CN108290946B - 抗tigit抗体和使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供抗TIGIT(具有Ig和ITIM域的T细胞免疫受体)抗体及其使用方法。

Description

抗TIGIT抗体和使用方法
序列表
本申请含有序列表，已经以ASCII格式电子提交且据此通过援引完整收录。2016年9月22日创建的所述ASCII拷贝命名为50474-120WO3_Sequence_Listing_9_22_16_ST25，而且大小为209,318个字节。
发明领域
本发明涉及抗TIGIT(具有Ig和ITIM域的T细胞免疫受体)抗体及其使用方法。
发明背景
免疫相关疾病(例如癌症)是在正常生理学中对于应答创伤(insult)或损伤(injury)、自创伤或损伤启动修复、及发起先天性和获得性防御是至关重要的复杂生物学途径的表现或后果。在这些正常生理学途径引起另外的创伤或损伤(与应答的强度直接相关(例如作为异常调节或过度刺激的后果)或作为对自身的反应)时发生疾病或病理。
虽然这些疾病的发生常常牵涉多步骤途径且常常牵涉多种不同生物学系统/途径，但是这些途径的一种或多种中的关键点处的干预可具有改善或治疗效果。治疗性干预可以通过拮抗有害过程/途径或刺激有益过程/途径而发生。
许多免疫相关疾病是已知的且已经广泛研究。此类疾病包括癌症(瘤形成)，免疫介导的炎性疾病，非免疫介导的炎性疾病、传染病、和免疫缺陷病。
T淋巴细胞(T细胞)是哺乳动物免疫应答的重要成分。T细胞识别与由主要组织相容性复合物(MHC)内的基因编码的自身分子联合的抗原。该抗原可以与MHC分子一起展示在抗原呈递细胞(APC)、受病毒感染的细胞、癌细胞、移植物、等的表面上。T细胞系统清除这些对宿主哺乳动物造成健康威胁的改变的细胞。T细胞包括辅助性T细胞和细胞毒性T细胞。辅助性T细胞在识别APC上的抗原-MHC复合物后大量增殖。辅助性T细胞还分泌多种细胞因子(即淋巴因子)，它们在B细胞、细胞毒性T细胞，和多种参与免疫应答的其它细胞的活化中发挥中心作用。
调节性T细胞(Treg)是在抑制自身反应性免疫应答中发挥至关重要作用的辅助性T细胞子集且常常在慢性发炎部位，诸如在肿瘤组织中找到。Treg在表型上通过CD25，CLTA4，GITR，和神经毡蛋白-1(NRP-1)的高细胞表面表达来定义且在转录因子FOXP3的控制下。Treg经由接触依赖性机制和细胞因子生成发挥它们对活化的T细胞的遏制功能。Treg还通过与树突细胞(DC)上的配体的直接相互作用来调控免疫应答，诸如CD40L连接和CTLA4与DC上的B7分子的相互作用，其引发对吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的诱导。DC是能够针对自身或非自身抗原诱导免疫或耐受的专职APC。DC扩充的Treg在体外遏制同种异体反应性应答，而且当过继性转移时，适宜的Treg抑制NODscid小鼠中的糖尿病或实验诱发的哮喘。DC上的配体与Treg的特异性相互作用还能消除它们的遏制性功能，诸如GITR在小鼠中的参与，提示DC可能在调控Treg功能中具有兼职作用。
分子CTLA4和GITR分别是共刺激/抑制分子的CD28-B7和TNF超家族内定义的配体的代表。这些分子在Treg上高表达但典型地在活化的T细胞上上调。更近地，将一种称作TIGIT(出于具有Ig和ITIM域的T细胞免疫受体)的蛋白质鉴定为一种细胞表面结合的蛋白质，其在T细胞中特异性表达，拥有一个IgV域，一个跨膜域，和两个假定的免疫受体酪氨酸抑制性(ITIM)基序。TIGIT显示出特别在Treg和记忆T细胞子集，以及NK细胞上表达。因为关于免疫相关病症，特别是癌症的新的治疗剂和治疗方法存在未满足的需要，所以本文中描述的是出乎意料有效的治疗性组合物，诸如抗TIGIT抗体及其组合物，和免疫相关病症和癌症的治疗方法，它们牵涉调控TIGIT与其结合配偶的相互作用。
发明概述
本发明提供抗TIGIT(具有Ig和ITIM域的T细胞免疫受体)抗体及其变体，它们具有改善的特性，包括例如结合亲和力，交叉反应性，药动学，和/或表达。特别地，本发明提供抗TIGIT抗体及其变体，它们拥有例如对人TIGIT的高结合亲和力；人TIGIT，食蟹猴(cyno)TIGIT，和/或家兔TIGIT之间的交叉反应性；食蟹猴中的期望清除特性；和赋予抗体及其变体以高稳定性的生物化学和生物物理学特性。
在一个方面，本发明特征在于一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体结合人TIGIT上包含人TIGIT的氨基酸残基Ser78，Ser80，和Lys82中一个或多个的表位。在一个实施方案中，该表位包含人TIGIT的氨基酸残基Ser80和Lys82。在另一个实施方案中，该表位包含人TIGIT的氨基酸残基Ser78，Ser80，和Lys82。在另一个实施方案中，该表位进一步包含人TIGIT的氨基酸残基Ala67。在另一个实施方案中，该表位进一步包含选自由人TIGIT的Glu60，Leu65，和Ile68组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基。在另一个实施方案中，该表位进一步包含选自由人TIGIT的Gln56，Asn70，Leu73，和His111组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基。在另一个实施方案中，该表位进一步包含选自由人TIGIT的Thr55，Asn58，Asp63，Gln64，His76，Ile77，和Pro79组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基。在另一个实施方案中，该表位由人TIGIT的氨基酸残基Thr55，Gln56，Asn58，Glu60，Asp63，Gln64，Leu65，Ala67，Ile68，Asn70，Leu73，His76，Ile77，Ser78，Pro79，Ser80，Lys82，和His111组成。
在另一个方面，本发明特征在于一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体结合人TIGIT上包含人TIGIT的氨基酸残基Thr55，Ser80，和Lys82中一个或多个的表位。在一个实施方案中，该表位包含人TIGIT的氨基酸残基Lys82。在另一个实施方案中，该表位包含人TIGIT的氨基酸残基Thr55，Ser80，和Lys82。在另一个实施方案中，该表位进一步包含人TIGIT的氨基酸残基Gln56。在另一个实施方案中，该表位进一步包含人TIGIT的氨基酸残基Ile77或Pro79。在另一个实施方案中，该表位进一步包含人TIGIT的氨基酸残基Ile77和Pro79。在另一个实施方案中，该表位进一步包含人TIGIT的氨基酸残基Asn58或Glu60。在另一个实施方案中，该表位进一步包含人TIGIT的氨基酸残基Asn58和Glu60。在另一个实施方案中，该表位进一步包含选自由人TIGIT的Leu65，Ile68，Leu73，His76，Ser78，和His111组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基。在另一个实施方案中，该表位进一步包含人TIGIT的氨基酸残基Leu65，Ile68，Leu73，His76，Ser78，和His111。在还有另一个实施方案中，该表位由人TIGIT的Thr55，Gln56，Asn58，Glu60，Leu65，Ile68，Leu73，His76，Ile77，Ser78，Pro79，Ser80，Lys82，和His111组成。
在另一个方面，本发明特征在于一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体包含互补位，其包含选自由重链可变区氨基酸残基Asn32，Tyr52，Arg52b，Phe53，Lys54，Tyr56，Asp58，Tyr99，Asp100，Leu100a，Leu100b，和Ala100c和轻链可变区氨基酸残基Tyr27d，Tyr92，Ser93，Thr94，和Phe96组成的组的一个或多个氨基酸残基。在一个实施方案中，该互补位由重链可变区氨基酸残基Asn32，Tyr52，Arg52b，Phe53，Lys54，Tyr56，Asp58，Tyr99，Asp100，Leu100a，Leu100b，和Ala100c和轻链可变区氨基酸残基Tyr27d，Tyr92，Ser93，Thr94，和Phe96组成。在任何上述方面中，该抗体可以能够结合家兔TIGIT。
在另一个方面，本发明特征在于一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体结合人TIGIT上包含选自由人TIGIT的Gln53，His111，和Tyr113组成的组的一个或多个氨基酸残基的表位。在一些实施方案中，该表位进一步包含人TIGIT的Gln56。在一些实施方案中，该表位进一步包含人TIGIT的Glu60，Leu65，Ile68，Asn70，Leu73，和His76。
在另一个方面，本发明特征在于一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体包含下述六种高变区(HVR)：包含SNSAAWN(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列的HVR-H1；包含KTYYRFKWYSDYAVSVKG(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列的HVR-H2；包含ESTTYDLLAGPFDY(SEQ IDNO：3)的氨基酸序列的HVR-H3；包含KSSQTVLYSSNNKKYLA(SEQ ID NO：4)的氨基酸序列的HVR-L1；包含WASTRES(SEQ ID NO：5)的氨基酸序列的HVR-L2；和包含QQYYSTPFT(SEQ IDNO：6)的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区框架区(FR)：包含DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO：7)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGQPPNLLIY(SEQ ID NO：8)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO：9)的氨基酸序列的FR-L3；和包含FGPGTKVEIK(SEQ ID NO：10)的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：包含X1VQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVS(SEQ ID NO：11)的氨基酸序列的FR-H1，其中X1是Q或E；包含WIRQSPSRGLEWLG(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列的FR-H2；包含RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTR(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列的FR-H3；和包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：包含EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVS(SEQ ID NO：15)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQSPSRGLEWLG(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列的FR-H2；包含RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTR(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列的FR-H3；和包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：包含QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVS(SEQ ID NO：16)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQSPSRGLEWLG(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列的FR-H2；包含RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTR(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列的FR-H3；和包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该抗体能够结合家兔TIGIT。
在另一个方面，本发明特征在于一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体包含下述六种HVR：包含SYPMN(SEQ ID NO：17)的氨基酸序列的HVR-H1；包含WINTNTGNPTYVQGFTG(SEQ ID NO：18)的氨基酸序列的HVR-H2；包含TGGHTYDSYAFDV(SEQ ID NO：19)的氨基酸序列的HVR-H3；包含RASQVISSSLA(SEQ ID NO：20)的氨基酸序列的HVR-L1；包含AASTLQS(SEQID NO：21)的氨基酸序列的HVR-L2；和包含QHLHGYPX1N(SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的HVR-L3，其中X1是C或S。在一些实施方案中，该抗体包含下述六种HVR：包含SYPMN(SEQ IDNO：17)的氨基酸序列的HVR-H1；包含WINTNTGNPTYVQGFTG(SEQ ID NO：18)的氨基酸序列的HVR-H2；包含TGGHTYDSYAFDV(SEQ ID NO：19)的氨基酸序列的HVR-H3；包含RASQVISSSLA(SEQ ID NO：20)的氨基酸序列的HVR-L1；包含AASTLQS(SEQ ID NO：21)的氨基酸序列的HVR-L2；和包含QHLHGYPSN(SEQ ID NO：23)的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：包含EVQLVQSGSDLKKPGASVRVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGHGLEWMG(SEQ ID NO：25)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVNTAYLQISSLKAEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列的FR-H3；和包含WGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：27)的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，抗体包含下述六种HVR：包含SYPMN(SEQ ID NO：17)的氨基酸序列的HVR-H1；包含WINTNTGNPTYVQGFTG(SEQID NO：18)的氨基酸序列的HVR-H2；包含TGGHTYDSYAFDV(SEQ ID NO：19)的氨基酸序列的HVR-H3；包含RASQVISSSLA(SEQ ID NO：20)的氨基酸序列的HVR-L1；包含AASTLQS(SEQ IDNO：21)的氨基酸序列的HVR-L2；和包含QHLHGYPCN(SEQ ID NO：28)的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：包含QVQLVQSGSDLKKPGASVRVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：29)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGHGLEWMG(SEQ ID NO：25)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVNTAYLQISSLKAEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列的FR-H3；和包含WGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：27)的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：包含DIQLTQSPTFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：30)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQNPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：31)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFVTYYC(SEQ IDNO：32)的氨基酸序列的FR-L3；和包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：33)的氨基酸序列的FR-L4。
在另一个方面，本发明特征在于一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体包含(a)与SEQ ID NO：34或35的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的重链可变区(VH)；(b)与SEQ ID NO：36的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的轻链可变区(VL)；或(c)如(a)中的重链可变区和如(b)中的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含(a)与SEQ ID NO：34的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的重链可变区(VH)；(b)与SEQ ID NO：36的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的轻链可变区(VL)；或(c)如(a)中的重链可变区和如(b)中的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含(a)与SEQ ID NO：35的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的重链可变区(VH)；(b)与SEQ ID NO：36的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的轻链可变区(VL)；或(c)如(a)中的重链可变区和如(b)中的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体能够结合家兔TIGIT。
在另一个方面，本发明特征在于一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体包含(a)与SEQ ID NO：37的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的重链可变区(VH)；(b)与SEQID NO：38的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的轻链可变区(VL)；或(c)如(a)中的重链可变区和如(b)中的轻链可变区。
在还有另一个方面，本发明特征在于一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体包含(a)与SEQ ID NO：39的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的重链可变区(VH)；(b)与SEQ ID NO：40的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的轻链可变区(VL)；或(c)如(a)中的重链可变区和如(b)中的轻链可变区。
在上文描述的方面任一中，该抗体可以能够结合人TIGIT和食蟹猴(cyno)TIGIT二者，但是不结合鼠TIGIT。在一些实施方案中，该抗体以约10nM或更低的Kd结合人TIGIT且以约10nM或更低的Kd结合食蟹猴TIGIT。在一些实施方案中，该抗体以约0.1nM至约1nM的Kd结合人TIGIT且以约0.5nM至约1nM的Kd结合食蟹猴TIGIT。在一些实施方案中，该抗体以约0.1nM或更低的Kd结合人TIGIT且以约0.5nM或更低的Kd结合食蟹猴TIGIT。
在上文描述的方面任一中，该抗体可以是拮抗性抗体或激动性抗体。
在一些实施方案中，该拮抗性抗体特异性结合TIGIT且抑制或阻断TIGIT与脊髓灰质炎病毒受体(PVR)的相互作用。在一些实施方案中，该拮抗性抗体抑制由TIGIT结合PVR介导的细胞内信号传导。在一些实施方案中，该拮抗性抗体以10nM或更低的IC50值抑制或阻断人TIGIT结合人PVR。在一些实施方案中，该拮抗性抗体以1nM至约10nM的IC50值抑制或阻断人TIGIT结合人PVR。在一些实施方案中，该拮抗性抗体以50nM或更低的IC50值抑制或阻断食蟹猴TIGIT结合食蟹猴PVR。在一些实施方案中，该拮抗性抗体以1nM至约50nM的IC50值抑制或阻断食蟹猴TIGIT结合食蟹猴PVR。在一些实施方案中，该拮抗性抗体以1nM至约5nM的IC50值抑制或阻断食蟹猴TIGIT结合食蟹猴PVR。
在一些实施方案中，该激动性抗体特异性结合TIGIT且刺激PVR与CD226或CD96的相互作用。在一些实施方案中，该激动性抗体特异性结合TIGIT且刺激PVR与CD226和CD96的相互作用。在一些实施方案中，该激动性抗体特异性结合TIGIT且刺激人PVR与人CD226和人CD96的相互作用。在一些实施方案中，该激动性抗体特异性结合TIGIT且刺激食蟹猴PVR与食蟹猴CD226和食蟹猴CD96的相互作用。
在另一个方面，本发明特征在于一种分离的抗体，其与上述方面任一的抗体竞争对TIGIT的结合。
在另一个方面，本发明特征在于一种分离的抗体，其与上述方面任一的抗体结合相同表位。
在上文描述的方面任一的一些实施方案中，该抗体是单克隆的。在一些实施方案中，该抗体是人的，人源化的，或嵌合的。在一些实施方案中，该抗体是全长抗体。在一些实施方案中，该抗体具有小于约10ml/kg/天(例如约3ml/kg/天至约10ml/kg/天)的施用(例如注射，例如静脉内注射)后清除率。在一些实施方案中，该抗体抗体具有约3ml/kg/天至约8ml/kg/天的清除率。在一些实施方案中，该抗体施用于哺乳动物(例如猴，诸如食蟹猴，或人)。在一些实施方案中，该抗体是结合TIGIT的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体片段选自由Fab，Fab’，Fab’-SH，Fv，单链可变片段(scFv)，和(Fab’)2片段组成的组。在一些实施方案中，该抗体是IgG类抗体。在一些实施方案中，该IgG类抗体是IgG1亚类抗体。在一些实施方案中，本文中描述的抗体可用作药物。在一些实施方案中，本文中描述的抗体可用于在有所需要的受试者中治疗癌症或延迟癌症进展。在一些实施方案中，该癌症选自由非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肾细胞癌，结直肠癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，膀胱癌，食道癌，间皮瘤，黑素瘤，头和颈癌，甲状腺癌，肉瘤，前列腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，胸腺癌，白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，蕈样肉芽肿，梅克尔细胞癌，和血液学恶性组成的组。在一些实施方案中，本文中描述的抗体可用于治疗多发性骨髓瘤(MM)或延迟多发性骨髓瘤(MM)进展。在一些实施方案中，本文中描述的抗体可用于在有所需要的受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展。在一些实施方案中，该免疫相关疾病与T细胞功能障碍性病症有关。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞耗尽。在一些实施方案中，该免疫相关疾病选自由未解决的急性感染，慢性感染，和肿瘤免疫组成的组。在一些实施方案中，本文中描述的抗体可用于在有所需要的受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能。
在另一个方面，本发明特征在于一种多核苷酸(例如一种分离的多核苷酸)，其编码本文中描述的任何抗体。在另一个方面，本发明特征在于一种载体(例如表达载体)，其包含用于表达该抗体的多核苷酸。在另一个方面，本发明特征在于一种宿主细胞，其包含前述多核苷酸和/或载体。在一些实施方案中，该宿主细胞是真核的(例如哺乳动物细胞)。在一些实施方案中，该真核的细胞是293细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，酵母细胞，或植物细胞。在一些实施方案中，该宿主细胞是原核细胞。在一些实施方案中，该原核细胞是大肠杆菌。
在另一个方面，本发明特征在于一种生成本文中描述的任何抗体的方法，该方法包括在培养基中培养包含任何前述载体(例如表达载体)的宿主细胞。在一些实施方案中，该方法进一步包括自该宿主细胞或该培养基回收该抗体。在一些实施方案中，该宿主细胞是真核的细胞，例如哺乳动物细胞，例如293细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，酵母细胞，或植物细胞。在一些实施方案中，该宿主细胞是原核细胞。在一些实施方案中，该原核细胞是大肠杆菌。
在另一个方面，本发明特征在于一种免疫缀合物，其包含本文中描述的抗体中任一种和药剂(例如治疗剂，例如细胞毒剂)。
在另一个方面，本发明特征在于一种组合物，其包含本文中描述的抗体。在一些实施方案中，该组合物进一步包含药学可接受载剂，赋形剂，或稀释剂。在一些实施方案中，该组合物用于诊断用途(例如检测TIGIT表达水平，例如TIGIT蛋白质表达水平)。在一些实施方案中，该组合物是药物组合物。在一些实施方案中，该组合物进一步包含PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂。
在另一个方面，本发明特征在于本文中描述的抗体在制造用于在有所需要的受试者中治疗癌症或延迟癌症进展的药物中的用途。在一些实施方案中，该癌症选自由非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肾细胞癌，结直肠癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，膀胱癌，食道癌，间皮瘤，黑素瘤，头和颈癌，甲状腺癌，肉瘤，前列腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，胸腺癌，白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，蕈样肉芽肿，梅克尔细胞癌，和血液学恶性组成的组。在一些实施方案中，该骨髓瘤是MM。在一些实施方案中，该药物是为皮下，静脉内，肌肉内，表面，口服，透皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，心室内，或鼻内施用配制的。在一些实施方案中，该受试者是人。
在另一个方面，本发明特征在于本文中描述的抗体在制造用于在有所需要的受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的药物中的用途。在一些实施方案中，该免疫相关疾病与T细胞功能障碍性病症有关。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞耗尽。在一些实施方案中，该免疫相关疾病选自由未解决的急性感染，慢性感染，和肿瘤免疫组成的组。在一些实施方案中，该药物是为皮下，静脉内，肌肉内，表面，口服，透皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，心室内，或鼻内施用配制的。在一些实施方案中，该受试者是人。
在另一个方面，本发明特征在于本文中描述的抗体在制造用于在有所需要的受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的药物中的用途。在一些实施方案中，该药物是为皮下，静脉内，肌肉内，表面，口服，透皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，心室内，或鼻内施用配制的。在一些实施方案中，该受试者是人。
在另一个方面，本发明特征在于一种用于在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的本文中描述的抗体中任一种或多种(例如1，2，3，4，5，或6或更多种)，由此在该受试者中治疗该癌症或延迟该癌症进展。在一些实施方案中，该癌症选自由非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肾细胞癌，结直肠癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，膀胱癌，食道癌，间皮瘤，黑素瘤，头和颈癌，甲状腺癌，肉瘤，前列腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，胸腺癌，白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，蕈样肉芽肿，梅克尔细胞癌，和血液学恶性组成的组。在一些实施方案中，该骨髓瘤是MM。
在另一个方面，本发明特征在于一种用于在受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的本文中描述的抗体中一种或多种(例如1，2，3，4，5，或6或更多种)，由此在该受试者中治疗该免疫相关疾病或延迟该免疫相关疾病进展。在一些实施方案中，该免疫相关疾病与T细胞功能障碍性病症有关。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞耗尽。在一些实施方案中，该免疫相关疾病选自由未解决的急性感染，慢性感染，和肿瘤免疫组成的组。
在另一个方面，本发明特征在于一种在受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的本文中描述的抗体中一种或多种(例如1，2，3，4，5，或6或更多种)，由此在该受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能。在一些实施方案中，该方法进一步包括对该受试者施用PD-1轴结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂在施用该抗体之前或之后施用。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂与该抗体并行施用。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂选自由PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂组成的组。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合它的配体结合配偶。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L2。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂选自由MDX 1106(nivolumab)，MK-3475(pembrolizumab)，CT-011(pidilizumab)，MEDI-0680(AMP-514)，PDR001，REGN2810，和BGB-108组成的组。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合B7-1。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和B7-1二者。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，该抗PD-L1抗体选自由MPDL3280A(atezolizumab)，YW243.55.S70，MDX-1105，MEDI4736(durvalumab)，和MSB0010718C(avelumab)组成的组。在一些实施方案中，该抗体是MPDL3280A。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L2结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-L2结合拮抗剂是抗PD-L2抗体。在一些实施方案中，该PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
在一些实施方案中，上文描述的治疗方法中任一种可进一步包括对该受试者施用OX40结合激动剂。在一些实施方案中，该OX40结合激动剂在施用该抗体和/或该PD-1轴结合拮抗剂之前或之后施用。在一些实施方案中，该OX40结合激动剂与该抗体和/或该PD-1轴结合拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，该OX40结合激动剂选自由OX40激动性抗体，OX40L激动性片段，OX40寡聚受体，和OX40免疫粘附素组成的组。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体消减表达人OX40的细胞。在一些实施方案中，该表达人OX40的细胞是CD4+效应T细胞。在一些实施方案中，该表达人OX40的细胞是调节性T(Treg)细胞。在一些实施方案中，该消减是通过ADCC和/或吞噬的。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体以小于或等于约1nM的亲和力结合人OX40。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体以小于或等于约0.45nM的亲和力结合人OX40。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体以小于或等于约0.4nM的亲和力结合人OX40。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体以小于或等于0.3μg/ml的EC50结合人OX40。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体以小于或等于0.2μg/ml的EC50结合人OX40。在一些实施方案中，与在用该OX40激动性抗体治疗之前的增殖和/或细胞因子生成相比该OX40激动性抗体提高CD4+效应T细胞增殖和/或提高该CD4+效应T细胞的细胞因子生成。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体提高记忆T细胞增殖和/或记忆T细胞的细胞因子生成。在一些实施方案中，该细胞因子生成是IFN-γ生成。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体抑制Treg功能。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体抑制Treg对效应T细胞功能的遏制(例如效应T细胞增殖和/或细胞因子生成)。在一些实施方案中，该效应T细胞是CD4+效应T细胞。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体提高表达OX40的靶细胞中的OX40信号转导。在一些实施方案中，该OX40信号转导通过监测NFkB下游信号传导来检测。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含包含消除对人效应细胞的结合的突变的变体IgG1Fc多肽且具有相对于包含天然序列IgG1Fc部分的OX40激动性抗体降低的活性。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含包含DANA突变的变体IgG1Fc多肽。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)VH域，其包含(i)包含SEQ ID NO：278，279，或280的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：281，282，283，284，285，或286的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含选自SEQ IDNO：287，288，或289的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)VL域，其包含(i)包含SEQ ID NO：290的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：291的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQ IDNO：292，293，294，295，296，297，298，或299的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)包含SEQ ID NO：278的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：281的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：287的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQID NO：290的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：291的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含选自SEQ ID NO：292的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)包含SEQ ID NO：278的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：281的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：287的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：290的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：291的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含选自SEQ ID NO：297的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)包含SEQ IDNO：278的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：281的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：287的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：290的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：291的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含选自SEQ ID NO：298的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含与SEQ ID NO：300-325任一的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的VH序列。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含与SEQ ID NO：300的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的VH序列。在一些实施方案中，在SEQ ID NO：300中替代，插入，和/或删除了总共1至10个氨基酸。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含VH，其包含一种，两种，或三种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO：278的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：281的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO：287的氨基酸序列的HVR-H3。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含与SEQ ID NO：326-351任一的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的VL序列。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含与SEQ ID NO：326的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的VL。在一些实施方案中，在SEQ ID NO：326中替代，插入，和/或删除了总共1至10个氨基酸。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含VL，其包含一种，两种，或三种选自下述的HVR：(a)包含SEQ IDNO：290的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：291的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO：292的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)SEQID NO：300的VH序列；(b)SEQ ID NO：326的VL序列；或(c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)SEQ ID NO：319的VH序列；(b)SEQ IDNO：345的VL序列；或(c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)SEQ ID NO：320的VH序列；(b)SEQ ID NO：346的VL序列；或(c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体是抗体L106，抗体ACT35，MEDI6469，或MEDI0562。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体是全长IgG1抗体。在一些实施方案中，该OX40免疫粘附素是三聚OX40-Fc蛋白质。
在一些实施方案中，上文描述的治疗方法中任一种可进一步包括对该受试者施用降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体的药剂。在一些实施方案中，该一种或多种另外的免疫共抑制受体选自由PD-1，CTLA-4，LAG3，TIM3，BTLA，VISTA，B7H4，和CD96组成的组。在一些实施方案中，上文描述的治疗方法中任一种可进一步包括对该受试者施用另外的治疗剂。在一些实施方案中，该另外的治疗剂是化疗剂。在一些实施方案中，皮下，静脉内，肌肉内，表面，口服，透皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，心室内，或鼻内施用抗体。在一些实施方案中，该受试者是人。
在另一个方面，本发明特征在于一种试剂盒，其包含本文中描述的抗体中任一种或多种(例如1，2，3，4，5，或6或更多种)和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗体在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展的用法说明书。在一些实施方案中，该癌症选自由非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肾细胞癌，结直肠癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，膀胱癌，食道癌，间皮瘤，黑素瘤，头和颈癌，甲状腺癌，肉瘤，前列腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，胸腺癌，白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，蕈样肉芽肿，梅克尔细胞癌，和血液学恶性组成的组。在一些实施方案中，该受试者是人。在一些实施方案中，该骨髓瘤是MM。
在另一个方面，本发明特征在于一种试剂盒，其包含本文中描述的抗体中任一种或多种(例如1，2，3，4，5，或6或更多种)和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗体在受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的用法说明书。在一些实施方案中，该免疫相关疾病与T细胞功能障碍性病症有关。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞耗尽。在一些实施方案中，该免疫相关疾病选自由未解决的急性感染，慢性感染，和肿瘤免疫组成的组。在一些实施方案中，该受试者是人。
在另一个方面，本发明特征在于一种试剂盒，其包含本文中描述的抗体中任一种或多种(例如1，2，3，4，5，或6或更多种)和包装插页，该包装插页包含关于在受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的用法说明书。在一些实施方案中，该受试者是人。
附图简述
图1A是CHO-TIGIT结合测定法的示意图。
图1B是一幅图，显示图1A中描绘的CHO-TIGIT结合测定法的结果，以不同浓度使用表达人TIGIT的CHO细胞和所示OMT衍生的抗TIGIT抗体，如通过FACS分析的。
图1C是一幅图，显示图1A中描绘的CHO-TIGIT结合测定法的结果，以不同浓度使用表达食蟹猴TIGIT的CHO细胞和所示OMT衍生的抗TIGIT抗体，如通过FACS分析的。
图1D是一幅图，显示图1A中描绘的CHO-TIGIT结合测定法的结果，以不同浓度使用表达人TIGIT的CHO细胞和所示SD衍生的抗TIGIT抗体，如通过FACS分析的。
图1E是一幅图，显示图1A中描绘的CHO-TIGIT结合测定法的结果，以不同浓度使用表达食蟹猴TIGIT的CHO细胞和所示SD衍生的抗TIGIT抗体，如通过FACS分析的。
图2A是一幅图，作为抗体浓度的函数显示所示OMT衍生的抗TIGIT抗体对人CD4T细胞的结合。
图2B是一幅图，作为抗体浓度的函数显示所示OMT衍生的抗TIGIT抗体对人CD8T细胞的结合。
图2C是一幅图，作为抗体浓度的函数显示所示SD衍生的抗TIGIT抗体对人CD4T细胞的结合。
图2D是一幅图，作为抗体浓度的函数显示所示SD衍生的抗TIGIT抗体对人CD8T细胞的结合。
图3A是一幅图，作为抗体/Fab浓度的函数显示阻断ELISA测定法的结果，使用人PVR-Fc融合蛋白包被的板，人TIGIT，和所示抗TIGIT抗体(Fab或IgG格式的10A7和4.1D3.Q1E)或抗CSF1Fab对照。
图3B是一幅图，作为抗体/Fab浓度的函数显示阻断ELISA测定法的结果，使用食蟹猴PVR-Fc融合蛋白包被的板，食蟹猴TIGIT，和所示抗TIGIT抗体(Fab或IgG格式的10A7和4.1D3.Q1E)或抗CSF1Fab对照。
图3C是一幅图，作为抗体/Fab浓度的函数显示阻断ELISA测定法的结果，使用鼠PVR-Fc融合蛋白包被的板，鼠TIGIT，和所示抗TIGIT抗体(Fab或IgG格式的10A7和4.1D3.Q1E)或抗CSF1Fab对照。
图3D是一张表，显示图3A-3C中描绘的阻断ELISA测定法的结果。
图4A是CHO-TIGIT PVR阻断测定法的示意图。
图4B是一幅图，显示图4A中描绘的CHO-TIGIT PVR阻断测定法的结果，以不同浓度使用表达人TIGIT的CHO细胞和所示OMT衍生的抗TIGIT抗体，如通过FACS分析的。
图4C是一幅图，显示图4A中描绘的CHO-TIGIT PVR阻断测定法的结果，以不同浓度使用表达食蟹猴TIGIT的CHO细胞和所示OMT衍生的抗TIGIT抗体，如通过FACS分析的。
图4D是一幅图，显示图4A中描绘的CHO-TIGIT PVR阻断测定法的结果，以不同浓度使用表达人TIGIT的CHO细胞和所示SD衍生的抗TIGIT抗体，如通过FACS分析的。
图4E是一幅图，显示图4A中描绘的CHO-TIGIT PVR阻断测定法的结果，以不同浓度使用表达食蟹猴TIGIT的CHO细胞和所示SD衍生的抗TIGIT抗体，如通过FACS分析的。
图5A是一幅图，作为血清浓度(μg/ml)随时间(天)的函数显示10mg/kg静脉内施用后所示抗TIGIT抗体在食蟹猴中的药动学清除。
图5B是一张表，显示在图5A中的药动学清除实验中测试的每种抗体的计算清除值。
图5C是一幅图，作为血清浓度(μg/ml)随时间(天；d0-d7)的函数显示10mg/kg静脉内施用后抗TIGIT抗体h10A7.K4G3和4.1D3在食蟹猴中的药动学清除。
图5D是一张表，显示在图5C中的药动学清除实验中测试的抗TIGIT抗体h10A7.K4G3和4.1D3的计算清除值。
图6A是结合至人TIGIT的4.1D3Fab的晶体结构的透视图，标示了4.1D3重链(HC)和轻链(LC)区且以颜色区分。
图6B是与已知的PVR-TIGIT结构(PDB 3UDW)叠加的，结合至人TIGIT的4.1D3Fab的晶体结构的透视图，显示了4.1D3抗体和PVR具有交叠的针对TIGIT的结合位点。
图6C是结合至人TIGIT的4.1D3Fab的晶体结构的透视图，标示了PVR结合位点的相对定位。还标示了TIGIT的72-79环的相对定位。
图6D和6E是从不同视角看结合至人TIGIT的4.1D3Fab的晶体结构的透视图，鉴定了4.1D3(互补位残基)和TIGIT(表位残基)的某些关键接触残基。图6E中标示的加框残基通过丙氨酸扫描诱变鉴定为功能上重要的表位残基。
图7A是一幅图，显示每种鉴定的抗TIGIT抗体对所示人TIGIT丙氨酸扫描突变体的KD值(nM)。
图7B是一幅图，显示每种鉴定的抗TIGIT抗体对所示人TIGIT丙氨酸扫描突变体的KD值(nM)，针对野生型人TIGIT靶物标准化。TIGIT的导致结合亲和力下降1至10倍或大于10倍的丙氨酸扫描突变体分别以浅灰色和深灰色阴影标示。
图7C是人TIGIT结构的飘带透视图，以球形标示和代表通过丙氨酸扫描诱变鉴定为对于10A7识别重要的残基。
图7D是人TIGIT结构的飘带透视图，以球形标示和代表通过丙氨酸扫描诱变鉴定为对于h1A5识别重要的残基。
图7E是人TIGIT结构的飘带透视图，以球形标示和代表通过丙氨酸扫描诱变鉴定为对于4.1D3识别重要的残基。
图7F是人TIGIT结构的飘带透视图，以球形标示和代表通过丙氨酸扫描诱变鉴定为对于7.4A3识别重要的残基。
图7G是人TIGIT结构的飘带透视图，以球形标示和代表通过丙氨酸扫描诱变鉴定为对于4.1A4识别重要的残基。
图7H是人TIGIT结构的飘带透视图，以球形标示和代表通过丙氨酸扫描诱变鉴定为对于h6B2识别重要的残基。
图7I是人TIGIT结构的飘带透视图，以球形标示和代表通过丙氨酸扫描诱变鉴定为对于h7E7识别重要的残基。
图8是结合至人TIGIT的1A5Fab的晶体结构的透视图，标示了1A5重链(HC)和轻链(LC)区且以颜色区分。
图9是4.1D3-TIGIT，1A5-TIGIT，和10A7-TIGIT复合物的晶体结构的透视图，就TIGIT而言彼此叠加，显示了三种抗TIGIT抗体在不相同的表位处结合人TIGIT。
图10A是结合至人TIGIT的10A7Fab的晶体结构的透视图，标示了10A7重链(HC)和轻链(LC)区且以颜色区分。
图10B是结合至人TIGIT的10A7Fab的晶体结构的透视图，标示了PVR结合位点的相对定位。还标示了TIGIT的72-79环的相对定位。
图11是4.1D3(顶部左边)，10A7(中部中间)，和1A5(底部右边)抗体的一系列透视图及人TIGIT的Ser78，Ser80，和Lys82残基的相对定位。结构指示人TIGIT的Ser78，Ser80，和Lys82残基对于4.1D3是关键表位残基，但是对于10A7或1A5不是，其中这三个残基位于离抗体结合袋更远的距离。
图12是一系列图，显示自多发性骨髓瘤(MM)患者的骨髓分离的CD4+和CD8+T细胞上的CD45，PD-1，TIGIT，和CD226表达(顶部行)和自健康患者的外周血分离的CD4+和CD8+T细胞上的PD-1，TIGIT，和CD226表达(底部行)，如通过多色流式细胞术评估的。
图13是一系列流式细胞术图(左边)和伴随图(右边)，显示TIGIT和PD-1在MM患者的骨髓中的CD4+和CD8+T细胞上共表达。
发明详述
I.通用技术
本文中描述或提及的技术和规程是本领域技术人员一般充分了解且通常采用的，其使用常规方法，诸如例如广泛利用的方法进行，该方法记载于Sambrook等,MolecularCloning:ALaboratory Manual 3d edition(2001)Cold Spring Harbor LaboratoryPress,Cold Spring Harbor,N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel等编,(2003))；丛刊Methods in Enzymology(Academic Press,Inc.):PCR2:APractical Approach(M.J.MacPherson,B.D.Hames and G.R.Taylor编(1995)),Harlow和Lane编(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,and Animal Cell Culture(R.I.Freshney编(1987))；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait编,1984)；Methods inMolecular Biology,Humana Press；Cell Biology:ALaboratory Notebook(J.E.Cellis编,1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney)编,1987)；Introductionto Cell and Tissue Culture(J.P.Mather和P.E.Roberts,1998)Plenum Press；Cell andTissue Culture:Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,和D.G.Newell编,1993-8)J.Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller和M.P.Calos编,1987)；PCR:The Polymerase Chain Reaction,(Mullis等编,1994)；CurrentProtocols in Immunology(J.E.Coligan等编,1991)；Short Protocols in MolecularBiology(Wiley和Sons,1999)；Immunobiology(C.A.Janeway和P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies:APractical Approach(D.Catty.编,IRL Press,1988-1989)；Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P.Shepherd和C.Dean编,Oxford University Press,2000)；Using Antibodies:ALaboratory Manual(E.Harlow和D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999)；The Antibodies(M.Zanetti和J.D.Capra编,Harwood Academic Publishers,1995)；及Cancer:Principles andPractice of Oncology(V.T.DeVita等编,J.B.Lippincott Company,1993)。
II.定义
如本文中使用的，术语“TIGIT”或“具有Ig和ITIM域的T细胞免疫受体”指来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠)的任何天然TIGIT，除非另有说明。TIGIT在本领域也称作DKFZp667A205，FLJ39873，含有V集和免疫球蛋白域的蛋白9，含有V集和跨膜域的蛋白3，VSIG9，VSTM3，和WUCAM。该术语涵盖“全长”，未加工的TIGIT(例如具有SEQ ID NO：352的氨基酸序列的全长人TIGIT)以及因细胞中的加工所致的任何形式的TIGIT(例如具有SEQ ID NO：353的氨基酸序列的没有信号序列的经过加工的人TIGIT)。该术语还涵盖TIGIT的天然发生变体，例如剪接变体或等位变体。一种例示性的人TIGIT的氨基酸序列可以见UniProt登录号Q495A1。
术语“抗TIGIT抗体”和“特异性结合TIGIT的抗体”指能够以足够亲和力结合TIGIT，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向TIGIT的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(RIA)的测量，抗TIGIT抗体结合无关的，非TIGIT的蛋白质的程度小于该抗体对TIGIT的结合的约10％。在某些实施方案中，结合TIGIT的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10-8M或更少，例如10-8M到10-13M，例如10-9M到10-13M)的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗TIGIT抗体结合在来自不同物种的TIGIT中保守的TIGIT表位或TIGIT上容许跨物种反应性的表位，诸如包含氨基酸残基Ser78，Ser80，和Lys82的表位。
术语“抗体”包括单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体)，具有多表位特异性的抗体组合物，多特异性抗体(例如双特异性抗体)，双抗体，和单链分子，及抗体片段(例如Fab，F(ab’)2，和Fv)。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换使用。
当用于描述本文中公开的各种抗体时，术语“分离的抗体”意指已经鉴定且与/自表达它的细胞或细胞培养物分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指典型地会干扰该多肽的诊断或治疗用途的物质，而且可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在一些实施方案中，抗体纯化至大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如SDS-PAGE，等电聚焦(IEF)，毛细管电泳)或层析(例如离子交换或反相HPLC)测定的。关于用于评估抗体纯度的方法的综述，参见例如Flatman et al.,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。在优选的实施方案中，抗体会纯化至(1)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(2)根据使用考马斯蓝或优选银染色的非还原性或还原性条件下的SDS-PAGE，达到同质。因为多肽天然环境的至少一种成分不会存在，所以分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的多肽通常会通过至少一个纯化步骤来制备。
基本的4链抗体单元是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)构成的异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本的异四聚体单元及称作J链的另外多肽组成，而且包含10个抗原结合位点，而IgA抗体包含与J链组合的2-5个能聚合而形成多价装配物的基本4链单元。在IgG的情况中，4链单元通常是约150,000道尔顿。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而两条重链通过一个或多个二硫键彼此相连，二硫键的数目取决于重链的同种型。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫桥。每条重链在N-末端具有一个可变域(VH)，接着是三个(对于α和γ链)或四个(对于μ和ε同种型)恒定域(CH)。每条轻链在N-末端具有一个可变域(VL)，接着是其另一端的一个恒定域(CL)。VL与VH排列在一起，而CL与重链第一恒定域(CH1)排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变域之间形成界面。一个VH和一个VL一起配对而形成一个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basicand Clinical Immunology,第8版,Daniel P.Sties,Abba I.Terr and TristramG.Parsolw(编),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,第71页和第6章。根据其恒定域氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的L链可归入两种截然不同类型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。根据其重链恒定域(CH)氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类别或同种型。有五类免疫球蛋白：IgA，IgD，IgE，IgG和IgM，分别具有称作α，δ，ε，γ和μ的重链。根据CH序列和功能的较小差异，γ和α类可进一步分为亚类，例如人类表达下列亚类：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3，IgG4，IgA1和IgA2。
抗体的“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链可变域和轻链可变域分别可以称为“VH”和“VL”。这些结构域一般是抗体的最易变部分(相对于同一类的其它抗体而言)且包含抗原结合位点。
术语“可变的”指可变域中的某些区段在抗体间序列差异广泛的实情。V结构域介导抗原结合且限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，变异性并非均匀分布于可变域的整个跨度。而是，它集中于轻链和重链可变域二者中称作高变区(HVR)的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR区，它们大多采取β-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成β-折叠片结构一部分的三个HVR连接。每条链中的HVR通过FR区非常接近的保持在一起，并与另一条链的HVR一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等,Sequences of Immunological Interest,第5版,National Institute of Health,Bethesda,MD.(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体在抗体依赖性细胞的细胞毒性中的参与。
“阻断性抗体”或“拮抗性抗体”是抑制或降低其结合的抗原的生物学活性的抗体。在一些实施方案中，阻断性抗体或拮抗性抗体实质性或完全抑制抗原的生物学活性。本发明的抗TIGIT抗体可阻断经由PVR，PVRL2，和/或PVRL3的信号传导，从而自针对抗原刺激的功能障碍性状态恢复T细胞的功能性应答(例如增殖，细胞因子生成，靶细胞杀伤)
“激动性抗体”或“活化性抗体”是通过与其结合的抗原增强或启动信号传导的抗体。在一些实施方案中，激动性抗体在不存在天然配体的情况中引起或激活信号传导。本发明的OX40激动性抗体可提高记忆T细胞增殖，提高记忆T细胞的细胞因子生成，抑制Treg细胞功能，和/或抑制效应T细胞功能(诸如效应T细胞增殖和/或细胞因子生成)的Treg细胞遏制。
“表位”是抗原中抗体特异性结合的部分。对于多肽抗原，表位一般是约4-15个氨基酸残基的肽部分，可以是连续的或不连续的。
与参照抗体“结合相同表位的抗体”指在竞争测定法中将参照抗体对其抗原的结合阻断50％或更多的抗体，且相反，参照抗体在竞争测定法中将该抗体对其抗原的结合阻断50％或更多。本文中提供了例示性的竞争测定法。
“互补位”意指抗体中选择性结合抗原表位的部分。互补位典型地包括来自抗体的VH和VL链的，特别是来自抗体的HVR区的氨基酸。
术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的天然存在突变和/或翻译后修饰(例如异构化，酰胺化)外。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性以外，单克隆抗体的优势在于它们是由杂交瘤培养物合成的，未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”指示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，有待依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法(例如Kohler and Milstein.,Nature,256:495-97(1975)；Hongo等,Hybridoma,14(3):253-260(1995),Harlow等,Antibodies:ALaboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.1988)；Hammerling等,in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))，重组DNA法(参见例如美国专利No.4,816,567)，噬菌体展示技术(参见例如Clackson等,Nature 352:624-628(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Nat.Acad.Sci.USA101(34):12467-12472(2004)；Lee等,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004))，及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术(参见例如WO1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits等,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann等,Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利No.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016；Marks等,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild等,Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996)；Lonberg and Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。
术语“裸抗体(裸露的抗体)”指未缀合细胞毒性模块或放射性标记物的抗体。
术语“全长抗体”，“完整抗体”和“全抗体”可互换使用，指基本上完整形式的抗体，与抗体片段不同。具体而言，完整抗体包括那些具有重链和轻链(包括Fc区)的。恒定域可以是天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。在有些情况中，完整抗体可具有一项或多项效应器功能。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合和/或可变区。抗体片段的例子包括Fab，Fab’，F(ab’)2和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5,641,870,实施例2；Zapata等,Protein Eng.8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称作“Fab”片段，和一个残余“Fc”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。Fab片段由完整L链及H链可变区域(VH)和重链第一恒定域(CH1)组成。每个Fab片段对于抗原结合是单价的，即它具有一个抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体产生一个较大F(ab’)2片段，它大体相当于两个通过二硫键相连的Fab片段，具有不同抗原结合活性且仍能够交联抗原。Fab’片段因在CH1结构域的羧基末端增加了少数残基而与Fab片段有所不同，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab’的称谓。F(ab’)2抗体片段最初是作为成对Fab’片段生成的，在Fab’片段之间具有铰链半胱氨酸。还知道抗体片段的其它化学偶联。
Fc片段包含通过二硫键保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应器功能由Fc区中的序列来决定，该区域也受到在某些类型的细胞上找到的Fc受体(FcR)识别。
“Fv”是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密，非共价结合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠中生发出六个高变环(重链和轻链各3个环)，贡献出抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或只包含对抗原特异的三个HVR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于完整结合位点。
“单链Fv”，也缩写成“sFv”或“scFv”，是包含连接成一条多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选的是，sFv多肽在VH与VL结构域之间进一步包含多肽接头，其使得sFv能够形成结合抗原的期望结构。关于sFv的综述参见Pluckthun，于《The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies》，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，New York，第269-315页，1994。
本发明抗体的“功能性片段”包含完整抗体的一部分，一般包括完整抗体的抗原结合或可变区或抗体的保留或具有改良FcR结合能力的Fc区。抗体片段的例子包括线性抗体，单链抗体分子和自抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“双抗体”指通过在VH和VL结构域之间使用短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(见上一段)而制备的小型抗体片段，由于接头短，使得V结构域实行链间而非链内配对，由此导致二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的VH和VL结构域存在于不同多肽链上。双抗体更详细的描述于例如EP404,097；WO 93/11161；Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)。
单克隆抗体在本文中明确包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(美国专利No.4,816,567；Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其中抗体的抗原结合区衍生自通过用例如感兴趣抗原免疫短尾猴(macaque monkey)而生成的抗体。如本文中所使用的，“人源化抗体”是“嵌合抗体”的一个子集。
非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的HVR残基(下文限定)用具有期望特异性，亲和力和/或能力的非人物种(供体抗体)(诸如小鼠，大鼠，家兔或非人灵长类动物)的HVR残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架(“FR”)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体中或在供体抗体中没有找到的残基。进行这些修饰可以是为了进一步改进抗体的性能，诸如结合亲和力。一般而言，人源化抗体将包含至少一个，通常两个基本上整个如下的可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白序列的高变环，且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白序列的FR区，尽管FR区可包含一处或多处改进抗体性能(诸如结合亲和力，异构化，免疫原性等)的个别FR残基替代。FR中这些氨基酸替代的数目，H链中通常不超过6处，L链通常不超过3处。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见例如Jones等,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等,Nature332:323-329(1988)；及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。还可参见例如Vaswani and Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle and Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；及美国专利No.6,982,321和7,087,409。
“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.227:381(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581(1991))。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法：Cole等,MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)；Boerner等,J.Immunol.147(1):86-95(1991)。还可参见van Dijk and van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.,5:368-74(2001)。可通过给已经修饰以应答抗原性刺激而生成人抗体但其内源基因座已经失去能力的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠(xenomice)施用抗原来制备人抗体(参见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584，关于XENOMOUSETM技术)。还可参见例如Li等,Proc.Natl.Ascad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)，关于经人B-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。
