NO347800B1 - Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning - Google Patents

Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning Download PDF

Info

Publication number
NO347800B1
NO347800B1 NO20220904A NO20220904A NO347800B1 NO 347800 B1 NO347800 B1 NO 347800B1 NO 20220904 A NO20220904 A NO 20220904A NO 20220904 A NO20220904 A NO 20220904A NO 347800 B1 NO347800 B1 NO 347800B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
antibody
seq
cells
sequence
cell
Prior art date
Application number
NO20220904A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20220904A1 (no
Inventor
Peter Brünker
Claudia Ferrara
Tobias Suter
Ursula Püntener
Ekkehard Mössner
Pablo Umana
Original Assignee
Roche Glycart Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34572912&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO347800(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Publication of NO20220904A1 publication Critical patent/NO20220904A1/no
Application filed by Roche Glycart Ag filed Critical Roche Glycart Ag
Publication of NO347800B1 publication Critical patent/NO347800B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01144—Beta-1,4-mannosyl-glycoprotein 4-beta-N-acetylglucosaminyltransferase (2.4.1.144)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/866—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fab, fv, fc, heavy chain or light chain
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/867—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody produced via recombinant dna technology

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)

Description

[0001] Foreliggende oppfinnelse angår humanisert type II anti-CD20 antistoff og en ekspresjonsvektor omfattende et polynukleotid og en isolert vertscelle omfattende ekspresjonsvektoren. Oppfinnelsen angår også en fremgangsmåte for fremstilling av det humaniserte Type-II anti-CD20 antistoffet og en farmasøytisk sammensetning omfattende antistoffet og anvendelse av antistoffet.
Immunsystemet og anti-CD20-antistoffer
[0002] Immunsystemet hos virveldyr, innbefattende mennesker, består av en rekke organer og celletyper, som er blitt utviklet til nøyaktig og spesifikt å gjenkjenne, binde og ødelegge inntrengende fremmende mikroorganismer ("antigener"). Lymfocytter er avgjørende for fyllestgjørende funksjon av immunsystemet. Disse celler dannes i thymus, milt og benmarg (voksne) og representerer ca.30% av den totale mengde hvite blodlegemer som finnes i sirkulasjonssystemet hos voksne mennesker. Det er to hoved-subpopulasjoner av lymfocytter: T-celler og B-celler. T-celler er ansvarlige for cellemediert immunitet, mens B-celler er ansvarlige for antistoffdannelse (humoral immunitet). I en typisk immunrespons funksjonerer imidlertid T-celler og B-celler i gjensidig avhengighet av hverandre: T-celler aktiveres når T-cellereseptoren bindes til fragmenter av et antigen som er bundet til vevstypekompleks-("MHC")-glykoproteiner på overflaten av en antigen-presenterende celle; slik aktivering gir frigjøring av biologiske mediatorer ("interleukiner"), som stimulerer B-celler til å differensiere og danne antistoffer ("immunglobuliner") overfor antigenet.
[0003] Hver B-celle i verten uttrykker et antistoff av én spesiell type og spesifisitet, og forskjellige B-celler uttrykker antistoffer som er spesifikke for forskjellige antigener. B-celleproliferasjon og antistoffdannelse skyter fart som reaksjon på et fremmed antigen, og begge opphører typisk (eller opphører i det vesentlige) straks det fremmede antigen er blitt nøytralisert. Leilighetsvis vil imidlertid proliferasjon av en spesiell B-celler fortsette med uforminsket styrke; slik proliferasjon kan resultere i en krefttype som omtales som "B-cellelymfom".
[0004] Både T-celler og B-celler omfatter celleoverflateproteiner som kan anvendes som "markører" for differensiering og identifisering. Én slik human B-cellemarkør er det humane B-lymfocytt-begrensede differensieringsantigen Bp35, omtalt som "CD20". CD20 uttrykkes under tidlig pre-B-celleutvikling og vedvarer inntil plasmacelledifferensiering. Spesifikt kan CD20-molekylet regulere et trinn i aktiveringsprosessen som er nødvendig for cellesyklusinitiering og -differensiering, og uttrykkes vanligvis i meget høye nivåer på neoplastiske ("tumor"-) B-celler. På grunn av at CD20 er til stede i høye nivåer på "maligne" B-celler, dvs. B-celler hvis uforminskede proliferasjon kan føre til B-celle-lymfom, har CD20-overflateantigenet potensial til å tjene som en kandidat for "målsøking" av B-cellelymfomer.
[0005] Slik målsøking kan hovedsakelig generaliseres som følger: antistoffer som er spesifikke for CD20-overflateantigenet på B-celler, innføres i en pasient, for eksempel ved injeksjon. Disse anti-CD20-antistoffer bindes spesifikt til CD20-celleoverflateantigenet på (øyensynlig) både normale og maligne B-celler; anti-CD20-antistoffet som er bundet til CD20-overflateantigenet, kan føre til ødeleggelse og uttømming av neoplastiske B-celler. Dessuten kan kjemiske midler eller radioaktive merkesubstanser med potensial til å ødelegge tumoren konjugeres til anti-CD20-antistoffet slik at midlet spesifikt "avgis" til f.eks. de neoplastiske B-celler. Uansett fremgangsmåte er det et primært mål å ødelegge tumoren: den spesifikke fremgangsmåte kan bestemmes ved det spesielle anti-CD20-antistoff som anvendes, og således kan de tilgjengelige fremgangsmåter for målsøking av CD20-antigenet variere i betydelig grad.
[0006] Ukonjugerte monoklonale antistoffer (mAb) kan være anvendelige medisiner for behandling av kreft, som vist ved U.S. Food and Drug Administrations godkjennelse av Rituximab (Rituxan<TM>; IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA, og Genetech Inc., San Francisco, CA), for behandling av CD20-positiv B-celle, lavgradig eller follikulær ikke-Hodgkins lymfom, Trastuzumab (Herceptin<TM>; Genentech Inc.) for behandling av fremskreden brystkreft (Grillo-Lopez, A.-J., et al., Semin. Oncol. 26:66-73 (1999); Goldenberg, M. M., Clin. Ther.
21:309-18 (1999)), Gemtuzumab (Mylotarg<TM>, Celltech/Wyeth-Ayerst) for behandling av tilbakefall av myeloid leukemi, samt Alemtuzumab (CAMPATH<TM>, Millenium Pharmaceuticals/Schering AG) for behandling av kronisk B-cellelymfocyttleukemi. Suksessen med disse produkter er ikke bare basert på deres effektivitet, men også på deres utmerkede sikkerhetsprofiler (Grillo-Lopez, A.-J., et al., Semin. Oncol.26:66-73 (1999); Goldenberg, M. M., Clin. Ther.21:309-18 (1999)). Til tross for oppnåelse av disse medikamenter, er det for tiden stor interesse for oppnåelse av høyere spesifikk antistoffaktivitet enn det som typisk fås ved ukonjugert mAb-terapi. Det monoklonale museantistoff, B-Ly1, er et annet antistoff som er kjent for å være spesifikt for humant CD20. (Poppema, S. og Visser, L., Biotest Bulletin 3: 131-139 (1987)).
[0007] Resultatene av en rekke undersøkelser tyder på at Fc-reseptoravhengige mekanismer i vesentlig grad bidrar til virkningen av cytotoksiske antistoffer overfor tumorer, og tyder på at et optimalt antistoff mot tumorer vil bindes preferensielt til aktiverings-Fc-reseptorer og minimalt til den inhiberende partner Fc γRIIB. (Clynes, R. A., et al., Nature Medicine 6(4):443-446 (2000);
Kalergis, A.M. og Ravetch, J. V., J Exp. Med.195(12):1653-1659 (juni 2002).
Resultatene av minst én undersøkelse tyder for eksempel på at Fc γRIIIareseptoren spesielt er sterkt forbundet med effektiviteten av antistoffterapi.
(Cartron, G., et al., Blood 99(3):754-757 (februar 2002)). Denne undersøkelse viste at pasienter som er homozygote for Fc γRIIIa, har bedre respons overfor Rituxirnab enn heterozygote pasienter. Forfatterne konkluderte med at den overlegne respons skyldtes bedre in vivo-binding av antistoffet til Fc γRIIIa, noe som resulterte i bedre ADCC-aktivitet overfor lymfomceller. (Cartron, G., et al., Blood 99(3):754-757 (februar 2002)).
[0008] Forskjellige forsøk på å målsøke CD20-overflateantigenet er rapportert. Monoklonalt museantistoff 1F5 (et anti-CD20-antistoff) ble ifølge rapport administrert ved kontinuerlig intravenøs infusjon til pasienter med B-cellelymfom. Meget høye nivåer (>2 gram) 1F5 var ifølge rapport nødvendig for å uttømme sirkulerende tumorceller, og resultatene ble beskrevet som "forbigående". Press et al., "Monoclonal Antibody 1F5 (Anti-CD20) Serotherapy of Human B-Cell Lymphomas." Blood 69/2:584-591 (1987). Et potensielt problem med denne fremgangsmåte er at ikke-humane monoklonale antistoffer (f.eks. monoklonale museantistoffer) typisk mangler human effektorfunksjonalitet, dvs. at de ikke er i stand til blant annet å formidle komplementavhengig lyse, eller til å lysere humane målceller via antistoffavhengig cellulær toksisitet eller Fc-reseptormediert fagocytose. Videre kan ikke-humane monoklonale antistoffer gjenkjennes av menneskeverten som et fremmed protein; gjentatte injeksjoner av slike fremmede antistoffer kan derfor føre til induksjon av immunresponser som fører til skadelige hypersensitivitetsreaksjoner. Når det gjelder musebaserte monoklonale antistoffer, omtales dette ofte som human anti-mus-antistoffrespons, eller "HAMA"respons. Disse "fremmede" antistoffer kan dessuten angripes av vertens immunsystem slik at de egentlig nøytraliseres før de når sitt målsted.
[0009] En annen rapportert fremgangsmåte til forbedring av evnen hos monoklonale museantistoffer til å være effektive ved behandling av B-celleforstyrrelser har vært å konjugere en radioaktiv merkesubstans eller toksin til antistoffet slik at merkesubstansen eller toksinet lokaliseres på tumorstedet. For eksempel er det ovenfor angitte 1F5-antistoff blitt "merket" med jod-131 ("<131>I") og er ifølge rapport evaluert for biofordeling i to pasienter. Se Eary, J. F. et al., "Imaging and Treatment of B-Cell Lymphoma" J. Nuc. Med.31/8:1257-1268 (1990); se også Press, O. W. et al., "Treatment of Refractory Non-Hodgkin's Lymphoma with Radiolabeled MB-1 (Anti-CD37) Antibody" J. Clin. Onc.7/8:1027-1038 (1989) (indikasjon om at én pasient behandlet med <131>I-merket IF-5 oppnådde en "delvis respons"); Goldenberg, D. M. et al., "Targeting, Dosimetry and Radioimmunotherapy of B-Cell Lymphomas with Iodine-131-Labeled LL2 Monoclonal Antibody" J. Clin. Onc.9/4:548-564 (1991) (tre av åtte pasienter som fikk multiple injeksjoner, rapporterte å ha utviklet en HAMA-respons); Appelbaum, F. R. "Radiolabeled Monoclonal Antibodies in the Treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma" Hem./Onc. Clinics of N. A.5/5:1013-1025 (1991) (oversiktsartikkel); Press, O. W. et al "Radiolabeled-Antibody Therapy of B-Cell Lymphoma with Autologous Bone Marrow Support." New England J. Med.329/17: 1219-1223 (1993) (iodine-131 labeled anti-CD20 antibody IFS and B1); og Kaminski, M. G. et al "Radioimmunotherapy of B-Cell Lymphoma with <131>I Anti-B1 (Anti-CD20) Antibody". New England J. Med.329/7(1993) (jod-131-merket anti-CD20-antistoff B1; i det følgende "Kaminski"). Toksiner (dvs. kjemoterapeutiske midler så som doksorubicin eller mitomycin C) er også blitt konjugert til antistoffer. Se for eksempel publisert PCT-patentsøknad WO 92/07466 (publisert 14. mai 1992).
[0010] Kimæriske antistoffer omfattende deler av antistoffer fra to eller flere forskjellige arter (f.eks. mus og menneske) er blitt utviklet som alternativ til "konjugerte" antistoffer. For eksempel beskriver Liu, A. Y. et al i "Production of a Mouse-Human Chimeric Monoclonal Antibody to CD20 with Potent Fc-Dependent Biologic Activity" J. Immun.139/10:3521-3526 (1987) et kimærisk muse/humantantistoff rettet mot CD20-antigenet. Se også PCT-publikasjon nr. WO 88/04936. For eksempel er rituximab (RITUXAN ®), et kimærisk anti-CD20, blitt godkjent for behandling av ikke-Hodgkins lymfom.
[0011] På bakgrunn av ekspresjonen av CD20 ved B-cellelymfomer kan dette antigen tjene som kandidat for "målsøking" av slike lymfomer. Slik målsøking kan hovedsakelig generaliseres som følger: antistoffer som er spesifikke for CD20-overflateantigen på B-celler, administreres til en pasient. Disse anti-CD20-antistoffer bindes spesifikt til CD20-antigenet på (tilsynelatende) både normale og maligne B-celler, og antistoffet bundet til CD20 på celleoverflaten resulterer i ødeleggelse og uttømming av tumorigene B-celler. Dessuten kan kjemiske midler, cytotoksiner eller radioaktive midler festes direkte eller indirekte til anti-CD20-antistoffet slik at midlet selektivt "avgis" til de CD20-antigen-uttrykkende B-celler. Med begge disse fremgangsmåter er det primære mål å ødelegge tumoren. Den spesifikke fremgangsmåte vil avhenge av det spesielle anti-CD20-antistoff som anvendes. Det fremgår således at de forskjellige fremgangsmåter for målsøking av CD20-antigenet kan variere betraktelig.
[0012] Rituximab- (RITUXAN®) antistoffet er et genteknologisk konstruert kimærisk humant konstant gamma 1-musedoméne inneholdende monoklonalt antistoff rettet mot det humane CD20-antigen. Dette kimæriske antistoff inneholder humane konstante gamma 1-doméner og identifiseres ved navnet "C2B8" i US-patent nr.5 736 137 utstedt 17. april 1998, overdradd til IDEC Pharmaceuticals Corporation. RITUXAN® er godkjent for behandling av pasienter med tilbakevendt eller refraktært ("refracting") lavgradig eller follikulært, CD20-positivt ikke-Hodgkins B-cellelymfom. In vitro-virkningsmekanisme-undersøkelser har vist at RITUXAN® viser human komplementavhengig cytotoksisitet (CDC) (Reff et. al, Blood 83(2): 435-445 (1994)). Det viser dessuten betydelig aktivitet i analyser som måler antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC). RITUXAN® er blitt vist å ha antiproliferativ aktivitet i thymidin-inkorporeringsanalyser og en begrenset evne til å indusere apoptose direkte, mens CD20-antistoffer ikke har dette (Maloney et. al, Blood 88 (10): 637a (1996)).
Antistoffglykosylering
[0013] Oligosakkaridkomponenten kan i betydelig grad påvirke egenskaper som angår effektiviteten av et terapeutisk glykoprotein, innbefattende fysisk stabilitet, motstandsdyktighet overfor proteaseangrep, interaksjoner med immunsystemet, farmakokinetikk og spesifikk biologisk aktivitet. Slike egenskaper kan avhenge ikke bare av tilstedeværelse eller fravær, men også av de spesifikke strukturer, av oligosakkarider. Det kan gjøres noen generaliseringer mellom oligosakkaridstruktur og glykoproteinfunksjon. For eksempel medierer visse oligosakkaridstrukturer hurtig fjerning av glykoproteinet fra blodstrømmen via interaksjoner med spesifikke karbohydratbindende proteiner, mens andre kan bindes av antistoffer og trigge uønskede immunreaksjoner (Jenkins et al., Nature Biotechnol. 14:975-81 (1996)).
[0014] Pattedyrceller er de foretrukne verter for dannelse av terapeutiske glykoproteiner på grunn av sin evne til å glykosylere proteiner i den mest kompatible form for human anvendelse (Cumming et al., Glycobiology 1:115-30 (1991); Jenkins et al., Nature Biotechnol.14:975-81 (1996)). Bakterier glykosylerer proteiner meget sjelden, og gir, i likhet med andre typer vanlige verter, så som gjærsopp, filamentøse sopp, insekt- og planteceller, glykosyleringsmønstre forbundet med hurtig fjerning fra blodstrømmen, uønskede immun-interaksjoner, og i noen spesifikke tilfeller redusert biologisk aktivitet. Blant pattedyrceller har kinesisk hamster-ovarie- (CHO)-celler vært mest alminnelig anvendt i de siste to tiår. I tillegg til at disse celler gir egnede glykosyleringsmønstre, muliggjør de konstant generering av genetisk stabile, meget produktive klonale cellelinjer. De kan dyrkes til høye tettheter i enkle bioreaktorer ved anvendelse av serumfrie medier, og muliggjøre utvikling av sikre og reproduserbare bioprosesser. Andre vanlig anvendte dyreceller innbefatter babyhamsternyre (BHK)-celler, NS0- og Sp2/0-musemyelomceller. I den senere tid er dannelse ut fra transgene dyr også blitt testet. (Jenkins et al., Nature Biotechnol.
14:975-81 (1996)).
[0015] Alle antistoffer inneholder karbohydratstrukturer i konserverte stillinger i de konstante tungkjederegioner, og hver isotype har en særlig rekke N-bundne karbohydratstrukturer, som variabelt påvirker proteinsammensetning, -utskillelse og funksjonell aktivitet. (Wright, A., og Morrison, S. L., Trends Biotech.
15:26-32 (1997)). Strukturen av det tilknyttede N-bundne karbohydrat varierer i betydelig grad, avhengig av graden av prosessering, og kan innbefatte komplekse oligosakkarider med høyt innhold av mannose, med multiple grener og med to antenner ("biantennary"). (Wright, A., og Morrison, S. L., Trends Biotech.15:26-32 (1997)). Det er typisk en heterogen prosessering av kjerne-oligosakkaridstrukturene tilknyttet på et spesielt glykosyleringssted, slik at til og med monoklonale antistoffer finnes som multiple glykoformer. Det er likeledes vist at hovedforskjeller i antistoff-glykosyleringen finnes mellom cellelinjer, og enda mindre forskjeller sees for en gitt cellelinje dyrket under forskjellige dyrkningsbetingelser. (Lifely, M. R. et al., Glycobiology 5(8):813-22 (1995)).
[0016] Én måte til å oppnå store økninger i potens, mens det opprettholdes en enkel produksjonsprosess og potensielt unngås betydelige, uønskede bivirkninger, er å forsterke de naturlige, cellemedierte effektorfunksjoner hos monoklonale antistoffer ved omarbeiding av deres oligosakkaridkomponent som beskrevet i Umaña, P. et al., Nature Biotechnol.17:176-180 (1999) og US-patent nr. 6 602 684. Antistoffer av IgG1-typen, de mest alminnelig anvendte antistoffer ved kreft-immunterapi, er glykoproteiner som har et konservert N-bundet glykosyleringssete ved Asn297 i hvert CH2-doméne. De to komplekse toantenneoligosakkarider knyttet til Asn297 er begravet mellom CH2-doménene og danner utstrakte kontakter med polypeptidskjelettet, og deres tilstedeværelse er essensiell for at antistoffet skal mediere effektorfunksjoner så som antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) (Lifely, M. R., et al., Glycobiology 5:813-822 (1995); Jefferis, R., et al., Immunol Rev.163:59-76 (1998); Wright, A. og Morrison, S. L., Trends Biotechnol. 15:26-32 (1997)).
[0017] De nærværende oppfinnere har tidligere vist at overekspresjon i kinesisk hamster-ovarie- (CHO)-celler av β(1,4)-N-acetylglukosaminyltransferase III ("GnTIII"), en glykosyltransferase som katalyserer dannelsen av todelte ("oligosakkarider, i betydelig grad øker ADCC-aktiviteten in vitro av et kimærisk monoklonalt anti-neuroblastom-antistoff (chCE7) dannet av de omarbeidede CHO-celler (se Umaña, P. et al., Nature Biotechnol.17:176-180 (1999); og internasjonal publikasjon nr. WO 99/54342. Antistoffet chCE7 hører til en stor klasse ukonjugerte mAb som har høy tumoraffinitet og -spesifisitet, men har for liten potens til å være klinisk anvendelige ved fremstilling i industrielle standardcellelinjer som mangler GnTIII-enzymet (Umaña, P., et al., Nature Biotechnol. 17:176-180 (1999)). Denne undersøkelse var den første som viste at store økninger i ADCC-aktivitet kan oppnås ved at de antistoffproduserende celler omarbeides til å uttrykke GnTIII, noe som også førte til en økning i andelen av todelte ("bisected") oligosakkarider som er knyttet til den konstante region (Fc), innbefattende todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider, over nivåene som finnes i naturlig forekommende antistoffer.
WO 03/011878 beskriver glukosyleringsvarianter av Rituxan anti-CD20 antistoff. Polyak, M. et al., Blood, 2002, vol.99, no.9, side 3256-3262, beskriver anvendelse av et helt-murint B-Ly1 anti-CD20 antistoff (Rituxan), blandt andre anti-CD20 antistoffer, for å teste reaktivitet, homotypisk aggregasjon og translokasjon av CD20 i cellemembranen.
[0018] Det er et stadig behov for forbedrede terapeutiske fremgangsmåter rettet mot CD20-antigenet for behandling av B-celle-lymfomer i primater, innbefattende, men ikke begrenset til, mennesker.
I henhold til oppfinnelsen er det tilveiebrakt humanisert type II anti-CD20 antistoff, som angitt i krav 1, omfattende
(a) en tungkjede variabel region valgt fra SEKV ID NR:62, SEKV ID NR:64, SEKV ID NR:66, SEKV ID NR:68, SEKV ID NR:70 og SEKV ID NR 72, og
(b) KV1 lett kjede variabel region av SEKV ID NR:76.
Videre angår oppfinnelsen det humanisert type II anti-CD20 antistoff ifølge krav 1, hvori den tungkjede variable regionen er kodet av en nukleinsyresekvens med SEKV ID NR: 61, 63, 65, 67, 69 eller 71 og den lett kjede variable regionen er kodet av en nukleinsyresekvens med SEKV ID NR: 75, hvori antistoffet induserer høyere nivåer av apoptose når det inkuberes med CD20-positive humane celler i forhold til en kontroll under identiske forhold ved bruk av det kimære C2B8 IgG1-antistoffet med en sekvens identisk med rituximab.
Oppfinnelsen angår også en ekspresjonsvektor, som angitt i krav 3, omfattende et polynukleotid som koder for den tungkjede variable regionen ifølge krav 1 eller krav 2 og et polynukleotid som koder for den lett kjede variable regionen ifølge krav 1 eller krav 2. Oppfinnelsen angår også en vektor ifølge krav 3, som er polycistronisk.
I henhold til oppfinnelsen er det også tilveiebrakt en isolert vertscelle, som angitt i krav 5, omfattende ekspresjonsvektoren ifølge krav 3 eller krav 4 eller et polynukleotid som koder for den tungkjede variable regionen ifølge krav 1 eller krav 2 og et polynukleotid som koder for den lett kjede variable regionen ifølge krav 1 eller krav 2.
Oppfinnelsen angår også vertscellen ifølge krav 5, hvori vertscellen er konstruert til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid som har β(1,4)-N-acetylglukosylaminyltransferase III-aktivitet. Som angitt i krav 7, angår oppfinnelsen også vertscellen ifølge krav 6, hvori polypeptidet som har β(1,4)-Nacetylglukosylaminyltransferase III-aktivitet er et fusjonspolypeptid som videre omfatter Golgi-lokaliseringsdomenet til et heterologt Golgi-resident polypeptid. Oppfinnelsen angår også, som angitt i krav 8, vertscellen ifølge krav 7, hvori nevnte Golgi-lokaliseringsdomene er valgt fra lokaliseringsdomenet til mannosidase II, lokaliseringsdomenet til β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase I, β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase II, mannosidase I eller α1-6 kjernefucosyltransferase.
I henhold til oppfinnelsen er det også tilveiebrakt en fremgangsmåte, som angitt i krav 9, for fremstilling av det humaniserte Type-II anti-CD20 antistoffet ifølge krav 1 eller krav 2, omfattende dyrking av vertscellen ifølge hvilket som helst av kravene 5 til 8 under betingelser som tillater produksjon av antistoffet og utvinning av antistoffet fra nevnte antistoffkultur.
I henhold til oppfinnelsen er det også tilveiebrakt humanisert type II anti-CD20-antistoff, som angitt i krav 10, hvori antistoffet er oppnåelig av vertscellen ifølge hvilket som helst av kravene 5 til 8. Ytterligere fordelaktige trekk ved det humaniserte type II anti-CD20-antistoffet vil fremkomme av de tilhørende uselvstendige kravene 11-15 og krav 17, 18 og 20.
I henhold til oppfinnelsen er det også tilveiebrakt en farmasøytisk sammensetning omfattende antistoffet ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
Foreliggende oppfinnelse angår også anvendelse av antistoffet ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, for fremstilling av et medikament for å behandle en lidelse som kan behandles ved B-celleutarming. Ytterligere fordelaktige trekk ved den foreliggende oppfinnelse vil fremkomme av de tilhørende uselvstendige kravene 21 og 22.
Trekk som ikke er omfattet av kravene er ikke en del av foreliggende oppfinnelse.
[0019] Idet man er klar over det voldsomme terapeutiske potensial hos antigenbindende molekyler (ABM) som har bindingsspesifisitet som hos muse-B-Ly1-antistoffet, og som er blitt glyko-omarbeidet til å forsterke Fc-reseptorbindende affinitet og -effektorfunksjon, har de nærværende oppfinnere utviklet en fremgangsmåte for fremstilling av slike ABM. Denne fremgangsmåte innbefatter blant annet frembringelse av rekombinante, kimæriske antistoffer eller kimæriske fragmenter derav. Effektiviteten av disse ABM blir ytterligere forsterket ved omarbeiding av glykosyleringsprofilen for antistoff-Fc-regionen.
[0020] Ved ett aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende: (a) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:5, SEKV ID NR: 6 og SEKV ID NR:7. (CDR VH-1); (b) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:21, SEKV ID NR:22 og SEKV ID NR:23. (CDR VH.2); og SEKV ID NR:24. Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR:8, SEKV ID NR:9 og SEKV ID NR:10. (CDR VL). Ved én utførelsesform koder hvilke som helst av disse polynukleotider for et fusjonspolypeptid.
[0021] Ved et ytterligere aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR:3. Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR:4. Ved et ytterligere aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:29; SEKV ID NR:31; SEKV ID NR:33; SEKV ID NR:35; SEKV ID NR:37; SEKV ID NR:39; SEKV ID NR:41; SEKV ID NR:43; SEKV ID NR:45; SEKV ID NR:47; SEKV ID NR:49; SEKV ID NR:51; SEKV ID NR:53; SEKV ID NR:55; SEKV ID NR:57; SEKV ID NR:59; SEKV ID NR:61; SEKV ID NR:63; SEKV ID NR:65; SEKV ID NR:67; SEKV ID NR:69; og SEKV ID NR:71. Ved et annet aspekt er oppfinnelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR:75. Ved én utførelsesform koder slike polynukleotider for fusjonspolypeptider.
[0022] Beskrivelsen er videre rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens med minst 80% identitet med SEKV ID NR:3, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Ved et ytterligere aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens med minst 80% identitet med SEKV ID NR: 4, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Beskrivelsen er videre rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens med minst 80% identitet med en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:29; SEKV ID NR:31; SEKV ID NR:33; SEKV ID NR:35; SEKV ID NR:37; SEKV ID NR:39; SEKV ID NR:41; SEKV ID NR:43; SEKV ID NR:45; SEKV ID NR:47; SEKV ID NR:49; SEKV ID NR:51; SEKV ID NR:53; SEKV ID NR:55; SEKV ID NR:57; SEKV ID NR:59; SEKV ID NR:61; SEKV ID NR:63; SEKV ID NR:65; SEKV ID NR:67; SEKV ID NR:69; og SEKV ID NR:71, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Ved et ytterligere aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens med minst 80% identitet med SEKV ID NR:75, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid.
[0023] Beskrivelsen er videre rettet mot et polynukleotid omfattende SEKV ID NR:11 (hel tung kjede), eller polynukleotider med 80%, 85%, 90%, 95% eller 99% identitet med SEKV ID NR:11. Beskrivelsen er også rettet mot et polynukleotid omfattende SEKV ID NR:12 (hel lett kjede), eller to polynukleotider med 80%, 85%, 90%, 95% or 99% identitet med SEKV ID NR:12.
[0024] Beskrivelsen er også rettet mot et isolert polynukleotid som koder for et kimærisk polypeptid med sekvensen SEKV ID NR:1. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR: 1, og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen for en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus.
Beskrivelsen er også rettet mot et isolert polynukleotid som koder for et kimærisk polypeptid med en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:30;
SEKV ID NR:32; SEKV ID NR:34; SEKV ID NR:36; SEKV ID NR:38; SEKV ID NR:40; SEKV ID NR:42; SEKV ID NR:44; SEKV ID NR:46; SEKV ID NR:48;
SEKV ID NR:50; SEKV ID NR:52; SEKV ID NR:54; SEKV ID NR:56; SEKV ID NR:58; SEKV ID NR:60; SEKV ID NR:62; SEKV ID NR:64; SEKV ID NR:66;
SEKV ID NR:68; SEKV ID NR:70; og SEKV ID NR:72. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet en sekvens som koder for et polypeptid med en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:30; SEKV ID NR:32; SEKV ID NR: 34, SEKV ID NR:36; SEKV ID NR:38; SEKV ID NR:40; SEKV ID NR:42; SEKV ID NR:44; SEKV ID NR:46; SEKV ID NR:48; SEKV ID NR:50; SEKV ID NR:52;
SEKV ID NR:54; SEKV ID NR:56; SEKV ID NR:58; SEKV ID NR:60; SEKV ID NR:62; SEKV ID NR:64; SEKV ID NR:66; SEKV ID NR:68; SEKV ID NR:70; og SEKV ID NR:72; og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen som hos en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus.
[0025] Ved enda et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid som koder for et kimærisk polypeptid med sekvensen SEKV ID NR: 2. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR: 2, og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen som hos en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus. Ved enda et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid som koder for et kimærisk polypeptid med sekvensen SEKV ID NR:76. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet en sekvens som koder for et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR:76; og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvens som for en antistoff-Fcregion, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus.
[0026] Beskrivelsen er også rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med VH-regionen som hos muse-B-Ly1-antistoffet, eller funksjonelle varianter derav, og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvens som for en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus. Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med VL-regionen av muse- B-Ly1-antistoffet, eller funksjonelle varianter derav, og en sekvens som koder for et polypeptid med sekvens som for en antistoff-Fc-region, eller et fragment derav, fra en annen art enn mus.
[0027] Beskrivelsen er videre rettet mot en ekspresjonsvektor omfattende hvilke som helst av de isolerte polynukleotider beskrevet ovenfor, og en vertscelle som omfatter en slik ekspresjonsvektor. Ved et ytterligere aspekt er beskrivelsen rettet mot en vertscelle omfattende hvilke som helst av de isolerte polynukleotider beskrevet ovenfor.
[0028] Ved ett aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polypeptid omfattende: (a) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:15, SEKV ID NR: 16 og SEKV ID NR:17. (CDR VH-1); (b) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:25, SEKV ID NR:26 og SEKV ID NR:27 (CDR VH.2); og SEKV ID NR:28, hvor polypeptidet er et fusjonspolypeptid. Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polypeptid omfattende SEKV ID NR:18, SEKV ID NR: 19 og SEKV ID NR:20. (CDR VL), hvor polypeptidet er et fusjonspolypeptid.
[0029] Beskrivelsen er også rettet mot et kimærisk polypeptid omfattende sekvensen SEKV ID NR:1 eller en variant derav. Beskrivelsen er videre rettet mot et kimærisk polypeptid omfattende sekvensen SEKV ID NR:2 eller en variant derav. Ved én utførelsesform omfatter hvert av disse polypeptider videre en human Fc-region. Beskrivelsen er også rettet mot et kimærisk polypeptid omfattende en sekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:30; SEKV ID NR:32; SEKV ID NR:34; SEKV ID NR:36; SEKV ID NR:38; SEKV ID NR:40;
SEKV ID NR:42; SEKV ID NR:44; SEKV ID NR:46; SEKV ID NR:48; SEKV ID NR:50; SEKV ID NR:52; SEKV ID NR:54; SEKV ID NR:56; SEKV ID NR:58;
SEKV ID NR:60; SEKV ID NR:62; SEKV ID NR:64; SEKV ID NR:66; SEKV ID NR:68; SEKV ID NR:70; og SEKV ID NR:72, eller en variant derav. Beskrivelsen er videre rettet mot et kimærisk polypeptid omfattende sekvensen SEKV ID NR:76 eller en variant derav. Ved én utførelsesform omfatter hvert av disse polypeptider videre en human Fc-region.
[0030] Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et polypeptid omfattende en sekvens som stammer fra muse-B-Ly1-antistoffet, og en sekvens som stammer fra et heterologt polypeptid, samt et antigenbindende molekyl omfattende et slikt polypeptid. Ved én utførelsesform er det antigenbindende molekyl et antistoff. Ved en foretrukket utførelsesform er antistoffet kimærisk. Ved en annen foretrukket utførelsesform er antistoffet humanisert eller primatisert.
[0031] Ved et ytterligere aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polypeptid omfattende SEKV ID NR: 13 eller en variant derav. Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et isolert polypeptid omfattende SEKV ID NR: 14.
[0032] Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et ABM som er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1-antistoffet med hensyn til binding til CD20, og som er kimærisk. Ved én utførelsesform er ABM et antistoff eller et fragment derav. Ved en ytterligere utførelsesform er ABM et rekombinant antistoff omfattende en VH-region med en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR:1; SEKV ID NR:30; SEKV ID NR:32; SEKV ID NR:34; SEKV ID NR:36; SEKV ID NR:38; SEKV ID NR:40; SEKV ID NR:42; SEKV ID NR:44;
SEKV ID NR:46; SEKV ID NR:48; SEKV ID NR:50; SEKV ID NR:52; SEKV ID NR:54; SEKV ID NR:56; SEKV ID NR:58; SEKV ID NR:60; SEKV ID NR:62;
SEKV ID NR:64; SEKV ID NR:66; SEKV ID NR:68; SEKV ID NR:70; og SEKV ID NR:72. Ved en annen utførelsesform er ABM is et rekombinant antistoff omfattende en VL-region med en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av SEKV ID NR: 2 og SEKV ID NR:76. Ved en ytterligere utførelsesform er ABM et rekombinant antistoff som er primatisert. Ved enda en ytterligere utførelsesform er ABM et rekombinant antistoff som er humanisert. Ved en annen utførelsesform er ABM et rekombinant antistoff omfattende en human Fc-region. Ved en ytterligere utførelsesform kan hvilke som helst av ABM omtalt ovenfor være konjugert til en del så som et toksin eller en radiomerkesubstans.
[0033] Beskrivelsen angår videre et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse, hvilket ABM har modifiserte oligosakkarider. Ved én utførelsesform har de modifiserte oligosakkarider redusert fukosylering sammenliknet med ikkemodifiserte oligosakkarider. Ved andre utførelsesformer er de modifiserte oligosakkarider hybride eller komplekse. Ved en ytterligere utførelsesform har ABM en øket andel av ikke-fukosylerte oligosakkarider eller todelte ikkefukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen av molekylet. Ved én utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider hybride. Ved en ytterligere utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider komplekse. Ved én utførelsesform er minst 20% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet ikke-fukosylerte eller todelte, ikke-fukosylerte. Ved mer foretrukne utførelsesformer er minst 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% eller 75% eller mer av oligosakkaridene ikke-fukosylerte eller todelte, ikke-fukosylerte.
[0034] Beskrivelsen angår videre et polynukleotid som koder for hvilke som helst av ABM omtalt ovenfor, samt ekspresjonsvektorer og celler omfattende et slikt polynukleotid.
[0035] Beskrivelsen angår videre en fremgangsmåte for fremstilling av et ABM som er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1-antistoffet om binding til CD20, og hvor nevnte ABM er kimærisk; hvilken fremgangsmåte omfatter: (a) dyrking av en vertscelle omfattende et polynukleotid som koder for et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse i et medium under betingelser som muliggjør ekspresjon av polynukleotidet som koder for dette ABM; og (b) gjenvinning av dette ABM fra den resulterende kultur.
[0036] Ved et annet aspekt angår beskrivelsen et farmasøytisk preparat omfattende ABM ifølge beskrivelsen. Det er påtenkt at det farmasøytiske preparat videre kan omfatte en farmasøytisk akseptabel bærer, en adjuvans eller en kombinasjon derav.
[0037] Det beskrives en fremgangsmåte for behandling av en sykdom som kan behandles med B-celle-uttømming. Fremgangsmåten omfatter administrering av en terapeutisk effektiv mengde av ABM til et menneske som trenger det. Ved en foretrukket utførelsesform behandles sykdommen ved administrering av et ABM som er et kimærisk antistoff, eller et kimærisk fragment av et antistoff.
[0038] Ved enda et annet aspekt angår beskrivelsen en vertscelle som er omarbeidet til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet i en mengde tilstrekkelig til å modifisere oligosakkaridene i Fcregionen dannet av vertscellen, hvor ABM er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1-antistoffet med hensyn til binding til CD20, og hvor ABM er kimærisk. Ved én utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid. Ved en annen utførelsesform er ABM dannet av vertscellen et antistoff eller et antistofffragment. Ved en ytterligere utførelsesform omfatter ABM en region ekvivalent med Fc-regionen av et humant IgG.
[0039] Beskrivelsen er også rettet mot et isolert polynukleotid omfattende minst én komplementaritetesbestemmende region av muse-B-Ly1-antistoffet, eller en variant eller avkortet form derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, hvor det isolerte polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Slike isolerte polynukleotider koder fortrinnsvis for et fusjonspolypeptid som er et antigenbindende molekyl. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1-antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitets-bestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved en annen utførelsesform koder polynukleotidet for hele den variable region av den lette eller tunge kjede av et kimærisk (f.eks. humanisert) antistoff. Beskrivelsen er videre rettet mot polypeptidene som kodes for av slike polynukleotider.
[0040] Ved en annen utførelsesform er beskrivelsen rettet mot et antigenkombinerende molekyl omfattende minst én komplementaritetsbestemmende region av muse-B-Ly1-antistoffet, eller en variant- eller avkortet form derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, og omfattende en sekvens som stammer fra et heterologt polypeptid. Ved én utførelsesform omfatter det antigenbindende molekyl tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1-antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved et annet aspekt omfatter det antigenbindende molekyl den variable region av en lett eller tung antistoffkjede. Ved én spesielt anvendelig utførelsesform er det antigenbindende molekyl et kimærisk, f.eks. humanisert, antistoff. Beskrivelsen er også rettet mot fremgangsmåter for frembringelse av slike antigenbindende molekyler, og anvendelse av disse ved behandling av sykdom, innbefattende B-celle-lymfomer.
[0041] Foreliggende oppfinnelse er det første kjente tilfelle hvor et type II-anti-CD20-antistoff er blitt omarbeidet til å ha økte effektorfunksjoner så som ADCC, mens det fremdeles bibeholder potent apoptoseevne. Foreliggende oppfinnelse er følgelig rettet mot et omarbeidet anti-CD20-antistoff type II med øket ADCC som resultat av denne omarbeidelse og uten tap av vesentlig evne til å indusere apoptose. Ved én utførelsesform er anti-CD20-antistoffene type II blitt omarbeidet til å ha forandret glykosyleringsmønster i Fc-regionen. Ved en spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et øket nivå av todelte komplekse rester i Fc-regionen. Ved en annen spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et redusert nivå av fukoserester i Fc-regionen. Ved en annen utførelsesform har anti-CD20-antistoffene type II gjennomgått polypeptidomarbeiding. Beskrivelsen er videre rettet mot fremgangsmåter for fremstilling av slike omarbeidede type II-antistoffer, og fremgangsmåter for anvendelse av slike antistoffer ved behandling av forskjellige B-celle-forstyrrelser, innbefattende B-celle-lymfomer.
[0042] Vertscellen ifølge foreliggende oppfinnelse kan velges fra gruppen som innbefatter, men som ikke er begrenset til, en CHO-celle, en BHK-celle, en NSO-celle, en SP2/0-celle, en YO-myelomcelle, en P3X63-musemyelomcelle, en PER-celle, en PER.C6-celle eller en hybridomcelle. Ved én utførelsesform omfatter vertscellen ifølge beskrivelsen videre et transfektert polynukleotid omfattende et polynukleotid som koder for VL-regionen av muse-B-Ly1-antistoffet eller varianter derav og en sekvens som koder for en region ekvivalent til Fcregionen av et humant immunglobulin. Ved en annen utførelsesform omfatter vertscellen ifølge beskrivelsen videre et transfektert polynukleotid omfattende et polynukleotid som koder for VH-regionen av muse-B-Ly1-antistoffet eller varianter derav, og en sekvens som koder for en region ekvivalent til Fc-regionen av et humant immunglobulin.
[0043] Ved et ytterligere aspekt er beskrivelsen rettet mot en vertscelle som danner et ABM som oppviser øket Fc-reseptorbindingsaffinitet og/eller øket effektorfunksjon som resultat av modifikasjonen av dets oligosakkarider. Ved én utførelsesform er den økte bindingsaffinitet til en Fc-reseptor, spesielt Fc γRIIIA-reseptoren. Effektorfunksjonen som er påtenkt i det foreliggende, kan velges fra gruppen som innbefatter, men som ikke er begrenset til, øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet; øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til polymorfonukleære celler; øket binding til monocytter; øket direkte signalisering som induserer apoptose; øket dendrittcelleutvikling; og øket T-celle-priming.
[0044] Ved en ytterligere utførelsesform omfatter vertscellen ifølge foreliggende beskrivelse minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, som er operabelt knyttet til et konstitutivt promoterelement.
[0045] Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot en metode for frembringelse av et ABM i en vertscelle, omfattende: (a) dyrking av en vertscelle som er omarbeidet til å uttrykke minst ett polynukleotid som koder for et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet, under betingelser som muliggjør frembringelse av nevnte ABM, og som muliggjør modifisering av oligosakkaridene som finnes på Fc-regionen av dette ABM; og (b) isolering av nevnte ABM; hvor nevnte ABM er i stand til å konkurrere med muse-B-Ly1-antistoffet med hensyn til binding til CD20, og hvor nevnte ABM er kimærisk. Ved én utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid, fortrinnsvis omfattende det katalytiske doméne av GnTIII og Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt Golgi-residerende polypeptid valgt fra gruppen bestående av lokalisasjonsdoménet av mannosidase II, lokalisasjonsdoménet av β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase I ("GnTI"), lokalisasjonsdoménet av mannosidase I, lokalisasjonsdoménet av β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase II ("GnTII") og lokalisasjonsdoménet av �1-6-kjerne-fukosyltransferase. Golgi-lokalisasjonsdoménet er fortrinnsvis fra mannosidase II eller GnTI.
[0046] Ved et ytterligere aspekt er beskrivelsen rettet mot en fremgangsmåte for modifisering av glykosyleringsprofilen for et anti-CD20-ABM frembrakt av en vertscelle, omfattende innføring i vertscellen av minst én nukleinsyre eller ekspresjonsvektor ifølge oppfinnelsen. Ved én utførelsesform er ABM et antistoff eller et fragment derav; fortrinnsvis omfattende Fc-regionen av et IgG. Alternativt er polypeptidet et fusjonsprotein som innbefatter en region ekvivalent til Fc-regionen av et humant IgG.
[0047] Ved ett aspekt angår beskrivelsen et rekombinant, kimærisk antistoff, eller et fragment derav, som kan konkurrere med muse-B-Ly1-antistoffet med hensyn til binding til CD20, og med redusert fukosylering.
[0048] Ved et annet aspekt er foreliggende beskrivelse rettet mot en fremgangsmåte for modifisering av glykosyleringen av det rekombinante antistoff eller et fragment derav ifølge oppfinnelsen ved anvendelse av et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet og omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt Golgi-residerende polypeptid. Ved én utførelsesform omfatter fusjonspolypeptidene ifølge beskrivelsen det katalytiske doméne av GnTIII. Ved en annen utførelsesform er Golgi-lokalisasjonsdoménet valgt fra gruppen bestående av: lokalisasjonsdoménet av mannosidase II, lokalisasjonsdoménet av GnTI, lokalisasjonsdoménet av mannosidase I, lokalisasjonsdoménet av GnTII og lokalisasjonsdoménet av �1-6-kjerne-fukosyltransferase. Fortrinnsvis er Golgilokalisasjonsdoménet fra mannosidase II eller GnTI.
[0049] Ved én utførelsesform er fremgangsmåten ifølge beskrivelsen rettet mot frembringelse av et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav, med modifiserte oligosakkarider hvor de modifiserte oligosakkarider har redusert fukosylering sammenliknet med ikke-modifiserte oligosakkarider. I henhold til foreliggende beskrivelse kan disse modifiserte oligosakkarider være hybride eller komplekse. Ved en annen utførelsesform er fremgangsmåten ifølge beskrivelsen rettet mot frembringelse av et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav med øket andel av todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen av polypeptidet. Ved én utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider hybride. Ved en annen utførelsesform er de todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider komplekse. Ved en ytterligere utførelsesform er fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen rettet mot frembringelse av et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav hvor minst 20% av oligosakkaridene i Fc-regionen av nevnte polypeptid er todelte, ikke-fukosylerte. Ved en foretrukket utførelsesform er minst 30% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet todelte, ikkefukosylerte. Ved en annen foretrukket utførelsesform er minst 35% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet todelte, ikke-fukosylerte.
[0050] Ved et ytterligere aspekt er beskrivelsen rettet mot et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav, som oppviser øket Fc-reseptorbindingsaffinitet og/eller øket effektorfunksjon som resultat av modifikasjonen av dets oligosakkarider. Ved én utførelsesform er den økte bindingsaffinitet til en Fcaktiverende reseptor. Ved en ytterligere utførelsesform er Fc-reseptoren Fc γaktiverende reseptor, spesielt Fc γRIIIa-reseptoren. Effektorfunksjonen som er påtenkt i det foreliggende, kan være valgt fra gruppen som innbefatter, men som ikke er begrenset til, øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet; øket binding til NK-celler; øket binding til makrofager; øket binding til polymorfonukleære celler; øket binding til monocytter; øket direkte signalisering som induserer apoptose; øket dendrittcelleutvikling; og øket T-celle-priming.
[0051] Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot et rekombinant, kimærisk antistoff-fragment, med bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet og inneholdende Fc-regionen, som er omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse.
[0052] Ved et annet aspekt er foreliggende beskrivelse rettet mot et fusjonsprotein som innbefatter et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR:1 og en region ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin, og som er omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende beskrivelse.
[0053] Ved et annet aspekt er foreliggende beskrivelse rettet mot et fusjonsprotein som innbefatter et polypeptid med sekvensen SEKV ID NR: 2 og en region ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin og omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon frembrakt ved hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende beskrivelse.
[0054] Ved ett aspekt er foreliggende beskrivelse rettet mot et farmasøytisk preparat omfattende et rekombinant, kimærisk antistoff, frembrakt ved hjelp av hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende beskrivelse, og en farmasøytisk akseptabel bærer. Ved et annet aspekt er foreliggende beskrivelse rettet mot et farmasøytisk preparat omfattende et rekombinant, kimærisk antistofffragment frembrakt ved hjelp av hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende beskrivelse, og en farmasøytisk akseptabel bærer. Ved et annet aspekt er foreliggende beskrivelse rettet mot et farmasøytisk preparat omfattende et fusjonsprotein frembrakt ved hjelp av hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge foreliggende beskrivelse, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
[0055] Det beskrives en fremgangsmåte for behandling av en sykdom som kan behandles ved B-celle-uttømming, omfattende administrering av en terapeutisk effektiv mengde av det rekombinante, kimæriske antistoff eller fragmentet derav, til et menneske som trenger det.
Det vises nå til tegningene.
[0056] Fig 1. Nukleotid- (SEKV ID NR:3) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:1) for VH-regionen av muse-B-Ly1.
[0057] Fig 2. Nukleotid- (SEKV ID NR:4) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:2) for VL-regionen av muse-B-Ly1.
[0058] Fig 3. Binding av Rituximab® (O) og ch-B-Ly1 (∆) til CD20 på Raji B-lymfomceller.
[0059] Fig 4. B-celle-uttømming ved Rituximab® (O) og ch-B-Ly1 (∆) i fullblod fra de tre forskjellige klasser av Fc γRIIIa-158V/F-genotype: (A) fullblod fra en F/F-donor, homozygot med hensyn til lavereaffinitets-reseptoren; (B) fullblod fra en F/V-donor, heterozygot med hensyn til affinitetsreseptoren; og (C) fullblod fra en V/V-donor, homozygot med hensyn til høyereaffinitetsreseptoren.
