-17I scFv之胺基酸序列。

SEQ ID NO:346係抗EPCAM scFv抗體7-F17 scFv之胺基酸序列。

SEQ ID NO:347係抗EPCAM scFv抗體12-C15 scFv之胺基酸序列。

SEQ ID NO:348係抗EPCAM scFv抗體16-G5 scFv之胺基酸序列。

SEQ ID NO:349係抗EPCAM scFv抗體17-C20 scFv之胺基酸序列。

SEQ ID NO:350係抗EPCAM scFv抗體24-G6 scFv之胺基酸序列。

SEQ ID NO:351係抗EPCAM抗體可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:352係抗EPCAM抗體可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:353係抗EPCAM抗體可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:354係抗EPCAM抗體可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:355係抗EPCAM抗體可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:356係抗EPCAM抗體可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:357係抗EPCAM抗體可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:358係抗EPCAM抗體重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:359係抗EPCAM抗體重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:360係抗EPCAM抗體重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:361係抗EPCAM抗體輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:362係抗EPCAM抗體輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:363係抗EPCAM抗體輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:364係編碼抗EPCAM scFv抗體3-17I scFv之核苷酸序列。

SEQ ID NO:365係編碼抗EPCAM scFv抗體7-F17 scFv之核苷酸序列。

SEQ ID NO:366係編碼抗EPCAM scFv抗體12-C15 scFv之核苷酸序列。

SEQ ID NO:366係編碼抗EPCAM scFv抗體16-G5 scFv之核苷酸序列。

SEQ ID NO:367係編碼抗EPCAM scFv抗體17-C20 scFv之核苷酸序列。

SEQ ID NO:368係編碼抗EPCAM scFv抗體24-G6 scFv之核苷酸序列。

SEQ ID NO:369係編碼抗EPCAM scFv可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:370係編碼抗EPCAM scFv可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:371係編碼抗EPCAM scFv可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:372係編碼抗EPCAM scFv可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:373係編碼抗EPCAM scFv可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:374係編碼抗EPCAM scFv可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:375係編碼抗EPCAM scFv可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:376係編碼抗EPCAM scFv可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:377係抗EPCAM抗體可變重鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:378係抗EPCAM抗體可變輕鏈胺基酸序列。

SEQ ID NO:379係抗EPCAM抗體重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:380係抗EPCAM抗體重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:381係抗EPCAM抗體重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:382係抗EPCAM抗體輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:383係抗EPCAM抗體輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:384係抗EPCAM抗體輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:385係抗組織因子抗體TF260可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:386係抗組織因子抗體TF260可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:387係抗組織因子抗體TF196可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:388係抗組織因子抗體TF196可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:389係抗組織因子抗體TF278可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:390係抗組織因子抗體TF278可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:391係抗組織因子抗體TF277可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:392係抗組織因子抗體TF277可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:393係抗組織因子抗體TF392可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:394係抗組織因子抗體TF392可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:395係抗組織因子抗體TF9可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:396係抗組織因子抗體TF9可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:397係抗組織因子抗體TF260重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:398係抗組織因子抗體TF260重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:399係抗組織因子抗體TF260重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:400係抗組織因子抗體TF260輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:401係抗組織因子抗體TF260輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:402係抗組織因子抗體TF260輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:403係抗組織因子抗體TF196重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:404係抗組織因子抗體TF196重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:405係抗組織因子抗體TF196重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:406係抗組織因子抗體TF196輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:407係抗組織因子抗體TF196輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:408係抗組織因子抗體TF196輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:409係抗組織因子抗體TF9重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:410係抗組織因子抗體TF9重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:411係抗組織因子抗體TF9重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:412係抗組織因子抗體TF9輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:413係抗組織因子抗體TF9輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:414係抗組織因子抗體TF9輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:415係抗組織因子抗體可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:416係抗組織因子抗體可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:417係抗組織因子抗體可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:418係抗組織因子抗體可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:419係抗組織因子抗體可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:420係抗組織因子抗體可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:421係抗組織因子抗體可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:422係抗組織因子抗體可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:423係抗組織因子抗體可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:424係抗組織因子抗體可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:425係編碼抗組織因子抗體TF260可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:426係編碼抗組織因子抗體TF260可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:427係編碼抗組織因子抗體TF196可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:428係編碼抗組織因子抗體TF196可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:429係編碼抗組織因子抗體TF278可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:430係編碼抗組織因子抗體TF278可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:431係編碼抗組織因子抗體TF277可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:432係編碼抗組織因子抗體TF277可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:433係編碼抗組織因子抗體TF392可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:434係編碼抗組織因子抗體TF392可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:435係編碼抗組織因子抗體TF9可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:436係編碼抗組織因子抗體TF9可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:437係抗LFA-1或抗CD11a抗體可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:438係抗LFA-1或抗CD11a抗體可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:439係抗LFA-1或抗CD11a抗體可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:440係抗LFA-1或抗CD11a抗體可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:441係抗LFA-1或抗CD11a抗體重鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:442係抗LFA-1或抗CD11a抗體重鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:443係抗LFA-1或抗CD11a抗體重鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:444係抗LFA-1或抗CD11a抗體輕鏈CDR1胺基酸序列。

