UA119235C2 - Антитіло анти-рецептор трансферину і способи його застосування - Google Patents

Антитіло анти-рецептор трансферину і способи його застосування Download PDF

Info

Publication number
UA119235C2
UA119235C2 UAA201512536A UA201512536A UA119235C2 UA 119235 C2 UA119235 C2 UA 119235C2 UA A201512536 A UAA201512536 A UA A201512536A UA 201512536 A UA201512536 A UA 201512536A UA 119235 C2 UA119235 C2 UA 119235C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
amino acid
sequence
antibodies
human
Prior art date
Application number
UAA201512536A
Other languages
English (en)
Inventor
Їнь Чжан
Джой Ю Зучеро
Джасвіндер Етвол
Джесіка Коуч
Марк Деніс
Джеймс Ернст
Райан Вотс
Грегорі А. Лазар
Original Assignee
Дженентек, Інк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дженентек, Інк. filed Critical Дженентек, Інк.
Publication of UA119235C2 publication Critical patent/UA119235C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2881—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Abstract

Винахід стосується антитіла анти-рецептор трансферину і способів його застосування.

Description

Галузь техніки, до якої належить винахід
Даний винахід стосується антитіл анти-рецептор трансферину і способів їхнього використання.
Споріднені заявки
Дана заявка просить пріоритет Тимчасової заявки на патент США Мо 61/825477, поданої 20 травня 2013 року, що включається в даний документ як посилання у всій своїй повноті.
Список послідовностей
Список послідовностей подається паралельно з описом як текстовий файл у форматі АЗСІЇ через ЕЕ5-УМер, з ім'ям файлу "Р5641КІ-УМО 5 їх", час створення - 16 травня 2014 року, і розмір - 154599 байт. Список послідовностей, поданий через ЕЕ5-УМер, являє собою частину опису і тим самим включається в даний документ як посилання у всій своїй повноті.
Рівень техніки
Проникнення в головний мозок великих молекул лікарських засобів сильно обмежено за допомогою в основному непроникного гематоенцефалічного бар'єра (ВВВ). Серед багатьох стратегій для подолання цієї перешкоди необхідно використовувати шляхи трансцитозу ендогенних рецепторів, експресованих у капілярному ендотелії головного мозку. Конструюються рекомбінантні білки, такі як моноклональні антитіла для цих рецепторів, щоб уможливити опосередковувану рецепторами доставку великих молекул у головний мозок. Стратегії доведення до максимуму споживання головного мозку, при цьому зводячи до мінімуму зворотний трансцитоз назад у кров, а також доведення до максимуму ступеня акумуляції після дозування терапевтичного препарату, здійснюються за допомогою таких даних, що антитіла з низькою спорідненістю до рецепторів ВВВ пропонують потенційну можливість істотного збільшення перенесення через ВВВ і утримання в СМ5 (центральній нервовій системі) асоційованих терапевтичних залишків/молекул, порівняно з типовими антитілами з високою спорідненістю до таких рецепторів (Агїмаї еї аї., Зсі. Тгапві. Мед. 3, в4га43 (2011); Ми єї аї., збі.
ТгапоІ. Ме4. 25 Мау 2011:МоІ. 3, Ієзце 84, р. 84га44). Однак ці антитіла не зв'язуються специфічно з ТІК людини і приматів.
Суть винаходу
Моноклональні антитіла мають величезний терапевтичний потенціал для лікування
Зо неврологічних захворювань або захворювань центральної нервової системи (СМ5), але їхнє проходження в головний мозок обмежено гематоенцефалічним бар'єром (ВВВ). У минулому дослідження показали, що дуже малий відсоток (приблизно 0,1 95) дб, що циркулюють у кровотоці, проходять через ВВВ у СМ5 (РеІдеппацег, Кіїп. Уу5спг. 52:1158-1164 (1974)), при цьому концентрація антитіл у СМ5 може бути недостатньою, щоб уможливити стійкий вплив.
Раніше було виявлено, що відсоток антитіл, які розподіляються в СМ5, міг би бути поліпшений з використанням рецепторів ВВВ (тобто рецептора трансферину, рецептора інсуліну тощо) (дивися, наприклад, МО 9502421). Наприклад, антитіло анти-рецептор ВВВ може бути зроблено мультиспецифічним для націлювання на один або кілька бажаних антигенів СМ5, або одна або декілька гетерологічних молекул можуть зв'язуватися з антитілом анти-рецептор ВВВ, у будь- якому випадку, антитіло анти-рецептор ВВВ може допомогти в доставці терапевтичної молекули в СМ5 через ВВВ.
Однак націлювання на рецептор ВВВ традиційного специфічного антитіла з високою спорідненістю, як правило, дає в результаті обмежене збільшення перенесення через ВВВ.
Пізніше автори знайшли, що величина споживання антитіла і розподіл антитіл у СМ5 серед досліджуваних антитіл анти-рецептор ВВВ зворотно пропорційна до його спорідненості зв'язування з рецептором ВВВ. Наприклад, антитіло з низькою спорідненістю до рецептора трансферину (ТІК), дозоване при терапевтичних рівнях дози, сильно поліпшує перенесення через ВВВ і утримання в СМ5 антитіла анти-ТІЕ відносно антитіла анти-ТІ з більш високою спорідненістю, й уможливлює більш легке одержання терапевтичних концентрацій у СМ5 (Аїмаї еї аї.,, сі. Тгап5і. Мей. 3, 84га43 (2011)). Доказ такого перенесення через ВВВ досягають із використанням біспецифічного антитіла, яке зв'язує як ТІК, так і фермент, що розщеплює білок- попередник амілоїду (АРР), ВД-секретазу (ВАСЕТ). Одна системна доза біспецифічного антитіла анти-ПТР/ВАСЕЇ, отриманого за допомогою генної інженерії з використанням методології цього винаходу, не тільки дає в результаті значне споживання антитіла в головному мозку, а також кардинально знижує рівні АВ:і-0о у головному мозку порівняно з одним тільки моноспецифічним анти-ВАСЕЇ1, говорячи про те, що проникність ВВВ залежить від сильнодії анти-ВАСЕТ. (Агмаї єї а!., Зсі. Ттапві. Мед. 3, в4га43 (2011); Ми еї аї., сі. Ттапві. Мед. 3, в4га44 (2011)).
Ці дані й експерименти висвітлюють кілька можливих механізмів, що стоять за збільшенням споживання антитіла в СМ5, з використанням підходу з антитілами з більш низькою бо спорідненістю. По-перше, антитіла анти-рецептор ВВВ (ВВВ-К) з високою спорідненістю
(наприклад, анти-ТІВ- із Амаї еї аїЇ. апа Ми еї аЇ., вище) обмежують споживання в головному мозку через швидке насичення ВВВ-К у судинній системі головного мозку, зменшуючи, таким чином, загальну кількість антитіла, споживаного в головному мозку, а також обмежуючи його розподіл у судинній системі. Суворо кажучи, зниження спорідненості до ВВВ-К поліпшує споживання і розподіл у головному мозку, зі стійким зсувом, що спостерігається при локалізації від судинної системи до нейронів і асоційованих нейропілів, розподілених у СМ5. По-друге, більш низька спорідненість антитіл до ВВВ-К, як передбачається, ослаблює здатність антитіла до повернення на судинну сторону ВВВ за допомогою ВВВ-К з боку СМ5 мембрани, оскільки загальна спорідненість антитіла до ВВВ-К є низькою і локальною концентрацією антитіла на стороні СМ5 ВВВ є ненасичувальною через швидке диспергування антитіла у відділі СМ5. По- третє, іп мімо, і як спостерігається для системи ТІК, антитіла з більш низькою спорідненістю до
ВВВ-К не виводяться із системи так само ефективно, як і антитіла з більш високою спорідненістю до ВВВ-К, і таким чином, вони залишаються при більш високих циркулюючих концентраціях, ніж їхні аналоги з більш високою спорідненістю. Це є переважним, оскільки рівні циркулюючих антитіл підтримуються при терапевтичних рівнях протягом більш тривалого періоду часу для антитіла з більш низькою спорідненістю, ніж для антитіла з більш високою спорідненістю, що, як наслідок, поліпшує споживання антитіла в головному мозку протягом більш тривалого періоду часу. Крім того, це поліпшення експонування, як для плазми крові, так і для головного мозку, може зменшити частоту дозування в клініці, що мало б потенційну перевагу не тільки для сприйнятливості і зручності пацієнта, але також і для полегшення будь- яких можливих побічних впливів або нецільових впливів антитіла і/або терапевтичної сполуки, зв'язаної з ним.
Антитіла ВВВ-К з низькою спорідненістю, описані в роботі, що вище згадується, вибирають/одержують за допомогою генної інженерії, щоб виключити негативний вплив на природне зв'язування між трансферином і ТК, і таким чином, усунути потенційні побічні впливи, пов'язані з перенесенням заліза. Проте, при уведенні визначених таких антитіл мишам спостерігаються деякі помітні побічні впливи. Миші демонструють первинну реакцію стійкого збідніння популяції ретикулоцитів, супроводжувану швидким настанням гострих клінічних симптомів. Хоча миші відновлюються, як після гострих клінічних симптомів, так і після
Зо зменшення рівнів ретикулоцитів, по ходу справи, усунення або інше ослаблення цього впливу на ретикулоцити є, мабуть, бажаним для антитіла анти-ТїЖ, щоб його можна було використовувати безпечно як терапевтичну молекулу. Виявлено, що первинна реакція на введення анти-ТТ (стійке збідніння ретикулоцитів і гострі клінічні ознаки) викликається здебільшого активністю антитіло-залежної опосередковуваної клітинами цитотоксичності (АрСС) антитіла, при цьому залишковий вплив збідніння ретикулоцитів опосередковується за допомогою шляху комплементу.
Ці попередні дослідження використовували антитіла миші, які специфічно зв'язуються з ТІК миші, але які не розпізнають специфічно ТІК приматів або людини., відповідно, даний винахід пропонує антитіла і їхні функціональні частини, які розпізнають специфічно ТІК, як приматів, так і людини, щоб спростити дослідження безпеки й ефективності на приматах за допомогою антитіл перед терапевтичним або діагностичним застосуванням на людях. Дослідження іп міїго з використанням лінії клітин еритробластів людини і первинних клітин кісткового мозку, оброблених антитілами анти-ТІК людини, за даним винаходом, демонструє, що стійке збідніння
ТІВ-позитивних еритроїдних клітин може так само спостерігатися в клітинних системах людини/приматів, як і на мишах (дивися, наприклад, Приклад 4).
Відповідно, у даному документі пропонуються також модифікації антитіл за даним винаходом для значного зниження або усунення небажаного зменшення популяції ТІК- експресуючих ретикулоцитів при введенні антитіл анти-ТІЖ, при цьому як і раніше роблячи можливим збільшення перенесення через ВВВ, збільшення розподілу в СМ5 і утримання в СМ5, забезпечуваного антитілами анти-ТЯЖЕ людини/приматів, уведених при терапевтичних концентраціях. У даному документі пропонуються кілька загальних підходів для ослаблення впливу, що спостерігається, антитіл анти-ТїЯК за даним винаходом, як на первинне, так і на залишкове збідніння ретикулоцитів, і вони можуть використовуватися окремо або в сполученні.
В одному з підходів, ефекторна функція антитіла анти-ТїЯК людини/цино (мавп циномолгус) зменшується або усувається для зменшення або усунення активності АОСС. В іншому підході, спорідненість антитіла анти-ТЯВ людини/цино до ТІК людини або приматів додатково зменшується таким чином, що взаємодії антитіла з популяцією ретикулоцитів є менш шкідливими для цієї популяції. Третій підхід спрямований на зменшення кількості антитіла анти-
ТІК людини/цино, що є присутньою у плазмі крові, для зменшення експонування популяції бо ретикулоцитів для потенційно шкідливих концентрацій антитіла. Четвертий підхід намагається захистити, стабілізувати і/або заповнити популяції ретикулоцитів таким чином, що будь-яке потенційне збідніння популяції ретикулоцитів у циркуляції або в кістковому мозку за допомогою введення антитіла анти-ТІК людини/цино запобігається, зменшується або ослаблюється.
Зменшення або усунення ефекторної функції, як описано в даному документі, може здійснюватися за допомогою: () зменшення або усунення глікозилування антитіла ссавців дикого типу (наприклад, за допомогою продукування антитіла в навколишньому середовищі, де таке глікозилування не може здійснюватися, за допомогою мутації в одній або декількох точках приєднання вуглеводів таким чином, що антитіло не може глікозилуватися, або за допомогою хімічного або ферментативного видалення одного або декількох вуглеводів з антитіла після того, як воно глікозилується); (ії) за допомогою зменшення або усунення здатності антитіла анти-ТІК людини/цино до зв'язування з Ес-рецептором (наприклад, за допомогою мутації Ес- області, за допомогою делеції в Есо-області або усунення Ес-області); або (ії) за допомогою використання ізотипу антитіла, про яке відомо, що воно має мінімальну ефекторну функцію або не має її (тобто, включаючи але не обмежуючись цим, Ідс4).
Зменшення активування комплементу антитілом, як описано в даному документі, може здійснюватися за допомогою зменшення або усунення здатності антитіла анти-ТІЕ людини/цино до зв'язування С14 (наприклад, за допомогою мутації, делеції в Ес-області або усунення Ес- області, або за допомогою модифікації частини антитіла анти-ТЯК людини/цино іншої, ніж Ес частина), або за допомогою пригнічення іншим способом активування або активності системи комплементу (наприклад, за допомогою спільного введення одного або декількох інгібіторів активування шляху комплементу або активності шляху комплементу).
При зв'язуванні антитіла анти-ТїЖК людини/цино з ТІК людини або цино на ретикулоцитах або на інших типах клітин, які експресують високі рівні ТІК, запускається їхнє збідніння, як для антитіл анти-ТЯК людини/цино, ілюстрованих у даному документі, зменшення зв'язування антитіл з ТІК людини або цино на ретикулоцитах або на інших типах клітин повинно, у свою чергу, зменшити величину збідніння ретикулоцитів або інших типів клітин у циркуляції або в кістковому мозку, що спостерігається при введенні антитіла. Спорідненість антитіла анти-ТІВ людини/цино до ТІК приматів або людини може модифікуватися з використанням будь-якого зі способів, описаних у даному документі, і як показано в Прикладах.
Зо Зменшення кількості антитіла анти-ТЯКЖ людини/цино, що присутнє у плазмі крові, для зменшення експонування популяції ретикулоцитів для потенційно шкідливих концентрацій антитіла, може здійснюватися декількома способами. Один зі способів полягає просто в зменшенні кількості антитіла, що дозується, потенційно, у цей же час, збільшуючи також частоту дозування, так що максимальна концентрація в плазмі знижується, але підтримується рівень у сироватці, достатній для ефективності, що у той же час, як і раніше, знаходиться нижче порогу побічного впливу збідніння клітин. Інший спосіб, що може поєднуватися з модифікаціями дозування, полягає у виборі або одержанні за допомогою генної інженерії антитіла анти-ТІК, що має рН-чутливе зв'язування з ТІК, так що воно зв'язується з ТІК на поверхні клітин у плазмі крові при рН 7,4 при бажаній низькій спорідненості, як описано в даному документі, але при інтерналізації в ендосомальному компартменті, таке зв'язування з ТІК швидко і значно зменшується при відносно більш низькому рН цього компартмента (рН 5,5-6,0). Така дисоціація може захистити антитіло від виведення, опосередковуваного антигеном, або підвищити кількість антитіла, що або доставляється в СМ5, або рециклюється назад через ВВВ, - у будь-якому випадку, ефективна концентрація антитіла збільшується порівняно з антитілом анти-ТІЕ, що не має такої рН-чутливості, без збільшення дози антитіла, що вводиться, і у свою чергу, потенційно дозволяє понизити дозу антитіла при одночасному зниженні ризику побічних впливів.
Захист, стабілізація і/або заповнення популяції ретикулоцитів може здійснюватися з використанням фармацевтичних або фізичних способів. На додаток до антитіла анти-ТТА людини/цино разом з ним може вводитися щонайменше один додатковий терапевтичний агент (одночасно або послідовно), що ослаблює негативні побічні впливи антитіла на популяції ретикулоцитів. Приклади таких терапевтичних агентів включають, але не обмежуючись цим, еритропоетин (ЕРО), добавки, що містять залізо, вітамін С, фолієву кислоту і вітамін В12.
Фізична заміна еритроцитів (тобто ретикулоцитів) є також можливою, наприклад, за допомогою трансфузії за допомогою подібних клітин, що можуть походити від іншого індивідуума з подібним типом крові або можуть попередньо витягатися із суб'єкта, якому вводили антитіло анти-ТІК людини/цино.
Фахівець у даній галузі побачить, що будь-яке сполучення згаданих вище способів можна використовувати для одержання за допомогою генної інженерії антитіла (/або режиму його дозування) з оптимальним балансом між (ї) бажаною низькою спорідненістю до ТІ приматів 60 або людини, що буде доводити до максимуму перенесення антитіла і будь-яких кон'юЮгованих сполук у СМ5; (її) спорідненістю кон'югованої сполуки (включаючи, як необмежувальний приклад, другу або додаткову специфічність зв'язування антигену в антитіла анти-ТТА людини/цино) до його антигену в СМ5, оскільки це важливо для тієї кількості сполуки, що повинна бути присутньою у СМЗ для одержання терапевтичного впливу; (іїї) швидкістю виведення антитіла анти-ТІК людини/цино; (ім) лабільністю анти-ТК/кон'югованої сполуки при низьких рН для полегшення вивільнення кон'югованої сполуки на стороні СМЗ/головного мозку
ВВВ і (м) впливом на популяції ретикулоцитів.
Також буде ясно, що вплив збідніння ретикулоцитів, що спостерігається в даному документі, для введення антитіла анти-ТІЖК, може бути корисним при лікуванні будь-якого захворювання або розладу, де проблема полягає у надпроліферації ретикулоцитів. Наприклад, при уродженій поліцитемії або при справжній неопластичній поліцитемії підвищені кількості еритроцитів через гіперпроліферацію, наприклад, ретикулоцитів, дають у результаті загущення крові і супутні фізіологічні симптоми. Введення антитіла анти-ТК людини/цино за даним винаходом, де ефекторна функція антитіла консервується щонайменше частково, зробило б можливим селективне видалення популяції незрілих ретикулоцитів без впливу на нормальне перенесення трансферину в СМ5. Дозування такого антитіла може модулюватися таким чином, що гострі клінічні симптоми могли б зводитися до мінімуму (наприклад, за допомогою дозування при дуже низькій дозі або через великі часові інтервали), як добре розуміють у даній галузі.
Антитіла анти-ТК/ВАСЕЇ і анти-ТТК/Ареїа, кожне, являють собою ообіцяючі і нові терапевтичні кандидати для лікування хвороби Альцгеймера. Крім того, технологія біспецифічного націлювання на основі перенесення, опосередковуваного рецепторами (КМТ), відкриває двері для широкого діапазону потенційних терапевтичних препаратів проти захворювань СМ5. Даний винахід пропонує способи одержання за допомогою генної інженерії терапевтичних препаратів, які проникають через ВВВ, що значно поліпшують перенесення через ВВВ і розподіл у СМ5 терапевтичних препаратів без збідніння ретикулоцитів.
Відповідно, у першому варіанті здійснення, даний винахід пропонує ізольоване антитіло, яке зв'язується з рецептором трансферину людини (ТІК) і ТІК приматів, де антитіло не інгібує зв'язування трансферину з ТІК. В одному з аспектів, зв'язування являє собою специфічне зв'язування. В іншому аспекті, антитіло, крім того, не інгібує зв'язування білка гемахроматозу
Зо людини ("НЕЕ") з ТІК. В одному з аспектів, зв'язування являє собою специфічне зв'язування. В одному з аспектів, антитіло являє собою моноклональне антитіло. В іншому аспекті, антитіло являє собою антитіло людини. В іншому аспекті, антитіло являє собою гуманізоване антитіло. В іншому аспекті, антитіло являє собою химерне антитіло. В іншому аспекті, антитіло являє собою фрагмент антитіла, який зв'язує ТІК людини і ТІК приматів. В іншому аспекті, ТІК приматів походить від мавп циномолгус.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-
Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:31, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМВ8-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:36, 38 і 39. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-На2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІО МО:З6, 40 і 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМА-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:42, 43 і 44. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮО МО:31, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУМВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:46, 48 і 49. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМУВ-І3, НУВ-НЗ2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:52, 54 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМАК-І 3, НУВ-НЕІ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:52, 58 і 59. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМВ8-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:62, 63 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-На2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:52, 65 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМА-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:68, 69 і 70. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:73, 75 і 76. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУМВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 60 ЗЕО ІЮ МО:79, 81 і 82. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМУВ-І3, НУВ-НЗ2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:79, 83 і 84. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-НЕІ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:87, 89 і 90. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМВ8-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:93, 95 і 96 в іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-На2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:99, 101 ї 102. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І З, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:127, 33 і 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:52, 156 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУМВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗБЕО ІЮО МО:52, 157 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ
МО:155, 54 і 55.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-
Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:32, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМАК-НІ, НМУВ-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:37, 38 і 39. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:32, 40 і 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НМА-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:37, 43 і 44. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМВ-НІТ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮО МО:32, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІО МО:А7, 48 і 49. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМУВ-НІ, НМВ-Н2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:53, 54 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 58 і 59. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НМУВ-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:53, 63 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:53, 65 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НМА-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:53, 69 і 70. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМАК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:74, 75 і 76. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:80, 81 і 82. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМУВ-НІ, НМВ-Н2 і НУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:80, 83 і 84. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:88, 89 ї 90. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НМУВ-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:94, 95 і 96. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот зЕО ІЮ МО:100, 101 ії 102. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:53, 156 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМАК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:53, 157 і 55.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-11, НУВ- 12 ї НМА-1І 3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:29, 30 ї 31. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:35, 30 і 36. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НУВ-12 ї НМК-1І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:41, 30 і 42. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-Ї1, НМВА-12 ї НМК-ІЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:29, 30 ї 31. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта 60 здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМУВ-12 ї НМК-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:45, 30 їі 46. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 1, НУВ-12 ї НМА-І-3, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:50, 51 і 52. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМВ-11, НМВ-1І2 ї НМА-ІЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:56, 57 і 52. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-11, НМВ-1І2 і
НМВ-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:60, 61 ї 62. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:60, 64 і 52. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НУВ-12 ї НМК-1І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:66, 67 і 68. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-Ї1, НМА-12 ї НМК-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:71, 72 і 73. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМУВ-12 ї НМК-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:77, 78 і 79. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 1, НУВ-12 ї НМА-І-3, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:85, 86 і 87. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМВ-11, НМВ-1І2 ї НМА-ІЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:91, 92 і 93. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-11, НМВ-1І2 і
НМВ-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:97, 98 ї 99. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:29, 30 ї 127. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НУВ-12 ї НМК-1І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:50, 51 і 155.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-11, НУВ- 2 ї НМА-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот зЕО ІЮ МО:29, 30 ї 31 ї НМЕ-НІ,
НМУВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:32, 33 і 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 1, НУВ-1І2 і НМЕК-
ІЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЗЕО ІЮ МО:35, 30 і 36 ії НМЕК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:37, 38 і 39. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:35, 30 їі 36 ії НМК-НІ, НУВ-НЕІ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:32, 40 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:А41, 30 ї 42 ії НМАК-НІ, НУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:37, 43 і 44. В іншому аспекті розглянутого вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМУВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:29, 30 ї 31 ї НМАК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕ ІЮ МО:32, 33 і 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:45, 30 і 46 ї НМК-НІ, НУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:47, 48 ї 49. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:50, 51 ї 52 ії НМК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮО МО:53, 54 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:56, 57 і 52 ії НМК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮО МО:53, 58 і 59. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:60, 61 і 62 ії НМК-НІ, НУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 63 ії 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:60, 64 і 52 ії НМК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 65 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:66, 67 і 68 ї НМК-НІ, НУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 69 ії 70. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:71, 72 їі 73 ії НМЕК-НІ, НМУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:74, 75 і 76. В іншому 60 аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З,
відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮО МО:77, 78 ї 79 ії НМЕК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:80, 81 ї 82. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:77, 78 і 79, і НМА-НІ, НМВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:80, 83 ії 84. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:85, 86 і 87 ії НМЕК-НІ, НУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:88, 89 ії 90. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:91, 92 ї 93 ї НМЕК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:94, 95 ї 96. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:97, 98 і 99 ї НМАК-НІ, НМУВ-НЕІ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот зЕО ІЮО МО:100, 101 і 102. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:29, 30 ї 127 ії НМАК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:32, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:50, 51 ї 52 ії НМК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:53, 156 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-Ї1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:50, 51 ї 52 ії НМК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:53, 157 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-Ї1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:50, 51 ї 155 ії НМАК-НІ, НУВ-Н2 і
НМВ-НУЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:53, 54 і 55.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить щонайменше одну послідовність НМК-НІ, НУВ-Н2г, НУВ-НЗ, НМУВ-11, НМУВ-І2 або НМК-1І3, вибрану з групи послідовностей, що складається з послідовності НМК-НІ, 5ЕБЕО ІЮ МО:47, 53 або 100;
Ко) послідовності НМАВ-Н2, 5ЕО ІО МО:48, 69, 101, 156 або 157; послідовності НМК-НЗ, 5ЕО ІЮ
МО:49, 76 або 102; послідовності НМЕ-І-1, 5ЕО ІО МО:45, 66 або 97; послідовності НМЕ-12, 5ЕО
ІО МО:30, 67 або 98; і послідовності НМЕ-І 3, 5ЕО ІЮ МО:46, 68 або 102.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить (а) послідовність МН, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовностей амінокислот з БЕО ІЮ
МО:7, 8, 9, 10, 15, 16, 17, 18, 20, 25, 26, 27, 28, 108, 114, 120, 126, 153 або 154; (р) послідовність
МІ, що має, щонайменше, 95 95 ідентичність послідовностей амінокислот з БЕО ІЮ МО:4, 5, 6, 11, 12, 13, 14, 19, 21, 22, 23, 24, 105, 111, 117, 123 або 151; або (с) послідовність УН як у (а) послідовність МІ. як у (Б). В одному з таких аспектів, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО 10
МО;:4 і послідовність МН, 5ЕО ІО МО:7. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність
МІ, ЗЕО ІЮ МО:5 і послідовність МН, ЗЕО ІЮ МО:8. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮ МО:5 і послідовність МН, 5ЕО І МО:9. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІО МО:6 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:10. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮ МО:11 і послідовність МН, ЗЕО ІЮ
МО:15. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІО МО:12 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:16. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ,
ЗЕО ІЮ МО:13 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:17. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, 5ЕО ІЮО МО:14 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:18. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІО МО:19 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:20, В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮ МО:21 і послідовність МН, ЗЕО ІЮ
БО МО:25. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕБЕО І МО:22 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:26. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ,
ЗЕО ІЮ МО:23 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:27. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, 5ЕО ІЮО МО:24 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:28. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮ МО:105 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:108. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІО МО:111 їі послідовність МН, ЗЕО ІО
МО:114. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, 5ЕО ІЮ МО:117 і послідовність МН, ЗЕО ІЮ МО:120. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ,
ЗЕО ІЮО МО:123 ї послідовність МН, ЗЕО ІЮО МО:126. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність М, ЗЕО ІЮ МО:105 їі послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:153. В іншому такому аспекті, 60 антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮ МО:105 і послідовність МН, ЗЕО ІЮ МО:154. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІО МО:151 і послідовність МН, ЗЕО І
МО:108. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МН (а) ЗЕО ІЮ МО:108, (6) 5ЕО
ІО МО:114, (с) ЗЕО ІЮО МО:120 або (4) ЗЕО ІО МО:126. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ (а) ЗЕО ІЮО МО:105, (Б) 5ЕО ІЮО МО:111, (с) ЗЕО ІО МО:117 або (4) ЗЕО ІЮ
МО:123.
В одному з аспектів варіанта здійснення розглянутого вище, антитіло вибирають із групи, яка складається з антитіла 7А4, вА2, 1502, 10011, 7810, 152511, 16055, 1303, 1604, 16Е6, 757, 402, 1812 і 1304. В одному з таких аспектів, антитіло являє собою 7А4. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 8А2. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1502. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 10011. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7810. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 15011. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1605. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1323. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1604. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 77. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 402. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1812. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1304.
В одному аспекті з будь-яких аспектів, згаданих вище, антитіло крім того, має дозрілу спорідненість. В одному з таких аспектів, антитіло вибирають із групи, яка складається з 15211.м1, 15011.м2, 15С211.М3, 15011.М4, 15011.м5, 7Айм1; 7А4.м2, 7А4м3, 7А4.м4, 7А4м5, 7ТА4.м6, 7А4.м7, 7А4.м8, 7А4м9, 7А4.м10, 7А4.м11, 7А4.м12, 7А4.м13, 7А4.м14, 7А4.м15, 707 М, 16Е6.м1, 16Е6.м2, 16Е6.м3, 16Е6.м4, 156511.М52А, 15011.Т53А і 15511.М/92А. В одному з таких аспектів, антитіло являє собою 150511.мі1. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150511.м2. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150511.му3. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150511.м4. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150511.м5. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м1. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м2. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.му3. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м4. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м5. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.мб6. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою
ТА4.м!7. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м8. В іншому такому аспекті,
Зо антитіло являє собою 7А4.м9. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м10, В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м11. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою
ТА4.м12. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м13. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м14. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м15. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 707.1. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6б.м1. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6.м2. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Еб.м3. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6.м4.
В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 15011.М52А. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150511.Т53А. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150511 .М/92А.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло модифікується в одному або декількох положеннях амінокислот у МН або Мі до амінокислоти, показаної для цього положення на Фігурах 4Е-1 і 4Е-2. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить послідовність або одну або кілька послідовностей НМК, що відповідають послідовностям однієї або декількох НУК, наведених для будь-якого з клонів на
Фігурах З і 4 і на Фігурах 4Е-1 і 4Е-2. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить послідовність МН або Мі, що відповідає послідовності, наведеній для будь- якого з клонів на Фігурах З і 4 і Фігурах 4Е-1 і 4Е-2. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить одну або кілька послідовностей НМК, що відповідають одній або декільком послідовностям, наведеним вище, для будь-якого з клонів на Фігурах З і 4 і Фігурах
АЕ-1 і 4Е-2.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло зв'язане з терапевтичною сполукою. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло зв'язане з агентом для одержання зображень або міткою. В одному з таких аспектів, антитіло являє собою мультиспецифічне антитіло, і терапевтична сполука необов'язкова утворює одну з частин мультиспецифічного антитіла. В одному з таких аспектів, мультиспецифічне антитіло містить перший сайт зв'язування антигену, що зв'язує ТІК, і другий сайт зв'язування антигену, що зв'язує антиген головного мозку. В одному з таких аспектів, антиген головного мозку вибирається з групи, яка складається з: бета-секретази 1 (ВАСЕЇТ1), АбБеїа, рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК), рецептора 2 епідермального фактора росту людини (НЕКЗ2), тау, аполіпопротеїну Е (АроЕ), альфа-синуклеїну, СО20, хантингтину, пріонного білка бо (РгР), збагаченої лейциновими повторами кінази 2 (І ККК2), паркіну, презеніліну 1, презеніліну
2, гамма-секретази, рецептора загибелі 6 (ОК), білка- попередника амілоїду (АРР), рецептора р75 нейротрофіну (р/7/5МТЕ) і каспази 6. В іншому такому аспекті, мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з ВАСЕТ1. В іншому такому аспекті, мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з Абейа. В іншому такому аспекті, терапевтична сполука являє собою лікарський засіб проти неврологічного розладу.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує ізольовану нуклеїнову кислоту, що кодує будь-яке зі згаданих вище антитіл. В іншому аспекті, даний винахід пропонує клітину-хазяїна, що містить таку нуклеїнову кислоту. В іншому аспекті, даний винахід пропонує спосіб продукування будь-якого зі згаданих вище антитіл, який включає культивування такої клітини-хазяїна, що продукує антитіло, і який необов'язково додатково включає витягнення антитіла з клітини-хазяїна.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує фармацевтичний препарат, який містить будь-яке зі згаданих вище антитіл і фармацевтично прийнятний носій.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує будь- яке зі згаданих вище антитіл для застосування як лікарського препарату. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує застосування будь-якого зі згаданих вище антитіл при виробництві лікарського препарату для лікування неврологічного розладу. В одному з таких аспектів, неврологічний розлад вибирається з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, розладу очного захворювання, епілептичного розладу, лізосомної хвороби нагромадження, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, розладу поведінки і запалення СМ5.
В іншому аспекті розглянутого вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує будь-яке зі згаданих вище антитіл для застосування при лікуванні неврологічного розладу. В одному з таких аспектів, неврологічний розлад вибирається з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, розладу очного захворювання, епілептичного розладу, лізосомної хвороби нагромадження, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, розладу поведінки і запалення СМ5.
В іншому аспекті розглянутого вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує будь-яке
Зо зі згаданих вище антитіл для застосування при перенесенні однієї або декількох сполук через
ВВВ. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, пропонується застосування будь- якого зі згаданих вище антитіл при виробництві лікарського препарату для перенесення однієї або декількох сполук через ВВВ.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, пропонується спосіб перенесення сполуки через ВВВ суб'єкта, що включає експонування будь-якого зі згаданих вище антитіл для ВВВ таким чином, що антитіло переносить сполуку, зв'язану з ним, через ВВВ.
В іншому такому аспекті, ВВВ стосується суб'єкта-людини. В іншому такому аспекті, величина дози і/або частота введення модулюється для зменшення концентрації антитіл, для якої експонуються еритроцити. В іншому такому аспекті, спосіб додатково включає стадію моніторингу суб'єкта відносно збідніння еритроцитів. В іншому такому аспекті, антитіло, зв'язане зі сполукою, вводиться в терапевтичній дозі. В одному з таких аспектів, терапевтична доза є
ТІВ-насичувальною. В іншому такому аспекті, введення антитіла здійснюється в дозі і/або частоті дозування, каліброваній для зведення до мінімуму гострих клінічних симптомів від введення антитіла.
В іншому аспекті розглянутого вище варіанта здійснення, пропонується спосіб збільшення експонування СМ5 суб'єкта для сполуки, що включає експонування будь-якого зі згаданих вище антитіл для ВВВ таким чином, що антитіло переносить сполуку, зв'язану з ним, через ВВВ. В іншому такому аспекті, ВВВ стосується суб'єкта-людини. В іншому такому аспекті, величина дози і/або частота введення модулюється для зменшення концентрації антитіла, для якого експонуються еритроцити. В іншому такому аспекті, спосіб додатково включає стадію моніторингу суб'єкта відносно збідніння еритроцитів. В іншому такому аспекті, антитіло, зв'язане зі сполукою, вводиться в терапевтичній дозі. В одному з таких аспектів, терапевтична доза є
ТІВ-насичувальною. В іншому такому аспекті, введення антитіла здійснюється в дозі і/або частоті дози, каліброваній для зведення до мінімуму гострих клінічних симптомів від введення антитіла.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, пропонується спосіб підвищення утримання в СМ5 сполуки, що вводиться суб'єкту, що включає експонування будь-якого зі згаданих вище антитіл для ВВВ таким чином, що утримання сполуки в СМ5 збільшується. В іншому такому аспекті, ВВВ стосується суб'єкта-людини. В іншому такому аспекті, величина 60 дози і/або частота введення модулюється для зменшення концентрації антитіла, для якого експонуються еритроцити. В іншому такому аспекті, спосіб додатково включає стадію моніторингу суб'єкта відносно збідніння еритроцитів. В іншому такому аспекті, антитіло, зв'язане зі сполукою, вводиться в терапевтичній дозі. В одному з таких аспектів, терапевтична доза є
ТІВ-насичувальною. В іншому такому аспекті, введення антитіла здійснюється в дозі і/або частоті дози, каліброваній для зведення до мінімуму гострих клінічних симптомів від введення антитіла.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, пропонується спосіб лікування неврологічного розладу в ссавця, що включає лікування ссавця за допомогою будь-якого зі згаданих вище антитіл. В одному з таких аспектів, неврологічний розлад вибирається з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, розладу очного захворювання, епілептичного розладу, лізосомної хвороби нагромадження, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, розладу поведінки і запалення СМ5. В іншому такому аспекті, неврологічний розлад стосується суб'єкта-людини. В іншому такому аспекті, величина дози і/або частота введення модулюється для зменшення концентрація антитіла, для якого експонуються еритроцити. В іншому такому аспекті, спосіб додатково включає стадію моніторингу суб'єкта відносно збідніння еритроцитів. В іншому такому аспекті, антитіло, зв'язане зі сполукою, вводиться в терапевтичній дозі. В одному з таких аспектів, терапевтична доза є
ТІВ-насичувальною. В іншому такому аспекті, введення антитіла здійснюється в дозі і/або частоті дози, каліброваній для зведення до мінімуму гострих клінічних симптомів від введення антитіла.
В інших варіантах здійснення, даний винахід пропонує ізольоване антитіло, що зв'язується з
ТІК людини і ТІК приматів, де антитіло не інгібує зв'язування трансферину з ТЕ, і де одна або кілька властивостей антитіла модифікуються для зменшення або усунення впливу антитіла на ретикулоцити і/або для зменшення важкості або присутності гострих клінічних симптомів у суб'єкта або ссавця, якого лікують за допомогою антитіла. В одному з аспектів, зв'язування являє собою специфічне зв'язування. В іншому аспекті, антитіло, крім того, не інгібує зв'язування НЕЕ з ТІК. В одному з аспектів, антитіло являє собою моноклональне антитіло. В іншому аспекті, антитіло являє собою антитіло людини. В іншому аспекті, антитіло являє собою гуманізоване антитіло. В іншому аспекті, антитіло являє собою химерне антитіло. В іншому
Зо аспекті, антитіло являє собою фрагмент антитіла, що зв'язує ТІК людини і ТІ примата. В іншому аспекті, ТІК примата походить від мавпи циномолгус.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-
Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:31, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМВ8-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:36, 38 і 39. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-Н2 і НУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:З6, 40 і 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМА-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:42, 43 і 44. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮО МО:31, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУМВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:46, 48 і 49. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМУВ-І3, НУВ-НЗ2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:52, 54 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-НЕІ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:52, 58 і 59. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМВ8-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:62, 63 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-На2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:52, 65 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМА-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:68, 69 і 70, В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:73, 75 і 76. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУМВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:79, 81 і 82. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМУВ-І3, НУВ-НЗ2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:79, 83 і 84. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-НЕІ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:87, 89 ї 90. В іншому 60 аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І3, НМВ8-Н2 ї НМК-НЗ,
відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:93, 95 і 96. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 3, НУВ-На2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:99, 101 ї 102. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І З, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:127, 33 і 34.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-
Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:32, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НМУВ-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:37, 38 і 39. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:32, 40 і 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НМА-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:37, 43 і 44. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМАК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮО МО:32, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:47, 48 і 49. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМУВ-НІ, НМВ-Н2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:53, 54 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМАК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 58 і 59. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НМУВ-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:53, 63 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:53, 65 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НМА-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:3, 69 і 70, В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМАК-НІ, НУВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:74, 75 і 76. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:80, 81 і 82. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМУВ-НІ, НМВ-Н2 і НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:80, 83 і 84. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:88, 89 і 90. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НМУВ-Н2 ї НМК-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:94, 95 і 96. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМА-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:100, 101 ї 102.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-11, НУВ- 2 ї НМА-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:29, 30 і 31. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:35, 30 і 36. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМАК-І1, НУВ-12 ї НМЕК-1І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:41, 30 і 42. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-Ї1, НМА-12 ї НМК-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:29, 30 ї 31. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМУВ-12 ї НМК-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:45, 30 їі 46. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 1, НУВ-12 ї НМА-І-3, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:50, 51 і 52. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМВ-11, НМУВ-1І2 ї НМА-ІЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:56, 57 і 52. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-11, НМВ-1І2 і
НМВ-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:60, 61 ї 62. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-Ї1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:60, 64 і 52. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НУВ-12 ї НМК-1І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:66, 67 і 68. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-Ї1, НМА-12 ї НМК-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:71, 72 і 73. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМАК-І1, НМУВ-12 ї НМК-І3, відповідно, що містять послідовності 60 амінокислот БЕО ІЮ МО:77, 78 і 79. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення,
антитіло містить НМК-І 1, НУВ-12 ї НМА-І-3, відповідно, що містять послідовності амінокислот
ЗЕО ІО МО:85, 86 і 87. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить
НМВ-11, НМВ-1І2 ї НМА-ІЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:91, 92 і 93. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НУВ-11, НМВ-1І2 і
НМВ-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:97, 98 ї 99. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:29, 30 і 127.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-11, НУВ- 2 ї НМА-І3, відповідно, що містять послідовності амінокислот зЕО ІЮ МО:29, 30 ї 31 ї НМЕ-НІ,
НМУВ-Н2 ї НМЕ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:32, 33 і 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І 1, НУВ-1І2 і НМЕК-
ІЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЗЕО ІЮ МО:35, 30 і 36 ії НМЕК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:37, 38 і 39. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:35, 30 їі 36 ії НМК-НІ, НУВ-НЕІ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:32, 40 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:А41, 30 ї 42 ії НМАК-НІ, НУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:37, 43 ї 44. В іншому аспекті розглянутого вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМУВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:29, 30 ї 31 ї НМАК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:32, 33 ї 34. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:45, 30 ії 46 ї НМК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:47, 48 і 49. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:50, 51 ї 52 ії НМК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 54 ї 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З,
Ко) відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:56, 57 і 52 ії НМЕК-НІ, НМУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 58 і 59. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:60, 61 і 62 і НМЕК-НІ, НУВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 63 ії 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:60, 64 їі 52 ії НМЕК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 65 і 55. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО:66, 67 і 68 ії НМЕК-НІ, НУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:53, 69 ії 70. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:71, 72 ї 73 ї НМАК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:74, 75 і 76. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:77, 78 і 79 ї НМАК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:80, 81 ї 82. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот 5ЕО ІЮО МО:77, 78 і 79, ії НМАК-НІ, НМВ-Н2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:80, 83 ії 84. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНА-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:85, 86 і 87 ії НМК-НІ, НУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮО МО:88, 89 ії 90. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НУМВ-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:91, 92 ї 93 ї НМЕК-НІ, НМУВ-НЕ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО:94, 95 ї 96. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-Ї1, НМВ-12 ї НМНК-1І З, відповідно, що містять послідовності амінокислот БЕО ІЮ МО:97, 98 і 99 ї НМАК-НІ, НМУВ-НЕІ2 і
НМУВ-НЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот зЕО ІЮО МО:100, 101 і 102. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить НМК-І1, НМВ-12 ї НМНК-1І З,
відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:29, 30 ї 127 ії НМАК-НІ, НУВ-Н2 і
НМВ-НУЗ, відповідно, що містять послідовності амінокислот ЗЕО ІЮ МО:32, 33 і 34.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить щонайменше одну послідовність з НМВ-НІ, НУВ-Н2, НУВ-НЗ, НУВ-11, НМУВ-12 або НМРЕ-1І 3, вибрану з групи послідовностей, що складається з послідовності НМК-НІ ЗЕО І МО:47, 53 або 100; послідовності НМЕ-Н2 5ЕО ІЮ МО:48, 69 або 101; послідовності НМЕ-НЗ 5ЕО ІЮО МО:49, 76 або 102; послідовності НМЕ-Ї1 5ЕО ІО МО:45, 66 або 97; послідовності НУБ-1/2 ЗЕО ІЮ МО:30, 67 або 98 і послідовності НМЕ-І З ЗЕО ІЮО МО:46, 68 або 102.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить (а) послідовність МН, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовностей амінокислот з БЕО ІЮ
МО:7, 8, 9, 10, 15, 16, 17, 18, 20, 25, 26, 27, 28, 108, 114, 120 або 126; (Б) послідовність МІ, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовностей амінокислот з БЕО ІЮО МО 4, 5, 6, 11, 12, 13, 14, 19, 21, 22, 23, 24, 105, 111, 117 або 123; або (с) послідовність УН як у (а) і послідовність МІ. як у (5). В одному з таких аспектів, антитіло містить послідовність МІ, 5ЕО ІЮ МОс4 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:7. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ,
ЗБЕО ІЮ МО:5 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:8. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮ МО:5 і послідовність МН, 5ЕО І МО:9. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність М, ЗЕО ІО МО:6 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:10. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮ МО:11 і послідовність МН, ЗЕО ІЮ
МО:15. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, 5ЕО ІЮ МО:12 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:16. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ,
ЗЕО ІЮ МО:13 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:17. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, 5ЕО ІЮО МО:14 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:18. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІО МО:19 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:20, В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮ МО:21 і послідовність МН, ЗЕО ІЮ
МО:25. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮО МО22 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:26. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ,
ЗЕО ІЮ МО:23 і послідовність МН, 5ЕО ІЮО МО:27. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, 5ЕО ІЮО МО:24 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:28. В іншому такому аспекті,
Ко) антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІЮ МО:105 і послідовність МН, 5ЕО ІЮ МО:108. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, ЗЕО ІО МО:111 їі послідовність МН, ЗЕО ІО
МО:114. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ, 5ЕБЕО ІЮ МО:1 17 ії послідовність МН, ЗЕО ІЮ МО:120. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ,
ЗЕО ІЮО МО:123 ї послідовність МН, ЗЕО ІЮО МО:126. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МН з (а) БЕО ІЮО МО:108, (Б) 5ЕО ІЮО МО:114, (с) 5ЕО ІЮ МО:120 або (а) ЗЕО ІО
МО:126. В іншому такому аспекті, антитіло містить послідовність МІ з (а) БЕО ІЮ МО:105, (Б)
ЗЕО ІЮ МО:111, (с) БЕО І МО:117 або (а) 5ЕО ІЮ МО:123.
В одному з аспектів варіанта здійснення вище, антитіло вибирають із групи, яка складається з антитіла 7А4, 8А2, 1502, 10011, 7810, 153511, 16055, 1303, 1604, 16Е6, 757, 402, 1812 і 1304.
В одному з таких аспектів, антитіло являє собою 7А4. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 8А2. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1502. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 10011. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7В10, В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 15011. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1605. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 13С3. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1604. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 707. В іншому такому аспекті, антитіло і5 4С2. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1В12. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 1304.
В одному аспекті з будь-якого з аспектів, згаданих вище, антитіло, крім того, має дозрілу спорідненість. В одному з таких аспектів, антитіло вибирають із групи, яка складається з 15211.м1, 150211.м2, 15211.М3, 15011.М4, 152011.м5, 7А4м1; 7А4м2, 7А4м3, 7А4.м4, 7А4м5, 7А4.мб, 7А4.м7, 7А4.м8, 7А4м9, 7А4.м10, 7А4.м11, 7А4м12, 7А4.м13, 7А4.м14, 7А4м15, 77 М, 16Е6.м1, 16Е6.м2, 16Е6.у3 і 16Е6.м4. В одному з таких аспектів, антитіло являє собою 150511.м1.
В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150311.м2. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 15011.м3. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150511.м4. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 15011.у5. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою
ТА4.мі1. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м2. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м3. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м4. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м5. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою
ТА4.мб. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м/. В іншому такому аспекті, бо антитіло являє собою 7А4.м8. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м9. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м10, В іншому такому аспекті, антитіло являє собою
ТА4.м11. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м12. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м13. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м14. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 7А4.м15. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 707.м1. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6.м1. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6б.м2. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6.м3. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 166.м4. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 15011.М52А. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6.м4. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150511.Т53А. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6.м4. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 150511.УМ92А. В іншому такому аспекті, антитіло являє собою 16Е6.м4.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло модифікується в одному або декількох положеннях амінокислот у МН або Мі до амінокислоти, показаної для цього положення на Фігурах 4Е-1 і 4Е-2. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить послідовність або одну або кілька послідовностей НМК, що відповідають послідовностям однієї або декількох НМК, наведених для будь-якого з клонів на
Фігурах З і 4 і на Фігурах 4Е-1 і 4Е-2. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить послідовність МН або Мі відповідних послідовностям, наведеним для будь- якого з клонів на Фігурах З і 4 і Фігурах 4Е-1 і 4Е-2. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло містить одну або кілька послідовностей НМК, що відповідають одній або декільком послідовностям, наведеним для будь-якого з клонів на Фігурах З і 4 і Фігурах 4Е-1 і
АЕ-2.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, одну або кілька властивостей антитіла вибирають з ефекторної функції Ес-області антитіла, функції активування комплементу антитіла і спорідненості антитіла до ТІК. В одному з таких аспектів, властивість являє собою ефекторну функцію в Ес-області антитіла. В іншому такому аспекті, властивість являє собою функцію активування комплементу антитіла. В іншому такому аспекті, властивість являє собою спорідненість антитіла до ТІК. В одному з таких аспектів, ефекторна функція або функція активування комплементу зменшується або усувається відносно антитіла дикого типу такого ж
Зо ізотипу. В одному з аспектів, ефекторна функція зменшується або усувається за допомогою способу, вибраного зі зниження глікозилування антитіла, модифікації ізотипу антитіла до ізотипу, що має природним способом зменшену або усунуту ефекторну функцію, і модифікації
Ес-області.
В одному з таких аспектів, ефекторна функція зменшується або усувається за допомогою зниження глікозилування антитіла. В одному з таких аспектів, глікозилування антитіла зменшується за допомогою способу, вибраного із: продукування антитіла в навколишньому середовищі, що не дає можливості для глікозилування дикого типу; видалення вуглеводних груп, що вже є присутніми на антитілі; і модифікації антитіла таким чином, що глікозилування дикого типу не здійснюється. В одному з таких аспектів, глікозилування антитіла зменшується за допомогою продукування антитіла в навколишньому середовищі, що не дає можливості для глікозилування дикого типу, такого як продукування в системі продукування клітин типу, відмінного від ссавців, або коли антитіло продукується синтетично. В одному з таких аспектів, антитіло продукується в системі продукування клітин, відмінній від ссавців. В іншому такому аспекті, антитіло продукується синтетично. В іншому такому аспекті, глікозилування антитіла зменшується за допомогою модифікації антитіла таким чином, що глікозилування дикого типу не здійснюється, наприклад, де Ес-область антитіла містить мутацію в положенні 297, так що аспарагіновий залишок дикого типу в цьому положенні замінений іншою амінокислотою, яка негативно впливає на глікозилування в цьому положенні.
В іншому такому аспекті, ефекторна функція зменшується або усувається за допомогою щонайменше однієї модифікації Ес-області. В одному з таких аспектів, ефекторна функція або функція активування комплементу зменшується або усувається за допомогою делеції всієї Ес- області або її частини, або за допомогою одержання за допомогою генної інженерії такого антитіла, що воно не містить Ес-області або відмінної від Ес-області, яка конкурує за ефекторну функцію або за функцію активування комплементу. В іншому такому аспекті щонайменше одна модифікація Ес-області вибирається з: точкової мутації Ес-області для ослаблення зв'язування з одним або декількома Ес-рецепторами, вибраної з наступних положень: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 і 439; точкової мутації Ес-області для ослаблення зв'язування з С14, вибраної з наступних положень: 60 270, 322, 329 і 321; усунення деякої частини або всієї Ес-області і точкової мутації в положенні
132 домену СНІ. В одному з таких аспектів, модифікація являє собою точкову мутацію Ес- області для ослаблення зв'язування з С1д, вибраної з наступних положень: 270, 322, 329 і 321.
В іншому такому аспекті, модифікація являє собою усунення деякої частини або всієї Ес- області В іншому такому аспекті, функція активування комплементу зменшується або усувається за допомогою делеції всієї Ес-області або її частини, або за допомогою одержання за допомогою генної інженерії такого антитіла, що воно не включає Ес-області, яка залучена в шлях комплементу. В одному з таких аспектів, антитіло вибирається з Бар або одноланцюжкового антитіла. В іншому такому аспекті, відмінна від Ес область антитіла модифікується для зменшення або усунення активування шляху комплементу за допомогою антитіла. В одному з таких аспектів, модифікація являє собою точкову мутацію області СНІ для ослаблення зв'язування з С3. В одному з таких аспектів, точкова мутація знаходиться в положенні 132 (дивися, наприклад, Мідаге еї аї., (2001) 9. Віої. Снет. 276(41):38217-38223).
В одному з аспектів, час напівжиття антитіла підвищується за допомогою модифікації в області зв'язування ЕсКп. В одному з аспектів, модифікація являє собою заміщення амінокислоти, вибране з наступних положень: 251, 256, 285, 290, 308, 314, 385, 389, 428, 434, 436, 238, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434. В одному з аспектів модифікація являє собою заміщення, вибране з наступних:
М252У, 5254Т, Т256Е, М434А і 4361.
В одному з аспектів, антитіло поєднують із додатковою сполукою, яка ослаблює або робить внесок у зменшення впливу на рівні ретикулоцитів або на гострі клінічні симптоми. В одному з таких аспектів, додаткова сполука захищає ретикулоцити від зв'язаного з антитілом збідніння або підтримує ріст, розвиток або заповнення ретикулоцитів. В іншому такому аспекті, додаткова сполука вибирається з еритропоетину (ЕРО), добавки, що містить залізо, вітаміну С, фолієвої кислоти і вітаміну В12 або еритроцитів або ретикулоцитів.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, спорідненість антитіла до ТІК зменшується, як вимірювано відносно антитіла дикого типу того ж ізотипу, що не має зниженої спорідненості до ТІК. В одному з таких аспектів, антитіло має КО або ІС5О відносно ТІВ приблизно від 1 пМ приблизно до 100 мкМ. В іншому аспекті, величина дози і/або частота введення антитіла модулюється для зменшення концентрації антитіла, для якого експонуються
Зо еритроцити.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло зв'язується з терапевтичною сполукою. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, антитіло зв'язується з агентом для одержання зображень або з міткою. В одному з таких аспектів, антитіло являє собою мультиспецифічне антитіло, і терапевтична сполука необов'язкова утворює одну з частин мультиспецифічного антитіла. В одному 3 таких аспектів, мультиспецифічне антитіло містить перший сайт зв'язування антигену, що зв'язує ТІК, і другий сайт зв'язування антигену, що зв'язує антиген головного мозку. В одному з таких аспектів, антиген головного мозку вибирають із групи, яка складається з: бета-секретази 1 (ВАСЕЇ),
Ареїа, епідермального фактора росту рецептора (ЕСЕК), рецептора 2 епідермального фактора росту людини (НЕК), тау, аполіпопротеїну Е (АроЕ), альфа-синуклеїну, СО20, хантинітину, пріонного білки (РгР), збагаченої лейциновими повторами кінази 2 (І КККЗ), паркіну, презеніліну 1, презеніліну 2, гамма-секретази, рецептора загибелі 6 (ОКб), білка-попередника амілоїду (АРР), рецептора нейротропіну р/5 (р/5МТК) і каспази 6. В іншому такому аспекті, мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з ВАСЕ1. В іншому такому аспекті, мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з Ареїа. В іншому такому аспекті, терапевтична сполука являє собою лікарський засіб проти неврологічного розладу.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує ізольовану нуклеїнову кислоту, що кодує будь-яке зі згаданих вище антитіл. В іншому аспекті, даний винахід пропонує клітину-хазяїна, що містить таку нуклеїнову кислоту. В іншому аспекті, даний винахід пропонує спосіб продукування будь-якого зі згаданих вище антитіл, який включає культивування такої клітини-хазяїна таким чином, що продукується антитіло, і який необов'язково додатково включає витягнення антитіла з клітини-хазяїна.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує фармацевтичний препарат, який містить будь-яке зі згаданих вище антитіл і фармацевтично прийнятний носій.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує будь- яке зі згаданих вище антитіл для застосування як лікарського препарату. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує застосування будь-якого зі згаданих вище антитіл при виробництві лікарського препарату для лікування неврологічного бо розладу. В одному з таких аспектів, неврологічний розлад вибирається з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, розладу очного захворювання, епілептичного розладу, лізосомної хвороби нагромадження, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, розладу поведінки і запалення СМ5.
В іншому аспекті розглянутого вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує будь-яке зі згаданих вище антитіл для застосування при лікуванні неврологічного розладу. В одному з таких аспектів, неврологічний розлад вибирається з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, розладу очного захворювання, епілептичного розладу, лізосомної хвороби нагромадження, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, розладу поведінки і запалення СМ5.
В іншому аспекті розглянутого вище варіанта здійснення, даний винахід пропонує будь-яке зі згаданих вище антитіл для застосування з метою перенесення однієї або декількох сполук через ВВВ. В іншому аспекті зазначеного вище варіанта здійснення, пропонується застосування будь-якого зі згаданих вище антитіл при виробництві лікарського препарату для перенесення однієї або декількох сполук через ВВВ.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, пропонується спосіб перенесення сполуки через ВВВ у суб'єкта, що включає експонування будь-якого зі згаданих вище антитіл для ВВВ таким чином, що антитіло переносить сполуку, зв'язану з ним, через ВВВ.
В іншому такому аспекті, ВВВ стосується суб'єкта-людини. В іншому такому аспекті, величина дози і/або частота введення модулюється для зменшення концентрації антитіла, для якого експонуються еритроцити. В іншому такому аспекті, спосіб додатково включає стадію моніторингу суб'єкта відносно збідніння еритроцитів. В іншому такому аспекті, антитіло, зв'язане зі сполукою, вводиться в терапевтичній дозі. В одному з таких аспектів, терапевтична доза є
ТІВ-насичувальною. В іншому такому аспекті, введення антитіла здійснюється в дозі і/або частоті дози, каліброваній для зведення до мінімуму гострих клінічних симптомів від введення антитіла.
В іншому аспекті розглянутого вище варіанта здійснення, пропонується спосіб збільшення експонування СМ5 суб'єкта для сполуки, що включає експонування будь-якого зі згаданих вище антитіл для ВВВ таким чином, що антитіло переносить сполуку, зв'язану з ним, через ВВВ. В іншому такому аспекті, ВВВ стосується суб'єкта-людини. В іншому такому аспекті, величина дози і/або частота введення модулюється для зменшення концентрації антитіла, для якого експонуються еритроцити. В іншому такому аспекті, спосіб додатково включає стадію моніторингу суб'єкта відносно збідніння еритроцитів. В іншому такому аспекті, антитіло, зв'язане зі сполукою, вводиться в терапевтичній дозі. В одному з таких аспектів, терапевтична доза є
ТІВ-насичувальною. В іншому такому аспекті, введення антитіла здійснюється в дозі і/або частоті дози, каліброваній для зведення до мінімуму гострих клінічних симптомів від введення антитіла.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, пропонується спосіб збільшення утримання в СМ5 сполуки, що вводиться суб'єкту, що включає експонування будь-якого зі згаданих вище антитіл для ВВВ таким чином, що утримання в СМ5 сполуки збільшується. В іншому такому аспекті, ВВВ стосується суб'єкта-людини. В іншому такому аспекті, величина дози і/або частота введення модулюється для зменшення концентрації антитіла, для якого експонуються еритроцити. В іншому такому аспекті, спосіб додатково включає стадію моніторингу суб'єкта відносно збідніння еритроцитів. В іншому такому аспекті, антитіло, зв'язане зі сполукою, вводиться в терапевтичній дозі. В одному з таких аспектів, терапевтична доза є
ТІВ-насичувальною. В іншому такому аспекті, введення антитіла здійснюється в дозі і/або частоті дози, каліброваній для зведення до мінімуму гострих клінічних симптомів від введення антитіла.
В одному з аспектів зазначеного вище варіанта здійснення, пропонується спосіб лікування неврологічного розладу в ссавця, що включає лікування ссавця за допомогою будь-якого зі згаданих вище антитіл. В одному з таких аспектів, неврологічний розлад вибирається з групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, розладу очного захворювання, епілептичного розладу, лізосомної хвороби нагромадження, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, розладу поведінки і запалення СМ5. В іншому такому аспекті, неврологічний розлад стосується суб'єкта-людини. В іншому такому аспекті, величина дози і/або частота введення модулюється для зменшення концентрації антитіла, для якого експонуються еритроцити. В іншому такому аспекті, спосіб додатково включає стадію моніторингу суб'єкта відносно збідніння еритроцитів. В іншому такому аспекті, антитіло, зв'язане зі сполукою, вводиться в терапевтичній дозі. В одному з таких аспектів, терапевтична доза є
ТІВ-насичувальною. В іншому такому аспекті, введення антитіла здійснюється в дозі і/або частоті дози, каліброваній для зведення до мінімуму гострих клінічних симптомів від введення антитіла.
В інших варіантах здійснення, даний винахід пропонує ізольоване антитіло, що зв'язується з таким же епітопом на ТІК, як і антитіло, вибране з групи, яка складається з антитіл 7А4, 8А2, 1502, 10011, 7810, 15211, 1625, 1303, 1604, 16Е6, 7.7, 402, 1812, 1304, 152011.м1, 15211.м2, 15211.м3, 152311.м4, 150511.м5, 7А4.м1; 7А4.м2, 7А4.м3, 7А4м4, 7А4м5, 7А4 мб, 7А4м7, 7А4 м8, 7ТА4.м9, 7А4.м10, 7А4.м11, 7А4.м12, 7А4.м13, 7А4.м14, 7А4.м15, 707.м1, 16Е6.м1, 16Е6.м2, 16Е6 м3, 16Е6.м4 150511.М52А, 150511.Т53А і 15511УУ92А.
В інших варіантах здійснення, пропонується спосіб зменшення виведення сполуки, що вводиться суб'єкту, де сполука зв'язується з антитілом, що зв'язується з низькою спорідненістю до ТЯ таким чином, що зменшується виведення сполуки і при цьому зменшується або усувається зниження рівнів еритроцитів у суб'єкта при введенні антитіла, зв'язаного зі сполукою.
В інших варіантах здійснення, пропонується спосіб оптимізації фармакокінетики і/або фармакодинаміки сполуки, щоб вона була ефективною у СМ5 суб'єкта, при цьому сполука зв'язується з антитілом, що зв'язується з ТІК з низькою спорідненістю, і антитіло вибирається таким чином, що його спорідненість з ТІК після зв'язування зі сполукою дає в результаті величину перенесення антитіла, кон'югованого зі сполукою, через ВВВ, що оптимізує фармакокінетику і/або фармакодинаміку сполуки в СМ5, де зменшується або усувається рівень еритроцитів у суб'єкта при введенні суб'єкту антитіла, зв'язаного зі сполукою.
Буде зрозуміло, що будь-який зі згаданих вище способів і композицій за даним винаходом може бути об'єднаний з іншими і/або з додатковими аспектами даного винаходу, описаними в даному описі.
Короткий опис фігур
Фігура 1 зображає тривимірну кристалічну структуру димеру ТІК у комплексі з ТІК, на основі файлу раб 35М9О. Відзначено апікальну область ТІК, що не зв'язується з ТІК.
Фігури 2А-28 зображають аналіз БАС5 зв'язування супернатантів батьківських клонів гібридоми мишей з ТІ людини і циномолгус, транзиторно експресованими в клітини 293 у присутності 1 мкМ голо-ТІК людини. Якщо не зазначено іншого, лінія, що обмежує сіре поле, на кожному графіку являє собою фон від детектування антитіл, сіра лінія середньої товщини являє собою зв'язування з 293 клітинами, які ендогенно експресують базальні рівні ТїЯК людини, товста чорна лінія представляє зв'язування з транзиторно експресованим ТІК людини, і тонка сіра лінія представляє зв'язування з транзиторно експресованим ТІК цино.
Фігура 2С зображає результати перехресно-реактивних конкурентних аналізів антитіла людини/циномолгус, як описано в Прикладі 1. Дев'ять з чотирнадцяти клонів, як виявлено, блокують зв'язування антитіла з апікальним зв'язуванням згідно з фаговим дисплеєм.
Фігури ЗА-1, ЗА-2, З3В-1, З3В-2, З30-1, 30-2, 30-1 ії 30-2 зображають послідовності варіабельних областей важких і легких ланцюгів клонів гібридоми, що зв'язуються з апікальними і не апікальними областями ТІК. Послідовності можуть додатково підрозділятися по епітопу і подібності послідовностей на клас І-Ш (апікальне зв'язування) і клас ІМ (не-апікальне зв'язування). НМЕК згідно з Кабраї зазначені за допомогою підкреслення.
Фігури 4А-1, 4А-2, 48-1, 48-2, 40-1, 40-2, 40-1 ії 40-2 зображають вирівнювання гуманізованих послідовностей для (А) 15011, (В) 7А4/8А2, (С) 707 і (0) 166. Кожна послідовність легкого або важкого варіабельного домену миші (другий рядок) вирівнюється по найближчій зародковій лінії людини або по консенсусному варіабельному домену (перший рядок). Гуманізована версія для кожного антитіла показана унизу (третій рядок). Відмінності від зародкової лінії людини або від консенсусної послідовності затінені. Послідовності НМЕ, що прищеплюються в каркас людини, обведені прямокутником. Показано визначення СОК згідно з
Кабаї.
Фігура 4Е-1 і 4Е-2 показують, що групи антитіл класу І-Ш, варіантні форми антитіл з модифікаціями на одному або декількох залишках ЕЕ. зберігають спорідненість і специфічність зв'язування.
Фігура 5 зображає зв'язування пи7А4.м15, пи15011.м5 і пи707.м1 з пит у присутності 6,3
МКМ голо-ТІК. Зв'язування антитіла на іммобілізованих пиТІКк показано в присутності (порожні символи і переривчасті лінії) або під час відсутності (зафарбовані символи і суцільні лінії) 6,3
МКМ голо-ТТА.
Фігури бА-В зображають результати аналізів зв'язування НЕЕ - Нит'йК і блокування НЕЕ, описаних у Прикладі 1. Фігура бА показує зв'язування антитіла при концентраціях питТІК, що збільшуються, захоплених за допомогою іммобілізованих НЕЕ. Фігура 6В показує зв'язування
ПиТІК на іммобілізованих НЕЕ у присутності збільшеної концентрації антитіла.
Фігури 7А-В зображають аналізи зв'язування 15011.м5 і 7А4.м5 Ідс і варіантів Раб Аїа з ТІК цино і людину, що демонструють впливи на спорідненість мутацій Аіа у СОК-ІЗ ї СОК-НЗ кожного антитіла, оцінюваних як дб, за допомогою зв'язування ЕГІЗА, і (дб або Раб - за допомогою аналізу 5РЕ іммобілізованих ТІК людини або цино, як описано в Прикладі 2.
Фігури 8А-В і Фігури 9А-В зображають результати експериментів, що оцінюють впливи статусу ефекторної функції на активність АЮОСС антитіл анти-ТЯЖК людини ("анти-пТЕК") у первинних мононуклеарних клітинах кісткового мозку людини або в лінії клітин еритробластів людини, як описано в Прикладі 4.
Фігура 10 зображає схему дозування і відбору зразків для досліджень на приматах, описаних у Прикладі 5.
Фігури 11А-118 зображають фармакокінетичні результати експериментів, описаних у
Прикладі 5, конкретно, індивідуальні і середні по групах концентрації в сироватці анти-
ТА '"/ВАСЕТ, анти-ТТВ2/ВАСЕТ і анти-д90, як функцію часу після однократного внутрішньовенного введення болюсу при 30 мг/кг на мавпах циномолгус у сироватці (Фігура 11А) і СЕ (Фігура 118).
Фігури 12А-12Е зображають фармакодинамічні результати експериментів, описаних у
Прикладі 5, конкретно, індивідуальні і середні по групах концентрації анти- ТА'/ВАСЕЇ1, анти-
ТІВ?/ВАСЕЇ і анти-дО у плазмі (А) або в С5Е (В-Е) як функцію часу після однократного внутрішньовенного введення болюсу при 30 мг/кг мавпам циномолгус. Верхні панелі показують рівні Абеїа:-ао у плазмі (Фігура 12А) і С5Е (Фігура 128), у той час як нижні панелі показують рівні розчинного АРР (Фігура 12С), рівні розчинного АРРВ (Фігура 120) і відношення 5зАРРДВ/5АРРа (Фігура 12Е) як функцію часу.
Фігури 13А-130 зображають результати відбору гематологічних зразків, здійснюваного протягом досліджень, описаних у Прикладі 5. У кожній із зазначених часових точок загальна кількість ретикулоцитів (Фігура 13 А), еритроцитів (Фігура 13В), гемоглобіну (Фігура 130) і відсоток незрілих ретикулоцитів у загальному пулі ретикулоцитів (Фігура 13С) вимірюють із використанням стандартних методик.
Фігура 14 зображає схему дозування і відбору зразків для дослідження на приматах, описаного в Прикладі 6.
Фігури 15А-158 зображають фармакодинамічні результати (А) і концентрації антитіла в
Зо головному мозку (В) для експериментів, описаних у Прикладі 6. Конкретно, Фігура 15А показує індивідуальні і середні по групах відношення анти-ТІВ'/ВАСЕЇ1, анти-ТТ8"/ВАСЕЇ1, анти-дО і анти-ВАСЕ1 для 5хАРРДВ/5АРРа у С5Е, як функцію часу після однократного внутрішньовенного введення болюсу при 30 мг/кг мавпам циномолгус. Фігура 158 показує індивідуальні концентрації антитіла анти-ТТВ'/ВАСЕ1, анти-ТВ82/ВАСЕ1, анти-900 і анти-ВАСЕЇ1 у різних областях головного мозку через 24 години після дозування.
Фігури 16А-В зображають послідовності амінокислот легких і важких ланцюгів клону
УМІ412.8 анти-ВАСЕЇ1Ї, отриманого з наївної бібліотеки фагових дисплеїв природного різноманіття, і форм УМ/412.8 з дозрілою спорідненістю. Фіг. 16А зображає вирівнювання варіабельних легких (МІ) послідовностей (5ЕО ОО МО. 132-137). Фіг. 168 зображає вирівнювання варіабельних важких (УН) послідовностей (ЗЕО ІЮ МО. 138-139). На обох фігурах, послідовності НМК для кожного клону показані за допомогою областей, обведених прямокутником, при цьому перший прямокутник показує НМК-11 (Фіг. 16А) або НМЕ-НІ (фіг. 168), другий прямокутник показує НМЕ-1 2 (Фіг. 16А) або НМЕА-НаІ (фіг. 168) і третій прямокутник показує НМЕ-І3 (Фіг. 16А) або НМЕ-НЗ (Фіг. 168).
Фігури 17А-В зображають послідовності амінокислот легких і важких ланцюгів клону Рар 12 антитіла анти-ВАСЕЇ, отриманих з наївної бібліотеки фагових дисплеїв синтетичного різноманіття, і форми Раб 12 з дозрілою спорідненістю. Фіг. 17А зображає вирівнювання послідовності легкого ланцюга (ЗЕО ІЮ МО. 140-143). Фігм. 178 зображає вирівнювання послідовності важкого ланцюга (ЗЕО ІЮ МО. 144). На обох фігурах, послідовності НМА для кожного клону показані за допомогою областей, обведених прямокутником, при цьому перший прямокутник показує НМЕ-11 (Фіг. 17А) або НМЕ-НІ (Фіг. 178), другий прямокутник показує НМК-
І2 (Фіг. 17А) або НМЕ-НЗ (Фіг. 17В) і третій прямокутник показує НМЕ-1І З (Фіг. 17А) або НМЕ-НЗ (Фіг. 178).
Фігури 18А-В зображають важкий ланцюг (Фіг. 18А; 5ЕО ІО МО. 145) і легкий ланцюг (Фіг. 188; 5ЕО ІЮ МО. 146) ілюстративного антитіла анти-Абеїа.
Фігура 19 зображає фармакокінетичні властивості анти-ТА'/ВАСЕЇ1, анти-ТТАР2/ВАСЕЇ! і анти-ТІАЗА/ВАСЕЇТ, як описано в Прикладі 5.
Фігура 20 зображає фармакокінетичні властивості антитіл анти-ТІВСР/ВАСЕЇ ії анти-д0 Ідага мишачих з мутаціями ефекторної функції Ес ГАГАРОС, як описано в Прикладі 7.
Фігура 21 зображає загальну кількість і кількість незрілих ретикулоцитів у мишей через 24 години після введення дози 50 мг/кг антитіл анти-ТІВР/ВАСЕ1 і анти-40О0 Ідсг2га мишачих з мутаціями ефекторної функції Ес Г АГАРС, як описано в Прикладі 7.
Фігура 22 зображає загальну кількість ретикулоцитів у мишей через 24 години після введення дози 50 мг/кг антитіл анти- ТТАР2/ВАСЕ1 (М2970), анти- ПТАР2У/ВАСЕТ (І АГ АРОС), анти-
ТІАР2А/ВАСЕТ (ГАЇ АРО/УТЕ), ТТАР2/ВАСЕ1 (ГАГАРС/АЇ) мишам, нокаутованим рецепторами трансферину людини, як описано в Прикладі 8.
Фігура 23 зображає результати експериментів, що оцінюють вплив статусу ефекторної функції на активність АОСС антитіл анти-ТЯК/90О0, анти-ПТР/ВАСЕ1 (М2975), анти-ТВ/ВАСЕ1 (АГ АРС), анти-ПК/ВАСЕ1 (М2970/434А/436І) і анти-ПР/ВАСЕ1 (ГАГАРС/УТЕ) у первинних мононуклеарних клітинах кісткового мозку людини або у лінії клітин еритробластів людини, як описано в Прикладі 8.
Фігура 24 зображає послідовності варіабельних областей важкого і легкого ланцюга 15110бу.5 (легкий ланцюг - 5ЕО ІЮ МО:105 і важкий ланцюг - БО ІЮ МО:108) і варіантів спорідненості 15511.52А (легкий ланцюг - ЗЕО ІЮ МО:105 і важкий ланцюг - БЕО ІЮ МО:153), 150611.53А (легкий ланцюг - 5ЕО ІЮ МО:105 і важкий ланцюг - 5ЕО ІЮ МО:154) і 15511.92А (легкий ланцюг - БЕО ІО МО:151 і важкий ланцюг - БЕО ІО МО:108). НМК згідно з Кабаї показані за допомогою підкреслення.
Фігура 25 зображає конкурентний аналіз порівняння між 15011у.5 і анти-ТІВУ2, як описано в
Прикладі 1.
Докладний опис варіантів здійснення даного винаходу 1. Визначення "Спорідненість" стосується сили суми загальних нековалентних взаємодій між окремим сайтом зв'язування молекули (наприклад, антитіла) і її партнером по зв'язуванню (наприклад, антигеном). Якщо не зазначено іншого, як використовується в даному документі, "спорідненість зв'язування" стосується власної спорідненості зв'язування, що відображає взаємодію 1:1 між елементами пари зв'язування (наприклад, антитілом і антигеном). Спорідненість молекули Х до її партнера МУ може, у цілому, бути представлена за допомогою константи дисоціації (КО, що являє собою відношення швидкості від'єднання Х від У (Ка або Коїї) до швидкості асоціації Х і У
Зо (Ка або Коп)). Сурогатний вимір для спорідненості одного або декількох антитіл до їхньої мішені являє собою їх половинну максимальну інгібіторну концентрацію (ІС50), міру того, скільки антитіла потрібно для інгібування зв'язування відомого ліганду з цільовим антитілом на 5095.
Спорідненість може вимірюватися за допомогою звичайних способів, відомих у даній галузі, включаючи ті, які описані в даному документі. Конкретні ілюстративні і зразкові варіанти здійснення для вимірювання спорідненості зв'язування описані в даному документі. "Гематоенцефалічний бар'єр або "ВВВ" стосується фізіологічного бар'єра між периферичним кровообігом і головним мозком і спинним мозком (тобто СМ5), що формується за допомогою щільних переходів за допомогою плазматичних мембран ендотелію капілярів головного мозку, які створюють щільний бар'єр, що обмежує перенесення молекул у головний мозок, навіть дуже малих молекул, таких як сечовина (60 Дальтонів). Гематоенцефалічний бар'єр у головному мозку, гематоспінальний бар'єр у спинному мозку і гематоретинальний у сітківці ока являють собою суцільні капілярні бар'єри в СМ5, і вони колективно згадуються в даному документі як гематоенцефалічний бар'єр або ВВВ. ВВВ також охоплює гемато-С5Е бар'єр (хороїдне сплетення), де бар'єр складається з епендимних клітин замість капілярних ендотеліальних клітин.