[0060] Fig 5. Nukleotid- (SEKV ID NR:11) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:13) for den tunge kjede av et kimærisk, anti-CD20-antistoff.
[0061] Fig 6. Nukleotid- (SEKV ID NR:12) og aminosyresekvens (SEKV ID NR:13) for den lette kjede av et kimærisk, anti-CD20-antistoff.
[0062] Fig 7. Nukleotid- og aminosyresekvenser for muse- B-Ly1-antistoff-CDR: (A) Forutsette CDR for VH-regionen. (B) Forutsette CDR for VL-regionen.
[0063] Fig 8. MALDI-TOF-profil for et glyko-omarbeidet, kimærisk B-Ly1-antistoff. (A) Tabell som detaljert viser prosentandelene av spesifikke topper; (B) Spektrum for glyko-omarbeidet kimærisk B-Ly1; (C) Spektrum for glykoomarbeidet kimærisk B-Ly1 behandlet med Endo-H.
[0064] Fig 9. Binding av forskjellige humaniserte anti-CD20-antistoffer til Raji B-celler. Forskjellene mellom B-HH2-konstruksjonen og B-HL8- og B-HL11-konstruksjonene befinner seg i rammeverk 1- og 2-regionene idet alle de tre CDR er identiske. FR1- og FR2-sekvensene i B-HL8 og B-HL11 stammer fra den humane VH3-klasse, mens det fullstendige B-HH2-rammeverk er humant VH1-avledet. B-HL11 er et derivat av B-HL8 med enkeltmutasjonen Glu1Gln, hvor Gln er aminosyreresten i B-HH2-konstruksjonen. Dette betyr at Glu1Gln-utskiftingen ikke forandringer bindingsaffiniteten eller -intensiteten. De andre forskjeller mellom B-HH2 og B-HL8 er 14 FR-rester, hvorav hvilke én eller flere vil innvirke på dette antistoffs antigenbindende oppførsel.
[0065] Fig. 10. Binding av det humaniserte anti-CD20-antistoff BHL4-KV1 på Raji-målceller. B-HL4-konstruksjonen fås fra B-HH2-antistoffet ved erstatting av FR1 i B-HH2 med FR1 fra den humane kimlinjesekvens VH1_45. Denne konstruksjon viser sterkt redusert antigenbindende evne, til tross for at den har forskjellige aminosyrer ved bare tre stillinger i FR1. Disse rester befinner seg i stillingene 2, 14 og 30 ifølge Kabat-nummerering. Blant disse ser det ut til at stilling 30 er den mest innflytelsesrike stilling, siden den er en del av Chothiadefinisjonen av CDR1.
[0066] Fig. 11. Sammenlikning av bindingsoppførselen hos B-HH1, B-HH2, B-HH3 og parentalantistoffet B-ly1. Dataene viser at alle Ab viser en liknende ED50-verdi, men B-HH1-konstruksjonen bindes med lavere intensitet/støkiometri enn variantene B-HH2 og B-HH3. B-HH1 kan skjelnes fra B-HH2 og B-HH3 ved sine delvis humane CDR1- og CDR2-regioner (Kabat-definisjon), samt Ala/Thrpolymorfismen i stilling 28 (Kabat-nummerering). Dette tyder på at enten stilling 28, den fullstendige CDR1 og/eller den fullstendige CDR2 er viktig for antistoff/antigen-interaksjon.
[0067] Fig. 12. Sammenlikning av B-HL1, B-HH1 og B-ly1-parentalantistoffet. Dataene viste fravær av en hver bindingsaktivitet i B-HL1-konstruksjonen, og omtrent halvdelen av bindingsintensiteten/støkiometrien for B-HH1 sammenliknet med B-ly1. Både B-HL1 og B-HH1 er utformet basert på akseptor-rammeverk som stammer fra den humane VH1-klasse. Blant andre forskjeller er stilling 71 (Kabat-nummerering) i B-HL1-konstruksjonen en slående forskjell, noe som tyder på dens putative betydning for antigenbinding.
[0068] Fig. 13. Fluorcytometrisk analyse av kapasiteten hos anti-CD20-antistoffet overfor sitt antigen. Dataene viste at B-HL2- og B-HL3-konstruksjonene ikke viser CD20-bindingsaktivitet.
[0069] Fig. 14. Apoptose av anti-CD20-antistoffer på Z-138 MCL-celler.
[0070] Fig. 15. Apoptose ved anti-CD20-antistoffer. Analysedetaljer: 5 x 10<5 >celler pr. brønn ble utsådd i 24-brønnsplater (5 x 10<5 >celler pr. ml) i dyrkningsmedium. 10 mg av de respektive Ab, PBS for den negative kontroll eller 5 mM kamptotecin (CPT)-positive kontroll ble tilsatt i brønnene. Prøvene ble inkubert natten over (16 timer), merket med AnnV-FITC og analysert ved hjelp av FACS. Analyser ble utført in triplo (*): Signal for PBS alene subtrahert (PBS alene ga 8% og 2% AnnV+ for henholdsvis PR-1- og Z-138-celler). Anvendte antistoffer var: C2B8 (kimæriske, ikke glyko-omarbeidede); BHH2-KV1 (humaniserte, ikke glyko-omarbeidede). Bemerk: denne analyse innbefatter ikke noen ytterligere effektorceller, bare målceller pluss antistoff eller kontroller.
[0071] Fig. 16. Målcelledreping ved anti-CD20-antistoffer med immuneffektorceller. Analysedetaljer: B-celle-uttømming i normalt fullblod inkubering natten over og analyse med henblikk på CD19+/CD3+ ved FACS. ADOC ved anvendelse av PBMC som effektorer, 4 timers inkubering, 25:1 effektor:mål-forhold, måldreping målt ved Calcein-retensjon i forhold til detergentlyse (100%) og lyse uten Ab (0%). Anvendte antistoffer: C2B8 (kimærisk, ikke glyko-omarbeidet form); BHH2-KV1-wt (humanisert, ikke glyko-omarbeidet form av BHH2-KV1); BHH2:KV1-GE (humanisert, glyko-omarbeidet form av BHH2-KV1).
[0072] Fig. 17. MALDI/TOF-MS-profil av PNGaseF-frigjorte Fcoligosakkarider av ikke-modifisert, ikke glyko-omarbeidet BHH2-KV1 humanisert IgG1 B-ly1 antihumant CD20-antistoff.
[0073] Fig. 18. MALDI/TOF-MS-profil av PNGaseF-frigjorte Fcoligosakkarider av glyko-omarbeidet BHH2-KV1g1 humanisert IgG1 B-ly1 antihumant CD20-antistoff. Glyko-omarbeiding utført ved koekspresjon i vertsceller av antistoffgener og gen som koder for enzym med β-1,4-N-acetylglukosaminyltransferase III (GnT-III)-katalytisk aktivitet.
[0074] Fig. 19. MALDI/TOF-MS-profil av PNGaseF-frigjorte Fcoligosakkarider av glyko-omarbeidet BHH2-KV1g2 humanisert IgG1 B-ly1 antihumant CD20-antistoff. Glyko-omarbeiding utført ved koekspresjon i vertsceller av antistoffgener og gen som koder for enzym med β-1,4-N-acetylglukosaminyltransferase III (GnT-III)-katalytisk aktivitet og koder for enzym med Golgi α-mannosidase II-katalytisk aktivitet.
[0075] Fig. 20. Binding av ikke glyko-omarbeidede og glyko-omarbeidede antistoffer til human FcgammaRIIIa-reseptor som viser seg på overflaten av rekombinante CHO-CD16-celler.
[0076] Fig. 21. Apoptose av ikke-Fc-omarbeidede og Fc-omarbeidede anti-CD20-antistoffer på Z-138 MCL-celler. Analysedetaljer: 5 x 10<5 >celler pr. brønn ble utsådd i 24 brønns plater (5 x 10<5 >celler pr. ml) i dyrkningsmedium.10 mg av det respektive Ab, PBS for den negative kontroll ble tilsatt i brønnene. Prøvene ble inkubert natten over (16 timer), merket med AnnV-FITC og analysert ved hjelp av FACS. Analyse ble utført in triplo. Ab anvendt: C2B8 = rituximab (kimærisk, ikke glyko-omarbeidet form, samme som kommersiell form); BHH2-KV1 (humanisert, ikke glyko-omarbeidet - se fig.6 for glykosyleringsprofil); BHH2-KV1g1 (humanisert, glyko-omarbeidet - se fig.7 for glykosyleringsprofil; BHH2-KV1g2 (humanisert, glyko-omarbeidet - se fig.8 med hensyn til glykosyleringsprofil). Bemerk: denne analyse innbefatter ikke noen ytterligere effektorceller, kun målceller pluss antistoff eller kontroller. (*): Signal for PBS alene subtrahert.
[0077] Betegnelser er anvendt her i dokumentet slik de vanligvis anvendes på området, dersom ikke annet er definert, som følger.
[0078] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen antistoff ment å innbefatte hele antistoffmolekyler, innbefattende monoklonale, polyklonale og multispesifikke (f.eks. bispesifikke) antistoffer, samt antistoff-fragmenter med Fc-regionen og som bibeholder bindingsspesifisitet, og fusjonsproteiner som innbefatter en region ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin og som bibeholder bindingsspesifisitet. Humaniserte, primatiserte og kimæriske antistoffer er også innbefattet.
[0079] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen Fc-region ment å angi en C-terminal region av en IgG-tungkjede. Skjønt grensene for Fc-regionen av en IgG-tungkjede kan variere litt, er den humane IgG-tungkjede-Fc-region vanligvis definert som å strekke seg fra aminosyreresten i stilling Cys226 til den karboksylterminale ende.
[0080] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen region ekvivalent med Fcregionen av et immunglobulin ment å innbefatte naturlig forekommende allele varianter av Fc-regionen av et immunglobulin samt varianter med forandringer som frembringer substitusjoner, addisjoner eller delesjoner, men som ikke i noen vesentlig grad reduserer immunglobulinets evne til å mediere effektorfunksjoner (så som antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet). For eksempel kan én eller flere aminosyrer utelukkes fra den N-terminale eller C-terminale ende av Fc-regionen av et immunglobulin uten vesentlig tap av biologisk funksjon. Slike varianter kan velges i henhold til generelle regler kjent på området, for å ha minimal effekt på aktiviteten. (Se f.eks. Bowie, J.U. et al., Science 247:1306-10 (1990).
[0081] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen antigenbindende molekyl i sin videste betydning et molekyl som spesifikt binder en antigen determinant. Mer spesifikt er et antigenbindende molekyl som binder CD20, et molekyl som spesifikt bindes til et ikke-glykosylert celleoverflate-fosfoprotein på 35 000 dalton, typisk betegnet som det humane B-lymfocytt-begrensede differensieringsantigen Bp35, vanligvis omtalt som CD20. Med "spesifikt binder" menes at bindingen er selektiv for antigenet og kan skjelnes fra uønskede eller ikke-spesifikke interaksjoner.
[0082] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsene fusjon og kimærisk, anvendt med henvisning til polypeptider så som ABM, polypeptider omfattende aminosyresekvenser som stammer fra to eller flere heterologe polypeptider, så som deler av antistoffer fra forskjellige arter. Når det for eksempel gjelder kimæriske ABM, kan de ikke-antigenbindende komponenter stamme fra mange forskjellige arter, innbefattende primater så som sjimpanser og mennesker. Den konstante region av det kimæriske ABM er mest foretrukket hovedsakelig identisk med den konstante region av et naturlig humant antistoff; den variable region av det kimæriske antistoff er mest foretrukket hovedsakelig identisk med den variable region av et rekombinant anti-CD20-antistoff med aminosyresekvens som hos den variable muse-B-Ly1-region. Humaniserte antistoffer er en spesielt foretrukket form av fusjons- eller kimærisk antistoff.
[0083] Anvendt her i dokumentet angir et polypeptid med "GnTIII-aktivitet" polypeptider som kan katalysere addisjonen av en N-acetylglykosamin- (GlcNAc-) rest i β-1-4-binding til det β-bundne mannosid i trimannosylkjernen av N-bundne oligosakkarider. Dette innbefatter fusjonspolypeptider som oppviser enzymatisk aktivitet i likhet med, men ikke nødvendigvis identisk med, aktiviteten av β(1,4)-N-acetylglukosaminyltransferase III, også kjent som β-1,4-mannosylglykoprotein 4-beta-N-acdetylglukosaminyl-transferase (EC 2.4.1.144), i henhold til Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUBMB) målt i en spesiell biologisk analyse, med eller uten doseavhengighet. I det tilfelle hvor doseavhengighet finnes, behøver det ikke være identisk med doseavhengigheten hos GnTIII, men heller hovedsakelig lik doseavhengigheten i en gitt aktivitet sammenliknet med GnTIII (dvs. at kandidatpolypeptidet vil oppvise større aktivitet eller ikke mer enn ca.25 ganger mindre, og fortrinnsvis ikke mer enn ca. ti ganger mindre aktivitet, og mest foretrukket ikke mer enn ca. tre ganger mindre aktivitet i forhold til GnTIII).
[0084] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen variant (eller analog) et polypeptid som er forskjellig fra et spesifikt angitt polypeptid ifølge oppfinnelsen ved aminosyreinnsettinger, -delesjoner og -substitusjoner, frembrakt ved anvendelse av f.eks. rekombinante DNA-teknikker. Varianter av ABM ifølge foreliggende oppfinnelse innbefatter kimæriske, primatiserte eller humaniserte antigenbindende molekyler hvor én eller flere av aminosyrerestene er modifisert ved substitusjon, addisjon og/eller delesjon på en slik måte at det ikke i noen vesentlig grad påvirker antigen- (f.eks. CD20-) bindende affinitet. Rettledning med hensyn til bestemmelse av hvilken aminosyrerest som kan erstattes, adderes eller utelukkes uten at aktuelle aktiviteter oppheves, kan finnes ved sammenlikning av sekvensen for det spesielle polypeptid med sekvensen for homologe peptider, og minimalisering av antallet aminosyresekvensforandringer utført i regioner med høy homologi (konserverte regioner), eller ved erstatting av aminosyrer med konsensussekvens.
[0085] Alternativt kan rekombinante varianter som koder for disse samme eller liknende polypeptider, syntetiseres eller utvelges ved at det gjøres bruk av "overflødigheten" i den genetiske kode. Forskjellige kodonsubstitusjoner, så som de stumme forandringer som frembringer forskjellige restriksjonsseter, kan innføres for optimalisering av kloning i et plasmid eller en virusvektor, eller ekspresjon i et spesielt prokaryot eller eukaryot system. Mutasjoner i polynukleotidsekvensen kan gjenspeiles i polypeptidet eller doménene av andre peptider som er tilføyd til polypeptidet, for modifisering av egenskapene hos hvilken som helst del av polypeptidet, under forandring av karakteregenskaper så som ligandbindende affiniteter, interkjedeaffiniteter eller nedbrytnings/turnoverhastighet.
[0086] Aminosyre-"substitusjoner" er fortrinnsvis et resultat av erstatting av én aminosyre med en annen aminosyre med liknende strukturelle og/eller kjemiske egenskaper, dvs. konserverende aminosyre-erstatninger.
"Konserverende" aminosyresubstitusjoner kan gjøres på basis av likhet med hensyn til polaritet, ladning, løselighet, hydrofobitet, hydrofilitet og/eller den amfipatiske beskaffenhet av de rester som inngår. For eksempel innbefatter ikkepolare (hydrofobe) aminosyrer alanin, leucin, isoleucin, valin, prolin, fenylalanin, tryptofan og metionin; polare nøytrale aminosyrer innbefatter glycin, serin, treonin, cystein, tyrosin, asparagin og glutamin; positivt ladde (basiske) aminosyrer innbefatter arginin, lysin og histidin; og negativt ladde (sure) aminosyrer innbefatter asparaginsyre og glutaminsyre. "Innsettinger" eller "utelukkelser" er fortrinnsvis i området ca.1-20 aminosyrer, mer foretrukket 1-10 aminosyrer. Den tillatte variasjon kan bestemmes eksperimentelt ved at det systematisk foretas innsettinger, utelukkelser eller substitusjoner av aminosyrer i et polypeptidmolekyl ved anvendelse av rekombinante DNA-teknikker og analysering av de resulterende rekombinante varianter med henblikk på aktivitet.
[0087] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen humanisert anvendt for henvisning til et antigenbindende molekyl som stammer fra et ikke-humant antigenbindende molekyl, for eksempel et museantistoff, som bibeholder eller i det vesentlige bibeholder de antigenbindende egenskaper hos opphavsmolekylet, men som er mindre immunogent i mennesker. Dette kan oppnås ved forskjellige metoder innbefattende (a) poding av hele de ikke-humane variable doméner på humane konstante regioner under frembringelse av kimæriske antistoffer, (b) poding av bare de ikke-humane CDR på humane rammeverk- og konstante regioner med eller uten tilbakeholdelse av kritiske rammeverkrester (f.eks. slike som er viktige for bibeholdelse av gode antigenbindende affinitets- eller antistofffunksjoner), eller (c) transplantering av hele de ikke-humane variable doméner, men "tilsløring" av dem med en humanliknende del ved erstatting av overflaterester. Slike metoder er beskrevet i Jones et al., Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 81:6851-6855 (1984); Morrison og Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec.
Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994). Det er generelt 3 komplementaritetsbestemmende regioner, eller CDR, (CDR1, CDR2 og CDR3) i hver av de variable tung- og lettkjededoméner av et antistoff, som er flankert av fire rammeverk-subregioner (dvs. FR1, FR2, FR3 og FR4) i hver av de variable tung- og lettkjededoméner av et antistoff: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. En omtale av humaniserte antistoffer kan blant annet finnes i US-patent nr.6 632 927, og i publisert US-patentsøknad nr.2003/0175269.
[0088] Anvendt her i dokumentet er likeledes betegnelsen primatisert anvendt for henvisning til et antigenbindende molekyl som stammer fra et antigenbindende ikke-primat-molekyl, for eksempel et museantistoff, som bibeholder eller i det vesentlige bibeholder de antigenbindende egenskaper hos opphavsmolekylet, men som er mindre immunogent i primater.
[0089] I det tilfelle hvor det er to eller flere definisjoner av en betegnelse som anvendes og/eller er akseptert på området, er definisjonen av betegnelsen anvendt her i dokumentet ment å innbefatte alle slike betydninger dersom ikke det motsatte er uttrykkelig angitt. Et spesifikt eksempel er bruken av betegnelsen "komplementaritetsbestemmende region" ("CDR") til beskrivelse av de ikke på hverandre følgende antigenkombinerende seter som finnes i den variable region av både tung- og lettkjede-polypeptider. Denne spesielle region er beskrevet av Kabat et al., U.S. Dept. of Health og Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (1983) og av Chothia et al., J. Mol. Biol.196:901-917 (1987), hvor definisjonene innbefatter overlappende eller subsett av aminosyrerester sammenliknet med hverandre. Ikke desto mindre er anvendelse av én av definisjonene til å omtale en CDR av et antistoff eller varianter derav ment å være innenfor rammen for betegnelsen som definert og anvendt her i dokumentet. De passende aminosyrerester som omfatter CDR som definert ved hver av de ovenfor angitte referanser, er angitt nedenfor i tabell I som sammenlikning. De nøyaktige restnumre som omfatter en bestemt CDR, vil variere avhengig av sekvensen og størrelsen av CDR. Fagfolk på området kan rutinemessig bestemme hvilke rester som omfatter en bestemt CDR på bakgrunn av aminosyresekvensen for den variable region av antistoffet.
TABELL 1. CDR-definisjoner<1>
<1>Nummerering av alle CDR-definisjoner i tabell 1 i henhold til nummereringskonvensjonene angitt av Kabat et al. (se nedenfor).
[0090] Kabat et al. definerte også et nummereringssystem for sekvenser av variable doméner, som er anvendelig for hvilket som helst antistoff. En vanlig fagperson på området kan utvetydig tilordne dette system med "Kabatnummerering" til hvilken som helst sekvens for variabelt doméne, uten å basere seg på noen forsøksdata ut over selve sekvensen. Avnendt her i dokumentet angir "Kabat-nummerering" nummereringssystemet angitt av Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest" (1983). Dersom ikke annet er spesifisert, er henvisninger til nummereringen av spesifikke aminosyrereststillinger i et ABM i henhold til Kabatnummereringssystemet. Sekvensene i sekvenslisten (dvs. SEKV ID NR: 1 til SEKV ID NR: 78) er ikke nummerert i henhold til Kabat-nummereringssystemet.
[0091] Med en nukleinsyre eller et polynukleotid med en nukleotidsekvens som er for eksempel minst 95% "identisk" med en referanse-nukleotidsekvens ifølge foreliggende beskrivelse menes at nukleotidsekvensen i polynukleotidet er identisk med referansesekvensen, bortsett fra at polynukleotidsekvensen kan innbefatte opp til fem punktmutasjoner pr.100 nukleotider i referansenukleotidsekvensen. Med andre ord kan opp til 5% av nukleotidene i referansesekvensen utelukkes eller substitueres med et annet nukleotid for oppnåelse av et polynukleotid med en nukleotidsekvens som er minst 95% identisk med en referanse-nukleotidsekvens, eller et antall nukleotider på opp til 5% av den totale mengde nukleotider i referansesekvensen kan innføres i referansesekvensen. Søkesekvensen kan være hele sekvensen vist enten på fig.
24 eller fig.25.
[0092] I praksis kan det bestemmes om hvorvidt hvilket som helst spesielt nukleinsyremolekyl eller polypeptid er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med en nukleotidsekvens eller polypeptid-sekvens ifølge foreliggende beskrivelse, på konvensjonell måte ved anvendelse av kjente datamaskinprogrammer. En foretrukket metode for bestemmelse av den beste totale samstemmighet mellom en søkesekvens (en sekvens ifølge foreliggende oppfinnelse) og en aktuell sekvens, også omtalt som en global sekvensinnretting, kan bestemmes ved anvendelse av FASTDB-datamaskin-programmet basert på algoritmen ifølge Brutlag et al., Comp. App. Biosci.6:237-245 (1990). I en sekvensoppstilling er både søkesekvensen og de aktuelle sekvenser DNA-sekvenser. En RNA-sekvens kan sammenliknes ved omdannelse av U til T.
Resultatet av den globale sekvensoppstilling er prosent identitet. Foretrukne parametere anvendt i en FASTDB-oppstilling av DNA-sekvenser for beregning av prosent identitet er: Matriks=Enhetlig, k-tuppel=4, Mismatch-fradrag (-"penalty")=1, Kombinasjons-("joining")-fradrag=30, Randomiseringsgruppelengde=0, Forkortnings-("cut off")-poeng=1, Mellomromsfradrag=5, Mellomromsstørrelse-fradrag 0,05, Vindusstørrelse=500 eller lengden av den aktuelle nukleotidsekvens, avhengig av hvilken som er den korteste.
[0093] Hvis den aktuelle sekvens er kortere enn søkesekvensen på grunn av 5'- eller 3'-delesjoner, ikke på grunn av indre delesjoner, må det utføres en manuell korrigering av resultatene. Dette er på grunn av at FASTDB-programmet ikke svarer for 5'- og 3'-avkortninger av den aktuelle sekvens ved beregning av prosent identitet. Når det gjelder aktuelle sekvenser som er avkortet i 5'- eller 3'-endene, i forhold til søkesekvensen, korrigeres prosent identitet ved beregning av antallet baser i søkesekvensen som er 5' og 3' i forhold til den aktuelle sekvens, som ikke er samsvarige/innrettet på linje, som prosent av de totale baser i søkesekvensen. Om et nukleotid er samsvarig/innrettet bestemmes ved resultatene av FASTDB-sekvensinnrettingen. Denne prosentandel blir så trukket fra prosent identitet, beregnet ved ovennevnte FASTDB-program ved anvendelse av de spesifiserte parametere, under opppnåelse av et endelig prosent identitetspoengtall. Dette korrigerte poengtall er det som anvendes for foreliggende oppfinnelses formål. Bare baser utenfor 5'- og 3'-basene i den aktuelle sekvens, vist ved FASTDB-innrettingen, som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen, beregnes for det formål å justere prosent identitetspoeng manuelt.
[0094] For eksempel blir en aktuell sekvens på 90 baser innrettet med en 100 basers søkesekvens for bestemmelse av prosent identitet. Delesjonene finnes i 5'-enden av den aktuelle sekvens, og derfor viser ikke FASTDB-innrettingen samsvar/innretting av de første 10 baser i 5'-enden. De 10 uparede baser representerer 10% av sekvensen (antall baser i 5'- og 3'-endene som ikke samsvarer/totalt antall baser i søkesekvensen) slik at 10% trekkes fra prosent identitet-poengtallet beregnet ved FASTDB-programmet. Hvis de gjenværende 90 baser var fullkomment tilpasset, ville den endelige prosent identitet være 90%. I et annet eksempel sammenliknes en 90 basers aktuell sekvens med en 100 basers søkesekvens. Denne gang er delesjonene indre delesjoner slik at det ikke er noen baser på 5' eller 3' av den aktuelle sekvens som ikke er tilpasset/innrettet med søkesekvensen. I dette tilfelle blir ikke prosent identitet beregnet ved FASTDB manuelt korrigert. Enda en gang blir bare baser 5' og 3' i den aktuelle sekvens som ikke er tilpasset/innrettet med søkesekvensen, korrigert manuelt. Ingen andre manuelle korrigeringer gjøres for foreliggende beskrivelses formål.
[0095] Med et polypeptid med en aminosyresekvens som for eksempel er minst 95% "identisk" med en søke-aminosyresekvens ifølge foreliggende beskrivelse, er det ment at aminosyresekvensen i det aktuelle polypeptid er identisk med søkesekvensen, bortsett fra at den aktuelle polypeptidsekvens kan innbefatte opp til fem aminosyreforandringer pr.100 aminosyrer i søkeaminosyresekvensen. For oppnåelse av et polypeptid med en aminosyresekvens som er minst 95% identisk med en søke-aminosyresekvens kan, med andre ord, opp til 5% av aminosyrerestene i den aktuelle sekvens innsettes, utelukkes eller erstattes med en annen aminosyre. Disse forandringer av referansesekvensen kan skje i de amino- eller karboksyterminale stillinger av referanse-aminosyresekvensen eller hvor som helst mellom disse terminale stillinger, spredt enten individuelt blant rester i referansesekvensen, eller i én eller flere på hverandre følgende grupper i referansesekvensen.
[0096] I praksis kan det bestemmes om hvorvidt hvilket som helst bestemt polypeptid er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med et referanse-polypeptid, konvensjonelt ved anvendelse av kjente datamaskin-programmer. En foretrukket metode for bestemmelse av det beste totale samsvar mellom en søkesekvens (en sekvens ifølge foreliggende oppfinnelse) og en aktuell sekvens, også omtalt som en global sekvensinnretting, kan bestemmes ved anvendelse av FASTDB-datamaskinprogrammet basert på algoritmen ifølge Brutlag et al., Comp. App. Biosci.6:237-245 (1990). Ved en sekvensinnretting er både søkesekvensen og den aktuelle sekvens enten nukleotidsekvenser eller aminosyresekvenser. Resultatet av den globale sekvensinnretting er prosent identitet. Foretrukne parametere anvendt i en FASTDB-aminosyreinnretting er:
Matriks=PAM 0, k-tuppel=2, Umake-fradrag = 1, Kombinasjonsfradrag=20, Randomiserings-gruppelengde=0, Forkortningspoeng=1, Vindusstørrelse= sekvenslengde, Mellomromsfradrag=5, Mellomromsstørrelse-fradrag 0,05, Vindusstørrelse=500 eller lengden av den aktuelle aminosyre, avhengig av hvilken som er den korteste.
[0097] Hvis den aktuelle sekvens er kortere enn søkesekvensen på grunn av N- eller C-terminale delesjoner, ikke på grunn av indre delesjoner, må det foretas en manuell korrigering av resultatene. Dette er på grunn av av FASTDB-programmet ikke gjør rede for N- og C-terminale avkortninger av den aktuelle sekvens ved beregning av global prosent identitet. Når det gjelder aktuelle sekvenser som er avkortet ved den N- og C-terminale ende, i forhold til søkesekvensen, blir prosent identitet korrigert ved beregning av antallet rester i søkesekvensen som er N- og C-terminale i forhold til den aktuelle sekvens, som ikke er samsvarige/innrettet med en tilsvarende aktuell rest, som prosent av de totale baser i søkesekvensen. Om en rest er samsvarig/innrettet bestemmes ved resultatene av FASTDB-sekvensinnrettingen. Denne prosentandel blir så trukket fra prosent identitet, beregnet ved ovennevnte FASTDB-program under anvendelse av de spesifiserte parametere, under oppnåelse av en endelig prosent identitetspoengverdi. Denne endelige prosent identitetspoengverdi er det som anvendes for foreliggende oppfinnelses formål. Bare rester til de N- og C-terminale ender av den aktuelle sekvens, som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen, tas i betraktning for manuell justering av prosent identitetspoengverdi. Det vil si bare søke-reststillingen utenfor de fjerneste N- og C-terminale rester i den aktuelle sekvens.
[0098] For eksempel blir en 90 aminosyreresters aktuell sekvens innrettet på linje med en 100 resters søkesekvens for bestemmelse av prosent identitet. Delesjonen finner sted i den N-terminale ende av den aktuelle sekvens, og derfor viser ikke FASTDB-innrettningen et samsvar/innretting av de første 10 rester i den N-terminale ende. De 10 uparede rester representerer 10% av sekvensen (antall rester i den N- og C-terminale ende som ikke er samsvarige/totalt antall rester i søkesekvensen) slik at 10% trekkes fra prosent identitet-poengverdien beregnet ved FASTDB-programmet. Hvis de gjenværende 90 rester var fullkomment samstemmige, ville den endelige prosent identitet være 90%. Ved et annet eksempel sammenliknes en 90 resters aktuell sekvens med en 100 resters søkesekvens. Denne gang er delesjonene indre delesjoner slik at det ikke er noen rester i den N- eller C-terminale ende av den aktuelle sekvens som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen. I dette tilfelle blir prosent identitet beregnet ved FASTDB ikke manuelt korrigert. Enda en gang blir bare reststillinger utenfor de N- og C-terminale ender av den aktuelle sekvens, vist i FASTDB-innrettingen, som ikke er samsvarige/innrettet med søkesekvensen, manuelt korrigert for. Ingen andre manuelle korrigeringer skal gjøres for foreliggende oppfinnelses formål.
[0099] Anvendt her i dokumentet angir en nukleinsyre som "hybridiserer under stringente betingelser" til en nukleinsyresekvens ifølge oppfinnelsen, et polynukleotid som hybridiserer i en inkubering natten over ved 42 ºC i en løsning omfattende 50% formamid, 5 x SSC (750 mM NaCl, 75 mM natriumcitrat), 50 mM natriumfosfat (pH 7,6), 5x Denhardts løsning, 10% dekstransulfat og 20 μg/ml denaturert, kuttet ("sheared") laksespermie-DNA, fulgt av vasking av filtrene i 0,1x SSC ved ca.65 ºC.
[0100] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen Golgi-lokalisasjonsdoméne aminosyresekvensen i et Golgi-residerende polypeptid som er ansvarlig for forankring av polypeptidet på lokasjonen i Golgi-komplekset. Lokalisasjonsdoméner omfatter generelt aminoterminale "haler" av et enzym.
[0101] Anvendt her i dokumentet angir betegnelsen effektorfunksjon de biologiske aktiviteter som kan tilskrives Fc-regionen (en nativ sekvens-Fc-region eller aminosyresekvens-variant-Fc-region) av et antistoff. Eksempler på antistoffeffektorfunksjoner innbefatter, men er ikke begrenset til, Fc-reseptorbindingsaffinitet, antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC), antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), cytokinutskillelse, immun-kompleksmediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, nedregulering av celleoverflatereseptorer, osv.
[0102] Anvendt her i dokumentet betraktes betegnelsene omarbeide, omarbeidet, omarbeiding og glykosyleringsomarbeiding som å innbefatte en hver manipulering av glykosyleringsmønsteret for et naturlig forekommende eller rekombinant polypeptid eller fragment derav. Glykosyleringsomarbeiding innbefatter metabolsk omarbeiding av en celles glykosyleringsmaskineri, innbefattende genetiske manipuleringer av oligosakkarid-synteseveiene under oppnåelse av forandret glykosylering av glykoproteiner som uttrykkes i celler. Videre innbefatter glykosyleringsomarbeiding virkningene av mutasjoner og cellemiljøet på glykosyleringen.
[0103] Anvendt her i dokumentet dekker betegnelsen vertscelle hver cellesystemtype som kan omarbeides til å frembringe polypeptidene og de antigenbindende molekyler ifølge foreliggende oppfinnelse. Ved én utførelsesform blir vertscellen omarbeidet til å muliggjøre dannelse av et antigenbindende molekyl med modifiserte glykoformer. Ved en foretrukket utførelsesform er det antigenbindende molekyl et antistoff, antistoff-fragment eller fusjonsprotein. Ved visse utførelsesformer er vertscellene blitt ytterligere manipulert til å uttrykke økte nivåer av ett eller flere polypeptider med GnTIII-aktivitet. Vertsceller innbefatter dyrkede celler, f.eks. dyrkede pattedyrceller, så som CHO-celler, BHK-celler, NS0-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, gjærceller, insektceller og planteceller, for bare å nevne noen få, men også celler som finnes i et transgent dyr, en transgen plante eller et dyrket plante- eller dyrevev.
[0104] Anvendt her i dokumentet innbefatter betegnelsen Fc-mediert cellulær cytotoksisitet antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet og cellulær cytotoksisitet mediert ved et løselig Fc-fusjonsprotein inneholdende en human Fcregion. Det er en immunmekanisme som fører til lyse av "antistoff-målsøkte celler" ved "humane immuneffektorceller", hvor:
[0105] De humane immuneffektorceller er en populasjon av leukocytter som viser Fc-reseptorer på sin overflate gjennom hvilke de bindes til Fc-regionen av antistoffer eller av Fc-fusjonsproteiner, og utfører effektorfunksjoner. En slik populasjon kan innbefatte, men er ikke begrenset til, mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) og/eller naturlige dreper-(NK-) celler.
[0106] De antistoff-målsøkte celler er celler som er bundet av antistoffene eller Fc-fusjonsproteinene. Antistoffene eller Fc-fusjonsproteinene bindes til målceller via proteindelen som er N-terminal i forhold til Fc-regionen.
[0107] Anvendt her i dokumentet er betegnelsen øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet definert som enten en økning i antallet "antistoff-målsøkte celler" som lyseres innen en gitt tid, ved en gitt konsentrasjon av antistoff eller av Fcprotein, i mediet som omgir målcellene, ved mekanismen for Fc-mediert cellulær cytotoksisitet definert ovenfor, og/eller en reduksjon i konsentrasjonen av antistoff, eller av Fc-fusjonsprotein, i mediet som omgir målcellene, som trenges for oppnåelse av lyse av et gitt antall "antistoff-målsøkte celler" i et gitt tidsrom, ved mekanismene for Fc-mediert cellulær cytotoksisitet. Økningen i Fc-mediert cellulær cytotoksisitet er i forhold til den cellulære cytotoksisitet som medieres ved det samme antistoff eller Fc-fusjonsprotein, frembrakt ved den samme type vertsceller, under anvendelse av de samme standardfrembringelses-, -rense-, -formulerings- og -lagringsmetoder, som er kjent for fagfolk på området, men som ikke er blitt frembrakt av vertsceller som er omarbeidet til å uttrykke glykosyltransferasen GnTIII ved metodene beskrevet her i dokumentet.
[0108] Med antistoff med øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) menes et antistoff, slik denne betegnelse er definert her i dokumentet, med øket ADCC ifølge bestemmelse ved hvilken som helst egnet metode kjent for vanlige fagfolk på området. Én akseptert in vitro-ADCC-analyse er som følger:
1) analysen anvender målceller som er kjent for å uttrykke målantigenet som gjenkjennes av den antigenbindende region av antistoffet;
2) analysen anvender humane mononukleære celler fra perifert blod (PBMC), isolert fra blod fra vilkårlig valgt frisk donor, som effektorceller;
3) analysen utføres i henhold til følgende protokoll:
i) PBMC isoleres under anvendelse av standard-densitetssentrifugeringsmetoder og oppslemmes med 5 x 10<6 >celler pr. ml i RPMI-celledyrkningsmedium;
ii) målcellene dyrkes ved standard-vevsdyrkningsmetoder, høstes fra den eksponensielle vekstfase med en levedyktighet høyere enn 90%, vaskes i RPMI-celledyrkningsmedium, merkes med 100 μCi <51>Cr, vaskes to ganger med celledyrkningsmedium og gjenoppslemmes i celledyrkningsmedium med en tetthet på 10<5 >celler pr. ml;
iii) 100 mikroliter av den endelige målcellesuspensjon ovenfor overføres til hver brønn i en 96 brønns mikrotiterplate;
iv) antistoffet seriefortynnes fra 4000 ng/ml til 0,04 ng/ml i celledyrkningsmedium, og 50 mikroliter av de resulterende antistoffløsninger tilsettes til målcellene i 96 brønns mikrotiterplaten, under in triplo-testing av forskjellige antistoffkonsentrasjsoner som dekker hele konsentrasjonsområdet ovenfor;
v) for maksimal frigjørings-(MR)-kontrollene får 3 ytterligere brønner i platen som inneholder de merkede målceller, 50 mikroliter av en 2% (på volumbasis) vandig løsning av ikke-ionisk detergent (Nonidet, Sigma, St. Louis), i stedet for antistoffløsningen (punkt iv ovenfor).
vi) for spontan frigjørings-(SR)-kontrollene får 3 ytterligere brønner i platen inneholdende de merkede målceller 50 mikroliter RPMI-celledyrkningsmedium i stedet for antistoffløsningen (punkt iv ovenfor);
vii) 96 brønns mikrotiterplaten blir så sentrifugert ved 50 x g i 1 minutt og inkuberes i 1 time ved 4 ºC;
viii) 50 mikroliter av PBMC-suspensjonen (punkt i ovenfor) tilsettes i hver brønn under frembringelse av et effektor:målcelle-forhold på 25:1, og platene anbringes i en inkubator under 5% CO2-atmosfære ved 37 ºC i 4 timer;
ix) den cellefrie supernatant fra hver brønn høstes, og den eksperimentelt frigjorte radioaktivitet (ER) kvantifiseres under anvendelse av en gammateller;
x) prosentandelen av spesifikk lyse beregnes for hver antistoffkonsentrasjon i henhold til formelen (ER-MR)/(MR-SR) x 100, hvor ER er den gjennomsnittlige kvantifiserte radioaktivitet (se punkt ix ovenfor) for denne antistoffkonsentrasjon, MR er den gjennomsnittlige kvantifiserte radioaktivitet (se punkt ix ovenfor) for MR-kontrollene (se punkt v ovenfor), og SR er den gjennomsnittlige kvantifiserte radioaktivitet (se punkt ix ovenfor) for SR-kontrollene (se punkt vi ovenfor);
4) "øket ADCC" er definert som enten en økning i den maksimale prosentandel av spesifikk lyse observert i antistoffkonsentrasjonsområdet testet ovenfor, og/eller en reduksjon i konsentrasjonen av antistoff som trenges for oppnåelse av halvdelen av den maksimale prosentandel av spesifikk lyse observert i antistoffkonsentrasjonsområdet testet ovenfor. Økningen i ADCC er i forhold til ADCC, målt med ovennevnte analyse, som medieres ved det samme antistoff, frembrakt ved den samme type vertsceller, under anvendelse av de samme standardfrembringelses-, -rense-, -formulerings- og -lagringsmetoder, som er kjent for fagfolk på området, men som ikke er blitt frembrakt av vertsceller som er omarbeidet til å overuttrykke GnTIII.
[0109] Ved ett aspekt angår foreliggende beskrivelse antigenbindende molekyler med bindingsspesifisitet som hos muse-B-Ly1-antistoffet, og oppdagelsen av at deres effektorfunksjoner kan forbedres ved forandret glykosylering. Ved én utførelsesform er det antigenbindende molekyl et kimærisk antistoff. Ved en foretrukket utførelsesform er beskrivelsen rettet mot et kimærisk antistoff, eller et fragment derav, omfattende CDR vist på fig.7. Spesifikt er beskrivelsen ved en foretrukket utførelsesform rettet mot et isolert polynukleotid omfattende: (a) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:5, SEKV ID NR: 6 og SEKV ID NR: 7. (CDR VH-1); og (b) en sekvens valgt fra en gruppe bestående av: SEKV ID NR:21, SEKV ID NR: 22 og SEKV ID NR: 23. (CDR VH-2; og SEKV ID NR: 24. Ved en annen foretrukket utførelsesform er beskrivelsen rettet mot et isolert polynukleotid omfattende SEKV ID NR: 8, SEKV ID NR: 9 og SEKV ID NR: 10. (CDR VL). Ved én utførelsesform koder hvert av disse polynukleotidene for et fusjonspolypeptid.
[0110] Ved en annen utførelsesform omfatter det antigenbindende molekyl VH-doménet av muse-B-Ly1-antistoffet vist på fig.1, eller en variant derav; og et ikke-muse-polypeptid. Ved en annen foretrukket utførelsesform er oppfinnelsen rettet mot et antigenbindende molekyl omfattende VL-doménet av muse-B-Ly1-antistoffet vist på fig.2, eller en variant derav; og et ikke-muse-polypeptid.
[0111] Ved et annet aspekt er beskrivelsen rettet mot antigenbindende molekyler omfattende én eller flere avkortede CDR av B-Ly1. Slike avkortede CDR vil mimimalt inneholde de spesifisitetsbestemmende aminosyrerester for den gitte CDR. Med "spesifisitetsbestemmende rest" menes de rester som er direkte involvert i interaksjonen med antigenet. Vanligvis deltar bare ca. én femtedel til én tredjedel av restene i en gitt CDR i binding til antigen. De spesifisitetsbestemmende rester i en spesiell CDR kan identifiseres for eksempel ved beregning av interatomiske kontakter ut fra tredimensjonal modellering og bestemmelse av sekvensvariabiliteten ved en gitt reststilling i henhold til metodene beskrevet i Padlan et al., FASEB J.9(1):133-139 (1995).
[0112] Beskrivelsen er følgelig også rettet mot et isolert polynukleotid omfattende minst én komplementaritetsbestemmende region av muse-B-Ly1-antistoffet, eller en variant- eller avkortet form derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, hvor det isolert polynukleotid koder for et fusjonspolypeptid. Slike isolerte polynukleotider koder fortrinnsvis for et fusjonspolypeptid som er et antigenbindende molekyl. Ved én utførelsesform omfatter polynukleotidet tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1-antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved en annen utførelsesform koder polynukleotidet for hele den variable region av den lette eller tunge kjede av et kimærisk (f.eks. humanisert) antistoff.
Beskrivelsen er videre rettet mot polypeptidene som kodes for av slike
polynukleotider.
[0113] Ved en annen utførelsesform er beskrivelsen rettet mot et antigenkombinerende molekyl omfattende minst én komplementaritetsbestemmende region av muse-B-Ly1-antistoffet, eller en variant eller avkortet form derav inneholdende i det minste de spesifisitetsbestemmende rester for den komplementaritetsbestemmende region, og omfattende en sekvens som stammer fra et heterologt polypeptid. Ved én utførelsesform omfatter det antigenbindende molekyl tre komplementaritetsbestemmende regioner av muse-B-Ly1-antistoffet, eller varianter eller avkortede former derav inneholdende minst de spesifisitetsbestemmende rester for hver av de tre komplementaritetsbestemmende regioner. Ved et annet aspekt omfatter det antigenbindende molekyl den variable region av en lett eller tung antistoffkjede. Ved én spesielt anvendelig utførelsesform er det antigenbindende molekyl et kimærisk, f.eks. humanisert, antistoff. Beskrivelsen er også rettet mot fremgangsmåter for frembringelse av slike antigenbindende molekyler, og anvendelse av disse ved behandling av sykdom, innbefattende B-celle-lymfomer.
[0114] Det er kjent at flere mekanismer inngår ved den terapeutiske effektivitet av anti-CD20-antistoffer, innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC), komplementavhengig cytotoksisitet (CDC) og induksjon av vekststansing eller apoptose. For eksempel tyder hovedandelen av eksperimentelle beviser på at rituximab opererer via konvensjonelle effektormekanismer målt ved CDC- og ADCC-analyser. Likeledes er det vist at bestandigheten hos forskjellige lymfomceller overfor rituximab in vivo er en funksjon av deres følsomhet overfor CDC in vitro. I motsetning til dette fordrer virkningsmåten in vivo for et annet antistoff som er blitt godkjent for terapeutisk bruk, B1, verken komplement eller naturlig dreper (NK)-celle-aktivitet.
Effektiviteten av B1 in vivo skyldes snarere dets evne til å indusere potent apoptose.
[0115] Monoklonale anti-CD20-antistoffer kan generelt inndeles i to atskilte kategorier basert på sin virkningsmekanisme med hensyn til å utrydde lymfomceller. Anti-CD20-antistoffer type I anvender hovedsakelig komplement til å drepe målceller, mens antistoffer type II opererer ved andre mekanismer, hovedsakelig apoptose. Rituximab og 1F5 er eksempler på anti-CD20-antistoffer type I, mens B1 er et eksempel på et antistoff type II. Se f.eks. Cragg, M.S, og Glennie, M.J., Blood 103(7):2738-2743 (april 2004); Teeling, J.L. et al., Blood 104(6):1793-1800 (september 2004).
[0116] Foreliggende beskrivelse er det første kjente tilfelle hvor et anti-CD20-antistoff type II er blitt omarbeidet til å ha økte effektorfunksjoner så som ADCC, mens det fremdeles bibeholder potent apoptoseevne. Foreliggende beskrivelse er følgelig rettet mot et omarbeidet anti-CD20-antistoff type II med øket ADCC som resultat av denne omarbeiding, og uten tap av vesentlig evne til å indusere apoptose. Ved én utførelsesform er anti-CD20-antistoffene type II blitt omarbeidet til å ha et forandret mønster for glykosylering i Fc-regionen. Ved en spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et øket nivå av todelte kompleksrester i Fc-regionen. Ved en annen spesiell utførelsesform omfatter den forandrede glykosylering et redusert nivå av fukoserester i Fcregionen. Se publisert US-patentsøknad nr.2004/0093621. Ved en annen utførelsesform har anti-CD20-antistoffene type II gjennomgått polypeptidomarbeiding som angitt i US-patent nr.6 737 056 eller publisert US-patentsøknad nr.2004/0185045 eller publisert US-patentsøknad nr.
2004/0132101. Beskrivelsen er videre rettet mot fremgangsmåter for frembringelse av slike omarbeidede antistoffer type II samt fremgangsmåter for anvendelse av slike antistoffer ved behandling av forskjellige B-celle-forstyrrelser, innbefattende B-celle-lymfomer.
[0117] Kimæriske muse-/humane antistoffer er beskrevet. Se for eksempel Morrison, S. L. et al., PNAS I1 :6851-6854 (november 1984); europeisk patentpublikasjon nr.173494; Boulianna, G. L, et al., Nature 312:642 (desember 1984); Neubeiger, M. S. et al., Nature 314:268 (mars 1985); europeisk patentpublikasjon nr.125023; Tan et al., J. Immunol.135:8564 (november 1985); Sun, L. K et al., Hybridoma 5(1):517 (1986); Sahagan et al., J. Immunol.
137:1066-1074 (1986). Se generelt Muron, Nature 312:597 (desember 1984); Dickson, Genetic Engineering News 5(3) (mars 1985); Marx, Science 229:455 (august 1985); og Morrison, Science 229:1202-1207 (september 1985). PCT-publikasjon nr. WO/88104936 beskriver et kimærisk antistoff med konstant human region og variabel museregion, med spesifisitet overfor en epitop på CD20; musedelen av det kimæriske antistoff i Robinson-referansen stammer fra det monoklonale museantistoff 2H7 (gamma 2b, kappa). Skjønt referansen bemerker at det beskrevne kimæriske antistoff er en "hovedkandidat" for behandling av B-celleforstyrrelser, kan dette utsagn anses som ikke mer enn et forslag overfor fagfolk på området for å bestemme om hvorvidt dette forslag er nøyaktig for dette spesielle antistoff eller ikke, spesielt på grunn av at referansen mangler data som underbygger påstanden om terapeutisk effektivitet, og i det vesentlige data som anvender høyereordens-pattedyr så som primater eller mennesker.
[0118] Metodikker for frembringelse av kimæriske antistoffer er tilgjengelige for fagfolk på området. For eksempel kan de lette og tunge kjeder uttrykkes separat, for eksempel under anvendelse av immunglobulin-lettkjeder og immunglobulin-tungkjeder i separate plasmider, eller på en enkelt (f.eks. polycistronisk) vektor. Disse kan så renses og settes sammen in vitro til fullstendige antistoffer; metodikker for utførelse av slik sammensetting er beskrevet. Se for eksempel Scharff M., Harvey Lectures 69:125 (1974). In vitroreaksjonsparametere for dannelse av IgG-antistoffer fra reduserte isolerte lette og tunge kjeder er også beskrevet. Se for eksempel Sears et al., Biochem.
16(9):2016-25 (1977).
[0119] Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er det kimæriske ABM ifølge foreliggende beskrivelse et humanisert antistoff. Metoder for humanisering av ikke-humane antistoffer er kjent på området. For eksempel kan humaniserte ABM ifølge foreliggende beskrivelse frembringes i henhold til metodene ifølge US-patent nr.5 225 539, US-patent nr.6 180 370 eller US-patent nr.6 632 927. Et humanisert antistoff har fortrinnsvis innført én eller flere aminosyrerester fra en kilde som er ikke-human. Disse ikke-humane aminosyrerester omtales ofte som "import"-rester, som typisk er tatt fra et variabelt "import"-doméne. Humanisering kan i det vesentlige utføres i henhold til metoden ifølge Winter og medarbeidere (Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)) ved innsetting av hypervariable regionsekvenser i stedet for de tilsvarende sekvenser av et humant antistoff. Slike "humaniserte" antistoffer er følgelig kimæriske antistoffer (US-patent nr.4 816 567) hvor hovedsakelig mindre enn et intakt humant variabelt doméne er blitt erstattet med den tilsvarende sekvens fra en ikke-human art. I praksis er humaniserte antistoffer typisk humane antistoffer hvor en del hypervariabel region-rester og eventuelt en del FR-rester er erstattet med rester fra analoge steder i gnager-antistoffer. De aktuelle humaniserte anti-CD20-antistoffer vil omfatte konstante regioner av humant immunglobulin.
[0120] Valget av humane variable doméner, både lette og tunge, for anvendelse ved frembringelse av de humaniserte antistoffer er meget viktig for redusering av antigenisitet. I henhold til den såkalte "beste tilpasnings"-metode blir sekvensen i det variable doméne av et gnager-antistoff screenet mot hele biblioteket av kjente humane variabelt doméne-sekvenser. Den humane sekvens som er nærmest gnagersekvensen, blir så akseptert som den humane rammeverkregion (FR) for det humaniserte antistoff (Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Clothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)). En annen metode for utvelging av den humane rammeverksekvens er å sammenlikne sekvensen for hver individuell subregion av hele gnager-rammeverket (dvs. FR1, FR2, FR3 og FR4) eller en kombinasjon av de individuelle subregioner (f.eks. FR1 og FR2) med et bibliotek av kjente humane variabel region-sekvenser som svarer til denne rammeverk-subregion (f.eks. bestemt ved Kabat-nummerering) og velge den humane sekvens for hver subregion eller kombinasjon som er nærmest gnagersekvensen (publisert US-patentsøknad nr.2003/0040606A1, publisert 27. feb. 2003). En annen metode anvender en bestemt rammeverkregion som stammer fra konsensussekvensen hos alle humane antistoffer i en spesiell subgruppe av lette eller tunge kjeder. Det samme rammeverk kan anvendes for flere forskjellige humaniserte antistoffer (Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993)).
