TWI780464B - 結合至病理性ｔａｕ種類之抗體及其用途 - Google Patents

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Abstract

本揭示內容係關於選擇性地結合病理性Tau之抗體，包括與此等抗體相關之組合物及方法，例如用於治療tau蛋白病變，即與Tau之病理性聚集相關之神經退化性疾病。

Description

結合至病理性TAU種類之抗體及其用途
本揭示內容概言之係關於結合病理性Tau種類之抗體，包括與該等抗體相關之組合物及方法，例如用於治療與Tau之病理性聚集相關之神經退化性疾病。
神經退化性疾病每年影響估計50百萬美國人，造成不可估量之個人損失及每年數千億美元之醫療費用及生產力損失經濟成本。Tau蛋白病變係一類與人腦中之Tau蛋白的病理性聚集相關之神經退化性疾病，且包括阿茲海默氏病(Alzheimer's disease, AD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、亨庭頓氏病(Huntington's disease, HD)、帕金森氏病(Parkinson's disease, PD)、匹克氏病(Pick’s Disease, PiD)及進行性核上性麻痺(PSP)。在tau蛋白病變中，Tau之聚集以普裡昂蛋白樣(prion-like)方式在腦中蔓延，例如在AD腦中所見(Braak, H.及Braak, E. V. A. (1995).Neurobiology of aging ,16 (3), 271-278；Braak, H.等人(2006)。Acta neuropathologica ,112 (4), 389-404)，其中Tau病理學顯現為一致之時空模式。Tau通常係高度可溶之細胞質蛋白，但在阿茲海默氏病中，Tau經異常磷酸化且在突觸處累積從而產生突觸毒性。已發現主要由短原纖維組成之Tau傳播種子在不存在廣泛細胞性Tau病理學之大腦區域之突觸部分中顯著富集，此指示Tau種子能夠沿著突觸連接之神經元網路在人腦中蔓延。
儘管已研究或正在研究許多旨在去除聚集的Tau種類之治療方法，但目前尚無有效治療來阻止、預防或逆轉此等神經退化性疾病之進展。因此，業內亟需能夠減緩該等神經退化性疾病之進展及/或預防其發展之醫藥劑。
此部分提供本揭示內容之總體概述，且並不全面涵蓋其全部範圍或其所有特徵。本申請案提供抗Tau抗體或其抗原結合部分(例如經分離之抗Tau抗體或其抗原結合部分)。不受理論束縛，在一些實施例中，抗Tau抗體或其抗原結合部分能夠選擇性地結合至在人類tau蛋白病變病症中更豐富之Tau聚集體。在一些實施例中，抗Tau抗體或其抗原結合部分能夠抑制Tau播散及/或Tau聚集，由此預防此等人類tau蛋白病變之起始及/或蔓延。
在一態樣中，本文提供抗Tau抗體或其抗原結合部分(例如經分離之抗Tau抗體或其抗原結合部分)，其包含：a)重鏈可變區，其包含i)互補決定區(CDR) 1，該CDR1包含SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；ii) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或iii) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或b)輕鏈可變區，其包含iv) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；v) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或vi) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，1)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；2)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 49、60及71之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 49、60及71之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 82、91及96之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 82、91及96之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；3)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 51、62及73之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 51、62及73之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 84、91及98之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 84、91及98之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；4)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 52、63及74之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 52、63及74之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 85、92及99之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 85、92及99之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；5)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 53、64及75之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 53、64及75之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 86、93及100之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 86、93及100之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；6)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 54、65及76之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 54、65及76之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 87、93及101之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 87、93及101之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；7)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 55、66及77之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 55、66及77之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及102之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 83、91及102之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；8)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 56、67及78之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 56、67及78之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 88、94及103之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 88、94及103之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；9)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 57、68及79之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 57、68及79之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 89、91及98之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 89、91及98之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；10)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 58、69及80之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 58、69及80之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 90、95及104之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 90、95及104之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；或11)重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 59、70及81之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 59、70及81之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 87、93及105之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 87、93及105之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 59、70及81之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 59、70及81之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 87、93及105之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 87、93及105之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 59、70及81之胺基酸序列；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 87、93及105之胺基酸序列。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，1)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 3之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；2)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 2之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；3)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 1之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；4)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；5)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；6)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 6之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 18之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；7)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 19之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；8)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 20之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；9)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 9之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；10)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 10之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 22之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；11)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 11之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 23之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；12)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 24之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；或13)重鏈可變區包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 107之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 3之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 107之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列；且輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，該抗體或抗原結合部分係單株抗體。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，該抗體或抗原結合部分係人類、人類化或嵌合抗體。在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，相對於正常人類Tau種類，該抗體或抗原結合部分較佳地結合至病理性人類Tau種類。在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，相對於正常人類Tau種類，該抗體或抗原結合部分特異性地結合至病理性人類Tau種類。在一些實施例中，病理性人類Tau種類係來自選自由以下組成之群之tau蛋白病變：阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。在一些實施例中，病理性人類Tau種類係來自選自由以下組成之群之tau蛋白病變腦：阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。在一些實施例中，病理性人類Tau種類係1A、IB、11 A或MB型Tau；錯序Tau；錯誤無序Tau (mis-disordered Tau)；十二醯基肌胺酸鈉不溶性Tau；細胞外Tau沈積物；Tau聚集體；成對螺旋絲；神經原纖維病理學形式；或截短Tau或全長Tau之高度磷酸化形式。在一些實施例中，病理性人類Tau種類係高度磷酸化且十二醯基肌胺酸鈉不溶性Tau種類。在一些實施例中，病理性人類Tau種類係在tau蛋白病變腦之突觸處累積之Tau聚集體及/或異常磷酸化Tau。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，該抗體或抗原結合部分結合至來自人類阿茲海默氏病(AD)腦溶解物之高度磷酸化且十二醯基肌胺酸鈉不溶性之64 kD Tau種類。在一些實施例中，該抗體或抗原結合部分i)進一步結合至來自人類AD腦溶解物之十二醯基肌胺酸鈉不溶性58 kD及/或68 kD Tau種類；及/或ii)不會結合至來自人類AD腦溶解物之140 kD及/或170 kD Tau種類。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，該抗體或抗原結合部分係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，該抗體或抗原結合部分係IgG1或IgG4抗體。
在另一態樣中，本文提供經分離核酸，其編碼根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分。
在另一態樣中，本文提供宿主細胞，其包含根據上文所闡述之任一實施例之核酸。
在另一態樣中，本文提供產生抗體或抗原結合部分之方法，其包含在適於產生該抗體或抗原結合部分之條件下培養根據上文所闡述之任一實施例之宿主細胞。
在另一態樣中，本文提供免疫偶聯物，其包含根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分及第二治療劑。
在另一態樣中，本文提供經標記抗體，其包含根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分及可檢測之標記。
在另一態樣中，本文提供醫藥組合物，其包含根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分及醫藥上可接受之載劑。
在另一態樣中，本文提供治療或預防個體之Tau蛋白相關疾病之方法，其包含向該個體投與根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分或根據上文所闡述之任一實施例之醫藥組合物。
在另一態樣中，本文提供保持或增加患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體的認知記憶能力或減緩記憶喪失之方法，其包含向該個體投與根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分或根據上文所闡述之任一實施例之醫藥組合物。
在另一態樣中，本文提供降低患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau蛋白含量之方法，其包含向該個體投與根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分或根據上文所闡述之任一實施例之醫藥組合物，其中i)非磷酸化Tau蛋白、磷酸化Tau蛋白及/或高度磷酸化Tau蛋白在該個體中之含量與在投與該抗體或抗原結合部分之前其在該個體中之含量相比降低；及/或ii)病理性Tau種類在該個體中之含量與在投與該抗體或抗原結合部分之前其在該個體中之含量相比降低。在一些實施例中，降低患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau蛋白聚集體之含量之方法包含向該個體投與根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分或根據上文所闡述之任一實施例之醫藥組合物，其中i)非磷酸化Tau蛋白、磷酸化Tau蛋白及/或高度磷酸化Tau蛋白在該個體中之含量與在投與該抗體或抗原結合部分之前其在該個體中之含量相比降低；及/或ii)病理性Tau種類在該個體中之含量與在投與該抗體或抗原結合部分之前其在該個體中之含量相比降低。在一些實施例中，Tau蛋白聚集體及/或異常磷酸化Tau在該個體中之含量與在投與該抗體或抗原結合部分之前其在該個體中之含量相比降低。
在另一態樣中，本文提供抑制及/或逆轉患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau聚集傳播之方法，其包含向該個體投與根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分或根據上文所闡述之任一實施例之醫藥組合物。在一些實施例中，抑制患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau聚集傳播之方法包含向該個體投與根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分或根據上文所闡述之任一實施例之醫藥組合物。
在另一態樣中，本文提供抑制及/或逆轉患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau播散之方法，其包含向該個體投與根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分或根據上文所闡述之任一實施例之醫藥組合物。在一些實施例中，抑制患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau播散之方法包含向該個體投與根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分或根據上文所闡述之任一實施例之醫藥組合物。
在一些實施例中，根據上文所闡述之任一方法，Tau蛋白相關疾病係tau蛋白病變。
在一些實施例中，tau蛋白病變係神經退化性tau蛋白病變。在一些實施例中，tau蛋白病變係選自由以下組成之群：阿茲海默氏病(AD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、亨庭頓氏病(HD)、帕金森氏病(PD)、庫-賈二氏病(Creutzfeldt-Jacob disease)、拳擊手型失智症、唐氏症候群(Down's Syndrome)、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、英國型失智症(British dementia)、丹麥型失智症(Danish dementia)、包涵體肌炎、普裡昂蛋白腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷、關島帕金森症-失智症候群(Guam Parkinsonism-dementia complex)、非關島運動神經元疾病伴神經原纖維纏結(Non-Guamanian motor neuron disease with neurofibrillary tangle)、嗜銀顆粒失智症、皮質基底核退化症、瀰漫性神經原纖維纏結伴鈣化症、額顳葉失智症、額顳葉失智症伴與染色體17相關之帕金森症、哈勒沃登-施帕茨病(Hallevorden-Spatz disease)、多系統萎縮、C型尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease type C)、蒼白球-腦橋-黑質退化、匹克氏病、進行性皮質下神經膠質瘤病、進行性核上性麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、僅纏結型失智症、白質tau蛋白病變伴球狀神經膠質包涵體、額顳葉失智症、腦炎後帕金森症、與染色體17相關之帕金森症及肌強直性營養不良。在一些實施例中，tau蛋白病變係阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)或匹克氏病(PiD)。
在一些實施例中，根據上文所闡述之任一方法，該方法進一步包含向該個體投與至少一種額外療法。在一些實施例中，該至少一種額外療法係選自神經保護劑、神經病學藥物、皮質類固醇、抗生素、抗病毒劑、抗Tau抗體、Tau抑制劑、抗類澱粉β抗體、β-類澱粉聚集抑制劑、抗BACE1抗體及BACE1抑制劑。在一些實施例中，該至少一種額外療法係選自神經病學藥物、皮質類固醇、抗生素、抗病毒劑、抗Tau抗體、Tau抑制劑、抗類澱粉β抗體、β-類澱粉聚集抑制劑、抗BACE1抗體及BACE1抑制劑。在一些實施例中，該至少一種額外療法係神經保護劑，其用於預防或治療性治療神經退化性疾病之組合療法中，包括延遲神經退化性疾病之發作、減緩其進展或改善其症狀。
在一些實施例中，根據上文所闡述之任一方法，個體診斷為患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病之風險下。在一些實施例中，個體診斷為患有選自由以下組成之群之tau蛋白病變或處於發展成該病變之風險下：阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。
在另一態樣中，本文提供檢測樣品中之病理性人類Tau之方法，其包含i)使該樣品與根據上文所闡述之任一實施例之抗體或抗原結合部分接觸並直接或間接地檢測該抗體或抗原結合部分；或ii)使該樣品與根據上文所闡述之任一實施例之經標記抗體或抗原結合部分接觸並檢測標記。在一些實施例中，病理性人類Tau係來自選自由以下組成之群之tau蛋白病變：阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。在一些實施例中，病理性人類Tau係來自選自由以下組成之群之tau蛋白病變腦：阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。在一些實施例中，病理性人類Tau係1A、IB、11 A或MB型Tau；錯序Tau；錯誤無序Tau；十二醯基肌胺酸鈉不溶性Tau；細胞外Tau沈積物；Tau聚集體；成對螺旋絲；神經原纖維病理學形式；或截短Tau或全長Tau之高度磷酸化形式。在一些實施例中，病理性人類Tau係高度磷酸化且十二醯基肌胺酸鈉不溶性Tau。在一些實施例中，樣品係腦樣品、腦脊髓液樣品或血液樣品。在一些實施例中，檢測包含產生讀出，該讀出包含關於樣品中病理性人類Tau之存在之資訊。在一些實施例中，樣品係來自個體且該方法進一步包含基於讀出診斷該個體是否患有tau蛋白病變或是否有可能發展成tau蛋白病變。
前述發明內容僅係說明性的且並非意欲以任何方式加以限制。除本文所闡述之說明性實施例及特徵以外，本揭示內容之其他態樣、實施例、目標及特徵自圖式及詳細說明以及申請專利範圍將變得完全顯而易見。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張於2019年8月6日提出申請之美國臨時申請案第62/883,605號之優先權，該臨時申請案出於所有目的係全文併入本文中。序列表
本申請案含有作為ASCII文本檔案之電腦可讀形式之序列表，其名稱為056239_501001WO_ST25.txt，大小為55,716個位元組，於2020年8月1日創建，且經由ePCT隨同本申請案一起以電子方式提交。該序列表係以全文引用的方式併入本文中且形成本揭示內容之一部分。
本發明係關於能夠結合至病理性(疾病相關) Tau種類之抗體，包括源自此等抗體之抗原結合部分(例如該等抗體之抗原結合片段)。高度期望結合病理性Tau種類且與正常(健康) Tau種類結合最小之抗體。本文提供結合至人類病理性Tau種類且能夠區分正常與病理性Tau種類之抗體及抗原結合部分。發現本文所闡述之抗體優先結合位於tau蛋白病變腦之突觸部分中之Tau種類(例如不溶性Tau種類)，且由於突觸丟失係tau蛋白病變中之早期病理性事件，故該等結果表明該等抗體及其抗原結合衍生物(例如mAb005及mAb037之人類化形式)適用於臨床，其中其在人類tau蛋白病變患者之腦中具有清除病理性Tau之潛力且對正常/生理性Tau種類具有最小效應。亦提供使用本文所闡述之抗體及抗原結合部分消除及/或預防Tau播散及/或傳播之方法及使用本文所闡述之抗體及抗原結合部分治療或預防諸如阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)、或匹克氏病(PiD)等tau蛋白病變之方法。
在以下詳細說明中，參考形成本文之一部分之附圖。在圖式中，除非上下文另有規定，否則類似符號通常鑑別類似組件。在詳細說明、圖式及申請專利範圍中所闡述之說明性替代方案並非意欲具有限制性。在不背離本文所呈現之標的物之精神或範圍之情形下可使用其他替代方案且可作出其他改變。將容易地理解，如本文所概述且圖中所圖解說明之各態樣可以眾多種不同構形佈置、取代、組合及設計，本申請案明確地審慎考慮所有該等不同構形且其構成本申請案之一部分。
除非另有定義，否則本文所使用之所有業內術語、符號及其他科學術語或用辭均意欲具有熟習本申請案所屬領域技術者通常所理解之含義。在一些情形中，具有通常所理解含義之術語為清晰及/或供及時參考起見而定義於本文中，且此等定義在本文中之納入不一定解釋為表示與業內通常所理解之術語之定義具有實質性差異。熟習此項技術者充分理解本文所闡述或提及之許多技術及程序且常使用習用方法對其加以採用。定義
術語「病理性Tau」及「疾病Tau」包括病理性Tau構形異構物及結構，且包括(但不限於)以下中之全部：1A、IB、11 A及MB型Tau (詳細闡述於WO2004/007547中)；錯序Tau；錯誤無序Tau (單體、二聚體、三聚體、寡聚體)；錯誤無序可溶性Tau；十二醯基肌胺酸鈉不溶性Tau；細胞外Tau沈積物；Tau聚集體；成對螺旋Tau絲；Tau神經原纖維病理學形式，包括神經原纖維病灶、纏結、絲線、原纖維及軸突球狀體；截短或全長Tau之高度磷酸化形式；或可藉由本文所闡述之抗體及/或Tau結合片段檢測到之與AD或另一tau蛋白病變相關之任何其他Tau形式。術語「tau蛋白病變」包括(但不限於)伴隨在患者腦中出現微管相關蛋白質Tau之異常形式之所有神經疾病。該術語包括(但不限於)以下疾病：阿茲海默氏病(AD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、亨庭頓氏病(HD)、帕金森氏病(PD)、庫-賈二氏病、拳擊手型失智症、唐氏症候群、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克病、英國型失智症、丹麥型失智症、包涵體肌炎、普裡昂蛋白腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷、關島帕金森症-失智症候群、非關島運動神經元疾病伴神經原纖維纏結、嗜銀顆粒失智症、皮質基底核退化症、瀰漫性神經原纖維纏結伴鈣化症、額顳葉失智症、額顳葉失智症伴與染色體17相關之帕金森症、哈勒沃登-施帕茨病、多系統萎縮、C型尼曼-匹克病、蒼白球-腦橋-黑質退化、匹克氏病、進行性皮質下神經膠質瘤病、進行性核上性麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、僅纏結型失智症、白質tau蛋白病變伴球狀神經膠質包涵體、額顳葉失智症、腦炎後帕金森症、與染色體17相關之帕金森症及肌強直性營養不良。例如，參見Goedert, M.等人 (2010)。Trends in neurosciences ,33 (7), 317-325。
如本文所使用之術語「Tau蛋白相關疾病」及「Tau蛋白相關疾病或病症」意指tau介導或tau相關之神經退化性疾病及/或神經退化性病理狀況，尤其為作為tau蛋白病變之神經退化性疾病及/或神經退化性病理狀況及/或與tau蛋白病變相關及/或伴隨其、較佳地與tau聚集相關及/或伴隨其之疾病及/或病理狀況。
如本文所使用之術語「可溶性Tau」或「可溶性Tau蛋白」意欲包括含有Tau蛋白/肽、Tau樣肽/蛋白質、經修飾或截短之Tau肽/蛋白質及/或Tau肽/蛋白質之其他衍生物之單體及/或寡聚體之增溶蛋白質種類。
如本文所使用之術語「不溶性Tau」或「不溶性Tau蛋白」意欲包括含有以下之蛋白質種類：聚集Tau肽/蛋白質、Tau樣肽/蛋白質、經修飾或截短之Tau肽/蛋白質及/或形成在活體外水性介質中及活體內哺乳動物體內、更特定而言哺乳動物腦中均不溶的寡聚或聚合結構之Tau肽/蛋白質之其他衍生物。「不溶性Tau」特定而言包括神經原纖維纏結(NFT)。
「親和力成熟」抗體係指與不具有改變之親代抗體相比在一或多個超變區(HVR)中具有一或多個改變之抗體，此等改變使得可改良該抗體對抗原之親和力。
術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現期望抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指除完整抗體以外之分子，其包含完整抗體之一部分，該部分結合完整抗體所結合之抗原。抗體片段之實例包括(但不限於) Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2 、雙價抗體、直鏈抗體、單鏈抗體分子(例如scFv)及自抗體片段形成之多特異性抗體。
術語「嵌合抗體」係指其中重鏈及/或輕鏈部分源自不同來源或種類之抗體。
「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區之彼等生物學活性，其隨抗體同型而有所變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
藥劑(例如醫藥調配物)之「有效量」係指在所需劑量下及在所需時間段中有效達成期望治療或預防結果之量。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈中含有恆定區之至少一部分之C末端區域。該術語包括天然序列Fc區及變體Fc區。在一些實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基末端。然而，Fc區之C末端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非在本文中另外指定，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據亦稱為EU索引之EU編號系統，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所闡述。
「框架」或「FR」係指除超變區(HVR)殘基或互補決定區(CDR)以外之可變結構域殘基。可變結構域之FR通常係由四個FR結構域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，HVR及FR序列通常以如下序列出現在VH (或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
如本文所使用之術語「超變區」或「HVR」係指抗體可變結構域中在序列上超變(「互補決定區」或「CDR」)及/或形成在結構上經定義之環(「超變環」)及/或含有抗原接觸殘基(「抗原觸點」)之區域中之每一者。通常，抗體包含六個HVR或CDR：三個在VH中(H1、H2、H3)，且三個在VL中(L1、L2、L3)。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用以指具有實質上與天然抗體結構類似之結構或具有含有如本文所定義Fc區之重鏈的抗體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞系」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指其中已引入外源核酸之細胞，包括此等細胞之子代。宿主細胞包括「轉化子」及「經轉化細胞」，其包括原代經轉化細胞及源自其之子代(與傳代次數無關)。子代之核酸含量與親代細胞可並不完全相同，而是可含有突變。本文包括如經篩選或選擇用於原始經轉化細胞中之具有相同功能或生物學活性的突變體子代。
