RU2585489C2 - КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ АФУКОЗИЛИРОВАННЫМ АНТИТЕЛОМ CD20 И ИНГИБИТОРОМ mTOR - Google Patents

КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ АФУКОЗИЛИРОВАННЫМ АНТИТЕЛОМ CD20 И ИНГИБИТОРОМ mTOR Download PDF

Info

Publication number
RU2585489C2
RU2585489C2 RU2012147340/10A RU2012147340A RU2585489C2 RU 2585489 C2 RU2585489 C2 RU 2585489C2 RU 2012147340/10 A RU2012147340/10 A RU 2012147340/10A RU 2012147340 A RU2012147340 A RU 2012147340A RU 2585489 C2 RU2585489 C2 RU 2585489C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
antibody
cancer
antibodies
cells
mtor inhibitor
Prior art date
Application number
RU2012147340/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2012147340A (ru
Inventor
Франк ГЕРТИНГ
Кристиан КЛЯЙН
Original Assignee
Рош Гликарт Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Рош Гликарт Аг filed Critical Рош Гликарт Аг
Publication of RU2012147340A publication Critical patent/RU2012147340A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2585489C2 publication Critical patent/RU2585489C2/ru

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61NELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00Radiation therapy
    • A61N5/10X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • A61P35/02Antineoplastic agents specific for leukemia
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • A61P35/04Antineoplastic agents specific for metastasis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2317/00Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41Glycosylation, sialylation, or fucosylation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области биохимии, в частности к комбинированной терапии афукозилированным антителом против CD20 и ингибитором mTOR для лечения рака. Заявлено применение афукозилированного гуманизированного антитела против CD20 В-Ly1 для изготовления лекарственного средства для лечения В-клеточной неходжкинской лимфомы в комбинации с ингибитором mTOR, таким как темсиролимус или эверолимус. Изобретение позволяет достичь синергического антипролиферативного эффекта при лечении рака. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.