SEQ ID NO:445係抗LFA-1或抗CD11a抗體輕鏈CDR2胺基酸序列。

SEQ ID NO:446係抗LFA-1或抗CD11a抗體輕鏈CDR3胺基酸序列。

SEQ ID NO:447係基於西羅珠單抗(sibrotuzumab)之抗FAP scFv之胺基酸序列。

SEQ ID NO:448係抗FAP抗體西羅珠單抗可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:449係抗FAP抗體西羅珠單抗可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:450係抗FAP抗體FAP5可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:451係抗FAP抗體FAP5可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:452係編碼抗FAP抗體西羅珠單抗可變重鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:453係編碼抗FAP抗體西羅珠單抗可變輕鏈之核苷酸序列。

SEQ ID NO:454係抗VISTA抗體1B8可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:455係抗VISTA抗體1B8可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:456係抗VISTA抗體1B8重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:457係抗VISTA抗體1B8重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:458係抗VISTA抗體1B8重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:459係抗VISTA抗體1B8輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:460係抗VISTA抗體1B8輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:461係抗VISTA抗體1B8輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:462係抗VISTA抗體2C12可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:463係抗VISTA抗體2C12可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:464係抗VISTA抗體2C12重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:465係抗VISTA抗體2C12重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:466係抗VISTA抗體2C12重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:467係抗VISTA抗體2C12輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:468係抗VISTA抗體2C12輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:469係抗VISTA抗體2C12輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:470係抗VISTA抗體1A12可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:471係抗VISTA抗體1A12可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:472係抗VISTA抗體1A12重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:473係抗VISTA抗體1A12重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:474係抗VISTA抗體1A12重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:475係抗VISTA抗體1A12輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:476係抗VISTA抗體1A12輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:477係抗VISTA抗體1A12輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:478係抗VISTA抗體3C5可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:479係抗VISTA抗體3C5可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:480係抗VISTA抗體3C5重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:481係抗VISTA抗體3C5重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:482係抗VISTA抗體3C5重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:483係抗VISTA抗體3C5輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:484係抗VISTA抗體3C5輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:485係抗VISTA抗體3C5輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:486係抗LRRC15抗體huM25可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:487係抗LRRC15抗體huM25可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:488係抗LRRC15抗體huM25重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:489係抗LRRC15抗體huM25重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:490係抗LRRC15抗體huM25重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:491係抗LRRC15抗體huM25輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:492係抗LRRC15抗體huM25輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:493係抗LRRC15抗體huM25輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:494係抗LRRC15抗體huAD208.4.1可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:495係抗LRRC15抗體huAD208.4.1可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:496係抗LRRC15抗體huAD208.4.1重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:497係抗LRRC15抗體huAD208.4.1重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:498係抗LRRC15抗體huAD208.4.1重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:499係抗LRRC15抗體huAD208.4.1輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:500係抗LRRC15抗體huAD208.4.1輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:501係抗LRRC15抗體huAD208.4.1輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:502係抗LRRC15抗體huAD208.12.1可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:503係抗LRRC15抗體huAD208.12.1可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:504係抗LRRC15抗體huAD208.12.1重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:505係抗LRRC15抗體huAD208.12.1重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:506係抗LRRC15抗體huAD208.12.1重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:507係抗LRRC15抗體huAD208.12.1輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:508係抗LRRC15抗體huAD208.12.1輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:509係抗LRRC15抗體huAD208.12.1輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:510係抗LRRC15抗體huAD208.14.1可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:511係抗LRRC15抗體huAD208.14.1可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:512係抗LRRC15抗體huAD208.14.1重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:513係抗LRRC15抗體huAD208.14.1重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:514係抗LRRC15抗體huAD208.14.1重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:515係抗LRRC15抗體huAD208.14.1輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:516係抗LRRC15抗體huAD208.14.1輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:517係抗LRRC15抗體huAD208.14.1輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:518係抗LRRC15抗體hu139.10可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:519係抗LRRC15抗體hu139.10可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:520係抗LRRC15抗體hu139.10重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:521係抗LRRC15抗體hu139.10重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:522係抗LRRC15抗體hu139.10重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:523係抗LRRC15抗體hu139.10輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:524係抗LRRC15抗體hu139.10輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:525係抗LRRC15抗體hu139.10輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:526係抗LRRC15抗體muAD210.40.9可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:527係抗LRRC15抗體muAD210.40.9可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:528係抗LRRC15抗體muAD210.40.9重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:529係抗LRRC15抗體muAD210.40.9重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:530係抗LRRC15抗體muAD210.40.9重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:531係抗LRRC15抗體muAD210.40.9輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:532係抗LRRC15抗體muAD210.40.9輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:533係抗LRRC15抗體muAD210.40.9輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:534係抗LRRC15抗體muAD209.9.1可變重鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:535係抗LRRC15抗體muAD209.9.1可變輕鏈之胺基酸序列。