術語「可變區」或「可變結構域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與抗體與抗原結合之結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變結構域(分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中每一結構域包含四個保守框架區(FR)及三個超變區(HVR)或互補決定區(CDR)。
「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基之嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包含實質上全部之至少一個、且通常兩個可變結構域，其中全部或實質上全部之HVR (例如，CDR)對應於非人類之彼等HVR，且全部或實質上全部之FR對應於人類抗體之彼等FR。人類化抗體視情況可包含源自人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體(例如非人類抗體)之「人類化形式」係指已經歷人類化之抗體。
「經分離」抗體係已與其天然環境中之組分分離之抗體。
「經分離」核酸係指已與其天然環境中之組分分離之核酸分子。經分離核酸包括通常含有核酸分子之細胞中所含之核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於與其天然染色體位置不同之染色體位置處。
「編碼抗體之核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多個核酸分子，包括單一載體或單獨載體中之此(等)核酸分子及在宿主細胞中存在於一或多個位置處之此(等)核酸分子。
如本文所使用之術語「單株抗體」係指自實質上同源之抗體群體獲得之抗體，例如，其中該群體之個別抗體相同及/或結合相同表位，但可能之變體抗體除外，例如，含有天然突變或在產生單株抗體製劑期間產生，此等變體通常以極少量存在。與通常包括針對不同決定子(表位)之不同抗體之多株抗體製劑相比，單株抗體製劑之每一單株抗體針對抗原上之單一決定子。舉例而言，根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製得，包括(但不限於)雜交瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法及利用含有所有或一部分人類免疫球蛋白基因座之轉基因動物之方法，此等方法及用於製備單株抗體之其他例示性方法闡述於本文中。
相對於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對候選序列及參考多肽序列並引入空位(若需要)以達成最大序列一致性百分比後，候選序列中之胺基酸殘基與參考多肽序列中之胺基酸殘基一致之百分比，且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的，可以熟習此項技術者所熟知之各種方式來達成比對，例如使用可公開獲得之電腦軟體，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定用於比對序列之適當參數，包括在所比較序列之全長範圍內達成最大比對所需要之任何演算法。
術語「醫藥組合物」或「醫藥調配物」係指如下製劑：其所呈之形式允許其中所含活性成分之生物學活性有效，且不含對將投與該調配物之個體具有不可接受毒性之額外組分。
「醫藥上可接受之載劑」係指醫藥組合物中除活性成分以外對個體無毒之成分。醫藥上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝劑、賦形劑、穩定劑及防腐劑。
術語「治療(treatment、treating)」及諸如此類在本文中通常用於意指獲得期望藥理學及/或生理學效應。就完全或部分地預防疾病或其症狀而言，該效應可為預防性的，及/或就部分或完全地治癒疾病及/或可歸因於該疾病之不良反應而言，該效應可為治療性的。如本文所使用之「治療」涵蓋哺乳動物中的疾病或症狀之任何治療，且包括：(a)預防疾病或症狀在可能易患該疾病或症狀但尚未診斷為患有該疾病或症狀之個體中發生；(b)抑制該疾病或症狀，例如阻止其發展；或(c)減輕該疾病，例如使該疾病消退。可在疾病發作之前、期間或之後投與治療劑。在一些實施例中，治療使一或多種症狀抑制至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施例中，治療使一或多種症狀減輕至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。
如本文所使用，「預防」係指在疾病之徵象在個體中可檢測到之前向該個體投與療法(例如投與抗Tau抗體或其抗原結合部分)。該個體(subject)可為處於發展成疾病或病症風險下之個體(individual)，例如具有已知與疾病或病症之發展或發作相關之一或多種風險因素之個體。在一些實施例中，預防使一或多種風險因素減少至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。舉例而言，在一些實施例中，如業內所已知，預防使具有遺傳風險因素之個體發展成tau蛋白病變之風險降低。例如，參見Avila, J.等人，Front. Aging Neurosci. 2015; 7:99。
術語「個體(individual及subject)」在本文中可互換使用且係指任何哺乳動物個體，例如人類。在一些情形中，期望診斷、治療或療法之個體係人類患者。
倘若提供值之範圍，則應理解本揭示內容涵蓋該範圍之上限與下限之間的每一中間值及該所述範圍內之任何其他所述值或中間值，除非上下文另外明確規定，否則精確至下限單位之十分之一。該等較小範圍之上限及下限可獨立地包括在較小範圍內且亦涵蓋在本揭示內容內，受所述範圍內任何明確排除限值約束。倘若所述範圍包括限值中之一者或二者，則本揭示內容中亦包括排除彼等所包括限值中之任一者或二者之範圍。
本文呈現數值前面有術語「約」之某些範圍。術語「約」在本文中用於提供對其所引領確切數字以及對接近或近似於該術語所引領數字之數字的字面支持。在確定數字是否接近或近似於明確列舉數字時，接近或近似之未列舉數字可為如下數字：在呈現該數字之上下文中，其提供明確列舉數字之實質等效形式。
應瞭解，為清晰起見而在單獨實施例之上下文中所闡述的本揭示內容之某些特徵亦可在單一實施例中組合提供。相反，為簡便起見而在單一實施例之上下文中所闡述的本揭示內容之各種特徵亦可單獨或以任何適宜子組合提供。與本揭示內容有關之實施例之所有組合均明確地囊括於本揭示內容內，且如同個別且明確地揭示每一及每個組合一般揭示於本文中。另外，各個實施例及其要素之所有子組合均亦明確地囊括於本揭示內容內，且如同在本文中個別且明確地揭示每一及每個此子組合一般揭示於本文中。抗 Tau 抗體
在一態樣中，本文提供結合至一或多種病理性Tau種類之抗體(例如經分離抗體)或抗原結合部分(例如抗原結合抗體片段) (此等病理性Tau種類在本文中亦稱為「pTau」，且此一抗體在本文中亦稱為「抗pTau抗體」)。在一些實施例中，該抗pTau抗體或抗原結合部分能夠區分一或多種病理性Tau種類與一或多種正常Tau種類。在一些實施例中，與來自相應健康腦樣品之Tau種類相比，該抗pTau抗體或抗原結合部分優先結合至來自tau蛋白病變腦樣品(例如來自阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)或匹克氏病(PiD)腦之樣品)之Tau種類。在一些實施例中，與參考抗Tau抗體(例如HT7、C2N-8E12或BIIB092)相比，該抗pTau抗體或抗原結合部分結合來自tau蛋白病變腦樣品之多個病理性Tau種類。在一些實施例中，與參考抗Tau抗體相比，該抗pTau抗體或抗原結合部分結合較少的來自健康腦樣品之正常Tau種類。在一些實施例中，參考抗Tau抗體係HT7、C2N-8E12 (參見WO2015/200806)或BIIB092 (參見美國專利第9,567,395號)。在一些實施例中，tau蛋白病變腦樣品係AD、PSP、CBD或PiD腦樣品。在一些實施例中，腦樣品係全腦溶解物或額葉皮質溶解物，包括其突觸部分及/或十二醯基肌胺酸鈉不溶性部分。在一些實施例中，腦樣品係腦溶解物之十二醯基肌胺酸鈉不溶性突觸部分。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，抗pTau抗體或抗原結合部分結合來自Tau轉基因小鼠rTg4510腦溶解物之高度磷酸化的64 kD Tau種類。在一些實施例中，抗pTau抗體或抗原結合部分不會結合至來自rTg4510腦溶解物之140 kD Tau種類。在一些實施例中，抗pTau抗體或抗原結合部分不會結合至來自rTg4510腦溶解物之170 kB Tau種類。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，抗pTau抗體或抗原結合部分結合來自人類AD腦樣品之高度磷酸化且十二醯基肌胺酸鈉不溶性之64 kD Tau種類。在一些實施例中，抗pTau抗體或抗原結合部分結合至來自人類AD腦樣品之58 kD Tau種類。在一些實施例中，抗pTau抗體或抗原結合部分結合至來自人類AD腦樣品之68 kD Tau種類。在一些實施例中，抗pTau抗體或抗原結合部分不會結合至來自人類AD腦樣品之140 kD Tau種類。在一些實施例中，抗pTau抗體或抗原結合部分不會結合至來自人類AD腦樣品之170 kD Tau種類。在一些實施例中，腦樣品係腦溶解物，例如自全腦、額葉皮質、中腦、丘腦、硬膜或額上回組織製備之溶解物。在一些實施例中，腦樣品係諸如自全腦、額葉皮質、中腦、丘腦、硬膜或額上回組織製備之溶解物等腦溶解物之十二醯基肌胺酸鈉不溶性部分。 例示性抗 pTau 抗體
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含：a)重鏈可變區，其包含含有SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體的互補決定區(CDR) 3；及/或b)輕鏈可變區，其包含含有SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變區包含含有SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列相比具有不超過3個失配之變體的CDR3；及/或輕鏈可變區包含含有SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列相比具有不超過3個失配之變體的CDR3。在一些實施例中，重鏈可變區包含含有SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列之CDR3；及/或輕鏈可變區包含含有SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列之CDR3。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 72之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 97之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 50及61之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 50及61之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 83及91之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 83及91之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 50及61之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 83及91之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 71之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 96之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 49及60之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 49及60之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 82及91之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 82及91之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 49及60之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 82及91之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 73之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 51及62之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 51及62之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 84及91之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 84及91之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 51及62之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 84及91之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 74之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 99之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 52及63之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 52及63之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 85及92之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 85及92之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 52及63之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 85及92之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 75之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 100之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 53及64之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 53及64之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 86及93之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 86及93之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 53及64之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 86及93之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 76之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 101之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 54及65之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 54及65之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 87及93之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 87及93之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 54及65之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 87及93之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 77之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 102之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 55及66之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 55及66之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 83及91之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 83及91之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 55及66之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 83及91之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 78之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 103之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 56及67之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 56及67之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 88及94之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 88及94之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 56及67之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 88及94之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 79之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 98之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 57及68之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 57及68之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 89及91之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 89及91之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 57及68之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 89及91之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 80之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 104之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 58及69之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 58及69之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 90及95之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 90及95之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 58及69之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 90及95之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR3之重鏈可變區及含有CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 81之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 105之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR3包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列且該輕鏈CDR3包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列。在一些實施例中，該重鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2且該輕鏈可變區進一步包含CDR1及CDR2，其中該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 59及70之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 59及70之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 87及93之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 87及93之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 59及70之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1及CDR2分別包含SEQ ID NO: 87及93之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含：a)重鏈可變區，其包含i) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；ii) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或iii) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或b)輕鏈可變區，其包含iv) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；v) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或vi) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，a)該重鏈可變區包含i) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列相比具有不超過3個失配之變體；ii) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列相比具有不超過3個失配之變體；及/或iii) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列相比具有不超過3個失配之變體；及/或b)該輕鏈可變區包含iv) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列相比具有不超過3個失配之變體；v) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列相比具有不超過3個失配之變體；及/或vi) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列相比具有不超過3個失配之變體。在一些實施例中，a)該重鏈可變區包含i) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列；ii) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列；及/或iii) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列；及/或b)該輕鏈可變區包含iv) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列；v) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列；及/或vi) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，該等重鏈及/或輕鏈CDR序列係如針對表1及2中所示之給定抗體純系所指示。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。
在一些實施例中，根據上述抗Tau抗體或抗原結合部分中之任一者，重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 50、61及72之胺基酸序列；且輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及97之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 49、60及71之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 49、60及71之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 82、91及96之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 82、91及96之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 49、60及71之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 82、91及96之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 51、62及73之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 51、62及73之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 84、91及98之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 84、91及98之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 51、62及73之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 84、91及98之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 52、63及74之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 52、63及74之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 85、92及99之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 85、92及99之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 52、63及74之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 85、92及99之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 53、64及75之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 53、64及75之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 86、93及100之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 86、93及100之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 53、64及75之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 86、93及100之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 54、65及76之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 54、65及76之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 87、93及101之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 87、93及101之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 54、65及76之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 87、93及101之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 55、66及77之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 55、66及77之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及102之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 83、91及102之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 55、66及77之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 83、91及102之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 56、67及78之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 56、67及78之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 88、94及103之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 88、94及103之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 56、67及78之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 88、94及103之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 57、68及79之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 57、68及79之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 89、91及98之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 89、91及98之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 57、68及79之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 89、91及98之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 58、69及80之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 58、69及80之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 90、95及104之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 90、95及104之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 58、69及80之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 90、95及104之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含含有CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 59、70及81之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 59、70及81之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 87、93及105之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 87、93及105之胺基酸序列分別具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 59、70及81之胺基酸序列；且該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含SEQ ID NO: 87、93及105之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1-12中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 1-12中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13-24中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 13-24中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，在可變區包含本文所揭示參考胺基酸序列之變體之情形下，該可變區中之每一CDR與該參考胺基酸序列中之相應CDR具有至少80%序列一致性。在一些實施例中，可變區中之每一CDR與參考胺基酸序列中之相應CDR具有100%序列一致性。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1-12中之任一者之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13-24中之任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，該等重鏈及輕鏈可變區係如針對表3中所示之給定抗體純系所指示。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 1之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 13之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 2之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 14之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 3之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 17之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 6之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 18之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 19之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 20之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 9之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 21之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 10之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 22之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 11之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 23之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 12之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 24之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 107之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含根據mAb004、mAb005、mAb008、mAb010、mAb011、mAb013、mAb020、mAb025、mAb032、mAb035或mAb037之以下重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列：