Терміни "амілоїд бета", "бета-амілоїд", "Ареїа", "амілоїдр" і "АВ", використовувані в даному документі взаємозамінно, стосуються фрагмента білка-попередника амілоїду (АРР"), який продукується при розщепленні АРР за допомогою р-секретази 1 ("ВАСЕ1"), а також його модифікацій, фрагментів і будь-яких функціональних еквівалентів, включаючи, але не обмежуючись цим, АВІ-о ії АВД:-42. АД, як відомо, існує в мономерній формі, а також асоціюється з утворенням олігомерів і фібрилярних структур, які можуть виявлятися як складові елементи амілоїдних бляшок. Структура і послідовності таких пептидів АВ добре відомі фахівцям у даній галузі, і способи продукування зазначених пептидів або витягнення їх з головного мозку й інших тканин описані, наприклад, у СіІіеппег апа УмМопд, Віоспет Віорпуз Ке5. Сотт. 129:885-890 (1984).
Крім того, пептиди АВ є також комерційно доступними в різноманітних формах. "Імуноглобулін анти-Абеїа", "антитіло анти-АБейа" і "антитіло, яке зв'язує Абеїа" використовуються в даному документі взаємозамінно, і стосуються антитіла, що специфічно зв'язується з Ареїа людини. Необмежувальний приклад антитіла анти-Абеїа являє собою 60 кренезумаб. Інші необмежувальні приклади антитіл анти-Абеїа являють собою соланезумаб,
бапінезумаб, гантенезумаб, адуканумаб, понезумаб і будь-які інші антитіла анти-Абеїа, описані в наступних публікаціях: МО 2000162801, УМО 2002046237, УМО 2002003911, МО 2003016466,
МО 2003016467, МО 2003077858, МО 2004029629, МО 2004032868, МО 2004032868, МО 2004108895, МО 2005028511, МО 2006039470, МО 2006036291, МО 2006066089, УМО 2006066171, МО 2006066049, МО 2006095041, МО 2009027105.
Терміни "кренезумаб" і "МАВТ5Ь102А" використовуються в даному документі взаємозамінно, і стосуються конкретного антитіла анти-Абеїа, що зв'язується з мономерними, олігомерними і фібрилярними формами АБбейа, і які зв'язані з САЗ гедібігу питбрег 1095207. В одному з варіантів здійснення, таке антитіло містить послідовності, наведені на Фігурах 184А і 188. "Носій аполіпопротеїну Е4" або "носій АроЕ4" використовуються в даному документі взаємозамінно з "позитивним по аполіпопротеїну Е4" або "позитивним по АроЕ4" і стосується індивідуума, що має щонайменше одну алель аполіпопротеїну Е4 (або "АроЕ4"). Індивідуум з нулем алелей АроЕЯ4 згадується в даному документі як такий, що є "негативним по АроЕ4" або "не носій АроЕ4". Дивися також РгеКипаг, еї аї!., 1996, Ат. 9. Рашої. 148:2083-95.
Термін "церебральний вазогенний набряк" стосується надлишкової акумуляції внутрішньосудинної рідини або білка у внутрішньоклітинних або позаклітинних просторах головного мозку. Церебральний вазогенний набряк детектується, наприклад, за допомогою МЕ (магнітної резонансної томографії) головного мозку, включаючи, але не обмежуючись цим
ЕГАЇїК МК, і може бути безсимптомним ("безсимптомний вазогенний набряк") або зв'язаним з неврологічними симптомами, такими як сплутаність свідомості, запаморочення, нудота і летаргія ("симптоматичний вазогенний набряк") (дивися 5регпіпо еї аіІ. АІ7/леійтег5 8 ЮОетепійа, 7:367, 2011).
Термін "церебральний макрокрововилив" стосується внутрішньочерепного крововиливу або кровотечі в головному мозку, площа якого становить більше приблизно 1 см у діаметрі.
Церебральний макрокрововилив детектується, наприклад, за допомогою МЕ головного мозку, включаючи але не обмежуючись цим, Т27"-зважену СКЕ МКІ, і може бути безсимптомним ("безсимптомний макрокрововилив") або пов'язаним із симптомами, такими як тимчасове або постійне осередкове ослаблення моторики або сенсорики, атаксія, афазія і дизартрія ("симптоматичний макрокрововилив") (дивися, наприклад, Спаієеіїа УА, Сботев5 У. Ехрегпі Кем.
Коо) Меишгоїпег. 2004 4267, 2004 апа Зрепіпа еї а. АІ2Аеїтег5 в Оетепіїа, 7:367, 2011).
Термін "церебральний мікрокрововилив" стосується внутрішньочерепного крововиливу або кровотечі в головному мозку, площа якого становить менше приблизно ніж 1 см у діаметрі.
Церебральний мікрокрововилив детектується, наприклад, за допомогою МКІ головного мозку, включаючи, але не обмежуючись цим, Т27-зважену СКЕ МР, і може бути безсимптомним ("безсимптомний мікрокрововилив") або може потенційно бути пов'язаним 3 такими симптомами, як тимчасове або постійне осередкове ослаблення моторики або сенсорики, атаксія, афазія і дизартрія ("симптоматичний мікрокрововилив"). Дивися, наприклад, сгеепрего, еї аї., 2009, І апсеї Мештої. 8:165-74.
Термін "сулькальний випіт" стосується випоту рідини в борозенці або в звивині головного мозку. Сулькальні випоти детектуються, наприклад, за допомогою МКІ! головного мозку, включаючи але не обмежуючись цим, РІГ АЇК МЕ. Дивися 5регійпо еї а. АІ2Неітегв 4 Оетепіа, 7:367, 2011.
Термін "поверхневий сидероз центральної нервової системи" стосується кровотечі або крововиливу в субарахноїдальній області головного мозку і детектується, наприклад, за допомогою МЕ головного мозку, включаючи але не обмежуючись цим, Т2"-зважену СОКЕ МР.
Симптоми, що вказують на поверхневий сидероз центральної нервової системи, включають перцептивну глухоту, мозочкову атаксію і пірамідальні ознаки. Дивися Китага-М, Ат У
Меишгогадіо!ї. 31:5, 2010.
Термін "амілоїдоз", як використовується в даному документі, стосується групи захворювань і
БО розладів, які викликаються амілоїдом або амілоїдоподібними білками або асоційованими з ними, і включає, але не обмежуючись цим, захворювання і розлади, які викликаються присутністю або активністю амілоїдоподібних білків у мономерному, фібрилярному або полімерному стані, або в будь-якому сполученні з цих трьох станів, включаючи амілоїдні бляшки. Такі захворювання включають, але не обмежуючись цим, вторинний амілоїдоз і віковий амілоїдоз, наприклад, захворювання, включаючи, але не обмежуючись цим, неврологічні розлади, такі як хвороба Альцгеймера ("А"), захворювання або стани, характеризовані втратою когнітивної здатності пам'яті, такі, наприклад, як помірні когнітивні порушення (МС), деменція з тільцями Леві, синдром Дауна, спадковий крововилив у мозок з амілоїдозом (Голландського типу), Гуамський комплекс хвороба Паркінсона - деменція й інші захворювання, 60 що основані на амілоїдоподібних білках або асоціюються з ними, такі як прогресуючий супрануклеарний параліч; множинний склероз, хвороба Крейтцфельда-Якоба, хвороба
Паркінсона, деменція, пов'язана з ВІЛ, АЇ5 (бічний аміотрофічний склероз), міозит із включеними тільцями (ІВМ), діабет дорослих, ендокринна пухлина і сенільний серцевий амілоїдоз, і різноманітні захворювання очей, включаючи дистрофію жовтої плями, пов'язану з друзами невропатію зорового нерва, глаукому і катаракту, пов'язані з відкладеннями бета- амілоїдів.
Глаукома являє собою групу захворювань зорового нерва, що включають втрату гангліонних клітин сітківки (КОС) у вигляді характерної структури оптичної нейропатії. КОС являють собою нервові клітини, які передають зорові сигнали від ока в головний мозок. Каспаза-3 і Каспаза-8, два головні ферменти в апоптичному процесі, активуються в процесі, що приводить до апоптозу
КОС. Каспаза-3 розщеплює білок-попередник амілоїду (АРР) із продукуванням нейротоксичних фрагментів, включаючи Абеїа. Без захисного впливу АРР акумуляція Абреїа у шарі гангліонних клітин сітківки приводить у результаті до загибелі КОС і необоротної втрати зору.
Глаукома часто, але не завжди, супроводжується підвищенням очного тиску, що може бути результатом блокування циркуляції водного середовища або його дренування. Хоча підвищений внутрішньоочний тиск є важливим чинником ризику для розвитку глаукоми, не можна визначити поріг внутрішньоочного тиску, що, напевно, викликав би глаукому.
Ушкодження може також викликатися поганим кровопостачанням вітальних волокон зорового нерва, слабістю структури нерва і/або проблемою зі здоров'ям самих нервових волокон.
Нелікована глаукома приводить до постійного ушкодження зорового нерва і втрати поля зору, що виникає в результаті, що може поступово привести до сліпоти.
Термін "легка хвороба Альцгеймера" або "легка АЮ", як використовується в даному документі (наприклад, "пацієнт із діагнозом легка АБ"), стосується стадії АОС, що відрізняється оцінкою ММ5Е від 20 до 26.
Термін "легка - помірна хвороба Альцгеймера" або "легка - помірна АЮ" як використовується в даному документі, охоплює як легку, так і помірну АБ, і відрізняється оцінкою ММЗ2Е від 18 до 26.
Термін "помірна хвороба Альцгеймера" або "помірна АЮ" як використовується в даному документі (наприклад, "пацієнт із діагнозом помірна АО") стосується стадії АО, що відрізняється оцінкою ММЗ2Е від 18 до 19. "Центральна нервова система" або "СМ5" стосується комплексу нервових тканин, що контролюють функції організму, і вона включає головний мозок і спинний мозок. "Рецептор гематоенцефалічного бар'єра" (у даному документі скорочено "ВВВ-К") являє собою трансмембранний рецепторний білок, експресований у ендотеліальних клітинах головного мозку, що може переносити молекули через гематоенцефалічний бар'єр. Приклади
ВВВ-К включають, але не обмежуючись цим: рецептор трансферину (ТІК), рецептор інсуліну, рецептор інсуліноподібного фактора росту (ІСБ-К), рецептори ліпопротеїнів низької густини, що включають, без обмеження, білок 1, зв'язаний з рецептором ліпопротеїнів низької густини (ІК), і білок 8, зв'язаний з рецептором ліпопротеїнів низької густини (І КРВ8), переносник глюкози 1 (СІшИ) ії фактор росту, що зв'язує гепарин, подібний епідермальному фактору росту (НВ-ЕСЕ).
Ілюстративний ВВВ-К у даному документі являє собою рецептор трансферину (ТІК).
Термін "рецептор трансферину" або "ТТ", як використовується в даному документі, стосується будь-якого нативного ТІК з будь-якого джерела - хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризунів (наприклад, мишей і щурів), якщо не зазначено іншого. Термін охоплює "повнорозмірний" непроцесований ТТ, а також будь-яку форму ТІК, що виходить у результаті процесингу в клітині. Термін також охоплює варіанти ТІК, що зустрічаються в природі, наприклад, сплайсовані варіанти або алельні варіанти. ТІК являє собою трансмембранний глікопротеїн (з молекулярною масою приблизно 180000), що складається з двох дисульфідно зв'язаних субодиниць (кожна з видимою молекулярною масою приблизно 90000), залучений у споживання заліза в хребетних тварин. В одному з варіантів здійснення, ТІК у даному документі являє собою ТІК людини ("ПТК"), що містить послідовність амінокислот, як наведено в Зсппеїдег еї аЇ. Маїиге 311:675 - 678 (1984), наприклад, (ЗЕО ІЮ
МО:1). В інших варіантах здійснення, ТІК у даному документі являє собою ТІК приматів ("ртІїк"), що містить послідовність амінокислот, як наведено в посиланні зЗепрапк АБО 18260.1 (5ЕО 10
МО:2). Для порівняння, послідовність ТІК миші можна знайти в посиланні зепрапк ААН54522.1 (ЗЕО ІО МО:3). "Неврологічний розлад", як використовується в даному документі, стосується захворювання або розладу, який впливає на СМ і/або який має етіологію в СМ5. Ілюстративні захворювання або розлади СМ5 включають, але не обмежуючись цим, невропатію, амілоїдоз, рак, очне 60 захворювання або розлад, вірусні або мікробні інфекції запалення, ішемію,
нейродегенеративне захворювання, епілепсію, розлади поведінки і лізосомну хворобу нагромадження. Для цілей даної заявки, СМ5 буде, як розуміється, включати око, яке, звичайно відокремлюється від іншої частини організму, гематоретинальним бар'єром. Конкретні приклади неврологічних розладів включають, але не обмежуючись цим, нейродегенеративні захворювання (включаючи, але не обмежуючись цим, захворювання з тільцями Леві, постполіомієлітний синдром, синдром Ши-Дрегера, оливомостомозочкову атрофію, хворобу
Паркінсона, множинну системну атрофію, стріатонігральну дегенерацію, таутопатії (включаючи, але не обмежуючись цим, хворобу Альцгеймера і супрануклеарний параліч), пріонні захворювання (включаючи, але не обмежуючись цим, губкоподібну енцефалопатію великої рогатої худоби, скрейпі, синдром Крейтцфельда-Якоба, куру, хворобу Герштмана-Штрауслера-
Шайнкера, хронічну вастинг-хворобу і фатальну спадкову інсомнію), бульбарний параліч, бічний аміотрофічний склероз і гетеродегенеративні розлади нервової системи (включаючи, але не обмежуючись цим, хворобу Канавана, хворобу Хантингтона, нейрональний цероїд- ліпофусциноз, хворобу Олександра, синдром Туретта, синдром кучерявого волосся Менкеса, синдром Кокейна, синдром Халервордена-Шпатца, хворобу Лафора, синдром Ретта, гепатолентикулярну дегенерацію, синдром Леша-Ніхана і синдром Унферіхта-Лундборга), деменцію (включаючи, але не обмежуючись цим, хворобу Піка і спінально-церебелярну атаксію), рак (наприклад, СМ5, включаючи метастази в головний мозок, що виникають у результаті раку де-небудь в організмі). "Лікарський засіб проти неврологічного розладу" являє собою лікарський засіб або терапевтичний агент, що лікує один або кілька неврологічних розладів. Лікарські засоби проти неврологічних розладів за даним винаходом включають, але не обмежуючись цим, антитіла, пептиди, білки, природні ліганди однієї або декількох мішеней у СМ5, модифіковані версії природних лігандів однієї або декількох мішеней у СМ5, аптамери, інгібіторні нуклеїнові кислоти (тобто малі інгібіторні РНК (5іеМА) і короткі шпилькові РНК (5ПЕМА)), рибозими і малі молекули або активні фрагменти будь-якої зі згаданих вище сполук. Ілюстративні лікарські засоби проти неврологічних розладів за даним винаходом описуються в даному документі і включають, але не обмежуючись цим: антитіла, аптамери, білки, пептиди, інгібіторні нуклеїнові кислоти і малі молекули, і активні фрагменти будь-яких зі згаданих вище сполук, які або самі собою
Зо представляють, або специфічно розпізнають і/або впливають (тобто інгібують, активують або детектують її) на антиген у СМ5 або цільову молекулу, таку як, але не обмежуючись цим, білок- попередник амілоїду або його частини, амілоїд бета, бета-секретаза, гамма-секретаза, тау, альфа-синуклеїн, паркін, хантингтин, ОР, презенілін, АроЕ, гліома або інші маркери раку СМ5 і нейротрофіни. Необмежувальні приклади лікарських засобів проти неврологічних розладів і розладів, при яких їх можна використовувати для лікування, наводяться в поданій далі
Таблиці 1.
Таблиця 1
Необмежувальні приклади лікарських засобів проти неврологічних розладів і відповідні розлади, для лікування яких їх можна використовувати пошкодження мозку, інсульт пошкодження спинного мозку
Нейротрофічний фактор, отриманий із .
Хронічне пошкодження головного мозку фібробластів 2 (ЕСЕ-2
Антитіло анти-рецептор епідерсального
Невральний фактор, отриманий з лінії .
Ка те йон . - Розлади лізосомального накопичення головного
Силіарний нейротрофічний фактор (СМТЕ) транстузумаб, пертузумаб, і тому подібне) позитивного раку діагностована, злоякісна гліома, що бевацизумаб) : . відновлюється, метастази в головной мозок "Агент для одержання зображень" являє собою сполуку, що має одну або кілька властивостей, що дозволяє детектувати прямо або побічно її присутність і/або положення.
Приклади таких агентів для одержання зображень включають білки і низькомолекулярні сполуки, що містять мічений залишок, що уможливлює детектування. "Антиген СМ5 " або "антиген головного мозку" являє собою антиген, експресований у СМ5, включаючи головний мозок, на який може націлюватися антитіло або мала молекула. Приклади таких антигенів включають, без обмеження: бета-секретазу 1 (ВАСЕЇ), амілоїд бета (Абегїа), рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕК), рецептор 2 епідермального фактора росту людини (НЕК), тау, аполіпопротеїн Е4 (АроЕ4), альфа-синуклеїн, СО20, хантинітин, пріонний білок (РгР), збагачену лейциновими повторами кіназу 2 (І ЕКК2), паркін, презенілін 1, презенілін 2, гамма-секретазу, рецептор загибелі 6 (ОКб), білок-попередник амілоїду (АРР), рецептор нейротрофіну р75 (р/5МТК), рецептор інтерлейкіну б (16К), рецептор ТМЕ 1 (ТМЕК'І), інтерлейкін 1 бета (І/1рД) і каспазу 6. В одному з варіантів здійснення, антиген являє собою
ВАСЕТ.
Термін "ВАСЕ1", як використовується в даному документі, стосується будь-якої нативної бета-секретази 1 (яка також називається фермент 1, що розщеплює р-сайт білка-попередника амілоїду, асоційована з мембраною аспарагілпротеаза 2, мемапсин 2, аспартилпротеаза 2 або
Авзр2) від будь-якого джерела хребетної тварини, включаючи ссавців, таких як примати (наприклад, люди) і гризуни (наприклад, миші і щури), якщо не зазначено іншого. Термін охоплює "повнорозмірну" непроцесовану ВАСЕЇТ, а також будь-яку форму ВАСЕЇТ, що виходить у результаті процесингу в клітині. Термін також охоплює варіанти, що зустрічаються в природі,
ВАСЕЇТ1, наприклад, сплайсовані варіанти або алельні варіанти. Послідовність амінокислот ілюстративного поліпептиду ВАСЕ1 являє собою послідовність для ВАСЕ1 людини, ізоформа А, як повідомляється в Маззаг єї аї., зсіепсе 286:735-741 (1999), що включається в даний документ як посилання у всій своїй повноті. Існують декілька інших ізоформ ВАСЕТ людини, включаючи ізоформи В, С і ОЮ. Дивися ОпіРгоїкВ/5м/із5-Ргої Епігу РУ6817, що включається в даний документ
Зо як посилання у всій своїй повноті.
Терміни "антитіло анти-бета-секретаза", "антитіло анти-ВАСЕТ1", "антитіло, що зв'язується з бета-секретазою" і "антитіло, що зв'язується з ВАСЕ1" стосуються антитіла, що може зв'язувати
ВАСЕЇ з достатньою спорідненістю, так що антитіло є корисним як діагностичний і/або терапевтичний агент при націлюванні на ВАСЕЇ1. В одному з варіантів здійснення, ступінь зв'язування антитіла анти-ВАСЕЇ з неспорідненим білком, відмінним від ВАСЕЇ, менше приблизно ніж 10 95 від зв'язування антитіла з ВАСЕЇ1, як вимірювано, наприклад, за допомогою радіоїмунного аналізу (КІА). У визначених варіантах здійснення, антитіло, що зв'язується з
ВАСЕЇТ, має константу дисоціації (Ка) «1 мкМ, «100 нМ, «10 нМ, «1 нМ, «0,1 нМ, «0,01 нМ або «0,001 нМ (наприклад, 1029М або менше, наприклад, від 108М до 10-3М, наприклад, від 109М до 10-3М). У визначених варіантах здійснення, антитіло анти-ВАСЕЇ1 зв'язується з епітопом ВАСЕЇ1, що є консервативним серед ВАСЕТ від різних видів і ізоформ. В одному з варіантів здійснення, пропонується антитіло, що зв'язується з епітопом на ВАСЕТ, зв'язаним з антитілом анти-ВАСЕ 1 "УМ412.8.31. В інших варіантах здійснення, пропонується антитіло, що зв'язується з екзосайтом у ВАСЕ1, розташованим у каталітичному домені ВАСЕ1. В одному з варіантів здійснення, пропонується антитіло, що конкурує з пептидами, ідентифікованими в Копаскег еї а!., Віоспет. 44:11567-11573 (2005), що включається в даний документ як посилання у всій своїй повноті, (наприклад, пептиди 1, 2, 3, 1-11, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 2-12, 3-12, 4-12, 5-12, 6-12, 7-12, 8-12, 9- 12, 10-12, 4, 5, 6, 5-10, 5-9, рандомізовані, У5А, РбА, У7А, ЕВА, І9А, РІ1ОА і І 114А), за зв'язування з ВАСЕТ. Ілюстративні послідовності антитіла ВАСЕ1 зображені на Фіг. 15А-В і Фіг. 16А-В. Одне з ілюстративних антитіл у даному документі містить варіабельні домени антитіла УУу412.8.31 (наприклад, як на фігурах 15А-В).
Білок з "нативною послідовністю" у даному документі стосується білка, що містить послідовність амінокислот білків, що зустрічаються в природі, включаючи варіанти білка, що зустрічаються в природі. Термін, як використовується в даному документі, включає білок, як ізольований з його природного джерела або як отриманий рекомбінантно.
Термін "антитіло" у даному документі використовується в найширшому змісті й охоплює різноманітні структури антитіл, включаючи, але не обмежуючись цим, моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла) і фрагменти антитіл стільки, скільки вони демонструють бажану активність зв'язування антигенів.
Зо "Фрагмент антитіла" стосується молекули іншої, ніж інтактне антитіло, що містить частину інтактного антитіла, що зв'язує антиген, з яким зв'язується інтактне антитіло. Приклади фрагментів антитіл добре відомі в даній галузі (дивися, наприклад, Меї5оп, МАбБз» (2010) 2(1):77 - 83) і включають але не обмежуючись цим, Раб, Бар Раб'і5Н, Кіа)» їі Гм; діатіла; лінійні антитіла; одноланцюжкові молекули антитіл, включаючи, але не обмежуючись цим, одноланцюжкові варіабельні фрагменти (5сЕм), продукти злиття доменів легкого і/або важкого ланцюга, які зв'язують антиген, з лінкером або без нього (і необов'язково, у тандемі); і моноспецифічні або мультиспецифічні молекули, що зв'язують антиген, сформовані з фрагментів антитіл (включаючи, але не обмежуючись цим, мультиспецифічні антитіла, сконструйовані з множини варіабельних доменів, у яких відсутні Ес-області).
Термін "моноклональне антитіло", як використовується в даному документі, стосується антитіла, отриманого з популяції по суті гомогенних антитіл, тобто індивідуальні антитіла, що складають популяцію, є ідентичними і/або зв'язуються з тим самим епітопом, за винятком можливих варіантів, наприклад, які містять мутації, що зустрічаються в природі, або вони можуть виникнути під час продукування моноклонального антитіла, такі варіанти, як правило, присутні в малих кількостях. На противагу препаратам поліклональних антитіл, що, як правило, містять антитіла, спрямовані проти різних детермінантів (епітопів), кожне моноклональне антитіло препарату моноклонального антитіла спрямовано проти одного детермінанта на антигені. Прикметник "моноклональне" вказує на характер антитіла як одержуваного по суті з гомогенної популяції антитіл, і воно не повинно розглядатися як антитіло, що потребує одержання, яким-небудь конкретним способом. Наприклад, моноклональні антитіла, що повинні використовуватися відповідно до даного винаходу, можуть бути приготовлені за допомогою різноманітних методик, включаючи але не обмежуючись цим, метод гібридоми (дивися, наприклад, Копіег еї аї., Маїиге, 256:495 (1975)), методи з використанням рекомбінантної ДНК (дивися, наприклад, патент США Мо 4816567), методи фагового дисплея (наприклад, з використанням методик, описаних у Сіаскзоп еї аї., Маїшге, 352:624-628 (1991), і Магкз еї аї.,..
Мої Віої, 222:581-597 (1991)), і способи, що використовують трансгенних тварин, які містить усі локуси імуноглобуліну людини або частину їх, такі способи й інші ілюстративні способи одержання моноклональних антитіл описуються в даному документі. Конкретні приклади моноклональних антитіл у даному документі включають химерні антитіла, гуманізовані антитіла бо й антитіла людини, включаючи їхні фрагменти, що зв'язують антиген.
Моноклональні антитіла в даному документі конкретно включають "химерні" антитіла (імуноглобуліни), у яких частина важкого і/або легкого ланцюга є ідентичною або гомологічною відповідним послідовностям в антитілах, отриманих від конкретних видів або належних до конкретного класу або підкласу антитіл, у той час як інша частина ланцюга (ланцюгів) є ідентичною або гомологічною відповідним послідовностям в антитілах, отриманих від інших видів або належних до іншого класу або підкласу антитіл, а також фрагменти таких антитіл, стільки, скільки вони демонструють бажану біологічну активність (патент США Мо 4816567;
Могттізоп еї аї., Ргос. Маї! Асай. 5сі. ОБА, 81:6851-6855 (1984)). "Акцепторний каркас людини" для цілей даного документа являє собою каркас, що містить послідовність амінокислот каркаса варіабельного домену легкого ланцюга (МІ) або каркаса варіабельного домену важкого ланцюга (УН), отриманий з каркаса імуноглобуліну людини або консенсусного каркаса людини, як визначено нижче. Акцепторний каркас людини, "отриманий з" каркаса імуноглобуліну людини або консенсусного каркаса людини, може містити його послідовність амінокислот, або він може містити зміни в послідовності амінокислот. У деяких варіантах здійснення, кількість змін амінокислот становить 10 або менше, 9 або менше, 8 або менше, 7 або менше, 6 або менше, 5 або менше, 4 або менше, З або менше або 2 або менше. У деяких варіантах здійснення, акцепторний каркас Мі людини ідентичний по послідовності каркаса Мі. імуноглобуліну людини або послідовності консенсусного каркаса людини. "Консенсусний каркас людини" являє собою каркас, що являє собою залишки амінокислот, які найбільш часто зустрічаються, при виборі послідовностей каркаса Мі або МН імуноглобуліну людини. Як правило, вибір послідовностей МІ або МН імуноглобуліну людини здійснюють з підгрупи послідовностей варіабельних доменів. Як правило, підгрупа послідовностей являє собою підгрупу як у Кабаї єї аІ., Зедоепсез ої Ргоїеіп5 ої Іттипоїодісаї! ої Іпіегеві, Бій Еайіоп,
МІН Рибіїсайоп 91-3242, Веїтезаа МО (1991), мої!5. 1-3. В одному з варіантів здійснення, для МІ, підгрупа являє собою підгрупу каппа І, як у Кабаї еї а!., вище. В одному з варіантів здійснення, для МН, підгрупа являє собою підгрупу І, як у Кабваї єї а!ї., вище. "Гуманізовані" форми антитіл (наприклад, мишачих), що не належать людині, являють собою химерні антитіла, що містять мінімальну послідовність, отриману від антитіл, що не належать людині. Здебільшого, гуманізовані антитіла являють собою антитіла людини (антитіла
Зо реципієнта), у яких залишки з гіперваріабельної області реципієнта заміняються залишками з гіперваріабельної області видів, відмінних від людини (донорське антитіло), таких як миша, щур, кролик або примат, відмінний від людини, що мають бажану специфічність, спорідненість і ємність. Наприклад, у визначених варіантах здійснення, гуманізоване антитіло буде містити по суті всі щонайменше з одного, а, як правило, із двох, варіабельних доменів, у яких усі або по суті всі НУК (наприклад, СОК) відповідають залишкам антитіла, що не належить людині, і всі або по суті всі області каркаса (ЕК) відповідають областям антитіла людини. У деяких випадках, залишки ЕК імуноглобуліну людини заміняються відповідними залишками, що не належать людині. Крім того, гуманізовані антитіла можуть містити залишки, що не містяться в антитілі реципієнта або в донорському антитілі. Ці модифікації здійснюють для додаткового визначення характеристик антитіла. У визначених варіантах здійснення, гуманізоване антитіло буде містити по суті всі щонайменше з одного, а, як правило, двох варіабельних доменів, у яких усі або по суті всі гіперваріабельні області відповідають областям антитіла, що не належить людині, і всі або по суті всі ЕК являють собою області антитіла людини, за винятком заміщення (заміщень)
ЕК, як відзначено вище. Гуманізоване антитіло необов'язкове також буде містити щонайменше частину постійної області антитіла, як правило, антитіла людини. "Гуманізована форма" антитіла, наприклад, антитіла, що не належить людині, стосується антитіла, що піддається гуманізації. Відносно додаткових деталей, дивися ЧУопез еї аЇ., Майштге 321:522-525 (1986);
Віесптапп еї а!., Маїшге 332:323-329 (1988); і Ргезіа, Сигт. Ор. зігисії. Віо! 2:593-596 (1992). "Антитіло людини" у даному документі являє собою антитіло, що містить структуру послідовностей амінокислот, що відповідає структурі послідовності амінокислот антитіла, продукованого людиною або клітиною людини, або отриманого з джерела, відмінного від людини, що використовує репертуари антитіл людини або інші послідовності, що кодують антитіло людини. Це визначення антитіла людини конкретно виключає гуманізоване антитіло, що містить залишки, які зв'язують антиген, що не належать людині. Такі антитіла можуть ідентифікуватися або готуватися за допомогою різноманітних методик, включаючи, але не обмежуючись цим: продукування за допомогою трансгенних тварин (наприклад, мишей), що здатні при імунізації продукувати антитіла людини під час відсутності ендогенного продукування імуноглобуліну (дивися, наприклад, Чакобромії: еї аї., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА, 90:2551 (1993);
УаКороміїв єї аї, Маїшге, 362:255-258 (1993); Вгиддептапп еї а!І., Уеаг у Іттипо., 7:33 (1993); і 60 патенти США МоМо 5591669, 5589369 і 5545807)); вибір із бібліотек фагових дисплеїв, які експресують антитіла людини або фрагменти антитіл людини (дивися, наприклад, МеСанепу еї аІ,, Майте 348:552-553 (1990); доппзоп еї аїЇ., Сцтепі Оріпіоп іп бісішига! Віооду 3:564-571 (1993); СіасКвоп еї аї., Маїшиге, 352:624-628 (1991); МагїКкз вї аї., У. Мої. ВіоїІ. 222:581-597 (1991);
СиіНйй еї аІ., ЕМВО 4. 12:725-734 (1993); патенти США МоМо 5565332 і 5573905); генерування за допомогою активованих іп міго В-лімфоцитів (дивися патенти США МоМо 5567610 і 5229275) і ізоляцію з гібридом, які продукують антитіла людини. "Мультиспецифічне антитіло" у даному документі являє собою антитіло, що має специфічність зв'язування щонайменше із двома різними епітопами. Ілюстративні мультиспецифічні антитіла можуть зв'язуватися як з ТІК, так і з антигеном головного мозку.
Мультиспецифічні антитіла можуть бути отримані у вигляді повнорозмірних антитіл або фрагментів антитіл (наприклад, біспецифічних антитіл Е(ар)2). Отримані за допомогою генної інженерії антитіла з двома, трьома або більше (наприклад, чотирма) функціональними сайтами зв'язування антигену також розглядаються (дивися, наприклад, заявку на патент США Мо 2002/0004587 АЇ, МіШег еї аІ-. Мультиспецифічні антитіла можуть бути отримані у вигляді повнорозмірних антитіл або у вигляді фрагментів антитіл.
Антитіла в даному документі включають "варіанти послідовностей амінокислот" зі зміненою активністю зв'язування антигену або біологічною активністю. Приклади таких змін амінокислот включають антитіла з підвищеною спорідненістю до антигену (наприклад, антитіла з "дозрілою спорідненістю") і антитіла зі зміненою Ес-областю, якщо вона присутня, наприклад, зі зміненою (підвищеною або зниженою) антитіло-залежною клітинною цитотоксичністю (АОСС) і/або комплемент-залежною цитотоксичністю (СОС) (дивися, наприклад, УМО 00/42072, Ргезіа, І. ії УМО 99/51642, Ідпозодіє еї а1І.); або з підвищеним або зниженим часом напівжиття в сироватці (дивися, наприклад, УМООО/42072, Ргевзіа, 1 .). "Варіант із модифікованою спорідненістю" має один або кілька заміщених залишків гіперваріабельної області або каркаса вихідного антитіла (наприклад, вихідного химерного, гуманізованого або антитіла людини), що змінюють (підвищують або знижують) спорідненість.
Звичайний шлях генерування таких заміщених варіантів використовує фаговий дисплей.
Коротко, декілька сайтів гіперваріабельної області (наприклад, 6-7 сайтів) мутують із генеруванням усіх можливих заміщень амінокислот на кожному сайті. Варіанти антитіл,
Зо генеровані таким чином, одержують за допомогою фагового дисплея одновалентним способом з нитковидних частинок фагів у вигляді злиттів із продуктом гена Ії М13, упакованого усередині кожної частинки. Потім здійснюють скринінг варіантів, отриманих за допомогою фагового дисплея, на їхню біологічну активність (наприклад, спорідненість зв'язування). Для ідентифікації можливих сайтів гіперваріабельної області для модифікації, можна здійснити аланін-скануючий мутагенез для ідентифікації залишків гіперваріабельних областей, що роблять значний внесок у зв'язування антигену. Альтернативно або на додаток до цього, може бути вигідним аналізувати кристалічну структуру комплексу антиген-антитіло для ідентифікації точок контакту між антитілом і його мішенню. Такі контактні залишки і сусідні залишки є кандидатами на заміщення відповідно до технологій, розроблених в даному документі. Після генерування таких варіантів, панелі варіантів піддають впливу скринінгу, і антитіла зі зміненою спорідненістю можуть вибиратися для подальшої розробки. "рРН-чутливий варіант антитіла" являє собою варіант антитіла, що має спорідненість зв'язування з цільовим антигеном при першому рН іншу, ніж при зв'язуванні з цим цільовим антигеном при іншому рН. Як необмежувальний приклад, антитіло анти-ТЯЕ за даним винаходом може бути вибране або отримане за допомогою генної інженерії, щоб воно мало рн- чутливе зв'язування з ТІК, для того, щоб воно зв'язувалося з бажаною низькою спорідненістю (як описано в даному документі) з ТІК поверхні клітини в плазмі при рН 7,4, але при інтерналізації в ендосомальному компартменті, швидко дисоціювало б від ТІ при відносно низьких рН (рН 5,5-6,0); така дисоціація може захистити антитіло від опосередковуваного антигеном виведення і збільшити кількість антитіла, що або доставляється в СМ5, або рециклюється назад через ВВВ, - у будь-якому випадку, ефективна концентрація антитіла збільшується порівняно з антитілом анти-ТТЖЕ, що не має такої чутливості до рН (дивися, наприклад, СПпарагго-Ніддеге еї аї. У. Віої. Спет. 287(14):11090-11097; Ідамжша єї аї., Маштеє
Віотесппої.. 28(11):1203-1208). Бажане сполучення спорідненості при рН сироватки і при рн ендосомального компартмента може легко бути визначене для ТІК і кон'югованої сполуки фахівцем у даній галузі.
Антитіло в даному документі може кон'югуватися з "гетерологічною молекулою", наприклад, для збільшення часу напівжиття або стабільності, або для іншого удосконалення антитіла.
Наприклад, антитіло може зв'язуватися з одним або декількома небілковими полімерами, 60 наприклад, поліетиленгліколем (РЕС), пропіленгліколем, поліоксіалкіленами або співполімерами поліеєетиленгліколю і пропіленгліколю. Фрагменти антитіла, такі як Рар', зв'язані з однією або декількома молекулами РЕС, являють собою ілюстративний варіант здійснення даного винаходу. В іншому прикладі, гетерологічна молекула являє собою терапевтичну сполуку або агент для візуалізації (тобто детектовану мітку), і антитіло використовується для перенесення такої гетерологічної молекули через ВВВ. Приклади гетерологічних молекул включають, але не обмежуючись цим, хімічну сполуку, пептид, полімер, ліпід, нуклеїнову кислоту і білок.
Антитіло в даному документі може являти собою "варіант із глікозилуванням", такий, що будь-який вуглевод, приєднаний до Ес-області, якщо він присутній, змінюється, або модифікується відносно присутності/відсутності, або модифікується відносно типу. Наприклад, антитіла з дозрілою структурою вуглеводів, у якій відсутня фукоза, приєднана до Ес-області антитіла, описані в заявці на патент США Мо 2003/0157108 (Ргевіа, Ї.). Дивися також 05 2004/0093621 (Куожа НакККо Кодуо Со., Ца). Антитіла з бісекцією М-ацетилглюкозаміну (СИеМАс) у вуглеводі, приєднаному до Ес-області антитіла, згадуються в УМО 2003/011878, деап-Маїгеї єї а). і в патенті США Мо 6602684, Отапа еї аІ. Антитіла щонайменше з одним залишком галактози в олігосахариді, приєднаному до Ес-області антитіла, обговорюються в УМО 1997/30087, Раїеі еї ам. Дивися, також, УМО 1998/58964 (Каї)|м, 5.) і МО 1999/22764 (Каїн, 5.) відносно антитіл зі зміненим вуглеводом, приєднаним до їх Ес-області. Дивися також 05 2005/0123546 (Штапа єї аі-), що описує антитіла з модифікованим глікозилуванням. Мутація консенсусної послідовності глікозилування в Ес-області (Азп-Х-Зег/Тпг у положеннях 297-299, де Х не може являти собою пролін), наприклад, за допомогою мутації Авп цієї послідовності, із заміною на будь-яку іншу амінокислоту, за допомогою вміщення Рго у положення 298 або модифікації положення 299 із заміною на будь-яку амінокислоту, іншу, ніж 5ег або ТНг, повинне пригнічувати глікозилування в цьому положенні (дивися, наприклад, Раге5 АІ-Е|ей еї аї., Сій. Сапсег Вез. (2007) 13:55195- 55275; Ітрепаїї апа 5паппоп, Віоспетівігу (1991) 30(18):4374-4380; Каїви, Віоспет 4). (1997)
З2З(РІ 2):415-419; ЗнакКіп-ЕзНетанп ес! аї., 9. Віо!Ї. Снет. (1996) 271:6363-6366).
Термін "гіперваріабельна область" або "НМК", як використовується в даному документі, стосується кожної з областей варіабельного домену антитіла, що є гіперваріабельними в послідовності ("області що визначають комплементарність" або "СОК") і/або утворюють
Зо структурно визначені петлі ("гіперваріабельні петлі") і/або містять залишки, що вступають у контакт з антигеном ("контакт з антигеном"). Як правило, антитіла містять шість НМЕ: три в МН (НІ, Н2, НЗ)ітри в МІ (ГІ, 12, (3). Ілюстративні НМК у даному документі включають: (а) гіперваріабельні петлі, здійснювані на залишках амінокислот 26-32 (1), 50-52 (12), 91-96 (3), 26-32 (НІ), 53-55 (Н2) і 96-101 (НЗ) (Споїйіа апа І евК, У). Мої. Віої!. 196:901-917 (1987)); (Б) СОК, здійснювані на залишках амінокислот 24-34 (ІІ), 50-56 (12), 89-97 (І 3), 31-35Б5 (НІ), 50-65 (Н2) і 95-102 (НЗ) (Кабаї еї аїЇ., Зедиєпсез ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї ої іпієгеві, Бій Ед.
Рибіїс Неанцй 5егуісе, Маїйопаї Іпвійшез ої Неайй, ВеїШйезаа, МО (1991)); (с) контакти з антигенами, здійснювані на залишках амінокислот 27-36 (ІІ), 46-55 (І 2), 89-96 (3), 30-355Б (НІ), 47-58 (Н2) і 93-101 (НЗ) (МасСаїШт еї а. У. Мої. Вісі. 262:732-745 (1996)); і (4) сполучення (а), (Б) і/або (с), що включають залишки амінокислот НМК 46-56 (12), 47-56 (12), 48-56 (І 2), 49-56 (12), 26-35 (НІ), 26-35Б (НІ), 49-65 (Нг), 93-102 (НЗ) і 94-102 (НЗ).
В одному з варіантів здійснення, залишки НУК містять залишки, ідентифіковані на Фігурах
ЗА-О або 4А-О, у Таблиці 4 або Таблиці 5, або ще де-небудь у даному описі.
Якщо не зазначено іншого, залишки НМК і інші залишки у варіабельному домені (наприклад,
ЕК залишки) нумеруються в даному документі відповідно до КаБбаї єї аї., вище.
Залишки "каркаса" або "БК" являють собою залишки варіабельного домену, інші, ніж залишки гіперваріабельної області як визначено в даному документі. ЕЕ. варіабельного домену, як правило, складається з чотирьох доменів ЕК: ЕК, ЕК2, ЕКЗ їі ЕКА4. Відповідно, послідовності
НМЕК і ЕЕ, як правило, з'являються в наступній послідовності в МН (або М): ЕК1-НІ1(11)-ЕВ2-
Наг(І2)-ЕВЗ3-НЗ(І3)-ЕК4. У визначених варіантах здійснення, один або декілька ЕК залишків можуть модифікуватися для модулювання стабільності антитіла або для модулювання тривимірного позиціонування однієї або декількох НУК антитіла, наприклад, для посилення зв'язування. "Повнорозмірне антитіло" являє собою антитіло, що містить варіабельну область зв'язування антигену, а також постійний домен легкого ланцюга (СІ) і постійні домени важкого ланцюга, СНІ, СН2 ї СНЗ. Постійні домени можуть являти собою постійні домени з нативною послідовністю (наприклад, постійні домени з нативною послідовністю людини) або варіанти їхніх послідовностей амінокислот.
Терміни "повнорозмірне антитіло", "Інтактне антитіло" і "цільне антитіло" використовуються в бо даному документі взаємозамінно для згадування антитіла, що має структуру по суті подібну з нативною структурою антитіла або що має важкі ланцюги, які містять Ес-область, як визначено в даному документі. "Голе антитіло" стосується антитіла, що не кон'югується з гетерологічним залишком (наприклад, з цитотоксичним залишком або радіоіїзотопною міткою). Голе антитіло може бути присутнім у фармацевтичному препараті. "Нативні антитіла" стосуються молекул імуноглобуліну, що зустрічаються в природі, з різними структурами. Наприклад, нативні антитіла дсС являють собою гетеротетрамерні глікопротетни масою приблизно 150000 Дальтонів, що складаються з двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичних важких ланцюгів, що зв'язані дисульфідними зв'язками. Від М- до С- закінчення, кожен важкий ланцюг має варіабельну область (МН), яка також називається варіабельним важким доменом або варіабельним доменом важкого ланцюга, за яким слідують три постійні домени (СНІ, СН2 і СНЗ). Подібним же чином, від М- до С-закінчення, кожен легкий ланцюг має варіабельну область (МІ), яка також називається варіабельним легким доменом або варіабельним доменом легкого ланцюга, за яким слідує постійний легкий домен (СІ).
Легкий ланцюг антитіла може бути приписаний до одного з двох типів, які називаються каппа (к) і лямбда (АХ), на основі послідовності амінокислот його постійного домену. "Ефекторні функції" антитіла стосується тих біологічних активностей антитіла, які дають у результаті активування імунної системи, інше, ніж активування шляху комплементу. Такі активності здебільшого знаходяться в Ес-області (Ес-області нативної послідовності або Ес- області послідовності амінокислот варіанта) антитіла. Приклади ефекторних функцій антитіла включають, наприклад, зв'язування Ес-рецептора й опосередковувану антитіло-залежними клітинами цитотоксичність (А0ОСС). В одному з варіантів здійснення, антитіло за даним документом по суті не має ефекторної функції. В іншому варіанті здійснення, антитіло за даним документом зберігає мінімальну ефекторну функцію. Способи модифікування або усунення ефекторної функції добре відомі в даній галузі і включають, але не обмежуючись цим, усунення всієї Ес-області, відповідальної за ефекторну функцію, або його частини (тобто використання антитіла або фрагмента антитіла у форматі, де відсутня уся Ес-область або її частина, такого, але не обмежуючись цим, як фрагмент Раб, одноланцюжкове антитіло тощо, як описано в даному документі і як відомо в даній галузі; модифікацію Ес-області в одному або декількох
Зо положеннях амінокислот для усунення ефекторної функції (що впливають на Ес-зв'язування: положення 238, 239, 248, 249, 252, 254, 256, 265, 268, 269, 270, 272, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 311, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 436, 437, 438 і 439; і модифікацію глікозилування антитіла (включаючи, але не обмежуючись цим, продукування антитіла в навколишньому середовищі, що не дає можливості для глікозилування для ссавців дикого типу, видалення однієї або декількох вуглеводних груп із уже глікозилованого антитіла і модифікацію антитіла в одному або декількох положеннях амінокислот для усунення здатності антитіла до глікозилування в цих положеннях (включаючи, але не обмежуючись цим, М297( і М297А і 0265А).
Функції "активування комплементу" антитіла або властивості антитіла, що уможливлюють або запускають "активування шляху комплементу" використовуються взаємозамінно і стосуються тих біологічних активностей антитіла, що залучені в шлях активування комплементу імунної системи суб'єкта або стимулюють його. Такі активності включають, наприклад, зв'язування С14 і комплемент-залежну цитотоксичність (СОС), і можуть опосередковуватися як
Ес-частиною, так і відмінною від Ес частиною антитіла. Способи модифікації або усунення функції активування комплементу добре відомі в даній галузі і включають, але не обмежуючись цим, усунення всієї Ес-області, відповідальної за активування комплементу, або її частини (тобто використання антитіла або фрагмента антитіла у форматі, де відсутня уся Ес-область або її частина, такого як, але не обмежуючись цим, фрагмент Раб, одноланцюжкове антитіло тощо, як описано в даному документі і як відомо в даній галузі, або модифікацію Ес-області в одному або декількох положеннях амінокислот для усунення або зменшення взаємодій з компонентами комплементу або здатності до активування компонентів комплементу, таких як положення 270, 322, 329 і 321, як відомо, залучені в зв'язування С1д), і або модифікацію усунення частини області, відмінної від Ес, відповідальної за активування комплементу (тобто модифікування СНІ області в положенні 132 (дивися, наприклад, Мідане еї аї., (2001) У. Віо!.
Спет. 276(41):38217-38223)).
Залежно від послідовності амінокислот постійного домену їхніх важких ланцюгів, повнорозмірні антитіла можуть бути приписані до різних "класів". Є п'ять головних класів повнорозмірних антитіл: ІдА, 90, ІДЕ, ІдсС і ДМ, ії декілька з них можуть додатково підрозділятися на "підкласи" (ізотипи), наприклад, Ідс1, Ідс2, доз, Ід04, ІДА і ІдДА2. Постійні 60 домени важких ланцюгів, що відповідають різним класам антитіл, називають альфа, дельта,
епсилон, гамма і мю, відповідно. Структури субодиниць і тривимірні конфігурації різних класів імуноглобулінів добре відомі в даній галузі.
Термін "рекомбінантне антитіло", як використовується в даному документі, стосується антитіла (наприклад, химерного, гуманізованого антитіла або антитіла людини або його фрагмента, що зв'язує антиген), що експресується рекомбінантною клітиною-хазяїном, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антитіло.
Терміни "клітина-хазяїн", "лінія клітин-хазяїнів" і "культура клітин-хазяїнів" використовуються взаємозамінно і стосуються клітин, у які може вводитися екзогенна нуклеїнова кислота, включаючи потомство таких клітин. Клітини-хазяїни включають "трансформанти" і "трансформовані клітини", що включають первинні трансформовані клітини і потомство, отримане від них, поза залежністю від кількості пасажів. Потомство може не бути повністю ідентичним по вмісту нуклеїнової кислоти вихідної клітини, але може містити мутації. Мутантне потомство, що має таку ж функцію або біологічну активність, як було отримано за допомогою скринінгу або вибрано для вихідних трансформованих клітин, включаються в розгляд у даному документі. Приклади "клітин-хазяїнів" для продукування рекомбінантних антитіл включають: (1) клітини ссавців, наприклад, клітини яєчників китайського хом'ячка (СНО), СО5, клітини мієломи (включаючи клітини МО і М5О), клітини нирок дитинчати хом'яка (ВНК), клітини Неїа і Мего; (2) клітини комах, наприклад, 519, 5121 і Тп5; (3) клітини рослин, наприклад, рослин, що належать до роду Місоїйапа (наприклад, Місоїапа їарасит); (4) клітини дріжджів, наприклад, дріжджів, що належать до роду Засспаготусез (наприклад, засспаготусез сегемізіає) або до роду Азрегайи5 (наприклад, АзрегоїйЇи5 підег); (5) бактеріальні клітини, наприклад, клітини Е5сПегіспіа соїї або клітини Васійи5 5зиБій5 тощо.
Як використовується в даному документі, "що специфічно зв'язується" або "специфічно зв'язується з" стосується антитіла, що селективно або переважно зв'язується з антигеном.
Спорідненість зв'язування, як правило, визначається з використанням стандартного аналізу, наприклад, аналізу Скатчарда, або методики поверхневого плазмонного резонансу (наприклад, з використанням ВІАСОКЕФ). "Антитіло, що зв'язується з таким же епітопом" як антитіло порівняння стосується антитіла, що блокує зв'язування антитіла порівняння з його антигеном при конкурентному аналізі на 50 95
Зо або більше, і навпаки, антитіло порівняння блокує зв'язування антитіла з його антигеном при конкурентному аналізі на 50 95 або більше. В одному з варіантів здійснення, антитіло анти-
ВАСЕЇТ, що утворює одне з біспецифічних або мультиспецифічних антитіл за даним винаходом, зв'язує епітоп ВАСЕ1, що зв'язується за допомогою УУу412.8.31. Ілюстративний конкурентний аналіз наводиться в даному документі.
Термін "цитотоксичний агент" як використовується в даному документі, стосується речовини, що інгібує або запобігає здійсненню клітинної функції і/або викликає загибель або руйнування клітини. Цитотоксичні агенти включають, але не обмежуючись цим, радіоактивні ізотопи (наприклад, А", 1191, 1125, 90, Де!86, Де88. пз, Віг12, рзг, рр: і радіоактивні ізотопи
Ги); хіміотерапевтичні агенти або лікарські засоби (наприклад, метотрексат, адріаміцин, алкалоїди вінка (вінкристин, вінбластин, етопозид), доксорубіцин, мелфалан, мітоміцин С, хлорамбуцил, даунорубіцин або інші інтеркалюючі агенти); агенти-інгібітори росту; ферменти і їхні фрагменти, такі як нуклеолітичні ферменти; антибіотики; токсини, такі як низькомолекулярні токсини або ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження, включаючи їхні фрагменти і/або варіанти; і різноманітні протипухлинні або протиракові агенти, описані в даному документі. "Ефективна кількість" агента, наприклад, фармацевтичного препарату, стосується кількості ефективної при необхідних дозах і протягом періодів часу необхідних для досягнення бажаного терапевтичного або профілактичного результату.
Термін "Бс-область" у даному документі використовується для визначення С-кінцевої області важкого ланцюга імуноглобуліну, що містить щонайменше частину постійної області.
Термін включає Ес-області нативної послідовності і Ес-області варіантів. В одному з варіантів здійснення, Ес-область важкого ланцюга до людини простягається від Су5з226 або від Рго230 до карбоксильного закінчення важкого ланцюга. Однак С-кінцевий лізин (ІГуз447) Ес-області може бути присутнім або не бути присутнім. Якщо в даному документі не зазначено іншого, нумерація залишків амінокислот у Ес-області або в постійній області здійснюється відповідно до системи нумерації ЕС, яка також називається індекс ЕС, як описано в КаБбаї єї аї.,, Зедоепсев ої
Ргоївіпв ої Іттипоіодіса! ої Іпіегеві, Бій Ед. Рибіїс Неайй Зегмісе, Маїйопаї! Іпвійшев ої Неанй,
Веїпезаа, МО, 1991.
Термін "рецептор ЕсКп" або "РсКп", як використовується в даному документі, стосується Ес- бо рецептора ("п" означає неонатальний), що, як відомо, залучений у перенесення материнських
Іо у фетус через плаценту людини або приматів або жовтковий мішок (кролика) і немовляті з молозива через тонкий кишечник. Також відомо, що ЕсКп залучений у підтримку постійних рівнів ЇЯО у сироватці за допомогою зв'язування молекул дос і рециклювання їх у сироватку. "Область зв'язування ЕсЕп" або "область зв'язування рецептора ЕсКп" стосується тієї частини антитіла, що взаємодіє з рецептором ЕсКп. Визначені модифікації області зв'язування ЕсКп антитіла збільшують спорідненість антитіла або його фрагмента до ЕсКп, а також збільшують час напівжиття молекули іп мімо. Заміщення амінокислот в одному або декількох з наступних положень амінокислот 251, 256, 285, 290, 308, 314, 385, 389, 428, 434 і 436 збільшують взаємодію антитіла з рецептором ЕсКп. Заміщення в наступних далі положеннях також збільшують взаємодію антитіла з рецептором Респ: 238, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, заміщення з (патенту
США Мо 7371826). "Імунокон'югат" являє собою антитіло, кон'юговане з однією або декількома гетерологічними молекулами, включаючи, але не обмежуючись цим, мітку або цитотоксичний агент.
Необов'язково, таке кон'югування здійснюється через лінкер. "Лінкер", як використовується в даному документі, являє собою структуру, що ковалентно або нековалентно з'єднує антитіло анти-ТЯК з гетерологічною молекулою. У визначених варіантах здійснення, лінкер являє собою пептид. В інших варіантах здійснення, лінкер являє собою хімічний лінкер. "Мітка" являє собою маркер, з'єднаний з антитілом за даним документом, і використовується для детектування або одержання зображень. Приклади таких міток включають: радіоіїзотопну мітку, флуорофор, хромофор або афінну мітку. В одному з варіантів здійснення, мітка являє собою радіоізотопну мітку, використовувану для одержання зображень, наприклад, їс99т або 1123, або спінову мітку для одержання зображень за допомогою ядерного магнітного резонансу (ЯМР) (також відомого як магнітна резонансна томографія, МК), таку, знову ж, як йод-123, йод- 131, індій-111, фтор-19, вуглець-13, азот-15, кисень-17, гадоліній, марганець, залізо тощо. "Індивідуум" або "суб'єкт" являє собою ссавця. Ссавці включають, але не обмежуючись цим, одомашнених тварин (наприклад, корів, овець, кішок, собак і коней), приматів (наприклад, людей і приматів, інших, ніж люди, таких як мавпи), кроликів і гризунів (наприклад, мишей і
Зо щурів). У визначених варіантах здійснення, індивідуум або суб'єкт являє собою людину. "Ізвольоване" антитіло являє собою антитіло, що відділене від компонента його природного навколишнього середовища. У деяких варіантах здійснення, антитілло очищається до чистоти більш ніж 95 95 або 99 95, як визначається, наприклад, за допомогою електрофоретичних (наприклад, 505-РАСЕ, ізоелектричного фокусування (ІЕЕ), капілярного електрофорезу) або хроматографічних (наприклад, іонообмінної хроматографії або ВЕРХ з оберненою фазою) способів. Відносно способів оцінки чистоти антитіла, дивися, наприклад, Біайтап еї аї., 5.
Спготагоаг. В 848:79-87 (2007). "Ізольована нуклеїнова кислота" стосується молекули нуклеїнової кислоти, що відділена від компонента її природного навколишнього середовища. Ізольована нуклеїнова кислота включає молекулу нуклеїнової кислоти, що міститься в клітинах, які звичайно містять молекулу нуклеїнової кислоти, але молекула нуклеїнової кислоти присутня екстрахромосомально або в хромосомальному положенні, що відрізняється від її природного хромосомального положення. "Ізольована нуклеїнова кислота, що кодує антитіло анти-ТІК", стосується однієї або декількох молекул нуклеїнової кислоти, що кодують важкі і легкі ланцюги антитіла (або їхні фрагменти), включаючи таку молекулу (молекули) нуклеїнової кислоти, вбудовану в один вектор або у роздільні вектори, і така молекула (молекули) нуклеїнової кислоти присутня в одному або декількох положеннях у клітині-хазяїні.
Термін "вставка в упакування" використовується для згадування інструкцій, терапевтичних продуктів, що вставляються вручну в комерційні упакування, які містять інформацію про показання, застосування, дозування, уведення, сполучену терапію, протипоказання і/або попередження відносно використання таких терапевтичних продуктів. "Відсоток (95) ідентичності послідовностей амінокислот" відносно послідовності поліпептидів порівняння визначається як відсоток залишків амінокислот у розглянутій послідовності, які є ідентичними із залишками амінокислот у послідовності поліпептидів порівняння, після вирівнювання послідовностей і введення розривів, при необхідності, для досягнення максимального відсотка ідентичності послідовностей, і не розглядаючи ніякі консервативні заміщення як частину ідентичності послідовностей. Вирівнювання для цілей визначення відсотка ідентичності послідовностей амінокислот може здійснюватися різними способами, що відомі фахівцям у даній галузі, наприклад, з використанням публічно доступного комп'ютерного 60 програмного забезпечення, такого як ВГАЗТ, ВІ А5Т-2, АГПІОМ або програмне забезпечення
Зо
Медаїїдп (ОМАБТАК). Фахівці в даній галузі можуть визначити відповідні параметри для вирівнювання послідовностей, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині послідовностей, які порівнюють. Для цілей у даному документі, однак, значення 95 ідентичності послідовностей амінокислот генерують із використанням комп'ютерної програми порівняння послідовностей АГІОМ-2. Комп'ютерна програма порівняння послідовностей АГІСМ-2 розроблена Сепепіесп, Іпс., і код джерела поданий разом з документацією користувача в ОШ.5. Соругідйї Опйісе, Умазпіпоїоп 0О.С., 20559, де він зареєстрований як Ш.5. Соругпдтї Кедізігайоп Мо. ТХО 10087. Програма АГІСМ-2 є публічно доступною від Сепепіесії, Іпс., ЗОШ Зап Егапсібсо, Саїйогпіа, або може бути компільована з коду джерела. Програма АГІСМ-2 повинна бути компільована для використання на оперативній системі ОМІХ, включаючи цифрову МІХ М4.00. Усі параметри порівняння послідовностей встановлюються програмою АГІСМ-2 їі не змінюються.
У ситуаціях, де АГІМ-2 використовується для порівняння послідовностей амінокислот, 90 ідентичності послідовностей амінокислот даної послідовності амінокислот А з даною послідовністю амінокислот В (це можна альтернативно перефразувати як Фо ідентичності даної послідовності амінокислот А, що має або містить визначений 95 ідентичності послідовностей амінокислот з даною послідовністю амінокислот В або порівняно з нею) обчислюється в такий спосіб: 100 помножити на Х/"У, де Х являє собою кількість залишків амінокислот, оцінюваних як ідентичні збіги за допомогою програми вирівнювання послідовностей АГІСМ-2 при вирівнюванні програмоб А і В, і де МУ являє собою загальну кількість залишків амінокислот у В. Буде очевидно, що, коли довжина послідовності амінокислот А не дорівнює довжині послідовності амінокислот В, 90 ідентичності послідовностей амінокислот А відносно В не буде дорівнювати 95 ідентичності послідовностей амінокислот В відносно А. Якщо конкретно не стверджується іншого, усі значення 95 ідентичності послідовностей амінокислот, використовувані в даному документі, одержують, як описано в попередньому абзаці з використанням комп'ютерної програми АГІСМ- 2.
Термін "фармацевтичний препарат" стосується препарату, який знаходиться в такій формі,
Зо щоб дозволити біологічній активності активного інгредієнта, що міститься в ньому, бути ефективною, і який не містить додаткових компонентів, що є неприйнятно токсичними для суб'єкта, якому препарат повинен уводитися. "Фармацевтично прийнятний носій" стосується інгредієнта у фармацевтичному препараті, іншого, ніж активний інгредієнт, що є нетоксичним для суб'єкта. Фармацевтично прийнятний носій включає, але не обмежуючись цим, буфер, наповнювач, стабілізатор або консервант.
Як використовується в даному документі, "лікування" (і його граматичні варіанти, такі як "лікувати" або "лікований") стосується клінічного втручання в спробі змінити природний хід подій для індивідуума, що лікується, і може здійснюватися або для профілактики, або в ході клінічної патології. Бажані впливи лікування включають, але не обмежуючись цим, запобігання появі або поновленню захворювання, ослаблення симптомів, зменшення будь-яких прямих або непрямих патологічних наслідків захворювання, запобігання появі метастаз, зменшення швидкості розвитку захворювання, полегшення або тимчасове полегшення хворобливого стану і ремісію або поліпшення прогнозу. У деяких варіантах здійснення, антитіла за даним винаходом використовують для уповільнення розвитку захворювання або для уповільнення ходу захворювання.
Термін "варіабельна область" або "варіабельний домен" стосується домену важкого або легкого ланцюга антитіла, що залучений у зв'язування антитіла з антигеном. Варіабельні домени важкого ланцюга і легкого ланцюга (МН і МІ, відповідно) нативного антитіла, як правило, мають подібні структури, при цьому кожен домен містить чотири консервативні області каркаса (ЕК) і три гіперваріабельні області (НМК). (Дивися, наприклад, Кіпаї еї аЇ. Кибу Іттипоїіоду, біпед., М.Н. ЕРгеетап і Со., раде 91 (2007).) Один МН або Мі домен може бути достатнім для надання специфічності зв'язування антигену. Крім того, антитіла, що зв'язують конкретний антиген, можуть бути ізольовані з використанням домену МН або Мі від антитіла, що зв'язує антиген, для скринінгу бібліотеки комплементарних доменів МІ або МН, відповідно. Дивися, наприклад, Ропоїапо еї аї., У. Іттипої. 150:880-887 (1993); СіаїКвоп еї аї., Майте 352:624-628 (1991).
Термін "вектор", як використовується в даному документі, стосується молекули нуклеїнової кислоти, здатної розмножувати іншу нуклеїнову кислоту, з якою вона зв'язана. Термін включає вектор як структуру нуклеїнової кислоти, яка самореплікується, а також вектор, включений у бо геном клітини-хазяїна, у яку він уводиться. Визначені вектори здатні спрямовувати експресію нуклеїнових кислот, з якими вони зв'язані в робочому стані. Такі вектори згадуються в даному документі як "вектори експресії". 2. Композиції і способи
А. Продукування антитіл анти-ТІК і їх кон'югатів
В одному з аспектів, даний винахід грунтується, частково, на антитілах анти-ТК, які можна використовувати для перенесення бажаних молекул через ВВВ. У визначених варіантах здійснення пропонуються антитіла, що зв'язуються з ТІК людини. У визначених варіантах здійснення, пропонуються антитіла, що зв'язуються як з ТІК людини, так і з ТІК приматів.
Антитіла за даним винаходом є корисними, наприклад, для діагностики або лікування захворювань, що впливають на головний мозок і/або СМ5.
А. Ілюстративні антитіла анти- ТІВ
В одному з аспектів, даний винахід пропонує ізольовані антитіла, що зв'язуються з ТІК. У визначених варіантах здійснення, антитіло анти-ТК за даним винаходом зв'язується специфічно як з ТІК людини, так і з ТІК приматів. У визначених таких варіантах здійснення, антитіло анти-ТІК за даним винаходом не інгібує зв'язування трансферину з ТІК. У визначених таких варіантах здійснення, антитіло анти-ТЯК за даним винаходом зв'язується з апікальним доменом ТІК. В інших визначених таких варіантах здійснення, антитіло анти-ТїК за даним винаходом зв'язується з неапікальним доменом ТІК. У визначених аспектах, антитіла анти-ТІВ можна використовувати для перенесення однієї або декількох кон'югованих сполук для одержання зображень або терапевтичних сполук через ВВВ.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:32; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:33; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:34; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:29; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:30; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:31. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМЕК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 7А4, як показано на фігурі ЗА і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:37; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:38; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:39; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮО МО:35; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:30; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:36. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 8А2, як показано на фігурі ЗА і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:32; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:40; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:34; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЕС ІЮ МО:35; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:30; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:36. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 1502, як показано на Фігурі ЗА і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО:37; (5) НМЕ-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:43; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:44; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:41; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
БО ЗЕО ІЮ МО:30; і (3) НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:42. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 10011, як показано на фігурі ЗА і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:32; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:33; (с)
НМУВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО 10 МО:34; (а) НМУВ-І71, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:29; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:30; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:31. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому бо аспекті, антитіло являє собою клон 7В10, як показано на фігурі ЗА і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:53; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:54; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:55; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот 5ЕС ІЮО МО:50; (є) НМВ-І2, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:1; ї (Ж НМК-І3, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО:52. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 15011, як показано на фігурі ЗВ і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:53; (Б) НУМВ-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:58; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:59; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:6; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот 5ЕО
ІО МО:57; і (1) НМА-1І-3, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО:52. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 16055, як показано на Фігурі ЗВ і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:53; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:63; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:55; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЕС ІЮ МО:60; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:61; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:62. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 13С3, як показано на Фігурі ЗВ і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:53; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:65; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:55; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЕС ІЮ МО:60; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
Ко) ЗЕО ІЮ МО:64; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:52. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМЕК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 16054, як показано на Фігурі ЗВ і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:74; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:75; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:76; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:71; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:72; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот БЕО ІЮ МО:73. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 16Е6, як показано на Фігурі ЗС і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:80; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:81; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:82; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:77; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:78; і () НМА-І3, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО:79. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 707, як показано на фігурі ЗО і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:80; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:83; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:84; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:77; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:78; і () НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:79. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 4С2, як показано на фігурі 30 і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:88; (Б) НМАК-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:859; (с) 60 НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:90; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:85; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:86; і () НМА-І3, що містить послідовність амінокислот БЕО ІЮ МО:87. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 1812, як показано на фігурі ЗО і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:94; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:95; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:96; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЕС ІЮ МО:91; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:92; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:93. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 1304, як показано на Фігурі 30 і в Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:32; (Б) НМАК-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮО МО:33; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:34; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:29; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:30; і (3) НМК-І3, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:127. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК. В іншому аспекті, антитіло являє собою клон 7А4.м15, як показано на Фігурі 4В і в Таблиці 4.
Клони, згадані вище, потрапляють у чотири комплементні групи з подібністю послідовностей у НМЕК. Як показано в Таблиці 3, консенсусні послідовності легко можуть бути отримані з пропонованих послідовностей антитіл для кожної НУК. Як один із необмежувальних прикладів, консенсусні НУК антитіл класу І є наступними:
НМВА-І1: Аго-Аіа-5ег-СПи-5ег-МаІ-Авзр-ІЗег або Аврі-Туг-СПу-(Азп або Рго|-5е/-Рпе-Меї-Нів (ЗЕО ІЮО МО:45);
НМУВ-12: Агу-АІа-5ег-Авп-Ї еи-С1и-5ег (ЗЕО ІЮ МО:30);
НМВ-13: Сіп-ІСіІп або Ніз|-Зег-Ав5п-С1Ш-|(АІа, СіІу або А5р|-Рго-Рго- Тит (ЗЕО ІО МО:46);
НМВ-НТІ: Авр-Туг-|Айа або сіІу|-Мей-Нів (ЗЕО ІО МО:47);
Зо НМУВв-Н2: |СІу або Мац|-Пе-5ег-І(Тйг, Рпе або Рго|-Ту-ІРпе або Зег|-Спіу-І(Агд або І уз|-ТНг-Авп-
ТуІАзп або Зег|-СІп-(Суз або Азп|-Ріпе-(Суз або МеЦ-Спіу (ЗЕО ІЮО МО:48);
НМУВ-НЗ: а1у-Ї еи-бЗег-Сіу-Азп-(ГТуг або Ріеє|-МаІ-ІМеї або Маї|-Авр-(Туг або Рпе| (ЗЕО ІЮ
МО:49). (дивися Таблицю 4). Консенсусні послідовності для класу І ії ІМ також наведені в
Таблиці 3.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НМК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:47; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО :48; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:49; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:45; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:30; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот БЕО ІЮ МО:46. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМ.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:53; (Б) НМАК-Н2, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:69; (с)
НМВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІО МО:70; (4) НМАК-Ї71, що містить послідовність амінокислот ЗЕО ІЮ МО:66; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:67; і () НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:68. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМ.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІїК, що містить щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість НУК, вибраних з (а) НМЕ-НІ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:100; (Б) НМА-Н2, що містить послідовність амінокислот БЕО ІЮ МО:101; (с) НУВ-НЗ, що містить послідовність амінокислот 5ЕО ІЮ МО:102; (4) НМК-І1, що містить послідовність амінокислот ЗЕ ІЮ МО:97; (е) НМК-12, що містить послідовність амінокислот
ЗЕО ІЮ МО:98; і (3 НМА-І3, що містить послідовність амінокислот 5БЕО ІЮ МО:99. В одному з аспектів, антитіло містить усі шість з перерахованих вище послідовностей НМК.
В одному з аспектів, даний винахід пропонує антитіло, що містить щонайменше одну щонайменше дві або всі три МН послідовності НМК будь-якого з антитіл, описаних вище. В одному з варіантів здійснення, антитіло містить послідовність НМА-НЗ будь-якого з антитіл, описаних вище. В інших варіантах здійснення, антитіло містить послідовності НМАК-НЗ їі НМК-І З 60 будь-якого з антитіл, описаних вище. В іншому варіанті здійснення, антитіло містить послідовності НМК-НЗ, НМВ-Ї3 ї НМА-НЕ2 будь-якого з антитіл, описаних вище. В інших варіантах здійснення, антитіло містить послідовності НМК-НІ, НУВ-Н2 ї НМАК-НЗ будь-якого з антитіл, описаних вище. В іншому аспекті, даний винахід пропонує антитіло, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три МІ. послідовності НМК будь-якого з антитіл, описаних вище. В одному з варіантів здійснення, антитіло містить послідовності НМА-11, НМУВ-1І2 і НМК-І3 будь- якого з антитіл, описаних вище.
В іншому аспекті, антитіло за даним винаходом містить (а) домен МН, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три МН послідовності НМК, вибрані з послідовностей НМВ-НІ, НУВ-Н2 ї НМЕА-НЗ будь-якого з антитіл, описаних вище; і (б) домен МІ, що містить щонайменше одну, щонайменше дві або всі три МІ послідовності НМЕ, вибрані з послідовностей НМА-І 1, НУВ-12 ї НМА-І З будь-якого з антитіл, описаних вище.
У будь-якому з розглянутих вище варіантів здійснення, антитіло анти-ТЯК являє собою гуманізоване антитіло. В одному з варіантів здійснення, антитіло анти-ТїК містить НМЕК, як у будь-якому з розглянутих вище варіантів здійснення, і додатково містить акцепторний каркас людини, наприклад, каркас імуноглобулінів людини або консенсусний каркас людини. В інших варіантах здійснення, антитіло анти-ТЯК містить НМК, як у будь-якому з розглянутих вище варіантів здійснення, і додатково містить МН або Мі, що містять одне або кілька заміщень амінокислот в одній або декількох областях ЕК. У Прикладі 2, у даному документі, заявники здійснюють аланін-сканування на визначених антитілах, вибраних з тих, які розглянуті вище, і визначають, що виходить подібне поліпшене або зв'язування, незважаючи на модифікації амінокислот у вибраних положеннях ЕК. Як показано на Фігурах 6-1 і 6-2 і в Прикладі 2 у даному документі, для груп антитіл класу І-ІІ, варіантні форми антитіл з модифікаціями на одному або декількох залишках ЕЕ. зберігають спорідненість і специфічність зв'язування. Наприклад, для антитіла 150511, положення 43 і 48 у легкому ланцюзі ЕК2, положення 48 у важкому ланцюзі
ЕКЗ і положення 67, 69, 71 і 73 у важкому ланцюзі ЕКЗ могли би модифікуватися, як показано на
Фігурах 6-1 і 6-2, і отримане в результаті антитіло, як і раніше, зберігає специфічність і сильну спорідненість зв'язування з ТІК людини/приматів. В іншому прикладі, для антитіла 7А4, положення 58 і 68 легкого ланцюга ЕКЗ, положення 24 у важкому ланцюзі ЕК!1 і положення 71 у важкому ланцюзі ЕКЗ могли б модифікуватися, як показано на Фігурах 6-1 і 6-2, і отримане в
Зо результаті антитіло, як і раніше, зберігає специфічність і сильну спорідненість зв'язування з ТІ людини/приматів. У третьому прикладі, для антитіла 16Е6, положення 43 і 44 легкого ланцюга
ЕКЗ і положення 71 і 78 важкого ланцюга ЕКЗ можна модифікувати, як показано на Фігурах 6-1 і 6-2, і отримане в результаті антитіло, як і раніше, зберігає специфічність і сильну спорідненість зв'язування з ТІК людини/приматів. В іншому аспекті, антитіло анти-ТІК містить послідовність варіабельного домену (УН) важкого ланцюга, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 95, 95 95, 96 90, 97 95, 98 90, 99 95 або 100 95 ідентичність послідовності з послідовністю амінокислот будь-якої з ЗЕО ІЮ МО:7-10, 15-18, 20, 25-28, 108, 114, 120 ї 126. У визначених варіантах здійснення, послідовність МН, що має щонайменше 90 905, 91 905, 92 90, 93 905, 94 95, 95
Фо, 96 9, 97 90, 98 95 або 99 95 ідентичність, містить заміщення (наприклад, консервативні заміщення), інсерції або делеції порівняно з послідовністю порівняння, але антитіло анти-ТІВ, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ТІК. У визначених варіантах здійснення, у цілому від 1 до10 амінокислот заміщаються, вставляються і/або видаляються в будь-якій з 5ЕО ІЮ МО:7-10, 15-18, 20, 25-28, 108, 114, 120 і 126. У визначених варіантах здійснення, заміщення, інсерції або делеції здійснюються в областях усередині НМК (тобто в
ЕК). Необов'язково, антитіло анти-ТІЕ містить послідовність МН будь-якої з БЕО ІЮ МО:7-10, 15- 18, 20 25-28, 108, 114, 120 і 126, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті здійснення, МН для конкретного антитіла містить одну, дві або три НМЕ, вибраних з: НМК, наведених вище й у Таблиці З або 4, для цього конкретного антитіла.
Послідовності УН для антитіл за даним винаходом показані на Фігурах З і 4 у даному документі.
В іншому аспекті, пропонується антитіло анти-ТІК, де антитіло містить варіабельний домен (М) легкого ланцюга, що має щонайменше 90 905, 91 9, 92 Фо, 93 Фо, 94 Уо, 95 У, 96 95, 97 95, 98
Фо, 99 95 або 100 95 ідентичність послідовностей з послідовністю амінокислот будь-якої з ЗЕО ІЮ
МО:4-6, 11-14, 19, 21-24, 105, 111, 117 і 123. У визначених варіантах здійснення, Мі. послідовність, що має щонайменше 90 95, 91 95, 92 95, 93 95, 94 905, 95 905, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 965 ідентичність, містить заміщення (наприклад, консервативні заміщення), інсерції або делеції, порівняно з послідовністю порівняння, але антитіло анти-ТТК, що містить таку послідовність, зберігає здатність до зв'язування з ТІК. У визначених варіантах здійснення, у цілому від 1 до 10 амінокислот заміщаються, вставляються і/або видаляються в будь-якій послідовності з «ЕО ІЮ МО:4-6, 11-14, 19, 21-24, 105, 111, 117 ї 123. У визначених варіантах 60 здійснення, заміщення, інсерції або делеції здійснюються в областях поза НМЕ (тобто в ЕК).
