KR101620661B1

KR101620661B1 - 어푸코실화된 ＣＤ20 항체와 mTOR 억제제의 복합 요법

Info

Publication number: KR101620661B1
Application number: KR1020127030881A
Authority: KR
Inventors: 프랭크 허팅; 크리스찬 클레인
Original assignee: 로슈 글리카트 아게
Priority date: 2010-04-27
Filing date: 2011-04-21
Publication date: 2016-05-12
Also published as: JP2015221799A; US20150071911A1; KR20130004597A; RU2012147340A; EP2563391A1; MX342590B; EP2563391B1; JP2013525399A; US20130280243A1; RU2585489C2; CN102844049B; CA2795544A1; JP6042801B2; WO2011134899A1; US20150265703A1; MX2012012118A; BR112012026707A2; CN102844049A

Abstract

본 발명은 암을 치료하기 위한 어푸코실화된 항-CD20 항체와 mTOR 억제제의 복합 요법, 특히 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체와 mTOR 억제제, 예컨대 템시로리무스 또는 에버로리무스를 사용한 CD20 발현 암의 복합 요법에 관한 것이다.

Description

어푸코실화된 ＣＤ20 항체와 mTOR 억제제의 복합 요법{COMBINATION THERAPY OF AN AFUCOSYLATED CD20 ANTIBODY WITH A mTOR INHIBITOR}

본 발명은 암을 치료하기 위한, 어푸코실화(afucosylating)된 CD20 항체와 mTOR 억제제의 복합 요법에 관한 것이다.

어푸코실화된 항체

우마나(Umana, P.) 등의 문헌[Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180]; 및 US 6,602,684 호에 기재되어 있는 바와 같이 단클론성 항체의 올리고사카라이드 성분을 조작함으로써 단클론성 항체의 세포-매개되는 실행기(effector) 기능을 향상시킬 수 있다. 암 면역요법에 가장 통상적으로 사용되는 항체인 IgG1 형 항체는 각 CH2 도메인의 Asn297에 보존된(conserved) N-연결된 당화 부위를 갖는 당단백질이다. Asn297에 부착된 2개의 복합 바이안테너리(biantennary) 올리고사카라이드는 CH2 도메인 사이에 매립되어, 폴리펩타이드 주쇄와 광범위한 접촉을 형성하고, 이들의 존재는 항체가 항체 의존성 세포 독성(ADCC) 같은 실행기 기능을 매개하는데 필수적이다(문헌[라이플리(Lifely, M.R.) 등, Glycobiology 5 (1995) 813-822], [제페리스(Jefferis, R.) 등, Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76], [라이트(Wright, A.) 및 모리슨(Morrison, S.L.), Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32]). 우마나 등의 문헌[Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180] 및 WO 99/54342 호는, 이분된 올리고사카라이드의 형성을 촉진하는 글라이코실트랜스퍼라제인 β(1,4)-N-아세틸글루코스아민일트랜스퍼라제 III("GnTIII")의 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포에서의 과발현이 항체의 생체 외 ADCC 활성을 상당히 증가시킴을 보여주었다. N297 탄수화물의 조성에서의 변화 또는 그의 제거는 또한 FcγR 및 Clq에 결합하는 Fc로의 결합에도 영향을 끼친다(문헌[우마나 등, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180], [데이비스(Davies, J.) 등, Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294], [미무라(Mimura, Y.) 등, J. Biol. Chem. 276 (2001) 45539-45547], [라대브(Radaev, S.) 등, J. Biol. Chem. 276 (2001) 16478-16483], [쉴즈(Shields, R.L.) 등, J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604], [쉴즈 등, J. Biol. Chem. 277 (2002) 26733-26740] 및 [시몬스(Simmons, L.C.) 등, J. Immunol. Methods 263 (2002) 133-147]).

문헌[이다(Iida, S.) 등, Clin. Cancer Res. 12 (2006) 2879-2887]은 어푸코실화된 항-CD20 항체의 효능이 푸코실화된 항-CD20의 첨가에 의해 억제됨을 보여준다. 어푸코실화된 및 푸코실화된 항-CD20의 1:9 혼합물(10 μg/mL)의 효능은 어푸코실화된 항-CD20의 1000 배 희석액(0.01 μg/mL)의 효능보다 열등하였다. 상기 문헌은 푸코실화된 카운터파트를 포함하지 않는, 어푸코실화된 IgG1이 고 FcγRIIIa 결합을 통해 ADCC 상의 혈장 IgG의 억제 효과를 벗어날 수 있다고 결론지었다. 내첨(Natsume, A.) 등은 문헌[J. Immunol. Methods 306 (2005) 93-103]에서 인간 IgG1-유형 항체의 복합체-유형 올리고사카라이드로부터 푸코즈 제거는 항체 의존성 세포 독성(ADCC)을 상당히 증가시킨다는 결론을 보여주었다. 문헌[사토(Satoh, M.) 등, Expert Opin. Biol. Ther. 6 (2006) 1161-1173]은 어푸코실화된 치료적 항체를 차세대 치료적 항체로서 논의하였다. 사토는 오로지 어푸코실화된 인간 IgG1 형태로 구성된 항체가 이상적이라고 결론지었다. 문헌[간다(Kanda, Y.) 등, Biotechnol. Bioeng. 94 (2006) 680-688]은 푸코실화된 CD20 항체(96 % 푸코실화, CHO/DG44 1H5)를 어푸코실화된 CD20 항체와 비교하였다. 문헌[데이비스 등, Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294]은 CD20 항체에 대하여 증가된 ADCC가 증가된 FcγRIII와의 결합과 연관있다고 보고하고 있다.

푸코즈의 양을 감소시켜 단클론성 항체의 세포-매개되는 실행기 기능을 향상시키는 방법이 기재되어 있다(예를 들어, WO　2005/018572, WO　2006/116260, WO　2006/114700, WO　2004/065540, WO　2005/011735, WO　2005/027966, WO　1997/028267, US　2006/0134709, US　2005/0054048, US　2005/0152894, WO　2003/035835, WO　2000/061739, 문헌[니와(Niwa, R.) 등, J. Immunol. Methods 306 (2005) 151-160], 문헌[쉰카와(Shinkawa, T.) 등, J. Biol. Chem. 278 (2003) 3466-3473], WO 03/055993 또는 US2005/0249722).

CD20 및 항- CD20 항체

CD20 분자(사람의 B-림프구-제한된 분화 항원 또는 Bp35로도 불림)는 전-B 및 성숙 B 림프구 상에 위치하는 약 35 kD의 분자량을 가진 소수성 막통과 단백질이다(문헌[발렌타인(Valentine, M.A.) 등, J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287], [아인펠트(Einfeld, D.A.) 등, EMBO J. 7 (1988) 711-717], [테더(Tedder, T.F.) 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212], [스타멘코빅(Stamenkovic, I.) 등, J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980] 및 [테더 등, J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568]). CD20은 말초 혈액 또는 림프 기관으로부터 B 세포의 90 % 이상의 표면상에서 발견되고 초기의 전-B 세포 발달 기간에 발현되며 혈장 세포가 분화할 때까지 남아있다. CD20은 정상 B 세포뿐만 아니라 종양 B 세포 모두에 존재한다. 특히, CD20은 B 세포 비-호지킨(non-Hodgkin's) 림프종(NHL)의 90% 이상에서 발현되지만[앤더슨(Anderson, K.C.) 등, Blood 63 (1984) 1424-1433], 조혈모세포, 프로-B 세포, 정상 혈장 세포 또는 다른 정상 조직에서는 발견되지 않는다(문헌[테더 등, J. Immunol. 135 (1985) 973-979]).

CD20 단백질의 85 아미노산 카복실-말단 영역은 사이토플라즘 내에 위치한다. 상기 영역의 길이는 IgM, IgD, 및 IgG 중쇄 또는 조직적합성 항원 분류 I1 α 또는 β쇄와 같은 다른 B 세포-특이적 표면 구조의 길이와 대조되고, 이는 각각 3, 3, 28, 15, 및 16 아미노산의 상대적으로 짧은 인트라사이토플라즘 영역을 가진다(문헌[코마로미(Komaromy, M.) 등, NAR 11 (1983) 6775-6785]). 마지막 61 카복실-말단 아미노산 중의, 21개는 산성 잔기인 반면, 오직 2개만이 염기성이고, 이는 상기 영역이 강한 음전하 합을 가짐을 나타낸다. 진뱅크(GenBank) 수탁 번호는 NP-690605이다. CD20은 활성화의 초기 단계 및 B 세포의 분화 과정을 조절하는 것과 관련있을 수 있는 것으로 여겨지고(문헌[테더(Tedder, T.F.) 등, Eur. J. Immunol. 16 (1986) 881-887]), 칼슘 이온 통로로서 기능할 수 있을 것이다(문헌[테더(Tedder, T.F.) 등, J. Cell. Biochem. 14D (1990) 195]).

CD20 결합 방식 및 생물학적 활성 면에서 상당히 상이한 항-CD20 항체의 두 상이한 유형이 있다(문헌[크래그(Cragg, M.S.) 등, Blood 103 (2004) 2738-2743] 및 [크래그 등, Blood 101 (2003) 1045-1052]). 예컨대 리툭시맙 같은 유형 I 항체는 보체 매개성 세포 독성 면에서 강력한 반면, 토시투모맙(B1), 11B8, AT80 또는 인간화된 B-Ly1 항체 같은 유형 II 항체는 포스파티딜세린을 동시에 노출시키면서 카스파제-비의존적 세포 자살을 통해 표적 세포사를 효과적으로 개시한다.

유형 I 및 유형 II 항-CD20 항체의 공통된 특징을 하기 표 1에 요약한다.

유형 I 및 유형 II 항-CD20 항체의 특성

유형 I 항-CD20 항체	유형 II 항-CD20 항체
유형 I CD20 항원결정부	유형 II CD20 항원결정부
CD20을 지질 뗏목(lipid raft)으로 국한시킴	CD20을 지질 뗏목으로 국한시키지 않음
증가된 CDC(IgG1 아이소타입의 경우)	감소된 CDC(IgG1 아이소타입의 경우)
ADCC 활성(IgG1 아이소타입의 경우)	ADCC 활성(IgG1 아이소타입의 경우)
최대한의 결합능	감소된 결합능
동종세포 유착	더욱 강력한 동종세포 유착
가교결합시 세포자살 유도	가교결합 없이 강력한 세포사 유도

mTOR 및 mTOR 억제제

mTOR은 라파마이신의 기계적 표적으로도 알려진 라파마이신의 포유류 표적(mTOR)이고, FK506 결합 단백질 12-라파마이신 관련 단백질 1(FRAP1)은 인간에서 FRAP1 유전자로 코딩되는 단백질이다(문헌[브라운(Brown, E.J.) 등, Nature 369 (1994) 756-758] 및 [무어(Moore, P.A.) 등, Genomics 33 (1996) 331-332]). mTOR은 세포 성장, 세포 증식, 세포 사망, 세포 생존, 단백질 합성 및 전사를 조절하는 세린/트레오닌 단백질 키나제이다(문헌[헤이(Hay, N.) 등, Genes Dev. 18 (2004) 1926-1945] 및 [비버스(Beevers, C. S.) 등, Int. J. Cancer 119 (2006) 757-764]).

mTOR은 인슐린, 성장 인자(예컨대, IGF-1 및 IGF-2), 및 마이토겐을 비롯한 상부 경로로부터 입력을 취합한다. 또한, mTOR은 세포 영양 및 에너지 수준 및 산화환원 반응의 상태를 감지한다. mTOR 경로는 인간 질환, 특히 특정 암에서 조절이 저하된다. 라파마이신은 세포내 수용체 FKBP12와 회합함으로써 mTOR을 억제할 수 있는 세균성 제품이다. FKBP12-라파마이신 복합체는 직접적으로 mTOR의 FKBP12-라파마이신 결합(FRB) 도메인에 결합한다.