Description

Настоящее изобретение направлено на комбинированную терапию афукозилированным антителом CD20 и ингибитором mTOR для лечения рака.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Афукозилированные антитела
Клеточно-опосредованные эффекторные функции моноклональных антител можно усилить конструированием их олигосахаридного компонента, как описано в Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 и US 6602684. Антитела типа IgG1, используемые чаще всего антитела в иммунотерапии рака, представляют собой гликопротеины, которые имеют консервативный сайт N-связанного гликозилирования на Asn297 в каждом домене СН2. Два сложных двухантенных олигосахарида, присоединенных к Asn297, спрятаны между доменами СН2, образуя обширные контакты с полипептидным остовом, и их присутствие является существенным для того, чтобы антитело опосредовало эффекторные функции, такие как зависимую от антител клеточную цитотоксичность (ADCC) (Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A., and Morrison, S.L, Trends Biotech. 15 (1997) 26-32). Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 и WO 99/54342 показали, что сверхэкспрессия β(1,4)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы III ("GnTIII"), гликозилтрансферазы, катализирующей образование разделенных надвое олигосахаридов, в клетках яичника китайского хомячка (СНО) значительно увеличивает активность ADCC антител in vitro. Изменения состава углевода на N297 или его устранение также влияют на связывание Fc с FcγR и С1 q (Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180; Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294; Mimura, Y., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 45539-45547; Radaev, S, et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 16478-16483; Shields, R.L, et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604; Shields, R.L, et al., J. Biol. Chem. 277 (2002) 26733-26740; Simmons, L.C., et al., J. Immunol. Methods 263 (2002) 133-147).
Iida, S., et al., Clin. Cancer Res. 12 (2006) 2879-2887 показали, что эффективность афукозилированного антитела против CD20 ингибировалась добавлением фукозилированного антитела против CD20. Эффективность смеси 1:9 (10 мкг/мл) афукозилированного и фукозилированного антител против CD20 была хуже эффективности 1000-кратного разведения (0,01 мкг/мл) одного афукозилированного антитела против CD20. Они сделали заключение о том, что афукозилированный IgG1, не включающий фукозилированных аналогов, может уклоняться от ингибирующего эффекта IgG плазмы на ADCC через его сильное связывание с Fc гамма RIIIa. Natsume, A., et al., показывают в J. Immunol. Methods 306 (2005) 93-103, что удаление фукозы из олигосахарида комплексного (сложного) типа человеческого антитела типа IgG1 приводит к значительному усилению зависимой от антител клеточной цитотоксичности (ADCC). Satoh, M., et al., Expert Opin. Biol. Ther. 6 (2006) 1161-1173 обсуждают афукозилированные терапевтические антитела в качестве терапевтических антител следующего поколения. Satoh заключает, что антитела, состоящие только из афукозилированной формы человеческого lgG1, по-видимому, являются идеальными. Kanda, Y., et al., Biotechnol. Bioeng. 94 (2006) 680-688 сравнили фукозилированное антитело CD20 (96% фукозилирования, CHO/DG44 1Н5) с афукозилированным антителом CD20. Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294 сообщают о том, что для антитела CD20 повышенная ADCC коррелирует с повышенным связыванием с FcγRIII.
Способы увеличения клеточно-опосредованных эффекторных функций моноклональных антител путем уменьшения количества фукозы описаны, например, в WO 2005/018572, WO 2006/116260, WO 2006/114700, WO 2004/065540, WO 2005/011735, WO 2005/027966, WO 1997/028267, US 2006/0134709, US 2005/0054048, US 2005/0152894, WO 2003/035835, WO 2000/061739, Niwa, R., et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 151-160; Shinkawa, Т., et al, J. Biol. Chem. 278 (2003) 3466-3473; WO 03/055993 или US 2005/0249722.
CD20 и антитела против CD20
Молекула CD20 (также именуемая как человеческий ограниченный В-лимфоцитами антиген дифференцировки или Вр35) представляет собой гидрофобный трансмембранный белок с молекулярной массой приблизительно 35 кДа, локализованный на пре-В и зрелых В-лимфоцитах (Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287 и Einfeld, DA, et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568). CD20 находится на поверхности больше чем 90% В-клеток из периферической крови или лимфоидных органов, экспрессируется на протяжении раннего развития пре-В-клеток и сохраняется до дифференцировки плазматической клетки. CD20 присутствует как на нормальных В-клетках, так и на злокачественных В-клетках. В частности, CD20 экспрессируется на более чем 90% В-клеток неходжкинских лимфом (NHL) (Anderson, K.C., et al., Blood 63 (1984) 1424-1433)), но не обнаруживается на гематопоэтических стволовых клетках, про-В-клетках, нормальных плазматических клетках или других нормальных тканях (Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 135 (1985) 973-979).
Карбоксиконцевая область белка CD20 из 85 аминокислот локализуется в цитоплазме. Длина данной области отличается от длины других специфичных для В-клеток поверхностных структур, таких как тяжелые цепи IgM, IgD и IgG или α или β цепи антигенов гистосовместимости класса II, которые имеют относительно короткие внутрицитоплазматические области из 3, 3, 28, 15 и 16 аминокислот соответственно (Komaromy, M., et al. NAR II (1983) 6775-6785). Из последней 61 карбоксиконцевой аминокислоты 21 представляют собой кислотные остатки, тогда как только 2 являются основными, указывая на то, что данная область имеет сильный отрицательный заряд. №доступа GenBank является NP-690605. Считается, что CD20 может участвовать в регуляции ранней стадии(ий) в процессе активации и дифференцировки В-клеток (Tedder, T.F., et al., Eur. J. Immunol. 16 (1986) 881-887) и мог бы функционировать в качестве кальциевого ионного канала (Tedder, T.F., et al., J. Cell. Biochem. 14D (1990) 195).
Существуют два разных типа антител против CD20, значительно отличающихся их способом связывания CD20 и биологическими активностями (Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743; и Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052). Антитела типа I, как, например, ритуксимаб, являются эффективными в цитотоксичности, опосредованной комплементом, тогда как антитела типа II, как, например, тозитумомаб (В1), 11 В8, АТ80 или гуманизированные антитела B-Ly1, эффективно инициируют смерть клетки-мишени через независимый от каспаз апоптоз с сопутствующей экспозицией фосфатидилсерина.
Наличие общих характеристик антител против CD20 типа I и типа II обобщено в Таблице 1.
Таблица 1:
свойства антител против CD20 типа I и типа II
Антитела против CD20 типа I Антитела против CD20 типа II
Эпитоп CD20 типа I Эпитоп CD20 типа II
Локализуют CD20 на липидных рафтах Не локализуют CD20 на липидных рафтах
Увеличивают CDC (зависимая от Снижают CDC (при изотипе IgG1)
комплемента цитотоксчность (при изотипе IgG1)
ADCC активность (при изотипе IgG1) ADCC активность (при изотипе IgG1)
Полная способность к связыванию Пониженная способность к связыванию
Гомотипическая агрегация Более сильная гомотипическая агрегация
Индукция апоптоза при поперечном связывании Сильная индукция клеточной смерти без поперечного связывания
mTOR и ингибиторы mTOR
mTOR представляет собой мишень рапамицина млекопитающих (mTOR), также известную как механистическая мишень рапамицина или FK506 связывающий белок 12-ассоциированный с рапамицином белок 1 (FRAP1), представляющий собой белок, который у людей кодируется геном FRAP1 (Brown, E.J., et al., Nature 369 (1994) 756-758; Moore, PA, et al., Genomics 33 (1996) 331-332). mTOR представляет собой серин/треониновую протеинкиназу, которая регулирует рост клеток, пролиферацию клеток, подвижность клеток, выживание клеток, синтез белка и транскрипцию (Hay, N., et al., Genes Dev. 18 (2004) 1926-1945; Beevers, С.S., et al., Int. J. Cancer 119 (2006) 757-764).
mTOR интегрирует входящий сигнал от находящихся выше по течению путей, включая (сигналы) инсулина, факторов роста (таких как IGF-1 (инсулиноподобный фактор роста-1) и IGF-2) и митогенов. mTOR также воспринимает уровни клеточных питательных веществ и энергии и редокс-статус. Регуляция пути mTOR нарушается при заболеваниях человека, особенно при определенных раковых заболеваниях. Рапамицин представляет собой бактериальный продукт, который может ингибировать mTOR путем ассоциации с его внутриклеточным рецептором FKBP12. Комплекс РКВР12-рапамицин непосредственно связывается с РКВР12-рапамицинсвязывающим доменом (FRB) mTOR.
mTOR представляет собой каталитическую субъединицу двух молекулярных комплексов. Комплекс 1 mTOR (mTORC1) состоит из mTOR, регуляторного ассоциированного белка mTOR (Raptor), белка, подобного LST8 млекопитающих/β-субъединице G-белка (mLST8/GβL), и недавно идентифицированных партнеров - PRAS40 и DEPTOR. Данный комплекс характеризуется классическими свойствами mTOR, функционируя как сенсор питательных веществ/энергии/редокс-статуса и контролируя синтез белка. Активность данного комплекса стимулируется инсулином, факторами роста, сывороткой, фосфатидной кислотой, аминокислотами (особенно лейцином) и окислительным стрессом.
mTORC1 ингибируется низкими уровнями питательных веществ, удалением факторов роста, восстановительным стрессом, кафеином, рапамицином, фарнезилтиосалициловой кислотой (FTS) и куркумином. Две лучше всего охарактеризованные мишени mTORC1 представляют собой p70-S6 киназу 1 (S6K1) и 4Е-ВР1 белок 1. [3], связывающий эукариотический фактор инициации 4Е (elF4E).
mTORC1 фосфорилирует S6K1 по меньшей мере по двум остаткам, причем самая критическая модификация происходит по остатку треонина (Т389). Данное событие стимулирует последующее фосфорилирование S6K1 посредством PDK1. Активная S6K1 может, в свою очередь, стимулировать инициацию синтеза белка через активацию рибосомального белка S6 (компонент рибосомы) и других компонентов трансляционного аппарата. S6K1 также может участвовать в петле положительной обратной связи с mTORC1 путем фосфорилирования негативного регуляторного домена mTOR по двум сайтам; фосфорилирование по данным сайтам, по-видимому, стимулирует активность mTOR.
Было показано, что mTORC1 фосфорилирует по меньшей мере четыре остатка 4Е-ВР1 иерархическим образом. Нефосфорилированный 4Е-ВР1 прочно связывается с фактором инициации трансляции elF4E, предотвращая его связывание с 5'-кэппированными мРНК и рекрутируя их в рибосомальный инициирующий комплекс. При фосфорилировании посредством mTORC1 4Е-ВР1 высвобождает elF4E, позволяя ему выполнять его функцию. Активность mTORC1, по-видимому, регулируется через динамическое взаимодействие между mTOR и Raptor, то, которое опосредовано GβL Raptor и mTOR имеют сильное N-концевое взаимодействие и более слабое С-концевое взаимодействие около киназного домена mTOR. При восприятии стимулирующих сигналов, таких как высокие уровни питательных веществ/энергии, С-концевое взаимодействие mTOR-Raptor ослабевает и, возможно, полностью утрачивается, обеспечивая включение киназной активности mTOR. При удалении стимулирующих сигналов, как, например, при низких уровнях питательных веществ, С-концевое взаимодействие mTOR-Raptor усиливается, по существу отключая киназную функцию mTOR.
Комплекс 2 mTOR (mTORC2) состоит из mTOR, нечувствительного к рапамицину спутника mTOR (Rictor), GβL и белка млекопитающих 1, взаимодействующего со стресс-активируемой протеинкиназой (mSIN1). Было показано, что mTORC2 функционирует в качестве важного регулятора цитоскелета через стимуляцию им стрессовых волокон F-актина, паксиллина, RhoA, Rac1, Cdc42 и протеинкиназы С а (РКСа). mTORC2 также, по-видимому, обладает активностью ранее неуловимого белка, известного как «PDK2". mTORC2 фосфорилирует серин/треониновую протеинкиназу Akt/PKB по остатку серина S473. Фосфорилирование серина стимулирует фосфорилирование Akt по остатку треонина Т308 посредством PDK1 и приводит к полной активации Akt; куркумин ингибирует обе, предотвращая фосфорилирование серина.
mTORC2, по-видимому, регулируется инсулином, факторами роста, сывороткой и уровнями питательных веществ. Первоначально mTORC2 идентифицировали как нечувствительную к рапамицину молекулу, так как кратковременное воздействие рапамицина не влияло на активность mTORC2 или фосфорилирование Akt. Однако последующие исследования показали, что, по меньшей мере в некоторых линиях клеток, при длительном воздействии рапамицин, не влияя на предсуществующий mTORC2, может связываться со свободными молекулами mTOR, таким образом, ингибируя образование нового mTORC2.
Предполагается, что некоторые диеты, подобные ограничению числа калорий и ограничению метионина, вызывают увеличение продолжительности жизни путем снижения активности mTor.
Ингибиторы mTOR
Были идентифицированы многие ингибиторы mTOR, и несколько находятся в клинических испытаниях для лечения рака (например RAD001 (также известный как эверолимус; Novartis); CCI-779 (также известный как темсиролимус; Wyeth); АР23573 (Ariad Pharmaceuticals) и KU-0059475 (Kudus Pharmaceuticals); Mita, M.M. et al., Cancer Biology & Therapy 2, Suppl. 1 (2003) S169-S177). Также было высказано предположение о потенциальной эффективности комбинаций таких ингибиторов mTOR с другими противораковыми агентами, и они тестируются в клинических испытаниях (Adjei, A.A. and Hidalgo, M., J. Clin. Oncol. 23 (2005) 5386-5403). Такие комбинации включают комбинации ингибиторов mTOR с ингибиторами протеин-тирозинкиназ (Sawyers, С.L, Cancer Cell 4 (2003) 343-348; Gemmill, R.M., et al., Br. J. Cancer 92 (2005) 2266-2277; Goudar, R.К., et al., Mol. Cancer Therapeutics 4 (2005) 101-112; международная публикация патента WO 2004/004644; Birle, D.C., et al., 94th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research, Washington, D.C., Vol.44, Second Edition, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. (July 2003) p.932, #R4692).
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение включает применение афукозилированного антитела против CD20 с количеством фукозы 60% или менее для изготовления лекарственного средства для лечения ракового заболевания в комбинации с ингибитором mTOR.
Одним аспектом изобретения является способ лечения пациента, страдающего от ракового заболевания, путем введения афукозилированного антитела против CD20 с количеством фукозы 60% или менее в комбинации с ингибитором mTOR пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
Другим аспектом изобретения является афукозилированное антитело против CD20 с количеством фукозы 60% или менее для лечения ракового заболевания в комбинации с ингибитором mTOR.
Предпочтительно количество фукозы составляет от 40% до 60% от общего количества олигосахаридов (сахаров) на Asn297.
Предпочтительно указанное афукозилированное антитело против CD20 представляет собой гуманизированное антитело B-Ly1, и указанное раковое заболевание представляет собой раковое заболевание, при котором экспрессируется CD20, предпочтительно В-клеточную неходжкинскую лимфому (NHL).
Предпочтительно ингибитором mTOR является рапамицин или аналог, или производное рапамицина. Предпочтительно ингибитором mTOR является темсиролимус или эверолимус.
Одно воплощение изобретения представляет собой композицию, содержащую афукозилированное антитело против CD20 с количеством фукозы 60% или менее и ингибитор mTOR для лечения рака.
Неожиданно авторы изобретения выяснили, что комбинация ингибитора mTOR с афукозилированным антителом против CD20 показывает синергетические (например, более чем аддитивные) антипролиферативные эффекты при лечении рака.
Авторы изобретения выяснили, что комбинация афукозилированного антитела против CD20 показывает синергетические (например, даже более чем аддитивные) антипролиферативные эффекты.
ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Фиг.1. Противоопухолевая активность in vivo комбинированного лечения афукозилированным антителом против CD20 типа II (GA101=B-HH6-B-KV1 GE) с ингибитором mTOR (темсиролимус) по сравнению с соответствующими монотерапиями.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение включает применение афукозилированного антитела против CD20 (предпочтительно изотипа IgG1 или IgG3, более предпочтительно изотипа IgG1) с количеством фукозы 60% или менее от общего количества олигосахаридов (сахаров) на Asn297, для изготовления лекарственного средства для лечения рака в комбинации с ингибитором mTOR.
Предпочтительно ингибитором mTOR является рапамицин или аналог или производное рапамицина. Предпочтительно ингибитор mTOR представляет собой темсиролимус или эверолимус.
Предпочтительно количество фукозы составляет от 40% до 60% от общего количества олигосахаридов (сахаров) на Asn297.
