CN101802012A - 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法 - Google Patents

抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明致力于对于哺乳动物中造血肿瘤治疗有用的人源化的、偶联的抗CD79B抗体和使用该抗体治疗哺乳动物中造血肿瘤的方法。

Description

抗CD79B抗体和免疫偶联物及使用方法
对相关申请的交叉引用
依据37CFR§1.53(b)提交的此非临时申请依据35USC§119(e)要求2007年7月16日提交的美国临时申请流水号60/950,052、2008年1月31日提交的美国临时申请流水号61/025,137、2009年2月29日提交的美国临时申请流水号61/032,790和2008年5月20日提交的美国临时申请流水号61/054,709的权益，通过述及完整收录每一篇。
发明领域
本发明致力于对于哺乳动物中造血肿瘤(hematopoietic tumor)治疗有用的组合物和使用那些组合物治疗哺乳动物中造血肿瘤的方法。
发明背景
恶性肿瘤(癌症)是美国第二位死因，排在心脏病之后(Boring等，CACancel J.Clin.43：7(1993))。癌症的特征在于衍生自正常组织的赘生性细胞或异常细胞的数目增加，所述细胞增殖而形成肿瘤块，这些赘生性肿瘤细胞侵入邻近组织，和产生经称作转移的过程最终经血液或淋巴系统扩散至局部淋巴结和远端部位。在癌性状态中，细胞在正常细胞不会生长的条件下增殖。癌症自身表现为极其多种形式，特征在于不同程度的侵入性和攻击性。
涉及造血(生成血液的细胞要素(诸如淋巴细胞、白细胞、血小板、红细胞和天然杀伤细胞)的过程)期间生成的细胞的癌症称作造血癌症。能在血液和淋巴组织中找到且对免疫应答至关重要的淋巴细胞分成两大类淋巴细胞：B淋巴细胞(B细胞)和T淋巴细胞(T细胞)，它们分别介导体液和细胞介导的免疫。
B细胞在骨髓内成熟，然后离开骨髓并在其细胞表面上表达抗原结合抗体。当幼稚B细胞初次遭遇其膜结合抗体对之特异性的抗原时，该细胞开始快速分裂且其后代分化成记忆B细胞和称作“浆细胞”的效应细胞。记忆B细胞具有较长的寿命并继续表达与最初的亲本细胞具有相同特异性的膜结合抗体。浆细胞不生成膜结合抗体，但改为生成可分泌形式的抗体。分泌型抗体是体液免疫的主要效应分子。
T细胞在胸腺内成熟，胸腺为未成熟T细胞的增殖和分化提供环境。在T细胞成熟期间，T细胞经历基因重排(这生成T细胞受体)及正和负选择(这有助于决定成熟T细胞的细胞表面表型)。成熟T细胞的特征性细胞表面标志物是CD3:T细胞受体复合物和共同受体CD4或CD8之一。
在试图发现癌症疗法的有效细胞靶物的尝试中，研究人员试图鉴定与一种或多种正常的非癌性细胞相比在一种或多种特定类型的癌细胞的表面上特异性表达的跨膜的或以其它方式与膜结合的多肽。通常，此类膜结合多肽在癌细胞表面上表达的丰度要高于非癌性细胞表面上的。此类膜结合细胞表面抗原多肽的鉴定产生了特异性靶向癌细胞的能力，供经基于抗体的疗法进行的破坏用。在这点上，注意到基于抗体的疗法在某些癌症的治疗中证明是非常有效的。例如，和
Figure GPA00001058503000022
(二者都来自Genentech公司(South San Francisco，California))是分别已经成功用于治疗乳腺癌和非何杰金氏淋巴瘤的抗体。更具体的说，
Figure GPA00001058503000023
是重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，其选择性结合人表皮生长因子受体2(HER2)原癌基因的胞外结构域。在25-30％的原发性乳腺癌中观察到HER2蛋白过表达。是遗传工程嵌合鼠/人单克隆抗体，其针对在正常和恶性B淋巴细胞的表面上找到的CD20抗原。这两种抗体都是在CHO细胞中重组生产的。
在试图发现癌症疗法的有效细胞靶物的其它尝试中，研究人员试图鉴定(1)与一种或多种特定类型的非癌性正常细胞相比由一种或多种特定类型的癌细胞特异性生成的非膜结合的多肽，(2)由癌细胞以显著高于一种或多种非癌性细胞的表达水平生成的多肽，或(3)其表达特异性限制于只有一种(或非常有限数目的不同)组织类型的多肽，所述组织处于癌性和非癌性两种状态(例如正常前列腺和前列腺肿瘤组织)。此类多肽可以保持胞内定位，或者可以由癌细胞分泌。此外，此类多肽可以是不是由癌细胞自身表达的，而是由生成和/或分泌对癌细胞具有强化或生长增强效果的多肽的细胞表达的。此类分泌多肽常常是给癌细胞提供胜过正常细胞的生长优势的蛋白质，而且包括诸如例如血管发生因子、细胞粘附因子、生长因子等等的物质。此类非膜结合多肽的拮抗剂的鉴定预期会充当此类癌症治疗的有效治疗剂。而且，此类多肽的表达样式的鉴定对于哺乳动物中特定癌症的诊断会是有用的。
尽管在哺乳动物癌症疗法中有了上述进展，对于能够分别检测哺乳动物中肿瘤的存在和有效抑制肿瘤性细胞生长的别的治疗剂仍然存在很大的需要。因此，本发明的一个目标是鉴定其表达特异性地局限于处于癌性和非癌性状态的单一(或非常有限数目的不同)组织类型即造血组织的，细胞膜结合的、分泌的或胞内的多肽，及使用那些多肽及其编码核酸来生成在哺乳动物中造血癌症的治疗性处理和/或检测中有用的组合物。
CD79是B细胞受体的信号传导构件，由含有CD79a(Igα，mb-1)和CD79b(Igβ，B29)的共价二聚体组成。CD79a和CD79b各含有胞外免疫球蛋白(Ig)域、跨膜域和胞内信号传导域、免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)域。CD79在B细胞上和在非何杰金氏淋巴瘤细胞(NHL)中表达(Cabezudo et al.，Haematologica，84：413-418(1999)；D’Arena et al.，Am.J.Hematol.，64：275-281(2000)；Olejniczak et al.，Immunol.Invest.，35：93-114(2006))。CD79a和CD79b和sIg都是CD79的表面表达所需要的(Matsuuchi et al.，Curr.Opin.Immunol.，13(3)：270-7))。CD79b在NHL上的平均表面表达与在正常B细胞上的相似，但是范围更大(Matsuuchi et al.，Curr.Opin.Immunol.，13(3)：270-7(2001))。
鉴于CD79b的表达，生成针对CD79b抗原的治疗性抗体是有益的，其在施用给患者时(尤其是用于长期治疗)产生最低限度的抗原性或不产生抗原性。本发明满足了这种需要和其它需要。本发明提供了抗CD79b抗体，其克服了当前治疗性组合物的限制且提供别的优点，这根据下文详述是显而易见的。
抗体-药物偶联物(ADC)，即免疫偶联物在局部递送细胞毒性剂或细胞生长抑制剂，即在治疗癌症中杀伤或抑制肿瘤细胞的药物中的应用(Lambert，J.(2005)Curr.Opinion in Pharmacology 5：543-549；Wu等(2005)NatureBiotechnology 23(9)：1137-1146；Payne，G.(2003)Cancer Cell 3：207-212；Syrigos和Epenetos(1999)Anticancer Research 19：605-614；Niculescu-Duvaz和Springer(1997)Adv.Drug Del.Rev.26：151-172；US 4975278)能够将药物模块靶向递送至肿瘤并且在其中发生胞内蓄积，其中全身给予这些未偶联的药物活性剂在对肿瘤细胞消除的同时也对正常细胞产生了不可接受水平的毒性(Baldwin等(1986)Lancet pp.(Mar.15，1986)：603-05；Thorpe，(1985)″AntibodyCarriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：A Review，″-MonoclonalAntibody′84：Biological and Clinical Applications，A.Pinchera等(ed.s)，pp.475-506)。提高ADC的治疗指数(即最高的功效与最低的毒性)的努力已经集中到多克隆抗体(Rowland et al(1986)Cancer Immunol.Immunother.，21：183-87)和单克隆抗体(mAbs)的特异性以及药物-连接和药物-释放特性上(Lambert，J.(2005)Curr.Opinion in Pharmacology 5：543-549)。用于抗体-药物偶联物的药物模块包括：细菌蛋白质毒素，诸如白喉毒素，植物蛋白质毒素，诸如蓖麻毒素；小分子，诸如auristatin、格尔德霉素(geldanamycin)(Mandler等(2000)J.of the Nat.Cancer Inst.92(19)：1573-1581；Mandler等(2000)Bioorganic&Med.Chem.Letters 10：1025-1028；Mandler等(2002)BioconjugateChem.13：786-791)；美登木素生物碱(maytansinoids)(EP 1391213；Liu等(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：8618-8623)；加利车霉素(calicheamicin)(Lode等(1998)Cancer Res.58：2928；Hinman等(1993)Cancer Res.53：3336-3342)；柔红霉素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、甲氨蝶呤(methotrexate)和长春地辛(vindesine)(Rowland等(1986)，见上文)。药物模块可以影响细胞毒性和细胞抑制性机制，包括微管蛋白结合、DNA结合或拓扑异构酶抑制。某些细胞毒性药物在与大的抗体或蛋白质受体配体偶联时趋向于失活或活性降低。
Auristatin肽类，auristatin E(AE)和monomethyl auristatin(MMAE)，多拉司他汀(dolastatin)的合成类似物(WO 02/088172)作为药物模块与下列各项偶联：(i)嵌合单克隆抗体cBR96(对癌上的Lewis Y具有特异性)；(ii)对血液恶性肿瘤上的CD30具有特异性的cAC10(Klussman，等(2004)，BioconjugateChemistry 15(4)：765-773；Doronina等(2003)Nature Biotechnology21(7)：778-784；Francisco等(2003)Blood 102(4)：1458-1465；US 2004/0018194；(iii)用于治疗表达CD20的癌症和免疫病变的抗-CD20抗体，诸如B细胞单克隆抗体(rituxan)(WO 04/032828)；(iv)用于治疗结肠直肠癌的抗-EphB2R抗体2H9(Mao等(2004)Cancer Research 64(3)：781-788)；(v)E-选择蛋白抗体(Bhaskar等(2003)Cancer Res.63：6387-6394)；(vi)曲妥单抗(trastuzumab，
Figure GPA00001058503000041
US 2005/0238649)；和(vi)其它抗-CD30抗体(WO03/043583)。auristatin E的变体披露在US 5767237和US 6124431中。与单克隆抗体偶联的Monoemethyl auristatin E披露在Senter等的Proceedings of theAmerican Association for Cancer Research，Volume 45，Abstract Number 623中，2004年3月28日提交。Auristatin类似物MMAE和MMAF与各种抗体偶联(US2005/0238649)。
常规附着方式，即通过共价键连接，药物模块与抗体一般产生不均一的(heterogeneous)分子混合物，其中药物模块结合在抗体上的许多位点上。例如，细胞毒性药物一般与抗体通过抗体的通常大量的赖氨酸残基偶联，从而产生不均一的抗体-药物偶联物混合物。根据反应条件的不同，所述的不均一混合物一般含有抗体0-约8或8以上附着的药物模块的分布。此外，在具有特定整数比的药物模块与抗体的偶联物各亚组内可能是不均一的混合物，其中药物模块结合在抗体上的不同位点上。分析和制备方法可能不足以分离和表征由偶联反应产生的不均一混合物中的抗体-药物偶联物类分子。抗体为较大的复杂的并且结构多样的生物分子，通常带有许多反应性官能基。其与接头试剂和药物-接头中间体的反应性取决于如下因素：诸如pH、浓度、盐浓度和共溶剂。此外，多步骤偶联过程因控制反应条件和表征反应剂和中间体方面的困难而可能不可再现。
半胱氨酸硫醇在中性pH具有反应性，这与在接近pH 7时质子化和亲核性降低的大部分胺类不同。由于游离硫醇(RSH，硫氢基)具有相对的反应性，所以带有半胱氨酸残基的蛋白质通常以其作为二硫化物-连接的寡聚体的氧化形式存在或具有内部桥连的二硫化物基团。胞外蛋白一般不带有游离硫醇(Garman，1997，Non-Radioactive Labelling：A Practical Approach，AcademicPress，London，55页上)。抗体半胱氨酸硫醇一般对亲电子偶联反应剂比对抗体胺或羟基更具反应性，即更具亲核性。已经通过遗传改造将半胱氨酸残基引入了蛋白质以便形成与配体的共价结合物或形成新的分子内二硫键(Better等(1994)J.Biol.Chem.13：9644-9650；Bernhard等(1994)Bioconjugate Chem.5：126-132；Greenwood等(1994)Therapeutic Immunology 1：247-255；Tu等(1999)Proc.Natl.Acad.Sci USA 96：4862-4867；Kanno等(2000)J.of Biotechnology，76：207-214；Chmura等(2001)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 98(15)：8480-8484；US6248564)。然而，通过使蛋白质的不同氨基酸残基突变成半胱氨酸氨基酸来改造半胱氨酸硫醇可能存在问题，特别是就未配对的(游离Cys)残基或那些相对易于进行反应或氧化的残基而言。在蛋白质的浓溶液中，无论是在大肠杆菌(E.coli)的周质中，还是在培养物上清液或部分或完全纯化的蛋白质中，蛋白质表面上的未配对的Cys残基可以配对并且氧化成分子内二硫化物和由此的蛋白质二聚体或多聚体。二硫化物二聚体的形成使得新的Cys无法与药物、配体或其它标记发生偶联反应。此外，如果蛋白质以氧化方式在新改造的Cys和已存在的Cys残基之间形成分子内二硫键，那么两种Cys硫醇基团对活性位点的参与和相互作用而言均无法利用。此外，可以通过错误折叠或丧失三级结构使蛋白质失活或赋予其非特异性(Zhang等(2002)Anal.Biochem.311：1-9)。
半胱氨酸改造抗体已经设计成Fab抗体片段(thioFab)和表达成全长IgG单克隆(thioMab)抗体(Junutula，J.R.et al.(2008)J Immunol Methods 332：41-52；US 2007/0092940，通过述及收录其内容)。ThioFab和ThioMab抗体经新引入的半胱氨酸硫醇处的接头与硫醇反应性接头试剂和药物-接头试剂偶联以制备抗体药物偶联物(Thio ADC)。
通过述及完整收录本文中引用的所有参考文献(包括专利申请和出版物)。
发明概述
本发明提供了抗CD79b抗体或其功能性片段，及其在造血肿瘤治疗中的使用方法。
一方面，本发明提供了一种与任何上文或下文所述多肽结合(优选特异性结合)的抗体。任选的是，所述抗体是单克隆抗体、抗体片段(包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段)、双抗体、单域抗体、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体或竞争性抑制抗CD79b多肽抗体结合其相应抗原性表位的抗体。本发明的抗体可任选偶联至生长抑制剂或细胞毒剂，诸如毒素，包括例如auristatin、美登木素生物碱、多拉司他汀衍生物或加利车霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶、诸如此类。本发明的抗体可任选在CHO细胞或细菌细胞中生成，且优选诱导它们所结合的细胞死亡。出于检测目的，本发明的抗体可以是可检测标记的，附着至固体支持物的，诸如此类。
一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中该抗体对CD79b的单价亲和力(例如Fab片段形式的抗体对CD79b的亲和力)或二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG片段形式的抗体对CD79b的亲和力)分别与鼠抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的鼠抗体对CD79b的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的嵌合抗体对CD79b的亲和力)的单价亲和力或其二价形式的亲和力基本上相同，分别低于鼠抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的鼠抗体对CD79b的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的嵌合抗体对CD79b的亲和力)的单价亲和力或其二价形式的亲和力，或分别高于鼠抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的鼠抗体对CD79b的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式或IgG片段形式的嵌合抗体对CD79b的亲和力)的单价亲和力或其二价形式的亲和力，所述鼠抗体或嵌和抗体包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列，由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ IDNO：14)所示轻链和重链可变域序列组成，或基本上由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的该抗体对CD79b的亲和力)是0.4nM、0.2nM或0.5nM。
一方面，提供了一种与CD79b结合的抗体，其中该抗体包含至少一种、两种、三种、四种、五种或六种选自下组的HVR：
(i)HVR-L1，其包含序列A1-A15，其中A1-A15是KASQSVDYDGDSFLN(SEQ ID NO：131)
(ii)HVR-L2，其包含序列B 1-B7，其中B 1-B7是AASNLES(SEQ ID NO：132)
(iii)HVR-L3，其包含序列C1-C9，其中C1-C9是QQSNEDPLT(SEQ ID NO：133)
(iv)HVR-H1，其包含序列D1-D10，其中D1-D10是GYTFSSYWIE(SEQ ID NO：134)
(v)HVR-H2，其包含序列E1-E18，其中E1-E18是GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO：135)和
(vi)HVR-H3，其包含序列F1-F10，其中F1-F10是TRRVPVYFDY(SEQ ID NO：136)。
一方面，提供了一种与CD79b结合的抗体，其中该抗体包含至少一种变异HVR，其中所述变异HVR序列包含SEQ ID NO：131、132、133、134、135或136所示序列的至少一个残基的修饰。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图15(SEQ ID NO：164-166)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图15(SEQ ID NO：156-158)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图16(SEQ ID NO：183-185)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图16(SEQ ID NO：175-177)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图17(SEQ ID NO：202-204)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图17(SEQ ID NO：194-196)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图18(SEQ ID NO：221-223)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图18(SEQ ID NO：213-215)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。
一方面，本发明包括一种抗CD79b抗体，其包含选自SEQ ID NO：170、189、208或227的重链可变域。
另一方面，本发明包括一种抗CD79b抗体，其包含选自SEQ ID NO：169、188、207或226的轻链可变域。
一方面，本发明包括一种半胱氨酸改造抗CD79b抗体，其包含一个或多个游离半胱氨酸氨基酸和选自SEQ ID NO：251-298的序列。所述半胱氨酸改造抗CD79b抗体可以与CD79b多肽结合。所述半胱氨酸改造抗CD79b抗体可以通过包括用半胱氨酸替换亲本抗CD79b抗体的一个或多个氨基酸残基的方法来制备。
一方面，本发明包括一种半胱氨酸改造抗CD79b抗体，其包含一个或多个游离半胱氨酸氨基酸，其中所述半胱氨酸改造抗CD79b抗体与CD79b多肽结合且是通过包括用半胱氨酸替换亲本抗CD79b抗体的一个或多个氨基酸残基的方法制备的，其中所述亲本抗体包含至少一种选自下组的HVR序列：
(a)HVR-L1，其包含序列A1-A15，其中A1-A15是KASQSVDYDGDSFLN(SEQ ID NO：131)或KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO：137)
(b)HVR-L2，其包含序列B1-B7，其中B1-B7是AASNLES(SEQ ID NO：132)
(c)HVR-L3，其包含序列C1-C9，其中C1-C9是QQSNEDPLT(SEQ ID NO：133)
(d)HVR-H1，其包含序列D1-D10，其中D1-D10是GYTFSSYWIE(SEQ IDNO：134)
(e)HVR-H2，其包含序列E1-E18，其中E1-E18是GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO：135)和
(f)HVR-H3，其包含序列F1-F10，其中F1-F10是TRRVPVYFDY(SEQ ID NO：136)或TRRVPIRLDY(SEQ ID NO：138)。
所述半胱氨酸改造抗CD79b抗体可以是单克隆抗体、抗体片段、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体或竞争性抑制抗CD79b多肽抗体结合其相应抗原性表位的抗体。本发明的抗体可任选偶联至生长抑制剂或细胞毒剂，诸如毒素，包括例如auristatin或美登木素生物碱。本发明的抗体可任选在CHO细胞或细菌细胞中生成，且优选抑制它们所结合的细胞生长或增殖或诱导它们所结合的细胞死亡。出于诊断目的，本发明的抗体可以是可检测标记的，附着至固体支持物的，诸如此类。
一方面，本发明提供了制备本发明抗体的方法。例如，本发明提供了一种制备CD79b抗体(如本文中所定义的，其包括全长抗体及其片段)的方法，所述方法包括在合适的宿主细胞中表达编码所述抗体(或其片段)的本发明重组载体，并回收所述抗体。
一方面，本发明是一种药物配制剂，其包含本发明的抗体或本发明的抗体-药物偶联物，及药学可接受稀释剂、载体或赋形剂。
一方面，本发明提供了一种制品，其包含容器；和装在该容器内的组合物，其中所述组合物包含一种或多种本发明的CD79b抗体。
一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包含第一容器，其中装有包含一种或多种本发明CD79b抗体的组合物；及第二容器，其中装有缓冲液。
一方面，本发明提供了本发明的CD79b抗体在制备用于治疗性和/或预防性处理疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)的药物中的用途。
一方面，本发明提供了本发明的制品在制备用于治疗性和/或预防性处理疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)的药物中的用途。
一方面，本发明提供了本发明的试剂盒在制备用于治疗性和/或预防性处理疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)的药物中的用途。
一方面，本发明提供了一种抑制表达CD79b的细胞生长的方法，所述方法包括使所述细胞接触本发明的抗体，由此引起对所述细胞生长的抑制。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了一种治疗性处理患有癌性肿瘤(所述癌性肿瘤包含表达CD79b的细胞)的哺乳动物的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗性有效量的本发明抗体，由此有效治疗所述哺乳动物。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了一种用于治疗或预防与CD79b表达升高有关的细胞增殖性病症的方法，所述方法包括给需要此类治疗的受试者施用有效量的本发明抗体，由此有效治疗或预防所述细胞增殖性病症。在一个实施方案中，所述增殖性病症是癌症。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了一种用于抑制细胞生长的方法，其中所述细胞的生长至少部分依赖于CD79b的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的本发明抗体，由此抑制所述细胞的生长。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了一种治疗性处理哺乳动物中的肿瘤的方法，其中所述肿瘤的生长至少部分依赖于CD79b的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的本发明抗体，由此有效治疗所述肿瘤。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，包括给患者施用药物配制剂，该药物配制剂包含本文所述免疫偶联物、可接受的稀释剂、载体或赋形剂。
一方面，本发明提供了一种抑制B细胞增殖的方法，包括在允许下述免疫偶联物结合至CD79b的条件下使细胞暴露于包含本发明抗体的免疫偶联物。
一方面，本发明提供了一种测定怀疑含有CD79b的样品中CD79b的存在情况的方法，所述方法包括使所述样品暴露于本发明的抗体，并测定所述抗体对所述样品中CD79b的结合，其中所述抗体结合所述样品中的CD79b指示所述样品中存在所述蛋白质。
一方面，本发明提供了一种诊断与表达CD79b的细胞(诸如B细胞)增多有关的细胞增殖性病症的方法，所述方法包括使生物学样品中的测试细胞接触任何上述抗体；通过检测所述抗体对CD79b的结合来测定结合至所述样品中测试细胞的抗体的水平；并比较结合至对照样品中细胞的抗体的水平，其中将所结合的抗体的水平相对于测试和对照样品中表达CD79b的细胞的数目标准化，且其中测试样品中所结合的抗体的水平高于对照样品指明存在与表达CD79b的细胞有关的细胞增殖性病症。
一方面，本发明提供了一种检测血液或血清中可溶性CD79b的方法，所述方法包括使来自怀疑经历B细胞增殖性病症的哺乳动物的血液或血清测试样品接触本发明的抗CD79b抗体，并检测测试样品中可溶性CD79b相对于来自正常哺乳动物的血液或血清对照样品的升高。
一方面，本发明提供了一种使本发明的抗体结合至表达CD79b的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞接触本发明的抗体。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
附图简述
图1显示了PRO36249cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)，其中SEQ IDNO：1是本文中称作“DNA225786”(在本文中也称作“CD79b”)的克隆。该核苷酸序列编码CD79b，其中起始和终止密码子以粗体显示且标有下划线。
图2显示了自图1所示编码序列SEQ ID NO：1推导出的氨基酸序列(SEQID NO：2)。
图3显示了嵌合CD79b鼠抗体(chMA79b)IgG1的轻链的核苷酸序列(SEQID NO：3)(MA79b是鼠单克隆抗CD79b抗体)。该核苷酸序列编码chMA79b的轻链，其中起始和终止密码子以粗体显示且标有下划线。
图4显示了自图3所示编码序列SEQ ID NO：3推导出的氨基酸序列(SEQID NO：4)，缺失前18个氨基酸的信号序列。可变区是未标有下划线的区域。
图5显示了嵌合鼠抗体(chMA79b)IgG1的重链的核苷酸序列(SEQ ID NO：5)(MA79b是鼠单克隆抗CD79b抗体)。该核苷酸序列编码chMA79b的重链，其中起始和终止密码子以粗体显示且标有下划线。
图6显示了自图5所示编码序列SEQ ID NO：5推导出的氨基酸序列(SEQID NO：6)，缺失前18个氨基酸的信号序列和终止密码子前最后的赖氨酸(K)。可变区是未标有下划线的区域。
图7A-B显示了下列各项的可变轻链序列比对：具有VL-FR1、VL-FR2、vL-FR3、VL-FR4(分别为SEQ ID NO：139-142)的轻链人κI共有序列(标示为“huKI”；SEQ ID NO：9)、鼠抗CD79b抗体(标示为“MA79b”；SEQ ID NO：10)、MA79b嫁接的“人源化”抗体(标示为“huMA79b嫁接物”；SEQ ID NO：11)、MA79b嫁接的“人源化”抗体变体17(标示为“huMA79b.v17”；SEQ ID NO：169)、MA79b嫁接的“人源化”抗体变体18(标示为“huMA79b.v18”；SEQ IDNO：188)、MA79b嫁接的“人源化”抗体变体28(标示为“huMA79b.v28”；SEQID NO：207)和MA79b嫁接的“人源化”抗体变体32(标示为“huMA79b.v32”；SEQ ID NO：226)。位置是依照Kabat编号的，而且框示了自MA79b嫁接至可变轻链κI共有框架的高变区(HVR)。
图8A-B显示了下列各项的可变重链序列比对：具有VH-FR1、VH-FR2、vH-FR3和VH-FR4(SEQ ID NO：143-146)的重链人亚组III共有序列(标示为“humIII”；SEQ ID NO：13)、鼠抗CD79b抗体(标示为“MA79b”；SEQ ID NO：14)、MA79b嫁接的“人源化”抗体(标示为“huMA79b嫁接物”；SEQ ID NO：15)(含有71A、73T和78A)、MA79b嫁接的“人源化”抗体变体17(标示为“huMA79b.v17”；SEQ ID NO：170)(含有71A、73T和78A)、MA79b嫁接的“人源化”抗体变体18(标示为“huMA79b.v18”；SEQ ID NO：189)(含有71A、73T和78A)、MA79b嫁接的“人源化”抗体变体28(标示为“huMA79b.v28”；SEQ ID NO：208)(含有71A、73T和78A)和MA79b嫁接的“人源化”抗体变体32(标示为“huMA79b.v32”；SEQ ID NO：227)(含有71A、73T和78A)。位置是依照Kabat编号的，而且框示了自MA79b嫁接至可变重链亚组III共有框架的高变区(HVR)。
图9显示了选定的MA79b嫁接的“人源化”抗体变体的各种HVR序列(SEQ ID NO：17-21)，其中每种变体具有MA79b嫁接的“人源化”抗体的单个HVR区中的单个氨基酸变化(HVR-L1(SEQ ID NO：131)；HVR-L2(SEQ IDNO：132)；HVR-L3(SEQ ID NO：133))。所示单个氨基酸变化以外的可变轻链和重链序列与huMA79b嫁接物相同，没有显示。在MA79b嫁接的“人源化”抗体的HVR-H1(SEQ ID NO：134)、HVR-H2(SEQ ID NO：135)或HVR-H3(SEQ ID NO：136)中没有观察到变化。
图10显示了选定的MA79b嫁接的“人源化”抗体变体(包括huMA79bL2-2(在本文中也称作“L2”)和huMA79b H3-10(在本文中也称作“H3”))的各种HVR序列(SEQ ID NO：22-106)，其中每种变体具有MA79b嫁接的“人源化”抗体的单个HVR区中的多个氨基酸变化(HVR-L2(SEQ ID NO：132)；HVR-L3(SEQ ID NO：133)；HVR-H1(SEQ ID NO：134)；部分HVR-H3(SEQID NO：136)在图10中显示为SEQ ID NO：107)。所示氨基酸变化以外的可变轻链和重链序列与huMA79b嫁接物相同，没有显示。在MA79b嫁接的“人源化”抗体的HVR-L1(SEQ ID NO：131)或HVR-H2(SEQ ID NO：135)中没有观察到变化。
图11显示了选定的抗CD79b抗体对指定的抗原的Biacore分析，选定的抗CD79b抗体包括鼠CD79b抗体(标示为“MA79b”)、MA79b嫁接的“人源化”抗体(标示为“huMA79b嫁接物”)和MA79b嫁接的“人源化”抗体变体，包括huMA79b L2-2(52R、53K、55G、56R；SEQ ID NO：22)、huMA79b H3-10(98I、99R、100L；SEQ ID NO：94)、huMA79b H1-6(28P、30T、31R、35N；SEQ ID NO：57)和huMA79b L2/H3(下文所示L2-2和H3-10突变)，指定的抗原包括人CD79b的胞外结构域(huCD79becd)、与Fc融合的人CD79b胞外结构域(huCD79becd-Fc)和16个氨基酸的含有MA79b和chMA79b表位的肽(SEQ IDNO：16)。
图12显示了选定的抗CD79b抗体对人CD79b胞外结构域(huCD79b-ecd抗原)的Biacore分析，所述选定的抗CD79b抗体包括MA79b嫁接的“人源化”抗体(标示为“huMA79b嫁接物”)和MA79b嫁接的“人源化”抗体变体(在第1列中标示为1-34或在第1列中标示为“整个框架”)。MA79b嫁接的“人源化”抗体变体包括其中存在可能重要的鼠框架残基“整个框架”变体及具有框架突变组合且有或无所示可变轻链和可变重链中HVR突变的变体(标示为1-34)。MA79b嫁接的“人源化”抗体变体17(在本文中称作“huMA79b.v17”)在第1列中标示为17，MA79b嫁接的“人源化”抗体变体18(在本文中称作“huMA79b.v18”)在第1列中标示为18，MA79b嫁接的“人源化”抗体变体28(在本文中称作“huMA79b.v28”)在第1列中标示为28，而MA79b嫁接的“人源化”抗体变体32(在本文中称作“huMA79b.v32”)在第1列中标示为32。二价结合倍数表述成特定MA79b嫁接的“人源化”抗体变体的Kd(标示为“Kd变 体”)/嵌合MA79b抗体(chMA79b)的Kd(标示为“Kd嵌合”)；标示“二价结合倍数”列下的值代表Kd变体/Kd嵌合。没有检测到结合在图中标示为“NDB”。
图13A-B(可变重链(VH)共有框架)和图14(可变轻链(VL)共有框架)描绘了用于实践本发明的例示性受体人共有框架序列，序列标识符如下：(图13A-B)人VH亚组I共有框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：108)、人VH亚组I共有框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：109-111)、人VH亚组II共有框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：112)、人VH亚组II共有框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：113-115)、人VH亚组III共有框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：116)、人VH亚组III共有框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：117-119)、人VH受体框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：120)、人VH受体框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：121-122)、人VH受体2框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：123)和人VH受体2框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：124-26)及(图14)人VLκ亚组I共有框架(SEQ ID NO：127)、人VLκ亚组II共有框架(SEQ ID NO：128)、人κ亚组III共有框架(SEQ ID NO：129)和人κ亚组IV共有框架(SEQ ID NO：130)。
图15A(轻链)和15B(重链)显示了本发明抗体(huMA79b.v17)的氨基酸序列。图15A(轻链)和15B(重链)显示了本发明抗体的一个实施方案(huMA79b.v17)的框架(FR)、高变区(HVR)、第一恒定域(CL或CH1)和Fc区(Fc)的氨基酸序列(SEQ ID NO：152-159(图15A)和SEQ ID NO：160-168(图15B))。显示了huMA79b.v17的轻链和重链的全长氨基酸序列(可变区和恒定区)(分别为SEQ ID NO：303(图15A)和304(图15B)，恒定域标有下划线)。显示了可变域的氨基酸序列(SEQ ID NO：169(图15A为轻链)和SEQID NO：170(图15B为重链))。
图16A(轻链)和16B(重链)显示了本发明抗体(huMA79b.v18)的氨基酸序列。图16A(轻链)和16B(重链)显示了本发明抗体的一个实施方案(huMA79b.v18)的框架(FR)、高变区(HVR)、第一恒定域(CL或CH1)和Fc区(Fc)的氨基酸序列(SEQ ID NO：171-178(图16A)和SEQ ID NO：179-187(图16B))。显示了huMA79b.v18的轻链和重链的全长氨基酸序列(可变区和恒定区)(分别为SEQ ID NO：305(图16A)和306(图16B)，恒定域标有下划线)。显示了可变域的氨基酸序列(SEQ ID NO：188(图16A为轻链)和SEQID NO：189(图16B为重链))。
图17A(轻链)和17B(重链)显示了本发明抗体(huMA79b.v28)的氨基酸序列。图17A(轻链)和17B(重链)显示了本发明抗体的一个实施方案(huMA79b.v28)的框架(FR)、高变区(HVR)、第一恒定域(CL或CH1)和Fc区(Fc)的氨基酸序列(SEQ ID NO：190-197(图17A)和SEQ ID NO：198-206(图17B))。显示了huMA79b.v28的轻链和重链的全长氨基酸序列(可变区和恒定区)(分别为SEQ ID NO：307(图17A)和308(图17B)，恒定域标有下划线)。显示了可变域的氨基酸序列(SEQ ID NO：207(图7A-B为轻链)和SEQID NO：208(图8A-B为重链))。
图18A(轻链)和18B(重链)显示了本发明抗体(huMA79b.v32)的氨基酸序列。图18A(轻链)和18B(重链)显示了本发明抗体的一个实施方案(huMA79b.v32)的框架(FR)、高变区(HVR)、第一恒定域(CL或CH1)和Fc区(Fc)的氨基酸序列(SEQ ID NO：209-216(图18A)和SEQ ID NO：217-225(图18B))。显示了huMA79b.v32的轻链和重链的全长氨基酸序列(可变区和恒定区)(分别为SEQ ID NO：309(图18A)和310(图18B)，恒定域标有下划线)。显示了可变域的氨基酸序列(SEQ ID NO：226(图18A为轻链)和SEQID NO：227(图18B为重链))。
图19显示了来自人(SEQ ID NO：2)、猕猴(cyno)(SEQ ID NO：7)和小鼠(SEQ ID NO：8)的CD79b的氨基酸序列比对。人和猕猴CD79b具有85％氨基酸同一性。标示了信号序列、测试肽(实施例1所述MA79b、chMA79b和抗cynoCD79b抗体的11个氨基酸的表位；ARSEDRYRNPK(SEQ ID NO：12))、跨膜(TM)结构域和免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)结构域。框示的区域是CD79b的剪接变体中不存在的CD79b区域(实施例1中有描述)。
图20是BJAB-萤光素酶异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用抗CD79b抗体((a)chMA79b-SMCC-DM1，药物载荷是大约2.9(表9)和(b)huMA79bL2/H3-SMCC-DM1，药物载荷是大约2.4(表9)显著抑制肿瘤生长。对照包括
Figure GPA00001058503000151
(trastuzumab)-SMCC-DM1(抗HER2-SMCC-DM1)。
图21A是Granta-519(人套细胞淋巴瘤)异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用抗CD79b抗体((a)chMA79b-SMCC-DM1，药物载荷是大约3.6(表10)、(b)huMA79b.v17-SMCC-DM1，药物载荷是大约3.4(表10)、(c)huMA79b.v28-SMCC-DM1，药物载荷是大约3.3或3.4(表10)、(d)huMA79b.v18-SMCC-DM1，药物载荷是大约3.4(表10)和(e)huMA79b.v32-SMCC-DM1，药物载荷是大约2.9(表10))显著抑制肿瘤生长。对照包括(trastuzumab)-SMCC-DM1(抗HER2-SMCC-DM1)。图21B是来自Granta-519异种移植物研究(图21A和表10)的小鼠中百分比体重变化的图，显示了研究的前7天期间体重没有显著变化。“hu”指人源化抗体，而“ch”指嵌合抗体。
图22显示了半胱氨酸改造抗CD79b抗体药物偶联物(ADC)的示意图，其中药物模块附着至轻链(LC-ADC)、重链(HC-ADC)和Fc区(Fc-ADC)中的改造半胱氨酸基团。
图23显示了下列步骤：(i)还原半胱氨酸二硫化物加合物及半胱氨酸改造抗CD79b抗体(ThioMab)中的链间和链内二硫化物用还原剂TCEP(盐酸三(2-羧乙基)膦)；(ii)用dhAA(脱氢抗坏血酸)部分氧化(即重新氧化)以重新形成链间和链内二硫化物；并(iii)将重新氧化的抗体与药物-接头中间体偶联以形成半胱氨酸抗CD79b药物偶联物(ADC)。
图24显示了人源化半胱氨酸改造抗CD79b抗体(thio-huMA79b.v17-HC-A118C)的(A)轻链序列(SEQ ID NO：229)和(B)重链序列(SEQ ID NO：228)，其中重链EU第118位(连续编号第118位丙氨酸；Kabat第114位)处的丙氨酸被改变成半胱氨酸。药物模块可附着至重链中改造的半胱氨酸基团。在每幅图中，改变的氨基酸以粗体显示且标有双下划线。单下划线标示恒定区。可变区是未标有下划线的区域。Fc区以斜体标示。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图25显示了人源化半胱氨酸改造抗CD79b抗体(thio-huMA79b.v18-HC-A118C)的(A)轻链序列(SEQ ID NO：231)和(B)重链序列(SEQ ID NO：230)，其中重链EU第118位(连续编号第118位丙氨酸；Kabat第114位)处的丙氨酸被改变成半胱氨酸。药物模块可附着至重链中改造的半胱氨酸基团。在每幅图中，改变的氨基酸以粗体显示且标有双下划线。单下划线标示恒定区。可变区是未标有下划线的区域。Fc区以斜体标示。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图26显示了人源化半胱氨酸改造抗CD79b抗体(thio-huMA79b.v28-HC-A118C)的(A)轻链序列(SEQ ID NO：233)和(B)重链序列(SEQ ID NO：232)，其中重链EU第118位(连续编号第118位丙氨酸；Kabat第114位)处的丙氨酸被改变成半胱氨酸。药物模块可附着至重链中改造的半胱氨酸基团。在每幅图中，改变的氨基酸以粗体显示且标有双下划线。单下划线标示恒定区。可变区是未标有下划线的区域。Fc区以斜体标示。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图27显示了半胱氨酸改造抗CD79b抗体(thio-MA79b-LC-V205C)的(A)轻链序列(SEQ ID NO：235)和(B)重链序列(SEQ ID NO：234)，其中轻链Kabat第205位(连续编号第209位缬氨酸)缬氨酸被改变成半胱氨酸。药物模块可附着至轻链中改造的半胱氨酸基团。在每幅图中，改变的氨基酸以粗体显示且标有双下划线。单下划线标示恒定区。可变区是未标有下划线的区域。Fc区以斜体标示。“Thio”指半胱氨酸改造抗体。
图28显示了半胱氨酸改造抗CD79b抗体(thio-MA79b-HC-A118C)的(A)轻链序列(SEQ ID NO：237)和(B)重链序列(SEQ ID NO：236)，其中重链EU第118位(连续编号第118位丙氨酸；Kabat第114位)处的丙氨酸被改变成半胱氨酸。药物模块可附着至重链中改造的半胱氨酸基团。在每幅图中，改变的氨基酸以粗体显示且标有双下划线。单下划线标示恒定区。可变区是未标有下划线的区域。Fc区以斜体标示。“Thio”指半胱氨酸改造抗体。
图29A-B是FACS图，指明对于与MMAF偶联的chMA79b的(A)LC(V205C)thioMAb变体和(B)HC(A118C)thioMAb变体，本发明的抗CD79bthioMAb药物偶联物(TDC)对BJAB-萤光素酶细胞表面上表达的CD79b的结合是类似的。检测使用MS抗人IgG-PE进行。“Thio”指半胱氨酸改造抗体。
图30A-D是FACS图，指明对于(A)裸的(未偶联的)huMA79b.v18的HC(A118C)thioMAb变体及与所示不同药物偶联物((B)MMAF、(C)MMAE和(D)DM1))偶联的huMA79b.v18的HC(A118C)thioMAb变体，本发明的抗CD79b thioMAb药物偶联物(TDC)对BJAB-萤光素酶细胞表面上表达的CD79b的结合是类似的。检测使用MS抗人IgG-PE进行。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图31A-D是FACS图，指明对于(A)裸的(未偶联的)的huMA79b.v28的HC(A118C)thioMAb变体及与所示不同药物偶联物((B)MMAE、(C)DM1和(D)MMAF))偶联的huMA79b.v28的HC(A118C)thioMAb变体，本发明的抗CD79b thioMAb药物偶联物(TDC)对BJAB-萤光素酶细胞表面上表达的CD79b的结合是类似的。检测使用MS抗人IgG-PE进行。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图32A-D是FACS图，指明对于(A)裸的(未偶联的)的抗cynoCD79b(ch10D10)的HC(A118C)thioMAb变体及与所示不同药物偶联物((B)MMAE、(C)DM1和(D)MMAF))偶联的抗cynoCD79b(ch10D10)的HC(A118C)thioMAb变体而言，本发明的抗猕猴CD79b thioMAb药物偶联物(TDC)对表达cynoCD79b的BJAB细胞表面上表达的CD79b的结合是类似的。检测使用MS抗人IgG-PE进行。“Thio”指半胱氨酸改造抗体。
图33A是Granta-519(人套细胞淋巴瘤)异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用改造半胱氨酸的位置(LC(V205C)或HC(A118C))不同和/或药物载荷不同的抗CD79b TDC显著抑制肿瘤生长。用药物载荷大约1.9的thio chMA79b-HC(A118C)-MC-MMAF(表11)或药物载荷大约1.8的thio chMA79b-LC(V205C)-MC-MMAF(表11)处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括hu-anti-HER2-MC-MMAF和thio hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF和chMA79b-MC-MMAF。图33B是来自Granta-519异种移植物研究(图33A和表11)的小鼠中百分比体重变化的图，显示了研究的前14天期间体重没有显著变化。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图34A是BJAB-萤光素酶(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用偶联至不同接头药物模块(MCvcPAB-MMAE、BMPEO-DM1或MC-MMAF)的抗CD79b TDC显著抑制肿瘤生长。用药物载荷大约1.87的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(表12)、药物载荷大约1.85的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表12)或药物载荷大约1.95的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF(表12)处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括抗HER2对照(thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)、huMA79b.v28对照(huMA79b.v28-SMCC-DM1和thio huMA79b.v28-HC(A118C))和抗CD22对照(thio hu-anti-CD22(10F4v3)-HC(A118C)-MC-MMAF)。图34B是来自BJAB-萤光素酶异种移植物研究(图34A和表12)的小鼠中百分比体重变化的图，显示了研究的前7天期间体重没有显著变化。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图35A是WSU-DLCL2(弥漫性大细胞淋巴瘤)异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用偶联至不同接头药物模块(MCvcPAB-MMAE、BMPEO-DM1或MC-MMAF)的抗CD79bTDC显著抑制肿瘤生长。用药物载荷大约1.87的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(表13)、药物载荷大约1.85的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表13)或药物载荷大约1.95的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF(表13)处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括抗HER2对照(thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)、huMA79b.v28对照(huMA79b.v28-SMCC-DM1和thio huMA79b.v28-HC(A118C))和抗CD22对照(thio hu-anti-CD22(10F4v3)-HC(A118C)-MC-MMAF)。图35B是来自WSU-DLCL2异种移植物研究(图35A和表13)的小鼠中百分比体重变化的图，显示了研究的前7天期间体重没有显著变化。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图36是DOHH2(滤泡性淋巴瘤)异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用偶联至不同接头药物模块(BMPEO-DM1、MC-MMAF或MCvcPAB-MMAE)的抗CD79b TDC显著抑制肿瘤生长。用thio huMA79b.v28-BMPEO-DM1(药物载荷大约1.85(表14))、thio huMA79b.v28-MC-MMAF(药物载荷大约1.95(表14))或thioMA79b-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(药物载荷大约1.87(表14))处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括抗HER2对照(thio hu-抗HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)、huMA79b.v28对照(huMA79b.v28-SMCC-DM1和thio huMA79b.v28-HC(A118C))和抗CD22对照(thio hu-anti-CD22(10F4v3)-HC(A118C)-MC-MMAF)。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图37是BJAB-萤光素酶(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用偶联至不同接头药物模块(MCvcPAB-MMAE、BMPEO-DM1或MC-MMAF)的抗CD79b TDC和/或以所示不同剂量施用显著抑制肿瘤生长。用药物载荷大约1.85的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表15)、药物载荷大约1.9的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(表15)或药物载荷大约1.9的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF(表15)处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括媒介(只是缓冲液)、抗HER2对照(thio hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)、huMA79b.v28对照(thiohuMA79b.v28-HC(A118C))和抗CD22对照(thiohu-anti-CD22(10F4v3)-HC(A118C)-MC-MMAF)。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图38A是Granta-619(人套细胞淋巴瘤)异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用偶联至不同接头药物模块(BMPEO-DM1或MC-MMAF)的抗CD79b TDC和/或以所示不同剂量施用显著抑制肿瘤生长。用药物载荷大约1.85的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表16)或药物载荷大约1.95的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF(表16)处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括抗HER2对照(thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF)。图38B是来自Granta-519异种移植物研究(图38A和表16)的小鼠中百分比体重变化的图，显示了研究的前14天期间体重没有显著变化。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图39是WSU-DLCL2(弥漫性大细胞淋巴瘤)异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用偶联至不同接头药物模块(BMPEO-DM1、MC-MMAF或MCvcPAB-MMAE)的抗CD79bTDC和/或以所示不同剂量施用显著抑制肿瘤生长。用药物载荷大约1.85的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表17)、药物载荷大约1.9的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF(表17)或药物载荷大约1.9的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(表17)处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括媒介(只是缓冲液)和抗HER2对照(thio hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图40是Granta-519(人套细胞淋巴瘤)异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用偶联至不同接头药物模块(BMPEO-DM1或MCvcPAB-MMAE)的抗CD79b TDC和/或以所示不同剂量施用显著抑制肿瘤生长。用药物载荷大约1.85的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表18)或药物载荷大约1.87的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(表18)处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括抗HER2对照(thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图41显示了体外细胞增殖测定法结果的图，其中用.001至10000ng/ml的不同浓度的TDC处理(A)BJAB、(B)Granta-519或(C)WSU-DLCL2肿瘤细胞，包括：(1)对照thio hu anti-gD-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE，MMAE/Ab载荷2.0；(2)对照thio hu anti-gD-HC(A118C)-MC-MMAF，MMAF/Ab载荷2.1；(3)对照thio hu anti-gD-HC(A118C)-BMPEO-DM1，DM1/Ab载荷2.1；(4)thiohuMA79b.v18-HC(A118C)-MC-MMAF，MMAF/Ab载荷1.91；(5)thiohuMA79b.v18-HC(A118C)-BMPEO-DM1，DM1/Ab载荷1.8；和(6)thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE，MMAE/Ab载荷2.0。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。“gD”指糖蛋白D。
图42显示了PRO283627cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO：238)，其中SEQID NO：235是称作“DNA548455”(在本文中也称作“cyno CD79b”)的克隆。该核苷酸序列编码猕猴CD79b，其中起始和终止密码子以粗体显示且标有下划线。
图43显示了自图42所示编码序列SEQ ID NO：235推导出的氨基酸序列(SEQ ID NO：239)。
图44显示了抗猕猴CD79b抗体(ch10D10)的轻链的核苷酸序列(SEQ IDNO：240)。该核苷酸序列编码抗猕猴CD79b抗体(ch10D10)的轻链，其中起始和终止密码子以粗体显示且标有下划线。
图45显示了自图44所示编码序列SEQ ID NO：240推导出的氨基酸序列(SEQ ID NO：241)，缺失前18个氨基酸的信号序列。可变区(SEQ ID NO：302)是未标有下划线的区域。
图46显示了抗猕猴CD79b抗体(ch10D10)的重链的核苷酸序列(SEQ IDNO：242)。该核苷酸序列编码抗猕猴CD79b抗体(ch10D10)的重链，其中起始和终止密码子以粗体显示且标有下划线。
图47显示了自图46所示编码序列SEQ ID NO：242推导出的氨基酸序列(SEQ ID NO：243)，缺失前18个氨基酸的信号序列和终止密码子前最后的赖氨酸(K)。可变区(SEQ ID NO：301)是未标有下划线的区域。
图48显示了半胱氨酸改造抗猕猴CD79b抗体(Thio-anti-cynoCD79b-HC-A118C)的(A)轻链序列(SEQ ID NO：245)和(B重链序列(SEQ ID NO：244)，其中重链EU第118位(连续编号第118位丙氨酸；Kabat第114位)处的丙氨酸被改变成半胱氨酸。重链EU第6位处的氨基酸D(在图中以阴影标示)或者可以是E。药物模块可附着至重链中改造的半胱氨酸基团。在每幅图中，改变的氨基酸以粗体显示且标有双下划线。单下划线标示恒定区。可变区是未标有下划线的区域。Fc区以斜体标示。“Thio”指半胱氨酸改造抗体。
图49显示了半胱氨酸改造抗猕猴CD79b抗体(Thio-anti-cynoCD79b-LC-V205C)的(A)轻链序列(SEQ ID NO：300)和(B)重链序列(SEQ ID NO：299)，其中轻链Kabat第205位(连续编号第209位缬氨酸)缬氨酸被改变成半胱氨酸。重链EU第6位处的氨基酸D(在图中以阴影标示)或者可以是E。药物模块可附着至轻链中改造的半胱氨酸基团。在每幅图中，改变的氨基酸以粗体显示且标有双下划线。单下划线标示恒定区。可变区是未标有下划线的区域。Fc区以斜体标示。“Thio”指半胱氨酸改造抗体。
图50是BJAB-cynoCD79b(表达cynoCD79b的BJAB细胞)(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠施用偶联至不同接头药物模块(BMPEO-DM1、MC-MMAF或MCvcPAB-MMAE)的抗CD79b TDC显著抑制肿瘤生长。用药物载荷大约1.85的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表19)、药物载荷大约1.9的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF(表19)、药物载荷大约1.9的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(表19)、药物载荷大约1.8的thioanti-cyno CD79b(ch10D10)-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表19)、药物载荷大约1.9的thio anti-cyno CD79b(ch10D10)-HC(A118C)-MC-MMAF(表19)或药物载荷大约1.86的thio anti-cyno CD79b(ch10D10)-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(表19)处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括抗HER2对照(thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE、thiohu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF)。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
图51是BJAB-cynoCD79b(表达cynoCD79b的BJAB细胞)(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))异种移植物模型中体内肿瘤生长抑制的图，显示了给具有人B细胞肿瘤的SCID小鼠以所示不同剂量施用具有BMPEO-DM1接头药物模块的抗CD79b TDC显著抑制肿瘤生长。用药物载荷大约1.85的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表20)或药物载荷大约1.8的thio anti-cyno(ch10D10)-HC(A118C)-BMPEO-DM1(表20)处理的异种移植物模型在研究期间显示出显著抑制肿瘤生长。对照包括抗HER2对照(thio hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1)和huMA79b.v28对照(thiohuMA79b.v28-HC(A118C))和抗cynoCD79b(ch10D10)对照(thioanti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C))。“Thio”指半胱氨酸改造抗体，而“hu”指人源化抗体。
发明详述
本发明提供了用于鉴定对于哺乳动物中造血肿瘤治疗有用的组合物的方法、组合物、试剂盒和制品及使用那些组合物治疗哺乳动物中造血肿瘤的方法。
本文中提供了这些方法、组合物、试剂盒和制品的详情。
I.通用技术
除非另有说明，本发明的实施将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在本领域的技术范围内。文献中充分阐述了此类技术，诸如“Molecular Cloning：ALaboratory Manual”，second edition(Sambrook et al.，1989)；“OligonucleotideSynthesis”(M.J.Gait，ed.，1984)；“Animal Cell Culture”(R.I.Freshney，ed.，1987)；“Methods in Enzymology”(Academic Press，Inc.)；“Current Protocols inMolecular Biology”(F.M.Ausubel et al.，eds.，1987，and periodic updates)；“PCR：The Polymerase Chain Reaction”，(Mullis et al.，ed.，1994)；“A PracticalGuide to Molecular Cloning”(Perbal Bernard V.，1988)；“Phage Display：ALaboratory Manual”(Barbas et al.，2001)。
II.定义
为了解释本说明书的目的，应用以下定义，而且在任何适宜的时候，以单数使用的术语也会包括复数，反之亦然。在所列任何定义与通过述及收入本文的任何文件抵触的情况中，应当以下文所列定义为准。
“B细胞表面标志物”或“B细胞表面抗原”在本文中指在B细胞表面上表达的抗原，可以用能结合它的拮抗剂来靶向它，包括但不限于B细胞表面抗原的抗体或能够拮抗配体对天然存在B细胞抗原的结合的可溶形式B细胞表面抗原的抗体。例示性的B细胞表面标志物包括CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85和CD86白细胞表面标志物(有关说明参见《The LeukocyteAntigen Facts Book》，第2版，1997，Barclay等编，Academic Press，HarcourtBrace&Co.，NewYork)。其它B细胞表面标志物包括RP105、FcRH2、B-cellCR2、CCR6、P2X5、HLA-DOB、CXCR5、FCER2、BR3、BAFF、BLys、Btig、NAG14、SLGC16270、FcRH1、IRTA2、ATWD578、FcRH3、IRTA1、FcRH6、BCMA和239287。特别感兴趣的B细胞表面标志物是在B细胞上较之哺乳动物的其它非B细胞组织优先表达的，而且可以是在前体B细胞和成熟B细胞二者上都表达的。
