KR20160030936A - Pd-1 축 결합 길항제 및 tigit 억제제를 사용한 암을 치료하는 방법 - Google Patents

Pd-1 축 결합 길항제 및 tigit 억제제를 사용한 암을 치료하는 방법 Download PDF

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로버트 제이. 존스턴
브라이언 어빙
제이슨 해크니
신 위
댄 이튼
크리스틴 볼스
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제넨테크, 인크.
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Abstract

본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 조합 치료, 및 증진된 면역원성이 요구되는 상태를 치료하는 방법, 예컨대 암 또는 만성 감염의 치료를 위해 종양 면역원성을 증가시키는 방법을 비롯한 그의 사용 방법을 기재한다.

Description

PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 억제제를 사용한 암을 치료하는 방법 {METHODS OF TREATING CANCER USING PD-1 AXIS BINDING ANTAGONISTS AND TIGIT INHIBITORS}
관련 출원에 대한 상호 참조
본원은 2013년 7월 16일에 출원된 미국 가출원 번호 61/846,941, 2013년 8월 13일에 출원된 미국 가출원 번호 61/865,582, 2014년 3월 10일에 출원된 미국 가출원 번호 61/950,754, 2014년 4월 29일에 출원된 미국 가출원 번호 61/985,884, 및 2014년 5월 12일에 출원된 미국 가출원 번호 61/992,109의 우선권 이익을 주장하며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일의 서열 목록 제출
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T-세포에 2개의 별개의 신호를 제공하는 것은 항원-제시 세포 (APC)에 의한 휴면 T 림프구의 림프구 활성화에 널리 허용되는 모델이다. 문헌 [Lafferty et al., Aust. J. Exp. Biol. Med. ScL 53: 27-42 (1975)]. 이 모델은 추가로 비-자기로부터 자기의 구별 및 면역 관용을 제공한다. 문헌 [Bretscher et al., Science 169: 1042-1049 (1970); Bretscher, P.A., P.N.A.S. USA 96: 185-190 (1999); Jenkins et al., J. Exp. Med. 165: 302-319 (1987)]. 1차 신호 또는 항원 특이적 신호는 주요 조직적합성-복합체 (MHC)와 관련하여 제시된 외래 항원 펩티드의 인식 이후에 T-세포 수용체 (TCR)를 통해 변환된다. 제2 또는 공동-자극 신호는 항원-제시 세포 (APC) 상에서 발현된 공동-자극 분자에 의해 T-세포로 전달되고, T-세포가 클론 증식, 시토카인 분비 및 이펙터 기능을 촉진하도록 유도한다. 문헌 [Lenschow et al., Ann. Rev. Immunol. 14:233 (1996)]. 공동-자극의 부재 하에서 T-세포는 항원 자극에 대해 불응성이 될 수 있고, 이는 외래 또는 내인성 항원에 대한 관용 반응을 야기한다.
2-신호 모델에서, T-세포는 양성 공동-자극 및 음성 공동-억제 신호 둘 다를 수신한다. 이러한 양성 및 음성 신호의 조절은 면역 관용을 유지하고 자가면역을 방지하면서 숙주의 보호 면역 반응을 최대화하는데 중요하다. 음성 신호는 T-세포 관용의 유도에 필요한 것으로 보이는 반면에, 양성 신호는 T-세포 활성화를 촉진한다.
공동-자극 및 공동-억제 신호 둘 다는 항원-노출된 T 세포에 제공되고, 공동-자극 및 공동-억제 신호 사이의 상호작용은 면역 반응의 규모를 제어하는데 본질적이다. 또한, T 세포에 제공된 신호는 감염 또는 면역 유발이 소거되거나, 악화되거나, 지속됨에 따라 변하고, 이들 변화는 반응 T 세포에 강력한 영향을 미쳐 면역 반응을 재-형성한다.
공동-자극 신호의 조작이 세포-기반 면역 반응을 증진시키거나 종결시키는 수단을 제공하는 것으로 밝혀졌으므로, 공동-자극의 메카니즘이 치료 관심사이다. 최근에, T 세포 기능장애 또는 무반응은 억제 수용체, 프로그램화된 사멸 1 폴리펩티드 (PD-1)의 유도된 및 지속된 발현과 공동으로 일어나는 것으로 발견되었다. 그 결과, PD-1 및 PD-1과의 상호작용을 통해 신호를 전달하는 다른 분자, 예컨대 프로그램화된 사멸 리간드 1 (PD-L1) 및 프로그램화된 사멸 리간드 2 (PD-L2)를 표적화하는 요법이 관심이 집중되는 영역이다.
PD-L1은 많은 암에서 과다발현되고, 종종 불량한 예후와 연관된다 (Okazaki T et al., Intern. Immun. 2007 19(7):813) (Thompson RH et al., Cancer Res 2006, 66(7):3381). 흥미롭게도, 정상 조직에서의 T 림프구 및 말초 혈액 T 림프구와 대조적으로 다수의 종양 침윤 T 림프구는 PD-1을 우세하게 발현하고, 이는 종양-반응성 T 세포 상에서의 PD-1의 상향-조절이 손상된 항종양 면역 반응에 기여할 수 있음을 나타낸다 (Blood 2009 114(8):1537). 이는 PD-1 발현 T 세포와 상호작용하는 PD-L1 발현 종양 세포에 의해 매개되는 PD-L1 신호전달의 착취로 인한 것일 수 있으며, 이는 T 세포 활성화의 감쇠 및 면역 감시의 회피를 야기한다 (Sharpe et al., Nat Rev 2002) (Keir ME et al., 2008 Annu. Rev. Immunol. 26:677). 따라서, PD-L1/PD-1 상호작용의 억제는 종양의 CD8+ T 세포-매개 사멸을 증진시킬 수 있다.
그의 직접적 리간드 (예를 들어, PD-L1, PD-L2)를 통한 PD-1 축 신호전달의 억제는 암의 치료를 위한 T 세포 면역 (예를 들어, 종양 면역)을 증진시키기 위한 수단으로서 제안되어 왔다. 또한, T 세포 면역에 대한 유사한 증진이 PD-L1의 결합 파트너 B7-1에 대한 결합을 억제하는 것에 의해 관찰되었다. 또한, 종양 세포에서 탈조절되는 다른 신호전달 경로와 PD-1 신호전달의 억제를 조합하는 것은 치료 효능을 추가로 증진시킬 수 있다. 다양한 암의 치료, 안정화, 예방 및/또는 발생 지연을 위한 이러한 최적의 요법에 대한 필요성이 계속 존재한다.
본원에 개시된 모든 참고문헌, 공개물 및 특허 출원은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 발명은 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 조합 치료를 기재한다.
개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 면역 관련 질환은 T 세포 기능장애성 장애와 연관된다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 항원 자극에 대한 감소된 반응성을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 무반응, 또는 시토카인을 분비하거나, 증식하거나 또는 세포용해 활성을 실행하는 것에 대한 감소된 능력을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 소진을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 관련 질환은 미해결 급성 감염, 만성 감염 및 종양 면역으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여함으로써, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 면역 관련 질환은 T 세포 기능장애성 장애와 연관된다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 항원 자극에 대한 감소된 반응성을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 무반응, 또는 시토카인을 분비하거나, 증식하거나 또는 세포용해 활성을 실행하는 것에 대한 감소된 능력을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 소진을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 관련 질환은 미해결 급성 감염, 만성 감염 및 종양 면역으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극할 수 있다.
일부 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다.
일부 실시양태에서, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다.
일부 실시양태에서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다.
본 발명은 또한 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 조합 치료를 기재한다.
개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 투여함으로써, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA 및 VISTA로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3 및 TIM3의 군으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 포함하는 조합 치료를 기재한다.
개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 투여함으로써, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD28, CD27, CD137, HVEM, 및 GITR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD27, CD137, HVEM 및 GITR의 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 OX-40 및 CD27로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 방법은 적어도 1종의 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 방법에서 개체는 암을 갖는다. 일부 실시양태에서, 임의의 상기 방법에서 개체는 인간이다.
일부 실시양태에서, 개체에서 CD4 및/또는 CD8 T 세포는 조합물의 투여 전에 비해, 증가되거나 증진된 프라이밍, 활성화, 증식, 시토카인 방출 및/또는 세포용해 활성을 갖는다.
일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 T 세포의 수는 조합물의 투여 전에 비해 상승된다. 일부 실시양태에서, 활성화된 CD4 및/또는 CD8 T 세포의 수는 조합물의 투여 전에 비해 상승된다. 일부 실시양태에서, 활성화된 CD4 및/또는 CD8 T 세포는 조합물의 투여 전에 비해 γ-IFN+ 생산 CD4 및/또는 CD8 T 세포 및/또는 증진된 세포용해 활성을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 T 세포는 IFN-γ, TNF-α 및 인터류킨으로 이루어진 군으로부터 선택된 시토카인의 증가된 방출을 나타낸다.
일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 T 세포는 이펙터 기억 T 세포이다. 일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 이펙터 기억 T 세포는 γ-IFN+ 생산 CD4 및/또는 CD8 T 세포 및/또는 증진된 세포용해 활성을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 이펙터 기억 T 세포는 CD44고 CD62L저의 발현을 갖는 것을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 방법에서 암은 상승된 수준의 T 세포 침윤을 갖는다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, 및 상호작용 및/또는 PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 아미노산 서열 KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6) 또는 RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 적어도 1개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은
Figure pct00001
에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은
Figure pct00002
에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은
Figure pct00003
에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 항체 중쇄는
Figure pct00004
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체는 인간화 항체, 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체 및 면역독소로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 임의의 KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6) 또는 RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12)에 제시된 HVR과 적어도 90% 동일한 적어도 1개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 단편은 각각
Figure pct00005
에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및/또는 중쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제, PD-L1 결합 길항제 및 PD-L2 결합 길항제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 그의 리간드 결합 파트너에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 PD-L1에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 PD-L2에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 PD-L1 및 PD-L2 둘 다에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 항체이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 MDX-1106 (니볼루맙)이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 머크(Merck) 3475 (람브롤리주맙)이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 CT-011 (피딜리주맙)이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 AMP-224이다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-L1 결합 길항제이다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1의 PD-1에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1의 B7-1에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1의 PD-1 및 B7-1 둘 다에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 항체이다.
일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 YW243.55.S70, MPDL3280A, MDX-1105 및 MEDI 4736으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 HVR-H1 서열 GFTFSDSWIH (서열 17), HVR-H2 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 18), 및 HVR-H3 서열 RHWPGGFDY (서열 19)를 포함하는 중쇄; 및 HVR-L1 서열 RASQDVSTAVA (서열 20), HVR-L2 서열 SASFLYS (서열 21), 및 HVR-L3 서열 QQYLYHPAT (서열 22)를 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는
Figure pct00006
의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및
Figure pct00007
의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-L2 결합 길항제이다. 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 항체이다. 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 이뮤노어드헤신이다.
일부 실시양태에서, 치료할 암은 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 신세포암, 결장직장암, 난소암, 유방암, 췌장암, 위 암종, 방광암, 식도암, 중피종, 흑색종, 두경부암, 갑상선암, 육종, 전립선암, 교모세포종, 자궁경부암, 흉선 암종, 백혈병, 림프종, 골수종, 균상 식육종, 메르켈 세포암 및 다른 혈액 악성종양으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 연속적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 간헐적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제 후에 투여된다.
또한, PD-1 축 결합 길항제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, PD-1 축 결합 길항제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, PD-1 축 결합 길항제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, PD-1 축 결합 길항제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 키트는 항-PD-L1 항체인 PD-1 축 결합 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 항-PD-1 항체인 PD-1 축 결합 길항제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, 및 상호작용 및/또는 PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 키트는 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극할 수 있는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제로부터 선택된 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제 및/또는 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제를 포함한다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위한 의약의 제조에서 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는데 사용하기 위한 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는데 사용하기 위한 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위한 의약의 제조에서 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는데 사용하기 위한 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 조합물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는데 사용하기 위한 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 면역 관련 질환은 T 세포 기능장애성 장애와 연관된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 면역 관련 질환은 바이러스 감염이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 바이러스 감염은 만성 바이러스 감염이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 항원 자극에 대한 감소된 반응성을 특징으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 무반응, 또는 시토카인을 분비하거나, 증식하거나 또는 세포용해 활성을 실행하는 것에 대한 감소된 능력을 특징으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 소진을 특징으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 면역 관련 질환은 미해결 급성 감염, 만성 감염, 및 종양 면역으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하는데 사용하기 위한 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 조합물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위한 의약의 제조에서 유효량의 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는데 사용하기 위한 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는데 사용하기 위한 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위한 의약의 제조에서 유효량의 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는데 사용하기 위한 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 포함하는 조합물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는데 사용하기 위한 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 면역 관련 질환은 T 세포 기능장애성 장애와 연관된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 면역 관련 질환은 바이러스 감염이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 바이러스 감염은 만성 바이러스 감염이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 항원 자극에 대한 감소된 반응성을 특징으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 무반응, 또는 시토카인을 분비하거나, 증식하거나 또는 세포용해 활성을 실행하는 것에 대한 감소된 능력을 특징으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 소진을 특징으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 면역 관련 질환은 미해결 급성 감염, 만성 감염, 및 종양 면역으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 PD-1 축 결합 길항제의 용도를 제공하며, 여기서 PD-1 축 결합 길항제는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하는데 사용하기 위한 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하는데 사용하기 위한 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 포함하는 조합물을 제공한다.
임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극하는 작용제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226과 PVR의 상호작용을 증가 및/또는 자극하는 작용제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 PVR에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극하는 작용제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 또는 억제 폴리펩티드이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로 이루어진 군으로부터 선택된 억제 핵산이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 안티센스 폴리뉴클레오티드는 TIGIT를 표적으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 간섭 RNA는 TIGIT를 표적으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 촉매 RNA는 TIGIT를 표적으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, RNA-DNA 키메라는 TIGIT를 표적으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로 이루어진 군으로부터 선택된 억제 핵산이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하는데 사용하기 위한 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하는데 사용하기 위한 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 조합물을 제공한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA, VISTA, B7H4, 및 CD96으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3 및 TIM3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하기 위한 의약의 제조에서 유효량의 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제의 용도를 제공하며, 여기서 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합되어 사용된다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제와 조합하여 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하는데 사용하기 위한 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 면역 반응 또는 기능을 증진시키거나 자극하는데 사용하기 위한 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 포함하는 조합물을 제공한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD28, CD27, CD137, HVEM, GITR, MICA, ICOS, NKG2D, 및 2B4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD27, CD137, HVEM 및 GITR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 OX-40 및 CD27로 이루어진 군으로부터 선택된다.
임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 개체는 암을 갖는다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 개체는 인간이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 개체에서 CD4 및/또는 CD8 T 세포는 조합물의 투여 전에 비해, 증가되거나 증진된 프라이밍, 활성화, 증식, 시토카인 방출 및/또는 세포용해 활성을 갖는다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 T 세포의 수는 조합물의 투여 전에 비해 상승된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 활성화된 CD4 및/또는 CD8 T 세포의 수는 조합물의 투여 전에 비해 상승된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 활성화된 CD4 및/또는 CD8 T 세포는 조합물의 투여 전에 비해 γ-IFN+ 생산 CD4 및/또는 CD8 T 세포 및/또는 증진된 세포용해 활성을 특징으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 T 세포는 IFN-γ, TNF-α 및 인터류킨으로 이루어진 군으로부터 선택된 시토카인의 증가된 방출을 나타낸다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 T 세포는 이펙터 기억 T 세포이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 이펙터 기억 T 세포는 γ-IFN+ 생산 CD4 및/또는 CD8 T 세포 및/또는 증진된 세포용해 활성을 특징으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 이펙터 기억 T 세포는 CD44고 CD62L저의 발현을 갖는 것을 특징으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 암은 상승된 수준의 T 세포 침윤을 갖는다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로 이루어진 군으로부터 선택된 억제 핵산이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 안티센스 폴리뉴클레오티드는 TIGIT를 표적으로 한다.
임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 간섭 RNA는 TIGIT를 표적으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 촉매 RNA는 TIGIT를 표적으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, RNA-DNA 키메라는 TIGIT를 표적으로 한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 아미노산 서열 (1) KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6); 또는 (2) RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 적어도 1개의 HVR을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄는
Figure pct00008
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 중쇄는
Figure pct00009
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄는
Figure pct00010
에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 항체 중쇄는
Figure pct00011
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체는 인간화 항체, 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체 및 면역독소로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (1) KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6); 또는 (2) RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12) 중 어느 하나에 제시된 HVR과 적어도 90% 동일한 적어도 1개의 HVR을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 단편은
Figure pct00012
에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및/또는
Figure pct00013
에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제, PD-L1 결합 길항제 및 PD-L2 결합 길항제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 그의 리간드 결합 파트너에 대한 결합을 억제한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제 PD-1의 PD-L1에 대한 결합을 억제한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 PD-L2에 대한 결합을 억제한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 PD-L1 및 PD-L2 둘 다에 대한 결합을 억제한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 항체이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 MDX-1106이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 MK-3475이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 CT-011이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 AMP-224이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-L1 결합 길항제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1의 PD-1에 대한 결합을 억제한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1의 B7-1에 대한 결합을 억제한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1의 PD-1 및 B7-1 둘 다에 대한 결합을 억제한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 항-PD-L1 항체이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 YW243.55.S70, MPDL3280A, MDX-1105, 및 MEDI4736으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 HVR-H1 서열 GFTFSDSWIH (서열 17), HVR-H2 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 18), 및 HVR-H3 서열 RHWPGGFDY (서열 19)를 포함하는 중쇄; 및 HVR-L1 서열 RASQDVSTAVA (서열 20), HVR-L2 서열 SASFLYS (서열 21), 및 HVR-L3 서열 QQYLYHPAT (서열 22)를 포함하는 경쇄를 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는
Figure pct00014
의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및
Figure pct00015
의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-L2 결합 길항제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 항체이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 이뮤노어드헤신이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 신세포암, 결장직장암, 난소암, 유방암, 췌장암, 위 암종, 방광암, 식도암, 중피종, 흑색종, 두경부암, 갑상선암, 육종, 전립선암, 교모세포종, 자궁경부암, 흉선 암종, 백혈병, 림프종, 골수종, 균상 식육종, 메르켈 세포암 및 다른 혈액 악성종양으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 연속적으로 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 간헐적으로 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제 전에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제와 동시에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 PD-1 축 결합 길항제 후에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제 전에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 동시에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제 후에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제 전에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제와 동시에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제 후에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제 전에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제와 동시에 투여된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제 후에 투여된다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다.
임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 항-PD-L1 항체이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 YW243.55.S70, MPDL3280A, MDX-1105 및 MEDI4736으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 HVR-H1 서열 GFTFSDSWIH (서열 17), HVR-H2 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 18), 및 HVR-H3 서열 RHWPGGFDY (서열 19)를 포함하는 중쇄; 및 HVR-L1 서열 RASQDVSTAVA (서열 20), HVR-L2 서열 SASFLYS (서열 21), 및 HVR-L3 서열 QQYLYHPAT (서열 22)를 포함하는 경쇄를 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는
Figure pct00016
의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및
Figure pct00017
의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 항-PD-1 항체이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 MDX-1106, MK-3475, 또는 CT-011이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 AMP-224이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-L2 결합 길항제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 항체이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 이뮤노어드헤신이다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA, VISTA, B7H4, 및 CD96으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3 및 TIM3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 다른 측면에서, 본 개시내용은 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD28, CD27, CD137, HVEM, GITR, MICA, ICOS, NKG2D, 및 2B4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD27, CD137, HVEM 및 GITR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 OX-40 및 CD27로 이루어진 군으로부터 선택된다.
임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 개체는 인간이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극하는 작용제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226과 PVR의 상호작용을 증가 및/또는 자극하는 작용제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 PVR에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극하는 작용제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 또는 억제 폴리펩티드이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 아미노산 서열 (1) KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6); 또는 (2) RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 적어도 1개의 HVR을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄는
Figure pct00018
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 중쇄는
Figure pct00019
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 실시양태와 조합될 수 있는 특정 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄는
Figure pct00020
에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 항체 중쇄는
Figure pct00021
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
도 1은 TIGIT가 소진된 CD8+ 및 CD4+ T 세포 상에서 고도로 발현됨을 제시한다. 도 1a는 시험관내에서 24-48시간 동안 플레이트-결합된 항-CD3 및 항-CD28로 자극한 MACS-풍부화 C57BL6/J 비장 CD8+ T 세포를 도시한다. 이소형 염색 (회색) 대비 TIGIT 발현 (적색)의 대표적인 유동 세포측정 히스토그램. TIGIT MFI의 정량화를 또한 제시한다. ***, P < 0.001. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 3. 도 1b-1c에서, C57BL6/J 마우스를 암스트롱(Armstrong) 균주 LCMV로 감염시키고, 감염 7일 후에 비장세포를 분석하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 1b는 나이브 (CD44저 CD62L고) 및 이펙터 기억 (CD44고 CD62L저) CD4+ 및 CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 유동 세포측정 히스토그램을 제시한다. TIGIT MFI의 정량화를 또한 제시한다. ***, P < 0.001. 도 1c는 PD-1고 및 PD-1저 이펙터 기억 CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 유동 세포측정 히스토그램을 제시한다. TIGIT MFI의 정량화를 또한 제시한다. ***, P < 0.001. 도 1d는 C57BL6/J 마우스에서 CD4+ T 세포를 간략하게 고갈시키고 클론 13 균주 LCMV로 감염시킨 것을 제시한다. 감염 42일 후에 비장세포를 분석하였다. 나이브 (CD44저 CD62L고), 중심 기억 (CD44고 CD62L고), 및 이펙터 기억 (CD44고 CD62L저) CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 유동 세포측정 히스토그램. TIGIT MFI의 정량화를 또한 제시한다. ***, P < 0.001. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 2는 TIGITloxP / loxP 마우스의 설계를 제시한다. TIGIT의 엑손 1을 표준 기술을 사용하여 loxP 부위에 플랭킹시켰다.
도 3은 TIGIT-결핍 CD8+ 및 CD4+ T 세포가 급성 바이러스 감염에 정상적으로 반응함을 제시한다. TIGITfl /fl CD4cre (CKO) 및 TIGITfl /fl 한배새끼 (WT)를 암스트롱 균주 LCMV로 감염시켰다. 감염 7일 후에 비장세포를 분석하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 3a는 CD8+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 제시하며, 활성화된 (CD44고) 세포는 박스로 표시한다. 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 활성화된 CD8+ T 세포의 정량화. 도 3b는 시험관내 자극 후에 CD8+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 제시하며, IFNγ-생산 세포는 박스로 표시한다. 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 IFNg-생산 세포의 정량화. 도 3c는 CD4+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 제시하며, 활성화된 (CD44고) 세포는 박스로 표시한다. 총 CD4+ T 세포의 백분율로서 활성화된 CD4+ T 세포의 정량화. 도 3d는 시험관내 자극 후에 CD4+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 제시하며, IFNg-생산 세포는 박스로 표시한다. 총 CD4+ T 세포의 백분율로서 IFNg-생산 세포의 정량화. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 4는 TIGIT 및 PD-1이 소진된 T 세포의 이펙터 기능을 생체내에서 상승작용적으로 조절함을 제시한다. 도 4a-4e에서, TIGITfl /fl CD4-cre- (WT) 및 TIGITfl /fl CD4-cre+ (CKO) 마우스에서 CD4+ T 세포를 간략하게 고갈시키고 클론 13 균주 LCMV로 감염시켰다. 감염 42일 후에 비장세포 및 간 바이러스 역가를 분석하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표하며, 군당 n = 6-9이다. 도 4a는 CD8+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, 활성화된 세포 (CD44고 CD62L저)는 박스로 표시한다. 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 활성화된 세포의 정량화. 도 4b는 시험관내 자극 후에 CD8+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, IFNγ+ 세포는 박스로 표시한다. CD8+ T 세포의 백분율로서 IFNγ-생산 세포의 정량화. 도 4c는 CD4+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, 활성화된 세포 (CD44고 CD62L저)는 박스로 표시한다. 총 CD4+ T 세포의 백분율로서 활성화된 세포의 정량화. 도 4d는 시험관내 자극 후에 CD4+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, IFNγ+ 세포는 박스로 표시한다. CD4+ T 세포의 백분율로서 IFNγ-생산 세포의 정량화. 도 4e는 간 LCMV 역가의 정량화를 도시한다. ***, P < 0.0001. 도 4f-4h에서, C57BL6/J 마우스에서 CD4+ T 세포를 간략하게 고갈시키고 클론 13 균주 LCMV로 감염시켰다. 감염 28일 후부터 마우스를 이소형-매치되는 대조군, 항-PD-L1, 항-TIGIT, 또는 항-PD-L1 + 항-TIGIT 항체로 처리하였다. 감염 42일 후에 비장세포 및 간 바이러스 역가를 분석하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 10. 도 4f는 CD8+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, 활성화된 세포 (CD44고 CD62L저)는 박스로 표시한다. 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 활성화된 세포의 정량화. ***, P < 0.0001. 도 4g는 시험관내 자극 후에 활성화된 CD8+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, IFNγ+ 세포는 박스로 표시한다. 활성화된 CD8+ T 세포의 백분율로서 IFNγ-생산 세포의 정량화. *, P = 0.0352. **, P = 0.0047. 도 4h는 간 LCMV 역가의 정량화를 도시한다. *, P = 0.0106. **, P = 0.0047. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 5는 TIGIT/PD-L1 공동-차단이 만성 바이러스 감염 동안 CD4+ T 세포 이펙터 기능을 증진시킴을 제시한다. C57BL6/J 마우스에서 CD4+ T 세포를 고갈시키고 클론 13 균주 LCMV로 감염시켰다. 감염 28일 후부터 마우스를 이소형 대조군, 항-PD-L1, 항-TIGIT, 또는 항-PD-L1 + 항-TIGIT 항체로 처리하였다. 감염 42일 후에 비장세포 및 간 바이러스 역가를 분석하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 10. 도 5a는 CD4+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, 활성화된 세포 (CD44고 CD62L저)는 박스로 표시한다. 총 CD4+ T 세포의 백분율로서 활성화된 CD4+ T 세포의 정량화. 도 5b는 시험관내 자극 후에 CD4+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, IFNγ-생산 세포는 박스로 표시한다. 총 CD4+ T 세포의 백분율로서 IFNγ-생산 세포의 정량화. *, P = 0.019. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 6은 TIGIT 발현이 인간 유방암에서 상승되고, CD8 및 억제 보조-수용체의 발현과 상호관련됨을 제시한다. 암 유전자 아틀라스 네트워크(Cancer Gene Atlas Network)에 의해 생성된 유방암 유전자 발현 마이크로어레이 데이터를 분석하였다. 유전자 발현 데이터를 정규화하고, 상대비 (log2)로서 표현한다. 도 6a는 정상 및 모든 유방 종양 샘플 (좌) 및 유방 종양 하위유형 (우)에서의 TIGIT 발현을 도시한다. ***, P = 6x10-12. 상자 수염 플롯을 제시한다. 도 6b는 TIGIT 및 CD3ε 발현의 상관관계를 도시한다. R2 = 0.61. 도 6c는 TIGIT 및 CD8α (좌, R2 = 0.80) 또는 CD4 (우, R2 = 0.42)의 상관관계를 도시한다. 도 6d는 TIGIT 및 PD-1 (좌, R2 = 0.87), LAG3 (중앙, R2 = 0.80), 및 CTLA4 (우, R2 = 0.76)의 상관관계를 도시한다.
