KR20210024550A - Pd-1 축 결합 길항제, 백금 제제, 및 토포이소머라제 ii 억제제를 이용한 폐암 치료 방법 - Google Patents

Pd-1 축 결합 길항제, 백금 제제, 및 토포이소머라제 ii 억제제를 이용한 폐암 치료 방법 Download PDF

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KR20210024550A
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antibody
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lung cancer
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carboplatin
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KR1020217001531A
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애리얼 로페즈-차베즈
대니얼 안토니우스 워터캠프
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제넨테크, 인크.
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Abstract

본 개시는 개체의 폐암(예를 들어, 소세포 폐암, 예컨대 확장 병기의 소세포 폐암)을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 PD-1 축 결합 길항제(예를 들어, 항-PD-L1 항체, 예컨대 아테졸리주맙), 백금 제제(예컨대, 시스플라틴 또는 카보플라틴), 및 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)를 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

Description

PD-1 축 결합 길항제, 백금 제제, 및 토포이소머라제 II 억제제를 이용한 폐암 치료 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 6월 23일에 출원한 미합중국 가출원 제 62/689,105호, 2018년 8월 17일에 출원한 미합중국 가출원 제 62/719,461호, 및 2018년 9월 25일에 출원한 미합중국 가출원 제 62/736,326호의 우선권 이익을 주장하며, 그 각각의 내용은 전체가 참조로서 본원에 포함된다.
ASCII 텍스트 파일로 서열 목록의 제출
ASCII 텍스트 파일로 아래와 같이 제출한 내용은 전체가 참조로서 본원에 포함된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독가능 형태(CRF)(파일 명칭: 146392044940SEQLIST.TXT, 기록 일자: 2019년 6월 18일, 크기: 37 KB).
본 개시는 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙)를 백금 제제(예컨대, 카보플라틴), 및 토포이소머라제 II의 억제제(예컨대, 에토포시드)와 병용으로 투여함으로써 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
폐암은 전 세계적으로 여전히 암 사망의 주요 원인으로 꼽힌다. 폐암은 남성에게 가장 흔한 암이며 2008년에 새롭게 발병한 암의 약 13%를 차지하였다(Jemal et al. (2011) CA Cancer J. Clin 61:69-90). 2012년 유럽에서는 313,000건의 새로운 폐암 사례 및 268,000건의 폐암 사망이 발생한 것으로 추정되었다(GLOBOCAN(2012). 예상 암 발병률: 2012년 전세계 사망률 및 유병률. globocan(dot)iarc(dot)fr/Pages/fact_sheets_cancer.aspx.에서 입수 가능함). 미국의 유사한 데이터는 2015년에 221,200건의 새로운 폐암 사례 및 158,040건의 폐암 사망이 있을 것으로 추정하였다(Siegel et al. (2015) CA Cancer J Clin. 65:5-29).
소세포 폐암(SCLC)은 전체 폐암 사례의 약 13%를 차지하며 빠른 발달 시간 및 전이성 질환의 조기 발병으로 인하여 비소세포 폐암(NSCLC)과 구별된다(Govindan et al. (2006) J Clin Oncol.24: 4539-44). 거의 모든 소세포 폐암(SCLC)의 사례는 흡연에 기인한다(Pesch et al. (2012) Int J Cancer. 131:1210-9). 소세포 폐암(SCLC) 환자는 광범위한 전이성 질환의 증상을 자주 나타내며 빠른 임상 악화를 경험할 수 있다. 따라서 상기 환자에 대한 신속한 치료 개시가 필요하다. 소세포 폐암(SCLC) 환자의 생존에 나쁜 예후 인자는 확장 병기의 질병, 수행 능력 저하, 체중 감소 및 과도한 규모의 질병과 관련된 표지자(예컨대, 젖산 탈수소 효소)를 포함한다(Yip et al. (2000) Lung Cancer. 28:173-85; Foster et al. (2009) Cancer.115:2721-31).
제한 병기의 소세포 폐암(SCLC) 환자는 장기 생존 가능성이 있는 화학요법과 방사선으로 치료할 수 있다(Stinchcombe et al. (2010) Oncologist.15:187-95). 하지만, 소세포 폐암(SCLC) 환자의 대다수(약 70%)는 생존 가능성이 낮은 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)으로 진단된다(전체 생존 기간[OS]의 중간값 약 10개월)(Socinski et al. (2009). J Clin Oncol. 27:4787-92.). 흉통, 호흡 곤란 및 기침은 폐암 환자가 경험하는 가장 빈번한 질병 관련 증상 중 하나이다. 화학요법만으로도 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC) 환자의 증상을 완화하고 생존을 연장시킬 수 있지만, 장기 생존은 드물다(Johnson et al. (2004) Hematol Oncol Clin North Am. 18:309-22; Demedts et al. (2010) Eur Respir J. 35:202-15).
1기 소세포 폐암(SCLC) 환자의 5년간 상대 생존율은 약 31%이지만, 4기에서는 5년간 상대 생존율이 약 2%로 감소한다(American Cancer Society; Small Cell Lung Cancer Survival Rates, by Stage: www(dot)cancer(dot)org/cancer/small-cell-lung-cancer/detection-diagnosis-staging/survival-rates(dot)html. Accessed June 2018). 따라서, 폐암을 치료하는 방법, 예컨대 생존율을 연장시키는 방법이 당해 분야에 요구된다.
특허 출원, 특허 공보, 및 UniProtKB/Swiss-Prot 수탁 번호를 포함한, 본원에 인용된 모든 참조문헌은, 각 개별 참조문헌이 참조로서 포함될 수 있도록 구체적으로 및 개별적으로 지시된 것처럼 그 전체가 참조로서 본원에 포함된다.
폐암 환자를 치료하기 위한 항-PD-L1 항체의 방법들 및 용도들이 본원에 제공된다. 특히, 상기 방법들 및 용도들은 전에 치료된 적이 없는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 가진 개체들을 대상으로 카보플라틴 및 에토포시드와 병용으로 한 아테졸리주맙(티쎈트릭(TECETRIQ)®)의 무작위 3상 임상 연구의 데이터를 기반으로 한다. 상기 연구는 티쎈트릭®(아테졸리주맙) 및 화학요법(카보플라틴 및 에토포시드)을 병용으로 한 초기(1차) 치료가 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC) 환자에게 화학요법 단독에 비하여 유의미하게 더 오래 사는 데 도움이 되었음을 보여주었다. 티쎈트릭-기반 조합은 또한 화학요법 단독에 비하여 질병 악화 또는 사망(PFS)의 위험을 감소시켰다. 티쎈트릭 및 화학요법 조합의 안전성은 개별 의약품의 공지된 안전성 프로파일과 일치하는 것으로 나타났으며, 상기 조합으로 새로운 안전성 징후가 확인되지는 않았다.
일 양태에서, 유효량의 항-PD-L1 항체, 백금 제제, 및 토포이소머라제 II 억제제를 개체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 연장시키는, 폐암을 가진 개체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 연장시킨다.
다른 양태에서, 유효량의 항-PD-L1 항체, 백금 제제, 및 토포이소머라제 II 억제제를 개체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 치료는 백금 제제 및 토포이소머라제 II 억제제로 치료를 받은 폐암을 가진 개체와 비교하여 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 (예컨대, 약 0.5, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 2, 2.25, 2.5, 2.75, 또는 3개월 중 적어도 하나 이상만큼)연장시키는, 폐암을 가진 개체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 전체 생존 기간(OS)을, 예컨대 약 10.5, 10.75, 11, 11.25, 11.5, 11.75, 12, 12.25, 12.5, 12.75, 13, 13.25, 13.5, 13.75, 또는 14개월 중 적어도 하나 이상만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 전체 생존 기간(OS)을 14개월 초과, 예컨대 약 14.25, 14.5, 14.75, 15, 15.25, 15.5, 15.75 또는 15.75개월 중 하나만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 전체 생존 기간(OS)을 약 15.9 개월만큼 연장시킨다.
일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5.2개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5.5개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5.6개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 6개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 11개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 11.5개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 12개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 12.3개월만큼 연장시킨다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체는, (a) GFTFSDSWIH(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, AWISPYGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-2, 및 RHWPGGFDY(서열 번호 3)의 아미노산을 포함하는 HVR-3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및 (b) RASQDVSTAVA(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, SASFLYS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 QQYLYHPAT(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이다.
일부 구현예들에서, 상기 백금 제제는 카보플라틴 또는 시스플라틴이다. 일부 구현예들에서, 상기 백금 제제는 카보플라틴이다. 일부 구현예들에서, 상기 토포이소머라제 II 억제제는 에토포시드, 테니포시드, 독소루비신, 다우노루비신, 미톡산트론, 암사크린, 엘립티신, 아우린트리카르복실산, 또는 HU-331이다. 일부 구현예들에서, 상기 토포이소머라제 억제제는 에토포시드이다. 일부 구현예들에서, 상기 백금 제제는 카보플라틴이고, 상기 토포이소머라제 II 억제제는 에토포시드이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체는 1200 mg의 용량으로 투여되고, 상기 백금 제제는 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되며, 상기 토포이소머라제 II 억제제는 100 mg/m2의 용량으로 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체, 상기 백금 제제, 및 상기 토포이소머라제 II 억제제는 21일 주기로 4회 투여되고, 상기 항-PD-L1 항체는 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여되고, 상기 백금 제제는 1일차에 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되며, 상기 토포이소머라제 II 억제제는 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일, 2일, 및 3일차에 각각 100 mg/m2의 용량으로 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체는 4주기 이후에 추가로 투여되고, 4주기 이후에 주기 별로 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체, 상기 백금 제제, 및 상기 토포이소머라제 II 억제제는 1 내지 4주기의 1일차에 순차적으로 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체는 상기 백금 제제 이전에 투여되고, 상기 백금 제제는 1 내지 4주기의 1일차에 상기 토포이소머라제 II 억제제 이전에 투여된다.
일부 구현예들에서, 상기 폐암은 소세포 폐암(SCLC)이다. 일부 구현예들에서, 상기 소세포 폐암(SCLC)은 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)이다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 대한 치료 경험이 없다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 약 10이다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 약 16이다. 일부 구현예들에서, 상기 폐암은 뇌로 전이되었다. 일부 구현예들에서, 상기 폐암은 간으로 전이되었다. 일부 구현예들에서, 상기 폐암은 부신으로 전이되었다. 일부 구현예들에서, 상기 폐암은 림프절로 전이되었다. 일부 구현예들에서, 상기 폐암은 폐 내부(예컨대, 질병의 원래 부위의 외부) 또는 다른 폐로 전이되었다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 65세 이상(예컨대, 약 65세 내지 약 74세, 약 75세 내지 약 84세, 또는 약 85세 초과)이다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 PD-L1 음성이다. 일부 구현예들에서, 상기 개체로부터 수득된 샘플에서 종양 세포(TC) 및/또는 종양 침윤 면역 세포(IC)의 1% 미만이, 예컨대 본원에 기재된 검정에 따라 PD-L1을 발현하는 경우, 상기 개체는 PD-L1 음성이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체, 상기 백금 제제, 및 상기 토포이소머라제 II 억제제는 각각 정맥 내로 투여된다.
다른 양태에서, 유효량의 아테졸리주맙, 카보플라틴, 및 에토포시드를 개체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 아테졸리주맙은 1200 mg의 용량으로 투여되고, 상기 카보플라틴은 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되고, 상기 에토포시드는 100 mg/m2의 용량으로 투여되고, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및 전체 생존 기간(OS)을 연장시키는, 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 가진 개체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 구현예들에서, 아테졸리주맙, 카보플라틴, 및 에토포시드는 21일 주기로 4회 투여되고, 아테졸리주맙은 4주기 이후에 추가로 투여되고, 아테졸리주맙은 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여되고, 카보플라틴은 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되고, 에토포시드는 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일, 2일, 및 3일차에 각각 100 mg/m2의 용량으로 투여되며, 아테졸리주맙은 4주기 이후에 주기 별로 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여된다.
일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5.2개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5.5개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5.6개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 6개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 11개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 11.5개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 12개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 12.3개월만큼 연장시킨다.
일부 구현예들에서, 상기 개체는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 대한 치료 경험이 없다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 약 10이다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 약 16이다. 일부 구현예들에서, 상기 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)은 뇌로 전이되었다. 일부 구현예들에서, 상기 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)은 간으로 전이되었다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 65세 이상이다.
일부 구현예들에서, 상기 아테졸리주맙, 상기 카보플라틴, 및 상기 에토포시드는 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 순차적으로 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 아테졸리주맙은 상기 카보플라틴 이전에 투여되고, 상기 카보플라틴은 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 상기 에토포시드 이전에 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 아테졸리주맙, 상기 카보플라틴, 및 상기 에토포시드는 각각 정맥 내로 투여된다.
일부 구현예들에서, 상기 개체는 인간이다.
다른 양태에서, 백금 제제 및 토포이소머라제 II 억제제와 병용으로 사용하기 위한 항-PD-L1 항체를 포함하는, 상기 및 본원에 기재된 방법 중 임의의 것에 따라 폐암을 가진 개체를 치료하기 위한 키트가 본원에 제공된다. 또한, 카보플라틴 및 에토포시드와 병용으로 사용하기 위한 아테졸리주맙을 포함하는, 상기 및 본원에 기재된 방법들 중 임의의 것에 따라 폐암을 가진 개체를 치료하기 위한 키트가 본원에 제공된다.
다른 양태에서, 유효량의 항-PD-L1 항체, 백금 제제, 및 토포이소머라제 II 억제제를 개체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및/또는 전체 생존 기간(OS)을 연장시키는, 개체의 폐암을 치료하는 방법에 사용하기 위한 항-PD-L1 항체가 본원에 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체는 상기 또는 본원에 기재된 방법들 중 임의의 것에 따른 방법에 따라 사용되기 위한 것이다.
다른 양태에서, 유효량의 아테졸리주맙, 카보플라틴, 및 에토포시드를 개체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 아테졸리주맙은 1200 mg의 용량으로 투여되고, 상기 카보플라틴은 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되고, 상기 에토포시드는 100 mg/m2의 용량으로 투여되고, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및 전체 생존 기간(OS)을 연장시키는, 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 치료하는 방법에 사용하기 위한 아테졸리주맙을 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 조성물은 상기 또는 본원에 기재된 방법들 중 하나에 따른 방법에 사용하기 위한 것이다.
본원에 기재된 다양한 구현예의 특성들 중 하나, 일부 또는 전부가 조합되어 본 발명의 다른 구현예들을 형성할 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명의 상기 및 다른 양태들은 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명의 상기 및 다른 구현예들은 하기 상세한 설명에 의해 추가로 설명된다.
특허 또는 출원 파일은 컬러로 실행되는 적어도 하나의 도면을 포함한다. 컬러 도면(들)을 포함한 상기 특허 또는 특허 출원 공보의 사본은 필요한 비용을 지불하고 요청할 경우 특허청에서 제공한다.
도 1은 실시예 1에 설명된 임상 시험의 연구 설계에 대한 개략도를 도시한다. A군은 201명의 환자를 포함하였다. B군은 202명의 환자를 포함하였다. PCI = 예방적 전뇌 방사선조사. PD = 질병 진행.
도 2는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드) 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯(Kaplan-Meier Plot)을 도시한다.
도 3은 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드) 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 4는 A군 대 B군 환자의 전체 생존율(ORR) 및 반응 기간(DOR)의 비교를 도시한다(CR = 완전 반응; CR/PR = 완전 반응/부분 반응; SD = 안정성 질환; PD = 진행성 질환) 전체 생존율(ORR) 및 반응 기간(DOR)은 RECIST v1.1 기준에 따라 평가하였다.
도 5a는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 다양한 기저 위험 인자를 가진 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 하위군 분석을 나타내는 포레스트 플롯(Forest Plot)을 도시한다. (P = 위약; A = 아테졸리주맙.) 중간값은 KM 방법으로 추정하였다. P + CE에 대한 상대적인 위험 비율 및 관련 신뢰 구간은 비층화 Cox 회귀를 이용하여 추정하였다. 간 전이는 표적 병변만을 기반으로 하였다.
도 5b는 또한 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 다양한 기저 위험 인자를 가진 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 하위군 분석을 나타내는 포레스트 플롯을 도시한다.
도 6a는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 다양한 기저 위험 인자를 가진 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 하위군 분석을 나타내는 포레스트 플롯을 도시한다. (P = 위약; A = 아테졸리주맙.) 중간값은 KM 방법으로 추정하였다. P + CE에 대한 상대적인 위험 비율 및 관련 신뢰 구간은 비층화 Cox 회귀를 이용하여 추정하였다. 간 전이는 표적 병변만을 기반으로 하였다.
도 6b는 또한 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 다양한 기저 위험 인자를 가진 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 하위군 분석을 나타내는 포레스트 플롯을 도시한다.
도 7a는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 bTMB > 16인 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 7b는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 bTMB < 16인 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 8a는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 bTMB > 10인 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 8b는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 bTMB < 10인 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 9a는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 bTMB > 16인 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 9b는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 bTMB < 16인 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 10a는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 bTMB > 10인 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 10b는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 bTMB < 10인 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 11a는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 다양한 기저 위험 인자를 가진 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 하위군 분석을 나타내는 포레스트 플롯을 도시한다.
도 11b는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 다양한 기저 위험 인자를 가진 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 하위군 분석을 나타내는 다른 포레스트 플롯을 도시한다.
도 11c는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 다양한 기저 위험 인자를 가진 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 하위군 분석을 나타내는 다른 포레스트 플롯을 도시한다.
도 12a는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 PD-L1 발현 수준 <1%인 BEP1(바이오마커 평가군 1) 내 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 12b는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 PD-L1 발현 수준 <1%인 BEP2(바이오마커 평가군 2) 내 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 13a는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 PD-L1 발현 수준 <1%인 BEP1(바이오마커 평가군 1) 내 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
도 13b는 A군(아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드) 대 B군(위약 + 카보플라틴 + 에토포시드)의 PD-L1 발현 수준 <1%인 BEP2(바이오마커 평가군 2) 내 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한다.
I. 정의
본 발명을 상세히 설명하기 전에, 본 발명은 당연히 달라질 수 있는 특정 조성물 또는 생물학적 시스템에 제한되지 않는다. 또한, 본원에서 사용된 용어는 단지 특정 구현예들을 설명하기 위한 목적이며, 한정하려는 것은 아님을 이해해야 한다.
본 명세서 및 첨부된 특허청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태(“a”, “an” 및 “the”)는 문맥에서 별도로 다르게 지시되지 않는 한, 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, “분자”에 대한 언급은 2개 이상의 상기 분자들의 조합 등을 선택적으로 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 “약”은 당업자에게 용이하게 공지된 개별 값에 대한 통상의 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 값 또는 매개변수에서 “약”에 대한 언급은 그 자체로 상기 값 또는 매개변수를 나타내는 구현예들을 포함한다(및 설명한다).
본원에 기재된 본 발명의 양태들 및 구현예들은 "포함하는(comprising)", "구성되는(consisting) 및 "~로 필수적으로 구성되는(consisting essentially of)"의 양태들 및 구현예들을 포함하는 것으로 이해된다.
용어 "PD-1 축 결합 길항제"는, T-세포 기능(예컨대, 증식, 사이토카인 생성, 표적 세포 사멸)을 복구하거나 증진시키는 결과를 갖는, PD-1 신호전달 축 상의 신호전달로부터 유발된, T-세포 기능이상을 제거하기 위하여, 이의 결합 상대 중 하나 또는 그 이상과의 PD-1 축 결합 상대의 상호작용을 억제하는 분자를 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제, PD-L1 결합 길항제, 및 PD-L2 결합 길항제를 포함한다.
용어 “PD-1 결합 길항제”는, 이의 결합 상대, 예컨대 PD-L1, PD-L2 중 하나 이상과의 PD-1의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 방해하는 분자를 지칭한다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-1 결합 길항제는 이의 결합 상대 중 하나 이상에 대한 PD-1의 결합을 억제하는 분자이다. 구체적인 양태에서, 상기 PD-1 결합 길항제는 PD-L1 및/또는 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 억제한다. 예를 들어, PD-1 결합 길항제들은, PD-L1 및/또는 PD-L2 와의 PD-1의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 방해하는, 항-PD-1 항체, 이의 항원-결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 기타 분자를 포함한다. 일 구현예에서, PD-1 결합 길항제는 PD-L1을 통한 T 림프구 매개된 신호전달에서 발현되는 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개되는 음성 공자극 신호를 감소시켜, 기능 장애 T 세포의 기능 장애를 줄여준다(예컨대, 항원 인식에 대한 효과기 반응을 증진시킨다). 일부 구현예들에서, 상기 PD-1 결합 길항제는 항-PD-1 항체이다. PD-1 결합 길항제의 구체적인 예는 아래에 제공된다.
용어 “PD-L1 결합 길항제”는, 이의 결합 상대, 예컨대 PD-1, B7-1 중 하나 또는 그 이상과의 PD-L1의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 방해하는 분자를 지칭한다. 일부 구현예들에서, PD-L1 결합 길항제는 이의 결합 상대에 대한 PD-L1의 결합을 억제하는 분자이다. 구체적인 양태에서, 상기 PD-L1 결합 길항제는 PD-1 및/또는 B7-1에 대한 PD-L1의 결합을 억제한다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 결합 길항제는, 이의 결합 상대, 예컨대 PD-1, B7-1 중 하나 이상과의 PD-L1의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 방해하는 항-PD-L1 항체, 이의 항원-결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 기타 분자들을 포함한다. 일 구현예에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1을 통한 T 림프구 매개된 신호전달에서 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개된 음성 공통자극 신호를 감소시켜, 기능 장애 T-세포의 기능 장애를 줄여 준다(예컨대, 항원 인식에 대한 효과기 반응을 증진시킨다). 일부 구현예들에서, PD-L1 결합 길항제는 항-PD-L1 항체이다. PD-L1 결합 길항제의 구체적인 예들은 아래에 제공된다.
용어 "PD-L2 결합 길항제"는, 이의 결합 상대, 예컨대 PD-1 중 하나 또는 그 이상과의 PD-L2의 상호작용으로부터 유발된 신호 형질도입을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 방해하는 분자를 지칭한다. 일부 구현예들에서, PD-L2 결합 길항제는 이의 결합 상대 중 하나 이상에 대한 PD-L2의 결합을 억제하는 분자이다. 구체적인 양태에서, 상기 PD-L2 결합 길항제는 PD-1에 대한 PD-L2의 결합을 억제한다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L2 길항제들은, 이의 결합 상대, 예컨대 PD-L1 중 하나 또는 그 이상과의 PD-L2의 상호작용으로부터 유발된 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 방해하는 항-PD-L2 항체, 이의 항원-결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 기타 분자들을 포함한다. 일 구현예에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-L2를 통해 T 림프구 매개된 신호전달에서 발현되는 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개되는 음성 공자극 신호를 감소시켜, 기능 장애 T 세포의 기능 장애를 줄여준다(예컨대, 항원 인식에 대한 효과기 반응을 증진시킨다). 일부 구현예들에서, PD-L2 결합 길항제는 면역접합체이다.
"지속적인 반응"은 치료의 중단 이후에 종양 성장을 감소시키는 데 미치는 지속적인 효과를 지칭한다. 예를 들어, 종양 크기는, 투여 단계의 개시 시점에서의 크기와 비교하여 같거나 작게 유지될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 지속적인 반응은, 치료 기간과 적어도 동일한 기간, 상기 치료 기간의 적어도 1.5X, 2.0X, 2.5X, 또는 3.0X 기간을 갖는다.
용어 "약학적 제형"은 활성 성분의 생물학적 활성이 유효하도록 허용하는 형태이고, 상기 제형이 투여될 대상체에 허용 불가능하게 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 상기 제형은 무균성이다. "약학적으로 허용가능한" 부형제(비히클, 첨가제)는 유효량의 활성 성분을 제공하기 위해 대상체 포유동물에 합리적으로 투여될 수 있는 부형제이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료"는 임상 병리 과정 중에 치료되는 개체 또는 세포의 자연스런 과정을 변경하도록 설계된 임상 개입을 지칭한다. 목적하는 치료 효과는 질병 진행 속도의 감소, 질병 상태의 완화 또는 경감, 및 관해, 또는 개선된 예후를 포함한다. 예를 들어, 개체는, 만약 암세포 증식의 감소(또는 파괴), 질병으로 유발된 증상의 감소, 질병을 앓는 환자군의 삶의 질 향상, 질병을 치료하는데 요구되는 기타 약제의 투여량 감소, 및/또는 개체 생존의 연장을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 암과 관련된 1종 이상의 증상이 경감 또는 제거되었다면, 성공적으로 "치료된" 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, “질병의 진행 지연"은 상기 질병(예컨대, 암)의 발병을 보류, 방해, 지체, 저지, 안정화, 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 상기 지연은 질병의 이력 및/또는 치료받는 개체에 따라 기간이 다양해질 수 있다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 충분한 또는 유의미한 지연은, 사실상, 상기 개체에게 질병이 발병하지 않는다는 점에서, 예방을 포함할 수 있다. 예를 들어, 말기 암, 예컨대 전이의 발병이 지연될 수 있다.
“유효량”은 특정 장애의 측정 가능한 개선 또는 예방을 실시하는데 요구되는 적어도 최소량이다. 본원의 유효량은 환자의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중과 같은 요인, 및 상기 개체 내 목적 반응을 불러일으키는 항체의 능력에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한, 상기 치료의 임의의 독성 또는 유해한 효과보다 치료적으로 유익한 효과가 더 크게 되는 양을 지칭한다. 예방 용도의 경우, 유익한 또는 원하는 결과는 결과, 예컨대 위험의 제거 또는 감소, 중증도의 약화, 또는 질병, 예컨대 상기 질병의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동적 증상, 이의 합병증, 및 상기 질병의 발달 중에 나타나는 중간의 병리적 표현형을 포함하는 상기 질병의 발생 지연을 포함한다. 치료 용도의 경우, 유익한 또는 원하는 결과는 임상 결과, 예컨대 질병으로부터 유발된 하나 이상의 증상 감소, 상기 질병을 앓는 환자의 삶의 질 개선, 상기 질병을 치료하는데 요구되는 다른 약제의 용량 감소, 예컨대 표적화를 통한 다른 약제의 효과 증진, 상기 질병 진행의 지연, 및/또는 생존 연장을 포함한다. 암 또는 종양의 경우, 유효량의 약물은 암 세포수의 감소; 종양 크기의 감소; 말초 기관 내로의 암 세포 침윤의 억제(즉, 어느 정도의 둔화 또는 바람직하게는 중단); 종양 전이의 억제(즉, 어느 정도의 둔화 및 바람직하게는 중단); 종양 성장의 어느 정도의 억제; 및/또는 장애와 관련된 증상들 중 하나 이상을 어느 정도로 경감시키는 데 효과를 미칠 수 있다. 유효량은 1종 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 약물, 화합물, 또는 약제적 조성물의 유효량은 직접 또는 간접적으로 예방적 또는 치료적 처치를 달성하는데 충분한 양이다. 임상적 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물, 또는 약학적 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물, 또는 약학적 조성물과 병용으로 달성될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 따라서, "유효량"은 하나 이상의 치료제를 투여하는 맥락에서 고려될 수 있고, 만약 하나 이상의 다른 제제와 병용으로 원하는 결과가 달성될 수 있거나 달성되면, 단일 제제는 유효량으로 제공된 것으로 간주될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "병용으로(~와 함께)"는 하나의 치료 양식에 더하여 다른 치료 양식으로도 투여하는 것을 지칭한다. 이와 같이, "병용으로(~와 함께)"는 개체에게 하나의 치료 양식을 투여하기 전, 투여하는 도중, 또는 투여한 이후에 다른 치료 양식을 투여하는 것을 지칭한다.
"장애"는 치료로부터 이득을 얻을 수 있는 임의의 상태로서, 포유동물에게 문제가 되는 상기 장애를 갖게 되도록 만든 병리적 상태를 포함하는 만성 및 급성 장애 또는 질병을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 임의의 상태를 지칭한다.
용어 “세포 증식성 장애” 및 “증식성 장애”는 어느 정도의 비정상적 세포 증식과 연관되는 장애를 지칭한다. 일 구현예에서, 상기 세포 증식성 장애는 암이다. 일 구현예에서, 상기 세포 증식성 장애는 종양이다.
본원에서 사용된 바와 같이, “종양”은 악성 또는 양성인지에 상관없이 모든 신생 세포의 성장 및 증식, 그리고 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다. 용어 "암", "암성", "세포 증식성 장애", "증식성 장애" 및 "종양"은 본원에서 상호 배타적인 것이 아니다.
용어 “암” 및 “암성”은 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는, 포유동물에서의 생리학적 상태를 지칭하거나 설명한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 상기 암의 좀 더 상세한 예는 편평세포암(예컨대, 편평상피세포암), 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평세포암종을 포함한 폐암, 복막의 암, 간세포암, 위장암 및 위장관 간질암을 포함한 위염암 또는 위암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 요로의 암, 간종양, 유방암, 대장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액샘 암종, 신장 또는 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종, 흑색종, 표재 확장성 흑색종, 악성 흑자 흑색종, 말단 흑자 흑색종, 결절성 흑색종, 다발성 골수종 및 B-세포 림프종(저등급/여포성 비-호지킨 림프종(NHL); 소형 림프구성(SL) NHL; 중등급/여포성 NHL; 중등급 미만성 NHL; 고등급 면역아세포성 NHL; 고등급 림프구성 NHL; 고등급 소형 비분할 세포 NHL; 거대 질병 NHL; 외투 세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증을 포함); 만성 림프구성 백혈병(CLL); 급성 림프아구성 백혈병(ALL); 모발 세포 백혈병; 만성 골수아구성 백혈병; 및 이식후 림프증식성 장애(PTLD), 뿐만 아니라 모반증과 관련된 비정상 혈관 증식, 부종(예컨대, 뇌 종양과 관련), 메이그 증후군, 뇌암 뿐만 아니라 두경부암, 및 관련된 전이를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 특정 구현예들에서, 본 발명의 항체에 의한 치료를 잘 받아들이는 암은 유방암, 결장직장암, 직장암, 비소세포 폐암, 교모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 신장 세포 암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연조직 육종, 카포시 육종, 카르시노이드 암종, 두경부암, 난소암, 중피종, 및 다발성 골수종을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 소세포 폐암, 교모세포종, 신경 모세포종, 흑색종, 유방암종, 위암, 결장직장암(CRC), 및 간세포 암종으로부터 선택된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포독성제"는 세포에 해로운 (예컨대, 세포사를 야기하고, 증식을 억제하거나, 그렇지 않으면 세포 기능을 방해하는) 임의의 제제를 지칭한다. 세포독성제는 방사성동위원소(예컨대, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성동위원소); 화학요법제; 성장 억제제; 효소 및 이의 단편, 예컨대 핵산분해 효소; 및 독소, 예컨대 소분자 독소, 또는 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소를 비롯한 이의 단편 및/또는 변이체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 예시적 세포독성제는 항-미세소관 제제, 백금 배위 착물, 알킬화제, 항생제, 토포이소머라제 II 억제제, 항대사물질, 토포이소머라제 I 억제제, 호르몬 및 호르몬 유사체, 신호 전달 경로 억제제, 비-수용체 티로신 키나아제 혈관신생 억제제, 면역치료제, 세포자멸 촉진제, LDH-A의 억제제, 지방산 생합성의 억제제, 세포 주기 신호전달 억제제, HDAC 억제제, 프로테아솜 억제제, 및 암 대사의 억제제로부터 선택될 수 있다. 일 구현예에서, 상기 세포독성제는 탁산이다. 일 구현예에서, 상기 탁산은 파클리탁셀 또는 도세탁셀이다. 일 구현예에서, 상기 세포독성제는 백금 제제이다. 일 구현예에서, 상기 세포독성제는 EGFR의 길항제이다. 일 구현예에서, 상기 EGFR의 길항제는 N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민 (예컨대, 에를로티닙)이다. 일 구현예에서, 상기 세포독성제는 RAF 억제제이다. 일 구현예에서, 상기 RAF 억제제는 BRAF 및/또는 CRAF 억제제이다. 일 구현예에서, 상기 RAF 억제제는 베무라페닙이다. 일 구현예에서, 상기 세포독성제는 PI3K 억제제이다.
“화학치료제”는 암의 치료에 유용한 화합물을 포함한다. 화학치료제들의 예는 에를로티닙(타쎄바(TARCEVA)®, 제넨텍(Genentech)/OSI 팜(OSI Pharm.)), 보르테조밉(벨케이드(VELCADE)®, 밀레니엄 팜(Millennium Pharm.)), 디설피람, 에피갈로카테킨 갈레이트, 살리노스포라마이드 A, 카필조밉, 17-AAG(겔다나마이신), 라디시콜, 젖산 탈수소효소 A(LDH-A), 풀베스트란트(파슬로덱스(FASLODEX)®, 아스트라제네카(AstraZeneca)), 수니팁(수텐트(SUTENT)®, 화이자(Pfizer)/수젠(Sugen)), 레트로졸(페마라(FEMARA)®, 노바르티스(Novartis)), 이매티닙 메실산염(글리벡(GLEEVEC)®, 노바르티스), 피나수네이트(바탈라닙(VATALANIB)®, 노바르티스), 옥살리플라틴(엘록사틴(ELOXATIN)®, 사노피(Sanofi)), 5-FU(5-플루오로우라실(fluorouracil)), 류코보린(leucovorin), 라파마이신(Rapamycin)(시롤리무스(Sirolimus), 라파뮨(RAPAMUNE)®, 와이어쓰(Wyeth)), 라파티닙(타이커브(TYKERB)®, GSK572016, 글락소 스미쓰 클라인(Glaxo Smith Kline)), 로나파밉(SCH 66336), 소라페닙(넥사바르(NEXAVAR)®, 바이엘 랩스(Bayer Labs)), 제피티닙(이레사(IRESSA)®, 아스트라제네카), AG1478, 알킬화제, 예컨대, 티오테파 및 사이톡산(CYTOXAN)® 사이클로포스프아마이드; 알킬 설폰산, 예컨대, 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대, 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸오멜라민을 포함한 에틸렌이민 및 메틸라멜아민; 아세토게닌(특히, 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(토포 테칸 및 이리노테칸을 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카젤레신 및 비젤레신 합성 유사체를 포함); 크립토피신(특히, 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 아드레노코르티코스테로이드(프레드니손 및 프레드니솔론을 포함); 시프로테론 아세테이트; 피나스테리드 및 두타스테리드를 포함한 5a-환원 효소; 보리노스타트, 로미뎁신, 파노비노스타트, 발프로산, 모세티노스타트 돌라스타틴; 알데스류킨, 탈크 듀오카마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사코딕타이인; 스폰기스타틴; 질소 머스타드, 예컨대, 클로람부실, 클로마파진, 클로로포스프아마이드, 에스트라무스틴, 이포스프아마이드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 펜에스테린, 프레드니무스틴, 트로포스프아마이드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대, 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라님누스틴; 항생제, 예컨대, 에네다이인 항생제(예컨대, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 γ1I 및 칼리케아미신 ω1I(Angew Chem. Intl. Ed. Engl. 1994 33:183-186); 다이네미신 A를 포함하는 다이네미신; 비스포스포네이트, 예컨대, 클로드로네이트; 에스퍼라미신; 및 네오카지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네다이인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우쓰라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신(ADRIAMYCIN)®(독소루비신), 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마셀로마이신, 미토마이신, 예컨대, 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투버시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물질, 예컨대, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대, 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트라이메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대, 플루다라빈, 6-머캡토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 사이타라빈, 다이데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신물질, 예컨대, 아미노글루테티마이드, 미토탄, 트라일로스탄; 엽산 보충제, 예컨대, 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스프아마이드 글라이코사이드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비스안트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 다이아지쿠온; 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대, 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피담놀; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체(제이에이치에스 네추럴 프로덕츠(JHS Natural Products), 오리건 주, 유진 소재); 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트라이아지쿠온; 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민; 트라이코테센(특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 사이클로포스프아마이드; 티오테파; 탁소이드, 예컨대, 탁솔(TAXOL)(파클리탁셀; 브리스톨-마이어스 스퀴브 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 미국 뉴저지주 프린스톤 소재), 아브락산(ABRAXANE)®(크레모포르 무함유), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형(아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 미국 일리노이주 샤움베르그 소재) 및 탁소테레(TAXOTERE)®(도세탁셀, 독세탁셀; 사노피-아벤티스); 클로람부실; 젬자르(GEMZAR)®(젬시타빈); 6-티오구아닌; 머캡토푸린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대, 시스플라틴 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 에토포시드(VP-16); 이포스프아마이드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 나벨빈(NAVELBINE)®(비노렐빈); 노반트론; 테니포사이드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈(젤로다(XELODA)®); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 다이플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노이드, 예컨대, 레티노산; 및 상기 화학치료제들 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산, 및 유도체를 포함한다.
화학치료제는 또한 (i) 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항-호르몬제, 예를 들어, 타목시펜(놀바덱스(NOLVADEX)®; 타목시펜 시트레이트를 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 요오독시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트라이옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 파레스톤(FARESTON)®(토레미핀 시트레이트)을 포함하는 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM); (ii) 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티마이드, 메가세(MEGASE)®(메게스트롤 아세테이트), 아로마신(AROMASIN)®(엑세메스탄; 화이자), 포르메스타니, 파드로졸, 리비소르(RIVISOR)®(보로졸), 페마라(FEMARA)®(레트로졸; 노바티스), 및 아리미덱스(ARIMIDEX)®(아나스트로졸; 아스트라제네카); (iii) 항-안드로겐, 예컨대, 플루타마이드, 닐루타마이드, 비칼루타마이드, 류프롤라이드, 및 고세렐린; 부세레린, 트립테렐린, 아세트산 메드록시프로게스테론, 디에틸스틸베스트롤, 프레마린, 플루옥시메스테론, 올트랜스레티노산, 펜레티니드 및 트록사시타빈(1,3-다이옥솔란 뉴클레오사이드 사이토신 유사체); (iv) 단백질 키나제 억제제; (v) 지질 키나제 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 비정상적인 세포 증식에 관여하는 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예를 들어, PKC-알파, Ralf 및 H-Ras; (vii) 리보자임, 예컨대, VEGF 발현 억제제(예컨대, 안지오자임(ANGIOZYME)®) 및 HER2 발현 억제제; (viii) 백신, 예컨대, 유전자 치료 백신, 예를 들어, 알로벡틴(ALLOVECTIN)®, 류벡틴(LEUVECTIN)® 및 백시드(VAXID)®; 프로류킨(PROLEUKIN)®, rIL-2; 토포이소머라제 1 억제제, 예컨대, 루르토테칸(LURTOTECAN)®; 아바렐릭스(ABARELIX)® rmRH; 및 (ix) 상기 화학치료제들 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산, 및 유도체를 포함한다.
화학치료제는 또한 알렘투주맙(캄파스(Campath)), 베바시주맙(아바스틴(AVASTIN)®, 제넨텍(Genentech)); 세툭시맙(얼비툭스(ERBITUX)®, 임클론(Imclone)); 파니투무맙(벡티빅스(VECTIBIX)®, 암젠(Amgen)), 리툭시맙(리툭산(RITUXAN)®, 제넨텍/바이오젠 아이덱(Biogen Idec)), 퍼투주맙(옴미타그(OMNITARG)®, 2C4, 제넨텍), 트라스투주맙(헤셉틴(HERCEPTIN)®, 제넨텍), 토시투모맙(벡사(Bexxar), 코릭시아(Corixia)), 및 항체 약물 접합체, 겜투주맙 오조가미신(마일로타그(MYLOTARG)®, 와이어스(Wyeth))를 포함한다. 본 발명의 화합물과 병용으로 한 제제로서 치료 가능성을 갖는 추가적인 인간화 단클론 항체들은 아폴리주맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 바피뉴주맙, 비바투주맙 메르탄신, 칸투주맙 메르탄신, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 시드푸시투주맙, 시드투주맙, 다클리주맙, 에쿨리주맙, 에팔리주맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙, 젬투주맙 오조가미신, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 니모투주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오크렐리주맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 펙셀리주맙, 랄리비주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레시비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 투코투주맙 셀모류킨, 투쿠시투주맙, 우마비주맙, 유르톡사주맙, 유스테키누맙, 비실리주맙, 및 인터류킨-12 p40 단백질을 인식하기 위하여 유전적으로 변형된 재조합 배타적 인간-서열, 전장 IgG1 λ 항체인 항-인터류킨-12(ABT-874/J695, 와이어쓰 리써치 앤드 애보트 래보러토리즈(Wyeth Research and Abbott Laboratories)를 포함한다.