SEQ ID NO:536係抗LRRC15抗體muAD209.9.1重鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:537係抗LRRC15抗體muAD209.9.1重鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:538係抗LRRC15抗體muAD209.9.1重鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:539係抗LRRC15抗體muAD209.9.1輕鏈CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO:540係抗LRRC15抗體muAD209.9.1輕鏈CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO:541係抗LRRC15抗體muAD209.9.1輕鏈CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO:542係PD-1跨膜結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:543係CD28跨膜結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:544係CD27跨膜結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:545係CD8α跨膜結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:546係CD8α絞鏈結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:547係IL-2Rβ絞鏈結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:548係IgG1跨膜及絞鏈結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:549係IgG1絞鏈結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:550係IgG4絞鏈結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:551係IgD絞鏈結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:552係編碼PD-1跨膜結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:553係編碼CD28跨膜結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:554係編碼CD27跨膜結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:555係編碼CD8α跨膜結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:556係編碼CD8α絞鏈結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:557係編碼IL-2Rβ絞鏈結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:558係編碼IgG1跨膜及絞鏈結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:559係編碼IgG1絞鏈結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:560係編碼IgG4絞鏈結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:561係編碼IgD絞鏈結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:562係CD28胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:563係CD134 (OX40)胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:564係CD278 (ICOS)胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:565係CD137 (4-1BB)胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:566係CD27胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:567係CD3ζ胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:568係IL-2Rβ胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:569係IL-2Rγ胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:570係IL-18R1胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:571係IL-7Rα胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:572係IL-12R1胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:573係IL-12R2胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:574係IL-15Rα胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:575係IL-21R胞內結構域之胺基酸序列。

SEQ ID NO:576係連接子之胺基酸序列。

SEQ ID NO:577係編碼CD28胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:578係編碼CD134 (OX40)胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:579係編碼CD278 (ICOS)胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:580係編碼CD137 (4-1BB)胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:581係編碼CD27胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:582係編碼CD3ζ胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:583係編碼IL-2Rβ胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:584係編碼IL-2Rγ胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:585係編碼IL-18R1胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:586係編碼IL-7Rα胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:587係編碼IL-12R1胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:588係編碼IL-12R2胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:589係編碼IL-15Rα胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:590係編碼IL-21R胞內結構域之核苷酸序列。

SEQ ID NO:591係編碼連接子之核苷酸序列。

SEQ ID NO:592係EF-1啟動子之核苷酸序列。

SEQ ID NO:593係CMV啟動子之核苷酸序列。

SEQ ID NO:594係MSCV啟動子之核苷酸序列。

SEQ ID NO:595係編碼包含(抗TROP2-V_L )-(連接子)-(抗TROP2-V_H )-(IgG4鉸鏈及跨膜)-(IL-2Rβ)之CCR的載體之核苷酸序列。

SEQ ID NO:596係編碼包含(抗FAP-V_L )-(連接子)-(抗FAP-V_H )-(CD8α鉸鏈及跨膜)-(IL-18R1)之CCR的載體之核苷酸序列。

SEQ ID NO:597係編碼包含(抗PD-L1-V_L )-(連接子)-(抗PD-L1-V_H )-(CD8α鉸鏈及跨膜)-(CD27)之CCR的載體之核苷酸序列，其使用本文所述之38A1抗PD-L1結構域。