抗體純系 重鏈 CDR1 重鏈 CDR2 重鏈 CDR3
mAb004 SYGMS (SEQ ID NO: 49) TISSSGSYTYYPDSVKG (SEQ ID NO: 60) TYYGAMDY (SEQ ID NO: 71)
mAb005 DYGMH (SEQ ID NO: 50) YSNSDSTTIYYADTVKG (SEQ ID NO: 61) SYYSNYVDY (SEQ ID NO: 72)
mAb008 RYWMS (SEQ ID NO: 51) EINPDGNAINYAPSLKD (SEQ ID NO: 62) PFPSV (SEQ ID NO: 73)
mAb010 GYGVN (SEQ ID NO: 52) MIWGDGSTDYNSALKS (SEQ ID NO: 63) WAFAY (SEQ ID NO: 74)
mAb011 SYWMH (SEQ ID NO: 53) MIDPSDSETRLNQKFKD (SEQ ID NO: 64) PYGDLDY (SEQ ID NO: 75)
mAb013 DFYMK (SEQ ID NO: 54) DIDPNNGDTFYNQKFKG (SEQ ID NO: 65) DLY (SEQ ID NO: 76)
mAb020 SYAVH (SEQ ID NO: 55) VMWSGGSTDYNAAFIS (SEQ ID NO: 66) MGDYDGVAWFAY (SEQ ID NO: 77)
mAb025 THGMS (SEQ ID NO: 56) TYSGVPTYTDDFKG (SEQ ID NO: 67) SELSWFAY (SEQ ID NO: 78)
mAb032 SYWMN (SEQ ID NO: 57) QIYPGDGDTDYNGKFKG (SEQ ID NO: 68) RSPY (SEQ ID NO: 79)
mAb033 TFGMGVG (SEQ ID NO: 58) HIWWDDDKYYNPALKS (SEQ ID NO: 69) RGSNALDY (SEQ ID NO: 80)
mAb037 DYNMD (SEQ ID NO: 59) DINPNTGGTIYNQKFKG (SEQ ID NO: 70) EGPYYYGTTHPFAY (SEQ ID NO: 81)
抗體純系 輕鏈 CDR1 輕鏈 CDR2 輕鏈 CDR3
mAb004 RSSQTIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 82) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) FQGSLVPWT (SEQ ID NO: 96)
mAb005 RSSQSLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 83) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) FQSTHVPPT (SEQ ID NO: 97)
mAb008 RSSQSLVRSNGNTYLE (SEQ ID NO: 84) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) FQGSHVPYT (SEQ ID NO: 98)
mAb010 KSSQSLLDSGGKTYLN (SEQ ID NO: 85) QVSKLDSGVPD (SEQ ID NO: 92) WQGTHFPLT (SEQ ID NO: 99)
mAb011 KSSQSLLDSDGKTYLN (SEQ ID NO: 86) LVSKLDS (SEQ ID NO: 93) WQGTHFPFT (SEQ ID NO: 100)
mAb013 KSSQSLLYSNGKTYLN (SEQ ID NO: 87) LVSKLDS (SEQ ID NO: 93) VQGTHFPHT (SEQ ID NO: 101)
mAb020 RSSQSLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 83) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) SQSTHVPPWT (SEQ ID NO: 102)
mAb025 RASQSISDYLH (SEQ ID NO: 88) YASQSIS (SEQ ID NO: 94) QNGHSFPYT (SEQ ID NO: 103)
mAb032 RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 89) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) FQGSHVPYT (SEQ ID NO: 98)
mAb033 RSSQSLANSYGNTYLS (SEQ ID NO: 90) GISNRFS (SEQ ID NO: 95) LQGTHQPWT (SEQ ID NO: 104)
mAb037 KSSQSLLYSNGKTYLN (SEQ ID NO: 87) LVSKLDS (SEQ ID NO: 93) VQGTHFPQT (SEQ ID NO: 105)
在一些實施例中，本文提供抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其包含根據mAb004、mAb005、人類化mAb005、mAb008、mAb010、mAb011、mAb013、mAb020、mAb025、mAb032、mAb035、mAb037或人類化mAb037之以下重鏈可變(VH )序列及輕鏈可變(VL )序列：
抗體純系 ( 可變區 ) 序列
mAb004 (VH ) EVQLVESGGDLVESGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSSGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLNSEDTAMYYCADTYYGAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1)
mAb004 (VL ) DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSLVPWTFGGGTQLEIR (SEQ ID NO: 13)
mAb005 (VH ) EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYSNSDSTTIYYADTVKGRFTISRDNAKSTLFLQMTSLRSEDTAMYYCGRSYYSNYVDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 2)
mAb005 (VL ) DIVMTQIPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCFQSTHVPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 14)
人類化mAb005，(VH ) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYSNSDSTTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRSYYSNYVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 3)
人類化mAb005，(VL ) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQSTHVPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 15)
mAb008 (VH ) EVKLLQSGGGLVQPGGSLKVSCAASGFDFSRYWMSWVRRAPGKGLEWIGEINPDGNAINYAPSLKDKFIVSRDNAKNTLYLQMSNVRSEDTALYYCARPFPSVWGTGTTVTVSS (SEQ ID NO: 4)
mAb008 (VL ) DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVRSNGNTYLEWYLQNPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 16)
mAb010 (VH ) QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYGVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTARYYCANWAFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 5)
mAb010 (VL ) DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSGGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYQVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPLTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 17)
mAb011 (VH ) QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKASGYSFTSYWMHWLKQRPGQGLEWIGMIDPSDSETRLNQKFKDKATLTVDKSSSTVYMHLSSPTSEDSAVYYCVRPYGDLDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 6)
mAb011 (VL ) DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 18)
mAb013 (VH ) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDFYMKWVKQSHGKSFEWIGDIDPNNGDTFYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARDLYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 7)
mAb013 (VL ) DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCVQGTHFPHTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 19)
mAb020 (VH ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYAVHWVRQSPGKGLEWLGVMWSGGSTDYNAAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYCARMGDYDGVAWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 8)
mAb020 (VL ) DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 20)
mAb025 (VH ) QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTTHGMSWVKQAPGKGLKWMGWINTYSGVPTYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARSELSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 9)
mAb025 (VL ) DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 21)
mAb032 (VH ) QVQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGKGLEWIGQIYPGDGDTDYNGKFKGKATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCASRSPYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 10)
mAb032 (VL ) DILMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 22)
mAb033 (VH ) QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTFGMGVGWFRQPSGKGLEWLAHIWWDDDKYYNPALKSRLTISKDTSKNQVFLKIANVDTADTATYYCARRGSNALDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 11)
mAb033 (VL ) DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLANSYGNTYLSWYLHKPGQSPQLLIYGISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 23)
mAb037 (VH ) EVQLQQSGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCAGEGPYYYGTTHPFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 12)
mAb037 (VL ) DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCVQGTHFPQTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 24)
人類化mAb037 (VH ) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNMDWVRQAHGQGLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAGEGPYYYGTTHPFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 106)
人類化mAb037 (VL ) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPQTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 107)
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分係單株抗體。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分係人類、人類化或嵌合抗體。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分係抗體片段，例如na Fv、Fab、Fab'、scFv、雙價抗體或F(ab')2片段。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分係全長抗體。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分結合至一或多種病理性人類Tau種類。在一些實施例中，病理性人類Tau種類係來自選自由以下組成之群之tau蛋白病變：阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。在一些實施例中，病理性人類Tau種類係來自選自由以下組成之群之tau蛋白病變腦：阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。
在一些實施例中，病理性人類Tau種類係以下中之一或多者：1A、IB、11 A及MB型Tau；錯序Tau；錯誤無序Tau；十二醯基肌胺酸鈉不溶性Tau；細胞外Tau沈積物；Tau聚集體；成對螺旋絲；神經原纖維病理學形式；及截短Tau或全長Tau之高度磷酸化形式。在一些實施例中，病理性人類Tau係高度磷酸化且十二醯基肌胺酸鈉不溶性Tau。在一些實施例中，Tau蛋白聚集體及/或異常磷酸化Tau。在一些實施例中，Tau聚集體及/或異常磷酸化Tau在腦之突觸處累積。在一些實施例中，Tau聚集體及/或異常磷酸化Tau在tau蛋白病變腦之突觸處累積。在一些實施例中，該抗體或抗原結合部分能夠區分一或多種病理性Tau種類與一或多種正常Tau種類。在一些實施例中，與來自相應健康腦樣品之Tau種類相比，該抗體或抗原結合部分優先結合至來自tau蛋白病變腦樣品(例如來自阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)或匹克氏病(PiD)腦之樣品)之Tau種類。在一些實施例中，與參考抗Tau抗體(例如HT7、C2N-8E12或BIIB092)相比，該抗體或抗原結合部分結合較多的來自tau蛋白病變腦樣品之病理性Tau種類。在一些實施例中，與參考抗Tau抗體相比，該抗體或抗原結合部分結合較少的來自健康腦樣品之正常Tau種類。在一些實施例中，參考抗Tau抗體係HT7、C2N-8E12或BIIB092。在一些實施例中，tau蛋白病變腦樣品係AD、PSP、CBD或PiD腦樣品。在一些實施例中，腦樣品係全腦溶解物或額葉皮質溶解物，包括其突觸部分及/或十二醯基肌胺酸鈉不溶性部分。在一些實施例中，腦樣品係腦溶解物之十二醯基肌胺酸鈉不溶性突觸部分。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分係IgG1或IgG4抗體。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分能夠抑制Tau播散。在一些實施例中，在投與本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分後，抑制較投與參考抗體或抗原結合部分後高至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，如藉由業內已知之任一分析所量測。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分能夠抑制Tau傳播。在一些實施例中，在投與本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分後，抑制較投與參考抗體或抗原結合部分後高至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，如藉由業內已知之任一分析所量測。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一抗pTau抗體或抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分能夠結合一定分子量之Tau種類。在一些實施例中，本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分能夠結合至約64 kD、約140 kD及/或約170 kD之Tau種類。 抗體親和力
在某些實施例中，本文所提供之抗pTau抗體之解離常數(KD) ≤ 1 μΜ、＜ 100 nM、＜ 10 nM、＜ 1 nM、＜ 0.1 nM、＜ 0.01 nM或＜ 0.001 nM。KD可使用業內已知之任何技術來量測。 人類化抗體
非人類抗體可經人類化以降低對人類之免疫原性，同時保持親代非人類抗體之特異性及親和力。通常，人類化抗體包含一或多個可變結構域，其中HVR (例如CDR) (或其部分)係源自非人類抗體，且FR (或其部分)係源自人類抗體序列。人類化抗體視情況亦將包含人類恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如HVR殘基所源自之抗體)之相應殘基取代以(例如)恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及其製備方法綜述於(例如) Almagro及Fransson，Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)中，且進一步闡述於(例如)以下文獻中：Riechmann等人，Nature 332:323-329 (1988)；Queen等人，Proc.Nat 'lAcad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人，Methods 36:25-34 (2005) (闡述特異性決定區(SDR)接枝)；Padlan，Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (闡述「表面重塑」)；Dall'Acqua等人，Methods 36:43-60 (2005) (闡述「FR改組」)；及Osbourn等人，Methods 36:61-68 (2005)及Klimka等人，Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (闡述FR改組之「引導選擇」方法)。
可用於人類化之人類框架區包括(但不限於)：使用「最佳擬合」方法選擇之框架區(例如，參見Sims等人，J. Immunol. 151:2296 (1993))；源自輕鏈或重鏈可變區之特定亞組之人類抗體之共有序列的框架區(例如，參見Carter等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及Presta等人，J. Immunol, 151:2623 (1993))；人類成熟(體細胞突變)框架區或人類種系框架區(例如，參見Almagro及Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008))；及源自篩選FR文庫之框架區(例如，參見Baca等人，J. Biol. Chem. 272: 10678-10684 (1997)及Rosok等人，J. Biol. Chem. 271: 22611-22618 (1996))。
在一些實施例中，本文提供人類化抗pTau抗體(例如經分離之抗pTau抗體)或其抗原結合部分，其係人類化mAb004、mAb005、mAb008、mAb010、mAb011、mAb013、mAb020、mAb025、mAb032、mAb035或mAb037。在一些實施例中，人類化抗pTau抗體係人類化mAb005。在一些實施例中，人類化抗pTau抗體係人類化mAb037。
在一些實施例中，根據以下人類化mAb005或人類化mAb037，人類化抗pTau抗體具有以下重鏈可變(VH )序列及輕鏈可變(VL )序列：
抗體純系 ( 可變區 ) 序列
人類化mAb005，(VH ) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYSNSDSTTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRSYYSNYVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 3)
人類化mAb005，(VL ) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQSTHVPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 15)
人類化mAb037 (VH ) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNMDWVRQAHGQGLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAGEGPYYYGTTHPFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 106)
人類化mAb037 (VL ) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPQTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 107)
文庫源性抗體
可藉由自組合文庫篩選具有一或多種期望活性之抗體來分離本發明抗體。舉例而言，業內已知用於生成噬菌體展示文庫及自此等文庫篩選具有期望結合特性之抗體的眾多種方法。此等方法綜述於(例如) Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien等人編輯，Human Press, Totowa, NJ, 2001)，且進一步闡述於(例如)以下文獻中：McCafferty等人，Nature 348:552-554；Clackson等人，Nature 352: 624-628 (1991)；Marks等人，J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)；Marks及Bradbury，Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo編輯，Human Press, Totowa, NJ, 2003)；Sidhu等人，J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)；Lee等人，J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)；Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (34): 12467-12472 (2004)；及Lee等人，J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)。
在某些噬菌體展示方法中，藉由聚合酶鏈式反應(PCR)單獨選殖VH及VL基因譜且將其在噬菌體文庫中隨機重組，然後可在其中篩選抗原結合噬菌體，如Winter等人，Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)中所闡述。噬菌體通常展示作為單鏈Fv (scFv)片段或作為Fab片段之抗體片段。來自免疫化源之文庫向免疫原提供高親和力抗體而無需構築雜交瘤。或者，可對天然譜進行選殖(例如自人類)以不經任何免疫即提供針對眾多種非自體抗原亦及自體抗原之抗體的單一來源，如Griffiths等人，EMBO J, 12: 725-734 (1993)中所闡述。最後，亦可藉由以下方式合成製備天然庫：自幹細胞選殖未重排V-基因區段，且使用含有隨機序列之PCR引子編碼高可變CDR3區並完成活體外重排，如Hoogenboom及Winter, J. Mol. Biol , 227: 381-388 (1992)中所闡述。闡述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括(例如)：美國專利第5,750,373號及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
本文中將自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段視為人類抗體或人類抗體片段。 多特異性抗體
在某些實施例中，本文所提供之抗體係多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體係對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，結合特異性中之一者係關於Tau且另一者係關於任一其他抗原。在某些實施例中，結合特異性中之一者係關於Tau且另一者係關於類澱粉β。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合至Tau之兩個不同表位。雙特異性抗體亦可用於將細胞毒性劑局域化至表現Tau之細胞。雙特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段。
製備多特異性抗體之技術包括(但不限於)重組共表現兩個具有不同特異性之免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(參見Milstein及Cuello，Nature 305: 537 (1983))、WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J. 10: 3655 (1991))及「隆凸於孔洞中(knob-in-hole)」工程改造(例如，參見美國專利第5,731,168號)。亦可藉由以下方式來製備多特異性抗體：工程改造用於製備抗體Fc-異源二聚分子之靜電牽引效應(WO 2009/089004A1)；使兩個或更多個抗體或片段交聯(例如，參見美國專利第4,676,980號及Brennan等人，Science 229: 81 (1985))；使用白胺酸拉鍊產生雙特異性抗體(例如，參見Kostelny等人，J. Immunol, 148(5): 1547-1553 (1992))；使用用於製備雙特異性抗體片段之「雙價抗體」技術(例如，參見Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993))；及使用單鏈Fv (scFv)二聚體(例如，參見Gruber等人，J. Immunol, 152:5368 (1994))；及製備三特異性抗體(例如，如Tutt等人，J. Immunol. 147: 60 (1991)中所闡述)。 抗體變體
在某些實施例中，審慎考慮本文所提供抗體之胺基酸序列變體。舉例而言，可能期望改良抗體之結合親和力及/或其他生物學性質。抗體之胺基酸序列變體可藉由向編碼該抗體之核苷酸序列中引入適當修飾或藉由肽合成來製備。此等修飾包括(例如)抗體胺基酸序列內殘基之缺失及/或插入及/或取代。可實施缺失、插入及取代之任一組合以獲得最終構築體，前提為最終構築體具有期望特性，例如抗原結合特性。
在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代(例如保守取代)之抗體變體。用於取代突變誘發之所關注位點包括HVR及FR。可將胺基酸取代引入至所關注抗體及經篩選具有期望活性之產物中，該期望活性係(例如)保留/改良之抗原結合、降低之免疫原性或經改良之ADCC或CDC。
一種取代變體類型涉及取代親代抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個超變區殘基。通常，選擇用於進一步研究之所得變體相對於親代抗體在某些生物學性質(例如，增加之親和力、降低之免疫原性)方面將具有改質(例如，改良)及/或將實質上保留親代抗體之某些生物學性質。例示性取代變體係親和力成熟抗體，其可便捷地(例如)使用基於噬菌體展示之親和力成熟技術(例如本文所闡述之彼等技術)生成。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且將變體抗體展示於噬菌體上並篩選特定生物學活性(例如結合親和力)。
可在HVR中進行改變(例如，取代)以(例如)改良抗體親和力。此等改變可在HVR「熱點」(即，由在體細胞成熟過程期間經歷高頻率突變之密碼子編碼的殘基) (例如，參見Chowdhury，Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008))及/或接觸抗原之殘基中進行，其中測試所得變體VH或VL之結合親和力。藉由自二級文庫構築並再選擇之親和力成熟已闡述於(例如) Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien等人編輯，Human Press, Totowa, NJ, (2001))中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由多種方法中之任一者(例如，易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸定向誘變)將多樣性引入至所選用於成熟之可變基因中。然後創建二級文庫。然後篩選該文庫以鑑別具有期望親和力之任一抗體變體。另一引入多樣性之方法涉及HVR定向之方法，其中將若干個HVR殘基(例如，一次4至6個殘基)隨機化。參與抗原結合之HVR殘基可特異性地鑑別，例如使用丙胺酸掃描誘變或建模。特定而言，通常靶向CDR-H3及CDR-L3。
在某些實施例中，取代、插入或缺失可發生於一或多個HVR內，只要此等改變不會實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可在HVR中進行不會實質上降低結合親和力之保守改變(例如，如本文所提供之保守取代)。此等改變可(例如)在HVR中之抗原接觸殘基外部。在上文所提供之變體VH及VL序列之某些實施例中，每一HVR未經改變，或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
用於鑑別抗體之可經靶向用於誘變之殘基或區域的有用方法稱為「丙胺酸掃描誘變」，如Cunningham及Wells (1989) Science, 244: 1081-1085所闡述。在此方法中，鑑別殘基或目標殘基之群(例如，諸如arg、asp、his、lys及glu等帶電殘基)，並使其經中性或帶負電荷之胺基酸(例如，丙胺酸或聚丙胺酸)替代以確定是否影響抗體與抗原之相互作用。可在對初始取代展示功能敏感性之胺基酸位置處引入其他取代。或者或另外，抗原-抗體複合物之晶體結構以鑑別抗體與抗原間之接觸點。可靶向此等接觸殘基及相鄰殘基作為取代候選物或將其消除。可篩選變體以確定其是否含有期望性質。
胺基酸序列插入包括胺基及/或羧基末端融合物(長度在一個殘基至含有上百或更多個殘基之多肽範圍內)、以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N末端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變體包括抗體N端或C端與酶(例如用於ADEPT)或延長抗體血清半衰期之多肽之融合物。