mTOR은 두 개의 분자 복합체의 촉매성 서브유닛이다. mTOR 복합체 1(mTORC1)은 mTOR, mTOR의 조절과 연관된 단백질 랩터(Raptor), 포유류 LST8/G-단백질 β-서브유닛 유사 단백질(mLST8/GβL) 및 최근에 식별된 파트너 PRAS40 및 뎁터(DEPTOR)로 구성된다. 상기 복합체는 영양/에너지/산화환원 반응 감지자로서 기능하고 단백질 합성을 조절함으로써 mTOR의 전형적인 특징을 나타낸다. 상기 복합체의 활성은 인슐린, 성장 인자, 혈청, 포스파티드 산, 아미노 산(특히 루신), 및 산화적 스트레스에 의해 자극된다.

mTORC1은 저 영양 수준, 성장 인자 부족, 환원적 스트레스, 카페인, 라파마이신, 파네실티오살리실 산(FTS) 및 커큐민에 의해 억제된다. mTORC1의 두 가지 가장 특징적인 표적은 p70-S6 키나제 1(S6K1) 및 4E-BP1, 진핵 개시 인자 4E(eIF4E) 결합 단백질1.[3]이다.

mTORC1은 트레오닌 잔기(T389) 상에서 발생하는 가장 중요한 변화로 두 개 이상의 잔기 상의 S6K1을 인산화한다. 상기 현상은 PDK1에 의해 S6K1의 후속적 인산화 반응을 자극한다. 활성 S6K1은 S6 리보좀 단백질(리보좀의 성분) 및 번역 기계의 다른 성분의 활성화를 통해 단백질 합성의 개시를 자극한다. 또한, S6K1은 두 부위에서 mTOR의 음성 조절 도메인을 인산화 반응시킴으로써 mTORC1을 가진 양성 피드백 루프에 참여할 수 있다(상기 부위에서 인산화 반응은 mTOR 활성을 자극하는 것으로 보인다).

mTORC1은 계층적 방식으로 4E-BP1의 4 개 이상의 잔기를 인산화시키는 것으로 나타났다. 비-인산화된 4E-BP1은 번역 개시 인자 eIF4E에 단단히 결합하여 5'-캡핑된 mRNA에 결합하는 것을 방지하고 리보좀 개시 복합체에 모이도록 한다. mTORC1에 의해 인산화시킬 때, 4E-BP1은 eIF4E를 유리하여 그의 기능을 수행하도록 한다. mTORC1의 활성은 mTOR과 랩터 사이의 동적 상호작용을 통해 조절되는 것으로 보이고, 그 중 하나가 GβL에 의해 매개된다. 랩터 및 mTOR은 mTOR의 키나제 도메인 근처에서 강한 N-말단 상호작용 및 약한 C-말단 상호작용을 공유한다. 자극성 신호(예컨대, 고 영양/에너지 수준)가 감지되면, mTOR-랩터 C-말단 상호작용은 약해지고, 가능하게는 완전히 상실되어 mTOR 키나제 활성을 작동시킨다. 자극성 신호(예컨대, 저 영양 수준)가 철회되면, mTOR-랩터 C-말단 상호작용은 강해져, mTOR 키나제 기능의 작동을 본질적으로 멈춘다.

mTOR 복합체 2(mTORC2)는 mTOR, mTOR의 라파마이신-비민감성 컴패니온 릭터(Rictor), GβL, 및 포유류 스트레스-활성화된 단백질 키나제 상호작용 단백질 1(mSIN1)로 구성된다. mTORC2는 F-액틴 스트레스 섬유, 팩실린, RhoA, Rac1, Cdc42, 및 단백질 키나제 C α(PKC α)의 자극을 통해 세포골격의 중요한 조절제로서 작용하는 것으로 나타났다. 또한, mTORC2는 "PDK2"로서 공지된 앞서 찾기 힘든 단백질의 활성을 가지는 것으로 보인다. mTORC2는 세린 잔기 S473에서 세린/트레오닌 단백질 키나제 Akt/PKB를 인산화시킨다. 세린의 인산화 반응은 PDK1에 의해 트레오닌 T308 잔기에서 Akt 인산화 반응을 자극하고 전체적인 Akt 활성화를 이끌고, 커큐민은 세린의 인산화 반응을 방지함으로써 이 모두를 억제한다.

mTORC2는 인슐린, 성장 인자, 세럼, 및 영양 수준에 의해 조절되는 것으로 보인다. 원래, 라파마이신에의 단기 노출이 mTORC2 활성 또는 Akt 인산화 반응에 영향을 끼치지 않았기 때문에 mTORC2는 라파마이신-비민감성 물질로서 동정되었다. 그러나, 후속적 연구는 최소한 몇몇의 세포주에서 라파마이신에의 장기 노출이 이미 존재하는 mTORC2에 영향을 미치지 않는 반면, 유리 mTOR 분자에 결합하여 새로운 mTORC2의 형성을 억제할 수 있음을 보여주었다.

몇몇의 식이 요법, 예를 들어 칼로리 제한 및 메티오닌 제한이 mTOR 활성을 감소시킴으로써 생명 연장을 유발한다고 가정한다.

mTOR 억제제

다수의 mTOR 억제제가 동정되었고, 몇몇은 암 치료를 위한 임상 실험중에 있다(예컨대, RAD001(또한, 에버로리무스로 공지됨; 노바티스(Novartis)); CCI-779(또한, 템시로리무스로 공지됨; 와이어쓰(Wyeth)); AP23573 (아리아드 파마슈티칼즈(Ariad Pharmaceuticals); 및 KU-0059475(쿠더스 파마슈티칼즈(Kudus Pharmaceuticals)); 문헌[미타(Mita, M.M.) 등, Cancer Biology & Therapy 2, Suppl. 1 (2003) S169-S177]). 또한, 이러한 mTOR 억제제와 다른 항암 제제의 조합의 잠재적 효과가 제안되어 왔고 임상 실험중에 있다(문헌[Adjei, A. A. and Hidalgo, M., J. Clin. Oncol. 23 (2005) 5386-5403]). 이러한 조합은 단백질-타이로신 키나제 억제제와 mTOR 억제제의 조합을 포함한다(문헌[Sawyers, C. L., Cancer Cell 4 (2003) 343-348]; 문헌[Gemmill, R. M., et al., Br. J. Cancer 92 (2005) 2266-2277]; 문헌[Goudar, R. K., et al., Mol. Cancer Therapeutics 4 (2005) 101-112]; 국제 특허 공개 번호 WO 2004/004644; 문헌[Birle, D.C., et al., 94^th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research, Washington, D.C., Vol. 44, Second Edition, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. (July 2003) p. 932, #R4692]).

본 발명은 mTOR 억제제와 조합하여 암 치료용 약제를 제조하기 위한, 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체의 용도를 포함한다.

본 발명의 한 양태는 암 치료가 필요한 환자에게, mTOR 억제제와 조합하여, 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 투여함으로써, 암 환자를 치료하는 방법이다.

본 발명의 다른 양태는 mTOR 억제제와 조합하여 암을 치료하기 위한, 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체이다.

바람직하게, 푸코즈의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 40% 내지 60%이다.

바람직하게, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이고, 상기 암은 CD20 발현 암, 바람직하게는 B-세포 비-호지킨 림프종(NHL)이다.

바람직하게, mTOR 억제제는 라파마이신이거나 라파마이신 유사체 또는 유도체이다.

바람직하게, mTOR 억제제는 템시로리무스 또는 에버로리무스이다.

본 발명의 한 실시양태는 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 항-CD20 어푸코실화된 항체 및 mTOR 억제제를 포함하는, 암 치료용 조성물이다.

놀랍게도, 본 발명자들은 어푸코실화된 항-CD20 항체와 mTOR 억제제의 조합이 암 치료에 있어서 상승작용적인(예를 들어, 더한 것보다 큰) 항증식 효과를 나타냄을 발견하였다.

본 발명자들은 어푸코실화된 항-CD20 항체의 조합이 상승작용적인(예를 들어, 더한 것보다 훨씬 큰) 항증식 효과를 나타냄을 발견하였다.

도 1은 어푸코실화된 유형 II 항-CD20 항체(GA101 = B-HH6-B-KV1 GE)와 mTOR 억제제(템시로리무스)의 복합 요법 및 개별적인 단독 요법의 생체 내 항종양 활성 비교를 나타낸다.

본 발명은 mTOR 억제제와 조합하여 암을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체(바람직하게는 IgG1 또는 IgG3 아이소타입, 더욱 바람직하게는 IgG1 아이소타입)의 용도를 포함한다.

용어 "항체"는 전체 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 및 단클론성 항체, 키메라 항체 또는 재조합 항체 같은 유전자 조작된 항체뿐만 아니라 본 발명에 따른 특징적인 특성을 보유하는 한 이러한 항체의 단편을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는 다양한 형태의 항체를 포괄한다. 본원에 사용되는 용어 "단클론성 항체" 또는 "단클론성 항체 조성물"은 단일 아미노산 조성의 항체 분자의 제제를 일컫는다. 따라서, 용어 "인간 단클론성 항체"는 인간 생식선 면역 글로불린 서열로부터 유도되는 가변 영역 및 불변 영역을 갖는 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 가리킨다. 하나의 실시양태에서, 인간 단클론성 항체는 불멸 세포로 융합된 인간 중쇄 이식 유전자 및 인간 경쇄 이식 유전자를 포함하는 게놈을 갖는 유전자 이식 비-인간 동물(예를 들어, 유전자 이식 마우스)로부터 수득되는 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성된다.

용어 "키메라 항체"는 통상적으로 재조합 DNA 기법에 의해 제조되는, 하나의 공급원 또는 종으로부터의 가변 영역, 즉 결합 영역, 및 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 단클론성 항체를 말한다. 쥐의 가변 영역 및 인간의 불변 영역을 포함하는 키메라 항체가 특히 바람직하다. 이러한 쥐/인간 키메라 항체는 쥐의 면역 글로불린 가변 영역을 코딩하는 DNA 분절 및 사람의 면역 글로불린 불변 영역을 코딩하는 DNA 분절을 포함하는 발현된 면역 글로불린 유전자의 생성물이다. 본 발명에 의해 포괄되는 "키메라 항체"의 다른 형태는 등급 또는 소등급이 원래 항체로부터 변형 또는 변화된 것이다. 이러한 "키메라" 항체는 또한 "등급-변경된 항체"라고도 불린다. 키메라 항체를 생성시키는 방법은 현재 당 업계에 널리 공지되어 있는 통상적인 재조합 DNA 및 유전자 형질감염 기법을 포함한다. 예를 들어, 모리슨(Morrison, S.L.) 등의 문헌[Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855]; US 5,202,238 호 및 US 5,204,244 호를 참조한다.

용어 "인간화된 항체"는 구조 형성 영역 또는 "상보성 결정 영역"(CDR)이 모 면역 글로불린과 비교하여 상이한 특이성의 면역 글로불린의 CDR을 포함하도록 변형된 항체를 말한다. 바람직한 실시양태에서는, 쥐의 CDR을 인간 항체의 구조 형성 영역으로 그라프팅하여 "인간화된 항체"를 제조한다. 예컨대, 리치만(Riechmann, L.) 등의 문헌[Nature 332 (1988) 323-327] 및 노이버거(Neuberger, M.S.) 등의 문헌[Nature 314 (1985) 268-270]을 참조한다.

본원에 사용되는 용어 "인간 항체"는 인간 생식선 면역 글로불린 서열로부터 유래되는 가변 영역 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하고자 한다. 인간 항체는 당 업계에 널리 공지되어 있다[반 디지크(van Dijk, M.A.) 및 반 드 윙클(van de Winkel J.G.), Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374]. 이러한 기술에 기초하여, 매우 다양한 표적에 대한 인간 항체를 생성시킬 수 있다. 인간 항체의 예는 예컨대 켈러만(Kellermann, S.A.) 등의 문헌[Curr. Opin. Biotechnol. 13 (2002) 593-597]에 기재되어 있다.