화학치료제는 또한 EGFR에 결합하거나, 그렇지 않으면 EGFR과 직접 상호작용하고, 이의 신호전달 활성을 예방 또는 감소시키는 화합물을 지칭하고, 대안적으로 "EGFR 길항제"로 지칭되는 "EGFR 억제제”를 포함한다. 상기 제제들의 예는 EGFR에 결합하는 항체 및 소분자를 포함한다. EGFR에 결합하는 항체들의 예는 MAb 579(ATCC CRL HB 8506), MAb 455(ATCC CRL HB8507), MAb 225(ATCC CRL 8508), MAb 528(ATCC CRL 8509)(미국 특허 제 4,943, 533호, Mendelsohn et al.를 참조) 및 이의 변이체, 예컨대, 키메라화 225(C225 또는 세툭시맙; 얼비툭스®) 및 재형성된 인간 225(H225)(WO 96/40210, 임클론 시스템즈(Imclone Systems Inc.)를 참조); 완전한 인간 EGFR- 표적 항체인 IMC-11F8(임클론); II형 돌연변이 EGFR에 결합하는 항체(미국 특허 제 5,212,290호); 미국 특허 제 5,891,996호에 기재된 바와 같이 EGFR에 결합하는 인간화 및 키메라 항체; 및 EGFR에 결합하는 인간 항체, 예컨대, ABX-EGF 또는 파니투무맙(WO98/50433, 어브제닉스(Abgenix)/암젠을 참조); EMD 55900(Stragliotto et al. Eur. J. Cancer 32A:636-640(1996)); EGFR 결합(EMD/머크(Merck))을 위해 EGF 및 TGF-알파 모두와 경쟁하는 EGFR에 맞서 지시된 인간화 EGFR 항체인 EMD7200(마투주맙); 인간 EGFR 항체, 휴맥스(HuMax)-EGFR(젠맙(GenMab)); E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6. 3 및 E7.6.3으로 공지되고 US 6,235,883호에 기재된 완전한 인간 항체; MDX-447(메다렉스(Medarex Inc)); 및 mAb 806 또는 인간화 mAb 806(Johns et al., J. Biol. Chem. 279(29):30375-30384 (2004))을 포함한다. 상기 항-EGFR 항체는 세포독성제와 접합되어, 면역접합체를 생성할 수 있다(예컨대, EP659439A2, 머크 특허(Merck Patent) GmbH를 참조). EGFR 길항제들은 미국 특허 제 5,616,582호, 5,457,105호, 5,475,001호, 5,654,307호, 5,679,683호, 6,084,095호, 6,265,410호, 6,455,534호, 6,521,620호, 6,596,726호, 6,713,484호, 5,770,599호, 6,140,332호, 5,866,572호, 6,399,602호, 6,344,459호, 6,602,863호, 6,391,874호, 6,344,455호, 5,760,041호, 6,002,008호, 및 5,747,498호 뿐만 아니라 하기의 PCT 공보들: WO98/14451, WO98/50038, WO99/09016, 및 WO99/24037에 기재된 화합물과 같은 소분자를 포함한다. 특정 소분자 EGFR 길항제는 OSI-774(CP-358774, 에를로티닙, 타쎄바® 제넨텍/OSI 제약); PD 183805(CI 1033, 2-프로펜아미드, N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴린일)프로폭시]-6-퀴나졸린일]-, 디하이드로클로라이드, 화이자 사); ZD1839, 게피티닙(이레사®) 4-(3’-클로로-4’-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-(3-모폴리노프로폭시)퀴나졸린, 아스트라제네카); ZM 105180 ((6-아미노-4-(3-메틸페닐-아미노)-퀴나졸린, 제네카); BIBX-1382(N8-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-N2-(1-메틸-피페리딘-4-일)-피리미도[5,4-d]피리미딘-2,8-디아민, 베링거 인겔하임(Boehringer Ingelheim)); PKI-166((R)-4-[4-[(1-페닐에틸)아미노]-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-페놀); (R)-6-(4-하이드록시페닐)-4-[(1-페닐에틸)아미노]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘); CL-387785 (N-[4-[(3-브로모페닐)아미노]-6-퀴나졸리닐]-2-부틴아미드; EKB-569(N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-3-시아노-7-에톡시-6-퀴놀리닐]-4-(디메틸아미노)-2-부텐아미드)(와이어쓰); AG1478(화이자); AG1571(SU 5271; 화이자); 이중 EGFR/HER2 티로신 키나제 억제제, 예컨대 라파티닙(타이커브®, GSK572016 또는 N-[3-클로로-4-[(3 플루오로페닐)메톡시]페닐]-6[5[[[2메틸설포닐)에틸]아미노]메틸]-2-푸라닐]-4-퀴나졸린아민)을 포함한다.
화학치료제들은 또한 선행하는 단락에 나타낸 EGFR-표적화된 약물을 포함한 “티로신 키나제 억제제"; 소분자 HER2 티로신 키나제 억제제, 예컨대, 다케다(Takeda)로부터 입수 가능한 TAK165(; CP-724,714, ErbB2 수용체 티로신 키나제의 경구 선택적 억제제(화이자 및 OSI); 이중-HER 억제제, 예컨대, EGFR에 우선적으로 결합하지만 HER2 및 EGFR-과발현 세포 둘다를 억제하는 EKB-569(와이어쓰로부터 입수 가능함); 라파티닙(GSK572016; 글락소-스미스클라인(Glaxo-SmithKline)으로부터 입수 가능함), 경구 HER2 및 EGFR 티로신 키나제 억제제; PKI-166 (노바르티스(Novartis)로부터 입수 가능함); 범-HER 억제제, 예컨대, 카네르티닙(CI-1033; 파마시아(Pharmacia)); Raf-1 신호전달을 억제하는 Raf-1 억제제, 예컨대, ISIS 파마슈티컬스(ISIS Pharmaceuticals)로부터 입수 가능한 안티센스 제제 ISIS-5132; 비-HER 표적화된 TK 억제제, 예컨대, 이마티닙 메실레이트(글리벡®, 글락소-스미스클라인으로부터 입수 가능함); 다중-표적화된 티로신 키나제 억제제, 예컨대, 수니티닙(수텐트(SUTENT)®, 화이자로부터 입수 가능함); VEGF 수용체 티로신 키나제 억제제, 예컨대, 바탈라닙(PTK787/ZK222584, 노바르티스/쉐링(Schering) AG로부터 입수 가능함); MAPK 세포외 조절된 키나제 I 억제제 CI-1040(파마시아로부터 입수 가능함); 퀴나졸린, 예컨대, PD 153035,4-(3-클로로아닐리노)퀴나졸린; 피리도피리미딘; 피리미도피리미딘; 피롤로피리미딘, 예컨대, CGP 59326, CGP 60261 및 CGP 62706; 피라졸로피리미딘, 4-(페닐아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘; 커큐민(디페룰로일 메탄, 4,5-비스(4-플루오로아닐리노)프탈이미드); 니트로티오펜 모이어티를 함유한 티르포스틴; PD-0183805(워너-램버트(Warner-Lamber)); 안티센스 분자(예컨대, HER-부호화 핵산에 결합하는 안티센스 분자); 퀴녹살린(미국 특허 제 5,804,396호); 트리포스틴(미국 특허 제 5,804,396호); ZD6474(아스트라제네카); PTK-787(노바르티스/쉐링 AG); 범-HER 억제제, 예컨대, CI-1033(화이자); 아피니탁(ISIS 3521; 이시스/릴리(Isis/Lilly); 이마티닙 메실레이트(글리벡®); PKI 166(노바르티스); GW2016(글락소-스미스클라인); CI-1033(화이자); EKB-569(와이어쓰); 세막시닙(화이자); ZD6474(아스트라제네카); PTK-787(노바르티스/쉐링 AG); INC-1C11(임클론), 라파마이신(시롤리무스, 라파뮨®); 또는 하기의 특허 공보들: 미국 특허 제 5,804,396호; WO 1999/09016(아메리칸 사이나미드(American Cyanamid)); WO 1998/43960(아메리칸 사이나미드); WO 1997/38983(워너-램버트); WO 1999/06378(워너-램버트); WO 1999/06396(워너-램버트); WO 1996/30347(화이자 사); WO 1996/33978(제네카); WO 1996/3397(제네카) 및 WO 1996/33980(제네카) 중 임의의 것에 기재된 바를 포함한다.
화학치료제들은 또한 덱사메타손, 인터페론, 콜히친, 메토프린, 사이클로스포린, 암포테리신, 메트로니다졸, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알로푸리놀, 아미포스틴, 삼산화비소, 아스파라기나제, BCG 생균, 베바쿠지맙, 베사로틴, 클라드리빈, 클로파라빈, 다베포에틴 알파, 데니류킨, 덱스라족산, 에포에틴 알파, 엘로티닙, 필그라스팀, 히스트렐린 아세테이트, 이브리투모맙, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 레날리도미드, 레바미졸, 메스나, 메톡살렌, 난드롤론, 넬라라빈, 노페투모맙, 오프렐베킨, 팔리페르민, 파미드로네이트, 페가데마제, 페가스파가제, 페그필그라스팀, 페메트렉세드 이나트륨, 플리카마이신, 포르피머 나트륨, 퀴나크린, 라스부리카제, 사르그라모스팀, 테모졸로미드, VM-26, 6-TG, 토레미펜, 트레티노인, ATRA, 발루비신, 졸레드로네이트 및 졸레드론산, 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
화학치료제들은 또한 히드로코르티손, 히드로코르티손 아세테이트, 코르티손 아세테이트, 틱소코르톨 피발레이트, 트리암시놀론 아세토나이드, 트리암시놀론 알코올, 모메타손, 암시노나이드, 부데소니드, 데소나이드, 플루오시노나이드, 플루오시놀론 아세토나이드, 베타메타손, 베타메타손 인산나트륨, 덱사메타손, 덱사메타손 인산나트륨, 플루오코르톨론, 히드로코르티손-17- 부티레이트, 히드로코르티손-17- 발레레이트, 아클로메타손 디프로피오네이트, 베타메타손 발레레이트, 베타메타손 디프로피오네이트, 프레드니카르베이트, 클로베타손-17-부티레이트, 클로베타솔-17-프로피오네이트, 플루오코르톨론 카프로에이트, 플루오코르톨론 피발레이트, 및 플루프레드니덴 아세테이트; 면역 선택적 항염증 펩티드(ImSAID), 예컨대, 페닐알라닌-글루타민-글리신(FEG) 및 이의 D-이성체 형태(feG)(이뮬란 바이오세라퓨틱스(IMULAN BioTherapeutics), LLC); 항-류마티스 약물, 예컨대, 아자티오프린, 시클로스포린(시클로스포린 A), D-페니실라민, 금염, 하이드록시클로로퀸, 레플루노미드미노사이클린, 설파살라진, 종양 괴사 인자 알파(TNFα) 차단제, 예컨대, 에타네셉트(엔브렐(Enbrel)), 인플릭시맵(레미케이드(Remicade)), 아달리무맙(휴미라(Humira)), 세르톨리주맙 페골(심지아(Cimzia)), 골리무맙(심포니(Simponi)), 인터루킨 1(IL-1) 차단제, 예컨대, 아나킨라(키네렛(Kineret)), T 세포 공자극 차단제, 예컨대, 아바타셉트(오렌시아(Orencia)), 인터루킨 6(IL-6) 차단제, 예컨대, 토실리주맙(악테메라(ACTEMERA)®); 인터루킨 13(IL-13) 차단제, 예컨대, 레브리키주맙; 인터페론 알파(IFN) 차단제, 예컨대, 론탈리주맙; 베타 7 인테그린 차단제, 예컨대, 류맙(rhuMAb) 베타7; IgE 경로 차단제, 예컨대, 안티-M1 프라임; 분비된 동형삼량체 LTa3 및 막결합 이종삼합체 LTa1/β2 차단제, 예컨대, 항-림포톡신 알파(LTa); 방사성 동위 원소(예컨대, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 루테튬(Lu)의 방사성 동위 원소); 기타 임상시험용 제제, 예컨대, 티오플라틴, PS-341, 페닐부티레이트, ET-18-OCH3, 또는 파르네실 트랜스퍼라제 억제제(L-739749, L-744832); 폴리페놀, 예컨대, 케르세틴, 레스베라트롤, 피세아타놀, 에피갈로카테킨 갈레이트, 테아플라빈, 플라바놀, 프로시아니딘, 베툴린산, 및 이의 유도체; 자가 포식 억제제, 예컨대, 클로로퀸; 델타-9-테트라히드로칸나비놀(드로나비놀, 마리놀(MARINOL)®); 베타-라파콘; 라파콜; 콜히친; 베툴린산; 아세틸캄토테신, 스코폴 렉틴, 및 9-아미노캄토테신); 포도필로톡신; 테가푸르(유프토랄(UFTORAL)®); 벡사로텐(타그레틴(TARGRETIN)®); 비스포스포네이트, 예컨대, 클로드로네이트(예를 들어, 보네포스(BONEFOS)® 또는 오스탁(OSTAC)®), 에티드로네이트(디드로칼(DIDROCAL)®), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트(조메타(ZOMETA)®), 알렌드로네이트(포사맥스(FOSAMAX)®), 파미드로네이트(아레디아(AREDIA)®), 틸루드로네이트(스켈리드(SKELID)®, 또는 리세드로네이트(악토넬(ACTONEL)®); 및 표피 성장 인자 수용체(EGF-R); 백신, 예컨대, 테라토프(THERATOPE)® 백신; 페리포신, COX-2 억제제(예컨대, 셀레콕십 또는 에토리콕십), 프로테오좀 억제제(예컨대, PS341); CCI-779; 티피파르닙(R11577); 오라페닙, ABT510; Bcl-2 억제제, 예컨대, 오블리머센 나트륨(제나센스(GENASENSE)®; 픽산트론; 파르네실트랜스퍼라제 억제제, 예컨대, 로나파르닙(SCH 6636, 사라사르(SARASAR)TM); 및 상기 화학치료제들 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산, 또는 유도체; 뿐만 아니라 상기 화학치료제들 중 둘 이상의 조합, 예컨대, 시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및 프레드니솔론의 조합 요법의 약어인 CHOP; 및 5-FU 및 류코보린과 병용으로 한 옥살리플라틴(엘록사틴(ELOXATIN)TM)을 사용한 치료 요법의 약어인 폴폭스(FOLFOX)를 포함한다.
화학치료제들은 또한 진통, 해열, 및 항-염증성 효과를 갖는 비-스테로이드 항-염증성 약물을 포함한다. NSAID들은 효소 사이클로옥시제나아제의 비-선택적 억제제들을 포함한다. NSAID들의 구체적인 예는 아스피린, 프로피온산 유도체, 예컨대, 이부프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜, 플루르비프로펜, 옥사프로진 및 나프록센, 아세트산 유도체, 예컨대, 인도메타신, 설린닥, 에토돌락, 디클로페낙, 에놀산 유도체, 예컨대, 피록시캄, 멜록시캄, 테녹시캄, 드록시캄, 로르녹시캄 및 이속시캄, 페남산 유도체, 예컨대, 메페남산, 메클로페남산, 플루페남산, 톨페남산, 및 COX-2 억제제, 예컨대, 셀레콕십, 에토리콕십, 루미라콕십, 파레콕십, 로페콕십, 및 발데콕십을 포함한다. NSAID들은 병태들, 예컨대, 류마티스성 관절염, 골관절염, 염증성 관절병증, 강직 척추염, 건선성 관절염, 라이터 증후군, 급성 통풍, 월경이상증, 전이성 골 통증, 두통 및 편두통, 수술후 통증, 염증 및 조직 부상으로 인한 경도-내지-중간 정도 통증, 열증, 장폐색증, 및 신장 산통의 증상 완화를 위해 권고될 수 있다.
본원에서 사용된 "성장 억제제"는 시험관내 또는 생체내 세포의 성장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 일 구현예에서, 성장 억제제는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포의 증식을 예방 또는 감소시키는 성장 억제성 항체이다. 다른 구현예에서, 상기 성장 억제제는 S상에서 세포의 백분율을 유의미하게 감소시키는 것일 수 있다. 성장 억제제들의 예는 (S상 이외의 위치에서) 세포 주기 진행을 차단하는 제제, 예컨대 G1 정지 및 M-상 정지를 유도하는 제제들을 포함한다. 고전적 M-상 차단제들은 빈카(빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁산, 및 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대, 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드, 및 블레오마이신을 포함한다. G1을 정지시키는 제제들은 또한 S-상 정지 내로 넘쳐 나오고, 예를 들어, DNA 알킬화제, 예컨대, 타목시펜, 프레드니손, 다카바진, 메클로르에타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 및 아라-C가 포함된다. 추가 정보는 Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1, entitled “Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs” by Murakami et al. (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995), e.g., p.13”에서 찾을 수 있다. 탁산(파클리탁셀 및 도세탁셀)은 둘 다 주목(yew tree)에서 유도된 항암 약물이다. 유럽 주목에서 유래된, 도세탁셀(탁소테레®, 롱프랑로러(Rhone-Poulenc Rorer))는 파클리탁셀의 반합성 유사체(탁솔(TAXOL)®, 브리스톨-마이어스-스퀴브(Bristol-Myers Squibb))이다. 파클리탁셀 및 도세탁셀은, 세포에서 유사분열의 억제를 초래하는, 해중합을 예방함으로써 튜불린 이량체로부터 미세소관의 어셈블리를 촉진시키고 미세소관을 안정화시킨다.
"방사선 요법"이란, 세포에 충분한 손상을 유도함으로써 정상적으로 기능할 수 있는 세포의 능력을 제한하거나 상기 세포를 완전히 파괴하기 위해 지시된 감마선 또는 베타선의 사용을 의미한다. 치료의 투여량 및 기간을 결정하기 위하여 당해 분야에 공지된 많은 방법이 있을 것이라는 점이 이해될 것이다. 전형적인 치료는 1회성 투여로서 실시하며, 전형적인 투여량은 1일당 10 내지 200 단위(Grays)의 범위이다.
치료의 목적을 위한 "대상체" 또는 "개체"는, 인간, 가축 및 경작용 동물, 동물원, 스포츠, 또는 애완용 동물, 예컨대 개, 말, 고양이, 소, 등을 포함한 포유동물로서 분류된 임의의 동물을 지칭한다. 바람직하게는, 상기 포유동물은 인간이다.
본원의 용어 "항체"는 광범위한 의미로 사용되며, 구체적으로 단클론 항체(전장 단클론 항체를 포함), 다클론 항체, 다중특이적 항체(예컨대, 이중특이적 항체), 및 원하는 생물학적 활성을 나타내기만 한다면 항체 단편을 포함한다.
"분리된" 항체는 이의 천연 환경의 성분으로부터 식별되고, 분리되고/거나 복구된 항체이다. 이의 천연 환경의 오염물질 성분들은 상기 항체에 대한 연구, 진단적 또는 치료적 사용을 방해할 물질이며, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 항체는, (1) 예를 들어, 로우리(Lowry) 방법으로 측정할 때 항체의 95 중량%를 초과하고, 일부 구현예들에서 99 중량%을 초과할 때까지; (2) 예를 들어, 스핀형 컵 서열분석기(spinning cup sequenator)를 이용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 수득하기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 예를 들어, 쿠마씨 블루(Coomassie blue) 또는 은 염색을 이용하여 환원 또는 비환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의해 균질화될 때까지 정제된다. 분리된 항체는 상기 항체의 천연 환경의 적어도 1종의 성분이 존재하지 않기 때문에 재조합 세포 내에 자체적으로 항체를 포함한다. 하지만, 통상적으로, 분리된 항체는 적어도 1종의 정제 단계에 의해 제조된다.
"천연 항체"는 보통 2개의 동일한 경(L) 쇄 및 2개의 동일한 중(H) 쇄로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. 각 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 결합되는 반면, 디설파이드 결합의 수는 상이한 면역글로불린 이소형의 중쇄 중에서 가변한다. 각 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 사슬내 디설파이드 가교를 가진다. 각 중쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VH)에 이어 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 하나의 말단에 가변 도메인을(VL) 및 다른 말단에 불변 도메인을 갖는다; 상기 경쇄의 불변 도메인은 상기 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되며, 상기 경쇄 가변 도메인은 상기 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기들은 경쇄 및 중쇄 가변 도메인들 사이에 계면을 형성하는 것으로 생각된다.
용어 "불변 도메인"은, 항원 결합 부위를 함유하는, 면역글로불린의 다른 부분, 즉 가변 도메인에 비하여 상대적으로 더욱 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 상기 불변 도메인은 상기 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인 (총괄하여, CH) 및 상기 경쇄의 CHL(또는 CL) 도메인을 함유한다.
항체의 상기 “가변 영역” 또는 “가변 도메인”은 상기 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노 말단 도메인을 지칭한다. 상기 중쇄의 상기 가변 도메인은 “VH”로 지칭될 수 있다. 상기 경쇄의 상기 가변 도메인은 “VL”로 지칭될 수 있다. 상기 도메인은 일반적으로 항체의 최대 가변 부분이고 상기 항원 결합 부위를 포함한다.
용어 "가변"은 상기 가변 도메인의 특정 부분들이 항체들 중에 서열에 있어서 광범위하게 상이하고 특정한 항원에 대한 각각의 특정한 항체의 결합 및 특이성에 있어서 사용된다는 사실을 지칭한다. 하지만, 상기 가변성은 항체들의 가변 도메인 전체를 통해 고르게 분포되어 있지 않다. 상기 가변성은 상기 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두에서 초가변성 영역(HVR)으로 불리는 3개의 절편에 집중된다. 가변 도메인들의 보다 고도로 보존된 부분들은 프레임워크 영역(FR)이라고 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은 주로 베타 시트 배위를 취하며 3개의 HVR에 의해 연결되어 있는 4개의 FR 영역을 포함하는데, 이것은 베타 시트 구조를 연결하고, 일부 경우에는 상기 베타 시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 각 쇄에서 HVR들은 FR 영역에 의해 근접하게 함께 위치하고, 다른 쇄로부터의 HVR과 함께 항체들의 항원-결합 부위 형성에 기여한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)를 참조한다). 불변 도메인은 항체를 항원에 결합시키는 데는 직접적으로 관여하지는 않지만, 다양한 효과기 기능, 예컨대 항체-의존적 세포 독성에서의 상기 항체의 참여를 나타낸다.
임의의 포유동물 종으로부터의 항체들(면역글로불린)의 "경쇄"는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로 하여, 카파("κ") 및 람다("λ")로 불리는 2개의 명확히 구별되는 유형 중 하나에 배정될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 IgG "이소형" 또는 "하위부류"는 이의 불변 영역의 화학적 및 항원성 특징에 의해 정의된 면역글로불린의 임의의 하위부류를 의미한다.
중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 항체들 (면역글로불린)은 상이한 부류에 배정될 수 있다. 면역글로불린의 5가지 주요 부류인 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 그리고 이들 중 몇 가지는 하위부류(이소형), 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가로 세분화될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류에 해당하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, γ, ε, γ, 및 μ로 불린다. 면역글로불린의 상이한 부류의 하부단위 구조 및 3차원 입체 배위는 잘 알려져 있고 일반적으로, 예를 들어, Abbas et al. Cellular and Mol. Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders, Co., 2000)에 기재되어 있다. 항체는 상기 항체와 하나 이상의 다른 단백질 또는 펩티이드와의 공유 또는 비-공유 결합에 의해 형성된 더 큰 융합 분자의 일부일 수 있다.
본원에서 사용된 용어들 "전장 항체", "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 상호교환적으로 아래에서 정의된 바와 같이 항체 단편이 아닌 이의 실질적으로 무손상 형태의 항체를 지칭한다. 상기 용어들은 특히 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
본원의 목적을 위해 "네이키드 항체(naked antibody)"는 세포독성 모이어티 또는 방사성 표지에 접합되지 않은 항체이다.
"항체 단편"은 바람직하게는 이의 항원-결합 영역을 포함하는 무손상 항체의 일부를 포함한다. 일부 구현예들에서, 본원에 기재된 항체 단편은 항원-결합 단편이다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체(linear antibodies); 단일-쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
항체의 파파인 분해는, "Fab" 단편이라 불리는 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는 2개의 동일한 항원-결합 단편 및 그 명칭이 쉽게 결정화하하는 능력을 반영한 잔류 "Fc" 단편을 생성한다. 펩신 처리는 2개의 항원 결합 부위를 갖고 항원을 여전히 가교결합할 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다.
"Fv"는 완전한 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 일 구현예에서, 2-쇄 Fv 종은 단단한 비-공유 결합으로 1개의 중쇄 가변 도메인 및 1개의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 구성된다. 단일-쇄 Fv(scFv) 종에서, 1개의 중쇄 가변 도메인 및 1개의 경쇄 가변 도메인은 상기 경쇄 및 중쇄가 2-쇄 Fv 종에서와 유사한 “이량체” 구조로 연관될 수 있도록 유연한 펩티드 링커에 의해 공유 결합될 수 있다. 상기 배위에서 각각의 가변 도메인의 3개의 HVR은 VH-VL 이량체의 표면 상에서 항원-결합 부위를 정의하도록 상호작용한다. 전체적으로, 6개의 HVR은 상기 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 하지만, 심지어 단일 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 단지 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)도 비록 전체 결합 부위보다 친화성이 낮긴 하지만, 항원을 인식하고 이에 결합하는 능력을 갖는다.
Fab 단편은 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 함유하고, 또한 상기 경쇄의 불변 도메인 및 상기 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab' 단편들은 항체 힌지 영역으로부터 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에서 몇 개의 잔기를 부가함으로써 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인들의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올기를 갖는 Fab'에 대한 본원에서의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편들은 본래 Fab' 단편들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 상기 Fab' 단편들의 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편들의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
"단일-쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편들은 항체의 VH 및 VL 도메인들을 포함하며, 상기 도메인들은 단일 폴리펩티드 쇄 내에 존재한다. 일반적으로, 상기 scFv 폴리펩티드는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함하며, 이는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있게 한다. sFv에 대한 검토를 위해서는, 예컨대, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York, 1994), pp. 269-315를 참조한다.
용어 “디아바디”는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 지칭하는데, 상기 단편들은 동일한 폴리펩티드 쇄(VH-VL) 내에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 너무 짧아서 동일한 쇄 상의 2개의 도메인 사이에 쌍을 형성할 수 없는 링커를 사용함으로써, 상기 도메인들은 또 다른 쇄의 상보적 도메인들과 쌍을 형성하여 2개의 항원-결합 부위를 생성하게 된다. 디아바디는 이가 또는 이중특이적일 수 있다. 디아바디는, 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)에서 더욱 충분히 설명된다. 트리아바디 및 테트라바디 역시 Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)에서 설명된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체군으로부터 수득된 항체를 지칭한다. 예컨대, 상기 군을 포함하는 개별 항체들은 가능한 돌연변이, 예컨대, 소량으로 존재할 수 있는 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 따라서, 수식어 "단클론"은 상기 항체의 특징을 구별되는 항체들의 혼합물이 아닌 것으로 나타낸다. 특정 구현예들에서, 상기 단클론 항체는 전형적으로 표적에 결합하는 폴리펩티드 서열을 포함하는 항체를 포함하며, 상기 표적-결합 폴리펩티드 서열은 복수의 폴리펩티드 서열로부터의 단일 표적-결합 폴리펩티드 서열의 선택을 포함하는 과정에 의해 수득되었다. 예를 들어, 상기 선택 방법은 복수의 클론, 예컨대 하이브리도마 클론, 파지 클론, 또는 재조합 DNA 클론의 풀로부터의 독특한 클론의 선택일 수 있다. 선택된 표적-결합 서열은, 예를 들어, 표적에 대한 친화성을 개선하기 위해, 표적-결합 서열을 인간화하기 위해, 세포 배양에서 이의 생산을 개선하기 위해, 생체 내에서 이의 면역원성을 감소시키기 위해, 다중특이적 항체 등을 생성하기 위해, 추가로 변경될 수 있고, 상기 변경된 표적-결합 서열을 포함하는 항체는 또한 본 발명의 단클론 항체인 것으로 이해되어야 한다. 상이한 결정인자(에피토프)에 대한 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다중클론 항체 제제와 대조적으로, 단일클론 항체 제제의 각 단일클론 항체는 항원 상에서 단일 결정인자에 대한 것이다. 단일클론 항체 제제는 이의 특이성에 더하여, 다른 면역글로불린에 의해 전형적으로 오염되지 않는다는 점에서 유리하다.
수식어 “단클론”은 항체의 특징을 실질적으로 균일한 항체군으로부터 수득되는 것으로 나타내고 임의의 특정 방법에 의한 상기 항체의 생성이 필요하다는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 단클론 항체는, 예를 들어 하이브리도마 방법을 포함하는 다양한 기술(예컨대, Kohler and Milstein, Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma 14 (3): 253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), 재조합 DNA 방법(예컨대, 미국 특허 제 4,816,567호를 참조), 파지-디스플레이 기술(예컨대, Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)를 참조), 및 인간 면역글로불린 서열을 부호화하는 유전자 또는 인간 면역글로불린 좌위의 일부 또는 전체를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생성하기 위한 기술(예컨대, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993); 미국 특허 제 5,545,807호; 5,545,806호; 5,569,825호; 5,625,126호; 5,633,425호; 및 5,661,016; Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995))에 의해 제조될 수 있다.
본원에서 단일클론 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체에서 대응하는 서열과 동일하거나 또는 이에 상동하는 반면, 상기 쇄(들)의 나머지 부분은 다른 종으로부터 유래되거나 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체에서 대응하는 서열과 동일하거나 또는 이에 상동하는 “키메라” 항체뿐만 아니라, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 상기 항체의 단편들 역시도 포함한다(예컨대, 미국 특허 제 4,816,567호; 및 Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)를 참조한다). 키메라 항체는 상기 항체의 항원-결합 영역이, 예컨대, 짧은꼬리 원숭이를 관심 항원으로 면역화시킴으로써 생성된 항체로부터 유래된 PRIMATTZED® 항체를 포함한다.
비인간(예컨대, 쥣과) 항체의 "인간화된" 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 일 구현예에서, 인간화 항체는 수용자의 HVR로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도, 및/또는 수용력을 갖는 비-인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 랫트, 토끼, 또는 비인간 영장류의 HVR로부터의 잔기로 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 경우들에서, 상기 인간 면역글로불린의 FR 잔기는 대응하는 비-인간 잔기들에 의해 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체에서 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 상기 변형들은 항체 성능을 추가로 정련하기 위해 제조될 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 및 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비인간 이뮤노글로불린의 것에 대응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이다. 상기 인간화 항체는 또한 선택적으로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 일부를 포함하게 된다. 추가적인 세부 사항에 대해서는, 예컨대, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)을 참조한다. 또한, 예컨대 Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); 및 미국 특허 제 6,982,321호 및 7,087,409호를 참조한다.
“인간 항체”는 인간에 의해 생성된 항체의 것에 대응하는 아미노산 서열을 보유하고/거나 본원에서 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하기 위한 기술들 중 임의의 것을 이용하여 제조된 것이다. 인간 항체에 대한 상기 정의는 구체적으로 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 제외한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리(phage-display library)를 포함하여, 당해 분야에서 공지된 다양한 기술을 이용하여 생성될 수 있다. Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). 인간 단일클론 항체의 제조를 위해, Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)에서 설명된 방법이 또한 입수 가능하다. 또한, van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)를 참조한다. 인간 항체는 항원 유발에 반응하여 상기 항체를 생성하도록 변형되어 있으나, 이의 내인성 좌위는 비활성화(disabled)되어 있는 유전자도입 동물, 예컨대, 면역화된 제노마우스에 상기 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다(예컨대, XENOMOUSE™ 기술에 관한 미국 특허 제 6,075,181호 및 6,150,584호를 참조). 또한, 인간 B-세포 하이브리도마 기법을 통해 생성된 인간 항체에 관하여, 예를 들어, Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)를 참조한다.
"종-의존성 항체"는 제2 포유동물 종 유래의 항원의 상동체에 대해서보다 제1 포유동물 종 유래의 항원에 대해 보다 강한 결합 친화성을 갖는 항체이다. 일반적으로, 상기 종-의존성 항체는 인간 항원(예컨대, 약 1 x 10-7 M 이하, 바람직하게는, 약 1 x 10-8 M 이하, 및 가장 바람직하게는 약 1 x 10-9 M 이하의 결합 친화성(Kd) 값을 갖는)에 "특이적으로 결합"하지만 상기 인간 항원에 대한 결합 친화성 보다 적어도 약 50배, 또는 적어도 약 500배, 또는 적어도 약 1000배 약한 제2 비인간 포유동물 종 유래의 항원의 상동체에 대해 결합 친화성을 갖는다. 상기 종-의존성 항체는 상기 정의된 임의의 다양한 유형의 항체일 수 있지만, 바람직하게는 인간화 또는 인간 항체이다.
본원에서 사용될 때, 용어 “초가변 영역”, “HVR,” 또는 “HV”는 서열에서 초가변성이고/거나 구조적으로 규정된 루프를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR; VH에서 3개(H1, H2, H3), 및 VL에서 3개(L1, L2, L3)를 포함한다. 천연 항체에서, H3 및 L3은 6개의 HVR를 가진 가장 큰 다양성을 나타내며, H3은, 특히 항체에 대해 정밀한 특이성을 부여하는데 있어서 독특한 역할을 담당하는 것으로 여겨진다. 예컨대, Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003)을 참조한다. 실제로, 중쇄만으로 구성된 천연 발생 낙타(camelid) 항체는 경쇄의 부재 하에서 기능적이고 안정적이다. 예컨대, Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993); Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)를 참조한다.
많은 HVR 설명이 사용되고 있이며, 본원에 포함된다. 카바트(Kabat) 상보성 결정 영역(CDRs)은 서열 가변성을 기초로 하며, 가장 흔히 사용된다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). 코티아(Chothia)는 대신에 구조적 루프의 위치를 지칭한다(Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). AbM HVR은 카바트 HVR 및 코티아 구조적 루프 사이의 절충안을 나타내며, 옥스포드 몰레큘러(Oxford Molecular)의 AbM 항체-모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접촉" HVR은 입수 가능한 복합체 결정 구조의 분석에 기초로 한다. 상기 HVR의 각각으로부터의 잔기가 아래에 나타낸다.
루프 카바트 AbM 코티아 접촉
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B(카바트 넘버링)
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35(코티아 넘버링)
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
HVR은 아래와 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34(L1), 46-56 또는 50-56(L2) 및 89-97 또는 89-96(L3) 및 VH에서 26-35(H1), 50-65 또는 49-65(H2) 및 93-102, 94-102, 또는 95-102(H3). 상기 가변 도메인 잔기들은 상기 정의들의 각각에 대해 상기 Kabat et al.에 따라 넘버링된다.
HVR은 아래와 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34(L1), 46-56 또는 50-56(L2) 및 89-97 또는 89-96(L3) 및 VH에서 26-35(H1), 50-65 또는 49-65(H2) 및 93-102, 94-102, 또는 95-102(H3). 상기 가변 도메인 잔기들은 상기 정의들의 각각에 대해 상기 Kabat et al.에 따라 넘버링된다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 정의된 바와 같이 HVR 잔기 이외의 가변-도메인 잔기이다.
용어 “카바트에서와 같은 가변 도메인 잔기 넘버링” 또는 “카바트에서와 같은 아미노산 위치 넘버링” 및 이의 변형은 상기 Kabat et al.에서 항체의 편집의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 상기 넘버링 시스템을 이용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축, 또는 삽입에 대응하는 보다 적거나 추가적인 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 뒤에 단일 아미노산 삽입(카바트에 따른 잔기 52a), 및 중쇄 FR 잔기 82 뒤에 삽입된 잔기(예컨대, 카바트에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카바트 넘버링은 상기 항체의 서열과 “표준” 카바트 넘버링된 서열의 상동성의 영역에서 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다.
상기 카바트 넘버링 시스템은 가변 도메인 내 잔기(대략 경쇄의 잔기 1-107 및 중쇄의 잔기 1-113)에 대하여 지칭할 때 일반적으로 사용된다(예컨대, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). “EU 넘버링 시스템” 또는 “EU 지수”는 일반적으로, 면역글로불린 중쇄 불변 영역 내의 잔기를 지칭할 때 사용된다(예컨대, 상기 Kabat et al.에서 보고된 EU 지수). “카바트에서와 같은 EU 지수”는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다.
표현 “선형 항체”는 Zapata et al. (1995 Protein Eng, 8(10):1057-1062)에 기재된 항체를 지칭한다. 간략하게, 상기 항체는 상보적 경쇄 폴리펩티드와 함께, 항원-결합 영역의 쌍을 형성하는 탠덤 Fd 분절(VH-CH1-VH-CH1)의 쌍을 포함한다. 선형 항체는 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "결합하다", "이에 특이적으로 결합하다" 또는 "이에 특이적인"은, 표적 및 항체 간의 결합과 같은 측정가능하고 재생가능한 상호작용을 지칭하며, 이는 생물학적 분자를 포함하는 분자의 이종성 집단의 존재 하에서 표적의 존재를 나타낸다. 예를 들어, 표적(에피토프일 수 있음)에 결합하거나 이에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 표적에 결합하는 것보다 더 큰 친화도, 결합능으로, 더욱 용이하게, 및/또는 더 긴 지속시간으로 상기 표적에 결합하는 항체이다. 일 구현예에서, 비관련 표적에 대한 항체의 결합 정도는, 예컨대, 방사면역검정법(RIA)으로 측정 시, 상기 표적에 대한 항체 결합의 약 10% 미만이다. 특정 구현예들에서, 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, 또는 ≤ 0.1 nM의 해리 상수(Kd)를 갖는다. 특정 구현예들에서, 항체는 상이한 종으로부터의 단백질 중에서 보존된 단백질 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 다른 구현예에서, 특이적 결합은 배타적 결합을 포함할 수 있지만, 배타적 결합을 필요로 하지는 않는다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 “샘플”은, 예를 들어, 물리적, 생화학적, 화학적 및/또는 생리학적 특성을 기준으로 특성이 분석되고/되거나 식별되어야만 하는 세포 및/또는 다른 분자 개체를 함유하는 관심 대상체 및/또는 개체로부터 수득되거나 유래된 조성물을 지칭한다. 예를 들어, 어구 “질환 샘플” 및 이의 변형은 특성이 규명되는 세포 및/또는 분자 개체를 함유하는 것으로 기대되거나 공지될 관심 대상체로부터 수득된 임의의 샘플을 지칭한다. 샘플은 1차 또는 배양된 세포 또는 세포주, 세포 상청액, 세포 용해물, 혈소판, 혈청, 혈장, 유리체액, 림프액, 활액, 여포액, 정액, 양수, 우유, 전혈, 혈액-유도된 세포, 소변, 뇌척수액, 타액, 가래, 눈물, 땀, 점액, 종양 용해물, 및 조직 배양 배지, 조직 추출물, 예컨대 균질화된 조직, 종양 조직, 세포성 추출물, 및 이들의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
“조직 샘플” 또는 “세포 샘플”은 대상체 또는 개체의 조직으로부터 수득된 유사한 세포들의 수집물을 의미한다. 조직 또는 세포 표본의 공급원은 신선한, 동결된 및/또는 보존된 장기, 조직 표본, 생검 및/또는 흡인물로부터 고형 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 성분, 예컨대 혈장; 체액, 예컨대 뇌척수액, 양수, 복막액, 또는 간질액; 개체의 임신 또는 발달에서 임의의 시점으로부터 세포일 수 있다. 상기 조직 샘플은 또한 1차 또는 배양된 세포 또는 세포주일 수 있다. 선택적으로, 상기 조직 또는 세포 샘플은 질병 조직/장기로부터 수득된다. 상기 조직 표본은 자연에서 조직과 자연적으로 혼합되지 않는 화합물, 예컨대 보존제, 항응고제, 완충제, 고정제, 영양소, 또는 항생제 등을 함유할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, “참조 표본”, “참조 세포”, “참조 조직”, “대조 표본”, “대조 세포”, 또는 “대조 조직”은 비교 목적으로 이용되는 표본, 세포, 조직, 표준, 또는 수준을 지칭한다. 일 구현예에서, 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은, 동일한 대상체 또는 개체의 몸체(예컨대, 조직 또는 세포)의 건강하고/하거나 병들지 않은 부분으로부터 수득된다. 예를 들어, 병든 세포 또는 조직에 인접한 건강한 및/또는 병들지 않은 세포 또는 조직(예컨대, 종양에 인접한 세포 또는 조직)이다. 다른 구현예에서, 참조 샘플은 동일한 대상체 또는 개체의 몸체의 비처리된 조직 및/또는 세포로부터 수득된다. 또 다른 구현예에서, 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은, 상기 대상체 또는 개체가 아닌 개체의 몸체(예컨대, 조직 또는 세포)의 건강하고/하거나 병들지 않은 부분으로부터 수득된다. 또 다른 구현예에서, 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은, 상기 대상체 또는 개체가 아닌 개체의 몸체의 비처리된 조직 및/또는 세포로부터 수득된다.
약제를 이용한 치료에 대한 환자의 "효과적인 반응" 또는 환자의 "반응성" 및 유사한 문구는 질병 또는 장애, 예컨대 암의 발병 위험이 있거나 이를 앓고 있는 환자에게 주어진 임상적 또는 치료적 이점을 지칭한다. 일 구현예에서, 상기 이점은 생존의 연장(전체 생존 및 무진행 생존을 포함); 객관적 반응의 유발(완전한 반응 또는 부분적 반응을 포함); 또는 암의 징후 또는 증상의 개선 중 임의의 하나 이상을 포함한다.
치료에 "효과적인 반응을 가지지 않는" 환자는 생존의 연장(전체 생존 및 무진행 생존을 포함); 객관적 반응의 유발(완전한 반응 또는 부분적 반응을 포함); 또는 암의 징후 또는 증상의 개선 중 임의의 하나를 가지지 않는 환자를 지칭한다.
“기능적 Fc 영역”은 선천적 서열 Fc 영역의 “효과기 기능”을 보유한다. 예시적인 "효과기 기능"은 C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식균 작용; 세포 표면 수용체(예컨대, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등을 포함한다. 상기 효과기 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예컨대, 항체 가변 도메인)과 결합되도록 요구하며, 예를 들어 본원의 정의에서 개시된 바와 같이 다양한 검정을 사용하여 평가될 수 있다.