[0121] Det er videre viktig at antistoffer humaniseres med retensjon av høy affinitet for antigenet og andre gunstige biologiske egenskaper. For å oppnå dette mål blir humaniserte antistoffer i henhold til en foretrukket metode frembrakt ved hjelp av en prosess for analyse av parentalsekvensene og forskjellige begrepsmessige humaniserte produkter under anvendelse av tredimensjonale modeller av parentalsekvensene og de humaniserte sekvenser. Tredimensjonale immunglobulinmodeller er alminnelig tilgjengelige og er kjent for fagfolk på området. Det er tilgjengelig datamaskinprogrammer som illustrerer og viser sannsynlige tredimensjonale konformasjonelle strukturer av utvalgte kandidatimmunglobulinsekvenser. Inspeksjon av disse fremvisninger muliggjør analyse av den sannsynlige rolle for restene ved funksjonering av kandidat-immunglobulinsekvensen, dvs. analyse av rester som innvirker på evnen hos kandidatimmunglobulinet til å binde sitt antigen. På denne måte kan FR-rester utvelges og kombineres fra mottaker- og importsekvensene slik at de ønskede antistoffkarakteregenskaper, så som øket affinitet for målantigenet (-antigenene) oppnås.
Vanligvis er restene i den hypervariable region direkte og i det alt vesentlige involvert i innvirkning på antigenbinding.
[0122] Ved en annen utførelsesform blir de antigenbindende molekyler ifølge foreliggende beskrivelse omarbeidet til å ha forøket bindingsaffinitet, for eksempel i henhold til metodene beskrevet i publisert US-patentsøknad nr.
2004/0132066.
[0123] Ved én utførelsesform blir det antigenbindende molekyl ifølge foreliggende beskrivelse konjugert til en ytterligere del, så som en radiomerkesubstans eller et toksin. Slike konjugerte ABM kan frembringes ved hjelp av tallrike metoder som er velkjente på området.
[0124] En rekke radionuklider er anvendelige ved foreliggende beskrivelse, og fagfolk på området tillegges evnen til lett å bestemme hvilken radionuklide som er mest hensiktsmessig under en rekke omstendigheter. For eksempel er <131>jod en velkjent radionuklide som anvendes for målsøkt immunterapi. Den kliniske anvendelighet av <131>jod kan imidlertid være begrenset av flere faktorer innbefattende: åtte dagers fysisk halveringstid; dehalogenering av jodert antistoff både i blodet og på tumorsteder; og emisjonsegenskaper (f.eks. stor gammakomponent) som kan være suboptimal for lokalisert doseavsetning i tumor. Med tilkomst av bedre chelateringsmidler har muligheten til å knytte metallchelaterende grupper til proteiner øket mulighetene til å anvende andre radionuklider så som <111>indium og <90>yttrium.<90>Yttrium gir flere fordeler for anvendelse ved radioimmunterapeutiske anvendelser: 64 timers halveringstiden for <90>yttrium er lang nok til å muliggjøre antistoffopphopning ved tumor, og i motsetning til f.eks.<131>jod, er <90>yttrium en ren betaemitter med høy energi uten noen ledsagende gammastråling ved nedbrytningen av det, med en rekkevidde i vev på 100 til 1000 cellediametre. Videre muliggjør den minimale mengde av gjennomtrengende stråling poliklinisk administrering av <90>yttrium-merkede antistoffer. Dessuten er internalisering av merket antistoff ikke nødvendig for celledreping, og den lokale emisjon av ioniserende stråling skulle være letal for nabo-tumorceller som mangler mål-antigenet.
[0125] Effektive enkeltbehandlingsdoseringer (dvs. terapeutisk effektive mengder) av <90>yttrium-merkede anti-CD20-antistoffer er i området mellom ca. 5 og ca.75 mCi, mer foretrukket mellom ca. 10 og ca.40 mCi. Effektive ablative enkeltbehandlings-benmargdoser av <131>jod-merkede anti-CD20-antistoffer er i området mellom ca.5 og ca. 70 mCi, mer foretrukket mellom ca. 5 og ca.40 mCi. Effektive ablative enkeltbehandlingsdoser (dvs. kan kreve autolog benmargtransplantasjon) av <131>jod-merkede anti-CD20-antistoffer er i området mellom ca.30 og ca.600 mCi, mer foretrukket mellom ca.50 og mindre enn ca.
500 mCi. I forbindelse med et kimærisk anti-CD20-antistoff er en effektiv ablativ enkeltbehandlings-benmargdose av <131>jod-merkede kimæriske anti-CD20-antistoffer i området mellom ca.5 og ca.40 mCi, mer foretrukket mindre enn ca.
30 mCi, på grunn av den lengre sirkulerings-halveringstid i forhold til museantistoffer. Avbildingskriterier for f.eks.<111>indium-merkesubstansen er typisk mindre enn ca.5 mCi.
[0126] Med hensyn til radiomerkede anti-CD20-antistoffer kan terapi med disse også finne sted ved anvendelse av en enkeltterapibehandling eller ved anvendelse av multiple behandlinger. På grunn av radionuklidekomponenten er det foretrukket at perifere stamceller ("PSC") eller benmarg ("BM") "høstes" for behandling av pasienter som har fått potensielt fatal benmargtoksisitet som resultat av bestråling. BM og/eller PSC høstes under anvendelse av standardteknikker, og blir så utskylt og frosset for eventuell reinfusjon. Det er dessuten meget foretrukket at det før behandling utføres en diagnostisk dosimetriundersøkelse med anvendelse av et diagnostisk merket antistoff (f.eks. under anvendelse av <111>indium) på pasienten; et formål med dette er å sikre at det terapeutisk merkede antistoff (f.eks. med anvendelse av <90>yttrium) ikke vil bli unødvendig "konsentrert" i noe normalt organ eller vev.
[0127] Ved en foretrukket utførelsesform er foreliggende beskrivelse rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med en aminosyresekvens som vist i tabell 3 nedenfor. Beskrivelsen er videre rettet mot en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med en nukleotidsekvens vist i tabell 2 nedenfor. Ved en annen utførelsesform er beskrivelsen rettet mot en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med en aminosyresekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med en aminosyresekvens i tabell 3. Beskrivelsen omfatter også en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med aminosyresekvens som hos hvilken som helst av konstruksjonene i tabell 3 med konserverende aminosyresubstitusjoner.
TABELL 2
TABELL 3
[0128] Ved en annen foretrukket utførelsesform er foreliggende beskrivelse rettet mot et isolert polynukleotid omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med aminosyresekvensen vist på fig. 1 eller fig. 2. Beskrivelsen er videre rettet mot en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med nukleotidsekvensen vist på fig. 5 eller fig. 6. Ved en annen utførelsesform er beskrivelsen rettet mot en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med en aminosyresekvens som er minst 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% eller 99% identisk med aminosyresekvensen vist på fig. 5 eller fig. 6. Beskrivelsen omfatter også en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med aminosyresekvensen ifølge hvilken som helst av fig. 1. fig. 2, fig. 5 eller fig. 6 med konserverende aminosyresubstitusjoner.
[0129] Ved en annen utførelsesform er foreliggende beskrivelse rettet mot en ekspresjonsvektor og/eller en vertscelle som omfatter ett eller flere isolerte polynukleotider ifølge foreliggende beskrivelse.
[0130] Generelt kan hvilken som helst type dyrket cellelinje anvendes til å uttrykke ABM ifølge foreliggende oppfinnelse. Ved en foretrukket utførelsesform anvendes CHO-celler, BHK-celler, NSO-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER. C6-celler eller hybridomceller, andre pattedyrceller, gjærceller, insektceller eller planteceller som bakgrunnscellelinje til frembringelse av de omarbeidede vertsceller ifølge beskrivelsen.
[0131] Den terapeutiske effektivitet av ABM ifølge foreliggende beskrivelse kan forsterkes ved at de frembringes i en vertscelle som videre uttrykker et polynukleotid som koder for et polypeptid med GnTI I l-aktivitet. Ved en foretrukket utførelsesform er polypeptidet med GnTII l-aktivitet et fusjonspolypeptid omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et polypeptid som finnes i Golgiapparatet. Ved en annen foretrukket utførelsesform resulterer ekspresjonen av ABM ifølge foreliggende beskrivelse i en vertscelle som uttrykker et polynukleotid som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, i ABM med øket Fc-reseptorbindingsaffinitet og øket effektorfunksjon. Ved én utførelsesform er foreliggende beskrivelse følgelig rettet mot en vertscelle omfattende (a) en isolert nukleinsyre omfattende en sekvens som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet; og (b) et isolert polynukleotid som koder for et ABM ifølge foreliggende beskrivelse, så som et kimærisk, primatisert eller humanisert antistoff som binder humant CD20. Ved en foretrukket utførelsesform er polypeptidet som har GnTIII-aktivitet, et fusjonspolypeptid omfattende det katalytiske doméne av GnTIII, og Golgilokalisdasjonsdoménet er lokalisasjonsdoménet for mannosidase II. Metoder for frembringelse av slike fusjonspolypeptider og anvendelse av dem til fremstilling av antistoffer med økte effektorfunksjoner er beskrevet i midlertidig US-patentsøknad nr. 60/495 142. Ved en annen foretrukket utførelsesform er det kimæriske ABM et kimærisk antistoff eller et fragment derav, som har bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform omfatter det kimæriske antistoff et humant Fc. Ved en annen foretrukket utførelsesform er antistoffet primatisert eller humanisert.
[0132] Ved én utførelsesform kan ett eller flere polynukleotider som koder for et ABM ifølge foreliggende beskrivelse, uttrykkes under regulering av en konstitutiv promoter, eller alternativt et regulert ekspresjonssystem. Egnede regulerte ekspresjonssystemer innbefatter, men er ikke begrenset til, et tetracyklinregulert ekspresjonssystem, et ecdyson-induserbart ekspresjonssystem, et lac-omskiftings-ekspresjonssystem, et glukokortikoid-induserbart ekspresjonssystem, et temperatur-induserbart promotersystem og et metalltionein-metall-induserbart ekspresjonssystem. Hvis flere forskjellige nukleinsyrer som koder for et ABM ifølge foreliggende beskrivelse finnes i vertscellesystemet, kan noen av dem uttrykkes under kontroll av en konstitutiv promoter, mens andre uttrykkes under kontroll av en regulert promoter. Det maksimale ekspresjonsnivå anses for å være det høyest mulige nivå av stabil polypeptidekspresjon som ikke har en betydelig uheldig virkning på celleveksthastigheten, og vil bli bestemt under anvendelse av rutineeksperimentering. Ekspresjonsnivåene bestemmes ved metoder som er generelt kjent på området, innbefattende Western blot-analyse med anvendelse av et antistoff som er spesifikt for ABM, eller et antistoff som er spesifikt for et peptidmerkemateriale koplet til ABM; og Northern blot-analyse. Ved et ytterligere alternativ kan polynukleotidet være operativt knyttet til et reportergen; ekspresjonsnivåene for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet bestemmes ved måling av et signal som er korrelert med ekspresjonsnivået for reportergenet. Reportergenet kan transkriberes sammen med nukleinsyren(e) som koder for nevnte polypeptid som et enkelt mRNA-molekyl; deres respektive kodingssekvenser kan sammenknyttes enten ved et indre ribosominngangssete (IRES) eller ved en deksel ("cap")-uavhengig translasjonsforsterker (CITE). Reportergenet kan translateres sammen med minst én nukleinsyre som koder for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet slik at det dannes en enkelt polypeptidkjede. Nukleinsyrene som koder for AMB ifølge foreliggende beskrivelse, kan være operativt knyttet til reportergenet under kontroll av en enkelt promoter, slik at nukleinsyren som koder for fusjonspolypeptidet og reportergenet, transkriberes til et RNA-molekyl som alternativt spleises til to atskilte budbringer-RNA (mRNA)-molekyler; ett av de resulterende mRNA translateres til reporterproteinet, og det andre translateres til fusjonsproteinet.
[0133] Metoder som er velkjente for fagfolk på området, kan anvendes til konstruering av ekspresjonsvektorer inneholdende kodingssekvensen for et ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet sammen med passende transkripsjons/translasjons-kontrollsignaler. Disse metoder innbefatter rekombinante in vitro-DNA-teknikker, synteseteknikker og in vivo-rekombinasjon/genetisk rekombinasjon. Se for eksempel teknikkene beskrevet i Maniatis et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989) og Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. (1989).
[0134] Det kan anvendes forskjellige verts-ekspresjonsvektorsystemer til å uttrykke kodingssekvensen for ABM ifølge foreliggende oppfinnelse. Det anvendes fortrinnsvis pattedyrceller som vertssystemer transfektert med rekombinant plasmid-DNA- eller kosmid-DNA-ekspresjonsvektorer inneholdende kodingssekvensen for det aktuelle protein, og kodingssekvensen for fusjonspolypeptidet. Mest foretrukket anvendes CHO-celler, BHK-celler, NSO-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, andre pattedyrceller, gjærceller, insektceller eller planteceller som vertscellesystem. Noen eksempler på ekspresjonssystemer og seleksjonsmetoder er beskrevet i følgende referanser, og referanser i disse: Borth et al., Biotechnol. Bioen.71(4):266-73 (2000-2001), i Werner et al., Arzneimittelforschung/Drug Res.48(8):870-80 (1998), i Andersen og Krummen, Curr. Op. Biotechnol.13:117-123 (2002), i Chadd og Chamow, Curr. Op.
Biotechnol. 12:188-194 (2001), og i Giddings, Curr. Op. Biotechnol.12: 450-454 (2001). Ved alternative utførelsesformer kan andre eukaryote vertscellesystemer overveies, innbefattende gjærceller transformert med rekombinante gjærekspresjonsvektorer inneholdende kodingssekvensen for et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse; insektscellesystemer infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (f.eks. baculovirus) inneholdende kodingssekvensen for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet; plantecellesystemer infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (f.eks. blomkålmosaikkvirus, CaMV; tobakkmosaikkvirus, TMV) eller transformert med rekombinante plasmid-ekspresjonsvektorer (f.eks. Ti-plasmid) inneholdende kodingssekvensen for ABM ifølge oppfinnelsen; eller dyrecellesystemer infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (f.eks. adenovirus, vacciniavirus) innbefattende cellelinjer omarbeidet til å inneholde multiple kopier av DNA som koder for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet, enten stabilt amplifisert (CHO/dhfr) eller ustabilt amplifisert i dobbelt-småkromosomer (f.eks. musecellelinjer). Ved én utførelsesform er vektoren omfattende polynukleotidet (polynukleotidene) som koder for ABM ifølge beskrivelsen, polycistronisk. Ved én utførelsesform er ABM omtalt ovenfor dessuten et antistoff eller et fragment derav. Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff.
[0135] Når det gjelder fremgangsmåtene ifølge denne beskrivelse, er stabil ekspresjon vanligvis foretrukket fremfor forbigående ekspresjon på grunn av at den typisk oppnår mer reproduserbare resultater og dessuten er mer tilpassbar til storskalaproduksjon. Heller enn å anvende ekspresjonsvektorer som inneholder virus-replikasjonsorigo, kan vertsceller transformeres med de respektive kodingsnukleinsyrer kontrollert ved passende ekspresjonskontrollelementer (f.eks. promoter, forsterker, sekvenser, transkripsjonsterminatorer, polyadenyleringsseter osv.) og en selekterbar markør. Etter innføring av fremmed DNA, kan omarbeidede celler få vokse i 1-2 dager i et anriket medium, som deretter blir skiftet til et selektivt medium. Den selekterbare markør i det rekombinante plasmid gir resistens til seleksjonen og muliggjør seleksjon av celler som har stabilt integrert plasmidet i sine kromosomer og vokser under dannelse av foci som i sin tur kan klones og ekspanderes i cellelinjer.
[0136] En rekke seleksjonssystemer kan anvendes, innbefattende, men ikke begrenset til, herpes simplex-virus-thymidinkinase- (Wigler et at, Cell 11:223 (1977)), hypoxantin-guanin fosforibosyltransferase- (Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:2026 (1962)), og adeninfosforibosyltransferase- (Lowy et at, Cell 22:817 (1980)) gener, som kan anvendes i henholdsvis tk-- hgprt-- eller aprt--celle. Dessuten kan antimetabolittresistens anvendes som basis for seleksjon med henblikk på dhfr, som gir resistens overfor metotreksat (Wigler et al., Natl. Acad. Sci. USA 77:3567 (1989); O'Hare et at , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527 (1981)); gpt, som gir resistens overfor mykofenolsyre (Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072 (1981)); neo, som gir resistens overfor aminoglykosid G-418- (Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol. 150:1 (1981)); og hygro, som gir resistens overfor hygromycin- (Santerre et at , Gene 30:147 (1984) gener. Det er nylig beskrevet ytterligere selekterbare gener, nemlig trpB, som gir mulighet for celler å anvende indol i stedet for tryptofan; hisD, som gir mulighet for celler å anvende histinol i stedet for histidin (Hartman & Mulligan, Proc. Natl. Acad. Set USA 85:8047 (1988)); glutaminsyntasesystemet; og ODC (ornitindekarboksylase) som gir resistens overfor ornitindekarboksylase-inhibitoren, 2-(difluormeyl-DL-ornitin, DFMO (McConlogue, i: Current Communications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory red. (1987)).
[0137] Foreliggende beskrivelse er videre rettet mot en metode for modifisering av glykosyleringsprofilen for ABM ifølge foreliggende beskrivelse som dannes av en vertscelle, omfattende ekspresjon i vertscellen av en nukleinsyre som koder for et ABM ifølge beskrivelsen, og en nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, eller en vektor omfattende slike nukleinsyrer. Det modifiserte polypeptid er fortrinnsvis IgG eller et fragment derav omfattende Fcregionen. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff eller et fragment derav.
[0138] De modifiserte ABM dannet av vertscellene ifølge oppfinnelsen oppviser øket Fc-reseptor-bindende affinitet og/eller øket effektorfunksjon som resultat av modifikasjonen. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff eller et fragment derav inneholdende Fc-regionen. Den økte Fc-reseptor-bindende affinitet er fortrinnsvis øket binding til en Fc γ-aktiverende reseptor, så som Fc γRIIIa-reseptoren. Den økte effektorfunksjon er fortrinnsvis en økning i én eller flere av følgende: øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet, øket antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), øket cytokinutskillelse, øket immunkompleks-mediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, øket Fcmediert cellulær cytotoksisitet, øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til polymorfonukleære celler (PMN), øket binding til monocytter, øket kryssbinding av målbundne antistoffer, øket direkte signalisering som induserer apoptose, øket dendrittcelleutvikling og øket T-celle-priming.
[0139] Foreliggende beskrivelse er også rettet mot en fremgangsmåte for frembringelse av et ABM ifølge foreliggende beskrivelse, med modifiserte oligosakkarider i en vertscelle, omfattende (a) dyrking av en vertscelle som er omarbeidet til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet under betingelser som muliggjør dannelse av et ABM ifølge foreliggende beskrivelse, hvor polypeptidet med GnTIII-aktivitet uttrykkes i en mengde som er tilstrekkelig til å modifisere oligosakkaridene i Fc-regionen av nevnte ABM dannet av vertscellen; og (b) isolering av dette ABM. Ved en foretrukket utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid omfattende det katalytiske doméne av GnTIII. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform omfatter fusjonspolypeptidet videre Golgi-lokalisasjonsdoménet av et polypeptid i Golgi-apparatet.
[0140] Golgi-lokalisasjonsdoménet er fortrinnsvis lokalisasjonsdoménet av mannosidase II eller GnTI. Alternativt er Golgi-lokalisasjonsdoménet valgt fra gruppen bestående av: lokalisasjonsdoménet av mannosidase I, lokalisasjonsdoménet av GnTII og lokalisasjonsdoménet av α1-6-kjerne-fukosyltransferase. ABM fremstilt ved hjelp av fremgangsmåtene ifølge foreliggende beskrivelse har øket Fc-reseptor-bindende affinitet og/eller øket effektorfunksjon. Den økte effektorfunksjon er fortrinnsvis én eller flere av følgende: øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet (innbefattende øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet), øket antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), øket cytokinutskillelse, øket immunkompleks-mediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til monocytter, øket binding til polymorfonukleære celler, øket direkte signalisering som induserer apoptose, øket kryssbinding av målbundne antistoffer, øket dendrittcelleutvikling eller øket T-celle-priming. Den økte Fc-reseptor-bindende affinitet er fortrinnsvis øket binding til Fc-aktiverende reseptorer så som Fc γRIIIa. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff eller et fragment derav.
[0141] Ved en annen utførelsesform er foreliggende beskrivelse rettet mot et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet frembrakt ved hjelp av fremgangsmåtene ifølge beskrivelse som har en øket andel av todelte oligosakkarider i Fc-regionen av nevnte polypeptid. Man tenker seg at et slikt ABM omfatter antistoffer og fragmenter derav omfattende Fc-regionen. Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff. Ved én utførelsesform er prosentandelen av todelte oligosakkarider i Fcregionen av ABM minst 50%, mer fortrukket minst 60%, minst 70%, minst 80%, minst 90% og mest foretrukket minst 90-95% av den totale mengde oligosakkarider. Ved enda en annen utførelsesform har ABM fremstilt ved fremgangsmåtene ifølge beskrivelsen en øket andel av ikke-fukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen som resultat av modifikasjonen av dets oligosakkarider ved hjelp av fremgangsmåtene ifølge foreliggende beskrivelse. Ved én utførelsesform er prosentandelen av ikke-fukosylerte oligosakkarider minst 50%, fortrinnsvis minst 60 til 70%, mest foretrukket minst 75%. De ikke-fukosylerte oligosakkarider kan være av hybrid- eller komplekstypen. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform har ABM dannet av vertscellene og ved fremgangsmåtene ifølge beskrivelsen en øket andel av todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider i Fc-regionen. De todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider kan være enten hybride eller komplekse. Fremgangsmåtene ifølge foreliggende beskrivelse kan spesifikt anvendes til frembringelse av ABM hvor minst 15%, mer foretrukket minst 20%, mer foretrukket minst 25%, mer foretrukket minst 30%, mer foretrukket minst 35% av oligosakkaridene i Fc-regionen av ABM er todelte, ikkefukosylerte. Fremgangsmåtene ifølge foreliggende beskrivelse kan også anvendes til fremstilling av polypeptider hvor minst 15%, mer foretrukket minst 20%, mer foretrukket minst 25%, mer foretrukket minst 30%, mer foretrukket minst 35% av oligosakkaridene i Fc-regionen av polypeptidet er todelte hybride, ikke-fukosylerte.
[0142] Ved en annen utførelsesform er foreliggende beskrivelse rettet mot et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-BLy1-antistoffet som er omarbeidet til å ha øket effektorfunksjon og/eller øket Fcreseptor-bindende affinitet, fremstilt ved fremgangsmåtene ifølge beskrivelsen. Den økte effektorfunksjon er fortrinnsvis én eller flere av følgende: øket Fc-mediert cellulær cytotoksisitet (innbefattende øket antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet), øket antistoffavhengig cellulær fagocytose (ADCP), øket cytokinutskillelse, øket immunkompleks-mediert antigenopptak ved antigenpresenterende celler, øket binding til NK-celler, øket binding til makrofager, øket binding til monocytter, øket binding til polymorfonukleære celler, øket direkte signalisering som induserer apoptose, øket kryssbinding av målbundne antistoffer, øket dendrittcelleutvikling eller øket T-celle-priming. Ved en foretrukket utførelsesform er den økte Fc-reseptor-bindende affinitet øket binding til en Fcaktiverende reseptor, mest foretrukket Fc γRIIIa. Ved én utførelsesform er ABM et antistoff, et antistoff-fragment inneholdende Fc-regionen eller et fusjonsprotein som innbefatter en region som er ekvivalent med Fc-regionen av et immunglobulin. Ved en spesielt foretrukket utførelsesform er ABM et humanisert antistoff.
[0143] Foreliggende beskrivelse er videre rettet mot farmasøytiske preparater omfattende ABM ifølge foreliggende beskrivelse og en farmasøytisk akseptabel bærer.
[0144] Foreliggende beskrivelse er videre rettet mot anvendelse av slike farmasøytiske preparater ved metoden for behandling av kreft. Spesifikt er foreliggende beskrivelse rettet mot en fremgangsmåte for behandling av kreft, omfattende administrering av en terapeutisk effektiv mengde av det farmasøytiske preparat ifølge beskrivelsen.
[0145] Foreliggende beskrivelse tilveiebringer videre fremgangsmåter for frembringelse og anvendelse av vertscellesystemer for fremstilling av glykoformer av ABM ifølge foreliggende beskrivelse, med øket Fc-reseptor-bindende affinitet, fortrinnsvis øket binding til Fc-aktiverende reseptorer, og/eller med økte effektorfunksjoner, innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet. Glykoomarbeidingsmetodikken som kan anvendes med ABM ifølge foreliggende beskrivelse, er beskrevet mer detaljert i US-patent nr.6 602 684 og midlertidig US-patentsøknad nr.60/441 307 og WO 2004/065540. ABM ifølge foreliggende beskrivelse kan alternativt glyko-omarbeides til å ha reduserte fukoserester i Fcregionen i henhold til teknikkene beskrevet i EP 1176 195 A1.
Frembringelse av cellelinjer for fremstilling av proteiner med forandret glykosyleringsmønster
[0146] Foreliggende beskrivelse tilveiebringer vertscelle-ekspresjonssystemer for frembringelse av ABM ifølge foreliggende beskrivelse med modifiserte glykosyleringsmønstre. Foreliggende beskrivelse tilveiebringer spesielt vertscellesystemer for frembringelse av glykoformer av ABM ifølge foreliggende beskrivelse med forbedret terapeutisk verdi. Beskrivelsen tilveiebringer derfor vertscelle-ekspresjonssystemer valgt eller omarbeidet til å uttrykke et polypeptid med GnTIII-aktivitet. Ved én utførelsesform er polypeptidet med GnTIII-aktivitet et fusjonspolypeptid omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid i Golgi-apparatet. Slike vertscelle-ekspresjons-systemer kan spesifikt omarbeides til å omfatte et rekombinant nukleinsyremolekyl som koder for et polypeptid med GnTIII, operabelt knyttet til et konstitutivt eller regulert promotersystem.
[0147] Ved én spesifikk utførelsesform tilveiebringer foreliggende beskrivelse en vertscelle som er blitt omarbeidet til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet og omfattende Golgilokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgiapparatet. Ved ett aspekt er vertscellen omarbeidet med et nukleinsyremolekyl omfattende minst ett gen som koder for et fusjonspolypeptid med GnTIII-aktivitet og omfattende Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet.
[0148] Generelt kan hvilken som helst type dyrket cellelinje, innbefattende cellelinjene omtalt ovenfor, anvendes som bakgrunn for omarbeiding av vertscellelinjene ifølge foreliggende beskrivelse. Ved en foretrukket utførelsesform anvendes CHO-celler, BHK-celler, NS0-celler, SP2/0-celler, YO-myelomceller, P3X63-musemyelomceller, PER-celler, PER.C6-celler eller hybridomceller, andre pattedyrceller, gjærceller, insektceller eller planteceller som bakgrunns-cellelinje for frembringelse av de omarbeidede vertsceller ifølge beskrivelsen.
[0149] Beskrivelsen er forutsett å omfatte hvilke som helst omarbeidede vertsceller som uttrykker et polypeptid med GnTIII-aktivitet, innbefattende et fusjonspolypeptid som omfatter Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet, som definert her i dokumentet.
[0150] Én eller flere nukleinsyrer som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet, kan uttrykkes under kontroll av en konstitutiv promoter, eller alternativt et regulert ekspresjonssystem. Slike systemer er velkjente på området og innbefatter systemene omtalt ovenfor. Hvis flere forskjellige nukleinsyrer som koder for fusjonspolypeptider med GnTIII-aktivitet, og som omfatter Golgi-lokalisasjonsdoménet av et heterologt polypeptid som befinner seg i Golgi-apparatet, omfattes i vertscellesystemet, kan noen av dem uttrykkes under kontroll av en konstitutiv promoter, mens andre uttrykkes under kontroll av en regulert promoter.
Ekspresjonsnivåer av fusjonspolypeptidene med GnTIII-aktivitet bestemmes ved metodene som er generelt kjent på området, innbefattende Western blot-analyse, Northern blot-analyse, reportergen-ekspresjonsanalyse eller måling av GnTIII-aktivitet. Alternativt kan det anvendes et lektin som bindes til biosyntetiske produkter av GnTIII, for eksempel E4-PHA-lektin. Alternativt kan det anvendes en funksjonsanalyse som måler den økte Fc-reseptor-binding eller øket effektorfunksjon formidlet av antistoffer dannet av cellene som er omarbeidet med nukleinsyren som koder for et polypeptid med GnTIII-aktivitet.
Identifikasjon av transfektanter eller transformanter som uttrykker proteinet med et modifisert glykosyleringsmønster
[0151] Vertscellene som inneholder kodingssekvensen for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet, og som uttrykker de biologisk aktive genprodukter, kan identifiseres ved minst fire generelle fremgangsmåter: (a) DNA-DNA- eller DNA-RNA-hybridisering; (b) tilstedeværelse eller fravær av "markør"-genfunksjoner; (c) fastsettelse av nivået av transkripsjon målt ved ekspresjon av de respektive mRNA-transkripter i vertscellen; og (d) påvisning av genproduktet målt ved immunanalyse eller ved dets biologiske aktivitet.
[0152] Ved den første fremgangsmåte kan tilstedeværelsen av kodingssekvensen for et kimærisk ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet, og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet påvises ved DNA-DNA- eller DNA-RNA-hybridisering under anvendelse av prober omfattende nukleotidsekvenser som er homologe med henholdsvis de respektive kodingssekvenser eller deler eller derivater derav.
[0153] Ved den andre fremgangsmåte kan det rekombinante ekspresjonsvektor/verts-system identifiseres og selekteres basert på tilstedeværelse eller fravær av visse "markør"-genfunksjoner (f.eks. thymidinkinaseaktivitet, resistens overfor antibiotika, resistens overfor metotreksat, transformasjons-fenotype, okklusjons-legemedannelse i baculovirus, osv.). Hvis for eksempel kodingssekvensen for ABM ifølge beskrivelsen, eller et fragment derav, og kodingsssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet innføres i en markørgensekvens av vektoren, kan rekombinanter inneholdende de respektive kodingssekvenser identifiseres ved fraværet av markørgenfunksjonen. Alternativt kan et markørgen anbringes i tandem med kodingssekvensene under kontroll av den samme eller annen promoter anvendt til regulering av ekspresjonen av kodingssekvensene. Ekspresjon av markøren som svar på induksjon eller seleksjon angir ekspresjon av kodingssekvensen for ABM ifølge beskrivelsen og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet.
[0154] Ved den tredje fremgangsmåte kan transkripsjonsaktivitet for kodingsregionen for ABM ifølge oppfinnelsen, eller et fragment derav, og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet, fastsettes ved hybridiseringsforsøk. For eksempel kan RNA isoleres og analyseres ved hjelp av Northern blot under anvendelse av en probe som er homolog til kodingssekvensene for ABM ifølge beskrivelsen, eller et fragment derav, og kodingssekvensen for polypeptidet med GnTIII-aktivitet eller spesielle deler derav. Alternativt kan total mengde nukleinsyrer i vertscellen ekstraheres og analyseres med henblikk på hybridisering til slike prober.
[0155] Ved den fjerde fremgangsmåte kan ekspresjonen av proteinproduktene fastsettes immunologisk, for eksempel ved Western blot, immunanalyser så som radioimmunpresipitasjon, enzymbundne immunanalyser og liknende. Den endelige test angående vellykkethet av ekspresjonssystemet innbefatter imidlertid påvisning av de biologisk aktive genprodukter.
Frembringelse og anvendelse av ABM med øket effektorfunksjon innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet
[0156] Ved foretrukne utførelsesformer tilveiebringer foreliggende beskrivelse glykoformer av kimæriske ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet og med øket effektorfunksjon innbefattende antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet. Glykosyleringsomarbeiding av antistoffer er beskrevet tidligere. Se f.eks. US-patent nr.6 602 684.
[0157] Kliniske forsøk angående ukonjugerte monoklonale antistoffer (mAb) for behandling av noen typer kreft har nylig gitt oppmuntrende resultater. Dillman, Cancer Biother. Radiopharm. 12:223-25 (1997); Deo et at, Immunology Today 18:127 (1997). Et kimærisk, ukonjugert IgG1 er godkjent for lavgradig eller follikulært ikke-Hodgkins B-celle-lymfom. Dillman, Cancer Biother. & Radiopharm. 12:223-25 (1997), mens et annet ukonjugert mAb, et humanisert IgG1 som søker mot faste brysttumorer, også har vist lovende resultater i kliniske forsøk fase III. Deo et al., Immunology Today 18:127 (1997). Antigenene for disse to mAb uttrykkes sterkt i sine respektive tumorceller, og antistoffene formidler potent tumorødeleggelse ved effektorceller in vitro og in vivo. I motsetning til dette kan mange andre ukonjugerte mAb med fine tumorspesifisiteter ikke trigge effektorfunksjoner med tilstrekkelig potens til at det er klinisk anvendelig. Frost et al., Cancer 80:317-33 (1997); Surfus et al., J. Immunother.19:184-91 (1996). Når det gjelder noen av disse svakere mAb, blir hjerper-cytokinterapi testet for tiden. Tilsetting av cytokiner kan stimulere antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) ved øking av aktiviteten og antallet av sirkulerende lymfocytter. Frost et al., Cancer 80:317-33 (1997); Surfus et at, J. Immunother.19:184-91 (1996). ADCC, et lytisk angrep på antistoff-målsøkte celler, trigges ved binding av leukocyttreseptorer til den konstante region (Fc) av antistoffer.
Deo et al., Immunology Today 18:127 (1997).
[0158] En annen, men komplementerende, fremgangsmåte for øking av ADCC-aktiviteten av ukonjugerte IgG1 er å omarbeide Fc-regionen av antistoffet. Proteinomarbeidingsundersøkelser har vist at Fc γR interagerer med den lavere hengselregion av IgG CH2-doménet. Lund et al., J. Immunol. 157:4963-69 (1996). Fc γR-binding fordrer imidlertid også tilstedeværelse av oligosakkarider som er kovalent knyttet til det konserverte Asn 297 i CH2-regionen. Lund et al., J. Immunol.157:4963-69 (1996); Wright og Morrison, Trends Biotech.15:26-31 (1997), noe som tyder på at både oligosakkarid og polypeptid bidrar direkte til interaksjonssetet, eller at oligosakkaridet trenges for opprettholdelse av en aktiv CH2-polypeptidkonformasjon. Modifikasjon av oligosakkaridstrukturen kan derfor utforskes som middel for å øke affiniteten ved interaksjonen.
[0159] Et IgG-molekyl bærer to N-bundne oligosakkarider i Fcregionen, ett på hver tung kjede. Som hvilket som helst glykoprotein, frembringes et antistoff som en populasjon av glykoformer som har samme polypeptidskjelett, men som har forskjellige oligosakkarider knyttet til glykosyleringssetene. Oligosakkaridene som normalt finnes i Fc-regionen av serum-IgG, er av kompleks toantennetype (Wormald et al., Biochemistry 36:130-38 (1997), med et lavt nivå av terminal sialinsyre og todelende N-acetylglukosamin (GlnNAc), og en variabel grad av terminal galaktosylering og kjerne-fukosylering. Noen undersøkelser tyder på at den minimale karbohydratstruktur som trenges for Fc γR-binding, ligger innenfor oligosakkaridkjernen. Lund et al., J. Immunol.157:4963-69 (1996).
[0160] De muse- eller hamsteravledede cellelinjer som anvendes i industrien og akademien for dannelse av ukonjugerte terapeutiske mAb, knytter normalt de fordrede oligosakkarid-determinanter til Fc-seter. IgG som uttrykkes i disse cellelinjer, mangler imidlertid det todelende GlcNAc som finnes i små mengder i serum-IgG. Lifely et al., Glycobiology 318:813-22 (1995). I motsetning til dette er det nylig observert at et rottemyelomfrembrakt, humanisert IgG1 (CAMPATH-1H) bar et todelende GlcNAc i noen av sine glykoformer. Lifely et al., Glycobiology 318:813-22 (1995). Det rottecelleavledede antistoff nådde en liknende maksimal in vitro-ADCC-aktivitet som CAMPATH-1H-antistoffer dannet i standardcellelinjer, men i betydelig lavere antistoffkonsentrasjoner.
[0161] CAMPATH-antigenet er normalt til stede i høye nivåer på lymfomceller, og dette kimæriske mAb har høy ADCC-aktivitet i fravær av et todelende GlcNAc. Lifely et al., Glycobiology 318:813-22 (1995). I den N-bundne glykosyleringsvei tilføyes et todelende GlcNAc ved GnTIII.
Schachter, Biochem. Cell Biol. 64:163-81 (1986).
[0162] Tidligere undersøkelser anvendte en enkelt antistoffproduserende CHO-cellelinje som på forhånd var blitt omarbeidet til på en eksternt regulert måte å uttrykke forskjellige nivåer av et klonet GnTIII-genenzym (Umana, P., et al., Nature Biotechnol.17:176-180 (1999)). Denne fremgangsmåte påviste for første gang en meget nøyaktig korrelasjon mellom ekspresjon av GnTIII og ADCC-aktiviteten av det modifiserte antistoff. Beskrivelsen forutsetter således også et rekombinant, kimærisk antistoff eller et fragment derav med bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet, med forandret glykosylering som resultat av øket GnTIII-aktivitet. Den økte GnTIII-aktivitet resulterer i en økning i prosentandelen av todelte oligosakkarider, samt en reduksjon i prosentandelen av fukoserester, i Fc-regionen av ABM. Dette antistoff, eller fragmentet derav, har øket Fcreseptor-bindende affinitet og øket effektorfunksjon. Beskrivelsen er dessuten rettet mot et antistoff-fragment og fusjonsproteiner omfattende en region som er ekvivalent med Fc-regionen av immunglobuliner.
Terapeutiske anvendelser av ABM fremstilt i henhold til fremgangsmåtene ifølge beskrivelsen.
[0163] ABM ifølge foreliggende beskrivelse kan anvendes alene til å målsøke og drepe tumorceller in vivo. ABM kan også anvendes i forbindelse med et passende terapeutisk middel til behandling av humant karsinom. For eksempel kan ABM anvendes i kombinasjon med standard- eller vanlige behandlingsmetoder så som kjemoterapi eller bestrålings-terapi, eller de kan konjugeres eller knyttes til et terapeutisk medikament eller toksin, samt til et lymfokin eller en tumorinhiberende vekstfaktor, for avgivelse av det terapeutiske middel til stedet for karsinomet. Konjugatene av ABM ifølge denne beskrivelse som er av største betydning, er (1) immuntoksiner (konjugater av ABM og en cytotoksisk del) og (2) merkede (f.eks. radiomerkede, enzym-merkede eller fluorkrom-merkede) ABM hvor merkesubstansen tilveiebringer et middel for identifisering av immunkomplekser som innbefatter det merkede ABM. ABM kan også anvendes til indusering av lyse gjennom den naturlige komplementprosess, og til å interagere med antistoffavhengige cytotoksiske celler som normalt er til stede.
[0164] Den cytotoksiske del av immuntoksinet kan være et cytotoksisk medikament eller et enzymatisk aktivt toksin av bakterie- eller planteopprinnelse, eller et enzymatisk aktivt fragment ("A-kjede") av et slikt toksin.
Enzymatisk aktive toksiner og fragmenter derav som anvendes, er difteri A-kjede, ikke-bindende aktive fragmenter av difteritoksin, eksotoksin A-kjede (fra Pseudomonas aeruginosa), ricin A-kjede, abrin A-kjede, modeccin A-kjede, alfa-sarcin, Aleurites fordii-proteiner, diantinproteiner, Phytolacca americana-proteiner (PAPI, PAPII og PAP-S), momordica charantia-inhibitor, curcin, crotin, sapaonaria officinalis-inhibitor, gelonin, mitogellin, restrictocin, fenomycin og enomycin. Ved en annen utførelsesform blir ABM konjugert til småmolekylære antikreftmedikamenter. Konjugater av ABM og slike cytotoksiske deler lages under anvendelse av forskjellige bifunksjonelle proteinkoplingsmidler. Eksempler på slike reagenser er SPDP, IT, bifunksjonelle derivater av imidoestere så som dimetyladipimidat-HCl, aktive estere så som disuksinimidylsuberat, aldehyder så som glutaraldehyd, bisazidoforbindelser så som bis(p-azidobenzoyl)heksandiamin, bisdiazoniumderivater så som bis(p-diazoniumbenzoyl)-etylendiamin, diisocyanater så som tolylen-2,6-diisocyanat, og bis-aktive fluorforfindelser så som 1,5-difluor-2,4-dinitrobenzen. Den lyserende del av et toksin kan knyttes til Fab-fragmentet av ABM. Ytterligere passende toksiner er kjent på området, som vist i f.eks. publisert US-patentsøknad nr.2002/0128448.
[0165] Ved én utførelsesform blir et kimærisk, glyko-omarbeidet ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet, konjugert til ricin A-kjede. Mest fordelaktig blir ricin A-kjeden deglykosylert og frembrakt ved rekombinante metoder. En fordelaktig metode for fremstilling av ricin-immuntoksinet er beskrevet i Vitetta et al., Science 238, 1098 (1987).
[0166] Anvendt til å drepe humane kreftceller in vitro for diagnostiske formål vil konjugatene typisk bli tilsatt til celledyrkningsmediet i en konsentrasjon på minst ca.10 nM. Formuleringen og administreringsmåten for in vitro-anvendelse er ikke avgjørende. Vandige formuleringer som er kompatible med dyrknings- eller perfusjonsmediet, vil normalt bli anvendt. Cytotoksisitet kan avleses ved konvensjonelle teknikker for bestemmelse av tilstedeværelse eller graden av kreft.
[0167] Som omtalt ovenfor, kan det lages et cytotoksisk radiofarmasøytisk middel for behandling av kreft ved konjugering av en radioaktiv isotop (f.eks. I, Y, Pr) til et kimærisk, glyko-omarbeidet ABM med hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som for muse-B-Ly1-antistoffet.
Betegnelsen "cytotoksisk del" anvendt her i dokumentet er ment å innbefatte slike isotoper.
[0168] Ved en annen utførelsesform fylles liposomer med et
cytotoksisk medikament, og liposomene belegges med ABM ifølge
foreliggende beskrivelse. På grunn av at det er mange CD20-molekyler på overflaten av den maligne B-celle, muliggjør denne metode avgivelse av
store mengder medikament til den riktige celletype.
[0169] Teknikker for konjugering av slike terapeutiske midler til antistoffer er velkjente (se f.eks. Arnon et al., "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy", i Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Reisfeld et al. (red.), s.243-56 (Alan R. Liss, Inc.1985);
Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", i Controlled Drug Delivery (2. utg.), Robinson et al. (red.), s.623-53 (Marcel Dekker, Inc.1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", i Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (red.), s.475-506 (1985); og Thorpe et al., "The Preparation And
Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev., 62:119-58 (1982)).
[0170] Enda andre terapeutiske anvendelser for ABM ifølge
beskrivelsen innbefatter konjugering eller binding, f.eks. ved rekombinante
DNA-teknikker, til et enzym som er i stand til å omdanne en prodroge til et cytotoksisk medikament, og anvendelse av dette antistoff-enzym-konjugat i kombinasjon med prodrogen til omdannelse av prodrogen til et cytotoksisk middel på tumorstedet (se f.eks. Senter et al., "Anti-Tumor Effects of
Antibody-alkaline Phosphatase", Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:4842-46
(1988); "Enhancement of the in vitro and in vivo Antitumor Activities of Phosphorylated Mitocycin C and Etoposide Derivatives by Monoclonal Antibody-Alkaline Phosphatase Conjugates", Cancer Research 49:5789-5792 (1989); og Senter, "Activation of Prodrugs by Antibody-Enzyme Conjugates: A New Approach to Cancer Therapy," FASEB J.4:188-193 (1990)).
[0171] Enda en annen terapeutisk anvendelse for ABM ifølge beskrivelsen innbefatter anvendelse, enten ukonjugert, i nærvær av komplement, eller som en del av et antistoff-medikament- eller antistoff-toksin-konjugat, til fjerning av tumorceller fra benmargen hos kreftpasienter. I henhold til denne fremgangsmåte kan autolog benmarg utspyles ex vivo ved behandling med antistoffet, og margen infunderes tilbake i pasienten [se f.eks. Ramsay et al., "Bone Marrow Purging Using Monoclonal Antibodies", J Clin. Immunol., 8(2):81-88 (1988)].
[0172] Det er videre forutsett at beskrivelsen omfatter et enkeltkjedet immuntoksin omfattende antigenbindende doméner som muliggjør hovedsakelig samme bindingsspesifisitet som muse-B-Ly1-antistoffet (f.eks. polypeptider omfattende CDR av muse-B-Ly1-antistoffet) og videre omfatter et toksin-polypeptid. Enkeltkjede-immuntoksinene ifølge oppfinnelsen kan anvendes til behandling av humant karsinom in vivo.
[0173] Likeledes kan det anvendes et fusjonsprotein omfattende minst den antigenbindende region av et ABM ifølge oppfinnelsen knyttet til minst en funksjonelt aktiv del av et andre protein med antitumoraktivitet, f.eks. et lymfokin eller onkostatin, til behandling av humant karsinom in vivo.
[0174] Det beskrives en fremgangsmåte for selektiv dreping av tumorceller som uttrykker CD20. Denne metode omfatter omsetting av immunkonjugatet (f.eks. immuntoksinet) med tumorcellene. Disse tumorceller kan være fra et humant karsinom.
[0175] Det beskrives en metode for behandling av karsinomer (for eksempel humane karsinomer) in vivo. Denne metode omfatter
administrering til et individ av en farmasøytisk effektiv mengde av et preparat inneholdende minst ett av immunkonjugatene (f.eks. immuntoksinet).
[0176] Det beskrives en forbedret metode for behandling av B-celleproliferative forstyrrelser innbefattende B-celle-lymfom, samt en autoimmun sykdom frembrakt helt eller delvis av patogene autoantistoffer, basert på B-celle-uttømming, omfattende administrering av en terapeutisk effektiv
mengde av et ABM ifølge foreliggende beskrivelse til et menneske som
trenger det. Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et glyko-omdannet
anti-CD20-antistoff med en bindingsspesifisitet som er hovedsakelig den
samme som for muse-B-Ly1-antistoffet. Ved en annen foretrukket utførelsesform er antistoffet humanisert. Eksempler på autoimmune
sykdommer eller forstyrrelser innbefatter, men er ikke begrenset til, immunmedierte trombocytopenier, så som akutt idiopatisk trombocytopenisk purpura og kronisk idiopatisk trombocytopenisk purpura, dermatomyositt, Sydenhams chorea, lupusnefritt, reumatisk feber, polyglandulære syndromer, Henoch-Schonlein purpura, post-streptokokk-nefritt, erythema nodosum, Takayasus arteritt, Addisons sykdom, erythema multiforme, polyarteritis nodosa, ankyloserende spondylitt, Goodpastures syndrom, tromboangitis ubiterans, primær biliær cirrhose, Hashimotos tyreoiditt, tyreotoksikose, kronisk aktiv hepatitt, polymyositt/dermatomyositt, polykondritt, pamphigus vulgaris, Wegeners granulomatose, membranøs nefropati, amyotrofisk lateral sklerose, tabes dorsalis, polymyaglia, perniciøs anemi, "rapidly progressive" glomerulonefritt og fibroserende alveolitt, inflammatoriske responser så som inflammatoriske hudsykdommer innbefattende psoriasis og dermatitt (f.eks. atopisk dermatitt); systemisk skleroderma og sklerose; responser forbundet med inflammatorisk tarmsykdom (så som Crohns sykdom og ulcerøs kolitt); åndenødssyndrom (inbefattende akutt åndenødssyndrom; ARDS); dermatitt; meningitt; encefalitt; uveitt; kolitt; glomerulonefritt; allergiske tilstander så som eksem og astma, og andre tilstander som innbefatter infiltrasjon av T-celler og kroniske inflammatoriske responser; aterosklerose; leukocyttadhesjonsdefekt; reumatoid artritt; systemisk lupus erythematosus (SLE); diabetes mellitus (f.eks. diabetes mellitus type 1, eller insulinavhengig diabetes mellitus); multippel sklerose; Reynauds syndrom; autoimmun tyreoiditt; allergisk encefalomyelitt; Sjögrens syndrom; juvenil diabetes; og immunresponser forbundet med akutt og forsinket hypersensitivitet mediert ved cytokiner og T-lymfocytter som typisk finnes ved tuberkulose, sarkoidose, polymyositt, granulomatose og vaskulitt; perniciøs anemi (Addisons sykdom); sykdommer som innbefatter leukocytt-diapedese; inflammatorisk forstyrrelse i sentralnervesystemet (CNS); multippelt organskadesyndrom; hemolytisk anemi (innbefattende, men ikke begrenset til, kryoglobulinemi eller Coombs positive anemi); myasthenia gravis; antigenantistoff-kompleks-medierte sykdommer; anti-glomerulær basalmembransykdom; antifosfolipidsyndrom; allergisk neuritt; Graves' sykdom; myastenisk Eaton-Lamberts syndrom; bulløst pemfigoid; pemfigus; autoimmune polyendokrinopatier; Reiters sykdom; "stiff man"-syndrom; Behcets sykdom; kjempecellearteritt; immunkompleks-nefritt; IgA-nefropati; IgM-polyneuropatier; idiopatisk trombocytopenisk purpura (ITP) eller autoimmun trombocytopeni osv. Ved dette aspekt ved beskrivelsen anvendes ABM ifølge beskrivelsen til tømming av blodet for normale B-celler i et langvarig tridsrom.
[0177] Individet kan være et menneske-, heste-, grise-, bovint, muse-, hunde-, katte- og fugleindivid. Andre varmblodige dyr inngår også..