术语“高变区”，“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR：三个在VH中(H1，H2，H3)，三个在VL中(L1，L2，L3)。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR的最大多样性，而且认为特别是H3在赋予抗体以精密特异性中发挥独特作用。参见例如Xu等，Immunity 13:37-45(2000)；Johnsonand Wu,于:Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo编,Human Press,Totowa,NJ,2003)。事实上，仅由重链组成的天然存在camelid抗体在缺乏轻链时是有功能的且稳定的。参见例如Hamers-Casterman等,Nature363:446-448(1993)；Sheriff等,NatureStruct.Biol.3:733-736(1996)。
本文中使用且涵盖许多HVR的叙述。Kabat互补决定区(CDR)是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))。Chothia改为指结构环的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM HVR代表Kabat HVR与Chothia结构环之间的折衷，而且得到OxfordMolecular的AbM抗体建模软件的使用。“接触”HVR是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些HVR中每一个的残基。
Figure BDA0001605976190000261
HVR可包括如下“延伸的HVR”：VL中的24-36或24-34(L1)，46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)及VH中的26-35(H1)，50-65或49-65(H2)和93-102，94-102，或95-102(H3)。对于这些定义中的每一个，可变域残基是依照Kabat等,见上文编号的。
表述“依照Kabat的可变域残基编号方式”或“依照Kabat的氨基酸位置编号方式”及其变体指Kabat等,见上文中用于抗体重链可变域或轻链可变域编辑的编号系统。使用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含较少或另外的氨基酸，对应于可变域FR或HVR的缩短或插入。例如，重链可变域可包含H2残基52后的单一氨基酸插入(依照Kabat为残基52a)及重链FR残基82后的插入残基(例如依照Kabat为残基82a，82b和82c等)。给定抗体的Kabat残基编号方式可通过将抗体序列与“标准”Kabat编号序列对比同源区来确定。
“框架”或“FR”残基指可变域中除本文中所定义的HVR残基外的那些残基。
“人共有框架”或“受体人框架”指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常见的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列选集来自可变域序列亚组。通常，序列亚组是如Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中的亚组。例子包括对于VL，亚组可以是亚组κI，κII，κIII或κIV，如在Kabat等,见上文中的。另外，对于VH，亚组可以是亚组I，亚组II，或亚组III，如在Kabat等,见上文中的。或者，人共有框架可以自上述框架衍生，其中特定残基，诸如人框架残基通过比对供体框架序列与各种人框架序列的集合基于其与供体框架的同源性选择。自人免疫球蛋白框架“衍生”的受体人框架或人共有框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有先前存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，先前存在的氨基酸变化的数目是10或更少，9或更少，8或更少，7或更少，6或更少，5或更少，4或更少，3或更少，或2或更少。
“VH亚组III共有框架”包含从Kabat等，见上文的可变重链亚组III中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VH亚组III共有框架氨基酸序列包含下列各序列中每一项的至少一部分或整个全部：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(HC-FR1)(SEQ ID NO:229)，WVRQAPGKGLEWV(HC-FR2)(SEQ ID NO:230)，RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(HC-FR3)(SEQ ID NO:232)，和WGQGTLVTVSA(HC-FR4)(SEQ ID NO:232)。
“VLκI共有框架”包含从Kabat等，见上文的可变轻链κ亚组I中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VL亚组I共有框架氨基酸序列包含下列各序列中每一项的至少一部分或整个：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(LC-FR1)(SEQ ID NO:233)，WYQQKPGKAPKLLIY(LC-FR2)(SEQ ID NO:234)，GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(LC-FR3)(SEQ ID NO:235)，和FGQGTKVEIKR(LC-FR4)(SEQ ID NO:236)。
指定位置(例如Fc区的)处的“氨基酸修饰”指指定残基的替代或删除，或指定残基附近至少一个氨基酸残基的插入。指定残基“附近”的插入意味着其一个至两个残基内的插入。插入可以在指定残基的N端或C端。本文中优选的氨基酸修饰是替代。
“亲和力”指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原，例如TIGIT)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有指示，如本文中使用的，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)来表述。亲和力可以通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于测量结合亲和力的具体的说明性和例示性的实施方案。
“亲和力成熟的”抗体指在抗体的一个或多个HVR中具有一处或多处改变，导致该抗体对抗原的亲和力与没有这些改变的亲本抗体相比有所改进的抗体。在一个实施方案，亲和力成熟的抗体具有纳摩尔或甚至皮摩尔量级的对靶抗原的亲和力。亲和力成熟的抗体可通过本领域已知规程来生成。例如，Marks等,Bio/Technology 10:779-783(1992)记载了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。以下文献记载了HVR和/或框架残基的随机诱变：例如，Barbas等,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813(1994)；Schier等,Gene 169:147-155(1995)；Yelton等,J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jackson等,J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；Hawkins等,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。
如本文中使用的，术语“结合”，“特异性结合”，或“对…特异性的”指可测量且可再现的相互作用，诸如靶物和抗体之间的结合，其确定在存在分子(包括生物学分子)的异质群体的情况中靶物的存在。例如，特异性结合靶物(其可以是表位)的抗体是以比其结合其它靶物更大的亲和力，亲合力，更容易，和/或以更大的持续时间结合此靶物的抗体。在一个实施方案中，抗体结合无关靶物的程度小于抗体结合靶物的约10％，如例如通过放射性免疫测定法(RIA)测量的。在某些实施方案中，特异性结合靶物的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，或≤0.1nM的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗体特异性结合蛋白质上在来自不同物种的蛋白质间保守的表位。在另一个实施方案中，特异性结合可以包括但不需要排他结合。如本文中使用的，该术语可以例如由具有10-4M或更低，或者10-5M或更低，或者10-6M或更低，或者10-7M或更低，或者10-8M或更低，或者10-9M或更低，或者10-10M或更低，或者10-11M或更低，或者10-12M或更低的针对靶物的Kd或10-4M至10-6M或10-6M至10-10M或10-7M至10-9M的范围中的Kd的分子展现。正如熟练技术人员会领会的，亲和力和Kd值反相关。针对抗原的高亲和力通过低Kd值来测量。在一个实施方案中，术语“特异性结合”指如下的结合，即分子在没有实质性结合任何其它多肽或多肽表位的情况下结合特定多肽或特定多肽上的表位。
如本文中使用的，术语“免疫粘附素”指组合异源蛋白质(“粘附素”)的结合特异性与免疫球蛋白恒定域的效应器功能的抗体样分子。在结构上，免疫粘附素包含具有与抗体的抗原识别和结合位点不同的期望结合特异性的氨基酸序列(即，是“异源的”)和免疫球蛋白恒定域序列的融合物。免疫粘附素分子的粘附素部分通常是至少包含受体或配体的结合位点的连续氨基酸序列。免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定域序列可以获自任何免疫球蛋白，诸如IgG-1，IgG-2(包括IgG2A和IgG2B)，IgG-3，或IgG-4亚型，IgA(包括IgA-1和IgA-2)，IgE，IgD或IgM。优选地，Ig融合物包含用本文中描述的多肽或抗体的域替换Ig分子内的至少一个可变区的取代。在一个特别优选的实施方案中，免疫球蛋白融合物包括IgG1分子的铰链，CH2和CH3，或铰链，CH1，CH2和CH3区。为了生成免疫球蛋白融合物，还可见1995年6月27日公告的美国专利No.5,428,130。例如，用于本文中的联合疗法的有用的免疫粘附素包括包含与免疫球蛋白质序列的恒定域融合的OX40L的胞外或OX40结合部分或OX40的胞外或OX40L结合部分的多肽，诸如OX40ECD–Fc或OX40L ECD–Fc。Ig Fc和细胞表面受体ECD的免疫粘附素组合有时称作可溶性受体。
“融合蛋白”和“融合多肽”指具有两个共价连接在一起的部分的多肽，其中每个部分是具有不同特性的多肽。特性可以是生物学特性，诸如体外或体内活性。特性也可以是简单的化学或物理特性，诸如对靶分子的结合，反应的催化，等等。两个部分可以通过单一肽键直接连接，或者经由肽接头连接，但是为彼此以符合读码框的方式。
术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C端区，包括天然序列Fc区和变异Fc区。虽然免疫球蛋白重链Fc区的边界可以变化，但是人IgG重链Fc区通常定义为自其Cys226或Pro230位置的氨基酸残基至羧基末端的区段。Fc区的C-末端赖氨酸(残基447，依照EU编号系统)可以消除，例如在生产或纯化抗体的过程中，或者通过对编码抗体重链的核酸进行重组工程改造。因而，完整抗体的组合物可包括所有K447残基都被消除的抗体群，无一K447残基被消除的抗体群，以及混合了有和无K447残基的抗体的抗体群。对于在本发明的抗体中使用而言合适的天然序列Fc区包括人IgG1，IgG2(IgG2A，IgG2B)，IgG3和IgG4。
“Fc受体”或“FcR”描述结合抗体Fc区的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体的FcR(γ受体)，包括FcγRI，FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位变体和可变剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在其胞质结构域中。活化受体FcγRIIA在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见M.
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Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR的综述参见Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)；Capel等,Immunomethods 4:25-34(1994)；de Haas等,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)。术语“FcR”在本文中涵盖其它FcR，包括那些未来将会鉴定的。
“人效应细胞”指表达一种或多种FcR并行使效应器功能的白细胞。在某些实施方案中，该细胞至少表达FcγRIII并行使ADCC效应器功能。介导ADCC的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)，天然杀伤(NK)细胞，单核细胞，细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞。效应细胞可以从其天然来源分离，例如血液。
“效应器功能”指那些可归于抗体Fc区且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。
短语“实质性降低”或“实质性不同”在用于本文时表示两个数值(通常一个与某分子有关而另一个与参照/比较分子有关)之间足够高的差异程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有统计学显著性。作为参照/比较分子该数值的函数，所述两个数值之间的差异例如大于约10％，大于约20％，大于约30％，大于约40％，和/或大于约50％。
短语“基本上相似”或“基本上相同”在用于本文时表示两个数值(例如，一个涉及本发明的抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的相似程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有很小的或没有生物学和/或统计学显著性。作为参照/比较值的函数，所述两个数值之间的差异例如小于约50％，小于约40％，小于约30％，小于约20％，和/或小于约10％。
术语“拮抗剂”以最广义使用，包括部分或完全阻断，抑制，或中和本文中所公开的天然多肽的生物学活性的任何分子。类似的，术语“激动剂”以最广义使用，包括模拟本文中所公开的天然多肽的生物学活性的任何分子。合适的激动剂或拮抗剂分子明确包括激动性或拮抗性抗体或抗体片段，天然多肽的片段或氨基酸序列变体，肽，反义寡核苷酸，有机小分子等。用于鉴定多肽的激动剂或拮抗剂的方法可包括使多肽接触候选激动剂或拮抗剂分子并测量通常与所述多肽有关的一种或多种生物学活性的可检测变化。
如本文中使用的，靶分子的“拮抗性抗体”指或是通过降低靶分子编码核酸的转录或翻译，或是通过抑制或阻断靶分子活性，或二者来干扰靶分子正常机能的抗体。例如，TIGIT的拮抗性抗体可以考虑或是通过降低TIGIT编码核酸的转录或翻译，或是通过抑制或阻断TIGIT多肽活性，或二者来干扰TIGIT正常功能的抗体或其抗TIGIT结合片段。本领域普通技术人员会理解，在一些情况中，TIGIT的拮抗性抗体可拮抗一种TIGIT活性而不影响另一种TIGIT活性。例如，供本文中的某些方法中使用的期望的TIGIT的拮抗性抗体是如下的TIGIT的拮抗性抗体，其响应PVR相互作用，PVRL3相互作用，或PVRL2相互作用之一而拮抗TIGIT活性，例如不影响或最小限度影响任何其它TIGIT相互作用。
术语“TIGIT”拮抗剂和“TIGIT活性或TIGIT表达的拮抗剂”可互换使用，指通过降低TIGIT编码核酸的转录或翻译，或通过抑制或阻断TIGIT多肽活性，或二者来干扰TIGIT正常发挥功能的化合物。TIGIT拮抗剂的例子包括但不限于反义多核苷酸，干扰性RNA，催化性RNA，RNA-DNA嵌合物，TIGIT特异性适体，抗TIGIT抗体，抗TIGIT抗体的TIGIT结合片段，TIGIT结合小分子，TIGIT结合肽，和其它特异性结合TIGIT的多肽(包括但不限于一种或多种TIGIT配体的TIGIT结合片段，任选融合至一个或多个别的结构域)，使得TIGIT拮抗剂与TIGIT之间的相互作用导致TIGIT活性或表达降低或停止。本领域普通技术人员会理解，在有些情况中，TIGIT拮抗剂可拮抗一种TIGIT活性但不影响另一种TIGIT活性。例如，供本文中某些方法中使用的想要的TIGIT拮抗剂是响应例如PVR相互作用，PVRL3相互作用，或PVRL2相互作用之一而拮抗TIGIT活性但不影响或最低限度影响任何其它TIGIT相互作用的TIGIT拮抗剂。
术语“PVR拮抗剂”和“PVR活性或PVR表达的拮抗剂”可互换使用，指通过降低PVR编码核酸的转录或翻译，或通过抑制或阻断PVR多肽活性，或二者来干扰PVR正常发挥功能的化合物。PVR拮抗剂的例子包括但不限于反义多核苷酸，干扰性RNA，催化性RNA，RNA-DNA嵌合物，PVR特异性适体，抗PVR抗体，抗PVR抗体的PVR结合片段，PVR结合小分子，PVR结合肽，和其它特异性结合PVR的多肽(包括但不限于一种或多种PVR配体的PVR结合片段，任选融合至一个或多个别的结构域)，使得PVR拮抗剂与PVR之间的相互作用导致PVR活性或表达降低或停止。本领域普通技术人员会理解，在有些情况中，PVR拮抗剂可拮抗一种PVR活性但不影响另一种PVR活性。例如，供本文中某些方法中使用的想要的PVR拮抗剂是响应TIGIT相互作用而拮抗PVR活性但不影响PVR-CD96和/或PVR-CD226相互作用的PVR拮抗剂。
术语“PD-1轴结合拮抗剂”指如下的分子，其抑制PD-1轴结合配偶与一种或多种它的结合配偶相互作用，从而去除源自PD-1信号传导轴上的信号传导的T细胞功能障碍–一项结果是恢复或增强T细胞功能(例如增殖，细胞因子生成，靶细胞杀伤)。如本文中使用的，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-L1，PD-L2)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1结合它的结合配偶中一种或多种的分子。在一个特定方面，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和/或PD-L2。例如，PD-1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用的信号转导的抗PD-1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-1介导信号传导)，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的MDX-1106(nivolumab)。在另一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的MK-3475(lambrolizumab)。在另一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的CT-011(pidilizumab)。在另一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的MEDI-0680(AMP-514)。在另一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的PDR001。在另一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的REGN2810。在另一个具体的方面，PD-1结合拮抗剂是本文中描述的BGB-108。
术语“PD-L1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1，B7-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1结合它的结合配偶的分子。在一个特定方面，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和/或B7-1。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1，B7-1)相互作用的信号转导的抗PD-L1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-L1介导信号传导)，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一个具体的方面，抗PD-L1抗体是本文中描述的YW243.55.S70。在另一个具体的方面，抗PD-L1抗体是本文中描述的MDX-1105。在仍有另一个具体的方面，抗PD-L1抗体是本文中描述的MPDL3280A(atezolizumab)。在仍有另一个具体的方面，抗PD-L1抗体是本文中描述的MEDI4736(durvalumab)。在仍有另一个具体的方面，抗PD-L1抗体是本文中描述的YW243.55.S70。在仍有另一个具体的方面，抗PD-L1抗体是本文中描述的MSB0010718C(avelumab)。
术语“PD-L2结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2结合它的结合配偶中一种或多种的分子。在一个特定方面，PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2结合PD-1。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导的抗PD-L2抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L2结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-L2介导信号传导)，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
如本文中使用的，术语“OX40”指来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠)的任何天然OX40，除非另有说明。该术语涵盖“全长”，未加工的OX40以及因细胞中的加工所致的任何形式的OX40。该术语还涵盖OX40的天然发生变体，例如剪接变体或等位变体。一种例示性的人OX40的氨基酸序列显示于SEQ IDNO:354。
“OX40活化”指OX40受体的活化。通常，OX40活化导致信号转导。
术语“适体”指能够结合靶分子(诸如多肽)的核酸分子。例如，本发明的适体能特异性结合TIGIT多肽，或调控TIGIT表达的信号传导途径中的分子。适体的生成和治疗用途是本领域已完善建立的。参见例如美国专利No.5,475,096，及
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(Eyetech,New York)用于治疗年龄相关黄斑变性的治疗功效。
术语“功能障碍”在免疫功能障碍的背景中指降低的对抗原性刺激的免疫响应性的状态。
如本文中使用的，术语“功能障碍性”还包括对抗原识别的不感受或不响应，特别地，将抗原识别转化成下游T细胞效应器功能，诸如增殖，细胞因子生成(例如γ-干扰素)和/或靶细胞杀伤的能力受损。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”指其中结合到某些细胞毒性细胞(例如NK细胞，嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上的分泌型免疫球蛋白使得这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的靶细胞，随后用细胞毒素杀死靶细胞的细胞毒性形式。介导ADCC的主要细胞，NK细胞，只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI，FcγRII和FcγRIII。Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)第464页表3总结了造血细胞上的FcR表达。为了评估目的分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定法，诸如美国专利No.5,500,362或5,821,337或美国专利No.6,737,056(Presta)中所记载的。可用于此类测定法的效应细胞包括PBMC和NK细胞。或者/另外，可在体内评估目的分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如Clynes et al.,PNAS(USA)95:652-656(1998)中所披露的。本文实施例中提供了用于评估ADCC活性的一种例示性测定法。
术语“无反应性”指源自经由T细胞受体投递的不完全或不充分信号(例如在缺乏ras活化的情况中胞内Ca+2增加)的对抗原刺激的无响应性状态。T细胞无反应性也可以在缺乏共刺激的情况中在用抗原刺激后发生，生成即使在共刺激的背景中对抗原的随后活化变得不感受的细胞。无响应性状态经常可以被白介素-2(IL-2)的存在超越。无反应性T细胞不经历克隆扩充和/或获得效应器功能。
“增强T细胞功能”意指诱导，引起或刺激效应或记忆T细胞具有更新，持续或放大的生物学功能。增强T细胞功能的例子包括：相对于干预前的此类水平，升高的来自CD8+效应T细胞的γ-干扰素分泌，升高的来自CD4+记忆和/或效应T细胞的γ-干扰素分泌，升高的CD4+效应和/或记忆T细胞的增殖，升高的CD8+效应T细胞的增殖，升高的抗原响应性(例如清除)。在一个实施方案中，增强的水平是至少50％，或者60％，70％，80％，90％，100％，120％，150％，200％。测量此增强的方式是本领域普通技术人员已知的。
术语“耗尽”指作为源自在许多慢性感染和癌症期间发生的持续TCR信号传导的T细胞功能障碍状态的T细胞耗尽。它与无反应性的区别在于它不经由不完全或缺乏的信号传导，而是由于持续信号传导而发生。它以较差的效应器功能，持续的抑制性受体表达和与功能性效应或记忆T细胞的转录状态不同的转录状态限定。耗尽阻止感染和肿瘤的最佳控制。耗尽可以源自外在负调节途径(例如免疫调节细胞因子)及细胞固有负调节(共刺激)途径(PD-1，B7-H3，B7-H4，等等)两者。
“增强T细胞功能”意指诱导，引起或刺激T细胞具有持续或放大的生物学功能，或者恢复或再活化耗尽的或无活性的T细胞。增强T细胞功能的例子包括：相对于干预前的此类水平，升高的来自CD8+T细胞的γ-干扰素分泌，升高的增殖，升高的抗原响应性(例如病毒，病原体，或肿瘤清除)。在一个实施方案中，增强的水平是至少50％，或者60％，70％，80％，90％，100％，120％，150％，200％。测量此增强的方式是本领域普通技术人员已知的。
“T细胞功能障碍性病症”是以降低的对抗原性刺激的响应性为特征的T细胞病症或状况。在一个具体的实施方案中，T细胞功能障碍性病症是明确与经由OX40和/或OX40L的不适当降低的信号传导有关的病症。在另一个实施方案中，T细胞功能障碍性病症是如下的病症，其中T细胞是无反应性的或者具有降低的分泌细胞因子，增殖，或者执行细胞裂解活性的能力。在一个具体的方面，降低的响应性导致对表达免疫原的病原体或肿瘤的无效控制。以T细胞功能障碍为特征的T细胞功能障碍性病症的例子包括未解决的急性感染，慢性感染和肿瘤免疫。
“肿瘤免疫”指肿瘤逃避免疫识别和清除的过程。如此，作为治疗概念，肿瘤免疫在此类逃避减弱时得到“治疗”，并且肿瘤被免疫系统识别并攻击。肿瘤识别的例子包括肿瘤结合，肿瘤收缩和肿瘤清除。
“免疫原性”指特定物质引发免疫应答的能力。肿瘤是免疫原性的，并且增强肿瘤免疫原性有助于通过免疫应答清除肿瘤细胞。增强肿瘤免疫原性的例子包括但不限于用OX40结合激动剂(例如抗OX40激动性抗体)和TIGIT抑制剂(例如抗TIGIT阻断性抗体)处理。
“持续应答”指在停止处理后对降低肿瘤生长的持续影响。例如，与施用阶段开始时的大小相比，肿瘤大小可以保持为相同或更小。在一些实施方案中，持续应答具有与处理持续时间至少相同的持续时间，处理持续时间的至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，或3.0倍长度。
“载体”在用于本文时包括药剂学可接受的载体，赋形剂或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。通常，生理学可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学可接受载体的例子包括缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM，聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
“包装插页”指通常包括在药物的商业包装中的说明书，它们包含有关涉及此类药物应用的适应征，用法，剂量，施用，禁忌症，与该包装产品联合的其它药物和/或警告的信息。
如本文中使用的，“治疗/处理”指设计用于改变临床病理学过程期间所治疗个体或细胞的自然进程的临床干预。治疗的期望效果包括降低疾病进展速率，改善或减轻疾病状态，和消退或改善的预后。例如，若一种或多种与癌症有关的症状是减轻或消除的，包括但不限于对癌性细胞的降低增殖(或破坏)，减少源自疾病的症状，提高那些患有疾病的个体的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，延迟疾病的进展，和/或延长个体存活，则个体得到成功“治疗”。
如本文中使用的，“延迟疾病的进展”意指推迟，阻碍，减缓，延迟，稳定，和/或延缓疾病(诸如癌症)的形成。根据疾病史和/或治疗的个体，此延迟可以是不同时间长度的。如对于本领域技术人员明显的是，充分或显著的延迟实质上可以涵盖预防，因为个体不形成疾病。例如，可以延迟晚期阶段癌症，诸如转移的形成。
如本文中使用的，术语“降低或抑制癌症复发”意指降低或抑制肿瘤或癌症复发或肿瘤或癌症进展。
如本文中使用的，“癌症”和“癌性”指或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调控的生理疾患。此定义中包括良性和恶性癌症以及休眠肿瘤或微转移。癌症的例子包括但不限于癌，骨髓瘤，淋巴瘤，母细胞瘤，肉瘤，和白血病。此类癌症的更具体例子包括多发性骨髓瘤(MM)，鳞状细胞癌，肺癌(包括小细胞肺癌，非小细胞肺癌，肺的腺癌，和肺的鳞癌)，腹膜癌，肝细胞癌，胃的或胃癌(包括胃肠癌)，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，乳腺癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌，唾液腺癌，肾或肾的癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝的癌，各种类型的头和颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，小淋巴细胞性(SL)NHL，中级/滤泡性NHL，中级弥漫性NHL，高级成免疫细胞性NHL，高级成淋巴细胞性NHL，高级小无核裂细胞性NHL，贮积病(bulky disease)NHL，套细胞淋巴瘤，AIDS相关淋巴瘤，和瓦尔登斯特伦氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)，毛细胞性白血病，慢性成髓细胞性白血病，和移植后淋巴增殖性病症(PTLD)，以及与瘢痣病(phakomatoses)，水肿(诸如与脑瘤有关的)和梅格斯氏(Meigs)综合征有关的异常血管增殖。
术语“肿瘤”指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性细胞和组织。术语“癌症”，“癌性”，“细胞增殖性病症”，“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。
如本文中使用的，“转移”指癌自其原发部位传播至身体中的其它位置。癌细胞能脱离原发性肿瘤，渗透入淋巴和血管，经由血流而循环，和在身体中其它地方的正常组织中的远端病灶(转移)中生长。转移可以是当地的或远端的。转移是一个连续过程，视肿瘤细胞自原发性肿瘤脱落，经由血流而传播，并在远端部位停止而定。在新的部位，该细胞建立血供且能生长至形成危及生命的团块。肿瘤细胞内的刺激性和抑制性分子途径调节这种行为，而且肿瘤细胞与远端部位中的宿主细胞之间的相互作用也是重要的。
“有效量”至少是实现特定病症的可测量改善或预防需要的最小浓度。本文中的有效量可以随诸如患者的疾病状态，年龄，性别，和重量，和抗体引发个体中期望的应答的能力等因素而变化。有效量也是治疗有益效果超过治疗的任何毒性或不利效果的量。为了预防性使用，有益或期望的结果包括如下的结果，诸如消除或降低风险，减轻严重性，或者延迟疾病的发作，包括疾病的生物化学，组织学和/或行为症状，其并发症和疾病形成期间呈现的中间病理学表型。为了治疗性使用，有益或期望的结果包括临床结果，诸如减少源自疾病的一种或多种症状，提高那些患有疾病的对象的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，增强另一种药物的效果(诸如经由靶向)，延迟疾病的进展，和/或延长存活。在癌症或肿瘤的情况中，药物的有效量在减少癌细胞的数目；降低肿瘤大小；抑制(即在一定程度上减缓或者期望地停止)癌细胞浸润入外周器官中；抑制(即在一定程度上减缓且期望地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻一种或多种与病症有关的症状中可以具有效果。可以在一次或多次施用中施用有效量。出于本发明的目的，药物，化合物，或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防或治疗性处理的量。如在临床背景中理解的，药物，化合物，或药物组合物的有效量可以与或不与另一种药物，化合物，或药物组合物一起实现。如此，可以在施用一种或多种治疗剂的背景中考虑“有效量”，并且若与一种或多种其它药剂一起，可以实现或者实现期望的结果，则可以认为单一药剂以有效量给予。
如本文中使用的，“与……联合/组合/一起”指在一种治疗形态外施用另一种治疗形态。因而，“与……联合/组合/一起”指在对个体施用一种治疗形态之前，期间，或者之后施用另一种治疗形态。
如本文中使用的，“受试者”或“个体”指哺乳动物，包括但不限于人或非人哺乳动物，诸如牛，马，犬，绵羊，或猫。优选地，受试者指人。在本文中，患者也是受试者。
“化疗剂”包括在治疗癌症中有用的化学化合物。化疗剂的例子包括厄洛替尼(erlotinib)(
Figure BDA0001605976190000391
Genentech/OSI Pharm.)，硼替佐米(bortezomib)(
Figure BDA0001605976190000392
Millennium Pharm.)，双硫仑(disulfiram)，没食子酸表没食子儿茶精(epigallocatechin gallate)，salinosporamide A，carfilzomib，17-AAG(格尔德霉素(geldanamycin))，根赤壳菌素(radicicol)，乳酸脱氢酶A(LDH-A)，氟维司群(fulvestrant)(
Figure BDA00016059761900003913
AstraZeneca)，舒尼替尼(sunitib)(
Figure BDA0001605976190000393
Pfizer/Sugen)，来曲唑(letrozole)(
Figure BDA0001605976190000394
Novartis)，甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)(
Figure BDA0001605976190000395
Novartis)，finasunate(
Figure BDA0001605976190000397
Novartis)，奥沙利铂(oxaliplatin)(
Figure BDA0001605976190000396
Sanofi)，5-FU(5-氟尿嘧啶)，甲酰四氢叶酸(leucovorin)，雷帕霉素(Rapamycin)(西罗莫司(Sirolimus)，
Figure BDA00016059761900003911
Wyeth)，拉帕替尼(Lapatinib)(
Figure BDA0001605976190000398
GSK572016，Glaxo Smith Kline)，Lonafamib(SCH 66336)，索拉非尼(sorafenib)(
Figure BDA00016059761900003910
Bayer Labs)，吉非替尼(gefitinib)(
Figure BDA0001605976190000399
AstraZeneca)，AG1478，烷化剂类(alkylating agents)，诸如塞替派(thiotepa)和
Figure BDA00016059761900003912
环磷酰胺(cyclosphosphamide)；磺酸烷基酯类(alkylsulfonates)，诸如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替派(meturedopa)，和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)，三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)，三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)，三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括托泊替康(topotecan)和伊立替康(irinotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)，卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；肾上腺皮质类固醇类(adrenocorticosteroids)，包括泼尼松(prednisone)和泼尼松龙(prednisolone)；醋酸环丙孕酮(cyproterone acetate)；5α-还原酶，包括非那雄胺(finasteride)和度他雄胺(dutasteride)；vorinostat,romidepsin,panobinostat,丙戊酸(valproic acid),mocetinostat多拉司他汀(dolastatin)；阿地白介素(aldesleukin),滑石(talc)duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)，萘氮芥(chlomaphazine)，胆磷酰胺(chlorophosphamide)，雌莫司汀(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)，美法仑(melphalan)，新氮芥(novembichin)，苯芥胆甾醇(phenesterine)，泼尼莫司汀(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)，和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ω1I(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.1994,33:183-186)；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A；二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)，阿克拉霉素(aclacinomysins)，放线菌素(actinomycin)，氨茴霉素(authramycin)，偶氮丝氨酸(azaserine)，博来霉素(bleomycin)，放线菌素C(cactinomycin)，carabicin，洋红霉素(caminomycin)，嗜癌霉素(carzinophilin)，色霉素(chromomycinis)，放线菌素D(dactinomycin)，柔红霉素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸，
Figure BDA0001605976190000401
(多柔比星(doxorubicin))，吗啉代多柔比星，氰基吗啉代多柔比星，2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)，表柔比星(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，麻西罗霉素(marcellomycin)，丝裂霉素(mitomycin)诸如丝裂霉素C，霉酚酸(mycophenolic acid)，诺拉霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，泊非霉素(porfiromycin)，嘌呤霉素(puromycin)，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素(streptonigrin)，链佐星(streptozocin)，杀结核菌素(tubercidin)，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(fluorouracil)(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)，甲氨蝶呤，蝶酰三谷氨酸(pteropterin)，三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基嘌呤(mercaptopurine)，硫咪嘌呤(thiamiprine)，硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷(cytarabine)，双脱氧尿苷(dideoxyuridine)，去氧氟尿苷(doxifluridine)，依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)，丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)，表硫雄醇(epitiostanol)，美雄烷(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfomithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；epothilone；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamnol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；
Figure BDA0001605976190000411
多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofuran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素，疣孢菌素(verracurin)A，杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoids)，例如泰素(TAXOL)(帕利他塞(paclitaxel)；Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)，
Figure BDA0001605976190000421
(无克列莫佛(Cremophor)的)，帕利他塞的清蛋白改造的纳米颗粒剂型(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)和泰索帝
Figure BDA0001605976190000422
(多西他塞(docetaxel，doxetaxel)；Sanofi-Aventis)；苯丁酸氮芥(chloranmbucil)；
Figure BDA0001605976190000423
(吉西他滨(gemcitabine))；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；
Figure BDA0001605976190000424
(长春瑞滨(vinorelbine))；能灭瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；卡培他滨(capecitabine)
Figure BDA0001605976190000425
伊本膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄酸(retinoids)，诸如视黄酸(retinoic acid)；及任何上述各项的药学可接受盐，酸和衍生物。
化疗剂还包括(i)起调节或抑制激素对肿瘤作用的作用的抗激素剂，诸如抗雌激素类和选择性雌激素受体调控物类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括
Figure BDA0001605976190000426
柠檬酸他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)，iodoxyfene，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，那洛昔芬(keoxifene)，LY117018，奥那司酮(onapristone)，和
Figure BDA0001605976190000427
(柠檬酸托瑞米芬(toremifine citrate))；(ii)抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑，氨鲁米特(aminoglutethimide)，
Figure BDA0001605976190000428
(醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))，
Figure BDA0001605976190000429
(依西美坦(exemestane)；Pfizer)，福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)，
Figure BDA00016059761900004210
(伏罗唑(vorozole))，
Figure BDA00016059761900004211
(来曲唑(letrozole)；Novartis)，和
Figure BDA00016059761900004212
(阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)，比卡米特(bicalutamide)，亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；布舍瑞林(buserelin)，曲普瑞林(tripterelin)，醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate)，己烯雌酚(diethylstilbestrol)，倍美力(premarin)，氟甲睾酮(fluoxymesterone)，全反式视黄酸，芬维A胺(fenretinide)，以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白质激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常细胞增殖的信号传导途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α，Ralf和H-Ras；(vii)核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如
Figure BDA0001605976190000431
)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如
Figure BDA0001605976190000432
和
Figure BDA0001605976190000433
rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如
Figure BDA0001605976190000434
rmRH；和(ix)及任何上述药剂的药学可接受盐，酸和衍生物。
化疗剂还包括抗体，诸如阿仑珠单抗(alemtuzumab)(Campath)，贝伐珠单抗(bevacizumab)(
Figure BDA0001605976190000435
Genentech)；西妥昔单抗(cetuximab)(
Figure BDA00016059761900004311
Imclone)；帕尼单抗(panitumumab)
Figure BDA0001605976190000436
Amgen)，利妥昔单抗(rituximab)(
Figure BDA0001605976190000437
Genentech/Biogen Idec)，帕妥珠单抗(pertuzumab)(
Figure BDA0001605976190000438
2C4，Genentech)，曲妥珠单抗(trastuzumab)(
Figure BDA0001605976190000439
Genentech)，托西莫单抗(tositumomab)(Bexxar，Corixia)，和抗体药物缀合物，吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabozogamicin)(
Figure BDA00016059761900004310
Wyeth)。具有作为与本发明化合物组合的药剂的治疗潜力的别的人源化单克隆抗体包括：阿泊珠单抗(apolizumab)，阿塞珠单抗(aselizumab)，atlizumab，巴匹珠单抗(bapineuzumab)，bivatuzumab mertansine，莫坎妥珠单抗(cantuzumab mertansine)，西利珠单抗(cedelizumab)，培舍珠单抗(certolizumabpegol)，cidfusituzumab，cidtuzumab，达克珠单抗(daclizumab)，依库珠单抗(eculizumab)，依法珠单抗(efalizumab)，依帕珠单抗(epratuzumab)，厄利珠单抗(erlizumab)，非维珠单抗(felvizumab)，芳妥珠单抗(fontolizumab)，吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)，英妥珠单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)，伊匹木单抗(ipilimumab)，拉贝珠单抗(labetuzumab)，林妥珠单抗(lintuzumab)，马妥珠单抗(matuzumab)，美泊利单抗(mepolizumab)，莫维珠单抗(motavizumab)，motovizumab，那他珠单抗(natalizumab)，尼妥珠单抗(nimotuzumab)，nolovizumab，numavizumab，ocrelizumab，奥马珠单抗(omalizumab)，帕利珠单抗(palivizumab)，帕考珠单抗(pascolizumab)，pecfusituzumab，pectuzumab，培克珠单抗(pexelizumab)，ralivizumab，雷珠单抗(ranibizumab)，reslivizumab，瑞利珠单抗(reslizumab)，resyvizumab，罗维珠单抗(rovelizumab)，卢利珠单抗(ruplizumab)，西罗珠单抗(sibrotuzumab)，西利珠单抗(siplizumab)，索土珠单抗(sontuzumab)，tacatuzumab tetraxetan，tadocizumab，他利珠单抗(talizumab)，特非珠单抗(tefibazumab)，托珠单抗(tocilizumab)，托利珠单抗(toralizumab)，tucotuzumab西莫白介素(celmoleukin)，tucusituzumab，umavizumab，乌珠单抗(urtoxazumab)，优特克单抗(ustekinumab)，维西珠单抗(visilizumab)，和抗白介素-12(ABT-874/J695，Wyeth Research and Abbott Laboratories)，其为经遗传修饰以识别白介素-12p40蛋白的重组专有人序列全长IgG1λ抗体。
化疗剂还包括“EGFR抑制剂”，其指结合EGFR或以其它方式直接与EGFR相互作用并阻止或降低其信号传导活性的化合物，其另外还称作“EGFR拮抗剂”。此类药剂的例子包括结合EGFR的抗体和小分子。结合EGFR的抗体的例子包括MAb 579(ATCC CRL HB8506)，MAb455(ATCC CRL HB8507)，MAb 225(ATCC CRL 8508)，MAb 528(ATCC CRL 8509)(参见美国专利No.4,943,533，Mendelsohn等人)及其变体，诸如嵌合化的225(C225或西妥昔单抗；
Figure BDA0001605976190000441
)和重构的人225(H225)(参见WO96/40210，Imclone Systerms Inc.)；IMC-11F8，一种完全人的EGFR靶向抗体(Imclone)；结合II型突变体EGFR的抗体(美国专利No.5,212,290)；结合EGFR的人源化和嵌合抗体，如美国专利No.5,891,996中所述；和结合EGFR的人抗体，诸如ABX-EGF或帕尼单抗(Panitumumab)(参见WO98/50433，Abgenix/Amgen)；EMD55900(Stragliotto et al.,Eur.J.Cancer32A:636-640(1996))；EMD7200(matuzumab)，一种针对EGFR且与EGF和TGF-α二者竞争EGFR结合的人源化EGFR抗体(EMD/Merck)；人EGFR抗体，HuMax-EGFR(GenMab)；称作E1.1，E2.4，E2.5，E6.2，E6.4，E2.11，E6.3和E7.6.3且描述在US 6,235,883中的完全人抗体；MDX-447(Medarex Inc)；和mAb 806或人源化mAb 806(Johns et al.,J.Biol.Chem.279(29):30375-30384(2004))。抗EGFR抗体可与细胞毒剂缀合，由此产生免疫缀合物(参见例如EP 659,439A2，Merck Patent GmbH)。EGFR拮抗剂包括小分子，诸如美国专利No.5,616,582，5,457,105，5,475,001，5,654,307，5,679,683，6,084,095，6,265,410，6,455,534，6,521,620，6,596,726，6,713,484，5,770,599，6,140,332，5,866,572，6,399,602，6,344,459，6,602,863，6,391,874，6,344,455，5,760,041，6,002,008，和5,747,498，以及PCT公开文本WO98/14451，WO98/50038，WO99/09016，和WO99/24037中描述的化合物。具体的小分子EGFR拮抗剂包括OSI-774(CP-358774，厄洛替尼(erlotinib)，
Figure BDA0001605976190000451
Genentech/OSI Pharmaceuticals)；PD183805(CI 1033，2-丙烯酰胺，N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-6-喹唑啉基]-，二氢氯化物，Pfizer Inc.)；ZD1839，吉非替尼(gefitinib)
Figure BDA0001605976190000452
4-(3’-氯-4’-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉，AstraZeneca)；ZM 105180((6-氨基-4-(3-甲基苯基-氨基)-喹唑啉，Zeneca)；BIBX-1382(N8-(3-氯-4-氟-苯基)-N2-(1-甲基-哌啶-4-基)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺，Boehringer Ingelheim)；PKI-166((R)-4-[4-[(1-苯基乙基)氨基]-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚)；(R)-6-(4-羟基苯基)-4-[(1-苯基乙基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶)；CL-387785(N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺)；EKB-569(N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺)(Wyeth)；AG1478(Pfizer)；AG1571(SU 5271；Pfizer)；双重EGFR/HER2酪氨酸激酶抑制剂，诸如拉帕替尼(lapatinib)(
Figure BDA0001605976190000453
GSK572016或N-[3-氯4-[(3氟苯基)甲氧基]苯基]-6[5[[[2甲基磺酰基)乙基]氨基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺)。
化疗剂还包括“酪氨酸激酶抑制剂”，包括前一段中提到的EGFR靶向药物；小分子HER2酪氨酸激酶抑制剂，诸如可从Takeda获得的TAK165；CP-724,714，一种口服ErbB2受体酪氨酸激酶选择性抑制剂(Pfizer和OSI)；优先结合EGFR但抑制HER2和EGFR过表达细胞二者的双重HER抑制剂，诸如EKB-569(可从Wyeth获得)；拉帕替尼(lapatinib)(GSK572016；可从Glaxo-SmithKline获得)，一种口服HER2和EGFR酪氨酸激酶抑制剂；PKI-166(可从Novartis获得)；泛HER抑制剂，诸如卡奈替尼(canertinib)(CI-1033；Pharmacia)；Raf-1抑制剂，诸如可从ISIS Pharmaceutica1s获得的，抑制Raf-1信号传导的反义药剂ISIS-5132；非HER靶向TK抑制剂，诸如甲磺酸伊马替尼(
Figure BDA0001605976190000454
可从Glaxo SmithKline获得)；多靶向酪氨酸激酶抑制剂，诸如舒尼替尼(sunitinib)(
Figure BDA0001605976190000461
可从Pfizer获得)；VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，诸如瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787/ZK222584，可从Novartis/Schering AG获得)；MAPK胞外调控激酶I抑制剂CI-1040(可从Pharmacia获得)；喹唑啉类，诸如PD 153035，4-(3-氯苯胺基)喹唑啉；吡啶并嘧啶类；嘧啶并嘧啶类；吡咯并嘧啶类，诸如CGP 59326，CGP 60261和CGP 62706；吡唑并嘧啶类，4-(苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶类；姜黄素(二阿魏酰甲烷，4,5-双(4-氟苯胺基)-酞酰亚胺)；含有硝基噻吩模块的tyrphostine；PD-0183805(Warner-Lamber)；反义分子(例如那些与编码HER的核酸结合的反义分子)；喹喔啉类(美国专利No.5,804,396)；tryphostins(美国专利No.5,804,396)；ZD6474(AstraZeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；泛HER抑制剂，诸如CI-1033(Pfizer)；Affinitac(ISIS 3521；Isis/Lilly)；甲磺酸伊马替尼
Figure BDA0001605976190000462
PKI166(Novartis)；GW2016(Glaxo SmithKline)；CI-1033(Pfizer)；EKB-569(Wyeth)；Semaxinib(Pfizer)；ZD6474(AstraZeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；INC-1C11(Imclone)，雷帕霉素(西罗莫司，
Figure BDA0001605976190000463
)；或任何下列专利公开文本中描述的：美国专利No.5,804,396；WO1999/09016(American Cyanamid)；WO1998/43960(AmericanCyanamid)；WO1997/38983(Warner Lambert)；WO1999/06378(Warner Lambert)；WO1999/06396(WarnerLambert)；WO1996/30347(Pfizer,Inc)；WO1996/33978(Zeneca)；WO1996/3397(Zeneca)和WO1996/33980(Zeneca)。
化疗剂还包括地塞米松(dexamethasone)，干扰素，秋水仙素(colchicine)，氯苯氨啶(metoprine)，环孢霉素(cyclosporine)，两性霉素(amphotericin)，甲硝唑(metronidazole)，阿仑单抗(alemtuzumab)，阿利维A酸(alitretinoin)，别嘌醇(allopurinol)，氨磷汀(amifostine)，三氧化二砷(arsenic trioxide)，天冬酰胺酶(asparaginase)，活的BCG，贝伐珠单抗(bevacuzimab)，贝沙罗汀(bexarotene)，克拉屈滨(cladribine)，里本灵(clofarabine)，darbepoetin alfa，地尼白介素(denileukin)，右雷佐生(dexrazoxane)，阿法依伯汀(epoetin alfa)，厄洛替尼(elotinib)，非格司亭(filgrastim)，醋酸组氨瑞林(histrelin acetate)，ibritumomab，干扰素α-2a，干扰素α-2b，lenalidomide，左旋咪唑(levamisole)，美司钠(mesna)，甲氧沙林(methoxsalen)，诺龙(nandrolone)，奈拉滨(nelarabine)，诺非单抗(nofetumomab)，奥普瑞白介素(oprelvekin)，palifermin，帕米膦酸盐(pamidronate)，培加酶(pegademase)，培门冬酶(pegaspargase)，PEG非格司亭(pegfilgrastim)，培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)，普卡霉素(plicamycin)，卟吩姆钠(porfimer sodium)，喹纳克林(quinacrine)，拉布立酶(rasburicase)，沙格司亭(sargramostim)，替莫唑胺(temozolomide)，VM-26，6-TG，托瑞米芬(toremifene)，tretinoin，ATRA，戊柔比星(valrubicin)，唑来膦酸盐(zoledronate)，和唑来膦酸(zoledronic acid)，及其药学可接受盐。
化疗剂还包括氢化可的松(hydrocortisone)，醋酸氢化可的松(hydrocortisoneacetate)，醋酸可的松(cortisone acetate)，替可的松匹伐酯(tixocortol pivalate)，曲安奈德(triamcinolone acetonide)，曲安西龙醇(triamcinolone alcohol)，莫米松(mometasone)，安西奈德(amcinonide)，布地奈德(budesonide)，地奈德(desonide)，fluocinonide，fluocinolone acetonide，倍他米松(betamethasone)，倍他米松磷酸钠(betamethasone sodium phosphate)，地塞米松(dexamethasone)，地塞米松磷酸钠(dexamethasone sodium phosphate)，氟可龙(fluocortolone)，氢化可的松-17-丁酸盐(hydrocortisone-17-butyrate)，氢化可的松-17-戊酸盐(hydrocortisone-17-valerate)，aclometasone dipropionate，戊酸倍他米松(betamethasone valerate)，二丙酸倍他米松(betamethasone dipropionate)，泼尼卡酯(prednicarbate)，氯倍他松-17-丁酸盐(clobetasone-17-butyrate)，氯倍他松-17-丙酸盐(clobetasol-17-propionate)，己酸氟考龙(fluocortolone caproate)，特戊酸氟考龙(fluocortolone pivalate)和醋酸氟甲叉龙(fluprednidene acetate)；免疫选择性抗炎肽(ImSAID)，诸如苯丙氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸(FEG)及其D-异构体形式(feG)(IMULAN BioTherapeutics,LLC)；抗风湿药物，诸如硫唑嘌呤(azathioprine)，环孢素(ciclosporin)(环孢霉素(cyclosporine)A)，D-青霉胺，金盐，羟氯喹，来氟米特(leflunomide)米诺环素(minocycline)，柳氮磺吡啶(sulfasalazine)，肿瘤坏死因子α(TNFα)阻断剂，诸如依那西普(etanercept)(Enbrel)，英夫利昔单抗(infliximab)(Remicade)，阿达木单抗(adalimumab)(Humira)，certolizumabpegol(Cimzia)，golimumab(Simponi)，白介素-1(IL-1)阻断剂，诸如阿那白滞素(anakinra)(Kineret)，T细胞共刺激阻断剂，诸如abatacept(Orencia)，白介素-6(IL-6)阻断剂，诸如tocilizumab
Figure BDA0001605976190000471
白介素-13(IL-13)阻断剂，诸如lebrikizumab；干扰素α(IFN)阻断剂，诸如Rontalizumab；β7-整联蛋白阻断剂，诸如rhuMAb Beta7；IgE途径阻断剂，诸如抗M1prime；分泌型同三聚LTa3和膜结合型异三聚LTa1/β2阻断剂，诸如抗淋巴毒素α(LTa)；放射性同位素，例如At211，I131，I125，Y90，Re186，Re188，Sm153，Bi212，P32，Pb212和Lu放射性同位素；混杂调查性药剂，诸如thioplatin，PS-341，丁酸苯酯，ET-18-OCH3，或法尼基转移酶抑制剂(L-739749，L-744832；多酚，诸如槲皮素(quercetin)，白藜芦醇(resveratrol)，piceatannol，没食子酸表没食子儿茶精(epigallocatechine gallate)，茶黄素(theaflavin)，黄烷醇(flavanol)，原花青素(procyanidins)，白桦脂酸(betulinicacid)及其衍生物；自噬抑制剂，诸如氯喹；δ-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol)，
Figure BDA0001605976190000481
)；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素类(colchicines)；白桦脂酸(betulinic acid)；乙酰喜树碱，东莨菪亭(scopolectin)，和9-氨基喜树碱)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；替加氟(tegafur)
Figure BDA0001605976190000482
贝沙罗汀(bexarotene)
Figure BDA0001605976190000483
二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)(例如
Figure BDA0001605976190000484
或
Figure BDA0001605976190000485
)，依替膦酸钠(etidronate)
Figure BDA0001605976190000486
NE-58095，唑来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronic acid/zoledronate)
Figure BDA0001605976190000487
阿伦膦酸盐(alendronate)
Figure BDA0001605976190000488
帕米膦酸盐(pamidronate)
Figure BDA0001605976190000489
替鲁膦酸盐(tiludronate)
Figure BDA00016059761900004810
或利塞膦酸盐(risedronate)
Figure BDA00016059761900004811
和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，诸如
Figure BDA00016059761900004812
疫苗；哌立福辛(perifosine)，COX-2抑制剂(例如塞来考昔(celecoxib)或艾托考昔(etoricoxib))，蛋白体抑制剂(例如PS341)；CCI-779；tipifarnib(R11577)；orafenib，ABT510；Bcl-2抑制剂，诸如oblimersen sodium
Figure BDA00016059761900004813
pixantrone；法尼基转移酶抑制剂，诸如lonafarnib(SCH 6636,SARASARTM)；及任何上述各项的药学可接受盐，酸或衍生物；以及两种或更多种上述各项的组合，诸如CHOP(环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)。
化疗剂还包括具有止痛，退热和消炎效果的非类固醇消炎药。NSAID包括酶环氧合酶的非选择性抑制剂。NSAID的具体例子包括阿司匹林(aspirin)，丙酸衍生物诸如布洛芬(ibuprofen)，非诺洛芬(fenoprofen)，酮洛芬(ketoprofen)，氟比洛芬(flurbiprofen)，奥沙普秦(oxaprozin)和荼普生(naproxen)，乙酸衍生物诸如吲哚美辛(indomethacin)，舒林酸(sulindac)，依托度酸(etodolac)，双氯芬酸(diclofenac)，烯醇酸衍生物诸如吡罗昔康(piroxicam)，美洛昔康(meloxicam)，替诺昔康(tenoxicam)，屈恶昔康(droxicam)，氯诺昔康(lornoxicam)和伊索昔康(isoxicam)，灭酸衍生物诸如甲灭酸(mefenamic acid)，甲氯芬那酸(meclofenamic acid)，氟芬那酸(flufenamic acid)，托芬那酸(tolfenamicacid)，和COX-2抑制剂诸如塞来考昔(celecoxib)，依托考昔(etoricoxib)，罗美考昔(lumiracoxib)，帕瑞考昔(parecoxib)，罗非考昔(rofecoxib)，罗非昔布(rofecoxib)，和伐地考昔(valdecoxib)。NSAID可被指示用于诸如类风湿性关节炎，骨关节炎，炎性关节病，强直性脊柱炎，银屑病关节炎，莱特尔氏综合征，急性痛风，痛经，骨转移疼痛，头痛和偏头痛，手术后疼痛，由于炎症和组织损伤引起的轻至中度疼痛，发热，肠梗阻，和肾绞痛等疾患的症状缓解。
如本文中使用的，术语“细胞因子”一般指由一种细胞群体释放的，作为细胞间介质对另一细胞起作用或者对生成该蛋白质的细胞具有自分泌影响的蛋白质。此类细胞因子的例子包括淋巴因子，单核因子；白介素(“IL”)，诸如IL-1，IL-1α，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL10，IL-11，IL-12，IL-13，IL-15，IL-17A-F，IL-18至IL-29(诸如IL-23)，IL-31，包括
Figure BDA0001605976190000491
rIL-2；肿瘤坏死因子，诸如TNF-α或TNF-β，TGF-β1-3；和其它多肽因子，包括白血病抑制因子(“LIF”)，睫状节神经细胞营养因子(“CNTF”)，CNTF样细胞因子(“CLC”)，心肌营养蛋白(“CT”)，和kit配体(“KL”)。
如本文中使用的，术语“趋化因子”指具有选择性诱导白细胞的趋化性和活化的能力的可溶性因子(例如细胞因子)。它们还触发血管发生，炎症，伤口愈合，和肿瘤发生的过程。趋化因子例子包括IL-8，即鼠角质形成细胞化学引诱物(KC)的人同系物。
关于参照多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为比对序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST，BLAST-2，ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定用于比对序列的合适参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写，并且源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(US Copyright Office,Washington D.C.,20559)，其中其以美国版权注册号TXU510087注册。公众自Genentech,Inc.,South San Francisco,California可获得ALIGN-2程序，或者可以从源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，包括数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。
在采用ALIGN-2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)，与(with)，或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于，与，或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算：
分数X/Y乘100
其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。应当领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。除非另有明确说明，本文中所使用的所有％氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。
短语“药学可接受的”指明该物质或组合物必须是在化学和/或毒理学方面与构成配制剂的其它成分和/或用它治疗的哺乳动物相容的。
如本文中使用的，“施用”指将一定剂量的化合物(例如本发明的抗TIGIT抗体或编码本发明的抗TIGIT抗体的核酸)或组合物(例如药物组合物，例如包含本发明的抗TIGIT抗体的药物组合物)给予受试者的方法。本文所述方法中利用的组合物可以例如静脉内，肌肉内，玻璃体内(例如通过玻璃体内注射)，通过滴眼剂，皮内，皮下，动脉内，腹膜内，损伤内，颅内，关节内，前列腺内，胸膜内，气管内，鞘内，鼻内，阴道内，直肠内，表面，肿瘤内，腹膜，皮下，结膜下，囊内，粘膜，心包内，脐内，眼内，眶内，口服，表面，透皮，通过吸入，通过注射，通过植入，通过输注，通过连续输注，通过直接浸浴靶细胞的局部灌注，通过导管，通过灌洗，以霜剂，或以脂质组合物来施用。本文中描述的方法中利用的组合物还可以系统或局部施用。施用的方法可以根据多种因素(例如所施用的化合物或组合物和所治疗的疾患，疾病，或病症的严重性)而变化。
如本文中使用的，术语“载体”意指能够运输与其连接的其它核酸的核酸分子。一类载体是“质粒”，指其中可连接另外的DNA区段的环状双链DNA环。另一类载体是噬菌体载体。另一类载体是病毒载体，其中可将另外的DNA区段连接到病毒基因组中。某些载体能够在其所导入的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如非附加型哺乳动物载体)可在导入宿主细胞后整合到宿主细胞的基因组中，由此随着宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与其可操作连接的基因表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“重组载体”或“表达载体”)。通常，在重组DNA技术中有用的表达载体常常是质粒形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用。
如本文中使用的，术语“约”指技术领域技术人员容易知道的相应数值的常规误差范围。本文中提到“约”数值或参数包括(且描述)涉及该数值或参数本身的实施方案。
III.例示性抗TIGIT抗体
本发明提供对于在受试者(例如人)中治疗癌症或免疫相关疾病(例如T细胞功能障碍性病症)或延迟癌症或免疫相关疾病(例如T细胞功能障碍性病症)进展有用的抗TIGIT抗体。