如本文中所使用的，术语“CD79b”指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人、猕猴(cyno))和啮齿类(例如小鼠和大鼠))的任何天然CD79b，除非另有说明。人CD79b在本文中还称作“PRO36249”(SEQID NO：2)且由在本文中还称作“DNA225786”的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)编码。猕猴CD79b在本文中还称作“cyno CD79b”或“PRO283627”(SEQ ID NO：239)且由在本文中还称作“DNA548455”的核苷酸序列(SEQ ID NO：238)编码。术语“CD79b”涵盖“全长”、未加工的CD79b以及自细胞中加工得到的任何形式的CD79b。该术语还涵盖天然存在的CD79b变体，例如剪接变体、等位变体和同等型(isoform)。本文所述CD79b多肽可以从多种来源分离，诸如人组织类型或其它来源，或者通过重组或合成方法制备。“天然序列CD79b多肽”包括与自自然界衍生的相应CD79b多肽具有相同氨基酸序列的多肽。此类天然序列CD79b多肽可以从自然界分离，或者可以通过重组或合成方法制备。术语“天然序列CD79b多肽”明确涵盖天然存在的截短或分泌形式的特定CD79b多肽(例如胞外结构域序列)、该多肽的天然存在变异形式(例如可变剪接形式)和天然存在等位变体。在本发明的某些实施方案中，本文中所公开的天然序列CD79b多肽是包含附图中所示全长氨基酸序列的成熟或全长天然序列多肽。起始和终止密码子(如果指明的话)在附图中以粗体显示且划有下划线。图中以“X”表示的核酸残基指任何核酸残基。然而，虽然图中所公开的CD79b多肽显示出以本文中在图中标示为第1位氨基酸的甲硫氨酸残基开始，但是想得到且和有可能的是，可以采用位于图中第1位氨基酸上游或下游的其它甲硫氨酸残基作为CD79b多肽的起始氨基酸残基。
“MA79b”或“鼠CD79b抗体”或“鼠抗CD79b抗体”在本文中用于具体指鼠抗CD79b单克隆抗体，其中所述鼠抗CD79b单克隆抗体包含轻链可变域SEQID NO：10(图7A-B)和重链可变域SEQ ID NO：14(图8A-B)。鼠抗CD79b单克隆抗体可以自商业来源购买，诸如Biomeda(抗人CD79b抗体；Foster City，CA)、BDbioscience(抗人CD79b抗体；San Diego，CA)或Ancell(抗人CD79b抗体；Bayport，MN)，或者自杂交瘤克隆3A2-2E7(美国典型培养物保藏中心(ATCC)保藏物编号HB11413，于1993年7月20日保藏于ATCC)生成。
“chMA79b”或“嵌合MA79b抗体”在本文中用于具体指嵌合抗人CD79b抗体(先前记载于2006年8月3日提交的美国申请No.11/462,336)，其中所述嵌合抗CD79b抗体包含轻链SEQ ID NO：4(图4)。所述轻链SEQ ID NO：4进一步包含可变域SEQ ID NO：10(图7A-B)和人IgG1轻链恒定域。所述嵌合抗CD79b抗体进一步包含重链SEQ ID NO：6(图6)。所述重链SEQ ID NO：6进一步包含可变域SEQ ID NO：14(图8A-B)和人IgG1重链恒定域。
“抗cynoCD79b”或“抗cyno CD79b”在本文中用于指与cyno CD79b(图43的SEQ ID NO：239)结合的抗体(先前记载于2006年8月3日提交的美国申请No.11/462,336)。“抗cynoCD79b(ch10D10)”或“ch10D10”在本文中用于指与cynoCD79b(图43的SEQ ID NO：239)结合的嵌合抗cynoCD79b(先前记载于2006年8月3日提交的美国申请No.11/462,336)。抗cynoCD79b(ch10D10)或ch10D10指包含轻链SEQ ID NO：241(图45)的嵌合抗cynoCD79b抗体。抗cynoCD79b(ch10D10)或ch10D10进一步包含重链SEQ ID NO：243(图47)。
“MA79b-嫁接物”或“MA79b-嫁接的‘人源化’抗体”或“huMA79b嫁接物”在本文中用于具体指通过将来自鼠抗CD79b抗体(MA79b)的高变区嫁接入受体人共有VLκI(huKI)和具有R71A、N73T和L78A的人亚组III共有VH(huIII)生成的嫁接物(Carter et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4285(1992))(见实施例1A和图7(SEQ ID NO：11)和图8(SEQ ID NO：15))。
氨基酸残基/位点的“修饰”在用于本文时指一级氨基酸序列与起始氨基酸序列相比的变化，其中所述改变源自牵涉所述氨基酸残基/位点的序列改变。例如，典型的修饰包括用另一种氨基酸替代所述残基(或者在所述位置)(例如保守或非保守替代)、在所述残基/位置插入一个或多个(通常少于5个或3个)氨基酸、及删除所述残基/位置。“氨基酸替代”或其变体指用不同氨基酸残基置换预定的(起初的)氨基酸序列中现有的氨基酸残基。通常且优选的是，修饰导致与包含起始(或“野生型”)氨基酸序列的多肽相比，变体多肽的至少一种物理生化活性发生变更。例如，在抗体的情况中，发生改变的物理生化活性可以是对靶分子的结合亲和力、结合能力和/或结合效应。
术语“抗体”以最广义使用，明确覆盖例如单一抗CD79b单克隆抗体(包括激动性抗体、拮抗性抗体、中和性抗体、全长或完整单克隆抗体)、具有多表位特异性的抗CD79b抗体组合物、多克隆抗体、多价抗体、自至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体，只要它们展现出期望的生物学活性)、单链抗CD79b抗体和抗CD79b抗体片段(见下文)(包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段)、双抗体、单域抗体(sdAb)，只要它们展现出期望的生物学或免疫学活性。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换使用。抗体可以是人的、人源化的和/或亲和力成熟的。
术语“抗CD79b抗体”或“与CD79b结合的抗体”指能够以足够亲和力结合CD79b的抗体，使得该抗体作为靶向CD79b中的诊断剂和/或治疗剂是有用的。优选的是，抗CD79b抗体结合无关的非CD79b蛋白质的程度小于该抗体对CD79b的结合的约10％，根据例如放射免疫测定法(RIA)的测量。在某些实施方案中，与CD79b结合的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM或≤0.1nM的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗CD79b抗体结合在来自不同物种的CD79b间保守的CD79b表位。
“分离的”抗体指已经鉴定且自其天然环境的一种成分分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指将会干扰该抗体的治疗用途的物质，可包括酶、激素和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将抗体纯化至(1)根据Lowry法的测定，抗体重量超过95％，最优选重量超过99％，(2)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE及使用考马斯蓝或优选的银染色，达到同质。既然抗体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。
基本的4链抗体单元是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)构成的异四聚体糖蛋白(IgM抗体由5个基本的异四聚体单元及称作J链的另外多肽组成，因此包含10个抗原结合位点；而分泌型IgA抗体可聚合而形成包含2-5个基本的4链单元及J链的多价装配物)。在IgG的情况中，4链单元通常是约150,000道尔顿。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而两条重链通过一个或多个二硫键彼此相连，二硫键的数目取决于重链的同种型。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫键。每条重链在N-末端具有一个可变区(VH)，接着是三个(对于α和γ链)或四个(对于μ和ε同种型)恒定区(CH)。每条轻链在N-末端具有一个可变区(VL)，接着是其另一端的一个恒定区(CL)。VL与VH排列在一起，而CL与重链第一恒定区(CH1)排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变区之间形成界面。一个VH和一个VL一起配对而形成一个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basic and Clinical Immunology，8th edition，Daniel P.Stites，Abba I.Terrand Tristram G.Parslow(eds.)，Appleton&Lange，Norwalk，CT，1994，page 71and Chapter 6。
根据其恒定域氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的L链可归入两种截然不同类型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。根据其重链恒定域(CH)氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类别或同种型。有五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有称作α、δ、ε、γ和μ的重链。根据CH序列和功能的较小差异，γ和α类可进一步分为亚类，例如人类表达下列亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。
抗体的“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变域可以称为“VH”。轻链的可变域可以称为“VL”。这些结构域一般是抗体的最易变部分且包含抗原结合位点。
术语“可变的”指可变域中的某些区段在抗体间序列差异广泛的实情。V结构域介导抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，变异性并非均匀分布于可变域跨越的110个氨基酸。事实上，V区由15-30个氨基酸，称作框架区(FR)的相对不变异的区段及将框架区分开的每个长度为9-12个氨基酸，称作“高变区”的极度变异的较短区域组成。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR，它们大多采取β-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成β-折叠片结构一部分的三个高变区连接。每条链中的高变区通过FR非常接近地保持在一起，并与另一条链的高变区一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat et al.，Sequences of Proteins of Immunological Interest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)中抗体的参与。
“完整抗体”指包含抗原结合位点以及CL和至少重链恒定域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定域可以是天然序列恒定区(例如人天然序列恒定区)或其氨基酸序列变体。优选的是，完整抗体具有一项或多项效应器功能。
“裸抗体(裸露的抗体)”为本发明目的指未偶联细胞毒性模块或放射性标记物的抗体。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5,641,870，实施例2；Zapata et al.，Protein Eng.8(10)：1057-1062(1995))；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。在一个实施方案中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，如此保留结合抗原的能力。
用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称作“Fab”片段，和残余“Fc”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。Fab片段由完整轻链及重链的可变区(VH)和第一恒定区(CH1)组成。每个Fab片段对于抗原结合是单价的，即它具有一个抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体产生一个较大F(ab′)2片段，它粗略相当于两个通过二硫键相连的Fab片段，具有二价抗原结合活性且仍能够交联抗原。Fab’片段因在CH1结构域的羧基末端增加了少数残基而与Fab片段有所不同，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文中对其中恒定区半胱氨酸残基携带一个游离硫醇基的Fab’的称谓。F(ab′)2抗体片段最初是作为成对Fab’片段生成的，在Fab’片段之间具有铰链半胱氨酸。还知道抗体片段的其它化学偶联。
Fc片段包含通过二硫键保持在一起的所有两条重链的羧基末端部分。抗体的效应器功能是由Fc区中的序列决定的，该区还是受到在某些类型的细胞上找到的Fc受体(FcR)所识别的部分。
“Fv”是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由紧密、非共价结合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。在单链Fv种类中，一个重链可变域和一个轻链可变域可以通过柔性肽接头共价相连，使得轻链和重链在与双链Fv种类类似的“二聚体”结构中相结合。从这两个结构域的折叠结构中散发出六个高变环(重链和轻链各3个环)，其贡献出供结合抗原的氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或是只包含对抗原特异性的三个CDR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，只是亲和力低于完整结合位点。
“单链Fv”，也可缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接成一条多肽链的抗体VH和VL结构域的抗体片段。优选的是，sFv多肽在VH和VL结构域之间还包含多肽接头，使得sFv形成抗原结合期望的结构。关于sFv的综述参见Plückthun，《The Pharmacology of Monoclonal Antibodies》，vol.113，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，New York，pp.269-315，1994；Borrebaeck 1995，见下文。
术语“双抗体”指具有两个抗原结合位点的抗体片段，该片段在同一条多肽链(VH-VL)中包含相连的重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)。通过在VH和VL结构域之间使用短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(见上一段)来制备小型抗体片段，由于接头短，使得V结构域实行链间而非链内配对，导致二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双抗体可以是二价的或双特异性的。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的VH和VL结构域存在于不同多肽链上。双抗体更完整的描述于例如EP404,097；WO 93/11161；Hudson et al.，Nat.Med.9：129-134(2003)；及Hollingeret al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：6444-6448(1993)。三抗体(Triabody)和四抗体(tetrabody)也记载于Hudson et al.，Nat.Med.9：129-134(2003)。
术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各抗体个体是相同的，除了可以以极小量存在的可能的天然存在突变形式外。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。此外，与包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性之外，单克隆抗体的优势在于它们可以在未受到其它抗体污染的情况中合成。修饰语“单克隆”不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可用于本发明的单克隆抗体可通过最初由Kohler等(1975)Nature 256：495记载的杂交瘤方法来制备，或者可通过重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(参见例如美国专利No.4,816,567)。“单克隆抗体”还可使用例如Clackson等(1991)Nature 352：624-628；和Marks等(1991)J.Mol.Biol.222：581-597中记载的技术从噬菌体抗体库分离。
单克隆抗体在本文中包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(参见美国专利No.4,816,567；Morrison et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA81：6851-6855(1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括包含衍生自非人灵长类动物(例如旧大陆猴类(Old World Monkey)、猿等)的可变域抗原结合序列和人恒定区序列的“灵长类化”抗体。
非人(例如啮齿类)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人抗体的序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的高变区残基用具有期望抗体特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的高变区残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架区(FR)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有找到的残基。进行这些修饰是为了进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个、通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见Jones et al.，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann et al.，Nature 332：323-329(1988)；和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992)。还可参见以下综述及其引用的参考文献：Vaswani andHamilton，Ann.Allergy，Asthma and Immunol.，1：105-115(1998)；Harris，Biochem.Soc.Transactions，23：1035-1038(1995)；Hurle and Gross，Curr.Op.Biotech.，5：428-433(1994)。
“thio”在本文中用于指抗体时指半胱氨酸改造抗体，而“hu”在本文中用于指抗体时指人源化抗体。
“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom and Winter，J.Mol.Biol.227：381(1991)；Marks et al.，J.Mol.Biol.222：581(1991))。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法：Cole et al.，Monoclonal Antibodiesand Cancer Therapy，Alan R.Liss，p.77(1985)；Boerner et al.，J.Immunol.147(1)：86-95(1991)。还可参见van Dijk and van de Winkel，Curr.Opin.Pharmacol.，5：368-74(2001)。可通过给已经修饰以应答抗原性刺激而生成人抗体但其内源基因组已经失能的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠(xenomice)施用抗原来制备人抗体(参见例如6,075,181和6,150,584，关于XENOMOUSETM技术)。还可参见例如Li et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，103：3557-3562(2006)，关于经人B-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。
术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个高变区：三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。本文中使用且涵盖许多高变区的叙述。Kabat互补决定区(CDR)是以序列变异性为基础的且是最常用的(Kabat et al.，Sequences of Proteins of Immunological Interest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD.(1991))。Chothia改为指结构环的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196：901-917(1987))。Chothia CDR-H1环的末端在使用Kabat编号规则编号时在H32与H34之间变化，取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案在H35A和H35B处放置插入；如果35A和35B都不存在，那么该环在32处结束；如果只有35A存在，那么该环在33处结束；如果35A和35B都存在，那么该环在34处结束)。AbM高变区代表Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，而且得到OxfordMolecular的AbM抗体建模软件的使用。“接触”高变区是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些高变区中每一个的残基。
环    Kabat          AbM        Chothia        接触
----  -----------    ---------- -----------    ----------
L1    L24-L34        L24-L34    L24-L34        L30-L36
L2    L50-L56        L50-L56    L50-L56        L46-L55
L3    L89-L97        L89-L97    L89-L97        L89-L96
H1    H31-H35B       H26-H35B   H26-H32..34    H30-H35B
(Kabat编号)
H1    H31-H35        H26-H35    H26-H32        H30-H35
(Chothia编号)
H2    H50-H65        H50-H58    H52-H56        H47-H58
H3    H95-H102       H95-H102   H95-H102       H93-H101
高变区可包括如下“延伸的高变区”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97(L3)及VH中的26-35B(H1)、50-65/47-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些定义中的每一个，可变区残基是依照Kabat等，见上文编号的。
“框架”或“FR”残基指可变域中那些除此处定义的高变区残基以外的残基。
术语“如Kabat中的可变域残基编号方式”或“如Kabat中的氨基酸位置编号方式”及其变化形式指Kabat等，《Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest》，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)中用于抗体重链可变域或轻链可变域编辑的编号系统。使用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可以包含较少的或另外的氨基酸，对应于可变域FR或CDR的缩短或插入。例如，重链可变域可以包含H2残基52后的单一氨基酸插入(依照Kabat的残基52a)和重链FR残基82后的插入残基(例如依照Kabat的残基82a、82b和82c等)。给定抗体的Kabat残基编号可以通过将抗体序列与“标准”Kabat编号序列对比同源区来确定。
Kabat编号系统一般在提及可变域中的残基(大约是轻链残基1-107和重链残基1-113)时使用(例如Kabat et al.，Sequences of Immunological Interest.5thEd.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991))。“EU编号系统”或“EU指数”一般在提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时使用(例如Kabat et al.，见上文中报道的EU指数)。“Kabat中的EU指数”指人IgG1 EU抗体的残基编号方式。除非本文中另有说明，提及抗体可变域中的残基编号指根据Kabat编号系统的残基编号方式。除非本文中另有说明，提及抗体恒定域中的残基编号指根据EU编号系统的残基编号方式(例如参见美国临时申请60/640,323，关于EU编号方式的图)。
“亲和力成熟的”抗体指在抗体的一个或多个HVR中具有一处或多处改变、导致该抗体对抗原的亲和力与没有这些改变的亲本抗体相比有所改进的抗体。优选的亲和力成熟的抗体具有纳摩尔或甚至皮摩尔量级的对靶抗原的亲和力。亲和力成熟的抗体可通过本领域已知规程来生成。Marks et al.，Bio/Technology 10：779-783(1992)记载了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。以下文献记载了HVR和/或框架残基的随机诱变：Barbas et al.，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 91：3809-3813(1994)；Schier et al.，Gene 169：147-155(1995)；Yelton et al.，J.Immunol.155：1994-2004(1995)；Jackson et al.，J.Immunol.154(7)：3310-9(1995)；Hawkins et al.，J.Mol.Biol.226：889-896(1992)。
“阻断性”抗体或“拮抗性”抗体指抑制或降低其所结合的抗原的生物学活性的抗体。优选的阻断性抗体或拮抗性抗体实质或完全抑制抗原的生物学活性。
“激动性抗体”在用于本文时指模拟目的多肽的至少一项功能性活性的抗体。
“物种依赖性抗体”，例如哺乳动物抗人IgE抗体，指对来自第一哺乳动物物种的抗原具有强于对该抗原来自第二哺乳动物物种的同系物的结合亲和力的抗体。通常，物种依赖性抗体“特异性结合”人类抗原(即具有不超过约1x10-7M，优选不超过约1x10-8M，最优选不超过约1x10-9M的结合亲和力(Kd))，但对该抗原来自第二非人哺乳动物物种的同系物具有比其对人类抗原的结合亲和力弱至少约50倍，或至少约500倍，或至少约1000倍的结合亲和力。物种依赖性抗体可以是如上定义的各种类型的抗体，但优选人源化抗体或人抗体。
“结合亲和力”通常指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，在用于本文时，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体与抗原)之间1∶1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可用解离常数(Kd)来表述。亲和力可通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的那些。低亲和力抗体通常缓慢的结合抗原且趋于容易解离，而高亲和力抗体通常更快速的结合抗原且趋于保持更长时间的结合。本领域知道测量结合亲和力的多种方法，其中任一种都可用于本发明的目的。下文描述了具体的示例性实施方案。
“或更好的”在本文中用于指结合亲和力时指分子与其结合配偶之间更强的结合。“或更好的”在本文中使用时指更强的结合物，以更小的Kd值来代表。例如，具有“.6nM或更好的”对抗原的亲和力的抗体，抗体对抗原的亲和力＜.6nM，即.59nM、.58nM、.57nM等或任何小于.6nM的值。
在一个实施方案中，依照本发明的“Kd”或“Kd值”是通过如下测定法所述使用Fab型式的目的抗体及其抗原进行的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的：通过在存在未标记抗原的滴定系列的条件下，用最小浓度的125I标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的平板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(Chen，et al.，J Mol Biol 293：865-881(1999))。为了确定测定条件，用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕捉用抗Fab抗体(CappelLabs)包被微量滴定板(Dynex)过夜，随后用PBS中的2％(w/v)牛血清清蛋白在室温(约23℃)封闭2-5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与连续稀释的目的Fab混合(例如与Presta et al.，Cancer Res.57：4593-4599(1997)中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)。然后将目的Fab保温过夜；不过，保温可持续更长时间(例如65个小时)以保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以进行室温保温(例如1小时)。然后除去溶液，并用含0.1％Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150μl/孔闪烁液(MicroScint-20；Packard)，然后在Topcount伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20％的浓度用于竞争性结合测定法。依照另一实施方案，Kd或Kd值是通过表面等离振子共振测定法使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore，Inc.，Piscataway，NJ)在25℃使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAcoreInc.)。用10mM乙酸钠pH 4.8将抗原稀释至5μg/ml(约0.2μM)，然后以5μl/分钟的流速注入至获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25℃以约25μl/分钟的流速注入在含0.05％Tween-20的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab(0.78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIAcoreEvaluation Software version 3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)以比率koff/kon计算。参见例如Chen，Y.，et al.，J Mol Biol 293：865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过106M-1S-1，那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(a stop-flow equippedspectrophometer)(Aviv Instruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，在存在浓度渐增的抗原的条件下，测量PBS，pH 7.2中的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25℃的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的升高或降低。
依照本发明的“结合速率”(on-rate，rate of association，association rate)或“kon”也可通过上文所述相同的表面等离振子共振技术使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore，Inc.，Piscataway，NJ)来测定。
短语“基本上相似”或“基本上相同”在用于本文时表示两个数值(通常一个涉及本发明的抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的相似程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有很小的或没有生物学和/或统计学显著性。作为参照/比较抗体该数值的函数，所述两个数值之间的差异优选小于约50％，优选小于约40％，优选小于约30％，优选小于约20％，优选小于约10％。
短语“实质性降低”或“实质性不同”在用于本文时表示两个数值(通常一个涉及本发明的抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的差异程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值、HAMA反应)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有统计学显著性。作为参照/比较抗体该数值的函数，所述两个数值之间的差异优选大于约10％，优选大于约20％，优选大于约30％，优选大于约40％，优选大于约50％。
“抗原”指抗体可选择性结合的预定抗原。靶抗原可以是多肽、碳水化合物、核酸、脂质、半抗原或其它天然存在的或合成的化合物。优选的是，靶抗原是多肽。
就本文目的而言，“受体人框架”是包含衍生自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架之氨基酸序列的框架。“衍生自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含与之相同的氨基酸序列，或者可包含预先存在的氨基酸序列变化。当存在预先存在的氨基酸变化时，优选存在不超过5个，优选4个或更少，或者3个或更少预先存在的氨基酸变化。当VH中存在预先存在的氨基酸变化时，优选那些变化只位于71H、73H和78H中的三个、两个或一个位置；例如，位于那些位置的氨基酸残基可以是71A、73T和/或78A。在一个实施方案中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“人共有框架”指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常见的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列选集来自可变区序列亚型。通常，序列亚型是如Kabat等人的亚型。在一个实施方案中，对于VL，亚型是如Kabat等人的亚型κI。在一个实施方案中，对于VH，亚型是如Kabat等人的亚型III。
“VH亚型III共有框架”包含从Kabat等人的可变重链亚型III中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VH亚型III共有框架氨基酸序列包含下列各序列的至少一部分或整个全部：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO：143)-H1-WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO：144)-H2-RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC(SEQ ID NO：145)-H3-WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：146)。
“VL亚型I共有框架”包含从Kabat等人的可变轻链κ亚型I中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VL亚型I共有框架氨基酸序列包含下列各序列的至少一部分或整个：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ IDNO：139)-L1-WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：140)-L2-GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：141)-L3-FGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：142)。
“未修饰的人框架”指与受体人框架具有相同氨基酸序列的人框架，例如在受体人框架中缺少人到非人的氨基酸替代。
“改变的高变区”就本文目的而言指其中包含一处或多处(例如1处至约16处)氨基酸替代的高变区。
“未修饰的高变区”就本文目的而言指具有与衍生它的非人抗体相同的氨基酸序列的高变区，即其中缺少一处或多处氨基酸替代的高变区。
“结合”目的抗原例如肿瘤相关多肽抗原靶物的抗体指以足够亲和力结合该抗原，使得该抗体可作为治疗剂用于靶向表达该抗原的细胞或组织且不显著与其它蛋白质发生交叉反应的多肽、抗体、拮抗剂或组合物。在此类实施方案中，根据荧光激活细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀(RIA)的测定，抗体结合“非靶物”蛋白质的程度将小于该抗体对其特定靶物蛋白质的结合的约10％。对于抗体对靶分子的结合，术语“特异结合”或“特异性结合”特定多肽或特定多肽靶物上的表位或对其“特异”意味着可测量的不同于非特异相互作用的结合。特异结合可通过例如测定分子的结合并与对照分子的结合比较来测量，所述对照分子通常是结构相似但没有结合活性的分子。例如，特异结合可通过与对照分子的竞争来测定，所述对照分子与靶物相似，例如过量的未标记靶物。在这种情况中，若经标记靶物与探针的结合受到过量未标记靶物的竞争性抑制，则指示特异结合。术语“特异结合”或“特异性结合”特定多肽或特定多肽靶物上的表位或对其“特异”在用于本文时可由例如对靶物的Kd为至少约10-4M，或至少约10-5M，或至少约10-6M，或至少约10-7M，或至少约10-8M，或至少约10-9M，或至少约10-10M，或至少约10-11M，或至少约10-12M或更大的分子展现。在一个实施方案中，术语“特异结合”指这样的结合，其中分子结合特定多肽或特定多肽上的表位，而基本上不结合任何其它多肽或多肽表位。
“抑制表达CD79b多肽的肿瘤细胞生长”的抗体或者“生长抑制性”抗体指导致可测量的表达或共表达适宜CD79b多肽的癌细胞生长抑制的抗体。所述CD79b多肽可以是在癌细胞表面上表达的跨膜多肽，或者可以是由癌细胞生成并分泌的多肽。优选的生长抑制性抗体与适宜对照相比对表达CD79b的肿瘤细胞生长的抑制超过20％、优选大约20％到大约50％和甚至更优选超过50％(例如大约50％到大约100％)，所述对照通常是未用所测试的抗体处理的肿瘤细胞。在一个实施方案中，生长抑制可以在细胞培养物中的抗体浓度为大约0.1-30μg/ml或大约0.5nM到200nM时测量，其中生长抑制在肿瘤细胞暴露于抗体后1-10天测定。体内肿瘤细胞生长抑制可以以多种方式测定，诸如下文实验实施例部分所描述的。如果抗CD79b抗体大约1μg/kg到大约100mg/kg体重的施用导致在距首次施用抗体大约5天到3个月内(优选大约5-30天内)肿瘤体积缩小或肿瘤细胞增殖减慢，那么该抗体在体内是生长抑制性的。
“诱导凋亡”的抗体指根据膜联蛋白V结合、DNA断裂、细胞收缩、内质网膨胀、细胞破裂和/或膜囊(称作凋亡小体)形成的测定，诱导程序性细胞死亡的抗体。所述细胞通常是过表达CD79b多肽受体的细胞。优选的是，所述细胞是肿瘤细胞，例如造血细胞，诸如B细胞、T细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞、血小板或红细胞。有多种方法可用于评估与凋亡有关的细胞事件。例如，可通过膜联蛋白结合来测量磷脂酰丝氨酸(PS)易位；可通过DNA梯化(laddering)来评估DNA断裂；可通过亚二倍体细胞的任何增加来评估伴随着DNA断裂的核/染色质浓缩。优选的是，诱导凋亡的抗体是在膜联蛋白结合测定法中导致对膜联蛋白的结合相对于未处理细胞诱导约2至50倍，优选约5至50倍，最优选约10至50倍的抗体。
“诱导细胞死亡”的抗体指引起可存活细胞变得不能存活的抗体。所述细胞指表达CD79b多肽且属于明确表达或共表达CD79b多肽的类型的细胞。所述细胞可以是特定细胞类型的癌性或正常细胞。所述CD79b多肽可以是在癌细胞表面上表达的跨膜多肽，或者可以是由癌细胞生成和分泌的多肽。所述细胞可以是癌细胞，例如B细胞或T细胞。体外细胞死亡可在不存在补体或免疫效应细胞时测定，以区分由抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)诱导的细胞死亡。如此，用于细胞死亡的测定法可使用热灭活血清(即不含补体)在不存在免疫效应细胞时进行。为了确定抗体是否能够诱导细胞死亡，可相对于未处理细胞评估膜完整性的丧失，它是通过碘化丙啶(propidium iodide)(PI)、锥虫蓝(参见Moore et al.，Cytotechnology17：1-11(1995))或7AAD的摄取来评估的。优选的诱导细胞死亡的抗体是在PI摄取测定法中在BT474细胞中诱导PI摄取的抗体。
抗体“效应器功能”指那些可归于抗体Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。
术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C-端区域，包括天然序列Fc区和变异Fc区。虽然免疫球蛋白重链Fc区的边界可以变化，但是人IgG重链Fc区通常定义为自其Cys226或Pro230位置的氨基酸残基至羧基末端的区段。Fc区的C-末端赖氨酸(残基447，依照EU编号系统)可以消除，例如在生产或纯化抗体的过程中，或者通过对编码抗体重链的核酸进行重组工程改造。因而，完整抗体组合物可以包括所有K447残基都被消除的抗体群、无一K447残基被消除的抗体群或者混合了有K447残基的抗体和没有K447残基的抗体的抗体群。
“功能性Fc区”拥有天然序列Fc区的“效应器功能”。例示性的“效应器功能”包括C1q结合；CDC；Fc受体结合；ADCC；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)下调等。此类效应器功能一般要求Fc区与结合结构域(例如抗体可变域)联合，而且可以使用多种测定法来评估，例如本文定义中所公开的。
“天然序列Fc区”包含与在自然界中找到的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2Fc区；天然序列人IgG3Fc区；和天然序列人IgG4Fc区；及其天然存在变体。
“变异Fc区”包含由于至少一处氨基酸修饰(优选一处或多处氨基酸替代)而与天然序列Fc区有所不同的氨基酸序列。优选的是，变异Fc区与天然序列Fc区相比或与亲本多肽的Fc区相比具有至少一处氨基酸替代，例如在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中具有约1处至约10处氨基酸替代，优选约1处至约5处氨基酸替代。变异Fc区在本文中优选与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区拥有至少约80％的同源性，最优选与它们具有至少约90％的同源性，更优选与它们具有至少约95％的同源性。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”指其中结合到某些细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上的分泌型Ig使得这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的靶细胞，随后用细胞毒素杀死靶细胞的细胞毒性形式。该抗体“武装”(arm)细胞毒性细胞，而且是此类杀伤作用绝对要求的。介导ADCC的主要细胞，NK细胞，只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetchand Kinet，Annu.Rev.Immunol.9：457-92(1991)第464页表3总结了造血细胞上的FcR表达。为了评估目的分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定法，诸如美国专利No.5,500,362或5,821,337中所记载的。可用于此类测定法的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可在体内评估目的分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如Clynes et al.，(USA)95：652-656(1998)中所披露的。
“Fc受体”或“FcR”描述能结合抗体Fc区的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是能结合IgG抗体的FcR(γ受体)，包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的各等位变体和各可变剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在于其胞质结构域。活化受体FcγRIIA在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见综述Annu.Rev.Immunol.15：203-234(1997))。FcR的综述参见Ravetch andKinet，Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)；Capel et al.，Immunomethods4：25-34(1994)；及de Haas et al.，J.Lab.Clin.Med.126：330-41(1995)。术语“FcR”在本文中涵盖其它FcR，包括那些未来将会鉴定的。该术语还包括新生儿受体，FcRn，其负责将母体IgG转移给胎儿(Guyer et al.，J.Immunol.117：587(1976)及Kim et al.，J.Immunol.24：249(1994))。
可测定人FcRn高亲和力结合多肽与人FcRn的体内结合和血清半衰期，例如在表达人FcRn的转基因小鼠或经转染的人细胞系中，或者在施用了具有变异Fc区的多肽的灵长类动物中。WO 00/42072(Presta)记载了对FcR的结合提高或降低的抗体变体。还可参见Shields et al.，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。
“人效应细胞”指表达一种或多种FcR并行使效应器功能的白细胞。优选的是，该细胞至少表达FcγRIII并行使ADCC效应器功能。介导ADCC的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞，优选PBMC和NK细胞。效应细胞可以从其天然来源分离，例如血液。
“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”指存在补体时对靶细胞的溶解。经典补体途径的激活是由补体系统第一组分(C1q)结合抗体(适宜亚类的)起始的，该抗体已结合至其关联抗原。为了评估补体激活，可进行CDC测定法，例如如Gazzano-Santoro et al.，J.Immunol.Methods 202：163(1996)中所记载的。具有更改的Fc区氨基酸序列(具有变异Fc区的多肽)及提高或降低的C1q结合能力的多肽变体记载于例如美国专利No.6,194,551B1和WO 1999/51642。还可参见例如Idusogie et al.，J.Immunol.164：4178-4184(2000)。
“含Fc区的抗体”指包含Fc区的抗体。Fc区的C-末端赖氨酸(依照EU编号系统的残基447)可以消除，例如在纯化抗体的过程中或者通过重组改造编码抗体的核酸。因此，依照本发明包含具有Fc区的抗体的组合物可包含具有K447的抗体、消除了所有K447的抗体或具有与没有K447残基的抗体的混合物。
CD79b多肽“胞外结构域”或“ECD”指CD79b多肽基本上不含跨膜结构域和胞质结构域的形式。通常，CD79b多肽ECD具有少于1％的此类跨膜结构域和/或胞质结构域，优选具有少于0.5％的此类结构域。可以理解，为本发明CD79b多肽鉴定的任何跨膜结构域是依照本领域常规用于鉴定该种类型疏水结构域的标准鉴定的。跨膜结构域的精确边界可以变化，但最有可能的是本文中最初鉴定的结构域任一末端不超过约5个氨基酸。因此，任选的是，CD79b多肽的胞外结构域可包含实施例或说明书中所鉴定的跨膜结构域/胞外结构域边界任一侧的约5个或5个以下的氨基酸，而且本发明设想了具有或没有相关信号肽的此类多肽及编码它们的核酸。
本说明书和/或附图中可能显示了本文中所公开的各种CD79b多肽的“信号肽”的大致位置。然而，应当注意，信号肽的C-末端边界可以变化，但最有可能的是本文中最初鉴定的信号肽C-末端边界任一侧不超过约5个氨基酸，其中信号肽的C-末端边界可依照本领域常规用于鉴定该种类型氨基酸序列元件的标准来鉴定(例如Nielsen et al.，Prot.Eng.10：1-6(1997)和von Heinjeet al.，Nucl.Acids.Res.14：4683-4690(1986))。此外，还认识到，在有些情况中，从分泌多肽上切除信号序列不是完全统一的，导致超过一种分泌种类。本发明设想了这些成熟多肽，其中信号肽在本文中所鉴定的信号肽C-末端边界任一侧不超过约5个氨基酸内切除，及编码它们的多核苷酸。
“CD79b多肽变体”意指与本文中所公开的全长天然序列CD79b多肽序列、本文中所公开的缺少信号肽的CD79b多肽序列、本文中所公开的具有或没有信号肽的CD79b多肽胞外结构域或本文中所公开的全长CD79b多肽序列的任何其它片段(诸如那些由只代表全长CD79b多肽完整编码序列的一部分的核酸编码的)具有至少约80％氨基酸序列同一性的CD79b多肽，优选本文中所定义的活性CD79b多肽。此类CD79b多肽变体包括例如在全长天然氨基酸序列的N-或C-末端添加或删除一个或多个氨基酸残基的CD79b多肽。通常，CD79b多肽变体与本文中所公开的全长天然序列CD79b多肽序列、本文中所公开的缺少信号肽的CD79b多肽序列、本文中所公开的具有或没有信号肽的CD79b多肽胞外结构域或本文中所公开的全长CD79b多肽序列的任何其它明确限定的片段具有至少约80％的氨基酸序列同一性，或者至少约81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列同一性。通常，CD79b变异多肽的长度为至少约10个氨基酸，或者长度为至少约20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600个氨基酸，或更多。任选的是，CD79b变异多肽与天然CD79b多肽序列相比具有不超过一处保守氨基酸替代，或者与天然CD79b多肽序列相比具有不超过2、3、4、5、6、7、8、9或10处保守氨基酸替代。
关于肽或多肽序列(即本文中所鉴定的CD79b多肽序列)的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为对比序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与特定肽或多肽序列(即CD79b多肽序列)中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定用于测量对比的适宜参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2获得的，其中下文表1中提供了ALIGN-2程序的完整源代码。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司编写，下文表1所示源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(US Copyright Office，WashingtonD.C.，20559)，并以美国版权注册号TXU510087注册。公众可通过Genentech公司(South San Francisco，California)得到ALIGN-2程序，或者可从下文表1中提供的源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，优选数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。
在采用ALIGN-2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)、与(with)或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于、与或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算：
分数X/Y乘100
其中X是由序列对比程序ALIGN-2在该程序的A和B对比中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。可以领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。
“CD79b变异多核苷酸”或“CD79b变异核酸”意指与编码本文中所公开的全长天然序列CD79b多肽序列、本文中所公开的缺少信号肽的全长多肽序列CD79b多肽序列、本文中所公开的具有或没有信号肽的CD79b多肽胞外结构域或本文中所公开的全长CD79b多肽序列的任何其它片段(诸如那些由只代表全长CD79b多肽完整编码序列的一部分的核酸编码的)具有至少约80％核酸序列同一性的编码CD79b多肽(优选本文中所定义的活性CD79b多肽)的核酸。通常，CD79b变异多核苷酸与编码本文中所公开的全长天然序列CD79b多肽序列、本文中所公开的缺少信号肽的全长天然CD79b多肽序列、本文中所公开的具有或没有信号序列的CD79b多肽胞外结构域或本文中所公开的全长CD79b多肽序列的任何其它片段的核酸序列具有至少约80％的核酸序列同一性，或者至少约81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的核酸序列同一性。变体不涵盖天然核苷酸序列。
通常，CD79b变异多核苷酸的长度为至少约5个核苷酸，或者长度为至少约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990或1000个核苷酸，其中在此语境中，术语“约”意指所述核苷酸序列长度加上或减去该所述长度的10％。
关于本文中所鉴定的CD79b编码核酸序列的“百分比(％)核酸序列同一性”定义为对比序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，候选序列中与感兴趣CD79b核酸序列中的核苷酸相同的核苷酸的百分率。为测定百分比核酸序列同一性目的的序列对比可以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。然而，为了本发明的目的，％核酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2获得的，其中下文表1中提供了ALIGN-2程序的完整源代码。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司编写，下文表1所示源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(USCopyright Office，Washington D.C.，20559)，并以美国版权注册号TXU510087注册。公众可通过Genentech公司(South San Francisco，California)得到ALIGN-2程序，或者可从下文表1中提供的源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，优选数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。
在采用ALIGN-2来比较核酸序列的情况中，给定核酸序列C相对于(to)、与(with)或针对(against)给定氨基酸序列D的％核酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于、与或针对给定核酸序列D的某一％核酸序列同一性的给定核酸序列C)如下计算：
分数W/Z乘100
其中W是由序列对比程序ALIGN-2在该程序的C和D对比中评分为相同匹配的核苷酸数，且其中Z是D中的核苷酸总数。可以领会，若核酸序列C的长度与核酸序列D的长度不相等，则C相对于D的％核酸序列同一性将不等于D相对于C的％核酸序列同一性。除非另有具体说明，本文中所使用的所有％核酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。
在其它实施方案中，CD79b变异多核苷酸是编码CD79b多肽且能够与本文中所公开的编码全长CD79b多肽的核苷酸序列杂交，优选在严格杂交和洗涤条件下杂交的核酸分子。CD79b变异多肽可以是那些由CD79b变异多核苷酸编码的。
术语“全长编码区”在述及编码CD79b多肽的核酸使用时指编码本发明全长CD79b多肽的核苷酸序列(常常在附图中起始和终止密码子(含)之间显示)。术语“全长编码区”在述及ATCC保藏核酸使用时指插入保藏在ATCC的载体中的cDNA的CD79b多肽编码部分(常常在附图中起始和终止密码子(含)之间显示，起始和终止密码子在图中以粗体显示且划有下划线)。
“分离的”，在用于描述本文中所公开的各种CD79b多肽时，意指已经鉴定且与/由其天然环境的成分分开和/或回收的多肽。多肽的天然环境的污染性成分指通常会干扰其治疗用途的物质，可包括酶、激素和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将多肽纯化至(1)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(2)根据使用考马斯蓝或优选银染色的非还原性或还原性条件下的SDS-PAGE，达到同质。既然CD79b多肽的天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的多肽包括重组细胞内的原位多肽。然而，分离的多肽通常通过至少一个纯化步骤来制备。
“分离的”CD79b多肽编码核酸或其它多肽编码核酸指已经鉴定且与多肽编码核酸的天然来源中通常与之关联的至少一种污染性核酸分子分开的核酸分子。分离的多肽编码核酸分子不同于在自然界中发现它时的形式或背景。分离的多肽编码核酸分子因此与存在于天然细胞中时的特定多肽编码核酸分子有区别。然而，分离的多肽编码核酸分子包括通常表达该多肽的细胞中所包含的多肽编码核酸分子，例如当所述核酸分子在所述细胞中的染色体定位不同于它在天然细胞中的染色体定位时。
术语“控制序列”指在特定宿主生物体中表达可操作连接的编码序列所必需的DNA序列。例如，适于原核生物的控制序列包括启动子、任选的操纵基因序列和核糖体结合位点。已知真核细胞利用启动子、多腺苷酸化信号和增强子。
若一段核酸与另一段核酸序列处于功能性相互关系中，则它是“可操作连接的”。例如，若前序列(presequence)或分泌前导(secretory leader)的DNA表达成参与多肽分泌的前蛋白质(preprotein)，则它与该多肽的DNA可操作连接；若启动子或增强子影响编码序列的转录，则它与该序列可操作连接；或者，若核糖体结合位点的位置促进翻译，则它与编码序列可操作连接。一般而言，“可操作连接的”意味着相连的DNA序列是相邻的，而且在分泌前导的情况中意味着相邻且处于阅读状态。然而，增强子不必相邻。连接可以通过在方便的限制性位点处的连接来实现。若没有此类位点，则依照常规实践使用合成的寡核苷酸衔接头或接头。
杂交反应的“严格性”容易为本领域普通技术人员所确定，并且通常取决于探针长度、洗涤温度和盐浓度凭经验计算。一般而言，较长的探针需要较高的温度用于正确的退火，而较短的探针则需要较低的温度。当互补链存在于低于它们解链温度的环境中时，杂交通常取决于变性DNA重新退火的能力。探针和能杂交的序列之间的期望同源性程度越高，就可使用越高的相对温度。作为结果，推出，更高的相对温度趋向于使反应条件更加严格，而更低的温度则更不严格。对于杂交反应的严格性的补充细节及解释参见Ausubel等的《Current Protocols in Molecular Biology》，Wiley IntersciencePublishers，(1995)。
如本文中所定义的，“严格条件”或“高严格条件”可以定义如下：(1)对于洗涤使用低离子强度和高温，例如0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠，50℃；(2)在杂交期间使用变性剂，诸如甲酰胺，例如，50％(v/v)甲酰胺及0.1％牛血清清蛋白/0.1％Ficoll/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/具有750mM氯化钠，75mM柠檬酸钠的50mM磷酸钠缓冲液pH 6.5，42℃，或(3)在使用50％甲酰胺，5x SSC(0.75M NaCl，0.075M柠檬酸钠)，50mM磷酸钠(pH6.8)，0.1％焦磷酸钠，5x Denhardt氏溶液，超声处理的鲑精DNA(50μg/ml)，0.1％SDS和10％硫酸右旋糖苷的溶液中于42℃杂交过夜，于42℃在0.2x SSC(氯化钠/柠檬酸钠)中洗涤10分钟，接着是于55℃由含有EDTA的0.1x SSC组成的10分钟高严格洗涤。
“中等严格条件”可规定为如Sambrook等的《Molecular Cloning：ALaboratory Manual》(New York：Cold Spring Harbor Press，1989)所描述的，而且包括使用与上文所述那些相比较不严格的洗涤溶液和杂交条件(例如温度、离子强度和％SDS)。中等严格条件的一个例子是在含：20％甲酰胺、5x SSC(150mM NaCl，15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH7.6)、5xDenhardt氏溶液、10％硫酸右旋糖苷和20mg/ml变性的剪切的鲑精DNA的溶液中于37℃温育过夜，然后于约37-50℃在1x SSC中洗涤滤膜。本领域熟练技术人员应当认识到如何根据适应诸如探针长度等因素的需要来调节温度、离子强度等。
术语“表位标记的”在用于本文时指包含CD79b多肽或抗CD79b抗体且其与“标签多肽”融合的嵌合多肽。标签多肽具有足够残基以提供表位而可制备针对其的抗体，但又足够短使得其不干扰与其融合的多肽的活性。标签多肽优选还是相当独特的，使得其抗体基本上不与其它表位发生交叉反应。合适的标签多肽通常具有至少6个氨基酸残基，通常在约8个和约50个氨基酸残基之间(优选在约10个和约20个氨基酸残基之间)。
“有活性的”或“活性”为了本发明的目的指CD79b多肽保留天然或天然存在CD79b的生物学和/或免疫学活性的形式，其中“生物学”活性指由天然或天然存在CD79b引起的，除诱导针对天然或天然存在CD79b所拥有的抗原性表位的抗体生成的能力外的生物学功能(或是抑制性的或是刺激性的)，而“免疫学”活性指诱导针对天然或天然存在CD79b所拥有的抗原性表位的抗体生成的能力。
术语“拮抗剂”以最广义使用，包括部分或完全阻断、抑制或中和天然CD79b多肽的生物学活性的任何分子。类似的，术语“激动剂”以最广义使用，包括模拟天然CD79b多肽的生物学活性的任何分子。合适的激动剂或拮抗剂明确包括激动性或拮抗性抗体或抗体片段、天然CD79b多肽的片段或氨基酸序列变体、肽、反义寡核苷酸、有机小分子、等。用于鉴定CD79b多肽的激动剂或拮抗剂的方法可包括使CD79b多肽接触候选激动剂或拮抗剂分子，并测量通常与CD79b多肽有关的一种或多种生物学活性中的可检测变化。
“纯化的”意味着分子以至少95％(以重量计)或至少98％(以包含它的样品的重量计)的浓度存在于样品中。
“分离的”核酸分子指与例如该核酸分子的天然来源中通常与之关联的至少一种其它核酸分子分开的核酸分子。分离的核酸分子进一步包括包含在通常表达该核酸分子的细胞中的核酸分子，但是所述核酸分子是以染色体外形式存在的或在染色体上的定位不同于它其天然染色体定位。
术语“载体”在用于本文时意指能够运输与其连接的其它核酸的核酸分子。一类载体是“质粒”，指其中可连接另外的DNA区段的环状双链DNA环。另一类载体是噬菌体载体。另一类载体是病毒载体，其中可将另外的DNA区段连接到病毒基因组中。某些载体能够在其所导入的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如非附加型哺乳动物载体)可在导入宿主细胞后整合到宿主细胞的基因组中，由此随着宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与其可操作连接的基因表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“重组载体”)。通常，在重组DNA技术中有用的表达载体常常是质粒形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是载体的最常用形式。