[0178] Det beskrives metoder for hemming av veksten av humane tumorceller, behandling av en tumor i et individ og behandling av en proliferativ sykdomstype hos et individ. Disse metoder omfatter administrering til individet av en effektiv mengde av preparatet.
[0179] Det er derfor klart at foreliggende beskrivelse omfatter farmasøytiske preparater, kombinasjoner og det beskrives metoder for behandling av humane karsinomer, så som et B-celle-lymfom. For eksempel innbefatter beskrivelsen farmasøytiske preparater for anvendelse ved behandling av humane karsinomer, omfattende en farmasøytisk effektiv mengde av et antistoff ifølge foreliggende beskrivelse og en farmasøytisk akseptabel bærer.
[0180] ABM-preparatene ifølge beskrivelsen kan administreres under anvendelse av konvensjonelle administreringsmåter innbefattende, men ikke begrenset til, intravenøs, intraperitoneal, oral, intralymfatisk eller administrering direkte i tumoren. Intravenøs administrering er foretrukket.
[0181] Ved ett aspekt ved beskrivelsen tilberedes terapeutiske utformninger inneholdende ABM ifølge beskrivelsen for lagring ved blanding av et antistoff med den ønskede grad av renhet med eventuelle farmasøytisk akseptable bærere, tilsetningsmidler eller stabilisatorer (Remington's Pharmaceutical Sciences 16. utgave, Osol, A. red. (1980)), i form av lyofiliserte formuleringer eller vandige løsninger. Akseptable bærere, tilsetningsmidler eller stabilisatorer er ikke-toksiske for mottakere i de anvendte doser og konsentrasjoner, og innbefatter buffere så som fosfat, citrat og andre organiske syrer; antioksidanter innbefattende askorbinsyre og metionin; konserveringsmidler (så som oktadekyldimetylbenzyl-ammoniumklorid; heksametoniumklorid; benzalkoniumklorid, benzetoniumklorid; fenol, butyl- eller benzylalkohol; alkylparabener så som metyl- eller propylparaben; katekol; resorcinol; cykloheksanol; 3-pentanol; og m-kresol); lavmolekylære (mindre enn ca.10 rester) polypeptider; proteiner, så som serumalbumin, gelatin eller immunglobuliner; hydrofile polymerer så som polyvinylpyrrolidon; aminosyrer så som glycin, glutamin, asparagin, histidin, arginin eller lysin; monosakkarider, disakkarider og andre karbohydrater innbefattende glukose, mannose eller dekstriner; chelateringsmidler så som EDTA; sukkerarter så som sakkarose, mannitol, trehalose og sorbitol; saltdannende mot-ioner så som natrium; metallkomplekser (f.eks. Zn-protein-komplekser); og/eller ikkeioniske overflateaktive midler så som TWEEN ™, PLURONICS ™ eller polyetylenglykol (PEG).
[0182] Eksempler på anti-CD20-ABM-formuleringer er beskrevet i WO98/56418. Denne publikasjon beskriver en flytende flerdoseformulering omfattende 40 mg/ml rituximab, 25 mM acetat, 150 mM trehalose, 0,9% benzylalkohol, 0,02% polysorbat 20 ved pH 5,0 som har en minimal holdbarhet på to års lagring ved 2-8 ºC. En annen aktuell anti-CD20-formulering omfatter 10 mg/ml rituximab i 9,0 mg/ml natriumklorid, 7,35 mg/ml natriumcitrat-dihydrat, 0,7 mg/ml polysorbat 80 og sterilt vann for injeksjon, pH 6,5. Ved foreliggende oppfinnelse vil RITUXAN ® bli erstattet med et ABM ifølge foreliggende beskrivelse.
[0183] Lyofiliserte formuleringer tilpasset for subkutan administrering er beskrevet i WO97/04801. Slike lyofiliserte formuleringer kan rekondisjoneres med et egnet fortynningsmiddel til høy proteinkonsentrasjon, og den rekondisjonerte formulering kan administreres subkutant til pattedyret som skal behandles i det foreliggende.
[0184] Formuleringen i det foreliggende kan også inneholde mer enn én aktiv forbindelse etter som det er nødvendig for den spesielle indikasjon som behandles, fortrinnsvis slike med komplementære aktiviteter som ikke på uheldig måte påvirker hverandre. Det kan for eksempel være ønskelig videre å tilveiebringe et cytotoksisk middel, et kjemoterapeutisk middel, et cytokin eller et immunundertrykkende middel (f.eks. et middel som virker på T-celler, så som cyklosporin eller et antistoff som binder T-celler, f.eks. ett som binder LFA-1). Den effektive mengde av slike andre midler avhenger av mengden av antagonist som finnes i formuleringen, typen sykdom eller forstyrrelse eller behandling, samt andre faktorer omtalt ovenfor. Disse anvendes vanligvis i samme doseringer og med administreringsmåter som anvendt i det foregående, eller omtrent fra 1 til 99% av de hittil anvendte doser.
[0185] De aktive bestanddeler kan også innfanges i mikrokapsler som for eksempel er fremstilt ved koacervasjonsteknikker eller ved grenseflatepolymerisering, for eksempel hydroksymetylcellulose, eller henholdsvis gelatin-mikrokapsler og poly(metylmetakrylat)-mikrokapsler, i kolloidale medikamentavgivelsessystemer (for eksempel liposomer, albuminmikrokuler, mikroemulsjoner, nanopartikler og nanokapsler) eller i makroemulsjoner. Slike teknikker er beskrevet i Remington's Pharmaceutical Sciences 16. utgave, Osol, A. red. (1980).
[0186] Det kan fremstilles preparater med langvarig frigjøring. Egnede eksempler på preparater med langvarig frigjøring innbefatter semipermeable matrikser av faste hydrofobe polymerer inneholdende antagonisten, hvilke matrikser er i form av formede artikler, f.eks. filmer, eller mikrokapsler.
Eksempler på matrikser for langvarig frigjøring innbefatter polyestere, hydrogeler (for eksempel poly(2-hydroksyetylmetakrylat), eller poly(vinylalkohol)), polylaktider (US-patent nr.3 773 919), kopolymerer av L-glutaminsyre og γetyl-L-glutamat, ikke-nedbrybart etylen-vinylacetat, nedbrytbare melkesyre-glykolsyre-kopolymerer så som LUPRON DEPOT ™ (injiserbare mikrokuler bestående av melkesyre-glykolsyre-kopolymer og leuprolidacetat), og poly-D-(-)-3-hydroksysmørsyre.
[0187] Formuleringene for anvendelse for in vivo-administrering må være sterile. Dette oppnås lett ved filtrering gjennom sterilfiltreringsmembraner.
[0188] Preparatene ifølge beskrivelsen kan være i mange forskjellige doseringsformer som innbefatter, men er ikke begrenset til, flytende løsninger eller suspensjoner, tabletter, piller, pulvere, stikkpiller, polymere mikrokapsler eller mikrovesikler, liposomer og injiserbare eller infunderbare løsninger. Den foretrukne form avhenger av administreringsmåten og den terapeutiske anvendelse.
[0189] Preparatene ifølge beskrivelsen innbefatter også fortrinnsvis konvensjonelle farmasøytisk akseptable bærere og adjuvanser kjent på området, så som humant serumalbumin, ionebyttere, aluminiumoksid, lecitin, buffersubstanser så som fosfater, glycin, sorbinsyre, kaliumsorbat, og salter eller elektrolytter så som protaminsulfat.
[0190] Den mest effektive administreringsmåte og doseringsregime for de farmasøytiske preparater ifølge denne oppfinnelse avhenger av graden og forløpet av sykdommen, pasientens helse og respons overfor behandling og den behandlende leges bedømmelse. Dosene av preparatene bør følgelig titreres til den individuelle pasient. Ikke desto mindre vil en effektiv dose av preparatene ifølge denne oppfinnelse vanligvis være i området fra ca.0,01 til ca. 2000 mg/kg.
[0191] Molekylene beskrevet her i dokumentet kan være i mange forskjellige doseringsformer som innbefatter, men er ikke begrenset til, flytende løsninger eller suspensjoner, tabletter, piller, pulvere, stikkpiller, polymere mikrokapsler eller mikrovesikler, liposomer, og injiserbare eller infunderbare løsninger. Den foretrukne form avhenger av administreringsmåten og den terapeutiske anvendelse.
[0192] Preparatet omfattende et ABM ifølge foreliggende oppfinnelse vil bli formulert, dosert og administrert på en måte i overensstemmelse med god medisinsk praksis. Faktorer for overveielse i denne forbindelse innbefatter den spesielle sykdom eller forstyrrelse som behandles, det spesielle pattedyr som behandles, den kliniske tilstand for den individuelle pasient, forløpet av sykdommen eller forstyrrelsen, stedet for avgivelse av midlet, administreringsmetoden, timeplanen for administrering og andre faktorer kjent for praktiserende leger. Den terapeutisk effektive mengde av antagonisten som skal administreres, vil bli styrt av slike hensyn.
[0193] Som et generelt forslag vil den terapeutisk effektive mengde av antistoffet administrert parenteralt pr. dose være i området ca.0,1 til 20 mg/kg pasient-kroppsvekt pr. dag, hvor det typiske innledende område for anvendt antagonist er i området ca.2-10 mg/kg.
[0194] Ved en foretrukket utførelsesform er ABM et antistoff, fortrinnsvis et humanisert antistoff. Egnede doser for et slikt ukonjugert antistoff er for eksempel i området fra ca.20 mg/m<2 >til ca.1000 mg/m<2>. Ved én utførelsesform er doseringen av antistoffet forskjellig fra det som for tiden anbefales for RITUXAN ®. Man kan for eksempel administrere til pasienten én eller flere doser med hovedsakelig mindre enn 375 mg/m<2 >av antistoffet, f.eks. hvor dosen er i området fra ca.20 mg/m<2 >til ca.250 mg/m<2>, for eksempel fra ca.50 mg/m<2 >til ca.200 mg/m<2>.
[0195] Man kan videre administrere én eller flere innledende doser av antistoffet, fulgt av én eller flere påfølgende doser, hvor mg/m<2 >dose for antistoffet i påfølgende dose(r) overstiger mg/m<2 >dose av antistoffet i den
(de) innledende dose(r). Den innledende dose kan for eksempel være i området fra ca.20 mg/m<2 >til ca.250 mg/m<2 >(f.eks. fra ca.50 mg/m<2 >til ca.200 mg/m<2>), og den påfølgende dose kan være i området fra ca.250 mg/m<2 >til ca. 1000 mg/m<2>.
[0196] Som angitt ovenfor, er imidlertid disse foreslåtte mengder av ABM gjenstand for en stor del terapeutisk skjønn. Nøkkelfaktoren ved utvelging av en passende dose og program er det oppnådde resultat, som angitt ovenfor. Det kan for eksempel trenges relativt høyere doser innledningsvis for behandling av pågående og akutte sykdommer. For oppnåelse av de mest effektive resultater, avhengig av sykdommen eller forstyrrelsen, blir antagonisten administrert så nær det første tegn på, diagnostisering av, tilsynekomst eller fremkomst av sykdommen eller forstyrrelsen som mulig eller under remisjon av sykdommen eller forstyrrelsen.
[0197] ABM ifølge foreliggende beskrivelse administreres på hvilken som helst egnet måte, innbefattende parenteralt, subkutant, intraperitonealt, intrapulmonalt og intranasalt, og, hvis ønskelig for lokal immunsuppressiv behandling, intralesjonal administrering. Parenterale infusjoner innbefatter intramuskulær, intravenøs, intraarteriell, intraperitoneal eller subkutan administrering. Dessuten kan antagonist passende administreres ved pulsinfusjon, f.eks. med avtakende doser av antagonisten. Doseringen gis fortrinnsvis ved injeksjoner, mest foretrukket intravenøs eller subkutan injeksjon, avhengig delvis av om hvorvidet administreringen er kort eller kronisk.
[0198] Man kan administrere andre forbindelser, så som cytotoksiske midler, kjemoterapeutiske midler, immunsuppressive midler og/eller cytokiner med antagonistene i det foreliggende. Den kombinerte administrering innbefatter koadministrering under anvendelse av separate formuleringer eller en enkelt farmasøytisk formulering, og på hverandre følgende administrering i hvilken som helst rekkefølge, hvor det fortrinnsvis er et tidsrom hvor begge (eller alle) aktive midler samtidig utøver sine biologiske aktiviteter.
[0199] Det vil være klart at dosen av preparatet ifølge beskrivelsen som trenges for oppnåelse av helbredelse, kan reduseres ytterligere med tidsplanoptimalisering.
[0200] I henhold til praksisen ifølge beskrivelsen kan den farmasøytiske bærer være en lipidbærer. Lipidbæreren kan være et fosfolipid. Videre kan lipidbæreren være en fettsyre. Lipidbæreren kan også være en detergent. Anvendt her i dokumentet er en detergent hvilken som helst substans som forandrer en væskes overflatespenning, generelt reduserer den.
[0201] Ved ett eksempel ifølge beskrivelsen kan detergenten være en ikkeionisk detergent. Eksempler på ikke-ioniske detergenter innbefatter, men er ikke begrenset til, polysorbat 80 (også kjent som Tween 80 eller (polyoksyetylensorbitan-monooleat), Brij og Triton (for eksempel Triton WR-1339 og Triton A-20).
[0202] Detergenten kan alternativt være en ionisk detergent. Et eksempel på en ionisk detergent innbefatter, men er ikke begrenset til, alkyltrimetylammoniumbromid.
[0203] I henhold til beskrivelsen kan lipidbæreren dessuten være et liposom. Anvendt i denne patentsøknad er et "liposom" hvilken som helst membranbundet vesikkel som inneholder hvilke som helst molekyler ifølge oppfinnelsen eller kombinasjoner derav.
[0204] Eksemplene nedenfor forklarer oppfinnelsen mer detaljert. Følgende preparater og eksempler er gitt for at fagfolk på området klarere skal kunne forstå og utøve foreliggende oppfinnelse. Foreliggende oppfinnelse er imidlertid ikke begrenset med hensyn til ramme ved de eksemplifiserte utførelsesformer, som kun er påtenkt som illustrasjoner av enkeltaspekter ved oppfinnelsen, og metoder som er funksjonelt ekvivalente, er innenfor oppfinnelsens ramme. Faktisk vil forskjellige modifikasjoner av oppfinnelsen, i tillegg til dem som er beskrevet her i dokumentet, bli åpenbare for fagfolk på området ut fra foranstående beskrivelse og de medfølgende tegninger. Slike modifikasjoner er påtenkt å ligge innenfor rammen for de tilknyttede krav.
EKSEMPLER
[BEMERK: Dersom ikke annet er spesifisert, er henvisninger til nummereringen av spesifikke aminosyrerest-stillinger i følgende eksempler i henhold til Kabatnummereringssystemet].
EKSEMPEL 1
Materialer og metoder
Kloning og ekspresjon av rekombinant antistoff B-Ly1
[0205] B-Ly1-uttrykkende hybridomceller ble dyrket i RPMI inneholdende 10% FBS og 4 mM L-glutamin.6 x 10<6 >celler med levedyktighet > 90% ble høstet, og total-RNA ble isolert under anvendelse av et Qiagen RNAeasy midi-sett. cDNA som kodet for de variable lette og tunge kjeder av B-Ly1, ble amplifisert ved RT-PCR. RT-PCR-reaksjonen ble utført under anvendelse av følgende betingelser: 30 min 50°C for førstestreng-cDNA syntese; 15 min 95°C begynnelsesdenaturering; 30 sykluser på 1 min 94°C, 1 min 45°C, 1,5 min 72°C; og et endelig forlengelsestrinn i 10 min ved 72°C. Den forventede størrelse av PCR-produktene ble bekreftet ved gel-elektroforese. PCR-produktene ble klonet i passende E. coli-vektorer, og DNA-sekvensering bekreftet at de variable lett- og tungkjede-kodende gener var isolert.
[0206] For konstruksjon av kimæriske B-Ly1-ekspresjonsvektorer ble syntesesignalsekvenser og passende restriksjonsseter koplet til de variable kjeder ved ytterligere PCR-reaksjoner. Etter en endelig bekreftelse av den riktige DNA-sekvens for de variable kjeder, ble de kombinert med de tilsvarende humane konstante IgG1-regioner. Etter at genene var konstruert, ble de klonet under kontroll av av MPSV-promoteren og oppstrøms for et syntetisk polyA-sete, under anvendelse av to separate vektorer, én for hver kjede, som resulterte i plasmidene pETR1808 (tungkjede-ekspresjonsvektor) og pETR1813 (lettkjedeekspresjonsvektor). Hver vektor bar en EBV OriP-sekvens.
[0207] Kimærisk B-Ly1 ble frembrakt ved ko-transfektering av HEK293-EBNA-celler med vektorer pETR1808 og pETR1813 under anvendelse av en kalsumfosfat-transfekteringsmetode. Eksponensielt voksende HEK293-EBNA-celler ble transfektert ved kalsiumfosfatmetoden. Cellene ble dyrket som tilheftende monolag-kulturer i T-kolber under anvendelse av DMEM-dyrkningsmedium supplert med 10% FCS, og ble transfektert når de var mellom 50 og 80% konfluente. For transfektering av en T75-kolbe ble 8 millioner celler utsådd 24 timer før transfektering i 14 ml DMEM-dyrkningsmedium supplert med FCS (i en endelig konsentrasjon på 10 volum%), 250 µg/ml neomycin, og cellene ble anbrakt ved 37°C i en inkubator med 5% CO2-atmosfære natten over. For hver T75-kolbe som skulle transfekteres ble det tilberedt en løsning av DNA, CaCl2 og vann ved blanding av 47 μg total plasmidvektor-DNA delt likt mellom lett- og tungkjede-ekspresjonsvektorene, 235 μl av en 1M CaCl2-løsning og tilsetting av vann til et sluttvolum på 469 μl. Til denne løsning ble det tilsatt 469 μl av en løsning av 50 mM HEPES og 280 mM NaCl, 1,5 mM Na2HPO4-løsning ved pH 7,05 ble tilsatt, og det ble umiddelbart blandet i 10 sek. og fikk stå ved romtemperatur i 20 sek. Suspensjonen ble fortynnet med 12 ml DMEM supplert med 2% FCS, og tilsatt til T75 i stedet for det eksisterende medium. Cellene ble inkubert ved 37°C og 5% CO2 i ca.17-20 timer, og medium ble deretter erstattet med 12 ml DMEM, 10% FCS. For frembringelse av umodifisert antistoff "chB-Ly1" ble cellene transfektert med bare antistoff-ekspresjonsvektorer pETR1808 og pETR1813 i et forhold på 1:1. For fremstilling av det glyko-omarbeidede antistoff "chB-Ly1-ge" ble cellene ko-transfektert med fire plasmider, to for antistoffekspresjon (pETR1808 og pETR1813), ett for en fusjons-GnTIII-polypeptidekspresjon (pETR1519) og én for mannosidase II-ekspresjon (pCLF9) i et forhold på henholdsvis 4:4:1:1. På dag 5 etter transfektering ble supernatanten høstet og sentrifugert i 5 min ved 1200 omdr. pr. min., fulgt av en andre sentrifugering i 10 min ved 4000 omdr. pr. min., og holdt ved 4°C.
[0208] chB-Ly1 og chB-Ly1-ge ble renset fra dyrkningssupernatant under anvendelse av tre sekvensielle kromatografiske trinn, protein A-kromatografi, kationebytterkromatografi og et størrelsesutelukkelseskromatografitrinn på en Superdex 200-kolonne (Amersham Pharmacia) idet bufferen ble skiftet til fosfatbufret saltløsning, og toppen for monomert antistoff fra dette siste trinn ble oppsamlet. Antistoffkonsentrasjonen ble anslått under anvendelse av et spektrofotometer, ut fra absorbansen ved 280 nm.
Oligosakkaridanalyse
[0209] Oligosakkarider ble frigjort enzymatisk fra antistoffene ved PNGaseF-digerering, hvor antistoffene enten var immobilisert på en PVDF-membran eller i løsning.
[0210] Den resulterende digereringsløsning inneholdende de frigjorte oligosakkarider ble enten tilberedt direkte for MALDI/TOF-MS-analyse eller ytterligere nedbrutt med EndoH-glykosidase før prøvetilberedning for MALDI/TOF-MS-analyse.
Oligosakkaridfrigjøringsmetode for PVDF-membran-immobiliserte antistoffer [0211] Brønnene i en 96-brønnsplate laget av en PVDF- (Immobilon P, Millipore, Bedford, Massachusetts) membran ble fuktet med 100 μl metanol, og væsken ble trukket gjennom PVDF-membranen under anvendelse av vakuum påført på Multiscreen vakuum-manifolden (Millipore, Bedford, Massachusetts). PVDF-membranene ble vasket tre ganger med 300 μl vann. Brønnene ble deretter vasket med 50 μl RCM-buffer (8M urea, 360 mM Tris, 3,2 mM EDTA, pH 8,6). Mellom 30 og 40 μg antistoff ble tilsatt i en brønn inneholdende 10 μl RCM-buffer. Væsken i brønnen ble trukket gjennom membranen ved påføring av vakuum, og membranen ble deretter vasket to ganger med 50 μl RCM-buffer. Reduksjon av disulfidbroer ble utført ved tilsetting av 50 μl 0,1M ditiotreitol i RCM og inkubering ved 37°C i 1 time.
[0212] Etter reduksjon ble det påført vakuum for fjerning av ditiotreitolløsningen fra brønnen. Brønnene ble vasket tre ganger med 300 μl vann før utførelse av karboksymetyleringen av cysteinrestene ved tilsetting av 50 μl 0,1M jodeddiksyre i RCM-buffer og inkubering ved romtemperatur i mørke i 30 min.
[0213] Etter karboksymetylering ble brønnene påført vakuum og deretter vasket tre ganger med 300 μl vann. PVDF-membranen ble deretter blokkert for forhindring av adsorpsjon av endoglykosidasen, ved inkubering av 100 μl av en 1% vandig løsning av polyvinylpyrrolidon 360 ved romtemperatur i 1 time. Blokkeringsreagenset ble deretter fjernet ved svakt vakuum fulgt av tre vaskinger med 300 μl vann.
[0214] N-bundne oligosakkarider ble frigjort ved tilsetting av 2,5 mE peptid-N-glykosydase F (rekombinant N-Glycanase, GLYKO, Novato, CA) og 0,1 mE Sialidase (GLYKO, Novato, CA), for fjerning av potensielle ladde monosakkaridrester, i et sluttvolum på 25 μl i 20 mM NaHCO3, pH 7,0). Digerering ble utført i 3 timer ved 37°C.
Oligosakkaridfrigjøringsmetode for antistoffer i løsning
[0215] Mellom 40 og 50 μg antistoff ble blandet med 2,5 mE PNGaseF (Glyko, U.S.A.) i 2 mM Tris, pH 7,0 i et sluttvolum på 25 mikroliter, og blandingen ble inkubert i 3 timer ved 37°C.
Anvendelse av endoglykosidase H-digerering av PNGaseF-frigjorte oligosakkarider for tilordning av hybride todelte oligosakkaridstrukturer til nøytrale MALDI/TOF-MS-oligosakkaridtopper
[0216] De PNGaseF-frigjorte oligosakkarider ble deretter digerert med Endoglykosidase H (EC 3.2.1.96). For EndoH-digerering ble 15 mE EndoH (Roche, Sveits) tilsatt til PNGaseF-digereringsproduktet (antistoff i løsning-metode ovenfor) under oppnåelse av et sluttvolum på 30 mikroliter, og blandingen ble inkubert i 3 timer ved 37°C. EndoH spalter mellom N-acetylglukosaminrestene i chitobiosekjernen i N-bundne oligosakkarider. Enzymet kan bare digerere oligomannose og de fleste glykaner av hybridtypen, mens komplekse oligosakkaridtyper ikke hydrolyseres.
Prøvetilberedning for MALDI/TOF-MS
[0217] De enzymatiske nedbrytningsprodukter inneholdende de frigjorte oligosakkarider ble inkubert i ytterligere 3 timer ved romtemperatur etter tilsetting av eddiksyre til en sluttkonsentrasjon på 150 mM, og ble deretter ledet gjennom 0,6 ml kationebytterharpiks (AG50W-X8-hrpiks, hydrogenform, 150-75 μm (100-200 mesh), BioRad, Sveits) pakket i en mikro-bio-spinn-kromatografikolonne (BioRad, Sveits) for fjerning av kationer og proteiner. Én mikroliter av den resulterende prøve ble påført på en målplate av rustfritt stål og blandet på platen med 1 μl sDHB-matriks. sDHB-matriks ble tilberedt ved oppløsing av 2 mg 2,5-dihydroksybenzosyre pluss 0,1 mg 5-metoksysalicylsyre i 1 ml etanol/10 mM vandig natriumklorid 1:1 (på volumbasis). Prøvene ble lufttørket, 0,2 μl etanol ble påført, og prøvene fikk til slutt omkrystalliseres under luft.
MALDI/TOF-MS
[0218] MALDI-TOF-massespektrometret anvendt til å oppnå massespektraene var en Voyager Elite (Perspective Biosystems). Instrumentet ble operert i lineær konfigurasjon, med en akselerering på 20kV og 80 ns forsinkelse. Ekstern kalibrering under anvendelse av oligosakkaridstandarder ble anvendt for masse-tilordning av ionene. Spektraene fra 200 laserskudd ble oppsummert for oppnåelse av sluttspektret.
Uttømming av fullblod-B-celler
[0219] 495 μl heparinisert blod fra en frisk donor ble porsjonert i 5 ml polystyrenrør, 5 μl 100 ganger konsentrerte antistoffprøver (sluttkonsentrasjon 1-1000 ng/ml) eller bare PBS ble tilsatt, og rørene ble inkubert ved 37°. Etter 24 timer ble 50 μl blod overført til et nytt rør og merket med anti-CD3-FITC, anti-CD19-PE og anti-CD45-CyChrome (Becton-Dickinson) i 15 min ved romtemperatur i mørke. Før analyse ble det tilsatt 500 μl FACS-buffer (PBS inneholdende 2% FCS og 5mM EDTA) til rørene. CD3-FITC- og CD19-PE-fluorescens av blodprøvene ble væskestrømcytometrisk analysert ved innstilling av en terskel på CD45-CyChrome. B celle-uttømming ble bestemt ved avsetting av forholdet mellom CD19<+ >B-celler og CD3<+ >T-celler.
Binding av anti-CD20-antistoffer til Raji-celler
[0220] 500 000 i 180 μl FACS-buffer (PBS inneholdende 2% FCS og 5mM EDTA) ble overført til 5 ml polystyrenrør, og 20 μl 10 ganger konsentrert anti-CD20-antistoffprøver (1-5000 ng/mI sluttkonsentrasjon) eller bare PBS ble tilsatt, og rørene ble inkubert ved 4°C i 30 min. Prøvene ble deretter vasket to ganger med FACS-buffer og pelletert ved 300 x g i 3 min. Supernatant ble avsugd, og cellene ble tatt opp i 100 μl FACS-buffer, 1 μl anti-Fc-spesifikke F(ab')2-FITC-fragmenter (Jackson Immuno Research Laboratories, USA) ble tilsatt, og rørene ble inkubert ved 4°C i 30 min. Prøvene ble vasket to ganger med FACS-buffer og tatt opp i 500 μl FACS-buffer inneholdende 0,5 µg/ml PI for analyse ved væskestrømcytometri. Binding ble bestemt ved avsetting av den geometriske middelfluorescens mot antistoffkonsentrasjonene.
EKSEMPEL 2
Høyhomologiakseptor-fremgangsmåte
[0221] Høyhomologi-antistoffakseptor-rammeverksøkingen ble utført ved innretting av muse-B-Ly1-proteinsekvensen mot en samling av humane kimlinjesekvensr og plukking av den humane sekvens som viste den høyeste sekvensidentitet. Her ble sekvensen VH1_10 fra VBase-databasen valgt som tungkjederammverk-akseptorsekvens, og VK_2_40-sekvensen ble valgt til være rammeverkakseptoren for den lette kjede. På disse to akseptor-rammeverk ble de tre komplementaritetsbestemmende regioner (CDR) av de tunge og lette variable musedoméner podet. Siden rammeverk 4-regionen ikke er en del av den variable region av kimlinje-V-genet, ble innrettingen for denne stilling utført individuelt. JH4-regionen ble valgt for den tunge kjede, og JK4-regionen ble valgt for den lette kjede. Molekylmodellering av det skisserte immunglobulindoméne viste ett sted som potensielt fordret muse-aminosyrerestene i stedet for de humane utenfor CDR. Gjeninnføring av muse-aminosyrerester i det humane rammeverk ville frembringe de såkalte tilbakemutasjoner. For eksempel ble den humane akseptoraminosyrerest i Kabat-stilling 27 tilbakemutert til en tyrosinrest. Det ble utformet humaniserte antistoffvarianter som enten innbefattet eller utelukket tilbakemutasjonene. Den lette humaniserte antistoffkjede fordret ikke noen tilbakemutasjoner. Etter skissering av proteinsekvensene, ble DNA-sekvenser som kodet for disse proteiner, syntetisert som angitt detaljert nedenfor.
Blandet rammeverk-fremgangsmåte
[0222] For å unngå innføring av tilbakemutasjoner i kritiske aminosyrereststillinger (kritiske for bibeholdelse av god antigenbindende affinitet eller antistofffunksjoner) i det humane akseptor-rammeverk ble det undersøkt om hvorvidt enten hele rammeverkregion 1 (FR1) eller rammeverkregionene 1 (FR1) og 2 (FR2) sammen kunne erstattes av humane antistoffsekvenser som allerede hadde donor-rester, eller funksjonelt ekvivalente, i disse viktige stillinger i den naturlige humane kimlinjesekvens. For dette formål ble VH-rammeverkene 1 og 2 av muse-Bly-1-sekvensen innrettet individuelt i forhold til humane kimlinjesekvenser. Her var det ikke viktig med høyeste sekvensidentitet, og dette ble ikke anvendt, for velging av akseptor-rammeverk, men i stedet ble matching av flere kritiske rester antatt å være viktigere. Disse kritiske rester omfatter restene 24, 71 og 94 (Kabatnummerering) og dessuten restene i stilling 27, 28 og 30 (Kabat-nummerering), som ligger utenfor CDR1-definisjonen ifølge Kabat, men ofte inngår ved antigenbinding. IMGT-sekvensen VH_3_15 ble valgt som en egnet sekvens. Etter skissering av proteinsekvensene, ble DNA-sekvensene som kodet for disse proteiner, syntetisert som angitt detaljert nedenfor. Ved anvendelse av denne fremgangsmåte trengtes det ingen tilbakemutasjoner verken for den lette eller tunge kjede, for bibeholdelse av gode nivåer av antigenbinding.
Syntese av antistoffgenene
[0223] Etter å ha utpekt aminosyresekvensen for den humaniserte antistoff V-region, måtte DNA-sekvensen frembringes. DNA-sekvensdataene for de individuelle rammeverkregioner ble funnet i databasene for humane kimlinjesekvenser. DNA-sekvensen for CDR-regionene ble tatt fra de tilsvarende muse-cDNA-data. Med disse sekvenser ble hele DNA-sekvensen i realiteten satt sammen. Med disse DNA-sekvensdata ble det innført diagnostiske restriksjonsseter i den virkelige sekvens, ved innføring av stumme mutasjoner, noe som frembrakte gjenkjennelsesseter for restriksjonsendonukleaser. For oppnåelse av den fysiske DNA-kjede ble det utført gensyntese (f.eks. Wheeler et al., 1995). Ved denne metode utformes oligonukleotider fra de aktuelle gener, slik at én serie oligonukleotider fås fra kodingsstrengen, og en annen serie fra den ikke-kodende streng. 3'- og 5'-endene av hvert oligonukleotid (bortsett fra den aller første og siste i rekken) viser alltid komplementære sekvenser med to primere som stammer fra den motsatte streng. Når disse oligonukleotider innlemmes i en reaksjonsbuffer egnet for hvilken som helst varmestabil polymerase, og det tilsettes Mg<2+>, dNTP og en DNA-polymerase, strekker hvert oligonukleotid seg fra sin 3'-ende. Den nydannede 3'-ende av én primer koples så til den neste primer på den motsatte streng og utvider sin sekvens videre under betingelser som er egnet for templatavhengig DNA-kjede-forlengelse. Det endelige produkt ble klonet i en konvensjonell vektor for formering i E. coli.
Antistoffproduksjon
[0224] Humane tung- og lettkjede-ledersekvenser (for sekresjon) ble tilføyd oppstrøms for de ovennevnte variabel region-sekvenser, og disse ble deretter sammenføyd oppstrøms for henholdsvis humane konstante tunge og lette IgG1-kappa-sekvenser under anvendelse av standard-molekylærbiologiteknikker. De resulterende fullstendige tung- og lettkjede-DNA-antistoffsekvenser ble subklonet i pattedyr-ekspresjonsvektorer (én for den lette kjede og én for den tunge kjede) under kontroll av MPSV-promoteren og oppstrøms for et syntetisk polyA-sete, idet hver vektor bar en EBV OriP-sekvens, som beskrevet i eksempel 1 ovenfor.
Antistoffer ble frembrakt som beskrevet i eksempel 1 ovenfor, nemlig ved kotransfektering av HEK293-EBNA med pattedyr-antistoff-tung- og lettkjedeekspresjonsvektorer, høsting av det kondisjonerte dyrkningsmedium 5 til 7 dager etter transfeksjon og rensing av de utskilte antistoffer ved protein A-affinitetskromatografi, fulgt av kationebytterkromatografi og et endelig størrelseseksklusjonskromatografitrinn for isolering av rene monomere IgG1-antistoffer. Antistoffene ble formulert i en løsning av 25 mM kaliumfosfat, 125 mM natriumklorid, 100 mM glycin, med pH 6,7. Glyko-omarbeidede varianter av de humaniserte antistoffvarianter ble frembrakt ved kotransfeksjon av antistoffekspresjonsvektorene sammen med en GnT-III-glykosyltransferaseekspresjonsvektor, eller sammen med en GnT-III-ekspresjonsvektor pluss en Golgi-mannosidase II-ekspresjonsvektor, som beskrevet for det kimæriske antistoff i eksempel 1 ovenfor. Glyko-omarbeide antistoffer ble renset og formulert som beskrevet ovenfor for de ikke-glyko-omarbeidede antistoffer.
Oligosakkaridene knyttet til Fc-regionen av antistoffene ble analysert ved MALDI/TOF-MS som beskrevet nedenfor.
Oligosakkaridanalyse
[0225] Oligosakkaridfrigjøringsmetode for antistoffer i løsning
Mellom 40 og 50 μg antistoff ble blandet med 2,5 mE PNGaseF (Glyko, USA) i 2 mM Tris, pH 7,0, i et sluttvolum på 25 mikroliter, og blandingen ble inkubert i 3 timer ved 37 ºC.
Prøvetilberedning for MALDI/TOF-MS
[0226] De enzymatiske nedbrytningsprodukter inneholdende de frigjorte oligosakkarider ble inkubert i ytterligere 3 timer ved romtemperatur etter tilsetting av eddiksyre til en sluttkonsentrasjon på 150 mM, og ble deretter ledet gjennom 0,6 ml kationebytterharpiks (AG50W-X8-harpiks, hydrogenform, 150-75 μm, BioRad, Sveits) pakket i en mikro-bio-spin-kromatografikolonne (BioRad, Sveits) under fjerning av kationer og proteiner. Én mikroliter av den resulterende prøve ble påført på en målplate av rustfritt stål og blandet på platen med 1 μl sDHB-matriks.
sDHB-matriks ble tilberedt ved oppløsing av 2 mg 2,5-dihydroksybenzosyre pluss 0,1 mg 5-metoksysalicylsyre i 1 ml etanol/10 mM vandig natriumklorid 1:1 (på volumbasis). Prøvene ble lufttørket, 0,2 μl etanol ble påført, og prøvene fikk til slutt omkrystalliseres under luft.
MALDI/TOF-MS
[0227] MALDI-TOF-massespektrometeret anvendt til opptak av massespektraene var et Voyager Elite (Perspective Biosystems). Instrumentet ble operert i lineær konfigurasjon, med en akselerering på 20kV og 80 ns forsinkelse. Ekstern kalibrering med anvendelse av oligosakkaridstandarder ble anvendt for massetilordning av ionene. Spektraene fra 200 laserskudd ble summert under oppnåelse av det endelige spektrum.
Antigenbindingsanalyse
[0228] De rensede, monomere humaniserte antistoffvarianter ble testet med hensyn til binding til humant CD20 på Raji B-cellelymfom-målceller under anvendelse av væskestrømcytometribasert analyse, som beskrevet for det kimæriske B-ly1-antistoff i Eksempel 1 ovenfor.
Binding av monomere IgG1-glykovarianter til NK-celler og Fc γRIIIA-uttrykkende CHO-cellelinje
[0229] Humane NK-celler ble isolert fra nyisolerte mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) med anvendelse av negativ seleksjonsanriking med hensyn til CD16- og CD56-positive celler (MACS-system, Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach/Tyskland). Renheten bestemt ved CD56-ekspresjon var mellom 88 og 95%. Nyisolerte NK-celler ble inkubert i PBS uten kalsium- og magnesium-ioner (3 x 10<5 >celler/ml) i 20 minutter ved 37°C under fjerning av NK-celle-assosiert IgG. Cellene ble inkubert med 10<6 >celler/ml med forskjellige konsentrasjoner av anti-CD20-antistoff (0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 μg/ml) i PBS, 0,1% BSA. Etter flere vaskinger ble antistoffbinding påvist ved inkubering med 1:200 FITC-konjugert F(ab')2 geiteantihumant, F(ab')2-spesifikt IgG (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA/USA) og anti-humant CD56-PE (BD Biosciences, Allschwil/Sveits). AntiFcgammaRIIIA 3G8 F(ab')2-fragmenter (Ancell, Bayport, MN/USA) ble tilsatt i en konsentrasjon på 10 µg/ml for konkurrering av binding av antistoff-glykovarianter (3 μg/ml). Fluorescensintensiteten som kan tilskrives de bundne antistoffvarianter, ble bestemt for CD56-positive celler på en FACSCalibur (BD Biosciences, Allschwil/Sveits). CHO-celler ble transfektert ved elektroporasjon (280 V, 950 μF, 0,4 cm) med en ekspresjonsvektor som kodet for FcgammaRIIIA-Val158 α-kjeden og γ-kjeden. Transfektanter ble selektert ved tilsetting av 6 μg/ml puromycin, og stabile kloner ble analysert ved FACS under anvendelse av 10 μl monoklonalt FITC-konjugert anti-FcgammaRIII 3G8-antistoff (BD Biosciences, Allschwil/Sveits) for 10<6 >celler. Binding av IgG1 til FcgammaRIIIA-Val158-uttrykkende CHO-celler ble utført analogt med NK-cellebindingen beskrevet ovenfor.
ADCC-analyse
[0230] Humane mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) ble anvendt som effektorceller og ble preparert under anvendelse av Histopaque-1077 (Sigma Diagnostics Inc., St. Louis, M063178 USA) og idet man hovedsakelig fulgte fabrikantens instruksjoner. Kort angitt ble veneblod tatt med hepariniserte sprøyter fra frivillige personer. Blodet ble fortynnet 1:0,75-1,3 med PBS (ikke inneholdende Ca<++ >eller Mg<++>) og lagt på Histopaque-1077. Gradienten ble sentrifugert ved 400 x g i 30 min ved romtemperatur (RT) uten bremser. Interfasen inneholdende PBMC ble oppsamlet og vasket med PBS (50 ml pr. celler fra to gradienter) og harvested ved sentrifugering ved 300 x g i 10 minutter ved RT. Etter gjenoppslemming av pelleten med PBS, ble PBMC tellet og vasket en andre gang ved sentrifugering ved 200 x g i 10 minutter ved RT. Cellene ble deretter gjenoppslemmet i passende medium for de påfølgende prosesser.
[0231] Forholdet mellom effektor og mål anvendt for ADCC-analysene var 25:1 og 10:1 for henholdsvis PBMC og NK-celler. Effektorcellene ble preparert i AIM-V-medium i passende konsentrasjon for tilsetting av 50 μl pr. brønn i rundbunnede 96 brønnsplater. Målcellene var humane B-lymfomceller (f.eks. Rajiceller) dyrket i DMEM inneholdende 10% FCS. Målcellene ble vasket i PBS, tellet og gjenoppslemmet i AIM-V med 0,3 millioner pr. ml for tilsetting av 30000 celler i 100 μl pr. mikrobrønn. Antistoffene ble fortynnet i AIM-V, tilsatt i 50 μl til de forutplatede målcellene og fikk bindes til målcellene i 10 minutter ved RT. Deretter ble effektorcellene tilsatt, og platen ble inkubert i 4 timer ved 37°C i fuktig atmosfære inneholdende 5% CO2. Dreping av målcellene ble fastslått ved måling av laktatdehydrogenase (LDH)-frigjøring fra ødelagte celler under anvendelse av Cytotoksisitetspåvisningssettet (Roche Diagnostics, Rotkreuz, Sveits). Etter inkuberingen på 4 timer ble platene sentrifugert ved 800 x g.100 μl supernatant fra hver brønn ble overført til en ny transparent flatbunnet 96 brønns plate.100 μl fargesubstratbuffer fra utstyrssettet ble tilsatt pr. brønn. Vmaks-verdiene for fargereaksjonen ble fastsatt i en ELISA-avlesningsinnretning ved 490 nm i minst 10 min under anvendelse av SOFTmax PRO-programvare (Molecular Devices, Sunnyvale, CA94089, USA). Spontan LDH-frigjøring ble målt fra brønner inneholdende bare mål- og effektorceller, men ingen antistoffer. Maksimal frigjøring ble bestemt fra brønner inneholdende bare målceller og 1% Triton X-100. Prosentandel av spesifikk antistoffmediert dreping ble beregnet som følger: ((x — SR)/(MR — SR)*100, hvor x er middelverdien for Vmaks ved en spesifikk antistoffkonsentrasjon, SR er middelverdien for Vmaks for den spontane frigjøring, og MR er middelverdien for Vmaks for den maksimale frigjøring.
Komplementavhengig cytotoksisitetsanalyse
[0232] Målcellene ble tellet, vasket med PBS, gjenoppslemmet i AIM-V (Invitrogen) med 1 millioner celler pr. ml.50 μl celler ble utplatet pr. brønn i en flatbunnet 96 brønns plate. Antistoff-fortynninger ble tilberedt i AIM-V og tilsatt i 50 μl til cellene. Antistoffene fikk bindes til cellene i 10 minutter ved romtemperatur. Humant serumkomplement (Quidel) ble nytint, fortynnet 3 ganger med AIM-V og tilsatt i 50 μl i brønnene. Kaninkomplement (Cedarlane Laboratories) ble tilberedt som beskrevet av fabrikanten, fortynnet 3 ganger med AIM-V og tilsatt i 50 μl i brønnene. Som kontroll ble komplementkilder oppvarmet i 30 min ved 56°C før tilsetting til analysen. Analyseplatene ble inkubert i 2 timer ved 37°C. Dreping av cellene ble bestemt ved måling av LDH-frigjøring. Kort angitt ble platene sentrifugert ved 300 x g i 3 min.50 μl supernatant pr. brønn ble overført til en ny 96 brønns plate, og 50 μl av analysereagenset fra Cytotoksisitets-settet (Roche) ble tilsatt. En kinetisk måling med ELISA-avlesningsinnretningen bestemte Vmaks som samsvarte med LDH-konsentrasjonen i supernatanten. Maksimal frigjøring ble bestemt ved inkubering av cellene i nærvær av 1% Trition X-100.
Uttømmingsanalyse for B-celler i fullblod
[0233] Normal B-celle-uttømming i fullblod ved anti-CD20-antistoffene ble utført som beskrevet i Eksempel 1 ovenfor.
Apoptoseanalyse
[0234] Den apoptotiske potens for antistoffene ble analysert ved inkubering av antistoffet med 10 μg/ml (metningsbetingelser med hensyn til antigenbinding) med målcellene (med en målcellekonsentrasjon på 5 x 10<5 >celler/ml) natten over (16-24 t). Prøvene ble merket med AnnV-FITC og analysert ved FACS. Analyse ble utført in triplo.
[0235] Påvisning utføres ved væskestrømcytometri ved at man fulgte tilsynekomsten av apoptotiske markører så som annexin V og fosfatidylserin.
Negativ kontroll (ingen apoptose indusert) inneholder intet antistoff, men bare fosfatbufret saltløsning. Positiv kontroll (maksimal apoptose) inneholder 5 mikromolar av det sterke apoptoseinduserende middel camptothecin (CPT).
Resultater og diskusjon
[0236] Sammenlikning av bindingen til humant CD20-antigen av antistoffvariantene B-HH1, B-HH2, B-HH3, enten kompleksbundet med den kimæriske B-ly1-lettkjede (mVL, som beskrevet i eksempel 1 ovenfor) eller med den humaniserte B-ly1-lettkjede (KV1), og det parentale, kimæriske antistoff chB-ly1 (beskrevet i eksempel 1 ovenfor) viser at alle antistoffer har liknende EC50-verdi, men B-HH1-konstruksjonen bindes med lavere intensitet/støkiometri enn variantene B-HH2 og B-HH3 (fig.11). B-HH1 kan skjelnes fra B-HH2 og B-HH3 ved sine delvis humane CDR1- og CDR2-regioner (Kabat-definisjon), samt Ala/Thr-polymorfismen i stilling 28 (Kabat-nummerering). Dette tyder på at enten 28, det fullstendige CDR1 og/eller det fullstendige CDR2 er viktige for antistoff/antigen-interaksjon.
[0237] Sammenlikningen av B-HL1, B-HH1 og det kimæriske parentale chB-ly1-antistoff viste fravær av en hver bindingsaktivitet i B-HL1-konstruksjonen, og omtrent halvdelen av bindingsintensiteten/støkiometrien for B-HH1 sammenliknet med B-ly1 (fig.12). Både B-HL1 og B-HH1 utformes basert på akseptorrammeverk som stammer fra den humane VH1-klasse. Blant andre forskjeller er stilling 71 (Kabat-nummerering; Kabat-stilling 71 svarer til stilling 72 i SEKV ID NR: 48) av B-HL1-konstruksjonen et slående avvik, noe som viser dens antatte betydning for antigenbinding.
[0238] Ved sammenlikning av antigenbindingsdataene ifølge fig.9-13 viser BHH2-KV1-, BHL8-KV1- og BHL11-KV1-variantene den beste bindingsaffinitet, blant de forskjellige testede humaniserte antistoffvarianter, til humant CD20 på overflaten av humane celler. Forskjellene mellom B-HH2 på den ene side og B-HL8 og B-HL11 på den annen side befinner seg kun i FR1- og FR2-regionene, idet alle de tre CDR er identiske (sammenlikne f.eks. SEKV ID NR: 32, 56 og 60, som ikke er nummerert ifølge Kabat, men hvis Kabat-nummerering lett kan bestemmes av en vanlig fagperson). B-HL8 og B-HL11 har sine FR1- og FR2-sekvenser fra den humane VH3-klasse, mens det fullstendige B-HH2-rammeverk er humant VH1-avledet. B-HL11 er et derivat av B-HL8 med enkeltmutasjonen Glu1Gln (stilling 1 er den samme både ved Kabat-nummerering og det konvensjonelle nummereringssystem anvendt i sekvenslisten), hvor Gln er aminosyreresten i B-HH2-konstruksjonen. Dette betyr at Glu1Gln-utskifting ikke forandrer bindingsaffinitet eller intensitet. De andre forskjeller mellom B-HH2 og B-HL8 er 14 rammeverkrester, hvorav én eller flere vil innvirke på den antigenbindende oppførsel hos dette antistoff.
[0239] B-HL4-konstruksjonen fås fra B-HH2-antistoffet ved erstatting av FR1 i B-HH2 med FR1 i den humane kimlinjesekvens VH1_45. Denne konstruksjon viser sterkt redusert antigenbindende evne, til tross for at den har forskjellige aminosyrer bare i tre stillinger i FR1. Disse rester befinner seg i stillingene 2, 14 og 30 (Kabat-nummerering). Blant disse kan stilling 30 være en stilling av betydning, siden det er en del av Chothia-definisjonen av CDR1. Total analyse av alle bindingskurvene fra fig.9 til 13 viser at følgende humaniserte B-ly1-tungkjederester (Kabat-nummerering) er viktige for binding til CD20: N35 (enden av Kabat CDR1), fullstendig Kabat CDR1, fullstendig Kabat CDR2 og fullstendig Kabat CDR3, restene A71 og R94 (i dette tilfelle kan R94 ikke erstattes av et treonin) og Y27. A28 og S30 bidrar også i mindre utstrekning. Dessuten er Kabat CDR3 og alle kanoniske rester viktige for antigenbinding. Ingen tilbakemutasjoner ble innført i den humaniserte lette kjede, som hadde de fullstendige Kabat CDR1, CDR2 og CDR3 innpodet. Ved induksjon av apoptose (fig. 14, 15 og 21) var den mest potente variant humanisert B-ly1-variant BHH2KV1 (enda mer potent enn den opprinnelige chB-ly1, og meget mer potent enn et antistoff med en sekvens identisk med rituximab, C2B8). Andre humaniserte varianter (derivater av BHL8) som kan gjenvinne den økte apoptose, er: B-HL12 til B-HL17 (se tabell) og BHH8 (blandede rammeverk) og BHH9 ("blandede rammeverk" med én tilbakemutasjon, S30T). Stillingene 9 og 48 (Kabatnummerering) kan kontakte antigenet. Variantene BHH4 til BHH7 er andre humaniserte B-ly1-varianter som ikke innfører ytterligere ikke-humane sekvenser.
[0240] Viktige egenskaper hos det humaniserte B-ly1-antistoff er at det er et anti-CD20-antistoff type II som definert i Cragg, M.S. og Glennie, M.J., Blood 103(7):2738-2743 (april 2004). Ved binding til CD20 induserte det derfor ikke noen betydelig resistens overfor ekstraksjon av CD20 med ikke-ionisk detergent fra overflaten av humane CD20+-celler, ved anvendelse av analysen beskrevet for dette formål i Polyak, M.J. og Deans, J.P., Blood 99(9):3256-3262 (2002). Det induserte unektelig betydelig mindre resistens overfor ekstraksjon av CD20 med ikke-ionisk detergent enn C2B8-antistoffet gjør (et annet anti-CD20-antistoff med identisk sekvens som rituximab (se US-patentpublikasjon nr.2003/0003097). Som ventet for et anti-CD20-antistoff type II, hadde det humaniserte B-ly1 ikke noen signifikant komplementmediert lyseaktivitet og unektelig en mengde mer komplementmediert lyseaktivitet enn anti-CD20-antistoffet C2B8 (kimærisk IgG1 med identisk sekvens som rituximab). En annen viktig egenskap hos det humaniserte B-ly1-antistoff var at det var meget potent i den homotypiske aggregeringsanalyse. I denne analyse ble CD20-positive humane celler, Daudiceller, inkubert i celledyrkningsanalysemedium i opp til 24 timer ved 37 ºC i 5% CO2-atmosfære i en pattedyrcelleinkubator som beskrevet detaljert i (Deans referanse) med antistoffet i en konsentrasjon på 1 mikrogram pr. ml og parallelt i en konsentrasjon på 5 mikrogram pr. ml. Til sammenlikning ble kontroll, parallell inkubering av cellene utført under identiske betingelser, men med anvendelse av anti-CD20-antistoffet C2B8. På forskjellige tidspunkter, innbefattende 8 timers og 24 timers inkubering, ble cellene inspisert visuelt ved anvendelse av mikroskop. Det ble funnet at det humaniserte B-ly1-antistoff førte til sterk homotypisk aggregering, idet aggregatene var betydelig større enn aggregatene innført ved tilsetting av C2B8-kontrollantistoffet. Dessuten, og i overensstemmelse med at antistoffet var anti-CD20 type II, induserte det høyere nivåer av apoptose når CD20-positive humane celler ble inkubert med det humaniserte B-ly1-antistoff, i forhold til en kontroll under identiske betingelser under anvendelse av det C2B8-kimæriske IgG1-antistoff med identisk sekvens som rituximab.
[0241] Glyko-omarbeidede varianter av de humaniserte antistoffer ble frembrakt ved ko-ekspresjon av GnTIII-glykosyltransferase, sammen med antistoffgenene, i pattedyrceller. Dette førte til en økning i fraksjonen av ikkefukosylerte oligosakkarider knyttet til Fc-regionen av antistoffene, innbefattende todelte ikke-fukosylerte oligosakkarider, som beskrevet i WO 2004/065540 (fig.17-19). De glyko-omarbeidede antistoffer hadde betydelig høyere nivåer av binding til humane FcgammaRIII-reseptorer (fig.20) samt ADCC-aktivitet (fig.16), i forhold til det ikke-glyko-omarbeidede antistoff og i forhold til C2B8-antistoffet. Det humaniserte B-ly1-antistoff var også mer potent ved innføring av human B-celleuttømming i en fullblodanalyse (fig.16), enn kontroll-C2B8-antistoffet. Dette var tilfellet både for det ikke-glyko-omarbeidede B-ly1-antistoff og for den glykoomarbeidede versjon av det. Det glyko-omarbeidede antistoff var omtrent 1000 ganger mer potent enn C2B8-kontroll-anti-CD20-antistoffet med hensyn til uttømming av B-celler i fullblodanalysen. Denne sammenlikning er viktig både for de ikke-glyko-omarbeidede og for de glyko-omarbeidede humaniserte former av B-ly1-antistoff, på grunn av at den viste at i analyser som kombinerte Fc-reseptoravhengige aktiviteter, så som ADCC, pluss komplementmediert lyse, pluss induksjon av apoptose, var begge former av B-ly1 betydelig mer potente enn C2B8, skjønt begge former av B-ly1 har dramatisk lavere komplementmediert lyseaktivitet. De Fc-reseptor-avhengige ADCC-dreperaktiviteter og apoptoseinduksjon var til stede i denne overlegne aktivitet av de humaniserte B-ly1-antistoffvarianter. Ved apoptoseanalysen var videre både de glyko-omarbeidede og ikke-glyko-omarbeidede former av dette type II-anti-CD20-antistoff potente, og de Fc-omarbeidede varianter med øket bindingsaffinitet til Fcgamma-reseptorer var enda mer potente ved apoptoseinduksjon enn den ikke-Fc-omarbeidede variant, og alle varianter var betydelig mer potente enn kontrollantistoffet C2B8. Den nøyaktige mekanisme for forøket homotypisk aggregering og induksjon av apoptose mediert ved type II-anti-CD20-antistoffer er ikke kjent, og samtidig binding til andre molekyler på overflaten av CD20-positive celler, så som Fcgamma-reseptorer, kan innvirke på denne viktige egenskap. Det var derfor viktig å vise at anti-CD20-antistoffer av type II som er blitt omarbeidet i sin Fc-region for øket bindingsaffinitet til Fc-gamma-reseptorer, innbefattende FcgammaRIII og med en tilknyttet økning i ADCC-aktivitet, fremdeles var i stand til å indusere sterk apoptose, enda høyere enn den ikke-Fc-omarbeidede og homotypiske aggregering. Apoptoseinduksjon er viktig in vivo, siden det er steder i kroppen hvor de CD20-positive målceller kan finnes, men hvor adgang til FcgammaRIII-positive celler er mer vanskelig enn i blod; slike steder er for eksempel lymfeknuter. På disse steder kan induksjonen av apoptose ved selve anti-CD20-antistoffet være avgjørende for god effektivitet av anti-CD20-antistoff-terapien hos mennesker, både for behandling av hematologiske maligniteter så som ikke-Hodgkins lymfomer og kronisk B-celle-lymfocyttleukemi, og for behandling av autoimmune sykdommer så som reumatoid artritt og lupus via en B-celleuttømmings-fremgangsmåte. Den økte bindingsaffinitet til FcgammaRIII og høyere ADCC hos det humaniserte, Fc-omarbeidede anti-CD20-antistoff type II kan også være en meget viktig egenskap for slike terapier. Endelig kan den reduserte eller ubetydelige komplementmedierte lyseaktivitet hos disse anti-CD20-antistoffer type II, innbefattende humaniserte og Fc-omarbeidede varianter, også være viktig høyere komplementaktivering ved anti-CD20-antistoffer er blitt korrelert med økte, uønskede bivirkninger.