도 7은 TIGIT 및 PD-1이 항-종양 T 세포 반응을 억제함을 제시한다. 도 7a-7b에서, BALB/C 마우스에게 CT26 결장직장 암종 세포를 접종하였다. 접종 14일 후에 종양이 대략 200mm3 크기에 이르면 비장세포 및 종양-침윤 림프구 (TIL)를 분석하였다. 데이터는 1종의 실험을 대표한다; n = 6. 도 7a는 비장 및 종양-침윤 CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 유동 세포측정 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화를 또한 제시한다. **, P = 0.0023. 도 7b는 비장 및 종양-침윤 CD4+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 유동 세포측정 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화를 또한 제시한다. ***, P = 0.0002. 도 7c-7e에서, BALB/C 마우스에게 CT26 결장직장 암종 세포를 접종하였다. 종양이 대략 200mm3 크기에 이르면, 마우스를 이소형 대조군, 항-PD-L1, 항-TIGIT, 또는 항-PD-L1 + 항-TIGIT 항체로 3주 동안 처리하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 10-20 (도 7c-7d) 또는 7-10 (도 7e). 도 7c는 시간의 경과에 따른 중앙 CT26 종양 부피를 도시한다. 도 7d는 마우스 생존을 도시한다. 도 7e는 초기 접종 대략 60일 후에, 항-TIGIT + 항-PD-L1을 제공받은 완전 완화 (CR) 상태의 마우스, 뿐만 아니라 나이브 BALB/c 마우스에게 그의 좌측 흉곽 측복부로 CT26 세포를 접종하고, 그의 유방 지방 패드로 EMT6 유방 암종 세포를 접종한 것을 제시한다. CR 마우스 (자주색 및 녹색) 및 나이브 마우스 (흑색 및 오렌지색) 종양에서 CT26 (사각형) 및 EMT6 (삼각형)의 경우의 중앙 (좌) 및 개별 (우) 종양 부피를 제시한다. 도 7f는 마우스에게 CT26 종양을 접종하고, 도 7c에서와 같이 처리한 것을 제시한다. 종양-침윤 및 종양-배액 림프절 상주 T 세포를 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 시험관내 자극 후에 CD8+ TIL의 대표적인 FACS 플롯, IFNγ-생산 세포는 박스로 표시한다. 총 CD8+ TIL의 백분율로서 IFNγ-생산 CD8+ TIL의 정량화. ***, P = 0.0003. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 8은 CT26 종양-침윤 림프구 TIGIT 발현이 Tim-3 발현과 상호관련됨을 제시한다. BALB/C 마우스에게 CT26 결장직장 암종 세포를 접종하였다. 접종 대략 14일 후에 종양이 대략 200mm3 크기에 이르면 비장세포 및 종양-침윤 림프구 (TIL)를 분석하였다. 데이터는 1종의 실험을 대표한다; n = 6. 도 8a는 비장 및 종양-침윤 CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화. **, P = 0.0026. 도 8b는 비장 및 종양-침윤 CD4+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화. ***, P < 0.0001. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 9는 MC38 종양-침윤 림프구 TIGIT 발현이 PD-1 및 Tim-3 발현과 상호관련됨을 제시한다. C57BL6/J 마우스에게 MC38 결장직장 암종 세포를 접종하였다. 접종 대략 14일 후에 종양이 대략 200mm3 크기에 이르면 비장세포 및 종양-침윤 림프구 (TIL)를 분석하였다. 데이터는 1종의 실험을 대표한다; n = 5. 도 9a는 비장 및 종양-침윤 CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화. ***, P < 0.0001. 도 9b는 비장 및 종양-침윤 CD4+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화. *, P = 0.0136. **, P = 0.0029. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 10은 항-PD-L1 및/또는 항-TIGIT로 처리된 마우스에서의 CT26 종양 성장을 제시한다. 나이브 BALB/c 마우스에게 CT26 종양 세포를 접종하고, 도 4d-4f에 기재된 바와 같이 항-PD-L1 및/또는 항-TIGIT 또는 이소형-매치되는 대조군 항체로 처리하였다. 각각의 처리군에서 개별 마우스에 대한 시간의 경과에 따른 종양 부피를 제시한다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다.
도 11은 CD4+ TIL 및 종양-배액 림프절 T 세포의 유동 세포측정 분석을 제시한다. BALB/C 마우스에게 CT26 결장직장 암종 세포를 접종하였다. 종양이 대략 200mm3 크기에 이르면, 마우스를 이소형 대조군, 항-PD-L1, 항-TIGIT, 또는 항-PD-L1 + 항-TIGIT 항체로 7일 동안 처리하였다. 종양 및 종양-배액 림프절을 수거하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 시험관내 자극 후에 종양-배액 림프절 CD8+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯, IFNγ-생산 세포는 박스로 표시한다. 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 IFNγ+ 세포의 정량화. ***, P < 0.001. 총 TIL의 백분율로서 CD8+ T 세포의 정량화. **, P = 0.0065. 총 CD8+ TIL의 백분율로서 활성화된 (CD44고 CD62L저) CD8+ T 세포의 정량화. *, P = 0.012. 총 종양-배액 림프절 세포의 백분율로서 CD8+ T 세포의 정량화. 종양-배액 림프절 내 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 활성화된 CD8+ T 세포의 정량화. *, P < 0.05. 도 11c는 총 TIL의 백분율로서 CD4+ T 세포의 정량화를 도시한다. *, P = 0.016. 도 11d는 총 CD4+ TIL의 백분율로서 활성화된 CD4+ T 세포의 정량화를 도시한다. 도 11e는 총 종양-배액 림프절 세포의 백분율로서 CD4+ T 세포의 정량화를 도시한다. 도 11f는 종양-배액 림프절 내 총 CD4+ T 세포의 백분율로서 활성화된 CD4+ T 세포의 정량화를 도시한다. 도 11a는 시험관내 자극 후에 CD4+ TIL의 백분율로서 IFNγ+ 세포의 정량화를 도시한다. 도 11b는 시험관내 자극 후에 종양-배액 림프절 내 CD4+ T 세포의 백분율로서 IFNγ+ 세포의 정량화를 도시한다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 12는 CD8+ TIL의 유동 세포측정 분석을 추가로 제시한다. BALB/C 마우스에게 CT26 결장직장 암종 세포를 접종하고, 도 4에 기재된 바와 같이 이소형 대조군, 항-PD-L1, 항-TIGIT, 또는 항-PD-L1 + 항-TIGIT 항체로 처리하였다. 처리 7일 후에 종양을 수거하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 12a는 총 CD8+ TIL의 백분율로서 TNFα+ 세포의 정량화를 도시한다. **, P < 0.01. 도 12b는 총 TIL의 백분율로서 CD8+ TIL의 정량화를 도시한다. **, P < 0.01. 도 12c는 총 CD8+ TIL의 백분율로서 활성화된 (CD44고 CD62L저) CD8+ TIL의 정량화를 도시한다. *, P < 0.05. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 13은 종양-배액 림프절 상주 CD8+ T 세포의 유동 세포측정 분석을 제시한다. BALB/C 마우스에게 CT26 결장직장 암종 세포를 접종하고, 도 4에 기재된 바와 같이 이소형 대조군, 항-PD-L1, 항-TIGIT, 또는 항-PD-L1 + 항-TIGIT 항체로 처리하였다. 처리 7일 후에 종양-배액 림프절을 수거하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 13a는 시험관내 자극 후에 종양-배액 림프절 상주 CD8+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, IFNγ-생산 세포는 박스로 표시한다. 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 IFNγ+ 세포의 정량화. ***, P < 0.001. 도 13b는 종양-배액 림프절 내 총 세포의 백분율로서 CD8+ T 세포의 정량화를 도시한다. 도 13c는 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 활성화된 (CD44고 CD62L저) CD8+ T 세포의 정량화를 도시한다. *, P < 0.05. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다. 도 13d는 총 종양-배액 림프절 CD8+ T 세포의 백분율로서 TNFα-생산 세포의 정량화를 도시한다.
도 14는 종양-침윤 CD8+ T 세포에 의한 CD226 및 TIGIT의 공동-발현을 제시한다. C57BL6/J 마우스에게 MC38 결장직장 암종 세포를 접종하였다. 접종 대략 14일 후에 종양이 대략 200mm3 크기에 이르면 비장세포 및 종양-침윤 림프구 (TIL)를 분석하였다. 비장 B 세포 (회색), 비장 CD8+ T 세포 (청색), 및 TIGIT+ 종양-침윤 CD8+ T 세포 (적색)에 의한 CD226 발현의 대표적인 히스토그램. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5.
도 15는 CD226 및 TIGIT가 형질감염된 세포 상에 공동-면역침전됨 (co-IP)을 제시한다. COS7 세포를 TIGIT-HA (5ng) 또는 CD226-Flag (10ng) 태그부착된 단백질에 대한 cDNA를 함유하는 발현 플라스미드, 또는 대조군 플라스미드 (pRK)로 공동-형질감염시켰다. 형질감염 후에, 세포를 세척하고, 원심분리하고, 세포 펠릿을 용해시켰다. 생성된 상청액을 사전-청정화하고, 원심분리한 다음, 2개의 튜브에 동등하게 분할하고, 표준 절차를 사용하여 항-HA 또는 항-flag로 면역-침전시켰다. 면역-침전된 단백질에 대해 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯을 행하였다. 웨스턴 블롯은 항-Flag-HRP 또는 항-HA-HRP로 탐침하였다.
도 16은 TIGIT 및 CD226이 1차 CD8+ T 세포에서 상호작용함을 제시한다. MACS-풍부화 비장 C57BL6/J CD8+ T 세포를 플레이트-결합된 항-CD3 및 항-CD28 항체 및 재조합 IL-2로 48시간 동안 자극하고 용해시켰다. 세포 용해물을 항-TIGIT로 면역침전시키고 항-CD226으로 탐침하였다. 레인: 분자량 사다리 (1), 입력 (2), 공동-면역침전 관통 (3), 및 공동-면역침전. 화살표는 CD226의 예상 분자량을 나타낸다.
도 17은 TR-FRET에 의한 TIGIT/CD226 상호작용의 검출을 제시한다. 도 17a는 HA-TIGIT에 의한 Flag-ST-CD226 동종이량체의 해리를 도시한다. Flag-ST-CD226 사이의 FRET 비를 일정한 양의 Flag-ST-CD226 및 증가하는 농도의 HA-TIGIT를 발현하는 COS-7 세포에 대해 측정하였다. 도 17b는 Flag-ST-CD226 사이의 FRET 비를 PBS (백색 막대) 또는 항-TIGIT 항체 (흑색 막대)의 15분 인큐베이션 후에 기록한 것을 도시한다. 도 17c는 HA-TIGIT에 의한 Flag-ST-CD226의 해리를 도시한다. 동일한 배치의 형질감염된 COS-7 세포에 대해 항-Flag ELISA에 의해 측정된 바와 같은 Flag-ST-CD226 발현에 대한 Flag-ST-CD226 및 HA-TIGIT 사이의 FRET 강도. 도 17d는 PBS (백색 막대) 또는 항-TIGIT 항체 (흑색 막대)의 15분 인큐베이션 후의 Flag-ST-CD226 및 HA-TIGIT 사이의 FRET 변동을 도시한다. a 및 c의 데이터는 각각 3중으로 수행된 4종의 독립적 실험을 대표한다. b 및 d의 데이터는 각각 3중으로 수행된 2종의 독립적 실험을 대표한다.
도 18은 Flag-ST-CD226 및 HA-TIGIT의 세포 표면 발현을 도시한다. 표시된 태그부착된-구축물을 발현하는 무손상 COS-7 세포에 대한 항-Flag 및 항-HA ELISA. 데이터는 각각 3중으로 수행된 3종의 독립적 실험을 대표한다.
도 19는 CD226 차단이 TIGIT/PD-L1 공동-차단에 의해 유도된 증진된 항-바이러스 T 세포 반응을 역전시킴을 제시한다. 도 19a-19d에서, C57BL6/J 마우스에서 CD4+ T 세포를 간략하게 고갈시키고 클론 13 균주 LCMV로 감염시켰다. 감염 28일 후부터 마우스를 이소형-매치되는 대조군, 항-CD226, 항-PD-L1 + 항-TIGIT, 또는 항-PD-L1 + 항-TIGIT + 항-CD226 항체로 처리하였다. 감염 42일 후에 비장세포 및 간 바이러스 역가를 분석하였다. 도 19a는 비장세포의 백분율로서 CD8+ T 세포의 정량화를 도시한다. 도 19b는 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 활성화된 CD8+ T 세포의 정량화를 도시한다. ***, P < 0.001. 도 19c는 활성화된 CD8+ T 세포의 백분율로서 IFNg-생산 세포의 정량화를 도시한다. ***, P < 0.001. 도 19d는 간 LCMV 역가의 정량화를 도시한다. ***, P < 0.001. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 20은 TIGIT 발현이 인간 암에서 상승되고 CD8 및 PD-1과 강력하게 상호관련됨을 제시한다. 인간 암의 유전자 발현 분석을 실시예 11에 기재된 바와 같이 수행하였다. 산점도는 라이브러리 크기에 의해 정규화된 유전자당 카운트 데이터를 제시한다. 상자 수염 플롯은 TIGIT 및 CD3e의 분산 안정화 발현 비를 제시한다. 도 20a는 LUSC (회색) 및 정상 폐 (흑색)에서 TIGIT 및 CD3e RNA 발현의 상관관계를 도시한다. ρ = 0.86. TIGIT/CD3e 발현 비의 정량화를 또한 제시한다. LUSC 비 증가 = 372%. ***, P = 1.46 x 10- 46. 도 20b는 COAD (회색) 및 정상 결장 (흑색)에서 TIGIT 및 CD3e RNA 발현의 상관관계를 도시한다. ρ = 0.83. TIGIT/CD3e 발현 비의 정량화를 또한 제시한다. COAD 비 증가 = 116%. ***, P = 3.66 x 10- 6. 도 20c는 UCEC (회색) 및 정상 자궁 내막 (흑색)에서 TIGIT 및 CD3e RNA 발현의 상관관계를 도시한다. ρ = 0.87. TIGIT/CD3e 발현 비의 정량화를 또한 제시한다. UCEC 비 증가 = 419%. ***, P = 7.41 x 10- 5. 도 20d는 BRCA (회색) 및 정상 유방 (흑색)에서 TIGIT 및 CD3e RNA 발현의 상관관계를 도시한다. ρ = 0.82. TIGIT/CD3e 발현 비의 정량화를 또한 제시한다. BRCA 비 증가 = 313%. ***, P = 4.6 x 10- 44. 도 20e는 신장 투명 세포 암종 (회색) 및 정상 신장 (흑색)에서 TIGIT 및 CD3e RNA 발현의 상관관계를 도시한다. ρ = 0.94. TIGIT/CD3e 발현 비의 정량화를 또한 제시한다. 도 20f는 폐 편평 세포 암종 (회색) 및 정상 폐 (흑색)에서 TIGIT 및 CD8A (좌) 또는 TIGIT 및 CD4 (우)의 상관관계를 도시한다. ρ = 각각 0.77 및 0.48. 도 20g는 폐 편평 세포 암종 (회색) 및 정상 폐 (흑색)에서 TIGIT 및 PD-1 (Pdcd1)의 상관관계를 도시한다. ρ = 0.82. 도 20h는 폐 편평 세포 암종 (적색) 및 정상 폐 (흑색)에서 TIGIT 및 CD226의 상관관계를 도시한다. ρ = 0.64.
도 21은 폐 편평 세포 암종 (LUSC)에서의 T 세포-연관 유전자 발현의 분석을 제시한다. LUSC 및 정상 조직 샘플에서의 유전자 발현을 실시예 11에 기재된 바와 같이 분석하고, LUSC 샘플에서의 유전자 서명과 최대로 상호관련된 유전자의 열 지도를 생성하였다. 유전자 및 샘플을 중심화 및 규모화 발현 데이터에 대한 유클리디안(Euclidean) 거리 매트릭스 상의 와드 연결을 사용한 계층적 클러스터링을 사용하여 둘 다 클러스터링하였다.
도 22는 TIGIT 및 PD-1이 인간 및 뮤린 종양-침윤 림프구에 의해 대등하게 발현됨을 제시한다. 도 22a-22c는 새롭게 절제한 인간 NSCLC 종양, 종양-매치되는 말초 혈액, 및 정상 공여자 말초 혈액으로부터의 림프구의 분석을 제시한다. 데이터는 2종의 독립적으로 분석된 종양을 대표한다. 도 22a는 말초 및 종양-침윤 CD8+ T 세포에 의한 대표적인 TIGIT 발현의 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, TIGIT+ 세포는 박스로 표시한다. 도 22b는 말초 및 종양-침윤 CD4+ T 세포에 의한 대표적인 TIGIT 발현의 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, TIGIT+ 세포는 박스로 표시한다. 도 22c는 PD-1고 (적색) 및 PD-1저 (청색) NSCLC-침윤 CD8+ (좌) 및 CD4+ (우) T 세포에 의한 대표적인 TIGIT 발현의 유동 세포측정 히스토그램을 도시한다. 도 22d-22g에서, BALB/C 마우스에게 동계 CT26 결장직장 암종 세포를 접종하였다. 접종 14일 후에 종양이 대략 200 mm3 크기에 이르면 비장세포 및 종양-침윤 림프구 (TIL)를 분석하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5-6. 도 22d는 종양-침윤 CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, TIGIT+ 세포는 박스로 표시한다. 도 22e는 종양-침윤 CD4+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, TIGIT+ 세포는 박스로 표시한다. 모든 T 세포의 백분율로서 TIGIT+ T 세포의 빈도의 정량화. *, P = 0.0134. ***, P < 0.0001. 도 22f는 PD-1고 및 PD-1저 종양-침윤 CD8+ T 세포 및 비장 CD8+ T 세포에 의한 대표적인 TIGIT 발현의 유동 세포측정 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화를 또한 제시한다. **, P = 0.0023. 도 22g는 PD-1고 및 PD-1저 종양-침윤 CD4+ T 세포 및 비장 CD4+ T 세포에 의한 대표적인 TIGIT 발현의 유동 세포측정 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화를 또한 제시한다. ***, P = 0.0002. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 23은 인간 종양-침윤 T 세포에 의한 TIGIT 발현의 특징을 제시한다. 도 23a-23b는 NSCLC 종양-침윤 CD8+ 및 CD4+ T 세포 (도 23a) 및 공여자-매치되는 PBMC CD8+ 및 CD4+ T 세포 (도 23b)에 의한 TIGIT 발현을 제시하는 FACS 플롯을 도시하며, TIGIT+ 세포는 박스로 표시한다. 도 23c-23d는 CRC 종양-침윤 CD8+ 및 CD4+ T 세포 (도 23c) 및 공여자-매치되는 PBMC CD8+ 및 CD4+ T 세포 (도 23d)에 의한 TIGIT 발현을 제시하는 FACS 플롯을 도시하며, TIGIT+ 세포는 박스로 표시한다.
도 24는 TIGIT:CD226 상호작용이 PVR에 의해 구동되지 않고, TIGIT:CD226 및 TIGIT Q56R:CD226 상호작용은 TR-FRET에 의해 검출되었음을 제시하고, Flag-ST-CD226 및 HA-TIGIT 또는 HA-TIGIT Q56R 사이의 FRET 비는 WT 및 Q56R TIGIT가 동일한 효능으로 CD226과 결합함을 제시한다. 데이터는 3중으로 수행된 3종의 독립적 실험을 대표한다.
도 25는 MC38 종양을 보유하는 마우스에서의 TIGIT/PD-L1 항체 공동-차단의 효능을 제시한다. 도 25a-25c에서, MC38 종양-보유 마우스를 상기와 같이 생성하고, PD-L1 (적색), TIGIT (청색), TIGIT 및 PD-L1 (자주색)에 대한 항체 또는 이소형-매치되는 대조군 항체 (흑색)로 3주 동안 처리하였다. N = 10 (대조군, 항-PD-L1 단독, 항-TIGIT 단독) 또는 20 (항-TIGIT + 항-PD-L1). 도 25a는 시간의 경과에 따른 중앙 (좌) 및 개별 (우) MC38 종양 부피를 도시한다. 도 25b는 항체 처리 14일 후의 MC38 종양 부피를 도시한다. ***, P = 0.0005. **, P = 0.0093. *, P = 0.0433. 도 25c는 시간의 경과에 따른 마우스 생존을 도시한다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 26은 뮤린 종양-침윤 T 세포에 의한 TIGIT 발현의 추가의 특징을 제시한다. 도 26a는 비장 C57BL6/J CD8+ T 세포를 MACS에 의해 풍부화하고 플레이트-코팅된 항-CD3 및 항-CD28 효능제 항체와 함께 배양한 것을 도시한다. 시간의 경과에 따른 TIGIT (적색) 및 이소형-매치되는 대조군 (채워진 회색) 염색의 대표적인 히스토그램. TIGIT MFI의 정량화. ***, P < 0.001. 자극된 세포는 PD-1을 유도적으로 발현하였고, CD226을 구성적으로 발현하였다 (데이터는 제시되지 않음). 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 26b-26e에서, 야생형 C57BL6/J 마우스에게 동계 MC38 결장직장 암종 세포를 피하로 접종하였다. 종양이 150-200 mm3 크기에 이를 때까지 개입 없이 성장되도록 하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 26b는 종양-침윤 CD8+ T 세포의 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, TIGIT+ 세포는 박스로 표시한다. 모든 종양-침윤 또는 비장 CD8+ T 세포의 백분율로서 TIGIT+ 세포의 빈도의 정량화. ***, P < 0.0001. 도 26c는 종양-침윤 CD4+ T 세포의 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, TIGIT+ 세포는 박스로 표시한다. 모든 종양-침윤 또는 비장 CD4+ T 세포의 백분율로서 TIGIT+ 세포의 빈도의 정량화. ***, P < 0.0001. 도 26d는 PD-1고 및 PD-1저 종양-침윤 CD8+ T 세포 (각각 적색 및 청색) 및 비장 CD8+ T 세포 (회색)에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화. ***, P < 0.0001. 도 26e는 PD-1고 및 PD-1저 종양-침윤 CD4+ T 세포 및 비장 CD4+ T 세포에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 히스토그램을 도시한다. TIGIT MFI의 정량화. *, P = 0.0136. **, P = 0.0029. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 27은 종양-침윤 CD8+ 및 CD4+ T 세포가 높은 수준의 CD226 발현을 유지함을 제시한다. 야생형 BALB/c 마우스에게 CT26 종양 세포를 본원에 기재된 바와 같이 접종하였다. 종양이 대략 150-200 mm3 크기로 성장한 후에, 종양 및 비장을 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 도 27a는 각각 모든 CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 및 비-T 세포의 백분율로서 CD226+ CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 및 비-T 세포의 정량화를 도시한다. 도 27b는 종양 및 비장에서 CD226 발현의 대표적인 히스토그램을 도시한다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 28은 CD8+ T 세포 반응의 TIGIT 억제가 CD226에 의존적임을 제시한다. BALB/C 마우스에게 CT26 결장직장 암종 세포를 그의 우측 흉곽 측복부로 피하로 접종하였다. 종양이 대략 200mm3 크기에 이르면, 마우스를 이소형 대조군 (흑색), 항-CD226 (오렌지색), 항-PD-L1 (적색), 항-TIGIT + 항-PD-L1 (자주색), 또는 항-TIGIT + 항-PD-L1 + 항-CD226 (녹색) 항체로 3주 동안 처리하였다. 데이터는 1종의 실험을 대표한다; n = 10 (a-b) 또는 5 (c-f). 도 28a는 시간의 경과에 따른 중앙 (좌) 및 개별 (우) CT26 종양 부피를 도시한다. 도 28b는 시간의 경과에 따른 마우스 생존을 도시한다. 도 28c-28f에서, 처리 7일 후에, 종양-침윤 림프구 및 종양-배액 림프절-상주 림프구를 유동 세포측정법에 의해 평가하였다. 도 28c는 시험관내 자극 후에 총 CD8+ TIL의 백분율로서 IFNγ-생산 CD8+ TIL의 정량화를 도시한다. **, P < 0.01. 도 28d는 시험관내 자극 후에 총 CD8+ T 세포의 백분율로서 IFNγ-생산 세포의 정량화를 도시한다. *, P < 0.05. 도 28e는 총 TIL의 백분율로서 CD8+ TIL의 정량화를 도시한다. **, P < 0.01. 도 28f는 모든 종양-배액 림프절-상주 림프구의 백분율로서 CD8+ T 세포의 정량화를 도시한다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 29는 TIGIT가 CD226 동종이량체화를 직접 교란시킴으로써 CD226 기능을 손상시킴을 제시한다. 도 29a는 CD8+ T 세포를 TIGITfl /fl CD4cre (CKO) 및 TIGITfl /fl CD4wt (WT) 한배새끼로부터 MACS-풍부화하고, 표시된 바와 같이 항-CD226 또는 이소형-매치되는 대조군 항체의 존재 하에 자극한 것을 도시한다. H3-티미딘 흡수는 항-CD3 + PVR-Fc와 함께 배양된 세포 대 항-CD3 단독과 함께 배양된 세포의 비로서 제시된다. **, P = 0.0061. ***, P < 0.0001. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 29b는 야생형 C57BL6/J CD8+ T 세포를 MACS-풍부화하고, 표시된 바와 같이 항-TIGIT, 항-CD226, 및/또는 이소형-매치되는 대조군 항체의 존재 하에 자극한 것을 도시한다. H3-티미딘 흡수는 항-CD3 + PVR-Fc와 함께 배양된 세포 대 항-CD3 단독과 함께 배양된 세포의 비로서 제시된다. 대응표본 t 검정에서 ***, P < 0.001. 도 29c는 1차 인간 CD8+ T 세포를 혈액으로부터 MACS-풍부화하고, 인간 재조합 PVR-Fc의 존재 또는 부재 하에 플레이트-결합된 항-CD3의 준최적 수준으로 자극한 것을 도시한다. 항-TIGIT 항체 또는 이소형-매치되는 대조군 항체를 표시된 바와 같이 첨가하였다. 3H-티미딘 흡수의 정량화. **, P = 각각 0.0071 및 0.0014. 도 29d는 CHO 세포를 표시된 바와 같이 증가하는 농도의 수용자 및 공여자 FLAG-ST-CD226으로 일시적으로 형질감염시킨 것을 도시한다. 공여자 방출 대비 FRET 강도의 정량화. 데이터는 3종의 독립적 실험을 대표한다; n = 3. 도 29e-29f에서, CHO 세포를 표시된 바와 같이 FLAG-ST-CD226 및 증가하는 농도의 HA-TIGIT로 일시적으로 형질감염시켰다. 데이터는 2종 이상의 독립적 실험을 대표한다; n = 4. 데이터는 최대 신호에 대해 정규화된다. 도 29e는 CD226:CD226 FRET 비의 정량화 (FRET 비 1)를 도시한다. 도 29f는 TIGIT:CD226 FRET 비의 정량화 (FRET 비 2)를 도시한다. 도 29g는 공 pRK 벡터 또는 Flag-CD226 및 HA-TIGIT의 조합으로 형질감염시킨 COS-7 세포로부터 제조된 항-FLAG 또는 항-HA 면역침전물에 대해 수행된 항-FLAG (좌) 및 항-HA (우) 이뮤노블롯을 도시한다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다. 도 29h는 PBS (백색) 또는 항-TIGIT 항체 (적색)와의 인큐베이션 후의 TIGIT:CD226 FRET 비의 정량화를 도시한다. ***, P < 0.001. 데이터는 4종의 독립적 실험을 대표한다; n = 3. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 30은 1차 인간 T 세포를 혈액으로부터 MACS-풍부화하고, 항-CD3 및 항-CD28로 자극한 것을 제시한다. TIGIT+ 및 TIGIT- 세포를 분류하고, 휴지시키고, 재-자극하고, FRET을 위해 표시된 항체로 표지하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다. ***, P < 0.001. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 31은 TIGIT 및 PD-1 공동-차단이 만성 바이러스 감염 동안 소진된 CD4+ T 세포의 이펙터 기능을 회복시키지 않음을 제시한다. 도 31a는 모든 비장세포의 백분율로서 CD8+ T 세포의 정량화를 도시한다. 도 31b는 모든 비장 CD8+ T 세포의 백분율로서 GP33 오량체+ 세포의 정량화를 도시한다. **, P = 0.0040. 도 31c는 시험관내 자극 후에 gp33 오량체+ CD8+ T 세포에 대해 게이팅된 대표적인 FACS 플롯을 도시하며, IFNγ+ 세포는 박스로 표시한다. 모든 gp33 오량체+ CD8+ T 세포의 백분율로서 IFNγ-생산 세포의 정량화. *, P = 0.0319. **, P = 0.0030. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 32는 TIGIT/PD-L1 공동-차단 효능이 CD8+ T 세포에 의존적임을 제시한다. 도 32a-32b에서, 야생형 BALB/c 마우스에게 CT26 종양을 도 7에 기재된 바와 같이 접종하였다. 종양이 100-150 mm3 크기에 이르면, 마우스에서 CD8+ T 세포를 일시적으로 고갈시키고, 항-TIGIT + 항-PD-L1로 처리하였다. 데이터는 1종의 실험을 대표한다; n = 10/군. 도 32a는 시간의 경과에 따른 중앙 (좌) 및 개별 (우) CT26 종양 부피를 도시한다. 도 32b는 치료 시작 17일 후의 CT26 종양 부피의 정량화를 도시한다. ***, P = 0.0004. 도 32c에서, 야생형 BALB/c 마우스에게 CT26 종양을 접종하고, 항-TIGIT + 항-PD-L1로 처리한 다음, CT26 종양으로 재-챌린지하였고, 재-챌린지 시점에 CD8+ T 세포는 일시적으로 고갈되었다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 32c는 시간의 경과에 따른 중앙 (좌) 및 개별 (우) CT26 종양 부피를 도시한다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 33은 종양 세포 상의 PVR 발현이 TIGIT/PD-L1 공동-차단 효능을 위해 불필요함을 제시한다. 야생형 BALB/c 마우스에게 기재된 바와 같이 야생형 또는 PVR-결핍 (PVR.KO) 종양을 접종하였다. 종양이 150-200 mm3 크기에 이르면, 마우스를 항-TIGIT + 항-PD-L1 또는 이소형-매치되는 대조군 항체로 처리하였다. 데이터는 1종의 실험을 대표한다; n = 10/군. 도 33은 시간의 경과에 따른 중앙 (좌) 및 개별 (우) CT26 종양 부피를 도시한다.
도 34는 EMT6 종양을 보유하는 마우스에서 TIGIT/PD-L1 항체 공동-차단의 효능을 제시한다. EMT6 종양-보유 마우스를 상기와 같이 생성하고, PD-L1 (적색), TIGIT (청색), TIGIT 및 PD-L1 (자주색)에 대한 차단 항체 또는 이소형-매치되는 대조군 항체 (흑색)로 3주 동안 처리하였다. N = 10 (대조군, 항-PD-L1 단독, 항-TIGIT 단독) 또는 20 (항-TIGIT + 항-PD-L1). 도 34는 시간의 경과에 따른 중앙 (좌) 및 개별 (우) EMT6 종양 부피를 도시한다.
도 35는 TIGIT가 종양-침윤 CD8+ T 세포 이펙터 기능을 조절함을 제시한다. BALB/C 마우스에게 CT26 결장직장 암종 세포를 그의 우측 흉곽 측복부로 피하로 접종하고, 도 7에 기재된 바와 같이 항-PD-L1, 항-TIGIT, 또는 항-PD-L1 + 항-TIGIT로 처리하였다. 처리 시작 7일 후에 종양-배액 림프절 (dLN) 상주 및 종양-침윤 T 세포를 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 35a는 각각 총 dLN 상주 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 백분율로서 IFNγ/TNFα 이중-생성 dLN 상주 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 정량화를 도시한다. 비자극 T 세포에 의한 이중 시토카인 생산을 또한 제시한다. **, P = 각각 0.002, 0.003, 및 0.001. 도 35b는 각각 총 종양-침윤 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 백분율로서 IFNγ/TNFα 이중-생산 종양-침윤 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 정량화를 도시한다. 비자극 T 세포에 의한 이중 시토카인 생산을 또한 제시한다. ***, P < 0.0001. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
도 36은 절제된 인간 NSCLC 종양, 종양-매치되는 말초 혈액, 및 정상 공여자 말초 혈액으로부터의 림프구의 분석을 제시한다. 3종의 독립적으로 획득한 샘플 세트로부터 데이터를 풀링하였다. 도 36a는 모든 CD8+ T 세포의 백분율로서 TIGIT+ 세포의 정량화를 도시한다. *, P < 0.05. 도 36b는 모든 CD4+ T 세포의 백분율로서 TIGIT+ 세포의 정량화를 도시한다.
도 37은 인간 종양에서 TIGIT 발현의 특징을 제시한다. 도 37a는 하위세트-매치되는 이소형 염색 (회색) 대비 NSCLC 종양-상주 림프구 (적색, CD45+ FSC저), 골수 세포 (청색, CD45+ FSC고), 및 비-조혈 세포 (녹색, CD45-)에 의한 TIGIT 발현의 대표적인 유동 세포측정 히스토그램을 도시한다. 도 37b는 PD-1고 및 PD-1저 NSCLC 종양-침윤 CD8+ 및 CD4+ T 세포에 대한 게이팅 전략을 도시한다.
I. 일반적 기술
본원에 기재되거나 언급된 기술 및 절차는 일반적으로 널리 이해되고, 통상의 기술자에 의해 통상의 방법론, 예컨대 예를 들어 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); 및 Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)]에 기재된 널리 활용되는 방법론을 사용하여 통상적으로 이용된다.
II. 정의
용어 "PD-1 축 결합 길항제"는 PD-1 신호전달 축 상의 신호전달로부터 발생한 T-세포 기능장애가 제거되어 T-세포 기능 (예를 들어, 증식, 시토카인 생산, 표적 세포 사멸)을 회복 또는 증진시키는 결과가 되도록, PD-1 축 결합 파트너와 그의 결합 파트너 중 1종 이상의 상호작용을 억제하는 분자이다. 본원에 사용된 PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제, PD-L1 결합 길항제 및 PD-L2 결합 길항제를 포함한다.
용어 "PD-1 결합 길항제"는 PD-1과 그의 결합 파트너 중 1종 이상, 예컨대 PD-L1, PD-L2의 상호작용으로부터 발생한 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거, 또는 간섭하는 분자이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 그의 결합 파트너에 대한 결합을 억제하는 분자이다. 구체적 측면에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 PD-L1 및/또는 PD-L2에 대한 결합을 억제한다. 예를 들어, PD-1 결합 길항제는 PD-1과 PD-L1 및/또는 PD-L2의 상호작용으로부터 발생한 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 항-PD-1 항체, 그의 항원 결합 단편, 이뮤노어드헤신, 융합 단백질, 올리고펩티드 및 다른 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1을 통해 신호전달이 매개되는 T 림프구 상에 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 그를 통해 매개되는 음성 공동-자극 신호를 감소시켜 기능장애성 T-세포가 덜 기능장애성이도록 한다 (예를 들어, 항원 인식에 대한 이펙터 반응을 증진시킴). 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 항-PD-1 항체이다. 구체적 측면에서, PD-1 결합 길항제는 본원에 기재된 MDX-1106이다. 또 다른 구체적 측면에서, PD-1 결합 길항제는 본원에 기재된 머크 3745이다. 또 다른 구체적 측면에서, PD-1 결합 길항제는 본원에 기재된 CT-011이다. 또 다른 구체적 측면에서, PD-1 결합 길항제는 본원에 기재된 AMP-224이다.
용어 "PD-L1 결합 길항제"는 PD-L1과 그의 결합 파트너 중 1종 이상, 예컨대 PD-1, B7-1의 상호작용으로부터 발생한 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 분자이다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1의 그의 결합 파트너에 대한 결합을 억제하는 분자이다. 구체적 측면에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1의 PD-1 및/또는 B7-1에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 항-PD-L1 항체, 그의 항원 결합 단편, 이뮤노어드헤신, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 PD-L1과 그의 결합 파트너 중 1종 이상, 예컨대 PD-1, B7-1의 상호작용으로부터 발생한 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 다른 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1을 통해 신호전달이 매개되는 T 림프구 상에 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 그를 통해 매개되는 음성 공동-자극 신호를 감소시켜 기능장애성 T-세포가 덜 기능장애성이도록 한다 (예를 들어, 항원 인식에 대한 이펙터 반응을 증진시킴). 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 항-PD-L1 항체이다. 구체적 측면에서, 항-PD-L1 항체 본원에 기재된 YW243.55.S70이다. 또 다른 구체적 측면에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 MDX-1105이다. 또 다른 구체적 측면에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 MPDL3280A이다. 또 다른 구체적 측면에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 MEDI 4736이다.
용어 "PD-L2 결합 길항제"는 PD-L2와 그의 결합 파트너 중 1종 이상, 예컨대 PD-1의 상호작용으로부터 발생한 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 분자이다. 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-L2의 그의 결합 파트너에 대한 결합을 억제하는 분자이다. 구체적 측면에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-L2의 PD-1에 대한 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-L2 길항제는 항-PD-L2 항체, 그의 항원 결합 단편, 이뮤노어드헤신, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 PD-L2와 그의 결합 파트너 중 1종 이상, 예컨대 PD-1의 상호작용으로부터 발생한 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 간섭하는 다른 분자를 포함한다. 한 실시앙태에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-L2를 통해 신호전달이 매개되는 T 림프구 상에 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 그를 통해 매개되는 음성 공동-자극 신호를 감소시켜 기능장애성 T-세포가 덜 기능장애성이도록 한다 (예를 들어, 항원 인식에 대한 이펙터 반응을 증진시킴). 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 이뮤노어드헤신이다.
용어 "압타머"는 표적 분자, 예컨대 폴리펩티드에 결합할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 예를 들어, 본 발명의 압타머는 TIGIT 폴리펩티드, 또는 TIGIT의 발현을 조정하는 신호전달 경로 내의 분자에 특이적으로 결합할 수 있다. 압타머의 생성 및 치료 용도는 관련 기술분야에 널리 확립되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,475,096, 및 연령-관련 황반 변성의 치료를 위한 마큐젠(Macugen)® (아이테크(Eyetech), 뉴욕)의 치료 효능을 참조한다.
용어 "길항제"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 본원에 개시된 천연 폴리펩티드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 차단, 억제 또는 중화시키는 임의의 분자를 포함한다. 유사한 방식으로, 용어 "효능제"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 본원에 개시된 천연 폴리펩티드의 생물학적 활성을 모방하는 임의의 분자를 포함한다. 적합한 효능제 또는 길항제 분자는 구체적으로 효능제 또는 길항제 항체 또는 항체 단편, 천연 폴리펩티드의 단편 또는 아미노산 서열 변이체, 펩티드, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 유기 소분자 등을 포함한다. 폴리펩티드의 효능제 또는 길항제를 확인하는 방법은 폴리펩티드를 후보 효능제 또는 길항제 분자와 접촉시키고, 폴리펩티드와 통상적으로 연관되는 하나 이상의 생물학적 활성에서 검출가능한 변화를 측정하는 것을 포함할 수 있다.
용어 "TIGIT 길항제" 및 "TIGIT 활성 또는 TIGIT 발현의 길항제"는 상호교환가능하게 사용되고, TIGIT-코딩 핵산의 전사 또는 번역의 감소 또는 TIGIT 폴리펩티드 활성의 억제 또는 차단, 또는 둘 다에 의해 TIGIT의 정상 기능을 간섭하는 화합물을 지칭한다. TIGIT 길항제의 예는 TIGIT 길항제와 TIGIT 사이의 상호작용이 TIGIT 활성 또는 발현의 감소 또는 중단을 야기하도록 하는, 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, RNA-DNA 키메라, TIGIT-특이적 압타머, 항-TIGIT 항체, 항-TIGIT 항체의 TIGIT-결합 단편, TIGIT-결합 소분자, TIGIT-결합 펩티드, 및 TIGIT에 특이적으로 결합하는 다른 폴리펩티드 (임의로 하나 이상의 추가의 도메인에 융합된 하나 이상의 TIGIT 리간드의 TIGIT-결합 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않음)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 경우에, TIGIT 길항제는 또 다른 TIGIT 활성에 영향을 미치지 않으면서 하나의 TIGIT 활성에 길항작용할 수 있는 것으로 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다. 예를 들어, 본원의 특정 방법에 사용하기 위한 바람직한 TIGIT 길항제는 예를 들어 임의의 다른 TIGIT 상호작용에 영향을 미치지 않거나 최소의 영향을 미치면서 PVR 상호작용, PVRL3 상호작용, 또는 PVRL2 상호작용 중 하나에 반응하여 TIGIT 활성에 길항작용하는 TIGIT 길항제이다.
용어 "PVR 길항제" 및 "PVR 활성 또는 PVR 발현의 길항제"는 상호교환가능하게 사용되고, PVR-코딩 핵산의 전사 또는 번역의 감소 또는 PVR 폴리펩티드 활성의 억제 또는 차단, 또는 둘 다에 의해 PVR의 정상 기능을 간섭하는 화합물을 지칭한다. PVR 길항제의 예는 PVR 길항제와 PVR 사이의 상호작용이 PVR 활성 또는 발현의 감소 또는 중단을 야기하도록 하는, 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, RNA-DNA 키메라, PVR-특이적 압타머, 항-PVR 항체, 항-PVR 항체의 PVR-결합 단편, PVR-결합 소분자, PVR-결합 펩티드, 및 PVR에 특이적으로 결합하는 다른 폴리펩티드 (임의로 하나 이상의 추가의 도메인에 융합된 하나 이상의 PVR 리간드의 PVR-결합 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않음)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 경우에, PVR 길항제는 또 다른 PVR 활성에 영향을 미치지 않으면서 하나의 PVR 활성에 길항작용할 수 있는 것으로 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다. 예를 들어, 본원의 특정 방법에 사용하기 위한 바람직한 PVR 길항제는 PVR-CD96 및/또는 PVR-CD226 상호작용에 영향을 미치지 않으면서 TIGIT 상호작용에 반응하여 PVR 활성에 길항작용하는 PVR 길항제이다.
면역 기능장애와 관련하여 용어 "기능장애"는 항원 자극에 대한 감소된 면역 반응성의 상태를 지칭한다. 이 용어는 항원 인식이 일어날 수 있지만 그로 인한 면역 반응이 감염 또는 종양 성장을 제어하는데 효과적이지 않은 소진 및/또는 무반응 둘 다의 공통 요소를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "기능장애성"은 또한 항원 인식에 대한 불응성 또는 비반응성, 구체적으로 항원 인식을 하류 T-세포 이펙터 기능, 예컨대 증식, 시토카인 생산 (예를 들어, IL-2) 및/또는 표적 세포 사멸로 번역하는 능력의 손상을 포함한다.
용어 "무반응"은 T-세포 수용체를 통해 전달된 불완전한 또는 불충분한 신호로부터 발생한 항원 자극에 대한 비반응성의 상태 (예를 들어, ras-활성화의 부재 하에 세포내 Ca+2를 증가시킴)를 지칭한다. T 세포 무반응은 또한 공동-자극의 부재 하에 항원으로의 자극 시에 발생할 수 있으며, 이는 세포가 심지어 공동자극과 관련해서도 항원에 의한 후속 활성화에 불응성이 되게 한다. 비반응성 상태는 종종 인터류킨-2의 존재에 의해 무효화될 수 있다. 무반응성 T-세포는 클론 확장을 거치고/거나 이펙터 기능을 획득하지 않는다.
용어 "소진"은 많은 만성 감염 및 암 동안 일어난 지속적인 TCR 신호전달로부터 유발된 T 세포 기능장애 상태로서의 T 세포 소진을 지칭한다. 이는 불완전 또는 결핍 신호전달을 통해서는 유발되지 않지만, 지속적인 신호전달로부터 유발되는 것으로 무반응과 구별된다. 이는 불량한 이펙터 기능, 억제 수용체의 지속적인 발현, 및 기능적 이펙터 또는 기억 T 세포의 그것과 별개의 전사 상태로 정의된다. 소진은 감염 및 종양의 최적의 제어를 막는다. 소진은 외인성 음성 조절 경로 (예를 들어, 면역조절 시토카인) 뿐만 아니라 세포 내인성 음성 조절 (공동자극) 경로 (PD-1, B7-H3, B7-H4 등) 둘 다로부터 발생할 수 있다.
"T-세포 기능을 증진시키는 것"은 T-세포가 지속적인 또는 증폭된 생물학적 기능을 갖도록 유도, 유발 또는 자극하는 것, 또는 소진된 또는 불활성 T-세포를 재생 또는 재활성화시키는 것을 의미한다. T-세포 기능을 증진시키는 것의 예는 개입 전의 수준에 비해 CD8+ T-세포로부터의 γ-인터페론의 증가된 분비, 증가된 증식, 증가된 항원 반응성 (예를 들어, 바이러스, 병원체 또는 종양 클리어런스)을 포함한다. 한 실시양태에서, 증진 수준은 적어도 50%, 대안적으로 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 120%, 150%, 200%이다. 이러한 증진을 측정하는 방식은 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
"T 세포 기능장애성 장애"는 항원 자극에 대한 감소된 반응성을 특징으로 하는 T-세포의 장애 또는 상태이다. 특정한 실시양태에서, T-세포 기능장애성 장애는 PD-1을 통한 부적절한 증가된 신호전달과 특이적으로 연관된 장애이다. 또 다른 실시양태에서, T-세포 기능장애성 장애는 T 세포가 무반응이거나, 또는 시토카인을 분비하거나, 증식하거나 또는 세포용해 활성을 실행하는 것에 대해 감소된 능력을 갖는 것이다. 구체적 측면에서, 감소된 반응성은 면역원을 발현하는 병원체 또는 종양의 비효과적 제어를 야기한다. T-세포 기능장애를 특징으로 하는 T 세포 기능장애성 장애의 예는 미해결 급성 감염, 만성 감염 및 종양 면역을 포함한다.
"종양 면역"은 종양이 면역 인식 및 클리어런스를 회피하는 과정을 지칭한다. 이에 따라, 치료 개념으로서 종양 면역은 이러한 회피가 감쇠되는 경우에 "치료"되고, 종양은 면역계에 의해 인식되고 공격받는다. 종양 인식의 예는 종양 결합, 종양 수축 및 종양 클리어런스를 포함한다.
"면역원성"은 면역 반응을 유발하는 특정한 물질의 능력을 지칭한다. 종양은 면역원성이고, 종양 면역원성을 증진시키는 것은 면역 반응에 의한 종양 세포의 클리어런스를 돕는다. 종양 면역원성을 증진시키는 것의 예는 PD-1 축 결합 길항제 (예를 들어, 항-PD-L1 항체 및 TIGIT 억제제 (예를 들어, 항-TIGIT 항체))에 의한 처리를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"지속적인 반응"은 치료 중단 후에 종양 성장 감소에 대한 지속적인 효과를 지칭한다. 예를 들어, 종양 크기는 투여 단계 초기의 크기와 비교하여 동일하거나 더 작게 유지될 수 있다. 일부 실시양태에서, 지속적인 반응은 적어도 치료 지속기간과 동일한 지속기간, 치료 지속기간의 적어도 1.5X, 2.0X, 2.5X 또는 3.0X 길이의 지속기간을 갖는다.
용어 "항체"는 모노클로날 항체 (이뮤노글로불린 Fc 영역을 갖는 전장 항체 포함), 폴리에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체, 디아바디 및 단일-쇄 분자, 뿐만 아니라 항체 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2, 및 Fv)을 포함한다. 용어 "이뮤노글로불린" (Ig)은 본원에서 "항체"와 상호교환가능하게 사용된다.
기본 4-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄 (L) 및 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된 이종사량체 당단백질이다. IgM 항체는 J 쇄로 불리는 추가의 폴리펩티드와 함께 5개의 기본 이종사량체 단위로 이루어지고, 10개의 항원 결합 부위를 함유하는 한편, IgA 항체는 중합되어 J 쇄와 조합된 다가 어셈블리를 형성할 수 있는 2-5개의 기본 4-쇄 단위를 포함한다. IgG의 경우에, 4-쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 쇄는 1개의 공유 디술피드 결합에 의해 H 쇄에 연결되지만, 2개의 H 쇄는 H 쇄 이소형에 따라 1개 이상의 디술피드 결합에 의해 서로 연결된다. 또한, 각각의 H 및 L 쇄는 일정한 간격을 두고 이격된 쇄내 디술피드 가교를 갖는다. 각각의 H 쇄는 N-말단에 가변 도메인 (VH)을 갖고, 이어서 α 및 γ 쇄 각각의 경우에는 3개의 불변 도메인 (CH), μ 및 ε 이소형의 경우에는 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 쇄는 N-말단에서 가변 도메인 (VL)을 갖고, 이어서 그의 다른 말단에서 불변 도메인을 갖는다. VL은 VH와 정렬되고, CL은 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)과 정렬된다. 특정한 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이의 인터페이스를 형성하는 것으로 여겨진다. VH 및 VL의 쌍형성은 함께 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 상이한 부류의 항체의 구조 및 특성에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw (eds), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6]을 참조한다. 임의의 척추동물 종으로부터의 L 쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파 및 람다로 불리는 2종의 명백하게 구분되는 유형 중 1종에 배정될 수 있다. 이뮤노글로불린은 그의 중쇄의 불변 도메인 (CH)의 아미노산 서열에 따라 상이한 부류 또는 이소형으로 배정될 수 있다. 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 지정된 중쇄를 갖는 5종의 부류의 이뮤노글로불린: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재한다. γ 및 α 부류는 CH 서열 및 기능에서의 비교적 부차적인 차이에 기초하여 하위부류로 추가로 나뉘며, 예를 들어 인간은 하기 하위부류: IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2를 발현한다.
항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 "VH" 및 "VL"로 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 (동일한 부류의 다른 항체에 비해) 항체의 가장 가변적인 부분이고, 항원 결합 부위를 함유한다.
용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 절편이 서열에서 항체마다 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 도메인은 항원 결합을 매개하고, 그의 특정한 항원에 대한 특정한 항체의 특이성을 정의한다. 그러나, 가변성은 가변 도메인의 전체 범위에 걸쳐 균등하게 분포되지 않는다. 대신에, 이는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다에서 초가변 영역 (HVR)으로 불리는 3개의 절편에 집중되어 있다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역 (FR)으로 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은, 주로 베타-시트 배위를 채택하여 3개의 HVR에 의해 연결되어 있는 4개의 FR 영역을 포함하며, 이는 베타-시트 구조를 연결하고 일부 경우에는 그의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 각각의 쇄 내의 HVR은 FR 영역에 의해 근접하게 함께 유지되고, 다른 쇄로부터의 HVR과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다 (문헌 [Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)] 참조). 불변 도메인은 항체의 항원에 대한 결합에 직접 수반되지 않지만, 다양한 이펙터 기능, 예컨대 항체-의존성 세포 독성에서 항체의 참여를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 집단을 구성하는 개개의 항체는 소량 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이 및/또는 번역후 변형 (예를 들어, 이성질체화, 아미드화)을 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 부위에 대해 지시된다. 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대해 지시되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다. 그의 특이성에 더하여, 모노클로날 항체는 그것이 하이브리도마 배양에 의해 합성되고, 다른 이뮤노글로불린에 의해 오염되지 않는다는 점에서 유리하다. 수식어 "모노클로날"은 항체가 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득되었다는 특징을 나타내고, 이는 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산이 필요하다는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 예를 들어 하이브리도마 방법 (예를 들어, 문헌 [Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)]), 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조), 파지-디스플레이 기술 (예를 들어, 문헌 [Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)] 참조), 및 일부 또는 모든 인간 이뮤노글로불린 유전자좌 또는 인간 이뮤노글로불린 서열을 코딩하는 유전자를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생산하는 기술 (예를 들어, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993)]; 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016; 문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)] 참조)을 비롯한 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