“인간 효과기 세포”는 하나 이상의 FcR을 발현하고 효과기 기능을 수행하는 백혈구를 지칭한다. 특정 구현예들에서, 상기 세포는 적어도 FcgRIII을 발현하고 ADCC 효과기 기능(들)을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 자연 살해(NK) 세포, 단핵구, 세포독성 T 세포, 및 호중구를 포함한다. 효과기 세포는 천연 공급원, 예컨대, 혈액으로부터 분리될 수 있다.
"인간 효과기 세포를 갖는" 암 또는 생물학적 샘플은, 진단 시험에서, 상기 샘플 내에 존재하는 인간 효과기 세포(예컨대, 침윤 인간 효과기 세포)를 갖는 샘플이다.
"FcR-발현 세포를 갖는" 암 또는 생물학적 샘플은, 진단 시험에서, 상기 샘플 내에 존재하는 FcR-발현(예컨대, 침윤 FcR-발현 세포)을 갖는 샘플이다. 일부 구현예들에서, FcR 은 FcγR이다. 일부 구현예들에서, FcR 은 활성화 FcγR이다.
Ⅱ. 개요
유효량의 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 항-PD-L1 항체, 예컨대 아테졸리주맙), 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴), 및 토포이소머라제 II의 억제제(예컨대, 에토포시드)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체의 폐암(예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)의 진행을 치료하거나 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 유효량의 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 항-PD-L1 항체, 예컨대 아테졸리주맙), 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴), 및 토포이소머라제 II의 억제제(예컨대, 에토포시드)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 폐암(예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)을 가진 개체의 면역 기능을 향상시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및/또는 전체 생존 기간(OS)을 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는, 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴) 및 토포이소머라제 II의 억제제(예컨대, 에토포시드)의 투여를 포함하는 치료와 비교하여, 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및/또는 전체 생존 기간(OS)을 연장시킨다.
일부 구현예들에서, 상기 방법은 카보플라틴 및 에토포시드를 병용으로 아테졸리주맙을 개체에게 투여함으로써 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 가진 개체를 치료하는 하는 단계를 포함하고, 상기 투여 단계는 유도기 및 유지기를 포함하고, 상기 유도기는 상기 아테졸리주맙을 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여하고, 상기 카보플라틴을 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여하고, 상기 에토포시드를 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일, 2일, 및 3일차에 각각 100 mg/m2의 용량으로 투여하며, 상기 유지기는 상기 아테졸리주맙을 4주기 이후에 주기 별로 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여하는 단계를 포함하며, 상기 투여는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및 전체 생존 기간(OS)을 연장시킨다.
Ⅲ. PD-1 축 결합 길항제
예를 들어, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제, PDL1 결합 길항제, 및 PDL2 결합 길항제를 포함한다. "PD-1"에 대한 대안적인 명칭은 CD279 및 SLEB2를 포함한다. “PDL1”에 대한 대안적인 명칭은 B7-H1, B7-4, CD274, 및 B7-H를 포함한다. “PDL2”에 대한 대안적인 명칭은 B7-DC, Btdc, 및 CD273을 포함한다. 일부 구현예들에서, PD-1, PDL1, 및 PDL2 는 인간 PD-1, PDL1 및 PDL2이다.
일부 구현예들에서, 상기 PD-1 결합 길항제는 리간드 결합 상대(들)에 대한 PD-1의 결합을 억제하는 분자이다. 구체적인 양태에서, 상기 PD-1 리간드 결합 상대는 PDL1 및/또는 PDL2이다. 다른 구현예에서, PDL1 결합 길항제는 결합 상대(들)에 대한 PDL1의 결합을 억제하는 분자이다. 구체적인 양태에서, PDL1 결합 상대(들)는 PD-1 및/또는 B7-1이다. 다른 구현예에서, 상기 PDL2 결합 길항제는 결합 상대(들)에 대한 PDL2의 결합을 억제하는 분자이다. 구체적인 양태에서, PDL2 결합 상대는 PD-1 이다. 상기 길항제는 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질, 또는 올리고펩티드일 수 있다.
일부 구현예들에서, 상기 PD-1 결합 길항제는 항-PD-1 항체(예컨대, 인간 항체, 인간화 항체, 또는 키메라 항체)이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 니볼루맙(CAS 등록 번호: 946414-94-4)이다. MDX-1106-04, MDX-1106, ONO-4538, BMS-936558, 및 OPDIVO®로도 공지된 니볼루맙(브리스톨-마이어스-스퀴브/온콜로지(Bristol-Myers Squibb/Ono))은 WO2006/121168에 기재된 항-PD-1 항체이다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하고:
(a) 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWY DGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (서열 번호 11), 및
(b) 상기 경쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 12).
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 서열 번호 11 및 서열 번호 12의 6개의 HVR 서열(예컨대, 서열 번호 11의 3개의 중쇄 HVR 및 서열 번호 12의 3개의 경쇄 HVR)을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 서열 번호 11의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 12의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 펨브로리주맙(CAS 등록 번호: 1374853-91-4)이다. MK-3475, 머크(Merck) 3475, 람브롤리주맙, 키트루다(KEYTRUDA)®, 및 SCH-900475로도 공지된 펨브롤리주맙(머크)은 WO2009/114335에 기재된 항-PD-1 항체이다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 항체는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하고:
(a) 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGG INPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYW GQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCP APEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (서열 번호 13), 및
(b) 상기 경쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
EIVLTQSPAT LSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLES GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 14).
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 서열 번호 13 및 서열 번호 14의 6개의 HVR 서열(예컨대, 서열 번호 13의 3개의 중쇄 HVR 및 서열 번호 14의 3개의 경쇄 HVR)을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 서열 번호 13의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 14의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 MEDI-0680(AMP-514; 아스트라제네카)이다. MEDI-0680은 인간화 IgG4 항-PD-1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 PDR001(CAS 등록 번호 1859072-53-9; 노바르티스)이다. PDR001은 PD-1에 대한 PDL1 및 PDL2의 결합을 차단하는 인간화 IgG4 항-PD1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 REGN2810(리제네론(Regeneron))이다. REGN2810은 인간 항-PD1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 BGB-108(베이진(BeiGene)이다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 BGB-A317(베이진(BeiGene)이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 JS-001(상하이 준시(Shanghai Junshi))이다. JS-001은 인간화 항-PD1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 STI-A1110(소렌토(Sorrento))이다. STI-A1110은 인간 항-PD1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 INCSHR-1210(인사이트(Incyte))이다. INCSHR-1210은 인간 IgG4 항-PD1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 PF-06801591(화이자)이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 TSR-042(ANB011; 테사로/아납티스바이오(Tesaro/AnaptysBio))이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 AM0001(ARMO 바이오사이언스(Biosciences))이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 ENUM 244C8(이뉴머럴 바이오메디컬 홀딩스(Enumeral Biomedical Holdings))이다. ENUM 244C8은 PD-1에 대한 PDL1의 결합을 차단하지 않고 PD-1 기능을 억제하는 항-PD1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 ENUM 388D4(이뉴머럴 바이오메디컬 홀딩스)이다. ENUM 388D4는 PD-1에 대한 PDL1의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항-PD1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PD-1 항체는 WO2015/112800(출원인: 리제네론), WO2015/112805(출원인: 리제네론), WO2015/112900(출원인: 노바르티스), US20150210769(노바르티스에 배정), WO2016/089873(출원인: 셀진(Celgene)), WO2015/035606(출원인: 베이진), WO2015/085847(출원인: 상하이 항서 파마슈티컬스(Shanghai Hengrui Pharmaceutical)/중국 항서 제약(Jiangsu Hengrui Medicine)), WO2014/206107(출원인: 상하이 준시 바이오사이언스(Shanghai Junshi Biosciences)/준명 바이오사이언스(Junmeng Biosciences)), WO2012/145493(출원인: 앰플리뮨(Amplimmune)), US9205148(메드이뮨(MedImmune)에 배정), WO2015/119930(출원인: 화이자/머크), WO2015/119923(출원인: 화이자/머크), WO2016/032927(출원인: 화이자/머크), WO2014/179664(출원인: 아납티스바이오), WO2016/106160(출원인: 이뉴머럴), 및 WO2014/194302(출원인: 소렌토)에 기재된 PD-1 항체로부터 6개의 HVR 서열(예컨대, 3개의 중쇄 HVR 및 3개의 경쇄 HVR) 및/또는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 구현예들에서, 상기 PD-1 결합 길항제는, 면역접합체 (예컨대, 불변 영역(예컨대, 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PDL1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합부를 포함하는 면역접합체)이다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-1 결합 길항제는 AMP-224이다. B7-DCIg로도 공지된 AMP-224(CAS 등록 번호 1422184-00-6; 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)/메드이뮨)는 WO2010/027827 및 WO2011/066342에 기재된 PDL2-Fc 융합 가용성 수용체이다.
일부 구현예들에서, 상기 PD-1 결합 길항제는 펩티드 또는 소분자 화합물이다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-1 결합 길항제는 AUNP-12(피에르 파브르(PierreFabre)/오리진(Aurigene))이다. 예컨대, WO2012/168944, WO2015/036927, WO2015/044900, WO2015/033303, WO2013/144704, WO2013/132317, 및 WO2011/161699를 참조한다.
일부 구현예들에서, 상기 PDL1 결합 길항제는 PD-1을 억제하는 소분자이다. 일부 구현예들에서, 상기 PDL1 결합 길항제는 PDL1을 억제하는 소분자이다. 일부 구현예들에서, 상기 PDL1 결합 길항제는 PDL1 및 VISTA를 억제하는 소분자이다. 일부 구현예들에서, 상기 PDL1 결합 길항제는 CA-170(AUPM-170으로도 공지된)이다. 일부 구현예들에서, 상기 PDL1 결합 길항제는 PDL1 및 TIM3을 억제하는 소분자이다. 일부 구현예들에서, 상기 소분자는 WO2015/033301 및 WO2015/033299에 기재된 화합물이다.
일부 구현예들에서, 상기 PD-1 축 결합 길항제는 항-PDL1 항체이다. 다양한 항-PDL1 항체가 본원에서 고려되고 설명된다. 본원의 구현예들 중 임의의 것에서, 상기 분리된 항-PDL1 항체는 인간 PDL1, 예컨대, 유니프롯KB/스위스-프롯(UniProtKB/Swiss-Prot) 수탁 번호 9NZQ7.1에 나타낸 인간 PDL1 또는 이의 변이체에 결합할 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 PDL1 및 PD-1 사이의 및/또는 PDL1 및 B7-1 사이의 결합을 억제할 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 단클론 항체이다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 Fab, Fab’-SH, Fv, scFv, 및 (Fab’)2 단편으로 구성된 군으로부터 선택된 항체 단편이다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 인간화 항체이다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 인간 항체이다. 본 발명의 방법에 유용한 항-PDL1 항체들 및 이를 제조하기 위한 방법들의 예시는 PCT 특허 출원 WO 2010/077634 A1 및 미국 특허 제 8,217,149호에 기재되며, 이의 내용은 본원에 참조로서 포함된다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고:
(a) 상기 중쇄 가변 영역은 GFTFSDSWIH(서열 번호 1), AWISPYGGSTYYADSVKG(서열 번호 2) 및 RHWPGGFDY(서열 번호 3)의 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 서열을 각각 포함하며,
(b) 상기 경쇄 가변 영역은 RASQDVSTAVA(서열 번호 4), SASFLYS(서열 번호 5) 및 QQYLYHPAT(서열 번호 6)의 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3 서열을 각각 포함한다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 아테졸리주맙 및 티쎈트릭(TECENTRIQ)®(CAS 등록 번호: 1422185-06-5)로도 알려진 MPDL3280A이다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하고:
(a) 상기 중쇄 가변 영역 서열은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (서열 번호 7), 및
(b) 상기 경쇄 가변 영역 서열은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASF LYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (서열 번호 8).
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하고:
(a) 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 9), 및
(b) 상기 경쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 10).
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 아벨루맙(CAS 등록 번호: 1537032-82-8)이다. MSB0010718C로도 공지된 아벨루맙은 인간 단클론 IgG1 항-PDL1 항체(머크 KGaA, 화이자)이다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하고:
(a) 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 15), 및
(b) 상기 경쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다: QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (서열 번호 16).
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 서열 번호 15 및 서열 번호 16의 6개의 HVR 서열(예컨대, 서열 번호 15의 3개의 중쇄 HVR 및 서열 번호 16의 3개의 경쇄 HVR)을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 서열 번호 15의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 16의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 더발루맙(CAS 등록 번호: 1428935-60-7)이다. MEDI4736으로도 공지된 더발루맙은 WO2011/066389 및 US2013/034559에 기재된 Fc 최적화 인간 단클론 IgG1 카파 항-PDL1 항체(메드이뮨, 아스트라제네카)이다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하고:
(a) 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열 번호 17), 및
(b) 상기 경쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 18).
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 서열 번호 17 및 서열 번호 18의 6개의 HVR 서열(예컨대, 서열 번호 17의 3개의 중쇄 HVR 및 서열 번호 18의 3개의 경쇄 HVR)을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 서열 번호 17의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 18의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 MDX-1105(브리스톨-마이어스-스퀴브)이다. BMS-936559로도 공지된 MDX-1105는 WO2007/005874에 기재된 항-PDL1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 LY3300054(엘리 릴리(Eli Lilly))이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 STI-A1014(소렌토(Sorrento))이다. STI-A1014는 인간 항-PDL1 항체이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 KN035(쑤저우 알파맙(Suzhou Alphamab))이다. KN035는 낙타 파지-디스플레이 라이브러리로부터 생성된 단일-도메인 항체(dAB)이다.
일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 절단될 때(예컨대, 종양 미세 환경에서 프로테아제에 의해) 항체 항원 결합 도메인을 활성화하여, 예컨대 비-결합 입체 모이어티를 제거함으로써 이의 항원에 결합하도록 하는 절단성 모이어티 또는 링커를 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PDL1 항체는 CX-072(사이톰엑스 테라퓨틱스(CytomX Therapeutics))이다.
일부 구현예들에서, 상기 PDL1 항체는 US20160108123(노바티스에 배정), WO2016/000619(출원인: 베이진), WO2012/145493(출원인: 앰플리뮨(Amplimmune)), US9205148(메드이뮨(MedImmune)에 배정), WO2013/181634(출원인: 소렌토), 및 WO2016/061142(출원인: 노바티스)에 기재된 PDL1 항체로부터 6개의 HVR 서열(예컨대, 3개의 중쇄 HVR 및 3개의 경쇄 HVR) 및/또는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
또 다른 추가의 구체적인 양태에서, 상기 항체는 인간 또는 쥣과의 불변 영역을 추가로 포함한다. 또 다른 추가의 양태에서, 상기 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가의 구체적인 양태에서, 상기 인간 불변 영역은 IgG1이다. 또 다른 추가의 양태에서, 상기 쥣과의 불변 영역은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 추가의 양태에서, 상기 쥣과의 불변 영역은 IgG2A이다.
또 다른 추가의 구체적인 양태에서, 상기 항체는 감소된 또는 최소의 효과기 기능을 갖는다. 또 다른 추가의 구체적인 양태에서, 상기 최소의 효과기 기능은 “효과기 없는 Fc 변이" 또는 비당화 변이로부터 유발된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 상기 효과기 없는 Fc 변이는 불변 영역 내에서의 N297A 또는 D265A/N297A 치환이다. 일부 구현예들에서, 상기 분리된 항-PDL1 항체는 비당화된다. 항체의 당화는 전형적으로 N-연결 또는 O-연결이다. N-연결은 탄수화물 모이어티를 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착하는 것을 지칭한다. X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산인, 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌)은 아스파라긴 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 효소 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드 내 상기 트리펩티드 서열 중 어느 하나의 존재는 잠재적인 당화 부위를 생성한다. O-연결된 당화는 히드록시아미노산, 가장 일반적으로는 세린 또는 트레오닌에 대한 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토오스 또는 자일로스 중 하나의 부착을 지칭하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신이 또한 사용될 수 있다. 항체로부터의 당화 부위의 제거는, 상기 아미노산 서열을 변경하여 편리하게 달성됨으로써(N-연결 당화 부위에 대한) 상기 기재된 트리펩티드 서열 중 하나가 제거된다. 상기 당화 부위 내의 아스파라긴, 세린 또는 트레오닌 잔기를 또 다른 아미노산 잔기(예컨대, 글리신, 알라닌 또는 보존적 치환)로 치환함으로써 변경이 이루어질 수 있다.
또 다른 추가의 구현예에서, 본 개시는 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체와 병용으로, 상기 기재된 항-PDL1 항체들 중 임의의 것을 포함하는 조성물들을 제공한다.
또 다른 추가의 구현예에서, 본 개시는 본원에 제공된 바와 같은 항-PDL1, 항-PD-1, 또는 항-PDL2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 구현예들에서, 상기 개체에 투여된 상기 항-PDL1, 항-PD-1, 또는 항-PDL2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물이다. 본원에 기재된 또는 당해 분야에 공지된 약학적으로 허용가능한 담체들 중 임의의 것이 사용될 수 있다.
Ⅳ. 백금 제제 및 토포이소머라제 II 억제제
백금 제제
백금 제제들(예컨대, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 및 사트라플라틴)은 단일부가물의 가교, 사슬간 교차결합, 사슬간 교차결합 또는 DNA 단백질 교차결합으로서 DNA의 가교를 유발하는데 널리 쓰이는 항종양 약물들이다. 백금 제제들은 1, 2 사슬간 교차결합을 형성하는 구아닌의 이웃하는 N-7 위치 상에 전형적으로 작용한다(Poklar et al. (1996). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (15): 7606-11; Rudd et al. (1995). Cancer Chemother. Pharmacol. 35 (4): 323-6). 결과로서 생성된 가교는 암세포 내에서 DNA 복구 및/또는 DNA 합성을 억제한다.
카보플라틴은 본원에 기재된 방법들에 사용되는 예시적인 백금 배위 화합물이다. 카보플라틴의 화학명은 백금, 디암민[1,1-시클로부탄디카르 복실레이토(2-)-O,O']-, (SP-4-2)이며, 카보플라틴은 하기의 구조식을 갖는다:
Figure pct00001
카보플라틴은 분자식이 C6H12N2O4Pt이고 분자량이 371.25인 결정 분말이다. 약 14 mg/mL의 속도로 물에 용해되며, 1% 용액의 pH는 5 내지 7이다. 에탄올, 아세톤 및 디메틸아세트아미드에는 사실상 불용성이다. 카보플라틴은 주로 사슬간 DNA 교차결합을 생성하며, 상기 효과는 세포주기 비특이적이다. 카보플라틴은 파라플라틴(PARAPLATIN)®, BIOCARN, BLASTOCARB, BLASTOPLATIN, CARBOKEM, CARBOMAX, CARBOPA, CARBOPLAN, CARBOTEEN, CARBOTINAL, CYTOCARB, DUCARB, KARPLAT, KEMOCARB, NAPROPLAT, NEOPLATIN, NISCARBO, ONCOCARBIN, TEVACARB, WOMASTIN, 및 기타로서 상업적으로 입수 가능하다.
토포이소머라제 II 억제제
토포이소머라제 II 억제제들(예컨대, 에토포시드(VP-16), 테니포시드, 독소루비신, 다우노루비신, 미톡산트론, 암사크린, 엘립티신, 아우린트리카르복실산 및 HU-331)은 또한 효소-매개 DNA 파손의 형성 후 토포이소머라제 II : DNA 공유 복합체(즉, "절단 복합체")를 안정화시키는 널리 쓰이는 항종양 약물들이다. 상기 절단 복합체의 축적은 세포 사멸 경로를 유도한다.
에토포시드는 본원에 기재된 방법들에 사용되는 예시적인 토포이소머라제 II 억제제이다. 에토포시드는 일반적으로 전구약물 에포토시드 포스페이트로서 투여되며, 이의 화학명은 4'-데메틸에피포도필로톡신 9-[4,6-O- (R)-에틸리덴-β-D글루코피라노시드], 4'(인산이수소)이다.
인산 에토포시드는 하기의 구조를 갖는다:
Figure pct00002
에토포시드의 인산 에스테르인 인산 에토포시드는 포도필로톡신의 반합성 유도체이며 탈인산화에 의해 에토포시드로 전환된다. 에토포시드는 DNA-토포이소머라제 II와의 상호 작용 또는 자유 라디칼 형성에 의해 DNA 가닥 파손을 유도하여 세포주기 정지(주로 상기 세포주기의 G2 단계에서) 및 세포 사멸을 초래한다. 에토포시드는 에토포포스(ETOPOPHOS)®, 토포사르(TOPOSAR)™, VP-16, VEPESID®, ACTITOP, ASIDE, BIOPOSIDE, CTOP, CYTOP, EPOSED, ESIDE, ETHOPUL, ETOLON, ETONIS, ETOPLAST, ETOSID, ETOVEL, FYTOP, FYTOSID, LASTET, NZYTOP, ONCOSIDE, PLACID, POSID, RETOPSON, TEVASIDE, TOPOK 및 TOPOSIDE 등으로 상업적으로 입수 가능하다.
Ⅴ. 항체 제조
본원에 기재된 항체는 당해 분야에서 항체 생성을 위한 입수 가능한 기술을 이용하여 제조하고, 이의 예시적 방법들은 하기의 섹션에서 더욱 상세히 설명된다.
상기 항체는 관심 항원(예컨대, 인간 PD-L1과 같은 PD-L1)에 대해 지향되어 있다. 바람직하게는, 상기 항원은 생물학적으로 중요한 폴리펩티드이고 장애를 앓는 포유동물에게 상기 항체를 투여하는 것은 상기 포유동물에서 치료적 이점을 가져올 수 있다.
특정 구현예들에서, 본원에 제공된 항체는 ≤1 μM, ≤150 nM, ≤100 nM, ≤50 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤0.01 nM 또는 ≤0.001 nM(예컨대, 10-8 M 이하, 예컨대, 10-8 M 내지 10-13 M, 예컨대, 10-9 M 내지 10-13 M)의 분해 상수(Kd)를 갖는다.
일 구현예에서, Kd는 하기의 검정에 의해 설명된 바와 같은 관심 항체의 Fab 버전 및 이의 항원과 병용으로 실시된 방사능표지된 항원 결합 검정(RIA)에 의해 측정된다. 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화도는 비표지된 항원의 적정 시리즈의 존재 하에 (125I)-표지된 항원의 최소 농도로 Fab를 평형화시킨 후, 항-Fab 항체 코팅된 플레이트로 결합된 항원을 포획함으로써 측정된다(예컨대, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999))을 참조). 상기 검정에 대한 조건을 확립하기 위해, 마이크로티터(MICROTITER)® 멀티-웰 플레이트(써모 사이언티픽(Thermo Scientific))를 50 mM 탄산나트륨(pH 9.6) 중에서의 5 μg/ml의 포획 항-Fab 항체(카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후, 실온(약 23℃)에서 2시간 내지 5시간 동안 PBS 중의 2%(w/v) 소 혈청 알부민으로 이어서 차단하였다. 비-흡착 플레이트(Nunc #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원을 관심 Fab의 연속 희석액과 혼합한다. 그런 다음, 상기 관심 Fab를 밤새 배양한다; 하지만, 상기 배양은 평형이 달성되도록 더 오랜 기간(예컨대, 약 65시간)동안 계속할 수 있다. 이 후, 상기 혼합물은 실온에서(예컨대, 1시간 동안) 배양하기 위해 포착 플레이트로 이동한다. 이 후, 상기 용액을 제거하고, 상기 플레이트를 PBS 중의 0.1% 폴리소르베이트 20(트윈(TWEEN)-20®)를 이용하여 8회 세척한다. 상기 플레이트들이 건조되었을 때, 150 μl/웰의 섬광제(마이크로신트(MICROSCINT)-20TM; 패커드(Packard))를 첨가하고, 상기 플레이트들을 탑카운트(TOPCOUNT)TM 감마 카운터(패커드) 상에서 10분 동안 계수한다. 경쟁적 결합 검정에서 이용하기 위하여 20% 이하의 최대 결합을 제공하는 각 Fab의 농도를 선택한다.
다른 구현예에 따르면, Kd는 약 10 반응 단위(RU)의 고정된 항원 CM5 칩을 이용하여 25℃에서 비아코어(BIACORE)®-2000 또는 비아코어®-3000(비아코어 사, 뉴저지주, 피츠카타웨이 소재 )을 사용하는 표면 플라즈몬 공명 검정을 이용하여 측정한다. 간략하게는, 카르복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, 비아코어 사)은 공급업체의 사용설명서에 따라 N-에틸-N’-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 염산염(EDC) 및 N-히드록시숙신이미드(NHS)를 이용하여 활성화시킨다. 항원을 약 10 반응 단위(RU)의 커플링된 단백질을 달성하기 위해, 5 μl/분의 유속으로 주입 전에 10 mM 아세트산 나트륨을 이용해, pH 4.8, 5 μg/ml(약 0.2 μM)까지 희석시킨다. 항원 주입 후, 반응하지 않은 기를 차단하기 위해 1M 에탄올아민을 주입한다. 동역학 측정을 위해, Fab의 2배 연속 희석액(0.78 nM 내지 500 nM)을 약 25 μl/분의 유속으로 25℃에서 0.05% 폴리소르베이트 20(트윈-20™) 계면활성제(PBST)를 포함하는 PBS 내에 주입한다. 결합 속도(kon) 및 해리 속도(koff)는 결합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅함으로써 단순한 1 대 1 랭뮤어(Langmuir) 결합 모델(비아코어® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 이용하여 계산한다. 평형 해리 상수(Kd)는 비율 koff/kon으로서 계산한다. 예컨대, Chen et al. J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)를 참조한다. 만약 화합률(on-rate)이 상기 표면 플라스몬 공명 검정에 의해 106 M-1 s-1을 초과하는 경우, 분광기, 예컨대 정지-유동 구비된 분광광도계(아비브 인스트루먼츠(Aviv Instruments)) 또는 교반된 큐벳을 갖춘 8000-시리즈 SLM-AMINCOTM 분광광도계(ThermoSpectronic)에서 측정된 바와 같이 농도가 증가하는 항원의 존재 하에 25℃에서 pH 7.2, PBS 내 20 nM 항-항원 항체(Fab 형태)의 형광 방출 강도(여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 대역통과)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 소광 기술을 이용함으로써 결합 속도를 측정할 수 있다.
(i) 항원 제조
선택적으로 다른 분자들에 접합된 가용성 항원들 또는 이의 단편들은 항체들을 생성하기 위한 면역원으로서 사용할 수 있다. 막관통 분자들, 예컨대 수용체들에 대하여, 이들의 단편들(예컨대, 수용체의 세포외 도메인)은 면역원으로서 사용할 수 있다. 대안적으로, 막관통 분자를 발현하는 세포들을 면역원으로서 사용할 수 있다. 상기 세포들은 천연 공급원(예컨대, 암 세포주)으로부터 유도될 수 있거나, 막관통 분자를 발현시키기 위해 재조합 기술에 의해 형질전환되는 세포일 수 있다. 항체 제조에 유용한 다른 항원들 및 이의 형태들은 당업자들에게 명백할 것이다.
(ii) 특정 항체-기반 방법
다클론 항체들은 바람직하게는 관련 항원 및 보조제의 다중 피하(sc) 또는 복강 내(ip) 주사에 의해 동물에서 발생한다. 면역화될 종에서 면역원성이 되는 단백질, 예컨대, 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린, 또는 대두 트립신 억제제에 이중작용성 제제 또는 유도체화제, 예를 들어, 말레이미도벤조일 설포석신이미드 에스테르(시스테인 잔기를 통한 접합), N-히드록시석신이미드(리신 잔기를 통한), 글루타르알데히드, 석신산 무수물, SOCl2, 또는 R1N=C=NR (R 및 R1 은 상이한 알킬기임)을 이용하여 관련된 항원을 접합하는 것이 유용할 수 있다.
예컨대, 100 μg 또는 5 μg의 단백질 또는 접합체(각각 토끼 또는 마우스의 경우)를 3 부피의 프로인트 완전 보조제와 혼합하고 상기 용액을 다수의 부위에 피내 주사함으로써, 동물은 상기 항원, 면역원성 접합체, 또는 유도체에 맞서 면역성을 갖게 된다. 1개월 후 상기 동물들은 다수의 부위에서 피하 주사에 의해 프로인트 완전 보조제 내 펩티드 또는 접합체의 최초 양의 1/5 내지 1/10로 강화(boost)된다. 7 내지 14일 후 상기 동물들을 채혈하고 혈청을 항체 역가에 대하여 검정한다. 동물들은 역가가 정체 상태를 유지할 때까지 강화된다. 바람직하게는, 상기 동물은 동일한 항원의 접합체로 강화되지만, 상이한 단백질에 및/또는 상이한 가교결합 시약을 통해 접합된다. 접합체들은 또한 단백질 융합으로서 재조합 세포 배양에서 제조할 수 있다. 또한, 응집제, 예컨대 명반은 면역 반응을 증진시키기 위해 적합하게 사용된다.
본 개시의 단클론 항체들은 인간-인간 하이브리도마와 관하여 Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)에 처음 설명되고, 예컨대 Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981), 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)에서 추가로 설명된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 추가적인 방법들은, 예를 들어, 하이브리도마 세포주로부터의 단클론 인간 천연 IgM 항체의 생성에 관한 미국 특허 제 7,189,826호에 기재된 방법들을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술(트리오마(Trioma) 기술)은 Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3): 185-91 (2005)에서 설명된다.
다양한 다른 하이브리도마 기술에 대해서는, 예컨대, US 2006/258841; US 2006/183887(완전 인간 항체), US 2006/059575; US 2005/287149; US 2005/100546; US 2005/026229; 및 미국 특허 제 7,078,492 및 7,153,507호를 참조한다. 상기 하이브리도마 방법을 사용하여 단클론 항체를 생성하는 예시적인 프로토콜이 아래와 같이 설명된다. 일 구현예에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대 햄스터가 면역화되어 면역화를 위해 사용된 단백질에 특이적으로 결합하게 될 항체를 생성하거나 생성할 수 있는 림프구를 유도한다. 항체들은 본 개시의 폴리펩티드 또는 이의 단편, 및 보조제, 예컨대 모노포스포릴 지질 A(MPL)/트레할로오스 디크리노미콜레이트(TDM)의 다중 피하(sc) 또는 복강내(ip) 주사에 의해 동물 내에서 생성된다(리비 이뮤노켐 리서치 사(Ribi Immunochem. Research, Inc.), 몬타나 주, 해밀턴 소재). 본 개시의 폴리펩티드(예컨대, 항원) 또는 이의 단편은 당해 분야에서 잘 알려진 방법, 예컨대 재조합 방법을 사용하여 제조될 수 있고, 이의 일부는 본원에서 추가로 설명된다. 면역화된 동물들의 혈청을 항-항원 항체에 대해 검정하고, 추가(강화) 면역화를 선택적으로 투여한다. 항-항원 항체를 생성하는 동물들로부터 림프구를 분리한다. 대안적으로, 림프구는 시험관 내에서 면역화될 수 있다.
그런 다음, 림프구는 하이브리도마 세포를 형성하기 위해 적합한 융합 제제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포와 융합한다. 예컨대, Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)을 참조한다. 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생성 세포에 의한 안정적인 고 수준의 항체 생성을 지지하며, 예컨대 HAT 배지와 같은 배지에 민감한 골수종 세포를 사용할 수 있다. 예시적인 골수종 세포는 쥣과의 골수종 세포주, 예컨대, 미국 캘리포니아 주 샌디에고 소재의 살크 인스티튜트 세포 분배 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)로부터 입수 가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 세포, 및 미국 메릴랜드주 록빌 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)으로부터 입수 가능한 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주는 또한 인간 단클론 항체의 생성을 위해 기재되었다(Kozbor, J. Immunol, 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
이렇게 제조된 하이브리도마 세포는 적합한 배양 배지, 예컨대, 비융합된, 모골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 배지 내에서 분주하고 성장한다. 예를 들어, 만약 상기 모골수종 세포에 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 전달효소(HGPRT 또는 HPRT)가 부재하다면, 상기 하이브리도마를 위한 배양 배지는 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지하는 물질인, 하이포잔틴, 아미노프테린 및 티미딘(HAT 배지)을 포함하게 된다. 바람직하게는, 무혈청 하이브리도마 세포 배양 방법들은, 예를 들어 Even et al., Trends in Biotechnology, 24(3), 105-108 (2006)에 기재된 바와 같이 우태아 혈청과 같은 동물-유래 혈청의 사용을 감소시키기 위해 사용된다.
하이브리도마 세포 배양의 생산성을 개선하기 위한 도구로서 올리고펩디드가 Franek, Trends in Monoclonal Antibody Research, 111-122 (2005)에 기재되어 있다. 구체적으로, 표준 배양 배지는 특정 아미노산(알라닌, 세린, 아스파라긴, 프롤린), 또는 단백질 가수분해물 분획이 풍부하고, 세포자멸사는 3 내지 6개의 아미노산 잔기로 구성된 합성 올리고펩티드들에 의해 유의미하게 억제될 수 있다. 상기 펩티드들은 밀리몰 또는 이보다 높은 농도로 존재한다.
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지는 본 개시의 항체에 결합하는 단클론 항체의 생성에 대해 검정할 수 있다. 하이브리도마 세포에 의해 생성된 단클론 항체의 결합 특이성은 면역침강 또는 시험관내 결합 검정, 예컨대 방사선면역검정(RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 결정될 수 있다. 상기 단클론 항체의 결합 친화도는, 예를 들어, 스캐차드(Scatchard) 분석에 의해 결정될 수 있다. 예컨대, Munson et al, Anal. Biochem, 107:220 (1980)을 참조한다.
원하는 특이성, 친화성, 및/또는 활성의 항체를 생성하는 하이브리도마 세포를 확인한 후, 클론들을 희석 절차를 제한함으로써 서브클로닝하고 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다. 예컨대, 상기 Goding을 참조한다. 상기 목적을 위해 적합한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는 동물 내에서 복수(ascite) 종양으로서 생체 내에서 성장할 수 있다. 상기 서브클론에 의하여 분비된 단클론 항체는 통상적인 면역글로불린 정제 절차, 예컨대 단백질 A-세포라제(Sepharose), 히드록실아퍼타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화성 크로마토그래피에 의해 배양 배지 또는 복수 유체 또는 혈청으로부터 적합하게 분리한다. 하이브리도마 세포로부터 단백질을 분리하기 위한 하나의 절차는 US 2005/176122 및 미국 특허 제 6,919,436호에 기재되어 있다. 상기 방법은 결합 과정에서 이액염과 같은 최소 염을 사용하고, 바람직하게는 용출 과정에서 소량의 유기 용매를 사용하는 방법을 포함한다.
(iii) 라이브러리-유래 항체
본 개시의 항체들은 원하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체들에 대해 조합 라이브러리를 선별검사함으로써 분리할 수 있다. 예를 들어, 파지-디스플레이 라이브러리를 생성하고 원하는 결합 특징을 보유한 항체들에 대해 상기 라이브러리를 선별검사하기 위한 다양한 벙법, 예컨대 실시예 3에 기재된 방법이 당해 분야에 공지되어 있다. 추가적인 방법들이, 예컨대, Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)에서 검토되고, 예컨대, McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)에서 추가로 설명된다.
특정 파지-디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 별도로 클로닝하고 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합하는데, 상기 라이브러리는 이후, Winter et al, Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)에서 기재된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 선별검사할 수 있다. 파지는 전형적으로, 단일-사슬 Fv(scFv) 단편으로서 또는 Fab 단편으로서 항체 단편을 전시한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요 없이 면역원에 대한 높은 친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 미경험 레퍼토리는 Griffiths et al, EMBO J, 12: 725-734(1993)에 기재된 바와 같이, 면역화 없이 넓은 범위의 비자가 및 자가 항원에 대한 항체들의 단일 공급원을 제공하도록 클로닝(예컨대, 인간으로부터)할 수 있다. 최종적으로, 미경험 라이브러리는 또한, Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388(1992)에 기재된 바와 같이, 줄기 세포로부터 재배열되지 않은 V-유전자 분절을 클로닝하고, 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 이용하여, 고도의 가변 CDR3 영역을 부호화하고, 시험관 내에서 재배열을 달성함으로써 합성적으로 제조할 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하는 특허 공보는, 예를 들어: 미국 특허 제 5,750,373호, 및 미국 특허 공보 제 2005/0079574호, 2005/0119455호, 2005/0266000호, 2007/0117126호, 2007/0160598호, 2007/0237764호, 2007/0292936호, 및 2009/0002360호를 포함한다.
인간 항체 라이브러리로부터 분리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편인 것으로 간주된다.
(iv) 키메라, 인간화 및 인간 항체
특정 구현예들에서, 본원에 제공되는 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체들은, 예컨대, 미국 특허 제 4,816,567호; 및 Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))에 기재되어 있다. 일 예시에서, 키메라 항체는 비인간 가변 영역(예컨대, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼, 또는 비인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가 예시에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 모항체의 부류로부터 변화된 “부류가 전환된” 항체이다. 키메라 항체는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
특정 구현예들에서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 인간화되어 인간에 대한 면역원성이 감소되지만, 모체 비-인간 항체의 특이성 및 친화도는 유지된다. 일반적으로, 인간화 항체는 HVR, 예컨대, CDR(또는 이의 일부)이 비인간 항체로부터 유래되고, FR(또는 이의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 선택적으로 인간 불변 영역의 적어도 일부분을 또한 포함할 것이다. 일부 구현예들에서, 인간화 항체에서 일부 FR 잔기들은 비-인간 항체(예컨대, HVR 잔기가 유래되는 항체)로부터 대응하는 잔기들로 치환되어, 예컨대, 항체 특이성 또는 친화성을 복구하거나 개선시킨다.
인간화 항체 및 이를 제조하는 방법은, 예컨대, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에 검토되어 있고, 예컨대, Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)]; 미국 특허 제5,821,337호, 7,527,791호, 6,982,321호 및 7,087,409호; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)(SDR(a-CDR) 그래프팅을 기재); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)("리서페이싱"을 기재); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)("FR 셔플링"을 기재); 및 Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)(FR 셔플링에 대한 "가이드된 선택" 접근법을 기재)에 추가로 기재되어 있다.
인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은: "베스트 피트(best-fit)" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역(예컨대, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)을 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 하위군의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역(예컨대, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)을 참조); 인간 성숙(체세포로 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식선 프레임워크 영역(예컨대, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); 및 스크리닝 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역(예컨대, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)을 참조)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
특정 구현예들에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체들은 당해 분야에 공지된 다양한 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 인간 항체들은 일반적으로 van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.
인간 항체들은 항원 유발에 대한 응답으로 무손상 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 포함하는 무손상 항체를 생성하도록 변형된 유전자도입 동물에 면역원을 투여함으로써 제조할 수 있다. 상기 동물들은 일반적으로 내인성 면역글로불린 좌위를 대체하거나, 염색체외 존재하거나 무작위로 동물의 염색체 내로 통합된, 인간 면역글로불린 좌위의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 유전자도입 마우스에서, 상기 내생적 면역글로불린 좌위는 일반적으로 비활성화되어 있다. 유전자도입 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법을 검토하기 위해서, Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125(2005)를 참조한다. 또한, 예컨대, 제노마우스(XENOMOUSE)TM 기술을 기재하는 미국 특허 제6,075,181호 및 6,150,584호; 휴맵(HuMab)® 기술을 기재하는 미국 특허 제5,770,429호; K-M 마우스(MOUSE)® 기술을 기재하는 미국 특허 제7,041,870호 및 벨로시마우스(VelociMouse)® 기술을 기재하는 미국 특허 출원 공보 제 US 2007/0061900호를 참조한다. 상기 동물들에 의해 생성된 무손상 항체로부터 인간 가변 영역은, 예컨대 상이한 인간 불변 영역과의 조합에 의해, 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체들은 또한 하이브리도마-기반 방법들에 의해 제조할 수 있다. 인간 단클론 항체를 생성하기 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재된 바 있다. (예컨대, Kozbor J. Immunol, 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)를 참조한다). 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통하여 생성된 인간 항체들은 또한 Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)에 기재되어 있다. 추가적인 방법들은, 예를 들어, 미국 특허 제 7,189,826호(하이브리도마 세포주로부터 단클론 인간 IgM 항체의 생산을 기재) 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)(인간-인간 하이브리도마를 기재)에서 기재된 방법들을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술(트리오마 기술)은 Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3): 185-91 (2005)에 또한 기재되어 있다.
인간 항체들은 또한, 인간-유래된 파지-디스플레이 라이브러리로부터 선택되는 Fv 클론 가변 도메인 서열을 분리함으로써 생성할 수 있다. 그런 다음, 상기 가변 도메인 서열은 원하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술은 아래에 설명된다.
(v) 항체 단편
항체 단편들은 효소 분해와 같은 전통적인 수단에 의해, 또는 재조합 기술에 의해 생성할 수 있다. 특정 상황들에서, 완전 항체보다는 항체 단편을 이용하는 것이 이점이 있다. 단편의 크기가 작을 수록 빠른 청소능이 가능하고, 고형 종양에 대한 접근을 개선할 수 있다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134를 참조한다.