在某些實施例中，改變本文所提供之抗體以增加或降低抗體經醣基化之程度。抗體醣基化位點之添加或缺失可便捷地藉由改變胺基酸序列使得產生或去除一或多個醣基化位點來實現。
當抗體包含Fc區時，其所連接之碳水化合物可能有所變化。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含具支鏈、二分枝寡醣，其通常藉由N鍵聯連接至Fc區之CH2結構域的Asn297。例如，參見Wright等人，TIBTECH 15:26-32 (1997)。該寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸以及連接至二分枝寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻醣。在一些實施例中，可對本發明抗體中之寡醣進行修飾以產生具有某些改良性質之抗體變體。
在一些實施例中，提供具有缺少連接(直接或間接)至Fc區的岩藻醣之碳水化合物結構之抗體變體。舉例而言，此抗體中岩藻醣之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。岩藻醣之量係藉由計算糖鏈內Asn297處之岩藻醣相對於連接至Asn297之所有糖結構(例如複合、雜合及高甘露糖結構)之總和的平均量來測定，如藉由MALDI-TOF質譜法所量測，如(例如) WO 2008/077546中所闡述。Asn297係指位於Fc區中約297位(Fc區殘基之Eu編號)之天冬醯胺殘基；然而，由於抗體中之微小序列變化，Asn297亦可位於297位上游或下游之約± 3個胺基酸處，即介於294位與300位之間。此等岩藻醣基化變體可具有改良之ADCC功能。例如，參見美國專利公開案第U.S. 2003/0157108號(Presta, L.)；第U.S. 2004/0093621號(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)。與「去岩藻醣基化」或「岩藻醣缺乏」抗體變體相關之公開案之實例包括：U.S. 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；U.S. 2002/0164328；U.S. 2004/0093621；U.S. 2004/0132140；U.S. 2004/0110704；U.S. 2004/0110282；U.S. 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人，J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki等人，Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)。 能夠產生去岩藻醣基化抗體之細胞系之實例包括缺乏蛋白質岩藻醣基化之Led 3 CHO細胞(Ripka等人，Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；美國公開案第2003/0157108 Al號，Presta, L；及WO 2004/056312 A1，Adams等人，尤其在實例11中)及基因剔除細胞系，例如α-1,6-岩藻醣基轉移酶基因FUT8剔除CHO細胞(例如，參見Yamane-Ohnuki等人，Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；Kanda, Y.等人Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及WO 2003/085107)。
進一步提供二等分寡醣之抗體變體，例如，其中連接至抗體Fc區之二分枝寡醣由GlcNAc二等分。此等抗體變體可具有降低之岩藻醣基化及/或改良之ADCC功能。此等抗體變體之實例闡述於(例如) WO 2003/011878 (Jean-Mairet等人)；美國專利第6,602,684號(Umana等人)；及美國公開案第2005/0123546號(Umana等人)中。亦提供在連接至Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基之抗體變體。此等抗體變體可具有改良之CDC功能。此等抗體變體闡述於(例如) WO 1997/30087 (Patel等人)；WO 1998/58964 (Raju, S.)；及WO 1999/22764 (Raju, S.)中。
在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入至本文所提供抗體之Fc區中，藉此生成Fc區變體。Fc區變體可包含在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施例中，本發明審慎考慮具有一些(但非全部)效應功能之抗體變體，此使得其成為許多應用之合意候選物，在該等應用中抗體之活體內半衰期較為重要，但某些效應功能(例如補體及ADCC)係不必要或有害的。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析來證實CDC及/或ADCC活性之降低/耗竭。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺少FcγR結合能力(因此可能缺少ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FCR於造血細胞上之表現匯總於Ravetch及Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)之第464頁上之表3中。評價所關注分子之ADCC活性之活體外分析之非限制性實例闡述於美國專利第5,500,362號(例如，參見Hellstrom, I.等人，Proc. Nat 'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986))及Hellstrom, I等人，Proc. Nat 'l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502 (1985)；5,821,337 (參見Bruggemann, M.等人，J. Exp. Med. 166: 1351-1361 (1987))中。或者，可採用非放射性分析方法(例如，參見用於流式細胞術之ACTI™非放射性細胞毒性分析(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA)及CytoTox 96® 非放射性細胞毒性分析(Promega, Madison, WI))。可用於此等分析之效應細胞包括外周血單核細胞(PBMC)及天然殺手(NK)細胞。或者或另外，可在活體內、例如在諸如Clynes等人，Proc. Nat 'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)中所揭示之動物模型中評價所關注分子之ADCC活性。亦可實施C1q結合分析以證實抗體不能結合C1q且因此缺少CDC活性。例如，參見WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評價補體活化，可實施CDC分析(例如，參見Gazzano-Santoro等人，J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)；Cragg, M.S.等人，Blood 101: 1045-1052 (2003)；及Cragg, M.S.及M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004))。亦可使用業內已知之方法來實施FcRn結合及活體內清除率/半衰期測定(例如，參見Petkova, S.B.等人，Int'l. Immunol. 18(12): 1759-1769 (2006))。
具有降低的效應功能之抗體包括Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者經取代之彼等抗體(美國專利第6,737,056號)。此等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或更多者處具有取代之Fc突變體，包括在殘基265及297處經丙胺酸取代之所謂「DANA」 Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
闡述與FcR之結合經改良或減小之某些抗體變體。(例如，參見美國專利第6,737,056號、WO 2004/056312及Shields等人，J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001))。
在某些實施例中，抗體變體包含具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代之Fc區，例如在Fc區之位置298、333及/或334處之取代(殘基之EU編號)。
在一些實施例中，在Fc區中進行改變，該等改變產生經改變(即，改良或減小)之C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，例如，如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人，J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)中所闡述。
具有延長之半衰期及改良之與新生Fc受體(FcRn)之結合的抗體(其負責將母體IgG轉移至胎中) (Guyer等人，J. Immunol. 117:587 (1976)及Kim等人，J. Immunol. 24:249 (1994))闡述於美國公開案第2005/0014934 A1 (Hinton等人)中。彼等抗體包含具有一或多個改良Fc區與FcRn之結合的取代之Fc區。此等Fc變體包括在以下Fc區殘基中之一或多者處具有取代之彼等變體：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如，取代Fc區殘基434 (美國專利第7,371,826號)。
亦參見Duncan及Winter，Nature 322:738-40 (1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及關於Fc區變體之其他實例之WO 94/29351。
在某些實施例中，可能期望產生半胱胺酸工程改造抗體，例如「thioMAb」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代殘基係在抗體之可及位點處出現。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基團藉此位於抗體之可及位點處且可用於使抗體偶聯至其他部分(例如藥物部分或連接體-藥物部分)以產生免疫偶聯物，如本文進一步所闡述。在某些實施例中，以下殘基中之任一者或多者可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205 (Kabat編號)；重鏈之A118 (EU編號)；及重鏈Fc區之S400 (EU編號)。半胱胺酸工程改造抗體可如(例如)美國專利第7,521,541號中所闡述來生成。
在某些實施例中，本文所提供之抗體可經進一步修飾以含有業內已知且易於獲得之額外非蛋白質性部分。適於衍生抗體之部分包括(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三氧雜環己烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或隨機共聚物)及右旋糖酐或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。
聚乙二醇丙醛可因其在水中之穩定性而有利於製造。聚合物可具有任何分子量，且可為具支鏈或無支鏈。連接至抗體之聚合物的數量可有所變化，且若連接一個以上之聚合物，則其可為相同或不同分子。通常，用於衍生之聚合物之數量及/或類型可基於包括(但不限於)以下在內之考慮因素來確定：欲改良抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將用於界定條件下之療法等。
在另一實施例中，提供抗體與非蛋白質性部分之偶聯物，其可藉由暴露於輻射來選擇性加熱。在一些實施例中，非蛋白質性部分係碳奈米管(Kam等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005))。輻射可具有任何波長，且包括(但不限於)如下波長之輻射：其不會危害正常細胞，但將非蛋白質性部分加熱至可將鄰近抗體-非蛋白質性部分之細胞殺死之溫度。 分析
可藉由業內已知之各種分析鑑別本文所提供之抗pTau抗體及抗原結合部分、對其物理/化學性質及/或生物學活性進行篩選及/或表徵。
在一個態樣中，藉由(例如)已知方法(例如ELISA、西方墨點等)測試本發明之抗體或抗原結合部分之抗原結合活性。
在另一態樣中，可使用競爭分析來鑑別與本文所闡述之抗體或抗原結合部分競爭與Tau結合之抗體或抗原結合部分。定位抗體所結合表位之詳細例示性方法提供於Morris (1996) 「Epitope Mapping Protocols」，Methods in Molecular Biology，第66卷(Humana Press, Totowa, NJ)中。
在例示性競爭分析中，於溶液中培育固定化之Tau種類(例如病理性Tau種類)，該溶液包含結合至該Tau種類之第一經標記抗體(例如本文所闡述之任一抗體，例如mAb005及mAb037)及正在測試其與第一抗體競爭與該Tau種類結合之能力的第二未經標記之抗體。第二抗體可存在於雜交瘤上清液中。作為對照，於包含第一經標記抗體但不包含第二未經標記抗體之溶液中培育固定化之Tau種類。在允許第一抗體結合至Tau種類之條件下培育後，去除過量未結合之抗體，且量測與固定化Tau種類締合之標記之量。若與固定化Tau種類締合之標記之量相對於對照樣品在測試樣品中實質上減少，則此指示第二抗體與第一抗體競爭與Tau種類之結合。參見Harlow及Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)。
在一個態樣中，提供分析以供鑑別具有生物學活性之抗Tau抗體。生物學活性可包括(例如)使此等抗體與多種形式之Tau (例如單體Tau、寡聚Tau、非磷酸化Tau及磷酸化Tau)結合及降低Tau蛋白(例如腦(例如腦突觸、皮質及/或海馬體)中之總Tau、總可溶性Tau、可溶性非磷酸化Tau、可溶性磷酸化Tau、總不溶性Tau、不溶性非磷酸化Tau、不溶性磷酸化Tau、高度磷酸化Tau或含有高度磷酸化Tau之成對螺旋絲)之含量。
在某些實施例中，測試本發明抗體之此生物學活性。舉例而言，可使用tau蛋白病變之動物模型(例如Tau轉基因小鼠(例如P301L))來檢測抗Tau抗體與腦切片及(例如)與轉基因小鼠腦中之病理性Tau種類(例如神經原纖維纏結)之結合。此外，可利用抗Tau抗體治療tau蛋白病變之動物模型(例如Tau轉基因小鼠(例如P301L))，且可使用業內已知之實驗技術來評價此治療是否降低小鼠腦(例如腦皮質及/或海馬體)中之Tau蛋白(例如總Tau、總可溶性Tau、可溶性磷酸化Tau、可溶性非磷酸化Tau、總不溶性Tau、不溶性磷酸化Tau、不溶性非磷酸化Tau、高度磷酸化Tau或含有高度磷酸化Tau之成對螺旋絲)之含量。 免疫偶聯物
本發明亦提供免疫偶聯物，其包含與一或多種其他治療劑或放射性同位素偶聯之本文之抗Tau抗體。
在一些實施例中，免疫偶聯物包含偶聯至放射性原子以形成放射性偶聯物之如本文所闡述之抗體或抗原結合部分。眾多種放射性同位素可用於產生放射性偶聯物。實例包括At211 、I131 、I125 、Y90 、Re186 、Re188 、Sm153 、Bi212 、P32 、Pb212 及Lu之放射性同位素。當放射性偶聯物用於檢測時，其可包含用於閃爍法研究之放射性原子，例如tc99m或I123；或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，mri)之自旋標記，例如碘-123(再次)、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。
抗體或抗原結合部分之偶聯物可使用多種功能性蛋白質偶合劑製得，該等偶合劑係例如3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-琥珀醯亞胺酯(SPDP)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、亞胺酸酯之無功能衍生物(例如己二醯亞胺二甲酯HCl)、活性酯(例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)、醛(例如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(例如雙(對-疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙-重氮衍生物(例如雙-(對-重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(例如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta等人，Science 238: 1098 (1987)中所闡述來製備。經碳-14標記之1-異硫氰酸根合苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)係用於偶聯放射性核苷酸與抗體之例示性螯合劑。參見WO 94/11026。連接體可為促進細胞毒性藥物在細胞內釋放之「可裂解連接體」。舉例而言，可使用酸不穩定性連接體、肽酶敏感性連接體、光不穩定性連接體、二甲基連接體或含有二硫鍵之連接體(Chari等人，Cancer Res.52:127-131 (1992)；美國專利第5,208,020號)。
本文之免疫偶聯物明確地審慎考慮(但不限於)利用包括(但不限於)以下交聯劑試劑製備之此等偶聯物：BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC及磺基-SMPB以及SVSB ((4-乙烯基碸)苯甲酸琥珀醯亞胺酯)，以上試劑可商業購得(例如可購自Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A.)。核酸
在另一態樣中，本文提供編碼根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸。在一些實施例中，此核酸係載體(例如重組表現載體)。
在一些實施例中，本文提供編碼抗pTau抗體或其抗原結合部分之核酸，其中該抗pTau抗體或抗原結合部分包含a)重鏈可變區，其包含i) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；ii) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或iii) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或b)輕鏈可變區，其包含iv) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；v) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或vi) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該等重鏈及/或輕鏈CDR序列係如針對表1及2中所示之給定抗體純系所指示。
在一些實施例中，本文提供編碼抗pTau抗體或其抗原結合部分之核酸，該抗pTau抗體或其抗原結合部分包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，該等重鏈及輕鏈可變區係如針對表3中所示之給定抗體純系所指示。
在一些實施例中，本文提供編碼抗pTau抗體或其抗原結合部分之核酸，其中該核酸包含編碼重鏈可變區之第一編碼序列，其中該第一編碼序列包含SEQ ID NO: 25-36及108中之任一者之核苷酸序列或其與SEQ ID NO: 25-36及108中之任一者之核苷酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或編碼輕鏈可變區之第二編碼序列，其中該第二編碼序列包含SEQ ID NO: 37-48及109中之任一者之核苷酸序列或其與SEQ ID NO: 37-48及109中之任一者之核苷酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該第一編碼序列包含SEQ ID NO: 25-36及108中之任一者之核苷酸序列；及/或該第二編碼序列包含SEQ ID NO: 37-48及109中之任一者之核苷酸序列。
在一些實施例中，本文提供編碼抗pTau抗體或其抗原結合部分之核酸，其中該核酸包含編碼重鏈可變區之第一編碼序列及編碼輕鏈可變區之第二編碼序列，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區係mAb004、mAb005、人類化mAb005、mAb008、mAb010、mAb011、mAb013、mAb020、mAb025、mAb032、mAb033、mAb037或人類化mAb037中之任一者，其由以下核酸序列編碼：
25 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGGAGTCTGGAGGGTCCCTAAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTATGGCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTAGTAGTGGTAGTTACACCTACTATCCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAACTCTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGCTGATACTTACTACGGAGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA 小鼠mAb004重鏈DNA序列
26 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTGACTATGGAATGCACTGGGTTCGTCAGGCTCCAGAGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCATACAGCAATAGTGACAGTACTACCATCTACTATGCAGACACAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAGCACCCTGTTCCTGCAAATGACCAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTATTGTGGAAGGAGCTACTATAGTAACTACGTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA 小鼠mAb005重鏈DNA序列
27 GAGGTGCAGCTGGTTGAATCTGGCGGAGGACTGGTTCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGATTATGGCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTTGAGTGGGTCGCCTACAGCAACAGCGACAGCACCACCATCTACTACGCCGACACCGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGGCAGAAGCTACTACTCCAACTACGTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACAGTGTCTAGC 人類化mAb005重鏈DNA序列
28 GAGGTGAAGCTTCTCCAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAAGTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAGATACTGGATGAGTTGGGTTCGGCGGGCTCCAGGAAAAGGACTAGAGTGGATTGGAGAAATTAATCCAGATGGCAATGCAATAAACTATGCACCATCTCTAAAGGATAAATTCATCGTCTCCAGAGACAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAATGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTGCACGACCTTTCCCCAGCGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA 小鼠mAb008重鏈DNA序列
29 CAGGTGCAGCTGAAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCATCACATGCACCGTCTCAGGGTTCTCATTAACCGGCTATGGTGTAAACTGGGTTCGCCAGCCTCCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAATGATATGGGGTGATGGAAGCACAGACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGAGCATCAGCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAATAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCAGGTACTACTGTGCCAACTGGGCCTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb010重鏈DNA序列
30 CAGGTGCAACTGCAGCAGTCTGGGCCTCAGCTGGTTAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTACTCATTCACCAGCTACTGGATGCACTGGCTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGTCTTGAGTGGATTGGCATGATTGATCCTTCCGATAGTGAAACTAGGTTAAATCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGTACAGTCTACATGCACCTCAGCAGCCCGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGTAAGGCCGTATGGTGACCTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA 小鼠mAb011重鏈DNA序列
31 GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACTGACTTCTACATGAAGTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCTTTGAGTGGATTGGAGATATTGATCCTAACAATGGTGATACTTTCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAACAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGGGATCTCTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA 小鼠mAb013重鏈DNA序列
32 CAGGTGCAGCTGAAGCAGTCAGGACCTGGCCTAGTGCAGCCCTCACAGAGCCTGTCCATCACCTGCACAGTCTCTGGTTTCTCATTAACTAGTTATGCTGTACACTGGGTTCGCCAGTCTCCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTGATGTGGAGTGGTGGAAGCACAGACTATAATGCAGCTTTCATATCCAGACTGAGCATCAGCAAGGACAATTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTTAAAATGAACAGTCTGCAAGCTGATGACACAGCCATATATTACTGTGCCAGAATGGGTGATTACGACGGGGTGGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb020重鏈DNA序列
33 CAGATCCAGTTGGTACAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATACCTTTACAACCCATGGAATGAGCTGGGTGAAACAGGCTCCAGGAAAGGGTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACTCTGGAGTGCCAACATATACTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGATCAGAACTGTCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb025重鏈DNA序列
34 CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAAGCTTCTGGCTACGCATTCAGTAGCTACTGGATGAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGAAAGGGTCTTGAGTGGATTGGACAGATTTATCCTGGAGATGGTGATACTGATTACAACGGAAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACCTCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGCCGATCCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb032重鏈DNA序列
35 CAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTTTGGTATGGGTGTAGGCTGGTTTCGTCAGCCTTCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTGGTGGGATGATGATAAGTACTATAACCCAGCCCTGAAGAGTCGGCTCACAATCTCCAAGGATACCTCCAAAAACCAGGTTTTCCTCAAGATCGCCAATGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGTGCTCGAAGGGGTAGTAATGCTCTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA 小鼠mAb033重鏈DNA序列
36 GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATACCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACATGGACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTAATCCTAACACTGGTGGTACTATCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCAGCACAGCCTACATGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCAGTCTATTACTGTGCAGGAGAGGGCCCTTATTACTACGGTACTACCCACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb037重鏈DNA序列
108 CAAGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGGTGTCTTGTAAAGCCTCTGGCTACACCTTCACCGACTACAACATGGA CTGGGTGCGGCAGGCCCACGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCGACATCAACCCCAACACCGGCGGAACAATCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAGAGCCACCCTGACAGTGGACACCAGCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGACTGAGAAGCGACGACACAGCCGTGTACTACTGCGCCGGCGAGGGCCCTTACTACTACGGCACGACCCACCCCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTGACCGTGTCCAGC 人類化mAb037重鏈DNA序列
37 GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGACCATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACTTGTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCCAGCTGGAAATCAGG 小鼠mAb004輕鏈DNA序列
38 GATATTGTGATGACCCAAATTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGTACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTAATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTTCTGCTTTCAAAGTACACATGTTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA 小鼠mAb005輕鏈DNA序列
39 GACGTGGTCATGACACAGAGCCCTCTGAGCCTGCCTGTGACACTGGGACAGCCTGCCAGCATCAGCTGTAGAAGCAGCCAGAGCCTGGTGCACAGCAACGGCAATACCTACCTGCACTGGTATCTGCAGAGGCCCGGACAGTCTCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCAACCGGTTCAGCGGCGTGCCCGATAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTTCTGCTTCCAAAGCACCCACGTGCCACCTACCTTTGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAG 人類化mAb005輕鏈DNA序列
40 GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGTCTTGTACGTAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAACCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 小鼠mAb008輕鏈DNA序列
41 GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGTAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGGTGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCAGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA 小鼠mAb010輕鏈DNA序列