용어 "네이키드 항체"는 세포독성 모이어티 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다.
용어 "전장 항체", "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 항체 단편과 대조적으로, 그의 실질적으로 무손상인 형태의 항체를 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다. 구체적으로, 전체 항체는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 것을 포함한다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 일부 경우에, 무손상 항체는 하나 이상의 이펙터 기능을 가질 수 있다.
"항체 단편"은 무손상 항체의 부분, 바람직하게는 무손상 항체의 항원 결합 및/또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체 (미국 특허 5,641,870, 실시예 2; 문헌 [Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062] 참조); 단일-쇄 항체 분자, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다. 항체의 파파인 소화는 "Fab" 단편으로 불리는 2개의 동일한 항원-결합 단편, 및 나머지 "Fc" 단편 (이 명칭은 용이하게 결정화되는 능력을 반영함)을 생산한다. Fab 단편은 H 쇄의 가변 영역 도메인 (VH) 및 1개의 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)과 함께 전체 L 쇄로 이루어진다. 각각의 Fab 단편은 항원 결합에 대해 1가이고, 즉 단일 항원-결합 부위를 갖는다. 항체의 펩신 처리는 상이한 항원-결합 활성을 갖는 2개의 디술피드 연결된 Fab 단편에 대략 상응하는 단일의 대형 F(ab')2 단편을 생성시키고, 여전히 항원에 가교될 수 있다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 1개 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 도메인의 카르복시 말단에서 수개의 추가의 잔기를 갖는다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 본원에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올 기를 보유하는 Fab'에 대한 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 본래 이들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
Fc 단편은 디술피드에 의해 함께 유지되어 있는 H 쇄 둘 다의 카르복시-말단 부분을 포함한다. 항체의 이펙터 기능은 Fc 영역 내의 서열에 의해 결정되고, 이 영역은 또한 특정 유형의 세포 상에서 발견되는 Fc 수용체 (FcR)에 의해 인식된다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 -결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 영역 도메인이 단단하게 비공유 회합된 이량체로 이루어진다. 이들 2개 도메인이 폴딩되어 6개의 초가변 루프 (H 및 L 쇄로부터 각각 3개의 루프)가 형성되며, 이는 항원 결합을 위한 아미노산 잔기를 제공하고 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 심지어 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)은 전체 결합 부위보다 친화도가 낮긴 하지만 항원을 인식하고 그에 결합하는 능력을 갖는다.
"sFv" 또는 "scFv"로도 약칭되는 "단일-쇄 Fv"는 단일 폴리펩티드 쇄에 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩티드는 sFv가 항원 결합을 위한 목적하는 구조를 형성할 수 있도록 하는, VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. sFv의 검토를 위해, 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.
본 발명의 항체의 "기능적 단편"은 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역, 또는 변형된 FcR 결합 능력을 보유하거나 갖는 항체의 Fc 영역을 포함하는 무손상 항체의 부분을 포함한다. 항체 단편의 예는 선형 항체, 단일-쇄 항체 분자, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
용어 "디아바디"는 V 도메인의 쇄내 쌍형성이 아닌 쇄간 쌍형성을 달성하여 그에 의해 2가 단편, 즉 2개의 항원-결합 부위를 갖는 단편을 생성하도록 VH와 VL 도메인 사이에 짧은 링커 (약 5-10개 잔기)를 갖는 sFv 단편 (상기 단락 참조)을 구축하는 것에 의해 제조된 소형 항체 단편을 지칭한다. 이중특이적 디아바디는 2개 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩티드 쇄에 존재하는 2개의 "교차" sFv 단편의 이종이량체이다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]에 보다 상세하게 기재되어 있다.
본원에서 모노클로날 항체는 구체적으로 중쇄 및/또는 경쇄 부분이 특정한 종으로부터 유래되거나 특정한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체 (이뮤노글로불린), 뿐만 아니라 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 포함한다 (미국 특허 번호 4,816,567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). 본원에서 관심 키메라 항체는 프리마티즈드(PRIMATIZED)® 항체를 포함하며, 여기서 항체의 항원-결합 영역은 예를 들어 마카크 원숭이를 관심 항원으로 면역시킴으로써 생산된 항체로부터 유래된다. 본원에 사용된 "인간화 항체"는 "키메라 항체"의 하위세트로 사용된다.
비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 한 실시양태에서, 인간화 항체는 수용자의 HVR (하기 정의됨)로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및/또는 능력을 갖는 비-인간 종 (공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 HVR로부터의 잔기로 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 이뮤노글로불린의 프레임워크 ("FR") 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능, 예컨대 결합 친화도를 추가로 정밀화하기 위해 이루어질 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 이뮤노글로불린 서열의 그것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 서열의 그것에 상응하지만, FR 영역은 항체 성능, 예컨대 결합 친화도, 이성질체화, 면역원성 등을 개선시키는 1개 이상의 개별 FR 잔기 치환을 포함할 수 있다. FR에서 이들 아미노산 치환의 수는 전형적으로 H 쇄에서 6개 이하 및 L 쇄에서 3개 이하이다. 인간화 항체는 임의로 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 그것을 또한 포함할 것이다. 추가의 세부사항에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 문헌 [Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)]; 및 미국 특허 번호 6,982,321 및 7,087,409를 참조한다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생산되고/거나 본원에 개시된 바와 같이 인간 항체를 제조하는 임의의 기술을 사용하여 제조된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 항체이다. 이러한 인간 항체는 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 구체적으로 배제한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리를 비롯한 관련 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]. 또한, 문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)]에 기재된 방법도 인간 모노클로날 항체의 제조에 이용가능하다. 또한 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)]을 참조한다. 인간 항체는, 항원 챌린지에 반응하여 이러한 항체를 생산하도록 변형시켰으나 내인성 유전자좌는 무력화시킨 트랜스제닉 동물, 예를 들어 면역화된 제노마우스에게 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다 (예를 들어, 제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술에 관한 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 참조). 또한, 예를 들어 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관한 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "초가변 영역", "HVR" 또는 "HV"는 서열이 초가변적이고/거나 구조적으로 한정된 루프를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR; VH 내에 3개 (H1, H2, H3) 및 VL 내에 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. 천연 항체에서, H3 및 L3은 6개의 HVR의 대부분의 다양성을 디스플레이하고, 특히 H3은 항체에 정밀한 특이성을 부여하는데 특유의 역할을 하는 것으로 여겨진다. 예를 들어, 문헌 [Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)]을 참조한다. 실제로, 중쇄만으로 이루어진 자연 발생 낙타류 항체는 경쇄의 부재 하에 기능적이고 안정하다. 예를 들어, 문헌 [Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993); Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)]을 참조한다.
다수의 HVR 설명이 사용되고 있고, 본원에 포괄된다. 카바트(Kabat) 상보성 결정 영역 (CDR)은 서열 가변성을 기반으로 하며, 가장 통상적으로 사용된다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). 코티아(Chothia)는 구조적 루프의 위치를 대신 지칭한다 (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). AbM HVR은 카바트 HVR과 코티아 구조적 루프 사이의 절충안을 나타내고, 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접촉" HVR은 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 각각의 이들 HVR로부터의 잔기가 하기 기재된다.
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HVR은 다음과 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2) 및 89-97 또는 89-96 (L3), 및 VH에서 26-35 (H1), 50-65 또는 49-65 (H2) 및 93-102, 94-102 또는 95-102 (H3). 가변 도메인 잔기는 각각의 이들 정의에 대해 [Kabat et al., 상기 문헌]에 따라 넘버링된다.
표현 "카바트에서와 같은 가변-도메인 잔기-넘버링" 또는 "카바트에서와 같은 아미노산-위치 넘버링" 및 그의 변형은 [Kabat et al., 상기 문헌]에서 항체 편집의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 그 내로의 삽입에 상응하는 보다 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 다음에 단일 아미노산 삽입 (카바트에 따른 잔기 52a), 및 중쇄 FR 잔기 82 다음에 삽입된 잔기 (예를 들어, 카바트에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카바트 넘버링은 항체 서열을 "표준" 카바트 넘버링된 서열과 상동성 영역에서 정렬함으로써 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 바와 같은 HVR 잔기 이외의 가변-도메인 잔기이다.
"인간 컨센서스 프레임워크" 또는 "수용자 인간 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택시에 가장 통상적으로 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위군으로부터 이루어진다. 일반적으로, 서열의 하위군은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에서와 같은 하위군이다. 그 예는, VL의 경우에 하위군이 [Kabat et al., 상기 문헌]에서와 같은 하위군 카파 I, 카파 II, 카파 III 또는 카파 IV일 수 있는 것을 포함한다. 추가로, VH의 경우에 하위군은 [Kabat et al., 상기 문헌]에서와 같은 하위군 I, 하위군 II 또는 하위군 III일 수 있다. 대안적으로, 인간 컨센서스 프레임워크는 공여자 프레임워크 서열을 다양한 인간 프레임워크 서열의 집합과 정렬하여 인간 프레임워크 잔기를 공여자 프레임워크에 대한 그의 상동성에 기초하여 선택하는 경우에서와 같이 상기 특정한 잔기로부터 유래될 수 있다. 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크"로부터 유래된" 수용자 인간 프레임워크는 그의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 이미 존재하는 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이미 존재하는 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하 또는 2개 이하이다.
"VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크"는 [Kabat et al., 상기 문헌]의 가변 중쇄 하위군 III 내의 아미노산 서열로부터 수득된 컨센서스 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크 아미노산 서열은 하기 서열 각각의 적어도 일부 또는 모두를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (HC-FR1)(서열 25), WVRQAPGKGLEWV (HC-FR2), (서열 26), RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (HC-FR3, 서열 27), WGQGTLVTVSA (HC-FR4), (서열 28).
"VL 카파 I 컨센서스 프레임워크"는 [Kabat et al., 상기 문헌]의 가변 경쇄 카파 하위군 I 내의 아미노산 서열로부터 수득된 컨센서스 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, VH 하위군 I 컨센서스 프레임워크 아미노산 서열은 하기 서열 각각의 적어도 일부 또는 모두를 포함한다: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (LC-FR1) (서열 29), WYQQKPGKAPKLLIY (LC-FR2) (서열 30), GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (LC-FR3)(서열 31), FGQGTKVEIKR (LC-FR4)(서열 32).
예를 들어 Fc 영역의 명시된 위치에서의 "아미노산 변형"은 명시된 잔기의 치환 또는 결실, 또는 명시된 잔기에 인접한 적어도 1개의 아미노산 잔기의 삽입을 지칭한다. 명시된 잔기에 "인접한" 삽입은 그의 1 내지 2개의 잔기 내의 삽입을 의미한다. 삽입은 명시된 잔기에 대해 N-말단 또는 C-말단일 수 있다. 본원에서 바람직한 아미노산 변형은 치환이다.
"친화도-성숙" 항체는 변경(들)을 보유하지 않는 모 항체와 비교하여 항원에 대한 항체의 친화도에서 개선을 생성하는, 그의 하나 이상의 HVR에 하나 이상의 변경을 갖는 항체이다. 한 실시양태에서, 친화도-성숙 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰의 친화도를 갖는다. 친화도-성숙 항체는 관련 기술분야에 공지된 절차에 의해 생산된다. 예를 들어, 문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)]은 VH- 및 VL-도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기재한다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발은 예를 들어 문헌 [Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); 및 Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)]에 기재되어 있다.
본원에 사용된 용어 "에 특이적으로 결합한다" 또는 "에 특이적인"은 측정가능하고 재현가능한 상호작용, 예컨대 생물학적 분자를 포함하는 이종 분자 집단의 존재 하에 표적의 존재를 결정하는 표적과 항체 사이의 결합을 지칭한다. 예를 들어, 표적 (에피토프일 수 있음)에 특이적으로 결합하는 항체는 항체가 다른 표적에 결합하는 것보다 더 큰 친화도, 결합력으로, 보다 용이하게, 및/또는 더 긴 지속기간으로 이러한 표적에 결합하는 항체이다. 한 실시양태에서, 항체의 비관련 표적에 대한 결합 정도는, 예를 들어 방사선면역검정 (RIA)에 의한 측정 시, 항체의 표적에 대한 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시양태에서, 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, 또는 ≤ 0.1 nM의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항체는 상이한 종으로부터의 단백질 사이에 보존된 단백질 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 특이적 결합은 배타적 결합을 포함할 수 있지만, 배타적 결합이 요구되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "이뮤노어드헤신"은 이종 단백질 ("어드헤신")의 결합 특이성을 이뮤노글로불린 불변 도메인의 이펙터 기능과 조합한 항체-유사 분자를 지정한다. 구조적으로, 이뮤노어드헤신은 항체의 항원 인식 및 결합 부위가 다른 (즉, "이종") 목적하는 결합 특이성을 갖는 아미노산 서열 및 이뮤노글로불린 불변 도메인 서열의 융합체를 포함한다. 이뮤노어드헤신 분자의 어드헤신 부분은 전형적으로 적어도 수용체 또는 리간드의 결합 부위를 포함하는 인접 아미노산 서열이다. 이뮤노어드헤신 내의 이뮤노글로불린 불변 도메인 서열은 임의의 이뮤노글로불린, 예컨대 IgG-1, IgG-2 (IgG2A 및 IgG2B 포함), IgG-3 또는 IgG-4 하위유형, IgA (IgA-1 및 IgA-2 포함), IgE, IgD 또는 IgM으로부터 수득될 수 있다. Ig 융합체는 바람직하게는 Ig 분자 내의 적어도 1개의 가변 영역 대신 본원에 기재된 폴리펩티드 또는 항체 도메인의 치환을 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 이뮤노글로불린 융합체는 IgG1분자의 힌지, CH2 및 CH3, 또는 힌지, CH1, CH2 및 CH3 영역을 포함한다. 이뮤노글로불린 융합체의 생산에 대해, 또한 1995년 6월 27일에 허여된 미국 특허 번호 5,428,130을 참조한다. 예를 들어, 본원의 조합 요법에 유용한 제2 의약으로서 유용한 이뮤노어드헤신은 이뮤노글로불린 서열의 불변 도메인에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분 또는 PD-1의 세포외 또는 PD-L1 또는 PD-L2 결합 부분을 포함하는 폴리펩티드, 예컨대 각각 PD-L1 ECD - Fc, PD-L2 ECD - Fc 및 PD-1 ECD - Fc를 포함한다. 세포 표면 수용체의 Ig Fc 및 ECD의 이뮤노어드헤신 조합은 때때로 가용성 수용체로 불린다.
"융합 단백질" 및 "융합 폴리펩티드"는 함께 공유 연결된 2개의 부분을 갖는 폴리펩티드를 지칭하며, 여기서 각각의 부분은 상이한 특성을 갖는 폴리펩티드이다. 특성은 생물학적 특성, 예컨대 시험관내 또는 생체내 활성일 수 있다. 또한, 특성은 간단한 화학적 또는 물리적 특성, 예컨대 표적 분자에 대한 결합, 반응의 촉매작용 등일 수 있다. 2개의 부분은 단일 펩티드 결합에 의해 또는 펩티드 링커를 통해 직접 연결될 수 있지만 서로 리딩 프레임 내에 있다.
"PD-1 올리고펩티드", "PD-L1 올리고펩티드" 또는 "PD-L2 올리고펩티드"는 본원에 기재된 바와 같이, 각각 수용체, 리간드 또는 신호전달 성분을 포함하는, 각각 PD-1, PD-L1 또는 PD-L2 음성 공동자극 폴리펩티드에 바람직하게는 특이적으로 결합하는 올리고펩티드이다. 이러한 올리고펩티드는 공지된 올리고펩티드 합성 방법론을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있거나, 또는 재조합 기술을 사용하여 제조 및 정제될 수 있다. 이러한 올리고펩티드는 통상적으로 적어도 약 5개 아미노산 길이이고, 대안적으로 적어도 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100개 아미노산 길이 또는 그 초과이다. 이러한 올리고펩티드는 널리 공지된 기술을 사용하여 확인할 수 잇다. 이와 관련하여, 폴리펩티드 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고펩티드에 대해 올리고펩티드 라이브러리를 스크리닝하는 기술이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있음을 주목한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,556,762, 5,750,373, 4,708,871, 4,833,092, 5,223,409, 5,403,484, 5,571,689, 5,663,143; PCT 공개 번호 WO 84/03506 및 WO84/03564; 문헌 [Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984); Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985); Geysen et al., in Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986); Geysen et al., J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987); Schoofs et al., J. Immunol., 140:611-616 (1988), Cwirla, S. E. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378 (1990); Lowman, H.B. et al. Biochemistry, 30:10832 (1991); Clackson, T. et al. Nature, 352: 624 (1991); Marks, J. D. et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991); Kang, A.S. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363 (1991), 및 Smith, G. P., Current Opin. Biotechnol., 2:668 (1991)] 참조).
"차단" 항체 또는 "길항제" 항체는 그것이 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 것이다. 일부 실시양태에서, 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 억제한다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 기능장애성 상태로부터 항원 자극까지 T-세포에 의한 기능적 반응 (예를 들어, 증식, 시토카인 생산, 표적 세포 사멸)이 회복되도록 PD-1을 통한 신호전달을 차단한다.
"효능제" 또는 활성화 항체는 그것이 결합하는 항원에 의한 신호전달을 증진시키거나 개시시키는 것이다. 일부 실시양태에서, 효능제 항체는 천연 리간드의 부재 하에 신호전달을 유발하거나 활성화시킨다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 천연-서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 비롯한, 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 위치 Cys226에서의 아미노산 잔기로부터 또는 Pro230으로부터 그의 카르복실-말단까지의 스트레치인 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 리신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들어 항체의 생산 또는 정제 동안 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산의 재조합적 조작에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 전혀 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 존재하는 항체와 존재하지 않는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. 본 발명의 항체에 사용하기에 적합한 천연-서열 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 (IgG2A, IgG2B), IgG3 및 IgG4를 포함한다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 또한, 바람직한 FcR은 IgG 항체에 결합하는 것이고 (감마 수용체), FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위부류의 수용체 (이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태 포함)를 포함하며, FcγRII 수용체는 주로 그의 세포질 도메인에서 상이한, 유사한 아미노산 서열을 갖는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함한다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다. (문헌 [M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)] 참조). FcR은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)]에서 검토된다. 향후 확인될 것을 비롯한 다른 FcR도 본원에서 용어 "FcR"에 포괄된다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 또한 모체 IgG의 태아로의 전달을 담당하는 네오나탈 수용체, FcRn을 포함한다. 문헌 [Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)]. FcRn에 대한 결합을 측정하는 방법이 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Ghetie and Ward, Immunol. Today 18: (12): 592-8 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology 15 (7): 637-40 (1997); Hinton et al., J. Biol. Chem. 279 (8): 6213-6 (2004)]; WO 2004/92219 (Hinton et al.) 참조). 생체내 FcRn에 대한 결합 및 인간 FcRn 고친화도 결합 폴리펩티드의 혈청 반감기는, 예를 들어 인간 FcRn을 발현하는 트랜스제닉 마우스 또는 형질감염된 인간 세포주에서, 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드가 투여된 영장류에서 검정될 수 있다. WO 2004/42072 (Presta)는 FcR에 대한 결합이 개선 또는 감소된 항체 변이체를 기재한다. 또한, 예를 들어 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)]을 참조한다.
본원에 사용된 어구 "실질적으로 감소된" 또는 "실질적으로 상이한"은 통상의 기술자가 2개의 수치 값 (일반적으로 하나는 분자와 연관되고, 다른 것은 참조/비교 분자와 연관됨)에 의해 측정된 생물학적 특성의 맥락 내에서 2개의 값 사이의 차이를 통계적 유의성을 갖는 것으로 간주하도록 하는, 상기 값 (예를 들어, Kd 값) 사이의 충분히 높은 정도의 차이를 나타낸다. 상기 2개의 값 사이의 차이는 참조/비교 분자에 대한 값의 함수로서 예를 들어 약 10% 초과, 약 20% 초과, 약 30% 초과, 약 40% 초과 및/또는 약 50% 초과이다.
본원에 사용된 용어 "실질적으로 유사한" 또는 "실질적으로 동일한"은 통상의 기술자가 2개의 수치 값 (예를 들어, 하나는 본 발명의 항체와 연관되고, 다른 것은 참조/비교 항체와 연관됨)에 의해 측정된 생물학적 특성의 맥락 내에서 2개의 값 사이의 차이를 생물학적 및/또는 통계적 유의성이 거의 또는 전혀 없는 것으로 간주하도록 하는, 상기 값 (예를 들어, Kd 값) 사이의 충분히 높은 정도의 유사성을 나타낸다. 상기 2개의 값 사이의 차이는 참조/비교 값의 함수로서 예를 들어 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 및/또는 약 10% 미만이다.
본원에 사용된 "담체"는 사용되는 투여량 및 농도에서 그에 노출되는 세포 또는 포유동물에 비독성인 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제를 포함한다. 종종, 생리학상 허용되는 담체는 수성 pH 완충 용액이다. 생리학상 허용되는 담체의 예는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 아스코르브산을 비롯한 항산화제; 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당 알콜, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)™, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 및 플루로닉스(PLURONICS)™를 포함한다.
"패키지 삽입물"은 적응증, 용법, 투여량, 투여, 금기, 포장된 제품과 조합되는 다른 의약에 대한 정보, 및/또는 이러한 의약의 사용에 대한 경고 등을 함유하는, 의약의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 지침서를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "치료"는 임상 병리상태의 과정 동안 치료되는 개체 또는 세포의 자연 과정을 변경시키도록 설계된 임상 개입을 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 호전 또는 완화, 및 경감 또는 개선된 예후를 포함한다. 예를 들어, 개체는 암성 세포의 증식의 감소 (또는 파괴), 질환으로부터 발생하는 증상의 감소, 질환을 앓고 있는 개체의 삶의 질의 증가, 질환을 치료하는데 요구되는 다른 의약의 용량의 감소, 질환 진행의 지연 및/또는 개체의 생존 연장을 포함하나 이에 제한되지는 않는 암과 연관된 하나 이상의 증상이 완화되거나 제거되는 경우에 성공적으로 "치료된다".
본원에 사용된 "질환 진행의 지연"은 질환 (예컨대 암)의 발생이 연기, 방해, 지체, 지연, 안정화 및/또는 연장되는 것을 의미한다. 이러한 지연은 치료할 질환 및/또는 개체의 병력에 따라 다양한 기간일 수 있다. 통상의 기술자에게 명백한 바와 같이, 충분한 또는 유의한 지연은 사실상 개체에서 질환이 발생하지 않는 예방을 포괄할 수 있다. 예를 들어, 말기 암, 예컨대 전이의 발생이 지연될 수 있다.
본원에 사용된 "암 재발의 감소 또는 억제"는 종양 또는 암 재발 또는 종양 또는 암 진행의 감소 또는 억제를 의미한다.
본원에 사용된 "암" 및 "암성"은 전형적으로 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 상태를 지칭하거나 기재한다. 이러한 정의에는 양성 및 악성 암 뿐만 아니라 휴면 종양 또는 미세전이가 포함된다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평 세포암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종, 및 폐의 편평세포 암종 포함), 복막암, 간세포성암, 위 또는 위암 (위장암 포함), 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장 또는 신암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종 및 다양한 유형의 두경부암, 뿐만 아니라 B-세포 림프종 (저등급/여포성 비-호지킨 림프종 (NHL); 소림프구성 (SL) NHL; 중등급/여포성 NHL; 중등급 미만성 NHL; 고등급 면역모세포성 NHL; 고등급 림프모구성 NHL; 고등급 소 비-분할 세포 NHL; 거대 종양 NHL; 외투 세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 포함); 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 급성 림프모구성 백혈병 (ALL); 모발상 세포 백혈병; 만성 골수모구성 백혈병; 및 이식후 림프증식성 장애 (PTLD), 뿐만 아니라 모반증과 연관된 비정상적 혈관 증식, 부종 (예컨대 뇌 종양과 연관됨), 및 메이그스 증후군을 포함한다.
본원에 사용된 "전이"는 암이 그의 원발성 부위로부터 신체 내 다른 위치로 확산된 것을 의미한다. 암 세포는 원발성 종양으로부터 분리되어, 림프 및 혈관 내로 침투하고, 혈류를 통해 순환하여 신체 내의 다른 정상 조직의 원위 병소에서 성장 (전이)할 수 있다. 전이는 국부 또는 원위일 수 있다. 전이는 원발성 종양으로부터 우발적인 종양 세포 분리, 혈류를 통한 이동, 및 원위 부위에서의 정지의 순차적 과정이다. 새로운 부위에서 세포는 혈액 공급을 확립하고 성장하여 생명을 위협하는 종괴를 형성할 수 있다. 종양 세포 내에서의 자극 및 억제 분자 경로 둘 다가 이러한 거동을 조절하고, 종양 세포와 원위 부위의 숙주 세포 사이의 상호작용이 또한 중요하다.
"유효량"은 특정한 장애의 측정가능한 개선 또는 예방을 생성하는데 요구되는 적어도 최소한의 농도이다. 유효량은 본원에서 환자의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 도출하는 항체의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한 치료상 유익한 효과가 치료의 임의의 독성 또는 유해한 효과를 능가하는 것이다. 예방적 사용의 경우에, 유익한 또는 목적하는 결과는 위험의 제거 또는 감소, 중증도의 완화, 또는 질환의 발생 동안 나타나는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 거동적 증상, 그의 합병증 및 중간 병리학적 표현형을 비롯한 질환의 발생 지연과 같은 결과를 포함한다. 치료적 사용의 경우에, 유익한 또는 목적하는 결과는 질환으로부터 발생하는 하나 이상의 증상의 감소, 질환을 앓고 있는 개체의 삶의 질의 증가, 질환을 치료하는데 요구되는 다른 의약의 용량의 감소, 예컨대 표적화를 통한 또 다른 의약의 효과의 증진, 질환의 진행의 지연 및/또는 생존 연장과 같은 임상 결과를 포함한다. 암 또는 종양의 경우에, 유효량의 약물은 암 세포의 수를 감소시키고/거나; 종양 크기를 감소시키고/거나; 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 늦추거나 바람직하게는 정지시킴); 종양 전이를 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 늦추거나 바람직하게는 정지시킴); 종양 성장을 어느 정도 억제하고/거나; 장애와 연관된 증상 중 하나 이상을 어느 정도 경감시키는 효과를 가질 수 있다. 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적상, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효량은 직접 또는 간접적으로 예방적 또는 치유적 치료를 달성하는데 충분한 양이다. 임상 환경에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물 또는 제약 조성물과 함께 달성될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 따라서, 1종 이상의 치료제를 투여하는 것과 관련하여 "유효량"이 고려될 수 있고, 1종 이상의 다른 작용제와 함께 목적하는 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우에 단일 작용제가 유효량으로 제공된 것으로 간주될 수 있다.
본원에 사용된 "와 함께"는 한 치료 양식에 더하여 또 다른 치료 양식의 투여를 지칭한다. 따라서, "와 함께"는 한 치료 양식을 개체에게 다른 치료 양식을 투여하기 전에, 그 동안 또는 그 후에 투여하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 "대상체"는 인간 또는 비-인간 포유동물, 예컨대 소, 말, 개, 양 또는 고양이를 포함하나 이에 제한되지는 않는 포유동물을 의미한다. 바람직하게는, 대상체는 인간이다. 본원에서 환자가 또한 대상체이다.
본원에 사용된 "완전 반응" 또는 "CR"은 모든 표적 병변의 소멸을 지칭하고; "부분 반응" 또는 "PR"은 기준선 최장 직경의 합 (SLD)을 참조하여 표적 병변의 SLD에서의 적어도 30% 감소를 지칭하고; "안정 질환" 또는 "SD"는 치료가 시작된 이후의 최소 SLD를 참조하여 PR을 만족시키는 표적 병변의 충분한 수축도 아니고 PD를 만족시키는 충분한 증가도 아닌 상태를 지칭한다.
본원에 사용된 "진행성 질환" 또는 "PD"는 치료가 시작된 이후에 기록된 최소 SLD를 참조하여 표적 병변의 SLD에서의 적어도 20% 증가 또는 하나 이상의 새로운 병변의 존재를 지칭한다.
본원에 사용된 "무진행 생존" (PFS)은 치료 동안 및 후에 치료될 질환 (예를 들어, 암)이 악화되지 않은 기간을 지칭한다. 무진행 생존은 환자가 완전 반응 또는 부분 반응을 경험한 시간의 양, 뿐만 아니라 환자가 안정 질환을 경험한 시간의 양을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "전체 반응률" (ORR)은 완전 반응 (CR)률 및 부분 반응 (PR)률의 합을 지칭한다.
본원에 사용된 "전체 생존"은 특정한 지속 기간 후에 살아있을 가능성이 있는 군 내의 개체의 백분율을 지칭한다.
"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드 (시톡산(CYTOXAN)®); 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민을 비롯한 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라히드로칸나비놀 (드로나비놀, 마리놀(MARINOL)®); 베타-라파콘; 라파콜; 콜키신; 베툴린산; 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 (하이캄틴(HYCAMTIN)®), CPT-11 (이리노테칸, 캄프토사르(CAMPTOSAR)®), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄프토테신 포함); 브리오스타틴; 페메트렉세드; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; TLK-286; CDP323, 경구 알파-4 인테그린 억제제; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (예를 들어, 문헌 [Nicolaou et al., Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)] 참조); 디네미신 A를 비롯한 디네미신; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (아드리아마이신(ADRIAMYCIN)®, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포솜 주사 (독실(DOXIL)®) 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물, 예컨대 메토트렉세이트, 겜시타빈 (겜자르(GEMZAR)®), 테가푸르 (유프토랄(UFTORAL)®), 카페시타빈 (젤로다(XELODA)®), 에포틸론 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘과 이마티닙 (2-페닐아미노피리미딘 유도체), 뿐만 아니라 다른 c-키트 억제제; 항부신제, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체 (JHS 내츄럴 프로덕츠(JHS Natural Products), 오레곤주 유진); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신 (엘디신(ELDISINE)®, 필데신(FILDESIN)®); 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)®), 파클리탁셀의 알부민-조작 나노입자 제제 (아브락산(ABRAXANE)™) 및 도세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)®); 클로란부실; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴 (벨반(VELBAN)®); 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴 (온코빈(ONCOVIN)®); 옥살리플라틴; 류코보빈; 비노렐빈 (나벨빈(NAVELBINE)®); 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 중 2종 이상의 조합, 예컨대 시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 조합 요법에 대한 약어인 CHOP, 및 5-FU 및 류코보빈과 조합된 옥살리플라틴 (엘록사틴(ELOXATIN)™)에 의한 치료 요법에 대한 약어인 FOLFOX를 포함한다.
또한, 이러한 정의에는 암의 성장을 촉진할 수 있는 호르몬의 효과를 조절, 감소, 차단 또는 억제하는 작용을 하고, 종종 전신 또는 온몸 치료의 형태인 항호르몬제도 포함된다. 이는 호르몬 그 자체일 수 있다. 예는 예를 들어 타목시펜 (놀바덱스(NOLVADEX)® 타목시펜 포함), 랄록시펜 (에비스타(EVISTA)®), 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜 (파레스톤(FARESTON)®)을 비롯한 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM); 항프로게스테론; 에스트로겐 수용체 하향-조절제 (ERD); 에스트로겐 수용체 길항제, 예컨대 풀베스트란트 (파슬로덱스(FASLODEX)®); 난소를 억제하거나 폐쇄시키는 기능을 하는 작용제, 예를 들어 황체형성 호르몬-방출 호르몬 (LHRH) 효능제, 예컨대 류프롤리드 아세테이트 (루프론(LUPRON)® 및 엘리가드(ELIGARD)®), 고세렐린 아세테이트, 부세렐린 아세테이트 및 트립테렐린; 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드 및 비칼루타미드; 및 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예컨대 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트 (메가세(MEGASE)®), 엑세메스탄 (아로마신(AROMASIN)®), 포르메스타니, 파드로졸, 보로졸 (리비소르(RIVISOR)®), 레트로졸 (페마라(FEMARA)®) 및 아나스트로졸 (아리미덱스(ARIMIDEX)®)를 포함한다. 또한 화학요법제의 이러한 정의는 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트 (예를 들어, 보네포스(BONEFOS)® 또는 오스탁(OSTAC)®), 에티드로네이트 (디드로칼(DIDROCAL)®), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트 (조메타(ZOMETA)®), 알렌드로네이트 (포사맥스(FOSAMAX)®), 파미드로네이트 (아레디아(AREDIA)®), 틸루드로네이트 (스켈리드(SKELID)®) 또는 리세드로네이트 (악토넬(ACTONEL)®); 뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 이상 세포 증식과 관련된 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것, 예컨대 예를 들어, PKC-알파, Raf, H-Ras 및 표피 성장 인자 수용체 (EGF-R); 백신, 예컨대 테라토프(THERATOPE)® 백신 및 유전자 요법 백신, 예를 들어 알로벡틴(ALLOVECTIN)® 백신, 류벡틴(LEUVECTIN)® 백신 및 박시드(VAXID)® 백신; 토포이소머라제 1 억제제 (예를 들어, 루르토테칸(LURTOTECAN)®); 항에스트로겐, 예컨대 풀베스트란트; 키트 억제제, 예컨대 이마티닙 또는 EXEL-0862 (티로신 키나제 억제제); EGFR 억제제, 예컨대 에를로티닙 또는 세툭시맙; 항-VEGF 억제제, 예컨대 베바시주맙; 이리노테칸; rmRH (예를 들어, 아바렐릭스(ABARELIX)®); 라파티닙 및 라파티닙 디토실레이트 (GW572016으로도 공지되어 있는 ErbB-2 및 EGFR 이중 티로신 키나제 소분자 억제제); 17AAG (열 쇼크 단백질 (Hsp) 90 독성물질인 겔다나마이신 유도체) 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "시토카인"은 일반적으로 또 다른 세포에 대해 세포간 매개자로서 작용하거나 또는 단백질을 생산하는 세포에 대해 자가분비 효과를 갖는 한 세포 집단에 의해 방출되는 단백질을 지칭한다. 이러한 시토카인의 예는 림포카인, 모노카인; 인터류킨 ("IL"), 예컨대 프로류킨(PROLEUKIN)® rIL-2를 비롯한 IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17A-F, IL-18 내지 IL-29 (예컨대 IL-23), IL-31; 종양-괴사 인자, 예컨대 TNF-α 또는 TNF-β, TGF-β1-3; 및 백혈병 억제 인자 ("LIF"), 섬모 신경영양 인자 ("CNTF"), CNTF-유사 시토카인 ("CLC"), 카디오트로핀 ("CT") 및 키트 리간드 ("KL")를 비롯한 다른 폴리펩티드 인자를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "케모카인"은 선택적으로 백혈구의 화학주성 및 활성화를 유도하는 능력을 갖는 가용성 인자 (예를 들어, 시토카인)를 지칭한다. 이는 또한 혈관신생, 염증, 상처 치유 및 종양발생의 과정을 촉발한다. 케모카인의 예는 뮤린 각질세포 화학유인물질 (KC)의 인간 상동체인 IL-8을 포함한다.
본원 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥에서 달리 명백하게 드러나지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.
본원에서 값 또는 파라미터에 대해 언급되는 "약"은 값 또는 파라미터 그 자체에 대해 지시된 변화를 포함 (및 기재)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급한 기재는 "X"의 기재를 포함한다.
본원에 사용된 어구 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 예시적인 염은 술페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 니트레이트, 비술페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올레에이트, 탄네이트, 판토테네이트, 비타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄술포네이트 "메실레이트", 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 파모에이트 (즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-히드록시-3-나프토에이트)) 염, 알칼리 금속 (예를 들어, 나트륨 및 칼륨) 염, 알칼리 토금속 (예를 들어, 마그네슘) 염 및 암모늄 염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 제약상 허용되는 염은 또 다른 분자, 예컨대 아세테이트 이온, 숙시네이트 이온 또는 다른 반대 이온의 내포를 수반할 수 있다. 반대 이온은 모 화합물의 전하를 안정시키는 임의의 유기 또는 무기 모이어티일 수 있다. 또한, 제약상 허용되는 염은 그의 구조 내에 1개 초과의 하전된 원자를 가질 수 있다. 다중 하전된 원자가 제약상 허용되는 염의 일부인 경우에는 다중 반대 이온을 가질 수 있다. 따라서, 제약상 허용되는 염은 1개 이상의 하전된 원자 및/또는 1개 이상의 반대 이온을 가질 수 있다.
본 발명의 화합물이 염기인 경우에, 목적하는 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 이용가능한 임의의 적합한 방법, 예를 들어 유리 염기의 무기 산, 예컨대 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 메탄술폰산, 인산 등, 또는 유기 산, 예컨대 아세트산, 말레산, 숙신산, 만델산, 푸마르산, 말론산, 피루브산, 옥살산, 글리콜산, 살리실산, 피라노시딜산, 예컨대 글루쿠론산 또는 갈락투론산, 알파 히드록시산, 예컨대 시트르산 또는 타르타르산, 아미노산, 예컨대 아스파르트산 또는 글루탐산, 방향족 산, 예컨대 벤조산 또는 신남산, 술폰산, 예컨대 p-톨루엔술폰산 또는 에탄술폰산 등에 의한 처리에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물이 산인 경우에, 목적하는 제약상 허용되는 염은 임의의 적합한 방법, 예를 들어 유리 산의 무기 또는 유기 염기, 예컨대 아민 (1급, 2급 또는 3급), 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 등에 의한 처리에 의해 제조될 수 있다. 적합한 염의 예시적인 예는 아미노산, 예컨대 글리신 및 아르기닌, 암모니아, 1급, 2급 및 3급 아민, 및 시클릭 아민, 예컨대 피페리딘, 모르폴린 및 피페라진으로부터 유래된 유기 염, 및 나트륨, 칼슘, 칼륨, 마그네슘, 망가니즈, 철, 구리, 아연, 알루미늄 및 리튬으로부터 유래된 무기 염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
어구 "제약상 허용되는"은 물질 또는 조성물이 제제를 포함하는 다른 성분 및/또는 그것으로 치료되는 포유동물과 화학적으로 및/또는 독성학적으로 상용성이어야 함을 나타낸다.
본원에 기재된 본 발명의 측면 및 변경은 측면 및 변경으로 "이루어지는" 및/또는 "로 본질적으로 이루어지는" 것을 포함하는 것으로 이해된다.
III. 방법