Claims

一種藉由將獲自病患的腫瘤之細胞族群擴增成細胞治療產物之產製該細胞治療產物之方法，該方法包含：基於產製供該病患之該細胞治療產物之細胞訂購需求，在產製機構接受來自該病患之細胞族群；藉由運算裝置產生病患特異性識別符，該病患特異性識別符包括與該細胞訂購需求相關聯之細胞訂購識別符；起始產製該細胞治療產物之製程，該製程包含：在該產製機構接受該細胞族群之後，藉由該運算裝置排程病患治療事件，使用細胞擴增技術自該細胞族群之至少一些起始該細胞治療產物之擴增，且判定在第一時間點及在該第一時間點後續的第二時間點該擴增細胞治療產物的接受參數，判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合與對應時間點相關聯之接受標準，因應該擴增細胞治療產物的該接受參數符合該第一時間點的該接受標準之判定，使用該細胞擴增技術自該經獲得之細胞治療產物之該至少一些繼續該細胞治療產物的擴增直到該第二時間點，及因應該擴增細胞治療產物的該接受參數不符合該第二時間點的該接受標準之判定：基於該第二時間點的該接受參數，判定自該第一時間點使用該細胞擴增技術再實施該細胞治療產物之擴增是否可行，因應該再實施係可行之判定，自該第一時間點使用該細胞擴增技術自該第二時間點獲得之該細胞治療產物之至少一些再實施該細胞治療產物之擴增以獲得該細胞治療產物，自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，藉由該運算裝置預估該細胞治療產物之擴增的完成時間，及藉由該運算裝置再排程該病患治療事件且完成自該第一時間點之細胞治療產物的後續擴增，其中該病患治療事件之再排程係基於該細胞治療產物之擴增的預估完成時間及在輸注該病患該經擴增之細胞治療產物之前或後續的病患治療事件之時間實施。
如請求項1之方法，其中該細胞治療產物包含T細胞。
如請求項1之方法，其中該細胞治療產物包含腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)。
如請求項1之方法，其中該病患治療事件包括住院時間期間、切除日期、淋巴細胞耗盡日期、以該細胞治療產物輸注該病患之輸注日期及IL-2治療日期之一或多者。
如請求項1之方法，其中該判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合該接受標準包含在起始該經獲得之細胞治療產物之擴增之後的複數個時間點判定該擴增細胞治療產物的該接受參數，該複數個時間點包括該第一及該第二時間點。
如請求項5之方法，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數不符合該接受標準的判定而再排程該病患治療事件。
如請求項5之方法，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定而終止該病患治療事件。
如請求項5之方法，其中因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定，終止細胞治療產物之該後續擴增。
如請求項8之方法，其中判定該擴增細胞治療產物的接受參數包含判定存活性、無菌性、細胞計數、黴漿菌計數、CD3計數、內毒素測定之結果及革蘭氏染色測定之結果之一或多者。
如請求項9之方法，其中該細胞擴增技術包含快速擴增步驟，且該方法進一步包含：判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合在該快速擴增步驟之前的該接受標準；及因應該擴增細胞治療產物的該接受參數符合該接受標準的判定，在該經擴增之細胞治療產物之產製完成之前的日期排程淋巴細胞耗盡日期、在該經擴增之細胞治療產物之產製完成之後的日期排程輸注日期及在該輸注日期之後排程IL-2治療日期。
如請求項1之方法，其中該細胞擴增技術包括在單一密閉容器生物反應器中培養該細胞治療產物。
如請求項1之方法，其中預估自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，該細胞治療產物之擴增的完成時間包含基於該第二時間點的該接受參數及與用於自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增的細胞族群相關聯之該接受參數之一或二者，判定自該第一時間點完成該擴增過程所需之時間。
如請求項1之方法，其中擴增細胞治療產物之細胞訂購需求係由醫院端界面接受，且該方法進一步包含在接受該細胞訂購需求後，傳遞已接受與該病患相關聯之該細胞訂購需求之確認至該醫院端界面，該確認包括該病患特異性識別符及該細胞訂購識別符之一或二者。
如請求項13之方法，其進一步包含取決於該細胞擴增技術及何時接受該細胞訂購需求來排程用於判定該擴增細胞治療產物的接受參數是否符合在該細胞治療產物之擴增期間的該接受標準之一組對應複數個時間點之日期，該複數個時間點包括該第一及第二時間點。
如請求項13之方法，其進一步包含在再排程該病患治療事件後，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的更新排程至該醫院端界面。