항체 단편의 생성을 위하여 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 상기 단편은 무손상 항체의 단백질 분해 소화를 통해 유래되었다(예컨대, Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992); 및 Brennan et al., Science, 229:81 (1985)를 참조). 하지만, 상기 단편은 현재 재조합 숙주 세포에 의해 직접적으로 생성될 수 있다. Fab, Fv, 및 ScFv 항체 단편은 모두 대장균 내에서 발현되고 이로부터 분비될 수 있으며, 따라서 많은 양의 상기 단편을 손쉽게 생성할 수 있다. 항체 단편은 위에서 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 분리할 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 대장균으로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양으로부터 직접 분리할 수 있다. 재생(salvage) 수용체 결합 에피토프 잔기들을 포함하는 생체내 반감기가 증가된 Fab 및 F(ab’)2 단편이 미국 특허 제 5,869,046호에 기재되어 있다. 항체 단편을 생성하기 위한 다른 기술들은 당업자에게 명백할 것이다. 특정 구현예들에서, 항체는 단일 쇄 Fv 단편(scFv)이다. WO 93/16185; 미국 특허 제 5,571,894호; 및 5,587,458호를 참조한다. Fv 및 scFv는 불변 영역들이 없는 무손상 결합 부위를 갖는 유일한 종이고; 따라서, 생체내 사용 중에 감소된 비특이적 결합에 적합할 수 있다. scFv 융합 단백질은 scFv의 아미노 또는 카복시 말단에서 효과기 단백질의 융합을 수득하도록 구성될 수 있다. 상기 Antibody Engineering, ed. Borrebaeck를 참조한다. 상기 항체 단편은 또한, 예컨대 미국 특허 제 5,641,870호에 기재된 바와 같이 "선형 항체"일 수 있다. 상기 선형 항체는 단일특이적 또는 이중특이적일 수 있다.
(vi) 다중특이적 항체
다중특이적 항체들은 적어도 2개의 상이한 에피토프에 결합 특이성을 갖고, 상기 에피토프들은 보통 상이한 항원으로부터 유래된다. 상기 분자들은 보통 2개의 상이한 에피토프(즉, 이중특이적 항체, BsAbs)를 단지 결합하는 반면, 추가적인 특이성을 갖는 항체들, 예컨대 삼중특이적 항체들은 본원에서 사용될 때 상기 발현에 포함된다. 이중특이적 항체들은 전장 항체 또는 항체 단편(예컨대, F(ab')2 이중특이적 항체)로서 제조될 수 있다.
이중특이적 항체를 제조하는 방법들은 당해 분야에 공지되어 있다. 전장 이중특이적 항체의 전통적 생성은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동 발현을 기초로 하며, 상기 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다(Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 배열 때문에, 상기 하이브리도마(쿼드로마)는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적인 혼합물을 생성하며, 이들 중 오직 하나만 정확한 이중특이적 구조를 갖는다. 보통 친화도 크로마토그래피 단계에 의하여 실시되는, 정확한 분자의 정제는 다소 번거롭고, 생성물 산출량이 낮다. 유사한 절차들이 WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)에 개시된다.
이중특이적 항체 제조를 위한 당해 분야에 공지된 하나의 접근법은 "구멍 내 손잡이(knobs-into-holes)" 또는 "구멍에 맞는 돌기(protuberance-into-cavity)" 접근법이다(예컨대, 미국 특허 제 5,731,168호를 참조한다). 상기 접근법에서, 2개의 면역글로불린 폴리펩티드(예컨대, 중쇄 폴리펩티드)의 각각은 계면을 포함한다. 일 면역글로불린 폴리펩티드의 계면은 타 면역글로불린 폴리펩티드 상에서 대응하는 계면과 상호작용함으로써, 2개의 면역글로불린 폴리펩티드를 결합시킨다. 상기 계면들은 일 면역글로불린 폴리펩티드의 계면에 위치한 "손잡이" 또는 "돌기"(상기 용어들은 본원에서 교환가능하게 사용될 수 있음)가 타 면역글로불린 폴리펩티드의 계면에 위치한 "구멍" 또는 "공동"(상기 용어들은 본원에서 교환가능하게 사용될 수 있음)과 대응하도록 조작될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 구멍은 상기 손잡이와 동일한 또는 유사한 크기이고, 상기 2개의 계면이 상호작용할 때, 일 계면의 손잡이가 타 계면의 대응하는 구멍 내에 위치할 수 있도록 적합하게 배치된다. 이론에 구속되는 것을 바라는 것은 아니지만, 이종다량체를 안정화시키고 다른 종, 예를 들어 동종다량체보다 이종다량체의 형성을 선호한다고 생각된다. 일부 구현예들에서, 상기 접근법은 2개의 상이한 면역글로불린 폴리펩티드의 이종다량체화를 촉진하여 상이한 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 폴리펩티드를 포함한 이중특이적 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예들에서, 손잡이는 작은 아미노산 측쇄를 더 큰 측쇄로 대체함으로써 구성될 수 있다. 일부 구현예들에서, 구멍은 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 측쇄로 대체함으로써 구성될 수 있다. 손잡이들 또는 구멍들은 본래 계면에 존재할 수 있거나 합성으로 도입될 수 있다. 예를 들어, 손잡이들 또는 구멍들은 적어도 하나의 "본래" 아미노산 잔기를 적어도 하나의 "유입" 아미노산 잔기로 대체하기 위해 상기 계면을 부호화한 핵산 서열을 변경함으로써 합성으로 도입될 수 있다. 핵산 서열들을 변경하는 방법들은 당해 분야에서 잘 알려진 표준 분자 생물학 기술을 포함할 수 있다. 다양한 아미노산 잔기의 측쇄 용적은 하기의 표 1에 나타낸다. 일부 구현예들에서, 본래 잔기들은 작은 측쇄 용적(예컨대, 알라닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글리신, 세린, 트레오닌, 또는 발린)을 갖고, 손잡이를 형성하기 위한 유입 잔기들은 자연 발생 아미노산들이고 아르기닌, 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판을 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 본래 잔기들은 큰 측쇄 용적(예컨대, 아르기닌, 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판)을 가질 수 있고, 구멍을 형성하기 위한 유입 잔기들은 자연 발생 아미노산이고 알라닌, 세린, 트레오닌, 및 발린을 포함할 수 있다.
아미노산 잔기의 특성
아미노산 단일 문자 약어 질량a
(달톤)		 용적b
(
Figure pct00003
3)		 접근가능한 표면적c(
Figure pct00004
2)
알라닌(Ala) A 71.08 88.6 115
아르기닌(Arg) R 156.20 173.4 225
아스파라긴(Asn) N 114.11 117.7 160
아스파르트산(Asp) D 115.09 111.1 150
시스테인(Cys) C 103.14 108.5 135
글루타민(Gln) Q 128.14 143.9 180
글루탐산(Glu) E 129.12 138.4 190
글리신(Gly) G 57.06 60.1 75
히스티딘(His) H 137.15 153.2 195
이소류신(Ile) I 113.17 166.7 175
류신(Leu) L 113.17 166.7 170
라이신(Lys) K 128.18 168.6 200
메티오닌(Met) M 131.21 162.9 185
페닐알라닌(Phe) F 147.18 189.9 210
프롤린(Pro) P 97.12 122.7 145
세린(Ser) S 87.08 89.0 115
트레오닌(Thr) T 101.11 116.1 140
트립토판(Trp) W 186.21 227.8 255
티로신(Tyr) Y 163.18 193.6 230
발린(Val) V 99.14 140.0 155
a 아미노산 분자량 - 물 분자량 Handbook of Chemistry and Physics, 43rd ed. Cleveland, Chemical Rubber Publishing Co., 1961로부터의 수치.
b A.A. Zamyatnin, Prog. Biophys. Mol. Biol. 24:107-123, 1972로부터의 수치.
c Chothia, J. Mol. Biol. 105:1-14, 1975로부터의 수치. 접근가능한 표면적은 상기 참조문헌의 도 6 내지 도 20에서 정의된다.
일부 구현예들에서, 손잡이 또는 구멍을 형성하기 위한 본래 잔기들은 이종다량체의 3차원 구조에 기초로 하여 확인된다. 3차원 구조를 수득하기 위하여 당해 분야에 공지된 기술들은 X-선 결정학 및 NMR을 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 계면은 면역글로불린 불변 도메인의 CH3 도메인이다. 상기 구현예들에서, 인간 IgG1 의 CH3/CH3 계면은 4개의 역-평행 β-가닥 상에 위치한 각 도메인 상에 16개의 잔기를 포함한다. 이론에 구속되는 것을 바라는 것은 아니지만, 돌연변이된 잔기들은 2개의 중심 역-평행 β-가닥 상에 바람직하게는 위치하여 손잡이들이 상대 CH3 도메인에서 보상성 구멍들 보다는 주위의 용매에 의해 수용될 수 있는 위험을 최소화시킨다. 일부 구현예들에서, 2개의 면역글로불린 폴리펩티드에서 대응하는 손잡이들 및 구멍들을 형성한 돌연변이들은 하기 표2에서 제공된 하나 이상의 쌍에 대응한다.
대응하는 손잡이-및 구멍-형성 돌연변이의 예시적 세트*
제1 면역글로불린의 CH3 제2 면역글로불린의 CH3
T366Y Y407T
T366W Y407A
F405A T394W
Y407T T366Y
T366Y:F405A T394W:Y407T
T366W:F405W T394S:Y407A
F405W:Y407A T366W:T394S
F405W T394S
* 돌연변이들은 본래 잔기, 그 다음 카바트 넘버링 시스템을 이용한 위치, 및 그 다음 유입 잔기에 의해 표시된다(모든 잔기는 단일-문자 아미노산 코드로 제공된다). 다중 돌연변이들은 결장(colon)에 의해 분리된다.
일부 구현예들에서, 면역글로불린 폴리펩티드는 상기 표 2에서 열거된 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한 CH3 도메인을 포함한다. 일부 구현예들에서, 이중특이적 항체는 표 2의 왼쪽 열에 열거된 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한 CH3 도메인을 포함한 제1 면역글로불린 폴리펩티드, 및 표 2의 오른쪽 열에 열거된 하나 이상의 대응하는 아미노산 치환을 포함한 CH3 도메인을 포함한 제2 면역글로불린 폴리펩티드를 포함한다.
상기에서 논의된 바와 같이 DNA의 돌연변이 이후, 하나 이상의 대응하는 손잡이- 또는 구멍-형성 돌연변이를 갖는 변형된 면역글로불린 폴리펩티드를 부호화한 폴리뉴클레오티드는 당해 분야에서 공지된 표준 재조합 기술 및 세포 시스템을 이용하여 발현 및 정제할 수 있다. 예컨대, 미국 특허 제 5,731,168호; 5,807,706호; 5,821,333호; 7,642,228호; 7,695,936호; 8,216,805호; 미국 특허 제 2013/0089553호; 및 Spiess et al., Nature Biotechnology 31: 753-758, 2013을 참조한다. 변형된 면역글로불린 폴리펩티드는 원핵 숙주세포, 예컨대 대장균, 또는 진핵 숙주 세포, 예컨대 CHO 세포를 사용하여 생성될 수 있다. 대응하는 손잡이- 및 구멍-보유 면역글로불린 폴리펩티드는 공-배양물 내 숙주 세포에서 발현될 수 있고 이종다량체로서 함께 정제될 수 있거나, 단일 배양물에서 발현되고, 별도로 정제되며, 시험관내 조립될 수 있다. 일부 구현예들에서, 박테리아성 숙주 세포의 2개 균주(하나는 손잡이를 갖는 면역글로불린 폴리펩티드를 발현하고, 다른 하나는 구멍을 갖는 면역글로불린 폴리펩티드를 발현함)는 당해 분야에 공지된 표준 박테리아성 배양 기술을 이용하여 공-배양된다. 일부 구현예들에서, 상기 2개의 균주는, 예컨대, 배양물에서 동등한 발현 수준을 달성하기 위해 특이적 비로 혼합될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 2개의 균주는 50:50, 60:40, 또는 70:30 비로 혼합될 수 있다. 폴리펩티드 발현 이후, 상기 세포들은 함께 용해될 수 있고, 단백질은 추출될 수 있다. 동종-다량체 대 이종-다량체 종의 존재비를 측정하는 당해 분야에 공지된 표준 기술들은 크기 배제 크로마토그래피를 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 각 변형된 면역글로불린 폴리펩티드는 표준 재조합 기술들을 이용하여 별도로 발현되고, 시험관 내에서 함께 조립될 수 있다. 조립은, 예를 들어, 각 변형된 면역글로불린 폴리펩티드를 정제하고, 동등한 질량으로 혼합 및 배양하며, 이황화 환원(예컨대, 디티오트레이톨로 처리), 농축, 및 폴리펩티드의 재-산화에 의해 달성할 수 있다. 형성된 이중특이적 항체들은 양이온-교환 크로마토그래피를 포함한 표준 기술들을 이용하여 정제할 수 있고, 크기 배제 크로마토그래피를 포함한 표준 기술들을 이용하여 측정할 수 있다. 상기 방법에 관한 좀 더 자세한 설명은, Speiss et al., Nat Biotechnol 31:753-8, 2013을 참조한다. 일부 구현예들에서, 변형된 면역글로불린 폴리펩티드들은 CHO 세포들에서 별개로 발현될 수 있고 상기 기재된 방법들을 사용하여 시험관 내에서 조립될 수 있다.
상이한 접근법에 따르면, 원하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인들(항체-항원 결합 부위)은 면역글로불린 불변 도메인 서열들에 융합된다. 상기 융합은 바람직하게는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 갖고, 힌지, CH2 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다. 상기 융합들 중 적어도 하나에 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역(CH1)을 갖는 것이 전형적이다. 상기 면역글로불린 중쇄 융합 및, 원하는 경우, 상기 면역글로불린 경쇄를 부호화하는 DNA는 별개의 발현 벡터 내로 삽입되고, 적합한 숙주 유기체에 공동 형질감염된다. 이는 구성에 사용된 3개의 폴리펩티드 쇄의 불균등 비가 최적의 수율을 제공하는 경우 구현예들에서 상기 3개의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정함에 있어 큰 가요성을 제공한다. 하지만, 균등 비에서 적어도 2개의 폴리펩티드 쇄의 발현이 고수율을 산출하는 경우, 또는 상기 비가 특별한 유의성이 없는 경우, 한 발현 벡터에서 2개 또는 3개 모두의 폴리펩티드 쇄에 대한 부호화 서열을 삽입하는 것이 가능하다.
상기 접근법의 일 구현예에서, 이중특이적 항체들은 하나의 팔에 제1 결합 특이성을 가진 하이브리드 면역글로불린 중쇄 및 다른 팔에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제2 결합 특이성을 제공)으로 구성된다. 이중특이적 분자의 단지 1/2 내의 면역글로불린 경쇄의 존재가 분리의 용이한 방법을 제공하므로, 상기 비대칭 구조는 원치않는 면역글로불린 쇄 조합으로부터의 원하는 이중특이적 화합물의 분리를 촉진하는 것으로 밝혀졌다. 상기 접근법은 WO 94/04690에 개시된다. 이중특이적 항제의 생성에 관한 추가적인 세부 사항은, 예를 들어 Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)을 참조한다.
WO96/27011에 기재된 다른 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 사이의 계면은 재조합 세포 배양으로부터 회수된 이종이량체의 비율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 일 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 상기 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄가 더 큰 측쇄들(예컨대, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 아미노산 측쇄들을 작은 측쇄들(예컨대, 알라닌 또는 트레오닌)로 대체하여 큰 측쇄(들)에 대해 동일하거나 유사한 크기의 보상성 "공동들"이 제2 항체 분자의 계면 상에 생성된다. 이는 동종이량체와 같은 다른 원치 않는 최종 산물에 비하여 이종이량체 수율을 증가시키기 위한 기전을 제공한다.
이중특이적 항체들은 가교 결합된 또는 "이종 접합체” 항체를 포함한다. 예를 들어, 이종 접합체 내 항체들 중 하나가 아비딘에 커플링되고, 다른 항체가 비오틴에 커플링될 수 있다. 예를 들어, 상기 항체들은 원치 않는 세포들에 대하여 면역계 세포들을 표적하기 위해(미국 특허 제 4,676,980호), 그리고 HIV 감염을 치료하기 위해(WO 91/00360, WO 92/200373, 및 EP 03089) 제안되었다. 이종 접합체 항체들은 임의의 편리한 가교결합 방법들을 사용하여 제조할 수 있다. 적합한 가교 결합제들은 당해 분야에 잘 알려져 있으며, 다수의 가교결합 기술과 함께 미국 특허 제 4,676,980호에 개시되어 있다.
항체 단편들로부터 이중특이적 항체들을 생성하기 위한 기술들은 또한 하기 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 이중특이적 항체들은 화학적 연결을 사용하여 제조할 수 있다. Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)은 무손상 항체가 F(ab’)2 단편을 생성하기 위하여 단백질가수분해적으로 절단되는 절차를 설명한다. 상기 단편들은 이웃한 디티올을 안정화하고 분자간 이황화 형성을 방지하기 위하여 디티올 착화제 아비산나트륨의 존재 하에서 환원된다. 그런 다음, 생성된 Fab’ 단편들은 티오니트로벤조에이트(TNB) 유도체로 전환된다. 그런 다음, Fab’-TNB 유도체 중 하나는 메르캅토에틸아민과의 환원에 의하여 Fab’-티올로 재전환되고, 등몰량의 다른 Fab’-TNB 유도체와 혼합되어 이중특이적 항체를 형성한다. 상기 생성된 이중특이적 항체들은 효소의 선택적 고정화를 위한 제제로서 사용될 수 있다.
최근의 발전은 대장균으로부터 Fab'-SH 단편을 직접적으로 회수하는 것을 수월하게 하며, 이들은 화학적으로 커플링되어 이중특이적 항체를 형성할 수 있다. Shalaby et al., J. Exp. Med., 175: 217-225 (1992)는 완전히 인간화된 이중특이적 항체 F(ab')2 분자의 생성을 기재한다. 각 Fab’ 단편은 대장균으로부터 별도로 분비되고, 시험관 내에서 지시된 화학적 커플링이 이루어져 이중특이적 항체를 형성하였다.
재조합 세포 배양물로부터 직접 유래한 이중특이적 항체 단편들을 제조하고 분리하는 다양한 기술이 또한 기재되었다. 예를 들어, 이중특이적 항체들은 류신 지퍼를 사용하여 생성되었다. Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992). Fos 및 Jun 단백질 유래의 류신 지퍼 펩티드는 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab’ 부분에 연결되었다. 항체 동종이량체들은 힌지 영역에서 환원되어 단량체들을 형성한 후, 재-산화되어 항체 이종이량체들을 형성하였다. 상기 방법은 또한 항체 동종이량체들의 생성을 위하여 이용될 수 있다. Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)에 기재된 "디아바디" 기술은 이중특이적 항체 단편들을 제조하기 위한 대안적인 기전을 제공하였다. 상기 단편들은 동일한 쇄 상의 두 도메인 간 쌍형성을 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 따라서, 한 단편의 VH 및 VL 도메인이 또 다른 단편의 상보적 VH 및 VL 도메인과 쌍을 형성하도록 유도되어 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일-쇄 Fv(sFv) 이량체를 사용하여 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 다른 전략이 또한 보고되었다. Gruber et al, J. Immunol, 152:5368 (1994)를 참조한다.
2개를 초과하는 원자가를 갖는 항체가 고려된다. 예를 들어, 삼중특이적 항체가 제조될 수 있다. Tuft et al. J. Immunol. 147: 60 (1991).
(vii) 단일-도메인 항체
일부 구현예들에서, 본 개시의 항체는 단일-도메인 항체이다. 단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 단일 폴리펩티드 사슬이다. 특정 구현예들에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다(매사추세츠 주 월섬의 도만티스 사( Domantis, Inc.); 예컨대, 미국 특허 제 6,248,516 B1을 참조한다). 일 구현예에서, 단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부로 구성된다.
(viii) 항체 변이체
일부 구현예들에서, 본원에 기재된 항체들의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들어, 상기 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 상기 항체의 아미노산 서열 변이체는 상기 항체를 부호화하는 뉴클레오티드 서열 내에 적절할 변화를 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 상기 변형은, 예를 들어 상기 항체의 아미노산 서열로부터의 잔기 결실, 및/또는 상기 아미노산 서열 내부로의 잔기 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 제작물이 원하는 특징을 갖는 한, 최종 제작물에 도달하기 위해 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합이 이뤄질 수 있다. 상기 아미노산 변경은 서열이 만들어지는 시간에 대상체 항체 아미노산 서열 내에 도입될 수 있다.
(ix) 치환, 삽입, 및 결실 변이체
특정 구현예들에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환적 돌연변이생성을 위한 관심 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 표 3에 나타낸다. 더 많은 실질적인 변화는 아미노산 측쇄 부류를 참조하여 “예시적 치환"이라는 제목 하에 그리고 하기에 추가로 기재되는 바와 같이 표 3에 제공된다. 아미노산 치환은 관심 항체 내로 도입될 수 있고, 생성물은 원하는 활성, 예컨대, 유지/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 선별검사될 수 있다.
보존적 치환
본래 잔기 예시적 치환 바람직한 치환
Ala (A) Val; Leu; Ile Val
Arg (R) Lys; Gln; Asn Lys
Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln
Asp (D) Glu; Asn Glu
Cys (C) Ser; Ala Ser
Gln (Q) Asn; Glu Asn
Glu (E) Asp; Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Arg
Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; 노르류신 Leu
Leu (L) 노르류신; Ile; Val; Met; Ala; Phe Ile
Lys (K) Arg; Gln; Asn Arg
Met (M) Leu; Phe; Ile Leu
Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val; Ser Ser
Trp (W) Tyr; Phe Tyr
Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe
Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; 노르류신 Leu
아미노산은 공통 측쇄 특성에 따라 분류할 수 있다.
a. 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
b. 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
c. 산성: Asp, Glu;
d. 염기성: His, Lys, Arg;
e. 사슬 방향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
f. 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환들은 상기 부류 중 하나의 요소를 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.
하나의 유형의 치환 변이체는 모 항체(예컨대, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기의 치환을 수반한다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택되는 수득한 변이체(들)은 모 항체에 대하여 특정 생물학적 특성(예컨대, 증가된 친화성, 감소된 면역원성)에서 변형(예컨대, 개선)을 가질 것이고/이거나 모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화성 성숙된 항체인데, 예컨대, 파지 디스플레이-기반 친화성 성숙 기술, 예컨대 본원에 기재된 기술들을 이용하여 편리하게 생성될 수 있다. 간략하게는, 하나 이상의 HVR 잔기는 돌연변이화되고, 파지 상에서 변이체 항체가 표시되며, 특정한 생물학적 활성(예컨대, 결합 친화도)을 위해 선별검사된다.
변경(예컨대, 치환들)은 HVR 내에서, 예컨대, 항체 친화도를 개선하기 위하여 실시될 수 있다. 상기 변경은 HVR "핫스팟", 즉 체세포 성숙 과정 중에 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 부호화된 잔기(예컨대, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)를 참조), 및/또는 SDR(a-CDR)에서 실시될 수 있고, 결과로서 생성된 변이체 VH 또는 VL은 결합 친화도에 대해 시험된다. 2차 라이브러리로부터의 구성 및 재선택에 의한 친화도 성숙은, 예컨대 Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)에 기재되어 있다. 친화도 성숙에 대한 일부 구현예들에서, 다양성이 다양한 방법들 중의 임의의 것(예컨대, 오류 발생이 쉬윈 PCR, 쇄 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-지시된 돌연변이생성)에 의한 성숙화를 위해 선택되는 가변 유전자 내로 도입된다. 그런 다음, 제2 라이브러리가 생성된다. 그런 다음, 상기 라이브러리를 선별 검사하여 원하는 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 동정한다. 다양성을 도입하기 위한 다른 방법은 HVR-지시된 접근법을 수반하고, 몇몇 HVR 잔기들(예컨대, 한 번에 4개 내지 6개의 잔기)이 무작위화된다. 항원 결합에 관련된 HVR 잔기들은 구체적으로, 예컨대 알라닌 주사 돌연변이생성(alanine scanning mutagenesis) 또는 모델링을 사용하여 식별할 수 있다. CDR-H3 및 CDR-L3이 특히 종종 표적이 된다.
특정 구현예들에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 상기 변경이 항원에 결합하는 상기 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 하나 이상의 HVRs 내에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 결합 친화성을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경(예컨대, 본원에서 제시된 바와 같은 보존적 치환)이 HVR에서 실시될 수 있다. 상기 변경은 HVR "핫스팟" 또는 SDR의 외부에 있을 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열에 관한 특정 구현예들에서, 각 HVR은 변경되지 않거나, 단지 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이생성을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기들 또는 영역들의 동정을 위한 유용한 방법은 Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085에 기재된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이생성"으로 불리운다. 상기 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기들의 군(예컨대, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys 및 glu)은 상기 항체와 항원과의 상호작용이 영향을 받는지 여부를 결정하기 위해 확인되고 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예컨대, 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 대체된다. 추가적인 치환은 아미노산 위치에서 도입되어 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 입증할 수 있다. 대안적으로 또는 부가적으로, 상기 항체 및 항원 사이에 접촉점을 확인하기 위한 항원-항체 복합체의 결정 구조이다. 상기 접촉 잔기 및 인접한 잔기는 치환의 후보로서 표적화되거나 또는 제거될 수 있다. 변이체는 그들이 원하는 특성을 함유하는지 여부를 결정하기 위해 선별검사될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은, 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입 뿐만 아니라, 1개의 잔기에서부터 100개 이상의 잔기를 함유한 폴리펩티드까지의 범위에 걸친 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체들은 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소(예컨대, ADEPT의 경우) 또는 폴리펩티드에 대한 상기 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 융합을 포함한다.
(x) 당화 변이체
특정 구현예들에서, 본원에 제공된 항체는 상기 항체가 당화되는 정도를 증가 또는 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 당화 부위의 부가 또는 결실은 아미노산 서열을 변경하여 편리하게 달성될 수 있음으로써, 하나 이상의 당화 부위가 생성 또는 제거된다.
상기 항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유류 세포들에 의해 생성된 천연 항체는 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 대한 N-연결에 의해 일반적으로 부착된 분지화된, 이촉각성(biantennary) 올리고당을 전형적으로 포함한다. 예컨대, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)을 참조한다. 상기 올리고당은 다양한 탄수화물, 예컨대, 만노오스, N-아세틸 글루코사민(GlcNAc), 갈락토오스, 및 시알산뿐만 아니라 이촉각성 올리고당 구조의 “줄기”에서 GlcNAc에 부착된 푸코오스를 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 본 개시의 항체에서 상기 올리고당의 변형은 일정한 개선된 특성을 갖는 항체 변이체들을 생성하기 위해 제조될 수 있다.
일 구현예에서, Fc 영역을 포함하는 항체 변이체들이 제공되고, 상기 Fc 영역에 부착된 탄수화물 구조는 ADCC 기능을 개선할 수 있는 푸코오스가 감소되거나 부족하다. 구체적으로, 야생형 CHO 세포에서 생성된 동일한 항체 상에서 푸코오스의 양에 비하여 상대적으로 푸코오스가 감소된 항체들이 본원에서 고려된다. 즉, 상기 항체들은 만약 천연 CHO 세포(예컨대, 천연 FUT8 유전자를 함유하는 CHO 세포와 같이, 천연 당화 패턴을 생성하는 CHO 세포)에 의해 생성될 경우에 가지게 될 양보다 적은 양의 푸코오스를 가지는 것이 특징이다. 특정 구현예들에서, 상기 항체는 상기 항체 상에 N-연결된 글리칸의 약 50%, 40%, 30%, 20%, 10% 또는 5% 미만이 푸코오스를 포함하는 것이다. 예를 들어, 상기 항체에서 푸코오스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 특정 구현예들에서, 상기 항체는 상기 항체 상에 N-연결된 글리칸의 그 어느 것도 푸코오스를 포함하지 않는 것, 즉, 상기 항체는 푸코오스가 전혀 없거나, 푸코오스를 가지지 않거나, 비푸코실화된 것이다. 푸코오스의 양은, 예를 들어 WO 2008/077546에서 기재된 바와 같이, MALDI-TOF 질량 분광분석법에 의해 측정될 때, Asn 297에 부착된 모든 당구조의 총합(예컨대, 복합체, 하이브리드 및 높은 만노오스 구조)에 비하여, 상대적으로 Asn297에서 당쇄 내에 푸코오스의 평균량을 계산함으로써 결정된다. Asn297은 Fc 영역 내에 대략 위치 297(Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 위치한 아스파라긴 잔기를 지칭한다; 하지만, Asn297은 항체들 내에서 경미한 서열 변이로 인해 위치 297의 대략 ±3개의 아미노산 상류 또는 하류에, 다시 말하면, 위치 294 및 300 사이에 위치할 수도 있다. 상기 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예컨대, 미국 특허 공보 제 US 2003/0157108호(Presta, L.); US 2004/0093621호(쿄와 하꼬 교토 사(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.))를 참조한다. “비푸코실화된" 또는 "푸코오스-결핍된" 항체 변이체와 관련된 공보의 예는 다음을 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). 비푸코실화된 항체를 생성할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 부족한 Lec13 CHO 세포(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원 제 US 2003/0157108 A1호, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포(예컨대, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107를 참조)를 포함한다.
항체 변이체는 양분된 올리고당류가 추가로 제공되고, 예컨대, 상기 항체의 Fc 영역에 부착된 이촉각성 올리고당은 GlcNAc에 의해 양분된다. 상기 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 상기 항체 변이체들의 예는, 예컨대 WO 2003/011878(Jean-Mairet et al.); 미국 특허 제 6,602,684호(Umana et al.); 및 Ferrara et al., Biotechnology and Bioengineering, 93(5): 851-861 (2006)에 기재되어 있다. 상기 Fc 영역에 부착된 올리고당에서 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 가진 항체 변이체들이 또한 제공된다. 상기 항체 변이체들은 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 상기 항체 변이체들은, 예컨대 WO 1997/30087(Patel et al.); WO 1998/58964(Raju, S.); 및 WO 1999/22764(Raju, S.)에 기재되어 있다.
특정 구현예들에서, 본원에 기재된 Fc 영역을 포함하는 항체 변이체들은 FcγRIII에 결합할 수 있다. 특정 구현예들에서, 본원에 기재된 Fc 영역을 포함하는 항체 변이체들은 인간 효과기 세포의 존재 하에서 ADCC 활성을 갖거나, 그렇지 않으면 인간 야생형 IgG1Fc 영역을 포함하는 동일할 항체와 비교하여 인간 효과기 세포의 존재 하에서 ADCC 활성이 증가된다.
(xi) Fc 영역 변이체
특정 구현예들에서, 하나 이상의 아미노산 변형은 본원에 제공된 항체의 Fc 영역 내로 도입됨으로써, Fc 영역 변이체를 생성한다. 상기 Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형(예컨대, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예컨대, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 구현예들에서, 본 개시는 생체내 상기 항체의 반감기가 중요하지만 특정 효과기 기능(예컨대, 보체 및 ADCC)은 불필요하거나 해로운 적용 분야에 바람직한 후보가 되게 하는 모두가 아닌 일부 효과기 기능을 보유하는 항체 변이체를 고려한다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정을 실시하여 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인할 수 있다. 예를 들어, 상기 항체가 FcγR 결합은 부족하지만(따라서 유사하게 ADCC 활성의 부족), FcRn 결합 능력을 보유하도록 Fc 수용체(FcR) 결합 검정을 실시할 수 있다. ADCC를 매개하기 위한 1차 세포인 NK 세포는 단지 Fc(RIII를 발현하는 반면, 단핵구는 Fc(RI, Fc(RII 및 Fc(RIII를 발현한다. 조혈 세포들에서 FcR 발현은 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)의 페이지 464의 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적인 예는 미국 특허 제 5,500,362호(예컨대, Hellstrom, I. et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)를 참조) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337(Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)를 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사능활성 검정 방법들이 이용될 수 있다(예를 들어, 유동 세포측정을 위한 ACTI™ 비-방사능활성 세포독성 검정(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); 및 시토톡스(CYTOTOX) 96® 비-방사능활성 세포독성 검정(Promega, Madison, Wi)을 참조). 상기 검정들에 유용한 효과기 세포들은 말초 혈액 단핵 세포들(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포들을 포함한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은, 예컨대 동물 모델, 예컨대 Clynes et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)에 기재된 것에서 생체내 평가될 수 있다. 상기 항체가 C1q에 결합할 수 없고, 따라서 CDC 활성이 부족하다는 것을 확인하기 위해, C1q 결합 검정이 또한 실행될 수 있다. 예컨대, WO　2006/029879 및 WO　2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 검정을 실시할 수 있다(예를 들어, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)을 참조). FcRn 결합 및 생체내 청소/반감기 결정은 당해 분야에 공지된 방법(예컨대, Petkova, S.B. et al., Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)을 참조)을 이용하여 또한 실시될 수 있다.
감소된 효과기 기능를 가진 항체들은 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 가진 항체들을 포함한다(미국 특허 제 6,737,056호). 상기 Fc 돌연변이체들은 잔기 265 및 297이 알라닌으로 치환된 소위 “DANA” Fc 변이체를 포함하는, 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 가진 Fc 돌연변이체를 포함한다(미국 특허 제 7,332,581을 참조).
FcRs에 대한 결합이 개선 또는 감소된 특정 항체 변이체들이 기재된다. (예컨대, 미국 특허 제6,737,056호; WO 제2004/056312, 및 Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)을 참조한다.)
특정 구현예들에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예컨대, Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334에서의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다(잔기의 EU 넘버링). 예시적 구현예에서, 상기 항체는 이의 Fc 영역에서 하기의 아미노산 치환: S298A, E333A, 및 K334A를 포함한다.
일부 구현예들에서, 예컨대 미국 특허 제6,194,551호, WO 제99/51642, 및 Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)에 기재된 바와 같이 변경된(즉, 개선 또는 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존적 세포독성(CDC)을 발생시키는 Fc 영역에서 변경이 이루어진다.
반감기가 증가되고, 태아에 대한 모계 IgGs의 전달을 책임지는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합이 개선된 항체들(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))이 US2005/0014934A1(Hinton et al.)에 기재된다. 상기 항체들은 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선시키는 하나 이상의 치환을 가진 Fc 영역을 내부에 포함한다. 상기 Fc 변이체들은 Fc 영역 잔기들: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에서 치환, 예컨대, Fc 영역 잔기 434의 치환(미국 특허 제 7,371,826호)을 갖는 것을 포함한다. 또한, Fc 영역 변이체들의 다른 예들에 관련된 Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); 미국 특허 제 5,648,260호; 미국 특허 제 5,624,821호; 및 WO 94/29351를 참조한다.
(xii) 항체 유도체
본 개시의 항체는 당해 분야에 공지되어 있고 쉽게 입수 가능한 추가적인 비단백질성 모이어티를 함유하기 위해 추가로 변형될 수 있다. 특정 구현예들에서, 상기 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체이다. 수용성 중합체의 비제한적인 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(단독중합체 또는 무작위 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 폴리올(예컨대, 글리세롤), 폴리비닐 알콜, 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드는 물에서의 안정성으로 인해, 제조 시에 이점을 가질 수 있다. 상기 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분기되거나 분기되지 않을 수 있다. 상기 항체에 부착된 중합체의 수는 가변적일 수 있고, 만약 하나를 초과한 중합체가 부착된 경우, 중합체들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 이용된 중합체의 수 및/또는 유형은 개선될 항체의 특정 성질들 또는 기능들, 상기 항체 유도체가 소정의 조건 하에서 치료에 이용되는지의 여부 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 고려사항들에 근거하여 결정될 수 있다.
(xiii) 벡터, 숙주 세포, 및 재조합 방법
항체는 또한 재조합 방법들을 사용하여 생성될 수 있다. 항-항원 항체의 재조합 생성을 위해, 상기 항체를 부호화하는 핵산을 분리하고 추가적인 클로닝(DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제가능한 벡터 내로 삽입한다. 상기 항체를 부호화하는 DNA는 쉽게 분리되고(예컨대, 상기 항체의 중쇄 및 경쇄를 부호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 종래의 절차를 사용하여 서열분석될 수 있다. 많은 벡터가 입수 가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 마커 유전자, 증강자(enhancer) 요소, 프로모터 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
또 다른 추가의 양태에서, 본원에 기재된 항체들 중 임의의 것을 부호화하는 핵산이 본원에 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 핵산은 이전에 기재된 항-PDL1, 항-PD-1, 또는 항-PDL2 항체들 중 임의의 것을 부호화하는 핵산의 발현에 적합한 벡터를 추가로 포함한다. 또 다른 추가의 구체적인 양태에서, 상기 벡터는 상기 핵산의 발현에 적합한 숙주 세포를 추가로 포함한다. 또 다른 추가의 구체적인 양태에서, 상기 숙주 세포는 진핵생물 세포 또는 원핵생물 세포이다. 또 다른 추가의 구체적인 양태에서, 상기 진핵생물 세포는 포유동물 세포, 예컨대 차이니즈 햄스터 난소(CHO)이다.
또 다른 추가의 구현예에서, 항-PDL1 항체의 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 서열을 부호화하는 분리된 핵산이 제공되고:
(a) 상기 중쇄는 GFTFSDSWIH(서열 번호 1), AWISPYGGSTYYADSVKG(서열 번호 2) 및 RHWPGGFDY(서열 번호 3), 각각에 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3 서열을 추가로 포함하고/하거나,
(b) (d) 상기 경쇄는 RASQDVSTAVA(서열 번호 4), SASFLYS(서열 번호 5) 및 QQYLYHPAT(서열 번호 6), 각각에 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3 서열을 추가로 포함한다.
구체적인 양태에서, 상기 서열 동일성은 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%이다.
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 상기 항체 또는 단편을 생산하기에 적합한 조건 하에서 발현에 적합한 형태의, 상기 기재된 항-PDL1, 항-PD-1, 또는 항-PDL2 항체 또는 항원 결합 단편 중 임의의 것을 부호화하는 핵산을 함유하는 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 항체 또는 단편을 회수하는 단계를 포함하는 공정에 의하여 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 추가의 예시적인 기술들 및 방법들이 본원에서 설명된다.
(a) 신호 서열 성분
본 개시의 항체는 직접적으로뿐만 아니라 이종 폴리펩티드와 함께 융합 폴리펩티드로서 재조합으로 생성될 수 있으며, 바람직하게는 신호 서열, 또는 성숙 단백질 또는 폴리펩티드의 N-말단에 특이적 절단 부위를 갖는 다른 폴리펩티드이다. 선택된 이종 신호 서열은 바람직하게는 숙주 세포에 의해 인식되고 처리되는(예컨대, 신호 펩티다아제에 의해 절단되는) 것이다. 천연 항체 신호 서열을 인식하고 처리하지 못하는 원핵 숙주 세포의 경우, 상기 신호 서열은, 예를 들어, 알칼리 포스파타제, 페니실리나제, lpp, 또는 열안정성 장독소 II 리더의 군으로부터 선택된 원핵 신호 서열로 치환된다. 효모 분비의 경우, 상기 천연 신호 서열은, 예컨대, 효모 인버타아제 리더, 인자 리더(사카로마이세스 및 클루이베로마이세스 α-인자 리더 포함), 또는 산 포스파타아제 리더, C. 알비칸스 글루코아밀라아제 리더, 또는 WO 제90/13646에 기재된 신호에 의해 치환될 수 있다. 포유동물 세포 발현에서, 포유동물 신호 서열뿐만 아니라 바이러스 분비성 리더(viral secretory leaders), 예를 들어, 단순 헤르페스 gD 신호가 입수 가능하다.
(b) 복제 기점
발현 및 클로닝 벡터 모두는 상기 벡터가 하나 이상의 선택된 숙주 세포에서 복제할 수 있게 하는 핵산 서열을 함유한다. 일반적으로, 클로닝 벡터에서 상기 서열은 상기 백터를 숙주 염색체 DNA와 별개로 복제하게 할 수 있고, 복제의 기점 또는 자율적으로 복제하는 서열들을 포함하는 것이다. 상기 서열들은 다양한 박테리아, 효모, 및 바이러스에 대해 잘 알려져 있다. 플라스미드 pBR322로부터의 복제 기점은 대부분 그람-음성 박테리아, 2μ에 대해 적합하고, 플라스미드 기원은 효모에 대해 적합하며, 다양한 바이러스 기원(SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, VSV 또는 BPV)은 포유동물 세포에서 벡터를 클로닝하는데 유용하다. 일반적으로, 복제 기점 성분은 포유동물 발현 벡터에 필요하지 않다(SV40 기원은 초기 프로모터를 함유하기 때문에 전형적으로 사용될 수 있다.
(c) 선택 유전자 성분
발현 및 클로닝 벡터는 선택 유전자, 또한 일명 선택가능한 마커를 함유할 수 있다. 전형적인 선택 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소, 예컨대, 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트, 또는 테트라사이클린에 내성을 부여하거나, (b) 영양요구성 결핍을 보충하거나, 또는 (c) 복합 배지로부터 입수 가능하지 않은 중요한 영양소를 공급하는 단백질을 부호화하며, 예컨대, 세균에 대하여 D-알라닌 라세미화 효소를 부호화하는 유전자이다.
선택 반응식의 일례는 숙주 세포의 성장을 정지하기 위해 약물을 이용한다. 이종 유전자로 성공적으로 형질전환된 상기 세포들은 약물 내성을 부여한 단백질을 생산하고, 따라서 선택 요법을 견디고 살아 남는다. 상기 우성 선택의 예로는 네오마이신, 미코페놀산 및 히그로마이신 약물을 사용한다.
포유동물 세포에 대한 적합한 선택가능한 마커의 다른 예는 항체-부호화 핵산을 흡수하는 능력이 있는 세포를 확인할 수 있는 것, 예컨대 DHFR, 글루타민 합성효소(GS), 티미딘 키나아제, 메탈로티오네인-I 및 -II, 바람직하게는 영장류 메탈로티오네인 유전자, 아데노신 데아미나아제, 오르니틴 데카복실라제 등이다.
