TWI759287B - 使用ｐｄ－１軸結合拮抗劑和抗ｇｐｃ３抗體治療癌症的方法 - Google Patents

使用ｐｄ－１軸結合拮抗劑和抗ｇｐｃ３抗體治療癌症的方法 Download PDF

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Abstract

本發明提供用於治療癌症的組成物及方法。所述方法包含施用PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。所述組合物包含用於治療癌症的醫藥組成物，其包含PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。亦揭示與PD-1軸結合拮抗劑組合使用於治療癌症的醫藥組成物，其包含抗GPC3抗體作為活性成分；以及與抗GPC3抗體組合使用於治療癌症的醫藥組成物，其包含PD-1軸結合拮抗劑作為活性成分。

Description

使用PD-1軸結合拮抗劑和抗GPC3抗體治療癌症的方法
本發明係關於藉由施用PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體以治療癌症的方法。
據報導，由肝細胞癌(hepatocellular cancer)所造成的死亡每年約有60萬，在世界上由癌症導致的死亡中位居第五位(非專利文獻1)。大部分患有肝細胞癌的患者在被診斷患有該疾病後的1年內死亡。不幸地，肝細胞癌的案例經常在晚期被診斷出，對於有療效的治療幾乎沒有反應。然而，包含化學療法、化學栓塞(chemoembolization)、燒灼及質子束療法等醫療處理對於此類病患的療效果並不充分。許多患者出現血管浸潤及多次肝內轉移的疾病復發，而快速發展到進展階段，其5年存活率僅為7%(非專利文獻2)。可實施局部病灶(foci)切除的肝細胞癌患者具有較佳的預後(prognosis)，但其5年存活率仍維持在15%到39%的程度(非專利文獻3)。因此，所屬技術領域存在對於針對此種惡性疾病肝細胞癌的新穎療法的需求。
據報導，在日本，肝細胞癌為超過90%的原發性肝癌例子的起因。用於治療此種肝細胞癌的醫療方法包含，例 如，以化療為基礎的經導管動脈栓塞術(transcatheter arterial embolization,TAE)療法，其涉及注射油性造影劑(Lipiodol)、抗癌劑及栓塞物質(Gelfoam)的混合液至肝動脈(其作為腫瘤的營養供給途徑)以阻塞營養動脈，藉此誘導肝細胞癌的選擇性壞死。此外，也可使用侵入式方法，像是皮乙醇注射、經皮微波凝固療法、射頻燒灼療法等。再者，將像是氟尿嘧啶(5-FU)、尿嘧啶-替加氟(uracil-tegafur，UFT)、絲裂黴素C(MMC)、米托蒽醌(DHAD)、阿黴素(ADR)、表阿黴素(EPI)及順鉑(CDDP)等的化療劑單獨使用或與干擾素(IFN)合併使用的方法，已於全身化學療法進行臨床試驗(非專利文獻4)。
同時，口服活性型的索拉非尼(Sorafenib)(Nexavar，BAY43-9006)已獲得許可，其抑制Raf/MEK/ERK信號轉導中的Raf激酶從而阻斷癌細胞的生長，同時藉由標靶VEGFR-2、VEGFR-3及PDGFR-β酪氨酸激酶而發揮抗血管生成效果，與上述化療劑相比顯示出了較有利的效果。索拉非尼的攻效已於標靶晚期肝細胞癌的兩個第III期多中心安慰劑(placebo)對照試驗(索拉非尼HCC評估隨機方案(Sorafenib HCC Assessment Randomized Protocol，SHARP)試驗及亞太地區試驗)中進行研究。在上述任一試驗中，均證實索拉非尼延長了生存期，且HR為0.68。在SAHARP試驗中，索拉非尼延長生存期至10.7個月，而安慰劑組為7.9個月。在亞洲的試驗中，此試劑將生存期延長至6.5個月，而安慰劑組為4.2個月。然而，所述試劑具有低客觀緩解率(objective response rate)且沒有延長對症狀進展的時間，雖然試劑在影像上顯示延長了腫瘤進展的時間 (在歐洲及美國的試驗中為5.5個月比上2.8個月，在亞洲的試驗中為2.8個月比上1.4個月)。亞洲人群組(cohort)顯示短的生存延長期，其原因可能是，與歐洲及美國相比，亞洲地區在疾病過程的稍晚時期才開始他們的治療(非專利文獻5及6)。
隨著肝癌的進展，通常可觀察到與肝功能失調相關的肝癌特異性症狀，如食欲不振、體重減少、全身倦怠感、可觸知的右季肋部質量(palpable right hypochondrial mass)、右季肋部痛、腹部脹滿感、發熱及黃疸等。然而，化療劑(例如，索拉非尼)具有下述必須克服的問題，包含它們固有的副作用，如腹瀉或便秘、貧血、免疫系統的抑制引起感染或敗血症(具有致死性的嚴重程度)、出血、心毒性、肝毒性、腎毒性、食欲不振及體重減少等。
雖然在初期觀察不到肝癌的特別的初期症狀，但隨著肝癌的進展，通常可觀察到與肝功能失調相關的肝癌特有的症狀，如食欲不振、體重減少、全身倦怠感、可觸知的右季肋部質量、右季肋部痛、腹部脹滿感、發熱及黃疸等。根據臨床觀察，這類症狀因化療劑的使用而加劇。例如，對於檢測出肝癌細胞的患者的食欲不振及例如與食欲不振相關或無關的體重減少的症狀，相較於未使用化療劑，對患者施用化療劑可能會加劇上述症狀。在一些例子中，具有這類症狀的患者必須中斷化療劑的使用。這些加劇的症狀會妨礙利用化療劑的治療。因此，例如從改善治療效果或改善接受治療患者的QOL的觀點而言，有確立更優異的治療方法之需求。
磷脂醯肌醇蛋白聚糖3(glypican 3，GPC3)在肝癌 中頻繁地高度表達，因此似乎有助於確定其在肝癌中的功能或是作為肝癌的治療或診斷標靶。
在上述情況下，展開將GPC3作為肝癌的治療靶標之藥物的開發。已發展出一種包含以抗GPC3抗體作為活性成分的肝癌藥物，所述抗體對表達GPC3的細胞具有抗體依賴性細胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity，稱為“ADCC”)活性及/或補體依賴性細胞毒性(complement-dependent cytotoxicity，稱為“CDC”)活性(專利文獻1)。另外，已開發出包含以具有ADCC活性及CDC活性的人源化抗GPC3抗體作為活性成分的GPC3標靶藥物(專利文獻2)。此外，已發展出GPC3標靶藥物，其包含具有增強的ADCC活性的人源化抗GPC3抗體(專利文獻3及4)或具有ADCC活性及CDC活性以及改善的等離子動力學(plasma dynamics)的抗GPC3抗體(專利文獻5)。這些抗GPC3抗體與如索拉非尼之化療劑的結合療法已發現可減弱副作用，例如，減弱化療劑(如索拉非尼)的單獨療法所帶來的副作用，且亦展現根據這些試劑的協同效果(專利文獻6)。因此，例如，從改善治療效果或改善接受治療的患者的QOL的觀點而言，以GPC3標靶藥物作為核心的更優異的肝癌治療方法正逐漸得到確立。
另一方面，向T細胞提供兩種不同的信號是抗原呈現細胞(APCs)淋巴細胞活化(lymphocyte activation)休止型T淋巴細胞的廣泛接受的模型，Lafferty等人，Aust.J.Exp.Biol.Med.Sci 53：27-42(1975)。此模型更提供自身(self)及非自身(non-self)的區別以及免疫耐受性。Bretscher等人，Science 169： 1042-1049(1970)；Bretscher,P.A.,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 96：185-190(1999)；Jenkins等人，J.Exp.Med.165：302-319(1987)。T細胞受體(TCR)在辨識呈現於主要組織相容性複合物(MHC)環境下的外源抗原胜肽之後，轉導(transduce)主要訊號或抗原特異性訊號。第二或共刺激訊號藉由表達於抗原呈現細胞(APCs)上的共刺激分子傳遞至T細胞，誘發T細胞以提升克隆擴增(clonal expansion)、細胞激素分泌及效應子(effector)功能。Lenschow等人，Ann.Rev.Immunol.14：233(1996)。在缺乏共刺激的情況下，T細胞可能會變得對抗原刺激有抵抗性(refractory)，不會產生有效的免疫反應，進一步可能導致對外源抗原的耗盡或耐受。
在雙訊號模型(two-signal model)中，T細胞接受正及負的二次共刺激訊號。此種正及負的訊號的調控對於最大化宿主的保護免疫反應同時維持免疫耐受性及預防自體免疫是關鍵的。負的二次訊號對於T細胞耐受性的誘導似乎是需要的，而正的訊號促進T細胞活化。雖然簡單的雙訊號模型仍然為初始淋巴細胞(naive lymphocyte)提供了有效的解釋，但宿主的免疫反應為動態過程，且亦可提供共刺激訊號給抗原暴露的(antigen-exposed)T細胞。共刺激的機制具有治療利益，因為共刺激訊號的操作已顯示提供了增強或終止以細胞為基礎的(cell-based)免疫反應的手段。近來，已發現T細胞功能失調或失能(anergy)與抑制性受體，程式死亡-多胜肽1(programmed death 1 polypeptide，PD-1)，的誘導及持續表達同時發生。於是，PD-1的治療標靶及透過與PD-1交互作用而產生訊號的其 它分子，如程式死亡-配體1(programmed death ligand 1，PD-L1)及細胞程式死亡-配體2(PD-L2)為高度感興趣的領域。
PD-L1過量表達於多種癌症中且通常與不良的預後(prognosis)相關(Okazaki T等人，Intern.Immun.200719(7)：813)(Thompson RH等人，Cancer Res 2006,66(7)：3381)。有趣地，相較於一般組織中的T淋巴細胞及外周血液T淋巴細胞，大多數腫瘤浸潤性(infiltrating)T淋巴細胞顯著表達PD-1，代表PD-1於腫瘤反應性T細胞的向上調控(up-regulation)可促進受損的抗腫瘤免疫反應(Blood 2009 114(8)：1537)。這可能是因為利用由PD-L1表達腫瘤細胞介導的PD-L1訊號與表達PD-1的T細胞相互作用導致T細胞活化的減弱及免疫監控(immune surveillance)的逃避(Sharpe等人，Nat Rev 2002)(Keir ME等人，2008Annu.Rev.Immunol.26：677)。因此，PD-L1/PD-1交互作用的抑制可提升CD8+ T細胞介導的腫瘤殺傷。
治療標靶PD-1及透過與PD-1交互作用而產生訊號的其它分子，如細胞程式死亡-配體1(PD-L1)及細胞程式死亡-配體2(PD-L2)為高度感興趣的領域。PD-L1訊號的抑制已被提出作為提升T細胞免疫以用於癌症治療(例如，腫瘤免疫)及感染的一種手段，所述感染包含急性及慢性(例如，持續的)感染。最適化的(optimal)治療處理可結合PD-1受體/配體交互作用的阻擋與直接地抑制腫瘤生長的試劑。對於治療、穩定、預防及/或延緩各種癌症發展的最適化療法之需求依然存在。
於本文中引用的所有參考文獻，包含專利申請文件、專利公告文件及UniProtKB/Swiss-Prot登錄號之整體內容 均通過引用而併入本文中，如同表示每個單獨的參考文獻具體且個別地通過引用併入。
本發明包含：
[1]一種用於治療或延緩個體中癌症進展的醫藥組成物，其係與PD-1軸結合拮抗劑(PD-1 axis binding antagonist)組合使用，所述組成物包含抗GPC3抗體作為活性成分。
[2]根據[1]所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體係在PD-1軸結合拮抗劑的施用(administration)之前、與PD-1軸結合拮抗劑的施用同時或在PD-1軸結合拮抗劑的施用之後進行施用。
[3]根據[1]或[2]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑擇自於PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑所組成之群組。
[4]根據[3]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-1結合拮抗劑。
[5]根據[4]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1結合至它的配體結合配偶體(partner)。
[6]根據[5]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L1的結合。
[7]根據[5]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L2的結合。
[8]根據[5]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L1及PD-L2兩者的結合。
[9]根據[5]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑為 抗體。
[10]根據[5]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑擇自於nivolumab、lambrolizumab(pembrolizumab)及pidilizumab所組成之群組。
[11]根據[2]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-L1結合拮抗劑。
[12]根據[1]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1的結合。
[13]根據[11]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對B7-1的結合。
[14]根據[11]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1及B7-1兩者的結合。
[15]根據[12]至[14]任一者所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。
[16]根據[11]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑擇自於YW243.55.S70、Atezolizumab、MPDL3280A、MDX-1105、avelumab及MEDI4736(durvalumab)所組成之群組。
[17]根據[15]所述之醫藥組成物，其中抗PD-L1抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：19的HVR-H1序列、序列辨識號：20的HVR-H2序列及序列辨識號：21的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：22的HVR-L1序列、序列辨識號：23的HVR-L2序列及序列辨識號：24的HVR-L3序列。
[18]根據[15]所述之醫藥組成物，其中抗PD-L1抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：25或26的胺基酸序列；以 及輕鏈可變區，其包含序列辨識號：4的胺基酸序列。
[19]根據[3]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-L2結合拮抗劑。
[20]根據[19]所述之醫藥組成物，其中PD-L2結合拮抗劑為抗體。
[21]根據[19]所述之醫藥組成物，其中PD-L2結合拮抗劑為免疫黏附素(immunoadhesin)。
[22]根據[1]至[21]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：34的HVR-H1序列、序列辨識號：35的HVR-H2序列及序列辨識號：36的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：37的HVR-L1序列、序列辨識號：38的HVR-L2序列及序列辨識號：39的HVR-L3序列。
[23]根據[1]至[21]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體能夠結合至第二抗體可結合的抗原決定位，其中所述第二抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：42的HVR-H1序列、序列辨識號：43的HVR-H2序列及序列辨識號：44的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：45的HVR-L1序列、序列辨識號：46的HVR-L2序列及序列辨識號：47的HVR-L3序列。
[24]根據[1]至[23]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體為人源化(humanized)抗體。
[25]根據[24]所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：50的胺基酸序列；以及輕鏈 可變區，其包含序列辨識號：52的胺基酸序列。
[26]根據[1]至[25]任一者所述之醫藥組成物，其中所述癌症擇自於肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌及前列腺癌所組成之群組。
本發明亦提供：
[27]一種用於治療或延緩個體中癌症進展的醫藥組成物，其係與抗GPC3抗體組合使用，所述組成物包含PD-1軸結合拮抗劑作為活性成分。
[28]根據[27]所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體係在該PD-1軸結合拮抗劑的施用之前、與該PD-1軸結合拮抗劑的施用同時或在該PD-1軸結合拮抗劑的施用之後進行施用。
[29]根據[27]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑擇自於PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑所組成之群組。
[30]根據[29]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-1結合拮抗劑。
[31]根據[30]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1結合至它的配體結合配偶體。
[32]根據[31]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L1的結合。
[33]根據[31]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L2的結合。
[34]根據[31]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑 抑制PD-1對PD-L1及PD-L2兩者的結合。
[35]根據[31]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑為抗體。
[36]根據[31]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑擇自於nivolumab、lambrolizumab(pembrolizumab)及pidilizumab所組成的群組。
[37]根據[28]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-L1結合拮抗劑。
[38]根據[37]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1的結合。
[39]根據[37]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對B7-1的結合。
[40]根據[37]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1及B7-1兩者的結合。
[41]根據[38]至[40]任一者所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。
[42]根據[37]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑擇自於YW243.55.S70、Atezolizumab、MPDL3280A、MDX-1105、avelumab及MEDI4736(durvalumab)所組成的群組。
[43]根據[41]所述之醫藥組成物，其中抗PD-L1抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：19的HVR-H1序列、序列辨識號：20的HVR-H2序列及序列辨識號：21的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：22的HVR-L1序列、序列辨識號：23的HVR-L2序列及序列辨識號：24的HVR-L3序列。
[44]根據[41]所述之醫藥組成物，其中抗PD-L1抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：25或26的胺基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含序列辨識號：4的胺基酸序列。
[45]根據[29]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-L2結合拮抗劑。
[46]根據[45]所述之醫藥組成物，其中PD-L2結合拮抗劑為抗體。
[47]根據[45]所述之醫藥組成物，其中PD-L2結合拮抗劑為免疫黏附素。
[48]根據[27]至[47]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：34的HVR-H1序列、序列辨識號：35的HVR-H2序列及序列辨識號：36的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：37的HVR-L1序列、序列辨識號：38的HVR-L2序列及序列辨識號：39的HVR-L3序列。
[49]根據[27]至[47]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體能夠結合至第二抗體可結合的抗原決定位，其中所述第二抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：42的HVR-H1序列、序列辨識號：43的HVR-H2序列及序列辨識號：44的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：45的HVR-L1序列、序列辨識號：46的HVR-L2序列及序列辨識號：47的HVR-L3序列。
[50]根據[27]至[49]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體為人源化抗體。
[51]根據[50]所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：50的胺基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含序列辨識號：52的胺基酸序列。
[52]根據[27]至[51]任一者所述之醫藥組成物，其中所述癌症擇自於肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌及前列腺癌所組成之群組。
本發明亦提供：
[53]一種用於治療或延緩個體中癌症進展的醫藥組成物，包含PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體的組合作為活性成分
[54]根據[53]所述之醫藥組成物，其中醫藥組成物為組合製劑(preparation)。
[55]根據[53]所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體係在該PD-1軸結合拮抗劑的施用之前、與該PD-1軸結合拮抗劑的施用同時或在該PD-1軸結合拮抗劑的施用之後進行施用。
[56]根據[53]或[55]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑擇自於PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑所組成之群組。
[57]根據[56]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-1結合拮抗劑。
[58]根據[57]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1結合至它的配體結合配偶體。
[59]根據[58]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑 抑制PD-1對PD-L1的結合。
[60]根據[58]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L2的結合。
[61]根據[58]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD1對PD-L1及PD-L2兩者的結合。
[62]根據[58]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑為抗體。
[63]根據[58]所述之醫藥組成物，其中PD-1結合拮抗劑擇自於nivolumab、lambrolizumab(pembrolizumab)及pidilizumab所組成的群組。
[64]根據[55]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-L1結合拮抗劑。
[65]根據[64]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1的結合。
[66]根據[64]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對B7-1的結合。
[67]根據[64]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1及B7-1兩者的結合。
[68]根據[65]至[67]任一者所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。
[69]根據[64]所述之醫藥組成物，其中PD-L1結合拮抗劑擇自於YW243.55.S70、Atezolizumab、MPDL3280A、MDX-1105、avelumab及MEDI4736(durvalumab)所組成的群組。
[70]根據[64]所述之醫藥組成物，其中抗PD-L1抗體包含 重鏈，其包含序列辨識號：19的HVR-H1序列、序列辨識號：20的HVR-H2序列及序列辨識號：21的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：22的HVR-L1序列、序列辨識號：23的HVR-L2序列及序列辨識號：24的HVR-L3序列。
[71]根據[68]所述之醫藥組成物，其中抗PD-L1抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：25或26的胺基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含序列辨識號：4的胺基酸序列。
[72]根據[56]所述之醫藥組成物，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-L2結合拮抗劑。
[73]根據[72]所述之醫藥組成物，其中PD-L2結合拮抗劑為抗體。
[74]根據[72]所述之醫藥組成物，其中PD-L2結合拮抗劑為免疫黏附素。
[75]根據[53]至[74]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：34的HVR-H1序列、序列辨識號：35的HVR-H2序列及序列辨識號：36的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：37的HVR-L1序列、序列辨識號：38的HVR-L2序列及序列辨識號：39的HVR-L3序列。
[76]根據[53]至[74]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體能夠結合至第二抗體可結合的抗原決定位，其中所述第二抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：42的HVR-H1序列、序列辨識號：43的HVR-H2序列及序列辨識號：44的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：45的HVR-L1 序列、序列辨識號：46的HVR-L2序列及序列辨識號：47的HVR-I3序列。
[77]根據[53]至[76]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體為人源化抗體。
[78]根據[77]所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：50的胺基酸序列；以及輕鏈可變區，其包含序列辨識號：52的胺基酸序列。
[79]根據[53]至[78]任一者所述之醫藥組成物，其中所述癌症擇自於肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌及前列腺癌所組成之群組。
本發明亦提供：
[80]一種用於提升個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應的醫藥組成物，其係與PD-1軸結合拮抗劑組合使用，所述組成物包含抗GPC3抗體作為活性成分。
[81]一種用於提升個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應的醫藥組成物，其係與抗GPC3抗體組合使用，所述組成物包含PD-1軸結合拮抗劑作為活性成分。
[82]一種用於提升個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應的醫藥組成物，包含PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體的組合作為活性成分。
[83]根據[80]至[82]任一者所述之醫藥組成物，其中抗GPC3抗體係在PD-1軸結合拮抗劑的施用之前、與PD-1軸結合拮抗劑的施用同時或在PD-1軸結合拮抗劑的施用之後進行 施用。
[84]根據[80]至[83]任一者所述之醫藥組成物，其中所述癌症擇自於肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌及前列腺癌所組成之群組。
本發明亦提供：
[85]一種用於治療或延緩個體中癌症進展的方法，包含對個體施用有效量的PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。
[86]根據[85]所述之方法，其中抗GPC3抗體係在PD-1軸結合拮抗劑的施用之前、與PD-1軸結合拮抗劑的施用同時或在PD-1軸結合拮抗劑的施用之後進行施用。
[87]根據[85]或[86]所述之方法，其中PD-1軸結合拮抗劑擇自於PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑所組成之群組。
[88]根據[87]所述之方法，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-1結合拮抗劑。
[89]根據[88]所述之方法，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1結合至它的配體結合配偶體。
[90]根據[89]所述之方法，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L1的結合。
[91]根據[89]所述之方法，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L2的結合。
[92]根據[89]所述之方法，其中PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L1及PD-L2兩者的結合。
[93]根據[89]所述之方法，其中PD-1結合拮抗劑為抗體。
[94]根據[89]所述之方法，其中PD-1結合拮抗劑擇自於nivolumab、lambrolizumab(pembrolizumab)及pidilizumab所組成的群組。
[95]根據[81]所述之方法，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-L1結合拮抗劑。
[96]根據[95]所述之方法，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1的結合。
[97]根據[95]所述之方法，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對B7-1的結合。
[98]根據[95]所述之方法，其中PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1及B7-1兩者的結合。
[99]根據[96]至[98]任一者所述之方法，其中PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。
[100]根據[95]所述之方法，其中PD-L1結合拮抗劑擇自於YW243.55.S70、Atezolizumab、MPDL3280A、MDX-1105、avelumab及MEDI4736(durvalumab)所組成的群組。
[101]根據[99]所述之方法，其中抗PD-L1抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：19的HVR-H1序列、序列辨識號：20的HVR-H2序列及序列辨識號：21的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：22的HVR-L1序列、序列辨識號：23的HVR-L2序列及序列辨識號：24的HVR-L3序列。
[102]根據[99]所述之方法，其中抗PD-L1抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：25或26的胺基酸序列；以及輕 鏈可變區，其包含序列辨識號：4的胺基酸序列。
[103]根據[87]所述之方法，其中PD-1軸結合拮抗劑為PD-L2結合拮抗劑。
[104]根據[103]所述之方法，其中PD-L2結合拮抗劑為抗體。
[105]根據[103]所述之方法，其中PD-L2結合拮抗劑為免疫黏附素。
[106]根據[85]至[105]任一者所述之方法，其中抗GPC3抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：34的HVR-H1序列、序列辨識號：35的HVR-H2序列及序列辨識號：36的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：37的HVR-L1序列、序列辨識號：38的HVR-L2序列及序列辨識號：39的HVR-L3序列。
[107]根據[85]至[105]任一者所述之方法，其中抗GPC3抗體能夠結合至第二抗體可結合的抗原決定位，其中所述第二抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：42的HVR-H1序列、序列辨識號：43的HVR-H2序列及序列辨識號：44的HVR-H3序列；以及輕鏈，其包含序列辨識號：45的HVR-L1序列、序列辨識號：46的HVR-L2序列及序列辨識號：47的HVR-L3序列。
[108]根據[85]至[107]任一者所述之方法，其中抗GPC3抗體為人源化抗體。
[109]根據[108]所述之方法，其中抗GPC3抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：50的胺基酸序列；以及輕鏈可變 區，其包含序列辨識號：52的胺基酸序列。
[110]根據[85]至[109]任一者所述之方法，其中所述癌症擇自於肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌及前列腺癌所組成之群組。
本發明亦提供：
[111]一種用於提升個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應的方法，其係與PD-1軸結合拮抗劑組合使用，所述組成物包含抗GPC3抗體作為活性成分。
[112]一種用於提升個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應的方法，其係與抗GPC3抗體組合使用，所述組成物包含PD-1軸結合拮抗劑作為活性成分。
[113]一種用於提升個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應的方法，包含PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體的組合作為活性成分。
[114]根據[111]至[113]任一者所述之方法，其中抗GPC3抗體係在PD-1軸結合拮抗劑的施用之前、與PD-1軸結合拮抗劑的施用同時或在PD-1軸結合拮抗劑的施用之後進行施用。
[115]根據[111]至[114]任一者所述之方法，其中所述癌症擇自於肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌及前列腺癌所組成之群組。
本發明亦提供：
[116]一種用於治療或延緩個體中癌症進展的組合，包含PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。
[117]根據[116]所述之組合，其中抗GPC3抗體係在PD-1 軸結合拮抗劑的施用之前、與PD-1軸結合拮抗劑的施用同時或在PD-1軸結合拮抗劑的施用之後進行施用。
[118]根據[116]或[117]所述之組合，其中所述癌症擇自於肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌及前列腺癌所組成之群組。
本發明亦提供：
[119]一種套組(kit)，包含(1)醫藥組成物，包含抗GPC3抗體作為活性成分；(2)容器(container)；以及(3)仿單(package insert)或包裝標示，包含醫藥組成物與PD-1軸結合拮抗劑組合施用以用於治療或延緩個體中癌症進展的說明。
[120]一種套組，包含第一醫藥組成物，其包含PD-1軸結合拮抗劑作為活性成分，以及第二醫藥組成物，其包含抗GPC3抗體作為活性成分。