Термин «антитело» охватывает разные формы антител, включающие, но не ограничивающиеся, цельными антителами, человеческими антителами, гуманизированными антителами и генетически модифицированными антителами, подобными моноклональным антителам, химерным антителам или рекомбинантным антителам, а также фрагментам таких антител, при условии, что сохраняются характерные свойства согласно изобретению. Термины «моноклональное антитело» или «композиция моноклонального антитела» в том виде, как они здесь используются, относятся к препарату молекул антитела одного аминокислотного состава. Соответственно, термин «человеческое моноклональное антитело» относится к антителам, демонстрирующим одну специфичность связывания, которые имеют вариабельные и константные области, происходящие из последовательностей иммуноглобулинов человеческой зародышевой линии. В одном воплощении человеческие моноклональные антитела продуцируются гибридомой, которая включает В-клетку, полученную от трансгенного животного, не являющегся человеком, например, от трансгенной мыши, имеющей геном, содержащий трансген человеческой тяжелой цепи и трансген легкой человеческой цепи, слитую с бессмертной клеткой.
Термин «химерное антитело» относится к моноклональному антителу, содержащему вариабельную область, т.е. связывающую область, из одного источника или вида и по меньшей мере часть константной области, происходящей из другого источника или вида, обычно полученному методиками генной инженерии. Особенно предпочтительными являются химерные антитела, содержащие мышиную вариабельную область и человеческую константную область. Такие мышиные/человеческие химерные антитела являются продуктом экспрессируемых генов иммуноглобулинов, содержащих сегменты ДНК, кодирующие мышиные вариабельные области иммуноглобулинов и сегменты ДНК, кодирующие человеческие константные области иммуноглобулинов. Другие формы «химерных антител», охватываемых настоящим изобретением, представляют собой антитела, в которых класс или подкласс был модифицирован или изменен относительно класса или подкласса исходного антитела. Такие «химерные» антитела также называются «антитела с переключенным классом». Способы получения химерных антител включают традиционные методики генной инженерии и трансфекции генов, теперь хорошо известные в данной области. Смотрите, например, Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855; US 5202238 и US 5204244.
Термин «гуманизированное антитело» относится к антителам, в которых каркас или «области, определяющие комплементарность» (CDR) (гипервариабельные области), были модифицированы с включением CDR иммуноглобулина другой специфичности по сравнению с CDR родительского иммуноглобулина. В предпочтительном воплощении мышиный CDR пересажен на каркасную область человеческого антитела с получением «гуманизированного антитела». Смотрите, например, Riechmann, L, et al., Nature 332 (1988) 323-327; и Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270.
Подразумевается, что термин «человеческое антитело» в том виде, как он здесь используется, включает антитела, имеющие вариабельные и константные области, происходящие из последовательностей человеческих иммуноглобулинов зародышевой линии. Человеческие антитела хорошо известны в современном уровне техники (van Dijk, M.A., and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374). На основе такой технологии можно получать человеческие антитела против широкого спектра мишеней. Примеры человеческих антител, например, описаны в Kellermann, S.A., et al., Curr Opin Biotechnol. 13 (2002) 593-597.
Подразумевается, что термин «рекомбинантное человеческое антитело» в том виде, как он здесь используется, включает все человеческие антитела, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют рекомбинантными способами, такие как антитела, выделенные из клетки-хозяина, такой как клетка NS50 или СНО, или из животного (например, мыши), которое является трансгенным в отношении человеческих генов иммуноглобулинов, или антитела, экспрессируемые с использованием рекомбинантного экспрессионного вектора, трансфицированного в клетку-хозяина. Такие рекомбинантные человеческие антитела имеют вариабельные и константные области, происходящие из последовательностей человеческих иммуноглобулинов зародышевой линии, в реаранжированной форме. Рекомбинантные человеческие антитела согласно изобретению подвергались соматической гипермутации in vivo. Таким образом, аминокислотные последовательности областей VH и VL рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, происходя из последовательностей VH и VL человеческой зародышевой линии и будучи родственными им, могут не существовать в природе в пределах репертуара человеческих антител зародышевой линии in vivo.
Термин «связывание» или «специфичное связывание» в том виде, как он здесь используется, относится к связыванию антитела с эпитопом опухолевого антигена в анализе in vitro, предпочтительно в анализе плазменным резонансом (BIAcore, GE-Healthcare Uppsala, Швеция) с очищенным антигеном дикого типа. Аффинность связывания определяется показателями ka (константа скорости для ассоциации антитела из комплекса антитело/антиген), kD (константа диссоциации) и KD (kD/ka). Связывание или специфичное связывание означает аффинность связывания (KD) 10-8 моль/л или меньше, предпочтительно от 10-9 до 10-13 моль/л. Таким образом, афукозилированное антитело согласно изобретению специфично связывается с опухолевым антигеном с аффинностью связывания (KD) 10-8 моль/л или меньше, предпочтительно от 10-9 до 10-13 моль/л.
Подразумевается, что термин «молекула нуклеиновой кислоты» в том виде, как он здесь используется, включает молекулы ДНК и молекулы РНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двухцепочечной, но предпочтительно представяет собой двухцепочечную ДНК.
«Константные домены» прямо не участвуют в связывании антитела с антигеном, но участвуют в эффекторных функциях (ADCC, связывание комплемента и CDC).
Термин «вариабельная область» (вариабельная область легкой цепи (VL), вариабельная область тяжелой цепи (VH)) в том виде, как он здесь используется, обозначает каждую пару легкой и тяжелой цепей, которая непосредственно участвует в связывании антитела с антигеном. Домены вариабельных человеческих легких и тяжелых цепей имеют одинаковую общую структуру, и каждый домен содержит четыре каркасные области (FR), последовательности которых являются в значительной степени консервативными, соединенные тремя «гипервариабельными областями» (или областями, определяющими комплементарность, CDR). Каркасные области принимают конформацию бета-складчатого слоя, и CDR могут образовать петли, соединяющие бета-складчатую структуру. CDR в каждой цепи поддерживаются в их трехмерной структуре каркасными областями и, совместно с CDR из другой цепи, образуют антигенсвязывающий сайт.
Термины «гипервариабельная область» или «антигенсвязывающая часть антитела» при использовании здесь относятся к аминокислотным остаткам антитела, которые отвечают за связывание антигена. Гипервариабельная область содержит аминокислотные остатки из «областей, определяющих комплементарность» или «CDR». «Каркасные» или «FR» области представляют собой те области вариабельных доменов, которые отличаются от остатков гипервариабельной области, как здесь определено. Следовательно, легкие и тяжелые цепи антитела содержат от N- до С-конца домены FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Особенно CDR3 тяжелой цепи представляет собой область, которая главным образом содействует связыванию антигена. Области CDR и FR определяются согласно стандартному определению Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991) и/или соответствуют тем остаткам из «гипервариабельной петли».
Ингибитор mTOR согласно изобретению может быть любым ингибитором mTOR, который в настоящее время известен в данной области или который будет идентифицирован в будущем, и включает любое химическое соединение, которое, при введении пациенту, приводит к ингибированию mTOR у пациента. Ингибитор mTOR может ингибировать mTOR любым биохимическим механизмом, включая конкуренцию в сайте связывания АТР, конкуренцию где-нибудь в каталитическом сайте mTOR киназы, неконкурентное ингибирование, необратимое ингибирование (например, ковалентную модификацию белка) или модуляцию взаимодействий других белковых субъединиц или связывающих белков с mTOR киназой способом, который приводит к ингибированию киназной антивности mTOR (например, модуляция взаимодействия mTOR с FKBP12, GβL, (mLST8), RAPTOR (mKOG1) или RICTOR (mAV03)). Конкретные примеры ингибиторов mTOR включают: рапамицин; другие рапамициновые макролиды, или аналоги, производные или пролекарства рапамицина; эверолимус (также известный как RAD001, эверолимус/RAD001 представляет собой алкилированный рапамицин (40-O-(2-гидроксиэтил)-рапамицин), раскрытый в патенте США №5665772; Novartis); темсиролимус (также известный как СС1-779, темсиролимус/СС1-779 представляет собой сложный эфир рапамицина (42-сложный эфир с 3-гидрокси-2-гидроксиметил-2-метилпропионовой кислотой), раскрытый в патенте США №5362718; Wyeth); AP23573 или АР23841 (Ariad Pharmaceuticals); ABT-578 (40-эпи-(тетразолил)-рапамицин; Abbott Laboratories); KU-0059475 (Kudus Pharmaceuticals); и TAFA-93 (пролекарство рапамицина; Isotecknika). Примеры аналогов и производных рапамицина, известных в данной области, включают те соединения, которые описаны в патентах США №6329386; 6200985; 6117863; 6015815; 6015809; 6004973; 5985890; 5955457; 5922730; 5912253; 5780462; 5665772; 5637590; 5567709; 5563145; 5559122; 5559120; 5559119; 5559112; 5550133; 5541192; 5541191; 5532355; 5530121; 5530007; 5525610; 5521194; 5519031; 5516780; 5508399; 5508290; 5508286; 5508285; 5504291; 5504204; 5491231; 5489680; 5489595; 5488054; 5486524; 5486523; 5486522; 5484791; 5484790; 5480989; 5480988; 5463048; 5446048; 5434260; 5411967; 5391730; 5389639; 5385910; 5385909; 5385908; 5378836; 5378696; 5373014; 5362718; 5358944; 5346893; 5344833; 5302584; 5262424; 5262423; 5260300; 5260299; 5233036; 5221740; 5221670; 5202332; 5194447; 5177203; 5169851; 5164399; 5162333; 5151413; 5138051; 5130307; 5120842; 5120727; 5120726; 5120725; 5118678; 5118677; 5100883; 5023264; 5023263 и 5023262, которые все включены сюда посредством ссылки. Производные рапамицина также раскрыты, например, в WO 94/09010, WO 95/16691, WO 96/41807, or WO 99/15530, которые включены сюда посредством ссылки. Такие аналоги и производные включают 32-дезоксорапамицин, 16-пент-2-инилокси-32-дезоксорапамицин, 16-пент-2-инилокси-32 (S или Р)-дигидро-рапамицин, 16-пент-2-инилокси-32 (S или К)-дигидро-40-O-(2-гидроксиэтил)-рапамицин, 40-O-(2-гидроксиэтил)-рапамицин, 32-дезоксорапамицин и 16-пент-2-инилокси-32(S)-дигидрорапамицин. Производные рапамицина также могут включать так называемые рапалоги, например, как раскрыто в WO 98/02441 и WO 01/14387 (например, AP23573, АР23464, АР23675 или АР23841). Другими примерами производного рапамицина являются производные, раскрытые под названием биолимус-7 или биолимус-9 (BIOLIMUS A9TM) (Biosensors International, Singapore). Любой из приведенных выше аналогов или производных рапамицина можно легко получить методиками, как описано в приведенных выше ссылках. Дополнительные примеры ингибиторов mTOR, полезных в описанном здесь изобретении, включают ингибиторы, раскрытые и заявленные в заявке на патент США с серийным №11/599663.
Предпочтительно ингибиторы mTOR представляют собой рапамицин или аналоги или производные рапамицина, более предпочтительно - аналоги или производные рапамицина. Предпочтительные аналоги или производные рапамицина представляют собой, например, темсиролимус или эверолимус.
Термин «афукозилированное антитело» относится к антителу изотипа IgG1 или IgG3 (предпочтительно изотипа IgG1) с измененной структурой гликозилирования в области Fc на Asn297, имеющим пониженный уровень остатков фукозы. Гликозилирование человеческого IgG1 или lgG3 происходит по Asn297, как ядре гликозилирования фукозилированного двухантенного комплексного олигосахарида, заканчивающегося остатками Ga1 вплоть до 2-х. Эти структуры обозначены как G0, G1 (α1,6 или α1,3) или G2 гликановые остатки, в зависимости от количества концевых остатков Gal (Raju, T.S., BioProcess Int. 1 (2003) 44-53). Гликозилирование СНО типа частей Fc антитела, например, описано Routier, F.H., Glycoconjugate J. 14 (1997) 201-207. Антитела, которые рекомбинантно экспрессируются в негликомодифицированных клетках-хозяевах СНО, обычно фукозилируются по Asn297 в количестве по меньшей мере 85%.
Таким образом, афукозилированное антитело согласно изобретению означает антитело изотипа IgG1 или IgG3 (предпочтительно изотипа IgG1), где количество фукозы составляет 60% или менее от общего количества олигосахаридов (сахаров) на Asn297 (что означает, что по меньшей мере 40% или более олигосахаридов области Fc на Asn297 являются нефукозилированными). В одном воплощении количество фукозы составляет от 40% до 60% олигосахаридов области Fc на Asn297. В другом воплощении количество фукозы составляет 50% или менее, и в еще одном другом воплощении количество фукозы составляет 30% или менее олигосахаридов области Fc на Asn297. Согласно изобретению фраза «количество фукозы» означает количество указанного олигосахарида (фукозы) в пределах олигосахаридной (сахарной) цепи на Asn297, по отношению к сумме всех олигосахаридов (сахаров), присоединенных к Asn297 (например, сложные, гибридные структуры и структуры с высоким содержанием маннозы), измеренное масс-спектрометрией MALDI-TOF (времяпролетная ионизация лазерной десорбцией с использованием матрицы) и рассчитанное как среднее значение (подробная методика определения количества фукозы описана, например, в WO 2008/077546). Кроме того, олигосахариды области Fc преимущественно являются разделеными надвое. Афукозилированное антитело согласно изобретению можно экспрессировать в гликомодифицированных клетках-хозяевах, сконструированных для экспрессии по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, имеющий GnTIII активность, в достаточном количестве для частичного фукозилирования олигосахаридов в области Fc. В одном воплощении полипептид, имеющий активность GnTIII, представляет собой слитый полипептид. В качестве альтернативы, а1,6-фукозилтрансферазная активность клетки-хозяина может быть снижена или устранена согласно US 6946292 с генерацией гликомодифицированных клеток-хозяев. Уровень фукозилирования антитела может быть задан, например, либо условиями ферментации (например, временем ферментации), либо комбинацией по меньшей мере двух антител с разным уровнем фукозилирования. Такие афукозилированные антитела и соответствующие способы гликоинженерии описаны в WO 2005/044859, WO 2004/065540, WO 2007/031875, Umana, P, et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180, WO 99/154342, WO 2005/018572, WO 2006/116260, WO 2006/114700, WO 2005/011735, WO 2005/027966, WO 97/028267, US 2006/0134709, US 2005/0054048, US 2005/0152894, WO 2003/035835, WO 2000/061739. Данные гликомодифицированные антитела имеют повышенную ADCC. Другие способы гликоинженерии, дающие афукозилированные антитела согласно изобретению, описаны, например, в Niwa, R., et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 151-160; Shinkawa, Т., et al., J. Biol. Chem. 278 (2003) 3466-3473; WO 03/055993 или US 2005/0249722.
Таким образом, одним аспектом изобретения является применение афукозилированного антитела против CD20 изотипа IgG1 или IgG3 (предпочтительно изотипа IgG1), специфично связывающегося с опухолевым антигеном, с количеством фукозы 60% или менее от общего количества олигосахаридов (сахаров) на Asn297 для изготовления лекарственного средства для лечения рака в комбинации с ингибитором mTOR. Предпочтительно количество фукозы составляет от 40% до 60% от общего количества олигосахаридов (сахаров) на Asn297.
CD20 (также известный как В-лимфоцитарный антиген CD20, В-лимфоцитарный поверхностный антиген В1, Leu-16, Bp35, BM5 и LF5; последовательности охарактеризованы записью Р11836 в базе данных SwissProt) представляет собой гидрофобный трансмембранный белок с молекулярной массой приблизительно 35 кДа, локализованный на пре-В и зрелых В-лимфоцитах (Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Einfeld, DA, et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568). Соответствующим человеческим геном является пронизывающий мембрану 4-доменный член 1 подсемейства А, также известный как MS4A1. Этот ген кодирует члена семейства генов пронизывающих мембрану (белков) 4А. Члены этого образующегося семейства белков отличаются общими структурными характеристиками и аналогичными границами сплайсинга интронов/экзонов, и демонстрируют уникальные картины экспрессии среди гематопоэтических клеток и нелимфоидных тканей. Данный ген кодирует В-лимфоцитарную поверхностную молекулу, которая играет роль в развитии и дифференцировке В-клеток в плазматические клетки. Этот член семейства локализован в 11q12, среди кластера членов семейства. Альтернативный сплайсинг данного гена приводит к двум вариантам транскриптов, которые кодируют тот же самый белок.
Термины "CD20" и "антиген CD20" используются здесь взаимозаменимо и включают любые варианты, изоформы и гомологи вида человеческого CD20, которые экспрессируются клетками в природе или экспрессируются на клетках, трансфицированных геном CD20. Связывание антитела по изобретению с антигеном CD20 опосредует умерщвление клеток, экспрессирующих CD20 (например, опухолевых клеток) путем инактивации CD20. Умерщвление клеток, экспрессирующих CD20, может происходить посредством одного или более чем одного из следующих механизмов: индукция клеточной смерти/апоптоза, ADCC или CDC.