Необов'язково, антитіло анти-ТІР містить послідовність МІ. у будь-якій з «ЕО ІЮ МО:4-6, 11-14, 19, 21-24, 105, 111, 117 ії 123, включаючи посттрансляційні модифікації цієї послідовності. У конкретному варіанті здійснення, МІ. містить одну, дві або три НМК, вибраних з НМК, наведених вище й у Таблиці 4 або 5, для цього конкретного антитіла. Послідовності МІ. для антитіл за даним винаходом показані на Фігурах З і 4 у даному документі.
В іншому аспекті, пропонується антитіло анти-ТІК, де антитіло містить МН, як у будь-якому з варіантів здійснення, наведених вище, і МІ, як у будь-якому з варіантів здійснення, наведених вище. В одному з варіантів здійснення, антитіло містить послідовності МІ їі МН, відповідно, у 5ЕОІЮ МО:417;518;519;6110;417;11115:12116;13117;14118;19120:21125;22126; 231 27; 24128; 105 їі 108; 111 ї 114; 117 ї 120; ї 123 ї 126, включаючи посттрансляційні модифікації цих послідовностей.
В іншому аспекті, даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з таким же епітопом, як і антитіло анти-ТІЖК, запропоноване в даному документі. Наприклад, у визначених варіантах здійснення, пропонується антитіло, що зв'язується з таким же епітопом, як антитіло анти-ТІВ, що містить послідовності МІ. і МН, відповідно, ЗЕО ІЮО МО:4 і17;518;:519;6110;5417;11115; 12 16; 13117; 14118;19120;21125;522126;23127; 24128; 1051108; 111 ї 114; 117 і 120; або 123 і 126. В одному з аспектів, антитіло конкурує з будь-яким з антитіл Класу І (тобто з клонами 7А4, вА2, 1502, 10011 або 7810, або з версіями з дозрілою спорідненістю будь-яких з цих антитіл) за зв'язування з ТІК. В іншому аспекті, антитіло конкурує з будь-яким з антитіл Класу ІІ (тобто з клонами 15011, 16055, 13023 або 160, або з версіями з дозрілою спорідненістю будь-яких з цих антитіл) за зв'язування з ТІК. В іншому аспекті, антитіло конкурує з клоном 16Е6б або з його версіями з дозрілою спорідненістю за зв'язування з ТІК. В іншому аспекті, антитіло конкурує з будь-яким з антитіл Класу ІМ (тобто з клонами 757, 402, 1812 або 1304, або з їхніми версіями з дозрілою спорідненістю) за зв'язування з ТІК.
В іншому аспекті даного винаходу, антитіло анти-ТІК відповідно до будь-якого з розглянутих вище варіантів здійснення являє собою моноклональне антитіло, включаючи химерне, гуманізоване антитіло або антитіло людини. В одному з варіантів здійснення, антитіло анти-ТТА являє собою фрагмент антитіла, наприклад, Ем, Раб, Рар', зсЕм, діатіло або фрагмент Е(аб)». В іншому варіанті здійснення, антитіло являє собою повнорозмірне антитіло, наприклад, інтактне
Ко) антитіло да, дае, ІдсЗ або антитіло Ідс4 або інший клас або ізотип антитіла, як визначено в даному документі.
В іншому аспекті, антитіло анти-ТІК відповідно до будь-якого з розглянутих вище варіантів здійснення може включати будь-яку з ознак окремо або в сполученні, як описано в Розділах 1-7, нижче: 1. Спорідненість антитіла
У визначених варіантах здійснення, антитіло, пропоноване в даному документі, має константу дисоціації (Ка) «1 мкМ, «100 НМ, «10 НМ, «1 НМ, «0,1 нМ, «0,01 нМ або «0,001 нм (наприклад, 109М або менше, наприклад від 109М до 10-3М, наприклад, від 109М до 10-73М).
У визначених аспектах даного винаходу, антитіло анти-ТТК з "низькою спорідненістю" за даним винаходом вибирається, наприклад, на основі результатів Прикладу 5 і Аммаї еї аї., збі.
Тгапзхі. Меа. 3, в4га43 (2011) і Ми еї аї., сі. Ттапві. Мед. 25 Мау 201 1:Мої. 3, Івзце 84, р.в4гад44, що показують, що такі антитіла проти ТІК з низькою спорідненістю демонструють поліпшене споживання в СМЗ (наприклад, у головному мозку) і/або стійкість у головному мозку/СМ5. Для ідентифікації таких антитіл з низькою спорідненістю, доступні кілька аналізів для вимірювання спорідненості антитіла включаючи, без обмеження: аналіз Скатчарда і методику поверхневого плазмонного резонансу (наприклад, з використанням ВІАСОКЕФ). Відповідно до одного з варіантів здійснення даного винаходу, антитіло має спорідненість до ТІК людини або приматів приблизно від 5 нМ або приблизно від 20 нМ, або приблизно від 100 нМ, приблизно до 50 мкМ, або приблизно до 30 мкМ, або приблизно до 10 мкМ, або приблизно до 1 мкМ, або приблизно до 500 нМ. Таким чином, спорідненість може знаходитися в межах приблизно від 5 НМ приблизно до 50 мкМ або в межах приблизно від 20 нМ приблизно до 30 мкМ, або в межах приблизно від 30 нМ приблизно до 30 мкМ, або в межах приблизно від 50 нМ приблизно до 1
МКМ, або в межах приблизно від 100 нМ приблизно до 500 нМ, наприклад, як вимірювано за допомогою аналізу Скатчарда або ВІАСОРКЕФ). В інших варіантах здійснення даного винаходу, антитіло має час напівжиття при дисоціації з ТК менше ніж 1 хвилина, менше ніж 2 хвилини, менше ніж З хвилини, менше ніж чотири хвилини, менше ніж 5 хвилин або менше ніж від 10 хвилин і приблизно до 20 хвилин, або приблизно до 30 хвилин, як вимірювано за допомогою аналізу конкурентного зв'язування або ВІАСОКЕФ).
Таким чином, даний винахід пропонує спосіб одержання антитіла, придатного для бо перенесення лікарського засобу проти неврологічного розладу через гематоенцефалічний бар'єр, що включає вибір антитіла з панелі антитіл проти ТІК, оскільки воно має спорідненість
ТІК, що знаходиться в межах приблизно від 5 НМ або приблизно від 20 нМ, або приблизно від 100 нМ, приблизно до 50 мкМ, або приблизно до 30 мкМ, або приблизно до 10 мкМ, або приблизно до 1 мкМ, або приблизно до 500 мМ. Таким чином, спорідненість може знаходитися в межах приблизно від 5 НМ приблизно до 50 мкМ або в межах приблизно від 20 нМ приблизно до 30 мкМ, або в межах приблизно від 30 нМ приблизно до 30 мкМ, або в межах приблизно від 50
НМ приблизно до 1 мкМ, або в межах приблизно від 100 нМ приблизно до 500 нМ, як вимірювано, наприклад, за допомогою аналізу Скатчарда або ВІАСОКЕФ). Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, кон'югування гетерологічної молекули/сполуки з антитілом часто буде зменшувати спорідненість антитіла до його мішені, наприклад, через стеричне ускладнення або навіть усунення одного плеча зв'язування, якщо антитіло робиться мультиспецифічним за допомогою одного або декількох плечей, що зв'язуються з антигеном, іншим, ніж вихідна мішень антитіла. В одному з варіантів здійснення, антитіло з низькою спорідненістю за даним винаходом специфічне до ТІК, кон'юговане з анти-ВАСЕЇ1, має Ка відносно ТІК, як вимірювано за допомогою ВІАСОКЕ, приблизно 30 нМ. В іншому варіанті здійснення, антитіло з низькою спорідненістю за даним винаходом специфічне відносно ТІК, кон'юЮговане з ВАСЕЇ має Ка відносно ТІК, як вимірювано за допомогою ВІАСОКЕ, приблизно 600 нМ. В іншому варіанті здійснення, антитіло з низькою спорідненістю за даним винаходом специфічне до ТІК, кон'юговане з ВАСЕЇТ, має Ка відносно ТІК, як вимірювано за допомогою ВІАСОКЕ, приблизно 20 мкМ. В інших варіантах здійснення, антитіло з низькою спорідненістю за даним винаходом специфічне до ТІК, кон'юговане з ВАСЕ!Т, має Ка відносно ТІК, як вимірювано за допомогою
ВІАСОКЕ, приблизно 30 мкМ.
В одному з варіантів здійснення, Ка вимірюють за допомогою аналізу зв'язування радіоактивно міченого антигену (КІА). В одному з варіантів здійснення, КІА здійснюють за допомогою версії Раб антитіла, що становить інтерес, і його антигену. Наприклад, спорідненість зв'язування в розчині Бар з антигеном вимірюють за допомогою врівноважування Раб за допомогою мінімальної концентрації (125І)-міченого антигену в присутності послідовних титрів неміченого антигену, потім захоплення зв'язаного антигену за допомогою планшета, покритого антитілом анти-бар (дивися, наприклад, Спеп еї аї., 9. Мої. ВіоЇ. 293:865-881(1999)). Для
Зо встановлення умов аналізу, багатоямкові планшети МІСКОТІТЕК (Тпегто 5сіепійіс) покривають протягом ночі 5 мкг/мл покриття, що захоплює антитіло анти-бар (Сарре! Гарзх), у 50 мМ карбонату натрію (рН 9,6), а згодом блокують за допомогою 2 95 (мас./об'єм) бичачого сироваткового альбуміну в РВ5 протягом двох-п'яти годин при кімнатній температурі (приблизно 23 "С). На неадсорбуючому планшеті (Мипс 2269620), 100 пМ або 26 пм Г25Ц- антигену змішують з послідовними розведеннями Рар, що становлять інтерес (наприклад, сумісних з оцінками антитіла анти-МЕСЕ, Рар-12, у Ргевзіа єї аЇ., Сапсег Ке5. 57:4593-4599 (1997)). Потім Рар, що становить інтерес, інкубується протягом ночі; однак інкубування може продовжуватися протягом більш тривалого періоду (наприклад, приблизно 65 годин), щоб забезпечити досягнення рівноваги. Після цього суміші переносять у захоплювальний планшет для інкубування при кімнатній температурі (наприклад, протягом однієї години). Потім розчин видаляють, і планшет промивають вісім разів 0,1 95 розчину полісорбату 20 (ТМ/ЕЕМ-2065)). у
РВ5. Коли планшети сушать, додають 150 мкл/ямка сцинтилянта (МІСКОЗСІМТ-20 мМ: РаскКага), і планшети зчитують на гамма-лічильнику ТОРСОШМТ М (РасКага) протягом десяти хвилин.
Концентрації кожного Бар, що дають 20 95 від максимального зв'язування або менше, вибирають для використання в конкурентних аналізах зв'язування.
В одному з аспектів, КІА являє собою аналіз Скатчарда. Наприклад, антитіло анти-ТІК, що становить інтерес, може йодуватися з використанням лактопероксидазного способу (Веппей апа Ногик, Меїподз іп Епгутоїоду 288 ра.134-148 (1997)). Радіоактивно мічене антитіло анти-
ТІК очищують від вільного 125І-Ма за допомогою гель-фільтрації з використанням колонки МАР- 5, ії вимірюють його питому активність. Конкурентні реакційні суміші по 50 мкл, що містять фіксовану концентрацію йодованого антитіла і зменшувані концентрації послідовно розведеного неміченого антитіла, поміщають у 96-ямкові планшети. Клітини, які транзиторно експресують
ТЯ, культивують у середовищах росту, що складаються з модифікованого за способом
Дульбекко середовища Ігла (ОМЕМ) (Сепепіесі), доповненого 10 95 ЕВ5, 2 мМ І -глютаміну і 1 х пеніциліну-стрептоміцину, при 37 С у 5 до СО». Клітини відділяють від чашок з використанням 5ідта СеїЇ Обіз5осіайоп боЇшіоп і промивають буфером для зв'язування (ОМЕМ з 1 95 розчином бичачого сироваткового альбуміну, 50 мМ НЕРЕЄ, рн 7,2 і 0,2 95 азиду натрію). Промиті клітини додають при зразковій густині 200000 клітин у 0,2 мл буфера для зв'язування в 96-ямкові планшети, що містять по 50 мкл конкурентних реакційних сумішей. Кінцева концентрація бо неміченого антитіла при конкурентній реакції з клітинами змінюється, починаючи від 1000 нМ, а потім зменшується за допомогою кратного розведення 1:2 для 10 концентрацій, і включаючи зразок, що містить тільки буфер з нульовим додаванням. Конкурентні реакції з клітинами для кожної концентрації неміченого антитіла аналізуються трикратно. Конкурентні реакції з клітинами інкубують протягом 2 годин при кімнатній температурі. Після 2-годинного інкубування, конкурентні реакції переносять на фільтрувальний планшет і промивають чотири рази буфером для зв'язування з метою поділу вільних і зв'язаних йодованих антитіл. Фільтри зчитують за допомогою гамма-лічильника, і дані по зв'язуванню оцінюють з використанням алгоритму підгонки Мипзоп апа Коабага (1980) для визначення спорідненості зв'язування антитіла.
Ілюстративний аналіз ВІАСОКЕФ з використанням композиції за даним винаходом може бути здійснений у такий спосіб. Ка вимірюють з використанням аналізу поверхневого плазмонного резонансу з використанням ВІАСОКЕФ-2000 (ВіАсоге, Іпс., Різсаїаулау, МУ) при 2526 з використанням набору анти-Ес людини (ВіАсоге Іпс., Різсаїаулау, МУ). Коротко, біосенсорні чипи на основі карбоксиметилованого декстрану (СМ5, ВІАСОКЕ, Іпс.) активують за допомогою // М-етил-М'«(З-диметиламінопропіл)карбодіїміду гідрохлориду (ЕЮОС) і М- гідроксисукциніміду (МН) відповідно до інструкцій постачальника. Антитіло анти-Рс людини розводять за допомогою 10 мМ ацетату натрію, рН 4,0, до 50 мкг/мл перед інжекцією при швидкості потоку 5 мкл/хвилин з одержанням приблизно 10000 одиниць реакції (КУ) зв'язаного білка. Після інжекції антитіла 1 М етаноламіну інжектують для блокування груп, які не прореагували. Для вимірювань кінетики моноспецифічні або мультиспецифічні варіанти антитіла анти-ТІК інжектують у НВЗ-Р з одержанням приблизно 220 КШ (одиниць реакції), потім інжектують дворазові послідовні розведення Ми А-Ніз (від 0,61 нМ до 157 нМ) у НВ5-Р при 25 "б при швидкості потоку приблизно 30 мкл/хв. Швидкості асоціації (Коп) і швидкості дисоціації (Кої) обчислюють з використанням простої моделі зв'язування Ленгмюра 1:11 (ВІАСОКЕФ
Емаїнайоп Боймаге мегзіоп 3.2) за допомогою одночасної підгонки сенсограм асоціації і дисоціації. Рівноважна константа дисоціації (Ка) обчислюється як відношення Копй/коп. Дивися, наприклад, Спеп еї аї., у). Мої. Віої. 293:865-881 (1999).
Відповідно до іншого варіанта здійснення, Ка вимірюють з використанням аналізу поверхневого плазмонного резонансу за допомогою пристрою ВІАСОКЕФ-2000 (ВіІАсоге, Іпс.,
Різсаїаугау, МУ) при 25 С, з використанням набору анти-Ес людини (ВіАсоге Іпс., Різсагаулау,
Зо МУ). Коротко, біосенсорні чипи на основі карбоксиметилованого декстрану (СМ5, ВІАСОКЕ, Іпс.) активуються за допомогою М-етил-М'-(З-диметиламінопропіл)-карбодіїміду гідрохлориду (ЕС) і
М-гідроксисукциніміду (МН) відповідно до інструкцій постачальника. Антитіло анти-Ес людини розводять 10 мМ ацетату натрію, рН 4,0, до 50 мкг/мл перед інжектуванням при швидкості потоку 5 мкл/ухвилин з одержанням приблизно 10000 одиниць реакції (КИ) зв'язаного білка.
Після інжектування антитіла інжектують 1 М етаноламіну для блокування груп, які не прореагували. Для вимірювання кінетики варіанти антитіла анти-ТїК інжектують у НВ5Б-Р з одержанням приблизно 220 КИ, потім дворазові послідовні розведення ТІК-Ніє (від 0,61 нм до157 нМ) інжектують у НВ5Б-Р при 25 "С при швидкості потоку приблизно 30 мкл/хв. Швидкості асоціації (Коп) і швидкості дисоціації (Кої) обчислюють з використанням простої моделі зв'язування Ленгмюра 1:1 (ВІАСОКЕ Ф ЕмаїІчайоп Зоїмаге мегвіоп 3.2) за допомогою одночасної підгонки сенсограм асоціації і дисоціації. Рівноважна константа дисоціації (Ка) обчислюється як відношення Коп/коп. Дивися, наприклад, Спеп еї аї, 9. Мої. Вісі. 293:865-881 (1999).
У даній галузі відомі кілька способів визначення ІС5О для даної сполуки; звичайний підхід полягає в здійсненні аналізу конкурентного зв'язування, такого як описано в даному документі. У цілому, високе значення ІС50 показує, що потрібно більше антитіла для інгібування зв'язування відомого ліганду, і таким чином, що спорідненість антитіла до цього ліганду є відносно низькою.
Навпаки, низьке значення ІС5О показує, що потрібно менше антитіла для інгібування зв'язування відомого ліганду, і таким чином, що спорідненість антитіла до цього ліганду є відносно високою.
Ілюстративний конкурентний аналіз ЕГІЗА для вимірювання значення ІС50 являє собою аналіз, при якому зростаючі концентрації варіантів антитіл анти-ТІВ або анти-ТІК/антиген головного мозку (тобто анти-Т/ВАСЕЇ, анти-ТА Арейа тощо) використовуються для конкуренції з біотинільованим відомим антитілом анти-ТІК за зв'язування з ТІК. Конкурентний аналіз ЕГІЗА анти-ТІК здійснюють на планшетах Махізогр (Меріипе, М.9.), покритих 2,5 мкг/мл очищеного позаклітинного домену ТІК мишачих у РВ5 при 4 "С протягом ночі. Планшети промивають за допомогою РВЗ/0,05 95 Тмеєп 20 і блокують з використанням блокуючого буфера Зирегбіоск у РВЗ (Тпепто Зсіепійіс, Нидбоп, МН). Титри кожного індивідуального антитіла анти-ТІК або анти-ТІК/антиген головного мозку (тобто анти-ТК/ВАСЕ 1 або анти-
ТІР/Абеїа) (послідовні розведення - 1:3) поєднують з біотинільованим відомим антитілом анти- бо ТІК (кінцева концентрація - 0,5 нМ) і додають на планшет протягом 1 години при кімнатній температурі. Планшети промивають РВБ/0,05 95 Тмжееп 20 і додають на планшет НЕР- стрептавідин (Зоційегп Віоїесі, Вігтіпудпат), і інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі. Планшети промивають РВЗ/0,05 95 Тмееп 20 і біотинільоване антитіло анти-ТІВ, зв'язане на планшеті, детектують із використанням субстрату ТМВ (ВіогхХ І арогайогіє5, Ом/пд5
МІЇв). 2. Фрагменти антитіл
У визначених варіантах здійснення, антитіло, запропоноване в даному документі, являє собою фрагмент антитіла.
Фрагменти антитіл включають, але не обмежуючись цим, фрагменти Раб, Рар', Рар'-5Н,
Каб)», Ем ії зоЕм і інші фрагменти, описані нижче. Відносно огляду визначених фрагментів антитіл, дивися Нидзоп еї аїЇ. Маї. Меа. 9:129-134 (2003). Відносно огляду фрагментів 5сЕм, дивися, наприклад, Рінскіпип, іп Тпе Рпаптасоїоду ої Мопосіопаї! Апііродієв, мої. 113, Нозеприга апа Мооге єав., (Зргіпдег-Мепаад, Мем Мої), рр. 269-315 (1994); дивися також УМО 93/16185; і патенти США МоМо 5571894 і 5587458. Відносно обговорення фрагментів Бар і Е(аб)», що містять залишки епітопа зв'язування рецептора реутилізації і що мають підвищений час напівжиття іп мімо, дивися патент США Мо 5869046.
Діатіла являють собою фрагменти антитіл із двома сайтами зв'язування антигену, що можуть бути бівалентними або біспецифічними. Дивися, наприклад, ЕР 404,097; МО 1993/01161; Ниадзоп еї а!., Маї. Мед. 9:129-134 (2003); і НоїПпдег еї аї., Ргос. Май. Асад. Зсі. ОБА 90:6444-6448 (1993). Триатіла і тетратіла також описуються в Ниазоп еї аї., Маї. Меа. 9:129-134 (2003).
Однодоменні антитіла являють собою фрагменти антитіл, що містять усі варіабельні домени важкого ланцюга або їхню частину або усі варіабельні домени легкого ланцюга антитіла або їхню частину. У визначених варіантах здійснення, однодоменне антитіло являє собою однодоменне антитіло людини (Юотапії5, Іпс., МУактат, МА; дивися, наприклад, патент США Мо 6248516 81).
Фрагменти антитіл можуть бути отримані за допомогою різних методик, включаючи, але не обмежуючись цим, протеолітичне переварювання інтактного антитіла, а також продукування за допомогою рекомбінантних клітин-хазяїнів (наприклад, Е. соїї або фага), як описано в даному документі. 3. Химерні і гуманізовані антитіла
У визначених варіантах здійснення, антитіло, запропоноване в даному документі, являє собою химерне антитіло. Визначені химерні антитіла описані, наприклад, у патенті США Мо 4816567; і Моїгтізоп еї аї., Ргос. Маїй!. Асад. Зсі. ОА, 81:68 1-6855 (1984)). В одному з прикладів, химерне антитіло містить варіабельну область, що не належить людині (наприклад, варіабельну область, отриману від миші, щура, хом'яка, кролика або примата, відмінного від людини, такого як мавпа), і постійну область людини. Химерні антитіла, що становлять інтерес, у даному документі включають "приматизування" антитіла, що містять послідовності варіабельного домену, які зв'язують антиген, отримані від примата, відмінного від людини (наприклад, мартишкових, таких як бабуїн, макак-резус або мавпа циномолгус) і послідовності постійної області людини (патент США Мо 5693780). В іншому прикладі, химерне антитіло являє собою антитіло "з переключенням синтезу", у якого клас або підклас відрізняється від класу або підкласу вихідного антитіла. Химерні антитіла включають їхні фрагменти, що зв'язують антиген.
У визначених варіантах здійснення, химерне антитіло являє собою гуманізоване антитіло.
Як правило, антитіло, що не належить людині, гуманізується для зменшення імуногенності для людини, у той же час, зберігаючи специфічність і спорідненість вихідного антитіла, що не належить людині. Як правило, гуманізоване антитіло містить один або декілька варіабельних доменів, у яких НУК, наприклад, СОК (або їх частини), одержують з антитіла, що не належить людині, а ЕК (або їх частини) одержують з послідовності антитіла людини. Гуманізоване антитіло необов'язкове буде також містити щонайменше частину постійної області людини. У деяких варіантах здійснення, деякі залишки ЕК у гуманізованому антитілі заміщаються відповідними залишками з антитіла, що не належить людині (наприклад, антитіла, з якого одержують залишки НМК), наприклад, для відновлення або поліпшення специфічності або спорідненості антитіла.
Гуманізовані антитіла і способи їхнього одержання обговорюються, наприклад, у АІтадго апа Екгапебоп, Егопі. Віовзсі. 13:1619-1633 (2008), і додатково описуються, наприклад, у
Віеєсптапп еї аї., Маште 332:323-329 (1988); Оцеєп еї аї., Ргос. Маї! Асад. 5сі. ОБА 86:10029- 10033 (1989); у патентах США МоМо 5821337, 7527791, 6982321 і 7087409; Казптігі еї аї.,
Меїподе 36:25-34 (2005) (що описує щеплення області, яка визначає специфічність (ЗОК)); бо Радіап, Мої. Іттипої. 28:489-498 (1991) (що описує "зміну поверхні"); баІгАсднпа еї аї., Метод»
3643-60 (2005) (що описує "перемішування ЕК"); ії О5рошгп еї аїЇ., Меїйоавз 3661-68 (2005) і
КіїтКа еї аї., Вг. У. Сапсег, 83:252-260 (2000) (що описує підхід "спрямованої селекції" до перемішування ЕК).
Області каркаса людини, які можна використовувати для гуманізації, включають, але не обмежуючись цим: області каркаса, вибрані з використанням способу "найкращої підгонки" (дивися, наприклад, Зіт5 еї аї. .. Іттипої. 151:2296 (1993)); області каркаса, отримані з консенсусної послідовності антитіл людини з конкретної підгрупи варіабельних областей легкого або важкого ланцюга (дивися, наприклад, Сагег еї аїЇ. Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОА, 89:4285 (1992); і
Ргевзіа єї аї. У. Іттипої, 151:2623 (1993)); області дозрілого (який соматично мутував) каркаса людини або області зародкової лінії каркаса людини (дивися, наприклад, АЇІтадго апа Егапв55оп,
Егопі. Віовсі. 13:1619-1633 (2008)); і з областей каркаса, отриманих при скринінгу ЕЕ. бібліотек (дивися, наприклад, Васа еї аї., 9. Віої. Спет. 272:10678-10684 (1997) ії КозокК еї аї., 9. Віої.
Спет. 271:22611-22618 (1996)). 4. Антитіла людини
У визначених варіантах здійснення, антитіло, запропоноване в даному документі, являє собою антитіло людини. Антитіла людини можуть бути отримані з використанням різних технологій, відомих у даній галузі. Антитіла людини в цілому описані в мап ОіїкК апа мап дае
МУіпКеї, Сицт. Оріп. РНаптасої. 5:368-74 (2001), ї в Гопрегд, Сигг. Оріп. Іттипої. 20:450-459 (2008).
Антитіла людини можуть бути отримані за допомогою введення імуногена трансгенній тварині, що модифікується для продукування інтактних антитіл людини або інтактних антитіл із варіабельними областями людини у відповідь на антигенне провокування. Такі тварини, як правило, містять усі ті локуси імуноглобуліну людини, або їхню частину, що заміняють локуси ендогенного імуноглобуліну або що присутні екстрахромосомально або вбудовуються невпорядковано в хромосоми тварини. У таких трансгенних мишей локуси ендогенного імуноглобуліну, як правило, дезактивуються. Відносно огляду способів одержання антитіл людини від трансгенних тварин, дивися ІГопрего, Маї. Віоїесп. 23:1117-1125 (2005). Дивися також, наприклад, патенти США МоМо 6075181 і 6150584, які описують методику
ХЕМОМОИШЗЕ "М; патент США Мо 5770429, що описує методику НОМАВО; патент США Мо
Зо 7041870, що описує методику К-М МОШЗЕФ, і публікацію заявки на патент Мо О5 2007/0061900, що описує методику МЕГОСІМООЗЕФ). Варіабельні області людини від інтактних антитіл, генерованих такими тваринами, можуть додатково модифікуватися, наприклад, за допомогою об'єднання з іншою постійною областю людини.
Антитіла людини можуть також бути отримані за допомогою способів, основаних на гібридомі. Описано лінії клітин мієломи людини і гетеромієломи миші-людини для продукування моноклональних антитіл людини. (Дивися, наприклад, Корог У. Іттипої, 133:3001 (1984);
Вгодешцг єї аї., Мопосіопа! Апіїбоду Ргодисіюп Тесппідне5 апа Арріїсайоп5, рр. 51-63 (Магсеї!
ОекКкКег, Іпс., Мем МогК, 1987); і Воегпег еї аї., У. Іттипої., 147:86 (1991). Антитіла людини, генеровані за допомогою методики гібридоми В-лімфоцитів людини, також описуються в Її еї а!., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА, 103:3557-3562 (2006). Додаткові способи включають ті, які описані, наприклад, у патенті США Мо 7189826 (що описують одержання моноклональних антитіл до людини з ліній клітин гібридоми) і Мі, Хіапдаії Міапуїхце, 26(4):265-268 (2006) (що описує гібридоми людина-людина). Методика гібридоми людини (методика Тгіота) також описана в
МоїПтег5 апа Вгапаїєїп, Нібюіоду апа Нівіораїйоіоду, 20(3):927-937 (2005), ії в МоїІтег5 апа
Вгапаїєїп, Мейодвз апа Ріпаїпо5 іп Ехрегітепіа! апа Сіїіпіса! Рнаптасоіоду, 27(3):185-91 (2005).
Антитіла людини можуть також генеруватися за допомогою ізолювання послідовностей варіабельного домену клону Ем, вибраних з бібліотек фагових дисплеїв, отриманих від людини.
Такі послідовності варіабельного домену можуть потім поєднуватися з бажаним постійним доменом людини. Методики вибору антитіл людини з бібліотек антитіл описані нижче.
БО 5. Антитіла, отримані з бібліотек
Антитіла за даним винаходом можуть ізолюватися за допомогою скринінгу комбінаторних бібліотек відносно антитіл з бажаною активністю або активностями. Наприклад, у даній галузі відомі різні способи генерування бібліотек фагових дисплеїв і скринінгу таких бібліотек відносно антитіл, що мають бажані характеристики зв'язування. Такі способи обговорюються, наприклад, у Ноодепроот еї аї. іп Меїпоаз іп Моїесшіаг Віоюду 178:1-37 (О'"Вгівп еї а!., ед., Нитап Ргезв5,
Тома, МУ, 2001), і додатково описуються, наприклад, у МсеСапйепу еї аї., Маїшге 348:552-554;
Сіаскзоп еї аї., Майте 352:624-628 (1991); Магкз5 еї аї., У. Мої. Вісі. 222:581-597 (1992); Маїк5 апа
Вгадригу, у Мешйод3з іп МоІесшаг Віоіоду 248:161-175 (10, ед., Нитап Ргев5, Тоїомжа, МУ, 2003); зЗіани еї аї, у. Мої. Віої. 338(2):299-310 (2004); І еє єї аї., у). Мої. Віої. 340(5):1073-1093 (2004);
ЕеПоизе, Ргос. Маїй!. Асай. сі. ОБА 101(34):12467-12472 (2004); і І ее еї аї., 9. Іттипої. Ме(йоаз 284(1-2):119-132(2004).
У визначених способах фагового дисплея, репертуари генів МН і МІ клонуються окремо за допомогою ланцюгової реакції полімерази (РСК) і рекомбінують випадковим чином у фагових бібліотеках, які потім можуть проглядатися відносно фага, що зв'язує антиген, як описано в
М/іпівг єї аї., Апп. Веу. Іттипої, 12:433-455 (1994). Фаговий дисплей, як правило, відображає фрагменти антитіл, або як одноланцюжкові Ем (5сЕм) фрагменти, або як Раб фрагменти.
Бібліотеки від імунізованих джерел забезпечують антитіла з високою спорідненістю до імуногену без вимоги конструювання гібридом. Альтернативно, може клонуватися наївний репертуар (наприклад, від людини) для одержання антитіл з одного джерела для широкого діапазону не своїх, а також своїх антигенів без якої-небудь імунізації, як описано стінйне еї аї.,
ЕМВО 9. 12:725-734 (1993). Нарешті, наївні бібліотеки можуть також бути отримані синтетично за допомогою клонування неперегрупованих сегментів М-генів від стовбурових клітин і з використанням праймерів РСК, що містять випадкову послідовність, для кодування сильно варіабельних областей СОКЗ і для здійснення перегрупування іп міго, як описано Ноодепроот апа Му/іпіег, у). Мої. Віої, 227:381-388 (1992). Патентні публікації, що описують фагові бібліотеки антитіл людини, включають, наприклад: патент США Мо 5750373 і публікації патентів США МоМо 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237 764, 2007/0292936 і 2009/0002360.
Антитіла або фрагменти антитіл, ізольованих з бібліотек антитіл людини, розглядаються в даному документі як антитіла людини або фрагменти антитіл людина. 6. Мультиспецифічні антитіла
У визначених варіантах здійснення, антитіло, запропоноване в даному документі, являє собою мультиспецифічне антитіло, наприклад, біспецифічне антитіло. Мультиспецифічні антитіла являють собою моноклональні антитіла, що мають специфічність зв'язування щонайменше для двох різних сайтів. У визначених варіантах здійснення, одна зі специфічностей зв'язування призначена для ТІК, а інша - для будь-якого іншого антигену. У визначених варіантах здійснення, біспецифічні антитіла можуть зв'язуватися з двома різними епітопами ТІК. Біспецифічні антитіла можуть також використовуватися для локалізації
Зо цитотоксичних агентів у клітинах, які експресують ТІК. Біспецифічні антитіла можуть бути отримані як повнорозмірні антитіла або фрагменти антитіла.
Методики одержання мультиспецифічних антитіл включають, але не обмежуючись цим, рекомбінантне спільне експресування двох пар важкий ланцюг - легкий ланцюг імуноглобуліну, що мають різні специфічності (дивися Міїсїеїп апа Сиеїо, Маїиге 305:537 (1983)), УМО 93/08829 і
ТгацпесКег еї аІ.,, ЕМВО 3. 10:3655 (1991)), і генну інженерію "виступ у западину" (дивися, наприклад, патент США Мо 5731168). Мультиспецифічні антитіла можуть також бути отримані за допомогою конструювання електростатичних керуючих ефектів для одержання /Ес- гетеродимерних молекул антитіл (МО 2009/089004А1); перехресного зв'язування двох або більше антитіл або фрагментів (дивися, наприклад, патент США Мо 4676980 і Вгеппап еї аї.,
Зсіепсе, 229:81 (1985)); використання лейцинових "блискавок" для одержання біспецифічних антитіл (дивися, наприклад, КовіеїІпу еї аї., У. Іттипої., 148(5):1547-1553 (1992)); використання методики "діатіл" для одержання біспецифічних фрагментів антитіл (дивися, наприклад,
Ноїїпдег єї а!., Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА, 90:6444-6448 (1993)) і використання одноланцюжкових димерів Ем (5Ем) (дивися, наприклад Огибег еї аї., У. Іттипої., 152:5368 (1994)); і приготування триспецифічних антитіл, як описано, наприклад, у Тий еї аї. 9. Іттипої. 147:60 (1991).
Антитіло або фрагмент у даному документі також включає "Раб подвійної дії" або "САЕ", що містить сайт зв'язування антигену, що зв'язується з ТІК, а також з іншим, відмінним від нього антигеном (дивися, наприклад, 5 2008/0069820).
Відповідно до одного з варіантів здійснення даного винаходу, "зв'язування" здійснюється за допомогою генерування мультиспецифічного антитіла (наприклад, біспецифічного антитіла).
Мультиспецифічні антитіла являють собою моноклональні антитіла, що мають специфічності зв'язування щонайменше до двох різних антигенів або епітопів. В одному з варіантів здійснення, мультиспецифічне антитіло містить перший сайт зв'язування антигену, що зв'язує ТІК, і другий сайт зв'язування антигену, що зв'язує антиген головного мозку, такий як бета-секретаза 1 (ВАСЕЇТ) або АБбепа, і інші антигени головного мозку, описані в даному документі.
Ілюстративний антиген головного мозку, що зв'язується за допомогою мультиспецифічного/біспецифічного антитіла, являє собою ВАСЕТ, і ілюстративне антитіло, що зв'язується з ним, являє собою антитіло УМ/412.8.31 на Фігурах 16А-В у даному документі.
В іншому варіанті здійснення, антиген головного мозку являє собою Абеїа, приклади таких 60 антитіл описані в МО 2007068412, МО 2008011348, МО 20080156622 і МО 2008156621, у явному вигляді, що включаються в даний документ як посилання, при цьому ілюстративне антитіло до Абеїа включає антитіло (9054 МАВТ5102А, що містить послідовності амінокислот важкого і легкого ланцюга, на фігурах 114А і 118, відповідно.
Методики одержання мультиспецифічних антитіл включають, але не обмежуючись цим, рекомбінантне спільне експресування двох пар важкий ланцюг - легкий ланцюг імуноглобуліну, що мають різні специфічності (дивися Міїбїеіп апа СпцеїПо, Маїиге 305:537 (1983)), УМО 93/08829, і
ТгаипесКег еї аІ,, ЕМВО 3. 10:3655 (1991)) і генну інженерію "виступ у западину" (дивися, наприклад, патент США Мо 5731168). Мультиспецифічні антитіла можуть також бути отримані за допомогою конструювання електростатичних керуючих ефектів для одержання /Ес- гетеродимерних молекул антитіл (МУМО 2009/089004А1); перехресного зв'язування двох або більше антитіл або фрагментів (дивися, наприклад, патент США Мо 4676980 і Вгеппап еї аї.,
Зсіепсе, 229:81 (1985)); використання лейцинових блискавок для одержання біспецифічних антитіл (дивися, наприклад, КовіеїІпу еї аї., У. Іттипої., 148(5):1547-1553 (1992)); використання методики "діатіл" для одержання біспецифічних фрагментів антитіл (дивися, наприклад,
Ноїїпдег єї а!., Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА, 90:6444-6448 (1993)) і використання одноланцюжкових димерів Ем (5Ем) (дивися, наприклад Сгибег еї аї., 9. Іттипої., 152:5368 (1994)) і приготування триспецифічних антитіл, як описано, наприклад, у Тий еї аї. У. Іттипої. 147:60 (1991).
Отримані за допомогою генної інженерії антитіла з трьеома або більше функціональними сайтами зв'язування антигену, включаючи "антитіла-восьминоги" або "імуноглобуліни з двома варіабельними доменами" (МО), також включаються в даний документ (дивися, наприклад, О5 2006/0025576А1 і Уми єї а). Маїшге Віотесппоіоду (2007)). 7. Варіанти антитіл
У визначених варіантах здійснення, розглядаються варіанти послідовностей амінокислот антитіл, запропонованих у даному документі. Наприклад, може бути бажаним поліпшення спорідненості зв'язування і/або інших біологічних властивостей антитіла. Варіанти послідовності амінокислот антитіла можуть бути отримані за допомогою уведення відповідних модифікацій у послідовність нуклеотидів, що кодує антитіло, або за допомогою пептидного синтезу. Такі модифікації включають, наприклад, делеції і/або інсерції і/або заміщення залишків у послідовностях амінокислота антитіла. Може здійснюватися будь-яке сполучення делецій,
Зо інсерцій і заміщень для одержання кінцевого конструкта, за умови, що кінцевий конструкт має бажані характеристики, наприклад, зв'язує антиген. а) Варіанти заміщень, інсерцій і делецій
У визначених варіантах здійснення пропонуються варіанти антитіл, що мають одне або кілька заміщень амінокислот. Сайти, що становлять інтерес, для мутагенезу за допомогою заміщень, включають НУК і ЕК. Консервативні заміщення показані в Таблиці 2 під заголовком "Переважні заміщення". Більш істотні зміни наводяться в Таблиці 2 під заголовком "Іплюстративні заміщення" і додатково описуються нижче з посиланнями на класи бічних ланцюгів амінокислот. Заміщення амінокислот можуть вводитися в антитіло, що становить інтерес, і в продукти, що переглядаються відносно бажаної активності, наприклад, збереження/поліпшення зв'язування антигену, зменшення імуногенності або поліпшення АОСС або СОС.
Таблиця 2
Аа (А) Уаї; І ви; Іе
Авп (М) Сп; Нів; Авр, І ув; Аг перо сус) сито о сьо)
Пе (І) Ї еи; Маї; Меї; Аа; Рпе; норлейцин
І ец() норлейцин; Іе; Ма!; Меї; Аа; Ре пе
Меї (М) Ї еи; Ре; Іе
РНе (Р) Тер; І и; Маї; Іе; Аа; Тут ро
І тис тем тус ян ма! (М) Пе; еи; Меї; Ре; Аіа; норлейцин
Амінокислоти можуть групуватися відповідно до загальних властивостей бічних ланцюгів: (1) гідрофобні: норлейцин, Меї, Аа, Маї, І ей, Не; (2) нейтральні гідрофільні: Суб, Зег, ТАг, Азп, біп; (3) кислотні: Ар, СМ; (4) основні: Ні, Г ув, Ага; (5) залишки, що впливають на орієнтацію ланцюга: су, Рго; (6) ароматичні: Тгр, Туг, Ріє.
Неконсервативні заміщення будуть давати заміну елемента одного з цих класів на інший клас.
Один з типів варіантів із заміщенням включає заміщення одного або декількох залишків гіперваріабельної області вихідного антитіла (наприклад, гуманізованого антитіла або антитіла людини). Як правило, отриманий у результаті варіант (варіанти) вибраний для подальших досліджень, буде мати модифікації (наприклад, поліпшення) визначених біологічних властивостей (наприклад, підвищену спорідненість, знижену імуногенність) порівняно з вихідним антитілом і/або буде мати по суті збережені визначені біологічні властивості вихідного антитіла. Ілюстративний варіант із заміщенням являє собою антитіло з дозрілою спорідненістю, що може бути зручно генерувати, наприклад, з використанням методик дозрівання спорідненості на основі фагового дисплея, таких як ті, які описані в даному документі. Коротко, один або кілька залишків НМЕК мутують, і варіанти антитіл одержують за допомогою фагового дисплея і переглядають на конкретну біологічну активність (наприклад, спорідненість зв'язування).
Зміни (наприклад, заміщення) можуть здійснюватися, наприклад, у НУК, для поліпшення спорідненості антитіла. Такі зміни можна здійснювати в "гарячих точках" НМК, тобто на залишках, кодованих кодонами, що піддаються мутаціям з високою частотою протягом процесу соматичного дозрівання (дивися, наприклад, Спожмапигу, Меїтоаз Мої. Віої. 207:179-196 (2008)), іабо на залишках, що вступають у контакт з антигеном, при цьому отриманий у результаті варіант МН або Мі досліджують на спорідненість зв'язування. Дозрівання спорідненості за допомогою конструювання і повторного вибору з вторинних бібліотек описано, наприклад, у
Ноодепроот еї а!. Меїйод3з іп Моїіесшціаг Віоіоду 1781-37 (О'Вгівп вї а!., єд., Нитап Ргезв, Тома,
МУ, (2001). У деяких варіантах здійснення дозрівання спорідненості, уводиться різноманіття у варіабельні гени, вибрані для дозрівання, за допомогою будь-якого з різноманітних способів (наприклад, РСК зі схильністю до помилок, перемішування ланцюгів або олігонуклеотид- спрямованого мутагенезу). Потім створюється вторинна бібліотека. Потім здійснюють скринінг бібліотеки для ідентифікації будь-яких варіантів антитіла з бажаною спорідненістю. Інший спосіб уведення різноманіття включає НМК-спрямовані підходи, при яких рандомізуються кілька залишків НМК (наприклад, 4-6 залишків за один раз). Залишки НУК, залучені в зв'язування з антигеном, можуть бути специфічно ідентифіковані, наприклад, з використанням аланін- скануючого мутагенезу або моделювання. Зокрема, мішенями часто є СОБК-НЗ їі СОК-Ї 3.
У визначених варіантах здійснення, заміщення, інсерції або делеції можуть здійснюватися в одній або декількох НМК остільки, поскільки такі зміни не зменшують істотно здатності антитіла до зв'язування антигену. Наприклад, у НМК можна здійснювати консервативні зміни (наприклад, консервативні заміщення, як пропонується в даному документі), що не зменшують істотно спорідненості зв'язування. Такі зміни можуть знаходитися, наприклад, поза залишками, що вступають у контакт з антигеном, у НМК. У визначених варіантах здійснення варіантів МН і МІ. послідовностей, запропонованих вище, кожна НУК або залишається незмінною, або містить не більше одного, двох або трьох заміщень амінокислот.
Корисний спосіб для ідентифікації залишків або областей антитіла, що можуть бути мішенями для мутагенезу, називається "аланін-скануючий мутагенез", як описано в Сиппіпднат
Зо апа Му/єїї (1989) бЗсієпсе, 244:1081-1085. У цьому способі, залишок або група цільових залишків (наприклад, заряджені залишки, такі як аго, азр, Пів, Іуз ї дію) ідентифікуються і заміняються нейтральною або негативно зарядженою амінокислотою (наприклад, аланіном або поліаланіном) для визначення того, чи впливає це на взаємодію антитіла з антигеном.
Додаткові заміщення можуть вводитися в положеннях амінокислот, що демонструють функціональну чутливість до початкових заміщень. Альтернативно або на додаток до цього, кристалічна структура комплексу антиген-антитіло може використовуватися для ідентифікації точок контакту між антитілом і антигеном. Такі контактні залишки і сусідні 3 ними залишки можуть бути зроблені мішенями або усунуті як кандидати на заміщення. Можна здійснити скринінг варіантів для визначення того, чи містять вони бажані властивості.
Інсерції в послідовності амінокислот включають аміно- і/або карбоксил-кінцеві злиття, що знаходяться в межах довжини від одного залишку до поліпептидів, що містять сотню або більше залишків, а також інсерції усередині послідовності з одного або множини залишків амінокислот.
Приклади кінцевих інсерцій включають антитіло з М-кінцевим метіонільним залишком. Інші варіанти інсерцій для молекули антитіла включають злиття з М- або С-закінченням антитіла ферменту (наприклад, АЮЕРТ) або поліпептиду, що збільшує час напівжиття антитіла в сироватці. р) Варіанти з глікозилуванням
У визначених варіантах здійснення, антитіло, запропоноване в даному документі, змінюється для збільшення або зменшення того ступеня, до якого антитіло глікозиловано.
Додавання або видалення сайтів глікозилування в антитіло може бути зручно здійснювати за допомогою такої зміни послідовності амінокислот, при якій створюється або видаляється один або декілька сайтів глікозилування.
Коли антитіло містить Ес-область, вуглевод, приєднаний до неї, може змінюватися. Нативні антитіла, продуковані клітинами ссавців, як правило, містять розгалужений, двоантенарний олігосахарид, що, як правило, приєднаний за допомогою М-зв'язку до Азп297 домену СН2 Ес- області. Дивися, наприклад, Умгіднії еї аіІ. ТІВТЕСН 15:26-32 (1997). Олігосахарид може містити різноманітні вуглеводи, наприклад, манозу, М-ацетил глюкозамін (СІСМАс), галактозу і сіалову кислоту, а також фукозу, з'єднану з СІСМАс, у "стеблі" двоантенарної структури олігосахариду. У деяких варіантах здійснення, можуть здійснюватися модифікації олігосахариду в антитілі за 60 даним винаходом для створення варіантів антитіла з визначеними поліпшеними властивостями.
В одному з варіантів здійснення, пропонуються варіанти антитіла, що мають структуру вуглеводу, у якому відсутня фукоза, приєднана (прямо або побічно) до Ес-області. Наприклад, кількість фукози в такому антитілі може становити від 1 95 до 80 905, від 1 95 до 65 905, від 5 95 до 65 95 або від 20 95 до 40 95. Кількість фукози визначається за допомогою обчислення середньої кількості фукози в цукровому ланцюзі на Азп297, відносно суми всіх глікоструктур, приєднаних до А5п297 (наприклад, комплексних, гібридних структур і структур з високим вмістом манози), як вимірювано за допомогою мас-спектрометрії МАГОІ-ТОЕ, як описано, наприклад, у УМО 2008/077546. А5п297 стосується аспарагінового залишку, розташованого біля положення 297 у
Ес-області (ЕС нумерація залишків Ес-області); однак, А5п297 може також розташовуватися приблизно за 3 амінокислоти до або після положення 297, тобто між положеннями 294 і 300, через малий розкид послідовностей в антитілах. Такі варіанти з фукозилуванням можуть мати поліпшену функцію АЮСС. Дивися, наприклад, публікації патентів США МоМо 2003/0157108 (Ргезіа, І); О5 2004/0093621 (уома Накко Кодуо Со., Ца). Приклади публікацій, що стосуються "дефукозилованим" або "фукоза-дефіцитних" варіантів антитіл, включають: ОЗ 2003/0157108;
МО 2000/61739; МО 2001/29246; 05 2003/0115614; 05 2002/0164328; 005 2004/0093621; ОО5 2004/0132140; 05 2004/0110704; 005 2004/01 10282; 05 2004/0109865; МО 2003/085119; МО 2003/084570; МО 2005/035586; УМО 2005/035778; МО 2005/053742; МО 2002/031140; ОКалакі єї аІ. У. Мої.Віої. 336:11239-1249 (2004); Матапе-ОНпикі еї аї. Віоїеси. Віоєпод. 87:614 (2004).
Приклади ліній клітин, здатних продукувати дефукозиловані антитіла, включають лінію клітин
Гес1зсНнО, дефіцитну по фукозилуванню білка (КіркКа еї аї. Агсй. Віоспет. Віорпу5. 249:533-545 (1986); заявка на патент США Мо 2003/0157108 АЇ, Ргезіа, І; ії УМО 2004/056312 АЇ, Адатзв еї аї., зокрема, Приклад 11), і лінії нокаутованих клітин, такі як клітини з геном альфа-1,6- фукозилтрансферази, ЕОТВ8, нокаутовані клітини СНО (дивися, наприклад, Хатапе-ОнНпикі еї а).
Віоїесн. Віоепд. 87:614 (2004); Капаа, У. єї аї!., Віоїеснпої. Віоепа., 94(4):680-688 (2006) ії УМО 2003/08107).
Крім того, пропонуються варіанти антитіл з розділеними навпіл олігосахаридами, наприклад, у яких двоантенарний олігосахарид, приєднаний до Ес-області антитіла, поділяється навпіл за допомогою СІСМАс. Такі варіанти антитіл можуть мати знижене фукозилування і/або поліпшену функцію АОСС. Приклади таких варіантів антитіл описані, наприклад, у УМО 2003/011878 (деап-
Зо Маїгеї еї аІ.); у патенті США Мо 6602684 (тапа еї аІ.); ії в 5 2005/0123546 (Штапа еї аї.).
Варіанти антитіл щонайменше з одним залишком галактози в олігосахариді, приєднаному до Ес- області, також пропонуються. Такі варіанти антитіл можуть мати поліпшену функцію СОС. Такі варіанти антитіл описані, наприклад, у УМО 1997/30087 (Раїеї еї а/І.); УМО 1998/58964 (Ка)/)им, 5.); і
МО 1999/22764 (Ва|и, 5.). с) Варіанти Ес-області
У визначених варіантах здійснення, одна або кілька модифікацій амінокислот можуть вводитися в Ес-область антитіла, запропонованого в даному документі, тим самим генеруючи варіант Ес-області. Варіант Ес-області може містити послідовність Ес-області людини (наприклад, Ес-область 951, ІдС2г, ІдСшЗ або Ід054 людини), що містить модифікацію амінокислот (наприклад, заміщення) в одному або декількох положеннях амінокислот.
У визначених варіантах здійснення, даний винахід розглядає варіант антитіла, що має деякі, але не всі ефекторні функції, що роблять його бажаним кандидатом для застосувань, у яких є важливим час напівжиття антитіла іп мімо, і при цьому визначені ефекторні функції (такі як активування комплементу і АЮСС) є непотрібними або шкідливими. Можуть здійснюватися аналізи цитотоксичності іп міїго і/або іп мімо, щоб підтвердити зменшення/збідніння активностей
СОС і/або АОСС. Наприклад, можуть здійснюватися аналізи зв'язування Ес-рецептора (Ес), щоб переконатися, що для антитіла відсутнє зв'язування Есуй (отже, ймовірно відсутня активність АЮСС), але зберігається здатність зв'язування ЕсКп. Первинні клітини для опосередкування АЮСС, МК клітини експресують тільки ЕсСукІ, у той час як моноцити експресують ЕсукКІ, ЕсуКІІ ї ЕсукІ. Експресування Есг у гематопоетичних клітинах наводиться в Таблиці З на сторінці 464 Камеїсп апа Кіпеї Аппи. Нем. Іттипої. 9:457-492 (1991).
Необмежувальні приклади аналізів іп міго для оцінки активності АЮОСС молекули, що становить інтерес, описані в патенті США Мо 5500362 (дивися, наприклад НеїІ5ігоп, І. еї аї. Ргос. Маї! Асаа. зЗсі. ОБА 83:7059-7063 (1986)) і Неїїбігот, І еї а!., Ргос. Май! Асай. Зсі. ОЗА 82:1499-1502 (1985); 5821337 (дивися Вгиддетапп, М. еї аї., у. Ехр. Мей. 166:1351-1361 (1987)). Альтернативно, можна використовувати методи нерадіоактивних аналізів (дивися, наприклад, нерадіоактивний аналіз цитотоксичності АСТІТМ для проточної цитометрії (СеПесппоїіоду, Іпс. Моипіаїп Міему,
СА); і нерадіоактивний аналіз цитотоксичності СуїюТох 9685 (Рготеда, Мадізоп, УМ). Корисні ефекторні клітини для таких аналізів включають мононуклеарні клітини периферичної крові бо (РВМС) і природні клітини-кілери (МК). Альтернативно, або на додаток до цього, активність
АОСС молекули, що становить інтерес, може оцінюватися іп мімо, наприклад, на тваринній моделі, такій, як та, яка описується в Сіупез еї аї. Ргос. Маг! Асай. Зсі. ОБА 95:652-656 (1998).
Аналіз зв'язування С1д може також здійснюватися для підтвердження того, що антитіло не здатне зв'язувати С1д, і, отже, у нього відсутня активність СОС. Дивися, наприклад, аналіз
ЕСІЗА зв'язування Ст1д і СЗс у УМО 2006/029879 і УМО 2005/100402. Для оцінки активування комплементу може бути здійснений аналіз СОС (дивися, наприклад, бСа7апо-бапіого еї аї.,».
Іттипої. Мештоав5 202:163 (1996); Стада, М.5. еї а!., Віоса 101:1045-1052 (2003); і Стадд, М.5. апа М.). Сієппіве, Віоса 103:2738-2743 (2004)). Зв'язування ЕсКп і визначення виведення/часу напівжиття іп мімо також можуть здійснюватися з використанням способів, відомих у даній галузі (дивися, наприклад, РеїКома, 5.В. еї аї., Іп!І. Іттипої. 18(12):1759-1769 (2006)).
Необмежувальні приклади антитіл зі зменшеною ефекторною функцією включають антитіла із заміщенням одного або декількох залишків 238, 265, 269, 270, 297, 327 і 329 Ес-області (патент США Мо 6737056). Такі Ес-мутанти включають Ес-мутанти з заміщеннями в двох або більше положеннях амінокислот 265, 269, 270, 297 і 327, включаючи так званий Ес-мутант "РАМА" із заміщенням залишків 265 і 297 аланіном (патент США Мо 7332581).
Описано визначені варіанти антитіл з поліпшеним або зменшеним зв'язуванням з ЕсВ. (Дивися, наприклад, патент США Мо 6737056; УМО 2004/056312 і ЗПієвїд5 еї аї., 9. ВіоЇ. Спет. 9(2):6591-6604 (2001).
У визначених варіантах здійснення, варіант антитіла містить Ес-область з одним або декількома заміщеннями амінокислот, що поліпшують АЮСС, наприклад, заміщеннями в положеннях 298, 333 і/або 334 Ес-області (нумерація залишків ЕС).
У деяких варіантах здійснення, здійснюють зміни в Ес-області, що дають у результаті зміну (тобто або поліпшення, або погіршення) зв'язування Сід і/або комплемент-залежної цитотоксичності (СОС), наприклад, як описано в патенті США Мо 6194551, М/О 99/51642 і в
Ідиводіє еї аї. У. Іттипої. 164:4178-4184 (2000).
Антитіла зі збільшеними часами напівжиття і поліпшеним зв'язуванням з неонатальним Ес- рецептором (ЕсКп), що є відповідальним за перенесення материнських до фетусу (сиуег еї аї.,
У. Іттипої. 117:587 (1976) і Кіт еї аї., 9. Іттипої. 24:249 (1994)), описані в О52005/0014934А1 (Ніпюоп еї аї.). Ці антитіла містять Ес-область з одним або декількома заміщеннями в ній, що
Зо поліпшують зв'язування Ес-області з ЕсКп. Такі, необмежувальні варіанти Ес включають варіанти з заміщеннями в одному або декількох залишках Ес-області: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434, наприклад, заміщення залишку 434 Ес-області (патент США Мо 7371826).
Дивися також Юипсап 85 Уміпіег, Майшге 322:738-40 (1988); патент США Мо 5648260; патент
США Мо 5624821 і УМО 94/29351 відносно інших прикладів варіантів Ес-області. а) Отримані за допомогою генної інженерії цистеїнові варіанти антитіл
У визначених варіантах здійснення, може бути бажаним створення отриманих за допомогою генної інженерії цистеїнових антитіл, наприклад, "йіоМАбБ", у яких один або кілька залишків антитіла заміщені цистеїновими залишками. У конкретних варіантах здійснення, заміщені залишки з'являються на доступних сайтах антитіла. За допомогою заміщення цих залишків цистеїном, реакційноздатні тіольні групи позиціонуються тим самим на доступних сайтах антитіла і можуть використовуватися для кон'югування антитіла з іншими залишками, такими як залишки лікарських засобів або залишки лінкер-лікарський засіб, для створення імунокон'югата, як додатково описується в даному документі. У визначених варіантах здійснення, будь-які один або декілька з наступних залишків можуть бути заміщені цистеїном: М205 (нумерація Каба) легкого ланцюга; А118 (нумерація ЕС) важкого ланцюга; і 5400 (нумерація ЕС) Ес-області важкого ланцюга.
Отримані за допомогою генної інженерії цистеїнові антитіла можуть генеруватися, як описано, наприклад, у патенті США Мо 7521541. е) Похідні антитіл
У визначених варіантах здійснення, антитіло, запропоноване в даному документі, може додатково модифікуватися, щоб воно містило додаткові небілкові залишки, що відомі в даній галузі і є легсодоступними. Залишки, придатні для дериватизації антитіла, включають, але не обмежуючись цим, водорозчинні полімери. Необмежувальні приклади водорозчинних полімерів включають, але не обмежуючись цим, поліетиленгліколь (РЕС), співполімери етиленгліколь/пропіленгліколь, карбоксиметилцелюлозу, декстран, полівініловий спирт, полівінілпіролідон, полі-1,3-діоксолан, полі-1,3,6-триоксан, співполімер етилен/малеїновий ангідрид, поліамінокислоти (або гомополімери, або неупорядковані співполімери) і декстран або полі(н-вінілпіролідон)поліетиленгліколь, гомополімери пропіленгліколю, співполімери пропілпропіленоксид/етиленоксид, поліоксіетиловані поліоли (наприклад, гліцерол), полівініловий спирт і їхні суміші.
Пропіональдегід поліетиленгліколю може мати переваги при виробництві, завдяки його стабільності у воді. Полімер може мати будь-яку молекулярну масу і може бути розгалуженим або нерозгалуженим.
Кількість полімерів, приєднаних до антитіла, може змінюватися, і якщо приєднано більше одного полімеру, вони можуть являти собою однакові або різні молекули. Як правило, кількість і/або тип полімерів, використовуваних для дериватизації, може визначатися на основі розумінь, що включають, але не обмежуючись цим, конкретні властивості або функції антитіла, що повинні бути поліпшені, то, чи буде похідне антитіла використовуватися в терапії при визначених станах тощо.
В іншому варіанті здійснення, пропонуються кон'югати антитіла і небілюкового залишку, що можуть селективно нагріватися при експонуванні для випромінювання. В одному з варіантів здійснення, небілюковий залишок являє собою вуглецеву нанотрубку (Кат еї а!., Ргос. Маї!. Асад.
Зсі. ОБА 102:11600-11605 (2005)). Випромінювання може мати будь-яку довжину хвилі, і вони включають, але не обмежуючись цим, довжини хвиль, що не ушкоджують звичайні клітини, але які нагрівають небілковий залишок до такої температури, при якій клітини, що знаходяться поруч з антитілом-небілковим залишком, гинуть.
В. Рекомбінантні способи і композиції
Антитіла можуть продукуватися з використанням рекомбінантних способів і композицій, наприклад, як описано в патенті США Мо 4816567. В одному з варіантів здійснення, пропонується ізольована нуклеїнова кислота, що кодує антитіло анти-ТІК, описане в даному документі. Така нуклеїнова кислота може кодувати послідовність амінокислот, що містить МІ, іабо послідовність амінокислот, що містить МН антитіла (наприклад, легкий і/або важкий ланцюги антитіла). В іншому варіанті здійснення, пропонуються один або кілька векторів (наприклад, векторів експресії), що містять таку нуклеїнову кислоту. В іншому варіанті здійснення пропонується клітина-хазяїн, що містить таку нуклеїнову кислоту. В одному з таких варіантів здійснення, клітина-хазяїн містить (наприклад, трансформується з його допомогою): (1) вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує послідовність амінокислот, що містить МІ.
Зо антитіла, і послідовність амінокислот, що містить МН антитіла, або (2) перший вектор, що містить нуклеїнову кислоту, що кодує послідовність амінокислот, що містить Мі. антитіла, і другий вектор, що містить нуклеїнову кислоту, що кодує послідовність амінокислот, що містить
МН антитіла. В одному з варіантів здійснення, клітина-хазяїн є еукаріотичною, наприклад, являє собою клітину яєчника китайського хом'ячка (СНО) або лімфоїдну клітину (наприклад, клітину
У0, МБО, Зр20). В одному з варіантів здійснення, пропонується спосіб одержання антитіла анти-
ТІК, де спосіб включає культивування клітини-хазяїна, що містить нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, як наведено вище, при умовах, придатних для експресування антитіла, і необов'язково, витягнення антитіла з клітини-хазяїна (або культурного середовища клітини- хазяїна).
Для рекомбінантного продукування антитіла анти-ТТЕ, нуклеїнова кислота, що кодує антитіло, наприклад, як описано вище, ізолюється і вставляється в один або кілька векторів для подальшого клонування і/або експресування в клітині-хазяїні. Така нуклеїнова кислота може легко бути ізольована і секвенована з використанням звичайних процедур (наприклад, з використанням олігонуклеотидних зондів, що здатні специфічно зв'язуватися з генами, які кодують важкі і легені ланцюги антитіла).
Клітини-хазяїни, придатні для клонування або експресування векторів, що кодують антитіло, включають прокаріотичні або еукаріотичні клітини, описані в даному документі. Наприклад, антитіла можуть продукуватися в бактеріях, зокрема, коли не потрібні глікозилування і Ес- ефекторна функція. Відносно експресії фрагментів антитіла і поліпептидів у бактерій, дивися,
БО наприклад, патенти США МоМо 5648237, 5789199 і 5840523. (Дивися також Спапоп, Меїноодв іп
Моїесшіаг Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. Го, єд., Нитапа Ргез5, Тоїоула, МУ, 2003), рр. 245-254, що описує експресування фрагментів антитіл у Е. соїї.) Після експресування антитіло може ізолюватися з пасти бактеріальних клітин у вигляді розчинної фракції і може додатково очищуватися.
На додаток до прокаріотів, еукаріотичні мікроби, такі як нитковидні грибки або дріжджі, є придатними для використання хазяїнами для клонування або експресування векторів, що кодують антитіло, включаючи штами грибків і дріжджів, де шляхи глікозилування є "германізованими", що дає в результаті продукування антитіла зі структурою глікозилування, що частково або повністю відповідає людині. Дивися Сегпдго55, Маї. Віоїесп. 22:1409-1414 (2004) і 60 Її еїа!., Маї. Віоїесі. 24:210-215 (2006).
Клітини-хазяїни придатні для експресування глікозилованого антитіла також виходять з багатоклітинних організмів (безхребетних тварин і хребетних тварин). Приклади клітин безхребетних включають клітини рослин і клітини комах. Ідентифіковано численні бакуловірусні штами, що можуть використовуватися в зв'язку з клітинами комах, зокрема, для трансфікування клітин 5родоріега Ігидірегаа.
Культури клітин рослин також можуть використовуватися як хазяїни. Дивися, наприклад, патенти США МоМо 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 і 6417429 (які описують методику
РІГАМТІВОБІЕ5З М для продукування антитіл у трансгенних рослинах).
Клітини хребетних можна також використовувати як хазяїни. Наприклад, корисними можуть бути лінії клітин ссавців, що адаптовані для росту в суспензії. Інші приклади корисних ліній клітин-хазяїнів ссавців являють собою лінію клітин СМ1 нирок мавп, трансформовану за допомогою 540 (СО5-7); лінію клітин нирок ембріона людини (293 або клітини 293 як описано, наприклад, у сгапат еї аї., У. Зеп МігоїЇ. 36:59 (1977)); клітини нирок дитинчати хом'яка (ВНК); клітини Сертолі миші (клітини ТМ4, як описано, наприклад, у Маїнег, ВіоІ. Кергод. 23:243-251 (1980)); клітини нирок мавпи (СМ1); клітини нирок африканської зеленої мавпи (МЕКО-76); клітини карциноми шийки матки людини (НЕГА); клітини нирок собачих (МОСК); клітини печінки щура бафало (ВК ЗА); клітини легень людини (М/138); клітини печінки людини (Нер 02); пухлина молочної залози миші (ММТ 060562); клітини ТКІ, як описано, наприклад, у Маїнег еї а!І., АппаїЇ5 М. У. Асад. 5сі. 383:44-68 (1982); клітини МКС 5 і клітини Е54. Інші корисні лінії клітин- хазяїнів ссавців включають клітини яєчників китайського хом'ячка (СНО), включаючи клітини
ОНЕАСНО (паць еї а!., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 77:4216 (1980)) і лінії клітин мієломи, такі як
У0, МБО ії 5р2/0. Відносно огляду визначених ліній клітин-хазяїнів ссавців, придатних для продукування антитіл, дивися, наприклад, Уаакі апа Ули, Меїйодз іп МоїІесшаг Віоіоду, Мої. 248 (В.К.С. 10, єд., Нитапа Ргезв, Тоїюома, МУ), рр. 255-268 (2003).
С. Аналізи
Антитіла анти-ТЯЖ, запропоновані в даному документі, можуть ідентифікуватися, проглядатися або характеризуватися відносно їх фізичних/хімічних властивостей і/або біологічних активностей за допомогою різноманітних аналізів, відомих у даній галузі. 1. Аналіз зв'язування й інші аналізи
Доступні різноманітні методики для визначення зв'язування антитіла з ТІК. Один з таких аналізів являє собою імуносорбентний аналіз за допомогою зв'язаного ферменту (ЕГІ5А) для підтвердження здатності зв'язування з ТІК людини (і з антигеном головного мозку). Відповідно до цього аналізу, планшети, покриті антигеном (наприклад, рекомбінантним ТІК), інкубують разом зі зразком, що містить антитіло анти-ТК, і визначають зв'язування антитіла з антигеном, що становить інтерес.
В одному з аспектів, антитіло за даним винаходом досліджують відносно його активності зв'язування антигену, наприклад, за допомогою відомих способів, таких як ЕГІЗА, Умевіегп Біої тощо.
В іншому аспекті, можна використовувати конкурентні аналізи для ідентифікації антитіла, що конкурує з будь-яким з антитіл за даним винаходом за зв'язування з ТІК. У визначених варіантах здійснення, таке конкуруюче антитіло зв'язується з таким же епітопом (наприклад, з лінійним або конформаційним епітопом), як зв'язаний з будь-яким з антитіл за даним винаходом, більш конкретно, з будь-яким з епітопів, специфічно зв'язаних з антитілами в класі І, класі ІЇ, класі ЇЇ або класі ІМ, як описано в даному документі (дивися, наприклад, Приклад 1 і
Таблицю 4). Докладні ілюстративні способи картування епітопа, з яким зв'язується антитіло, наведені в Могттіз5 (1996) "Ерйор Марріпуд Ргоїосої5", іп Меїйод5 іп МоїІесціаг Віоіоду мої. 66 (Нитапа Ргез5, Тоїома, М).
В ілюстративному конкурентному аналізі, іммобілізований ТІК інкубують у розчині, що містить перше мічене антитіло, що зв'язується з ТІК (наприклад, одне або декілька з антитіл, описаних у даному документі), і друге немічене антитіло, яке досліджують на його здатність конкурувати з першим антитілом за зв'язування з ТІК. Друге антитіло може бути присутнім у супернатанті гібридоми. Як контроль, іммобілізований ТІ інкубується в розчині, що містить перше мічене антитіло, але не друге немічене антитіло. Після інкубування при умовах, що дають можливість для зв'язування першого антитіла з ТІК, надлишок незв'язаного антитіла видаляють, і вимірюють кількість мітки, зв'язану з іммобілізованим ТІК. Якщо кількість мітки, асоційованої з іммобілізованим ТІК, істотно зменшується в досліджуваному зразку порівняно з контрольним зразком, це показує, що друге антитіло конкурує з першим антитілом за зв'язування з ТІК. Дивися Нагіож апа І апе (1988) Апііродіє5: А І арогаюгу Мапиаї! сп.14 (Со!їй
Зргіпд Нарог І арогайїогу, Соїа 5ргіпд Наїбог, МУ). бо 2. Аналізи активності
В одному з аспектів, пропонуються аналізи для ідентифікації антитіл анти-ТїЖК, що мають біологічну активність. Біологічна активність може включати, наприклад, перенесення сполуки, асоційованої/кон'югованої з антитілом, через ВВВ у головний мозок і/або СМ5. Також пропонуються антитіла, що мають таку біологічну активність іп мімо і/або іп міго.
У визначених варіантах здійснення, антитіло за даним винаходом досліджується на таку біологічну активність.
О. Імунокон'югати
Даний винахід також пропонує імунокон'югати, що містять антитіло анти-ТїК за даним документом, кон'юговане з одним або декількома цитотоксичними агентами, такими як хіміотерапевтичні агенти або лікарські засоби, агенти для інгібування росту, токсини (наприклад, білкові токсини, ферментативно активні токсини бактеріального, грибкового, рослинного або тваринного походження або їхні фрагменти) або радісактивні ізотопи.
В одному з варіантів здійснення, антитіло анти-ТїЕ за даним документом зв'язано з лікарським засобом проти неврологічного розладу, хіміотерапевтичним агентом і/або агентом для одержання зображень для більш ефективного перенесення лікарського засобу, хіміотерапевтичного агента і/або радіофармацевтичного засобу через ВВВ.
Ковалентне кон'югування може бути або прямим, або через лінкер. У визначених варіантах здійснення, пряме кон'югування здійснюється за допомогою конструювання білка злиття (тобто за допомогою генетичного злиття двох генів, що кодують антитіло анти-ТІК, і, наприклад, лікарський засіб проти неврологічного розладу, і експресування їх у вигляді одного білка). У визначених варіантах здійснення, пряме кон'югування здійснюється за допомогою утворення ковалентного зв'язку між реакційноздатною групою на одній із двох частин антитіла анти-тТІК і відповідною групою або акцептором, наприклад, на неврологічному лікарському засобі. У визначених варіантах здійснення, пряме кон'югування здійснюється за допомогою модифікування (тобто генетичного модифікування) однієї з двох молекул, що повинні кон'югуватися, для включення реакційноздатної групи (як необмежувальні приклади, сульфгідрильної групи або карбоксильної групи), що утворює ковалентне приєднання до іншої молекули, що повинна кон'югуватися, при відповідних умовах. Як один із необмежувальних прикладів, молекула (наприклад, амінокислота) з бажаною реакційноздатною групою
Зо (наприклад, цистетновим залишком) може вводитися в антитіло анти-ТїК, і утворюється дисульфідний зв'язок, наприклад, з неврологічним лікарським засобом. Способи ковалентного кон'югування нуклеїнових кислот з білками також відомі в даній галузі (тобто фотозв'язування, дивися, наприклад, 2аїзеріп еї а. Ки55. Спет. Кем. 74:77-95 (2005)).
Нековалентне кон'юЮюгування може являти собою будь-які засоби нековалентного приєднання, включаючи гідрофобні зв'язки, іонні зв'язки, електростатичні взаємодії тощо, як можна легко зрозуміти фахівцю в даній галузі.
Кон'югування також може здійснюватися з використанням різноманітних лінкерів.
Наприклад, антитіло анти-ТЇЖК і неврологічний лікарський засіб можуть кон'югуватися з використанням різних біфункціональних білкових зв'язувальних агентів, таких як М- сукцинімідил-3-(2-піридилдитіо)пропіонат (5РОР), сукцинімідил-4-(М- малеїмідометил)циклогексан-1-карбоксилат (5МСС), імінотіолан (ІТ), біфункціональні похідні складних імідоефірів (таких як диметиладипімідат НС), активні складні ефіри (такі як дисукцинімідилсуберат), альдегіди (такі як глютаральдегід), біс-азидо сполуки (такі як біс(п- азидобензоїл)гександіамін), біс-діазонієві похідні (такі як біс-(п-діазонійбензоїл)етилендіамін), діззоціанати (такі як толуол 2,6-діїзоціанат) і біс-активні сполуки фтору (такі як 1,5-дифтор-2,4- динітробензол). Наприклад, рициновий імунотоксин може бути приготовлений, як описано в
Мена ей а., Зсієпсе 238:1098 (1987). Мічена вуглецем-14 1-ізотіоціанатобензил-3- метилдіетилентриамінпентаоцтова кислота (МХ-ОТРА) являє собою ілюстративний хелатуючий агент для кон'югування радіоактивного нуклеотиду з антитілом. Дивися М/094/11026. Пептидні лінкери, що складаються з однієї-двадцяти амінокислот, з'єднаних пептидними зв'язками, також можуть використовуватися. У визначених таких варіантах здійснення, амінокислоти вибираються з двадцяти амінокислот, що зустрічаються в природі. У визначених інших таких варіантах здійснення, одна або кілька амінокислот вибираються з гліцину, аланіну, проліну, аспарагіну, глютаміну і лізину. Лінкер може являти собою "відщеплюваний лінкер", що полегшує вивільнення неврологічного лікарського засобу при доставці в головний мозок. Можна використовувати, наприклад, кислотно-лабільний лінкер, пептидаза-чутливий лінкер, фотолабільний лінкер, диметиловий лінкер або дисульфід-вмісний лінкер (Спагі еї аіЇ., Сапсег
Вез. 52:127-131 (1992); патент США Мо 5208020).
Даний винахід у явному вигляді розглядає, але не обмежуючись цим, кон'югати, отримані за 60 допомогою крос-лінкерних реагентів, включаючи, але не обмежуючись цим, ВМР5, ЕМС5,
СМВ5, НВУБ5, І 0-5МСС, МВ5, МРВН, 5ВАР, ІА, ЗІАВ, ЗМСОС, ЗМРВ, ЗМРН, сульфо-ЕМО5, сульфо-СМВ5, сульфо-КМИ5, сульфо-МВ5, сульфо-5ІАВ, сульфо-ЗМОС і сульфо-5МРВ, і
ЗМЗВ (сукцинімідил-(4-вінілсульфон)бензоат), що є комерційно доступними (наприклад, від
Рієгсе Віотесппоіоду, Іпс., ВоскКіога, ІГ., 0.5. А).
В одному з варіантів здійснення, імунокон'югат являє собою кон'югат антитіло-лікарський засіб (АОС), у якому антитіло кон'югується з одним або декількома лікарськими засобами, включаючи але не обмежуючись цим, майтансиноїд (дивися патенти США МоМо 5208020, 5416064 і Європейський патент ЕР 0425235 ВІ); ауристатин, такий як залишки ОЕ ії ОЄГ лікарського засобу монометилауристатину (ММАЕ і ММАБРЕ) (дивися патенти США МоМо 5635483 і 5780588, і 7498298); доластатин; каліхіміцин або його похідне (дивися патенти США МоМо 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 і 5877296; Ніптап еї аї.,
Сапсег Рез. 53:3336-3342 (1993); і І оде еї аЇ., Сапсег Ке5. 58:2925-2928 (1998)); антрациклін, такий як дауноміцин або доксорубіцин (дивися Кгаїх еї аі!., Сиггепі Мед. Спет. 13:477-523 (2006);
Уейтеу еї а!., Віоогдапіс 5 Мед. Спет. І ейЦег5 16:358-362 (2006); Тогдом еї аї., Віосопі. Спет. 16:717-721 (2005); Мааду єї аї., Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 97:829-834 (2000); ВбБиромснік еї аї.,
Віоогуд. 5 Мед. Спет. І енег5 12:1529-1532 (2002); Кіпа еї аї., 9). Мед. Спет. 45:4336-4343 (2002); і патент США Мо 6630579); метотрексат; віндезин; таксан, такий як доцетаксель, паклітаксель, ларотаксель, тезетаксель і ортатаксель; трихотхецин і СС1065.