Claims (22)

Patentkrav
1. Humanisert type II anti-CD20 antistoff omfattende
(a) en tungkjede variabel region valgt fra SEKV ID NR:62, SEKV ID NR:64, SEKV ID NR:66, SEKV ID NR:68, SEKV ID NR:70 og SEKV ID NR 72, og (b) KV1 lett kjede variabel region av SEKV ID NR:76.
2. Humanisert type II anti-CD20 antistoff ifølge krav 1, hvori den tungkjede variable regionen er kodet av en nukleinsyresekvens med SEKV ID NR: 61, 63, 65, 67, 69 eller 71 og den lett kjede variable regionen er kodet av en nukleinsyresekvens med SEKV ID NR: 75, hvori antistoffet induserer høyere nivåer av apoptose når det inkuberes med CD20-positive humane celler i forhold til en kontroll under identiske forhold ved bruk av det kimære C2B8 IgG1-antistoffet med en sekvens identisk med rituximab.
3. Ekspresjonsvektor omfattende et polynukleotid som koder for den tungkjede variable regionen ifølge krav 1 eller krav 2 og et polynukleotid som koder for den lett kjede variable regionen ifølge krav 1 eller krav 2.
4. Vektor ifølge krav 3, som er polycistronisk.
5. Isolert vertscelle omfattende ekspresjonsvektoren ifølge krav 3 eller krav 4 eller et polynukleotid som koder for den tungkjede variable regionen ifølge krav 1 eller krav 2 og et polynukleotid som koder for den lett kjede variable regionen ifølge krav 1 eller krav 2.
6. Vertscelle ifølge krav 5, hvori vertscellen er konstruert til å uttrykke minst én nukleinsyre som koder for et polypeptid som har β(1,4)-N-acetylglukosylaminyltransferase III-aktivitet.
7. Vertscelle ifølge krav 6, hvori polypeptidet som har β(1,4)-N-acetylglukosylaminyltransferase III-aktivitet er et fusjonspolypeptid som videre omfatter Golgi-lokaliseringsdomenet til et heterologt Golgi-resident polypeptid.
8. Vertscelle ifølge krav 7, hvori nevnte Golgi-lokaliseringsdomene er valgt fra lokaliseringsdomenet til mannosidase II, lokaliseringsdomenet til β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase I, β(1,2)-N-acetylglukosaminyltransferase II, mannosidase I eller α1-6 kjernefucosyltransferase.
9. Fremgangsmåte for fremstilling av det humaniserte Type-II anti-CD20 antistoffet ifølge krav 1 eller krav 2, omfattende dyrking av vertscellen ifølge hvilket som helst av kravene 5 til 8 under betingelser som tillater produksjon av antistoffet og utvinning av antistoffet fra nevnte antistoffkultur.
10. Humanisert type II anti-CD20-antistoff, hvori antistoffet er oppnåelig av vertscellen ifølge hvilket som helst av kravene 5 til 8.
11. Antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, hvori antistoffet omfatter en glykokonstruert Fc-region.
12. Antistoff ifølge krav 11, hvori antistoffet har en økning i fraksjonen av ikkefukosylerte oligosakkarider festet til den glykokonstruerte Fc-regionen.
13. Antistoff ifølge krav 11, hvori nevnte antistoff har en økning i fraksjonen av todelte, ikke-fukosylerte oligosakkarider festet til nevnte glykokonstruerte Fc-region.
14. Antistoff ifølge krav 11, hvori nevnte antistoff har signifikant høyere nivåer av binding til humane FcgammaRIII-reseptorer i forhold til det ikke-glykokonstruerte antistoffet.
15. Antistoff ifølge krav 11, hvori nevnte antistoff har signifikant høyere nivåer av ADCC-aktivitet i forhold til det ikke-glykokonstruerte antistoffet.
16. Farmasøytisk sammensetning omfattende antistoffet ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
17. Antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, for bruk som et medikament for å behandle en B-cellelidelse.
18. Antistoff ifølge krav 17, hvori nevnte B-cellelidelse er et B-celle lymfom.
19. Anvendelse av antistoffet ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, for fremstilling av et medikament for å behandle en lidelse som kan behandles ved B-celleutarming.
20. Antistoff ifølge hvilket som helst av kravene 1, 2 eller 10 til 15, eller oppnåelig ved fremgangsmåten ifølge krav 9, for bruk som et medikament for å behandle en lidelse som kan behandles ved B-celleutarming.
21. Anvendelse ifølge krav 19 eller antistoffet ifølge krav 20, hvori nevnte lidelse er en hematologisk malignitet eller en autoimmun sykdom.
22. Antistoff eller anvendelse ifølge krav 21, hvori den hematologiske maligniteten er B-celle lymfom, non-Hodgkins lymfom eller B-celle kronisk lymfatisk leukemi.
NO20220904A 2003-11-05 2022-08-24 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning NO347800B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US51709603P 2003-11-05 2003-11-05
PCT/IB2004/003896 WO2005044859A2 (en) 2003-11-05 2004-11-05 Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20220904A1 NO20220904A1 (no) 2006-08-03
NO347800B1 true NO347800B1 (no) 2024-03-25