42 GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA 小鼠mAb011輕鏈DNA序列
43 GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCTATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTATATAGTAATGGAAAAACCTATTTGAATTGGTTATTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGAACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGGGTTTATTACTGCGTGCAAGGTACACATTTTCCTCACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 小鼠mAb013輕鏈DNA序列
44 GATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGTACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTTCTGCTCTCAAAGTACACATGTTCCTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA 小鼠mAb020輕鏈DNA序列
45 GACATTGTGATGACTCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGACTCCAGGAGATAGAGTCTCTCTTTCCTGCAGGGCCAGCCAGAGTATTAGCGACTACTTACACTGGTATCAACAAAAATCACATGAGTCTCCAAGGCTTCTCATCAAATATGCTTCCCAATCCATCTCTGGGATCCCCTCCAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGTCAGATTTCACTCTCAGTATCAACAGTGTGGAACCTGAAGATGTTGGAGTGTATTACTGTCAAAATGGTCACAGCTTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 小鼠mAb025輕鏈DNA序列
46 GATATTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 小鼠mAb032輕鏈DNA序列
47 GATGTTGTGGTGACTCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGCTTTGGAGATCAAGTTTCTATCTCTTGCAGGTCTAGTCAGAGTCTTGCAAACAGTTATGGGAACACCTATTTGTCTTGGTACCTGCACAAGCCTGGCCAGTCTCCACAGCTCCTCATCTATGGGATTTCCAACAGATTTTCTGGGGTGCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGTTCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCACAATAAAGCCTGAGGACTTGGGAATGTATTACTGCTTACAAGGTACACATCAGCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA 小鼠mAb033輕鏈DNA序列
48 GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCTATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTATATAGTAATGGAAAAACCTATTTGAATTGGTTATTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGAACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTACTGCGTGCAAGGTACACATTTTCCTCAGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA 小鼠mAb037輕鏈DNA序列
109 GATGTGGTGATGACCCAGTCTCCACTGAGCCTGCCTGTGACCCTGGGCCAACCTGCCAGCATCAGCTGTAAAAGCAGCCAGAGCCTGCTGTACAGCAACGGCAAGACCTACCTGAACTGGCTGCTGCAGAGACCTGGCCAGAGCCCTAGACGGCTGATCTACCTGGTGTCCAAGCTGGACAGCGGCGTCCCCGATAGATTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGTAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCGTGCAGGGCACACACTTCCCCCAGACCTTCGGCGGCGGAACAAAGCTGGAAATCAAG 人類化mAb037輕鏈DNA序列
在一些實施例中，根據編碼本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分之任一核酸，核酸係載體。在一些實施例中，載體係用於在宿主細胞中表現抗pTau抗體或抗原結合部分之表現載體。審慎考慮之表現載體包括(但不限於)基於牛痘病毒、脊髓灰白質炎病毒、腺病毒、AAV、SV40、單純疱疹病毒、人類免疫缺失病毒、反轉錄病毒(例如鼠類白血病病毒、脾壞死病毒及源自諸如勞斯肉瘤(Rous Sarcoma)病毒、哈維肉瘤(Harvey Sarcoma)病毒、禽白血病病毒、慢病毒、人類免疫缺失病毒、骨髓增生性肉瘤病毒及乳房腫瘤病毒等反轉錄病毒之載體)之病毒載體及其他重組載體。可使用其他載體，只要其與宿主細胞相容即可。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一實施例之載體包含一或多個轉錄及/或轉譯控制元件。取決於所用之宿主/載體系統，包括組成型及誘導型啟動子、轉錄增強子元件、轉錄終止子等在內之諸多適宜轉錄及轉譯控制元件中之任一者均可用於表現載體中。
在一些實施例中，根據本文所闡述之任一實施例之載體包含用於轉譯起始之核糖體結合位點及轉錄終止子。在一些實施例中，載體包含用於擴增表現之適當序列。在一些實施例中，載體包含編碼非天然標籤(例如組胺酸標籤、血球凝集素標籤、綠色螢光蛋白等)之核苷酸序列，該等核苷酸序列融合至編碼所關注多肽(例如抗原結合構築體)之核苷酸序列，藉此容許表現包含該等標籤之融合蛋白。
在一些實施例中，根據本文所闡述之包含啟動子之任一載體，該啟動子係誘導型啟動子(例如熱休克啟動子、四環素調控型啟動子、類固醇調控型啟動子、金屬調控型啟動子、雌激素受體調控型啟動子等)或組成型啟動子(例如CMV啟動子、UBC啟動子等)。在一些實施例中，啟動子係空間受限及/或時間受限之啟動子(例如組織特異性啟動子、細胞類型特異性啟動子等)。 密碼子最佳化
在一些實施例中，對編碼如本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸進行密碼子最佳化，例如基於欲在其中表現該抗pTau抗體或抗原結合部分之具體宿主細胞進行密碼子最佳化。熟習此項技術者應瞭解，可對本揭示內容之任一核苷酸序列進行密碼子最佳化以供在任一所關注物種中表現。密碼子最佳化為業內所熟知且涉及使用物種特異性密碼子使用錶針對密碼子使用偏好對核苷酸序列進行修飾。密碼子使用表可基於針對所關注物種之最高度表現基因之序列分析來生成。可藉由比較物種特異性密碼子使用表與天然多核苷酸序列中所存在之密碼子來確定核苷酸序列之修飾。
針對密碼子最佳化之策略及方法為業內所已知且可用於各種系統。在一些實施例中，對本文所闡述之核酸進行密碼子最佳化以增加在宿主細胞中之表現。
如業內所充分理解，核苷酸序列之密碼子最佳化產生與天然核苷酸序列具有小於100%一致性(例如小於70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%)之核苷酸序列，但其仍編碼與原始天然核苷酸序列所編碼之多肽具有相同功能之多肽。宿主細胞
在另一態樣中，本文提供包含或能夠表現根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分之宿主細胞。在一些實施例中，宿主細胞包含編碼如本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸(例如載體)，例如異源核酸。在一些實施例中，宿主細胞係真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如，Y0、NS0、Sp20細胞)。
用於選殖或表現編碼抗pTau抗體或抗原結合部分之載體的適宜宿主細胞包括原核及真核細胞。舉例而言，抗體或其抗原結合部分可在細菌中產生，特定而言在無需醣基化及Fc效應功能時。關於在細菌中表現抗體片段及多肽，參見(例如)美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號(亦參見Charlton, Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C. Lo編輯，Humana Press, Totowa, NJ, 2003)，第245-254頁，其闡述抗體片段在大腸桿菌(E. coli )中之表現)。表現後，可以可溶性部分自細菌細胞團分離抗體或抗原結合部分且可將其進一步純化。
除原核生物以外，真核微生物(例如絲狀真菌或酵母)亦係用於編碼抗體之載體之適宜選殖或表現宿主，包括醣基化路徑已「人類化」從而產生具有部分或完全人類醣基化模式之抗體的真菌及酵母菌株。參見Gemgross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004)，及Li等人，Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)。
用於表現醣基化抗體之適宜宿主細胞亦可源自多細胞性生物體。已鑑別出多種可與昆蟲細胞聯合使用之桿狀病毒株，特定而言用於轉染草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda )細胞。
亦可利用植物細胞培養物作為宿主。例如，參見美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(其闡述用於在轉基因植物中產生抗體之PLANTIBODIES™技術)。
亦可使用脊椎動物細胞作為宿主。舉例而言，可使用適於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞系。可用之哺乳動物宿主細胞系之實例包括經SV40轉化之猴腎CV1細胞系(COS-7)；人類胚胎腎細胞系(293或293細胞，如(例如) Graham等人，J. Gen Virol.36:59 (1977)中所闡述)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠支持細胞(TM4細胞，如(例如) Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)中所闡述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK；布法羅大鼠(buffalo rat)肝細胞(BRL 3 A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，如(例如) Mather等人，Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)中所闡述；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他可用之哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR” CHO細胞(Urlaub等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))；及骨髓瘤細胞系，例如Y0、NS0及Sp2/0。關於適用於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞系之綜述，參見(例如) Yazaki及Wu，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C. Lo編輯，Humana Press, Totowa, NJ)，第255-268頁(2003)。
在一些實施例中，本文提供包含編碼抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸之宿主細胞，其中該抗pTau抗體或抗原結合部分包含a)重鏈可變區，其包含i) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；ii) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或iii) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或b)輕鏈可變區，其包含iv) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；v) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或vi) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該等重鏈及/或輕鏈CDR序列係如針對表1及2中所示之給定抗體純系所指示。
在一些實施例中，本文提供包含編碼抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸之宿主細胞，其中該抗pTau抗體或抗原結合部分包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，該等重鏈及輕鏈可變區係如針對表3中所示之給定抗體純系所指示。
在一些實施例中，本文提供包含編碼抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸之宿主細胞，其中該核酸包含編碼重鏈可變區之第一編碼序列，其中該第一編碼序列包含SEQ ID NO: 25-36及108中之任一者之核苷酸序列或其與SEQ ID NO: 25-36及108中之任一者之核苷酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或編碼輕鏈可變區之第二編碼序列，其中該第二編碼序列包含SEQ ID NO: 37-48及109中之任一者之核苷酸序列或其與SEQ ID NO: 37-48及109中之任一者之核苷酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該第一編碼序列包含SEQ ID NO: 25-36及108中之任一者之核苷酸序列；及/或該第二編碼序列包含SEQ ID NO: 37-48及109中之任一者之核苷酸序列。
可使用充分開發之轉染技術(例如，參見Angel, M.等人(2010).PLoS ONE, 5 (7):e11756)及來自Qiagen之市售TransMessenger®試劑、來自Stemgent之Stemfect™ RNA轉染套組及來自Mims Bio之TransiT®-mRNA轉染套組將如本文所闡述之核酸及載體提供至細胞中。亦參見Beumer, K. J.等人(2008).Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105 (50):19821-19826。可獲得可用於將核酸轉移至宿主細胞中之許多載體，例如質體、黏粒、微環、噬菌體、病毒等。包含核酸之載體可以游離型維持，例如作為質體、微環DNA、病毒(例如巨細胞病毒、腺病毒等)，或其可經由同源重組或隨機整合而整合至宿主細胞基因體中，例如諸如MMLV、HIV-1、ALV等反轉錄病毒源性載體。
可將載體直接提供至細胞中。換言之，使細胞接觸載體，使得該等載體由細胞吸收。使細胞與為質體之核酸載體接觸之方法為業內所熟知，包括電穿孔、氯化鈣轉染、顯微注射及脂轉染。對於病毒載體遞送，使細胞與包含如本文所闡述之核酸之病毒顆粒接觸。反轉錄病毒(例如慢病毒)尤其適用於本揭示內容之方法。常用反轉錄病毒載體係「有缺陷的」，例如無法產生生產性感染所需之病毒蛋白質。相反，載體之複製需要在包裝細胞系中生長。為生成包含所關注核酸之病毒顆粒，藉由包裝細胞系將包含該核酸之反轉錄病毒核酸包裝至病毒衣殼中。不同的包裝細胞系提供不同的待併入至衣殼中之套膜蛋白(嗜親性、雙嗜性或嗜異性)，此套膜蛋白決定病毒顆粒對細胞之特異性(對於鼠類及大鼠為嗜親性；對於包括人類、狗及小鼠在內之大多數哺乳動物細胞類型為雙嗜性；且對於鼠類細胞除外之大多數哺乳動物細胞類型為嗜異性)。可使用適當包裝細胞系來確保細胞被經包裝之病毒顆粒靶向。將包含編碼重編程因子之核酸的反轉錄病毒載體引入至包裝細胞系中及收集由包裝細胞系所生成之病毒顆粒之方法為業內所熟知。亦可藉由直接微量注射引入核酸(例如將RNA注射至斑馬魚胚胎中)。
載體通常將包含用於驅動所關注核酸之表現(亦即轉錄活化)之適宜啟動子。換言之，將所關注核酸可操作地連接至啟動子。此啟動子可包括普遍存在之活性啟動子(例如CMV-13-肌動蛋白啟動子)或誘導型啟動子(例如在特定細胞群體中具有活性或對諸如四環素等藥物之存在有反應之啟動子)。藉由轉錄活化，意欲將宿主細胞中之轉錄增加至基礎含量以上至少約10倍(例如至少約100倍、1000倍或更多中之任一者)。另外，載體可包括編碼宿主細胞中之可選標記物之核酸序列。本揭示內容之方法 製備抗 pTau 抗體或抗原結合部分之方法
如本文所闡述之抗體及其抗原結合部分可使用重組方法及組合物來產生，例如如美國專利第4,816,567號中所闡述。在一些實施例中，該等方法採用編碼本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸。在一些實施例中，該核酸為一或多種載體(例如表現載體)。在一些實施例中，採用包含此核酸之宿主細胞。在一個此實施例中，宿主細胞包含如下載體(例如已經如下載體轉化)：(1)包含編碼構成抗pTau抗體或抗原結合部分之輕鏈可變區之胺基酸序列及構成抗pTau抗體或抗原結合部分之重鏈可變區之胺基酸序列之核酸的載體，或(2)第一載體，該第一載體包含編碼構成抗pTau抗體或抗原結合部分之輕鏈可變區之胺基酸序列之核酸；及第二載體，該第二載體包含編碼構成抗pTau抗體或抗原結合部分之重鏈可變區之胺基酸序列之核酸。在一些實施例中，宿主細胞係真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一些實施例中，提供製備抗pTau抗體或抗原結合部分之方法，其中該方法包含在適於表現該抗pTau抗體或抗原結合部分之條件下培養如本文所提供之包含編碼該抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸的宿主細胞，及視情況自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗pTau抗體或抗原結合部分。
對於抗pTau抗體或抗原結合部分之重組產生，分離(例如)如本文所闡述之編碼該抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸並將其插入至一或多個載體中以供在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。此核酸可使用習用程序容易地分離並測序(例如，藉由使用能夠與編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針)。
在另一態樣中，本文提供根據本文所闡述之任一方法製備之抗pTau抗體或抗原結合部分。 檢測病理性 Tau 之方法
在某些實施例中，本文所提供之任一抗pTau抗體均可用於檢測生物樣品中一或多種病理性Tau種類之存在。如本文所使用之術語「檢測」涵蓋定量或定性檢測。在某些實施例中，生物樣品包含細胞或組織，例如腦脊髓液、腦之細胞或組織(例如腦皮質或海馬體)或血液。在一些實施例中，生物樣品係腦脊髓液。
在一些實施例中，提供用於診斷或檢測方法中之抗pTau抗體。在另一態樣中，提供檢測生物樣品中一或多種病理性Tau種類之存在之方法。在某些實施例中，該方法包含使生物樣品與如本文所闡述之抗pTau抗體在允許該抗pTau抗體與該一或多種病理性Tau種類結合之條件下接觸及檢測在該抗pTau抗體與該一或多種病理性Tau種類之間是否形成複合物。此方法可為活體外或活體內方法。此外，可將測試生物樣品中在抗pTau抗體與一或多種病理性Tau種類之間形成的複合物與對照生物樣品(例如來自一或多個健康個體之生物樣品)中所形成的複合物進行比較。亦可對測試生物樣品中在抗pTau抗體與一或多種病理性Tau種類之間形成的複合物之量進行定量且將其與對照生物樣品(例如來自一或多個健康個體之生物樣品)中所形成的複合物之量或已知在健康個體中所形成的複合物之平均量進行比較。
在一些實施例中，使用抗pTau抗體來選擇適於利用抗pTau抗體之療法的個體，例如其中一或多種病理性Tau種類係用於選擇患者之生物標記物。舉例而言，在一些實施例中，使用抗pTau抗體來檢測個體是否患有Tau蛋白疾病或病症或個體是否處於Tau蛋白疾病或病症之高風險下(或易患該疾病或病症)。
在一些實施例中，該一或多種病理性Tau種類係選自1A、IB、11 A及MB型Tau；錯序Tau；錯誤無序Tau；十二醯基肌胺酸鈉不溶性Tau；細胞外Tau沈積物；Tau聚集體；成對螺旋絲；神經原纖維病理學形式；及截短Tau或全長Tau之高度磷酸化形式。在一些實施例中，該一或多種病理性Tau種類包括高度磷酸化且十二醯基肌胺酸鈉不溶性之Tau。
可使用本發明抗體診斷之例示性疾病或病症包括Tau蛋白相關之疾病或病症及由一或多種病理性Tau種類之形成所引起或與其相關之疾病或病症。在一些實施例中，可使用本發明抗體診斷之疾病或病症包括Tau蛋白相關之疾病或病症，其表現為包括推理、情境判斷、記憶能力、學習及/或特殊導航(special navigation)在內之認知功能受損或喪失。特定而言，可使用本發明抗體診斷之疾病或病症包括tau蛋白病變，例如神經退化性tau蛋白病變。可使用本發明抗體診斷之例示性疾病或病症包括(但不限於)阿茲海默氏病(AD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、亨庭頓氏病(HD)、帕金森氏病(PD)、庫-賈二氏病、拳擊手型失智症、唐氏症候群、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克病、英國型失智症、丹麥型失智症、包涵體肌炎、普裡昂蛋白腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷、關島帕金森症-失智症候群、非關島運動神經元疾病伴神經原纖維纏結、嗜銀顆粒失智症、皮質基底核退化症、瀰漫性神經原纖維纏結伴鈣化症、額顳葉失智症、額顳葉失智症伴與染色體17相關之帕金森症、哈勒沃登-施帕茨病、多系統萎縮、C型尼曼-匹克病、蒼白球-腦橋-黑質退化、匹克氏病、進行性皮質下神經膠質瘤病、進行性核上性麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、僅纏結型失智症、白質tau蛋白病變伴球狀神經膠質包涵體、額顳葉失智症、腦炎後帕金森症、與染色體17相關之帕金森症及肌強直性營養不良。在一些實施例中，可使用本發明抗體診斷之病症係阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)或匹克氏病(PiD)。
在某些實施例中，提供經標記之抗pTau抗體。標記包括(但不限於)直接檢測之標記或部分(例如螢光標記、發色團標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射性標記)以及經由(例如)酶反應或分子相互作用間接檢測之部分(例如酶或配體)。例示性標記包括(但不限於)放射性同位素2 P、14 C、125 I、H及m I、螢光團(例如稀土螯合物或螢光黃及其衍生物)、玫瑰紅及其衍生物、丹醯、繖形酮、螢光素酶(例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶)(美國專利第4,737,456號)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、辣根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶)、雜環氧化酶(例如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，其與諸如HRP、乳過氧化物酶或微過氧化物酶等採用過氧化氫來氧化染料前體之酶偶合)、生物素/抗生物素蛋白、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基及諸如此類。 治療 Tau 蛋白相關疾病之方法
在本揭示內容之一些態樣中，出於治療或預防個體之Tau蛋白相關疾病之目的採用根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分。在一些實施例中，該疾病係tau蛋白病變。在一些實施例中，tau蛋白病變係神經退化性tau蛋白病變。在一些實施例中，tau蛋白病變係選自由以下組成之群：阿茲海默氏病(AD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、亨庭頓氏病(HD)、帕金森氏病(PD)、庫-賈二氏病、拳擊手型失智症、唐氏症候群、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克病、英國型失智症、丹麥型失智症、包涵體肌炎、普裡昂蛋白腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷、關島帕金森症-失智症候群、非關島運動神經元疾病伴神經原纖維纏結、嗜銀顆粒失智症、皮質基底核退化症、瀰漫性神經原纖維纏結伴鈣化症、額顳葉失智症、額顳葉失智症伴與染色體17相關之帕金森症、哈勒沃登-施帕茨病、多系統萎縮、C型尼曼-匹克病、蒼白球-腦橋-黑質退化、匹克氏病、進行性皮質下神經膠質瘤病、進行性核上性麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、僅纏結型失智症、白質tau蛋白病變伴球狀神經膠質包涵體、額顳葉失智症、腦炎後帕金森症、與染色體17相關之帕金森症及肌強直性營養不良。可將抗pTau抗體或抗原結合部分併入至多種調配物中，包括包含抗pTau抗體或抗原結合部分、編碼抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸及/或能夠表現抗pTau抗體或抗原結合部分之宿主細胞之彼等調配物。更特定而言，可藉由使抗pTau抗體或抗原結合部分與適當醫藥上可接受之載劑或稀釋劑組合來將其調配成醫藥組合物。在一些實施例中，將抗pTau抗體或抗原結合部分投與給個體具有以下效應中之一或多者：保留或增加認知記憶能力、減緩記憶喪失、降低Tau蛋白之含量、抑制及/或逆轉Tau聚集之傳播以及抑制及/或逆轉Tau播散。在一些實施例中，將抗pTau抗體或抗原結合部分投與給個體具有以下效應中之一或多者：保留或增加認知記憶能力、減緩記憶喪失、降低Tau蛋白之含量、抑制Tau聚集之傳播及抑制Tau播散。在一些實施例中，投與後之效應變化較投與抗pTau抗體或抗原結合部分之前低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，如藉由業內已知之分析所量測。在一些實施例中，投與後之效應變化較投與抗pTau抗體或抗原結合部分之前高至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，如藉由業內已知之分析所量測。
在一些實施例中，本文提供治療或預防有需要之個體的tau蛋白病變之方法，該方法包含向該個體投與根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分。在一些實施例中，將抗pTau抗體或抗原結合部分投與給個體具有以下效應中之一或多者：保留或增加認知記憶能力、減緩記憶喪失、降低Tau蛋白之含量、抑制及/或逆轉Tau聚集之傳播以及抑制及/或逆轉Tau播散。在一些實施例中，將抗pTau抗體或抗原結合部分投與給個體具有以下效應中之一或多者：保留或增加認知記憶能力、減緩記憶喪失、降低Tau蛋白聚集體之含量、抑制Tau聚集之傳播及抑制Tau播散。在一些實施例中，投與後之效應變化較投與抗pTau抗體或抗原結合部分之前低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，如藉由業內已知之分析所量測。在一些實施例中，投與後之效應變化較投與抗pTau抗體或抗原結合部分之前高至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，如藉由業內已知之分析所量測。
在一些實施例中，本文提供保持或增加患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體的認知記憶能力或減緩記憶喪失之方法，該方法包含向該個體投與根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分。
在一些實施例中，本文提供降低患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau蛋白含量之方法，該方法包含向該個體投與根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分。在一些實施例中，本文提供降低患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體的Tau蛋白聚集體含量之方法，該方法包含向該個體投與根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分。在一些實施例中，非磷酸化Tau蛋白、磷酸化Tau蛋白及/或高度磷酸化Tau蛋白在個體中之含量與在投與抗體或抗原結合部分之前其在個體中之含量相比降低。在一些實施例中，Tau聚集體及/或異常磷酸化Tau蛋白在腦之突觸處累積。在一些實施例中，Tau聚集體及/或異常磷酸化Tau蛋白在tau蛋白病變腦之突觸處累積。在一些實施例中，病理性Tau種類在個體中之含量與在投與抗體或抗原結合部分之前其在個體中之含量相比降低。在一些實施例中，投與後之效應變化較投與抗pTau抗體或抗原結合部分之前低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，如藉由業內已知之分析所量測。
在一些實施例中，本文提供抑制及/或逆轉患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau聚集傳播之方法，該方法包含向該個體投與根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分。在一些實施例中，本文提供抑制患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau聚集傳播之方法，該方法包含向該個體投與根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分。在一些實施例中，投與後之效應變化較投與抗pTau抗體或抗原結合部分之前低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，如藉由業內已知之分析所量測。
在一些實施例中，本文提供抑制及/或逆轉患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau播散之方法，該方法包含向該個體投與根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分。在一些實施例中，本文提供抑制患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau播散之方法，該方法包含向該個體投與根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分。在一些實施例中，投與後之效應變化較投與抗pTau抗體或抗原結合部分之前低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，如藉由業內已知之分析所量測。
在一些實施例中，根據包含向個體投與抗pTau抗體或抗原結合部分之任一方法，Tau蛋白相關疾病係tau蛋白病變。在一些實施例中，tau蛋白病變係神經退化性tau蛋白病變。在一些實施例中，tau蛋白病變係選自由以下組成之群：阿茲海默氏病(AD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、亨庭頓氏病(HD)、帕金森氏病(PD)、庫-賈二氏病、拳擊手型失智症、唐氏症候群、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克病、英國型失智症、丹麥型失智症、包涵體肌炎、普裡昂蛋白腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷、關島帕金森症-失智症候群、非關島運動神經元疾病伴神經原纖維纏結、嗜銀顆粒失智症、皮質基底核退化症、瀰漫性神經原纖維纏結伴鈣化症、額顳葉失智症、額顳葉失智症伴與染色體17相關之帕金森症、哈勒沃登-施帕茨病、多系統萎縮、C型尼曼-匹克病、蒼白球-腦橋-黑質退化、匹克氏病、進行性皮質下神經膠質瘤病、進行性核上性麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、僅纏結型失智症、白質tau蛋白病變伴球狀神經膠質包涵體、額顳葉失智症、腦炎後帕金森症、與染色體17相關之帕金森症及肌強直性營養不良。
在一些實施例中，根據包含向個體投與抗pTau抗體或抗原結合部分之任一方法，將抗pTau抗體或抗原結合部分併入至包含抗pTau抗體或抗原結合部分、編碼抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸及/或能夠表現抗pTau抗體或抗原結合部分之宿主細胞之調配物中。在一些實施例中，藉由使抗pTau抗體或抗原結合部分與適當醫藥上可接受之載劑或稀釋劑組合來將其調配成醫藥組合物。
在一些實施例中，根據包含向個體投與抗pTau抗體或抗原結合部分之任一方法，該方法進一步包含向該個體投與至少一種額外治療劑，例如生物活性物質或化合物，包括(例如)用於tau蛋白病變及/或類澱粉變性之藥劑中之已知化合物，該等tau蛋白病變及/或類澱粉變性係一組與類澱粉或類澱粉樣蛋白質(例如與阿茲海默氏病相關之類澱粉β蛋白質)相關之疾病/病症。在一些實施例中，該至少一種額外治療劑係選自神經病學藥物、皮質類固醇、抗生素、抗病毒劑、抗pTau抗體、Tau抑制劑、抗類澱粉β抗體、β-類澱粉聚集抑制劑、抗BACE1抗體及BACE1抑制劑。在一些實施例中，該至少一種額外治療劑係選自神經元傳遞增強劑、精神治療藥物、乙醯膽鹼酯酶抑制劑、鈣通道阻斷劑、生物胺、苯并二氮呯鎮靜劑、乙醯膽鹼合成、儲存或釋放增強劑、乙醯膽鹼突觸後受體促效劑、單胺氧化酶-A或單胺氧化酶-B抑制劑、N-甲基-D-天冬胺酸麩胺酸受體拮抗劑、非類固醇消炎藥、抗氧化劑、血清素能受體拮抗劑或其他治療劑。特定而言，生物活性劑或化合物可包含至少一種選自以下之化合物：對抗氧化壓力之化合物；抗細胞凋亡化合物；金屬螯合劑；DNA修復抑制劑，例如哌侖西平(pirenzepine)及代謝物；3-胺基-1-丙磺酸(3 APS)；1,3-丙二磺酸鹽(1,3PDS)；分泌酶活化劑；β-及γ-分泌酶抑制劑；tau蛋白；抗Tau抗體(包括(但不限於) WO 2012049570、WO 2014028777、WO 2014165271、WO 2014100600、WO 2015200806、美國專利第8,980,270號及第8,980,271號中所揭示之抗體)；神經傳遞質；β-摺疊破壞劑；抗發炎性分子；「非典型抗精神病藥」，諸如例如氯氮平(clozapine)、齊拉西酮(ziprasidone)、利培酮(risperidone)、阿立哌唑(aripiprazole)或奧氮平(olanzapine)；或膽鹼酯酶抑制劑(ChEI)，例如塔克寧(tacrine)、利凡斯的明(rivastigmine)、多奈派齊(donepezil)及/或加蘭他敏(galantamine)；以及其他藥物及營養補充劑，諸如例如維生素B 12、半胱胺酸、乙醯膽鹼前體、卵磷脂、膽鹼、銀杏(Ginkgo biloba)、乙醯基-L-肉鹼、艾地苯醌(idebenone)、丙戊茶鹼(propentofylline)或黃嘌呤衍生物。