“多核苷酸”或“核酸”在本文中可互换使用，指任何长度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经过修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物，或者是可通过DNA或RNA聚合酶或者通过合成反应掺入聚合物的任何底物。多核苷酸可包含经过修饰的核苷酸，诸如甲基化核苷酸及其类似物。如果有的话，对核苷酸结构的修饰可以在装配聚合物之前或之后进行。核苷酸序列可以由非核苷酸组分中断。多核苷酸可以在合成后进一步修饰，诸如通过与标记物偶联。其它类型的修饰包括例如“帽”，将一个或多个天然存在的核苷酸用类似物替代，核苷酸间修饰诸如例如具有不带电荷连接(例如膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺酯(phosphoamidate)、氨基甲酸酯等)和具有带电荷连接(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的修饰，含有悬垂模块(pendant moiety)诸如例如蛋白质(例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚L-赖氨酸等)的修饰、具有嵌入剂(例如吖啶、补骨脂素等)的修饰、含有螯合剂(例如金属、放射性金属、硼、氧化性金属等)的修饰、含有烷化剂的修饰、具有经修饰连接(例如α端基异构核酸(anomeric nucleicacid)等)的修饰、以及未修饰形式的多核苷酸。另外，通常存在于糖类中的任何羟基可以用例如膦酸(phosphonate)基团、磷酸(phosphate)基团替换，用标准保护基团保护，或活化以制备与别的核苷酸的别的连接，或者可偶联至固体或半固体支持物。5′和3′末端OH可磷酸化或者用胺或1-20个碳原子的有机加帽基团模块取代。其它羟基也可衍生成标准保护基团。多核苷酸还可含有本领域普遍知道的核糖或脱氧核糖糖类的类似物形式，包括例如2′-氧-甲基、2′-氧-烯丙基、2′-氟-或2′-叠氮-核糖，碳环糖类似物，α-端基异构糖，差向异构糖诸如阿拉伯糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖，无环类似物及脱碱基核苷类似物诸如甲基核糖核苷。可用备选接头团替换一个或多个磷酸二酯连接。这些备选接头团包括但不限于以下实施方案，其中磷酸酯用P(O)S(“硫代酸酯”(thioate))、P(S)S(“二硫代酸酯”(dithioate))、(O)NR2(“酰胺酯”(amidate))、P(O)R、P(O)OR′、CO或CH2(“甲缩醛”(formacetal))替代，其中R或R′各自独立为H或者取代或未取代的烷基(1-20个C)，任选含有醚(-O-)连接、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。并非多核苷酸中的所有连接都必需是相同的。前述描述适用于本文中提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
“寡核苷酸”在用于本文时一般指短的多核苷酸，一般是单链，一般是合成的，长度一般但不是必需小于约200个核苷酸。术语“寡核苷酸”与“多核苷酸”并不互相排斥。上文关于多核苷酸的描述平等且完全适用于寡核苷酸。
术语“癌症”和“癌性”指或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调节的生理疾患。癌症的例子包括但不限于造血癌症或血液相关癌症，诸如淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴样恶性肿瘤，但是还有脾的癌症和淋巴结的癌症，而且还有癌瘤(carcinoma)、母细胞瘤(blastoma)和肉瘤(sarcoma)。癌症的更具体例子包括B细胞相关癌症，包括例如高级、中级和低级淋巴瘤(包括B细胞淋巴瘤，诸如例如粘膜相关淋巴样组织B细胞淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、套细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、小淋巴细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和何杰金氏淋巴瘤及T细胞淋巴瘤)和白血病(包括继发性白血病、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)诸如B细胞白血病(CD5+B淋巴细胞)、髓细胞性白血病诸如急性髓细胞样白血病、慢性髓细胞样白血病、淋巴样白血病诸如急性成淋巴细胞性白血病(ALL)和脊髓发育不良)和其它血液学和/或B细胞或T细胞相关癌症。还包括别的造血细胞的癌症，包括多形核白细胞，诸如嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞、树突细胞、血小板、红细胞和天然杀伤细胞。还包括选自下组的癌性B细胞增殖性病症：淋巴瘤(lymphoma)、非何杰金氏淋巴瘤(non-Hodgkins lymphoma)(NHL)、攻击性NHL(aggressiveNHL)、复发性攻击性NHL(relapsed aggressive NHL)、复发性无痛性NHL(relapsed indolent NHL)、顽固性NHL(refractory NHL)、顽固性无痛性NHL(refractory indolent NHL)、慢性淋巴细胞性白血病(refractory indolentNHL)(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(small lymphocytic lymphoma)、白血病(leukemia)、毛细胞白血病(hairy cell leukemia)(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(acute lymphocytic leukemia)(ALL)和套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)。B细胞癌症的起源包括如下：边缘区B细胞淋巴瘤源自边缘区中的记忆B细胞，滤泡性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤源自生发中心的亮区(light zone)中的中央细胞(centrocyte)，慢性淋巴细胞性白血病和小淋巴细胞性白血病源自B1细胞(CD5+)，套细胞淋巴瘤源自外套层(mantle zone)中的幼稚B细胞(naive B cell)，而伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)源自生发中心的暗区(dark zone)中的成中央细胞(centroblast)。包括本文中称作“造血细胞组织”的造血细胞的组织包括胸腺和骨髓及外周淋巴样组织，诸如脾、淋巴结、与粘膜有关的淋巴样组织，诸如肠相关淋巴样组织、扁桃体、派伊尔氏斑及与其它粘膜有关的附件(appendix)和淋巴样组织，例如支气管内衬(lining)。此类癌症的其它具体例子包括括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、肺的鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝肉瘤(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、白血病和其它淋巴增生性病症、及各种类型的头和颈癌。
“B细胞恶性肿瘤”在本文中包括非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，其包括低级/滤泡性NHL、小淋巴细胞性(SL)NHL、中级/滤泡性NHL、中级弥漫性NHL、高级成免疫细胞性NHL、高级成淋巴细胞性NHL、高级小无核裂细胞NHL、大块病NHL、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s Macroglobulinemia)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、淋巴细胞为主型的何杰金氏病(LPHD)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、无痛性NHL(包括复发性无痛性NHL和利妥昔单抗不应性无痛性NHL)；白血病，其包括急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞白血病、慢性成髓细胞性白血病；套细胞淋巴瘤；和其它血液学恶性肿瘤。此类恶性肿瘤可以用针对B细胞表面标志物(诸如CD79b)的抗体来治疗。此类疾病涵盖在本文中，以通过施用针对B细胞表面标志物(诸如CD79b)的抗体来治疗，包括施用未偶联的抗体(“裸抗体”)或偶联有细胞毒剂的抗体，正如本文中所公开的。此类疾病还涵盖在本文中，以通过包括本发明的抗CD79b抗体或抗CD79b抗体药物偶联物联合另一抗体或抗体药物偶联物、另一细胞毒剂、放射或其它治疗的联合疗法(同时施用或顺次施用)来治疗。在本发明的例示性治疗方法中，联合施用本发明的抗CD79b抗体及抗CD20抗体、免疫球蛋白或其CD20结合片段，或是一起施用或是顺次施用。所述抗CD20抗体可以是裸抗体或抗体药物偶联物。在联合疗法的一个实施方案中，所述抗CD79b抗体是本发明的抗体，而所述抗CD20抗体是
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(利妥昔单抗，即rituximab)。
术语“非何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤”或“NHL”在用于本文时指何杰金氏淋巴瘤以外的淋巴系统癌症。通常可通过何杰金氏淋巴瘤中存在里-施(Reed-Sternberg)细胞而非何杰金氏淋巴瘤中不存在所述细胞将何杰金氏淋巴瘤与非何杰金氏淋巴瘤区分开来。非何杰金氏淋巴瘤在该术语用于本文时所涵盖的例子包括本领域技术人员(例如肿瘤学家或病理学家)依照本领域已知的分类表将鉴定为此类的任何淋巴瘤，诸如Color Atlas of ClinicalHematology，第3版，Victor A.Hoffbrand和John E.Pettit编，Harcourt PublishersLtd.，2000中记载的Revised European-American Lymphoma(REAL)scheme(欧美淋巴瘤修正表)。具体参见图11.57、11.58和11.59中的表。更具体例子包括但不限于复发性或顽固性NHL、前线(front line)低级NHL、阶段III/IV NHL、化疗耐受性NHL、前体B成淋巴细胞性白血病和/或淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞性白血病和/或前淋巴细胞性白血病和/或小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞前淋巴细胞性淋巴瘤、免疫细胞瘤和/或淋巴浆细胞性(lymphoplasmacytic)淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、节外边缘区(extranodal marginal zone)-MALT淋巴瘤、节边缘区(nodal marginal zone)淋巴瘤、毛细胞性白血病、浆细胞瘤和/或浆细胞骨髓瘤、低级/滤泡淋巴瘤、中级/滤泡NHL、套细胞淋巴瘤、滤泡中心淋巴瘤(滤泡的)、中级弥漫性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤、攻击性(agressive)NHL(包括攻击性前线NHL和攻击性复发性NHL)、自体干细胞移植后复发性或顽固性NHL、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、高级成免疫细胞NHL、高级成淋巴细胞NHL、高级小无核裂细胞NHL、贮积病(bulkydisease)NHL、伯基特氏(Burkitt)淋巴瘤、前体(外周)大粒状淋巴细胞白血病、蕈样肉芽肿病和/或塞扎里(Sezary)综合征、皮肤淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤。
“病症”指任何会受益于使用本发明物质/分子或方法的治疗的疾患。这包括慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物倾向于所讨论病症的病理状况。本文中待治疗的病症的非限制性例子包括癌性疾患，诸如恶性和良性肿瘤；非白血病和淋巴样恶性肿瘤；神经元、神经胶质、星形胶质细胞、下丘脑和其它腺体、巨噬细胞、上皮、基质/间质和囊胚腔病症；及炎性、免疫学和其它血管发生相关病症。病症进一步包括癌性疾患，诸如B细胞增殖性病症和/或B细胞肿瘤，例如淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指癌症。
“肿瘤”在用于本文时指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性细胞和组织。
“自身免疫病”在本文中指源于且针对个体自身组织或器官的疾病或紊乱或其共分离(co-segregate)或表现或由其导致的状况。在这些自身免疫病和炎症紊乱的许多中，可以存在许多临床和实验室标志，包括但不限于：高丙种球蛋白血症、高水平自身抗体、组织中抗原-抗体复合物沉积、得益于皮质类固醇或免疫抑制治疗、及受侵害组织中的淋巴样细胞集合体。不限于任意一种有关B细胞介导的自身免疫病的理论，认为B细胞通过众多机械途径在人自身免疫病中表现出致病作用，包括自身抗体产生、免疫复合物形成、树突细胞和T细胞活化、细胞因子合成、直接趋化因子释放和提供用于异位新淋巴生成的巢。这些途径中的每一种可以以不同程度参与自身免疫病的病理学。
自身免疫病可以为器官特异性疾病(即免疫应答特异性针对一种器官系统，诸如内分泌系统、造血系统、皮肤、心肺系统、胃肠和肝系统、肾系统、甲状腺、耳、神经肌肉系统、中枢神经系统等)或可以影响多器官系统的系统性疾病(例如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、多肌炎等)。优选的此类疾病包括自身免疫性风湿病学病症(诸如例如类风湿性关节炎、斯耶格伦氏综合征(
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syndrome)、硬皮病、狼疮(诸如SLE和狼疮肾炎)、多肌炎/皮肌炎、冷球蛋白血症、抗磷脂抗体综合征和银屑病关节炎)、自身免疫性胃肠和肝病症(诸如例如炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病(Crohn′s disease))、自身免疫性胃炎和恶性贫血、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎和乳糜泻)、血管炎(诸如例如ANCA阴性血管炎和ANCA相关血管炎，包括丘施二氏血管炎(Churg-Straussvasculitis)、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener′s granulomatosis)和微观多脉管炎)、自身免疫性神经病学病症(诸如例如多发性氧化、视性眼阵挛肌阵挛综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎、帕金森氏病(Parkinson’s disease)、阿耳茨海默氏病(Alzheimer’s disease)和自身免疫性多神经病)、肾病症(诸如例如肾小球肾炎、古德帕斯丘氏综合征(Goodpasture’s syndrome)和贝格尔氏病(Berger’sdisease))、自身免疫性皮肤病学病症(诸如例如银屑病、荨麻疹、hives、寻常型天疱疮、大疱性类天疱疮、和皮肤红斑狼疮)、血液学病症(诸如例如血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、输血后紫癜和自身免疫性溶血性贫血)、动脉粥样硬化、葡萄膜炎、自身免疫性听觉疾病(诸如例如内耳病和听力损失)、贝切特氏病(Behcet′s disease)、雷诺氏综合征(Raynaud′ssyndrome)、器官移植和自身免疫性内分泌病症(诸如例如糖尿病相关自身免疫病诸如胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、阿狄森氏病(Addison’s disease)和自身免疫性甲状腺病(例如格雷夫斯氏病(Graves’disease)和甲状腺炎))。更优选的此类疾病包括例如类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、ANCA相关血管炎、狼疮、多发性硬化、斯耶格伦氏综合征、格雷夫斯氏病、IDDM、恶性贫血、甲状腺炎和肾小球肾炎。
本文中所定义的其它自身免疫性疾病的具体例子(在有些情况中涵盖上文所列举的那些)包括但不限于关节炎(急性的和慢性的，类风湿性关节炎，包括幼发型类风湿性关节炎和关节炎的各个阶段诸如类风湿性滑膜炎、痛风或痛风性关节炎、急性免疫性关节炎、慢性炎性关节炎、退行性关节炎、II型胶原诱发的关节炎、感染性关节炎、莱姆(Lyme)关节炎、增生性关节炎、银屑病性关节炎、斯提耳氏(Still)病、脊椎关节炎、骨关节炎、慢性进行性关节炎、变形性关节炎、慢性原发性多关节炎、反应性关节炎、绝经期关节炎、雌激素消减性关节炎和强直性脊柱炎/类风湿性脊椎炎)，自身免疫性淋巴细胞增生性疾病，炎性过度增殖性皮肤病，银屑病诸如斑块状银屑病、滴状银屑病、脓疱性银屑病和指甲银屑病，特应性包括特应性疾病诸如干草热和乔布氏(Job)综合征，皮炎包括接触性皮炎、慢性接触性皮炎、剥脱性皮炎、变应性皮炎、变应性接触性皮炎、荨麻疹、疱疹样皮炎、钱币状皮炎、脂溢性皮炎、非特异性皮炎、原发性刺激性接触性皮炎和特应性皮炎，x连锁的高IgM综合征，变应性眼内炎性疾病，荨麻疹诸如慢性变应性荨麻疹和慢性特发性荨麻疹(包括慢性自身免疫性荨麻疹)，肌炎，多肌炎/皮肌炎，青少年型皮肌炎，中毒性表皮坏死松解症，硬皮病(包括系统性硬皮病)，硬化诸如系统性硬化、多发性硬化(MS)诸如脊髓-眼(spino-optical)MS、原发性进行性MS(PPMS)和复发性消退性(relapsing remitting)MS(RRMS)、进行性系统性硬化、动脉粥样硬化、动脉硬化、播散性硬化、共济失调性(ataxic)硬化，视神经脊髓炎(NMO)，炎症性肠病(IBD)(例如克罗恩氏(Crohn)病、自身免疫介导的胃肠病、胃肠炎症、结肠炎诸如溃疡性结肠炎(colitis ulcerosa)、微观结肠炎、胶原性结肠炎、息肉状结肠炎、坏死性小肠结肠炎和透壁性结肠炎和自身免疫性炎症性肠病)，肠炎，坏疽性脓皮症，结节性红斑，原发性硬化性胆管炎，呼吸窘迫综合征包括成人型或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，脑膜炎，整个或部分葡萄膜的炎症，虹膜炎，脉络膜炎，自身免疫性血液学病症，移植物抗宿主疾病，血管性水肿诸如遗传性血管性水肿，脑神经损伤像脑膜炎中的，妊娠疱疹，妊娠性类天疱疮，阴囊瘙癣(pruritis scroti)，自身免疫性早熟性卵巢衰竭，因自身免疫性疾患引起的突发性听觉丧失，IgE介导的疾病诸如过敏反应和变应性和特应性鼻炎，脑炎诸如拉斯默森氏(Rasmussen)脑炎和边缘系和/或脑干脑炎，葡萄膜炎(诸如前葡萄膜炎、急性前葡萄膜炎、肉芽肿性葡萄膜炎、非肉芽肿性葡萄膜炎、晶状体抗原性葡萄膜炎、后葡萄膜炎或自身免疫性葡萄膜炎，具有和没有肾病综合征的肾小球肾炎(GN)诸如慢性或急性肾小球肾炎诸如原发性GN、免疫介导的GN、膜性GN(膜性肾病)、特发性膜性GN或特发性膜性肾病、膜增殖性或膜性增殖性GN(MPGN)(包括I型和II型)和急进性GN(RPGN)，增殖性肾炎，自身免疫性多腺体内分泌衰竭，龟头炎包括浆细胞性局限性龟头炎，龟头包皮炎，离心性环状红斑，持久性色素异常性红斑，多形性红斑，环状肉芽肿，光泽苔藓，硬化萎缩性苔藓，慢性单纯苔藓，小棘苔藓，扁平苔藓，片层状鱼鳞癣，表皮松解性角化过度，恶变前角化，坏疽性脓皮症，变应性疾患和应答，食物过敏，药物过敏，昆虫过敏，罕见的过敏性病症诸如肥大细胞增生病，过敏反应，湿疹包括变应性或特应性湿疹、干性湿疹、汗疱和水泡性掌跖湿疹(vesicular palmoplantar eczema)，哮喘诸如支气管哮喘(asthma bronchiale，bronchial asthma)和自身免疫性哮喘，涉及T细胞浸润和慢性炎性应答的疾患，针对外来抗原诸如妊娠期间胎儿A-B-O血型的免疫反应，慢性肺部炎性疾病，自身免疫性心肌炎，白细胞粘附缺陷，狼疮包括狼疮肾炎、狼疮脑炎、儿科狼疮、非肾狼疮、肾外狼疮、盘状狼疮和盘状红斑狼疮、狼疮脱发、SLE(诸如皮肤SLE或亚急性皮肤SLE)、新生儿狼疮综合征(NLE)和播散性红斑狼疮，幼发型(I型)糖尿病包括儿科IDDM，成人期发作的糖尿病(II型糖尿病)，自身免疫性糖尿病，特发性尿崩症，糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病，糖尿病结肠炎，糖尿病大动脉病症，与细胞因子和T-淋巴细胞介导的急性和迟发型超敏感性有关的免疫应答，结核病，结节病，肉芽肿病包括淋巴瘤样肉芽肿病、粒细胞缺乏，血管炎病(包括大血管血管炎(诸如风湿性多肌痛和巨细胞(高安氏(Takayasu))动脉炎)、中血管血管炎(诸如川崎氏(Kawasaki)病和结节性多动脉炎/结节性动脉周围炎)、免疫血管炎、CNS血管炎、皮肤性血管炎、超敏感性血管炎、坏死性血管炎(诸如类纤维蛋白坏死性血管炎和系统性坏死性血管炎)、ANCA阴性血管炎和ANCA相关血管炎诸如丘-施二氏(Churg-Strauss)综合征(CSS)，韦格纳氏(Wegener)肉芽肿病和微观多脉管炎)，颞动脉炎，再生障碍性贫血，自身免疫性再生障碍性贫血，库姆斯(Coombs)阳性贫血，戴-布二氏(Diamond Blackfan)贫血，溶血性贫血或免疫性溶血性贫血包括自身免疫性溶血性贫血(AIHA)，恶性贫血(anemiaperniciosa)，阿狄森氏(Addison)病，单纯红细胞性贫血或再生障碍(PRCA)，因子VIII缺乏，血友病A，自身免疫性嗜中性粒细胞减少症，细胞减少症诸如全血细胞减少症，白细胞减少症，涉及白细胞渗出的疾病，CNS炎性病症，阿耳茨海默氏(Alzheimer)病，帕金森氏(Parkinson)病，多器官损伤综合征诸如那些脓毒症、外伤或出血继发的，抗原-抗体复合物介导的疾病，抗肾小球基底膜病，抗磷脂抗体综合征，运动神经炎，变应性神经炎，贝切特氏
Figure GPA00001058503000561
病/综合征，卡斯尔曼氏(Castleman)综合征，古德帕斯丘氏(Goodpasture)综合征，雷诺氏(Reynaud)综合征，斯耶格伦氏综合征，史-约二氏(Stevens-Johnson)综合征，类天疱疮或天疱疮诸如大疱性类天疱疮、瘢痕性(粘膜)类天疱疮、皮肤类天疱疮、寻常型天疱疮、副肿瘤性天疱疮、落叶型天疱疮、粘膜类天疱疮型天疱疮和红斑性天疱疮，获得性大疱性表皮松解症，眼部炎症(优选变应性眼部炎症，诸如变应性结膜炎、线性IgA大疱性疾病、自身免疫诱发的结膜炎症)，自身免疫性多内分泌病，莱特氏(Reiter)病或综合征，由自身免疫性疾患引起的热伤，先兆子痫，免疫复合物病症诸如免疫复合物肾炎，抗体介导的肾炎，神经炎性病症，多神经病，慢性神经病诸如IgM多神经病或IgM介导的神经病，血小板减少症(例如心肌梗死患者发生的)包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、输血后紫癜(PTP)、肝素诱发的血小板减少症和自身免疫或免疫介导的血小板减少症(包括例如特发性血小板减少性紫癜(ITP)包括慢性或急性ITP)，巩膜炎诸如特发性角膜-巩膜炎、巩膜外层炎，睾丸和卵巢的自身免疫病包括自身免疫性睾丸炎和卵巢炎，原发性甲状腺功能减退症，甲状旁腺功能减退，自身免疫性内分泌病包括甲状腺炎(诸如自身免疫性甲状腺炎、桥本氏(Hashimoto)病、慢性甲状腺炎(桥本氏(Hashimoto)甲状腺炎)或亚急性甲状腺炎)、自身免疫性甲状腺病、特发性甲状腺功能减退症、格雷夫斯氏(Graves)病，格雷夫斯氏眼病(Grave′s eyedisease)(眼部或甲状腺相关眼部)，多腺性综合征诸如自身免疫性多腺体综合征例如I型(或多腺性内分泌病综合征)，瘤外综合征包括神经学瘤外综合征诸如兰伯特-伊顿(Lambert-Eaton)肌无力综合征或伊顿-兰伯特(Lambert-Eaton)综合征，僵体或僵人综合征，脑脊髓炎诸如变应性脑脊髓炎(encephalomyelitis allergica)和实验性变应性脑脊髓炎(EAE)，重症肌无力诸如胸腺瘤相关重症肌无力，小脑变性，神经性肌强直，视性眼阵挛或视性眼阵挛肌阵挛综合征(OMS)，和感觉神经病，多病灶运动神经病，席汉氏(Sheehan)综合征，自身免疫性肝炎、慢性肝炎、类狼疮肝炎、巨细胞性肝炎、慢性活动性肝炎或自身免疫性慢性活动性肝炎，肺炎诸如淋巴样间质性肺炎(LIP)，梗阻性细支气管炎(非移植物)对NSIP，格-巴二氏(Guillain-Barré)综合征，贝格尔氏(Berger)病(IgA肾病)，特发性IgA肾病，线性IgA皮肤病，急性热性嗜中性白细胞皮肤病，角质层下脓疱皮肤病，一过性棘层松解性皮肤病，硬化诸如原发性胆汁性肝硬化和肺硬变，自身免疫性肠病综合征，乳糜泻，腹腔或腹部疾病，口炎性腹泻(麸质肠病)，顽固性口炎性腹泻，特发性口炎性腹泻，冷球蛋白血症诸如混合型冷球蛋白血症、肌萎缩侧索硬化(ALS)(卢格里克氏(Lou Gehrig)病)，冠状动脉病，自身免疫性耳病诸如自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫性听觉丧失，多软骨炎诸如顽固性或复发的或复发性多软骨炎，肺泡蛋白沉着症，角膜炎诸如寇甘氏(Cogan)综合征/非梅毒性间质性角膜炎，贝耳氏(Bell)麻痹，斯威特氏(Sweet)病/综合征，自身免疫性酒糟鼻，带状疱疹相关疼痛，淀粉样变，非癌性淋巴细胞增多，原发性淋巴细胞增多包括单克隆B细胞淋巴细胞增多(例如良性单克隆丙种球蛋白病和性质未确定的单克隆丙种球蛋白病(MGUS))，周围神经病，瘤外综合征，通道病诸如癫痫、偏头痛、心率失常、肌肉病症、失聪、失明、周期性瘫痪和CNS的通道病，孤独症，炎性肌病，局灶性或节段性或局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)，内分泌性眼病，葡萄膜视网膜炎，脉络膜视网膜炎，自身免疫性肝脏病学病症，纤维肌痛，多发性内分泌衰竭，施密特氏(Schmidt)综合征，肾上腺炎，胃萎缩，早老性痴呆，脱髓鞘病诸如自身免疫性脱髓鞘病和慢性炎性脱髓鞘性多神经病，德雷斯勒氏(Dressler)综合征，斑秃，全秃，CREST综合征(钙质沉着症、雷诺氏(Raynaud)现象、食道运动功能障碍、指端硬化和毛细管扩张)，男性和女性自身免疫性不孕不育例如由于抗精虫抗体的，混合性结缔组织病，恰加斯氏(Chagas)病，风湿热，习惯性流产，农民肺，多形红斑，心脏切开术后综合征，柯兴氏(Cushing)综合征，养鸟者肺，变应性肉芽肿性血管炎，良性淋巴细胞性血管炎，阿尔波特氏(Alport)综合征，肺泡炎诸如变应性肺泡炎和纤维化肺泡炎，间质性肺病，输血反应，麻风，疟疾，寄生虫病诸如利什曼病、锥虫病(kypanosomiasis)、血吸虫病、蛔虫病，曲霉病，Sampter氏综合征，卡普兰氏(Caplan)综合征，登革，心内膜炎，心内膜心肌纤维化，弥漫性肺间质纤维化，间质性肺纤维化，纤维性纵隔炎，肺纤维化，特发性肺纤维化，囊性纤维化，眼内炎，持久隆起性红斑，胎儿成红细胞增多症，嗜曙红细胞性筋膜炎(faciitis)、舒尔曼氏(Shulman)综合征，费尔提氏(Felty)综合征，flariasis，睫状体炎诸如慢性睫状体炎、异时性睫状体炎、虹膜睫状体炎(急性或慢性)或Fuch氏睫状体炎，亨诺-许兰二氏(Henoch-Schonlein)紫癜，人免疫缺陷病毒(HIV)感染，SCID，获得性免疫缺陷综合征(AIDS)，艾柯病毒感染，脓毒症(系统性炎性应答综合征(SIRS))，内毒素血症，胰腺炎，甲状腺毒症(thyroxicosis)，细小病毒感染，风疹病毒感染，种痘后综合征，先天性风疹感染，爱泼斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒感染，腮腺炎，埃文斯(Evans)综合征，自身免疫性性腺衰竭，西登哈姆氏(Sydenham)舞蹈病，链球菌后肾炎，闭塞性血栓血管炎(thromboangitisubiterans)，甲状腺毒症，脊髓痨，脉络膜炎，巨细胞性多肌痛，慢性超敏感性肺炎，结膜炎，诸如春季卡他、干燥性角膜结膜炎和流行性角膜结膜炎，特发性肾炎综合征，微小病变肾病，良性家族性和缺血-再灌注损伤，移植器官再灌注，视网膜自身免疫，关节炎症，支气管炎，慢性阻塞性气道/肺部疾病，硅沉着病，口疮，口疮性口炎，动脉硬化性病症(大脑血管功能不全)诸如动脉硬化性脑病和动脉硬化性视网膜病，无精子发生(aspermiogenese)，自身免疫性溶血，伯克氏(Boeck)病，冷球蛋白血症，杜普伊特伦氏(Dupuytren)挛缩，晶体过敏性眼内炎(endophthalmia phacoanaphylactica)，变应性小肠炎(enteritis allergica)，麻风节结性红斑，特发性面瘫，慢性疲乏综合征，风湿热(febris rheumatica)，哈-里二氏(Hamman-Rich)病，感觉神经性听觉丧失，阵发性血红蛋白尿(haemoglobinuria paroxysmatica)，性腺功能减退，局限性回肠炎(ileitis regionalis)，白细胞减少症，传染性单核细胞增多症，横贯性(traverse)脊髓炎，原发性特发性粘液水肿，肾病，交感性眼炎(ophthalmiasymphatica)(sympathetic ophthalmitis)，新生儿眼炎，视神经炎，肉芽肿性睾丸炎(orchitis granulomatosa)，胰腺炎，急性多神经根炎，坏疽性脓皮症，奎尔万氏(Quervain)甲状腺炎，获得性脾萎缩，非恶性胸腺瘤，淋巴滤泡性胸腺炎，白癜风，中毒性休克综合征，食物中毒，涉及T细胞浸润的疾患，白细胞粘附缺陷，与细胞因子和T-淋巴细胞介导的急性和迟发性超敏感性有关的免疫应答，涉及白细胞渗出的疾病，多器官损伤综合征，抗原-抗体复合物介导的疾病，抗肾小球基底膜病，自身免疫性多内分泌病，卵巢炎，原发性粘液水肿，自身免疫性萎缩性胃炎，风湿病，混合性结缔组织病，肾病综合征，胰岛炎，多内分泌衰竭，自身免疫性多腺性综合征，包括多腺性综合征I型，成人期发作的特发性甲状旁腺功能减退(AOIH)，心肌病诸如扩张型心肌病，获得性大疱性表皮松解(epidermolisis bullosa acquisita，EBA)，血色素沉着，心肌炎，肾病综合征，原发性硬化性胆管炎，化脓性或非化脓性鼻窦炎，急性或慢性鼻窦炎，筛窦炎，额窦炎，上颌窦炎或蝶窦炎，变应性鼻窦炎，嗜曙红细胞相关病症诸如嗜曙红细胞增多症、肺嗜曙红细胞增多性浸润、嗜曙红细胞增多-肌痛综合征、吕弗勒氏(Loffler)综合征、慢性嗜曙红细胞性肺炎、热带肺嗜曙红细胞增多、支气管肺曲霉病、曲霉肿或含有嗜曙红细胞的肉芽肿，过敏反应，脊椎关节病，血清阴性脊椎关节炎病，多内分泌自身免疫病，硬化性胆管炎，巩膜、巩膜外层、慢性粘膜皮肤假丝酵母病，布鲁顿氏(Bruton)综合征，婴儿期一过性低丙种球蛋白血症，威斯科特-奥尔德里齐(Wiskott-Aldrich)综合征，共济失调性毛细管扩张综合征，血管扩张，与以下各项有关的自身免疫性病症：胶原病、风湿病诸如慢性关节风湿病、淋巴结炎、血压应答降低(reduction in blood pressure response)、血管功能障碍、组织损伤、心血管缺血、痛觉过敏、肾缺血、脑缺血和伴随血管化的疾病，变应性超敏感性病症，肾小球肾炎病，再灌注损伤，缺血再灌注病症，心肌或其它组织的再灌注损伤，淋巴瘤气管支气管炎，炎性皮肤病，具有急性炎性成分的皮肤病，多器官衰竭，大疱病，肾皮质坏死，急性化脓性脑膜炎或其它中枢神经系统炎性病症，眼和眶炎性病症，粒细胞输血相关综合征，细胞因子诱发的中毒，发作性睡病，急性重度炎症，慢性顽固性炎症，肾盂炎，动脉内增生，消化性溃疡，心瓣炎，和子宫内膜异位症。本文中通过施用与B细胞表面标志物(诸如CD79b)的抗体来治疗此类疾病，包括施用未偶联的抗体(裸抗体)或偶联有细胞毒剂的抗体，如本文中所公开的。本文中还通过包括同时或序贯施用的本发明抗CD79b抗体或抗CD79b抗体药物偶联物与另一种抗体或抗体药物偶联物、另一种细胞毒剂、放射或其它治疗方法的组合的联合疗法来治疗此类疾病。
“处理”或“治疗”或“缓和”指治疗性处理及预防性或防范性措施二者，其中目标是预防或减缓(减轻)所针对的病理学状况或紊乱。需要治疗的受试者包括早就患有紊乱的受试者以及倾向于患上紊乱的受试者或要预防紊乱的受试者。如果在依照本发明的方法接受治疗量的抗CD79b抗体后，患者在如下一项或多项中显示出可观察和/或可测量的降低或消失，那么受试者或哺乳动物成功“治疗”了表达CD79b多肽的癌症：癌细胞数减少或癌细胞消失；肿瘤体积缩小；癌细胞浸润到周围器官中，包括癌传播到软组织和骨中受到抑制(即一定程度的减缓，优选停止)；肿瘤转移受到抑制(即一定程度的减缓，优选停止)；肿瘤生长受到一定程度的抑制；和/或与特定癌症有关的一种或多种症状得到一定程度的减轻；发病率和死亡率降低；及生命质量提高。就抗CD79b抗体可预防癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞而言，它可能是抑制细胞的和/或毒害细胞的。这些征候或症状的减轻还可以由患者感受到。
用于评估疾病的成功治疗和改善的上述参数可以容易地通过内科医师所熟悉的常规流程来测量。对于癌症治疗，可通过例如评估疾病进展时间(TTP)和/或测定响应速率(RR)来测量功效。转移可通过分期测试(staging test)来测定，及通过骨扫描及钙水平和其它酶的测试以测定是否传播到骨。还可进行CT扫描以查明是否传播到骨盆及该区域中的淋巴结。分别使用胸腔X射线和通过已知方法进行的肝酶水平测量来查明是否转移到肺和肝。用于监测疾病的其它常规方法包括经直肠超声检查(TRUS)和经直肠针吸活组织检查(TRNB)。
对于膀胱癌，一种更加局部化的癌症，测定疾病进展的方法包括通过膀胱镜检术进行的尿细胞学评估、监测尿液中血的存在情况、通过超声波检查术显现尿路上皮道(urothelial tract)或静脉注射肾盂造影照片(intravenouspyelogram)、计算机断层摄影术(computed tomography)(CT)和磁共振成像(magnetic resonance imaging)(MRI)。远程转移的存在情况可通过腹部CT、胸腔X射线或骨骼放射性核素成像来评估。
“长期”施用指与短期模式相反，以连续模式施用药剂，从而将初始治疗效果(活性)维持较长一段时间。“间歇”施用指不是无间断连续进行的治疗，而是本质上周期性的。
“个体”指脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎动物指哺乳动物。哺乳动物包括，但不限于，牲畜(诸如牛)、运动用动物、宠物(诸如猫、犬和马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。在某些实施方案中，哺乳动物指人。
为了治疗癌症或缓和癌症症状的目的，“哺乳动物”指归入哺乳类的任何动物，包括人，家畜和牲畜，及动物园、运动或宠物动物，诸如犬、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、家兔、等。优选的是，哺乳动物指人。
与一种或多种其它治疗剂“联合”施用包括同时(共同)施用和任何次序的序贯施用。
“载体”在用于本文时包括药剂学可接受的载体、赋形剂或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。通常，生理学可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学可接受载体的例子包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；和/或非离子表面活性剂，诸如
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、聚乙二醇(PEG)和
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“固相”或“固体支持物”意指本发明的抗体可粘着或附着其上的非水性基质。本文中所涵盖的固相的例子包括那些部分或完全由玻璃(例如可控孔径玻璃)、多糖(例如琼脂糖)、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇和聚硅氧烷(silicone)制成的固相。在某些实施方案中，根据语境，固相可包括测定板的孔；在其它实施方案中，它指纯化柱(例如亲和层析柱)。此术语还包括离散颗粒的不连续固相，诸如美国专利No.4,275,149中所记载的。
“脂质体”指由各种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂构成的，可用于对哺乳动物投递药物(诸如CD79b抗体)的小囊泡。脂质体的成分通常排列成双层形式，与生物膜的脂质排列相似。
“小”分子或有机“小”分子在本文中定义为分子量小于约500道尔顿。
“个体”、“受试者”或“患者”指脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎动物指哺乳动物。哺乳动物包括，但不限于，牲畜(诸如牛)、运动用动物、宠物(诸如猫、犬和马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。在某些实施方案中，哺乳动物指人。
术语“药物配制剂”指其形式容许活性成分的生物学活性是有效的，且不含对会施用该配制剂的受试者产生不可接受的毒性的别的成分的制备物。此类配制剂可以是无菌的。
“无菌”配制剂是无菌的或者不含所有活的微生物及其孢子。
本文中所公开的抗体的“有效量”指足以实现明确规定的目的的量。“有效量”可凭经验且以常规方式，联系规定的目的来确定。
术语“治疗有效量”指在受试者或哺乳动物中有效“治疗”疾病或紊乱的抗体的量。在癌症的情况中，药物的治疗有效量可减少癌细胞数；缩小肿瘤体积；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)癌细胞浸润到周围器官中；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)肿瘤转移；一定程度的抑制肿瘤生长；和/或一定程度的减轻与癌症有关的一种或多种症状。参见本文中“治疗”的定义。就药物可预防癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是抑制细胞的和/或毒害细胞的。“预防有效量”指在必需的剂量和时间上有效实现期望的预防效果的量。通常而非必然，由于预防剂量是在疾病发作之前或在疾病的早期用于受试者的，因此预防有效量将低于治疗有效量。
抗CD79b抗体的“生长抑制量”指能够在体外或在体内抑制细胞，尤其是肿瘤，例如癌细胞生长的数量。抗CD79b抗体为了抑制肿瘤性细胞生长的“生长抑制量”可凭经验且以常规方式来确定。
抗CD79b抗体的“细胞毒性量”指能够在体外或在体内引起细胞，尤其是肿瘤，例如癌细胞破坏的量。抗CD79b抗体为了抑制肿瘤性细胞生长的“细胞毒性量”可凭经验且以常规方式来确定。
“表达CD79b的细胞”指或在细胞表面上或以分泌形式表达内源或转染的CD79b多肽的细胞。“表达CD79b的癌”指包含在细胞表面上存在CD79b多肽或生成和分泌CD79b多肽的细胞的癌。“表达CD79b的癌”任选在其细胞表面上生成足够水平的CD79b多肽，使得抗CD79b抗体可与其结合并对癌产生治疗效果。在另一个实施方案中，“表达CD79b的癌”任选生成和分泌足够水平的CD79b多肽，使得抗CD79b抗体可与其结合并对癌具有治疗效果。对于后者，所述拮抗剂可以是降低、抑制或阻止肿瘤细胞生成和分泌分泌型CD79b多肽的反义寡核苷酸。“过表达”CD79b多肽的癌指与同一组织类型的非癌性细胞相比，在其细胞表面上具有显著更高水平的CD79b多肽或生成和分泌显著更高水平的CD79b多肽的癌。此类过表达可以是由基因扩增或者是由转录或翻译提高引起的。可在检测或预后测定法中通过评估细胞表面上存在的或细胞分泌的CD79b蛋白质水平的升高(例如通过免疫组织化学测定法，使用针对分离的CD79b多肽制备的抗CD79b抗体，所述多肽可使用重组DNA技术从编码CD79b多肽的分离的核酸制备；FACS分析；等)来确定CD79b多肽过表达。或者/另外，可测量细胞中编码CD79b多肽的核酸或mRNA的水平，例如通过荧光原位杂交，使用对应于编码CD79b的核酸或其互补链的基于核酸的探针(FISH；参见WO 98/45479，公开于1998年10月)；Southern印迹；Northern印迹；或聚合酶链式反应(PCR)技术，诸如实时定量PCR(RT-PCR)。还可使用基于抗体的测定法，通过测量生物学流体诸如血清中的脱落抗原来研究CD79b多肽过表达(还可参见例如美国专利4,933,294，授权于1990年6月12日；WO 91/05264，公开于1991年4月18日；美国专利5,401,638，授权于1995年3月28日；Sias et al.，J.Immunol.Methods 132：73-80(1990))。除了上述测定法，熟练从业人员还可利用多种体内测定法。例如，可将患者体内细胞暴露于任选用可检测标记物例如放射性同位素标记的抗体，并且可评估抗体与患者体内细胞的结合，例如通过外部扫描放射性或通过分析取自事先已暴露于所述抗体的患者的活组织检查切片。
在用于本文时，术语“免疫粘附素”指将异源蛋白质(“粘附素”)的结合特异性与免疫球蛋白恒定域的效应器功能联合起来的抗体样分子。在结构上，免疫粘附素包括不同于抗体的抗原识别和结合位点(即是“异源”的)、具有期望结合特异性的氨基酸序列和免疫球蛋白恒定域序列的融合物。免疫粘附素分子的粘附素部分典型的是至少包含受体或配体的结合位点的连续氨基酸序列。免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定域序列可以从任何免疫球蛋白获得，诸如IgG-1、IgG-2、IgG-3或IgG-4亚型、IgA(包括IgA-1和IgA-2)、IgE、IgD或IgM。
“标记物”在本文中使用时指与抗体直接或间接偶联从而生成“带标记物的”或“经过标记的”抗体的可检测化合物或组合物。标记物可以是通过自身就可检测的(例如放射性同位素标记物或荧光标记物)，或者在酶标记物的情况中，可催化可检测的底物化合物或组合物的化学改变。
术语“细胞毒剂”在用于本文时指抑制或防止细胞的功能和/或引起细胞破坏的物质。该术语意图包括：放射性同位素，例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素；化疗剂，例如甲氨蝶呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、长春花生物碱类(vinca alkaloids)(长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂；酶及其片段，诸如溶核酶；抗生素；和毒素，诸如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物起源的酶活毒素，包括其片段和/或变体；及下文披露的各种抗肿瘤药或抗癌药。下文记载了其它细胞毒剂。杀肿瘤药引起肿瘤细胞的破坏。
“毒素”指能够对细胞的生长或增殖产生有害效果的任何物质。
“化疗剂”指可用于治疗癌症的化学化合物，不管作用机制。化疗剂的类别包括但不限于：烷化剂类(alkyating agents)、抗代谢物类(antimetabolites)、纺锤体毒植物生物碱类(spindle poison plant alkaloids)、细胞毒性/抗肿瘤抗生素类(cytoxic/antitumor antibiotics)、拓扑异构酶抑制剂类(topoisomeraseinhibitors)、抗体类(antibodies)、光敏剂类(photosensitizers)和激酶抑制剂类(kinase inhibitors)。化疗剂包括在“靶向疗法”和常规化疗中使用的化合物。化疗剂的例子包括：erlotinib(Genentech/OSI Pharm.)、多西他塞(docetaxel)(
Figure GPA00001058503000642
Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，CAS No.51-21-8)、吉西他滨(gemcitabine)(
Figure GPA00001058503000643
Lilly)、PD-0325901(CAS No.391210-10-9，Pfizer)、顺铂(cisplatin)(顺式-二胺，二氯铂(II)，CAS No.15663-27-1)、卡铂(carboplatin)(CAS No.41575-94-4)、帕利他塞(paclitaxel)(
Figure GPA00001058503000644
Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、曲妥单抗(trastuzumab)(
Figure GPA00001058503000645
Genentech)、替莫唑胺(temozolomide)(4-甲基-5-氧-2，3，4，6，8-五氮双环[4.3.0]九-2，7，9-三烯-9-羧酰胺，CAS No.85622-93-l，
Figure GPA00001058503000646
Schering Plough)、他莫昔芬(tamoxifen)((Z)-2-[4-(1，2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N，N-二甲基-乙胺，
Figure GPA00001058503000647
Figure GPA00001058503000648
)和多柔比星(doxorubicin)(
Figure GPA00001058503000649
)、Akti-1/2、HPPD和雷帕霉素(rapamycin)。
化疗剂的更多例子包括：化疗剂的更多例子包括：奥沙利铂(oxaliplatin)(
Figure GPA000010585030006410
Sanofi)、bortezomib(
Figure GPA000010585030006411
Millennium Pharm.)、sutent(SU11248，Pfizer)、来曲唑(letrozole)(
Figure GPA000010585030006413
Novartis)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)(
Figure GPA000010585030006414
Novartis)、XL-518(Mek抑制剂，Exelixis，WO 2007/044515)、ARRY-886(Mek抑制剂，AZD6244，ArrayBioPharma，Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制剂，Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制剂，Novartis)、XL-147(PI3K抑制剂，Exelixis)、PTK787/ZK222584(Novartis)、氟维司群(fulvestrant)(AstraZeneca)、亚叶酸(leucovorin，folinic acid)、雷帕霉素(rapamycin)(西罗莫司(sirolimus)，Wyeth)、lapatinib(
Figure GPA000010585030006417
GSK572016，Glaxo SmithKline)、lonafarnib(SARASARTM，SCH 66336，Schering Plough)、sorafenib(BAY43-9006，Bayer Labs)、gefitinib(
Figure GPA000010585030006419
AstraZeneca)、伊立替康(irinotecan)(
Figure GPA000010585030006420
CPT-11，Pfizer)、tipifarnib(ZARNESTRATM，Johnson&Johnson)、ABRAXANETM不含克列莫佛(Cremophor)、清蛋白改造纳米颗粒剂型帕利他塞(paclitaxel)(AmericanPharmaceutical Partners，Schaumberg，Il)、vandetanib(rINN，ZD6474，
Figure GPA000010585030006421
AstraZeneca)、chloranmbucil、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、temsirolimus(
Figure GPA000010585030006422
Wyeth)、pazopanib(GlaxoSmithKline)、canfosfamide(
Figure GPA00001058503000651
Telik)、塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)(
Figure GPA00001058503000652
Figure GPA00001058503000653
)；磺酸烷基酯类(alkylsulfonates)，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(例如加利车霉素(calicheamicin)、加利车霉素γ1I、加利车霉素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.，(1994)33：183-186)；蒽环类抗生素(dynemicin)，dynemicin A；二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defosfamide)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；
Figure GPA00001058503000661
多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2，2′，2″-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疣孢菌素(verrucarin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；塞替派(thiotepa)；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨(vinorelbine)(
Figure GPA00001058503000671
)；能灭瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；卡培他滨(capecitabine)(Roche)；伊本膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄酸类(retinoids)，诸如视黄酸(retinoic acid)；及任何上述物质的药剂学可接受的盐、酸和衍生物。
“化疗剂”的定义中还包括：(i)抗激素剂，其作用是调节或抑制激素对肿瘤的作用，诸如抗雌激素类和选择性雌激素受体调节剂类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括
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柠檬酸他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和
Figure GPA00001058503000674
(柠檬酸托瑞米芬(toremifene citrate))；(ii)芳香酶抑制剂，其抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶，诸如例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、(醋酸甲地孕酮(megestrol acetate))、
Figure GPA00001058503000676
(依西美坦(exemestane)；Pfizer)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozole)、
Figure GPA00001058503000677
(伏罗唑(vorozole))、(来曲唑(letrozole)；Novartis)和
Figure GPA00001058503000679
(阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他滨(troxacitabine)(1，3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白质激酶抑制剂，诸如MEK抑制剂(WO2007/044515)；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常(aberrant)细胞增殖的信号传导途经中的基因表达的反义寡核苷酸，例如PKC-α、Raf和H-Ras，诸如oblimersen(
Figure GPA00001058503000681
Genta Inc.)；(vii)核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如
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)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如
Figure GPA00001058503000683
Figure GPA00001058503000684
和
Figure GPA00001058503000686
rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如
Figure GPA00001058503000687
Figure GPA00001058503000688
rmRH；(ix)抗血管发生剂，诸如贝伐单抗(bevacizumab)(Genentech)；及任何上述物质的药学可接受盐、酸和衍生物。“化疗剂”的定义中还包括治疗性抗体，诸如阿伦单抗(alemtuzumab)(Campath)、贝伐单抗(bevacizumab)(
Figure GPA000010585030006810
Genentech)、西妥昔单抗(cetuximab)(
Figure GPA000010585030006811
Imclone)、panitumumab(
Figure GPA000010585030006812
Amgen)、利妥昔单抗(rituximab)(
Figure GPA000010585030006813
Genentech/Biogen Idec)、pertuzumab(OMNITARGTM，2C4，Genentech)、曲妥单抗(trastuzumab)(
Figure GPA000010585030006814
Genentech)、托西莫单抗(tositumomab)(Bexxar，Corixia)、及抗体药物偶联物、吉姆单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(
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Wyeth)。
“生长抑制剂”在用于本文时指在体外或在体内抑制细胞，尤其是表达CD79b的癌细胞生长的化合物或组合物。因此，生长抑制剂可以是显著降低处于S期的表达CD79b的细胞百分比的药剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进(处于S期以外的位置)的药剂，诸如诱导G1停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))、紫杉烷类(taxanes)和拓扑异构酶II抑制剂诸如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。那些阻滞G1的药剂也溢出进入S期停滞，例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)、泼尼松(prednisone)、达卡巴嗪(dacarbazine)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、顺铂(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可参见《TheMolecular Basis of Cancer》，Mendelsohn和Israel编，第1章，题为“Cell cycleregulation，oncogenes，and antieioplastic drugs”，Murakaini等人，WB Saunders，Philadelphia，1995，尤其是第13页。紫杉烷类(紫杉醇(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛(
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Rhone-Poulenc Rorer)是紫杉醇(
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Bristol-MyersSquibb)的半合成类似物。紫杉醇和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定，导致对细胞中有丝分裂的抑制。
“多柔比星(Doxorubicin)”是蒽环类抗生素。多柔比星的完整化学名是(8S-顺式)-10-[(3-氨基-2，3，6-三脱氧-α-L-来苏-吡喃己糖基)氧基]-7，8，9，10-四氢-6，8，11-三羟基-8-(羟基乙酰基)-1-甲氧基-5，12-萘二酮。(8S-cis)-10-[(3-amino-2，3，6-trideoxy-α-L-lyxo-hexapyranosyl)oxy]-7，8，9，10-tetrahydro-6，8，11-trihydroxy-8-(hydroxyacetyl)-1-methoxy-5，12-naphthacenedione
术语“细胞因子”是由一种细胞群释放，作为细胞间介质作用于另一细胞的蛋白质的通称。此类细胞因子的例子有淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子中包括生长激素，诸如人生长激素、N-甲硫氨酰人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松驰素；松驰素原；糖蛋白激素类，诸如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和促黄体激素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；促乳素；胎盘催乳激素；肿瘤坏死因子-α和-β；穆勒氏(Mullerian)抑制性物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子，诸如NGF-β；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)，诸如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子(osteoinductive factor)；干扰素，诸如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(CSF)，诸如巨噬细胞CSF(M-CSF)、粒细胞-巨噬细胞CSF(GM-CSF)和粒细胞CSF(G-CSF)；白介素(IL)，诸如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-11、IL-12；肿瘤坏死因子，诸如TNF-α或TNF-β；及其它多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。在用于本文时，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质及天然序列细胞因子的生物学活性等效物。
“包装插页”用于指通常包括在治疗用产品的商业包装中的说明书，它们包含有关涉及此类治疗用产品应用的适应征、用法、剂量、施用、禁忌症和/或警告的信息。
术语“胞内代谢物”指由细胞内对抗体-药物偶联物(ADC)的代谢过程或反应产生的化合物。所述代谢过程或反应可以是酶促过程，诸如ADC的肽接头的蛋白水解切割或官能基诸如腙、酯或酰胺的水解。胞内代谢物包括但不限于在进入、扩散、摄取或转运进入细胞后经历胞内切割的抗体和游离药物。
术语“胞内切割的”和“胞内切割”指细胞内对抗体-药物偶联物(ADC)的代谢过程或反应，由此共价附着，即药物模块(D)与抗体(Ab)之间的接头被打断，导致在细胞内游离药物与抗体解离。ADC别切割的模块因而是胞内代谢物。
术语“生物利用度”指施用于患者的给定量的药物的系统利用度(即血液/血浆水平)。生物利用度是表明药物从所施用的剂量形式到达大循环的时间(速率)和总量(程度)二者度量的绝对项。
术语“细胞毒活性”指ADC或ADC的胞内代谢物的细胞杀伤、细胞抑制或生长抑制效果。细胞毒活性可以表述为IC50值，即半数细胞存活时每单位体积的浓度(摩尔或质量)。
如本文中所使用的，术语“烷基”指1-12个碳原子(C1-C12)的饱和的、线性的或分支的单价烃基，其中烷基可以是任选用下文所述一种或多种取代基取代的。在另一个实施方案质，烷基指1-8个碳原子(C1-C8)或1-6个碳原子(C1-C6)的。烷基的实例包括但不限于甲基(Me，-CH3)、乙基(Et，-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr，正丙基，-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr，异丙基，-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu，正丁基，-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu，异丁基，-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu，仲丁基，-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu，叔丁基，-C(CH3)3)、1-戊基(n-戊基，-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2，3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3，3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基、1-辛基、等等。
术语“烯基”指2-8个碳原子(C2-C8)的、有至少一个不饱和位点(即碳-碳，sp2双键)的、线性的或分支的单价烃基，其中烯基可以是任选用下文所述一种或多种取代基独立取代的，而且包括具有“顺式”和“反式”取向或者“E”和“Z”取向的根。实例包括但不限于乙烯基(-CH＝CH2)、丙烯基(-CH2CH＝CH2)、等等。
术语“炔基”指2-8个碳原子(C2-C8)的、有至少一个不饱和位点(即碳-碳，sp三键)的、线性的或分支的单价烃基，其中炔基可以是任选用下文所述一种或多种取代基独立取代的。实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基或炔丙基(-CH2C≡CH)、等等。
术语“碳环”、“碳环基”、“碳环环”和“环烃基”指作为单环环具有3-12个碳原子(C3-C12)或作为双环环具有7-12个碳原子的、单价的、非芳香族的、饱和的或部分未饱和的环。具有7-12个碳的双环碳环可以排列成例如双环[4，5]、[5，5]、[5，6]或[6，6]体系，而具有9或10个环原子的双环碳环可以排列成双环[5，6]或[6，6]体系，或者桥连体系诸如双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.2]壬烷。单环碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基、等等。
“芳基”指6-20个碳原子(C6-C20)的、通过从亲本芳香族环体系的一个碳原子除去一个氢原子而衍生的、单价烃基。有些芳基在例示结构中以“Ar”来代表。芳基包括包含与饱和的、部分未饱和的环或芳香族碳环环融合的芳香环的双环基。典型的芳基包括但不限于自苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、联苯、茚基、茚满基、1，2-二氢萘、1，2，3，4-四氢萘基、等等衍生的。芳基可以是任选用本文所述一种或多种取代基独立取代的。
术语“杂环”、“杂环基”和“杂环环”在本文中可互换使用，指3-20个环原子的(其中至少一个环原子是选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子是C)、饱和的或部分未饱和的(即在环内具有一个或多个双键和/或三键)碳环基，其中一个或多个环原子是任选用下文所述一种或多种取代基独立取代的。杂环可以是具有3-7个环成员(2-6个碳原子和1-4个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7-10个环成员(4-9个碳原子和1-6个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如双环[4，5]、[5，5]、[5，6]或[6，6]体系，而具有9或10个环原子的双环碳环可以排列成双环[5，6]或[6，6]体系。杂环记载于Paquette，Leo A.；″Principles of Modern Heterocyclic Chemistry″(W.A.Benjamin，NewYork，1968)，特别是第1，3，4，6，7，和9章；″The Chemistry of HeterocyclicCompounds，A series of Monographs″(John Wiley&Sons，New York，1950至今)，特别是第13，14，16，19，和28卷；及J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566。“杂环基”还包括杂环基与饱和的、部分未饱和的环或芳香族碳环或杂环环融合的根。杂环环的实例包括但不限于吡咯烷基(pyrrolidinyl)、四氢呋喃基(tetrahydrofuranyl)、二氢呋喃基(dihydrofuranyl)、四氢噻吩基(tetrahydrothienyl)、四氢吡喃基(tetrahydropyranyl)、二氢吡喃基(dihydropyranyl)、四氢硫代吡喃基(tetrahydrothiopyranyl)、哌啶子基(piperidino)、吗啉子基(morpholino)、硫代吗啉子基(thiomorpholino)、噻噁烷基(thioxanyl)、哌嗪基(piperazinyl)、高哌嗪基(homopiperazinyl)、氮杂环丁烷基(azetidinyl)、氧杂环丁烷基(oxetanyl)、thietanyl、高哌啶基(homopiperidinyl)、oxepanyl、thiepanyl、oxazepinyl、二氮杂草基(diazepinyl)、thiazepinyl、2-吡咯啉基(2-pyrrolinyl)、3-吡咯啉基(3-pyrrolinyl)、(indolineyl)、2H-吡喃基(2H-pyranyl)、4H-吡喃基(4H-pyranyl)、二噁烷基(dioxanyl)、1，3-二氧戊环基(1，3-dioxolanyl)、吡唑啉基(pyrazolinyl)、二噻烷基(dithianyl)、二硫戊环基(dithiolanyl)、二氢吡喃基(dihydropyranyl)、二氢噻吩基(dihydrothienyl)、二氢呋喃基(dihydrofuranyl)、吡唑烷基(pyrazolidinyl)咪唑啉基(imidazolinyl)、咪唑烷基(imidazolidinyl)、3-氮双环[3.1.0]己烷基(3-azabicyco[3.1.0]hexanyl)、3-氮双环[4.1.0]庚烷基(3-azabicyclo[4.1.0]heptanyl)、氮双环[2.2.2]己烷基(azabicyclo[2.2.2]hexanyl)、3H-吲哚基(3H-indolyl)喹嗪基(quinolizinyl)和N-吡啶基尿素(N-pyridyl ureas)。螺模块也包括在此定义的范围内。其中2个环碳原子被氧(＝O)模块取代的杂环基的实例有嘧啶酮基(pyrimidinonyl)和1，1-二氧-硫代吗啉基(1，1-dioxo-thiomorpholinyl)。本文中的杂环基是任选用本文所述一种或多种取代基独立取代的。