[121]根據[119]或[120]所述之套組，其中所述癌症擇自於肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌及前列腺癌所組成之群組。
本發明亦提供：
[122]一種PD-1軸結合拮抗劑的用途，其係用於製造用以治療或延緩個體中癌症進展的藥劑，其中所述藥劑包含PD-1軸結合拮抗劑以及可選的(optional)醫藥上可接受的載體，且其中所述治療包含藥劑及組成物的組合施用，所述組成物包含抗GPC3抗體及可選的醫藥上可接受的載體。
[123]一種抗GPC3抗體的用途，其係用於製造用以治療或延緩個體中癌症進展的藥劑，其中所述藥劑包含抗GPC3抗體以及可選的醫藥上可接受的載體，且其中所述治療包含藥劑及組成物的組合施用，所述組成物包含PD-1軸結合拮抗劑及可選的醫藥上可接受的載體。
發明人發現，比起單獨使用抗GPC3抗體或人類PD-1軸結合拮抗劑，組合所述抗GPC3抗體及人類PD-1軸結合拮抗劑，可於癌症患者中可達到較佳的治療效果。
在一態樣中，於本文中提供的是一種用於治療或延緩個體中癌症進展的方法，包含對個體施用有效量的人類PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。
在另一態樣中，於本文中提供的是一種用於提升具有癌症的個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應的方法，包含施用有效量的PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。舉例而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含免疫細胞浸潤(infiltration)於腫瘤組織中，所述免疫細胞包含巨噬細胞及多核巨細胞(multinucleated giant cell)。就另一例子而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含CD45+淋巴細胞、CD3+淋巴細胞及CD8+ T淋巴細胞於腫瘤浸潤淋巴細胞(infiltrated lymphocytes，TILs)中的增加。
在另一態樣中，於本文中提供的是一種人類PD1軸結合拮抗劑的用途，其係用於製造用以治療或延緩個體中癌症進展的藥劑，其中所述藥劑包含人類PD-1軸結合拮抗劑及 可選的醫藥上可接受的載體，且其中所述治療包含藥劑及組成物的組合施用，所述組成物包含抗GPC3抗體及可選的醫藥上可接受的載體。
在另一態樣中，於本文中提供的是一種抗GPC3抗體的用途，其係用於製造用以治療或延緩個體中癌症進展的藥劑，其中所述藥劑包含抗GPC3抗體以及可選的醫藥上可接受的載體，且其中所述治療包含藥劑及組成物的組合施用，所述組成物包含人類PD-1軸結合拮抗劑及可選的醫藥上可接受的載體。
在另一態樣中，於本文中提供的是一種組成物，包含人類PD-1軸結合拮抗劑及可選的醫藥上可接受的載體，用於治療或延緩個體中的癌症進展，其中所述治療包含組成物及第二組成物的組合施用，其中所述第二組成物包含抗GPC3抗體及可選的醫藥上可接受的載體。
在另一態樣中，於本文中提供的是一種組成物，包含抗GPC3抗體及可選的醫藥上可接受的載體，用於治療或延緩個體中的癌症進展，其中所述治療包含組成物及第二組成物的組合施用，其中所述第二組成物包含人類PD-1軸結合拮抗劑及可選的醫藥上可接受的載體。
在另一態樣中，於本文中提供的是一種套組，包含藥劑，其包含PD-1軸結合拮抗劑及可選的醫藥上可接受的載體，以及仿單(package insert)，其包含藥劑與含有抗GPC3抗體及可選的醫藥上可接受的載體的組成物組合施用，以治療或延緩個體中的癌症進展之說明。
在另一態樣中，於本文中提供的是一種套組，包含第一藥劑，其包含PD-1軸結合拮抗劑及可選的醫藥上可接受的載體，以及第二藥劑，其包含抗GPC3抗體及可選的醫藥上可接受的載體。在一些實施例中，套組更包含仿單，其包含施用第一藥劑及第二藥劑以治療或延緩個體中癌症進展的說明。
在另一態樣中，於本文中提供的是一種套組，包含藥劑，其包含抗GPC3抗體及可選的醫藥上可接受的載體，以及仿單，其包含藥劑與含有PD-1軸結合拮抗劑及可選的醫藥上可接受的載體的組成物組合施用，以治療或延緩個體中癌症進展之說明。
在前文及文中所述的方法、用途、組成物及套組的一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑擇自於PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑所組成的群組。在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑為抗體。在一些實施例中，抗體為人源化抗體、嵌合抗體(chimeric antibody)或人類抗體。在一些實施例中，抗體為抗原結合片段。在一些實施例中，抗原結合片段擇自於Fab、Fab'、F(ab')2、scFv及Fv所組成的群組。
在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑為PD-1結合拮抗劑。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑抑制PD-1結合至它的配體結合配偶體。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L1的結合。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L2的結合。在一些實施例中，PD-1結合拮抗 劑抑制PD-1對PD-L1及PD-L2兩者的結合。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為抗體。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑擇自於MDX-1106(nivolumab)、MK-3475(pembrolizumab、lambrolizumab)、CT-011(pidilizumab)、PDR001、REGN2810、BGB A317、SHR-1210、AMP-514(MEDI0680)及AMP-224所組成的群組。
在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑為PD-L1結合拮抗劑。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1的結合。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對B7-1的結合。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1及B7-1兩者的結合。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑為抗體。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑擇自於YW243.55.S70、Atezolizumab、MPDL3280A、MDX-1105、avelumab及MEDI4736(durvalumab)所組成的群組。在一些實施例中，抗PD-L1抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：19的HVR-H1序列、序列辨識號：20的HVR-H2序列及序列辨識號：21的HVR-H3序列，及/或輕鏈，其包含序列辨識號：22的HVR-L1序列、序列辨識號：23的HVR-L2序列及序列辨識號：24的HVR-L3序列。在一些實施例中，抗PD-L1抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：25或26的胺基酸序列，及/或輕鏈可變區，其包含序列辨識號：4的胺基酸序列。在一些實施例中，抗PD-L1抗體包含抗體YW243.55.S70的三個重鏈HVR序列，及/或抗體YW243.55.S70的三個輕鏈HVR序列，如WO2010/077634及美國專利號8,217,149所述，其通過引用 併入本文中。在一些實施例中，抗PD-L1抗體包含抗體YW243.55.S70的三個重鏈可變區序列，及/或抗體YW243.55.S70的三個輕鏈可變區序列。在一些實施例中，抗PD-L1抗體為Atezolizumab。
在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑為PD-L2結合拮抗劑。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑為抗體。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑為免疫黏附素。
在前文及文中所述的方法、用途、組成物及套組的一些實施例中，抗GPC3抗體為人源化抗體、嵌合抗體或人類抗體。在一些實施例中，抗體為抗原結合片段。在一些實施例中，抗原結合片段擇自於Fab、Fab'、F(ab')2、scFv及Fv所組成的群組。
在一些實施例中，抗GPC3抗體為GC33或codrituzumab。在一些實施例中，抗GPC3抗體包含重鏈，其包含序列辨識號：42的HVR-H1序列、序列辨識號：43的HVR-H2序列及序列辨識號：44的HVR-H3序列，及/或輕鏈，其包含序列辨識號：45的HVR-L1序列、序列辨識號：46的HVR-L2序列及序列辨識號：47的HVR-L3序列。在一些實施例中，抗GPC3抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：50的胺基酸序列，及/或輕鏈可變區，其包含序列辨識號：51的胺基酸序列。在一些實施例中，抗GPC3抗體包含重鏈可變區，其包含序列辨識號：50的胺基酸序列，及/或輕鏈可變區，其包含序列辨識號：52的胺基酸序列。在一些與任一其它實施例組合的實施例中，抗GPC3抗體不是GC33或codrituzumab。
在一些實施例中，本文中所述的抗體(例如，PD-1軸結合拮抗劑抗體或抗GPC3抗體)包含去糖基化位點突變(aglycosylation site mutation)。在一些實施例中，糖基化位點突變為取代突變。在一些實施例中，取代突變是位於胺基酸殘基N297、L234、L235及/或D265(EU編號)。在一些實施例中，取代突變擇自於N297G、N297A、L234A、L235A及D265A所組成的群組。在一些實施例中，取代突變為D265A突變及N297G突變。在一些實施例中，糖基化位點突變降低抗體的效應子功能。在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑(例如，抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體或抗PD-L2抗體)為具有在位置297的Asn取代為Ala的人類IgG1，根據EU編號。
在前文及文中所述的方法、用途、組成物及套組的一些實施例中，癌症為GPC3陽性的癌症。在一些實施例中，癌症為肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌、前列腺癌或文中所述的其它癌症。在一些實施例中，個體具有癌症或已被診斷患有癌症。在一些實施例中，個體中的癌症細胞表達PD-L1。
在前文及文中所述的方法、用途、組成物及套組的一些實施例中，人類PD-1軸結合拮抗劑以及抗GPC3抗體的治療或施用在個體中斷治療後產生持續的反應。在一些實施例中，抗GPC3抗體在PD-1軸結合拮抗劑的施用之前、與PD-1軸結合拮抗劑的施用同時或在PD-1軸結合拮抗劑的施用之後進行施用。在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體在相同的組成物中。在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗 劑及抗GPC3抗體在分開的組成物中。
在前文及文中所述的方法、用途、組成物及套組的一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑及/或抗GPC3抗體是靜脈內地、肌內地、皮下地、局部地、口服地、經皮地、腹腔內地、眶內地(intraorbitally)、藉由植入、藉由吸入、鞘內地(intrathecally)、心室內地或鼻內地施用。在前文及文中所述的方法、用途、組成物及套組的一些實施例中，治療更包含施用用以治療或延緩個體中癌症進展的化療劑(chemotherapeutic agent)。在一些實施例中，在以PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體組合治療前，個體已經過化療劑治療。在一些實施例中，經過PD-1軸結合拮抗劑及/或抗GPC3抗體組合治療的個體對於化療劑治療有抵抗性(refractory)。本案所述的方法、用途、組成物及套組的一些實施例，更包含施用用以治療或延緩癌症進展的化療劑。
在前文及文中所述的方法、用途、組成物及套組的一些實施例中，相對於施用組合之前，個體中的CD8 T細胞具有增強的啟動(priming)、活化、增生(proliferation)及/或細胞溶解活性(cytolytic activity)。在一些實施例中，相對於施用組合之前，CD8 T細胞的數量提升。在一些實施例中，CD8 T細胞為抗原特異性CD8 T細胞。
應理解的是，於本文中所述的各種實施例的一、一些或全部的特徵可被結合以形成本發明的另一些實施例。對於所述技術領域中具有通常知識者而言，發明的這些及其它態樣將為明顯的。發明的這些及其它實施例將於下文進一步詳細 描述。
[第1圖]第1圖顯示於各小鼠中Hepa1-6表達人類GPC3的腫瘤體積變化示意圖，所述小鼠每周經載體控制組(vehicle control)、1mg/kg或5mg/kg的mGC33處理3次。箭頭標示注射的日期。每組處理5隻小鼠。
[第2A圖]第2A圖顯示從經載體控制組或5mg/kg的mGC33處理的小鼠分離的組織之蘇木精及伊紅染色(hematoxylin and eosin staining，HE)或F4/80免疫組織化學染色(immune-histochemical staining，IHC)的影像圖。
[第2B圖]第2B圖顯示從經載體控制組或5mg/kg的mGC33處理的小鼠分離的組織之蘇木精及伊紅染色(HE)或PD-L1免疫組織化學染色(IHC)的影像圖。箭頭標示於浸潤的免疫細胞的細胞膜觀察到的PD-L1免疫反應性。
[第3A圖]第3A圖顯示於各小鼠中CT26表達人類GPC3的腫瘤體積變化示意圖，所述小鼠經單方療法(monotherapy)(mGC33或10F.9G2(抗PD-L1))或組合(mGC33+10F.9G2)處理。箭頭標示注射的日期。每組處理5隻小鼠。繪製每組的腫瘤體積平均及標準差線(SD bar)。
[第3B圖]第3B圖顯示帶有CT26/hGPC3的小鼠的無進展存活率(progression free survival rate)示意圖，所述小鼠經單方療法(mGC33或10F.9G2(抗PD-L1))或組合(mGC33+10F.9G2)處理。進展是在腫瘤尺寸達到大於100mm3時進行定 義。
[第4A圖]第4A圖顯示於經單方療法或組合治療的各小鼠中CT26表達人類GPC3的腫瘤體積變化示意圖。箭頭標示注射的日期。每組處理5隻小鼠。繪製每組的腫瘤體積平均及標準差線(SD bar)。5mg/kg或25mg/kg的mGC33、10F.9G2、5mg/kg或25mg/kg的mGC33+10F.9G2的腫瘤生長抑制值分別為52%、58%、68%、75%及85%。
[第4B圖]第4B圖顯示於第29天的個別的腫瘤體積示意圖。亦繪製每組的腫瘤體積平均(*)。
[第5A圖]第5A圖顯示於各小鼠中Hepa1-6表達人類GPC3的腫瘤體積變化示意圖，所述小鼠經載體控制組、1mg/kg、5mg/kg或25mg/kg的mGC33、10F.9G2或5mg/kg或25mg/kg的GC33及10F.9G2的組合處理。箭頭標示注射的日期。每組處理5隻小鼠。
[第5B圖]第5B圖顯示於第34天在經處理的每組中個別的腫瘤區域或種瘤區域的平均+SD示意圖。腫瘤區域(mm2)是在從各小鼠分離腫瘤組織的HE染色後，由(腫瘤組織的長軸長度(mm))x(腫瘤組織的短軸長度1(mm))計算。且各腫瘤組織的病理評估結果附加於圖表的底部。疾病的病理進展(pathological progression of disease，pPD)定義為“未觀察到腫瘤消退”。病理部分消退(pathological partial regression，pPR)定義為“觀察到具有免疫細胞浸潤的腫瘤細胞的變性(degeneration)及/或壞死”。病理完全消退(pathological complete regression，pCR)定義為“在腫瘤植入位置未觀察到腫瘤細胞”。
[第6A圖]第6A圖顯示於各小鼠中Hepa1-6表達人類GPC3的腫瘤體積變化示意圖，所述小鼠經mGC33及6E11(anti-PD-L1)的單方療法或組合處理，以標示的不同劑量程度及時程。箭頭標示注射的日期。每組處理5隻小鼠。
[第6B圖]第6B圖顯示於各小鼠組別中Hepa1-6表達人類GPC3的腫瘤體積變化示意圖，所述小鼠組別經mGC33及6E11的單方療法或組合處理。相較於以GC33或6E11單方療法處理的組別，組合組別的腫瘤成長顯著地被抑制。箭頭標示注射的日期。每組處理5隻小鼠。*：Wilcoxon的P<0.05(SAS Institute Inc.)。
[第6C圖]第6C圖顯示在帶有Hepa1-6表達人類GPC3的小鼠的各個經處理的組別中體重改變的平均值示意圖。添加標準差線(SD bar)。
[第7圖]第7圖顯示於各組別中皮下組織中腫瘤組織的顯微照片示意圖。灰色區域表示沒有壞死的腫瘤區域或淋巴/肉芽(granulation)組織。藍色區域表示壞死的腫瘤區域或淋巴組織。虛線表示塊體(mass)的邊界。L代表淋巴組織，G代表肉芽組織，pCR代表病理完全反應(組織病理學切片(slide)上沒有腫瘤組織)，以及MOR代表由腫瘤進展導致的瀕死犧牲動物。
[第8A圖]第8A圖顯示在各個經處理的組別中適應於(adjusting to)基質(stroma)的塊體周圍的HE染色腫瘤組織代表性顯微照片示意圖。在所有經處理的組別中均觀察到具有免疫細胞(包含巨噬細胞/多核巨細胞)浸潤的腫瘤壞死。病灶(lesion)的嚴重程度如下：mGC33 5mg/kg單一+6E11 q7d x 3 >mGC33 5mg/kg單一或6E11 q7d x 3。S代表適應腫瘤塊體的基質，且P代表腫瘤塊體的周圍。
[第8B圖]第8B圖顯示在各個經處理的組別中適應於基質的塊體周圍的F4/80 IHC腫瘤組織的代表性顯微照片示意圖。於載體中，主要在基質中觀察到F4/80陽性細胞。另一方面，在所有經處理的組別中，F4/80陽性免疫細胞(包含巨噬細胞/多核巨細胞)的增加的嚴重程度主要在腫瘤塊體的周圍觀察到。陽性細胞浸潤的嚴重程度如下：mGC33 5mg/kg單一+6E11 q7d x 3>mGC33 5mg/kg單一或6E11 q7d x 3。S代表適應腫瘤塊體的基質，且P代表腫瘤塊體的周圍。
[第8C圖]第8C圖顯示在各個經處理的組別中適應於基質的塊體周圍的PD-L1 IHC腫瘤組織的代表性顯微照片示意圖。於載體中，主要在腫瘤細胞的細胞質中觀察到強度微弱的PD-L1陽性細胞反應。另一方面，在所有經處理的組別中，觀察到免疫細胞(包含巨噬細胞/多核巨細胞)中的PD-L1陽性反應的嚴重程度增加，由微弱變成中等強度。S代表適應腫瘤塊體的基質，且P代表腫瘤塊體的周圍。
[第9圖]第9圖顯示在各個經處理的組別中觀察到的指標(marker)陽性細胞的比例。於各圖中，繪製每組的個別值及平均，且標示出平均值。
本案中的數據顯示抗GPC3抗體及抗PD-L1免疫療法的組合造成腫瘤成長的加強抑制、增加的反應速率及持久反應。發明人證明了組合兩種療法的益處：對抗GPC3表達的 腫瘤細胞的細胞毒殺活性連同抑制T細胞抑制性PD-1/PD-L1訊號傳遞，產生提升的治療效果及持久的長期反應。
在一態樣中，於本文中提供的是用於治療或延緩個體中癌症進展的方法、組成物及用途，包含施用有效量的人類PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。
在另一態樣中，於本文中提供的是用於提升具有癌症的個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應的方法、組成物及用途，包含施用有效量的人類PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。舉例而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含免疫細胞浸潤於腫瘤組織中，所述免疫細胞包含巨噬細胞及多核巨細胞。就另一例子而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含CD45+淋巴細胞、CD3+淋巴細胞及CD8+ T淋巴細胞於腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)中的增加。
I.定義
在詳細描述本發明前，應理解的是，本發明並未限定於特定的組成物或生物系統，其當然地可有所變化。也應理解的是，於本文中使用的術語僅是用於描述特定的實施例，而非意圖限定。
如本說明書及所附申請專利範圍中所使用，單數形式的“一(a)”、“一(an)”及“該(the)”包含複數的指涉對象，除非內容另明確指示。因此，舉例而言，提及“一個分子”可選地包含兩個或更多個此種分子的組合等。
於本文中使用的用詞“約”，代表所屬技術領域中具有通常知識者已知對於相應值的通常誤差範圍。本文中提及的 “約”值或參數包含(及描述)針對該值或參數本身的實施例。
可理解的是，本文中所述之發明的態樣及實施例包含“包括”、“由...所組成”及“大致上由...所組成”的態樣及實施例。
用詞“PD-1軸結合拮抗劑”代表抑制PD-1軸結合配偶體與它的一或多個結合配偶體的交互作用，以移除PD-1訊號傳遞軸上的訊號傳遞(signaling)-其造成T細胞功能的恢復獲提升(例如，增生、細胞激素增加、標靶細胞死亡)-所導致的T細胞功能失調。如本文中所使用，PD-1軸結合拮抗劑包含PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑。
用詞“PD-1結合拮抗劑”代表減少、阻擋、抑制、廢除或干擾PD-1與它的一或多個結合配偶體(如PD-L1及PD-L2)交互作用所產生的訊號轉導(transduction)之分子。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為抑制PD-1結合至它的一或多個結合配偶體之分子。在一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑抑制PD-1對PD-L1及/或PD-L2的結合。舉例而言，PD-1結合拮抗劑包含抗PD-1抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡胜肽及可減少、阻擋、抑制、廢除或干擾PD-1與PD-L1及/或PD-L2交互作用所產生的訊號轉導的其它分子。在一實施例中，PD-1結合拮抗劑減少負的共刺激訊號，其是藉由或通過T淋巴細胞上表達的細胞表面蛋白進行調控，所述細胞表面蛋白通過PD-1調控訊號傳遞，使得功能失調的T細胞減少功能失調(例如，提升對抗原辨識的效應子反應)。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為抗PD-1抗體。在一特定態樣 中，PD-1結合拮抗劑為文中所述的MDX-1106(nivolumab)。在另一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑為文中所述的MK-3475(lambrolizumab)。在另一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑為文中所述的CT-011(pidilizumab)。在另一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑為文中所述的AMP-224或AMP-514(MEDI0680)。在另一特定態樣中，PD-1拮抗劑擇自於文中所述PDR001、REGN2810、BGB A317及SHR-1210所組成的群組。
用詞“PD-L1結合拮抗劑”代表減少、阻擋、抑制、廢除或干擾PD-L1與它的一或多個結合配偶體(如PD-1及B7-1)交互作用所產生的訊號轉導之分子。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑為抑制PD-L1結合至它的結合配偶體之分子。在一特定態樣中，PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1對PD-1及/或B7-1的結合。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑包含抗PD-L1抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡胜肽及可減少、阻擋、抑制、廢除或干擾PD-L1與它的一或多個結合配偶體(如PD-1及B7-1)交互作用所產生的訊號轉導的其它分子。在一實施例中，PD-L1結合拮抗劑減少負的共刺激訊號，其是藉由或通過T淋巴細胞上表達的細胞表面蛋白進行調控，所述細胞表面蛋白通過PD-L1調控訊號傳遞，使得功能失調的T細胞減少功能失調(例如，提升對抗原辨識的效應子反應)。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。在一特定態樣中，抗PD-L1抗體為文中所述的YW243.55.S70或Atezolizumab。在另一特定態樣中，抗PD-L1抗體為文中所述的MDX-1105。在另一特定態樣中，抗PD-L1抗體為文中所 述的avelumab。在又一些特定態樣中，抗PD-L1抗體為文中所述的MPDL3280A。在又一些特定態樣中，抗PD-L1抗體為文中所述的MEDI4736(durvalumab)。
用詞“PD-L2結合拮抗劑”代表減少、阻擋、抑制、廢除或干擾PD-L2與它的一或多個結合配偶體(如PD-1)交互作用所產生的訊號轉導之分子。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑為抑制PD-L2結合至它的一或多個結合配偶體之分子。在一特定態樣中，PD-L2結合拮抗劑抑制PD-L2對PD-1的結合。在一些實施例中，PD-L2拮抗劑包含抗PD-L2抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡胜肽及可減少、阻擋、抑制、廢除或干擾PD-L2與它的一或多個結合配偶體(如PD-1)交互作用所產生的訊號轉導的其它分子。在一實施例中，PD-L2結合拮抗劑減少負的共刺激訊號，其是藉由或通過T淋巴細胞上表達的細胞表面蛋白進行調控，所述細胞表面蛋白通過PD-L2調控訊號傳遞，使得功能失調的T細胞減少功能失調(例如，提升對抗原辨識的效應子反應)。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑為免疫黏附素。
在免疫功能失調的上下文中，用詞“功能失調(dysfunction)”代表對抗原刺激的免疫反應性降低的狀態。此用詞包含可能發生抗原識別的耗盡(exhaustion)及/或失能，但接著發生的免疫反應對於控制感染或腫瘤生長無效的兩者的共同要素。
本文中使用的用詞“功能失調的(dysfunctional)”亦包含對抗原辨識有抵抗性(refractory)或無反應，具體而言，將 抗原辨識轉化為下游T細胞效應子功能的能力受損，所述T細胞效應子功能如增生、細胞激素產生(例如，IL-2)及/或標靶細胞死亡。
用詞“失能(anergy)”代表通過T細胞受體傳遞的不完整或不足的訊號(例如，在沒有ras活化的情況下增加細胞內的Ca2+)所導致對抗原刺激無反應性之狀態。T細胞失能亦可能導致導致在沒有共刺激的情況下以抗原刺激，造成細胞變得對後續抗原的活化有抵抗性，即使在共刺激的情況下。無反應的狀態通常在介白素-2(Interleukin-2)的存在下可被克服(overriden)。失能的T細胞不經歷克隆擴增(clonal expansion)及/或取得效應子功能。
用詞“耗盡(exhaustion)”代表T細胞耗盡，因為持續的TCR訊號傳遞產生的T細胞功能失調的狀態，其在許多慢性感染及癌症期間發生。它並非透過不完整或不足的訊號傳遞產生而是由持續的訊號傳遞所導致，因此可與失能區分。耗盡由效應子功能不良、抑制性受體的持續表達及與功能性效應子或記憶性T細胞不同的轉錄狀態所定義。耗盡防止感染及腫瘤的最適化控制。耗盡可由外在負調節途徑(例如，免疫調節細胞激素)以及細胞內在負調節(共刺激的)途徑兩者所導致(PD-1、B7-H3、B7-H4等)。
“提升的T細胞功能”代表誘導、造成或刺激T細胞以具有持續或放大的生物功能、或更新或重新活化耗盡或的T細胞不具活性的T細胞。提升T細胞功能的例子包含：從CD8+ T細胞增加的γ-干擾素(γ-interferon)分泌、增加的增生、 增加的抗原反應性(例如，病毒、病原或腫瘤清除)，相對於這些程度在干預前。在一實施例中，提升的程度至少為50%，或者60%、70%、80%、90%、100%、120%、150%、200%。測量此提升的方式對於所屬技術領域中具有通常知識者為已知的。
“T細胞失調疾病”為特徵在於對抗原刺激的反應性降低的T細胞的疾病或狀況。在一特定實施例中，T細胞失調疾病特別是與通過PD-1不適當增加的訊號傳遞有關的疾病。在另一實施例中，T細胞失調疾病為T細胞為失能或分泌細胞激素、增生的能力下降或執行細胞溶解活性的疾病。在一特定態樣中，降低的反應性造成表達免疫原的病原或腫瘤的無效控制。以T細胞功能失調為特徵的T細胞功能失調疾病的例子包含尚未解決的急性感染、慢性感染及腫瘤免疫性。
“腫瘤免疫性(tumor immunity)”代表其中腫瘤逃避免疫辨識及清除的過程。因此，作為治療的概念，當此類逃避被減弱及腫瘤被免疫系統辨識且攻擊時，腫瘤免疫性被“治療”。腫瘤辨識的例子包含腫瘤結合、腫瘤縮小及腫瘤清除。
“免疫原性(immunogenecity)”代表特定物質引發免疫反應的能力。腫瘤為免疫原性的，且增強腫瘤免疫原性有助於通過免疫反應清除腫瘤細胞。增強腫瘤免疫原性的例子包含以PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體治療。
“持續反應(sustained response)”代表在中斷治療後對降低腫瘤生長的持續影響。例如，與施用階段開始時的尺寸相比，腫瘤尺寸可保持為相同或較小。在一些實施例中，持 續反應具有至少與治療期間相同的期間，治療期間至少1.5倍、2.0倍、2.5倍或3.0倍的長度。
用詞“醫藥配方(pharmaceutical formulation)”代表以允許活性成分的生物活性為有效的形式存在，且不包含對將施用所述配方的受試者(subject)具有不可接受的毒性的額外成分之製劑。所述配方為無菌的。“醫藥上可接受的”賦形劑(excipient)(載體、添加物)為可合理地施用於受試哺乳類以提供使用的活性成分的有效劑量。
如本文中所使用，“治療(treatment)”代表在臨床病理過程中，試圖改變受治療的個體或細胞的自然病程之臨床干預。希望得到的治療效果包含降低疾病進展速度、改善或減輕疾病狀態及緩解或改善預後(prognosis)。舉例而言，如果與癌症相關的一種或多種症狀得到緩解或消除，則個體成功地被“治療”，前述症狀的緩解或消除包含但不限於，減少(或破壞)癌細胞的增生、減少腫瘤生長、減少疾病引起的症狀、增加患有疾病的人的生活質量、減少治療疾病所需的其它藥物的劑量及/或延長個體的生存。
如本文中所使用，“延緩疾病的進展”代表推遲、阻止、緩慢、延遲、穩定及/或推遲疾病(如癌症)的發展。根據疾病的歷程及/或被治療的個體，此種延遲可具有不同的時間長度。對於所屬技術領域具有通常知識者顯然的是，充分或顯著的延遲實際上可涵蓋預防，於個體未發展疾病的情狀下。例如，可延緩晚期癌症，如轉移(metastasis)的發展。
“有效量”至少為實現特定病症的可測量的改善或 預防所需的最小濃度。本文中的有效量可根據，例如患者的疾病狀態、年齡、性別及體重，及抗體引發個體中期望的反應的能力等因素而改變。有效量也是治療有益效果超過治療的任何毒性或不利效果的量。用於預防性(prophylactic)使用，有益或期望的結果包含下述的結果，例如，消除或降低風險、減輕嚴重性或延遲疾病的發作，包含疾病的生物化學、組織學及/或行為症狀，其併發症及疾病發展期間呈現的中間病理表型(pathological phenotype)。為了治療使用，有益或期望的結果包含下述臨床結果，例如，減少源自疾病的一或多種症狀、提高患有疾病的患者的生活品質、降低治療疾病所需的其它藥物的劑量、增強另一種藥物的效果(例如，藉由標靶)、延緩疾病的進展及/或延長生存。在癌症或腫瘤的情況中，藥物的有效量可具有減少癌細胞的數目；降低腫瘤大小；抑制(即，減緩至一定程度或理想地停止)癌細胞浸潤至周圍器官；抑制(即，減緩至一定程度或理想地停止)腫瘤轉移；抑制腫瘤生長至一定程度；及/或在減輕一種或多種與病症有關的症狀至一定程度等效果。可以在一或多次的施用中施用有效量。為了本發明的目的，藥物、化合物或醫藥組成物的有效量為足以直接或間接實現預防或治療性處理的量。如在臨床條件下理解的，藥物、化合物或醫藥組成物的有效量可與或可不與另一藥物、化合物或醫藥組成物一起達成。因此，可在施用一或多種治療劑的條件下考慮“有效量”，且若與一或多種其它試劑結合，可實現期望的結果或實現了期望的結果，則可認為單一試劑以有效量被給予。
如本文中所使用，“與...結合/一起(in conjunction with)”代表在一種治療形態外施用另一種治療形態。如此一來，“與...結合/一起”代表在對個體施用一種治療形態之前、期間或之後施用另一種治療形態。
“病症(disorder)”為將可從治療中得到益處的任一狀況，包含但不限於，慢性及急性病症或疾病，包含使哺乳動物容易患有所討論的病症的那些病理狀況。
用詞“細胞增生失調”及“增生失調”代表與一些程度的異常細胞增生有關的病症。在一實施例中，細胞增生失調為癌症。在一實施例中，細胞增生失調為腫瘤。
如本文中所使用，“腫瘤”代表所有贅生細胞(neoplastic cell)生長及增生，無論是惡性或良性，以及所有癌前(pre-cancerous)及癌細胞及組織。用詞“癌症”、“癌的(cancerous)”、“細胞增生失調”、“增生失調”及“腫瘤”並非互斥的(mutually exclusive)，如文中所述。
用詞“癌症”及“癌的”代表或描述哺乳動物中的生理狀況，其通常以細胞生長不受調控為特徵。癌症的例子包含但不限於，癌(carcinoma)、淋巴瘤、母細胞瘤(blastoma)、肉瘤(sarcoma)及白血病或淋巴惡性腫瘤。此類癌症的更具體例子包含但不限於，鱗狀細胞癌(squamous cell cancer)(例如，上皮鱗狀細胞癌)、肺癌(包含小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺的腺癌及肺的鱗狀細胞癌)、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌(gastric cancer或stomach cancer)(包含胃腸癌及腸胃道基質腫瘤)、胰腺癌、膠質母細胞瘤(glioblastoma)、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、 尿道癌、肝腫瘤(hepatoma)、乳腺癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌(kidney cancer或renal cancer)、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、肛門癌、陰莖癌、黑色素瘤(melanoma)、淺表擴散性黑色素瘤、惡性雀斑樣黑色素瘤(lentigo maligna melanoma)、肢端黑色素瘤(acral lentiginous melanoma)、結節性黑素瘤(nodular melanoma)、多發性骨髓瘤(multiple myeloma)及B細胞淋巴瘤(包含低級/濾泡性非何杰金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma，NHL)；小淋巴細胞性(SL)NHL；中級/濾泡性NHL；中級擴散性NHL；高級免疫母細胞性NHL；高級小無核裂細胞性NHL；貯積病(bulky disease)NHL；被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)；AIDS相關淋巴瘤；及華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglobulinemia))、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；急性成淋巴細胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)、毛細胞白血病；慢性骨髓性白血病(chronic myeloblastic leukemia)、及移植後淋巴增生失調(post-transplant lymphoproliferative disorder，PTLD)，以及與斑痣性錯構瘤(phakomatoses)、水腫(如與腦腫瘤有關的)、梅格斯氏症候群(Meigs' syndrome)、大腦以及與頭及頸癌相關的轉移有關之異常血管增生。在一些特定實施例中，適用於本發明的抗體治療的癌症包含乳腺癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、膠質母細胞瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、腎細胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤(kaposi's sarcoma)、類癌(carcinoid carcinoma)、頭及頸癌、卵巢癌、間 皮瘤(mesothelioma)及多發性骨髓瘤。在一些實施例中，癌症擇自於：小細胞肺癌、膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、胃癌、結腸直腸癌(colorectal cancer，CRC)及肝細胞癌。然而，在一些實施例中，癌症擇自於：非小細胞肺癌、結腸直腸癌、膠質母細胞瘤、乳腺癌及肝細胞癌，其包含這些癌症的轉移形式。