Family

ID=34572912

Family Applications (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20210499A NO346533B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Antigenbindingsmolekyler med økt Fc-reseptorbindingsaffinitet og effektorfunksjon.
NO20220263A NO347530B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Et humanisert type II anti-CD20 antistoff og vertscelle som produserer et humanisert type II anti-CD20 antistoff samt en fremgangsmåte for fremstilling og en farmasøytisk sammensetning.
NO20062289A NO341893B1 (no) 2003-11-05 2006-05-19 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning.
NO20171989A NO346167B1 (no) 2003-11-05 2017-12-13 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning
NO20220904A NO347800B1 (no) 2003-11-05 2022-08-24 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning

Family Applications Before (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20210499A NO346533B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Antigenbindingsmolekyler med økt Fc-reseptorbindingsaffinitet og effektorfunksjon.
NO20220263A NO347530B1 (no) 2003-11-05 2004-11-05 Et humanisert type II anti-CD20 antistoff og vertscelle som produserer et humanisert type II anti-CD20 antistoff samt en fremgangsmåte for fremstilling og en farmasøytisk sammensetning.
NO20062289A NO341893B1 (no) 2003-11-05 2006-05-19 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning.
NO20171989A NO346167B1 (no) 2003-11-05 2017-12-13 Humanisert, glykoomkonstruert Type II anti-CD20 antistoff og anvendelse derav, samt vertscelle og farmasøytisk sammensetning

Country Status (40)

Country Link
US (7) US9296820B2 (no)
EP (5) EP2077282B1 (no)
JP (5) JP4653109B2 (no)
KR (3) KR101220691B1 (no)
CN (4) CN104829719A (no)
AT (1) ATE463513T1 (no)
AU (1) AU2004287643C1 (no)
BE (1) BE2016C008I2 (no)
BR (2) BR122020013239B1 (no)
CA (1) CA2544865C (no)
CR (1) CR11848A (no)
CY (6) CY1110301T1 (no)
DE (1) DE602004026470D1 (no)
DK (5) DK2348051T3 (no)
EA (4) EA202091901A1 (no)
EC (2) ECSP066603A (no)
ES (5) ES2550311T3 (no)
FR (1) FR15C0076I2 (no)
HK (4) HK1167681A1 (no)
HR (5) HRP20100303T1 (no)
HU (5) HUE042914T2 (no)
IL (4) IL175367A (no)
LT (4) LT2348051T (no)
LU (2) LU92632I2 (no)
MA (1) MA31040B1 (no)
ME (3) ME01775B (no)
MX (2) MX337587B (no)
NL (1) NL300801I2 (no)
NO (5) NO346533B1 (no)
NZ (2) NZ547589A (no)
PL (5) PL1692182T3 (no)
PT (5) PT2348051T (no)
RS (5) RS58420B1 (no)
SG (3) SG10202008722QA (no)
SI (5) SI2077282T1 (no)
TN (1) TNSN06126A1 (no)
TR (2) TR201903329T4 (no)
UA (1) UA91823C2 (no)
WO (1) WO2005044859A2 (no)
ZA (1) ZA200604547B (no)