在一个例子中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括选自由人TIGIT的Ser78，Ser80，和Lys82组成的组的一个或多个氨基酸残基(例如1，2，或3个氨基酸残基)的表位。例如在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Ser80和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Ser78和Ser80的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Ser78和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Ser78，Ser80，和Lys82的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上在Ser78，Ser80，和/或Lys82以外包括人TIGIT的残基Ala67的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78和Ala67；Ser80和Ala67；Lys82和Ala67；Ser78，Ser80，和Ala67；Ser78，Lys82，和Ala67；Ser80，Lys82，和Ala67；或Ser78，Ser80，Lys82，和Ala67的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上在Ser78，Ser80，和/或Lys82以外包括选自由人TIGIT的Glu60，Leu65，和Ile68组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基(例如1，2，或3个氨基酸残基)的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78和Glu60；Ser80和Glu60；Lys82和Glu60；Ser78和Leu65；Ser80和Leu65；Lys82和Leu65；Ser78和Ile68；Ser80和Ile68；Lys82和Ile68的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78，Ser80，和Glu60；Ser78，Ser80，和Leu65；Ser78，Ser80，和Ile68；Ser80，Lys82，和Glu60；Ser80，Lys82，和Leu65；Ser80，Lys82，和Ile68；Ser78，Lys82，和Glu60；Ser78，Lys82，和Leu65；Ser78，Lys82，和Ile68的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78，Ser80，Lys82，和Glu60；Ser78，Ser80，Lys82，和Leu65；Ser78，Ser80，Lys82，和Ile68的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Glu60，Leu65，和Ser78；Glu60，Leu65，和Ser80；Glu60，Leu65，和Lys82；Leu65，Ile68，和Ser78；Leu65，Ile68，和Ser80；Leu65，Ile68，和Lys82；Glu60，Ile68，和Ser78；Glu60，Ile68，和Ser80；Glu60，Ile68，和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Glu60，Leu65，Ile68，和Ser78；Glu60，Leu65，Ile68，和Ser80；Glu60，Leu65，Ile68，和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Glu60，Leu65，Ser78，和Ser80；Glu60，Leu65，Ser78，和Lys82；Glu60，Leu65，Ser80，和Lys82；Leu65，Ile68，Ser78，和Ser80；Leu65，Ile68，Ser78，和Lys82；Leu65，Ile68，Ser80，和Lys82；Leu65，Glu60，Ser78，和Ser80；Leu65，Glu60，Ser78，和Lys82；Leu65，Glu60，Ser80，和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Glu60，Leu65，Ser78，Ser80，和Lys82；Leu65，Ile68，Ser78，Ser80，和Lys82；Glu60，Leu65，Ser78，Ser80，和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78，Ser80，Glu60，Leu65，和Ile68；Ser78，Lys82，Glu60，Leu65，和Ile68；Ser80，和Lys82，Glu60，Leu65，和Ile68的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78，Ser80，Lys82，Glu60，Leu65，和Ile68的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上在Ser78，Ser80，和Lys82以外包括选自由人TIGIT的Gln56，Asn70，Leu73，和His111组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基(例如1，2，3，或4个氨基酸残基)的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78，Ser80，Lys82，和Gln56；Ser78，Ser80，Lys82，和Asn70；Ser78，Ser80，Lys82，和Leu73；Ser78，Ser80，Lys82，和His111的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78，Ser80，Lys82，Gln56，和Asn70；Ser78，Ser80，Lys82，Gln56，和Leu73；Ser78，Ser80，Lys82，Gln56，和His111；Ser78，Ser80，Lys82，Asn70，和Leu73；Ser78，Ser80，Lys82，Asn70，和His111；Ser78，Ser80，Lys82，Leu73，和His111的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78，Ser80，Lys82，Gln56，Asn70，和Leu73；Ser78，Ser80，Lys82，Gln56，Asn70，和His111；Ser78，Ser80，Lys82，Gln56，Leu73，和His111；Ser78，Ser80，Lys82，Asn70，Leu73，和His111的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Ser78，Ser80，Lys82，Gln56，Asn70，Leu73，和His111的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上在Ser78，Ser80，和/或Lys82以外包括选自由人TIGIT的Thr55，Asn58，Asp63，Gln64，His76，Ile77，和Pro79组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基(例如1，2，或3个氨基酸残基)的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括人TIGIT的氨基酸残基Thr55，Gln56，Asn58，Glu60，Asp63，Gln64，Leu65，Ala67，Ile68，Asn70，Leu73，His76，Ile77，Ser78，Pro79，Ser80，Lys82，和His111的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上由人TIGIT的氨基酸残基Thr55，Gln56，Asn58，Glu60，Asp63，Gln64，Leu65，Ala67，Ile68，Asn70，Leu73，His76，Ile77，Ser78，Pro79，Ser80，Lys82，和His111组成的表位。
在另一个例子中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括选自由人TIGIT的Thr55，Ser80，和Lys82组成的组的一个或多个氨基酸残基(例如1，2，或3氨基酸残基)的表位。例如在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Ser80和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Thr55和Ser80的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Thr55和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Thr55，Ser80，和Lys82的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上在Thr55，Ser80，和/或Lys82以外包括人TIGIT的残基Gln56的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Thr55和Gln56；Ser80和Gln56；Lys82和Gln56；Thr55，Ser80，和Gln56；Thr55，Lys82，和Gln56；Ser80，Lys82，和Gln56；或Thr55，Ser80，Lys82，和Gln56的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上在Thr55，Ser80，和/或Lys82以外包括选自由人TIGIT的Asn58，Glu60，Ile77，和Pro79组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基(例如1，2，或3个氨基酸残基)的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Thr55和Asn58；Thr55和Glu60；Ser80和Asn58；Ser80和Glu60；Lys82和Asn58；Lys82和Glu60；Thr55和Ile77；Ser80和Ile77；Lys82和Ile77；Thr55和Pro79；Ser80和Pro79；Lys82和Pro79的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Thr55，Ser80，和Asn58；Thr55，Ser80，和Glu60；Thr55，Ser80，和Ile77；Thr55，Ser80，和Pro79；Ser80，Lys82，和Asn58；Ser80，Lys82，和Glu60；Ser80，Lys82，和Ile77；Ser80，Lys82，和Pro79；Thr55，Lys82，和Asn58；Thr55，Lys82，和Glu60；Thr55，Lys82，和Ile77；Thr55，Lys82，和Pro79的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Thr55，Ser80，Lys82，和Asn58；Thr55，Ser80，Lys82，和Glu60；Thr55，Ser80，Lys82，和Ile77；Thr55，Ser80，Lys82，和Pro79的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Asn58，Ile77，和Thr55；Glu60，Ile77，和Thr55；Asn58，Ile77，和Ser80；Glu60，Ile77，和Ser80；Asn58，Ile77，和Lys82；Glu60，Ile77，和Lys82；Ile77，Pro79，和Thr55；Ile77，Pro79，和Ser80；Ile77，Pro79，和Lys82；Glu60，Pro79，和Thr55；Asn58，Pro79，和Ser80；Glu60，Pro79，和Ser80；Asn58，Pro79，和Lys82；Glu60，Pro79，和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Asn58，Ile77，Pro79，和Thr55；Glu60，Ile77，Pro79，和Thr55；Asn58，Ile77，Pro79，和Ser80；Glu60，Ile77，Pro79，和Ser80；Asn58，Ile77，Pro79，和Lys82；Glu60，Ile77，Pro79，和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Asn58，Ile77，Thr55，和Ser80；Glu60，Ile77，Thr55，和Ser80；Asn58，Ile77，Thr55，和Lys82；Glu60，Ile77，Thr55，和Lys82；Asn58，Ile77，Ser80，和Lys82；Glu60，Ile77，Ser80，和Lys82；Ile77，Pro79，Thr55，和Ser80；Ile77，Pro79，Thr55，和Lys82；Ile77，Pro79，Ser80，和Lys82；Ile77，Asn58，Thr55，和Ser80；Ile77，Glu60，Thr55，和Ser80；Ile77，Asn58，Thr55，和Lys82；Ile77，Asn58，Thr55，和Lys82；Ile77，Glu60，Thr55，和Lys82；Ile77，Asn58，Ser80，和Lys82；Ile77，Glu60，Ser80，和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Asn58，Ile77，Thr55，Ser80，和Lys82；Glu60，Ile77，Thr55，Ser80，和Lys82；Ile77，Pro79，Thr55，Ser80，和Lys82；Asn58，Ile77，Thr55，Ser80，和Lys82；Glu60，Ile77，Thr55，Ser80，和Lys82的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Thr55，Ser80，Asn58，Ile77，和Pro79；Thr55，Ser80，Glu60，Ile77，和Pro79；Thr55，Lys82，Asn58，Ile77，和Pro79；Thr55，Lys82，Glu60，Ile77，和Pro79；Ser80，Lys82，Asn58，Ile77，和Pro79；和Ser80，Lys82，Glu60，Ile77，和Pro79的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Thr55，Ser80，Lys82，Glu60，Ile77，和Pro79的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Thr55，Ser80，Lys82，Asn58，Ile77，和Pro79的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Thr55，Asn58，Glu60，Ile77，Pro79，Ser80，和Lys82的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上在Thr55，Ser80，和Lys82以外包括选自由Leu65，Ile68，Leu73，His76，Ser78，和His111组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基(例如1，2，3，4，5，或6个氨基酸残基)的进一步包含人TIGIT的氨基酸残基Leu65，Ile68，Leu73，His76，Ser78，和His111的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括人TIGIT的氨基酸残基Thr55，Gln56，Asn58，Glu60，Leu65，Ile68，Leu73，His76，Ile77，Ser78，Pro79，Ser80，Lys82，和His111的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上由人TIGIT的氨基酸残基Thr55，Gln56，Asn58，Glu60，Leu65，Ile68，Leu73，His76，Ile77，Ser78，Pro79，Ser80，Lys82，和His111组成的表位。
在一些情况中，上文描述的任何抗TIGIT抗体可包括互补位，其包括选自由重链可变区氨基酸残基Asn32，Tyr52，Arg52b，Phe53，Lys54，Tyr56，Asp58，Tyr99，Asp100，Leu100a，Leu100b，和Ala100c组成的组的一个或多个氨基酸残基(例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，或12个氨基酸残基)和/或选自由轻链可变区氨基酸残基Tyr27d，Tyr92，Ser93，Thr94，和Phe96组成的组的一个或多个氨基酸残基(例如1，2，3，4，或5个氨基酸残基)。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体可包括互补位，其由重链可变区氨基酸残基Asn32，Tyr52，Arg52b，Phe53，Lys54，Tyr56，Asp58，Tyr99，Asp100，Leu100a，Leu100b，和Ala100c和轻链可变区氨基酸残基Tyr27d，Tyr92，Ser93，Thr94，和Phe96组成。
在某些实施方案中，本发明的抗TIGIT抗体以4.5埃，3.7埃，3.5埃，3.25埃，3.00埃，2.75埃，或更少的距离与人TIGIT的氨基酸进行独特接触。在某些实施方案中，提供了一种抗体，其以4.5埃，3.7埃，3.5埃，3.25埃，3.00埃，2.75埃或更少的距离结合由人TIGIT的一个，两个，三个，四个，或五个氨基酸组成的表位。在一个实施方案中，本发明的抗TIGIT抗体以3.7埃或更少的距离与人TIGIT的氨基酸进行独特接触。在某些实施方案中，提供了一种抗体，其以3.7埃或更少的距离结合由人TIGIT的一个，两个，三个，四个，或五个氨基酸组成的表位。
在一些情况中，任何上述抗TIGIT抗体包括至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SNSAAWN(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含KTYYRFKWYSDYAVSVKG(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含ESTTYDLLAGPFDY(SEQID NO：3)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KSSQTVLYSSNNKKYLA(SEQ ID NO：4)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含WASTRES(SEQ ID NO：5)的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(f)包含QQYYSTPFT(SEQ ID NO：6)的氨基酸序列的HVR-L3，或上述HVR中一种或多种和其与SEQ IDNO：1-6任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，任何上述抗TIGIT抗体包括(a)包含SNSAAWN(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含KTYYRFKWYSDYAVSVKG(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含ESTTYDLLAGPFDY(SEQID NO：3)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KSSQTVLYSSNNKKYLA(SEQ ID NO：4)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含WASTRES(SEQ ID NO：5)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QQYYSTPFT(SEQ ID NO：6)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体4.1D3和其衍生物(例如4.1D3.Q1E)拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体可具有包含与SEQ ID NO：34或35具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：34或35的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：36具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：36的序列的VL域。在一些情况中，该抗TIGIT抗体可具有包含与SEQ ID NO：34具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：34的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：36具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：36的序列的VL域。在一种特定的情况中，该抗TIGIT抗体可以是4.1D3.Q1E，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，该抗TIGIT抗体可具有包含与SEQ ID NO：35具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：35的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：36具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：36的序列的VL域。在一种特定的情况中，该抗TIGIT抗体可以是4.1D3，或其衍生物或克隆亲属。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述轻链可变区框架区(FR)中至少一种，两种，三种，或四种：包含DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO：7)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGQPPNLLIY(SEQ ID NO：8)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO：9)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGPGTKVEIK(SEQ ID NO：10)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：7-10任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体组合。在一些情况中，例如，该抗体进一步包含包含DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO：7)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGQPPNLLIY(SEQ ID NO：8)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ IDNO：9)的氨基酸序列的FR-L3；和包含FGPGTKVEIK(SEQ ID NO：10)的氨基酸序列的FR-L4，诸如由抗TIGIT抗体4.1D3.Q1E和4.1D3拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含X1VQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVS(SEQ ID NO：11)的氨基酸序列的FR-H1，其中X1是Q或E；包含WIRQSPSRGLEWLG(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列的FR-H2；包含RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTR(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：11-14任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVS(SEQ ID NO：15)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQSPSRGLEWLG(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列的FR-H2；包含RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTR(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ IDNO：12-15任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVS(SEQ ID NO：15)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQSPSRGLEWLG(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列的FR-H2；包含RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTR(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列的FR-H3；和包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列的FR-H4，诸如由4.1D3.Q1E抗体拥有的。在另一种情况中，例如，该抗TIGIT抗体可进一步包括下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVS(SEQ ID NO：16)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQSPSRGLEWLG(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列的FR-H2；包含RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTR(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：12-14和16任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVS(SEQ ID NO：16)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQSPSRGLEWLG(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列的FR-H2；包含RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTR(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列的FR-H3；和包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列的FR-H4，诸如由4.1D3抗体拥有的。
在另一个例子中，本发明提供抗TIGIT抗体，其结合人TIGIT上包括选自由人TIGIT的Gln53，His111，和Tyr113组成的组的一个或多个氨基酸残基(例如1，2，或3个氨基酸残基)的表位。例如在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基His111和Tyr113的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Gln53和His111的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Gln53和Tyr113的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括氨基酸残基Gln53，His111，和Tyr113的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上在Gln53，His111，和/或Tyr113以外包括人TIGIT的残基Gln56的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53和Gln56；His111和Gln56；Tyr113和Gln56；Gln53，His111，和Gln56；Gln53，Tyr113，和Gln56；His111，Tyr113，和Gln56；或Gln53，His111，Tyr113，和Gln56的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上在Gln53，His111，Tyr113，和/或Gln56以外包括选自由人TIGIT的Glu60，Leu65，Ile68，Asn70，Leu73，和His76组成的组的一个或多个另外的氨基酸残基(例如1，2，3，4，5，或6氨基酸残基)的表位。例如，在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，和Glu60；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，和Leu65；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，和Ile68；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，和Asn70；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，和Leu65；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，和Ile68；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，和Asn70；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，和Ile68；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，和Asn70；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Ile68，和Asn70；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Ile68，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Ile68，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Asn70，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Asn70，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu73，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，和Asn70；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Ile68，Asn70，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Ile68，Asn70，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，Asn70，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，Asn70，和His76；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Ile68，Asn70，Leu73和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，Asn70，Leu73，和His76的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，和Ile68；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，和Asn70；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Ile68，和Asn70；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Ile68，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Ile68，和Asn70；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Ile68，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Asn70，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Asn70，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Leu73，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Ile68，Asn70，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Ile68，Asn70，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Asn70，Leu73，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu65，Ile68，Asn70，Leu73，和His76的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Ile68，和Asn70；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Ile68，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Ile68，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Ile68，Asn70，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Ile68，Asn70，和His76；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Ile68，Leu73，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Ile68，Asn70，Leu73，和His76的表位。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Asn70，和Leu73；Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Asn70，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Asn70，Leu73，和His76的表位。在一些情况中，该抗TIGIT抗体结合人TIGIT上包括Gln53，His111，Tyr113，Gln56，Leu73，和His76的表位。
在一些情况中，前述实施例的任何抗TIGIT抗体包括至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SYPMN(SEQ ID NO：17)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含WINTNTGNPTYVQGFTG(SEQ ID NO：18)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TGGHTYDSYAFDV(SEQ ID NO：19)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含RASQVISSSLA(SEQ ID NO：20)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含AASTLQS(SEQ ID NO：21)的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(f)包含QHLHGYPX1N(SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的HVR-L3，其中X1是C或S，或上述HVR中一种或多种和其与SEQ ID NO：17-22任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，前述实施例的任何上述抗TIGIT抗体可包括例如(a)包含SYPMN(SEQ ID NO：17)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含WINTNTGNPTYVQGFTG(SEQ ID NO：18)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TGGHTYDSYAFDV(SEQ ID NO：19)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含RASQVISSSLA(SEQ ID NO：20)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含AASTLQS(SEQ ID NO：21)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QHLHGYPX1N(SEQ ID NO：22)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体7.4A3和其衍生物(例如7.4A3.C96S.Q1E)拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体可包括(a)包含SYPMN(SEQ ID NO：17)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含WINTNTGNPTYVQGFTG(SEQ ID NO：18)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TGGHTYDSYAFDV(SEQ ID NO：19)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含RASQVISSSLA(SEQ ID NO：20)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含AASTLQS(SEQ IDNO：21)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QHLHGYPSN(SEQ ID NO：23)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体7.4A3.C96S.Q1E拥有的。在其它情况中，该抗TIGIT抗体可包括(a)包含SYPMN(SEQ ID NO：17)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含WINTNTGNPTYVQGFTG(SEQ IDNO：18)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TGGHTYDSYAFDV(SEQ ID NO：19)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含RASQVISSSLA(SEQ ID NO：20)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含AASTLQS(SEQ ID NO：21)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QHLHGYPCN(SEQ ID NO：28)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体7.4A3拥有的。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体可具有包含与SEQ ID NO：37具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：37的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：38具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：38的序列的VL域。在一种特定的情况中，该抗TIGIT抗体可以是7.4A3.C96S.Q1E，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，该抗TIGIT抗体可具有包含与SEQID NO：39具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：39的序列的VH域和/或包含与SEQ IDNO：40具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO：40的序列的VL域。在一种特定的情况中，该抗TIGIT抗体可以是7.4A3，或其衍生物或克隆亲属。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述轻链可变区框架区(FR)中至少一种，两种，三种，或四种：包含DIQLTQSPTFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：30)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQNPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：31)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFVTYYC(SEQ ID NO：32)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：33)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：30-33任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体7.4A3和其衍生物(例如7.4A3.C96S.Q1E)拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含EVQLVQSGSDLKKPGASVRVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列或QVQLVQSGSDLKKPGASVRVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：29)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGHGLEWMG(SEQ ID NO：25)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVNTAYLQISSLKAEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：27)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：24-27和29任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含EVQLVQSGSDLKKPGASVRVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGHGLEWMG(SEQ ID NO：25)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVNTAYLQISSLKAEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：27)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ IDNO：24-27任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGSDLKKPGASVRVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：24)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGHGLEWMG(SEQ ID NO：25)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVNTAYLQISSLKAEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列的FR-H3；和包含WGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：27)的氨基酸序列的FR-H4，诸如由7.4A3.C96S.Q1E抗体拥有的。在另一种情况中，例如，该抗TIGIT抗体可进一步包括下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含QVQLVQSGSDLKKPGASVRVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：29)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGHGLEWMG(SEQ ID NO：25)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVNTAYLQISSLKAEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：27)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：25-27和29任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含QVQLVQSGSDLKKPGASVRVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：29)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGHGLEWMG(SEQ ID NO：25)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVNTAYLQISSLKAEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：26)的氨基酸序列的FR-H3；和包含WGQGTMVTVSS(SEQ ID NO：27)的氨基酸序列的FR-H4，诸如由7.4A3抗TIGIT抗体拥有的。
在另一个例子中，本发明提供抗TIGIT抗体，其包括至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含NYPMN(SEQ ID NO：41)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含WINTNTGSPAYAQDFTE(SEQ ID NO：42)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TAITSVYHFDY(SEQ IDNO：43)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO：44)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含GATTLQS(SEQ ID NO：45)的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(f)包含QKLNSHPX1S(SEQ ID NO：46)的氨基酸序列的HVR-L3，其中X1是C，S，或Y，或上述HVR中一种或多种和其与SEQ ID NO：41-46任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，前述实施例的任何上述抗TIGIT抗体可包括例如(a)包含NYPMN(SEQ ID NO：41)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含WINTNTGSPAYAQDFTE(SEQ ID NO：42)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TAITSVYHFDY(SEQ ID NO：43)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO：44)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含GATTLQS(SEQ ID NO：45)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QKLNSHPX1S(SEQ ID NO：46)的氨基酸序列的HVR-L3，其中X1是C，S，或Y，诸如由抗TIGIT抗体4.1A4和其衍生物(例如4.1A4.C96S.Q1E和4.1A4.C96Y.Q1E)拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体可包括(a)包含NYPMN(SEQ ID NO：41)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含WINTNTGSPAYAQDFTE(SEQ ID NO：42)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TAITSVYHFDY(SEQ IDNO：43)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO：44)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含GATTLQS(SEQ ID NO：45)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QKLNSHPCS(SEQ IDNO：47)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体4.1A4拥有的。在其它情况中，该抗TIGIT抗体可包括(a)包含NYPMN(SEQ ID NO：41)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含WINTNTGSPAYAQDFTE(SEQ ID NO：42)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TAITSVYHFDY(SEQ IDNO：43)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO：44)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含GATTLQS(SEQ ID NO：45)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QKLNSHPSS(SEQ IDNO：48)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体4.1A4.C96S.Q1E拥有的。在其它情况中，该抗TIGIT抗体可包括(a)包含NYPMN(SEQ ID NO：41)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含WINTNTGSPAYAQDFTE(SEQ ID NO：42)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TAITSVYHFDY(SEQ IDNO：43)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO：44)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含GATTLQS(SEQ ID NO：45)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QKLNSHPYS(SEQ IDNO：49)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体4.1A4.C96Y.Q1E拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述轻链可变区框架区(FR)中至少一种，两种，三种，或四种：包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：56)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPRVLIY(SEQ ID NO：57)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSESGTEFTLTISSLQPEDLATYYC(SEQ ID NO：58)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：59)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：56-59任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体4.1A4和其衍生物(例如1A4.C96S.Q1E和1A4.C96Y.Q1E)拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含X1VQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTLT(SEQ ID NO：50)的氨基酸序列的FR-H1，其中X1是E或Q；包含WVRQAPGRGLEWMG(SEQ ID NO：51)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVTTAYLQISSLKAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：52)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：53)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：50-53任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTLT(SEQ ID NO：54)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGRGLEWMG(SEQ ID NO：51)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVTTAYLQISSLKAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：52)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：53)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ IDNO：51-54任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体4.1A4拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTLT(SEQ ID NO：55)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGRGLEWMG(SEQ ID NO：51)的氨基酸序列的FR-H2；包含RFVFSLDTSVTTAYLQISSLKAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：52)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：53)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ IDNO：51-53和55任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体1A4.C96S.Q1E或1A4.C96Y.Q1E拥有的。
在另一个例子中，本发明提供抗TIGIT抗体，其包括至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含TYGMGVS(SEQ ID NO：68)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SIWWNGNTYYNPSLKS(SEQ ID NO：69)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TGGAVITWFAY(SEQID NO：70)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KASQSVGKNIA(SEQ ID NO：71)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含YASNRYT(SEQ ID NO：72)的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(f)包含QHIYNSPYP(SEQ ID NO：73)的氨基酸序列的HVR-L3，或上述HVR中一种或多种和其与SEQ ID NO：68-73任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，前述实施例的任何上述抗TIGIT抗体可包括例如(a)包含TYGMGVS(SEQ ID NO：68)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SIWWNGNTYYNPSLKS(SEQ ID NO：69)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TGGAVITWFAY(SEQ IDNO：70)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KASQSVGKNIA(SEQ ID NO：71)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含YASNRYT(SEQ ID NO：72)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QHIYNSPYP(SEQ IDNO：73)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体rat6B2和其衍生物(例如h6B2.L1H1，h6B2.L2H1，h6B2.L1H2，h6B2.L1H3，h6B2.L1H4，h6B2.L1H5，和h6B2.L2H5)拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述轻链可变区框架区(FR)中至少一种，两种，三种，或四种：包含X1IX2MTQSPX3SX4SX5SVGDRVTX6X7C(SEQ ID NO：88)的氨基酸序列的FR-L1，其中X1是D或N；X2是Q或V；X3是K或S；X4是L或M；X5是A或I；X6是I或M；且X7是N或T；包含WYQQKPGX1X2PKLLIY(SEQ ID NO：89)的氨基酸序列的FR-L2，其中X1是K或Q且X2是A或S；包含GVPX1RFX2GX3GSGTDFTX4TIX5X6X7QX8EDX9AX10X11YC(SEQ ID NO：90)的氨基酸序列的FR-L3，其中X1是D或S；X2是S或T；X3是G或S；X4是F或L；X5是N或S；X6是S或T；X7是L或V；X8是A或P；X9是A或I；X10是F或T；且X11是F或Y；和/或包含FGX1GTKX2EIK(SEQ ID NO：91)的氨基酸序列的FR-L4，其中X1是Q或T且X2是L或V，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：88-91任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat6B2和其衍生物(例如h6B2.L1H1，h6B2.L2H1，h6B2.L1H2，h6B2.L1H3，h6B2.L1H4，h6B2.L1H5，和h6B2.L2H5)拥有的。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述轻链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含NIVMTQSPKSMSISVGDRVTMNC(SEQ ID NO：92)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGQSPKLLIY(SEQ ID NO：93)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPDRFTGGGSGTDFTLTINTVQAEDAAFFYC(SEQ IDNO：94)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGTGTKLEIK(SEQ ID NO：95)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：92-65任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat6B2拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：96)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKSPKLLIY(SEQ ID NO：97)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC(SEQ IDNO：99)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：100)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：96-97和99-100任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h6B2.L1H1，h6B2.L1H2，h6B2.L1H3，h6B2.L1H4，和h6B2.L1H5拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQID NO：96)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：98)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO：99)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：100)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：96和98-100任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h6B2.L2H1和h6B2.L2H5拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含X1VX2LKESGPX3X4X5X6PX7X8TLX9LTCX10FSGFSLS(SEQ ID NO：74)的氨基酸序列的FR-H1，其中X1是E或Q；X2是S或T；X3是A或G；X4是I或L；X5是L或V；X6是K或Q；X7是S或T；X8是H或Q；X9是S或T；且X10是S或T；包含WIRQPX1X2KX3LEWLA(SEQ ID NO：75)的氨基酸序列的FR-H2，其中X1是P或S；X2是E或G；且X3是A或G；包含RLTX1X2KDX3SX4X5QX6X7LX8X9TX10X11DX12X13DTATYYCAH(SEQ ID NO：76)的氨基酸序列的FR-H3，其中X1是I或V；X2是S或T；X3是A或T；X4是K或N；X5是D或N；X6是A或V；X7是F或V；X8是N或T；X9是M或V；X10是N或S；X11是M或V；X12是P或T；且X13是T或V；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：77)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：74-77任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat6B2和其衍生物(例如h6B2.L1H1，h6B2.L2H1，h6B2.L1H2，h6B2.L1H3，h6B2.L1H4，h6B2.L1H5，和h6B2.L2H5)拥有的。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含QVSLKESGPGILQPSHTLSLTCSFSGFSLS(SEQ ID NO：78)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPSEKGLEWLA(SEQ ID NO：79)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTVSKDASNDQAFLNVTSVDTTDTATYYCAH(SEQ ID NO：80)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：77)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ IDNO：77-80任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat6B2拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLS(SEQ ID NO：81)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPPGKALEWLA(SEQ ID NO：82)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTVTKDASKNQAVLTMTNMDPVDTATYYCAH(SEQ ID NO：83)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：77)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ IDNO：77和81-83任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h6B2.L1H1和h6B2.L2H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLS(SEQ ID NO：81)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPPGKALEWLA(SEQ ID NO：82)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTITKDASKNQAVLTMTNMDPVDTATYYCAH(SEQ ID NO：84)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：77)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：77，81-82，和84任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h6B2.L1H2拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLS(SEQ ID NO：81)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPPGKALEWLA(SEQ ID NO：82)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTVTKDTSKNQAVLTMTNMDPVDTATYYCAH(SEQ ID NO：85)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：77)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：77，81-82，和85任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h6B2.L1H3拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLS(SEQ IDNO：81)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPPGKALEWLA(SEQ ID NO：82)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTVTKDASKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAH(SEQ ID NO：86)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：77)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：77，81-82，和85任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h6B2.L1H4拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLS(SEQ ID NO：81)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPPGKALEWLA(SEQ ID NO：82)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTITKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAH(SEQ ID NO：87)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：77)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：77，81-82，和87任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h6B2.L1H5和h6B2.L2H5拥有的。