如請求項15之方法，其進一步包含：基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之取貨令至物流界面；及基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的排程至醫院端界面。
如請求項16之方法，其進一步包含：因應自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增係可行的判定：藉由該運算裝置解關聯該細胞訂購識別符與該病患特異性識別符，及藉由該運算裝置產生與該細胞訂購需求相關聯之新細胞訂購識別符且使該新細胞訂購識別符與該病患特異性識別符相關聯。
如請求項17之方法，其中擴增細胞治療產物之該細胞訂購需求係自醫院端界面接受，且該方法進一步包含傳遞包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符及該細胞治療產物之擴增的預估完成時間至該醫院端界面。
如請求項17之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，基於該病患治療事件之該再排程產生與該病患治療事件相關聯之運輸及物流事件的新排程，及基於運輸及物流事件之該再排程，傳遞與包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符相關聯之運輸及物流事件的該新排程至物流界面。
如請求項17之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，使各時間點之該病患特異性識別符與該新細胞訂購識別符相關聯，在該各時間點做出接受參數是否符合該某些接受標準之判定，該新細胞訂購識別符包括對應各個別時間點及該判定之結果的欄位。
如請求項20之方法，其中該排程包含：藉由該運算裝置，基於包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符排程該病患治療事件。
如請求項21之方法，其進一步包含因應該再實施係不可能之判定，藉由該運算裝置取消排程在該第二時間點後續的該病患治療事件。
如請求項22之方法，其進一步包含傳遞該病患治療事件之取消至醫院端界面及物流界面。
如請求項23之方法，其進一步包含因應該再實施係不可行之判定，銷毀該經擴增之細胞治療產物且解關聯該病患特異性識別符與該細胞訂購識別符。
一種藉由如請求項1之方法根據該再排程病患治療事件所獲得之該擴增細胞治療產物治療該病患之方法。
一種產製用於病患的細胞治療產物之方法，該方法包含：在運算裝置接受產製供該病患之該細胞治療產物之細胞訂購需求、在複數個產製機構製造用於產製該細胞治療產物之產製槽及用於以該細胞治療產物治療該病患之病患治療事件的初步排程，其中在來自與個別產製機構相關聯之產製商電腦子系統的該運算裝置接受該個別產製機構之產製槽；藉由該運算裝置，基於該病患治療事件的初步排程，在排程使用者介面中判定及展示複數個用於產製該細胞治療產物之可用產製槽；在選擇該可用產製槽之一者之後，根據該病患治療事件的初步排程及該可用產製槽，在醫學機構對該病患實施程序以自該病患獲得實體腫瘤；根據該可用產製槽，將該經獲得之實體腫瘤轉移至對應該可用產製槽之產製機構；在該產製機構接受該經獲得之實體腫瘤後，使用細胞擴增技術自該經獲得之實體腫瘤的至少一部分起始該細胞治療產物的產製；在該細胞治療產物的產製期間，判定在第一時間點及在該第一時間點後續的第二時間點該經產製之細胞治療產物的接受參數及該接受參數是否符合與對應時間點相關聯之接受標準，該接受參數係基於與該對應時間點相關聯之測定的結果判定；基於是否符合在該第一及第二時間點之一或二者之該接受標準，藉由該運算裝置，修改產製該細胞治療產物之產製排程、對應該產製機構之產製槽及該病患治療事件的初步排程；及如果符合在該第一及第二時間點兩者之該接受標準，根據該經修改之產製排程完成該細胞治療產物的產製。
如請求項26之方法，其進一步包含將該經產製之細胞治療產物轉移至該醫學機構。
如請求項26之方法，其進一步包含在接受該細胞訂購需求時，藉由該運算裝置產生與該病患相關聯之病患特異性識別符及該細胞訂購需求。
如請求項28之方法，其進一步包含藉由該運算裝置自動產生用於該經獲得之實體腫瘤的容器之運輸標籤，該運輸標籤包含該病患特異性識別符、該細胞訂購需求、該產製槽及對應該可用產製槽之該產製機構。
如請求項29之方法，其進一步包含藉由該運算裝置自動產生用於該經獲得之實體腫瘤的容器之產製標籤，該產製標籤包含當該產製標籤產生時對應於用於產製該細胞治療產物之產製過程的時間點、容器識別條碼、該病患特異性識別符、在該時間點完成之產製步驟、與該經完成之過程相關聯之接受參數及在該時間點實施之產製過程。
如請求項26之方法，其中該細胞治療產物包含T細胞。
如請求項26之方法，其中該細胞治療產物包含腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)。