Families Citing this family (784)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2180007T4 (da) * 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
EP1423510A4 (en) 2001-08-03 2005-06-01 Glycart Biotechnology Ag ANTIBODY GLYCOSYLATION VARIANTS WITH INCREASED CELL CYTOTOXICITY DEPENDENT OF ANTIBODIES
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
NZ568403A (en) 2003-05-09 2009-10-30 Univ Duke CD20-specific antibodies and methods of employing same
ME01775B (me) 2003-11-05 2011-02-28 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antitijela sa povećanim afinitetom vezivanja za fc receptor i efektornom funkcijom
NZ552433A (en) * 2004-07-22 2009-10-30 Genentech Inc Method of treating sjogrenÆs syndrome
EP2213683B1 (en) 2004-08-04 2013-06-05 Mentrik Biotech, LLC Variant Fc regions
AU2005294666A1 (en) 2004-10-05 2006-04-20 Genentech, Inc. Method for treating vasculitis
EP1871805B1 (en) 2005-02-07 2019-09-25 Roche Glycart AG Antigen binding molecules that bind egfr, vectors encoding same, and uses thereof
EP1888649A2 (en) * 2005-05-09 2008-02-20 GlycArt Biotechnology AG Antigen binding molecules having modified fc regions and altered binding to fc receptors
EP1902320B1 (en) * 2005-05-20 2010-03-10 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
JP2008541770A (ja) * 2005-06-03 2008-11-27 ジェネンテック・インコーポレーテッド 改変したフコシル化レベルを有する抗体の産生方法
SG164379A1 (en) 2005-07-21 2010-09-29 Genmab As Potency assays for antibody drug substance binding to an fc receptor
TWI615407B (zh) * 2005-08-26 2018-02-21 羅齊克雷雅公司 具有經改變細胞傳訊活性之改質抗原結合分子
AU2012216702B2 (en) * 2005-08-26 2014-12-04 Roche Glycart Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
WO2007055916A2 (en) * 2005-11-07 2007-05-18 The Rockefeller University Reagents, methods and systems for selecting a cytotoxic antibody or variant thereof
US20080206246A1 (en) * 2006-04-05 2008-08-28 Ravetch Jeffrey V Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
US8470318B2 (en) * 2005-11-07 2013-06-25 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
CN105859886A (zh) 2005-12-02 2016-08-17 健泰科生物技术公司 牵涉与il-22和il-22r结合的抗体的组合物和方法
DK1973950T3 (en) 2006-01-05 2014-12-15 Genentech Inc ANTI-EphB4 ANTIBODIES AND METHODS FOR USING SAME
DK1991273T4 (da) 2006-02-10 2022-02-07 Life Technologies Corp Mærkning og påvisning af post-translationelt modificerede proteiner
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
EP3456351A1 (en) * 2006-04-05 2019-03-20 The Rockefeller University Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods
EP2446904B1 (en) 2006-05-30 2015-04-29 Genentech, Inc. Anti-CD22 antibodies, their immunoconjugates and uses thereof
RU2008152435A (ru) * 2006-06-06 2010-07-20 Дженентек, Инк. (Us) Композиции и способы регулирования развития сосудов
AR062223A1 (es) * 2006-08-09 2008-10-22 Glycart Biotechnology Ag Moleculas de adhesion al antigeno que se adhieren a egfr, vectores que los codifican, y sus usos de estas
WO2008063776A2 (en) 2006-10-12 2008-05-29 Genentech, Inc. Antibodies to lymphotoxin-alpha
ES2636089T3 (es) 2006-10-27 2017-10-05 Genentech, Inc. Anticuerpos e inmunoconjugados y usos para los mismos
AU2013202392B2 (en) * 2006-12-20 2016-02-25 Mmrglobal, Inc. Antibodies and methods for making and using them
EP2716657A3 (en) 2006-12-20 2014-10-08 Mmrglobal, Inc. Antibodies and methods for making and using them
ATE526017T1 (de) 2007-01-22 2011-10-15 Genentech Inc Abscheidung von polyelektrolyten und reinigung von antikörpern
JP2010517944A (ja) * 2007-01-26 2010-05-27 バイオインヴェント インターナショナル アーベー Ｄｌｌ４シグナリング阻害薬およびその使用
WO2008100805A2 (en) 2007-02-09 2008-08-21 Genentech, Inc. Anti-robo4 antibodies and uses therefor
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
FR2915398B1 (fr) * 2007-04-25 2012-12-28 Lab Francais Du Fractionnement "ensemble de moyens pour le traitement d'une pathologie maligne, d'une maladie auto-immune ou d'une maladie infectieuse"
NO3072525T3 (no) 2007-05-14 2018-06-30
SI2158315T1 (sl) 2007-06-25 2016-05-31 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Postopki za spreminjanje protiteles in spremenjena protitelesa z izboljšanimi funkcionalnimi lastnostmi
PE20090481A1 (es) 2007-07-16 2009-05-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd79b e inmunoconjugados humanizados y metodos de uso
CN111499748A (zh) 2007-07-16 2020-08-07 健泰科生物技术公司 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法
CA2697482C (en) * 2007-09-05 2016-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with type i and type ii anti-cd20 antibodies
SG193868A1 (en) 2007-09-26 2013-10-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Modified antibody constant region
US20090098118A1 (en) * 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US20090110688A1 (en) * 2007-10-24 2009-04-30 Georg Fertig Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
CA2705007A1 (en) 2007-11-07 2009-05-14 Genentech, Inc. Compositions and methods for treatment of microbial disorders
TWI580694B (zh) 2007-11-30 2017-05-01 建南德克公司 抗-ｖｅｇｆ抗體
CN101945667A (zh) * 2007-12-21 2011-01-12 健泰科生物技术公司 利妥昔单抗不应性类风湿性关节炎患者的疗法
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
BRPI0820819B1 (pt) * 2007-12-21 2021-06-08 F. Hoffmann-La Roche Ag formulação de anticorpos humanizados b-ly 1 e seu uso
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
EP3269737B1 (en) 2008-01-31 2024-06-19 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
ES2592312T3 (es) * 2008-03-25 2016-11-29 Roche Glycart Ag Utilización de un anticuerpo anti-CD20 de tipo II con citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) incrementada en combinación con ciclofosfamida, vincristina y doxorrubicina para el tratamiento de linfomas no de Hodgkin
CA2718120A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing asthma
CA2722173A1 (en) * 2008-04-22 2009-10-29 The Rockefeller University Methods of identifying anti-inflammatory compounds
WO2009134738A1 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
KR101054362B1 (ko) * 2008-07-03 2011-08-05 재단법인 목암생명공학연구소 재조합 단백질의 푸코스 함량을 감소시키는 방법
US8680020B2 (en) 2008-07-15 2014-03-25 Academia Sinica Glycan arrays on PTFE-like aluminum coated glass slides and related methods
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
TWI572357B (zh) 2008-10-14 2017-03-01 建南德克公司 免疫球蛋白變異體及其用途
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
BRPI0918204A2 (pt) 2008-12-23 2015-12-08 Genentech Inc igv variante composição farmaceutica e kit
CN102356092B (zh) 2009-03-20 2014-11-05 霍夫曼-拉罗奇有限公司 双特异性抗-her抗体
PE20120770A1 (es) 2009-03-25 2012-07-10 Genentech Inc ANTICUERPOS ANTI alfa5ß1 CON ACTIVIDAD SOBRE GLIOBLASTOMAS
HUE061117T2 (hu) 2009-03-25 2023-05-28 Genentech Inc Anti-FGFR3 antitestek és eljárások alkalmazásukra
US20100247484A1 (en) * 2009-03-31 2010-09-30 Heinrich Barchet Combination therapy of an afucosylated antibody and one or more of the cytokines gm csf, m csf and/or il3
EP2414391B1 (en) 2009-04-02 2018-11-28 Roche Glycart AG Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain fab fragments
PL2417156T3 (pl) 2009-04-07 2015-07-31 Roche Glycart Ag Trójwartościowe, bispecyficzne przeciwciała
WO2010115553A1 (en) 2009-04-07 2010-10-14 Roche Glycart Ag Bispecific anti-erbb-2/anti-c-met antibodies
BRPI1012589A2 (pt) 2009-04-07 2016-03-22 Roche Glycart Ag anticorpos bi-específicos anti-erbb-3/anti-c-met
US20100316639A1 (en) 2009-06-16 2010-12-16 Genentech, Inc. Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
DE202010018640U1 (de) 2009-07-24 2019-11-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Rührersystem
AR077595A1 (es) 2009-07-27 2011-09-07 Genentech Inc Tratamientos de combinacion
MX2012001306A (es) 2009-07-31 2012-02-28 Genentech Inc Inhibicion de matastasis de tumor.
TWI409079B (zh) * 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
MA33470B1 (fr) 2009-08-14 2012-07-03 Hoffmann La Roche Polythérapie à base d'un anticorps afucosylé anti-cd20 et de fludarabine et/ou mitoxantrone
GB0914691D0 (en) 2009-08-21 2009-09-30 Lonza Biologics Plc Immunoglobulin variants
TW201113037A (en) 2009-08-28 2011-04-16 Hoffmann La Roche Antibodies against CDCP1 for the treatment of cancer
TWI412375B (zh) 2009-08-28 2013-10-21 Roche Glycart Ag 人類化抗ｃｄｃｐ１抗體
WO2011028950A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
AR078161A1 (es) * 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
RU2573915C2 (ru) 2009-09-16 2016-01-27 Дженентек, Инк. Содержащие суперспираль и/или привязку белковые комплексы и их применение
SI2486141T1 (en) * 2009-10-07 2018-06-29 Macrogenics, Inc. FC REGION-CONTAINING POLYPETHYDE, AFFECTING A BETTERED EFFECTORAL FUNCTION, BY CHANGES IN THE SCOPE OF FUKOZILATION AND METHODS FOR THEIR USE
JP5814925B2 (ja) 2009-10-22 2015-11-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ヘプシン抗体及びその使用方法
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
CA2780221A1 (en) 2009-11-04 2011-05-12 Fabrus Llc Methods for affinity maturation-based antibody optimization
US8361744B2 (en) 2009-11-05 2013-01-29 Genentech, Inc. Methods and composition for secretion of heterologous polypeptides
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US8486397B2 (en) 2009-12-11 2013-07-16 Genentech, Inc. Anti-VEGF-C antibodies and methods using same
AU2010335282B2 (en) 2009-12-22 2015-05-21 Roche Glycart Ag Anti-HER3 antibodies and uses thereof
AU2010336485B2 (en) 2009-12-23 2015-03-26 Genentech, Inc. Anti-Bv8 antibodies and uses thereof
AR080154A1 (es) 2010-02-10 2012-03-14 Immunogen Inc Anticuerpos cd20 y su utilizacion
MX336473B (es) 2010-02-11 2016-01-20 Hoffmann La Roche Ensayo mediante adcc nk facs tridimensional.
RU2587619C2 (ru) 2010-02-18 2016-06-20 Дженентек, Инк. Антагонисты неурегулина и применение их в лечении злокачественного новообразования
BR112012022044A2 (pt) 2010-03-24 2020-08-25 Genentech Inc ''anticorpo,imunoconjugado,formulação farmacêutica,uso do anticorpo,método de tratamento,anticorpo biespecifico isolado e célula hospedeira''.
TW201138821A (en) 2010-03-26 2011-11-16 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies
US9441032B2 (en) 2010-04-07 2016-09-13 Agency For Science, Technology And Research Binding molecules against Chikungunya virus and uses thereof
EP2374816B1 (en) 2010-04-07 2016-09-28 Agency For Science, Technology And Research Binding molecules against Chikungunya virus and uses thereof
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
EP2563391B1 (en) 2010-04-27 2020-08-26 Roche Glycart AG Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with a mtor inhibitor
EP2568976B1 (en) 2010-05-10 2015-09-30 Academia Sinica Zanamivir phosphonate congeners with anti-influenza activity and determining oseltamivir susceptibility of influenza viruses
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
WO2011153346A1 (en) 2010-06-03 2011-12-08 Genentech, Inc. Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses therefor
KR101885388B1 (ko) 2010-06-18 2018-08-03 제넨테크, 인크. 항-Ａｘｌ 항체 및 사용 방법
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
BR112013000340A2 (pt) 2010-07-09 2016-05-31 Genentech Inc anticorpo isolado que se liga a neuropilina-1 (nrp1), ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado e método de detecção da presença de nrp1 em uma amostra biológica
KR20140002601A (ko) 2010-07-09 2014-01-08 바이오겐 이데크 헤모필리아 인코포레이티드 키메라 응고 인자
EP2409712A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Anti-CD19 antibody having ADCC and CDC functions and improved glycosylation profile
EP2409989A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Method to improve glycosylation profile for antibody
EP2409993A1 (en) 2010-07-19 2012-01-25 International-Drug-Development-Biotech Anti-CD19 antibody having ADCC function with improved glycosylation profile
FR2962908A1 (fr) 2010-07-20 2012-01-27 Lfb Biotechnologies Formulation d'anticorps anti-cd20
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
CA2806855A1 (en) 2010-08-03 2012-02-09 F. Hoffmann - La Roche Ag Chronic lymphocytic leukemia (cll) biomarkers
CA2805564A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stefan Jenewein Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP3333194B1 (en) 2010-08-13 2021-03-17 Roche Glycart AG Anti-fap antibodies and methods of use
KR101653030B1 (ko) 2010-08-13 2016-08-31 로슈 글리카트 아게 항-테나신-c a２ 항체 및 이의 사용 방법
WO2012022734A2 (en) 2010-08-16 2012-02-23 Medimmune Limited Anti-icam-1 antibodies and methods of use
AR082693A1 (es) 2010-08-17 2012-12-26 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo anti-cd20 afucosilado con un anticuerpo anti-vegf
NZ604510A (en) 2010-08-17 2013-10-25 Csl Ltd Dilutable biocidal compositions and methods of use
BR112013001847A2 (pt) 2010-08-24 2016-05-31 Hoffmann La Roche anticorpo biespecífico, método de preparação do anticorpo biespecífico, do anticorpo biespecífico trivalente, métodos e composição farmacêutica
CN103080132B (zh) 2010-08-25 2016-06-08 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗il-18r1的抗体及其用途
DK2612151T3 (en) 2010-08-31 2017-10-02 Genentech Inc BIOMARKETS AND METHODS OF TREATMENT
CA2821992A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
AU2011312205B2 (en) 2010-10-05 2015-08-13 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
MX2013005024A (es) 2010-11-08 2013-11-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-il-6 receptor administrado subcutaneamente.
CN103228674B (zh) 2010-11-10 2019-07-05 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于神经疾病免疫疗法的方法和组合物
TW201305200A (zh) 2010-11-30 2013-02-01 Genentech Inc 低親和力血腦障壁受體抗體及其用途
BR112013014522A2 (pt) 2010-12-16 2017-09-26 Roche Glycart Ag anticorpo anti-cd20 afucosilado e seu uso, composição e método para tratamento de um paciente que sofre de câncer
EP3447491A3 (en) 2010-12-16 2019-06-05 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnosis and treatments relating to th2 inhibition
TWI477513B (zh) 2010-12-20 2015-03-21 建南德克公司 抗間皮素（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）抗體及免疫接合物
SG191219A1 (en) 2010-12-22 2013-07-31 Genentech Inc Anti-pcsk9 antibodies and methods of use
SG191153A1 (en) 2010-12-23 2013-07-31 Hoffmann La Roche Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery
JP2014511147A (ja) 2011-02-10 2014-05-12 ロシュ グリクアート アーゲー 改善された免疫療法
MX342034B (es) 2011-02-28 2016-09-12 Hoffmann La Roche Proteinas monovalentes que se unen a antigenos.
EP2681239B8 (en) 2011-02-28 2015-09-09 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding proteins
PT2691417T (pt) 2011-03-29 2018-10-31 Roche Glycart Ag Variantes de fc de anticorpos
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
KR20140021589A (ko) 2011-04-07 2014-02-20 제넨테크, 인크. 항-fgfr4 항체 및 사용 방법
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
US8679767B2 (en) 2011-05-12 2014-03-25 Genentech, Inc. Multiple reaction monitoring LC-MS/MS method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature peptides
DK2710035T3 (en) 2011-05-16 2017-06-19 Hoffmann La Roche FGFR1 agonists and methods of use
CA2837914A1 (en) 2011-06-15 2012-12-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-human epo receptor antibodies and methods of use
AR086982A1 (es) 2011-06-22 2014-02-05 Hoffmann La Roche Eliminacion de celulas diana por parte de celulas t citotoxicas especificas de virus utilizando complejos que comprenden mhc de clase i
FR2976811A1 (fr) 2011-06-22 2012-12-28 Lfb Biotechnologies Utilisation d'un anticorps anti-cd20 a haute adcc pour le traitement de la maladie de waldenstrom
AR086823A1 (es) 2011-06-30 2014-01-22 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpo anti-c-met, metodos
EP2744824A1 (en) 2011-08-17 2014-06-25 F.Hoffmann-La Roche Ag Neuregulin antibodies and uses thereof
WO2013025944A1 (en) 2011-08-17 2013-02-21 Genentech, Inc. Inhibition of angiogenesis in refractory tumors
EP2748195A1 (en) 2011-08-23 2014-07-02 Roche Glycart AG Anti-mcsp antibodies
KR101870555B1 (ko) 2011-08-23 2018-06-22 로슈 글리카트 아게 T 세포 활성화 항원 및 종양 항원에 대해 특이적인 이중특이적 항체 및 이의 사용 방법
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
MX2014003094A (es) 2011-09-15 2014-04-25 Genentech Inc Metodos para promover diferenciacion.
KR20140064971A (ko) 2011-09-19 2014-05-28 제넨테크, 인크. c-met 길항제 및 B-raf 길항제를 포함하는 조합 치료
CN104302668A (zh) 2011-09-23 2015-01-21 罗氏格黎卡特股份公司 双特异性的抗-egfr/抗igf-1r抗体
KR102528622B1 (ko) 2011-09-30 2023-05-04 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 이온 농도 의존성 결합 분자 라이브러리
JP2014531210A (ja) 2011-09-30 2014-11-27 テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド ＴＬ１ａに対する抗体およびその使用
ES2911677T3 (es) 2011-10-03 2022-05-20 Modernatx Inc Nucleósidos, nucleótidos y ácidos nucleicos modificados, y sus usos
US20130089562A1 (en) 2011-10-05 2013-04-11 Genenthech, Inc. Methods of treating liver conditions using notch2 antagonists
EP3461839A1 (en) 2011-10-14 2019-04-03 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-htra1 antibodies and methods of use
EP2766000A2 (en) 2011-10-15 2014-08-20 F.Hoffmann-La Roche Ag Scd1 antagonists for treating cancer
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
SG11201401815XA (en) 2011-10-28 2014-05-29 Genentech Inc Therapeutic combinations and methods of treating melanoma
AU2012327878A1 (en) 2011-10-28 2014-05-29 Patrys Limited PAT-LM1 epitopes and methods for using same
US9580509B2 (en) 2011-11-07 2017-02-28 Medimmune, Llc Multispecific and multivalent binding proteins and uses thereof
CN104066748A (zh) 2011-11-21 2014-09-24 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗c-met抗体的纯化
US20130302274A1 (en) 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
US20140335084A1 (en) 2011-12-06 2014-11-13 Hoffmann-La Roche Inc. Antibody formulation
DE12858350T1 (de) 2011-12-16 2021-10-07 Modernatx, Inc. Modifizierte mrna zusammensetzungen
SI2794905T1 (sl) 2011-12-20 2020-08-31 Medimmune, Llc Modificirani polipeptidi za ogrodja bispecifičnega protitelesa
EP2794878B1 (en) 2011-12-22 2020-03-18 F.Hoffmann-La Roche Ag Expression vector organization, novel production cell generation methods and their use for the recombinant production of polypeptides
RU2625033C2 (ru) 2011-12-22 2017-07-11 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Система индикации на основе полноразмерного антитела для эукариотических клеток и ее применение
CN113881702A (zh) 2011-12-22 2022-01-04 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 表达载体元件组合、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途
WO2013096791A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Genentech, Inc. Process for making high concentration protein formulations
EP2804630B1 (en) 2012-01-18 2017-10-18 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of using fgf19 modulators
IN2014DN05885A (no) 2012-01-18 2015-06-05 Hoffmann La Roche
EP2812357B1 (en) 2012-02-10 2020-11-04 F.Hoffmann-La Roche Ag Single-chain antibodies and other heteromultimers
KR102148303B1 (ko) 2012-02-11 2020-08-26 제넨테크, 인크. R-스폰딘 전위 및 그의 사용 방법
CA2860600C (en) 2012-02-15 2022-07-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor based affinity chromatography
EP2831115A1 (en) 2012-03-27 2015-02-04 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnosis and treatments relating to her3 inhibitors
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
EP3501550A1 (en) 2012-04-02 2019-06-26 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
CA2867824A1 (en) 2012-05-01 2013-11-07 Genentech, Inc. Anti-pmel17 antibodies and immunoconjugates
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
KR102326359B1 (ko) 2012-05-18 2021-11-12 제넨테크, 인크. 고농도 모노클로날 항체 제제
KR102293061B1 (ko) 2012-05-21 2021-08-23 제넨테크, 인크. 혈액-뇌 장벽 수송의 안전성을 개선하는 방법
MX2014014086A (es) 2012-05-23 2015-01-26 Genentech Inc Metodo de seleccion para agentes terapeuticos.
BR112014031310A2 (pt) 2012-06-15 2017-07-25 Genentech Inc anticorpos anti-pcsk9, formulações, dosagem e métodos de uso
EP2863954A1 (en) 2012-06-21 2015-04-29 Indiana University Research and Technology Corporation Incretin receptor ligand polypeptide fc-region fusion polypeptides and conjugates with altered fc-effector function
JP6203838B2 (ja) 2012-06-27 2017-09-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 少なくとも２つの異なる結合実体を含む、テーラーメイドの高度に選択的かつ多重特異的なターゲティング実体を選択および作製するための方法、ならびにその使用
WO2014001325A1 (en) 2012-06-27 2014-01-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof
US20140004121A1 (en) 2012-06-27 2014-01-02 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
WO2014006123A1 (en) 2012-07-04 2014-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-biotin antibodies and methods of use
CN104428006B (zh) 2012-07-04 2017-09-08 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 共价连接的抗原‑抗体缀合物
WO2014006118A1 (en) 2012-07-04 2014-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-theophylline antibodies and methods of use
ES2743401T3 (es) 2012-07-05 2020-02-19 Hoffmann La Roche Sistema de expresión y secreción
MX2015000315A (es) 2012-07-09 2015-07-06 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd22 e inmunoconjugados.
EA201590174A1 (ru) 2012-07-09 2015-09-30 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие анти-cd22 антитела
MX2015000314A (es) 2012-07-09 2015-04-10 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd79b e inmunoconjugados.
US20140030280A1 (en) 2012-07-09 2014-01-30 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates
ES2896493T3 (es) 2012-07-13 2022-02-24 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecíficos anti-VEGF/anti-ANG-2 y su uso en el tratamiento de enfermedades vasculares oculares
AR092044A1 (es) 2012-08-07 2015-03-18 Roche Glycart Ag Inmunoterapia mejorada
CA2880701A1 (en) 2012-08-18 2014-02-27 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
AU2013305827A1 (en) 2012-08-21 2015-03-05 Academia Sinica Benzocyclooctyne compounds and uses thereof
KR102036262B1 (ko) 2012-08-29 2019-10-24 에프. 호프만-라 로슈 아게 혈액 뇌 장벽 셔틀
CN111481552A (zh) 2012-09-07 2020-08-04 吉宁特有限公司 II型抗CD20抗体与选择性Bcl-2抑制剂的组合治疗
EP2905290B1 (en) 2012-10-05 2019-12-04 Kyowa Kirin Co., Ltd. Heterodimeric protein composition
RU2015117393A (ru) 2012-10-08 2016-12-10 Роше Гликарт Аг Лишенные fc антитела, содержащие два Fab-фрагмента, и способы их применения
EP2727942A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Bispecific antibodies against human EGFR, HER2, and HER3
WO2014067642A1 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Mab Discovery Gmbh Method for the production of multispecific antibodies
WO2014071358A2 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
EP2727943A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Trispecific antibodies against human EGFR, HER2 and HER3
EP2727941A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Method for the production of multispecific antibodies
SG11201502538TA (en) 2012-11-08 2015-05-28 Hoffmann La Roche Her3 antigen binding proteins binding to the beta-hairpin of her3
TWI657095B (zh) 2012-11-13 2019-04-21 美商建南德克公司 抗血球凝集素抗體及使用方法
US9597380B2 (en) 2012-11-26 2017-03-21 Modernatx, Inc. Terminally modified RNA
CA2894225A1 (fr) 2012-12-17 2014-06-26 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Utilisation d'anticorps monoclonaux pour le traitement de l'inflammation et d'infections bacteriennes
SG11201504414UA (en) 2012-12-21 2015-07-30 Hoffmann La Roche Disulfide-linked multivalent mhc class i comprising multi-function proteins
US20140194368A1 (en) * 2013-01-04 2014-07-10 Beech Tree Labs, Inc. Method of Treating Cancer by Administration of Low Levels of Heat Shock Protein 70 (HSP70)
AR094403A1 (es) 2013-01-11 2015-07-29 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de anticuerpos anti-her3
RU2519546C1 (ru) * 2013-01-16 2014-06-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Биоинтегратор" (Ооо "Биоинтегратор") КОНЪЮГАТЫ И МАЛЫЕ МОЛЕКУЛЫ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИЕ С РЕЦЕПТОРОМ CD16а
WO2014113729A2 (en) 2013-01-18 2014-07-24 Foundation Mecicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
JP6539585B2 (ja) 2013-02-01 2019-07-03 デンドロサイト バイオテック ピーティーワイ リミテッド 抗ｃｄ８３抗体及びその使用
JP6545105B2 (ja) 2013-02-07 2019-07-17 シーエスエル、リミテッド Ｉｌ−１１ｒ結合タンパク質及びその使用
JP2016508515A (ja) 2013-02-13 2016-03-22 ラボラトワール フランセ デュ フラクショヌマン エ デ ビオテクノロジーＬａｂｏｒａｔｏｉｒｅ Ｆｒａｎｃａｉｓ ｄｕ Ｆｒａｃｔｉｏｎｎｅｍｅｎｔ ｅｔ ｄｅｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ 高ガラクトシル化抗ＴＮＦ−α抗体およびその使用
KR20150118159A (ko) 2013-02-22 2015-10-21 에프. 호프만-라 로슈 아게 암의 치료 방법 및 약물 내성의 예방 방법
KR20210094673A (ko) 2013-02-26 2021-07-29 로슈 글리카트 아게 이중특이적 t 세포 활성화 항원 결합 분자
CN105143270B (zh) 2013-02-26 2019-11-12 罗切格利卡特公司 双特异性t细胞活化抗原结合分子
CA2896259A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Anti-mcsp antibodies
RU2015137610A (ru) 2013-03-06 2017-04-10 Дженентек, Инк. Способы лечения и профилактики лекарственной резистентности злокачественных опухолей
US10251906B2 (en) * 2013-03-12 2019-04-09 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods for inducing apoptosis
CA2906057A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Genentech, Inc. Antibody formulations
KR20150127199A (ko) 2013-03-14 2015-11-16 제넨테크, 인크. 항-b7-h4 항체 및 면역접합체
CA2905070A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
KR20150127203A (ko) 2013-03-14 2015-11-16 제넨테크, 인크. Mek 억제제 화합물과 her3/egfr 억제제 화합물의 조합물 및 사용 방법
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
SG11201507429TA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Genentech Inc Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use
US20160143910A1 (en) 2013-03-15 2016-05-26 Constellation Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
CN110079599B (zh) 2013-03-15 2024-06-04 豪夫迈·罗氏有限公司 治疗pd-1和pd-l1相关疾患的生物标志物和方法
EP2970921B1 (en) 2013-03-15 2018-09-19 aTyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetase-fc conjugates
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
BR112015021521A2 (pt) 2013-03-15 2017-10-10 Genentech Inc anticorpos anti-crth2 e métodos para seu uso
MX2015012872A (es) 2013-03-15 2016-02-03 Ac Immune Sa Anticuerpos anti-tau y metodos de uso.
PE20151750A1 (es) 2013-03-15 2015-12-07 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento del cancer hepatico
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
RU2019108429A (ru) 2013-04-29 2019-05-06 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Модифицированные асимметричные антитела, связывающие fc-рецептор, и способы их применения
EP2992011B1 (en) 2013-04-29 2017-12-13 F. Hoffmann-La Roche AG Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases
MY172430A (en) 2013-04-29 2019-11-25 Hoffmann La Roche Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use
SI2992016T1 (en) * 2013-05-02 2018-01-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Combined treatment of an afcoxylated CD20 antibody with an antibody CD79b conjugate and a medicament
AR096184A1 (es) * 2013-05-02 2015-12-16 Hoffmann La Roche Terapia de combinación de un anticuerpo para cd20 afucosilado con un conjugado de anticuerpos para cd22-fármaco
AR096364A1 (es) 2013-05-20 2015-12-23 Genentech Inc Anticuerpos receptores de antitransferina y métodos de uso
WO2014210397A1 (en) 2013-06-26 2014-12-31 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
US9981030B2 (en) 2013-06-27 2018-05-29 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
HUE058243T2 (hu) 2013-08-01 2022-07-28 Five Prime Therapeutics Inc Afukozilált, FGFR2IIIB elleni antitestek
WO2015031673A2 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Bioasis Technologies Inc. Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof
US9782476B2 (en) 2013-09-06 2017-10-10 Academia Sinica Human iNKT cell activation using glycolipids with altered glycosyl groups
KR20160055252A (ko) 2013-09-17 2016-05-17 제넨테크, 인크. 항-lgr5 항체의 사용 방법
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015050959A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Yale University Anti-kit antibodies and methods of use thereof
SI3052192T1 (sl) 2013-10-02 2020-11-30 Medimmune, Llc Nevtralizarijoča protitelesa proti-influenci A in njihove uporabe
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
JP2016537965A (ja) 2013-10-11 2016-12-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｎｓｐ４阻害剤及び使用方法
ES2764833T3 (es) 2013-10-11 2020-06-04 The United States Of America Represented By The Sec Dep Of Health And Human Services Anticuerpos contra TEM8 y su uso
JP6422956B2 (ja) 2013-10-11 2018-11-14 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体
CA2925598A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Genentech, Inc. Anti-rspo antibodies and methods of use
KR20160068802A (ko) 2013-10-23 2016-06-15 제넨테크, 인크. 호산구성 장애를 진단 및 치료하는 방법
CN111499742B (zh) 2013-11-21 2024-05-07 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-α-突触核蛋白抗体及使用方法
WO2015082446A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment of cancer using an anti-cdcp1 antibody and a taxane
CA2930886C (en) 2013-12-09 2024-05-21 Christopher R. Bebbington Anti-siglec-8 antibodies and methods of use thereof
AU2014362238A1 (en) 2013-12-13 2016-06-09 Genentech, Inc. Anti-CD33 antibodies and immunoconjugates
BR112016013741A2 (pt) 2013-12-17 2017-10-03 Genentech Inc Usos de antagonistas de ligação de eixo de pd-1 e um anticorpo de anti-cd20, e kit compreendendo os mesmos
LT3736292T (lt) 2013-12-17 2024-07-25 Genentech, Inc. Antikūnai prieš cd3 ir jų naudojimo būdai
MX2016007887A (es) 2013-12-17 2016-10-28 Genentech Inc Metodos de tratamiento de canceres positivos a her2 usando antagonistas de union del eje de pd-1 y anticuerpos anti-her2.
SG11201604979WA (en) 2013-12-17 2016-07-28 Genentech Inc Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
JP6521464B2 (ja) 2014-01-03 2019-05-29 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 共有結合で連結されたポリペプチド毒素−抗体コンジュゲート
RU2694981C2 (ru) 2014-01-03 2019-07-18 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Ковалентно связанные конъюгаты хеликар-антитело против хеликара и их применения
EP3960768A1 (en) 2014-01-03 2022-03-02 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
BR112016015589A2 (pt) 2014-01-06 2017-10-31 Hoffmann La Roche módulos de trânsito monovalentes para a barreira hematoencefálica
KR20160107190A (ko) 2014-01-15 2016-09-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 변형된 FcRn-결합 및 유지된 단백질 A-결합 성질을 갖는 Fc-영역 변이체
WO2015109180A2 (en) 2014-01-16 2015-07-23 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
CA2935393A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Genentech, Inc. Methods of using anti-steap1 antibodies and immunoconjugates
WO2015120075A2 (en) 2014-02-04 2015-08-13 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
TWI785472B (zh) 2014-02-08 2022-12-01 美商建南德克公司 治療阿茲海默症之方法
KR20210121288A (ko) 2014-02-08 2021-10-07 제넨테크, 인크. 알츠하이머 질환을 치료하는 방법
EP3825332A1 (en) 2014-02-12 2021-05-26 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-jagged1 antibodies and methods of use
CR20160379A (es) 2014-02-21 2016-10-07 Genentech Inc Anticuerpos biespecificos anti-il 13/il-17 y sus usos
EP4014995A1 (en) 2014-02-28 2022-06-22 Allakos Inc. Methods and compositions for treating siglec-8 associated diseases
ES2897765T3 (es) 2014-03-14 2022-03-02 Hoffmann La Roche Procedimientos y composiciones para la secreción de polipéptidos heterólogos
WO2015140591A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
MA39776A (fr) 2014-03-24 2017-02-01 Hoffmann La Roche Traitement du cancer avec des antagonistes de c-met et corrélation de ces derniers avec l'expression de hgf
TWI687428B (zh) 2014-03-27 2020-03-11 中央研究院 反應性標記化合物及其用途
MX2016012779A (es) 2014-03-31 2017-04-27 Genentech Inc Terapia de combinacion con agentes antiangiogénesis y agonistas de unión a ox40.
PT3126394T (pt) 2014-03-31 2019-12-19 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-ox40 e métodos de utilização
EP3129055B1 (en) 2014-04-11 2020-07-01 MedImmune, LLC Bispecific her2 antibodies
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
CA2946662A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Genentech, Inc. Anti-gpc3 antibodies and immunoconjugates
EP3146071B1 (en) 2014-05-23 2020-09-02 F. Hoffmann-La Roche AG Mit biomarkers and methods using the same
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
JP7093612B2 (ja) 2014-05-27 2022-06-30 アカデミア シニカ Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ由来のフコシダーゼおよびそれを使用する方法
JP7062361B2 (ja) 2014-05-27 2022-05-06 アカデミア シニカ 抗ｈｅｒ２糖操作抗体群およびその使用
CN106573971A (zh) 2014-05-27 2017-04-19 中央研究院 抗cd20醣抗体及其用途
JP7063538B2 (ja) 2014-05-28 2022-05-09 アカデミア シニカ 抗ＴＮＦα糖操作抗体群およびその使用
PT3148581T (pt) 2014-05-30 2020-01-06 Henlix Biotech Co Ltd Anticorpos antirrecetor do fator de crescimento epidérmico (egfr)
MX2016016233A (es) 2014-06-11 2017-03-31 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 y sus usos.
WO2015191986A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Genentech, Inc. Methods of treating and preventing cancer drug resistance
MX2016015280A (es) 2014-06-26 2017-03-03 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-bromodesoxiuridina(brdu) y metodos de uso.
MX2017000419A (es) 2014-07-11 2017-08-16 Genentech Inc Anticuerpos anti-pd-l1 y sus usos de diagnóstico.
CN106488775A (zh) 2014-07-11 2017-03-08 基因泰克公司 Notch途径抑制
HUE044814T2 (hu) 2014-08-04 2019-11-28 Hoffmann La Roche Bispecifikus, T-sejt-aktiváló antigénkötõ molekulák
KR102615681B1 (ko) 2014-08-28 2023-12-18 바이오아트라, 인코퍼레이티드 변형된 t 세포에 대한 조건부 활성 키메라 항원 수용체
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
AU2015315294B2 (en) 2014-09-08 2020-09-17 Academia Sinica Human iNKT cell activation using glycolipids
WO2016037947A1 (en) * 2014-09-10 2016-03-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Galactoengineered immunoglobulin 1 antibodies
DK3191135T3 (da) 2014-09-12 2020-10-12 Genentech Inc Anti-HER2-antistoffer og immunokonjugater
CN113698488A (zh) 2014-09-12 2021-11-26 基因泰克公司 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物
PE20170670A1 (es) 2014-09-12 2017-06-06 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados
WO2016044334A1 (en) 2014-09-15 2016-03-24 Genentech, Inc. Antibody formulations
RU2727663C2 (ru) 2014-09-17 2020-07-22 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие антитела против her2 и пирролбензодиазепины
CA3069221C (en) 2014-09-23 2023-04-04 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates
JP2017536102A (ja) 2014-10-16 2017-12-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗アルファ−シヌクレイン抗体及び使用方法
EP3209695A4 (en) 2014-10-23 2018-05-30 DendroCyte BioTech Pty Ltd Cd83 binding proteins and uses thereof
US10626176B2 (en) 2014-10-31 2020-04-21 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind B7-H4
RU2017119231A (ru) 2014-11-03 2018-12-06 Дженентек, Инк. Способы и биомаркеры для прогнозирования эффективности и оценки лечения агонистом ох40
CA2966523A1 (en) 2014-11-03 2016-05-12 Genentech, Inc. Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof
CA2961439A1 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-fgfr2/3 antibodies and methods using same
SG11201703376QA (en) 2014-11-06 2017-05-30 Genentech Inc Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors
CN107108720A (zh) 2014-11-06 2017-08-29 豪夫迈·罗氏有限公司 具有改变的FCRN结合的Fc区变体及其使用方法
WO2016071377A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn- and protein a-binding properties
EA201791029A1 (ru) 2014-11-10 2017-12-29 Дженентек, Инк. Антитела против интерлейкина-33 и их применение
EP3552488A1 (en) 2014-11-10 2019-10-16 F. Hoffmann-La Roche AG Animal model for nephropathy and agents for treating the same
PL3224275T3 (pl) 2014-11-14 2020-09-07 F.Hoffmann-La Roche Ag Cząsteczki wiążące antygen zawierające trimer liganda z rodziny TNF
EP3218397B8 (en) 2014-11-14 2021-04-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
US20160166685A1 (en) 2014-11-17 2016-06-16 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
US10508151B2 (en) 2014-11-19 2019-12-17 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
EP3221361B1 (en) 2014-11-19 2021-04-21 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use
CN107108745B (zh) 2014-11-19 2021-01-12 基因泰克公司 抗bace1的抗体和其用于神经疾病免疫疗法的用途
PL3789402T3 (pl) 2014-11-20 2022-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Terapia skojarzona składająca się z dwuswoistych cząsteczek wiążących antygen aktywujących limfocyty T oraz antagonistów wiązania osi PD-1
ES2764111T3 (es) 2014-12-03 2020-06-02 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos
EA201790984A1 (ru) 2014-12-05 2018-05-31 Дженентек, Инк. Анти-cd79b антитела и способы их применения
RU2017120039A (ru) 2014-12-10 2019-01-10 Дженентек, Инк. Антитела к рецепторам гематоэнцефалического барьера и способы их применения
KR20230044338A (ko) 2014-12-19 2023-04-03 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항-c5 항체 및 그의 사용 방법
US20160200815A1 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
EP3245231B1 (en) 2015-01-16 2020-08-12 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for ror1
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US20180016327A1 (en) 2015-01-22 2018-01-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A Combination of Two or More Anti-C5 Antibodies and Methods of Use
TWI736523B (zh) 2015-01-24 2021-08-21 中央研究院 新穎聚醣結合物及其使用方法
AU2016215227A1 (en) 2015-02-04 2017-09-21 Assistance Publique-Hopitaux De Paris Mutant smoothened and methods of using the same
CN107108729A (zh) 2015-02-05 2017-08-29 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体，fc区变体，il‑8‑结合抗体，及其应用
US10301377B2 (en) 2015-02-24 2019-05-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Middle east respiratory syndrome coronavirus immunogens, antibodies, and their use
WO2016149276A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 Genentech, Inc. Methods of detecting and quantifying il-13 and uses in diagnosing and treating th2-associated diseases
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
SI3271389T1 (sl) 2015-03-20 2020-09-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Nevtralizirajoča protitelesa proti GP120 in njihova uporaba
DK3274370T3 (da) 2015-03-23 2020-02-17 Bayer Pharma AG Anti-ceacam6-antistoffer og anvendelser deraf
US10023635B2 (en) 2015-03-23 2018-07-17 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to ICOS
RU2754041C2 (ru) 2015-04-03 2021-08-25 Еурека Терапьютикс, Инк. Конструкции, направленные на комплексы пептида afp/мнс, и виды их использования
PL3286315T3 (pl) 2015-04-24 2021-11-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposoby identyfikacji bakterii zawierających polipeptydy wiążące
CN107708986B (zh) * 2015-04-30 2019-12-13 富士胶片株式会社 装饰片
JP2018520642A (ja) 2015-05-01 2018-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド マスク抗ｃｄ３抗体及びその使用方法
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
WO2016183104A1 (en) * 2015-05-11 2016-11-17 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
MX2017014381A (es) 2015-05-12 2018-03-02 Genentech Inc Metodos terapeuticos y diagnosticos para cancer.
CN107771182A (zh) 2015-05-29 2018-03-06 豪夫迈·罗氏有限公司 人源化抗埃博拉病毒糖蛋白抗体和使用方法
CN107532217A (zh) 2015-05-29 2018-01-02 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的治疗和诊断方法
WO2016196679A1 (en) 2015-06-02 2016-12-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for using anti-il-34 antibodies to treat neurological diseases
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
JP6360265B2 (ja) 2015-06-04 2018-07-18 オスペダーレ・サン・ラッファエーレ・エッセエッレエッレ Ｉｇｆｂｐ３／ｔｍｅｍ２１９軸及び糖尿病のインヒビター
PL3302520T3 (pl) 2015-06-04 2021-03-22 Ospedale San Raffaele S.R.L. IGFBP3 i jego zastosowania
MA44955A (fr) 2015-06-05 2019-03-20 Ac Immune Sa Anticorps anti-tau et leurs méthodes d'utilisation
CN107750164A (zh) 2015-06-08 2018-03-02 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗ox40抗体和pd‑1轴结合拮抗剂治疗癌症的方法
CN107810011A (zh) 2015-06-08 2018-03-16 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗ox40抗体治疗癌症的方法
CN108064246A (zh) 2015-06-15 2018-05-22 基因泰克公司 抗体和免疫结合物
JP2018526972A (ja) 2015-06-16 2018-09-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ３抗体及び使用方法
PT3310814T (pt) 2015-06-16 2023-10-02 H Hoffnabb La Roche Ag Anticorpos humanizados e de afinidade amadurecida para fcrh5 e métodos de utilização
US10501545B2 (en) 2015-06-16 2019-12-10 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and methods of use
EP3310812A2 (en) 2015-06-17 2018-04-25 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-her2 antibodies and methods of use
CN107771076A (zh) 2015-06-17 2018-03-06 豪夫迈·罗氏有限公司 使用pd‑1轴结合拮抗剂和紫杉烷治疗局部晚期或转移性乳腺癌的方法
CA2987797A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Christopher Robert Bebbington Methods and compositions for treating fibrotic diseases
EP3108897A1 (en) 2015-06-24 2016-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
US20180222985A1 (en) * 2015-06-24 2018-08-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
IL302486A (en) 2015-06-24 2023-06-01 Hoffmann La Roche Antibodies against the transnephrine receptor with adapted affinity
WO2016207304A2 (en) 2015-06-26 2016-12-29 Mab Discovery Gmbh Monoclonal anti-il-1racp antibodies
US20170029520A1 (en) 2015-06-29 2017-02-02 Genentech, Inc. Compositions and methods for use in organ transplantation
CA3162816A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Ventana Medical Systems, Inc. Materials and methods for performing histochemical assays for human pro-epiregulin and amphiregulin
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
EP3341415B1 (en) 2015-08-28 2021-03-24 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-hypusine antibodies and uses thereof
CA2999369C (en) 2015-09-22 2023-11-07 Spring Bioscience Corporation Anti-ox40 antibodies and diagnostic uses thereof
JP6959912B2 (ja) 2015-09-23 2021-11-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｖｅｇｆ抗体の最適化変異体
JP6955487B2 (ja) 2015-09-24 2021-10-27 アブビトロ， エルエルシー Ｈｉｖ抗体組成物および使用方法
BR112018005862A2 (pt) 2015-09-25 2018-10-16 Genentech, Inc. anticorpos, anticorpos isolados, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, método de produção do anticorpo, imunoconjugado, composição, usos dos anticorpos, métodos para tratar ou retardar a progressão de um câncer e de uma doença e para aumentar, potencializar ou estimular uma resposta ou função imune e kit
US10358497B2 (en) 2015-09-29 2019-07-23 Amgen Inc. Methods of treating cardiovascular disease with an ASGR inhibitor
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
CA2990755A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffman-La Roche Ag Bispecific anti-ceaxcd3 t cell activating antigen binding molecules
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
MA43017A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Anticorps bispécifiques spécifiques d'un récepteur de co-stimulation du tnf
MX2018003822A (es) 2015-10-02 2018-06-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos contra el cd20 humano y el receptor de transferrina humano y metodos de uso.
LT3356411T (lt) 2015-10-02 2021-09-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecifiniai antikūnai, specifiniai pd1 ir tim3
PE20181349A1 (es) 2015-10-07 2018-08-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos con tetravalencia para un receptor de fnt coestimulador
AU2016335750B2 (en) 2015-10-07 2023-05-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services IL-7R-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
AU2016342269A1 (en) 2015-10-22 2018-03-29 Jounce Therapeutics, Inc. Gene signatures for determining icos expression
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
EP4015533A1 (en) 2015-10-29 2022-06-22 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-variant fc-region antibodies and methods of use
JP2018534930A (ja) 2015-10-30 2018-11-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｄ因子抗体及びコンジュゲート
CA3001362C (en) 2015-10-30 2020-10-13 Genentech, Inc. Anti-htra1 antibodies and methods of use thereof
CN115010805A (zh) 2015-11-03 2022-09-06 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) Hiv-1 gp41中和抗体及其用途
JP6998869B2 (ja) 2015-11-08 2022-02-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重特異性抗体のスクリーニング方法
BR112018010410A8 (pt) 2015-11-23 2019-02-26 Five Prime Therapeutics Inc método para tratar câncer em um sujeito, composição e métodos de aumento do número de células nk e de aumento do número de uma ou mais células positivas para pd-l1
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
CA2997406C (en) 2015-12-09 2024-05-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies or cytokine release
BR112018009067A8 (pt) 2015-12-18 2019-02-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anticorpos anti-c5 e métodos de uso
WO2017118675A1 (en) 2016-01-08 2017-07-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating cea-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-cea/anti-cd3 bispecific antibodies
BR112018014762A2 (pt) 2016-01-20 2018-12-26 Genentech Inc método de tratamento da doença de alzheimer (da) precoce
AU2017213826A1 (en) 2016-02-04 2018-08-23 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
KR102500659B1 (ko) 2016-02-29 2023-02-16 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
JP2019517991A (ja) * 2016-03-01 2019-06-27 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 低減したａｄｃｐを有するオビヌツズマブ及びリツキシマブ変異体
JP2019515876A (ja) 2016-03-08 2019-06-13 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ Ｎ−グリカンおよびそのアレイのモジュール合成のための方法
CN109153719B (zh) 2016-03-15 2022-12-30 中外制药株式会社 使用pd-1轴结合拮抗剂和抗gpc3抗体治疗癌症的方法
HRP20230528T1 (hr) 2016-03-22 2023-08-04 F. Hoffmann - La Roche Ag Bispecifične molekule t stanica aktivirane proteazom
EP4273551A3 (en) 2016-03-25 2024-01-17 F. Hoffmann-La Roche AG Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
AU2017241161B2 (en) * 2016-03-31 2022-05-26 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Binding proteins and methods of use thereof
US20170319688A1 (en) 2016-04-14 2017-11-09 Genentech, Inc. Anti-rspo3 antibodies and methods of use
MX2018012418A (es) 2016-04-15 2019-07-10 Bioatla Llc Anticuerpos anti-axl, fragmentos de anticuerpos y sus inmunoconjugados y usos de los mismos.
CN109154027A (zh) 2016-04-15 2019-01-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于监测和治疗癌症的方法
JP7503887B2 (ja) 2016-04-15 2024-06-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんを監視及び治療するための方法
WO2017192589A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to influenza ha and their use and identification
CN109071635B (zh) 2016-05-02 2023-09-01 豪夫迈·罗氏有限公司 Contorsbody－单链靶标结合物
EP3241845A1 (en) 2016-05-06 2017-11-08 MAB Discovery GmbH Humanized anti-il-1r3 antibodies
EP3243836A1 (en) 2016-05-11 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG C-terminally fused tnf family ligand trimer-containing antigen binding molecules
EP3455252B1 (en) 2016-05-11 2022-02-23 F. Hoffmann-La Roche AG Modified anti-tenascin antibodies and methods of use
CN109071652B (zh) 2016-05-11 2022-09-23 豪夫迈·罗氏有限公司 包含tnf家族配体三聚体和生腱蛋白结合模块的抗原结合分子
EP3243832A1 (en) 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
US11254742B2 (en) 2016-05-13 2022-02-22 Bioatla, Inc. Anti-Ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
WO2017201449A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 Genentech, Inc. Protac antibody conjugates and methods of use
JP7022080B2 (ja) 2016-05-27 2022-02-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 部位特異的抗体－薬物複合体の特徴付けのための生化学分析的方法
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
CA3059010A1 (en) 2016-06-02 2018-12-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3257866A1 (en) 2016-06-17 2017-12-20 Academisch Medisch Centrum Modified anti-tnf antibody and use thereof in the treatment of ibd
JP7133477B2 (ja) 2016-06-24 2022-09-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ポリユビキチン多重特異性抗体
MX2018015414A (es) * 2016-06-30 2019-08-01 Hoffmann La Roche Terapia de célula t adoptiva mejorada.
CN109415435B (zh) 2016-07-04 2024-01-16 豪夫迈·罗氏有限公司 新型抗体形式
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
AU2017301887A1 (en) 2016-07-29 2019-02-07 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies against anti-CD19 antibodies
WO2018021450A1 (ja) 2016-07-29 2018-02-01 中外製薬株式会社 増強されたｆｖｉｉｉ補因子機能代替活性を有する二重特異性抗体
CA3026050A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for prophylaxis or treatment of il-8 related diseases
EP3497129A1 (en) 2016-08-08 2019-06-19 H. Hoffnabb-La Roche Ag Therapeutic and diagnostic methods for cancer
US10538592B2 (en) 2016-08-22 2020-01-21 Cho Pharma, Inc. Antibodies, binding fragments, and methods of use
WO2018045379A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
WO2018049083A1 (en) 2016-09-07 2018-03-15 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
CN116731197A (zh) 2016-09-19 2023-09-12 豪夫迈·罗氏有限公司 基于补体因子的亲和层析
KR102557643B1 (ko) 2016-09-23 2023-07-20 제넨테크, 인크. 아토피성 피부염을 치료하기 위한 il-13 길항제의 용도
EP3519437B1 (en) 2016-09-30 2021-09-08 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antibodies against p95her2
CN110139873A (zh) 2016-10-03 2019-08-16 朱诺治疗学股份有限公司 Hpv特异性结合分子
JP7050770B2 (ja) 2016-10-05 2022-04-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗体薬物コンジュゲートの調製方法
CN110418851A (zh) 2016-10-06 2019-11-05 基因泰克公司 癌症的治疗和诊断方法
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
CN110267678A (zh) 2016-10-29 2019-09-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗mic抗体和使用方法
HRP20211703T1 (hr) 2016-11-02 2022-02-04 Jounce Therapeutics, Inc. Protutijela protiv pd-1 i njihova upotreba
KR20190074300A (ko) 2016-11-15 2019-06-27 제넨테크, 인크. 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체에 의한 치료를 위한 투약
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
WO2018091724A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Cureab Gmbh Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
KR102645073B1 (ko) 2016-12-07 2024-03-11 제넨테크, 인크. 항-타우 항체 및 이의 이용 방법
AU2017373889A1 (en) 2016-12-07 2019-06-06 Ac Immune Sa Anti-Tau antibodies and methods of use
JP2020511408A (ja) 2016-12-12 2020-04-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｐｄ−ｌ１抗体及び抗アンドロゲン薬を使用してがんを治療する方法
CA3039430A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with targeted 4-1bb (cd137) agonists
KR20190093588A (ko) 2016-12-20 2019-08-09 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-cd20/항-cd3 이중특이성 항체 및 4-1bb(cd137) 작용물질의 병용 요법
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
BR112019013189A2 (pt) 2017-01-03 2019-12-10 Hoffmann La Roche moléculas de ligação ao antígeno biespecífica, polinucleotídeo, célula hospedeira, método de produção da molécula de ligação ao antígeno biespecífica, composição farmacêutica, uso, métodos para inibir o crescimento de células tumorais em um indivíduo e para tratar o câncer ou uma doença infecciosa
US20180230218A1 (en) 2017-01-04 2018-08-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
US11274157B2 (en) 2017-01-12 2022-03-15 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting histone H3 peptide/MHC complexes and uses thereof
EP3580235B1 (en) 2017-02-10 2024-05-01 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
CN110494453B (zh) 2017-02-10 2023-05-26 豪夫迈·罗氏有限公司 抗类胰蛋白酶抗体、其组合物及其用途
CN110546277B (zh) 2017-03-01 2024-06-11 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的诊断和治疗方法
AR111249A1 (es) 2017-03-22 2019-06-19 Genentech Inc Composiciones de anticuerpo optimizadas para el tratamiento de trastornos oculares
CN110494446A (zh) 2017-03-28 2019-11-22 基因泰克公司 治疗神经退行性疾病的方法
EP3601345A1 (en) 2017-03-29 2020-02-05 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
EP3601346A1 (en) 2017-03-29 2020-02-05 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
MA49039A (fr) 2017-04-04 2020-02-12 Hoffmann La Roche Nouvelles molécules bispécifiques de liaison à l'antigène capables de se lier spécifiquement à cd40 et à fap
SG11201909154SA (en) 2017-04-05 2019-10-30 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specifically binding to pd1 and lag3
US11866507B2 (en) 2017-04-11 2024-01-09 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs having constrained CD3 binding and methods of using the same
EP3610042A1 (en) 2017-04-14 2020-02-19 H. Hoffnabb-La Roche Ag Diagnostic and therapeutic methods for cancer
WO2018195338A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods for treating lung inflammation
CA3059615A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Genentech, Inc. Use of klk5 antagonists for treatment of a disease
US11447564B2 (en) 2017-04-26 2022-09-20 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs specifically recognizing glypican 3 and uses thereof
AU2018256934B2 (en) 2017-04-27 2021-10-14 Anaptysbio, Inc. Antibody agents directed against Lymphocyte Activation Gene-3 (LAG-3) and uses thereof
JP2020518638A (ja) 2017-05-05 2020-06-25 アラコス インコーポレイテッド アレルギー性眼疾患を処置するための方法および組成物
EP3401332A1 (en) 2017-05-08 2018-11-14 MAB Discovery GmbH Anti-il-1r3 antibodies for use in inflammatory conditions
KR20200006538A (ko) 2017-05-16 2020-01-20 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 암 치료에서 화학요법제와 병용되는 항-fgfr2 항체
WO2019011918A1 (en) 2017-07-10 2019-01-17 International - Drug - Development - Biotech TREATMENT OF LYMPHOCYTE B MALIGNANCIES USING AFUCOSYLATED PRO-APOPTOTIC ANTI-CD19 ANTIBODIES IN COMBINATION WITH ANTI-CD20 ANTIBODIES OR CHEMOTHERAPEUTIC AGENTS
CN111492245A (zh) 2017-07-21 2020-08-04 基因泰克公司 癌症的治疗和诊断方法
JP7122370B2 (ja) 2017-07-26 2022-08-19 フォーティ セブン， インコーポレイテッド 抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体及び関連方法
JP2020528061A (ja) 2017-07-26 2020-09-17 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を用いた併用療法
TWI772488B (zh) 2017-08-08 2022-08-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 新穎DLBCL病患次族群之歐比托珠單抗(obinutuzumab)治療
CN107881160A (zh) 2017-08-11 2018-04-06 百奥泰生物科技(广州)有限公司 一种由基因组被编辑的cho宿主细胞产生的具有独特糖谱的重组抗体及其制备方法
CN111511762A (zh) 2017-08-21 2020-08-07 天演药业公司 抗cd137分子及其用途
EP3456738B1 (en) * 2017-09-19 2024-07-17 Tillotts Pharma Ag Antibody variants
US20200216542A1 (en) 2017-09-20 2020-07-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Dosage regimen for combination therapy using pd-1 axis binding antagonists and gpc3 targeting agent
KR20200104284A (ko) 2017-10-03 2020-09-03 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Hpv-특이적 결합 분자
JP2020536967A (ja) 2017-10-12 2020-12-17 イミュノウェイク インコーポレイテッド Ｖｅｇｆｒ−抗体軽鎖融合タンパク質
TWI828593B (zh) 2017-10-19 2024-01-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 醫藥組合物
MA49911A (fr) 2017-11-01 2020-06-24 Juno Therapeutics Inc Anticorps et récepteurs antigéniques chimériques spécifiques de l'antigene de maturation des lymphocytes b
US20210324108A1 (en) 2017-11-01 2021-10-21 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific 2+1 contorsbodies
EP3704155A2 (en) 2017-11-01 2020-09-09 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy with targeted ox40 agonists
CN111246884A (zh) 2017-11-01 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 新颖的含有tnf家族配体三聚体的抗原结合分子
TW201923089A (zh) 2017-11-06 2019-06-16 美商建南德克公司 癌症之診斷及治療方法
AU2018375331A1 (en) 2017-12-01 2020-05-14 Pfizer Inc. Anti-CXCR5 antibodies and compositions and uses thereof
CN111212660A (zh) 2017-12-14 2020-05-29 豪夫迈·罗氏有限公司 Cea cd3双特异性抗体和pd-1轴结合拮抗剂在治疗癌症的剂量方案中的用途
US12006356B2 (en) 2017-12-15 2024-06-11 Juno Therapeutics, Inc. Anti-CCT5 binding molecules and chimeric antigen receptors comprising the same
EP3502140A1 (en) 2017-12-21 2019-06-26 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of tumor targeted icos agonists with t-cell bispecific molecules
WO2019126472A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Genentech, Inc. Use of pilra binding agents for treatment of a disease
EP3728318A2 (en) 2017-12-22 2020-10-28 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies for lilrb2
CA3078849A1 (en) 2017-12-28 2019-07-04 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Antibodies and variants thereof against pd-l1
US11905327B2 (en) 2017-12-28 2024-02-20 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against TIGIT
US11976109B2 (en) 2018-01-02 2024-05-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
CN111886247A (zh) 2018-01-05 2020-11-03 Ac免疫有限公司 错折叠tdp-43结合分子
EP3508499A1 (en) 2018-01-08 2019-07-10 iOmx Therapeutics AG Antibodies targeting, and other modulators of, an immunoglobulin gene associated with resistance against anti-tumour immune responses, and uses thereof
CN111699200B (zh) 2018-01-15 2023-05-26 南京传奇生物科技有限公司 针对pd-1的单域抗体和其变体
EP3740505A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Lakepharma Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
EP3743437A1 (en) 2018-01-26 2020-12-02 F. Hoffmann-La Roche AG Il-22 fc fusion proteins and methods of use
DK3743088T3 (da) 2018-01-26 2022-12-19 Hoffmann La Roche IL-22 Fc-sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse
TWI800854B (zh) 2018-02-01 2023-05-01 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 全人源的抗ｂ細胞成熟抗原（ｂｃｍａ）單鏈抗體及其應用
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
CA3089287A1 (en) 2018-02-08 2019-08-15 Genentech, Inc. Bispecific antigen-binding molecules and methods of use
KR20230142806A (ko) 2018-02-09 2023-10-11 제넨테크, 인크. 비만 세포 매개 염증성 질환에 대한 치료 및 진단 방법
EP3752530A1 (en) 2018-02-14 2020-12-23 ABBA Therapeutics AG Anti-human pd-l2 antibodies
CA3091139A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 Genentech, Inc. Dosing for treatment with il-22 fc fusion proteins
CN111971299A (zh) 2018-02-21 2020-11-20 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) HIV-1 Env的中和抗体及其用途
WO2019165434A1 (en) 2018-02-26 2019-08-29 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
EP3765489A1 (en) 2018-03-13 2021-01-20 F. Hoffmann-La Roche AG Therapeutic combination of 4-1 bb agonists with anti-cd20 antibodies
AU2019235330A1 (en) 2018-03-13 2020-07-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with targeted 4-1BB (CD137) agonists
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
RU2020128013A (ru) 2018-03-14 2022-04-15 Бейцзин Сюаньи Фармасайенсиз Ко., Лтд. Антитела против клаудина 18.2
CA3093729A1 (en) 2018-03-15 2019-09-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-dengue virus antibodies having cross-reactivity to zika virus and methods of use
CN111971304A (zh) 2018-03-21 2020-11-20 戊瑞治疗有限公司 在酸性pH结合至VISTA的抗体
JP7346790B2 (ja) 2018-03-30 2023-09-20 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｌａｇ‐３に対する単一ドメイン抗体およびその使用
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
CN112566698A (zh) 2018-04-05 2021-03-26 朱诺治疗学股份有限公司 T细胞受体和表达该t细胞受体的工程化细胞
SG11202009804RA (en) 2018-04-11 2020-11-27 Inhibrx Inc Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and related methods and uses
AR114284A1 (es) 2018-04-13 2020-08-12 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno dirigidas a her2 que comprenden 4-1bbl
EP3560945A1 (en) 2018-04-27 2019-10-30 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for purification of polypeptides using polysorbates
JP2021525806A (ja) 2018-06-01 2021-09-27 タユー ファシャ バイオテック メディカル グループ カンパニー， リミテッド 疾患または状態を処置するための組成物およびそれらの使用
US20210238308A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule showing changed half-life in cytoplasm
WO2019245991A1 (en) 2018-06-18 2019-12-26 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting prostate-specific membrane antigen (psma) and uses thereof
JP7513530B2 (ja) 2018-06-22 2024-07-09 ジェンマブ ホールディング ビー．ブイ． 抗ｃｄ３７抗体および抗ｃｄ２０抗体、組成物、ならびにそれらの使用方法
KR20210024550A (ko) 2018-06-23 2021-03-05 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제, 백금 제제, 및 토포이소머라제 ii 억제제를 이용한 폐암 치료 방법
EP3818082A1 (en) 2018-07-04 2021-05-12 F. Hoffmann-La Roche AG Novel bispecific agonistic 4-1bb antigen binding molecules
PE20211604A1 (es) 2018-07-09 2021-08-23 Five Prime Therapeutics Inc Anticuerpos de union a ilt4
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
TW202028235A (zh) 2018-07-11 2020-08-01 美商戊瑞治療有限公司 於酸性ｐｈ結合至含免疫球蛋白ｖ域之t細胞活化抑制子（ｖｉｓｔａ）之抗體
CN112839644A (zh) 2018-07-18 2021-05-25 豪夫迈·罗氏有限公司 用pd-1轴结合拮抗剂、抗代谢物和铂剂治疗肺癌的方法
CA3106114A1 (en) 2018-07-20 2020-01-23 Surface Oncology, Inc. Anti-cd112r compositions and methods
EP3827019A1 (en) 2018-07-24 2021-06-02 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs containing a constrained cd3 binding domain and a receptor binding region and methods of using the same
JP7504027B2 (ja) 2018-08-03 2024-06-21 中外製薬株式会社 互いに連結された２つの抗原結合ドメインを含む抗原結合分子
CA3051549A1 (en) 2018-08-09 2020-02-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal fc receptor
CN112839960A (zh) 2018-08-10 2021-05-25 中外制药株式会社 抗cd137抗原结合分子及其应用
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
AU2019342099A1 (en) 2018-09-19 2021-04-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
CA3111809A1 (en) 2018-09-21 2020-03-26 Genentech, Inc. Diagnostic methods for triple-negative breast cancer
BR112021005907A2 (pt) 2018-09-27 2021-08-10 Xilio Development, Inc. citocinas mascaradas, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, métodos para produzir uma citocina mascarada, para tratar ou prevenir uma doença neoplásica e para tratar ou prevenir uma doença inflamatória ou autoimune neoplásica, composição, composição farmacêutica e kit
MX2021003548A (es) 2018-10-01 2021-05-27 Hoffmann La Roche Moleculas de union a antigeno biespecificas que comprenden el clon 212 anti-fap.
CN112654641A (zh) 2018-10-01 2021-04-13 豪夫迈·罗氏有限公司 具有与cd40的三价结合的双特异性抗原结合分子
EP3632929A1 (en) 2018-10-02 2020-04-08 Ospedale San Raffaele S.r.l. Antibodies and uses thereof
PE20211213A1 (es) 2018-10-05 2021-07-05 Five Prime Therapeutics Inc Formulaciones de anticuerpos anti-fgfr2
US11208485B2 (en) 2018-10-11 2021-12-28 Inhibrx, Inc. PD-1 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
JP2022512744A (ja) 2018-10-18 2022-02-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド 肉腫様腎臓がんのための診断および治療方法
WO2020092427A1 (en) * 2018-10-29 2020-05-07 Tigatx, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS COMPRISING IgA ANTIBODY CONSTRUCTS
US20210395390A1 (en) 2018-10-31 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft Reversal agents for neutralizing the therapeutic activity of anti-fxia antibodies
EA202191058A1 (ru) 2018-11-16 2021-10-07 Мемориал Слоун Кеттеринг Кэнсер Сентр Антитела против муцина-16 и способы их применения
WO2020117952A2 (en) 2018-12-05 2020-06-11 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for cancer immunotherapy
BR112021010908A2 (pt) 2018-12-06 2021-08-31 Genentech, Inc. Método para tratamento de linfoma difuso de grandes células b, kit e imunoconjugado
CN113227119A (zh) 2018-12-10 2021-08-06 基因泰克公司 用于与含Fc的蛋白质进行位点特异性缀合的光交联肽
AR117453A1 (es) 2018-12-20 2021-08-04 Genentech Inc Fc de anticuerpos modificados y métodos para utilizarlas
US20220089694A1 (en) 2018-12-20 2022-03-24 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
WO2020127628A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Tumor-targeted superagonistic cd28 antigen binding molecules
CN113286821A (zh) 2018-12-21 2021-08-20 豪夫迈·罗氏有限公司 靶向肿瘤的激动性cd28抗原结合分子
CA3123050A1 (en) 2018-12-26 2020-07-02 City Of Hope Activatable masked anti-ctla4 binding proteins
JP2022515543A (ja) 2018-12-30 2022-02-18 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 抗ウサギｃｄ１９抗体および使用方法
JP2022518399A (ja) 2019-01-14 2022-03-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ－１軸結合アンタゴニスト及びｒｎａワクチンを用いてがんを処置する方法
CN113330030A (zh) 2019-01-17 2021-08-31 拜耳公司 确定受试者是否适于用可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的激动剂治疗的方法
WO2020153467A1 (ja) 2019-01-24 2020-07-30 中外製薬株式会社 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
EP3917570A1 (en) 2019-01-29 2021-12-08 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1 (ror1)
CN113710706A (zh) 2019-02-27 2021-11-26 豪夫迈·罗氏有限公司 用于抗tigit抗体和抗cd20抗体或抗cd38抗体治疗的给药
KR20210138588A (ko) 2019-03-08 2021-11-19 제넨테크, 인크. 세포외 소포 상에서 막 관련 단백질을 검출하고 정량하기 위한 방법
CA3130446A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 Genentech, Inc. Treatment of cancer with her2xcd3 bispecific antibodies in combination with anti-her2 mab
EP3952996A1 (en) 2019-04-12 2022-02-16 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antigen binding molecules comprising lipocalin muteins
EP3956364A1 (en) 2019-04-19 2022-02-23 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-mertk antibodies and their methods of use
JPWO2020213724A1 (no) 2019-04-19 2020-10-22
US20220227853A1 (en) 2019-05-03 2022-07-21 The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2020226986A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody
BR112021022815A2 (pt) 2019-05-14 2021-12-28 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular, kits, imunoconjugados e polatuzumabe vedotina
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
EP3972692A1 (en) 2019-05-23 2022-03-30 AC Immune SA Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
EP4023230A4 (en) * 2019-06-05 2023-11-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTIBODY CLEAVAGE SITE BINDING MOLECULE
TW202115124A (zh) 2019-06-26 2021-04-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合至cea之新穎抗原結合分子
WO2020260326A1 (en) 2019-06-27 2020-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel icos antibodies and tumor-targeted antigen binding molecules comprising them
WO2021003297A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind egfrviii and their use
CN114401992A (zh) 2019-07-05 2022-04-26 艾欧麦克斯治疗股份公司 结合igsf11（vsig3）的igc2的抗体及其用途
US20220267452A1 (en) 2019-07-12 2022-08-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-mutation type fgfr3 antibody and use therefor
TWI780464B (zh) 2019-08-06 2022-10-11 香港商新旭生技股份有限公司 結合至病理性ｔａｕ種類之抗體及其用途
TW202118512A (zh) 2019-09-12 2021-05-16 美商建南德克公司 治療狼瘡性腎炎之組成物及方法
KR20220065816A (ko) 2019-09-19 2022-05-20 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 산성 pH에서 VISTA에 결합하는 항체
AU2020348393A1 (en) 2019-09-20 2022-02-24 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
PE20221110A1 (es) 2019-09-27 2022-07-11 Genentech Inc Administracion de dosis para tratamiento con anticuerpos antagonistas anti-tigit y anti-pd-l1
CA3153880A1 (en) 2019-10-18 2020-06-09 Juana Elva HERNANDEZ MONTALVO Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
EP4055388A1 (en) 2019-11-06 2022-09-14 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers
WO2021094620A1 (en) 2019-11-15 2021-05-20 Enthera S.R.L. Tmem219 antibodies and therapeutic uses thereof
EP3822288A1 (en) 2019-11-18 2021-05-19 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung des öffentlichen Rechts Antibodies targeting, and other modulators of, the cd276 antigen, and uses thereof
JP2023503105A (ja) 2019-11-21 2023-01-26 エンテラ・エッセ・エッレ・エッレ Ｉｇｆｂｐ３抗体及びその治療的使用
WO2021113776A1 (en) 2019-12-06 2021-06-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to bcma-targeted binding domains and related compositions and methods
KR20220122656A (ko) 2019-12-06 2022-09-02 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Ｇｐｒｃ5ｄ-표적화 결합 도메인에 대한 항-이디오타입 항체 및 관련 조성물 및 방법
PE20221511A1 (es) 2019-12-13 2022-10-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6g6d y metodos de uso
BR112022011723A2 (pt) 2019-12-27 2022-09-06 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorpo anti-ctla-4 e uso do mesmo
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
KR20220107251A (ko) 2020-01-09 2022-08-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 새로운 4-1bbl 삼량체-함유 항원 결합 분자
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021155071A1 (en) 2020-01-29 2021-08-05 Inhibrx, Inc. Cd28 single domain antibodies and multivalent and multispecific constructs thereof
WO2021155295A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 The Cleveland Clinic Foundation Anti-müllerian hormone receptor 2 antibodies and methods of use
CA3164559A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Lars Mueller Methods of inducing neoepitope-specific t cells with a pd-1 axis binding antagonist and an rna vaccine
TW202144395A (zh) 2020-02-12 2021-12-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
CR20220396A (es) 2020-02-14 2022-11-14 Jounce Therapeutics Inc Anticuerpos y proteínas de fusión que se unen a ccr8 y usos de estos
EP3868396A1 (en) 2020-02-20 2021-08-25 Enthera S.R.L. Inhibitors and uses thereof
US20230348568A1 (en) 2020-02-20 2023-11-02 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Epstein-barr virus monoclonal antibodies and uses thereof
AU2021228078A1 (en) 2020-02-28 2022-09-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-CD137 constructs, multispecific antibody and uses thereof
KR20220148209A (ko) 2020-02-28 2022-11-04 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항cd137 작제물 및 그 용도
JP2023517345A (ja) 2020-03-13 2023-04-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗インターロイキン－３３抗体及びその使用
CA3169626A1 (en) 2020-03-19 2021-09-23 Genentech, Inc. Isoform-selective anti-tgf-beta antibodies and methods of use
CN115916820A (zh) 2020-03-23 2023-04-04 基因泰克公司 用il6拮抗剂治疗包括covid-19肺炎在内的肺炎的方法
JP2023518812A (ja) 2020-03-23 2023-05-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃｏｖｉｄ１９肺炎を治療するための、トシリズマブとレムデシビルとの組み合わせ
JP2023518814A (ja) 2020-03-23 2023-05-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃｏｖｉｄ－１９肺炎における、ｉｌ－６アンタゴニストに対する応答を予測するためのバイオマーカー
CA3169967A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Tie2-binding agents and methods of use
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
CN115698717A (zh) 2020-04-03 2023-02-03 基因泰克公司 癌症的治疗和诊断方法
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
EP4139359A1 (en) 2020-04-24 2023-03-01 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates
EP4143225A4 (en) 2020-04-27 2024-05-15 The Regents of the University of California ISOFORM-INDEPENDENT ANTIBODIES AGAINST LIPOPROTEIN(A)
CN115885050A (zh) 2020-04-28 2023-03-31 基因泰克公司 用于非小细胞肺癌免疫疗法的方法和组合物
EP4146283A1 (en) 2020-05-03 2023-03-15 Levena (Suzhou) Biopharma Co., Ltd. Antibody-drug conjugates (adcs) comprising an anti-trop-2 antibody, compositions comprising such adcs, as well as methods of making and using the same
US20230220057A1 (en) 2020-05-27 2023-07-13 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing nerve growth factor and uses thereof
EP4157462A1 (en) 2020-06-02 2023-04-05 Dynamicure Biotechnology LLC Anti-cd93 constructs and uses thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
CN115698719A (zh) 2020-06-12 2023-02-03 基因泰克公司 用于癌症免疫疗法的方法和组合物
MX2022015877A (es) 2020-06-16 2023-01-24 Genentech Inc Metodos y composiciones para tratar cancer de mama triple negativo.
AU2021293507A1 (en) 2020-06-18 2023-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment with anti-TIGIT antibodies and PD-1 axis binding antagonists
US11780920B2 (en) 2020-06-19 2023-10-10 Hoffmann-La Roche Inc. Antibodies binding to CD3 and CD19
JP2023530760A (ja) 2020-06-23 2023-07-19 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｈｅｒ２を標的とするアゴニストＣＤ２８抗原結合分子
WO2021260064A1 (en) 2020-06-25 2021-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd3/anti-cd28 bispecific antigen binding molecules
EP4175668A1 (en) 2020-07-06 2023-05-10 iOmx Therapeutics AG Antibodies binding igv of igsf11 (vsig3) and uses thereof
EP4178529A1 (en) 2020-07-07 2023-05-17 F. Hoffmann-La Roche AG Alternative surfactants as stabilizers for therapeutic protein formulations
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
TW202221029A (zh) 2020-07-29 2022-06-01 美商當康生物科技有限公司 抗cd93之構築體及其用途
EP4189121A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for lymphoma
WO2022029660A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
IL300260A (en) 2020-08-07 2023-03-01 Genentech Inc FLT3 ligand fusion proteins and methods of use
CN116615452A (zh) 2020-08-14 2023-08-18 Ac免疫有限公司 人源化抗tdp-43结合分子及其用途
WO2022043517A2 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Cureab Gmbh Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
AU2021343834A1 (en) 2020-09-15 2023-04-13 Bayer Aktiengesellschaft Novel anti-A2AP antibodies and uses thereof
JP2023541921A (ja) 2020-09-17 2023-10-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃｏｖｉｄ－１９肺炎を有する入院患者におけるトシリズマブの有効性及び安全性を評価するためのランダム化二重盲検プラセボ対照多施設試験（ｅｍｐａｃｔａ）の結果
MX2023003756A (es) 2020-10-05 2023-04-24 Genentech Inc Dosis para el tratamiento con anticuerpos biespecificos anti-fcrh5/anti-cd3.
CA3190782A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of pd-1 axis binding antagonists and lrrk2 inhibitors
EP4232475A1 (en) 2020-10-20 2023-08-30 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
WO2022096536A1 (en) 2020-11-03 2022-05-12 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Target-cell restricted, costimulatory, bispecific and bivalent anti-cd28 antibodies
IL302396A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies
CA3196191A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
EP4240766A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
CN117916261A (zh) 2020-11-16 2024-04-19 豪夫迈·罗氏有限公司 与靶向fap的cd40激动剂的组合疗法
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
JP2024503826A (ja) 2021-01-06 2024-01-29 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ１－ｌａｇ３二重特異性抗体及びｃｄ２０ ｔ細胞二重特異性抗体を用いる併用療法
WO2022162587A1 (en) 2021-01-27 2022-08-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
AU2022212599A1 (en) 2021-01-28 2023-08-17 Universität Ulm Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
EP4291226A1 (en) 2021-02-09 2023-12-20 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Antibodies targeting the spike protein of coronaviruses
US20240117019A1 (en) 2021-02-09 2024-04-11 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Human monoclonal antibodies against pneumococcal antigens
CA3208365A1 (en) 2021-02-15 2022-08-18 Chantal KUHN Cell therapy compositions and methods for modulating tgf-b signaling
WO2022180145A2 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Bayer Aktiengesellschaft Inhibitors of il-11 or il-11ra for use in the treatment of abnormal uterine bleeding
US20220306743A1 (en) 2021-03-01 2022-09-29 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
CA3209364A1 (en) 2021-03-01 2022-09-09 Jennifer O'neil Combination of masked ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
JP2024509169A (ja) 2021-03-03 2024-02-29 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッド 抗ｂｃｍａ抗体を含む抗体－薬物コンジュゲート
US20240141048A1 (en) 2021-03-05 2024-05-02 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
BR112023018621A2 (pt) 2021-03-15 2023-10-24 Hoffmann La Roche Métodos para tratar nefrite lúpica, esgotar células b periféricas, kits para tratar nefrite lúpica e anticorpos anti-cd20 tipo ii
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
US20240150466A1 (en) 2021-03-25 2024-05-09 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-igfbp7 constructs and uses thereof
BR112023018061A2 (pt) 2021-03-30 2023-10-03 Bayer Ag Anticorpos anti-sema3a e usos dos mesmos
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
AU2021443318A1 (en) 2021-04-30 2023-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
CA3217803A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody
IL308351A (en) 2021-05-12 2024-01-01 Genentech Inc Methods for using anti-CD79B immunoconjugates to treat diffuse large B-cell lymphoma
KR20240007928A (ko) 2021-05-14 2024-01-17 제넨테크, 인크. Trem2의 효능제
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
AR126009A1 (es) 2021-06-02 2023-08-30 Hoffmann La Roche Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
WO2022255440A1 (en) 2021-06-04 2022-12-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ddr2 antibodies and uses thereof
BR112023025738A2 (pt) 2021-06-09 2024-02-27 Hoffmann La Roche Combinação de um inibidor de braf e um antagonista de ligação ao eixo pd-1, uso de uma combinação de um inibidor de braf e um antagonista de ligação ao eixo pd-1, método para o tratamento ou profilaxia de câncer, composição farmacêutica e invenção
AU2022289017A1 (en) 2021-06-11 2023-11-30 Genentech, Inc. Method for treating chronic obstructive pulmonary disease with an st2 antagonist
EP4355785A1 (en) 2021-06-17 2024-04-24 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
WO2022263638A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
BR112023023480A2 (pt) 2021-06-25 2024-01-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Uso de anticorpo anti-ctla-4
BR112023022992A2 (pt) 2021-06-25 2024-01-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorpo anti-ctla-4
EP4367139A1 (en) 2021-07-08 2024-05-15 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing tnfr2 and uses thereof
KR20240058075A (ko) 2021-07-14 2024-05-03 스테이드슨 (베이징) 바이오팔마슈티칼스 캄퍼니 리미티드 Cd40을 특이적으로 식별하는 항체 및 이의 응용
EP4373576A1 (en) 2021-07-22 2024-05-29 Genentech, Inc. Brain targeting compositions and methods of use thereof
TW202337499A (zh) 2021-08-07 2023-10-01 美商建南德克公司 使用抗ｃｄ７９ｂ免疫結合物治療瀰漫性大ｂ細胞淋巴瘤之方法
WO2023019239A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
CN117858905A (zh) 2021-08-19 2024-04-09 豪夫迈·罗氏有限公司 多价抗变体fc区抗体及使用方法
IL310382A (en) 2021-08-27 2024-03-01 Genentech Inc Methods for treating tau pathologies
EP4396223A1 (en) 2021-08-30 2024-07-10 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
WO2023044272A1 (en) 2021-09-17 2023-03-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Synthetic humanized llama nanobody library and use thereof to identify sars-cov-2 neutralizing antibodies
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
AR127269A1 (es) 2021-10-08 2024-01-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulación de anticuerpo anti-hla-dq2.5
WO2023081818A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 American Diagnostics & Therapy, Llc (Adxrx) Monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigens, and their uses
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
IL312870A (en) 2021-11-16 2024-07-01 Ac Immune Sa New molecules for treatment and diagnosis
TW202337494A (zh) 2021-11-16 2023-10-01 美商建南德克公司 用莫蘇妥珠單抗治療全身性紅斑狼瘡（ｓｌｅ）之方法及組成物
CN116829179A (zh) 2021-12-06 2023-09-29 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司 特异性结合肺炎克雷伯菌o2抗原和o1抗原的双特异性抗体以及组合物
WO2023109900A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-ox40 antibodies, multispecific antibodies and methods of use
CA3240565A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Wenfeng Xu Anti-ox40 antibodies and methods of use
AU2022423749A1 (en) 2021-12-20 2024-06-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic ltbr antibodies and bispecific antibodies comprising them
AR128222A1 (es) 2022-01-07 2024-04-10 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc MATERIALES Y MÉTODOS DE PROTEÍNAS DE UNIÓN A IL-1b
WO2023154824A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses
AR128540A1 (es) 2022-02-16 2024-05-22 Ac Immune Sa Moléculas de unión anti-tdp-43 humanizadas y usos de las mismas
TW202342520A (zh) 2022-02-18 2023-11-01 美商樂天醫藥生技股份有限公司 抗計畫性死亡配體１（ｐｄ—ｌ１）抗體分子、編碼多核苷酸及使用方法
WO2023173026A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US20230414750A1 (en) 2022-03-23 2023-12-28 Hoffmann-La Roche Inc. Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy
WO2023192827A1 (en) 2022-03-26 2023-10-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023186756A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these
WO2023192881A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023194565A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
WO2023198727A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compositions of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and methods of use
WO2023201299A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
WO2023203177A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
TW202406934A (zh) 2022-05-03 2024-02-16 美商建南德克公司 抗Ｌｙ６Ｅ抗體、免疫結合物及其用途
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
US11965032B1 (en) 2022-06-01 2024-04-23 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11807689B1 (en) * 2022-06-01 2023-11-07 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023237706A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020432A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020407A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
WO2024020579A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to human pad4 and uses thereof
WO2024020564A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Genentech, Inc. Anti-steap1 antigen-binding molecules and uses thereof
WO2024030829A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024028731A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Transferrin receptor binding proteins for treating brain tumors
WO2024028732A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. Cd98 binding constructs for treating brain tumors
WO2024044779A2 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024064826A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2024068996A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (C.H.U.V.) Anti-sars-cov-2 antibodies and use thereof in the treatment of sars-cov-2 infection
WO2024091991A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
WO2024094741A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody
US20240165227A1 (en) 2022-11-04 2024-05-23 Gilead Sciences, Inc. Anticancer therapies using anti-ccr8 antibody, chemo and immunotherapy combinations
WO2024102734A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024100200A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Cis Pharma Ag Anti-l1-cam antibodies and their uses for diagnostic and therapeutic applications
US20240226313A1 (en) 2022-11-17 2024-07-11 Sanofi Ceacam5 antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2024137381A1 (en) 2022-12-19 2024-06-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies for treating sars-cov-2 infection
WO2024133940A2 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Iomx Therapeutics Ag Cross-specific antigen binding proteins (abp) targeting leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily b1 (lilrb1) and lilrb2, combinations and uses thereof
WO2024148240A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. ANTI-IL-11Rα ANTIBODIES FOR TREATING THYROID EYE DISEASE
WO2024148243A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. Anti-il-18bp antibodies
WO2024148241A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Lassen Therapeutics 1, Inc. Anti-il-18bp antibodies