В іншому варіанті здійснення, імунокон'югат містить антитіло, як описано в даному документі, кон'юговане з ферментативно активним токсином або його фрагментом, включаючи але не обмежуючись цим, ланцюг А дифтерії, активні фрагменти токсину дифтерії, що не зв'язуються, ланцюг А екзотоксину (з Рхейдотопах аегидіпоза), ланцюг А рицину, ланцюг А абрину, ланцюг А модецину, альфа-сарцин, білки АїІецшпез Тогайїї, білки діантини, білки Рпуїїаса атегісапа (РАРІ, РАРІЇ ї РАР-5), інгібітор тотогаїса спагапійа, курцин, кротин, інгібітор зараопагіа опйісіпаїї5, гелонін, мітогелін, рестриктоцин, феноміцин, еноміцин і трикотецени.
В іншому варіанті здійснення, імунокон'югат містить антитіло, як описано в даному документі, кон'юговане з радіоактивним атомом з утворенням радіоактивного кон'югата.
Доступні різноманітні радіоактивні ізотопи для одержання радіоактивних кон'югатів. Приклади включають А", 1191, 25, Мо Де!86, Де"88, пт!» Віг12, рзг2, рр": | радіоактивні ізотопи и. Коли для детектування використовують радіоактивний кон'югат, він може містити радіоактивний атом для сцинтиграфічних досліджень, наприклад, їс99т або 123, або спінову мітку для одержання зображень за допомогою ядерного магнітного резонансу (ЯМР) (також відомого як магнітна резонансна томографія, МК), таку, знову ж, як йод-123, йод-131, індій-111, фтор-19, вуглець-13, азот-15, кисень-17, гадоліній, марганець або залізо.
Е. Способи і композиції діагностики і детектування
У визначених варіантах здійснення, будь-яке з антитіл анти-ТІК, запропонованих у даному документі, є корисними для детектування присутності ТК у біологічному зразку. Термін "детектування", як використовується в даному документі, охоплює кількісне або якісне детектування. У визначених варіантах здійснення, біологічний зразок містить клітину або тканину, наприклад, кров (наприклад, незрілі еритроцити), С5Е і тканину, що містить ВВВ.
В одному з варіантів здійснення, пропонується антитіло анти-ТЯК для використання в способі діагностики або детектування. В іншому аспекті, пропонується спосіб детектування присутності ТІК у біологічному зразку. У визначених варіантах здійснення, спосіб включає вступ у контакт біологічного зразка з антитілом анти-ТІК, як описано в даному документі, при умовах, що дають можливість для зв'язування антитіла анти-ТТК з ТІК і для детектування того, чи утвориться комплекс між антитілом анти-ТІК і ТТ. Такий спосіб може являти собою спосіб іп міго або іп мімо. В одному з варіантів здійснення, антитіло анти-ТЯЖК використовується для вибору суб'єктів, придатних для терапії за допомогою антитіла анти-ТІЕ, наприклад, коли ТІВ являє собою біомаркер для вибору пацієнтів.
Ілюстративні розлади, що можуть діагностуватися з використанням антитіла за даним винаходом, включають розлади за участю незрілих еритроцитів, завдяки тому факту, що ТІК експресується в ретикулоцитах і з цієї причини є детектованим за допомогою будь-яких антитіл за даним винаходом. Такі розлади включають анемію й інші розлади, що виникають через знижені рівні ретикулоцитів, або уроджену поліцитемію або справжню неопластичну поліцитемію, де підвищені кількості еритроцитів через гіперпроліферацію, наприклад, ретикулоцитів, дає в результаті загущення крові і супутні фізіологічні симптоми.
У визначених варіантах здійснення пропонуються мічені антитіла анти-ТІК. Мітки включають, але не обмежуючись цим, мітки або залишки, що детектуються безпосередньо (наприклад, флуоресцентні, хромофорні, електронно-оплотні, хемілюмінесцентні і радіоактивні 60 мітки), а також, такі залишки, як ферменти або ліганди, що детектуються опосередковано, 5О0 наприклад, за допомогою ферментативної реакції або молекулярної взаємодії. Ілюстративні мітки включають, але не обмежуючись цим, радіоіїзотопи З2Р, 140, 125І, ЗН і 1911, флюорофори, такі як хелати рідкоземельних металів або флуоресцеїн і їхні похідні, родамін і його похідні, данзил, умбеліферон, люциферази, наприклад, люциферазу світлячків і бактеріальну люциферазу (патент США Мо 4737456), люциферин, 2,3-дигідрофталазиндіони, пероксидазу хрону (НАР), лужну фосфатазу, В-галактозидазу, глюкоамілазу, лізозим, сахаридоксидази, наприклад, глюкозаоксидазу, галактозаоксидазу і глюкоза-6-фосфатдегідрогеназу, гетероциклічні оксидази, такі як уриказа і ксантиноксидаза, зв'язані з ферментом, що використовує перекис водню для окислювання попередника барвника, такого як НЕР, лактопероксидазу або мікропероксидазу, біотин/авідин, спінові мітки, бактеріофагові мітки, стабільні вільні радикали тощо.
В одному з варіантів здійснення, у інтактного антитіла відсутня ефекторна функція. В іншому варіанті здійснення, інтактне антитіло має знижену ефекторну функцію. В іншому варіанті здійснення, інтактне антитіло одержують за допомогою генної інженерії, щоб воно мало знижену ефекторну функцію. В одному з аспектів, антитіло являє собою Рар. В іншому аспекті, антитіло має одну або декілька Ес-мутацій, що зменшують або усувають ефекторну функцію. В іншому аспекті, антитіло має модифіковане глікозилування, наприклад, завдяки продукуванню антитіла в системі, у якій відсутні нормальні ферменти глікозилування людини. В іншому аспекті, основний ланцюг Ід модифікується до ланцюга, що природним способом має знижену ефекторну функцію або взагалі її не має.
Доступні різноманітні методики для визначення зв'язування антитіла з ТІК. Один з таких аналізів являє собою імуносорбентний аналіз за допомогою зв'язаного ферменту (ЕГІ5А) для підтвердження здатності до зв'язування з ТїЖК людини (і з антигеном головного мозку).
Відповідно до цього аналізу, планшети, покриті антигеном (наприклад, рекомбінантним ТІК), інкубуються разом зі зразком, що містить антитіло анти-ТК, і визначається зв'язування антитіла з антигеном, що становить інтерес.
Аналізи для оцінки споживання антитіла, що системно вводиться, і іншої біологічної активності антитіла можуть здійснюватися, як описано в прикладах або як відомо для антитіла анти-антиген СМ5, що становить інтерес.
В одному з аспектів, пропонуються аналізи для ідентифікації антитіл анти-ТІК, кон'югованих
Зо (або ковалентно, або нековалентно) з антитілами анти-ВАСЕ1, що мають біологічну активність.
Біологічна активність може включати, наприклад, інгібування активності аспартилпротеази
ВАСЕТ1. Також пропонуються антитіла, що мають таку ж біологічну активність іп мімо і/або іп міго, наприклад, як оцінюється за допомогою гомогенного флуоресцентного аналізу НТКЕ з розрізненням за часом або мікрогідродинамічного капілярного електрофоретичного аналізу (МСЕ) з використанням синтетичних пептидів як субстрата або іп мімо у лініях клітин, що експресують субстрати ВАСЕТ, такі як АРР.
Е. Фармацевтичні препарати
Фармацевтичні препарати для анти-ТЖ, як описано в даному документі, готують за допомогою змішування такого антитіла, що має бажаний ступінь чистоти, з одним або декількома необов'язковими фармацевтично прийнятними носіями, наповнювачами або стабілізаторами (Кетіпдіоп'є Рпаптасеціїса! Зсіепсе5 161п еайіоп, О5ої, А. Ей. (1980)), у формі ліофілізованих препаратів або водних розчинів. Фармацевтично прийнятні носії, наповнювачі або стабілізатори є, як правило, нетоксичними для реципієнтів при використовуваних дозуваннях і концентраціях і включають, але не обмежуючись цим: буфери, такі як фосфатний, цитратний і інші органічні кислоти; антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту і метіонін; консерванти (такі як октадецилдиметилбензиламонійхлорид; гексаметонійхлорид; бензалконійхлорид, бензетонійхлорид; фенол, бутиловий або бензиловий спирт; алкілпарабени, такі як метил- або пропілпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3- пентанол і м-крезол); низькомолекулярні (менше приблизно ніж 10 залишків) поліпептиди; білки, такі як сироватковий альбумін, желатин або імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, глютамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; моносахариди, дисахариди й інші вуглеводи, включаючи глюкозу, манозу або декстрини; хелатуючі агенти, такі як ЕОТА; цукри, такі як сахароза, манітол, трегалоза або сорбітол; протиїони, що формують солі, такі як натрій; комплекси металів (наприклад, комплекси 2п-білок) або неіїонні поверхнево-активні речовини, такі як поліетиленгліколь (РЕС). Ілюстративні фармацевтично прийнятні носії за даним документом додатково включають агенти для диспергування лікарських засобів у кишечнику, такі як розчинні нейтрально-активні глікопротеїни гіалуронідази (5НАБЕСР), наприклад, розчинні глікопротеїни гіалуронідази людини РН-20, такі як ГгНиИРН2гО (НУ ЕМЕХФ), Вахіег Іпіегпайіопаї, Іпс.). Визначені ілюстративні бо 5НАЗЕОРз: і їхні способи використання, включаючи гНиРН2О, описані в публікаціях патентів
США Мо 2005/0260186 і 2006/0104968. В одному з аспектів, ЗНАБЕОР поєднується з однією або декількома додатковими глікозаміногліканазами, такими як хондроїтинази.
Ілюстративні ліофілізовані препарати антитіла описані в патенті США Мо 6267958. Водні препарати антитіла включають ті, які описані в патенті США Мо 6171586 і в МО 2006/044908, останні препарати включають гістидин-ацетатний буфер.
Препарат за даним документом може також містити кілька активних інгредієнтів, як необхідно для конкретного показання, що лікується, переважно, інгредієнтів (із комплементарними активностями, що не впливають негативно один на одного. Наприклад, було б бажаним запропонувати один або кілька активних інгредієнтів для лікування невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, розладу очного захворювання, епілептичного розладу, лізосомної хвороби нагромадження, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, розладу поведінки або запалення СМ5. Такі ілюстративні лікарські препарати обговорюються в даному документі нижче. Такі активні інгредієнти присутні відповідним чином у сполученні, у кількостях, що є ефективними для передбачуваної мети.
Активні інгредієнти можуть бути захоплені в приготовлені мікрокапсули, наприклад, за допомогою методик коацервації, або за допомогою полімеризації на границі розділу, наприклад, мікрокапсул з гідроксиметилцелюлози або желатину і полі(метилметакрилатних) мікрокапсул, відповідно, у колоїдних системах доставки лікарських засобів (наприклад, у ліпосомах, альбумінових мікросферах, мікроемульсіях, наночастинках і нанокапсулах) або в макроемульсіях. Такі методики описані, наприклад, у Кетіпдіоп'є Рпаптасешціса! 5сіеєпсез 161йп еайіоп, О50ї, А. Ей. (1980). Один або кілька активних інгредієнтів можуть інкапсулюватися в ліпосомах, що з'єднані антитілами анти-ТІК, описаними в даному документі (дивися, наприклад, публікацію заявки на патент США Мо 20020025313).
Можуть бути приготовлені препарати із затримкою вивільнення. Відповідні приклади препаратів із затримкою вивільнення включають напівпроникні матриці з твердих гідрофобних полімерів, що містять антитіло; ці матриці мають форму формованих виробів, наприклад плівок або мікрокапсул. Необмежувальні приклади матриць із затримкою вивільнення включають складні поліефіри, гідрогелі (наприклад, полі(2-гідроксіетил-метакрилат) або полі(вініловий спирт)), поліактиди (патент США Мо 3773919), співполімери І -глютамінової кислоти і у етил-ї - глютамату, недеградований етиленвінілацетат, деградовані співполімери молочна кислота - гліколева кислота, такі як ГШРКОМ ОЕРОТ"М (мікросфери для ін'єкцій, що складаються із співполімеру молочна кислота - гліколева кислота і леупроліду ацетату) і полі-О-(-)-3- гідроксимасляної кислоти.
Препарати, що повинні використовуватися для введення іп мімо, як правило, є стерильними.
Стерильність може бути легко отримана, наприклад, за допомогою фільтрування через мембрани для стерильного фільтрування. б. Терапевтичні способи і композиції
Будь-яке з антитіл анти-ТІК, запропонованих у даному документі, можна використовувати в терапевтичних способах. В одному з аспектів пропонується антитіло анти-ТІ" для застосування як лікарського препарату. Наприклад, даний винахід пропонує спосіб перенесення терапевтичної сполуки через гематоенцефалічний бар'єр зі зменшенням або усуненням впливу на популяції еритроцитів, що включає експонування антитіла анти-ТїК, зв'язаного з терапевтичною сполукою (наприклад, мультиспецифічного антитіла, що зв'язується як з ТІК, так і з антигеном головного мозку), для ВВВ таким чином, що антитіло переносить терапевтичну сполуку, зв'язану з ним, через ВВВ. В іншому прикладі, даний винахід пропонує спосіб перенесення лікарського засобу проти неврологічного розладу через гематоенцефалічний бар'єр, що включає експонування антитіла анти-ТїЖ за даним винаходом, зв'язаного з лікарським засобом проти розладу головного мозку (наприклад, мультиспецифічного антитіла, що зв'язується як з ТІК, так і з антигеном головного мозку), для ВВВ таким чином, що антитіло переносить лікарський засіб проти неврологічного розладу, зв'язаний з ним, через ВВВ зі зменшенням або усуненням впливу на популяції еритроцитів. В одному з варіантів здійснення,
ВВВ є в ссавця (наприклад, людини), наприклад, такого, який має неврологічний розлад, включаючи, без обмеження: хворобу Альцгеймера (АБ), інсульт, деменцію, м'язову дистрофію (МО), множинний склероз (М5), бічний аміотрофічний склероз (АГ 5), кістозний фіброз, синдром
Ейнджелмена, синдром Лідла, хворобу Паркінсона, хворобу Піка, хворобу Педжета, рак, травматичне ушкодження головного мозку тощо.
В одному з варіантів здійснення, неврологічний розлад вибирається з: невропатичного розладу, амілоїдозу, раку (наприклад, включаючи рак СМ5 або рак головного мозку), очного захворювання або розладу, вірусної або мікробної інфекції, запалення (наприклад, СМ5 або 60 головного мозку), ішемії, нейродегенеративного захворювання, епілепсії, розладу поведінки,
лізосомної хвороби нагромадження тощо. Антитіла за даним винаходом є особливо корисними для лікування таких неврологічних розладів завдяки їх здатності переносити один або кілька асоційованих активних інгредієнтів/зв'язаних терапевтичних сполук через ВВВ і в СМ5/головний мозок, де такі розлади знаходять їх молекулярну, клітинну або вірусну/мікробну основу.
Невропатичні розлади являють собою захворювання або порушення нервової системи, що відрізняються невідповідною або неконтрольованою передачею нервових сигналів або її відсутністю, і включають, але не обмежуючись цим, хронічний біль (включаючи ноцицептивний біль), біль, який викликається ушкодженням тканин організму, включаючи біль, пов'язаний з раком, невропатичний біль (біль, який викликається порушеннями в нервах, спинному мозку або в головному мозку) і психогенний біль (повністю або здебільшого пов'язаний з психологічним розладом), цефалгію, мігрень, невропатію і симптоми і синдроми, що часто супроводжують невропатичні розлади, такі як запаморочення або нудота.
Для невропатичного розладу може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що являє собою анальгетик, включаючи, але не обмежуючись цим, наркотичний/опіоїдний анальгетик (тобто морфін, фентаніл, гідрокодон, меперидин, метадон, оксиморфон, пентазоцин, пропоксифен, трамадол, кодеїн і оксикодон), нестероїдний протизапальний лікарський засіб (МЗАЇІЮ) (тобто ібупрофен, напроксен, диклофенак, дифлунізал, етодолак, фенопрофен, флурбіпрофен, індометацин, кеторолак, мефенамову кислоту, мелоксикам, набуметон, оксапрозин, піроксикам, суліндак і толметин), кортикостероїд (тобто кортизон, преднізон, преднізолон, дексаметазон, метилпреднізолон і триамцинолон), агент проти мігрені (тобто суматриптин, алмотриптам, фроватриптам, суматриптам, ризатриптам, елетриптам, золмітриптам, дигідроерготамін, елетриптам і ерготамін), ацетамінофен, саліцилат (тобто аспірин, холін саліцилат, магній саліцилат, дифлунізал і салсалат), анти-конвульсант (тобто карбамазепін, клоназепам, габапентин, ламотригін, прегабалін, тіагабін і топірамат), болезаспокійливі засоби (тобто ізофлуран, трихлоретилен, галотан, севофлуран, бензокаїн, хлорпрокаїн, кокаїн, циклометикаїн, диметокаїн, пропоксикаїн, прокаїн, новокаїн, пропаракаїн, тетракаїн, артикаїн, бупівакаїн, картикаїн, цинхокаїн, етидокаїн, левобупівакаїн, лідокаїн, мепівакаїн, піперокаїн, прилокаїн, ропівакаїн, тримекаїн, сакситоксин і тетродотоксин) і інгібітор сох-2 (тобто целококсиб, рофекоксиб і валдекоксиб). Для невропатичного розладу із
Зо запамороченнями може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що являє собою агент проти запаморочення, включаючи, але не обмежуючись цим, меклізин, дифенгідрамін, прометазин і діазепам. Для невропатичного розладу з нудотою може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що являє собою агент проти нудоти, включаючи, але не обмежуючись цим, прометазин, хлорпромазин, прохлорпемазин, триметобензамід (|і метоклопрамід.
Амілоїдози являють собою групу захворювань і розладів, пов'язаних із позаклітинними білковими відкладеннями в СМ5, включаючи, але не обмежуючись цим, вторинний амілоїдоз, віковий амілоїдоз, хворобу Альцгеймера (АБ), помірні когнітивні порушення (МС), деменцію з тільцями Леві, синдром Дауна, спадковий крововилив у мозок з амілоїдозом (Голландського типу); Гуамський комплекс хвороба Паркінсона - деменція, церебральну амілоїдну ангіопатію, хворобу Хантинітона, прогресуючий супрануклеарний параліч, множинний склероз; хворобу
Крейтцфельда-Якоба, хворобу Паркінсона, трансмісивну губчату енцефалопатію, деменцію, пов'язану з ВІЛ, аміотропний латеральний склероз (АЇ 5), міозит із включеними тільцями (ІВМ) і очні захворювання, пов'язані з відкладеннями бета-амілоїдів (тобто дистрофію жовтої плями, пов'язану з друзами невропатію зорового нерва і катаракту).
Проти амілоїдозу може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що включає, але не обмежуючись цим, антитіло або іншу молекулу, що зв'язується (включаючи, але не обмежуючись цим, малу молекулу, пептид, аптамер або інший білковий зв'язувальний агент), яка специфічно зв'язується з мішенню, вибраною з: бета секретази, тау, презеніліну, білка- попередника амілоїду або його частин, пептиду бета амілоїду або їх олігомерів або фібрил, рецептора загибелі 6 (Об), рецептора кінцевих продуктів посиленого глікозилування (КАСЕ), паркіну і хантингтину; інгібітор холінестерази (тобто галантамін, донепезил, ривастигмін і такрин); антагоніст рецептора ММОА (тобто мемантин), деплетор моноаміну (тобто тетрабеназин); ерголоїд мезилат; антихолінергічний антипаркінсонічний агент (тобто проклідин, дифенгідрамін, тригексилфенідил, бензтропін, біпериден і тригексилфенідил); дофамінергічний антипаркінсонічний агент (тобто ентакапон, селегілін, праміпексол, бромкриптин, ротиготин, селегілін, ропінірорл, расагілін, апоморфін, карбідопа, леводопа, перголід, толкапон і амантадин); тетрабеназин; протизапальний лікарський засіб (включаючи, але не обмежуючись цим, нестероїдний протизапальний лікарський засіб (тобто індометацин і інші сполуки, бо перераховані вище); гормон (тобто естроген, прогестерон і леупролід); вітамін (тобто фолат і нікотинамід); димеболін; гомотаурин (тобто З-амінопропансульфонову кислоту; З АРБ); модулятор активності рецепторів серотоніну (тобто ксаліпроден); інтерферон і глюкокортикоїд.
Ракові захворювання СМ5 відрізняються аберантною проліферацією однієї або декількох клітин СМ5 (тобто нервових клітин) і включають, але не обмежуючись цим, гліому, гліобластому мультиформ, менінгіому, астроцитому, невриному слухового нерва, хондрому, олігодендрогліому, медулобластому, гангліогліому, шваному, нейрофіброму, нейробластому і екстрадуральні, інтрамедулярні або інтрадуральні пухлини.
Проти раку може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що являє собою хіміотерапевтичний агент. Приклади хіміотерапевтичних агентів включають алкілуючі агенти, такі як тіотепа і циклофосфамід СУТОХАМФ; алкілсульфонати, такі як бусульфан, імпросульфан і піпосульфан; азиридини, такі як бензодопа, карбоквон, метуредопа й уредопа; етиленіміни і метиламеламіни, включаючи альтретамін, триетиленмеламін, триетиленфосфорамід, триетилентіофосфор-амід і триметилоломеламін; ацетогеніни (зокрема, булатацин і булатацинон); дельта-9-тетрагідроканабіол (дронабінол, МАКІМОЇІФ); бета- лапахон; лапахол; колхіцини; бетулінову кислоту; камптотецин (включаючи синтетичний аналог топотекан (НУСАМТІМФ), СРТ-11 (іринотекан, САМРТОЗА Ф)), ацетилкамптотецин, скополектин і 9У-амінокамптотецин); бріостатин; калістатин; СС-1065 (включаючи його синтетичні аналоги адозелезин, карзелезин і бізелезин); подофілотоксин; подофілінову кислоту; теніпозид; криптофіцини (зокрема, криптофіцин 1 і криптофіцин 8); доластатин; дуокарміцин (включаючи синтетичні аналоги, КМУУ-2189 і СВ1-ТМІ1); елеутеробін; панкратистатин; саркодиктиїн; спонгістатин; азотні гірчиці, такі як хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамід, естрамустин, іфосфамід, мехлоретам, мехлоретам оксид гідрохлорид, мелфалан, новембіхін, фенестерин, преднімустин, трофосфамід, урацилову гірчицю; нітрозосечовини, такі як кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, німустин і ранімнустин; антибіотики, такі як енедіїнові антибіотики (наприклад, каліхіміцин, зокрема, каліхіміцин гамматї| і каліхіміцин омега! (дивися, наприклад, Адпем/, Спет Іпії. Ед. Епаі!., 33:183-186 (1994)); динеміцин, включаючи динеміцин А; еспераміцин; а також неокарциностатиновий хромофор і споріднені хромопротеїнові енединові антибіотичні хромофори), аклациномізини, актиноміцин, аутраміцин, азасерин, блеоміцини, сактиноміцин, карабіцин, карміноміцин, карзинофілін, хромоміцини, дактиноміцин, даунорубіцин, деторубіцин, б-діазо-5-оксо-і-норлейцин, доксорубіцин АОКІАМУСІМФ (включаючи морфоліно-доксорубіцин, ціаноморфоліно-доксорубіцин, 2-піроліно-доксорубіцин і діоксидоксорубіцин), епірубіцин, езорубіцин, ідарубіцин, марцеломіцин, мітоміцини, такі як мітоміцин С, мікофенолова кислота, ногаламіцин, олівоміцини, пепломіцин, потфіроміцин, пуроміцин, хеламіцин, родорубіцин, стрептонігрин, стрептозоцин, туберцидин, убенімекс, зиностатин, зорубіцин; анти-метаболіти, такі як метотрексат і 5-фторурацил (5-ЕУ); аналоги фолієвої кислоти, такі як деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуринові аналоги, такі як флударабін, б-меркатопурин, триаміприн, тіогуанін; піримідинові аналоги, такі як анцитабін, азацитидин, б-азауридин, кармофур, цитарабін, дидеоксіуридин, доксифлуридин, еноцитабін, фіоксуридин; андрогени, такі як калустерон, дромостанолон пропіонат, епітіостанол, мепітіостан, тестолактон; агенти проти пухлини надниркових залоз, такі як аміно, мітотан, трилостан; поповнювач фолієвої кислоти, такий як фролінова кислота; ацеглатон; альдофосфамід глікозид; амінолевулінову кислоту; енілурацил; амсакрин; бестрабуцил; бісантрен; едатраксат; дефофамін; демеколцин; діазихінон; елфорнітин; еліптиній ацетат; епотилон; етоглюцид; галій нітрат; гідроксисечовину; лентинан; лонідаїнін; майтансиноїди, такі як майтансин і ансамітоцини; мітогуазон; мітоксантрон; мопіданмол; нітраерин; пентостатин; фенамет; пірарубіцин; лосоксантрон; 2-етилгідразид; прокарбазин; полісахаридний комплекс
РЗКФ (ОН Маїшга! Ргодисієх, Еидепе, ОН); разоксан; ризоксин; сизофіран; спірогерманій; тенуазонову кислоту; триазихон; 2,2,2"-трихлортриєтиламін; трихотецени (зокрема, токсин Т-2, веракурин А, роридин А і ангуїдин); уретан; віндезин (ЕЇОІБЗІМЕФ, РІ ОЕ5ІМФ); дакарбазин; маномустин; мітобронітол; мітолактол; піпоброман; гацитозин; арабінозид ("Ага-С"); тіотепа; таксоїди, наприклад, паклітаксель ТАХОГФ (ВгібіоІ-Муєг5 Бацірб Опсоіоду, Ргіпсейп, М..),
АВАВАХАМЕ"М, що не містить кремофору, отриманий за допомогою генної інженерії препарат паклітакселю в наночастинках альбуміну (Атегісап Ріагтасеціїса! Рагіпег5, Зспаштбего, ПШіпоїв) і доксетаксель ТАХОТЕКЕФ (КПпопе-Рошепс Когег, Апіопу, Егапсе); хлоранбуцил; генцитабін (СЕМ2АКФ)); 6-тіогуанін; меркатопурин; метотрексат; аналоги платини, такі як цисплатин і карбоплатин; вінбластин (МЕ! ВАМФ); платину; етопозид (МР-16); іфосфамід; мітоксантрон; вінкристин (ОМСОМІМФ)); оксаліплатин; лейкововін; вінорельбін (МАМЕЇ ВІМЕФ); новатрон; едатрексат; дауноміцин; аміноптерин; ібандронат; інгібітор топоїзомерази КЕБ5 2000; дифторметилорнітин (ОМЕО); ретиноїди, такі як ретиноєва кислота; капецитабін (ХЕ ОБАФ); бо фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-яких із зазначених вище сполук; а також сполучення двох або більше із зазначених вище сполук, такі як СНОР, скорочене найменування препарату для сполученої терапії з циклофосфаміду, доксорубіцину, вінкристину і преднізолону, і РОЇ РОХ, скорочене найменування для режиму лікування за допомогою оксаліплатину (ЕГОХАТЕ ТМ), об'єднаного з 5-Ри і лейкововіном.
У це визначення також включаються хіміотерапевтичні агенти, що являють собою антигормональні агенти, що діють для регулювання, зменшення, блокування або інгібування впливу гормонів, що можуть сприяти росту раку і часто мають форму системного або призначеного для лікування організму в цілому препарату. Вони самі можуть являти собою гормони. Приклади включають анти-естрогени і селективні модулятори рецепторів естрогенів (ЗЕКМ), включаючи, наприклад, тамоксифен (включаючи тамоксифен МОЇ МАОЕХФ), ралоксифен ЕМІ5ТАФ, дролоксифен, 4-гідрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, І М117018, опаристон і тореміфен ЕАКЕЗТОМЄ); анти-прогестерони; даун-регулятори рецепторів естрогенів (ЕКО); агенти, що функціонують для пригнічення або вимикання яєчників, наприклад, агоністи гормону, що вивільняє леутинізуючий гормон (НЕКН), такі як леупролід ацетат ГОРКОМО і
ЕПІСАКОФ, гозерелін ацетат, бусерелін ацетат і триптерелін; інші анти-андрогени, такі як флутамід, нілутамід і бікалутамід; і інгібітори ароматази, що інгібують фермент ароматазу, що регулює продукування естрогенів у надниркових залозах, такі, наприклад, як 4(5)-імідазоли, аміноглютетимід, мегестрол ацетат МЕСАБЕФ, екземестан АКОМАБІМФ, оптптезапіеє, фадрозол, ворозол КІМІЗОКФ),, летрозол РЕЕМАКАФ і анастрозол АКІМІОЕХФ). На додаток до цього, таке визначення хіміотерапевтичних агентів включає бісфосфонати, такі як клодронат (наприклад, ВОМЕРОБТФ або О5ТАСФ), етидронат БІОКОСАЇФ, МЕ-58095, золедронову кислоту/золедронат 2ОМЕТАФ, алендронат ЕОБАМАХФО, памідронат АКЕОІАФ, тилудронат
ЗКЕПОФ або ризедронат АСТОМЕЇГ Ф; а також троксацитабін (аналог 1,3-діоксолан нуклеозиду цитозину); антисмислові олігонуклеотиди, зокрема, ті, які інгібують експресування генів у шляхах передачі сигналів, що беруть участь в аберантній проліферації клітин, такі, наприклад, як РКО-альфа, Каї, Н-Каз і рецептор епідермального фактора росту (ЕСЕ-К); вакцини, такі як вакцина ТНЕКАТОРЕФ, і вакцини для генної терапії, наприклад, вакцина АГ'ОМЕСТЕФ, вакцина ГЕОМЕСТІМЯЕ і вакцина МАХІЮФ); інгібітор топоїзомерази 1 (ШЕТОТЕСАМО; ттКН
АВАВЕІХФ»; лапатиніб дитозилат (подвійний низькомолекулярний інгібітор тирозинкінази ЕгоВ-
Зо 2 і ЕСЕК, також відомий як ЗМУ572016) і фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-яких із зазначених вище сполук.
Інша група сполук, що можуть бути вибрані як неврологічні лікарські засоби для лікування або запобігання раку, являють собою протиракові імуноглобуліни (включаючи, але не обмежуючись цим, транстузумаб, петузумаб, бевацизумаб, алемтуксумаб, цетуксимаб, гемтузумаб озогаміцин, ібритумомаб тіуксетан, панітумаб і ритуксимаб). У деяких випадках, антитіла в кон'югуванні з токсичною міткою або кон'югатом можна використовувати для націлювання і знищення бажаних клітин (тобто ракових клітин), включаючи, але не обмежуючись цим, тозитумомаб разом з радіоізотопною міткою "| або транстузумаб емтанзин.
Очні захворювання або розлади являють собою захворювання або розлади очей, що для цілей даного документа вважаються органами СМ5, відділеними за допомогою ВВВ. Очні захворювання або розлади включають, але не обмежуючись цим, розлади склери, рогівки, райдужної оболонки і війчастого тіла (тобто склерит, кератит, виразку рогівки, ерозію рогівки, сніжну сліпоту, опік очей, поверхневий точковий кератит Тайджесона, неоваскуляризацію рогівки, дистрофію Фукса, кератоконус, сухий кератокон'юнктивіт, запалення райдужної оболонки ока й увеїти), розлади кришталика (тобто катаракту), розлади судинної оболонки і сітківки ока (тобто відшарування сітківки, ретиношизис, гіпертонічну ретинопатію, діабетичну ретинопатію, ретинопатію, ретинопатію недоношених, вікову дистрофію жовтої плями, дистрофію жовтої плями (вологу або суху), епіретинальну мембрану, пігментну дистрофію сітківки і макулярний набряк), глаукому, плаваюче помутніння, розлади зорового нерва і зорових шляхів (тобто спадкову нейропатію зорового нерва Лебера і друзи диска зорового нерва), розлади очних м'язів/акомодації/рефракції бінокулярного руху (тобто косоокість, офтальмопарез, прогресуючу зовнішню офтальмоплегію, езотропію, екзотропію, далекозорість, короткозорість, астигматизм, анізометропію, старечу далекозорість і параліч очних м'язів), розлади зору і медичну сліпоту (тобто амбліопію, спадковий амвроз Левера, скотому, колірну сліпоту, повну колірну сліпоту, нікталопію, медичну сліпоту, річкову сліпоту і мікроофтальмію/колобому), червоне око, зіницю Аргіла Робертсона, кератомікоз, ксерофтальмію й анданіридію.
Проти очного захворювання або розладу може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що являє собою анти-ангіогенний офтальмологічний агент (тобто бевацизумаб, 60 ранібізумаб і пегаптаніб), офтальмологічний агент проти глаукоми (тобто карбахол, епінефрин,
демекарійбромід, апраклонідин, бримонідин, бринзоламід, левобунолол, тимолол, бетаксолол, дорзоламід, біматопрост, картеолол, метипранолол, дипівефрин, травопрост і латанопрост), інгібітор вугільної ангідрази (тобто метазоламід і ацетазоламід), офтальмологічний антигістаміний засіб (тобто нафазолін, фенілефрин і тетрагідрозолін), змащувальну речовину для очей, офтальмологічний стероїд (тобто фторметолон, преднізолон, лотепреднол, дексаметазон, дифлупреднат, римексолон, флуоцинолон, медризон і триамцинолон), офтальмологічний анестетик (тобто лідокаїн, пропаракаїн і тетракаїн), офтальмологічний протиінфекційний засіб (тобто левофлоксацин, гатифлоксацин, ципрофлоксацин, моксифлоксацин, хлорамфенікол, бацитрацин/поліміксин б, сульфацетамід, тобраміцин, азитроміцин, безифіоксацин, норфлоксацин, сульфізоксазол, гентаміцин, ідоксуридин, еритроміцин, натаміцин, граміцидин, неоміцин, офлоксацин, трифлуридин, ганцикловір, відарабін), офтальмологічний протизапальний агент (тобто нерафенак, кеторолак, флурбіпрофен, супрофен, циклоспорин, триамцинолон, диклофенак і бромфенак) і офтальмологічний антигістамінний засіб або деконгестант (тобто кетотифен, олопатадин, епінастин, нафазолін, кромолін, тетрагідрозолін, пеміроласт, бепостатин, нафазолін, фенілефрин, недокромил, лодоксамід, фенілефрин, емедастатин і азеластин).
Вірусні або мікробні інфекції СМ5 включають, але не обмежуючись цим, інфекції вірусів (тобто грипу, ВІЛ, вірусу поліомієліту, краснухи), бактерій (тобто Меїз5зепга 5р., Зігеріососсив 5р.,
Рзепдотопав 5р., Ргоїви5 5р., Б. соїї, 5. айгеи5, Рпештососсив в5р., Мепіпдососсив 5зр.,
Наеторпйиз 5р., ії Мусобасіегішт їшрегсціов5і5) і інших мікроорганізмів, таких як грибки (тобто дріжджі, Стгуріососси5 пеоїоптапв), паразитів (тобто охоріазта допаїї), або амеб, що приводять у результаті до патофізіології СМ5, включаючи, але не обмежуючись цим, менінгіт, енцефаліт, мієліт, васкуліт і абсцес, що можуть бути гострими або хронічними.
Проти вірусного або мікробного захворювання може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що включає, але не обмежуючись цим, противірусну сполуку (включаючи, але не обмежуючись цим, адамантановий противірусний лікарський засіб (тобто римантадин і амантадин), противірусний інтерферон (тобто пегінтерферон альфа-2Б), антагоніст рецептора хемокінів (тобто маравірок), інгібітор перенесення ланцюга інтегрази (тобто ральтегравір), інгібітор нейрамінідази (тобто озельтамівір і занамівір), ненуклеозидний інгібітор зворотної
Зо транскриптази (тобто ефавіренз, етравірин, делавірдин і невірапін), нуклеозидні інгібітори зворотної транскриптази (тенофовір, абакавір, ламівудин, зидовудин, ставудин, ентекавір, емтрицитабін, адефовір, зальцитабін, тельбівудин і диданозин), інгібітор протеази (тобто дарунавір, атазанавір, фосампренавір, типранавір, ритонавір, нельфмавір, ампренавір, індинавір і саквінавір), пуриновий нуклеозид (тобто валацикловір, фамцикловір, ацикловір, рибавірин, ганцикловір, вальганцикловір і цидофовір) і різноманітні противірусні лікарські засоби (тобто енфувіртид, фоскарнет, палівізумаб і фомівірсен)), антибіотик (включаючи, але не обмежуючись цим, амінопеніцилін (тобто амоксицилін, ампіцилін, оксацилін, нафцилін, клоксацилін, диклоксацилін, флукоксацилін, темоцилін, азлоцилін, карбеніцилін, тицарцилін, мезлоцилін, піперацилін і бакампіцилін), цефалоспорин (тобто цефазолін, цефалексин, цефалотин, цефамандол, цефтриаксон, цефотаксим, цефподоксим, цефтазидим, цефадроксил, цефрадин, лоракарбеф, цефотетан, цефуроксим, цефрозил, цефаклор і цефокситин), карбапенем/пенем (тобто іміпенем, меропенем, ертапенем, фаропенем і дорипенем), монобактам (тобто азтреонам, тигеноман, норкардицин А і табтоксинін-бета-лактам, інгібітор бета-лактамази (тобто клавуланову кислоту, тазобактам і сульбактам) у кон'югуванні з іншим бета-лактамовим антибіотиком, аміноглікозид (тобто амікацин, гентаміцин, канаміцин, неоміцин, нетилміцин, стрептоміцин, тобраміцин і паромоміцин), ансаміцин (тобто гелданаміцин і гербіміцин), карбацефем (тобто лоракабеф), глікопептиди (тобто тейкопланін і ванкоміцин), макролід (тобто азитроміцин, кларитроміцин, диритроміцин, еритроміцин, рокситроміцин, тролеандоміцин, телітроміцин і спектиноміцин), монобактам (тобто азтреонам), хінолон (тобто ципрофлоксацин, еноксацин, гатифлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин, моксифлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин, тровафлоксацин, грепафлоксацин, спарфлоксацин і темафлоксацин), сульфонамід (тобто мафенід, сульфонамідохризоїдин, сульфацетамід, сульфадіазин, сульфаметизол, сульфаніламід, сульфасалазин, сульфізоксазол, триметоприм, триметоприм і сульфаметоксазол), тетрациклін (тобто тетрациклін, демеклоциклін, доксициклін, міноциклін і окситетрациклін), протипухлинний або цитотоксичний антибіотик (тобто доксорубіцин, мітоксантрон, блеоміцин, даунорубіцин, дактиноміцин, епірубіцин, ідарубіцин, плікаміцин, мітоміцин, пентостатин і вальрубіцин) і різноманітні антибактеріальні сполуки (тобто бацитрацин, колістин і ополіміксин В)), протигрибкові засоби (тобто метронідазол, нітазоксанід, тинідазол, хлорохін, йодхінол і бо паромоміцин) і протипаразитарні засоби (включаючи, але не обмежуючись цим, хінін, хлорохін,
амодіахін, піриметамін, сульфадоксин, прогуаніл, мефлохін, атовахон, примахін, артемезинін, галофантрин, доксициклін, кліндаміцин, мебендазол, пірантел памоат, тіабендазол, діетилкарбамазин, івермектин, рифампін, амфотерицин В, мералсопрол, ефорнітин і альбендазол).
Запалення СМ5 включає, але не обмежуючись цим, запалення, що викликається ушкодженням СМ5, що може являти собою фізичне ушкодження (тобто через нещасний випадок, хірургічну операцію, травму головного мозку, ушкодження спинного мозку, струс головного мозку) і ушкодження, викликане одним або декількома іншими захворюваннями або розладами СМ5 (тобто абсцесом, раком, вірусною або мікробною інфекцією) або пов'язане з ним.
Проти запалення СМ5 може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що відповідає самому запаленню (тобто нестероїдний протизапальний агент, такий як ібупрофен або напроксен), або такий, який лікує причину запалення (тобто противірусний або протираковий агент).
Ішемія СМ5, як використовується в даному документі, стосується групи розладів, що стосуються аберантного кровотоку або судинної поведінки в головному мозку або викликаючих його, і включає, але не обмежуючись цим: місцеву ішемію головного мозку, загальну ішемію головного мозку, інсульт (тобто субарахноїдальний крововилив і внутрішньомозковий крововилив) і аневризму.
Проти ішемії може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що включає, але не обмежуючись цим, тромболітичний лікарський засіб (тобто урокіназу, альтеплазу, ретеплазу і тенеклеплазу), інгібітор агрегації тромбоцитів (тобто аспірин, цилостазол, клопідогрель, прасугрель і дипіридамол), статин (тобто ловастатин, правастатин, флувастатин, розувастатин, аторвастатин, симвастатин, церивастатин і пітавастатин) і сполука для поліпшення кровотоку або гнучкості судин, включаючи, наприклад, лікарські препарати проти підвищеного кров'яного тиску.
Нейродегенеративні захворювання являють собою групу захворювань і розладів, асоційованих із втратою функцій або загибеллю нервових клітин у СМ5, і включають, але не обмежуючись цим: адренолейкодистрофію, хворобу Олександра, хворобу Альпера, бічний
Зо аміотрофічний склероз, атаксію-телеангіектазію, хворобу Баттена, кокаїновий синдром, кортикобазальну дегенерацію, дегенерацію, яка викликається амілоїдозом або асоційована з ним, атаксію Фрідрейха, лобово-скроневу лобарну дегенерацію, хворобу Кеннеді, множинну системну атрофію, множинний склероз, первинний латеральний склероз, прогресуючий супрануклеарний параліч, спінальну м'язову атрофію, поперечний мієліт, хворобу Рефсума і спінально-церебелярну атаксію.
Проти нейродегенеративного захворювання може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що являє собою гормон росту або нейротрофічний фактор; приклади включають але не обмежуючись цим, отриманий з головного мозку нейротрофічний фактор (ВОМЕ), фактор росту нервових клітин (МОР), нейротрофін-4/5, фактор росту фібробластів (БОЕ)-2 і інші ЕСЕ, нейротрофін (МТ)-3, еритропоетин (ЕРО), фактор росту гепатоцитів (НОР), фактор епідермального росту (ЕСЕ), трансформуючий фактор росту (ТОЕ)-альфа, ТОЕ-бета, фактор росту ендотелію судин (МЕСЕ), антагоніст рецептора інтерлейкіну-!1 (ІЇ-1га), циліарний нейротрофічний фактор (СМТЕ), гліальний нейротрофічний фактор (СОМЕ), нейртурин, тромбоцитарний фактор росту (РОСЕ), херегулін, нейрегулін, артемін, персефін, інтерлейкіни, нейротрофічний фактор гліальної клітинної лінії (ЗЕК), фактор, що стимулює колонії гранулоцитів (С5Е), С5Е гранулоцитів-макрофагів, нетрини, кардіотрофін-1, білки хеджехоги, інгібіторний фактор лейкемії (ГІР), мідкін, плейотрофін, морфогенетичні білки кісток (ВМР), нетрини, сапозини, семафорини і фактор стовбурових клітин (ЗСЕ).
Захворювання епілепсії і розлади СМ5 включають невідповідну і/або аномальну електропровідність у СМ5, і вони включають, але не обмежуючись цим епілепсію (тобто малий епілептичний напад, атонічний напад, доброякісну дитячу епілепсію, ювенільний абсанс, клонічні судоми, комплексні парціальні судоми, лобову епілепсію, пропасні судоми, дитячі судоми, ювенільну міоклонічну епілепсію, ювенільну абсансну епілепсію, синдром Леннокса-
Гасто, синдром Ландау-Клефнера, синдром Драве, синдром Отахарі, синдром Веста, міоклонічні судоми, мітохондріальні розлади, прогресуючий міоклонічний епілептичний напад, психогенні судоми, рефлекторну епілепсію, синдром Расмусена, прості парціальні судоми, вторинні генералізовані судоми, скроневу епілепсію, тоноклонічні судоми, тонічні судоми, психомоторні епілептичні напади, лімбічну епілепсію, парціальні напади, генералізовані напади, епілептичний статус, абдомінальну епілепсію, акінетичні напади, спонтанні напади, масивні 60 двосторонні міоклонічні судоми, катаменіальну епілепсію, судоми з падіннями, емоційні судоми,
фокальний епілептичний напад, епілептичні напади сміху, Джексонівську епілепсію, хворобу
Лафора, моторні судоми, багатофокальний епілептичний напад, нічні епілептичні напади, фотогенну епілепсію, псевдоепілепсію, сенсорну епілепсію, слабовиражену епілепсію, лісову епілепсію, епілепсію при абстинентному синдромі і зорові рефлекторні епілептичні напади).
Проти епілептичного розладу може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що являє собою антиконвульсант або протиепілептик, включаючи, але не обмежуючись цим, барбітуратні антиконвульсанти (тобто примідон, метарбітал, мефобарбітал, алобарбітал, амобарбітал, апробарбітал, альфенал, барбітал, бралобарбітал і фенолбарбітал), бензодіазепінові антиконвульсанти (тобто діазепам, клоназепам і лоразепам), карбаматні антиконвульсанти (тобто фельбамат), антиконвульсанти на основі інгібітору вугільної ангідрази (тобто ацетозоламід, топірамат і зонізамід), дибензазепінові антиконвульсанти (тобто рафмамід, карбамазепін і окскарбазепін), антиконвульсанти на основі похідних жирних кислот (тобто дивалпроекс і вальпроєву кислоту), аналоги гамма-аміномасляної кислоти (тобто прегабалін, габапентин і вігабатрин), інгібітори повторного споживання гамма-аміномасляної кислоти (тобто тіагабін), інгібітори трансамінази гамма-аміномасляної кислоти (тобто вігабатрин), гідантоїнові антиконвульсанти (тобто дифенін, етотоїн, фосдифенін і медифенін), різноманітні антиконвульсанти (тобто лакозамід і сульфат магнію), прогестини (тобто прогестерон), оксазолідиндіонові антиконвульсанти (тобто параметадіон і триметадіон), піролідинові антиконвульсанти (тобто леветиракетам), сукцинімідні антиконвульсанти (тобто етосуксимід іметсуксимід), триазинові антиконвульсанти (тобто ламотригін) і сечовинні антиконвульсанти (тобто фенацемід і фенетурид).
Розлади поведінки і розлади СМ5, що відрізняються аберантною поведінкою з боку підданого їм суб'єкта, включають, але не обмежуючись цим: розлади сну (тобто інсомнію, парасомнію, нічні страхи, розлади сну, пов'язані з циркодіанним ритмом і нарколепсію), розлади настрою (тобто депресію, суїцидальну депресію, страх, хронічні афективні розлади, фобії, напади паніки, обсесивно-компульсивний розлад, розлад гіперактивності з дефіцитом уваги (АРНО), розлад дефіциту уваги (АОБ), синдром хронічної втоми, агорафобію, розлад пост- травматичного стресу, біполярний розлад), розлади харчування (тобто анорексію або булімію), психози, поведінкові розлади розвитку (тобто аутизм, синдром Ретта, синдром Аспергера),
Зо розлади особистості і психотичні розлади (тобто шизофренія, маревний розлад тощо).
Проти розладу поведінки може бути вибраний неврологічний лікарський засіб зі сполуки, що модифікує поведінку, включаючи, але не обмежуючись цим, атипічні антипсихотичні засоби (тобто рисперидон, аланзапін, априпіпразол, хетіапін, паліперидон, азенапін, клозапін, ілоперидон і зипразидон), фенотіазиновий антипсихотичний засіб (тобто прохлорпемазин, хлорпромазин, флуфеназин, перфеназин, трифлуоперазин, тіоридазин і мезоридазин), тіоксантеновий антипсихотичний засіб (тобто тіотиксен), різноманітні антипсихотичні засоби (тобто пімозид, літій, моліндон, галоперидол і локсапін), селективний інгібітор повторного споживання серотоніну (тобто циталопрам, есциталопрам, пароксетин, флуоксетин і сертралін), інгібітор повторного споживання серотоніну-норепінефрину (тобто дулоксетин, велафаксин, десвелафаксин, трициклічний антидепресант (тобто доксепін, кломіпрамін, амоксапін, нортриптилін, амітриптилін, триміпрамін, іміпрамін, протриплітин і дезипрамін), тетрациклічний антидепресант (тобто міртазапін і мапротилін), фенілпіперазиновий антидепресант (тобто тразодон і нефазодон), інгібітор моноаміноксидази (тобто ізокарбоксазид, фенелзин, селегілін і транілципромін), бензодіазепін (тобто алпразолам, естазолам, флуразептам, клоназепам, лоразепам і діазепам), інгібітор повторного споживання норепінефрину-допаміну (тобто бупропіон), стимулятор СМ5 (тобто фентермін, діетилпропіон, метамфетамін, декстроамфетамін, амфетамін, метилфенідат, дексметилфенідат, ліздексамфетамін, модафініл, пемсолін, фендиметразин, бензфетамін, фендиметразин, армодафініл, діетилпропіон, кофеїн, атомоксетин, доксапрам і мазиндол), анксіолітичний/седативний/снотворний засіб (включаючи, але не обмежуючись цим, барбітурат (тобто секобарбітал, фенобарбітал і мефобарбітал), бензодіазепін (як описано вище), і різноманітні анксіолітичні/седативні/снотворні засоби (тобто дифенгідрамін, натрій оксибат, залеплон, гідроксизин, хлораль гідрат, аолпідем, буспірон, доксепін, есзопіклон, рамелтеон, мепробамат і етхлорвінол)), секретин (дивися, наприклад, Канйй-бсНнаицб еї аі. Ашіівт 9:256-265 (2005)), опіоїдний пептид (дивися, наприклад, Соуеп еї аї., У. Меигоспет. 89:273-285 (2004)) і нейорпептид (дивися, наприклад, Неїпула вї а). Ат. У. Рпузіо!. 289:Е301-305 (2005)).
Лізосомні розлади нагромадження являють собою метаболічні розлади, що у деяких випадках асоціюються з СМ5З або мають СМ5-специфічні симптоми; такі розлади включають, але не обмежуючись цим: хворобу Тея-Сакса, хворобу Гоше, хворобу Фабрі, мукополісахаридоз 60 (типи ЇЇ, ПШ, 0, ІМ, М, МІ ї МІ), хворобу нагромадження глікогену, ОМ'1-гангліозидоз,
метахроматичну лейкодистрофію, хворобу Фарбера, лейкодистрофію Канавана і типи 1 і 2 нейронного цероїдного ліпофусцинозу, хворобу Німана-Піка, хворобу Помпі і хворобу Краббе.
Проти лізосомної хвороби нагромадження може бути вибраний неврологічний лікарський засіб, що сам по собі має активність ферменту, що ослаблюється при захворюванні, або іншим способом відтворює її. Ілюстративні рекомбінантні ферменти для лікування лізосомніх розладів нагромадження включають, але, не обмежуючись, ті, які наведені, наприклад, у публікації заявки на патент США Мо 2005/0142141 (тобто альфа-! -ідуронідазу, ідуронат-2-сульфатазу, М- сульфатазу, альфа-М-ацетилглюкозамінідазу, М-ацетил-галактозамін-б6-сульфатазу, бета- галактозидазу, арилсульфатазу В, бета-глюкуронідазу, кислу альфа-глюкозидазу, глюкоцереброзидазу, альфа-галактозидазу А, гексозамінідазу А, кислу сфінгомієліназу, бета- галактоцереброзидазу, бета-галактозидазу, арилсульфатазу А, кислу церамідазу, аспартоацилазу, пальмітоїл-протеїнтіоестеразу 1 і трипептидиламінопептидазу 1).
В інших варіантах здійснення, захворювання, пов'язані з неправильним надпродукуванням еритроцитів або викликувані ним, або захворювання, де надпродукування еритроцитів є впливом захворювання, можуть запобігатися або лікуватися за допомогою впливу збідніння ретикулоцитів, що спостерігається в даному документі для антитіл анти-ТІК, які зберігають щонайменше часткову ефекторну функцію. Наприклад, при спадковій або неопластичній справжній поліцитемії підвищені кількості еритроцитів через гіперпроліферацію, наприклад, ретикулоцитів, дають в результаті загущення крові і супутні фізіологічні симптоми (а'Опоїтіо еї а!., Сі. Г ар. Наетайі. (1996) Биррі. 1:29-34). Введення антитіла анти-ТІК за даним винаходом, де щонайменше часткова ефекторна функція антитіла зберігається, зробило б можливим селективне видалення популяції незрілих ретикулоцитів без впливу на нормальне перенесення трансферину в СМ5. Дозування такого антитіла модулювалося б таким чином, що гострі клінічні симптоми могли б зводитися до мінімуму (тобто за допомогою дозування при дуже низькій дозі або через великі часові інтервали), як добре відомо в даній галузі.
В одному з аспектів, антитіло за даним винаходом використовується для детектування неврологічного розладу до настання симптомів і/або для оцінки важкості або тривалості захворювання або розладу. В одному з аспектів, антитіло уможливлює детектування і/або одержання зображень неврологічного розладу, включаючи одержання зображень за допомогою
Зо радіографії, томографії або магнітної резонансної томографії (МЕ).
В одному з аспектів, пропонується антитіло анти-ТК з низькою спорідненістю за даним винаходом для застосування як лікарського препарату. В інших аспектах, пропонується антитіло анти-ТІК з низькою спорідненістю для застосування при лікуванні неврологічного захворювання або розладу (наприклад, хвороби Альцгеймера) без збідніння еритроцитів (тобто ретикулоцитів). У визначених варіантах здійснення, пропонується модифіковане антитіло анти-
ТЯ з низькою спорідненістю для використання в способі лікування, як описано в даному документі. У визначених варіантах здійснення, даний винахід пропонує антитіло анти-ТІК з низькою спорідненістю, модифіковане для поліпшення його безпеки, для використання в способі лікування індивідуума, що має неврологічне захворювання або розлад, що включає введення індивідууму ефективної кількості антитіла анти-ТЯ (необов'язково, пов'язаного з лікарським засобом проти неврологічного розладу). В одному такому варіанті здійснення, спосіб додатково включає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента. В інших варіантах здійснення, даний винахід пропонує антитіло анти-
ТЯ, модифіковане для поліпшення його безпеки, для використання при зменшенні або інгібуванні утворення амілоїдних бляшок у пацієнта, що має ризик неврологічного захворювання або розладу (наприклад, хвороба Альцгеймера) або страждає від нього. "Індивідуум" відповідно до будь-якого з розглянутих вище варіантів здійснення необов'язково являє собою людину. У визначених аспектах, антитіло анти-ТІЕ за даним винаходом для використання в способах за даним винаходом поліпшує споживання лікарського засобу проти неврологічного розладу, з яким воно пов'язано.
В іншому аспекті, даний винахід пропонує для використання антитіла анти-ТїК з низькою спорідненістю за даним винаходом при виробництві або приготуванні лікарського препарату. В одному з варіантів здійснення, лікарський препарат призначений для лікування неврологічного захворювання або розладу. В іншому варіанті здійснення, лікарський препарат призначений для використання в способі лікування неврологічного захворювання або розладу, що включає введення індивідууму, що має неврологічне захворювання або розлад, ефективної кількості лікарського препарату. В одному такому варіанті здійснення, спосіб додатково включає введення індивідууму ефективної кількості щонайменше одного додаткового терапевтичного агента.
В іншому аспекті, даний винахід пропонує спосіб лікування хвороби Альцгеймера. В одному з варіантів здійснення, спосіб включає введення індивідууму, що має хворобу Альцгеймера, ефективної кількості мультиспецифічного антитіла за даним винаходом, що зв'язує як ВАСЕ!1, так і ТІК або як Абеїа, так і ТІК. В одному такому варіанті здійснення, спосіб додатково включає введення індивідууму ефективної кількість щонайменше одного додаткового терапевтичного агента. "Індивідуум" відповідно до будь-якого з розглянутих вище варіантів здійснення може являти собою людину.
Антитіла анти-ТІЕ за даним винаходом можуть використовуватися при терапії або самі по собі, або в сполученні з іншими агентами. Наприклад, антитіло анти-ТІК за даним винаходом може вводитися спільно щонайменше з одним додатковим терапевтичним агентом. У визначених варіантах здійснення, додатковий терапевтичний агент являє собою терапевтичний агент, ефективний при лікуванні такого ж або іншого неврологічного розладу, як той, для лікування якого використовується антитіло анти-ТІК. Ілюстративні додаткові терапевтичні агенти включають, але не обмежуючись цим: різноманітні неврологічні лікарські засоби, описані вище, інгібітори холінестерази (такі як донепезил, галантамін, ровастигмін і такрин), антагоністи рецепторів ММОА (такі як мемантин), інгібітори агрегації пептидів амілоїду бета, антиоксиданти, модулятори у-секретази, міметики фактора росту нервів (МОР) або генну терапію МОРЕ, агоністи
РРАКУ, інгібітори редуктази НМ5-СоА (статини), ампакіни, блокатори кальцієвих каналів, антагоністи рецепторів САВА, інгібітори глікогенсинтазакінази, внутрішньовенний імуноглобулін, агоністи мускаринових рецепторів, модулятори нікотинових рецепторів, активну або пасивну імунізацію пептиду амілоїду бета, інгібітори фосфодіестерази, антагоністи рецепторів серотоніну й антитіла анти-пептид амілоїду бета. У визначених варіантах здійснення щонайменше один додатковий терапевтичний агент вибирається по його здатності ослаблювати один або кілька побічних впливів неврологічного лікарського засобу.
Як ілюструється в даному документі, визначені антитіла анти-ТЇЖЕ можуть мати побічні впливи, що негативно впливають на популяції ретикулоцитів у суб'єкта, якого лікують за допомогою антитіла анти-ТІК. Таким чином, у визначених варіантах здійснення щонайменше один додатковий терапевтичний агент, вибраний через його здатність ослаблювати такий негативний побічний вплив на популяції ретикулоцитів, уводиться разом з антитілом анти-ТІК за даним винаходом. Приклади таких терапевтичних агентів включають, але не обмежуючись цим, агенти для збільшення популяції еритроцитів (тобто ретикулоцитів), агенти для підтримки росту і розвитку еритроцитів (тобто ретикулоцитів) і агенти для захисту популяції еритроцитів від впливів антитіла анти-ТІК; такі агенти включають, але не обмежуючись цим, еритропоетин (ЕРО), добавки, що містять залізо, вітамін С, фолієву кислоту і вітамін В12, а також фізичне заповнення еритроцитів (тобто ретикулоцитів) за допомогою, наприклад, вливання подібних клітин, що можуть походити від іншого індивідуума з подібним типом крові або можуть попередньо витягатися в суб'єкта, якому вводять антитіло анти-ТІК. Для фахівця в даній галузі буде зрозуміло, що в деяких випадках, агенти, призначені для захисту існуючих еритроцитів (тобто ретикулоцитів), переважно вводяться суб'єкту до терапії за допомогою антитіла анти-ТТА або одночасно з нею, у той час як агенти, призначені для підтримки або ініціювання повторного росту/розвитку еритроцитів або популяцій клітин крові (тобто ретикулоцитів або популяції ретикулоцитів), переважно вводяться одночасно з терапією за допомогою антитіла анти-ТІ" або після неї, так що такі клітини крові можуть заповнюватися після лікування за допомогою антитіла анти-ТІВ.
У визначених інших таких варіантах здійснення щонайменше один додатковий терапевтичний агент вибирається через його здатність інгібувати або запобігати активуванню шляху комплементу при введенні антитіла анти-ТК. Приклади таких терапевтичних агентів включають, але не обмежуючись цим, агенти, що негативно впливають на здатність антитіла анти-ТІК до зв'язування або активування шляху комплементу, і агенти, що інгібують одну або кілька молекулярних взаємодій зі шляхом комплементу, і описуються в цілому, у МоїІпе5 апа
КіквспйикК (2006) Моїес. Іттипої. 43:107-121, зміст якої в явному вигляді включається в даний документ як посилання.
Такі сполучені терапії, відзначені вище, у даному документі охоплюють сполучене введення (коли два або більше терапевтичні агенти включаються в той самий або в різні препарати) і роздільне введення, у цьому випадку, введення антитіла за даним винаходом може здійснюватися до, під час і/або після введення додаткового терапевтичного агента і/або допоміжної речовини. В одному з варіантів здійснення, введення антитіла анти-ТІК і введення додаткового терапевтичного агента здійснюється з різницею за часом у межах приблизно одного місяця або в межах приблизно одного, двох або трьох тижнів, або в межах приблизно 60 одного, двох, трьох, чотирьох, п'яти або шести днів. Антитіла за даним винаходом можуть також бо використовуватися в сполученні з іншими видами інтервенційної терапії, такими як, але не обмежуючись цим, радіаційна терапія, поведінкова терапія або інші види терапії, відомі в даній галузі і відповідні неврологічному розладу, що повинен лікуватися або запобігатися.
Антитіло анти-ТІК за даним винаходом (і будь-який додатковий терапевтичний агент) може вводитися за допомогою будь-яких придатних для використання засобів, включаючи парентеральне, інтрапульмонарне і інтраназальне введення, і, за бажанням, місцевого лікування, внутрішньоранового введення. Парентеральні вливання включають внутрішньом'язове, внутрішньовенне, внутрішньоартеріальне, внутрішньочеревинне або підшкірне введення. Дозування може здійснюватися за допомогою будь-якого придатного для використання способу, наприклад, за допомогою ін'єкцій, таких як внутрішньовенні або підшкірні ін'єкції, залежно, почасти, від того, чи є введення коротким або хронічним. У даному документі передбачаються різноманітні часові графіки дозування, включаючи, але не обмежуючись цим, однократне або множинне введення в різні моменти часу, уведення болюсу й імпульсне вливання.
Антитіла за даним винаходом можуть готуватися, дозуватися і вводитися способом, що відповідає хорошій медичній практиці. Фактори для розгляду в цьому контексті включають конкретний розлад, що лікується, конкретного ссавця, що лікується, клінічний стан індивідуального пацієнта, причину розладу, місце доставки агента, спосіб уведення, часовий графік введення й інші фактори, відомі медичним працівникам. Антитіло не повинне готуватися, але необов'язково готується разом з одним або декількома агентами, використовуваними в даний час для запобігання або лікування розглянутого розладу або для запобігання, ослаблення або полегшення одного або декількох побічних впливів введення антитіла.
Ефективна кількість таких інших агентів залежить від кількості антитіла, що присутній у препараті, типу розладу або лікування і від інших факторів, обговорюваних вище. Вони, як правило, використовуються при таких же дозуваннях і за допомогою таких же способів уведення, як описується в даному документі, або в межах приблизно від 1 до 99 95 дозувань, описаних у даному документі, або при будь-якому дозуванні і за допомогою будь-якого способу, що емпірично/клінічно визначається як відповідний.
Для запобігання або лікування захворювання, відповідне дозування антитіла за даним
Зо винаходом (коли воно використовується окремо або в сполученні з одним або декількома іншими додатковими терапевтичними агентами) буде залежати від типу захворювання, що повинне лікуватися, типу антитіла, важкості і перебігу захворювання, від того, чи вводиться антитіло для превентивних або терапевтичних цілей, від попередньої терапії, від клінічної історії пацієнта і від реакції на антитіло, і від судження спостерігаючого лікаря. Антитіло уводиться відповідним чином пацієнту за один раз або протягом ряду сеансів лікування. Залежно від типу і важкості захворювання, приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,1 мг/кг - 10 мг/кг) антитіла може являти собою початкове пробне дозування для введення пацієнту, наприклад, за допомогою одного або декількох окремих уведень, або за допомогою безперервного вливання.
Одна типова щоденна доза може знаходитися в межах приблизно від 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше, залежно від факторів, розглянутих вище. Для багаторазових уведень протягом декількох днів або довше, залежно від стану, лікування, як правило, може бути продовжене доти, поки не відбудеться бажаного пригнічення симптомів захворювання. Одне ілюстративне дозування антитіла може знаходитися в межах приблизно від 0,05 мг/кг приблизно до 40 мг/кг.
Таким чином, пацієнту можуть вводитися одна або кілька доз приблизно по 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг, 5,0 мг/кг, 7,5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг, 25 мг/кг, 30 мг/кг, 35 мг/кг або 40 мг/кг (або будь-яке їхнє сполучення). Такі дози можуть уводитися з проміжками, наприклад, щотижня або кожні три тижні (наприклад, таким чином, що пацієнт приймає приблизно від двох приблизно до двадцяти доз або, наприклад, приблизно шість доз антитіла). Можна вводити початкову більш високу навантажувальну дозу, за якої слідують одна або декілька більш низьких доз. Однак можуть бути корисними й інші режими дозування. Буде очевидно, що один зі способів зменшення впливу на популяції ретикулоцитів за допомогою введення антитіла анти-ТА полягає в модифікації кількості доз або часового режиму дозування таким чином, що в кровотоці присутні в цілому більш низькі кількості циркулюючого антитіла для взаємодії з ретикулоцитами. В одному з необмежувальних прикладів, може вводитися більш низька доза антитіл анти-ТІК з більшою частотою, ніж це було б при більш високій дозі. Використовувана доза може відповідати балансу між кількістю антитіла, що повинне доставлятися в СМ5 (що саме по собі зв'язане зі спорідненістю з СМ5 антиген-специфічною частиною антитіла), спорідненістю цього антитіла до ТІК і тим, чи вводиться сполука (сполуки), що захищає еритроцити (тобто ретикулоцити), що стимулює ріст і розвиток або інгібує шлях комплементу,
разом з антитілом або послідовно. Хід цієї терапії легко відслідковується за допомогою звичайних методик і аналізів, як описано в даному документі і як відомо в даній галузі.
Зрозуміло, що будь-який із зазначених вище препаратів або терапевтичних способів, може здійснюватися з використанням імунокон'югата за даним винаходом замість антитіла анти-ТїА або на додаток до нього.
Н. Промислові вироби
В іншому аспекті даного винаходу, пропонується промисловий виріб, що містить матеріали корисні при лікуванні, запобіганні і/або діагностиці розладів, описаних вище. Промисловий виріб містить контейнер і мітку або вставку в упакування, на контейнері, або пов'язану з ним. Придатні для використання контейнери включають, наприклад, пляшки, флакони, шприци, мішки з розчинами для внутрішньовенного ведення тощо. Контейнери можуть бути сформовані з різноманітних матеріалів, таких як скло або пластик. Контейнер містить композицію, що сама по собі або в сполученні з іншою композицією є ефективною для лікування, запобігання і/або діагностики стану, і може мати вузол стерильного доступу (наприклад, контейнер може являти собою мішок з розчином для внутрішньовенного уведення або флакон, що має пробку, яка проколюється за допомогою голки для гіподермічних ін'єкцій). Щонайменше один активний агент у композиції являє собою антитіло за даним винаходом. Етикетка або вставка в упакування показує, що композиція використовується для лікування вибраного стану. Крім того, промисловий виріб може містити: (а) перший контейнер з композицією, що міститься в ньому, де композиція містить антитіло за даним винаходом; і (б) другий контейнер з композицією, що міститься в ньому, де композиція містить додатковий цитотоксичний або інший терапевтичний агент. Промисловий виріб у цьому варіанті здійснення даного винаходу може додатково містити вставку в упакування, що показує, що композиції можна використовувати для лікування конкретного стану. Альтернативно або на додаток до цього, промисловий виріб може додатково містити другий (або третій) контейнер, що містить фармацевтично прийнятний буфер, такий як бактеріостатична вода для ін'єкцій (ВУМУРІ), фосфатний сольовий буфер, розчин Рінгера і розчин декстрози. Він може додатково містити інші матеріали, бажані з промислової точки зору і з погляду користувача, включаючи інші буфери, розріджувачі, фільтри, голки і шприци.
Зрозуміло, що будь-який із зазначених вище промислових виробів може містити імунокон'югат за даним винаходом замість антитіла анти-ТІК або на додаток до нього.
Приклади
Приклад 1: Генерування, характеризація і гуманізація перехресно-реактивних антитіл анти-
ТІК людини/цино
Спочатку здійснюють процес фагового пенінгу наївних антитіл у спробі ідентифікації антитіл перехресно-реактивних відносно як до ТІК людини, так і до ТІК мавпи циномолгус ("цино"), Що надалі не конкурують з ТІК за зв'язування з ТІК (Іее еї аІ. МВ (2004) 1073-1093). Такого перехресно-реактивного, що не конкурує з ТІЖ, клону не ідентифікують у цьому процесі фагового пенінгу. Однак ідентифікують два антитіла, що є корисними при характеризації генерованих згодом клонів гібридоми.
Ідентифікують види перехресно-реактивного антитіла, що конкурує з ТІК за зв'язування з
ТЯ людини або цино (ТІК-конкуруюче антитіло). Епітоп іншого клону, специфічний для ТІК людини, картується в апікальному домені пиТІЯК з використанням химерних рецепторів ТІК миші/людини (Фігура 1). Цей клон, що зв'язується з апікальним доменом, втрачає зв'язок з пит, коли послідовність ТІК миші в апікальному домені заміщають у положенні пит'к.
Потім здійснюють оснований на імунізації підхід до генерування перехресно-реактивних антитіл анти-ТїЯК людини/цино. Позаклітинний домен ТІК людини ("еса"), що містить М-кінцеву мітку Ні і білок гемахроматозу людини ("НЕЕ"), експресують і очищують, як описано (Веппеї єї аІ., Маїште (2000) 403, 46-53). Одержують анологічний конструкт еса ТІК цино. ТІК цино експресують і очищують подібним способом. Перехресно-реактивні антитіла ТЕ людини і цино генерують за допомогою імунізації 5 мишей Ваї!їБ/С у підошву лапи за допомогою 6 доз (два рази в тиждень), що містять по 2 мкг, кожна, еса супотії і питТК. Усі сироватки мишей є позитивними по РАС, і усі миші є злитими. З 1632 переглянутих гібридом 111 є позитивними згідно з ЕГІЗА відносно зв'язування з ТІК як людини, так і цино.
Отримані в результаті ЕГІ5А-позитивні гібридоми переглядають за допомогою БАС5 у присутності 1 мкМ голо-ТК людини на зв'язування з 293 клітинами, які транзиторно експресують ТІК людини або цино. Коротко, аналіз ЕАС5 здійснюють із використанням 293 клітин, трансфікованих повнорозмірним ТІК людини або цино з використанням ліпофектаміну 2000 плюс (Іпмігодеп) за 48-72 години перед аналізом ЕАС5. Нетрансфіковані (контрольні) і трансфіковані 293 клітини промивають два рази буфером ГАСЗ5 (РВ5, що містить 1 95 ВЗА), бо додають 50 мкл супернатанта гібридоми (нормованого на 10 мкг/мл) до клітин 293 у присутності
1 мкМ голо-ТІК людини і інкубують на льоду протягом 30 хв. Клітини промивають два рази буфером РАС5, додають 50 мкл РЕ-кози-анти-Есу мишачих (даскбзоп ІттипоКезеагсі) до клітин, і інкубують їх на льоду протягом 30 хв. Клітини промивають буфером ЕАСЗ і повторно суспендують у 100 мкл буфера ЕАСЗ для аналізу. 14 клонів є позитивними відносно зв'язування ТІК як людини, так і цино (Фігури 2А і 28В). Ці клони додатково субклонують і оцінюють на зв'язування з ТІК як людини, так і цино, за допомогою ЕГІЗА, і картують епітоп на пиТїЖК з використанням клону фага з апікальним зв'язуванням, ідентифікованого вище. Коротко, конкурентний аналіз ЕГІЗА фага з апікальним доменом здійснюють на планшетах Махізогр, покритих 2 мкг/мл очищеного ТІК людини або цино, у РВЗ при 4 "С протягом ночі. Планшети промивають РВ5Б/0,05 95 Тмееп 20 і блокують із використанням ЗирегріоскК з казеїном (Тпепто Зсіепійіс, Ниазоп, МН). У кожну ямку додають 30- мкл аліквоту супернатанта гібридоми (нормованого на 10 мкг/мл) протягом 45 хв. За цим слідує додавання 30 мкл фага, що зв'язується з апікальним доменом, при ОО (оптичної густини) 0,05 протягом 15 хв. Планшети промивають РВБЗ/О,05 90 Тмееп 20, і додають на планшет розведене 171000 НАР-миші-анти М1З3 (СЕ Пеаййсаге) і інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі. Планшети промивають РВБ/0,0595 Тмуеєп 20, і зв'язаний фаг детектують із використанням субстрату ТМВ (ВіоЕХ І арогайгіє5, Ом/іпд5 Мій5). Дев'ять з чотирнадцяти клонів, як виявлено, блокують зв'язування антитіла з апікальним зв'язуванням, згідно з фаговим дисплеєм (дивися Фігуру 2С).
Спорідненість антитіл вимірюють із використанням поверхневого плазмонного резонансу
СЗРЕ") (Віасоге"м, СЕ Неайвсаге). Антитіло анти-Ніз (Оіадеп) зв'язується на чотирьох різних проточних комірках сенсорного чипа СМ5 ВІАСОКЕ "М (Віасоге, Іпс., Різсаїаулау, МУ) при значенні в межах між 6000 і 8000 КИ. Іммобілізація здійснюється за допомогою неупорядкованого зв'язування через аміно групи з використанням протоколу, що постачається виробником. Т0Х НВЗ-Р (Віасоге, Іпс., Різсаїажау, МУ) розводять у воді і використовують як буфер для розведення і проточного буфера. Очищений ТІК людини або цино захоплюється, після цього інжектують 3-кратні послідовні розведення до або Раб, при швидкості потоку 30 мл/хв. із використанням способу одноциклової кінетики. Постійні спорідненості визначають із використанням простої моделі зв'язування Ленгмюра 1:11 або з використанням стаціонарної моделі, коли Коп або Кок знаходяться нижче меж детектування. Рівноважну константу дисоціації (Ко) обчислюють як відношення константи швидкості асоціації (Кол) і константи швидкості дисоціації (Кок). Результати показані на Фігурі 2С.
Кожну гібридому клонують. РНК у цілому ізолюють від гібридом з використанням міні-набору
КМеазу (Оіадеп). СОМА генерують із використанням ЗМАКТ 5 КАСЕ сОМА Аптрійісайоп Кії (Сіопіесі) на основі інструкцій виробника. Варіабельну область кожного антитіла ампліфікують із використанням ОРМ (5' оліго), що постачається в наборі, і 3' оліго, що відпалюється відносно постійної області. Потім продукт РОК у цілому клонують у вектор рРСК4ВІіІпі-ТОРО (Іпмігодеп) для секвенування. Після аналізу послідовностей гібридоми можуть додатково підрозділятися на 4 групи (Фігури ЗА-30). Клони, що конкурують з антитілом з апікальним зв'язуванням, потрапляють у З споріднені класи послідовностей (Фігура ЗА-С). 4 неапікальні клони (Фігура 30) складаються з 2 споріднених клонів і 2 інших унікальних послідовностей. СОК легкого і важкого ланцюга кожного клону наводяться в Таблиці 3.