术语“杂芳基”指五、六或七元环的单价芳香基，而且包括5-20个原子(含有一个或多个独立选自氮、氧和硫的杂原子)的稠环体系(其中至少一个是芳香族的)。杂芳基的实例有吡啶基(pyridinyl)(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基(imidazolyl)、咪唑并吡啶基(imidazopyridinyl)、嘧啶基(pyrimidinyl)(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基(pyrazolyl)、三唑基(triazolyl)、吡嗪基(pyrazinyl)、四唑基(tetrazolyl)、呋喃基(furyl)、噻吩基(thienyl)、异噁唑基(isoxazolyl)、噻唑基(thiazolyl)、噁唑基(oxazolyl)、异噻唑基(isothiazolyl)、吡咯基(pyrrolyl)、喹啉基(quinolinyl)、异喹啉基(isoquinolinyl)、吲哚基(indolyl)、苯并咪唑基(benzimidazolyl)、苯并呋喃基(benzofuranyl)、噌啉基(cinnolinyl)、吲唑基(indazolyl)、吲嗪基(indolizinyl)、酞嗪基(phthalazinyl)、哒嗪基(pyridazinyl)、三嗪基(triazinyl)、异吲哚基(isoindolyl)、喋啶基(pteridinyl)、嘌呤基(purinyl)、噁二唑基(oxadiazolyl)、三唑基(triazolyl)、噻二唑基(thiadiazolyl)、噻二唑基(thiadiazolyl)、呋咱基(furazanyl)、苯并呋咱基(benzofurazanyl)、苯并噻吩基(benzothiophenyl)、苯并噻唑基(benzothiazolyl)、苯噁基(benzoxazolyl)、喹唑啉基(quinazolinyl)、喹噁啉基(quinoxalinyl)、naphthyridinyl和furopyridinyl。杂芳基是任选用本文所述一种或多种取代基独立取代的。
杂环或杂芳基可以是碳(碳连的)或氮(氮连的)键合的，在那里可能的情况中。举例而非限制，碳键合的杂环或杂芳基在吡啶的2、3、4、5或6位，哒嗪的3、4、5或6位，嘧啶的2、4、5或6位，吡嗪的2、3、5或6位，呋喃、四氢呋喃、硫代呋喃(thiofuran)、噻吩、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位，氮丙啶的2或3位，吖丁啶的2、3或4位，喹啉的2、3、4、5、6、7或8位，或异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位处键合。
举例而非限制，氮键合的杂环或杂芳基在氮丙啶、吖丁啶、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚、1H-吲唑的1位，异吲唑或异二氢吲哚的2位，吗啉的4位，和咔唑或β-咔啉的9位处键合。
“亚烷基”指1-18个碳原子且具有两个单价基心(radical center)(通过从亲本烃的同一碳原子或两个不同碳原子除去两个氢原子而衍生的)的饱和的、分支的或直链的或环状的烃基。典型的亚烃基包括但不限于：亚甲基(-CH2-)、1，2-乙基(亚乙基)(-CH2CH2-)、1，3-丙基(亚丙基)(-CH2CH2CH2-)、1，4-丁基(亚丁基)(-CH2CH2CH2CH2-)、等等。
“C1-C10亚烷基”指通式-(CH2)1-10-的直链、饱和烃基。C1-C10亚烃基的实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基、亚壬基和亚癸基。
“亚烯基”指2-18个碳原子且具有两个单价基心(radical center)(通过从亲本烯烃的同一碳原子或两个不同碳原子除去两个氢原子而衍生的)的不饱和的、分支的或直链的或环状的烃基。典型的亚烯基包括但不限于：1，2-亚乙烯基(-CH＝CH-)。
“亚炔基”指指2-18个碳原子且具有两个单价基心(radical center)(通过从亲本炔烃的同一碳原子或两个不同碳原子除去两个氢原子而衍生的)的不饱和的、分支的或直链的或环状的烃基。典型的亚炔基包括但不限于：亚乙炔基(-C≡C-)、亚丙炔基(-CH2C≡C-)和4-亚戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。
“亚芳基”指具有两个共价键且可以是邻位、间位或对位构型的芳基，如下述结构所示：
Figure GPA00001058503000741
其中苯基可以是未取代的，或者是被至多四个下述基团取代的，包括但不限于-C1-C8烃基、-O-(C1-C8烃基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立选自H、-C1-C8烃基和芳基。
“芳烃基”指键合至碳原子(通常是末端或sp3碳原子)的氢原子之一被芳基取代的非环烃基。典型的芳烃基包括但不限于苄基、2-苯基乙烷-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘甲基、2-萘基乙烷-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘并苄基、2-萘并苯基乙烷-1-基等等。芳烃基包含6-20个碳原子，例如芳烃基的烃基模块(包括烷基、烯基或炔基)是1-6个碳原子，芳基模块是5-14个碳原子。
“杂芳烃基”指键合至碳原子(通常是末端或sp3碳原子)的氢原子之一被杂芳基取代的非环烃基。典型的杂芳烃基包括但不限于2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基、等等。杂芳烃基包含6-20个碳原子，例如杂芳烃基的烃基模块(包括烷基、烯基或炔基)是1-6个碳原子，杂芳基模块是5-14个碳原子和1-3个选自N、O、P和S的杂原子。杂芳烃基的杂芳基模块可以是具有3-7个环成员(2-6个碳原子和1-3个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7-10个环成员(4-9个碳原子和1-3个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如双环[4，5]、[5，5]、[5，6]或[6，6]体系。
术语“前体药物”在用于本申请时指与亲本化合物或药物相比对细胞的细胞毒性较小并能够酶促或水解活化或转变为更具活性亲本形式的本发明化合物的前体或衍生物形式。参见例如Wilman，“Prodrugs in CancerChemotherapy”，Biochemical Society Transactions，14，pp.375-382，615thMeeting Belfast(1986)和Stella等，“Prodrugs：A Chemical Approach to TargetedDrug Delivery”，Directed Drug Delivery，Borchardt等，编，pp.247-267，HumanaPress(1985)。本发明的前体药物包括但不限于含磷酸盐/酯前体药物、含硫代磷酸盐/酯前体药物、含硫酸盐/酯前体药物、含肽前体药物、D-氨基酸修饰前体药物、糖基化前体药物、含β-内酰胺前体药物、含任选取代苯氧基乙酰胺的前体药物、含任选取代苯乙酰胺的前体药物、可转化为更具活性而无细胞毒性的药物的5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿苷前体药物。可衍生为本发明使用的前体药物形式的细胞毒性药物的例子包括但不限于本发明的化合物和化疗剂(诸如上文所描述的)。
“代谢物”指特定化合物或其盐在身体中经由代谢生成的产物。化合物的代谢物可以使用本领域已知的常规技术来鉴定，而且它们的活性可以使用诸如本文中所描述的测试来测定。此类产物可能源自例如所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、脱酯、酶促切割、等等。因而，本发明包括本发明化合物的代谢物，包括通过如下过程生成的化合物，所述过程包括使本发明的化合物接触哺乳动物一段时间，该段时间足以生成其代谢产物。
“脂质体”指由各种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂构成的，可用于对哺乳动物投递药物的小囊泡。脂质体的成分通常排列成双层形式，与生物膜的脂质排列相似。
“接头”指包含将抗体共价附着于药物模块的共价键或原子链的化学模块。在各个实施方案中，接头包括诸如烃基二基、芳基二基、杂芳基二基的二价基，诸如-(CR2)nO(CR2)n-的模块，烃基氧(例如聚乙烯氧、PEG、聚亚甲基氧)和烃基氨基(例如聚乙烯氨基、JeffamineTM)的重复单元；及二酸酯和酰胺，包括琥珀酸酯、琥珀酰胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯和己酰胺(caproamide)。
术语“手性”指分子具有镜像对映体不可重叠的特性，而术语“非手性”指分子可重叠于其镜像对映体上。
术语“立体异构体”指具有相同的化学结构，但是在原子或基团的空间排列方面有所不同的化合物。
“非对映异构体”指具有两个或多个手性中心且其分子彼此不为镜像对映体的空间异构体。非对映体具有不同的物理特性，例如熔点、沸点、光谱特征和反应性。非对映异构体的混合物可以在高分辨力的分析规程下分开，诸如电泳和层析。
“对映异构体”指化合物的彼此为不可重叠镜像的两种空间异构体。
本文中所使用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker，Ed.，McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill BookCompany，New York；及Eliel，E.and Wilen，S.，Stereochemistry of OrganicCompounds(1994)John Wiley&Sons，Inc.，New York。许多有机化合物以旋光型存在，即它们具有旋转平面偏振光的平面的能力。在描述旋光性化合物时，使用前缀D和L，或者R和S来表示分子关于其手性中心的绝对构型。采用前缀d和l或者(+)和(-)来指示化合物对平面偏振光的旋转，(-)或l意味着化合物是左旋的。带有前缀(+)或d的化合物是右旋的。对于给定的化学结构，这些立体异构体是相同的，只是它们互为镜像。特定的立体异构体还可以称为对映异构体，而且此类异构体的混合物常常称为对映混合物。对映异构体的50∶50混合物称为外消旋混合物或外消旋物，其可以在化学反应或过程中没有立体选择或立体特异性时发生。术语“外消旋混合物”和“外消旋物”指两种对映异构体的等摩尔混合物，其没有旋光性。
术语“互变异构体”或“互变异构体形式”指具有不同能量的结构同分异构体，它们经由低能障可互变。例如，质子互变异构体(也称作质子移变互变异构体)包括经由质子迁移发生的互变，诸如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。化合价互变异构体包括通过一些成键电子的重新组织发生的互变。
短语“药学可接受盐”在用于本文时指本发明化合物的药学可接受的有机或无机盐。例示性的盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐(即1，1’-亚甲基-双(2-羟基-3-萘甲酸盐))。药学可接受盐可能牵涉包含另一种分子，诸如乙酸盐离子、琥珀酸盐离子或其它抗衡离子。抗衡离子可以是稳定母体化合物电荷的任何有机或无机模块。另外，药学可接受盐可以在其结构中具有超过一种带电荷原子。在多种带电荷原子作为药学可接受盐的组成部分的情况中可以具有多种抗衡离子。因此，药学可接受盐可具有一种或多种带电荷原子和/或一种或多种抗衡离子。
如果本发明的化合物是碱，那么期望的药学可接受的盐可以通过本领域可得的任何合适方法来制备，例如用无机酸(诸如氢氯酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等等)或用有机酸(诸如乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸/延胡索酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)(诸如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)、α羟酸(诸如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳香酸(诸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(诸如对甲苯磺酸或乙磺酸)、等等)处理游离碱。
如果本发明的化合物是酸，那么期望的药学可接受的盐可以通过任何合适方法来制备，例如用无机或有机碱(诸如胺(伯、仲或叔))、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物、等等处理游离酸。合适的盐的例示性例子包括但不限于自氨基酸(诸如甘氨酸和精氨酸)、铵、伯/仲/叔胺和环胺(诸如哌啶、吗啉和哌嗪)衍生的有机盐，和自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂衍生的无机盐。
短语“药学可接受的”指明该物质或组合物必须是在化学和/或毒理学方面与构成配制剂的其它成分和/或用它治疗的哺乳动物相容的。
“溶剂合物”指一个或多个溶剂分子与本发明化合物的缔合物或复合物。形成溶剂合物的溶剂的例子包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语“水合物”指其中的溶剂分子是水的复合物。
术语“保护基团”指常用于在与化合物上的其它官能团起反应的同时封闭或保护特定官能度的取代基。例如“氨基保护基团”指附着至化合物中的氨基并阻断或保护氨基官能度的取代基。合适的氨基保护基团包括乙酰基、三氟乙酰基、叔-丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBZ)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)。类似的，“羟基保护基团”指附着至阻断或保护羟基官能度的羟基取代基。合适的保护基团包括乙酰基和甲硅烷基。“羧基保护基团”指附着至阻断或保护羧基官能度的羟基取代基。常用的羧基保护基团包括苯基磺酰基乙基、氰乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、2-(对甲苯磺酰基)乙基、2-(对硝基苯基亚磺酰基)乙基、2-(联苯基膦基)-乙基、硝基乙基等等。关于保护基团及其用途的一般性说明参见T.W.Greene，Protective Groups inOrganic Synthesis，John Wiley&Sons，New York，1991。
“离去基团”指可以被另一官能基取代的官能基。某些离去基团是本领域公知的，实例包括但不限于卤化物(例如氯化物、溴化物、碘化物)、甲基磺酰基(甲磺酰基)、对甲苯磺酰基(甲苯磺酰基)、三氟甲基磺酰基(triflate)和三氟甲基磺酸根。
缩写
接头组件：
MC＝6-马来酰亚氨基己酰基
Val-Cit或“vc”＝缬氨酸-瓜氨酸(蛋白酶可切割接头中的例示二肽)
瓜氨酸＝2-氨基-5-脲基戊酸
PAB＝对氨基苯甲基氧羰基(“自我牺牲”接头构件的例示)
Me-Val-Cit＝正甲基-缬氨酸-瓜氨酸(其中接头肽键已经修饰以防止其受到组织蛋白酶B的切割)
MC(PEG)6-OH＝马来酰亚氨基己酰基-聚乙二醇(可附着于抗体半胱氨酸)。
细胞毒性药物：
MMAE＝单甲基auristatin E(MW 718)
MMAF＝auristatin E(MMAE)的变体，其在药物的C-末端处有苯丙氨酸(MW731.5)
MMAF-DMAEA＝有DMAEA(二甲基氨基乙胺)以酰胺连接至C-末端苯丙氨酸的MMAF(MW 801.5)
MMAF-TEG＝有四乙二醇酯化至苯丙氨酸的MMAF
MMAF-NtBu＝正叔丁基作为酰胺附着于MMAF的C-末端
DM1＝N(2′)-脱乙酰基-N(2′)-(3-巯基-1-氧丙基)-美登素
DM3＝N(2′)-脱乙酰基-N2-(4-巯基-1-氧戊基)-美登素
DM4＝N(2′)-脱乙酰基-N2-(4-巯基-4-甲基-1-氧戊基)-美登素
别的缩写如下：AE指auristatin E；Boc指正(叔丁氧羰基)；cit指瓜氨酸；dap指dolaproine；DCC指1，3-二环己基碳二亚胺；DCM指二氯甲烷；DEA指二乙胺；DEAD指二乙基偶氮二羧酸根；DEPC指二乙基磷酰基氰酸根；DIAD指二异丙基偶氮二羧酸根；DIEA指N，n-二异丙基乙胺；dil指dolaisoleucine；DMA指二甲基乙酰胺；DMAP指4-二甲基氨基吡啶；DME指乙二醇二甲基醚(或1，2-二甲氧乙烷)；DMF指N，n-二甲基甲酰胺；DMSO指二甲基亚砜；doe指dolaphenine；dov指N，n-二甲基缬氨酸；DTNB指5，5’-二硫双(2-硝基苯甲酸)；DTPA指二乙烯三胺五乙酸；DTT指二硫苏糖醇；EDCI指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺氢氯化物；EEDQ指2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢喹啉；ES-MS指电喷雾质谱；EtOAc指乙酸乙酯；Fmoc指正-(9-芴基甲氧羰基)；gly指甘氨酸；HATU指O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯；HOBt指1-羟基苯并三唑；HPLC指高压液相层析；ile指异亮氨酸；lys指赖氨酸；MeCN(CH3CN)指乙腈；MeOH指甲醇；Mtr指4-茴香基联苯基甲基(或4-甲氧基三苯甲基)；nor指(1S；2R)-(+)-去甲麻黄碱；PBS指磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)；PEG指聚乙二醇；Ph指苯基；Pnp指对硝基苯基；MC指6-马来酰亚氨基己酰基；phe指L-苯丙氨酸；PyBrop指溴三吡咯烷膦六氟磷酸酯；SEC指大小排阻层析；Su指琥珀酰亚胺；TFA指三氟乙酸；TLC指薄层层析；UV指紫外线；而val指缬氨酸。
“游离半胱氨酸”指已经工程改造入亲本抗体的、具有硫醇官能基(-SH)的、且没有配对成为分子内或分子间二硫桥的半胱氨酸残基。
术语“硫醇反应性值(thio reactivity value)”是游离半胱氨酸氨基酸的反应性的定量表征。硫醇反应性值指经过半胱氨酸工程改造的抗体中与硫醇反应性试剂反应的游离半胱氨酸氨基酸的百分比，且换算成最大值1。例如，经过半胱氨酸工程改造的抗体上与硫醇反应性试剂(诸如生物素-马来酰亚胺试剂)以100％产率反应(以形成生物素标记的抗体)的游离半胱氨酸氨基酸具有1.0的硫醇反应性值。已工程改造入相同或不同亲本抗体、与硫醇反应性试剂以80％产率反应的另一个半胱氨酸氨基酸具有0.8的硫醇反应性值。已工程改造入相同或不同亲本抗体、完全不能与硫醇反应性试剂反应的另一个半胱氨酸氨基酸具有0的硫醇反应性值。特定半胱氨酸的硫醇反应性值的测定可以通过ELISA测定法、质谱、液相层析、放射自显影或其它定量分析测试来进行。
“亲本抗体”指包含其中一个或多个氨基酸残基有待用一个或多个半胱氨酸残基替换的氨基酸序列的抗体。亲本抗体可以包含天然的或野生型的序列。亲本抗体可具有相对于其它天然的、野生型的或修饰形式的抗体而言的现有氨基酸序列修饰(诸如添加、删除和/或替代)。亲本抗体可以针对感兴趣的靶抗原，例如生物学重要的多肽。还涵盖针对非多肽抗原(诸如肿瘤相关糖脂抗原；参见US 5091178)的抗体。
表1
/*
 *
 *C-C increased from 12 to 15
 *Z is average of EQ
 *B is average of ND
 *match with stop is _M；stop-stop＝0；J (joker)match＝0
 */
#define_M   -8        /*value of a match with a stop */
int    _day[26][26]＝{
/*        A  B  C  D  E  F  G  H  I  J  K  L  M  N  O  P  Q  R  S  T  U  V  W  X  Y  Z */
/*A*/    {2，0，-2，0，0，-4，1，-1，-1，0，-1，-2，-1，0，_M，1，0，-2，1，1，0，0，-6，0，-3，0}，
/*B*/    {0，3，-4，3，2，-5，0，1，-2，0，0，-3，-2，2，_M，-1，1，0，0，0，0，-2，-5，0，-3，1}，
/*C*/    {-2，-4，15，-5，-5，-4，-3，-3，-2，0，-5，-6，-5，-4，_M，-3，-5，-4，0，-2，0，-2，-8，0，0，-5}，
/*D*/    {0，3，-5，4，3，-6，1，1，-2，0，0，-4，-3，2，_M，-1，2，-1，0，0，0，-2，-7，0，-4，2}，
/*E*/    {0，2，-5，3，4，-5，0，1，-2，0，0，-3，-2，1，_M，-1，2，-1，0，0，0，-2，-7，0，-4，3}，
/*F*/    {-4，-5，-4，-6，-5，9，-5，-2，1，0，-5，2，0，-4，_M，-5，-5，-4，-3，-3，0，-1，0，0，7，-5}，
/*G*/    {1，0，-3，1，0，-5，5，-2，-3，0，-2，-4，-3，0，_M，-1，-1，-3，1，0，0，-1，-7，0，-5，0}，
/*H*/    {-1，1，-3，1，1，-2，-2，6，-2，0，0，-2，-2，2，_M，0，3，2，-1，-1，0，-2，-3，0，0，2}，
/*I*/    {-1，-2，-2，-2，-2，1，-3，-2，5，0，-2，2，2，-2，_M，-2，-2，-2，-1，0，0，4，-5，0，-1，-2}，
/*J*/    {0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，_M，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0}，
/*K*/    {-1，0，-5，0，0，-5，-2，0，-2，0，5，-3，0，1，_M，-1，1，3，0，0，0，-2，-3，0，-4，0}，
/*L*/    {-2，-3，-6，-4，-3，2，-4，-2，2，0，-3，6，4，-3，_M，-3，-2，-3，-3，-1，0，2，-2，0，-1，-2}，
/*M*/    {-1，-2，-5，-3，-2，0，-3，-2，2，0，0，4，6，-2，_M，-2，-1，0，-2，-1，0，2，-4，0，-2，-1}，
/*N*/    {0，2，-4，2，1，-4，0，2，-2，0，1，-3，-2，2，_M，-1，1，0，1，0，0，-2，-4，0，-2，1}，
/*O*/    {_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，0，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M，_M}，
/*P*/    {1，-1，-3，-1，-1，-5，-1，0，-2，0，-1，-3，-2，-1，_M，6，0，0，1，0，0，-1，-6，0，-5，0}，
/*Q*/    {0，1，-5，2，2，-5，-1，3，-2，0，1，-2，-1，1，_M，0，4，1，-1，-1，0，-2，-5，0，-4，3}，
/*R*/    {-2，0，-4，-1，-1，-4，-3，2，-2，0，3，-3，0，0，_M，0，1，6，0，-1，0，-2，2，0，-4，0}，
/*S*/    {1，0，0，0，0，-3，1，-1，-1，0，0，-3，-2，1，_M，1，-1，0，2，1，0，-1，-2，0，-3，0}，
/*T*/    {1，0，-2，0，0，-3，0，-1，0，0，0，-1，-1，0，_M，0，-1，-1，1，3，0，0，-5，0，-3，0}，
/*U*/    {0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，_M，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0}，
/*V*/    {0，-2，-2，-2，-2，-1，-1，-2，4，0，-2，2，2，-2，_M，-1，-2，-2，-1，0，0，4，-6，0，-2，-2}，
/*W*/    {-6，-5，-8，-7，-7，0，-7，-3，-5，0，-3，-2，-4，-4，_M，-6，-5，2，-2，-5，0，-6，17，0，0，-6}，
/*X*/    {0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，_M，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0，0}，
/*Y*/    {-3，-3，0，-4，-4，7，-5，0，-1，0，-4，-1，-2，-2，_M，-5，-4，-4，-3，-3，0，-2，0，0，10，-4}，
/*Z*/    {0，1，-5，2，3，-5，0，2，-2，0，0，-2，-1，1，_M，0，3，0，0，0，0，-2，-6，0，-4，4}
}；
                                Table 1(cont’)
/*
 */
#include <stdio.h>
#include <ctype.h>
#defineMAXJMP    16    /*max jumps in a diag */
#defineMAXGAP    24    /*don′t continue to penalize gaps larger than this */
#defineJMPS      1024  /*max jmps in an path */
#defineMX        4     /*save if there′s at least MX-1 bases since last jmp */
#defineDMAT      3     /*value of matching bases */
#defineDMIS      0     /*penalty for mismatched bases */
#defineDINS0     8     /*penalty for a gap */
#defineDINS1     1     /*penalty per base */
#definePINS0     8     /*penalty for a gap */
#definePINS1     4     /*penalty per residue */
struct jmp {
        short       n[MAXJMP]；/*size of jmp (neg for dely) */
        unsigned short   x[MAXJMP]；/*base no.of jmp in seq x */
}；                           /*limits seq to 2^16-1 */
struct diag {
        int          score；  /*score at last jmp */
        long         offset； /*offset of prey block */
        short        ijmp；   /*current jmp index */
        struct jmp   jp；     /*list of jmps */
}；
struct path {
        int    spc；    /*number of leading spaces* /
        short  n[JMPS]；/*size of jmp(gap) */
        int    x[JMPS]；/*loc of jmp(last elem before gap) */
}；
char         *ofile；        /*output file name */
char         *namex[2]；     /*seq names:getseqs() */
char         *prog；         /*prog name for err msgs */
char         *seqx[2]；      /*seqs:getseqs() */
int          dmax；          /*best diag:nw() */
int          dmax0；         /*final diag */
int          dna；           /*set ifdna:main() */
int          endgaps；       /*set if penalizing end gaps */
int          gapx，gapy；    /*total gaps in seqs */
int          len0，len1；    /*seq lens */
int          ngapx，ngapy；  /*total size of gaps */
int          smax；          /*max score:nw() */
int          *xbm；          /*bitmap for matching */
long         offset；        /*current offset in jmp file */
struct diag  *dx；           /*holds diagonals */
struct path  pp[2]；         /*holds path for seqs */
char         *calloc()，*malloc()，*index()，*strcpy()；
char         *getseq()，*g_calloc()；
                    Table 1(cont’)
/*Needleman-Wunsch alignment program
 *
 *usage:progs file1 file2
 *    where file1 and file2 are two dna or two protein sequences.
 *    The sequences can be in upper-or lower-case an may contain ambiguity
 *    Any lines beginning with ′；′，′＞′or ′＜′are ignored
 *    Max file length is 65535(limited by unsigned short x in the jmp struet)
 *    A sequence with 1/3 or more of its elements ACGTU is assumed to be DNA
 *    Output is in the file ″align.out″
 *
 *The program may create a tmp file in/tmp to hold info about traceback.
 *Original version developed under BSD 4.3 on a vax 8650
 */
#include ″nw.h″
#include ″day.h″
static _dbval[26]＝{
       1，14，2，13，0，0，4，11，0，0，12，0，3，15，0，0，0，5，6，8，8，7，9，0，10，0
}；
static _pbval[26]＝{
       1，2|(1＜＜(′D′-′A′))|(1＜＜(′N′-′A′))，4，8，16，32，64，
       128，256，0xFFFFFFF，1＜＜10，1＜＜11，1＜＜12，1＜＜13，1＜＜14，
       1＜＜15，1＜＜16，1＜＜17，1＜＜18，1＜＜19，1＜＜20，1＜＜21，1＜＜22，
       1＜＜23，1＜＜24，1＜＜25|(1＜＜(′E′-′A′))|(1＜＜(′Q′-′A′))
}；
main(ac，av)                                                                        main
       int    ac；
       char   *av[]；
{
       prog＝av[0]；
       if(ac ！＝3){
                fprintf(stderr，″usage:％s file1 file2\n″，prog)；
                fprintf(stderr，″where file1 and file2 are two dna or two protein sequences.\n″)；
                fprintf(stderr，″The sequences can be in upper-or lower-case\n″)；
                fprintf(stderr，″Any lines beginning with ′；′or ′＜′are ignored\n″)；
                fprintf(stderr，″Output is in the file \″align.out\″\n″)；
                exit(1)；
        }
        namex[0]＝av[1]；
        namex[1]＝av[2]；
        seqx[0]＝getseq(namex[0]，&len0)；
        seqx[1]＝getseq(namex[1]，&len1)；
        xbm＝(dna)？_dbval:_pbval；
        endgaps ＝0；        /*1 to penalize endgaps */
        ofile ＝″align.out″；     /*output file */
        nw()；        /*fill in the matrix，get the possible jmps */
        readjmps()；  /*get the actual jmps */
        print()；     /*print stats，alignment */
        cleanup(0)；  /*unlink any tmp files */}
                            Table 1(cont’)
/*do the alignment，return best score:main()
 *dna:values in Fitch and Smith，PNAS，80，1382-1386，1983
 *pro:PAM 250 values
 *When scores are equal，we prefer mismatches to any gap，prefer
 *a new gap to extending an ongoing gap，and prefer a gap in seqx
 *to a gap in seq y.
 */
nw()                                                                        nw
{
    char         *px，*py；             /*seqs and ptrs */
    int          *ndely，*dely； /*keep track ofdely */
    int          ndelx，delx；   /*keep track of delx */
    int          *tmp；          /*for swapping row0，row1 */
    int          mis；           /*score for each type */
    int          ins0，ins1；    /*insertion penalties */
    register             id；            /*diagonal index */
    register             ij；            /*jmp index */
    register             *col0，*col1；  /*score for curr，last row */
    register             xx，yy；        /*index into seqs */
    dx＝(struct diag *)g_calloc(″to get diags″，len0+len1+1，sizeof(struct diag))；
    ndely＝(int *)g_calloc(″to get ndely″，len1+1，sizeof(int))；
    dely＝(int *)g_calloc(″to get dely″，len1+1，sizeof(int))；
    col0＝(int *)g_calloc(″to get col0″，len1+1，sizeof(int))；
    col1＝(int *)g_calloc(″to get col1″，len1+1，sizeof(int))；
    ins0＝(dna)？DINS0:PINS0；
    ins1＝(dna)？DINS1:PINS1；
    smax＝-10000；
    if(endgaps){
           for(col0[0]＝dely[0]＝-ins0，yy ＝1；yy＜＝len1；yy++){
                 col0[yy]＝dely[yy]＝col0[yy-1]-ins1；
                 ndely[yy]＝yy；
           }
           col0[0]＝0；/*Waterman Bull Math Biol 84*/
    }
    else
           for(yy＝1；yy＜＝len1；yy++)
                 dely[yy]＝-ins0；
    /*fill in match matrix
     */
    for(px＝seqx[0]，xx ＝1；xx＜＝len0；px++，xx++){
          /*initialize first entry in col
           */
          if(endgaps){
                 if(xx＝＝1)
                      col1[0]＝delx＝-(ins0+ins1)；
                 else
                      col1[0]＝delx＝col0[0]-ins1；
                 ndelx＝xx；
          }
          else{
                 col1[0]＝0；
                 delx＝-ins0；
                 ndelx＝0；
               }
                            Table 1(cont’)
                                                                            ...nw
for(py＝seqx[1]，yy＝1；yy＜＝len1；py++，yy++){
       mis＝col0[yy-1]；
       if(dna)
           mis+＝(xbm[*px-′A′]&xbm[*py-′A′])？DMAT:DMIS；
       else
           mis+＝_day[*px-′A′][*py-′A′]；
       /*update penalty for del in x seq；
        *favor new del over ongong del
        *ignore MAXGAP if weighting endgaps
        */
       if(endgaps||ndely[yy]＜MAXGAP){
              if(col0[yy]-ins0＞＝dely[yy]){
                      dely[yy]＝col0[yy]-(ins0+ins1)；
                      ndely[yy]＝1；
              }else{
                      dely[yy]-＝ins1；
                      ndely[yy]++；
              }
       }else {
              if(col0[yy]-(ins0+ins1)＞＝dely[yy]){
                     dely[yy]＝col0[yy]-(ins0+ins1)；
                     ndely[yy]＝1；
              }else
                     ndely[yy]++；
       }
      /*update penalty for del in y seq；
       *favor new del over ongong del
       */
      if(endgaps||ndelx＜MAXGAP){
             if(col1[yy-1]-ins0＞＝delx){
                    delx＝col1[yy-1]-(ins0+ins1)；
                    ndelx＝1；
             }else {
                    delx-＝ins1；
                    ndelx++；
             }
       }else{
             if(col1[yy-1]-(ins0+ins1)＞＝delx){
                    delx＝col1[yy-1]-(ins0+insl)；
                    ndelx＝1；
             }else
                    ndelx++；
       }
       /*pick the maximum score；we′re favoring
        *mis over any del and delx over dely
        */
                                                                                  ...nw
       id＝xx-yy+len1-1；
       if(mis＞＝delx &&mis＞＝dely[yy])
             col1[yy]＝mis；
                        Table 1(cont’)
             else if(delx＞＝dely[yy]){
                     col1[yy]＝delx；
                     ij＝dx[id].ijmp；
                     if(dx[id].jp.n[0]&&(！dna||(ndelx＞＝MAXJMP
                     &&xx＞dx[id].jp.x[ij]+MX)||mis＞dx[id].score+DINS0)){
                         dx[id].ijmp++；
                         if(++ij＞＝MAXJMP){
                                writejmps(id)；
                                ij＝dx[id].ijmp＝0；
                                dx[id].offset＝offset；
                                offset+＝sizeof(struct jmp)+sizeof(offset)；
                         }
                      }
                      dx[id].jp.n[ij]＝ndelx；
                      dx[id].jp.x[ij]＝xx；
                      dx[id].score＝delx；
             }
             else{
                      col1[yy]＝dely[yy]；
                      ij＝dx[id].ijmp；
if(dx[id].jp.n[0]&&(！dna||(ndely[yy]＞＝MAXJMP
                      &&xx＞dx[id].jp.x[ij]+MX)||mis ＞dx[id].score+DINS0)){
                          dx[id].ijmp++；
                          if(++ij＞＝MAXJMP){
                                  writejmps(id)；
                                  ij ＝dx[id].ijmp＝0；
                                  dx[id].offset＝offset；
                                  offset+＝sizeof(struct jmp)+sizeof(offset)；
                          }
                      }
                      dx[id].jp.n[ij]＝-ndely[yy]；
                      dx[id].jp.x[ij]＝xx；
                      dx[id].score＝dely[yy]；
             }
             if(xx＝＝len0&&yy＜len1){
                     /*last col
                      */
                     if(endgaps)
                            col1[yy]-＝ins0+ins1*(len1-yy)；
                     if(col1[yy]＞smax){
                            smax＝col1[yy]；
                             dmax＝id；
                     }
              }
     }
    if(endgaps &&xx＜len0)
            col1[yy-1]-＝ins0+ins1*(len0-xx)；
    if(col1[yy-1]＞smax){
            smax＝col1[yy-1]；
            dmax＝id；
    }
                                            tmp＝col0；col0＝col1；col1＝tmp；         }
(void)free((char *)ndely)；
(void)free((char *)dely)；
(void)free((char *)col0)；
                                      (void)free((char *)col1)；                  }
                    Table 1(cont’)
/*
 *
 *print()--only routine visible outside this module
 *
 *static:
 *getmat()--trace back best path，count matches:print()
 *pr_align()--print alignment of described in array p[]:print()
 *dumpblock()--dump a block of lines with numbers，stars:pr_align()
 *nums()--put out a number line:dumpblock()
 *putline()--put out aline(name，[num]，seq，[nurm]):dumpblock()
 *stars()--put a line of stars:dumpblock()
 *stripname()--strip any path and prefix from a seqname
 */
#include ″nw.h″
#define SPC 3
#define P_LINE     256    /*maximum output line */
#define P_SPC3     /*space between name or num and seq */
extern _day[26][26]；
int    olen；      /*set output line length */
FILE   *fx；       /*output file */
print()                                                                        print
{
       int    lx，ly，firstgap，lastgap；/*overlap */
       if((fx＝fopen(ofile，″w″))＝＝0){
               fprintf(stderr，″％s:can′t write ％s\n″，prog，ofile)；
               cleanup(1)；
       }
       fprintf(fx，″＜first sequence:％s(length ＝％d)\n″，namex[0]，len0)；
       fprintf(fx，″＜second sequence:％s(length ＝％d)\n″，namex[1]，len1)；
       olen＝60；
       lx＝len0；
       ly＝len1；
       firstgap＝lastgap＝0；
       if(dmax＜len1-1){/*leading gap in x */
              pp[0].spc＝firstgap＝len1-dmax-1；
              ly-＝pp[0].spc；
       }
       else if(dmax＞len 1-1){    /*leading gap in y */
              pp[1].spc＝firstgap＝dmax-(len1-1)；
              lx-＝pp[1].spc；
       }
       if(dmax0＜len0-1){/*trailing gap in x */
              lastgap＝len0-dmax0-1；
              lx-＝lastgap；
       }   
       else if(dmax0＞len0-1){    /*trailing gap in y */
              lastgap＝dmax0-(len0-1)；
              ly-＝lastgap；
       }
       getmat(lx，ly，firstgap，lastgap)；
                   pr_align()；    }
                Table 1(cont’)
/*
 *trace back the best path，count matches
 */
static
getmat(lx，ly，firstgap，lastgap)                                                getmat
       int       lx，ly；        /*″core″(minus endgaps)*/
       int       firstgap，lastgap；     /*leading trailing overlap */
{
       int               nm，i0，i1，siz0，siz1；
       char              outx[32]；
       double            pct；
       register                  n0，n1；
       register char     *p0，*p1；
       /*get total matches，score
        */
       i0＝i1＝siz0＝siz1＝0；
       p0＝seqx[0]+pp[1].spc；
       p1＝seqx[1]+pp[0].spc；
       n0＝pp[1].spc+1；
       n1＝pp[0].spc+1；
       nm＝0；
       while(*p0&&*p1){
             if(siz0){
                     p1++；
                     n1++；
                     siz0--；
             }
             else if(siz1){
                     p0++；
                     n0++；
                     siz1--；
             }
             else{
                     if(xbm[*p0-′A′]&xbm[*p1-′A′])
                           nm++；
                     if(n0++＝＝pp[0].x[i0])
                           siz0＝pp[0].n[i0++]；
                     if(n1++＝＝pp[1].x[i1])
                           siz1＝pp[1].n[i1++]；
                     p0++；
                     p1++；
             }
    }
    /*pct homology:
      *ifpenalizing endgaps，base is the shorter seq
      *else，knock off overhangs and take shorter core
      */
    if(endgaps)
           lx＝(len0＜len1)？len0:len1；
    else
             lx＝(lx ＜ly)？lx:ly；
    pct＝100.*(double)nm/(double)lx；
    fprintf(fx，″\n″)；
    fprintf(fx，″＜％d match％s in an overlap of ％d:％.2f percent similarity\n″，
             nm，(nm＝＝1)？″″:″es″，lx，pct)；
                                  Table 1(cont’)
       fprintf(fx，″＜gaps in first sequence:％d″，gapx)；                         ...getmat
     if(gapx){
             (void)sprintf(outx，″(％d％s％s)″，
                    ngapx，(dna)？″base″:″residue″，(ngapx＝＝1)？″″:″s″)；
             fprintf(fx，″％s″，outx)；
     fprintf(fx，″，gaps in second sequence:％d″，gapy)；
     if(gapy){
             (void)sprintf(outx，″(％d％s％s)″，
                    ngapy，(dna)？″base″:″residue″，(ngapy＝＝1)？″″:″s″)；
             fprintf(fx，″％s″，outx)；
     }
     if(dna)
             fprintf(fx，
             ″\n＜score:％d(match＝％d，mismatch＝％d，gap penalty＝％d +％d per base)\n″，
             smax，DMAT，DMIS，DINS0，DINS1)；
     else
             fprintf(fx，
             ″\n＜score:％d (Dayhoff PAM 250 matrix，gap penalty＝％d+％d per residue)\n″，
             smax，PINS0，PINS1)；
     if (endgaps)
              fprintf(fx，
             ″＜endgaps penalized.left endgap:％d％s％s，right endgap:％d％s％s\n″，
             firstgap，(dna)？″base″:″residue″，(firstgap＝＝1)？″″:″s″，
             lastgap，(dna)？″base″:″residue″，(lastgap＝＝1)？″″:″s″)；
     else
             fprintf(fx，″＜endgaps not penalized\n″)；
}
 static      nm；          /*matches in core--for checking */
 static      lmax；        /*lengths of stripped file names */
 static      ij[2]；       /*jmp index for a path */
 static      nc[2]；       /*number at start of current line */
 static      ni[2]；       /*current elem number--for gapping */
 static      siz[2]；
 static char *ps[2]；      /*ptr to current element */
 static char *po[2]；      /*ptr to next output char slot */
 static char out[2][P_LINE]；    /*output line */
 static char star[P_LINE]；/*set by stars() */
/*
 *print alignment of described in struct path pp[]
 */
static
pr_align()                                                                pr_align
{
        int          nn；/*char count */
        int          more；
        register         i；
        for(i＝0，lmax＝0；i＜2；i++){
               nn＝stripname(namex[i])；
               if(nn＞lmax)
                      lmax＝nn；
               nc[i]＝1；
               ni[i]＝1；
               siz[i]＝ij[i]＝0；
               ps[i]＝seqx[i]；
                                             po[i]＝out[i]；            }
                    Table 1(cont’)
    for(nn＝nm＝0，more＝1；more；){                                    ...pr_align
         for(i＝more＝0；i＜2；i++){
                /*
                 *do we have more of this sequence？
                 */
                if(！*ps[i])
                        continue；
                more++；
                if(pp[i].spc){/*leading space */
                        *po[i]++＝′′；
                        pp[i].spc--；
                }
                else if(siz[i]){/*in a gap */
                        *po[i]++＝′-′；
                        siz[i]--；
                }
                else{            /*we′re putting a seq element
                                  */
                        *po[i]＝*ps[i]；
                        if(islower(*ps[i]))
                               *ps[i]＝toupper(*ps[i])；
                        po[i]++；
                        ps[i]++；
                        /*
                         *are we at next gap for this seq？
                         */
                        if(ni[i]＝＝pp[i].x[ij[i]]){
                               /*
                                *we need to merge all gaps
                                *at this location
                                */
                              siz[i]＝pp[i].n[ij[i]++]；
                              while(ni[i]＝＝pp[i].x[ij[i]])
                                    siz[i]+＝pp[i].n[ij[i]++]；
                        }
                        ni[i]++；
                 }
        }
        if(++nn＝＝olen||！more &&nn){
              dumpblock()；
              for(i＝0；i＜2；i++)
                     po[i]＝out[i]；
              nn＝0；
        }
    }
}
/*
 *dump a block of lines，including numbers，stars:pr_align()
 */
static
dumpblock()                                                                   dumpblock
{
     register      i；
     for(i＝0；i＜2；i++)
            *po[i]--＝′\0′；
                    Table 1(cont’)
      (void)putc(′\n′，fx)；                                      ...dumpblock
      for(i＝0；i＜2；i++){
             if(*out[i]&&(*out[i]！＝″||*(po[i])！＝″)){
                    if(i＝＝0)
                            nums(i)；
                    if(i＝＝0&&*out[1])
                            stars()；
                    putline(i)；
                    if(i＝＝0&&*out[1])
                            fprintf(fx，star)；
                    if(i＝＝1)
                            nums(i)；
             }
       }
}
/*
 *put out a number line:dumpblock()
 */
static
nums(ix)                                                                  nums
       int    ix；/*index in out[]holding seq line */
{
       char        nline[P_LINE]；
       register            i，j；
       register char *pn，*px，*py；
       for(pn＝nline，i＝0；i＜lmax+P_SPC；i++，pn++)
              *pn＝′′；
       for(i＝nc[ix]，py＝out[ix]；*py；py++，pn++){
              if(*py＝＝′′||*py＝＝′-′)
                    *pn＝′′；
              else{
                    if(i％10＝＝0||(i＝＝1&&nc[ix]！＝1)){
                           j＝(i＜0)？-i:i；
                           for(px＝pn；j；j/＝10，px--)
                                 *px＝j％10+′0′；
                           if(i＜0)
                                 *px ＝′-′；