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003011878A2 (en) * 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity

Family Cites Families (173)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7097A (en) 1850-02-19 Elevating- and lowering carriage-tops
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6893625B1 (en) 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5262296A (en) 1988-03-30 1993-11-16 Toray Industries, Inc. Freeze-dried composition containing enzyme-labeled anti-human interferon-β antibody and enzyme immunoassay kit containing the composition
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
JPH06501705A (ja) 1990-11-05 1994-02-24 ブリストル−マイアーズ　スクイブ　カンパニー 抗−腫瘍抗体及び生物学的活性剤の組合せによる相乗治療
DK0669836T3 (da) 1992-11-13 1996-10-14 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimære og radioaktivt mærkede antistoffer og humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantigen til behandling af B-cellelymfom
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US7744877B2 (en) * 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US20030180290A1 (en) * 1995-06-07 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Corporation Anti-CD80 antibody having ADCC activity for ADCC mediated killing of B cell lymphoma cells alone or in combination with other therapies
CN102416176A (zh) 1995-07-27 2012-04-18 基因技术股份有限公司 稳定等渗的冻干蛋白质制剂
US6001358A (en) 1995-11-07 1999-12-14 Idec Pharmaceuticals Corporation Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof
JP2000516594A (ja) 1996-07-26 2000-12-12 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 免疫細胞介在全身性疾患の改良された治療法
UA76934C2 (en) * 1996-10-04 2006-10-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Reconstructed human anti-hm 1.24 antibody, coding dna, vector, host cell, method for production of reconstructed human antibody, pharmaceutical composition and drug for treating myeloma containing reconstructed human anti-hm 1.24 antibody
ES2335365T3 (es) 1996-11-27 2010-03-25 Genentech, Inc. Purificacion por afinidad de polipeptido en una matriz de proteina a.
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
EP0999853B1 (en) 1997-06-13 2003-01-02 Genentech, Inc. Stabilized antibody formulation
US6991790B1 (en) 1997-06-13 2006-01-31 Genentech, Inc. Antibody formulation
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US20040191256A1 (en) * 1997-06-24 2004-09-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
DE69830315T2 (de) 1997-06-24 2006-02-02 Genentech Inc., San Francisco Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
JP3998419B2 (ja) * 1998-04-03 2007-10-24 中外製薬株式会社 ヒト組織因子（ｔｆ）に対するヒト型化抗体およびヒト型化抗体の作製方法
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
CN103641885A (zh) 1998-05-06 2014-03-19 基因技术股份有限公司 用离子交换层析纯化蛋白质
NZ528199A (en) * 1998-08-11 2005-06-24 Idec Pharma Corp Combination therapies for B-cell lyphomas comprising administration of anti-CD20 antibody
AU5565299A (en) 1998-08-17 2000-03-06 California Institute Of Technology Devices and methods for analysis of non-ionic solutes
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
WO2000027433A1 (en) 1998-11-09 2000-05-18 Idec Pharmaceuticals Corporation Chimeric anti-cd20 antibody treatment of patients receiving bmt or pbsc transplants
PT1616572E (pt) * 1998-11-09 2010-11-11 Biogen Idec Inc Anticorpo quimérico anti-cd20, rituxan, para utilização no tratamento de leucemia linfocítica crónica
KR101077001B1 (ko) 1999-01-15 2011-10-26 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ES2571230T3 (es) 1999-04-09 2016-05-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
HUP0201009A2 (en) * 1999-05-07 2002-07-29 Genentech Inc Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
US7074403B1 (en) 1999-06-09 2006-07-11 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target B-cells
CN1373672A (zh) 1999-07-12 2002-10-09 杰南技术公司 应用结合cd20的拮抗剂阻断对外来抗原的免疫应答
JP2003513012A (ja) 1999-08-11 2003-04-08 アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション 抗ｃｄ２０抗体による骨髄病変を伴う非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
CN1169952C (zh) 1999-10-10 2004-10-06 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院 抗cd20单克隆抗体的重链和轻链可变区基因及其应用
US20020006404A1 (en) * 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
US20020028178A1 (en) * 2000-07-12 2002-03-07 Nabil Hanna Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
RU2305561C2 (ru) * 1999-11-08 2007-09-10 Байоджен Айдек Инк. Лечение в-клеточных злокачественных опухолей с использованием антител против cd40l в комбинации с антителами против cd20 и/или химиотерапией и лучевой терапией
HUP0300919A2 (hu) 2000-03-24 2003-07-28 Micromet Ag Többfunkciós polipeptidek NKG2D receptor komplex epitóp kötőhellyel
CN1981868A (zh) * 2000-03-31 2007-06-20 拜奥根Idec公司 抗细胞因子抗体或拮抗剂与抗－cd20在b细胞淋巴瘤治疗中的联合应用
JP2003531178A (ja) 2000-04-25 2003-10-21 アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション 中枢神経系リンパ腫治療用のリツキシマブのクモ膜下投与
EP2052742A1 (en) * 2000-06-20 2009-04-29 Biogen Idec Inc. Treatment of B-cell associated diseases such as malignancies and autoimmune diseases using a cold anti-CD20 antibody/radiolabeled anti-CD22 antibody combination
AU6461201A (en) 2000-07-12 2002-01-21 Idec Pharma Corp Treatment of b cell malignancies using combination of b cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
DE60142971D1 (de) * 2000-07-31 2010-10-14 Biolex Therapeutics Inc Expression biologisch aktiver polypeptide in wasserlinse
DE10043452A1 (de) 2000-09-04 2002-03-14 Basf Ag Formkörper mit einer tonmineralischen Beschichtung
KR20040023565A (ko) 2000-09-18 2004-03-18 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 Ｂ 세포 고갈/면역조절 항체 조합을 이용한 자가면역질환의 치료를 위한 조합 요법
AU2002213357A1 (en) * 2000-10-20 2002-05-06 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant igg3 rituxan r and therapeutic use thereof
US7754208B2 (en) * 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030211107A1 (en) * 2002-01-31 2003-11-13 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
US20020159996A1 (en) * 2001-01-31 2002-10-31 Kandasamy Hariharan Use of CD23 antagonists for the treatment of neoplastic disorders
WO2002060485A2 (en) * 2001-01-31 2002-08-08 Idec Pharmaceuticals Corporation Use of immunoregulatory antibodies in the treatment of neoplastic disorders
US20030103971A1 (en) * 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
US20030077826A1 (en) 2001-02-02 2003-04-24 Lena Edelman Chimeric molecules containing a module able to target specific cells and a module regulating the apoptogenic function of the permeability transition pore complex (PTPC)
WO2002062850A2 (en) 2001-02-02 2002-08-15 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Hybrid antibodies and uses thereof
US20030003097A1 (en) * 2001-04-02 2003-01-02 Idec Pharmaceutical Corporation Recombinant antibodies coexpressed with GnTIII
WO2002078766A2 (en) 2001-04-02 2002-10-10 Genentech, Inc. Combination therapy
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
MXPA05000511A (es) * 2001-07-12 2005-09-30 Jefferson Foote Anticuepros super humanizados.
WO2003024388A2 (en) 2001-09-20 2003-03-27 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and compositions for treating and preventing skin disorders using binding agents specific for psma
HUP0600342A3 (en) * 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) * 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
KR101001243B1 (ko) 2001-12-27 2010-12-17 글리코파이, 인크. 포유동물-유형 탄수화물 구조의 설계 방법
CA2476166C (en) 2002-02-14 2011-11-15 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US7432063B2 (en) 2002-02-14 2008-10-07 Kalobios Pharmaceuticals, Inc. Methods for affinity maturation
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20030180292A1 (en) * 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
CA2478294C (en) 2002-03-19 2013-09-03 Plant Research International B.V. Gntiii (udp-n-acetylglucosamine:beta-d mannoside beta (1,4)-n-acetylglucosaminyltransferase iii) expression in plants
JP2005520523A (ja) * 2002-03-21 2005-07-14 イーライ・リリー・アンド・カンパニー アンタゴニスト的抗ｈＦａｓリガントヒト抗体およびそのフラグメント
US8420353B2 (en) 2002-03-22 2013-04-16 Aprogen, Inc. Humanized antibody and process for preparing same
US20030190689A1 (en) * 2002-04-05 2003-10-09 Cell Signaling Technology,Inc. Molecular profiling of disease and therapeutic response using phospho-specific antibodies
WO2003084570A1 (fr) * 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition d'anticorps appropriee au patient souffrant de polymorphisme fc$g(g)riiia
WO2003084569A1 (fr) * 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition anticorps
AU2003251597A1 (en) * 2002-06-19 2004-01-06 Abgenix, Inc. Method for predicting response to epidermal growth factor receptor-directed therapy
US7425619B2 (en) * 2002-08-14 2008-09-16 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
EP1539966B1 (en) 2002-09-12 2010-06-30 Greenovation Biotech GmbH Protein production method
DK3284753T3 (da) 2002-10-17 2021-07-05 Genmab As Humane monoklonale antistoffer mod cd20 til anvendelse i behandlingen af multipel sclerose
CN1878795A (zh) * 2002-12-02 2006-12-13 阿布格尼克斯公司 针对磷脂酶a2的抗体及其应用
EP1572744B1 (en) 2002-12-16 2010-06-09 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
EP1573314B1 (en) 2002-12-16 2008-07-23 Genentech, Inc. Transgenic mice expressing human cd20
WO2004057002A2 (en) 2002-12-20 2004-07-08 Greenovation Biotech Gmbh Production of heterologous glycosylated proteins in bryophyte cells
US7355008B2 (en) 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7960512B2 (en) * 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
ES2542885T3 (es) 2003-01-22 2015-08-12 Roche Glycart Ag Constructos de fusión y uso de los mismos para producir anticuerpos con mayor afinidad de unión al receptor de Fc y función efectora
WO2004065417A2 (en) * 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
CA2518980A1 (en) * 2003-03-14 2004-09-30 Pharmacia Corporation Antibodies to igf-i receptor for the treatment of cancers
EP2062916A3 (en) * 2003-04-09 2009-08-19 Genentech, Inc. Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a TNF-Alpha inhibitor
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
US20050163775A1 (en) 2003-06-05 2005-07-28 Genentech, Inc. Combination therapy for B cell disorders
PT2272868E (pt) * 2003-06-05 2015-07-07 Genentech Inc Terapêutica de combinação para distúrbios de células b
ZA200600798B (en) * 2003-07-29 2007-06-27 Genentech Inc Assay for human anti CD20 antibodies and uses therefor
US20050042664A1 (en) * 2003-08-22 2005-02-24 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
MXPA06002134A (es) 2003-08-29 2006-05-31 Genentech Inc Terapia de trastornos oculares.
ME01775B (me) 2003-11-05 2011-02-28 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antitijela sa povećanim afinitetom vezivanja za fc receptor i efektornom funkcijom
BRPI0417105A (pt) 2003-12-19 2007-02-06 Genentech Inc métodos de tratamento de doenças autoimunológicas em pacientes
KR20060107555A (ko) 2003-12-19 2006-10-13 제넨테크, 인크. 이식 거부에서 ｃｄ20의 검출
CN1947012A (zh) 2003-12-23 2007-04-11 瑞纳神经科学公司 激动剂抗－trkC抗体和使用其的方法
WO2005079479A2 (en) 2004-02-17 2005-09-01 Absalus, Inc. Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus
CA2563432A1 (en) * 2004-04-16 2005-12-01 Genentech, Inc. Method for augmenting b cell depletion
CN1997893A (zh) 2004-04-16 2007-07-11 健泰科生物技术公司 抗体测定法
WO2005115453A2 (en) * 2004-04-16 2005-12-08 Genentech, Inc. Treatment of polychondritis and mononeuritis multiplex with anti-cd20 antibodies
BRPI0510224A (pt) 2004-05-05 2007-10-23 Genentech Inc métodos de prevenção de doença autoimunológica e artigo industrializado
US7514223B2 (en) * 2004-05-15 2009-04-07 Genentech, Inc. Cross-screening system and methods for detecting a molecule having binding affinity for a target molecule
PA8635501A1 (es) 2004-06-04 2006-06-02 Genentech Inc Uso de un anticuerpo para el tratamiento del lupus
WO2005117978A2 (en) * 2004-06-04 2005-12-15 Genentech, Inc. Method for treating multiple sclerosis
US7501121B2 (en) * 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
NZ552433A (en) * 2004-07-22 2009-10-30 Genentech Inc Method of treating sjogrenÆs syndrome
CN101052654A (zh) * 2004-08-19 2007-10-10 健泰科生物技术公司 具有改变的效应子功能的多肽变体
CN101048428A (zh) * 2004-09-08 2007-10-03 健泰科生物技术公司 利用死亡受体配体和cd20抗体的方法
EP1791864A2 (en) 2004-09-08 2007-06-06 Genentech, Inc. Methods of using death receptor ligands and cd20 antibodies
CA2579142A1 (en) * 2004-09-13 2006-03-23 Macrogenics, Inc. Humanized antibodies against west nile virus and therapeutic and prophylactic uses thereof
AU2005294666A1 (en) 2004-10-05 2006-04-20 Genentech, Inc. Method for treating vasculitis
US8916165B2 (en) 2004-12-15 2014-12-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized Aβ antibodies for use in improving cognition
KR20070086218A (ko) * 2004-12-17 2007-08-27 제넨테크, 인크. 자가면역 질환에 대한 이전 요법에 실패했던 환자에서의,자가면역 질환의 항-혈관신생 요법
CA2592390A1 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Genentech, Inc. Methods for producing soluble multi-membrane-spanning proteins
US20060188495A1 (en) 2005-01-13 2006-08-24 Genentech, Inc. Treatment method
DOP2006000029A (es) 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
TW200714289A (en) 2005-02-28 2007-04-16 Genentech Inc Treatment of bone disorders
AR053579A1 (es) 2005-04-15 2007-05-09 Genentech Inc Tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (eii)
ZA200708857B (en) 2005-04-22 2009-01-28 Genentech Inc Method for treating dementia or alzheimer's disease with a CD30 antibody
US20070009518A1 (en) 2005-05-18 2007-01-11 Biogen Idec Inc. Methods for treating fibrotic conditions
EP1902320B1 (en) 2005-05-20 2010-03-10 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
JP2008541770A (ja) 2005-06-03 2008-11-27 ジェネンテック・インコーポレーテッド 改変したフコシル化レベルを有する抗体の産生方法
TWI615407B (zh) 2005-08-26 2018-02-21 羅齊克雷雅公司 具有經改變細胞傳訊活性之改質抗原結合分子
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
CA2629306A1 (en) 2005-11-23 2007-05-31 Genentech, Inc. Methods and compositions related to b cell assays
WO2007064911A1 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Biogen Idec Inc. Anti-mouse cd20 antibodies and uses thereof
US7708944B1 (en) 2006-06-13 2010-05-04 Research Foundation Of State University Of New York Ultra-sensitive, portable capillary sensor
AU2008232506A1 (en) 2007-04-02 2008-10-09 Genentech, Inc. Biological markers predictive of rheumatoid arthritis response to B-cell antagonists
WO2008157282A1 (en) 2007-06-18 2008-12-24 Genentech, Inc. Biological markers predictive of rheumatoid arthritis response to b-cell antagonists
LT3597659T (lt) 2007-07-09 2023-05-10 Genentech, Inc. Disulfidinės jungties redukcijos prevencijos būdas gaminant polipeptidą rekombinantiniu būdu
KR100898362B1 (ko) 2007-07-10 2009-05-18 주식회사 그리폰 다목적 신발
CA2697482C (en) 2007-09-05 2016-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with type i and type ii anti-cd20 antibodies
GB0718684D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Roche Products Ltd Treatment method
US20090214561A1 (en) 2007-09-24 2009-08-27 David Robert Close Treatment method
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US20090110688A1 (en) 2007-10-24 2009-04-30 Georg Fertig Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
SI2215117T2 (en) 2007-10-30 2018-04-30 Genentech, Inc. Purification of the antibody by cation exchange chromatography
CN101945667A (zh) 2007-12-21 2011-01-12 健泰科生物技术公司 利妥昔单抗不应性类风湿性关节炎患者的疗法
WO2009085765A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Genentech, Inc. Crystallization of anti-cd20 antibodies
BRPI0820819B1 (pt) 2007-12-21 2021-06-08 F. Hoffmann-La Roche Ag formulação de anticorpos humanizados b-ly 1 e seu uso
US20090162351A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Depuy Spine, Inc. Transdiscal administration of inhibitors of p38 MAP kinase
ES2592312T3 (es) 2008-03-25 2016-11-29 Roche Glycart Ag Utilización de un anticuerpo anti-CD20 de tipo II con citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) incrementada en combinación con ciclofosfamida, vincristina y doxorrubicina para el tratamiento de linfomas no de Hodgkin
WO2009134738A1 (en) 2008-04-29 2009-11-05 Genentech, Inc. Responses to immunizations in rheumatoid arthritis patients treated with a cd20 antibody
US8021850B2 (en) 2008-07-14 2011-09-20 Ribo Guo Universal tandem solid-phases based immunoassay
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
CN102281902B (zh) 2008-11-17 2013-11-13 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于减少大分子在生理条件下聚集的方法和制剂
PE20120169A1 (es) 2008-11-17 2012-02-29 Genentech Inc Metodo y formulacion para reducir la agregacion de una macromolecula bajo condiciones fisiologicas
US20100247484A1 (en) 2009-03-31 2010-09-30 Heinrich Barchet Combination therapy of an afucosylated antibody and one or more of the cytokines gm csf, m csf and/or il3
MA33470B1 (fr) 2009-08-14 2012-07-03 Hoffmann La Roche Polythérapie à base d'un anticorps afucosylé anti-cd20 et de fludarabine et/ou mitoxantrone
TWI409079B (zh) 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
US8728730B2 (en) 2009-09-03 2014-05-20 Genentech, Inc. Methods for treating, diagnosing, and monitoring rheumatoid arthritis
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
WO2011131749A1 (en) 2010-04-23 2011-10-27 Glaxo Group Limited New 14 and 15 membered macrolides for the treatment of neutrophil dominated inflammatory diseases
CA2806855A1 (en) 2010-08-03 2012-02-09 F. Hoffmann - La Roche Ag Chronic lymphocytic leukemia (cll) biomarkers
AR082693A1 (es) 2010-08-17 2012-12-26 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo anti-cd20 afucosilado con un anticuerpo anti-vegf
MX353143B (es) 2011-02-28 2017-12-20 Genentech Inc Marcadores biologicos y metodos para pronosticar respuesta a antagonistas de celulas b.
US8592156B2 (en) 2011-08-08 2013-11-26 Roche Molecular Systems, Inc. Predicting response to anti-CD20 therapy in DLBCL patients
WO2014039885A1 (en) 2012-09-06 2014-03-13 Freedom Innovations, Llc Method and system for a prosthetic device with multiple levels of functionality enabled through multiple control systems
CN111481552A (zh) 2012-09-07 2020-08-04 吉宁特有限公司 II型抗CD20抗体与选择性Bcl-2抑制剂的组合治疗

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003011878A2 (en) * 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
POLYAK MARIA J. & DEANS JULIE P., "Alanine-170 and proline-172 are critical determinants for extracellular CD20 epitopes; heterogeneity in the fine specificity of CD20 monoclonal antibodies is defined by additional requirements imposed by both amino acid sequence and quaternary structure". Blood, 2002, vol. 99, no. 9, side 3256-3262. , Dated: 01.01.0001 *

Also Published As

Publication number Publication date
NO346167B1 (no) 2022-04-04
LT2077282T (lt) 2017-03-10
EP1692182A2 (en) 2006-08-23
CN1902231B (zh) 2015-05-20
EP2380910A1 (en) 2011-10-26
NO20062289L (no) 2006-08-03
HK1167681A1 (en) 2012-12-07
DK2380911T3 (en) 2018-08-06
JP2015134814A (ja) 2015-07-27
HK1100005A1 (en) 2007-08-31
LU92632I2 (fr) 2015-11-02
WO2005044859A3 (en) 2005-08-04
PT2077282T (pt) 2017-02-14
RS55723B1 (sr) 2017-07-31
AU2004287643B2 (en) 2011-11-17
KR20060130579A (ko) 2006-12-19
TR201809892T4 (tr) 2018-07-23
DE602004026470D1 (de) 2010-05-20
PT2348051T (pt) 2019-02-04
CY2016004I1 (el) 2016-08-31
IL207347A (en) 2015-08-31
KR101364902B1 (ko) 2014-02-21
LT2348051T (lt) 2019-02-25
JP2010081940A (ja) 2010-04-15
CY2015001I2 (el) 2016-06-22
EP2348051B1 (en) 2018-12-19
SI1692182T1 (sl) 2010-06-30
US8883980B2 (en) 2014-11-11
NO20220263A1 (no) 2006-08-03
NO341893B1 (no) 2018-02-12
ZA200604547B (en) 2007-07-25
KR20110129990A (ko) 2011-12-02
ME01775B (me) 2011-02-28
CY1110301T1 (el) 2015-01-14
HUS1600013I1 (hu) 2016-04-28
CY1121206T1 (el) 2020-05-29
EA200600905A1 (ru) 2006-12-29
EP2077282A3 (en) 2009-08-05
DK2348051T3 (en) 2019-03-18
NO20210499A1 (no) 2006-08-03
EP2077282B1 (en) 2016-12-28
US20160075794A1 (en) 2016-03-17
PT2380911T (pt) 2018-07-04
US20230212303A1 (en) 2023-07-06
FR15C0076I2 (fr) 2016-03-11
EP2348051A3 (en) 2012-12-19
DK2077282T3 (en) 2017-01-30
CN1902231A (zh) 2007-01-24
EP2077282A2 (en) 2009-07-08
PT2380910E (pt) 2015-11-26
CY2015001I1 (el) 2016-06-22
EA036531B1 (ru) 2020-11-19
IL232954A0 (en) 2014-07-31
ECSP21023271A (es) 2021-05-31
SI2380910T1 (sl) 2015-11-30
HRP20170398T2 (hr) 2019-06-28
IL207347A0 (en) 2010-12-30
AU2004287643C1 (en) 2012-05-31
FR15C0076I1 (no) 2016-01-01
UA91823C2 (ru) 2010-09-10
TR201903329T4 (tr) 2019-04-22
SG10202008722QA (en) 2020-10-29
IL235172A0 (en) 2014-11-30
PL2380911T3 (pl) 2018-10-31
US9296820B2 (en) 2016-03-29
RS57466B1 (sr) 2018-09-28
TNSN06126A1 (en) 2007-11-15
ME02332B (me) 2016-06-30
CY1118719T1 (el) 2017-07-12
EA025962B1 (ru) 2017-02-28
ES2672640T3 (es) 2018-06-15
PL1692182T3 (pl) 2010-09-30
KR101220691B1 (ko) 2013-01-14
ES2708095T3 (es) 2019-04-08
EA202091901A1 (ru) 2020-11-24
CN104829719A (zh) 2015-08-12
HUE026669T2 (en) 2016-06-28
JP6125770B2 (ja) 2017-05-10
MX337587B (es) 2016-03-11
ATE463513T1 (de) 2010-04-15
SI2380911T1 (en) 2018-07-31
EP2380910B1 (en) 2015-09-30
IL175367A0 (en) 2006-09-05
EP2380911A1 (en) 2011-10-26
ECSP066603A (es) 2006-10-17
EP2380911B1 (en) 2018-05-09
EP2348051A2 (en) 2011-07-27
US20160075793A1 (en) 2016-03-17
LT2380911T (lt) 2018-07-10
ES2550311T3 (es) 2015-11-06
IL175367A (en) 2014-11-30
EA201100128A1 (ru) 2011-06-30
JP2018027088A (ja) 2018-02-22
PL2077282T3 (pl) 2017-08-31
HUE031632T2 (en) 2017-07-28
CN102373215A (zh) 2012-03-14
HRP20170398T1 (hr) 2017-05-19
NL300801I2 (nl) 2017-09-19
BR122020013239B1 (pt) 2022-05-10
SI2077282T1 (sl) 2017-03-31
BRPI0416262B1 (pt) 2022-04-12
MA31040B1 (fr) 2010-01-04
RS51334B (en) 2011-02-28
HRP20100303T1 (hr) 2010-07-31
EA201300481A1 (ru) 2014-01-30
CN102373215B (zh) 2014-07-30
SG10201504094SA (en) 2015-06-29
JP2012254083A (ja) 2012-12-27
HRP20181204T1 (hr) 2018-09-21
RS58420B1 (sr) 2019-04-30
DK2380910T3 (en) 2015-10-19
MXPA06004836A (es) 2006-07-06
US20050123546A1 (en) 2005-06-09
JP4653109B2 (ja) 2011-03-16
NZ588860A (en) 2012-03-30
NO346533B1 (no) 2022-09-26
LU93001I2 (fr) 2016-05-17
CN102373214A (zh) 2012-03-14
NO20171989A1 (no) 2006-08-03
ES2341009T3 (es) 2010-06-14
SG160348A1 (en) 2010-04-29
CY2016004I2 (el) 2016-08-31
HRP20151418T1 (hr) 2016-01-29
EA015009B1 (ru) 2011-04-29
HUE042914T2 (hu) 2019-07-29
ES2615507T3 (es) 2017-06-07
WO2005044859A2 (en) 2005-05-19
NZ547589A (en) 2009-05-31
CR11848A (es) 2011-04-04
CN102373214B (zh) 2014-07-09
CY1120252T1 (el) 2019-07-10
JP6235521B2 (ja) 2017-11-22
NO20220904A1 (no) 2006-08-03
EP1692182B1 (en) 2010-04-07
HUE038955T2 (hu) 2018-12-28
ME03330B (me) 2019-10-20
PT1692182E (pt) 2010-05-13
SI2348051T1 (sl) 2019-03-29
DK1692182T3 (da) 2010-05-31
HRP20190333T1 (hr) 2019-05-03
HK1167682A1 (en) 2012-12-07
RS54450B1 (en) 2016-06-30
US20210002382A1 (en) 2021-01-07
KR101364858B1 (ko) 2014-02-19
KR20120104419A (ko) 2012-09-20
IL232954A (en) 2015-09-24
JP2008500017A (ja) 2008-01-10
NO347530B1 (no) 2023-12-11
LTC2380910I2 (lt) 2018-01-25
AU2004287643A1 (en) 2005-05-19
PL2348051T3 (pl) 2019-05-31
BE2016C008I2 (no) 2021-08-16
US20160076009A1 (en) 2016-03-17
CA2544865C (en) 2019-07-09
CA2544865A1 (en) 2005-05-19
PL2380910T3 (pl) 2015-12-31
BRPI0416262A (pt) 2007-01-09
HK1213574A1 (zh) 2016-07-08
US20090010921A1 (en) 2009-01-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230212303A1 (en) Antigen binding molecules with increased fc receptor binding affinity and effector function
EP2395024B1 (en) Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity