CN104411337A - 包含抗cd79b抗体的免疫偶联物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供包含与奈莫柔比星衍生物共价连接的抗CD79b抗体的免疫偶联物以及使用它们的方法。

Description

包含抗CD79B抗体的免疫偶联物
发明领域
本发明涉及包含抗CD79b抗体的免疫偶联物和使用它们的方法。
背景技术
CD79是由含有CD79a(Ig，mb-1)和CD79b(Ig，B29)的共价异二聚体组成的B细胞受体的信号传导组分。CD79a和CD79b各自含有细胞外免疫球蛋白(Ig)结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，后者为基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)结构域。CD79在B细胞上并且例如在非霍奇金氏(Non-Hodgkin’s)淋巴瘤细胞(NHL)上表达(Cabezudo等，Haematologica，84：413-418(1999)；D’Arena等，Am.J.Hematol.，64：275-281(2000)；Olejniczak等，Immunol.Invest.，35：93-114(2006))。CD79的表面表达都需要CD79a和CD79b以及sIg(Matsuuchi等Curr.Opin.Immunol.，13(3)：270-7))。CD79b在NHL上的平均表面表达与在正常B细胞上的相似，但具有更大范围(Matsuuchi等，Curr.Opin.Immunol.，13(3)：270-7(2001))。
本领域需要用于诊断和治疗CD79b相关的病状(诸如癌症)的靶向CD79b的药剂。本发明满足该需要并提供其他益处。
发明概述
本发明提供抗CD79b抗体和免疫偶联物以及使用它们的方法。
在一些实施方案中，提供包含结合与细胞毒性剂共价连接的CD79b的抗体的免疫偶联物。在一些实施方案中，细胞毒性剂为奈莫柔比星(nemorubicin)衍生物。在一些实施方案中，结合CD79b的抗体包含(i)含有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)含有SEQID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)含有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3。在一些实施方案中，抗体还包含(i)含有选自SEQ ID NO：18、24和35的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)含有SEQ IDNO：25的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)含有SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L1。
在一些实施方案中，抗体包含：a)与SEQ ID NO：11的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；或b)与SEQ ID NO：12的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列。在一些实施方案中，抗体包含具有选自SEQID NO：7、9、11和13的氨基酸序列的VH序列。在一些实施方案中，抗体包含具有SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VH序列。在一些实施方案中，抗体包含具有选自SEQ ID NO：8、10、12和14的氨基酸序列的VL序列。在一些实施方案中，抗体包含具有SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VL序列。在一些实施方案中，抗体为IgG1、IgG2a或IgG2b抗体。
在一些实施方案中，提供包含结合与细胞毒性剂共价连接的CD79b的抗体的免疫偶联物，其中所述抗体包含(a)具有SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VH序列和具有SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VL序列，并且其中所述细胞毒性剂为奈莫柔比星衍生物。
在一些实施方案中，免疫偶联物具有式Ab-(L-D)p，其中：(a)Ab为抗体；(b)L为连接子；(c)D为细胞毒性剂；并且(d)p的范围为1-8。
在一些实施方案中，D为奈莫柔比星衍生物。在一些此类实施方案中，D具有选自以下的结构：
在一些实施方案中，免疫偶联物包含可被蛋白酶裂解的连接子。在一些此类实施方案中，连接子包含val-cit二肽或Phe-homoLys二肽。在一些实施方案中，免疫偶联物包含酸不稳定的连接子。在一些此类实施方案中，连接子包含腙。
在一些实施方案中，免疫偶联物具有选自以下的式：
其中R1和R2独立选自H和C1-C6烷基。在一些实施方案中，p的范围为1-3。
在一些实施方案中，提供免疫偶联物，其中所述免疫偶联物具有选自以下的式：
其中Ab为包含以下的抗体(i)包含SEQ ID NO：21的所述氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：22的所述氨基酸序列的HVR-H2，(iii)包含SEQ ID NO：23的所述氨基酸序列的HVR-H3，(iv)包含SEQ ID NO：24的所述氨基酸序列的HVR-L1，(v)包含SEQ ID NO：25的所述氨基酸序列的HVR-L2，和(vi)包含SEQ ID NO：26的所述氨基酸序列的HVR-L3；并且其中p的范围为1至3。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：11的VH序列和SEQ ID NO：12的VL序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO：39的重链和SEQ IDNO：37的轻链。
在本文所述的任何实施方案中，抗体可以为单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体可以为人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体为结合CD79b的抗体片段。在一些实施方案中，抗体结合人CD79b。在一些此类实施方案中，人CD79b具有SEQ IDNO：40或SEQ ID NO：41的序列。
在一些实施方案中，提供药物制剂，其中所述制剂包含本文所述的免疫偶联物和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，药物制剂包含另外的治疗剂。
在一些实施方案中，提供治疗患有CD79b阳性癌症的个体的方法。在一些实施方案中，方法包括向所述个体施用有效量的本文所述的免疫偶联物。在一些实施方案中，CD79b阳性癌症选自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，该方法还包括向所述个体施用另外的治疗剂。在一些此类实施方案中，所述另外的治疗剂包含结合CD22的抗体。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是包含结合与细胞毒性剂共价连接的CD22的抗体的免疫偶联物。
在一些实施方案中，提供了治疗患有CD79b阳性癌症的个体的方法，其中所述CD79b阳性癌症对第一治疗剂有抗性。在一些实施方案中，所述方法包括向所述个体施用有效量的本文所述的免疫偶联物。在一些实施方案中，CD79b阳性癌症选自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，所述第一治疗剂包含结合抗原而非CD79b的第一抗体。在一些实施方案中，所述第一治疗剂是包含结合抗原而非CD79b和第一细胞毒性剂的第一抗体的第一免疫偶联物。在一些实施方案中，所述第一抗体结合CD22。在一些实施方案中，所述第一治疗剂包含结合CD79b的第一抗体。在一些实施方案中，所述第一治疗剂是包含结合CD79b和第一细胞毒性剂的第一抗体的第一免疫偶联物。在一些实施方案中，本文所述的第一细胞毒性剂和免疫偶联物的细胞毒性剂是不同的。在一些实施方案中，所述第一细胞毒性剂为MMAE。在一些实施方案中，所述第一细胞毒性剂为吡咯并苯并二氮杂卓(pyrrolobenzodiazepine)。在一些实施方案中，所述第一细胞毒性剂为美登木素生物碱(maytansinoid)。在一些实施方案中，对第一治疗剂有抗性的CD79b阳性癌症表达P-糖蛋白(P-gp)。
在一些实施方案中，提供了治疗患有CD79b阳性癌症的个体的方法，其中所述CD79b阳性癌症表达P-gp。在一些实施方案中，所述方法包括向所述个体施用有效量的本文所述的免疫偶联物。在一些实施方案中，CD79b阳性/P-gp阳性癌症选自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，CD79b阳性/P-gp阳性癌症比对照细胞或组织表达更高水平的P-gpmRNA和/或蛋白质。
在一些实施方案中，提供抑制CD79b阳性细胞增殖的方法。在一些此类实施方案中，所述方法包括在允许免疫偶联物与细胞表面的CD79b结合的条件下使细胞暴露于本文所述的免疫偶联物，从而抑制细胞的增殖。在一些实施方案中，所述细胞为肿瘤B细胞。在一些实施方案中，所述细胞为淋巴瘤细胞。
附图简述
图1A-1B示出鼠抗CD79b抗体MA79b的重链可变区与人源化MA79b移植物和人源化形式17、18、28和32(分别为huMA79b移植物、huMA79bv17、huMA79bv18、huMA79bv28和huMA79bv32)以及与人亚群III序列比对的氨基酸序列。HVR是加框的(HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3)。将HVR括起来的序列为框架序列(FR-H1至FR-H4)。序列编号按照Kabat编号。Kabat、Chothia和接触CDR指示加框的HVR。
图2A-2B示出鼠抗CD79b抗体MA79b的轻链可变区与人源化MA79b移植物和人源化形式17、18、28和32(分别为huMA79b移植物、huMA79bv17、huMA79bv18、huMA79bv28和huMA79bv32)以及与人亚群κI序列比对的氨基酸序列。HVR是加框的。FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4序列将HVR括起来(HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3)。序列编号按照Kabat编号。Kabat、Chothia和接触CDR指示加框的HVR。
图3示出人源化抗CD79b抗体huMA79bv28(同种型IgG1)的轻链和重链的全长氨基酸序列(可变区和恒定区)。下划线部分为恒定结构域。
图4示出抗CD79b的半胱氨酸工程改造的抗体的氨基酸序列，其中改变轻链或重链或Fc区以在所选的氨基酸位置用半胱氨酸取代氨基酸。所示半胱氨酸工程改造的抗体包括Thio-huMA79bv28-HC-A118C重链，其中在EU位置118的丙氨酸(顺序位置丙氨酸118)被改变为半胱氨酸；Thio-huMA79b.v28-LC-V205C轻链，其中在Kabat位置205的缬氨酸(顺序位置缬氨酸209)被改变为半胱氨酸；和Thio-huMA79b.v28-HC-S400C重链，其中在EU位置400的丝氨酸(顺序位置丝氨酸400)被改变为半胱氨酸。在每个图中，改变的氨基酸以双下划线的粗体文本显示。单下划线表示恒定区。可变区没有下划线。
图5示出实施例A所述的(A)huMA79bv28-PNU-2；和(B)huMA79bv28-PNU-1的连接子和药物结构。
图6示出如实施例B所述的在WSU-DLCL2小鼠异种移植模型中各种抗体药物偶联物的功效。
图7示出如实施例C所述的在Granta-519小鼠异种移植模型中各种抗体药物偶联物的功效。
图8示出如实施例D所述的在SuDHL4-1uc小鼠异种移植模型中各种抗体药物偶联物的功效。
图9示出如实施例E所述的在SuDHL4-1uc小鼠异种移植模型中通过huMA79bv28-PNU-1产生的肿瘤生长的剂量依赖性抑制。
图10示出如实施例F所述的在BJAB-1uc小鼠异种移植模型中通过huMA79bv28-PNU-1产生的肿瘤生长的剂量依赖性抑制。
图11示出如实施例G所述的在BJAB-luc小鼠异种移植模型中通过huMA79bv28-MMAE产生的肿瘤生长的抑制。
图12示出如实施例H所述通过FACS测定的在BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.1X1和BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.2X1抗性细胞中以及在稳定表达P-gp的Bjab-luc细胞中P-gp的表达。
图13示出如实施例H所述的通过PNU-159682产生的稳定表达P-gp的Bjab-luc细胞的剂量依赖性抑制。
发明详述
I.定义
用于本文目的的“受体人框架”是包含来源于如下所定义的人免疫球蛋白框架或人共有框架的轻链可变结构域(VL)框架或重链可变结构域(VH)框架的氨基酸序列的框架。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含其相同的氨基酸序列，或它可含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目为10或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小或2或更小。在一些实施方案中，VL受体人框架序列与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单一结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另外说明，本文所用的“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间1∶1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其伴侣Y的亲和力通常可用解离常数(Kd)来表示。亲和力可通过本领域已知的常用方法(包括本文中描述的那些方法)进行测量。用于测量结合亲和力的特定的说明性和示例性实施方案如以下所述。
“亲和力成熟的”抗体是指与不具有此类改变的亲本抗体相比，在一个或多个高变区(HVR)具有一个或多个改变的抗体，此类改变导致抗体对抗原的亲和力改进。
术语“抗CD79b抗体”和“与CD79b结合的抗体”是指能够以足够的亲和力结合CD79b的抗体，以使该抗体用作靶向CD79b的诊断和/或治疗剂。在一个实施方案中，抗CD79b抗体与不相关、非CD79b蛋白的结合程度小于抗体与CD79b的结合的约10％，例如通过放射免疫测定(RIA)所测量。在某些实施方案中，与CD79b结合的抗体的解离常数(Kd)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤5Nm、≤4nM、≤3nM、≤2nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10- 8M或更少，例如，10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M)。在某些实施方案中，抗CD79b抗体与CD79b的表位结合，该表位在不同物种的CD79b之间是保守的。
术语“抗体”在本文以最广义使用并涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出期望的抗原结合活性。
术语“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，该分子包含完整抗体的一部分并且结合完整抗体结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab′、Fab’-SH、F(ab′)2；双抗体(diabody)；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
作为参考抗体的“与相同表位结合的抗体”是指在竞争测定中阻断参考抗体与其抗原的结合50％或更多的抗体，并且相反地，在竞争测定中参考抗体阻断抗体与其抗原的结合50％或更多。本文提供示例性的竞争测定。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中一般以失调的细胞生长/增殖为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于黑色素瘤、癌、淋巴瘤(例如，霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤)、母细胞瘤、肉瘤和白血病。癌症更具体的实例包括B细胞相关的癌症，包括例如高级、中级和低级淋巴瘤(包括B细胞淋巴瘤，诸如例如粘膜相关的淋巴组织B细胞淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、套细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和霍奇金氏淋巴瘤和T细胞淋巴瘤)和白血病(包括继发性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，诸如B细胞白血病(CD5+B淋巴细胞)、骨髓性白血病，诸如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴细胞性白血病，诸如急性淋巴细胞性白血病(ALL)和脊髓发育不良)和其它血液和/或B细胞或T细胞相关的癌症。也包括另外的造血细胞的癌症，包括多形核白细胞诸如嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞、树突细胞、血小板、红细胞和天然杀伤细胞。也包括选自以下的癌性B细胞增殖性病症：淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。B细胞癌症的起源包括以下：边缘区B细胞淋巴瘤起源于边缘区的记忆B细胞，滤泡性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤起源于生发中心明区的中心细胞(centrocytes)，慢性淋巴细胞性白血病和小淋巴细胞性白血病起源于B1细胞(CD5+)，套细胞淋巴瘤起源于外套区的幼稚B细胞并且伯基特氏淋巴瘤起源于生发中心暗区的中心母细胞。包括本文称为“造血细胞组织”的造血细胞的组织包括胸腺和骨髓和外周淋巴组织(诸如脾、淋巴结)、与粘膜相关的淋巴组织(诸如肠相关的淋巴组织)、扁桃体、派伊尔结(Peyer’s patch)和阑尾以及与其它粘膜相关的淋巴组织(例如，支气管衬里)。此类癌症的其它具体实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、神经胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、白血病和其它淋巴增殖性病症以及各种类型的头颈癌。
本文的“B细胞恶性肿瘤”包括非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)，包括低级/滤泡性NHL、小淋巴细胞(SL)NHL、中级/滤泡性NHL、中级弥漫性NHL、高级免疫母细胞NHL、高级淋巴母细胞NHL、高级小无核裂细胞NHL、肿瘤体积较大的(bulky disease)NHL、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤和沃登斯通氏(Waldenstrom’s)巨球蛋白血症、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、淋巴细胞占优势的霍奇金氏病(LPHD)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、无痛NHL包括复发性无痛NHL和利妥昔单抗顽固性无痛NHL；白血病，包括急性淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、多毛细胞白血病、慢性髓细胞性白血病；伯基特氏淋巴瘤；套细胞淋巴瘤；和其它恶性血液病。此类恶性肿瘤可以用针对B细胞表面标志(诸如CD79b)的抗体来治疗。本文预期此类疾病通过施用针对B细胞表面标志(诸如CD79b)的抗体来治疗，并且包括施用未偶联的(“裸的”)抗体或如本文所公开的偶联至细胞毒性剂的抗体。本文还预期此类疾病通过包括抗CD79b抗体或本发明的抗CD79b抗体药物偶联物与另一种抗体或抗体药物偶联物、另一种细胞毒性剂、放射或同时或连续施用的其它治疗的组合的联合疗法来治疗。在示例性治疗方法中，抗CD79b免疫偶联物与抗CD22抗体、免疫球蛋白或其CD22结合片段同时或顺序组合施用。抗CD22抗体可以是裸抗体或抗体药物偶联物。在另一个示例性治疗方法中，抗CD79b免疫偶联物与抗CD20抗体、免疫球蛋白或其CD20结合片段同时或顺序组合施用。抗CD20抗体可以是裸抗体或抗体药物偶联物。在联合疗法的一些实施方案中，抗CD79b免疫偶联物与(利妥昔单抗)一起施用。
本文所用的术语“非霍奇金氏淋巴瘤”或“NHL”是指淋巴系统的癌症而不是霍奇金氏淋巴瘤。通过霍奇金氏淋巴瘤中存在里德-斯泰伯格氏(Reed-Stemberg)细胞和在非霍奇金氏淋巴瘤中不存在所述细胞可通常区别霍奇金氏淋巴瘤与非霍奇金氏淋巴瘤。如本文所用的术语涵盖的非霍奇金氏淋巴瘤的实例包括按照本领域已知的分类方案将被本领域技术人员(例如，肿瘤学家或者病理学家)鉴定为此类的任何淋巴瘤，所述方案诸如欧美淋巴瘤修订表(Revised European-American Lymphoma(REAL)scheme)，如Color Atlas of ClinicalHematology(第3版)，A.Victor Hoffbrand和John E.Pettit(编)(HarcourtPublishers Ltd.，2000)所述。特别地参见图11.57、11.58和11.59所列。更具体的实例包括但不限于：复发性或顽固性NHL、前线低级(frontline low grade)NHL、阶段III/IV NHL、化疗抗性NHL、前体B淋巴细胞性白血病和/或淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞性白血病和/或原淋巴细胞性白血病和/或小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞原淋巴细胞性淋巴瘤、免疫细胞瘤(immunocytoma)和/或淋巴浆细胞性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、结外边缘区-MALT淋巴瘤、节边缘区淋巴瘤、多毛细胞白血病、浆细胞瘤和/或浆细胞骨髓瘤、低级/滤泡性淋巴瘤、中级/滤泡性NHL、套细胞淋巴瘤、滤泡中心淋巴瘤(滤泡)、中级弥漫性NHL、弥散性大B细胞淋巴瘤、侵袭性NHL(包括侵袭性前线NHL和侵袭性复发性NHL)、在自体干细胞移植后或抵抗自体干细胞移植的NHL复发、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、高级免疫母细胞NHL、高级淋巴母细胞NHL、高级小无核裂细胞NHL、肿瘤体积较大的NHL、伯基特氏淋巴瘤、前体(外围)大颗粒淋巴细胞性白血病、蕈样肉芽肿病和/或赛扎里(Sezary)综合征、皮肤(表皮)淋巴瘤、退行性大细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤。
术语“嵌合”抗体是指其中一部分重链和/或轻链衍生自特定来源或物种，而剩余的重链和/或轻链衍生自不同来源或物种的抗体。
抗体的“类别”是指其重链所拥有的恒定结构域或恒定区的类型。有五种主要类别的抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的几种可以被进一步划分成亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于免疫球蛋白的不同类别的重链恒定结构域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。
本文所用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性性剂包括但不限于：放射性同位素(例如，At211、I131、I125、y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、p32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化疗剂或药物(例如，甲氨蝶呤、阿霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春碱、依托泊苷)、多柔比星、美法仑(melphalan)、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、柔红霉素或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段诸如溶核酶；抗生素；毒素诸如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体；和下面公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。
“化疗剂”是用于治疗癌症的化合物。化疗剂的实例包括烷化剂诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺()；烷基磺酸酯类诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类诸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺(ethylenimine)和甲基蜜胺类(methylamelamine)包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚乙酰(acetogenin)(特别是布拉他辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，)；β-拉帕醌(beta-lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙碱；白桦脂酸；喜树碱(包括合成类似物托泊替康(topotecan)(HYCA)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)，)、乙酰喜树碱(acetylcamptothecin)、东莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括它的阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷(teniposide)；隐藻素类(cryptophycin)(特别为隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；多米卡星(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；五加苷素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlomaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；硝基脲(nitrosurea)类，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(例如，加利车霉素(calicheamicin)，特别为加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1(参见，例如，Agnew，Chem Intl.编著Engl.，33：183-186(1994))；dynemicin，包括dynemicin A；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博莱霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)；丝裂霉素类诸如丝裂霉素C、酶酚酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培来霉素(peplomycin)、potfiromycin、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链脲酶素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercindin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘧啶、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮杂尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡普睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酪(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(elfornithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃博霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖复合物(JHS天然产物，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；西交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2，2′，2″-三氯乙胺；单端孢霉烯(trichothecene)类(特别为T-2毒素、抚孢菌素(verracurin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛 达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(“Ara-C”)；塞替派(thiiotepa)；紫杉烷类，例如紫杉醇Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、ABRAXANETM不含Cremophor、紫杉醇的白蛋白-工程改造的纳米微粒组合物(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，Illinois)和多西他赛(doxetaxel)Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；吉西他滨(gemcitabine) 6-硫代鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物诸如顺铂和卡铂；长春碱铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱奥沙利铂(oxaliplatin)；亚叶酸(leucovovin)；长春瑞滨(vinorelbine) 米托蒽醌(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；柔红霉素(daunomycin)；氨基蝶呤；伊班膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(difluorometlhylornithine)(DMFO)；类维A酸诸如视黄酸；卡培他滨上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及上述两种或更多种的组合，诸如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙(prednisolone)的联合疗法的缩写)；CVP(环磷酰胺、长春新碱和泼尼松龙的联合疗法的缩写)；和FOLFOX(用与5-FU和亚叶酸组合的奥沙利铂(ELOXATINTM)的治疗方案的缩写)。
“效应功能”是指由抗体的Fc区引起的那些生物活性，其随抗体同种型而发生变化。抗体效应功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用和细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调；和B细胞激活。
试剂(例如，药物制剂)的“有效量”是指以剂量和在需要的时间段内能有效获得所需的治疗或预防结果的量。
术语“表位”是指抗原分子上与抗体结合的特定位点。
本文的术语“Fc区”用于定义含有至少一部分恒定区的免疫球蛋白重链的C-末端区域。该术语包括天然序列Fc区和可变Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羰基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)的可以存在或可以不存在。除非另有具体说明，Fc区或恒定区的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，也称为EU索引，如Kabat等，Sequences of Proteinsof Immunological Interest，第5版。Public Health Service，NationalInstitutes of Health，Bethesda，MD，1991所述。
“框架”或“FR”是指可变结构域残基而不是高变区(HVR)残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列在VH(或VL)中通常以以下序列出现：FRi-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
术语“全长抗体”“完整抗体”和“全抗体”在本文中可以互换使用以指具有基本上类似于天然抗体结构的结构或具有含有如本文所定义的Fc区的重链的抗体。
术语“CD79b的糖基化形式”是指通过加入碳水化合物残基进行翻译后修饰的CD79b的天然存在形式。
术语“宿主细胞”“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”互换使用并且是指已经引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化的细胞”，其包括初始转化细胞以及由此衍生的后代，而不考虑传代的次数。后代的核酸含量不可能与亲代细胞完全相同，但可能含有突变。本文包括所筛选的或所选择的与初始转化的细胞具有相同功能或生物活性的突变体后代。
“人抗体”是具有对应于由人或人细胞所产生的抗体的氨基酸序列或来源于利用人抗体库或其它人抗体编码序列的非人来源的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
“人共有框架”是代表在选择人免疫球蛋白VL或VH框架序列中最通常存在的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，NIH出版91-3242，Bethesda MD(1991)，第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，亚组是如Kabat等的亚组k I，同上。在一个实施方案中，对于VH，亚组是如Kabat等的亚组III，同上。
“人源化”抗体是指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个以及通常两个可变结构域，其中所有的或者基本上所有的HVR(例如，CDR)对应于非人抗体的HVR，并且所有的或者基本上所有的FR对应于人抗体的FR。人源化抗体任选地可以包含来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体的“人源化形式”(例如，非人抗体)是指已经经历人源化的抗体。
本文所用的术语“高变区”或“HVR”是指抗体可变结构域的每个区域，其在序列上高度可变和/或形成结构确定的环(“高变环”)。通常，天然四链抗体包含六个HVR；三个在VH(H1、H2、H3)并且三个在VL(L1、L2、L3)。HVR通常包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，后者具有最高的序列可变性和/或参与抗原识别。示例性的高变环发生在氨基酸残基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)。(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)。)示例性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)发生在L1的氨基酸残基24-34、L2的氨基酸残基50-56、L3的氨基酸残基89-97、H1的氨基酸残基31-35B、H2的氨基酸残基50-65和H3的氨基酸残基95-102。(Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版。PublicHealth Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)。)除了VH中的CDR1外，CDR通常包含形成高变环的氨基酸残基。CDR还包含“特异性决定残基”或“SDR”，其为接触抗原的残基。SDR包含在CDR区域内，被称为缩短-CDR或a-CDR。示例性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2和a-CDR-H3)出现在L1的氨基酸残基31-34、L2的氨基酸残基50-55、L3的氨基酸残基89-96、H1的氨基酸残基31-35B、H2的氨基酸残基50-58和H3的氨基酸残基95-102。参见Almagro和Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008)。)除非另有说明，本文按照Kabat等将HVR残基和可变结构域中的其它残基(例如，FR残基)编号，同上。
“免疫偶联物”是偶联至一种或多种异源分子(包括但不限于细胞毒性剂)的抗体。
“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于：家畜(例如，牛、羊、猫、狗和马)、灵长类(例如，人和非人的灵长类诸如猴)、兔和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
“分离的抗体”是已经从其天然环境的组分中分离的抗体。在一些实施方案中，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱法(例如，离子交换或反相HPLC)所测定，抗体被纯化至大于95％或99％的纯度。对于评价抗体纯度的方法的综述，参见例如Flatman等，J.Chromatogr.B848：79-87(2007)。
“分离的核酸”是指已经从其天然环境的组分中分离的核酸分子。分离的核酸包括通常含有核酸分子的细胞中含有的核酸分子，但所述核酸分子存在于染色体外或不同于其天然染色体位置的染色体位置。
“分离的编码抗CD79b抗体的核酸”是指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括在单个载体或不同载体上的此类核酸分子和存在于宿主细胞中一个或多个位置的此类核酸分子。
如本文所用术语“CD79b”是指来自任何脊椎动物源的任何天然CD79b，包括哺乳动物诸如灵长类(例如人、猕猴(cyno))和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)，除非另有说明。该术语涵盖“全长”未处理CD79b以及由细胞内加工产生的任何形式的CD79b。该术语还涵盖CD79b的天然存在的变体，例如，剪接变体、等位基因变体和同种型。示例性人CD79b前体的氨基酸序列(含信号序列)示于SEQ ID No：40。示例性人成熟CD79b的氨基酸序列(不含信号序列)示于SEQ ID No：41。
术语“CD79b阳性癌症”是指包含在其表面表达CD79b的细胞的癌症。
术语“CD79b阳性细胞”是指在其表面表达CD79b的细胞。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同种抗体的群体获得的抗体，所述基本上同种抗体即组成所述群体的单个抗体是相同的和/或结合相同的表位，除了可能的突变抗体，例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的生产期间出现的突变，此类突变通常以微量存在。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，修饰语“单克隆”表示当从抗体的基本上同种的群体获得时的抗体特征，并且不被解释为需要通过任何特定方法来生产抗体。例如，依照本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术来制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，用于制备单克隆抗体的此类方法和其它示例性方法如本文所述。
“裸抗体”是指不与异种部分(例如，细胞毒性部分)或放射性标记偶联的抗体。裸抗体可以存在于药物制剂中。
“天然抗体”是指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是由通过二硫键连接的两条相同的轻链和两条相同的重链组成的约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白。从N-至C-末端，每条重链具有可变区(VH)(也称为可变重链结构域或重链可变结构域)，接着是三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N-至C-末端，每条轻链具有可变区(VL)(也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域)，接着是恒定轻链(CL)结构域。基于其恒定结构域的氨基酸序列，抗体的轻链可以被指定为两种类型(称为κ和λ)中的一种。
使用术语“包装说明书”是指通常在治疗产品的商业包装中包括的说明，其含有关于使用此类治疗产品的适应症、用法、剂量、施用、联合疗法、禁忌症和/或警告的信息。
关于参考多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为在比对序列并引入空位(如果需要的话)以实现最大百分比的序列同一性之后，并在不将任何保守取代视为序列同一性的部分的情况下，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为了测定氨基酸序列同一性百分比的比对可以通过本领域技术范围内的多种方式实现，例如，使用公开获得的计算机软件诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括实现在所比较序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，为了本文目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2来生成氨基酸序列同一性％值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司编写，并且源代码已经与用户文件一起提交给美国版权局(U.S.Copyright Office，Washington D.C.，20559)，其中它以美国版权注册号TXU510087注册。ALIGN-2程序可从Genentech，Inc.，South San Francisco，California公开获得，或可以从源代码被编译。应当编译ALIGN-2程序用于UNIX操作系统，包括数字UNLX V4.0D。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定并且不能改变。
在ALIGN-2用于氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A对、与或针对给定氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％(或者可表达为具有或包含对、与或针对给定氨基酸序列B的一定的氨基酸序列同一性％的给定氨基酸序列A)计算如下：
100乘以分数X/Y
其中X为在序列比对程序ALIGN-2的A和B的比对中通过该程序评分为相同匹配的氨基酸残基数，并且其中Y为B中氨基酸残基的总数。应当理解，当氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度时，A对B的氨基酸序列同一性％将不等于B对A的氨基酸序列同一性％。除非另有具体说明，本文使用的所有氨基酸序列同一性％值如在紧接前一段中所述使用ALIGN-2计算机程序来获得。
术语“药物制剂”是指以允许包含在其中的活性成分的生物活性有效的形式的制剂，并且其不含有对将施用制剂的受试者具有不可接受的毒性的其它组分。
“药学上可接受的载体”是指对受试者无毒的药物制剂中活性成分以外的成分。药学上可接受的载体包括但不限于：缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
本文使用的“治疗(treatment)”(及其语法变形诸如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)是指尝试改变被治疗的个体的自然进程的临床干预，并且可以为了预防或在临床病理学过程期间进行。理想的治疗效果包括但不限于：防止疾病的发生或复发、缓解症状、消除疾病的任何直接或间接的病理学后果、防止转移、降低疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态以及缓解或改善预后。在一些实施方案中，本发明的免疫偶联物用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进程。
术语“可变区”或“可变结构域”是指参与抗体与抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL))通常具有类似结构，其中每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个高变区(HVR)。(参见，例如，Kindt等Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页(2007)。)单个VH或VL结构域足以赋予抗原结合特异性。此外，使用来自结合特定抗原的抗体的VH或VL结构域以分别筛选互补的VL或VH结构域文库可以分离结合该抗原的抗体。参见，例如，Portolano等，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等，Nature 352：624-628(1991)。
如本文所用，术语“载体”是指能够使与其连接的另外的核酸增殖的核酸分子。该术语包括作为自我复制的核酸结构的载体以及并入已经引入该载体的宿主细胞的基因组内的载体。某些载体能够引导与其可操作性连接的核酸的表达。本文将此类载体称为“表达载体”。
“烷基”是含有正、仲、叔或环碳原子的C1-C18烃。实例为甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(正丙基(n-Pr)、正丙基(n-propyl)、-CH2CH2CH3)、2-丙基(异丙基(i-Pr)、异丙基(i-propyl)、-CH(CH3)2)、1-丁基(正丁基(n-Bu)、正丁基(n-butyl)、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(异丁基(i-Bu)、异丁基(i-butyl)、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(仲丁基(s-Bu)、仲丁基(s-butyl)、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(叔丁基(t-Bu)、叔丁基(t-butyl)、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2，3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3，3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3。
本文所用的术语“C1-C8烷基，”是指具有1至8个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和烃。代表性的“C1-C8烷基”包括但不限于-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基、-正辛基、-正壬基和-正癸基；而支链C1-C8烷基包括但不限于-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基、2-甲基丁基；不饱和C1-C8烷基包括但不限于-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-异亚丁基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2，3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基、3-己基、-乙炔基(acetylenyl)、-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基、-3-甲基-1丁炔基。C1-C8烷基可以是未取代的或被包括但不限于以下的一个或多个基团取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2-NHC(O)R’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立选自H、-C1-C8烷基和芳基。
本文所用的术语“C1-C6烷基，”是指具有1至6个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和烃。代表性的“C1-C6烷基”包括但不限于-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基和-正己基；而支链C1-C6烷基包括但不限于-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基和2-甲基丁基；不饱和C1-C6烷基包括但不限于-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基和-异亚丁基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2，3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基和3-己基。C1-C6烷基可以是未取代的或被如上对于C1-C8烷基所述的一个或多个基团取代。
本文所用的术语“C1-C4烷基，”是指具有1至4个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和烃。代表性“C1-C4烷基”包括但不限于-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基；而支链C1-C4烷基包括但不限于-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基；不饱和C1-C4烷基包括但不限于-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基和-异亚丁基。C1-C4烷基可以是未取代的或被如上对于C1-C8烷基所述的一个或多个基团取代。
“烷氧基”是与氧单独键合的烷基。示例性烷氧基包括但不限于甲氧基(-OCH3)和乙氧基(-OCH2CH3)。“C1-C5烷氧基”是具有1至5个碳原子的烷氧基。烷氧基可以是未取代的或被如上对于烷基所述的一个或多个基团取代
“烯基”是含有具有至少一个不饱和位点的正、仲、叔或环碳原子的C2-C18烃，该不饱和位点即碳-碳sp2双键。实例包括但不限于：乙烯或乙烯基(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)、环戊烯基(-C5H7)和5-己烯基(-CH2CH2CH2CH2CH＝CH2)。“C2-C8烯基”是含有具有至少一个不饱和位点的2至8个正、仲、叔或环碳原子的烃，该不饱和位点即碳-碳sp2双键。
“炔基”是含有具有至少一个不饱和位点的正、仲、叔或环碳原子的C2-C18烃，该不饱和位点即碳-碳sp三键。实例包括但不限于：乙炔(-C≡CH)和炔丙基(-CH2C≡CH)。“C2-C8炔基”是含有具有至少一个不饱和位点的2至8个正、仲、叔或环碳原子的烃，该不饱和位点即碳-碳sp三键。
“亚烷基”是指1-18个碳原子的饱和、支链或直链或环状烃基团，并具有通过从母体烷烃的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子而衍生的两个单价基团中心。典型的亚烷基基团包括但不限于：亚甲基(-CH2-)1，2-乙基(-CH2CH2-)、1，3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1，4-丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。
“C1-C10亚烷基”是式-(CH2)1-10-的直链、饱和烃基。C1-Ci0亚烷基的实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基、亚壬基和亚癸基。
“亚烯基”是指2-18个碳原子的不饱和、支链或直链或环状烃基团，并具有通过从母体烯烃的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子而衍生的两个单价基团中心。典型的亚烯基基团包括但不限于：1，2-乙烯(-CH＝CH-)。
“亚炔基”是指2-18个碳原子的不饱和、支链或直链或环状烃基团，并具有通过从母体炔烃的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子而衍生的两个单价基团中心。典型的亚炔基基团包括但不限于：乙炔(-C≡C-)、炔丙基(-CH2C≡C-)和4-戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。
“芳基”是指碳环芳族基团。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。碳环芳族基团或杂环芳族基团可以是未取代的或被包括但不限于以下的一个或多个基团取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-卤素、-N3、-NH2，-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立选自H、-C1-C8烷基和芳基。
“C5-C20芳基”是在碳环芳环中具有5至20个碳原子的芳基。C5-C20芳基的实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。C5-C20芳基可以是如上对于芳基所述的取代或未取代的。“C5-C14芳基”是在碳环芳环中具有5至14个碳原子的芳基。C5-C14芳基的实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。C5-C14芳基可以是如上对于芳基所述的取代或未取代的。
“亚芳基”是如以下结构所示的具有两个共价键并且可以呈邻位、间位或对位构象的芳基。
其中苯基可以是未取代的或被包括但不限于以下的至多四个基团取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立选自H、-C1-C8烷基和芳基。
“芳烷基”是指其中键合到碳原子(通常为末端或sp3碳原子)的一个氢原子被芳基替代的非环状烷基基团。典型的芳烷基包括但不限于：苄基、2-苯基乙烷-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘基甲基、2-萘基乙烷-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘基苄基、2-萘基苯基乙烷-1-基等。芳烷基包含6至20个碳原子，例如芳烷基的烷基部分(包括链烷基(alkanyl)、烯基或炔基)为1至6个碳原子并且芳基部分为5至14个碳原子。
“杂芳烷基”是指其中键合到碳原子(通常为末端或sp3碳原子)的一个氢原子被杂芳基替代的非环状烷基基团。典型的杂芳烷基包括但不限于2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基等。杂芳烷基包含6至20个碳原子，例如杂芳烷基的烷基部分(包括链烷基、烯基或炔基)为1至6个碳原子并且杂芳基部分为5至14个碳原子和选自N、O、P和S的1至3个杂原子。杂芳烷基的杂芳基部分可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子和选自N、O、P和S的1至3个杂原子)的双环，例如：双环[4，5]、[5，5]、[5，6]或[6，6]系统。
“取代的烷基，”“取代的芳基，”和“取代的芳烷基”分别意指其中一个或多个氢原子每个独立地被取代基替代的烷基、芳基和芳烷基。典型的取代基包括但不限于：-X、-R、-O-、-OR、-SR，-S-、-NR2、-NR3、＝NR、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N＝C＝O、-NCS、-NO、-NO2、＝N2、-N3、NC(＝O)R、-C(＝O)R、-C(＝O)NR2、-SO3 -、-SO3H、-S(＝O)2R、-OS(＝O)2OR、-S(＝O)2NR、-S(＝O)R、-OP(＝O)(OR)2、-P(＝O)(OR)2、-PO- 3、PO3H2、-C(＝O)R、-C(＝O)X、-C(＝S)R、-CO2R、-CO2 -、-C(＝S)OR、-C(＝O)SR、-C(＝S)SR、-C(＝O)NR2、-C(＝S)NR2、-C(＝NR)NR2，其中每个X独立地为卤素：F、Cl、Br或I；并且每个R独立地为-H、C2-C18烷基、C6-C20芳基、C3-C14杂环、保护基团或前药部分。如上所述亚烷基、亚烯基和亚炔基也可类似地被取代。
“杂芳基”和“杂环”是指其中一个或多个环原子为杂原子(例如氮、氧和硫)的环系统。杂环基团包含3至20个碳原子和选自N、O、P和S的1至3个杂原子。杂环可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子和选自N、O、P和S的1至3个杂原子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子和选自N、O、P和S的1至3个杂原子)的双环，例如：双环[4，5]、[5，5]、[5，6]或[6，6]系统。
示例性杂环描述于例如Paquette，Leo A.，“Principles of ModernHeterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin，New York，1968)，特别是第1、3、4、6、7和9章；“The Chemistry of Heterocyclic Compounds，Aseries of Monographs”(John Wiley&Sons，New York，1950年至今)，特别是第13、14、16、19和28卷；和J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566。
举例而非限制，杂环的实例包括吡啶基、二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基)、噻唑基、四氢噻吩基、硫氧化四氢噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、硫杂萘基(thianaphthalenyl)、吲哚基、吲哚烯基(indolenyl)、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氢呋喃基、双-四氢呋喃基、四氢吡喃基、双-四氢吡喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、吖辛因基(azocinyl)、三嗪基、6H-1，2，5-噻二嗪基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基(dithiazinyl)、噻吩基、噻蒽基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、呫吨基、吩噻噁基(phenoxathinyl)、2H-吡咯基、异噻唑基、异噁唑基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基、吩嗪基(phenazinyl)、吩噻嗪基、呋咱基、吩噁嗪基、异色满基、色满基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、奎宁环基、吗啉基、噁唑烷基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、羟吲哚基、苯并噁唑啉基(benzoxazolinyl)和靛红酰基(isatinoyl)。
举例而非限制，碳键合的杂环键合在吡啶的位置2、3、4、5或6；哒嗪的位置3、4、5或6；嘧啶的位置2、4、5或6；吡嗪的位置2、3、5或6；呋喃、四氢呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的位置2、3、4或5；噁唑、咪唑或噻唑的位置2、4或5；异噁唑、吡唑或异噻唑的位置3、4或5；氮丙啶的位置2或3；吖丁啶的位置2、3或4；喹啉的位置2、3、4、5、6、7或8或者异喹啉的位置1、3、4、5、6、7或8。还更典型的是，碳键合的杂环包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基、6-哒嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
举例而非限制，氮键合的杂环键合在氮丙啶、吖丁啶、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑的位置1；异吲哚或异吲哚啉的位置2；吗啉的位置4和咔唑或β-咔啉的位置9。还更典型的是，氮键合的杂环包括1-吖丙啶基(aziridyl)、1-氮杂环丁烷基(azetedyl)、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基和1-哌啶基。
“C3-C8杂环”是指其中一至四个环碳原子独立地被选自O、S和N的杂原子替代的芳族或非芳族C3-C8碳环。C3-C8杂环的代表性实例包括但不限于：苯并呋喃基、苯并噻吩、吲哚基、苯并吡唑基、香豆素基(coumarinyl)、异喹啉基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、喹啉基、嘧啶基、吡啶基、吡啶酮基、吡嗪基、哒嗪基、异噻唑基、异噁唑基和四唑基。C3-C8杂环可以是未取代的或被包括但不限于以下的至多七个基团取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立选自H、-C1-C8烷基和芳基。
“C3-C8杂环基”是指其中一个杂环基的氢原子被键替代的如上所定义的C3-C8杂环基。C3-C8杂环基可以是未取代的或被包括但不限于以下的至多六个基团取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立选自H、-C1-C8烷基和芳基。
“碳环”意指具有3至7个碳原子作为单环或7至12个碳原子作为双环的饱和或不饱和环。单环碳环具有3至6个环原子，还更通常是5或6个环原子。双环碳环具有例如排列成双环[4，5]、[5，5]、[5，6]或[6，6]系统的7至12个环原子，或排列成双环[5，6]或[6，6]系统的9或10个环原子。单环碳环的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环庚基和环辛基。
“C3-C8碳环”是3-、4-、5-、6-、7-或8-元饱和或不饱和非芳族碳环。代表性的C3-C8碳环包括但不限于：-环丙基、-环丁基、-环戊基、-环戊二烯基、-环己基、-环己烯基、-1，3-环己二烯基、-1，4-环己二烯基、-环庚基、-1，3-环庚二烯基、-1，3，5-环庚三烯基、-环辛基和-环辛二烯基。C3-C8碳环基可以是未取代的或被包括但不限于以下的一个或多个基团取代：-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立选自H、-C1-C8烷基和芳基。
“C3-C8碳环”是指其中一个碳环基的氢原子被键替代的如上所定义的C3-C8碳环基。
“连接子”是指包含共价键或将抗体与药物部分共价连接的原子链的化学部分。在各个实施方案中，连接子包括二价基团诸如烷基二基(alkyldiyl)、芳基二基(aryldiyl)、杂芳基二基(heteroaryldiyl)，部分诸如：-(CR2)nO(CR2)n-，烷氧基的重复单元(例如聚亚乙基氧基(polyethylenoxy)、PEG、聚亚甲基氧基(polymethyleneoxy))和烷基氨基(例如聚乙烯氨基，JeffamineTM)；以及二酸酯和酰胺，包括琥珀酸酯、琥珀酰胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯和己酰胺。在各个实施方案中，连接子可包含一个或多个氨基酸残基，诸如缬氨酸、苯基丙氨酸、赖氨酸和高赖氨酸。
术语“手性”是指具有镜像配偶体(mirror image partner)的不可重叠(non-superimposability)特性的分子，而术语“非手性”是指在其镜像配偶体上可以重叠的分子。
术语“立体异构体”是指具有相同化学组成，但是关于原子或基团在空间上的排列不同的化合物。
“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心并且其分子不是彼此的镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理特性，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。可在高分辨率分析方法(诸如电泳和色谱法)下可分离非对映异构体的混合物。
“对映异构体”是指化合物的彼此为不可重叠的镜像的两个立体异构体。
本文使用的立体化学定义和惯例一般遵循S.P.Parker，编，McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill BookCompany，New York；以及Eliel，E.和Wilen，S.，Stereochemistry ofOrganic Compounds(1994)John Wiley & Sons，Inc.，New York。许多有机化合物以光学活性形式存在，即，它们能够旋转平面偏振光的平面。在描述光学活性化合物时，前缀D和L，或R和S，用于表示分子关于其手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用于表示化合物的平面偏振光的旋转标记，其中用(-)或1表示化合物是左旋的。具有(+)或d前缀的化合物是右旋的。对于给定的化学结构，这些立体异构体是相同的，不同之处在于它们为彼此的镜像。还可以将特定的立体异构体称为对映异构体，以及此类异构体的混合物经常被称为对映异构体混合物。50∶50的对映异构体混合物被称为外消旋混合物或外消旋物，其可以出现在化学反应或过程中一直没有立体选择性或立体特异性的情况下。术语“外消旋混合物”和“外消旋物”是指两种没有光学活性的对映异构体种类的等摩尔混合物。
“离去基团”是指可以被另一个官能团取代的官能团。某些离去基团在本领域是公知的，并且实例包括但不限于卤化物(例加，氯化物、溴化物、碘化物)、甲磺酰基(methanesulfonyl)(甲磺酰基(mesyl))、对甲苯磺酰基(甲苯磺酰基)、三氟甲磺酰基(三氟甲磺酸酯)和三氟甲磺酸酯。
术语“保护基团”是指当使化合物上其它官能团反应时通常用于阻断或保护特定官能度的取代基。例如，“氨基保护基团”是连接至氨基的阻断或保护化合物中的氨基官能度的取代基。合适的氨基保护基团包括但不限于乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苄氧基羰基(CBZ)和9-芴基亚甲基氧基羰基(Fmoc)。对于保护基团及其用途的一般性描述，参见T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，New York，1991，或后续版本。
II.组合物及方法
一方面，本发明部分基于结合CD79b的抗体和包含此类抗体的免疫偶联物。本发明的抗体和免疫偶联物可用于例如诊断或治疗CD79b阳性癌症。
A.示例性抗CD79b抗体
在一些实施方案中，提供结合CD79b的分离的抗体。CD79b与CD79a异源二聚以形成CD79，其为B细胞限制性受体。CD79b在各种B细胞相关的病症和癌症(包括各种淋巴瘤，诸如非霍奇金氏淋巴瘤)中表达。
SEQ ID NO：40中提供具有信号序列(氨基酸1-28)的示例性的天然存在的人CD79b前体序列，并且相应的成熟CD79b序列示于SEQID NO：41(对应于SEQ ID NO：40的氨基酸29至229)。
在一些实施方案中，抗CD79b抗体结合人CD79b。在一些实施方案中，抗CD79b抗体以≤10nM、或≤5nM、或≤4nM、或≤3nM、或≤2nM并任选地≥0.0001nM、或≥0.001nM、或≥0.01nM的亲和力结合人CD79b。示例性的此类抗体包括huMA79bv28和huMA79bv32，其分别以0.44nM和0.24nM的亲和力结合人CD79b。参见，例如，US 8,088,378 B2。
测定
使用Scatchard分析来测定抗CD79b抗体是否以≤10nM、或≤5nM、或≤4nM、或≤3nM、或≤2nM的亲和力结合，如例如US 8,088,378B2所述。简言之，在表达人CD79b的BJAB细胞存在下使I125标记的抗体与系列稀释的未标记抗体的竞争。孵育后洗涤细胞，并通过γ计数器读取细胞沉淀计数。参加，例加，US 8,088,378 B2。可以按照采用非线性曲线拟合程序进行的标准Scatchard分析来确定抗体的结合亲和力KD(参见，例如，Munson等，Anal Biochem，107：220-239，1980)。
抗体MA79b和其它实施方案
在一些实施方案中，本发明提供抗CD79b抗体或包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR的免疫偶联物：(a)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含选自SEQ ID NO：18、24和35的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在一些此类实施方案中，抗体或免疫偶联物包含下述中的至少一种：(i)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3，和/或(ii)包含选自SEQID NO：24和35的氨基酸序列的HVR-L1。
在一些实施方案中，本发明提供抗CD79b抗体或包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR的免疫偶联物：(a)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在一些此类实施方案中，抗体或免疫偶联物包含下述中的至少一种：(i)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3，和/或(ii)包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L1。
一方面，本发明提供包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列的抗体或免疫偶联物：(a)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3。在另一个实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3和含有SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在另一实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3和含有SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2。在另一实施方案中，抗体包含(a)含有SEQID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)含有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3。
另一方面，本发明提供包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列的抗体或免疫偶联物：(a)包含选自SEQ ID NO：18、24和35的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。另一方面，本发明提供包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VLHVR序列的抗体或免疫偶联物：(a)包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，抗体包含(a)含有选自SEQ ID NO：24和35的氨基酸序列的HVR-L1；(b)含有SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。含有在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的HVR-L1。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L1。在一些实施方案中，抗体包含(a)含有SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L1；(b)含有SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含(a)含有SEQ ID NO：35的氨基酸序列的HVR-L1；(b)含有SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有SEQ IDNO：26的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，抗体或免疫偶联物包含(a)含有至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列的VH结构域：(i)包含SEQ IDNO：21的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含选自SEQ ID NO：17和23的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)含有至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VLHVR序列的VL结构域：(i)包含选自SEQ ID NO：18、24和35的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在一些此类实施方案中，抗体或免疫偶联物包含下述中的至少一种：(i)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3，和/或(ii)包含SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的HVR-L1。
另一方面，本发明提供包含以下的抗体或免疫偶联物：(a)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含选自SEQ ID NO：18、24和35的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在一些此类实施方案中，抗体或免疫偶联物包含下述中的至少一种：包含SEQ IDNO：23的氨基酸序列的HVR-H3，和/或包含选自SEQ ID NO：24和35的氨基酸序列的HVR-L1。另一方面，本发明提供包含以下的抗体或免疫偶联物：(a)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。
在以上任何实施方案中，抗CD79b抗体是人源化的。在一个实施方案中，抗CD79b抗体包含如在以上任何实施方案中的HVR，并且还包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。在某些实施方案中，人受体框架是人VL κ I(VL KI)框架和/或VH框架VHIII。在一些实施方案中，人源化抗CD79b抗体包含：(a)含有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有选自SEQ ID NO：18、24和35的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，人源化抗CD79b抗体包含：(a)含有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，抗CD79b抗体包含与SEQ ID NO：11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些实施方案中，与SEQ ID NO：11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含该序列的抗CD79b抗体保留结合CD79b的能力。在某些实施方案中，在SEQ IDNO：11中总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在SEQ ID NO：11中总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域(即，在FR中)。
任选地，抗CD79b抗体包含SEQ ID NO：5、7、9、11和13中的任一个的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗CD79b抗体包含SEQ ID NO：11的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQID NO：22的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQ ID NO：17或SEQID NO：23的氨基酸序列的HVR-H3。
在一些实施方案中，提供抗CD79b抗体，其中所述抗体包含与SEQ ID NO：12的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变结构域(VL)。在某些实施方案中，与SEQ ID NO：12的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如，保守性取代)、插入或缺失，但包含该序列的抗CD79b抗体保留结合CD79b的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID NO：12中总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在SEQ ID NO：12中总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域(即，在FR中)。任选地，抗CD79b抗体包含SEQ ID NO：6、8、10、12和14中的任一个的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗CD79b抗体包含SEQID NO：12的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含选自SEQ IDNO：18、24和35的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)包含SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQID NO：26的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，提供抗CD79b抗体，其中所述抗体包含如在上面提供的任何实施方案中的VH和如在上面提供的任何实施方案中的VL。在一些实施方案中，抗体分别包含SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗体分别包含SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗体分别包含SEQID NO：9和SEQ ID NO：10的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗体分别包含SEQ ID NO：7和SEQ IDNO：8的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗体分别包含SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：37的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗体分别包含SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：37的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗体分别包含SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：54的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗体分别包含SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：37的重链和轻链序列，包括那些序列的翻译后修饰。
又一方面，本发明提供与本文提供的抗CD79b抗体结合相同表位的抗体或免疫偶联物。例如，在某些实施方案中，提供与包含SEQID NO：11的VH序列和SEQ ID NO：12的VL序列的抗CD79b抗体结合相同表位的抗体或免疫偶联物。
在本发明的又一方面，根据以上任何实施方案的抗CD79b抗体为单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。在一个实施方案中，抗CD79b抗体为抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双抗体或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，抗体为基本上全长的抗体，例如，如本文所定义的IgG1抗体或其它抗体类型或同种型。
在上述的任何免疫偶联物中，抗体可以与药物部分偶联。在一些实施方案中，抗体与细胞毒性剂偶联。在一些此类实施方案中，细胞毒性剂为奈莫柔比星衍生物，诸如PNU-159682。本文讨论各种非限制性示例性的奈莫柔比星衍生物。
又一方面，根据任何上述实施方案的抗CD79b抗体或免疫偶联物可以单独或组合并入如以下部分1-7所述的任何特征。
1.抗体亲和力
在某些实施方案中，本文提供的抗体的解离常数(Kd)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM，并任选地为≥10-13M。(例如10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。
在一个实施方案中，如下文的测定所述的，通过用目标抗体的Fab形式及其抗原进行的放射性标记的抗原结合测定(RIA)来测量Kd。Fab对抗原的溶液结合亲和力通过以下来测量：用最小浓度的(125I)-标记的抗原在滴定系列的未标记的抗原的存在下平衡Fab，然后用抗Fab抗体涂覆的板捕获结合的抗原(参见，例如，Chen等，J.Mol.Biol.293：865-881(1999))。为了建立测定条件，将多孔板(Thermo Scientific)用在50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕捉抗Fab抗体(Cappel Labs)涂覆过夜，并随后用PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白在室温下(大约23℃)封闭2至5小时。在非吸附板中(Nunc#269620)，将100pM或26pM[125I]-抗原与连续稀释的目标Fab(例如，与抗VEGF抗体Fab-12的评价一致，在Presta等CancerRes.57：4593-4599(1997))。然后将目标Fab孵育过夜；然而，孵育可以持续更长的时间(例如，约65小时)，以确保达到平衡。随后，将混合物转移至捕获板以在室温下孵育(例如，1小时)。然后除去溶液并
将板用PBS中的0.1％聚山梨醇酯洗涤8次。将板干燥后，加入150μl/孔的闪烁剂(MICROSCINT-20TM；Packard)，并将板在TOPCOUNTTMγ计数器(Packard)上计数10分钟。选择给出小于或等于20％的最大结合的每个Fab的浓度用于竞争性结合测定。
根据另一个实施方案，使用表面等离子共振测定来测量Kd，所述表面等离子共振测定其使用-2000或-3000(BIAcore，Inc.，Piscataway，NJ)，用约10应答单位(RU)的固定抗原CM5芯片在25℃下进行。简言之，将羧甲基化的葡聚糖生物传感器芯片(CM5，BIACORE，Inc.)用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)根据供应商的说明书活化。将抗原用pH 4.8的10mM乙酸钠稀释至5μg/ml(约0.2μM)，然后以5μl/分钟的流速注入以实现大约10应答单位(RU)的偶联蛋白。在注入抗原之后，注射1M乙醇胺以封闭未反应的基团。对于动力学测量，在25℃下，以大约25μl/min的流速在含有0.05％聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中注入两倍连续稀释的Fab(0.78nM至500nM)。结合速率(kon)和解离速率(koff)利用简单的一对一朗缪尔(Langmuir)结合模型(评价软件，3.2版)，通过同时拟合结合和解离传感图(sensorgram)来计算。平衡解离常数(Kd)计算为koff/kon的比值。参见，例如，Chen等，J.Mol.Biol.293：865-881(1999)。如果通过上述的表面等离子共振测定测得的结合速率超过106M-1s-1，则该结合速率可以通过利用荧光淬灭技术来测定，所述荧光淬灭技术在25℃下，在如分光计中测量的渐增浓度的抗原存在下，测量pH为7.2的PBS中20nM抗抗原抗体(Fab形式)的荧光发射强度的增加或减少(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm通带)，所述分光计诸如配备停流(stop-flow)的分光光度计(Aviv Instruments)或具有搅拌的比色杯的8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)。
2.抗体片段
在某些实施方案中，本文提供的抗体为抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段以及以下所述的其它片段。对于某些抗体片段的综述，参见Hudson等，Nat.Med.9：129-134(2003)。关于scFv片段的综述，参见，例如，Pluckthün在The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编，(Springer-Verlag，New York)，第269-315页(1994)；还参见WO 93/16185；和美国专利号5,571,894和5,587,458。对于包含补救受体结合表位残基并具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab′)2片段的讨论，参见美国专利号5,869,046。
双抗体为具有可以为二价的或双特异性的两个抗原结合位点的抗体片段。参见，例如，EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等，Nat.Med.9：129-134(2003)；和Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-6448(1993)。三链抗体(triabody)和四链抗体(tetrabody)也描述于Hudson等，Nat.Med.9：129-134(2003)。
单结构域抗体为包含抗体的所有或一部分重链可变结构域或所有或一部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体为人单结构域抗体(Domantis，Inc.，Waltham，MA；参见，例如，美国专利号6,248,516 B1)。
抗体片段可以通过各种技术来制备，所述技术包括但不限于如本文所述的完整抗体的蛋白水解消化以及由重组宿主细胞(例如大肠杆菌(E.coli)或噬菌体)产生。
3.嵌合抗体和人源化抗体
在某些实施方案中，本文提供的抗体为嵌合抗体。某些嵌合抗体描述于例如美国专利号4,816,567；和Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：6851-6855(1984))。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，来源于小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类诸如猴的可变区)和人恒定区。在另一个实例中，嵌合抗体为“类型转换(classswitched)”抗体，其中类或亚类已从亲本抗体的类或亚类而改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施方案中，嵌合抗体为人源化抗体。通常，非人抗体被人源化以减少对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中HVR，例如CDR(或其部分)来源于非人抗体，并且FR(或其部分)来源于人抗体序列。人源化抗体任选地还将包含人恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，HVR残基来源于其中的抗体)的相应残基取代，例如，以恢复或提高抗体特异性或亲和力。
人源化抗体和它们的制备方法被综述于例如，Almagro和Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008)，并且还描述于例如，Riechmann等，Nature 332：323-329(1988)；Queen等，Proc.Nat’lAcad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美国专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等，Methods 36：25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植)；Padlan，Mol.Immunol.28：489-498(1991)(描述“表面重塑(resurfacing)”)；Dall’Acqua等，Methods 36：43-60(2005)(描述“FR改组(shuffling)”)；和Osbourn等，Methods 36：61-68(2005)和Klimka等，Br.J.Cancer，83：252-260(2000)(描述FR改组的“导向选择(guided selection)”方法)。
可以用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最适(best-fit)”方法选择的框架区(参见，例如，Sims等，J.Immunol.151：2296(1993))；来源于轻链或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见，例如，Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4285(1992)；和Presta等，J.Immunol.，151：2623(1993))；人成熟(体细胞突变(somatically mutated))框架区或人种系框架区(参见，例如，Almagro和Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；和来源于筛选FR文库的框架区(参见，例如，Baca等，J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)和Rosok等，J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。
4.人抗体
在某些实施方案中，本文提供的抗体为人抗体。可以使用本领域已知的各种技术生产人抗体。人抗体通常描述于van Dijk和van deWinkel，Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)和Lonberg，Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)。
可以通过将免疫原施用于已被改性以产生对抗原激发应答的完整人抗体或具有人可变区的完整抗体的转基因动物来制备人抗体。此类动物通常含有全部或一部分的人免疫球蛋白基因座，该基因座代替内源免疫球蛋白基因座或存在于染色体外或随机整合到动物的染色体。在此类转基因小鼠中，内源免疫球蛋白基因座通常已经失活。对于从转基因动物获得人抗体的方法综述，参见Lonberg，Nat.Biotech.23：1117-1125(2005)。还参见，例如，描述XENOMOUSETM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584；描述技术的美国专利号5,770,429；描述K-技术的美国专利号7,041,870，和描述技术的美国专利申请公开号US2007/0061900)。来自由此类动物产生的完整抗体的人可变区可以被进一步改性，例如，通过与不同的人恒定区组合。
也可以通过基于杂交瘤的方法来制备人抗体。已描述用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系。(参见，例如，Kozbor J.Immunol.，133：3001(1984)；Brodeur等，Monoclonal AntibodyProduction Techniques and Applications，第51-63页(Marcel Dekker，Inc.，New York，1987)；和Boerner等，J.Immunol.，147：86(1991)。)通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体也描述于Li等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，103：3557-3562(2006)。其它方法包括描述于例如美国专利号7,189,826(描述从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)和Ni，Xiandai Mianyixue，26(4)：265-268(2006)(描述人-人杂交瘤)的那些方法。人杂交瘤技术(Trioma技术)也描述于Vollmers和Brandlein，Histology and Histopathology，20(3)：927-937(2005)以及Vollmers和Brandlein，Methods and Findings in Experimental and ClinicalPharmacology，27(3)：185-91(2005)。
也可通过分离选自来源于人的噬菌体展示文库的Fv克隆的可变结构域序列来产生人抗体。然后此类可变结构域序列可与期望的人恒定结构域组合。从抗体文库选择人抗体的技术如下所述。
5.来源于文库的抗体
可以通过筛选具有所需的一种或多种活性的抗体的组合文库来分离抗体。例如，本领域已知多种方法用于产生噬菌体展示文库和筛选具有所需结合特性的抗体的此类文库。此类方法综述于例如Hoogenboom等，在Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等，编，Human Press，Totowa，NJ，2001)并且还描述于例如在McCafferty等，Nature 348：552-554；Clackson等，Nature 352：624-628(1991)；Marks等，J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Marks和Bradbury，在Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo，编，Human Press，Totowa，NJ，2003)；Sidhu等，J.Mol.Biol.338(2)：299-310(2004)；Lee等，J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；和Lee等，J.Immunol.Methods284(1-2)：119-132(2004)。
在某些噬菌体展示方法中，VH和VL基因的库(repertoire)通过聚合酶链式反应(PCR)分别克隆，并且在噬菌体文库中随机重组，然后其可以用来筛选抗原结合噬菌体，如在Winter等，Ann.Rev.Immunol.，12：433-455(1994)中所述。噬菌体通常以单链Fv(scFv)片段或以Fab片段展示抗体片段。来自免疫源的文库给免疫原提供高亲和力抗体而不需要构建杂交瘤。或者，可以克隆(例如，从人)初始库(naiverepertoire)以给多种非自体抗原也和没有任何免疫作用的自体抗原提供单一来源的抗体，如Griffiths等，EMBO J，12：725-734(1993)所述。最后，还可以通过克隆来自干细胞的未重排的V基因片段和使用含有编码高度可变的CDR3区并实现体外重排的随机序列的PCR引物来通过合成制备初始文库，如Hoogenboom和Winter，J.Mol.Biol.，227：381-388(1992)所述。描述人抗体噬菌体文库的专利出版物包括，例如：美国专利号5,750,373和美国专利公开号2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。
从人抗体文库分离的抗体或抗体片段被认为本文的人抗体或人抗体片段。
6.多特异性抗体
在某些实施方案中，本文提供的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体为具有对至少两个不同位点的结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，一种结合特异性是针对CD79b，且另一种是针对任何其它抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可以结合CD79b的两个不同表位。双特异性抗体也可用于将细胞毒性剂定位到表达CD79b的细胞。双特异性抗体可制备成全长抗体或抗体片段。
用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见Milstein和Cuello，Nature 305：537(1983))、WO 93/08829和Traunecker等，EMBO J.10：3655(1991))，和“结进孔(knob-in-hole)”工程改造(参见，例如，美国专利号5,731,168)。多特异性抗体还可以如下方式制备：工程改造静电操作作用(engineering electrostatic steering effect)用于制备抗体Fc-异二聚体分子(WO 2009/089004A1)；交联两种或多种抗体或片段(参见，例如，美国专利号4,676,980，和Brennan等，Science，229：81(1985))；使用亮氨酸拉链以产生双特异性抗体(参见，例如，Kostelny等，J.Immunol.，148(5)：1547-1553(1992))；使用“双抗体”技术用于制备双特异性抗体片段(参见，例如，Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：6444-6448(1993))；和使用单链Fv(sFv)二聚体(参见，例如，Gruber等，J.Immunol.，152：5368(1994))；和制备三特异性抗体，如例如在Tutt等J.Immunol.147：60(1991)中所述。
具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程改造的抗体，包括“章鱼(Octopus)抗体”也包括在本文中(参见，例如，US 2006/0025576A1)。
本文的抗体或片段还包括“双重作用FAb(Dual Acting FAb)”或“DAF”，其包结合CD79b以及另一个不同抗原的抗原结合位点(例如参见，US 2008/0069820)。
7.抗体变体
在某些实施方案中，考虑本文提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，可能希望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。抗体的氨基酸序列变体可以通过将适当的修改引入到编码抗体的核苷酸序列中或通过肽合成来制备。此类修改包括例如在抗体的氨基酸序列内残基的缺失和/或插入和/或取代。可进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终的构建体，前体条件是最终的构建体具有所需的特性，例如，抗原结合。
a)取代、插入和缺失变体
在某些实施方案中，提供具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。用于取代突变的目标位点包括HVR和FR。保守取代示于表1中的“优选的取代”的标题下。更实质的变化在表1中在“示例性取代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别来进一步描述。可以将氨基酸取代引入目标抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC。
表1
初始残基 示例性取代 优选的取代
Ser(S) Thr Thr
Thr(T) Val；Ser Ser
Trp(W) Tyr；Phe Tyr
Tyr(Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val(V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正亮氨酸 Leu
根据共同的侧链特性，氨基酸可以被如下分组：
(1)疏水性的：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性的：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性的：Asp、Glu；
(4)碱性的：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；
(6)芳族的：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代将需要用这些类别之一的成员替换另一个类别的。
一种类型的取代变体涉及取代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。通常，选择用于进一步研究的所得变体相对于亲本抗体将具有某些生物学特性的修改(例如，改善)(例如，升高的亲和力、降低的免疫原性)和/或将具有基本上保留的亲本抗体的某些生物学特性。示例性的取代变体是亲和力成熟的抗体，其可以例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术诸如本文中所描述的那些技术来方便地生成。简言之，将一个或多个HVR残基突变，并将变体抗体在噬菌体上展示，并对其筛选特定的生物学活性(例如结合亲和力)。
可以对HVR做出改变(例如，取代)，例如以改善抗体亲和力。可以对HVR“热点”，即由在体细胞成熟过程期间以高频率经历突变的密码子编码的残基(参见，例如，Chowdhury，Methods Mol.Biol.207：179-196(2008))，和/或SDR(a-CDR)做出此类改变，其中对所得的变体VH或VL测试结合亲和力。通过次级文库的构建和再选择进行的亲和力成熟已经描述于例如Hoogenboom等，在Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等，编，Human Press，Totowa，NJ，(2001)。)在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如，易错PCR、链改组或寡核苷酸指导的诱变)的任何一种将多样性引入为成熟选择的可变基因。然后，创建次级文库。然后，筛选文库以鉴定具有期望的亲和力的任何抗体变体。另一种引入多样性的方法涉及HVR指导的方法，其中将几个HVR残基(例如，一次4-6个残基)随机化。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性鉴定涉及抗原结合的HVR残基。特别地，经常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些实施方案中，可以在一个或多个HVR内发生取代、插入或缺失，只要此类改变不实质性降低抗体结合抗原的能力。例如，可以对HVR进行不实质性降低结合亲和力的保守性改变(例如，如本文提供的保守性取代)。此类改变可以在HVR“热点”或SDR外部。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个HVR是未改变的，或者含有不超过1、2或3处氨基酸取代。
一种可用于鉴定抗体中可以作为诱变靶位的残基或区域的方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如由Cunningham和Wells(1989)Science，244：1081-1085所述。在此方法中，将残基或靶残基的组(例如，带电荷的残基诸如arg、asp、his、lys和glu)鉴定，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙氨酸或多丙氨酸)取代以测定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始取代显示功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的取代。或者或另外，利用抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体与抗原间的接触点。可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基作为取代的候选。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的特性。
氨基酸序列插入包括长度范围为一个残基至含有100或更多个残基的多肽的氨基-和/或羧基-末端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N-末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体的N-或C-末端与酶(例如对于ADEPT)或延长抗体的血清半衰期的多肽的融合。
b)糖基化变体
在某些实施方案中，改变本文提供的抗体以提高或降低抗体糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列以使得创建或除去一个或多个糖基化位点来方便地实现对抗体的糖基化位点的添加或缺失。
在抗体包含Fc区的情况中，可以改变与其连接的碳水化合物。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分支的、双触角寡糖，其一般通过N键连接于Fc区的CH2结构域的Asn297。参见，例如，Wright等，TIBTECH 15：26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及连接于双触角寡糖结构“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中，可以对抗体中的寡糖进行修饰以创建具有某些改善的特性的抗体变体。
在一个实施方案中，提供了抗体变体，其具有缺乏连接(直接或间接)于Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，此类抗体中的岩藻糖的量可以是1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。通过相对于连接于Asn 297的所有糖结构(例如，复合的、杂合的和高甘露糖的结构)的总和计算糖链内Asn297处岩藻糖的平均量来测定岩藻糖量，如通过MALDI-TOF质谱法测量的，例如如描述于WO 2008/077546。Asn297是指位于Fc区中的约位置297(Fc区残基的Eu编号)的天冬酰胺残基；然而，Asn297也可以由于抗体中的微小序列变化而位于位置297上游或下游约±3个氨基酸，即在位置294和位置300之间。此类岩藻糖基化变体可以具有改善的ADCC功能。参见，例如，美国专利公开号US 2003/0157108(Presta，L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd)。涉及“脱岩藻糖基化的”或“岩藻糖缺乏的”抗体变体的出版物的实例包括：US 2003/0157108；WO2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等.J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能够产生脱岩藻糖基化抗体的细胞系的实例包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的Lec13 CHO细胞(Ripka等Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美国专利申请号US 2003/0157108 A1，Presta，L；和WO 2004/056312 A1，Adams等，尤其在实施例11)，和敲除细胞系，诸如α-1，6-岩藻糖基转移酶基因FUT8，敲除CHO细胞(参见，例如，Yamane-Ohnuki等，Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda，Y.等，Biotechnol.Bioeng.，94(4)：680-688(2006)；和WO2003/085107)。
进一步提供具有两分型寡糖(bisected oligosaccharide)的抗体变体，例如其中连接于抗体Fc区的双触角寡糖是通过GlcNAc两分的。此类抗体变体可以具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的实例描述于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等)；美国专利号6,602,684(Umana等)；和US 2005/0123546(Umana等)。还提供在连接于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可以具有改善的CDC功能。此抗体变体描述于例如WO1997/30087(Patel等)；WO 1998/58964(Raju，S.)；和WO 1999/22764(Raju，S.)。
c)Fc区变体
在某些实施方案中，可以将一种或多种氨基酸修饰引入本文提供的抗体的Fc区中，由此生成Fc区变体。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸修饰(例如取代)的人Fc区序列(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc区)。
在某些实施方案中，本发明涵盖具有一些但不是所有效应功能的抗体变体，所述效应功能使其成为用于如下应用的期望候选物，其中抗体的体内半衰期是重要的，而某些效应功能(诸如补体和ADCC)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定以证实CDC和/或ADCC活性的减少/消除。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺乏FcγR结合(因此有可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞(NK细胞)仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达汇总于Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)的第464页上的表3中。评估目标分子的ADCC活性的体外测定的非限制性实例描述于美国专利号5,500,362(参见，例如Hellstrom，I.等Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))和Hellstrom，I等，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；5,821,337(参见Bruggemann，M.等，J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))。或者，可以采用非放射性测定方法(参见，例如，用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定(CellTechnology，Inc.Mountain View，CA；和CytoTox非放射性细胞毒性测定(Promega，Madison，WI)。对于此类测定有用的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者或另外，可以在体内例如在动物模型中评估目标分子的ADCC活性，诸如公开于Clynes等Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95：652-656(1998)的动物模型。也可以进行C1q结合测定以证实抗体不能结合C1q，并且因此缺乏CDC活性。参见，例如，WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体激活，可以实施CDC测定(参见，例如，Gazzano-Santoro等，J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg，M.S.等，Blood101：1045-1052(2003)；以及Cragg，M.S.和M.J.Glennie，Blood 103：2738-2743(2004))。也可以使用本领域已知的方法来实施FcRn结合和体内清除/半衰期测定(参见，例如，Petkova，S.B.等，Int’l.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。
具有降低的效应功能的抗体包括具有Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个的取代的那些抗体(美国专利号6,737,056)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两处或更多处具有取代的Fc突变体，包括残基265和297取代成丙氨酸的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利号7,332,581)。
描述具有改善的或降低的与FcR的结合的某些抗体变体。(参见，例如，美国专利号6,737,056；WO 2004/056312，和Shields等，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。)
在某些实施方案中，抗体变体包含具有改善ADCC的一处或多处氨基酸取代，例如Fc区的位置298、333和/或334(残基的EU编号方式)的取代的Fc区。
在一些实施方案中，对Fc区做出改变，其导致改变的(即，改善的或降低的)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如，如描述于美国专利号6,194,551、WO 99/51642以及Idusogie等J.Immunol.164：4178-4184(2000)。
具有延长的半衰期和改善的与新生儿Fc受体(FcRn)的结合的抗体描述于US2005/0014934A1(Hinton等)，新生儿Fc受体(FcRn)负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等，J.Immunol.117：587(1976)和Kim等，J.Immunol.24：249(1994))。那些抗体包含其中具有改善Fc区与FcRn结合的一处或多处取代的Fc区。此类Fc变体包括在Fc区残基238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434中的一处或多处具有取代，例如Fc区残基434的取代(美国专利号7,371,826)的那些变体。
还参见Duncan和Winter，Nature 322：738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821；和WO 94/29351，其涉及Fc区变体的其它实例。
d)经半胱氨酸工程改造的抗体变体
在某些实施方案中，可能期望创建经半胱氨酸工程改造的抗体，例如，“thioMAb”，其中抗体的一个或多个残基用半胱氨酸残基取代。在具体的实施方案中，取代的残基存在于抗体的可接近位点。通过用半胱氨酸取代那些残基，反应性硫醇基团由此定位于抗体的可接近位点，并且可以用于将抗体与其它部分(诸如药物部分或连接子-药物部分)偶联，以创建免疫偶联物，如本文进一步所描述。在某些实施方案中，可以用半胱氨酸取代下列残基之任一个或多个：轻链的V205(Kabat编号)；重链的A118(EU编号)；和重链Fc区的S400(EU编号)。非限制性示例性半胱氨酸工程改造的huMA79bv28抗体的重链和轻链示于图4(SEQ ID NO：39、54和55)。可以如例如美国专利号7,521,541所述生成经半胱氨酸工程改造的抗体。
e)抗体衍生物
在某些实施方案中，可以进一步修饰本文提供的抗体以含有本领域已知的且易于获得的另外的非蛋白质部分。适合于抗体衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二氧戊环、聚-1，3，6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)和葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、环氧丙烷/环氧乙烷共聚物(prolypropylene oxide/ethylene oxide co-polymer)、聚氧乙烯化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。连接到抗体上的聚合物数目可以变化，而且如果连接了一个以上的聚合物，那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可根据下列考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于抗体要改进的具体特性或功能、抗体衍生物是否将用于确定条件下的治疗等。
在另一个实施方案中，提供了抗体和可以通过暴露于辐射选择性加热的非蛋白质部分的偶联物。在一个实施方案中，非蛋白质部分是碳纳米管(Kam等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605(2005))。辐射可以是任何波长的，并且包括但不限于对普通细胞没有损害，但是将非蛋白质部分加热至抗体-非蛋白质部分附近的细胞被杀死的温度的波长。
B.重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物来产生抗体，例如，如描述于美国专利号4,816,567。在一个实施方案中，提供了编码本文所述的抗CD79b抗体的分离的核酸。此类核酸可以编码组成抗体VL的氨基酸序列和/或组成抗体VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在另一实施方案中，提供包含此类核酸的一种或多种载体(例如，表达载体)。在另一实施方案中，提供包含此类核酸的宿主细胞。在一个此类实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用下列载体转化)：(1)包含编码组成抗体的VL的氨基酸序列和组成抗体的VH的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)包含编码组成抗体的VL的氨基酸序列的核酸的第一载体和包含编码组成抗体的VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了制备抗CD79b抗体的方法，其中所述方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码如上文所提供的抗体的核酸的宿主细胞，并且任选地，从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
对于抗CD79b抗体的重组生产，将编码例如如上所述的抗体的核酸分离，并插入一种或多种载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可使用常规程序将此类核酸容易地分离并进行测序(例如，通过使用寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针能够特异性结合编码抗体的重链和轻链的基因)。
适合于克隆或表达编码抗体的载体的宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，特别是在不需要糖基化和Fc效应功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见，例如，美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见Charlton，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo，编，Humana Press，Totowa，NJ，2003)，第245-254页，其描述抗体片段在大肠杆菌(E.coli)中的表达。)表达后，可以将抗体在可溶性级分中从细菌细胞团糊中分离，并可以进一步纯化。
除了原核生物外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是适合于编码抗体的载体的克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已经“人源化”从而导致产生具有部分或完全人糖基化样式的抗体的真菌和酵母菌株。参见Gerngross，Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)，和Li等，Nat.Biotech.24：210-215(2006)。
适合于表达糖基化抗体的宿主细胞也衍生自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已经鉴定出许多杆状病毒株，其可以与昆虫细胞一起使用，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。
也可以利用植物细胞培养物作为宿主。参见，例如，美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(其描述了用于在转基因植物中生产抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适合于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它实例是经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或293细胞，如描述于例如Graham等，J.Gen Virol.36：59(1977))；幼年仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4细胞，如描述于例如Mather，Biol.Reprod.23：243-251(1980)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；buffalo大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如描述于例如Mather等，Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68(1982)；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；和骨髓瘤细胞系诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于适合于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见，例如，Yazaki和Wu，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo，编，Humana Press，Totowa，NJ)，第255-268页(2003)。
C.测定
可以通过本领域已知的多种测定对本文提供的抗CD79b抗体鉴定、筛选或表征其物理/化学特性和/或生物学活性。
-方面，例如通过已知方法诸如ELISA、FACS或Western印迹对抗体测试其抗原结合活性。
另一方面，可使用竞争测定来鉴定与本文所述任一抗体竞争与CD79b的结合的抗体。在某些实施方案中，此类竞争性抗体结合与由本文所述任一抗体所结合表位相同的表位(例如，线性或构象表位)。用于定位抗体所结合表位的详细实例性方法提供于Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols，”在Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press，Totowa，NJ)。
在示例性竞争测定中，在包含结合CD79b的第一标记抗体(例如，鼠MA79b抗体、人源化MA79b.v17抗体和/或人源化MA79b.v18抗体和/或人源化MA79b.v28和/或人源化MA79b.v32)和第二未标记抗体(其要测试与第一抗体竞争与CD79b的结合的能力)的溶液中温育固定的CD79b。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，在包含第一标记抗体但不包含第二未标记抗体的溶液中温育固定的CD79b。在允许第一抗体与CD79b结合的条件下温育后，除去过量的未结合抗体，并测量与固定的CD79b缔合的标记的量。如果测试样品中与固定的CD79b缔合的标记的量与对照样品相比实质性降低，那么这指示第二抗体与第一抗体竞争与CD79b的结合。在某些实施方案中，固定的CD79b存在于细胞表面上或在从在其表面上表达CD79b的细胞获得的膜制剂中。参见Harlow和Lane(1988)Antibodies：ALaboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory，ColdSpring Harbor，NY)。
D.免疫偶联物
本发明还提供包含偶联至一种或多种细胞毒性剂的本文抗CD79b抗体的免疫偶联物，所述细胞毒性剂诸如化学治疗剂或药物、生长抑制剂、毒素(例如，蛋白质毒素、细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即，放射偶联物)。
免疫偶联物允许将药物部分靶向递送至肿瘤，并且在一些实施方案中，在其中进行细胞内积聚，其中未偶联药物的全身施用可导致对正常细胞的毒性至不可接受的水平(Polakis P.(2005)Current Opinion inPharmacology 5：382-387)。
抗体药物偶联物(ADC)为通过将有效的细胞毒性药物靶向至抗原表达肿瘤细胞而结合抗体和细胞毒性药物的特性的靶向的化学治疗分子(Teicher，B.A.(2009)Current Cancer Drug Targets 9：982-1004)，从而通过使功效最大化和使脱靶毒性最小化来提高治疗指数(Carter，P.J.和Senter P.D.(2008)The Cancer dour.14(3)：154-169；Chari，R.V.(2008)Acc.Chem.Res.41：98-107。
本发明的ADC化合物包括具有抗癌活性的那些。在一些实施方案中，ADC化合物包含偶联(即共价连接)至药物部分的抗体。在一些实施方案中，抗体通过连接子共价连接至药物部分。本发明的抗体-药物偶联物(ADC)选择性地将有效剂量的药物递送至肿瘤组织，从而可以实现更大的选择性(即更低的有效剂量)，同时提高治疗指数(“治疗窗口”)。
抗体-药物偶联物(ADC)的药物部分(D)可以包括具有细胞毒性或细胞抑制作用的任何化合物、部分或基团。示例性的药物部分包括但不限于具有细胞毒性活性的奈莫柔比星及其衍生物，诸如PNU-159682。此类免疫偶联物的非限制性实例在下面更详细地讨论。
1.示例性抗体-药物偶联物
抗体-药物偶联物(ADC)化合物的示例性实施方案包含靶向肿瘤细胞的抗体(Ab)、药物部分(D)和将Ab连接至D的连接子部分(L)。在一些实施方案中，抗体通过一个或多个氨基酸残基(诸如赖氨酸和/或半胱氨酸)连接至连接子部分(L)。
一种示例性ADC具有式I：
Ab-(L-D)p  I
其中p为1至约20。在一些实施方案中，可以偶联至抗体的药物部分的数量受到游离半胱氨酸残基数量的限制。在一些实施方案中，通过本文所述的方法将游离半胱氨酸残基引入到抗体氨基酸序列。式I的示例性ADC包括但不限于具有1、2、3或4个工程改造的半胱氨酸氨基酸的抗体(Lyon，R.等(2012)Methods in Enzym.502：123-138)。在一些实施方案中，不使用工程改造的一个或多个游离半胱氨酸残基已经存在于抗体中，在这种情况下，现有的游离半胱氨酸残基可用于将抗体偶联至药物。在一些实施方案中，在抗体偶联之前将抗体暴露于还原条件下以产生一个或多个游离半胱氨酸残基。
a)示例性连接子
“连接子”(L)是可用于将一个或多个药物部分(D)连接至抗体(Ab)以形成式I的抗体-药物偶联物(ADC)的双官能或多官能部分。在一些实施方案中，可以使用具有反应性官能团用于共价连接至药物和至抗体的连接子来制备抗体-药物偶联物(ADC)。例如，在一些实施方案中，抗体(Ab)的半胱氨酸硫醇可以与连接子或药物-连接子中间体的反应性官能团形成键以制备ADC。
一方面，连接子具有能够与抗体上存在的游离半胱氨酸反应以形成共价键的官能团。此类反应性官能团的非限制性实例包括马来酰亚胺、卤代乙酰胺类(haloacetamides)、α-卤代乙酰基、活化酯诸如琥珀酰亚胺酯、4-硝基苯基酯、五氟苯基酯、四氟苯基酯、酸酐、酰氯、磺酰氯、异氰酸酯和异硫氰酸酯。参见，例加，Klussman，等(2004)，Bioconjugate Chemistry 15(4)：765-773的第766页的偶联方法和本文的实施例。
在一些实施方案中，连接子具有能够与存在于抗体上的亲电基团反应的官能团。示例性的此类亲电基团包括但不限于醛和酮的羰基。在一些实施方案中，连接子的反应性官能团的杂原子可以与抗体上的亲电基团反应并形成至抗体单元的共价键。此类反应性官能团的非限制性实例包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。
连接子可以包含一个或多个连接子组分。示例性的连接子组分包括6-马来酰亚胺基己酰基(maleimidocaproyl)(“MC”)、马来酰亚胺基丙酰基(maleimidopropanoyl)(“MP”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”)、对氨基苯甲基氧羰基(“PAB”)、N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫)戊酸酯(“SPP”)和4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1羧酸酯(“MCC”)。各种连接子成分是本领域已知的，其中一些在下面描述。
连接子可以是促进药物释放的“可裂解连接子”。非限制性示例性可裂解连接子包括酸不稳定的连接子(例如，包括腙)、蛋白酶敏感的(例如，肽酶敏感的)连接子、光不稳定连接子或含二硫化物的连接子(Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)；US 5208020)。
在某些实施方案中，连接子具有下式II：
-Aa-Ww-Yy-  II
其中A为“拉伸单元(stretcher unit)”，并且a为0至1的整数；W为“氨基酸单元”，并且w为0至12的整数；Y为“间隔基单元”，并且y为0、1或2。包含式II的连接子的ADC具有式I(A)：Ab-(Aa-Ww-Yy-D)p，其中Ab、D和p如上对于式I所定义。此类连接子的示例性实施方案描述于美国专利号7,498,298，其通过引用明确并入本文。
在一些实施方案中，连接子组分包括将抗体连接至另一个连接子组分或药物部分的“拉伸单元”(A)。非限制性示例性拉伸单元如下所示(其中波浪线表示共价连接至抗体、药物或另外的连接子组分的位点)：
在一些实施方案中，连接子组分包括“氨基酸单元”(W)。在一些此类实施方案中，氨基酸单元允许连接子被蛋白酶裂解，从而促进在暴露于细胞内蛋白酶(诸如溶酶体酶)后药物从免疫偶联物的释放(Doronina等(2003)Nat.Biotechnol.21：778-784)。示例性氨基酸单元包括但不限于二肽、三肽、四肽和五肽。示例性二肽包括但不限于缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)；苯丙氨酸-赖氨酸(fk(或phe-lys)；苯丙氨酸-高赖氨酸(phe-homolys)；和N-甲基-丙氨酸-瓜氨酸(Me-val-cit)。示例性三肽包括但不限于甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。氨基酸单元可以包含天然存在的氨基酸残基和/或次要氨基酸和/或非天然存在的氨基酸类似物，诸如瓜氨酸。氨基酸单元可被设计和优化以供特定酶进行酶促裂解，所述特定酶例如，肿瘤相关的蛋白酶、组织蛋白酶B、C和D或纤维蛋白溶酶蛋白酶。
通常，可以通过形成两个或多个氨基酸和/或肽片段之间的肽键来制备肽型连接子。例如可以根据液相合成方法制备此类肽键(例如，E.和K.Lübke(1965)“The Peptides”，第1卷，第76-136页，Academic Press)。
在一些实施方案中，连接子组分包括直接或通过拉伸单元和/或氨基酸单元将抗体连接至药物部分的“间隔基单元”(Y)。间隔基单元可以是“自我牺牲的(self-immolative)”或“非自我牺牲的”。“非自我牺牲的”间隔基单元是其中部分或全部间隔基单元在裂解ADC后保持与药物部分结合的单元。非自我牺牲的间隔基单元的实例包括但不限于甘氨酸间隔基单元和甘氨酸-甘氨酸间隔基单元。在一些实施方案中，通过肿瘤细胞相关的蛋白酶将含有甘氨酸-甘氨酸间隔基单元的ADC进行酶促裂解导致甘氨酸-甘氨酸-药物部分从ADC的其余部分上释放。在一些此类实施方案中，甘氨酸-甘氨酸-药物部分在肿瘤细胞中经历水解步骤，因此从药物部分上裂解甘氨酸-甘氨酸间隔基单元。
“自我牺牲的”间隔基单元允许释放药物部分。在某些实施方案中，连接子的间隔基单元包含对-氨基苄基单元。在一些此类实施方案中，将对氨基苄基醇通过酰胺键连接到氨基酸单元，并且在苄醇和药物之间形成氨基甲酸酯、氨基甲酸甲酯或碳酸酯(Hamann等(2005)ExpertOpin.Ther.Patents(2005)15：1087-1103)。在一些实施方案中，间隔基单元包含对氨基苯甲基氧羰基(PAB)。在一些实施方案中，包含自我牺牲的连接子的ADC具有以下结构：
其中Q为-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-卤素、-硝基或-氰基；m为0至4的整数；X可以是一个或多个另外的间隔基单元或可以不存在，并且p为1至约20。在一些实施方案中，p的范围为1至10、1至7、1至5或1至4。非限制性示例性X间隔基单元包括：
其中R1和R2独立选自H和C1-C6烷基。在一些实施方案中，R1和R2各自为-CH3。
自我牺牲的间隔基的其它实例包括但不限于：电子上类似于PAB基团的芳族化合物，诸如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(美国专利号7,375,078；Hay等(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9：2237)和邻或对氨基苄基缩醛。在一些实施方案中，可以使用在酰胺键水解后进行环化的间隔基，诸如取代和未取代的4-氨基丁酸酰胺(Rodrigues等(1995)Chemistry Biology 2：223)、适当取代的双环[2.2.1]和双环[2.2.2]环系(Storm等(1972)J.Amer.Chem.Soc.94：5815)和2-氨基苯基丙酸酰胺(Amsberry，等(1990)J.Org.Chem.55：5867)。将药物连接至甘氨酸残基的α-碳上是可用于ADC的自我牺牲的间隔基的另一个实例(Kingsbury等(1984)J.Med.Chem.27：1447)。
在一些实施方案中，连接子L可以是通过分支的多官能连接子部分将一个以上药物部分共价连接至抗体的树枝状类型连接子(Sun等(2002)Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 12：2213-2215；Sun等(2003)Bioorganic&Medicinal Chemistry 11：1761-1768)。树枝状连接子可以增加药物与抗体的摩尔比，即负载，其与ADC的效能有关。因此，如果抗体仅带有一个反应性半胱氨酸硫醇基团，那么可以通过树枝状连接子连接众多药物部分。
如下示出式I的ADC情形中的非限制性示例性连接子：
其中R1和R2独立选自H和C1-C6烷基。在一些实施方案中，R1和R2各自为-CH3。
Phe-homoLys-PAB-Ab；其中n为0至12。在一些实施方案中，n为2至10。在一些实施方案中，n为4至8。
又一非限制性示例性ADC包括以下结构：
其中X为：
Y为：
每个R独立地为H或C1-C6烷基；并且n为1至12。
在一些实施方案中，连接子被调节溶解度和/或反应性的基团取代。作为非限制性实例，带电荷的取代基诸如磺酸酯(-SO3 -)或铵可以增加连接子试剂的水溶性和促进连接子试剂与抗体和/或药物部分的偶联反应，或促进Ab-L(抗体-连接子中间体)与D或D-L(药物-连接子中间体)与Ab的偶联反应，这取决于制备ADC所采用的合成途径。在一些实施方案中，将一部分连接子偶联到抗体并且将一部分连接子偶联到药物，然后将Ab-(连接子部分)a偶联到药物-(连接子部分)b以形成式I的ADC。
本发明的化合物明确包括但不限于用以下连接子试剂制备的ADC：双马来酰亚胺基-三氧基乙二醇(BMPEO)、N-(β-马来酰亚胺基丙基氧基)-N-羟基琥珀酰亚胺酯(BMPS)、N-(ε-马来酰亚胺基己酰氧基)琥珀酰亚胺酯(EMCS)、N-[γ-马来酰亚胺基丁酰氧基]琥珀酰亚胺酯(GMBS)、1，6-正己烷-二-乙烯基砜(HBVS)、琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧基-(6-氨基己酸酯)(LC-SMCC)、间-马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、4-(4-N-马来酰亚胺基苯基)丁酸酰肼(MPBH)、琥珀酰亚胺基3-(溴乙酰胺基)丙酸酯(SBAP)、琥珀酰亚胺基碘乙酸酯(SIA)、琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶硫)戊酸酯(SPP)、琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)、琥珀酰亚胺基4-(对-马来酰亚胺基苯基)丁酸酯(SMPB)、琥珀酰亚胺基6-[(β-马来酰亚胺基丙酰胺基)己酸酯](SMPH)、亚氨基四氢噻吩(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC和磺基-SMPB和琥珀酰亚胺基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯(SVSB)，并包括双-马来酰亚胺试剂：二硫基双马来酰亚胺基乙烷(DTME)、1，4-双马来酰亚胺基丁烷(BMB)、1，4双马来酰亚胺基-2，3-二羟基丁烷(BMDB)、双马来酰亚胺基己烷(BMH)、双马来酰亚胺基乙烷(BMOE)、BM(PEG)2(如下所示)，和BM(PEG)3(如下所示)；亚胺酯的双官能衍生物(诸如乙二亚胺基二甲酯HCl)、活性酯(诸如双琥拍亚胺酰辛二酸酯)、醛(诸如戊二醛)、双-叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)、双-叠氮衍生物(诸如双-(对叠氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2，6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1，5-二氟-2,4-二硝基苯)。在一些实施方案中，双-马来酰亚胺试剂使抗体中的半胱氨酸的硫醇基团连接到含有硫醇的药物部分、连接子或连接子-药物中间体。与硫醇基团具有反应性的其它官能团包括但不限于碘乙酰胺、溴乙酰胺、乙烯基吡啶、二硫化物、吡啶基二硫化物、异氰酸酯和异硫氰酸酯。
某些有用的连接子试剂可以从各种商业来源获得，诸如PierceBiotechnology，Inc.(Rockford，IL)，Molecular Biosciences Inc.(Boulder，CO)，或根据本领域描述的方法合成；例如在Toki等(2002)J.Org.Chem.67：1866-1872；Dubowchik，等(1997)Tetrahedron Letters，38：5257-60；Walker，M.A.(1995)J.Org.Chem.60：5352-5355；Frisch等(1996)Bioconjugate Chem.7：180-186；US 6214345；WO 02/088172；US 2003130189；US2003096743；WO 03/026577；WO 03/043583；和WO 04/032828。
碳-14标记的1-异硫氰酰苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸偶联至抗体的示例性螯合剂。参见，例如，WO94/11026。
b)示例性药物部分
在一些实施方案中，ADC包含蒽环类药物。蒽环类药物为展现细胞毒性活性的抗生素化合物。尽管不旨在受任何具体理论约束，但研究已表明蒽环类药物可通过几种不同机制操作用来杀死细胞，所述机制包括：1)将药物分子插入细胞的DNA中从而抑制依赖DNA的核酸合成；2)通过然后与细胞大分子反应以引起细胞损伤的自由基药物来产生，和/或3)药物分子与细胞膜的相互作用(参见，例如，C.Peterson等，“Transport And Storage Of Anthracycline In ExperimentalSystems And Human Leukemia”在Anthracycline Antibiotics In Cancer  Therapy；N.R.Bachur，“Free Radical Damage”同上，在第97-102页)。由于其细胞毒性可能性，蒽环类药物已用于治疗许多癌症诸如白血病、乳腺癌、肺癌、卵巢腺癌和肉瘤(参见例如，P.H-Wiernik，在Anthracycline：Current Status And New Developments第11页)。
非限制性示例性蒽环类药物包括多柔比星、表柔比星、伊达比星、柔红霉素、奈莫柔比星及其衍生物。已经制备并研究柔红霉素和多柔比星的免疫偶联物和前药(Kratz等(2006)Current Med.Chem.13：477-523；Jeffrey等(2006)Bioorganic&Med.Chem.Letters 16：358-362；Torgov等(2005)Bioconj.Chem.16：717-721；Nagy等(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：829-834；Dubowchik等(2002)Bioorg.&Med.Chem.Letters 12：1529-1532；King等(2002)J.Med.Chem.45：4336-4343；EP 0328147；US 6630579)。抗体-药物偶联物BR96-多柔比星与肿瘤相关的抗原Lewis-Y特异性反应并且已在I期和II期研究中评估(Saleh等(2000)J.Clin.Oncology 18：2282-2292；Ajani等(2000)Cancer Jour.6：78-81；Tolcher等(1999)J.Clin.Oncology 17：478-484)。
PNU-159682是奈莫柔比星有效的代谢物(或衍生物)(Quintieri，等(2005)Clinical Cancer Research 11(4)：1608-1617)。奈莫柔比星是在多柔比星的糖苷氨基上具有2-甲氧基吗啉代基团的多柔比星的半合成类似物并且已进行临床评估(Grandi等(1990)Cancer Treat.Rev.17：133；Ripamonti等(1992)Brit.J.Cancer 65：703；)，包括肝细胞癌的II/III期试验(Sun等(2003)Proceedings of the American Societyfor Clinical Oncology 22，Abs1448；Quintieri(2003)Proceedings of the American Association of Cancer Research，44：第1版，Abs 4649；Pacciarini等(2006)Jour.Clin.Oncology 24：14116)。
包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物的非限制性示例性ADC示于式Ia中：
其中R1是氢原子、羟基或甲氧基并且R2是C1-C5烷氧基；或其药学上可接受的盐；
L1和Z一起为如本文所述的连接子(L)；
T为如本文所述的抗体(Ab)；并且
m为1至约20。在一些实施方案中，m为1至10、1至7、1至5或1至4。
在一些实施方案中，R1和R2均为甲氧基(-OMe)。
包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物的另外的非限制性示例性ADC示于式Ib中：
其中R1是氢原子、羟基或甲氧基并且R2是C1-C5烷氧基；或其药学上可接受的盐；
L2和Z一起为如本文所述的连接子(L)；
T为如本文所述的抗体(Ab)；并且
m为1至约20。在一些实施方案中，m为1至10、1至7、1至5或1至4。
在一些实施方案中，R1和R2均为甲氧基(-OMe)。
在一些实施方案中，含有奈莫柔比星的ADC的奈莫柔比星组分为PNU-159682。在一些此类实施方案中，ADC的药物部分可以具有以下结构之一：
其中波浪线表示与所述连接子(L)的所述连接。
蒽环类药物(包括PNU-159682)可以通过几个连接位点和多个连接子与抗体偶联(US 2011/0076287；WO2009/099741；US 2010/0034837；WO 2010/009124)，包括本文所述的连接子。
包含奈莫柔比星和连接子的示例性ADC包括但不限于：
PNU-159682马来酰亚胺缩醛-Ab；
PNU-159682-val-cit-PAB-Ab；
PNU-159682-val-cit-PAB-间隔基-Ab；
PNU-159682-val-cit-PAB-间隔基(R1R2)-Ab，其中：
R1和R2独立选自H和C1-C6烷基；并且
PNU-159682-马来酰亚胺缩醛-Ab。
PNU-159682马来酰亚胺缩醛-Ab的连接子是酸不稳定的，而PNU-159682-val-cit-PAB-Ab、PNU-159682-val-cit-PAB-间隔基-Ab和PNU-159682-val-cit-PAB-间隔基(R1R2)-Ab的连接子可被蛋白酶裂解。
c)药物负载
药物负载由p表示，式I的分子中每个抗体的药物部分的平均数。药物负载范围可以为1至20个药物部分(D)/抗体。式I的ADC包括与从1至20的药物部分范围偶联的抗体的集合。在由偶联反应制备ADC中的每个抗体的药物部分的平均数可以通过常规方法(诸如质谱法、ELISA测定和HPLC)来表征。也可以根据p确定ADC的数量分布。在一些情况下，均匀的ADC(其中p为具有其它药物负载的ADC的某一值)的分离、纯化和表征可以通过诸如反相HPLC或电泳的方法来实现。
对于一些抗体-药物偶联物，p可能受到抗体上连接位点数量的限制。例如，当连接为如在上述某些示例性实施方案中的半胱氨酸硫醇时，抗体可以仅具有一个或多个半胱氨酸硫醇基团，或者可以仅具有一个或多个充分反应性硫醇基团，通过该硫醇基团可以连接连接子。在某些实施方案中，较高药物负载(例如p＞5)可能导致聚集、不溶性、毒性或丧失某些抗体-药物偶联物的细胞渗透性。在某些实施方案中，ADC的平均药物负载范围为1至约8；约2至约6；或约3至约5。实际上，已经表明对于某些ADC，每个抗体的药物部分的最佳比率可以小于8，并且可以为约2至约5(US 7498298)。
在某些实施方案中，在偶联反应期间与抗体偶联的药物部分的量少于理论最大值。抗体可以包含例如不与药物-连接子中间体或连接子试剂反应的赖氨酸残基，如下所述。通常，抗体不含有许多可以连接至药物部分的游离的和反应性的半胱氨酸硫醇基团；实际上抗体中的大部分半胱氨酸硫醇残基作为二硫桥而存在。在某些实施方案中，可以用还原剂诸如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(tricarbonylethylphosphine)(TCEP)在部分或全部还原条件下使抗体还原以产生反应性半胱氨酸硫醇基团。在某些实施方案中，使抗体经历变性条件以揭示反应性亲核基团诸如赖氨酸或半胱氨酸。
ADC的负载(药物/抗体比率)可以以不同方式控制，例如通过：(i)限制药物-连接子中间体或连接子试剂相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制偶联反应时间或温度，和(iii)部分或限制半胱氨酸硫醇修饰的还原条件。
应当理解，如果不止一个亲核基团与药物-连接子中间体或连接子试剂反应，那么所得产物是ADC化合物与连接至抗体的一个或多个药物部分的分布的混合物。可以通过对抗体特异性并且对药物特异性的双ELISA抗体测定从混合物中计算每个抗体的药物的平均数。可以通过质谱法来鉴定混合物中的单个ADC分子，并通过HPLC例如疏水性相互作用色谱法来分离(参见，例如，McDonagh等(2006)Prot.Engr.Design & Selection 19(7)：299-307；Hamblett等(2004)Clin.CancerRes.10：7063-7070；Hamblett，K.J.，等“Effect of drug loading on thepharmacology，pharmacokinetics，and toxicity of an anti-CD30antibody-drug conjugate，”摘要号624，美国癌症研究协会(American Associationfor Cancer Research)，2004届年会，2004年3月27日至31日，Proceedings of the AACR，第45卷，2004年3月；Alley，S.C.，等“Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates，”摘要号627，美国癌症研究协会，2004届年会，2004年3月27日至31日，Proceedings ofthe AACR，第45卷，2004年3月)。在某些实施方案中，可以通过电泳或色谱法从偶联混合物中分离具有单负载值的均匀的ADC。
d)制备免疫偶联物的某些方法
可通过采用本领域技术人员已知的有机化学反应、条件和试剂的多种途径制备式I的ADC，所述途径包括：(1)使抗体的亲核基团与二价连接子试剂反应以通过共价键形成Ab-L，然后与药物部分D反应；和(2)使药物部分的亲核基团与二价连接子试剂反应以通过共价键形成D-L，然后与抗体的亲核基团反应。通过后一种途径制备式I的ADC的示例性方法描述于US 7498298，其通过引用明确并入本文。
抗体上的亲核基团包括但不限于：(i)N-末端胺基团，(ii)侧链胺基团，例如赖氨酸，(iii)侧链硫醇基团，例如半胱氨酸，和(iv)糖羟基或氨基团，其中所述抗体是糖基化的。胺、硫醇和羟基为亲核性的并且能够与连接子部分和连接子试剂上的亲电子基团反应以形成共价键，所述连接子部分和连接子试剂包括：(i)活性酯诸如NHS酯、HOBt酯、卤代甲酸酯和酰卤；(ii)烷基和苄基卤化物诸如卤代乙酰胺类；和(iii)醛、酮、羧基和马来酰亚胺基团。某些抗体具有可还原的链间二硫键，即半胱氨酸桥。可通过用还原剂诸如DTT(二硫苏糖醇)或三羰基乙基膦(TCEP)处理使得抗体具有反应性用于与连接子试剂偶联，以使所述抗体完全或部分还原。理论上，每个半胱氨酸桥将因此形成两个反应性硫醇亲核体。可以通过赖氨酸残基的修饰，例如通过使赖氨酸残基与2-亚胺硫醇烷(2-iminothiolane)(Traut’s试剂)反应，将另外的亲核基团引入抗体，导致胺转化为硫醇。也可以通过引入一个、两个、三个、四个或更多个半胱氨酸残基(例如，通过制备包含一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的变体抗体)将反应性硫醇基团引入抗体。
也可以通过使抗体上的亲电子基团(诸如醛或酮羰基)与连接子试剂或药物上的亲核基团反应来产生本发明的抗体-药物偶联物连接子试剂上的有用的亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。在一个实施方案中，修饰抗体以引入能够与连接子试剂或药物上的亲核取代基反应的亲电子部分。在另一个实施方案中，糖基化抗体上的糖可以用例如高碘酸盐氧化剂氧化，以形成可以与连接子试剂或药物部分的胺基团反应的醛或酮基团。所得的亚胺席夫(Schiff)碱基团可形成稳定的键，或可以被例如硼氢化物试剂还原以形成稳定的胺键。在一个实施方案中，糖基化抗体的碳水化合物部分与半乳糖氧化酶或偏高碘酸钠(sodium meta-periodate)的反应可以产生可能与药物上的适当基团反应的抗体的羰基(醛和酮)基团(Hermanson，Bioconjugate Techniques)。在另一个实施方案中，含有N-末端丝氨酸或苏氨酸残基的抗体可以与偏高碘酸钠反应，导致产生醛代替第一氨基酸(Geoghegan & Stroh，(1992)Bioconjugate Chem.3：138-146；US 5362852)。此类醛可以与药物部分或连接子亲核体反应。
药物部分上的示例性亲核基团包括但不限于：胺、硫醇、羟基、酰肼、肟、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼基团，所述亲核基团能够与连接子部分和连接子试剂上的亲电子基团反应以形成共价键，所述连接子部分和连接子试剂包括：(i)活性酯诸如NHS酯、HOBt酯、卤代甲酸酯和酰卤；(ii)烷基和苄基卤化物诸如卤代乙酰胺类；(iii)醛、酮、羧基和马来酰亚胺基团。
在本文标题为“示例性连接子”的部分描述可用于制备ADC的非限制性示例性交联剂。使用此类交联剂连接两个部分(包括蛋白质部分和化学部分)的方法是本领域已知的。在一些实施方案中，包含抗体和细胞毒性剂的融合蛋白可以例如通过重组技术或肽合成来制备。重组DNA分子可以包含编码偶联物的抗体和细胞毒性部分的区域，所述抗体和细胞毒性部分彼此邻近或被编码不破坏偶联物的所需特性的连接子多肽的区域隔开。
在另一个实施方案中，抗体可以偶联至“受体”(诸如链霉亲和素)用于肿瘤预靶向，其中将抗体-受体偶联物施用于患者，然后使用清除剂从循环中除去未结合的偶联物，然后施用偶联至细胞毒性剂(例如，药物或放射性核苷酸)的“配体”(例如，抗生物素蛋白)。
E.用于诊断和检测的方法和组合物
在某些实施方案中，本文提供的任何抗CD79b抗体可用于检测生物样品中CD79b的存在。本文所用的术语“检测”涵盖定量或定性检测。“生物样品”包括例如细胞或组织(例如，活检材料，包括癌性或可能癌性的淋巴组织，包括来自患有或疑似患有B细胞病症和/或B细胞增殖性病症的受试者的组织，所述病症包括但不限于淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。
在一个实施方案中，提供用于诊断或检测方法的抗CD79b抗体。在另一方面，提供检测生物样品中CD79b的存在的方法。在某些实施方案中，该方法包括在允许抗CD79b抗体与CD79b结合的条件下使生物样品与如本文所述的抗CD79b抗体接触，以及检测抗CD79b抗体和生物样品中的CD79b之间是否形成复合物。此类方法可以是体外或体内方法。在一个实施方案中，抗CD79b抗体用于选择有资格用抗CD79b抗体治疗(例如其中CD79b是用于选择患者的生物标记物)的受试者。在另一实施方案中，生物样品为细胞或组织(例如，癌性或可能癌性的淋巴组织，包括患有或疑似患有B细胞病症和/或B细胞增殖性病症的受试者的组织，所述病症包括但不限于淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。
在另一实施方案中，抗CD79b抗体在体内被用于检测(例如，通过体内成像)受试者中的CD79b阳性癌症，例如为了对癌症进行诊断、预后或分期、确定适当的疗程或监测癌症对治疗的反应的目的。本领域已知的用于体内检测的一种方法是免疫-正电子发射断层扫描(免疫-PET)，如描述于例如van Dongen等，The Oncologist 12：1379-1389(2007)和Verel等，J.Nucl.Med.44：1271-1281(2003)。在此类实施方案中，提供用于检测受试者中CD79b阳性癌症的方法，所述方法包括给患有或疑似患有CD79b阳性癌症的受试者施用标记的抗CD79b抗体，以及检测受试者中标记的抗CD79b抗体，其中检测到所述标记的抗CD79b抗体表明受试者中的CD79b阳性癌症。在某些此类实施方案中，标记的抗CD79b抗体包含偶联到正电子发射体(诸如68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr和124I)的抗CD79b抗体。在特定的实施方案中，正电子发射体为89Zr。
在其它实施方案中，诊断或检测的方法包括使固定在基质的第一抗CD79b抗体与生物样品接触以测试CD79b的存在，使基质暴露于第二抗CD79b抗体，并检测是否第二抗CD79b结合于第一抗CD79b抗体和生物样品中的CD79b之间的复合物。基质可以是任何支持介质，例如玻璃、金属、陶瓷、聚合物珠粒、载玻片、芯片和其它基质。在某些实施方案中，生物样品包括细胞或组织(例如，活检材料，包括癌性或可能癌性的淋巴组织，包括来自患有或疑似患有B细胞病症和/或B细胞增殖性病症的受试者的组织，所述病症包括但不限于淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)。在某些实施方案中，第一或第二抗CD79b抗体为本文所述的任何抗体。
根据任何上述实施方案可以诊断或检测的示例性病症包括CD79b阳性癌症，诸如CD79b阳性淋巴瘤、CD79b阳性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL；包括但不限于CD79b阳性侵袭性NHL、CD79b阳性复发性侵袭性NHL、CD79b阳性复发性无痛NHL、CD79b阳性顽固性NHL和CD79b阳性顽固性无痛NHL)、CD79b阳性慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、CD79b阳性小淋巴细胞性淋巴瘤、CD79b阳性白血病、CD79b阳性多毛细胞白血病(HCL)、CD79b阳性急性淋巴细胞性白血病(ALL)、CD79b阳性伯基特氏淋巴瘤和CD79b阳性套细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，CD79b阳性癌症为接收抗CD79b免疫组织化学(IHC)分值大于“0”的癌症，其对应于在＞90％的肿瘤细胞中非常弱的染色或无染色。在一些实施方案中，CD79b阳性癌症以1+、2+或3+水平表达CD79b，其中1+对应于在＞50％的肿瘤细胞中为弱染色，2+对应于在＞50％的肿瘤细胞中为中度染色，并且3+对应于在＞50％的肿瘤细胞中为强染色。在一些实施方案中，CD79b阳性癌症为根据原位杂交(ISH)测定表达CD79b的癌症。在一些此类实施方案中，使用类似于用于IHC的计分系统。在一些实施方案中，CD79b阳性癌症为根据检测CD79b mRNA的反转录酶PCR(RT-PCR)测定来表达CD79b的癌症。在一些实施方案中，所述RT-PCR为定量RT-PCR。
在某些实施方案中，提供标记的抗CD79b抗体。标记包括但不限于直接检测的标记或部分(诸如荧光、发色团、电子致密、化学发光和放射性标记)以及间接检测(例如，通过酶促反应或分子相互作用)的部分，诸如酶或配体。示例性标记包括但不限于放射性同位素32p、14C、125I、3H和131I；荧光团诸如稀土螯合物或荧光黄及其衍生物；罗丹明及其衍生物；丹磺酰；伞形酮(umbelliferone)；荧光素酶(luceriferase)例如萤火虫萤光素酶和细菌荧光素酶(美国专利号4,737,456)；荧光素；2，3-二氢酞嗪二酮；辣根过氧化物酶(HRP)；碱性磷酸酶；β-半乳糖苷酶；葡萄糖淀粉酶；溶菌酶；糖氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；杂环氧化酶诸如尿酸氧化酶和黄嘌呤氧化酶，其与采用过氧化氢以氧化染料前体的酶(诸如HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶)偶联；生物素/抗生物素蛋白；自旋标记；噬菌体标记；稳定的自由基等。在另一个实施方案中，标记是正电子发射体。正电子发射体包括但不限于68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr和124I。在特定实施方案中，正电子发射体为89Zr。
F.药物制剂
通过使具有所需纯度的此类抗体或免疫偶联物与一种或多种任选的药学上可接受的载体混合来制备如本文所述的抗CD79b抗体或免疫偶联物的药物制剂(Remington′s Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编著(1980))，以冻干制剂或水溶液的形式。药学上可接受的载体在采用的剂量和浓度下对接受者通常是无毒的，并且包括但不限于：缓中液诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷基酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂诸如EDTA；糖类诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子诸如钠离子；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂诸如聚乙二醇(PEG)。本文示例性的药学上可接受的载体还包括间质药物分散剂诸如可溶性在中性条件下具有活性的(neutral-active)透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如，人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(BaxterInternational，Inc.)。某些示例性sHASEGP和使用方法(包括rHuPH20)公开于美国专利公开号2005/0260186和2006/0104968。一方面，sHASEGP与一种或多种其它糖胺聚糖酶(glycosaminoglycanase)诸如软骨素酶组合。
示例性的冻干抗体或免疫偶联物制剂描述于美国专利号6,267,958。含水的抗体或免疫偶联物制剂包括描述于美国专利号6,171,586和WO2006/044908的那些制剂，后者的制剂包括组氨酸-醋酸盐缓中液。
本文的制剂还可以含有正在被治疗的特定适用症所必需的超过一种活性成分，优选地具有不会不利地互相影响的互补活性的那些。
活性成分也可以包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如分别为羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中、包埋在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)中或包埋在粗乳剂中。此类技术公开于Remington′s Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编著(1980)。
可以制备缓释制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有抗体或免疫偶联物的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质呈成形物品，例如膜或微胶囊的形式。
将用于体内施用的制剂通常是无菌的。例如，通过经由无菌过滤膜过滤来容易地实现灭菌。
G.治疗方法和组合物
本文提供的任何抗CD79b抗体或免疫偶联物可以用于方法(例如治疗方法)中。
一方面，本文提供的抗CD79b抗体或免疫偶联物用于抑制CD79b阳性细胞增殖的方法中，该方法包括在允许使抗CD79b抗体或免疫偶联物与细胞表面的CD79b结合的条件下将细胞暴露于抗CD79b抗体或免疫偶联物中，从而抑制细胞增殖。在某些实施方案中，该方法是体外或体内方法。在一些实施方案中，该细胞为B细胞。在一些实施方案中，该细胞是肿瘤B细胞，诸如淋巴瘤细胞或白血病细胞。
体外细胞增殖的抑制可使用从Promega(Madison，WI)商购获得的CellTiter-GloTM发光细胞活力测定(Luminescent Cell Viability Assay)来测定。该测定基于存在的ATP的定量(其为代谢活性细胞的指示)来确定培养物中存活细胞的数量。参见Crouch等(1993)J.Immunol.Meth.160：81-88，美国专利号6602677。该测定可以在96-或384-孔板格式中进行，使得它适于自动高通量筛选(HTS)。参见Cree等(1995)AntiCancerDrugs 6：398-404。该测定方法涉及直接向培养的细胞中加入单个试剂(试剂)。这导致细胞裂解并产生通过荧光素酶反应产生的发光信号。发光信号与存在的ATP的量成比例，所述存在的ATP的量与存在于培养物中的活细胞的数量成正比。可以通过光度计或CCD摄像成像装置来记录数据。发光输出表示为相对光单位(RLU)。
另一方面，提供用作药物的抗CD79b抗体或免疫偶联物。另一方面，提供用于治疗方法的抗CD79b抗体或免疫偶联物。在某些实施方案中，提供用于治疗CD79b阳性癌症的抗CD79b抗体或免疫偶联物。在某些实施方案中，本发明提供用于治疗患有CD79b阳性癌症的个体的方法的抗CD79b抗体或免疫偶联物，该方法包括向所述个体施用有效量的抗CD79b抗体或免疫偶联物。在一个此类实施方案中，该方法还包括向所述个体施用有效量的至少一种例如如下所述的另外的治疗剂。
另一方面，本发明提供抗CD79b抗体或免疫偶联物在生产或制备药物中的用途。在一个实施方案中，所述药物用于治疗CD79b阳性癌症。在另一实施方案中，所述药物用于治疗CD79b阳性癌症的方法，该方法包括向患有CD79b阳性癌症的个体施用有效量的药物。在一个此类实施方案中，该方法还包括向所述个体施用有效量的至少一种例如如下所述的另外的治疗剂。
另一方面，本发明提供治疗CD79b阳性癌症的方法。在一个实施方案中，该方法包括向患有此类CD79b阳性癌症的个体施用有效量的抗CD79b抗体或免疫偶联物。在一个此类实施方案中，该方法还包括向所述个体施用有效量的至少一种例如如下所述的另外的治疗剂。
根据任何上述实施方案的CD79b阳性癌症可以为，例如，淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)。在一些实施方案中，CD79b阳性癌症为接收抗CD79b免疫组织化学(IHC)或原位杂交(ISH)分值大于“0”的癌症，其对应于在＞90％的肿瘤细胞中非常弱的染色或无染色。在另一个实施方案中，CD79b阳性癌症以1+、2+或3+水平表达CD79b，其中1+对应于在＞50％的肿瘤细胞中为弱染色，2+对应于在＞50％的肿瘤细胞中为中度染色，并且3+对应于在＞50％的肿瘤细胞中为强染色。在一些实施方案中，CD79b阳性癌症为根据检测CD79b mRNA的反转录酶PCR(RT-PCR)测定来表达CD79b的癌症。在一些实施方案中，所述RT-PCR为定量RT-PCR。
在一些实施方案中，包含通过蛋白酶可裂解的连接子共价连接至抗CD79b抗体的奈莫柔比星衍生物的免疫偶联物尤其可用于治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤，如例如通过在实施例B、C、D、E和G中所示的异种移植模型所证实。在一些实施方案中，用于治疗弥散性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和/或伯基特氏淋巴瘤的免疫偶联物可以包含PNU-159682。在一些此类实施方案中，免疫偶联物包含PNU-159682和包含val-cit的连接子，诸如如图5C所示的免疫偶联物。
在一些实施方案中，提供了治疗患有CD79b阳性癌症的个体的方法，其中所述CD79b阳性癌症对第一治疗剂有抗性。在一些实施方案中，对第一治疗剂有抗性的CD79b阳性癌症表达P-糖蛋白(P-gp)。在一些实施方案中，所述方法包括向所述个体施用有效量的包含与CD79b结合的抗体的免疫偶联物。在一些实施方案中，CD79b阳性癌症选自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，所述第一治疗剂包含结合抗原而非CD79b的第一抗体。在一些实施方案中，所述第一治疗剂是包含结合抗原而非CD79b和第一细胞毒性剂的第一抗体的第一免疫偶联物。在一些实施方案中，所述第一抗体结合CD22。在一些实施方案中，所述第一细胞毒性剂和包含与CD79b结合的抗体的免疫偶联物的细胞毒性剂是不同的。在一些此类实施方案中，所述第一细胞毒性剂选自MMAE、加利车霉素、美登木素生物碱和吡咯并苯并二氮杂卓。在一些此类实施方案中，所述第一细胞毒性剂是MMAE并且包含与CD79b结合的抗体的免疫偶联物的细胞毒性剂是奈莫柔比星衍生物。在一些此类实施方案中，所述第一细胞毒性剂是吡咯并苯并二氮杂卓并且包含与CD79b结合的抗体的免疫偶联物的细胞毒性剂是奈莫柔比星衍生物。在一些此类实施方案中，所述第一细胞毒性剂是美登木素生物碱并且包含与CD79b结合的抗体的免疫偶联物的细胞毒性剂是奈莫柔比星衍生物。
在一些实施方案中，所述第一抗体结合CD79b。在一些此类实施方案中，所述第一细胞毒性剂选自MMAE、加利车霉素和吡咯并苯并二氮杂卓并且本文所述的免疫偶联物的细胞毒性剂是奈莫柔比星衍生物。在一些实施方案中，所述第一细胞毒性剂是MMAE并且本文所述的免疫偶联物的细胞毒性剂是奈莫柔比星衍生物。在一些实施方案中，所述第一细胞毒性剂是吡咯并苯并二氮杂卓并且本文所述的免疫偶联物的细胞毒性剂是奈莫柔比星衍生物。在一些实施方案中，所述第一细胞毒性剂是美登木素生物碱并且本文所述的免疫偶联物的细胞毒性剂是奈莫柔比星衍生物。
在一些实施方案中，提供了治疗患有CD79b阳性/P-gp阳性癌症的个体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向所述个体施用有效量的本文所述的免疫偶联物。在一些实施方案中，CD79b阳性/P-gp阳性癌症选自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，当癌症比对照细胞或组织表达更高水平的P-gp mRNA和/或蛋白质时，该癌症被认为是P-gp阳性。在各个实施方案中，对照细胞或组织可以是：来自同一患者的非癌性细胞或组织；来自不同患者或健康个体或来自患者或健康个体的混合的非癌性或癌性细胞或组织；来自在较早的时间点(诸如，例如，在初始治疗方案之前)取得的同一患者的非癌性或癌性细胞或组织；或来自健康个体；等。
在一些实施方案中，提供了治疗患有癌症的个体的方法，其中所述癌症对第一治疗剂有抗性。在一些实施方案中，所述第一治疗剂是包含通过第一连接子与第一细胞毒性剂连接的第一抗体的第一免疫偶联物。在一些实施方案中，治疗患有对第一治疗剂(诸如第一免疫偶联物)有抗性的癌症的个体的方法包括施用包含通过第二连接子与第二细胞毒性剂连接的第二抗体的第二免疫偶联物。在一些实施方案中，第一抗体和第二抗体与不同抗原结合并且第一细胞毒性剂和第二细胞毒性剂是相同或不同的。在一些实施方案中，第一抗体和第二抗体与存在于至少一些相同细胞上的不同抗原结合。在一些实施方案中，第一抗体和第二抗体与不同抗原结合并且第一细胞毒性剂和第二细胞毒性剂是不同的。在一些实施方案中，第一抗体和第二抗体与相同抗原结合，并且第一细胞毒性剂和第二细胞毒性剂是不同的。在任一上述实施方案中，第一连接子和第二连接子可以是相同或不同的。在一些实施方案中，第一抗体和第二抗体与不同抗原结合，第一和第二连接子是不同的，并且第一和第二细胞毒性剂是不同的。
根据任何上述实施方案的“个体”可以是人。
另一方面，本发明提供包含本文提供的例如用于任何上述治疗方法的任何抗CD79b抗体或免疫偶联物的药物制剂。在一个实施方案中，药物制剂包含本文提供的任何抗CD79b抗体或免疫偶联物和药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，药物制剂包含本文提供的任何抗CD79b抗体或免疫偶联物和至少一种例如如下所述的另外的治疗剂。
本发明的抗体或免疫偶联物在治疗中可单独使用或与其它药剂组合。例如，本发明的抗体或免疫偶联物可以与至少一种另外的治疗剂共同施用。
在一些实施方案中，抗CD79b免疫偶联物与抗CD22抗体或免疫偶联物阻组合施用。非限制性示例性抗CD22抗体或免疫偶联物包含10F4v3的高变区，使得抗CD22抗体或免疫偶联物包含：(i)具有SEQ ID NO：42的序列的HVR H1；(ii)具有SEQ ID NO：43的序列的HVR H2；(iii)具有SEQ ID NO：44的序列的HVR H3；(iv)具有SEQID NO：45的序列的HVR L1；(v)具有SEQ ID NO：46的序列的HVRL2；和(vi)具有SEQ ID NO：47的序列的HVR L3。在一些实施方案中，抗CD22抗体或免疫偶联物包含10F4v3的重链可变区和轻链可变区。在一些此类实施方案中，抗CD22抗体或免疫偶联物包含具有SEQ ID NO：48的序列的重链可变区和具有SEQ ID NO：49的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗CD22免疫偶联物包含选自奥里斯他汀(auristatin)、奈莫柔比星(nemorubicin)衍生物和吡咯并苯并二氮杂卓的细胞毒性剂。在一些实施方案中，抗CD22免疫偶联物包含选自MMAE、PNU-159682和具有以下结构的PBD二聚体的细胞毒性剂：
其中波浪线表示与连接子连接，所述连接子连接至抗CD79b抗体，并且其中n为0或1。可用于抗CD79b免疫偶联物的非限制性示例性连接子包括本文所述的那些。在一些实施方案中，抗CD22免疫偶联物选自Thio Hu抗CD22 10F4v3HC A118C-MC-val-cit-PAB-MMAE、Thio Hu抗CD22 10F4v3HC S400C-MC-val-cit-PAB-MMAE和Thio Hu抗CD22 10F4v3LC V205C-MC-val-cit-PAB-MMAE免疫偶联物，其描述于例如US 2008/0050310；Thio Hu抗CD2210F4v3HC A118C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682、Thio Hu抗CD2210F4v3HC A118C-MC-缩醛-PNU-159682、Thio Hu抗CD22 10F4v3HC A118C-MC-val-cit-PAB-PBD、Thio Hu抗CD22 10F4v3HCS400C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682、Thio Hu抗CD22 10F4v3HCS400C-MC-缩醛-PNU-159682、Thio Hu抗CD22 10F4v3HC S400C-MC-val-cit-PAB-PBD、Thio Hu抗CD22 10F4v3LC V205C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682、Thio Hu抗CD22 10F4v3LC V205C-MC-缩醛-PNU-159682和Thio Hu抗CD22 10F4v3LC V205C-MC-val-cit-PAB-PBD。Thio Hu抗CD22 10F4v3HC A118C的重链和轻链序列分别示于SEQ ID NO：50和51。Thio Hu抗CD22 10F4v3HC S400C的重链和轻链序列分别示于SEQ ID NO：52和51。ThioHu抗CD22 10F4v3LC V205C的重链和轻链序列分别示于SEQ ID NO：56和53。除了特异性抗体序列，抗CD22免疫偶联物的结构类似于本文所述的抗CD79b免疫偶联物的结构。
在一些实施方案中，抗CD22免疫偶联物与抗CD20抗体(或裸抗体或ADC)组合施用。在一些实施方案中，抗CD20抗体是利妥昔单抗()或2H7(Genentech，Inc.，South San Francisco，CA)。在一些实施方案中，抗CD22免疫偶联物与抗VEGF抗体(例如贝伐珠单抗(bevicizumab)，商品名)组合施用。
其它治疗方案可与施用抗CD22免疫偶联物组合，包括但不限于放射治疗和/或骨髓和外周血移植和/或细胞毒性剂。在一些实施方案中，细胞毒性剂是药剂或药剂组合，诸如例如，环磷酰胺、羟基柔红霉素(hydroxydaunorubicin)、阿霉素、多柔比星(doxorubincin)、长春新碱(OncovinTM)、泼尼松龙(prednisolone)、CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙的组合)、CVP(环磷酰胺、长春新碱和泼尼松龙的组合)或免疫治疗剂诸如抗CD20(例如，利妥昔单抗，商品名)、抗VEGF(例如贝伐珠单抗，商品名)、紫杉烷类(诸如紫杉醇和多西他赛)和蒽环类抗生素。
上述此类联合疗法涵盖组合施用(其中两种或多种治疗剂被包括在相同或不同的制剂中)和独立施用，在此情况下，本发明的抗体或免疫偶联物的施用可以发生在另外的治疗剂和/或佐剂的施用之前、同时和/或之后。本发明的抗体或免疫偶联物也可以与放射治疗组合使用。
本发明的抗体或免疫偶联物(和任何另外的治疗剂)可以通过任何合适的方式施用，包括胃肠外、肺内和鼻内，并且如果需要进行局部治疗，则病灶内施用。胃肠外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。可以通过任何合适的途径，例如通过注射(诸如静脉内或皮下注射)来给药，这部分地取决于施用是短暂或长期的。本文考虑包括但不限于在各种时间点单次或多次施用、推注施用和脉冲输注的各种给药方案。
本发明的抗体或免疫偶联物可以与良好的医学实践一致的方式被配制、给药和施用。在此背景下考虑的因素包括受治疗的具体病症、受治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病状、病症的起因、药剂的递送部位、施用方法、施用时程以及从业医生已知的其它因素。抗体或免疫偶联物不需要但是可以任选地与一种或多种目前用于预防或治疗讨论的病症的药剂一起配制。此类其它药剂的有效量取决于存在于制剂中的抗体或免疫偶联物的量、病症或治疗的类型和上面讨论的其它因素。通常以相同的剂量和用如本文所述的施用途径，或约1％至99％的本文所述的剂量，或以任何剂量和通过经经验/临床确定为合适的任何途径来使用这些。
对于疾病的预防和治疗，本发明的任何抗体或免疫偶联物的合适剂量(当单独使用或与一种或多种其它另外的治疗剂组合使用时)将取决于待治疗的疾病类型、抗体或免疫偶联物的类型、疾病的严重性和进展、是否施用抗体或免疫偶联物用于预防和治疗目的、先前的治疗、患者的临床史和对抗体或免疫偶联物的应答以及参与医生的判断。同时或通过一系列治疗将抗体或免疫偶联物适当地施用于患者。根据疾病的类型和严重性，约1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)的抗体或免疫偶联物可以为施用于患者的初始候选剂量，例如无论是否通过一次或多次分开的施用或者通过连续输注。一种典型的日剂量范围可以为约1μg/kg至100mg/kg或更多，这取决于上面提到的因素。对于几天或更长时间内的重复施用(这取决于条件)，将通常维持治疗直到疾病症状发生所需的抑制。抗体或免疫偶联物的一种示例性剂量范围将为约0.05mg/kg至约10mg/kg。因此，约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何组合)的一种或多种剂量可以施用于患者。此类剂量可以间歇施用，例如每周或每三周一次(例如以使患者接受约2至约20或例如约六个剂量的抗体)。可以施用初始较高的负载剂量，然后是一个或多个较低的剂量。然而，可以使用其它的给药方案。通过常规技术和测定容易监控这种治疗的进程。
在一些实施方案中，较低剂量的包含奈莫柔比星衍生物诸如PNU-159682的huMA79b(诸如huMA79bv28)ADC可以用于实现与较高剂量的包含MMAE部分的huMA79b ADC相同的功效。
应当理解，使用本发明的免疫偶联物和抗CD79b抗体可以进行任何上述的配制或治疗方法。
H.制品
在本发明的另一方面，提供含有用于治疗、预防和/或诊断上述病症的物质的制品。该制品包括容器和在所述容器上或与所述容器相关联的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以由多种材料(诸如玻璃或塑料)形成。该容器装有自身或与另一种组合物组合能有效治疗、预防和/或诊断病症的组合物并且可以具有无菌入口(例如，所述容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉注射溶液袋或小瓶)。组合物中至少一种活性剂为本发明的抗体或免疫偶联物。标签或包装说明书指示该组合物用于治疗所选的病状。此外，制品可以包含(a)第一容器和其中包含的组合物，其中该组合物包含本发明的抗体或免疫偶联物；和(b)第二容器和其中包含的组合物，其中该组合物包含其它细胞毒性剂或另外的治疗剂。本发明的此实施方案中的制品还可以包括包装说明书，其指示该组合物可用于治疗特定病状。或者或另外，制品还可以包括第二(或第三)容器，其包含药学上可接受的缓冲液，诸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏(Ringer′s)溶液或葡萄糖溶液。它还可以包括在商业和使用者看来所需的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
III.实施例
下面是本发明的方法和组合物的实施例。可以理解，考虑到以上的一般性描述，可以实施各种其它实施方案。
A.抗CD79b抗体药物偶联物的产生
抗CD79b抗体MA79b和某些变体，包括人源化huMA79b移植物和人源化变体huMA79bv17、huMA79bv18、huMA79bv28和huMA79bv32，描述于例如US 8,088,378 B2。表2示出对应于每种抗体的重链、轻链和高变区(HVR)的SEQ ID NO。
表2：对应于MA79b和人源化变体的序列
抗体huMA79bv17、huMA79bv18、huMA79bv28和huMA79bv32的重链框架区HC FR1至FR4分别示于SEQ ID NO：27至30。抗体huMA79bv17、huMA79bv18和huMA79bv28的轻链框架区LCFR1至FR4分别示于SEQ ID NO：31至34。抗体huMA79bv32的轻链框架区LC FR1至FR4分别示于SEQ ID NO：31、36、33和34。使用Scatchard分析发现huMA79b的结合亲和力为约0.4nM。参见，例如，US 8,088,378 B2。
对于大规模抗体生产，抗体在CHO细胞中产生。将编码VL和VH的载体转染到CHO细胞并且通过蛋白质A亲和色谱法从细胞培养基中纯化IgG。
通过将Thio huMA79bv28HC A118C抗体偶联至某些药物部分来产生抗CD79b抗体-药物偶联物(ADC)。Thio huMA79bv28 HCA118C是在重链中具有添加可偶联的硫醇基团的A118C突变的huMA79bv28抗体。参加，例如，US 8,088,378 B2。Thio huMA79bv28HC A118C的重链的氨基酸序列示于SEQ ID NO：39(参见图4)，并且Thio huMA79bv28 HC A118C的轻链的氨基酸序列示于SEQ ID NO：37(参见图3)。如下制备免疫偶联物。
Thio huMA79bv28 HC A118C-MC-缩醛-PNU-159682(“huMA79bv28-PNU-2”)
在偶联之前，用二硫苏糖醇(DTT)还原抗体以从thio-抗体的工程改造的半胱氨酸上除去封闭基团(例如半胱氨酸)。此过程也还原抗体的链间二硫键。将还原的抗体纯化以除去释放的封闭基团并且使用脱氢抗坏血酸(dhAA)使链间二硫化物再氧化。然后使完整抗体与药物-连接子部分MC-缩醛-PNU-159682组合以使药物-连接子部分偶联至抗体的工程改造的半胱氨酸残基。通过加入过量的N-乙酰基-半胱氨酸以与任何游离的连接子-药物部分反应来使偶联反应淬灭，并纯化ADC。ADC的药物负载(药物部分/抗体的平均数)为约1.86，如下面的实施例所示。huMA79bv28-PNU-2的结构示于图5B(p＝药物负载)。
Thio huMA79bv28 HC A118C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682(“huMA79bv28-PNU-1”)
在偶联之前，用二硫苏糖醇(DTT)还原抗体以从thio-抗体的工程改造的半胱氨酸上除去封闭基团(例如半胱氨酸)。此过程也还原抗体的链间二硫键。将还原的抗体纯化以除去释放的封闭基团并且使用脱氢抗坏血酸(dhAA)使链间二硫化物再氧化。然后使完整抗体与药物-连接子部分MC-val-cit-PAB-PNU-159682(“val-cit”本文也可以称为“vc”)组合以使药物-连接子部分偶联至抗体的工程改造的半胱氨酸残基。通过加入过量的N-乙酰基-半胱氨酸以与任何游离的连接子-药物部分反应来使偶联反应淬灭，并纯化ADC。ADC的药物负载(药物部分/抗体的平均数)的范围为约1.8至约1.9，如下面的实施例所示。huMA79bv28-PNU-1的结构示于图5C(p＝药物负载)。
Thio huMA79bv28 HC A118C-MC-val-cit-PAB-MMAE(“huMA79bv28-MMAE”)
在偶联之前，用二硫苏糖醇(DTT)还原抗体以从thio-抗体的工程改造的半胱氨酸上除去封闭基团(例如半胱氨酸)。此过程也还原抗体的链间二硫键。将还原的抗体纯化以除去释放的封闭基团并且使用脱氢抗坏血酸(dhAA)使链间二硫化物再氧化。然后使完整抗体与药物-连接子部分MC-val-cit-PAB-MMAE(“val-cit”本文也可以称为“vc”)组合以使药物-连接子部分偶联至抗体的工程改造的半胱氨酸残基。通过加入过量的N-乙酰基-半胱氨酸以与任何游离的连接子-药物部分反应来使偶联反应淬灭，并纯化ADC。确定ADC的药物负载(药物部分/抗体的平均数)为约2，如下面的实施例所示。Thio huMA79bv28HC A118C-MC-val-cit-PAB-MMAE描述于例如US 8,088,378B2。
B.WSU-DLCL2异种移植模型中的人源化抗CD79b抗体药物偶联物的体内抗肿瘤活性
为了测试具有PNU-159682的Thio huMA79bv28HC A118C偶联物(“huMA79bv28-PNU-1”和“huMA79bv28-PNU-2”)的功效，检测WSU-DLCL2肿瘤(弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系)的小鼠异种移植模型中偶联的抗体的影响。
将雌性CB17ICR SCID小鼠(11-12周龄，来自Charles RiversLaboratories；Hollister，CA)各自在侧腹皮下接种2x 107个WSU-DLCL2细胞(DSMZ，德国微生物和细胞培养物收藏中心(GermanCollection of Microorganisms and Cell Cultures)，Braunschweig，Germany)。当异种移植肿瘤达到平均肿瘤体积为150-250mm3(称为第0天)时，施用第一且仅治疗剂量。基于两个尺寸来计算肿瘤体积，使用测径器测量，并根据式V＝0.5a x b2以mm3表示，其中a和b分别为肿瘤的长直径和短直径。为随时间分析来自相同动物的肿瘤体积的重复测量，使用混合建模法(参见，例如，Pinheiro J，等nlme：linearand nonlinear mixed effects models.2009；R package，第3.1-96版)。由于在研究结束前动物的非治疗有关的除去，此方法可以解决重复测量和适度的脱失率。三次回归样条用于将非线性曲线拟合为在每个剂量水平的log2肿瘤体积的时间进程。然后使这些非线性曲线与混合模型内的剂量相关。
用2mg ADC/kg的Thio huMA79bv28HC A118C免疫偶联物或对照抗体-药物偶联物(对照ADC)的单次静脉内(i.v.)剂量来处理8只小鼠的组。对照ADC结合在WSU-DLCL2细胞的表面上不表达的蛋白质。在整个实验过程中每周1-2次测量小鼠的肿瘤和体重。在肿瘤体积达到3000mm3之前或当肿瘤显示即将发生溃疡的迹象时处死小鼠。所有的动物协议由动物管理和使用委员会(IACUC)批准。
该实验的结果示于表3和图6。表3示出每个处理组、在研究结束时具有能观察到的肿瘤的小鼠数量(“TI”)、显示局部响应的小鼠数量(“PR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至在第0天测量的肿瘤体积的50％以下)、显示完全响应的小鼠数量(“CR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)、每组的药物剂量、每组的抗体剂量和对于施用的每种ADC的药物负载。
表3：对具有WSU-DLCL2异种移植物的小鼠的抗CD79b ADC 施用
*媒介物＝20mM组氨酸醋酸盐，pH 5.5，240mM蔗糖，0.02％PS20；n/a＝不适用。
在如表3所示药物偶联物和剂量的35天时程中，与媒介物和对照ADC(“对照-PNU-1”)相比，通过可被蛋白酶裂解的连接子与PNU-159682偶联的thio huMA79bv28ADC(“huMA79bv28-PNU-1”)示出对具有WSU-DLCL2肿瘤的SCID小鼠的肿瘤生长的抑制。参见图6。与媒介物和对照ADC(“对照-PNU-2”)相比，通过酸不稳定的连接子与PNU-159682偶联的Thio huMA79bv28(“huMA79bv28-PNU-2”)也示出对具有WSU-DLCL2肿瘤的SCID小鼠的肿瘤生长的抑制。
此外，当以2mg/kg施用时，与用奥里斯他汀药物MMAE偶联的huMA79bv28(“huMA79bv28-MMAE”)相比，huMA79bv28-PNU-1更好地抑制肿瘤生长。参见图6。
在此研究中，在每一剂量组测定体重变化百分比。结果表明在研究期间施用huMA79bv28ADC不导致体重显著下降。
C.Granta-519异种移植模型中的人源化抗CD79b抗体药物偶联物的体内抗肿瘤活性
为了测试具有PNU-159682的Thio huMA79bv28HC A118C偶联物(“huMA79bv28-PNU-1”和“huMA79bv28-PNU-2”)的功效，检测Granta-519肿瘤(人套细胞淋巴瘤细胞系)的小鼠异种移植模型中偶联的抗体的影响。
将雌性CB17ICR SCID小鼠(10-11周龄，来自Charles RiversLaboratories；Hollister，CA)各自在侧腹皮下接种2x 107个Granta-519细胞(DSMZ，德国微生物和细胞培养物收藏中心(German Collection ofMicroorganisms and Cell Cultures)，Braunschweig，Germany)。当异种移植肿瘤达到平均肿瘤体积为150-250mm3(称为第0天)时，施用第一且仅治疗剂量。基于两个尺寸来计算肿瘤体积，使用测径器测量，并根据式V＝0.5a x b2以mm3表示，其中a和b分别为肿瘤的长直径和短直径。为随时间分析来自相同动物的肿瘤体积的重复测量，使用混合建模法(参见，例如，Pinheiro等，2009)。由于在研究结束前动物的非治疗有关的除去，此方法可以解决重复测量和适度的脱失率。三次回归样条用于将非线性曲线拟合为在每个剂量水平的log2肿瘤体积的时间进程。然后使这些非线性曲线与混合模型内的剂量相关。
用1mg ADC/kg的huMA79bv28免疫偶联物或对照抗体-药物偶联物(对照ADC)的单次静脉内(i.v.)剂量来处理8只小鼠的组。对照ADC结合在Grant-519细胞的表面上不表达的蛋白质。在整个实验过程中每周1-2次测量小鼠的肿瘤和体重。在肿瘤体积达到3000mm3之前或当肿瘤显示即将发生溃疡的迹象时处死小鼠。所有的动物协议由动物管理和使用委员会(IACUC)批准。
该实验的结果示于表4和图7。表4示出每个处理组、在研究结束时具有能观察到的肿瘤的小鼠数量(“TI”)、显示局部响应的小鼠数量(“PR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至在第0天测量的肿瘤体积的50％以下)、显示完全响应的小鼠数量(“CR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)、每组的药物剂量、每组的抗体剂量和对于施用的每种ADC的药物负载。
表4：对具有Grant-519异种移植物的小鼠的抗CD79bADC施用
*媒介物＝20mM组氨酸醋酸盐，pH 5.5，240mM蔗糖，0.02％PS20；n/a＝不适用。
在如表4所示ADC和剂量的31天时程中，与媒介物和对照ADC(“对照-PNU-1”)相比，通过可被蛋白酶裂解的连接子与PNU-159682偶联的Thio huMA79bv28(“huMA79bv28-PNU-1”)示出对具有Granta-519肿瘤的SCID小鼠的肿瘤生长的抑制。参见图7。与媒介物和对照ADC(“对照-PNU-2”)相比，通过酸不稳定的连接子与PNU-159682偶联的Thio huMA79bv28(“huMA79bv28-PNU-2”)也示出对具有Granta-519肿瘤的SCID小鼠的肿瘤生长的抑制。当以1mg/kg给药时，huMA79bv28-PNU-1比与奥里斯他汀药物MMAE偶联的人源化抗CD79b thiomab(“huMA79bv28-MMAE”)示出稍微更有效的肿瘤生长的抑制。
接受1mg/kg的huMA79bv28-PNU-1的4只小鼠显示完全应答，而接受1mg/kg的huMA79bv28-MMAE的仅两只小鼠显示完全应答。参见表4。
在此研究中，在每一剂量组测定体重变化百分比。结果表明在研究期间施用huMA79bv28ADC不导致体重显著下降。
D.SuDHL4-luc异种移植模型中的人源化抗CD79b抗体药物偶联物的体内抗肿瘤活性
为了测试具有PNU-159682的Thio huMA79bv28HC A118C偶联物(“huMA79bv28-PNU-1”和“huMA79bv28-PNU-2”)的功效，检测SuDHL4-luc肿瘤(弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系)的小鼠异种移植模型中偶联的抗体的影响。
将雌性CB17ICR SCID小鼠(10-11周龄，来自Charles RiversLaboratories；Hollister，CA)各自在侧腹皮下接种2x 107个SuDHL4-luc细胞(从DSMZ获得，德国微生物和细胞培养物收藏中心(GermanCollection of Microorganisms and Cell Cultures)，Braunschweig，Germany，并在Genentech进行工程改造以稳定表达荧光素酶基因)。当异种移植肿瘤达到平均肿瘤体积为150-250mm3(称为第0天)时，施用第一且仅治疗剂量。基于两个尺寸来计算肿瘤体积，使用测径器测量，并根据式V＝0.5a x b2以mm3表示，其中a和b分别为肿瘤的长直径和短直径。为随时间分析来自相同动物的肿瘤体积的重复测量，使用混合建模法(参见，例如，Pinheiro等，2008)。由于在研究结束前动物的非治疗有关的除去，此方法可以解决重复测量和适度的脱失率。三次回归样条用于将非线性曲线拟合为在每个剂量水平的log2肿瘤体积的时间进程。然后使这些非线性曲线与混合模型内的剂量相关。
用1mg ADC/kg的huMA79bv28免疫偶联物或对照抗体-药物偶联物(对照ADC)的单次静脉内(i.v.)剂量来处理7只小鼠的组。对照ADC结合在SuDHL4-luc细胞的表面上不表达的蛋白质。在整个实验过程中每周1-2次测量小鼠的肿瘤和体重。在肿瘤体积达到3000mm3之前或当肿瘤显示即将发生溃疡的迹象时处死小鼠。所有的动物协议由动物管理和使用委员会(IACUC)批准。
该实验的结果示于表5和图8。表5示出每个处理组、在研究结束时具有能观察到的肿瘤的小鼠数量(“TI”)、显示局部响应的小鼠数量(“PR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至在第0天测量的肿瘤体积的50％以下)、显示完全响应的小鼠数量(“CR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)、每组的药物剂量、每组的抗体剂量和对于施用的每种ADC的药物负载。
表5：对具有SuDHL4-luc异种移植物的小鼠的抗CD79b ADC施 用
*媒介物＝20mM组氨酸醋酸盐，pH 5.5，240mM蔗糖，0.02％PS20；n/a＝不适用。
在如表5所示药物偶联物和剂量的21天时程中，与媒介物和对照ADC(“对照-PNU-1”)相比，通过可被蛋白酶裂解的连接子与PNU-159682偶联的Thio Hu抗CD79b ADC(“huMA79bv28-PNU-1”)示出对具有SuDHL4-luc肿瘤的SCID小鼠的肿瘤生长的抑制。参见图8。与媒介物和对照ADC(“对照-PNU-2”)相比，通过酸不稳定的连接子与PNU-159682偶联的Thio huMA79bv28(“huMA79bv28-PNU-2”)也示出对具有SuDHL4-luc肿瘤的SCID小鼠的肿瘤生长的抑制。
此外，1mg/kg的huMA79bv28-PNU-1示出与偶联奥里斯他汀药物MMAE的人源化抗CD79b thiomab(“huMA79bv28-MMAE”)相当的抗肿瘤活性。
在此研究中，在每一剂量组测定体重变化百分比。结果表明在研究期间施用huMA79bv28ADC不导致体重显著下降。
E.在SuDHL4-luc异种移植模型中huMA79bv28-PNU-1的剂量递增研究
对SuDHL4-luc肿瘤(弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系)的小鼠异种移植模型中的不同剂量水平的huMA79bv28-PNU-1的功效进行检测。
将雌性CB17ICR SCID小鼠(10-11周龄，来自Charles RiversLaboratories；Hollister，CA)各自在侧腹皮下接种2x 107个SuDHL4-luc细胞(从DSMZ获得，德国微生物和细胞培养物收藏中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)，Braunschweig，Germany，并在Genentech进行工程改造以稳定表达荧光素酶基因)。当异种移植肿瘤达到平均肿瘤体积为150-300mm3(称为第0天)时，施用第一且仅治疗剂量。基于两个尺寸来计算肿瘤体积，使用测径器测量，并根据式V＝0.5a x b2以mm3表示，其中a和b分别为肿瘤的长直径和短直径。为随时间分析来自相同动物的肿瘤体积的重复测量，使用混合建模法(参见，例如，Pinheiro等，2008)。由于在研究结束前动物的非治疗有关的除去，此方法可以解决重复测量和适度的脱失率。三次回归样条用于将非线性曲线拟合为在每个剂量水平的log2肿瘤体积的时间进程。然后使这些非线性曲线与混合模型内的剂量相关。
用0.2mg、0.5mg、1mg或2mg ADC/kg的huMA79bv28-PNU-1或对照-PNU-1(其与不在SuDHL4-luc细胞表面表达的蛋白质结合)的单次静脉内(i.v.)剂量来处理7只小鼠的组。在整个实验过程中每周1-2次测量小鼠的肿瘤和体重。在肿瘤体积达到3000mm3之前或当肿瘤显示即将发生溃疡的迹象时处死小鼠。所有的动物协议由动物管理和使用委员会(IACUC)批准。
该实验的结果示于表6和图9。表6示出每个处理组、在研究结束时具有能观察到的肿瘤的小鼠数量(“TI”)、显示局部响应的小鼠数量(“PR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至在第0天测量的肿瘤体积的50％以下)、显示完全响应的小鼠数量(“CR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)、每组的药物剂量、每组的抗体剂量和对于施用的每种ADC的药物负载。
表6：对具有SuDHL4-luc异种移植物的小鼠的抗CD79b ADC施 用
*媒介物＝20mM组氨酸醋酸盐，pH 5.5，240mM蔗糖，0.02％PS20；n/a＝不适用。
在如表6所示药物偶联物和剂量的49天时程中，在具有SuDHL4-luc肿瘤的SCID小鼠中huMA79bv28-PNU-1显示对肿瘤生长的剂量依赖性抑制。当以0.2mg/kg或更高剂量施用时，与媒介物或对照ADC相比，huMA79bv28-PNU-1显示明显的抑制活性。参见图9。以2mg/kg时，施用huMA79bv28-PNU-1的三只小鼠示出完全应答并且四只小鼠示出部分应答。参见表6。
在此研究中，在每一剂量组测定体重变化百分比。结果表明在研究期间施用huMA79bv28-PNU-1不导致体重显著下降。与治疗无关，给予1mg/kg huMA79bv28-PNU-1的一只小鼠变得厌食并且在体重减少达到15％之前对其进行安乐死。
F.在BJAB-luc异种移植模型中huMA79bv28-PNU-1的剂量递增研究
对BJAB-luc肿瘤(伯基特氏淋巴瘤细胞系)的小鼠异种移植模型中的不同剂量水平的huMA79bv28-PNU-1的功效进行检测。
将雌性CB17ICR SCID小鼠(12-13周龄，来自Charles RiversLaboratories；Hollister，CA)各自在侧腹皮下接种2x 107个BJAB-luc细胞(例如从Lonza，Basel，Switzerland获得，并在Genentech进行工程改造以稳定表达荧光素酶基因)。当异种移植肿瘤达到平均肿瘤体积为150-300mm3(称为第0天)时，施用第一且仅治疗剂量。基于两个尺寸来计算肿瘤体积，使用测径器测量，并根据式V＝0.5axb2以mm3表示，其中a和b分别为肿瘤的长直径和短直径。为随时间分析来自相同动物的肿瘤体积的重复测量，使用混合建模法(参见，例如，Pinheiro等，2008)。由于在研究结束前动物的非治疗有关的除去，此方法可以解决重复测量和适度的脱失率。三次回归样条用于将非线性曲线拟合为在每个剂量水平的log2肿瘤体积的时间进程。然后使这些非线性曲线与混合模型内的剂量相关。
用0.2mg、0.5mg、1mg或2mg ADC/kg的huMA79bv28-PNU-1或对照-PNU-1(其与不在BJAB-luc细胞表面表达的蛋白质结合)的单次静脉内(i.v.)剂量来处理8只小鼠的组。在整个实验过程中每周1-2次测量小鼠的肿瘤和体重。在肿瘤体积达到3000mm3之前或当肿瘤显示即将发生溃疡的迹象时处死小鼠。所有的动物协议由动物管理和使用委员会(IACUC)批准。
该实验的结果示于表7和图10。表8示出每个处理组、在研究结束时具有能观察到的肿瘤的小鼠数量(“TI”)、显示局部响应的小鼠数量(“PR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至在第0天测量的肿瘤体积的50％以下)、显示完全响应的小鼠数量(“CR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)、每组的药物剂量、每组的抗体剂量和对于施用的每种ADC的药物负载。
表7：对具有BJAB-luc异种移植物的小鼠的抗CD79b ADC施用
*媒介物＝20mM组氨酸醋酸盐，pH 5.5，240mM蔗糖，0.02％PS20；n/a＝不适用。
在如表8所示药物偶联物和剂量的41天时程中，在具有BJAB-luc肿瘤的SCID小鼠中huMA79bv28-PNU-1显示对肿瘤生长的剂量依赖性抑制。当以0.2mg/kg或更高剂量施用时，与媒介物或对照ADC相比，huMA79bv28-PNU-1显示明显的抑制活性。参见图10。此外，单剂量的1mg/kg或2mg/kghuMA79bv28-PNU-1导致所有的处理动物的完全的肿瘤缓解。
在此研究中，在每一剂量组测定体重变化百分比。结果表明在研究期间施用huMA79bv28-PNU-1不导致体重显著下降。
G.在BJAB-Iuc异种移植模型中huMA79bv28-MMAE的剂量递增研究
对BJAB-luc肿瘤(伯基特氏淋巴瘤细胞系)的小鼠异种移植模型中的不同剂量水平的huMA79bv28-MMAE的功效进行检测。
将雌性CB17 ICR SCID小鼠(13-14周龄，来自Charles RiversLaboratories；Hollister，CA)各自在侧腹皮下接种2x107个BJAB-luc细胞(例如从Lonza，Basel，Switzerland获得，并在Genentech进行工程改造以稳定表达荧光素酶基因)。当异种移植肿瘤达到平均肿瘤体积为150-300mm3(称为第0天)时，施用第一且仅治疗剂量。基于两个尺寸来计算肿瘤体积，使用测径器测量，并根据式V＝0.5axb2以mm3表示，其中a和b分别为肿瘤的长直径和短直径。为随时间分析来自相同动物的肿瘤体积的重复测量，使用混合建模法(参见，例如，Pinheiro等，2008)。由于在研究结束前动物的非治疗有关的除去，此方法可以解决重复测量和适度的脱失率。三次回归样条用于将非线性曲线拟合为在每个剂量水平的log2肿瘤体积的时间进程。然后使这些非线性曲线与混合模型内的剂量相关。
用0.1mg、0.5mg、1mg、2mg或4mg ADC/kg的huMA79bv28-MMAE、未偶联的huMA79bv28或对照-MMAE(其与不在BJAB-luc细胞表面表达的蛋白质结合)的单次静脉内(i.v.)剂量来处理8只小鼠的组。在整个实验过程中每周1-2次测量小鼠的肿瘤和体重。在肿瘤体积达到3000mm3之前或当肿瘤显示即将发生溃疡的迹象时处死小鼠。所有的动物协议由动物管理和使用委员会(IACUC)批准。
该实验的结果示于表8和图11。表10示出每个处理组、在研究结束时具有能观察到的肿瘤的小鼠数量(“TI”)、显示局部响应的小鼠数量(“PR”；其中在施用后任何时间的肿瘤体积下降至在第0天测量的肿瘤体积的50％以下)、显示完全响应的小鼠数量(“CR”；在施用后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)、每组的药物剂量、每组的抗体剂量和对于施用的每种ADC的药物负载。
表8：对具有BJAB-luc异种移植物的小鼠的抗CD79a ADC施用
*媒介物＝20mM组氨酸醋酸盐，pH 5.5，240mM蔗糖，0.02％PS20；n/a＝不适用。
在如表10所示药物偶联物和剂量的42天时程中，在具有BJAB-luc肿瘤的SCID小鼠中huMA79bv28-MMAE显示对肿瘤生长的剂量依赖性抑制。与在1mg ADC/kg时示出完全抑制并且在0.5mgADC/kg时示出很强抑制的huMA79bv28-PNU-1相反(参见图10)，huMA79bv28-MMAE在直到剂量为2mg ADC/kg时才示出完全抑制。
在此研究中，在每一剂量组测定体重变化百分比。结果表明在研究期间施用huMA79bv28-MMAE不导致体重显著下降。
H.在对抗CD79b-vc-MMAE有抗性的Bjab-luc细胞中包含奈莫柔比星衍生物的抗CD79b免疫偶联物的功效
为确定在对抗CD79b-vc-MMAE已形成抗性的非霍奇金氏淋巴瘤中包含奈莫柔比星衍生物的抗CD79b免疫偶联物的功效，在体内产生对抗CD79b-vc-MMAE有抗性的Bjab-luc细胞。
在CB17 SCID小鼠(Charles River实验室，Hollister，CA)右侧腹背侧皮下接种20,000,000个在HBSS中的Bjab-luc细胞。将接种有Bjab-luc细胞的二十只小鼠在第0天用1.5mg/kg huMA79bv28-MC-vc-PAB-MMAE静脉内给药。为确定什么时候小鼠将再次给药以及以什么剂量给药，考虑以下因素：在初始治疗后肿瘤是否再次生长(即，在第0天生长回到初始肿瘤体积大小的肿瘤)和再次生长的速率。施用的剂量频率随时间变化但不超过2次剂量/周。静脉内剂量不超过300μL。施用的剂量范围为1.5、2、3、3.5、4、5、6、8、10、15、18、20和30mg/kg。一旦肿瘤不再对一系列递增的剂量应答(即，它显示抗性)，则停止给药。
生成两个抗性系，称作BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.1X1和BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.2X1。CD79b表达于抗性细胞的表面，并且抗CD79b抗体被抗性细胞内化。在BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.1X1异种移植模型中证实对thio huMA79bv28HCA118C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682的体内抗性。
通过RT-PCR、FACS和表面等离子体共振来确定抗性细胞和母体Bjab-luc细胞中P-糖蛋白(P-gp，也称作多药抗性蛋白1，或MDR1)的表达。所有三种方法示出与母体Bjab-luc细胞相比，在BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.1X1和BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.2X1细胞中P-gp被上调。图12示出如通过FACS确定的在抗性细胞中P-gp的表达。
为支持P-gp是在BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.1X1和BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.2X1细胞中发现的huMA79bv28-MMAE抗性的至少部分原因的假说，产生了稳定表达P-gp的Bjab-luc细胞。图12示出在两株稳定表达的Bjab-luc细胞系(高表达细胞系和低表达细胞系)中P-gp的表达。也发现Bjab-luc_P-gp细胞对huMA79bv28-MMAE有抗性。
为确定包含奈莫柔比星衍生物的抗CD79b免疫偶联物是否可以有效抵抗抗性细胞，在表达P-gp的Bjab-luc细胞系中测试PNU-159682的功效。如图13所示，虽然PNU-159682是蒽环类似物，但它似乎不是P-gp的底物。高表达P-gp的Bjab-luc细胞和低表达P-gp的Bjab-luc细胞均对PNU-159682敏感。
在BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.2X1异种移植模型中测定thio huMA79bv28HC A118C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682(“huMA79bv28-PNU-1”)的功效。将雌性CB17 ICR SCID小鼠(10周龄，来自Charles Rivers实验室；Hollister，CA)各自在侧腹皮下接种2x107个BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.2X1细胞。当异种移植肿瘤达到平均肿瘤体积为100-200mm3(称为第0天)时，施用第一且仅治疗剂量。基于两个尺寸来计算肿瘤体积，使用测径器测量，并根据式V＝0.5axb2以mm3表示，其中a和b分别为肿瘤的长直径和短直径。为随时间分析来自相同动物的肿瘤体积的重复测量，可以使用混合建模法(参见，例如，Pinheiro等，2008)。由于在研究结束前动物的非治疗有关的除去，此方法可以解决重复测量和适度的脱失率。三次回归样条用于将非线性曲线拟合为在每个剂量水平的log2肿瘤体积的时间进程。然后使这些非线性曲线与混合模型内的剂量相关。
用1-2mg ADC/kg的huMA79bv28-PNU-1或8-12mg ADC/kghuMA79bv28-MC-vc-PAB-MMAE的单次静脉内(i.v.)剂量来处理8只小鼠的组。在整个实验过程中每周1-2次测量小鼠的肿瘤和体重。在肿瘤体积达到3000mm3之前或当肿瘤显示即将发生溃疡的迹象时处死小鼠。
期望在体内BJAB.Luc_SN8v28-vcE(CD79b)_T1.1X1细胞对huMA79bv28-MC-vc-PAB-MMAE有抗性，但对huMA79bv28-PNU-1敏感。
虽然出于清楚理解的目的已通过说明和实施例相当详细地描述了上述发明，但这些描述和实施例不应当被解释为限制本发明的范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容通过引用被整体明确并入。
序列表

Claims (49)