Синонимы CD20, как известно в данной области, включают В-лимфоцитарный антиген CD20, В-лимфоцитарный поверхностный антиген В1, Leu-16, Вр35, BM5HLF5.
Термин «антитело против CD20» согласно изобретению представляет собой антитело, которое специфично связывается с антигеном CD20. В зависимости от свойств связывания и биологических активностей антител против CD20 в отношении антигена CD20, можно различать два типа антител против CD20 (антитела против CD20 типа I и типа II) согласно Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743 и Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052, смотрите Таблицу 2.
Таблица 2:
свойства антител против CD20 типа I и типа II
антитела против CD20 типа I антитела против CD20 типа II
Эпитоп CD20 типа I Эпитоп CD20 типа II
Локализуют CD20 в липидных рафтах Не локализуют CD20 в липидных рафтах
Увеличивают CDC (в случае изотипа IgG1) Снижают CDC (в случае изотипа IgG1)
ADCC активность (в случае изотипа IgG1) ADCC активность (в случае изотипа IgG1)
Полная способность к связыванию Пониженная способность к связыванию
Гомотипическая агрегация Более сильная гомотипическая агрегация
Индукция апоптоза при поперечном связывании Сильная индукция смерти клеток без поперечного связывания
Примеры антител против CD20 типа II включают, например, гуманизированное антитело, IgG1 B-Ly1 (химерное гуманизированное антитело IgG1, как раскрыто в WO 2005/044859), IgG1 11B8 (как раскрыто в WO 2004/035607) и IgG1 АТ80. Типично антитела против CD20 типа II изотипа IgG1 показывают характерные свойства CDC. Антитела против CD20 типа II имеют пониженную CDC (в случае изотипа IgG1) по сравнению с антителами типа I изотипа IgG1.
Примеры антител против CD20 типа I включают, например, ритуксимаб, IgG3 HI47 (ЕСАСС, гибридома), IgG1 2С6 (как раскрыто в WO 2005/103081), IgG1 2F2 (как раскрыто в WO 2004/035607 и WO 2005/103081) и IgG1 2Н7 (как раскрыто в WO 2004/056312).
Афукозилированные антитела против CD20 согласно изобретению предпочтительно представляют собой антитело против CD20 типа II, более предпочтительно афукозилированное гуманизированное антитело B-Ly1.
Афукозилированные антитела против CD20 согласно изобретению имеют повышенную клеточную цитотоксичность, зависимую от антител (ADCC).
Под «афукозилированным антителом против CD20 с повышенной клеточной цитотоксичностью, зависимой от антител (ADCC)» подразумевается афукозилированное антитело против CD20 в том виде, как здесь определен данный термин, имеющее повышенную ADCC, как определено любым подходящим способом, известным обычным специалистам в данной области. Общепринятыми анализами ADCC in vitro являются следующие:
1) анализ с применением клеток-мишеней, для которых известно, что они экспрессируют антиген-мишень, распознаваевый антигенсвязывающей областью антитела;
2) анализ с применением, в качестве эффекторных клеток, человеческих одноядерных клеток периферической крови (РВМС), выделенных из крови здорового донора, выбранного случайным образом;
3) анализ, проводящийся согласно следующему протоколу:
i) РВМС выделяют с использованием стандартных методик центрифугирования в градиенте плотности и суспендируют в концентрации 5×106 клеток/мл в среде для культуры клеток RPMI;
ii) клетки-мишени выращивают стандартными способами выращивания культуры тканей, собирают в фазе экспоненциального роста с жизнеспособностью, превышающей 90%, промывают в среде для культуры клеток RPMI, метят 100 микрокюри 51Cr, дважды промывают средой для культуры клеток и ресуспендируют в среде для культуры клеток в концентрации 105 клеток/мл;
iii) 100 микролитров описанной выше конечной суспензии клеток-мишеней переносят в каждую лунку 96-луночного планшета для микротитрования;
iv) антитело последовательно разводят от 4000 нг/мл до 0,04 нг/мл в среде для культуры клеток, и 50 микролитров образующихся растворов антитела добавляют к клеткам-мишеням в 96-луночном планшете для микротитрования, тестируя в тройной повторности разные концентрации антитела, покрывающие весь приведенный выше интервал концентраций;
v) для контролей максимального высвобождения (MR) в 3 дополнительные лунки на планшете, содержащем меченые клетки-мишени, вводят 50 микролитров 2% (VN) водного раствора неионного детергента (Nonindet, Sigma, St. Louis) вместо раствора антитела (пункт 4, приведенный выше);
vi) для контролей спонтанного высвобождения (SR) в 3 дополнительные лунки на планшете, содержащем меченые клетки-мишени, вводят 50 микролитров среды для культуры клеток RPMI вместо раствора антитела (пункт 4, приведенный выше);
vii) 96-луночный планшет для микротитрования затем центрифугируют при 50×g в течение 1 минуты и инкубируют в течение 1 часа при 4°С;
viii) в каждую лунку добавляют 50 микролитров суспензии РВМС (пункт 1, приведенный выше) с получением соотношения эффектор: клетка-мишень 25:1, и планшеты помещают в инкубатор в атмосферу 5%-ного CO2 при 37°С на 4 часа;
ix) бесклеточный супернатант из каждой лунки собирают и проводят количественную оценку экспериментально высвобожденной радиоактивности (ER) с использованием гамма-счетчика;
х) процентную долю специфичного лизиса рассчитывают для каждой концентрации антитела согласно формуле (ER-MR)/(MR-SR) × 100, где ER представляет собой среднюю количественно измеренную радиоактивность (смотрите пункт 9, приведенный выше) для данной концентрации антитела, MR представляет собой среднюю количественно измеренную радиоактивность (смотрите пункт 9, приведенный выше) для контролей MR (смотрите пункт 5, приведенный выше), и SR представляет собой среднюю количественно измеренную радиоактивность (смотрите пункт 9, приведенный выше) для контролей SR (смотрите пункт 6, приведенный выше);
4) «повышенная ADCC» определяется либо как увеличение максимальной процентной доли специфичного лизиса, наблюдаемого в пределах протестированного выше интервала концентраций антитела, и/или снижение концентрации антитела, требующейся для достижения полумаксимальной процентной доли специфичного лизиса, наблюдаемого в пределах протестированного выше интервала концентраций антитела. Увеличение ADCC является относительным к ADCC, измеренной приведенным выше анализом, опосредованной таким же антителом, продуцированной тем же самым типом клеток-хозяев, с использованием таких же стандартных способов получения, очистки, приготовления в виде препарата и хранения, которые известны специалистам в данной области, но которые не были получены клетками-хозяевами, сконструированными для сверхэкспрессии GnTIII.
Указанная «повышенная ADCC» может быть получена гликоинженерией указанных антител, что означает усиление указанных природных клеточно-опосредованных эффекторных функций моноклональных антител посредством инженерии их олигосахаридного компонента, как описано в Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 и US 6602684.
Термин «цитотоксичность, зависимая от комплемента (CDC)» относится к лизису человеческих опухолевых клеток-мишеней антителом согласно изобретению в присутствии комплемента. CDC предпочтительно измеряют обработкой препарата клеток, экспрессирующих CD20, антителом против CD20 согласно изобретению в присутствии комплемента. CDC обнаруживается, если антитело в концентрации 100 нМ индуцирует лизис (смерть клеток) 20% или более опухолевых клеток через 4 часа. Анализ предпочтительно проводится с опухолевыми клетками, меченными 51Cr или Eu, и измерением высвобожденного 51Cr или Eu. Контроли включают инкубацию опухолевых клеток-мишеней с комплементом, но без антитела.
Антитело «ритуксимаб» (контрольное антитело; пример антитела против CD20 типа I) представляет собой генетически модифицированное химерное моноклональное антитело, содержащее человеческий константный домен гамма 1, направленное против человеческого антигена CD20. Ритуксимаб не является афукозилированным, имея количество фукозы приблизительно 85% или более от общего количества олигосахаридов (сахаров) на Asn297. Это химерное антитело содержит человеческие константные домены гамма 1 и идентифицируется наименованием «С2 В8» в US 5736137 (Andersen et al.), выданном 17 апреля 1998, закрепленном за IDEC Pharmaceuticals Corporation. Ритуксимаб одобрен для лечения пациентов с рецидивирующей или возвратной, низкой степени или фолликулярной, CD20-позитивной В-клеточной неходжкинской лимфомой. Исследования по механизму действия in vitro показали, что ритуксимаб демонстрирует цитотоксичность, зависимую от человеческого комплемента (CDC) (Reff, M.E., et. al., Blood 83 (1994) 435-445). Дополнительно, он демонстрирует значительную активность в анализах, в которых измеряется клеточная цитотоксичность, зависимая от антител (ADCC). Ритуксимаб не является афукозилированным.
Антитело Количество фукозы
Ритуксимаб (неафукозилированный) >85%
Афукозилированное гликомодифицированное гуманизированное B-Ly1 дикого типа (В-НН6-В-KV1) (неафукозилированное) >85%
Афукозилированное гликомодифицированное гуманизированное B-Ly1 (B-HH6-B-KV1 GE) 45-50%
Термин «гуманизированное антитело B-Ly1» относится к гуманизированному антителу B-Ly1, как раскрыто в WO 2005/044859 и WO 2007/031875, которое было получено из мышиного моноклонального антитела против CD20 B-Ly1 (вариабельная область мышиной тяжелой цепи (VH): SEQ ID NO: 1; вариабельная область мышиной легкой цепи (VL): SEQ ID NO: 2 - смотрите Poppema, S., and Visser, L., Biotest Bulletin 3(1987) 131-139) путем химеризации с человеческим константным доменом из IgG1 и последующей гуманизации (смотрите WO 2005/044859 и WO 2007/031875). Эти «гуманизированные антитела B-Ly1» подробно раскрыты в WO 2005/044859 и WO 2007/031875.
Предпочтительно «гуманизированное антитело B-Ly1» имеет вариабельную область тяжелой цепи (VH), выбранную из группы от SEQ ID NO: 3 до SEQ ID NO: 20 (от В-НН2 до В-НН9 и от B-HL8 до B-HL17 WO 2005/044859 и WO 2007/031875). Особенно предпочтительными являются SEQ ID NO: 3, 4, 7, 9, 11, 13 и 15 (В-НН2, ВНН-3, В-НН6, В-НН8, B-HL8, B-HL11 и B-HL13 WO 2005/044859 и WO 2007/031875). Предпочтительно «гуманизированное антитело B-Ly1» имеет вариабельную область легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 20 (B-KV1 WO 2005/044859 и WO 2007/031875). Предпочтительно «гуманизированное антитело B-Ly1» имеет вариабельную область тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 7 (В-НН6 WO 2005/044859 и WO 2007/031875) и вариабельную область легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 20 (B-KV1 WO 2005/044859 и WO 2007/031875). Кроме того, гуманизированное антитело В-Ly1 предпочтительно представляет собой антитело IgG1. Согласно изобретению такие афукозилированные гуманизированные антитела B-Ly1 являются гликомодифицированными (GE) в области Fc согласно методикам, описанным в WO 2005/044859, WO 2004/065540, WO 2007/031875, Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 и WO 99/154342. Афукозилированное гликомодифицированное гуманизированное B-Ly1 (B-HH6-B-KV1 GE) является предпочтительным в одном воплощении изобретения. Такие гликомодифицированные гуманизированные антитела B-Ly1 имеют измененную структуру гликозилирования в области Fc, предпочтительно имея пониженный уровень остатков фукозы. Предпочтительно количество фукозы составляет 60% или менее от общего количества олигосахаридов на Asn297 (в одном воплощении количество фукозы составляет от 40% до 60%, в другом воплощении количество фукозы составляет 50% или менее, и в еще одном другом воплощении количество фукозы составляет 30% или менее). Кроме того, олигосахариды области Fc предпочтительно являются разделенными надвое. Эти гликомодифицированные гуманизированные антитела B-Ly1 имеют повышенную ADCC.
Олигосахаридный компонент может значительно влиять на свойства, релевантные для эффективности терапевтического гликопротеина, включая физическую стабильность, устойчивость к протеазной атаке, взаимодействия с иммунной системой, фармакокинетику и специфическую биологическую активность. Такие свойства могут зависеть не только от присутствия или отсутствия, но также и от специфичных структур олигосахаридов. Можно сделать некоторые обобщения между структурой олигосахарида и функцией гликопротеина. Например, определенные структуры олигосахарида опосредуют быстрый клиренс гликопротеина из кровотока через взаимодействия со специфичными углеводсвязывающими белками, тогда как другие могут связываться антителами и запускать нежелательные иммунные реакции (Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981).
Клетки млекопитающих являются предпочтительными хозяевами для продукции терапевтических гликопротеинов из-за их способности гликозилировать белки в наиболее совместимой форме для применения у человека (Cumming, D.A., et al., Glycobiology 1 (1991) 115-30; Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981). Бактерии очень редко гликозилируют белки и, подобно другим типам обычных хозяев, таких как дрожжи, мицелиальные грибы, клетки насекомых и растений, дают структуры гликозилирования, ассоциированные с быстрым клиренсом из кровотока, нежелательными иммунными реакциями и, в некоторых конкретных случаях, с пониженной биологической активностью. Среди клеток млекопитающих на протяжении последних двух десятилетий чаще всего использовались клетки яичника китайского хомячка (СНО). Помимо обеспечения подходящих структур гликозилирования, данные клетки обеспечивают согласованную генерацию генетически стабильных высокопродуктивных клональных линий клеток. Их можно культивировать в простых биореакторах до высокой плотности с использованием бессывороточной среды, и они обеспечивают разработку безопасных и воспроизводимых биопроцессов. Другие обычно используемые клетки животных включают клетки почки новорожденного хомяка (ВНК), NSO- и 8Р2/0-мышиные миеломные клетки. В более недавнее время также была протестирована продукция от трансгенных животных (Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981).
Все антитела содержат углеводные структуры в консервативных положениях в константных областях тяжелой цепи, причем каждый изотип обладает отличным набором N-связанных углеводородных структур, которые неодинаково влияют на сборку, секрецию или функциональную активность белка (Wright, A., and Morrison, S.L, Trends Biotech. 15 (1997) 26-32). Структура присоединенного N-связанного углевода значительно варьирует, в зависимости от степени процессинга, и может включать сложные олигосахариды с высоким содержанием маннозы, многократно разветвленные, а также двухантенные сложные олигосахариды (Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32). Типично имеет место гетерогенный процессинг коровых олигосахаридных структур, присоедиенных к конкретному сайту гликозилирования, так что даже моноклональные антитела существуют в виде многочисленных гликоформ. Подобным образом, было показано, что встречаются большие различия в гликозилировании антител между линиями клеток, и для данной линии клеток, выращенной при разных условиях культуры, видны даже минорные различия (Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822).
Одним способом получения большого увеличения эффективности при сохранении простого способа получения и потенциальном избежании значительных нежелательных побочных эффектов является усиление природных клеточно-опосредованных эффекторных функций моноклональных антител путем конструирования их олигосахаридного компонента, как описано в Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 и US 6602684. Антитела типа IgG1, чаще всего используемые антитела в иммунотерапии рака, представляют собой гликопротеины, которые имеют консервативный сайт N-связанного гликозилирования на Asn297 в каждом домене СН2. Два сложных двухантенных олигосахарида, присоединенных к Asn297, скрыты между доменами СН2, формируя обширные контакты с полипептидным остовом, и их присутствие является существенным для того, чтобы антитело опосредовало эффекторные функции, такие как клеточную цитотоксичность, зависимую от антител (ADCC) (Lifely, M.R, et al, Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A, and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32).
Ранее было показано, что сверхэкспрессия в клетках яичника китайского хомячка (СНО) β(1,4)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы I11 ("GnTII17y"), гликозилтрансферазы, катализирующей образование разделенных надвое олигосахаридов, значительно увеличивает активность ADCC in vitro антинейробластомного химерного моноклонального антитела (chCE7), продуцируемого генетически модифицированными клетками СНО (Смотрите Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 и WO 99/154342, полное содержание которых включено сюда посредством ссылки). Антитело сПСЕ7 принадлежит к большому классу неконъюгированных моноклональных антител, которые имеют высокую аффинность и специфичность к опухолям, но имеют слишком низкую эффективность для того, чтобы быть клинически полезными при продукции в стандартных промышленных линиях клеток, не имеющих фермента GnTIII (Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180). В данном исследовании впервые показали, что большие увеличения активности ADCC могли быть получены конструированием клеток, продуцирующих антитела, для экспрессии GnTIII, что также приводило к увеличению доли ассоциированных с константной областью (Fc), разделенных надвое олигосахаридов, включая разделенные надвое нефукозилированные олигосахариды с уровнем выше, чем у обнаруженных во встречающихся в природе антителах.