本文中使用的用詞“細胞毒性劑(cytotoxic agent)”代表對細胞有害的任一試劑(例如，造成細胞死亡、抑制增生或者阻礙細胞功能)。細胞毒性劑包含但不限於，放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu的放射性同位素)；化療劑；生長抑制劑；酶及其片段，例如核酸分解酶；以及毒素，例如細菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素，包含其片段及/或變異體(variant)。示例的細胞毒性劑可擇自於抗微管劑、鉑配位複合物、烷化劑、抗生素劑、拓撲異構酶II抑制劑(topoisomerase II inhibitor)、抗代謝物，拓撲異構酶I抑制劑、激素(hormone)及激素類似物、信號轉導途徑抑制劑、非受體酪胺酸激酶血管生成抑制劑、免疫治療劑、促細胞凋亡劑(proapoptotic agent)、LDH-A抑制劑、脂肪酸生物合成抑制劑、細胞週期訊號傳導抑制劑、HDAC抑制劑、蛋白酶體抑制劑及癌症代謝物抑制劑。在一實施例中，細胞毒性劑為紫杉烷(taxane)。在一實施例中，紫杉烷為太平洋紫杉醇(paclitaxel)或歐洲紫杉醇(docetaxel)。在一實施例中，細胞毒性劑為鉑劑。在一實施例中，細胞毒性劑為EGFR的拮抗劑。在一實施 例中，EGFR的拮抗劑為N-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(例如厄洛替尼(erlotinib))。在一實施例中，細胞毒性劑為RAF抑制劑。在一實施例中，RAF抑制劑為BRAF及/或CRAF抑制劑。在一實施例中，RAF抑制劑為威羅菲尼(vemurafenib)。在一實施例中，細胞毒性劑為PI3K抑制劑。
“化療劑”包含但不限於，氮芥類似物(nitrogen mustard analogue)、烷基磺酸鹽(alkyl sulfonate)、乙烯亞胺(ethylene imine)、硝基脲(nitrosourea)、環氧化物(epoxide)、其它烷化劑、葉酸類似物(Folic acid analogue)、嘌呤類似物(purine analogue)、嘧啶類似物(pyrimidine analogue)、其它抗代謝劑、長春花生物鹼(vinca alkaloid)或類似物、鬼臼毒素衍生物(podophyllotoxin derivative)、喜樹鹼類似物(camptothecan analog)、秋水仙鹼衍生物(colchicine derivative)、紫杉烷類(taxane)、其它植物生物鹼或天然產物、放線菌素(actinomycine)、蒽環類藥物(anthracyclines)或相關物質或其它細胞毒性抗生素、鉑化合物、甲基肼(methylhydrazine)、激酶抑制劑、酶、組蛋白去乙醯酶抑制劑、類視色素(retinoid)、免疫檢查點抑制劑、抗體及其它分子標靶藥物。
“化療劑”亦包含用於癌症治療的化合物。化療劑的例子包含厄洛替尼(erlotinib)(TARCEVA®，Genentech/OSI Pharm)、硼替佐米(bortezomib)(VELCADE，Millennium Pharm)、雙硫崙(disulfiram)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate)、salinosporamide A、carfilzomib、 17-AAG(格爾德黴素(geldanamycin))、radicicol、乳酸脫氫酶A(LDH-A)、氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX®，AstraZeneca、sunitib(SUTENT®，Pfizer/Sugen)、來曲唑(letrozole)(FEMARA®，Novartis)、伊馬替尼甲磺酸鹽(imatinib mesylate)(GLEEVEC®，Novartis)、finasunate(VATALANIB®，Novartis)、奧沙利鉑(oxaliplatin)(ELOXATIN®，Sanofi)、5-FU(5-氟尿嘧啶)、亞葉酸(leucovorin)、雷帕黴素(Rapamycin)(Sirolimus，RAPAMUNE®，Wyeth)、拉帕替尼(Lapatinib)(TYKERB®，GSK572016，Glaxo Smith Kline)、Lonafamib(SCH 66336)、索拉非尼(sorafenib)(NEXAVAR，Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(IRESSA®，AstraZeneca)、AG1478、烷基化劑，如噻替派(thiotepa)及CYTOXAN®環磷醯胺(cyclosphosphamide)；烷基磺酸鹽，如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)，如本多帕(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、米特多帕(meturedopa)及優多帕(uredopa)；乙烯亞胺(ethylenimine)及和甲基蜜胺(methylamelamine)，包含六甲蜜胺(altretamine)、三亞乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三亞乙基磷醯胺(triethylenephosphoramide)、三亞乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphoramide)及三羥甲基蜜胺(trimethylomelamine)；多聚乙醯(acetogenins)(特別是布拉它辛(bullatacin)及布拉它辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin)(包含拓撲替康(topotecan)及伊立替康(irinotecan))；苔蘚抑素(bryostatin)；凱利他汀(callystatin)； CC-1065(包含其的阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)的合成類似物)；念珠藻素(cryptophycin)(特別是念珠藻素1及念珠藻素8)；腎上腺皮質類固醇(adrenocorticosteroid)(包含潑尼松(prednisone)及prednisolone(潑尼松龍))；醋酸環丙孕酮(cyproterone acetate)；5α-還原酶(包含非那雄胺(finasteride)及度他雄胺(dutasteride))；伏立諾他(vorinostat)、羅米地辛(romidepsin)、帕比斯他(panobinostat)、丙戊酸(valproic acid)、莫西汀那(mocetinostat)、多拉司他汀(dolastatin)；阿地白介素(aldesleukin)、滑石倍癌黴素(talc duocarmycin)(包含合成類似物，KW-2189及CB1-TM1)；艾槽塞洛素(eleutherobin)；潘卡他汀(pancratistatin)；sarcodictyin；海綿抑素(spongistatin)；氮芥類(nitrogen mustard)，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽磷醯胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、威克瘤(melphalan)、新氮芥(novembichin)、膽固醇苯乙酸氮芥(phenesterine)、撥尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿啼唆氮芥(uracil mustard)；亞硝脲類(nitrosoureas，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimustine)；抗生素類，例如烯二炔類抗生素(enediyne antibiotic)(例如，加利車黴素(calicheamicin)，特別是加利車黴素γ1I及加利車黴素ω1I(Angew Chem.Intl.Ed.Engl., (1994)33：183-186)；蒽環類抗生素(dynemicin)，包含dynemicin A；二膦酸鹽類(bisphosphonates)，例如氯膦酸鹽(clodronate)；埃斯波黴素(esperamicin)；以及新致癌素發色團(neocarzino statin chromophore)及相關色蛋白烯二炔類(chromoprotein enediyne)抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、氨茴黴素(authramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、著色真菌(chromomycinis)、放射菌素D(dactinomycin、柔紅黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN®(多柔比星(doxorubicin))、嗎啉代多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基嗎啉代多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯代多柔比星(2-pyrrolino-doxorubicin)及去氧多柔比星(deoxydoxorubicin))、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素類(mitomycin)，例如絲裂黴素C(mitomycin C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨斯他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物類，例如甲氨蝶呤(methotrexate) 及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物(folic acid analog)，例如二甲葉酸(denopterin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，例如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，例如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素類(androgen)，例如卡魯睪酮(calusterone、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺類(anti-adrenal)，例如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，例如亞葉酸(folinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿啼唆(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defosfamide)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfomithine；伊利醋銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；美登木素生物鹼類(maytansinoids)，例如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇 (mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索惠醌(losoxantrone)；鬼白酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯胼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴胼(procartazine)；PSK®多糖複合物(JHS Natural Products,Eugene,Oreg)；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢菌素類(trichothecene)(特別是T-2毒素、疣孢菌素A(verrucarin A)、桿抱菌素A(roridin A)及蛇形菌素(anguidin))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；環磷醯胺(cyclophosphamide)；噻替哌(thiotepa)；類毒素類(taxoids)，例如，TAXOL(太平洋紫杉醇(paclitaxel；Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、ABRAXANE®(Cremophor-free)、太平洋紫杉醇的白蛋白基因工程奈米粒子配方(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,I11.)及TAXOTERE®(歐洲紫杉醇(docetaxel)、doxetaxel；Sanofi-Aventis)；苯丁酸氮芥(chloranmbucil)；GEMZAR®(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)；巰基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；鉬類似物，例如順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春花鹼(vinblastine)；依托泊苷(etoposide)(VP-16))；異環磷醯胺(ifosfamide)；米托蒽 醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；NAVELBINE®(長春瑞濱(vinorelbine))；諾凡特龍(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；卡培他濱(capecitabine)(XELODA®)；伊班麟酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶(topoisomerase)抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥氨酸(difluoromethylornithine)(DMFO)；類視色素(retinoid)，例如視黃酸(retinoic acid)；以及上述任一者的醫藥上可接受的鹽、酸及衍生物。
化療劑亦包抗體，例如阿倫單抗(alemtuzumab)(Campath)、貝伐單抗(bevacizumab)(AVASTIN®，Genentech)、西妥昔單抗(cetuximab)(ERBITUX®，Imclone)；panitumumab(VECTIBIX®，Amgen)、利妥昔單抗(rituximab)(RITUXAN®，Genentech/Biogen Idee)、pertuzumab(OMNITARGTM，2C4，Genentech)、曲妥單抗(trastuzumab)(HERCEPTIN®，Genentech)、托西莫單抗(tositumomab)(Bexxar，Corixia)及抗體藥物偶聯物，吉姆單抗奧佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(MYLOTARG®，Wyeth)。與本發明的化合物組合之具有治療潛力的額外人源化單株抗體包含：阿泊珠單抗(apolizumab)、阿塞珠單抗(aselizumab)、atlizumab、bapineuzumab、貝伐珠單抗(bevacizumab)、貝伐珠單抗美登素(bivatuzumab mertansine)、莫坎妥珠單抗美登素(cantuzumab mertansine)、西利珠單抗(cedelizumab)、賽妥珠單抗(certolizumab pegol)、cidfusituzumab、cidtuzumab、達克珠單抗(daclizumab)、依庫珠單抗(eculizumab)、依法珠單抗(efalizumab)、依帕珠單抗 (epratuzumab)、厄利珠單抗(erlizumab)、泛維珠單抗(felvizumab)、芳妥珠單抗(fonto1izumab)、奧吉妥珠單抗(gemtuzumab ozogamicin)、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)、ipilimumab、拉貝珠單抗(labetuzumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、美泊珠單抗(mepolizumab)、莫維珠單抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠單抗(natalizumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奧馬珠單抗(omalizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、帕考珠單抗(pascolizumab)、peefusituzumab、pectuzumab、培妥珠單抗(pertuzumab)、培克珠單抗(pexelizumab)、ralivizumab、雷珠單抗(ranibizumab)、reslivizumab、reslizumab、resyvizumab、羅維珠單抗(rovelizumab)、盧利珠單抗(ruplizumab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、西利珠單抗(siplizumab)、索土珠單抗(sontuzumab)、他珠單抗(tacatuzumab tetraxetan)、tadocizumab、他利珠單抗(talizumab)、特非珠單抗(tefibazumab)、托珠單抗(tocilizumab)、托利珠單抗(toralizumab)、tucotuzumab、西莫白介素(tucotuzumab celmoleukin)、tucusituzumab、umavizumab、烏珠單抗(urtoxazumab)、ustekinumab、維西珠單抗(visilizumab)及抗介白素-12(ABT-874/J695，Wyeth Research and Abbott Laboratories)，其為重組專屬的人類序列，經遺傳修飾以辨識介白素-12 p40蛋白質的全長IgG1 λ抗體。
本文中使用的“生長抑制劑”，代表抑制細胞於體外 (in vitro)或體內(in vivo)生長的化合物或組合物。在一實施例中，生長抑制劑為生長抑制性抗體，其防止或降低表達抗體所結合的抗原的細胞的增生。在另一實施例中，生長抑制劑可為顯著地降低細胞於S間期的百分比之試劑。生長抑制劑的例子包含阻擋細胞週期進展(在S間期之外的地方)的試劑，如誘發G1停滯(G1 arrest)及M間期停滯的試劑。典型的M間期停滯劑包含長春花鹼(長春新鹼(vincristine)及長春花鹼(vincristine))、紫杉烷類(taxanes)及拓撲異構酶II抑制劑，如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)及博來黴素(bleomycin)。那些停滯G1間期也超出至S間期停滯的試劑，例如，DNA烷化劑，如他莫昔芬(tamoxifen)、潑尼松(prednisone)、達卡巴嗪(dacarbazine)、氮芥(mechlorethamine)、順鉑(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)及阿糖胞苷(ara-C)。進一步的資訊可見於Mendelsohn及Israel編輯，The Molecular Basis of Cancer,Chapter 1，標題“Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs”，Murakami等人，(W.B.Saunders,Philadelphia,1995)，例如第13頁。紫杉烷類(taxanes)(太平洋紫杉醇(paclitaxel)及歐洲紫杉醇(docetaxel))均為源自紫杉樹的抗癌症藥物。歐洲紫杉醇(docetaxel)(TAXOTERE®，Rhone-Poulenc Rorer)，源自歐洲紫杉醇，其為太平洋紫杉醇(paclitaxel)的半合成類似物(TAXOL®，Bristol-Myers Squibb)。太平洋紫杉醇(paclitaxel)及歐洲紫杉醇(docetaxel)提升自微管蛋白二聚體的微管 (microtubule)組裝及防止解聚合以穩定微管，其導致細胞中有絲分裂的抑制。
“放射治療”代表使用定向γ射線或β射線對細胞誘發足夠的傷害，以限制其正常作用的功能或完全地破壞細胞。可理解的是，所屬技術領域中存在許多已知方法以決定治療的劑量及持續時間。典型的治療是一次施用(one-time administration)，典型劑量範圍為每天10至200單位(格雷斯(Grays))。
以治療為目的之“受試者(subject)”或“個體”代表歸類為哺乳類的任一動物，包含人類、家畜及動物，動物園、運動或寵物動物，如狗、馬、貓、牛等。較佳地，所述哺乳類為人類。
本文中的用詞“抗體”以最廣泛的涵義使用，且具體地涵蓋單株抗體(包含全長單株抗體)、多株抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)及抗體片段，只要它們表現出想要的生物活性。
“分離的(isolated)”抗體為已被鑑定且分離及/或從其天然環境的組成中回收的抗體。其自然環境的污染成分為會干擾抗體的研究、診斷或治療用途的物質，可能包含酶、激素及其它蛋白質或非蛋白質溶質。在一些實施例中，抗體經純化(1)至大於95重量%的抗體，藉由例如Lowry方法進行測定，以及在一些實施例中，至大於99重量%；(2)至足以獲得至少15個N末端或內部氨基酸序列的殘基的程度，藉由使用例如旋轉杯測序儀(spinning cup sequenator)，或(3)藉由 SDS-PAGE在還原或非還原條件下達到均質(homogeneity)，例如，使用考馬斯藍(Coomassie blue)或銀染。分離的抗體包含在重組細胞內原位(in situ)的抗體，因為抗體的天然環境的至少一成分將不存在。然而，分離的抗體通常將藉由至少一純化步驟進行製備。
“天然抗體(native antibodies)”通常為約150,000道爾頓(dalton)的異源四聚體(heterotetrameric)醣蛋白，由兩個相同的輕(L)鏈及兩個相同的重(H)鏈所構成。每個輕鏈藉由一個共價雙硫鍵結連接至重鏈，而雙硫鍵。不同免疫球蛋白的同型(isotype)的重鏈之間的雙硫鍵數目有所不同。各個重及輕鏈亦具有規律間隔的鏈內雙硫橋(disulfide bridge)。各重鏈在一端具有可變域(variable domain，VH)，接續為數個恆定域(constant domain)。各輕鏈在一端具有可變域(VL)且在其另一端具有恆定域；輕鏈的恆定域與重鏈的第一恆定域對齊，輕鏈的可變域與重鏈的可變域對齊。特定的胺基酸殘基被認為在輕鏈及重鏈可變域之間形成界面(interface)。
用詞“恆定域”代表相較於免疫球蛋白的其它部分(包含抗原結合位的可變域)，具有較保守的胺基酸序列的免疫球蛋白分子的部分。恆定域包含重鏈的CH1、CH2及CH3結構域(統稱為CH)以及輕鏈的CHL(或CL)。
抗體的“可變區”或“可變域”代表抗體的重或輕鏈的胺基末端結構域(domain)。重鏈的可變域可稱作“VH”。輕鏈的可變域可稱作“VL”。這些結構域通常為抗體變異最大的部分且包含抗原結合位。
用詞“可變的”代表以下事實，即可變域的某些部分在抗體的序列中廣泛地變化，且用於每種特定的抗體對其特定的抗原的結合及特異性(specificity)。然而，在抗體的全部可變域中，可變性並非均勻地分佈。其集中在輕鏈及重鏈可變域中被稱為高度變異區(hypervariable region，HVR)的三個部分中。可變域中更高度保守的部分稱為框架區(framework region，FR)。天然重鏈及輕鏈的可變域各包含4個FR區，其主要採取β-折疊構型(beta-sheet configuration)，由3個HVR連接，形成環式連接，且在一些情況下形成部分的β-折疊結構。每條鏈上的HVR藉由FR區緊密地保持在一起，並且與其它鏈的HVR一起促進抗體的抗原結合位的形成(請參見Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunologicallnterest,Fifth Edition，NationalInstitute of Health，Bethesda，MD(1991))。恆定域並不直接涉及抗體對抗原的結合，但是表現出各種效應子功能，例如抗體於抗體依賴性細胞毒性的參與。
源自任一哺乳動物物種的抗體(免疫球蛋白)的“輕鏈”可分為稱作“κ”(kappa)及“λ”(lambda)的兩種截然不同的類型中的一種，根據它們恆定域的胺基酸序列。
本文中使用的用詞IgG“同型(isotype)”或“亞類(subclass)”代表免疫球蛋白的任一亞類，由它們的恆定區的化學及抗原特徵所定義。
抗體(免疫球蛋白)根據它們的重鏈恆定域的胺基酸序列可分為不同的種類。有5種主要種類的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且這些免疫球蛋白中的多種可更 進一步分為亞類(同型)，例如，IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同種類的免疫球蛋白的重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。不同種類的免疫球蛋白的次單元(subunit)結構及三維構型是已知的，且概括地描述於，例如，Abbas等人，Cellular and Mol.Immunology,4th ed.(W.B.Saunders,Co.，2000)。抗體可為更大的融合分子的一部分，所述融合分子藉由抗體與一或多種其它蛋白或胜肽的共價或非共價結合形成。
用詞“全長抗體”、“完整抗體”及“全抗體”在本文中可互換地使用，代表實質上(substantially)處於完整形式的抗體，而非下文所定義的抗體片段。此用詞特別地表示具有包含Fc區的重鏈的抗體。
“裸抗體(naked antibody)”在本文中的目的是指沒有與細胞毒性部分(moiety)或放射性標記偶聯的抗體。
“抗體片段”包含完整抗體的一部分，較佳地包含其抗原結合區。在一些實施例中，本文描述的抗體片段為抗原結合片段。抗體片段的例子包含Fab、Fab’、F(ab’)2、scFv及Fv片段；雙抗體；線性抗體(linear antibody)；單鏈抗體分子；以及由抗體片段形成的多特異性抗體。
抗體的木瓜蛋白酶(papain)消化產生稱為“Fab”片段的兩個相同的抗原結合片段以及殘留的“Fc”片段，每一Fab片段具有單一抗原結合位，Fc片段的名字反映其容易結晶的能力。胃蛋白酶(pepsin)處理產生具有兩個抗原結合位且仍然能夠交聯(cross-link)抗原的F(ab’)2片段。
“Fv”為包含完整的抗原結合位的最小抗體片段。在一實施例中，雙鏈Fv種類由二聚體組成，所述二聚體為緊密、非共價聯連結形式的一個重鏈可變域及一個輕鏈可變域。在單鏈Fv(scFv)的種類中，一個重鏈可變域及一個輕鏈可變域可藉由柔性(flexible)胜肽連接物共價地連接，使得輕鏈及重鏈可以類似於雙鏈Fv種類中結構的“二聚體”結構結合。正是在此種構型中，各個可變域的3個HVR相互作用以定義VH-VL二聚體表面的抗原結合位。6個HVR共同地賦予抗體抗原結合特異性。然而，甚至單一個可變域(或僅包含3個對抗原具有特異性的HVR的Fv的一半)具有識識及結合抗原的能力，儘管親和力比起完整的結合位低。
Fab片段包含重鏈可變域及輕鏈可變域，且亦包含輕鏈的恆定域以及重鏈的第一恆定域(CHl)。Fab’片段與Fab片段的不同在於，其在重鏈CHl結構域的羧基末端添加了數個殘基，包含一或多個來自抗體鉸鏈區(hinge region)的半胱胺酸(cysteine)。Fab’-SH於本文中表示恆定域的半胱胺酸殘基帶有游離的巰基(thiol)的Fab’。F(ab’)2抗體片段起初被製作為Fab’片段對，具有鉸鏈半胱胺酸在它們之間。抗體片段的其它化學偶聯亦為已知的。
“單鏈Fv”或“scFv”抗體片段包含抗體的VH及VL結構域，其中這些結構域存在於單一多肽鏈中。一般而言，scFv多肽更包含VH與VL結構域之間的多肽連接物，使得scFv形成對抗原結合所期望的結構。關於scFv的綜述，請參見，例如，Pluckthün，in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，vol.113，Rosenburg及Moore編輯，(Springer-Verlag，New York,1994)，pp.269-315。
用詞“雙抗體(diabodies)”代表具有兩個抗原結合位的抗體片段，所述片段包含在相同多肽鏈(VH-VL)中與輕鏈可變域(VL)連接的重鏈可變域(VH)。藉由使用過短以至於無法允許相同鏈上的兩個結構域的配對的連接物(linker)，使結構域被迫與另一鏈的互補結構域配對從而產生兩個抗原結合位。雙抗體可為二價或雙特異性的。雙抗體更完整地描述於，例如，EP404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9：129_134(2003)；以及Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444_6448(1993)。三抗體(triabodies)及四抗體(tetrabodies)亦描述於Hudson等人，Nat.Med.9：129-134(2003)。
本文使用的用詞“單株抗體”代表從實質上同質的抗體群所獲得的抗體，例如，包含個體抗體的群體為相同的，除了可能的突變外，例如，自然發生的突變，其可能少量存在。因此，修飾詞“單株”表示抗體並不是離散抗體的混合物的特徵。在一些特定實施例中，這類單株抗體通常包含含有與靶標結合的多肽序列的抗體，其中靶標結合多肽序列藉由包含從多個多肽序列選擇單一靶標結合多肽序列的方法取得。舉例而言，選擇方法可為從多個克隆選擇特定的克隆，例如雜交瘤(hybridoma)克隆、噬菌體克隆或重組DNA克隆的池(pool)。應理解的是，可以進一步改變選擇的靶標結合序列，例如，改善對靶標的親和力、將靶標結合序列人源化、改善其在細胞培養 中的產生、減少其體內(in vivo)免疫原性、製造多特異性抗體等，且包含改變的靶標結合序列的抗體亦為本發明的單株抗體。相較於通常包含針對不同抗原決定位(determinant)(表位(epitope))的不同抗體的多株抗體製劑，單株抗體製劑的每一單株抗體是針對抗原上的單一抗原決定位。除了它們的特異性以外，單株抗體製劑的優勢在於，它們通常不被其它免疫球蛋白所污染。
修飾詞“單株”代表從實質上同質的抗體群獲得的抗體的特徵，且不應被解釋為需要藉由任何特定方法生產。例如，用於本發明的單株抗體可以藉由各種技術進行製備，其包含，例如雜交瘤方法(例如，Kohler及Milstein，Nature,256：495-97(1975)；Hongo等人，Hybridoma,14(3)：253-260(1995)，Harlow等人，Antibodies：A LaboratoryManual，(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.1988)；Hammerling等人於：Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridoma 563-681(Elsevier，N.Y.，1981))；重組DNA方法(請參見，例如美國專利號4,816,567)；噬菌體展示技術(請參見，例如Clackson等人，Nature,352：624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.338(2)：299_310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467_12472(2004)；及Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)；以及在具有部分或全部人類免疫球蛋白基因座(loci)或編碼人免疫球蛋白序列的基因的動物中製 造人類或人樣(human-like)抗體的技術(請參見，例如WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：2551(1993)；Jakobovits等人，Nature 362：255-258(1993)；Bruggemann等人，Year in Immunol.7：33(1993)；美國專利號5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；及5,661,016；Marks等人，Bio/Technology 10：779-783(1992)；Lonberg等人，Nature 368：856-859(1994)；Morrison，Nature 368：812-813(1994)；Fishwild等人，Nature Biotechnol.14：845-851(1996)；Neuberger，Nature Biotechnol.14：826(1996)；及Lonberg及Huszar，Intern.Rev.Immunol.13：65-93(1995)。
本文的單株抗體特別地包含“嵌合”抗體，其中重鏈及/或輕鏈的一部分與源自特定物種或屬於特定抗體類或亞類(subclass)的抗體的對應序列相同或者同源，而鏈的剩餘部分與源自另一物種或屬於另一抗體類或亞類的抗體的對應序列相同或同源，以及這類抗體的片段，只要它們表現出期望的生物活性(請參見，例如美國專利號4,816,567及Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855(1984))。嵌合抗體包含PRIMATTZED®抗體，其中抗體的抗原結合區衍生自，藉由例如以感興趣的抗原免疫獼猴(macaque monkeys)所產生的抗體。
非人類(例如，鼠科動物(murine))抗體的“人源化”形式為包含衍生自非人類免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗 體。在一實施例中，人源化抗體為人類免疫球蛋白(受體抗體(recipient antibody))，其中受體HVR的殘基被非人類物種(供體抗體(donor antibody))的HVR的殘基取代，所述非人類物種例如具有期望的特異性、親和力及/或能力(capacity)的小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類。在一些例子中，人類免疫球蛋白的FR殘基被相應的非人類殘基取代。此外，人源化抗體可包含未在受體抗體或供體抗體中發現的殘基。可進行這些修飾以進一步完善抗體效能。一般而言，人源化抗體實質上將包含至少一個、通常兩個的全部可變域，其中全部或實質上全部的高度變異環(hypervariable loop)對應於非人類免疫球蛋白的高度變異環，並且全部或實質上全部的FR為人類免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體亦將可選地包含至少一部分的免疫球蛋白恆定區(Fc)，通常為人類免疫球蛋白的恆定區。進一步的細節，請參見，例如Jones等人，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323-329(1988)；及Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992)。亦請參照，例如，Vaswani及Hamilton，Ann.Allergy,Asthma & Immunol.1：105-115(1998)；Harris，Biochem.Soc.Transactions 23：1035-1038(1995)；Hurle及Gross，Curr.Op.Biotech.5：428-433(1994)；及美國專利號6,982,321及7,087,409。
“人類抗體”為具有胺基酸序列的抗體，所述胺基酸序列對應於由人類產生及/或利用如本文所公開的用於製備人類抗體的任一技術所產生的抗體的胺基酸序列。人類抗體的這個定義特別地排除包含非人類抗原結合殘基的人源化抗體。人 類抗體可以利用所屬技術領域已知的各種技術產生，包含噬菌體展示庫(phage-display librarie)。Hoogenboom及Winter，J.Mol.Biol.,227：381(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.,222：581(1991)。製備人類單株抗體其它可用的方法描述於Cole等人，MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，p.77(1985)；Boerner等人，J.Immunol.,147(1)：86-95(1991)。亦請參照van Dijk及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.,5：368-74(2001)。人類抗體可藉由向基因轉殖(transgenic)動物施用抗原進行製備，所述基因轉殖動物經過修飾為對抗原攻擊(antigenic challenge)反應以產生這類抗體，但基因轉殖動物的內源基因座(endogenous loci)已經喪失能力，例如，經免疫的異種小鼠(xenomice)(請參見，例如，關於XENOMOUSETM技術的美國專利號6,075,181及6,150,584)。關於藉由人類B細胞雜交瘤技術所產生的人類抗體，亦請參見，例如，Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103：3557-3562(2006)。
“物種依賴性抗體(species-dependent antibody)”是對來自第一哺乳動物物種的抗原比對來自第二哺乳動物物種的該抗原的同源物(homologue)具有更強的結合親和力的抗體。正常地，物種依賴性抗體“特異地結合”於人類抗原(例如，具有不大於約1x10-7M，較佳地不大於約1x10-8M，以及較佳地不大於約1x10-9M的結合親和力(Kd)值)，但是其對來自第二非人類哺乳動物物種的抗原的同源物的結合親和力比其對人類抗原的結合親和力弱至少約50倍、或至少約500倍、或至少約1000倍。物種依賴性抗體可為如上文所定義的任一類型 的抗體，但較佳為人源化或人類抗體。