Таблиця З
СОК Легких і важких ланцюгів перехресно-реактивних антитіл анти-ТІК цино/людини
НИНІ Я Все НЕ вн НЕЗНЕ КЯНЕІ орех ОДУ з
Соня ом з ПОД юс ор ююмн я вом денно ФО во ом солоних вдЕеМо зо консенсусного р) ею) 45 ВАЗМЕЗ 30 С/0)РР 46 класу | т (ев) важких (С/ЛЛІ(Т/Р/Р) аі замі класу І КкК/М)а У/Е вен вно» БЕЛА вен вно з БЛОК о» 50 в зов лин |АБОЖН з | лятио в ЗІ ее веною БОЮ в ТИ сеог| лян |АБОЖН з | ким | в |З т
Продовження таблиці З оре ре ря рев рт
СОК легких ланцюгів ВАБ(Е/0)М (О/АХАЛІТІМ/ | в тет консенсусного (І /)М5МГА РМ. АЮ м) класу ЇЇ
У данцютв ем ТЛ/В)МО СТВАУ 5УММН ва 00 | ВТМ 70 консенсусного К/М/Т)ЕК(В/К) НУ) класу ЇЇ
ТТ ВАБКБІБКУ ООНМЕ усУсм
Важкий ЗЕМАММ 74 УЗУЗОТІВУ |в РАТА | 76
МРІЇ КУ цу
ТТ ВАВОБУБТВ ОНТМУЕ
БувЕМн УАвІОєе ет соУр5 у "УТ ВАВОБУЄТЬ ОНТУУЕ
БУвЕМн УАвІОєе ет соУр5
Н
-Гтт555УРББУ ОУН 'в'2 втемлє | ев | єрЕт
ОСАГУ
САМОУ
0 Ї вАСООІТММ. ООАМТ восус ду
Продовження таблиці З (А/ХА/ТХВ/5 сука (Ф/НХ
СОВ легких (о/5уЗИХМ ОХтТ/М/ й 5) (М/5ХА/Т)І/ ланцюгів т/- 97 М/ВХО АХМ//Н/ консенсусного | МХЕ/В/
ХЗ/М/О)(З/Р/) (Е/А/Н)5 класу ІМ ТХИБ/Л) (М/5/Г)(Б/М) Р(Е/ЮТ (ЕЛОХМ/Р/ /М) (с/О/В8)
С(У/А/й
ХЛ
(М/5/Е(М/В/)) В/гУ
Сов важких (5/0/М) М (МУ) (РЛОДСД(З/СХаИа д/С/0) ланцюгів (М/) зо0 | ЛОХЗИОТКЛОЇ 4010 | Му 102 консенсусного (Н/Х/Е) КО/Р/МХЕ/0Х Е/У/ЕХ класу ІМ ВЖЛУЕЛК В/Е7- (5/б) Ха (А/-(М/- (А/0)(Х/
Н
Репрезентативні клони з кожного класу (150511, 7А4, 16Е6 і 7037) наводяться для ілюстрації в даному документі з метою гуманізації і додаткової характеризації. Гуманізація здійснюється з використанням щеплень НМК разом із включенням вибраних верньєрних положень, як зображено, нижче, на Фігурах 4А-4Е. 150511 гуманізують за допомогою щеплення НУК у варіабельних доменах людини ІЗКМ1-МІ 1701 ї ІЗНМ1-3701. Сполучення різних верньєрних положень миші включаються в гуманізовані варіанти, як зображено на фігурі 4Е. Гуманізований варіант 15511 150511.у5 містить вибрані верньєрні положення в МІ. (положення 43 і 48) ії ун (положення 48, 67, 69, 71 і 73), як зображено на Фігурі 4А. На додаток до цього, М-закінчення УН змінене з О на Е. Для гуманізації 7А4 роблять щеплення НМЕ з використанням НМЕ важкого ланцюга 7А4 і легкого ланцюга 8А2 (7А4 і вВА2 являють собою споріднені клони, Фігура ЗА). НУК прищеплюють у варіабельних доменах людини І5КМ4-1701 і (ЗНМ1-2702. Сполучення різних верньєрних положень миші включаються в гуманізовані варіанти, як зображено на Фігурі 4Е.
Гуманізований варіант 7А4 7А4.м15 містить вибрані верньєрні положення в МІ. (положення 68) і
МН (положення 24 і 71) і зміну СОК-І З С94А, як зображено на Фігурі 48. 757 гуманізують за допомогою щеплення НМУК у консенсусних варіабельних доменах людини каппа 4 і підгрупи разом з вибраними верньєрними положеннями в МН (положення 93), як зображено на Фігурі 4С.
Це гуманізований варіант називається 707.м1. 16Е6 гуманізують за допомогою щеплення НУК у варіабельних доменах людини ІСКМ1-901 ї ІЗНМ4-59701. Сполучення різних верньєрних положень миші включають у гуманізовані варіанти, як зображено на фігурі 4Е. Гуманізований варіант 16Е6 16Е6.м4 містить 2 зміни в МІ. (1481 і Е71У), а також вибрані верньєрні положення в
МІ. (положення 43 і 44) і МН (положення 71 і 78), як зображено на Фігурі 40.
Таблиця 4
СОК легкого і важкого ланцюга гуманізованих антитіл/бар
Й 5ЕО 5ЕО ЗЕО
Назва |Важкий/ сов! Тв) сов І совз3 о клону легкий Мо Мо Мо 150211 .у5 ВАБОМІ УЗМІА РАТМІ АЮ ОНЕМСТРІТ 0000000 |Важкий| 6МУМН ЕІМРТМОВТММУТЕКЕКВ СТВАУНУ 7А4м15 ВАЗЕЗМО5УСМЗЕМН ВА5МІ Е5 ОО5МЕАРРТ 00 Важкий ОУАМН СІБТУгОВТМУМОКЕК ві вОМУУМ 7а7.м1 ВАВО5У5ТЗ5УЗЕМН УАВІОЕ5 ОНТМ/ЕІРЕТ 0000 Важкий 5УМУМН во МІУРОБО5ТКУОЕВЕК5 КИ ОВНАМЕ 16Е6.м4 ВА5КОІ5КУТА 55705 ООНМЕХРМТ 0000 Важкий ЗЕМАМ/М УІ8У5СТТ5УМРБІ К5 УВИМРАТА
Спорідненість гуманізованих варіантів відносно ТІК людини і цино визначають за допомогою
ОРЕ як до (Фігура 4Е). Вибрані клони також аналізують за допомогою ЗРК як Рабр для оцінки одновалентної спорідненості (Таблиця 7). В обох випадках, експерименти ЗРК здійснюють, як описано вище.
Таблиця 5
Дані Віасоге по зв'язуванню вибраних Гар-форматованих варіантів
Відношення
Зразок | Ка | ка | ко | Ка | ка | ко ./:(К
Ми15011.Рар 1,38Е--06 | 4,65Е-03 3,37Е-09|1,07Е--06 | 623-033 5,81Б-09. 1,72.
Ми15011.Рар 6,34Е-05 | 1,52Е-03 ІД,А1Е-09| 4,85Е-05 | 3,68Б-037,57Б-09Ї ЗБ СС
Ни15211 .мі.БГаб 6,38ЕО5|0,006986 П,09Е-08І5,05Е05| 0,0373 7,39Б-ОВЇ 000000111111с1сС
Ниї152411.м3.Рар 6,42Е-0О5|0,0046577,26Е-094,83Е-05| 0,0201 Л,9Б-О8Ї 00000111
Ниї152411.м5.Рар 456Е 05000063 000 пи1520411.м5.Рар 7,76Е--0О5 | 0,003643 4,70БЕ-09,1,41Е--06| 002184 МП,56Б-О8Ї 0034 ни і и а Я ПОЛЯ ПОЛЯ ПО
Ми7А4.Рар 1,65Е--06 | 3,13Е-04 П1,90Е-1011,14Е-06|845БЕ-04 1741-10 00/39
Ни?7А4.м5.Рар 2,2А4Е--06 | 1,53Е-03 Б,86Е-1011,18Е-06|6,41Б-03 0544-09 0000000111сСсС
Ни?7А4.м8.Рар 9,28Е--05 | 1,07Е-О3 М, 15Е-09|7,97Е-05|6,81Б-03 8Б55Б-09 0000011
Ни?7А4.м9.Рар 1,71Е-4-06|6,86Е-04 М,О1Е-1018,08Е-05| 3442-03 23-09 00000001
Ни?7А4.м12.Рар 3,32Е--06|8,44БЕ-04 2,55Е-1011,74Е-06|3,31Б-03 90-09 00101011 пи? А4.м15.Рар 9,10Е--05 | 3,17Е-04 ІЗ,48Е-10І3,78Е--05|0,001618 48-09 000111 ни і а а Я ПОЛЯ ПОЛЯ ПО
Ни?707.м1 Бар 1,44Е--05 | 0,006594 4,58Е-0О8І 3,84Е--04|0,007231 188-044 пи и и а Я ПОЛЯ ПОЛЯ ПО
Ми16Е6.Рар 6,07Е--04 | 1,90Е-04 ІЗ,13Е-09| 5,11Е--04 | 1,37Е-0О3 2,68Б-О8І 008,56 (
Ни16Еб.м4.Рар 1,31Е--05 | 1,69Е-04 П1,29Е-099,89Е-04|244Б-03247Б-08 191
Епітопи зв'язування для антитіл підтверджуються повторно в такий спосіб. Здійснюють
ЕГІ5А із блокуванням ТІ-ТІЕ на планшетах Махізогр, покритих 2 мкг/мл очищеного ТІК людини в
РВ5З, при 4 "С протягом ночі. Планшети промивають РВБЗ/0,05 95 Тмееп 20 і блокують з використанням блокуючого буфера ЗирегбіоскК у РВ5 (Тпегто Зсіепіййс, Нидзоп, МН). На планшети додають 50 мкл 12,5 мкМ голо-ТІК людини (К5О Зузіетв5, Міппеароїї5, ММ) протягом 40 хв. На планшети додають 50-мкл титри пи7А4.м15, пи150511.м5, антитіла, що конкурує з ТІК і пи707.м1 (починаючи з 10 мкг/мл, послідовні розведення 1:3), і інкубують протягом 20 хв.
Планшети промивають РВ5Б/0,05 95 Тмееп 20, і додають розведене 1:1000 НЕР-кози-анти Есу людини (даск5зоп ІттипоКезеагсі) на планшет і інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі. Планшети промивають РВБЗ/0,05 95 Тмееп 20 і детектують із використанням субстрату ТМВ (ВіоЕХ І абогафгіе5, Ом/іпд5 Мійв5).
Здійснюють аналіз ЕГІЗА зв'язування НЕЕ-ТІК на планшетах Махізогр, покритих 1 мкг/мл
НЕЕ у РВХ, при 4 "С протягом ночі. Планшети промивають РВЗ/0,05 95 Тмееп 20 і блокують з використанням блокуючого буфера Зирегбіоск у РВЗ (Тпегто Зсіепійіс, Нидзоп, МН). Титр ТТ людини (починаючи при 100 мкг/мл, послідовне розведення 1:3) додають на планшет і інкубують протягом 1 години. 1 мкг/мл пи150511.м5, пи7А4.м15 або пи77.м1 додають потім на планшет протягом 1 години. Планшети промивають РВБ/0,05 95 Тмееп 20, і додають на планшет розведене 1:1000 НЕР-кози-анти Есу людини (даскзоп ІттипокКезеагсі), і інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі. Планшети промивають РВЗ/0,05 95 Тмееп 20 і детектують з використанням субстрату ТМВ (ВіогХ Іарогаїогіех, Ом/іпд5 Мій). Здійснюють аналіз ЕГІ5ЗА із блокуванням НЕЕ-ТІК на планшетах Махізогр, покритих 1 мкг/мл НЕЕ у РВ5, при 4 "С протягом ночі. Планшети промивають РВБ/0,05 95 Тмееп 20 і блокують з використанням блокуючого буфера ЗирегбіосК у РВ5 (Тпепто Зсіепіййс, Ниазоп, МН). На планшеті МОМС М, титр пи7А4.м15, пи15011.м5, антитіла конкуруючого з ТІЇ, голо-ТІК людини і контрольний дО (400 мкг для всіх антитіл, 8000 мкг/мл для голотрансферину, послідовне розведення 1:3) поєднують з 2 мкг/мл біотинільованого ТІК людини і інкубують протягом 1 години. Суміш потім додають на планшет, покритий НЕЕ, протягом 1 години при кімнатній температурі. Планшети промивають РВ5Б/0,05 95 Тмееп 20, і розведене 1:1000 НЕеР-стрептавідин (ЗошїПпегпВіоїеси,
Віппіпдапат) додають на планшет і інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі.
Планшети промивають РВ5Б/0,05 95 Тмееп 20, і детектують біотинільований ТІК людини, зв'язаний на планшеті з використанням субстрату ТМВ (ВіоЕХ ГІ арогайогіє5, Ом/іпд5 МіЇЇ5).
На зв'язування цих гуманізованих варіантів з ТІК не робить впливу присутність 6,3 мкМ голо-
ТЕ, у той час як зв'язування антитіла, що конкурує з ТТ, що зв'язується із сайтом зв'язування Тї
Зо на ТІК, інгібується (Фігура 5). Крім того, гуманізовані 7А4.м15, 150511.м5 і 757.М1, як і раніше, можуть зв'язувати НЕЕ, захоплений ПиТтІК, показуючи, що на них не впливає зв'язування пиТІКк з іммобілізованим НЕЕ (Фігура бА). У спорідненому експерименті, 7А4.м15 і 150511.м5 не блокують зв'язування біотинільованого ТІК з іммобілізованим НЕЕ. На противагу цьому, ця взаємодія блокується антитілом, що конкурує з Ті і голо-ТІК (Фігура 6В). НЕЕ і т, як відомо, мають загальний епітоп, подібний з ТЕ (Веппеї еї а!., Маїиге (2000) 403, 46-53).
Іммобілізовані 150511м.5 і анти-ТЯК оцінюють на зв'язування з ЕСО біотинільованого ТІВ людини або з одновалентним фагом М13, що здійснює фаговий дисплей апікального домену
ТІВ людини. Анти-ТТВЄ!2 одержують з фагової бібліотеки синтетичних антитіл, для яких здійснюють пенінг відносно ЕСО ТІК людини, і воно зв'язується із сайтом на ТІК людини, що конкурує зі зв'язуванням трансферину. Антитіла наносять у вигляді покриття при 1 мкг/мл у РВ5 на планшети Махізогр. Зв'язаний біотинільований ЕСО ТІК людини або фаг апікального домену
ТІК детектують за допомогою НКР-стрептавідину (ЗЕ пеанй саге, ЕРМ 4401М) або НЕеЕР-анти-
М1З3 (СЕ Неайй саге, 27-9421-01), відповідно. Фігура 25 показує, що 150511м.5 зв'язується з апікальним доменом ТІК людини. Сайт зв'язування 1505511у.5 картується в апікальному домені, це сайт, видалений від сайтів зв'язування лігандів ТІВ.
Приклад 2: Одержання за допомогою генної інженерії спорідненості перехресно-реактивних антитіл анти-ТІК людини/цино
На додаток до гуманізованих варіантів, описаних вище, одержують додаткові, отримані за допомогою генної інженерії варіанти зі спорідненістю. У даному документі ілюструється одержання за допомогою генної інженерії спорідненості 150511.м5 і 7А4.м15. Варіанти зі спорідненістю генерують за допомогою здійснення індивідуальних заміщень аланіну в СОК-Ї З або СОВТ-НЗ з використанням стандартних методик. Ці варіанти проглядаються як Іде за допомогою ЕГІЗА ії ЗРК для ідентифікації положень, важливих для зв'язування ТІК людини і цино; одновалентна спорідненість вибраних варіантів як бар також визначається. Варіант зі скануванням Аїа до або Раб експресуються в клітинах 293 і зв'язуються з ТІК людини або цино, кількісно визначеним за допомогою ЕГІЗА на планшетах Махізогр, покритих 1,8 мкг мл антитіла кози анти-Рсу людини (Часкбзоп ІттипоКезеагсі) у РВ5, при 4 "С протягом ночі. Планшети промивають РВ5Б/0,05 95 Тмееп 20 і блокують з використанням блокуючого буфера ЗирегріоскК у
РВЗ5 (Тпепто зсіепійіс, Ниазоп, МН). Супернатанти, що містять експресований Ідс, послідовно 60 розводять 1:5 і додають на планшет протягом 1 години. Очищені пи150511.м5 або пи7А4.м15 використовують як страндарти (розведені 1:5, починаючи при 1 мкг/мл). Планшети промивають
РВБЗ/0,05 956 Тмееп 20, і додають на планшет розведене 1:1000 НКР-кози-анти каппа (Зошпегп
Віотесп), і інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі. Планшети промивають
РВБЗ/О,05 95 Тмееп 20 і детектують з використанням субстрату ТМВ (ВіоЕХ І арогайгіє5, Ом/пд5
МІЇІ5). Зв'язування також оцінюють за допомогою 5РК, як описано вище. Результати показані на
Фігурах 7А (варіанти 150511.м5) і 7В (варіанти 7А4.м15).
Додаткові варіанти 150511.м5 з індивідуальними аланіновими заміщеннями в положеннях у
СОВ-І1, СОВ-І2, СОВ-НІ ії СОБК-НО2 також генеруються, експресуються і спочатку проглядаються на зв'язування з ТІК людини і цино за допомогою аналізу ЕГІЗА (Таблиця 6).
Аналіз ЕГІЗА зв'язування Ни/Су здійснюють на планшетах Махізогр, покритих 2 мкг/мл очищеного ТІК людини або цино в РВ5 при 4 "С протягом ночі. Планшети промивають РВ5/0,05
Фо Тмееп 20 і блокують із використанням блокуючого буфера Зирегріоск у РВЗ (Тпегто
Зсіепійіс, Нидзоп, МН). Супернатанти культури клітин, що містять експресовані варіанти до з
АІїа-сканами, послідовно розводять 1:5 і додають у ямки протягом 1 години. Планшети промивають РВБЗ/0,0595 Тмееп 20, і додають на планшет розведене 1:1000 НЕКР-кози-анти Есу людини (даскзоп ІттипокКезеагсі), і інкубують протягом 1 години при кімнатній температурі.
Планшети промивають РВБ/0,0595 Тмееп 20 і детектують із використанням субстрату ТМВ (ВІОЕХ І арогаютгівев, Ом/пдз МІіЇЇ5).
Таблиця 6
Аналіз ЕГІЗА Аїа варіантів |ІЦ пи15011.м5
З5412222020 Се С (нг/мл) (нг/мл) 11111111 Бетті 17771118 17711108 2 нини су и ж п ПО ТК: ПОЛЯ 1111111 ДМА | 14672 11111 нини: жи шия: по По о 1111111 1Б2ЗА 77777777 77111125. 17771711115 ЮЩщ
НУвНнІ ОЇ 77771711 01ТЗ0А7777777171717171717117ї1111109 | 104 2 1111111 Ї5МА 77 77711 0111111711711111005 2щЩ 1111111 Д1МА111111111111171 11111411 040 11111111 ДМА 17113625 17775956 Ж южмЕК 1111111 |ММА 77777777 Їли 11111104 нн ЕЕ: ПО Тих ПОЛЯ ПО ЖЕ ЗО 11111111 ФЕБОА 777777 | 71409717 206 2 щЩ ( 11111111 ММА 7777777 |Ї77717106 17777102 2 щ нннн"н"ШІИИИ У По Ж: пох ПО з ЗО 1111111 ФЇРБгаА//// | 77777 8177117717711111539 0 нин ти пи ях До По ок ЗО 11111111 ЇВБвА77777777777 | 54055. 55 ни ЕТ: ОО: Толя ПО СУК ЗО
ПУнНИ ОО пмвА11101170010и011108 ни ІТ: ТТ ПО Ох ПО ЖЕ ЗНО 11111111 ДФЕЄВА 7 | 7717106 177702 2 щ " нннн6ИНИШСсс жи гсу лиш ших лиш 11111111 ФЕ6З8А777777777777/ |77717106 17777171 04 2 11111111 Д1КвА777777777777/ |777117106 17771710 2 Фщ 11111111 Ї56БА/// | 17107. 102 2 Ф "
Продовження таблиці 6 11111111 1ВМА 7 | 10417770 11111111 Ї5вБА7777777777771 7711106 71111711102 2 11111111 ДФоО27А77777777717|1771111087111111102 ннн""6"8ИЬЮИХЬИИСУ: им пи: поля Ол ох зи нини ши ших ши пил хз пн ЕТ По А: Я ПО ЯК ЗО 1111111 Ї5МА 7 Ї777117107 177703 2 Ф
ПУ пмгА1110117000140001 16 нн Ех г пох ПО ПОЛ Ж с УДО 11111111 МюБОА77777777771171 1111105 17771102 2 11111111 ТБА7777777111171 11111 03111111102 11111111 ЇМБЗА777777777777/ |Ї77717106 71777710 2 щЩ 11111111 ДА 17111061 04 2 11111111 ФОБвА777777777771717|Ї111105 1703 2 Ф
Потім вибрані варіанти очищуються, і їхню одновалентну спорідненість до ТІК людини або цино оцінюють за допомогою 5РЕК (Таблиця 7).
Таблиця 7
Одновалентний аналіз 5РК вибраних аланінових варіантів бар 150511.му5
Відно- ген ДЕ
Су/пи 11111111, ка | ка | ко |) ка | ка | ко
Приклад 3: Конструювання й аналіз іп міго біспецифічного антитіла анти-ТІК людини
Визначені варіанти згаданих вище антитіл переформатуються як біспецифічні антитіла з другим плечем, що специфічно зв'язується з ВАСЕ1. Антитіла анти-ТІК людини Ни150511.м5,
Ни15011.С92А, Ни150511.НС52А ії Ни150511.НС5ЗА використовуються для одержання за допомогою генної інженерії плеча для зв'язування ТІК біспецифічного антитіла з використанням методики конструювання біспецифічного антитіла "виступ у западину" (Сагег, Р. (2001) у.
Іттипої. Меїнодз 248, 7-15; Віддугау, у. В., Ргезіа, І. С, апа Сапег, Р. (1996) Ргоївіп Епод. 9, 617- 621; МегеНапі, А. М., 2пи, 7., Уцап, у. О., Содаага, А., Адатзв», С. МУ/., Ргезіа, І. С., апа Сапег, Р. (1998) Маї. Віоїесппої. 16, 677-681; Аїм'еї, 5., Ніддмау, 5. В., МУ/еїЇв, у. А., апа Сапег, Р. (1997) У.
МОЇ. Віої. 270, 26-35). На додаток до мутацій типу виступу і западини в Ес для анти-ТВ (западина) і анти-ВАСЕ1 (виступ), усі половинки антитіл містять мутації в Ес-області, що анулюють ефекторну функцію (М2970) і Ни150511.м5, і Ни150511.1С292А містять додаткову мутацію Ес, що анулює ефекторну функцію (0265А). Половинки антитіл типу виступ і западина очищуються окремо від Е.соїї і поєднуються при відношенні 1:1,1 анти-ТЯК для запобігання утворенню гомодимерів анти-ТІЕ. Зборка біспецифічного антитіла завершується за допомогою відновлювального відпалу протягом щонайменше трьох днів при кімнатній температурі в буфері, що містить відновлений глютатіон при відношенні 100х до антитіла і 200 мМ аргініну, РН 8,0. Після зборки біспецифічні антитіла очищують за допомогою хроматографії гідрофобних взаємодій. Зборка підтверджується за допомогою рідинної хроматографії - мас-спектрометрії і
ЗО5-РАСЕ. За допомогою ексклюзійної хроматографії і спектроскопії багатокутового лазерного розсіювання підтверджується, що очищені антитіла є гомогенними і монодисперсними.
Отримані в результаті біспецифічні антитіла називаються 15011.м5 (анти-ТІВ"), 150311.М/92А (15011.С92А або анти-ТТ82), Ни150511.М52А (анти-ТТЯА»2х) і Ни15011.Т53А (анти-ТІВ52Х).
Одновалентна спорідненість і кінетика відносно ТІК людини і цино визначаються для 115011.м5 і 115511.М/92А за допомогою 5РЕ, як вище (дивися Таблицю 9). Анти-ТІВ' і анти-ТІВ? мають спорідненість одновалентного зв'язування, подібну з анти-ТІВ2 і анти-ТІВР, відносно зв'язування
З ТІК миші (дивися Аймаї еї аї., Зсі. Тгапві. Мед. 3, 84га43 (2011); Ми еї аї., сі. Тгапві. Мед. 25
Мау 2011:Мо)ї. 3, Іввце 84, р. в4гада4).
Таблиця 8
Одновалентний 5РЕ аналіз 153511.м5 (ТІК) і 15511.ММ/92А (І.С92А, ТІК)
Нитта СупоттА Відношення
Ни15а11.м5 Баб 6,74Е--0514,74Е-0317,03Е-0914,51 Е0511,27Е-02 звавов 40
Біспецифічні
Ни15011 М92А 1,28Е--0513,7 7 Е-0212,95Е-0718,36Е--0415,20Е-02 вав
На додаток до цього, спорідненість зв'язування анти-ТІВ', анти-ТІТВг, біспецифічних антитіл
Ни15011.М52А їі Ни150511.Т53А вимірюють відносно ТІК людини і цино за допомогою 5РЕ, як описано раніше. Як показано в Таблиці 9, нижче, анти-ТТВ?2А і анти-ТІАЗА мають спорідненість зв'язування до ТІВ. людини і цино в межах між значеннями для ТІН11!"5611.у5 | ТІД21 С9гА,
Таблиця 9
Антитіла анти-ТІАВ цино/людини (НМ) ни ТІВ людини ТІВ цино
Приклад 4: Вплив моноспецифічних і біспецифічних антитіл, які містять ефектори і які не містять ефекторів, на лінію клітин еритролейкемії людини і на первинні мононуклеарні клітини кісткового мозку
Попередні дослідження на мишах визначили, що антитіла, що зв'язують ТїК мишачих з ефекторною функцією і/або зі здібностями зв'язування комплементу, селективно збіднюють ТІК- експресуючі ретикулоцити. Щоб переконатися, чи є збідніння, що спостерігається при дослідженнях на мишах, унікальним для системи мишачих, здійснюють додаткові експерименти з використанням анти-ТІК, що зв'язуються з ТІК людини.
Аналізи АЮОСС здійснюють з використанням мононуклеарних клітин периферичної крові (РВМСО) від здорових донорів людей як ефекторних клітин. Лінія клітин еритролейкемії людини (НЕС, АТСС) і первинні мононуклеарні клітини кісткового мозку людини (АЇїЇСеїЇ5, пс.) використовують як цільові клітини. Для зведення до мінімуму розкиду серед донорів, який
Зо потенційно міг би виникнути, через алотипічні розходження в залишку в 158 положенні в
ЕсукПША, донори крові обмежуються тими, які несуть генотип гетерозиготного КСсуУКША (ЕЛ/158) у першому наборі експериментів (Фігура вВА-В). Для другого набору експериментів (Фігура 9А-В), як цільові клітини використовують тілько клітини НЕГ,, з РВМС від здорових донорів людей, що несуть або генотип ЕЛ/158, або генотип ЕсуКША МЛ/158. Генотип У//158 також включається в цей аналіз, через відому асоціацію з підвищенням активності АЮОСС, опосередковуваної МК клітинами, а також здатності зв'язувати антитіла Ідс4 (ВоулЛе5 апа Умеїіпег, 2005; Вгийпп5 еї аї.
2008). Клітини зчитують, і життєздатність визначають за допомогою Мі-СЕЇ І 2(ВесКктап СоципМег;
Ешіепоп, СА) слідуючи інструкціям виробника.
РВМС ізолюють за допомогою центрифугування в градієнті густини з використанням пробірок для поділу крові Опі-Зер "м (Ассигаїе Спетісаї! 5 5сіепійіс Согр.; МУезіригу, МУ). Цільові клітини в 50 мкл середовища для аналізу (КРМІ-1640 з 1 95 В5А і 100 одиниць/мл пеніциліну і стрептоміцину) висівають у 9б-ямковий круглодонний планшет при 4х10"/ямка. На планшети, що містять цільові клітини, додають послідовні розведення досліджуваних і контрольних антитіл (50 мкл/ямка), з наступним інкубуванням при 37 "С при 5 956 СО» протягом 30 хвилин, щоб уможливити опсонізацію. Кінцеві концентрації антитіл знаходяться в межах від 0,0051 до 10000 нг/мл після 5-кратних послідовних розведень у цілому для 10 точок даних. Після інкубування 1,0х105 ефекторних клітин РВМС у 100 мкл середовища для аналізу додають у кожну ямку з одержанням відношення ефекторні клітини:цільові клітини 25:1, і планшети інкубують протягом додаткових 4 годин. По закінченні інкубування планшети центрифугують, і супернатанти досліджують на активність лактатдегідрогенази (ОН) з використанням Суїоїохісйу Оеїесіоп
КИ м (Коспе Арріїєа 5сіпесе; Іпаіапароїї5, В). Реакційну суміш СОН додають до супернатантів, і планшети інкубують при кімнатній температурі протягом 15 хвилин при постійному струшуванні.
Реакцію завершують за допомогою 1 М НзРоОх, і вимірюють коефіцієнт поглинання при 490 нм (фон, вимірюваний при 650 нМ, віднімають для кожної ямки) з використанням зчитувального пристрою для мікропланшетів ЗресігаМах Ріиз. Коефіцієнт поглинання ямок, що містять тільки цільові клітини, служить як контроль для фону (низький контроль), при цьому ямки, що містять цільові клітини, лізовані за допомогою Т/тйоп-Х100, забезпечують максимальний доступний сигнал (високий контроль). Незалежну від антитіл клітинну цитотоксичність (АІСС) вимірюють у ямках, що містять цільові і ефекторні клітини без додавання антитіла. Ступінь питомої АОСС обчислюють у такий спосіб: бат і зразок) 7 Аз САКСО хх АрСС о 100 Ж сять еттх жест нет тече тк те ти ня зе няття тент тет
Аяяз ї високий контроль 7 Або ї низький контроль !
Значення АЮСС для розведень зразка зображають у вигляді графіка залежності від
Зо концентрації антитіла, і криві доза-реакція підганяють за допомогою чотирипараметричної моделі з використанням бойМах Рго.
У першому наборі експериментів, активність АЮСС різних конструктів ТІК анти-людини оцінюють з використанням або лінії клітин еритролейкемії людини (клітини НЕГ), або первинних мононуклеарних клітин кісткового мозку людини як цільових клітин. Двовалентне антитіло анти-
ТІК 1 людини 150211 компетентне відносно ефекторної функції Ідс1 і біспецифічна форма цього антитіла з плечем анти-ВАСЕ1 у форматі Ід01 людини, що містить мутації 0265А і М2970 для анулювання ефекторної функції (дивися Приклад 3), досліджуються при різних концентраціях при аналізі АОСС, з використанням Ід! анти-900 М/Т як негативного контролю і антитіла мишачих НГ А людини (клас І) як позитивного контролю. Результати показані на Фігурах 8А і 88.
Або для клітин НЕЇ як мішеней (Фіг. 8А), або для мононуклеарних клітин кісткового мозку як мішеней (Фіг. 88), моноспецифічне ефектор-позитивне антитіло анти-ТЖК людини 15011 демонструє значну активність АОСС. Ця активність є подібною з активністю антитіл анти-НІ А людини позитивного контролю відносно клітин НЕЇ і знаходиться на стійкому, але більш низькому рівні відносно позитивного контролю на мононуклеарних клітинах кісткового мозку.
Трохи більш низький рівень, що спостерігається в експерименті з мононуклеарними клітинами кісткового мозку, імовірно, пов'язаний з тим фактом, що тільки частина гетерогенної суміші мієлоїдної і еритроїдної ліній клітин РВМС, використовуваних в експерименті, експресує високі рівні ТІК, у той час як клітини НЕЇ мають консистентно високе експресування ТІК по популяції клональних клітин. Як різкий контраст, біспецифічне антитіло анти-ТЯК людини/ВАСЕТ1, що не містить ефекторів, не демонструє ніякої активності АЮОСС ні в клітинах НЕЇ, ні в мононуклеарних клітинах кісткового мозку, подібно негативному контролю.
В другому наборі експериментів, оцінюють вплив переключення ізотипу антитіла в цій системі аналізу. Процедура аналіз АОСС ідентичний тій, яка описана вище, з тим виключенням, що всі цільові клітини являють собою клітини НЕЇ, а ефекторні клітини являють собою РВМС від здорових донорів людей, що несуть або гетерозиготний генотип ЕсуВШа-Мм/Р158, або гомозиготний генотип ЕсувВІШа-М//158. Усі досліджувані антитіла анти-ТЖК людини є біспецифічними, з анти-д0О0 на трьох різних основних ланцюгах Ід: Ї3051 людини дикого типу,
Іі людини з мутацією М2970 і Ідс4 людини. Досліджують також антитіло анти-Абреїа з основним ланцюгом Ід54 людини, і антитіла миші анти-НГА людини (клас І) служать як позитивний контроль. Результати показані на Фігурах 9А і 9В. Як очікувалося на основі відомої асоціації між активуванням ефекторної клітини і генотипом МЛ/158 (ВомлЛе5 апа Ууеїпег 2005), активність АОСС більш стійко демонструється донором РВМС МЛ/158 (виявляється вплив «45 до цільових клітин) порівняно з донорами ЕА/158 (виявляється вплив «25 95 цільових клітин) (порівняйте Фіг. 9А і Фіг. 98). Антитіла анти-ТЯК/9О з ІдДО1 дикого типу індукують стійку АОСС у клітинах НЕЇ, у той час як анти-ТЯК/9О з Ідс1, що не містить ефекторів, не показують ніякої активності АОСС у клітинах НЕЇ, відтворюючи результати з першого набору експериментів.
Відзначимо, що при концентраціях 100 нг/мл або вище, антитіла анти-ТТК/д94О0 ізотипу Ід4 показують помірну активність АОСС. Ця активність не спостерігається в результатах для ІдС4 анти-Абеїа, показуючи, що для АЮСС активності потрібно зв'язування ТІВ. Ці дані корелюють з попередніми повідомленнями, що 19054 має мінімальну, але вимірювану ефекторну функцію (Ааоїйзоп еї аї., У. Мешговсі. З2(28):9677-9689 (2012); мап дег 7еє єї а!. Сіїп Ехр. Іттипої. 64:415- 422 (1986)); Тао єї а!., 9. ЕЄхр. Мед. 173:1025-1028 (1991)).
Приклад 5: Оцінка іп мімо біспецифічних антитіл анти-ТІЕ людини/ВАСЕ1
А. Фармакокінетичні, фармакодинамічні дослідження і дослідження безпеки
Для оцінки концентрацій лікарських засобів, ефектів фармакодинаміки і безпеки біспецифічних антитіл анти-ТїЯЖ людини іп мімо, мавпи циномолгус (Масаса Тавзсісціагів) дозуються біспецифічними антитілами з використанням клону 15011 антитіла анти-ТІВ, спареного з таким же плечем анти-ВАСЕТ1, як використовується в попередніх прикладах (анти-
ТІА"/ВАСЕТ), або клоном 1505111 С92А, спареним з таким же плечем анти-ВАСЕТ1, як використовується в попередніх прикладах (анти-ТТ82/ВАСЕ1), або Ни15011.М52А (анти-
ТІА2А/ВАСЕТ) і Ни15011. 7зА(анти-ТТАР2/ВАСЕТ). Ці біспецифічні антитіла мають формат ІдС1 людини з мутаціями М29765 або 0265А і М2970, що анулюють ефекторну функцію, як описано раніше. Як контроль використовують молекулу анти-дО на ІдсС1 людини. Це дослідження здійснюють на приматах, відмінних від людини, оскільки крос-реактивність цих антитіл анти- ТА обмежується приматами, відмінними від людини, і людьми. На додаток до цього, дослідження показали, що механізми перенесення лікарських засобів між відділами спинномозкової рідини
Зо (СЕ) і плазми можуть бути подібними між людьми і приматами (РоріаскК еї аї., 1977). Антитіла вводяться за допомогою однократної внутрішньовенної (ІМ) ін'єкції болюсу в сафенну вену в дозі 30 мг/кг здоровим мавпам циномолгус зі стаціонарно встановленими катетерами в мозочковомозковій цистерні. У різні моменти часу до 60 днів після дозування відбирають зразки плазми, сироватки і (С5Е). Аналіз зразків включає гематологію (цільної крові), клінічну хімію (сироватки), концентрацію антитіла (сироватки і С5Е) і фармакодинамічну реакцію на антитіло (плазма і С5Е). Дивися Фігуру 10 відносно докладної схеми відбору зразків.
Концентрації дозованих антитіл у сироватці і С5Е мавп циномолгус вимірюють за допомогою аналізу ЕГІБА з використанням покриття з антитіл вівці анти-ідб людини, абсорбованого мавпою, з наступним додаванням зразків сироватки, починаючи від розведення 1:100 і закінчуючи за допомогою додавання антитіла кози анти-І(дО людини, кон'югованого з пероксидазою хрону, абсорбованого мавпою, для детектування. Аналіз має стандартний діапазон кривої 0,78-50 нг/мл і межу детектування 0,08 мкг/мл. Результати нижче цієї межі детектування повідомляються як не реєстровані (ГТК).
Фігури 11А-В показують результати фармакокінетичного аналізу для антитіл анти-
ТІВ'/ВАСЕЇ ї анти-ТТА2/ВАСЕ1. Фармакокінетичний профіль для антитіла анти-дО є таким, як очікується для типового антитіла (91 людини у мавпах циномолгус із середнім виведенням 3,98 мл/день/кг. Обидва антитіла анти-ТІК/ВАСЕТ виводяться швидше ніж анти-д0О, імовірно, завдяки периферичному виведенню, опосередковуваному мішенню. Анти-ПА'/ВАСЕЇ має більш швидке виведення, відповідно до того, що воно має найвищу спорідненість зв'язування з
ТІВ, у той час як анти-ТІВ/ВАСЕ1 показує поліпшений фармакокінетичний профіль (тобто більш тривале експонування в сироватці) порівняно з анти-ТТВ'/ВАСЕ1, імовірно, завдяки його зниженій спорідненості до ТІК. Виведення для анти-ТА'/ВАСЕЇ1 і анти-ТІВ"/ВАСЕ1 становить 18,9 мл/день/кг і 8,14 мл/день/кг, відповідно. Всі антитіла детектуються в С5Е приблизно при одній тисячній від концентрації в сироватці. Однак є високий розкид і, у цілому, детектованих розходжень у концентрації антитіл у С5Е між молекулами немає.
Таблиця 10
Середні (-503) оцінки параметра РК для всіх досліджуваних антитіл після однократного внутрішньовенного введення дози болюсу при 30 мг/кг мавпам циномолгус (п-:5) нтитіло х х (день" мкг/мл) | (день" мкг/мл) (мкг/мл) (мл/день/кг) (мл/кг)
ТІА"/ВАСЕ1 Щ Щ щ пиши мин зО-стандартне відхилення; ІМевнутрішньовенно; АОСа-площа під кривою концентрація- час від часу 0 до часу останньої вимірюваної концентрації; АШОрт-площа під кривою концентрація-час, екстрапольованою до безкінечності; Стах- спостережувана максимальна концентрація в сироватці; Сі виведення; Мее-об'єм розподілу в стаціонарному стані; тіп-мінімум, тах-максимум.
Фігура 19 показує результати фармакокінетичного аналізу для антитіл анти-ТТА'"/ВАСЕЇ1, анти-ТТВ2А/ВАСЕЇТ ії анти-ТТАР/ВАСЕТ. Всі антитіла анти-ТІБ/ВАСЕ1 виводяться швидше ніж анти-д90, імовірно, завдяки периферичному виведенню, опосередковуваному мішенню. Анти-
ТІА"/ВАСЕЇ показує найшвидше виведення, що відповідає тому, що воно має найвищу спорідненість зв'язування з ТІК, у той час як анти-ТТЕР2У/ВАСЕЇ і анти-ТТАР2/ВАСЕЇ1 показують поліпшений фармакокінетичний профіль (тобто більш тривале експонування в сироватці) порівняно з анти-ТТВ'/ВАСЕ1, імовірно, завдяки зниженій спорідненості до ТІ в анти-
ТІВР2А/ВАСЕТ їі анти-ТТАРЗА/ВАСЕ1.
Щоб побачити фармакодинамічний вплив у відповідь на дозування анти- ПК/ВАСЕЇ1, автори вимірювали рівні Авреїа!-«о і 5АРРа і ВАРРРВ у плазмі і СЗЕ мавп циномолгус. Абеїа:-«о вимірюють за допомогою ЕГІЗА з використанням специфічного поліклонального покриття з антитіл анти-
Ареїа!-«о, з наступним додаванням зразків і закінчують додаванням моноклонального антитіла миші анти-Абреїа!:-4о людини, кон'югованого з пероксидазою хрону, для детектування. Аналіз має межу детектування 60 пг/мл для плазми і 140 пг/мл для С5Р. Результати нижче цієї концентрації вважаються не детектованими (ТК). Концентрації в СЕ 5АРРа і 5АРРД визначають із використанням мультиспотового аналізу ЗАРРДВ/5АРРа (Мезозсаїе Різсомегу (Сайпетгериго, МО)).
С5Е відтаюють на льоду, потім розводять 1:10 у 1 95 ВЗА у ТВ5-Т (10 мМ Тті5 буфера, рН 8,0, 150 мМ Масі, 0,1 95 Тмееп-20). Аналіз здійснюють відповідно до протоколу виробника. Аналіз має нижню межу значень кількісного визначення 0,05 нг/мл для 5АРРа і 0,03 нг/мл для 5АРРРД.
Фігури 12А-Е наводять зведення фармакодинамічної поведінки антитіл. На периферії, рівні
Ареїа:-ло у плазмі залишаються незмінними після введення анти-д0О0, але транзиторно зменшуються після введення анти-ТБ/ВАСЕЇ1. Обидва варіанти знижують рівні Абеїа:-ло у плазмі, при максимальному інгібуванні 50 95, що досягається через 1 день після дозування.
Рівні Ареїа:ї-ло у плазмі поступово відновлюються, при цьому тварини, що одержують анти-
ТІВ'/ВАСЕЇ, повертаються до фонових рівнів АбБеїа:ло приблизно через 14 днів після дозування. Рівні Абе(аїло повертаються до фонових рівнів у межах між 21 і 30 днями після
Зо дозування у тварин, яких лікують анти-ТТВ2/ВАСЕ1. Обидва антитіла анти-ТІК/ВАСЕ1 знижують рівні Ареїаї-ло у С5Е, при цьому змін не спостерігається у тварин, яким дозують анти-40.
Введення анти-ТА'/ВАСЕЇ дає в результаті більш значне зменшення рівнів Ареїаїло у С5ЗЕ (середнє максимальне інгібування 50 95 від фонового), ніж для анти-ТІВ2/ВАСЕ1 (середнє максимальне інгібування 20 95 від фонового). Продукування 5АРРВДВ інгібується у тварин, лікованих анти-ТР/ВАСЕЇ, але не у тварин, що одержували анти-40. Подібно результатам для
АВ40, анти-ТТА'"/ВАСЕЇ1 має більш сильний інгібіторний вплив на продукування 5АРРВ, ніж анти-
ТІВУ/ВАСЕЇ1, продукування 5АРРа стимулюється під час інгібування ВАСЕ1 як анти-ТТА'"/ВАСЕЇ1, так і анти-ТТВ"/ВАСЕЇ, і реакція має зворотну кореляцію з рівнем інгібування, що спостерігається для 5АРРВДВ ії Абреїаїло. 5АРРа і 5АРРВ являють собою первинні продукти процесування білка-попередника амілоїду (АРР), і їхні рівні сильно скорельовані. Відношення 5АРРВ/5АРРа нормує результати на потенційні зміни у фоновому експресуванні АРР або потенційні переданалітичні розходження при зборі С5Е і маніпуляціях з нею в ході досліджень.
Відношення 5АРРДВ/5АРРа у С5Е з анти-ТТА"/ВАСЕ1 демонструє більш стійкий ефект РО, ніж анти-ТІВ2/ВАСЕ1. Таким чином, ці результати підтримують залученість мішені (тобто ВАСЕТ) для антитіл анти-ТТВ/ВАСЕЇ1.
Реакція РО для антитіл анти-ТТВР2/ВАСЕЇ і анти-ТТАА/ВАСЕЇ1 також корелює з тривалістю експонування антитіла і зниженням спорідненості плеча до ТІК показує збільшення зменшення
АВ40 (дані не показані). Ці дані також підтримують залученість мішені в цих біспецифічних антитілах.
У цілому, ці результати говорять, що біспецифічне антитіло анти-ТК/ВАСЕЇ1 «зі спорідненістю до ТІК людини в межах між спорідненістю анти-ТТА'/ВАСЕЇ1 і анти-ТТВ2/ВАСЕЇ1, імовірно, мало би бажаний фармакокінетичний/фармакодинамічний баланс.
У даному дослідженні не спостерігається ніяких сигналів відносно безпеки. Немає ніяких доведених впливів на будь-які параметри гематології або клінічної хімії для мавп, що одержують 30 мг/кг будь-якого введеного біспецифічного антитіла, до 60 днів після дозування. Важливо, що рівні ретикулоцитів залишаються незмінними при лікуванні або анти-ТТВ'/ВАСЕЇ1, або анти-
ТІВ?/ВАСЕЇ1 (Фігура 13), як і очікувалося, оскільки ці антитіла мають ослаблену ефекторну функцію, і середній рівень циркулюючих ранніх ретикулоцитів з високими рівнями ТІК у нормальних приматів є дуже низьким (дивися Приклад 4).
Приклад 6: Оцінка біспецифічних антитіл анти- ТРЕ/ВАСЕ1 людини іп мімо
Для дослідження співвідношення між фармакодинамікою антитіла в С5Е і фармакокінетикою в головному мозку, мавпам циномолгус (Масаса їазсісціагіє) дозують біспецифічні антитіла анти-ТІВ'/ВАСЕЇ1 або анти-ТТА8г/ВАСЕЇ1, як у попередньому прикладі. Ці біспецифічні антитіла мають формат ІдДс1 людини з мутаціями 0265А і М2970, що анулюють ефекторну функцію. Як контроль використовують молекулу анти-дО на Ідс! людини. Для порівняння, автори також дозують двовалентне антитіло анти-ВАСЕЇ, що являє собою такий же клон, як використовується для біспецифічних антитіл. Антитіла вводяться за допомогою однократної внутрішньовенної (ІМ) ін'єкції болюсу в сафенну вену в дозі 30 мг/кг здоровим мавпам
Зо циномолгус зі стаціонарно встановленими катетерами в мозочковомозковій цистерні. Фонові зразки С5Е збирають за 24 і 48 годин перед дозуванням, і інший зразок С5Е збирають через 24 години після дозування (як показано схематично на фігурі 14). Після збору С5Е через 24 години після дозування здійснюють вливання сольового розчину твариним, і головний мозок збирають для аналізу концентрації антитіла. Різні області головного мозку гомогенізують у 1 95 МР-40 (Саї!-
Віоспет) у РВ5, що містить таблетки повного міні-коктейлю інгібіторів протеаз, що не містить
ЕОТА (Коспе Оіадповііс5). Гомогенізовані зразки головного мозку обертають при 4 "С протягом 1 години перед центрифугуванням при 14000 об./хв. протягом 20 хвилин. Супернатант ізолюють для вимірювання рівнів антитіла в головному мозку з використанням способу ЕГІ5А, описаного в попередньому прикладі. Кров також збирають для підтвердження периферичного експонування і реакцій фармакодинаміки, що є подібними зі спостереженнями авторів у
Прикладі 5.
Фармакодинамічні впливи анти-ТТА'/ВАСЕЇ і анти-ТТВ"/ВАСЕЇТ, як оцінюється, у С5Е також є подібними з ефектами, що спостерігаються в попередньому прикладі. Фігура 15 демонструє, що відношення 5АРРДВ/5АРРа у С5Е стійко зменшується після дозування анти-ТВ'/ВАСЕ1. Анти-
ТЕІВ?/ВАСЕЇ не показує явного зменшення через 24 години після дозування при цих дослідженнях. Анти-ВАСЕ1 також не показує впливу. Аналіз концентрацій антитіла в головному мозку показує, що як контрольний Ідс, так і антитіло анти-ВАСЕ1 мають обмежене споживання в головному мозку при рівнях, що ледве перевищують межу детектування в аналізі авторів (у середньому «670 пМ). Анти-ТТВ?/ВАСЕЇ має в «3 рази поліпшене споживання в головному мозку порівняно з контрольним Ідс (у середньому 2 НМ), і анти-ТТА'/ВАСЕ1 має найкраще споживання в головному мозку, у «15 разів більше, ніж контрольний дос (у середньому «10 нМ).
Концентрації антитіла в головному мозку для різних антитіл корелюють з реакцією фармакодинаміки, що спостерігається в СЕ у дослідженнях авторів, при цьому анти-
ТІВ'/ВАСЕЇ має найкраще споживання в головному мозку і найбільш стійкий вплив фармакодинаміки, і анти-ТТА?/ВАСЕЇ має менше споживання в головному мозку і більш помірний вплив.
Ці результати розширюють попередні дані авторів, демонструючи, що біспецифічні антитіла, що зв'язують ТІК, поліпшують споживання в головному мозку приматів, відмінних від людини. У приматів, як і в мишей, імовірно, є оптимальна спорідненість до ТІК, що найкраще балансує бо споживання в головному мозку і виведення, опосередковуване ТІК. У прикладі авторів, анти-
ТА '"/ВАСЕТ з більш високою спорідненістю демонструє хороше споживання в головному мозку, і на нього впливає периферичне виведення, опосередковуване мішенню. ТІВ2/ВАСЕЇ1 зі зменшеною спорідненістю має поліпшені властивості при виведенні, але, напевно, має настільки низьке зв'язування з ТІК, що не може ефективно переноситися за допомогою ТІК (в основному таким же шляхом, коли антитіло анти-ТЇВ ТІВ, що має низьку спорідненість, в патенті США 5 2012/0171120 переходить через деякий поріг спорідненості, за яким спорідненість є занадто низькою, щоб уможливити достатню взаємодію між антитілом і ТІК так, що антитіло залишалося б асоційованим з ТІК, коли ТІ починає процес транслокації). За результатами цього експерименту біспецифічне антитіло анти- ТЕ/ВАСЕ1 людини/цино, що має спорідненість до ТІЖ у межах між ТІА'ї ТІВ, відповідно до передбачень, повинне мати поліпшені властивості споживання і виведення порівняно або з анти-ТТА'/ВАСЕЇ, або з анти-
ТІВ2/ВАСЕТ у цій системі.
Приклад 7: Створення додаткових мутацій, які не містять ефекторів, у контексті біспецифічного антитіла рецептора трансферину
Інші мутації в Ес-області, які анулюють ефекторну функцію, на додаток до М2970 і 026А, досліджуються на їхню здатність зменшувати або запобігати збідніння ТІБ-експресуючих ретикулоцитів. Конкретно, Ес-мутації І 234А, І 235А і РЗ29О ("| АГАРО"), що описані в публікації заявки на патент США Мо 2012/021531, що включається в даний документ як посилання, вводяться в антитіло анти-ТВСР/ВАСЕЇ1 (яке описано в публікації Міжнародної заявки на патент
Мо 2013/177062, і яка включається в даний документ як посилання у всій своїй повноті).
Фармакокінетичний аналіз і кількість ретикулоцитів після однократного введення антитіла мишам здійснюють у такий спосіб. Самки мишей С578В/б дикого типу у віці 6-8 тижнів використовуються для всіх досліджень. Догляд за тваринами здійснюється відповідно до офіційних інструкцій. Мишам дозують внутрішньовенно однократну дозу 50 мг/кг або антитіла анти-дО (Ідсб2а мишачих) з мутаціями ГАГАРОС, антитіла анти-ТВО/ВАСЕ1 (химера щура/мишачих) з мутаціями І АГАРО. Загальний об'єм ін'єкції не перевищує 250 мкл і антитіла розводять у О-РВ5, при необхідності (Іпмігодеп). Через 24 години цільну кров збирають перед вливанням у пробірки мікроконтейнери з ЕОТА (ВО Оіадпозвіїс5), дають можливість для осідання протягом 30 хвилин при кімнатній температурі, і центрифугують при 5000х д протягом 10
Зо хвилин. Верхній шар плазми переносять у нові пробірки для вимірювань антитіла.
Загальні концентрації антитіла в плазмі мишей вимірюють із використанням для ЕГІЗА антитіла анти-ідсга миші (алотип а)/антитіла анти-Ідсг2га миші (алотип а). 384-ямкові імунопланшети Махізогр МОМ (Меріипе, МУ) покривають антитілом миші анти-Іде2а, алотип А, антитілом, специфічним до алотипу А (ВО/РПагтпідеп Зап дозе, СА), протягом ночі при 4 "С.
Планшети блокуються за допомогою РВ5, 0,5 956 ВБА протягом 1 години при 25 "С. Кожне антитіло (анти-дО0 і біспецифічні варіанти анти-ТТР/ВАСЕ1) використовують як стандарт для кількісного визначення концентрації антитіла. Планшети промивають РВ5, 0,05 906 Тмееп-20 з використанням пристрою для промивання для мікропланшетів (Віо-Тек Іпвігитепів, Іпс.,
Уміпоозкі, МТ), і стандарти і зразки, розведені в РВ5, що містить 0,5 95 ВБА, 0,35 М Масі, 0,25 90
СНАРБ, 5 мМ ЕОТА, 0,2 95 Вода, 0,05 95 Тмееп-20 їі 15 м. ч. РгосіїпФ (бідта-Аїагіс!), додають протягом двох годин при 25 "С. Зв'язане антитіло детектують за допомогою біотин- кон'югованого антитіла миші анти-Ідое2а, алотип А, антитіла специфічного до алотипу А (ВО/Рпагтідеп Зап добзе, СА). Зв'язане антитіло, кон'юЮговане з біотином, детектують за допомогою стрептавідину, кон'юЮюгованого з пероксидазою хрону (ЗЕ НеакПпсаге І йе Зсіепсев,
Рінббигой, РА). Зразки виявляють з використанням 3,3',5,5'-тетраметилбензидину (ТМВ) (КРІ,
Іпс., сайпегериго, МО), і коефіцієнт поглинання вимірюють на 450 нМ за допомогою пристрою для зчитування МийізКап Азсепі (Тпепто зЗсіепіййс, Ниазоп, МН). Концентрації визначають зі стандартної кривої з використанням програми чотирипараметричної нелінійної регресії. Аналіз має нижню межу значення кількісного визначення (ГГ ОС) 78,13 нг/мл у плазмі. Статистичний аналіз розходжень між експериментальними групами здійснюють із використанням двохвостового непарного і-тесту.
При введенні антитіл анти-ТТАР/ВАСЕЇ, що містять мутації Ес ГАГАРОС, миші не демонструють клінічних симптомів, як спостерігалося раніше з використанням антитіл з повною ефекторною функцією. Дивися Соисі еї аї., зсі. Тгап5. Мей. 5:183Зга57 (2013). Фігура 20 показує результати фармакокінетичного аналізу.
На додаток до цього, кількість незрілих ретикулоцитів і ретикулоцитів у цілому визначають із використанням бБузтех ХТ2О00їМ (бЗузтех, Коре, дарап) відповідно до інструкцій виробників.
Через 24 години після дозування не спостерігається розходжень у частці незрілих ретикулоцитів або в загальній кількості ретикулоцитів порівняно з будь-яким досліджуваним антитілом, як бо видно на Фігурі 21. Ці результати говорять про те, що мутація Г(АГАРО не тільки анулює ефекторну функцію антитіла, але також зменшує зв'язування комплементу й опосередковуване комплементом виведення ретикулоцитів, видно навіть для каркаса антитіла, що не містить ефектора (Соисі єї аІ. 2013). Це відповідає іншому повідомленню про те, що включення мутації
ГАГА у ЇдД01 людини може обмежувати зв'язування комплементу (Неззеї! єї аїЇ. Майге 449:101- 104 (2007)).
Приклад 8 - Одержання біспецифічних варіантів Ес пен
Для збільшення часу напівжиття біспецифічних антитіл, і тим самим, потенційного збільшення концентрації антитіла в головному мозку, одержують біспецифічні варіанти, що містять мутації в постійному домені до, а конкретно - у домені, що зв'язується з Ес-рецептором немовлят (РсКп) (мутації ЕсКписн), Домен зв'язування ЕсКп бере участь у перенесенні антитіл від матері до плоду. Дивися еїогу еї аїЇ., У. Ехр. Мей., 180:2377 2381, 1994. Заміщення амінокислот у домені зв'язування ЕсКп збільшує спорідненість постійного домену до ЕсКп, збільшуючи тим самим час напівжиття антитіла.
Мутації домену зв'язування БсКп М252У, 52541 і Т256Е (УТЕ) як описано, збільшують зв'язування ЕсКп і, таким чином, збільшують час напівжиття антитіл. Дивися опубліковану заявку на патент США Мо 2003/0190311 і раІгАсдцпа еї аї., у. Віої. Спет. 281:23514-23524 (2006).
На додаток до цього, мутації домену зв'язування ЕсКп М434А і У4361 (АЇ), як описано, також збільшують зв'язування ЕсКп. Дивися Уеипд еї аї.,.. Іттипої. 182:7663-7671 (2009). Мутації
МТЕ (М252у/52541/1256Е) і А! (М434/у436І) включені в біспецифічні антитіла, як анти-
ТІВР2А/ВАСЕТ, так і анти-ТТВ2/ВАСЕЇ, що містять або М/П ІдДС1 людини, або не містять ефекторів мутації ГАГАРС або М2970. На додаток до цього, мутації ЕсКпНІеН здійснюють в антитілі пІДС анти-д90, як контролі. Мутації конструюють з використанням мутагенезу по Кункелю, антитіла експресуються транзиторно в клітинах СНО, і білки очищуються з використанням хроматографії на білку А з наступною ексклюзійною хроматографією (ЗЕС).
Зв'язування варіантів антитіл ЕсвпНіенН з РсКп вимірюється з використанням ВіАсоге. Білки
ЕсКп людини і мавпи циномолгус експресуються в СНО і очищуються з використанням афінної хроматографії на до. Дані одержують на інструменті ВІАсоге Т200. Сенсорний чип серії 5 СМ5 (СЕ Неапйсаге, Са. ВК100530) активують за допомогою реагентів ЕОС і МН5 відповідно до інструкцій постачальника, і антитіло анти-Рар (Нитап Раб саріцге Кії, СЕ Неайй саге Віо-зсієпсе.
Зо АВ 5Е-7 184, Оррзаїа, Зугедеп) зв'язують з одержанням приблизно 10000 одиниць відгуку (КУ), з наступним блокуванням груп, які не прореагували, за допомогою 1 метаноламіну. Для вимірювань спорідненості спочатку здійснюють інжекцію антитіл при швидкості потоку 10 мкл/хв., для захоплення приблизно 1000 РКИШ на З різних проточних комірках (ЕС), за винятком
ЕС1 (для порівняння), а потім інжектують 2-кратні послідовні розведення ЕсКп людини (або
ЕсКп цино) у буфері рНб (0,1М фосфат натрію), від низьких концентрацій (1 нМ) до високих (25
МКМ) (швидкість потоку: 30 мкл/хв.), одне за іншим, у тому самому циклі без регенерації між ін'єкціями. Реєструють сенсограми і здійснюють віднімання для порівняння і буфера перед оцінкою з використанням ВіАсоге Т200 ЕЕмаїцчайоп Зоймаге (мегбіоп 2,0). Спорідненість визначають за допомогою аналізу рівня зв'язування в стаціонарному стані на підставі моделі зв'язування 1:1. Спорідненість зв'язування для варіантів ГАГАРС, М2970, ІГАГАРО.МТЕ і
ІГАГАРО.АЇ антитіла анти-ТТН»2А/ВАСЕЇ показані в Таблиці 11, нижче. Дані показують, що варіанти ЕсЕпНіенН збільшують спорідненість при ендосомальних умовах (рН б) до ЕсРп, як людини, так і цино.
Таблиця 11 функція людини сення ж ро 33 МеВ (МКМ) рнб (мкм)
Анти-ТІВ.з2А/ВАСЕТ ІДС! 7 МТ МТ Її Її!
Анти-ТІВ.52А/ВАСЕЇ пт АГАР АГАР (МТ | 08 | 12
Анти-ТІВ.52А/ВАСЕЇ ПідСІ.М2970.УТЕ /М2г976 |МЕ | /
Анти-ТІВ.52А/ВАСЕТ ПідСІ.М2970.А! 0 0Мм2г970 0 |МаЗаАЛЯЗВІ | /-/-:
Анти-ТІВ.52А/ВАСЕЇ ПІДГАГАРО.А! ГАГАРО |МАЗАА/Л/ЯЗ6І | 06 | 04
Анти-ТІВ.52А/ВАСЕЇ ПідСІ.М2976.А 0 0Мм2г97а 0 |МЗдА//// | 7 |! нн'нВІЧнІІЛЛТОВВВВВВВВВВВВВВВВ ВВ НЯ І ПО
Продовження таблиці 11
Анти- ТТВ2/ВАСЕТ.підас1т М2970 М2г970
Анти- ТТВ2/ВАСЕ1.ПІдДСІ1 ГАГАРО ІАГАРС
Анти- ТІВ2/ВАР. ЕТ ЛІДСІ ЛГ АГ АРОСУТЕ І АГ АРО нини шини шииии ший
Анти-да.підси Мт (МТ 7/1 07 | 09
Анти-да.підС1. ТЕ Мт МЕ Її
Анти-да.пІдат.АЇ МАЗАА/У4З6І
Анти-да.підс1.А МАЗ4А
Вибрані варіанти ЄсЕпиенН будуть досліджуватися на мавпах циномолгус для визначення того, чи може підвищення спорідненості до ЕсСКп поліпшити фармакокінетичні властивості і/або збільшити експонування для головного мозку антитіла анти- ТТВ/ВАСЕТ1.
Для оцінки безпеки мутацій, що не мають ефекторів, і мутацій ЕсЕпненН визначені біспецифічні антитіла вводяться мишам, нокаутованим рецептором трансферину людинии, що експресують рецептору трансферину людини. Миші, нокаутовані питТїК, генеруються в такий спосіб. Конструкт для націлювання СОМА ТІ людини на локус С57ВІ/6 Тітс у клітинах ЕЗ одержують з використанням сполучення методик рекомбінування (М/аптіпод еї а. МоІесшаг апа
Сеїїшаг Віоіоду мої. 26 (18) рр. 6913-22 2006; І іш еї аі. бСепоте Незеагсй (2003) мої. 13 (3) рр. 476- 84) і стандартних методик молекулярного клонування.
Коротко, касета (СОМА ТІК людини, 5М40 рА і п-РаЕК-ет7-Мео-ВанНраА-тО), фланкована за допомогою коротких гомологічних груп із геном Тіто миші, використовується для модифікації Тс
С57ВІ/6) ВАС (бібліотека КР2З3 ВАС) за допомогою рекомбінування. Касета СОМА ТІК людини вставляється в ендогенну АТО, і залишок екзона 2 Тіїтс плюс початку інтрона 2 видаляється.
Цільова область у ВАС потім повертається в рВідне-ТК (У/агтіпу еї аІ. МоїІесшціаг апа Сеїшаг
Віоіоду мої. 26 (18) рр. 6913-22 2006) разом із рланкуючими геномними послідовностями Тігс як гомологічними плечами для націлювання на клітини Е5. Конкретно, 5' гомологічне плече, 2950 рр, відповідає (зборці МСВІЗ7/тто): спг.16:32,610,333-32,613,282 і 3" гомологічне плече, 2599 рр, відповідає спг.16:32,613,320-32,615,918. Кінцевий вектор підтверджується за допомогою секвенування ДНК.
Вектор ТітС/ТЕКС КІ лінеаризується за допомогою Мої і С57ВІ/6М С2 ї націлюється на клітини ЕЗ з використанням стандартних способів (5418-позитивна і ганцикловір-негативна селекція). Позитивні клони ідентифікуються з використанням РСК і аналізу Тадмап і підтверджуються за допомогою секвенування модифікованого локусу. Правильно націлені клітини Е5 трансфікуються плазмідою РіІре для видалення Мео, і потім клітини Е5 уводяться як ін'єкція в бластоцисти з використанням стандартних методик. Зародкову передачу одержують
Зо після схрещування отриманих у результаті химер із самками С57ВІ /6М.
Конкретно, антитіла, перераховані в Таблиці, нижче, уводять мишам, нокаутованим пит, у вигляді однократної дози 50 мг/кг і через 24 години витягають кров і досліджують ретикулоцити, пид1, М297И.
Таблиця 12 анти ТА УВА пидет, мото пил анти-ТІВегА/ВАСЕ ПШ9С, ГАГАРО ви ж анти тІяеА ВАС пот ГАГАРСУТЕ нин анти-ТЕВ2А/ВАСЕ1 пиде1, ГАГАРС/АІ в
Після введення антитіл анти-ТТА»2А/ВАСЕТ І АГАРС, І АГАРС/УТЕ або І АГ АРС/АЇ (Групи 3-5 у Таблиці 12), миші, нокаутовані ТЯК людини, не виявляють клінічних симптомів або втрати ретикулоцитів (Фігура 22), як спостерігалося раніше з використанням антитіл анти-ТІК з повною ефекторною функцією (Социсп еї а. 2013). Ці результати показують, що включення мутацій
ГАГАРОС у каркас (901 людини також анулює ефекторну функцію і, крім того, говорить, що додавання мутацій або МУТЕ, або АІЕсКпНЯН не впливає негативно на бажані властивості мутацій І АГАРО, щоб зробити антитіло таким, що не містить ефекторів.
Здійснюють також аналізи АОСС для підтвердження статусу, що не містить ефекторів, сполучень мутацій І АГАРО, І АГАРС/МУТЕ і І АГАРО/АЇ у лінії клітин, отриманих від людини. Як і раніше, лінія клітин еритролейкемії людини (НЕЇ, АТСС) використовується як клітини мішені з
РВМС від здорових донорів-людей, що несуть або генотип ЕЛ/158, або генотип ЕсуУкША МЛ/158.
Генотип МЛ/158 також включається в даний аналіз, через відому асоціацію зі збільшенням активності АОСС, опосередковуваної МК-клітинами, а також здатності зв'язувати антитіла Іде (Вом/Лез5 апа МУеїпег, 2005: Вгийп5 еї а). 2008). Клітини зчитують, і їхня життєздатність визначається за допомогою Мі-СЕЇ 19 (Весктап Сошнег; Ешіепоп, СА), слідуючи інструкціям виробника.
РВМС ізолюють за допомогою центрифугування в градієнті густини з використанням пробірок для поділу крові Опі-Зер "м (Ассигаге Спетісаї 5 5сіепійіс Согр.; УМезіригу, МУ). Цільові клітини в 50 мкл середовища для аналізу (КРМІ-1640 з 1 95 В5А ії 100 одиниць/мл пеніциліну і стрептоміцину) висівають у 9б-ямковий круглодонний планшет при 4хі0"/ямка. Послідовні розведення досліджуваних і контрольних антитіл (50 мкл/ямка) додають у планшети, що містять цільові клітини, з наступним інкубуванням при 37 С з 595 СО» протягом 30 хвилин, щоб уможливити опсонізацію. Кінцеві концентрації антитіл у межах від 0,0051 до 10000 нг/мл вимірюють після 5-кратних послідовних розведень у цілому для 10 моментів часу. Після інкубування 1,0х105 ефекторних клітин РВМС у 100 мкл середовища для аналізу додають у кожну ямку для одержання відношення ефекторні клітини:цільові клітини 25:1, і планшети інкубують протягом додаткових 4 годин. Планшети центрифугують наприкінці інкубування, і супернатанти досліджують на активність лактатдегідрогенази (ОН) з використанням Суїоїохісйу
Оеїесіп Кім (Коспе Арріїей Зсіепсе; Іпаіапароїї5, У). Реакційну суміш з (ОН додають до супернатантів, і планшети інкубують при кімнатній температурі протягом 15 хвилин при постійному струшуванні. Реакцію завершують за допомогою 1 М НзРоОа, і коефіцієнт поглинання вимірюють при 490 нМ (фон, вимірюваний при 650 нМ, віднімають для кожної ямки) з
Зо використанням зчитувального пристрою для мікропланшетів ЗресігаМах Ріи5. Коефіцієнт поглинання ямок, що містять тільки цільові клітини, служить як контроль для фону (низький контроль), у той час як ямки, що містять цільові клітини, лізовані за допомогою Тгйоп-Х100, забезпечують максимальний доступний сигнал (високий контроль). Незалежну від антитіла клітинну цитотоксичність (АІСС) вимірюють у ямках, що містять цільові і ефекторні клітини без додавання антитіла. Частка конкретних АОСС обчислюється в такий спосіб:
Азїго ( зразок о! Аза АТС)
Ж АСС т 100 д зняття
Аз і високий контраль Ко Аза 1) низький контроль !
Значення АОСС розведень зразка зображають у вигляді графіка залежності від концентрації антитіла, і криві доза-реакція підганяють до чотирипараметричної моделі з використанням
ЗойМах Рго.
Результати аналізу АЮСС показані на Фігурі 23. Як і очікувалося, ефектор-позитивне антитіло анти-ТІЕ людини (анти-ТТА"/94О Ід! УТ) демонструє значну активність АЮСС на клітинах НЕЇ. На протиавгу цьому, варіанти антитіла анти-ТІН!»2А/ВАСЕ1, що містять мутації
І АГ АРОС, ГАГАРС/УТЕ або ГАГАРО/АЇ, не демонструють ніякої активності АОСС на клітинах
НЕЇ, подібно негативному контролю, антитілу анти-ТТ8525/дО Мм2г97а.
Хоча викладений вище даний винахід описаний у деяких подробицях як ілюстрація і приклад для цілей ясності розуміння, описи і приклади не повинні розглядатися як такі, що обмежують рамки даного винаходу. Опис усієї патентної і наукової літератури, цитованої у даному документі, у явному вигляді включається у всій його повноті як посилання.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 СЕМЕМТЕСН, ІМС. ЕТ АЇ. «1205 АНТИТІЛА АНТИ-РЕЦЕПТОР ТРАНСФЕРИНУ І СПОСОБИ ЇХ ВИКОРИСТАННЯ «1305 Р5Уб41к1-МО «140» «1415 «1505» 61/825,477 «1515 2013-05-20 «1605» 175 «1705 РасепсІп мегзіоп 3.5 «21051 «211» 760 «2125 БІЛОК «2135 Ното з5аріеп5 «4005 1 мес мет Ар сіп Аїа Агуд 5ег АЇа Ре 5ег А5Зп Гей Ре сТу О1у си 1 5 10 15
Зо
РгОо Ге бек Туг ТИг Агуд Ре 5ег Геи АЇїа Агд сіп ма! Азр су дор 20 25 30
А5п о б5ег Ні ма! сіи мес Гуз Ге Аїа ма! Азр сЇи си си А5п Аїа 35 40 45
А5Зр о А5п о АЗп о Тигогуз АЇа Азп Ма! Тйг гу Рго Гуз Агд Суз 5ег су 50 55 60 5ег ІІе Суз Туг сіу Тйг че Аїа маї ІІе ма! Ріе РНе Гей ІЇе Сс1У 65 70 75 80
Рпе мет ІІе сіу туг Ге сіу туг Суз Гуз сіу ма! сі Рго Гуз ТНг 85 90 95 сіи Суз си Агд Гей Аїа сіу Тк сій 5ег Рго ма! Агуд сіи си Рго 100 105 110 со1у сій А5р Рпе Рго АЇа АЇа Агуд Агд Геи Туг Тгр Ар А5р Геи Гуз 115 120 125
Аг Гуз Ге б5ег сіи Гуз Гей Азр 5ег ТИг Ар Ре тиг 5ег Ттиг Пе бо 130 135 140
Гуз Ге Гей АЗп сій АЗп о 5ег Туг ма! Рго Аг сім АЇа су 5ег сіІп 145 150 155 160 65
Гуз Азр си АЗп Гей Аїа Геи Туг ма! сої А5п сіп Ре Аго сім РПе 165 170 175
Гуз Ге бек Гуз ма! Тер Агд Ар сіп Ні5 Ре ма! Гуз Пе сп маї 180 185 190
Гуз А5р 5ег АЇа сіп А5п 5ег ма! ІЇїе ІЇїе ма! А5р Гу5 А5Зп О1У Ага 195 200 205
Ге ма! Туг Гей ма! сі А5п Рго сіу сІЇу туг ма! АїЇа туг 5ег Гуз 210 215 220
АТїа Аїа тйг ма! тийг сІу Гуз Ге маї нНі5 АЇа А5п Ре СсСІіу Ти Гуз 225 230 235 240
Гуз АЗр Ре сі АЗр Гей Туг Тийг о Рго маїЇ Азп сіу 5ег Те ма! Пе 245 250 255
Уа! Агд АТа су Гуз ІЇе тис Ріє АїТа сіи Гуз ма! Аїа д5п Аїа си 260 265 270 5ег Гей А5п АЇа ч1іе сіу ма! Гей ІчІЇе Туг Мес дор сіп тйг Гуз РНе 275 280 285
Рго ІІе маї А5п АТа сіи Ге б5ег Ре Ріє СсІу Ні АїЇа Ні5 Геи Сс1у 290 295 з00
ТВг о с1у Ар Рго Туг ТВг оРго сІіу Ре Рго 5ег Ре А5Зп Ні Ттиг сп 305 310 315 320
Ре Рго Рго бег Агуд 5ег б5ег сіу Ге Рго А5п ІЇе Рго маї сп ТтЕг 325 330 335 чІ1е 5ег Аг Аїа АїЇа АТїа сіи Гуз Гей Ре сІу Абзп Мет сіи сіу А5р 340 345 350 суз Рго бек Ар Тгр Гуз ТИг о Азр б5ег о Тиг Суз Агдуд Мет ма! тиг 5ег 355 360 365 сі б5ег Гуз Азп Ма! Гуз Ге Тийг Ма! 5ег А5п маї гей Гуз сом Пе 370 375 380
Гуз чІІе Гей А5п ІІе Ре сІу ма! чІЇе Гуз сіу Ре ма! си Рго А5р 385 390 395 400
Ні туг ма! ма! ма! сіу Аїа сіп Агд А5р АїЇа тгр су Рго СсІу Аїа 405 410 415 (516)
Аїа Гуз 5ег сіу ма! сІу тйг Аїа гей Гей ей уз Гей АЇа сіп мет 420 425 430 65
Ре 5ег Ар Мет ма! Геи Гуз Азр с1у Ре сіп Рго 5ег Ага 5ег Пе 435 440 445 70 че Ре АЇїа 5ег Тгр 5ег Аїа сіу Азр Ре су 5ег ма! сіу Аїа тНг
450 455 460 сіи Тер Гей сіи сіу Ттуг Геи 5ег 5ег ей Ні Гей Гуз АЇїа Ре ТЕГ 465 470 475 480 туг тІе Ап Гей Ар Гуз АЇа ма! Гей сіу Тиг 5ег А5Зп РНе Гуз маї 485 490 495 5ег АЇа 5ег Рго Ге Гей Туг ТИг Гей ІІе сій Гу5 Ттийг мет сіп дп 500 505 510 ма! Гуз Ні Рго ма! Ттийг сіу сіп Ре Гей Туг сіп Азр 5ег А5Зп Тер 515 520 525
Аїа бек Гуз ма! сіи Гуз Гей Ттийг о Ге Ад5р АЗп АЇа АЇа Ре Рго РПе 530 535 540
Гей АЇїа туг 5ег сІіу ІЇе Рго АїЇа ма! 5ег Ре Су5 Ре Су5 си дор 545 550 555 560
ТВг оА5р тує Рго Туг Ге сіу Тйг о тиг оМмет Ар тйг туг Гуз си Гей 565 570 575
Зо ч11е соми Агуд ІЇе Рго сЇи Геи А5п Гуз маї Аїа Аг АїЇа Аїа Аїа си 580 585 590 ма! Аїа сіу сіп РПе ма! ІЇе губ Гей Тиг Ні А5зр ма! си Геи дп 595 600 605
Гей А5р Туг сій Агуд туг АбЗп о бег сій Ге Ге бег Ре маї Ага дор 610 615 620
Гей А5п сіп Туг Агу АЇїа А5р ІчІЇе їу5 сЇи мес сІу гей 5ег Геи сіп 625 630 635 640
Тер Геи Ттуг 5ег АїЇа Агуд сІ1у А5р Ре Ре Агу АЇа Тйг 5ег Аг Геи 645 650 655
ТАг тис о Ад5р о Ре сіу Ап АТа сіи Гуз Тс о АЗр Ага Ре ма! мес Гуз 660 665 670
Гуз Гей Азп Ар Агуд Ма! Мет Агуд ма! сіи Ттуг Ні РіПе Ге 5ег Рго 675 680 685 60 тукг ма! 5ег Рго Гуз сій 5ег Рго Ре Агуд Ні5 ма! Ре Ттгр сі1Уу 5ег 690 695 700 о1у б5ег Ні ТИг Геи Рго АЇа гей Ге сЇи А5Зп їеи Гуз Геи Ага Гуз 65 705 710 715 720 сій АбЗп Ап с1у АТа Ре А5Зп сіи Тиг ге Ре Агд Ап сп Геи Аїа 725 730 735 70
Гей АЇїа Ттйг Тер тг ІЇе сіп сіу АЇа АїЇа А5п АЇїа ге 5ег су дор 740 745 750 ма! Тер А5Зр ІЇе д5р Абп сій РБе 755 760 «210» 2 «211» 760 «2125 БІЛОК «2135» Чорна макака «400» 2 мес мет Ар сіп Аїа Агуд 5ег АЇа Ре 5ег А5Зп їеи Ре ОсТу О1у си 1 5 10 15
РгОо Ге бек Туг ТИг Агуд Ре 5ег Геи АЇїа Агд сіп ма! А5р су дор 20 25 30
Азп б5ег Ні маї сіи мес Гуз Гей сіу ма! Азхр сіи сій сі Азп тег
А5Зр о А5п о АЗп о Тигогуз Рго АЗп соЇ1у Тс Гуз Рго Гуз Аго Суз с1у с1у 60
Зо
Азп ІІе Суз Туг сіу Тийг ІІе АЇїа маїЇ 1Іе ІЇе Ре РПе гГеи ІЇе сІу 65 70 75 80 35
Рпе мет ІІе сіу туг Ге сіу туг Суз Гуз сіу ма! сі Рго Гуз ТНг 85 90 95 40 сіи Ссуз сім Агод Гей Аїа сіу Тк сіи 5ег Рго Аїа Агод сіи сіи Рго 100 105 110 си сій А5р Ре Рго АЇа АЇа Рго Агд Геи Туг Тгр Ар А5р Геи Гуз 45 115 120 125
Аг Гуз Ге б5ег сіи Гуз Гей АЗр Тйг о ТИйг о АЗр Ре тиг 5ег Ттиг Пе 130 135 140 50
Гуз Гей Гей АЗп сі АЗп Ге Туг ма! Рго Агу сім АЇа су 5ег сіІп 145 150 155 160 55
Гуз Азр сЇи Ап гей АЇїа Ге Туг ІЇе сЇи А5п сіп Ре Ага сім РПе 165 170 175 60 Гуз Ге бек Гуз ма! Тер Агд Ар сіп Ні5 Ре ма! Гуз Пе сп маї 180 185 190
Гуз А5р б5ег АЇа сіп Азп 5ег ма!Ї ІЇе ІЇе ма! д5р (уз А5Зп сІу С1У 65 195 200 205
Гей ма! туг Ге ма! сій А5п Рго сіу сіу туг ма! АЇїа туг 5ег Гуз 210 215 220 70
АТїа Аїа тйг ма! тийг сІу Гуз Ге маї нНі5 АЇа А5п Ре СсСІіу Ти Гуз 225 230 235 240
Гуз АЗр Ре сі АЗр Гей А5Зр 5ег Рго ма! Азп сіу 5ег Те ма! Пе 245 250 255
Уа! Агд АТа су Гуз ІЇе тис Ріє АїТа сіи Гуз ма! Аїа д5п Аїа си 260 265 270 5ег Гей А5п АЇа ч1іе сіу ма! Гей ІчІЇе Туг Мес дор сіп тйг Гуз РНе 275 280 285
Рго ІІе ма! Гуз АЇа Азр Гей 5ег Ре РПе СсІу НІі5 АїЇа Ні5 Ге су 290 295 з00
ТВг о с1у Ар Рго Туг ТВг оРго сІіу Ре Рго 5ег Ре А5Зп Ні Ттиг сп 305 310 315 320
Ре Рго Рго 5ег сіп 5ег б5ег сіу Ге Рго А5зп ІІе Рго маЇ сіп тиг 325 330 335 чІ1е 5ег Аг Аїа АїЇа АТїа сіи Гуз Гей Ре сІу Абзп Мет сіи сіу А5р 340 345 350
Суз Рго 5ег А5Зр Тер Гуз ТИг о АЗр о 5ег Тиг Суб Гуз Мет ма! тиг 5ег 355 360 365 сі А5п Гуз 5ег ма! Гуз Гей Тийг ма! 5ег А5п маїЇ гей Гуз сіи тиг 370 375 380
Гуз чІЇе Гей А5п ІІе Ре сІіу ма! ІІе Гуз сІу Ре ма! сіи Рго А5р 385 390 395 400
Ні туг ма! ма! ма! сіу Аїа сіп Агд А5р АїЇа тгр су Рго СсІу Аїа 405 410 415
АТїа Гуз 5ег 5ег ма! сіу тпйг АТа ге їГеи їеи їу5 Ге АЇїа сіп мес 420 425 430
Ре 5ег Ар Мет ма! Геи Гуз Азр с1у Ре сіп Рго 5ег Ага 5ег Пе 435 440 445 ч11е Ре АЇїа 5ег Тгр 5ег АїЇа сіу Азр Ре сіу 5ег ма! сіу АТа тиг 450 455 460 (516) сій Тер Гей сіи сіу Туг Геи 5ег 5ег ей Ні Гей Гуз АЇїа Ре ТЕГ 465 470 475 480 65 туг тІе Ап Гей Ар Гуз АЇа ма! Гей сіу Тиг 5ег А5Зп РНе Гуз маї 485 490 495 70 5зег АїЇа 5ег Рго Гей Гей Туг ТиПг Гей ІЇе сіи Гуз тиг мес сіп А5р
500 505 510 ма! Гуз Ні Рго Ма! Тк сіу Агд 5ег Геи Туг сп А5р 5ег А5п тер 515 520 525
Аїа 5екг уз ма! сіи Гуз Ге ТИг Гей А5Зр Азп АЇа Аїа Ре Рго РІНе 530 535 540
Гей АЇїа туг 5ег сІіу ІЇе Рго АїЇа ма! 5ег Ре Су5 Ре Су5 си дор 545 550 555 560
ТВг оА5р тує Рго Туг Ге сіу Тйг о тиг оМет др тиг туг Гуз си Гей 565 570 575 ма! сій Агуд Іїе Рго сій Ге Азп Гуз маї Аїа Агд Аїа Аїа Аїа си 580 585 590 ма! Аїа сіу сіп Ре ма! ІЇе губ Гей Тиг Ні А5р тиг сіи Геи дп 595 600 605
Гей А5р Туг сій Агуд туг А5Зп бег сп Ге гей їеи Ре Геи Ага дор 610 615 620
Зо
Гей А5п о сіп Туг Агуд АЇїа А5р ма! Гуз соЇи мес сіу гей 5ег Геи сіп 625 630 635 640
Тер Геи Ттуг 5ег АїЇа Агуд сІ1у А5р Ре Ре Агу АЇа Тйг 5ег Аг Геи 645 650 655
ТАг о тиг о А5р Ре Агуд Ап АЇа сій уз Агуд АЗр о Гуз Ре ма! мес Гуз 660 665 670
Гуз Гей Азп Ар Агуд Ма! Мет Агуд Ма! сіи ТтТуг туг Ре Ге 5ег Рго 675 680 685 тукг ма! 5ег Рго Гуз сЇи 5ег Рго Ре Агуд Ні5 ма! Ре Ттгр сі1Уу 5ег 690 695 700 о1у б5ег Ні ТИг Гей 5ег АЇа гей їеи сЇи 5ег їеи уз Ге Ага Ага 705 710 715 720 сій А5п о АбЗп обег АЇа Ре доп сіи Тиг Ге Ре Агд Ап сп Геи Аїа 725 730 735 60 Гей Аїа тйг Тер тийг чІЇе сіп сіу АТа Аїа д5п АЇа гей 5ег су дор 740 745 750 ма! Тер А5Зр ІЇе д5р Абп сій РБе 65 755 760 «210» З «211» 763 70 «2125 БІЛОК
«2135 Ми5 ти5сии5 «400» З мес мет Ар сіп Аїа Агуд 5ег АЇа Ре 5ег А5Зп їеи Ре ОсТу О1у си 1 5 10 15
РгОо Ге бек Туг ТИг Агуд Ре 5ег Геи АЇїа Агд сіп ма! А5р су дор 20 25 30
Азп б5ег Ні маЇ сім меї їуз Гей АїЇа Аїа Азр сіи сіи сім Азп АїЇа 35 40 45
А5Зр А5п АЗп Мет Гуз АЇа бег маї Агд Гуз Рго Гуз Аг Ре А5п су 50 55 60
Агд Гей сСу5 Ріє АЇа АїЇа ІЇе Аїа ге ма! ІЇе Ре Ріе гГеи Іе с1у 65 70 75 80
Ре Мет б5ег сіу туг Геи сіу Тукг Суз Гуз Агд ма! сіи сіп Гуз си 85 90 95 сіи Суз ма! Гуз Гей АЇїа сіи тег сіи сі Тйг А5Зр о гуз 5ег сіи тНг 100 105 110
Зо мес сіи Тк сій АЗр ма! Рго Тийг 5ег 5ег Агд Ге Туг Тгр АїТа д5р 115 120 125
Гей Гуз ТИг Ге Ге 5ег си Гуз Ге Азп 5ег ІЇе сі Ре АїЇа дзр 130 135 140
Тк ІТе Гуз сіп Гей б5ег сп д5п Тйг туго Тс РгО Аг сій Аїа с1У 145 150 155 160 5ег сіп Гуз Азр сіи 5ег Ге АЇїа Туг Туг ІЇе сій Азп сіп Ре Ні 165 170 175 си Ре Гуз РПе 5ег Гуз ма! Тер Агуд Азр си ніх туг ма! Гуз Пе 180 185 190 сіп ма! Гуз 5ег 5ег ІчІЇе сІіу сіп А5п Мет ма! Ттиг ІЇе ма! сіп 5ег 195 200 205
Азп с1у А5п о Гей А5р Рго ма! сіи 5ег Рго сі сіу туг ма! Аїа РНе 210 215 220 60 5зег Гуз Рго Тийг сіи ма! бек сІу Гуз Ге ма! нНі5 Аа д5п РПе су 225 230 235 240
ТВг огГуз Гуз АЗр Ре сіи сій Ге б5ег Туг 5ег ма!Ї Азп сіу 5ег Геи 65 245 250 255 ма! Пе ма! Агу Аїа сіу сій ІІе тйг Ре АїЇа сіи Гуз ма! Аїа А5п 260 265 270 70
Аїа сіп 5ег РПе А5п АЇа ІЇе сіу маЇ Гей ІЇе Туг Мет д5р Гуз д5бп 275 280 285
Гуз Ре Рго ма! ма! сіи АїТа Азхр ем АїЇа ге Ре СсІу НІі5 АїЇа НІ15 290 295 з00
Ге сіу Тк сіу А5р Рго Туг Тис о Рго с1у Ре Рго 5ег РМПе А5п Ні 305 310 315 320
ТВг Осій Ре Рго Рго 5ег сіп 5ег 5ег СсСІіу Геи Рго А5ЗпП ІЇе Рго Ммаї 325 330 335 сп тс че 5ег Агу АЇа АЇа Аїа сіи Гуз Ге Ре сіу Гуз Мет си 340 345 350 о1у б5ег Суз Рго АЇїа Агуд Тгр Азп ІЇе А5зр 5ег 5ег Су Гуз Геи си 355 360 365
Гей 5ег сп Ап о сіп Ап ма! Гуз їеи ІЇе ма! Гуз Азп маї Геи Гуз 370 375 380 си Аг Агуд ІчІЇе Гей А5п ІЇе Ре су ма! ІЇе гуз сіу туг оЇми си 385 390 395 400
Рго А5р Агдуд Туг ма! ма! ма! сіу АТа сіп Аг А5р АїЇа геи с1у Аїа 405 410 415 сіу ма! АТа АЇїа губ 5ег 5ег ма! сіу тк сіу гей їеи їецй уз гей 420 425 430
АТїа сіп ма! Ре 5ег А5р Мет ІЇе 5ег Гуз Ар с1у РПе Агд Рго 5ег 435 440 445
Агуд б5ег Іїе Іїе Ре АїЇа б5ег Тгр Тйг АїЇа сіу А5р Ріе су Аїа ма! 450 455 460
О1У Аїа тк сіи тер Геи сіи сіу туг Ге 5ег 5ег їеи Ні Геи Гуз 465 470 475 480
АТїа Ре тйг туг ІчІЇе Азп Ге А5Зр Гуз ма! маЇ Гей сіу тйг 5ег дп 485 490 495
Ре Гуз ма! 5ег АЇїа 5ег Рго Гей їеи Туг Тйг Гей мет сСІу Гуз Пе 500 505 510 (516) мес сіп Ар ма!ї Гуз Ні Рго ма! Азр су Гуз бег їеи туг Ага дор 515 520 525 65 5зег А5Зп Тгр ІЇе 5ег Гуз ма! сій Гуз Ге 5ег Ре Азр А5п АїЇа АїЇа 530 535 540 70 туг Рго Ре Ге Аїа туг 5ег сіу ІЇе Рго Аїа ма! 5ег РПе сСу5 РПе
545 550 555 560 суз сім А5р Аїа А5р Туг Рго Туг Ге сЇу Тйг Агд Гей А5Зр тег Отуг 565 570 575 си Аїа гей Тк о сіп Гуз ма! Рго сіп Ге А5п сіп мес ма! Ага тнг 580 585 590
АїЇа АїЇа сіи ма! АЇїа сІу сіп Гей ІЇе те Гу5 Гей Тис Ні Азр маї 595 600 605 сіи Ге Ап Ге АЗр Туг сіи Меї Туг Азп 5ег їу5 Ге Гей 5ег РНе 610 615 620 мес Гуз Ар Гей Ап сіп Ре Гуз Тиг Азр ІЇе Агд Азр Мет сту Геи 625 630 635 640 5зег Гей сіЇп Тер Геи Туг б5ег АТа Агуд сіу Азр Туг Ре Ага АЇїа ТтЕг 645 650 655 зег Агд Гей Тийг о тТйг о А5р Ре НІі5 А5п АЇа сіи губ ТНг о Абп Ага Рве 660 665 670
Зо ма! меє Агуд сії ІЇе А5п Ар Аг ІЇІе Мет Гуз ма! сЇи туг Ні РНе 675 680 685
Гей б5ег Рго Туг Ма! 5ег Рго Агуд сі 5ег Рго Ре Агуд Ні5 ІІе РПе 690 695 700
Тер оТ1у б5ег с1у бек Ні тТиг Ге 5ег АїЇа гей ма! сіи Азп Гей Гуз 705 710 715 720
Гей Агд сіп Гуз АЗп ІЇе Тйг АЇїа Ре Ап сіи ТйгогГеи РМБе Ага А5П 725 730 735 сіп ге АТа ге Аїа тйг тер тйг ІЇе сіп сіу маїЇ АїЇа Абп Аїа гей 740 745 750 5ег с1у А5р ІЇе Тер А5п ІЇе А5р Азп си Ре 755 760 «210» 4 «2115 111 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність (516) «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" 65 «400» 4
Азр ІІе ма! гей тйг сіп 5ег Рго АЇа 5ег Геи АЇа маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15 70 сп Аг Аїа Тс о ІЇе б5ег сСуз5з Агуд Аїа 5ег сіи бег ма! А5р А5р туг 20 25 30
О1Уу А5п о бег Рпе Мет ніх Тегр Туг сп сп Гуз Рго сіу сп Рго РГгОо 35 40 45
Гуз Гей Гей ІїІе туг Агд АЇа 5ег Азп Ге сіи б5ег сіу Іе Рго АїЇа 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІ1у 5ег сіу бек Аг ТИг Ар РПе тиг Ге Тиг ІЇе А5бп 65 70 75 80
Рго ма! сій Аїа А5р Азр ма! Аїа тйг о туг туг Су5 сіп сіп 5ег дп 85 90 95 сій Аїа Рго Рго Тийг Ре сіу сіу сЇу тиг Гуз їеи сіи Іе Ага 100 105 110 «210» 5 «2115 111 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 5
Азр ІІе ма! гей тйг сіп 5ег Рго АЇа 5ег Геи АЇа маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15 сп Аг Аїа Тс о ІЇе б5ег сСуз Агуд Аїа 5ег сіи бег ма! А5р 5ег туг 20 25 30 с1у А5п о б5ег Ре Мет Ні Тгр Ттуг сіп сіп Гуз Рго сіу сіп Рго РгОо 35 40 45
Гуз Гей Гей ІїІе туг Агд АЇа 5ег Азп Ге сіи б5ег сіу Іе Рго АїЇа 60 50
Аг Рпе б5ег сІ1у 5ег сіу бек Аг ТИг Ар РПе тиг Ге Тиг ІЇе А5бп 65 70 75 80 55
Рго ма! сій Аїа А5р Азр ма! Аїа тйг о туг туг Су5 сіп сіп 5ег дп 85 90 95 60 си с1у Рго Рго Тийг Ре сіу сіу сЇу тНг Гуз їеи сіЇи ІІе Гуз 100 105 110 «2105» 6 65 «2115 111 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» 70 «221» джерело
«223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 6
А5зр чІІе маїЇ Ге тйг сіп б5ег Рго АЇа 5ег Ге АїЇа ма! 5ег гГеи су 1 5 10 15 сп Аг Аїа Тс о ІЇе б5ег сСуз Агуд Аїа 5ег сіи бег ма! А5р 5ег туг 20 25 30 с1Уу Рго 5ег Ре Мет Ні Тер туг сіп сіп Гу5 Рго сіу сіп Рго РгОо 35 40 45
Гуз Гей Гей ІїІе туг Агд АЇа 5ег Азп Ге сіи б5ег сіу Іе Рго АїЇа 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек Аг ТиПг дор Ре Тийг Ге Тиг ІЇе А5бп 65 70 75 80
Рго ма! сій Аїа А5р А5р ма! АїЇа тийг туг туг Суз сіп Ні 5ег дзп 85 90 95 сІи А5р о Рго Рго Тиг Ре сіу сіу сІу тНг Агд Гей сіи Іе Гуз 100 105 110 «210» 7 «2115» 119 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 7 сп ма! сіп гей соЇп сіп б5ег сіу Рго сЇи Ге маї Агуд Рго су маї 1 5 10 15 5ег ма! Гуз ІІе 5ег Су5 Гуз сіу бек сІіу туг Тйг Ре Тиг Азр туг 20 25 30
АТа мес ніх тер ма! Гуз сіп 5ег Ні5 АїЇа Гуз 5ег Гей сіи Тер Іе 35 40 45 сІ1у сіу ч11е бек Ттийг о туг Ре сіу Аг тТНг доп тТуг Ап сп Гуз РВе 50 55 60 60 Гуз сіу Агуд Аїа тТийг Мет тийг ма! А5р Гуз 5ег бег б5ег Ттиг Аа туг 65 70 75 80 мес сім Гей Аїа Агуд Геи Тийг бек си Азр 5ег АЇа геи Туг туг сСуз 65 85 90 95
Аїа Агуд с1у Ге б5ег сіу Азп Ттуг ма! Мет Азр туг Тгр сТ1у сп с1у 100 105 110 70
Тис б5ег ма! тТиг ма! 5ег 5ег «210» 8 «2115» 119 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 8 сп ма! сіп гей соЇп сіп б5ег сіу Рго сЇи Ге маї Агуд Рго су маї 1 5 10 15 5ег ма! Гуз ІІе 5ег Су5 Гуз сіу бек сІіу туг Тйг Ре Тиг Азр туг 20 25 30 сІ1у мет ніх Тер ма! Гуз сіп бек Ні5 АЇа Гуз 5ег їеи си Тер Пе сІіу ма! ІЇе бек Рго Туг 5ег сіу Аг ТНг доп Туг Ап сп А5Зп о РВе
Ко) 50 55 60
Гуз сіу Гуз АЇїа Тийг о Меє тиг омаї А5р Гуз 5ег б5ег 5ег Тг АїЇа туг 65 70 75 80 35
Гей сі Гей Аїа Агуд Ге Тийг бек сі АЗр 5ег АЇа ІЇе туг туг суз 85 90 95 40
Аїа Агуд с1у Ге б5ег сіу Азп Ттуг ма! ма! Азр туг тгр сТ1у сп с1у 100 105 110 45 Тис б5ег ма! тТиг ма! 5ег 5ег 115 «2105» 9 «2115» 119 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 9 60 соІп ма! сіп гей сЇп сіп б5ег сіу Рго сЇи Ге маї Агуд Рго су маї 1 5 10 15 5ег ма! Гуз ІІе 5ег Су5 Гуз сіу бек сІіу туг Тйг мМмаї тиг А5р туг 65 20 25 30
АТа мес ніх тер ма! Гуз сіп 5ег Ні5 АїЇа Гуз 5ег Гей сіи Тер Іе 35 40 45 70 сіу ма! ІІе 5ег РіПе Туг 5ег сіу Гуз ТИг А5Зп Туг А5Зп о сіп Гуз РНе 50 55 60 меє сіу Гуз АЇїа Ттийг о Мес тиг омаї А5р Гуз 5ег б5ег 5ег Тг Аїа туг 65 70 75 80 мес сім Гей Аїа Агуд Геи Тйг бек сі Азр 5ег АЇа ІЇе туг туг суз 85 90 95
Аїа Агуд с1у Ге б5ег сіу Азп Ттуг ма! Мет Азр туг Тгр сТ1у сп с1у 100 105 110
Тис б5ег ма! тТиг ма! 5ег 5ег 115 «210» 10 «2115» 119 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний
Ко) поліпептид" «400» 10 соІп ма! сіп гей сЇп сіп б5ег сіу Рго сЇи Ге маї Агуд Рго су маї 1 5 10 15
АТїа маЇ Гуз ІІе 5ег сСу5 Гуз сІіу б5ег сІіу туг Гуз Ре ІЇе Азр тТуг 20 25 30 сіу мет ні5 Тер ма! Гуз сіп 5ег Ні Типг Гуз 5ег те сіп Тер Пе 35 40 45 сІіу ма! ІЇе бек Рго Туг 5ег сіу Гуз ТНг Аб5п Туг б5ег сп Гуз РПе 60
Гуз сіу Гуз АЇїа Тийг о Меє тиг омаї А5р Гуз 5ег б5ег 5ег Тг АїЇа туг 50 65 70 75 80 мес сім Гей Аїа Агуд Геи Тйг бек сі А5р 5ег АЇа ІЇе туг туг суз 85 90 95 55
Аїа Агуд с1у Ге б5ег сіу Азп Ре ма! Мет Азр Ре Тгр с1у сп су 100 105 110 (516)
Тис б5ег ма! тТиг ма! 5ег 5ег 115 65 «210» 11 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність 70 «220»
«221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 11
Азр ІІе сіп Меє тийг осіп 5ег Рго АЇа 5ег Ге 5ег мМа!Ї 5ег маї сіу 1 5 10 15 сіи тис ома! тс оІТе тйг о сСуз Агуд АТа 5ег дор Ап Гей Туг 5ег дзп 20 25 30
Гей АЇа Тер туг сіп сіп Гу5 сіп сіу Гуз 5ег Рго сіп Гей Геи ма! 35 40 45 туг АЗр АЇїа Тйг Ап Ге АЇїа А5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу тйг сіп Ттуг 5ег гей Гу5 ІЇе А5зп 5ег їеи сіп 5ег 65 70 75 80 сі! А5р Ре сіу Ттийг отуг туго Суз сіп Ні Ре Тгр сіу тТНг Рго Гей 85 90 95
Тис Ре с1у АТа сіу тиг Гуз Геи сіи Гей Гуз 100 105 «210» 12 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 12
А5р че сЇп Ге Ттйг сій Тс Рго АЇа 5ег о їеи 5ег ма! 5ег ма! с1у 1 5 10 15 сіи тис Ома! тйг о ІТе тйг сСуз Агуд АТа 5ег сім Азп ІЇе туг 5ег дзп 20 25 30
Гей Аїа Тер Туг сп сіп Гуз сіп оІу Гуз 5ег Рго сіп Геи Геи маї 35 40 45 туг АТа Аїа тТийг А5р Ге Аїа дор сіу ма! Рго 5ег Агуд Ріпе Аг с1уУ 50 55 60 (516) 5ег сіу 5ег сіу тйг сіп Ттуг 5ег гей Гу5 ІЇе А5зп 5ег їеи сіп 5ег 65 70 75 80 65 сій А5р Ре сіу б5ег Туг Туг Суз соЇп Ні Ре Тгр сіу тНг Рго Геи 85 90 95
Тиг Ре с1у АТа сіу тйг Гуз Ге сій Геи Пе 70 100 105
«210» 13 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 13
Азр ІІе сіп Меє тийг осіп 5ег Рго АЇа 5ег Ге 5ег мМа!Ї 5ег маї сіу 1 5 10 15 сіи тис ома! тс оІТе тйг о сСуз Агуд АТа 5ег дор Ап ІЇе туг 5ег дзп 20
Гей АЇа Тер туг сіп сіп Гу5 сіп сіу Гуз 5ег Рго сіп Гей Геи ма! 25 туг АТа Аїа Тийг Ап Гей АЇїа Ад5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 60 30 5зег сіу б5ег сІ1у Ттйг сіп туг 5ег Ге Гуз ІЇе Азп 5ег Геи сіп 5ег 65 70 75 80 сі А5р Ре сіу б5ег Туг Туг Суб сіп Ніб5 Ре Тгр сіу тТНг Рго Гей 35 85 90 95
Меє Ре сІу 5ег сІу тиг Гуз Гей сіи Геи Гуз 100 105 40 «210» 14 «2115» 107 «2125 БІЛОК 45 «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний 50 поліпептид" «400» 14
Азр ІІе сіп Меє тийг осіп 5ег Рго АЇа 5ег Ге 5ег мМа!Ї 5ег маї сіу 1 5 10 15 55 сіи тис Ома! тс оІТе тйг о сСуз Агуд АТа 5ег д5р Ап ІЇе туг 5ег дп 20 25 30 (516)
Гей АЇа Тер туг сіп сіп Гу5 сіп сіу Гуз 5ег Рго сіп Гей Геи ма! 35 40 45 65 туг АТа ма! Тийг Ап Ге АЇїа дор сіу ма! Рго 5ег Агуд Ріпе 5ег су 50 55 60 5зег сіу б5ег сІ1у Ттйг сіп туг 5ег Ге Гуз ІЇе Азп 5ег Геи сіп 5ег 70 65 70 75 80 сі! А5р Ре сіу б5ег Туг Туг Суб сіп Ніб5 Ре Тгр сіу Тиг Рго Гей 85 90 95
Тиг Ре су АТа сіу тиг Гуз їеи си Геи Гуз 100 105 «210» 15 «2115» 116 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 15 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег маЇ Гуз Гей 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу Ттуг Тиг Ре тиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе со1у сім ч11е А5п о РгГоО Тйг о А5п с1іу Агуд ТВг о АбЗп Туг Іч1Їе сіи Гуз РПе 35 50 55 60
Гуз б5ег Гуз АїЇа Тийг о Ге Тйг о ма! А5р Гуз 5ег бег б5ег Тиг Аа туг 65 70 75 80 40 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о 5ег сій Ар 5ег АЇа ма! Ттуг туг су 85 90 95 45
Аїа Агд с1у тиг Аг Аїа туг Ні Туг Тер сЇу сіп сІу тс 5ег ма! 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «210» 16 «2115» 116 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» бо «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 16 65 сп ма! сіп гей сп сіп Рго сіу АТа сЇи Геи ма! Агуд Рго с1у АїЇа 1 5 10 15
АТїа маїЇ Гуз Гей 5ег сСу5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 70 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго сЇу сЇп сІу гГеи сіи Тегр Пе 35 40 45 со1у сім ч11е А5п о РгГОоО Тйг о А5п с1у Аг ТВг о доп о тТуг Ап си Ап о РВе 50 55 60
Гуз 5ег Гуз АЇїа ТийгоГеи тТиг омаї А5р Гуз 5ег б5ег 5ег Тг АЇа туг 65 70 75 80
Мес сіп їеи бек б5ег Ге ТИйг бек сі АЗр 5ег АЇа ма! туг туг суз 85 90 95
Аїа Агд с1у тТиг Аг Аїа тукг Ні5 Ре Тгр сіу сіп сІу тНг 5ег маї 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «210» 17 «2115» 116 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 17 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5ег маЇ Гуз Гей 5ег Су5 Гуз АЇа 5ег сіу туг Тйг РіПе АїЇа 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 со1у сім ч11е А5п о РгГоО ІЇе доп сіу Агуд Тиг доп Туг бег си Гуз РПе 50 55 60
Гуз Гуз Гуз АЇїа Тийг о Гей тТиг омаї А5р Гуз 5ег 5ег 5ег Тг АїЇа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95 (516)
Аїа Агд с1у тиг Аг Аїа туг Ні Туг Тер сЇу сіп сІу тс 5ег ма! 100 105 110 65
Тк ма! 5ег 5ег 115 70 «210» 18
«2115» 116 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 18 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 зег ма! Гуз Ге б5ег Суз Гуз АЇїа б5ег сіу Туг ТНПг РНе тиг 5ег туг
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 20 35 40 45 со1у сім Іч11е Ап о РгГО 5ег д5п сіу Аг Тгодбоп о тТуг АЗп сої Тг РВе 50 55 60 25
Гуз 5ег Гуз АЇїа Тийг оГеи тТиг омаї А5р Гуз 5ег 5ег 5ег Тг АїЇа туг 65 70 75 80
Зо мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
Аїа Агд с1у тиг Аг Аїа туг Ні Туг Тер сЇу сіп сІу тс 5ег ма! 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «210» 19 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 19
Азр ма! сіп чІЇе тйг сіп 5ег Рго 5ег Туг Ге Тиг Аїа 5ег Рго сіІу 1 5 10 15 сі тис отче тиск о ІЇе доп сСуз Агуд Аїа 5ег Гуз бег ІЇе 5ег Гуз Туг 20 25 30 (516)
Гей АЇа Тер туг сіп сіи Гу5 Рго сСІЇу Гуз ТНг АЗп Гуз Гей їГеи Пе 35 40 45 65 туг 5ег сіу 5ег Тк Ге сіп 5ег сіу ІЇе Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 70 5зег сіу б5ег сТу Тйг А5Зр РПе тТийг Ге Тийг ІЇе 5ег А5Зп Гей сіи РгОо
65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Мет Туг Ттуг Су5 сіп сіп Ні А5зп сі Туг Рго Тер 85 90 95
Тиг Ре сіу сІу сіу тйг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105 «210» 20 «2115» 122 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 20
Азр ма! сіп гей сіп сій 5ег сІу Рго сСІу Гей ма! Гу5 Рго 5ег сіп 1 5 10 15 5зег Гей 5ег гей Тиг о Суз ТиИг Ома! тк с1у Азп 5ег ІЇе тиг 5ег си 20 25 30
Зо туг АТа Тер А5Зп Тер ІЇе Агуд сіп Ре Рго О1У А5п Гуз Гей си Тгр 35 мес сіу туг ІІе 5ег Туг 5ег сіу тТийг тНг 5ег туг Азп РгОо 5ег Геи 60
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег ІЇе Тйг Агуд Азр тТиг 5ег їу5 АЗп сп Ге РПе 40 65 70 75 80
Гей сіп Гей А5п о б5ег ма! Тийг отийг сій Азр Тс АТа тс отуг РВе су 85 90 95 45
АТїа Агд туг сІ1у Ттуг с1іу А5п РгГоО АЇїа Тйг Агуд тує РБе д5р ма! тер 100 105 110 50 с1у Аїа сіу тйг о тигомаї тиг о маї 5ег 5ег 115 120 55 «210» 21 «2115 111 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність бо «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" 65 «4005» 21
Азр ІІе ма! гей тйг сіп 5ег Рго АЇа 5ег Геи АЇа маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15 70 сіп Агд Аїа Тийг о І1Їе 5ег су5 Агуд Аїа Агуд сіп б5ег ма!їЇ 5ег Тс 5ег
20 25 30 5зег Туг бег Ре Мет ніх Тгр туг Агд сіп Гуз АЇїа сІЇу сіп Рго РГгО 35 40 45
Гуз Ге Гей ІчІЇе Гуз Ттуг АЇїа 5ег ІЇе сіп сі 5ег сіу ма! Рго АїЇа 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІу 5ег сіу бек сІ1у ТИйг А5р Ре тНг Геи А5п ІїЇе г еи 65 70 75 80
Рго ма! сій сіи сій Азр Тг о Аїа тТйготугєс туго Суз сіп ніх тег тер 85 90 95 сі ІЇе Рго Рпе Тийг Ре сіу бек су тНг Гуз їеи сіЇи ІІе Гуз 100 105 110 «2105» 22 «2115 111 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220»
Зо «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 22
А5зр чІІе маїЇ Ге тйг сіп 5ег Рго АЇа 5ег Гей АїЇа ма! 5ег гГеи су 1 5 10 15 сп Аг Аїа Тс о ІЇе 5ег сСуз Агуд Аїа Агуд сіп бег ма! 5ег тНг 5ег 20 25 30 5зег Ттуг бег Ре Мет Ні Тгр туг сіп сіп Гу5 Рго сЇу сп Рго Рго 35 40 45
Гуз Ге Гей ІчІЇе Гуз Ттуг АЇїа 5ег ІЇе сіп сі 5ег сіу ма! Рго АїЇа 60 50
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек сІ1у Тйг А5р Ре тТиг Геи А5п ІЇе Геи 65 70 75 80 55 Рго ма! сіи сій сій А5р тс Аїа тиготуг тус Суз сп ні тег Тер 85 90 95 сі ІЇе Рго Рпе Тийг Ре сіу бек су тНг Ап Геи сіи ІЇе Гуз бо 100 105 110 «210» 23 «2115» 108 65 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело 70 «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 23 сіп 1Іе ма!їЇ Ге тиг сіп 5ег Рго АЇа ІІе мет 5ег АЇа 5ег Ге СсС1У 1 5 10 15 о1у Агд ма! Тиск Мет тийг о сСуз Тис о тТиг об5ег 5ег бег ма! Рго 5ег 5ег 20 25 30 туг Ре Ні Тер туг сіп сіп Гуз Рго сіу 5ег 5ег Рго Гуз Гецй Тер 35 40 45
ІІе туг 5ег ТИг 5ег АЗзп Ге АЇа бег сіу ма! Рго АЇа Агуд Ре 5ег 50 55 60 со1у б5ег сіу бек сІ1у Ттйг 5ег Туг 5ег Ге Тийг ІЇе б5ег 5ег Меї си 65 70 75 80
АТїа сій А5р АТа діа тик тує туго Суз Ні сіп тує НІі5 Агдуд 5ег РГгО 85 90 95
Рпе Ттйг Ре сіу 5ег сіу тиг Гуз їГеи сіи ІЇе Гуз 100 105
Зо «210» 24 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 24
Азр ІІе сіп Меє тйг осіп тйг тег 5ег о б5ег гей 5ег Аа 5ег Гей сі1у 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о чІЇе Азп сСу5 Агу АЇа сіу сіп А5р ІЇе Тйг А5Зп туг 20 25 30
Гей Азп Тер Ре сіп сіп губ Рго А5зр сіу тйг маїЇ Гуз Гей їГеи Пе 35 40 45 тТукг туг Тийг 5ег Агуд Ге Ні 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг А5Зр Туг 5ег Гей Тиг ІЇе тйг Ап Геи си сіп бо 65 70 75 80 сій А5р ч1Іе АЇїа тТийг отуг Ре Суб сіп сіп АЇа А5п тТйг гей Рго туг 85 90 95 65
Тиг Ре сіу су сіу тйг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105 70
«210» 25 «2115» 120 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 25 сп ма! сіп гей сп сіп Рго сіу 5ег сЇи Геи ма! Агуд Рго Ос1у АїЇа 1 5 10 15 5зег маЇ Гуз Гей 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Аг ніх сіу сп су гГеи сіи Тер Пе
О1Уу А5п о ІЇе Туг Рго сіу 5ег сіу б5ег Тиг Гуз туг Азр си Ага РПе 25 50 55 60
Гуз 5ег Гуз сіу Тийг Гей тТийг омаї А5р тТийг 5ег б5ег 5ег Тиг АїЇа туг 65 70 75 80
Зо мес Ні Гей 5ег б5ег гей ТИг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95 35
Тк Агуд сіу сіу Туг Азр 5ег Аг АЇа Тгр Ріє АїЇа Туг Тгр Сс1у сп 100 105 110 40 с1у тйг Гей ма! тиг ма! 5ег Аїа 115 120 «210» 26 45 «2115» 120 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 26 сп ма! сіп гей сп сіп Рго сіу 5ег сЇи Геи ма! Агуд Рго Ос1у АїЇа 1 5 10 15 зег ма! Гуз Ге б5ег Суз Гуз АЇїа б5ег сіу Туг ТНПг РНе тиг 5ег туг бо 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Аг ніх сіу сЇп сІу гГеи сіи Тер Пе 35 40 45 65 с1Уу А5п ІЇе Туг Рго сіу 5ег сіу 5ег ТИйг Гуз тТуг А5зр си Гуз РНе 50 55 60 70
Гуз 5ег Гуз сіу Тийг Гей тТийгомаї А5р тТийг 5ег о б5ег о 5ег Тиг АїЇа туг 65 70 75 80
Мес ніх їеи бек б5ег Ге ТИйг бек сі А5р 5ег АЇа ма! туг туг суз 85 90 95
Тк Агуд сіу сіу Ттуг Азр 5ег Агд АїЇа Тгр Ріє АїЇа Ніх Тер сІ1у сіп 100 105 110 сіу тйг Ге ма! тиг маї 5ег Аїа 115 120 «210» 27 «2115» 124 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 27 сіи ма! Гуз Ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Ге маїЇ сіп Рго сІу с1У 1 5 10 15
Зо
Ре їеи Гуз їеи б5ег сСу5з АЇа Тийг о5ег сіу Ре ТиПг РМПе 5ег д5р туг 20 25 30 тукг мет туг Тегр ма! Агуд сп тйг Рго сЇи Гуз Агод Геи сіи тТгр ма! 35 40 45
Аїа бек ІЇІе 5ег А5п сіу сіу А5р А5п ТИйг отТуг туг Рго А5зр Тег маї 50 55 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег Агуд А5р Азп АЇа Гуз А5зп тТиг о Геи туг 65 70 75 80 ей сіп Меє бек Агуд Ге Гуз бек сі АЗзр Тйг АїЇа мес туг туг су 85 90 95
Аїа Агд сЇп с1Уу АЇїа гей Туг Азр сіу Туг туг Агуд с1у Аїа мес д5р 100 105 110 туг Тер сіу сіп сіу тс об5ег ма! тиг ма! 5ег 5ег 115 120 бо «210» 28 «2115» 121 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність 65 «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" 70 «400» 28 сіп ма! сіп ге сіп сіп 5ег сіу АЇїа сій Ге Меї Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз Іїе б5ег Су5 Гуз АЇїа АЇїа сіу Туг ТНг РМНе 5ег дА5п туг 20 25 30
Тер те сіи Тер ма! Гуз сп Агд Рго сіу Ні5 су гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 сіу сім І1ІІе Ге Рго сіу 5ег сіу 5ег ТИйг Гуз туг А5зп си Гуз РНе 50 55 60
Гуз сіу Гуз АЇїа Тийг о РПе Тиг АЇїа А5р Ттийг о б5ег б5ег Ап ТИг АЇа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
Аїа Агд Агуд сї1у сіу туг сіу туг Азр су сім Ре АїЇа Ттуг Тер с1у 100 105 110 сіп сіу Ттийг о ге ма! тиг ма! 5ег Аїа 115 120 «210» 29 «211» 15 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 29
Аг Аїа 5ег сіи 5ег ма! А5зр 5ег Туг сіу Азп 5ег Ре Мет Ні 1 5 10 15 «2105» 30 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 30
Аг АЇїа 5ег Азп Геи си 5ег бо 1 5 «210» 31 «2115» 9 65 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело 70 «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 31 сп сіп б5ег А5п си АЇїа Рго Рго ТЕГ 1 5 «2105» 32 «2115» 5 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 32
Азр туг АЇїа Меє Ні 1 5 «2105» 33 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 33 со1у ІчІЇїе бек Тк туг Ре сІіу Агуд Тиг Ап Туг Ап о сіп Гуз РБе Гуз 1 5 10 15 с1у «210» 34 «2115» 10 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 34 с1у Ге б5ег сіу Азп Туг ма! Меє дор туг 1 5 10 «2105» 35 «211» 15 «2125 БІЛОК 60 «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний 65 пептид" «4005» 35
Аг Аїа 5ег сіи 5ег ма! А5зр 5ег Туг сіу Азп 5ег Ре Мет Ні 1 5 10 15 70
«2105» 36 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 36 сіп сіп б5ег А5п сій с1у Рго РгОо Тег 1 5 «210» 37 «2115» 5 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 37
Азр туг сіу Меє Ні 1 5
Зо «2105» 38 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 38 ма! ІІе 5ег Рго Туг 5ег сіу Аг ТНг о Абоп Туг А5зп сп доп РВе Гуз 1 5 10 15 с1у «2105» 39 «2115» 10 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" (516) «4005» 39 с1у Ге б5ег сіу Азп Туг ма! маї дор туг 1 5 10 65 «210» 40 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність 70
«221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 40 ма! ІчІїІе 5ег РМПе Туг б5ег сіу Гу5 ТИПг о АЗп Туг АЗп сіп Гуз Ре мет 1 5 10 15 чу «210» 41 «211» 15 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 41
Аг Аїа 5ег сіи 5ег ма! А5зр 5ег Туг сіу Азп 5ег Ре Мет Ні 1 5 10 15
Зо «210» 42 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 42 сіп Ні 5ег Ап сій АЗр Рго РгГО Тег 1 5 «210» 43 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 43 ма! ІчІїе 5ег Рго Туг 5ег сіу Гу5 ТИПг АЗп Туг 5ег сп Гуз РНе Гуз 1 5 10 15 60 с1у «210» 44 65 «2115» 10 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» 70 «221» джерело
«223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 44
О1Уу Ге бек сіу А5зп Ре ма! Мет А5зр РНе 1 5 10 «210» 45 «211» 15 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (8)..(8) «223» /замінити-"А5р" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (11). .(11)3 «223» /замінити-"Рго"
Зо «220» «221» тізс Театиге «222» (13..(15) «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотаціях положень варіантів «400» 45
Аг Аїа 5ег сіи 5ег ма! А5зр 5ег Туг сіу Азп 5ег Ре Мет Ні 1 5 10 15 «210» 46 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (2)..(2) «223» /замінити-"Нів" «220» «221» ВАРІАНТ бо «222» (6)..:(6) «223» /замінити-"сІу" или "А5р" «220» «221» тізс Театиге 65 «222» (13.. (9) , й й й й «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотаціях положень варіантів 70
«400» 46 сіп сіп 5ег А5п сій АЇа Рго РгГо Тег 1 5 «210» 47 «2115» 5 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (33..(3) «223» /замінити-"сіу" «220» «221» ті5с Театиге «222» («13..(5) «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотацтях положень варіантів «400» 47
Азр Ттуг АТа мет нів 1 5 «210» 48 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (13..:513 «223» /замінити-"маї1" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (43..:(4)3 «223» /замінити-"Рпйе" или "Рго" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (6)..:(6) «223» /замінити-"5ерг" бо «220» «221» ВАРІАНТ «222» (8)..(8) «223» /замінити-"Г ув" 65 «220» «221» ВАРІАНТ «222» (123..(12) «223» /замінити-"5ерг" 70 «220»
«221» ВАРІАНТ «222» (14)3..(14) «223» /замінити-"А5п" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (16)..(16) «223» /замінити-"Ммет" «220» «221» ті5с Театиге «222» (13..(17) «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотацтях положень варіантів «400» 48 о1у ІчІЇїе бек Тк о туг Ре сІіу Агуд Тийг о АЗп туг АбЗп о сіп Гуз Ре Гуз 1 5 10 15 с1у
«210» 49 «2115» 10 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид"
«220» «221» ВАРІАНТ «222» (6)..:(6)
«223» /замінити-"РНе" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (8)..(8)
«223» /замінити-"маї1" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (103..(10)
«223» /замінити-"РНе" «220» «221» ті5с Театиге «222» (13..(10)
«223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотацтях положень варіантів
«400» 49 60 О1Уу Ге бек сіу Азп Туг ма! мес А5р туг 1 5 10 «2105» 50 65 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» 70 «221» джерело
«223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005 50
Аг Аїа б5ег А5р А5п гей Туг 5ег А5п Геи АїЇа 1 5 10 «2105» 51 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 51
А5Зр Аа тиг Ап геи АїЇа дор 1 5 «2105» 52 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220»
Зо «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 52 сіп ні Ре Тгр сЇу тТйг Рго Гей ТЕГ 1 5 «2105» 53 «2115» 5 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005 53 зег Туг тгр мет нів 1 5 «2105» 54 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» бо «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 54 65 сі ІЇе А5п о Рго Тиг доп с1у Агуд ТВг о АбЗп Туг Іч1Їе сій Гуз РНе Гуз 1 5 10 15 зег 70
«2105» 55 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005 55 с1у тйг Агд Аїа туг ніх туг 1 5 «2105» 56 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005 56
Аг Аїа 5ег си А5п ІЇе Туг 5ег А5п Геи АїЇа 1 5 10 «2105» 57 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 57
АЇїа Аїа тйг Ар Ге АїЇа дор 1 5 «2105» 58 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 58 сі ІЇе А5п о Рго ТИг доп с1у Агуд ТВг оАбЗп туг АбЗп си АЗп Ре Гуз бо 1 5 10 15 зег 65 «2105» 59 «2115 7 «2125 БІЛОК 70 «213» штучна послідовність
«221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005 59 с1у тйг Агу Аїа туг ніх РПе 1 5 «210» 60 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 60
Аг Аїа б5ег А5р дп ІЇе Туг 5ег А5Зп Геи АїЇа 1 5 10 «2105» 61 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 61
АЇїа Аїа тйг Атп Ге АїЇа дор 1 5 «2105» 62 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 62 сіп Ні Ре Тер сіу Тйг Рго Геци Мет 1 5 «2105» 63 «2115» 17 «2125 БІЛОК 60 «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний 65 пептид" «4005» 63 сі ІЇе А5п Рго ІЇе д5п сіу Агуд Тиг Ап Туг бег сій Гуз РНе Гуз 1 5 10 15 70
Гуз «210» 64 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 64
АТїа ма! тйг Атп Ге АїЇа дор 1 5 «2105» 65 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид"
Зо «4005» 65 сі ІЇе А5п Рго 5ег д5п с1іу Агуд ТВг о АбЗп Туг Ап си Тег РБе Гуз 1 5 10 15 зег «210» 66 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (43..:(4)3 «223» /замінити-"А5р" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (6)..:(6) «223» /замінити-"ІІе" (516) «220» «221» тізс Театиге «222» (13..(11) «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, 65 які не мають переваг відносно залишків в анотаціях положень варіантів «400» 66
Аг Аїа 5ег си А5п Ге Туг 5ег А5Зп Геи АїЇа 70 1 5 10
«2105» 67 2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (13..:513 «223» /замінити-"АїЇа" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (235..52)3 «223» /замінити-"маї1" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (43..:(4)3 «223» /замінити-"Ав5р" «220» «221» тізс Театиге «222» (13..57) «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотацтях положень варіантів «400» 67
АЗр АЇа Тйг АЗп Ге АїЇа дор 1 5 «2105» 68 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (93..(9) «223» /замінити-"Ммет" «220» «221» ті5с Театиге «222» («13..09) 60 «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотаціях положень варіантів «400» 68 65 сіп ні Ре Тгр сЇу тТйг Рго Гей ТЕГ 1 5 «2105» 69 70 «2115» 17
«2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (53..(5) «223» /замінити-"ІтІ1е" або "5ег" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (12)3..(12) «223» /замінити-"А5зп" або "5ег" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (14)3..(14) «223» /замінити-"Азп" або "те" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (173)3..(17) «223» /замінити-"Г ув"
Зо «220» «221» ті5с Театиге «222» (13..(17) «223» /примітка: залишки вартантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотацтях положень варіантів" «4005» 69 сі ІЇе А5п о Рго Тиг о Абп с1у Агуд Тс о АЗп туг ч1Їе сій Гуз РНе Гуз 1 5 10 15 зег «210» 70 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (73..57) 60 «223» /замінити-"РНе" «220» «221» ті5с Театиге «222» (13..57) 65 «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотацтях положень варіантів" «4005» 70 70 с1у тйг Агд Аїа туг ніх туг
1 5 «210» 71 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 71
Аг Аїа 5ег Гуз 5ег ІЇе бек Гуз Туг Геи Аїа 1 5 10 «2105» 72 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005 72 5зег сіу 5ег тТиг Геи сіп 5ег 1 5 «210» 73 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 73 сп сіп Ні Ап сої туго Рго Тер тег 1 5 «210» 74 «21156 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 74 60 5зег си туг АТа Тер А5п 1 5 «210» 75 65 «2115» 16 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» 70 «221» джерело
«223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 75 тукг ІІе 5ег Туг бек с1у тиг тТийг о бег Ттуг Азп Рго 5ег їеи уз 5ег 1 5 10 15 «210» 76 «211» 13 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 76 тукг сТу туг с1у А5п РгГО АЇїа Тйг Агуд туг Ре д5р маї 1 5 10 «210» 77 «211» 15 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220»
Зо «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 77
Аг Аїа Агуд сіп б5ег Ма! бег ТИг бег 5ег Туг 5ег Ре Меє Ні 1 5 10 15 «210» 78 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 78 туг АТа 5ег ІЇе сіп сЇи 5ег 1 5 «210» 79 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» бо «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 79 65 сіп ніх Тс Тер сої І1Ї1е Рго РПе ТНг 1 5 «210» 80 70 «2115» 5
«2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 80 зег Туг тгр мет нів 1 5 «210» 81 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 81
АЗзп о ІІе туг Рго сіу бек сіу 5ег ТИйг Гуз туг А5р си Аг РПе Гуз 1 5 10 15 зег
Зо «2105» 82 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 82 с1у сіу Ттуг Азр 5ег Агд АЇа Тгр Ре АїЇа туг 1 5 10 «2105» 83 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 83
Азп ІЇе Ттуг Рго сіу б5ег сіу б5ег ТИйг Гуз Туг А5Зр си Гуз РНе Гуз бо 1 5 10 15 зег 65 «210» 84 «2115 11 «2125 БІЛОК 70 «213» штучна послідовність
«221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 84 с1у сіу Ттуг Азр 5ег Аг АЇа Тгр Ре Аїа Ні5 1 5 10 «2105» 85 «2115» 12 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 85
Тис отТиг об5ег об5ег бек ма! Рго 5ег 5ег Туг Ріе Ні 1 5 10 «210» 86 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 86 5зег ТИг 5ег Азп Геи АїЇа 5ег 1 5 «210» 87 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 87
Ні сіп туг НІі5 Агд бег Рго Ре ТЕг 1 5 «2105» 88 «2115» 5 «2125 БІЛОК 60 «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний 65 пептид" «4005» 88
Азр Туг туг мес туг 1 5 70
«210» 89 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 89 5ег ІІе 5ег Ап сіу сІ1у А5р АЗп о ТИйг о Туг туго Рго Азр Тег маї Гуз 1 5 10 15 с1у «2105» 90 «211» 15 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид"
Зо «4005» 90 сп с1у Аїа гей туг А5р сіу Туг туг Агд сІ1у АїЇа мес А5р туг 1 5 10 15 «210» 91 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 91
Аг Аїа с1у сп д5р че Тиг А5Зп Туг Геи А5бп 1 5 10 «2105» 92 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" (516) «4005» 92 туг тТНг 5ег Агд Гей Ні 5ег 1 5 65 «210» 93 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність 70
«221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 93 сіп сіп АТа доп о тг огей Рго Туг Тег 1 5 «210» 94 «2115» 5 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 94
Азп Ттуг Ттр Пе сим 1 5 «210» 95 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 95 сій т1Ііе Гей Рго сіу 5ег сІу бек ТИг Гуз туг Азп сіи Гуз РНе Гуз 1 5 10 15 с1у «210» 96 «2115» 12 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «400» 96
Агд сіу сїу туг сіу туг Азр оЇу сім Ре Аїа туг 1 5 10 бо «210» 97 «211» 15 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність 65 «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" 70
«221» ВАРІАНТ «222» (13..:513 «223» /замінити-"ТЕис" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (235..(52)3 «223» /замінити-"ТЕис" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (33..(3) «223» /замінити-"5ег" або "су" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (43..:(4)3 «223» /замінити-"5ес" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (5)..(8) «223» /замінити-" " «220» «221» ВАРІАНТ «222» (93..(9) «223» /замінити-"ма!" або "д5р" 0) «220» «221» ВАРІАНТ «222» (103..(010)3 «223» /замінити-"Рро" або "те" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (1135..(«113 «223» /замінити-"б5ек" або "тис" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (123..(012) «223» /замінити-"А5п" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (133..(13) «223» /замінити-"Тус" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (14)3..(14) «223» /замінити-"РиПе" або "ІГеи" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (153..(015) «223» /замінити-"А5п" 10) «220» «221» тізс. Театиге «222» (13..(15)3 «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, 65 які не мають переваг відносно залишків в анотацтях положень варіантів" «400» 97
Аг Аїа Агуд сіп б5ег ма! бек тТиг 5ег о 5ег о Туг 5ег Ріе Мет нів 70 1 5 10 15
«2105» 98 2115 7 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (13..:513 «223» /замінити-"5ег" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (235..52)3 «223» /замінити-"Тиг" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (43..:(4)3 «223» /замінити-"А5п" або "Агд" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (53..(5) «223» /замінити-"Гец" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (6)..:(6) «223» /замінити-"Аїа" або "Н1і5" «220» «221» ті5с Театиге «222» (13..57)3 «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотацтях положень варіантів"
«4005» 98 туг АТа 5ег Пе сіп сіи 5ег 1 5
«210» 99 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність
«220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" 60 «220» «221» ВАРІАНТ «222» (13..:513 65 «223» /замінити-"Нів" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (235..52)3 70 «223» /замінити-"сіп"
«221» ВАРІАНТ «222» (33..(3) «223» /замінити-"Ттук" або "Аа" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (43..:(4)3 «223» /замінити-"Нів" або "Азп" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (53..(5) «223» /замінити-"Агуд" або "тис" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (6)..:(6) «223» /замінити-"б5еск" або "Ге" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (8)..(8) «223» /замінити-"Тус" «220» «221» тізс.
Театиге «222» («13..09)
«223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотаціях положень варіантів"
«400» 99 сіп ніх Тс Тер сої І1Ї1е Рго РПе ТНг 1 5 «210» 100 «2115» 5 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид"
«220»
«221» ВАРІАНТ
«222» (13..:513
«223» /замінити-"Азр" або "А5зп" «220»
«221» ВАРІАНТ
«222» (33..(3)
«223» /замінити-"Тус" 60 «220»
«221» ВАРІАНТ
«222» (43..:(4)3
«223» /замінити-"Іе" 65 «220»
«221» ВАРІАНТ
«222» (53..(5)
«223» /замінити-"Ттук" або "си"
70 «220»
«221» тізс.