在另一个例子中，本发明提供抗TIGIT抗体，其包括至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含TYGMGVS(SEQ ID NO：110)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SIWWNGNTYYNPSLRS(SEQ ID NO：111)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TGGAVITWFAY(SEQ ID NO：112)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KASQSVGKNIA(SEQ ID NO：113)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含YASNRYT(SEQ ID NO：114)的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(f)包含QHIYNSPYP(SEQ ID NO：115)的氨基酸序列的HVR-L3，或上述HVR中一种或多种和其与SEQID NO：110-115任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，前述实施例的任何上述抗TIGIT抗体可包括例如(a)包含TYGMGVS(SEQ ID NO：110)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SIWWNGNTYYNPSLRS(SEQ ID NO：111)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含TGGAVITWFAY(SEQ ID NO：112)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KASQSVGKNIA(SEQ ID NO：113)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含YASNRYT(SEQ ID NO：114)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含QHIYNSPYP(SEQ ID NO：115)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体rat10A5和其衍生物(例如h10A5.L1H1；h10A5.L2H1；h10A5.L3H1；h10A5.L4H1；h10A5.L1H2；h10A5.L1H3；h10A5.L1H4；和h10A5.L4H4)拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述轻链可变区框架区(FR)中至少一种，两种，三种，或四种：包含X1IVMTQSPX2X3X4SX5SX6GX7RX8TX9X10C(SEQ ID NO：129)的氨基酸序列的FR-L1，其中X1是E或N；X2是A或K；X3是S或T；X4是L或M；X5是I或V；X6是I或P；X7是D或E；X8是A或V；X9是L或M；且X10是N或S；包含WYQQKX1GQX2PX3LLIY(SEQ ID NO：130)的氨基酸序列的FR-L2，其中X1是P或T；X2是A或S；且X3是Q或R；包含GX1PX2RFX3GX4GSGTX5FTLTIX6SX7QX8EDX9AX1 0X11YC(SEQ ID NO：131)的氨基酸序列的FR-L3，其中X1是I或V；X2是A或D；X3是S或T；X4是G或S；X5是D或E；X6是N或S；X7是L或V；X8是A或S；X9是A或F；X10是F或V；且X11是F或Y；和/或包含FGX1GTKX2EIK(SEQ ID NO：132)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：129-132任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat10A5和其衍生物(例如h10A5.L1H1；h10A5.L2H1；h10A5.L3H1；h10A5.L4H1；h10A5.L1H2；h10A5.L1H3；h10A5.L1H4；和h10A5.L4H4)拥有的。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述轻链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含NIVMTQSPKSMSISIGDRVTMNC(SEQ ID NO：133)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKTGQSPQLLIY(SEQ ID NO：134)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPDRFTGGGSGTDFTLTINSVQAEDAAFFYC(SEQ ID NO：135)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGTGTKLEIK(SEQ ID NO：136)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：133-136任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat10A5拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(SEQID NO：137)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGQSPRLLIY(SEQ ID NO：138)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(SEQ ID NO：140)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：142)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：137-138，140，和142任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h10A5.L1H1，h10A5.L1H2，h10A5.L1H3，和h10A5.L1H4拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(SEQ ID NO：137)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：139)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(SEQ ID NO：140)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQID NO：142)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：137，139-140，和142任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h10A5.L2H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(SEQ ID NO：137)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGQSPRLLIY(SEQ ID NO：138)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(SEQ ID NO：141)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：142)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ IDNO：137-138和141-142任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h10A5.L3H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC(SEQ ID NO：137)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：139)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC(SEQ ID NO：141)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：142)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：137，139，和141-142任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h10A5.L4H1和h10A5.L4H4拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含X1VX2LKESGPX3X4X5X6PX7X8TLX9LTCX10FSGFSLT(SEQ ID NO：116)的氨基酸序列的FR-H1，其中X1是E或Q；X2是S或T；X3是A或G；X4是I或L；X5是L或V；X6是K或Q；X7是S或T；X8是H或Q；X9是S或T；且X10是S或T；包含WIRQPX1X2KX3LEWLA(SEQ ID NO：117)的氨基酸序列的FR-H2，其中X1是P或S；X2是E或G；且X3是A或G；包含RLTX1X2KDTSX3X4QX5X6LX7X8TX9X10DX11X12DTATYYCAH(SEQ ID NO：118)的氨基酸序列的FR-H3，其中X1是I或V；X2是S或T；X3是K或N；X4是D或N；X5是A或V；X6是F或V；X7是N或T；X8是M或V；X9是N或S；X10是M或V；X11是P或T；且X12是T或V；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：119)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：116-119任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat10A5和其衍生物(例如h10A5.L1H1；h10A5.L2H1；h10A5.L3H1；h10A5.L4H1；h10A5.L1H2；h10A5.L1H3；h10A5.L1H4；和h10A5.L4H4)拥有的。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含QVSLKESGPGILQPSHTLSLTCSFSGFSLT(SEQID NO：120)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPSEKGLEWLA(SEQ ID NO：121)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTVSKDTSNDQAFLNVTSVDTTDTATYYCAH(SEQ ID NO：122)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：119)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：119-122任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat10A5拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLT(SEQ ID NO：123)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPPGKALEWLA(SEQ ID NO：124)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTVTKDTSKNQAVLTMTNMDPVDTATYYCAH(SEQ ID NO：125)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：119)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：119和123-125任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h10A5.L1H1，h10A5.L2H1，h10A5.L3H1，和h10A5.L4H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLT(SEQ ID NO：123)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPPGKALEWLA(SEQ ID NO：124)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTITKDTSKNQAVLTMTNMDPVDTATYYCAH(SEQ ID NO：126)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：119)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：119，123-124，和126任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h10A5.L1H2拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLT(SEQ ID NO：123)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPPGKALEWLA(SEQ ID NO：124)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTVTKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAH(SEQ ID NO：127)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：119)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：119，123-124，和127任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h10A5.L1H3拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLT(SEQ ID NO：123)的氨基酸序列的FR-H1；包含WIRQPPGKALEWLA(SEQ ID NO：124)的氨基酸序列的FR-H2；包含RLTITKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAH(SEQ ID NO：128)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：119)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：119，123-124，和128任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h10A5.L1H4和h10A5.L4H4拥有的。
在另一个例子中，本发明提供抗TIGIT抗体，其包括至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含EYSIY(SEQ ID NO：153)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含RIDPKNGRTYYVDKFKN(SEQ ID NO：154)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含IYGFYFDF(SEQ IDNO：155)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KGSQNVNKYLV(SEQ ID NO：156)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含NTDNLQS(SEQ ID NO：157)的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(f)包含YQYNNGFT(SEQ ID NO：158)的氨基酸序列的HVR-L3，或上述HVR中一种或多种和其与SEQ ID NO：153-158任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，前述实施例的任何上述抗TIGIT抗体可包括例如(a)包含EYSIY(SEQ ID NO：153)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含RIDPKNGRTYYVDKFKN(SEQ ID NO：154)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含IYGFYFDF(SEQ IDNO：155)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KGSQNVNKYLV(SEQ ID NO：156)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含NTDNLQS(SEQ ID NO：157)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含YQYNNGFT(SEQ ID NO：158)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体rat7E7和其衍生物(例如h7E7.L1H1，h7E7.L2H1，h7E7.L3H1，h7E7.L4H1，h7E7.L5H1，h7E7.L1H2，h7E7.L1H3，h7E7.L1H4，h7E7.L1H5，h7E7.L1H6，h7E7.L1H7，h7E7.L1H8，h7E7.L1H9，h7E7.L5H9，和7E7.L5aH9a)拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述轻链可变区框架区(FR)中至少一种，两种，三种，或四种：包含X1IX2LTQSPSX3LSASVGDRVTX4X5C(SEQ ID NO：180)的氨基酸序列的FR-L1，其中X1是D或N；X2是H或Q；X3是F或L；X4是I或L；且X5是S或T；包含WYQQKX1GX2APKLLIY(SEQ IDNO：181)的氨基酸序列的FR-L2，其中X1是L或P；且X2是E或K；包含GX1PSRFSGSGSGTX2X3TLTISSLQPEDX4ATYX5C(SEQ ID NO：182)的氨基酸序列的FR-L3，其中X1是I或V；X2是D或E；X3是F或Y；X4是A或F；且X5是F或Y；和/或包含FGX1GTKX2EIK(SEQ ID NO：183)的氨基酸序列的FR-L4，其中X1是Q或S；且X2是L或V，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：180-183任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat7E7和其衍生物(例如h7E7.L1H1，h7E7.L2H1，h7E7.L3H1，h7E7.L4H1，h7E7.L5H1，h7E7.L1H2，h7E7.L1H3，h7E7.L1H4，h7E7.L1H5，h7E7.L1H6，h7E7.L1H7，h7E7.L1H8，h7E7.L1H9，h7E7.L5H9，和7E7.L5aH9a)拥有的。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述轻链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含NIHLTQSPSLLSASVGDRVTLSC(SEQ ID NO：184)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKLGEAPKLLIY(SEQ ID NO：185)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDAATYFC(SEQ ID NO：186)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGSGTKLEIK(SEQ ID NO：187)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：184-187任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat7E7拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：188)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：189)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPEDFATYFC(SEQ ID NO：190)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：196)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：188-190和196任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H1，h7E7.L1H2，h7E7.L1H3，h7E7.L1H4，h7E7.L1H5，h7E7.L1H6，h7E7.L1H7，h7E7.L1H8，和h7E7.L1H9拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：188)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：189)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPEDFATYFC(SEQ ID NO：191)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：196)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ IDNO：188-189，191和196任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L2H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQID NO：188)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：189)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFC(SEQ ID NO：192)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：196)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：188-189，192和196任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L3H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：188)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：189)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPEDFATYYC(SEQID NO：193)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：196)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：188-189，193和196任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L4H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：188)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：189)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：194)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：196)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：188-189，194和196任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L5H1和h7E7.L5H9拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQID NO：188)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：189)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：195)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：196)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：188-189和195-196任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体7E7.L5aH9a拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含EVQLX1QSGX2EX3X4X5PGASVKX6SCKAX7GYTFT(SEQ ID NO：159)的氨基酸序列的FR-H1，其中X1是Q或V；X2是A或P；X3是L或V；X4是K或Q；X5是K或R；X6是L或V；且X7是S或T；包含WVX1QX2PX3QX4LEX5X6G(SEQ ID NO：160)的氨基酸序列的FR-H2，其中X1是K或R；X2是A或R；X3是G或K；X4是R或S；X5是I或W；且X6是I或M；包含RX1TX2TX3DTSX4X5TAYMX6LSSLX7SEDTAX8YX9CX1 0R(SEQ ID NO：161)的氨基酸序列的FR-H3，其中X1是A或V；X2是I或L；X3是A或R；X4是A或S；X5是N或S；X6是E或Q；X7是R或T；X8是T或V；X9是F或Y；且X10是A或T；和/或包含WGQGX1X2VTX3SS(SEQ ID NO：162)的氨基酸序列的FR-H4，其中X1是T或V；X2是L或M；且X3是A或V，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：159-162任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat7E7和其衍生物(例如h7E7.L1H1，h7E7.L2H1，h7E7.L3H1，h7E7.L4H1，h7E7.L5H1，h7E7.L1H2，h7E7.L1H3，h7E7.L1H4，h7E7.L1H5，h7E7.L1H6，h7E7.L1H7，h7E7.L1H8，h7E7.L1H9，h7E7.L5H9，和7E7.L5aH9a)拥有的。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含EVQLQQSGPELQRPGASVKLSCKATGYTFT(SEQ ID NO：163)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVKQRPKQSLEIIG(SEQ ID NO：164)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTADTSSNTAYMQLSSLTSEDTATYFCTR(SEQ ID NO：165)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGVMVTASS(SEQ ID NO：166)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：163-166任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat7E7拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：168)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCTR(SEQ ID NO：172)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：167-138，172，和179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H1，h7E7.L2H1，h7E7.L3H1，h7E7.L4H1，和h7E7.L5H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEWIG(SEQ ID NO：169)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCTR(SEQ ID NO：172)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：167，169，172，和179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H2拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEIMG(SEQ ID NO：170)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCTR(SEQ ID NO：172)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：167，170，172，和179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H3拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：168)的氨基酸序列的FR-H2；包含RVTLTADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCTR(SEQ ID NO：173)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：167-168，173，和179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H4拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：168)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCTR(SEQ ID NO：174)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：167-168，174，和179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H5拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：168)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCTR(SEQ ID NO：175)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：167-168，175，和179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H6拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：168)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：176)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：167-168，176，和179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H7拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：168)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：177)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：167-168，177，和179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H8拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEWMG(SEQ ID NO：171)的氨基酸序列的FR-H2；包含RVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：178)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：167，171，和178-179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h7E7.L1H9和h7E7.L5H9拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：167)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEIMG(SEQ ID NO：170)的氨基酸序列的FR-H2；包含RVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：178)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：179)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：167，170，和178-179任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体7E7.L5aH9a拥有的。
在另一个例子中，本发明提供抗TIGIT抗体，其包括至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含EHSIY(SEQ ID NO：215)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含RIDPKNGRTYFVDKFKN(SEQ ID NO：216)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含IDGFYFDF(SEQ IDNO：217)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KGSQNVNKYLV(SEQ ID NO：218)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含STDNLQS(SEQ ID NO：219)的氨基酸序列的HVR-L2；和/或(f)包含YQYNNGFT(SEQ ID NO：220)的氨基酸序列的HVR-L3，或上述HVR中一种或多种和其与SEQ ID NO：215-220任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合。在一些情况中，前述实施例的任何上述抗TIGIT抗体可包括例如(a)包含EHSIY(SEQ ID NO：215)的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含RIDPKNGRTYFVDKFKN(SEQ ID NO：216)的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含IDGFYFDF(SEQ IDNO：217)的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含KGSQNVNKYLV(SEQ ID NO：218)的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含STDNLQS(SEQ ID NO：219)的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含YQYNNGFT(SEQ ID NO：220)的氨基酸序列的HVR-L3，诸如由抗TIGIT抗体rat15C8和其衍生物(例如h15C8.L1H1，h15C8.L2H1，h15C8.L3H1，h15C8.L4H1，h15C8.L5H1，h15C8.L1H2，h15C8.L1H3，h15C8.L1H4，h15C8.L1H5，h15C8.L1H6，h15C8.L1H7，h15C8.L1H8，h15C8.L1H9，h15C8.L5H9，和5C8.L5aH9a)拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述轻链可变区框架区(FR)中至少一种，两种，三种，或四种：包含X1IX2LTQSPSX3LSASVGDRVTX4X5C(SEQ ID NO：243)的氨基酸序列的FR-L1，其中X1是D或N；X2是H或Q；X3是F或L；X4是I或L；且X5是S或T；包含WYQQKX1GX2APKLLIY(SEQ IDNO：244)的氨基酸序列的FR-L2，其中X1是L或P且X2是E或K；包含GX1PSRFSGSGSGTX2X3TLTISSLQPEDX4ATYX5C(SEQ ID NO：245)的氨基酸序列的FR-L3，其中X1是I或V；X2是D或E；X3是F或Y；X4是A或F；且X5是F或Y；和/或包含FGX1GTKX2EIK(SEQ ID NO：246)的氨基酸序列的FR-L4，其中X1是Q或S且X2是L或V，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：243-246任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat15C8和其衍生物(例如h15C8.L1H1，h15C8.L2H1，h15C8.L3H1，h15C8.L4H1，h15C8.L5H1，h15C8.L1H2，h15C8.L1H3，h15C8.L1H4，h15C8.L1H5，h15C8.L1H6，h15C8.L1H7，h15C8.L1H8，h15C8.L1H9，h15C8.L5H9，和5C8.L5aH9a)拥有的。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述轻链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含NIHLTQSPSLLSASVGDRVTLSC(SEQ ID NO：247)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKLGEAPKLLIY(SEQ ID NO：248)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDAATYFC(SEQ ID NO：249)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGSGTKLEIK(SEQ IDNO：250)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：247-250任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat15C8拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：251)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：252)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPEDFATYFC(SEQ ID NO：253)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：259)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：251-253和259任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H1，h15C8.L1H2，h15C8.L1H3，h15C8.L1H4，h15C8.L1H5，h15C8.L1H6，h15C8.L1H7，h15C8.L1H8，和h15C8.L1H9拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：251)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：252)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPEDFATYFC(SEQ ID NO：254)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：259)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：251-252，254，和259任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L2H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：251)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：252)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYFC(SEQID NO：255)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：259)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：251-252，255，和259任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L3H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：251)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：252)的氨基酸序列的FR-L2；包含GIPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：256)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：259)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：251-252，256，和259任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L4H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：251)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：252)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：257)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：259)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ IDNO：251-252，257，和259任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L5H1和h15C8.L5H9拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：251)的氨基酸序列的FR-L1；包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：252)的氨基酸序列的FR-L2；包含GVPSRFSGSGSGTEYTLTISSLQPEDFATYYC(SEQID NO：258)的氨基酸序列的FR-L3；和/或包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：259)的氨基酸序列的FR-L4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：251-252，和258-259任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体5C8.L5aH9a拥有的。
在一些情况中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含EVQLX1QSGX2EX3X4X5PGASVKX6SCKASGYTFT(SEQ ID NO：221)的氨基酸序列的FR-H1，其中X1是Q或V；X2是A或P；X3是L或V；X4是K或Q；X5是K或R；且X6是L或V；包含WX1X2QX3PX4QX5LEX6X7G(SEQ ID NO：222)的氨基酸序列的FR-H2，其中X1是L或V；X2是K或R；X3是A或R；X4是G或K；X5是R或S；X6是I或W；且X7是I或M；包含RX1TX2TX3X4TSX5X6TAYMX7LSSLX8SEDTAX9YX10CAR(SEQ ID NO：223)的氨基酸序列的FR-H3，其中X1是A或V；X2是I或L；X3是R或T；X4是D或N；X5是A或S；X6是N或S；X7是E或Q；X8是R或T；X9是I或V；且X10是F或Y；和/或包含WGQGX1X2VTX3SS(SEQ ID NO：224)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：221-224任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat15C8和其衍生物(例如h15C8.L1H1，h15C8.L2H1，h15C8.L3H1，h15C8.L4H1，h15C8.L5H1，h15C8.L1H2，h15C8.L1H3，h15C8.L1H4，h15C8.L1H5，h15C8.L1H6，h15C8.L1H7，h15C8.L1H8，h15C8.L1H9，h15C8.L5H9，和5C8.L5aH9a)拥有的。该抗TIGIT抗体可进一步包括例如下述重链可变区FR中至少一种，两种，三种，或四种：包含EVQLQQSGPELQRPGASVKLSCKASGYTFT(SEQID NO：225)的氨基酸序列的FR-H1；包含WLKQRPKQSLEIIG(SEQ ID NO：226)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTTNTSSNTAYMQLSSLTSEDTAIYFCAR(SEQ ID NO：227)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGVMVTASS(SEQ ID NO：228)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：225-228任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体rat15C8拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WLRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：230)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：235)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：229-230，235，和242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H1，h15C8.L2H1，h15C8.L3H1，h15C8.L4H1，和h15C8.L5H1拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：231)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：235)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：229，231，235，和242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H2拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WLRQAPGQRLEWIG(SEQ ID NO：232)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：235)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：229，232，235，和242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H3拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WLRQAPGQRLEIMG(SEQ ID NO：233)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：235)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：229，233，235，和242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H4拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WLRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：230)的氨基酸序列的FR-H2；包含RVTLTTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：236)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：229-230，236，和242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H5拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WLRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：230)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATITTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：237)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：229-230，237，和242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H6拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WLRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：230)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR(SEQ ID NO：238)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：229-230，238，和242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H7拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WLRQAPGQRLEIIG(SEQ ID NO：230)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATLTTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：239)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：229-230，239，和242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H8拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WVRQAPGQRLEWMG(SEQ ID NO：234)的氨基酸序列的FR-H2；包含RVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：240)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQID NO：229，234，240，和242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体h15C8.L1H9和h15C8.L5H9拥有的。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：229)的氨基酸序列的FR-H1；包含WLRQAPGQRLEIMG(SEQ ID NO：233)的氨基酸序列的FR-H2；包含RATITTDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：241)的氨基酸序列的FR-H3；和/或包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：242)的氨基酸序列的FR-H4，或上述FR中一种或多种和其与SEQ ID NO：229，233，和241-242任一具有至少约90％序列同一性(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％同一性)的一种或多种变体的组合，诸如由抗TIGIT抗体5C8.L5aH9a拥有的。
还提供抗TIGIT抗体，其包括具有与SEQ ID NO：60，62，66，101，103，104，105，106，107，145，146，147，148，197，199，200，201，202，203，204，205，206，207，213，260，262，263，264，265，266，267，268，269，270，或276的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区。还提供抗TIGIT抗体，其包括具有与SEQ ID NO：61，63，64，67，102，108，109，144，149，150，151，152，198，208，209，210，211，212，214，261，271，272，273，274，275，或277的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：60的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：61的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：62的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ IDNO：63的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQID NO：62的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：64的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：66的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：67的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：101的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：102的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：103的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：108的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：104的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：108的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：105的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：108的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：106的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：108的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQID NO：107的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：109的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：143的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：144的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：145的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：149的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：145的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：150的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：145的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：151的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：145的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：152的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：147的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQID NO：149的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQID NO：148的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：149的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：148的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：152的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：197的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：198的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：199的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：208的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：200的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：208的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：201的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：208的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：202的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQID NO：208的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQID NO：203的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：208的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：204的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：208的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：205的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：208的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：206的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：208的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：207的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：208的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：207的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：212的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：199的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQID NO：209的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQID NO：199的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：210的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：199的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：211的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：199的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：212的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：213的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：214的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：260的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：261的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：262的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：271的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：263的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQID NO：271的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQID NO：264的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：271的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：265的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：271的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：266的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：271的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：267的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：271的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：268的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：271的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：269的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：271的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：270的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQID NO：271的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQID NO：270的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：275的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：262的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：272的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：262的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：273的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：262的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：274的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：262的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：275的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。在一些情况中，该抗TIGIT抗体包括具有与SEQ ID NO：276的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO：277的至少90％(例如91％，92％，93％，或94％)，或至少95％(例如96％，97％，98％，或99％)序列同一性或其序列的轻链可变区。
在另一个方面，提供抗TIGIT抗体，其中该抗体包含上文提供的任何实施方案中的VH和上文提供的任何实施方案中的VL，其中该可变域序列之一或二者包括翻译后修饰。
在一些情况中，在人TIGIT以外，上文描述的抗TIGIT抗体中任一种可以能够结合家兔TIGIT。在一些情况中，上文描述的抗TIGIT抗体中任一种可以能够结合人TIGIT和食蟹猴TIGIT二者。在一些情况中，上文描述的抗TIGIT抗体中任一种可以能够结合人TIGIT，食蟹猴TIGIT，和家兔TIGIT。在一些情况中，上文描述的抗TIGIT抗体中任一种(例如4.1D3或其衍生物)可以能够结合人TIGIT，食蟹猴TIGIT，和家兔TIGIT，但是不结合鼠TIGIT。
在一些情况中，该抗TIGIT抗体以约10nM或更低的Kd结合人TIGIT且以约10nM或更低的Kd结合食蟹猴TIGIT(例如以约0.1nM至约1nM的Kd结合人TIGIT且以约0.5nM至约1nM的Kd结合食蟹猴TIGIT，例如以约0.1nM或更低的Kd结合人TIGIT且以约0.5nM或更低的Kd结合食蟹猴TIGIT)。
在一些实施方案中，该抗TIGIT抗体是拮抗性抗体。该拮抗性抗体可以特异性结合TIGIT且抑制或阻断TIGIT与脊髓灰质炎病毒受体(PVR)相互作用(例如，该拮抗性抗体抑制由TIGIT结合PVR介导的细胞内信号传导)。在一些情况中，该拮抗性抗体以10nM或更低(例如1nM至约10nM)的IC50值抑制或阻断人TIGIT结合人PVR。在一些情况中，该拮抗性抗体以50nM或更低(例如1nM至约50nM，例如1nM至约5nM)的IC50值抑制或阻断食蟹猴TIGIT结合食蟹猴PVR。
在其它实施方案中，该抗TIGIT抗体可以是激动性抗体。该激动性抗体能特异性结合TIGIT且刺激PVR与CD226或CD96的相互作用。例如，该激动性抗体能特异性结合TIGIT且刺激PVR与CD226和CD96的相互作用(例如结合人TIGIT且刺激人PVR与人CD226和人CD96的相互作用和/或结合食蟹猴TIGIT且刺激食蟹猴PVR与食蟹猴CD226和食蟹猴CD96的相互作用)。
在又一个方面，本发明提供一种分离的抗体，其与上文描述的任何抗TIGIT抗体竞争结合TIGIT。在还有又一个方面，本发明提供一种分离的抗体，其与上文描述的抗TIGIT抗体结合相同表位。
依照任何上述实施方案的抗TIGIT抗体是单克隆抗体，包含嵌合，人源化，或人抗体。在一个实施方案中，抗TIGIT抗体是抗体片段，例如Fv，Fab，Fab’，scFv，双抗体，或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体是全长抗体，例如完整IgG抗体(例如完整IgG1抗体)或其它抗体类或同种型，如本文中定义的。
在又一个方面，依照任何上述实施方案的抗TIGIT抗体可单一地或组合地并入下文1-7节中描述的任何特征：
1.抗体亲和力
在某些实施方案中，本文中提供的抗体(例如抗TIGIT抗体)具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM的解离常数(Kd)(例如10-8M或更少，例如10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M)。
在一个实施方案中，Kd是通过放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的。在一个实施方案中，用Fab型式的感兴趣抗体及其抗原实施RIA。例如，通过在存在未标记抗原的滴定系列的情况中用最小浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(见例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了建立测定法的条件，将
Figure BDA0001605976190000991
多孔板(Thermo Scientific)用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被过夜，随后用PBS中的2％(w/v)牛血清清蛋白于室温(约23℃)封闭2-5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与连续稀释的感兴趣Fab(例如与Presta等,Cancer Res.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)混合。然后将感兴趣的Fab温育过夜；然而，温育可持续更长时间(例如约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板，于室温温育(例如1小时)。然后除去溶液，并用PBS中的0.1％聚山梨酯20
Figure BDA0001605976190000993
洗板8次。平板干燥后，加入150μl/孔闪烁液(MICROSCINT-20TM；Packard)，然后在TOPCOUNTTM伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20％的浓度用于竞争性结合测定法。
依照另一个实施方案，Kd是使用
Figure BDA0001605976190000992
表面等离振子共振测定法测量的。例如，于25℃使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)使用
Figure BDA0001605976190000995
-2000或
Figure BDA0001605976190000996
-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)实施测定法。在一个实施方案中，依照供应商的用法说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。将抗原用10mM乙酸钠pH 4.8稀释至5μg/ml(约0.2μM)，然后以5μl/分钟的流速注射以获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，于25℃以约25μl/分钟的流速注入在含0.05％聚山梨酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab(0.78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(
Figure BDA0001605976190000994
Evaluation Software version 3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。以比率koff/kon计算平衡解离常数(Kd)。见例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过106M-1S-1，那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，在存在浓度渐增的抗原的情况中，测量PBSpH 7.2中20nM抗抗原抗体(Fab形式)于25℃的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的升高或降低。
2.抗体片段
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)2，Fv，和scFv片段，及下文所描述的其它片段。关于某些抗体片段的综述，见Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，见例如Pluckthün,于The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编,(Springer-Verlag,New York),第269-315页(1994)；还可见WO 93/16185；及美国专利No.5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基，并且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论，见美国专利No.5,869,046。
双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。见例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)；及Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三抗体和四抗体也记载于Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)。
单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域或整个或部分轻链可变域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；见例如美国专利No.6,248,516B1)。
可以通过多种技术，包括但不限于对完整抗体的蛋白水解消化及重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)的生成来生成抗体片段，如本文中所描述的。
3.嵌合抗体和人源化抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体记载于例如美国专利No.4,816,567；及Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)。在一个例子中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，自小鼠，大鼠，仓鼠，家兔，或非人灵长类，诸如猴衍生的可变区)和人恒定区。在又一个例子中，嵌合抗体是“类转换的”抗体，其中类或亚类已经自亲本抗体的类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。一般地，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中HVR，例如CDR(或其部分)自非人抗体衍生，而FR(或其部分)自人抗体序列衍生。任选地，人源化抗体还会至少包含人恒定区的一部分。在一些实施方案中，将人源化抗体中的一些FR残基用来自非人抗体(例如衍生HVR残基的抗体)的相应残基替代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其生成方法综述于例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)，并且进一步记载于例如Riechmann等,Nature332:323-329(1988)；Queen等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美国专利No.5,821,337,7,527,791,6,982,321和7,087,409；Kashmiri等,Methods 36:25-34(2005)(描述了特异性决定区(SDR)嫁接)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述了“重修表面”)；Dall’Acqua等,Methods36:43-60(2005)(描述了“FR改组”)；及Osbourn等,Methods 36:61-68(2005)和Klimka等,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述了FR改组的“引导选择”方法)。