Термин «рак» в том виде, как он здесь используется, включает лимфомы, лимфоцитарные лейкозы, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого (NSCL), рак легкого бронхиолоальвиолярных клеток, рак кости, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы и шеи, меланому кожи или внутриглазную меланому, рак матки, рак яичника, рак прямой кишки, рак анальной области, рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта, рак прямой и ободочной кишки, рак молочной железы, рак матки, карциному фаллопиевых труб, карциному эндометрия, карциному шейки матки, карциному вагины, карциному вульвы, болезнь Ходжкина, рак пищевода, рак тонкого кишечника, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак надпочечника, саркому мягкой ткани, рак уретры, рак пениса, рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, рак почки или мочеточника, почечно-клеточную карциному, карциному почечной лоханки, мезотелиому, гепатоклеточный рак, рак желчного пузыря, новообразования центральной нервной системы (ЦНС), опухоли оси позвоночника, глиому ствола мозга, мультиформную глиобластому, астроцитомы, шванномы, эпендимому, медуллобластомы, менингиомы, плоскоклеточные карциномы, аденому гипофиза, включая неподдающиеся лечению версии любого из приведенных выше раковых заболеваний или комбинацию одного или более чем одного из приведенных выше раковых заболеваний. Предпочтительно термин «раковое заболевание» относится к раковому заболеванию, при котором экспрессируется CD20.
Подразумевается, что термин «экспрессия антигена CD20» указывает на значительный уровень экспрессии антигена CD20 в клетке, предпочтительно на клеточной поверхности Т- или В-клетки, более предпочтительно В-клетки из опухоли или ракового заболевания соответственно, предпочтительно несолидной опухоли. Пациентов, имеющих «раковое заболевание, при котором экспрессируется CD20», можно определить стандартными анализами, известными в данной области. Например, экспрессию антигена CD20 измеряют с использованием иммуногистохимической (1НС) детекции, FACS (сортировка флуоресцентно активированных клеток) или посредством детекции на основе PCR (полимеразная цепная реакция) соответствующей мРНК.
Термин «раковое заболевание, при котором экспрессируется CD20» в том виде, как он здесь используется, относится ко всем раковым заболеваниям, при которых раковые клетки демонстрируют экспрессию антигена CD20. Предпочтительно термин «раковое заболевание, при котором экспрессируется CD20» в том виде, как он здесь используется, относится к лимфомам (предпочтительно В-клеточным неходжкинским лимфомам (NHL)) и лимфоцитарным лейкозам. Такие лимфомы и лимфоцитарные лейкозы включают, например, а) фолликулярные лимфомы, б) мелкоклеточные лимфомы с нерасщепленным ядром/лимфому Беркитта (включая эндемическую лимфому Беркитта, спорадическую лимфому Беркитта и лимфому, не являющуюся лимфомой Беркитта), в) лимфомы из клеток маргинальной зоны (включая экстранодальную В-клеточную лимфому из клеток маргинальной зоны (лимфомы лимфатической ткани, ассоциированные со слизистыми, MALT), нодальную В-клеточную лимфому из клеток маргинальной зоны и селезеночную лимфому из клеток маргинальной зоны), г) лимфому из клеток мантии (MCL), д) крупноклеточную лимфому (включая В-клеточную диффузную крупноклеточную лимфому (DLCL), диффузную смешанно-клеточную лимфому, иммунобластную лимфому, первичную медиастинальную В-клеточную лимфому, лимфангиому - легочную В-клеточную лимфому, е) лейкоз ворсистых клеток, ж) лимфоцитарную лимфому, макроглобулинемию Вальденстрема, з) острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL)/мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), В-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, и) новообразования плазматических клеток, миелому плазматических клеток, множественную миелому, плазмацитому, к) болезнь Ходжкина.
Более предпочтительно раковое заболевание, при котором экспрессируется CD20, представляет собой В-клеточную неходжкинскую лимфому (NHL). В особенности, раковое заболевание, при котором экспрессируется CD20, представляет собой лимфому из клеток мантии (MCL), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), В-клеточную диффузную крупноклеточную лимфому (DLCL), лимфому Беркитта, лейкоз ворсистых клеток, фолликулярную лимфому, множественную миелому, лимфому из клеток маргинальной зоны, посттрансплантационный лимфопролиферативный синдром (PTLD), лимфому, ассоциированную с ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), макроглобулинемию Вальденстрема или первичную лимфому ЦНС (центральной нервной системы).
Термин «способ лечения» или его эквиваленты, при применении, например, к раковому заболеванию, относится к процедуре или ходу действий, которые разработаны для уменьшения числа или устранения раковых клеток у пациента или для облегчения симптомов ракового заболевания. Термин «способ лечения» ракового заболевания или другого пролиферативного расстройства не обязательно означает то, что раковые клетки или другое расстройство на самом деле будут устранены, что число клеток или расстройство на самом деле будут уменьшены или что симптомы ракового заболевания или другого расстройства на самом деле будут облегчены. Часто способ лечения ракового заболевания будет проводиться даже при малой вероятности успеха, но который, как полагают, принимая во внимание медицинскую историю и оценочную выживаемость пациента, тем не менее, индуцирует в целом полезный ход действий.
Термины «совместное введение» или «осуществление совместного введения» относятся к введению указанного афукозилированного антитела против CD20 и указанного ингибитора mTOR в виде одного единичного препарата или в виде двух раздельных препаратов. Совместное введение может быть одновременным или последовательным в любом порядке, где предпочтительно имеется период времени, когда оба (или все) активные агенты одновременно проявляют их биологические активности. Указанное афукозилированное антитело против CD20 и указанный ингибитор mTOR вводятся совместно либо одновременно, либо последовательно (например, внутривенно (I.V.) через непрерывную инфузию (одну для антитела против CD20 и, в конечном счете, одну для указанного ингибитора mTOR). При совместном последовательном введении обоих терапевтических агентов, доза вводится либо на те же самые сутки в двух раздельных введениях, либо один из агентов вводится на сутки 1, и второй совместно вводится на сутки 2-7, предпочтительно на сутки 2-4. Таким образом, термин «последовательно» означает введение в пределах 7 суток после дозы первого компонента (антитела против CD20 или ингибитора mTOR), предпочтительно в пределах 4 суток после дозы первого компонента; а термин «одновременно» означает в то же самое время. Термины «совместное введение» в отношении поддерживающих доз указанного афукозилированного антитела против CD20 и указанного ингибитора mTOR означают то, что поддерживающие дозы могут вводиться совместно одновременно, если цикл лечения является подходящим для обоих лекарственных средств, например, каждую неделю. Либо указанный ингибитор mTOR, например, вводится каждые первые-третьи сутки, и указанное афукозилированное антитело вводится каждую неделю. Либо поддерживающие дозы вводятся совместно последовательно либо в пределах одних, либо в пределах нескольких суток.
Является самоочевидным, что антитела вводятся пациенту в «терапевтически эффективном количестве» (или просто «эффективном количестве»), которое представляет собой количество соответствующего соединения или комбинации, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ ткани, системы, животного или человека, которого добивается исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист.
Количество совместного введения указанного афукозилированного антитела против CD20 и указанного ингибитора mTOR, и время совместного введения будут зависеть от типа (вид, пол, возраст, масса и т.д.) и состояния пациента, которого лечат, и тяжести заболевания или состояния, которое лечат. Указанное афукозилированное антитело против CD20 и указанный ингибитор mTOR, подходящим образом, вводятся пациенту совместно в одно время или на протяжении серии обработок.
Если введение является внутривенным, исходное время инфузии для указанного афукозилированного антитела против CD20 или указанного ингибитора mTOR может быть более длительным, чем последующие периоды инфузии, например, приблизительно 90 минут для исходной инфузии и приблизительно 30 минут для последующих инфузии (если исходная инфузия хорошо переносится).
В зависимости от типа и тяжести заболевания, примерно от 1 мкг/кг до 50 мг/кг (например, 0,1-20 мг/кг) указанного афукозилированного антитела против CD20 и от 1 мкг/кг до 50 мг/кг (например, 0,1-20 мг/кг) указанного ингибитора mTOR представляет собой возможную исходную дозировку для совместного введения обоих лекарственных средств пациенту. В одном воплощении предпочтительная дозировка указанного афукозилированного антитела против CD20 (предпочтительно афукозилированного гуманизированного антитела B-Ly1) будет находиться в интервале от примерно 0,05 мг/кг до примерно 30 мг/кг. Таким образом, пациенту могут совместно вводиться одна или более чем одна доза примерно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг, 10 мг/кг или 30 мг/кг (или их любая комбинация). Предпочтительная дозировка указанного ингибитора mTOR будет находиться в интервале от 0,01 мг/кг до примерно 30 мг/кг, например, от 0,1 мг/кг до 10,0 мг/кг. В зависимости от типа (вид, пол, возраст, масса и т.д.) и состояния пациента и от типа афукозилированного антитела против CD20, дозировка и схема введения указанного афукозилированного антитела могут отличаться для указанного ингибитора mTOR. Например, указанное афукозилированное антитело против CD20 может вводиться, например, каждую одну-три недели, и указанный ингибитор mTOR может вводиться ежесуточно или каждые 2-10 суток. Также может вводиться исходная более высокая загрузочная доза, с последующей одной или более чем одной меньшей дозами.
Предпочтительно указанное гуманизированное антитело B-Ly1 вводится в дозировке от 800 до 1200 мг на сутки 1, 8, 15 6-недельного цикла дозировки и затем в дозировке от 800 до 1200 мг на сутки 1 вплоть до пяти 4-недельных циклов дозировки. В качестве альтернативы, предпочтительная дозировка указанного афукозилированного антитела против CD20 может составлять от 800 до 1200 мг (предпочтительно 1000 мг) на сутки 1 на протяжении вплоть до восьми 3-недельных циклов дозировки.
Предпочтительно указанный ингибитор mTOR вводится в дозировке от 25 мг в неделю до 175 мг в неделю, в зависимости от типа лимфомы. Например, указанный ингибитор mTOR вводится в лимфому из клеток мантии (MCL) в дозировке 75 мг в неделю. Для рецидивирующей или неподдающейся лечению MCL возможна дополнительная дозировка один раз в неделю 175 мг в течение 3 недель с последующими 75 мг один раз в неделю (175/75). Для фолликулярной NDL, DLBCL и CLL, например, вводится дозировка 25 мг в неделю.
В предпочтительном воплощении лекарственное средство является полезным для предупреждения или уменьшения метастазов или дальнейшего распространения у пациента, страдающего от ракового заболевания, предпочтительно ракового заболевания, при котором экспрессируется CD20. Лекарственное средство является полезным для увеличения продолжительности выживания такого пациента, улучшения хода свободного выживания такого пациента, увеличения продолжительности ответа, приводящего к статистически значимому и клинически значимому улучшению у пациента, которого лечат, при измерении по продолжительности выживания, ходу свободного выживания, частоте ответа или продолжительности ответа. В предпочтительном воплощении лекарственное средство является полезным для увеличения частоты ответа в группе пациентов.
В контексте данного изобретения в комбинированном лечении рака афукозилированным антителом против CD20 и указанным ингибитором mTOR можно использовать другие дополнительные цитотоксические, химиотерапевтические или противораковые агенты или соединения, которые усиливают эффекты таких агентов (например, цитокины). Такие молекулы подходящим образом присутствуют в комбинации в количествах, которые являются эффективными для намеченной цели. Предпочтительно комбинированное лечение указанным афукозилированным антителом против CD20 и указанным ингибитором mTOR используется без таких дополнительных цитотоксических, химиотерапевтических или противораковых агентов или соединений, которые усиливают эффекты таких агентов.
Такие агенты включают, например: алкилирующие агенты или агенты с алкилирующим действием, такие как циклофосфамид (СТХ; например cytoxan®), хлорамбуцил (CHL; например leukeran®), цисплатин (CisP; например platinol®), бусульфан (например, myleran®), мелфалан, кармустин (BCNU), стрептозотоцин, триэтиленмеламин (ТЕМ), митомицин С и тому подобное; антиметаболиты, такие как метотрексат (МТХ), этопозид (VP16; например vepesid®), 6-меркаптопурин (6МР), 6-тиогуанин (6TG), цитарабин (Ara-С), 5-фторурацил (5-FU), капецитабин (например, Xeloda®), дакарбазин (DTIC) и тому подобное; антибиотики, такие как актиномицин Д, доксорубицин (DXR; например adriamycin®), даунорубицин (дауномицин), блеомицин, митрамицин и тому подобное; алкалоиды, такие как алкалоиды барвинка, такие как винкристин (VCR), винбластин и тому подобное; и другие противоопухолевые агенты, такие как паклитаксел (например, taxol®) и производные паклитаксела, цитостатические агенты, глюкокортикоиды, такие как дексаметазон (DEX; например decadron®), и кортикостероиды, такие как преднизон, ингибиторы нуклеозидных ферментов, такие как гидроксимочевина, ферменты, уменьшающие уровень аминокислот, такие как аспарагиназа, лейковорин и другие производные фолиевой кислоты, и аналогичные разнообразные противоопухолевые агенты. В качестве дополнительных агентов также можно использовать следующие агенты: арнифостин (например, ethyol®), дактиномицин, мехлорэтамин (азотистый иприт), стрептозоцин, циклофосфамид, ломустин (CCNU), доксорубицин липо (например, doxil®), гемцитабин (например, gemzar®), даунорубицин липо (например, daunoxome®), прокарбазин, митомицин, доцетаксел (например, taxotere®), альдеслейкин, карбоплатин, оксалиплатин, кладрибин, камптотецин, СРТ 11 (иринотекан), 10-гидрокси-7-этил-камптотецин (SN38), флоксуридин, флударабин, ифосфамид, идарубицин, месна, интерферон бета, интерферон альфа, митоксантрон, топотекан, лейпролид, мегестрол, мелфалан, меркаптопурин, пликамицин, митотан, пегаспаргаза, пентостатин, пипоброман, пликамицин, тамоксифен, тенипозид, тестолактон, тиогуанин, тиотепа, урамустин, винорелбин, хлорамбуцил. Предпочтительно комбинированное лечение афукозилированным антителом против CD20 и указанным ингибитором mTOR используют без таких дополнительных агентов.
Применение описанных выше цитотоксических и противораковых агентов, а также антипролиферативных специфичных к мишени противораковых лекарственных средств, подобных ингибиторам протеинкиназ, в химиотерапевтических схемах обычно хорошо охарактеризовано в области терапии рака, и их применение здесь подпадает под те же самые соображения для мониторинга устойчивости и эффективности и для контролируемых путей введения и дозировок с некоторыми корректировками. Например, реальные дозировки цитотоксических агентов могут варьировать, в зависимости от ответа культивируемой клетки пациента, определенного посредством применения способов культуры тканей. Обычно дозировка будет пониженной по сравнению с количеством, используемым в отсутствии других дополнительных агентов.
Типичные дозировки эффективного цитотоксического агента могут находиться в интервалах, рекомендованных производителем, и, когда это показано ответами in vitro или ответами в животных моделях, могут быть снижены вплоть до примерно одного порядка концентрации или количества. Таким образом, реальная дозировка будет зависеть от решения лечащего врача, состояния пациента и эффективности терапевтического способа, на основе восприимчивости in vitro первичной культуры злокачественных клеток или образца ткани, культивируемой в культуре ткани, или ответов, наблюдаемых в подходящих животных моделях.
В контексте данного изобретения, помимо комбинированного лечения рака, при котором экспрессируется CD20, афукозилированным антителом против CD20 и указанным ингибитором mTOR, может осуществляться воздействие эффективным количеством ионизирующего излучения и/или может использоваться радиоактивный фармацевтический препарат. Источник радиации для пациента, которого лечат, может быть либо внешним, либо внутренним. Когда источник является внешним по отношению к пациенту, терапия известна как наружная лучевая терапия (EBRT). Когда источник радиации является внутренним по отношению к пациенту, лечение называется брахитерапией (ВТ). Радиоактивные атомы для применения в контексте данного изобретения можно выбрать из группы, включающей, но не ограничивающейся, радием, цезием-137, иридием-192, америцием-241, золотом-198, кобальтом-57, медью-67, технецием-99, йодом-123, йодом-131 и индием-111. Также возможно метить антитело такими радиоактивными изотопами. Предпочтительно комбинированное лечение афукозилированным антителом против CD20 и указанным ингибитором mTOR используют без такого ионизирующего излучения.