Театиге «222» («13..(5) «223» /примітка: залишки вартантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотацтях положень варіантів" «400» 100 5зег Ттуг Тгр Меє нів 1 5
«2105» 101 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» («13..413 «223» /замінити-"б5ек" або "си" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (33..(3) «223» /замінити-"б5еск" або "Ге" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (4)..:(4) «223» /замінити-"А5п" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (6)..:(6) «223» /замінити-"сТу" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (73..57) «223» /замінити-"А5р" «220» «221» ВАРІАНТ 5О «222» (83..(8) «223» /замінити-"А5п" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (103..(10)3 «223» /замінити-"Тус" «220» «221» ВАРІАНТ 60 «222» (123..(12)3 «223» /замінити-"Ргко" або "Ап" «220» «221» ВАРІАНТ 65 «222» (133..(13) «223» /замінити-"А5р" «220» «221» ВАРІАНТ 70 «222» (143..(14)3
«223» /замінити-"Гуз" або "ти" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (15)..(15) «223» /замінити-"маї1" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (173)3..(17) «223» /замінити-"сТу" «220» «221» ті5с Театиге «222» (13..(17) «223» /примітка: залишки вартантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотаціях положень варіантів" «4005» 101
АЗзп о ІІе туг Рго сіу бек сіу 5ег ТИйг Гуз туг А5р си Аг РПе Гуз 1 5 10 15 зег «2105» 102
Зо «211» 15 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (13..:513 «223» /замінити-"сіп" або "Агд" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (33..(3) «223» /замінити-"Аїа" або "шу" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (43..:(4)3 «223» /замінити-"Геи" або "тус" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (53..(5) «223» /замінити-"туг" або "пу" бо «220» «221» ВАРІАНТ «222» (6)..:(6) «223» /замінити-"Азр" або "тус" 65 «220» «221» ВАРІАНТ «222» (73..57) «223» /замінити-"сІу" або "А5р" 70 «220»
«221» ВАРІАНТ «222» (8)..(8) «223» /замінити-"Ттуг" або "су" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (93..(9) «223» /замінити-"Ттук" або "си" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (103..(10) «223» /замінити-" Ре" або " " «220» «221» ВАРІАНТ «222» (11)3..(13) «223» /замінити" " «220» «221» ВАРІАНТ «222» (14)3..(14) «223» /замінити-"Ав5р" «220» «221» ВАРІАНТ «222» (15)..(15) «223» /замінити-"Нів"
Зо «220» «221» тізс Театиге «222» (13..(15) «223» /примітка: залишки варіантів, наведені в послідовності, які не мають переваг відносно залишків в анотаціях положень варіантів" «4005» 102 сІ1у сіу туг Ар 5ег Аг АЇїа Тгр Ре Агуд сІіу АЇа мес АїЇа туг 1 5 10 15 «210» 103 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» Ното зарієп5 «4005» 103
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5 Агу Аїа 5ег сіп сЇу ІЇе 5ег А5п 5ег 20 25 30
Гей АЇа Тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гу5 АЇа Рго їТуз ей їеи Геий 35 40 45 60 туг АТа Аїа 5ег Агуд Ге сіи б5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг о Азр Туг ТигогГеи Тиг о ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 65 70 75 80 сій А5р Ре Аїа тТийг о туг туго Суз соЇп соЇп туго туг бег ТНг о Рго тТуг 85 90 95 70
Тиг Ре сіу сіп сіу тйг Гуз їГеи сіи ІІе Гуз 100 105 «2105» 104 «2115» 107 «2125 БІЛОК «2135 Ми5 ти5сии5 «4005» 104
Азр ІІе сіп Меє тийг осіп 5ег Рго АЇа 5ег Ге 5ег мМа!Ї 5ег маї сіу 1 5 10 15 сіи тис ома! тс оІТе тйг о сСуз Агуд АТа 5ег дор Ап Гей Туг 5ег дзп 20 Гей Аїа Тер Туг сп сіп Гуз сіп оІу Гуз 5ег Рго сіп Геи Геи маї туг АЗр АЇїа Тйг Ап Ге АЇїа А5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 25 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу тйг сіп Ттуг 5ег гей Гу5 ІЇе А5зп 5ег їеи сіп 5ег 65 70 75 80
Зо сі! А5р Ре сіу Ттийг отуг туго Суз сіп Ні Ре Тгр сіу тТНг Рго Гей 85 90 95 35
Тиг Ре су АТа сіу тиг Гуз їеи си Геи Гуз 100 105 40 «210» 105 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність 45 «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 105
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Гей 5ег АЇа 5ег маїЇ сС1У 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5 Аг АЇїа 5ег А5р АЗзп Геу Туг 5ег дп 20 25 30
Гей АЇїа Тер туг сіп сіп Гу5 Рго сіу Гу5 5ег Рго Гуз Геци Геи маї бо 35 40 45 туг АЗр АЇїа Тйг Ап Ге АЇїа А5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 65 5ег сіу 5ег сіу ТИг о Азр Туг ТигогГеи Тиг о І1Їе 5ег 5ег гей сп РгОо 65 70 75 80 70 сі А5р Ре АЇїа Ттийг туго туг Суб сіп Ні Ре Тгр сіу тТНг Рго Гей 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тиг Гуз ма! сім ІЇе Гуз 100 105 «210» 106 «2115» 112 «2125 БІЛОК «2135 Ното з5аріеп5 «4005» 106 сп ма! сіп Гей ма! сіп 5ег сіу АТа сЇи ма! уз гГу5 Рго о1у АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 25 30
АТа меє ні Ттгр ма! Агуд сіп АТа Рго сІу сіп Агу Ге сіи Тер мес 35 40 45 сіу Тер ІІе А5п АЇа сіу доп сіу Аб5п о Тс огуз Туг 5ег сп Гуз РНе 50 55 60
Зо сіп сіу Агуд ма! тийг от1Те Тйг Агуд АЗр о тг 5ег АЇа б5ег тиг Аїа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
Аїа Агуд Ре Ар ма! Тгр сіу сіп сіу тТйг мес ма! тиг ма! 5ег 5ег 100 105 110 «2105» 107 «2115» 116 «2125 БІЛОК «2135 Ми5 ти5сии5 «4005» 107 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег маЇ Гуз Гей 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу Ттуг Тиг Ре тиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 (516) со1у сім ч11е А5п о РгГоО Тйг о А5п с1іу Агуд ТВг о АбЗп Туг Іч1Їе сіи Гуз РПе 50 55 60 65 Гуз б5ег Гуз АїЇа Тийг о Ге Тйг о ма! А5р Гуз 5ег бег б5ег Тиг Аа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о 5ег сій Ар 5ег АЇа ма! Туг туг су 70 85 90 95
Аїа Агд с1у тиг Аг Аїа туг Ні Туг Тер сЇу сіп сІу тс 5ег ма! 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «210» 108 «2115» 116 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 108 сіи ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу АЇа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз ма!Ї 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сп Аг гГеи сіи Тер Те со1у сім ч11е А5п о РгГоО Тйг о А5п с1іу Аг ТВг Ап Ттуг ч1Їе си Гуз РПе 35 50 55 60
Гуз 5ег Агуд Аїа тТийг о Ге Тйг ма! А5р Гуз 5ег АЇа б5ег Тиг Аїа туг 65 70 75 80 40 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі Азр Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95 45
Аїа Агд с1у тТиг Агд Аїа тукг Ні Туг Тер сіу сіп сІу тНг меє маї 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «210» 109 «2115» 113 «2125 БІЛОК «2135 Ното з5аріеп5 «4005» 109 60 Азр чІІе ма! Мет тийг о сіп б5ег Рго А5р 5ег Гей АїЇа ма! 5ег Геи су 1 5 10 15 сій Аг Аїа Тис о ІЇе А5п Суз Гуз 5ег 5ег сіп б5ег ма! Ге туг 5ег 65 20 25 30 5зег Ап А5п губ А5Зп Туг Ге АЇа Тгр Туг сіп сіп Гу5 Рго с1у сп 35 40 45 70
Рго Рго Гуз Гей Гей ІІе Ттуг Тгр АТа 5ег Тийг Агд сіи 5ег су маї 50 55 60
Рго А5р Агу Рпе б5ег сіу 5ег сіу 5ег сІу ТИйг А5зр Ре тиг Ге тег 65 70 75 80
ІІе 5ег 5ег Ге сіп АТа сі А5р ма! АїЇа ма! туг туг су5 сіп сп 85 90 95
Ттуг туг бек ТИг о Рго Туг Тйг Ре СІу сіп сІу тйг Гуз Ге си Іе 100 105 110
Гуз «2105» 110 «2115 111 «2125 БІЛОК «2135 Ми5 ти5сии5 «4005» 110
Азр ІІе ма! гей тйг сіп 5ег Рго АЇа 5ег Геи АЇа маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15
Зо сп Аг Аїа Тс о ІЇе б5ег сСуз Агуд АЇїа 5ег сіи бег ма! А5р 5ег туг 20 25 30 с1у А5п о б5ег Ре Мет Ні Тгр туг сіп сіп Гуз Рго сіу сіп Рго РгО 35 40 45
Гуз Гей Гей ІїІе туг Агд АЇа 5ег Азп Ге сіи б5ег сіу Іе Рго АїЇа 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІ1у 5ег сіу бек Аг ТИг Ар Ре тиг Ге Тиг ІЇе дА5бп 65 70 75 80
Рго ма! сій Аїа А5р Азр ма! Аїа тйг о туг туг Су5 сіп сіп 5ег дзп 85 90 95 сій сіу Рго Рго ТИг Ре СсСІу сіу сіу Ттиг уз Гей сіи Іе Гуз 100 105 110 «2105» 111 «2115 111 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність (516) «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" 65 «4005» 111
Азр ІчІІе ма! Ммеє тйг о сіп 5ег Рго Азр 5ег Ге АЇа маїЇ 5ег Гей Сс1У 1 5 10 15 70 сій Аг Аїа Тс о ІЇе А5п сСуз Агуд Аїа б5ег сіи бег ма! А5р 5ег туг 20 25 30
О1Уу А5п о бег Рпе Мет ніх Тегр Туг сіп сЇп Гуз Рго сіу сіп Рго РгОо 35 40 45
Гуз Гей Гей ІїІе туг Агуд АЇїа бек Азп Ге сіи бег сіу ма! Рго дор 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек Аг ТиПг дор Ре Тийг Ге Тиг ІЇе 5ег 65 70 75 80 5ег Гей сіп Аїа сі А5зр ма! Аїа ма! Ттуг туг Су5 сіп сіп 5ег дп 85 90 95 сій АЇїа Рго Рго Тиг Ре СІу сіп сіу Ттиг уз Гей сіи те Гуз 100 105 110 «2105» 112 «2115» 112 «2125 БІЛОК «2135 Ното з5аріеп5 «4005» 112 сіп ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу АЇа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз ма! 5ег сСуз Гуз АЇїа 5ег сіу Туг ТиПг Ре тийг сТу туг 20 25 30 тукг мет ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сіп сіу гГеи сіи Ттгр мес 35 40 45 сіу Тер ІІе А5пП РгГО Ап 5ег сіу сіу Тйг А5Зп Туг АЇа сіп Гуз РНе 50 55 60 сіп сіу Агуд ма! тийг мес тйг Агу АЗр о тиг о б5ег І11е б5ег тНг Аїа туг 65 70 75 80 мес сіи їеи бек Агуд Ге Агд бег А5р Ар ТИг АЇа ма! туг туг суз 85 90 95
АТа Агд Мет А5р туг Тгр сіу сЇп сіу Тс тс ма! тиг ма! 5ег 5ег 100 105 110 «2105» 113 бо «2115» 119 «2125 БІЛОК «2135 Ми5 ти5сии5 «4005» 113 65 сп ма! сіп гей соЇп сіп б5ег сіу Рго сЇи Ге маї Агуд Рго су маї 1 5 10 15 5ег ма! Гуз ІІе 5ег Су5 Гуз сіу бек сІіу туг Тйг Ре Тиг Азр туг 70 20 25 30
АТа мес ніх тер ма! Гуз сіп 5ег Ні5 АїЇа Гуз 5ег Гей сіи Тер Іе 35 40 45 сІ1у сіу че бек тТийг о туг Ре сіу Аг тТНг доп тТуг Ап сп Гуз РВе 50 55 60
Гуз сіу Агуд Аїа тТийг Мет тийг ма! А5р Гуз 5ег бег б5ег Ттиг Аа туг 65 70 75 80 мес сім Гей Аїа Агуд Геи Тийг бек си Азр 5ег АЇа геи Туг туг сСуз 85 90 95
Аїа Агуд с1у Ге б5ег сіу Азп Ттуг ма! Мет Азр туг Тгр с1у сп с1у 100 105 110
Тис б5ег ма! тТиг ма! 5ег 5ег 115 «2105» 114 «2115» 119 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 114 сіи ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу АЇа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз ма!Ї 5екг Су5 Гуз сіу бек сІіу туг Тйг Ре Тиг Азр туг 20 25 30
АТа меє ні Ттгр ма! Агуд сіп АТа Рго сІу сіп сЇу Ге сіи Тер мес 35 40 45 сІ1у сіу ч11е бек Ттийг о туг Ре сіу Аг тТНг доп тТуг Ап сп Гуз РВе 50 55 60
Гуз сіу Агд ма! тийг Мет тийг ма! А5р тиг 5ег ІЇе б5ег тНг Аїа туг 65 70 75 80 мес сіи їеи бек Агуд Ге Агд бег А5р Ар ТИг АЇа ма! туг туг суз 85 90 95 (516)
Аїа Агуд с1у Ге б5ег сіу Азп Ттуг ма! Мет Азр туг Тгр сТ1у сп с1у 100 105 110 65
Тк тис ма! тис ма! 5ег 5ег 115 70 «2105» 115
«2115» 113 «2125 БІЛОК «2135 Ното 5аріеп5 «4005» 115
Азр ІІе ма! Ммеє тйг сіп 5ег Рго Азр 5ег Гецй АЇа маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15 сій Аг Аїа Тис о ІЇе А5п Суз Гуз 5ег 5ег сіп б5ег ма! Ге туг 5ег 20 25 30 5зег Ап А5Зп губ А5Зп Туг Ге АЇа Тгр Ттуг сіп сіп Гу5 Рго сІ1у сіп 35 40 45
Рго Рго Гуз Гей Гей ІІе Туг Тгр АТа 5ег Тийг Агд сіи 5ег су маї 50 55 60
Рго А5р Агу Рпе б5ег сіу 5ег сіу 5ег сІу Тйг А5зр Ре тНг Ге тЕг 65 70 75 80
ІчІІе 5ег 5ег Ге сіп АЇїа сій А5р ма! Аїа ма! туг туг Ссу5 сп сп 85 90 95
Тукг туг 5ег ТИйг о Рго Ре Тийг Ре сіу сіп сІу тйг Гуз ма! сіїи Пе 100 105 110
Гуз «2105» 116 «2115 111 «2125 БІЛОК «2135 Ми5 ти5сии5 «4005» 116
Азр ІІе ма! Гей тйг сіп 5ег Рго АЇа 5ег Геи АЇа маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15 сп Аг Аїа Тс о ІЇе 5ег сСуз Агуд Аїа Агуд сіп бег ма! 5ег тНг 5ег 20 25 30 5зег Туг бег Ре Мет ніх Тгр туг Агд сіп Гуз АЇїа сІЇу сіп Рго РГгО 35 40 45
Гуз Ге Гей ІчІЇе Гуз Ттуг АЇїа 5ег ІЇе сіп сі 5ег сіу ма! Рго АїЇа 50 55 60 60 Аг Рпе б5ег сІу 5ег сіу бек сІ1у ТИйг А5р Ре тНг Геи А5п ІїЇе г еи 65 70 75 80
Рго ма! сій сіи сій Азр Тг о Аїа тТйготугєс туго Суз сіп ніх тег тер 65 85 90 95 сій 1і1е Рго Ре ТиПг РПе сСІу 5ег сіу Тиг Гуз Гей сіи Іе Гуз 100 105 110 70
«2105» 117 «2115 111 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 117
Азр ІІе ма! Ммеє тйг сіп 5ег Рго Азр 5ег Гецй АЇа маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15 сій Аг Аїа Тис о ІЇе А5п сСуз Агуд Аїа Агуд сіп бег ма! 5ег тНг 5ег 20 5зег Ттуг 5ег Рпе Мет Ні5 Тгр Туг сіп сіп Рго АЇа сіу сіп Рго Рго 25 Гуз Гей гей ІЇе Гуз туг АЇїа бек ІЇїе сЇп сіи бег сіу маї Рго др 60
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек сІу Тйг Ар Ре тиг Ге Тиг ІЇе 5ег 30 65 70 75 80 5ег Гей сіп Аїа сі А5зр ма! Аїа ма! туг туг Су5з сіп ніх Тис тер 85 90 95 35 сій 1і1е Рго Ре Тийг Ре СсСІу сіп сіу тТийг Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110 40 «2105» 118 «2115» 112 «2125 БІЛОК «2135 Ното з5аріеп5 45 «4005» 118 сіи ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу АЇа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 50 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 25 30 55 тукг Пе ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 сіу Тер ІІе А5п РгГоО сіу 5ег сіу А5п Тйг А5п о Туг АЇа сіп Гуз РНе бо 50 55 60 сіп сіу Агуд ма! тийг от1Те Тйг Агу АЗр о тиг об5ег о тиг б5ег тиг АїТа туг 65 70 75 80 65 ем сі їеи бег б5ег Ге Агд бег сі АЗзр Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95 70
Аїа Агуд Ре Ар Туг Тгр сіу сіп сіу тТйгоїеи ма! тиг ма! 5ег 5ег 100 105 110 «2105» 119 «2115» 120 «2125 БІЛОК «2135 Ми5 ти5сии5 «4005» 119 сп ма! сіп гей сп сіп Рго сіу бек сЇи Ге ма! Агуд Рго Ос1у АїЇа 1 5 10 15 зег ма! Гуз Ге б5ег Суз Гуз АЇїа б5ег сіу Туг ТНПг РНе тиг 5ег туг
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд ніх сіу сіп су гей сіи Тер Пе 20 35 40 45
О1Уу А5п о ІЇе Туг Рго сіу 5ег сіу б5ег Тиг Гуз туг Азр си Ага РПе 50 55 60 25
Гуз 5ег Гуз сіу Тийг Ге Ттийг омаї А5р тТийг 5ег б5ег 5ег Тиг АїЇа туг 65 70 75 80
Зо мес ні Гей 5ег б5ег ге ТИг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
Тк Агуд сіу сіу Туг Азр 5ег Агд АЇа Тгр Ріє АїЇа Туг Тгр с1у сп 100 105 110 сіу тйг Ге ма! тиг маї 5ег Аїа 115 120 «2105» 120 «2115» 120 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 120 сіи ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу АЇа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5з Гуз АЇа 5ег сіу Туг Тиг РМПе тиг 5ег туг 20 25 30 (516)
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 65
О1Уу А5п о ІЇе Туг Рго сіу 5ег сіу б5ег Тиг Гуз туг Азр си Ага РПе 50 55 60 70 Гуз б5ег Агуд ма! тТийг о ІЇе тйг ма! А5р о тиг 5ег о тиг о б5ег тиг АїТа туг
65 70 75 80 ем сі їеи бег б5ег Ге Агд бег сі АЗзр Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
Тк Агуд сіу сіу Туг Азр 5ег Агд АЇа Тгр Ріє АїЇа Туг Тгр с1у сп 100 105 110 сіу тйг Ге ма! тиг маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 121 «2115» 107 «2125 БІЛОК «2135 Ното з5аріеп5 «4005» 121
АЗр ІЇе сіп Гей Тйг осіп 5ег Рго 5ег Рпе Гей 5ег АЇа 5ег ма! сІу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5 Аг АЇїа 5ег сіп с1у ІЇїе 5ег 5ег туг 20 25 30
Гей Аїа Тер Туг сп сіп Гуз Рго су Гуз АїЇа Рго їу5 Геи Ге Пе туг АТа Аїа 5ег Тк Ге сіп б5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 35 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу Ттйг сій Ре тТиг гей Тиг ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 40 сі А5р Ре АЇїа Ттийг о туго туг Суб5 сіп сіп ге АЗп 5ег о Туг Рго Тер 85 90 95 45
Тис Ре сіу сіп сіу тйг Гуз ма! сіи че Гуз 100 105 «2105» 122 «2115» 107 «2125 БІЛОК «2135 Ми5 ти5сии5 «4005» 122
Азр ма! сіп чІЇе тйг сіп 5ег Рго 5ег Туг Гей Тиг Аїа 5ег Рго сіІу 1 5 10 15 60 сі тис отче тиск о ІЇе доп сСуз Агуд Аїа 5ег Гуз бег ІЇе 5ег Гуз Туг 20 25 30
Гей АЇа Тер туг сіп сіи Гу5 Рго сіу Гу5 ТИг Ап Гуз Гей їГеи Пе 65 35 40 45 туг 5ег сіу 5ег Тк Ге сіп б5ег сіу ІЇе Рго 5ег Агуд Ріпе 5ег су 50 55 60 70
5ег сіу 5ег сіу Тйг А5р Ре Тиг Гей Тиг ІЇе 5ег Азп Ге сіи Рго 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Мет Туг Туг Су5 сіп сіп Ні А5п сі Туг Рго Тер 85 90 95
Тк Ре сіу сіу сіу тиг Гуз Геи сіи ІЇе Гуз 100 105 «2105» 123 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 123
Азр чІІе сіп Мет тТийг о сіп бег Рго 5ег 5ег їеи 5ег АЇа 5ег ма! с1у 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5 Аг АЇїа 5ег їу5 бег ІІе 5ег Гуз тТуг 20 25 30
Гей Аїа Тер Туг сп сіп Гуз Рго сЇу Гуз Тйг Ап їу5 Геи Геи Геи 35 туг 5ег сіу 5ег Тк Ге сіп 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 60 40 5ег сіу 5ег сіу ТИг о А5р тТуг ТигогГеи Тиг о ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 45 сій А5р Ре Аїа тийг туго туг Су5 сп оп Ні А5п сій тує Рго Тер 85 90 95
Тис Ре сіу сіп сіу тйг Гуз ма! сіи че Гуз 50 100 105 «2105» 124 «2115 111 55 «2125 БІЛОК «2135 Ното з5аріеп5 «4005» 124 сіп ма! сіп ге сіп сій б5ег сіу Рго сіу Ге ма!Ї Гуз Рго 5ег Си бо 1 5 10 15
ТИг Ге бек ге Тиг о Суз Тиг ома! 5ег сіу сіу 5ег ІІе 5ег 5ег тТуг 20 25 30 65 туг тер 5ег Тер ІЇе Агу сп Рго Рго сІіу Гуз сІу гГеи сЇи Тгр Пе 35 40 45 70 сіу туг чІІе Туг туг бек сІ1у 5ег ТИг о АЗзп Туг Азп Рго 5ег Геи Гуз 50 55 60 зег Агуд ма! тТийг ІЇе бек ма! А5р Тийг 5ег їу5 А5Зп сп Ре 5ег 1еи 65 70 75 80
Гуз Ге б5ег 5ег ма! Тс АТа Аїа А5р Тийг АЇїа ма! туг туг сСуз АїЇа 85 90 95
Агд Ммеє Ар ма! Тер сіу уз соІу тТйг тис ма! тег маї 5ег 5ег 100 105 110 «2105» 125 «2115» 122 «2125 БІЛОК «2135 Ми5 ти5сии5 «4005» 125
Азр ма! сіп гей сіп сій 5ег сІіу Рго сІу Ге ма! Гу5 Рго 5ег СсіІп 1 5 10 15 5зег Гей 5ег гей Тиг о Суз ТиИг Ома! тк с1у Азп 5ег ІЇе тиг 5ег си 20 25 30
Зо туг АТа Тер А5Зп Тер ІЇе Агуд сіп Ре Рго су А5п Гуз Геи си тТгр 35 мес сіу туг ІІе 5ег Туг 5ег сіу тТийг тНг 5ег туг Азп РгОо 5ег Геи 60
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег ІЇе Тйг Агуд Азр Тиг 5ег Гуз А5зп сЇп Ге РПе 40 65 70 75 80
Гей сіп Гей А5п о б5ег ма! Тийг отийг сій Азр Тс АТа тс отуг РВе су 85 90 95 45
АТїа Агд туг сІїу Ттуг с1у А5зп РгГоО Аїа Тйг Агдуд Ттуг РБе А5р ма! тгр 100 105 110 50 с1у Аїа сіу тйг о тигомаї тиг о маї 5ег 5ег 115 120 55 «2105» 126 «2115» 122 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність бо «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" 65 «4005» 126 сіи ма! сіп ге ма! сі б5ег сіу Рго сіу Ге ма!Ї Гуз Рго 5ег Си 1 5 10 15 70 Тк Ге б5егогеи Тк о Суз тТиг о ма! 5ег сіу Ап 5ег ІЇе тиг 5ег си
20 25 30 туг АТа Тер А5п Тгр ІЇе Агду сіп Рго Рго су Гуз СсІу Гей си Тер 35 40 45
ІІе сІу туг ІІе б5ег Туг бек сіу Тиг тиг об5ег о Туг АзЗзп РГгГО 5ег Гей 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ма! тТиг ІЇе 5ег Агуд Азр Тиг 5ег уз Азп сп Геи 5ег 65 70 75 80
Гей Гуз Гей 5ег б5ег ма! Тиг Аїа Аїа А5зр Ттйг АТа ма! Ттуг туг су 85 90 95
АТїа Агд туг сІ1у Ттуг с1іу А5п РгГоО АЇїа Тйг Агуд тує РБе д5р ма! тер 100 105 110 сіу сіп сіу тйг огГеи маї тиг маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 127 «2115» 9
Зо «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 127 сп сіп б5ег А5п си Аа Рго Рго ТЕГ 1 5 «2105» 128 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 128 сіп ні Ре Тер сІу Тйг Рго Гей ТЕГ 1 5 «2105» 129 «2115 7 бо «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело 65 «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 129 о1у тйг Агд Аїа туг ніх туг 70 1 5
«210» 130 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 130 сп сіп б5ег А5п сої АЇїа Рго Рго ТЕГ 1 5 «2105» 131 «2115» 10 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 131 с1у Ге б5ег сіу Азп Туг ма! Меє дор туг 1 5 10 «2105» 132 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 132
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тийг оче тийг сСу5 Агу Аїа 5ег сіп Азр ма! 5ег тиг Аїа 20 25 30 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Гей ІїЇе 35 40 45 туг 5ег Аїа 5ег РПе Ге Туг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 60 5зег сіу б5ег сТ1у Тйг А5р РПе тТийг Ге Тийг ІЇе 5ег 5ег Гей сіп РгОо 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг отуг туго Суб сіп сіп 5ег о Туг ТВйг тег Рго РгГО 65 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 70
«210» 133 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 133
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тийг о ч1Те тТийг сСу5 Агу АЇїа 5ег сіп Азр ма! 5ег тиг Аїа 20 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Гей ІїЇе 25 туг 5ег Аїа 5ег РПе Ге Туг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг А5р Ре Тиг Гей Тиг ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 30 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийготуг туго Суб сіп сіп РБе Рго Тйг туго гГеи Рго 85 90 95 35
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 40 «2105» 134 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність 45 «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" 50 «4005» 134
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Гей 5ег АЇа 5ег маїЇ сС1У 1 5 10 15 55
А5Зр Агуд Ма! тийг о ч1Те тТийг сСу5 Агу АЇїа 5ег сіп Азр ма! 5ег тиг Аїа 20 25 30 60 ма! Аїа тгр туг сіп сіп гу5 Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Ге Ге Пе 35 40 45 туг 5ег Аїа 5ег РПе Ге Туг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 65 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг А5р Ре Тиг о їеи Тиг ІЇе 5ег 5ег Гей сп Рго 65 70 75 80 70 сі А5р Ре АЇїа тТийг о туго туг Су5 сіп сіп сіу туг А5Зп о А5Зр Рго РгГО 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тик Гуз ма! сім ІЇе Гуз Ага 100 105 «210» 135 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 135
Азр ІІе сіп Меє тТийг о сіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тийг оче тийг сСу5 Агу Аїа 5ег сіп Азр ма! 5ег тиг Аїа 20 25 30 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сІ1у Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Гей ІїЇе
Ко) 35 40 45 туг 5ег Аїа 5ег РПе Ге Туг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг А5р Ре Тиг Гей Тиг ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг отуг туг Суб сіп сіп 5егобег ТТГ о А5Зр Рго тег 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 «210» 136 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 136 60 Азр чІІе сіп Мет тТийг о сіп бег Рго 5ег 5ег їеи 5ег АЇа 5ег ма! с1у 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1Те Тиск сСу5 Агуд АЇїа 5ег сіп ма! ма! Аїа дА5п 5ег 65 20 25 30
Гей АЇа Тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гуз АЇа Рго Гуз Гей їГеи Пе 35 40 45 70 туг Гей Аїа 5ег РПе Ге Ттуг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг А5р Ре Тиг Гей Тиг ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 сій А5р Ре Аїа тийг туго туг Су5 оп сп д5р АЇїа Тс о5ег Рго РгО 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 «2105» 137 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 137
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тийг оче тийг сСу5 Агу Аїа 5ег сіп Азр ма! 5ег тиг Аїа 20 25 30 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Гей ІїЇе 35 40 45 туг 5ег Аїа 5ег РПе Ге Ттуг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5зег сіу б5ег сІ1у Тйг А5р РПе тТийг Ге Тийг ІЇе 5ег 5ег Гей сіп РгОо 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг о туго туг Су5 сіп сіп туг АТа ТтВг о А5Зр о Рго РгГО 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 «210» 138 «2115» 119 «2125 БІЛОК 60 «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний 65 поліпептид" «4005» 138 сіи ма! сіп ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Ге ма!ї сіп Рго сІу с1Уу 1 5 10 15 70 зег їеи Агуд Гей 5ег Суз АїЇа Аїа 5ег сіу Ре Тийг РПе 5ег сІу туг 20 25 30
Аїа ІІе ні5 Тгр ма! Агуд сіп Аїа Рго сІу їу5 ОоЇУу Геи сіи Тер ма! 35 40 45 со1у Тер ІЇе б5ег Рго АЇа сіу сіу бек ТНг А5р Туг АЇа Азр 5ег маї 50 55 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег АЇа А5р тТиг 5ег о їу5 АЗп Тиг Аїа туг 65 70 75 80
Ге сіп Меє А5зп 5ег Гей Аг АїЇа сій А5зр Тиг АЇа ма! туг туг суз 85 90 95
Аїа Агд с1у Рго Ре б5ег Рго Тгр ма! Мет Азр туг Тгр сТ1у сп с1у 100 105 110
Тк Се ма! тТиг ма! 5ег 5ег 115 «2105» 139 «2115» 119 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 139 сіи ма! сіп ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Ге маїЇ сіп Рго сІу сі1у 1 5 10 15 зег їеи Агуд Гей 5ег Суз АЇа Аїа 5ег сіу Ре тТНг РіПе гГеи сІу туг 20 25 30 о1у те ніх Тер ма! Агд сіп АїЇа Рго су Гуз СсІ1у гей сіи Тгр ма! 35 40 45 сіу Тер тІІе 5ег Рго АЇа сіу сіу 5ег ТиПг А5зр Туг АЇа А5р 5ег маї 50 55 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег АЇа Ар Тиг 5ег Гуз Азп ТИг Аїа туг 65 70 75 80 (516)
Ге сіп Меє Азп 5ег Ге Аг АїЇа сі Азр Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95 65 Аїа Агд с1у Рго Ре 5ег Рго Тгр Ма! мех д5р туг Ттгр с1у сп с1у 100 105 110
Тк Се ма! тТиг ма! 5ег 5ег 70 115
«2105» 140 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 140
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе тТийг сСу5з Агуд Аїа 5ег сіп б5ег ма! 5ег 5ег АїЇа 20 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Гей ІїЇе 25 туг 5ег АЇїа 5ег бег Ге Ттуг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег су 60 30 5зег сіу б5ег сІ1у Тйг А5р РПе тТийг Ге Тийг ІЇе 5ег 5ег Гей сіп РгОо 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг отуг туг Суб сіп сіп туго бек Туг 5ег Рго РІе 35 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 40 «2105» 141 «2115» 108 «2125 БІЛОК 45 «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний 50 поліпептид" «4005» 141
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15 55
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1ЇТе тТийг сСу5з Агуд Аїа 5ег сіп 5ег ма!ї 5ег 5ег АїЇа 20 25 30 (516) ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Гей ІїЇе 35 40 45 65 5зег Тгр Аїа 5ег Тгр Гей Туг б5ег сіу ма! Рго 5ег Аг Ріпе 5ег су 50 55 60 5зег сіу б5ег сІ1у Тйг А5р РПе тТийг Ге Тийг ІЇе 5ег 5ег Гей сіп РгОо 70 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг отуг туг Суб сіп сіп туго б5ег о Туг б5ег Рго Ре 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 «2105» 142 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 142
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1Їе тТийг сСу5з Агуд АЇїа 5ег сіп 5ег ма!ї 5ег 5ег АїЇа 20 25 30 ма! Аїа тгр туг сіп сіп гу5 Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Геи Іе
Тер туг Аїа б5ег Тгр Ге Ттуг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 35 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг А5р Ре Тиг Гей Тиг ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 40 сі А5р Ре АЇїа Ттийг отуг туг Суб сіп сіп туго б5ег о Туг б5ег Рго Ре 85 90 95 45
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 «2105» 143 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" бо «4005» 143
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15 65 А5зр Агуд Ма! Тиг о Іїе тТиг сСуз Агуд Аїа 5ег сіп 5ег ма!Ї 5ег 5ег Аїа 20 25 30 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Гей ІїЇе 70 35 40 45
Тер тер Аїа 5ег бек ге Туг б5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг А5р Ре Тиг Гей Тиг ІЇе 5ег 5ег ге сіп РгОо 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг о туго туг Суб сіп сіп туго б5ег о Туг б5ег Рго Ре 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 «2105» 144 «2115» 126 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 144 сіи ма! сіп гей ма! сіи 5ег сіу сЇу су гГеи ма! сіп Рго су Ос1Уу 1 5 10 15 зег їеи Агуд Гей 5ег Суз АЇа Аїа б5ег сіу Ре А5п РПе Туг Туг 5ег 20 25 30 5зег ІІе Ні Тгр ма! Агуд сіп Аїа Рго сІу Гуз с1у Геи си Тгр маї 35 40 45
Аїа б5екг ІЇе 5ег Рго Туг 5ег сіу Туг Тиг 5ег Ттуг АїЇа А5р 5ег маї 50 55 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег АЇа Ар Тиг 5ег Гуз Азп ТИг Аїа туг 65 70 75 80
Ге сіп Меє Абзп 5ег Ге Аг АїЇа сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
Аїа Агд сіп Рго Тйг о нНіз Туг туг туг Ттуг АТа гу5з су Туг Гуз АїЇа 100 105 110 мек А5р туг Тгр сІ1у сіп сіу тйгоїеи ма! тиг ма! 5ег 5ег 115 120 125 (516) «2105» 145 «211» 438 «2125 БІЛОК 65 «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний 70 поліпептид"
«4005» 145 сіи ма! сіп ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Ге ма!ї сіп Рго сІу с1Уу 1 5 10 15 зег їеи Агуд Гей 5ег Суз АЇа Аїа б5ег сіу Ре ТНг РМБе 5ег 5ег туг 20 25 30 с1у мет 5ег Тгр ма! Агд сіп АїЇа Рго су Гуз сІ1у гГеи си Геим маї 35 40 45
АТїа бек ІЇе А5зп 5ег Ап сіу сіу б5ег Тйг о туг туг Рго А5р 5ег ма! 50 55 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег Агуд Азр Азп АЇа губ Азп 5ег Геи туг 65 70 75 80
Ге сіп Меє Абзп 5ег Ге Аг АїЇа сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
АТїа б5екг сіу Азр Туг Тер сіу сіп сіу тТийг оте ма! тис ма! 5ег 5ег 100 105 110
Зо
Аїа бек тТиг о Гуз сІіу Рго бек ма! Ре Рго Гей АЇїа Рго Су5 5ег Агд 115 120 125 5зег ТИг о 5ег соЇи 5ег Тйг Аїа АТа ге сіу Су5з Гей ма! Гуз А5р туг 130 135 140
Ре Рго сій Рго ма! тик ма! бек Тер Азп 5ег С1Уу АЇа Гей тЕг 5ег 145 150 155 160 сіу ма! ні Тийг РМПе Рго АЇїа маЇ Ге сіп 5ег б5ег сіу Геи Туг 5ег 165 170 175
Ге 5ег б5ег ма! ма! тис ома!їЇ Рго 5ег 5ег 5ег їеи сіу Ттиг Гуз тиг 180 185 190
Туг ТНг Суб АЗзп о маЇ А5Зр о Ні Гуз Рго 5ег АЗзп ТИг Гуз маї А5р Гуз 195 200 205
Агд ма! сЇи б5ег Гуз Тукг с1іу Рго Рго Су5 Рго Рго Су5 Рго АїЇа РГгО 210 215 220 сі Ре Гей сіу сіу Рго 5ег ма! Ре Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз бо 225 230 235 240
Азр ТИг Ге Мет ІЇе бек Агуд Тиг о Рго сіи ма! тНг суз ма! маї ма! 245 250 255 65
Азр ма! 5ег сіп сі А5р Рго сіи маї сіп Ре А5п Тгр Ттуг маї дор 260 265 270 70 сІ1у ма! сіи маї Ні5 А5п АЇа Гуз Тиг Гуз Рго Агд сіи сЇи сіп Ре 275 280 285
АЗп бек Тиг о туг Агуд ма! ма! 5ег ма! Ге тик маї ге ніх сіп др 290 295 з00
Тер Гей Ап сіу Гуз сіи Туг Гуз Су5з Гуз ма! 5ег А5Зп Гуз СТУ Гей 305 310 315 320
Рго 5ег б5ег ІЇе сЇи Гуз Тийг ІЇе 5ег Гуз АЇа Гуз сіу сіп Рго Ага 325 330 335 сі Рго сіп ма! Туг тис Гей Рго Рго 5ег сіп сіи сіи Ме тЕг Гуз 340 345 350
Азп сіп ма! бек їеи Тиг о Суз Гей ма! Гуз сіу Ре Туг Рго 5ег дор 355 360 365 чІІе АТа ма! сіи Тер сЇи 5ег А5п сіу сіп Рго сі А5п Ап туго Гуз 370 375 380
ТВг о Тиг РгО Рго МмаЇ Гей Азр 5ег Ар сіу б5ег Ре Ре Геи Туг 5ег
Ко) 385 390 395 400
Аг Гей тиг о маї дор Гуз б5ег Аг Тгр сіп сій с1у А5п Ма! РВе 5ег 405 410 415
Суз 5ег ма! мет ні5 сі АТа Гей Ні5 Ап Ні5 Туг Тиг о сіп Гуз 5ег 420 425 430
Гей 5ег Гей 5ег Гей сі1у 435 «2105» 146 «2115» 219 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 146
Азр ІІе ма! Меє тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 60 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд 5ег 5ег сіп 5ег їеи ма! туг 5ег 20 25 30
Азп с1у А5р Тйг туго Гей Ні Тер туг Гей сіп Гу5 Рго сіу сіп 5ег 65 35 40 45
Рго сіп Гей Гей ІЇІе туг Гуз ма! 5ег Азп Аг Ре б5ег сіу ма! Рго 50 55 60 70
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5Зр Ре тНг гГеи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агуд ма! сії Аїа сій Азр ма! сІу ма! туг туг Су5 5ег сіп 5ег 85 90 95
Тк онНіб ма! Рго Тер Ттийг РПе сіу сіп сіу тиг Гуз ма! сіи те Гуз 100 105 110
Агд Тис ома!ї АТа діа Рго бек ма! РБе ІЇе Ре Рго Рго 5ег А5р си 115 120 125 сіп ге Гуз 5ег сіу Тйг АТа 5ег ма! маї Суз Гей Ге А5Зп А5п Ре 130 135 140 туг Рго Агуд сім АЇїа Гуз ма! сіп Тер Гуз маї д5р доп АїЇа гей сп 145 150 155 160 5ег с1у А5п 5ег сіп сій 5ег ма! тийг си сіп д5р 5ег уз Азр 5ег 165 170 175
Тк туг б5ег їеи бек б5ег Тиг Ге ТИг гей 5ег Гуз АЇа Азр Туг си 180 185 190
Гуз Ніз Гуз ма! туг Аїа Су5 сіи ма! тийг ніх сіп сіу Гей 5ег 5ег 195 200 205
Рго ма! Тиск Гуз 5ег Ре А5п Агуд су си сСуз 210 215 «2105» 147 «2115» 10 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 147 сіу туг Тиг Ре тТиг о 5ег Ттуг тер мет Ні 1 5 10 «2105» 148 «2115» 10 «2125 БІЛОК 60 «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний 65 пептид" «400» 148 сіу туг Тиг Ре тТиг Азр туг Аа мет нів 1 5 10 70
«2105» 149 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 149 сіу туг Тиг Ре 5ег о Туг Тер Меє нН15 1 5 «210» 150 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 150
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Геу 5ег АЇа 5ег маїЇ сС1У 1 5 10 15
Зо
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5 Аг АЇїа 5ег А5р АЗзп Геу Туг 5ег дп 20 25 30
Гей АЇїа Тер туг сіп сіп Гу5 Рго сІу Гу5 5ег Рго Гуз Гецй Геи маї 35 40 45 туг АЗр АЇїа Тйг Ап Ге АЇїа А5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу Тйг о А5р туг ТигогГеи Тиг о ІЇе 5ег 5ег ей сп Рго 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг туго туг Суб сіп Ні Ре Тгр сіу тТНг Рго Гей 85 90 95
ТВг Ре сіу сіп сіу тиг Гуз ма! сіи че Гуз 100 105 «2105» 151 «2115» 107 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність (516) «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" 65 «4005» 151
Азр ІІе сіп Меє тТийг о сіп 5ег Рго 5ег 5ег їГеу 5ег АЇа 5ег ма! сІу 1 5 10 15 70
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5 Аг АЇїа 5ег А5р АЗзп Геу Туг 5ег дп 20 25 30
Гей Аїа Тер Туг сп сіп Гуз Рго сІЇу Гуз 5ег Рго Гу5 Геи Геи маї 35 40 45 туг АЗр АЇїа Тйг Ап Ге АЇїа А5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг о Азр Туг ТигогГеи Тиг о ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа тТийг о туго туг Су5 сіп Ніб5 Ре АЇТа сіу тТНг Рго Гей 85 90 95
Тис Ре сіу сіп сіу тйг Гуз ма! сіи че Гуз 100 105 «2105» 152 «2115» 116 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність
Зо «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 152 сіи ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу АЇа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз ма! 5ег сСуз Гуз АЇїа б5ег сіу Туг ТНПг РНе тиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сп Агод Гей сіи Тер Пе 35 40 45 со1у сім ч11е А5п о РгГоО Тйг о А5п с1іу Аг ТВг Ап Ттуг ч1Їе си Гуз РПе 60 50
Гуз 5ег Агуд Аїа тТийг о Ге Тйг ма! А5зр Гуз 5ег АЇа б5ег тНг Аїа туг 65 70 75 80 55 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95 60 Аїа Агд с1у тиг Агд Аїа туг Ні Туг Тер с1Їу сіп сІу тйг меє ма! 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 65 115 «210» 153 «2115» 116 70 «2125 БІЛОК
«213» штучна послідовність «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 153 сіи ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу АЇа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5з Гуз АЇа 5ег сіу туг Тиг Ре тиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сп Агод Гей сіи Тер Пе 35 40 45 со1у сім ч11е Аїа Рго Тйг Адбоп сіу Агу Тг Ап Ттуг ч1Їе си Гуз РПе 50 55 60
Гуз 5ег Агуд Аїа тТийг о Ге Тйг ма! А5зр Гуз 5ег АЇа б5ег тНг Аїа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз
Ко) 85 90 95
Аїа Агд с1у тиг Агд Аїа туг Ні Туг Тер с1Їу сіп сІу тйг меє ма! 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «2105» 154 «2115» 116 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 154 сіи ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу АЇа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз ма!Ї 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 25 30 60 Тер мес ніх Тер ма! Агу сп Аїа Рго сіу сіп Агд Гей сіи Тер Іе 35 40 45 о1у сім ч11е А5п РгГОоО АЇа А5п сіу Агу Тг дп Ттуг Іч1Їе сЇи Гуз РПе 65 50 55 60
Гуз 5ег Агуд Аїа тТийг о Ге Тйг о ма! Ар Гуз 5ег АЇа б5ег Тиг Аїа туг 65 70 75 80 70 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
З .
Аїа Агд с1у тТиг Аг Аїа тукг Ні Ттуг Тер сІу сіп сІу тйг меє ма! 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «210» 155 «2115» 9 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 155 сіп ніх Ре Аїа сІу тТйг Рго Гей ТЕГ 1 5 «210» 156
Зо «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 156 си че Аїа Рго ТПг доп с1іу Агуд ТВг о АбЗп Туг Іч1Їе сій Гуз РНе Гуз 1 5 10 15 зег «2105» 157 «2115» 17 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 157 си ІЇе А5п Рго АЇа доп сіу Агуд ТВг Ап Туг Іч1Їе сій Гуз РНе Гуз бо 1 5 10 15 зег 65 «210» 158 «2115» 214 «2125 БІЛОК 70 «213» штучна послідовність
«221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 158
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5 Аг АЇїа 5ег А5р АЗзп Геу Туг 5ег дп 20 25 30
Гей АЇїа Тер туг сіп сіп Гу5 Рго сіу Гу5 5ег Рго Гуз Гецй Геи ма! 35 40 45 туг АЗр АЇїа Тйг Ап Гей АЇїа Ад5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг о Азр Туг ТигогГеи Тиг о ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг туго туг Суб сіп Ні Ре Тгр сіу тТНг Рго Гей 85 90 95
Зо
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сій ІчІЇе Гуз Агд тйг ма! Аїа Аїа 100 105 110
Рго 5ег ма! Ре ІІе РПе Рго Рго 5ег Азр сіи сіп Ге Гуз 5ег С1У 115 120 125
Тк АТа 5ег ма! ма! Ссуз Ге Ге А5п АЗп РіПе Туг Рго Аг сіи Аїа 130 135 140
Гуз ма! сіп Тер Гуз маїЇ А5Зр Аозп АЇа Гей сіп 5ег сіу Азп 5ег сп 145 150 155 160 сій 5ег ма! тийг сій сіп др б5ег уз Азр 5ег Тиг Туг 5ег їеи 5ег 165 170 175 5ег ТИг Ге Тийг Ге б5ег їуз АЇа Азр Туг сій Гу5 Ні Гуз ма!ї туг 180 185 190
АТїа Субз сіи ма! тис о ні5 сіп сіу Гей б5ег б5ег Рго ма! Ттиг Гуз 5ег 195 200 205 60 Ре А5п Агу сіу си сСуз 210 «210» 159 65 «2115» 446 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» 70 «221» джерело
«223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 159 сіи ма! сіп Гей ма! сіп 5ег сіу АТа сЇи ма! уз гГу5 Рго Ос1у АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сп Агд гГеи сіи Тер Пе 35 40 45 со1у сім ч11е А5п о РгГОоО Тйг о Адбп сіу Аг ТВг о Адбп тТуг ч1Їе си Гуз РПе 50 55 60
Гуз 5ег Агуд Аїа тТийг о Ге Тйг ма! А5зр Гуз 5ег АЇа б5ег тНг Аїа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі Азр Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
Аїа Агд с1у тиг Агд Аїа туг Ні Туг Тер с1Їу сіп сІу тйг меє ма! 100 105 110
Тиг ма! бек б5ег АЇа 5ег Тийг оїуз сСІ1у Рго 5ег ма! Ріе Рго Гецй АїЇа 115 120 125
Рго 5ег б5ег Гуз 5ег ТИг 5ег сіу сіу ТПг АЇа АТа ге сІу сСуз Гей 130 135 140 ма! Гуз Азр Туг Ре Рго сі Рго Ма! тТиг маїЇ 5ег Тер Азп 5ег су 145 150 155 160
Аїа гей тийг о б5ег сіу ма! ні тиг Рпе Рго АїЇа ма! Ге сіп 5ег 5ег 165 170 175 с1у гїеи туг 5ег Ге б5ег б5ег ма! ма! тис ма! Рго 5ег 5ег 5ег гей 180 185 190 сіу тис сій тс тує ч11е Су5 Азп ма! Ап Ні губ Рго 5ег А5Зп тег 195 200 205
Гуз ма! А5р Гуз Гуз маї сЇи Рго Гуз 5ег Суз А5Зр Гуз ТИг Ні тиг 210 215 220 (516)
Суз Рго Рго Суз Рго АЇа Рго сій Ге Гей сіу сІіу Рго 5ег ма! РНе 225 230 235 240 65 Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТИг Ге Мет ІчІ1е б5ег Агуд тТиг РгО 245 250 255 сіи ма! тийг о сСуз ма! маї ма! Аїа ма! 5ек ніх сіи А5р Рго сім маї 70 260 265 270
Гуз Ре Азп Тгр Туг маїЇ Азр сіу ма! сіи ма! Ніб А5п АЇа Гуз Тиг 275 280 285
Гуз Рго Агд сій сій сбіп Туг сіу 5ег Ттиг туг Агд ма! ма! 5ег маї 290 295 00
Ге тйг маїЇ ге ніх сіп А5р Тер ге Ап сіу Гуз сіи Ттуг Гуз сСуз 305 310 315 320
Гуз ма! 5ег Ап Гуз АЇа Ге Рго АЇїа Рго ІЇе сіи Гуз ТтПг Пе 5ег 325 330 335
Гуз Аїа Гуз сіу сЇп Рго Агд сій Рго сіп Маї Туг Тис о Геи Рго РгОо 340 345 350 зег Агуд сім сіи Меє Тис о їу5 Ап сіп ма! б5ег Гей 5ег Су5 Аїа ма! 355 360 365
Гуз сІіу Ре Туг Рго 5ег А5Зр ІЇе Аїа ма! сіи Тер сіи 5ег А5Зп су 370 375 380
Зо сій Рго сій Аб5п о АЗп о Туг Гуз Тс Тс Рго Рго ма!Ї Ге А5зр 5ег дьр 385 390 395 400 со1у б5ег Рпе РПе Геи Ма! 5ег уз Гей Тиг ма! Азр Гуз 5ег Ага Тгр 405 410 415 сіп сіп с1у А5п ма! Ре 5ег Су5 5ег Ма! мет нНі5 сіи Аїа Геи НІ15 420 425 430
Азп Ні Туг Тйг сіп Гуз б5ег їеи б5ег гей б5ег Рго СУ Гуз 435 440 445 «210» 160 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 160
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15 (516)
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5 Аг АЇїа 5ег А5р АЗп Геу Туг 5ег дп 20 25 30 65
Гей АЇїа Тер туг сіп сіп Гу5 Рго сіу Гу5 5ег Рго Гуз Гецй Геи ма! 35 40 45 70 туг АЗр АЇїа Тйг Ап Ге АЇїа А5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У
50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг о Азр Туг ТигогГеи Тиг о ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа тТийг о туго туг Су5 сіп Ніб5 Ре АЇТа сіу тТНг Рго Гей 85 90 95
Тк Ре сІіу сіп сіу тийг Гуз ма! сіи ІЇе Гуз Ага 100 105 «2105» 161 «211» 15 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 161
Аг Аїа 5ег сіи 5ег ма! А5р А5р Туг сІіу А5зп 5ег Ре Мет Ні 1 5 10 15
Зо «2105» 162 «211» 15 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний пептид" «4005» 162
Аг Аїа 5ег сіи 5ег ма! Ар 5ег Туг сіу Рго 5ег Ре Меє Ні 1 5 10 15 «210» 163 «2115» 112 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 163
Азр ІІе сіп Меє тийг осіп 5ег Рго АЇа 5ег Ге 5ег мМа!Ї 5ег маї сіу 1 5 10 15 (516) сіи тис ома! тис оІТе тиг сСуз Агуд Аїа 5ег др А5Зп Гей Туг 5ег дзп 20 25 30 65 Гей Аїа Тер Туг сп сіп Гуз сіп оІу Гуз 5ег Рго сіп Геи Геи маї 35 40 45 туг АЗр АЇїа Тйг Ап Ге АЇїа А5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 70 50 55 60
5ег сіу 5ег сіу тйг сіп Ттуг 5ег гей Гу5 ІЇе А5зп 5ег їеи сіп 5ег 65 70 75 80 сі! А5р Ре сіу Тийготуг туго Суз сіп Ні Ре Тгр сіу тТНг Рго Гей 85 90 95
Тис Ре сТ1у АїТа сіу тиг Гуз Геми сіи гей Гуз Аг АїЇа Азр АїЇа Аїа 100 105 110 «2105» 164 «2115» 125 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 164 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 зег ма! Гуз Ге б5ег Суз Гуз АЇїа б5ег сіу Туг ТНПг РНе тиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 со1у сім ч11е А5п о РгГОоО Тйг о Адбп сіу Аг ТВг о Адбп тТуг ч1Їе си Гуз РПе 50 55 60
Гуз 5ег Гуз АЇїа Тийг оГеи тТиг омаї А5р Гуз 5ег 5ег 5ег Тг АїЇа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
Аїа Агд с1у тТиг Агд Аїа тукг Ні Туг Тер с1Їу сіп сІу тйг 5ег маї 100 105 110
Тиг омаї бек б5ег АЇїа Гуз Тиг о тТиг АЇТа Рго 5ег ма! туг 115 120 125 «210» 165 «2115» 113 бо «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело 65 «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 165
А5р ІЇе сіп Гей Тйг осіп Тс Рго АЇа 5ег Гей 5ег мМаї 5ег маї сіу 70 1 5 10 15 сіи тис Ома! тс о ІТе тйг сСуз Агуд Аїа 5ег си А5п ІчІЇе Туг 5ег дзп 20 25 30
Гей АЇа Тер туг сіп сіп Гу5 сіп сіу Гуз 5ег Рго сіп Гей Геи ма! 35 40 45 туг АТа Аїа тТийг А5р Гей АЇїа Ад5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ріе Аг с1уУ 50 55 60 5зег сіу б5ег сІ1у Ттйг сіп туг 5ег Ге Гуз ІЇе Азп 5ег Геи сіп 5ег 65 70 75 80 сі А5р Ре сіу б5ег Туг Туг Суб сіп Ніб5 Ре Тгр сіу ТНг Рго Гей 85 90 95
Тис Ре сТ1у АїТа сіу тиг Гуз Геми сіи Гей ІЇе Аг АїЇа Аз5р АїЇа Аїа 100 105 110
РгО
Зо «210» 166 «2115» 125 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 166 оп ма! сіп гей сп сіп Рго сіу АТа сЇи Геи ма! Агуд Рго Ос1у АїЇа 1 5 10 15
АТїа маїЇ Гуз Гей 5ег сСу5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 со1у сім ч11е А5п о РгГОоО Тйг о А5п с1у Аг ТВг о доп о тТуг Ап си Ап о РВе 50 55 60
Гуз 5ег Гуз АЇїа Тийг оГеи тТиг омаї А5р Гуз 5ег 5ег 5ег Тг АїЇа туг 65 70 75 80 (516) мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95 65
Аїа Агд с1у тТиг Аг Аїа туг Ні5 Ре Тгр сіу сіп сІу тйг 5ег ма! 100 105 110 70 Тк ма! 5ег б5ег АЇїа Гуз Тиг о тйг Аїа Рго 5ег ма! туг
115 120 125 «2105» 167 «2115» 113 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 167
Азр чІІе сіп Мет тТийг о сіп бег Рго діа 5ег їеи 5ег ма! 5ег ма! с1у 1 5 10 15 сіи тис Ома! тс оІТе тйг о сСуз Агуд АТа 5ег А5р А5п ІЇе Туг 5ег дп 20 25 30
Гей АЇа Тер туг сіп сіп Гу5 сіп сіу Гуз 5ег Рго сіп Гей Геи ма! 35 40 45 туг АТа Аїа Тийг Ап Гей Аїа Ад5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60
Зо 5ег сіу 5ег сіу тйг сіп Ттуг 5ег гей Гу5 ІЇе А5зп 5ег їеи сіп 5ег 65 70 75 80 сій А5р Ре сіу б5ег Туг Туг Суз сіп НІі5 Ре Тер сіу Тйг Рго Геи 85 90 95
Мес Ре сіу б5егкг су тйг Гуз Гей си Гей Гуз Агд АїЇа А5р Аїа Аїа 100 105 110
РгО «210» 168 «2115» 125 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «400» 168 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 (516) 5ег маЇ Гуз Гей 5ег Су5 Гуз АЇа 5ег сіу туг Тйг РіПе АїЇа 5ег туг 20 25 30 65
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 70 со1у сім ч11е А5п о РгГоО ІЇе А5п сіу Агуд Тиг доп Туг бег си Гуз РПе
50 55 60
Гуз Гуз Гуз АЇїа Тийг о Гей тТиг омаї А5р Гуз 5ег 5ег 5ег Тг АїЇа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
Аїа Агд с1у тиг Аг Аїа туг Ні Туг Тер сЇу сіп сІу тс 5ег ма! 100 105 110
Тиг омаї бек б5ег АЇїа Гуз Тиг о тТиг АЇТа Рго 5ег ма! туг 115 120 125 «210» 169 «2115» 119 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид"
Коо) «400» 169 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз Ге б5ег Суз Гуз АЇїа 5ег сіу Туг Тийг РПе тНг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 со1у сім Іч11е Ап РгГОоО 5ег А5п сіу Аг ТигоАбЗп Туг Ап си Тег Ре 50 55 60
Гуз 5ег Гуз АЇїа ТийгоГеи тТиг омаї А5р Гуз 5ег б5ег 5ег Тг АїЇа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о 5ег сій Ар 5ег АЇа ма! Ттуг туг су 85 90 95
Аїа Агд с1у тиг Аг Аїа туг Ні Туг Тер сЇу сіп сІу тс 5ег ма! 100 105 110
Тиг ма! 5екг б5ег АїЇа Гуз тиг бо 115 «2105» 170 «2115» 113 65 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело 70 «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 170
Азр ма! сіп чІЇе тйг сіп 5ег Рго 5ег Туг Гей Тиг Аїа 5ег Рго Сс1У 1 5 10 15 сі тис отче тиск о ІЇе доп сСуз Агуд АЇїа 5ег Гуз бег ІЇе 5ег Гуз Туг 20 25 30
Гей АЇїа Тер туг сіп сіи Гу5 Рго сіу Гуз Тйг АЗп Гуз Гей їГеи Іе 35 40 45 туг 5ег сіу 5ег Тк Ге сіп 5ег сіу ІЇе Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5зег сіу б5ег сТ1у Тйг А5р РПе тТийг Ге Тийг ІЇе б5ег А5зп Ге сіи Рго 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Мет Туг Ттуг Су5 сіп сіп Ні А5зп сі Туг Рго Тер 85 90 95
Тк Ре сІу сіу сіу тиг Гуз Геми сім ІЇе їу5 Аг АїЇа А5р АїЇа Аїа 100 105 110
Зо
РгО «2105» 171 «2115 131 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 171
Азр ма! сіп гей сіп сій 5ег сІу Рго сСІу Гей ма! Гу5 Рго 5ег сіп 1 5 10 15 5зег Гей 5ег гей Тиг о Суз ТиИг Ома! тк с1у Азп 5ег ІЇе тиг 5ег си 20 25 30 туг АТа Тер А5Зп Тер ІЇе Агуд сіп Ре Рго О1У А5п Гуз Гей си Тгр 35 40 45 мес сіу туг ІІе б5ег Туг 5ег сіу Тиг о тТиг о 5ег туг Азп Рго 5ег Гей бо 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег ІЇе Тйг Агуд Азр тТиг 5ег їу5 АЗп сп Ге РПе 65 70 75 80 65
Гей сіп Гей А5п о б5ег ма! Тийг отийг сій Азр Тс АТа тс отуг РВе су 85 90 95 70
АТїа Агд туг сІ1у Ттуг с1іу А5п РгГОоО АЇїа Тйг Агуд тує РБе д5р ма! тер 100 105 110 о1у Аїа сіу Тйг тийгома! тис ма! б5ег о б5ег АЇїа Гуз Тиг о тТНг РгОо РГгО 115 120 125 зег ма! туг 130 «2105» 172 «2115» 123 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 172 сп ма! сіп гей сп сіп Рго сіу 5ег сЇи Геи ма! Агуд Рго Ос1у АїЇа 1 5 10 15 5зег маЇ Гуз Гей 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 25 30
Зо
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Аг ніх сіу сп су гГеи сіи Тер Пе 35
О1Уу А5п о ІЇе Туг Рго сіу 5ег сіу б5ег Тиг Гуз туг Азр си Ага РПе 60 40 Гуз 5ег Гуз сіу тТийг Ге Тйг о ма! А5р тиг 5ег б5ег б5ег Ттиг Аа туг 65 70 75 80
Мес ніх їеи бек б5ег Ге ТИйг бек сі А5р 5ег АЇа ма! туг туг суз 45 85 90 95
Тк Агуд сіу сіу Туг Азр 5ег Аг АЇа Тгр Ріє АїЇа Туг Тгр Сс1у сп 100 105 110 50 сіу тйг Ге ма! тиг маї 5ег АїЇа АЇїа Гу5 тег 115 120 55 «2105» 173 «2115» 123 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність (516) «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" 65 «4005» 173 сп ма! сіп гей сп сіп Рго сіу 5ег сЇи Геи ма! Агуд Рго Ос1у АїЇа 1 5 10 15 70
5зег маЇ Гуз Гей 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Аг ніх сіу сп су гГеи сіи Тер Пе 35 40 45 с1Уу А5п ІЇе Туг Рго сіу 5ег сіу 5ег ТИйг Гуз тТуг А5зр си Гуз РНе 50 55 60
Гуз 5ег Гуз сіу Тийг Гей тТийг омаї А5р тТийг 5ег б5ег 5ег Тиг АїЇа туг 65 70 75 80 мес ні Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
Тк Агуд сіу сіу Туг Азр 5ег Агд АїЇа Тгр Ріє АїЇа Ні Тгр с1у сп 100 105 110 о1у тйг о їеи ма! тиг ма! 5ег АїЇа АТа Гуз тЕг 115 120 «2105» 174 «2115» 127 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 174 сіи ма! Гуз Гей ма! сіи 5ег сіу сЇу су гГеи ма! сіп Рго сТу сІу 1 5 10 15
Ре їеи Гуз їеи б5ег сСу5з АЇа Тийг о5ег сіу Ре ТиПг РМПе 5ег д5р туг 20 25 30 тукг мет туг Тегр ма! Агуд сп тйг Рго сЇи Гуз Агод Геи сіи тТгр ма! 35 40 45
АТїа б5екг ІЇе 5ег А5п сіу сіу А5р Ап ТИг оТтТуг туго Рго А5Зр тег маї 50 55 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег Агуд А5р Азп АЇа Гуз А5зп тТиг о Геи туг 65 70 75 80 60 ей сіп Меє бек Агуд Ге Гуз бек сі АЗзр Тйг АїЇа мес туг туг су 85 90 95
Аїа Агд сЇп с1Уу АЇїа гей Туг Азр сіу Туг туг Агуд с1у Аїа мес д5р 65 100 105 110 туг Тер сіу сіп сіу тб об5ег ма! тиг ма! 5ег 5ег Аа Гуз тНг 115 120 125 70
«2105» 175 «2115» 124 «2125 БІЛОК «213» штучна послідовність «220» «221» джерело «223» примітка: опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид" «4005» 175 сіп ма! сіп ге сіп сіп 5ег сіу АЇїа сій Ге Мет Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5ег ма!Ї Гуз ІЇІе 5ег сСу5 Гуз АЇа Аїа сіу туг Тйг РПе 5ег Азп ТУугГ 20
Тер те сіи Тер ма! Гуз сп Агд Рго сіу Ні5 сІу гГеи сіЇи Тгр Пе 25 со1у сім ч11е Гей Рго сіу 5ег сіу 5ег Тиг о Гуз Ттуг Азп сЇи Гуз РПе 60
Гуз сіу Гуз АЇїа Тийг Ре Тиг Аїа А5р Ттийг о б5ег о б5ег Ап Тиг Аа туг 30 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95 35
Аїа Агд Агуд сї1у сіу Ттуг сіу туг Азр сІ1у си Ре АїЇа Ттуг Тер с1у 100 105 110 40 сіп сіу тийг ге ма! тис ма! 5ег АїЇа Аїа Гуз тиг 115 120

Claims (1)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Ізольоване антитіло, яке зв'язується з рецептором трансферину людини (ТІК) і ТІК приматів, де антитіло не інгібує зв'язування трансферину з ТІК, де антитіло включає НУВ-НІ, НМВ-Н2 і НМУВ-НЗ, які відповідно включають послідовності амінокислот ЗЕО ІО МО: 53, 156 та 55; і включає НУВ-І1, НМУВ-12 та НМВ-Ї 3, які відповідно включають послідовності амінокислот 5ЕО ІО МО: 50, 51 та 52.
2. Ізольоване антитіло, яке зв'язується з ТІК людини і ТІК приматів, де антитіло не інгібує зв'язування трансферину з ТІК, і де одна або кілька властивостей антитіла модифікуються для зменшення або усунення впливу антитіла на ретикулоцити і/або зменшення тяжкості або присутності гострих клінічних симптомів у суб'єкта або ссавця, яких лікують за допомогою антитіла, де одна або більше властивостей вибрані з: ефекторної функції Ес-області антитіла та функції активування комплементу антитіла, і де ефекторна функція або функція активації комплемента зменшується або усувається відносно антитіла дикого типу того ж самого ізотипу, і де антитіло включає НМВ-НІ, НМА-Н2 та НУВ-НЗ, які відповідно включають послідовності амінокислот 5ЕО ІО МО: 53, 156 та 55; і включає НМВ-11, НУВ-12 та НМВ-Ї 3, які відповідно включають послідовності амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 50, 51 і 52.
3. Антитіло за п. 1 або 2, яке являє собою моноклональне антитіло.
4. Антитіло за будь-яким із попередніх пунктів, яке являє собою антитіло людини, гуманізоване антитіло або химерне антитіло.
5. Антитіло за будь-яким із попередніх пунктів, яке являє собою фрагмент антитіла, що зв'язує ТІК людини і ТІК приматів.
6. Антитіло за будь-яким із попередніх пунктів, де антитіло містить: а) МН послідовність, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з послідовністю амінокислот 5ЕО ІЮО МО: 153; або Б) М. послідовність, що має щонайменше 95 95 ідентичність послідовності з послідовністю амінокислот 5ЕО ІЮ МО: 105; або Зо с) МН послідовність як у (а) і МІ. послідовність як у (Б).
7. Антитіло, яке містить МН послідовність ЗЕО ІЮ МО: 153 ї МІ. послідовність 5БЕО ІЮ МО: 105, де антитіло зв'язується з ТІВ людини і ТА приматів.
8. Антитіло за п. 2, де ефекторна функція зменшується або усувається за допомогою способу, вибраного зі зменшення глікозилування антитіла, модифікації ізотипу антитіла до ізотипу, який природним способом має зменшену або усунуту ефекторну функцію, і модифікації Ес-області.
9. Антитіло за п. 8, де глікозилування антитіла зменшується за допомогою способу, вибраного із: продукування антитіла в навколишньому середовищі, яке не дає можливості для глікозилування дикого типу; видалення вуглеводних груп, що вже є присутніми на антитілі; і модифікації антитіла таким чином, що не виникає глікозилування дикого типу.
10. Антитіло за п. 9, де антитіло виробляється у системі виробництва клітин не-ссавців, або де антитіло виробляється синтетично.
11. Антитіло за п. 9, де Ес-область антитіла містить мутацію в положенні 297 так, що аспарагіновий залишок дикого типу в цьому положенні замінюється іншою амінокислотою, яка негативно впливає на глікозилування в цьому положенні.
12. Антитіло за п. 8, де ефекторна функція зменшується або усувається за допомогою щонайменше однієї модифікації Ес-області.
13. Антитіло за п. 12, де ефекторна функція зменшується або усувається за допомогою делеції всієї Ес-області або її частини, або шляхом одержання за допомогою генної інженерії антитіла так, що воно не містить Есо-область або містить Ес-область, не компетентну відносно ефекторної функції або функції активування комплементу.
14. Антитіло за п. 12, де модифікація вибирається із: точкової мутації Ес-області для ослаблення зв'язування з одним або декількома рецепторами Ес, вибраної з наступних положень: 234, 235, 238, 239, 248, 249, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 272, 218, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 і 439; точкової мутації Ес-області для ослаблення зв'язування з С1а4,
вибраної з наступних положень: 270, 322, 329 і 321; усунення деякої частини або всієї Ес- області і точкової мутації в положенні 132 домену СНІ.
15. Антитіло за п. 14, де модифікація являє собою щонайменше одну точкову мутацію Ес- області для зменшення зв'язування з одним або більше рецепторами Ес, де щонайменше одна точкова мутація знаходиться в положенні, вибраному з 234, 235, 265, 297 і 329.
16. Антитіло за п. 15, де модифікація знаходиться в положенні 297 або в положеннях 265 і 297.
17. Антитіло за п. 15, де модифікація знаходиться в положеннях 234, 235 і 329.
18. Антитіло за п. 16, де модифікація являє собою М2970; 0265А і М297А або О0265А і М2970; або І 234А, І 235А і РЗ3290.
19. Антитіло за будь-яким із попередніх пунктів, де час півжиття антитіла збільшується за допомогою модифікації в домені зв'язування ЕсКп антитіла в положенні, вибраному з: 252, 254, 256, 434 і 436.
20. Антитіло за п. 19, де модифікація знаходиться в положеннях 252, 254 і 256.
21. Антитіло за п. 19, де модифікація знаходиться в положеннях 434 і 436.
22. Антитіло за п. 20, де модифікація являє собою М252У, 52541 і Т256Е, або М43З4А і 4361.
23. Антитіло за п. 21, де модифікація являє собою М4З4А і 4361.
24. Антитіло за будь-яким із попередніх пунктів, де антитіло зв'язане з терапевтичною сполукою.
25. Антитіло за п. 24, де антитіло являє собою мультиспецифічне антитіло, і терапевтична сполука необов'язкова утворює частину мультиспецифічного антитіла.
26. Антитіло за п. 25, де мультиспецифічне антитіло містить перший сайт зв'язування антигену, що зв'язує ТІК, і другий сайт зв'язування антигену, що зв'язує антиген головного мозку.
27. Антитіло за п. 26, де антиген головного мозку вибирають із групи, яка складається з: бета- секретази 1 (ВАСЕТ1), Абеїа, рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК), рецептора епідермального фактора росту людини 2 (НЕК2), тау, аполіпопротеїну Е (АроЕЄ), альфа- синуклеїну, СО20, хантингтину, пріонного білка (РгР), збагаченої лейциновими повторами кінази 2 (ІКККЗ), паркіну, презеніліну 1, презеніліну 2, гамма-секретази, рецептора загибелі 6 (ОКб), білка- попередника амілоїду (АРР), рецептора р75 нейротрофіну (р75МТЕ) і каспази 6.
28. Антитіло за п. 27, де мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з ВАСЕТ1, або де мультиспецифічне антитіло зв'язується як з ТІК, так і з Абеїа. Зо 29. Антитіло за п. 24, де терапевтична сполука являє собою лікарський засіб проти неврологічного розладу.
30. Ізольована нуклеїнова кислота, яка кодує антитіло за будь-яким із пп. 1-29.
31. Клітина-хазяїн, яка містить нуклеїнову кислоту за п. 30.
32. Спосіб продукування антитіла, який включає культивування клітин-хазяїнів за п. 31 таким чином, що продукується антитіло, і який необов'язково додатково включає виділення антитіла з клітини-хазяїна.
33. Застосування фармацевтичного препарату, що містить антитіло за будь-яким із пп. 1-29 і фармацевтично прийнятного носія як лікарського препарату.
34. Застосування антитіла за будь-яким із пп. 1-29 як лікарського препарату.
35. Застосування антитіла за будь-яким із пп. 1-29 для лікування неврологічного розладу.
36. Застосування за п. 35, де неврологічний розлад вибирають із групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, розладу очного захворювання, епілептичного розладу, лізосомної хвороби нагромадження, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, розладу поведінки і запалення ЦНС.
37. Застосування антитіла за будь-яким із пп. 1-29 при перенесенні однієї або декількох сполук через непроникний гематопоетичний бар'єр - ВВВ.
38. Спосіб перенесення сполук через ВВВ суб'єкта, який включає вплив антитіла за будь-яким із пп. 24-29 на ВВВ, так що антитіло переносить сполуку, зв'язану з ним, через ВВВ.
39. Спосіб збільшення впливу ЦНС суб'єкта до сполуки, який включає вплив антитіла за будь- яким із пп. 24-29 на ВВВ, так що антитіло переносить сполуку, зв'язану з ним, через ВВВ.
40. Спосіб збільшення утримання в ЦНС сполуки, що вводиться суб'єкту, який включає вплив антитіла за будь-яким із пп. 24-29 на ВВВ таким чином, що утримання в ЦНС сполуки збільшується.
41. Спосіб лікування неврологічного розладу в ссавця, який включає лікування ссавця за допомогою антитіла за будь-яким із пп. 24-29.
42. Спосіб за п. 41, у якому неврологічний розлад вибирають із групи, яка складається з невропатичного розладу, нейродегенеративного захворювання, раку, розладу очного захворювання, епілептичного розладу, лізосомної хвороби нагромадження, амілоїдозу, вірусного або мікробного захворювання, ішемії, розладу поведінки і запалення ЦНС.
43. Спосіб за будь-яким одним із пп. 38-42, у якому ВВВ або неврологічний розлад стосується суб'єкта-людини, і у якому величина дози і/або частота введення модулюється для зменшення концентрації антитіла, яке піддається впливу еритроцитів.
44. Спосіб за п. 43, який додатково включає стадію моніторингу суб'єкта відносно збідніння еритроцитів.
45. Спосіб за п. 43, у якому антитіло вводиться в терапевтичній дозі, у якому терапевтична доза є ТІкК-насичувальною.
46. Спосіб за п. 43, у якому введення антитіла здійснюється в дозі і/або при частоті дози, каліброваної для зведення до мінімуму гострих клінічних симптомів від введення антитіла. ци т . «й мети те и є В ки А апІіКальнинй дай Я. зе КВ й. Я у із Я З их БК в я й: ЩЕ ше а в В ше шах и їд Се он От й тає сни ВО я Ше шк с чо шк Ес, НН С Б; ; що ій Зкней о жна Щи я ше ше са і; у Гидке зе, шк й се ше а ЖИ, пе ши ї ще ча. А ще ж ОО, а Бон З и и ще тк пес Ж а ОО мя ов о М стуку ух А і" на. й м за о ло, и я а і" о ек ек и чЧч й засо: ТВ оса "В ху В с і - Я а "ж я ек ши же БО соте я Й не Бей Му Бо ше Ще ак Ж шк хх т Ки, х ю. "Дій ж 7 тат ; В ки ч о Кк " а о в: ж ТУ че МЕ І"ег си ві: Фо аж
Фк. і
40р13 і я5ра і ВА тА4 ах ШИ ЩЕ ЕЕ я Б 197 ЕЕ 700 -ко а з Ж й в КА дня Я Ж аг» и вої Й м Ії шо Ши киш еш нн ек ШЕ ШВ КЕНЕ» І ьх й дек ШИ : - Бе НА ш Шх ме з ше НД ШЕ сля Ж Я раю орав ур в зі Ш з роя ! ії ор: й й ше Ж зу у А за де ї щ Чи 7 тт й р- Боня ввум 7 ч їв тер 0 / Кк ттнитвь ге се чи й п ще яд ми 08 Я Я0б Яд ло? оз ще чо а 03 109 зо 0 4090 БОНН. 2- висота ВІ Кі висота Кран: г 2-пнсота ЕС БІ ?-висота твій 767 асе тВві2 100: пеооя 001000 пе 106 и 100- ряди З ЕЕ щ ла й З : Що в 1 б Я КИ вя Крах, ква Ки - з а щи в ШЕ ШЕ я ме в що Я Б ЗК - ко НЕ ШЕ у с Б ША Ше і: Зк КЕ ЩЕ. ШИ Хе я в і «хх 60 нон В ху а ІА Я х - во п х ї 5 Де ой ЩЕ кі не и МБ НИ ННК Я Ра жо ів; ОО льві ор рЯК в шле ше Яд Е дос а "о ай кв ОМ а р х х 203/. А ше ши ше хто го ла рЬ т лчий Я й Не. не. я їй те в о Є я й -е тя її є в я бя ня а ї ява я МОЯ яд? 403405 180302 303 ел ло? з Яд" я02 40330 ЕКЯ-НІБІ 2 висота КІЯНІ КІ г-висота КІН Ка висота КС Есе висота зафарбована (сірим чорна крива) ее М АБ-РЕ (темне-сіра) х сут трансфіковані 293 Куемно-оїри) Ви РІК транефіковані 293 (середньо-сіра) : 293 Фіг 2А 1304 А1бЕв 158511 1363 що с Я 196 Фк 100 т вь р ше ШЕ Де ОА ї Б У 5 Ше х НІ Я ав , ВЕ й ще ВрО в. и НА Ши ШИ С ЯН В В А ре Ез щен Ше е фі УЗ яру м |. Я о шен шен ше ше сн и мо ен рела и ше п а З в и и І ве 5 Р НИ МЕ ВИ в ге ЕНН яри я сш Кіа ам : Е рр ї о Я Ж Б ОН: гаю ни А пи кан ев В дні, вн: жан ж мим а дан сир ни ВО о афозоє о яаяи я яоюо ояо о я яд а СЕН РЕ» висота КІНО. зисота Ман висота РН: Кг висота 1805 1654 ТЕСотрейна АВ Медіа 100 «во и 10 їз ї 100 й їх й н 100. я «ящик Ше і ше ке сш ЯН. с. ви Ії Бі ж в КА У пови ши и й се В еще Я ЯН! я а Е Я я 5 ОВ ГО ою Ро со й Не Ши я ж в кс к ярах моде ШЕШШе ши Бош в ие й о ев 1 Кв ри Я о ВЕ 1: їж ї- 5 Я Н 1 о й ЯЗ із ОО Нд ас и зви ДК тв ЧК й вне х «ект Е 0 З сет» через паз зви се А М ДЕ КЛ ЕТ п нн п ПАТ сть що Об я ох ци ВЗН ЕК. висота РІ А-Н: Рі-висота БрО-НІ БЕо- висота К2-Н: БІ 2- висота зафарбована (срим за крина) - гпй АВРЕ пемно-сіпа) су трансфіковані 29: ! рафарбована (сірим чорна крива) - й АВРЕ Стемно-сіра) ЛВ транефіковані 293 ктемно-сіра) - ВИТІК тразефіковані 293 (середнво-сіра) 293
Фіг. 2 характеризанія перехресно-реактивних гібридом анти-ТТЕ людини і мавн циномолгує, які не конкурують з ТЕ за зв'язування з ЛК
І. БЕ з ! | Віасоге гібридоми або химерних 180 2385 | ВИН Суп ПК Е - : ЕЕ ЕНЗВА | ЕЦВА І пт спот Суїйви й зв'язування т'язування Ка ке ко Ка Ка ка зо, «ні І яке Р ЗЕов| Я ЗЯЕОЯ | 2ОВЕ-10 | 1О6ЕНОВІ ВІвЗБОЄ І 87-10 ва? якою Р оавков| оИИЕчМ | 179Б-О | ТЕН 7ЛБЕ-03 | 9040 506. Класті а НовАацсі я | ко оеж 301606 | ЗаБеМ | 1260 | 43овю6! 122603 92БЕО НН НОСЕНИ НОЗНИ ПОСЗН ПООНОЛННЯ ПОЛНАЯ ВАЛННННННЯ НАВАН мон мон НАННЯ то я ОІВББНБ ЗЯЕОЇ ОБО вАБЕНМ І БЕ Ве 355 Тв1о ін 1561 тек фон 1ВО0ЕЮБІ ВЯЗЕОЯ І 90-10 129506 3.352031 БОЮ 269. Клас 155 Же фроожеж о роя г з | нн ні 1604 182203 | 34ОБ-09 | 2305 | 5236-03 2.24Б-08 Класім! 16Е6 ТабЕНОВ | 2В1Е-ОЯ 2075-09 123Е05 І ОЗ та5Е-08 яви 1 ЯЗЕЯБ БОВЕЮІ БЕ оВ Аве РіБо | ВОВК БЕ ЮКлас1Уу З 7 орав ТОЛК вт: ПОПАВ та ПЕВ ТУТ лЯняя пар ве укр ввкл Троя 0172507 но ЕН отв 506о5 іє Ббоєо кеВ ов ши хм и с НЕ В В о А В МЕС
Фіг. 2С варіабельниа облість легкого ланцюга ГооБіт-контакті пл пе п МНН М фон вот ня ув і СО: Кара немерзгілноЗз Керак 1. 3.3 4 5 6 Ото 5 0 1 2 31 3415 15 17 18 15-20 21 22 25 34 95 95 2 ота йлье7с 91638 29.30 3122 3335 35 36-35 38 71 уУ хх? обєзАЕУВвбвІА ІХС ВЕВЕ хо во нбв:нЕНнНуІВО ВА? о 1 7 5 ОБРАВ ЬАХВЬСДВАаАВІВС А Е В У В (ув нвтнечуо ї5.реезт»втї 9: вьхамсьсонкяїІтгвскаАЗЕВ т тон КккнХхОВ о Ой от тот оба ввзхьОояВ тА ВА АЕВ У 5 ія сіре т хижі оо ТВО 5 І ж? 05 БАБІ ООоВА Іво як хв ох б кЕНУО Со: контакт І СБНІ Соні, ГТС - Кава! номеротіннос оКареб 3) 401 93-43 35 3536 42443 50 51-52 55 54 55 56 57 58 55 859 61 52 63 53 55 5Е 67 б Я 0 71 73 75 ст5 76 т; ЗЕ ОТЖ ВО ТА Ко 0 8 вхьБІ АВ Усі АК ВО ЕЕ В тата ВА ж во дв в их вЬ Ії: а А ЗМ Ж ЕІ ВАВ Ва в ож 152 кт б б ж ЕД ьЬ І З КА 8 ЕІ ВАВ НЕ с ВІ ть І1ВвчКА чех: 58 т кв ьї ху Ввах кі ВЕТО вті Рух 710 хз 5. кх ьо їх ВА ЕМ Б ЕІ РАВ Ж В 5 ЕЕ ТО ТТ ЕХ ВА ШВЕЯ контакті СОБІ СБаве СОВЗ: Кара номсрозгідноя Кабеб 8; й? КУ 84 85 ВБОВХ Б8О89 90: 39 83 35 За 8795 93 МО. У дз зо ОБО ТАА Б 5 вату О 05 ХВ ЕТ Вб ш й ж в ожЖ її в БЕЗІЮМО:Я ВА? о от тя со ов Ето в в отож ож тіж) ЗБОЮМО 5 15р2 б ву тусовки ЖЕРТВ Ей В мМ ж б ж тд ЗБОЮ золю є вт в тут со відрив тт ев 5 т ж Бі ЗБОЮ То с б аз ту сок АРТ о я КЕ ж І я ЗБОЮ МОЯ М дн тн риття
Фіг. ЗА-1
Зв я щ янв пок й варіабельна область важково ланцюга й І ОБВАНі-Євйа СОМ КВОе вномер'згідноЗ Кава 3.2.3 5 5 6 7 8 9 191 13 МО Б15 МОМ 8-9 20 22233 24 253627 38 29 30 3 35 33 34 35 363758 39 40 5) 4) ази» УєткЕІвВ Ехо воит та НЕНУХОЯЕА бло у бо обся ьУРОУВУХ;:БСсСКБ5ОЇ т т т ЗІ ЕНІХОБАХ ро сгсзо г: го овкеуУ6 дн вствУХхІВЇСХховахт М: оуаивнитХОВкА оно тзо усю вер У сю: вс кое ох енткі ввр Шо 0о БАХ: ТВ АкотТУХІ5Ххб50 ЕЕ ух ЕНИУХОВ ЇХ СОСОК» сконтают ІОБЕ Но сСпова! шо СО сб не кю нОМмерзгінноЗ кара 0345 55 5 т 30 4950 31.59 52а 55 54 555 5 БЕ ЗО БО БЕ БО БР Б БУ БЕ ВО ОТ ТЕ 73 М 75 7572 7879 ДООВІ Во в Ах БІЕн:ІбсІ5ї ЕСЕ ЖУКОХРА ВАТИ ТУ ВХ ЕЛАКЕХА У ве НН НН НН а ее А НН НЕ З З З в в Я В В Я с ЗНАНАННННННАН В НАННЯ ТЕ У мВт ЬХ ших ние ги й ї я й я я - коро е пом ве з сія: вірив ов фо кв ес їн т У хв БЕТтТАИНЙЕА зав в 1 83 ЕТ кокосова то 5БЕЗУАВІКЕАХ Гена вн сн ВА ВЮННВ ССБОВ ТУ: Кава вомерзгійнос Кереєй лоті В де я: І ВУ 08: 9233 3395 05 31 ЯК 93 І ВА МКФ 0 10 З0Х 05 Моб НІ Я НН І ОВІ Таз з єЕжховбкЕхегсажкев ов у ж пу вдо ст Б то 5 5 ЗЕОЮВМОЇ Во ж ь с Іва тсажевясвя я ву ж ж 0 6 7 5 У тот в 5 ОБО МОВ 1502 з ттзжЕБЕтТтсяаа Ес хх ж я в'я в я б бот 5 у т її 5 5 БОЮ МОВ роя в пе вто вріттсавосвеврфу х БІЙ Ж с о бот 5 тт 5 5 ЗЕОЮМО Ю твої т 525в531 Ус хв ес У я б У Ер тт ВОЮ Фі ЗА-2 варіабельна область легкого ланнюга РЕБЕТІ кОВтВК С 608 КЕ комерзпдноя каояї и 345 5385 пари иа меми ов о ро 3 39 3 35353537 в ВОЗІ 0ххї: 5? 55УТСсаіУТІт9вВАВОВ БУ ХАКІ КОоОК і6б50 с: оп от хз вуст ттс вки кинув вВоз;таїт 05 вва уУ тету св нІУ кіт ог БА І нт оба: суЄВТУЛІТС ЕХО зи хок для ин пн иа ал я важ алтея Й ГОБОВіз кбнтає |. я Та Своіля І СОНЯ й НОМерзноз Карасе3 56538 49.59 55 50 53 54 55 55 523855 Б Бі ба 3 Бі 5 ТЕ МОЯ ОО ТОНО5 ОВО2 78 НВО 8 82 03 БО 55 хитка обу я ЕВ сьо їх 5555 моз ка в Уа тівЬ са уз б а кре З Бест в в ОВ ЕЕ оз з вия хаос 565с076 т Б5185505Е5 КЕ ІНН нан я 5 1505 ЕВЕс захеемееніфевй інн неті нен СОмід-контакто СВАСЗ СВенаЕ ОРЗ я Каває НОМерогІдне З Карає 85 35 8) 03.85 50 9 30 45 БО ЕК 0: 86 5 5 НІМ ам ме КОН оту у жов жовоя в т В 5 т вк б Б 6 ток ов я 3 я БЕБІ оз тео вжи т ть ве Ат в 5 | 5БОЮВМОЮ вбзб5|іх совно т т ьКе ее т жов ж 5 хх ЗЕОЮМ З то4і я у со БК я бо ов вв водою ток всю хх ЗБЕНО МЖК ТЯ р клоп іл п ПЛ ТЛА ЛАТ АЛ ЛА АЛАНА лопата КК
Фіг. 38В-1 по дн варіабелйьна область важкого ланцюга Й ІК. СВ НІ «контакт СК НІ - Споївів. СОМ НІ - Кадаї номерзгіднеа кар 3 2 345 50 7 8 5 О1213 3515 6151 19 2902122 23 20 2525 23 2 29 Ме 31 395 33 34 35 36235 39 33 І вОНауУз удо саАвУуУХЬСЕ ВУ т т ЯЕЕНУКОХХ 15050009 хх Ус х скло» уЖжЕКЕЕЕУХО Я ізо по 0з0в вух оз сУ т І ТЯЕКНУХ Я бі х0 09 кЕБТХВОВІ УХА ОУТ ЕТ НЕЕНУХВ» г звати СОВКНО контакт СОК НО- спот , : СОН Не - Кара! Що НОМеротіднО я Кар 230 55 85 7 8 49505 5:30 52353 525555 57 58 5950 616 63 бе 55 БЕ Б БО БК Й ОТ 72 73 34 75 7877 7039. 88 8 ба Юе ІБ-1о є тях світ асо АТЬ ТУ Зх ТАХ НОВ босих нсвкеЦя ху хАт т т я В КБ КтНО хі ВоосбожкіІбвкІХРШ ЕЕ ся: ку КАК ЕАЇ:І Ії кВА сі ервекІВвЕІ кА Бек 5 КАТ т У 5 Бк: ши ГЕРЕ НО - контакті СО НЗ-сСНоВа СОМ НЗ А Кабаї ВОМер ЗГІДНО омевеоВій 82о ВУ 8: 05 Вб? йЕ ВВ ЗБ МО 82 51 095 ко УТ 085 9 МІ Я 03 НЯ лов ми ШК це мі 313 МОм я в т ЕВ Б ат у т с Аве? ат В я й б 00352 т 5 8 5 ЗЕОІЮМОЬ во б тво а же» саке? хат йо ут кв ВЕОІЮМОЇВ МОЗ в ТЕКА авт кат я їв т ут у вк БЕОЮМОЗІ ї6б4 5 5 ж БЖ В Б ат у я с а Вт В ж Ж х Жов фор от 8 У т я 8 8 ЗОВ й ИН уч но ння вич | . . пінні вт тент
Фіг. 38-72 варіабельна воласть легкого ланцюга и тво СОТ: контакт МИ КЛ Й СбКі-Кавн комерсгіднозо Кавабі 2 3 4 55 78 5193 15 5 5 218 ОО 2129 23 253536 97. 25 29 30 31 3535 ЗК 3555 373873 4541 43 бо т01:1729555: 73580271 ВА5Ж 5 5 УА НУХТ? -- ЛВ З у ІГОебНі5 с контат СОМ 19 -СТюЇНіа ООКІЙ-Каза померзгізноз Караєй3 5 45 2748-49 50 5139 51 54 55 55 57.35 59-50 6167 63 54 55 56676859 70 71 72 73 7475 76 7287980 81 82 83 84 яЕбт ух ІуУвотї о в8вІ1953В85 са БТІ БЕВКЕБбА пледи пдлюддоиВ. ОССОКіЗ-контакто С ІбОНІ 5 бно І З- кара п оБВ З - Кава номерної Карр 85 8185 59 90 НО82 93. 9 95 85 7 38 99 3 ЩО СНО МО Не ЩІ 106 7 Рв з в го фея я Р Тс бот ЕЕ Її К ЗЕОІЮМО: 15 і плоти пліт ніна тн клонічні нон лини У : нн п п пн в
Фіг. 80-1 варіасельна область важкого ланцюга 17 СБК контакт З сок НІ - Споша ОК НІ Кара номерсгідяез кебаі 3 5 45 6 25 У 1011211 813 1617 19359 20024 0233 24 25 0697 Ж 29 30 31 3233 Ж 5 35Е 365 30 39 46 41 166800 ЕЕ Ео всі ук О5 с тТутокх т 5 ЕЕ А НКНКІВО г шин СОСТБВБ Но контакт СК НІ - стопа Й й номерзгідноз Карас:? 43 фі 65 б 41 4й 9 50 51.55 53.55 55 55 37-58 89 50 61 52 51 55 655 БТ БК 50 СОТ ОА 73 76 15 7527 7519 80 ВЕ 35 15656 о й Кк хе Ж Ко ху т 85 У б б т75 У ВРХ 515178 5555806 понесе тот тота пня ле я інків дн нирку тунель СОНЯ контакт й ОЮА НЗ- СВО. й ОВК 5ЕШО вомерогілноз Майже Ще 31 85 56 8105 03 95132 93 9 959632 38:99 3000 10052002 08 Нє МЕ 00 ММ Зо св В Ме о І І МО б у? ЕВТАТХІВсСАВІсІоюЮв я т 8 ху ВВ т жаб тУуУ 20 , поні іч дні ічної пічне ніч пінні чі чні ой одні ніінінінічі Я
Фіг. 3-2 варіабельна область легкого нанцюга усне птн вктотстеют КО сКкантаки ОС опора СВК - Кана померзіідноЗ каре 3 3 4 5 6 Я 8 5 ЛЬ ОЮ 1) Бі ЮК Ю 0ОСТР ОХ б3 295 Б 27 ут 75 ЗіЄ тб 28 39.30 ЗК ЗК 13 З я 36 37 3 77 З 1У 705 Р А ВА УВЬОВАТ ІЕЕ ВОВЇ Тл АсЕКАУхВ 2011506? АБУ ьсоВвАг І: хо 5 У 5 т 5 Вт вх ВХ ої окт квоти свв о ВЕК Ен м и Я З и Я З в Я ЗК В о м з ав з и и м м о о в и п ЕЕ М В ВЕНИ Гессе ее ее ее Енея ет ее Я Со а Сповша шо | СВ Ге - Кара і комерзгілноз кове 313 4651 143 565546 43 43 29 56 51 525354. 5554 51 58 50 60 БЕ БО й БЕ БЯ Сб, бу ДЯ 63 3073 Ху тя 3 ОТ) й хх ковку Во ВЕОУРАРБЄЕЄ С пк Е 4с2 156 0.5 т 5 Б 0.1 Ж У й 6 їх ож є 5 у та Ж Є 8 сб б 5 6 5 5 ЕТ вт Рв 1812 ху 5 5 В КІ М У 5 т б У Б А я 0 У 8 А ОВ Ж Кб 5 б 5 6 5 5 5 Б 16 5 ВА вет: еВ Ви ВЕ Злив я з п ЗЕ ЗИ и и ев З ЗИ ЕЕ и пи в а ЕЕ ВЕ З ДЕ нені по поді сОміз-контакт -- СС ОРІ -Кабаї номерзгідноз мабате) 85 83 8 85 8 87 ЗЕ БУ 80 81 52 95 9495 85 Ж ЗБ ОЗ Б ММ. 102 03 195 МОБ НЕ та? а б тт ж св в ж й в лов от т Кб Об 5 ло жо ОВ ої ж 0 БЕОНОМО 4с2 з б т ж я т с б в Ж В 8 роб у т Кк обов 6 тт я ток ЗЕОЮМО 2 ТТ я б А А ЛА Я С я З Ж КО 5 Ж 2 т Б 5 5 6 т Кв ох Р ох УЕООМО: ЯЗ ни І КЕ дк ВИ З п п А з ДЕ З З т ЗИ ЗД НИ ВК З т ВЕСТ ФІТІТІТІТТІІІШТТІд ІІІ дт то плои х пе й сш й Я й й
Фіг. 30-1 варіїйбеньна область важкого ланцюга ГЕВВТ скота ОСОКНІ-сСпавма о ТВА НЕО КаБає ВОМерЗПННОЗ Кевеб) 3 5 5 6 78 8 110211 4515 ЖКОЯ 222125 23 2525 0621 8 2 30 ЗБ 33 34 1535 238 3904 43 Міо: бто ву си УХЬЕсСсСЕкхсОї т: Ук ИиЕНУКО, УВ 2:01: Уу? с ух сКкаАВСУТ У нНИЕкКОкН ЕЕ ХРЧА ЗК ВЕ ВЕ ЗЕ ЕН НИ З МЕ ЯМ З АК ЗЕ ОД АКНЕ ЗО ЗАЕС ЗНОЄ ЗАМ ЗАВВ З ще ЗЕ ЕЕ ЗИ ЕЛЕКТ ДЕК, Мото) 0 86 Аю б КЕКА АХ ІВс КАВОВІ ТЕ чІІЕКУКУОКР косптосттитси СОМ НО контакт. СОНЯ -Споця ШИ СОМ Не. КоВаї ще ВОМерсгноЗ маке 23555464 88505152 30а 5335 555557 559 ЩО БІ 65 БІ КБ БЕ ХЕ БО Я ОТ 70 73 М О25 7677 1875 Во ВЕ ВВЕ Ютуб ЕкІСВІТІї во 657? ВКОоОгТЬїУ Вт Ви ооо йс:спі їв ої 65 тку ВР кол: її у 15565 5А КЕ 1812 Ек в п в ж у а 5 15 5 б 0 8 Ку в ох вк І В О.К АК Я ЕЕ хи І ас ІК 6505 тт Кс А вка ГО ЄВЕНасконтвктО 00001 СОБНЗ Е опогіа СОМ НУ - Кабаї БОЮ ноМмерзадмо сх окабві др 02253 02 ВК 553559 35.30 53 395 8Е 57 85.93-106 1003 2035 Мдо ОЯ Мобво КЕ НУ МЕ Ме КІ КбІЖ М ЕК НИНІ МО; ТА тв КАТІ УссУуВь В а МІ витсоаостіт ВА В са: тав гатчухссвбкурі у кт у у. Вс ост хх: В 12 т Б БЕ: Тахо о в а и я 36563555 МОг б; бу :ажоваузУСИБЕТ ХВ ОВ її» АВ вух В пасту пов попе трит т пупси створ пе типиопеи етери стенди качині рт ніч т пуло-тттення Я
Фіг. 30-2 гуманізація 150211 з тенеруванням наі5С11.у5 легкий ланцюг, каппа: антитіло митні, вивівняне пе зародкових лініях людини нн 5 НЕ номерзлдної кхані1231355 аз юпсвВвиИсеривайивяви | 28 29-38 31 32 33 35 35.36 КАМИ: ах: 05Ра85 558 УСВВУТ ІІ сВАВ Й У. 185551 СИ: нку фр 5 ту зл сівюав. .. ... ЖЕУЩЬ кт вибо в с: б м? 00 5в 58 5УЄВЕУТ І сІвАбВ. . . хх, .| БУ ВІ іх ГО св помер'згднеу кара 3 339 8051 034 55683 орі 53255758 59 БО бі 62 53 6 655 65 5859 7 7 Км о бх сх АК»: АВ: у, ЕВ У ВЕ ЕЕ Е505680т73х нн нан ик ВА ВИ б ЯН Не хв а касове ВАС НА оо жк г о ків Кк Б тісрудоя|т ць о.» и А НЕ У 5 5 В Ж 5 685 085 І СОВІЗ Й вес номер'зідная ісакаєТ? МОМ РТ ЕВ УВО ВІ ЛОВ 8 85 36 87 ВЕ о 90 91 о 93 53 35 Й в Не я ННЯ КУМ зт І680 ЕС оОО Т В, с ТІР Я бс т тя ем ект в віх сг уся кр. о. ЦЕ Б с с кв кр М МОНУ? ТОРА СО НОВ, хі трат Те їх 0105
Фіг. 4А-1 гуманізація 15011 з генерувищяням ви150511,у5 важкий лаштюг, каппа: антитіло мин, вирівняне но зародкових лініях людини сті номерзпдноз каві 23 5 6 7 Ж З Я ІЗ Ло 6 741 202125 2305 15 0621 38.29 30 31323635 0 БМ И ШНУ ото су ов секеуУХх?СсавуУКУ Ста УВНУ, УВО ооо ав тягове кв с НМ Я з оій|? в 16 виборів о су у аАвЕТКХ ок УЄУ с КаАІСУЄЕТтуЩНА. ЇЧУХОА РІО Ї совно воМер-дної клеї 45 3547 ЯКО 5) 5Е 50 а 13 54 5556-51. 50 59 Ба 61 62 53 86 5; БО 67 00-65 07113724 75 6 ЗБЕ а Ь с ВВ НУТУ х Ех КК ПІК І Ж А у я ше НУ Фора тт: т вовк ьоЬЕ ва Кк я 5 т|: НЕ «Ме ект Ух пкт Чі Нет хек нів я хі аккрІ хів; 37) сік ті іт кут є ксуаАгтІЦтТк атак І ЩИ Сов НЗ і | ЕС номерзтілноЗ кара 35 ЗБЕ ВЕ В 0 Із ОБУ ших З Мі ОХ Ме Нм 5 Є Вт не я Бе 19 МО: НУО Во ТАТІ. сх яхт ЕВ ТК 6 б б т в т ху 5 806 ОМ Ес то МЕТ ка юю хх Б Я б б б тру т т в я 0? МОН ЕТ А У А ЖИТ ва кю яєякякхх я 15 8 ІН б 5 б т Б У т ох 5 5 308 Фіг 4А-2 гуманізація 7АЯ/8Аг2 з генеруванням Ве7А4,ів легкий ланцют, капта: антитіло мин, вирівняне позаралкових ЛІНІЯХ ЛЮюЛИМИ Сов номерсгішноЗ: карії 2 3 85 6? 8 З ФП БІТ 212523 050607 а В с й в ї 3 09303130 3 33 6 юку Іти 79559385 55сЕВАТ ІВ СХОВУ У Б кИЕХНВУЕ вопаєв І хі оз в весни я НН пов. Бк ВУ пт: ст ко пев кАТ ІН СТІ ів ті б. кокон І сій номер зтідноз кебаб 3; 05 3 0 4Е 3243 24 45 46 47 «В ЕК 50 51 5 53 З 55 Вб ТБ За бр ях о 53 бе БЕ б б ЕІ КАР Ок сорт АВТ»... ВУ? В Ж Кб 5655070 вама я дк сов х Б тав... 556 Бр ж я б з 815 5 котам о ок т пови гір 5 В. юю... БЕХ Лв Р Бе світо СОБІ | 5ЕОЮ номер-гідноя кава 727137 251106 6ЯРВІ В ВБ КТ В НІ ФО ВІ о 51 9455 Б БР Я МІ МО 116055 НЯ ОО МО: БК тити сот и ТД т кт кН вата тт ЦЕ У АН МА у се о ве, хх От офсет я в я м кю вима тьтІв факс тхУЗ св... ОІВ ст кі и
Фіг. 8-1 гумазізація ТАЙНА з генеруванням НОТА ІВ важкий лавнює, каппа: вититло мипи, вирівняне по зародкових ліщях людини: Стевкнг БОМерагНОЗ Кава 1 2 3 4 5 8 88 51031121 1315151718 1923 212) 0133 25 5 07 25 293331 35 0000 38 1383950 143535 НИЗ о зов у ес квчкковУкч катета. | жтиокови Боно хо БІО МЕ ох вх кВ кА ве звітна; Крок о он Уріт о ву вовк вов кт Бс кА ЕХ ЕТ ЮНИ, ятВдюАРОВ СО Не шо НОМСр ЗДО маврако5 дб РАХ 5 51 50508 53 54 5556 51 5 ОБО КЕ БО БУ БЕ 5 8 6 БД 65 0.13 722745 677 В ТА ВВІВ а В с 3 Во Ірма ьх ННІ: ха, еНТКУВОКЕ»СсіУтІКОТЕАВсІХхУМІВБВІ 1591 с в тро я |. «Бів сте вх вт БІК М т чен нн ня ваБонуві з я віт віт. «фе ср ет хіх віх ікра т|лІ Ікс ху ють й СК НІ ВЕС БОМЕр о МНО кава; 05 587 ВО 83055 5295 ЗК ЗЕ 555 35 195 103 щ03 НОЮ 105 ЖОМУ МІВ ОХ 1 119 5 ООСМО: НУ Во ат ст как кю аю Е 0 31 б о б т в у т 8 50106 БОНН Есть бю ною ко ЖК Я ця і У ті ж У 55 0 ОНПУ ЕІ УТІК, ик ха їх РЕЯ ЦЯ б 0 б т Ж т т 5 ОВ
Фіг. 48-25 гуманізація 7027 з генеруванням ви70:7.1 легкий ланцюг, канта: витихідо мий, вйрієняне по зародкових діціях людини п сов зомер згідвоз Кава? 23455155 ИиМНЬИІ195203 050 а Ь с бе Є ЗОМ МНІБІТктТо ву ахвітсккА ті сІк5505 ХУ Ух Ухвнія тот: осв ва» вьсіука тісто тів т, БУВ паст З т у Ж т б Б т Б 5 БА У 5 ВК Я х т 1 5 сук хво 5 Ж В. то. 0: 5 Б.Я Б ЕМ ЩЕ У Го СОКІВ номерзтіднез каре?) 35 39 5045 ЯК ЗК оЯ5 46 37 Б 49 5051 305) 5у 6575 59 БК 1 65й 853 5 55 бо ат ой 59 0 7 КН сожа вози кіт... Е5І6 УР о в Бо отае Щорс» хо: 5. хи о Бару вія в ввовото пПООМ 0?» ті пз го, тя и є Ж 56 ХХ В Б Я В 5 6 5 65670 Гб во номерсгілноз ЖавафсТ 1351 УТ І ЗБ Я ВІ ВЕУ ВЕ АК 909153 35 36 Я 56 З ММ 102 103 А 5 БО 0 МОХ НІ з ьтІ55 БОБ Ут Оу ТР хи 1 716 т х 15 зсттЬгрт ухва орі со ня Це бах ій ЩЕ сб) с я ка ток Нв ел Ве В ЕЕ Р ее З кв Я С: СО Яни НН НЕ я КК ВВЕ ен т НО НЯ
Фіг. 4С-1 гуманізація 70:57 з генеруванням пи7б7,хї важкий ланцюг, капий: антитіло мини, вирівняне по зародкових лініях людини. Іоан Намероагідної кава 1 2 3 45 6 7 8 ФОП ОЗМ3 Мбіт 052122 336 75 2607 29331323 БлюивИвшВИ КАМНІ 5: 05 у о кс ВЕ КЕ пА5УХУХВЕХКА У? РІВІУТВ, НУО тот о іі сік У ес каска вівся зе, в У о|х ків оо СТУ ТТ ІЗ В ЕСАЕХККАРБАБУКтТвСКАВІСУ РН». ІнУЗуяРОЯС ро Тов ШИ номерзгілноЗ коарак 545 873845 505152 а 53.55 5556 57 58-59 БО 61 БО 53 0465 бе ЕТ БВ БО 0 7 То ТЕТ ТЕТ ТО ВОВІВК я Ь є ВУ КН БЕН І НІ ВР. , Б совтитйаи кову? 17372575 БЕБЕВХХ ПетНе чне ще сумі «БВ сіті Ех ех Брови зт гак 55 ІВ висту! в я я повіті. п 5 сівфтіх тів в втік БД 9 з т ті т ет БУ ТЕВБА В " СОН ЕС комер лива Кава 88755990 95 595 ПОТ 35 81 В го ІМ ше неІв Не ші Фо і маю МО: КАН ВТО В я кю ли хз ЕВ УЖ 6 об т 1 у 795 5 НВ
Ето. хуя 6 ЕН я об я 5 у т ВОНО пит вот ау тісті ик. . из к хх ве дю то ж т у в й
Фіг. 40-29 гуманізація 196 3 геверуванням ниток дегкий ланцюг, капа: антитіло миті, вирівняне по зародкових лініях подини І сок номерзгідноЗз кари ії 2 Ж 5 5 78 51031513 41515 189 23 2129 83 4 05 06 25-45 35 31 32 33 34 35 36 ЮК 10529588 АБУ ІСІ КЕЙ У У з хх 01 5БУБАКІ зво золі: ов ес іо Осетія івібрБая о г ОН б Б? Брі ва вує?» УтІТСсІВАВІКІ. Ю.І 5ІЮТЬ дя с КВ НОМЕР ЗЛНОЗ кара ЗБ 39 8 41 42 3544 45 45 3 Ж ЯЗ 5051 55 53 5 й 55 56513 55 50 БР 69 53 54 55 Б БЕ КА во жо жав та Ат... я В БІ0 У В 5 В ж 8 8 Боб НН НН НН НИ вах о ІД» в ак каввовогІю перу б б кот б жи ви у Бр вв... я БУ В 8 В Р є СБ б 8 б ОКО У і С - -ВЕщО номерзгіншноз каБаюто 137 157779 ВІВ ЯУ ВЕ ВЕ ЕТ ВО 50 М 99 33 5455 132 ето що и Ме іо Ки МО: КУ тотівсвовеоат тусовки окт еф тку ли їй 16К6 мовно МН каз кю А В св т хв т око 122 кібрбі т от іа ЕОкаАтІ спр: я» ІК ТЕ фо лк ук 13
Фіг. 4-1 гуманізація 16жКе з генсруванням іштеке:ха важкий занцює капа: антитіло миції, вирівняне но зародкових лініях людини СТЕБКЕНИ номерзгідноз кави 1 23 45 578 9 Ю 1213 415 610 19 395102 230425 262258 2930 32335 36138396 о Ісус хо У ВЕС особі ву, |НтІяО РКО ів У б бо хвовох жк |в гер пев юю. яз хо» ср пиіброла|ври о Ба дб вс б У жк в ть ост ВІВ: злісюти хавізо вва сте НОМерзпдноЗ каряр 95 574549 б Бі 52 з3 жа сх 5 37-50 50 0) 62 2 63 Ж К5 66 БІ КВ БО 70 71723345 У ВОІВ а св с В В на в ЕН ВІТ и. З 605 от УТАКЕОТсЬКОвХиЕК виб б в к|М о Шен 65 сі т ум» кБ5а|5І ог5к 5 оп ен У (й змиевіув ь в в 1 Біт т. 0. хв сіс|тів у ке в хх Вр У: фазу в я оц ву аву тя Ї одн 5ЕЛІЮ номерної хни ВО; ВЕЖІ В ЕВ ШИ а со шу 8 0.0 103 203 тоб то У ОВ ЗА І ще З МО: ІСНУЄ А ВТ У УКВ зо ях нкх кої Я ОО КРЯ ох б т т У т у 855 ЕЕ МУК ВХ вхо хау г в ур се т т тт у» пов ОТ ХУ ху сьіохея хи. я 05 51 це «Кт 955 5
Фіг. 40-2 фе я 1 і ФГ. ехо і ' Коюодетюсєтттнто зва, тА ії 16ЕВ варіанти гумазизації не букетів сити із звів || ка | ко | ко | ке | ка | хо зношення шої! (5 М ОК Юм КО вооовов в88оББ ах ЗБвБЛО товвЕНОЮВ ЗЗ4ОБОЗ 0 250ОБ В 28 пасту А ОВО МО МОР я то бовнов сзивавоЗ оБОБОВ йБУЕО5 ВВОБ ОВ 0101208 то евет я АСОМ МО ІМ то 35206305 3280603 9708 45605 ВДЕ бе за ішівоіїма Т8 М мо мо око то 50305 234.03 4ЯЗБЕДЮ сВОфавО5 фРОжВя 0 5358Е09 13 тивості 8 мМ М Мі К т ат73ЕОВ 1ЯББЕ-О3 ЗВВБЕ-ОО 53 ОВ 4лазЕОЗ 0 тоЗВЕоЗ 8 твіст |8 М 1 А 6 МК вен б.опо З.а3Е-09. БЕЗЕ в.д0БАт мів КК ШЕ суютів сук Гета| звієв| зя|2я|7| 1 жа | кі | ко | ка 1 ко | КО відношення св тА р Н ВТ АТ У Ф.Е 43804 0? бБЕй забеНОЄ ба бо Зла СНТАМІВА? вії вісі х ЗООТЕНОВ ЗЗ53ЕОЄ ЗлІБЕ-О 115 О6 12853 5247 В витАВА З М в оАВВ ХАТИ ЗлАБДЄ отой ЗБЕ; 53603 01857809 ва вигда м? з м о зісік ТЯОБОЇ ЗЕ ОЄ 252. ЗвЯОЄ 7603. 0122509 ща вита З 5 М 66 А Ш бля 33594 БаЗЕЯЮ ЗооБ5 8 З4Б04 0025005 53 вагах з у в оів Ум авоБжОя 295ЕЧМ о влЛеБЛО ооо ВББЕОЯ. 38309 3 пита У Зб б в ТТАВЕсО6 бЗб3ЕОї З840Б-0 4463508 73? Б-03 003505 3 Ви7АЯ хо зіптро вівів ЗВОБЕХО6 т7З56Е 04 оБООЕЯО БТВОЕОЄ 833 01058609 44
Фіг. 4Е-І1
МОТАйх? 8 Й во АГ м 1ІЗЕНОВ БІЗБЕОЯ Бі оАОВЕеОВ 85-03 01176209 23 НитАЯ хв 5 ее вів х ЗБЕ 41077603 948 олЛЕВЕОЯ ЗЯМЕОЗ 0 1о32Б08 95 ВиТАй мВ 5 У Я б АК ТЯ3ОБНБ РОМЕО ЗлЛоЯв-О ЗоВОБНЮ дЯТтЕедЯє 0 4о7Ечо 38 вита 5 У я. о Фів 1684206 2407БМ 1429Б-1О ОБОЄ БОБ 0 БОМЕАО 35 петадж 8 МІВ В АХ ТАВТЕОБ 2лозвЯи 5бОБ-Ю ВОЮ ЛеВЕЕОЄ Арт Ю 5 вим 8 У в! вв У їяаЕОї ЗЯЗІЕОЮ об 0 ахатЕ5 оБВОБМ 0 2ОВОБВ 1 штам 8 М б А у! аКЕНЖ 8ЛлЯБОЇ 3609 35 24053 0 1ЛЯБОВ 83 нимдаум 81 о Ав м. яЛ4БО5 7233Б4 Лов ОО ОЗБІЕЙЮ 01857548 32 пчотадаів 8 У (КІ дв у БЛ3ЕНО ЗУБА БЕ 290605 2о6Б3 00780509 із8
Гл ит нин по ИН "сут тив ГТ М Кк 1ЗБЕНО5 ові 2079 0 123Е505 913БМ 0745509 35 пав АВ У.Е 4Л0Б-04 Т67ЕМ АЛЕ ОВ8 а беЕНМ 0009049 04199207 17 вибо А РІК АВОЕНМ То?Е-М 425529 АЗаЕЯ бобові 0 вдєОВ 15 ВИТбЕВ т КІМ ТЯБЕ»ОЄ З23БЯ Я31Е0о ТобБНМ ббдаБоз 0 За5БО8 84 еівевла 1 т М Б ВоОЕНМ тЯЕОБ.