본원에 사용되는 용어 "재조합 인간 항체"는 NS0 또는 CHO 세포 같은 숙주 세포로부터 또는 인간 면역 글로불린 유전자를 위해 유전자 이식된 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체, 또는 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체 같은 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 창조 또는 단리되는 모든 인간 항체를 포함하고자 한다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식선 면역 글로불린 서열로부터 유래되는 가변 영역 및 불변 영역을 재배열된 형태로 갖는다. 본 발명에 따른 재조합 인간 항체를 생체 내에서 체세포 초돌연변이시켰다. 따라서, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 인간 생식선 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 그에 연관되기는 하지만 생체 내에서 인간 항체 생식선 목록 내에 자연적으로 존재할 수 없다.

본원에 사용되는 용어 "결합" 또는 "특이적으로 결합"은 정제된 야생형 항원을 사용하는 생체 외 검정, 바람직하게는 플라스몬 공명 검정[비아코어(BIAcore), 지이-헬쓰케어 업살라(GE-Healthcare Uppsala), 스웨덴]에서 종양 항원의 항원결정부로의 항체의 결합을 가리킨다. 결합 친화력은 용어 ka(항체/항원 복합체로부터의 항체의 결합에 대한 반응 속도 상수), k_D(해리 상수) 및 K_D(k_D/ka)에 의해 정의된다. 결합 또는 특이적으로 결합은 10^- ⁸몰/l 이하, 바람직하게는 10^-9M 내지 10^- ¹³몰/l의 결합 친화력(K_D)을 의미한다. 따라서, 본 발명에 따른 어푸코실화된 항체는 10^-8몰/l 이하, 바람직하게는 10^-9M 내지 10^- ¹³몰/l의 결합 친화력(K_D)으로 종양 항원에 특이적으로 결합한다.

본원에 사용되는 용어 "핵산 분자"는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함하고자 한다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있으나, 바람직하게는 이중 가닥 DNA이다.

"불변 도메인"은 항체를 항원에 결합시키는데 직접적으로 관련되지 않고, 실행기 기능(ADCC, 보체 결합 및 CDC)에 관련된다.

본원에 사용되는 "가변 영역"(경쇄의 가변 영역(VL), 중쇄의 가변 영역(VH))은 항체를 항원에 결합시키는데 직접적으로 관련되는 각각의 경쇄 및 중쇄 쌍을 말한다. 가변 인간 경쇄 및 중쇄의 도메인은 동일한 전체적인 구조를 갖고, 각 도메인은 3개의 "초가변 영역"(또는 상보성 결정 영역, CDR)에 의해 연결된, 그의 서열이 광범위하게 보존된 4개의 구조 형성 영역(FR)을 포함한다. 구조 형성 영역은 b-시트 구조를 채택하고, CDR은 b-시트 구조를 연결하는 루프를 형성할 수 있다. 각 쇄의 CDR은 구조 형성 영역에 의해 그의 3차원 구조로 유지되며, 다른 쇄로부터의 CDR과 함께 항원 결합 부위를 형성한다.

본원에 사용되는 용어 "초가변 영역" 또는 "항체의 항원-결합 부위"는 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 가리킨다. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. "구조 형성 영역" 또는 "FR" 영역은 본원에서 정의되는 초가변 영역 잔기 외의 가변 도메인 영역이다. 그러므로, 항체의 경쇄 및 중쇄는 N-말단으로부터 C-말단으로 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 특히, 중쇄의 CDR3은 항원 결합에 가장 기여하는 영역이다. CDR 및 FR 영역은 카밧(Kabat) 등의 표준 정의[Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, 국립보건원, 미국 메릴랜드주 베데스다(1991)] 및/또는 "초가변 루프"로부터의 잔기에 따라 결정된다.

본 발명에 따른 mTOR 억제제는 현재 당해 분야에 공지되었거나 미래에 동정될 임의의 mTOR 억제제일 수 있고, 환자에 투여시 환자에게서 mTOR 억제를 초래하는 임의의 화학적 물질을 포함한다. mTOR 억제제는 ATP 결합 부위에서의 경쟁, mTOR 키나제의 촉매 부위 어느 곳에든 존재하는 경쟁, 비-경쟁적 억제, 비가역적 억제(예컨대 공유 단백질 변형), 또는 mTOR 키나제 활성의 억제를 초래하는 방식으로 mTOR 키나제와 다른 단백질 서브유닛 또는 결합 단백질의 상호작용의 조절(예컨대, FKBP12, GβL(mLST8), RAPTOR(mKOG1), 또는 RICTOR(mAVO3)와 mTOR의 상호작용의 조절)을 비롯한 임의의 생화학적 메커니즘에 의해 mTOR을 억제할 수 있다. mTOR 억제제의 특정 예로는 라파마이신; 그 외 라파마이신 매크로라이드(macrolides), 또는 라파마이신 유사체, 유도체 또는 전구체; 에버로리무스(또한 RAD001로서도 공지됨, 에버로리무스/RAD001은 미국 특허 제 5,665,772 호(노바티스)에 기재된 알킬화된 라파마이신(40-O-(2-하이드록시에틸)-라파마이신임); 템시로리무스(CCI-779로서도 공지됨, 템시로리무스/CCI-779는 미국 특허 제 5,362,718 호(와이어쓰)에 기재된 라파마이신 에스터(3-하이드록시-2-하이드록시메틸-2-메틸프로피온산에 의한 42-에스터)임; AP23573 또는 AP23841(아리아드 파마슈티칼즈); ABT-578 (40-에피-(테트라졸일)-라파마이신; 애보트 래보래토리즈(Abbott Laboratories); KU-0059475(쿠더스 파마슈티칼즈); 및 TAFA-93(라파마이신 전구체; 이소테크니카(Isotechnika))가 포함된다. 당해 업계에서 공지된 라파마이신 유사체 및 유도체의 예시로는 하기 기재된 화합물들이 포함된다(미국 특허 번호 6,329,386; 6,200,985; 6,117,863; 6,015,815; 6,015,809; 6,004,973; 5,985,890; 5,955,457; 5,922,730; 5,912,253; 5,780,462; 5,665,772; 5,637,590; 5,567,709; 5,563,145; 5,559,122; 5,559,120; 5,559,119; 5,559,112; 5,550,133; 5,541,192; 5,541,191; 5,532,355; 5,530,121; 5,530,007; 5,525,610; 5,521,194; 5,519,031; 5,516,780; 5,508,399; 5,508,290; 5,508,286; 5,508,285; 5,504,291; 5,504,204; 5,491,231; 5,489,680; 5,489,595; 5,488,054; 5,486,524; 5,486,523; 5,486,522; 5,484,791; 5,484,790; 5,480,989; 5,480,988; 5,463,048; 5,446,048; 5,434,260; 5,411,967; 5,391,730; 5,389,639; 5,385,910; 5,385,909; 5,385,908; 5,378,836; 5,378,696; 5,373,014; 5,362,718; 5,358,944; 5,346,893; 5,344,833; 5,302,584; 5,262,424; 5,262,423; 5,260,300; 5,260,299; 5,233,036; 5,221,740; 5,221,670; 5,202,332; 5,194,447; 5,177,203; 5,169,851; 5,164,399; 5,162,333; 5,151,413; 5,138,051; 5,130,307; 5,120,842; 5,120,727; 5,120,726; 5,120,725; 5,118,678; 5,118,677; 5,100,883; 5,023,264; 5,023,263; 및 5,023,262; 상기 모든 특허는 본원에 참조로 혼입되어 있다). 또한, 라파마이신 유도체는 예를 들어 WO 94/09010, WO 95/16691, WO 96/41807, 또는 WO 99/15530에 기재되어 있고, 이들은 본원에 참조로 혼입되어 있다. 이러한 유사체 및 유도체로는 32-데옥소라파마이신, 16-펜트-2-인일옥시-32-데옥소라파마이신, 16-펜트-2-인일옥시-32(S 또는 R)-다이하이드로-라파마이신, 16-펜트-2-인일옥시-32(S 또는 R)-다이하이드로-40-O-(2-하이드록시에틸)-라파마이신, 40-O-(2-하이드록시에틸)-라파마이신, 32-데옥소라파마이신 및 16-펜트-2-인일옥시-32(S)-다이하이드로-라파마이신이 포함된다. 또한, 라파마이신 유도체는, 예컨대 WO 98/02441 및 WO 01/14387에 기재된 바와 같은 라팔로그(rapalog)로 불리는 물질(예컨대, AP23573, AP23464, AP23675 또는 AP23841)을 포함할 수 있다. 또한, 라파마이신 유도체의 예로는 바이오리무스-7(biolimus-7) 또는 바이오리무스-9(BIOLIMUS A9^TM)(바이오센서 인터네셔널(Biosensors International), 싱가폴)로 기재되어 있다. 상기 임의의 라파마이신 유사체 또는 유도체는 상기 참조에서 기재된 바와 같은 과정에 의해 용이하게 제조될 수 있다. 본원에 기재된 본 발명에 유용한 mTOR 억제제의 추가적 예로는 미국 특허 출원 제 11/599,663 호에 기재되고 청구된 것들이 포함된다.

mTOR 억제제는 바람직하게 라파마이신 또는 라파마이신 유사체 또는 유도체이고, 더욱 바람직하게 라파마이신 유사체 또는 유도체이다. 바람직한 라파마이신 유사체 또는 유도체는, 예컨대 템시로리무스 또는 에버로리무스이다.

용어 "어푸코실화된 항체"는 감소된 푸코즈 잔기 수준을 갖는 Asn297에서의 Fc 영역의 변화된 당화 패턴을 갖는 IgG1 또는 IgG3 아이소타입(바람직하게는 IgG1 아이소타입)의 항체를 가리킨다. 인간 IgG1 또는 IgG3의 당화는 2개 이하의 Gal 잔기로 종결되는 코어 푸코실화된 바이안테너리 복합 올리고사카라이드 당화로서 Asn297에서 일어난다. 이들 구조는 말단 Gal 잔기의 양에 따라 G0, G1(α1,6 또는 α1,3) 또는 G2 글라이칸 잔기로서 지칭된다[라주(Raju, T.S.), BioProcess Int. 1 (2003) 44-53]. 항체 Fc 부분의 CHO 형 당화는 예를 들어 루티어(Routier, F.H.)의 문헌[Glycoconjugate J. 14 (1997) 201-207]에 기재되어 있다. 당화 변형되지 않은 CHO 숙주 세포에서 재조합 기법으로 발현된 항체는 통상 85% 이상의 양으로 Asn297에서 푸코실화된다.