用詞“高度變異區(hypervariable region)”、“HVR”或“HV”，當在本文中使用時，代表在序列中為高度變異及/或形成結構上定義的環的抗體可變域的區域。一般而言，抗體包含6個HVR，3個位於VH(H1、H2、H3)，3個位於VL(L1、L2、L3)。在天然抗體中，H3及L3表現出6個HVR的最多樣性(diversity)，且H3特別地被認為在賦予對抗體的高特異性中扮演特別的角色。請參見，例如Xu等人，Immunity 13：37-45(2000)；Johnson及Wu，in Methods in Molecular Biology 248：1-25(Lo編輯，Human Press,Totowa,N.J.,2003)。確實地，僅由重鏈所組成的天然存在的駱駝抗體(camelid antibodies)在沒有輕鏈時為有作用且穩定的。請參見，例如，Hamers-Casterman等人，Nature 363：446-448(1993)；Sheriff等人，Nature Struct.Biol.3：733-736(1996)。
本文使用並涵蓋數個HVR的描述。Kabat互補性決定區(Complementarity Determining Regions，CDRs)是以序列變異性為基礎，且是最常使用的(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，5th Ed.，Public Health Service，National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。Chothia指的是結構環的位置(Chothia及Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))。AbM HVR表示Kabat HVR及Chothia結構環之間的折衷，且被Oxford Molecular’s AbM抗體建模軟體所使用。“contact(接觸)”HVR以可得的複雜晶體結構的分析為基礎。來自這些HVR的各個殘基如下所示：
Figure 106108296-A0202-12-0064-99
HVR可包含如下的“延伸的HVR(extended HVR)：”VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)及89-97或89-96(L3)，以及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(H2)及93-102、94-102或95-102(H3)。對於這些定義的每一個，可變域殘基是根據Kabat等人，supra編號。
“框架(framework)”或“FR”殘基為除了本文所定義的HVR殘基以外的那些可變域殘基。
用詞“如Kabat中的可變域殘基編號”或“如Kabat中的胺基酸位置編號”及其變化型，代表Kabat等人，supra中用於編輯抗體的重鏈可變域或輕鏈可變域的編號系統。利用此編號系統，實際的線性胺基酸序列可能包含較少或額外的胺基酸序列，其對應於縮短或插入於可變域的FR或HVR。例如，重鏈可變域可包含在H2的52號殘基後的單一胺基酸插入(根據Kabat的殘基52a)及在重鏈FR 82號殘基後插入的殘基(例如，根據Kabat的82a號、82b號及82c號殘基等)。給定抗體的殘基的Kabat編號可藉由以“標準”Kabat編號的序列比對抗 體序列的同源區域來判定。
Kabat編號系統通常在涉及可變域中的殘基時使用(約輕鏈的殘基1-107及重鏈的殘基1-113)(例如，Kabat等人，Sequences of Immunological Interest.5th Ed Public Health Service，National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。“EU編號系統”或“EU索引(EU index)”通常在涉及免疫球蛋白重鏈恆定區中的殘基時使用(例如，於Kabat等人，supra中報導的EU索引)。“Kabat中的EU索引”代表人類IgG1 EU抗體的殘基編號。
表述“線性抗體”代表Zapata等人(1995 Protein Eng,8(10)：1057-1062)中描述的抗體。簡言之，這些抗體包含一對串聯的(tandem)Fd節段(VH-CH1-VH-CH1)，其與互補輕鏈多肽一起形成一對抗原結合區。線性抗體可為雙特異性或單特異性的。
如本文中所使用，用詞“結合”、“特異性結合至”或“對...具有特異性”代表可測量及可重複的交互作用，例如標靶及抗體之間的結合，其確定在分子(包含生物分子)的異質(heterogeneous)群體存在的情況下標靶的存在。例如，特異性結合標靶(其可為表位)的抗體是以比其結合其它標靶較大的親和力、結合力(avidity)、較容易及/或以較久的持續時間結合此標靶的抗體。在一實施例中，例如藉由放射免疫測定(radioimmunoassay，RIA)測量，抗體對不相關的標靶的結合程度小於所述抗體對標靶的結合約10%。在一些特定實施例中，特異性結合至標靶的抗體具有
Figure 106108296-A0202-12-0065-84
1μM、
Figure 106108296-A0202-12-0065-85
100nM、
Figure 106108296-A0202-12-0065-86
10nM、
Figure 106108296-A0202-12-0065-87
1Nm 或
Figure 106108296-A0202-12-0066-88
0.1nM的解離常數(Kd)。在一些特定實施例中，抗體特異性結合蛋白質上的表位，其在來自不同物種的蛋白質之間為保守的(conserved)。在另一實施例中，特異性結合可包含但不需要排他的結合(exclusive binding)。
II.PD-1軸結合拮抗劑
於本文中提供的是用於治療或延緩個體中癌症進展的方法，包含對個體施用有效量的PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。於本文中亦提供用於提升具有癌症的個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應的方法，包含對個體施用有效量的PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。舉例而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含免疫細胞浸潤於腫瘤組織中，所述免疫細胞包含巨噬細胞及多核巨細胞。就另一例子而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含CD45+淋巴細胞、CD3+淋巴細胞及CD8+T淋巴細胞於腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)中的增加。例如，PD-1軸包含PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑。PD-1(程式死亡1，programmed death 1)在所屬技術領域中亦稱作“程式細胞死亡1(programmed cell death 1)”、PDCD1、CD279及SLEB2。PD-L1(程式死亡配體1，programmed death ligand 1)在所屬技術領域中亦稱作“程式細胞死亡1配體1(programmed cell death 1 ligand 1)”、PDCD1LG1、CD274、B7-H及PD-L1。PD-L2(程式死亡配體2，programmed death ligand 2)在所屬技術領域中亦稱作“程式細胞死亡1配體2(programmed cell death 1 ligand 2)”、PDCD1LG2、CD273、B7-DC、Btdc及PDL2。在一些實施例中，PD-1、PD-L1及PD-L2 為人類PD-1、PD-L1及PD-L2。
在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為抑制PD-1結合至它的配體結合配偶體的分子。在一特定態樣中，PD-1配體結合配偶體為PD-L1及/或PD-L2。在另一實施例中，PD-L1結合拮抗劑為抑制PD-L1結合至它的結合配偶體的分子。在一特定態樣中，PD-L1結合配偶體為PD-1及/或B7-1。在另一實施例中，PD-L2結合拮抗劑為抑制PD-L2結合至它的結合配偶體的分子。在一特定態樣中，PD-L2結合配偶體為PD-1。拮抗劑可為抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白或寡胜肽。
在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為抗PD-1抗體(例如，人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體)。在一些實施例中，抗PD-1抗體擇自於MDX-1106(nivolumab)、MK-3475(lambrolizumab)及CT-011(pidilizumab)所組成的群組。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為免疫黏附素(例如，包含PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1結合部分融合至恆定區(例如，免疫球蛋白序列的Fc區)的免疫黏附素)。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為AMP-224或AMP-514(MEDI0680)。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑擇自於PDR001、REGN2810、BGB A317及SHR-1210所組成的群組。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。在一些實施例中，抗PD-L1結合拮抗劑擇自於YW243.55.S70、Atezolizumab、MPDL3280A、MDX-1105、avelumab及MEDI4736(durvalumab)所組成的群組。抗體YW243.55.S70為WO2010/077634中所述的抗 PD-L1。MDX-1105，亦稱為BMS-936559，為WO2007/005874中所述的抗PD-L1抗體。Avelumab為WO2013079174中所述的抗PDL1抗體。MEDI4736(durvalumab)，為WO2011/066389及US2013/034559中所述的抗PD-L1單株抗體。Nivolumab，亦稱為MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558及OPDIVO®，為WO2006/121168中所述的抗PD-1抗體。Pembrolizumab，亦稱為MK-3475、Merck 3475、lambrolizumab、KEYTRUDA®及SCH-900475，為WO2009/114335中所述的抗PD-1抗體。CT-011，亦稱為hBAT、hBAT-1或pidilizumab，為WO2009/101611中所描述的抗PD-1抗體。AMP-224，亦稱為B7-DCIg，為WO2010/027827及WO2011/066342中所述的PD-L2-Fc融合可溶性受體。
在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。在一些實施例中，抗PD-L1抗體能夠抑制PD-L1以及PD-1之間的結合及/或PD-L1以及B7-1之間的結合。在一些實施例中，抗PD-L1抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗PD-L1抗體為擇自於Fab、Fab’-SH、Fv、scFv及(Fab’)2片段所組成的群組的抗體片段。在一些實施例中，抗PD-L1抗體為人源化抗體。在一些實施例中，抗PD-L1抗體為人類抗體。
可用於本發明方法的抗PD-L1抗體及其製作方法的例子描述於PCT專利申請號WO2010/077634、WO2007/005874、WO2011/066389及US2013/034559，其通過引用併入本文中。可用於本發明的抗PD-L1抗體，包含含有此抗體的組成物，可與抗GPC3抗體組合使用以治療癌症。
抗PD1抗體
在一些實施例中，抗PD-1抗體為MDX-1106。“MDX-1106”的替代名稱包含MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558或Nivolumab。在一些實施例中，抗PD-1抗體為Nivolumab(CAS註冊號：946414-94-4)。在又一實施例中，提供的是一種分離的抗PD-1抗體，包含重鏈可變區，其包含來自序列辨識號：1的重鏈可變區胺基酸序列及/或輕鏈可變區，其包含來自序列辨識號：2的輕鏈可變區胺基酸序列。在又一實施例中，提供的是一種分離的抗PD-1抗體，包含重鏈及/或輕鏈序列，其中：(a)重鏈序列與前述序列辨識號：1的重鏈序列具有至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性(sequence identity)；及(b)輕鏈序列與前述序列辨識號：2的輕鏈序列具有至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性。
抗PD-L1抗體
在一些實施例中，配方中的抗體包含至少一個色胺酸(tryptophan)(例如，至少兩個、至少三個或至少四個)於重鏈及/或輕鏈序列中。在一些實施例中，胺基酸色胺酸在抗體的CDR區、框架區及/或恆定區中。在一些實施例中，抗體包含兩個或三個色胺酸殘基於CDR區中。在一些實施例中，配 方中的抗體為抗PD-L1抗體。PD-L1(程式死亡配體1)，亦稱為PD-L1、B7-H1、B7-4、CD274及B7-H，為跨膜蛋白且其與PD-1的交互作用抑制T細胞活化及細胞激素的產生。在一些實施例中，本文中描述的抗PD-L1抗體結合至人類PD-L1。可用於本文所述方法的抗PD-L1抗體的例子為PCT專利申請WO 2010/077634 A1及US 8,217,149中所述的Atezolizumab或抗PD-L1抗體，其通過引用併入本文中。
在一些實施例中，抗PD-L1抗體能夠抑制PD-L1以及PD-1之間及/或PD-L1以及B7-1之間的結合。在一些實施例中，抗PD-L1抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗PD-L1抗體為擇自於Fab、Fab’-SH、Fv、scFv及(Fab’)2片段所組成的群組的抗體片段。在一些實施例中，抗PD-L1抗體為人源化抗體。在一些實施例中，抗PD-L1抗體為人類抗體。
WO 2010/077634 A1及US 8,217,149中所述的抗PD-L1抗體可用於本文所述的方法中。在一些實施例中，抗PD-L1抗體包含序列辨識號：3的重鏈可變區序列及/或序列辨識號：4的輕鏈可變區序列。在又一實施例中，提供的是一種分離的抗PD-L1抗體，包含重鏈及/或輕鏈序列，其中：(a)重鏈序列與前述序列辨識號：3的重鏈序列具有至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性；及(b)輕鏈序列與前述序列辨識號：4的輕鏈序列具有至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、 至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性。
在一實施例中，抗PD-L1抗體包含重鏈可變區多肽，其包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3序列，其中：(a)HVR-H1序列為GFTFSX1SWIH(序列辨識號：5)；(b)HVR-H2序列為AWIX2PYGGSX3YYADSVKG(序列辨識號：6)；(c)HVR-H3序列為RHWPGGFDY(序列辨識號：7)；進一步地，其中：X1為D或G；X2為S或L；X3為T或S。在一特定態樣中，X1為D；X2為S且X3為T。
在另一態樣中，多肽更包含並列(juxtaposed)於HVR之間的可變區重鏈框架序列，根據下式：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列衍生自人類共有(consensus)框架序列。在又一態樣中，框架序列為VH子群(subgroup)III共有框架。在又另一態樣中，框架序列的至少一者如下列所示：
HC-FR1為EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(序列辨識號：8)
HC-FR2為WVRQAPGKGLEWV(序列辨識號：9)
HC-FR3為RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(序列辨識號：10)
HC-FR4為WGQGTLVTVSA(序列辨識號：11)。
在又另一態樣中，重鏈多肽進一步與包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3的可變區輕鏈組合，其中： (a)HVR-L1序列為RASQX4X5X6TX7X8A(序列辨識號：12)；(b)HVR-L2序列為SASX9LX10S(序列辨識號：13)；(c)HVR-L3序列為QQX11X12X13X14PX15T(序列辨識號：14)；其中：X4為D或V；X5為V或I；X6為S或N；X7為A或F；X8為V或L；X9為F或T；X10為Y或A；X11為Y、G、F或S；X12為L、Y、F或W；X13為Y、N、A、T、G、F或I；X14為H、V、P、T或I；X15為A、W、R、P或T。在又另一態樣中，X4為D；X5為V；X6為S；X7為A；X8為V；X9為F；X10為Y；X11為Y；X12為L；X13為Y；X14為H；X15為A。
在又另一態樣中，輕鏈進一步包含並列於HVR之間的可變區輕鏈框架序列，根據下式：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列衍生自人類共有框架序列。在又另一態樣中，框架序列為VLκ I共有框架。在又另一態樣中，框架序列的至少一者如下列所示：
LC-FR1為DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(序列辨識號：15)
LC-FR2為WYQQKPGKAPKLLIY(序列辨識號：16)
LC-FR3為GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(序列辨識號：17)
LC-FR4為FGQGTKVEIKR(序列辨識號：18)。
在另一實施例中，提供的是分離的抗PD-L1抗體或抗原結合片段，其包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中：(a)重鏈包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，進一步地，其中：
(i)HVR-H1序列為GFTFSX1SWIH(序列辨識號：5)
(ii)HVR-H2序列為AWIX2PYGGSX3YYADSVKG(序列辨識號：6)
(iii)HVR-H3序列為RHWPGGFDY(序列辨識號：7)
(b)輕鏈包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3，進一步地，其中：
(i)HVR-L1序列為RASQX4X5X6TX7X8A(序列辨識號：12)
(ii)HVR-L2序列為SASX9LX10S(序列辨識號：13)
(iii)HVR-L3序列為QQX11X12X13X14PX15T(序列辨識號：14)
其中：X1為D或G；X2為S或L；X3為T或S；X4為D或V；X5為V或I；X6為S或N；X7為A或F；X8為V或L；X9為F或T；X10為Y或A；X11為Y、G、F或S；X12為L、Y、F或W；X13為Y、N、A、T、G、F或I；X14為H、V、P、T或I；X15為A、W、R、P或T。在一特定態樣中，X1為D；X2為S且X3為T。在另一態樣中，X4為D；X5為V；X6為S；X7為A；X8為V；X9為F；X10為Y；X11為Y；X12為L；X13為Y；X14為H；X15為A。在又另一態樣中，X1為D；X2為S且X3為T、X4為D；X5為V；X6為S；X7為A；X8為V；X9為F；X10為Y；X11為Y；X12為L；X13為Y；X14為H且X15 為A。
在又一態樣中，重鏈可變區包含並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列衍生自人類共有框架序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列衍生自Kabat子群I、II或III序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為VH子群III共有框架。在又另一態樣中，重鏈框架序列的一或多個如序列辨識號：8、9、10及11所示。在又另一態樣中，輕鏈框架序列衍生自Kabat κ I、II、III或IV子群序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為VL κ I共有框架。在又另一態樣中，輕鏈框架序列的一或多個如序列辨識號：15、16、17及18所示。
在又另一特定樣態中，抗體更包含人類或鼠科的恆定區。在又另一態樣中，人類恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4所組成的群組。在又另一特定樣態中，人類恆定區為IgG1。在又另一態樣中，鼠科恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3所組成的群組。在又另一態樣中，鼠科恆定區為IgG2A。在又另一特定樣態中，抗體具有降低或最小的效應子功能。在又另一特定樣態中，最小的效應子功能由“效應子減少的Fc突變(effector-less Fc mutation)”或去糖基化(aglycosylation)所導致。在又另一實施例中，效應子減少的Fc突變為恆定區中的N297A或D265A/N297A取代。
在又另一實施例中，提供的是一種抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中：(a)重鏈更包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3序列，其分別與GFTFSDSWIH(序列辨識號：19)、AWISPYGGSTYYADSVKG(序列辨識號：20)及RHWPGGFDY(序列辨識號：21)具有至少85%的序列相同性，或(b)輕鏈更包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3序列，其分別與RASQDVSTAVA(序列辨識號：22)、SASFLYS(序列辨識號：23)及QQYLYHPAT(序列辨識號：24)具有至少85%的序列相同性。在一特定態樣中，序列相同性為86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
在另一態樣中，重鏈可變區包含並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一樣態中，框架序列衍生自人類共有框架序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列衍生自Kabat子群I、II或III序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為VH子群III共有框架。在又另一態樣中，重鏈框架序列的一或多個如序列辨識號：8、9、10及11所示。在又另一態樣中，輕鏈框架序列衍生自Kabat κ I、II、III或IV子群序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為VL κ I共有框架。在又另一態樣中，輕鏈框架序列的一或多個 如序列辨識號：15、16、17及18所示。
在又另一特定樣態中，抗體更包含人類或鼠科的恆定區。在又另一態樣中，人類恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4所組成的群組。在又另一特定樣態中，人類恆定區為IgG1。在又另一態樣中，鼠科恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3所組成的群組。在又另一態樣中，鼠科恆定區為IgG2A。在又另一特定樣態中，抗體具有降低或最小的效應子功能。在又另一特定樣態中，最小的效應子功能由“效應子減少的Fc突變”或去糖基化(aglycosylation)所導致。在又另一實施例中，效應子減少的Fc突變為恆定區中的N297A或D265A/N297A取代。
在另一實施例中，提供的是一種分離的抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中：(a)重鏈序列與序列辨識號：25所示的重鏈序列具有至少85%的序列相同性，及/或(b)輕鏈序列與序列辨識號：4所示的輕鏈序列具有至少85%的序列相同性。
在一特定態樣中，序列相同性為86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
在另一態樣中，重鏈可變區包含並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(LC-FR1)-(HVR-L1)- (LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列衍生自人類共有框架序列。在又一態樣中，重鏈框架序列衍生自Kabat子群I、II或III序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為VH子群III共有框架。在又另一態樣中，重鏈框架序列的一或多個如序列辨識號：8、9、10及WGQGTLVTVSS(序列辨識號：27)所示。在又另一態樣中，輕鏈框架序列衍生自Kabat κ I、II、III或IV子群序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為VL κ I共有框架。
在又另一態樣中，輕鏈框架序列的一或多個如序列辨識號：15、16、17及18所示。
在又另一特定樣態中，抗體更包含人類或鼠科的恆定區。在又另一態樣中，人類恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4所組成的群組。在又另一特定樣態中，人類恆定區為IgG1。在又另一態樣中，鼠科恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3所組成的群組。在又另一態樣中，鼠科恆定區為IgG2A。在又另一特定樣態中，抗體具有降低或最小的效應子功能。在又另一特定樣態中，最小的效應子功能由原核細胞的產生所導致。在又另一特定樣態中，最小的效應子功能由“效應子減少的Fc突變”或去糖基化(aglycosylation)所導致。在又另一實施例中，效應子減少的Fc突變為恆定區中的N297A或D265A/N297A取代。
在另一態樣中，重鏈可變區包含並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含 並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列衍生自人類共有框架序列。在又另一樣態中，框架序列衍生自人類共有框架序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列衍生自Kabat子群I、II或III序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為VH子群III共有框架。在又另一態樣中，重鏈框架序列的一或多個如下所示：
HC-FR1為EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(序列辨識號：29)
HC-FR2為WVRQAPGKGLEWVA(序列辨識號：30)
HC-FR3為RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(序列辨識號：10)
HC-FR4為WGQGTLVTVSS(序列辨識號：27)。
在又另一態樣中，輕鏈框架序列衍生自Kabat κ I、II、III或IV子群序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為VL κ I共有框架。在又另一態樣中，輕鏈框架序列的一或多個如下所示：
LC-FR1為DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(序列辨識號：15)
LC-FR2為WYQQKPGKAPKLLIY(序列辨識號：16)
LC-FR3為GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(序列辨識號：17)
LC-FR4為FGQGTKVEIK(序列辨識號：28)。
在又另一特定樣態中，抗體更包含人類或鼠科的 恆定區。在又另一態樣中，人類恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4所組成的群組。在又另一特定樣態中，人類恆定區為IgG1。在又另一態樣中，鼠科恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3所組成的群組。在又另一態樣中，鼠科恆定區為IgG2A。在又另一特定樣態中，抗體具有降低或最小的效應子功能。在又另一特定樣態中，最小的效應子功能由“效應子減少的Fc突變”或去糖基化(aglycosylation)所導致。在又另一實施例中，效應子減少的Fc突變為恆定區中的N297A或D265A/N297A取代。
在又另一實施例中，提供的是一種抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中：(c)重鏈更包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3序列，其分別與GFTFSDSWIH(序列辨識號：19)、AWISPYGGSTYYADSVKG(序列辨識號：20)及RHWPGGFDY(序列辨識號：21)具有至少85%的序列相同性，及/或(d)輕鏈更包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3序列，其分別與RASQDVSTAVA(序列辨識號：22)、SASFLYS(序列辨識號：23)及QQYLYHPAT(序列辨識號：24)具有至少85%的序列相同性。
在一特定態樣中，序列相同性為86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
在另一態樣中，重鏈可變區包含並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)- (HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含並列於HVR之間的一或多個框架序列，如：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列衍生自人類共有框架序列。在又另一樣態中，框架序列衍生自人類共有框架序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列衍生自Kabat子群I、II或III序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為VH子群III共有框架。在又另一態樣中，重鏈框架序列的一或多個如序列辨識號：8、9、10及WGQGTLVTVSSASTK(序列辨識號：31)所示。
在又另一態樣中，輕鏈框架序列衍生自Kabat κ I、II、III或IV子群序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為VL κ I共有框架。在又另一態樣中，輕鏈框架序列的一或多個如序列辨識號：15、16、17及18所示。在又另一特定樣態中，抗體更包含人類或鼠科的恆定區。在又另一態樣中，人類恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4所組成的群組。在又另一特定樣態中，人類恆定區為IgG1。在又另一態樣中，鼠科恆定區擇自於IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3所組成的群組。在又另一態樣中，鼠科恆定區為IgG2A。在又另一特定樣態中，抗體具有降低或最小的效應子功能。在又另一特定樣態中，最小的效應子功能由“效應子減少的Fc突變”或去糖基化(aglycosylation)所導致。在又另一實施例中，效應子減少的Fc突變為恆定區中的N297A或D265A/N297A取代。
在又一實施例中，提供的是一種分離的抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中： (a)重鏈序列與序列辨識號：26所示的重鏈序列具有至少85%的序列相同性，或(b)輕鏈序列與序列辨識號：4所示的輕鏈序列具有至少85%的序列相同性。
在一些實施例中，提供的是一種分離的抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中輕鏈可變區序列與序列辨識號：4的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性。在一些實施例中，提供的是一種抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中重鏈可變區序列與序列辨識號：26的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性。在一些實施例中，提供的是一種分離的抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中輕鏈可變區序列與序列辨識號：4的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列相同性，且重鏈可變區序列與序列辨識號：26的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99% 或100%的序列相同性。在一些實施例中，位在重鏈及/或輕鏈的N端的1、2、3、4或5個胺基酸殘基可被刪除、取代或修飾。
在又一實施例中，提供的是一種分離的抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈序列，其中：(a)重鏈序列與序列辨識號：32所示的重鏈序列具有至少85%的序列相同性，及/或(b)輕鏈序列與序列辨識號：33所示的輕鏈序列具有至少85%的序列相同性。
在又一實施例中，提供的是一種分離的抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈序列，其中：(a)重鏈序列與序列辨識號：55所示的重鏈序列具有至少85%的序列相同性，及/或(b)輕鏈序列與序列辨識號：33所示的輕鏈序列具有至少85%的序列相同性。
在一些實施例中，提供的是一種分離的抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈序列，其中輕鏈序列與序列辨識號：33的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。在一些實施例中，提供的是一種分離的抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈序列，其中重鏈序列與序列辨識號：32或55的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、 至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。在一些實施例中，提供的是分離的抗PD-L1抗體，其包含重鏈及輕鏈序列，其中輕鏈序列與序列辨識號：33的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性，且重鏈序列與序列辨識號：32或55的胺基酸序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的序列相同性。
在一些實施例中，分離的抗PD-L1抗體為去糖基化的(aglycosylated)。抗體的糖基化一般是N-連接的(N-linked)或O-連接的(O-linked)。N-連接的是指碳水化合物部分與天冬醯胺(asparagine)殘基側鏈相連。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸(asparagine-X-serine)及天冬醯胺-X-蘇胺酸(asparagine-X-threonine)(其中X是除脯胺酸(proline)之外的任一胺基酸)為碳水化合物部分與天冬醯胺側鏈的酶連接(enzymatic attachment)的識別序列。因此，這些三肽序列中的任一個在多肽中的存在產生了潛在的糖基化位點。O-連接的糖基化是指糖類N-乙醯基半乳糖胺(N-aceylgalactosamine)、半乳糖(galactose)或木糖(xylose)與羥胺基酸(hydroxyamino acid)、大多為絲胺酸或蘇胺酸的連接，雖然亦可使用5-羥脯胺酸(5-hydroxyproline)或5-羥賴胺酸(5-hydroxylysine)。從抗體移除糖基化位點可藉由改 變胺基酸序列方便地達成，使得上述三肽序列(用於N-連接的糖基化位點)的其中之一被移除。可藉由取代糖基化位點內的天冬醯胺酸、絲胺酸或蘇胺酸殘基為另一胺基酸殘基(例如，甘胺酸(glycine)、丙胺酸(alanine)或or a conservative substitution)進行改變。
在本文中的任一實施例中，分離的抗PD-L1抗體可與人類PD-L1結合，例如UniProtKB/Swiss-Prot登錄號Q9NZQ7.1所示的人類PD-L1或其變異體。
在又一實施例中，提供的是一種分離的核酸，其編碼本文所述的任一抗體。在一些實施例中，核酸更包含適於編碼前述任一抗PD-L1抗體的核酸表達的載體。在又另一特定樣態中，載體在適於核酸表達的宿主細胞中。在又另一特定樣態中，宿主細胞為真核細胞或原核細胞。在又另一特定樣態中，真核細胞為哺乳動物細胞，如中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)細胞。
抗體或其抗原結合片段，可利用所屬技術領域已知的方法製備，例如，藉由包含下述步驟的方法，在適於產生此類抗體或片段的條件下，以適於表達的形式培養包含編碼前述任一抗PD-L1抗體或抗原結合片段的核酸的宿主細胞，以及回收抗體或片段。
III.抗GPC3抗體