上述此等組合療法涵蓋組合投與(其中兩種或更多種治療劑包括於相同或分開的調配物中)及分開投與(在此情形下，可在投與一或多種額外治療劑之前、與其同時及/或在其之後投與本發明之抗體)。在一些實施例中，抗pTau抗體之投與及額外治療劑之投與彼此在約一個月內或約一週、兩週或三週內或約一天、兩天、三天、四天、五天或六天內進行。
在一些實施例中，根據包含向個體投與抗pTau抗體或抗原結合部分之任一方法，該個體診斷為患有Tau蛋白相關疾病(例如tau蛋白病變，包括本文所闡述之彼等Tau蛋白相關疾病)或處於發展成該疾病之風險下。在一些實施例中，該個體診斷為患有選自由以下組成之群之tau蛋白病變或處於發展成該病變之風險下：阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。
在一些實施例中，根據包含向個體投與抗pTau抗體或抗原結合部分之任一方法，該抗pTau抗體或抗原結合部分包含a)重鏈可變區，其包含i) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 49-59中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；ii) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 60-70中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或iii) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 71-81中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或b)輕鏈可變區，其包含iv) CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 82-90中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；v) CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 91-95中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或vi) CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 96-105中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該等重鏈及/或輕鏈CDR序列係如針對表1及2中所示之給定抗體純系所指示。
在一些實施例中，根據包含向個體投與抗pTau抗體或抗原結合部分之任一方法，該抗pTau抗體或其抗原結合部分包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體；及/或輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列或其與SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列具有至少80%序列一致性之變體。在一些實施例中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1-12及106中之任一者之胺基酸序列；及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 13-24及107中之任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，該等重鏈及輕鏈可變區係如針對表3中所示之給定抗體純系所指示。
本發明之抗體(及任何額外治療劑)可藉由任何適宜方式投與，包括非經腸、肺內、及鼻內以及(若期望用於局部治療)病灶內投與。非經腸輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。可藉由任何適宜途徑、例如藉由注射、例如靜脈內或皮下注射進行投藥，此部分地取決於投與係短期的抑或長期的。在一些實施例中，向個體靜脈內投與抗pTau抗體或抗原結合部分。在一些實施例中，向個體皮下投與抗pTau抗體或抗原結合部分。本文審慎考慮各種投藥時間表，包括(但不限於)在各個時間點單次或多次投與、濃注投與及脈衝輸注。
本發明之抗體可以符合良好醫療實踐之方式調配、計量及投與。在此背景中需考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個體患者之臨床狀況、病症原因、藥劑之遞送部位、投與方法、投與時間安排及從業醫師所知之其他因素。抗體無需但視情況與一或多種當前用於預防或治療所討論病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量端視調配物中所存在抗體之量、病症或治療之類型及上文所論述之其他因素而定。該等藥劑通常係以相同劑量及利用如本文所闡述之投與途徑或約1%至99%之本文所闡述之劑量或以任一劑量及藉由任一在經驗上/臨床上確定為適當之途徑來使用。
對於疾病之預防或治療而言，本發明抗體之適當劑量(當單獨使用或與一或多種其他額外治療劑組合使用時)將端視欲治療疾病之類型、抗體類型、疾病之嚴重程度及病程、投與抗體係用於預防性目的抑或治療性目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應以及主治醫師之判斷而定。將抗體適宜地一次性或經一系列治療投與給患者。端視疾病之類型及嚴重程度，約1 μg/kg至15 mg/kg (例如0.1 mg/kg至10 mg/kg)抗體可為投與給患者之初始候選劑量，不論(例如)係藉由一或多個單獨投與抑或藉由連續輸注。端視上文所提及之因素，一種典型日劑量可在約1 μg/kg至100 mg/kg或更高之範圍內。對於經若干天或更長時間重複投與而言，端視病狀而定，治療通常可持續至對疾病症狀之期望阻抑出現為止。抗體之一種例示性劑量將在約0.05 mg/kg至約10 mg/kg範圍內。因此，可向患者投與一或多個約0.5 mg/kg、2.0 mg/kg、4.0 mg/kg或10 mg/kg (或其任一組合)之劑量。此等劑量可間歇性投與，例如每週或每三週(例如，應使得患者接受約2至約20或(例如)約6個劑量之抗體)。可投與初始較高負載劑量，之後投與一或多個較低劑量。然而，可使用其他劑量方案。此療法之進展可藉由習用技術及分析進行監測。
應理解，可使用本發明之免疫偶聯物代替抗pTau抗體或與抗pTau抗體一起來實施任一上述調配物或治療方法。
在一些實施例中，本文提供根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分、編碼該抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸及/或能夠表現該抗pTau抗體或抗原結合部分之宿主細胞，其用於治療個體之Tau蛋白相關疾病，例如用於製造用於治療Tau蛋白相關疾病之藥劑。在一些實施例中，該疾病係tau蛋白病變，包括本文所闡述之任一tau蛋白病變。組合物
在另一態樣中，本文提供組合物，其包含以下中之一或多者：如本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分；編碼如本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸；及能夠表現如本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分之宿主細胞。在一些實施例中，該組合物係醫藥組合物且進一步包含醫藥上可接受之賦形劑及/或載劑。
在一些實施例中，本文提供醫藥製劑或組合物，其包含存在於醫藥上可接受之媒劑中的根據本文所闡述之任一實施例之抗pTau抗體或抗原結合部分、編碼該抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸及/或能夠表現該抗pTau抗體或抗原結合部分之宿主細胞。「醫藥上可接受之媒劑」可為已經聯邦或州政府之管理機構批准或列示於美國藥典(US Pharmacopeia)或其他公認藥典中用於哺乳動物(例如人類)中之媒劑。術語「媒劑」係指與本揭示內容之化合物一起調配用於投與給哺乳動物之稀釋劑、佐劑、賦形劑或載劑。此等醫藥媒劑可為脂質，例如脂質體，例如脂質體樹枝狀聚合物；液體，例如水及油，包括石油、動物、植物或合成起源之彼等油，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及諸如此類、鹽水；阿拉伯樹膠、明膠、澱粉糊、滑石、角蛋白、膠體二氧化矽、尿素及諸如此類。另外，可使用助劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑及著色劑。可將醫藥組合物調配成呈固體、半固體、液體或氣態形式之製劑，例如錠劑、膠囊、粉末、顆粒、軟膏劑、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠、微球及氣溶膠。因此，可以各種方式達成抗pTau抗體或抗原結合部分、編碼該抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸及/或能夠表現該抗pTau抗體或抗原結合部分之宿主細胞之投與，包括藉由靜脈內、經口、經頰、經直腸、非經腸、腹膜內、真皮內、經皮、氣管內、眼內投與等。舉例而言，可藉由靜脈內或皮下投與達成抗pTau抗體或抗原結合部分、編碼該抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸及/或能夠表現該抗pTau抗體或抗原結合部分之宿主細胞之投與。在一些實施例中，抗pTau抗體或抗原結合部分之組合物適於靜脈內投與給個體。在一些實施例中，抗pTau抗體或抗原結合部分之組合物適於皮下投與給個體。活性劑在投與之後可為全身性的，或可藉由使用區域投與、壁內投與或使用用以將活性劑量保持在植入部位之植入物而為局域性的。活性劑可經調配以獲得立即活性或其可經調配以獲得持續釋放。
端視所期望之調配物，醫藥組合物可包括稀釋劑之醫藥上可接受之無毒載劑，其定義為常用於調配用於動物或人類投與之醫藥組合物之媒劑。稀釋劑經選擇以不影響組合之生物學活性。此等稀釋劑之實例係蒸餾水、緩衝水、生理鹽水、PBS、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖溶液及漢克氏溶液(Hank's solution)。另外，醫藥組合物或調配物可包括其他載劑、佐劑或無毒、非治療性、非免疫原性穩定劑、賦形劑及諸如此類。組合物亦可包括接近生理條件之額外物質，例如pH調整及緩衝劑、毒性調整劑、潤濕劑及清潔劑。
組合物亦可包括多種穩定劑中之任一者，例如抗氧化劑。當醫藥組合物包括多肽時，該多肽可與增強該多肽之活體內穩定性或以其他方式增強其藥理學性質(例如延長該多肽之半衰期、降低其毒性及/或增強溶解性或攝取)之各種眾所周知之化合物複合。此等改質劑或複合劑之實例包括硫酸鹽、葡萄糖酸鹽、檸檬酸鹽及磷酸鹽。組合物之核酸或多肽亦可與增強其活體內特性之分子複合。此等分子包括(例如)碳水化合物、多胺、胺基酸、其他肽、離子(例如鈉、鉀、鈣、鎂、錳)及脂質。套組
在另一態樣中，本文提供用於實施本文所闡述方法之套組。套組可包括以下中之一或多者：如本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分；編碼如本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分之核酸；及能夠表現如本文所闡述之抗pTau抗體或抗原結合部分之宿主細胞。在一些實施例中，套組進一步包含用於重構及/或稀釋套組組分中之一或多者之試劑。
如本文所闡述之套組可進一步包括一或多種額外試劑，其中此等額外試劑可選自：稀釋緩衝液；重構溶液；洗滌緩衝液；對照試劑；對照表現載體或多核糖核苷酸；自DNA活體外產生抗pTau抗體或抗原結合部分之試劑及諸如此類。
套組之組分可在單獨容器中；或可合併於單一容器中。
除上文所提及之組分以外，套組可進一步包括使用該套組之組分實踐該等方法之說明書。舉例而言，在一些實施例中，套組包括關於將抗pTau抗體或抗原結合部分靜脈內投與給個體之指示。在一些實施例中，套組包括關於將抗pTau抗體或抗原結合部分皮下投與給個體之指示。關於實踐該等方法之說明書通常記錄在適宜記錄媒體上。舉例而言，說明書可印刷在諸如紙或塑膠等基板上。因此，說明書可作為包裝插頁存在於套組中，存在於套組之容器或其組件之標記中(例如與包裝或亞包裝相連)等。在一些實施例中，說明書作為存在於適宜電腦可讀儲存媒體(例如CD-ROM、磁片、快閃驅動器等)上之電子儲存資料檔案存在。在其他實施例中，套組中不存在實際說明書，但提供自遠程來源(例如經由網際網路)獲得說明書之方式。此實施例之實例係包括網址之套組，在該網址上可查看說明書及/或可自該網址下載說明書。與說明書一樣，此獲得說明書之方式記錄在適宜基板上。實例
除非另外指示，否則本發明之實踐將採用分子生物學、微生物學、細胞生物學、生物化學、核酸化學及免疫學之習用技術，該等技術為熟習此項技術者所熟知。此等技術全面闡釋於文獻中，例如Sambrook, J.及Russell, D. W. (2012).Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第4版). Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory，及Sambrook, J.及Russel, D. W. (2001).Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第3版). Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory (在本文中共同地稱為「Sambrook」)；Ausubel, F. M. (1987).Current Protocols in Molecular Biology. New York, NY: Wiley (包括直至2014之增刊)；Bollag, D. M.等人 (1996).Protein Methods. New York, NY: Wiley-Liss；Huang, L.等人 (2005).Nonviral Vectors for Gene Therapy. San Diego: Academic Press；Kaplitt, M. G.等人(1995).Viral Vectors: Gene Therapy and Neuroscience Applications. San Diego, CA: Academic Press；Lefkovits, I. (1997).The Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques. San Diego, CA: Academic Press；Doyle, A.等人(1998).Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures in Biotechnology. New York, NY: Wiley；Mullis, K. B.、Ferré, F.及Gibbs, R. (1994).PCR: The Polymerase Chain Reaction. Boston: Birkhauser Publisher；Greenfield, E. A. (2014).Antibodies: A Laboratory Manual (第2版). New York, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press；Beaucage, S. L.等人(2000).Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry . New York, NY: Wiley，(包括直至2014之增刊)；及Makrides, S. C. (2003).Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells. Amsterdam, NL: Elsevier Sciences B.V.，該等文獻之揭示內容係以引用的方式併入本文中。
以下實例中進一步詳細地揭示額外實施例，該等實施例係以說明方式提供且不意欲以任何方式限制本揭示內容或申請專利範圍之範圍。材料及方法 人腦溶解物製備
如所指示之腦組織係購自Banner Health Institute (AZ, USA)。自3名AD (阿茲海默氏病，Braak分期V及VI)患者及3名ND (非癡呆，Braak分期III)個體之額葉皮質製備腦勻漿。將溶解緩衝液(50 mM Tris pH 8.0、274 mM NaCl、5 mM KCl、2 mM EGTA、2 mM EDTA、蛋白酶及磷酸酶抑制劑(Pierce, 88668))以約5 ml/g添加至腦組織。然後添加ZrO2珠粒，且將Bullet摻和器(Next Advance)設置在第9級持續2 min以生成勻漿。使勻漿在4℃下以13,000 ×g旋轉15 min。收集上清液作為總溶解物。藉由Bradford蛋白質分析測定蛋白質濃度。十二醯基肌胺酸鈉提取以生成 S1 及 P2 部分
使於0.9 ml溶解緩衝液中之1 mg總溶解物與0.1 ml 10% N-月桂基肌胺酸(溶解於溶解緩衝液中)一起在室溫下培育1小時。使混合物在4℃下以150,000 ×g旋轉20 min。收集上清液作為S1部分，而將團粒重新懸浮於500 µl PBS中且在4℃下以150,000 ×g旋轉20 min。使用100 µl PBS重新懸浮團粒作為P2。西方墨點
使冷凍腦溶解物在冰上解凍，且分成15 µg之等分試樣並添加PBS至15 µL。然後添加5 µL NuPAGE® LDS樣品緩衝液(Invitrogen)及2 µL NuPAGE®樣品還原劑(Invitrogen)，且將管在100℃下煮沸5 min。將經煮沸之樣品加載至小型凝膠槽(Invitrogen)中之Bolt™ 4-12% Bis-Tris Plus凝膠之孔中。加載PageRuler預染之蛋白梯帶(Invitrogen)作為分子量標記物，以使在設為150 V之恆定電壓下蛋白質遷移之進展可視化。在染料前沿遷移出凝膠後，停止凝膠電泳，之後使用iBlot 2乾法印漬系統(Invitrogen)之預設P0程式(20 V，1 min；23 V，4 min；25 V，2 min)將蛋白質條帶轉移至預切割之PVDF膜上。然後藉由封阻緩衝液(LI-COR)將膜在室溫下封阻30 min。使0.2 µg/mL之第一抗體(於封阻緩衝液中製備)與膜一起在室溫下培育1小時。將膜在室溫下用PBS洗滌5 min，3次。使二級抗體(LI-COR，以1:10,000藉由封阻緩衝液稀釋)與膜一起在室溫下培育1小時。再次將膜在室溫下用PBS洗滌5 min，3次。實施Odyssey成像系統掃描以使膜上之蛋白質可視化。藉由西方墨點之 S1 及 P2 Tau 定量
簡言之，使重組全長Tau (1.25至40 ng Tau，2倍增量) S1及P2與還原劑(Invitrogen, NP009)、LDS樣品緩衝液(Invitrogen, NP007)混合且在100℃下煮沸5 min。藉由Bolt™ 4-12% Bis-Tris Plus凝膠(Invitrogen, NW04125BOX)分離樣品且藉由iBlot 2乾法印漬系統(Invitrogen)將其轉移至PVDF膜。使用連續稀釋之重組全長Tau蛋白之強度來繪製校正曲線，且使用線性回歸方程式來確定樣品中之Tau濃度。突觸神經小體及胞質液製備
利用冷的緩衝液A ((25 mM HEPES、pH7.5. 120 mM NaCl、5 mM KCl、1 mM MgCl2、2 mM CaCl2，新鮮添加蛋白酶及磷酸酶抑制劑(Thermo, 88668)))將腦片狀物轉移至冷的2 mL玻璃均質器中。將鐵氟龍(Teflon)研杵附接至攪拌電動機且將速度設置為170 rpm。首先，施加短衝程以完全破壞組織直至沒有大塊留下，且然後施加7個上下衝程以進行均質化。將勻漿添加至具有80 μm過濾器(Millipore，編號NY8002500)之3 mL注射器中且藉由輕輕地推送穿過80 μm過濾器過濾該勻漿。將經過濾之勻漿輕輕地加載至具有5 μm過濾器之注射器上。使濾液以1000 g旋轉10 min，收集團粒及上清液作為P1及S1。藉由緩衝液A洗滌P1且使其以1000 g旋轉10 min。收集團粒作為突觸神經小體部分。使S1以100,000 g離心30 min以去除所有細胞器，且收集上清液作為胞質液部分。實例 1 ：結合病理性 Tau 種類之抗體之選擇
藉由採用習用雜交瘤技術生成結合病理性Tau種類之抗體。鑑別出如表1至3中所闡述之抗體。表 1 ：抗體重鏈 CDR
抗體純系 重鏈 CDR1 重鏈 CDR2 重鏈 CDR3
mAb004 SYGMS (SEQ ID NO: 49) TISSSGSYTYYPDSVKG (SEQ ID NO: 60) TYYGAMDY (SEQ ID NO: 71)
mAb005 DYGMH (SEQ ID NO: 50) YSNSDSTTIYYADTVKG (SEQ ID NO: 61) SYYSNYVDY (SEQ ID NO: 72)
mAb008 RYWMS (SEQ ID NO: 51) EINPDGNAINYAPSLKD (SEQ ID NO: 62) PFPSV (SEQ ID NO: 73)
mAb010 GYGVN (SEQ ID NO: 52) MIWGDGSTDYNSALKS (SEQ ID NO: 63) WAFAY (SEQ ID NO: 74)
mAb011 SYWMH (SEQ ID NO: 53) MIDPSDSETRLNQKFKD (SEQ ID NO: 64) PYGDLDY (SEQ ID NO: 75)
mAb013 DFYMK (SEQ ID NO: 54) DIDPNNGDTFYNQKFKG (SEQ ID NO: 65) DLY (SEQ ID NO: 76)
mAb020 SYAVH (SEQ ID NO: 55) VMWSGGSTDYNAAFIS (SEQ ID NO: 66) MGDYDGVAWFAY (SEQ ID NO: 77)
mAb025 THGMS (SEQ ID NO: 56) TYSGVPTYTDDFKG (SEQ ID NO: 67) SELSWFAY (SEQ ID NO: 78)
mAb032 SYWMN (SEQ ID NO: 57) QIYPGDGDTDYNGKFKG (SEQ ID NO: 68) RSPY (SEQ ID NO: 79)
mAb033 TFGMGVG (SEQ ID NO: 58) HIWWDDDKYYNPALKS (SEQ ID NO: 69) RGSNALDY (SEQ ID NO: 80)
mAb037 DYNMD (SEQ ID NO: 59) DINPNTGGTIYNQKFKG (SEQ ID NO: 70) EGPYYYGTTHPFAY (SEQ ID NO: 81)
表 2 ：抗體輕鏈 CDR
抗體純系 輕鏈 CDR1 輕鏈 CDR2 輕鏈 CDR3
mAb004 RSSQTIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 82) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) FQGSLVPWT (SEQ ID NO: 96)
mAb005 RSSQSLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 83) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) FQSTHVPPT (SEQ ID NO: 97)
mAb008 RSSQSLVRSNGNTYLE (SEQ ID NO: 84) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) FQGSHVPYT (SEQ ID NO: 98)
mAb010 KSSQSLLDSGGKTYLN (SEQ ID NO: 85) QVSKLDSGVPD (SEQ ID NO: 92) WQGTHFPLT (SEQ ID NO: 99)
mAb011 KSSQSLLDSDGKTYLN (SEQ ID NO: 86) LVSKLDS (SEQ ID NO: 93) WQGTHFPFT (SEQ ID NO: 100)
mAb013 KSSQSLLYSNGKTYLN (SEQ ID NO: 87) LVSKLDS (SEQ ID NO: 93) VQGTHFPHT (SEQ ID NO: 101)
mAb020 RSSQSLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 83) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) SQSTHVPPWT (SEQ ID NO: 102)
mAb025 RASQSISDYLH (SEQ ID NO: 88) YASQSIS (SEQ ID NO: 94) QNGHSFPYT (SEQ ID NO: 103)
mAb032 RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 89) KVSNRFS (SEQ ID NO: 91) FQGSHVPYT (SEQ ID NO: 98)
mAb033 RSSQSLANSYGNTYLS (SEQ ID NO: 90) GISNRFS (SEQ ID NO: 95) LQGTHQPWT (SEQ ID NO: 104)
mAb037 KSSQSLLYSNGKTYLN (SEQ ID NO: 87) LVSKLDS (SEQ ID NO: 93) VQGTHFPQT (SEQ ID NO: 105)
表 3 ：抗體可變區
抗體純系 ( 可變區 ) 序列
mAb004 (VH ) EVQLVESGGDLVESGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSSGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLNSEDTAMYYCADTYYGAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 1)
mAb004 (VL ) DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSLVPWTFGGGTQLEIR (SEQ ID NO: 13)
mAb005 (VH ) EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYSNSDSTTIYYADTVKGRFTISRDNAKSTLFLQMTSLRSEDTAMYYCGRSYYSNYVDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 2)
mAb005 (VL ) DIVMTQIPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCFQSTHVPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 14)
人類化mAb005，(VH ) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYSNSDSTTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRSYYSNYVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 3)
人類化mAb005，(VL ) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQSTHVPPTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 15)
mAb008 (VH ) EVKLLQSGGGLVQPGGSLKVSCAASGFDFSRYWMSWVRRAPGKGLEWIGEINPDGNAINYAPSLKDKFIVSRDNAKNTLYLQMSNVRSEDTALYYCARPFPSVWGTGTTVTVSS (SEQ ID NO: 4)
mAb008 (VL ) DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVRSNGNTYLEWYLQNPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 16)
mAb010 (VH ) QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYGVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTARYYCANWAFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 5)
mAb010 (VL ) DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSGGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYQVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPLTFGAGTKLELK (SEQ ID NO: 17)
mAb011 (VH ) QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKASGYSFTSYWMHWLKQRPGQGLEWIGMIDPSDSETRLNQKFKDKATLTVDKSSSTVYMHLSSPTSEDSAVYYCVRPYGDLDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 6)
mAb011 (VL ) DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEIK (SEQ ID NO: 18)
mAb013 (VH ) EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDFYMKWVKQSHGKSFEWIGDIDPNNGDTFYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARDLYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO: 7)
mAb013 (VL ) DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCVQGTHFPHTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 19)
mAb020 (VH ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYAVHWVRQSPGKGLEWLGVMWSGGSTDYNAAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYCARMGDYDGVAWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 8)
mAb020 (VL ) DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 20)
mAb025 (VH ) QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTTHGMSWVKQAPGKGLKWMGWINTYSGVPTYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARSELSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 9)
mAb025 (VL ) DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 21)
mAb032 (VH ) QVQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGKGLEWIGQIYPGDGDTDYNGKFKGKATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCASRSPYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 10)
mAb032 (VL ) DILMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 22)
mAb033 (VH ) QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTFGMGVGWFRQPSGKGLEWLAHIWWDDDKYYNPALKSRLTISKDTSKNQVFLKIANVDTADTATYYCARRGSNALDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 11)
mAb033 (VL ) DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLANSYGNTYLSWYLHKPGQSPQLLIYGISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 23)
mAb037 (VH ) EVQLQQSGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCAGEGPYYYGTTHPFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 12)
mAb037 (VL ) DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCVQGTHFPQTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 24)
人類化mAb037 (VH ) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNMDWVRQAHGQGLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAGEGPYYYGTTHPFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 106)
人類化mAb037 (VL ) DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPQTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 107)
實例 2 ： Tau 轉基因小鼠 rTg4510 之腦中之抗體結合特徵
為評估mAb005與tau蛋白病變腦中之Tau蛋白之結合特徵，藉由西方墨點分析來自轉基因小鼠rTg4510 (表現人類Tau之可抑制形式之小鼠模型，該可抑制形式含有表型模擬Tau病理學及在人類tau蛋白病變中所觀察到之顯著神經退化之P301L突變)之腦溶解物及對照野生型腦溶解物。圖 1 顯示由HT7 (抗人類Tai抗體，ThermoFisher)或mAb005染色之rTg4510及WT腦溶解物之西方墨點。使6月齡rTg4510 (Tg)及年齡匹配之野生型(WT)腦於Tris緩衝液中均質化且處理以進行針對HT7 (左圖)及mAb005 (右圖)之西方墨點分析。將過度曝光之影像包括在內以突出mAb005對Tg樣品中之人類Tau種類之特異性。
結果顯示，mAb005僅識別43、55及64 kD Tau種類(圖1A至1B，mAb005圖)，而HT7 (表位：人類Tau 159-163 a.a., PPGQK)識別所有43、55及64 kD Tau種類以及一些高分子量物質(140/170 kD) (圖1A至1B，HT7圖)。mAb037之西方墨點分析顯示與mAb005相當之特徵。總之，mAb005特異性地識別人類Tau種類，包括rTg4510小鼠腦中之高度磷酸化64 kD形式，但不識別WT小鼠Tau種類。此外，mAb005不識別140/170 kD Tau種類。實例 3 ：與 ND 腦相比 AD 腦中之抗體結合特徵