따라서, 본 발명에 따른 어푸코실화된 항체는 푸코즈의 양이 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하인(이는 Asn297에서의 Fc 영역의 올리고사카라이드중 40% 이상이 어푸코실화되었음을 의미함) IgG1 또는 IgG3 아이소타입(바람직하게는 IgG1 아이소타입)의 항체를 의미한다. 하나의 실시양태에서, 푸코즈의 양은 Asn297에서의 Fc 영역의 올리고사카라이드의 40% 내지 60%이다. 다른 실시양태에서 푸코즈의 양은 50% 이하이며, 또 다른 실시양태에서 푸코즈의 양은 Asn297에서의 Fc 영역의 올리고사카라이드의 30% 이하이다. 본 발명에 따라, "푸코즈의 양"은 MALDI-TOF 질량 분광분석법에 의해 측정되고 평균 값으로서 계산된, Asn297에 부착된 모든 올리고사카라이드(당)(예를 들어, 복합, 하이브리드 및 고-만노즈 구조)의 합에 관련된, Asn297에서의 올리고사카라이드(당) 쇄 내의 상기 올리고사카라이드(푸코즈)의 양을 의미한다(푸코즈의 양을 결정하기 위한 상세한 절차는 예컨대 WO 2008/077546 호에 기재되어 있다). 뿐만 아니라, Fc 영역의 올리고사카라이드는 바람직하게는 이분된다. 본 발명에 따른 어푸코실화된 항체는 Fc 영역에서 올리고사카라이드를 부분적으로 푸코실화시키기에 충분한 양으로 GnTIII 활성을 갖는 폴리펩타이드를 코딩하는 하나 이상의 핵산을 발현하도록 조작된 당화 변형된 숙주 세포에서 발현될 수 있다. 한 실시양태에서, GnTIII 활성을 갖는 폴리펩타이드는 융합 폴리펩타이드이다. 다르게는, US 6,946,292 호에 따라 숙주 세포의 α1,6-푸코실트랜스퍼라제 활성을 감소시키거나 제거하여, 당화 변형 숙주 세포를 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 발효 조건(예컨대, 발효 시간)에 의해 또는 상이한 푸코실화량을 갖는 둘 이상의 항체의 조합에 의해 항체 푸코실화의 양을 예정할 수 있다. 이러한 어푸코실화된 항체 및 개별적인 당화-조작 방법은 WO 2005/044859 호, WO 2004/065540 호, WO 2007/031875 호, 우마나 등의 문헌[Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180], WO 1999/54342 호, WO 2005/018572 호, WO 2006/116260 호, WO 2006/114700 호, WO 2005/011735 호, WO 2005/027966 호, WO 97/028267 호, US 2006/0134709 호, US 2005/0054048 호, US 2005/0152894 호, WO 2003/035835 호, WO 2000/061739 호에 기재되어 있다. 이들 당화-조작된 항체는 증가된 ADCC를 갖는다. 본 발명에 따른 어푸코실화된 항체를 수득하는 다른 당화-조작 방법은 예를 들어 니와(Niwa, R.) 등의 문헌[J. Immunol. Methods 306 (2005) 151-160]; 신카와(Shinkawa, T.) 등의 문헌[J. Biol. Chem. 278 (2003) 3466-3473]; WO 03/055993 호 또는 US 2005/0249722 호에 기재되어 있다.

그러므로, 본 발명의 한 양태는 mTOR 억제제와 조합하여 암 치료용 약제를 제조하기 위한, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 종양 항원에 특이적으로 결합하는 IgG1 또는 IgG3 아이소타입(바람직하게는 IgG1 아이소타입)의 어푸코실화된 항-CD20 항체의 용도이다. 바람직하게, 푸코즈의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 40% 내지 60%이다.

CD20[B-림프구 항원 CD20, B-림프구 표면 항원 B1, Leu-16, Bp35, BM5 및 LF5로도 알려져 있음; 서열은 스위스프롯(SwissProt) 데이터베이스 엔트리 P11836을 그 특징으로 함]은 전-B 및 성숙 B 림프구 상에 위치된 약 35kD의 분자량을 갖는 소수성 막통과 단백질이다[발렌타인 등, J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; 테더 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-12; 스타멘코빅 등, J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; 아인펠트 등, EMBO J. 7 (1988) 711-717; 테더 등, J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568]. 상응하는 인간 유전자는 MS4A1로도 알려져 있는 멤브레인-스패닝 4-도메인, 서브패밀리 A, 멤버 1(Membrane-spanning 4-domains, subfamily A, member 1)이다. 이 유전자는 막에 걸친 4A 유전자군의 일원을 코딩한다. 이 발생기 단백질군의 일원은 공통적인 구조적 특징 및 유사한 인트론/엑손 스플라이스 경계를 그 특징으로 하며, 조혈모세포 및 비-림프구 조직 사이에서 독특한 발현 패턴을 나타낸다. 이 유전자는 B-세포의 발생 및 혈장 세포로의 분화에서 역할을 담당하는 B-림프구 표면 분자를 코딩한다. 이 군의 일원은 군 일원의 집단 중에서 11q12로 국한된다. 이 유전자의 다른 스플라이싱은 동일한 단백질을 코딩하는 두 전사체 변이체를 생성시킨다.

용어 "CD20" 및 "CD20 항원"은 본원에서 호환성 있게 사용되며, 세포에 의해 자연적으로 발현되거나 CD20 유전자로 형질감염된 세포 상에서 발현되는 인간 CD20의 임의의 변이체, 이소폼(isoform) 및 종 상동체를 포함한다. 본 발명의 항체를 CD20 항원에 결합시키면 CD20을 불활성화시킴으로써 CD20을 발현하는 세포(예컨대, 종양 세포)의 죽음을 매개한다. CD20을 발현하는 세포의 죽음은 하기 기작중 하나 이상에 의해 일어날 수 있다: 세포사/세포자살 유도, ADCC 및 CDC.

당 업계에서 인정되는 CD20의 동의어는 B-림프구 항원 CD20, B-림프구 표면 항원 B1, Leu-16, Bp35, BM5 및 LF5를 포함한다.

본 발명에 따른 용어 "항-CD20 항체"는 CD20 항원에 특이적으로 결합하는 항체이다. 항-CD20 항체의 CD20 항원으로의 결합 특성 및 생물학적 활성에 따라, 크래그 등의 문헌[Blood 103 (2004) 2738-2743]; 및 크래그 등의 문헌[Blood 101 (2003) 1045-1051]에 따라 항-CD20 항체의 두 유형(유형 I 및 유형 II 항-CD20 항체)이 구분될 수 있다. 표 2를 참조한다.

유형 I 및 유형 II 항-CD20 항체의 특성

유형 II 항-CD20 항체의 예는 예를 들어 인간화된 B-Ly1 항체 IgG1(WO 2005/044859 호에 개시된 키메라 인간화된 IgG1 항체), 11B8 IgG1(WO 2004/035607 호에 개시됨) 및 AT80 IgG1을 포함한다. 전형적으로, IgG1 아이소타입의 유형 II 항-CD20 항체는 특징적인 CDC 특성을 보여준다. 유형 II 항-CD20 항체는 IgG1 아이소타입의 유형 I 항체에 비해 감소된 CDC(IgG1 아이소타입의 경우)를 갖는다.

유형 I 항-CD20 항체의 예는 예를 들어 리툭시맙, HI47 IgG3(ECACC, 하이브리도마), 2C6 IgG1(WO 2005/103081 호에 개시됨), 2F2 IgG1(WO 2004/035607 호 및 WO 2005/103081 호에 개시됨) 및 2H7 IgG1(WO 2004/056312 호에 개시됨)을 포함한다.

본 발명에 따른 어푸코실화된 항-CD20 항체는 바람직하게는 유형 II 항-CD20 항체이고, 더욱 바람직하게는 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체이다.

본 발명에 따른 어푸코실화된 항-CD20 항체는 증가된 항체 의존성 세포 독성(ADCC)을 갖는다.

"증가된 항체 의존성 세포 독성(ADCC)을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체"는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 의미하는데, 이 용어가 본원에서는 당 업자에게 공지되어 있는 임의의 적합한 방법에 의해 결정할 때 증가된 ADCC를 갖는 것으로 정의되기 때문이다. 하나의 인정된 생체 외 ADCC 검정은 다음과 같다:

1) 검정은 항체의 항원-결합 영역에 의해 인식되는 표적 항원을 발현하는 것으로 알려진 표적 세포를 사용한다;

2) 검정은 실행기 세포로서, 무작위적으로 선택된 건강한 공여자의 혈액으로부터 단리된 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 사용한다;

3) 하기 프로토콜에 따라 검정을 수행한다:

i) 표준 밀도 원심분리 절차를 이용하여 PBMC를 단리하고, RPMI 세포 배지 중에 5×10⁶개 세포/ml로 현탁한다;

ii) 표적 세포를 표준 조직 배양 방법에 의해 생육시키고, 90%보다 높은 생존율로 대수증식기로부터 수확하며, RPMI 세포 배지 중에서 세척하고, ⁵¹Cr 100마이크로큐리(micro-Curies)로 라벨링하며, 세포 배지로 2회 세척하고, 10⁵개 세포/ml의 밀도로 세포 배지에 재현탁시킨다;

iii) 상기 최종 표적 세포 현탁액 100㎕를 96개-웰 미소적정판의 각 웰에 옮겨넣는다;

iv) 항체를 세포 배지 중에서 4000ng/ml로부터 0.04ng/ml로 연속 희석시키고, 생성되는 항체 용액 50㎕를 96개-웰 미소적정판의 표적 세포에 첨가하여, 상기 전체 농도 범위를 포괄하는 다양한 항체 농도를 3회씩 시험한다;

v) 최대 방출(MR) 대조용으로서, 라벨링된 표적 세포를 함유하는 판의 3개의 추가적인 웰에 항체 용액(상기 iv) 대신 비-이온성 세제[노니뎃(Nonidet), 시그마(Sigma), 세인트루이스]의 2%(VN) 수용액 50㎕를 넣는다;

vi) 자발적인 방출(SR) 대조용으로서, 라벨링된 표적 세포를 함유하는 판의 3개의 추가적인 웰에 항체 용액(상기 iv) 대신 RPMI 세포 배지 50㎕를 넣는다;

vii) 이어, 96개-웰 미소적정판을 50×g에서 1분간 원심분리하고, 4℃에서 1시간동안 배양한다;

viii) PBMC 현탁액(상기 i) 50㎕를 각 웰에 첨가하여 25:1의 실행기:표적 세포 비를 수득하고, 판을 5% CO₂ 대기하에 37℃에서 4시간동안 배양기에 넣어둔다;

ix) 각 웰로부터 무세포 상청액을 수획하고, 감마 카운터를 이용하여 실험에 의해 방출된 방사능(ER)을 정량한다;

x) 수학식 (ER-MR)/(MR-SR)×100에 따라 각 항체 농도에 대해 특이적인 세포 용해의 백분율을 계산하는데, 이 때 ER은 그 항체 농도에서 정량된 평균 방사능(상기 ix 참조)이고, MR은 MR 대조용(상기 v 참조)의 경우에 정량된 평균 방사능(상기 ix 참조)이고, SR은 SR 대조용(상기 vi 참조)의 경우에 정량된 평균 방사능(상기 ix 참조)이다;

4) "증가된 ADCC"는 상기 시험된 항체 농도 범위 내에서 관찰되는 특이적인 세포 용해의 최대 백분율의 증가 및/또는 상기 시험된 항체 농도 범위 내에서 관찰된 특이적인 세포 용해의 최대 백분율의 절반을 달성하는데 필요한 항체 농도의 감소로서 정의된다. ADCC의 증가는 상기 검정에 의해 측정되고 동일한 항체에 의해 매개되며 동일한 유형의 숙주 세포에 의해 생성되고 당 업자에게 공지되어 있는 동일한 표준 생성, 정제, 제형화 및 저장 방법을 이용하지만, GnTIII을 과발현하도록 조작된 숙주 세포에 의해 생성되지 않은 ADCC에 대한 것이다.

상기 항체의 당화-조작에 의해 상기 "증가된 ADCC"를 수득할 수 있는데, 이는 우마나 등의 문헌[Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180] 및 US 6,602,684 호에 기재되어 있는 그들의 올리고사카라이드 성분을 조작함으로써 단클론성 항체의 상기 천연, 세포-매개되는 실행기 기능을 향상시킴을 의미한다.

용어 "보체-의존성 세포 독성(CDC)"은 보체의 존재하에서 본 발명에 따른 항체에 의해 인간 종양 표적 세포를 용해시킴을 말한다. 바람직하게는 보체의 존재하에 본 발명에 따른 항-CD20 항체로 CD20 발현 세포의 제제를 처리함으로써 CDC를 측정한다. 항체가 4시간 후에 100nM의 농도에서 종양 세포의 20% 이상의 세포 용해(세포사)를 유도하는 경우 CDC가 발견된다. 바람직하게는 ⁵¹Cr 또는 Eu 라벨링된 종양 세포 및 방출되는 ⁵¹Cr 또는 Eu의 측정을 이용하여 검정을 수행한다. 대조용은 보체와 함께, 그러나 항체 없이 종양 표적 세포를 배양함을 포함한다.