1.一种包含结合与细胞毒性剂共价连接的CD79b的抗体的免疫偶联物，其中结合CD79b的所述抗体包含(i)含有SEQ ID NO：21的所述氨基酸序列的HVR-H1，(ii)含有SEQ ID NO：22的所述氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)含有SEQ ID NO：23的所述氨基酸序列的HVR-H3；并且其中所述细胞毒性剂为奈莫柔比星衍生物。
2.根据权利要求1所述的免疫偶联物，其中所述抗体还包含(i)含有选自SEQ ID NO：18、24和35的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)含有SEQ ID NO：25的所述氨基酸序列的HVR-L2，和(iii)含有SEQ IDNO：26的所述氨基酸序列的HVR-L3。
3.根据权利要求2所述的免疫偶联物，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO：24的所述氨基酸序列的HVR-L1。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫偶联物，其中所述抗体包含：
a)与SEQ ID NO：11的所述氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；或
b)与SEQ ID NO：12的所述氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或
c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的免疫偶联物，其包含具有选自SEQ ID NO：7、9、11和13的氨基酸序列的VH序列。
6.根据权利要求5所述的免疫偶联物，其包含具有SEQ ID NO：11的所述氨基酸序列的VH序列。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫偶联物，其包含具有选自SEQ ID NO：8、10、12和14的氨基酸序列的VL序列。
8.根据权利要求7所述的免疫偶联物，其包含具有SEQ ID NO：12的所述氨基酸序列的VL序列。
9.一种包含结合与细胞毒性剂共价连接的CD79b的抗体的免疫偶联物，其中所述抗体包含(a)具有SEQ IDNO：11的所述氨基酸序列的VH序列和具有SEQ ID NO：12的所述氨基酸序列的VL序列，并且其中所述细胞毒性剂为奈莫柔比星衍生物。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的免疫偶联物，其中所述抗体为IgG1、IgG2a或IgG2b抗体。
11.一种根据权利要求1至10中任一项所述的免疫偶联物，其中所述免疫偶联物具有所述式Ab-(L-D)p，其中：
(a)Ab为所述抗体；
(b)L为连接子；
(c)D为所述细胞毒性剂；并且
(d)p的范围为1-8。
12.根据权利要求11所述的免疫偶联物，其中D为奈莫柔比星衍生物。
13.根据权利要求12所述的免疫偶联物，其中D具有选自以下的结构：
14.根据权利要求11至13中任一项所述的免疫偶联物，其中所述连接子可被蛋白酶裂解。
15.根据权利要求14所述的免疫偶联物，其中所述连接子包含val-cit二肽或Phe-homoLys二肽。
16.根据权利要求11至13中任一项所述的免疫偶联物，其中所述连接子为酸不稳定的。
17.根据权利要求16所述的免疫偶联物，其中所述连接子包含腙。
18.根据权利要求13所述的免疫偶联物，其具有选自以下的式：
19.根据权利要求11至18中任一项所述的免疫偶联物，其中p的范围为1-3。
20.一种免疫偶联物，其具有选自以下的式：
其中Ab为包含以下的抗体(i)包含SEQ ID NO：21的所述氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO：22的所述氨基酸序列的HVR-H2，(iii)包含SEQ IDNO：23的所述氨基酸序列的HVR-H3，(iv)包含SEQ ID NO：24的所述氨基酸序列的HVR-L1，(v)包含SEQ ID NO：25的所述氨基酸序列的HVR-L2，和(vi)包含SEQ ID NO：26的所述氨基酸序列的HVR-L3；并且其中p的范围为1至3。
21.根据权利要求20所述的免疫偶联物，其中所述抗体包含SEQID NO：11的VH序列和SEQ ID NO：12的VL序列。
22.根据权利要求21所述的免疫偶联物，其中所述抗体包含SEQID NO：39的重链和SEQ ID NO：37的轻链。
23.根据前述权利要求中任一项所述的免疫偶联物，其中所述抗体为单克隆抗体。
24.根据前述权利要求中任一项所述的免疫偶联物，其中所述抗体为人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
25.根据前述权利要求中任一项所述的免疫偶联物，其中所述抗体为结合CD79b的抗体片段。
26.根据前述权利要求中任一项所述的免疫偶联物，其中所述抗体结合人CD79b。
27.根据权利要求26所述的免疫偶联物，其中人CD79b具有SEQ ID NO：40或SEQ ID NO：41的所述序列。
28.一种药物制剂，其包含前述权利要求中任一项所述的免疫偶联物和药学上可接受的载体。
29.根据权利要求28所述的药物制剂，其还包含另外的治疗剂。
30.一种治疗患有CD79b阳性癌症的个体的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的根据权利要求1至27中任一项所述的免疫偶联物。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述CD79b阳性癌症选自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。
32.根据权利要求31所述的方法，其还包括向所述个体施用另外的治疗剂。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述另外的治疗剂包含结合CD22的抗体。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述另外的治疗剂为包含结合与细胞毒性剂共价连接的CD22的抗体的免疫偶联物。
35.一种抑制CD79b阳性细胞增殖的方法，所述方法包括在允许所述免疫偶联物与所述细胞的表面上的CD79b结合的条件下使所述细胞暴露于根据权利要求1至27中任一项所述的免疫偶联物，从而抑制所述细胞的增殖。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述细胞为肿瘤B细胞。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述细胞为淋巴瘤细胞。
38.一种治疗患有CD79b阳性癌症的个体的方法，其中所述CD22阳性癌症对第一治疗剂有抗性，所述方法包括向所述个体施用有效量的根据权利要求1至27中任一项所述的免疫偶联物。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述CD79b阳性癌症选自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。
40.根据权利要求38或权利要求39所述的方法，其中所述第一治疗剂包含结合抗原而非CD79b的第一抗体。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述第一治疗剂是包含结合抗原而非CD79b和第一细胞毒性剂的第一抗体的第一免疫偶联物。
42.根据权利要求40或权利要求41所述的方法，其中所述第一抗体结合CD22。
43.根据权利要求38或权利要求39所述的方法，其中所述第一治疗剂包含结合CD79b的第一抗体。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述第一治疗剂是包含结合CD79b和第一细胞毒性剂的第一抗体的第一免疫偶联物。
45.根据权利要求41至44中任一项所述的方法，其中所述第一细胞毒性剂和根据权利要求1至27中任一项所述的免疫偶联物的细胞毒性剂是不同的。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述第一细胞毒性剂为MMAE。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述CD79b阳性癌症表达P-糖蛋白(P-gp)。
48.一种治疗患有CD79b阳性癌症的个体的方法，其中所述CD22阳性癌症表达P-gp，所述方法包括向所述个体施用有效量的根据权利要求1至27中任一项所述的免疫偶联物。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述CD79b阳性癌症选自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛NHL、顽固性NHL、顽固性无痛NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。
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TW (1) TW201408697A (zh)
WO (1) WO2014011521A1 (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017025057A1 (en) * 2015-08-11 2017-02-16 Coherent Biopharma Multi-ligand drug conjugates and uses thereof
CN106466484A (zh) * 2015-08-11 2017-03-01 同宜医药开曼有限公司 一种具有细胞内吞介导功能的多靶向配体-药物偶联体
CN111592598A (zh) * 2020-07-16 2020-08-28 西安迪赛生物药业有限责任公司 高三尖杉酯碱靶向治疗剂及其应用
CN112094345A (zh) * 2020-06-01 2020-12-18 普众发现医药科技(上海)有限公司 可应用于肿瘤细胞捕获的小鼠抗免疫球蛋白关联βCD79b的单克隆抗体
WO2022268202A1 (zh) * 2021-06-25 2022-12-29 同宜医药（苏州）有限公司 配体药物偶联物及其应用

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9801951B2 (en) 2012-05-15 2017-10-31 Concortis Biosystems, Corp. Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
US10836821B2 (en) 2013-10-15 2020-11-17 Sorrento Therapeutics, Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
GB201409558D0 (en) 2014-05-29 2014-07-16 Ucb Biopharma Sprl Method
GB201412659D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
GB201412658D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
LT3227336T (lt) * 2014-12-05 2019-09-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-cd79b antikūnai ir jų naudojimo būdai
CN107849090A (zh) 2015-01-28 2018-03-27 索伦托医疗有限公司 抗体药物偶联物
WO2016127081A1 (en) * 2015-02-06 2016-08-11 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates
GB201601073D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201601075D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies molecules
GB201601077D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibody molecule
GB201521389D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Method
GB201521393D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201521383D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl And Ucb Celltech Method
GB201521382D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201521391D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
AU2017361887B2 (en) * 2016-11-21 2019-08-15 Cureab Gmbh Anti-GP73 antibodies and immunoconjugates
KR20200006972A (ko) 2017-04-14 2020-01-21 톨나인, 인크. 면역조절 폴리뉴클레오티드, 이의 항체 접합체, 및 이의 사용 방법
JP2020524487A (ja) * 2017-06-07 2020-08-20 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション キメラ抗原受容体を発現するｔ細胞
KR20200017519A (ko) * 2017-06-20 2020-02-18 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 Cd38 항체 약물 접합체
US11648317B2 (en) * 2018-04-13 2023-05-16 Genentech, Inc. Stable anti-CD79B immunoconjugate formulations
MX2021006912A (es) 2018-12-11 2021-08-24 Disruption Labs Inc Composiciones para la administracion de agentes terapeuticos y metodos de uso y fabricacion de las mismas.
CA3127556A1 (en) 2019-01-28 2020-08-06 Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Anti-cd79b antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof
TW202140078A (zh) * 2020-01-22 2021-11-01 大陸商上海森輝醫藥有限公司 艾日布林衍生物的藥物偶聯物、其製備方法及其在醫藥上的應用
JP2023515566A (ja) 2020-02-28 2023-04-13 タラック セラピューティクス，インク． トランスグルタミナーゼ媒介コンジュゲーション

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101490087A (zh) * 2006-05-30 2009-07-22 健泰科生物技术公司 抗体和免疫偶联物及其用途
WO2009099741A1 (en) * 2008-02-01 2009-08-13 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
CN101530411A (zh) * 2009-04-14 2009-09-16 中国药科大学 一种no供体型化合物作为p-糖蛋白抑制剂和肿瘤多药耐药逆转剂的应用
CN101802012A (zh) * 2007-07-16 2010-08-11 健泰科生物技术公司 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法

Family Cites Families (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
FI102355B1 (fi) 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
DE69333807T2 (de) 1992-02-06 2006-02-02 Chiron Corp., Emeryville Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
WO1994011026A2 (en) 1992-11-13 1994-05-26 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
DE69830315T2 (de) 1997-06-24 2006-02-02 Genentech Inc., San Francisco Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
EP1028751B1 (en) 1997-10-31 2008-12-31 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
DK1034298T3 (da) 1997-12-05 2012-01-30 Scripps Research Inst Humanisering af murint antistof
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
IL138608A0 (en) 1998-04-02 2001-10-31 Genentech Inc Antibody variants and fragments thereof
ES2340112T3 (es) 1998-04-20 2010-05-28 Glycart Biotechnology Ag Ingenieria de glicosilacion de anticuerpos para la mejora de la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.
WO2000042072A2 (en) 1999-01-15 2000-07-20 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1176195B1 (en) 1999-04-09 2013-05-22 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
KR100797667B1 (ko) 1999-10-04 2008-01-23 메디카고 인코포레이티드 외래 유전자의 전사를 조절하는 방법
JP4668498B2 (ja) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
WO2001044463A1 (en) 1999-12-15 2001-06-21 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
DK1242438T3 (da) 1999-12-29 2007-02-12 Immunogen Inc Cytotoksiske midler omfattende modificerede doxorubiciner og daunorubiciner og deres terapeutiske anvendelse
LT2857516T (lt) 2000-04-11 2017-09-11 Genentech, Inc. Multivalentiniai antikūnai ir jų panaudojimas
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
PL218428B1 (pl) 2000-10-06 2014-12-31 Kyowa Hakko Kogyo Kk Komórka, sposoby wytwarzania przeciwciał, leki zawierające przeciwciała, komórka CHO i przeciwciało klasy IgG
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7041870B2 (en) 2000-11-30 2006-05-09 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
EP2180044A1 (en) 2001-08-03 2010-04-28 GlycArt Biotechnology AG Antibody glycosylation variants having increased anti-body-dependent cellular cytotoxicity
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
WO2003035835A2 (en) 2001-10-25 2003-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
WO2003043583A2 (en) 2001-11-20 2003-05-30 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
PL373256A1 (en) 2002-04-09 2005-08-22 Kyowa Hakko Kogyo Co, Ltd. Cells with modified genome
WO2003084569A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Medicament contenant une composition anticorps
US20050031613A1 (en) 2002-04-09 2005-02-10 Kazuyasu Nakamura Therapeutic agent for patients having human FcgammaRIIIa
ES2362419T3 (es) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa.
CA2481837A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
US20040259150A1 (en) 2002-04-09 2004-12-23 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of enhancing of binding activity of antibody composition to Fcgamma receptor IIIa
AU2003239966B9 (en) 2002-06-03 2010-08-26 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
AU2003294210A1 (en) 2002-07-31 2004-05-04 Seattle Genetics, Inc Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
AR042485A1 (es) 2002-12-16 2005-06-22 Genentech Inc Anticuerpo humanizado que se une al cd20 humano
CA2510003A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US20080241884A1 (en) 2003-10-08 2008-10-02 Kenya Shitara Fused Protein Composition
AU2004280065A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
EA036531B1 (ru) 2003-11-05 2020-11-19 Роше Гликарт Аг Гуманизированное антитело типа ii к cd20 (варианты), фармацевтическая композиция, содержащая эти варианты антитела, и их применение
ZA200603619B (en) 2003-11-06 2008-10-29 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
JP5064037B2 (ja) 2004-02-23 2012-10-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 複素環式自壊的リンカーおよび結合体
ZA200608130B (en) 2004-03-31 2008-12-31 Genentech Inc Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
CA2561533C (en) 2004-04-13 2015-06-16 Yvo Graus Anti-p-selectin antibodies
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
NZ580115A (en) 2004-09-23 2010-10-29 Genentech Inc Cysteine engineered antibody light chains and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US8679490B2 (en) 2005-11-07 2014-03-25 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
EP2016101A2 (en) 2006-05-09 2009-01-21 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
RS53168B (en) 2006-05-30 2014-06-30 Genentech Inc. Antibodies and Immunoconjugates and Their Use
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
ES2774337T3 (es) 2008-01-07 2020-07-20 Amgen Inc Método para fabricación de moléculas heterodímeras Fc de anticuerpos utilizando efectos de conducción electrostática
PE20110571A1 (es) 2008-07-15 2011-08-29 Genentech Inc Conjugados derivados de antraciclina, como compuestos antitumorales

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101490087A (zh) * 2006-05-30 2009-07-22 健泰科生物技术公司 抗体和免疫偶联物及其用途
CN101802012A (zh) * 2007-07-16 2010-08-11 健泰科生物技术公司 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法
WO2009099741A1 (en) * 2008-02-01 2009-08-13 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
CN101530411A (zh) * 2009-04-14 2009-09-16 中国药科大学 一种no供体型化合物作为p-糖蛋白抑制剂和肿瘤多药耐药逆转剂的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHUWEN YU等: "Synthesis and Biological Activities of a 3’-Azido Analogue of Doxorubicin Against Drug-Resistant Cancer Cells", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017025057A1 (en) * 2015-08-11 2017-02-16 Coherent Biopharma Multi-ligand drug conjugates and uses thereof
CN106466484A (zh) * 2015-08-11 2017-03-01 同宜医药开曼有限公司 一种具有细胞内吞介导功能的多靶向配体-药物偶联体
CN106466484B (zh) * 2015-08-11 2021-05-04 同宜医药（苏州）有限公司 一种具有细胞内吞介导功能的多靶向配体-药物偶联体
CN112094345A (zh) * 2020-06-01 2020-12-18 普众发现医药科技(上海)有限公司 可应用于肿瘤细胞捕获的小鼠抗免疫球蛋白关联βCD79b的单克隆抗体
CN112094345B (zh) * 2020-06-01 2024-01-05 普众发现医药科技(上海)有限公司 可应用于肿瘤细胞捕获的小鼠抗免疫球蛋白关联βCD79b的单克隆抗体
CN111592598A (zh) * 2020-07-16 2020-08-28 西安迪赛生物药业有限责任公司 高三尖杉酯碱靶向治疗剂及其应用
WO2022268202A1 (zh) * 2021-06-25 2022-12-29 同宜医药（苏州）有限公司 配体药物偶联物及其应用

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