如請求項26之方法，其中該病患治療事件包括住院時間期間、切除日期、淋巴細胞耗盡日期、以該細胞治療產物輸注該病患之輸注日期及IL-2治療日期之一或多者。
如請求項26之方法，其中該判定該經產製之細胞治療產物的該接受參數是否符合該接受標準包含在起始該經接受之細胞治療產物之擴增之後的複數個時間點判定該經產製之細胞治療產物的該接受參數，該複數個時間點包括該第一及該第二時間點。
如請求項34之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置再排程該病患治療事件且完成細胞治療產物的後續擴增，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該經產製之細胞治療產物的該接受參數不符合該接受標準的判定而再排程該病患治療事件。
如請求項34之方法，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該經產製之細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定而終止該病患治療事件。
如請求項34之方法，其中因應在該複數個時間點之任一者該經產製之細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定，終止細胞治療產物之該後續擴增。
如請求項37之方法，其中判定該經產製之細胞治療產物的接受參數包含判定存活性、無菌性、細胞計數、黴漿菌計數、CD3計數、內毒素測定之結果及革蘭氏染色測定之結果之一或多者。
如請求項38之方法，其中該細胞擴增技術包含快速擴增步驟，且該方法進一步包含：判定該經產製之細胞治療產物的該接受參數是否符合在該快速擴增步驟之前的該接受標準；及因應該經產製之細胞治療產物的該接受參數符合該接受標準的判定，在該細胞治療產物之產製完成之前的日期排程淋巴細胞耗盡日期、在該細胞治療產物之產製完成之後的日期排程輸注日期及在該輸注日期之後排程IL-2治療日期。
如請求項26之方法，其中該細胞擴增技術包括在單一密閉容器生物反應器中培養該細胞治療產物。
如請求項26之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，預估該細胞治療產物之擴增的完成時間，其中預估自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，該細胞治療產物之擴增的完成時間包含基於該第二時間點的該接受參數及與用於自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增的細胞族群相關聯之該接受參數之一或二者，判定自該第一時間點完成該擴增過程所需之時間。
如請求項29之方法，其中擴增細胞治療產物之細胞訂購需求係由醫院端界面接受，且該方法進一步包含在接受該細胞訂購需求後，傳遞已接受與該病患相關聯之該細胞訂購需求之確認至該醫院端界面，該確認包括該病患特異性識別符及該細胞訂購識別符之一或二者。
如請求項42之方法，其進一步包含根據該細胞擴增技術及何時接受該細胞訂購需求來排程用於判定該經產製之細胞治療產物的接受參數是否符合在該細胞治療產物之擴增期間的該接受標準之一組對應複數個時間點之日期，該複數個時間點包括該第一及第二時間點。
如請求項43之方法，其進一步包含在再排程該病患治療事件後，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的更新排程至該醫院端界面。
如請求項44之方法，其進一步包含：基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之取貨令至物流界面；及基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的排程至醫院端界面。
如請求項45之方法，其進一步包含：因應自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增係可行的判定：藉由該運算裝置解關聯該細胞訂購識別符與該病患特異性識別符，及藉由該運算裝置產生與該細胞訂購需求相關聯之新細胞訂購識別符且使該新細胞訂購識別符與該病患特異性識別符相關聯。
如請求項46之方法，其中擴增細胞治療產物之該細胞訂購需求係自醫院端界面接受，且該方法進一步包含傳遞包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符及該細胞治療產物之擴增的預估完成時間至該醫院端界面。
如請求項47之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，基於該病患治療事件之該再排程產生與該病患治療事件相關聯之運輸及物流事件的新排程，及基於運輸及物流事件之該再排程，傳遞與包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符相關聯之運輸及物流事件的該新排程至物流界面。