                    }
                    else
                           *pn＝′′；
                    i++；
             }
       }
       *pn＝′\0′；
       nc[ix]＝i；
       for(pn＝nline；*pn；pn++)
             (void)putc(*pn，fx)；
       (void)putc(′\n′，fx)；
}
/*
 *put out a line(name，[num]，seq，[num]):dumpblock()
 */
static
putline(ix)                                                        putline
                             int ix；             {
                                  Table 1(cont’)
                                                                            ...putline
    int           i；
    register char *px；
    for(px＝namex[ix]，i＝0；*px&&*px！＝′:′；px++，i++)
             (void)putc(*px，fx)；
    for (；i＜lmax+P_SPC；i++)
           (void)putc(′′，fx)；
    /*these count from 1:
     *ni[]is current element(from 1)
     *nc[]is number at start of current line
     */
    for(px＝out[ix]；*px；px++)
          (void)putc(*px&0x7F，fx)；
    (void)putc(′\n′，fx)；
}
/*
 *put a line of stars (seqs always in out[0]，out[1]):dumpblock()
 */
static
stars()                                                                       stars
{
    int           i；
    register char *p0，*p1，cx，*px；
    if(！*out[0]||(*out[0]＝＝″&&*(po[0])＝＝″)||
          ！*out[1]||(*out[1]＝＝″&&*(po[1])＝＝″))
             return；
    px＝star；
    for(i＝lmax+P_SPC；i；i--)
           *px++＝′′；
    for(p0＝out[0]，p1＝out[1]；*p0&&*p1；p0++，p1++){
          if(isalpha(*p0)&&isalpha(*p1)){
                  if(xbm[*p0-′A′]&xbm[*p1-′A′]){
                         cx＝′*′；
                         nm++；
                  }
                  else if(！dna &&_day[*p0-′A′][*p 1-′A′]＞0)
                          cx＝′.′；
                  else
                          cx＝′′；
          }
          else
                  cx＝′′；
          *px++＝cx；
    }
    *px++＝′\n′；
    *px＝′\0′；
} 
                    Table 1(cont’)
/*
 *strip path or prefix from pn，return len:pr_align()
 */
static
stripname(pn)                                                    stripname
        char *pn；/*file name(may be path)*/
{
        register char *px，*py；
        py＝0；
        for(px＝pn；*px；px++)
              if(*px＝＝′/′)
                    py＝px+1；
        if(py)
              (void)strcpy(pn，py)；
        return(strlen(pn))；
}
                        Table 1(cont’)
/*
 *cleanup()--cleanup any tmp file
 *getseq()--read in seq，set dna，len，maxlen
 *g_calloc()--calloc()with error checkin
 *readjmps()--get the good jmps，from tmp file if necessary
 *writejmps()--write a filled array ofjmps to a tmp file:nw()
 */
#include ″nw.h″
#include<sys/file.h>
char  *jname＝″/tmp/homgXXXXXX″；        /*tmp file forjmps */
FILE  *fj；
int   cleanup()；                /*cleanup tmp file */
long  lseek()；
/*
 *remove any tmp file if we blow     */
cleanup(i)                                                                cleanup
        int    i；
{
        if(fj)
               (void)unlink(jname)；
        exit(i)；
}
/*
 *read，return ptr to seq，set dna，len，maxlen
 *skip lines starting with ′；′，′＜′，or ′＞′
 *seq in upper or lower case
 */
char  *
getseq(file，len)                                                        getseq
        char  *file； /*file name */
        int    *len； /*seq len */
{
        char          line[1024]，*pseq；
        register char *px，*py；
        int           natgc，tlen；
        FILE          *fp；
        if((fp＝fopen(file，″r″))＝＝0){
               fprintf(stderr，″％s:can′t read％s\n″，prog，file)；
               exit(1)；
        }
        tlen＝natgc＝0；
        while(fgets(line，1024，fp)){
               if(*line＝＝′；′||*line＝＝′＜′||*line＝＝′＞′)
                       continue；
               for(px＝line；*px ！＝′\n′；px++)
                     if(isupper(*px)||islower(*px))
                             tlen++；
        }
        if((pseq＝malloc((unsigned)(tlen+6)))＝＝0){
               fprintf(stderr，″％s:malloc()failed to get％d bytes for ％s\n″，prog，tlen+6，file)；
               exit(1)；
        }
        pseq[0]＝pseq[1]＝pseq[2]＝pseq[3]＝′\0′；
                                Table 1(cont’)
                                                                          ...getseq
    py＝pseq+4；
    *len＝tlen；
    rewind(fp)；
    while(fgets(line，1024，fp)){
           if(*line＝＝′；′||*line＝＝′＜′||*line＝＝′＞′)
                 continue；
           for(px＝line；*px！＝′\n′；px++){
                 if(isupper(*px))
                         *py++＝*px；
                 else if(islower(*px))
                         *py++＝toupper(*px)；
                 if(index(″ATGCU″，*(py-1)))
                         natgc++；
           }
     }
     *py++＝′\0′；
     *py＝′\0′；
     (void)fclose(fp)；
     dna＝natgc＞(tlen/3)；
     return(pseq+4)；
}
char   *
g_calloc(msg，nx，sz)                                                        g_calloc
       char  *msg；    /*program，calling routine */
       int   nx，sz；  /*number and size of elements */
{
       char         *px，*calloc()；
       if((px＝calloc((unsigned)nx，(unsigned)sz))＝＝0){
              if(*msg){
                     fprintf(stderr，″％s:g_calloc()failed％s(n＝％d，sz＝％d)\n″，prog，msg，nx，sz)；
                     exit(1)；
              }
       }
       return(px)；
}
/*
 *get final jmps from dx[]or tmp file，set pp[]，reset dmax:main()
 */
readjmps()                                                                  readjmps
{
       int          fd＝-1；
       int          siz，i0，i1；
       register     i，j，xx；
       if(fj) {
               (void)fclose(fj)；
               if((fd＝open(jname，O_RDONLY，0))＜0){
                       fprintf(stderr，″％s:can′t open()％s\n″，prog，jname)；
                       cleanup(1)；
               }
      }
      for(i＝i0＝i1＝0，dmax0＝dmax，xx＝len0；；i++){
             while(1){
                    for(j＝dx[dmax].ijmp；j＞＝0&&dx[dmax].jp.x[j]＞＝xx；j--)
                           ；
                        Table 1(cont’)
                                                                           ...readjmps
                  if(j＜0&&dx[dmax].offset &&fj){
                         (void)lseek(fd，dx[dmax].offset，0)；
                         (void)read(fd，(char*)&dx[dmax].jp，sizeof(struct jmp))；
                         (void)read(fd，(char*)&dx[dmax].offset，sizeof(dx[dmax].offset))；
                         dx[dmax].ijmp＝MAXJMP-1；                }
                  else
                         break；        }
          if(i＞＝JMPS){
                  fprintf(stderr，″％s:too many gaps in alignment\n″，prog)；
                  cleanup(1)；
          }
          if(j＞＝0){
                  siz＝dx[dmax].jp.n[j]；
                  xx＝dx[dmax].jp.x[j]；
                  dmax+＝siz；
                  if(siz＜0){            /*gap in second seq */
                         pp[1].n[i1]＝-siz；
                         xx+＝siz；
                         /*id＝xx -yy+len1-1                */
                         pp[1].x[il]＝xx-dmax+len1-1；
                         gapy++；
                         ngapy-＝siz；
/*ignore MAXGAP when doing endgaps */
                         siz＝(-siz＜MAXGAP||endgaps)？-siz:MAXGAP；
                         i1++；
                 }
                 else if(siz＞0){     /*gap in first seq */
                         pp[0].n[i0]＝siz；
                         pp[0].x[i0]＝xx；
                         gapx++；
                         ngapx+＝siz；
/*ignore MAXGAP when doing endgaps */
                         siz＝(siz＜MAXGAP||endgaps)？siz:MAXGAP；
                         i0++；
                 }
            }
           else
                 break；
        }
        /*reverse the order of jmps    */
        for(j＝0，i0--；j＜i0；j++，i0--){
               i＝pp[0].n[j]；pp[0].n[j]＝pp[0].n[i0]；pp[0].n[i0]＝i；
               i＝pp[0].x[j]；pp[0].x[j]＝pp[0].x[i0]；pp[0].x[i0]＝i；
        }
        for(j＝0，i1--；j＜i1；j++，i1--){
               i＝pp[1].n[j]；pp[1].n[j]＝pp[1].n[i1]；pp[1].n[i1]＝i；
               i＝pp[1].x[j]；pp[1].x[j]＝pp[1].x[i1]；pp[1].x[i1]＝i；
        }
        if(fd＞＝0)
              (void)close(fd)；
        if(fj){
              (void)unlink(jname)；
              fj＝0；
              offset＝0；
                                     }                    }
                                Table 1(cont’)
/*
 *write a filled jmp struct offset of the prev one (ifany):nw()
 */
writejmps(ix)                                                                writejmps
       int        ix；
{
       char       *mktemp()；
       if (！fj){
                  if (mktemp(jname)＜0){
                          fprintf(stderr，″％s:can′t mktemp() ％s\n″，prog，jname)；
                          cleanup(1)；
                  }
                  if((fj＝fopen(jname，″w″))＝＝0){
                          fprintf(stderr，″％s:can′t write ％s\n″，prog，jname)；
                          exit(1)；
                  }
       }
      (void)fwrite((ehar *)&dx[ix]jp，sizeof(struct jmp)，1，fj)；
      (void)fwrite((char *)&dx[ix].offset，sizeof(dx[ix].offset)，1，fj)；
}
III.本发明的组合物和方法
本发明提供了抗CD79b抗体或其功能性片段，及其在造血肿瘤治疗中的使用方法。
一方面，本发明提供了一种与任何上文或下文所述多肽结合(优选特异性结合)的抗体。任选的是，所述抗体是单克隆抗体、抗体片段(包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段)、双抗体、单域抗体、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体或竞争性抑制抗CD79b多肽抗体结合其相应抗原性表位的抗体。本发明的抗体可任选偶联至生长抑制剂或细胞毒剂，诸如毒素，包括例如auristatin、美登木素生物碱、多拉司他汀衍生物或加利车霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶、诸如此类。本发明的抗体可任选在CHO细胞或细菌细胞中生成，且优选诱导它们所结合的细胞死亡。出于检测目的，本发明的抗体可以是可检测标记的，附着至固体支持物的，诸如此类。
一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中该抗体对CD79b的单价亲和力(例如Fab片段形式的抗体对CD79b的亲和力)与鼠抗体(例如Fab片段形式的鼠抗体对CD79b的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式的嵌合抗体对CD79b的亲和力)的单价亲和力基本上相同，所述鼠抗体或嵌和抗体包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列，由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成，或基本上由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中该抗体对CD79b的单价亲和力(例如Fab片段形式的抗体对CD79b的亲和力)比鼠抗体(例如Fab片段形式的鼠抗体对CD79b的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式的嵌合抗体对CD79b的亲和力)的单价亲和力低，例如低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55或60倍，所述鼠抗体或嵌和抗体包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列，由图7A-B(SEQID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成，或基本上由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中该抗体对CD79b的单价亲和力(例如Fab片段形式的抗体对CD79b的亲和力)比鼠抗体(例如Fab片段形式的鼠抗体对CD79b的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式的嵌合抗体对CD79b的亲和力)的单价亲和力高，例如高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍，所述鼠抗体或嵌和抗体包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列，由图7A-B(SEQ IDNO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成，或基本上由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成。
一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)与二价形式的鼠抗体(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)或嵌合抗体(例如Fab片段形式的嵌合抗体对CD79b的亲和力)的亲和力基本上相同，所述鼠抗体或嵌和抗体包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列，由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成，或基本上由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)比二价形式的鼠抗体(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)或嵌合抗体(例如IgG片段形式的嵌合抗体对CD79b的亲和力)的亲和力低，例如低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55或60倍，所述鼠抗体或嵌和抗体包含图7A-B(SEQ IDNO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列，由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成，或基本上由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)比二价形式的鼠抗体(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)或嵌合抗体(例如IgG片段形式的嵌合抗体对CD79b的亲和力)的亲和力高，例如高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍，所述鼠抗体或嵌和抗体包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列，由图7A-B(SEQID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成，或基本上由图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变域序列组成。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.4nM。在另一个方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.4nM+/-0.04。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.3nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.32nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.36nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.4nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.44nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.48nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.5nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是介于0.3nM和0.5nM之间。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.32nM和0.48nM之间。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.36nM和0.44nM之间。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.2nM。在又一个方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.2nM+/-0.02。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.1nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.12nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.14nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.16nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.18nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.2nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.22nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.24nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.26nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.28nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.30nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.1nM和0.3nM之间。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.12nM和0.28nM之间。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.14nM和0.26nM之间。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.16nM和0.24nM之间。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.18nM和0.22nM之间。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.5nM。在又一个方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.5nM+/-0.1。
另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.4nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.5nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.6nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)是0.7nM或更好。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.3nM和0.7nM之间。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.4nM和0.6nM之间。另一方面，本发明提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对CD79b的亲和力(例如IgG形式的抗体对CD79b的亲和力)介于0.5nM和0.55nM之间。
一方面，所述鼠抗体对CD79b的单价亲和力与包含可变域序列SEQ IDNO：10(图7A-B)和SEQ ID NO：14(图8A-B)的Fab片段的结合亲和力基本上相同。另一方面，所述鼠抗体对CD79b的单价亲和力与包含下述抗体(所述抗体是自1993年7月20日保藏于ATCC的杂交瘤HB11413生成的)的可变域序列的Fab片段或包含下述抗体(所述抗体是自1993年7月20日保藏于ATCC的杂交瘤HB11413生成的)的可变域的嵌合抗体的结合亲和力基本上相同。
如本领域中所完善确立的，配体对其受体的结合亲和力可以使用多种测定法之任一种来测定，并以多种定量数值表示。因而，在一个实施方案中，结合亲和力以Kd值表示，并反映内在结合亲和力(例如具有最小化的亲合效应)。一般且优选地，结合亲和力是在体外测量的，无论在无细胞的或细胞相关的环境中。如本文中更为详细描述的，结合亲和力的倍数差异可根据人源化抗体(例如以Fab形式)的单价结合亲和力数值和参照/比较抗体(例如以Fab形式)(例如具有供体高变区序列的鼠抗体)的单价结合亲和力数值的比率量化，其中所述结合亲和力数值是在相似测定条件下测定的。如此，在一个实施方案中，结合亲和力的倍数差异是作为Fab形式人源化抗体和所述参比/比较Fab抗体的Kd值比率测定。例如，在一个实施方案中，如果本发明抗体(A)具有比参比抗体(M)的亲和力“低3倍”的亲和力，那么A的Kd值是3x，M的Kd值是1x，而A的Kd对M的Kd的比率是3∶1。相反，在一个实施方案中，如果本发明抗体(C)具有比参比抗体(R)的亲和力“高3倍”的亲和力，那么C的Kd值是1x，R的Kd值是3x，而C的Kd对R的Kd的比率是1∶3。本领域已知的许多测定法中的任一种，包括那些本文所描述的，都可用于获取结合亲和力测量，包括例如Biacore、放射免疫测定法(RIA)和ELISA。
一方面，提供了一种与CD79b结合的抗体，其中该抗体包含：
(a)至少一种、两种、三种、四种、五种或六种选自下组的HVR：
(i)HVR-L1，其包含序列A1-A15，其中A1-A15是KASQSVDYDGDSFLN(SEQ ID NO：131)
(ii)HVR-L2，其包含序列B1-B7，其中B1-B7是AASNLES(SEQ ID NO：132)
(iii)HVR-L3，其包含序列C1-C9，其中C1-C9是QQSNEDPLT(SEQ IDNO：133)
(iv)HVR-H1，其包含序列D1-D10，其中D1-D10是GYTFSSYWIE(SEQID NO：134)
(v)HVR-H2，其包含序列E1-E18，其中E1-E18是GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO：135)和
(vi)HVR-H3，其包含序列F1-F10，其中F1-F10是TRRVPVYFDY(SEQ IDNO：136)。
在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-L1包含序列SEQ ID NO：131。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-L2包含序列SEQ ID NO：132。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-L3包含序列SEQ ID NO：133。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-H1包含序列SEQ ID NO：134。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-H2包含序列SEQ ID NO：135。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-H3包含序列SEQ ID NO：136。在一个实施方案中，包含这些序列(以本文所述方式组合的)的本发明抗体是人源化的或人的。
一方面，提供了一种与CD79b结合的抗体，其中该抗体包含：
(a)至少一种、两种、三种、四种、五种或六种选自下组的HVR：
(i)HVR-L1，其包含序列A1-A15，其中A1-A15是KASQSVDYDGDSFLN(SEQ ID NO：131)
(ii)HVR-L2，其包含序列B1-B7，其中B1-B7是AASNLES(SEQ ID NO：132)
(iii)HVR-L3，其包含序列C1-C9，其中C1-C9是QQSNEDPLT(SEQ IDNO：133)
(iv)HVR-H1，其包含序列D1-D10，其中D1-D10是GYTFSSYWIE(SEQID NO：134)
(v)HVR-H2，其包含序列E1-E18，其中E1-E18是GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO：135)和
(vi)HVR-H3，其包含序列F1-F10，其中F1-F10是TRRVPVYFDY(SEQ IDNO：136)；和
(b)至少一种变异HVR，其中所述变异HVR序列包含SEQ ID NO：131、132、133、134、135或136的所示序列的至少一个残基的修饰。
在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-L1包含序列SEQ ID NO：131。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-L2包含序列SEQ ID NO：132。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-L3包含序列SEQ ID NO：133。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-H1包含序列SEQ ID NO：134。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-H2包含序列SEQ ID NO：135。在一个实施方案中，本发明抗体的HVR-H3包含序列SEQ ID NO：136。在一个实施方案中，包含这些序列(以本文所述方式组合的)的本发明抗体是人源化的或人的。
一方面，本发明提供了包含一种、两种、三种、四种、五种或六种HVR的抗体，其中每种HVR包含选自下组的序列、由选自下组的序列组成或基本上由选自下组的序列组成：SEQ ID NO：131、132、133、134、135和136，且其中SEQ ID NO：131对应于HVR-L1，SEQ ID NO：132对应于HVR-L2，SEQ ID NO：133对应于HVR-L3，SEQ ID NO：134对应于HVR-H1，SEQ IDNO：135对应于HVR-H2，而SEQ ID NO：136对应于HVR-H3。在一个实施方案中，本发明的抗体包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中每个依次包含SEQ ID NO：131、132、133、134、135和136。
本发明抗体中的变异HVR可具有该HVR内一个或多个残基的修饰。在一个实施方案中，HVR-L1变体在下列位置中包含一处替代：A4(K)、A9(E或S)和A10(A或S)。在一个实施方案中，HVR-L2变体在下列位置的任何一个或组合中包含1-5(1、2、3、4或5)处替代：B2(S或G)、B3(R或G)、B4(K、R、Y、I、H或Q)、B5(R)、B6(G、K、A、R、S或L)和B7(R、N、T或G)。在一个实施方案中，HVR-L3变体在下列位置的任何一个或组合中包含1-4(1、2、3或4)处替代：C1(N或D)、C2(N或P)、C3(D或R)、C5(S、K、A、Q、D、L或G)、C6(A、E或N)、C7(A)、C8(R)和C9(N)。在一个实施方案中，HVR-H1变体在下列位置的任何一个或组合中包含1-7(1、2、3、4、5、6或7)处替代：D1(P)、D2(F)、D3(P、S、Y、G或N)、D4(L或V)、D5(T、R、N、K、C、G或P)、D6(R、T、K或G)、D8(F)、D9(V或L)和D10(S、Q、N或D)。在一个实施方案中，HVR-H3变体在下列位置的任何一个或组合中包含1-3(1、2或3)处替代：F4(R或I)、F6(I或F)、F7(K、C、R、V或F)、F8(L)，和F9(S)。每个位置后面的括号中的字母指明例示性的替代(即替换)氨基酸；正如对本领域技术人员显而易见的是，其它氨基酸作为本文所述背景中替代氨基酸的合适性可以使用本领域已知的和/或本文中描述的技术例行评估。在一个实施方案中，变异HVR-L1中的A9是E。在一个实施方案中，变异HVR-H3中的F6是I。在一个实施方案中，变异HVR-H3中的F7是R。在一个实施方案中，变异HVR-H3中的F8是L。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-H3，其中F6是I、F7是R且F8是L。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-L1(其中A9是E)和变异HVR-H3(其中F6是I、F7是R且F8是L)。在一个实施方案中，变异HVR-L1中的A9是S。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-L1(其中A9是S)和变异HVR-H3(其中F6是I、F7是R且F8是L)。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-L1，其中A4是K。在一些实施方案中，所述变异HVR-L1抗体进一步包含HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中每个依次包含SEQ ID NO：132、133、134、135和136所示序列。在一些实施方案中，所述变异HVR-L1抗体进一步包含HVR-L1变体，其中A9是E或S和/或A10是A或S。在一些实施方案中，所述变异HVR-L1抗体进一步包含HVR-L3变体，其中C6是E或N和/或C7是A。在一些实施方案中，这些抗体进一步包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，第71位是A、第73位是T和/或第78位是A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一些实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。在这些抗体的一个实施方案中，人亚组III重链框架共有序列包含第48、67、69、71、73、75、78和/或80位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(所述人亚组III重链框架共有序列的)第48位是I、第67位是A、第69位是F、第71位是A、第73位是T、第75位是S、第78位是A和/或第80位是M。在这些抗体的一些实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-L2，其中B3是R、B4是K、B6是G且B7是R。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-L2，其中B3是R、B4是Y、B6是K且B7是R。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-L2，其中B3是R、B4是K且B6是G。在一些实施方案中，所述变异HVR-L2抗体进一步包含HVR-L1、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中每个依次包含SEQ ID NO：131、133、134、135和136所示序列。在一些实施方案中，所述变异HVR-L2抗体进一步包含HVR-L1变体，其中A9是E或S和/或A10是A或S。在一些实施方案中，所述变异HVR-L2抗体进一步包含HVR-L3变体，其中C6是E或N和/或C7是A。在一些实施方案中，这些抗体进一步包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，第71位是A、第73位是T和/或第78位是A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一些实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。在这些抗体的一个实施方案中，所述人亚组III重链框架共有序列包含第48、67、69、71、73、75、78和/或80位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(所述人亚组III重链框架共有序列的)第48位是I、第67位是A、第69位是F、第71位是A、第73位是T、第75位是S、第78位是A和/或第80位是M。在这些抗体的一些实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-L3，其中C5是K。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-L3，其中C5是S。在一些实施方案中，所述变异HVR-L3抗体进一步包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中每个依次包含SEQ ID NO：131、132、134、135和136所示序列。在一些实施方案中，所述变异HVR-L3抗体进一步包含HVR-L1变体，其中A9是E或S和/或A10是A或S。在一些实施方案中，所述变异HVR-L3抗体进一步包含HVR-L3变体，其中C6是E或N和/或C7是A。在一些实施方案中，这些抗体进一步包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，第71位是A、第73位是T和/或第78位是A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一些实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。在这些抗体的一个实施方案中，所述人亚组III重链框架共有序列包含第48、67、69、71、73、75、78和/或80位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(所述人亚组III重链框架共有序列的)第48位是I、第67位是A、第69位是F、第71位是A、第73位是T、第75位是S、第78位是A和/或第80位是M。在这些抗体的一些实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-H1，其中D3是P、D5是T、D6是R且D10是N。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-H1，其中D3是P、D5是N、D6是R且D10是N。在一些实施方案中，所述变异HVR-H1抗体进一步包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H2和HVR-H3，其中每个依次包含SEQ ID NO：131、132、133、135和136所示序列。在一些实施方案中，所述变异HVR-H1抗体进一步包含HVR-L1变体，其中A9是E或S和/或A10是A或S。在一些实施方案中，所述变异HVR-H1抗体进一步包含HVR-L3变体，其中C6是E或N和/或C7是A。在一些实施方案中，这些抗体进一步包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，第71位是A、第73位是T和/或第78位是A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一些实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。在这些抗体的一个实施方案中，所述人亚组III重链框架共有序列包含第48、67、69、71、73、75、78和/或80位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(所述人亚组III重链框架共有序列的)第48位是I、第67位是A、第69位是F、第71位是A、第73位是T、第75位是S、第78位是A和/或第80位是M。在这些抗体的一些实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-H3，其中F6是I和F8是L。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变异HVR-H3，其中F6是I、F7是R且F8是L。在一些实施方案中，所述变异HVR-H3抗体进一步包含HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1和HVR-H2，其中每个依次包含SEQID NO：131、132、133、134和135所示序列。在一些实施方案中，所述变异HVR-H3抗体进一步包含HVR-L1变体，其中A9是E或S和/或A10是A或S。在一些实施方案中，所述变异HVR-H3抗体进一步包含HVR-L3变体，其中C6是E或N和/或C7是A。在一些实施方案中，这些抗体进一步包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述人亚组III重链框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(所述人亚组III重链框架共有序列的)第71位是A、第73位是T和/或第78位是A。在这些抗体的一个实施方案中，所述人亚组III重链框架共有序列包含第48、67、69、71、73和/或78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(所述人亚组III重链框架共有序列的)第48位是I、第67位是A、第69位是F、第71位是A、第73位是T和/或第78位是A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一些实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(所述人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。在这些抗体的一个实施方案中，所述人亚组III重链框架共有序列包含第48、67、69、71、73、75、78和/或80位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(所述人亚组III重链框架共有序列的)第48位是I、第67位是A、第69位是F、第71位是A、第73位是T、第75位是S、第78位是A和/或第80是M。在这些抗体的一些实施方案中，这些抗体进一步包含人κI轻链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述框架人κI轻链框架共有序列包含第4位和/或第47位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，(所述人κI轻链框架共有序列的)第4位是L和/或第47位是F。
一方面，本发明提供了包含图9(SEQ ID NO：17-21)和/或图10(SEQ IDNO：22-106)所示一种、两种、三种、四种、五种或所有HVR序列的抗体。
用于在宿主受试者中使用的治疗剂优选在所述受试者中针对所述药剂引发很小的免疫原性应答至没有引发免疫原应答。在一个实施方案中，本发明提供了这样的药剂。在一个实施方案中，本发明提供了一种人源化抗体，其在宿主受试者中引发和/或预期引发与包含序列SEQ ID NO：10&14的抗体相比实质性降低水平的人抗小鼠抗体应答(HAMA)。在另一个例子中，本发明提供了一种人源化抗体，其引发和/或期望引发最低限度的人抗小鼠抗体应答(HAMA)，或其不引发和/或期望不引发人抗小鼠抗体应答(HAMA)。在一个例子中，本发明的抗体引发临床可接受水平的或临床可接受水平以下的抗小鼠抗体应答。
本发明的人源化抗体可在其重链和/或轻链可变域中包含一种或多种人和/或人共有非高变区(例如框架)序列。在一些实施方案中，所述人和/或人共有非高变区序列内存在一处或多处别的修饰。在一个实施方案中，本发明抗体的重链可变域包含人共有框架序列，其在一个实施方案中是亚组III共有框架序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含修饰了至少一个氨基酸位置的变异亚组III共有框架序列。例如在一个实施方案中，变异亚组III共有框架序列可在第71、73和/或78位中一个或多个处包含替代。在一个实施方案中，所述替代是R71A、N73T和/或L78A、其任意组合。例如，在一个实施方案中，变异亚组III重链框架共有序列包含第48、67、69、71、73和/或78位处的替代。在一个实施方案中，所述替代是V48I、F67A、I69F、R71A、N73T和/或L78A。例如在一个实施方案中，变异亚组III重链框架共有序列包含第48、67、69、71、73、75、78和/或80位处的替代。在一个实施方案中，所述替代是V48I、F67A、I69F、R71A、N73T、K75S、L78A和/或L80M。在一个实施方案中，本发明抗体的轻链可变域包含人共有框架序列，其在一个实施方案中是κI共有框架序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含修饰了至少一个氨基酸位置的变异κI共有框架序列。例如在一个实施方案中，变异κI共有框架序列可包含第4位处的替代。在一个实施方案中，所述替代是M4L。例如在一个实施方案中，变异κI共有框架序列可包含第4位和/或第47位处的替代。在一个实施方案中，所述替代是M4L和/或L47F。
正如本领域已知的，和正如下文更为详细描述的，描述抗体高变区的氨基酸位置/边界可以有所变化，这取决于本领域中已知的背景和各种定义(如下文所述的)。可变域(区)内的有些位置可以看作杂合高变位置，因为这些位置在一组标准下可认为在高变区内，而在不同的一组标准下被认为在高变区外。在延伸的高变区(如下文进一步定义的)中也能找到这些位置中的一处或多处。本发明提供了在这些杂合高变位置中包含修饰的抗体。在一个实施方案中，这些高变位置包括重链可变域中位置26-30、33-35B、47-49、57-65、93、94和101-102中的一处或多处。在一个实施方案中，这些杂合高变位置包括轻链可变域中位置24-29、35-36、46-49、56和97中的一处或多处。在一个实施方案中，本发明的抗体包含修饰了一个或多个杂合高变位置的人变异人亚组共有框架序列。
一方面，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含在位置26-30、33-35、48-49、58、60-63、93和101中的一处或多处有修饰的变异人亚组III共有框架序列。在一个实施方案中，所述抗体包含G26P替代。在一个实施方案中，所述抗体包含F27Y替代。在一个实施方案中，所述抗体包含T28P、S、Y、G或N替代。在一个实施方案中，所述抗体包含F29L或F29V替代。在一个实施方案中，所述抗体包含S30T、R、N、K、C、G或P替代。在一个实施方案中，所述抗体包含A33W或A33F替代。在一个实施方案中，所述抗体包含M34I、V或L替代。在一个实施方案中，S35E、Q、N或D。在一个实施方案中，所述抗体包含V48I替代。在一个实施方案中，所述抗体包含S49G替代。在一个实施方案中，所述抗体包含Y58N替代。在一个实施方案中，所述抗体包含A60N替代。在一个实施方案中，所述抗体包含D61E替代。在一个实施方案中，所述抗体包含S62I替代。在一个实施方案中，所述抗体包含V63F替代。在一个实施方案中，所述抗体包含A93T替代。在一个实施方案中，所述抗体包含D101S替代。
一方面，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含在位置24、27-29、56和97中的一处或多处有修饰的变异人κ亚组I共有框架序列。在一个实施方案中，所述抗体包含R24K替代。在一个实施方案中，所述抗体包含Q27K替代。在一个实施方案中，所述抗体包含S28D或E替代。在一个实施方案中，所述抗体包含I29G、A或S替代。在一个实施方案中，所述抗体包含S56R、N、T或G替代。在一个实施方案中，所述抗体包含T97N替代。
一方面，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含在位置26-30、33-35、48-49、58、60-63、93和101中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16处或所有处有修饰的变异人亚组III共有框架序列。在一个实施方案中，修饰选自下组：G26P、F27Y、T28P(S、Y、G或N)、F29L(V)、S30T(R、N、K、C、G或P)、A33W(F)、M34I(V或L)、S35E(Q、N或D)、V48I、S49G、Y58N、A60N、D61E、S62I、V63F、A93T和D101S。在本发明的一些实施方案中，本发明的抗体包含在位置48、67、69、71、73、75、78和/或80处有修饰的变异亚组III共有框架序列。在一个实施方案中，所述替代是V48I、F67A、I69F、R71A、N73T、K75S、L78A和/或L80M。
一方面，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含在位置24、27-29、56和97中的1、2、3、4、5处或所有处有修饰的变异人κ亚组I共有框架序列。在一个实施方案中，修饰选自下组：R24K、Q27K、S28D(E)、I29G(A或S)、S56R(N、T或G)和T97N。在本发明的一些实施方案中，本发明的抗体包含在第4位和/或第47位处有修饰的变异κI共有框架序列。在一个实施方案中，所述替代是M4L和/或L47F。
本发明的抗体可包含任何合适的人轻链框架序列或人共有轻链框架序列，前提是该抗体展现期望的生物学特征(例如期望的结合亲和力)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含至少部分(或整个)人κ轻链框架序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含至少部分(或整个)人κ亚组I框架共有序列。
一方面，本发明的抗体包含重链和/或轻链可变域，该重链和/或轻链可变域包含SEQ ID NO：9(图7A-B)和/或13(图8A-B)所示框架序列。
一方面，本发明抗体是偶联至细胞毒剂的人源化抗CD79b抗体。一方面，所述偶联至细胞毒剂的人源化抗CD79b抗体在异种移植物中抑制肿瘤进展。
一方面，所述人源化抗体和嵌合抗体都是单价的。在一个实施方案中，所述人源化和嵌合抗体都包含单个连接至Fc区的Fab区。在一个实施方案中，所述参比嵌合抗体包含连接至人Fc区的图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示可变域序列。在一个实施方案中，所述人Fc区是IgG(例如IgG1、2、3或4)的。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图15(SEQ ID NO：164-166)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。在一个实施方案中，所述可变域包含图15(SEQ ID NO：160-163)所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图15(SEQ ID NO：167和/或168)所示CH1和/或Fc序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图15、SEQ ID NO：164-166)，及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列(图15、SEQ ID NO：160-163)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图15、SEQ ID NO：164-166)，及图15(SEQ IDNO：167和/或168)所示CH1和/或Fc序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图15、SEQ ID NO：164-166)，及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列(图15、SEQ ID NO：160-163)，及CH1和/或Fc(图15、SEQ ID NO：167和/或168)。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图15(SEQ ID NO：156-158)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。在一个实施方案中，所述可变域包含图15(SEQ ID NO：152-155)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图15(SEQ ID NO：159)所示CL1序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：156-158)，及图15(SEQ ID NO：152-155)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：156-158)，及图15(SEQ ID NO：159)所示CL1序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：156-158)，及图15(SEQ ID NO：152-155)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列，及图15(SEQ ID NO：159)所示CL1序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图16(SEQ ID NO：183-185)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。在一个实施方案中，所述可变域包含图16(SEQ ID NO：179-182)所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图16(SEQ ID NO：186和/或187)所示CH1和/或Fc序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图16、SEQ ID NO：183-185)，及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列(图16、SEQ ID NO：179-182)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图16、SEQ ID NO：183-185)，及图16(SEQ IDNO：186和/或187)所示CH1和/或Fc序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图16、SEQ ID NO：183-185)，及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列(图16、SEQ ID NO：179-182)，及CH1和/或Fc(图16、SEQ ID NO：186和/或187)。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图16(SEQ ID NO：175-177)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。在一个实施方案中，所述可变域包含图16(SEQ ID NO：171-174)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图16(SEQ ID NO：178)所示CL1序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：175-177)，及图16(SEQ ID NO：171-174)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：175-177)，及图16(SEQ ID NO：178)所示CL1序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：175-177)，及图16(SEQ ID NO：171-174)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列，及图16(SEQ ID NO：178)所示CL1序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图17(SEQ ID NO：202-204)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。在一个实施方案中，所述可变域包含图17(SEQ ID NO：198-201)所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图17(SEQ ID NO：205和/或206)所示CH1和/或Fc序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图17、SEQ ID NO：202-204)，及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列(图17、SEQ ID NO：198-201)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图17、SEQ ID NO：202-204)，及图17(SEQ IDNO：205和/或206)所示CH1和/或Fc序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图17、SEQ ID NO：202-204)，及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列(图17、SEQ ID NO：198-201)，及CH1和/或Fc(图17、SEQ ID NO：205和/或206)。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图17(SEQ ID NO：194-196)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HV3-LC序列。在一个实施方案中，所述可变域包含图17(SEQ ID NO：190-193)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图17(SEQ ID NO：197)所示CL1序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：194-196)，及图17(SEQ ID NO：190-193)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：194-196)，及图17(SEQ ID NO：197)所示CL1序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：194-196)，及图17(SEQ ID NO：190-193)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列，及图17(SEQ ID NO：197)所示CL1序列。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图18(SEQ ID NO：221-223)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。在一个实施方案中，所述可变域包含图18(SEQ ID NO：217-220)所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图18(SEQ ID NO：224和/或225)所示CH1和/或Fc序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图18、SEQ ID NO：221-223)，及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列(图18、SEQ ID NO：217-220)。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图18、SEQ ID NO：221-223)，及CH1和/或Fc图18(SEQ ID NO：224和/或225)所示序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链可变域，该重链可变域包含HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列(图18、SEQ ID NO：221-223)，及FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列(图18、SEQ ID NO：217-220)，及CH1和/或Fc(图18、SEQ ID NO：224和/或225)。