可以用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合(best-fit)”方法选择的框架区(见例如Sims等,J.Immunol.151:2296(1993))；自轻或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列衍生的框架区(见例如Carter等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；及Presta等,J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟的(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(见例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；和通过筛选FR文库衍生的框架区(见例如Baca等,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及Rosok等,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
4.人抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是人抗体。可以使用本领域中已知的多种技术来生成人抗体。一般地，人抗体记载于van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)。
可以通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，所述转基因动物已经修饰为响应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其替换内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于自转基因动物获得人抗体的方法的综述，见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还可见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584，其描述了XENOMOUSETM技术；美国专利No.5,770,429，其描述了
Figure BDA0001605976190001021
技术；美国专利No.7,041,870，其描述了K-M
Figure BDA0001605976190001022
技术，和美国专利申请公开文本No.US 2007/0061900，其描述了
Figure BDA0001605976190001023
技术)。可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区。
也可以通过基于杂交瘤的方法生成人抗体。已经描述了用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异骨髓瘤细胞系(见例如Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；及Boerner等,
J.Immunol.,147:86(1991))。经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于Li等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。其它方法包括那些例如记载于美国专利No.7,189,826(其描述了自杂交瘤细胞系生成单克隆人IgM抗体)和Ni,XiandaiMianyixue,26(4):265-268(2006)(其描述了人-人杂交瘤)的。人杂交瘤技术(Trioma技术)也记载于Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)及Vollmers和Brandlein,Methods and Findings in Experimental and ClinicalPharmacology,27(3):185-91(2005)。
也可以通过分离自人衍生的噬菌体展示文库选择的Fv克隆可变域序列生成人抗体。然后，可以将此类可变域序列与期望的人恒定域组合。下文描述了自抗体文库选择人抗体的技术。
5.文库衍生的抗体
可以通过对组合文库筛选具有期望的一种或多种活性的抗体来分离本发明的抗体。例如，用于生成噬菌体展示文库并对此类文库筛选拥有期望结合特征的抗体的多种方法是本领域中已知的。此类方法综述于例如Hoogenboom等,于Methods in MolecularBiology 178:1-37(O’Brien等编,Human Press,Totowa,NJ,2001)，并且进一步记载于例如McCafferty等,Nature 348:552-554；Clackson等,Nature 352:624-628(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury,于Methods in Molecular Biology248:161-175(Lo编,Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；及Lee等,J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004)。
在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的全集分别通过聚合酶链式反应(PCR)克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以对所述噬菌体文库筛选抗原结合噬菌体，如记载于Winter等,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)的。噬菌体通常以单链Fv(scFv)片段或以Fab片段展示抗体片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而不需要构建杂交瘤。或者，可以(例如自人)克隆天然全集以在没有任何免疫的情况中提供针对一大批非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源，如由Griffiths等,EMBO J,12:725-734(1993)描述的。最后，也可以通过自干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用含有随机序列的PCR引物编码高度可变的CDR3区并在体外实现重排来合成生成未免疫文库，如由Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所描述的。描述人抗体噬菌体文库的专利公开文本包括例如：美国专利No.5,750,373，和美国专利公开文本No.2005/0079574,2005/0119455,2005/0266000,2007/0117126,2007/0160598,2007/0237764,2007/0292936和2009/0002360。
认为自人抗体文库分离的抗体或抗体片段是本文中的人抗体或人抗体片段。
6.多特异性抗体
在任一上述方面中，本文中提供的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)可以是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体可以是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，双特异性抗体可以结合TIGIT的两个不同表位。在某些实施方案中，结合特异性之一针对TIGIT且另一针对任何其它抗原(例如第二生物学分子，例如细胞表面抗原，例如肿瘤抗原)。因而，双特异性抗TIGIT抗体可以具有针对TIGIT的和第二生物学分子，诸如PD-1，PD-L1，PD-L2，OX40，PD-1，CTLA-4，LAG3，TIM3，BTLA，VISTA，B7H4，或CD96的结合特异性。双特异性抗体也可以以全长抗体或抗体片段制备。
在其它实施方案中，双特异性抗体可以结合TIGIT，OX40，PD-1，PD-L1，PD-L2的两个不同表位。在某些实施方案中，结合特异性之一针对TIGIT且另一针对任何其它抗原(例如第二生物学分子，诸如OX40)。在其它实施方案中，该双特异性抗体可以具有针对TIGIT和PD-L1；TIGIT和PD-L2；TIGIT和PD-1；TIGIT和CTLA-4；TIGIT和LAG3；TIGIT和TIM3；TIGIT和BTLA；TIGIT和VISTA；TIGIT和B7H4；或TIGIT和CD96的结合特异性，其中该双特异性抗体优选对于TIGIT是拮抗性抗体且对于其第二靶物是拮抗性抗体。在其它实施方案中，该双特异性抗体可以具有针对TIGIT和CD226；TIGIT和CD28；TIGIT和CD27；TIGIT和CD137；TIGIT和HVEM；TIGIT和GITR；TIGIT和MICA；TIGIT和ICOS；TIGIT和NKG2D；或TIGIT和2B4的结合特异性，其中该双特异性抗体优选对于TIGIT和其第二靶物是拮抗性抗体。在其它实施方案中，该双特异性抗体可以具有性质上不是拮抗性的针对TIGIT的结合特异性(即，该双特异性抗体不具有作为TIGIT拮抗剂的作用)。
用于生成多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两对免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(见Milstein和Cuello,Nature 305:537(1983))，WO 93/08829，和Traunecker等,EMBO J.10:3655(1991))，和“节-入-穴”工程化(见例如美国专利No.5,731,168)。可以利用多特异性抗体的“节-入-穴”工程化改造来生成含有节的第一臂和含有穴的第二臂，第一臂的节可以结合入第二臂的穴。在一个实施方案中，本发明的多特异性抗体的节可以是抗TIGIT臂。或者，在一个实施方案中，本发明的多特异性抗体的节可以是抗TIGIT臂。也可以使用免疫球蛋白交叉/交换(也称作Fab域交换或CrossMab型式)技术来工程化改造多特异性抗体(参见例如WO2009/080253；Schaefer et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,108:11187-11192(2011))。也可以通过用于生成抗体Fc-异二聚体分子的工程化静电操纵效应(WO 2009/089004A1)；交联两个或更多个抗体或片段(见例如美国专利No.4,676,980,及Brennan等,Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链来生成双特异性抗体(见例如Kostelny等,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用用于生成双特异性抗体片段的“双抗体”技术(见例如Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；及使用单链Fv(sFv)二聚体(见例如Gruber等,J.Immunol.,152:5368(1994))；及如例如Tutt等,J.Immunol.147:60(1991)中所描述的，制备三特异性抗体来生成多特异性抗体。
本文中还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程化改造抗体，包括“章鱼抗体”(见例如US 2006/0025576A1)。
抗体或其抗体片段还可以包括包含结合TIGIT及另一种不同抗原(例如第二生物学分子)的抗原结合位点的“双重作用FAb”或“DAF”(见例如US 2008/0069820)。
7.抗体变体
在某些实施方案中，涵盖本发明的抗TIGIT抗体的氨基酸序列变体。如本文中详细描述的，抗TIGIT抗体可以基于期望的结构和功能特性进行优化。例如，可以期望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。可以通过将合适的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中，或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如对抗体的氨基酸序列内的残基的删除，和/或插入和/或替代。可以进行删除，插入，和替代的任何组合以得到最终的构建体，只要最终的构建体拥有期望的特征，例如，抗原结合。
I.替代，插入，和删除变体
在某些实施方案中，提供了具有一处或多处氨基酸替代的抗体变体。替代诱变感兴趣的位点包括HVR和FR。保守替代在表1中在“优选的替代”的标题下显示。更实质的变化在表1中在“例示性替代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别进一步描述的。可以将氨基酸替代引入感兴趣的抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。
表1：例示性和优选的氨基酸替代
Figure BDA0001605976190001051
Figure BDA0001605976190001061
依照共同的侧链特性，氨基酸可以如下分组：
(1)疏水性的：正亮氨酸,Met,Ala,Val,Leu,Ile；
(2)中性，亲水性的：Cys,Ser,Thr,Asn,Gln；
(3)酸性的：Asp,Glu；
(4)碱性的：His,Lys,Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly,Pro；
(6)芳香族的：Trp,Tyr,Phe。
非保守替代会需要用这些类别之一的成员替换另一个类别的。
一类替代变体牵涉替代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。一般地，为进一步研究选择的所得变体相对于亲本抗体会具有某些生物学特性的改变(例如改善)(例如升高的亲和力，降低的免疫原性)和/或会基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。例示性的替代变体是亲和力成熟的抗体，其可以例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术诸如本文中所描述的那些技术来方便地生成。简言之，将一个或多个HVR残基突变，并将变体抗体在噬菌体上展示，并对其筛选特定的生物学活性(例如结合亲和力)。
可以对HVR做出变化(例如，替代)，例如以改善抗体亲和力。可以对HVR“热点”，即由在体细胞成熟过程期间以高频率经历突变的密码子编码的残基(见例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))，和/或接触抗原的残基做出此类变化，其中对所得的变体VH或VL测试结合亲和力。通过次级文库的构建和再选择进行的亲和力成熟已经记载于例如Hoogenboom等,于Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等编,Human Press,Totowa,NJ,(2001))。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如，易错PCR，链改组，或寡核苷酸指导的诱变)任一将多样性引入为成熟选择的可变基因。然后，创建次级文库。然后，筛选文库以鉴定具有期望的亲和力的任何抗体变体。另一种引入多样性的方法牵涉HVR指导的方法，其中将几个HVR残基(例如，一次4-6个残基)随机化。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性鉴定牵涉抗原结合的HVR残基。特别地，经常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些实施方案中，可以在一个或多个HVR内发生替代，插入，或删除，只要此类变化不实质性降低抗体结合抗原的能力。例如，可以对HVR做出保守变化(例如，保守替代，如本文中提供的)，其不实质性降低结合亲和力。例如，此类变化可以在HVR中的抗原接触残基以外。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个HVR是未改变的，或者含有不超过1，2或3处氨基酸替代。
一种可用于鉴定抗体中可以作为诱变靶位的残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如由Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所描述的。在此方法中，将残基或靶残基的组(例如，带电荷的残基诸如arg，asp，his，lys，和glu)鉴定，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙氨酸或多丙氨酸)替换以测定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始替代表明功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的替代。或者/另外，利用抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体与抗原间的接触点。作为替代的候选，可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的特性。
氨基酸序列插入包括长度范围为1个残基至含有100或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基端融合，及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体的N或C端与酶(例如对于ADEPT)或延长抗体的血清半衰期的多肽的融合物。
II.糖基化变体
在某些实施方案中，可以改变本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)以提高或降低抗体糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列，使得创建或消除一个或多个糖基化位点来方便地实现对本发明的抗TIGIT抗体的糖基化位点的添加或删除。
在抗体包含Fc区的情况中，可以改变其附着的碳水化合物。由哺乳动物细胞生成的天然抗体通常包含分支的，双触角寡糖，其一般通过N连接附着于Fc区的CH2域的Asn297。见例如Wright等,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如，甘露糖，N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)，半乳糖，和唾液酸，以及附着于双触角寡糖结构“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中，可以对本发明抗体中的寡糖进行修饰以创建具有某些改善的特性的抗体变体。
在一个实施方案中，提供了抗TIGIT抗体变体，其具有缺乏附着(直接或间接)于Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，此类抗体中的岩藻糖量可以是1％至80％，1％至65％，5％至65％或20％至40％。通过相对于附着于Asn297的所有糖结构(例如，复合的，杂合的和高甘露糖的结构)的总和，计算Asn297处糖链内岩藻糖的平均量来测定岩藻糖量，如通过MALDI-TOF质谱术测量的，例如如记载于WO 2008/077546的。Asn297指位于Fc区中的约第297位(Fc区残基的EU编号方式)的天冬酰胺残基；然而，Asn297也可以由于抗体中的微小序列变异而位于第297位上游或下游约±3个氨基酸，即在第294位和第300位之间。此类岩藻糖基化变体可以具有改善的ADCC功能。见例如美国专利公开文本No.US 2003/0157108(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。涉及“脱岩藻糖基化的”或“岩藻糖缺乏的”抗体变体的出版物的例子包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等,J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等,Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够生成脱岩藻糖基化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的Lec13CHO细胞(Ripka等,Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请No US 2003/0157108A1,Presta,L；及WO 2004/056312A1,Adams等，尤其在实施例11)，和敲除细胞系，诸如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8敲除CHO细胞(见例如Yamane-Ohnuki等,Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；及WO2003/085107)。
进一步提供了具有两分型寡糖的抗TIGIT抗体变体，例如其中附着于抗体Fc区的双触角寡糖是通过GlcNAc两分的。此类抗体变体可以具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的例子记载于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等)；美国专利No.6,602,684(Umana等)；及US 2005/0123546(Umana等)。还提供了在附着于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可以具有改善的CDC功能。此类抗体变体记载于例如WO 1997/30087(Patel等)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)。
III.Fc区变体
在某些实施方案中，可以将一处或多处氨基酸修饰引入本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)的Fc区中，由此生成Fc区变体(见例如US 2012/0251531)。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸修饰(例如替代)的人Fc区序列(例如，人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4Fc区)。
在某些实施方案中，本发明涵盖拥有一些但不是所有效应器功能的抗TIGIT抗体变体，所述效应器功能使其成为如下应用的期望候选物，其中抗体的体内半衰期是重要的，而某些效应器功能(诸如补体和ADCC)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定法以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消减。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定法以确保抗体缺乏FcγR结合(因此有可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI，FcγRII和FcγRIII。在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页上的表3中汇总了造血细胞上的FcR表达。评估感兴趣分子的ADCC活性的体外测定法的非限制性例子记载于美国专利No.5,500,362(见例如Hellstrom,I.等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(见Bruggemann,M.等,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。或者，可以采用非放射性测定方法(见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定法(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA；和CytoTox
Figure BDA0001605976190001091
非放射性细胞毒性测定法(Promega,Madison,WI))。对于此类测定法有用的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可以在体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如披露于Clynes等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)的。也可以实施C1q结合测定法以确认抗体不能结合C1q，并且因此缺乏CDC活性。见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体激活，可以实施CDC测定法(见例如Gazzano-Santoro等,J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等,Blood 101:1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。也可以使用本领域中已知的方法来实施FcRn结合和体内清除/半衰期测定(见例如Petkova,S.B.等,Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
具有降低的效应器功能的抗体包括那些具有Fc区残基238,265,269,270,297,327和329中的一个或多个的替代的(美国专利No.6,737,056和8,219,149)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265，269，270，297和327中的两处或更多处具有替代的Fc突变体，包括残基265和297替代成丙氨酸的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利No.7,332,581和8,219,149)。
在某些实施方案中，该抗体中的野生型人Fc区的位置329处的脯氨酸用甘氨酸或精氨酸或大得足以破坏Fc/Fcγ受体界面内在Fc的脯氨酸329和FcγRIII的色氨酸残基Trp87和Trp 110之间形成的脯氨酸三明治的氨基酸残基替代(Sondermann et al.,Nature406,267-273(20Jul.2000))。在某些实施方案中，该抗体包含至少一处别的氨基酸替代。在一个实施方案中，该别的氨基酸替代是S228P，E233P，L234A，L235A，L235E，N297A，N297D，或P331S，且仍然在另一个实施方案中，该至少一处别的氨基酸替代是人IgG1Fc区的L234A和L235A或人IgG4Fc区的S228P和L235E(参见例如US2012/0251531)，且仍然在另一个实施方案中，该至少一处别的氨基酸替代是人IgG1Fc区的L234A和L235A和P329G。
描述了具有改善的或降低的对FcR的结合的某些抗体变体(见例如美国专利No.6,737,056；WO 2004/056312，及Shields等,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。
在某些实施方案中，抗体变体包含具有改善ADCC的一处或多处氨基酸替代，例如Fc区的位置298，333，和/或334(残基的EU编号方式)的替代的Fc区。
在一些实施方案中，对Fc区做出改变，其导致改变的(即，改善的或降低的)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如，如记载于美国专利No.6,194,551，WO 99/51642，及Idusogie等,J.Immunol.164:4178-4184(2000)的。
具有延长的半衰期和改善的对新生儿Fc受体(FcRn)的结合的抗体记载于US2005/0014934A1(Hinton等)，新生儿Fc受体(FcRn)负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等,J.Immunol.117:587(1976)及Kim等,J.Immunol.24:249(1994))。那些抗体包含其中具有改善Fc区对FcRn结合的一处或多处替代的Fc区。此类Fc变体包括那些在Fc区残基238,256,265,272,286,303,305,307,311,312,317,340,356,360,362,376,378,380,382,413,424或434中的一处或多处具有替代，例如，Fc区残基434的替代的(美国专利No.7,371,826)。
还可见Duncan和Winter,Nature 322:738-40(1988)；美国专利No.5,648,260；美国专利No.5,624,821；及WO 94/29351，其关注Fc区变体的其它例子。
在一些方面，该抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)包含包含N297G突变的Fc区。
在一些实施方案中，该抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)包含一个或多个重链恒定域，其中该一个或多个重链恒定域选自第一CH1(CH11)域，第一CH2(CH21)域，第一CH3(CH31)域，第二CH1(CH12)域，第二CH2(CH22)域，和第二CH3(CH32)域。在一些情况中，该一个或多个重链恒定域中至少一个与另一个重链恒定域配对。在一些情况中，该CH31和CH32域各自包含隆起或空腔，且其中该CH31域中的隆起或空腔分别可位于该CH32域中的空腔或隆起中。在一些情况中，该CH31和CH32域在所述隆起和空腔之间的界面处相遇。在一些情况中，该CH21和CH22域各自包含隆起或空腔，且其中该CH21域中的隆起或空腔分别可位于该CH22域中的空腔或隆起中。在其它情况中，该CH21和CH22域在所述隆起和空腔之间的界面处相遇。在一些情况中，该抗TIGIT抗体为IgG1抗体。
IV.经半胱氨酸工程化改造的抗体变体
在某些实施方案中，可以期望创建经半胱氨酸工程化改造的抗体，例如，“thioMAb”，其中抗体的一个或多个残基用半胱氨酸残基替代。在具体的实施方案中，替代的残基存在于抗体的可接近位点。通过用半胱氨酸替代那些残基，反应性硫醇基团由此定位于抗体的可接近位点，并且可以用于将抗体与其它模块，诸如药物模块或接头-药物模块缀合，以创建免疫缀合物，如本文中进一步描述的。在某些实施方案中，可以用半胱氨酸替代下列残基之任一个或多个：轻链的V205(Kabat编号方式)；重链的A118(EU编号方式)；和重链Fc区的S400(EU编号方式)。可以如例如美国专利No.7,521,541所述生成经半胱氨酸工程化改造的抗体。
V.抗体衍生物
在某些实施方案中，可以进一步修饰本文中提供的发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)以含有本领域知道的且易于获得的额外非蛋白质性质模块。适合于抗体衍生化的模块包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)，乙二醇/丙二醇共聚物，羧甲基纤维素，右旋糖苷，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚-1,3-二氧戊环，聚-1,3,6-三恶烷，乙烯/马来酸酐共聚物，聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)，和右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇，丙二醇均聚物，环氧丙烷/环氧乙烷共聚物，聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)，聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附着到抗体上的聚合物数目可以变化，而且如果附着了超过一个聚合物，那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可根据下列考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于抗体要改进的具体特性或功能，抗体衍生物是否将用于指定条件下的治疗等。
在另一个实施方案中，提供了抗体和可以通过暴露于辐射选择性加热的非蛋白质性质模块的缀合物。在一个实施方案中，非蛋白质性质模块是碳纳米管(Kam等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。辐射可以是任何波长的，并且包括但不限于对普通细胞没有损害，但是将非蛋白质性质模块加热至抗体-非蛋白质性质模块附近的细胞被杀死的温度的波长。
IV.重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物来生成本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，例如，如记载于美国专利No.4,816,567的，通过援引将其完整收入本文。在一个实施方案中，提供了编码本文中所描述的抗TIGIT抗体的分离的核酸。此类核酸可以编码包含抗体VL的氨基酸序列和/或包含抗体VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻和/或重链)。在又一个实施方案中，提供了包含此类核酸的一种或多种载体(例如，表达载体)。在又一个实施方案中，提供了包含此类核酸的宿主细胞。在一个此类实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用下列载体转化)：(1)包含核酸的载体，所述核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列，或(2)第一载体和第二载体，所述第一载体包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列的核酸，所述第二载体包含编码包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0，NS0，Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了生成抗TIGIT抗体的方法，其中该方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞，如上文提供的，并且任选地，自宿主细胞(或宿主细胞培养液)回收抗体。
对于抗TIGIT抗体的重组生成，将编码抗体的核酸(例如如上文所描述的)分离，并插入一种或多种载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规规程将此类核酸容易地分离并测序(例如，通过使用寡核苷酸探针来进行，所述寡核苷酸探针能够特异性结合编码抗体的重和轻链的基因)。
适合于克隆或表达抗体编码载体的宿主细胞包括本文中所描述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中生成抗体，特别是在不需要糖基化和Fc效应器功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，见例如美国专利No.5,648,237,5,789,199和5,840,523(还可见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254页，其描述了抗体片段在大肠杆菌(E.coli.)中的表达)。表达后，可以将抗体在可溶性级分中自细菌细胞团糊分离，并可以进一步纯化。
在原核生物外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是适合于抗体编码载体的克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已经“人源化”，导致生成具有部分或完全人的糖基化样式的抗体的真菌和酵母菌株。见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004),及Li等,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
适合于表达糖基化抗体的宿主细胞也自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)衍生。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定出许多杆状病毒株，其可以与昆虫细胞一起使用，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。
也可以利用植物细胞培养物作为宿主。见例如美国专利No.5,959,177,6,040,498,6,420,548,7,125,978和6,417,429(其描述了用于在转基因植物中生成抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适合于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它例子是经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或293细胞，如记载于例如Graham等,J.Gen Virol.36:59(1977)的)；幼年仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4细胞，如记载于例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如记载于例如Mather等,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)的；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系诸如Y0，NS0和Sp2/0。关于适合于抗体生成的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268页(2003)。
V.免疫缀合物
本发明还提供了包含与一种或多种细胞毒剂，诸如化疗剂或药物，生长抑制剂，毒素(例如蛋白质毒素，细菌，真菌，植物或动物起源的酶活性毒素，或其片段)，或放射性同位素缀合的本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)的免疫缀合物。
在一个实施方案中，免疫缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体与一种或多种药物缀合，包括但不限于美登木素生物碱(见美国专利No.5,208,020，5,416,064和欧洲专利EP 0 425 235 B1)；auristatin诸如单甲基auristatin药物模块DE和DF(MMAE和MMAF)(见美国专利No.5,635,483和5,780,588及7,498,298)；多拉司他汀(dolastatin)；加利车霉素(calicheamicin)或其衍生物(见美国专利No.5,712,374,5,714,586,5,739,116,5,767,285,5,770,701,5,770,710,5,773,001和5,877,296；Hinman等,Cancer Res.53:3336-3342(1993)；及Lode等,Cancer Res.58:2925-2928(1998))；蒽环类抗生素诸如道诺霉素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)(见Kratz等,Current Med.Chem.13:477-523(2006)；Jeffrey等,Bioorganic&Med.Chem.Letters 16:358-362(2006)；Torgov等,Bioconj.Chem.16:717-721(2005)；Nagy等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834(2000)；Dubowchik等,Bioorg.&Med.Chem.Letters 12:1529-1532(2002)；King等,J.Med.Chem.45:4336-4343(2002)；及美国专利No.6,630,579)；甲氨蝶呤；长春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)诸如多西他赛(docetaxel)，帕利他赛，larotaxel，tesetaxel，和ortataxel；单端孢霉素(trichothecene)；和CC1065。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与酶活性毒素或其片段缀合的如本文中所描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，所述酶活性毒素包括但不限于白喉A链，白喉毒素的非结合活性片段，外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa))，蓖麻毒蛋白(ricin)A链，相思豆毒蛋白(abrin)A链，蒴莲根毒蛋白(modeccin)A链，α-帚曲霉素(sarcin)，油桐(Aleurites fordii)毒蛋白，香石竹(dianthin)毒蛋白，美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI，PAPII和PAP-S)，苦瓜(Momordica charantia)抑制物，麻疯树毒蛋白(curcin)，巴豆毒蛋白(crotin)，肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂，白树毒蛋白(gelonin)，丝林霉素(mitogellin)，局限曲菌素(restrictocin)，酚霉素(phenomycin)，依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(tricothecenes)。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与放射性原子缀合以形成放射性缀合物的如本文中所描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)。多种放射性同位素可用于生成放射性缀合物。例子包括At211，I131，I125，Y90，Re186，Re188，Sm153，Bi212，P32，Pb212和Lu的放射性同位素。在使用放射性缀合物进行检测时，它可以包含供闪烁法研究用的放射性原子，例如tc99m或I123，或供核磁共振(NMR)成像(又称为磁共振成像，mri)用的自旋标记物，诸如再一次的碘-123，碘-131，铟-111，氟-19，碳-13，氮-15，氧-17，钆，锰或铁。
可以使用多种双功能蛋白质偶联剂来生成抗体和细胞毒剂的缀合物，诸如N-琥珀酰亚氨基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)，琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)，亚氨基硫烷(IT)，亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)，活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)，醛类(诸如戊二醛)，双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)，双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)，二异硫氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)，和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)的双功能衍生物。例如，可以如Vitetta等,Science 238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰酸苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的例示性螯合剂。参见WO94/11026。接头可以是便于在细胞中释放细胞毒性药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头，肽酶敏感性接头，光不稳定接头，二甲基接头或含二硫化物接头(Chari等,Cancer Res 52:127-131(1992)；美国专利No.5,208,020)。
本文中的免疫缀合物或ADC明确涵盖，但不限于用交联试剂制备的此类缀合物，所述交联试剂包括但不限于BMPS，EMCS，GMBS，HBVS，LC-SMCC，MBS，MPBH，SBAP，SIA，SIAB，SMCC，SMPB，SMPH，sulfo-EMCS，sulfo-GMBS，sulfo-KMUS，sulfo-MBS，sulfo-SIAB，sulfo-SMCC，和sulfo-SMPB，及SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，它们是商品化的(例如，来自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)。
VI.用于诊断和检测的方法和组合物
在某些实施方案中，本发明的任何抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)可用于检测生物学样品中TIGIT的存在。如本文中使用的，术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些实施方案中，生物学样品包括细胞或组织。
在一个实施方案中，提供了在诊断或检测方法中使用的抗TIGIT抗体。在又一方面，提供了检测生物学样品中TIGIT的存在的方法。在某些实施方案中，该方法包括在容许抗TIGIT抗体结合TIGIT的条件下使生物学样品与抗TIGIT抗体接触，如本文中所描述的，并检测是否在抗TIGIT抗体与TIGIT间形成复合物。此类方法可以是体外或体内方法。
在某些实施方案中，提供了经标记的抗TIGIT抗体。标记物包括但不限于直接检测的标记物或模块(诸如荧光，发色，电子致密，化学发光，和放射性标记物)，及例如经由酶反应或分子相互作用间接检测的模块，诸如酶或配体。例示性的标记物包括但不限于放射性同位素32P，14C，125I，3H，和131I，荧光团诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物，罗丹明(rhodamine)及其衍生物，丹酰，伞形酮，萤光素酶，例如，萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利No.4,737,456)，萤光素，2,3-二氢酞嗪二酮，辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，杂环氧化酶诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶(其与采用过氧化氢氧化染料前体的酶诸如HRP偶联)，乳过氧化物酶，或微过氧化物酶，生物素/亲合素，自旋标记物，噬菌体标记物，稳定的自由基，等等。
VII.药物组合物
通过混合具有期望纯度的此类抗体与一种或多种任选的药学可接受载剂(Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))以冻干组合物或水性溶液形式制备本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)的药物组合物。一般地，药学可接受载剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括但不限于缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵，苄索氯铵；酚，丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烃基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨醇；成盐相反离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。本文中的例示性的药学可接受载剂进一步包含间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(
Figure BDA0001605976190001171
BaxterInternational,Inc.)。某些例示性的sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20记载于美国专利公开文本No.2005/0260186和2006/0104968。在一方面，将sHASEGP与一种或多种别的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。
在一些情况中，本文中提供的包括抗TIGIT抗体的药物组合物可进一步包括PD-1轴结合拮抗剂，诸如PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂。
在一些情况中，本文中提供的包括抗TIGIT抗体的药物组合物可进一步包括OX40结合激动剂，诸如OX40激动性抗体，OX40L激动性片段，OX40寡聚受体，和OX40免疫粘附素。
在一些情况中，本文中提供的包括抗TIGIT抗体的药物组合物可进一步包括另外的治疗剂，诸如化疗剂或降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体(例如PD-1，CTLA-4，LAG3，TIM3，BTLA，VISTA，B7H4，和/或CD96)的药剂。
在其它实施方案中，包括抗TIGIT抗体的药物组合物可进一步包括(a)PD-1轴结合拮抗剂和OX40结合激动剂；(b)PD-1轴结合拮抗剂和另外的治疗剂(例如化疗剂)；(c)PD-1轴结合拮抗剂和降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体(例如PD-1，CTLA-4，LAG3，TIM3，BTLA，VISTA，B7H4，和/或CD96)的药剂；(d)OX40结合激动剂和另外的治疗剂(例如化疗剂)；(e)OX40结合激动剂和降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体(例如PD-1，CTLA-4，LAG3，TIM3，BTLA，VISTA，B7H4，和/或CD96)的药剂；(f)另外的治疗剂(例如化疗剂)和降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体(例如PD-1，CTLA-4，LAG3，TIM3，BTLA，VISTA，B7H4，和/或CD96)的药剂；或(g)PD-1轴结合拮抗剂，OX40结合激动剂，和降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体(例如PD-1，CTLA-4，LAG3，TIM3，BTLA，VISTA，B7H4，和/或CD96)的药剂。任选地，该药物组合物会包括一种或多种药学可接受载剂，赋形剂，或稀释剂。
例示性的冻干抗体组合物记载于美国专利No.6,267,958。水性抗体组合物包括那些记载于美国专利No.6,171,586和WO2006/044908的，后一种组合物包含组氨酸-乙酸盐缓冲液。
本文中的组合物还可含有超过一种所治疗具体适应症所必需的活性组分，优选活性互补且彼此没有不利影响的。例如，可能期望进一步提供另外的治疗剂(例如化疗剂，细胞毒剂，生长抑制剂，和/或抗激素剂，诸如本文中上文描述的那些)。合适的是，此类活性组分以对于预定目的有效的量组合存在。
活性组分可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)，在胶状药物投递系统中(例如脂质体，清蛋白微球体，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)，或在粗滴乳状液中。此类技术披露于Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.编(1980)。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适的例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质为成形商品形式，例如膜，或微胶囊。
用于体内施用的组合物一般是无菌的。无菌性可容易地实现，例如通过穿过无菌滤膜过滤。
VIII.治疗方法
可以在治疗方法中使用本发明的任何抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)。
在一个方面，提供了抗TIGIT抗体，其用作药物。在又一个方面，提供了本文中描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，其用于在受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展。在某些实施方案中，本发明提供抗TIGIT抗体，其用于治疗具有免疫相关疾病的受试者的方法，该免疫相关疾病与T细胞功能障碍性病症有关。在其它实施方案中，该免疫相关疾病为病毒感染。在某些实施方案中，该病毒感染为慢性病毒感染。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于降低的对抗原性刺激的响应性。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞无反应性或降低的分泌细胞因子，增殖或执行细胞溶解活性的能力。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞耗尽。在一些实施方案中，该T细胞为CD4+和CD8+T细胞。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症包括未解决的急性感染，慢性感染和肿瘤免疫。
在另一个方面，提供了本文中描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，其用于在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展。在某些实施方案中，该癌症选自由非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肾细胞癌，结直肠癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，膀胱癌，食道癌，间皮瘤，黑素瘤，头和颈癌，甲状腺癌，肉瘤，前列腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，胸腺癌，白血病，淋巴瘤，骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤(MM))，蕈样肉芽肿，梅克尔细胞癌，和血液学恶性组成的组。如此，可以治疗多种癌症，或者可以延迟其进展。在一些实施方案中，该个体可以具有乳腺癌(例如三重阴性乳腺癌)。在其它实施方案中，该个体可以具有胰腺癌(例如胰腺导管腺癌(PDAC))。在一些实施方案中，该个体具有非小细胞肺癌。该非小细胞肺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有小细胞肺癌。该小细胞肺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有肾细胞癌。该肾细胞癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有结直肠癌。该结直肠癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有卵巢癌。该卵巢癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有乳腺癌。该乳腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有胰腺癌。该胰腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有胃癌。该胃癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有膀胱癌。该膀胱癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有食道癌。该食道癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有间皮瘤。该间皮瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有黑素瘤。该黑素瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有头和颈癌。该头和颈癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有甲状腺癌。该甲状腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有肉瘤。该肉瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有前列腺癌。该前列腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有成胶质细胞瘤。该成胶质细胞瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有宫颈癌。该宫颈癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有胸腺癌。该胸腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有白血病。该白血病可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有淋巴瘤。该淋巴瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有骨髓瘤(例如MM)。该骨髓瘤(例如MM)可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有蕈样肉芽肿。该蕈样肉芽肿可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有梅克尔细胞癌。该梅克尔细胞癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有血液学恶性。该血液学恶性可以处于早期阶段或处于晚期阶段。
在另一个方面，提供了本文中描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，其用于在有所需要的受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能。在一些实施方案中，该免疫应答或功能是通过在该受试者中活化效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)，扩充(提高)效应细胞群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶肿瘤细胞)而提高，增强，和/或刺激的。在一些实施方案中，该个体中的CD4和/或CD8T细胞具有相对于施用该组合之前提高的或增强的引发，活化，增殖，细胞因子释放，和/或细胞溶解活性。在一些实施方案中，CD4和/或CD8T细胞的数目相对于施用该组合之前上升。在一些实施方案中，活化的CD4和/或CD8T细胞的数目相对于施用该组合之前上升。在一些实施方案中，活化的CD4和/或CD8T细胞特征在于γ-IFN+生成性CD4和/或CD8T细胞和/或相对于施用该组合之前增强的细胞溶解活性。在一些实施方案中，该CD4和/或CD8T细胞展现提高的选自下组的细胞因子的释放：IFN-γ，TNF-α，和白介素。在本发明的方法的一些实施方案中，该CD4和/或CD8T细胞为效应记忆T细胞。在一些实施方案中，该CD4和/或CD8效应记忆T细胞特征在于γ-IFN+生成性CD4和/或CD8T细胞和/或增强的细胞溶解活性。在一些实施方案中，该CD4和/或CD8效应记忆T细胞特征在于具有CD44高CD62L低的表达。在一些实施方案中，该癌症具有上升水平的T细胞浸润。
在任何上述方面中，该抗TIGIT抗体可用于与不同TIGIT拮抗剂，PD-1轴结合拮抗剂，OX40结合激动剂，降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体的药剂，和/或另外的治疗剂，诸如化疗剂组合使用，如本文中详细描述的。
在另一个方面，本发明提供本文中描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)在制造或制备药物中的用途。在一个实施方案中，该药物用于治疗癌症或延迟癌症进展。在又一个实施方案中，该药物用于治疗非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肾细胞癌，结直肠癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，膀胱癌，食道癌，间皮瘤，黑素瘤，头和颈癌，甲状腺癌，肉瘤，前列腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，胸腺癌，白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，蕈样肉芽肿，梅克尔细胞癌，或血液学恶性或延迟其进展。如此，可以治疗多种癌症，或者可以延迟其进展。在一些实施方案中，该个体可以具有乳腺癌(例如三重阴性乳腺癌)。在其它实施方案中，该个体可以具有胰腺癌(例如胰腺导管腺癌(PDAC))。在一些实施方案中，该个体具有非小细胞肺癌。该非小细胞肺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有小细胞肺癌。该小细胞肺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有肾细胞癌。该肾细胞癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有结直肠癌。该结直肠癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有卵巢癌。该卵巢癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有乳腺癌。该乳腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有胰腺癌。该胰腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有胃癌。该胃癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有膀胱癌。该膀胱癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有食道癌。该食道癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有间皮瘤。该间皮瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有黑素瘤。该黑素瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有头和颈癌。该头和颈癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有甲状腺癌。该甲状腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有肉瘤。该肉瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有前列腺癌。该前列腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有成胶质细胞瘤。该成胶质细胞瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有宫颈癌。该宫颈癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有胸腺癌。该胸腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有白血病。该白血病可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有淋巴瘤。该淋巴瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有骨髓瘤(例如MM)。该骨髓瘤(例如MM)可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有蕈样肉芽肿。该蕈样肉芽肿可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有梅克尔细胞癌。该梅克尔细胞癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有血液学恶性。该血液学恶性可以处于早期阶段或处于晚期阶段。
在另一个方面，本发明提供本文中描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)在制造用于治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的药物中的用途。在一些实施方案中，该免疫相关疾病与T细胞功能障碍性病症有关。在一些实施方案中，该免疫相关疾病为病毒感染。在某些实施方案中，该病毒感染为慢性病毒感染。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于降低的对抗原性刺激的响应性。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞无反应性或降低的分泌细胞因子，增殖或执行细胞溶解活性的能力。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞耗尽。在一些实施方案中，该T细胞为CD4+和CD8+T细胞。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症包括未解决的急性感染，慢性感染和肿瘤免疫。
在另一个方面，提供了本文中描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，其用于制造用于在有所需要的受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的药物。在一些实施方案中，该免疫应答或功能是通过在该受试者中活化效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)，扩充(提高)效应细胞群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶肿瘤细胞)而提高，增强，和/或刺激的。在一些实施方案中，该个体中的CD4和/或CD8T细胞具有相对于施用该组合之前提高的或增强的引发，活化，增殖，细胞因子释放，和/或细胞溶解活性。在一些实施方案中，CD4和/或CD8T细胞的数目相对于施用该组合之前上升。在一些实施方案中，活化的CD4和/或CD8T细胞的数目相对于施用该组合之前上升。在一些实施方案中，活化的CD4和/或CD8T细胞特征在于γ-IFN+生成性CD4和/或CD8T细胞和/或相对于施用该组合之前增强的细胞溶解活性。在一些实施方案中，该CD4和/或CD8T细胞展现提高的选自下组的细胞因子的释放：IFN-γ，TNF-α，和白介素。在本发明的方法的一些实施方案中，该CD4和/或CD8T细胞为效应记忆T细胞。在一些实施方案中，该CD4和/或CD8效应记忆T细胞特征在于γ-IFN+生成性CD4和/或CD8T细胞和/或增强的细胞溶解活性。在一些实施方案中，该CD4和/或CD8效应记忆T细胞特征在于具有CD44高CD62L低的表达。在一些实施方案中，该癌症具有上升水平的T细胞浸润。
在任何上述方面中，可以配制药物，其用于与不同TIGIT拮抗剂，PD-1轴结合拮抗剂，OX40结合激动剂，降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体的药剂，和/或另外的治疗剂，诸如化疗剂组合，如本文中详细描述的。
在另一个方面，本发明提供一种用于在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的本文中描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，由此在该受试者中治疗该癌症或延迟该癌症进展。在某些实施方案中，该癌症选自由非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肾细胞癌，结直肠癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，膀胱癌，食道癌，间皮瘤，黑素瘤，头和颈癌，甲状腺癌，肉瘤，前列腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，胸腺癌，白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，蕈样肉芽肿，梅克尔细胞癌，和血液学恶性组成的组。如此，可以治疗多种癌症，或者可以延迟其进展。在一些实施方案中，该个体可以具有乳腺癌(例如三重阴性乳腺癌)。在其它实施方案中，该个体可以具有胰腺癌(例如胰腺导管腺癌(PDAC))。在一些实施方案中，该个体具有非小细胞肺癌。该非小细胞肺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有小细胞肺癌。该小细胞肺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有肾细胞癌。该肾细胞癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有结直肠癌。该结直肠癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有卵巢癌。该卵巢癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有乳腺癌。该乳腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有胰腺癌。该胰腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有胃癌。该胃癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有膀胱癌。该膀胱癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有食道癌。该食道癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有间皮瘤。该间皮瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有黑素瘤。该黑素瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有头和颈癌。该头和颈癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有甲状腺癌。该甲状腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有肉瘤。该肉瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有前列腺癌。该前列腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有成胶质细胞瘤。该成胶质细胞瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有宫颈癌。该宫颈癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有胸腺癌。该胸腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有白血病。该白血病可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有淋巴瘤。该淋巴瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有骨髓瘤(例如MM)。该骨髓瘤(例如MM)可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有蕈样肉芽肿。该蕈样肉芽肿可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有梅克尔细胞癌。该梅克尔细胞癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该个体具有血液学恶性。该血液学恶性可以处于早期阶段或处于晚期阶段。
在另一个方面，本发明提供一种用于在受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的本文中描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，由此在该受试者中治疗该免疫相关疾病或延迟该免疫相关疾病进展。在一些实施方案中，该免疫相关疾病与T细胞功能障碍性病症有关。在一些实施方案中，该免疫相关疾病为病毒感染。在某些实施方案中，该病毒感染为慢性病毒感染。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于降低的对抗原性刺激的响应性。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞无反应性或降低的分泌细胞因子，增殖或执行细胞溶解活性的能力。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞耗尽。在一些实施方案中，该T细胞为CD4+和CD8+T细胞。在一些实施方案中，该T细胞功能障碍性病症包括未解决的急性感染，慢性感染和肿瘤免疫。
在另一个方面，本发明提供一种在受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的本文中描述的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，由此在该受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能。在一些实施方案中，该免疫应答或功能是通过在该受试者中活化效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)，扩充(提高)效应细胞群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶肿瘤细胞)而提高，增强，和/或刺激的。在本发明的方法的一些实施方案中，该个体中的CD4和/或CD8T细胞具有相对于施用该组合之前提高的或增强的引发，活化，增殖，细胞因子释放，和/或细胞溶解活性。在本发明的方法的一些实施方案中，CD4和/或CD8T细胞的数目相对于施用该组合之前上升。在本发明的方法的一些实施方案中，活化的CD4和/或CD8T细胞的数目相对于施用该组合之前上升。在本发明的方法的一些实施方案中，活化的CD4和/或CD8T细胞特征在于γ-IFN+生成性CD4和/或CD8T细胞和/或相对于施用该组合之前增强的细胞溶解活性。在本发明的方法的一些实施方案中，该CD4和/或CD8T细胞展现提高的选自下组的细胞因子的释放：IFN-γ，TNF-α，和白介素。在本发明的方法的一些实施方案中，该CD4和/或CD8T细胞为效应记忆T细胞。在本发明的方法的一些实施方案中，该CD4和/或CD8效应记忆T细胞特征在于γ-IFN+生成性CD4和/或CD8T细胞和/或增强的细胞溶解活性。在本发明的方法的一些实施方案中，该CD4和/或CD8效应记忆T细胞特征在于具有CD44高CD62L低的表达。在本发明的方法的一些实施方案中，该癌症具有上升水平的T细胞浸润。
在任何上述方面中，该抗TIGIT抗体可以与不同TIGIT拮抗剂，PD-1轴结合拮抗剂，OX40结合激动剂，降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体的药剂，和/或另外的治疗剂，诸如化疗剂组合施用，如本文中详细描述的。
在一些实施方案中，该不同(第二)TIGIT拮抗剂可以是TIGIT表达和/或活性的拮抗剂，诸如小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。在一些实施方案中，该TIGIT拮抗剂是不同抗TIGIT抗体或其抗原结合片段(例如结合TIGIT上与所使用的本发明抗TIGIT抗体识别的表位或是不交叠或是仅部分交叠的不同表位的)。在一些实施方案中，该TIGIT拮抗剂为选自反义多核苷酸，干扰RNA，催化RNA，和RNA-DNA嵌合物的抑制性核酸。