於本文中提供的是用於治療或延緩個體中癌症進展的方法，包含對個體施用有效量的PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。於本文中亦提供用於提升具有癌症的個體中對抗 腫瘤細胞的免疫反應的方法，包含對個體施用有效量的PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。舉例而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含免疫細胞浸潤於腫瘤組織中，所述免疫細胞包含巨噬細胞及多核巨細胞。就另一例子而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含CD45+淋巴細胞、CD3+淋巴細胞及CD8+T淋巴細胞於腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)中的增加。
本文中提供結合至人類磷脂醯肌醇蛋白聚糖3(GPC3)的抗體。“GPC3”的別稱包含SGB、DGSX、MXR7、SDYS、SGBS、OCI-5、SGBS1及GTR2-2。文中使用的用詞“GPC3”代表來自任一人類來源的天然GPC3。此用詞涵蓋“全長”及未經處理的GPC3，以及由細胞中處理所產生的任一形式的GPC3(例如，成熟蛋白)，包含但不限於，GPC3的C端胜肽。此用詞亦涵蓋自然發生的GPC3的變異體及亞型(isoform)，例如，剪接的變體(splice variant)或等位基因變體(allelic variant)。舉例而言，GPC3及序列的描述於UniProtKB/Swiss-Prot登錄號P51654.1中提供。
在一些實施例中，抗GPC3抗體結合至GPC3且抑制癌細胞的增生或生長。在一些實施例中，抗GPC3抗體為codrituzumab。
在一些實施例中，抗GPC3抗體可包含抗體藥物偶聯物(antibody-drug conjugate，ADC)(WO2007/137170)，其包含與細胞毒性物質偶聯的1G12抗體(WO2003/100429)(以BioMosaics Inc.目錄號B0134R出售)。
在一些實施例中，抗GPC3抗體為如 WO2006/006693或WO2007/047291中所述的人源化抗GPC3抗體。
在一些實施例中，抗GPC3抗體包含如WO2006/006693或WO2009/041062中所述的人源化抗GPC3抗體。在一些實施例中，提供的是包含重鏈及輕鏈可變區序列的人源化抗GPC3抗體，其中：
(a)重鏈包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，進一步地，其中：
(i)HVR-H1序列為DYSMH(序列辨識號：34)
(ii)HVR-H2序列WINTETGEPTYADDFKG(序列辨識號：35)
(iii)HVR-H3序列為LY(序列辨識號：36)
(b)輕鏈包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3，進一步地，其中：
(i)HVR-L1序列為KSSQSLLHSDGKTFLN(序列辨識號：37)
(ii)HVR-L2序列為LVSRLDS(序列辨識號：38)
(iii)HVR-L3序列為CQGTHFPRT(序列辨識號：39)。
在一特定態樣中，抗GPC3抗體為人源化的。人源化抗GPC3抗體可利用，適當地選擇與序列辨識號：40所示的重鏈框架序列或序列辨識號：41所示的輕鏈框架序列具有高度序列相同性的人類框架序列，作為人源化的模板(template)進行製備。
在一些實施例中，本文提供的是抗GPC3嵌合抗體 或人源化抗GPC3抗體，包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中：
(a)重鏈包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，進一步地，其中：
(i)HVR-H1序列為DYEMH(序列辨識號：42)
(ii)HVR-H2序列為ALDPKTGDTAYSQKFKG(序列辨識號：43)
(iii)HVR-H3序列為FYSYTY(序列辨識號：44)
(b)輕鏈包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3，進一步地，其中：
(i)HVR-L1序列為RSSQSLVHSNRNTYLH(序列辨識號：45)
(ii)HVR-L2序列為KVSNRFS(序列辨識號：46)
(iii)HVR-L3序列為SQNTHVPPT(序列辨識號：47)。
人源化抗GPC3抗體可利用，適當地選擇與序列辨識號：48所示的重鏈框架序列或序列辨識號：49所示的輕鏈框架序列具有高度序列相同性的人類框架序列，作為人源化的模板進行製備。
在又一實施例中，本文提供的是一種能夠結合至第二抗體可結合的表位(epitope)的人源化抗GPC3抗體，其中所述第二抗體包含重鏈及輕鏈可變區序列，其中：
(a)重鏈包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，進一步地，其中：
(i)HVR-H1序列為DYEMH(序列辨識號：42)
(ii)HVR-H2序列為ALDPKTGDTAYSQKFKG(序列辨識 號：43)
(iii)HVR-H3序列為FYSYTY(序列辨識號：44)
(b)輕鏈包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3，進一步地，其中：
(i)HVR-L1序列為RSSQSLVHSNRNTYLH(序列辨識號：45)
(ii)HVR-L2序列為KVSNRFS(序列辨識號：46)
(iii)HVR-L3序列為SQNTHVPPT(序列辨識號：47)。
在又一實施例中，提供的是一種人源化抗GPC3抗體，其包含擇自於序列辨識號：50所示的重鏈可變區的群組的重鏈可變區，以及序列辨識號：51所示的輕鏈可變區。在又一可選非限定的態樣中，提供的是一種人源化抗GPC3抗體，其包含擇自於序列辨識號：50所示的重鏈可變區的群組的重鏈可變區，以及擇自於序列辨識號：52所示的輕鏈可變區的群組的輕鏈可變區。
在又一實施例中，提供的是人源化抗GPC3抗體，其包含序列辨識號：53所示的重鏈可變區以及序列辨識號：54所示的輕鏈可變區。
本發明的抗GPC3抗體的可選例子包含具有細胞毒殺活性的抗GPC3抗體。在本發明中，細胞毒殺活性的非限定例子包含抗體依賴性細胞調節毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)或抗體依賴性細胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity，ADCC)活性、補體依賴性細胞毒性(complement-dependent cytotoxicity，CDC)活性及以T細 胞為基礎的細胞毒殺活性。在本發明中，CDC活性指補體系統帶來的細胞毒殺活性。另一方面，ADCC活性指破壞標靶細胞的活性，例如藉由免疫細胞，藉由表達於免疫細胞上的Fcγ受體，免疫細胞結合至抗原結合分子的Fc區，所述抗原結合分子包含能夠結合至表達於標靶細胞的細胞膜上的膜分子之抗原結合域。感興趣的抗原結合分子是否具有ADCC活性或是否具有CDC活性可藉由所屬技術領域已知的方法判定(例如，Current protocols in Immunology，Chapter 7.Immunologic studies in humans，Coligan等人編輯(1993))。
在一些實施例中，本發明的抗GPC3抗體的可選的例子包含與細胞毒性物質偶聯的抗GPC3抗體。此種抗GPC3抗體-藥物偶聯物(ADC)具體地揭示於，例如，WO2007/137170，然而本發明的偶聯物不限於其中所述者。具體而言，細胞毒性物質可為下列任一化療劑，或可為Alley等人(Curr.Opin.Chem.Biol.(2010)14,529-537)或WO2009/140242中揭示的化合物。抗原結合分子藉由合適的連接物等與這些化合物偶聯。
在一些實施例中，本發明的抗GPC3抗體的可選的例子包含含有FcγR結合修飾的Fc區的抗GPC3抗體，所述FcγR結合修飾的Fc區對FcγR受體的結合活性，比天然人類IgG的Fc區對FcγR受體的結合活性高。修飾包含胺基酸在任一位置的修飾，只要產生的Fc區對FcγR受體的結合活性，比天然人類IgG的Fc區對FcγR受體的結合活性高。當抗原結合分子包含人類IgG1 Fc區作為人類Fc區時，修飾較佳地允許Fc區包 含含有岩藻糖的糖鏈作為結合到位置297的糖鏈(EU編號)，且與針對Fcγ受體的天然人類IgG Fc區相比，對Fcγ受體產生更高的結合活性是有效的。此種胺基酸修飾已於，例如，國際公開號WO2007/024249、WO2007/021841、WO2006/031370、WO2000/042072、WO2004/029207、WO2004/099249、WO2006/105338、WO2007/041635、WO2008/092117、WO2005/070963、WO2006/020114、WO2006/116260、WO2006/023403及WO2014/097648中報導。
在一些實施例中，本發明提供的抗GPC3抗體所含的Fc區亦可包含修飾的Fc區，使得在糖鏈結合至Fc區的組成中，較高比例的缺乏岩藻糖(fucose-deficient)的糖鏈與Fc區結合，或較高比例的二等分(bisecting)N-乙醯葡萄糖胺(N-acetylglucosamine)添加至與Fc區。WO2006/046751及WO2009/041062揭示抗GPC3抗體的特定例子，所述抗GPC3抗體包含Fc區，其經修飾使得在糖鏈結合至Fc區的組成中，較高比例的缺乏岩藻糖的糖鏈與Fc區結合，或較高比例的二等分N-乙醯葡萄糖胺添加至Fc區。
在一些實施例中，可用於本發明的抗GPC3抗體包含具有胺基酸殘基修飾以改變其等電點(isoelectric point，pI)的抗GPC3抗體。抗GPC3抗體中“胺基酸殘基的電荷的改變”的較佳例子如WO2009/041062所述。
在一些實施例中，抗GPC3抗體包含已接受構成抗GPC3抗體的一級結構的多肽的轉譯後修飾(posttranslational modification)的抗體的修飾形式。多肽的轉譯後修飾指的是在 多肽生物合成的過程中給予被轉譯的多肽的化學修飾。舉例而言，藉由焦谷化(pyroglutamylation)得到將N端的谷氨醯胺變成焦谷胺酸(pyroglutamic acid)的修飾的抗GPC3抗體當然地亦包含於本發明的抗GPC3抗體中。又，例如，包含重鏈及輕鏈或藉由“雙硫鍵”連接的重鏈之轉譯後修飾的抗GPC3抗體亦包含於本發明的抗GPC3抗體中，前述雙硫鍵代表在兩個硫原子之間形成的共價鍵。胺基酸半胱胺酸(cysteine)中含有的硫醇基(thiol group)可與第二硫醇基形成雙硫鍵或交聯。在一般的IgG分子中，CH1及CL區藉由雙硫鍵連接，且構成重鏈的兩個多肽是藉由雙硫鍵在位置226及229(根據EU編號)的半胱胺酸之間連接。具有藉由雙硫鍵的此種鍵結的轉譯後修飾的抗GPC3抗體亦包含於本發明的抗GPC3抗體中。
在又一實施例中，提供的是一種分離的核酸，其編碼本文中所述的任一抗體。在一些實施例中，核酸更包含適於編碼前述任一抗GPC3抗體的核酸表達的載體。在又另一特定樣態中，載體在適於核酸表達的宿主細胞中。在又另一特定樣態中，宿主細胞為真核細胞或原核細胞。在又另一特定樣態中，真核細胞為哺乳動物細胞，如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。
抗體或其抗原結合片段，可利用所屬技術領域已知的方法製備，例如，藉由包含下述步驟的方法，在適於產生此類抗體或片段的條件下，以適於表達的形式培養包含編碼前述任一抗GPC3抗體或抗原結合片段的核酸的宿主細胞，以及回收抗體或片段。
IV.抗體製備
本文中所述的抗體是利用所屬技術領域可用於產生抗體的技術進行製備，其示例性方法將於下列段落詳細描述。
抗體是針對感興趣的抗原(即，PD-L1(如人類PD-L1)或GPC3(如人類磷脂醯肌醇蛋白聚糖3))。較佳地，抗原為生物上重要的多肽，且對患有病症的哺乳動物施用抗體可產生哺乳動物的治療益處。
在一些特定實施例中，本文提供的抗體具有
Figure 106108296-A0202-12-0092-89
1μM、
Figure 106108296-A0202-12-0092-90
150nM、
Figure 106108296-A0202-12-0092-91
100nM、
Figure 106108296-A0202-12-0092-92
50nM、
Figure 106108296-A0202-12-0092-93
10nM、
Figure 106108296-A0202-12-0092-94
1nM、
Figure 106108296-A0202-12-0092-95
0.1nM、
Figure 106108296-A0202-12-0092-96
0.01nM或
Figure 106108296-A0202-12-0092-97
0.001nM(例如10-8M或更小，例如從10-8M至10-13M，例如從10-9M至10-13M)的解離常數(Kd)。
在一實施例中，Kd藉由放射性標記抗原結合測定法(radiolabeled antigen binding assay，RIA)進行測量，以感興趣的抗體的Fab形式及其抗原，如下述測定法實行。藉由在存在未標記抗原的滴定系列的條件下，以最小濃度的(125I)-標記抗原平衡(equilibrate)Fab，然後以抗Fab抗體被覆的盤捕捉結合的抗原，以測量Fab對抗原的溶液結合親和性(請參照，例如Chen等人，J.Mol.Biol.293：865-881(1999))。為了確立測定的條件，以於50mM碳酸鈉(pH 9.6)中的5μg/ml捕捉用抗Fab抗體(Cappel Labs)被覆MICROTITER®多孔盤(Thermo Scientific)隔夜，接著以於PBS中的2%(w/v)牛血清蛋白在室溫(約23℃)進行阻斷2至5小時。在非吸附盤(Nunc#269620)中，將100pM或26pM[125I]-抗原與連續稀釋的感興趣的Fab混合。接著將感興趣的Fab培養隔夜；然而，培養可持續更長 的時間(例如，約65小時)以確保達到平衡。此後，將混合物轉移至捕捉盤於室溫下培養(例如，1小時)。接著移除溶液並以含0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20®)的PBS清洗盤8次。當盤已乾燥，加入150μl/孔的閃爍液(scintillant)(MICROSCINT-20TM；Packard)，且於TOPCOUNTTM伽馬計數器(Packard)上對盤計數10分鐘。選擇各Fab給出小於或等於最大結合之20%的濃度，用於競爭性結合測定法(competitive binding assays)。
根據另一實施例，Kd是以BIACORE®-2000或BIACORE®-3000(BIAcore,Inc.，Piscataway,NJ)利用表面電漿共振測定法(surface plasmon resonance assay)，在25℃以固定化抗原CM5晶片在~10個回應單位(response unit，RU)下進行測量。簡言之，根據供應商的說明書，以N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide hydrochloride，EDC)及N-羥基琥珀醯亞胺(N-hydroxysuccinimide，NHS)活化羧甲基化聚葡萄糖生物感測器晶片(CM5，BIACORE®,Inc.)。在以5μl/分鐘的流速注入以獲得約10個回應單位(RU)的偶聯蛋白質之前，以10mM乙酸鈉，pH4.8，將抗原稀釋至5μg/ml(~0.2μM)。在抗原的注入之後，注入1M乙醇胺以阻斷未反應基團。為了進行動力學測量，將兩倍連續稀釋的Fab(0.78nM至500nM)在25℃以約25μl/分鐘的流速注入於含0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)介面活性劑的PBS(PBST)中。使用簡單一對一Langmuir結合模型(simple one-to-one Langmuir binding model)(BIACORE® Evaluation Software version 3.2)藉由同時 擬合結合及解離傳感圖(sensorgram)計算結合速率(association rate，kon)及解離速率(dissociation rate，koff)。平衡解離常數(Kd)以比例koff/kon計算。請參照，例如，Chen等人，J.Mol.Biol.293：865-881(1999)。若根據上述表面電漿共振測定法，結合速率(on-rate)超過106M-1s-1，那麼結合速率可利用螢光淬滅(fluorescentquenching)技術加以測定，所述螢光淬滅技術在如分光光度計(例如，配有停流(stop-flow)的分光光度計(Aviv Instruments)或具有攪拌比色管的8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic))測量的濃度增加的抗原的存在下，測量25℃時PBS，pH 7.2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)的螢光發射強度(激發=295nm；發射=340nm，16nm帶通(band-pass))的增加或降低。
(i)抗原製備
可使用可溶性抗原或其片段可選地與其他分子偶聯，作為產生抗體的免疫原(immunogen)。對於跨膜分子，例如受體，可使用這些分子的片段(例如，受體的細胞外結構域)作為免疫原。或者，可使用表達跨膜分子的細胞作為免疫原。這類細胞可衍生自天然來源(例如，癌細胞系)或可為已藉由重組(recombinant)技術轉化(transform)以表達跨膜分子的細胞。可用於製備抗體的其它抗原及其形式對於所屬技術領域具有通常知識者將為明顯的。
(ii)某些以抗體為基礎的方法
多株抗體較佳地是藉由多次皮下(subcutaneous，sc)或腹膜內(intraperitoneal，ip)注射相關抗原及佐劑 (adjuvant)而在動物中產生。利用雙功能或衍生劑，例如，馬來醯亞胺苯甲醯磺基琥珀醯亞胺酯(maleimidobenzoyl sulfosuccinimide ester)(通過半胱胺酸殘基偶聯)、N-羥基琥珀醯亞胺(N-hydroxysuccinimide)(通過賴胺酸殘基)、戊二醛(glutaraldehyde)、琥珀酸酐(succinic anhydride)、SOCl2或R1N=C=NR(其中R及R1是不同的烷基)，將相關抗原與在將被免疫的物種中有免疫原性的蛋白質(例如，鎖眼帽貝血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin)、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑)偶聯可為有用的。
可藉由將例如100μg或5μg的蛋白質或偶聯物(分別對於兔或小鼠)與3體積的完全弗氏佐劑(Freund's complete adjuvant)組合，且在多個部位真皮內(intradermally)注射該溶液，使動物對抗原、免疫原性偶聯物或衍生物免疫。一個月後，通過在多個部位皮下注射在完全弗氏佐劑中原始劑量的1/5至1/10的胜肽或偶聯物，加強免疫(boost)動物。7至14天後，對動物採血，分析血清的抗體滴度(titer)。加強免疫動物直至滴度平臺期(plateaus)。較佳地，以與偶聯物的抗原相同但偶聯於不同蛋白質及/或藉由不同交聯劑(cross-linking reagent)的偶聯物加強動物。亦可在重組細胞培養物中將偶聯物製備為蛋白質融合體。聚集劑(aggregating agent)，例如明礬，亦適用於增強免疫反應。
本發明的單株抗體可利用Kohler等人，Nature,256：495(1975)，首次描述的雜交瘤方法製備，且進一步描述於，例如Hongo等人，Hybridoma,14(3)：253-260(1995)，Harlow 等人，Antibodies：A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.1988)；Hammerling等人於：Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981)，以及關於人類-人類雜交瘤的Ni，Xiandai Mianyixue，26(4)：265-268(2006)。額外的方法包含描述於，例如，美國專利號7,189,826，關於從雜交瘤細胞系產生單株人類天然IgM抗體的方法。人類雜交瘤技術(Trioma technology)描述於Vollmers及Brandlein，Histology and Histopathology,20(3)：927-937(2005)，以及Vollmers及Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3)：185-91(2005)。
關於各種其它雜交瘤技術，請參照，例如，US2006/258841；US2006/183887(全人類抗體)，US2006/059575；US2005/287149；US2005/100546；US2005/026229；及美國專利號7,078,492及7,153,507。使用雜交瘤方法製備單株抗體的示例性方案描述如下。在一實施例中，小鼠或其它合適的宿主動物，例如倉鼠，經免疫以引發產生或能夠產生將特異性結合用於免疫的蛋白質的抗體的淋巴細胞。抗體是藉由多次皮下(subcutaneous，sc)或腹膜內(intraperitoneal，ip)注射本發明的多肽或其片段以及佐劑而產生，所述佐劑例如為單磷醯脂質A(monophosphoryl lipid A，MPL)/海藻糖二叉菌酸酯(trehalose dicrynomycolate，TDM)(Ribi Immunochem.Research,Inc.，Hamilton,Mont.)。本發明的多肽(例如，抗原)或其片段可利用所屬技術領域習知的方法進行製備，例如，重組方法， 其中一些進一步於本文中描述。測定來自經免疫的動物的血清之抗抗原抗體，以及可選的施用加強免疫。分離產生抗抗原抗體的動物的淋巴細胞。或者，淋巴細胞可於體外(invitro)免疫。
接著使用合適的融合劑，如聚乙二醇(polyethylene glycol)，將淋巴細胞與骨髓瘤(myeloma)細胞融合，以形成雜交瘤細胞。請參照，例如，Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice,pp.59-103(Academic Press,1986)。可使用可有效融合、藉由選擇的產生抗體的細胞支持穩定高水平的抗體產生，並且對於培養基敏感的骨髓瘤細胞，所述培養基例如HAT培養基。示例性的骨髓瘤細胞包含但不限於，鼠科骨髓瘤細胞系，如衍生自MOPC-21及MPC-11小鼠腫瘤的那些，其可由Salk Institute Cell Distribution Center，San Diego，Calif.USA取得，以及SP-2或X63-Ag8-653細胞，其可由American Type Culture Collection，Rockville，Md.USA取得。人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞系亦已被描述用於人類單株抗體的生產(Kozbor，J.Immunol.,133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，pp.51-63(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。
將由此製備的雜交瘤細胞接種並於合適的培養基中生長，例如，包含抑制未融合的親本(parental)骨髓瘤細胞的生長或存活的一或多種物質的培養基。舉例而言，若親本骨髓瘤細胞缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase，HGPRT或HPRT)，融合瘤 的培養基通常將包含次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸腺嘧啶(HAT培養基)，這些物質防止HGPRT-缺陷型細胞的生長。較佳的，使用無血清的雜交瘤細胞培養方法，以減少動物衍生的血清(如胎牛血清)的使用，其於，例如Even等人，Trends in Biotechnology,24(3),105-108(2006)中描述。
寡胜肽作為用以改善雜交瘤細胞的生產力的工具已描述於Franek，Trends in Monoclonal Antibody Research，111-122(2005)。具體而言，標準培養基富含特定的胺基酸(丙胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、脯胺酸)或蛋白質水解部分，且由3至6個胺基酸殘基構成的合成寡胜肽可顯著地抑制細胞凋亡(apoptosis)。胜肽以毫莫耳(millimolar)或更高的濃度存在。
可檢測雜交瘤細胞生長的培養基是否產生結合本發明的抗體的單株抗體。由雜交瘤細胞產生的單株抗體的結合特異性可藉由免疫沉澱法(immunoprecipitation)或藉由體外結合檢測(例如，放射性免疫測定(radioimmunoassay，RIA)或酶連接免疫吸附測定(enzyme-linked immunoadsorbent assay，ELISA)進行測定。單株抗體的結合親和力可藉由，例如，Scatchard分析進行測定。請參照，例如，Munson等人，Anal.Biochem.,107：220(1980)。
在辨識出產生具有想要的特異性、親和性及/或活性的抗體的融合瘤細胞後，這些克隆可利用標準方法藉由限制稀釋程序及生長加以亞克隆(subclone)。請參照，例如，Goding，supra。適於此目的培養基包含，例如，D-MEM或RPMI-1640培養基。此外，融合瘤細胞可生長於體內作為哺乳 動物中的腹水腫瘤(ascites tumor)。亞克隆分泌的單克隆抗體藉由常規的免疫球蛋白純化方法從培養基、腹水或血清中適當地分離，所述常規的免疫球蛋白純化方法為，例如，protein A-Sepharose、羥基磷灰石層析(hydroxylapatite chromatography)、膠體電泳、透析或親和性層析。在US2005/176122及美國專利號6,919,436中描述一種從雜交瘤細胞中分離蛋白質的方法。所述方法包含在結合過程中使用最小量的鹽，例如感膠離子鹽(lyotropic salt)，且較佳地亦在洗提過程中使用少量的有機溶劑。
(iii)源自資料庫(library)的抗體
本發明的抗體可藉由在組合資料庫中篩選具有所需活性的抗體進行分離。例如，所屬技術領域中已知多種用於產生噬菌體展示資料庫並且在這類資料庫中篩選具有所需結合特徵的抗體的方法。附加的方法綜述於，例如，Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O'Brien等人編輯，Human Press，Totowa,NJ,2001)，且進一步描述於，例如，the McCafferty等人，Nature 348：552-554；Clackson等人，Nature 352：624-628(1991)：Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Marks及Bradbury，於Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo編輯，Human Press，Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.338(2)：299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；以及Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)。
在特定的噬菌體展示方法中，藉由聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)分別克隆VH及VL基因的庫(repertoires)，且在噬菌體資料庫中隨機重組，接著可篩選抗原結合的噬菌體，如Winter等人，於Ann.Rev.Immunol,12：433-455(1994)中所述。噬菌體通常展示作為單鏈Fv(scFv)或是作為Fab片段的抗體片段。來自免疫來源的資料庫提供免疫原(immunogen)高親和力抗體，而不需要構建雜交瘤。或者，可克隆(cloned)(例如，自人類)天然庫(naive repertoire)為廣泛範圍的非自體抗原以及自體抗原提供抗體的單一來源，而不需要任何免疫，如Griffiths等人，EMBO J,12：725-734(1993)所述。最後，也可藉由從幹細胞克隆未重排的V基因片段，並使用含有隨機序列的PCR引子(primer)來編碼高度變異的CDR3區，且實現體外(in vitro)重排以合成製備天然資料庫，如Hoogenboom及Winter，J.Mol.Biol,227：381-388(1992)所述。描述人類抗體噬菌體資料庫的專利公告包含，例如：美國專利號5,750,373，以及美國專利公開號2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936及2009/0002360。
自人類抗體資料庫分離的抗體或抗體片段在本文中視為人類抗體或人類抗體片段。
(iv)嵌合、人源化及人類抗體
在一些特定實施例中，本文提供的抗體為嵌合抗體。特定嵌合抗體描述於，例如，美國專利號4,816,567；及Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855 (1984)。在一例子中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如，衍生自小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類(如猴)的可變區)以及人類恆定區。在又一例子中，嵌合抗體為“類別交換的(class switched)”抗體，其中類別或亞類(subclass)已從親本抗體的類別或亞類改變。嵌合抗體包含其抗原結合片段。
在一些特定實施例中，嵌合抗體為人源化抗體。通常，非人類抗體經人源化以降低對人類的免疫原性，同時保有親本非人類抗體的特異性及親和性。一般而言，人源化抗體包含一或多個可變域，其中HVR，例如，CDR(或其部分)衍生自非人類抗體，且FR(或其部分)衍生自人類抗體序列。人源化抗體可選地也將包含人類恆定區的至少一部分。在一些實施例中，人源化抗體中的一些FR殘基被來自非人類抗體(例如，衍生HVR殘基的抗體)對應之殘基取代，例如，以恢復或改善抗體特異性或親和性。
人源化抗體及製備其的方法綜述於，例如，Almagro及Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008)，及進一步描述於，例如，Riechmann等人，Nature 332：323-329(1988)；Queen等人，Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美國專利號5,821,337、7,527,791、6,982,321及7,087,409；Kashmiri等人，Methods 36：25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植(grafting))；Padlan，Mol.Immunol.28：489-498(1991)(描述“再表面化(resurfacing)”)；Dall'Acqua等人，Methods 36：43-60(2005)(描述“FR改組(FR shuffling)”；以及Osbourn等人，Methods 36：61-68(2005)及Klimka等人，Br.J. Cancer,83：252-260(2000)(描述FR改組的“導向選擇”方法)。
可用於人源化的人類框架區包含但不限於：使用“最適(best-fit)”方法選擇的框架區(請參照，例如，Sims等人，J.Immunol.151：2296(1993))；衍生自輕鏈或重鏈可變區的特定子群(subgroup)的人類抗體的共有序列之框架區(請參照，例如，Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285(1992)；及Presta等人，J.Immunol,151：2623(1993))；人類成熟(體細胞突變的)框架區或人類種系(germline)框架區(請參照，例如，Almagro及Fransson，,Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；以及衍生自篩選FR資料庫的框架區(請參照，例如，Baca等人，J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)以及Rosok等人，J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。
在一些特定實施例中，本文提供之抗體為人類抗體。人類抗體可利用各種所屬技術領域習知的技術進行製備。人類抗體大致地描述於van Dijk及van de Winkel，Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)及Lonberg，Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)。
人類抗體可藉由向基因轉殖(transgenic)動物施用免疫原進行製備，所述基因轉殖動物經過修飾而產生完整人類抗體或具有因應抗原攻擊的人類可變區的完整抗體。這類動物通常包含全部或部分的人類免疫球蛋白基因座(loci)，其取代了內源(endogenous)免疫球蛋白基因座，或其於染色體外(extrachromosomally)存在或隨機整合至動物的染色體中。在這類基因轉殖小鼠中，內源免疫球蛋白基因座一般已不活化。關 於自基因轉殖動物獲取人類抗體的方法的綜述，請參照Lonberg，Nat.Biotech.23：1117-1125(2005)。請亦參照，例如，美國專利號6,075,181及6,150,584，其描述XENOMOUSETM技術；美國專利號5,770,429，其描述HUMAB®技術；美國專利號7,041,870，其描述K-M MOUSE®技術，以及美國專利公開號US2007/0061900，其描述VELOCIMOUSE®技術)。藉由這類動物產生的完整抗體的人類可變區可進一步被修飾，例如，藉由與不同人類恆定區組合。
人類抗體也可藉由以融合瘤為基礎的方法進行製備。用於產生人類單株抗體的人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞系已被描述。(請參照，例如，Kozbor J.Immunol,133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,pp.51-63(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；以及Boerner等人，J.Immunol.,147：86(1991)。藉由人類B細胞融合瘤技術產生的人類抗體亦描述於Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103：3557-3562(2006)。額外方法包含描述於，例如，美國專利號7,189,826(描述從融合瘤細胞系產生單株人類IgM抗體)及Ni，Xiandai Mianyixue,26(4)：265-268(2006)(描述人類-人類融合瘤)的那些方法。人類融合瘤技術(Trioma技術)亦描述於Vollmers及Brandlein，Histology and Histopathology,20(3)：927-937(2005)以及Vollmers及Brandlein，Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3)：185-91(2005)。
亦可藉由分離選自衍生自人類的噬菌體展示資料庫的Fv克隆可變域序列產生人類抗體。這類可變域序列接著可與所望的人類恆定域組合。下文將描述從抗體資料庫選擇人類抗體的技術。
(v)抗體片段
抗體片段可藉由常規工具產生，例如，酶消化(enzymatic digestion)或重組技術。在一些特定情況下，使用抗體片段而非全部抗體具有優點。片段的較小尺寸允許快速清除，且可造成接近實體瘤的改善。特定抗體片段的綜述，請參照Hudson等人，(2003)Nat.Med.9：129-134。
用於產生抗體片段的各種技術已經發展。常規上，這些片段藉由完整抗體的蛋白水解消化(proteolytic digestion)取得(請參照，例如，Morimoto等人，Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24：107-117(1992)；及Brennan等人，Science,229：81(1985))。然而，這些片段現在可藉由重組的宿主細胞直接產生。Fab、Fv及ScFv抗體片段均在E.coli中表達及分泌，從而允許容易地產生大量的這些片段。抗體片段可分離自以下討論的抗體噬菌體資料庫。或者，Fab’-SH片段可直接地從E.coli回收並化學偶聯以形成F(ab’)2片段(Carter等人，Bio/Technology 10：163-167(1992))。根據另一方案，F(ab’)2片段可直接地從重組的宿主細胞培養物分離。具有增加的體內半衰期(half-life)的Fab及F(ab’)2片段包含搶救性受體(salvage receptor)結合表位殘基，如美國專利號5,869,046中所述。用於生產抗體片段的其它技術對於熟 練的從業人員而言將為顯然的。在一些特定實施例中，抗體為單鏈Fv片段(scFv)。請參照WO93/16185；美國專利號5,571,894；及5,587,458。Fv及scFv為具有缺乏恆定區的完整組合位點的唯一物種；因此，它們可能適於在體內使用期間降低的非特異性結合。可建構scFv融合蛋白以於scFv的胺基或羧基端產生效應子蛋白的融合。請參照Antibody Engineering,ed.Borrebaeck，supra。抗體片段亦可為“線性抗體”，例如，描述於美國專利號5,641,870。此類線性抗體可為單特異性或雙特異性。
(vi)單域抗體
在一些實施例中，本發明的抗體為單域抗體。單域抗體為包含抗體的所有或部分的重鏈可變域，或全部或部分的輕鏈可變域的單一多肽鏈。在一些特定實施例中，單域抗體為人類單域抗體(Domantis,Inc.，Waltham,Mass.；請參照，例如，美國專利號6,248,516)。在一實施例中，單域抗體由抗體的重鏈可變域的全部或部分所組成。
(vii)抗體變異體
在一些實施例中，本文描述的抗體的胺基酸序列修飾為經設想的。例如，改善抗體的結合親和性及/或其它生物特性可為理想的。可藉由導入適當的改變至編碼抗體的核苷酸序列、或藉由肽合成，製備抗體的胺基酸序列變異體。此類修飾包含，例如，在抗體的胺基酸序列中刪除、及/或插入及/或取代殘基。可進行刪除、插入及取代的任一組合以達成最終構建體(construct)，前提為最終構建體具有期望的特徵。胺基 酸修改可在製備序列時導入於目標抗體胺基酸序列中。