한 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 본원에 개시된 바와 같이, 암 재발 및/또는 암 진행은 제한 없이, 암 전이를 포함한다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 면역 관련 질환은 T 세포 기능장애성 장애와 연관된다. 일부 실시양태에서, 면역 관련 질환은 바이러스 감염이다. 특정 실시양태에서, 바이러스 감염은 만성 바이러스 감염이다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 항원 자극에 대한 감소된 반응성을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 무반응, 또는 시토카인을 분비하거나, 증식하거나 또는 세포용해 활성을 실행하는 것에 대한 감소된 능력을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 소진을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 미해결 급성 감염, 만성 감염 및 종양 면역을 포함한다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 면역 관련 질환은 T 세포 기능장애성 장애와 연관된다. 일부 실시양태에서, 면역 관련 질환은 바이러스 감염이다. 특정 실시양태에서, 바이러스 감염은 만성 바이러스 감염이다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 항원 자극에 대한 감소된 반응성을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 무반응, 또는 시토카인을 분비하거나, 증식하거나 또는 세포용해 활성을 실행하는 것에 대한 감소된 능력을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포 기능장애성 장애는 T 세포 소진을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 관련 질환은 미해결 급성 감염, 만성 감염 및 종양 면역으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여함으로써, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극할 수 있고; CD226과 PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3의 상호작용을 증가 및/또는 자극할 수 있고; PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극할 수 있다. 본원에 사용된 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극할 수 있는 작용제는, 제한 없이 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극하는 작용제를 포함한다. 본원에 사용된 CD226과 PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3의 상호작용을 증가 및/또는 자극할 수 있는 작용제는, 제한 없이 CD226과 PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3의 상호작용을 증가 및/또는 자극하는 작용제를 포함한다. 본원에 사용된 PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극할 수 있는 작용제는, 제한 없이 PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극하는 작용제를 포함한다.
일부 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 그의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로부터 선택된 억제 핵산이다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로부터 선택된 억제 핵산이다.
일부 실시양태에서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체의 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여함으로써, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA VISTA, B7H4, 및 CD96으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3 및 TIM3으로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체의 발현 및/또는 활성을 증가 또는 활성화시키는 작용제를 투여함으로써, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD28, CD27, CD137, HVEM, GITR, MICA, ICOS, NKG2D, 및 2B4로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD28, CD27, CD137, HVEM, 및 GITR로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 OX-40 및 CD27로부터 선택된다.
본 발명의 방법은 암 또는 T 세포 기능장애성 장애의 치료를 위해 종양 면역원성을 증가시키는 것과 같은, 증진된 면역원성을 목적으로 하는 상태를 치료하는데 용도를 발견할 수 있다.
다양한 암이 치료될 수 있거나, 또는 그의 진행이 지연될 수 있다.
일부 실시양태에서, 개체는 비소세포 폐암을 갖는다. 비소세포 폐암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 소세포 폐암을 갖는다. 소세포 폐암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 신세포암을 갖는다. 신세포암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 결장직장암을 갖는다. 결장직장암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 난소암을 갖는다. 난소암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 유방암을 갖는다. 유방암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 췌장암을 갖는다. 췌장암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 위 암종을 갖는다. 위 암종은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 방광암을 갖는다. 방광암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 식도암을 갖는다. 식도암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 중피종을 갖는다. 중피종은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 흑색종을 갖는다. 흑색종은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 두경부암을 갖는다. 두경부암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 갑상선암을 갖는다. 갑상선암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 육종을 갖는다. 육종은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 전립선암을 갖는다. 전립선암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 교모세포종을 갖는다. 교모세포종은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 자궁경부암을 갖는다. 자궁경부암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 흉선 암종을 갖는다. 흉선 암종은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 백혈병을 갖는다. 백혈병은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 림프종을 갖는다. 림프종은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 골수종을 갖는다. 골수종은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 균상 식육종을 갖는다. 균상 식육종은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 메르켈 세포암을 갖는다. 메르켈 세포암은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 혈액 악성종양을 갖는다. 혈액 악성종양은 초기 또는 말기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다.
본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, 개체에서 CD4 및/또는 CD8 T 세포는 조합물의 투여 전에 비해, 증가되거나 증진된 프라이밍, 활성화, 증식, 시토카인 방출 및/또는 세포용해 활성을 갖는다.
본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 T 세포의 수는 조합물의 투여 전에 비해 상승된다. 본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, 활성화된 CD4 및/또는 CD8 T 세포의 수는 조합물의 투여 전에 비해 상승된다.
본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, 활성화된 CD4 및/또는 CD8 T 세포는 조합물의 투여 전에 비해 γ-IFN+ 생산 CD4 및/또는 CD8 T 세포 및/또는 증진된 세포용해 활성을 특징으로 한다.
본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 T 세포는 IFN-γ, TNF-α 및 인터류킨으로 이루어진 군으로부터 선택된 시토카인의 증가된 방출을 나타낸다.
본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 T 세포는 이펙터 기억 T 세포이다. 본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 이펙터 기억 T 세포는 γ-IFN+ 생산 CD4 및/또는 CD8 T 세포 및/또는 증진된 세포용해 활성을 특징으로 한다. 본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, CD4 및/또는 CD8 이펙터 기억 T 세포는 CD44고 CD62L저의 발현을 갖는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, 암은 상승된 수준의 T 세포 침윤을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 추가의 요법을 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 추가의 요법은 방사선 요법, 수술, 화학요법, 유전자 요법, DNA 요법, 바이러스 요법, RNA 요법, 면역요법, 골수 이식, 나노요법, 모노클로날 항체 요법 또는 상기의 조합일 수 있다. 추가의 요법은 보조 또는 신보조 요법의 형태일 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 요법은 부작용 제한 작용제 (예를 들어, 치료의 부작용의 발생 및/또는 중증도를 완화시키기 위해 의도되는 작용제, 예컨대 항-오심제 등)의 투여이다. 일부 실시양태에서, 추가의 요법은 방사선 요법이다. 일부 실시양태에서, 추가의 요법은 수술이다. 일부 실시양태에서, 추가의 요법은 상기 기재된 화학요법제 중 하나 이상일 수 있다.
하기 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 본 발명의 방법에서 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 표적 (예를 들어, PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA, VISTA, B7H4, CD96, B7-1, TIGIT, CD226, OX-40, CD28, CD27, CD137, HVEM, GITR, MICA, ICOS, NKG2D, 2B4 등)은 인간 단백질이다.
PD-1 축 결합 길항제
개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암의 치료 또는 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다.
예를 들어, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제, PD-L1 결합 길항제 및 PD-L2 결합 길항제를 포함한다.
일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 그의 리간드 결합 파트너에 대한 결합을 억제하는 분자이다. 구체적 측면에서, PD-1 리간드 결합 파트너는 PD-L1 및/또는 PD-L2이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1의 그의 결합 파트너에 대한 결합을 억제하는 분자이다. 구체적 측면에서, PD-L1 결합 파트너는 PD-1 및/또는 B7-1이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-L2의 그의 결합 파트너에 대한 결합을 억제하는 분자이다. 구체적 측면에서, PD-L2 결합 파트너는 PD-1이다. 길항제는 항체, 그의 항원 결합 단편, 이뮤노어드헤신, 융합 단백질 또는 올리고펩티드일 수 있다.
일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 MDX-1106 (니볼루맙), 머크 3745 (람브롤리주맙), CT-011 (피딜리주맙), 및 AMP-224로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 YW243.55.S70, MPDL3280A, MDX-1105, 및 MEDI 4736으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 AMP-224이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 AMP-224이다. BMS-936559로도 공지되어 있는 MDX-1105는 WO2007/005874에 기재되어 있는 항-PD-L1 항체이다. 항체 YW243.55.S70 (서열 20)은 본원에 참조로 포함되는 WO 2010/077634 A1 및 US 8,217,149에 기재되어 있는 항-PD-L1이다. MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558, 또는 니볼루맙으로도 공지되어 있는 MDX-1106은 WO2006/121168에 기재되어 있는 항-PD-1 항체이다. MK 3475, MK-3475, SCH-900475, 또는 람브롤리주맙으로도 공지되어 있는 머크 3745는 WO2009/114335에 기재되어 있는 항-PD-1 항체이다. hBAT, hBAT-1, 또는 피딜리주맙으로도 공지되어 있는 CT-011은 WO2009/101611에 기재되어 있는 항-PD-1 항체이다. B7-DCIg로도 공지되어 있는 AMP-224는 WO2010/027827 및 WO2011/066342에 기재되어 있는 PD-L2-Fc 융합 가용성 수용체이다.
본 발명의 방법에 유용한 항-PD-L1 항체의 예 및 그의 제조 방법은 본원에 참조로 포함되는 PCT 특허 출원 WO 2010/077634 A1 및 US 8,217,149에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 항-PD-L1 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 PD-L1 및 PD-1 사이 및/또는 PD-L1 및 B7-1 사이의 결합을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 및 (Fab')2 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 인간 항체이다.
WO 2010/077634 A1 및 US 8,217,149에 기재되어 있는 것과 같은 항-PD-L1 항체를 함유하는 조성물을 비롯한 본 발명에 유용한 이러한 항체는 암 또는 면역 관련 질환 (예를 들어, T 세포 기능장애성 장애, 바이러스 감염, 만성 바이러스 감염 등)을 치료하기 위해 임의의 추가의 요법 (예를 들어, 화학요법)의 존재 또는 부재 하에 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합되어 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 서열을 포함하며, 여기서:
(a) HVR-H1 서열은 GFTFSX1SWIH (서열 33)이고;
(b) HVR-H2 서열은 AWIX2PYGGSX3YYADSVKG (서열 34)이고;
(c) HVR-H3 서열은 RHWPGGFDY (서열 19)이고;
추가로 여기서: X1은 D 또는 G이고; X2는 S 또는 L이고; X3은 T 또는 S인 중쇄 가변 영역 폴리펩티드를 함유한다.
한 구체적 측면에서, X1은 D이고; X2는 S이고, X3은 T이다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 화학식: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)에 따라 HVR 사이에 병렬배치된 가변 영역 중쇄 프레임워크 서열을 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 프레임워크 서열 중 적어도 1개는 하기와 같다:
HC-FR1은 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (서열 25)이고,
HC-FR2는 WVRQAPGKGLEWV (서열 26)이고,
HC-FR3은 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열 27)이고,
HC-FR4는 WGQGTLVTVSA (서열 28)이다.
추가 측면에서, 중쇄 폴리펩티드는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하며, 여기서:
(a) HVR-L1 서열은 RASQX4X5X6TX7X8A (서열 35)이고;
(b) HVR-L2 서열은 SASX9LX10S (서열 36)이고;
(c) HVR-L3 서열은 QQX11X12X13X14PX15T (서열 37)이고;
추가로 여기서: X4는 D 또는 V이고; X5는 V 또는 I이고; X6은 S 또는 N이고; X7은 A 또는 F이고; X8은 V 또는 L이고; X9는 F 또는 T이고; X10은 Y 또는 A이고; X11은 Y, G, F, 또는 S이고; X12는 L, Y, F 또는 W이고; X13은 Y, N, A, T, G, F 또는 I이고; X14는 H, V, P, T 또는 I이고; X15는 A, W, R, P 또는 T인 가변 영역 경쇄와 추가로 조합된다.
추가 측면에서, X4는 D이고; X5는 V이고; X6은 S이고; X7은 A이고; X8은 V이고; X9는 F이고; X10은 Y이고; X11은 Y이고; X12는 L이고; X13은 Y이고; X14는 H이고; X15는 A이다. 추가 측면에서, 경쇄는 화학식: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)에 따라 HVR 사이에 병렬배치된 가변 영역 경쇄 프레임워크 서열을 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 프레임워크 서열 중 적어도 1개는 하기와 같다:
LC-FR1은 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열 29)이고,
LC-FR2는 WYQQKPGKAPKLLIY (서열 30)이고,
LC-FR3은 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열 31)이고,
LC-FR4는 FGQGTKVEIKR (서열 32)이다.
또 다른 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서
(a) 중쇄는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3을 포함하고, 여기서 추가로:
(i) HVR-H1 서열은 GFTFSX1SWIH (서열 33)이고,
(ii) HVR-H2 서열은 AWIX2PYGGSX3YYADSVKG (서열 34)이고,
(iii) HVR-H3 서열은 RHWPGGFDY (서열 19)이고,
(b) 경쇄는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3을 포함하고, 여기서 추가로:
(i) HVR-L1 서열은 RASQX4X5X6TX7X8A (서열 35)이고,
(ii) HVR-L2 서열은 SASX9LX10S (서열 36)이고,
(iii) HVR-L3 서열은 QQX11X12X13X14PX15T (서열 37)이고,
추가로 여기서: X1은 D 또는 G이고; X2는 S 또는 L이고; X3은 T 또는 S이고; X4는 D 또는 V이고; X5는 V 또는 I이고; X6은 S 또는 N이고; X7은 A 또는 F이고; X8은 V 또는 L이고; X9는 F 또는 T이고; X10은 Y 또는 A이고; X11은 Y, G, F, 또는 S이고; X12는 L, Y, F 또는 W이고; X13은 Y, N, A, T, G, F 또는 I이고; X14는 H, V, P, T 또는 I이고; X15는 A, W, R, P 또는 T인 단리된 항-PD-L1 항체 또는 항원 결합 단편이 제공된다.
구체적 측면에서, X1은 D이고; X2는 S이고, X3은 T이다. 또 다른 측면에서, X4는 D이고; X5는 V이고; X6은 S이고; X7은 A이고; X8은 V이고; X9는 F이고; X10은 Y이고; X11은 Y이고; X12는 L이고; X13은 Y이고; X14는 H이고; X15는 A이다. 또 다른 측면에서, X1은 D이고; X2는 S이고; X3은 T이고; X4는 D이고; X5는 V이고; X6은 S이고; X7은 A이고; X8은 V이고; X9는 F이고; X10은 Y이고; X11은 Y이고; X12는 L이고; X13은 Y이고; X14는 H이고; X15는 A이다.
추가 측면에서, 중쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함하고: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4), 경쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함한다: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). 추가 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II, 또는 III 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (서열 25)
HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV (서열 26)
HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열 27)
HC-FR4 WGQGTLVTVSA (서열 28).
추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열 29)
LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY (서열 30)
LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열 31)
LC-FR4 FGQGTKVEIKR (서열 32).
추가의 구체적 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구체적 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 구체적 측면에서, 항체는 감소된 또는 최소 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 구체적 측면에서 최소 이펙터 기능은 "이펙터-무함유 Fc 돌연변이" 또는 비-글리코실화로부터 발생한다. 추가 실시양태에서, 이펙터-무함유 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다.
또 다른 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서:
(a) 중쇄는 각각 GFTFSDSWIH (서열 17), AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 18) 및 RHWPGGFDY (서열 19)와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 서열을 추가로 포함하거나, 또는
(b) 경쇄는 각각 RASQDVSTAVA (서열 20), SASFLYS (서열 21) 및 QQYLYHPAT (서열 22)와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3 서열을 추가로 포함하는 것인 항-PD-L1 항체가 제공된다.
구체적 측면에서, 서열 동일성은 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%이다. 또 다른 측면에서, 중쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함하고: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4), 경쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함한다: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II 또는 III 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (서열 25)
HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV (서열 26)
HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열 27)
HC-FR4 WGQGTLVTVSA (서열 28).
추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열 29)
LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY (서열 30)
LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열 31)
LC-FR4 FGQGTKVEIKR (서열 32).
추가의 구체적 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구체적 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 구체적 측면에서, 항체는 감소된 또는 최소 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 구체적 측면에서 최소 이펙터 기능은 "이펙터-무함유 Fc 돌연변이" 또는 비-글리코실화로부터 발생한다. 추가 실시양태에서, 이펙터-무함유 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다.
추가 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서:
(a) 중쇄 서열은 하기 중쇄 서열:
Figure pct00023
와 적어도 85% 서열 동일성을 갖거나,
(b) 경쇄 서열은 하기 경쇄 서열:
Figure pct00024
와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PD-L1 항체가 제공된다.
구체적 측면에서, 서열 동일성은 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%이다. 또 다른 측면에서, 중쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함하고: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4), 경쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함한다: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II 또는 III 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (서열 25)
HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV (서열 26)
HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열 27)
HC-FR4 WGQGTLVTVSA (서열 28).
추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열 29)
LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY (서열 30)
LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열 31)
LC-FR4 FGQGTKVEIKR (서열 32).
추가의 구체적 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구체적 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 구체적 측면에서, 항체는 감소된 또는 최소 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 구체적 측면에서, 최소 이펙터 기능은 원핵 세포에서의 생산으로부터 발생한다. 추가의 구체적 측면에서 최소 이펙터 기능은 "이펙터-무함유 Fc 돌연변이" 또는 비-글리코실화로부터 발생한다. 추가 실시양태에서, 이펙터-무함유 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 임의의 상기 기재된 항-PD-L1 항체를 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체와 조합하여 포함하는 조성물을 제공한다.
추가 실시양태에서, 항-PD-L1 항체의 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 서열을 코딩하는 단리된 핵산이 제공되며, 여기서:
(a) 중쇄는 각각 GFTFSDSWIH (서열 17), AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 18) 및 RHWPGGFDY (서열 19)와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 서열을 추가로 포함하고,
(b) 경쇄는 각각 RASQDVSTAVA (서열 20), SASFLYS (서열 21) 및 QQYLYHPAT (서열 22)와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3 서열을 추가로 포함한다.
구체적 측면에서, 서열 동일성은 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%이다. 측면에서, 중쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함하고: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4), 경쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함한다: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II 또는 III 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (서열 25)
HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV (서열 26)
HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열 27)
HC-FR4 WGQGTLVTVSA (서열 28).
추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열 29)
LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY (서열 30)
LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열 31)
LC-FR4 FGQGTKVEIKR (서열 32).
추가의 구체적 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구체적 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 구체적 측면에서, 항체는 감소된 또는 최소 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 구체적 측면에서, 최소 이펙터 기능은 원핵 세포에서의 생산으로부터 발생한다. 추가의 구체적 측면에서 최소 이펙터 기능은 "이펙터-무함유 Fc 돌연변이" 또는 비-글리코실화로부터 발생한다. 추가 측면에서, 이펙터-무함유 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다.
또 다른 추가 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서:
(a) 중쇄 서열은 하기 중쇄 서열:
Figure pct00025
와 적어도 85% 서열 동일성을 갖거나, 또는
(b) 경쇄 서열은 하기 경쇄 서열:
Figure pct00026
와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PDL1 항체가 제공된다.
구체적 측면에서, 서열 동일성은 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%이다. 또 다른 측면에서, 중쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함하고: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4), 경쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함한다: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II 또는 III 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (서열 25)
HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV (서열 26)
HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열 27)
HC-FR4 WGQGTLVTVSS (서열 42).
추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열 29)
LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY (서열 30)
LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열 31)
LC-FR4 FGQGTKVEIKR (서열 32).
추가의 구체적 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구체적 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 구체적 측면에서, 항체는 감소된 또는 최소 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 구체적 측면에서, 최소 이펙터 기능은 원핵 세포에서의 생산으로부터 발생한다. 추가의 구체적 측면에서 최소 이펙터 기능은 "이펙터-무함유 Fc 돌연변이" 또는 비-글리코실화로부터 발생한다. 추가 실시양태에서, 이펙터-무함유 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다.
추가 측면에서, 중쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함하고: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4), 경쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함한다: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). 추가 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II 또는 III 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (서열 43)
HC-FR2 WVRQAPGKGLEWVA (서열 44)
HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열 27)
HC-FR4 WGQGTLVTVSS (서열 45).
추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열 29)
LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY (서열 30)
LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열 31)
LC-FR4 FGQGTKVEIK (서열 46).
추가의 구체적 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구체적 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 구체적 측면에서, 항체는 감소된 또는 최소 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 구체적 측면에서 최소 이펙터 기능은 "이펙터-무함유 Fc 돌연변이" 또는 비-글리코실화로부터 발생한다. 추가 실시양태에서, 이펙터-무함유 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다.
또 다른 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서:
(d) 중쇄는 각각 GFTFSDSWIH (서열 17), AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 18) 및 RHWPGGFDY (서열 19)와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 서열을 추가로 포함하거나, 또는
(e) 경쇄는 각각 RASQDVSTAVA (서열 20), SASFLYS (서열 21) 및 QQYLYHPAT (서열 22)와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3 서열을 추가로 포함하는 것인 항-PDL1 항체가 제공된다.
구체적 측면에서, 서열 동일성은 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%이다. 또 다른 측면에서, 중쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함하며: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4), 경쇄 가변 영역은 하기와 같이 HVR 사이에 병렬배치된 1개 이상의 프레임워크 서열을 포함한다: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). 또 다른 측면에서, 프레임워크 서열은 인간 컨센서스 프레임워크 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 카바트 하위군 I, II 또는 III 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열은 VH 하위군 III 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 중쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (서열 25)
HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV (서열 26)
HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (서열 27)
HC-FR4 WGQGTLVTVSSASTK (서열 47).
추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 카바트 카파 I, II, II 또는 IV 하위군 서열로부터 유래된다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열은 VL 카파 I 컨센서스 프레임워크이다. 추가 측면에서, 경쇄 프레임워크 서열 중 1개 이상은 하기와 같다:
LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (서열 29)
LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY (서열 30)
LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (서열 31)
LC-FR4 FGQGTKVEIKR (서열 32).
추가의 구체적 측면에서, 항체는 인간 또는 뮤린 불변 영역을 추가로 포함한다. 추가 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구체적 측면에서, 인간 불변 영역은 IgG1이다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가 측면에서, 뮤린 불변 영역은 IgG2A이다. 추가의 구체적 측면에서, 항체는 감소된 또는 최소 이펙터 기능을 갖는다. 추가의 구체적 측면에서 최소 이펙터 기능은 "이펙터-무함유 Fc 돌연변이" 또는 비-글리코실화로부터 발생한다. 추가 실시양태에서, 이펙터-무함유 Fc 돌연변이는 불변 영역에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다.
추가 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서:
(a) 중쇄 서열은 하기 중쇄 서열:
Figure pct00027
와 적어도 85% 서열 동일성을 갖거나, 또는
(b) 경쇄 서열은 하기 경쇄 서열:
Figure pct00028
와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PDL1 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서 경쇄 가변 영역 서열은 서열 24의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PDL1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역 서열은 서열 40의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PDL1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하며, 여기서 경쇄 가변 영역 서열은 서열 24의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖고, 중쇄 가변 영역 서열은 서열 40의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PDL1 항체가 제공된다.
추가 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하며, 여기서:
(a) 중쇄 서열은 하기 중쇄 서열:
Figure pct00029
와 적어도 85% 서열 동일성을 갖거나, 또는
(b) 경쇄 서열은 하기 경쇄 서열:
Figure pct00030
와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PDL1 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하며, 여기서 경쇄 서열은 서열 49의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PDL1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하며, 여기서 중쇄 서열은 서열 48의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PDL1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하며, 여기서 경쇄 서열은 서열 49의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖고, 중쇄 서열은 서열 48의 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 것인 단리된 항-PDL1 항체가 제공된다.
추가 측면에서, 핵산은 임의의 이전에 기재된 항-PD-L1 항체를 코딩하는 핵산의 발현에 적합한 벡터를 추가로 포함한다. 추가의 구체적 측면에서, 벡터는 핵산의 발현에 적합한 숙주 세포를 추가로 포함한다. 추가의 구체적 측면에서, 숙주 세포는 진핵 세포 또는 원핵 세포이다. 추가의 구체적 측면에서, 진핵 세포는 포유동물 세포, 예컨대 차이니즈 햄스터 난소 (CHO)이다.
항-PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어 발현에 적합한 형태의 임의의 이전에 기재된 항-PD-L1 항체 또는 항원-결합 단편을 코딩하는 핵산을 함유하는 숙주 세포를 이러한 항체 또는 단편을 생산하는데 적합한 조건 하에서 배양하는 단계, 및 항체 또는 단편을 회수하는 단계를 포함하는 공정에 의해 제조될 수 있다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 본원에 제공된 바와 같은 항-PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.
TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제
개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료 또는 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제는 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 그의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로부터 선택된 억제 핵산이다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
WO 2009/126688에 기재되어 있는 것과 같은 항-TIGIT 항체를 함유하는 조성물을 비롯하여 본 발명에 유용한 이러한 항체는 PD-1 축 결합 길항제와 조합되어 사용될 수 있다.
항-TIGIT 항체
본 발명은 항-TIGIT 항체를 제공한다. 예시적인 항체는 폴리클로날, 모노클로날, 인간화, 이중특이적 및 이종접합체 항체를 포함한다. 본 발명이 다른 폴리펩티드에 대한 항체 (즉, 항-PVR 항체)를 또한 제공하고, 항-TIGIT 항체의 생성 방법, 생산, 변형, 사용 또는 다른 측면에 대해 본원에서 구체적으로 제시된 임의의 설명은 다른 비-TIGIT 폴리펩티드에 특이적인 항체에도 적용될 수 있음을 통상의 기술자는 이해할 것이다.
폴리클로날 항체
항-TIGIT 항체는 폴리클로날 항체를 포함할 수 있다. 폴리클로날 항체를 제조하는 방법은 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 폴리클로날 항체는, 예를 들어 면역화제 및 원하는 경우에 아주반트의 1회 이상의 주사에 의해 포유동물에서 생성될 수 있다. 전형적으로, 면역화제 및/또는 아주반트는 다중 피하 또는 복강내 주사에 의해 포유동물에 주사될 것이다. 면역화제는 TIGIT 폴리펩티드 또는 그의 융합 단백질을 포함할 수 있다. 면역화시킬 포유동물에서 면역원성인 것으로 공지된 단백질에 면역화제를 접합시키는 것이 유용할 수 있다. 이러한 면역원성 단백질의 예는 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린 및 대두 트립신 억제제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 사용될 수 있는 아주반트의 예는 프로인트 완전 아주반트 및 MPL-TDM 아주반트 (모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로스 디코리노미콜레이트)를 포함한다. 면역화 프로토콜은 과도한 실험 없이 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다.
모노클로날 항체
항-TIGIT 항체는 대안적으로 모노클로날 항체일 수 있다. 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법, 예컨대 문헌 [Kohler and Milstein, Nature, 256:495 (1975)]에 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 하이브리도마 방법에서, 마우스, 햄스터 또는 다른 적절한 숙주 동물을 면역화제로 전형적으로 면역화시켜, 면역화제에 특이적으로 결합할 항체를 생성하거나 생성할 수 있는 림프구를 도출한다. 대안적으로, 림프구는 시험관내 면역화될 수 있다.
면역화제는 전형적으로 TIGIT 폴리펩티드 또는 그의 융합 단백질을 포함할 것이다. 일반적으로, 인간 기원의 세포를 원하는 경우에 말초 혈액 림프구 ("PBL")가 사용되거나, 또는 비-인간 포유동물 공급원을 원하는 경우에 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 이어서, 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 림프구를 불멸화 세포주와 융합시켜, 하이브리도마 세포를 형성한다 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103]. 불멸화 세포주는 통상적으로 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 통상적으로, 래트 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 하이브리도마 세포는 바람직하게는 비융합 불멸화 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 1종 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지 중에서 배양될 수 있다. 예를 들어, 모 세포에 효소 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결여되어 있는 경우에, 하이브리도마를 위한 배양 배지는 전형적으로 하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 함유할 것이며 ("HAT 배지"), 상기 물질은 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지한다.
바람직한 불멸화 세포주는, 효율적으로 융합되고, 선택된 항체-생산 세포에 의한 항체의 안정적인 높은 수준 발현을 지지하며, HAT 배지와 같은 배지에 감수성인 것이다. 보다 바람직한 불멸화 세포주는, 예를 들어 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재의 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center) 및 버지니아주 마나사스 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)으로부터 수득할 수 있는 뮤린 골수종 세포주이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 또한 인간 모노클로날 항체의 생산을 위해 기재되어 있다 [Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63].
이어서, 하이브리도마 세포를 배양하는 배양 배지를 폴리펩티드에 대해 지시된 모노클로날 항체의 존재에 대해 검정할 수 있다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생산된 모노클로날 항체의 결합 특이성을 면역침전 또는 시험관내 결합 검정, 예컨대 방사선면역검정 (RIA) 또는 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정한다. 이러한 기술 및 검정은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 모노클로날 항체의 결합 친화도는 예를 들어 문헌 [Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)]의 스캐차드 분석에 의해 결정될 수 있다.
목적하는 하이브리도마 세포가 확인된 후에, 클론을 한계 희석 절차에 의해 서브클로닝하고, 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다 [Goding, 상기 문헌]. 이러한 목적에 적합한 배양 배지는, 예를 들어 둘베코 변형 이글 배지 및 RPMI-1640 배지를 포함한다. 대안적으로, 하이브리도마 세포를 생체내에서 포유동물 내 복수로서 성장시킬 수 있다.
서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 통상의 이뮤노글로불린 정제 절차, 예컨대 예를 들어 단백질 A-세파로스, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화성 크로마토그래피에 의해 배양 배지 또는 복수액으로부터 단리 또는 정제될 수 있다.
모노클로날 항체는 또한 재조합 DNA 방법, 예컨대 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 발명의 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상의 절차를 사용하여 (예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하는 것에 의해) 용이하게 단리되고 서열분석될 수 있다. 본 발명의 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서의 역할을 한다. 단리되면, DNA를 발현 벡터 내에 위치시킬 수 있고, 이어서 달리 이뮤노글로불린 단백질을 생산하지 않는 숙주 세포, 예컨대 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 골수종 세포 내로 형질감염시켜 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체의 합성을 수득한다. DNA를 또한, 예를 들어 상동성 뮤린 서열 대신 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 치환시키거나 [미국 특허 번호 4,816,567; Morrison et al., 상기 문헌], 또는 이뮤노글로불린 코딩 서열에 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 전부 또는 일부를 공유 연결시킴으로써 변형시킬 수 있다. 이러한 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드는 본 발명의 항체의 불변 도메인을 치환시킬 수 있거나, 또는 본 발명의 항체의 하나의 항원-결합 부위의 가변 도메인을 치환시켜 키메라 2가 항체를 생성할 수 있다.
항체는 1가 항체일 수 있다. 1가 항체를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 한 방법은 이뮤노글로불린 경쇄 및 변형된 중쇄의 재조합 발현을 수반한다. 중쇄는 중쇄 가교를 방지하도록 일반적으로 Fc 영역 내의 임의의 지점에서 말단절단된다. 대안적으로, 관련 시스테인 잔기는 가교를 방지하도록 또 다른 아미노산 잔기로 치환되거나 결실된다.
시험관내 방법이 또한 1가 항체를 제조하는데 적합하다. 항체의 그의 단편, 특히 Fab 단편의 생산을 위한 소화는 관련 기술분야에 공지된 상용 기술을 사용하여 달성할 수 있다.