如請求項48之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，使各時間點之該病患特異性識別符與該新細胞訂購識別符相關聯，在該各時間點做出接受參數是否符合該接受標準之判定，該新細胞訂購識別符包括對應各個別時間點及該判定之結果的欄位。
如請求項49之方法，其中該排程包含：藉由該運算裝置，基於包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符排程該病患治療事件。
如請求項50之方法，其進一步包含因應該再實施係不可能之判定，藉由該運算裝置取消排程在該第二時間點後續的該病患治療事件。
如請求項51之方法，其進一步包含傳遞該病患治療事件之取消至醫院端界面及物流界面。
如請求項52之方法，其進一步包含因應該再實施係不可行之判定，銷毀該經擴增之細胞治療產物且解關聯該病患特異性識別符與該細胞訂購識別符。
一種藉由如請求項26之方法根據該再排程病患治療事件所獲得之該經產製之細胞治療產物治療該病患之方法。
一種用於產製細胞治療產物之方法，該方法包含：在產製機構接受獲自病患之實體腫瘤；藉由運算裝置產生用於產製容器之產製標籤，該產製容器待用於使用細胞擴增技術自該經獲得之實體腫瘤的至少一部分產製該細胞治療產物之過程，該產製標籤包含與該病患、該產製過程及經產製之細胞治療產物之品質相關聯之資訊；起始產製該細胞治療產物之製程，該製程包含：在醫學機構對該病患實施程序以自該病患獲得實體腫瘤，將該經獲得之實體腫瘤轉移至產製機構，在該產製機構接受該經獲得之實體腫瘤之後，藉由該運算裝置動態排程病患治療事件，該動態排程係取決於後續經獲得之擴增細胞治療產物的接受參數，使用細胞擴增技術自該經獲得之實體腫瘤之至少一些起始該細胞治療產物之擴增，且判定在複數個時間點該擴增細胞治療產物的接受參數，實施品質管制測定以判定該經產製之細胞治療產物在該複數個時間點的接受參數；在該運算裝置接受該經產製之細胞治療產物的該接受參數；藉由該運算裝置產生對應於該複數個時間點之各者的經更新之產製標籤，該經更新之產製標籤包含與經產製之細胞治療產物之品質相關聯之經更新之資訊，該經更新之資訊包含在對應時間點之該接受參數；藉由該運算裝置讀取在該複數個時間點之各者的該經更新之產製標籤；及基於在該複數個時間點之各者自該經更新之產製標籤讀取的資訊，完成該細胞治療產物之擴增。
如請求項55之方法，其進一步包含如果下列發生，則藉由該運算裝置提供警告信號：在該經更新之產製標籤上與該病患之後續產製步驟有關的資訊不符合在該產製標籤上與該病患之前一產製步驟有關的資訊，或在該經更新之產製標籤上該產製過程之給定時間點的接受參數不符合該產製過程之該時間點的接受標準，其中該接受參數包含存活性、無菌性、細胞計數、黴漿菌計數、CD3計數、內毒素測定之結果及革蘭氏染色測定之結果之一或多者。
如請求項55之方法，其中與該病患有關的資訊包含病患特異性識別符及與產製供該病患之該細胞治療產物之細胞訂購需求相關聯之細胞訂購識別符。
如請求項55之方法，其中該細胞擴增技術包括在單一密閉容器生物反應器中培養該細胞治療產物。
如請求項55之方法，其中該產製標籤包含條碼，該條碼編碼與該病患、該產製過程及經產製之細胞治療產物之品質相關聯之資訊。
如請求項56之方法，其進一步包含取決於該產製機構所使用之該細胞擴增技術及何時接受細胞訂購需求來排程用於判定該經產製之細胞治療產物的接受參數是否符合在該產製過程期間的該接受標準之一組對應複數個時間點之日期，該複數個時間點包括第一時間點及在該第一時間點後續的第二時間點。
如請求項60之方法，其進一步包含與物流界面整合、經由快遞運算子系統接受快遞狀態資訊（其中快遞狀態資訊包括且因應接受該快遞狀態資訊）、基於該經判定之產製排程判定用於運輸該經產製之細胞治療產物的運輸排程及產生用於含有該經產製之細胞治療產物之運輸容器的運輸標籤。
如請求項60之方法，其進一步包含基於該經判定之運輸排程傳遞運輸需求至物流機構。
如請求項60之方法，其進一步包含在實施最終品質管制測定之前產生用於含有該經產製之細胞治療產物之運輸容器的運輸標籤，該運輸標籤指示該經產製之細胞治療產物係不可釋出，除非該最終品質管制測定之結果指示該對應接受參數符合該對應接受標準。
如請求項56之方法，其進一步包含：在判定該經產製之細胞治療產物的該接受參數符合該接受標準時，判定用於產製該細胞療法的完成日期；藉由該運算裝置，基於該完成日期，產生對應於使用該細胞治療產物以治療病患之病患治療事件的排程；基於該完成日期，傳遞取貨令至物流界面；及傳遞該病患治療事件的排程至醫院端界面。
如請求項55之方法，其中該細胞治療產物包含T細胞。
如請求項55之方法，其中該細胞治療產物包含腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)。
如請求項55之方法，其中該病患治療事件包括住院時間期間、切除日期、淋巴細胞耗盡日期、以該細胞治療產物輸注該病患之輸注日期及IL-2治療日期之一或多者。
如請求項56之方法，其中該判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合該接受標準包含在起始該經獲得之細胞治療產物之擴增之後的複數個時間點判定該擴增細胞治療產物的該接受參數，該複數個時間點包括該第一及該第二時間點。