(viii)取代、插入及刪除變異體
在一些特定實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代的抗體變異體。取代誘變(mutagenesis)的感興趣的位點包含HVR及FR。表1中的標題“優選取代”下顯示保守取代。表1中的標題“示例性取代”下提供較實質(substantial)的改變，且參考胺基酸側鏈類別於下文進一步描述。可將胺基酸取代導入感興趣的抗體及篩選具有期望的活性的產物，例如，保留/改善的抗體結合、降低的免疫原性、或改善的ADCC或CDC。
Figure 106108296-A0202-12-0106-1
可根據共同的側鏈特性將胺基酸分類為：a.疏水：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；b.中性親水：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；c.酸性：Asp、Glu；d.鹼性：His、Lys、Arg；e.影響鏈方位的殘基：Gly、Pro；以及f.芳香族：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代將使得這些群組中之一的成員與另一群組的成員交換。
取代變異體的一類涉及取代親本抗體(例如，人源化或人類抗體)的一或多個高度變異區殘基。一般而言，選擇用於進一步研究之產生的變異體，相對於親本抗體，將於某些生物特性(例如，增加的親和性、降低的免疫原性)具有修飾(例如，改善)及/或將具有親本抗體實質上保留的某些生物特性。示例性的取代變異體為親和性成熟的抗體，其可方便地被產生，例如，使用以噬菌體展示為基礎的親和性成熟技術，如本文中所述者。簡言之，一或多個HVR殘基經突變，且於噬菌體上展示變異體抗體，以及篩選特定的生物活性(例如，結合親和性)。
可以在HVR中形成修改(alteration)(例如，取代)，舉例而言，以改善抗體親和性。此類修改可形成於HVR“熱點(hotspot)”中，即，由在體細胞成熟過程中高頻率經歷突變的密碼子(codon)所編碼的殘基(請參照，例如，Chowdhury，Methods Mol.Biol.207：179-196(2008))及/或SDR(a-CDR)，且測試產 生的變異體VH或VL的結合親和性。藉由建構以及從第二資料庫重新選擇的親和性成熟已描述於，例如Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O'Brien等人編輯，Human Press,Totowa,NJ,(2001).)。在親和性成熟的一些實施例中，多樣性藉由多種方法的任一種(例如，易錯PCR(error-prone PCR)、鏈改組(chain shuffling)或寡核苷酸定向誘變)導入選擇用於成熟的可變基因中。接著產生第二資料庫。然後篩選資料庫以辨識具有期望的親和性的任一抗體變異體。另一導入多樣性的方法涉及HVR定向方法，其中隨機化(randomize)數個HVR殘基(例如，1次4至6個殘基)。涉及抗原結合的HVR殘基可特異地被辨識，例如，使用丙胺酸掃描誘變或建立模型。CDR-H3及CDR-L3特別常被標靶。
在一些特定實施例中，取代、插入或刪除可能發生在一或多個HVR內，只要此修改未實質降低抗體結合抗原的能力。例如，可於HVR中形成未實質降低結合親和性的保守修改(例如，如本文中提供的保守取代)。此類修改可在HVR“熱點”或SDR之外。在以上提供的變異體VH和VL序列的特定實施例中，每一HVR或未被修改，或包含不多於1個、2個或3個胺基酸取代。
一種可用於辨識可被標靶用於誘變的抗體的殘基或區域的方法稱為“丙胺酸掃描誘變(alanine scanning mutagenesis)”，如Cunningham及Wells，Science,244：1081-1085所述。在此方法中，殘基或一群目標殘基(例如，帶電的殘基，如arg、asp、his、lys及glu)被辨識且被中性或帶負電的胺基 酸(例如，丙胺酸或聚丙胺酸)取代，以測定抗體與抗原的相互作用是否被影響。可在對於初始取代顯示功能性敏感的胺基酸位置導入更多的取代。替代地、或額外地，抗原抗體複合物的晶體結構可經分析以辨識抗體及抗原之間的接觸點。此類接觸殘基及相鄰的殘基可被標靶或消除，作為取代的候選對象。變異體可被篩選以測定它們是否包含期望的性質。
胺基酸序列插入物包含長度範圍從一個殘基至包含100個或更多殘基的多肽之胺基-及/或羧基-末端融合物，以及單一或多個胺基酸殘基的序列內(intrasequence)插入物。末端插入物的例子包含具有N端甲硫胺醯基(methionyl)殘基的抗體。抗體分子的其它插入變異體包含抗體的N末端或C末端對酶(例如，對ADEPT)或多肽的融合，或增加抗體的血清半衰期的多肽。
(ix)糖化(glycosylation)變異體
在一些特定實施例中，本文提供的抗體被修改以增加或減少抗體被糖化的程度。可藉由修改胺基酸序列使得一或多個糖化位點被製造或移除，可方便地完成抗體的糖化位點的添加或刪除。
當抗體包含Fc區域時，附著於其上的糖類可被修改。由哺乳動物細胞產生的天然抗體通常包含分支的、雙末端(biantennary)的寡糖，其一般藉由N連接附著至Fc區域的CH2結構域的Asn297。請參照，例如，Wright等人，TIBTECH 15：26-32(1997)。寡糖可包含各種糖，例如，甘露糖(mannose)、N-乙醯基葡糖胺(N-acetyl glucosamine，GlcNAc)、半乳糖及唾 液酸，以及附著至雙末端寡糖結構的“主幹”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些實施例中，可形成修飾於本發明的抗體中的寡糖，以產生具有特定改善特性的抗體變異體。
在一實施例中，提供的抗體變異體包含Fc區，其中附著至Fc區域的糖結構具有較少的岩藻糖或缺少岩藻糖，其可改善ADCC功能。具體而言，本文中的抗體是經設想具有減少的岩藻糖，其是相對於在野生型CHO細胞中產生的相同抗體上的岩藻糖的量。亦即，它們的特徵在於，若藉由天然CHO細胞(例如，產生天然糖基化模式的CHO細胞，如包含天然FUT8基因的CHO細胞)產生，則具有比其它方式低的岩藻糖量。在一些特定實施例中，抗體為其中少於約50%、40%、30%、20%、10%或5%的N連接的聚糖包含岩藻糖的抗體。例如，此類抗體中岩藻糖的量可為從1%至80%、從1%至65%、從5%至65%或從20%至40%。在一些特定實施例中，抗體為其中沒有N連接的聚糖包含岩藻糖的抗體，即，其中抗體完全沒有岩藻糖，或不具有岩藻糖或為去岩藻糖化(afucosylated)。岩藻糖的量是藉由計算糖鏈內在Asn297處的岩藻糖的平均量，相對於如藉由MALDI-TOF質譜分析測量之附著於Asn297的所有糖基結構的總和(例如，複合物、雜合物及高甘露糖結構)進行測定，例如，如WO 2008/077546中所述。Asn297指位於Fc區域中約在位置297處(Fc區域殘基的Eu編號)的天冬醯胺殘基；然而，由於抗體中微小的序列變異，Asn297亦可位在位置297約±3個胺基酸的上游或下游，即，位置294及300之間。此類岩藻糖化變異體可具有改善的ADCC功能。請 參照，例如，美國專利公開號2003/0157108(Presta,L.)；2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。與“去岩藻糖化的(defucosylated)”或“缺乏岩藻糖的”抗體變異體相關的公開刊物的例子包含：US2003/0157108；WO2000/61739；WO2001/29246；US2003/0115614；US2002/0164328；US2004/0093621；US2004/0132140；US2004/0110704；US2004/0110282；US2004/0109865；WO2003/085119；WO2003/084570；WO2005/035586；WO2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人，J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能夠生產去岩藻糖化的抗體的細胞系的例子包含，缺乏蛋白質岩藻糖化的Lec13CHO細胞(Ripka等人，Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美國專利公開號2003/0157108，Presta,L；及WO2004/056312，Adams等人，特別是在實施例11)，以及敲除(knockout)細胞系，像是α-1,6-岩藻糖轉移酶(alpha-1,6-fucosyltransferase)基因、FUT8、敲除CHO細胞(請參照，例如，Yamane-Ohnuki等人，Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.等人，Biotechnol.Bioeng.,94(4)：680-688(2006)；及WO2003/085107)。
進一步提供具有等分(bisected)寡糖的抗體變異體，例如，其中附著至抗體Fc區的雙末端寡糖被GIcNAc平分。此類抗體變異體可具有降低的岩藻糖化及/或改善的ADCC功能。此類抗體變異體的例子描述於，例如WO2003/011878(Jean-Mairet等人)；美國專利號6,602,684(Umana等人)；US 2005/0123546(Umana等人)及Ferrara等人，Biotechnology and Bioengineering,93(5)：851-861(2006)。亦提供了在附著至Fc區的寡糖中具有至少一個半乳糖殘基的抗體變異體。此種抗體變異體可具有改善的CDC功能。此種抗體變異體描述於，例如，WO1997/30087(Patel等人)；WO1998/58964(Raju,S)；及WO1999/22764(Raju,S)。
在一些特定實施例中，包含本文所述Fc區的抗體變異體能夠與FcγRIII結合。在一些特定實施例中，相較於包含人類野生型IgG1 Fc區的另外的相同抗體，包含本文所述Fc區的抗體變異體在人類效應子細胞的存在下具有ADCC活性，或在人類效應子細胞的存在下具有增加的ADCC活性。
(x)Fc區變異體
在一些特定實施例中，可將一或多個胺基酸修飾導入本文提供的抗體的Fc區中，從而產生Fc區變異體。Fc區變異體可包含人類Fc區序列(例如，人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)，其包含胺基酸修飾(例如，取代)於一或多個胺基酸位置。
在一些特定實施例中，本發明設想具有一些但並非全部效應子功能的抗體變異體，這使得其為用於應用的理想候選者，所述應用中抗體的體內半衰期為重要的，然而特定效應子功能(例如補體及ADCC)為不必要或有害的。可進行體外及/或體內細胞毒性測定法以確認CDC及/或ADCC活性的降低/耗盡。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析法以確保抗體 缺少FcγR結合(因此可能缺少ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。調節ADCC的主要細胞，NK細胞，僅表達FcγRIII，而單核細胞則表達FcγRI、FcγRII及FcγRIII。造血細胞上的FcR表達總結於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)第464頁的表3中。用於評估感興趣的分子的ADCC活性的體外測定法的非限定的例子，描述於美國專利號5,500,362(請參照，例如，Hellstrom,I.等人，Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人，Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；美國專利號5,821,337(請參照，Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))。或者，可採用非放射性測定法(請參照，例如，流式細胞術的ACTITM非放射性細胞毒性測定法(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA；及CytoTox 96®非放射性細胞毒性測定法(Promega,Madison,WI))。對於此類測定法有用的效應子細胞包含周邊血液單核細胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)及自然殺手(Natural Killer，NK)細胞。替代地、或額外地，感興趣的分子的ADCC活性可在體內評估，例如，在動物模型中，如Clynes等人，Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 95：652-656(1998)中所揭示。亦可進行Clq結合分析法以確定抗體不能結合Clq並因此缺少CDC活性。請參照，例如，WO2006/029879及WO2005/100402中的Clq及C3c結合ELISA。為了評估補體活化，可進行CDC測定法(請參照，例如，Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101：1045-1052(2003)；及 Cragg,M.S.及M.J.Glennie，Blood 103：2738-2743(2004))。FcRn結合及體內清除/半衰期測定亦可使用所屬技術領域已知的方法進行(請參照，例如，Petkova,S.B.等人，Int'l.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。
具有降低的效應子功能的抗體包含在Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中的一或多個具有取代的那些抗體(美國專利號6,737,056)。此類Fc突變體包含在胺基酸位置265、269、270、297及327中的兩個或多個具有取代的Fc突變體，包含具有殘基265及297取代為丙胺酸的所謂的“DANA”Fc突變體(美國專利號7,332,581)。
對FcR具有改善或減弱的結合的特定抗體變異體已描述於(請參照，例如，美國專利號6,737,056；WO2004/056312及Shields等人，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001))。
在一些特定實施例中，抗體變異體包含Fc區，其具有改善ADCC的一個或多個胺基酸取代，例如，在Fc區的位置298、333及/或334(殘基的EU編號)的取代。在一示例性實施例中，抗體包含下列胺基酸取代於其Fc區：S298A、E333A及K334A。
在一些實施例中，在Fc區域中形成改變，其導致改變的(即，改善或減弱的)Clq結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，例如，如美國專利號6,194,551、WO99/51642及Idusogie等人，J.Immunol.164：4178-4184(2000)所述。
對新生兒Fc受體(neonatal Fc receptor，FcRn)具 有增加的半衰期及改善的結合的抗體描述於US2005/0014934(Hinton等人)，所述新生兒Fc受體是負責將母體IgG傳送至胎兒(Guyer等人，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol.24：249(1994))。那些抗體包含具有一或多個取代於其中的Fc區，其改善Fc區對FcRn的結合。此類Fc變異體包含在Fc區殘基：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434的一或多個具有取代的那些變異體，例如Fc區殘基434的取代(美國專利號7,371,826)。關於Fc區變異體的其它例子，請亦參照Duncan & Winter，Nature 322：738-40(1988)；美國專利號5,648,260；美國專利號5,624,821；及WO94/29351。
(xi)抗體衍生物
本發明的抗體可進一步經修飾，以包含所屬技術領域已知且易於取得的額外非蛋白質(nonproteinaceous)部分。在一些特定實施例中，適於抗體的衍生化(derivatization)的部分為水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限定的例子包含但不限於，聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)、乙二醇(ethylene glycol)/丙二醇(propylene glycol)的共聚物、羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose)、聚葡萄糖(dextran)、聚乙烯醇(polyvinyl alcohol)、聚乙烯吡咯啶酮(polyvinyl pyrrolidone)、聚-1,3-二氧戊環(poly-1,3-dioxolane)、聚-1,3,6-三
Figure 106108296-A0202-12-0115-98
(poly-1,3,6-trioxane)、乙烯(ethylene)/順丁烯二酸酐(maleic anhydride)共聚物、聚胺基酸(同聚物或隨機共聚物)，及聚葡萄 糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇(poly(n-vinyl pyrrolidone)polyethylene glycol)、聚丙二醇(polypropylene glycol)同聚物、聚環氧丙烷(polypropylene oxide)/環氧乙烷(ethylene oxide)共聚物、聚氧乙烷化多元醇(polyoxyethylated polyol)(例如，甘油)、聚乙烯醇(polyvinyl alcohol)及其混合物。聚乙二醇丙醛(polyethylene glycol propionaldehyde)可在生產中具有優勢，由於其在水中的穩定性。聚合物可具有任一分子量，且可為分支或無分支的。附著於抗體的聚合物的數目可改變，且如果多於一個聚合物附著，它們可為相同或不同的分子。一般而言，用於衍生化的聚合物的數量及/或類型可根據以下決定，包含但不限於，考慮待改善的抗體的特別特性或功能、抗體衍生物是否將在定義的條件下用於療法中等。
(xii)載體、宿主細胞及重組方法
亦可使用重組方法產生抗體。為了抗抗原抗體(anti-antigen antibody)的重組生產，編碼抗體的核酸被分離且插入至可複製的載體(replicable vector)中，用於進一步克隆(DNA的擴增)或用於表達。編碼抗體的DNA可容易地利用常規方法進行分離及定序(例如，使用能夠特異性結合編碼抗體的重鏈及輕鏈的基因的寡核苷酸探針)。許多載體為可用的。載體組成通常包含但不限於，下述的一或多者：訊號序列、複製起始點(origin of replication)、一或多個標記基因(marker gene)、增強子元件(enhancer element)、啟動子及轉錄終止序列。
(a)訊號序列成分
本發明的抗體不僅可直接地，且亦可與異源多肽 作為融合多肽重組產生，所述異源多肽較佳為在成熟蛋白質或多肽的N端具有特異性切割位點的訊號序列或其它多肽。選擇的異源訊號序列較佳為被宿主細胞辨識及處理(例如，由訊號肽酶(signal peptidase)切割)的異源訊號序列。對於無法辨識及處理天然抗體訊號序列的原核宿主細胞，訊號序列被原核訊號序列取代，所述原核訊號序列擇自於，例如，鹼性磷酸酶、青黴素酶(penicillinas)、lpp或熱穩定腸毒素II前導物(enterotoxin II leader)的群組。對於酵母菌分泌，天然訊號序列可被，例如，酵母菌轉化酶前導物(yeast invertase leader)、因子前導物(包含酵母菌屬(Saccharomyces)及克魯維酵母菌屬(Kluyveromyces)α-因子引導物)或酸性磷酸酶前導物、白色念珠菌葡糖澱粉酶前導物(C.albicans glucoamylase leader)或WO90/13646中描述的訊號取代。在哺乳動物細胞表達中，哺乳動物訊號序列以及病毒分泌的前導物，例如，單純疱疹病毒(herpes simplex)gD信號為可用的。
(b)複製起始點
表達及克隆載體均包含可使載體於一或多個選擇的宿主細胞中複製的核酸序列。一般而言，在克隆載體中，此序列為使得載體可獨立於宿主染色體DNA複製的序列，且包含複製的起始點或自主複製的序列。此種序列對於多種細菌、酵母菌及病毒為習知的。來自質體pBR322的複製起始點適用於大多數的革蘭氏陰性菌(Gram-negative bacteria)，2μ，質體起始點適用於酵母菌，以及多種病毒起始點(SV40、多瘤病毒(polyoma)、腺病毒(adenovirus)、VSV或BPV)可用於哺乳動物 細胞中的克隆載體。一般而言，哺乳動物表達載體不需要複製起始點成分(SV40起始點通常被使用，僅因其包含早期啟動子)。
(c)選擇基因成分
表達及克隆載體可包含選擇基因，亦稱為選擇性標記(selectable marker.)。一般選擇性基因編碼為蛋白質，其(a)賦予對抗生素或其它毒素的抗性，所述抗生素或其它毒素例如，氨芐青黴素(ampicillin)、新黴素(neomycin)、甲氨蝶呤(methotrexate)或四環素(tetracycline)，(b)補充營養缺陷，或(c)提供複雜基質(media)不可得的關鍵營養物質，例如，編碼芽孢桿菌(Bacilli)的D-丙胺酸消旋酶(racemase)。
選擇方案的一例子利用藥物以阻滯(arrest)宿主細胞的生長。以異源基因成功轉化的那些細胞產生賦予藥物抗性的蛋白質，因而於選擇制度(regimen)中生存。此類顯性選擇的例子使用藥物新黴素、黴酚酸(mycophenolic acid)及潮黴素(hygromycin)。
適於哺乳動物細胞的選擇性標記的另一例子為那些能夠辨識有能力攝取編碼抗體的核酸的細胞的選擇性標記，例如DHFR、谷氨醯胺合成酶(glutamine synthetase，GS)、胸苷激酶(thymidine kinase)、金屬硫蛋白(metallothionein)-I及-II(較佳為靈長類金屬硫蛋白基因)、腺苷脫氨酶(adenosine deaminase)、鳥氨酸脫羧酶(ornithine decarboxylase)等。
舉例而言，藉由培養轉化細胞(transformant)於含有甲氨蝶呤(methotrexate，Mtx)(DHFR的競爭性拮抗劑)的培 養基中，辨識出經DHFR基因轉化的細胞。在這些條件下，DHFR基因與任一其它共轉化的(co-transformed)核酸一起擴增。可使用內源性DHFR活性缺陷的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞系(例如，ATCC CRL-9096)。
或者，可藉由培養轉化細胞於含有L-甲硫氨酸亞磺醯亞胺(L-methionine sulfoximine，Msx)(GS的抑制劑)的培養基中，辨識出經GS基因轉化的細胞。在這些條件下，GS基因與任一其它共轉化的核酸一起擴增。GS選擇/擴增系統可與上述DHFR選擇/擴增系統組合使用。
或者，可藉由培養細胞在含有針對選擇性標記的選擇劑(例如，胺基糖苷類抗生素，如卡那黴素(kanamycin)、新黴素或G418)的培養基中，選擇與DNA序列轉化或共轉化的宿主細胞(特別是包含內源DHFR的野生型宿主)，所述DNA序列編碼感興趣的抗體、野生型DHFR基因及另一選擇性標記，如胺基糖苷3’-磷酸轉移酶(aminoglycoside 3'-phosphotransferase，APH)。請參照，美國專利號4,965,199。
適用於酵母的選擇基因為存在於酵母質體YRp7中的trp 1基因(Stinchcomb等人，Nature,282：39(1979))。trp 1基因為缺乏於色胺酸中生長的能力的酵母菌突變株提供選擇性標記，所述酵母菌突變株例如為ATCC No.44076或PEP4-1，Jones,Genetics,85：12(1977)。酵母菌宿主細胞基因組中trp 1損傷(lesion)的存在接著提供了用於在缺少色胺酸的條件下生長以檢測轉化的有效環境。相似地，用攜帶Leu2基因的已知質粒補足Leu2缺陷型酵母菌株(ATCC 20,622或38, 626)。Leu2缺陷的酵母菌株(ATCC 20,622或38,626)藉由帶有Leu2基因的已知質粒補足。
此外，衍生自1.6μm環狀質體pKDl的載體可用於克魯維酵母菌屬酵母菌的轉化。或者，用於大規模生產重組小牛凝乳酶的表達系統已報導於K.lactis，Van den Berg，Bio/Technology,8：135(1990)。藉由克魯維酵母菌屬的工業用菌株分泌成熟重組人類血清白蛋白的穩定多拷貝(multi-copy)表達載體亦已揭示於Fleer等人，Bio/Technology,9：968-975(1991)。
(d)啟動子成分
表達及克隆載體通常包含可被宿主生物體辨識的啟動子，且可操作地(operably)連接至編碼抗體的核酸。適用於原核宿主的啟動子包含phoA啟動子、β-內酰胺酶(β-lactamase)及乳糖啟動子系統、鹼性磷酸酶啟動子、色胺酸(trp)啟動子系統及雜合啟動子(hybrid promoter)，如tac啟動子。然而，其它已知的細菌啟動子亦為合適的。用於細菌系統的啟動子也將包含可操作地連接至編碼抗體的DNA的Shine-Dalgarno(S.D.)序列。
真核細胞的啟動子序列為已知的。實際上，所有真核基因都具有富含AT的區，其位於轉錄起始的位點上游約25至30個鹼基處。在許多基因的轉錄起點上游70至80個鹼基處發現的另一種序列為CNCAAT區，其中N可為任一核苷酸。在大多數真核基因的3’端為AATAAA序列，其可能為對編碼序列的3’端添加聚腺苷酸尾(poly A tail)的訓號。這些序 列全部均合適地插入至真核表達載體。
適用於酵母菌宿主的啟動子序列的例子包含3-磷酸甘油酸激酶(3-phosphoglycerate kinase)或其它糖類分解酶(glycolytic enzyme)的啟動子，例如烯醇酶(enolase)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)、己糖激酶(hexokinase)、丙酮酸脫羧酶(pyruvate decarboxylase)、磷酸果糖激酶(phosphofructokinase)、葡萄糖-6-磷酸異構酶(glucose-6-phosphate isomerase)、3-磷酸甘油酸變位酶(3-phosphoglycerate mutase)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase)、三磷酸異構酶(triosephosphate isomerase)、磷酸葡萄糖異構酶(phosphoglucose isomerase)及葡糖激酶(glucokinase)。
其它酵母啟動子，具有藉由生長條件控制轉錄的額外優點的誘導型啟動子，為醇脫氫酶2(alcohol dehydrogenase 2)、異細胞色素C(isocytochrome C)、酸性磷酸酶、與氮代謝有關的降解酶、金屬硫蛋白(metallothionei)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)及負責麥芽糖和半乳糖利用的酶的啟動子區。適用於酵母菌表達的載體及啟動子進一步描述於EP 73,657。酵母菌增強子亦可有利地與酵母菌啟動子一起使用。
在哺乳動物宿主細胞中由載體轉錄的抗體可受到控制，例如，藉由從病毒的基因組取得的啟動子，所述病毒如多瘤病毒(polyoma virus)、禽痘病毒(fowlpox viru)、腺病毒(adenovirus)(如腺病毒2)、牛乳頭瘤病毒(bovine papilloma virus)、禽類肉瘤病毒(avian sarcoma virus)、巨細胞病毒 (cytomegalovirus)、逆轉錄病毒(retrovirus)、B肝病毒(hepatitis-B virus)、猿病毒40(Simian Virus 40，SV40)，或從異源哺乳動物啟動子，例如，肌動蛋白啟動子或免疫球蛋白啟動子，從熱休克啟動子，只要這類啟動子與宿主細胞系統相容即可。
方便地以SV40限制性片段的形式獲得SV40病毒的早期和晚期啟動子，所述片段亦包含SV40病毒的複製起始點。方便地以HindIII E限制性片段的形式獲得人類巨細胞病毒的即時早期啟動子。使用牛乳頭瘤病毒作為載體以在哺乳動物宿主中表達DNA的系統，揭示於美國專利號4,419,446。此系統的修飾描述於美國專利號4,601,978。在來自單純疱疹病毒的胸苷激酶啟動子的控制下，於小鼠細胞中表達人類β-干擾素cDNA，亦可參照Reyes等人，Nature 297：598-601(1982)。或者，可使用勞氏肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus)長末端重複序列作為啟動子。
(e)增強子元件成分
藉由高等真核生物編碼本發明的抗體的DNA的轉錄，通常藉由將增強子序列插入於載體而增加。目前已知許多增強子序列目前已知來自哺乳動物基因(珠蛋白(globin)、彈性蛋白酶(elastase)、清蛋白(albumin)、α-甲胎蛋白(α-fetoprotein)及胰島素)。然而，一般而言，會使用來自真核細胞病毒的增強子。例子包含在複製起始點晚期側上的SV40增強子(bp 100-270)、巨細胞病毒早期啟動子增強子、在複製起始點晚期側上的多瘤病毒增強子及腺病毒增強子。關於活化真核啟動子 的增強元件，請參見Yaniv，Nature 297：17-18(1982)。增強子可被剪接至載體位於抗體編碼序列的5’或3’的位置，但較佳位於來自啟動子的5’位點。
(f)轉錄終止成分
用於真核宿主細胞(酵母、真菌、昆蟲、植物、動物、人類或來自其它多細胞生物的有核細胞)的表達載體也將含有轉錄終止及用於穩定mRNA所需的序列。此種序列通常可從真核或病毒DNA或cDNA的5’以及偶爾從3’的非轉譯區取得。這些區域包含核苷酸片段，其轉錄為mRNA編碼的抗體的非轉譯部分中的多腺苷酸化片段。一種有用的轉錄終止成分為牛生長激素多聚腺苷酸化區。請參照WO94/11026及於其中揭示的表達載體。
(g)宿主細胞的選擇及轉化(transformation)
適於克隆或表達本文載體中的DNA的宿主細胞為上述的原核生物、酵母菌或高等真核生物細胞。適於此目的的原核生物包含真細菌(eubacteria)，如革蘭氏陰性生物體或革蘭氏陽性生物體，例如，腸桿菌科(Enterobacteriaceae)，如埃希氏菌屬(Escherichia)，例如，大腸桿菌(E.coli)、腸桿菌屬(Enterobacter)、歐文氏菌屬(Erwinia)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、變形菌屬(Proteus)、沙門氏菌屬(Salmonella)，例如，鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)、沙雷氏菌屬(Serratia)，例如，黏質沙雷氏菌(Serratia marcescans)、志賀氏菌屬(Shigella)，以及芽孢桿菌屬(Bacilli)，如枯草芽孢桿菌(B.subtilis)及地衣芽抱桿菌(B.licheniformis)(例如，1989年4月 12日公告的DD 266,710中揭示的地衣芽孢桿菌41P)、假單胞菌屬(Pseudomonas)，如銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)、及鏈黴菌屬(Streptomyces)。一較佳的大腸桿菌克隆宿主為大腸桿菌294(ATCC 31,446)，儘管如大腸桿菌B、大腸桿菌X1776(ATCC 31,537)及大腸桿菌W3110(ATCC 27,325)的其它菌株亦為合適的。這些例子為例示性，而非限制性的。
全長抗體、抗體融合蛋白及抗體片段可於細菌中產生，特別是不需要糖基化及Fc效應子功能時，例如當治療性抗體與細胞毒性劑(例如，毒素)偶聯時，其本身顯示腫瘤細胞破壞的有效性。全長抗體於循環中具有較長的半衰期。於大腸桿菌中的生產較快且較具成本效益。抗體片段及多肽於細菌中的表達，請參照，例如，美國專利號5,648,237(Carter等人)、美國專利號5,789,199(Joly等人)、美國專利號5,840,523(Simmons等人)，其描述用於最適化表達及分泌的轉譯起始區(translation initiation region，TIR)及訊號序列。亦請參照，Charlton，Methods in Molecular Biology，Vol.248(B.K.C.Lo編輯，Humana Press,Totowa,N.J.,2003)，pp.245-254，其描述抗體片段於大腸桿菌的表達。在表達之後，抗體可從可溶性級分中的大腸桿菌細胞糊(cell paste)中分離且可進行純化，例如，藉由蛋白質A或G管柱，根據同型(isotype)。最終純化可以類似於純化，例如CHO細胞中表達的抗體的方法進行。
除了原核生物以外，真核微生物如絲狀真菌(filamentous fungi)或酵母菌亦為編碼抗體的載體的合適克隆或表達宿主。釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或常見的麵 包酵母，為低等真核宿主微生物之中最常使用的。然而，多種其它屬(genera)、種及菌株於本文中為通常可取得且有用的，如粟酒裂殖糖酵母(Schizosaccharomyce pombe)；克魯維酵母菌屬(Kluyveromyces)宿主如，例如，乳酸克魯維酵母(K.lactis)、脆壁克魯維酵母(K.fragi1is)(ATCC 12,424)、保加利亞克魯維酵母(K.bulgaricus)(ATCC 16,045)、威克克魯維酵母(K.wickeramii)(ATCC 24,178)、K.waltii(ATCC 56,500)、果蠅克魯維酵母(K.drosophilarum)(ATCC 36,906)、耐熱克魯維酵母(K.thermotolerans)及馬克思克魯維酵母(K.marxianus)；亞羅酵母菌屬(yarrowia)(EP 402,226)；巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)(EP183,070)；假絲酵母屬(Candida)；瑞氏木霉(Trichoderma reesia)(EP 244,234)；粉色麵包黴菌(Neurospora crassa)；許旺酵母菌屬(Schwanniomyces)，如西方許旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)；及絲狀真菌如，例如，鏈孢黴屬(Neurospora)、青黴屬(Penicillium)、彎頸黴屬(Tolypocladium)及曲黴屬(Aspergillus)宿主，如構巢曲黴(A.nidulans)及黑曲黴(A.niger)。關於討論酵母菌及絲狀真菌用於治療性蛋白質生產的綜述，請參照，例如Gerngross，Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)。
可選擇某些真菌及酵母菌株，其中糖基化途徑已“人源化”，導致產生具有部分或完全的人類糖基化模式的抗體。請參照，例如Li等人，Nat.Biotech.24：210-215(2006)(描述巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)中糖基化途徑的人源化)；及Gerngross等人，supra。
適於表達糖基化抗體的宿主細胞亦可衍生自多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞的例子包含植物及昆蟲細胞。已鑑定出許多桿狀病毒株及變異體體以及相應許可的昆蟲宿主細胞，來自例如草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)(毛蟲)、埃及伊蚊(Aedesaegypti)(蚊子)、白紋伊蚊(Aedes albopictus)(蚊子)、黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)(果蠅)及家蟬(Bombyx mori)等宿主。用於轉染(transfection)的多種病毒株為公眾可取得的，例如，苜宿銀紋夜蛾(Autographa californica)NPV的L-1變異體及家蠶(Bombyx mori)NPV的Bm-5株，且此類病毒可依本發明作為本文中的病毒，特別是用於草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞的轉染。
亦可利用棉、玉米、馬鈴薯、大豆、矮牽牛(petunia)、番茄、浮萍(Leninaceae)、蓿苜(M.truncatula)及煙草的植物細胞培養物作為宿主。請參照，例如，美國專利號5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978及6,417,429(描述用於在基因轉殖(transgenic)植物中產生抗體的PLANTIBODIESTM技術)。
亦可使用脊椎動物細胞作用宿主，且脊椎動物細胞在培養(組織培養)中的增殖已成為常規程序。有用的哺乳動物宿主細胞系的例子為被SV40轉化的猴腎CV1系(COS-7，ATCC CRL 1651)；人類胚腎系(293或用於在懸浮培養中生長而亞克隆的293細胞，Graham等人，J.Gen Virol.36：59(1977))；幼倉鼠腎細胞(BHK，ATCC CCL 10)；小鼠塞爾托利氏(sertoli)細胞(TM4，Mather，Biol.Reprod.23：243-251 (1980))；猴腎細胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人類宮頸癌細胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬腎細胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛大鼠(buffalo rat)肝細胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人類肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人類肝細胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI細胞(Mather等人，Annals NY.Acad.Sci.383：44-68(1982))；MRC 5細胞；FS4細胞；及人類肝癌細胞系(Hep G2)。其它有用的哺乳動物宿主細胞系包含中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包含DHFR-CHO細胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；及骨髓瘤細胞系，如NS0及Sp2/0。關於適用於抗體生產的特定哺乳動物宿主細胞系的綜述，請參照，例如Yazaki及Wu，Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo編輯，Humana Press,Totowa,N.J.,2003)，pp.255-268。