Лучевая терапия является стандартным лечением для контролируемых нерезектабельных или неоперабельных опухолей и/или метастазов опухолей. Улучшенные результаты наблюдали при объединении лучевой терапии с химиотерапией. Лучевая терапия основана на том принципе, что высокая доза радиации, доставленная в область-мишень, будет приводить к гибели репродуктивных клеток как в опухоли, так и в нормальных тканях. Схема дозировки радиации обычно определяется в показателях поглощенной дозы радиации (Gy), времени и фракционирования, и должна тщательно определяться онкологом. Количество радиации, которое получает пациент, будет зависеть от разных соображений, но двумя самыми важными являются расположение опухоли относительно других критических структур или органов организма и степени, до которой распространилась опухоль. Типичным ходом лечения для пациента, подвергающегося лучевой терапии, будет схема лечения в течение 1-6-недельного периода, причем общая доза от 10 до 80 Gy вводится пациенту одиночными суточными долями примерно от 1,8 до 2,0 Gy 5 суток в неделю. В предпочтительном воплощении данного изобретения имеется синергия при лечении опухолей у пациентов, являющихся людьми, комбинированным лечением по изобретению и радиацией. Другими словами, ингибирование роста опухоли посредством агентов, содержащих комбинацию по изобретению, усиливается при объединении с радиацией, возможно с дополнительными химиотерапевтическими или противораковыми агентами. Параметры адъювантных лучевых терапий, например, содержатся в WO 99/60023.
Афукозилированные антитела против CD20 вводятся пациенту согласно известным способам путем внутривенного введения в виде болюса или непрерывной инфузией в течение периода времени, внутримышечным, внутрибрюшинным, интрацереброспинальным, подкожным, внутрисуставным, интрасиновиальным или интратекальным путями. Предпочтительным является внутривенное или подкожное введение антител.
Ингибитор mTOR вводится пациенту согласно известным способам, например путем внутривенного введения в виде болюса или непрерывной инфузией в течение периода времени, внутримышечным, внутрибрюшинным, интрацереброспинальным, подкожным, внутрисуставным, интрасиновиальным, интратекальным или пероральным путями. Предпочтительным является внутривенное или внутрибрюшинное введение.
Подразумевается, что термин «фармацевтически приемлемый носитель» в том виде, как он здесь используется, включает все и любые вещества, совместимые с фармацевтическим введением, включающие растворители, диспергирующие среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотоничные и задерживающие поглощение агенты и другие вещества и соединения, совместимые с фармацевтическим введением. За исключением того, что любые традиционные среды или агент являются несовместимыми с активным соединением, их применение рассматривается в композициях по изобретению. В композиции также могут быть включены вспомогательные активные соединения.
Фармацевтические композиции
Фармацевтические композиции могут быть получены обработкой антитела против CD20 и/или ингибитора mTOR согласно данному изобретению фармацевтически приемлемыми неорганическими или органическими носителями. Можно использовать лактозу, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновые кислоты или их соли и тому подобное, например, в виде таких носителей для таблеток, покрытых таблеток, драже и твердых желатиновых капсул. Подходящими носителями для мягких желатиновых капсул являются, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и тому подобное. В зависимости от природы активного вещества, однако, обычно не требуется носителей в случае мягких желатиновых капсул. Подходящие носители для получения растворов и сиропов представляют собой, например, воду, полиолы, глицерин, растительное масло и тому подобное. Подходящие носители для суппозиториев представляют собой, например, природные или отвержденные масла, воска, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и тому подобное.
Фармацевтические композиции, кроме того, могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, увлажнители, эмульгаторы, подсластители, красители, корригенты, соли для варьирования осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты. Кроме того, они также могут содержать другие терапевтически значимые вещества.
Одно воплощение изобретения представляет собой композицию, содержащую и указанное афукозилированное антитело против CD20 с количеством фукозы 60% или менее (предпочтительно указанное афукозилированное гуманизированное антитело B-Ly1) и указанный ингибитор mTOR для применения при лечении ракового заболевания, в частности ракового заболевания, при котором экспрессируется CD20.
Указанная фармацевтическая композиция может дополнительно содержать один или более чем один фармацевтически приемлемый носитель.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предложена фармацевтическая композиция, в частности, для применения при раковом заболевании, содержащая (1) эффективное первое количество афукозилированного антитела против CD20 с количеством фукозы 60% или менее (предпочтительно афукозилированное гуманизированное антитело B-Ly1) и (2) эффективное второе количество ингибитора mTOR. Такая композиция возможно содержит фармацевтически приемлемые носители и/или эксципиенты.
Фармацевтические композиции одного афукозилированного антитела против CD20, используемые согласно настоящему изобретению, получают для хранения смешиванием антитела, имеющего желательную степень чистоты, с возможными фармацевтически приемлемыми носителями, эксципиентами или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)) в форме лиофилизированных препаратов или водных растворов. Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и включают такие буферы как фосфатный, цитратный и на основе других органических кислот; антиоксиданты, включающие аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензил аммония хлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид; бензэтония хлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (меньше чем примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включающие глюкозу, маннозу или декстрины; хелаторы, такие как EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота); сахара, такие как сахароза, манит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок) и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEENTM, PLURONICSTM или полиэтиленгликоль (PEG).
Фармацевтические композиции ингибитора mTOR могут быть аналогичными композициям, описанным выше, для афукозилированного антитела против CD20.
В одном другом воплощении изобретения фармацевтические композиции согласно изобретению предпочтительно представляют собой два раздельных препарата для указанного афукозилированного антитела против CD20 и указанного ингибитора mTOR.
Активные ингредиенты также могут быть захвачены в микрокапсулах, полученных, например, методиками коацервации или межтиповой полимеризации, например, в микрокапсулах из гидроксиметилцеллюлозы или желатиновых микрокапсулах и поли- (метилметакрилатных) микрокапсулах соответственно, в коллоидных системах доставки лекарственного средства (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсиях. Такие методики раскрыты в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).
Можно получить препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащих антитело, которые находятся в форме формованных изделий, например пленок или микрокапсул. Примеры матриц для замедленного высвобождения включают полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтил-метакрилат) или поливиниловый спирт), полилактиды (US 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма-этил-L-лутамата, недеградирующий этиленвинилацетат, деградирующие сополимеры молочной кислоты-гликолевой кислоты, такие как LUPRON DEPOTTM (инъецируемые микросферы, состоящие из сополимера молочной кислоты-гликолевой кислоты и лейпролида ацетата) и поли-D-(-)-3-гидроксимасляная кислота.
Препараты, подлежащие применению для введения in vivo, должны быть стерильными. Это легко достигается фильтрованием через мембраны для стерилизующей фильтрации.
Согласно настоящему изобретению дополнительно предложен способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, (1) эффективного первого количества афукозилированного антитела против CD20 с количеством фукозы 60% или менее (предпочтительно афукозилированного гуманизированного антитела B-Ly1) и (2) эффективного второго количества ингибитора mTOR.
Предпочтительно количество фукозы составляет от 40% до 60%.
Предпочтительно указанное раковое заболевание представляет собой раковое заболевание, при котором экспрессируется CD20.
Предпочтительно указанное раковое заболевание, при котором экспрессируется CD20, представляет собой В-клеточную неходжкинскую лимфому (NHL).
Предпочтительно указанное афукозилированное антитело против CD20 представляет собой антитело против CD20 типа II.
Предпочтительно указанное антитело представляет собой гуманизированное антитело B-Ly1.
Предпочтительно ингибитор mTOR представляет собой рапамицин или аналог или производное рапамицина. Предпочтительно ингибитор mTOR представляет собой темсиролимус или эверолимус.
Предпочтительно указанное гуманизированное антитело B-Ly1 вводится в дозировке от 800 до 1200 мг на сутки 1, 8, 15 6-недельного цикла дозировки и затем в дозировке от 800 до 1200 мг на сутки 1 вплоть до пяти 4-недельных циклов дозировки. Предпочтительно указанный ингибитор mTOR вводится в дозировке от 25 мг в неделю до 175 мг в неделю, в зависимости от типа лимфомного заболевания. Например, указанный ингибитор mTOR вводится при лимфоме из клеток мантии (MCL) в дозировке 75 мг в неделю. (Для рецидивирующей или неизлечимой MCL возможна дополнительная дозировка 175 мг один раз в неделю в течение 3 недель с последующими 75 мг один раз в неделю (175/75). Для фолликулярной NHL, DLBCL и CLL, например, вводится дозировка 25 мг в неделю.
Термин «пациент» в том виде, как он здесь используется, предпочтительно относится к человеку, нуждающемуся в лечении афукозилированным антителом против CD20 (например, пациент, страдающий от ракового заболевания, при котором экспрессируется CD20) для любой цели, и более предпочтительно к человеку, нуждающемуся в таком лечении для лечения рака или предракового состояния или поражения. Однако термин «пациент» также может относится к животным, не являющимся людьми, предпочтительно млекопитающим, таким как, среди прочих, собаки, кошки, лошади, коровы, свиньи, овцы и приматы, не являющиеся людьми.
Изобретение дополнительно включает афукозилированное антитело против CD20 с количеством фукозы 60% или менее для лечения рака в комбинации с ингибитором mTOR.
Изобретение дополнительно включает афукозилированное антитело против CD20 с количеством фукозы 60% или менее и ингибитор mTOR для применения в лечении рака.
Предпочтительно указанное афукозилированное антитело против CD20 представляет собой гуманизированное антитело B-Ly1.
Предпочтительно ингибитор mTOR представляет собой рапамицин или аналог или производное рапамицина. Предпочтительно ингибитор mTOR представляет собой темсиролимус или эверолимус.
Предпочтительно раковое заболевание представляет собой раковое заболевание, при котором экспрессируется CD20, более предпочтительно В-клеточную неходжкинскую лимфому (NHL).
Следующие примеры и графические материалы приведены для того, чтобы помочь в понимании настоящего изобретения, истинный объем которого изложен в приложенной формуле изобретения. Понятно, что в изложенных методиках можно сделать модификации без отступления от сущности изобретения.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
SEQ ID NO: 1 аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) мышиного моноклонального антитела против CD20 B-Ly1.
SEQ ID NO: 2 аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи (VL) мышиного моноклонального антитела против CD20 B-Ly1.
SEQ ID NO: 3-19 аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) гуманизированных антител B-Ly1 (от В-НН2 до В-НН9, B-HL8 и от B-HL10 до B-HL17).
SEQ ID NO: 20 аминокислотные последовательности вариабельной области легкой цепи (VL) гуманизированного антитела B-Ly1 B-KV1.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МЕТОДИКИ
Противоопухолевая активность комбинированного лечения антителом против CD20 типа II (B-HH6-B-KV1 GE) с темсиролимусом (Torisel®)
Тестируемые агенты
Антитело против CD20 типа II B-HH6-B-KV1 GE (=гуманизированное B-Ly1, гликомодифицированное B-HH6-B-KV1=GA101, смотрите WO 2005/044859 и WO 2007/031875) было предоставлено GlycArt, Schilieren, Швейцария. Буфер для антитела включал гистидин, трегалозу и полисорбат 20. Раствор антитела подходящим образом разводили в PBS (фосфатно-солевой буферный раствор) из маточного раствора перед инъекциями. Темсиролимус (Torisel®, 25 мг/мл, Wyeth Pharmaceuticals) был поставлен Oncodesign и хранился при +4°С с защитой от света согласно инструкциям поставщика.
Линии клеток и условия культивирования
Человеческие лимфомные клетки SU-DHL-4 (DSMZ NO.: ACC 495) выращивали в виде суспензии при 37°С в увлажненной атмосфере (5% СО2, 95% воздуха). Культуральная среда представляла собой RPMI 1640, содержащую 2 мМ L-глутамина (Ref BE12-702F, N° партии 8МВ0056, Lonza, Verviers, Бельгия) и дополненную 10% фетальной коровьей сывороткой (Ref 3302, N° партии Р282005, Lonza). Клетки подсчитывали в гемоцитометре, и их жизнеспособность оценивали по исключению 0,25% трипанового синего.
Животные
Самок 5-6 недельных бежевых мышей СВ17 SCID, весящих 16-20 г, получали у Charles River (L'Arbresle, Франция). Перед обработкой за животными наблюдали в течение 7 суток в боксах для ухода за животными, не содержащих специфичных патогенов (SPF).
Подразделение по уходу за животными авторизовано Французским министерством сельского хозяйства и исследований (соглашение №А21231011). Эксперименты с животными проводили согласно этическим правилам экспериментирования с животными (1) и английским правилам по обеспечению жизни животных при экспериментальной неоплазии (2).
S.C. (подкожная) индукция опухолей SU-DHL-4 у бежевых мышей SCID
Десять миллионов (107) опухолевых клеток SU-DHL-4 в 100 мкл PBS с матригелем (50:50, BD Biosciences, Франция) инъецировали подкожно (S.C.) в правый бок 52 самок бежевых мышей SCID.
Мониторинг
Всеми данными исследования, включая измерения массы тела животного, объем опухоли, клинические записи, записи смертности и управление обработкой лекарственным средством, управляли с использованием программы Vivo Manager® (Biosystems, Дижон, Франция).
Для анестезии животных перед S.C. инокуляцией опухолевых клеток, I.V. инъекцией соединений и умерщвлением использовали изофлуран форен (Minerve, Bondoufle, Франция). Каждые сутки записывали смертность, клинические признаки и поведение. Массы тела животных и объемы опухолей отслеживали и записывали дважды в неделю.
Обработка животных
При достижении опухолями среднего объема 173±95 мм3, 40 из 52 голых мышей, имеющих опухоль, распределяли в 4 группы по 10 мышей. Выбранная схема обработки была следующей:
- Мыши из группы 1 получали один раз в неделю I.V. болюсную инъекцию носителя в течение 4 следующих друг за другом недель (Q7D×4).
- Мыши из группы 2 получали один раз в неделю I.V. болюсную инъекцию антитела против CD20 GA101 (B-HH6-B-KV1 GE) в дозировке 3 мг/кг/инъекцию в течение 4 следующих друг за другом недель (Q7D×4).
- Мыши из группы 3 получали один раз в сутки I.P. инъекцию Torisel® в дозировке 3 мг/кг/инъекцию с 3-суточным интервалом между каждой дозировкой и всего 10 инъекций (Q3D×10).
- Мыши из группы 4 получали один раз в неделю I.V. болюсную инъекцию антитела против CD20 GA101 (B-HH6-B-KV1 GE) в дозировке 3 мг/кг/инъекцию в течение 4 следующих друг за другом недель (Q7D×4) в комбинации с одной ежесуточной I.P. инъекцией Torisel® в дозировке 3 мг/кг/инъекцию с 3-суточным интервалом между каждой дозировкой и всего 10 инъекций (Q3D×10).
Исследование по ингибированию роста опухолей in vivo
Исследовали противоопухолевую эффективность антитела против CD20 GA101 (B-HH6-B-KV1 GE), одного и в комбинации с Torisel®. Torisel®, инъецированный в качестве единственного агента, использовали в качестве контрольного соединения. По сравнению с опухолями из животных, обработанных носителем, рост опухолей SU-DHL-4 частично задерживался у мышей, обработанных 3 мг/кг одного антитела против CD20 GA101 (B-HH6-B-KV1 GE) или Torisel®. Объединенная обработка антителом против CD20 GA101 (B-HH6-B-KV1 GE) плюс Torisel® улучшала противоопухолевую активность in vivo по сравнению с любым из двух агентов поодиночке. Для комбинации значение задержки роста опухоли было выше, чем значение для соответствующих доз одного антитела против CD20 GA101 (B-HH6-B-KV1 GE) или Torisel®. Рост опухолей был согласованно более низким в группе, подвергавшейся комбинированной обработке, чем в группах, обработанных одним агентом.
На сутки 46 после инъекции опухолевых клеток значения Т/С (%) обработанных групп по сравнению с группой, обработанной носителем, составляли 51, 60 и 35 для антитела против CD20 GA101 (B-HH6-B-KV1 GE), Torisel® и комбинации обоих соответственно.
Результаты по развитию объема опухоли на протяжении терапии показаны на Фиг.1.