인간 및 인간화 항체
본 발명의 항-TIGIT 항체는 추가로 인간화 항체 또는 인간 항체를 포함할 수 있다. 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 인간화 형태는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 이뮤노글로불린, 이뮤노글로불린 쇄 또는 그의 단편 (예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)이다. 인간화 항체는 수용자의 상보성 결정 영역 (CDR)으로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종 (공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기로 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)을 포함한다. 일부 경우에, 인간 이뮤노글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체에서도 또는 유입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 이뮤노글로불린의 그것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 컨센서스 서열의 그것이다. 인간화 항체는 최적으로는 또한 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 그것을 포함할 것이다 [Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992)].
비-인간 항체를 인간화하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비-인간 공급원으로부터 도입된 1개 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "유입" 잔기로 지칭되고, 이는 전형적으로 "유입" 가변 도메인으로부터의 것이다. 인간화는 본질적으로, 인간 항체의 상응하는 서열을 설치류 CDR 또는 CDR 서열로 치환하는 것에 의한, 윈터(Winter) 및 동료들의 방법 [Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)]에 따라 수행할 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화" 항체는 무손상 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적은 서열이 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열로 치환된 키메라 항체 (미국 특허 번호 4,816,567)이다. 실제로, 인간화 항체는 전형적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 FR 잔기가 설치류 항체의 유사한 부위로부터의 잔기로 치환된 인간 항체이다.
인간 항체는 또한 파지 디스플레이 라이브러리를 비롯한 관련 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산할 수 있다 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]. 콜(Cole) 등 및 보에르네르(Boerner) 등의 기술이 또한 인간 모노클로날 항체의 제조에 이용가능하다 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) 및 Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)]. 유사하게, 인간 이뮤노글로불린 유전자좌를 트랜스제닉 동물, 예를 들어 내인성 이뮤노글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 불활성화된 마우스 내로 도입함으로써 인간 항체를 제조할 수 있다. 챌린지 시에 인간 항체 생산이 관찰되고, 이는 유전자 재배열, 어셈블리 및 항체 레퍼토리를 비롯한 모든 측면에서 인간에서 관찰되는 것과 매우 유사하다. 이러한 접근법은 예를 들어 미국 특허 번호 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016, 및 하기 과학 문헌: [Marks et al., Bio/Technology 10, 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368 856-859 (1994); Morrison, Nature 368, 812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995)]에 기재되어 있다.
또한 항체는 상기 기재된 바와 같은 공지된 선택 및/또는 돌연변이유발 방법을 사용하여 친화도 성숙될 수 있다. 바람직한 친화도 성숙 항체는 성숙 항체가 제조되는 출발 항체 (일반적으로 뮤린, 인간화 또는 인간)보다 5배, 보다 바람직하게는 10배, 보다 더 바람직하게는 20 또는 30배 더 큰 친화도를 갖는다.
이중특이적 항체
이중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 갖는 모노클로날, 바람직하게는 인간 또는 인간화, 항체이다. 본 발명에서, 결합 특이성 중 하나는 TIGIT에 대한 것이고, 다른 하나는 임의의 다른 항원, 바람직하게는 세포-표면 단백질 또는 수용체 또는 수용체 서브유닛에 대한 것이다.
이중특이적 항체를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 전통적으로, 이중특이적 항체의 재조합 생산은 2개의 이뮤노글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공동-발현을 기초로 하고, 여기서 2개의 중쇄는 상이한 특이성을 갖는다 [Milstein and Cuello, Nature, 305:537-539 (1983)]. 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류로 인해, 이들 하이브리도마 (쿼드로마)는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생산하며, 이 중 오직 하나만이 정확한 이중특이적 구조를 갖는다. 정확한 분자의 정제는 통상적으로 친화성 크로마토그래피 단계에 의해 달성된다. 유사한 절차가 1993년 5월 13일에 공개된 WO 93/08829 및 문헌 [Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다.
목적하는 결합 특이성 (항체-항원 결합 부위)을 갖는 항체 가변 도메인을 이뮤노글로불린 불변 도메인 서열에 융합시킬 수 있다. 융합은 바람직하게는 힌지, CH2 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄 불변 도메인과 이루어진다. 융합체 중 적어도 1개에 존재하는 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역 (CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 이뮤노글로불린 중쇄 융합체 및, 원하는 경우에, 이뮤노글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA는 개별 발현 벡터 내로 삽입되고, 적합한 숙주 유기체 내로 동시-형질감염된다. 이중특이적 항체의 생성에 대한 추가의 상세내용에 대해서는 예를 들어 문헌 [Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)]을 참조한다.
WO 96/27011에 기재된 또 다른 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 사이의 계면을 조작하여 재조합 세포 배양으로부터 회수되는 이종이량체의 백분율을 최대화할 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다. 이러한 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터 하나 이상의 소형 아미노산 측쇄가 보다 대형의 측쇄 (예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 대형 아미노산 측쇄를 보다 소형의 것 (예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체함으로써 대형 측쇄(들)와 동일하거나 유사한 크기의 보상성 "함몰부"가 제2 항체 분자의 계면 상에 생성된다. 이는 동종이량체와 같은 다른 원치않는 최종-생성물보다 이종이량체의 수율을 증가시키기 위한 메카니즘을 제공한다.
이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab')2 이중특이적 항체)으로서 제조될 수 있다. 항체 단편으로부터 이중특이적 항체를 생성하는 기술은 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 화학적 연결을 사용하여 이중특이적 항체를 제조할 수 있다. 문헌 [Brennan et al., Science 229:81 (1985)]은 무손상 항체를 단백질분해적으로 절단하여 F(ab')2 단편을 생성하는 절차를 기재한다. 이들 단편을 디티올 착화제인 아비산나트륨의 존재 하에 환원시켜, 이웃자리 디티올을 안정화시키고 분자간 디술피드 형성을 방지한다. 이어서 생성된 Fab' 단편을 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환시킨다. 이어서 Fab'-TNB 유도체 중 하나를 메르캅토에틸아민으로의 환원에 의해 Fab'-티올로 재전환시키고, 등몰량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합하여 이중특이적 항체를 형성한다. 생산된 이중특이적 항체는 효소의 선택적 고정화를 위한 작용제로서 사용될 수 있다.
Fab' 단편을 이. 콜라이(E. coli)로부터 직접 회수하고, 화학적으로 커플링시켜 이중특이적 항체를 형성할 수 있다. 문헌 [Shalaby et al., J. Exp. Med. 175:217-225 (1992)]은 완전 인간화 이중특이적 항체 F(ab')2 분자의 생산을 기재한다. 각각의 Fab' 단편을 이. 콜라이로부터 개별적으로 분비시키고, 시험관내 유도 화학 커플링에 적용하여 이중특이적 항체를 형성하였다. 이에 따라 형성된 이중특이적 항체는 ErbB2 수용체를 과다발현하는 세포 및 정상 인간 T 세포에 결합할 수 있을 뿐만 아니라, 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용해 활성을 촉발할 수 있었다.
재조합 세포 배양으로부터 직접적으로 이중특이적 항체 단편을 제조 및 단리하기 위한 다양한 기술이 또한 기재되어 있다. 예를 들어, 류신 지퍼를 사용하여 이중특이적 항체가 생산되었다. Kostelny et al., J. Immunol. 148(5):1547-1553 (1992). Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩티드를 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 유전자 융합에 의해 연결시켰다. 항체 동종이량체를 힌지 영역에서 환원시켜 단량체를 형성한 다음, 재-산화시켜 항체 이종이량체를 형성하였다. 이러한 방법은 항체 동종이량체의 생산에 또한 사용될 수 있다. 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)]에 기재된 "디아바디" 기술은 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 대안적 메카니즘을 제공한다. 단편은 동일 쇄 상의 2개의 도메인 사이의 쌍 형성을 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 따라서, 한 단편의 VH 및 VL 도메인이 또 다른 단편의 상보적인 VL 및 VH 도메인과 쌍을 이루게 되어, 그에 의해 2개의 항원-결합 부위가 형성된다. 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용하여 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 또 다른 전략이 또한 보고되어 있다. 문헌 [Gruber et al., J. Immunol. 152:5368 (1994)]을 참조한다.
2가 초과의 원자가를 갖는 항체가 고려된다. 하나의 비제한적 예로서, 삼중특이적 항체를 제조할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Tutt et al., J. Immunol. 147:60 (1991)]을 참조한다.
예시적인 이중특이적 항체는 본원에 주어진 TIGIT 폴리펩티드 상의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로, 항-TIGIT 폴리펩티드 아암은 세포성 방어 메카니즘을 특정한 TIGIT 폴리펩티드를 발현하는 세포에 집중시키기 위해, 백혈구 상의 촉발 분자, 예컨대 T-세포 수용체 분자 (예를 들어, CD2, CD3, CD28, 또는 B7), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예컨대 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 세포독성제를 특정한 TIGIT 폴리펩티드를 발현하는 세포에 국재화시키는데 사용될 수 있다. 이들 항체는 TIGIT-결합 아암, 및 세포독성제 또는 방사성핵종 킬레이트화제, 예컨대 EOTUBE, DPTA, DOTA, 또는 TETA에 결합하는 아암을 보유한다. 또 다른 관심 이중특이적 항체는 TIGIT 폴리펩티드에 결합하고, 추가로 조직 인자 (TF)에 결합한다.
이종접합체 항체
이종접합체 항체가 또한 본 발명의 범위 내에 있다. 이종접합체 항체는 2개의 공유 연결된 항체로 구성된다. 이러한 항체는 예를 들어 면역계 세포의 원치않는 세포로의 표적화 [미국 특허 번호 4,676,980] 및 HIV 감염의 치료 [WO 91/00360; WO 92/200373; EP 03089]를 위해 제안되어 왔다. 항체는 가교제를 수반하는 것을 비롯하여, 합성 단백질 화학에서 공지된 방법을 사용하여 시험관내 제조될 수 있는 것으로 고려된다. 예를 들어, 디술피드 교환 반응을 사용하거나 또는 티오에테르 결합을 형성하는 것에 의해 면역독소를 구축할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-메르캅토부티르이미데이트, 및 예를 들어 미국 특허 번호 4,676,980에 개시된 것을 포함한다.
이펙터 기능 조작
예를 들어 암을 치료하는데 있어서 항체의 유효성을 증진시키기 위해, 본 발명의 항체를 이펙터 기능과 관련하여 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 시스테인 잔기(들)를 Fc 영역 내에 도입하여, 그에 의해 이러한 영역 내에 쇄간 디술피드 결합이 형성되도록 할 수 있다. 이로써 생성된 동종이량체 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개 세포 사멸 및 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC)을 가질 수 있다. 문헌 [Caron et al., J. Exp Med., 176: 1191-1195 (1992) 및 Shopes, J. Immunol., 148: 2918-2922 (1992)]을 참조한다. 증진된 항종양 활성을 갖는 동종이량체 항체는 또한 문헌 [Wolff et al. Cancer Research, 53: 2560-2565 (1993)]에 기재된 바와 같이 이종이관능성 가교제를 사용하여 제조할 수 있다. 대안적으로, 이중 Fc 영역을 갖는 항체를 조작할 수 있고, 그에 의해 증진된 보체 용해 및 ADCC 능력을 가질 수 있다. 문헌 [Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3: 219-230 (1989)]을 참조한다.
일부 실시양태에서, 햄스터-항-마우스 항체인 항-TIGIT 항체를 생성하였다. 2개의 항체, 10A7 및 1F4는 또한 인간 TIGIT에 특이적으로 결합한다. 10A7 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열은 표준 기술을 사용하여 결정하였다. 이러한 항체의 경쇄 서열은:
Figure pct00031
이고, 이러한 항체의 중쇄 서열은:
Figure pct00032
이며, 여기서 각각의 쇄의 상보성 결정 영역 (CDR)은 볼드 텍스트로 나타내어진다. 따라서, 10A7 경쇄의 CDR1은 서열 KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1)를 갖고, 10A7 경쇄의 CDR2는 서열 ASIRFT (서열 2)를 갖고, 10A7 경쇄의 CDR3은 서열 QQGINNPLT (서열 3)를 갖는다. 10A7 중쇄의 CDR1은 서열 GFTFSSFTMH (서열 4)를 갖고, 10A7 중쇄의 CDR2는 서열 FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5)를 갖고, 10A7 중쇄의 CDR3은 서열 RPLGHNTFDS (서열 6)를 갖는다.
1F4 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열을 또한 결정하였다. 이러한 항체의 경쇄 서열은:
Figure pct00033
이고. 이러한 항체의 중쇄 서열은:
Figure pct00034
이며, 여기서 각각의 쇄의 상보성 결정 영역 (CDR)은 볼드 텍스트로 나타내어진다. 따라서, 1F4 경쇄의 CDR1은 서열 RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7)를 갖고, 1F4 경쇄의 CDR2는 서열 GISNRFS (서열 8)를 갖고, 1F4 경쇄의 CDR3은 서열 LQGTHQPPT (서열 9)를 갖는다. 1F4 중쇄의 CDR1은 서열 GYSFTGHLMN (서열 10)을 갖고, 1F4 중쇄의 CDR2는 서열 LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11)를 갖고, 1F4 중쇄의 CDR3은 서열 GLRGFYAMDY (서열 12)를 갖는다.
1F4 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은
Figure pct00035
인 것으로 결정되었고, 1F4 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은
Figure pct00036
인 것으로 결정되었다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (1) KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6), 또는 (2) RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12)에 제시된 아미노산 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 적어도 1개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄는
Figure pct00037
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 중쇄는
Figure pct00038
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄는
Figure pct00039
에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 항체 중쇄는
Figure pct00040
에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체는 인간화 항체, 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체 및 면역독소로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 임의의 (1) KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6), 또는 (2) RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12)에 제시된 HVR과 적어도 90% 동일한 적어도 1개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 단편은 각각
Figure pct00041
에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및/또는 중쇄를 포함한다.
CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제
개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여함으로써, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다.
예를 들어, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극할 수 있고, CD226과 PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3의 상호작용을 증가 및/또는 자극할 수 있고, PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극할 수 있는 작용제이다. 일부 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극할 수 있는 작용제는 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극하는 작용제이다. 일부 실시양태에서, CD226과 PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3의 상호작용을 증가 및/또는 자극할 수 있는 작용제는 CD226과 PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3의 상호작용을 증가 및/또는 자극하는 작용제이다. 일부 실시양태에서, PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극할 수 있는 작용제는 PVR, PVRL2, 및/또는 PVRL3에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극하는 작용제이다.
일부 실시양태에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제는 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 그의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로부터 선택된 억제 핵산이다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로부터 선택된 억제 핵산이다. 일부 실시양태에서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드이다.
일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제하는 작용제는 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로부터 선택된 억제 핵산이다.
면역조절 항체 요법을 위한 T 세포 표적의 조합
TCR을 통한 특이적 항원 인식에 더하여, T-세포 활성화는 공동-자극 수용체에 의해 제공되는 양성 및 음성 신호의 균형을 통해 조절된다. 이들 표면 단백질은 전형적으로 TNF 수용체 또는 B7 슈퍼패밀리의 구성원이다. 활성화 공동-자극 수용체는 CD226, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, MICA, ICOS, NKG2D, 및 2B4를 포함한다. 억제 공동-자극 수용체는 CTLA-4, PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, B7H4, 및 CD96을 포함한다. 활성화 공동-자극 분자에 대해 지시된 효능작용 항체 및 음성 공동-자극 분자에 대한 차단 항체는 T-세포 자극을 증진시켜 종양 파괴를 촉진할 수 있다.
개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 투여함으로써, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA, VISTA, B7H4, 및 CD96으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체는 PD-1, CTLA-4, LAG3 및 TIM3으로부터 선택된다.
또한, 개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 투여함으로써, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD28, CD27, CD137, HVEM, GITR, MICA, ICOS, NKG2D, 및 2B4로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 CD226, OX-40, CD27, CD137, HVEM 및 GITR로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체는 OX-40 및 CD27로부터 선택된다.
IV. 키트
또 다른 측면에서, PD-1 축 결합 길항제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, PD-1 축 결합 길항제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, PD-1 축 결합 길항제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 PD-1 축 결합 길항제 및/또는 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및/또는 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및/또는 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및/또는 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및/또는 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및/또는 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
또 다른 측면에서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 본원에 기재된 임의의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및/또는 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제가 키트에 포함될 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 PD-1 축 결합 길항제 중 1종 이상 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 함유하는 용기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 PD-1 축 결합 길항제 중 1종 이상 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 함유하는 용기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 중 1종 이상 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 함유하는 용기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 중 1종 이상 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 함유하는 용기를 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어 병, 바이알 (예를 들어, 이중 챔버 바이알), 시린지 (예컨대 단일 또는 이중 챔버 시린지) 및 시험 튜브를 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 키트는 라벨 (예를 들어, 용기 상의 또는 그에 부착된) 또는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 그 안에 함유된 화합물이 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는데 또는 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키는데 유용하거나, 또는 그를 위해 의도될 수 있음을 나타낼 수 있다. 키트는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 비롯하여, 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
실시예
본 발명은 하기 실시예를 참조하여 추가로 이해될 수 있으며, 이는 예시로서 제공된 것이며 제한하고자 하는 것은 아니다.
실시예 1: TIGIT는 소진된 CD8+ 및 CD4+ T 세포 상에서 고도로 발현되고, PD-1 발현과 상호관련된다.
CD8+ T 세포가 시험관내 자극 후에 TIGIT를 발현하는데 적격인지를 확인하기 위해, MACS-풍부화 C57BL6/J 비장 CD8+ T 세포를 플레이트-결합된 항-CD3 및 항-CD28로 시험관내에서 24-48시간 동안 자극하였다. 유동 세포측정법을 사용하여 TIGIT 발현을 측정하였다. CD4+ T 세포에 의한 TIGIT 발현과 마찬가지로 (Yu, X., et al. The surface protein TIGIT suppresses T cell activation by promoting the generation of mature immunoregulatory dendritic cells. Nature immunology 10, 48-57 (2009)), 뮤린 CD8+ T 세포는 48시간 이내의 시험관내 자극으로 TIGIT를 발현하였다 (도 1a).
생체내 활성화된 CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현을 평가하기 위해, C57BL6/J 마우스를 암스트롱 균주 림프구성 맥락수막염 바이러스 (LCMV)로 감염시키고, 감염 7일 후에 비장세포를 분석하였다. 간략하게, 급성 감염을 위해, 마우스를 2x106개의 플라크-형성 단위 (PFU) 암스트롱 균주 LCMV로 정맥내로 감염시켰다. 유동 세포측정법을 사용하여 나이브 (CD44저 CD62L고) 및 이펙터 기억 (CD44고 CD62L저) CD8+ 및 CD4+ T 세포에 의한 TIGIT 발현을 측정하였다. LCMV T 세포 반응의 정점에서, CD4+ 이펙터 기억 T 세포 (TEM)의 하위세트 및 거의 모든 CD8+ TEM 세포가 TIGIT를 강력하게 발현하였다 (도 1b). 유동 세포측정법을 사용하여 PD-1고 및 PD-1저 이펙터 기억 CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현을 측정하였다. 흥미롭게도, TIGIT 발현은 PD-1 발현과 거의 완벽하게 상호관련되었다 (도 1c).
PD-1이 T 세포 소진과 연관되기 때문에, 만성 자극된 T 세포에 대해 TIGIT 발현을 검사하였다. 간략하게, 만성 감염을 위해, C57BL6/J 마우스를 2x106개의 PFU 클론 13 균주 LCMV로 정맥내 감염시키고, 각각 감염 3일 전 및 4일 후에 500ug 및 250ug의 고갈성 항-CD4 항체 (클론 GK1.5)로 처리하였다. 표시된 바와 같이, 클론 13 균주 LCMV로 감염된 마우스에게 감염후 제28일에서 제42일까지 1주에 3회 200ug의 이소형 대조군 항체, 200ug의 항-PD-L1 항체, 및/또는 500ug의 항-TIGIT 항체의 복강내 주사를 제공하였다. 감염 42일 후에 비장세포를 분석하였다. 유동 세포측정법을 사용하여 나이브 (CD44저 CD62L고), 중심 기억 (CD44고 CD62L고), 및 이펙터 기억 (CD44고 CD62L저) CD8+ T 세포에 의한 TIGIT 발현을 측정하였다. 실제로, 클론 13 균주 LCMV로 만성 감염된 마우스에서, TIGIT는 PD-1고 T 세포 상에서는 우세하게 고도로 발현되었지만, 나이브 세포, PD-1저 TEM 세포, 또는 중심 기억 T 세포에서는 그렇지 않았다 (도 1d).
실시예 2: TIGIT 결핍 마우스에서 T 세포 소진에서의 TIGIT의 역할.
T 세포 소진에서의 TIGIT의 역할을 특성화하기 위해, T 세포에서 TIGIT를 조건부 결실시킨 마우스를 생성하였다 (TIGITfl /fl CD4-cre+ (CKO), 도 2). 간략하게, CD4cre 마우스 및 TIGITloxP / loxP 마우스를 C57BL/6J 배경에서 표준 기술로 생성하고, 교배시켰다. 품질-시험된 ES 세포주 (아트(Art) B6/3.6 (유전적 배경: C57BL/6 NTac)를 백혈병 억제 인자 및 태아 소 혈청을 함유하는 ES 세포 배양 배지에서 마우스 배아 섬유모세포로 구성된 유사분열 불활성화 피더 층 상에서 성장시켰다. 세포를, 타코닉 아르테미스(Taconic Artemis)의 표준 작업 절차에 따라 선형화 DNA 표적화 벡터로 전기천공시켰다. 상동 재조합 클론의 풍부화를 위한 메카니즘으로서 G418 및 간시클로비르 선택을 사용하였다. 형질감염 후 제8일에 별개의 형태를 갖는 저항성 ES 세포 콜로니 (ES 클론)를 단리하고, 1차 스크린으로 서던 블롯팅 및/또는 PCR에 의해 분석하였다. 상동 재조합 ES 세포주를 확장시키고, 대규모 분자 확인 후에 액체 질소 내에서 동결시켰다. flpE 레콤비나제에 의해 neo 카세트를 제거한 후에 Bl/6 암컷 알비노 공여자 내로 미세주사하였다. 키메라 자손이 생산되었고, 배선 전이에 대해 PCR에 의해 꼬리를 스크리닝하였다. TIGITloxP / loxP CD4cre 마우스에서 T 세포로부터 TIGIT 발현이 96% 효율로 제거되었다.
T 세포에서 TIGIT가 결여된 마우스는 야생형 마우스와 유사한 급성 암스트롱 균주 LCMV 감염에 대한 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응을 개시하였다 (도 3).
만성 감염 설정에서의 효과를 평가하기 위해, TIGITfl /fl CD4-cre- (WT) 및 TIGITfl/fl CD4-cre+ (CKO) 마우스에서 CD4+ T 세포를 간략하게 고갈시키고 클론 13 균주 LCMV로 감염시켰다. 감염 42일 후에 비장세포 및 간 바이러스 역가를 분석하였다. 클론 13 균주 LCMV에 의한 만성 감염 후에, TIGITfl /fl CD4-cre+ (CKO) 마우스로부터의 유의하게 더 많은 CD8+ 및 CD4+ T 세포가 야생형 한배새끼 마우스 (TIGITfl/fl CD4-cre- (WT))로부터의 T 세포보다 인터페론 감마 (IFNγ)를 생산하는데 적격이었다 (82-86% 증가, P < 0.01, 도 4a-4d). 또한, 바이러스 로드는 만성 감염된 TIGITfl /fl CD4-cre+ (CKO) 마우스에서 유의하게 감소되었다 (68% 감소, P < 0.0001, 도 4e).
이들 결과는 TIGIT가 만성 면역 반응 동안, 예컨대 만성 바이러스 감염 동안 T 세포 활성 및 반응을 조절하는데 중요한 역할을 하고, TIGIT는 이펙터 기능, 특히 만성 자극되거나 소진된 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 이펙터 시토카인, 예컨대 IFNγ 및 TNFα를 생산하는 적격을 조절할 수 있음을 시사한다.
실시예 3: TIGIT 및 PD-1은 생체내에서 소진된 T 세포의 이펙터 기능을 상승작용적으로 조절한다.
TIGIT 발현이, 특히 급성 및 만성 바이러스 감염 동안 CD8+ T 세포에서, PD-1 발현과 밀접하게 상호관련되기 때문에 (도 1), TIGIT 및 PD-1을 조합하여 차단하는 것은 보조-수용체 중 어느 하나를 단독으로 차단함으로써 수득되는 것보다 더 큰 수준으로 T 세포 이펙터 기능을 회복시킬 수 있다.
이러한 가설을 시험하기 위해, C57BL6/J 마우스에서 CD4+ T 세포를 간략하게 고갈시키고 클론 13 균주 LCMV로 감염시켰다. 만성 감염을 위해, 마우스를 2x106개의 PFU 클론 13 균주 LCMV로 정맥내 감염시키고, 각각 감염 3일 전 및 4일 후에 500ug 및 250ug의 고갈성 항-CD4 항체 (클론 GK1.5)로 처리하였다. 표시된 바와 같이, 클론 13 균주 LCMV로 감염된 마우스에게 감염후 제28일에서 제42일까지 1주에 3회 200ug의 이소형 대조군 항체, 200ug의 항-PD-L1 항체, 및/또는 500ug의 항-TIGIT 항체의 복강내 주사를 제공하였다. 감염 28일 후에 처리를 시작하였고, 이는 이러한 만성 바이러스 감염 모델에서 이 시점에 T 세포 반응이 대체로 소진되기 때문이다 (Wherry et al, Molecular Signature of CD8+ T cell Exhaustion During Chronic Viral Infection, Immunity. 2007 Oct;27(4):670-84). 감염 42일 후에 비장세포 및 간 바이러스 역가를 분석하였다.
이들 마우스에서, 항-PD-L1 처리는, 이전에 보고된 바와 같이 (Barber, D.L., et al. Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection. Nature 439, 682-687 (2006)), 매치되는 이소형 대조군 항체에 의한 처리보다 더 강건한 CD8+ T 세포 활성화를 유도하였다 (88% 증가, P < 0.0001, 도 4f). 항-TIGIT 처리는 그 자체로도 또는 항-PD-L1과 조합되어서도 CD8+ T 세포 활성화에 대해 어떠한 분명한 효과도 갖지 않았다 (도 4f). 유사하게, PD-1 단독의 차단은 CD8+ T 세포 시토카인 적격을 중간 정도로 증가시킨 반면에, TIGIT 단독의 차단은 어떠한 효과도 없었다 (도 4g). 그러나, IFNγ-생산 CD8+ T 세포의 빈도는 항-TIGIT 및 항-PD-L1 둘 다로 처리된 마우스에서 극적으로 증가되었고, 항-PD-L1 단독으로 처리된 마우스에서 관찰되는 것보다 유의하게 더 큰 정도로 증가되었다 (도 4g 93% 증가, P = 0.0050). 유사한 효과가 CD4+ T 세포에 의해 관찰되었다 (도 5). 도 31에도 제시된 바와 같이, TIGIT/PD-L1 공동-차단은 항-PD-L1 단독으로 처리된 마우스와 비교하여 마우스에서 CD8+ T 세포 이펙터 기능을 유의하게 증진시켰지만 CD4+ T 세포 이펙터 기능은 그렇지 않았다. 유사한 효과가 또한 LCMV gp33 항원-특이적 T 세포에서 T 세포 확장 및 이펙터 기능에 대해 관찰되었다 (도 31). 이들 결과는 소진된 CD8+ T 세포에 대한 PD-1 및 TIGIT 사이의 강력한 상승작용을 입증하고, TIGIT가 CD8+ T 세포 시토카인 적격 및 이펙터 기능을 특이적으로 조절함을 나타낸다.
이들 결과와 일관되게, LCMV 바이러스 로드가 항-PD-L1 단독으로 처리된 마우스에서 중간 정도로 감소되었고, 항-TIGIT 단독으로 처리된 마우스에서는 감소되지 않았고, 항-TIGIT 및 항-PD-L1 둘 다로 처리된 마우스에서는 실질적으로 감소되었다 (항-PD-L1 처리에 의한 68% 바이러스 역가 감소, P = 0.0004. 항-TIGIT + 항-PD-L1 처리에 의한 92% 바이러스 역가 감소, P < 0.0001, 도 4h). 이들 데이터는 PD-1 및 TIGIT의 억제 효과 사이의 강력한 상승작용을 입증하고, PD-1과 달리, TIGIT는 이펙터 T 세포 활성화의 광범위한 억제제가 아니며 오히려 T 세포 시토카인 적격 및 이펙터 기능을 제한하는데 있어서 제한적 역할을 가짐을 시사한다.
실시예 4: TIGIT 발현은 인간 유방암에서 상승되고, CD8 및 억제 보조-수용체의 발현과 상호관련된다.
T 세포 소진은 또한 암의 주요 면역학적 특징으로, 많은 종양-침윤 림프구 (TIL)는 높은 수준의 억제 보조-수용체를 발현하고, 이펙터 시토카인을 생산하는 능력은 결여되어 있다 (Wherry, E.J. T cell exhaustion. Nature immunology 12, 492-499 (2011); Rabinovich, G.A., Gabrilovich, D. & Sotomayor, E.M. Immunosuppressive strategies that are mediated by tumor cells. Annual review of immunology 25, 267-296 (2007)).
TIGIT가 TIL 이펙터 기능을 억제하는지 여부를 결정하기 위해, 암 게놈 아틀라스 네트워크 (CGAN)에 의해 생성된 유방암 유전자 발현 마이크로어레이 데이터를 분석하였다 (Network, C.G.A. Comprehensive molecular portraits of human breast tumours. Nature 490, 61-70 (2012)).
TIGIT 발현은 전체적인 유방 종양 (정상 샘플에 비해 135% 증가, P = 6x10-12, 도 6a) 및 유방암의 4가지 주요 분자 하위유형에 걸쳐 (도 6a) 유의하게 상승되었다 (Perou, C.M., et al. Molecular portraits of human breast tumours. Nature 406, 747-752 (2000); Sorlie, T., et al. Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclasses with clinical implications. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 98, 10869-10874 (2001)). TIGIT의 발현은, TIL에 의한 그의 발현과 일관되게 CD3ε의 발현과 고도로 상호관련되었다 (R2 = 0.61, 도 6b). 흥미롭게도, TIGIT 발현은 CD8α와 고도로 상호관련되었지만, CD4와는 전혀 상호관련되지 않거나 또는 CD4와 단지 중간 정도로 상호관련되었고, 이는 TIGIT가 주로 CD8+ TIL 기능을 조절할 수 있음을 시사한다 (CD8α, R2 = 0.80. CD4, R2 = 0.42. 도 6c).
만성 바이러스 감염 동안 TIGIT 및 PD-1의 공동-발현을 고려하여, 본 발명자들은 또한 유방암에서 PD-1 및 다른 억제 보조-수용체와 TIGIT의 상관관계를 평가하였다. TIGIT 및 PD-1, CTLA4, 및 LAG3 사이의 상관관계는 매우 강력하였다 (PD-1, R2 = 0.87. CTLA4, R2 = 0.76. LAG3, R2 = 0.80. 도 6d). 종합하면, 이들 데이터는 TIGIT가 TIL, 특히 CD8+ T 세포에 의해 발현되고, 이것의 그들의 기능을 억제할 수 있음을 시사한다.
실시예 5: TIGIT 및 PD-1은 항-종양 T 세포 반응을 억제한다.
마우스에서 TIL에 의해 TIGIT를 보다 잘 특성화하기 위해, BALB/C 마우스에게 CT26 결장직장 암종 세포를 접종하였다. 간략하게, BALB/c 마우스에게 매트리겔 (BD 바이오사이언시스(BD Biosciences)) 중에 현탁시킨 1x105개의 CT26 결장 암종 세포를 우측 편측 흉곽 측복부 내로 피하로 접종하였다. 2주 후에, 대략 200 mm3의 종양을 보유하는 마우스를 3주 동안 1주에 3회 복강내 주사에 의해 35 mg/kg의 이소형 대조군 항체, 항-PD-L1 항체, 및/또는 항-TIGIT 항체가 제공되는 처리군으로 무작위 동원하였다. 종양을 캘리퍼로 1주에 2회 측정하였다. 종양이 궤양화/괴사되거나 또는 2000 mm3을 초과하여 성장한 동물은 안락사시켰다. 접종 14일 후에 종양이 대략 200mm3 크기에 이르면 비장세포 및 종양-침윤 림프구 (TIL)를 분석하였다.
인간 종양에서의 TIGIT 발현과 일관되게 (도 6), CD8+ 및 CD4+ CT26 TIL 둘 다는 높은 수준의 TIGIT를 발현하였다 (도 7a-7b). 또한, 만성 바이러스 감염 연구와 마찬가지로, TIL TIGIT 발현은 PD-1 (도 7a-7b) 및 Tim-3 (도 8)을 비롯한 다른 억제 보조-수용체의 발현과 밀접하게 상호관련되었다. TIGIT 발현의 유사한 패턴이 MC38 결장 암종 종양에서 발견되었다 (도 9).
항-종양 면역 반응과 관련하여 TIGIT 발현의 생리학적 관련성을 시험하기 위해, 확립된 CT26 종양 (대략 200mm3 크기)을 갖는 BALB/C 마우스를 200ug 이소형 대조군, 200ug 항-PD-L1, 500ug 항-TIGIT, 또는 200ug 항-PD-L1 + 500ug 항-TIGIT 항체로 3주 동안 처리하였다.
CT26 종양 성장은 항-TIGIT 또는 항-PD-L1 단독으로의 처리에 의해 단지 약간 늦춰졌고, 둘 다는 중앙 생존기간에서 중간 정도의 3일 증가를 생성하였다 (도 7c-7d). 그러나, 항-PD-L1 및 항-TIGIT 둘 다에 의한 조합 요법은 종양 성장을 극적으로 감소시켰다 (제16일째 중앙 종양 부피에서 75% 감소, P < 0.0001, 도 7c 및 도 10). 또한, 항-TIGIT 및 항-PD-L1 둘 다를 제공받은 마우스의 70%는 추가의 항체 처리의 부재 하에서도 완전하고 영속적인 종양 완화를 경험하였고, 연구 기간 동안 생존하였다 (도 7c-7d). 이들 효과는 또한 TIGIT 및 PD-1에 대한 차단 항체의 조합으로 처리된 종양-보유 마우스에서도 관찰되었다.
이들 생존 마우스의 CT26 종양 세포에 대한 면역을 시험하기 위해, 초기 접종 대략 60일 후에, 항-TIGIT + 항-PD-L1을 제공받은 완전 완화 (CR) 상태의 마우스 뿐만 아니라 나이브 BALB/c 마우스에게 CT26 세포를 그의 좌측 (이전에 접종되지 않은) 편측 흉곽 측복부 내로 재-접종하였다. 이들 마우스에게 또한 매트리겔 중의 1 X 105개의 EMT6 유방 암종 세포를 제4 유방 지방 패드 내로 접종하였다. 종양을 1주에 2회 측정하였다. 종양이 궤양화/괴사되거나 또는 총 종양 부담이 2000 mm3을 초과하는 동물은 안락사시켰다.
도 7e에 제시된 바와 같이, 둘 다의 종양은 나이브 대조군 마우스에서 용이하게 성장하였지만, 이전에 CT26 종양이 소거된 마우스에서는 EMT6 종양만이 성장하였다. 이들 결과는 종양발생 동안 TIGIT 및 PD-1의 공동-차단이 CT26 종양 세포에 대해 특이적인 면역 상태를 확립시킴을 나타낸다.
TIGIT/PD-L1 공동-차단의 효능이 CD8+ T 세포에 의해 매개되는지 여부를 결정하기 위해, 항-TIGIT 및 항-PDL1로의 처리 개시 시에 고갈성 항체를 사용하여 CT26-종양 보유 마우스에서 CD8+ T 세포를 제거하였다. 항-TIGIT 및 항-PD-L1 항체로 처리된 마우스는 처리 시작 시에 CD8+ T 세포가 고갈된 경우에 CT26 종양을 거부할 수 없었다 (처리 17일 후에 평균 종양 부피에서 1532% 증가, P = 0.0004, 도 32a-32b). 또한, CD8+ T 세포 고갈은 이전에 처리된 CR 마우스가 재-접종된 CT26 종양을 제어하는 능력을 손상시켰다 (도 32c). 종합하면, 이들 결과는 항-TIGIT 및 항-PD-L1이 CD8+ T 세포를 통해 작용하여 효과적인 원발성 및 속발성 항-종양 면역 반응을 도출함을 입증하였다.
종양 세포의 PVR 발현이 TIGIT/PD-L1 공동-차단 효능을 위해 불필요한지 여부를 결정하기 위해, 야생형 BALB/c 마우스에게 야생형 CT26 종양 (PVR을 발현함) 또는 PVR-결핍 CT26 종양을 접종하였다. 간략하게, 야생형 CT26 종양 세포를 PVR의 발현을 감소시키는 핵산으로 일시적으로 형질감염시켰다. 형질감염 대략 2주 후에, CT26 세포를 유동 세포측정법 및 qPCR에 의해 PVR 발현의 손실에 기초하여 서브클로닝하였다. 종양이 150-200 mm3 크기에 이르면, 마우스를 항-TIGIT 및 항-PD-L1 항체, 또는 이소형-매치되는 대조군 항체로 처리하였다. 항-TIGIT 및 항-PD-L1 항체로 처리된 마우스는 대조군 항체로 처리된 종양-접종된 마우스와 비교하여 야생형 및 PVR-결핍 종양 둘 다를 거부할 수 있었다 (도 33). 이들 결과는 항-TIGIT 및 항-PD-L1이 종양-발현 PVR과 독립적으로 작용함을 입증하였다.
MC38 종양 모델에서 TIGIT/PD-L1 공동-차단의 효능을 또한 시험하고 확인하였다. 야생형 C57BL6/J 마우스에게 동계 MC38 결장직장 암종 세포를 피하로 접종하고, 확립된 종양을 전과 같이 TIGIT 및 PD-L1 차단 항체의 조합으로 처리하였다. CT26 모델과 달리, 항-PD-L1 단독으로의 처리는 일부 마우스에서 완전 반응을 유도하는데 충분하였다 (도 25). 그러나, CT26 모델에서와 같이, MC38 종양-보유 마우스의 항-TIGIT 및 항-PD-L1 둘 다로의 처리는 대부분의 마우스에서 종양 성장을 상승작용적으로 역전시키고 종양 클리어런스를 유도하였다 (도 26). 이들 효과는 또한 동계 EMT6 유방 암종 세포를 접종한 마우스에서도 관찰되었다 (도 34).
이들 결과는 TIGIT 및 PD-1의 공동-차단이 지속적이고 항원-특이적인 항-종양 면역 반응을 도출할 수 있음을 입증하였다. 이들 결과는 또한 적응 항-종양 반응이 완전히 기능적이고, 치유적으로 치료된 마우스에서 재활성화됨을 시사하였다.
종양-침윤 림프구에 대한 TIGIT 및 PD-1 차단 그 자체의 기능적 효과를 평가하기 위해, 마우스에게 CT26 종양 세포를 접종하고, 전과 같이 항-TIGIT 및/또는 항-PD-L1로 처리하였다. 처리 시작 7일 후에, 유동 세포측정법에 의한 분석을 위해 종양 및 종양-배액 림프절을 수집하였다.
종양-침윤 및 종양-배액 림프절 상주 CD4+ T 세포는 IFNγ를 거의 생산하지 않았고, TIGIT/PD-1 차단 시 더욱 생산하지 않았다 (도 11). 그러나, 항-TIGIT 및 항-PD-L1 둘 다로 처리된 마우스로부터의 종양-침윤 CD8+ T 세포는 시험관내 자극 시 IFNγ 생산에 유의하게 더 적격이었지만 (대조군에 비해 174% 증가, P = 0.0001, 도 13d), 항-TIGIT 또는 항-PD-L1 단독으로 처리된 마우스로부터의 것은 그렇지 않았다. 유사한 결과가 TNFα의 CD8+ TIL 생산에 대해 관찰되었다 (도 12).
흥미롭게도, 항-TIGIT 또는 항-PD-L1 단독 또는 둘 다로 처리된 마우스에서 모두 종양-배액 림프절 상주 CD8+ T 세포의 증가된 시토카인 적격이 관찰되었고 (75-113% 증가, P < 0.001, 도 13), 이는 림프절-상주 CD8+ T 세포가 그의 종양-침윤 대응물보다 더 낮은 정도의 억제 하에 있음을 시사한다. 종양-침윤 및 종양-배액 림프절 상주 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포의 축적 및 표현형 활성화는 변하지 않았고, 단일 항체 처리 및 이중 항체 및 이중 항체 처리에 의해 각각 약하게 증진되었다 (도 12-13). 종양 및 종양-배액 림프절에서 IFNγ/TNFα 이중-생산 CD8+ T 세포의 빈도는 유사한 패턴을 따랐다 (도 35a-35b).
따라서, 종양-배액 림프절에서 CD8+ T 세포 이펙터 기능을 증진시키는데 TIGIT 또는 PD-L1 단독의 차단이 충분한 반면에, 종양 미세환경이 고도로 면역억제성이라는 개념과 일관되게, 종양 그 자체 내에서 소진된 CD8+ T 세포의 기능을 회복시키는데에는 둘 다의 수용체의 차단이 필요하였다.
실시예 6: 종양-침윤 CD8+ T 세포 상에서의 CD226과 TIGIT 공동-발현.
TIGIT는 폴리오바이러스 수용체 (PVR)에의 결합에 대해 공동-자극 수용체 CD226과 경쟁한다 (Yu, X., et al. The surface protein TIGIT suppresses T cell activation by promoting the generation of mature immunoregulatory dendritic cells. Nature immunology 10, 48-57 (2009)). CD226 결핍이 만성 바이러스 감염 동안 T 세포 소진을 증진시킬 수 있음을 고려하면 (Cella, M., et al. Loss of DNAM-1 contributes to CD8+ T-cell exhaustion in chronic HIV-1 infection. European Journal of Immunology 40(4), 949-954 (2010); Welch, M., et al. CD8 T cell defect of TNA-a and IL-2 in DNAM-1 deficient mice delays clearance in vivo of a persistent virus infection. Virology 429(2) 163-170 (2012)), TIGIT가 CD226 활성을 간섭함으로써 부분적으로 T 세포 반응을 억제할 수 있는 것이 가능하다.
T 세포 반응을 억제하는데 있어서 CD226 및 TIGIT 사이에 관계가 존재하는지 여부를 평가하기 위해, 종양 침윤 CD8+ T 세포 상에서의 TIGIT 및 CD226의 발현을 결정하였다.
도 14에 제시된 바와 같이, C57BL6/J 마우스에게 MC38 결장직장 암종 세포를 접종하였다. 접종 대략 14일 후에 종양이 대략 200mm3 크기에 이르면 FACs 분석에 의해 비장세포 및 종양-침윤 림프구 (TIL)를 분석하였다. 비장 B 세포 (회색), 비장 CD8+ T 세포 (청색), 및 TIGIT+ 종양-침윤 CD8+ T 세포 (적색)에 의한 CD226 발현의 대표적인 히스토그램. 데이터는 2종의 독립적 실험을 대표한다; n = 5. 도 14는 비장 CD8+ T 세포가 CD226을 고도로 발현하고, 또한 종양-침윤 TIGIT+ CD8+ T 세포도 또한 CD226을 고도로 발현함을 예시한다. 데이터는 TIGIT 및 CD226이 뮤린 종양-침윤 CD8+ T 세포 상에서 대등하게 발현되고, CD8+ T 세포 상에서 서로의 기능을 조절할 수 있음을 입증한다. 이러한 관찰은 또한 TIGIT 및 CD226을 공동-발현하는 활성화된 CD4+ T 세포 및 NK 세포에서의 관찰과 유사하다.
실시예 7: 형질감염된 세포 상의 TIGIT 및 CD226의 공동-면역침전.
TIGIT가 세포 표면에서 CD226과 상호작용하는지 여부를 결정하기 위해, 세포를 인간-TIGIT 및 인간-CD226으로 공동-형질감염시키고, 면역침전시켰다. 간략하게, 15 cm 플레이트에서 COS 7 세포를 TIGIT-HA (5ng) 또는 CD226-Flag (10ng) 태그부착된 단백질에 대한 cDNA를 함유하는 발현 플라스미드, 또는 대조군 플라스미드 (pRK)로 공동-형질감염시켰다. 형질감염 23시간 후에 세포를 PBS로 세척하고, 4 ml의 빙냉 PBS 중에서 수거하고, 300xg에서 5분 동안 원심분리하고, 세포 펠릿을 4℃에서 2 ml의 용해 완충제 중에 재현탁시켰다. 세포를 15분마다 볼텍싱하면서 50분에 걸쳐 용해시키고, 이어서 4℃에서 15분 동안 10,00xg에서 원심분리하였다. 생성된 상청액을 4℃에서 30분 동안 회전시키는 것에 의해 160 μl의 CL6B 세파로스 슬러리로 사전-청정화하고, 3000xg에서 2분 동안 원심분리하였다. 상청액을 2개의 튜브 내로 동등하게 분할하고, 표준 절차를 사용하여 항-HA 또는 항-flag로 면역-침전시켰다. 면역-침전된 단백질에 대해 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯을 행하였다. 웨스턴 블롯은 항-Flag-HRP 또는 항-HA-HRP로 탐침하였다.
도 15에 제시된 바와 같이, 항-TIGIT는 CD226을 풀 다운시키고 항-CD226은 TIGIT를 풀 다운시켜, TIGIT 및 CD226은 세포 표면에서 물리적 접촉 상태에 있음을 입증하였다.
실시예 8: TIGIT 및 CD226은 1차 CD8+ T 세포에서 상호작용한다.