在一些实施方案中，TIGIT拮抗剂可以是调控CD226表达和/或活性的药剂。例如，调控CD226表达和/或活性的药剂能够提高和/或刺激CD226表达和/或活性；提高和/或刺激CD226与PVR，PVRL2，和/或PVRL3的相互作用；及提高和/或刺激由结合PVR，PVRL2，和/或PVRL3的CD226介导的细胞内信号传导。如本文中使用的，能够提高和/或刺激CD226表达和/或活性的药剂包括但不限于提高和/或刺激CD226表达和/或活性的药剂。如本文中使用的，能够提高和/或刺激CD226与PVR，PVRL2，和/或PVRL3的相互作用的药剂包括但不限于提高和/或刺激CD226与PVR，PVRL2，和/或PVRL3的相互作用的药剂。如本文中使用的，能够提高和/或刺激由结合PVR，PVRL2，和/或PVRL3的CD226介导的细胞内信号传导的药剂包括但不限于提高和/或刺激由结合PVR，PVRL2，和/或PVRL3的CD226介导的细胞内信号传导的药剂。
在一些实施方案中，该调控CD226表达和/或活性的药剂选自抑制和/或阻断CD226与TIGIT的相互作用的药剂，PVR表达和/或活性的拮抗剂，抑制和/或阻断TIGIT与PVR的相互作用的药剂，抑制和/或阻断TIGIT与PVRL2的相互作用的药剂，抑制和/或阻断TIGIT与PVRL3的相互作用的药剂，抑制和/或阻断由结合PVR的TIGIT介导的细胞内信号传导的药剂，抑制和/或阻断由结合PVRL2的TIGIT介导的细胞内信号传导的药剂，抑制和/或阻断由结合PVRL3的TIGIT介导的细胞内信号传导的药剂，和其组合。
在一些实施方案中，该抑制和/或阻断CD226与TIGIT的相互作用的药剂为小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。在一些实施方案中，该抑制和/或阻断CD226与TIGIT的相互作用的药剂为抗TIGIT抗体或其抗原结合片段(例如结合TIGIT上与所使用的本发明抗TIGIT抗体识别的表位或是不交叠或是仅部分交叠的不同表位的)。在一些实施方案中，该抑制和/或阻断CD226与TIGIT的相互作用的药剂为选自反义多核苷酸，干扰RNA，催化RNA，和RNA-DNA嵌合物的抑制性核酸。
在一些实施方案中，该PVR表达和/或活性的拮抗剂为小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。在一些实施方案中，该PVR表达和/或活性的拮抗剂选自小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。
在一些实施方案中，该抑制和/或阻断TIGIT与PVR的相互作用的药剂为小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。在一些实施方案中，该抑制和/或阻断TIGIT与PVR的相互作用的药剂选自小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。在一些实施方案中，该抑制和/或阻断TIGIT与PVRL2的相互作用的药剂选自小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。在一些实施方案中，该抑制和/或阻断TIGIT与PVRL3的相互作用的药剂选自小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。
在一些实施方案中，该抑制和/或阻断由结合PVR的TIGIT介导的细胞内信号传导的药剂为小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。在一些实施方案中，该抑制和/或阻断由结合PVR的TIGIT介导的细胞内信号传导的药剂选自小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。在一些实施方案中，该抑制和/或阻断由结合PVRL2的TIGIT介导的细胞内信号传导的药剂选自小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。在一些实施方案中，该抑制和/或阻断由结合PVRL3的TIGIT介导的细胞内信号传导的药剂选自小分子抑制剂，抑制性抗体或其抗原结合片段，适体，抑制性核酸，和抑制性多肽。
可以与本发明的抗TIGIT抗体组合使用的其它TIGIT拮抗剂包括WO2009/126688中描述的抗TIGIT抗体和含有此类抗体的组合物，通过援引将其完整收入本文。
在一些情况中，本文中提供的方法包括在本发明的抗TIGIT抗体(和任选的一种或多种另外的药剂，诸如第二不同TIGIT拮抗剂，OX40结合激动剂，化疗剂，等)之前，之后，或并行施用有效量的PD-1轴结合拮抗剂。该PD-1轴结合拮抗剂可以是选自由PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂组成的组。
在上述方面的一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合它的配体结合配偶。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L2。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和PD-L2二者。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂选自由MDX1106(nivolumab)，MK-3475(pembrolizumab)，CT-011(pidilizumab)，MEDI-0680(AMP-514)，PDR001，REGN2810，和BGB-108组成的组。
在上述方面的其它实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合B7-1。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和B7-1二者。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，该抗体选自由MPDL3280A(atezolizumab)，YW243.55.S70，MDX-1105，MEDI4736(durvalumab)，和MSB0010718C(avelumab)组成的组。
在上述方面的其它实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L2结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-L2结合拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，该PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
作为一般建议，可以施用于人的PD-1轴结合拮抗剂(例如抗PD-L1抗体)的治疗性有效量会在约0.01至约50mg/kg患者体重的范围中，无论是通过一次或是多次施用。在一些实施方案中，例如，以例如每天施用约0.01至约45mg/kg，约0.01至约40mg/kg，约0.01至约35mg/kg，约0.01至约30mg/kg，约0.01至约25mg/kg，约0.01至约20mg/kg，约0.01至约15mg/kg，约0.01至约10mg/kg，约0.01至约5mg/kg，或约0.01至约1mg/kg的剂量施用该拮抗剂(例如抗PD-L1抗体)。在一些实施方案中，以15mg/kg施用该拮抗剂(例如抗PD-L1抗体)。然而，其它剂量方案可能是有用的。在一个实施方案中，以约100mg，约200mg，约300mg，约400mg，约500mg，约600mg，约700mg，约800mg，约900mg，约1000mg，约1100mg，约1200mg，约1300mg，约1400mg，或约1500mg的剂量将PD-1轴结合拮抗剂(例如抗PD-L1抗体)施用于人。在一些实施方案中，以每两周约800mg至约850mg的剂量施用PD-1轴结合拮抗剂(例如抗PD-L1抗体)。在一些实施方案中，以每两周约840mg的剂量施用PD-1轴结合拮抗剂(例如抗PD-L1抗体)。该剂量可以作为单剂或作为多剂(例如2或3剂)施用，诸如输注。组合治疗中施用的抗体的剂量可以与单一治疗相比降低。在一些实施方案中，例如，用于在个体中治疗局部晚期或转移性乳腺癌或延迟局部晚期或转移性乳腺癌进展的方法包括包含治疗周期的剂量方案，其中在每个周期的第1和15天以约840mg的剂量对该个体施用人PD-1轴结合拮抗剂(例如抗PD-L1抗体)，其中每个周期是28天(即，每28天重复每个周期)。此疗法的进展易于通过常规技术来监测。
在一些实施方案中，OX40结合激动剂包括例如OX40激动性抗体(例如抗人OX40激动性抗体)，OX40L激动性片段，OX40寡聚受体，和OX40免疫粘附素。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体消减表达人OX40的细胞(例如CD4+效应T细胞，CD8+T细胞，和/或Treg细胞)，例如通过ADCC和/或吞噬进行。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体以小于或等于约1nM(例如小于或等于约0.5nM，例如小于或等于约0.45nM，例如小于或等于约0.4nM，例如小于或等于约0.3nM)的亲和力结合人OX40。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体的结合亲和力是使用放射免疫测定法测定的。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体结合人OX40和食蟹猴OX40。在又一些实施方案中，对人OX40和食蟹猴OX40的结合是使用FACS测定法测定的。在一些实施方案中，对人OX40的结合具有小于或等于约1μg/ml(例如小于或等于约0.7μg/ml，例如小于或等于约0.5μg/ml，例如小于或等于约0.4μg/ml，例如小于或等于约0.3μg/ml，例如小于或等于约0.2μg/ml，例如小于或等于约0.1μg/ml)的EC50。在一些实施方案中，对食蟹猴OX40的结合具有小于或等于3μg/ml(例如小于或等于约2μg/ml，例如小于或等于约1.7μg/ml，例如小于或等于约1.5μg/ml，例如小于或等于约1.4μg/ml，例如小于或等于约1.3μg/ml，例如小于或等于约1.2μg/ml，例如小于或等于约1.1μg/ml，例如小于或等于约1.0μg/ml)的EC50。
在一些实施方案中，与该OX40激动性抗体处理之前的增殖和/或细胞因子生成相比，该OX40激动性抗体提高CD4+效应T细胞增殖和/或提高CD4+效应T细胞的细胞因子生成。在一些实施方案中，该细胞因子是干扰素-γ。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体提高记忆T细胞增殖和/或提高记忆细胞的细胞因子生成。在一些实施方案中，该细胞因子是干扰素-γ。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体抑制效应T细胞功能的Treg遏制。在一些实施方案中，该效应T细胞功能是效应T细胞增殖和/或细胞因子生成。在一些实施方案中，该效应T细胞是CD4+效应T细胞。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体提高表达OX40的靶细胞中的OX40信号转导。在一些实施方案中，OX40信号转导是通过监测NFkB下游信号传导检测的。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体于40℃处理1至4周，例如1周，2周，3周，或4周后是稳定的。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体于40℃处理2周后是稳定的。
在一些实施方案中，包含变异IgG1Fc多肽的该OX40激动性抗体具有相对于包含天然序列IgG1Fc部分的该OX40激动性抗体降低的活性，该变异IgG1Fc多肽包含消除对人效应细胞的结合的突变。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含包含DANA突变的变异Fc部分。
在一些实施方案中，抗人OX40拮抗性抗体功能需要抗体交联。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)VH域，该VH域包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:278，279或280的HVR-H1，(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:281，282，283，284，285或286的HVR-H2，和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:287，288或289的HVR-H3；和(b)VL域，该VL域包含：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:290的HVR-L1，(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:291的HVR-L2，和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:292，293，294，295，296，297，298或299的HVR-L3。例如，在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:278的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:281的HVR-H2；(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:287的HVR-H3；(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:290的HVR-L1；(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:291的HVR-L2；和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:292的HVR-L3。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:278的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:281的HVR-H2；(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:287的HVR-H3；(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:290的HVR-L1；(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:291的HVR-L2；和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:297的HVR-L3。在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:278的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:281的HVR-H2；(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:287的HVR-H3；(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:290的HVR-L1；(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:291的HVR-L2；和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:298的HVR-L3。
在其它实施方案中，该OX40激动性抗体包含与SEQ ID NO：300-325任一的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的VH序列。例如，该OX40激动性抗体包含与SEQ ID NO：300的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的VH序列(例如，其中在SEQ ID NO：300中替代，插入，和/或删除了总共1至10个氨基酸)。如此，在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含包含一种，两种，或三种选自下述的HVR的VH：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:278的HVR-H1，(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:281的HVR-H2，和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:287的HVR-H3。
在其它实施方案中，该OX40激动性抗体包含与SEQ ID NO：326-351任一的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的VL序列。例如，该OX40激动性抗体包含与SEQ ID NO：326的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的VL(例如，其中在SEQ ID NO：326中替代，插入，和/或删除了总共1至10个氨基酸)。如此，在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含包含一种，两种，或三种选自下述的HVR的VL：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:290的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:291的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:292的HVR-L3。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)SEQ ID NO：300的VH序列；(b)SEQID NO：326的VL序列；或(c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)SEQ ID NO：319的VH序列；(b)SEQID NO：345的VL序列；或(c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体包含(a)SEQ ID NO：320的VH序列；(b)SEQID NO：346的VL序列；或(c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列。
还具体涵盖的是OX40激动性抗体，诸如分享美国专利No.7,550,140和国际公开文本No.WO 2014/148895和WO 2013/038191中披露的抗OX40抗体的相同或实质性相同的HVR序列和/或VH和VL序列的抗体，通过援引将其完整收入本文。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体是L106BD(Pharmingen产品号340420)。在一些实施方案中，该抗体包含抗体L106(BD Pharmingen产品号340420)的至少一种，两种，三种，四种，五种或六种高变区(HVR)序列。在一些实施方案中，该抗体包含抗体L106(BDPharmingen产品号340420)的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体是ACT35(Santa Cruz Biotechnology，目录号20073)。在一些实施方案中，该抗体包含抗体ACT35(Santa Cruz Biotechnology，目录号20073)的至少一种，两种，三种，四种，五种或六种高变区(HVR)序列。在一些实施方案中，该抗体包含抗体ACT35(Santa Cruz Biotechnology，目录号20073)的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体是MEDI6469。在一些实施方案中，该抗体包含抗体MEDI6469的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(HVR)序列。在一些实施方案中，该抗体包含抗体MEDI6469的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体是MEDI0562。在一些实施方案中，该抗体包含抗体MEDI0562的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(HVR)序列。在一些实施方案中，该抗体包含抗体MEDI0562的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。
在一些实施方案中，该OX40激动性抗体是与上文所列任一OX40激动性抗体结合相同表位的激动性抗体。
在任何上述实施方案中，该OX40激动性抗体可以是全长抗体(例如IgG1抗体)或抗体片段。
对本文所述方法有用的OX40激动剂绝非意图限于抗体。涵盖非抗体OX40激动剂，而且是本领域公知的。
如上所述，OX40L(也称作CD134L)充当OX40的配体。因此，呈现部分或整个OX40L的激动剂可充当OX40激动剂。在一些实施方案中，OX40激动剂可包括一个或多个OX40L胞外域。OX40L胞外域的例子可包括OX40结合域。在一些实施方案中，OX40激动剂可以是可溶性形式的OX40L，其包括一个或多个OX40L胞外域但缺乏该蛋白质的其它，不溶性域，例如跨膜域。在一些实施方案中，OX40激动剂是包括能够结合OX40L的一个或多个OX40L胞外域的可溶性蛋白质。在一些实施方案中，OX40激动剂可连接至另一蛋白质域，例如为了提高其有效性，半衰期，或其它期望特征。在一些实施方案中，OX40激动剂可包括连接至免疫球蛋白Fc域的一个或多个OX40L胞外域。
在一些实施方案中，OX40激动剂可以是寡聚或多聚分子。例如，OX40激动剂可含有一个或多个容许蛋白质寡聚化的域(例如亮氨酸拉链域)。在一些实施方案中，OX40激动剂可包括连接至一个或多个亮氨酸拉链域的一个或多个OX40L胞外域。
在一些实施方案中，OX40激动剂可以是欧洲专利No.EP0672141B1中描述的任一OX40激动剂。
在一些实施方案中，OX40激动剂可以是三聚OX40L融合蛋白。例如，OX40激动剂可包括连接至免疫球蛋白Fc域和三聚化域(包括但不限于异亮氨酸拉链域)的一个或多个OX40L胞外域。
在一些实施方案中，OX40激动剂可以是国际公开文本No.WO2006/121810中描述的任一OX40激动剂，诸如OX40免疫粘附素。在一些实施方案中，该OX40免疫粘附素可以是三聚OX40-Fc蛋白。在一些实施方案中，该OX40激动剂是MEDI6383。
上文记录的此类组合疗法涵盖组合施用(其中抗TIGIT抗体和一种或多种药剂(例如PD-1轴结合拮抗剂，OX40结合激动剂，降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体的药剂，和/或另外的治疗剂)包含在同一配制剂或分开的配制剂中)，和分开施用(其中可以在一种或多种药剂(例如PD-1轴结合拮抗剂，OX40结合激动剂，降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体的药剂，和/或另外的治疗剂)的施用之前，同时，和/或之后发生本发明的抗TIGIT抗体的施用)。在一个实施方案中，抗TIGIT抗体的施用和一种或多种药剂的施用彼此在约1个月内，或在约1，2或3周内，或在约1，2，3，4，5，或6天内发生。本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)也可以与放射疗法组合使用。
可以通过任何合适的手段(包括胃肠外，肺内，和鼻内，及若期望用于局部治疗的话，损伤内施用)来施用本发明的抗TIGIT抗体(和/或任何另外的治疗剂)。胃肠外输注包括肌肉内，静脉内，动脉内，腹膜内，或皮下施用。在一些实施方案中，通过皮下施用来施用该抗体。在一些实施方案中，通过皮下注射施用的抗TIGIT抗体在患者中展现比通过静脉内注射施用的相同抗TIGIT抗体要少的毒性反应。部分根据施用是短暂的还是长期的，剂量给药可以通过任何合适的路径(例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射)来进行。本文中涵盖各种剂量给药日程表，包括但不限于单次施用或在多个时间点里的多次施用，推注施用，和脉冲输注。
本发明的抗TIGIT抗体会以一种符合优秀的医学实践的方式配制，定剂量和施用。在此背景中考虑的因素包括所治疗的特定病症，所治疗的特定哺乳动物，患者个体的临床状况，病症的起因，药剂投递部位，施用方法，施用日程表及医学从业人员知道的其它因素。抗体无需但任选与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论病症的药剂一起配制。此类其它药剂的有效量取决于配制剂中存在的抗体的量，病症或治疗的类型，及上文讨论的其它因素。这些通常以本文所述相同的剂量和施用途径使用，或以约1-99％的本文所述剂量使用，或以凭经验/临床上确定为适宜的任何剂量和任何途径使用。
为了预防或治疗疾病，本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)当单独或与一种或多种其它别的治疗剂(例如PD-1轴结合拮抗剂，OX40结合激动剂，降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体的药剂，和/或另外的治疗剂)组合使用时的适宜剂量会取决于要治疗的疾病的类型，所使用的抗体的类型，疾病的严重性和病程，施用抗体是预防还是治疗目的，之前的疗法，患者的临床史和对抗体的响应，及主治医师的斟酌。抗体适合于在一次或一系列的治疗中施用于患者。
作为一般建议，施用于人的抗TIGIT抗体的治疗有效量会在约0.01至约100mg/kg患者体重的范围中，无论是通过一次或多次施用。在一些实施方案中，所使用的抗体为例如每天施用约0.01至约45mg/kg，约0.01至约40mg/kg，约0.01至约35mg/kg，约0.01至约30mg/kg，约0.01至约25mg/kg，约0.01至约20mg/kg，约0.01至约15mg/kg，约0.01至约10mg/kg，约0.01至约5mg/kg，或约0.01至约1mg/kg。在一个实施方案中，在21天周期的第1天以约100mg，约200mg，约300mg，约400mg，约500mg，约600mg，约700mg，约800mg，约900mg，约1000mg，约1100mg，约1200mg，约1300mg或约1400mg的剂量将本文中描述的抗TIGIT抗体施用于人。该剂量可以作为单剂或作为多剂(例如2或3剂)施用，诸如输注。对于几天或更长时间上的重复施用，根据状况，治疗通常会持续直至疾病症状发生期望的阻抑。抗体的一种例示性剂量会在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围中。如此，可以将一剂或多剂约0.5mg/kg，2.0mg/kg，4.0mg/kg，或10mg/kg(或其任意组合)施用于患者。此类剂量可间歇施用，例如每周或每三周(例如使得患者接受约2至约20剂，或例如约6剂抗TIGIT抗体)。可以施用较高的初始加载剂，接着是较低的一或多剂。此疗法的进展易于通过常规技术和测定法来监测。
在一些实施方案中，该方法可以进一步包括另外的疗法。该另外的疗法可以为放射疗法，手术，化学疗法，基因疗法，DNA疗法，病毒疗法，RNA疗法，免疫疗法，骨髓移植，纳米疗法(nanotherapy)，单克隆抗体疗法，或前述疗法的组合。该另外的疗法可以为辅助或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，该另外的疗法为施用小分子酶抑制剂或抗转移剂。在一些实施方案中，该另外的疗法为施用副作用限制剂(例如意图减轻治疗副作用的发生和/或严重性的药剂，诸如抗恶心剂等)。在一些实施方案中，该另外的疗法为放射疗法。在一些实施方案中，该另外的疗法为手术。在一些实施方案中，该另外的疗法为放射疗法和手术的组合。在一些实施方案中，该另外的疗法为γ照射。在一些实施方案中，该另外的疗法可以为分开施用一种或多种上文所述治疗剂。
IX.制品
在本发明的另一个方面，提供了一种制品或试剂盒，其含有可用于治疗，预防和/或诊断上文描述的病症的材料。制品包含容器和容器上或与容器联合的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶，管形瓶，注射器，IV溶液袋，等。容器可以自多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器容纳单独或与另一种组合物组合有效治疗，预防和/或诊断状况的组合物，并且可以具有无菌存取口(例如，容器可以是具有由皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶或静脉内溶液袋)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗TIGIT抗体。标签或包装插页指示使用组合物来治疗选择的状况。此外，制品可以包含(a)其中装有组合物的第一容器，其中组合物包含本发明的抗体；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中组合物包含别的细胞毒性或其它方面治疗性的药剂。本发明的此实施方案中的制品可以进一步包含包装插页，其指示可以使用组合物来治疗特定的状况。或者/另外，制品可以进一步包含第二(或第三)容器，其包含药学可接受缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)，磷酸盐缓冲盐水，Ringer氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包含从商业和用户观点看期望的其它材料，包括其它缓冲剂，稀释剂，滤器，针，和注射器。
在一个实施方案中，提供的是一种试剂盒，其包括本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗TIGIT抗体在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展或在受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的用法说明书。在一个相关实施方案中，本发明特征在于一种试剂盒，其包括本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂)，和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗TIGIT抗体在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展或在受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的用法说明书。在一个相关实施方案中，本发明特征在于一种试剂盒，其包括本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，OX40结合激动剂(例如OX40激动性抗体，OX40L激动性片段，OX40寡聚受体，和OX40免疫粘附素)，和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗TIGIT抗体在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展或在受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的用法说明书。在一个相关实施方案中，本发明特征在于一种试剂盒，其包括本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂)，OX40结合激动剂(例如OX40激动性抗体，OX40L激动性片段，OX40寡聚受体，和OX40免疫粘附素)，和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗TIGIT抗体在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展或在受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的用法说明书。在任何上述实施方案中，该受试者可以是例如人。具体涵盖的是本文中描述的任何抗TIGIT抗体，OX40结合激动剂，和PD-1轴结合拮抗剂可以包括在该试剂盒中。
在还有另一个实施方案中，提供的是一种试剂盒，其包括本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)和包装插页，该包装插页包含关于在受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的用法说明书。在一个相关实施方案中，本发明特征在于一种试剂盒，其包括本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂)，和包装插页，其包含关于在受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的用法说明书。在一个相关实施方案中，本发明特征在于一种试剂盒，其包括本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，OX40结合激动剂(例如OX40激动性抗体，OX40L激动性片段，OX40寡聚受体，和OX40免疫粘附素)，和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗TIGIT抗体在受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的用法说明书。在一个相关实施方案中，本发明特征在于一种试剂盒，其包括本发明的抗TIGIT抗体(例如4.1D3或其变体，例如4.1D3.Q1E)，PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂)，OX40结合激动剂(例如OX40激动性抗体，OX40L激动性片段，OX40寡聚受体，和OX40免疫粘附素)，和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗TIGIT抗体在受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的用法说明书。在任何上述实施方案中，该受试者可以是例如人。具体涵盖的是本文中描述的任何抗TIGIT抗体，OX40结合激动剂，和PD-1轴结合拮抗剂可以包括在该试剂盒中。
实施例
通过援引下述实施例能进一步了解本发明，它们是作为示例提供的且并非意图限制。
实施例1：抗TIGIT抗体的生成
给Sprague Dawley大鼠或OMT转基因大鼠(Open Monoclonal Technology，PaloAlto，CA)皮下共免疫接种与完全弗氏佐剂(BD，Franklin Lakes，NJ)混合的50μg人TIGIT蛋白质(Genentech，Inc.)和50μg食蟹猴TIGIT蛋白质(Genentech，Inc.)的初始剂，接着是每两周皮下和腹膜内多个部位的在PBS中稀释的25μg人TIGIT蛋白质和25μg食蟹猴TIGIT蛋白质。
最后一次免疫接种后3天收获多个淋巴结。用生物素化的靶向大鼠非B细胞的抗体(BD；eBioscience，SDiego，CA)和链霉亲合素包被的磁珠(Miltenyi，SDiego，CA)使用负选择富集来自这些大鼠的B细胞。经由电融合(Harvard Apparatus，Holliston，MA)将所得B细胞群体与P3X63-Ag8U.1小鼠骨髓瘤细胞(AmericType Culture Collection，Rockville，MD)融合。将融合的细胞在培养基C(StemCell Technologies，Vancouver，BC，Canada)中于37℃，7％CO2温育过夜，之后在含抗大鼠IgG-FITC(Sigma-Aldrich，St。Louis，MO)的半固体培养基D(StemCell Technologies)中重悬浮并分配入Omniwell盘(Thermo FisherScientific，Rochester，NY)。分配后7天，选择发荧光的集落并使用Clonepix FL(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)转移入装有培养基E(StemCell Technologies)的96孔培养板(BD)。挑取集落后7天通过ELISA针对人TIGIT蛋白质筛选上清液。用在0.05M碳酸钠缓冲液，pH9.6中稀释的1μg/ml蛋白质包被384孔板(Greiner Microlon，Greiner Bio-One，Monroe，NC)，并于4℃温育过夜。然后将孔用100μl含有0.5％BSA和0.5％Tween-20的PBS于室温封闭1小时。清洗后，以50μl添加上清液和/或血清并于室温摇动30分钟。为了检测特异性抗体，将辣根过氧化物酶缀合的抗大鼠IgG抗体(Bethyl Laboratories，Montgomery，TX)在含有0.5％BSA和0.5％Tween-20的PBS中稀释至经过优化的浓度并在清洗后以50μl每孔添加，并将板于室温摇动30分钟。将板用100μl含有0.05％Tween-20的PBS清洗3次。添加50μl TMB底物(BioFX，Owings Mills，MD)并将板于室温温育5分钟，接着添加50μl终止溶液(BioFX)，然后于630nm读数。将人TIGIT结合性杂交瘤细胞系扩充和培养2-4天，然后通过针对人TIGIT，食蟹猴TIGIT，和小鼠TIGIT蛋白质的ELISA(Genentech，Inc.)进行筛选。收获来自人和食蟹猴交叉反应性细胞系的上清液并通过蛋白G(蛋白G Sepharose4Fast Flow，GE Healthcare，Pittsburgh，PA)进行纯化。筛选了大约500个克隆。自该筛选，鉴定出来自免疫接种OMT大鼠的克隆4.1D3，7.4A3，和4.1A4，并且鉴定出来自免疫接种Sprague Dawley大鼠的克隆1.6B2，1.10A5，1.7E7，和1.15C8。
实施例2：抗TIGIT抗体的优化
A.OMT大鼠衍生的抗TIGIT人单克隆抗体抛光
为了对于克隆4.1A4，4.1D3，和7.4A3(分别也称作1A4，1D3，和4A3)防止不想要的焦谷氨酸形成及对于克隆4.1A4和7.4A3解决不配对半胱氨酸残基的问题，生成了下述经过优化的抗TIGIT抗体变体：4.1A4.C96S.Q1E，4.1A4.C96Y.Q1E，4.1D3.Q1E，7.4A3.C96S.Q1E，和7.4A3.C96Y.Q1E(分别也称作1A4.C96S.Q1E，1A4.C96Y.Q1E，1D3.Q1E，4A3.C96S.Q1E，和4A3.C96Y.Q1E)。如下文表2中描述的，然后通过表面等离振子共振(SRP)(BIACORETM分析)测定这五种经过优化的变体对人和食蟹猴TIGIT的亲和力并与它们各自亲本克隆的亲和力比较。
简言之，用N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺氢氯化物(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)试剂依照供应商(GE Healthcare Biosciences，Piscataway，NJ)的说明书活化S系列CM5传感器芯片，并应用人抗体捕捉试剂盒偶联山羊抗人Fc IgG以在每个流动室上实现大约10,000个响应单位(RU)，接着用1M乙醇胺封闭未反应的基团。
为了动力学测量，于25℃捕捉每种克隆以实现大约250个RU并注射TIGIT抗原在HBS-P缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4，0.15M NaCl，0.005％表面活性剂P20)中的5倍连续稀释液(1.23nM至300nM)(流速：30μl/min)，注射之间没有再生。记录传感图并在减去参照室信号后通过BIAcoreTMT200评估软件(2.0版)进行评估。使用简单一对一Langmuir结合模型计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。作为比率koff/kon计算平衡解离常数(KD)。
表2：OMT大鼠衍生的1A4，1D3，和4A3抗体变体针对人和食蟹猴TIGIT的BIACORETM亲和力测量
Figure BDA0001605976190001401
通过与亲本克隆的比较，认为克隆4.1A4.C96S.Q1E，7.4A3.C96S.Q1E，和4.1D3.Q1E是具有相似且可接受的对人和食蟹猴TIGIT二者的结合亲和力的最终分子。另外的BIACORETM分析揭示了4.1D3.Q1E克隆特别能够交叉反应和以低纳摩尔亲和力结合家兔TIGIT(表3)。
表3：4.1D3.Q1E能够与人，食蟹猴，和家兔TIGIT交叉反应
Figure BDA0001605976190001411
B.SD大鼠衍生的抗TIGIT单克隆抗体的人源化
如下文描述的那样人源化单克隆抗体1.6B2，1.10A5，1.7E7，和1.15C8(在本文中分别称作6B2，10A5，7E7，和15C8)。残基编号依照Kabat et al.,Sequences of Proteinsof Immunological Interest.5th Ed.,Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(1991)。
为了6B2抗体人源化，将来自大鼠6B2(rat6B2)抗体的高变区工程化改造入它的最接近的人受体框架以生成人源化6B2(h6B2.L1H1)。具体地，将来自rat6B2VL域的位置24-34(L1)，50-56(L2)，和89-97(L3)嫁接入人种系IGKV1-33*01。将来自rat6B2VH域的位置26-35(H1)，50-65(H2)，和95-102(H3)嫁接入人种系IGHV2-5*08。另外，在h6B2.L1H1中保留来自大鼠序列的VL的框架II中的位置43和VH的框架III中的位置69，73，78。发现那些残基是作为“游标(Vernier)”区起作用的框架残基的一部分，可调节CDR/HVR结构及细调抗原贴合。参见例如Foote and Winter,J.Mol.Biol.224:487-499(1992)。这些CDR/HVR定义包括通过它们的序列高变性(Wu,T.T.&Kabat,E.A.(1970))，它们的结构定位(Chothia,C.&Lesk,A.M.(1987))和它们在抗原-抗体接触中的参与(MacCallum et al.J.Mol.Biol.262:732-745(1996))定义的位置。
通过将h6B2.L1H1在游标区的每个大鼠残基工程化改造回人种系残基生成了另外的人源化6B2变体，而且这些变体是h6B2.L2H1(VL：S43A)，h6B2.L1H2(VH：V69I)，h6B2.L1H3(VH：A73T)，h6B2.L1H4(VH：A78V)，h6B2.L1H5(VH：V69I，A73T，A78V)，和h6B2.L2H5(VL：S43A，VH：V69I，A73T，A78V；一种完全人源化型式)。
为了10A5抗体人源化，将来自大鼠10A5(rat10A5)抗体的高变区工程化改造入它的最接近的人受体框架以生成人源化10A5(h10A5.L1H1)。具体地，将来自rat10A5VL域的位置24-34(L1)，50-56(L2)，和89-97(L3)嫁接入人种系IGKV3-15*01。将来自rat10A5VH域的位置26-35(H1)，50-65(H2)和95-102(H3)嫁接入人种系IGHV2-5*08。另外，在h10A5.L1H1中保留来自大鼠序列的VL的框架II中的位置43和框架III中的位置58和VH的框架III中的位置69和78。发现那些残基是作为“游标”区起作用的框架残基的一部分，如上文描述的。
通过将h10A5.L1H1在游标区的每个大鼠残基工程化改造回人种系残基生成了另外的人源化10A5变体，而且这些变体是h10A5.L2H1(VL：S43A)，h10A5.L3H1(VL：V58I)，h10A5.L4H1(VL：S43A，V58I)，h10A5.L1H2(VH：V69I)，h10A5.L1H3(VH：A78V)，h10A5.L1H4(VH：V69I，A78V)，和h10A5.L4H4(VL：S43A，V58I，VH：V69I，A78V；一种完全人源化型式)
为了7E7抗体人源化，将来自大鼠7E7(rat7E7)抗体的高变区工程化改造入它的最接近的人受体框架以生成人源化7E7(h7E7.L1H1)。具体地，将来自rat7E7VL域的位置24-34(L1)，50-56(L2)，和89-97(L3)嫁接入人种系IGKV1-9*01。将来自rat7E7VH域的位置26-35(H1)，50-65(H2)，和95-102(H3)嫁接入人种系IGHV1-3*01。另外，在h7E7.L1H1中保留来自大鼠序列的VL的框架III中的位置58，71，和87，VH的框架II中的位置47，48和VH的框架III中的位置67，69，71，91，和93。发现那些残基是作为“游标”区起作用的框架残基的一部分，如上文描述的。
通过将h7E7.L1H1在游标区的每个大鼠残基工程化改造回人种系残基生成了另外的人源化7E7变体，而且这些变体是h7E7.L2H1(VL：I58V)，h7E7.L3H1(VL：Y71F)，h7E7.L4H1(VL：F87Y)，h7E7.L5H1(VL：I58V，Y71F，F87Y)，h7E7.L1H2(VH：I47W)，h7E7.L1H3(VH：I48M)，h7E7.L1H4(VH：A67V)，h7E7.L1H5(VH：L69I)，h7E7.L1H6(VH：A71R)，h7E7.L1H7(VH：F91Y)，h7E7.L1H8(VH：T93A)，h7E7.L1H9(VH：I47W，I48M，A67V，L69I，A71R，F91Y，T93A)，和h7E7.L5H9(VL：I58V，Y71F，F87Y，VH：I47W，I48M，A67V，L69I，A71R，F91Y，T93A；一种完全人源化型式)。
为了15C8抗体人源化，将来自大鼠15C8(rat15C8)抗体的高变区工程化改造入它的最接近的人受体框架以生成人源化15C8(h15C8.L1H1)。具体地，将来自rat15C8VL域的位置24-34(L1)，50-56(L2)，和89-97(L3)嫁接入人种系IGKV1-9*01。将来自rat15C8VH域的位置26-35(H1)，50-65(H2)，和95-102(H3)嫁接入人种系IGHV1-3*01。另外，在h15C8.L1H1中保留来自大鼠序列的VL的框架III中的位置58，71，和87，VH的框架II中的位置37，47，和48，和VH的框架III中的位置67，69，71，和91。发现那些残基是作为“游标”区起作用的框架残基的一部分，如上文描述的。
通过将h15C8.L1H1在游标区的每个大鼠残基工程化改造回人种系残基生成了另外的人源化15C8变体，而且这些变体是h15C8.L2H1(VL：I58V)，h15C8.L3H1(VL：Y71F)，h15C8.L4H1(VL：F87Y)，h15C8.L5H1(VL：I58V，Y71F，F87Y)，h15C8.L1H2(VH：L37V)，h15C8.L1H3(VH：I47W)，h15C8.L1H4(VH：I48M)，h15C8.L1H5(VH：A67V)，h15C8.L1H6(VH：L69I)，h15C8.L1H7(VH：T71R)，h15C8.L1H8(VH：F91Y)，h15C8.L1H9(VH：L37V，I47W，I48M，A67V，L69I，T71R，F91Y)，和h7E7.L5H9(VL：I58V，Y71F，F87Y，VH：L37V，I47W，I48M，A67V，L69I，T71R，F91Y；一种完全人源化型式)。
将第一批人源化型式h6B2，L1H1，h10A5.L1H1，h7E7，L1H1，和h15C8.L1H1(它们含有大鼠CDR和游标位置处的框架残基二者)和完全人源化型式h6B2.L2H5，h10A5.L4H4，h7E7.L5H9，和h15C8.L5H9(它们只含有大鼠CDR)提交BIAcore亲和力测量，与原始大鼠抗体rat6B2，rat10A5，rat7E7和rat15C8比较。为了通过单循环动力学测定TIGIT抗体针对人TIGIT，食蟹猴TIGIT和人丙氨酸扫描TIGIT突变体的结合亲和力，使用BIACORETM-T200仪器的表面等离振子共振(SRP)测量，如上文描述的。下文表4中的BIACORETM结果指示所有人源化变体展现针对人和食蟹猴TIGIT二者的结合亲和力下降(即KD升高)约5-10倍。完全人源化型式的h6B2.L2H5和h10A5.L4H4令人惊讶地显示与第一批人源化型式的h6B2.L1H1和h10A5.L1H1相似的结合亲和力，提示游标位置处的rat6B2和rat10A5框架残基对人和食蟹猴TIGIT结合没有贡献。因此，h6B2.L2H5和h10A5.L4H4二者分别代表rat6B2和rat10A5的最终的人源化型式。与之对比，完全人源化型式的h7E7.L5H9和h15C8.L5H9丧失结合人和食蟹猴TIGIT的能力。
为了进一步阐明第一批人源化抗体h7E7，L1H1，和h15C8.L1H1的游标位置处的哪些大鼠框架残基对于结合是至关紧要的，将所有框架抛光变体提交BIAcore亲和力测量。对于7E7框架抛光，含有VH：I47W替代的h7E7.L1H2，h7E7.L1H9，和h7E7.L5H9变体显示人和食蟹猴TIGIT结合亲和力下降超过100倍，而含有VL：Y71F替代的h7E7.L3H1和h7E7.L5H1变体显示食蟹猴TIGIT结合亲和力下降约2-3倍。因此，在最终的7E7人源化型式，称作h7E7.L5aH9a中保持VH：I47和VL：Y71大鼠框架残基二者以保留人和食蟹猴TIGIT结合。对于15C8框架抛光，含有VH：I47W替代的h15C8.L1H3，h15C8.L1H9，和h15C8.L5H9变体显示人和食蟹猴TIGIT结合亲和力下降超过100倍，而含有VL：Y71F替代的h15C8.L3H1和h15C8.L5H1变体显示人和食蟹猴TIGIT结合亲和力下降约2-3倍。其它分别含有VH：L37V，A67V，和T71R替代的h15C8.L1H2，h15C8.L1H5，和h15C8.L1H7变体也显示人TIGIT结合亲和力下降约2-3倍。因此，在最终的15C8人源化型式，称作h15C8.L5aH9a中保持所有五个VH：I47，L37，A67，T71和VL：Y71大鼠框架残基以保留人和食蟹猴TIGIT结合。
表4：人源化SD大鼠衍生的6B2，10A5，7E7，和15C8抗体变体针对人和食蟹猴TIGIT的BIACORETM亲和力测量汇总
Figure BDA0001605976190001441
Figure BDA0001605976190001451
实施例3：抗TIGIT抗体的体外结合和阻断研究
A.抗TIGIT抗体的体外结合表征
对OMT和SD衍生的抗TIGIT抗体在体外表征它们结合TIGIT及阻断脊髓灰质炎病毒受体(PVR)结合TIGIT的能力。对人和食蟹猴TIGIT的结合在单价和二价亲和力二者的背景中通过上文描述的BIACORETM分析来测试，并与小鼠衍生的抗TIGIT抗体(1A5)和嵌合的仓鼠衍生的抗TIGIT抗体(10A7；参见例如美国公开文本No.2009/0258013，通过援引将其完整收入本文)进行比较。表5中描绘的BIACORETM分析的结果指示众多OMT衍生的抗TIGIT克隆变体，诸如4.1D3.Q1E和7.4A3.C96S.Q1E，和SD衍生的抗TIGIT克隆变体能够结合人和食蟹猴TIGIT二者，每一种均以较高且相似的亲和力。此类特性是治疗性抗TIGIT抗体所期望的，因为它们容许容易的使用食蟹猴(Macaca fascicularis)作为非临床毒理学物种的毒性测试。4.1D3.Q1E克隆与家兔的另外的交叉反应性可提供另外的毒理学物种。
表5：经过优化的OMT和SD衍生的抗TIGIT克隆的BIACORETM分析
Figure BDA0001605976190001461
Figure BDA0001605976190001471
进行了OMT和SD衍生的抗TIGIT抗体克隆的另外的体外结合研究。通过FACS分析对OMT和SD衍生的抗TIGIT克隆测试对CHO细胞的表面上表达的人和食蟹猴TIGIT的结合。用全长人TIGIT(CHO-hTIGIT)或食蟹猴TIGIT(CHO-cyTIGIT)转染CHO细胞。将表达TIGIT的CHO细胞与所示浓度的每一种抗TIGIT抗体一起温育，然后使用标准方法经由FITC标记的抗hIgG抗体(见图1A)进行检测。表6和图1B-1E中显示的结果确证了来自上文描述的BIACORETM分析的结果。
还通过FACS分析对OMT和SD衍生的抗TIGIT克隆测试对人原代T细胞的结合。如Yuet al.Nature Immunology.10:48-57,2009(通过援引将其完整收入本文)中描述的将人PBMC用板结合的抗CD3(5μg/ml)和可溶性抗CD28(2μg/ml)活化2天。然后，清洗细胞并与所示浓度的每一种抗TIGIT抗体一起温育，然后经由FITC标记的抗hIgG抗体进行检测。还将细胞用抗CD4，抗CD8，和抗CD25(BD bioscience)染色。通过FACS对人CD4+(CD25+CD4+)和人CD8+(CD25+CD8+)T细胞评估抗TIGIT克隆的结合。在LSR-II或LSR-Fortessa仪器(BDBiosciences)上获取所有样品并使用FlowJo软件(Treestar)进行分析。如表6和图2A-2D中描述的，该等克隆展现大致等同的对它们的靶TIGIT的结合。
表6：经过优化的OMT和SD衍生的抗TIGIT克隆的CHO-TIGIT和人T细胞结合的汇总
Figure BDA0001605976190001472
B.抗TIGIT抗体的体外阻断表征
还对OMT和SD衍生的抗TIGIT抗体克隆测试它们阻断TIGIT-PVR和TIGIT-CD226相互作用的能力。
为了测试该等克隆阻断TIGIT-PVR相互作用的能力，使用了阻断ELISA测定法。简言之，将重组人PVR-Fc融合蛋白，食蟹猴PVR-Fc融合蛋白，或小鼠PVR-Fc融合蛋白在磷酸盐缓冲盐水(PBS，pH 7.0)中以4μg/ml和25μl/孔包被到384孔Maxisorp微量滴定板(NUNC，Denmark)上并于4℃温育过夜。然后丢弃包被溶液，以80μl/孔使用PBS中0.5％牛血清清蛋白(BSA)封闭板并在温和摇动下温育1小时。使用12个连续2.5倍稀释(40000-1.7ng/mL)在测定缓冲液(PBS，0.5％BSA，0.05％Tween 20)中稀释抗TIGIT和Fab同种型对照抗体的滴定曲线。将等体积的人TIGIT-AviFlag-生物素(1μg/mL)，食蟹猴TIGIT-AviFlag-生物素(150ng/mL)，或小鼠TIGIT-His(1μg/mL)添加至这些滴定曲线并在温和摇动下于室温温育1小时。使用ELx405自动化微量滴定板清洗仪(BioTek Instruments，Vermont)将经过封闭的板用清洗缓冲液(PBS，0.05％Tween 20，pH 7.4)清洗3次，以25μl/孔添加抗体/配体-生物素或配体-His混合物并在温和摇动下于室温温育1小时。然后将板用清洗缓冲液清洗6次并通过添加25μl/孔在测定缓冲液中稀释的辣根过氧化物酶缀合的链霉亲合素(1:10000，Amersham，UK)或辣根过氧化物酶缀合的小鼠抗His(1:2500，Qiagen，Germany)来检测结合的人TIGIT-AviFlag-生物素，食蟹猴TIGIT-AviFlag-生物素，或小鼠TIGIT-His。温育30分钟或1小时后，将板用清洗缓冲液清洗6次并添加100μl/孔3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)底物(KPL，Inc.，Gaithersburg，MD USA)以容许显色。通过添加1M磷酸来淬灭反应。在MULTISKAN
Figure BDA0001605976190001481
微量滴定板读数仪(Thermo Labsystems，Helsinki，Finland)上于450nm读取吸光度。根据来自ELISA板的所得光密度值绘制拟合曲线并使用GenedataScreener软件(Genedata，Switzerland)计算IC50。如下文图3A-3D中显示的，这些测定法证明了4.1D3.Q1E对于人TIGIT和食蟹猴TIGIT的交叉反应性和阻断能力，这区分4.1D3.Q1E与仓鼠衍生的抗TIGIT抗体10A7，后者与小鼠TIGIT但不与食蟹猴TIGIT交叉反应。数据指示4.1D3.Q1E强烈阻断食蟹猴TIGIT结合食蟹猴PVR。数据还指示4.1D3.Q1E是比10A7仓鼠衍生的抗TIGIT抗体克隆更强的对于人TIGIT结合人PVR的阻断剂。
这些研究在CHO-TIGIT PVR阻断测定法实验中得到进一步验证，在后者中将表达TIGIT的CHO细胞与带标记物的PVR-Fc融合蛋白一起在抗TIGIT抗体或人IgG1对照存在下温育(图4A)。如表7和图4B-4E中显示的，与10μg/ml OMT衍生的抗TIGIT抗体(图4B和4C)或SD衍生的抗TIGIT抗体(图4D和4E)一起温育导致对于huTIGIT-huPVR和cyTIGIT-cyPVR二者阻断TIGIT-PVR结合，IC50值在纳摩尔和亚纳摩尔范围中。
为了测试该等克隆阻断TIGIT-CD226相互作用的能力，使用了TR-FRET(时间解析荧光共振能量转移)。首先，使用CHO细胞表达并标记带有非渗透性供体和受体荧光团的人带SNAP标签的(ST)CD226。在OMT和SD衍生的抗TIGIT抗体克隆存在或缺失下，与带HA标签的TIGIT一起共表达人ST-CD226。将每一种所测试的克隆添加至细胞培养物显著降低TIGIT和CD226结合的能力(表7)。这些数据提示用所鉴定的抗TIGIT抗体进行的抗TIGIT处理能限制TIGIT与CD226的相互作用，指示基于它们通过解放TIGIT介导的对CD226活性的遏制和阻止后续CD8+T细胞耗尽来活化T细胞活性的能力，这些抗体可能是有利的治疗剂。
表7：经过优化的OMT和SD衍生的抗TIGIT克隆的TIGIT-PVR阻断和TIGIT-CD226阻断的汇总
Figure BDA0001605976190001491
实施例4：抗TIGIT抗体的药动学表征
接下来，在食蟹猴中测试OMT和SD衍生的抗TIGIT抗体克隆的药动学(PK)特性，与携带N297G无糖基化突变的小鼠衍生的抗TIGIT抗体(1A5N297G)和抗gD对照抗体比较。在这些实验中，在食蟹猴中10mg/kg静脉内施用后跨越28天测量测量抗体的血清浓度。PK研究揭示了SD衍生的h1.6B2变体展现最快的清除率，大约20ml/天/kg(图5A和5B)。所测试的1A5变体也展现较快的清除率，大约15ml/天/kg(图5A和5B)。与这些抗TIGIT变体形成对比，所测试的OMT变体(4.1D3.Q1E，7.4A3.C96S.Q1E，和4.1A4.C96S.Q1E)展现大约8-10ml/天/kg的清除率(图5A和5B)，在历史上接受的食蟹猴范围大约4-8ml/天/kg的高末端。OMT变体的PK概况直到第10天与对照抗gD抗体相似，此时靶物介导的药物部署(TMDD)和/或抗治疗剂抗体(ATA)效应卷绕(convolute)估值。
还在7天PK研究中将展现有利的PK特性的OMT衍生的抗TIGIT抗体4.1D3与人源化10A7(h10A7.K4G3)比较。在这项实验中，将8只雌性食蟹猴分仓入两组各4只猴，第一组接受h10A7.K4G3而第二组接受4.1D3。两种抗TIGIT抗体均以10mg/kg的剂量水平(剂量体积5ml/kg；剂量浓度2mg/ml)通过慢推注静脉内注射施用。在0小时(给药前)，给药后0.25小时，2小时，8小时，1天，3天，和7天依照下述收集窗收集血液样品(0.5ml)：
Figure BDA0001605976190001501
使用凝胶血清分离管。将血液维持于环境温度并容许在离心之前凝结至少20分钟。在收集1小时内将样品离心(大约10至15分钟，大约1500至2000x g[力]，2℃至8℃)。在离心开始30分钟内收获血清并转移入0.5mL2D条形码螺旋顶管(ThermofisherScientific，目录#3744或等同物)。对血清样品标注动物编号，物种，剂量组，收集日，样品类型(即PK-血清)，和研究编号。然后对血清样品分析h10A7.K4G3或4.1D3的浓度。如图5C和5D中显示的，这项PK研究揭示了h10A7.K4G3展现比4.1D3更快的清除率(更低的AUC)，而且h10A7.K4G3的清除率(>9ml/天/kg)比食蟹猴中的单克隆抗体选择的推荐更快。估算的清除率基于第0天至第7天的数据且是由Winnonlin使用NCA计算的。
实施例5：抗TIGIT抗体的分子分析
还在分子评估(MA)分析中对OMT衍生的(4.1D3，7.4A3.C96S，和4.1A4.C96S)和SD衍生的(h1.6B2.L1H1，h1.10A5.L1H1，h1.7E7.L1H1，和h1.15C8.L1H1)抗TIGIT抗体克隆测试稳定细胞系特性。简言之，对抗TIGIT抗体(1mg/ml)测试在AAPH(2,2-偶氮二(2-脒基丙烷)二氢氯化物)，一种已知生成自由基的小分子的化学条件下以及在不同pH的热条件(2周40℃热应力测试，或是pH 5.5或是pH 7.4)下的应力。如下文表8和9中显示的，测定出4.1A4.C96S是不稳定的，在MA研究中显示不可接受的主峰损失和升高的脱酰胺。类似地，h1.7E7.L1H1和h1.15C8.L1H1显示较高的初始脱酰胺(>30％)。另一方面，发现了抗TIGIT抗体4.1D3，7.4A3.C96S，h1.6B2.L1H1，和h1.10A5.L1H1在MA研究中拥有可接受的稳定性特性。
表8：OMT衍生的抗TIGIT抗体克隆的MA稳定性汇总
Figure BDA0001605976190001511
Figure BDA0001605976190001521
表9-1：SD衍生的抗TIGIT抗体克隆的MA稳定性汇总
Figure BDA0001605976190001522
Figure BDA0001605976190001531
表9-2：SD衍生的抗TIGIT抗体克隆的MA稳定性汇总
Figure BDA0001605976190001532
Figure BDA0001605976190001541
实施例6：结构性和功能性TIGIT表位作图
为了更好地了解4.1D3抗TIGIT抗体及其优化变体(例如4.1D3.Q1E)特别是如何能够实现例示性交叉反应性(例如人，食蟹猴，和家兔TIGIT之间的交叉反应性)，针对TIGIT的高亲和力，和稳健阻断TIGIT-PVR和TIGIT-CD226相互作用/功能同时展现药动学和分子评估特性，测定了与TIGIT复合的4.1D3的晶体结构并与结合至TIGIT的小鼠衍生的抗TIGIT抗体1A5和结合至TIGIT的仓鼠衍生的抗TIGIT抗体10A7的晶体结构进行比较，如下文详细描述的。还实施了TIGIT界面的丙氨酸扫描诱变实验以鉴定功能性表位残基。
A.TIGIT和Fab表达，纯化，和结晶
如描述的那样(参见例如Stengel et al.PNAS.109(14):5399-5404,2012)表达并纯化人TIGIT残基23-128。如描述的那样(参见例如Carter et al.Nat.Biotech.1992)表达并纯化包括重和轻链的Fab片段。将经过纯化的TIGIT与过量的经过纯化的Fab片段混合以生成TIGIT/Fab复合物。然后在HEPES缓冲盐水(10mM HEPES，pH 7.5和100mM NaCl)中平衡的大小排阻柱上进一步纯化复合物以生成只含有TIGIT和Fab的1:1复合物的样品。然后浓缩每一种TIGIT/Fab复合物用于结晶并提交高通量蒸气扩散结晶筛选的标准技术。对于TIGIT/10A7复合物，在0.1M HEPES pH 7.5，20％PEG 4000，和10％异丙醇中将样品浓缩至大约25mg/mL并发现结晶。对于TIGIT/1A5复合物，在0.05M HEPES pH 7.0，12％PEG3350，和1％胰胨中将样品浓缩至大约25mg/mL并发现结晶。对于TIGIT/4.1D3复合物，在0.1M HEPESpH7.5，10％PEG 6000，和5％MPD中将样品浓缩至大约25mg/mL并发现结晶。将晶体用甘油防冻并依照标准技术在液氮中闪冻用于收据收集。
B.数据收集和结构解析
依照标准方法在Advanced Light Source(Berkeley，CA)或Advanced PhotonSource(Argonne，IL)使用各种同步加速器X射线放射于100°K在低温冷却条件下收集X射线衍射数据。使用数据加工软件XDS(Kabsch W.Acta Cryst.D.Biol.Crystl.66:125-132,2010)加工并分解(reduce)衍射图像。用PHASER程序使用分子置换技术生成模型。使用人TIGIT的结构(Stengel et al PNAS 2012)和Fab抗体模型(Nakamura et al Cell HostMicrobe 2013)作为搜索模型。结构经历使用COOT程序进行的迭代轮次的模型调整和使用Phenix.refine或BUSTER程序进行的精化。精化模型至可接受的R和Rfree值和Ramachandran统计量(由Molprobity计算)。数据加工和精化统计量可以见表10。
表10：数据收集和精化统计量
数据收集和精化统计量
Figure BDA0001605976190001551
*圆括号中的值是分辨率最高的壳的。
C.结合至人TIGIT的4.1D3的结构
与TIGIT复合的4.1D3Fab以I4空间群结晶，不对称单元中有两个复合物，而且衍射至
Figure BDA0001605976190001552
不对称单元中的两个复合物个体的覆盖图只显示个体拷贝之间主链布局的微小变化。结合至人TIGIT的4.1D3的结构(图6A)显示了4.1D3在空间上妨碍PVR结合(图6B和6C)。4.1D3和TIGIT之间埋藏的表面积是大约
Figure BDA0001605976190001553
4.1D3轻链相互作用在TIGIT残基77-82周围聚簇，CDR L1Tyr27d和CDR L3Tyr92，Ser93，Thr94，和Phe96接触TIGIT残基Ile77，Pro79，Ser80，和Lys82。CDR L2不与TIGIT进行任何接触。4.1D3重链相互作用主要由CDR H2和H3介导且与TIGIT进行广泛接触。4.1D3CDR H1 Asn32接触TIGIT Leu73。4.1D3CDRH2Tyr52，Arg52b，Phe53，Lys54，Tyr56，和Asp58接触TIGIT残基Thr55，Gln56，Asn58，Glu60，Asp63，Gln64，Leu65，Ile68，Asn70，Ser80，和His111。4.1D3CDR H3残基Tyr99，Asp100，Leu100a Leu100b，和Ala100c接触TIGIT残基Leu65，Ala67，Ile68，Leu73，His76，Ile77，Ser78，Pro79，和Lys82。4.1D3利用非极性和极性相互作用的组合与TIGIT相互作用。轻链残基CDR L3Thr94与TIGIT Pro79和Ser80形成极性接触。重链CDR H2残基Arg52b和Tyr56与TIGIT残基Asn58和Glu60形成氢键。重链CDR H3残基Leu100a与TIGIT His76形成氢键。重链CDR H2残基Lys54和CDR H3残基Asp100分别与TIGIT残基Glu60和Lys82形成盐桥。还可见图6D和6E。
基于4.1D3/TIGIT复合物的晶体结构，确定了TIGIT中受到4.1D3接触的残基(即TIGIT中受到4.1D3结合的表位残基)和4.1D3中受到TIGIT接触的残基(即4.1D3中受到TIGIT接触的互补位残基)。下文表11和12显示了TIGIT的残基和它们接触的4.1D3的轻或重链残基，如使用接触距离严格性(contact distance stringency)
Figure BDA0001605976190001563
评估的，这是范德华(非极性)相互作用力最高的点。
表11：TIGIT的表位残基和它们在4.1D3的轻链上的对应互补位残基
Figure BDA0001605976190001561
表12：TIGIT的表位残基和它们在4.1D3的重链上的对应互补位残基
Figure BDA0001605976190001562
Figure BDA0001605976190001571
还实施了人TIGIT界面的丙氨酸扫描，对Gln53，Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，Asn70，Leu73，His76，His111，Tyr113，和Thr117进行TIGIT残基的丙氨酸突变。对这些突变体连同野生型测试对4.1D3Fab片段的结合。在这项实验中，TIGIT残基Glu60，Leu65，和Ile68的突变降低4.1D3结合大于10倍(图7A，7B，和7E)。TIGIT残基Gln56，Asn70，Leu73，His111，和Tyr113的突变降低4.1D3结合介于1和10倍之间(图7A，7B，和7E)。TIGIT Gln53，His76，和Thr117的突变并不影响4.1D3结合(图7A，7B，和7E)。这项分析符合晶体结构分析，发现对4.1D3结合影响最大的TIGIT残基在该结构中与4.1D3相互作用。
D.结合至人TIGIT的1A5的结构
与TIGIT复合的1A5Fab以P1空间群结晶，不对称单元中有四个复合物，而且衍射至
Figure BDA0001605976190001572
不对称单元中的四个复合物个体的覆盖图只显示个体拷贝之间主链布局的微小变化。结合至人TIGIT的1A5的结构(图8)显示了1A5在空间上妨碍PVR结合，但是人TIGIT上1A5所结合的表位与4.1D3的表位不相同(图9)。1A5和TIGIT之间埋藏的表面积是大约
Figure BDA0001605976190001573
1A5轻链与TIGIT的相互作用主要在残基109和119之间聚簇，Glu60有一项偏远的接触。1A5轻链CDR L1具有单一接触残基Trp32，其接触TIGIT残基Ile109，Thr117，和Thr119。1A5CDR L2残基Lys50接触TIGIT Glu60。1A5CDR L3残基Gly91，Gln92，Ser93，和Tyr94接触TIGIT残基Thr112，Tyr113，Pro114，Asp115，Gly116，和Thr117。对于10A7重链，CDR H1残基Thr30和Asp31与TIGIT残基Leu73进行接触。10A7CDR H2残基Tyr52，Val53，Ser54，Tyr58，和Tyr59与TIGIT残基Gln53，Thr55，Asp72，Leu73，和Tyr113进行接触。10A7CDR H3残基Phe97，Arg98，Pro100，和Trp100a与TIGIT残基Gln56，Asn58，Glu60，Asp63，Gln64，Leu65，Ile68，Leu73，His76，和His111进行接触。1A5和TIGIT之间的接触在性质上主要是非极性的，两项例外是1A5CDR H2残基Ser54和TIGIT残基Asp72之间的氢键，和1A5CDRH3残基Arg98和TIGIT残基Glu60之间的盐桥。
基于1A5/TIGIT复合物的晶体结构，确定了TIGIT中受到1A5接触的残基(即TIGIT中受到1A5结合的表位残基)和1A5中受到TIGIT接触的残基(即1A5中受到TIGIT接触的互补位残基)。下文表13和14显示了TIGIT的残基和它们接触的1A5的轻或重链残基，如使用接触距离严格性
Figure BDA0001605976190001583
评估的，这是范德华(非极性)相互作用力最高的点。
表13：TIGIT的表位残基和它们在1A5的轻链上的对应互补位残基
Figure BDA0001605976190001581
表14：TIGIT的表位残基和它们在1A5的重链上的对应互补位残基
Figure BDA0001605976190001582
Figure BDA0001605976190001591
还实施了TIGIT界面的丙氨酸扫描，对Gln53，Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，Asn70，Leu73，His76，His111，Tyr113，和Thr117进行TIGIT残基的丙氨酸突变。对这些突变体连同野生型测试对1A5Fab片段的结合。在这项实验中，TIGIT残基Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，和Tyr113的突变降低1A5结合大于10倍(图7A，7B，和7D)。TIGIT残基Leu73，His76，Asn70，His111，和Thr117的突变降低1A5结合介于1和10倍之间(图7A，7B，和7D)。只有TIGIT Gln53的突变并不影响1A5结合(图7A，7B，和7D)。这项分析符合晶体结构分析，发现对1A5结合影响最大的TIGIT残基中的许多在该结构中与1A5相互作用。
E.结合至人TIGIT的10A7的结构
10A7Fab/TIGIT复合物以P21空间群结晶，不对称单元中有两个10A7/TIGIT复合物，而且衍射至
Figure BDA0001605976190001593
两个复合物的覆盖图只显示TIGIT和10A7二者的主链布局的微小差异。结合至人TIGIT的10A7的结构(图10A)显示了10A7在空间上妨碍PVR结合(图10B)，但是人TIGIT上10A7所结合的表位与4.1D3或1A5的表位不相同(图9)。10A7和TIGIT之间埋藏的表面积是大约
Figure BDA0001605976190001592
TIGIT接触残基在Leu65和Ile77之间聚簇，TIGIT Gln56和Pro87有两项偏远的10A7CDR接触。轻链CDR L1具有六处氨基酸插入且利用残基Tyr27d，Gly27f，Val28，Lys29，和Leu32来进行与TIGIT残基Gln56，Leu65，Ile68，Asn70，Leu73，His76，Ser78，Ile77，和Pro79的接触。CDR L2只经由Tyr50和Ile53进行与TIGIT His76，Ile77，和Pro79的两项接触。CDR L3Gly91，Ile92，Asn93，和Asn94接触TIGIT残基Asp72，Leu73，和His76。对于重链CDR，没有H1残基接触TIGIT。对于CDR H2，Phe50和Arg52接触Asn70，Ala71，Asp72，Leu73，和Gly74。对于CDR H3，残基Arg95，Leu97，Gly98，His99，和Asn100接触TIGIT残基Leu73，Gly74，Trp75，His76，Ile77，和Pro87。10A7轻链和TIGIT之间的总体相互作用在性质上主要是疏水性的，有CDR L2Tyr50羟基和Ile77主链羰基之间的一项氢键接触。对于10A7重链，发现了Arg52与TIGIT Ala71和Asp72主链羰基之间，以及Arg95与Gly74和Trp75主链羰基之间的极性接触。
基于10A7/TIGIT复合物的晶体结构，确定了TIGIT中受到10A7接触的残基(即TIGIT中受到10A7结合的表位残基)和10A7中受到TIGIT接触的残基(即10A7中受到TIGIT接触的互补位残基)。下文表15和16显示了TIGIT的残基和它们接触的10A7的轻或重链残基，如使用接触距离严格性
Figure BDA0001605976190001603
评估的，这是范德华(非极性)相互作用力最高的点。
表15：TIGIT的表位残基和它们在10A7的轻链上的对应互补位残基
Figure BDA0001605976190001601
表16：TIGIT的表位残基和它们在10A7的重链上的对应互补位残基
Figure BDA0001605976190001602
Figure BDA0001605976190001611
还实施了TIGIT界面的丙氨酸扫描，对Gln53，Gln56，Glu60，Leu65，Ile68，Asn70，Leu73，His76，His111，Tyr113，和Thr117进行TIGIT残基的丙氨酸突变。对这些突变体连同野生型测试对10A7Fab片段的结合。在这项实验中，只有Leu73Ala和His76Ala突变影响10A7结合大于10倍(图7A-7C)。其它所列残基的突变并不显著影响10A7结合(图7A-7C)。这紧密符合结合至TIGIT的10A7的晶体结构，其中直接发现Leu73和His76在受到10A7结合的表位中。
F.抗TIGIT抗体4.1D3，1A5，和10A7在独特表位处识别TIGIT
上文描述的结构研究证明了三种抗TIGIT抗体4.1D3，1A5，和10A7在独特表位处识别TIGIT，这可以解释它们截然不同的功能特性和特征。如下文表17中显示的，例如，4.1D3在残基Ser78，Ser80，和Lys82处结合TIGIT，它们没有受到1A5或10A7抗体结合。图11是结构透视图，显示了TIGIT的残基Ser78，Ser80，和Lys82受到4.1D3但未受到1A5或10A7密切接触。
表17：TIGIT上对于4.1D3，1A5，和10A7抗TIGIT抗体在
Figure BDA0001605976190001613
内的表位残基
Figure BDA0001605976190001612
Figure BDA0001605976190001621
实施例7：免疫细胞上的TIGIT，PD-1，和CD226表达的表征
接下来，我们使用多色流式细胞术表征来自多发性骨髓瘤(MM)患者的骨髓标本的CD4+和CD8+T细胞上TIGIT，PD-1，和CD226的表达。自MM患者(n＝10)取得的冷冻骨髓分离细胞。所测试的MM患者中两人具有在诊断时收集的样品和在缓解(remission)后再次收集的样品。使用来自健康供体的冷冻的骨髓作为对照(n＝8)。在这些实验中，将骨髓样品用下述荧光缀合的单克隆抗体染色：BV605(PD-1)，Alexa Fluor 488(FoxP3)，PE-DNAM-1(CD226)，PE-Cy7(CD45)，BUV737(CD8)，PerCP-eF710(CD4)，APC(TIGIT)，亮紫421(NKp46)，亮紫421(CD56)，亮紫510(CD3)，亮紫510(CD38)，PE-Cy7(CD319)，PE(CD19)，和活/死可固定近IR死细胞染料(Life Technologies，ThermoFisher)。