Claims (2)

1. Применение афукозилированного антитела против CD20 с количеством фукозы от 40% до 60% для изготовления лекарственного средства для лечения рака в комбинации с ингибитором mTOR, где указанное антитело представляет собой гуманизированное антитело В-Ly1, характеризующееся тем, что содержит аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 7 (В-НН6) и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 20 (B-KV1), где указанный рак представляет собой В-клеточную неходжкинскую лимфому (NHL), при которой экспрессируется CD20, и где ингибитор mTOR представляет собой темсиролимус или эверолимус.
2. Применение по п. 1, характеризующееся тем, что вводится один или более чем один другой дополнительный цитотоксический, химиотерапевтический или противораковый агент или соединение, или ионизирующая радиация, которые усиливают эффекты таких агентов.
RU2012147340/10A 2010-04-27 2011-04-21 КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ АФУКОЗИЛИРОВАННЫМ АНТИТЕЛОМ CD20 И ИНГИБИТОРОМ mTOR RU2585489C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP10161181 2010-04-27
EP10161181.2 2010-04-27
PCT/EP2011/056461 WO2011134899A1 (en) 2010-04-27 2011-04-21 Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with a mtor inhibitor

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012147340A RU2012147340A (ru) 2014-06-10
RU2585489C2 true RU2585489C2 (ru) 2016-05-27

Family

ID=42289417

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012147340/10A RU2585489C2 (ru) 2010-04-27 2011-04-21 КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ АФУКОЗИЛИРОВАННЫМ АНТИТЕЛОМ CD20 И ИНГИБИТОРОМ mTOR

Country Status (10)