宿主細胞是以上述用於產生抗體的表達或克隆載體被轉化，且為了誘導啟動子、選擇轉化細胞(transformant)或擴增編碼期望序列的基因，在適當修改的常規營養培養基中進行培養。
(h)培養宿主細胞
用於產生本發明抗體的宿主細胞可培養於各種培養基中。市售的培養基，如Ham's F10(Sigma)、Minimal Essential Medium((MEM)，(Sigma)、RPMI-1640(Sigma)及Dulbecco's Modified Eagle's Medium((DMEM)，Sigma)適於培養宿主細胞。此外，可以使用下列文獻中描述的任一培養基作 為宿主細胞的培養基：Ham等人，Meth.Enz.58：44(1979)、Barnes等人，Anal.Biochem.102：255(1980)、美國專利號4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655；或5,122,469；WO90/03430；WO87/00195；或美國專利Re.30,985。這些培養基的任一者可根據需要補充激素及/或其它生長因子(如胰島素、運鐵蛋白(transferrin)或表皮生長因子)、鹽類(如氯化鈉、鈣、鎂及磷酸鹽)、緩衝劑(如HEPES)、核苷酸(如腺苷及胸苷)、抗生素(如GENTAMYCINTM藥物)、痕量元素(trace element)(定義為通常以微摩爾範圍的終濃度存在的無機化合物)及葡萄糖或等效能源。亦可包含適當濃度的任一其它必需補充物，其為所屬技術領域具有通常知識者習知的。培養條件，如溫度、pH等，為先前為表達而選擇用於宿主細胞的條件，且對於普通技術人員而言為顯然的。
(xiii)抗體的純化
在使用重組技術時，可在細胞內、在周質空間(periplasmic space)中產生抗體，或直接地分泌至培養基中。若為在細胞內產生抗體，那麼作為第一步，例如，藉由離心或超過濾去除宿主細胞或裂解片段的顆粒碎片(particulate debris)。Carter等人，Bio/Technology 10：163-167(1992)描述用於分離分泌至大腸桿菌周質空間的抗體的方法。簡言之，在乙酸鈉(pH 3.5)、EDTA及苯甲基磺醯氟(phenylmethylsulfonylfluoride，PMSF)的存在下，使細胞糊解凍約30分鐘。可藉由離心除去細胞碎片。在抗體分泌至培養基的情況中，來自這種表達系統的上清液通常先利用市售的蛋白質濃縮過濾器進行濃縮，例 如，Amicon或Millipore Pellicon超過濾單元。在上述任一步驟中，可包含如PMSF的蛋白酶抑制劑以抑制蛋白水解，且可包含抗生素以防止外來污染物的生長。
從細胞製備的抗體組成物可使用，例如羥磷灰石層析(hydroxylapatite chromatography)、疏水交互作用層析、膠體電泳、透析及親和性層析進行純化，其中親和性層析為是典型較佳的純化步驟之一。蛋白質A作為親和性配體的適宜性取決於抗體中存在的任一免疫球蛋白Fc域的種類及同型。蛋白質A可用於純化以人類γ1、γ2或γ4重鏈為基礎的抗體(Lindmark 等人，J.Immunol.Meth.62：1-13(1983))。蛋白質G被推薦用於所有小鼠同型及人類γ3(Guss等人，EMBO J.5：15671575(1986))。親和配體所附著的基質最常用的為瓊脂糖(agarose)，但亦可使用其它基質。物理穩定的基質例如可控制孔徑的玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯(poly(styrenedivinyl)benzene)可達到比瓊脂糖更快的流速及更短的處理時間。在抗體包含CH3結構域的情況下，可使用Bakerbond ABXTM樹脂(J.T.Baker，Phillipsburg,N.J.))進行純化。根據待回收的抗體，亦可使用其它蛋白質純化技術，例如離子交換管柱上的分級(fractionation)、乙醇沈澱、反相HPLC、硅土上的層析、肝素SEPHAROSETM上的層析、陰離子或陽離子交換樹脂(例如，聚天冬胺酸管柱)上的層析、層析聚焦(chromatofocusing)、SDS-PAGE及硫酸銨沈澱。
一般而言，用以製備用於研究、測試及臨床的抗體的各種方法在所屬技術領域已純熟，與上述方法一致及/或 為所屬技術領域具有通常知識者認定對於感感興趣的抗體為合適的。
C.選擇生物活性抗體
可對如上述製造的抗體進行一或多種“生物活性”測定，以選擇從治療角度具有有利特性的抗體或選擇保留抗體生物活性的製劑及條件。可測試抗體與其增加而對抗的抗原的結合能力。例如，可使用所屬技術領域已知的方法(如ELISA、西方墨點法等)。
舉例而言，對於抗PD-L1抗體，抗體的抗原結合性質可於偵測與PD-L1結合的能力的測定進行評估。在一些實施例中，抗體的結合可藉由，例如飽和結合；ELISA；及/或競爭性結合測定法(例如RIA’s)進行測定。亦可對抗體進行其它生物活性測定，例如，以評估其作為治療的有效性。此類測定法為所屬技術領域習知的，且取決於標靶抗原及抗體的預期用途。舉例而言，抗體對PD-L1阻斷的生物學作用可於CD8+T細胞、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus，LCMV)小鼠模型及/或同基因腫瘤模型(syngeneic tumor model)中進行評估，例如，描述於美國專利號8,217,149。
為了篩選與感興趣的抗原上的特定表位結合的抗體(例如，阻斷實施例的抗PD-L1抗體與PD-L1結合的抗體)，可實行常規的交叉阻斷(cross-blocking)測定法，如Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory，Ed Harlow及David Lane(1988)中所述。或者，可實行表位定位 (epitope mapping)以判斷抗體是否與感興趣的表位結合，例如，描述於Champe等人，J.Biol.Chem.270：1388-1394(1995)。
D.醫藥組成物及配方(formulation)
本文中亦提供醫藥組成物及配方，其包含PD-1軸結合拮抗劑及/或本文所述的抗體(例如抗PD-L1抗體或抗GPC3抗體)作為活性成分，以及醫藥上可接受的載體。
本文中描述的“組合”代表用於組合使用的活性成分的組合，且包含其中在施用時與分開的物質組合使用，或其中提供它們作為混合物(組合製劑)的兩種模式。
本文所述的醫藥組成物及配方可藉由混合具有所需期望純度的活性成分(例如，抗PD-L1抗體及/或抗GPC3抗體)與一或多種可選的醫藥上可接受的載體(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980))進行製備，以凍乾(lyophilized)配方或水溶液的形式。醫藥上可接受的載體通常在所使用的劑量及濃度對接受者無毒，且包含但不限於：緩衝劑，如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其它有機酸；抗氧化劑，包含抗壞血酸(ascorbic acid)及甲硫胺酸(methionine)；防腐劑(如氯化十八烷基二甲基苄銨(octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride)；氯化六羥季銨(hexamethonium chloride)；羥基氯苯胺(benzalkonium chloride)；苄索氯銨(benzethonium chloride)；苯酚(phenol)、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷酯(alkyl paraben)，如對羥基苯甲酸甲酯(methyl paraben)或對羥基苯甲酸丙酯(propyl paraben)；磷苯二酚(catechol)；間苯二酚(resorcinol)；環己醇(cyclohexanol)；3- 戊醇(3-pentanol)；及間甲酚(m-cresol))；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，如血清白蛋白(serum albumin)、明膠(gelatin)或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯啶酮(polyvinylpyrrolidone)；胺基酸，如甘胺酸、谷氨醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或賴胺酸；單糖、雙糖及其它糖類，包含葡萄糖、甘露糖或糊精(dextrin)；螯合劑(chelating agent)，如EDTA；糖類，如蔗糖、甘露醇(mannitol)、海藻糖(trehalose)或山梨醇(sorbitol)；鹽形成反離子(salt-forming counter-ion)，如鈉；金屬複合體(例如，Zn-蛋白質複合體)；及/或非離子表面活性劑，如聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)。本文中示例性醫藥上可接受的載體進一步包含藥物間質分散劑(insterstitial drug dispersion agents)，如可溶性中性-活性透明質酸酶糖蛋白(soluble neutral-active hyaluronidase glycoprotein，sHASEGP)，例如，人類可溶性PH-20透明質酸酶糖蛋白(hyaluronidase glycoprotein)，如rHuPH20(HYLENEX®，Baxter International,Inc.)。特定的示例性sHASEGP及使用方法，包含rHuPH20，描述於美國專利公開號2005/0260186及2006/0104968。在一態樣中，sHASEGP與一或多種額外的葡糖胺聚糖酶(glycosaminoglycanase)組合，例如與軟骨素酶(chondroitinase)組合。
示例性凍乾的抗體配方描述於美國專利號6,267,958。水溶液抗體配方包含描述於美國專利號6,171,586及WO 2006/044908中的那些配方，後者配方包含組胺酸-醋酸鹽緩衝液。在一些實施例中，本文中所述的抗PD-L1抗體是在 包含濃度約為60mg/mL的抗體、濃度約為20mM的組氨酸乙酸鹽、濃度約為120mM的蔗糖及濃度為0.04%(w/v)的聚山梨酯(例如，聚山梨醇酯20(polysorbate 20))的配方中，且配方具有約為5.8的pH。在一些實施例中，本文中所述的抗PD-L1抗體是在包含濃度約為125mg/mL的抗體、濃度約為20mM的組氨酸乙酸鹽、蔗糖濃度約為240mM以及濃度為0.02%(w/v)的聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20)的配方中，且配方具有約為5.5的pH。
本文中的配方亦可包含多於一種的活性成分，若為被治療的特定適應症所需，較佳為具有不會不利地影響彼此的互補活性的那些活性成分。此種活性成分以對於目的用途有效的量合適地組合存在。
可將活性成分截留於例如藉由凝聚(coacervation)技術或藉由介面聚合(interfacial polymerization)所製備的微膠囊中，例如，羥甲基纖維素(hydroxymethylcellulose)或明膠微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)(poly-(methylmethacylate))微膠囊，分別地，在膠狀藥物傳遞系統(例如，脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)中或在粗滴乳狀液(macroemulsion)中。此類技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition，Osol,A.編輯(1980)。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑的合適例子包含含有抗體的固體疏水聚合物的半滲透基質，所述基質呈現成形物品的形式，例如，薄膜或微膠囊。將被用於體內施用的配方通常為無菌的。無菌例如，可藉由通過無菌過濾膜的過濾 輕易地實現。
IV.治療的方法
本文提供的是用於治療、預防或延緩個體中癌症進展的方法，其包含對個體施用有效量的PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。在一些實施例中，在停治療止後，治療於個體中產生持續反應。本文所述方法可用於治療需要增強免疫原性(immunogenicity)的病症，例如，增加用於治療癌症的腫瘤免疫原性。本文亦提供用於提升具有癌症的個體中對抗腫瘤細胞的免疫反應之方法，其包含對個體施用有效量的PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。舉例而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含免疫細胞浸潤於腫瘤組織中，所述免疫細胞包含巨噬細胞及多核巨細胞。就另一例子而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含CD45+淋巴細胞、CD3+淋巴細胞及CD8+ T淋巴細胞於腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)中的增加。方法中可使用所屬技術領域已知或於本文中描述的任一PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。
在一些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體具有GPC3陽性癌症。在一些實施例中，GPC3陽性癌症為肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌或前列腺癌。在一些實施例中，肝癌為肝細胞癌(hepatocellular carcinorma)。在一些實施例中，乳癌為乳房癌(breast carcinoma)或乳腺癌(breast adenocarcinoma)。在一些實施例中，乳房癌為浸潤性乳腺管癌(invasive ductal carcinoma)。在一些實施例中，肺癌為肺腺癌。在一些實施例 中，結腸癌為結腸直腸腺癌。在一些實施例中，在個體中的癌細胞表達PD-L1。在一些實施例中，在個體中的癌細胞以可檢測的水平表達GPC3蛋白(例如，使用所屬領域已知方法為可檢測的)。
在一些實施例中，在以PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體組合治療之前，個體已接受GPC3標靶治療。在一些實施例中，GPC3標靶治療包含以一或多種小分子(例如，索拉非尼(sorafenib))進行治療。
在一些實施例中，本發明的組合療法包含PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體的施用。PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體可以所屬技術領域已知的任一合適方式進行施用。例如，可依序(在不同時間)或同時(在相同時間)施用PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體。在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑與抗GPC3抗體在分開的組成物中。在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑與抗GPC3抗體在相同的組成物中。
PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體可藉由相同的施用途徑或不同的施用途徑進行施用。在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑靜脈內地、肌內地、皮下地、局部地、口服地、經皮地、腹腔內地、眶內地、藉由植入、藉由吸入、鞘內地、心室內地或鼻內地施用。可施用有效量的PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體以預防或治療疾病。PD-1軸結合拮抗劑及/或抗GPC3抗體的合適劑量可根據待治療的疾病類型、PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體的類型、疾病的嚴重性及病程、個體的臨床狀況、個體的臨床病史及對治療的反應及主治醫師的判 斷決定。
作為一般建議，施用於人類的抗體的治療有效量將在約0.01至約50mg/kg患者體重的範圍，無論藉由一次或多次施用。在一些實施例中，舉例而言，使用的抗體為約0.01至約45mg/kg、約0.01至約40mg/kg、約0.01至約35mg/kg、約0.01至約30mg/kg、約0.01至約25mg/kg、約0.01至約20mg/kg、約0.01至約15mg/kg、約0.01至約10mg/kg、約0.01至約5mg/kg、或約0.01至約1mg/kg每日施用。在一些實施例中，抗體以15mg/kg施用。然而，其它劑量方案可為有用的。在一實施例中，本文中描述的抗PD-L1抗體是以約100mg、約200mg、約300mg、約400mg、約500mg、約600mg、約700mg、約800mg、約900mg、約1000mg、約1100mg、約1200mg、約1300mg或約1400mg的劑量於21日週期(21-day cycle)的第1天施用於人類。劑量可以單次劑量或多次劑量(例如，2或3次劑量)，如輸注給藥(infusion)。相較於單次治療，組合治療中施用的抗體的劑量可減少。此療法的進展可藉由常規技術容易地進行監測。
在一些實施例中，方法可進一步包含額外的治療。額外的治療可為放射治療、手術(例如，乳房腫瘤切除術(lumpectomy)及乳腺切除術(mastectomy))、化療、基因治療、DNA治療、病毒治療、RNA治療、免疫治療、骨髓移植、奈米療法(nanotherapy)、單株抗體治療或前述的組合。額外的治療可以是佐劑或新輔助(neoadjuvant)治療的形式。在一些實施例中，額外的治療為小分子酶抑制劑或抗轉移劑的施用。在一 些實施例中，額外的治療為副作用限制劑的施用(例如，意圖減輕治療副作用的發生及/或嚴重性的試劑，如抗噁心劑(anti-nausea agent)等)。在一些實施例中，額外的治療為放射治療。在一些實施例中，額外的治療為手術。在一些實施例中，額外的治療為放射治療及手術的組合。在一些實施例中，額外的治療為γ射線。在一些實施例中，額外的治療為標靶PI3K/AKT/mTOR途徑的治療、HSP90抑制劑、微管蛋白抑制劑、細胞凋亡抑制劑及/或化學預防劑。額外的治療可為上文所述的一或多個化療劑。
V.製品或套組
在本發明的另一實施例中，提供製品(article of manufacture)或套組，其包含PD-1軸結合拮抗劑及/或抗GPC3抗體。在一些實施例中，製品或套組進一步包含仿單(package insert)，其包含要求PD-1軸結合拮抗劑與抗GPC3抗體結合，以治療或延緩個體中的癌症進展或提升個體對抗腫瘤細胞的免疫反應之說明。例如，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含免疫細胞浸潤於腫瘤組織中，所述免疫細胞包含巨噬細胞及多核巨細胞。就另一例子而言，對抗腫瘤細胞的提升的免疫反應包含CD45+淋巴細胞、CD3+淋巴細胞及CD8+ T淋巴細胞於腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)中的增加。製品或套組可包含本文中描述的任一PD-1軸結合拮抗劑及/或抗GPC3抗體。
在一些實施例中，PD-1軸結合拮抗劑及抗GPC3抗體在相同的容器或不同的容器中。合適的容器包含，例如，瓶子、小瓶(vial)、袋子及注射器。容器可由各種材料如玻璃、 塑膠(如聚氯乙烯(polyvinyl chloride)或聚烯烴(polyolefin))或金屬合金(如不鏽鋼或耐酸合金(hastelloy))製成。在一些實施例中，容器裝有配方及於容器上或與容器結合的標籤，其可標示使用說明。製品或套組可進一步包含商業及用戶立場上所期望的其它材料，包含其它緩衝液、稀釋劑、過濾器、針、注射器及具有使用說明的仿單。在一些實施例中，製品進一步包含一或多種另外的試劑(例如，化學治療劑及抗腫瘤生成劑(anti-neoplastic agent))。一或多種試劑的合適的容器包含，例如，瓶子、小瓶、袋子及注射器。
本說明書被認為足以使所屬技術領域具有通常知識者能夠實施本發明。除了本文中顯示及描述的內容之外，從上述之敘述，本發明的各種修改對於所屬技術領域具有通常知識者將為顯然的，且落在所附申請專利範圍的範疇內。出於所有目的，本文中引用的所有文獻、專利及專利申請文件均通過引用而整體併入本文中。
實施例
[實施例1]
表達人類磷脂醯肌醇蛋白聚糖3(GPC3)的小鼠細胞系
以人類GPC3表達載體，pCXND2/hGPC3(FL)[Ishiguro T.等人，Cancer Res.2008；68：9832-9838]，轉染小鼠癌細胞系，Hepa1-6(ATCC編號CRL-1830)及CT26(ATCC編號CRL-2638)，其利用FuGENE6(Roche Diagnostics Corp)且以1mg/mL G418(Invitrogen)選擇。收集即使在G418的存在下仍生長的細胞，且藉由有限稀釋法(limiting dilution)分離克隆。使 用抗人類GPC3抗體，GC33[Ishiguro T.等人，Cancer Res.2008；68：9832-9838]，藉由FACS確認人類GPC3的表達。選擇代表性克隆並用於實驗。
[實施例2]
使用表達人類GPC3的Hepa1-6細胞系於同基因(syngenic)小鼠模型中的抗GPC3抗體的抗腫瘤活性
使用細胞培養瓶於培養器(設定在37℃及5% CO2)中培養Hepa1-6/hGPC3細胞。以胰蛋白酶使細胞從瓶分離，並以含有10%(v/v)FBS、0.6mg/mL G418的D MEM清洗。接著於D-MEM(2×108細胞/mL)中使細胞再懸浮(re-suspend)，且加入等體積的基質膠(Matrigel)。移植的細胞濃度為1×108細胞/mL。將細胞皮下地(subcutaneously)接種(inoculate)至每隻C57BL/6J小鼠的右側腹部(right flank)(Charles River Laboratories Japan)(1×107細胞/小鼠)。一旦可察覺的腫瘤建立，將動物隨機分至試驗組，使得研究開始時每組具有相似的平均腫瘤體積。在腫瘤接種之後，於第14、21及28天靜脈內地(intravenously)注射1或5mg/kg稀釋於PBS中的小鼠GC33抗人類GPC3單株抗體[WO2006/006693]或作為載體控制組(vehicle control)的PBS。相較於載體控制組，小鼠GC33顯示具有劑量依賴性的腫瘤生長抑制(第1圖)。
[實施例3]
使用表達人類GPC3的Hepa1-6細胞株於同基因小鼠模型中由抗GPC3抗體所誘導的病理變化
為了評估小鼠GC33治療對Hepa1-6腫瘤組織的改變，使 用在單次注射小鼠GC33抗體或載體控制組的3或7天後所分離的腫瘤組織於病理檢查。以4%多聚甲醛(parafolmaldehyde，PFA)固定腫瘤組織，且藉由AMeX方法[Suzuki等人，J Toxicol Sci.2002；27：165-172，Watanabe等人，J Toxicol Pathol.2015；28：43-49]將腫瘤組織包埋於石蠟(paraffin)中。以蘇木精及伊紅(hematoxylin and eosin，HE)或免疫組織化學地(immunohistochemically，IHC)對3個微米石蠟切片進行染色。IHC染色是根據標記的鏈黴親和素-生物素(streptavidin-biotin)(LSAB)方法(RTU辣根過氧化物酶鏈黴親和素(horseradish peroxidase streptavidin))實行。使用針對F4/80(鼠科巨噬細胞的標記抗原；A3-1，BioLegend)、PD-L1(小鼠B7-H1/PD-L1的標記抗原；AF1019，R&D系統)的抗體作為一級抗體。正訊號可藉由過氧化物酶-二胺基聯苯胺(peroxidase-diaminobenzidine)反應可視化，且切片以蘇木精對比染色(counterstain)。
藉由小鼠GC33的注射，在腫瘤組織的周邊區域觀察到免疫細胞浸潤及腫瘤細胞死亡。在由小鼠GC33處理的腫瘤組織觀察到腫瘤細胞死亡的區域中，亦觀察到F4/80陽性巨噬細胞的浸潤增加，而在載體控制組的腫瘤組織的基質區域中主要觀察到F4/80陽性細胞(第2A圖)。隨後，相較於載體控制組，小鼠GC33增加PD-L1表達，特別是於浸潤的免疫細胞，其表示可能可誘導PD-L1以抑制小鼠GC33的抗腫瘤活性(第2B圖)。
[實施例4]
使用表達人類GPC3的CT26細胞系於同基因小鼠模型中抗GPC3(GC33)與抗PD-L1抗體(10F.9G2)組合的抗腫瘤活性
為了評估抗GPC3或抗PD-L1單方療法或組合於小鼠CT26/hGPC3模型中的抗腫瘤活性，在皮下地接種1×106個CT26/hGPC3細胞之後的第3(早期治療模型)或15天(已建立模型)，注射小鼠GC33抗體及/或500g的抗小鼠PD-L1大鼠抗體、10F.9G2(自BioXCell購買)。在早期治療模型中，在第3、6、10及13天靜脈內地注射5或25mg/kg的小鼠GC33，並以相同時程注射500μg抗PD-L1抗體，10F.9G2，作為單一試劑或組合。在已建立模型中，在第15及18天靜脈內地注射5或25mg/kg的小鼠GC33，並以相同時程注射500μg的抗PD-L1抗體，10F.9G2，作為單一試劑或組合。
在兩種模型中，相較於單方療法，25mg kg的GC33及10F.9G2的組合顯示最有效的抗腫瘤活性(第3及4圖)。
[實施例5]
使用表達人類GPC3的Hepa1-6細胞系於同基因小鼠模型中抗GPC3(GC33)與抗PD-L1抗體(10F.9G2)組合的抗腫瘤活性
以1、5或25mg/kg的小鼠GC33抗體每週1次持續3周，或以200μg的抗小鼠PD-L1大鼠抗體，10F.9G2，隨後每週100μg持續2週，作為單一試劑或組合，靜脈內地注射帶有Hepa1-6的小鼠，如上所述。以HE染色切片進行病理檢查，所述HE染色切片以前述常規方法進行製備。對於IHC，使用表2所列的第一抗體於各標記，且藉由上述LSAB方法或ENV+方法可視化。對每組3個代表動物進行IHC。
Figure 106108296-A0202-12-0142-2
雖然小鼠GC33或10F.9G2與載體控制組相比之下，顯示腫瘤生長的抑制，但小鼠GC33及10F.9G2的組合顯示最強的抗腫瘤活性(第5A圖)。第3次注射後的第5天，對所有小鼠進行解剖檢驗(necropsy)，且對腫瘤組織進行病理學評估。在所檢驗的腫瘤組織中，在以25mg/kg的小鼠GC33與PD-L1抗體組合治療的所有小鼠，以及在以5mg/kg的小鼠GC33與PD-L1抗體組合治療的5隻小鼠的4隻中未觀察到可存活的腫瘤細胞(第5B圖)。
每個經治療的腫瘤組織的病理檢查顯示，相較於載體控制組，每個治療中F4/80陽性細胞的數量增加、PD-L1於多核巨細胞(MNGC)的表達增加以及CD3陽性細胞浸潤於腫瘤組織的增加，且CD206、CD163及CD11b陽性細胞的數量減少及PD-L1 於單核細胞(MNC)的表達減少。藉由組合，CD3陽性T細胞的浸潤比起單方療法增加，所述單方療法傾向與抗腫瘤活性相關(表3)。
Figure 106108296-A0202-12-0143-3
[實施例6]
使用表達人類GPC3的Hepa1-6細胞系於同基因小鼠模型中抗GPC3(GC33)與抗PD-L1抗體(6E11)組合的抗腫瘤活性
以每週1次或3次(q7d×3)將1mg/kg或5mg/kg的小鼠GC33，靜脈內地給予具有已建立的Hepa1-6/hGPC3腫瘤的C57BL/6J小鼠。以10mg/kg靜脈內地給予抗小鼠PD-L1 mAb(克隆6E11、mIgG2A、D265A及N297A；Genentech[WO2015/095418])1次，接續以5mg/kg每週兩次(q7d x 3)腹腔內給予。
相較於以單方療法治療，組合治療增加腫瘤生長的抑制 (第6A及B圖)。1mg/kg mGC33單一、5mg/kg mGC33單一、1mg/kg mGC33 q7d x 3、5mg/kg mGC33 q7d x 3、6E11 q7d x 3、6E11 q7d x 3+1mg/kg mGC33單一、6E11 q7d x 3+5mg/kg mGC33單一、及6E11 q7d x 3+1mg/kg mGC33 q7d x 3、6E11 q7d x 3+5mg/kg mGC33 q7d x 3最終測量的腫瘤生長抑制值分別為73%、84%、73%、80%、88%、85%、95%、88%及104%。5mg/kg mGC33 q7d x 3組中的1隻小鼠、1mg/kg mGC33 q7d x 3組中的1隻小鼠、5mg/kg mGC33單一組中的1隻小鼠、1mg/kg mGC33單一組中的2隻小鼠透過腫瘤進展被安樂死(euthanized)。在施用期間未觀察到小鼠死亡，且未觀察到嚴重的體重減輕(第6C圖)。
從組織病理學(histopathology)的結果，藉由mGC33、6E11及組合的施用，觀察到減少的腫瘤區域，其伴隨著壞死嚴重程度的增加或未具有壞死嚴重程度的增加(第7圖)。在6E11 q7d x 3+5mg/kg mGC33單一或q7d x 3組別中，在5隻小鼠中的1隻或2隻小鼠中觀察到病理學完全緩解(pathological complete response)(pCR；組織病理學切片上沒有腫瘤組織)。此外，在所有治療組中均發現具有免疫細胞浸潤的腫瘤壞死，所述免疫細胞包含巨噬細胞/多核巨細胞；損傷的嚴重程度依次為：mGC33 5mg/kg單一或q7d x 3、6E11 q7d x 3<mGC33 5mg/kg單一或q7d x 3+6E11 q7d x 3(第8A圖)。如第8B圖所示，於腫瘤塊體周邊觀察到的F4/80陽性細胞在組合的情況下最多，然後順序為mGC33或6E11 q7d x 3及載體(第8B圖)。在載體中，發現PD-L1陽性反應主要在腫瘤細胞的細胞質中強 度較弱。另一方面，在所有治療組中均發現免疫細胞中PD-L1陽性反應的強度增加(由弱至中等)及頻率增加，所述免疫細胞包含巨噬細胞/多核巨細胞(第8C圖)。
[實施例7]
使用表達人類GPC3的Hepa1-6細胞系於同基因小鼠模型中的細胞毒性T細胞的誘導
除了NK細胞及巨噬細胞的先天免疫之外，藉由細胞毒性T細胞誘導的後天性免疫對於殺死腫瘤細胞為重要的。為了評估治療的小鼠中後天性免疫的誘導，評估浸潤性T細胞進入腫瘤組織。將表達人類GPC3的Hepa1-6細胞皮下地接種於C57BL/6J小鼠中。一旦可察覺的腫瘤建立，小鼠被分配至12組；3組作為控制組，3組在腫瘤接種後的第13及20天以5mg/kg的小鼠GC33處理2次，3組在腫瘤接種後的第13天以10mg/kg的6E11處理且在腫瘤接種後的第20天以5mg/kg的6E11處理，或3組以小鼠GC33(在腫瘤接種後的第13及20天處理2次)與6E11(在腫瘤接種後的第13天以10mg/kg的6E11處理以及在腫瘤接種後的第20天以5mg/kg的6E11處理)的組合處理。在第2次施用後的第1、3及8天，分離腫瘤組織並切碎。在gentleMACSTM Octo Dissociator消化後，清洗細胞並用於流式細胞儀以量化CD45、CD3ε、CD4或CD8陽性腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)。
如第9圖所示，在以小鼠GC33或6E11處理的小鼠中，觀察到CD45+淋巴細胞、CD3ε+及CD8+T淋巴細胞的增加，但CD4+淋巴細胞未增加。與前述抗腫瘤活性相同，在小鼠 GC33及6E11的組合中，觀察到比每個單方療法強的淋巴細胞的誘導，所述淋巴細胞包含CD8陽性TIL。
產業利用性
本發明有助於改善PD-1軸結合拮抗劑或抗GPC3抗體的功效，藉由彼此組合，以及改善待治療患者的QOL，且可用於治療癌症，包含肝癌。
<110> 中外製藥股份有限公司(CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA) 美商建南德克公司(GENENTECH,INC.)
<120> 使用PD-1軸結合拮抗劑和抗GPC3抗體治療癌症的方法
<130> PCG-5046TW
<150> JP2016-051424
<151> 2016-03-15
<160> 55
<210> 1
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 1
Figure 106108296-A0305-02-0149-1
Figure 106108296-A0202-12-0148-5
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 2
Figure 106108296-A0202-12-0148-6
Figure 106108296-A0202-12-0149-7
<210> 3
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 3
Figure 106108296-A0202-12-0149-8
<210> 4
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 4
Figure 106108296-A0202-12-0149-9
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<220>
<221> 變異體
<222> 6
<223> Xaa=Asp或Gly
<400> 5
Figure 106108296-A0202-12-0150-10
<210> 6
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<220>
<221> 變異體
<222> 4
<223> Xaa=Ser或Leu
<220>
<221> 變異體
<222> 10
<223> Xaa=Thr或Ser
<400> 6
Figure 106108296-A0202-12-0150-11
<210> 7
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 7
Figure 106108296-A0202-12-0150-12
<210> 8
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 8
Figure 106108296-A0202-12-0151-13
<210> 9
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 9
Figure 106108296-A0202-12-0151-14
<210> 10
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 10
Figure 106108296-A0202-12-0151-15
<210> 11
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 11
Figure 106108296-A0202-12-0151-16
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<220>
<221> 變異體
<222> 5
<223> Xaa=Asp或Val
<220>
<221> 變異體
<222> 6
<223> Xaa=Val或Ile
<220>
<221> 變異體
<222> 7
<223> Xaa=Ser或Asn
<220>
<221> 變異體
<222> 9
<223> Xaa=Ala或Phe
<220>
<221> 變異體
<222> 10
<223> Xaa=Val或Leu
<400> 12
Figure 106108296-A0202-12-0152-17
<210> 13
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<220>
<221> 變異體
<222> 4
<223> Xaa=Phe或Thr
<220>
<221> 變異體
<222> 6
<223> Xaa=Tyr或Ala
<400> 13
Figure 106108296-A0202-12-0152-18
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<220>
<221> 變異體
<222> 3
<223> Xaa=Tyr,Gly,Phe或Ser
<220>
<221> 變異體
<222> 4
<223> Xaa=Leu,Tyr,Phe或Trp
<220>
<221> 變異體
<222> 5
<223> Xaa=Tvr,Asn,Ala,Thr,Gly,Phe或Ile
<220>
<221> 變異體
<222> 6
<223> Xaa=His,Val,Pro,Thr或Ile
<220>
<221> 變異體
<222> 8
<223> Xaa=Ala,Trp,Arg,Pro或Thr
<400> 14
Figure 106108296-A0202-12-0153-19
<210> 15
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 15
Figure 106108296-A0202-12-0153-20
<210> 16
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 16
Figure 106108296-A0202-12-0153-21
<210> 17
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 17
Figure 106108296-A0202-12-0153-22
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 18
Figure 106108296-A0202-12-0154-23
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 19
Figure 106108296-A0202-12-0154-24
<210> 20
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 20