예를 들어, 상기 DHFR 유전자로 형질전환된 세포들은 DHFR의 경쟁적 길항제인 메토트렉세이트(Mtx)를 함유하는 배양 배지에서 형질전환체를 배양함으로써 식별된다. 상기 조건 하에서, 상기 DHFR 유전자는 임의의 다른 공동-형질전환된 핵산과 함께 증폭된다. 내인성 DHFR 활성이 결핍된 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주 (예컨대, ATCC CRL-9096)가 사용될 수 있다.
대안적으로, 상기 GS 유전자로 형질전환된 세포들은 GS의 억제제인 L-메티오닌 설폭시민(Msx)을 함유하는 배양 배지에서 형질전환체를 배양함으로써 식별된다. 상기 조건 하에서, 상기 GS 유전자는 임의의 다른 공동-형질전환된 핵산과 함께 증폭된다. GS 선택/증폭 시스템은 상기 기재된 DHFR 선택/증폭 시스템과 함께 사용될 수 있다.
대안적으로, 관심 항체, 야생형 DHFR 유전자, 및 다른 선택가능한 마커, 예컨대 아미노글리코시드 3'-인산전달효소(APH)를 부호화하는 DNA 서열로 형질전환된 또는 공동-형질전환된 숙주세포(특히, 내인성 DHFR을 함유하는 야생형 숙주)가 상기 선택가능한 마커, 예컨대 아미노글리코시드 항생제, 예컨대, 카나마이신, 네오마이신, 또는 G418에 대한 선택 제제를 함유하는 배지에서 세포 성장에 의해 선택될 수 있다. 미국 특허 제 4,965,199호를 참조한다.
효모에서 사용하는데 적합한 선택 유전자는 효모 플라스미드 YRp7에 존재하는 trp1 유전자이다(Stinchcomb et al., Nature, 282:39 (1979)). 상기 trp1 유전자는 트립토판에서 성장하는 능력이 결여된 효모의 돌연변이체 균주, 예를 들어 ATCC 번호 44076 또는 PEP4-1에 대한 선택 마커를 제공한다. Jones, Genetics, 85:12 (1977). 그런 다음, 효모 숙주 세포 게놈에서 trp1 병변의 존재는 트립토판의 부재 하에서의 성장에 의해 형질전환을 검출하기 위한 효과적인 환경을 제공한다. 유사하게, Leu2-결핍 효모 균주(ATCC 20,622 또는 38,626)는 Leu2 유전자를 갖는 공지된 플라스미드에 의해 보완된다.
또한, 1.6 μm 원형 플라스미드 pKD1로부터 유래된 벡터는 클루이베로마이세스 효모의 형질전환에 사용될 수 있다. 대안적으로, 재조합 송아지 카이모마이신의 대량 생산을 위한 발현 시스템이 K. lactis에 대해 보고되었다. Van den Berg, Bio/Technology, 8:135 (1990). 클루이베로마이세스의 산업 균주에 의해 성숙한 재조합 인간 혈청 알부민을 분비하기 위한 안정된 다중 복제 발현 벡터가 또한 개시되었다. Fleer et al., Bio/Technology, 9:968-975 (1991).
(d) 숙주 세포의 선택 및 형질전환
본원의 벡터에 DNA를 클로닝 또는 발현하기에 적합한 숙주세포는 상기 기재된 원핵생물, 효모, 또는 고등 진핵생물 세포이다. 상기 목적을 위해 적합한 원핵생물은 진정세균, 예컨대 그람-음성 또는 그람-양성 세균, 예를 들어, 대장균속과 같은 장내세균, 예컨대, 대장균, 엔테로박터, 에르비니아균, 클레브시엘라, 프로테우스, 살모넬라, 예컨대 쥐장티푸스균, 세라티아, 예컨대, 세라티아-마르세센스, 및 시겔라뿐만 아니라 바실루스균, 예컨대, 고초균 및 바실러스 리케니포미스(예컨대, 1989년 4월 12일에 공개된 DD 266,710에 개시된 B. 바실러스 리케니포미스 41P), 슈도모나스균, 예컨대 녹농균 및 스트렙토마이세스균을 포함한다. 한 가지 바람직한 대장균 클로닝 숙주는 E. coli 294 (ATCC 31,446)이지만, 다른 균주들, 예컨대 E. coli B, E. coli X1776 (ATCC 31,537), 및 E. coli W3110 (ATCC 27,325)이 적합하다. 상기 실시예들은 제한적이기보다 예시적이다.
특히 글리코실화 및 Fc 효과기 기능이 필요없는 경우, 예컨대 치료적 항체가 종양 세포 파괴에서 그 자체로 유효성을 보이는 세포독성제(예컨대, 독소)에 접합된 경우, 전장 항체, 항체 융합 단백질, 및 항체 단편은 박테리아에서 생성될 수 있다. 전장 항체들은 순환 중에 더 큰 반감기를 갖는다. 대장균 내 생성은 더 빠르고 더욱 비용 효율적이다. 박테리아 내에서 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예컨대, 미국 특허 제 5,648,237호(Carter et al.), 미국 특허 제 5,789,199호(Joly et al.), 미국 특허 제 5,840,523호(Simmons et al.)를 참조하며, 이는 발현 및 분비를 최적화하기 위한 번역 개시 영역(TIR) 및 신호 서열을 기재한다. 또한, 대장균 내에서의 항체 단편의 발현을 기재한 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254를 참조한다. 발현 후, 상기 항체는 대장균 세포 덩어리페이스트로부터 분리될 수 있고, 예컨대, 이소형에 의존한 단백질 A 또는 G 칼럼을 통해 정제될 수 있다. 최종 정제는, 예컨대, CHO 세포에서 발현된 항체를 정제하는 공정과 유사하게 실시될 수 있다.
원핵생물 이외에, 진핵 미생물, 예컨대 사상균 또는 효모는 항체-부호화 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비지애, 또는 일반적인 빵 효모가 하등 진핵 숙주 미생물 중에서 가장 일반적으로 사용된다. 하지만, 다수의 다른 속, 종 및 균주가 본원에서 일반적으로 입수 가능하고 유용하며, 예컨대 스키조사카로마이세스 폼베; 클루이베로마이세스 숙주, 예컨대, K. 락티스, K. 프라질리스(ATCC 12,424), K. 불가리쿠스(ATCC 16,045), K. 위커라미(ATCC 24,178), K. 왈티(ATCC 56,500), K. 드로소필라룸(ATCC 36,906), K. 테르모톨레란스, 및 K. 마르시아누스; 야로위아(EP 402,226); 피치아 파스토리스(EP 183,070); 칸디다; 트리코더마 리에세이(EP 244,234); 뉴로스포라 크라사; 쉬와니오미세스, 예컨대 쉬와니오마이세스 옥시덴탈리스; 및 사상성진균, 예컨대 뉴로스포라, 페니실륨, 톨리포클라디움, 및 아스페르질루스 숙주, 예컨대 A. 니둘란스 및 A. 니게르이다. 치료 단백질의 생성을 위한 효모 및 사상균의 사용을 논의하는 검토를 위해, 예컨대, Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)를 참조한다.
당화 경로가 "인간화"되어 부분적 또는 완전 인간 당화 패턴을 갖는 항체의 생산을 유발하는 특정 진균 및 효모 균주가 선택될 수 있다. 예컨대, Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)(피키아 파스토리스에서 당화 경로의 인간화를 기재함); 및 상기 Gerngross et al.를 참조한다.
당화된 항체의 발현을 위해 적합한 숙주 세포는, 또한 다세포 생물체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 많은 배큘로바이러스 균주 및 변이체, 그리고 숙주들, 예컨대 스포도프테라 프루기페르다(애벌레), 숲모기(모기), 흰줄숲모기(모기), 노랑초파리(초파리), 및 누에나방으로부터의 해당하는 허용된 곤충 숙주 세포가 확인되었다. 형질감염을 위한 다양한 바이러스 균주, 예컨대, 아우토그라파 칼리포르니카 NPV의 L-1 변이체 및 누에나방 NPV의 Bm-5 균주가 공개적으로 입수 가능하며, 상기 바이러스는, 특히 스포도프테라 프루기페르다 세포의 형질감염을 위해, 본 개시에 따라 본원의 바이러스로서 사용될 수 있다.
면화, 옥수수, 감자, 대두, 페투니아, 토마토, 좀개구리밥 (레니나세아에), 알팔파(메디카고 트룬카툴라), 및 담배의 식물 세포 배양이 또한 숙주로서 이용될 수 있다. 예컨대, (유전자도입 식물에서 항체를 생성하기 위한 플란티보디스(PLANTIBODIES)TM 기술을 기재한) 미국 특허 제 5,959,177호, 제 6,040,498호, 제 6,420,548호, 제 7,125,978호 및 제 6,417,429호를 참조한다.
척추동물 세포가 숙주로서 사용될 수 있고, 배양(조직 배양)시 척추동물 세포의 전파는 일상적인 절차가 되었다. 유용한 포유류 숙주 세포주들의 예는 SV40(COS-7, ATCC CRL 1651)에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통; 인간 배아 신장 계통(현탁액 배양에서 성장을 위해 서브클로닝된 293 또는 293 세포, Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); 새끼 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10); 마우스 세르톨리 세포(TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)); 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA, ATCC CCL 2); 개과 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(Hep G2, HB 8065); 마우스 포유류 종양(MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포(Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간암 계통(Hep G2)이다. 다른 유용한 포유류 숙주 세포주들은 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 예컨대 DHFR-CHO 세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주, 예컨대 NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생성에 적합한 특정 포유류 숙주 세포주들의 검토를 위해, 예컨대 Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268을 참조한다.
숙주 세포들은 항체 생성을 위한 상기 기재된 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환되고, 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선택하거나, 원하는 서열을 부호화하는 유전자를 증폭하는데 적절하게 변형된 통상적인 영양 배지 내에서 배양된다.
(e) 숙주 세포 배양
본 개시의 항체를 생성하기 위해 사용된 숙주세포들은 다양한 배지에서 배양될 수 있다. 상업적으로 입수 가능한 배지, 예컨대, 햄스(Ham's) F10(시그마(Sigma)), 최소 필수 배지((MEM), (시그마), RPMI-1640(시그마), 및 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)((DMEM), 시그마)가 숙주 세포들을 배양하는데 적합하다. 또한, Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980), 미국 특허 제 4,767,704호; 4,657,866호; 4,927,762호; 4,560,655호; 또는 5,122,469호; WO 90/03430호; WO 87/00195; 또는 미국 특허 Re. 30,985는 숙주 세포의 배양 배지로 사용될 수 있다. 상기 배지들 중 임의의 것은 필요에 따라 호르몬 및/또는 다른 성장 인자(예컨대, 인슐린, 트랜스페린 또는 상피 성장 인자), 염(예컨대, 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘 및 인산염), 완충제(예컨대, HEPES), 뉴클레오티드(예컨대, 아데노신 및 티미딘), 항생제(예컨대, 젠타마이신(GENTAMYCIN)™ 약물), 미량 원소(보통 마이크로몰(micromolar) 범위 내 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로서 정의됨), 및 글루코스 또는 등가의 에너지 공급원으로 보충시킬 수 있다. 임의의 다른 필요한 보충물이 또한 당업자들에게 공지될 적절한 농도로 포함될 수 있다. 배양 조건, 예컨대 온도 및 pH 등은 발현을 위해 선택된 숙주 세포와 함께 이전에 사용된 조건이며, 통상의 지식을 가진 당업자에게 분명할 것이다.
(xiv) 항체의 정제
재조합 기술을 이용하는 경우, 항체는 세포 내에서 생성되거나, 원형질막 주위 공간에서 생성되거나, 배지 내로 직접 분비될 수 있다. 상기 항체가 세포 내에서 생성되는 경우, 제1 단계로서, 숙주 세포 또는 용해된 단편인 미립자 파편은, 예를 들어, 원심분리 또는 초미세여과에 의해 제거된다. Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)은 대장균의 원형질막 주위 공간으로 분비되는 항체를 분리하는 절차를 기재한다. 간략하게는, 세포 덩어리를 아세트산나트륨(pH 3.5), EDTA, 및 페닐메틸설포닐플루오라이드(PMSF)의 존재 하에 약 30분에 걸쳐서 해동시킨다. 세포 파편은 원심 분리로 제거할 수 있다. 상기 항체가 상기 배지 내로 분비되는 경우, 상기 발현 시스템으로부터의 상청액은 일반적으로 우선 상업적으로 입수 가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어, 아미콘(Amicon) 또는 밀리포어 펠리콘(Millipore Pellicon) 초미세여과 유닛을 사용하여 농축된다. PMSF와 같은 프로테아제 억제제는 단백질 분해를 억제하기 위한 전술한 단계들 중 임의의 것에 포함될 수 있고, 항생제는 우발적인 오염물의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다.
상기 세포들로부터 제조된 항체 조성물은, 예를 들어, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화도 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있으며, 친화도 크로마토그래피가 전형적으로 바람직한 정제 단계 중 하나이다. 친화성 리간드로서 단백질 A의 적합성은 상기 항체 내에 존재하는 임의의 면역글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소형에 따라 좌우된다. 단백질 A는 인간 γ1, γ2, 또는 γ4 중쇄에 기초하여 항체를 정제하는데 사용될 수 있다(Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)). 단백질 G는 모든 마우스 이소형에 대해 및 인간 γ3에 대해 권고된다(Guss et al., EMBO J. 5:15671575 (1986)). 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 많은 경우에 아가로스이지만, 다른 매트릭스도 입수 가능하다. 기계적으로 안정된 매트릭스, 예컨대 조절된 기공 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠은 아가로스로 달성될 수 있는 것보다 더 빠른 유속 및 더 짧은 가공 시간을 허용한다. 상기 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, Bakerbond ABXTM 수지(J. T. Baker, 뉴저지 주의 필립스버그 소재)가 정제에 유용하다. 단백질 정제를 위한 다른 기술들, 예컨대 이온-교환 컬럼 상의 분획화, 에탄올 침전법, 역상 HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피, 헤파린 상의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지 상의 세파로스(SEPHAROSE)™ 크로마토그래피(예컨대, 폴리아스파르트산 컬럼), 크로마토포커싱(chromatofocusing), SDS-PAGE, 및 황산암모늄 침전법이 또한 회수될 항체에 따라 입수 가능하다.
일반적으로, 상기 기재된 방법론과 일치하고/하거나 특정 관심 항체에 대해 당해 분야의 당업자에 의해 적절한 것으로 간주되는, 연구, 시험 및 임상에 사용하기 위한 항체를 제조하기 위한 다양한 방법론은 당해 분야에 잘 확립되어 있다.
Ⅵ. 생리 활성 항체의 선택
상기 기재된 바와 같이 생성된 항체들은 치료적 관점에서 유익한 특성을 갖는 항체를 선택하기 위해 하나 이상의 "생물학적 활성" 검정을 받거나 상기 항체의 생물학적 활성을 보유하는 제형 및 조건을 선택하는 데 적용될 수 있다. 상기 항체는 상기 항체가 항원에 맞서서 상승되는 상기 항원에 결합할 수 있는 능력에 대하여 시험될 수 있다. 예를 들어, 당해 분야에서 공지된 방법들(예컨대, ELISA, 웨스턴 블랏, 등)이 사용될 수 있다.
예를 들어, 항-PDL1 항체에 대해, 상기 항체의 항원 결합 특성은 PDL1에 결합하는 능력을 검출하는 검정에서 평가될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 항체의 결합은, 예를 들어 포화 결합; ELISA; 및/또는 경쟁 검정(예컨대, RIA's)에 의해 결정될 수 있다. 또한, 상기 항체는, 예컨대, 치료제로서의 유효성을 평가하기 위해, 다른 생물학적 활성 검정들을 받을 수 있다. 상기 검정들은 당해 분야에 공지되어 있고 상기 표적 항원 및 상기 항체에 대한 의도된 사용에 따라 좌우된다. 예를 들어, 상기 항체에 의한 PD-L1 봉쇄의 생물학적 효과는, 예컨대 미국 특허 제 8,217,149호에 기재된 바와 같이 CD8+T 세포, 림프구 맥락수막염 바이러스(LCMV) 마우스 모델 및/또는 동계의 종양 모델에서 평가될 수 있다.
관심 항원 상의 특정한 에피토프에 결합하는 항체들(예컨대, PD-L1에 대한 실례의 항-PDL1 항체의 결합을 차단하는 것)을 선별검사하기 위해, 예컨대 Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)에 기재된 바와 같이 일반적인 교차-차단 검정이 실시될 수 있다. 대안적으로, 예컨대, Champe et al., J. Biol. Chem. 270: 1388-1394 (1995)에 기재된 바와 같이 에피토프 매핑을 실시하여 상기 항체가 관심 에피토프에 결합하는지 여부를 결정할 수 있다.
Ⅶ. 약학적 조성물 및 제형
또한, 본원에서는, 예컨대, PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 백금 제제(예컨대, 카보플라틴), 및 토포이소머라제 II의 억제제(예컨대, 에토포시드)를 포함하는, 폐암(예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)을 치료하기 위한 약학적 조성물들 및 제형들이 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 약학적 조성물들 및 제형들은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함한다.
일부 구현예들에서, 본원에 기재된 항-PDL1 항체(예컨대, 아테졸리주맙)는 약 60 mg/mL의 양으로 상기 항체를, 약 20 mM의 농도로 히스티딘 아세테이트를, 약 120 mM의 농도로 수크로오스를, 및 0.04%(w/v)의 농도로 폴리소르베이트(예컨대, 폴리소르베이트 20)를 포함하는 제형이고, 상기 제형은 약 5.8의 pH를 가진다. 일부 구현예들에서, 본원에 기재된 상기 항-PDL1 항체는 약 125 mg/mL의 양으로 상기 항체를, 약 20 mM의 농도로 히스티딘 아세테이트를, 약 240 mM의 농도로 수크로오스를, 및 0.02%(w/v)의 농도로 폴리소르베이트(예컨대, 폴리소르베이트 20)를 포함하는 제형이고, 상기 제형은 약 5.5의 pH를 가진다.
상기 관심 항체의 제조 후(예컨대, 본원에 개시된 바와 같이 제제화될 수 있는 항체를 생성하기 위한 기술들이 본원에 상세하게 설명되고 당해 분야에 공지됨), 상기 항체를 포함하는 약학적 제형이 제조된다. 특정 구현예들에서, 제제화될 항체는 사전에 동결건조되지 않았고 본원의 관심 제형은 수성 제형이다. 특정 구현예들에서, 상기 항체는 전장 항체이다. 일 구현예에서, 상기 제형 내의 항체는 항체 단편, 예컨대 F(ab’)2이며, 이 경우 상기 전장 항체에게 발생하지 않을 수도 있는 문제점들(예컨대, Fab에 대한 상기 항체의 클리핑)은 언급될 필요가 있을 수 있다. 상기 제형 내에 존재하는 항체의 치료적 유효량은, 예를 들어, 원하는 용량 부피 및 투여 방식(들)을 고려하여 결정된다. 상기 제형 내의 예시적인 항체 농도는 약 25 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 또는 약 30 mg/mL 내지 약 140 mg/mL, 또는 약 35 mg/mL 내지 약 130 mg/mL, 또는 약 40 mg/mL 내지 약 120 mg/mL, 또는 약 50 mg/mL 내지 약 130 mg/mL, 또는 약 50 mg/mL 내지 약 125 mg/mL, 또는 약 50 mg/mL 내지 약 120 mg/mL, 또는 약 50 mg/mL 내지 약 110 mg/mL, 또는 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 또는 약 50 mg/mL 내지 약 90 mg/mL, 또는 약 50 mg/mL 내지 약 80 mg/mL, 또는 약 54 mg/mL 내지 약 66 mg/mL이다.
pH 완충 용액 내에 상기 항체를 포함하는 수성 제형이 제조된다. 일부 구현예들에서, 본 개시의 완충제는 약 5.0 내지 약 7.0의 범위의 pH를 갖는다. 특정 구현예들에서, 상기 pH는 약 5.0 내지 약 6.5의 범위이고, 상기 pH는 약 5.0 내지 약 6.4의 범위, 약 5.0 내지 약 6.3의 범위이고, 상기 pH는 약 5.0 내지 약 6.2의 범위이고, 상기 pH는 약 5.0 내지 약 6.1의 범위이고, 상기 pH는 약 5.5 내지 약 6.1의 범위이고, 상기 pH는 약 5.0 내지 약 6.0의 범위이고, 상기 pH는 약 5.0 내지 약 5.9의 범위이고, 상기 pH는 약 5.0 내지 약 5.8의 범위이고, 상기 pH는 약 5.1 내지 약 6.0의 범위이고, 상기 pH는 약 5.2 내지 약 6.0의 범위이고, 상기 pH는 약 5.3 내지 약 6.0의 범위이고, 상기 pH는 약 5.4 내지 약 6.0의 범위이고, 상기 pH는 약 5.5 내지 약 6.0의 범위이고, 상기 pH는 약 5.6 내지 약 6.0의 범위이고, 상기 pH는 약 5.7 내지 약 6.0의 범위이거나, 상기 pH는 약 5.8 내지 약 6.0 범위이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형은 6.0 또는 약 6.0의 pH를 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 제형은 5.9 또는 약 5.9의 pH를 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 제형은 5.8 또는 약 5.8의 pH를 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 제형은 5.7 또는 약 5.7의 pH를 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 제형은 5.6 또는 약 5.6의 pH를 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 제형은 5.5 또는 약 5.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 제형은 5.4 또는 약 5.4의 pH를 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 제형은 5.3 또는 약 5.3의 pH를 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 제형은 5.2 또는 약 5.2의 pH를 갖는다. 상기 범위 내에서 상기 pH를 조절하는 완충제들의 예는 히스티딘(예컨대, L-히스티딘) 또는 아세트산 나트륨을 포함한다. 특정 구현예들에서, 상기 완충제는 약 15 mM 내지 약 25 mM 농도의 히스티딘 아세테이트 또는 나트륨 아세테이트를 함유한다. 일부 구현예들에서, 상기 완충제는 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨을 약 15 mM 내지 약 25 mM, 약 16 mM 내지 약 25 mM, 약 17 mM 내지 약 25 mM, 약 18 mM 내지 약 25 mM, 약 19 mM 내지 약 25 mM, 약 20 mM 내지 약 25 mM, 약 21 mM 내지 약 25 mM, 약 22 mM 내지 약 25 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 또는 약 25 mM의 농도로 함유한다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.0의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.1의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.2의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.3의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.4의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.5의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.6의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.7의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.8의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 5.9의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 6.0의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 6.1의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 6.2의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 20 mM의 양인 pH 6.3의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 5.2의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 5.3의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 5.4의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 5.5의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 5.6의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 5.7의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 5.8의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 5.9의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 6.0의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 6.1의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 6.2의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다. 일 구현예에서, 상기 완충제는 약 25 mM의 양인 pH 6.3의 히스티딘 아세테이트 또는 아세트산 나트륨이다.
일부 구현예들에서, 상기 제형은 수크로오스를 약 60 mM 내지 약 240 mM의 양으로 추가로 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 제형의 수크로오스는 약 60 mM 내지 약 230 mM, 약 60 mM 내지 약 220 mM, 약 60 mM 내지 약 210 mM, 약 60 mM 내지 약 200 mM, 약 60 mM 내지 약 190 mM, 약 60 mM 내지 약 180 mM, 약 60 mM 내지 약 170 mM, 약 60 mM 내지 약 160 mM, 약 60 mM 내지 약 150 mM, 약 60 mM 내지 약 140 mM, 약 80 mM 내지 약 240 mM, 약 90 mM 내지 약 240 mM, 약 100 mM 내지 약 240 mM, 약 110 mM 내지 약 240 mM, 약 120 mM 내지 약 240 mM, 약 130 mM 내지 약 240 mM, 약 140 mM 내지 약 240 mM, 약 150 mM 내지 약 240 mM, 약 160 mM 내지 약 240 mM, 약 170 mM 내지 약 240 mM, 약 180 mM 내지 약 240 mM, 약 190 mM 내지 약 240 mM, 약 200 mM 내지 약 240 mM, 약 80 mM 내지 약 160 mM, 약 100 mM 내지 약 140 mM, 또는 약 110 mM 내지 약 130 mM이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형의 수크로오스는 약 60 mM, 약 70 mM, 약 80 mM, 약 90 mM, 약 100 mM, 약 100 mM, 약 110 mM, 약 120 mM, 약 130 mM, 약 140 mM, 약 150 mM, 약 160 mM, 약 170 mM, 약 180 mM, 약 190 mM, 약 200 mM, 약 210 mM, 약 220 mM, 약 230 mM, 또는 약 240 mM이다.
일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 40 mg/ml 내지 약 125 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 40 mg/ml 내지 약 120 mg/ml, 약 40 mg/ml 내지 약 110 mg/ml, 약 40 mg/ml 내지 약 100 mg/ml, 약 40 mg/ml 내지 약 90 mg/ml, 약 40 mg/ml 내지 약 80 mg/ml, 약 40 mg/ml 내지 약 70 mg/ml, 약 50 mg/ml 내지 약 120 mg/ml, 약 60 mg/ml 내지 약 120 mg/ml, 약 70 mg/ml 내지 약 120 mg/ml, 약 80 mg/ml 내지 약 120 mg/ml, 약 90 mg/ml 내지 약 120 mg/ml, 또는 약 100 mg/ml 내지 약 120 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 60 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 65 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 70 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 75 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 80 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 85 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 90 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 95 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 100 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 110 mg/ml이다. 일부 구현예들에서, 상기 제형 내의 항체 농도는 약 125 mg/ml이다.
일부 구현예들에서, 계면활성제는 상기 항체 제형에 첨가된다. 예시적인 계면활성제들은 비이온성 계면활성제들, 예컨대 폴리소르베이트(예컨대, 폴리소르베이트 20, 80 등) 또는 폴록사머(예컨대, 폴록사머 188 등)을 포함한다. 첨가되는 계면활성제의 양은 제제화된 항체의 응집을 감소시키고/거나 상기 제형 내에서 미립자의 형성을 최소화하고/하거나 흡착을 감소시키는 양이다. 예를 들어, 상기 계면활성제는 약 0.001% 내지 약 0.5%(w/v)의 양으로 상기 제형 내에 존재할 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 약 0.005% 내지 약 0.2%, 약 0.005% 내지 약 0.1%, 약 0.005% 내지 약 0.09%, 약 0.005% 내지 약 0.08%, 약 0.005% 내지 약 0.07%, 약 0.005% 내지 약 0.06%, 약 0.005% 내지 약 0.05%, 약 0.005% 내지 약 0.04%, 약 0.008% 내지 약 0.06%, 약 0.01% 내지 약 0.06%, 약 0.02% 내지 약 0.06%, 약 0.01% 내지 약 0.05%, 또는 약 0.02% 내지 약 0.04%이다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.005% 또는 약 0.005%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.006% 또는 약 0.006%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.007% 또는 약 0.007%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.008% 또는 약 0.008%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.009% 또는 약 0.009%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.01% 또는 약 0.01%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.02% 또는 약 0.02%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.03% 또는 약 0.03%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.04% 또는 약 0.04%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.05% 또는 약 0.05%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.06% 또는 약 0.06%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.07% 또는 약 0.07%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.08% 또는 약 0.08%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.1% 또는 약 0.1%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.2% 또는 약 0.2%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.3% 또는 약 0.3%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.4% 또는 약 0.4%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다. 특정 구현예들에서, 상기 계면활성제(예컨대, 폴리소르베이트 20)는 0.5% 또는 약 0.5%의 양으로 상기 제형 내에 존재한다.
일 구현예에서, 상기 제형은 상기 확인된 제제들(예컨대, 항체, 완충제, 수크로오스, 및/또는 계면활성제)을 함유하며, 하나 이상의 보존제, 예컨대, 벤질 알콜, 페놀, m-크레졸, 클로로부탄올 및 벤즈에토늄 Cl가 본질적으로 없다. 다른 구현예에서, 보존제는, 특히 상기 제형이 다중용량 제형인 경우, 상기 제형 내에 포함될 수 있다. 보존제의 농도는 약 0.1% 내지 약 2%, 바람직하게는 약 0.5% 내지 약 1%의 범위일 수 있다. Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에 기재된 바와 같은 하나 이상의 다른 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 상기 제형의 원하는 특성에 악영향을 미치지 않는 한 상기 제형 내에 포함될 수 있다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 추가 완충제; 공-용매; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; EDTA와 같은 킬레이트제; 금속 착물(예컨대, Zn-단백질 착물); 폴리에스테르와 같은 생분해성 폴리머; 및/또는 염-형성 반대 이온을 포함한다. 본원의 예시적인 약학적으로 허용가능한 담체는 간질성 약물 분산제, 예컨대, 가용성 중성-활성 하이알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어, 인간 가용성 PH-20 히알루로니다아제 당단백질, 예컨대, rHuPH20(HYLENEX®, Baxter International, Inc.)을 추가로 포함한다. rHuPH20을 포함하는 특정한 예시적인 sHASEGPs 및 이용 방법은 US 특허공보 제 2005/0260186 및 2006/0104968에서 설명된다. 일 양태에서, sHASEGP는 하나 이상의 추가적인 글리코사미노글리카나아제, 예컨대 콘드로이티나아제와 조합된다.
본원의 제형은 또한 치료되는 특정 징후에 대해 필요에 따라 하나를 초과하는 단백질, 바람직하게는 다른 단백질에 부정적으로 영향을 주지 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 함유할 수 있다. 예를 들어, 상기 항체가 항-PDL1(예컨대, 아테졸리주맙)인 경우, 상기 항체는 다른 제제(예컨대, 화학치료제, 및 항종양제)와 조합될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 약학적 조성물들 및 제형들은 원하는 순도를 갖는 활성 성분들(예컨대, 항체 또는 폴리펩티드)을 하나 이상의 선택적인 약학적으로 허용가능한 담체(Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합함으로써 동결건조 제형 또는 수용액 형태로 제조될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체들은 일반적으로 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제(예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 염화벤잘코늄; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 뷰틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레솔); 저분자량(약 10개 미만의 잔기)폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물, 예컨대, 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온, 예컨대, 나트륨; 금속 착물(예컨대, Zn-단백질 착물); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 본원의 예시적인 약학적으로 허용가능한 담체는 간질성 약물 분산제, 예컨대, 가용성 중성-활성 하이알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어, 인간 가용성 PH-20 히알루로니다아제 당단백질, 예컨대, rHuPH20(HYLENEX®, Baxter International, Inc.)을 추가로 포함한다. rHuPH20을 포함하는 특정한 예시적인 sHASEGPs 및 이용 방법은 US 특허공보 제 2005/0260186 및 2006/0104968에 기재된다. 일 양태에서, sHASEGP는 하나 이상의 추가적인 글리코사미노글리카나아제, 예컨대 콘드로이티나아제와 조합된다.
예시적인 동결 건조된 항체 제형들은 미국 특허 제 6,267,958호에서 기재된다. 수성 항체 제형들은 미국 특허 제 6,171,586호 및 WO2006/044908에 기재된 것들을 포함하는데, 후자의 제형들은 히스티딘-아세트산염 완충제를 포함한다.
본원의 조성물 및 제형은 또한 치료되는 특정 징후에 대해 필요에 따라 하나를 초과하는 활성 성분, 바람직하게는 서로 불리하게 영향을 미치는 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 함유할 수 있다. 상기 활성 성분들은 의도된 목적을 위해 효과적인 양으로 배합되어 존재한다.
활성 성분들은, 예를 들어, 액적형성 기술에 의해 또는 계면 중합화에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로유제, 나노입자 및 나노캡슐)에서 또는 마크로유제에서 히드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에 각각 포획될 수 있다. 상기 기술들은 Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에 기재되어 있다.
서방형 제제들이 제조될 수 있다. 서방형 제제들의 적합한 예는 상기 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체들의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형품, 예컨대, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 생체내 투여에 이용되는 제형들은 일반적으로 무균성이다. 무균성은, 예컨대, 무균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성될 수 있다.
카보플라틴 및/또는 에토포시드의 약학적 제형들은 상업적으로 입수 가능하다. 예를 들어, 카보플라틴은 파라플라틴(PARAPLATIN)®을 포함한 다양한 상품명(본원의 다른 곳에 기재됨)으로 공지되어 있다. 에토포시드는 VP-16, 에토포포스(ETOPOPHOS)®, 토포사르(TOPOSAR)™ 및 베페시드(VEPESID)®를 포함한 다양한 상표명(본원의 다른 곳에 기재됨)으로 공지되어 있다. 일부 구현예들에서, 상기 카보플라틴 및/또는 에토포시드는 별도의 용기들 내에 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 카르보플라틴 및/또는 에토포시드는 각각 상업적으로 입수 가능한 제품과 함께 입수 가능한 처방 정보에 기재된 바와 같이 개체에게 투여하기 위해 사용하고/거나 제조된다.
Ⅷ. 치료 방법
유효량의 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 항-PD-L1 항체), 백금 제제(예컨대, 카보플라틴), 및 토포이소머라제 억제제(예컨대, 에토포시드)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체의 암(예컨대, 폐암, 예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)의 진행을 치료하거나 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 치료의 중단 이후 개체에서 지속적인 반응을 유발한다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및/또는 전체 생존 기간(OS)을 연장시킨다. 본원에 기재된 방법은, 암의 치료를 위하여 종양 면역원성을 증가시키는 것과 같은 증진된 면역원성이 바람직할 경우, 병태의 치료에 있어 용도를 발견할 수 있다. 유효량의 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 항-PD-L1 항체), 백금 제제(예컨대, 카보플라틴), 및 토포이소머라제 억제제(예컨대, 에토포시드)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암(예컨대, 폐암, 예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)을 가진 개체 내 면역 기능을 증진시키는 방법들이 본원에 제공된다.
일부 구현예들에서, 상기 폐암은 소세포 폐암(SCLC)이다. 일부 구현예들에서, 상기 소세포 폐암(SCLC)은 4(IV)기 소세포 폐암(SCLC)으로도 지칭되는 확장병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)이다. 일부 구현예들에서, 상기 소세포 폐암(SCLC)은 미국보훈부폐연구그룹(Veterans Administration Lung Study Group: VALG)의 병기 체계(예컨대, Micke et al. (2002) “Staging small cell lung cancer: Veterans Administration Lung Study Group versus International Association for the Study of Lung Cancer―what limits limited disease?” Lung Cancer 37:271-6을 참조)에 따라서 또는 이에 정의된 바와 같이 조직학적 또는 세포학적으로 확인되었다. 일부 구현예들에서, 소세포 폐암(SCLC)은 상기 개체가 수술이 불가능하고, 제한된 또는 제한된 단계의 소세포 폐암(L-SCLC 또는 LS-SCLC)을 갖는 것으로 분류될 수 없는 경우 확장병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)으로 분류된다. 일부 구현예들에서, 상기 확장병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)은 검출 가능하고/거나 최초로 암이 발생한 폐의 외부로 퍼져 나갔다.
일부 구현예들에서, 상기 확장병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)은 검출 가능하고/거나, 기타(예컨대, 먼) 기관, 예컨대(이에 제한되지는 않는), 간, 부신, 림프절 및/또는 뇌로 추가로 퍼져 나갔다. 일부 구현예들에서, 상기 확장병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)은 치료하기 어렵다.
일부 구현예들에서, 상기 개체는 예후가 좋지 않다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 치료 경험이 없는 개체이다. 일부 구현예들에서, 치료 경험이 없는 개체는, 예컨대, 암, 소세포 폐암(SCLC) 또는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 대한 사전 치료를 받지 않은 개체이다. 일부 구현예들에서, 상기 치료 경험이 없는 개체는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 대한 사전 치료를 받지 않은 개체이다. 일부 구현예들에서, 치료 경험이 없는 개체는 화학요법 경험이 없는, 예컨대, 암, 소세포 폐암(SCLC) 및/또는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)의 치료를 위해 사전 화학요법을 받지 않은 개체이다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 대한 치료를 받지 않았다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 대한 사전 전신 치료를 받지 않았다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 치료 목적으로 제한된 병기의 소세포 폐암(LS-SCLC)에 대한 사전 화학방사선 요법을 받았으며, 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC) 진단으로부터 마지막 화학요법, 방사선 요법 또는 화학방사선 요법 주기 이후 6개월 이상의 무치료 주기를 경험하였다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 무증상 상부 또는 소뇌 중추 신경계(CNS) 전이를 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 중뇌, 뇌교, 수질 또는 척수로의 전이를 갖지 않는다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 중추 신경계(CNS) 질환을 가지며, 중추 신경계(CNS) 질환에 대한 코르티코스테로이드 치료를 필요로 하지 않는다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 새로운 무증상 전이를 가지며, 중추 신경계(CNS) 전이에 대한 방사선 요법 및/또는 수술을 받았다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 RECIST v1.1 기준(예컨대, Eisenhauer et al. (2009) “New response evaluation criteria in solid tumors: Revised RECIST guideline (version 1.1).” Eur. J. Cancer. 45: 228-247)에 따라/정의된 바와 같이 측정 가능한 질병을 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는, 예컨대, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 제한없이 포함하는 CD137 길항제 또는 면역관문 차단 요법으로 사전 치료를 받지 않았다.
당해 분야에 공지되거나 본원에 기재된 PD-1 축 결합 길항제, 백금 제제, 및 토포이소머라제 II 억제제 중 임의의 것이 본 방법에서 사용될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-1 축 결합 길항제는 아테졸리주맙이고, 상기 백금 제제는 카보플라틴 또는 시스플라틴이고/거나, 상기 토포이소머라제 II 억제제는 에토포시드이다.
일부 구현예들에서, 치료는 유도기 및 유지기(또는 "유지 요법")를 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 유도기는 상기 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 항-PD-L1 항체, 예컨대, 아테졸리주맙)를 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로, 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴)를 1일차에 5 mg/mL/min의 초기 목표 곡선하 면적(AUC)을 달성하기에 충분한 용량으로, 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)를 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일, 2일, 및 3일차에 각각 100 mg/m2의 용량으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 유지기는 상기 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 항-PD-L1 항체, 예컨대, 아테졸리주맙)를 4주기 이후에 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여하는 단계를 포함한다. 유도 주기 및 유지 주기를 포함하는 예시적인 용량 및 투약 일정이 하기의 표 4에 제공된다:
예시적인 용량 및 투약 일정
유도
기		 유지
기
약물들
(투약 순서로 나열됨)		 1-4주기* > 4주기*
1일 2일 3일 1일
1) 항-PD-L1 Ab
(아테졸리주맙)		 1200 mg 1200 mg
2) 백금 제제
(카보플라틴 또는 시스플라틴)		 AUC = 5‡
3) 토포이소머라제 II
억제제
(에포토시드)		 100 mg/m2 100 mg/m2 100 mg/m2
* 21일 주기
‡ mg/ml/min
일부 구현예들에서, 아테졸리주맙의 1200 mg 용량은 평균 체중 기반 용량의 15 m/kg과 같다. 일부 구현예들에서, 5 mg/mL/min의 AUC를 달성하는 데 필요한 카보플라틴의 용량은 캘버트(Calvert) 공식(예컨대, Calvert et al. (1989) “Carboplatin dosage: prospective evaluation of a simple formula based on renal function.” J.　Clin.　Oncol. 7: 1748-56; van Warmerdam et al. (1995) J. Cancer Res. Clin. Oncol. 121 (8) 478-486을 참조)에 따라 계산된다. 추가적인 세부 사항은 하기의 실시예 1을 참조한다.
일부 구현예들에서, 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)은 RECIST v1.1 기준에 따라, Eisenhauer et al. (2009) “New response evaluation criteria in solid tumors: Revised RECIST guideline (Version 1.1).” Eur J Cancer. 45:228-47)에 기재된 바와 같이 측정된다. 일부 구현예들에서, 무진행 생존 기간(PFS)은 RECIST v1.1 기준에 의해 결정된 바와 같이 치료 시작부터 질병 진행의 최초 발생까지의 기간으로서 측정된다. 일부 구현예들에서, 무진행 생존 기간(PFS)은 치료 시작부터 사망까지의 시간으로 측정된다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 약 4.5, 4.75, 5, 5.25, 5.5, 5.75 또는 6개월(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함) 중 적어도 하나 이상만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5.6개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴) 및 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)로 치료를 받은 폐암(예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)을 가진 개체와 비교하여 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 약 0.5, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 2, 2.25, 2.5, 2.75, 또는 3개월(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함) 중 적어도 하나 이상만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴) 및 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)로 치료를 받은 폐암(예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)을 가진 개체와 비교하여 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 1.1개월만큼 연장시킨다.
일부 구현예들에서, 전체 생존 기간(OS)은 치료 시작부터 사망까지의 기간으로서 측정된다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 약 10.5, 10.75, 11, 11.25, 11.5, 11.75, 12, 12.25, 12.5, 12.75, 13, 13.25, 13.5, 13.75, 또는 14개월(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함) 중 적어도 하나 이상만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 전체 생존 기간(OS)을 14개월 초과, 예컨대 약 14.25, 14.5, 14.75, 15, 15.25, 15.5, 15.75 또는 15.75개월(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함) 중 하나만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 전체 생존 기간(OS)을 약 15.9 개월만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴) 및 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)로 치료를 받은 폐암(예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)을 가진 개체와 비교하여 상기 개체의 전제 생존 기간(OS)을 약 0.5, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 2, 2.25, 2.5, 2.75, 또는 3개월(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함) 중 적어도 하나 이상만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴) 및 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)로 치료를 받은 폐암(예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)을 가진 개체와 비교하여 상기 개체의 전제 생존 기간(OS)을 약 3개월을 초과하여, 예컨대, 약 4, 4.25, 4.5, 4.75, 5, 5.25, 5.5, 5.75, 6, 6.25, 6.5, 또는 6.75개월(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함) 중 적어도 하나 이상만큼 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 치료는 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴) 및 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)로 치료를 받은 폐암(예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)을 가진 개체와 비교하여 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 약 6.6개월만큼 연장시킨다.