"리툭시맙" 항체(기준 항체; 유형 I 항-CD20 항체의 예)는 인간 CD20 항원에 대항하도록 유도된 단클론성 항체를 함유하는 유전자 조작된 키메라 인간 감마 1 쥐 불변 도메인이다. 리툭시맙은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 약 85 %의 이상의 푸코즈의 양으로 어푸코실화되지 않는다. 이 키메라 항체는 인간 감마 1 불변 도메인을 함유하고, 아이디이씨 파마슈티칼즈 코포레이션(IDEC Pharmaceuticals Corporation)에게 양도된, 1998년 4월 17일자로 허여된 US 5,736,137 호(앤더슨(Andersen) 등)에서 명칭 "C3B8"로 동정된다. 리툭시맙은 재발되거나 난치성의 저등급 또는 소낭성, CD20 양성, B 세포 비-호지킨스 림프종을 앓는 환자의 치료를 위해 승인된다. 생체 외 작용 기작 연구는 리툭시맙이 인간 보체-의존성 세포 독성(CDC)을 나타냄을 보여주었다[레프(Reff, M.E.) 등, Blood 83(2) (1994) 435-445]. 또한, 이는 항체-의존성 세포 독성(ADCC)을 측정하는 검정에서 상당한 활성을 나타낸다. 리툭시맙은 어푸코실화되지 않는다.

용어 "인간화된 B-Ly1 항체"는, IgG1으로부터의 인간 불변 도메인을 사용하여 키메라를 형성시킨 후 인간화시킴으로써(WO 2005/044859 호 및 WO 2007/031875 호 참조), 쥐의 단클론성 항-CD20 항체 B-Ly1[쥐의 중쇄의 가변 영역(VH): 서열 번호:1; 쥐의 경쇄의 가변 영역(VL): 서열 번호:2; 포페마(Poppema, S.) 및 비서(Visser, L.), Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139 참조]로부터 수득된, WO 2005/044859 호 및 WO 2007/031875 호에 개시된 인간화된 B-Ly1 항체를 일컫는다. 이들 "인간화된 B-Ly1 항체"는 WO 2005/044859 호 및 WO 2007/031875 호에 상세하게 개시되어 있다.

바람직하게, "인간화된 B-Ly1 항체"는 서열 번호:3 내지 서열 번호:20(WO 2005/044859 호 및 WO 2007/031875 호의 B-HH2 내지 B-HH9 및 B-HL8 내지 B-HL17)의 군으로부터 선택되는 중쇄의 가변 영역(VH)을 갖는다. 특히, 서열 번호:3, 4, 7, 9, 11, 13 및 15(WO 2005/044859 호 및 WO 2007/031875 호의 B-HH2, B-HH3, B-HH6, B-HH8, B-HL8, B-HL11 및 B-HL13)가 바람직하다. 바람직하게는, "인간화된 B-Ly1 항체"는 서열 번호:20(WO 2005/044859 호 및 WO 2007/031875 호의 B-KV1)의 경쇄의 가변 영역(VL)을 갖는다. 바람직하게, "인간화된 B-Ly1 항체"는 서열 번호:7(WO 2005/044859 호 및 WO 2007/031875 호의 B-HH6)의 중쇄의 가변 영역(VH) 및 서열 번호:20(WO 2005/044859 호 및 WO 2007/031875 호의 B-KV1)의 경쇄의 가변 영역(VL)을 갖는다. 또한, 인간화된 B-Ly1 항체는 바람직하게 IgG1 항체이다. 본 발명에 따라, 이러한 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체는 WO 2005/044859 호, WO 2004/065540 호, WO 2007/031875 호, 우마나 등의 문헌[Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180] 및 WO 99/154342 호에 기재되어 있는 절차에 따라 Fc 영역에서 당화-조작된다(GE). 어푸코실화된 당화-조작된 인간화된 B-Ly1(B-HH6-B-KV1 GE)이 본 발명의 한 실시양태에서 바람직하다. 이러한 당화-조작된 인간화된 B-Ly1 항체는 바람직하게는 감소된 푸코즈 잔기 수준을 갖는, Fc 영역에서의 변화된 당화 패턴을 갖는다. 바람직하게, 푸코즈의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드의 총량의 60% 이하이다(하나의 실시양태에서 푸코즈의 양은 40% 내지 60%이고, 또 하나의 실시양태에서 푸코즈의 양은 50% 이하이며, 또 다른 실시양태에서 푸코즈의 양은 30% 이하이다). 또한, Fc 영역의 올리고사카라이드는 바람직하게는 이분된다. 이들 당화-조작된 인간화된 B-Ly1 항체는 증가된 ADCC를 갖는다.

올리고사카라이드 성분은 물리적 안정성, 프로테아제 공격에 대한 저항성, 면역계와의 상호작용, 약동학 및 특이적인 생물학적 활성을 비롯한, 치료용 당단백질의 효능과 관련되는 특성에 상당히 영향을 줄 수 있다. 이러한 특성은 올리고사카라이드의 존재 또는 부재뿐만 아니라 올리고사카라이드의 특이적인 구조에 따라서도 달라질 수 있다. 올리고사카라이드 구조와 당단백질 기능 사이의 관계를 약간 일반화시킬 수 있다. 예를 들면, 특정 올리고사카라이드 구조는 특이적인 탄수화물 결합 단백질과의 상호작용을 통해 혈류로부터의 당단백질의 신속한 제거를 매개하는 한편, 다른 것들은 항체에 의해 결합되어 바람직하지 못한 면역 반응을 유발할 수 있다[젠킨스(Jenkins, N.) 등, Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981].

포유동물 세포는 인간 용도에 가장 양립가능한 형태로 단백질을 당화시키는 이들의 능력으로 인해 치료용 당단백질의 생성에 탁월한 숙주이다[커밍(Cumming, D.A.) 등, Glycobiology 1 (1991) 115-130; 젠킨스 등, Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981]. 세균은 단백질을 거의 당화시키지 않으며, 효모, 사상균, 곤충 및 식물 세포 같은 다른 유형의 통상적인 숙주와 마찬가지로 혈류로부터의 신속한 제거, 바람직하지 못한 면역 상호작용 및 일부 특정한 경우 감소된 생물학적 활성을 수반하는 당화 패턴을 생성시킨다. 포유동물 세포 중에서, 차이니스 햄스터 난소(CHO) 세포가 지난 20년간 가장 통상적으로 사용되어 왔다. 적합한 당화 패턴을 제공함에 덧붙여, 이들 세포는 유전학적으로 안정하고 고도로 생산성인 클론 세포주를 일관되게 생성시킬 수 있다. 이들은 무혈청 배지를 사용하는 단순한 생물 반응기에서 고밀도로 배양될 수 있고, 안전하고 재현성있는 생물학적 공정의 개발을 가능케 한다. 다른 통상적으로 사용되는 동물 세포는 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, NSO- 및 SP2/0-마우스 골수종 세포를 포함한다. 더욱 최근에는, 유전자 이식된 동물로부터의 생산도 시험되었다(젠킨스 등, Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981].

모든 항체는 중쇄 불변 영역에서 보존된 위치에 탄수화물 구조를 함유하며, 각 아이소타입은 N-연결된 탄수화물 구조의 개별 어레이를 갖는데, 이는 단백질 조립, 분비 또는 기능적 활성에 가변적으로 영향을 끼친다[라이트(Wright, A.) 및 모니슨(Monison, S.L.), Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32]. 부착된 N-연결된 탄수화물의 구조는 가공 정도에 따라 상당히 변화되고, 고-만노즈, 다중-분지 및 바이안테너리 복합 올리고사카라이드를 포함할 수 있다[라이트 및 모리슨, Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32]. 전형적으로, 단클론성 항체라도 복수개의 당형으로서 존재하도록 특정 당화 부위에 부착된 코어 올리고사카라이드 구조를 불균일하게 가공한다. 마찬가지로, 세포주 사이에서 항체 당화의 큰 차이가 발생하고, 상이한 배양 조건하에 생육된 소정 세포주의 경우에는 작은 차이도 보이는 것으로 밝혀졌다[라이플리 등, Glycobiology 5 (1995) 813-822].

간단한 생성 공정을 유지하고 중요한 바람직하지 못한 부작용을 피할 수 있으면서 효력의 큰 증가를 수득하는 한가지 방법은 우마나 등의 문헌[Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180] 및 US 6,602,684 호에 기재되어 있는 바와 같이 올리고사카라이드 성분을 조작함으로써 단클론성 항체의 자연적인, 세포-매개되는 실행기 기능을 향상시키는 것이다. 암 면역 요법에 가장 통상적으로 사용되는 항체인 IgG1 형 항체는 각 CH2 도메인에서 Asn297에 보존된 N-연결된 당화 부위를 갖는 당단백질이다. Asn297에 부착된 2개의 복합 바이안테너리 올리고사카라이드는 CH2 도메인 사이에 매립되어 폴리펩타이드 주쇄와 광범위한 접촉을 형성하고, 이들의 존재는 항체가 항체 의존성 세포 독성(ADCC) 같은 실행기 기능을 매개하는데 필수적이다[라이플리 등, Glycobiology 5(8) (1995) 813-822; 제페리스 등, Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; 라이트 및 모리슨, Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32].

이분된 올리고사카라이드의 형성을 촉진하는 글라이코실트랜스퍼라제인 β(1,4)-N-아세틸글루코스아민일트랜스퍼라제 III("GnTIII7y")의 차이니스 햄스터 난소(CHO) 세포에서의 과발현이 조작된 CHO 세포에 의해 생성되는 항신경아세포종 키메라 단클론성 항체(chCE7)의 생체 외 ADCC 활성을 상당히 증가시킨다는 것은 이미 밝혀져 있다[우마나 등, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180; 및 WO 1999/54342 호 참조, 이들 문헌의 전체 내용은 본원에 참고로 인용됨]. 항체 chCE7은 높은 종양 친화력 및 특이성을 갖지만 GnTIII 효소가 결핍된 표준 공업용 세포주에서 생성되는 경우 효력이 너무 작아 임상적으로 유용하지 못한 비접합형(unconjugated) 단클론성 항체의 큰 부류에 속한다[우마나 등, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180]. 이 연구는 항체를 조작하여 GnTIII을 발현하는 세포를 생성시킴으로써(이는 또한 이분된 비-푸코실화된 올리고사카라이드를 포함하는 불변 영역(Fc)-결합된 이분된 올리고사카라이드의 비율을 천연 항체에서 발견되는 수준보다 높게 증가시켰음) ADCC 활성을 크게 증가시킬 수 있음을 보여준 첫 연구였다.

본원에 사용되는 용어 "암"은 하기 암중 임의의 것의 난치성 형태 또는 하기 암중 하나 이상의 조합을 비롯하여, 림프종, 림프구성 백혈병, 폐암, 비-소세포 폐암(NSCL), 기관지 폐포 세포 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부의 암, 위암, 위장관암, 결장암, 유방암, 자궁암, 난관암, 자궁내막암, 자궁경부암, 질암, 음문암, 호지킨병(Hodgkin's Disease), 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신세포암, 신우암, 중피종, 간암, 담관암, 중추신경계(CNS)의 종양, 척추 종양, 뇌간 교세포종, 다형성 교모세포종, 성상세포종, 신경초종, 상의세포종, 수모세포종, 뇌수막종, 편평세포암종, 뇌하수체 선종을 포함한다. 바람직하게, 용어 암은 CD20 발현 암을 가리킨다.

용어 "CD20 발현" 항원은 각각 종양 또는 암, 바람직하게는 비-고형암으로부터의 세포에서, 바람직하게는 T- 또는 B-세포, 더욱 바람직하게는 B-세포의 세포 표면 상에서 CD20 항원의 상당한 발현 수준을 나타내고자 한다. 당 업계에 공지되어 있는 표준 검정에 의해 "CD20 발현 암" 환자를 결정할 수 있다. 예를 들면, 면역조직화학(IHC) 검출, FACS를 이용하여 또는 상응하는 mRNA의 PCR-계 검출을 통해, CD20 항원 발현을 측정한다.