显示了与自健康患者的外周血获得的CD4+和CD8+T细胞相比，TIGIT，PD-1，和CD226在自MM患者的骨髓获得的CD4+和CD8+T细胞上高表达(图12)。还确定了自MM患者的骨髓获得的CD4+和CD8+T细胞共表达TIGIT和PD-1二者(图13)。鉴于这种表达样式，本发明的抗TIGIT抗体对于治疗具有免疫相关疾病或癌症(例如骨髓瘤，例如MM)的患者是有用的，或是作为单一疗法或是与另外的治疗剂，诸如PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-L1结合拮抗剂，例如抗PD-L1抗体，例如MPDL3280A(atezolizumab))组合。
其它实施方案
尽管为了清楚理解的目的已经通过举例说明的方式较为详细地描述了上述发明，说明书和实施例不应解释为限制发明范围。应当理解，鉴于上文提供的一般描述，可以实施各种其它实施方案。通过述及明确收录本文中引用的所有专利和科学文献的完整公开内容。
序列表
<110> 基因泰克公司（Genentech, Inc.）
豪夫迈·罗氏有限公司（F. Hoffmann-La Roche AG）
<120> 抗TIGIT抗体和使用方法
<130> 50474-120WO3
<150> US 62/369,299
<151> 2016-08-01
<150> US 62/233,230
<151> 2015-09-25
<160> 354
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 7
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 1
Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn
1 5
<210> 2
<211> 18
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 2
Lys Thr Tyr Tyr Arg Phe Lys Trp Tyr Ser Asp Tyr Ala Val Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 3
Glu Ser Thr Thr Tyr Asp Leu Leu Ala Gly Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 4
Lys Ser Ser Gln Thr Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Lys Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 5
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 6
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 7
<211> 23
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 7
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 8
<211> 15
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 8
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 9
<211> 32
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 9
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 10
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 11
<211> 30
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Gln 或 Glu
<400> 11
Xaa Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser
20 25 30
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 12
Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly
1 5 10
<210> 13
<211> 32
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 13
Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln
1 5 10 15
Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 14
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 15
<211> 30
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 15
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser
20 25 30
<210> 16
<211> 30
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 16
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser
20 25 30
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 17
Ser Tyr Pro Met Asn
1 5
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 18
Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Val Gln Gly Phe Thr
1 5 10 15
Gly
<210> 19
<211> 13
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 19
Thr Gly Gly His Thr Tyr Asp Ser Tyr Ala Phe Asp Val
1 5 10
<210> 20
<211> 11
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 20
Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser Ser Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 21
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (8)..(8)
<223> Xaa 是 Cys, Ser, 或 Tyr
<400> 22
Gln His Leu His Gly Tyr Pro Xaa Asn
1 5
<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 23
Gln His Leu His Gly Tyr Pro Ser Asn
1 5
<210> 24
<211> 30
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Asp Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 25
<211> 14
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 25
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 26
<211> 32
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 26
Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 27
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 28
Gln His Leu His Gly Tyr Pro Cys Asn
1 5
<210> 29
<211> 30
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Asp Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 30
<211> 23
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 30
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Thr Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 31
<211> 15
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 31
Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 32
<211> 32
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 32
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 33
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 34
<211> 126
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 34
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Lys Thr Tyr Tyr Arg Phe Lys Trp Tyr Ser Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Gly Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Phe Tyr Cys Thr Arg Glu Ser Thr Thr Tyr Asp Leu Leu Ala Gly Pro
100 105 110
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 35
<211> 126
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 35
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Lys Thr Tyr Tyr Arg Phe Lys Trp Tyr Ser Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Gly Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Phe Tyr Cys Thr Arg Glu Ser Thr Thr Tyr Asp Leu Leu Ala Gly Pro
100 105 110
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 36
<211> 113
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 36
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Thr Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 37
<211> 122
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Asp Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Pro Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Val Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Gly Gly His Thr Tyr Asp Ser Tyr Ala Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 38
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Thr Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Gln His Leu His Gly Tyr Pro Ser
85 90 95
Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 39
<211> 122
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Asp Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Pro Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Val Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Gly Gly His Thr Tyr Asp Ser Tyr Ala Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 40
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Thr Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Gln His Leu His Gly Tyr Pro Cys
85 90 95
Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 5
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 41
Asn Tyr Pro Met Asn
1 5
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 42
Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Ser Pro Ala Tyr Ala Gln Asp Phe Thr
1 5 10 15
Glu
<210> 43
<211> 11
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 43
Thr Ala Ile Thr Ser Val Tyr His Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 44
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 45
Gly Ala Thr Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (8)..(8)
<223> Xaa 是 Cys, Ser, 或 Tyr
<400> 46
Gln Lys Leu Asn Ser His Pro Xaa Ser
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 47
Gln Lys Leu Asn Ser His Pro Cys Ser
1 5
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 48
Gln Lys Leu Asn Ser His Pro Ser Ser
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 49
Gln Lys Leu Asn Ser His Pro Tyr Ser
1 5
<210> 50
<211> 30
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Glu 或 Gln
<400> 50
Xaa Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr
20 25 30
<210> 51
<211> 14
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 51
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 52
<211> 32
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 52
Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Thr Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 53
<211> 11
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 53
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 54
<211> 30
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr
20 25 30
<210> 55
<211> 30
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 55
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr
20 25 30
<210> 56
<211> 23
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 56
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 57
<211> 15
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 57
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Val Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 58
<211> 32
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 58
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Glu Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 59
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 60
<211> 120
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Pro Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Ser Pro Ala Tyr Ala Gln Asp Phe
50 55 60
Thr Glu Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Ala Ile Thr Ser Val Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 61
<211> 107
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 61
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Leu Asn Ser His Pro Cys
85 90 95
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 62
<211> 120
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 62
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Pro Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Ser Pro Ala Tyr Ala Gln Asp Phe
50 55 60
Thr Glu Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Ala Ile Thr Ser Val Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 63
<211> 107
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 63
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Leu Asn Ser His Pro Ser
85 90 95
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 64
<211> 107
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 64
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Leu Asn Ser His Pro Tyr
85 90 95
Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 65
Gln His Leu His Gly Tyr Pro Tyr Asn
1 5
<210> 66
<211> 122
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Asp Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Pro Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Val Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Gly Gly His Thr Tyr Asp Ser Tyr Ala Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 67
<211> 107
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 67
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Thr Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Gln His Leu His Gly Tyr Pro Tyr
85 90 95
Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 68
<211> 7
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 68
Thr Tyr Gly Met Gly Val Ser
1 5
<210> 69
<211> 16
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 69
Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 70
<211> 11
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 70
Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 71
Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn Ile Ala
1 5 10
<210> 72
<211> 7
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 72
Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 73
Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr Pro
1 5
<210> 74
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Glu 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 是 Ala 或 Gly
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Ile 或 Leu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Lys 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (15)..(15)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (16)..(16)
<223> Xaa 是 His 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (19)..(19)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (23)..(23)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<400> 74
Xaa Val Xaa Leu Lys Glu Ser Gly Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Xaa
1 5 10 15
Thr Leu Xaa Leu Thr Cys Xaa Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 75
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Pro 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Glu 或 Gly
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Gly
<400> 75
Trp Ile Arg Gln Pro Xaa Xaa Lys Xaa Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 76
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 是 Ile 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (8)..(8)
<223> Xaa 是 Ala 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 是 Lys 或 Asn
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Asp 或 Asn
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Ala 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (14)..(14)
<223> Xaa 是 Phe 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (16)..(16)
<223> Xaa 是 Asn 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (17)..(17)
<223> Xaa 是 Met 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (19)..(19)
<223> Xaa 是 Asn 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 是 Met 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (22)..(22)
<223> Xaa 是 Pro 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (23)..(23)
<223> Xaa 是 Thr 或 Val
<400> 76
Arg Leu Thr Xaa Xaa Lys Asp Xaa Ser Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Leu Xaa
1 5 10 15
Xaa Thr Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 77
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 78
<211> 30
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 78
Gln Val Ser Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser His
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 79
<211> 14
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 79
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Glu Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 80
<211> 32
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 80
Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Ala Ser Asn Asp Gln Ala Phe Leu Asn
1 5 10 15
Val Thr Ser Val Asp Thr Thr Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 81
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 81
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 82
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 82
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 83
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 83
Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asn Gln Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 84
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 84
Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asn Gln Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 85
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 85
Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 86
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 86
Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr
1 5 10 15
Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 87
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 87
Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr
1 5 10 15
Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 88
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Asp 或 Asn
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 Gln 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Lys 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Leu 或 Met
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Ala 或 Ile
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (21)..(21)
<223> Xaa 是 Ile 或 Met
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (22)..(22)
<223> Xaa 是 Asn 或 Thr
<400> 88
Xaa Ile Xaa Met Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Xaa Ser Xaa Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Xaa Xaa Cys
20
<210> 89
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (8)..(8)
<223> Xaa 是 Lys 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Ser
<400> 89
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Xaa Xaa Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 90
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 是 Asp 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Gly 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (17)..(17)
<223> Xaa 是 Phe 或 Leu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 是 Asn 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (21)..(21)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (22)..(22)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (24)..(24)
<223> Xaa 是 Ala 或 Pro
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (27)..(27)
<223> Xaa 是 Ala 或 Ile
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (29)..(29)
<223> Xaa 是 Phe 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 是 Phe 或 Tyr
<400> 90
Gly Val Pro Xaa Arg Phe Xaa Gly Xaa Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Xaa Thr Ile Xaa Xaa Xaa Gln Xaa Glu Asp Xaa Ala Xaa Xaa Tyr Cys
20 25 30
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 Gln 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<400> 91
Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Xaa Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 92
<211> 23
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 92
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Ile Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Asn Cys
20
<210> 93
<211> 15
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 93
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 94
<211> 32
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 94
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Asn Thr Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Phe Phe Tyr Cys
20 25 30
<210> 95
<211> 10
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 95
Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 96
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 96
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 97
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 97
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 98
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 98
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 99
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 99
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 100
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 100
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 101
<211> 121
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 101
Gln Val Ser Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser His
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Glu Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Ala Ser Asn Asp Gln Ala
65 70 75 80
Phe Leu Asn Val Thr Ser Val Asp Thr Thr Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 102
<211> 107
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 102
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Ile Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Asn Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Thr Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Phe Phe Tyr Cys Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr
85 90 95
Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 103
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 103
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asn Gln Ala
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 104
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 104
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asn Gln Ala
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 105
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 105
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Ala
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 106
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 106
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 107
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 107
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 108
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 108
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr
85 90 95
Pro Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 109
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 109
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr
85 90 95
Pro Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 110
<211> 7
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 110
Thr Tyr Gly Met Gly Val Ser
1 5
<210> 111
<211> 16
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 111
Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Arg Ser
1 5 10 15
<210> 112
<211> 11
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 112
Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 113
Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn Ile Ala
1 5 10
<210> 114
<211> 7
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 114
Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 115
<211> 9
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 115
Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr Pro
1 5
<210> 116
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Glu 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 是 Ala 或 Gly
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Ile 或 Leu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Lys 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (15)..(15)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (16)..(16)
<223> Xaa 是 His 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (19)..(19)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (23)..(23)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<400> 116
Xaa Val Xaa Leu Lys Glu Ser Gly Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Xaa
1 5 10 15
Thr Leu Xaa Leu Thr Cys Xaa Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr
20 25 30
<210> 117
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Pro 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Glu 或 Gly
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Gly
<400> 117
Trp Ile Arg Gln Pro Xaa Xaa Lys Xaa Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 118
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 是 Ile 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 是 Lys 或 Asn
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Asp 或 Asn
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Ala 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (14)..(14)
<223> Xaa 是 Phe 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (16)..(16)
<223> Xaa 是 Asn 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (17)..(17)
<223> Xaa 是 Met 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (19)..(19)
<223> Xaa 是 Asn 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 是 Met 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (22)..(22)
<223> Xaa 是 Pro 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (23)..(23)
<223> Xaa 是 Thr 或 Val
<400> 118
Arg Leu Thr Xaa Xaa Lys Asp Thr Ser Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Leu Xaa
1 5 10 15
Xaa Thr Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 119
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 119
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 120
<211> 30
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 120
Gln Val Ser Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser His
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr
20 25 30
<210> 121
<211> 14
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 121
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Glu Lys Gly Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 122
<211> 32
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 122
Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asp Gln Ala Phe Leu Asn
1 5 10 15
Val Thr Ser Val Asp Thr Thr Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 123
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 123
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr
20 25 30
<210> 124
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 124
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 125
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 125
Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 126
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 126
Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 127
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 127
Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr
1 5 10 15
Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 128
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 128
Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr
1 5 10 15
Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His
20 25 30
<210> 129
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Glu 或 Asn
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Lys
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Leu 或 Met
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Ile 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (15)..(15)
<223> Xaa 是 Ile 或 Pro
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (17)..(17)
<223> Xaa 是 Asp 或 Glu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (19)..(19)
<223> Xaa 是 Ala 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (21)..(21)
<223> Xaa 是 Leu 或 Met
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (22)..(22)
<223> Xaa 是 Asn 或 Ser
<400> 129
Xaa Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Ser Xaa Gly
1 5 10 15
Xaa Arg Xaa Thr Xaa Xaa Cys
20
<210> 130
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Pro 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Gln 或 Arg
<400> 130
Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Gly Gln Xaa Pro Xaa Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 131
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 是 Ile 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 是 Ala 或 Asp
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Gly 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (14)..(14)
<223> Xaa 是 Asp 或 Glu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 是 Asn 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (22)..(22)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (24)..(24)
<223> Xaa 是 Ala 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (27)..(27)
<223> Xaa 是 Ala 或 Phe
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (29)..(29)
<223> Xaa 是 Phe 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 是 Phe 或 Tyr
<400> 131
Gly Xaa Pro Xaa Arg Phe Xaa Gly Xaa Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Xaa Ser Xaa Gln Xaa Glu Asp Xaa Ala Xaa Xaa Tyr Cys
20 25 30
<210> 132
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 Gln 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<400> 132
Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Xaa Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 133
<211> 23
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 133
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Ile Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Asn Cys
20
<210> 134
<211> 15
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 134
Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 135
<211> 32
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 135
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Asn Ser Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Phe Phe Tyr Cys
20 25 30
<210> 136
<211> 10
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 136
Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 137
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 137
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 138
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 138
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 139
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 139
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 140
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 140
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 141
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 141
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 142
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 142
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 143
<211> 121
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 143
Gln Val Ser Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser His
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Glu Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asp Gln Ala
65 70 75 80
Phe Leu Asn Val Thr Ser Val Asp Thr Thr Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 144
<211> 107
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 144
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Ile Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Met Asn Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Phe Phe Tyr Cys Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr
85 90 95
Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 145
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 145
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Ser Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Ala
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 146
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 146
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Ala
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 147
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 147
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Ser Arg Leu Thr Val Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 148
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 148
Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala His Thr Gly Gly Ala Val Ile Thr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 149
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr
85 90 95
Pro Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 150
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 150
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr
85 90 95
Pro Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 151
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 151
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr
85 90 95
Pro Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 152
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 152
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Gly Lys Asn
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ile Tyr Asn Ser Pro Tyr
85 90 95
Pro Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 153
<211> 5
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 153
Glu Tyr Ser Ile Tyr
1 5
<210> 154
<211> 17
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 154
Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asn
<210> 155
<211> 8
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 155
Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe
1 5
<210> 156
<211> 11
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 156
Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr Leu Val
1 5 10
<210> 157
<211> 7
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 157
Asn Thr Asp Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 158
<211> 8
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 158
Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
1 5
<210> 159
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 是 Gln 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Pro
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 是 Lys 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Lys 或 Arg
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (25)..(25)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<400> 159
Glu Val Gln Leu Xaa Gln Ser Gly Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Xaa Ser Cys Lys Ala Xaa Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 160
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 Lys 或 Arg
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 是 Ala 或 Arg
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Gly 或 Lys
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Arg 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 是 Ile 或 Trp
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Ile 或 Met
<400> 160
Trp Val Xaa Gln Xaa Pro Xaa Gln Xaa Leu Glu Xaa Xaa Gly
1 5 10
<210> 161
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 是 Ala 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 是 Ile 或 Leu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Ala 或 Arg
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 是 Ala 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Asn 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (16)..(16)
<223> Xaa 是 Glu 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (21)..(21)
<223> Xaa 是 Arg 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (27)..(27)
<223> Xaa 是 Thr 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (29)..(29)
<223> Xaa 是 Phe 或 Tyr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (31)..(31)
<223> Xaa 是 Ala 或 Thr
<400> 161
Arg Xaa Thr Xaa Thr Xaa Asp Thr Ser Xaa Xaa Thr Ala Tyr Met Xaa
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Xaa Ser Glu Asp Thr Ala Xaa Tyr Xaa Cys Xaa Arg
20 25 30
<210> 162
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 是 Thr 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Leu 或 Met
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Val
<400> 162
Trp Gly Gln Gly Xaa Xaa Val Thr Xaa Ser Ser
1 5 10
<210> 163
<211> 30
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 163
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Gln Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 164
<211> 14
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 164
Trp Val Lys Gln Arg Pro Lys Gln Ser Leu Glu Ile Ile Gly
1 5 10
<210> 165
<211> 32
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 165
Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 166
<211> 11
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 166
Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Ala Ser Ser
1 5 10
<210> 167
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 167
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 168
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 168
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile Gly
1 5 10
<210> 169
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 169
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 170
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 170
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Met Gly
1 5 10
<210> 171
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 171
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 172
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 172
Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 173
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 173
Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 174