一方面，本发明提供了一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图18(SEQ ID NO：213-215)所示HVR1-LC、HV2-LC和/或HV3-LC序列。在一个实施方案中，所述可变域包含图18(SEQ ID NO：209-212)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一个实施方案中，所述抗体包含图18(SEQ ID NO：216)所示CL1序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：213-215)，及图18(SEQ ID NO：209-212)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：213-215)，及图18(SEQ ID NO：216)所示CL1序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列(SEQ ID NO：213-215)，及图18(SEQ ID NO：209-212)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列，及图18(SEQ ID NO：216)所示CL1序列。
在一个方面，本发明的抗体包括半胱氨酸改造抗体，其中用游离半胱氨酸氨基酸替代亲本抗体的一个或多个氨基酸，正如WO2006/034488；US2007/0092940中所披露的(完整收入本文作为参考)。可以对任何形式的抗CD79b抗体进行如此改造，即突变。例如，可以改造亲本Fab抗体片段以形成半胱氨酸改造的Fab，在本文中称为“ThioFab”。类似地，可以改造亲本单克隆抗体以形成“ThioMab”。应当注意，单位点突变在ThioFab中产生单个改造的半胱氨酸残基，而单位点突变在ThioMab中产生两个改造的半胱氨酸残基，由于IgG抗体的二聚体特性。本发明的半胱氨酸改造抗CD79b抗体包括单克隆抗体，人源化的或嵌合的单克隆抗体，及抗体的抗原结合片段、融合多肽和类似物，其优先结合细胞相关CD79b多肽(cell-associated CD79bpolypeptide)。或者，半胱氨酸改造抗体可以包括下述抗体，其在抗体或Fab中在本文中所公开的位置包含半胱氨酸，该抗体由抗体的序列设计和/或选择产生，而不必改变亲本抗体，诸如通过噬菌体展示抗体设计和选择或经由轻链和/或重链框架序列和恒定区的重新设计。半胱氨酸改造抗体包含一个或多个游离半胱氨酸氨基酸，其具有范围为0.6至1.0；0.7至1.0；或0.8至1.0的硫醇反应性值。游离的半胱氨酸氨基酸指已经被改造入亲本抗体且不是二硫桥的一部分的半胱氨酸残基。半胱氨酸改造抗体可用于在改造的半胱氨酸位点附着细胞毒性化合物和/或成像化合物，例如经由马来酰亚胺或卤代乙酰基。Cys残基的硫醇官能度对马来酰亚胺基团的亲核反应性比蛋白质中任何其它氨基酸官能度(诸如赖氨酸残基的氨基或N末端氨基)高大约1000倍。碘代乙酰基和马来酰亚胺试剂中的硫醇特异性官能度可以与胺基团起反应，但需要较高的pH(＞9.0)和较长的反应时间(Garman，1997，Non-RadioactiveLabelling：A Practical Approach，Academic Press，London)。
在一个方面，本发明的半胱氨酸改造抗CD79b抗体包含任何一个如下位置的改造的半胱氨酸，其中该位置是轻链中依照Kabat等的编号(参见Kabat等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，PublicHealth Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)和重链(包括Fc区)中依照EU编号方式(参见Kabat等(1991)，见上文)的编号，其中通过在图24A、25A、26A、27A、28、48A和49A中划下划线来描述的轻链恒定区开始于第109位(Kabat编号方式)，且通过在图24B、25B、26B、27B、28B、48B和49B中划下划线来描述的重链恒定区开始于第118位(EU编号方式)。该位置还可以通过其在图24-28、48和49中所示全长轻链或重链的氨基酸顺序编号方式中的位置来提到。依照本发明的一个实施方案，抗CD79b抗体包含LC-V205C处的改造的半胱氨酸(Kabat编号：Val 205；图27A和49A中顺序编号209，在那个位置改造成Cys)。在图27A和49A中以粗体、双下划线文本显示了轻链中改造的半胱氨酸。依照一个实施方案，抗CD79b抗体包含HC-A118C处的改造的半胱氨酸(EU编号：Ala 118；Kabat编号114；图24B、25B、26B、28B或48B中顺序编号118，在那个位置改造成Cys)。在图24B、25B、26B、28B或48B中以粗体、双下划线文本显示了重链中改造的半胱氨酸。依照一个实施方案，抗CD79b抗体包含Fc-S400C处的改造的半胱氨酸(EU编号：Ser 400；Kabat编号396；图24B、25B、26B、28B或48B中顺序编号400，在那个位置改造成Cys)。在其它实施方案中，重链(包括Fc区)的改造的半胱氨酸位于任何一个下列位置(依照Kabat编号方式及括号中的EU编号方式)：5、23、84、112、114(118，EU编号方式)、116(120，EU编号方式)、278(282，EU编号方式)、371(375，EU编号方式)或396(400，EU编号方式)。如此，本发明的亲本人源化抗CD79b抗体在这些位置上的氨基酸改变是：V5C、A23C、A84C、S112C、A114C(A118C，EU编号方式)、T116C(T120C，EU编号方式)、V278C(V282C，EU编号方式)、S371C(S375C，EU编号方式)或S396C(S400C，EU编号方式)。如此，本发明的亲本嵌和抗CD79b抗体在这些位置上的氨基酸改变是：Q5C、K23C、S84C、S112C、A114C(A118C，EU编号方式)、T116C(T120C，EU编号方式)、V278C(V282C，EU编号方式)、S371C(S375C，EU编号方式)或S396C(S400C，EU编号方式)。如此，本发明的亲本人源化抗cynoCD79b抗体在这些位置上的氨基酸改变是：Q5C、T23C、S84C、S112C、A114C(A118C，EU编号方式)、T116C(T120C，EU编号方式)、V278C(V282C，EU编号方式)、S371C(S375C，EU编号方式)或S396C(S400C，EU编号方式)。在其它实施方案中，轻链的改造的半胱氨酸位于任何一个下列位置(依照Kabat编号方式)：15、110、114、121、127、168、205。如此，本发明的亲本人源化抗CD79b抗体在这些位置上的氨基酸改变是：V15C、V110C、S114C、S121C、S127C、S168C或V205C。如此，本发明的亲本嵌合抗CD79b抗体在这些位置上的氨基酸改变是：L15C、V110C、S114C、S121C、S127C、S168C或V205C。如此，本发明的亲本抗cynoCD79b抗体在这些位置上的氨基酸改变是：L15C、V110C、S114C、S121C、S127C、S168C或V205C。
在一个方面，本发明包括包含一个或多个游离的半胱氨酸氨基酸的半胱氨酸改造抗CD79b抗体，其中该半胱氨酸改造抗CD79b抗体结合CD79b多肽，且是通过包括用半胱氨酸替代亲本抗CD79b抗体的一个或多个氨基酸残基的方法来制备的，其中该亲本抗体包含至少一种HVR序列，其选自：
(a)HVR-L1，其包含序列A1-A15，其中A1-A15是KASQSVDYDGDSFLN(SEQ ID NO：131)或KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO：137)；
(b)HVR-L2，其包含序列B1-B7，其中B1-B7是AASNLES(SEQ ID NO：132)；
(c)HVR-L3，其包含序列C1-C9，其中C1-C9是QQSNEDPLT(SEQ ID NO：133)；
(d)HVR-H1，其包含序列D1-D10，其中D1-D10是GYTFSSYWIE(SEQ IDNO：134)；
(e)HVR-H2，其包含序列E1-E18，其中E1-E18是GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO：135)；和
(f)HVR-H3，其包含序列F1-F10，其中F1-F10是TRRVPVYFDY(SEQ ID NO：136)或TRRVPIRLDY(SEQ ID NO：138)。
在某个方面中，本发明涉及一种半胱氨酸改造抗CD79b抗体，其包含与具有如本文中所公开的全长氨基酸序列的半胱氨酸改造抗体具有至少约80％氨基酸序列同一性，或者至少约81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或缺乏如本文中所公开的信号肽的半胱氨酸改造抗体。
在又一个方面中，本发明涉及一种分离的半胱氨酸改造抗CD79b抗体，其包含由如下核苷酸序列所编码的氨基酸序列，该核苷酸序列能与编码下列各项的DNA分子的互补链发生杂交：(a)半胱氨酸改造抗体，其具有如本文中所公开的全长氨基酸序列，(b)半胱氨酸改造抗体氨基酸序列，其缺乏如本文中所公开的信号肽，(c)跨膜的半胱氨酸改造抗体蛋白的胞外结构域，其带有或不带有如本文中所公开的信号肽，(d)由任何在本文中所公开的核酸序列所编码的氨基酸序列，或(e)如本文中所公开的全长的半胱氨酸改造抗体氨基酸序列的任何其它明确限定的片段。
在一个具体的方面中，本发明提供了一种分离的半胱氨酸改造抗CD79b抗体，其不带有N末端信号序列和/或不带有起始甲硫氨酸，并且是由编码如本文中所描述的氨基酸序列的核苷酸序列所编码的。其产生方法在本文中也有描述，其中那些方法包括在适于表达半胱氨酸改造抗体的条件下培养包含含有合适的编码核酸分子的载体的宿主细胞和从该细胞培养物中回收半胱氨酸改造抗体。
本发明的另一个方面提供了一种分离的半胱氨酸改造抗CD79b抗体，其或是跨膜结构域删除的或是跨膜结构域失活的。其产生方法在本文中也有描述，其中那些方法包括在适于表达半胱氨酸改造抗体的条件下培养包含含有合适的编码核酸分子的载体的宿主细胞和从该细胞培养物中回收半胱氨酸改造抗体。
在其它方面，本发明提供了分离的抗CD79b嵌合半胱氨酸改造抗体，其包含与异源(非CD79b)多肽融合的任何本文所述半胱氨酸改造抗体。此类嵌合分子的例子包括与异源多肽(诸如例如表位标签序列或免疫球蛋白Fc区)融合的任何本文所述半胱氨酸改造抗体。
半胱氨酸改造抗CD79b抗体可以是单克隆抗体、抗体片段、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体或竞争性抑制抗CD79b多肽抗体与其相应抗原表位结合的抗体。本发明的抗体可以任选地偶联至生长抑制剂或细胞毒剂，诸如毒素，包括例如auristatin、美登木素生物碱、多拉司他汀衍生物或加利车霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶等。本发明的抗体可以任选地在CHO细胞或细菌细胞中产生，且优选地抑制它们所结合的细胞的生长或增殖或诱导与它们所结合的细胞的死亡。为了诊断目的，本发明的抗体可以带上可检测标记物、附着至固体支持物、等等。
在本发明的其它方面，本发明提供了包含编码任何本文所述抗CD79b抗体和抗CD79b半胱氨酸改造抗体的DNA的载体。还提供了包含任何此类载体的宿主细胞。举例而言，宿主细胞可以是CHO细胞、大肠杆菌细胞或酵母细胞。用于产生任何本文所述多肽的方法有进一步的提供，且包括在适于表达期望多肽的条件下培养宿主细胞和从该细胞培养物中回收期望多肽。
半胱氨酸改造抗体可用于治疗癌症，并包括对细胞表面和跨膜受体及肿瘤相关抗原(TAA)特异性的抗体。此类抗体可以以裸抗体(未偶联至药物或标记物模块)或抗体-药物偶联物(ADC)的形式使用。本发明的半胱氨酸改造抗体可以位点特异性地且高效地偶联硫醇反应性试剂。该硫醇反应性试剂可以是多功能接头试剂、捕获标记物试剂、荧光团试剂或药物-接头中间体。半胱氨酸改造抗体可以用可检测标记物标记，在固相支持物上固定化和/或与药物模块偶联。可以将硫醇反应性普及至任何抗体，其中可以用反应性半胱氨酸氨基酸进行氨基酸替代，这发生在轻链中选自下列氨基酸范围的范围内：L10-L20，L105-L115，L109-L119，L116-L126，L122-L132，L163-L173，L200-L210，及重链中选自下列氨基酸范围的范围内：H1-H10，H18-H28，H79-H89，H107-H117，H109-H119，H111-H121，及Fc区中选自下组的范围内：H270-H280，H366-H376，H391-401，其中氨基酸位置的编号方式开始于Kabat编号系统(Kabat等(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)的第1位并在其后顺序延续，正如WO2006034488；US 2007/0092940中所披露的。还可以将硫醇反应性普及至抗体的某些结构域，诸如轻链恒定域(CL)和重链恒定域(CH1、CH2和CH3)。可以进行导致0.6和更高的硫醇反应性值的半胱氨酸替换，这分别发生在完整抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM(包括IgG亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，IgA1和IgA2)的重链恒定域α、δ、ε、γ和μ中。此类抗体及其用途在WO 2006/034488；US 2007/0092940中有披露。
本发明的半胱氨酸改造抗体优选地保留它们野生型、亲本抗体对应物的抗原结合能力。如此，半胱氨酸改造抗体能够结合(优选特异性地)抗原。此类抗原包括例如肿瘤相关抗原(TAA)、细胞表面受体蛋白和其它细胞表面分子、跨膜蛋白、信号传导蛋白、细胞存活调节因子、细胞增殖调节因子、与组织发育或分化有关的(例如已知或怀疑在功能上促进的)分子、淋巴因子、细胞因子、牵涉细胞周期调控的分子、涉及脉管发生(vasculogenesis)的分子和与血管发生(angiogenesis)有关的(例如已知或怀疑在功能上促进的)分子。肿瘤相关抗原可以是簇分化因子(cluster differentiation factor)(即CD蛋白，包括但不限于CD79b)。本发明的半胱氨酸改造抗CD79b抗体保留它们亲本抗CD79b抗体对应物的抗原结合能力。如此，本发明的半胱氨酸改造抗CD79b抗体能够结合(优选特异性地)CD79b抗原，包括人抗CD79b同种型β和/或α，包括此类抗原在细胞(包括但不限于B细胞)表面上表达时。
在一个方面，本发明的抗体可以与任何标记物模块偶联，所述标记物模块可以通过反应性模块、活化的模块或反应性半胱氨酸硫醇基团共价附着至抗体(Singh等(2002)Anal.Biochem.304：147-15；Harlow E.和Lane，D.(1999)Using Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Springs Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；Lundblad R.L.(1991)Chemical Reagents for ProteinModification，第2版，CRC Press，Boca Raton，FL)。所附着的标记物可以发挥下列功能：(i)提供可检测信号；(ii)与第二标记物相互作用以修饰由第一或第二标记物所提供的可检测信号，例如以给出FRET(荧光共振能量转移)；(iii)稳定与抗原或配体的相互作用或提高与抗原或配体结合的亲和力；(iv)通过电荷、疏水性、形状或其它物理参数来影响迁移率，例如电泳迁移率或细胞通透性；或(v)提供捕获模块以调控配体亲和力、抗体/抗原结合或离子络合。
经过标记的半胱氨酸改造抗体可以用于诊断测定法，例如用于在特定细胞、组织或血清中检测感兴趣抗原的表达。为了诊断应用，典型地用可检测模块标记抗体。许多标记物是可获得的，一般可将它们分组成下列种类：
放射性同位素(放射性核素)，诸如3H、11C、14C、18F、32P、35S、64Cu、68Ga、86Y、99Tc、111In、123I、124I、125I、131I、133Xe、177Lu、211At或213Bi。放射性同位素标记的抗体可用于受体靶向成像实验。使用Current Protocols inImmunology，卷1和2，Coligen等编，Wiley-Interscience，New York，NY，Pubs.(1991)中记载的技术，可以用结合、螯合或以其它方式络合放射性同位素金属的配体试剂来标记抗体，其中该试剂与该抗体的改造的半胱氨酸硫醇具有反应性。可以络合金属离子的螯合配体包括DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA和TETA(Macrocyclics，Dallas，TX)。放射性核素可以通过与本发明的抗体-药物偶联物络合来靶向(Wu等(2005)Nature Biotechnology 23(9)：1137-1146)。
接头试剂，诸如DOTA-马来酰亚胺(4-马来酰亚氨基丁酰氨基苄基-DOTA)(4-maleimidobutyramidobenzyl-DOTA)可以通过氨基苄基-DOTA与用氯甲酸异丙酯(isopropylchloroformate)(Aldrich)活化的4-马来酰亚氨基丁酸(Fluka)反应来制备，其遵循Axworthy等(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA97(4)：1802-1807的规程。DOTA-马来酰亚胺试剂与半胱氨酸改造抗体的游离半胱氨酸氨基酸起反应，并在该抗体上提供金属络合配体(Lewis等(1998)Bioconj.Chem.9：72-86)。螯合接头标记试剂，诸如DOTA-NHS(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸单(N-羟基琥珀酰亚胺酯))(1，4，7，10-tetraazacyclododecane-1，4，7，10-tetraacetic acid mono(N-hydroxysuccinimideester))是商品化的(Macrocyclics，Dallas，TX)。用放射性核素标记的抗体进行的受体靶物成像可以通过检测和定量抗体在肿瘤组织中的逐渐积累来提供途径活化的标志(Albert等(1998)Bioorg.Med.Chem.Lett.8：1207-1210)。在溶酶体降解后，所偶联的放射性金属可以保留在细胞内。
适合作为用于成像实验的抗体标记物的金属-螯合剂复合体披露于：US5,342,606；US 5,428,155；US 5,316,757；US 5,480,990；US 5,462,725；US5,428,139；US 5,385,893；US 5,739,294；US 5,750,660；US 5,834,456；Hnatowich等(1983)J.Immunol.Methods 65：147-157；Meares等(1984)Anal.Biochem.142：68-78；Mirzadeh等(1990)Bioconjugate Chem.1：59-65；Meares等(1990)J.Cancer 1990，Suppl.10：21-26；Izard等(1992)Bioconjugate Chem.3：346-350；Nikula等(1995)Nucl.Med.Biol.22：387-90；Camera等(1993)Nuel.Med.Biol.20：955-62；Kukis等(1998)J.Nucl.Med.39：2105-2110；Verel等(2003)J.Nucl.Med.44：1663-1670；Camera等(1994)J.Nucl.Med.21：640-646；Ruegg等(1990)Cancer Res.50：4221-4226；Verel等(2003)J.Nucl.Med.44：1663-1670；Lee等(2001)Cancer Res.61：4474-4482；Mitchell等(2003)J.Nucl.Med.44：1105-1112；Kobayashi等(1999)Bioconjugate Chem.10：103-111；Miederer等(2004)J.Nucl.Med.45：129-137；DeNardo等(1998)Clinical Cancer Research 4：2483-90；Blend等(2003)Cancer Biotherapy&Radiopharmaceuticals 18：355-363；Nikula等(1999)J.Nucl.Med.40：166-76；Kobayashi等(1998)J.Nucl.Med.39：829-36；Mardirossian等(1993)Nucl.Med.Biol.20：65-74；Roselli等(1999)Cancer Biotherapy &Radiopharmaceuticals，14：209-20。
荧光标记物，诸如稀土螯合物(铕螯合物)；荧光素类，包括FITC、5-羧基荧光素、6-羧基荧光素；罗丹明类，包括TAMRA；丹酰(dansyl)；丽丝胺(Lissamine)；花青(cyanines)；藻红蛋白；德克萨斯红(Texas Red)；和它们的类似物。使用例如Current Protocols in Immunology(见上文)中披露的技术，可以将荧光标记物偶联至抗体。荧光染料和荧光标记物试剂包括那些可购自Invitrogen/Molecular Probes(Eugene，OR)和Pierce Biotechnology，Inc.(Rockford，IL)的。
各种酶-底物标记物是可获得的或有披露的(US 4275149)。该酶一般催化显色底物的化学改变，其可以使用各种技术来测量。例如，该酶可以催化底物的颜色变化，其可以用分光光度法来测量。或者，该酶可以改变底物的荧光或化学发光。用于定量荧光变化的技术在上文有描述。化学发光底物通过化学反应而成为电子激发的，然后可以发射可测量的光(例如使用化学发光计)或给荧光受体贡献能量。酶标记物的例子包括萤光素酶(例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶；US 4,737,456)、萤光素、2，3-二氢酞嗪二酮、苹果酸脱氢酶、脲酶、过氧化物酶诸如辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等。用于将酶偶联至抗体的技术披露于：O′Sullivan等(1981)“Methods for the Preparation of Enzyme-AntibodyConjugates for use in Enzyme Immunoassay”，于Methods in Enzym.(J.Langone和H.Van Vunakis编)，Academic Press，New York，73：147-166。
酶-底物组合的例子包括例如：
(i)辣根过氧化物酶(HRP)与作为底物的过氧化氢，其中该过氧化氢氧化染料前体(例如邻苯二胺(OPD)或3，3′，5，5′-四甲基联苯胺盐酸盐(TMB))；
(ii)碱性磷酸酶(AP)与作为显色底物的对硝基苯基磷酸酯；和
(iii)β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)与显色底物(例如对硝基苯基-β-D-半乳糖苷)或荧光底物4-甲基伞形基-β-D-半乳糖苷)。
许多其它的酶-底物组合对本领域技术人员而言是可获得的。一般综述参见US 4275149和US 4318980。
标记物可以间接地与氨基酸侧链、活化的氨基酸侧链、半胱氨酸改造抗体等偶联。例如，抗体可以与生物素偶联，并且任何上述三大类标记物可以与亲合素或链霉亲合素偶联，反之亦然。生物素选择性结合链霉亲合素，如此，标记物可以以该间接方式与抗体偶联。或者，为了实现标记物与多肽变体的间接偶联，多肽变体与小的半抗原(例如地高辛)偶联，并且上述不同类型的标记物之一与抗半抗原多肽变体(例如抗地高辛抗体)偶联。如此，可以实现标记物与多肽变体的间接偶联(Hermanson，G.(1996)于Bioconjugate Techniques Academic Press，San Diego)。
可以在任何已知的测定方法中使用本发明的抗体，诸如ELISA、竞争性结合测定法、直接和间接三明治式(或夹心式)测定法和免疫沉淀测定法(Zola，(1987)Monoclonal Antibodies：A Manual of Techniques，pp.147-158，CRC Press，Inc.)。
检测标记物可用于对结合或识别事件进行定位、显现和定量。经过标记的本发明抗体可检测细胞表面受体。经过可检测标记的抗体的另一种用途是基于珠子的免疫捕获方法，其包括使珠子与荧光标记的抗体偶联，和在配体结合后检测荧光信号。类似的结合检测方法学利用表面等离振子共振(SPR)效应来测量和检测抗体-抗原相互作用。
检测标记物(诸如荧光染料和化学发光染料)(Briggs等(1997)″Synthesisof Functionalised Fluorescent Dyes and Their Coupling to Amines and AminoAcids″，J.Chem.Soc.，Perkin-Trans.1：1051-1058)提供可检测的信号，并且一般可用于标记抗体，优选具有下列性质：(i)经过标记的抗体应产生很高的信号但低的背景，使得在无细胞测定法和基于细胞的测定法中都能灵敏地检测出少量的抗体；和(ii)经过标记的抗体应是光稳定的，使得可以观察、监测和记录到荧光信号，但没有显著的光漂白。对于涉及经标记抗体对膜或细胞表面(尤其是活细胞)的细胞表面结合的应用，标记物优选地(iii)具有优秀的水溶性以实现有效的偶联物浓度和检测灵敏度，和(iv)对活细胞是无毒性的，免得破坏细胞的正常代谢过程或引起过早的细胞死亡。
可以在用活细胞或珠子自动实施混合和读取(mix-and-read)、非放射性测定法的系统(
Figure GPA00001058503001231
8100 HTS System，Applied Biosystems，Foster City，Calif.)上进行细胞荧光强度的直接定量和荧光标记事件(例如肽-染料偶联物的细胞表面结合)的点查(Miraglia，″Homogeneous cell-and bead-based assays forhigh throughput screening using fluorometric microvolume assay technology″，(1999)J.of Biomolecular Screening 4：193-204)。经过标记的抗体的用途还包括细胞表面受体结合测定法、免疫捕获测定法、荧光连接的免疫吸附测定法(FLISA)、胱天蛋白酶切割(Zheng，″Caspase-3 controls both cytoplasmic andnuclear events associated with Fas-mediated apoptosis in vivo″，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：618-23；US 6,372,907)、凋亡(Vermes，″A novel assay forapoptosis.Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on earlyapoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V″(1995)J.Immunol.Methods 184：39-51)和细胞毒性测定法。可以使用荧光计量微体积测定法(fluorometric microvolume assay)技术鉴定由靶向细胞表面的分子所引起的上调或下调(Swartzman，″A homogeneous and multiplexed immunoassay forhigh-throughput screening using fluorometric microvolume assay technology″，(1999)Anal.Biochem.271：143-51)。
经过标记的本发明抗体可通过生物医学和分子成像的各种方法和技术用作成像生物标志物和探针，诸如：(i)MRI(磁共振成像)；(ii)microCT(计算机化断层成像)；(iii)SPECT(单光子发射计算机化断层成像)；(iv)PET(正电子发射断层成像)Chen等(2004)Bioconjugate Chem.15：41-49；(v)生物发光；(vi)荧光；和(vii)超声。免疫闪烁成像是一种成像规程，其中给动物或人患者施用用放射性物质标记的抗体，并拍摄身体中该抗体定位的部位的照片(US 6528624)。可以将成像生物标志物作为正常生物学过程、致病过程或对治疗性干涉的药理学应答的指示客观地测量并评估。生物标志物可以是数种类型：类型0是疾病的天然历史标志物，并与已知临床指标纵向相关，例如类风湿性关节炎中滑膜炎症的MRI评估；类型I标志物捕获干预的依照作用机制的效应，即使该机制可能与临床结果无关；类型II标志物发挥代用终点(surrogate endpoint)的功能，其中该生物标志物的改变或来自该生物标志物的信号预示临床益处以“证实”靶向应答，诸如通过CT在类风湿性关节炎中测量到的骨侵蚀。如此，成像生物标志物可以提供关于下列各项的药效学(PD)治疗信息：(i)靶蛋白的表达，(ii)治疗剂对靶蛋白的结合，即选择性，和(iii)清除和半衰期药动学数据。体内成像生物标志物相对于基于实验室的生物标志物的优点包括：非侵入性处理，可定量，全身评估，重复定量给药和评估(即多个时间点)，及从临床前结果(小动物)至临床结果(人)的潜在可转换效应。对于一些应用，生物成像代替或最少化临床前研究中动物实验的数目。
肽标记方法是公知的。参见Haugland，2003，Molecular Probes Handbookof Fluorescent Probes and Research Chemicals，Molecular Probes，Inc.；Brinkley，1992，Bioconjugate Chem.3∶2；Garman，(1997)Non-Radioactive Labelling：APractical Approach，Academic Press，London；Means(1990)Bioconjugate Chem.1∶2；Glazer等(1975)Chemical Modification of Proteins.Laboratory Techniquesin Biochemistry and Molecular Biology(T.S.Work和E.Work编)AmericanElsevier Publishing Co.，New York；Lundblad，R.L.和Noyes，C.M.(1984)Chemical Reagents for Protein Modification，卷I和II，CRC Press，New York；Pfleiderer，G(1985)“Chemical Modification of Proteins”，Modern Methods inProtein Chemistry，H.Tschesche编，Walter DeGryter，Berlin和New York；及Wong(1991)Chemistry of Protein Conjugation and Cross-linking，CRC Press，Boca Raton，Fla.)；De Leon-Rodriguez等(2004)Chem.Eur.J.10：1149-1155；Lewis等(2001)Bioconjugate Chem.12：320-324；Li等(2002)BioconjugateChem.13：110-115；Mier等(2005)Bioconjugate Chem.16：240-237。
用两种模块即荧光报道物和淬灭剂标记的肽和蛋白质在足够接近时经历荧光共振能量转移(FRET)。报道物基团典型地是荧光染料，其由某个波长的光激发并转移能量给受体或淬灭剂基团，这具有合适的斯托克司频移(Stokes shift)以在最高亮度发光。荧光染料包括具有扩展芳香性(extendedaromaticity)的分子，诸如荧光素和罗丹明及其衍生物。荧光报道物可以由完整肽中的淬灭剂模块部分地或显著地淬灭。在肽酶或蛋白酶切割肽后，可以测量可检测的荧光增加(Knight，C.(1995)“Fluorimetric Assays of ProteolyticEnzymes”，Methods in Enzymology，Academic Press，248：18-34)。
经过标记的本发明抗体还可以用作亲和纯化剂。在该方法中，使用本领域公知的方法将经过标记的抗体固定化在固相(诸如Sephadex树脂或滤纸)上。使固定化的抗体与含有待纯化抗原的样品接触，其后用合适的溶剂清洗支持物，这会清除该样品中除待纯化抗原(其结合至固定化的多肽变体)以外的基本上所有材料。最后，用另一种合适的溶剂(诸如甘氨酸缓冲液，pH5.0)清洗支持物，这会从多肽变体中释放抗原。
标记试剂典型地具有反应性官能度，其可以(i)与半胱氨酸改造抗体的半胱氨酸硫醇直接反应以形成经过标记的抗体，(ii)与接头试剂反应以形成接头-标记物中间体，或(iii)与接头抗体反应以形成经过标记的抗体。标记试剂的反应性官能度包括：马来酰亚胺、卤乙酰基、碘乙酰胺琥珀酰亚氨基酯(例如NHS，N-羟基琥珀酰亚胺)、异硫氰酸盐/酯、磺酰氯、2，6-二氯三嗪基、五氟苯基酯和亚磷酰胺，尽管还可以使用其它官能团。
例示性的反应性官能团是可检测标记物(例如生物素或荧光染料)的羧基取代基的N-羟基琥珀酰亚氨基酯(NHS)。可以预制、分离、纯化和/或表征该标记物的NHS酯，或者可以使其原位形成并与抗体的亲核基团起反应。典型地，将羧基形式的标记物通过与碳二亚胺试剂(例如二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺)或脲阳离子试剂(例如TSTU(O-(N-琥珀酰亚氨基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐/酯)、HBTU((O-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐/酯)或HATU((O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐/酯)、活化剂(诸如1-羟基苯并三唑(HOBt))和N-羟基琥珀酰亚胺的一些组合起反应而活化以给出该标记物的NHS酯。在一些情况中，可以通过标记物的原位活化和与抗体反应来偶联标记物和抗体以在一个步骤中形成标记物-抗体偶联物。其它活化和偶联试剂包括TBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1-1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐/酯)、TFFH(N，N’，N”，N’”-四甲基脲2-氟-六氟磷酸盐/酯)、PyBOP(苯并三唑-1-基-氧-三吡咯烷膦六氟磷酸盐/酯)、EEDQ(2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢-喹啉)、DCC(二环己基碳二亚胺)、DIPCDI(二异丙基碳二亚胺)、MSNT(1-(均三甲基苯-2-磺酰)-3-硝基-1H-1，2，4-三唑和芳基磺酰卤化物(例如三异丙基苯磺酰氯)。
本发明的清蛋白结合肽-Fab化合物：
在一个方面，本发明的抗体融合至清蛋白结合蛋白。血浆蛋白结合可以是改善短命分子的药动学性质的有效手段。清蛋白是血浆中最丰富的蛋白质。血清清蛋白结合肽(ABP)可以改变所融合的活性结构域蛋白质的药效学，包括改变组织摄取、渗透和扩散。可以通过合适的血清清蛋白结合肽序列的具体选择来调控这些药效学参数(US 20040001827)。通过噬菌体展示筛选鉴定了一系列清蛋白结合肽(Dennis等(2002)“Albumin Binding As A GeneralStrategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins”J Biol Chem.277：35035-35043；WO 01/45746)。本发明的化合物包括由下列文献所教导的ABP序列：(i)Dennis等(2002)J Biol Chem.277：35035-35043表III和IV，第35038页；(ii)US 20040001827段[0076]SEQ ID NO：9-22；和(iii)WO01/45746，第12-13页，都收入本文作为参考。通过以1∶1化学计量比(1ABP/1Fab)将清蛋白结合肽融合至Fab重链的C末端来改造清蛋白结合(ABP)-Fab。显示了这些ABP-Fab与清蛋白的结合使抗体在家兔和小鼠中的半衰期增加了25倍多。因此，可以将上述反应性Cys残基导入这些ABP-Fab，并用于与细胞毒性药物的位点特异性偶联，接着是体内动物研究。
例示性的清蛋白结合肽序列包括但不限于SEQ ID NO：246-250中列出的氨基酸序列：
CDKTHTGGGSQRLMEDICLPRWGCLWEDDF    SEQ ID NO：246
QRLMEDICLPRWGCLWEDDF              SEQ ID NO：247
QRLIEDICLPRWGCLWEDDF              SEQ ID NO：248
RLIEDICLPRWGCLWEDD                SEQ ID NO：249
DICLPRWGCLW                       SEQ ID NO：250
抗体-药物偶联物
在另一个方面，本发明提供了包含偶联有细胞毒剂的抗体的免疫偶联物或抗体-药物偶联物(ADC)，所述细胞毒剂诸如化疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物起源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射偶联物)。在另一个方面，本发明进一步提供了使用免疫偶联物的方法。在一个方面，免疫偶联物包含共价附着至细胞毒剂或可检测试剂的任何上述抗CD79b抗体。
一方面，本发明的CD79b抗体结合CD79b上另一种CD79b抗体所结合的同一表位。在另一个实施方案中，本发明的CD79b抗体结合CD79b上如下Fab片段(自1993年7月20日保藏于ATCC的杂交瘤HB11413生成的单克隆抗体、包含可变域SEQ ID NO：10(图7A-B)和SEQ ID NO：14(图8A-B)的单克隆抗体的Fab片段)或如下嵌合抗体(包含自1993年7月20日保藏于ATCC的HB11413杂交瘤生成的抗体的可变域或包含序列SEQ ID NO：10(图7A-B)和SEQ ID NO：14(图8A-B)的单克隆抗体的可变域及IgG1的恒定域的嵌和抗体)所结合的同一表位。在另一个实施方案中，本发明的CD79b抗体结合CD79b上另一种CD79b抗体(即CB3.1(BD Biosciences产品目录号555678；San Jose，CA)、AT105-1(AbD Serotec产品目录号MCA2208；Raleigh，NC)、AT107-2(AbD Serotec产品目录号MCA2209)、抗人CD79b抗体(BDBiosciences产品目录号557592；San Jose，CA))所结合的同一表位。
另一方面，本发明的CD79b抗体结合CD79b上与另一种CD79b抗体所结合的表位不同的表位。在另一个实施方案中，本发明的CD79b抗体结合CD79b上与如下Fab片段(自1993年7月20日保藏于ATCC的HB11413杂交瘤生成的单克隆抗体、包含可变域SEQ ID NO：10(图7A-B)和SEQ ID NO：14(图8A-B)的单克隆抗体的Fab片段)或如下嵌合抗体(包含自1993年7月20日保藏于ATCC的HB11413杂交瘤生成的抗体的可变域或包含序列SEQ ID NO：10(图7A-B)和SEQ ID NO：14(图8A-B)的单克隆抗体的可变域及IgG1的恒定域的嵌合抗体)所结合的表位不同的表位。在另一个实施方案中，本发明的CD79b抗体结合CD79b上与另一种CD79b抗体(即CB3.1(BD Biosciences产品目录号555678；San Jose，CA)、AT105-1(AbD Serotec产品目录号MCA2208；Raleigh，NC)、AT107-2(AbD Serotec产品目录号MCA2209)、抗人CD79b抗体(BD Biosciences产品目录号557592；San Jose，CA))所结合的表位不同的表位。
另一方面，本发明的CD79b抗体不同于(即不是)自1993年7月20日保藏于ATCC的杂交瘤HB 11413生成的单克隆抗体、包含可变域SEQ ID NO：10(图7A-B)和SEQ ID NO：14(图8A-B)的单克隆抗体的Fab片段，或包含自1993年7月20日保藏于ATCC的杂交瘤HB11413生成的抗体的可变域或包含序列SEQ ID NO：10(图7A-B)和SEQ ID NO：14(图8A-B)的单克隆抗体的可变域及IgG1的恒定域的嵌合抗体。在另一个实施方案中，本发明的CD79b抗体不同于(即不是)另一种CD79b抗体(即CB3.1(BD Biosciences产品目录号555678；San Jose，CA)、AT105-1(AbD Serotec产品目录号MCA2208；Raleigh，NC)、AT107-2(AbD Serotec产品目录号MCA2209)、抗人CD79b抗体(BDBiosciences产品目录号557592；San Jose，CA))的Fab片段。
一方面，本发明抗体特异性结合第一动物物种的CD79b，且不特异性结合第二动物物种的CD79b。在一个实施方案中，所述第一物种是人和/或灵长类(例如猕猴)，而所述第二动物物种是鼠(例如小鼠)和/或犬科动物。在一个实施方案中，所述第一动物物种是人。在一个实施方案中，所述第一动物物种是灵长类，例如猕猴。在一个实施方案中，所述第二动物物种是鼠，例如小鼠。在一个实施方案中，所述第二动物物种是犬。
一方面，本发明提供了包含一种或多种本发明抗体和载体的组合物。在一个实施方案中，所述载体是药学可接受。
一方面，本发明提供了编码本发明CD79b抗体的核酸。
一方面，本发明提供了包含本发明核酸的载体。
一方面，本发明提供了包含本发明核酸或载体的宿主细胞。载体可以是任何类型的，例如重组载体，正如表达载体。可以使用多种宿主细胞之任一种。在一个实施方案中，宿主细胞是原核细胞，例如大肠杆菌(E.coli)。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如哺乳动物细胞，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
一方面，本发明提供了用于制备本发明抗体的方法。例如，本发明提供了制备CD79b抗体(如本文中所定义的，包括其全长和片段)的方法，所述方法包括在合适的宿主细胞中表达编码所述抗体(或其片段)的本发明载体并回收所述抗体。
一方面，本发明提供了制品，其包括容器；和装在该容器内的组合物，其中所述组合物包含一种或多种本发明CD79b抗体。在一个实施方案中，所述组合物包含本发明的核酸。在一个实施方案中，包含抗体的组合物进一步包含载体，其在一些实施方案中是药学可接受的。在一个实施方案中，本发明的制品进一步包含关于给受试者施用所述组合物(例如所述抗体)的指令。
一方面，本发明提供了试剂盒，其包括第一容器，其中装有包含一种或多种本发明CD79b抗体的组合物；和第二容器，其中装有缓冲液。在一个实施方案中，所述缓冲液是药学可接受的。在一个实施方案中，包含拮抗性抗体的组合物进一步包含载体，其在一些实施方案中是药学可接受的。在一个实施方案中，试剂盒进一步包含关于向受试者施用所述组合物(例如所述抗体)的指令。
一方面，本发明提供了本发明的CD79b抗体在制备用于疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)治疗性和/或预防性处理的药物中的用途。在一个实施方案中，癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
一方面，本发明提供了本发明的核酸在制备用于疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)治疗性和/或预防性处理的药物中的用途。在一个实施方案中，癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
一方面，本发明提供了本发明的表达载体在制备用于疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)治疗性和/或预防性处理的药物中的用途。在一个实施方案中，癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
一方面，本发明提供了本发明的宿主细胞在制备用于疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)治疗性和/或预防性处理的药物中的用途。在一个实施方案中，癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
一方面，本发明提供了本发明的制品在制备用于疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)治疗性和/或预防性处理的药物中的用途。在一个实施方案中，癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
一方面，本发明提供了本发明的试剂盒在制备用于疾病(诸如癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症)治疗性和/或预防性处理的药物中的用途。在一个实施方案中，癌症、肿瘤和/或细胞增殖性病症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
一方面，本发明提供了抑制表达CD79b的细胞生长的方法，所述方法包括使所述细胞接触本发明抗体，由此引起对所述细胞生长的抑制。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了治疗性处理患有包含表达CD79b的细胞的癌性肿瘤的哺乳动物的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗性有效量的本发明抗体，由此有效治疗所述哺乳动物。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了用于治疗或预防与CD79b表达升高有关的细胞增殖性病症的方法，所述方法包括给需要此类治疗的受试者施用有效量的本发明抗体，由此有效治疗或预防所述细胞增殖性病症。在一个实施方案中，所述增殖性病症是癌症。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了抑制细胞生长的方法，其中所述细胞的生长至少部分依赖于CD79b的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的本发明抗体，由此抑制所述细胞的生长。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了治疗性处理哺乳动物中的肿瘤的方法，其中所述肿瘤的生长至少部分依赖于CD79b的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的本发明抗体，由此有效治疗所述肿瘤。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
一方面，本发明提供了治疗癌症的方法，包含给患者施用包含本文所述免疫偶联物、可接受的稀释剂、载体或赋形剂的药物配制剂。在一个实施方案中，所述癌症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，与所述抗体-药物偶联物化合物组合地给所述患者施用细胞毒剂。
一方面，本发明提供了抑制B细胞增殖的方法，包括在允许下述免疫偶联物结合至CD79b的条件下使细胞暴露于包含本发明抗体的免疫偶联物。在一个实施方案中，所述B细胞增殖选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，所述B细胞是异种移植物。在一个实施方案中，所述暴露发生于体外。在一个实施方案中，所述暴露发生于体内。
一方面，本发明提供了测定怀疑含有CD79b的生物学样品中CD79b的存在情况的方法，所述方法包括使所述样品暴露于本发明的抗体，并测定所述抗体对所述样品中CD79b的结合，其中所述抗体结合至所述样品中的CD79b指示所述样品中存在所述蛋白质。在一个实施方案中，所述样品是生物学样品。在又一个实施方案中，所述生物学样品包含B细胞。在一个实施方案中，所述生物学样品来自经历或怀疑经历B细胞病症和/或B细胞增殖性病症的哺乳动物，所述B细胞病症和/或B细胞增殖性病症包括但不限于淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
一方面，提供了诊断与表达CD79b的细胞(诸如B细胞)增多有关的细胞增殖性病症的方法，所述方法包括使生物学样品中的测试细胞接触任何上述细胞；通过检测所述抗体对CD79b的结合来测定结合至所述样品中测试细胞的抗体的水平；并比较结合至对照样品中细胞的抗体的水平，其中将所结合的抗体的水平相对于测试和对照样品中表达CD79b的细胞的数目标准化，且其中测试样品中所结合的抗体的水平高于对照样品指明存在与表达CD79b的细胞有关的细胞增殖性病症。
一方面，提供了检测血液或血清中可溶性CD79b的方法，所述方法包括使来自怀疑经历B细胞增殖性病症的哺乳动物的血液或血清测试样品接触本发明的抗CD79b抗体，并检测测试样品中可溶性CD79b相对于来自正常哺乳动物的血液或血清对照样品的升高。在一个实施方案中，所述检测方法作为诊断与哺乳动物血液或血清中可溶性CD79b升高有关的B细胞增殖性病症的方法是有用的。
一方面，提供了使本发明的抗体结合至表达CD79b的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞接触本发明的抗体。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至细胞毒剂的。在一个实施方案中，所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
本发明的方法可用于改变任何合适的病理状态，例如与CD79b表达有关的细胞和/或组织。在一个实施方案中，本发明方法中所靶向的细胞是造血细胞。例如，造血细胞可以是选自下组的细胞：淋巴细胞、白细胞、血小板、红细胞和天然杀伤细胞。在一个实施方案中，本发明方法中所靶向的细胞是B细胞或T细胞。在一个实施方案中，本发明方法中所靶向的细胞是癌细胞。例如，癌症细胞可以是选自下组的细胞：淋巴瘤细胞、白血病细胞或骨髓瘤细胞。
本发明的方法可进一步包括别的治疗步骤。例如在一个实施方案中，方法进一步包括其中使所靶向的细胞和/或组织(例如癌细胞)暴露于放射治疗或化疗剂的步骤。
如本文中所描述的，CD79b是B细胞受体的信号传导构件。因而，在本发明方法的一个实施方案中，所靶向的细胞(例如癌细胞)是与不表达CD79b的细胞相比表达CD79b的细胞。在又一个实施方案中，所靶向的细胞是其中CD79b表达与同一组织类型的正常非癌细胞相比得到增强的癌细胞。在一个实施方案中，本发明的方法引起所靶向的细胞死亡。
在本发明的其它方面，本发明提供了包含编码任何本文所述抗体的DNA的载体。还提供了包含任何此类载体的宿主细胞。举例而言，所述宿主细胞可以是CHO细胞、大肠杆菌细胞或酵母细胞。进一步提供了用于生成任何本文所述抗体的方法，包括在适合于期望抗体表达的条件下培养宿主细胞并自所述细胞培养物回收所述期望抗体。
在有一个方面，本发明关注包含与载体组合的本文所述抗CD79b抗体的组合物。任选的是，所述载体是药学可接受载体。
本发明的另一个方面致力于本文所述抗CD79b多肽抗体用于制备在对所述抗CD79b多肽抗体有响应的疾患的治疗中有用的药物的用途。
本发明的另一个方面是包含式I的抗体-药物化合物的混合物的组合物，其中每个抗体的平均药物载荷是约2个至约5个或约3个至约4个。
本发明的另一个方面是包含式IADC化合物、式IADC化合物的混合物或其药学可接受盐或溶剂合物、及药学可接受稀释剂、载体或赋形剂的药物组合物。
另一个方面提供了包含式I ADC化合物和具有抗癌特性或其它治疗效果的第二化合物的药物组合。
另一个方面是用于杀死肿瘤细胞或癌细胞或抑制肿瘤细胞或癌细胞增殖的方法，包括用有效杀死肿瘤细胞或癌细胞或抑制肿瘤细胞或癌细胞增殖的量的式I抗体-药物偶联物或其药学可接受盐或溶剂合物处理所述细胞。
另一个方面是治疗癌症的方法，包括给患者施用治疗性有效量的包含式I ADC的药物组合物。
另一个方面包括制品，即试剂盒，其包括抗体-药物偶联物、容器和指示治疗方法的包装插页或标签。
本发明的一个方面是制备式I抗体-药物偶联物化合物的方法，包含下列步骤：(a)使半胱氨酸改造抗体的改造半胱氨酸基团与接头试剂起反应以形成抗体-接头中间体Ab-L；并(b)使Ab-L与活化的药物模块D起反应；由此抗体-药物偶联物形成；或包括下列步骤：(c)使药物模块的亲核基团与接头试剂起反应以形成药物-接头中间体D-L；并(d)使D-L与半胱氨酸改造抗体的改造半胱氨酸基团起反应；由此抗体-药物偶联物形成。
本发明的一个方面是用于检测癌细胞的测定法，包括：(a)使细胞暴露于半胱氨酸改造抗CD79b抗体-药物偶联物；并(b)测定所述半胱氨酸改造抗CD79b抗体-药物偶联物化合物对所述细胞的结合程度。
A.抗CD79b抗体
在一个实施方案中，本发明提供了可在本文中用作治疗剂的抗CD79b抗体。例示性的抗体包括多克隆的、单克隆的、人源化的、双特异性的和异源偶联的抗体。
1.多克隆抗体
多克隆抗体优选通过在动物中多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂来生成。将相关抗原(尤其在使用合成肽时)与在待免疫的物种中有免疫原性的蛋白质偶联可能是有用的。例如，可使用双功能或衍生化试剂，例如马来酰亚胺苯甲酰磺基琥珀酰亚胺酯(经半胱氨酸残基的偶联)、N-羟基琥珀酰亚胺(经赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2或R1N＝C＝NR，其中R和R1是不同的烃基，将抗原与匙孔
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蓝蛋白(KLH)、血清清蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂偶联。
通过将例如100μg或5μg蛋白质或偶联物(分别用于家兔或小鼠)与3倍体积的弗氏完全佐剂混和，并将溶液皮内注射于多个部位，由此将动物针对抗原、免疫原性偶联物或衍生物进行免疫。一个月后，通过多个部位的皮下注射，用弗氏完全佐剂中1/5-1/10初始量的肽或偶联物对动物进行强化免疫。7-14天后，采集动物的血液，并测定血清的抗体滴度。对动物进行强化直到滴度达到稳定的高水平。偶联物还可在重组细胞培养物中作为蛋白质融合物来制备。同样，适当使用凝聚剂诸如明矾来增强免疫应答。
2.单克隆抗体
单克隆抗体可以使用最初由Kohler等，Nature 256：495(1975)记载的杂交瘤方法来制备，或者可以通过重组DNA方法来制备(美国专利No.4,816,567)。
在杂交瘤方法中，如上所述免疫小鼠或其它合适的宿主动物，诸如仓鼠，以引发生成或能够生成如下抗体的淋巴细胞，所述抗体会特异性结合用于免疫的蛋白质。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。免疫后，分离淋巴细胞，然后使用合适的融合剂诸如聚乙二醇将淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合，形成杂交瘤细胞(Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice，pp.59-103，Academic Press，1986)。
将如此制备的杂交瘤细胞在合适的培养基中接种和培养，所述培养基优选含有抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞(也称作融合配偶)生长或存活的一种或多种物质。例如，如果亲本骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，那么用于杂交瘤的选择性培养基通常会含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT培养基)，这些物质阻止HGPRT缺陷细胞生长。
优选的融合配偶骨髓瘤细胞是那些高效融合、支持选择的抗体生成细胞稳定地高水平生成抗体、并对针对未融合亲本细胞进行选择的选择性培养基敏感的骨髓瘤细胞。优选的骨髓瘤细胞系是鼠骨髓瘤系，诸如可从索尔克研究所细胞分配中心(Salk Institute Cell Distribution Center，San Diege，California，USA)获得的MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤所衍生的细胞系，以及可从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，Manassas，Virginia，USA)获得的SP-2及衍生物，例如X63-Ag8-653细胞。用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也已有描述(Kozbor，J.Immunol.133：3001(1984)；及Brodeur等，Monoclonal AntibodyProduction Techniques and Applications，pp.51-63，Marcel Dekker，Inc.，NewYork，1987)。
可对杂交瘤细胞正在其中生长的培养基测定针对抗原的单克隆抗体的生成。优选的是，通过免疫沉淀或通过体外结合测定法，诸如放射性免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)，测定由杂交瘤细胞生成的单克隆抗体的结合特异性。
单克隆抗体的结合亲和力可通过例如Munson等，Anal.Biochem.107：220(1980)中记载的Scatchard分析来测定。
一旦鉴定得到生成具有所需特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞，所述克隆可通过有限稀释流程进行亚克隆，并通过标准方法进行培养(Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice，pp.59-103，Academic Press，1986)。适于这一目的的培养基包括例如D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可在动物中作为腹水瘤进行体内培养，例如通过将细胞i.p.注射到小鼠中。
可通过常规抗体纯化流程，诸如例如亲和层析(例如使用蛋白A或蛋白G-Sepharose)或离子交换层析、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析等，将亚克隆分泌的单克隆抗体与培养基、腹水或血清适当分开。
编码单克隆抗体的DNA易于使用常规流程分离并测序(例如通过使用能够与编码鼠抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。以杂交瘤细胞作为此类DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将该表达载体转染到不另外产生抗体蛋白质的宿主细胞中，诸如大肠杆菌细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞，以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。关于编码抗体的DNA在细菌中的重组表达的综述性论文包括Skerra等，Curr.Opinion in Immunol.5：256-262(1993)及Plückthun，Immunol.Revs.130：151-188(1992)。
在另一个实施方案中，可从使用McCafferty等，Nature 348：552-554(1990)所述技术构建的噬菌体抗体文库中分离单克隆抗体或抗体片段。Clackson等，Nature 352：624-628(1991)及Marks等，J.Mol.Biol.222：581-597(1991)分别描述了使用噬菌体文库分离鼠抗体和人抗体。后续出版物描述了通过链改组(Marks等，Bio/Technology 10：779-783(1992))，以及组合感染和体内重组作为构建非常大的噬菌体文库的策略(Waterhouse等，Nuc.Acids Res.21：2265-2266(1993))，生成高亲和力(nM范围)的人抗体。如此，这些技术是用于分离单克隆抗体的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行替换方法。
可以修饰编码抗体的DNA以生成嵌合或融合抗体多肽，例如通过用人重链和轻链恒定域(CH和CL)序列替代同源鼠序列(美国专利No.4,816,567；及Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851(1984))，或通过融合免疫球蛋白编码序列和非免疫球蛋白多肽(异源多肽)的整个或部分编码序列。非免疫球蛋白多肽序列可替代抗体的恒定域，或者用它们替代抗体的一个抗原结合位点的可变域，以产生嵌合二价抗体，它包含对一种抗原具有特异性的一个抗原结合位点以及对不同抗原具有特异性的另一个抗原结合位点。
3.人抗体和人源化抗体
本发明的抗CD79b抗体可进一步包括人源化抗体或人抗体。非人(例如鼠)抗体的人源化形式指最低限度包含自非人免疫球蛋白衍生的序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2或抗体的其它抗原结合子序列)。人源化抗体包括人免疫球蛋白(受体抗体)中的互补决定区(CDR)残基用具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠或家兔的CDR残基替换而得到的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的Fv框架残基用相应的非人残基替换。人源化抗体还可包含在受体抗体或所输入的CDR或框架序列中没有发现的残基。通常，人源化抗体包含至少一个、通常两个基本上整个如下的可变域，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列的FR区。人源化抗体最好还包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区(Jones等，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann等，Nature 332：323-329(1988)；及Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992))。
用于将非人抗体人源化的方法在本领域是众所周知的。通常，人源化抗体具有一个或多个从非人来源引入的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常常称作“输入”残基，它们通常取自“输入”可变域。人源化可基本上依照Winter及其同事的方法实施(Jones等，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann等，Nature 332：323-327(1988)；Verhoeyen等，Science 239：1534-1536(1988))，通过用啮齿类CDR序列替代相应的人抗体序列来进行。因而，此类“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利No.4,816,567)，其中基本上少于整个人可变域用来自非人物种的相应序列替代。在实践中，人源化抗体通常是将人抗体中的一些CDR残基和可能的一些FR残基用来自啮齿类抗体中类似位点的残基替代而得到的抗体。
当抗体意图在于人类治疗性用途时，用于生成人源化抗体的人可变域的选择，包括轻链和重链二者，对于降低抗原性和HAMA应答(人抗小鼠抗体)非常重要。HAMA应答降低或消除是合适治疗剂的临床开发的一个重要方面。参见例如Khaxzaeli等，J.Natl.Cancer Inst.(1988)，80：937；Jaffers等，Transplantation(1986)，41：572；Shawler等，J.Immunol.(1985)，135：1530；Sears等，J.Biol.Response Mod(1984)，3：138；Miller等，Blood(1983)，62：988；Hakimi等，J.Immunol.(1991)，147：1352；Reichmann等，Nature(1988)，332：323；Junghans等，Cancer Res(1990)，50：1495。如本文中所描述的，本发明提供了经人源化使得HAMA应答降低或消除的抗体。可使用本领域已知的常规方法(其中有些在下文中有进一步描述)进一步获得这些抗体的变体。依照所谓的“最适(best-fit)”方法，用啮齿类抗体可变域序列对已知的人可变域序列的整个文库进行筛选。鉴定与啮齿类最接近的人V结构域序列，并接受其中的人框架区(FR)用于人源化抗体(Sims等，J.Immunol.151：2296(1993)；Chothia等，J.Mol.Biol.196：901(1987))。另一种方法使用自轻链或重链特定亚型的所有人抗体的共有序列衍生的特定框架区。同一框架可用于数种不同的人源化抗体(Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：4285(1992)；Presta等，J.Immunol.151：2623(1993))。
例如，来自本文所述抗体的氨基酸序列可充当框架和/或高变序列多样化的起始(亲本)序列。起始高变序列所连接的选定框架序列在本文中称为受体人框架。尽管受体人框架可来自或衍生自人免疫球蛋白(其VL和/或VH区)，优选受体人框架来自或衍生自人共有框架序列，因为这样的框架已证实在人类患者中具有最小免疫原性或者没有免疫原性。
当受体衍生自人免疫球蛋白时，可任选选择根据它与供体框架序列的同源性而选择的人框架序列，即将供体框架序列与人框架序列集合中的各种人框架序列比对，并选择最具同源性的框架序列作为受体。
在一个实施方案中，本文中的人共有框架来自或衍生自VH亚组III和/或VLκ亚组I共有框架序列。
因此，VH受体人框架可包含一种、两种、三种或所有如下框架序列：
FR1包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO：143)，
FR2包含WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO：144)，
FR3包含FR3包含RFTISX1DX2SKNTX3YLQMNSLRAEDTAVYYC(SEQ IDNO：147)，其中X1是A或R，X2是T或N，而X3是A或L，
FR4包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：146)。
VH共有框架的例子包括：
人VH亚组I共有框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：108)；
人VH亚组I共有框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：109-111)；
人VH亚组II共有框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：112)；
人VH亚组II共有框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：113-115)；