본원에 사용되는 용어 "CD20 발현 암"은 암세포가 CD20 항원의 발현을 나타내는 모든 암을 나타낸다. 바람직하게는, 본원에 사용되는 CD20 발현 암은 림프종[바람직하게는, B-세포 비-호지킨 림프종(NHL)] 및 림프구성 백혈병을 가리킨다. 이러한 림프종 및 림프구성 백혈병은 예를 들어 a) 소낭성 림프종, b) 비-분리 소세포 림프종/버킷(Burkitt's) 림프종(풍토성 버킷 림프종, 산발성 버킷 림프종 및 비-버킷 림프종 포함), c) 변연부 림프종[결절외 변연부 B 세포 림프종(점막-관련 림프 조직 림프종, MALT), 결절 변연부 B 세포 림프종 및 비장 변연부 림프종 포함], d) 맨틀세포 림프종(MCL), e) 대세포 림프종(B-세포 확산성 대세포 림프종(DLCL), 확산성 혼합 세포 림프종, 면역모세포 림프종, 원발성 종격동 B-세포 림프종, 혈관 중심성 림프종-폐 B-세포 림프종), f) 모발상 세포 백혈병, g) 림프구성 림프종, 발덴스트룀(waldenstrom's) 거대글로불린혈증, h) 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL)/소림프구성 림프종(SLL), B-세포 전림프구성 백혈병, i) 혈장세포 종양, 혈장세포 골수종, 다발성 골수종, 혈장세포종, j) 호지킨병을 포함한다.

더욱 바람직하게, CD20 발현 암은 B-세포 비-호지킨 림프종(NHL)이다. 특히, CD20 발현 암은 맨틀세포 림프종(MCL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), B-세포 확산성 대세포 림프종(DLCL), 버킷 림프종, 모발상 세포 백혈병, 소낭성 림프종, 다발성 골수종, 변연부 림프종, 이식 후 림프 증식성 질환(PTLD), HIV 관련 림프종, 발덴스트룀 거대글로불린혈증 또는 원발성 CNS 림프종이다.

용어 "치료 방법" 또는 그의 등가 용어는 예컨대 암에 적용되는 경우, 환자에서 암 세포의 수를 감소시키거나 제거하도록, 또는 암의 증상을 경감시키도록 구상된 절차 또는 행위의 과정을 일컫는다. 암 또는 다른 증식성 질환의 "치료 방법"은 반드시 암 세포 또는 다른 질환이 실제로 제거되거나, 세포 또는 질환의 수가 실제로 감소되거나, 또는 암 또는 다른 질환의 증상이 실제로 경감됨을 의미하지는 않는다. 종종, 성공 가능성이 낮은 경우에라도, 환자의 병력 및 추정되는 생존 기대로 보아 그럼에도 불구하고 전체적으로 유리한 행위의 과정을 유도해내는 것으로 보이는 암 치료 방법을 수행하게 된다.

용어 "공동-투여" 또는 "공동으로 투여하는"은 상기 어푸코실화된 항-CD20, 및 mTOR 억제제를 하나의 단일 제형으로서 또는 두개의 별개의 제형으로서 투여함을 가리킨다. 공동-투여는 동시일 수 있거나 또는 아무 순서대로나 연속적일 수 있으며, 바람직하게는 두(또는 모든) 활성 약제가 동시에 그들의 생물학적 활성을 발휘하는 동안 시간이 있다. 상기 항-CD20 어푸코실화된 항체 및 mTOR 억제제를 동시에 또는 연속적으로[예를 들어, 연속 주입(하나는 항-CD20 항체용, 마지막으로 하나는 mTOR 억제제용)을 통해 정맥내(i.v.)로] 공동-투여한다. 두 치료제를 연속적으로 공동-투여하는 경우, 같은 날에 2회의 별도의 투여로 투여량을 투여하거나, 또는 약제중 하나는 제1일에 투여하고 두번째 약제는 제2일 내지 제7일, 바람직하게는 제2일 내지 제4일에 공동-투여한다. 따라서, 용어 "연속적으로"는 첫번째 성분(항-CD20 항체 또는 mTOR 억제제)을 투여한 후 7일 이내, 바람직하게는 첫번째 성분을 투여한 후 4일 이내를 의미하며; 용어 "동시에"는 같은 시간을 의미한다. 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 mTOR 억제제의 유지 투여량과 관련하여 용어 "공동-투여"는 치료 사이클이 두 약물 모두에게 적절한 경우, 유지 투여량을 동시에, 예컨대 매주 공동-투여할 수 있음을 의미한다. 또는, 상기 mTOR 억제제를 예를 들어 매 제1일 내지 제3일에 투여하고, 상기 어푸코실화된 항체를 매주 투여한다. 또는 유지 투여량을 1일 이내 또는 7일 이내에 연속적으로 공동-투여한다.

연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의가 추구하는 조직, 계, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 이끌어내는 개별 화합물 또는 조합의 양인 "치료 효과량"(또는 간단히 "효과량")으로 항체를 환자에게 투여하는 것은 자명하다.

상기 항-CD20 어푸코실화된 항체와 상기 mTOR 억제제의 공동-투여량 및 공동-투여의 시간은 치료받는 환자의 유형(종, 성별, 연령, 체중 등) 및 상태, 및 치료할 질환 및 상태의 심각성에 의존한다. 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 상기 mTOR 억제제는 한번에 또는 여러번의 치료를 거쳐 적절하게 환자에게 공동-투여된다.

정맥내 투여인 경우, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 또는 mTOR 억제제의 초기 침투 시간은 차후 침투 시간보다 더 연장될 수 있다(예를 들어 약 90 분의 초기 침투 및 약 30 분의 차후 침투)(초기 침투가 잘 이루어진 경우).

질병의 유형 및 중증도에 따라, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 약 1㎍/kg 내지 50mg/kg(예컨대, 0.1 내지 20mg/kg) 및 mTOR 억제제 1㎍/kg 내지 50mg/kg(예를 들어, 0.1 내지 20mg/kg)이 환자에 대한 두 약물의 공동-투여를 위한 초기 후보 투여량이다. 하나의 실시양태에서, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체(바람직하게는, 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체)의 바람직한 투여량은 약 0.05mg/kg 내지 약 30mg/kg이다. 따라서, 약 0.5mg/kg, 2.0mg/kg, 4.0mg/kg, 10mg/kg 또는 30mg/kg(또는 이들의 임의의 조합)중 하나 이상의 투여량을 환자에게 공동-투여할 수 있다. 바람직한 상기 mTOR 억제제의 투여량은 0.01mg/kg 내지 약 30mg/kg, 예컨대 0.1mg/kg 내지 10.0mg/kg이다. 환자의 유형(종, 성별, 연령, 체중 등) 및 질환에 따라, 또한 어푸코실화된 항-CD20 항체의 유형에 따라, 상기 어푸코실화된 항체의 투여량 및 투여 스케쥴은 상기 mTOR 억제제와 달라질 수 있다. 예를 들어, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체를 예컨대 매 1주 내지 3주마다 투여할 수 있고, mTOR 억제제를 매일 또는 매 2일 내지 10일마다 투여할 수 있다. 더 높은 투여량으로 시작한 후, 하나 이상의 더 낮은 투여량을 투여할 수도 있다.

바람직하게, 상기 인간화된 B-Ly1 항체는 6주-투여-사이클의 제1일, 제8일, 제15일에 800 내지 1,200mg의 투여량으로 투여된 후, 5회 이하의 4주-투여 사이클의 제1일에 800 내지 1,200mg의 투여량으로 투여된다. 대안으로, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체의 바람직한 투여량은 8회 이하의 3주-투여 사이클의 제1일에 800 내지 1,200mg(바람직하게는 1,000 mg)의 투여량으로 투여될 수 있다.

바람직하게, 상기 mTOR 억제제는 림프종 질환의 유형에 따라 25 mg/주 내지 175 mg/주의 투여량이 투여된다. 예를 들어, 상기 mTOR 억제제는 75 mg/주의 투여량으로 맨틀세포 림프종(MCL)으로 투여된다(또한, 재발되거나 난치성인 MCL을 위해 3 주 동안 175 mg의 주 당 1 회 투여 후 주 당 1 회 75 mg의 투여량(175/75)이 가능하다). 여포성 NHL, DLBCL 및 CLL을 위해, 예컨대 25 mg/주의 투여량이 투여된다.

바람직한 실시양태에서, 약제는 암, 바람직하게는 CD20 발현 암을 앓는 환자에서 전이 또는 추가적인 전파(dissemination)를 예방하거나 감소시키는데 유용하다. 약제는 이러한 환자의 생존 기간을 증가시키고, 이러한 환자의 진행이 없는 생존을 증가시키고, 응답 기간을 증가시켜, 생존 기간, 진행 없는 생존, 응답 속도 또는 응답 기간에 의해 측정되는 치료되는 환자의 통계학적으로 유의하고 임상적으로 의미있는 개선을 야기하는데 유용하다. 바람직한 실시양태에서, 약제는 일군의 환자에서 응답 속도를 증가시키는데 유용하다.

본 발명과 관련하여, 추가의 다른 세포 독성제, 화학치료제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물(예컨대, 사이토카인)을 암의 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 mTOR 억제제 복합 치료에 사용할 수 있다. 이러한 분자는 의도되는 목적에 효과적인 양으로 조합에 적합하게 존재한다. 바람직하게, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 mTOR 억제제 복합 치료를 이러한 추가적인 세포 독성제, 화학치료제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 없이 사용한다.

이러한 제제는 예를 들어 사이클로포스파마이드(CTX; 예컨대 사이톡산(등록상표)), 클로람부실[CHL; 예를 들어 류케란(leukeran)(등록상표)], 시스플라틴[CisP; 예를 들어 플라스티놀(plastinol)(등록상표)], 부설판[예를 들어, 마일레란(myleran)(등록상표)], 멜팔란, 카무스틴(BCNU), 스트렙토조토신, 트라이에틸렌멜라민(TEM), 마이토마이신 C 등과 같은 알킬화제 또는 알킬화 작용을 갖는 약제; 메토트렉세이트(MTX), 에토포사이드(VP16; 예를 들어 베페시드(vepesid)(등록상표)], 6-머캅토퓨린(6MP), 6-티옥구아닌(6TG), 사이타라빈(Ara-C), 5-플루오로우라실(5-FU), 카페시타빈[예를 들어, 젤로다(Xeloda)(등록상표)], 다카바진(DTIC) 등과 같은 대사길항물질; 액티노마이신 D, 독소루비신[DXR; 예컨대 아드리아마이신(adriamycin)(등록상표)], 도노루비신(도노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신 등과 같은 항생제; 빈크리스틴(VCR), 빈블라스틴 등과 같은 빈카 알칼로이드 등의 알칼로이드; 및 파클리탁셀[예를 들어, 탁솔(taxol)(등록상표)] 및 파클리탁셀 유도체, 세포 성장 억제제(cytostatic agent), 덱사메타손[DEX; 예컨대 데카드론(decadron)(등록상표)] 같은 글루코코르티코이드, 및 프레드니손 같은 코르티코스테로이드, 하이드록시우레아 같은 뉴클레오사이드 효소 억제제, 아스파라기나제, 류코보린 및 다른 엽산 유도체 같은 아미노산 결핍 효소, 및 유사한 다양한 항암제 등의 다른 항종양제를 포함한다. 하기 제제를 또한 추가적인 제제로서 사용할 수 있다: 아니포스틴[예를 들어, 에티올(ethyol)(등록상표)], 닥티노마이신, 메클로레타민(질소 머스타드), 스트렙토조신, 사이클로포스파마이드, 로무스틴(CCNU), 독소루비신 리포[예를 들어, 독실(doxil)(등록상표)], 겜시타빈[예를 들어, 겜자(gemzar)(등록상표)], 도노루비신 리포[예컨대, 도녹솜(daunoxome)(등록상표)], 프로카바진, 마이토마이신, 도세탁셀[예컨대, 탁소테레(taxotere)(등록상표)], 알데스류킨, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 클라드리빈, 캄프토테신, CPT 11(이리노테칸), 10-하이드록시 7-에틸-캄프토테신(SN38), 플록수리딘, 플루다라빈, 이포스파마이드, 이다루비신, 메스나, 인터페론 베타, 인터페론 알파, 미토잔트론, 토포테칸, 류프롤라이드, 메게스트롤, 멜팔란, 머캅토퓨린, 플리카마이신, 미토테인, 페가스파가스, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 타목시펜, 테니포사이드, 테스톨락톤, 티오구아닌, 티오테파, 우라실 머스타드, 비노렐빈, 클로람부실. 바람직하게는, 이러한 추가적인 제제 없이 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 mTOR 억제제 복합 치료를 사용한다.