CD226 및 TIGIT가 형질감염된 세포에서 상호작용하는 능력을 입증한 것에 더하여, 1차 CD8+ T 세포에서의 CD226 및 TIGIT의 상호작용을 또한 평가하였다. 간략하게, MACS-풍부화 비장 C57BL6/J CD8+ T 세포를 플레이트-결합된 항-CD3 및 항-CD28 항체 및 재조합 IL-2로 48시간 동안 자극하고 용해시켰다. 세포 용해물을 항-TIGIT로 면역침전시키고, 항-CD226으로 탐침하였다. 도 16은 TIGIT 및 CD226 둘 다가 공동-면역침전에서 검출가능하였으므로 이들은 활성화된 1차 CD8+ 세포에서 상호작용함을 예시한다. 이러한 데이터는 CD226 및 TIGIT가 또한 1차 세포 상에서 서로 상호작용함을 입증한다.
실시예 9: TR-FRET (시간 분해-형광 공명 에너지 전달)을 사용한 형질감염된 세포 상에서의 TIGIT/CD226 상호작용
TIGIT 및 CD226 사이에 임의의 분자 상호작용이 존재하는지 여부를 평가하기 위해, TR-FRET 방법론을 사용하였다. FRET (형광 공명 에너지 전달)는 2개의 형광단, 공여자 및 수용자 사이의, 근접 시 에너지 전달을 기반으로 한다. 생체분자 사이의 분자 상호작용은 각각의 파트너를 형광 표지와 커플링시키고 에너지 전달 수준을 검출함으로써 평가할 수 있다. 2개의 엔티티가 서로 충분히 근접하게 되면, 에너지원에 의한 공여자의 여기는 수용자에 대한 에너지 전달을 촉발하고, 이는 차례로 주어진 파장에서 특정 형광을 방출한다. 이들 스펙트럼 특성으로 인해, 공여자-수용자 복합체는 미결합 파트너로부터의 물리적 분리에 대한 필요 없이 검출될 수 있다. FRET의 시간 분해 (TR) 측정과의 조합은 신호가 배경 형광에서 분명해지게 한다. 이는 전형적으로 시스템 여기 및 형광 측정 사이에 시간 지연을 도입하여 신호가 모든 비-특이적 단기 방출로부터 분명해지도록 하는 것에 의해 이루어진다.
TR-FRET를 사용하여 여기서 본 발명자들은 TIGIT 및 CD226이 동일한 세포에서 발현된 경우에 FRET를 도출함을 입증하였고, 이는 이들 2개의 분자의 분자 상호작용을 나타낸다. 간략하게, COS-7세포를 리포펙타민(Lipofectamine) 2000 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies))을 사용하여 SNAP-태그부착된 (ST) CD226 및 HA-TIGIT로 형질감염시키고, 백색 96-웰 플레이트 (코스타(Costar))에 웰당 100,000개의 세포로 시딩하였다. 24시간 후에, 세포를 DMEM 10% FCS 중에 희석시킨 100 nM의 공여자-접합된 벤질-구아닌 SNAP-Lumi-4Tb (시스바이오(Cisbio)) 및 1 μM 공여자-접합된 벤질-구아닌 SNAP-A647 (뉴잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs))로 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 표지하였다. PBS 중에서 3회 세척 후에, 343 nm에서 레이저 여기에 이어 60 μs 지연 후에 사파이어2(Safire2) 플레이트 판독기 (테칸(Tecan))를 사용하여 FRET 신호를 665 nm에서 400 μs 동안 기록하였다. 항-TIGIT 항체를 시험한 경우에, 15분 인큐베이션 후에 FRET 신호를 또한 기록하였다. 이어서 FRET 강도를 620 nm에서의 공여자 방출로 나눈 것으로서 FRET 비를 계산하였다. FRET 강도는: (SNAP-공여자 및 수용자로 표지된 세포로부터의 665 nm에서의 신호) - (SNAP-공여자 단독으로 표지된 동일한 배치의 형질감염된 세포로부터의 665 nm에서의 신호).
도 17에 제시된 바와 같이, TIGIT는 CD226 동종이량체를 직접적으로 교란시키고 그의 해리를 유발할 수 있었다. 도 17a에 제시된 바와 같이, Flag-ST-CD226 동종이량체의 해리는, 일정한 양의 Flag-ST-CD226 및 증가하는 농도의 HA-TIGIT를 발현하는 COS-7 세포 상에서 측정된 Flag-ST-CD226 사이의 감소하는 FRET 비에 의해 예시되는 바와 같이, 증가하는 농도의 HA-TIGIT에 의해 관찰되었다. 그러나, 도 17b에 제시된 바와 같이, 항-TIGIT 항체를 세포 배양물에 첨가한 경우에, 이는 TIGIT 및 CD226의 회합 능력을 차단하였다. 이는 Flag-ST-CD226 동종이량체의 FRET 강도에서의 감소의 결여에 의해 예시된다. 이는 CD226 및 TIGIT가 복합체로서 회합되지만 항-TIGIT 항체는 이들 상호작용을 교란시킬 수 있음을 입증한다 (도 17a 및 17b).
TR-FRET를 사용하여, TIGIT가 CD226과 회합되는 능력을 또한 입증하였고 이를 도 17c 및 17d에 제시한다. 간략하게, 1 μM의 공여자-접합된 벤질-구아닌 SNAP-A647를 사용한 SNAP-태그 표지 후에 (상기 참조), 세포를 PBS 중에서 3회 세척하고, PBS + 0.2% BSA 중에 희석시킨 2 nM의 항-HA 공여자-접합된 Lumi-4Tb (시스바이오)와 함께 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 FRET 신호를 기록하였다. 이 경우에, FRET 강도는: (SNAP-수용자 및 항-HA 공여자로 표지된 세포로부터의 665 nm에서의 신호) - (SNAP-수용자 및 항-HA 공여자로 표지된 모의 형질감염된 세포로부터의 665 nm에서의 신호)이다.
도 17c에 제시된 바와 같이, Flag-ST-CD226과 HA-TIGIT의 회합은, 일정한 양의 Flag-ST-CD226 및 증가하는 농도의 HA-TIGIT를 발현하는 COS-7 세포 상에서 측정된 Flag-ST-CD226 및 HA-TIGIT 사이의 증가하는 FRET 강도에 의해 예시되는 바와 같이 관찰되었다. 항-TIGIT 항체를 첨가한 경우에, FRET 강도는 도 17d에 제시된 바와 같이 Flag-ST-CD226과 HA-TIGIT 사이에서 감소되었고, 이는 TIGIT와 CD226의 상호작용이 항-TIGIT 차단 항체에 의해 차단될 수 있음을 시사한다.
FRET 실험에서 Flag-ST-CD226 및 HA-TIGIT의 세포 표면 발현을 확인하기 위해, 표시된 태그부착된-구축물을 발현하는 무손상 COS-7 세포 상에서 항-Flag 및 항-HA ELISA를 수행하였다. 간략하게, COS7 세포를 4% 파라포름알데히드로 고정시키고, 2회 세척하고, 포스페이트-완충 염수 + 1% 소 태아 혈청 (FCS) 중에서 차단시켰다. 이어서 세포를, 둘 다 양고추냉이 퍼옥시다제와 접합시킨 항-HA 모노클로날 항체 (클론 3F10, 로슈 어플라이드 사이언스(Roche applied science)) 또는 항-Flag-M2 모노클로날 항체 (시그마(Sigma))와 함께 인큐베이션하였다. 세척 후에, 세포를 슈퍼시그널(SuperSignal) ELISA 기질 (피어스(Pierce))과 함께 인큐베이션하고, 사파이어2 플레이트 판독기 (테칸) 상에서 화학발광을 검출하였다. 특정 신호는 모의 형질감염된 세포에 대해 기록된 신호를 차감하여 계산하였다. 도 18에 예시된 바와 같이, CD226 및 TIGIT 둘 다의 세포 표면 발현을 ELISA 검정으로 확인하였다.
TIGIT:CD226 상호작용이 PVR 결합에 의해 구동되는지 확인하기 위해, Flag-ST-CD226 및 HA-TIGIT (WT) 또는 HA-TIGIT Q56R을 문헌 [Stengel et al., (2012) PNAS 109(14):5399-5904]에 기재된 바와 같이 생성하고, FRET 비를 기재된 바와 같이 결정하였다. 도 24에 제시된 바와 같이, WT TIGIT 및 Q56R TIGIT는 동일한 효능으로 CD226과 결합하였다.
이러한 데이터는 CD226 및 TIGIT가 복합체로서 회합됨을 입증할 뿐만 아니라, 항-TIGIT 항체는 이들 상호작용을 교란시킬 수 있고, TIGIT:CD226 상호작용은 PVR 결합에 의해 구동되지 않음을 입증한다. 데이터는 T 세포의 CD226-매개 활성화를 제한하는데 있어서 TIGIT의 역할을 지지하고, CD226 활성의 간섭은 TIGIT가 T 세포 반응 및 활성을 억제하는 중요한 작용 메카니즘일 수 있다.
실시예 10: CD226 차단은 생체내 TIGIT/PD-L1 차단의 이펙터를 역전시킨다.
CD226 및 TIGIT 상호작용의 생리학적 관련성을 시험하기 위해, 마우스를 클론 13 LCMV로 만성 감염시킨 다음, 항-CD226 차단 항체의 존재 또는 부재 하에 항-TIGIT + 항-PD-L1로 처리하였다. 간략하게, C57BL6/J 마우스에서 CD4+ T 세포를 간략하게 고갈시키고 클론 13 균주 LCMV로 감염시켰다. 만성 감염을 위해, 마우스를 2x106개의 PFU 클론 13 균주 LCMV로 정맥내 감염시키고, 각각 감염 3일 전 및 4일 후에 500ug 및 250ug의 고갈성 항-CD4 항체 (클론 GK1.5)로 처리하였다. 표시된 바와 같이, 클론 13 균주 LCMV로 감염된 마우스에게 감염후 제28일에서 제42일까지 1주에 3회 200ug의 이소형 대조군 항체, 500ug의 항-CD226 항체, 200ug의 항-PD-L1 항체 + 500ug의 항-TIGIT 항체, 또는 500ug의 항-CD226 항체 + 200ug의 항-PD-L1 항체 + 500ug의 항-TIGIT 항체의 복강내 주사를 제공하였다. 감염 28일 후에 처리를 시작하였고, 이는 이러한 만성 바이러스 감염 모델에서 이 시점에 T 세포 반응이 대체로 소진되기 때문이다 (Wherry et al, Molecular Signature of CD8+ T cell Exhaustion During Chronic Viral Infection, Immunity. 2007 Oct;27(4):670-84). 감염 42일 후에 비장세포 및 간 바이러스 역가를 분석하였다.
이들 마우스에서, 항-CD226 단독 처리는 CD8+ T 세포 빈도, 활성화, 또는 시토카인 적격에 대해 제한적 효과를 가졌다 (도 19a-19c). 그러나, 항-CD226 처리는 항-PD-L1 + 항-TIGIT로 처리된 마우스에서 관찰되는 CD8+ T 세포 활성화 및 IFNg 생산에서의 증가를 강력하게 역전시켰다 (각각 59% 및 58% 감소, P < 0.001. 도 19b-19d).
이들 결과와 일관되게, LCMV 바이러스 로드는 항-PD-L1 + 항-TIGIT 단독으로 처리된 마우스에서보다 항-CD226 + 항-PD-L1 + 항-TIGIT로 처리된 마우스에서 유의하게 더 높았다 (272% 증가, P < 0.001, 도 19d).
이러한 데이터는 TIGIT가 만성 T 세포 반응을 제한하는 1차 메카니즘이 CD226-매개 공동-자극 간섭임을 시사한다. 데이터는 CD226과의 상호작용 및 교란에 있어서 이전에 공지되지 않은 TIGIT의 역할을 확인시켜주었고, 이는 CD8+ T 세포에서 주요 공동-자극 신호의 감소 또는 손실을 야기한다. 데이터는 CD226-매개 T 세포 공동자극 간섭이 TIGIT가 예컨대 암 또는 만성 바이러스 감염 동안 만성 T 세포 반응을 제한하는 주요 메카니즘일 수 있음을 입증한다. 데이터는 또한 TIGIT의 CD226과 상호작용하는 능력 및/또는 TIGIT의 CD226 이량체화를 교란시키는 능력을 간섭함으로써 만성 자극되거나 소진된 CD8+ 또는 CD4+ T 세포의 이펙터 기능을 회복시키기 위해 의도되는 항-TIGIT 항체에 대한 본질적인 파라미터를 정의한다.
물질 및 방법
마우스. C57BL/6J 및 BALB/c 마우스를 잭슨 래보러토리(Jackson Laboratory) 및 찰스 리버 래보러토리즈(Charles River Laboratories)로부터 구입하였다. CD4cre 마우스 및 TIGITloxP / loxP 마우스를 C57BL/6J 배경에서 표준 절차를 사용하여 생성하고, 교배시켰다. TIGIT 발현은 TIGITloxP / loxP CD4cre 마우스에서 T 세포로부터 96% 효율로 제거되었다.
유동 세포측정법. 비장, 림프절 및 종양의 단세포 현탁액을 완만한 기계적 교란 하에 제조하였다. 표면 염색은 CD4, CD8, CD44, CD62L, PD-1 (이바이오사이언시스(eBiosciences)) 및 CD226 (바이오레전드(Biolegend))에 대한 상업용 항체로 수행하였다. TIGIT 항체를 제넨테크(Genentech)에서 이전에 기재된 바와 같이 (Yu, X. et al. The surface protein TIGIT suppresses T cell activation by promoting the generation of mature immunoregulatory dendritic cells. Nature immunology 10, 48-57 (2009)) 생성하고, 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 647에 제조업체의 지침 (몰레큘라 프로브스(Molecular Probes))에 따라 접합시켰다.
세포내 시토카인 염색 (ICS)을 위해, 세포를 3 μg/mL 브레펠딘 A (Brefeldin A) (이바이오사이언시스)의 존재 하에 20 ng/mL 포르볼(Phorbol) 12-미리스테이트 13-아세테이트 (PMA, 시그마) 및 1 μM 이오노마이신(Ionomycin) (시그마)로 4시간 동안 자극하였다. 자극 후에, 세포를 기재된 바와 같이 표면 마커에 대해 염색하고, 이바이오사이언스의 FoxP3 고정 완충제 세트를 사용하여 제조업체의 지침에 따라 고정시키고 투과되게 하였다. 고정된 세포를 IFNγ 및 TNFα에 대한 항체 (이바이오사이언시스)로 염색하였다.
차단 항체. 차단 항-TIGIT IgG2a 모노클로날 항체 (클론 10A7, 마우스 및 인간 TIGIT 둘 다에 대해 반응성)를 이전에 기재된 바와 같이 생성하고, 뮤린 IgG2a 백본으로 클로닝하였다. Pdl1-/- 마우스를 PD-1-Fc 융합 단백질로 면역화함으로써 차단 항-PD-L1 IgG2a 모노클로날 항체 (클론 25A1)를 생성하고, 뮤린 IgG2a 백본으로 클로닝하였다. 클론 25A1을 Fcγ 수용체에 대한 결합을 제거하는 이전에 기재된 돌연변이에 의해 변형시켰다. 햄스터를 재조합 뮤린 CD226으로 면역화함으로써 차단 항-CD226 IgG2a 모노클로날 항체 (클론 37F6)를 생성하고, 뮤린 IgG2a 백본으로 클로닝하였다. 이들 항체를 또한 본원에 기재된 다른 실시예에서 기재된 시험에 사용하였다.
바이러스 감염. 급성 감염을 위해, 마우스를 2x106개의 플라크-형성 단위 (PFU) 암스트롱 균주 LCMV로 정맥내로 감염시켰다. 만성 감염을 위해, 마우스를 2x106개의 PFU 클론 13 균주 LCMV로 정맥내로 감염시키고, 각각 감염 3일 전 및 4일 후에 500ug 및 250ug의 고갈성 항-CD4 항체 (클론 GK1.5)로 처리하였다. 표시된 바와 같이, 클론 13 균주 LCMV로 감염된 마우스에게 감염후 제28일에서 제42일까지 1주에 3회 200ug의 이소형 대조군 항체, 200ug의 항-PD-L1 항체, 및/또는 500ug의 항-TIGIT 항체의 복강내 주사를 제공하였다.
바이러스 역가 검정. MC57 세포의 단층을 1% 메틸셀룰로스의 오버레이로 배양하고, LCMV-감염된 마우스로부터의 연속 희석 간 균질물로 감염시켰다. 감염 72시간 후에, 마우스를 4% 파라포름알데히드로 고정시키고, 0.5% 트리톤-X로 투과되게 하였다. 바이러스 플라크를 항-LCMV NP (클론 VL-4) 및 HRP-접합된 항-래트 IgG로 염색하고, O-페닐렌디아민 (OPD, 시그마)으로 가시화하였다.
생물정보학. 유방암 유전자 발현 데이터 마이크로어레이 데이터를 암 유전자 아틀라스 네트워크 (Network, T.C.G.A. Comprehensive genomic characterization of squamous cell lung cancers. Nature 489, 519-525 (2012))로부터 수득하였다. 마이크로어레이 데이터의 프로세싱 및 정규화는 R 프로그래밍 언어 (http://r-project.org) 및 바이오컨덕터(Bioconductor)의 림마 패키지(limma package) (http://bioconductor.org)를 사용하여 수행하였다. 각각의 채널로부터의 마이크로어레이 강도 값은 이전에 기재된 바와 같이22 정규 + 지수 배경 보정 방법을 사용하여 사전프로세싱하였다. 이어서 보정된 강도 값을 이전에 기재된 바와 같이23 분위 정규화를 사용하여 정규화하였다. 정규화된 로그-비 데이터는 각각의 어레이에 대한 시험 채널로부터 참조 채널을 차감하여 계산하였다. 이전에 기재된 바와 같이24 비-특이적 필터를 사용하고, 공지된 유전자에 대해 맵핑되지 않은 프로브를 제거하고, 데이터세트를 유전자당 1개의 프로브로 감소시켜 데이터를 추가로 필터링하였다. 차등 발현 분석을 위해, 이전에 기재된 바와 같이 (Smyth, G.K. Linear models and empirical bayes methods for assessing differential expression in microarray experiments. Statistical applications in genetics and molecular biology 3, Article3 (2004)) 림마 패키지로 중도 t-통계를 계산하였다. 상관관계를 평가하기 위해, 피어슨(Pearson)의 상관 계수를 사용하였다.
CT26 결장 암종. BALB/c에게 매트리겔 (BD 바이오사이언시스) 중에 현탁시킨 1x105개의 CT26 결장 암종 세포를 우측 편측 흉곽 측복부 내로 피하로 접종하였다. 2주 후에, 대략 200 mm3의 종양을 보유하는 마우스를 3주 동안 1주에 3회 복강내 주사에 의해 35 mg/kg의 이소형 대조군 항체, 항-PD-L1 항체, 및/또는 항-TIGIT 항체가 제공되는 처리군으로 무작위 동원하였다. 종양을 캘리퍼로 1주에 2회 측정하였다. 종양이 궤양화/괴사되거나 또는 2000 mm3을 초과하여 성장한 동물은 안락사시켰다.
EMT6 유방 암종. BALB/c 마우스에게 매트리겔 (BD 바이오사이언시스) 중 1x105개의 동계 EMT6 유방 암종 세포를 제4 유방 지방 패드 내로 피하로 접종하였다. 2주 후에, 150-200 mm3의 종양을 보유하는 마우스를 3주 동안 1주에 3회 복강내 주사에 의해 35 mg/kg의 이소형 대조군 항체, 항-PD-L1 항체, 및/또는 항-TIGIT 항체가 제공되는 처리군으로 무작위 동원하였다. 종양을 캘리퍼로 1주에 2회 측정하고, 종양 부피를 변형된 타원체 공식, ½ x (길이 x 너비2)를 사용하여 계산하였다. 종양이 32 mm3 이하로 수축된 동물은 완전 반응 (CR) 상태인 것으로 간주하였다. 종양이 2000 mm3 초과로 성장한 동물은 진행성인 것으로 간주하고 안락사시켰다. 종양이 진행 또는 완전 반응 전에 궤양화된 동물은 안락사시키고 연구에서 제거하였다.
CT26 재-챌린지. 표시된 바와 같이, CT26 결장 암종 세포를 상기 기재된 바와 같이 이전에 접종한 BALB/c 마우스에게 CT26 세포를 좌측 (이전에 접종되지 않은) 편측 흉곽 측복부 내로 재-접종하였다. 이들 마우스에게 또한 매트리겔 중 1 x 105개의 EMT6 유방 암종 세포를 제4 유방 지방 패드 내로 접종하였다. 종양을 1주에 2회 측정하였다. 종양이 궤양화/괴사되거나 또는 총 종양 부담이 2000 mm3을 초과하는 동물은 안락사시켰다.
통계. 통계 검정은 독립표본 (명시된 경우에 대응표본) 2-꼬리 스튜던트 t-검정을 사용하여 수행하였다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 도시한다.
동물 연구 감독. 모든 동물 연구는 제넨테크의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인받았다.
실시예 11: TIGIT 발현은 인간 암에서 상승되고, CD8 및 PD-1 발현 및 CD8+ T 세포 침윤과 상호관련된다.
물질 및 방법
생물정보학. RNA-서열분석 데이터의 프로세싱 및 분석은 바이오컨덕터 프로젝트 (http://www.bioconductor.org)로부터의 여러 패키지와 함께 R 프로그래밍 언어 (http://www.r-project.org)를 사용하여 수행하였다. 암 및 매치되는 정상 샘플에 대한 RNA-서열분석 데이터는 TCGA로부터 5종의 상이한 적응증에 대해 수득하였다: 유방암 (Network, C.G.A. Comprehensive molecular portraits of human breast tumours. Nature 490, 61-70 (2012)), 결장 선암종 (Network, T.C.G.A. Comprehensive molecular characterization of human colon and rectal cancer. Nature 487, 330-337 (2012)), 신장 투명 세포 암종 (Network, C.G.A. Comprehensive molecular characterization of clear cell renal cell carcinoma. Nature 499, 43-49 (2013)), 폐 편평 세포 암종 (Network, T.C.G.A. Comprehensive genomic characterization of squamous cell lung cancers. Nature 489, 519-525 (2012)), 및 자궁내막 암종 (Network, T.C.G.A. Integrated genomic characterization of endometrial carcinoma. Nature 497, 67-73 (2012)).
미가공 RNA-서열 판독물을 HTSeqGenie 바이오컨덕터 패키지를 사용하여 프로세싱하였다. 간략하게, 판독물을 GSNAP 알고리즘 (Wu, T.D. & Nacu, S. Fast and SNP-tolerant detection of complex variants and splicing in short reads. Bioinformatics (Oxford, England) 26, 873-881 (2010))을 사용하여 인간 게놈 (NCBI 빌드 37)과 정렬시켰다. 엑손에 속하는 고유하게 정렬된 판독 쌍을 카운팅하여 개개의 유전자에 대한 유전자 발현 수준 추정치를 제공하였다. 본 발명자들은 엣지R(edgeR) 패키지 (Robinson, M.D., McCarthy, D.J. & Smyth, G.K. edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data. Bioinformatics (Oxford, England) 26, 139-140 (2010))로부터의 라이브러리 크기 추정을 사용하여 상이한 샘플에 걸쳐 그의 각각의 서열분석 깊이에 대해 정규화하였다.
T 세포 특이적 유전자 서명을 유도하기 위해, 본 발명자들은 IRIS 프로젝트에 의해 확인된 T 세포 유전자를 수동으로 큐레이트하여, 세포 주기 과정과 연관된 유전자, 다른 조직에서 고도로 발현되는 유전자, 및 공지된 공동-활성화 및 공동-억제 수용체를 제거하였다. 이는 T 세포에 대해 특이적인 15-유전자 서명을 생성하였다. 폐 편평 세포 암종 데이터에서 T 세포 유전자 발현 서명 스코어를 계산하기 위해, 본 발명자들은 먼저 림마 바이오컨덕터 패키지로부터의 붐(voom) 함수를 사용하여 미가공 카운트 데이터에 대해 분산 안정화 변환을 수행하였다. 이어서 본 발명자들은 15-유전자 T 세포 서명으로부터 중앙화 및 규모화 분산-안정화 데이터의 제1 고유벡터를 계산하였다. 이러한 접근법은 관련 T 세포 존재비의 강건한 샘플당 추정치를 생성한다. 이어서 T 세포 서명 스코어를 포함하는 선형 모델을 다시 림마 패키지를 사용하여 각각의 유전자에 대해 피팅시켰다. 이어서 본 발명자들은 본 발명자들의 선형 모델에서 T 세포 서명과 그의 상관관계에 의해 유전자의 순위를 결정하여, T 세포 서명과 양의 상관관계가 있는 유전자만을 선택하였다. T 세포-연관 유전자를 열지도로서 가시화하기 위해, 본 발명자들은 분산-안정화 데이터를 단위 분산으로 중앙화 및 규모화하여, 상이한 평균 발현 수준을 갖는 유전자가 비교되게 하였다.
TIGIT 및 다른 유전자의 발현 사이의 상관관계를 결정하기 위해, 본 발명자들은 RNA-서열분석 카운트 데이터를 정규화하여 엣지R 바이오컨덕터 패키지로부터의 방법을 사용하여 (Robinson, M.D., McCarthy, D.J. & Smyth, G.K. edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data. Bioinformatics (Oxford, England) 26, 139-140 (2010)) 라이브러리 크기에서의 차이를 확인하였다. 이어서 본 발명자들은 정규화된 카운트에 대해 스피어만의 랭크 상관 계수를 계산하였다. 본 발명자들은 rho > 0.75는 강력한 상관관계를 나타내는 것으로, rho ≤ 0.75이지만 > 0.5는 중간 정도의 상관관계를 나타내는 것으로, rho ≤ 0.5이지만 > 0.25는 약한 상관관계를 나타내는 것으로 간주하였다.
각각의 적응증에 걸쳐 TIGIT/CD3ε 비의 계산을 위해, 본 발명자들은 먼저 각각의 RNA-서열분석 데이터 세트에 대해 분산-안정화 데이터를 계산하였다. 본 발명자들은 이어서 TIGIT 및 CD3ε에 대한 분산-안정화 데이터의 log2 비를 계산하였다. 종양 및 정상 샘플 사이의 차이를 계산하기 위해, 본 발명자들은 표준 R 함수를 사용하여 표준 선형 모델 분석을 수행하였다. 본 발명자들은 <0.01의 p-값을 종양 및 정상 사이의 유의차의 증거로서 인정하였다.
종양-침윤 T 세포와 연관된 유전자를 확인하기 위해, 본 발명자들은 유전자 서명-기반 접근법을 사용하여 암 게놈 아틀라스 (TCGA) 폐 편평 세포 암종 (LUSC) 집합 (Network, T.C.G.A. Comprehensive genomic characterization of squamous cell lung cancers. Nature 489, 519-525 (2012))으로부터 유전자 발현 데이터를 조사하였다. 면역 반응 인 실리코 프로젝트 (Abbas, A.R. et al. Immune response in silico (IRIS): immune-specific genes identified from a compendium of microarray expression data. Genes and immunity 6, 319-331 (2005))에 의해 정의된 면역 세포-특이적 유전자 세트 및 상기 기재된 방법을 사용하여, 본 발명자들은 고도로 특이적인 15개 유전자 서명을 개발하였다. T 세포 서명과 가장 고도로 연관된 유전자를 조사하여, 본 발명자들은 이전에 종양에서 T 세포 기능장애와 연관된 여러 공동-억제 수용체, 특히 PD-1을 확인하였다 (도 21). LUSC에서, TIGIT 및 CD3ε의 발현은 스피어만의 랭크 상관 계수 (0.82의 ρ (도 20a))를 가지며 고도로 상호관련되었다. 실제로, TIGIT 및 CD3ε 발현은 또한 0.83 내지 0.94의 ρ 범위를 갖는 (도 20b-20e) 결장 선암종 (COAD), 자궁체부 자궁내막 암종 (UCEC), 유방 암종 (BRCA), 및 신장 투명 세포 암종 (KIRC)을 비롯하여 많은 추가의 TCGA 종양 유전자 발현 데이터세트에서 고도로 상호관련되었다. 또한, TIGIT의 발현은 많은 종양 샘플에서 CD3ε의 발현에 비해 상승되었고, 매치되는 정상 조직과 비교하여 LUSC, COAC, UCEC, 및 BRCA 종양 샘플에서 증가되는 TIGIT/CD3ε 비를 가졌다 (116% - 419% 증가, 도 20a-20d). KIRC 샘플에서 TIGIT 대 CD3ε 발현의 비는, TIGIT 및 CD3ε 둘 다의 발현이 정상 조직 샘플보다 KIRC 샘플에서 훨씬 더 높기는 하지만, 변하지 않았다 (도 20e). 이들 데이터는 TIGIT 발현이 넓은 범위의 고형 종양에서 종양-침윤 림프구 (TIL)에 의해 상향조절됨을 나타내었다.
TIGIT는 CD4+ T 세포 프라이밍의 억제제로서 이전에 기재된 바 있고, CD8+ T 세포에서는 어떠한 공지된 기능도 없었다. 그러나, LUSC 샘플에서의 TIGIT 발현은 CD8A와 고도로 상호관련되었고, CD4와는 단지 약하게 상호관련되었다 (ρ = 각각 0.77 및 0.48, 도 20f). TIGIT의 발현은 또한 그의 상보적 공동-자극 수용체, CD226의 발현, 뿐만 아니라 종양에서 그리고 다른 만성 면역 반응 동안 T 세포 억제의 주요 매개자인 PD-1의 발현과도 상호관련되었다 (ρ = 각각 0.64 및 0.82, 도 20g-20h). 이들 유전자의 일부 비-림프구 세포 공급원은 종양 내에 존재하지만, 이들 데이터는 종양-침윤 T 세포, 특히 "소진된" CD8+ T 세포가 높은 수준의 TIGIT를 발현함을 강력하게 시사하였다.
실시예 12: TIGIT 및 PD-1은 인간 및 뮤린 종양-침윤 림프구에 의해 대등하게 발현된다
물질 및 방법
인간 종양 및 PBMC 샘플. 매치되는 전혈 및 새롭게 외과적으로 절제된 종양 조직은 컨버슨트 바이오사이언시스(Conversant Biosciences) 또는 파운데이션 바이오(Foundation Bio)로부터 수득하였다. 모든 시편은 서면 사전 동의서와 함께 수득하였고, 하트포드(Hartford) 병원 임상 시험 심사 위원회 (IRB) (NSCLC 환자 1, 도 22에 도시됨) 또는 웨스턴(Western) IRB (NSCLC 환자 2 및 CRC 환자 1, 도 23 및 도 37에 도시됨)에 의해 승인된 프로토콜을 사용하여 수집하였다. 정상 성인 전혈은 건강한 지원자로부터 수득하였다. 전혈로부터 피콜(Ficoll) 구배 원심분리에 의해 PBMC를 정제하였다. 종양 조직을 작은 조각으로 절단하고, 콜라게나제 및 DNAse (로슈)와 함께 인큐베이션하고, 완만한 MACS 해리기 (밀테니(Miltenyi))를 사용하여 해리시켰다.
유동 세포측정법. 마우스 비장, 림프절 및 종양의 단세포 현탁액을 완만한 기계적 교란 하에 제조하였다. 표면 염색은 CD4, CD8, CD44, CD62L, PD-1 (이바이오사이언시스) 및 CD226 (바이오레전드)에 대한 상업용 항체로 수행하였다. TIGIT 항체를 제넨테크에서 생성하고, 알렉사 플루오르 647에 제조업체의 지침 (몰레큘라 프로브스)에 따라 접합시켰다.
세포내 시토카인 염색 (ICS)을 위해, 세포를 3 μg/mL 브레펠딘 A (이바이오사이언시스)의 존재 하에 20 ng/mL 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트 (PMA, 시그마) 및 1 μM 이오노마이신 (시그마)로 4시간 동안 자극하였다. 자극 후에, 세포를 기재된 바와 같이 표면 마커에 대해 염색하고, 이바이오사이언스 FoxP3 고정 완충제 세트를 사용하여 제조업체의 지침에 따라 고정시키고 투과되게 하였다. 고정된 세포를 IFNγ 및 TNFα에 대한 항체 (이바이오사이언시스)로 염색하였다.
인간 종양 및 PBMC 샘플을 상기 기재된 바와 같이 제조하였다. 표면 염색은 생존 염료 (몰레큘라 프로브스), CD45 (이바이오사이언시스), CD3, CD4, CD8, PD-1 (BD 바이오사이언시스)에 대한 상업용 항체, 및 상기 기재된 바와 같이 제조된 항-TIGIT 항체로 수행하였다.
모든 샘플을 LSR-II 또는 LSR-포르테사 기기 (BD 바이오사이언시스) 상에서 획득하고, 플루우조(FlowJo) 소프트웨어 (트리스타(Treestar))를 사용하여 분석하였다.
종양-침윤 T 세포에 의한 TIGIT의 상향-조절을 확인하기 위해, 본 발명자들은 인간 비소세포 폐 암종 종양-침윤 T 세포, 매치되는 말초 T 세포, 및 정상 공여자 말초 T 세포 상에서의 TIGIT 단백질 발현을 평가하였다. 세포 표면 TIGIT는 NSCLC-침윤 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 하위세트에 의해 발현되었다 (각각 51% 및 39%, 도 22a-22b). 도 36은 세포 표면 TIGIT가 큰 백분율의 NSCLC-침윤 CD8+ 및 CD4+ T 세포에 의해 발현되었음을 추가로 입증한다 (각각 58% 및 28% TIGIT+, 도 36a-36b). 흥미롭게도, NSCLC 종양 공여자로부터의 말초 CD8+ 및 CD4+ T 세포는 또한 건강한 공여자로부터의 세포보다 더 높은 수준의 TIGIT를 발현하였다 (도 22a-22b 및 도 36a-36b). 유사한 결과가 매치되는 NSCLC 및 PBMC 샘플의 제2 세트 및 매치되는 결장직장 암종 (CRC) 및 PBMC 샘플 세트에서 수득되었다 (도 23 및 도 37). 높은 수준의 TIGIT를 발현하는 거의 모든 종양-침윤 T 세포는 도 1에 기재된 TIGIT 및 PD-1 발현 사이의 상관관계와 일관되게 PD-1을 공동-발현하였다 (도 22c).
본 발명자들의 인간 발견사항을 전-임상 암 모델로 확장하기 위해, 본 발명자들은 각각 야생형 BALB/c 마우스 및 C57BL6/J 마우스에서 T 세포 침윤 피하 CT26 및 MC38 결장직장 종양에 의한 TIGIT 발현을 특성화하였다. 접종 2주 후에 CT26 및 MC38 종양이 확립되고 150-200 mm3 크기로 성장했을 때, TIGIT는 대략 50%의 종양-침윤 CD8+ T 세포 및 25%의 종양-침윤 CD4+ T 세포에 의해 시험관내 자극된 1차 CD8+ T 세포의 수준과 유사한 수준으로 발현되었다 (도 22d-22e 및 도 26). CD8+ 및 CD4+ 뮤린 TIL 둘 다에서, CD226은 구성적으로 발현되었고, TIGIT 및 PD-1 발현은 다시 밀접하게 상호관련되었다 (도 22f-22g).
이들 결과는 TIGIT가 종양-침윤 T 세포에 의해 고도로 발현되고, TIGIT의 발현이 다른 공동-억제 수용체, 가장 특히 PD-1의 발현과 병행하여 일어남을 확인시켜주었다.
실시예 13: CD8+ T 세포 반응의 TIGIT 억제는 CD226에 의존한다
PD-1 또는 CTLA-4와 달리, TIGIT에 의해 시스로 개시되는 T 세포 억제 신호전달 캐스케이드의 직접적인 생화학적 증거는 전혀 존재하지 않는다. 그러나, 공동-억제 수용체는 또한 상보적 공동-자극 수용체의 활성을 제한함으로써, 예컨대 CTLA-4에 의한 CD28 신호전달의 억제에 의해 기능할 수 있다. TIGIT를 종양-침윤 및 항-바이러스 CD8+ T 세포의 음성 조절자로서 확립하고, 본 발명자들은 TIGIT가 말초 및 종양-침윤 CD8+ T 세포에 의해 고도로 발현되는 그의 상보적 공동-자극 수용체, CD226의 억제를 통해 간접적으로 T 세포 소진을 유도하는지 여부에 의문을 가졌다 (도 27).
150-200 mm3 CT26 종양을 보유하는 야생형 BALB/c 마우스를 차단 항-CD226 항체의 존재 또는 부재 하에 항-PD-L1 및 항-TIGIT 항체의 조합 또는 항-CD226 단독으로 처리하였다. 항-CD226 단독에 의한 처리는 대조군 마우스에 비해 종양 성장을 약간 가속화하여, 2일의 감소된 중앙 생존기간을 생성하였다 (항-CD226 단독 vs. 대조군, P = 0.0118, 도 28a-28b). 놀랍게도, 항-TIGIT 및 항-PD-L1 공동-차단으로 처리된 마우스에의 항-CD226 차단 항체의 첨가는 종양 성장을 크게 증진시켰고, 종양 퇴행 및 생존에 대한 TIGIT/PD-L1 공동-차단의 효능을 완전히 역전시켰다 (도 28a-28b). 유사한 효과가 항-TIGIT, 항-PD-L1, 및/또는 항-CD226으로 처리된 만성 감염 마우스에서 LCMV 역가에 대해 관찰되었다 (도 19d). 이들 데이터는 CD226이 항-종양 및 다른 만성 T 세포 반응에 기여하고, TIGIT가 CD226의 억제에 의해 적어도 부분적으로 이들 반응을 억제함을 나타내었다.
TIGIT 및 CD226 활성이 항-종양 T 세포 반응에 어떻게 영향을 미치는지 보다 완전하게 이해하기 위해, 본 발명자들은 CD226이 단독으로 및 TIGIT와 협력하여 T 세포 활성화, 종양 침윤, 및 이펙터 기능에 어떻게 영향을 미치는지 시험하였다. 본 발명자들은 7일 동안 상기한 바와 같이 처리한 CT26 종양-보유 마우스로부터의 종양 및 종양-배액 림프절을 분석하였다. 전과 같이, PD-L1 및 TIGIT의 공동-차단은 종양-침윤 및 종양-배액 림프절-상주 CD8+ T 세포 둘 다의 IFNγ 생산을 증진시켰다 (각각 130% 및 99% 증가, P < 0.001, 도 28c-28d). CD226 단독의 차단은 종양-침윤 및 종양-배액 림프절-상주 CD8+ T 세포에 의한 IFNγ 생산에 어떠한 효과도 갖지 않았고, 이는 CD226 공동-자극의 효과가 소진된 T 세포에서 이미 제한되었음을 시사한다 (도 28c-28e). 그러나, CD226 차단은 항-TIGIT 및 항-PD-L1 조합으로 처리된 마우스에서 종양-침윤 CD8+ T 세포의 빈도 및 이펙터 기능 둘 다를 손상시켰다 (57% 감소, P = 0.0015, 도 28d). 항-CD226에 의한 처리는 종양-배액 림프절에 상주하는 CD8+ T 세포에 대해서는 이러한 효과를 전혀 갖지 않은 반면에, 항-PD-L1 단독은 CD8+ T 세포 이펙터 기능을 증진시켰고, 이는 PD-L1 차단이 CD226의 부재 하에서도 CD8+ T 세포 이펙터 기능을 증진시키는데 충분함을 시사한다. CD226 차단은 또한 종양-침윤 CD8+ T 세포의 감소된 빈도를 야기하였다 (53% 감소, P = 0.0044, 도 28e-28f). 종합하면, 이들 데이터는 CD226이 종양-침윤 CD8+ T 세포의 축적 및 이펙터 기능 둘 다를 지지하는 기능을 하고, TIGIT가 후자를 상쇄시킴을 시사한다.
실시예 14: TIGIT는 CD226 동종이량체화를 직접적으로 교란시킴으로써 CD226 기능을 손상시킨다
TIGIT가 CD226 활성에 시스로 길항작용할 수 있는지 시험하기 위해, 시험관내 CD226 공동-자극에 대한 TIGIT의 효과를 시험하였다. 항-CD3의 준최적 수준으로 자극된 TIGIT-결핍 CD8+ T 세포는 PVR 공동-자극에 대해 야생형 한배새끼 CD8+ T 세포보다 더 강건하게 반응하였고, 이러한 증진된 반응은 CD226에 의존적이었다 (증식에서 46% 증가, P = 0.0061, 도 29a). 이들 데이터와 일관되게, 준최적 항-CD3 및 PVR에 의해 자극된 야생형 CD8+ T 세포는 항-TIGIT 항체의 존재 하에, 이소형-매치되는 대조군 항체의 존재 하에서보다 더 강건하게 증식하였고, 이러한 효과도 또한 CD226에 의존적이었다 (증식에서 105% 증가, P = 0.0010, 도 29b).
TIGIT의 1차 인간 CD8+ T 세포에 대한 관련성을 시험하기 위해, 본 발명자들은 건강한 공여자 혈액으로부터 CD8+ T 세포를 정제하고, 준최적 수준의 플레이트-결합된 항-CD3 및 재조합 인간 PVR-Fc 융합 단백질로 이들을 자극하였다. 이소형-매치되는 대조군 항체의 존재 하에, PVR 공동-자극은 T 세포 자극 및 증식을 중간 정도로 증진시켰다. 또한, 차단 항-TIGIT 항체의 첨가는, TIGIT의 1차 뮤린 CD8+ T 세포에 대한 효과와 일관되게 PVR 공동-자극의 효과를 유의하게 증진시켰다 (증식에서 69% 증가, P = 0.0071, 도 29c). 이들 데이터는 1차 뮤린 및 인간 CD8+ T 세포에 대한 CD226 기능의 TIGIT 억제에 대한 세포-고유 역할을 입증하였다.
TR-FRET (시간-분해 형광 공명 에너지 전달)를 사용하여 TIGIT가 CD226 활성을 손상시키는 분자 메카니즘을 결정하였다. 먼저, 본 발명자들은 인간 ST-CD226을 발현시키고 비-투과 공여자 및 수용자 형광단으로 표지하였다. 이들 세포는 강력한 FRET 신호를 생성하여, CD226이 동종이량체화하는 능력을 확인시켜주었다 (도 29d). 세포 표면 상에서의 CD226 및 TIGIT 상호작용을 모니터링하기 위해, 본 발명자들은 본 발명자들이 각각 SNAP-태그 기질 및 항-HA 항체로 표지한 인간 HA-TIGIT의 존재 또는 부재 하에 ST-CD226을 발현시켰다. 놀랍게도, 증가하는 양의 TIGIT의 공동-발현 (ELISA에 의해 모니터링됨)은 CD226/CD226 FRET 신호를 감쇠시켰고, 이는 TIGIT가 CD226 동종이량체화를 교란시킬 수 있음을 나타낸다 (도 29e). 실제로, 수용자 CD226 및 공여자 TIGIT는 또한 유의한 FRET 신호를 생성하였고, 이는 이들 2개의 단백질 사이의 직접적인 상호작용을 나타낸다 (도 29f). 이러한 상호작용은 공동-면역침전에 의해 추가로 확인되었다 (도 29g). 이들 데이터는 TIGIT 및 CD226이 세포 표면에서 직접적으로 상호작용하고, 이러한 상호작용은 CD226 동종이량체화를 손상시킬 수 있음을 입증하였다.
TIGIT-CD226 상호작용에 대한 TIGIT 항체 차단의 효과를 시험하기 위해, 본 발명자들은 다시 이번에는 인간 TIGIT에 대한 차단 항체의 존재 또는 부재 하에 인간 ST-CD226 및 HA-TIGIT를 공동-발현시켰다. 세포 배양물에의 항-TIGIT의 첨가는 TIGIT 및 CD226의 회합 능력을 유의하게 감소시켰다 (도 29h). 이들 데이터는 항-TIGIT 처리가 TIGIT의 CD226과의 상호작용을 제한할 수 있음을 시사하고, 이는 CD226 활성의 억제가 TIGIT가 CD8+ T 세포 소진을 일으키는 주요 작용 메카니즘이라는 개념과 일관된다. 이는 또한 항-TIGIT 항체의 CD226 공동-자극을 증진시키는 능력과 일관된다.
다음으로, 본 발명자들은 내인성 TIGIT 및 CD226의 상호작용 능력을 확인하였다 (도 30). 1차 인간 T 세포를 시험관내에서 항-CD3 및 항-CD28 항체로 자극하고, TIGIT 발현에 기초하여 분류하고, 휴지시키고, 재-자극하고, TR-FRET와 상용성인 형광단에 접합시킨 내인성 TIGIT 및 CD226에 대한 항체로 표지하였다. 공여자-접합된 항-TIGIT 및 수용자-접합된 항-CD226 항체로 표지된 TIGIT-발현 T 세포는 강력한 FRET 신호를 생성하였다 (도 30). 대조적으로, TIGIT를 발현하지 않거나 또는 공여자-접합된 항-TIGIT 및 수용자-접합된 항-HVEM 항체로 표지된 T 세포 상에서는 무시할 만한 FRET 신호만이 검출되었고 (도 30), 이는 내인성 TIGIT 및 CD226 사이에 검출된 상호작용의 특이성을 확인시켜주었다.
이들 결과는 내인성 TIGIT 및 CD226이 세포 표면에서 직접적으로 상호작용할 수 있고, 이러한 상호작용은 CD226 동종이량체화를 손상시킴을 입증한다. 생체내 T 세포 반응의 공동-자극자로서 CD226의 역할을 고려하면, 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, CD226의 억제가 TIGIT가 만성 바이러스 감염 및 암 동안 CD8+ T 세포 소진을 일으키는 주요 작용 메카니즘일 수 있는 것으로 여겨진다.
물질 및 방법
형질감염된 세포주에 의한 시간-분해 형광 공명 에너지 전달. CHO 세포를 리포펙타민 2000 (라이프 테크놀로지스)을 사용하여 N-말단 SNAP-태그부착된 (ST) CD226 및 N-말단 HA-TIGIT로 형질감염시키고, 백색 96-웰 플레이트 (코스타)에 웰당 100,000개의 세포로 시딩하였다. 24시간 후에, 세포를 표지하여 SNAP-공여자 / SNAP-수용자 사이 또는 SNAP-수용자 / 항-HA 공여자 사이의 TR-FRET를 측정하였다. 1) SNAP-공여자 / SNAP-수용자 표지: 세포를 DMEM 10% FCS 중에 희석시킨 100 nM의 공여자-접합된 벤질-구아닌 SNAP-Lumi-4Tb (시스바이오) 및 1 μM 수용자-접합된 벤질-구아닌 SNAP-A647 (뉴잉글랜드 바이오랩스)과 함께 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 PBS중에서 3회 세척한 후에, FRET 신호를 판독하였다. 2) SNAP-수용자/항-HA 공여자: 세포를 DMEM 10% FCS 중에 희석시킨 1 μM 수용자-접합된 벤질-구아닌 SNAP-A647과 함께 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. PBS 중에서 3회 세척 후에, 세포를 PBS + 0.2% BSA 중의 2 nM 항-HA Lumi-4Tb (시스바이오)와 함께 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 343 nm에서 레이저 여기에 이어 60 μs 지연 후에 사파이어2 플레이트 판독기 (테칸)를 사용하여 FRET 신호를 665 nm에서 400 μs 동안 기록하였다. 항-TIGIT를 10μg/ml 최종으로 시험한 경우에, FRET 신호를 15분 인큐베이션 후에 또한 기록하였다. Flag-ST-CD226/Flag-ST-CD226 상호작용의 경우에, 620 nm에서의 공여자 방출로 나눈 FRET 강도로서 FRET 비를 계산하였고, 이는 CD226 발현에 비례하였다. FRET 강도는: (SNAP-공여자 및 수용자로 표지된 세포로부터의 665 nm에서의 신호) - (SNAP-공여자 단독으로 표지된 동일한 배치의 형질감염된 세포로부터의 665 nm에서의 신호). Flag-ST-CD226/HA-TIGIT 상호작용의 경우에, FRET 비는 항-Flag ELISA에 의해 측정된 바와 같은 Flag-ST-CD226 발현으로 나눈 FRET 강도를 나타낸다. 그러한 경우에, FRET 강도 = (SNAP-수용자 및 항-HA 공여자로 표지된 세포로부터의 665 nm에서의 신호) - (SNAP-수용자 및 항-HA 공여자로 표지된 모의 형질감염된 세포로부터의 665 nm에서의 신호).
인간 T 세포에 의한 시간-분해 형광 공명 에너지 전달. 인간 항-TIGIT (제넨테크 클론 1F4), 항-CD226 (산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology)), 및 항-HVEM (이바이오사이언스) 항체를 TR-FRET (시스바이오)와 상용성인 형광단에 접합시켰다. 1차 인간 T 세포를 혈액으로부터 MACS-풍부화하고, 플레이트 결합된 항-CD3 및 항-CD28로 72시간 동안 시험관내 자극하였다. 이어서 TIGIT-발현 및 비-발현 T 세포 (모두 CD226을 발현함)를 분류하고, 72시간 동안 자극 없이 휴지시키고, 48시간 동안 재-자극하였다. 이어서 각 집단을 트리스-KREBS 완충제 (20mM 트리스 pH 7.4, 118mM NaCl, 5.6mM 글루코스, 1.2mM KH2PO4, 1.2mM MgSO4, 4.7mM KCl, 1.8mM CaCl2)로 1회 세척하고, 하기 조건 하에 3중으로 배양하였다: 1) 항-TIGIT Ab-Lumi4-Tb (5 μg/ml), 2) 항-TIGIT Ab-Lumi4-Tb (5 μg/ml) + 항-HVEM-d2 (10 μg/ml), 3) 항-TIGIT Ab-Lumi4-Tb (5 μg/ml) + 항-CD226 (10 μg/ml), 4) 항-TIGIT Ab-Lumi4-Tb (5 μg/ml) + 항-CD226 (10 μg/ml) + 차가운 항-TIGIT Ab (클론 1F4) (50 μg/ml). 표시된 농도는 최고 FRET 신호를 보장하기 위해 최적화시켰다. 세포를 회전기 상에서 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한 다음, 트리스-KREBS 완충제 중에서 3회 세척하였다. 이어서 T 세포를 백색 96-웰 플레이트 (코스타)에 400,000개 세포/웰로 시딩하고, 343 nm에서 레이저 여기에 이어 60 μs 지연 후에 페라스타(PHERAstar) 플레이트 판독기 (BMG 랩테크(BMG Labtech))를 사용하여 TR-FRET를 665 nm에서 400 μs 동안 기록하였다. FRET 강도는 Ab-Lumi4-Tb + Ab-d2로 표지된 세포로부터의 665 nm에서의 신호 마이너스 Ab-Lumi4-Tb 단독으로 표지된 동일한 배치의 세포로부터의 665 nm에서의 신호로 표현되었다. 비-특이적 FRET 신호가 Lumi4Tb + d2 + 과량의 차가운 Ab와 함께 인큐베이션된 T 세포에 의해 제공되었다.
공동-면역침전. 간략하게, 15 cm 플레이트에서 COS 7 세포를 TIGIT-HA (5ng) 또는 CD226-Flag (10ng) 태그부착된 단백질에 대한 cDNA를 함유하는 발현 플라스미드, 또는 대조군 플라스미드 (pRK)로 공동-형질감염시켰다. 형질감염 23시간 후에 세포를 PBS로 세척하고, 4 ml의 빙냉 PBS 중에서 수거하고, 300xg에서 5분 동안 원심분리하고, 세포 펠릿을 4℃에서 2 ml의 용해 완충제 중에 재현탁시켰다. 세포를 15분마다 볼텍싱하면서 50분에 걸쳐 용해시키고, 이어서 4℃에서 15분 동안 10,00xg에서 원심분리하였다. 생성된 상청액을 4℃에서 30분 동안 회전시키는 것에 의해 160 μl의 CL6B 세파로스 슬러리로 사전-청정화하고, 3000xg에서 2분 동안 원심분리하였다. 상청액을 2개의 튜브 내로 동등하게 분할하고, 표준 절차를 사용하여 항-HA 또는 항-flag로 면역-침전시켰다. 면역-침전된 단백질에 대해 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯을 행하였다. 웨스턴 블롯은 항-Flag-HRP 또는 항-HA-HRP로 탐침하였다.
본원에 인용된 모든 특허, 특허 출원, 문헌 및 논문은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
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<212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 31 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 32 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Asp or Gly <400> 33 Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Ser Trp Ile His 1 5 10 <210> 34 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Ser or Leu <220> <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = Thr or Ser <400> 34 Ala Trp Ile Xaa Pro Tyr Gly Gly Ser Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys Gly <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = Asp or Val <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Ser or Asn <220> <221> VARIANT <222> 9 <223> Xaa = Ala or Phe <220> <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = Val or Leu <400> 35 Arg Ala Ser Gln Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Ala 1 5 10 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Phe or Thr <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = Tyr or Ala <400> 36 Ser Ala Ser Xaa Leu Xaa Ser 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Tyr, Gly, Phe, or Ser <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Leu, Tyr, Phe or Trp <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = Tyr, Asn, Ala, Thr, Gly, Phe or Ile <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa = His, Val, Pro, Thr or Ile <220> <221> VARIANT <222> 8 <223> Xaa = Ala, Trp, Arg, Pro or Thr <400> 37 Gln Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr 1 5 <210> 38 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 38 gatgttgtgt tgactcaaac tccactctcc ctgtctgtca gctttggaga tcaagtttct 60 atctcttgca ggtctagtca gagtcttgta aacagttatg ggaacacctt tttgtcttgg 120 tacctgcaca agcctggcca gtctccacag ctcctcatct ttgggatttc caacagattt 180 tctggggtgc cagacaggtt cagtggcagt ggttcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcacaataa agcctgagga cttgggaatg tattactgct tacaaggtac gcatcagcct 300 cccacgttcg gtcctgggac caagctggag gtgaaa 336 <210> 39 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 39 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggaacttc aatgaagata 60 tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggccatctta tgaactgggt gaagcagagc 120 catggaaaga accttgagtg gattggactt attattcctt acaatggtgg tacaagctat 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcatccag cacagcctac 240 atggagctcc tcagtctgac ttctgatgac tctgcagtct atttctgttc aagaggcctt 300 aggggcttct atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357 <210> 40 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 40 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 <210> 41 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 41 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 42 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 43 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 43 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 44 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 44 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 45 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 46 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 47 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 47 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 1 5 10 15 <210> 48 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 48 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 49 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 49 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (166)