如請求項68之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置再排程該病患治療事件且完成細胞治療產物的後續擴增，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數不符合該接受標準的判定而再排程該病患治療事件。
如請求項68之方法，其中該病患治療事件之再排程包含因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定而終止該病患治療事件。
如請求項68之方法，其中因應在該複數個時間點之任一者該擴增細胞治療產物的該接受參數因為污染不符合該接受標準的判定，終止細胞治療產物之該後續擴增。
如請求項71之方法，其中判定該擴增細胞治療產物的接受參數包含判定存活性、無菌性、細胞計數、黴漿菌計數、CD3計數、內毒素測定之結果及革蘭氏染色測定之結果之一或多者。
如請求項72之方法，其中該細胞擴增技術包含快速擴增步驟，且該方法進一步包含：判定該擴增細胞治療產物的該接受參數是否符合在該快速擴增步驟之前的該接受標準；及因應該擴增細胞治療產物的該接受參數符合該接受標準的判定，在該細胞治療產物之產製完成之前的日期排程淋巴細胞耗盡日期、在該細胞治療產物之產製完成之後的日期排程輸注日期及在該輸注日期之後排程IL-2治療日期。
如請求項55之方法，其中該細胞擴增技術包括在單一密閉容器生物反應器中培養該細胞治療產物。
如請求項55之方法，其中預估自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增之後，該細胞治療產物之擴增的完成時間包含基於該第二時間點的該接受參數及與用於自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增的細胞族群相關聯之該接受參數之一或二者，判定自該第一時間點完成該擴增過程所需之時間。
如請求項57之方法，其中擴增細胞治療產物之細胞訂購需求係由醫院端界面接受，且該方法進一步包含在接受該細胞訂購需求後，傳遞已接受與該病患相關聯之該細胞訂購需求之確認至該醫院端界面，該確認包括該病患特異性識別符及該細胞訂購識別符之一或二者。
如請求項76之方法，其進一步包含取決於該細胞擴增技術及何時接受該細胞訂購需求來排程用於判定該擴增細胞治療產物的接受參數是否符合在該細胞治療產物之擴增期間的該接受標準之一組對應複數個時間點之日期，該複數個時間點包括該第一及第二時間點。
如請求項76之方法，其進一步包含在再排程該病患治療事件後，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的更新排程至該醫院端界面。
如請求項78之方法，其進一步包含：基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之取貨令至物流界面；及基於該完成時間，傳遞與該病患特異性識別符相關聯之該病患治療事件的排程至醫院端界面。
如請求項79之方法，其進一步包含：因應自該第一時間點再實施該細胞治療產物之擴增係可行的判定：藉由該運算裝置解關聯該細胞訂購識別符與該病患特異性識別符，及藉由該運算裝置產生與該細胞訂購需求相關聯之新細胞訂購識別符且使該新細胞訂購識別符與該病患特異性識別符相關聯。
如請求項80之方法，其中擴增細胞治療產物之該細胞訂購需求係自醫院端界面接受，且該方法進一步包含傳遞包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符及該細胞治療產物之擴增的預估完成時間至該醫院端界面。
如請求項80之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，基於該病患治療事件之該再排程產生與該病患治療事件相關聯之運輸及物流事件的新排程，及基於運輸及物流事件之該再排程，傳遞與包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符相關聯之運輸及物流事件的該新排程至物流界面。
如請求項80之方法，其進一步包含：藉由該運算裝置，使各時間點之該病患特異性識別符與該新細胞訂購識別符相關聯，在該各時間點做出接受參數是否符合該某些接受標準之判定，該新細胞訂購識別符包括對應各個別時間點及該判定之結果的欄位。
如請求項83之方法，其中該排程包含：藉由該運算裝置，基於包括該新細胞訂購識別符之該病患特異性識別符排程該病患治療事件。
如請求項84之方法，其進一步包含因應該再實施係不可能之判定，藉由該運算裝置取消排程在該第二時間點後續的該病患治療事件。
如請求項85之方法，其進一步包含傳遞該病患治療事件之取消至醫院端界面及物流界面。
如請求項86之方法，其進一步包含因應該再實施係不可行之判定，銷毀該經擴增之細胞治療產物且解關聯該病患特異性識別符與該細胞訂購識別符。
一種藉由如請求項55之方法根據該再排程病患治療事件所獲得之該擴增細胞治療產物治療該病患之方法。