화학요법에 상기 기재된 세포 독성제 및 항암제뿐만 아니라 단백질 키나제 억제제 같은 항증식성 표적-특이적 항암 약물을 사용하는 것은 일반적으로 암 치료 분야에서 잘 특징화되어 있고, 본원에서의 이들의 사용은 내약성 및 효율을 모니터링하고 약간 조정하면서 투여 경로 및 투여량을 제어하기 위하여 동일한 고려사항 하에 놓인다. 예를 들어, 세포 독성제의 실제 투여량은 조직 배양 방법을 이용함으로써 결정되는 환자의 배양된 세포 응답에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 투여량은 추가적인 다른 제제의 부재하에 사용되는 양에 비해 감소된다.

효과적인 세포 독성제의 전형적인 투여량은 제조업체에서 권장되는 범위일 수 있고; 생체 외 응답 또는 동물 모델에서의 응답에 의해 표시되는 경우, 농도 또는 양의 크기의 약 1차수만큼 감소될 수 있다. 그러므로, 실제 투여량은 의사의 판단, 환자의 상태, 및 초대 배양된 악성 세포 또는 조직 배양된 조직 샘플의 생체 외 응답, 또는 적절한 동물 모델에서 관찰되는 응답에 기초하는 치료 방법의 효율에 따라 달라진다.

본 발명과 관련하여, 효과량의 이온화 선을 실시할 수 있고/있거나 CD20 발현 암의 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 mTOR 억제제 복합 치료에 덧붙여 방사성 약품을 사용할 수 있다. 선의 공급원은 치료되는 환자에 대해 외부 또는 내부일 수 있다. 공급원이 환자 외부인 경우, 이 요법은 외부 빔 조사 요법(EBRT)으로서 알려져 있다. 선의 공급원이 환자에 대해 내부인 경우, 이 치료는 근접치료(BT)로 불린다. 본 발명과 관련하여 사용하기 위한 방사성 원자는 라듐, 세슘-137, 이리듐-192, 아메리슘-241, 금-198, 코발트-57, 구리-67, 테크네튬-99, 요오드-123, 요오드-131 및 인듐-111을 포함하는(이들로 한정되지는 않음) 군으로부터 선택될 수 있다. 항체를 이러한 방사성 동위원소로 라벨링하는 것도 가능하다. 바람직하게는, 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 mTOR 억제제 복합 치료를 이러한 이온화 선 없이 이용한다.

방사선 요법은 절제 또는 수술이 불가능한 종양 및/또는 종양 전이를 억제하기 위한 표준 치료이다. 방사선 요법이 화학요법과 조합되면 개선된 결과가 나타났다. 방사선 요법은 표적 구역에 전달되는 고-선량 방사선이 종양 조직 및 정상 조직 둘 다에 있는 생식 세포의 죽음을 야기하는 원리에 기초한다. 방사선량 요법은 일반적으로 방사선 흡수 선량(Gy), 시간 및 분류의 용어로 정의되며, 종양학자에 의해 조심스럽게 정의되어야 한다. 환자가 받아들이는 방사선의 양은 다양한 고려사항에 따라 달라지지만, 두 가지 가장 중요한 것은 신체의 다른 중요한 구조 또는 기관과 관련한 종양의 위치, 및 종양이 퍼진 정도이다. 방사선 요법을 받고 있는 환자에게 전형적인 치료 과정은 한 주에 5일간 약 1.8 내지 2.0Gy의 단일 1일 분율로 환자에게 투여되는 10 내지 80Gy의 총 선량으로 1 내지 6주의 기간에 걸친 치료 스케쥴이다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서는, 인간 환자의 종양을 본 발명의 복합 치료 및 방사선으로 치료할 경우 상승작용이 있다. 달리 말해, 선택적으로는 추가적인 화학치료제 또는 항암제와 함께 방사선과 조합될 때, 본 발명의 조합을 포함하는 약제에 의한 종양 성장 억제가 향상된다. 보조적인 방사선 요법의 매개변수는 예컨대 WO 99/60023 호에 포함되어 있다.

공지 방법에 따라, 큰 알약(bolus)으로서 정맥내 투여함으로써, 또는 장시간에 걸친 연속적인 주입으로서, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활막내 또는 척추강내 경로에 의해, 어푸코실화된 항-CD20 항체를 환자에게 투여한다. 항체의 정맥내 또는 피하 투여가 바람직하다.

공지 방법에 따라, 예를 들어 큰 알약으로서 정맥내 투여함으로써, 또는 장시간에 걸친 연속적인 주입으로서, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활막내, 척추강내 또는 경구 경로에 의해, mTOR 억제제를 환자에게 투여할 수 있다. 정맥내 또는 복강내 투여가 바람직하다.

본원에 사용되는 "약학적으로 허용가능한 담체"는 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제, 항진균제, 등장화제, 흡수 지연제, 및 약학 투여와 양립성인 다른 물질 및 화합물을 비롯한, 약학 투여와 양립성인 임의의 모든 물질을 포함하고자 한다. 임의의 통상적인 매질 또는 약제가 활성 화합물과 상용성이 아닌 경우를 제외하고는 본 발명의 조성물중 이들의 사용은 고려된다. 보충적인 활성 화합물을 또한 조성물에 혼입할 수 있다.

약학 조성물:

본 발명에 따른 항-CD20 항체 및/또는 mTOR 억제제를 약학적으로 허용가능한 무기 또는 유기 담체와 함께 가공함으로써 약학 조성물을 수득할 수 있다. 락토즈, 옥수수 전분 또는 그의 유도체, 활석, 스테아르산 또는 그의 염 등을 예컨대 정제, 코팅된 정제, 당의정 또는 경질 젤라틴 캡슐용 담체로서 사용할 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐에 적합한 담체는 예를 들어 식물성 오일, 왁스, 지방, 반고체 및 액체 폴리올 등이다. 그러나, 활성 성분의 특성에 따라, 연질 젤라틴 캡슐의 경우에는 담체가 통상적으로 필요하지 않다. 용액 및 시럽의 제조에 적합한 담체는 예를 들어 물, 폴리올, 글라이세롤, 식물유 등이다. 좌약에 적합한 담체는 예컨대 천연 또는 경화된 오일, 왁스, 지방, 반고체 또는 액체 폴리올 등이다.

약학 조성물은 또한 보존제, 가용화제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 향미제, 삼투압을 변화시키기 위한 염, 완충제, 마스킹제 또는 산화방지제를 함유할 수 있다. 이들은 또한 다른 치료 면에서 가치있는 성분도 함유할 수 있다.

본 발명의 한 실시양태는 암, 특히 CD20 발현 암의 치료에 사용하기 위하여, 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 mTOR 억제제(바람직하게는 상기 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체) 및 mTOR 억제제 둘 다를 포함하는 조성물이다.

상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 (i) 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체(바람직하게는, 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체) 제 1 효과량, 및 (ii) mTOR 억제제 제 2 효과량을 포함하는, 특히 암에 사용하기 위한 약학 조성물을 추가로 제공한다. 이러한 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제를 선택적으로 포함한다.

선택적인 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, 오솔(Osol, A.) 편집 (1980)]와 목적하는 순도를 갖는 항체를 동결 건조된 배합물 또는 수용액의 형태로 혼합함으로써, 본 발명에 따라 사용되는 어푸코실화 항-CD20 항체를 단독으로 포함하는 약학 조성물을 저장을 위해 제조한다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 복용자에게 비독성이고, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 산화방지제; 보존제(예를 들어, 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 뷰틸 또는 벤질 알콜; 메틸 또는 프로필 파라벤 등의 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈 같은 친수성 중합체; 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신 같은 아미노산; 글루코즈, 만노즈 또는 덱스트린을 비롯한 모노사카라이드, 다이사카라이드 및 다른 탄수화물; EDTA 같은 킬레이트화제; 슈크로즈, 만니톨, 트레할로즈 또는 솔비톨 같은 당; 나트륨 같은 염-형성 대이온; 금속 착체(예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 트윈(TWEEN)(상표) 플루로닉스(PLURONICS)(상표) 또는 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다.

mTOR 억제제의 약학 조성물은 어푸코실화된 항-CD20 항체에 대해 상기 기재된 것과 유사할 수 있다.

본 발명의 하나의 다른 실시양태에서는, 본 발명에 따른 약학 조성물은 바람직하게는 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 mTOR 억제제를 두개의 별도의 약학 조성물로 제형화한다.

활성 성분을 또한 예컨대 코아세르베이션 기법에 의해 또는 이종(interracial) 중합에 의해 제조된 미소캡슐, 예를 들어 각각 하이드록시메틸셀룰로즈 또는 젤라틴-미소캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 미소캡슐 내에, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구, 미소유화액, 나노-입자 및 나노캡슐) 내에, 또는 거대유화액 내에 포획시킬 수 있다. 이러한 기법은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, 오솔 편집 (1980)]에 개시되어 있다.

서방성 제제를 제조할 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 미소캡슐의 형태이다. 서방성 매트릭스의 예는 폴리에스터, 하이드로겔(예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락타이드(US 3,773,919 호), L-글루탐산과 감마-에틸-L-글루탐에이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 루프론 디포(LUPRON DEPOT)(상표)(락트산-글라이콜산 공중합체 및 류프롤라이드 아세테이트로 구성된 주사가능한 미소구) 같은 분해성 락트산-글라이콜산 공중합체, 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시뷰티르산을 포함한다.

생체 내 투여에 사용되는 제형은 멸균되어야 한다. 이는 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.

본 발명은 (i) 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체(바람직하게는 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체) 제 1 효과량; 및 (ii) mTOR 억제제 제 2 효과량을 암 치료를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하는, 암 치료방법을 추가로 제공한다.

바람직하게는, 푸코즈의 양은 40% 내지 60%이다.

바람직하게는, 상기 암은 CD20 발현 암이다.

바람직하게는, 상기 CD20 발현 암은 B-세포 비-호지킨 림프종(NHL)이다.

바람직하게는, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체는 유형 II 항-CD20 항체이다.

바람직하게는, 상기 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이다.

바람직하게는, mTOR 억제제는 라파마이신이거나 라파마이신 유사체 또는 유도체이다.

바람직하게는, mTOR 억제제는 템시로리무스 또는 에버로리무스이다.

바람직하게, 상기 인간화된 B-Ly1 항체는 6주-투여 사이클의 제1일, 제8일, 제15일에 800 내지 1,200mg의 투여량으로 투여된 후, 5회 이하의 4주-투여 사이클의 제1일에 800 내지 1,200mg의 투여량으로 투여된다. 바람직하게, 상기 mTOR 억제제는 림프종 질환의 유형에 따라 25 mg/주 내지 175 mg/주의 투여량으로 투여된다. 예를 들어, 상기 mTOR 억제제는 75 mg/주의 투여량으로 맨틀세포 림프종(MCL)으로 투여된다(또한, 재발되거나 난치성인 MCL을 위해 3 주 동안 175 mg의 주 당 1회 투여 후 주 당 1회 75 mg의 투여량(175/75)이 가능하다). 여포성 NHL, DLBCL 및 CLL을 위해, 예컨대 25 mg/주의 투여량이 투여된다.