為進一步表徵健康及患病人腦組織中被mAb005及mAb037識別之人類Tau種類，使用具有HT7、mAb005及mAb037染色之AD腦溶解物及非癡呆(ND)腦樣品實施西方墨點分析。圖 2A 至2B 顯示經HT7、mAb005及mAb037染色之AD及ND腦溶解物之西方墨點。自Banner Sun Health Research Institute (AZ, USA)獲得三名ND (非癡呆；Braak分期III)及三名AD (阿茲海默氏病，Braak分期V-VI)冷凍額葉皮質，且切出等量之組織於Tris緩衝液中進行均質化且然後將其合併用於隨後之蛋白質定量。藉由SDS-PAGE對15 µg總溶解物進行解析且對HT7 (左圖)、mAb005 (中圖)及mAb037 (右圖) (圖2B)進行西方墨點分析。星號表示64 kD Tau種類，且括號表示140/170 kD Tau種類。顯示過度曝光之影像以突出弱信號。
在ND腦樣品中，幾個Tau種類(MW介於45 kD至62 kD之間)被mAb005及mAb037識別，而更多的Tau種類(MW介於30 kD至68 kD之間)被HT7識別。在AD腦溶解物中，mAb005及mAb037進一步識別兩種Tau種類(MW：64及68 kD) 。特定而言，已知64 kD種類(圖2A 至2B ，星號標記之條帶)對應於高度磷酸化且十二醯基肌胺酸鈉不溶性之病理性Tau種類。另外，AD樣品中之HT7陽性140/170 kD Tau種類未被mAb005檢測到，但被mAb037 (圖2B，「037」)檢測到。總之，mAb005及mAb037識別病理性Tau種類之亞群體(MW介於45至68 kD之間)，包括AD腦中之64 kD病理學相關種類。實例 4 ： AD 人腦之十二醯基肌胺酸鈉可溶性及不溶性部分中之抗體結合特徵
由於mAb005及mAb037結合至AD患病腦中之64 kD Tau種類(其對應於Tau之十二醯基肌胺酸鈉不溶性高度磷酸化形式)，對使用高速離心藉由分級分離製備之10%十二醯基肌胺酸鈉提取之AD腦溶解物進行西方墨點分析。圖 3A 至3B 顯示十二醯基肌胺酸鈉可溶性及不溶性AD腦部分之西方墨點。使實例3中所闡述之AD腦溶解物經受10%十二醯基肌胺酸鈉提取，之後進行150k × g離心以獲得上清液1 (S1)及團粒1 (P1)。將P1重新懸浮於PBS中且再次旋轉以獲得團粒2 (P2)。S1表示十二醯基肌胺酸鈉可溶性部分且P2表示十二醯基肌胺酸鈉不溶性部分。在正規化至10 ng Tau後，加載S1及P2二者以進行西方墨點。藉由對該等部分與2.5 ng至40 ng之兩倍連續稀釋度之經純化單體Tau蛋白一起進行單獨的西方墨點獲得該等部分中之Tau含量量測。藉由Odyssey成像系統(LI-COR)實施定量。星號表示64 kD Tau種類且括號表示140/170 kD Tau種類。顯示過度曝光之影像以證實mAb005及mAb037 (圖3B，「037」)與某些Tau種類無結合。除mAb005與十二醯基肌胺酸鈉不溶性部分(P2)中之64 kD Tau種類(圖3A至3B，星號)結合以外，亦檢測到68 kD及58 kD之兩種主要Tau種類。mAb005僅識別少量之十二醯基肌胺酸鈉可溶性(S1) Tau種類，且其鑑別為45 kD、57 kD及59 kD之分子量與在P2部分中所識別之Tau種類不同。不同於mAb005，HT7及mAb037並不顯示對存在於S1或P2部分中之Tau種類之偏好，其識別較大數量之S1部分中之Tau種類。總之，mAb005優先識別AD腦之十二醯基肌胺酸鈉不溶性部分中之三種主要的Tau種類，即58 kD、64 kD及68 kD，而HT7及mAb037不顯示此偏好。實例 5 ： ND 及 AD 人腦溶解物之胞質液及突觸神經小體部分中之抗體結合特徵
已知病理性Tau在AD腦中之突觸處累積(Tai, H. C.等人(2012).The American journal of pathology ,181 (4), 1426-1435)。實施點狀墨點分析以解決mAb005識別之Tau種類是否在突觸處富集以及是否可在非變性條件下藉由點狀墨點檢測到藉由西方墨點所鑑別出之mAb005識別之Tau種類。
圖4 顯示亞細胞分級分離方案之示意圖及點狀墨點分析之結果。使實例3中所闡述之AD及ND腦溶解物經受如圖4A中所繪示之亞細胞分級分離。藉由兩次過濾及若干次離心實施胞質液及突觸神經小體之分離。藉由Bradford蛋白質分析(Bio-Rad)量測每一部分中之蛋白質含量，且將等量之蛋白質(0.4 µg)點至一片硝化纖維素膜上且在使該膜進行短暫的風乾時期後實施免疫印漬。在突觸神經小體及胞質部分中分別觀察到突觸標記物突觸素及胞質標記物GAPDH之富集(圖4B)。縮寫：Cy：胞質液；Cy adj.：減少之胞質液加載量以有助於並排比較；Sy：突觸神經小體。包括兩種參考抗Tau抗體C2N-8E12 (ABBV-8E12, AbbVie) (圖4B中之「參考AbbVie」)及BIIB092 (舊稱BMS-986168/IPN007，Biogen) (圖4B中之「參考Biogen」)以供並排比較。如圖4B中所示，mAb005顯示優先結合至定位於AD腦而非ND腦之突觸處之Tau種類，而兩種參考抗體均顯示優先結合至胞質Tau種類，而與ND或AD無關。此外，mAb005顯示優先結合至AD總腦溶解物中之Tau種類，此與先前之發現一致，而兩種參考抗體均顯示優先結合至ND總腦溶解物中之Tau種類。如實例4中所闡述自AD腦製備十二醯基肌胺酸鈉不溶性部分(P2)及十二醯基肌胺酸鈉可溶性部分(S1)且藉由點狀墨點進行類似分析(圖4B，右圖)。mAb005顯示優先結合至AD十二醯基肌胺酸鈉不溶性部分(P2)中之Tau種類，而兩種參考抗體均顯示優先結合至AD十二醯基肌胺酸鈉可溶性部分(S1)中之Tau種類。
圖4C顯示mAb005 (「005」)、mAb008 (「008」)、mAb010 (「010」)、mAb011 (「011」)、mAb013 (「013」)、mAb020 (「020」)、mAb025 (「025」)、mAb032 (「032」)及mAb037 (「037」)展現優先結合至定位於AD腦而非ND腦之突觸處之Tau種類。自3個獨立實驗量測Sy對Cy之比率，該等實驗自上至下顯示每一抗體之平均值以展示突觸偏好。此外，本文所闡述之抗體顯示優先結合至AD總腦溶解物中之Tau種類，此與先前之發現一致，而兩種參考抗體均顯示優先結合至ND總腦溶解物中之Tau種類。實例 6 ： tau 蛋白病變人腦溶解物中之抗體結合特徵
文獻中已顯示病理性Tau種類在若干種tau蛋白病變中累積，該等tau蛋白病變包括AD、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。為檢查mAb005是否識別除AD以外之tau蛋白病變中之Tau種類，自Banner Sun Health Research Institute (AZ, USA)獲得來自PSP、CBD及PiD腦之冷凍腦組織以進行點狀墨點分析。首先使用AT8抗體藉由點狀墨點分析驗證該等各種組織之腦溶解物中病理性Tau種類之存在。相對於各別腦區域之ND對照，所有患病腦溶解物均顯示出顯著之AT8信號(圖5A，頂部兩列)，此證實該等樣品中病理性Tau之存在，而HT7信號不顯示此等差異。接下來，藉由點狀墨點分析對mAb005以及參考抗體C2N-8E12及BIIB092之結合進行分析。相對於相應對照ND腦溶解物，mAb005在所有患病腦溶解物中均顯示出較高之信號，而HT7及該兩種參考抗體不顯示此區別(圖5B)。
如圖5A中之AT8信號所指示，病理性Tau之含量跨越不同腦區域有所變化，且圖5B中之mAb005信號顯示類似變化。然而，mAb005與AT8識別不同之表位，如在PSP丘腦及硬膜樣品中檢測到大量信號所證明。圖5C顯示對mAb005 (「005」)、mAb011 (「011」)、mAb013 (「013」)、mAb010 (「010」)、mAb032 (「032」)、mAb037 (「037」)、mAb020 (「020」)、mAb008 (「008」)、mAb025 (「025」)、mAb033 (「033」)及mAb004 (「004」)之點狀墨點分析。總之，mAb005、mAb011、mAb013、mAb010、mAb032、mAb037、mAb020、mAb008、mAb025、mAb033及mAb004在所測試之所有tau蛋白病變(即AD、PSP、CBD及PiD)中均良好地識別病理性Tau種類。值得注意的是，相對於來自其他疾病之樣品，mAb005、mAb011、mAb013、mAb010、mAb032、mAb037、mAb020及mAb008在AD及PiD樣品中顯示更強之信號，此表明mAb005、mAb011、mAb013、mAb010、mAb032、mAb037、mAb020及mAb008陽性Tau種類在AD及PiD中相較於其他tau蛋白病變中更豐富。實例 7 ：蔗糖梯度分級分離之 AD 及 ND 腦溶解物中之抗體結合特徵
已在蔗糖梯度分級分離之Tau轉基因小鼠腦溶解物之高密度部分中發現病理性Tau種類之種子勝任形式(Jackson等人，2016 JN)。實施蔗糖梯度分析以評估人腦溶解物中mAb005陽性Tau種類之密度。圖6A顯示自低至高密度之蔗糖梯度分級分離之ND及AD腦溶解物中HT7陽性及AT8陽性Tau種類二者之分佈。對於兩種抗體，在AD樣品中均發現高密度Tau種類，此與已公佈之結果一致。然後在非變性條件下利用包括以下之抗體對蔗糖梯度分級分離之腦溶解物實施點狀墨點分析：HT7、AT8、突觸素、GAPDH及mAb005 (圖6B)。
圖6A 顯示ND及AD腦溶解物之蔗糖梯度離心(SGC)及西方墨點分析。藉由將3 mL之2 mg/mL ND及AD腦溶解物(如實例3中所闡述藉由將來自三名個體之樣品合併來製備)加載至新鮮製備的含有7.5 mL蔗糖溶液之SW41離心管(10-50%，每層1.5 mL)上實施SGC。然後使該管在4℃下以250k × g旋轉4小時，且藉由自上至下移液來收集每一部分。然後使用HT7及AT8對熱變性後之每一分級分離之ND及AD樣品實施西方墨點分析。
圖6B 顯示ND及AD腦溶解物之SGC及點狀墨點分析。對未經熱變性之SGC分級分離之樣品實施點狀墨點分析，利用HT7、AT8、突觸素、GAPDH及mAb005探測。在西方墨點中，跨越所有部分，HT7與AT8具有類似之信號波動模式(圖6A)，而在點狀墨點中不存在頂部及10%部分二者中之AT8信號。突觸素(突觸標記物)主要存在於20-50%部分中，而胞質標記物GAPDH更多的富集於自頂部至20%之低密度部分中。
總之，觀察到mAb005陽性Tau種類存在於AD中之所有部分中，其中在最高密度部分(50%)處信號增加，此表明mAb005陽性Tau種類已併入至具有廣泛多樣之性質的多種複合物中，更甚於HT7及AT8。實例 8 ： SEC 分級分離之 AD 及 ND 腦溶解物中之抗體結合特徵
為深入瞭解mAb005陽性Tau種類之複合物性質，實施ND及AD腦溶解物之SEC分析以根據分子量分離不同的Tau種類。
圖7A 顯示ND及AD腦溶解物之粒徑篩析層析(SEC)及西方墨點分析。在使樣品熱變性後實施HT7之西方墨點分析以揭示每一部分中之各種Tau片段之大小。藉由分子大小標記物之校正揭示部分11、15及17分別對應於769 kD、158 kD及大約66 kD。注意，由於在SEC之前需要進行預過濾步驟以防止管柱堵塞，因此極大聚集體被排除。藉由HT7對所收集之部分實施西方墨點分析(圖7A)。部分8至10 (＞ 670 kD)中之HT7信號僅在AD樣品中顯著。值得注意的是，該等64 kD及140/170 kD之熱變性穩定之Tau種類僅存在於部分8至10中，此指示源自AD腦之該等部分含有在非變性條件中超過670 kD之病理性Tau種類，且即使在熱變性之後，在64 kD及140/170 kD之MW下亦高度穩定。
接下來，針對HT7、AT8、突觸素(Synapt)、GAPDH、mAb005、C2N-8E12 (參考AbbVie)及BIIB092 (參考Biogen)，對SEC部分實施點狀墨點分析。圖 7B 顯示ND及AD腦溶解物之SEC及點狀墨點分析。將等體積之未經熱變性之每一部分點在NC膜上以進行所有點狀墨點分析，利用HT7、AT8、突觸素(Synapt)、GAPDH、mAb005、C2N-8E12 (參考AbbVie)及BIIB092 (參考Biogen)探測。
在所測試之Tau-抗體中，mAb005及AT8二者跨越所有部分在部分8至10中顯示最顯著之信號，此證明mAb005陽性Tau種類對含有錯誤摺疊之Tau及其他蛋白質之較大分子量複合物(＞679 kD)中之AD Tau具有特異性。值得注意的是，突觸素信號在部分8至10 (對應於mAb005陽性物之彼等部分)中亦顯著，此表明大複合物中之許多mAb005陽性Tau種類存在於突觸中，此與圖4之結果一致。此外，胞質標記物GAPDH信號在部分16至21中最顯著。最後，來自AbbVie及Biogen之兩種參考抗體均結合至AD及ND二者樣品中的介於部分13至22之間的Tau種類，此證明其結合種類在AD及ND二者中之較小複合物中均有發現。實例 9 ： SEC 分級分離之 Tau 轉基因小鼠 rTg4510 腦溶解物中之抗體結合特徵
在Tau轉基因動物中，病理性Tau種類隨年齡增長進展成更聚集之形式(Berger等人，2007 JN)。為確定在rTg4510小鼠腦中mAb005陽性Tau種類是否亦隨年齡增長併入至較大的蛋白質複合物中，對自2.5月齡及6月齡WT及Tg動物提取之腦溶解物實施SEC分析。在此分析之前，在點狀墨點分析中檢查mAb005陽性種類之病理性Tau蛋白含量之年齡依賴性，與HT7、AT8、C2N-8E12及BIIB092之其他Tau-抗體進行比較。
圖8A 顯示1月齡至6月齡rTg4510 (Tg)及野生型(WT)小鼠腦溶解物之點狀墨點分析。將等量蛋白質點在NC膜上，利用mAb005、HT7、AT8、C2N-8E12及BIIB092抗體探測。使用來自1至6月齡之rTg4510，發現mAb005及AT8信號之年齡依賴性增加(圖8A)。然而，HT7、C2N-8E12及BIIB092抗體跨越所有年齡展現相等程度之信號。
接下來，對2.5月齡及6月齡Tg動物之腦溶解物組合實施SEC分析及利用mAb005探測之點狀墨點研究。圖 8B 顯示利用mAb005探測之2.5月齡及6月齡Tg腦溶解物之SEC及點狀墨點分析。將過度曝光之影像包括在內以突出峰值分佈。僅利用小鼠二級抗體探測之對照點在部分16至19中顯示出一些非特異性信號。
自2.5月齡中之部分10至6月齡中之部分9，觀察到mAb005陽性Tau信號朝超過670 kD之顯著更高分子量部分之峰值移位(圖8B)。此外，在6月齡Tg小鼠中，介於部分14至19之間的mAb005陽性Tau信號變得更侷限於較少之部分，幾乎為背景含量，此表明在Tg動物之衰老過程期間Tau複合物形成之變化。實例 10 ： PSP 及 AD 腦之免疫組織化學分析
為確定mAb005及mAb037是否可以區域特異性及Braak分期特異性方式結合至患病腦中之病理性Tau，經由與來自Banner Sun Health Research Institute (AZ, USA)之經驗豐富的神經病理學家Dr. Thomas Beach簽訂合同在AD及PSP腦切片中實施免疫組織化學分析。
圖9A 顯示Tau經由突觸連接之腦區域蔓延之示意圖示(修改自Brettschneider等人，2015 Nat Rev Neurosci)。圖 9B 至9C 顯示人腦切片之指示腦區域之放大照片，其中在頂部標記其疾病狀態(ND對AD)、Braak分期(I至VI)及ID。加框線之照片顯示經mAb005 (亦稱RAA7)標記之Tau纏結之陽性信號。在所有Braak分期中(包括ND個體)，經mAb005及mAb037標記之Tau纏結由點狀及瀰散信號顯示，此指示mAb005及mab037在疾病發作之前結合至病理性tau種類之能力。圖 9D 指示PSP腦組織對mAb005信號均呈陽性。圖 9E 指示來自四名患者之PSP腦組織對mAb005及mAb037信號均呈陽性。對包括硬膜、蒼白球及邁內特基底核(nucleus basalis of Meynert)在內之三個腦區域進行染色以顯示具有由mAb005及mAb037識別之tau纏結之星狀細胞及神經元。
由於mAb005抗體在AD腦溶解物中之突觸處富集(圖4B)，因此有可能於連接之腦區域中出現mAb005陽性Tau纏結，如圖9A中所繪示，在疾病進展期間自橫內嗅至同形皮質(Isocortical)區域。與此概念一致，早在Braak分期III即在兩個臨床ND個體之內嗅皮質區中觀察到mAb005陽性Tau沈積物，而更強烈之mAb005信號在臨床AD腦中發現(圖9B，藍框影像)。在與內嗅皮質突觸連接之海馬體CA1區域中，mAb005信號在ND腦中早在之III之類似Braak分期中出現。然而，在前額葉皮質中，mAb005信號較弱且未持續到Braak後期，此表明其Tau種類在此腦區域中含量較低。另一方面，在PSP腦中，mAB005分別在硬膜、蒼白球及基底核中識別簇狀星狀細胞、寡突膠質細胞及神經元中之Tau纏結(圖9C)。綜上所述，得出如下結論：mAb005優先在早期Braak分期III在內嗅皮質-海馬體連接區域中以及在PSP中識別AD中之Tau纏結。實例 11 ： rTg4510 腦之免疫組織化學分析
接下來，檢查mAb005陽性Tau種類在3月齡及6月齡rTg4510腦切片中之定位以揭示：(1) mAb005染色模式之年齡依賴性變化；(2)海馬體結構中體幹中對軸突-樹突區室中之相對信號。在將臨限值施加至WT及Tg腦切片二者使得在WT影像中幾乎不存在信號後，使mAb005特異性信號示於圖10中。
圖10A 至10B 顯示藉由mAb005對rTg4510腦之免疫組織化學染色。圖10A顯示3個月時之染色。圖10B顯示6個月時之染色。使用如所闡述之類似自由浮動切片免疫染色程序(Evilsizor等人，2015 J Vis Exp)，使30-µm厚度之冷凍腦切片與mAb005抗體一起培育。藉由ImageXpress Micro XLS (Molecular Device)獲取影像。縮寫：WT：野生型，Tg：rTg4510，sub：下腳，SO：起始層，SP：錐體層，SR：透明層，SL-M：腔隙分子層(Stratum Lacunosum Moleculare)，CA：安蒙氏角(Cornus Ammonis)。
在海馬體-皮質區域中觀察到顯著mAb005信號，此與所報導之rTg4510小鼠腦中之Tau過表現模式一致(SantaCruz等人，2005 Science)。在海馬體結構內，在體幹(錐體層，SP)中觀察到弱mAb005信號，而在3月齡影像中觀察到軸突-樹突區室中之均勻強信號，此證明mAb005陽性Tau種類優先定位於神經突中。另外，mAb005信號強烈標記6月齡腦切片中整個海馬體-皮質區域中之Tau纏結結構，此指示mAb005陽性Tau種類存在於神經原纖維纏結中。實例 12 ：使用血漿 Tau 含量之替代反應研究
在經Tau抗體治療之動物及人類中，一種獨特的活體內反應係在腹膜內注射抗體後48小時血漿Tau含量快速增加(Yanamandra等人，2017 Sci Trans Med)。為探索mAb005是否能夠在rTg4510 Tau轉基因動物中引發此反應，在3月齡動物中實施C2N-8E12及mAb005之腹膜內注射且藉由人類總Tau套組利用Simoa HD-1分析儀(Quanterix)對血漿Tau含量進行定量。
圖11A 至11B 顯示在向3月齡rTg4510動物中腹膜內注射(i.p.) C2N-8E12及mAb005後之總結圖表(n = 4-5隻動物；平均值±SD)。A ，在注射10 mg/kg及50 mg/kg C2N-8E12後2天、4天及8天Tau含量之變化。B ，在注射10 mg/kg及25 mg/kg mAb005後2天、4天、6天及8天Tau含量之變化。左側欄中之圖表：血漿Tau之絕對量(以pg/mL計)，右側欄中之圖表：與注射前相比Tau含量之相對倍數增加。色彩編碼點表示各別動物之每一數據點。
與文獻一致，在以10 mg/kg及50 mg/kg抗體之劑量注射之動物中，C2N-8E12在第2天使血漿Tau含量增加，差異分別為大約20倍及40倍(圖11A)。然而，在以10 mg/kg及25 mg/kg之劑量注射mAb005之動物中，未觀察到血漿Tau含量之明顯增加(圖11B)。無法在mAb005注射之動物中檢測到血漿Tau含量可能係由於諸如以下等若干原因所致：血漿中所存在之mAb005陽性Tau種類之量低於血漿中之檢測限、人類總Tau套組中之Tau抗體不能檢測mAb005陽性Tau種類或mAb005結合導致表位掩蓋從而無法藉由Quanterix Tau抗體進行檢測。實例 13 ：人類化 mAb005 及 mAb037 之選擇及表徵
為促進mAb005之治療性使用，藉由將可變重鏈(VH )及可變輕鏈(VL )之互補決定區(CDR)接枝至人類IgG4 S228P主鏈中對mAb005及mAb037實施人類化(無Fab臂交換突變體，Silva等人，2015 JBC)。在CDR周圍之鄰近殘基中引入四個點突變以保留所得變體之功能性。然後實施點狀墨點分析以測定與原始小鼠/嵌合純系相比每一變體之EC50 ，以及使與ND Tau蛋白相比對AD Tau蛋白之特異性可視化。圖 12A 至 12B 顯示小鼠mAb005及mAb037以及mAb005及mAb037之人類化變體(如表1至3中所示)對AD及ND腦勻漿之結合親和力。藉由將ND及AD總腦溶解物以一式三份點樣來實施點狀墨點實驗，且自6 × 10-8 M之最大濃度以稀釋因子2連續稀釋抗體溶液。總結圖表表示3個獨立實驗之平均值± SD。
結果顯示，人類化mAb005以4.3 × 10-10 M之EC50 值展現與AD之結合親和力，該值接近於原始小鼠純系之4.0 × 10-10 M之EC50 值，此指示人類化mAb005變體以與原始小鼠純系類似之方式維持結合親和力及結合特異性。人類化mAb037以9.5 × 10-10 M之EC50 值展現與AD之結合親和力，該值接近於原始小鼠純系之5.4 × 10-10 M之EC50 值，此指示人類化mAb037變體以與原始小鼠純系類似之方式維持結合親和力及結合特異性。實例 14 ： mAb005 及 mAb037 阻斷 Tau 播散能力
由於本文所闡述之抗體(例如mAb005、008、010、011、013、020、025、032及037)優先識別突觸Tau，其與Tau蔓延高度相關(DeVos等人，2018 Front Neurosci)，因此實施Tau播散分析以測定mAb005及mAb037對Tau播散傳播之效應。
為研究mAb005及mAb037是否可抑制Tau傳播，藉由在HEK293細胞(Tau-LM細胞)中穩定地表現在N末端帶有GFP標籤之突變體Tau (ΔK280/ P301L/V337M)之4R重複序列結構域確立報導基因系統(Najla., 2012 J Biol Chem)。首先將來自133.3 nM同型對照小鼠IgG、mAb005或mAb037之兩倍連續稀釋液與6月齡rTg4510腦溶解物混合。使抗體-溶解物混合物與Tau-LM細胞一起培育24小時。在使溶解物與細胞一起培育48小時且將細胞固定並用DAPI染色後實施Tau-斑點形成之成像。藉由ImageXpress Micro Confocal檢查Tau斑點之數量(由GFP陽性信號代表)及細胞數量(由DAPI陽性斑點代表)。藉由細胞數量對Tau斑點之數量進行正規化且藉由減去「無溶解物」條件下之值進行調整(N = 3，平均值± SD)。獲得mAb005之EC50 值72.2×10-9 M及mAb037之EC50值22.91 ×10-9 M以對相對於對照IgG樣品之抑制功效進行量化。該等結果表明，mAb005識別之Tau及mab037識別之Tau與Tau傳播高度相關。(圖13A至13B)。
藉由與mAb005及同型對照小鼠IgG偶聯之蛋白質G珠粒，以自133.3 nM 2倍連續稀釋之抗體濃度對6月齡rTg4510腦溶解物進行免疫耗竭。在免疫耗竭後，使溶解物與Tau-LM細胞一起培育24小時。再經24小時後，使細胞固定並用DAPI染色。在使溶解物與細胞一起培育48小時後實施Tau-斑點形成之成像。圖13C. 藉由ImageXpress Micro Confocal檢查Tau斑點之數量及細胞數量。藉由細胞數量對Tau斑點之數量進行正規化且藉由減去「無溶解物」條件下之值進行調整(N=3：平均值± SD)。圖13D. 藉由Tau HTRF聚集分析量測免疫耗竭溶解物中之聚集Tau之含量(N=3：平均值±SD)。圖13E. 藉由西方墨點分析對免疫團粒珠粒進行分析。利用HT7抗體(泛Tau抗體)對膜進行印漬且藉由Odyssey紅外成像系統(LI-COR)掃描。圖13B及13C匯總三個獨立實驗之結果。當將mAb005免疫耗竭之溶解物施加至Tau-LM細胞時，Tau斑點數量以濃度依賴性方式減少，其中EC50值為0.62 ± 0.76 nM (圖13C)。亦使用Tau聚集HTRF分析(Cisbio)雙重確認mAb005免疫耗竭之溶解物中之聚集Tau之含量(圖13D)。當將mAb005與同型對照小鼠IgG進行比較時，mAb005幾乎消除腦溶解物中之聚集Tau，其中EC50值為1.12 ± 0.18 nM。最後，使用西方墨點分析證實mAb005可捕獲rTg4510腦溶解物中之Tau (圖13E)。有趣的是，mAb005不僅捕獲Tau且與55 kD Tau相比亦優先富集64 kD Tau。根據先前研究，64 kD Tau含有磷酸化Tau且主要存在於高分子量部分中(Zdenek., 2007 J Neurosci)，該等高分子量部分含有強Tau傳播活性(Shuko., 2015 Nature Communications)。該等結果表明，mAb005識別之Tau與Tau傳播高度相關。實例 15 ： 藉由構形表位定位使用交聯耦合質譜法對 mAb005 及 mAb037 之表徵
為深入瞭解mAb005及mAb037之構形結合基序，應用使用交聯耦合質譜法之構形表位定位以鑑別由該等抗Tau抗體識別之構形表位(圖14)。
在本研究中應用交聯耦合質譜法，其由CovalX Instrument Incorporated實施。在本研究中使用自阿茲海默氏病患者分離之清潔劑不溶性Tau聚集體作為抗原。使抗體mAb005及mAb037分別與Tau聚集體及氘化交聯劑一起培育。由於在交聯化學後抗體/抗原複合物極其穩定，故將多種酶(5種，平行使用)及消化條件施加至該複合物以提供許多不同的重疊肽。使用高解析度Orbitrap™質譜法及MS/MS技術實施該等肽之鑑別。使用連接至交聯試劑之質量標籤對交聯肽之鑑別進行確定。在MS/MS片段化後，使用XQuest及Stavros軟體分析所生成之數據。
結果顯示，mAb005及mAb037結合至定位在Tau之中間區域及微管結合結構域之多肽區。具體而言，mAb005結合至人類2N4R Tau同種型中包含胺基酸S131、K132、T135、S137及R155之結構域，且mAb037結合至人類2N4R Tau同種型中包含胺基酸R230、T231、S237、T245、K281及S289之結構域。
儘管已揭示本揭示內容之特定替代方案，但應理解，各種修改形式及組合係可能的且隨附申請專利範圍之真實精神及範圍內審慎考慮該等修改形式。因此，不意欲對本文所呈現之確切摘要及揭示內容進行限制。序列表
SEQ ID NO 序列 說明
1 EVQLVESGGDLVESGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSSGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLNSEDTAMYYCADTYYGAMDYWGQGTSVTVSS 小鼠mAb004重鏈AA序列
2 EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYSNSDSTTIYYADTVKGRFTISRDNAKSTLFLQMTSLRSEDTAMYYCGRSYYSNYVDYWGQGTTLTVSS 小鼠mAb005重鏈AA序列
3 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAYSNSDSTTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRSYYSNYVDYWGQGTLVTVSS 人類化mAb005重鏈AA序列
4 EVKLLQSGGGLVQPGGSLKVSCAASGFDFSRYWMSWVRRAPGKGLEWIGEINPDGNAINYAPSLKDKFIVSRDNAKNTLYLQMSNVRSEDTALYYCARPFPSVWGTGTTVTVSS 小鼠mAb008重鏈AA序列
5 QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYGVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTARYYCANWAFAYWGQGTLVTVSA 小鼠mAb010重鏈AA序列
6 QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKASGYSFTSYWMHWLKQRPGQGLEWIGMIDPSDSETRLNQKFKDKATLTVDKSSSTVYMHLSSPTSEDSAVYYCVRPYGDLDYWGQGTTLTVSS 小鼠mAb011重鏈AA序列
7 EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDFYMKWVKQSHGKSFEWIGDIDPNNGDTFYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARDLYWGQGTTLTVSS 小鼠mAb013重鏈AA序列
8 QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYAVHWVRQSPGKGLEWLGVMWSGGSTDYNAAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYCARMGDYDGVAWFAYWGQGTLVTVSA 小鼠mAb020重鏈AA序列
9 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTTHGMSWVKQAPGKGLKWMGWINTYSGVPTYTDDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARSELSWFAYWGQGTLVTVSA 小鼠mAb025重鏈AA序列
10 QVQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGKGLEWIGQIYPGDGDTDYNGKFKGKATLTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCASRSPYWGQGTLVTVSA 小鼠mAb032重鏈AA序列
11 QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTFGMGVGWFRQPSGKGLEWLAHIWWDDDKYYNPALKSRLTISKDTSKNQVFLKIANVDTADTATYYCARRGSNALDYWGQGTSVTVSS 小鼠mAb033重鏈AA序列
12 EVQLQQSGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCAGEGPYYYGTTHPFAYWGQGTLVTVSA 小鼠mAb037重鏈AA序列
106 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNMDWVRQAHGQGLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAGEGPYYYGTTHPFAYWGQGTLVTVSS 人類化mAb037重鏈AA序列
13 DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSLVPWTFGGGTQLEIR 小鼠mAb004輕鏈AA序列
14 DIVMTQIPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCFQSTHVPPTFGGGTKLEIK 小鼠mAb005輕鏈AA序列
15 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQRPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCFQSTHVPPTFGQGTKLEIK 人類化mAb005輕鏈AA序列
16 DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVRSNGNTYLEWYLQNPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK 小鼠mAb008輕鏈AA序列
17 DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSGGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYQVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPLTFGAGTKLELK 小鼠mAb010輕鏈AA序列
18 DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEIK 小鼠mAb011輕鏈AA序列
19 DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCVQGTHFPHTFGGGTKLEIK 小鼠mAb013輕鏈AA序列
20 DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPPWTFGGGTKLEIK 小鼠mAb020輕鏈AA序列
21 DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPYTFGGGTKLEIK 小鼠mAb025輕鏈AA序列
22 DILMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK 小鼠mAb032輕鏈AA序列
23 DVVVTQTPLSLPVSFGDQVSISCRSSQSLANSYGNTYLSWYLHKPGQSPQLLIYGISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISTIKPEDLGMYYCLQGTHQPWTFGGGTKLEIK 小鼠mAb033輕鏈AA序列
24 DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCVQGTHFPQTFGGGTKLEIK 小鼠mAb037輕鏈AA序列
107 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPQTFGGGTKLEIK 人類化mAb037輕鏈AA序列
25 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGGAGTCTGGAGGGTCCCTAAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTATGGCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTAGTAGTGGTAGTTACACCTACTATCCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAACTCTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGCTGATACTTACTACGGAGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA 小鼠mAb004重鏈DNA序列
26 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTGACTATGGAATGCACTGGGTTCGTCAGGCTCCAGAGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCATACAGCAATAGTGACAGTACTACCATCTACTATGCAGACACAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAGCACCCTGTTCCTGCAAATGACCAGTCTGAGGTCTGAGGACACGGCCATGTATTATTGTGGAAGGAGCTACTATAGTAACTACGTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA 小鼠mAb005重鏈DNA序列