ВЕЛО 830БИМ ВЗ 0 ЛОБОВ 5
«Фіг. 4Б-2
7 и і т тт Її Що Я зма с я ТАТ Ї ж як г ! Ук аю Ж а о з го Х Ка с с гав й І: Ка і о М, с
0.54 Кі / ї КК: / КЗ І Я К. і й гу й ! м ше. ке ж а ЯК Не ЕВ; сте ЗА ; ВАС інже Я «і пити се за я лов м 109 103 105 абсожотна концентрація (нг/мл) Зв'язування антитіла в присутності (білі значки, переривиста лінія) або за відсукністю (чорні значки, суцільна лінія) 6,3 мкм Ва1о-тТЕ пи7АЯ 15 - квадрат ви ЗО 1.5 - ромо Вши?707: мі» трикутник ТТ конкуруюче антитіло - кружок
Фіг. 5
25 : сини ' 4. Збчрнет тн ст ; пен | - дн В ---ни1561х8 пи и ча и тан о тка де св о А А В | , плож-т. т !
2. а п Я ше о. - в-во й | і: тей яхт уся р ж нь ки 1 в ї в ШЕ их у к. е 7 7 5 Гах з В ! я ау ше Б ов 13 я єї и й" ї їх ї Х як, - о 1-- де и . о їх ! «7 А Кх кра 04 ік й й і х ! А ! Еш 2 Кай Е у Е Є й Ще «зве и ВОТАЯ АВ що у й дае Ви В я з Е а М, СБ дутеовтровкио ш- я й . ура - пу тою ТЕ Шк пери 1 ко ее Ср ТЕ поксеруючий по в пиття - о пет, в 4 1 то 302 та те 19 ще в абсолютна концентрація (мкг/мл) абсоліютні канцентрація (мкгумл) г вить й Ї й вико ув ВИТАЄ ! ф пита воТІВ І» вида мів пут І (3 ф нин ехі НЕ ЩА га м НЕЕ х поКокн не а ПУМЖОМУ ;
Фіг. бА Фіг. 68 ВИЖАЕСОО підгонка (СК) ! підгонка підсенка з використанням ТяСу ТЯ яНіво Ї етапісвавний став Яеб) (Баб) ооовота о Суютів йетів Супотів. по суюТя пет о Сулотів варіанті увримл) (НГЛМЛ) (НМ) інМ) (нм) (М) їм) (МО Твен ва же 1551 ТВА РА 03378 175 435 сов-на УВА 18.1 218 ОА 142 216 ОМА 7 223 й Ш ОА 30 щоб 125 Ба ще ен НЯВА 13 24 УА 45.8 9535 167 5 55 2285159 83 МВА ня ДА З 32 Е 123 327 280 ЗО
595. 14.5 яд 40 1 150 413 245 ТОЮ СоВАІЗ ТА 188 293 БОБА 156 40.5 25 57 9 255 но 885 19бА 9538 18 ТУ7ТА 13.4 тя СОКЕз ср и . аккаунт інникниик КАК ик нн нкнкиникккинакикинки СОЯ ІЗ уунккннккннєттт кни ккккккккккккнінійнттнко ХУКОЇ ЩІ
Ва. 90 81 55 ЯЗ 954 95 95 57 м З ЯБ 8 98. 9530102 Ж З НЕ Ж а т ві т 128 с т вВАЧХН тя
Фіг. ТА
ВИХ (ЕСБОЇ підгонка(вску підгонка підгонка зникористанцям 160 СЯЄ стаціонарні стано пе (Бай) І во 0 Смавтів ВОЛА о Супютів вен СуютА ВК 0 булотів 000 тАаварівнтюо! обиляарі (вмма) 0 нм) (НМ) М) (М). (нм) ВМ) пі 17 я па р ов 71007174 я СВБА 135 8 совВ-ні ГЗбА 1558 81 ЗА Я СОВА та 247 МА їй 822 Кк 22 ча 77 жд 59 24 Ї хиббак Е МООБА, тв 68 ГОА Ма 18.5 ЯОЗА 5 те і | і і СВОА 9 за ОвбА | 93 181 16 570 4 829 ї3а тео БОТА 183 тва х М92А 8 13.7 З БА ро 42230078 РабА 9 155 РЯБА Ю 152 ТВА їз 225 птн ше - ВЕН шин ЕФ 83 80 51 52 9394 95 96 97 МО: о5 85 87 88 9900008 1005 102 0 МО: й ба 5 М ЕХ Р ВТ бі вомУ У мМ о ж в інт п п п п п пи
Фіг. 7 дорос 20 паж снрісотн ср І як у а в сх в З я скрін с ся кур : і і НН | ві . І | і Що | ЩІ | ! га і - анти-лЛюдини шип ше Ці ! Й | | А Чо твлУтівої І | і | ЦІ 13 | ші Й Е І ЩО та ша І Я : ши як не шини ! - і Ми -е ; ЕН ії Гея винекнньк Н | (| | ! | й ІД МЕ о антитізо миші ! | ра анти-НІА людини ПЕНІ КН ЩО! ще ! жи і ІЗ г 4 ї й Ір й Е г ТИ) ! | і І о НІКИшЕ її | її ум а ПО НІ і ИЙ я 4 Ці ПМ Не М СІ: я Її т шишки щі 7 -ЖЯ -- - ! ро анти-людини: ПІ | | | й | І МУ, пввасет, : ОЇ ие А еВ фен І ФА Ії ВО ПАМО ЩСї Пере ро вад екревтер мн роде фу тьваноя - кхует, ее ИН "ЗД ФІ НИ де: ря и ве ! Ї її І 14 анти І ! 131 І ; о ! / ОН 113 бо ши пл 1 Ю 700 1000 опо концентрація (нг/мл)
Фіг. ВА
Що І М о дос | Ш І ШИ | антіптіло мені з шк МЕНІ |. ЩЕ ПЕ Пи ПЕ внти- ВТ, 1 )Ї М тва щи и 3 ПІ НАНИНІНННЕ КІПНАНАЯ 0 Не | ї - ден / рай Ь | ! | | | | | | ; і Її 7 ЕНН НИМИ НИ МАН ПАЮ НИК Щ | Щі г | Ул анНИ і | Й веяаутву 6-3 и ПИШИ ИН Я Й ВИ все, ЩІ І -К І /й ! | и 1. бАМО би о стеки АНА піірні інве тв Пул: Пар я ри жі ня фс При м ді яву га яр ни ри | вити Др ее Ї нонелом не нке: капи зннвнах шинки НАННЯ НН: НІ НИ ЖИ ЕХ НУ КОНЯ НОЖІ ЯК ЗМ КТ У НИНІ МИ ЗИ НК ВИ о І о 190 1006 вв концентрація (зг/мл)
Фіг. 88 Вес дит анти ВТІАЛОЮ ов» А СДС ЛЕТ ел МИ КІ МО І ИН НІ шен ще ЩО ШИБАНННЯНШИНІ ШЕ | НИК ШИНИ (8) 15 - І Ї іі І я | і і І і ! | | | | й Внти НЕ, ее ЩІ о ЩІ, НЕ Те їй ; д-- - -4 Е Шк вінкі ванаван янь ! | | | | | | | / | Н у анти ПВДО Ї ! | ї Ї ше ї | з ще о | | |і ! о Не ев твІщю І І І я й М ПВ. Ії Мов? о и К ЕК, зі дахові со ж. Бокс де йде ж Ж З 3 КИ ж се | З Н СД іні. зн «ім ткь-вен нн Іннениикніннн й інакяиний о 0.0 04 1 НІВ! 0 3000 0000 конценкрація (нг/мл
Фіг. 9А
АВ вн вТВЛЯЮ що ірлх ЗБ ЛЕ Яе я Я хг пе ЕЕ ВЛ Я аве ня ВИК КА зві Же я тв ялсв М с зма і 7 СОТ КВ яка ку ве ! і ЦІ 1 Ї Й ! І ! | ! ін 7, 4б- ЦЕ о ! ! ; ! ЖЕНЯ п ТІ ЯН ШИМИ ШИ МИ ши І І ЦІ Ди ян т о ПІ ЕНН, ЯН | ні і ! ! « жі ШІ. й : ШЕ ПІВНЯ НТ | ПИ І і Ії г 1, ДЕ анти ПТВІЮ Е | : ; й 1 І | і ! ідо ШК ЩІ | й ; й ш- ме ще ие ех ці пери орВ А Ефь ТНь М й ХК - ПО нннельс Я ія А, | АКТА ДІ Те ! НИ овег Дер хоніенінеткийк Я нний ЕНН теле НВ о МЕ ЧЕНВЙиС АКНЕ и лижажис:пннннк ЗНИК ИНМИНКНННИ НЕ ИМЕНИ МЕ І А ЩО рено 7 т фен ; пе шини щк Я лижні шо Вр Мото
О0.001 ген пі З 10 100 Т000 10000 концентрація снгумлі
Фіг. 98 о: , Віасога Віасоге група|Кіясть тх ізотиух доза тк вотт Супотів і Смс заргант (ям. бабі | (нм Бай) і стявт С зна ПИВА носі АМО | КТ Іво пІ1с98АЇ 2303 140 440 ж 150 щої що і ! ї У іа; Ж є ' во) ! ! ше ши я мк м о МИ шк. х ; ; ; і : в Ір 1 дик ЩО З Й й пет 2|1112)зу|5 вт) е| 5 юн рез «розу ту ву т Й п з ; тематологія (ретикулонят СН) , : клівічна хімія ССО | і т- в плазмі, лікарський засіб в снроватці (РА); виш я лікарський засіб СЯ в Абе СА) Проміжне й : Ківдене но дослідження на мавнах винусршипеовенної траву вання транспортування зразка
Фіг. 10 т000 й. І Є І а анти-з т НАЦ а - ЯЗ канти- ТІВ УВАСЕЯ Е 1064 ери шк ши" хееде-ханти- ТІВІВАСЕ СИ Я Ах -А -- а В я ГК т " стеклах щк и і СІ чех а в р Й Е З М я іх "Щ8 -- ЧИ т я іо ц їх ПЕ | за о е
Е . "й 013 й Е: | ох ш : А т й 01 : 0 20 40 во часідень) Фіг, ПА 2 сойка вовікі кодові овдсвнт і увіавнкав вного : -ь «анти-до а --ж1- анти вАСЕЇ
Е 2.0: «ефе анти лк Увдевї щ «- їх г 8 151 о Ф х : а прое ш г 8 104 хи нет. й ся «А й В в й; І й з У кх к з я, і | г Б ше днк і св я р ї Я Й Востттуу ге й ов. в їх а а Фе о 5 10 яв 20 25 час (лень)
Фіг. ІВ во РЕ (АРІО в плазмі св -ВНТИ-ЗО В їз «43 - анти- ПЕ УВАСЕ нев: ВНТИ- ТА УВАСЕТ З в - г А я Е ДІ.
Б б... В оде. а ї 80 в'я г я. -- 8. спек З адо Кай АВ Шик сни ШИ о ва щ 15 ші Ше. 5 к й); На в а шк лав 8 до Ти, А В й 1 20 за 40 5 ко час(день)
фіг. 12А СЕ во (САВА) 100004 г І е-яканти- ЗО ШІ! е ія ча анти- НВУВАСЕ А А в З недианти- ПАУВАСЕ - ін аю У З В їх Ж вооойлаНяЯ и. її Е ов ГК, тах В'я пот в - е Ж у а А й 4 Ан ее, о ля тях о ЕТ вай з А дов пера З в Ше: КЕ о 10 28 за 3й 5О во час (день)
Фіг. 128
СБЕ БАРВ, во ! 4 й -Ф-антизо - ЖІ» аНТИ- ПВ ВАСЕ А а «же анти. ПНЗВАСЕЇ а а А а я ант а ме а й А н-3 зов з Ах А т А А Е ДОС ша, в В А Ж ща и ЕЕ - и щ Жав п ш й а? ра В а її я «В В сто «г С Е, Ку ож І З. ТЗ й оте. я в ОВО ат в й я 89 ве п г й йо в ? а в е в г а Ф г З ЕВ) 5 то ї5 час(день)
Фіг. 12 Са 8АРР Щ м ам А ВИ бо А --ч41- анти- ПЕ УВАСЕ аг пеефу- ВНТИ-ПКУВАСЕ В а ; а А ко т їх А КЗ -Е я , і щ в ЕН я в ол я А 5 їх ння я Ф й рев ово о в я я го Де й Ще В... ткали І пдиквякт АНТ лання що сі а к в зай ій див Й й В : Мн ве Ва Я-8 8 в пана аа а а а а А Аа а а А А а А а а А а ан й 5 та їв часідень) «Чнг. 1213 й ІЗ су Тор М її ен Го д а пт й Ще: -7 Е нижня шия Я 1 їх й В а р й і в В й, ІН і А 7 Сл 05 х в З ІК но и З я ВВ І «нв-анти-90 (5-1 анти- ПА ЙУВАСЕ. вк ханти- ТІВРУВАСЕ
0.04 ; Го 5 10 15 час (день)
Фіг. 26 оо регикулоцити загалом. - -- в ВНТИ-9О 30 Мгке « з й ЩІ му -- 150 Ш Її «ЯЛПеанти- НКУВАСЕ ЗО МИКг т. 7 | Око речи анти УВАСЕ 30 мг/кг т | ! ку це. Ж 160 зн ? з; ще ; г се Й -( щі до! вой и Ї. ко шк т За ж 7 с. Яд к | р В ща в в ід З ї- Я а пефддваиия в. що 50- : и гВ | св В 0 т - ї- те я ї- у «з З с - ї З - а я я ч і - Кк а Ко : 8 5 5 я 5 5 т 5 5 Ж Ж « Ф ай день досліджень
Фіг. 13ЗА 05 поши т Еритроцити в.о . чи : 55 АК ух Ши ї- 1 о с о Ду й Е см р й х Кв є ; їв | тк ІЗ ке -- знанні: я ; 2 ВО ї. і виш: я І їх Що її | пкт Ас екнттінню оатіттюнмтя ння , теа--античо 30 можг
4.5 - Ганта ВАЄ ЗО МКГ «тд ВНТИННУВАСЕ 30 МгАт 4 ; не й що я сн чан НИ НИ а В є 4 5 3 8 2 2 Б й ее 5 4 5 5 5 5 : на ши я щ- ч « Ж 5 р) день досліджень Фіг, ІЗВ
Бо- фракція незрілих ретикулоцитів (95) се фвити- ЗО ЗО МО/Кг
40. -Я1-анти- ТЕ УВАСЕ ЗО мкг пед «ВНТИСТЯВАСЕ 30 МК то З Ек учоя. с Ки а ТАРИ ; М и Ї ж Й й А З ; о ! в ; пенні мк: Не ПІ б І е Ї й кї та ке сі ре с Ге -
а. во 5 с сх день досліджень
Фіг. 130 46 гемоглобін нев антиі ЗМК - Я -анти-ПВ'ЯЗАСЕ ЗО Мел пев канти ПІВУВАСЕ 30 мг/кг - м | ; Е й ках зихА 5 рр Даххаєє их ша ие НИ і ЯКОБ нон г ех І ке м Пот й І; 7 - о. їх у, вк з иа, й Ж оя2 с Й і ! дже і
10. я зна я- ї- Шу их - р. -20 М о тр й є її д я АД се й ш І всі М ся в В м рев Ф ей А 0. Ки А: ре б що їх « Б 5 Ко її в Е ч с с І-й КУ 5 день досліджень
«нг. 30 група Кілеть тк їзотнн доза | пк. шт | супоттв р о смгінг) варіант ГЯвнм, Баб) їнм. аву Ії 5 анти-Я0 | відс 130 |і й о 2 5 Івнти- НАЗВАСЕЯ наСіАМО | 0) пет ви юхв Ї з 5 |аніи-твУвАЄСЕТ | пюстрАме ватастісваА| о3ожі | 4аб'ж тво анти: ВАСЕ! пвсї ше (вра; Кінцеві моменти | лікарський Засіб і Абе в головному : Р мозку (за години) (ВА) (НІ е т . гематологія (ретикулоцити3 (НІ (Се) ! | кпінізна хімія (СС Арега в плазмі, лікарський засіб в. (РА) 1 сироватці (ГА) (сл) І лікарський засіб 4 СЕ в АВМЯ (СА) " і 1 ії 1 1 І ' доза евтаназія внутрішньовенно
Фіг. 14
Бак ше а
1.5 м по | й охжжкине Й й а. у, я а, І й ще - мод внти- ДО Б Що анти- НК ОУВАСЕЇ ! кжеффк» анти. ТПАС/ВАСЕЇ нтк-анти- ВАС
0.04 т-- ; - -3 -2 -1 0 1 2 Час (дні)
Фіг. 15А ОО зни дО ЩО знти- ПК УВАСЕЇ дан 4 вт ПЕОВАСЕЗ р я и ВАС Я 20 а їй щі Не : а її Б) й ш ше Во 8. | в Що жа В КО и «й в ся | А. В чі ш я я. ж чо ш в За г ва Ж 5 і во Ов сш ши 8 5 | далаолова Аа вд Ада вдо Ва о 00-44 сно ржжо почи яр аа сот ося зн т и и ни и - є Е Гея Ге 5 п «о я Ко і Е 5 г. жк т щ т я сл я щ Ка Х ш їн я. в Ей Ф Ок рез й що Ж Ж в.
Фіг. ІВ
Номера 123 5 5 7 8 161 МІБІЄТ ІВ ра сао Вс Ж БО М 35 3 МОВ ОвИ Го ВВС : споща-сокіІї. й , Її жонтакт БОМ УДО В РІШЕТ ВЕ ВВ ау ік УтІжІВ ВО ВТ БТ АХ АК УМ 10575555 81 са зах ит ТУМОВІЮ сток 05 БАБУ ВАУТІТ СА З УВІ КУА» КАУНІВИ пітон об евЕавУвоот сват жива У Я Тов 5105? 585555 кв Уж вЕвьщціїае УМИ2ВУ Бобкова бота пкуУТІтСсІЕ ВУ В т в У хх З НомерКабає 3339 4041-9135 б Ат ІВ АВ БФ 5153 335455 55 57 Б 5 БО КЕ 62 63 54 55 бе 6 Мр бо 70 74 75 ТЯ 75 ле ТЕЗ ВО Квас пен ЕН Ї контакт я СІ Ме УМІВ от бать А5РБІВВ ТУ ЕКО ВОоВої 51155502 ЯМА пса ьІ те АВЕРЬХ ВУ? 5 КВОТ? І 5 Б ЩА ох ся вжи іївавьк ву? В оас5овттї5ї52 УДЖЕОВО дих? ек АРКЬ ІК АВ ЕК ВІЮХ? ВВР сот ЕтТиІТІ18 550 Ума аа а хаб; БІВ ОТ А ОВ Зк ктьїт АЕС АЕЬОСВ ТВ тТЬТІя Бо Немевхава: В 8385 35 БЕ 855 ОВК У .3 93 М 543596 8 939 3000 ВЗ НО ОНКО МУ ЕВ В с Карі СОВІЯ Ко бвощів Сов хонтакт- ОН ІЗ ущетя жовту тТсИв ук вто Кк лою ЗЕОЮМО13о Ума типа тя ктів летів о т ву В 1 5 я ЗЕНОМО УМОВІ ко» х7 ср бю ор сб б т ку я їх я ЗБШЮМО ЮА дав вот авт тю вт ж ЕЕ її ж ЕМО 35 УМО то латутсІо ориг о т|в со б т ж т х я ЗЕОІЮМО; 6 УМ ЯЯВ го тУ ТО яхт БРІВ ОВ ХВ я т ЗЕМ ВІ
Фіг. 16А НемерКавай ух; кб 7 В 8 Мои 123 5 лю а В 2 25 5206 27 36 З а З 5 ВО 33 ки оранж ЇМ СІК НИ Севевн сВАНИ Тс контакт. СІКНІ 1 МАТИ В: ЕТ: Ето обуУсєв»Вь сх У А ВІК УВА ЩА Я3 ЕТО 075050 свЬКЕ САТ дІВКУВ УА ков хо ЕоБУЗУЕбОов»ВьЬ Ак ЕРоІкІВЕУВоК Удай ватки твссоькавса вве кл вна жМаїВво ж У а ЕВ о ов У оББАВ 5 ХОРІ КІЗ УА УМІВ ЕЕ Ух Во бува ЬьБ си бро АТВІК УЗ Намержавяє 21453253 5051595 й соб) 555 5) 56 5 БО 6 Ба ау БЕРУ То Я т ОН ТВ 00 Кара СОН ЩІ Її сСпзта-сВВНо-ї ! контакт- СОКИ Ума ге ІСТ ВУКТВ ТЕКИ: кіт УАМІ2ВЗ 5 сухі ким ВІВ Ада ІВУхвхксІвРІ ВАРТЕ ДОВ г еко чхвтт бабу ахКсвТ:55 Тк тео вех сітки 55? ЗЕМ КІН ЕТ: АТХ УМОВ в екв витра МІ В аб 5т10 КАФЕ КСКЕИ:ВАТХНТА ЖУ445551 вень виліт А єв вВу ВАХ КІВ: 5 тб кКкт Номеріайші 79208132 5 Б 334 5 ЕВ З З ОКА РОК В В ВР Обов ох НЕЯВ М3 ВА МОНЕ НИ МЕ ЮЗ ІН ЛИ МА г Кава СОКУ Спвіна СИ На вка о момтакт СПК НУ. і ле Дом вав і рвов попи по ие ов во вне ЩО: АВ ховала вртаУтС ВІТИ Х мот боб т Бут 5 5 В УМОВ туго сьвахотауУтУУСсАТІтТоСТ НІ Е.О ЖІН б о б т Б У т т 5 5 139 УМЯ12 830 укокус А ОТаАсХТС ВЕР оТВУ неті во ость ч хв СеУНоВи їв а яскравих ке ІЗ в 0 є т 555 5 УМІВ уко сЬВАЕБТаттуЄЬсВІЇ НУ Вл ж є б б т 5 у т т 5 5 38 УУНААВ хоп віьвавочитьУЄ тури -- жів в б єть я тт 5 5 й . " . -й
Фіг. 168
НомеркКавав 1 2 3.5 5 5 Б ВО ЗІ На ОВ 3 92122 23 м аз ом В Є ВО Е РОЇ ОВ МІ 33 35 36 523633 і Й Кеер: СОБІ во АЗИ ННЯ і Ї хонтаєт «СОНЯ Евбта ше ме М п В З ЕЕ ВИ в В п нки Я МЕ ЕС У Б ВАХ АК У св щО пгбитаврРЕ вас ВУТІтсСІВ АВ УББ АНУ ІС а 21510585 5 55; 5 У БАХА ІОВ 27127053 5555 570081 тсіВАУ 5 У 5 в АТ АНЯ НенменкКзба!є 3,3 301142 4335 5556 4 48 49 56 5157 5155 5555 51 55 5 50 Б БЕЗ Б БУ І БВ до ЛЕ МОУ ЗК Т5 НОР В 79 В -Кав СОЯ Сіюта-срВ о контакт КЛІК Я авт ЗВЕР РКБІ5АВЕЬІ Іст? яті хОог Сб юо Б ЕВахАРЕхІі ВРУ АНКЕТІ ВІТЕР тво ОО кр ехаА?ЖЬІ ні авиьї с» ко 5стТОогтТь 55 ОЗ що ЗК ЕХ А Рі Ви ВВЕ 5ьо Номеркара: ЗЕ БО ВТ ЕК БИ Я ВОЗИ 333 ЯК ЯР ЗЕ УКВ МОХ ОО КК ТК КО Кабвії КІЗ сСпоша- СОКУ ро контек. СО, Геї Її ЕВбі? уратів є т ж тв їх Кк ЗЕОЮМОо ІСБЩО БОРХТІЇСІІ тес вт кт я їх КК ЗЕ0ЮМ М їсвво ЕТ у8ВІ ЕТ от кт я 1 хв ВЕОЮЮТю іСШюз жо тАатхтсіоютьех кто) ст хх у ЕЕ їх в ЗЕОЮМО Фіг, 17А Немер Кабає РЕ з ог 5220 Бк я й ов 035 02 3335 35 35 1 35.39.40 Кара: СОК НІ Обнова -СОБ с д і еектакт СОКИ Баба. ЕХО ЕВ соб УОРЕсСЕКо са ткРЕТЗ ІНІЙ Оо А ЮЄ в токуьвовохтмовосв ях Авт він хтя їЗЮО тт вбосоБхоРввьНьсав сти ВІ ЗУ; МОЮ ж У УтгвєсСЬУО РЕВІНЬ ОСТЕР ІЗІНУВ Номержкаває 41429 рії М 4148 Ж 50 51 52 А ОЗ Об 53 54 55-56 57 58 59.50.63 БО БО Б 5 БЕ 576059 01 6 МВ І с КВАС ЯВННО 7 сен 1 «ОВС СОВВ М а Й і Ева Екс еВНЧХкТЕ УВУ А РЕ СІВЕТІВАО ВКА Сб вес кої екв 55519595 ЕТІВАВТВЕЕВА ЇСВЮОЄ в сКсБЕВУВБ 1 52 хвої сІвв Івана ОШЮО Р скОБЕЧАЕ ТБ таїти 5У Ко ЕРТІвАТЕКЕТА МамерКкаба: 713515 5 0363330 ЗБ оБатов В ов веж о в КИ КО МЕ Не Мб Ум ро о Но
2-7. Же СОВНІ Сюта СОКУ | Ей 7 контак «СОМ НІ ТТ І Піо в авіа воолавовий МО: зві ни же ев ме в З КВ В А Б Я ЕЕ ВК ЕЕ мир п че о о В НС ІСбЮс твоя хозАУттІсАВОР НІ тк АКСтКЖхНОУ ІН с бої МОЮ 50555 ЕотТАХУУСАВІО?ТТІУ тА сСТЮ НОЇ |на: 5 ЛОЮ 0 хкаЕосатусазНУуУ КТ АКТУ ті й 0 с ту тя в М іч . ; ; шк;
Фіг. 178 і БУОБУВБОСО БУОРОСЧЬВІ. БСААБСЕТЕО БЖОМОМУВОА РОКОБЕБУАВ ІМНБМСССТУУ РОБУКОВЕТІ БВОМАКМБІУ БОММЕБКАЕВ ТАУХХСАБаВ 101 УчСсОсСтТтТУТУ ББАБТКОРБУ ЕРБАРСЗВЕТ ЗЕБТААТОСЬ ЧКОХЕРЕРУТ 151 УБМЕ5САБТе СУНТЕРАУТО ЗБСПУВЬОБВУ УТУРЕВБВЕВООТ КТЖТОМУЮНЕ 201 гБМТЕУЮКИУ ЕБЖЖОРРОВВ СРАРЕЕБОСР БУКОЕКРРЕРК ОТОЬМІВНТВЕ 251 УТСУУУБВУВО БЕОРЕУОРМИУ УОСУБУНМАК ТКРЕЕКЕОРМЕ ТУНУУВУЮТУ 301 БНОбИСБМОКЕ ЧУКСКУЄМЕСІ РББТЕКТІБК АКСОРБЕРОУ УТІРРЕОБЕМ 351 ТКМОУБОТСЬ УКОЕУРБОТА УКНББМСОРЕ ММУКТТРВЛ, ПЕООБЕКТХВ 401 ВБТУОКВЕМО ЕСМУКЗСВУМ НЖЕАБНМНУТО КЕВсСІЯТЄ (ЗБ 10 МО: 145)
Фіг. ІА 1 БЕУМТОБРІВ БРУТРОВРАБ ІЇІВБСВБВБОВБСУ ЖХВМОрТУБНИ ЖОКРООБРО 51 ШЬІЖКУВМВЕ БСУРОВЕВОЯЇ СБОСТОЕТІКІ ЗВУБАВОУСУ УУСБОВТНУР 101 щмтЕСОСТКУК ІКЕТУВАРНУ ЕТЕРРЕОКОЇ: КОСТАНУУСЬ ТММЕХРЕЖАХ 151 ЧОЧКУЮМАБО БОМБОББУТЕ ОЮБКОВТУВІ: ББТОТОВКАЮ УЕКНКУЧТАСЯ 201 УТНОСЬБЕРУ ТКВЕМНОВС (ЩО 10 МО; 146) Фіг, 158585 паста с--- ВН НКЕНВАСВА В ялин вл ІТ БОДлЗАСЕЇ - 0000 х сення вн-ТІЗ ЗАЛА СЕ Я 1000 0, я шк я и не сов ше о Я нн НН о З й Й ї шо М т В як 11 й я ЩЕ у Ф -о тт 2-х й КЗ : об я ча В гя ще за Е 0-01 Дн - И о 10 20 Зо Час (день)
Фіг. 19 ІЇ3-3558: в плазмі 50 Ммр/кг, 24 години ! я 1000 - ВО0 . о й Е - бю ее ж ш що щ кн т 200- Е а тя ; внти-аО авти А гуВАСЕї тидега С ААРО
Чис. 20
13-3558: фракція незрілих ретикулодитів 50 мкг, 24 тОодини то 80 З сп | в. ш й шинах пе Мина ово: -ййю-- 8 до 203 0 ; анти- 90 анти- ТІВО/ВАСЕ тиега КТ АСАВО
Фіг. ЛА 13-3558: ретикулоцити. н цілому 30 мкг, 24 нд гадини 1000 т . Е 800 ж к 500 її в Ше 5400 кій Шлніні ни Гея Б 200 Е «в я о їх анти-дяі анти-ТТВОуВАСЕЇ тидовга АБАРО.:
Фіг. 218 л- 1343558: ретикулоцити 50 міу/кг, 24 я години після дозування м В 2 тою щ вою " в 5 а з М Ф -т ш - сере я 500 - 7 ше п 8 | -Як- с Щ - «00- ? я З 300 -х ре ; а «Е Ф су «У Те -е ск і СУ ох З З | :
т диво де об ди же «х хоч К-
ж хи в
Е
З
-
Фіг, 22 й дорос іх ПИЛЕ НКИ ЕЕ: НАМ АК ОА ЯК НЕ КУН МААННО МЕНЕ НКИ ЕТ ЕНН ЖДЕ МЕ Й і ЕН Он тт анти ТИ УдДО щОЯ ні ц ї-- дин кни КС НІ 4 ре ж анти ТВО го? | ї | | ; -й-ветм ПНІВАСЕ САБА-НО Те ГЕ І г невосантя ПЕУВАСЕ МОЧАсіЯЗаАМЗЯ ОТ ді | НЯ ай сосен ПВУВАСЕТАБАВО, УТЕ ОС -еН ; З Я ВН ІНВ ТТН РИ НЕ. г ше | | щи | шик І Я І КЗ НІ | п і ТЕ | Е НІ ї зо ж я поч 11 І КО Я; ПНІ і По. і з ШИ КН шен яки ГІВ КН. - шин ' І. М й ННІ ї ще | ЩІ ! І ІМ І ЦІ ! о я о 111, не НИНІ шк шишки 1 шин т | ши; | 7, " ш І В ! НО І Б Ї 1 ши ше ні нене шен: | ! зо «4 НЕ споді ше Ін я 1. ни Її шині ІЙ І Іони у Е КІ ДИАННІ ЯНАНИНІ ВО ШАХИ ВАМИ ИН їни пай них їх сое жи ех фей сет 4; сни в ох «вк с ві вин КУ ДІ зн: їй ІТИ МІГ ї | ай, ет їй ге МЕ ій ЯН НИ НИ Ей Ян ! В; ПИ Бі
О.ої 0:01 пр 1 16 то то ч16о0о концентрація (нг/мл) ЯР шідгонка: (А ОТ (ЮК: А в Не в ве Сографію яї фата тав 162 за 1 СТррафік 49 -4.Е овах зЗ.о0108 З: 5» Огва аграфік ЯЗ ЗВ вла Ален 4.8 0ов5а Яграфік о ВЖ 00442 18.5 258 2:33 обов Фурафік 5 483 авг оо5В7 ав2 по763 опція нідгонки кривої - фіксоване значення вагового коефіцієнта
Фіг. 23 варіабельна область легкого ланцюга я СсОВі1:боМає с: туя сок -Свотів І Сов. Кава і Номер Кабаї: 1 514145 6 78 5913933 3415 16173819 2522 25 34 259621 98 25 33 3 32 33 34 35 36 338 539 49 2 45 БО НА(ННІ 519705 РЕБЬ ВА УЄЬЕУтІТтТСсВвВАВЮВКн 5 АНУ юкРЕХ ПТО ЗИ БІ103 7 05РЕБЬ В АЗУЄ5ЬХ? ЕТ АВРК У ВАНІ ОВЮКР А ВО ОМА бІб ТОРА УбрІУ ВІЙ ЕАВВ В т 5: аАНХУВОКРБ Кк ПОСІБ р хан оті абУсВнУу го кАБВОХ І аАНЗОд1ЇЕРО ХК геок Со вв Со 2 «Опотів СОМ Кабаї Номер Караї щі Ак ах 45 4 48 49 50 51.99 53 54 55 5657 58 59 60 01 62.63 64 055 66 679853 70 71. ХО 79 74 75 78 71.78 59-89 81 82 83 8 МОНО 5 ЕКО ток АБО ХР ОБО т БІВ 5 ОРЕ А НОТ ОгА З РЕЖіпуУТОТяЬьаАвсхувАтбвбоВото УВІ 5508 ББЕХ МИ ОЗА 5 РЖХ;ьУТОоАТтТНЬоСУРВЗКЕКВИВВ8сТОо її 2155508ЕБЕА МБО 82А(ИНІ Б РУ КВАТтТНкАВОУРВКЕЕБсВСосСВс?В їх тІВЕЬО?ЕВЕАХ СОБІ сома СоКіЗ - СпоівВів шк сОоВЕ3-Каваї Номер Кава дя нео фІ-НЕ яБ 9391 97 94 92 95 96 9798 У5 У 0) 02 103 04 305 105 301 МОВУ) т у хо це т Вт 6068 ЕЕ МБ ВА т ж же о ЖЕНА т В ь т Во б КУ І к Мото ЗА т її ж со БВ НОТ В Ь ТЕО п КУ ІК визат ато є у ж соб т т воду Мен нн нненяннирсннвовні фіг. 24А варіабельна область важкого ланцюга ет тінню ГСОВ НІ -Сопіза оБА НІС СБК ТОН. номер Карайї 1 355 6 58 5 Ц 1 МБО І 50.23 04 9536 ит 28 0 35 31 37,33 34 35363 ПИЛОМ Е У 5 т 0 50 А ЕХ КЕ РЕ АБУ т вунКнУУХОК» ВИБСНОА Е У о У 0 бо А УХХ РАЗУ ВСЕ АВТ ТЕ в хнНннУЗОХ шБСП5А кої У дсп вуха уЄХ скоїв с вен» БИ5СНЖАТ ЕХО У п АКТУ хво УКУС ІТ: Б УВКНИХУЯ АВ ринви нини аннннинякі ССО Не Сов НС лю Ї Сов На. контакт і номерКараї «55:45 55051 52504534 5556 57509 БО 61 620364 Б; 566 ЕКО БУ ОО 7203 38 25.7 ТЕ 7079 80 ВІ ВО бів. МАВП КН ОВ ВЕН ІоВІВ ок КЕХ АТ ях Хан пом В в ьЕНІСЕ ІВ Жх са ку КЕКУВаЇ її аАБ5ТА ХНЕУ ВОНА дяка хо іх я жІБЕКЕЖКВХА? то хЗА Тих КИБОПЯАКА дов ь ЕВ 108 1 5 РТ ЕТО ЕК ЕнАТЬ Хо вАБТИХНЕВАе (ев ее сосни кн нив склав еррнаря БА шу СОКНЗ Сройна Ї що СОМ НЗ «контакт номер Караїстькоє в: 5 пев Из 081 33 5 дк 3 Ж 21 3К 090 МО: 203 05 05 05 7 ЩЕ НИ ПЬШЕНІ КИЗИЛ 5 5 я є коту свт ХУ я б б КУТУ ООП ОА Є т хвоста юв т я в оо т куму ОЗНА 8 т коту: ота УЕ У ЯЗ опт я тт БО ЛАПЕО 5 Важ гАтТуТсавствати в й б о оп їм хх еплотттттт тот нн
Фіг. 248 142 ПО внтитви 4284 ГИ Данти-тівете Ех 10 опрннту: Ко р ) добре.
г 0.8 я і і Ма і. ; 04 иа є ї Ї і 0 ! : : "ові -- лк нин ми ит апікальний домен щи А
Фіг. 25
UAA201512536A 2013-05-20 2014-05-20 Антитіло анти-рецептор трансферину і способи його застосування UA119235C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361825477P 2013-05-20 2013-05-20
PCT/US2014/038847 WO2014189973A2 (en) 2013-05-20 2014-05-20 Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA119235C2 true UA119235C2 (uk) 2019-05-27

Family

ID=50983167

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201512536A UA119235C2 (uk) 2013-05-20 2014-05-20 Антитіло анти-рецептор трансферину і способи його застосування

Country Status (23)

Country Link
US (3) US9708406B2 (uk)
EP (3) EP3594240B1 (uk)
JP (1) JP6612214B2 (uk)
KR (1) KR102293064B1 (uk)
CN (1) CN105358578B (uk)
AR (1) AR096364A1 (uk)
AU (3) AU2014268726B2 (uk)
CA (1) CA2908743A1 (uk)
CL (1) CL2015003406A1 (uk)
CR (1) CR20150618A (uk)
EA (1) EA038367B1 (uk)
HK (1) HK1215584A1 (uk)
HR (1) HRP20240107T1 (uk)
IL (2) IL242088B2 (uk)
MA (1) MA38632B1 (uk)
MX (1) MX2015015970A (uk)
PE (2) PE20210649A1 (uk)
PH (1) PH12015502565A1 (uk)
PL (1) PL3594240T3 (uk)
SG (2) SG11201509566RA (uk)
TW (1) TWI573805B (uk)
UA (1) UA119235C2 (uk)
WO (1) WO2014189973A2 (uk)

Families Citing this family (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2013306390B2 (en) 2012-08-24 2018-07-05 The Regents Of The University Of California Antibodies and vaccines for use in treating ROR1 cancers and inhibiting metastasis
EP3851452A1 (en) 2014-01-06 2021-07-21 F. Hoffmann-La Roche AG Monovalent blood brain barrier shuttle modules
CA2967830A1 (en) 2014-11-14 2016-05-19 Ossianix, Inc. Tfr selective binding compounds and related methods
EP3221361B1 (en) * 2014-11-19 2021-04-21 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use
EP3221362B1 (en) * 2014-11-19 2019-07-24 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
SI3292149T1 (sl) * 2015-05-04 2022-04-29 Cytomx Therapeutics, Inc. Aktivacijska protitelesa anti-CD71 in njihovi načini uporabe
JP6996983B2 (ja) * 2015-06-16 2022-02-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｌｌ－１抗体及び使用方法
AU2016283343B2 (en) 2015-06-24 2022-05-19 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Anti-human transferrin receptor antibody permeating blood-brain barrier
WO2016208696A1 (ja) 2015-06-24 2016-12-29 Ｊｃｒファーマ株式会社 Ｂｄｎｆを含む融合蛋白質
PL3313879T3 (pl) * 2015-06-24 2022-04-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Przeciwciała przeciwko receptorowi transferyny z dostosowanym powinowactwem
MX2018003822A (es) * 2015-10-02 2018-06-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos contra el cd20 humano y el receptor de transferrina humano y metodos de uso.
AR106189A1 (es) * 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
KR102355950B1 (ko) 2016-03-04 2022-01-26 제이엔 바이오사이언시즈 엘엘씨 Tigit에 대한 항체
KR20190022752A (ko) 2016-06-27 2019-03-06 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 암 치료 조합
WO2018031424A1 (en) 2016-08-06 2018-02-15 Ossianix, Inc. In vivo methods for selecting peptides that cross the blood brain barrier, related compositions and methods of use
CN110214152A (zh) * 2016-10-14 2019-09-06 丹娜法伯癌症研究所公司 模块化四聚体双特异性抗体平台
US10611823B2 (en) 2016-12-14 2020-04-07 Hanssen Biotech, Inc CD137 binding fibronectin type III domains
KR102568559B1 (ko) 2016-12-14 2023-08-18 얀센 바이오테크 인코포레이티드 Cd8a-결합 섬유결합소 iii형 도메인
US10597438B2 (en) 2016-12-14 2020-03-24 Janssen Biotech, Inc. PD-L1 binding fibronectin type III domains
TWI833178B (zh) 2016-12-26 2024-02-21 日商Ｊｃｒ製藥股份有限公司 通過血腦障壁之新穎抗人類運鐵蛋白受體抗體
EP3565577A4 (en) 2017-01-06 2020-10-07 Avidity Biosciences, Inc. NUCLEIC ACID-POLYPEPTIDE COMPOSITIONS AND METHODS OF INDUCTION OF EXON SKIP
US10457717B2 (en) 2017-02-17 2019-10-29 Denali Therapeutics Inc. Engineered polypeptides
SG11201907419PA (en) * 2017-02-17 2019-09-27 Denali Therapeutics Inc Transferrin receptor transgenic models
AU2018221731C1 (en) 2017-02-17 2021-11-18 Denali Therapeutics Inc. Engineered transferrin receptor binding polypeptides
US10143187B2 (en) 2017-02-17 2018-12-04 Denali Therapeutics Inc. Transferrin receptor transgenic models
AU2018231127A1 (en) 2017-03-09 2019-09-19 Cytomx Therapeutics, Inc. CD147 antibodies, activatable CD147 antibodies, and methods of making and use thereof
GB201711809D0 (en) 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
CN111356477A (zh) * 2017-08-01 2020-06-30 Ab工作室有限公司 双特异性抗体及其用途
CA3071634A1 (en) 2017-08-02 2019-02-07 Stressmarq Biosciences Inc. Antibody binding active alpha-synuclein
HUE063021T2 (hu) * 2017-08-10 2023-12-28 Denali Therapeutics Inc Mesterségesen elõállított transzferrin receptor-kötõ polipeptidek
WO2019070577A1 (en) 2017-10-02 2019-04-11 Denali Therapeutics Inc. FUSION PROTEINS COMPRISING SUBSTITUTE ENZYM THERAPY ENZYMES
CN111712518A (zh) 2017-11-17 2020-09-25 默沙东公司 对免疫球蛋白样转录物3(ilt3)具有特异性的抗体及其用途
MA51103A (fr) 2017-12-06 2020-10-14 Avidity Biosciences Inc Compositions et procédés de traitement de l'atrophie musculaire et de la dystrophie myotonique
MX2020007389A (es) * 2018-01-10 2020-10-14 Denali Therapeutics Inc Polipéptidos de unión al receptor de transferrina y usos de estos.
AU2019215782A1 (en) * 2018-02-05 2020-07-16 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Method for delivering drug to muscle
WO2019157224A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for therapeutic protein delivery
JP2021528437A (ja) 2018-06-21 2021-10-21 ノヴォ ノルディスク アー／エス 肥満を治療するための新規化合物
US11168141B2 (en) 2018-08-02 2021-11-09 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
JP2021533196A (ja) * 2018-08-02 2021-12-02 ダイン セラピューティクス, インコーポレーテッドDyne Therapeutics, Inc. 進行性骨化性線維異形成症を処置するための筋標的化複合体およびそれらの使用
US11911484B2 (en) 2018-08-02 2024-02-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
US20220193250A1 (en) 2018-08-02 2022-06-23 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
AU2019312692A1 (en) 2018-08-02 2021-03-11 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
CN112839955A (zh) 2018-08-16 2021-05-25 戴纳立制药公司 经工程改造双特异性蛋白
CN109336973B (zh) * 2018-10-11 2021-08-24 中国科学院昆明动物研究所 抗转铁蛋白抗体及其用途
KR20200047937A (ko) 2018-10-26 2020-05-08 재단법인 목암생명과학연구소 Ids를 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도
TW202039573A (zh) * 2018-12-21 2020-11-01 美商亞維代堤生物科學公司 抗轉鐵蛋白受體抗體及其用途
SG11202106990PA (en) * 2018-12-28 2021-07-29 Kyowa Kirin Co Ltd BISPECIFIC ANTIBODY BINDING TO TfR
WO2021061867A1 (en) 2019-09-23 2021-04-01 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-cd47 antibodies, activatable anti-cd47 antibodies, and methods of use thereof
EP4045061A4 (en) 2019-10-14 2024-04-17 Aro Biotherapeutics Company FIBRONECTIN TYPE III DOMAINS BINDING TO CD137
US11781138B2 (en) 2019-10-14 2023-10-10 Aro Biotherapeutics Company FN3 domain-siRNA conjugates and uses thereof
EP4081536A1 (en) 2019-12-23 2022-11-02 Denali Therapeutics Inc. Progranulin variants
CN114930170A (zh) 2020-01-02 2022-08-19 豪夫迈·罗氏有限公司 用于测定脑中的治疗性抗体量的方法
WO2021142260A1 (en) * 2020-01-10 2021-07-15 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for modulation of acvr1
US11555190B2 (en) * 2020-03-19 2023-01-17 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
EP4126066A4 (en) 2020-03-27 2024-04-24 Avidity Biosciences Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING MUSCULAR DYSTROPHY
CN116096427A (zh) * 2020-04-08 2023-05-09 阿里亚达治疗公司 用于血脑屏障递送的组合物和方法
MX2022015157A (es) 2020-06-02 2023-01-16 Arcus Biosciences Inc Anticuerpos para tigit.
AR125406A1 (es) * 2021-04-23 2023-07-12 Univ Pennsylvania Nuevas composiciones con motivos selectivos para el cerebro y composiciones que las contienen
US11633498B2 (en) 2021-07-09 2023-04-25 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
US11638761B2 (en) 2021-07-09 2023-05-02 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11969475B2 (en) 2021-07-09 2024-04-30 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11648318B2 (en) 2021-07-09 2023-05-16 Dyne Therapeutics, Inc. Anti-transferrin receptor (TFR) antibody and uses thereof
US11771776B2 (en) 2021-07-09 2023-10-03 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
WO2023287238A1 (ko) * 2021-07-15 2023-01-19 한양대학교 산학협력단 뇌혈관장벽 통과 효율이 향상된 항 인간 트랜스페린 수용체 항체, 및 이를 이용한 다중특이적 항체 및 약학 조성물
AU2022340568A1 (en) 2021-09-01 2024-03-28 Biogen Ma Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and uses thereof
WO2023043953A1 (en) 2021-09-16 2023-03-23 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11931421B2 (en) 2022-04-15 2024-03-19 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and formulations for treating myotonic dystrophy
WO2024026494A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Viral particles retargeted to transferrin receptor 1
WO2024026488A2 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a modified transferrin receptor locus
TW202405020A (zh) 2022-07-29 2024-02-01 美商阿列克特有限責任公司 轉鐵蛋白受體抗原結合域及其用途
WO2024026471A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Alector Llc Cd98hc antigen-binding domains and uses therefor
WO2024036333A2 (en) 2022-08-12 2024-02-15 Epibiologics, Inc. Degradation of egfr using a bispecific binding agent

Family Cites Families (142)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20559A (en) 1858-06-15 Reducing wheel-tires
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
JPS633262A (ja) * 1986-06-24 1988-01-08 Toshiba Corp 網状赤血球の分析方法及び装置
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
EP0368684B2 (en) 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5672683A (en) 1989-09-07 1997-09-30 Alkermes, Inc. Transferrin neuropharmaceutical agent fusion protein
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
MX9204374A (es) 1991-07-25 1993-03-01 Idec Pharma Corp Anticuerpo recombinante y metodo para su produccion.
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
JPH07509444A (ja) 1991-11-26 1995-10-19 アルカーメス・インコーポレーテツド トランスフェリンセレプター特異的抗体−神経薬又は診断薬複合体の製造法
DE69334255D1 (de) 1992-02-06 2009-02-12 Novartis Vaccines & Diagnostic Marker für Krebs und biosynthetisches Bindeprotein dafür
WO1993016177A1 (en) 1992-02-11 1993-08-19 Cell Genesys, Inc. Homogenotization of gene-targeting events
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
JPH07509250A (ja) 1992-07-27 1995-10-12 アメリカ合衆国 血液脳バリヤーへのリポソームの標的化
EP1005870B1 (en) 1992-11-13 2009-01-21 Biogen Idec Inc. Therapeutic application of chimeric antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6015555A (en) * 1995-05-19 2000-01-18 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
PT994903E (pt) 1997-06-24 2005-10-31 Genentech Inc Metodos e composicoes para glicoproteinas galactosiladas
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
BR9813365A (pt) 1997-12-05 2004-06-15 Scripps Research Inst Método para produção e humanização de um anticorpo monoclonal de rato
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
JP2002510481A (ja) 1998-04-02 2002-04-09 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体変異体及びその断片
ATE458007T1 (de) 1998-04-20 2010-03-15 Glycart Biotechnology Ag Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2011-10-31 Genentech Inc Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna
EP2264166B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
WO2001025454A2 (en) 1999-10-04 2001-04-12 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes in the presence of nitrogen
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
US7504256B1 (en) 1999-10-19 2009-03-17 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing polypeptide
US20030180714A1 (en) 1999-12-15 2003-09-25 Genentech, Inc. Shotgun scanning
PT1242438E (pt) 1999-12-29 2007-02-28 Immunogen Inc Agentes citotóxicos compreendendo dixorrubicinas e daunorrubicinas modificadas e seu uso terapêutico
DE60106394T3 (de) 2000-02-24 2013-07-25 Washington University St. Louis Humanisierte antikörper, die amyloid beta peptid sequestrieren
HUP0300369A2 (hu) 2000-04-11 2003-06-28 Genentech, Inc. Többértékű antitestek és alkalmazásuk
JP5362164B2 (ja) 2000-07-07 2013-12-11 バイオアークティック ニューロサイエンス アーベー アルツハイマー病の予防及び治療
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
DK2314686T4 (da) 2000-10-06 2023-08-21 Kyowa Kirin Co Ltd Celler, der danner antistofsammensætninger
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
KR100857943B1 (ko) 2000-11-30 2008-09-09 메다렉스, 인코포레이티드 인간 항체의 제조를 위한 형질전환 트랜스염색체 설치류
TWI255272B (en) 2000-12-06 2006-05-21 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
ES2649037T3 (es) 2000-12-12 2018-01-09 Medimmune, Llc Moléculas con semividas prolongadas, composiciones y usos de las mismas
WO2003011878A2 (en) 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
JP2005500389A (ja) 2001-08-17 2005-01-06 イーライ・リリー・アンド・カンパニー Ａβに関連する病態および疾患を治療するための、可溶性Ａβに高い親和性を有する抗体の使用
EP1432444A4 (en) 2001-08-17 2005-11-02 Lilly Co Eli ANTI-BETA ANTIBODIES
WO2003035835A2 (en) 2001-10-25 2003-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
CA2481656A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells in which activity of the protein involved in transportation of gdp-fucose is reduced or lost
US20040132140A1 (en) 2002-04-09 2004-07-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
US7691568B2 (en) 2002-04-09 2010-04-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Antibody composition-containing medicament
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
EP1502603A4 (en) 2002-04-09 2006-12-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk AN ANTIBODY COMPOSITION CONTAINING MEDICAMENT FOR PATIENTS WITH Fc gamma RIIIa POLYMORPHISM
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
WO2003102157A2 (en) 2002-06-03 2003-12-11 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
EP1545595B1 (en) * 2002-08-30 2010-07-07 Biorexis Pharmaceutical Corporation Modified transferrin fusion proteins comprising duplicate transferrin amino or carboxy terminal domains
WO2004029629A1 (en) 2002-09-27 2004-04-08 Janssen Pharmaceutica N.V. N-11 truncated amyloid-beta nomoclonal antibodies, compositions, methods and uses
KR20050071564A (ko) 2002-10-09 2005-07-07 리나트 뉴로사이언스 코퍼레이션 아밀로이드 베타 펩티드에 대한 항체를 사용하여알츠하이머병을 치료하는 방법 및 그의 조성물
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US20050142141A1 (en) 2002-11-27 2005-06-30 Pardridge William M. Delivery of enzymes to the brain
CN103833854B (zh) 2002-12-16 2017-12-12 健泰科生物技术公司 免疫球蛋白变体及其用途
WO2004065416A2 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
EA200501524A1 (ru) 2003-03-28 2006-06-30 Сентокор, Инк. Антитела против амилоида, композиции, способы и применения
TWI306458B (en) 2003-05-30 2009-02-21 Elan Pharma Int Ltd Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
JP4794301B2 (ja) * 2003-06-11 2011-10-19 中外製薬株式会社 抗体の製造方法
CA2542046A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Fused protein composition
CA2542125A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using rna inhibiting the function of .alpha.1,6-fucosyltransferase
SI2380911T1 (en) 2003-11-05 2018-07-31 Roche Glycart Ag ANTIGEN-RELATED PATIENTS WITH INCREASED ATTENTION ON THE RECEPTOR FC AND EFFECTORAL FUNCTION
SG195524A1 (en) 2003-11-06 2013-12-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
ES2527292T3 (es) 2004-03-31 2015-01-22 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-TGF-beta humanizados
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
CA2885854C (en) 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
WO2005111082A1 (en) 2004-04-30 2005-11-24 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Anti-tfr antibody.
WO2005121179A2 (en) * 2004-06-07 2005-12-22 Raven Biotechnologies, Inc. Transferrin receptor antibodies
NZ552480A (en) 2004-07-30 2010-01-29 Rinat Neuroscience Corp Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods of using same
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
SI1791565T1 (sl) 2004-09-23 2016-08-31 Genentech, Inc. Cisteinsko konstruirana protitelesa in konjugati
WO2006039470A2 (en) 2004-09-29 2006-04-13 Centocor, Inc. Anti- amyloid antibodies, compositions, methods and uses
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US8802820B2 (en) * 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8916165B2 (en) 2004-12-15 2014-12-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized Aβ antibodies for use in improving cognition
US20060257396A1 (en) 2004-12-15 2006-11-16 Jacobsen Jack S Abeta antibodies for use in improving cognition
PE20061152A1 (es) 2004-12-15 2006-10-13 Neuralab Ltd Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta amiloideo
ES2259270B1 (es) 2005-03-09 2007-11-01 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas Metodo de diagnostico in vitro de la enfermedad de alzheimer mediante un anticuerpo monoclonal.
US8053569B2 (en) 2005-10-07 2011-11-08 Armagen Technologies, Inc. Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins
WO2007056441A2 (en) 2005-11-07 2007-05-18 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
BRPI0619748B8 (pt) 2005-12-12 2021-05-25 Ac Immune Sa anticorpo monoclonal, polinucleotídeo, composição, mistura, uso de um anticorpo monoclonal ou uma parte funcional do mesmo, método para preparar uma composição farmacêutica, linhagem celular de hibridoma isolado, método de diagnóstico de uma doença ou condição associada a amilóide em um paciente, método para diagnosticar uma predisposição para uma doença ou condição, método para monitorar doença residual mínima, método para prever a responsividade de um paciente e kits de teste
CA2651567A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
CA2657681C (en) 2006-07-14 2019-03-19 Ac Immune S.A. Humanized antibodies against beta amyloid protein
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN101245107B (zh) * 2007-02-14 2010-10-13 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
TWI453217B (zh) 2007-06-12 2014-09-21 Ac Immune Sa 抗β類澱粉蛋白單株抗體
WO2008156622A1 (en) 2007-06-12 2008-12-24 Ac Immune S.A. Humanized antibodies to amyloid beta
US9370531B2 (en) 2007-08-31 2016-06-21 New York University Method of providing patient specific immune response in amyloidoses and protein aggregation disorders
MX350962B (es) 2008-01-07 2017-09-27 Amgen Inc Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion.
LT2646470T (lt) 2010-11-30 2017-06-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Mažo giminingumo antitransferino receptorių antikūnai ir jų panaudojimas pernešti gydomąjį vienos grandinės antikūną (scfv) per hematoencefalinį barjerą
WO2012130831A1 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
CN104520325A (zh) 2012-05-21 2015-04-15 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于提高血脑屏障转运的安全性的方法
EP3221362B1 (en) * 2014-11-19 2019-07-24 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
MA38632A1 (fr) 2018-09-28
KR20160011198A (ko) 2016-01-29
EP4324480A2 (en) 2024-02-21
MX2015015970A (es) 2016-09-08
PH12015502565B1 (en) 2016-02-29
CN105358578B (zh) 2021-08-06
AU2014268726B2 (en) 2019-10-31
EP3594240A1 (en) 2020-01-15
US20150110791A1 (en) 2015-04-23
EA038367B1 (ru) 2021-08-16
AU2014268726A1 (en) 2015-11-19
PL3594240T3 (pl) 2024-04-02
EA201592213A1 (ru) 2016-04-29
TWI573805B (zh) 2017-03-11
JP2016526878A (ja) 2016-09-08
HRP20240107T1 (hr) 2024-04-12
AU2022201773A1 (en) 2022-04-07
WO2014189973A2 (en) 2014-11-27
CN105358578A (zh) 2016-02-24
AU2020200355A1 (en) 2020-02-06
KR102293064B1 (ko) 2021-08-23
TW201500373A (zh) 2015-01-01
CR20150618A (es) 2016-02-08
WO2014189973A3 (en) 2015-03-05
SG11201509566RA (en) 2015-12-30
US20180002433A1 (en) 2018-01-04
EP4324480A3 (en) 2024-05-08
SG10202003997UA (en) 2020-06-29
IL242088B2 (en) 2023-12-01
PH12015502565A1 (en) 2016-02-29
US20210087288A1 (en) 2021-03-25
HK1215584A1 (zh) 2016-09-02
CA2908743A1 (en) 2014-11-27
BR112015029009A2 (pt) 2017-09-19
CL2015003406A1 (es) 2016-07-15
US10808036B2 (en) 2020-10-20
JP6612214B2 (ja) 2019-11-27
PE20151926A1 (es) 2016-01-07
IL242088A (uk) 2015-12-31
IL242088B1 (en) 2023-08-01
IL304243A (en) 2023-09-01
AR096364A1 (es) 2015-12-23
EP2999716A2 (en) 2016-03-30
EP3594240C0 (en) 2023-12-06
MA38632B1 (fr) 2019-10-31
EP3594240B1 (en) 2023-12-06
US9708406B2 (en) 2017-07-18
PE20210649A1 (es) 2021-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA119235C2 (uk) Антитіло анти-рецептор трансферину і способи його застосування
UA123053C2 (uk) Антитіло до рецептора трансферину зі спеціально підібраною афінністю
US10508151B2 (en) Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
KR102188544B1 (ko) 저친화도 혈액-뇌 장벽 수용체 항체 및 그의 용도
US20180000964A1 (en) Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
UA125432C2 (uk) Оптимізовані варіанти анти-vegf антитіл
UA123759C2 (uk) Застосування моноклонального антитіла, яке інгібує шлях пов'язаного з геном кальциноніну пептиду (cgrp), для лікування або зниження частоти випадків мігренозного головного болю у суб'єкта
KR20190116582A (ko) 혈액-뇌 장벽 수송의 안전성을 개선하는 방법
UA125757C2 (uk) Антитіло до par2 і його застосування
UA123773C2 (uk) ВИДІЛЕНЕ АНТИТІЛО ПРОТИ HtrA1 ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ ПРИ ЛІКУВАННІ ПОВ'ЯЗАНОГО З HtrA1 ПОРУШЕННЯ АБО ХВОРОБИ ОКА
US20130149237A1 (en) Delivery system for diagnostic and therapeutic agents
JP2022514290A (ja) 改変抗体ｆｃおよび使用方法
BR112015029009B1 (pt) Anticorpos, formulação farmacêutica e usos de um anticorpo