일부 구현예들에서, 상기 개체는 65세 이상(예컨대, 약 65세 내지 약 74세, 약 75세 내지 약 84세, 또는 약 85세 이상)이다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 약 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16이다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 16 초과이다. 혈액 종양변이부담(bTMB)은 잘 알려진 방법을 사용하여 순환 종양 DNA(ctDNA)의 게놈 염기배열 결성을 통해 계산된 종양 게놈의 부호화 영역 당 총 돌연변이의 수를 나타낸다.
일부 구현예들에서, 상기 개체는, 예컨대 치료 시작 이후 12주에 하나 이상의 폐암 관련 증상의 완화를 보고한다. 일부 구현예들에서, 폐암 관련 증상들은 팔 통증, 어깨 통증, 흉통, 기침 및 호흡 곤란(즉, 호흡 곤란 또는 고된 호흡) 중 하나 이상이다.
일부 구현예들에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 구현예들에서, 상기 개체는 하나 이상의 PD-1 축 길항제에 대해 내성있는(내성있는 것으로 입증된) 암을 갖는다. 일부 구현예들에서, PD-1 축 길항제에 대한 내성은 암 또는 난치암의 재발을 포함한다. 재발은 치료 후 최초 부위 또는 신규 부위에서 암의 재현을 지칭할 수 있다. 일부 구현예들에서, PD-1 축 길항제에 대한 내성은 상기 PD-1 축 길항제로 치료하는 동안 암의 진행을 포함한다. 일부 구현예들에서, PD-1 축 길항제에 대한 내성은 치료에 반응하지 않는 암을 포함한다. 상기 암은 치료의 시점에서 내성일 수 있거나 치료하는 동안 내성이 될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 조기 또는 말기이다.
다른 양태에서, 상기 개체는 PD-L1 바이오마커를 발현하는 (예컨대, 진단 시험에서 발현하는 것으로 나타난) 암을 가진다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 "PD-L1 양성"이거나 "PD-L1 양성 암"인 암을 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 PD-L1 발현(예컨대, 단백질 발현)이 상기 개체로부터의 샘플에서 종양 세포(TC) 상에서(또는 내에서) 검출되는 경우, 또는 PD-L1 발현(예컨대, 단백질 발현)이 상기 개체로부터의 샘플에서 종양 침윤 면역 세포(IC) 상에서(또는 내에서) 검출되는 경우, "PD-L1 양성"이거나 "PD-L1 양성 암"을 갖는다. 일부 구현예들에서, 상기 개체의 TC 및/또는 IC는 낮은 수준의 PD-L1 바이오마커를 발현한다. 일부 구현예들에서, 상기 개체의 TC 및/또는 IC는 높은 수준의 PD-L1 바이오마커를 발현한다. 방법들, 검정들 및/또는 키트들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상기 개체는 상기 PD-L1 바이오마커가 상기 개체로부터의 샘플의 0% 초과, 샘플의 1% 이상, 샘플의 5% 이상, 또는 샘플의 10% 이상(예컨대, 상기 개체의 TC 및/또는 IC를 함유하는 상기 개체로부터의 샘플) 존재하는(예컨대, IHC를 통해, 예컨대 검출되는) 경우, "PD-L1 양성"이거나 "PD-L1 양성 암"인 암을 갖는다. 상기 방법들, 검정들 및/또는 키트들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 샘플 내에서(예컨대, 상기 개체의 TC 및/또는 IC를 함유하는 상기 개체로부터의 샘플 내에서) 상기 PD-L1 바이오마커의 존재는 상기 샘플 내에서 임의의 염색 정도로서 검출된다.
상기 방법들, 검정들 및/또는 키트들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 FACS, 웨스턴 블랏, ELISA, 면역침강, 면역조직화학, 면역형광, 방사선면역검정, 점적, 면역검출 방법, HPLC, 표면 플라즈몬 공명, 광학적 분광법, 질량 분광분석기, HPLC, qPCR, RT-qPCR, 다중 qPCR 또는 RT-qPCR, RNA-seq, 마이크로어레이 분석, SAGE, 매스 어레이 기술, 및 FISH, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 방법을 사용하여 상기 샘플 내에서 검출된다.
상기 방법들, 검정들 및/또는 키트들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 단백질 발현에 의해 상기 샘플 내에서 검출된다. 일부 구현예들에서, 단백질 발현은 면역조직화학(IHC)에 의해 결정된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 항-PD-L1 항체를 사용하여 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 IHC에 의해 약한 염색 강도로서 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 IHC에 의해 중간 염색 강도로서 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 IHC에 의해 강한 염색 강도로서 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 종양 세포, 종양 침투 면역 세포, 기질 세포, 및 이들의 임의의 조합에서 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 염색은 막 염색, 세포질 염색 또는 이들의 조합이다.
일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 항-PD-L1 토끼 단클론 1차 항체를 사용하여 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1은 포르말린-고정 파라핀-포매 샘플 내에서 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 항-PD-L1 토끼 단클론 1차 항체는 검출 가능한 표지를 포함하는 2차 항체로 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1을 검출하는 데 사용되는 검정은 벤타나(VENTANA) PD-L1(SP142) 검정(벤타나®로부터 상업적으로 입수 가능)이다.
다른 양태에서, 상기 개체는 PD-L1 바이오마커를 발현하지 않거나 매우 낮은 수준의 PD-L1 바이오마커를 발현하는 암을 가진다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는 "PD-L1 음성"으로 지칭되거나 "PD-L1 음성 암"을 갖는 것으로 지칭된다. 일부 구현예들에서, 상기 개체는, PD-L1 발현(예컨대, 단백질 발현)이 상기 개체로부터의 샘플에서 종양 세포(TC) 상에서(또는 내에서) 검출되지 않는 경우, 또는 PD-L1 발현(예컨대, 단백질 발현)이 상기 개체로부터의 샘플에서 종양 침윤 면역 세포(IC) 상에서(또는 내에서) 검출되는 경우, 또는 PD-L1 발현(예컨대, 단백질 발현)이 상기 개인으로부터의 샘플에서 TC 및/또는 IC 상에서(또는 내에서) 매우 낮은 수준으로 검출되는 경우, "PD-L1 음성"이거나 "PD-L1 음성 암"을 갖는다. 상기 방법들, 검정들 및/또는 키트들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상기 개체는, PD-L1(예컨대, PD-L1 발현)이 상기 개체로부터의 샘플 내에서 0%의 TC 및/또는 IC로 (예컨대, IHC 또는 기타 검정을 통해)검출된 경우, "PD-L1 음성"이거나 "PD-L1 음성 암"을 갖는다. 상기 방법들, 검정들 및/또는 키트들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상기 개체는, PD-L1(예컨대, PD-L1 발현)이 상기 개체로부터의 샘플 내에서 <1%의 TC 및/또는 IC로 (예컨대, IHC 또는 기타 검정을 통해)검출된 경우, "PD-L1 음성"이거나 "PD-L1 음성 암"을 갖는다. 상기 방법들, 검정들 및/또는 키트들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, "PD-L1 음성"은 상기 샘플 내에서, 예컨대, 상기 개체의 TC 및/또는 IC를 함유하는 상기 개체로부터의 샘플 내에서 염색이 없음을 의미한다.
상기 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴) 및 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)는 임의의 순서로 투여될 수 있다. 예를 들어, PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴) 및 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)는 순차적으로(상이한 시간에) 또는 함께(동시에) 투여될 수 있다. 일부 구현예들에서, PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴) 및 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)는 별개의 조성물 내에 있다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴) 및 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드) 중 하나 이상(또는 세가지 모두)은 동일한 조성물 내에 있다.
상기 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴) 및 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)는 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-1 축 결합 길항제는 정맥 내, 근육 내, 피하, 국소, 경구, 경피, 복강 내, 안와 내, 이식, 흡입, 척수강 내, 심실 내 또는 비강 내로 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴)는 정맥 내, 근육 내, 피하, 국소, 경구, 경피, 복강 내, 안와 내, 이식, 흡입, 척수강 내, 심실 내 또는 비강 내로 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)는 정맥 내, 근육 내, 피하, 국소, 경구, 경피, 복강 내, 안와 내, 이식, 흡입, 척수강 내, 심실 내 또는 비강 내로 투여된다. 일부 구현예들에서, PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴) 및 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)는 정맥 내 주입을 통해 투여된다. 유효량의 상기 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴) 및 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)는 질병의 예방 또는 치료를 위해 투여될 수 있다.
일부 구현예들에서, 유효량의 아테졸리주맙, 카보플라틴 및 에토포시드를 개체에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 투여 단계는 유도기 및 유지기를 포함하고, 상기 유도기는 상기 아테졸리주맙을 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로, 상기 카보플라틴을 1일차에 5 mg/mL/min의 초기 목표 곡선하 면적(AUC)을 달성하기에 충분한 용량으로, 및 상기 에토포시드를 1일, 2일, 및 3일차에 각각 100 mg/m2의 용량으로 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체(예컨대, 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 대한 치료 경험이 없는 개체)의 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 유지기는 상기 아테졸리주맙을 4주기 이후에 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 방법은 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)(예컨대, 약 4.5, 4.75, 5, 5.25, 5.5, 5.75 또는 6개월 중 적어도 하나 이상만큼(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함)) 및/또는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)(예컨대, 약 10.5, 10.75, 11, 11.25, 11.5, 11.75, 12, 12.25, 12.5, 12.75, 13, 13.25, 13.5, 13.75, 또는 14개월 중 적어도 하나 이상만큼(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함))을 연장시킨다. 일부 구현예들에서, 상기 방법은 백금 제제(예컨대, 카보플라틴 또는 시스플라틴) 및 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)로 치료를 받은 폐암(예컨대, 소세포 폐암, 예컨대 확장병기의 소세포 폐암)을 가진 개체와 비교하여 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 (예컨대, 약 0.5, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 2, 2.25, 2.5, 2.75, 또는 3개월 중 적어도 하나 이상만큼(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함)) 및/또는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)(예컨대, 약 0.5, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 2, 2.25, 2.5, 2.75, 또는 3개월 중 적어도 하나 이상만큼(상기 수치들 사이의 임의의 범위를 포함))을 연장시킨다.
일부 구현예들에서, 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에, 예컨대, 상기의 표 4에 나타낸 바와 같이 상기 아테졸리주맙의 투여 후에 상기 카보플라틴이 투여되고, 상기 카보플라틴의 투여 후에 상기 에토포시드가 투여된다.
일부 구현예들에서, 상기 아테졸리주맙은 첫 번째 21일 주기(즉, 주기 1)의 1일차에 60(±15분)에 걸쳐 정맥 내로 투여되고, 상기 카보플라틴은 1일차에 30~60분 기간에 걸쳐 정맥 내로 투여되며, 상기 에토포시드는 1일, 2일 및 3일차에 60분 동안 정맥 내로 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 아테졸리주맙은 2 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 30(±10분)에 걸쳐 정맥 내로 투여되고, 상기 카보플라틴은 1일차에 30~60분 기간에 걸쳐 정맥 내로 투여되며, 상기 에토포시드는 1일, 2일 및 3일차에 60분 동안 정맥 내로 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 아테졸리주맙은 4주기 이후에 매 21일 주기의 1일차에 30(±10분)에 걸쳐 정맥 내로 투여된다.
일반적인 경우로서, 인간에게 투여되는 항체의 치료적 유효량은 1회이든 또는 그 이상의 투여에 의해서든지 간에 환자 체중당 약 0.01 내지 약 50 mg/kg의 범위 내일 것이다. 일부 구현예들에서, 사용된 항체는, 예를 들어, 매일 약 0.01 내지 약 45 mg/kg, 약 0.01 내지 약 40 mg/kg, 약 0.01 내지 약 35 mg/kg, 약 0.01 내지 약 30 mg/kg, 약 0.01 내지 약 25 mg/kg, 약 0.01 내지 약 20 mg/kg, 약 0.01 내지 약 15 mg/kg, 약 0.01 내지 약 10 mg/kg, 약 0.01 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 0.01 내지 약 1 mg/kg 투여된다. 일부 구현예들에서, 상기 항체는 15 mg/kg으로 투여된다. 하지만, 다른 투여량 요법이 유용할 수 있다. 일 구현예에서, 본원에 기재된 항-PDL1 항체는 21일 주기의 1일차에 약 100 mg, 약 200 mg, 약 300 mg, 약 400 mg, 약 500 mg, 약 600 mg, 약 700 mg, 약 800 mg, 약 900 mg, 약 1000 mg, 약 1100 mg, 약 1200 mg, 약 1300 mg 또는 약 1400 mg의 용량으로 인간에게 투여된다. 상기 용량은 단회 용량 또는 다중 용량(예컨대, 2 또는 3회 용량)으로, 예컨대 주입으로 투여될 수 있다. 병용 치료에서 투여된 항체의 용량은 단일 치료와 비교하여 감소될 수 있다. 상기 요법의 과정은 통상적인 기술에 의해 용이하게 모니터링된다.
일부 구현예들에서, 상기 방법들은 추가적인 요법을 추가로 포함할 수 있다. 상기 추가적인 요법은 방사선 요법, 수술(예컨대, 종양절제술 및 유방절제술), 화학요법, 유전자 요법, DNA 요법, 바이러스 요법, RNA 요법, 면역 요법, 골수 이식, 나노 요법, 단클론 항체 요법, 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 추가적인 요법은 보조 또는 신보조 요법의 형태일 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 추가적인 요법은 소분자 효소 억제제 또는 항-전이성 제제의 투여이다. 일부 구현예들에서, 상기 추가적인 요법은 부작용 제한 제제(예컨대, 치료의 부작용의 발생 및/또는 중증도를 줄이고자 하는 제제, 예컨대 항-메스꺼움 제제 등)의 투여이다. 일부 구현예들에서, 상기 추가적인 요법은 방사선 요법이다. 일부 구현예들에서, 상기 추가적인 요법은 수술이다. 일부 구현예들에서, 상기 추가적인 요법은 방사선 요법 및 수술의 병용이다. 일부 구현예들에서, 상기 추가적인 요법은 감마선 조사이다.
일부 구현예들에서, 상기 추가적인 요법은 CT-011(피딜리주맙 또는 MDV9300으로도 공지됨; CAS 등록 번호 1036730-42-3; 큐어테크(CureTech)/메디베이션(Medivation))을 포함한다. hBAT 또는 hBAT-1로도 공지된 CT-011은 WO2009/101611에 기재된 항체이다. 일부 구현예들에서, 상기 추가적인 치료 항체는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하고:
(a) 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함하고: QVQLVQSGSELKKPGASVKISCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLQWMGWINTDSGESTYAEEFKGRFVFSLDTSVNTAYLQITSLTAEDTGMYFCVRVGYDALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 19), 및
(b) 상기 경쇄는 하기의 아미노산 서열을 포함한다: EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCSARSSVSYMHWFQQKPGKAPKLWIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTSYCLTINSLQPEDFATYYCQQRSSFPLTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 20).
일부 구현예들에서, 상기 추가적인 치료 항체는 서열 번호 19 및 서열 번호 20의 6개의 HVR 서열(예컨대, 서열 번호 19의 3개의 중쇄 HVR 및 서열 번호 20의 3개의 경쇄 HVR)을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 추가적인 치료 항체는 서열 번호 19의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 20의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 본원에서의 사용을 위해 고려되는 다른 추가적인 치료 항체들은 알렘투 주맙(캠패트(Campath)), 베바시주맙(아바스틴(AVASTIN)®, 제넨텍); 세툭시맙(얼비툭스(ERBITUX)®, 임클론); 파니투무맙(벡티빅스(VECTIBIX)®, 암젠), 리툭시맙(리툭산(RITUXAN)®, 제넨텍/바이오젠 아이덱), 퍼투 주맙(옴니타그(OMNITARG)®, 2C4, 제넨텍), 트라스투주맙(헤셉틴(HERCEPTIN)®, 제넨텍), 토시투모맙(벡사, 코릭시아), 항체 약물 접합체, 젬투주맙 오조가미신(마일로타그(MYLOTARG)®, 와이어쓰), 아폴리주맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 바피뉴주맙, 비바투주맙 메르탄신, 칸투주맙 메르탄신, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 시드푸시투주맙, 시드투주맙, 다클리주맙, 에쿨리주맙, 에팔리주맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙, 젬투주맙 오조가미신, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 니모투주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오크렐리주맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 펙셀리주맙, 랄리비주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레시비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 투코투주맙 셀모류킨, 투쿠시투주맙, 우마비주맙, 유르톡사주맙, 유스테키누맙, 비실리주맙, 및 항-인터류킨-12(ABT-874/J695, 와이어쓰 리써치 앤드 애보트 래보러토리즈)를 포함한다.
일부 구현예들에서, 상기 추가적인 요법은 PI3K/AKT/mTOR 경로, HSP90 억제제, 튜불린 억제제, 세포자멸사 억제제, 및/또는 화학예방적 제제를 표적한 요법이다. 일부 구현예들에서, 상기 추가적인 요법은 CTLA-4(CD152로도 공지됨), 예컨대, 차단 항체, 이필리무맙(MDX-010, MDX-101, 또는 예르보이(Yervoy)®로도 공지됨), 트레멜리무맙(티실리무맙 또는 CP-675,206으로도 공지됨), B7-H3에 대해 지향된 길항제(CD276으로도 공지됨), 예컨대, 차단 항체, MGA271, TGF 베타에 대해 지향된 길항제, 예컨대, 메테리무맙(CAT-192로도 공지됨), 프레소리무맙(GC1008로도 공지됨), 또는 LY2157299, 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포(예컨대, 세포독성 T 세포 또는 CTL)의 입양 전이를 포함한 치료, 우성-음성 TGF 베타 수용체, 예컨대, 우성-음성 TGF 베타 II형 수용체를 포함하는 T 세포의 입양 전이를 포함한 치료, HERCREEM 프로토콜(예컨대, ClinicalTrials.gov Identifier NCT00889954를 참조)을 포함한 치료, CD137에 대해 지향된 작용제(TNFRSF9, 4-1BB, 또는 ILA로도 공지됨), 예컨대, 활성 항체, 우렐루맙(BMS-663513으로도 공지됨), CD40에 대해 지향된 작용제, 예컨대, 활성 항체, CP-870893, OX40에 대해 지향된 작용제(CD134로도 공지됨), 예컨대, 상이한 항-OX40 항체(예컨대, AgonOX)와 병용으로 투여되는 활성 항체, , CD27에 대해 지향된 작용제, 예컨대, 활성 항체, CDX-1127, 인돌아민-2,3-디옥시게나제(IDO), 1-메틸-D-트립토판(1-D-MT로도 공지됨), 항-약물 접합체(일부 구현예들에서, 메르탄신 또는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)를 포함), 항-NaPi2b 항체-MMAE 접합체(DNIB0600A 또는 RG7599로도 공지됨), 트라스투주맙 엠탄신(T-DM1, 아도-트라스투주맙 엠탄신, 또는 케싸일라(KADCYLA)®, 제넨텍으로 공지됨), DMUC5754A, 엔도텔린 B 수용체(EDNBR)를 표적하는 항-약물 접합체, 예컨대, MMAE와 접합된 EDNBR에 대해 지향된 항체, 혈관신생 억제제, VEGF, 예컨대, VEGF-A에 대해 지향된 항체, 베바시주맙(아바스틴®, 제넨텍으로도 공지됨), 안지오포이에틴 2(Ang2로도 공지됨)에 대해 지향된 항체, MEDI3617, 항종양성 제제, CSF-1R(M-CSFR 또는 CD115로도 공지됨)을 표적하는 제제, 항-CSF-1R(IMC-CS4로도 공지됨), 인터페론, 예를 들어, 인터페론 알파 또는 인터페론 감마, 로페론(Roferon)-A, GM-CSF(재조합 인간 과립구대식구집락자극인자, rhu GM-CSF, 사그라모스팀, 또는 류카인(Leukine)®으로도 공지됨), IL-2(알데스루킨 또는 프로류킨(Proleukin)®으로도 공지됨), IL-12, CD20을 표적하는 항체(일부 구현예들에서, CD20을 표적하는 상기 항체는 오비누투주맙(GA101 또는 가싸이바(Gazyva)®로도 공지됨) 또는 리툭시맙임), GITR를 표적하는 항체(일부 구현예들에서, GITR을 표적하는 상기 항체는 TRX518임), 암 백신과 병용(일부 구현예들에서, 상기 암 백신은 펩티드 암 백신이며, 일부 구현예들에서, 맞춤형 펩티드 백신이고; 일부 구현예들에서, 상기 펩티드 암 백신은 다가 긴 펩티드, 멀티-펩티드, 혼합 펩티드, 잡종 펩티드, 또는 펩티드로 감작된 수지상 세포(예컨대, Yamada et al., Cancer Sci, 104:14-21, 2013을 참조)), 보강제인 TLR 작용제와 병용, 예컨대, 폴리-ICLC(힐토놀(Hiltonol)®로도 공지됨), LPS, MPL, 또는 CpG ODN, 종양괴사인자(TNF) 알파, IL-1, HMGB1, IL-10 길항제, IL-4 길항제, IL-13 길항제, HVEM 길항제, ICOS 작용제, 예컨대, ICOS-L의 투여, 또는 ICOS에 대해 지향된 작용 항체, CX3CL1표적 치료, CXCL10 표적 치료, CCL5 표적 치료, LFA-1 또는 ICAM1 작용제, 셀렉틴(Selectin) 작용제, 표적 치료, B-Raf의 억제제, 베뮤라페닙(젤보라프(Zelboraf)®로도 공지됨), 다브라페닙(타핀라(Tafinlar)®로도 공지됨), 엘로티닙(타쎄바(Tarceva)®로도 공지됨), MEK, 예컨대 MEK1(MAP2K1로도 공지됨) 또는 MEK2(MAP2K2로도 공지됨)의 억제제, 코비메티닙(GDC-0973 또는 XL-518로도 공지됨), 트라메티닙(메키니스트(Mekinist)®으로도 공지됨), K-Ras의 억제제, c-Met의 억제제, 오나투주맙(메트맙(MetMAb)으로도 공지됨), Alk의 억제제, AF802(CH5424802 또는 알렉티닙으로도 공지됨), 포스파티딜이노시톨 3-키나제(PI3K)의 억제제, BKM120, 이델라리십(GS-1101 또는 CAL-101로도 공지됨), 페리포신(KRX-0401로도 공지됨), Akt, MK2206, GSK690693, GDC-0941, mTOR의 억제제, 시롤리무스(라파마이신으로도 공지됨), 템시롤리무스(CCI-779 또는 토리셀(Torisel)®로도 공지됨), 에베로리무스(RAD001로도 공지됨), 리다포롤리스(AP-23573, MK-8669 또는 데포롤리무스로도 공지됨), OSI-027, AZD8055, INK128, 이중 PI3K/mTOR 억제제, XL765, GDC-0980, BEZ235(NVP-BEZ235로도 공지됨), BGT226, GSK2126458, PF-04691502, PF-05212384 (PKI-587로도 공지됨)이다. 상기 추가적인 요법은 본원에 기재된 화학치료제들 중 하나 이상일 수 있다.
Ⅸ. 검출 및 진단의 방법
일부 구현예들에서, 상기 샘플은 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 백금 제제(예컨대, 카보플라틴), 및 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)로 치료하기 전에 수득한다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 포르말린 고정 및 파라핀 포매이며, 기록되고, 신성한 상태로 냉동된다.
일부 구현예들에서, 상기 샘플은 전혈이다. 일부 구현예들에서, 상기 전혈은 면역 세포, 순환 종양 세포 및 이들의 임의의 조합을 포함한다.
바이오마커(예컨대, PD-L1)의 존재 및/또는 발현 수준/양은 DNA, mRNA, cDNA, 단백질, 단백질 단편 및/또는 유전자 복제 수를 포함하지만 이에 제한되지는 않는 당해 분야에서 공지된 임의의 적합한 기준에 따라 정성적으로 및/또는 정량적으로 결정될 수 있다. 특정 구현예들에서, 제1 샘플에서 바이오마커의 존재 및/또는 발현 수준/양은 제2 샘플에서 존재/부재 및/또는 발현 수준/양과 비교하여 증가되거나 또는 상승된다. 특정 구현예들에서, 제1 샘플에서 바이오마커의 존재/부재 및/또는 발현 수준/양은 제2 샘플에서 존재 및/또는 발현 수준/양과 비교하여 줄거나 감소된다. 특정 구현예들에서, 상기 제2 샘플은 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직이다. 유전자의 존재/부재 및/또는 발현 수준/양을 결정하기 위한 추가적인 개시가 본원에 기재되어 있다.
방법들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상승된 발현은 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직과 비교하여 본원에 기재된 것과 같은 공지된 방법들의 표준 기술에 의해 검출된, 바이오마커(예컨대, 단백질 또는 핵산(예컨대, 유전자 또는 mRNA))의 수준에서 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 중 임의의 것만큼의 전체적인 증가를 지칭한다. 특정 구현예들에서, 상기 상승된 발현은 상기 샘플에서 바이오마커의 발현 수준/양에서의 증가를 지칭하고, 상기 증가는 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직에서 각각의 바이오마커의 약 1.5X, 1.75X, 2X, 3X, 4X, 5X, 6X, 7X, 8X, 9X, 10X, 25X, 50X, 75X, 또는 100X 발현 수준/양 중 적어도 임의의 것 이상이다. 일부 구현예들에서, 상승된 발현은 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 대조군 조직, 또는 내부 대조군 (예컨대, 하우스키핑 유전자)과 비교하여 약 1.5배, 약 1.75배, 약 2배, 약 2.25배, 약 2.5배, 약 2.75배, 약 3.0배, 또는 약 3.25배를 초과하는 전체적인 증가를 지칭한다.
상기 방법들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 감소된 발현은 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직과 비교하여 본원에 기재된 것과 같은 공지된 방법들의 표준 기술에 의해 검출된, 바이오마커(예컨대, 단백질 또는 핵산(예컨대, 유전자 또는 mRNA))의 수준에서 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 중 임의의 것만큼의 전체적인 감소를 지칭한다. 특정 구현예들에서, 감소된 발현은 상기 샘플에서 바이오마커의 발현 수준/양에서의 감소를 지칭하고, 상기 감소는 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직에서 각각의 바이오마커의 적어도 약 0.9X, 0.8X, 0.7X, 0.6X, 0.5X, 0.4X, 0.3X, 0.2X, 0.1X, 0.05X, 또는 0.01X 발현 수준/양 중 적어도 임의의 것 이상이다.
샘플 내 다양한 바이오마커의 존재 및/또는 발현 수준/양은 다수의 방법론에 의해 분석될 수 있고, 이들 중 많은 방법론이 당업자들에게 공지되고 이해되며, 면역조직화학("IHC"), 웨스턴 블랏 분석, 면역침강, 분자 결합 검정, ELISA, ELIFA, 형광 활성 세포 분류("FACS"), 매스어레이, 단백질체학, 정량적 혈액 기반 검정(예를 들어, 혈청 ELISA로서), 생화학 효소적 활성 검정, 원위치 혼성화, 서던 분석, 노던 분석, 전체 게놈 서열분석, 정량적 실시간 PCR("qRT-PCR")를 포함한 중합효소 연쇄 반응("PCR"), 및 기타 증폭 유형 검출 방법, 예컨대, 예를 들어, 분지 DNA, SISBA, TMA 등), RNA-서열(RNA-Seq), FISH, 마이크로어레이 분석, 유전 발현 프로파일링, 및/또는 유전자 발현의 일련 분석("SAGE") 뿐만 아니라 단백질, 유전자, 및/또는 조직 어레이 분석에 의하여 실시될 수 있는 다양한 범위의 검정들 중 임의의 것을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 유전자 및 유전자 생성물의 상태를 평가하기 위한 전형적인 프로토콜은, 예를 들어, Ausubel et al., 1995, Current Protocols In Molecular Biology, Units 2(노던 블랏팅), 4(서던 블랏팅), 15(면역블랏팅) 및 18(PCR 분석)에서 찾을 수 있다. 다중 면역검정, 예컨대 룰스 베이스드 메디슨(Rules Based Medicine) 또는 메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery, "MSD")에서 입수 가능한 것들이 또한 사용될 수 있다.
일부 구현예들에서, 바이오마커의 존재 및/또는 발현 수준/양은: (a) 샘플(예컨대, 대상체 암 샘플) 상에서 유전자 발현 프로파일링, PCR(예컨대, rtPCR 또는 qRT-PCR), RNA-seq, 마이크로어레이 분석, SAGE, 매스 어레이 기술, 또는 FISH를 실시하는 단계; 및 b) 상기 샘플에서 바이오마커의 존재 및/또는 발현 수준/양을 결정하는 단계를 포함하는 방법을 사용하여 결정된다. 일부 구현예들에서, 상기 마이크로어레이 방법은 엄격한 조건 하에서 상기 언급된 유전자를 부호화하는 핵산 분자에 하이브리드화 가능한 하나 이상의 핵산 분자를 갖거나 또는 상기 언급된 유전자들에 의해 부호화된 단백질들 중 하나 이상에 결합할 수 있는 하나 이상의 폴리펩티드(예컨대, 펩티드 또는 항체)를 갖는 마이크로어레이 칩의 사용을 포함한다. 일 구현예에서, 상기 PCR 방법은 qRT-PCR이다. 일 구현예에서, 상기 PCR 방법은 다중-PCR이다. 일부 구현예들에서, 유전자 발현은 마이크로어레이에 의해 측정된다. 일부 구현예들에서, 유전자 발현은 qRT-PCR에 의해 측정된다. 일부 구현예들에서, 발현은 다중-PCR에 의해 측정된다.
세포에서 mRNA를 평가하기 위한 방법은 잘 알려져 있고, 예를 들어, 상보적 DNA 프로브를 사용한 혼성화 검정(예컨대, 1종 이상의 유전자에 특이적인 표지된 리보프로브를 사용한 원위치 혼성화, 노던 블랏 및 관련된 기술) 및 다양한 핵산 증폭 검정(예컨대, 유전자 중 1종 이상에 특이적인 상보적 프라이머를 사용한 RT-PCR, 및 다른 증폭 유형 검출 방법들, 예컨대, 예를 들어, 분지 DNA, SISBA, 및 TMA 등)을 포함한다.
포유동물로부터의 샘플은 노던, 닷 블랏 또는 PCR 분석을 사용하여 mRNA에 대해 편리하게 검정될 수 있다. 또한, 상기 방법들은 생물학적 샘플 내 표적 mRNA의 수준을 결정하도록 하는 하나 이상의 단계들(예컨대, “하우스키핑” 유전자, 예컨대 액틴족 요소의 비교 대조군 mRNA 서열 수준들을 동시에 검토함으로써)을 포함할 수 있다. 선택적으로, 상기 증폭된 표적 cDNA의 서열이 결정될 수 있다.
선택적인 방법들은 마이크로어레이 기술에 의해 조직 또는 세포 샘플 내에서 mRNA, 예컨대, 표적 mmRNA를 검토하거나 검출하는 프로토콜을 포함한다. 핵산 마이크로어레이를 사용하여, 시험 및 대조군 조직 샘플로부터 시험 및 대조군 mRNA 샘플이 역전사되고 표지되어 cDNA 프로브를 생성한다. 그런 다음, 상기 프로브는 고형 지지체 상에 고정된 핵산의 배열에 혼성화된다. 상기 배열은 배열의 각 요소의 서열 및 위치를 알 수 있도록 구성된다. 예를 들어, 발현이 항-혈관신생 요법의 임상 이득의 증가 또는 감소와 관련있어 선택된 유전자들은 고형 지지체 상에 배열될 수 있다. 특정 배열 요소로 표지된 프로브의 혼성화는 상기 프로브가 유도된 샘플이 상기 유전자를 발현한다는 것을 나타낸다.
일부 구현예들에 따라서, 존재 및/또는 발현 수준/양은 상기 언급된 유전자의 단백질 발현 수준을 관찰함으로써 측정된다. 특정 구현예들에서, 상기 방법은 상기 생물학적 샘플을, 상기 바이오마커의 결합을 위해 허용된 조건 하에서 본원에 기재된 상기 바이오마커(예컨대, 항-PD-L1 항체)의 항체들과 접촉시키는 단계, 및 상기 항체들 및 바이오마커 사이에 복합체가가 형성되는지 여부를 결정하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 시험관내 또는 생체내 방법일 수 있다. 일 구현예에서, 항체는 PD-L1 축 결합 길항제, 예컨대, 선택된 개체들을 위한 바이오마커를 이용한 치료에 적격인 대상체들을 선택하기 위해 사용된다.
특정 구현예들에서, 샘플 내 바이오마커 단백질의 존재 및/또는 발현 수준/양은 IHC 및 염색 프로토콜들을 사용하여 검토될 수 있다. 조직 절편의 IHC 염색은 샘플에서 단백질의 존재를 결정하거나 검출하는 신뢰할 만한 방법임이 밝혀진 바 있다. 상기 방법들, 검정들 및/또는 키트들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 PD-L1이다. 일부 구현예들에서, PD-L1은 면역조직화학에 의해 검출된다. 일부 구현예들에서, 개체로부터의 샘플에서 PD-L1 바이오마커의 상승된 발현은 상승된 단백질 발현이고, 추가 구현예들에서 IHC를 사용하여 결정된다. 일 구현예에서, 바이오마커의 발현 수준은: (a) 항체를 갖는 샘플(예컨대, 대상체 암 샘플)의 IHC 분석을 실시하는 단계; 및 b) 상기 샘플에서 바이오마커의 발현 수준을 결정하는 단계를 포함하는 방법을 사용하여 결정된다. 일부 구현예들에서, IHC 염색 강도는 참조와 비교하여 결정된다. 일부 구현예들에서, 상기 참조는 참조 값이다. 일부 구현예들에서, 상기 참조는 참조 샘플(예컨대, 비-암성 환자로부터의 대조군 세포주 염색 샘플 또는 조직 샘플)이다.
IHC는 추가적인 기술들, 예컨대, 형태학적 염색 및/또는 형광 원위치 혼성화와 조합하여 실시될 수 있다. IHC의 두 가지 일반적인 방법이 입수 가능하며, 이는 직접 검정 및 간접 검정이다. 상기 제1 검정에 따라서, 표적 항원에 대한 항체의 결합이 직접적으로 결정된다. 상기 직접 검정은 표지된 시약, 예컨대, 추가적인 항체 상호작용 없이 가시화될 수 있는 형광 태그 또는 효소로 표지된 1차 항체를 사용한다. 전형적인 간접 검정에서, 미접합된 1차 항체는 상기 항원에 결합한 다음, 표지된 2차 항체가 상기 1차 항체에 결합한다. 상기 2차 항체가 효소 표지에 접합된 경우, 발색성 또는 형광성 기질이 첨가되어 상기 항원의 가시화를 제공한다. 여러 2차 항체가 상기 1차 항체 상의 상이한 에피토프들과 반응할 수 있기 때문에 신호 증폭이 발생한다.
IHC을 위해 사용되는 상기 1차 및/또는 2차 항체는 전형적으로 검출가능한 모이어티로 표지될 것이다. 일반적으로 하기의 범주들로 분류될 수 있는 수많은 표지가 입수 가능하다: (a) 방사선 동위원소, 예컨대, 35S, 14C, 125I, 3H, 및 131I; (b) 콜로이드성 금 입자; (c) 형광 표지, 예컨대, 희토류 킬레이트(유로퓸 킬레이트), 텍사스 레드, 로다민, 플루오레세인, 단실, 리스사민, 엄벨리페론, 파이코크리테린, 파이코시아닌 또는 상업적으로 입수가능한 형광단, 예컨대 스펙트럼 오렌지(SPECTRUM ORANGE)7 및 스펙트럼 그린(SPECTRUM GREEN)7 및/또는 상기의 것들 중 임의의 하나 이상의 유도체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는 형광 표지; (d) 다양한 효소-기질 표지가 입수 가능하며, 미국 특허 제 4,275,149호는 상기의 표지들 중 일부에 대한 검토를 제공한다. 효소 표지들의 예는 루시페라아제(예컨대, 반딧불 루시퍼라제 및 박테리아 루시퍼라제; 미국 특허 제 4,737,456호), 루시페린, 2,3-디히드로프탈라진디온, 말레이트 디히드로게나아제, 우레아제, 과산화효소, 예컨대 호스래디쉬 퍼옥시다제(HRPO), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다아제, 글루코아밀라아제, 리소자임, 사카라이드 옥시다아제(예컨대, 글루코오스 옥시다아제, 갈락토오스 옥시다아제 및 글루코오스-6-포스페이트 디히드로게나아제), 헤테로고리 옥시다아제(예컨대, 유리카아제 및 잔틴 옥시다아제), 락토퍼록시다아제, 및 마이크로퍼록시다아제 등을 포함한다.
효소-기질 조합들의 예는, 예를 들어, 수소 퍼옥시다제를 기질로서 갖는 호스래디쉬 퍼옥시다제(HRPO); 발색성 기질로서 파라-니트로페닐 포스페이트를 갖는 알칼리성 인산가수분해효소(AP); 발색성 기질(예컨대, p-니트로페닐-β-D-갈락토시다아제) 또는 형광원성 기질(예컨대, 4-메틸움벨리페릴-β-D-갈락토시다아제)를 갖는 β-D-갈락토시다아제(β-D-Gal)를 포함한다. 상기의 것들에 대한 일반적인 검토를 위해, 미국 특허 제 4,275,149호 및 4,318,980호를 참조한다.
상기 방법들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, PD-L1은 항-PD-L1 진단용 항체(즉, 1차 항체)를 사용한 면역조직화학에 의해 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 진단용 항체는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 진단용 항체는 비인간 항체이다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 진단용 항체는 랫트, 마우스, 또는 토끼 항체이다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 진단용 항체는 단클론 항체이다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 진단용 항체는 직접적으로 표지된다.
이렇게 제조된 시료는 장착되어 유리덮개로 덮일 수 있다. 그런 다음, 예컨대, 현미경을 사용하여 슬라이드 평가를 결정하고, 당해 분야에서 일상적으로 사용되는 염색 강도 기준을 사용할 수 있다. 일 구현예에서, 종양 유래의 세포 및/또는 조직이 IHC를 사용하여 검토될 경우, 염색은 일반적으로 종양 세포 및/또는 조직에서 (상기 샘플 내 존재할 수 있는 기질 또는 주변 조직과 대조적으로)결정 또는 평가되는 것으로 이해된다. 일부 구현예들에서, 종양 유래의 세포 및/또는 조직이 IHC를 사용하여 검토될 경우, 염색은 종양내 또는 종양주변 면역 세포를 포함하는, 종양 침윤 면역 세포 내에서 결정 또는 평가하는 것을 포함한다.
일부 구현예들에서, PDL1 발현은 종양 또는 종양 샘플에 대해 평가된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 종양 또는 종양 샘플은 종양 세포들에 의해 점유된 종양 면적의 일부 또는 모두를 포괄할 수 있다. 일부 구현예들에서, 종양 또는 종양 샘플은 종양 관련 종양내의 세포 및/또는 종양 관련 기질(예컨대, 인접한 주변-종양의 결합조직형성 기질)에 의해 점유된 종양 영역을 추가로 포괄할 수 있다. 종양 관련 종양내의 세포 및/또는 종양 관련 기질은 주요 종양 덩어리에 바로 인접한 및/또는 이와 접하는 면역 침윤물(예컨대, 본원에 기재된 바와 같이 종양 침투 면역 세포)의 영역을 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, PDL1 발현은 종양 세포에 대해 평가된다. 일부 구현예들에서, PDL1 발현은 상기 기재된 바와 같이 종양 영역, 예컨대 종양 침투 면역 세포 내에서 면역 세포에 대해 평가된다.
대안적인 방법들에서, 상기 샘플은 항체-바이오마커 복합체가 형성되기에 충분한 조건 하에서 상기 바이오마커에 특이적인 항체와 접촉될 수 있고, 그런 다음 상기 복합체를 검출할 수 있다. 상기 바이오마커의 존재는 수많은 방식으로, 예컨대 혈장 또는 혈청을 포함하는 다양한 조직 및 샘플을 검정하기 위한 웨스턴 블랏팅 및 ELISA 절차에 의해 검출될 수 있다. 상기 검정 방식을 이용하는 광범위한 면역검정 기술이 입수 가능하며, 예컨대 미국 특허 제 4,016,043호, 4,424,279호 및 4,018,653호를 참조한다. 상기 기술들은 비경쟁적 유형의 단일-부위와 2-부위 검정 또는 "샌드위치" 검정뿐만 아니라 전통적인 경쟁적 결합 검정 모두를 포함한다. 상기 검정들은, 또한 표적 바이오마커에 대한 표지화된 항체의 직접적인 결합을 포함한다.
조직 또는 세포 샘플에서 선택된 바이오마커의 존재 및/또는 발현 수준/양은 작용성 또는 활성-기반 검정들에 의해 검토될 수도 있다. 예를 들어, 만약 상기 바이오마커가 효소이면, 상기 조직 또는 세포 샘플에서 주어진 효소 활성의 존재를 결정 또는 검출하기 위해 당해 분야에 공지된 검정들을 실시할 수 있다.