27 GAGGTGCAGCTGGTTGAATCTGGCGGAGGACTGGTTCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCGATTATGGCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGACTTGAGTGGGTCGCCTACAGCAACAGCGACAGCACCACCATCTACTACGCCGACACCGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGGCAGAAGCTACTACTCCAACTACGTGGACTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACAGTGTCTAGC 人類化mAb005重鏈DNA序列
28 GAGGTGAAGCTTCTCCAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAAGTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAGATACTGGATGAGTTGGGTTCGGCGGGCTCCAGGAAAAGGACTAGAGTGGATTGGAGAAATTAATCCAGATGGCAATGCAATAAACTATGCACCATCTCTAAAGGATAAATTCATCGTCTCCAGAGACAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAATGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTGCACGACCTTTCCCCAGCGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA 小鼠mAb008重鏈DNA序列
29 CAGGTGCAGCTGAAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCATCACATGCACCGTCTCAGGGTTCTCATTAACCGGCTATGGTGTAAACTGGGTTCGCCAGCCTCCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAATGATATGGGGTGATGGAAGCACAGACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGAGCATCAGCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAATAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCAGGTACTACTGTGCCAACTGGGCCTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb010重鏈DNA序列
30 CAGGTGCAACTGCAGCAGTCTGGGCCTCAGCTGGTTAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGTTACTCATTCACCAGCTACTGGATGCACTGGCTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGTCTTGAGTGGATTGGCATGATTGATCCTTCCGATAGTGAAACTAGGTTAAATCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGTACAGTCTACATGCACCTCAGCAGCCCGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGTAAGGCCGTATGGTGACCTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA 小鼠mAb011重鏈DNA序列
31 GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACTGACTTCTACATGAAGTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCTTTGAGTGGATTGGAGATATTGATCCTAACAATGGTGATACTTTCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAACAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGGGATCTCTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA 小鼠mAb013重鏈DNA序列
32 CAGGTGCAGCTGAAGCAGTCAGGACCTGGCCTAGTGCAGCCCTCACAGAGCCTGTCCATCACCTGCACAGTCTCTGGTTTCTCATTAACTAGTTATGCTGTACACTGGGTTCGCCAGTCTCCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTGATGTGGAGTGGTGGAAGCACAGACTATAATGCAGCTTTCATATCCAGACTGAGCATCAGCAAGGACAATTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTTAAAATGAACAGTCTGCAAGCTGATGACACAGCCATATATTACTGTGCCAGAATGGGTGATTACGACGGGGTGGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb020重鏈DNA序列
33 CAGATCCAGTTGGTACAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATACCTTTACAACCCATGGAATGAGCTGGGTGAAACAGGCTCCAGGAAAGGGTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACTCTGGAGTGCCAACATATACTGATGACTTCAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCTACATATTTCTGTGCAAGATCAGAACTGTCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb025重鏈DNA序列
34 CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAAGCTTCTGGCTACGCATTCAGTAGCTACTGGATGAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGAAAGGGTCTTGAGTGGATTGGACAGATTTATCCTGGAGATGGTGATACTGATTACAACGGAAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACCTCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGCCGATCCCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb032重鏈DNA序列
35 CAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTTTGGTATGGGTGTAGGCTGGTTTCGTCAGCCTTCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTGGTGGGATGATGATAAGTACTATAACCCAGCCCTGAAGAGTCGGCTCACAATCTCCAAGGATACCTCCAAAAACCAGGTTTTCCTCAAGATCGCCAATGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGTGCTCGAAGGGGTAGTAATGCTCTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA 小鼠mAb033重鏈DNA序列
36 GAGGTCCAGCTGCAACAGTCTGGACCTGAGCTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGATACCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACATGGACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTAATCCTAACACTGGTGGTACTATCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCAGCACAGCCTACATGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCAGTCTATTACTGTGCAGGAGAGGGCCCTTATTACTACGGTACTACCCACCCTTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA 小鼠mAb037重鏈DNA序列
108 CAAGTGCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAAAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAGGTGTCTTGTAAAGCCTCTGGCTACACCTTCACCGACTACAACATGGA CTGGGTGCGGCAGGCCCACGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCGACATCAACCCCAACACCGGCGGAACAATCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAGAGCCACCCTGACAGTGGACACCAGCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGACTGAGAAGCGACGACACAGCCGTGTACTACTGCGCCGGCGAGGGCCCTTACTACTACGGCACGACCCACCCCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTGACCGTGTCCAGC 人類化mAb037重鏈DNA序列
37 GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGACCATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACTTGTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCCAGCTGGAAATCAGG 小鼠mAb004輕鏈DNA序列
38 GATATTGTGATGACCCAAATTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGTACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTAATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTTCTGCTTTCAAAGTACACATGTTCCTCCGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA 小鼠mAb005輕鏈DNA序列
39 GACGTGGTCATGACACAGAGCCCTCTGAGCCTGCCTGTGACACTGGGACAGCCTGCCAGCATCAGCTGTAGAAGCAGCCAGAGCCTGGTGCACAGCAACGGCAATACCTACCTGCACTGGTATCTGCAGAGGCCCGGACAGTCTCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCAACCGGTTCAGCGGCGTGCCCGATAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTTCTGCTTCCAAAGCACCCACGTGCCACCTACCTTTGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAG 人類化mAb005輕鏈DNA序列
40 GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGTCTTGTACGTAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAACCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 小鼠mAb008輕鏈DNA序列
41 GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGTAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGGTGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCAGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA 小鼠mAb010輕鏈DNA序列
42 GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTATTGCTGGCAAGGTACACATTTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA 小鼠mAb011輕鏈DNA序列
43 GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCTATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTATATAGTAATGGAAAAACCTATTTGAATTGGTTATTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGAACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGGGTTTATTACTGCGTGCAAGGTACACATTTTCCTCACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 小鼠mAb013輕鏈DNA序列
44 GATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCCTTGTACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTTCTGCTCTCAAAGTACACATGTTCCTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA 小鼠mAb020輕鏈DNA序列
45 GACATTGTGATGACTCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGACTCCAGGAGATAGAGTCTCTCTTTCCTGCAGGGCCAGCCAGAGTATTAGCGACTACTTACACTGGTATCAACAAAAATCACATGAGTCTCCAAGGCTTCTCATCAAATATGCTTCCCAATCCATCTCTGGGATCCCCTCCAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGTCAGATTTCACTCTCAGTATCAACAGTGTGGAACCTGAAGATGTTGGAGTGTATTACTGTCAAAATGGTCACAGCTTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 小鼠mAb025輕鏈DNA序列
46 GATATTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTACATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA 小鼠mAb032輕鏈DNA序列
47 GATGTTGTGGTGACTCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGCTTTGGAGATCAAGTTTCTATCTCTTGCAGGTCTAGTCAGAGTCTTGCAAACAGTTATGGGAACACCTATTTGTCTTGGTACCTGCACAAGCCTGGCCAGTCTCCACAGCTCCTCATCTATGGGATTTCCAACAGATTTTCTGGGGTGCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGTTCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCACAATAAAGCCTGAGGACTTGGGAATGTATTACTGCTTACAAGGTACACATCAGCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA 小鼠mAb033輕鏈DNA序列
48 GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCTATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTATATAGTAATGGAAAAACCTATTTGAATTGGTTATTACAGAGGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGAACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTACTGCGTGCAAGGTACACATTTTCCTCAGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA 小鼠mAb037輕鏈DNA序列
109 GATGTGGTGATGACCCAGTCTCCACTGAGCCTGCCTGTGACCCTGGGCCAACCTGCCAGCATCAGCTGTAAAAGCAGCCAGAGCCTGCTGTACAGCAACGGCAAGACCTACCTGAACTGGCTGCTGCAGAGACCTGGCCAGAGCCCTAGACGGCTGATCTACCTGGTGTCCAAGCTGGACAGCGGCGTCCCCGATAGATTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGTAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCGTGCAGGGCACACACTTCCCCCAGACCTTCGGCGGCGGAACAAAGCTGGAAATCAAG 人類化mAb037輕鏈DNA序列
49 SYGMS 小鼠mAb004重鏈CDR1
50 DYGMH 小鼠mAb005重鏈CDR1
51 RYWMS 小鼠mAb008重鏈CDR1
52 GYGVN 小鼠mAb010重鏈CDR1
53 SYWMH 小鼠mAb011重鏈CDR1
54 DFYMK 小鼠mAb013重鏈CDR1
55 SYAVH 小鼠mAb020重鏈CDR1
56 THGMS 小鼠mAb025重鏈CDR1
57 SYWMN 小鼠mAb032重鏈CDR1
58 TFGMGVG 小鼠mAb033重鏈CDR1
59 DYNMD 小鼠mAb037重鏈CDR1
60 TISSSGSYTYYPDSVKG 小鼠mAb004重鏈CDR2
61 YSNSDSTTIYYADTVKG 小鼠mAb005重鏈CDR2
62 EINPDGNAINYAPSLKD 小鼠mAb008重鏈CDR2
63 MIWGDGSTDYNSALKS 小鼠mAb010重鏈CDR2
64 MIDPSDSETRLNQKFKD 小鼠mAb011重鏈CDR2
65 DIDPNNGDTFYNQKFKG 小鼠mAb013重鏈CDR2
66 VMWSGGSTDYNAAFIS 小鼠mAb020重鏈CDR2
67 TYSGVPTYTDDFKG 小鼠mAb025重鏈CDR2
68 QIYPGDGDTDYNGKFKG 小鼠mAb032重鏈CDR2
69 HIWWDDDKYYNPALKS 小鼠mAb033重鏈CDR2
70 DINPNTGGTIYNQKFKG 小鼠mAb037重鏈CDR2
71 TYYGAMDY 小鼠mAb004重鏈CDR3
72 SYYSNYVDY 小鼠mAb005重鏈CDR3
73 PFPSV 小鼠mAb008重鏈CDR3
74 WAFAY 小鼠mAb010重鏈CDR3
75 PYGDLDY 小鼠mAb011重鏈CDR3
76 DLY 小鼠mAb013重鏈CDR3
77 MGDYDGVAWFAY 小鼠mAb020重鏈CDR3
78 SELSWFAY 小鼠mAb025重鏈CDR3
79 RSPY 小鼠mAb032重鏈CDR3
80 RGSNALDY 小鼠mAb033重鏈CDR3
81 EGPYYYGTTHPFAY 小鼠mAb037重鏈CDR3
82 RSSQTIVHSNGNTYLE 小鼠mAb004輕鏈CDR1
83 RSSQSLVHSNGNTYLH 小鼠mAb005輕鏈CDR1
84 RSSQSLVRSNGNTYLE 小鼠mAb008輕鏈CDR1
85 KSSQSLLDSGGKTYLN 小鼠mAb010輕鏈CDR1
86 KSSQSLLDSDGKTYLN 小鼠mAb011輕鏈CDR1
87 KSSQSLLYSNGKTYLN 小鼠mAb013輕鏈CDR1
88 RASQSISDYLH 小鼠mAb025輕鏈CDR1
89 RSSQSIVHSNGNTYLE 小鼠mAb032輕鏈CDR1
90 RSSQSLANSYGNTYLS 小鼠mAb033輕鏈CDR1
91 KVSNRFS 小鼠mAb004輕鏈CDR2
92 QVSKLDSGVPD 小鼠mAb010輕鏈CDR2
93 LVSKLDS 小鼠mAb011輕鏈CDR2
94 YASQSIS 小鼠mAb025輕鏈CDR2
95 GISNRFS 小鼠mAb033輕鏈CDR2
96 FQGSLVPWT 小鼠mAb004輕鏈CDR3
97 FQSTHVPPT 小鼠mAb005輕鏈CDR3
98 FQGSHVPYT 小鼠mAb008輕鏈CDR3
99 WQGTHFPLT 小鼠mAb010輕鏈CDR3
100 WQGTHFPFT 小鼠mAb011輕鏈CDR3
101 VQGTHFPHT 小鼠mAb013輕鏈CDR3
102 SQSTHVPPWT 小鼠mAb020輕鏈CDR3
103 QNGHSFPYT 小鼠mAb025輕鏈CDR3
104 LQGTHQPWT 小鼠mAb033輕鏈CDR3
105 VQGTHFPQT 小鼠mAb037輕鏈CDR3
圖1A至1B顯示藉由HT7、mAb005及mAb037對rTg4510及WT腦溶解物之西方墨點(western blot)分析。
圖2A至2B顯示藉由HT7、mAb005及mAb037對AD及ND腦溶解物之西方墨點分析。
圖3A至3B顯示藉由HT7、mAb005及mAb037對十二醯基肌胺酸鈉可溶性及不溶性部分中之AD腦之西方墨點分析。
圖4A顯示亞細胞分級分離。
圖4B顯示HT7、mAb005及參考抗體之點狀墨點分析。
圖4C顯示mAb005 (「005」)、mAb011 (「011」)、mAb013 (「013」)、mAb010 (「010」)、mAb032 (「032」)、mAb037 (「037」)、mAb020 (「020」)、mAb008 (「008」)、mAb025 (「025」)、mAb033 (「033」)及mAb004 (「004」)之點狀墨點分析。
圖5A及5B顯示對各種腦組織之點狀墨點分析。圖5A顯示非癡呆(「ND」)、阿茲海默氏病(「AD」)、進行性核上性麻痺(「PSP」)、皮質基底核退化症(「CBD」)或匹克氏病(「PiD」)腦之中腦、丘腦、硬膜、額上回及額葉皮質區域中的AT8及HT7之結果。圖5B顯示非癡呆(「ND」)、阿茲海默氏病(「AD」)、進行性核上性麻痺(「PSP」)、皮質基底核退化症(「CBD」)或匹克氏病(「PiD」)腦之中腦、丘腦、硬膜、額上回、額葉皮質及小腦區域中的mAb005、HT7及參考抗體之結果。
圖5C顯示mAb005 (「005」)、mAb011 (「011」)、mAb013 (「013」)、mAb010 (「010」)、mAb032 (「032」)、mAb037 (「037」)、mAb020 (「020」)、mAb008 (「008」)、mAb025 (「025」)、mAb033 (「033」)及mAb004 (「004」)之點狀墨點分析。
圖6A顯示利用HT7及AT8對ND及AD腦溶解物之蔗糖梯度離心(SGC)及西方墨點分析。
圖6B顯示利用HT7、AT8、突觸素、GAPDH及mAb005對ND及AD腦溶解物之SGC及點狀墨點分析。
圖7A顯示利用HT7對ND及AD腦溶解物之粒徑篩析層析(SEC)及西方墨點分析。
圖7B顯示利用HT7、AT8、突觸素(「Synapt」)、GAPDH、mAb005及參考抗體對ND及AD腦溶解物之SEC及點狀墨點分析。
圖8A顯示利用mAb005、HT7、AT8及參考抗體對1至6月齡rTg4510 (Tg)及野生型(WT)小鼠腦溶解物之點狀墨點分析。
圖8B顯示利用mAb005探測之2.5月齡及6月齡Tg腦溶解物之SEC及點狀墨點分析。
圖9A顯示Tau經由突觸連接之腦區域蔓延之示意圖示(修改自Brettschneider, J.等人(2015).Nature Reviews Neuroscience ,16 (2), 109)。
圖9B顯示利用mAb005 (亦稱為RAA7)對人腦切片之指示腦區域之免疫組織化學(IHC)染色，其中在頂部標記其疾病狀態(ND對AD)、Braak分期(I至VI)及ID。加框線之照片顯示mAb005標記之Tau纏結之陽性信號。
圖9C顯示利用mAb005 (亦稱為RAA7)及mAb037對人腦切片之指示腦區域之免疫組織化學(IHC)染色，其中在頂部標記其疾病狀態(ND對AD)、Braak分期(I至VI)及ID。
圖9D顯示利用mAb005對所指示PSP腦組織之IHC染色，其顯示每一組織之陽性mAb005信號。
圖9E顯示利用mAb005及mAb037對所指示之四種PSP腦組織之IHC染色，其顯示每一組織之陽性mAb005信號。
圖10A至10B顯示藉由mAb005對rTg4510腦之IHC染色。圖10A顯示3個月時Tg腦中之染色。圖10B顯示6個月時Tg腦中之染色。
圖11A及11B顯示C2N-8E12 (參考AbbVie)及mAb005在腹膜內注射(i.p.)至3月齡rTg4510動物中後之總結圖表(n = 4-5隻動物；平均值±SD)。
圖12A顯示原始小鼠純系mAb005及人類化mAb005對AD及ND腦勻漿之結合親和力。
圖12B顯示原始小鼠純系mAb037及人類化mAb037對AD及ND腦勻漿之結合親和力。
圖13A至13B顯示mAb005及mAb037對Tau播散能力之效應。圖13A顯示在有及沒有mAb005及同型對照(「mIgG」)情形下之Tau及DAPI染色。圖13B顯示在有及沒有mAb005及mAb037情形下之Tau及DAPI染色。
圖13C至13E顯示mAb005免疫耗竭分析之結果。圖13C顯示Tau斑點對mAb005抗體濃度；圖13D顯示Tau耗竭對mAb005抗體濃度；圖13E顯示在經mAb005或小鼠IgG同型對照處理後之西方墨點染色。
圖14顯示使用交聯耦合質譜法藉由構形表位定位對mAb005及mAb037之表徵。
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Claims (26)

  1. 一種經分離之抗Tau抗體或其抗原結合部分，其包含：a)重鏈可變區，其包含i)互補決定區(CDR)1，該CDR1包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列；ii)CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列；及iii)CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO：72之胺基酸序列；及b)輕鏈可變區，其包含iv)CDR1，該CDR1包含SEQ ID NO：83之胺基酸序列；v)CDR2，該CDR2包含SEQ ID NO：91之胺基酸序列；及vi)CDR3，該CDR3包含SEQ ID NO：97之胺基酸序列。
  2. 如請求項1之抗體或其抗原結合部分，其中該等重鏈可變區包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列或與SEQ ID NO：3之具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。
  3. 如請求項1之抗體或其抗原結合部分，其中該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列或與SEQ ID NO：15具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。
  4. 如請求項1之抗體或其抗原結合部分，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列或與SEQ ID NO：2具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列或與SEQ ID NO：14具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。
  5. 如請求項1之抗體或其抗原結合部分，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列或與SEQ ID NO：3具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列或與SEQ ID NO：15具有至少95%序列一致性之胺基酸序列。
  6. 如請求項5之抗體或其抗原結合部分，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列。
  7. 如請求項1至6中任一項之抗體或其抗原結合部分，其中該抗體或其抗原結合部分係單株抗體。
  8. 如請求項1至6中任一項之抗體或其抗原結合部分，其中該抗體或其抗原結合部分相對於正常人類Tau種類優先地結合至病理性人類Tau種類。
  9. 如請求項8之抗體或其抗原結合部分，其中該病理性人類Tau種類係來自tau蛋白病變腦；Tau聚集體或異常磷酸化Tau或二者；在腦之突觸處累積之Tau聚集體或異常磷酸化Tau或二者；或在tau蛋白病變腦之突觸處累積之Tau聚集體或異常磷酸化Tau或二者。
  10. 如請求項1之抗體或其抗原結合部分，其中該抗體或其抗原結合部分結合至人類2N4R Tau同種型中之胺基酸殘基S131、K132、T135、S137 及R155。
  11. 一種經標記抗體，其包含如請求項1至10中任一項之抗體或其抗原結合部分及可檢測標記。
  12. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至10中任一項之抗體或其抗原結合部分及醫藥上可接受之載劑。
  13. 一種如請求項1至10中任一項之抗體或其抗原結合部分或如請求項12之醫藥組合物之用途，其係用於製備用於治療或預防個體之Tau蛋白相關疾病之藥劑。
  14. 一種如請求項1至10中任一項之抗體或其抗原結合部分或如請求項12之醫藥組合物之用途，其係用於製備用於保持或增加患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體的認知記憶能力或減緩記憶喪失之藥劑。
  15. 一種如請求項1至10中任一項之抗體或其抗原結合部分或如請求項12之醫藥組合物之用途，其係用於製備用於降低患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau蛋白含量之藥劑，其中i)非磷酸化Tau蛋白、磷酸化Tau蛋白及/或高度磷酸化Tau蛋白在該個體中之含量與在投與該抗體或其抗原結合部分之前其在該個體中之含量相比降低；及/或 ii)病理性Tau種類在該個體中之含量與在投與該抗體或其抗原結合部分之前其在該個體中之含量相比降低。
  16. 一種如請求項1至10中任一項之抗體或其抗原結合部分或如請求項12之醫藥組合物之用途，其係用於製備用於降低患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau蛋白聚集體含量之藥劑，其中i)非磷酸化Tau蛋白、磷酸化Tau蛋白及/或高度磷酸化Tau蛋白在該個體中之含量與在投與該抗體或其抗原結合部分之前其在該個體中之含量相比降低；及/或ii)病理性Tau種類在該個體中之含量與在投與該抗體或其抗原結合部分之前其在該個體中之含量相比降低。
  17. 一種如請求項1至10中任一項之抗體或其抗原結合部分或如請求項12之醫藥組合物之用途，其係用於製備用於抑制及/或逆轉患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau聚集傳播之藥劑。
  18. 一種如請求項1至10中任一項之抗體或其抗原結合部分或如請求項12之醫藥組合物之用途，其係用於製備用於抑制及/或逆轉患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病風險下之個體中的Tau播散之藥劑。
  19. 如請求項13至18中任一項之用途，其中該Tau蛋白相關疾病係tau蛋白病變。
  20. 如請求項19之用途，其中該tau蛋白病變係神經退化性tau蛋白病變。
  21. 如請求項19之用途，其中該tau蛋白病變係選自由以下組成之群：阿茲海默氏病(AD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、亨庭頓氏病(Huntington's disease,HD)、帕金森氏病(Parkinson's disease,PD)、庫-賈二氏病(Creutzfeldt-Jacob disease)、拳擊手型失智症、唐氏症候群(Down's Syndrome)、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、英國型失智症(British dementia)、丹麥型失智症(Danish dementia)、包涵體肌炎、普裡昂蛋白(prion protein)腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷、關島帕金森症-失智症候群(Guam Parkinsonism-dementia complex)、非關島運動神經元疾病伴神經原纖維纏結(Non-Guamanian motor neuron disease with neurofibrillary tangle)、嗜銀顆粒失智症、皮質基底核退化症、瀰漫性神經原纖維纏結伴鈣化症、額顳葉失智症、額顳葉失智症伴與染色體17相關之帕金森症、哈勒沃登-施帕茨病(Hallevorden-Spatz disease)、多系統萎縮、C型尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease type C)、蒼白球-腦橋-黑質退化、匹克氏病、進行性皮質下神經膠質瘤病、進行性核上性麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、僅纏結型失智症、白質tau蛋白病變伴球狀神經膠質包涵體、額顳葉失智症、腦炎後帕金森症、與染色體17相關之帕金森症及肌強直性營養不良。
  22. 如請求項19之用途，其中該tau蛋白病變係阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)或匹克氏病(PiD)。
  23. 如請求項13至18中任一項之用途，其中該藥劑係用於與至少一種額外療法組合使用。
  24. 如請求項23之用途，其中該至少一種額外療法係選自神經病學藥物、皮質類固醇、抗生素、抗病毒劑、抗Tau抗體、Tau抑制劑、抗類澱粉β抗體、β-類澱粉聚集抑制劑、抗BACE1抗體及BACE1抑制劑。
  25. 如請求項13至18中任一項之用途，其中該個體診斷為患有Tau蛋白相關疾病或處於發展成該疾病之風險下。
  26. 如請求項25之用途，其中該個體診斷為患有選自由以下組成之群之tau蛋白病變或處於發展成該病變之風險下：阿茲海默氏病(AD)、進行性核上性麻痺(PSP)、皮質基底核退化症(CBD)及匹克氏病(PiD)。
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