Figure 106108296-A0202-12-0154-26
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 21
Figure 106108296-A0202-12-0154-27
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 22
Figure 106108296-A0202-12-0154-28
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 23
Figure 106108296-A0202-12-0155-29
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 24
Figure 106108296-A0202-12-0155-30
<210> 25
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 25
Figure 106108296-A0202-12-0155-31
<210> 26
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 26
Figure 106108296-A0202-12-0155-32
Figure 106108296-A0202-12-0156-33
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 27
Figure 106108296-A0202-12-0156-34
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 28
Figure 106108296-A0202-12-0156-35
<210> 29
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 29
Figure 106108296-A0202-12-0156-36
<210> 30
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 30
Figure 106108296-A0202-12-0157-37
<210> 31
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 31
Figure 106108296-A0202-12-0157-38
<210> 32
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 32
Figure 106108296-A0202-12-0157-39
Figure 106108296-A0202-12-0158-40
<210> 33
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 33
Figure 106108296-A0202-12-0158-41
Figure 106108296-A0202-12-0159-42
<210> 34
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 34
Figure 106108296-A0202-12-0159-43
<210> 35
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 35
Figure 106108296-A0202-12-0159-44
<210> 36
<211> 2
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 36
Figure 106108296-A0202-12-0159-45
<210> 37
<211> 16
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 37
Figure 106108296-A0202-12-0159-46
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 38
Figure 106108296-A0202-12-0159-47
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 39
Figure 106108296-A0202-12-0160-48
<210> 40
<211> 111
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 40
Figure 106108296-A0202-12-0160-49
<210> 41
<211> 112
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 41
Figure 106108296-A0202-12-0160-50
<210> 42
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 42
Figure 106108296-A0202-12-0161-51
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 43
Figure 106108296-A0202-12-0161-52
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 44
Figure 106108296-A0202-12-0161-53
<210> 45
<211> 16
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 45
Figure 106108296-A0202-12-0161-54
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 46
Figure 106108296-A0202-12-0161-55
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 47
Figure 106108296-A0202-12-0161-56
<210> 48
<211> 115
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 48
Figure 106108296-A0202-12-0162-57
<210> 49
<211> 112
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 49
Figure 106108296-A0202-12-0162-58
<210> 50
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 修飾的抗體片段
<400> 50
Figure 106108296-A0202-12-0162-59
Figure 106108296-A0202-12-0163-60
<210> 51
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 修飾的抗體片段
<400> 51
Figure 106108296-A0202-12-0163-61
<210> 52
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 修飾的抗體片段
<400> 52
Figure 106108296-A0202-12-0163-62
Figure 106108296-A0202-12-0164-63
<210> 53
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 修飾的抗體片段
<400> 53
Figure 106108296-A0202-12-0164-64
<210> 54
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 修飾的抗體片段
<400> 54
Figure 106108296-A0202-12-0164-65
<210> 55
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構建體
<400> 55
Figure 106108296-A0202-12-0165-66
Figure 106108296-A0202-12-0166-67

Claims (8)

  1. 一種抗GPC3抗體製備用於治療或延緩個體中癌症進展的醫藥組成物之用途，該醫藥組成物係與Atezolizumab組合使用。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中所述Atezolizumab包括一重鏈，其包含序列辨識號：19的HVR-H1序列、序列辨識號：20的HVR-H2序列及序列辨識號：21的HVR-H3序列；以及一輕鏈，其包含序列辨識號：22的HVR-L1序列、序列辨識號：23的HVR-L2序列及序列辨識號：24的HVR-L3序列。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中所述Atezolizumab包括一重鏈可變區，其包含序列辨識號：25或26的胺基酸序列；以及一輕鏈可變區，其包含序列辨識號：4的胺基酸序列。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之用途，其中該抗GPC3抗體包括一重鏈，其包含序列辨識號：34的HVR-H1序列、序列辨識號：35的HVR-H2序列及序列辨識號：36的HVR-H3序列；以及一輕鏈，其包含序列辨識號：37的HVR-L1序列、序列辨識號：38的HVR-L2序列及序列辨識號：39的HVR-L3序列。
  5. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之用途，其中該抗GPC3抗體能夠結合至一第二抗體可結合的抗原決定位，其中該第二抗體包括一重鏈，其包含序列辨識號：42的HVR-H1序列、序列辨識號：43的HVR-H2序列及序列 辨識號：44的HVR-H3序列；以及一輕鏈，其包含序列辨識號：45的HVR-L1序列、序列辨識號：46的HVR-L2序列及序列辨識號：47的HVR-L3序列。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗GPC3抗體為一人源化抗體。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該抗GPC3抗體包括一重鏈可變區，其包含序列辨識號：50的胺基酸序列；以及一輕鏈可變區，其包含序列辨識號：52的胺基酸序列。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該癌症擇自於肝癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宮內膜癌、結腸癌、腎癌、食道癌及前列腺癌所組成之群組。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW202248213A (zh) 2016-03-15 2022-12-16 日商中外製藥股份有限公司 使用pd-1軸結合拮抗劑和抗gpc3抗體治療癌症的方法
EP3684413A1 (en) * 2017-09-20 2020-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Dosage regimen for combination therapy using pd-1 axis binding antagonists and gpc3 targeting agent
WO2021152495A1 (en) * 2020-01-28 2021-08-05 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination treatments and uses and methods thereof
WO2023092099A1 (en) * 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070190599A1 (en) * 2004-07-09 2007-08-16 Kiyotaka Nakano Anti-glypican 3 antibody
WO2015112805A1 (en) * 2014-01-23 2015-07-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to pd-l1
US20150216970A1 (en) * 2013-07-16 2015-08-06 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and tigit inhibitors
WO2015142675A2 (en) * 2014-03-15 2015-09-24 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor

Family Cites Families (150)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
USRE30985E (en) 1978-01-01 1982-06-29 Serum-free cell culture media
US4419446A (en) 1980-12-31 1983-12-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector
NZ201705A (en) 1981-08-31 1986-03-14 Genentech Inc Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast
US4601978A (en) 1982-11-24 1986-07-22 The Regents Of The University Of California Mammalian metallothionein promoter system
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
DE68925971T2 (de) 1988-09-23 1996-09-05 Cetus Oncology Corp Zellenzuchtmedium für erhöhtes zellenwachstum, zur erhöhung der langlebigkeit und expression der produkte
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DE69120146T2 (de) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2246502T3 (es) 1990-08-29 2006-02-16 Genpharm International, Inc. Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
ES2206447T3 (es) 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
AU675929B2 (en) 1992-02-06 1997-02-27 Curis, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
CA2149329C (en) 1992-11-13 2008-07-15 Darrell R. Anderson Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
JPH08511420A (ja) 1993-06-16 1996-12-03 セルテック・セラピューテイクス・リミテッド 抗 体
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
ES2304786T3 (es) 1995-04-27 2008-10-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos anti-il-8 humanos, derivados a partir de xenoratones inmunizados.
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
AU729039C (en) 1996-08-30 2001-08-02 Upfront Chromatography A/S Isolation of immunoglobulins
DK1500329T3 (da) 1996-12-03 2012-07-09 Amgen Fremont Inc Humane antistoffer, der specifikt binder TNF-alfa
US20080318254A9 (en) 1997-03-10 2008-12-25 The Regents Of The University Of California PSCA antibodies and hybridomas producing them
US20020173629A1 (en) 1997-05-05 2002-11-21 Aya Jakobovits Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
DE69830315T2 (de) 1997-06-24 2006-02-02 Genentech Inc., San Francisco Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
ATE531812T1 (de) 1997-12-05 2011-11-15 Scripps Research Inst Humanisierung von nager-antikörpern
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
DE60039596D1 (de) 1999-03-30 2008-09-04 Japan Tobacco Inc Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikörpern
EP2275540B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
AU782626B2 (en) 1999-10-04 2005-08-18 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
EP1229125A4 (en) 1999-10-19 2005-06-01 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PRODUCING A POLYPEPTIDE
AU784983B2 (en) 1999-12-15 2006-08-17 Genentech Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
CA2424602C (en) 2000-10-06 2012-09-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-producing cell
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
JP3523245B1 (ja) 2000-11-30 2004-04-26 メダレックス，インコーポレーテッド ヒト抗体作製用トランスジェニック染色体導入齧歯動物
WO2002092017A2 (en) 2001-05-16 2002-11-21 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Human antipneumococcal antibodies from non-human animals
ATE407204T1 (de) 2001-06-22 2008-09-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Zellproliferationsinhibitoren mit anti-glypican-3-antikörper
NZ592087A (en) 2001-08-03 2012-11-30 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
JP4359503B2 (ja) 2001-08-23 2009-11-04 ゲンマブ エー／エス インターロイキン１５（ｉｌ−１５）に特異的なヒト抗体
ES2326964T3 (es) 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
ATE503829T1 (de) 2002-04-09 2011-04-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins
US7691568B2 (en) 2002-04-09 2010-04-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Antibody composition-containing medicament
AU2003236019A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
CA2481837A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
CA2482881C (en) 2002-05-23 2016-11-08 Sunnybrook And Women's College Health Sciences Centre Diagnosis of hepatocellular carcinoma
EP1513879B1 (en) 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
BRPI0314814C1 (pt) 2002-09-27 2021-07-27 Xencor Inc anticorpo compreendendo uma variante de fc
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
DE60332957D1 (de) 2002-12-16 2010-07-22 Genentech Inc Immunoglobulinvarianten und deren verwendungen
AU2004205631A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
CA2513308A1 (en) 2003-01-17 2004-08-05 Josef Michl Pancreatic cancer associated antigen, antibody thereto, and diagnostic and treatment methods
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
AU2004270103B2 (en) 2003-05-21 2012-02-23 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies against Bacillusanthracis protective antigen
US20080241884A1 (en) 2003-10-08 2008-10-02 Kenya Shitara Fused Protein Composition
AU2004280065A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
EA036531B1 (ru) 2003-11-05 2020-11-19 Роше Гликарт Аг Гуманизированное антитело типа ii к cd20 (варианты), фармацевтическая композиция, содержащая эти варианты антитела, и их применение
JPWO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2007-06-28 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物を含有する医薬
DE602005015542D1 (de) 2004-01-12 2009-09-03 Applied Molecular Evolution Varianten der fc-region
MXPA06011199A (es) 2004-03-31 2007-04-16 Genentech Inc Anticuerpos anti-tgf-beta humanizados.
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
CA2885854C (en) 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
EA012464B1 (ru) 2004-08-04 2009-10-30 Эпплайд Молекьюлар Эволюшн, Инк. Антитело против cd20 и его применение
AU2005277567A1 (en) 2004-08-16 2006-03-02 Medimmune, Llc Integrin antagonists with enhanced antibody dependent cell-mediated cytotoxicity activity
CA2577133A1 (en) 2004-08-19 2006-03-23 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
TWI468514B (zh) 2004-10-26 2015-01-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Sugar chain modified phosphatidylinositol glyphosyl 3 antibody
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
EP1871808A2 (en) 2005-03-31 2008-01-02 Xencor, Inc. Fc VARIANTS WITH OPTIMIZED PROPERTIES
CA2606102C (en) 2005-04-26 2014-09-30 Medimmune, Inc. Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
LT2439273T (lt) 2005-05-09 2019-05-10 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Žmogaus monokloniniai antikūnai prieš programuotos mirties 1(pd-1) baltymą, ir vėžio gydymo būdai, naudojant vien tik anti-pd-1 antikūnus arba derinyje su kitais imunoterapiniais vaistais
CN105330741B (zh) 2005-07-01 2023-01-31 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
SI2573114T1 (sl) 2005-08-10 2016-08-31 Macrogenics, Inc. Identifikacija in inženiring protiteles z variantnimi fc regijami in postopki za njih uporabo
EP1931709B1 (en) 2005-10-03 2016-12-07 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
US20070087005A1 (en) 2005-10-14 2007-04-19 Lazar Gregory A Anti-glypican-3 antibody
ES2577292T3 (es) 2005-11-07 2016-07-14 Genentech, Inc. Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso
US20070237764A1 (en) 2005-12-02 2007-10-11 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
CA2651567A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
WO2007137170A2 (en) 2006-05-20 2007-11-29 Seattle Genetics, Inc. Anti-glypican-3 antibody drug conjugates
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
WO2008092117A2 (en) 2007-01-25 2008-07-31 Xencor, Inc. Immunoglobulins with modifications in the fcr binding region
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
AU2008305851B2 (en) 2007-09-28 2014-12-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-glypican-3 antibody having improved kinetics in plasma
BRPI0907718A2 (pt) 2008-02-11 2017-06-13 Curetech Ltd método para tratar um tumor, método para melhorar a tolerabilidade a pelo menos um agente quimiterápico, método para aumentar a sobrevida de um indivíduo que tem um tumor, método para reduzir ou prevenir recidiva tumoral, uso de um anticorpo monoclonal humanizado ou seu fragmento e anticorpo monoclonal humanizado ou seu fragmento
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
CL2009000647A1 (es) * 2008-04-04 2010-06-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Composicion farmaceutica para tratar o prevenir cancer hepatico que comprende una combinacion de un agente quimioterapeutico y un anticuerpo anti-glipicano 3; agente para atenuar un efecto secundario que comprende dicho anticuerpo; metodo para tratar o prevenir un cancer hepatico de un sujeto.
CA2720124C (en) 2008-05-13 2015-07-21 Genentech, Inc. Analysis of antibody drug conjugates by bead-based affinity capture and mass spectrometry
US20110159023A1 (en) 2008-08-25 2011-06-30 Solomon Langermann Pd-1 antagonists and methods for treating infectious disease
SI2376535T1 (sl) 2008-12-09 2017-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Protitelesa anti-pd-l1 in njihova uporaba za izboljšanje funkcije celic t
NZ599405A (en) 2009-11-24 2014-09-26 Medimmune Ltd Targeted binding agents against b7-h1
JP2013512251A (ja) 2009-11-24 2013-04-11 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−ｌ１／ｐｄ−ｌ２の同時阻害
CN102180969B (zh) 2011-01-30 2013-04-10 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 抗肝癌活性单克隆抗体及其应用
TW201840336A (zh) * 2011-08-01 2018-11-16 美商建南德克公司 利用pd-1軸結合拮抗劑及mek抑制劑治療癌症之方法
KR101981873B1 (ko) 2011-11-28 2019-05-23 메르크 파텐트 게엠베하 항-ｐｄ-ｌ1 항체 및 그의 용도
TWI693073B (zh) 2012-12-21 2020-05-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑
SG11201602283UA (en) * 2013-09-27 2016-04-28 Genentech Inc Anti-pdl1 antibody formulations
US9388222B2 (en) * 2013-10-06 2016-07-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Modified Pseudomonas exotoxin A
EP3083692B1 (en) 2013-12-17 2020-02-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating her2-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-her2 antibodies
EP3166974A1 (en) * 2014-07-11 2017-05-17 Genentech, Inc. Anti-pd-l1 antibodies and diagnostic uses thereof
WO2017005771A1 (en) 2015-07-07 2017-01-12 Universite de Bordeaux Use of glypican-3-targeting micrornas for treating liver cancer
CN106397593B (zh) 2015-08-03 2019-09-10 科济生物医药（上海）有限公司 抗磷脂酰肌醇蛋白多糖-3的抗体及其应用
TW202248213A (zh) 2016-03-15 2022-12-16 日商中外製藥股份有限公司 使用pd-1軸結合拮抗劑和抗gpc3抗體治療癌症的方法
EP3551663A1 (en) 2016-12-12 2019-10-16 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-pd-l1 antibodies and antiandrogens

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070190599A1 (en) * 2004-07-09 2007-08-16 Kiyotaka Nakano Anti-glypican 3 antibody
US20150216970A1 (en) * 2013-07-16 2015-08-06 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and tigit inhibitors
WO2015112805A1 (en) * 2014-01-23 2015-07-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to pd-l1
WO2015142675A2 (en) * 2014-03-15 2015-09-24 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor

Also Published As

Publication number Publication date
EP3430054A1 (en) 2019-01-23
BR112018067923A2 (pt) 2019-02-05
JP2018516842A (ja) 2018-06-28
EP3430054B1 (en) 2021-12-29
PL3430054T3 (pl) 2022-05-23
CA3016552A1 (en) 2017-09-21
CN116196412A (zh) 2023-06-02
WO2017159699A1 (en) 2017-09-21
TW202248213A (zh) 2022-12-16
AU2017235097B2 (en) 2023-08-31
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