Country Link
US (3) US20130280243A1 (ru)
EP (1) EP2563391B1 (ru)
JP (2) JP6042801B2 (ru)
KR (1) KR101620661B1 (ru)
CN (1) CN102844049B (ru)
BR (1) BR112012026707A2 (ru)
CA (1) CA2795544A1 (ru)
MX (1) MX342590B (ru)
RU (1) RU2585489C2 (ru)
WO (1) WO2011134899A1 (ru)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130028895A1 (en) * 2011-07-27 2013-01-31 Gerald Wulf Exosome inhibiting agents and uses thereof
US20130302274A1 (en) * 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
WO2013088304A1 (en) * 2011-12-16 2013-06-20 Pfizer Inc. Combination of inotuzumab ozogamicin and torisel for the treatment of cancer
PL2992015T3 (pl) * 2013-05-02 2019-01-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Leczenie skojarzone niefukozylowanym przeciwciałem anty-CD20 z koniugatem przeciwciało anty-CD22-lek
CA2943609A1 (en) 2014-03-27 2015-10-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Metabolically-activated drug conjugates to overcome resistance in cancer therapy
US11357851B2 (en) * 2015-11-11 2022-06-14 Novartis Ag Uses of myostatin antagonists, combinations containing them and uses thereof
US20180206726A1 (en) 2016-12-07 2018-07-26 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
WO2018183929A1 (en) 2017-03-30 2018-10-04 Progenity Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immune modulatory agent released using an ingestible device
WO2019246312A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunomodulator
WO2019246317A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease or condition in a tissue originating from the endoderm
US20220249814A1 (en) 2018-11-19 2022-08-11 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000027428A1 (en) * 1998-11-09 2000-05-18 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of hematologic malignancies associated with circulating tumor cells using chimeric anti-cd20 antibody
WO2005044859A2 (en) * 2003-11-05 2005-05-19 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
WO2008121876A2 (en) * 2007-03-28 2008-10-09 Biogen Idec Inc. Non-fucosylated antibodies

Family Cites Families (88)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5023264A (en) 1990-07-16 1991-06-11 American Home Products Corporation Rapamycin oximes
US5120726A (en) 1991-03-08 1992-06-09 American Home Products Corporation Rapamycin hydrazones
US5023263A (en) 1990-08-09 1991-06-11 American Home Products Corporation 42-oxorapamycin
US5023262A (en) 1990-08-14 1991-06-11 American Home Products Corporation Hydrogenated rapamycin derivatives
US5378696A (en) 1990-09-19 1995-01-03 American Home Products Corporation Rapamycin esters
US5358944A (en) 1990-09-19 1994-10-25 American Home Products Corporation Rapamycin esters for treating transplantation rejection
US5130307A (en) 1990-09-28 1992-07-14 American Home Products Corporation Aminoesters of rapamycin
US5221670A (en) 1990-09-19 1993-06-22 American Home Products Corporation Rapamycin esters
US5233036A (en) 1990-10-16 1993-08-03 American Home Products Corporation Rapamycin alkoxyesters
US5120842A (en) 1991-04-01 1992-06-09 American Home Products Corporation Silyl ethers of rapamycin
US5100883A (en) 1991-04-08 1992-03-31 American Home Products Corporation Fluorinated esters of rapamycin
US5194447A (en) 1992-02-18 1993-03-16 American Home Products Corporation Sulfonylcarbamates of rapamycin
US5118678A (en) 1991-04-17 1992-06-02 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5138051A (en) 1991-08-07 1992-08-11 American Home Products Corporation Rapamycin analogs as immunosuppressants and antifungals
US5118677A (en) 1991-05-20 1992-06-02 American Home Products Corporation Amide esters of rapamycin
US5120725A (en) 1991-05-29 1992-06-09 American Home Products Corporation Bicyclic rapamycins
US5120727A (en) 1991-05-29 1992-06-09 American Home Products Corporation Rapamycin dimers
US5169851A (en) 1991-08-07 1992-12-08 American Home Products Corporation Rapamycin analog as immunosuppressants and antifungals
US5202332A (en) 1991-08-07 1993-04-13 American Home Products Corporation Rapamycin analog as immunosuppressant
US5162333A (en) 1991-09-11 1992-11-10 American Home Products Corporation Aminodiesters of rapamycin
US5151413A (en) 1991-11-06 1992-09-29 American Home Products Corporation Rapamycin acetals as immunosuppressant and antifungal agents
US5164399A (en) 1991-11-18 1992-11-17 American Home Products Corporation Rapamycin pyrazoles
US5221740A (en) 1992-01-16 1993-06-22 American Home Products Corporation Oxepane isomers of rapamycin useful as immunosuppressive agents
US5262424A (en) 1992-02-18 1993-11-16 American Home Products Corporation Composition of sulfonylcarbamates of rapamycin and method of treating diseases requiring immunosuppression therewith
US5260299A (en) 1992-03-05 1993-11-09 American Home Products Corporation Rapamycin 42-sulfonates and 42-(N-Carboalkoxy)Sulfamates Useful as Immunosuppressive Agents
US5177203A (en) 1992-03-05 1993-01-05 American Home Products Corporation Rapamycin 42-sulfonates and 42-(N-carboalkoxy) sulfamates useful as immunosuppressive agents
GB9221220D0 (en) 1992-10-09 1992-11-25 Sandoz Ag Organic componds
US5302584A (en) 1992-10-13 1994-04-12 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5480989A (en) 1992-10-13 1996-01-02 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5411967A (en) 1992-10-13 1995-05-02 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5489680A (en) 1992-10-13 1996-02-06 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5480988A (en) 1992-10-13 1996-01-02 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5434260A (en) 1992-10-13 1995-07-18 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5262423A (en) 1992-10-29 1993-11-16 American Home Products Corporation Rapamycin arylcarbonyl and alkoxycarbonyl carbamates as immunosuppressive and antifungal agents
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5260300A (en) 1992-11-19 1993-11-09 American Home Products Corporation Rapamycin carbonate esters as immuno-suppressant agents
US5391730A (en) 1993-10-08 1995-02-21 American Home Products Corporation Phosphorylcarbamates of rapamycin and oxime derivatives thereof
US5373014A (en) 1993-10-08 1994-12-13 American Home Products Corporation Rapamycin oximes
US5378836A (en) 1993-10-08 1995-01-03 American Home Products Corporation Rapamycin oximes and hydrazones
US5385909A (en) 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Heterocyclic esters of rapamycin
US5385910A (en) 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Gem-distributed esters of rapamycin
US5385908A (en) 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Hindered esters of rapamycin
SG64372A1 (en) 1993-12-17 1999-04-27 Novartis Ag Rapamycin derivatives
US5389639A (en) 1993-12-29 1995-02-14 American Home Products Company Amino alkanoic esters of rapamycin
US5504291A (en) 1994-02-14 1996-04-02 Square D Company Contact blade assembly for a circuit breaker
US5525610A (en) 1994-03-31 1996-06-11 American Home Products Corporation 42-Epi-rapamycin and pharmaceutical compositions thereof
US5362718A (en) 1994-04-18 1994-11-08 American Home Products Corporation Rapamycin hydroxyesters
US5463048A (en) 1994-06-14 1995-10-31 American Home Products Corporation Rapamycin amidino carbamates
US5491231A (en) 1994-11-28 1996-02-13 American Home Products Corporation Hindered N-oxide esters of rapamycin
US5563145A (en) 1994-12-07 1996-10-08 American Home Products Corporation Rapamycin 42-oximes and hydroxylamines
WO1996041807A1 (en) 1995-06-09 1996-12-27 Novartis Ag Rapamycin derivatives
BE1009856A5 (fr) 1995-07-14 1997-10-07 Sandoz Sa Composition pharmaceutique sous la forme d'une dispersion solide comprenant un macrolide et un vehicule.
US5780462A (en) 1995-12-27 1998-07-14 American Home Products Corporation Water soluble rapamycin esters
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
AU735648B2 (en) 1996-07-12 2001-07-12 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Materials and method for treating or preventing pathogenic fungal infection
US5922730A (en) 1996-09-09 1999-07-13 American Home Products Corporation Alkylated rapamycin derivatives
US6015815A (en) 1997-09-26 2000-01-18 Abbott Laboratories Tetrazole-containing rapamycin analogs with shortened half-lives
TW557297B (en) 1997-09-26 2003-10-11 Abbott Lab Rapamycin analogs having immunomodulatory activity, and pharmaceutical compositions containing same
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
CA2332331A1 (en) 1998-05-15 1999-11-25 Francisco Robert Treatment of human tumors with radiation and inhibitors of growth factor receptor tyrosine kinases
US6015809A (en) 1998-08-17 2000-01-18 American Home Products Corporation Photocyclized rapamycin
PT1176195E (pt) 1999-04-09 2013-07-18 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Processo para controlar a actividade de uma molécula funcional sob o ponto de vista imunológico
AU783158B2 (en) 1999-08-24 2005-09-29 Ariad Pharmaceuticals, Inc. 28-epirapalogs
FR2807767B1 (fr) 2000-04-12 2005-01-14 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps monoclonaux anti-d
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20060094674A1 (en) 2002-07-05 2006-05-04 Neel Benjamin G Combination of mtor inhibitor and a tyrosine kinase inhibitor for the treatment of neoplasms
KR20090088973A (ko) 2002-10-17 2009-08-20 젠맵 에이/에스 Cd20에 대한 인간 모노클로날 항체
SI2289936T1 (sl) 2002-12-16 2017-10-30 Genentech, Inc. Imunoglobulinske variante in njihove uporabe
EP2264151B1 (en) 2003-01-22 2016-04-20 Roche Glycart AG Fusion constructs and use of same to produce antibodies with increased FC receptor binding affinity and effector function
EP1648511A1 (en) 2003-07-29 2006-04-26 Morphotek, Inc. Antibodies and methods for generating genetically altered antibodies with enhanced effector function
JP2007503206A (ja) 2003-08-22 2007-02-22 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 変更されたエフェクター機能を有する改良された抗体およびその抗体を産生する方法
EP1663306A2 (en) 2003-09-05 2006-06-07 Genentech, Inc. Antibodies with altered effector functions
US7850962B2 (en) 2004-04-20 2010-12-14 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against CD20
CA2587766A1 (en) 2004-11-10 2007-03-01 Macrogenics, Inc. Engineering fc antibody regions to confer effector function
US8008443B2 (en) 2005-04-26 2011-08-30 Medimmune, Llc Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
US20090215639A1 (en) 2005-04-26 2009-08-27 Bioren, Inc. Method of Producing Human IgG Antibodies with Enhanced Effector Functions
CA2619298C (en) 2005-08-26 2017-07-04 Glycart Biotechnology Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity
US20090060921A1 (en) * 2006-01-17 2009-03-05 Biolex Therapeutics, Inc. Glycan-optimized anti-cd20 antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
AU2008295140A1 (en) * 2007-09-05 2009-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with type I and type II anti-CD20 antibodies
WO2009043038A1 (en) * 2007-09-27 2009-04-02 Norseman Plastics Ltd. Bottle crate
US20090110688A1 (en) * 2007-10-24 2009-04-30 Georg Fertig Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
AU2008342956A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-09 Genentech, Inc. Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000027428A1 (en) * 1998-11-09 2000-05-18 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of hematologic malignancies associated with circulating tumor cells using chimeric anti-cd20 antibody
WO2005044859A2 (en) * 2003-11-05 2005-05-19 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
WO2008121876A2 (en) * 2007-03-28 2008-10-09 Biogen Idec Inc. Non-fucosylated antibodies

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ПЕРЕВОДЧИКОВА Н.И., Таргетные препараты и их место в современной терапии опухолевых заболеваний, Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика, 2009, том 2, N4, с.367-373. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN102844049A (zh) 2012-12-26
JP2013525399A (ja) 2013-06-20
CN102844049B (zh) 2016-06-01
WO2011134899A1 (en) 2011-11-03
MX2012012118A (es) 2012-12-17
US20150071911A1 (en) 2015-03-12
RU2012147340A (ru) 2014-06-10
EP2563391A1 (en) 2013-03-06
EP2563391B1 (en) 2020-08-26
US20150265703A1 (en) 2015-09-24
KR20130004597A (ko) 2013-01-11
JP6042801B2 (ja) 2016-12-14
BR112012026707A2 (pt) 2017-03-14
KR101620661B1 (ko) 2016-05-12
US20130280243A1 (en) 2013-10-24
JP2015221799A (ja) 2015-12-10
CA2795544A1 (en) 2011-11-03
MX342590B (es) 2016-10-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2585489C2 (ru) КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ АФУКОЗИЛИРОВАННЫМ АНТИТЕЛОМ CD20 И ИНГИБИТОРОМ mTOR
US20200171153A1 (en) Combination therapy of an anti cd20 antibody with a btk inhibitor
EP2464382B1 (en) Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with bendamustine
US20150274834A1 (en) Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with fludarabine and/or mitoxantrone
RU2615459C2 (ru) Сочетанная терапия афукозилированным антителом к cd20 с антителом к vegf
RU2575820C2 (ru) Комбинированная терапия нефукозилированным анти-cd20 антителом с бендамустином

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190422