  1. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법.
  2. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법.
  3. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법.
  4. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 면역 관련 질환이 T 세포 기능장애성 장애와 연관된 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, T 세포 기능장애성 장애가 항원 자극에 대한 감소된 반응성을 특징으로 하는 것인 방법.
  7. 제5항에 있어서, T 세포 기능장애성 장애가 T 세포 무반응, 또는 시토카인을 분비하거나, 증식하거나 또는 세포용해 활성을 실행하는 것에 대한 감소된 능력을 특징으로 하는 것인 방법.
  8. 제5항에 있어서, T 세포 기능장애성 장애가 T 세포 소진을 특징으로 하는 것인 방법.
  9. 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 CD4+ 및 CD8+ T 세포인 방법.
  10. 제3항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 관련 질환이 미해결 급성 감염, 만성 감염, 및 종양 면역으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  11. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법.
  12. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법.
  13. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 재발 또는 암 진행을 감소 또는 억제하는 방법.
  14. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환을 치료하거나 그의 진행을 지연시키는 방법.
  15. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 관련 질환의 진행을 감소 또는 억제하는 방법.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 면역 관련 질환이 T 세포 기능장애성 장애와 연관된 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, T 세포 기능장애성 장애가 항원 자극에 대한 감소된 반응성을 특징으로 하는 것인 방법.
  18. 제16항에 있어서, T 세포 기능장애성 장애가 T 세포 무반응, 또는 시토카인을 분비하거나, 증식하거나 또는 세포용해 활성을 실행하는 것에 대한 감소된 능력을 특징으로 하는 것인 방법.
  19. 제16항에 있어서, T 세포 기능장애성 장애가 T 세포 소진을 특징으로 하는 것인 방법.
  20. 제16항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 CD4+ 및 CD8+ T 세포인 방법.
  21. 제14항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 관련 질환이 미해결 급성 감염, 만성 감염 및 종양 면역으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  22. 개체에게 유효량의 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법.
  23. 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극하는 작용제인 방법.
  24. 제12항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 CD226과 PVR의 상호작용을 증가 및/또는 자극하는 작용제인 방법.
  25. 제12항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 PVR에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극하는 작용제인 방법.
  26. 제12항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  27. 제26항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제인 방법.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 또는 억제 폴리펩티드인 방법.
  29. 제26항 또는 제27항에 있어서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 방법.
  30. 제26항 또는 제27항에 있어서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로 이루어진 군으로부터 선택된 억제 핵산인 방법.
  31. 제26항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제인 방법.
  32. 제26항 또는 제31항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드인 방법.
  33. 제26항 또는 제31항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제가 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 방법.
  34. 제26항 또는 제31항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제가 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로 이루어진 군으로부터 선택된 억제 핵산인 방법.
  35. 제26항에 있어서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  36. 제26항에 있어서, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  37. 제26항에 있어서, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  38. 제26항에 있어서, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  39. 제26항에 있어서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  40. 제26항에 있어서, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  41. 제26항에 있어서, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  42. 개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법.
  43. 제42항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체가 PD-1, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA, VISTA, B7H4, 및 CD96으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  44. 제42항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체가 PD-1, CTLA-4, LAG3 및 TIM3으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  45. 개체에게 유효량의 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 면역 반응 또는 기능을 증가, 증진 또는 자극하는 방법.
  46. 제45항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체가 CD226, OX-40, CD28, CD27, CD137, HVEM, GITR, MICA, ICOS, NKG2D, 및 2B4로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  47. 제45항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체가 CD226, OX-40, CD27, CD137, HVEM 및 GITR로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  48. 제45항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체가 OX-40 및 CD27로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 암을 갖는 것인 방법.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에서 CD4 및/또는 CD8 T 세포가 조합물의 투여 전에 비해, 증가되거나 증진된 프라이밍, 활성화, 증식, 시토카인 방출 및/또는 세포용해 활성을 갖는 것인 방법.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, CD4 및/또는 CD8 T 세포의 수가 조합물의 투여 전에 비해 상승된 것인 방법.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 활성화된 CD4 및/또는 CD8 T 세포의 수가 조합물의 투여 전에 비해 상승된 것인 방법.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 활성화된 CD4 및/또는 CD8 T 세포가 조합물의 투여 전에 비해 γ-IFN+ 생산 CD4 및/또는 CD8 T 세포 및/또는 증진된 세포용해 활성을 특징으로 하는 것인 방법.
  55. 제51항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, CD4 및/또는 CD8 T 세포가 IFN-γ, TNF-α 및 인터류킨으로 이루어진 군으로부터 선택된 시토카인의 증가된 방출을 나타내는 것인 방법.
  56. 제51항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, CD4 및/또는 CD8 T 세포가 이펙터 기억 T 세포인 방법.
  57. 제56항에 있어서, CD4 및/또는 CD8 이펙터 기억 T 세포가 γ-IFN+ 생산 CD4 및/또는 CD8 T 세포 및/또는 증진된 세포용해 활성을 특징으로 하는 것인 방법.
  58. 제56항에 있어서, CD4 및/또는 CD8 이펙터 기억 T 세포가 CD44고 CD62L저의 발현을 갖는 것을 특징으로 하는 것인 방법.
  59. 제1항, 제2항, 제12항, 제13항, 제23항 내지 제41항 및 제49항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 상승된 수준의 T 세포 침윤을 갖는 것인 방법.
  60. 제1항 내지 제11항 및 제42항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  61. 제60항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  62. 제60항에 있어서, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  63. 제60항에 있어서, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  64. 제60항에 있어서, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  65. 제60항에 있어서, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  66. 제60항에 있어서, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  67. 제60항에 있어서, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  68. 제60항에 있어서, PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 및 억제 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  69. 제60항 또는 제61항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제가 안티센스 폴리뉴클레오티드, 간섭 RNA, 촉매 RNA, 및 RNA-DNA 키메라로 이루어진 군으로부터 선택된 억제 핵산인 방법.
  70. 제60항 또는 제61항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제가 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 방법.
  71. 제29항 또는 제70항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 아미노산 서열 (1) KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6); 또는 (2) RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 적어도 1개의 HVR을 포함하는 것인 방법.
  72. 제29항, 제70항 및 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄가
    Figure pct00042