人VH亚组III共有框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：116)；
人VH亚组III共有框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：117-119)；
人VH受体框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：120)；
人VH受体框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：121-122)；
人VH受体2框架减去Kabat CDR(SEQ ID NO：123)；或
人VH受体2框架减去延伸的高变区(SEQ ID NO：124-126)。
在一个实施方案中，VL受体人框架可包含一种、两种、三种或所有如下框架序列：
FR1包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO：143)，
FR2包含WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO：144)，
FR3包含RfTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYC(SEQ ID NO：145)，
RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCA(SEQ ID NO：148)，
RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：149)，
RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCS(SEQ ID NO：150)，或
RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSR(SEQ ID NO：151)
FR4包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：146)。
VL受体人框架可包含一种、两种、三种或所有如下框架序列：
FR1包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：139)，
FR2包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：140)，
FR3包含GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：141)，
FR4包含FGQGTKVEIKR(SEQ ID NO：142)。
VL共有框架的例子包括：
人VLκ亚组I共有框架(SEQ ID NO：127)；
人VLκ亚组II共有框架(SEQ ID NO：128)；
人VLκ亚组III共有框架(SEQ ID NO：129)；或
人VLκ亚组IV共有框架(SEQ ID NO：130)。
虽然受体可在序列上与选定的人框架序列相同，无论它是来自人免疫球蛋白或人共有框架，在本发明中，受体序列可包含相对于人免疫球蛋白序列或人共有框架序列而言预先存在的氨基酸替代。这些预先存在的替代优选是最小限度的；通常相对于人免疫球蛋白序列或共有框架序列而言的仅四处、三处、两处或一处氨基酸差异。
将非人抗体的高变区残基掺入VL和/或VH受体人框架。例如，可掺入对应于Kabat CDR残基、Chothia高变环残基、Abm残基和/或接触残基的残基。任选的是，掺入如下延伸的高变区残基：24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)，26-35B(H1)、50-65、47-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。
虽然本文中讨论了高变区残基的“掺入”，但是应当领会这可以各种方式实现，例如编码期望氨基酸序列的核酸可通过突变编码小鼠可变域序列的核酸使得其框架残基改变成受体人框架残基，或者通过突变编码人可变域序列的核酸使得高变域残基改变成非人残基，或者通过合成编码期望序列的核酸等等而产生。
在本文的例子中，高变区嫁接(graft)变体是使用各个高变区的各个寡核苷酸通过编码人受体序列的核酸的Kunkel诱变而产生的。Kunkel等，MethodsEnzymol.154：367-382(1987)。可利用常规技术在框架和/或高变区内引入合适的改变以纠正和重建正确的高变区-抗原相互作用。
噬菌体(噬菌粒)展示(本文在有些内容中也称为噬菌体展示)可作为方便快捷的方法用于在通过序列随机化构建的文库中生成和筛选许多不同的潜在变体抗体。然而，熟练技术人员可利用其它方法来制备和筛选改变的抗体。
噬菌体(噬菌粒)展示技术为生成和选择与配体诸如抗原结合的新蛋白质提供了有力的工具。噬菌体(噬菌粒)展示技术的使用容许构建大型蛋白质变体文库，可从中快速分拣以高亲和力与靶分子结合的那些序列。通常将编码变体多肽的核酸与编码病毒外壳蛋白诸如基因III蛋白或基因VIII蛋白的核酸序列融合。已经开发出了其中编码蛋白质或多肽的核酸序列与编码基因III蛋白一部分的核酸序列融合的单价噬菌粒展示系统(Bass，S.，Proteins，8：309(1990)；Lowman和Wells，Methods：A Companion to Methods  inEnzymology，3：205(1991))。在单价噬菌粒展示系统中，基因融合物以低水平表达，而且野生型基因III蛋白也表达，从而保留了粒子的侵染性。许多专利中已经公开了构建肽库和筛选那些文库的方法(例如美国专利No.5,723,286；美国专利No.5,432,018；美国专利No.5,580,717；美国专利No.5,427,908；和美国专利No.5,498,530)。
已经以许多方式制备了抗体或抗原结合多肽的文库，包括通过插入随机DNA序列或通过克隆一族相关基因来改变单个基因。利用噬菌体(噬菌粒)展示来展示抗体或抗原结合片段的方法记载于美国专利No.5,750,373、5,733,743、5,837,242、5,969,108、6,172,197、5,580,717和5,658,727。然后对文库筛选具期望特性的抗体或抗原结合蛋白的表达。
本领域已经建立了将所选择的氨基酸替代入模板核酸中的方法，本文中描述了其中的一些。例如，可使用Kunkel方法来替代高变区残基(参见例如Kunkel et al.，Methods Enzymol.154：367-382(1987))。
寡核苷酸序列包含待改变高变区残基的一个或多个期望密码子集合。密码子集合是用于编码期望变体氨基酸的不同核苷酸三联体序列的集合。密码子集合可用如下所示依照IUB密码指定特定核苷酸或等摩尔核苷酸混合物的符号来表示。
IUB代码
G    鸟嘌呤
A    腺嘌呤
T    胸腺嘧啶
C    胞嘧啶
R    (A或G)
Y    (C或T)
M    (A或C)
K    (G或T)
S    (C或G)
W    (A或T)
H    (A或C或T)
B  (C或G或T)
V  (A或C或G)
D  (A或G或T)
N  (A或C或G或T)
例如，在密码子集合DVK中，D可以是核苷酸A或G或T；V可以是A或G或C；而K可以是G或T。此密码子集合可代表18种不同的密码子，而且可编码氨基酸Ala、Trp、Tyr、Lys、Thr、Asn、Lys、Ser、Arg、Asp、Glu、Gly和Cys。
寡核苷酸或引物集合可用标准方法合成。可通过例如固相合成来合成包含如下序列的一套寡核苷酸，所述序列代表密码子集合所提供的核苷酸三联体所有可能组合且会编码期望氨基酸集合。在某些位置具有选定核苷酸“简并性”的寡核苷酸的合成是本领域众所周知的。具有某些密码子集合的此类核苷酸集合可使用商品化核酸合成仪(可从例如Applied Biosystems，FosterCity，CA购买)来合成，或者可通过商业途径获得(例如Life Technologies，Rockville，MD)。因此，具有特定密码子集合的合成寡核苷酸集合会通常包括具有不同序列的众多寡核苷酸，所述差异由整个序列内的密码子集合确定。依照本发明使用的寡核苷酸具有容许与可变域核酸模板杂交的序列且还可包含用于克隆目的的限制酶位点。
在一种方法中，可通过寡核苷酸介导的诱变来产生编码变体氨基酸的核酸序列。此技术是本领域众所周知的，如Zoller等，Nucleic Acids Res.10：6487-6504(1987)中所述。简单的说，编码变体氨基酸的核酸序列是如下产生的，将编码期望密码子集合的寡核苷酸集合与DNA模板杂交，其中模板是包含可变区核酸模板序列的单链形式质粒。杂交后，用DNA聚合酶合成模板的完整第二条互补链，其由此会掺入寡核苷酸引物，并会含有寡核苷酸集合所提供的密码子集合。
通常使用长度为至少25个核苷酸的寡核苷酸。最佳寡核苷酸会有12至15个核苷酸与编码突变的核苷酸任一侧的模板完全互补。这确保了寡核苷酸会与单链DNA模板分子正确杂交。寡核苷酸易于使用本领域已知的技术合成，诸如Crea等，Proc.Nat′l.Acad.Sci.USA，75：5765(1978)中所述。
DNA模板是由衍生自噬菌体M13载体(商品化M13mp18和M13mp19载体是合适的)的那些载体或如Viera等，Meth.Enzymol.，153：3(1987)中所述包含单链噬菌体复制起点的那些载体产生的。因此，为了产生单链模板，可将待突变的DNA插入这些载体之一。Sambrook等(见上文)在第4.21-4.41节中记载了单链模板的产生。
为了改变天然DNA序列，在合适的杂交条件下将寡核苷酸与单链模板杂交。然后加入DNA聚合酶，通常是T7DNA聚合酶或DNA聚合酶I的Klenow片段，以所述寡核苷酸作为合成的引物合成所述模板的互补链。由此形成异源双链体分子，其中DNA的一条链编码基因1的突变形式，另一条链(最初的模板)编码天然的、未改变的基因1序列。然后将此异源双链体分子转化到合适的宿主细胞中，通常是原核生物，诸如大肠杆菌JM101。培养细胞后，将它们涂布到琼脂糖平板上，并用32-磷酸盐放射性标记的寡核苷酸引物进行筛选，以鉴定包含突变DNA的细菌菌落。
可修改上文刚刚描述的方法，以便产生其中质粒两条链均包含突变的同源双链体分子。修改如下：如上所述将单链寡核苷酸与单链模板退火。将三种脱氧核糖核苷酸：脱氧核糖腺苷酸(dATP)、脱氧核糖鸟苷酸(dGTP)和脱氧核糖胸苷酸(dTT)的混合物与称为dCTP-(aS)(可从Amersham购买)的修饰硫代脱氧核糖胞苷酸混合。将此混合物加入模板-寡核苷酸复合物中。向此混合物中添加DNA聚合酶后，产生了除突变碱基外与模板相同的一条DNA链。此外，这条新的DNA链会包含dCTP-(aS)替代dCTP，这用于保护它不受限制性内切核酸酶的消化。在用恰当的限制酶对双链异源双链体的模板链造成缺刻后，可用ExoIII核酸酶或其它适当的核酸酶消化模板链，越过包含待诱变位点的区域。然后终止反应，剩下只有部分是单链的分子。然后在存在所有四种脱氧核糖核苷三磷酸、ATP和DNA连接酶的条件下用DNA聚合酶形成完整的双链DNA同源双链体。然后可将此同源双链体分子转化到合适的宿主细胞中。
正如先前所指出的，寡核苷酸集合的序列在长度上足以与模板核酸杂交，而且还可以，但不是必须的，包含限制性位点。可由衍生自噬菌体M13载体或如Viera等，Meth.Enzymol.，153：3(1987)中所述包含单链噬菌体复制起点的载体的那些载体生成DNA模板。因此，为了生成单链模板，必须将待突变DNA插入这些载体之一。Sambrook等人(见上文)在第4.21-4.41节中记载了单链模板的产生。
依照另一种方法，可以在抗体人源化期间经由对修复的高变区的选择来恢复抗原结合(参见2005年2月18日提交的申请No.11/061,841)。该方法包括将非人高变区掺到受体框架上并进一步在一个或多个高变区中引入一处或多处替代，而不修饰受体框架序列。或者，一处或多处氨基酸替代的引入可伴有受体框架序列中的修饰。
依照另一种方法，可如下构建文库，即提供上游和下游寡核苷酸集合，每个集合含有具有不同序列的众多寡核苷酸，即由寡核苷酸序列内所提供的密码子集合确定的不同序列。上游和下游寡核苷酸集合，与可变域模板核酸序列一起，可用于聚合酶链式反应(PCR)，以产生PCR产物“文库”。PCR产物可称为“核酸盒”，因为利用已建立的分子生物学技术，可将它们与其它相关或无关的核酸序列融合，例如病毒外壳蛋白和二聚化结构域。
PCR引物序列包含高变区中溶剂可及的且高度多样的位置的一个或多个设计密码子集合。如上所述，密码子集合是用于编码期望变体氨基酸的不同核苷酸三联体序列的集合。
通过适当的筛选/选择步骤选定的符合预期标准的抗体选出物(selectant)可使用标准重组技术进行分离和克隆。
更为重要的是，抗体在人源化后保持对抗原的高结合亲和力及其它有利的生物学特性。为了实现这一目的，依照一种优选的方法，通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的方法来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的，且为本领域熟练技术人员所熟悉。还可获得图解和显示所选择的候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序。检查这些显示图像能够分析残基在候选免疫球蛋白序列行使功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从受体和输入序列中选出FR残基并进行组合，从而获得所需抗体特征，诸如对靶抗原的亲和力提高。通常，高变区残基直接且最实质的涉及对抗原结合的影响。
本发明涵盖人源化抗CD79b抗体的各种形式。例如，人源化抗体可以是抗体片段，诸如Fab，任选偶联有一种或多种细胞毒剂以生成免疫偶联物。或者，人源化抗体可以是完整的抗体，诸如完整的IgG1抗体。
作为人源化的替代方法，可生成人抗体。例如，现在有可能生成在缺乏内源免疫球蛋白生成的情况下能够在免疫后生成人抗体完整全集的转基因动物(例如小鼠)。例如，已经描述了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合删除导致对内源抗体生成的完全抑制。将人种系免疫球蛋白基因阵列(array)转移到此类种系突变小鼠中会导致在抗原攻击后生成人抗体。参见例如Jakobovits等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：2551(1993)；Jakobovits等，Nature 362：255-258(1993)；Bruggemann等，Year in Immuno.7：33(1993)；美国专利No.5,545,806，5,569,825，5,591,669(都是GenPharm的)；5,545,807；及WO 97/17852。
或者，噬菌体展示技术(McCafferty等，Nature 348：552-553(1990))可用于在体外从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变(V)域基因全集生成人抗体和抗体片段。依照这种技术，将抗体V结构域基因以符合读码框的方式克隆到丝状噬菌体诸如M13或fd的主要或次要外壳蛋白基因中，并在噬菌体颗粒表面上展示为功能性抗体片段。因为丝状颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝，以抗体的功能特性为基础进行的选择也导致编码展示那些特性的抗体的基因的选择。如此，噬菌体模拟B细胞的一些特性。噬菌体展示可以多种形式进行，综述参见例如Johnson，Kevin S.和Chiswell，David J.，CurrentOpinion in Structural Biology 3：564-571(1993)。V基因区段的数种来源可用于噬菌体展示。Clackson等，Nature 352：624-628(1991)从衍生自免疫小鼠脾的小型V基因随机组合文库分离得到大量不同的抗噁唑酮抗体。可基本上遵循Marks等，J.Mol.Biol.222：581-597(1991)或Griffith等，EMBO J.12：725-734(1993)所述技术，由未免疫人供体构建V基因全集，并分离针对大量不同抗原(包括自身抗原)的抗体。还可参见美国专利No.5,565,332和5,573,905。
如上所述，还可通过体外激活B细胞(参见美国专利No.5,567,610和5,229,275)来生成人抗体。
4.抗体片段
在某些情况中，使用抗体片段而非完整抗体是有利的。片段的体积较小，容许快速清除，并且可导致对实体瘤的接近和进入提高。
已经开发了用于生成抗体片段的多种技术。传统上，通过蛋白水解消化完整抗体来衍生这些片段(参见例如Morimoto等，Journal of Biochemical andBiophysical Methods 24：107-117(1992)；及Brennan等，Science 229：81(1985))。然而，现在可直接由重组宿主细胞生成这些片段。Fab、Fv和scFv抗体片段都可在大肠杆菌中表达和由大肠杆菌分泌，如此容许容易地生成大量的这些片段。可从上文讨论的抗体噬菌体文库分离抗体片段。或者，可直接从大肠杆菌回收Fab′-SH片段，并通过化学方法偶联以形成F(ab′)2片段(Carter等，Bio/Technology 10：163-167(1992))。依照另一种方法，可直接从重组宿主细胞培养物分离F(ab′)2片段。包含补救受体结合表位残基、具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab′)2片段描述于美国专利No.5,869,046。用于生成抗体片段的其它技术对熟练从业人员是显而易见的。在其它实施方案中，选择的抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185；美国专利No.5,571,894；及美国专利No.5,587,458。Fv和sFv是具有完整结合位点且缺乏恒定区的唯一种类；如此，它们是合适的，因为在体内使用过程中具有降低的非特异性结合。可构建sFv融合蛋白以生成效应物蛋白质位于sFv氨基或羧基末端的融合物。参见《Antibody Engineering》，Borrebaeck编，见上文。抗体片段还可以是“线性抗体”，例如如美国专利No.5,641,870中所描述的。此类线性抗体片段可以是单特异性的或双特异性的。
5.双特异性抗体
双特异性抗体指对至少两种不同表位具有结合特异性的抗体。例示性的双特异性抗体可结合本文所述CD79b蛋白质的两种不同表位。其它此类抗体可将CD79b结合位点与针对另一种蛋白质的结合位点组合。或者，可以将抗CD79b臂与结合白细胞上触发分子诸如T细胞受体分子(例如CD3)或IgG的Fc受体(FcγR)诸如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)的臂组合，从而将细胞防御机制聚焦和定位于表达CD79b的细胞。双特异性抗体还可用于将细胞毒剂定位于表达CD79b的细胞。这些抗体拥有CD79b结合臂及结合细胞毒剂(例如肥皂草毒蛋白(saporin)、抗干扰素-α、长春花生物碱(vincaalkaloid)、蓖麻毒蛋白A链、甲氨蝶呤或放射性同位素半抗原)的臂。可将双特异性抗体制备成全长抗体或抗体片段(例如F(ab′)2双特异性抗体)。
WO 96/16673描述了双特异性抗ErbB2/抗FcγRIII抗体，而美国专利No.5,837,234公开了双特异性抗ErbB2/抗FcγRI抗体。双特异性抗ErbB2/Fcα抗体显示于WO 98/02463。美国专利No.5,821,337教导了双特异性抗ErbB2/抗CD3抗体。
用于生成双特异性抗体的方法是本领域已知的。全长双特异性抗体的传统生成基于两种免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，其中两种链具有不同的特异性(Millstein等，Nature 305：537-539(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadroma))生成10种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和层析步骤进行的正确分子的纯化相当麻烦，且产物产量低。WO 93/08829及Traunecker等，EMBO J.10：3655-3659(1991)中公开了类似的流程。
依照一种不同的方法，将具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域与免疫球蛋白恒定域序列融合。优选的是，融合使用包含至少部分铰链、CH2和CH3区的免疫球蛋白重链恒定域。优选的是，在至少一种融合物中具有包含轻链结合所必需的位点的第一重链恒定区(CH1)。将编码免疫球蛋白重链融合物以及，如果需要，免疫球蛋白轻链的DNA插入分开的表达载体中，并共转染到合适的宿主细胞中。在用于构建的三种多肽链比例不等时提供期望双特异性抗体的最佳产量的实施方案中，这为调整三种多肽片段的相互比例提供了更大的灵活性。然而，在至少两种多肽链以相同比率表达导致高产量时或在该比率对期望链组合的产量没有显著影响时，有可能将两种或所有三种多肽链的编码序列插入同一表达载体。
在本方法的一个优选实施方案中，双特异性抗体由一个臂上具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链，和另一个臂上的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。由于免疫球蛋白轻链仅在半个双特异性分子中的存在提供了分离的便利途径，因此发现这种不对称结构便于将所需双特异性化合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开。该方法公开于WO94/04690。关于生成双特异性抗体的其它细节参见例如Suresh等，Methods inEnzymology 121：210(1986)。
依照美国专利No.5,731,168中描述的另一种方法，可改造一对抗体分子之间的界面，将从重组细胞培养物中回收的异二聚体的百分比最大化。优选的界面包含至少部分CH3结构域。在该方法中，将第一抗体分子界面的一个或多个小型氨基酸侧链用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换。通过用较小氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换大型氨基酸侧链，在第二抗体分子的界面上产生大小与大型侧链相同或相似的补偿性“空腔”。这提供了较之其它不想要的终产物诸如同二聚体提高异二聚体产量的机制。
双特异性抗体包括交联或“异源偶联”抗体。例如，异源偶联物中的一种抗体可与亲合素偶联，另一种抗体与生物素偶联。例如，此类抗体建议用于将免疫系统细胞靶向不想要的细胞(美国专利No.4,676,980)，及用于治疗HIV感染(WO 91/00360、WO 92/200373及EP 03089)。可使用任何便利的交联方法制备异源偶联抗体。合适的交联剂是本领域众所周知的，并且连同许多交联技术一起公开于美国专利No.4,676,980。
文献中还描述了由抗体片段生成双特异性抗体的技术。例如，可使用化学连接来制备双特异性抗体。Brennan等，Science 229：81(1985)描述了一种规程，其中通过蛋白水解切割完整抗体以生成F(ab′)2片段。将这些片段在存在二硫醇络合剂亚砷酸钠的情况下还原，以稳定邻近的二硫醇并防止分子间二硫键的形成。然后将产生的Fab′片段转变为硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。然后将Fab′-TNB衍生物之一通过巯基乙胺的还原重新恢复成Fab′-硫醇，并与等摩尔量的另一种Fab′-TNB衍生物混合，以形成双特异性抗体。产生的双特异性抗体可用作酶的选择性固定化试剂。
最近的进展使得从大肠杆菌中直接回收Fab′-SH片段变得更加容易，这些片段可化学偶联以形成双特异性抗体。Shalaby等，J.Exp.Med.175：217-225(1992)描述了完全人源化的双特异性抗体F(ab′)2分子的生成。每个Fab′片段由大肠杆菌分开分泌，并在体外进行定向化学偶联以形成双特异性抗体。如此形成的双特异性抗体能够结合过表达ErbB2受体的细胞和正常人T细胞，以及触发人细胞毒性淋巴细胞针对人乳房肿瘤靶的溶解活性。
还描述了从重组细胞培养物直接制备和分离双特异性抗体片段的多种技术。例如，已使用亮氨酸拉链生成双特异性抗体。Kostelny等，J.Immunol.148(5)：1547-1553(1992)。将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两种不同抗体的Fab′部分连接。抗体同二聚体在铰链区还原而形成单体，然后重新氧化而形成抗体异二聚体。这种方法也可用于生成抗体同二聚体。由Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)描述的“双抗体(diabody)”技术提供了制备双特异性抗体片段的替代机制。该片段包含通过接头相连的VH和VL，所述接头太短使得同一条链上的两个结构域之间不能配对。因而，迫使一个片段上的VH和VL结构域与另一个片段上的互补VL和VH结构域配对，由此形成两个抗原结合位点。还报道了通过使用单链Fv(scFv)二聚体制备双特异性抗体片段的另一种策略。参见Gruber等，J.Immunol.152：5368(1994)。
涵盖具有超过两个效价的抗体。例如，可制备三特异性抗体。Tutt等，J.Immunol.147：60(1991)。
6.异源偶联抗体
异源偶联抗体也在本发明的范围之内。异源偶联抗体由两种共价连接的抗体构成。此类抗体建议例如用于将免疫系统细胞靶向不想要的细胞(美国专利No.4,676,980)及用于治疗HIV感染(WO 91/00360；WO 92/200373；EP03089)。可在体外使用合成蛋白质化学的已知方法制备抗体，包括那些涉及交联剂的方法。例如，可使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。适于此目的的试剂的例子包括亚氨基硫醇酯/盐(iminothiolate)和4-巯基丁亚氨酸甲酯(methyl-4-mercaptobutyrimidate)及例如美国专利No.4,676,980中所公开的。
7.多价抗体
多价抗体可以比二价抗体更快地受到表达该抗体所结合抗原的细胞的内化(和/或异化)。本发明的抗体可以是具有三个或更多抗原结合位点(例如四价抗体)的多价抗体(不同于IgM类)，其可容易地通过编码抗体多肽链的核酸的重组表达来生成。多价抗体可包含二聚化结构域和三个或更多抗原结合位点。优选的二聚化结构域包含(或由其组成)Fc区或铰链区。在这种情况中，抗体可包含Fc区及Fc区氨基末端的三个或更多抗原结合位点。本文中优选的多价抗体包含(或由其组成)三个至约八个，但优选四个抗原结合位点。多价抗体包含至少一条多肽链(且优选两条多肽链)，其中所述多肽链包含两个或多个可变域。例如，多肽链可包含VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1是第一可变域，VD2是第二可变域，Fc是Fc区的一条多肽链，X1和X2代表氨基酸或多肽，而n是0或1。例如，多肽链可包含：VH-CH1-柔性接头-VH-CH1-Fc区链；或VH-CH1-VH-CH1-Fc区链。本文中的多价抗体优选进一步包含至少两条(且优选四条)轻链可变域多肽。本文中的多价抗体可包含例如约两条至约八条轻链可变域多肽。本文涵盖的轻链可变域多肽包含轻链可变域，且任选进一步包含CL结构域。
8.效应器功能的工程改造
可能希望在效应器功能方面修饰本发明的抗体，例如为了增强抗体的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。这可通过在抗体Fc区中引入一个或多个氨基酸替代来实现。或者/另外，可在Fc区中引入半胱氨酸残基，从而容许在该区中形成链间二硫键。如此生成的同二聚体抗体可具有改善的内化能力和/或提高的补体介导的细胞杀伤和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。参见Caron等，J.Exp.Med.176：1191-1195(1992)及Shopes，B.，J.Immunol.148：2918-2922(1992)。具有增强的抗肿瘤活性的同二聚体抗体还可使用如Wolff等，Cancer Research 53：2560-2565(1993)中描述的异双功能交联剂来制备。或者，抗体可改造成具有双重Fc区，由此可具有增强的补体溶解和ADCC能力。参见Stevenson等，Anti-Cancer药物Design 3：219-230(1989)。为了提高抗体的血清半衰期，可如例如美国专利No.5,739,277中所述将补救受体结合表位掺入抗体(尤其是抗体片段)中。在用于本文时，术语“补救(salvage)受体结合表位”指IgG分子(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)Fc区中负责提高IgG分子体内血清半衰期的表位。
9.免疫偶联物
本发明还关于包含偶联有细胞毒剂的抗体的免疫偶联物(可互换地称作“抗体-药物偶联物”或“ADC”)，所述细胞毒剂诸如化疗剂、生长抑制剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物起源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射偶联物)。
在某些实施方案中，免疫偶联物包含抗体和化疗剂或其它毒素。上文已经描述了可用于生成此类免疫偶联物的化疗剂。可使用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒蛋白A链、α-帚曲霉素、油桐(Aleurites fordii)蛋白、香石竹蛋白(dianthin proteins)、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒蛋白、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素和单端孢菌素。多种放射性核素可用于生成放射偶联抗体。实例包括212Bi、131I、131In、90Y和186Re。抗体和细胞毒剂的偶联物可使用多种双功能蛋白质偶联剂来制备，诸如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)、活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2，6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)的双功能衍生物。例如，可如Vitetta等，Science 238：1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰酸苯甲基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体偶联的示例性的螯合剂。参见WO 94/11026。
本文还设想了抗体与一种或多种小分子毒素(如加利车霉素、auristatin肽诸如monomethylauristatin(MMAE)(多拉司他汀的合成类似物)、美登木素生物碱类诸如DM1、单端孢霉素和CC1065，及这些毒素具有毒素活性的衍生物)的偶联物。
例示性的免疫偶联物-抗体-药物偶联物
本发明的免疫偶联物(或“抗体-药物偶联物”(“ADC”))可以是下文通式I，其中抗体经任选的接头(L)与一个或多个药物模块(D)偶联(即共价附着)。ADC可以包括thioMAb药物偶联物(“TDC”)。
Ab-(L-D)p    式I
因而，抗体可直接地或经接头地偶联至药物。在通式I中，p是每个抗体的平均药物模块数，其范围可以是例如每个抗体约1个到约20个药物模块，在某些实施方案中是每个抗体1个到约8个药物模块。本发明包括包含式I抗体-药物偶联物的混合物的组合物，其中每个抗体的平均药物载荷是约2个至约5个或约3个至约4个。
a.例示性的接头
接头可以包含一种或多种接头构件。例示性的接头构件包括6-马来酰亚氨基己酰基(“MC”)、马来酰亚氨基丙酰基(“MP”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”)、对氨基苄氧羰基(“PAB”)、及那样源自与接头试剂的偶联的：N-琥珀酰亚氨基4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(“SPP”)、N-琥珀酰亚氨基4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1羧酸酯(“SMCC”，在本文中也称作“MCC”)和N-琥珀酰亚氨基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯(“SIAB”)。本领域知道多种接头构件，下文也描述了一些。
接头可以是便于在细胞中释放药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二甲基接头或含二硫化物接头(Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)；美国专利No.5,208,020)。
在某些实施方案中，接头是如下面式II所示的：
-Aa-Ww-Yy-               II
其中A是延伸物(stretcher)单元，而a是0到1的整数；W是氨基酸单元，而w是0到12的整数；Y是间隔物单元，而y是0、1或2；且Ab、D和p如上文通式I的定义。此类接头的例示性实施方案记载于US 2005-0238649A1，明确收入本文作为参考。
在有些实施方案中，接头构件可以包含将抗体连接至另一接头构件或药物模块的“延伸物单元”。例示性的延伸物单元显示于下文(其中波形线指示共价附着至抗体的位点)：
Figure GPA00001058503001521
在有些实施方案中，接头构件可以包含氨基酸单元。在一个这样的实施方案中，氨基酸单元容许蛋白酶切割接头，由此便于在暴露于胞内蛋白酶(诸如溶酶体酶)后从免疫偶联物释放药物。参见例如Doronina等(2003)Nat.Biotechnol.21：778-784。例示性的氨基酸单元包括但不限于二肽、三肽、四肽和五肽。例示性的二肽包括：缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)；丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)；苯丙氨酸-赖氨酸(fk或phe-lys)；或N-甲基-缬氨酸-瓜氨酸(Me-val-cit)。例示性的三肽包括：甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。氨基酸单元可以包含天然存在的氨基酸残基，以及次要氨基酸(minor amino acid)和非天然存在氨基酸类似物，诸如瓜氨酸。氨基酸单元可以在它们对特定酶(例如肿瘤相关蛋白酶，组织蛋白酶B、C和D，或血浆蛋白酶)的酶促切割的选择性方面进行设计和优化。
在有些实施方案中，接头构件可以包含将抗体连接(或是直接的或是通过延伸物单元和/或氨基酸单元)至药物模块的“间隔物”单元。间隔物单元可以是“自我牺牲的”(self-immolative)或“非自我牺牲的”。“非自我牺牲的”间隔物单元指间隔物单元的部分或整体在ADC的酶促(蛋白水解)切割后保持结合于药物模块的间隔物单元。非自我牺牲的间隔物单元的例子包括但不限于甘氨酸间隔物单元和甘氨酸-甘氨酸间隔物单元。还涵盖对序列特异性酶促切割敏感的肽间隔物的其它组合。例如，肿瘤细胞相关蛋白酶对含甘氨酸-甘氨酸间隔物单元的ADC的酶促切割将导致甘氨酸-甘氨酸-药物模块从ADC的剩余部分释放。在一个这样的实施方案中，甘氨酸-甘氨酸-药物模块然后在肿瘤细胞中进行分开的水解步骤，如此从药物模块切割甘氨酸-甘氨酸间隔物单元。
“自我牺牲的”间隔物单元容许释放药物模块而没有分开的水解步骤。在某些实施方案中，接头的间隔物单元包含对氨基苄基单元。在一个这样的实施方案中，将对氨基苯甲醇经酰胺键附着至氨基酸单元，并且在苯甲醇与细胞毒剂之间生成氨基甲酸酯、甲基氨基甲酸酯或碳酸酯。参见例如Hamann等(2005)Expert Opin.Ther.Patents(2005)15：1087-1103。在一个实施方案中，间隔物单元是对氨基苄氧羰基(PAB)。在某些实施方案中，对氨基苄基单元的亚苯基部分是用Qm取代的，其中Q是-C1-C8烃基、-O-(C1-C8烃基)、-卤素、-硝基或-氰基；而m是范围为0-4的整数。自我牺牲的间隔物单元的例子进一步包括但不限于在电子上与对氨基苯甲醇相似的芳香族化合物(参见例如US2005/0256030A1)，诸如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(Hay等(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9：2237)和邻位或对位氨基苄基乙缩醛。可以使用在酰胺键水解后发生环化的间隔物，诸如取代的和未取代的4-氨基丁酸酰胺(Rodrigues等，Chemistry Biology，1995，2，223)；适当取代的双环[2.2.1]和双环[2.2.2]环体系(Storm，等，J.Amer.Chem.Soc.，1972，94，5815)；及2-氨基苯基丙酸酰胺(Amsberry等，J.Org.Chem.，1990，55，5867)。消除在甘氨酸a位取代的含胺药物(Kingsbury等，J.Med.Chem.，1984，27，1447)也是可用于ADC的自我牺牲的间隔物的例子。
在一个实施方案中，间隔物单元是下文所示分支的双(羟甲基)苯乙烯(BHMS)单元，其可用于掺入和释放多个药物。
其中Q是-C1-C8烃基、-O-(C1-C8烃基)、-卤素、硝基或氰基；m是范围为0-4的整数；n是0或1；而p的范围是1到约20。
在另一个实施方案中，接头L可以为树枝状类型接头，其用于通过支化多官能接头模块与抗体共价结合一个以上药物模块(Sun等(2002)Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 12：2213-2215；Sun等(2003)Bioorganic&Medicinal Chemistry 11：1761-1768)。树枝状接头可以增加药物与抗体的摩尔比，即载荷，它与ADC的效能相关。因此，如果半胱氨酸改造的抗体仅带有一个反应性半胱氨酸巯基，那么可以通过树枝状接头结合众多药物模块。
显示了下文通式II的ADC背景中的例示性接头构件及其组合：
Figure GPA00001058503001542
Val-Cit或VC
Figure GPA00001058503001551
MC-val-cit
Figure GPA00001058503001552
MC-val-cit-PAB
接头构件，包括延伸物、间隔物和氨基酸单元，可以通过本领域已知方法合成，诸如US 2005-0238649A1中所记载的。
b.例示性的药物模块
(1)美登素和美登木素生物碱类
在有些实施方案中，免疫偶联物包含偶联有一个或多个美登木素生物碱分子的抗体。美登木素生物碱类是通过抑制微管蛋白多聚化来发挥作用的有丝分裂抑制剂。美登素最初从东非灌木齿叶美登木(Maytenus serrata)分离得到(美国专利3,896,111)。随后发现某些微生物也生成美登木素生物碱类，诸如美登醇和C-3美登醇酯(美国专利4,151,042)。例如下列美国专利公开了合成美登醇及其衍生物和类似物：4,137,230；4,248,870；4,256,746；4,260,608；4,265,814；4,294,757；4,307,016；4,308,268；4,308,269；4,309,428；4,313,946；4,315,929；4,317,821；4,322,348；4,331,598；4,361,650；4,364,866；4,424,219；4,450,254；4,362,663；及4,371,533。
美登木素生物碱类药物模块在抗体药物偶联物中是有吸引力的药物模块，因为它们：(i)相对易于通过发酵或发酵产物的化学修饰或衍生化来制备；(ii)易于用适于通过二硫化物和非二硫化物接头的偶联的官能基衍生化；(iii)在血浆中稳定；且(iv)有效针对多种肿瘤细胞系。
适于用作美登木素生物碱类药物模块的美登素化合物是本领域公知的，而且可以依照已知方法从天然来源分离，或是使用遗传工程和发酵技术生产(US 6790952；US 2005/0170475；Yu et al(2002)PNAS 99：7968-7973)。美登醇和美登醇类似物也可以依照已知方法合成制备。
例示性的美登木素生物碱类药物模块包括那些具有修饰的芳香环的，诸如：C-19-脱氯(美国专利No.4256746)(通过安丝菌素(ansamytocin)P2的氢化铝锂还原来制备)；C-20-羟基(或C-20-脱甲基)+/-C-19-脱氯(美国专利No.4361650和4307016)(通过使用链霉菌或放线菌的脱甲基化或使用LAH的脱氯化来制备)；及C-20-脱甲氧基，C-20-酰氧基(-OCOR)，+/-脱氯(美国专利No.4,294,757)(通过使用酰氯的酰化来制备)，以及在其它位置具有修饰的。
例示性的美登木素生物碱类药物模块还包括那些具有修饰的，诸如：C-9-SH(美国专利No.4424219)(通过美登醇与H2S或P2S5的反应来制备)；C-14-烷氧基甲基(脱甲氧基/CH2OR)(US 4331598)；C-14-羟甲基或酰氧甲基(CH2OH或CH2OAc)(美国专利No.4450254)(自诺卡氏菌制备)；C-15-羟基/酰氧基(US 4364866)(通过链霉菌对美登醇的转化来制备)；C-15-甲氧基(美国专利No.4313946和4315929)(自Trewia nudlflora分离)；C-18-N-脱甲基(美国专利No.4362663和4322348)(通过链霉菌对美登醇的脱甲基化来制备)；及4，5-脱氧(US 4371533)(通过美登醇的三氯化钛/LAH还原来制备)。
已知美登素化合物上的许多位置作为连接位置是有用的，这取决于连接的类型。例如，为了形成酯键，具有羟基的C-3位、用羟甲基修饰的C-14位、用羟基修饰的C-15位和具有羟基的C-20位均是合适的(US 5208020；USRE39151；US 6913748；US 7368565；US 2006/0167245；US 2007/0037972)。
美登木素生物碱药物模块包括那些具有如下结构的：
Figure GPA00001058503001561
其中波状线表示美登木素生物碱药物模块的硫原子附着至ADC的接头。R可以独立为H或C1-C6烃基。使酰胺基附着至硫原子的亚烃基链可以为甲基(methanyl)、乙基(ethanyl)或丙基，即m为1、2或3(US 633410；US 5208020；US7276497；Chari et al(1992)Cancer Res.52：127-131；Liu et al(1996)Proc.Natl.Acad.Sci USA 93：8618-8623)。
本发明的化合物涵盖美登木素生物碱药物模块的所有立体异构体，即D的手性碳处的R和S构型的任何组合。在一个实施方案中，美登木素生物碱药物模块会具有如下的立体化学：
Figure GPA00001058503001571
美登木素生物碱类药物模块的例示性实施方案包括具有如下结构的DM1、DM3和DM4：
Figure GPA00001058503001572
Figure GPA00001058503001581
其中波形线指示药物的硫原子对抗体-药物偶联物的接头(L)的共价附着(WO2005/037992；US 2005/0276812A1)。
其它例示性的美登木素生物碱类抗体-药物偶联物具有如下结构和缩写(其中Ab是抗体，而p是1到约8)：
Figure GPA00001058503001582
Ab-SPP-DM1
Figure GPA00001058503001591
Ab-SPDB-DM4
Ab-SMCC-DM1
其中DM1经BMPEO接头连接抗体硫醇基的例示性抗体-药物偶联物具有如下结构和缩写：
Figure GPA00001058503001593
其中Ab是抗体；n是0、1或2；而p是1、2、3或4。
例如下列专利公开了包含美登木素生物碱类的免疫偶联物及其制备方法和治疗用途：Erickson，et al(2006)Cancer Res.66(8)：4426-4433；美国专利5,208,020；5,416,064；US 2005/0276812A1；及欧洲专利EP 0425235B1，明确将其公开内容收入本文作为参考。
抗体-美登木素生物碱偶联物通过将抗体与美登木素生物碱分子化学连接且不显著削弱抗体或美登木素生物碱分子的生物学活性来制备。参见例如美国专利No.5,208,020，明确将其公开内容收入本文作为参考。美登木素生物碱类可通过已知技术合成或从天然来源分离。例如美国专利5,208,020和上文提及的其它专利及非专利发表物中公开了合适的美登木素生物碱类，诸如美登醇和美登醇分子的芳香环或其它位置经过修饰的美登醇类似物，诸如各种美登醇酯。
本领域知道许多接头团可用于制备抗体-美登木素生物碱偶联物，包括例如美国专利5,208,020或欧洲专利0425235B1；Chari et al.，Cancer Research52：127-131(1992)；及US 2005/016993A1中所公开的，明确将其公开内容收入本文作为参考。包含接头构件SMCC的抗体-美登木素生物碱类偶联物可以如US 2005/0276812A1，“Antibody-drug conjugates and Methods”中所披露的来制备。接头包含二硫化物基团、硫醚基团、酸不稳定基团、光不稳定基团、肽酶不稳定基团或酯酶不稳定基团，正如上文所述专利中所公开的。本文中描述和例示了别的接头。
可使用多种双功能蛋白质偶联剂来制备抗体和美登木素生物碱的偶联物，诸如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)、活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2，6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)的双功能衍生物。在某些实施方案中，偶联剂是N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)(Carlsson et al.，Biochem.J.173：723-737(1978))或N-琥珀酰亚氨基-4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(SPP)，由此提供二硫键连接。
根据连接的类型，可将接头附着于美登木素生物碱分子的多个位置。例如，可使用常规偶联技术通过与羟基的反应来形成酯键。反应可发生在具有羟基的C-3位置、经羟甲基修饰的C-14位置、经羟基修饰的C-15位置和具有羟基的C-20位置。在一个实施方案中，在美登醇或美登醇类似物的C-3位置形成键连接。
(2)Auristatin和多拉司他汀
在有些实施方案中，免疫偶联物包含与多拉司他汀(dolastatin)或多拉司他汀肽类似物或衍生物(例如auristatin)(美国专利No.5,635,483；5,780,588)偶联的抗体。多拉司他汀类和auristatin类已经显示出干扰微管动力学、GTP水解、及核和细胞分裂(Woyke et al(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12)：3580-3584)且具有抗癌(美国专利No.5663149)和抗真菌活性(Pettit et al(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42：2961-2965)。多拉司他汀或auristatin药物模块可经由肽药物模块的N(氨基)末端或C(羧基)末端附着于抗体(WO02/088172)。
例示性的auristatin实施方案包括N-末端连接的单甲基auristatin药物模块DE和DF(US 2005/0238649，披露于Senter et al，Proceedings of the AmericanAssociation for Cancer Research，Volume 45，Abstract Number 623，presentedMarch 28，2004，明确将其公开内容完整收入本文作为参考)。
肽药物模块可以选自下文通式DE和DF：
Figure GPA00001058503001611
其中DE和DF的波形线指示抗体或抗体-接头构件的共价附着位点，且每个位置是独立的
R2选自H和C1-C8烷基；
R3选自H、C1-C8烷基、C3-C8碳环、芳基、C1-C8烷基-芳基、C1-C8烷基-(C3-C8碳环)、C3-C8杂环和C1-C8烷基-(C3-C8杂环)；
R4选自H、C1-C8烷基、C3-C8碳环、芳基、C1-C8烷基-芳基、C1-C8烷基-(C3-C8碳环)、C3-C8杂环和C1-C8烷基-(C3-C8杂环)；
R5选自H和甲基；
或者R4与R5一起形成碳环且具有通式-(CRaRb)n-，其中Ra和Rb独立地选自H、C1-C8烷基和C3-C8碳环，而n选自2、3、4、5和6；
R6选自H和C1-C8烷基；
R7选自H、C1-C8烷基、C3-C8碳环、芳基、C1-C8烷基-芳基、C1-C8烷基-(C3-C8碳环)、C3-C8杂环和C1-C8烷基-(C3-C8杂环)；
每个R8独立地选自H、OH、C1-C8烷基、C3-C8碳环和O-(C1-C8烷基)；
R9选自H和C1-C8烷基；
R10选自芳基或C3-C8杂环；
Z为O、S、NH或NR12，其中R12为C1-C8烷基；
R11选自H、C1-C20烷基、芳基、C3-C8杂环、-(R13O)m-R14或-(R13O)m-CH(R15)2；
m是范围为1-1000的整数；
R13为C2-C8烷基；
R14为H或C1-C8烷基；
R15每次出现独立为H、COOH、-(CH2)n-N(R16)2、-(CH2)n-SO3H或-(CH2)n-SO3-C1-C8烷基；
R16每次出现独立为H、C1-C8烷基或-(CH2)n-COOH；
R18选自-C(R8)2-C(R8)2-芳基、-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8杂环)和-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8碳环)；且
n是范围为0到6的整数。
在一个实施方案中，R3、R4和R7独立为异丙基或仲丁基，而R5为-H或甲基。在一个例示性的实施方案中，R3和R4各自为异丙基，R5为-H，而R7为仲丁基。
在又一个实施方案中，R2和R6各自为甲基，而R9为-H。
在又一个实施方案中，R8每次出现为-OCH3。
在一个例示性的实施方案中，R3和R4各自为异丙基，R2和R6各自为甲基，R5为-H，R7为仲丁基，R8每次出现为-OCH3，而R9为-H。
在一个实施方案中，Z为-O-或-NH-。
在一个实施方案中，R10为芳基。
在一个例示性的实施方案中，R10为-苯基。
在一个例示性的实施方案中，若Z为-O-，则R11为-H、甲基或叔丁基。
在一个实施方案中，若Z为-NH，则R11为-CH(R15)2，其中R15为-(CH2)n-N(R16)2，而R16为-C1-C8烷基或-(CH2)n-COOH。
在另一个实施方案中，若Z为-NH，则R11为-CH(R15)2，其中R15为-(CH2)n-SO3H。
通式DE的一种例示性auristatin实施方案是MMAE，其中波形线指示共价附着至抗体-药物偶联物的接头(L)：
通式DF的一种例示性auristatin实施方案是MMAF，其中波形线指示共价附着至抗体-药物偶联物的接头(L)(参见US 2005/0238649及Doronina et al.(2006)Bioconjugate Chem.17：114-124)：
Figure GPA00001058503001632
其它例示性的实施方案包括在五肽auristatin药物模块的C末端具有苯丙氨酸羧基修饰的单甲基缬氨酸化合物(WO 2007/008848)和在五肽auristatin药物模块的C末端具有苯丙氨酸侧链修饰的单甲基缬氨酸化合物(WO2007/008603)。
其它药物模块包括以下MMAF衍生物，其中波形线指示共价附着至抗体-药物偶联物的接头(L)：
Figure GPA00001058503001641
Figure GPA00001058503001651
一方面，可以将亲水性基团在R11处附着于药物模块，所述亲水性基团包括但不限于三乙二醇酯(triethylene glycol ester，TEG)，如上所述。不限于任何特定理论，所述亲水性基团有助于药物模块的内在化和不聚集(non-agglomeration)。
包含auristatin/多拉司他汀或其衍生物的通式I ADC的例示性实施方案记载于US 2005-0238649及Doronina et al.(2006)Bioconjugate Chem.17：114-124，明确收入本文作为参考。包含MMAE或MMAF及各种接头构件的通式I ADC的例示性实施方案具有如下结构和缩写(其中“Ab”是抗体；p是1到约8；“Val-Cit”或“vc”是缬氨酸-瓜氨酸二肽；而“S”是硫原子)。应当注意，在本文中硫连接的ADC的某些结构描述中，抗体表示成“Ab-S”，仅仅用于指明硫连接特征而非指明一个特定硫原子携带多个接头-药物模块。以下结构左边的圆括号也可以放置在硫原子的左边，在Ab与S之间，这会是本文全文描述的发明的ADC的等同描述。
Figure GPA00001058503001661
Ab-MC-vc-PAB-MMAF
Figure GPA00001058503001662
Ab-MC-vc-PAB-MMAE
Figure GPA00001058503001663
Ab-MC-MMAE
Figure GPA00001058503001664
Ab-MC-MMAF
包含MMAF及各种接头构件的通式I ADC的例示性实施方案进一步包括Ab-MC-PAB-MMAF和Ab-PAB-MMAF。有趣的是，包含经不可蛋白水解切割的接头附着于抗体的MMAF的免疫偶联物显示出具有与包含经可蛋白水解切割的接头附着于抗体的MMAF的免疫偶联物相当的活性。参见Doroninaet al.(2006)Bioconjugate Chem.17：114-124。在这种情况中，认为药物释放是由细胞中的抗体降解来实现的。同上。
典型的是，基于肽的药物模块可通过在两个或多个氨基酸和/或肽片段之间形成肽键来制备。此类肽键可依照例如肽化学领域众所周知的液相合成法来制备(参见E.and K.Lübke，“The Peptides”，volume 1，pp 76-136，1965，Academic Press)。auristatin/多拉司他汀药物模块可依照以下文献中的方法来制备：US 2005-0238649A1；美国专利No.5635483；美国专利No.5780588；Pettit et al(1989)J.Am.Chem.Soc.111：5463-5465；Pettit et al(1998)Anti-Cancer Drug Design 13：243-277；Pettit，G.R.，et al.Synthesis，1996，719-725；Pettit et al(1996)J.Chem.Soc.Perkin Trans.15：859-863；及Doronina(2003)Nat.Biotechnol.21(7)：778-784。
具体而言，通式DF诸如MMAF及其衍生物的auristatin/多拉司他汀药物模块可以使用US 2005-0238649A1及Doronina et al.(2006)Bioconjugate Chem.17：114-124中记载的方法来制备。通式DE诸如MMAE及其衍生物的auristatin/多拉司他汀药物模块可以使用Doronina et al.(2003)Nat.Biotech.21：778-784中加载的方法来制备。可以通过常规方法方便地合成药物-接头模块(moiety)MC-MMAF、MC-MMAE、MC-vc-PAB-MMAF和MC-vc-PAB-MMAE，例如Doronina et al.(2003)Nat.Biotech.21：778-784及美国专利申请公开号US2005/0238649A1中所记载的，然后将它们偶联至感兴趣的抗体。
(3)加利车霉素
在其它实施方案中，免疫偶联物包含偶联有一个或多个加利车霉素分子的抗体。加利车霉素抗生素家族能够在亚皮摩尔浓度生成双链DNA断裂。关于加利车霉素家族偶联物的制备参见美国专利No.5,712,374；5,714,586；5,739,116；5,767,285；5,770,701；5,770,710；5,773,001；5,877,296(都授予美国Cyanamid公司)。可用的加利车霉素结构类似物包括但不限于γ1I、α2I、α3I、N-乙酰基-γ1I、PSAG和θI1(Hinman et al.，Cancer Research 53：3336-3342(1993)；Lode et al.，Cancer Research 58：2925-2928(1998)；及上述授予美国Cyanamid公司的美国专利)。可与抗体偶联的另一种抗肿瘤药物是QFA，它是一种抗叶酸药物。加利车霉素和QFA都具有胞内作用位点，且不易穿过质膜。因此，这些试剂经由抗体介导的内在化的细胞摄取大大增强了它们的细胞毒效应。
c.其它细胞毒剂
可与抗体偶联的其它抗肿瘤剂包括BCNU、链佐星(streptozoicin)、长春新碱(vincristine)、5-氟尿嘧啶、美国专利No.5,053,394、5,770,710中记载的统称为LL-E33288复合物的试剂家族、及埃斯波霉素类(esperamicins)(美国专利No.5,877,296)。
可用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa)、蓖麻毒蛋白(ricin)A链、相思豆毒蛋白(abrin)A链、蒴莲根毒蛋白(modeccin)A链、α-帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleutites fordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordicacharantia)抑制物、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制物、白树毒蛋白(gelonin)、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(trichothecenes)。参见例如1993年10月28日公布的WO 93/21232。
本发明还设想了抗体和具有核酸降解活性的化合物(如核糖核酸酶或DNA内切核酸酶，诸如脱氧核糖核酸酶；DNA酶)之间形成的免疫偶联物。
在某些实施方案中，免疫偶联物可包含高度放射性原子。多种放射性同位素可用于生成放射偶联抗体。实例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。在将免疫偶联物用于检测时，可包含放射性原子用于闪烁照相研究，例如Tc99m或I123，或是包含自旋标记物用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，MRI)，诸如碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。
可以已知方式将放射性或其它标记物掺入免疫偶联物。例如，可生物合成肽，或是通过化学氨基酸合成法合成肽，其中使用涉及例如氟-19代替氢的合适氨基酸前体。可经肽中的半胱氨酸残基来附着标记物，诸如Tc99m或I123、Re186、Re188和In111。可以经赖氨酸残基来附着钇-90。IODOGEN法(Frakeret al.(1978)Biochem.Biophys.Res.Commun.80：49-57)可用于掺入碘-123。《Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy》(Chatal，CRC Press，1989)详细记载了其它方法。
在某些实施方案中，免疫偶联物可以包含偶联至前体药物活化酶的抗体，所述前体药物活化酶能将前体药物(例如肽基化疗剂，参见WO 81/01145)转变成活性药物，诸如抗癌药。此类免疫偶联物可用于抗体依赖性酶介导的前体药物疗法(“ADEPT”)。可以偶联至抗体的酶包括但不限于可将含磷酸盐/酯的前体药物转变为游离药物的碱性磷酸酶；可将含硫酸盐/酯的前体药物转变为游离药物的芳基硫酸酯酶；可将无毒5-氟胞嘧啶转变为抗癌药物5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脱氨酶；可将含肽的前体药物转变为游离药物的蛋白酶，诸如沙雷氏菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶和组织蛋白酶(诸如组织蛋白酶B和L)；可转化含D-氨基酸替代的前体药物的D-丙氨酰羧肽酶；可将糖基化前体药物转变为游离药物的碳水化合物切割酶类，诸如β-半乳糖苷酶和神经氨酸酶；可将β-内酰胺衍生的药物转变为游离药物的β-内酰胺酶；及可将在其胺氮处分别用苯氧乙酰基或苯乙酰基衍生的药物转变成游离药物的青霉素酰胺酶，诸如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。可以通过本领域众所周知的重组DNA技术将酶共价结合至抗体。参见例如Neubergeret al.，Nature 312：604-608(1984)。
d.药物载荷
药物载荷(loading)由p表示，即通式I的分子中每个抗体的平均药物模块数。药物载荷的范围可以为每个抗体1-20个药物模块(D)。通式I的ADC包括偶联有一定范围(1-20个)药物模块的抗体的集合。来自偶联反应的ADC制备物中每个抗体的平均药物模块数可以通过常规手段来表征，诸如质谱、ELISA测定法和HPLC。还可以测定ADC在p方面的定量分布。在有些情况中，将p为某数值时的同质ADC从具有其它药物载荷的ADC中分离、纯化和表征可以通过诸如反相HPLC或电泳的手段来实现。式I抗体-药物偶联物的药物配制剂可以如此是抗体连接1、2、3、4或更多个药物模块的此类偶联物的异质混合物。
对于有些抗体-药物偶联物，p可能受到抗体上附着位点数目的限制。例如，若附着是半胱氨酸硫醇，正如上文例示性实施方案中的那样，则抗体可能只有一个或数个半胱氨酸硫醇基，或者可能只有一个或数个有足够反应性的硫醇基，可附着接头。在某些实施方案中，较高的药物载荷，例如p＞5，可引起某些抗体-药物偶联物的聚集、不溶性、毒性或丧失细胞通透性。在某些实施方案中，本发明ADC的药物载荷的范围为1到约8；约2到约6；或约3到约5。事实上，对于某些ADC已经显示了每个抗体的药物模块的最佳比率可以为小于8，可以为约2到约5。参见US 2005-0238649A1。
在某些实施方案中，在偶联反应中少于理论最大值的药物模块偶联至抗体。抗体可包含例如赖氨酸残基，其不与药物-接头中间物或接头试剂起反应，如下文所讨论的。一般而言，抗体不包含许多游离的和反应性的半胱氨酸硫醇基，其可连接药物模块；事实上，抗体中的大多数半胱氨酸硫醇基以二硫桥形式存在。在某些实施方案中，可以在部分或完全还原性条件下用还原剂诸如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)还原抗体以产生反应性半胱氨酸硫醇基。在某些实施方案中，将抗体置于变性条件以暴露反应性亲核基团，诸如赖氨酸或半胱氨酸。
ADC的载荷(药物/抗体比率)可以以不同方式来控制，例如通过：(i)限制药物-接头中间物或接头试剂相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制偶联反应的时间或温度，和(iii)半胱氨酸硫醇修饰的部分或限制还原性条件。
应当理解，若超过一个亲核基团与药物-接头中间物或者与接头试剂和接下来的药物模块试剂起反应，则所得产物是具有一个或多个药物模块附着于抗体之分布的ADC化合物混合物。可以通过对抗体特异性的和对药物特异性的双重ELISA抗体测定法自混合物计算每个抗体的平均药物数。混合物中的各种ADC分子可以通过质谱来鉴定，并通过HPLC来分离，例如疏水相互作用层析(参见例如McDonagh et al(2006)Prot.Engr.Design&Selection19(7)：299-307；Hamblett et al(2004)Clin.Cancer Res.10：7063-7070；Hamblett，K.J.等，“Effect of drug loading on the pharmacology，pharmacokinetics，andtoxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate，”摘要号624，AmericanAssociation for Cancer Research，2004 Annual Meeting，2004年3月27-31日，Proceedings of the AACR，卷45，March 2004；Alley，S.C.等，“Controlling thelocation of drug attachment in antibody-drug conjugates，”摘要号627，AmericanAssociation for Cancer Research，2004 Annual Meeting，2004年3月27-31日，Proceedings of the AACR，卷45，March 2004)。在某些实施方案中，可以通过电泳或层析从偶联混合物中分离具有均一载荷值的同质ADC。
e.制备免疫偶联物的某些方法
可以采用本领域技术人员知道的有机化学反应、条件和试剂通过数种路径来制备通式I的ADC，包括：(1)抗体的亲核基团经共价键与二价接头试剂反应，经共价键形成Ab-L，接着与药物模块D反应；和(2)药物模块的亲核基团与二价接头试剂反应，经共价键形成D-L，接着与抗体的亲核基团反应。经后一种路径制备通式I的ADC的例示性方法记载于US 2005-0238649A1，明确收入本文作为参考。
抗体的亲核基团包括但不限于：(i)N末端胺基；(ii)侧链胺基，例如赖氨酸；(iii)侧链硫醇基，例如半胱氨酸；和(iv)糖基化抗体中糖的羟基或氨基。胺、硫醇和羟基是亲核的，能够与接头模块上的亲电子基团反应而形成共价键，而接头试剂包括：(i)活性酯类，诸如NHS酯、HOBt酯、卤代甲酸酯和酸性卤化物；(ii)烷基和苄基卤化物，诸如卤代乙酰胺；(iii)醛类、酮类、羧基和马来酰亚胺基团。某些抗体具有可还原的链间二硫键，即半胱氨酸桥。可通过还原剂诸如DTT(二硫苏糖醇)或三羰基乙基膦(TCEP)处理使抗体完全或部分还原，从而具有与接头试剂偶联的反应活性。每个半胱氨酸桥理论上将形成两个反应性硫醇亲核体。可经由赖氨酸的修饰将额外亲核基团引入抗体，例如通过使赖氨酸残基与2-亚氨基硫烷(Traut氏试剂)起反应，导致胺转变为硫醇。可以通过导入一个、两个、三个、四个或更多个半胱氨酸残基(例如通过制备包含一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的变体抗体)而将反应性硫醇基导入抗体。
还可通过抗体上的亲电子基团(诸如醛或酮羰基)与接头试剂或药物上的亲核基团之间的反应来生成本发明的抗体-药物偶联物。接头试剂上的有用亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。在一个实施方案中，修饰抗体以导入能够与接头试剂或药物上的亲核取代基起反应的亲电子模块。在另一个实施方案中，可以用例如高碘酸盐氧化剂氧化糖基化抗体的糖，从而形成可与接头试剂或药物模块的胺基团反应的醛或酮基团。所得亚胺Schiff碱基可形成稳定的连接，或者可以用例如硼氢化物试剂还原而形成稳定的胺连接。在一个实施方案中，糖基化抗体的碳水化合物部分与半乳糖氧化酶或偏高碘酸钠的反应可以在抗体中生成羰基(醛基和酮基)，它可与药物上的适宜基团反应(Hermanson，BioconjugateTechniques)。在另一个实施方案中，包含N-末端丝氨酸或苏氨酸残基的抗体可以与偏高碘酸钠反应，导致在第一个氨基酸处生成醛(Geoghegan&Stroh，(1992)Bioconjugate Chem.3：138-146；US 5362852)。这样的醛可与药物模块或接头亲核体反应。
药物模块上的亲核基团包括但不限于：胺、硫醇、羟基、酰肼、肟、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼基团，它们能够与接头模块上的亲电子基团反应而形成共价键，而接头试剂包括：(i)活性酯类，诸如NHS酯、HOBt酯、卤代甲酸酯和酸性卤化物；(ii)烷基和苯甲基卤化物，诸如卤代乙酰胺；(iii)醛类、酮类、羧基和马来酰亚胺基团。