본원에 사용되는 용어 "환자"는 바람직하게는 임의의 목적을 위해 어푸코실화된 항-CD20 항체로 치료될 필요가 있는 인간(예를 들어, CD20 발현 암에 걸린 환자), 더욱 바람직하게는 암, 또는 전암 상태 또는 병변을 치료하기 위하여 이러한 치료를 받을 필요가 있는 인간을 일컫는다. 그러나, 용어 "환자"는 또한 인간이 아닌 동물, 바람직하게는 특히 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 양 및 인간이 아닌 영장류 같은 포유동물도 가리킬 수 있다.

또한, 본 발명은 mTOR 억제제와 조합하여 암을 치료하기 위한, 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 포함한다.

또한, 본 발명은 암 치료용 mTOR 억제제 및 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 포함한다.

바람직하게는, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이다.

바람직하게는, 암은 CD20 발현 암, 더욱 바람직하게는 B-세포 비-호지킨 림프종(NHL)이다.

본 발명의 이해를 돕기 위하여 하기 실시예 및 도면이 제공되며, 본 발명의 진정한 영역은 첨부된 특허청구범위에 기재된다. 본 발명의 원리로부터 벗어나지 않으면서 기재된 절차를 변형할 수 있는 것으로 생각된다.

서열 목록

서열 번호:1

쥐의 단클론성 항-CD20 항체 B-Ly1의 중쇄의 가변 영역(VH)의 아미노산 서열

서열 번호:2

쥐의 단클론성 항-CD20 항체 B-Ly1의 경쇄의 가변 영역(VL)의 아미노산 서열

서열 번호:3 내지 19

인간화된 B-Ly1 항체(B-HH2 내지 B-HH9, B-HL8, 및 B-HL10 내지 B-HL17)의 중쇄의 가변 영역(VH)의 아미노산 서열

서열 번호:20

인간화된 B-Ly1 항체 B-KV1의 경쇄의 가변 영역(VL)의 아미노산 서열

실험 절차

유형 II 항- CD20 항체(B- HH6 -B- KV1 GE )와 템시로리무스( 토리젤 ( Torisel ), 등록상표)의 복합 치료의 항종양 활성

시험 제제

유형 II 항-CD20 항체 B-HH6-B-KV1 GE(=인간화된 B-Ly1, 당화-조작된 B-HH6-B-KV1= GA101, WO 2005/044859 호 및 WO 2007/031875 호 참조)는 스위스 쉴리렌 소재의 글라이카트(GlycArt)로부터 제공되었다. 항체 완충액은 히스티딘, 트레할로즈 및 폴리솔베이트 20을 포함하였다. 항체 용액을 주사하기 전에 모용액으로부터 PBS 중에 적절하게 희석하였다. 템시로리무스(토리젤, 등록상표, 25 mg/ml, 와이어쓰 파마슈티칼즈)는 온코디자인(Oncodesign)에 의해 공급되고 영상 4 ℃에서 보관되었으며 공급자의 지시에 따라 빛으로부터 차단되었다.

세포주 및 배양 조건

SU-DHL-4 인간 림프종 세포(DSMZ NO.: ACC 495)를 습한 대기(5% CO₂, 95% 공기), 37 ℃에서 현탁액으로서 성장시켰다. 배양 배지는 2 mM L-글루타민(참고 BE12-702F, 배치 N °8MB0056, 벨기에 베르비에 소재의 론자(Lonza))을 함유하는 RPMI 1640이었고 10 % 소 태아 혈청(참고 3302, 배치 N °P282005, 론자)으로 보충되었다. 세포를 혈구계산기로 계수하고 이들의 생존능력을 0.25% 트리판 청색 축출에 의해 조사하였다.

동물

5 내지 6주령이고 무게 16 내지 20 g인 암컷 CB17 SCID 베이지 마우스를 프랑스 라브레즐 소재의 찰스 리버(Charles River)에서 구입하였다. 동물을 치료 전 특이적-병원균-비함유(SPF) 동물 보호하에 7일 동안 관찰하였다.

동물 보호 단체는 프랑스의 농림연구기관(승인 번호 A21231011)에 의해 승인을 받았다. 동물 실험의 윤리적 가이드라인(1) 및 실험적 종양 형성에서 동물의 복지를 위한 영어 가이드라인(2)에 따라 동물 실험을 수행하였다.

SCID 베이지 마우스에서 SC SU - DHL -4 종양의 유도

매트리젤(50:50, 비디 바이오사이언시즈(BD Biosciences), 프랑스)을 가진 100 μl의 PBS 중 10 밀리언(10⁷)의 SU-DHL-4 종양 세포를 52 암컷 SCID 베이지 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하(SC) 주사하였다.

모니터링

동물 체중 측정, 종양 부피, 병상 및 사망 일지, 및 약물 치료 관리를 포함한 모든 실험 데이터를 비보 매니저(Vivo Manager(등록상표)) 소프트웨어(바이오시스템즈(Biosystems), 프랑스 디존 소재)를 사용하여 관리하였다.

종양 세포의 SC 접종, 화합물의 정맥내(IV) 주사 및 희생 전에 동물을 마취시키는데 이소플루레인 포렌(미너브(Minerve), 프랑스 본뒈플)을 사용하였다. 사망률, 병리적 징후 및 행동을 매일 기록하였다. 동물의 체중 및 종양 크기를 1 주일에 2 회 모니터링하고 기록하였다.

동물의 치료

종양이 173 ±95 mm³의 평균 크기에 도달했을 때, 종양을 견디는 52 마리의 누드 마우스 중 40 마리를 10 마리씩 4 군으로 분배하였다. 치료 스케쥴을 아래와 같이 선택하였다:

● 1 군의 마우스는 4 주 동안 연이어 비히클의 정맥내 볼루스 주사를 주 당 1 회씩 받았다(Q7Dx4).

● 2 군의 마우스는 4 주 동안 연이어 3 mg/kg/주사로 항-CD20 항체 GA101(B-HH6-B-KV1 GE)의 정맥내 볼루스 주사를 주 당 1 회씩 받았다(Q7Dx4).

● 3 군의 마우스는 각 투여량과 총 10 회의 주사로 3 일 간격으로 3 mg/kg/주사로 토리젤의 복강내(IP) 주사를 매일 1 회씩 받았다(Q3Dx10).

● 4 군의 마우스는 각 투여량과 총 10 회의 주사로 3 일 간격으로 3 mg/kg/주사로 토리젤의 복강내 주사를 매일 1 회 받음(Q3Dx10)과 동시에 4 주 동안 연이어 3 mg/kg/주사로 항-CD20 항체 GA101(B-HH6-B-KV1 GE)의 정맥내 볼러스 주사를 주 당 1 회씩 받았다(Q7Dx4).

생체내 종양 성장 억제 연구

항-CD20 항체 GA101(B-HH6-B-KV1 GE) 단독으로 및 토리젤과 조합하여 항종양 효능을 조사하였다. 단일 제제로 주사된 토리젤을 대조 화합물로 사용하였다. 비히클-처리된 동물의 종양과 비교하여, SU-DHL-4 종양 성장은 3 mg/kg 항-CD20 항체 GA101(B-HH6-B-KV1 GE) 또는 토리젤 단독으로 치료된 마우스에서 부분적으로 지연되었다. 항-CD20 항체 GA101(B-HH6-B-KV1 GE) 및 토리젤의 조합 치료는 이들을 각각 단독으로 사용한 것과 비교하여 생체내 항종양 활성을 개선시켰다. 조합에 대해, 종양 성장 지연 값은 항-CD20 항체 GA101(B-HH6-B-KV1 GE) 또는 토리젤 단독의 상응하는 투여량의 그것보다 높았다. 종양 성장은 단일-제제 군에서보다 조합 치료군에서 지속적으로 느려졌다.

종양 세포 주사 후 제46일에, 비히클 군과 비교하여 치료 군의 T/C(%) 값은 항-CD20 항체 GA101(B-HH6-B-KV1 GE), 토리젤 및 이들의 조합을 사용한 경우 각각 51, 60 및 35이었다.

치료 기간 동안 종양 부피 성장의 결과가 도 1에 나타나 있다.

SEQUENCE LISTING <110> Roche Glycart AG <120> Combination therapy of an afucosylated CD20 antibody with a mTOR inhbibitor <130> 26693 FT <140> PCT/EP2011/056461 <141> 2011-04-21 <150> EP 10161181.2 <151> 2010-04-27 <160> 20 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 112 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <221> MISC_FEATURE <223> amino acid sequence of variable region of the heavy chain (VH) of murine monoclonal anti-CD20 antibody B-Ly1 <400> 1 Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys 1 5 10 15 Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Leu 20 25 30 Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp 35 40 45 Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 50 55 60 Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr 65 70 75 80 Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly 85 90 95 Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 100 105 110 <210> 2 <211> 103 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <221> MISC_FEATURE <223> amino acid sequence of variable region of the light chain (VL) of murine monoclonal anti-CD20 antibody B-Ly1 <400> 2 Asn Pro Val Thr Leu Gly Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser 1 5 10 15 Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu 20 25 30 Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn 35 40 45 Leu Val Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr 50 55 60 Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val 65 70 75 80 Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 85 90 95 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH2) <400> 3 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 4 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH3) <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 5 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH4) <400> 5 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 6 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH5) <400> 6 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 7 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH6) <400> 7 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH7) <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 9 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH8) <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH9) <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL8) <400> 11 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 12 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL10) <400> 12 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 13 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL11) <400> 13 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 14 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL12) <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 15 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL13) <400> 15 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 16 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL14) <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Lys Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 17 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL15) <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL16) <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL17) <400> 19 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 20 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the light chain (VL) of humanized B-Ly1 antibody B-KV1 <400> 20 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val 115

Claims

60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화(afucosylating)된 항-CD20 항체, 및 템시로리무스(Temsirolimus) 및 에버로리무스(Everolimus)로부터 선택되는 mTOR 억제제를 포함하며, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체가 서열 번호:7(B-HH6)의 아미노산 서열로 표시되는 중쇄의 가변 영역(VH) 및 서열 번호:20(B-KV1)의 아미노산 서열로 표시되는 경쇄의 가변 영역(VL)을 갖는 인간화된 B-Ly1 항체인, 암 치료용 약학 조성물.
제 1 항에 있어서,
푸코즈 양이 40 % 내지 60 %인, 약학 조성물.
제 1 항에 있어서,
푸코즈 양이 50 % 이하인, 약학 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
암이 CD20 발현 암인, 약학 조성물.
제 4 항에 있어서,
CD20 발현 암이 B-세포 비-호지킨(Non-Hodgkin) 림프종(NHL)인, 약학 조성물.
삭제
삭제
삭제
삭제
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
알킬화제, 대사길항물질, 항생제, 알칼로이드, 파클리탁셀 및 그의 유도체, 세포 성장 억제제(cytostatic agent), 글루코코르티코이드, 코르티코스테로이드, 뉴클레오사이드 효소 억제제, 류코보린(leucovorin) 및 사이토카인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가적인 제제, 또는 이온화 선과 함께 투여되는, 약학 조성물.
삭제
삭제
치료가 필요한, 인간을 제외한 동물에게 템시로리무스 및 에버로리무스로부터 선택되는 mTOR 억제제와 조합하여 60% 이하의 푸코즈 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 투여함으로써, 암에 걸린 인간을 제외한 동물을 치료하는 방법으로서, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체가 서열 번호:7(B-HH6)의 아미노산 서열로 표시되는 중쇄의 가변 영역(VH) 및 서열 번호:20(B-KV1)의 아미노산 서열로 표시되는 경쇄의 가변 영역(VL)을 갖는 인간화된 B-Ly1 항체인, 방법.
제 13 항에 있어서,
푸코즈 양이 40 % 내지 60 %인, 방법.
제 13 항 또는 제 14 항에 있어서,
암이 B-세포 비-호지킨(Non-Hodgkin) 림프종(NHL)인, 방법.