    에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  73. 제29항 및 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 중쇄가
    Figure pct00043

    에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  74. 제29항, 제70항 및 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄가
    Figure pct00044

    에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 항체 중쇄가
    Figure pct00045

    에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  75. 제29항 및 제70항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체가 인간화 항체, 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체 및 면역독소로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  76. 제29항 및 제70항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 (1) KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6); 또는 (2) RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12) 중 어느 하나에 제시된 HVR과 적어도 90% 동일한 적어도 1개의 HVR을 포함하는 것인 방법.
  77. 제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 단편이
    Figure pct00046

    에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및/또는
    Figure pct00047

    에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 방법.
  78. 제1항 내지 제41항, 제43항, 제44항 및 제49항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 PD-1 결합 길항제, PD-L1 결합 길항제 및 PD-L2 결합 길항제로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  79. 제78항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 PD-1 결합 길항제인 방법.
  80. 제79항에 있어서, PD-1 결합 길항제가 PD-1의 그의 리간드 결합 파트너에 대한 결합을 억제하는 것인 방법.
  81. 제79항 또는 제80항에 있어서, PD-1 결합 길항제가 PD-1의 PD-L1에 대한 결합을 억제하는 것인 방법.
  82. 제79항 또는 제80항에 있어서, PD-1 결합 길항제가 PD-1의 PD-L2에 대한 결합을 억제하는 것인 방법.
  83. 제79항 또는 제80항에 있어서, PD-1 결합 길항제가 PD-1의 PD-L1 및 PD-L2 둘 다에 대한 결합을 억제하는 것인 방법.
  84. 제79항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 결합 길항제가 항체인 방법.
  85. 제79항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 결합 길항제가 MDX-1106인 방법.
  86. 제79항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 결합 길항제가 MK-3475인 방법.
  87. 제79항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 결합 길항제가 CT-011인 방법.
  88. 제79항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 결합 길항제가 AMP-224인 방법.
  89. 제78항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 PD-L1 결합 길항제인 방법.
  90. 제89항에 있어서, PD-L1 결합 길항제가 PD-L1의 PD-1에 대한 결합을 억제하는 것인 방법.
  91. 제89항에 있어서, PD-L1 결합 길항제가 PD-L1의 B7-1에 대한 결합을 억제하는 것인 방법.
  92. 제89항에 있어서, PD-L1 결합 길항제가 PD-L1의 PD-1 및 B7-1 둘 다에 대한 결합을 억제하는 것인 방법.
  93. 제89항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, PD-L1 결합 길항제가 항-PD-L1 항체인 방법.
  94. 제89항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, PD-L1 결합 길항제가 YW243.55.S70, MPDL3280A, MDX-1105, 및 MEDI4736으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  95. 제93항에 있어서, 항-PD-L1 항체가 HVR-H1 서열 GFTFSDSWIH (서열 17), HVR-H2 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 18), 및 HVR-H3 서열 RHWPGGFDY (서열 19)를 포함하는 중쇄; 및 HVR-L1 서열 RASQDVSTAVA (서열 20), HVR-L2 서열 SASFLYS (서열 21), 및 HVR-L3 서열 QQYLYHPAT (서열 22)를 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
  96. 제93항에 있어서, 항-PD-L1 항체가
    Figure pct00048

    의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및
    Figure pct00049

    의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  97. 제78항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 PD-L2 결합 길항제인 방법.
  98. 제97항에 있어서, PD-L2 결합 길항제가 항체인 방법.
  99. 제97항에 있어서, PD-L2 결합 길항제가 이뮤노어드헤신인 방법.
  100. 제1항, 제2항, 제12항, 제13항, 제23항 내지 제41항 및 제49항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 신세포암, 결장직장암, 난소암, 유방암, 췌장암, 위 암종, 방광암, 식도암, 중피종, 흑색종, 두경부암, 갑상선암, 육종, 전립선암, 교모세포종, 자궁경부암, 흉선 암종, 백혈병, 림프종, 골수종, 균상 식육종, 메르켈 세포암 및 다른 혈액 악성종양으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  101. 제1항 내지 제11항 및 제42항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 연속적으로 투여되는 것인 방법.
  102. 제1항 내지 제11항 및 제42항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 간헐적으로 투여되는 것인 방법.
  103. 제1항 내지 제11항 및 제49항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 PD-1 축 결합 길항제 전에 투여되는 것인 방법.
  104. 제1항 내지 제11항 및 제49항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 PD-1 축 결합 길항제와 동시에 투여되는 것인 방법.
  105. 제1항 내지 제11항 및 제49항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 PD-1 축 결합 길항제 후에 투여되는 것인 방법.
  106. 제12항 내지 제41항 및 제49항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제 전에 투여되는 것인 방법.
  107. 제12항 내지 제41항 및 제49항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 동시에 투여되는 것인 방법.
  108. 제12항 내지 제41항 및 제49항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제 후에 투여되는 것인 방법.
  109. 제42항 내지 제44항 및 제49항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제 전에 투여되는 것인 방법.
  110. 제42항 내지 제44항 및 제49항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제와 동시에 투여되는 것인 방법.
  111. 제42항 내지 제44항 및 제49항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제 후에 투여되는 것인 방법.
  112. 제45항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제 전에 투여되는 것인 방법.
  113. 제45항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제와 동시에 투여되는 것인 방법.
  114. 제45항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제 후에 투여되는 것인 방법.
  115. PD-1 축 결합 길항제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  116. PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  117. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  118. PD-1 축 결합 길항제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  119. PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  120. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  121. PD-1 축 결합 길항제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  122. PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  123. CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  124. PD-1 축 결합 길항제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제를 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  125. PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 PD-1 축 결합 길항제 및 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  126. CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제를 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  127. 제115항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 항-PD-L1 항체인 키트.
  128. 제127항에 있어서, 항-PD-L1 항체가 YW243.55.S70, MPDL3280A, MDX-1105 및 MEDI4736으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 키트.
  129. 제127항에 있어서, 항-PD-L1 항체가 HVR-H1 서열 GFTFSDSWIH (서열 17), HVR-H2 서열 AWISPYGGSTYYADSVKG (서열 18), 및 HVR-H3 서열 RHWPGGFDY (서열 19)를 포함하는 중쇄; 및 HVR-L1 서열 RASQDVSTAVA (서열 20), HVR-L2 서열 SASFLYS (서열 21), 및 HVR-L3 서열 QQYLYHPAT (서열 22)를 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 키트.
  130. 제127항에 있어서, 항-PD-L1 항체가
    Figure pct00050

    의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및
    Figure pct00051

    의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 키트.
  131. 제115항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 항-PD-1 항체인 키트.
  132. 제131항에 있어서, 항-PD-1 항체가 MDX-1106, MK-3475, 또는 CT-011인 키트.
  133. 제115항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 AMP-224인 키트.
  134. 제115항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 축 결합 길항제가 PD-L2 결합 길항제인 키트.
  135. 제134항에 있어서, PD-L2 결합 길항제가 항체인 키트.
  136. 제134항에 있어서, PD-L2 결합 길항제가 이뮤노어드헤신인 키트.
  137. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  138. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  139. 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  140. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  141. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  142. 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체를 감소 또는 억제하는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  143. 제137항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체가 PD-1, CTLA-4, LAG3, TIM3, BTLA, VISTA, B7H4, 및 CD96으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 키트.
  144. 제137항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-억제 수용체가 PD-1, CTLA-4, LAG3 및 TIM3으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 키트.
  145. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  146. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  147. 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 개체에서 암을 치료하거나 그의 진행을 지연시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  148. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제를 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  149. TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제 및 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  150. 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제, 및 암을 갖는 개체의 면역 기능을 증진시키기 위해 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체를 증가 또는 활성화시키는 작용제를 TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제와 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  151. 제145항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체가 CD226, OX-40, CD28, CD27, CD137, HVEM, GITR, MICA, ICOS, NKG2D, 및 2B4로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 키트.
  152. 제145항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체가 CD226, OX-40, CD27, CD137, HVEM 및 GITR로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 키트.
  153. 제145항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 추가의 면역 공동-자극 수용체가 OX-40 및 CD27로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 키트.
  154. 제115항 내지 제120항 및 제127항 내지 제153항 중 어느 한 항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성을 감소 또는 억제하는 작용제가 TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 키트.
  155. 제154항에 있어서, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제가 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 키트.
  156. 제121항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 CD226 발현 및/또는 활성을 증가 및/또는 자극하는 작용제인 키트.
  157. 제121항 내지 제136항 및 제156항 중 어느 한 항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 CD226과 PVR의 상호작용을 증가 및/또는 자극하는 작용제인 키트.
  158. 제121항 내지 제136항, 제156항 및 제157항 중 어느 한 항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 PVR에 대한 CD226 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 증가 및/또는 자극하는 작용제인 키트.
  159. 제121항 내지 제136항 및 제156항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT 발현 및/또는 활성의 길항제, PVR 발현 및/또는 활성의 길항제, TIGIT와 PVR의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL2의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, TIGIT와 PVRL3의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVR에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, PVRL2에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제, 및 PVRL3에 대한 TIGIT 결합에 의해 매개되는 세포내 신호전달을 억제 및/또는 차단하는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 키트.
  160. 제159항에 있어서, CD226 발현 및/또는 활성을 조정하는 작용제가 CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제인 키트.
  161. 제159항 또는 제160항에 있어서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 소분자 억제제, 억제 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 압타머, 억제 핵산, 또는 억제 폴리펩티드인 키트.
  162. 제159항 또는 제160항에 있어서, CD226과 TIGIT의 상호작용을 억제 및/또는 차단하는 작용제가 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 키트.
  163. 제155항 또는 제162항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 아미노산 서열 (1) KSSQSLYYSGVKENLLA (서열 1), ASIRFT (서열 2), QQGINNPLT (서열 3), GFTFSSFTMH (서열 4), FIRSGSGIVFYADAVRG (서열 5), 및 RPLGHNTFDS (서열 6); 또는 (2) RSSQSLVNSYGNTFLS (서열 7), GISNRFS (서열 8), LQGTHQPPT (서열 9), GYSFTGHLMN (서열 10), LIIPYNGGTSYNQKFKG (서열 11), 및 GLRGFYAMDY (서열 12)로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 적어도 1개의 HVR을 포함하는 것인 키트.
  164. 제155항, 제162항 및 제163항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄가
    Figure pct00052

    에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 키트.
  165. 제155항 및 제162항 내지 제164항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 중쇄가
    Figure pct00053

    에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 키트.
  166. 제155항, 제162항 및 제163항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편에서 항체 경쇄가
    Figure pct00054

    에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 항체 중쇄가
    Figure pct00055

    에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 키트.
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