특정 구현예들에서, 상기 샘플들은 검정된 바이오마커의 양에서의 차이 및 사용된 샘플들의 품질의 가변성, 및 검정 실행 사이의 가변성 모두에 대해 정규화된다. 상기 정규화는 잘 알려진 하우스키핑 유전자들을 포함하여 특정 정규화 바이오마커들의 발현을 검출하고 통합함으로써 달성될 수 있다. 대안적으로, 정규화는 모든 검정된 유전자 또는 이의 큰 하위군의 평균 또는 중간 신호를 기반으로 할 수 있다(전면적인 정규화 접근법). 유전자-대-유전자를 기준으로, 대상체 종양 mRNA 또는 단백질의 측정된 정규화된 양은 참조 세트에서 제공된 양과 비교한다. 대상체별로 시험된 종양 당 각 mRNA 또는 단백질에 대한 정규화된 발현 수준은 참조 세트에서 측정된 발현 수준의 백분율로 표현될 수 있다. 분석될 특정한 대상체 샘플에서 측정된 존재 및/또는 발현 수준/양은 당해 분야에서 잘 알려진 방법들에 의해 결정될 수 있는 상기 범위 내의 일부 백분위로 나타낼 수 있다.
일 구현예에서, 상기 샘플은 임상 샘플이다. 다른 구현예에서, 상기 샘플은 진단학적 검정에 사용된다. 일부 구현예들에서, 상기 샘플은 1차 또는 전이성 종양으로부터 수득된다. 조직 생검은 종종 종양 조직의 대표적인 일부를 수득하기 위해 사용된다. 대안적으로, 종양 세포는 관심 종양 세포를 함유하는 것으로 공지되거나 또는 간주되는 조직 또는 체액의 형태로 간접적으로 수득될 수 있다. 예를 들어, 폐암 병변의 샘플은 절제, 기관지내시경, 가는 바늘 흡인, 기관지 찰과법에 의해, 또는 객담, 흉수 또는 혈액으로부터 수득될 수 있다. 유전자 또는 유전자 생성물은 암 또는 종양 조직으로부터 또는 다른 신체 샘플들, 예컨대 소변, 가래, 혈청 또는 혈장으로부터 검출될 수 있다. 암성 샘플에서 표적 유전자 또는 유전자 생성물의 검출을 위해 상기 논의된 동일한 기술들이 다른 신체 샘플들에도 적용될 수 있다. 암 세포는 암 병변으로부터 떨어져 나올 수 있으며 상기 신체 샘플들에 나타날 수 있다. 상기 신체 샘플들을 선별검사함으로써, 상기 암에 대한 간단한 조기 진단이 달성될 수 있다. 또한, 요법의 진행은 표적 유전자 또는 유전자 생성물에 대한 상기 신체 샘플을 시험함으로써 보다 쉽게 모니터링될 수 있다.
특정 구현예들에서, 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은 상기 시험 샘플이 수득될 때보다 하나 이상의 상이한 시점에서 수득된 동일한 대상체 또는 개체로부터의 단일 샘플 또는 조합된 다중 샘플이다. 예를 들어, 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은 상기 시험 샘플이 수득될 때보다 동일한 대상체 또는 개체로부터 조기 시점에서 수득된다. 상기 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은, 만약 상기 참조 샘플이 암의 초기 진단 중에 수득되고 상기 시험 샘플은 상기 암이 전이성이 될 때 이후에 수득되면, 유용할 수 있다.
특정 구현예들에서, 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은 상기 대상체 또는 개체가 아닌 하나 이상의 건강한 개체로부터 조합된 다중 샘플이다. 특정 구현예들에서, 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은 상기 대상체 또는 개체가 아닌 질환 또는 장애(예컨대, 암)를 갖는 하나 이상의 개체로부터 조합된 다중 샘플이다. 특정 구현예들에서, 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은 상기 대상체 또는 개체가 아닌 하나 이상의 개체로부터의 정상 조직 또는 풀링된 혈장 또는 혈청 샘플로부터 풀링된 RNA 샘플이다. 특정 구현예들에서, 참조 샘플, 참조 세포, 참조 조직, 대조군 샘플, 대조군 세포, 또는 대조군 조직은 상기 대상체 또는 개체가 아닌 질환 또는 장애(예컨대, 암)를 갖는 하나 이상의 개체로부터의 종양 조직 또는 풀링된 혈장 또는 혈청 샘플로부터 풀링된 RNA 샘플이다.
일부 구현예들에서, 상기 샘플은 상기 개체 유래의 조직 샘플이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 종양 조직 샘플(예컨대, 생검 조직)이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 폐 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 신장 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 피부 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 췌장 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 위 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 방광 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 식도 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 중피 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 유방 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 갑상선 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 결장직장 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 두경부 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 골육종 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 전립선 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 난소 조직, HCC(간), 혈구, 림프절, 및/또는 골/골수 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 결장 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 자궁내막 조직이다. 일부 구현예들에서, 상기 조직 샘플은 뇌 조직(예컨대, 교모세포종 및 신경모세포종 등)이다.
일부 구현예들에서, 종양 조직 샘플(용어 "종양 샘플"이 본원에 상호교환적으로 사용됨)은 종양 세포에 의해 점유된 종양 면적의 일부 또는 모두를 포괄할 수 있다. 일부 구현예들에서, 종양 또는 종양 샘플은 종양 관련 종양내의 세포 및/또는 종양 관련 기질(예컨대, 인접한 주변-종양의 결합조직형성 기질)에 의해 점유된 종양 영역을 추가로 포괄할 수 있다. 종양 관련 종양내의 세포 및/또는 종양 관련 기질은 주요 종양 덩어리에 바로 인접한 및/또는 이와 접하는 면역 침윤물(예컨대, 본원에 기재된 바와 같이 종양 침투 면역 세포)의 영역을 포함할 수 있다.
상기 방법들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상기 질환 또는 장애는 종양이다. 일부 구현예들에서, 상기 종양은 악성 암성 종양(즉, 암)이다. 일부 구현예들에서, 상기 종양 및/또는 암은 고형 종양 또는 비-고형 또는 연조직 종양이다. 연 조직 종양들의 예는 백혈병(예를 들어, 만성 골수성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 성인 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 성숙한 B-세포 급성 림프아구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 포림프구성 백혈병, 또는 모발 세포 백혈병) 또는 림프종(예를 들어, 비-호지킨 림프종, 피부 T-세포 림프종, 또는 호지킨 질환)을 포함한다. 고형 종양은 혈액, 골수, 또는 림프계 이외의 신체 조직들의 임의의 암을 포함한다. 고형 종양들은 상피 세포 기원의 것 및 비-상피 세포 기원의 것으로 추가로 분화될 수 있다. 상피성 세포 고형 종양들의 예는 위장관, 결장, 결장직장(예컨대, 기저양 결장직장 암종), 유방, 전립선, 폐, 신장, 간, 췌장, 난소(예컨대, 자궁내막모양 난소 암종), 두경부, 구강, 위, 십이지장, 작은 창자, 큰 창자, 항문, 담낭, 음순, 비인두, 피부, 자궁, 남성 생식기 장기, 비뇨기(예컨대, 요로상피 암종, 형성이상 요로상피 암종, 이행 세포 암종), 방광, 및 피부의 종양을 포함한다. 비-상피성 기원의 고형 종양들은 육종, 뇌종양, 및 골 종양을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 비-소세포 폐암(NSCLC)이다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 2차 또는 3차 국소 진행성 또는 전이성 비-소세포 폐암이다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 선암종이다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 편평세포암종이다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 비-소세포 폐암(NSCLC), 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 유방 암종(예컨대, 삼중-음성 유방암), 위암, 대장암(CRC), 또는 간세포 암종이다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 1차 종양이다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 암의 상기 유형들 중 임의의 것으로부터 유도된 제2 부위에서 전이성 종양이다.
상기 방법들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상기 암은 인간 효과기 세포를 전시한다(예컨대, 인간 효과기 세포에 의해 침윤된다). 인간 효과기 세포를 검출하는 방법들은, 예를 들어 IHC에 의한 것을 포함하여, 당해 분야에서 잘 알려져 있다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 높은 수준의 인간 효과기 세포를 전시한다. 일부 구현예들에서, 인간 효과기 세포는 NK 세포, 대식세포, 단핵구 중 1종 이상이다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 본원에 기재된 임의의 암이다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 비-소세포 폐암(NSCLC), 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 유방 암종(예컨대, 삼중-음성 유방암), 위암, 대장안(CRC), 또는 간세포 암종이다.
상기 방법들 중 임의의 것에 대한 일부 구현예들에서, 상기 암은 FcR을 발현하는 세포를 전시한다(예컨대, FcR을 발현하는 세포에 의해 침윤된다). FcR를 검출하는 방법들은, 예를 들어, IHC에 의한 것을 포함하여 당해 분야에서 잘 알려져 있다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 높은 수준의 FcR을 발현하는 세포를 전시한다. 일부 구현예들에서, FcR 은 FcγR이다. 일부 구현예들에서, FcR 은 활성화 FcγR이다. 일부 구현예들에서, 상기 암은 비-소세포 폐암(NSCLC), 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 유방 암종(예컨대, 삼중-음성 유방암), 위암, 대장암(CRC), 또는 간세포 암종이다.
일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 FACS, 웨스턴 블랏, ELISA, 면역침강, 면역조직화학, 면역형광, 방사선면역검정, 점적, 면역검출 방법, HPLC, 표면 플라즈몬 공명, 광학적 분광법, 질량 분광분석기, HPLC, qPCR, RT-qPCR, 다중 qPCR 또는 RT-qPCR, RNA-seq, 마이크로어레이 분석, SAGE, 매스 어레이 기술, 및 FISH, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 방법을 사용하여 상기 샘플에서 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 FACS 분석을 사용하여 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 바이오마커는 PD-L1이다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 발현은 혈액 샘플에서 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 발현은 혈액 샘플의 순환 면역 세포 상에서 검출된다. 일부 구현예들에서, 상기 순환 면역 세포는 CD3+/CD8+ T 세포이다. 일부 구현예들에서, 분석 전에, 상기 면역 세포는 상기 혈액 샘플로부터 분리된다. 상기 세포군을 분리/농축시키는 임의의 적합한 방법은 세포 분류를 포함하지만 이에 제한되지는 않게 사용될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 발현은 항-PD-L1 항체와 같은 PD-L1/PD-1 축 경로의 억제제를 이용한 치료에 반응하는 개체로부터의 샘플에서 상승된다. 일부 구현예들에서, 상기 PD-L1 발현은 혈액 샘플에서 CD3+/CD8+ T 세포와 같은 순환 면역 세포에서 상승된다.
본 개시의 특정 양태들은 샘플에서 하나 이상의 유전자 또는 하나 이상의 단백질의 발현 수준의 측정에 관한 것이다. 일부 구현예들에서, 샘플은 백혈구를 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 샘플은 (예컨대, 종양이 있는 환자로부터의)말초 혈액 샘플일 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 샘플은 종양 샘플이다. 종양 샘플은 암 세포, 림프구, 백혈구, 기질, 혈관, 연결조직, 기저판, 및 상기 종양과 관련된 기타 임의의 세포 유형을 포함한다. 일부 구현예들에서, 상기 샘플은 종양 침윤 백혈구를 함유한 종양 조직 샘플이다. 일부 구현예들에서, 상기 샘플은 하나 이상의 세포 유형(예컨대, 백혈구)을 분리 또는 단리시키기 위해 가공될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 샘플은 세포 유형의 분리 또는 단리 없이 사용될 수 있다.
종양 샘플은, 생검, 내시경술, 또는 수술 과정을 제한없이 포함하여, 당해 분야에서 공지된 임의의 방법에 의해 대상체로부터 수득될 수 있다. 일부 구현예들에서, 종양 샘플은 방법들, 예컨대, 냉동, (예컨대, 포르말린 또는 유사한 고정제를 이용한)고정, 및/또는 파라핀 왁스 내 포매에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예들에서, 종양 샘플은 절단될 수 있다. 일부 구현예들에서, 신선한 종양 샘플(즉, 상기 기재된 방법들에 의해 제조되지 않은 것)이 사용될 수 있다. 일부 구현예들에서, 종양 샘플은 mRNA 및/또는 단백질 완전성을 보존하기 위해 용액 내 배양에 의해 제조될 수 있다.
일부 구현예들에서, 상기 샘플은 말초 혈액 샘플일 수 있다. 말초 혈액 샘플은 백혈구 및 PBMC 등을 포함할 수 있다. 말초 혈액 샘플로부터 백혈구 분리를 위하여 당해 분야에서 공지된 임의의 기술이 사용될 수 있다. 예를 들어, 혈액 샘플은 추출할 수 있고, 적혈구는 용해될 수 있고, 백혈구 펠렛은 분리될 수 있으며, 샘플로 사용될 수 있다. 다른 예에서, 밀도 구배 분리는 적혈구로부터 백혈구(예컨대, PBMC)를 분리하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예들에서, 신선한 말초 혈액 샘플(즉, 상기 기재된 방법들에 의해 제조되지 않았던 것)이 사용될 수 있다. 일부 구현예들에서, 말초 혈액 샘플은 mRNA 및/또는 단백질 완전성을 보전하기 위해 용액 내 배양에 의해 제조될 수 있다.
일부 구현예들에서, 치료에 대한 반응성은 연장된 생존(전체 생존 및 무진행 생존을 포함); 객관적 반응의 유발(완전한 반응 또는 부분적 반응을 포함); 또는 암의 징후 또는 증상의 개선 중 하나 이상을 지칭할 수 있다. 일부 구현예들에서, 반응성은 암 환자에서 종양의 상태를 결정하기 위한, 즉, 반응, 안정화, 또는 진행을 위한 RECIST 지침의 공개된 세트에 따라 하나 이상의 인자의 개선을 지칭할 수 있다. 상기 지침에 대한 좀 더 자세한 논의는, Eisenhauer et al., Eur J Cancer 2009;45: 22847; Topalian et al., N Engl J Med 2012;366:244354; Wolchok et al., Clin Can Res 2009;15:741220; 및 Therasse, P., et al. J. Natl. Cancer Inst. 92:205-16 (2000)을 참조한다. 반응성 대상체는 암(들)이, 예컨대, RECIST 기준에 기반한 하나 이상의 인자에 따라 개선을 보이는 대상체를 지칭할 수 있다. 비-반응성 대상체는 암(들)이, 예컨대, RECIST 기준에 기반한 하나 이상의 인자에 따라 개선을 보이지 않는 대상체를 지칭할 수 있다.
종래의 반응 기준은, 신규 병변의 외관을 포함한, 초기 명백한 방사선학적 진행에 의해 선행될 수 있는 지연된 반응을 생성할 수 있는, 면역치료제의 항-종양 활성을 특성화하는데 적절하지 않을 수 있다. 따라서, 신규 병변의 가능한 외관을 설명하고 후속 평가에서 방사선학적 진행이 확인되도록 하는 변형된 반응 기준이 개발되었다. 따라서, 일부 구현예들에서, 반응성은 면역-관련된 반응 기준2(irRC)에 따라 더 많은 인자 중 하나의 개선을 지칭할 수 있다. 예를 들어, Wolchok et al., Clin Can Res 2009;15:7412 20을 참조한다. 일부 구현예들에서, 신규 병변은 소정의 종양 부하에 추가되고, 예컨대, 후속 평가에서의 방사선학적 진행을 위해 뒤이어 적용된다. 일부 구현예들에서, 비-표적 병변의 존재는 완전한 반응의 평가에 포함되고 방사선학적 진행의 평가에는 포함되지 않는다. 일부 구현예들에서, 방사선학적 진행은 측정가능한 질병만을 기준으로 하여 결정될 수 있고/있거나 최초로 문서화된 일자로부터 ≥ 4주 연속적인 평가에 의해 확인될 수 있다.
일부 구현예들에서, 반응성은 면역 활성화를 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 반응성은 치료 효능을 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 반응성은 면역 활성화 및 치료 효능을 포함할 수 있다.
Ⅹ. 제조 물품 또는 키트
본 발명의 다른 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 백금 제제(예컨대, 카보플라틴), 및/또는 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)를 포함하여 제공된다. 일부 구현예들에서, 상기 제조 물품 또는 키트는 상기 PD-1 축 결합 길항제를 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴) 및 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)와 병용으로 사용하여 개체 내에서 암(예컨대, 폐암, 예컨대, 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 포함한 소세포 폐암(SCLC))을 치료 또는 지연시키거나, 암(예컨대, 폐암, 예컨대, 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 포함한 소세포 폐암(SCLC))을 가진 개체의 면역 기능을 향상시키기 위한 설명서를 포함한 패키지 삽입물을 추가로 포함한다. 당해 분야에 공지된 상기 PD-1 축 결합 길항제, 백금 제제, 및 토포이소머라제 II 억제제 중 임의의 것이 상기 제조 물품 또는 키트 내에 포함될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 키트는 아테졸리주맙, 카보플라틴, 및 에토포시드를 포함할 수 있다.
일부 구현예들에서, 상기 PD-1 축 결합 길항제(예컨대, 아테졸리주맙), 상기 백금 제제(예컨대, 카보플라틴) 및 상기 토포이소머라제 II 억제제(예컨대, 에토포시드)는 동일한 용기 또는 별개의 용기 내에 있다. 적합한 용기들은, 예를 들어, 병, 바이알, 봉투 및 주사기를 포함한다. 상기 용기는 다양한 물질, 예컨대, 유리, 플라스틱(예컨대, 폴리비닐 클로라이드 또는 폴리올레핀), 또는 금속 합금(예컨대, 스테인레스강 또는 하스텔로이)로부터 형성될 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 용기는 상기 제형, 및 상기 제형에 대한 또는 이와 관련된 라벨을 보유하고, 상기 용기는 사용법을 나타낼 수 있다. 상기 제조 물품 또는 키트는 다른 완충제, 희석제, 충전제, 바늘, 주사기 및 사용 설명서가 있는 패키지 삽입물을 포함하는, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 재료들을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예들에서, 상기 제조 물품은 하나 이상의 또 다른 제제(예컨대, 화학치료제 및 항종양제)를 추가로 포함한다. 하나 이상의 제제에 적합한 용기는, 예를 들어, 병, 바이알, 봉투 및 주사기를 포함한다.
본 명세서는 당업자가 본 발명을 실시할 수 있기에 충분한 것으로 간주된다. 본원에 나타내고 기재한 것에 추가로 본 발명의 다양한 변형은 전술한 설명으로부터 당업자에게 명확할 것이고, 첨부하는 청구범위 내에 속할 것이다. 모든 공보, 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전체로 참조로서 본원에 인용된다.
실시예
본 개시는 하기 실시예들을 참조하여 더욱 완전하게 이해될 것이다. 하지만, 실시예들은 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본원에 기재된 실시예 및 구현예는 단지 예시적 목적을 위한 것이고, 이들의 견지에서 다양한 변형 또는 변화가 당업자에게 제시될 것이며, 본 출원의 사상 및 범위 그리고 첨부된 청구범위의 범위 내에 포함되는 것으로 이해된다.
실시예 1: 치료되지 않은 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC) 환자를 대상으로 아테졸리주맙(항-PD-L1 항체)을 병용하거나 병용하지 않는 카보플라틴 및 에토포시드에 대한 I/III 상, 무작위, 이중 맹검, 위약 대조 연구
본 연구는 아테졸리주맙으로 치료된 환자에게서 나타나는 항종양 효과가 화학요법 경험이 없는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC) 환자에게서 위약, 카보플라틴 및 에토포시드와 비교하여 카보플라틴 및 에토포시드와 병용할 때 무진행 생존 기간(PFS) 및 전체 생존 기간(OS)에서 통계적으로 유의하고 임상적으로 관련있는 개선으로 변환되는지 여부를 평가하기 위해 고안되었다. 본 연구는 ITT 군에서 아테졸리주맙의 효능을 평가하고, PD-L1 발현에 의한 소급적 평가를 포함하지만 이에 제한되지는 않는 탐색적 면역 평가 변수 및 환자 결과와의 연관성을 평가하는 것을 고려하였다.
연구 목표
본 연구의 1차 효능 목표는 다음과 같다:
Figure pct00005
RECIST v1.1에 따라(예컨대, Eisenhauer et al. (2009) “New response evaluation criteria in solid tumors: Revised RECIST guideline (Version 1.1).” Eur J Cancer. 45:228-47을 참조) 시험자가 평가한 무진행 생존 기간(PFS)에 의해 측정된 바와 같이 상기 치료의향(ITT) 군에서 위약 + 카보플라틴 + 에토포시드와 비교하여 아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드의 효능을 평가한다.
Figure pct00006
전체 생존 기간(OS)에 의해 측정된 바와 같이 상기 ITT 군에서 위약 + 카보플라틴 + 에토포시드와 비교하여 아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드의 효능을 평가한다.
본 연구의 2차 효능 목표는 다음과 같다:
Figure pct00007
RECIST v1.1에 따라 시험자가 평가한 전체 반응율(ORR)에 의해 측정된 바와 같이 상기 ITT 군에서 위약　+　카보플라틴　+　에토포시드와 비교하여 아테졸리주맙　+　카보플라틴　+　에토포시드의 효능을 평가한다.
Figure pct00008
RECIST v1.1에 따라 시험자가 평가한 반응 기간(DOR)에 의해 측정된 바와 같이 상기 ITT 군에서 위약　+　카보플라틴　+　에토포시드와 비교하여 아테졸리주맙　+　카보플라틴　+　에토포시드의 효능을 평가한다.
Figure pct00009
상기 ITT 군에 대한 각 치료군에서 6개월 및 1년에 무진행 생존(PFS)율을 평가한다. 상기 ITT 군에 대한 각 치료군에서 1년 및 2년에 전체 생존(OS)율을 평가한다.
Figure pct00010
상기 ITT 군에서 위약　+　카보플라틴　+　에토포시드와 비교하여 아테졸리주맙　+　카보플라틴　+　에토포시드로 치료받은 환자를 대상으로 유럽 암 연구 및 치료기구(European Organization for the Research and Treatment of Cancer, EORTC)의 삶의 질 설문지 코어 30(Quality of Life Questionnaire-Core 30, QLQ-C30) 및 추가 폐암 모듈(QLQ-LC13)을 사용하여 환자가 보고한 기침, 호흡곤란(단일 항목 및 다중 항목 부척도), 흉통, 팔/어깨 통증, 또는 피로의 폐암 증상이 악화되기까지 걸린 시간에 의해 측정된 바대로 아테졸리주맙의 영향을 결정한다.
본 연구의 안전 목표는 다음과 같다:
Figure pct00011
카보플라틴　+　에토포시드와 비교하여 카보플라틴　+　에토포시드와 병용한 아테졸리주맙의 안전성 및 내성을 평가한다.
Figure pct00012
아테졸리주맙에 대한 항-치료 항체(ATA)의 발생률 및 역가를 평가하고, 약동학, 안전성, 및 효능과의 면역원성 반응의 잠재적 관계를 탐색한다.
본 연구의 약동학적 목표는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 가진 화학요법 경험이 없는 환자에서 아테졸리주맙, 카보플라틴, 및 에토포시드의 약동학을 특성화하는 것이다.
본 연구의 탐색 목표는 다음과 같다:
Figure pct00013
상기 ITT군에서 아테졸리주맙-함유 치료군에 대해 시험자가 평가한 PFS, ORR 및 DOR 변형된 RECIST를 평가한다.
Figure pct00014
면역조직화학(IHC) 또는 정량적 역전사 효소-중합효소 연쇄 반응(qRT-PCR)에 의해 정의된 바와 같이 종양 바이오마커(PD-L1, PD-1 및 체세포 돌연변이 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않음), 차세대 염기서열결정(NGS) 및/또는 기타 방법들 및 효능 측정간의 관계를 평가한다.
연구 설계
확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 갖고 있지만 상기 확장 병기 질병에 대한 화학요법 경험이 없는 환자를 대상으로 위약 + 카보플라틴 + 에토포시드의 치료와 비교하여 카보플라틴 + 에토포시드와 병용한 아테졸리주맙의 안전성 및 효능을 평가하기 위해 고안된 무작위, I/III 상, 다기관, 이중 맹검, 위약 대조 연구의 세부 사항이 하기와 같이 기재된다. 도 1은 연구 설계를 도시한다. 상기 연구 설계에 대한 추가적인 세부 사항은 하기의 계획 내에 제공된다:
Figure pct00015
적격 환자는 성별(남성 대 여성), ECOG(즉, 미 동부 종양연구 단체(Eastern Cooperative Oncology Group))의 운동 수행 능력(0 대 1), 뇌 전이의 유무(예 대 아니오)에 따라 층화되고 1:1 무작위 배정을 통해 표5에 나타낸 바와 같이 하기의 치료 요법들 중 하나를 받았다. ECOG 운동 수행 능력에 관한 추가적인 세부 사항은 Oken et al. (1982) Am J Clin Oncol. 5: 649-655)에 제공된다.
연구 치료군
치료군 유도기
(21일 주기 4회)		 유지기
(4주기 이후 모든 21일 주기)
A
(201명의 환자)		 아테졸리주맙　+ 카보플라틴　+　에토포시드 아테졸리주맙
B(202명의 환자) 위약 + 카보플라틴　+　에토포시드 위약
유도 치료는 4주기 동안 21일 주기로 실시되었다. 유도기 이후, 환자들은 아테졸리주맙(A군) 또는 위약(B군)으로 유지 요법을 계속하였다. 상기 유지기 중에, 예방적 두개골 조사는 현지 표준 치료에 따라 허용되었으며 상기 예방적 두개골 조사 전자 사례 보고서 양식(eCRF)에 따라 보고되었다. 치료 의도 또는 잔류 질병을 제거할 의도가 있는 흉부 방사선은 허용되지 않았다. 일시적인 완화 흉부 방사선은 허용되었다. 표 5의 치료 요법에 대한 용량 및 투약 일정은 하기의 표 6에 제공된다.
치료 요법에 대한 용량 및 투약 일정
유도
기		 유지
기
약물
(투약 순서로 나열됨)		 1-4주기* > 4주기*
1일 2일 3일 1일
1) 아테졸리주맙
(A군) 또는
위약(B군)		 1200 mg 1200 mg
2) 카보플라틴 AUC = 5
3) 에토포시드 100 mg/m2 100 mg/m2 100 mg/m2
* 21일 주기
‡ mg/ml/min
임상적으로 가능하다면, 환자는 방사선학적 질병이 진행될 때 종양 생검 샘플 수집을 받도록 권장되었다. 상기 데이터는 방사선 사진 결과가 종양의 존재와 일치하는지 여부를 조사하는 데 사용되었다. 또한, 상기 데이터를 분석하여 종양 조직의 변화 및 임상 결과 사이의 연관성을 평가하고, 아테졸리주맙에 대한 진행 및 내성의 잠재적 메커니즘을 화학요법만으로 치료한 후의 상기 메커니즘과 비교하여 추가로 이해하였다. 상기 탐색적 바이오마커 평가는 치료 관련 결정에 사용되지 않았다.
모든 환자는 치료 용량 지연에 관계없이 1주기, 1일차 후의 48주 동안 기준선에서 그리고 6주(±7일)마다 종양 평가를 받았다. 48주 종양 평가를 완료한 후, 치료 용량 지연에 관계없이 이후 9주(±7일)마다 종양 평가가 요구되었다. 환자는 RECIST v1.1에 따라 방사선학적 질병 진행, 동의 철회, 의뢰자에 의한 연구 종료 또는 사망 중 어느 것이든 먼저 발생한 시점까지 종양 평가를 받았다.
RECIST v1.1에 따라 방사선학적 질병 진행 이상으로 치료를 계속 한 환자는 6주(±7일)마다 지속적으로 또는 증상 악화가 발생한 경우 더 빨리 종양 평가를 받았다. 상기 환자들의 경우, 연구 치료가 중단될 때까지 연구 기간 중의 시점에 상관없이 6주(±7일)마다 종양 평가가 계속되었다.
RECIST v1.1에 따른 방사선학적 질병 진행(예컨대, 독성, 증상 악화) 이외의 이유로 치료를 중단한 환자는, RECIST v1.1에 따라 방사선학적 질병 진행, 동의 철회, 의뢰자에 의한 연구 종료 또는 사망 중 어느 것이든 먼저 발생한 시점까지 환자가 새로운 항암 치료를 시작했는지의 여부와 상관없이, 상기 환자가 연구 치료를 계속 받았다면 뒤이어 진행되었을 것과 동일한 빈도로 예정된 종양 평가를 계속하였다(즉, 1주기, 1일차 이후 48주 동안 매 6주[±7일], 그런 후 치료 용량 지연과 상관없이 매 9주[±7일]).
상기 연구가 조기에 종료되는 경우, 아테졸리주맙 치료로 임상적 이점을 얻고 있던 환자는 시험자의 재량에 따라 아테졸리주맙 치료를 계속할 수 있었다.
결과 측정 기준
본 연구에 대한 1차 효능 결과 측정 기준은 하기와 같다:
Figure pct00016
RECIST v1.1을 사용하여 시험자가 결정한 바와 같이 무작위 배정에서부터 질병 진행의 첫 번째 발생 또는 임의의 원인에 의한 사망 중 어느 것이든 먼저 발생한 시점까지의 시간으로 정의되는, 무진행 생존 기간(PFS).
Figure pct00017
무작위 배정에서부터 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로 정의되는, 전체 생존 기간(OS).
본 연구에 대한 2차 효능 결과 측정 기준은 하기와 같다:
Figure pct00018
RECIST v1.1에 따라 시험자가 결정한 바와 같이 PR 또는 CR로 정의된, 객관적 반응.
Figure pct00019
RECIST v1.1을 사용하여 시험자가 결정한 바와 같이 문서화된 객관적 반응이 처음 발생했을 때부터 질병 진행 시간 또는 임의의 원인에 의한 사망 중 어느 것이든 먼저 발생한 시점까지의 시간 간격으로 정의되는, 반응 기간(DOR).
Figure pct00020
6개월 및 1년의 무진행 생존율(PFS).
Figure pct00021
1년 및 2년의 전체 생존율(OS).
Figure pct00022
2번의 평가 또는 1번의 평가 후 3주 이내에 임의의 원인으로 사망에 이르기까지 유지되어온 유럽 암 연구 및 치료기구의 삶의 질 설문지 C30(EORTC QLQ-C30) 및 EORTC QLQ-LC13 증상 부척도(Berman et al. (1994) Eur J Cancer. 30A(5):635-42를 참조)의 각각에 대한 무작위 배정에서부터 악화(10-점 변화)에 이르기까지의 시간으로 정의된, 환자가 보고한 폐암 증상이 악화되기까지 걸린 시간(TTD).
본 연구에 대한 안전 결과 측정 기준은 하기와 같다:
Figure pct00023
미국국립암학회-이상반응표준용어기준(National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events, NCI CTCAE) v4.0에 따라 등급이 매겨진 이상 반응의 발생률, 성질 및 중증도.
Figure pct00024
연구 치료 투여 중 및 이후의 활력 징후, 신체적 소견 및 임상 실험실 결과에서의 변화.
Figure pct00025
아테졸리주맙에 대한 항-치료 항체(ATA) 반응의 발생률 및 PK, 약력학, 안전성 및 효능 매개 변수와의 잠재적인 상관 관계.
본 연구에 대한 약동학적 결과 측정 기준은 하기와 같다:
Figure pct00026
주입 후 최대로 관찰된 혈청 아테졸리주맙의 농도(Cmax).
Figure pct00027
선택된 주기, 치료 중단시 및 마지막 아테졸리주맙 투여 후 120일(±30일)에 주입 전 최소로 관찰된 혈청 아테졸리주맙의 농도(Cmin).
Figure pct00028
카보플라틴에 대한 혈장 농도.
Figure pct00029
에토포시드에 대한 혈장 농도.
본 연구에 대한 탐구 결과 측정 기준은 하기와 같다:
Figure pct00030
수정된 RECIST에 따라 시험자가 결정한 바와 같은 객관적 반응, 무진행 생존 기간(PFS) 및 반응 기간(DOR).
Figure pct00031
아테졸리주맙 치료 전, 치료 중 또는 치료 후 또는 질병 상태의 진행 및 이의 연관성 및/또는 아테졸리주맙에 대한 반응시 기록 보관 중인 및/또는 신선하게 수득한 종양 조직, 및 혈액(또는 혈액 유도체) 내 PD-L1-, 면역- 및 SCLC-관련 및 기타 탐색적 바이오 마커의 상태.
Figure pct00032
EQ-5D-5L의 효용 점수(즉, 일반 건강 상태 측정을 위한 표준화된 장치; The EuroQol Group (1990) Health Policy 16(3): 199-208)을 참조.)
Figure pct00033
EORTC QLQ-C30 및 QLQ-LC13에 의해 평가된 건강 관련 삶의 질, 폐암 관련 증상, 신체 기능 및 건강 상태에 대한 PRO의 기준선으로부터의 변화.
Figure pct00034
유도 요법 중 및 이후에 말초 및 종양-특이적 T 세포군에 대한 수준 및 유형의 변화, 및 이의 효능 및 안전성.
환자
환자들은 화학요법 경험이 없고 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 가진 경우 본 연구에 참여할 자격이 있다.
선정 기준
주요 선정 기준은 하기와 같다: 18 세 이상; 0 또는 1의 ECOG 수행 능력; 조직학적 또는 세포학적으로 확인된 ES-SCLC(미국보훈부폐연구그룹(Veterans Administration Lung Study Group, VALG)의 병기 체계에 따름); (Micke et al. (2002) “Staging small cell lung cancer: Veterans Administration Lung Study Group versus International Association for the Study of Lung Cancer―what limits limited disease?” Lung Cancer 37:271-6); ES-SCLC에 대한 사전 전신 치료 없음; 제한 병기의 SCLC에 대해 이전에 화학방사선 요법을 받은 환자는 치료 의도로 치료를 받았어야 하며, 확장 병기 SCLC 진단으로부터 마지막 화학요법, 방사선 요법 또는 화학방사선 요법 주기 이후 최소 6개월의 무치료 간격을 경험했어야 함; (a) 전이가 천막위 및/또는 소뇌인 경우(즉, 중뇌, 뇌교, 수질 또는 척수로의 전이가 없음); (b) 환자에게 CNS 질병에 대한 요법으로서 코르티코 스테로이드에 대한 지속적인 요구가 없을 경우, (c) 환자에게 CNS 지시 요법의 완료 및 무작위 배정 사이에 중간 진행의 증거가 없는 경우, 및 (d) 선별검사 스캔에서 검출된 새로운 무증상 CNS 전이가 있는 환자는 방사선 요법 및/또는 CNS 전이에 대한 수술을 받아야 하는 경우에만, 치료된 무증상 중추 신경계(CNS) 전이의 병력이 있는 환자는 적격이 됨; RECIST v1.1에 따라 정의된 바와 같이 측정 가능한 질병(이전에 방사선을 조사한 병변은 방사선 이후 해당 부위에서 질병 진행이 분명하게 문서화되고 이전에 조사된 병변이 질병의 유일한 부위가 아닌 경우에만 측정 가능한 질병으로 간주됨); 무작위 배정 전 14일 이내에 수득한 다음 실험실 시험 결과에 의해 정의된 적절한 혈액학적 및 말기 기관 기능:
o 과립구 집락 자극인자의 지원이 없는 ANC
Figure pct00035
　1500 세포//μL.
o 림프구 수
Figure pct00036
　500/μL.
o 수혈 없는 혈소판 수
Figure pct00037
　100,000/μL.
o 헤모글로빈
Figure pct00038
9.0 g/dL. (환자들은 상기 기준을 충족하기 위해 수혈이 허용되었다.)
o INR 또는 aPTT
Figure pct00039
　1.5
Figure pct00040
　정상 상한치(ULN). (이는 치료적 항응고를 받지 않은 환자에게만 적용되었고; 항응고 치료를 받은 환자는 안정된 용량을 사용하도록 요구되었다.)
o AST, ALT 및 알칼리성 포스파타제
Figure pct00041
　2.5　
Figure pct00042
ULN은 하기와 같은 예외 사항을 두었다:
Figure pct00043
문서로 기록된 간 전이를 가진 환자: AST 및/또는 ALT
Figure pct00044
　5　
Figure pct00045
　ULN.
Figure pct00046
문서로 기록된 간 또는 골 전이를 가진 환자: 알칼리성 포스파타아제
Figure pct00047
　5　
Figure pct00048
　ULN.
o 혈청 빌리루빈
Figure pct00049
　1.25
Figure pct00050
　ULN. (혈청 빌리루빈 수치가
Figure pct00051
　3　
Figure pct00052
lULN인 것으로 알려진 길버트 병 환자가 등록하였다.)
o 혈청 크레아티닌
Figure pct00053
　1.5
Figure pct00054
　ULN.
환자는 무작위 배정 전 또는 이후 4주 이내에 치료 전 종양 조직 샘플을 제출하도록 하였다. (임의의 입수 가능한 종양 조직 샘플을 제출할 수 있었다.)
배제 기준
주요 배제 기준은 하기를 포함하였다: 선별검사 및 사전 방사선 평가 중 컴퓨터 단층 촬영(CT) 또는 자기공명영상(MRI) 평가에 의해 결정된 바에 따른 활성 또는 치료되지 않은 CNS 전이; 수술 및/또는 방사선으로 확정적으로 치료되지 않은 척수 압박 또는 무작위 배정 전
Figure pct00055
1주 동안 질병이 임상적으로 안정적이라는 증거없이 이전에 진단 및 치료된 척수 압박; 연수막 질환; 통제되지 않은 흉막 삼출, 심낭 삼출 또는 반복적인 배액 절차가 필요한 복수(매월 1회 이상, 하지만 유치 카테터(예컨대, PleurXβ)가 있는 환자는 배액 빈도에 관계없이 허용됨); 통제되지 않거나 증상이 있는 고칼슘혈증(무작위 배정 이전에 데노수맙을 투여받은 환자는 자격이 있는 경우 이의 사용을 중단하고 상기 연구 중에 비스포스포네이트로 대체해야 했음); 무작위 배정 전 5년 이내의 SCLC 이외의 악성 종양, 단, 치료적 결과를 예상하고 치료를 받았고 전이 또는 사망 위험이 미미한 경우(예컨대, 5-년의 OS　>　90% 예상)는 예외로 함(예컨대, 자궁 경부, 기저 또는 편평 세포 피부암, 치료 목적으로 외과적으로 치료된 국소 전립선 암, 치료 목적으로 외과적으로 치료된 관내 암종의 제 위치에서 적절하게 치료된 암종); 상기 연구 기간 동안 임신, 수유 중이거나 임신을 계획중인 여성; 중증 근무력증, 근염, 자가 면역 간염, 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 염증성 장 질환, 항인지질 증후군과 관련된 혈관 혈전증, 베게너 육아 종증, 쇼그렌 증후군, 길랭-바레 증후군, 다발성 경화증, 혈관염 또는 사구체 신염을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 병력(갑상선 대체 호르몬 요법에 대한 자가 면역 관련 갑상선 기능 저하증의 병력이 있는 환자는 자격이 있음; 인슐린 요법에서 통제된 제1 형 진성 당뇨병 환자는 자격이 있음); 특발성 폐섬유증, 조직화 폐렴(예컨대, 폐쇄성 세기관지염), 약물-유발성 폐렴, 특발성 폐렴 또는 선별 흉부 CT 스캔에서 활동성 폐렴의 증거의 병력. (방사선 장에서 방사선 폐렴(섬유증)의 병력은 허용됨); HIV 양성 검사 결과; 활동성 B형 간염(만성 또는 급성; 스크리닝에서 양성 B형 감염 표면 항원[HBsAg] 시험 결과를 가진 것으로 정의됨) 또는 C형 감염 바이러스(HCV)를 가진 환자; 활동성 결핵; 감염, 균혈증, 또는 심한 폐렴을 포함하지만 이에 제한되지는 않는, 무작위 배정시 심각한 감염; 무작위 배정 전 3개월 내에 현저한 심혈관 질환, 예컨대, 뉴욕심장협회(New York Heart Association)의 심장 질환(2급 이상), 심근 경색증, 또는 뇌혈관 사고, 불안정한 부정맥, 또는 불안정한 협심증. (공지된 관상 동맥 질환, 상기 기준을 충족하지 못하는 울혈성 심부전 또는 좌심실 박출률 50%가 있는 환자는 적절한 경우 심장 전문의와 상담하여 치료 의사의 소견에 따라 최적화 된 안정적인 의료 요법을 받아야 했음); 무작위 배정 전 28일 이내에 진단을 위한 것 이외의 주요 수술 절차 또는 상기 연구 과정 중 주요 수술 절차의 필요성 예상; 사전 동종 골수 이식 또는 고형 장기 이식; 시험용 약물의 사용을 금하거나 결과 해석에 영향을 주거나 환자에게 치료 합병증의 위험을 높일 수 있는 질병 또는 상태를 합리적으로 의심하게 하는 기타 질병, 대사 기능 장애, 신체 검사 결과, 또는 임상 검사 결과; 연구 절차를 이해하고 따르고/거나 준수하는 능력을 방해하는 질병 또는 상태가 있는 환자; 무작위 배정 전 28일 이내에 치료 목적으로 다른 시험용 제제로 치료; 무작위 배정 전 4주 이내에 약독화 생백신을 투여하였거나 상기 연구 기간 동안 상기 약독화 생백신이 필요할 것으로 예상되는 경우; CD137 작용제 또는 면역 관문 차단 요법, 항-PD-1 및 항-PD-L1 치료 항체를 사용한 사전 치료; 무작위 배정 전 1주 이내에 전신 면역억제 약물(코르티코스테로이드, 시클로포스파미드, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 탈리도마이드 및 항종양 괴사 인자[항-TNF] 제제를 포함하되 이에 제한되지 않는)로 치료; 키메라 또는 인간화 항체 또는 융합 단백질에 대한 심각한 알레르기, 아나필락시스 또는 기타 과민 반응의 병력; 중국 햄스터 난소 세포 또는 아테졸리주맙 제형의 임의의 성분에서 생성된 생물약제에 대한 공지된 과민성 또는 알레르기; 및 카보플라틴 또는 에토포시드에 대한 알레르기 반응의 병력.