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 174
Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 175
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 175
Arg Ala Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 176
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 176
Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 177
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 177
Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 178
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 178
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 179
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 179
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 180
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Asp 或 Asn
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 His 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 是 Phe 或 Leu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (21)..(21)
<223> Xaa 是 Ile 或 Leu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (22)..(22)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<400> 180
Xaa Ile Xaa Leu Thr Gln Ser Pro Ser Xaa Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Xaa Xaa Cys
20
<210> 181
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Leu 或 Pro
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (8)..(8)
<223> Xaa 是 Glu 或 Lys
<400> 181
Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Gly Xaa Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 182
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 是 Ile 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (14)..(14)
<223> Xaa 是 Asp 或 Glu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (15)..(15)
<223> Xaa 是 Phe 或 Tyr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (27)..(27)
<223> Xaa 是 Ala 或 Phe
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (31)..(31)
<223> Xaa 是 Phe 或 Tyr
<400> 182
Gly Xaa Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Xaa Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Xaa Ala Thr Tyr Xaa Cys
20 25 30
<210> 183
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 Gln 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<400> 183
Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Xaa Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 184
<211> 23
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 184
Asn Ile His Leu Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys
20
<210> 185
<211> 15
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 185
Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 186
<211> 32
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 186
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 187
<211> 10
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 187
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 188
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 188
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 189
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 189
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 190
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 190
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 191
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 191
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 192
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Seq_193
<400> 192
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 193
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 193
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 194
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 194
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 195
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 195
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 196
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 196
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 197
<211> 117
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 197
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Gln Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Lys Gln Ser Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Val Met
100 105 110
Val Thr Ala Ser Ser
115
<210> 198
<211> 106
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 198
Asn Ile His Leu Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asp Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 199
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 199
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 200
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 200
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 201
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 201
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 202
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 202
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 203
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 203
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 204
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 204
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 205
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 205
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 206
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 206
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 207
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 207
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 208
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 208
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asp Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 209
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 209
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asp Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 210
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 210
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asp Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 211
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 211
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asp Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 212
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 212
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asp Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 213
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 213
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 214
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 214
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asp Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 215
<211> 5
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 215
Glu His Ser Ile Tyr
1 5
<210> 216
<211> 17
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 216
Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asn
<210> 217
<211> 8
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 217
Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe
1 5
<210> 218
<211> 11
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 218
Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr Leu Val
1 5 10
<210> 219
<211> 7
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 219
Ser Thr Asp Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 220
<211> 8
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 220
Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
1 5
<210> 221
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 是 Gln 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Pro
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 是 Lys 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Lys 或 Arg
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<400> 221
Glu Val Gln Leu Xaa Gln Ser Gly Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Xaa Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 222
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 Lys 或 Arg
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 是 Ala 或 Arg
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Gly 或 Lys
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Arg 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 是 Ile 或 Trp
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Ile 或 Met
<400> 222
Trp Xaa Xaa Gln Xaa Pro Xaa Gln Xaa Leu Glu Xaa Xaa Gly
1 5 10
<210> 223
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 是 Ala 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (4)..(4)
<223> Xaa 是 Ile 或 Leu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Arg 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Asp 或 Asn
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 是 Ala 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 是 Asn 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (16)..(16)
<223> Xaa 是 Glu 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (21)..(21)
<223> Xaa 是 Arg 或 Thr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (27)..(27)
<223> Xaa 是 Ile 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (29)..(29)
<223> Xaa 是 Phe 或 Tyr
<400> 223
Arg Xaa Thr Xaa Thr Xaa Xaa Thr Ser Xaa Xaa Thr Ala Tyr Met Xaa
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Xaa Ser Glu Asp Thr Ala Xaa Tyr Xaa Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 224
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (5)..(5)
<223> Xaa 是 Thr 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Leu 或 Met
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Val
<400> 224
Trp Gly Gln Gly Xaa Xaa Val Thr Xaa Ser Ser
1 5 10
<210> 225
<211> 30
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 225
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Gln Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 226
<211> 14
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 226
Trp Leu Lys Gln Arg Pro Lys Gln Ser Leu Glu Ile Ile Gly
1 5 10
<210> 227
<211> 32
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 227
Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asn Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 228
<211> 11
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 228
Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Ala Ser Ser
1 5 10
<210> 229
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 229
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 230
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 230
Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile Gly
1 5 10
<210> 231
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 231
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile Gly
1 5 10
<210> 232
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 232
Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 233
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 233
Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Met Gly
1 5 10
<210> 234
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 234
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 235
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 235
Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 236
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 236
Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 237
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 237
Arg Ala Thr Ile Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 238
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 238
Arg Ala Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 239
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 239
Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 240
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 240
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 241
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 241
Arg Ala Thr Ile Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 242
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 242
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 243
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Asp 或 Asn
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 His 或 Gln
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 是 Phe 或 Leu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (21)..(21)
<223> Xaa 是 Ile 或 Leu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (22)..(22)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<400> 243
Xaa Ile Xaa Leu Thr Gln Ser Pro Ser Xaa Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Xaa Xaa Cys
20
<210> 244
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Leu 或 Pro
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (8)..(8)
<223> Xaa 是 Glu 或 Lys
<400> 244
Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Gly Xaa Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 245
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 是 Ile 或 Val
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (14)..(14)
<223> Xaa 是 Asp 或 Glu
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (15)..(15)
<223> Xaa 是 Phe 或 Tyr
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (27)..(27)
<223> Xaa 是 Ala 或 Phe
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (31)..(31)
<223> Xaa 是 Phe 或 Tyr
<400> 245
Gly Xaa Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Xaa Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Xaa Ala Thr Tyr Xaa Cys
20 25 30
<210> 246
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (3)..(3)
<223> Xaa 是 Gln 或 Ser
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (7)..(7)
<223> Xaa 是 Leu 或 Val
<400> 246
Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Xaa Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 247
<211> 23
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 247
Asn Ile His Leu Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys
20
<210> 248
<211> 15
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 248
Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 249
<211> 32
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 249
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 250
<211> 10
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 250
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 251
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 251
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 252
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 252
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 253
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 253
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 254
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 254
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 255
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 255
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 256
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 256
Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 257
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 257
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 258
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 258
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 259
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 259
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 260
<211> 117
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 260
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Gln Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Leu Lys Gln Arg Pro Lys Gln Ser Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asn Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Val Met
100 105 110
Val Thr Ala Ser Ser
115
<210> 261
<211> 106
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 261
Asn Ile His Leu Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Asp Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 262
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 262
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 263
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 263
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 264
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 264
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 265
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 265
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 266
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 266
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 267
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 267
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Ile Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 268
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 268
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 269
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 269
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Ile Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 270
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 270
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
20 25 30
Ser Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Lys Asn Gly Arg Thr Tyr Phe Val Asp Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 271
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 271
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Asp Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 272
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 272
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 273
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Tyr Gln Tyr Asn Asn Gly Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 274
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 275
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 276
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu His
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100 105 110
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115
<210> 277
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 277
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Val Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
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Asp Ser Tyr Met Ser
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 279
Asp Ala Tyr Met Ser
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
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Glu Ser Tyr Met Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 281
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Glu
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 282
Asp Met Tyr Pro Asp Asn Ala Asp Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Arg
1 5 10 15
Glu
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 283
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1 5 10 15
Glu
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<220>
<223> 合成构建物
<400> 284
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Glu
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
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Glu
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<220>
<223> 合成构建物
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Glu
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 288
Ala Pro Arg Trp Tyr Phe Ser Ala
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
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Ala Pro Arg Trp Tyr Phe Ala Val
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
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Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 291
Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 292
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1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 293
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1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
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1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 295
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 296
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 297
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 298
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 299
Gln Ala Gly His Thr Leu Pro Pro Thr
1 5
<210> 300
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 300
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
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115
<210> 301
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 301
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Met Tyr Pro Asp Asn Gly Asp Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 302
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 302
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Met Tyr Pro Asp Asn Gly Asp Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
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115
<210> 303
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 303
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 304
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 304
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
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35 40 45
Gly Asp Met Tyr Pro Asp Asn Gly Asp Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 305
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 305
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Met Tyr Pro Asp Asn Gly Asp Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Glu Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Leu Ala Pro Arg Trp Tyr Phe Ser Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 306
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 306
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Met Tyr Pro Asp Asn Gly Asp Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
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Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Val Leu Ala Pro Arg Trp Tyr Phe Ser Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 307
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 307
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ala
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115
<210> 308
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 308
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Ser
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 309
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 309
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 310
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 310
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 311
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 311
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
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115
<210> 312
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 312
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
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100 105 110
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<210> 313
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 313
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
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115
<210> 314
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 314
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 344
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ala Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 345
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 345
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala His Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 346
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 346
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Ala Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 347
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 347
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ala Gly His Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 348
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 348
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 349
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 349
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 350
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 350
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 351
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 351
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 352
<211> 244
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 352
Met Arg Trp Cys Leu Leu Leu Ile Trp Ala Gln Gly Leu Arg Gln Ala
1 5 10 15
Pro Leu Ala Ser Gly Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn
20 25 30
Ile Ser Ala Glu Lys Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser
35 40 45
Ser Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln
50 55 60
Leu Leu Ala Ile Cys Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser
65 70 75 80
Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln
85 90 95
Ser Leu Thr Val Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr
100 105 110
Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu
115 120 125
Ser Ser Val Ala Glu His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Met Ala Ala Thr Leu Val Val Ile Cys Thr Ala Val Ile Val Val
145 150 155 160
Val Ala Leu Thr Arg Lys Lys Lys Ala Leu Arg Ile His Ser Val Glu
165 170 175
Gly Asp Leu Arg Arg Lys Ser Ala Gly Gln Glu Glu Trp Ser Pro Ser
180 185 190
Ala Pro Ser Pro Pro Gly Ser Cys Val Gln Ala Glu Ala Ala Pro Ala
195 200 205
Gly Leu Cys Gly Glu Gln Arg Gly Glu Asp Cys Ala Glu Leu His Asp
210 215 220
Tyr Phe Asn Val Leu Ser Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Cys Ser Phe Phe
225 230 235 240
Thr Glu Thr Gly
<210> 353
<211> 223
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 353
Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn Ile Ser Ala Glu Lys
1 5 10 15
Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser Ser Thr Thr Ala Gln
20 25 30
Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln Leu Leu Ala Ile Cys
35 40 45
Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys Asp Arg Val
50 55 60
Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln Ser Leu Thr Val Asn
65 70 75 80
Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr
85 90 95
Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu Ser Ser Val Ala Glu
100 105 110
His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro Leu Leu Gly Ala Met Ala Ala Thr
115 120 125
Leu Val Val Ile Cys Thr Ala Val Ile Val Val Val Ala Leu Thr Arg
130 135 140
Lys Lys Lys Ala Leu Arg Ile His Ser Val Glu Gly Asp Leu Arg Arg
145 150 155 160
Lys Ser Ala Gly Gln Glu Glu Trp Ser Pro Ser Ala Pro Ser Pro Pro
165 170 175
Gly Ser Cys Val Gln Ala Glu Ala Ala Pro Ala Gly Leu Cys Gly Glu
180 185 190
Gln Arg Gly Glu Asp Cys Ala Glu Leu His Asp Tyr Phe Asn Val Leu
195 200 205
Ser Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Cys Ser Phe Phe Thr Glu Thr Gly
210 215 220
<210> 354
<211> 249
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 354
Leu His Cys Val Gly Asp Thr Tyr Pro Ser Asn Asp Arg Cys Cys His
1 5 10 15
Glu Cys Arg Pro Gly Asn Gly Met Val Ser Arg Cys Ser Arg Ser Gln
20 25 30
Asn Thr Val Cys Arg Pro Cys Gly Pro Gly Phe Tyr Asn Asp Val Val
35 40 45
Ser Ser Lys Pro Cys Lys Pro Cys Thr Trp Cys Asn Leu Arg Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Arg Lys Gln Leu Cys Thr Ala Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg
65 70 75 80
Cys Arg Ala Gly Thr Gln Pro Leu Asp Ser Tyr Lys Pro Gly Val Asp
85 90 95
Cys Ala Pro Cys Pro Pro Gly His Phe Ser Pro Gly Asp Asn Gln Ala
100 105 110
Cys Lys Pro Trp Thr Asn Cys Thr Leu Ala Gly Lys His Thr Leu Gln
115 120 125
Pro Ala Ser Asn Ser Ser Asp Ala Ile Cys Glu Asp Arg Asp Pro Pro
130 135 140
Ala Thr Gln Pro Gln Glu Thr Gln Gly Pro Pro Ala Arg Pro Ile Thr
145 150 155 160
Val Gln Pro Thr Glu Ala Trp Pro Arg Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr
165 170 175
Arg Pro Val Glu Val Pro Gly Gly Arg Ala Val Ala Ala Ile Leu Gly
180 185 190
Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu Leu Ala
195 200 205
Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His Lys
210 215 220
Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln Ala
225 230 235 240
Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile
245

Claims (83)

1.一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体包含下述六种高变区(HVR)：
如SNSAAWN(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列所示的HVR-H1；
如KTYYRFKWYSDYAVSVKG(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列所示的HVR-H2；
如ESTTYDLLAGPFDY(SEQ ID NO：3)的氨基酸序列所示的HVR-H3；
如KSSQTVLYSSNNKKYLA(SEQ ID NO：4)的氨基酸序列所示的HVR-L1；
如WASTRES(SEQ ID NO：5)的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
如QQYYSTPFT(SEQ ID NO：6)的氨基酸序列所示的HVR-L3。
2.权利要求1的抗体，其中该抗体进一步包含下述轻链可变区框架区(FR)：
如DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO：7)的氨基酸序列所示的FR-L1；
如WYQQKPGQPPNLLIY(SEQ ID NO：8)的氨基酸序列所示的FR-L2；
如GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO：9)的氨基酸序列所示的FR-L3；和
如FGPGTKVEIK(SEQ ID NO：10)的氨基酸序列所示的FR-L4。
3.权利要求1或2的抗体，其中该抗体进一步包含下述重链可变区FR：
如X1VQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVS(SEQ ID NO：11)的氨基酸序列所示的FR-H1，其中X1是Q或E；
如WIRQSPSRGLEWLG(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列所示的FR-H2；
如RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTR(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列所示的FR-H3；和
如WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列所示的FR-H4。
4.权利要求3的抗体，其中X1是Q。
5.权利要求3的抗体，其中X1是E。
6.权利要求1的抗体，其中该抗体包含(a)与SEQ ID NO：34或35的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的重链可变区(VH)；(b)与SEQ ID NO：36的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的轻链可变区(VL)；或(c)如(a)中的重链可变区和如(b)中的轻链可变区。
7.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
8.一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体包含包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列的重链可变区(VH)和包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
9.一种特异性结合人TIGIT的抗体，其中该抗体包含包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链可变区(VH)和包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。
10.权利要求1的抗体，其中该抗体是单克隆的。
11.权利要求1的抗体，其中该抗体是人的。
12.权利要求1的抗体，其中该抗体是全长抗体。
13.权利要求1的抗体，其中该抗体是结合TIGIT的抗体片段。
14.权利要求13的抗体，其中该抗体片段是Fab，Fab’，Fab’-SH，Fv，单链可变片段(scFv)，或(Fab’)2片段。
15.权利要求1的抗体，其中该抗体是IgG类抗体。
16.权利要求15的抗体，其中该IgG类抗体是IgG1亚类抗体。
17.权利要求15的抗体，其中所述IgG类抗体包含在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸修饰的人类Fc区序列。
18.权利要求1的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体。
19.一种多核苷酸，其编码权利要求1的抗体。
20.一种载体，其包含权利要求19的多核苷酸。
21.一种宿主细胞，其包含权利要求20的载体。
22.权利要求21的宿主细胞，其中该宿主细胞是原核的。
23.权利要求22的宿主细胞，其中该宿主细胞是大肠杆菌(Escherichia coli)宿主细胞。
24.权利要求21的宿主细胞，其中该宿主细胞是真核的。
25.权利要求24的宿主细胞，其中该宿主细胞是293宿主细胞，CHO宿主细胞，酵母宿主细胞，或植物宿主细胞。
26.一种生成权利要求1的抗体的方法，该方法包括在培养基中培养权利要求21的宿主细胞。
27.权利要求26的方法，其中该方法进一步包括自该宿主细胞或培养基回收该抗体。
28.一种免疫缀合物，其包含权利要求1的抗体和细胞毒剂。
29.一种组合物，其包含权利要求1的抗体和药学可接受载剂，赋形剂，或稀释剂。
30.权利要求29的组合物，其中该组合物是药物组合物。
31.权利要求29或30的组合物，其中该组合物进一步包含PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂。
32.权利要求1的抗体在制备用于在有所需要的受试者中治疗癌症或延迟癌症进展的药物中的用途。
33.权利要求32的用途，其中该癌症是非小细胞肺癌，小细胞肺癌，肾细胞癌，结直肠癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，膀胱癌，食道癌，间皮瘤，黑素瘤，头和颈癌，甲状腺癌，肉瘤，前列腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，胸腺癌，白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，蕈样肉芽肿，或梅克尔细胞癌。
34.权利要求33的用途，其中该骨髓瘤是多发性骨髓瘤(MM)。
35.权利要求32的用途，其中该癌症是血液学恶性肿瘤。
36.权利要求1的抗体在制备用于在有所需要的受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的药物中的用途。
37.权利要求36的用途，其中该免疫相关疾病与T细胞功能障碍性病症有关。
38.权利要求37的用途，其中该T细胞功能障碍性病症特征在于T细胞耗尽。
39.权利要求36的用途，其中该免疫相关疾病是未解决的急性感染，慢性感染，或肿瘤免疫。
40.权利要求1的抗体在制备用于在有所需要的受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的药物中的用途。
41.权利要求32或36的用途，其中该药物与PD-1轴结合拮抗剂一起施用。
42.权利要求41的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂在施用该抗体之前或之后施用。
43.权利要求41的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂与该抗体并行施用。
44.权利要求41的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂是PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂，或PD-L2结合拮抗剂。
45.权利要求44的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂是PD-1结合拮抗剂。
46.权利要求45的用途，其中该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合它的配体结合配偶。
47.权利要求46的用途，其中该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1。
48.权利要求46的用途，其中该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L2。
49.权利要求46的用途，其中该PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和PD-L2二者。
50.权利要求46的用途，其中该PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。
51.权利要求46的用途，其中该PD-1结合拮抗剂是MDX 1106(nivolumab)，MK-3475(pembrolizumab)，MEDI-0680(AMP-514)，PDR001，REGN2810，或BGB-108。
52.权利要求44的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L1结合拮抗剂。
53.权利要求52的用途，其中该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1。
54.权利要求52的用途，其中该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合B7-1。
55.权利要求52的用途，其中该PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和B7-1二者。
56.权利要求52的用途，其中该PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。
57.权利要求56的用途，其中该抗PD-L1抗体是MPDL3280A(atezolizumab)，YW243.55.S70，MDX-1105，MEDI4736(durvalumab)，或MSB0010718C(avelumab)。
58.权利要求57的用途，其中该抗体是MPDL3280A(阿特珠单抗)。
59.权利要求44的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L2结合拮抗剂。
60.权利要求59的用途，其中该PD-L2结合拮抗剂是抗PD-L2抗体。
61.权利要求59的用途，其中该PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
62.权利要求32或36的用途，其中该药物与OX40结合激动剂一起施用。
63.权利要求62的用途，其中该OX40结合激动剂在施用该抗体之前或之后施用。
64.权利要求62的用途，其中该OX40结合激动剂与该抗体并行施用。
65.权利要求41的用途，其中该药物与OX40结合激动剂一起施用。
66.权利要求65的用途，其中该OX40结合激动剂在施用该抗体和/或该PD-1轴结合拮抗剂之前或之后施用。
67.权利要求65的用途，其中该OX40结合激动剂与该抗体和/或该PD-1轴结合拮抗剂并行施用。
68.权利要求62或65的用途，其中该OX40结合激动剂是OX40激动性抗体，OX40L激动性片段，OX40寡聚受体，或OX40免疫粘附素。
69.权利要求68的用途，其中该OX40激动性抗体包含包含消除对人效应细胞的结合的突变的变体IgG1 Fc多肽且具有相对于包含天然序列IgG1Fc部分的OX40激动性抗体降低的活性。
70.权利要求68的用途，其中该OX40激动性抗体包含(a)如SEQ ID NO：278的氨基酸序列所示的HVR-H1；(b)如SEQ ID NO：281的氨基酸序列所示的HVR-H2；(c)如SEQ ID NO：287的氨基酸序列所示的HVR-H3；(d)如SEQ ID NO：290的氨基酸序列所示的HVR-L1；(e)如SEQID NO：291的氨基酸序列所示的HVR-L2；和(f)如SEQ ID NO：292的氨基酸序列所示的HVR-L3。
71.权利要求68的用途，其中该OX40激动性抗体包含(a)如SEQ ID NO：278的氨基酸序列所示的HVR-H1；(b)如SEQ ID NO：281的氨基酸序列所示的HVR-H2；(c)如SEQ ID NO：287的氨基酸序列所示的HVR-H3；(d)如SEQ ID NO：290的氨基酸序列所示的HVR-L1；(e)如SEQID NO：291的氨基酸序列所示的HVR-L2；和(f)如SEQ ID NO：297的氨基酸序列所示的HVR-L3。
72.权利要求68的用途，其中该OX40激动性抗体包含(a)如SEQ ID NO：278的氨基酸序列所示的HVR-H1；(b)如SEQ ID NO：281的氨基酸序列所示的HVR-H2；(c)如SEQ ID NO：287的氨基酸序列所示的HVR-H3；(d)如SEQ ID NO：290的氨基酸序列所示的HVR-L1；(e)如SEQID NO：291的氨基酸序列所示的HVR-L2；和(f)如SEQ ID NO：298的氨基酸序列所示的HVR-L3。
73.权利要求68的用途，其中该OX40激动性抗体是全长IgG1抗体。
74.权利要求68的用途，其中该OX40免疫粘附素是三聚OX40-Fc蛋白质。
75.权利要求32或36的用途，其中该药物与降低或抑制一种或多种另外的免疫共抑制受体的药剂一起施用。
76.权利要求75的用途，其中该一种或多种另外的免疫共抑制受体是PD-1，CTLA-4，LAG3，TIM3，BTLA，VISTA，B7H4，或CD96。
77.权利要求32或36的用途，其中该药物与另外的治疗剂一起施用。
78.权利要求77的用途，其中该另外的治疗剂是化疗剂。
79.权利要求32或36的用途，其中该抗体皮下，静脉内，肌肉内，表面，口服，透皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，心室内，或鼻内施用。
80.权利要求32或36的用途，其中该受试者是人。
81.一种试剂盒，其包含权利要求1的抗体和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗体在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展的用法说明书。
82.一种试剂盒，其包含权利要求1的抗体和包装插页，该包装插页包含关于使用该抗体在受试者中治疗免疫相关疾病或延迟免疫相关疾病进展的用法说明书。
83.一种试剂盒，其包含权利要求1的抗体和包装插页，该包装插页包含关于在受试者中提高，增强，或刺激免疫应答或功能的用法说明书。
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