치료 방법
403명의 환자를 무작위로 배정(1:1)하여 아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드(A군) 또는 위약 + 카보플라틴 + 에토포시드(B군)로 치료를 받았다. (치료 A군 및 B군의 세부 사항은 상기 표 5에 나타내었다.) 환자 성향은 하기의 표 7에, 환자 인구통계 및 기저 특성들은 하기의 표 8에 나타내었다. (표 7 및 8에서, PBO +CE = “위약 + 카보플라틴 + 에토포시드.” Atezo + CE = “아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드.”
환자 성향
ITT
(N=403)		 PBO+CE
(N=202)		 Atezo+CE
(N=201)
치료 받음 197 (97.5%) 197 (98.0%)
연구 중 60 (29.7%) 77 (38.3%)
생존 : 치료 중 11 (5.4%) 23 (11.4%)
생존 : 추적 중 49 (24.3%) 54 (26.9%)
연구 중지 142 (70.3%) 124 (61.7%)
사망 132 (65.3%) 101 (50.2%)
추적 상실 1 (0.5%) 3 (1.5%)
의사의 결정 0 2 (1.0%)
기권 환자 9 (4.5%) 18 (9.0%)
환자 인구 통게 및 기저 특성들
인구 통계/기저 특성들 PBO=CE
(N=202)		 Atezo+CE
(N=201)
연령(세) <65 106 (52.5%) 111 (55.2%)
성별(IxRS) 남성 132 (65.3%) 130 (64.7%)
인종 백인 159 (78.7%) 163 (81.1%)
아시아인 36 (17.8%) 33 (16.4%)
기타 7 (3.5%) 5 (2.5%)
흡연 이력 없음 3 (1.5%) 9 (4.5%)
뇌 전이(IxRS) 예 16 (7.9%) 16 (8.0%)
기저선 ECOG(IxRS) 1 130 (64.4%) 128 (63.7%)
bTMB >=16 40 (22.5%) 40 (23.1%)
>=10 110 (61.8%) 102 (59.0%)
기전선의 SLD 평균(SD) 116.58 (58.28) 120.90 (58.88)
중간값 105.5 113.0
환자들은 가능한 경우 무작위 배정 당일에 연구 약물의 첫 용량을 투여 받았다. 상기 투여가 가능하지 않은 경우, 첫 번째 용량은 무작위 배정 후 5일 이내에 실시하였다. 아테졸리무맙 및 위약은 의뢰자가 제공하였다. 카보플라틴 및 에토포시드는 배경 치료였으며 비-조사 의약품(NIMP)으로 간주되었다. 카보플라틴 및 에토포시드는 상업적으로 입수 가능한 제형으로 사용하였다.
상기 연구의 유도기는 아테졸리주맙/위약과 화학요법의 4주기로 구성되었으며, 각 주기의 기간은 21일이었다. 도 1을 참조한다. 각 주기의 1일차에 모든 적격 환자에게 하기의 순서로 연구 약물을 주입하였다.
A군: 아테졸리주맙 → 카보플라틴 → 에토포시드
B군: 위약 → 카보플라틴 → 에토포시드
상기 유도기 중에, 연구 치료제는 1일차에 하기와 같은 방식으로 투여하였다:
1. 아테졸리주맙/위약(1200 mg, 평균 체중 기반 용량 15 mg/kg에 해당), 60(±　15) 분에 걸쳐 정맥 투여(첫 번째 주입의 경우이며, 후속 주입의 경우에는 30[[±　10]분으로 단축), 그런 다음
2. 카보플라틴, 5 mg/mL/min의 농도-시간 곡선(AUC) 하에서 초기 표적 영역을 달성하기 위해 30-60 분에 걸쳐 정맥 내로 투여(캘버트 공식 투여), 그런 다음
3. 에토포시드(100 mg/m2), 60분에 걸쳐 정맥 내로 투여.
AUC 5의 카보플?香? 용량은 캘버트 공식(Calvert et al. (1989) J　Clin　Oncol　7:1748-56)을 사용하여 계산하였다:
캘버트 공식:
총 용량(mg)　=　(목표 AUC)　ⅹ　(사구체 여과율[GFR]　+　25)
AUC-기반 용량을 계산하기 위해 상기 캘버트 공식에서 사용된 GFR은 125 mL/min를 초과하지 않았다. 상기 프로토콜의 목적상 상기 GFR은 크레아티닌 청소율(CRCL)과 동등한 것으로 간주되었다. 상기 CRCL은 기관의 지침 또는 콕크로프트 및 가울트(Cockcroft and Gault, 1976)의 Nephron 16 : 3141에 설명된 방법에 따라 하기의 공식을 사용하여 계산된다.
Figure pct00056
: CRCL　=　크레아티닌청소율(mL/min)
연령　=　환자의 연령(세)
wt　=　환자의 체중(kg)
Scr　=　혈청 크레아티닌(mg/dL)
혈청 크레아티닌 수치가 비정상적으로 낮은 환자의 경우, 최소 크레아티닌 수치 0.8 mg/dL를 사용하여 상기 GFR을 추정하거나 추정된 GFR을 125 mL/min으로 그 상한치가 제한되었다. 의사는 과다 복용으로 인한 잠재적인 독성을 피하기 위해 원하는 노출(AUC)에 대한 카보플라틴 용량을 제한할 것을 권고하였다. 카보플라틴 라벨에 기재된 칼베트 공식을 기반으로 최대 용량은 다음과 같이 계산되었다:
최대 카보플라틴 용량(mg)　=　목표 AUC (mg　ⅹ　min/mL)　ⅹ　(GFR　+　25 mL/min)
상기 최대 용량은 정상 신장 기능을 가진 환자에게 125 mL/min로 그 상한치가 제한된 GFR 추정치를 기반으로 하였다. 이보다 높은 GFR 추정치는 사용되지 않았다. 목표 AUC　=　5의 경우, 상기 최대 용량은 5　ⅹ　150　=　750 mg이었다. 목표 AUC　=　4의 경우, 상기 최대 용량은 4　ⅹ　150　=　600 mg이었다. 카보플라틴 용량에 관한 추가적인 세부 사항은 www(dot)fda(dot)gov/aboutfda/centersoffices/officeofmedicalproductsandtobacco/cder/ucm228974.htm에 제공된다.
상기 유도기 중에, 에토포시드(100 mg/m2)는 2일 및 3일에 60분에 걸쳐 정맥 내로도 투여되었다. 화학요법이 제공되지 않은 주기는 총 유도 화학요법 주기 수 계산에 포함되지 않았다.
상기 유도기 이후, 환자는 아테졸리주맙/위약으로 유지 요법을 시작하였다(즉, 매 후속 21일 주기의 1일 째에 상기 기재된 바와 같이 1200 mg를 주입하였고, 도 1 및 상기 연구 계획을 참조한다). 아테졸리주맙/위약에 대한 용량 변경은 허용되지 않았다.
종양 및 반응 평가
선별 평가는 컴퓨터 단층 촬영(CT) 스캔(금기 사항이 없는 한 구강/IV 대조 포함) 또는 흉부 및 복부의 자기 공명 영상(MRI)을 포함하였다. 골반의 CT 또는 MRI 스캔은 스크리닝시 및 임상적으로 권고된 대로 또는 후속 반응 평가에서 현지 표준 치료에 따라 요구되었다. 가능한 경우, 흉부의 나선형 CT 스캔을 수득하였지만, 필수 사항은 아니었다.
모든 환자에게서 중추 신경계 전이를 평가하기 위해 스크리닝시 CT(금기 사항이 아닌 경우 조영제 포함) 또는 MRI 스캔이 요구되었다. 모호한 스캔의 경우 기준선에서 CNS 전이의 진단을 확인하거나 반박하기 위해 뇌의 MRI 스캔이 요구되었다. 활성 또는 치료되지 않은 CNS 전이가 있는 환자는 상기 연구에 적합하지 않았다(배제 기준을 참조).
종양 평가를 위한 CT 스캔이 양전자 방출 단층촬영(PET)/CT 스캐너에서 실시되면, CT 취득은 전체 대비 진단 CT 스캔을 위한 표준과 일치해야 한다.
임상적으로 권고되는 경우, 목의 뼈 스캔 및 CT 스캔도 실시하였다. 시험자의 재량에 따라, RECIST v1.1에 따라 측정가능한 질병에 대한 다른 평가 방법이 사용될 수 있다.
사전 동의를 얻기 전과 1주기, 1일 후 28일 이내에 표준 치료로 실시된 종양 평가를 반복 테스트 대신 사용하는 것이 허용되었다. 스크리닝시 공지된 모든 질병 부위에 대한 문서화가 필요했으며 이후의 각 종양 평가에서 문서를 재평가하였다. 스크리닝시 질병 부위를 평가하는데 사용된 동일한 방사선 절차를 연구 내내 사용해야 했다(예컨대, CT 스캔을 위한 동일한 조영제 프로토콜). 반응은 RECIST v1.1(Eisenhauer et al. (2009) New response evaluation criteria in solid tumors: Revised RECIST guideline(Version 1.1)을 사용하여 시험자가 평가하였다. Eur J Cancer. 45: 228-47) 및 수정된 RECIST 기준. 수정된 RECIST 기준은 RECIST v1.1(Eisenhauer et al.; Topalian et al. (2012) N Engl J Med. 366: 2443-54; 및 Wolchok et al. (2009) Clin Can Res 15: 7412-20) 및 immune-related response criteria (Wolchoik et al.; Nishino et al. (2014) J Immunother Can. 2:17; 및 Nishino et al. (2013) Clin Can Res. 19:3936-43)으로부터 도출되었다. 평가는 가능하다면 방문을 통해 내부 일관성을 확보하기 위해 동일한 평가자가 실시하였다. 결과는 다음 주기의 용량 전에 시험자가 검토하였다.
환자들은 치료 용량 지연에 관계없이 1주기, 1일 후의 48주 동안 기준선에서 그리고 6주(±7일)마다 종양 평가를 받았다. 48주 종양 평가를 완료한 후, 치료 용량 지연에 관계없이 이후 9주(±7일)마다 종양 평가가 요구되었다. 환자는 RECIST v1.1에 따라 방사선학적 질병 진행, 동의 철회, 의뢰자에 의한 연구 종료 또는 사망 중 어느 것이든 먼저 발생한 시점까지 종양 평가를 받았다. RECIST v1.1에 따라 방사선학적 질병 진행 이상으로 치료를 계속 한 환자는 6주(7일)마다 지속적으로 또는 증상 악화가 발생한 경우 더 빨리 종양 평가를 받았다. 상기 환자들의 경우, 연구 치료가 중단될 때까지 연구 중의 시점에 관계없이 6주(±7일)마다 종양 평가가 계속되었다.
RECIST v1.1에 따른 방사선학적 질병 진행(예컨대, 독성, 증상 악화) 이외의 이유로 치료를 중단한 환자는, RECIST v1.1에 따라 방사선학적 질병 진행, 동의 철회, 의뢰자에 의한 연구 종료 또는 사망 중 어느 것이든 먼저 발생한 시점까지 환자가 새로운 항암 치료를 시작했는지의 여부와 상관없이, 상기 환자가 연구 치료를 계속 받았다면 뒤이어 진행되었을 것과 동일한 빈도로 예정된 종양 평가를 계속하였다(즉, 1주기, 1일 이후 48주 동안 매 6주[±7일], 그런 후 치료 용량 지연과 상관없이 매 9주[±7일]).
결과
상기 연구의 결과는 하기의 표 9에 제시된다:
1차 효능 평가 변수의 요약
ITT PBO+CE
(N=202)		 Atezo+CE
(N=201)
OS 중간값(월) 10.3 12.3
층화 HR(95% CI)
층화 로그 순위 p		 0.7 (0.54, 0.91)
p=0.0069
PFS 중간값(월) 4.3 5.2
층화 HR(95% CI)
층화 로그 순위 p		 0.77 (0.62, 0.96)
p= 0.017
표 9는 상기 연구가 RCECIST v1.1에 따라 전체 생존 기간(OS) 및 시험자가 평가한 무진행 생존 기간(PFS)의 공동 1차 평가 변수를 충족하였음을 보여준다. 전체 생존의 개선은 통계적으로 유의하고 임상적으로 의미가 있다.
Atezo + CE로 치료받은 환자들은 위약 + CE로 치료받은 환자와 비교하여 전체 생존 기간이 연장되었다. 도 2를 참조한다. Atezo + CE를 받은 환자의 6개월 전체 생존 기간(OS)은 85.8%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 82.8%였다. Atezo + CE를 받은 환자의 12개월 전체 생존 기간(OS)은 51.7%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 38.2%였다. Atezo + CE로 치료받은 환자들 역시 위약 + CE로 치료받은 환자와 비교하여 전체 생존 기간이 연장되었다. 도 3을 참조한다. Atezo + CE를 받은 환자의 6개월 무진행 생존 기간(PFS)은 30.9%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 22.4%였다. Atezo + CE를 받은 환자의 12개월 무진행 생존 기간(PFS)은 12.6%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 5.4%였다.
Atezo + CE로 치료받은 환자의 1년 전체 생존율은 51.7%였고, 위약 + CE를 투여받은 환자의 1년 전체 생존율은 38.2%였다.
또한, 상기 전체 반응률(ORR)은 두 치료군 간에 유사하였으며, 아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드를 투여받은 환자에게서 ORR은 60%로 확인되었으며, 위약 + 카보플라틴 + 에토포시드을 투여받은 환자에게서는 64%였다(CR : 아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드 군에서 2.5% 대 위약 + 카보플라틴 + 에토포시드군에서 1%). 도 4를 참조한다(CR = 완전 반응, CR/PR = 완전 반응/부분 반응, SD = 안정 질병, PD = 진행성 질병) 하기의 표 10을 또한 참조한다. 반응 기간(DOR) 역시 두 치료군 간에 유사하였으며, 상기 아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드군의 경우 반응기간(DOR)은 4.2개월이었고, 상기 위약 + 카보플라틴 + 에토포시드군의 경우 3.9개월이었다. 전체 생존율(ORR) 및 반응 기간(DOR)은 RECIST v1.1 기준에 따라 평가하였다.
확인된 시험자 평가 객관적 반응률 및 반응 기간(기준선에서 측정 가능한 질병이 있는 치료 의향 집단).
변수 아테졸리주맙
군 		위약
군
반응†
평가 가능한 환자의 수 201 202
객관적으로 확인된 반응 ― 수. (%) 121 (60.2 [53.1-67.0]) 130 (64.4 [57.3-71.0])
완전 5 (2.5 [0.8-5.7]) 2 (1.0 [0.1-3.5])
부분 116 (57.7 [50.6-64.6]) 128 (63.4 [56.3-70.0])
안정 질병 ― 수. (% [95% CI]) 42 (20.9 [15.5-27.2]) 43 (21.3 [15.9-27.6])
진행성 질병 ― 수. (% [95% CI]) 22 (10.9 [7.0-16.1]) 14 (6.9 [3.8-11.4])
데이터가 누락되었거나 평가할 수 없는 환자 ― 수. (%) 16 (8.0) 15 (7.4)
반응 기간‡
평가 가능한 환자의 수 121 130
중간 반응 기간(범위) ― 수 4.2 (1.4+-19.5) 3.9 (2.0-16.1+)
데이터 마감일에 진행 중인 반응을 가진 환자 ― 수. (%) 18 (14.9) 7 (5.4)
객관적 반응은 RECIST v1.1 기준에 따라 시험자가 결정한 바와 같이 완전한 반응 또는 부분 반응으로 정의되었다.
반응 기간은 객관적인 반응을 가진 환자들 중에 평가되었고, RECIST를 사용하여 시험자가 결정한 바와 같이 문서화된 객관적 반응이 처음 발생했을 때부터 질병 진행 시간 또는 임의의 원인에 의한 사망 중 어느 것이든 먼저 발생한 시점까지의 시간으로 정의되었다.
+는 중도 절단 관측을 나타내고; CI는 신뢰 구간을 나타낸다.
전체 생존 기간(OS)의 이점 및 무진행 생존 기간(PFS)의 이점은 분석된 모든 하위군에서 관찰되었다. 도 5 및 6을 각각 참조한다. 전체 생존 기간(OS)의 이점은 혈액 종양 돌연변이 부담(bTMB)에 관계없이 관찰되었다. bTMB>16인 각 치료군에서 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯(Kaplan-Meier Plot)을 도시한 도 7a 대 bTMB <16 인 각 치료군에서 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한 도 7b를 참조한다.
bTMB>10인 각 치료군에서 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한 도 8a 대 bTMB<10인 각 치료군에서 환자의 전체 생존 기간(OS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한 도 8b를 참조한다.
유사하게, 무진행 생존 기간(PFS)의 이점은 혈액 종양 돌연변이 부담(bTMB)에 관계없이 관찰되었다. bTMB>16인 각 치료군에서 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한 도 9a 대 bTMB<16 인 각 치료군에서 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한 도 9b를 참조한다. bTMB>10인 각 치료군에서 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한 도 10a 대 bTMB<10인 각 치료군에서 환자의 무진행 생존 기간(PFS)에 대한 카플란-마이어 플롯을 도시한 도 10b를 참조한다.
아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드를 투여받은 환자의 안전성 프로파일을 개별 치료 성분의 공지된 위험과 일치하였다. 새로운 안전 신호가 확인되지 않았다. 화학요법 노출은 두 치료군에서 유사했으며, 이는 아테졸리주맙의 투여가 아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드 치료 요법에서 카보플라틴 + 에토포시드의 전달을 손상시키지 않았음을 시사한다. 골수 억제와 관련된 독성(예컨대, 호중구 감소증 및 혈소판 감소증)은 두 치료군간에 일관되었으며 화학요법과 관련된 비율과 일치하였다.
상기 연구는 아테졸리주맙과 화학요법(카보플라틴 및 에토포시드)의 조합을 사용한 초기(1차) 치료가 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC) 환자가 단독 화학요법에 비하여 유의미하게 더 오래 살 수 있도록 도움을 주었다는 것을 보여주었다. 상기 아테졸리주맙과 화학요법(카보플라틴 및 에토포시드) 조합은 또한 단독 화학요법에 비하여 질병 악화 또는 사망(PFS) 위험을 줄였다. 이는 확장 병기의 소세포 폐암, 특히 치료가 어려운 유형의 질병의 초기 치료에서 면역 요법 기반 조합을 사용한 동시 치료에 대한 최초의 양성 생존 결과이다. 또한, 이는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)의 초기 치료에서 단독 화학요법에 비하여 전체 생존이 임상적으로 및 통계적으로 유의미하게 개선되었음을 보여주는 지난 20년 간의 첫 연구이다. 1년간의 생존율은 아테졸리주맙 군에서 13% 더 높았으며, 이는 치명적인 질병에서 장기 생존의 이점의 가능성을 시사하였다.
실시예 2: 실시예 1로부터 환자가 보고한 결과(PRO)
실시예 1에 기재된 상기 연구에 참여한 환자들은 유럽 암 연구 및 치료기구(European Organization for the Research and Treatment of Cancer, EORTC)의 삶의 질 설문지 C30(EORTC QLQ-C30) 및 삶의 질 설문지 LC13(Quality of Life Questionnaire LC13, QLQ-C30)을 기준선에서 그리고 이후 매 3주마다 완성하였다. 분석은 기준선으로부터의 변화, 12주차까지의 변화에 대한 누적 분포 함수 곡선 및 악화되기까지 걸린 시간(TTD)을 포함하였다. 임상적 의미는 기준선(점수 범위 0-100)로부터의 ≥10점의 변화를 기반으로 하였다.
완료율은 상기 연구의 두 군 모두에서 기준선에서 ≥85% 및 75주까지 ≥70%였다. 기준선의 환자가 보고한 결과 점수는 두 군에서 비슷하였다. 두 군의 환자는 위약 + CE에 비하여 Atezo + CE가 수치 상으로 더 많이 개선되는 경향을 보이면서 조기에 현저한 증상 개선을 보고하였다. 표 11 참고. 12주차까지, 위약 + CE를 투여받은 환자에 비하여 Atezo + CE를 투여받은 환자의 더 높은 비율이 폐암(LC) 관련 증상이 완화되었다고 보고하였다(표 11를 참조). 기침 또는 흉통의 TTD에서 뚜렷한 차이는 관찰되지 않았지만, 호흡 곤란의 TTD에서 수치상 지연이 Atezo + CE를 투여받는 환자에게 유리하였다(HR 0.75 [95 % CI 0.55-1.02]). Atezo + CE군의 환자들은 54주차까지 대부분의 방문에서 지속된 신체/역할 기능 및 건강 관련 삶의 질(HRQoL; ≥10점 증가)의 개선을 보고하였다. 치료 관련 증상(예컨대, 설사, 메스꺼움/구토)의 변화는 두 군 사이에서 유사하였다.
Atezo + CE를 사용한 1차 치료는 위약 + CE 치료에 비하여 환자가 보고한 폐암 증상의 즉각적이고 가시적인 개선 외에도 전체 생존 기간(OS) 및 무진행 생존 기간(PFS)의 이점을 제공하였다. 환자는 치료 독성으로 인한 영향을 최소화하면서 지속적인 기능 및 건강 관련 삶의 질 개선을 나타내는 결과를 보고하였고, 따라서 1차 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 Atezo + CE를 추가하는 것의 긍정적인 이득:위험을 더욱 뒷받침하였다.
12주까지의 평균 변화의 범위(음의 변화는 증상의 개선을 나타냄)
Atezo + CE (n=124) 위약 + CE (n=131)
팔/어깨 통증 -7.0 -2.5
흉통 -7.8 -4.1
기침 -14.8 -15.5
호흡곤란 -6.5 -2.3
실시예 3: 전체 생존 기간(OS)에 의해 측정된 바와 같이 상기 ITT 군에서 위약 + 카보플라틴 + 에토포시드와 비교하여 아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드의 효능에 관한 추가적인 데이터
전체 생존 기간(OS)에 의해 측정된 바와 같이 상기 ITT 군에서 위약 + 카보플라틴 + 에토포시드와 비교하여 아테졸리주맙 + 카보플라틴 + 에토포시드의 효능에 관한 추가적인 데이터가 하기에 기재된다.
6-, 12-, 18-, 및 24-개월의 전체 생존
실시예 1에서 논의된 바와 같이, Atezo + CE로 치료받은 환자들은 위약 + CE로 치료받은 환자와 비교하여 전체 생존 기간이 연장되었다. 도 2를 참조한다. Atezo + CE를 받은 환자의 6개월 전체 생존 기간(OS)은 85.8%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 82.8%였다. Atezo + CE를 받은 환자의 12개월 전체 생존 기간(OS)은 51.7%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 38.2%였다. Atezo + CE로 치료받은 환자들 역시 위약 + CE로 치료받은 환자와 비교하여 전체 생존 기간이 연장되었다. 도 3을 참조한다. Atezo + CE를 받은 환자의 6개월 무진행 생존 기간(PFS)은 30.9%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 22.4%였다. Atezo + CE를 받은 환자의 12개월 무진행 생존 기간(PFS)은 12.6%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 5.4%였다. Atezo + CE로 치료받은 환자의 1년 전체 생존율은 51.7%였고, 위약 + CE를 투여받은 환자의 1년 전체 생존율은 38.2%였다.
무작위 배정 후 22.9개월에 실시된 추가 분석에서, Atezo + CE로 치료된 환자들의 전체 생존 기간(OS) 중간값은 약 23.3개월이었고, 위약 + CE로 치료된 환자들의 전체 생존 기간(OS) 중간값은 10.3 개월이었다(층화된 HR(95% CI) = 0.755 (0.601, 0.949); 층화된 로그 순위 p- 값 - 0.0154). 22.9개월 추적에서 Atezo + CE로 치료된 환자 대 위약 + CE로 치료된 환자의 6개월, 12개월, 18개월 및 24개월 전체 생존율이 하가의 표 12에 제공된다:
갱신된 전체 생존 분석
PBO+CE
(n=202)		 Atezo+CE
(n=201)
6개월 82.8%
(n=160)		 85.8%
(n=159)
12개월 39.0%
(n=74)		 51.9%
(n=93)
18개월 21.0%
(=39)		 34.0%
(n=61)
24개월 16.8%
(n=8)		 22.0%
(n=21)
실시예 1에서 앞서 기재된 바와 같이, Atezo + CE를 받은 환자의 6개월 전체 생존 기간(OS)은 85.8%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 82.8%였다. Atezo + CE를 받은 환자의 12개월 전체 생존 기간(OS)은 51.9%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 39%였으며, 이는실시예 1에 기재된 결과와 매우 유사하다. Atezo + CE를 받은 환자의 18개월 전체 생존 기간(OS)은 34%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 21%였다. Atezo + CE를 받은 환자의 24개월 전체 생존 기간(OS)은 22%였고, 위약 + CE를 받은 환자의 경우는 16.8%였다.
하위군 분석
추가로 업데이트된 하위군 분석 데이터가 도 11a -11C에 제공된다. 실시예 1에서 관찰된 전체 생존 기간(OS)의 이점은, 예컨대, 65 세 미만, 65-74세 사이, 75-84세 사이, 및 85세 이상의 환자들; 남성 및 여성 환자 모두에서; 아메리카 원주민, 알래스카인, 아시아인, 흑인, 아프리카계 미국인, 및 백인 환자; 한번도 흡연을 하지 않은 환자, 현재 흡연을 하는 환자, 및 이전에 흡연을 한 적이 있는 환자; 뇌(등록시), 폐(등록시), 간(등록시), 림프절(등록시), 및/또는 부신(등록시)에 전이가 있거나 없는 환자들; 그리고 bTMB에 관계없이 모든 환자들을 포함하여 분석된 모든 하위군에서 확인되었다.
바이오마커 하위군 분석
PD-L1 발현에 대해 질병이 선택되지 않은 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC) 환자들은 실시예 1에 기재된 시험에 등록되었다. 실시예 1에 기재된 바와 같이, 가능한 경우, 종양 바이오 마커(예컨대, PD-L1) 및 치료에 대한 반응 사이의 관계를 평가하기 위하여, 분석을 위한 시험에 등록된 환자들로부터 치료 전 종양 조직 샘플을 수득하였다. 바이오마커 평가 가능한 환자들 사이의 PD-L1 유병률은 표 13에 나타내었다.
바이오마커 평가 가능한 환자들의 PD-L1 유병률
PBO+CE
(n=202)		 Atezo + CE
(n=201)		 총
(n=403)
BEP1 (섹션 연령 <=1년) 73 (36%) 64 (32%) 137 (34%)
TC>=50% 또는 IC>=50% 0 0 0
TC>=25% 또는 IC>=25% 0 1 (1.6%) 1 (0.7%)
TC>=5% 또는 IC>=5% 14 (19.2%) 15 (23.4%) 29 (21.2%)
TC>=1% 또는 IC>=1% 36 (49.3%) 36 (56.3%) 72 (52.6%)
TC<1% 및 IC<1% 37 (50.7%) 28 (43.8%) 65 (47.4%)
BEP2 (임의의 섹션 연령) 93 (46%) 75 (37%) 168 (42%)
TC>=50% 또는 IC>=50% 0 0 0
TC>=25% 또는 IC>=25% 0 1 (1.3%) 1 (0.6%)
TC>=5% 또는 IC>=5% 22 (23.7%) 17 (22.7%) 39 (23.2%)
TC>=1% 또는 IC>=1% 51 (54.8%) 42 (56.0%) 93 (55.4%)
TC<1% 및 IC<1% 42 (45.2%) 33 (44.0%) 75 (44.6%)
TC = 종양 세포 상에서의 PD-L1 발현
IC = 종양 침윤 면역 세포 상에서의 PD-L1 발현.
BEP1은 IHC 염색 전 1년 이하의 절개된 종양 조직 슬라이드에서 수득한 유효한 PD-L1 면역 조직 화학(IHC) 결과를 가진 시험에서 바이오마커 평가가능한 환자들을 지칭한다. BEP2는 IHC 염색 시 슬라이드 연령과 상관없이 종양 조직 슬라이드에서 수득한 유효한 PD-L1 면역 조직 화학(IHC) 결과를 가진 시험에서 바이오마커 평가가능한 환자들을 지칭한다. 다양한 컷오프(cutoff)에서 PD-L1 유병률에 대한 백분율은 BEP1/2를 기반으로 한다. BEP1 및 BEP2의 인구 통계학 및 기저 특성들은 일반적으로 치료군간에 균형을 이루었다. 표 14 및 15를 참조한다.
BEP1의 인구통계 및 기저 특성들
인구통계/기저선 PBO+CE
(n=73)		 Atezo+CE
(n=64)
연령(세) <65 43 (58.9%) 41 (64.1%)
성별(eCRF) 남성 46 (63.0%) 39 (60.9%)
인종 백인 71 (97.3%) 64 (100.0%)
아시아인 NA NA
흡연 이력 없음 1 (1.4%) 5 (7.8%)
뇌 전이(eCRF) 예 4 (5.5%) 3 (4.7%)
ECOG 점수(eCRF) 0 24 (32.9%) 21(32.8%)
bTMB>=16 예 13 (19.1%) 15 (25.9%)
bTMB>=10 예 38 (55.9%) 36 (62.1%)
기전선의 SLD 중간값 최소-최대 123
(26.0 - 353.0)		 125.5
(12.0 - 325.0)
BEP2의 인구통계 및 기저 특성들
인구통계/기저선 PBO+CE (n=93) Atezo+CE (n=75)
연령(세) <65 53 (57.0%) 46 (61.3%)
성별(eCRF) 남성 60 (64.5%) 44 (58.7%)
인종 백인 81 (87.1%) 73 (97.3%)
아시아인 10 (10.8%) 2 (2.7%)
흡연 이력 없음 1 (1.1%) 6 (8.0%)
뇌 전이(eCRF) 예 5 (5.4%) 5 (6.7%)
ECOG 점수(eCRF) 0 32 (34.4%) 23 (30.7%)
bTMB>=16 예 20 (23.3%) 20 (29.4%)
bTMB>=10 예 52 (60.5%) 44 (64.7%)
기전선의 SLD 중간값 최소-최대 116
(26.0 - 353.0)		 122
(12.0 - 325.0)
SLD = 표적 병변(종양)의 가장 긴 지름의 합
Atezo + CE로 치료받은 BEP1 및 BEP2의 모든 환자는 위약 + CE로 치료받은 BEP1 및 BEP2 환자에 비하여 무진행 생존 기간(PFS)의 이점을 보여주었다. 도 12a 및 도 12b에서 도시된 바와 같이, 상기 무진행 생존 기간(PFS)의 이점은 위약 + CE를 받은 환자와 비교하여 Atezo + CE로 치료된 BEP1 및 BEP의 환자에게서도 관찰되었다. 또한, PD-L1 발현 수준이 1% 미만인 BEP1 및 BEP2의 환자들 중 Atezo + Ce를 받은 환자의 전체 반응률(ORR)이 위약 + Ce를 받은 환자들의 ORR보다 높았다. 표 16를 참조한다.
PD-L1 발현이 1% 미만인 환자들의 전체 반응률
BEP1 위약 + CE
(n = 73)		 Atezo+CE
(n = 64)
확인된 ORR
TC< 1% 및 IC < 1%		 62.2% 75.0%
확인된 ORR
TC< 1% 및 IC < 1%		 70.3% 82.1%
BEP2 위약 + CE
(n = 73)		 Atezo+CE
(n = 64)
확인된 ORR
TC< 1% 및 IC < 1%		 66.7% 78.8%
확인된 ORR
TC< 1% 및 IC < 1%		 73.8% 84.8%
Atezo + CE로 치료받은 BEP1 및 BEP2의 모든 환자는 위약 + CE로 치료받은 BEP1 및 BEP2 환자에 비하여 전체 생존 기간(OS)의 이점을 보여주었다. 도 13a 및 도 13b에서 도시된 바와 같이, 상기 무진행 생존 기간(PFS)의 이점은 위약 + CE를 받은 환자와 비교하여 Atezo + CE로 치료된 BEP1 및 BEP의 환자에게서도 관찰되었다.
따라서, PD-L1 음성 하위군(즉, 종양 세포 또는 종양 침윤 면역 세포에서 1% 미만의 PD-L1 발현을 갖는 환자들)은 위약 + CE로 치료받은 환자들과 비교하여 Atezo + CE 치료로부터 임상적 이점을 도출한 것으로 밝혀졌다. 상기 결과는 모든 사람의 치료 이점을 나타낸다.
비록 본 발명이 이해의 명료함을 위해 예시와 실례에 의하여 일부 상세하게 설명되긴 했지만, 이들 설명과 실례는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 내용은 그 전체가 참고문헌으로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> Genentech, Inc. <120> METHODS OF TREATING LUNG CANCER WITH A PD-1 AXIS BINDING ANTAGONIST, A PLATINUM AGENT, AND A TOPOISOMERASE II INHIBITOR <130> 14639-20449.40 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 62/736,326 <151> 2018-09-25 <150> US 62/719,461 <151> 2018-08-17 <150> US 62/689,105 <151> 2018-06-23 <160> 20 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His 1 5 10 <210> 2 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys Gly <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr 1 5 <210> 7 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 9 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 9 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 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Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 16 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 16 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 115 120 125 Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr 130 135 140 Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys 145 150 155 160 Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 165 170 175 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 17 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly 225 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Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro 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Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (54)

  1. 유효량의 항-PD-L1 항체, 백금 제제, 및 토포이소머라제 II 억제제를 폐암을 가진 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 폐암을 가진 개체를 치료하는 방법이며,
    상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS)을 연장시키는 것인 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 연장시키는 것인 방법.
  3. 유효량의 항-PD-L1 항체, 백금 제제, 및 토포이소머라제 II 억제제를 폐암을 가진 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 폐암을 가진 개체를 치료하는 방법이며,
    상기 치료는 상기 개체의 전체 생존 기간(OS)을 연장시키는 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 치료는 상기 개체의 상기 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5개월만큼 연장시키는 것인 방법.
  5. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 치료는 상기 개체의 상기 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 11개월만큼 연장시키는 것인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-L1 항체는,
    (a) GFTFSDSWIH(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1,
    AWISPYGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-2, 및
    아미노산 RHWPGGFDY(서열 번호 3)를 포함하는 HVR-3
    을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH); 및
    (b) RASQDVSTAVA(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1,
    SASFLYS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및
    QQYLYHPAT(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3
    을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)
    을 포함하는 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-L1 항체는
    서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및
    서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)
    을 포함하는 것인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙인 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백금 제제는 카보플라틴 또는 시스플라틴인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 백금 제제는 카보플라틴인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 토포이소머라제 II 억제제는 에토포시드, 테니포시드, 독소루비신, 다우노루비신, 미톡산트론, 암사크린, 엘립티신, 아우린트리카르복실산, 또는 HU-331인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 토포이소머라제 억제제는 에토포시드인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-PD-L1 항체는 1200 mg의 용량으로 투여되고,
    상기 백금 제제는 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되고,
    상기 토포이소머라제 II 억제제는 100 mg/m2의 용량으로 투여되는 것인
    방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-PD-L1 항체, 상기 백금 제제, 및 상기 토포이소머라제 II 억제제는 21일 주기로 4회 투여되며,
    상기 항-PD-L1 항체는 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여되고,
    상기 백금 제제는 1일차에 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되고,
    상기 토포이소머라제 II 억제제는 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차, 2일차, 및 3일차에 각각 100 mg/m2의 용량으로 투여되는 것인
    방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 항-PD-L1 항체는 4주기 이후에 추가로 투여되며, 4주기 이후에 주기 별로 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-L1 항체, 상기 백금 제제, 및 상기 토포이소머라제 II 억제제는 1 내지 4주기의 1일차에 순차적으로 투여되는 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 항-PD-L1 항체는 상기 백금 제제 이전에 투여되며,
    상기 백금 제제는 1 내지 4주기의 1일차에 상기 토포이소머라제 II 억제제 이전에 투여되는 것인
    방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐암은 소세포 폐암(SCLC)인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 소세포 폐암(SCLC)은 확장 병기(extensive stage)의 소세포 폐암(ES-SCLC)인 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 개체는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 대한 치료 경험이 없는(treatment-naive) 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 약 10인 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 약 16인 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐암은 뇌로 전이된 것인 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐암은 간으로 전이된 것인 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐암은 림프절로 전이된 것인 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐암은 부신으로 전이된 것인 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 65세 이상인 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 PD-L1 음성인 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 환자는, 환자로부터의 샘플에서 종양 세포 또는 종양 침윤 면역 세포의 1% 미만이 PD-L1을 발현하는 경우에 PD-L1 음성인 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-L1 항체, 상기 백금 제제, 및 상기 토포이소머라제 II 억제제는 각각 정맥 내로 투여되는 것인 방법.
  31. 유효량의 아테졸리주맙, 카보플라틴, 및 에토포시드를 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 가진 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 가진 개체를 치료하는 방법이며,
    상기 아테졸리주맙은 1200 mg의 용량으로 투여되고,
    상기 카보플라틴은 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되고,
    상기 에토포시드는 100 mg/m2의 용량으로 투여되고,
    상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및 전체 생존 기간(OS)을 연장시키는 것인
    방법.
  32. 제31항에 있어서,
    아테졸리주맙, 카보플라틴, 및 에토포시드는 21일 주기로 4회 투여되고, 상기 아테졸리주맙은 4주기 이후에 추가로 투여되며,
    상기 아테졸리주맙은 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 투여되고,
    상기 카보플라틴은 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되고,
    상기 에토포시드는 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차, 2일차, 및 3일차에 각각 100 mg/m2의 용량으로 투여되고,
    상기 아테졸리주맙은 4주기 이후에 주기 별로 매 21일 주기의 1일차에 1200 mg의 용량으로 추가로 투여되는 것인
    방법.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 상기 개체는 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)에 대한 치료 경험이 없는 것인 방법.
  34. 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료는 상기 개체의 상기 무진행 생존 기간(PFS)을 적어도 약 5개월만큼 연장시키는 것인 방법.
  35. 제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료는 상기 개체의 상기 전체 생존 기간(OS)을 적어도 약 11개월만큼 연장시키는 것인 방법.
  36. 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 약 10인 방법.
  37. 제36항에 있어서, 상기 개체는 혈액 종양변이부담(bTMB)이 적어도 약 16인 방법.
  38. 제31항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)은 뇌로 전이된 것인 방법.
  39. 제31항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)은 간으로 전이된 것인 방법.
  40. 제31항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐암은 림프절로 전이된 것인 방법.
  41. 제31항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐암은 부신으로 전이된 것인 방법.
  42. 제31항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 65세 이상인 방법.
  43. 제31항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 PD-L1 음성인 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 환자는, 환자로부터의 샘플에서 종양 세포 또는 종양 침윤 면역 세포의 1% 미만이 PD-L1을 발현하는 경우에 PD-L1 음성인 방법.
  45. 제31항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아테졸리주맙, 상기 카보플라틴, 및 상기 에토포시드는 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 순차적으로 투여되는 것인 방법.
  46. 제45항에 있어서,
    상기 아테졸리주맙은 상기 카보플라틴 이전에 투여되며,
    상기 카보플라틴은 1 내지 4주기 동안 매 21일 주기의 1일차에 상기 에토포시드 이전에 투여되는 것인
    방법.
  47. 제31항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아테졸리주맙, 상기 카보플라틴, 및 상기 에토포시드는 각각 정맥 내로 투여되는 것인 방법.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 인간인 방법.
  49. 백금 제제 및 토포이소머라제 II 억제제와 병용으로 사용하기 위한 항-PD-L1 항체를 포함하는, 제1항 내지 제30항 및 제48항 중 어느 한 항에 따른 방법에 따라 폐암을 가진 개체를 치료하기 위한 키트.
  50. 카보플라틴 및 에토포시드와 병용으로 사용하기 위한 아테졸리주맙을 포함하는, 제31항 내지 제48항 중 어느 한 항에 따른 방법에 따라 폐암을 가진 개체를 치료하기 위한 키트.
  51. 유효량의 항-PD-L1 항체, 백금 제제, 및 토포이소머라제 II 억제제를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 폐암을 치료하는 방법에 사용하기 위한 항-PD-L1 항체이며,
    상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및/또는 전체 생존 기간(OS)을 연장시키는 것인 항-PD-L1 항체.
  52. 제51항에 있어서, 제2항 내지 제30항 및 제48항 중 어느 한 항에 따른 방법에 사용하기 위한 항-PD-L1 항체.
  53. 유효량의 아테졸리주맙, 카보플라틴, 및 에토포시드를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 확장 병기의 소세포 폐암(ES-SCLC)을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 아테졸리주맙을 포함하는 조성물이며,
    상기 아테졸리주맙은 1200 mg의 용량으로 투여되고,
    상기 카보플라틴은 AUC = 5 mg/ml/min을 달성하기에 충분한 용량으로 투여되고,
    상기 에토포시드는 100 mg/m2의 용량으로 투여되고,
    상기 치료는 상기 개체의 무진행 생존 기간(PFS) 및 전체 생존 기간(OS)을 연장시키는 것인
    조성물.
  54. 제53항에 있어서, 제31항 내지 제48항 중 어느 한 항에 따른 방법에 사용하기 위한 조성물.
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