本发明的化合物明确涵盖但不限于用如下交联试剂制备的ADC：BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、sulfo-EMCS、sulfo-GMBS、sulfo-KMUS、sulfo-MBS、sulfo-SIAB、sulfo-SMCC和sulfo-SMPB、及SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，它们可通过商业途径获得(例如Pierce Biotechnology，Inc.，Rockford，IL.，U.S.A；参见2003-2004年度应用手册和产品目录(2003-2004Applications Handbook and Catalog)第467-498页)。
还可使用多种双功能蛋白质偶联剂来制备包含抗体和细胞毒剂的免疫偶联物，诸如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)、活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异硫氰酸酯(诸如甲苯2，6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)的双功能衍生物。例如，可如Vitetta et al.，Science 238：1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰酸苯甲基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体偶联的例示性螯合剂。参见WO94/11026。
或者，可通过例如重组技术或肽合成来制备包含抗体和细胞毒剂的融合蛋白。重组DNA分子可以包含各自编码偶联物的抗体和细胞毒部分的区域，彼此或是毗邻或是由编码接头肽的区域分开，该接头肽不破坏偶联物的期望特性。
在又一个实施方案中，可以将抗体与“受体”(诸如链霉亲合素)偶联从而用于肿瘤预先靶向，其中对患者施用抗体-受体偶联物，接着使用清除剂由循环中清除未结合的偶联物，然后施用与细胞毒剂(如放射性核苷酸)偶联的“配体”(如亲合素)。
例示性的免疫偶联物-Thio-抗体药物偶联物
a.半胱氨酸改造抗CD79b抗体的制备
可通过多种方法制备编码本发明的亲本抗CD79b抗体和半胱氨酸改造抗CD79b抗体的氨基酸序列变体的DNA，包括但不限于自天然来源分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况中)、通过定点诱变(或寡核苷酸介导的诱变)(Carter等(1985)Nucleic Acids Res.13：4431-4443；Ho等(1989)Gene(Amst.)77：51-59；Kunkel等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：488；Liu等(1998)J.Biol.Chem.273：20252-20260)、PCR诱变(Higuchi，(1990)于PCRProtocols，pp.177-183，Academic Press；Ito等(1991)Gene 102：67-70；Bernhard等(1994)Bioconjugate Chem.5：126-132；及Vallette等(1989)Nuc.Acids Res.17：723-733)和对较早制备的编码多肽的DNA的盒式诱变(Wells等(1985)Gene 34：315-323)来制备。诱变方案、试剂盒和试剂可通过商业途径获得，例如
Figure GPA00001058503001731
多重定点诱变试剂盒(Stratagene，La Jolla，CA)。还可以使用双链质粒DNA作为模板通过基于PCR的诱变通过寡核苷酸介导的诱变来生成单一诱变(Sambrook和Russel，(2001)Molecular Cloning：A LaboratoryManual，第3版；Zoller等(1983)Methods Enzymol.100：468-500；Zoller，M.J.和Smith，M.(1982)Nucl.Acids Res.10：6487-6500)。还可以通过限制性片段操作或通过使用合成寡核苷酸的交叠延伸PCR构建重组抗体的变体。诱变引物编码半胱氨酸密码子替换物。标准诱变技术可以用于产生编码此类突变型半胱氨酸改造抗体的DNA(Sambrook等，Molecular Cloning，A LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y，1989；及Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing andWiley-Interscience，New York，N.Y.，1993)。
噬菌体展示技术(McCafferty等，(1990)Nature 348：552-553)可用于在体外从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变域(V)基因全集生成抗CD79b人抗体和抗体片段。依照这种技术，将抗体可变域基因以符合读码框的方式克隆入丝状噬菌体诸如M13或fd的主要或次要外壳蛋白基因，并在噬菌体颗粒表面上展示为功能性抗体片段。因为丝状噬菌体颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝，以抗体的功能特性为基础进行的选择也导致编码展示那些特性的抗体的基因得到选择。如此，噬菌体模拟B细胞的一些特性(Johnson等(1993)Current Opinion in Structural Biology 3：564-571；Clackson等(1991)Nature，352：624-628；Marks等(1991)J.Mol.Biol.222：581-597；Griffith等(1993)EMBO J.12：725-734；US 5565332；US 5573905；US 5567610；US 5229275)。
抗CD79b抗体可以使用已知的寡肽合成方法来化学合成，或者可以使用重组技术来制备和纯化。适宜的氨基酸序列或其部分可以使用固相技术通过直接肽合成来生成(Stewart等，Solid-Phase Peptide Synthesis，(1969)W.H.Freeman Co.，San Francisco，CA；Merrifield，(1963)J.Am.Chem.Soc.，85：2149-2154)。体外蛋白质合成可以使用手动技术或通过自动化来进行。自动化固相合成可以例如采用受t-BOC或Fmoc保护的氨基酸并使用AppliedBiosystems肽合成仪(Foster City，CA)依照制造商的说明书来进行。抗CD79b抗体或CD79b多肽的各个部分可以分开地化学合成，并使用化学或酶促方法联合以生成期望的抗CD79b抗体或CD79b多肽。
已经开发了用于生成抗体片段的多种技术。传统上，通过蛋白水解消化完整抗体来衍生这些片段(Morimoto等(1992)Journal of Biochemical andBiophysical Methods 24：107-117；及Brennan等(1985)Science，229：81)，或者直接由重组宿主细胞生成这些片段。Fab、Fv和scFv抗CD79b抗体片段都可在大肠杆菌中表达及由大肠杆菌分泌，如此容许容易地生成大量的这些片段。可以从上文讨论的噬菌体抗体库中分离抗体片段。或者，可以直接从大肠杆菌回收Fab′-SH片段并化学偶联以形成F(ab′)2片段(Carter等(1992)Bio/Technology 10：163-167)，或者，直接从重组宿主细胞培养物分离F(ab′)2片段。抗CD79b抗体可以是单链Fv片段(scFv)(WO 93/16185；US 5571894；US5587458)。抗CD79b抗体片段还可以是“线性抗体”(US 5,641,870)。此类线性抗体片段可以是单特异性的或双特异性的。
下文描述主要涉及通过培养经包含抗CD79b抗体编码核酸的载体转化或转染的细胞来生成抗CD79b抗体。编码抗CD79b抗体的DNA可以得自认为具有抗CD79b抗体mRNA且以可检测水平表达之的组织制备的cDNA文库。因而，人抗CD79b抗体或CD79b多肽DNA可以方便地得自自人组织制备的cDNA文库。抗CD79b抗体编码基因还可以得自基因组文库或已知的合成规程(例如自动化核酸合成)。
本发明的设计、选择和制备方法能够得到具有亲电子官能度(functionality)反应性的半胱氨酸改造抗CD79b抗体。这些方法进一步能够获得抗体偶联物化合物，诸如在指定的、设计的、选择性的位点上具有药物分子的抗体-药物偶联物(ADC)化合物。抗体表面上的反应性半胱氨酸残基容许通过硫醇反应性基团，诸如马来酰亚胺或卤代乙酰基特异性地偶联药物模块。Cys残基的硫醇官能度与马来酰亚胺基团的亲核反应性高于蛋白质中任何其它氨基酸官能度，诸如赖氨酸残基的氨基或N-末端氨基约1000倍。碘乙酰基和马来酰亚胺试剂中的硫醇特异性官能度可以与胺基团反应，但需要更高的pH(＞9.0)和更长的反应时间(Garman，1997，Non-Radioactive Labelling：APractical Approach，Academic Press，London)。可以通过标准Ellman测定法来估计蛋白质中游离硫醇的量。免疫球蛋白M为二硫化物连接的五聚体的例子，而免疫球蛋白G为内部二硫桥将各亚基键合在一起的蛋白质的例子。在诸如这种蛋白质中，用诸如二硫苏糖醇(DTT)或硒醇还原二硫键(Singh等(2002)Anal.Biochem.304：147-156)是产生反应性游离硫醇所需的。这种方法可以导致抗体的三级结构和抗原结合特异性丧失。
PHESELECTOR(用于选择反应性硫醇的噬菌体ELISA)测定法容许以ELISA噬菌体形式检测抗体中反应性半胱氨酸基团，由此辅助半胱氨酸改造抗体的设计(Junutula，J.R.et al.(2008)J Immunol Methods 332：41-52；WO2006/034488；US 2007/0092940)。在孔表面上包被半胱氨酸改造抗体，随后与噬菌体颗粒一起温育，添加HRP标记的二抗，并检测吸光度。可以以快速、有力和高流通量方式筛选噬菌体上展示的突变蛋白。可以使用与从抗体或其它蛋白质的随机蛋白质-噬菌体文库鉴定游离Cys掺入的适当反应性位点相同的方法生成半胱氨酸改造抗体的文库并且进行结合选择。这项技术包括使噬菌体上展示的半胱氨酸突变蛋白与也为硫醇反应性的亲和试剂或报告基团反应。
PHESELECTOR测定法容许筛选抗体中的反应性硫醇基团。通过该方法鉴定A121C变体是例示性的。可以高效地搜索整个Fab分子以鉴定更多的带有反应性硫醇基团的ThioFab变体。采用参数，表面可及分数(fractional surfaceaccessibility)来鉴定和量化溶剂对多肽中氨基酸残基的可及性。将表面可及性表述为可以由溶剂分子，例如水接触的表面积
Figure GPA00001058503001751
水占据的空间近似为1.4半径球体。软件为自由可获得的或可许可的(Secretary to CCP4，DaresburyLaboratory，Warrington，WA44AD，United Kingdom，Fax：(+44)1925603825，或通过因特网：www.ccp4.ac.uk/dist/html/INDEX.html)，如使用计算具有已知X射线晶体学衍生坐标的蛋白质的每个氨基酸的表面可及性的算法的晶体学程序CCP4 Suite(“The CCP4Suite：Programs for Protein Crystallography”(1994)Acta.Cryst.D50：760-763)。执行表面可及性计算的两种例示性软件模块为“AREAIMOL”和“SURFACE”，其基于B.Lee和F.M.Richards(1971)J.Mol.Biol.55：379-400的算法。AREAIMOL将蛋白质的溶剂可及表面定义为探针球(probe sphere)(代表溶剂分子)在蛋白质的Van der Waals表面上翻转时其中心的位置。AREAIMOL如下计算溶剂可及表面积，即在关于每个原子的扩充球体上产生表面点(距原子中心的距离等于原子和探针半径的总和)，并且消除那些位于与相邻原子相关的等同球体内的点。AREAIMOL找到了PDB坐标文件中原子的溶剂可及面积并概括了残基、链和整个分子的可及面积。可以将各原子的可及面积(或面积差)存储成假拟-PDB输出文件。AREAIMOL假设了每个成分的单一半径并仅识别有限数量的不同成分。AREAIMOL和SURFACE报导了绝对可及性，即平方埃
Figure GPA00001058503001761
数。通过参比多肽内氨基酸相关标准状态来计算表面可及分数。参比状态为三肽Gly-X-Gly，其中X为感兴趣的氨基酸，且参比状态应为“扩展的”构象，即像那些在β链中的构象。扩展的构象使X的可及性达到最大值。用计算的可及面积除以Gly-X-Gly三肽参比状态中的可及面积并报告商数，其为可及性分数。可及性百分比为可及性分数乘以100。计算表面可及性的另一种例示性算法基于程序xsae的SOLV模块(Broger，C.，E Hoffman-LaRoche，Basel)，它基于多肽的X射线坐标计算氨基酸残基对水球体的可及性分数。可以使用可得到的晶体结构信息来计算抗体中每个氨基酸的表面可及性分数(Eigenbrot等(1993)J Mol Biol.229：969-995)。
编码半胱氨酸改造抗体的DNA易于使用常规规程来分离和测序(例如通过使用能够与编码鼠抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞充当此类DNA的来源。一旦分离，可以将DNA置入表达载体，然后转染入原本不生成抗体蛋白质的宿主细胞，诸如大肠杆菌细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或其它哺乳动物宿主细胞，诸如骨髓瘤细胞(US 5807715；US 2005/0048572；US 2004/0229310)，以获得单克隆抗体在重组宿主细胞中的合成。
在设计和选择后，可如下生成具有改造的、高度反应性的未配对的Cys残基的半胱氨酸改造抗体，例如ThioFab：(i)在细菌例如大肠杆菌系统(Skerra等(1993)Curr.Opinion in Immunol.5：256-262；Plückthun(1992)Immunol.Revs.130：151-188)或哺乳动物细胞培养物系统(WO 01/00245)例如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达；和(ii)使用常用的蛋白质纯化技术纯化(Lowman等(1991)J.Biol.Chem.266(17)：10982-10988)。
改造的Cys硫醇基团与亲电子的接头试剂和药物-接头中间体起反应而形成半胱氨酸改造抗体-药物偶联物和其它经标记的半胱氨酸改造抗体。半胱氨酸改造抗体的和存在于亲本抗体中的、配对并形成链间和链内二硫键的Cys残基不具有任何反应性硫醇基团(除非用还原剂处理)且不与亲电子的接头试剂或药物-接头中间体起反应。新近改造的Cys残基可以保持不配对，而且能够与亲电子的接头试剂或药物-接头中间体(诸如药物-马来酰亚胺)起反应(即偶联)。例示性的药物-接头中间体包括：MC-MMAE、MC-MMAF、MC-vc-PAB-MMAE和MC-vc-PAB-MMAF。重链和轻链中经改造的Cys残基的结构位置依照连续编号系统来编号。此连续编号系统与自N末端起始的Kabat编号系统(Kabat等(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)有关，与Kabat编号方案(底行)的区别在于标示为a、b、c的插入。使用Kabat编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含减少的或添加的氨基酸，对应于可变域FR或CDR中的缩短或插入。经半胱氨酸改造的重链变体位点通过连续编号方式和Kabat编号方案来标示。
在一个实施方案中，通过包括下列步骤的方法制备半胱氨酸改造的抗CD79b抗体：
(a)用半胱氨酸替代亲代抗CD79b抗体的一个或多个氨基酸残基；和
(b)通过使半胱氨酸改造的抗CD79b抗体与巯基-反应试剂反应测定半胱氨酸改造的抗体的巯基反应性(thiol reactivity)。
半胱氨酸改造的抗体可以比亲代抗体更具与巯基-反应试剂的反应性。
游离半胱氨酸氨基酸残基可以位于重链或轻链中或恒定域或可变域(区)中。还可以通过用一个或多个半胱氨酸氨基酸替代抗体片段的氨基酸来改造抗体片段，例如Fab，以便形成半胱氨酸改造的抗体片段。
本发明的另一个实施方案提供了制备半胱氨酸改造的抗CD79b抗体的方法，包括：
(a)将一个或多个半胱氨酸氨基酸引入亲代抗CD79b抗体以便生成半胱氨酸改造的抗CD79b抗体；和
(b)测定半胱氨酸改造的抗体与巯基-反应试剂的巯基反应性；
其中半胱氨酸改造的抗体比亲代抗体更具与巯基-反应试剂的反应性。
制备半胱氨酸改造的抗体的方法的步骤(a)可以包含：
(i)诱变编码半胱氨酸改造的抗体的核酸序列；
(ii)表达半胱氨酸改造的抗体；和
(iii)分离和纯化半胱氨酸改造的抗体。
制备半胱氨酸改造的抗体的方法的步骤(b)可以包含表达选自噬菌体或噬菌粒颗粒的病毒颗粒上的半胱氨酸改造的抗体。
制备半胱氨酸改造的抗体的方法的步骤(b)还可以包含：
(i)使半胱氨酸改造的抗体与巯基-反应性亲和试剂反应而生成亲和标记的半胱氨酸改造的抗体；和
(ii)测定亲和标记的半胱氨酸改造的抗体与俘获介质的结合。
本发明的另一个实施方案为筛选带有高反应性的未配对的半胱氨酸氨基酸的半胱氨酸改造的抗体的巯基反应性的方法，包含：
(a)将一个或多个半胱氨酸氨基酸导入亲代抗体以便产生半胱氨酸改造的抗体；
(b)使半胱氨酸改造的抗体与巯基-反应性亲和试剂反应而生成亲和标记的半胱氨酸改造的抗体；和
(c)测定亲和标记的半胱氨酸改造的抗体与俘获介质的结合；和
(d)测定半胱氨酸改造的抗体与巯基-反应试剂的巯基反应性。
筛选半胱氨酸改造的抗体的方法的步骤(a)可以包含：
(i)诱变编码半胱氨酸改造的抗体的核酸序列；
(ii)表达半胱氨酸改造的抗体；和
(iii)分离和纯化半胱氨酸改造的抗体。
筛选半胱氨酸改造的抗体的方法的步骤(b)可以包含表达选自噬菌体或噬菌粒颗粒的病毒颗粒上的半胱氨酸改造的抗体。
筛选半胱氨酸改造的抗体的方法的步骤(b)还可以包含：
(i)使半胱氨酸改造的抗体与巯基-反应性亲和试剂反应而生成亲和标记的半胱氨酸改造的抗体；和
(ii)测定亲和标记的半胱氨酸改造的抗体与俘获介质的结合。
b.抗CD79b IgG变体的半胱氨酸改造
通过本文所述半胱氨酸工程改造方法，将半胱氨酸在重链118(EU编号方式)(相当于连续编号方式的重链第118位)位点处导入全长、嵌合亲本单克隆抗CD79b抗体，或者在轻链205(Kabat编号方式)(相当于连续编号方式的轻链第209位)位点处导入全长、嵌合亲本单克隆抗CD79b抗体。
生成了在重链118(EU编号方式)处具有半胱氨酸的半胱氨酸改造抗体：(a)thio-MA79b.v17-HC(A118C)，其具有重链序列(SEQ ID NO：228)和轻链序列(SEQ ID NO：229)，图24；(b)thio-MA79b.v18-HC(A118C)，其具有重链序列(SEQ ID NO：230)和轻链序列(SEQ ID NO：231)，图25；(c)thio-MA79b.v28-HC(A118C)，其具有重链序列(SEQ ID NO：232)和轻链序列(SEQ ID NO：233)，图26；(d)thio-MA79b-HC(A118C)，其具有重链序列(SEQID NO：236)和轻链序列(SEQ ID NO：237)，图28；和(e)thio-anti-cynoCD79b-HC(A118C)，其具有重链序列(SEQ ID NO：244)和轻链序列(SEQ ID NO：245)，图48。
生成了在轻链205(Kabat编号方式)处具有半胱氨酸的半胱氨酸改造抗体：(a)thio-MA79b-LC(V205C)，其具有重链序列(SEQ ID NO：234)和轻链序列(SEQ ID NO：235)，图27和(b)thio-anti-cynoCD79b(ch10D10)-LC(V205C)，其具有重链序列(SEQ ID NO：299)和轻链序列(SEQ ID NO：300)，图49。
通过含1mM半胱氨酸的培养基中的瞬时发酵，在CHO(中国仓鼠卵巢)细胞中表达这些半胱氨酸改造的单克隆抗体。
依照一个实施方案，人源化MA79b半胱氨酸改造的抗CD79b抗体包含一个或多个具有游离半胱氨酸氨基酸的如下可变区重链序列(SEQ ID NO：251-259，表2)。
表2：人源化MA79b半胱氨酸改造抗CD79b抗体变体的连续、Kabat和Eu编号方式的重链比较
  序列   连续编号  KABAT编号   EU编号  SEQ ID NO：
  EVQLCESGGG   V5C   V5C   251
  LRLSCCASGYT   A23C   A23C   252
  MNSLRCEDTAV   A88C   A84C   253
  TLVTVCSASTK   S116C   S112C   254
  VTVSSCSTKGP   A118C   A114C   A118C   255
  VSSASCKGPSV   T120C   T116C   T120C   256
  WYVDGCEVHNA   V282C   V278C   V282C   257
  KGFYPCDIAVE   S375C   S371C   S375C   258
  PPVLDCDGSFF   S400C   S396C   S400C   259
依照一个实施方案，嵌合MA79b半胱氨酸改造的抗CD79b抗体包含一个或多个具有游离半胱氨酸氨基酸的如下重链序列(SEQ ID NO：260-268，表3)。
表3：chMA79b半胱氨酸改造的抗CD79b抗体变体的连续、Kabat和Eu编号方式的重链比较
  序列   连续编号  KABAT编号   EU编号  SEQ ID NO：
  EVQLCQSGAE   Q5C   Q5C   260
  VKISCCATGYT   K23C   K23C   261
  LSSLTCEDSAV   S88C   S84C   262
  TSVTVCSASTK   S116C   S112C   263
  VTVSSCSTKGP   A118C   A114C   A118C   264
  VSSASCKGPSV   T120C   T116C   T120C   265
  WYVDGCEVHNA   V282C   V278C   V282C   266
  KGFYPCDIAVE   S375C   S371C   S375C   267
  PPVLDCDGSFF   S400C   S396C   S400C   268
依照一个实施方案，anti-cynoCD79b(ch10D10)半胱氨酸改造的抗CD79b抗体包含一个或多个具有游离半胱氨酸氨基酸的如下重链序列(SEQ ID NO：269-277，表4)。
表4：anti-cynoCD79b(ch10D10)半胱氨酸改造的抗CD79b抗体变体的连续、Kabat和EU编号方式的重链比较
  序列   连续编号   KABAT编号   EU编号  SEQ ID NO：
  EVQLCESGPG   Q5C   Q5C   269
  LSLTCCVTGYS   T23C   T23C   270
  LNSVTCEDTAT   S88C   S84C   271
  TTLTVCSASTK   S111C   S112C   272
  LTVSSCSTKGP   A113C   A114C   A118C   273
  VSSASCKGPSV   T115C   T116C   T120C   274
  序列   连续编号   KABAT编号   EU编号  SEQ ID NO：
  WYVDGCEVHNA   V282C   V278C   V282C   275
  KGFYPCDIAVE   S370C   S371C   S375C   276
  PPVLDCDGSFF   S395C   S396C   S400C   277
依照一个实施方案，人源化MA79b半胱氨酸改造的抗CD79b抗体包含一个或多个具有游离半胱氨酸氨基酸的如下轻链序列(SEQ ID NO：278-284，表5)。
表5：人源化MA79b半胱氨酸改造的抗CD79b抗体变体的连续和Kabat编号方式的轻链比较
 序列   连续编号  KABAT编号  SEQ ID NO：
 SLSASCGDRVT   V15C  V15C  278
  EIKRTCAAPSV   V114C   V110C   279
  TVAAPCVFIFP   S118C   S114C   280
  FIFPPCDEQLK   S125C   S121C   281
  DEQLKCGTASV   S131C   S127C   282
  VTEQDCKDSTY   S172C   S168C   283
  GLSSPCTKSFN   V209C   V205C   284
依照一个实施方案，嵌和MA79b半胱氨酸改造的抗CD79b抗体包含一个或多个具有游离半胱氨酸氨基酸的如下轻链序列(SEQ ID NO：285-291，表6)。
表6：嵌和MA79b半胱氨酸改造的抗CD79b抗体变体的连续和Kabat编号方式的轻链比较
  序列   连续编号  KABAT编号  SEQ ID NO：
  SLAVSCGQRAT   L15C   L15C   285
  ELKRTCAAPSV   V114C   V110C   286
  TVAAPCVFIFP   S118C   S114C   287
  序列   连续编号  KABAT编号  SEQ ID NO：
  FIFPPCDEQLK   S125C   S121C   288
  DEQLKCGTASV   S131C   S127C   289
  VTEQDCKDSTY   S172C   S168C   290
  GLSSPCTKSFN   V209C   V205C   291
依照一个实施方案，anti-cynoCD79b(ch10D10)半胱氨酸改造的抗CD79b抗体包含一个或多个具有游离半胱氨酸氨基酸的如下轻链序列(SEQ ID NO：292-298，表7)。
表7：anti-cynoCD79b(ch10D10)半胱氨酸改造的抗CD79b抗体变体的连续和Kabat编号方式的轻链比较
  序列   连续编号  KABAT编号  SEQ ID NO：
  SLAVSCGQRAT   L15C   L15C   292
  EIKRTCAAPSV   V114C   V110C   293
  TVAAPCVFIFP   S118C   S114C   294
  FIFPPCDEQLK   S125C   S121C   295
  DEQLKCGTASV   S131C   S127C   296
  VTEQDCKDSTY   S172C   S168C   297
  GLSSPCTKSFN   V209C   V205C   298
c.经过标记的半胱氨酸改造的抗CD79b抗体
半胱氨酸改造的抗CD79b抗体可以位点特异性地和有效地与硫醇反应性试剂偶联。硫醇反应性试剂可以是多官能接头试剂(multifunctional linkerreagent)；捕捉(即亲和、标记)试剂(例如生物素-接头试剂)；检测标记物(例如荧光团试剂)；固相固定化试剂(例如SEPHAROSETM、聚苯乙烯或玻璃)；或药物-接头中间体。硫醇反应性试剂的一个例子是N-乙基马来酰亚胺(NEM)。在一个例示性的实施方案中，ThioFab与生物素-接头试剂反应得到生物素化的ThioFab，通过这种方式可以检测和测量改造的半胱氨酸残基的存在和反应性。ThioFab与多官能接头试剂反应得到带有可以与药物模块试剂或其它标记物进一步反应的官能化接头的ThioFab。ThioFab与药物-接头中间体反应得到ThioFab药物偶联物。
本文所述例示性方法一般可应用于鉴定和生产抗体，并且更一般地通过应用本文所述的设计和筛选步骤用于其它蛋白质。
此类办法可应用于偶联其它硫醇反应性试剂，其中反应性基团是例如马来酰亚胺、碘乙酰胺、吡啶基二硫化物或其它硫醇反应性偶联配偶体(Haugland，2003，Molecular Probes Handbook of Fluorescent Probes andResearch Chemicals，Molecular Probes，Inc.；Brinkley，1992，Bioconjugate Chem.3∶2；Garman，1997，Non-Radioactive Labelling：A Practical Approach，AcademicPress，London；Means(1990)Bioconjugate Chem.1∶2；Hermanson，G.inBioconjugate Techniques(1996)Academic Press，San Diego，pp.40-55，643-671)。硫醇反应性试剂可以是药物模块；荧光团，诸如荧光染料，像荧光素或若丹明；用于成像的螯合剂或放射性治疗金属；肽基或非肽基标记物或检测标记；或清除改性剂(clearance-modifying agent)，诸如聚乙二醇的各种异构体；结合第三种成分的肽或另一种碳水化合物或亲脂性试剂。
d.半胱氨酸改造的抗CD79b抗体的用途
半胱氨酸改造的抗CD79b抗体及其偶联物可用作治疗和/或诊断试剂。本发明进一步提供了预防、管理、治疗或改善与B细胞相关病症有关的一种或多种症状的方法。具体而言，本发明提供了预防、管理、治疗或改善与细胞增殖性病症有关的一种或多种症状的方法，诸如癌症，例如淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。本发明还进一步提供了诊断CD79b相关病症或发生此类病症的素因的方法，以及鉴定优先结合B细胞结合(cell-associated)CD79b多肽的抗体和抗体的抗原结合片段的方法。
本发明的另一个实施方案致力于半胱氨酸改造的抗CD79b抗体用于制备药物的用途，所述药物在对B细胞相关病症有响应的疾患的治疗中是有用的。
e.半胱氨酸改造的抗体药物偶联物(Thio-抗体药物偶联物(TDC))
本发明的另一个方面是抗体-药物偶联物化合物，其包含半胱氨酸改造的抗CD79b抗体(Ab)和auristatin药物模块(D)，其中半胱氨酸改造的抗体经由一个或多个游离的半胱氨酸氨基酸通过接头模块(L)附着至D；该化合物具有式I：
Ab-(L-D)p            I
其中p为1，2，3，或4；且其中所述半胱氨酸改造的抗体是通过如下方法制备的，即包括用一个或多个游离的半胱氨酸氨基酸替换亲本抗CD79b抗体的一个或多个氨基酸残基。
本发明的另一个方面是包含式I的抗体-药物化合物的混合物的组合物，其中每个抗体的平均药物载荷是约2个至约5个或约3个至约4个。
图24-28和48-49显示了半胱氨酸改造的抗CD79b抗体药物偶联物(ADC)的实施方案，其中auristatin药物模块附着至轻链(LC-ADC)或重链(HC-ADC)中的改造的半胱氨酸基团。
半胱氨酸改造的抗CD79b抗体药物偶联物的潜在优点包括安全性改善(治疗指数更大)；PK参数改善；抗体链间二硫键得到保留，这可稳定偶联物并保留其活性结合构象；药物偶联位点确定；及自半胱氨酸改造抗体与药物-接头试剂的偶联制备半胱氨酸改造抗体药物偶联物导致更均一的产物。
接头
“接头”、“接头单元”或“连接”指包含使抗体共价附着于药物模块的共价键或原子链的化学模块。在各个实施方案中，接头以L表示。“接头”(L)为可用于连接一个或多个药物模块(D)和抗体单元(Ab)而形成通式I的抗体-药物偶联物(ADC)的双功能或多功能模块。可以使用具有供结合药物和抗体用的反应性官能度的接头而便利地制备抗体-药物偶联物(ADC)。半胱氨酸改造抗体(Ab)的半胱氨酸硫醇可以与接头试剂、药物模块或药物-接头中间体的亲电子官能团形成键。
一方面，接头具有反应性位点，该位点具有与存在于抗体上的亲核半胱氨酸具有反应性的亲电子基团。抗体的半胱氨酸硫醇与接头上的亲电子基团具有反应性并且与接头形成共价键。有用的亲电子基团包括但不限于马来酰亚胺和卤代乙酰胺基团。
接头包括：二价基，诸如亚烃基(alkyldiyl)、亚芳基、亚杂芳基；模块，诸如-(CR2)nO(CR2)n-、烷氧基重复单元(例如聚亚乙基氧基(polyethylenoxy)、PEG、聚亚甲基氧基(polymethyleneoxy))和烷氨基(例如聚乙烯氨基，JeffamineTM)；及二酸酯和酰胺，包括琥珀酸酯、琥珀酰胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯和己酰胺。
半胱氨酸改造抗体与接头试剂或药物-接头中间体，与亲电子官能团诸如马来酰亚胺或α-卤代羰基依照Klussman等(2004)Bioconjugate Chemistry15(4)：765-773，766页上的偶联方法和依照实施例6的方案起反应。
接头可以由一种或多种接头构件构成。例示性的接头构件包括6-马来酰亚氨基己酰基(“MC”)、马来酰亚氨基丙酰基(“MP”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”或“af”)、对氨基苄氧羰基(“PAB”)、N-琥珀酰亚氨基4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(“SPP”)、N-琥珀酰亚氨基4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1羧酸酯(“SMCC”)和N-琥珀酰亚氨基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯(“SIAB”)、亚乙基氧基-CH2CH2O-作为一个或多个重复单元(“EO”或“PEO”)。本领域知道别的接头构件，本文中也描述了一些。
在一个实施方案中，ADC的接头L具有通式：
-Aa-Ww-Yy-
其中：
-A-为共价附着于抗体(Ab)半胱氨酸硫醇的延伸物单元；
a为0或1；
每个-W-独立为氨基酸单元；
w独立为0-12的整数；
-Y-为共价附着于药物模块的间隔物(spacer)单元；且
y为0、1或2。
延伸物单元
当存在时，延伸物单元(-A-)能够连接抗体单元与氨基酸单元(-W-)。在这方面，抗体(Ab)具有能与延伸物的官能团形成键的官能团。抗体上能存在(天然的或经化学操作的)的有用的官能团包括但不限于硫氢基(-SH)、氨基、羟基、羧基、碳水化合物的异头羟基和羧基。在一个方面，所述抗体官能团是硫氢基或氨基。可以通过还原抗体的分子内二硫键来生成硫氢基。或者，可以通过用2-亚氨基，硫烷(Traut氏试剂)或其它硫氢基生成试剂使抗体的赖氨酸模块的氨基来生成硫氢基。在一个实施方案中，抗体(Ab)具有能与延伸物单元的亲电子官能团形成键的游离半胱氨酸硫醇基团。式II和III描绘了式I中的例示性延伸物单元，其中Ab-、-W-、-Y-、-D、w和y如上文所定义且R17为选自下列的二价基：(CH2)r、C3-C8碳环基、O-(CH2)r、亚芳基、(CH2)r-亚芳基、-亚芳基-(CH2)r-、(CH2)r-(C3-C8碳环基)、(C3-C8碳环基)-(CH2)r、C3-C8杂环基、(CH2)r-(C3-C8杂环基)、-(C3-C8杂环基)-(CH2)r-、-(CH2)rC(O)NRb(CH2)r-、-(CH2CH2O)r-、-(CH2CH2O)r-CH2-、-(CH2)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-、-(CH2)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2-、-(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-、-(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2-和-(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2)r-；其中Rb为H、C1-C6烃基(烷基)、苯基或苄基；且r独立地为范围1-10的整数。
亚芳基包括通过从芳族环体系中除去两个氢原子而衍生的6-20个碳原子的二价芳族烃基。典型的亚芳基包括但不限于衍生自苯、取代的苯、萘、蒽、联苯等的基团。
杂环基包括一个或多个环原子为杂原子(例如氮、氧和硫)的环体系。杂环基包含1-20个碳原子和1-3个选自N、O、P和S的杂原子。杂环可以为具有3-7个环成员的单环(2-6个碳原子和1-3个选自N、O、P和S的杂原子)或具有7-10个环成员的双环(4-9个碳原子和1-3个选自N、O、P和S的杂原子)，例如：双环[4，5]，[5，5]，[5，6]或[6，6]体系。杂环记载于Paquette，Leo A.；“Principles of Modern Heterocyclic Chemistry”，W.A.Benjamin，New York，1968，特别是1，3，4，6，7，和9章；“The Chemistry of Heterocyclic Compound，Aseries of Monographs”，John Wiley&Sons，New York，1950至今，特别是卷13，14，16，19，和28；及J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566。
举例而言而非限制，杂环的例子包括：吡啶基、二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基)、噻唑基、四氢噻吩基(tetrahydrothiophenyl)、硫氧化的四氢噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基(thienyl)、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、硫杂萘基(thianaphthalenyl)、吲哚基、indolenyl、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氢呋喃基、双-四氢呋喃基(bis-tetrahydrofuranyl)、四氢吡喃基、双-四氢吡喃基(bis-tetrahydropyranyl)、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢喹啉基、吖辛因基(azocinyl)、三嗪基、6H-1，2，5-噻二嗪基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、噻吩基、噻蒽基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、呫吨基、酚噁噻基(phenoxathinyl)、2H-吡咯基、异噻唑基、异噁唑基、吡嗪基、哒嗪基、吲嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4Ah-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、呋咱基、吩噁嗪基、异色满基、色满基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、奎宁环基、吗啉基、噁唑烷基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、羟吲哚基、苯并噁唑啉基和靛红酰基(isatinoyl)。
碳环基包括具有3-7个碳原子(作为单环)或7-12个碳原子(作为双环)的饱和或不饱和环。单环碳环具有3-6个环原子，更通常地为5或6个环原子。双环碳环具有7-12个环原子，例如排列成双环[4，5]，[5，5]，[5，6]或[6，6]体系，或者9或10个环原子，排列成双环[5，6]或[6，6]体系。单环碳环的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环庚基和环辛基。
根据式I ADC的所有例示性实施方案诸如II-VI应当理解，即使在未明确表述的情况中，有1-4个药物模块与抗体连接(p＝1-4)，这取决于改造的半胱氨酸残基的数目。
Figure GPA00001058503001871
一种例示性式II延伸物单元衍生自马来酰亚氨基-己酰基(MC)，其中R17为-(CH2)5-：
Figure GPA00001058503001872
一种例示性式II延伸物单元衍生自马来酰亚氨基-丙酰基(MP)，其中R17为-(CH2)2-：
另一种例示性式II延伸物单元，其中R17为-(CH2CH2O)r-CH2-且r为2：
Figure GPA00001058503001874
另一种例示性式II延伸物单元，其中R17为-(CH2)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2-，其中Rb为H且每个r为2：
Figure GPA00001058503001875
另一种例示性式III延伸物单元，其中R17为-(CH2)5-：
Figure GPA00001058503001876
在另一个实施方案中，延伸物单元通过抗体的改造半胱氨酸的硫原子与延伸物单元的硫原子之间的二硫键与半胱氨酸改造抗CD79b抗体连接。该实施方案的代表性延伸物单元以式IV描绘，其中R17、Ab-、-W-、-Y-、-D、w和y如上文所定义。
在又一个实施方案中，延伸物的反应性基团含有能与抗体的游离半胱氨酸硫醇形成键的硫醇反应性官能团。硫醇反应性官能团的例子包括但不限于：马来酰亚胺；α-卤代乙酰基；活化的酯类，诸如琥珀酰亚胺酯、4-硝基苯基酯、五氟苯基酯、四氟苯基酯；酸酐类；酸性氯化物或酰基氯类(acidchloride)；磺酰氯类；异氰酸酯类和异硫氰酸酯类。该实施方案的代表性延伸物单元以式Va和Vb描绘，其中-R17-、Ab-、-W-、-Y-、-D、w和y如上文所定义。
Figure GPA00001058503001882
在另一个实施方案中，接头可以为树状类型接头(dendritic type linker)，其用于通过分支的多功能接头模块将超过一个药物模块共价附着于抗体(Sun等(2002)Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 12：2213-2215；Sun等(2003)Bioorganic&Medicinal Chemistry 11：1761-1768；King(2002)Tetrahedron Letters 43：1987-1990)。树状接头能增加药物与抗体的摩尔比，即载荷，它与ADC的效能相关。如此，如果半胱氨酸改造抗体仅携带一个反应性半胱氨酸硫醇基团，那么可以通过树状接头附着众多药物模块。
氨基酸单元
接头可以包含氨基酸残基。如果存在，那么氨基酸单元(-Ww-)使本发明的半胱氨酸改造抗体-药物偶联物(ADC)的抗体(Ab)与药物模块(D)连接。
-Ww-为二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元。包含氨基酸单元的氨基酸残基包括那些天然存在的以及次要的氨基酸和非天然存在的氨基酸类似物，诸如瓜氨酸。各个-W-单元独立地具有如下所示的方括号内的通式，且w为范围0-12的整数：
Figure GPA00001058503001891
其中R19为氢、甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、苄基、对羟基苄基、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2SCH3、-CH2CONH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-(CH2)3NHC(＝NH)NH2、-(CH2)3NH2、-(CH2)3NHCOCH3、-(CH2)3NHCHO、-(CH2)4NHC(＝NH)NH2、-(CH2)4NH2、-(CH2)4NHCOCH3、-(CH2)4NHCHO、-(CH2)3NHCONH2、-(CH2)4NHCONH2、-CH2CH2CH(OH)CH2NH2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、苯基、环己基、
Figure GPA00001058503001892
当R19不为氢时，R19所附着的碳原子为手性的。R19所附着的各个碳原子独立地以(S)或(R)构型或外消旋混合物附着。氨基酸单元如此可以为对映体方面纯的、外消旋的或非对映异构体的。
例示性的-Ww-氨基酸单元包括二肽、三肽、四肽或五肽。例示性的二肽包括：缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)。例示性的三肽包括：甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。构成氨基酸接头构件的氨基酸残基包括天然存在的氨基酸，以及次要氨基酸和非天然存在的氨基酸类似物，诸如瓜氨酸。
可以用一种或多种酶(包括肿瘤相关蛋白酶)酶促切割氨基酸单元，以释放药物模块(-D)，其在一个实施方案中在体内释放时被质子化以提供药物(D)。可以在特定酶(例如肿瘤相关蛋白酶，组织蛋白酶B、C和D，或纤溶酶蛋白酶)的酶促切割的选择性方面设计和优化氨基酸接头构件。
间隔物单元
在氨基酸单元存在时(w＝1-12)，间隔物单元(-Yy-)(在存在时，y＝1或2)使氨基酸单元(-Ww-)与药物模块(D)连接。或者，在氨基酸单元不存在时，间隔物单元使延伸物单元与药物模块连接。在氨基酸单元和延伸物单元都不存在时(w，y＝0)，间隔物单元还使药物模块与抗体单元连接。间隔物单元有两大类：自我牺牲的(self-immolative)和非自我牺牲的。非自我牺牲的间隔物单元为部分或所有间隔物单元在从抗体-药物偶联物或药物模块-接头切割(特别是酶促切割)氨基酸单元后保持与药物模块结合的间隔物单元。当含有甘氨酸-甘氨酸间隔物单元或甘氨酸间隔物单元的ADC通过肿瘤细胞相关蛋白酶、癌细胞相关蛋白酶或淋巴细胞相关蛋白酶进行酶促切割时，甘氨酸-甘氨酸-药物模块或甘氨酸-药物模块从Ab-Aa-Ww-上切割下来。在一个实施方案中，在靶细胞内发生独立的水解反应，其切割甘氨酸-药物模块的键并释放药物。
在另一个实施方案中，-Yy-为对氨基苄基氨甲酰基(PAB)单元，其亚苯基部分被Qm取代，其中Q为-C1-C8烃基(烷基，alkyl)、-O-(C1-C8烃基(烷基，alkyl))、-卤素、-硝基或-氰基；且m为范围0-4的整数。
非自我牺牲的间隔物单元(-Y-)的例示性实施方案为：-Gly-Gly-；-Gly-；-Ala-Phe-；-Val-Cit-。
在一个实施方案中，提供了药物模块-接头或ADC或其药学可接受的盐或溶剂化物，其中间隔物单元不存在(y＝0)。
或者，含有自我牺牲的间隔物单元的ADC能释放-D。在一个实施方案中，-Y-为通过PAB基团的氨基氮原子连接至-Ww-，且通过碳酸酯、氨基甲酸酯或醚基团直接连接至-D的PAB基团，其中ADC具有如下例示性结构：
Figure GPA00001058503001901
其中Q为-C1-C8烃基(烷基，alkyl)、-0-(C1-C8烃基(烷基，alkyl))、-卤素、-硝基或-氰基；m为范围0-4的整数；且p范围为1-4。
自我牺牲的间隔物的其它例子包括但不限于在电子方面与PAB基团类似的芳族化合物，诸如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(Hay等(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9：2237)、杂环PAB类似物(US 2005/0256030)、β-葡糖苷酸(WO2007/011968)和邻位或对位氨基苄基乙缩醛。可以使用在酰胺键水解时进行环化的间隔物，诸如取代和未取代的4-氨基丁酸酰胺类(Rodrigues等(1995)Chemistry Biology 2：223)、适当取代的双环[2.2.1]和双环[2.2.2]环体系(Storm等(1972)J.Amer.Chem.Soc.94：5815)和2-氨基苯基丙酸酰胺类(Amsberry等(1990)J.Org.Chem.55：5867)。消去在甘氨酸上取代的含胺药物(Kingsbury等(1984)J.Med.Chem.27：1447)也是可用于ADC的自我牺牲的间隔物的例子。
例示性的间隔物单元(-Yy-)以式X-XII表示：
Figure GPA00001058503001911
树状接头
在另一个实施方案中，接头L可以为树状类型接头(dendritic type linker)，其用于通过分支的多功能接头模块将超过一个药物模块共价附着于抗体(Sun等(2002)Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 12：2213-2215；Sun等(2003)Bioorganic&Medicinal Chemistry 11：1761-1768)。树状接头能增加药物与抗体的摩尔比，即载荷，它与ADC的效能相关。如此，如果半胱氨酸改造抗体仅携带一个反应性半胱氨酸硫醇基团，那么可以通过树状接头附着众多药物模块。分支的树状接头的例示性实施方案包括2，6-双(羟甲基)-对甲酚和2，4，6-三(羟甲基)-酚树状聚物单元(dendrimer unit)(WO 2004/01993；Szalai等(2003)J.Amer.Chem.Soc.125：15688-15689；Shamis等(2004)J.Amer.Chem.Soc.126：1726-1731；Amir等(2003)Angew.Chem.Int.Ed.42：4494-4499)。
在一个实施方案中，间隔物单元为分支的双(羟甲基)苯乙烯(BHMS)，它可以用于掺入和释放众多药物，其具有如下结构：
Figure GPA00001058503001921
其包含2-(4-氨基亚苄基)丙烷-1，3-二醇树状聚物单元(WO 2004/043493；deGroot等(2003)Angew.Chem.Int.Ed.42：4490-4494)，其中Q为-C1-C8烃基(烷基，alkyl)，-O-(C1-C8烃基(烷基，alkyl))、-卤素、-硝基或-氰基；m为范围0-4的整数；n为0或1；且p范围为1-4。
式I抗体-药物偶联物化合物的例示性实施方案包括XIIIa(MC)、XIIIb(val-cit)、XIIIc(MC-val-cit)和XIIId(MC-val-cit-PAB)：
Figure GPA00001058503001922
式Ia抗体-药物偶联物化合物的其它例示性实施方案包括XIVa-e：
Figure GPA00001058503001923
Figure GPA00001058503001931
其中X为：
Figure GPA00001058503001932
Y为：
Figure GPA00001058503001933
且R独立为H或C1-C6烃基(烷基，alkyl)；且n为1-12。
在另一个实施方案中，接头具有反应性官能团，该反应性官能团具有与存在于抗体上的亲电子基团具有反应性的亲核基团。抗体上有用的亲电子基团包括但不限于醛和酮羰基。接头的亲核基团的杂原子能与抗体上的亲电子基团反应并且与抗体单元形成共价键。接头上有用的亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、缩氨基硫脲(thiosemicarbazone)、肼羧酸酯和芳基酰肼。抗体上的亲电子基团提供了用于附着接头的便利位点。
典型地，可以通过在两个或更多氨基酸和/或肽片段之间形成肽键来制备肽类型的接头。例如，可以按照肽化学领域众所周知的液相合成法(E.
Figure GPA00001058503001941
和K.Lübke(1965)“The Peptides”，卷1，pp 76-136，Academic Press)来制备此类肽键。可以通过包括间隔物、延伸物和氨基酸单元的反应的任意组合或顺序来装配接头中间体。间隔物、延伸物和氨基酸单元可以采用本质上为亲电子、亲核或游离基的反应性官能团。反应性官能团包括但不限于羧基、羟基、对硝基苯基碳酸根、异硫氰酸根和离去基团，诸如O-甲磺酰基、O-甲苯磺酰基、-Cl、-Br、-I；或马来酰亚胺。
例如，带电荷的取代基，诸如磺酸根(-SO3 -)或铵可以增加试剂的水溶性并且有利于接头试剂与抗体或药物模块的偶联反应，或有利于Ab-L(抗体-接头中间体)与D的偶联反应或D-L(药物-接头中间体)与Ab的偶联反应，这取决于用于制备ADC的合成途径。
接头试剂
可以使用多种双功能接头试剂来制备包含抗体和auristatin的偶联物，诸如N-琥珀酰亚氨基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)，琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)，亚氨基硫烷(IT)，亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)、活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异硫氰酸酯(诸如甲苯2，6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)的双功能衍生物。
抗体药物偶联物还可以用下列接头试剂来制备：BMPEO、BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMPB、SMPH、sulfo-EMCS、sulfo-GMBS、sulfo-KMUS、sulfo-MBS、sulfo-SIAB、sulfo-SMCC和sulfo-SMPB、及SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)；并且包括双马来酰亚胺试剂：DTME、BMB、BMDB、BMH、BMOE、1，8-双-马来酰亚氨基二甘醇(BM(PEO)2)和1，11-双-马来酰亚氨基三甘醇(BM(PEO)3)，它们可购自Pierce Biotechnology，Inc.、ThermoScientific(Rockford，IL)、及其它试剂供应商。双马来酰亚胺试剂容许将半胱氨酸改造抗体的硫醇基团按照依次或同时的方式附着至含硫醇药物模块、标记物或接头中间体。除马来酰亚胺外的其它与半胱氨酸改造抗体、药物模块、标记物或接头中间体的硫醇基团具有反应性的官能团包括碘乙酰胺、溴乙酰胺、乙烯基吡啶、二硫化物、吡啶基二硫化物、异氰酸根和异硫氰酸根。
Figure GPA00001058503001951
还可以通过其它商业(诸如Molecular Biosciences Inc.(Boulder，CO))来源获得或按照下列文献中所述的规程合成有用的接头试剂：Toki等(2002)J.Org.Chem.67：1866-1872；Walker，M.A.(1995)J.Org.Chem.60：5352-5355；Frisch等(1996)Bioconjugate Chem.7：180-186；US 6214345；WO 02/088172；US 2003130189；US2003096743；WO 03/026577；WO 03/043583；和WO04/032828。
可以通过使下列接头试剂与氨基酸单元的N-末端反应将式(IIIa)的延伸物引入接头：
Figure GPA00001058503001952
其中n为范围1-10的整数且T为-H或-SO3Na；
Figure GPA00001058503001953
其中n为范围0-3的整数；
Figure GPA00001058503001954
可以通过使下列双官能试剂与氨基酸单元的N-末端反应将延伸物单元引入接头：
Figure GPA00001058503001962
其中X为Br或I。
还可以通过使下列双官能试剂与氨基酸单元的N-末端反应将式的延伸物单元引入接头：
Figure GPA00001058503001963
具有马来酰亚胺延伸物和对氨基苄基氨甲酰基(PAB)自我牺牲间隔物的例示性缬氨酸-瓜氨酸(val-cit或vc)二肽接头试剂具有如下结构：
具有马来酰亚胺延伸物单元和PAB自我牺牲间隔物单元的例示性phe-lys(Mtr，单-4-甲氧基三苯甲基)二肽接头试剂可以按照Dubowchik等(1997)Tetrahedron Letters，38：5257-60所述制备且具有如下结构：
Figure GPA00001058503001971
半胱氨酸改造抗CD79b抗体-药物偶联物的制备
可以通过数种途径，采用本领域技术人员公知的有机化学反应、条件和试剂来制备式I的ADC，包括：(1)使半胱氨酸改造抗体的半胱氨酸基团与接头试剂反应，从而通过共价键形成抗体-接头中间体Ab-L，随后与活化的药物模块D反应；和(2)使药物模块的亲核基团与接头试剂反应，从而通过共价键形成药物-接头中间体D-L，随后与半胱氨酸改造抗体的半胱氨酸基团反应。偶联方法(1)和(2)可以与各种半胱氨酸改造抗体、药物模块和接头-起使用以制备式I的抗体-药物偶联物。
抗体半胱氨酸硫醇基团为亲核性的并且能够与接头试剂和药物-接头中间体上的亲电子基团反应而形成共价键，所述亲电子基团包括：(i)活性酯类，诸如NHS酯类、HOBt酯类、卤代甲酸酯类和酸性氯化物类；(ii)烃基和苄基卤化物，诸如卤代乙酰胺类；(iii)醛类、酮类、羧基和马来酰亚胺基团；和(iv)通过硫化物交换的二硫化物，包括吡啶基二硫化物。药物模块上的亲核基团包括但不限于：胺、硫醇、羟基、酰肼、肟、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼基团，它们能够与接头模块和接头试剂上的亲电子基团反应而形成共价键。
可以如下使半胱氨酸改造抗体变成反应性的以便偶联接头试剂，即用还原剂，诸如DTT(Cleland氏试剂，二硫苏糖醇)或TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐)处理(Getz等(1999)Anal.Biochem.273：73-80；Soltec Ventures，Beverly，MA)，接着再氧化以再形成链间和链内二硫键(实施例5)。例如，在37℃用约50倍摩尔过量的TCEP将在CHO细胞中表达的全长半胱氨酸改造的单克隆抗体(ThioMab)还原3小时以还原半胱氨酸加合物中的二硫键，其可以在新引入的半胱氨酸残基与存在于培养基中的半胱氨酸之间形成。用10mM乙酸钠，pH 5稀释还原后的ThioMab并且加载至10mM乙酸钠，pH 5中的HiTrap S柱上并且用含有0.3M氯化钠的PBS洗脱。在室温用稀(200nM)硫酸铜(CuSO4)水溶液重新建立亲本Mab中存在的半胱氨酸残基之间的二硫键过夜。或者，脱氢抗坏血酸(DHAA)是有效的氧化剂，用于在半胱氨酸加合物的还原性切割之后重新建立半胱氨酸改造抗体的链内二硫化物基团。可以使用本领域公知的其它氧化剂，即氧化性试剂和氧化性条件。环境空气氧化也是有效的。这种温和的部分再氧化步骤有效地高保真度地形成链内二硫键并保护新引入的半胱氨酸残基的硫醇基团。加入约10倍过量的药物-接头中间体，例如MC-vc-PAB-MMAE，混合并且在室温放置约1小时，以进行偶联并形成抗CD79b抗体-药物偶联物。将偶联混合物进行凝胶过滤、加载和通过HiTrap S柱洗脱以除去过量的药物-接头中间体和其它杂质。
附图23显示了制备由细胞培养物表达的用于偶联的半胱氨酸改造抗体的一般方法。当细胞培养基含有半胱氨酸时，可以在新引入的半胱氨酸氨基酸和培养基中的半胱氨酸之间形成二硫化物加合物。必须将这些半胱氨酸加合物(描绘为图23中的例示性ThioMab(左)中的环)还原以生成具有偶联反应性的半胱氨酸改造抗体。将半胱氨酸加合物，可能还有多个链间二硫键用还原剂诸如TCEP还原性切割以产生还原形式的抗体。在部分氧化条件下，用硫酸铜、DHAA或暴露于环境氧而重新形成配对半胱氨酸残基之间的链间二硫键。新引入的、改造的和未配对的半胱氨酸残基仍然可用于与接头试剂或药物-接头中间体反应而形成本发明的抗体偶联物。哺乳动物细胞系中表达的ThioMabs通过-S-S-键形成产生外部偶联至改造的Cys的Cys加合物。因此，纯化的ThioMabs如实施例5所述通过还原和再氧化规程处理以产生反应性ThioMabs。这些ThioMabs用于偶联含有马来酰亚胺的细胞毒性药物、荧光团和其它标记物。
10.免疫脂质体
本文中所公开的抗CD79b抗体还可配制成免疫脂质体。“脂质体”指由各种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂构成的，可用于对哺乳动物投递药物的小囊泡。脂质体的成分通常排列成双层形式，与生物膜的脂质排列相似。含有抗体的脂质体可通过本领域已知方法来制备，诸如Epstein et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688(1985)；Hwang et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4030(1980)；美国专利4,485,045和4,544,545；及1997年10月23日公布的WO97/38731。循环时间延长的脂质体披露于美国专利5,013,556。
可用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂类组合物通过反相蒸发法生成特别有用的脂质体。将脂质体挤过具有设定孔径的滤器，产生具有期望直径的脂质体。可如Martin et al.，J.Biol.Chem.257：286-288(1982)中所述，将本发明抗体的Fab’片段经二硫化物交换反应与脂质体偶联。任选在脂质体中包含化疗剂。参见Gabizon et al.，J.National CancerInst.81(19)：1484(1989)。
B.制备抗体的某些方法
1.筛选具有期望特性的抗CD79b抗体
上文已经描述了用于生成与CD79b多肽结合的抗体的方法。可以根据需要进一步选择具有某些生物学特征的抗体。
本发明抗CD79b抗体的生长抑制效果可通过本领域知道的方法来评估，例如使用内源性的或在用CD79b基因转染后表达CD79b多肽的细胞。例如，可将适宜肿瘤细胞系和CD79b转染细胞用多种浓度的本发明抗CD79b单克隆抗体处理数天(例如2-7天)，并用结晶紫或MTT染色，或者通过一些其它比色测定法进行分析。测量增殖的另一种方法将是通过比较在存在或缺乏本发明抗CD79b抗体时处理的细胞的3H-胸苷摄取。处理后，收获细胞并在闪烁计数器中对掺入DNA的放射性的量定量。适宜的阳性对照包括用已知抑制选定细胞系生长的生长抑制性抗体处理该细胞系。可以本领域知道的多种方法来测定体内肿瘤细胞的生长抑制。所述肿瘤细胞可以是过表达CD79b多肽的肿瘤细胞。与未处理的肿瘤细胞相比，抗CD79b抗体会在体外或在体内抑制表达CD79b的肿瘤细胞的细胞增殖达约25-100％，更优选约30-100％，甚更优选约50-100％或70-100％，在一个实施方案中，抗体浓度为约0.5-30μg/ml。可在细胞培养物中在抗体浓度为约0.5-30μg/ml或约0.5nM至200nM时测量生长抑制，其中在使肿瘤细胞暴露于抗体后1-10天测量生长抑制。如果以约1μg/kg至约100mg/kg体重施用抗CD79b抗体导致在自首次施用抗体起约5天至3个月内、优选约5至30天内肿瘤体积缩小或肿瘤细胞增殖降低，那么该抗体是体内生长抑制性的。
为了选择诱导细胞死亡的抗CD79b抗体，可相对于对照评估通过例如碘化丙啶(PI)、锥虫蓝或7AAD摄取显示的膜完整性丧失。PI摄取测定法可在缺乏补体和免疫效应细胞时进行。在单独的培养基或含有适宜抗CD79b抗体(例如约10μg/ml)的培养基中温育表达CD79b多肽的肿瘤细胞。将细胞温育3天的时限。每次处理后，将细胞清洗并等分到35mm盖有滤网(strainer-capped)的12x 75管中(每管1ml，每个处理组3管)以除去细胞团块。然后向管中加入PI(10μg/ml)。可以使用流式细胞仪和
Figure GPA00001058503002002
CellQuest软件(Becton Dickinson)分析样品。可以将那些根据PI摄取的测定诱导统计学显著水平的细胞死亡的抗CD79b抗体选作诱导细胞死亡的抗CD79b抗体。
为了筛选结合CD79b多肽上目的抗体所结合的表位的抗体，可进行常规交叉阻断测定法，诸如Antibodies，A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory，Ed Harlow and David Lane，1988中所记载的。此测定法可用于测定测试抗体是否与已知的抗CD79b抗体结合相同位点或表位。或者/另外，可通过本领域知道的方法进行表位作图。例如，可对抗体序列进行诱变，诸如通过丙氨酸扫描，以鉴定接触残基。首先对突变型抗体测试多克隆抗体的结合以确保正确折叠。在一种不同的方法中，可将对应于CD79b不同区域的肽与测试抗体或者与测试抗体及具有已表征或已知表位的抗体一起用于竞争测定法。
2.某些文库筛选方法
本发明的抗CD79b抗体可以通过使用组合库筛选具有期望活性的抗体来生成。例如，本领域知道用于构建噬菌体展示库及对此类文库筛选具有期望的结合特性的抗体的多种方法。此类方法一般记载于Hoogenboom等(2001)于：Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等编，Human Press，Totowa，NJ)，在某些实施方案中是Lee等(2004)J.Mol.Biol.340：1073-1093。
在原理上，通过筛选噬菌体文库来选择合成抗体克隆，所述噬菌体文库含有展示融合至噬菌体外壳蛋白的各种抗体可变区(Fv)片段的噬菌体。通过针对所需抗原的亲和层析来淘选此类噬菌体文库。表达能够结合所需抗原的Fv片段的克隆被吸附至抗原，从而与文库中不结合的克隆分开。然后将结合的克隆从抗原上洗脱，而且可以通过额外的抗原吸附/洗脱循环进一步富集。本发明的任何抗CD79b抗体可以如下获得，即设计合适的抗原筛选规程来选择感兴趣的噬菌体克隆，接着使用来自感兴趣的噬菌体克隆的Fv序列和Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIHPublication 91-3242，Bethesda MD(1991)，卷1-3中记载的合适的恒定区(Fc)序列来构建全长抗CD79b抗体克隆。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合域由两个约110个氨基酸的可变(V)区形成，分别来自轻链(VL)和重链(VH)，都呈现三个高变环(HVR)或互补决定区(CDR)。可变域可以功能性的展示在噬菌体上，或是作为单链Fv(scFv)片段(其中VH和VL通过短的、柔性的接头共价相连)，或者作为Fab片段(其中它们各自与恒定域融合且非共价相互作用)，如Winter等，Ann.Rev.Immunol.，12：433-455(1994)所述。在用于本文时，编码scFv的噬菌体克隆和编码Fab的噬菌体克隆统称为“Fv噬菌体克隆”或“Fv克隆”。
VH和VL基因的全集可以通过聚合酶链式反应(PCR)分开克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以搜索抗原结合克隆，如Winter等，Ann.Rev.Immunol.，12：433-455(1994)所述。来自经免疫来源的文库提供对免疫原有高亲和力的抗体，无需构建杂交瘤。或者，可以克隆未免疫的全集，用于为广泛的非自身的及自身的抗原提供单一人抗体来源，无需任何免疫，如Griffiths等，EMBO J，12：725-734(1993)所述。最后，未免疫的文库还可以以合成方式来构建，即从干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用包含随机序列的PCR引物来编码高度可变的CDR3区及用来在体外实现重排，如Hoogenboom和Winter，J.Mol.Biol.，227：381-388(1992)所述。
在某些实施方案中，通过与次要外壳蛋白pIII融合，使用丝状噬菌体来展示抗体片段。抗体片段可以展示为单链Fv片段，其中VH与VL结构域通过柔性多肽间隔物在同一多肽链上相连，例如如Marks等，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)所述，或者展示为Fab片段，其中一条链与pIII融合，另一条链分泌入细菌宿主细胞周质，在此装配Fab-外壳蛋白结构，其通过替换一些野生型外壳蛋白而展示在噬菌体表面上，例如如Hoogenboom等，Nucl.AcidsRes.，19：4133-4137(1991)所述。
一般而言，从收获自人或动物的免疫细胞获得编码抗体基因片段的核酸。如果希望文库偏向抗CD79b克隆，那么可以给受试者免疫CD79b以产生抗体应答，并回收脾细胞和/或循环B细胞或其它外周血淋巴细胞(PBL)用于文库构建。在一个优选的实施方案中，如下得到了偏向抗CD79b克隆的人抗体基因片段文库，即在携带功能性人免疫球蛋白基因阵列(且缺乏功能性内源抗体生成系统)的转基因小鼠中产生抗CD79b抗体应答，使得CD79b免疫产生生成针对CD79b的人抗体的B细胞。生成人抗体的转基因小鼠的生成在下文中有描述。
可以如下获得抗CD79b反应性细胞群的进一步富集，即使用合适的筛选规程来分离表达CD79b特异性膜结合抗体的B细胞，例如通过使用CD79b亲和层析进行的细胞分离或者细胞对荧光染料标记的CD79b的吸附及后续的荧光激活细胞分选(flow-activated cell sorting，FACS)。
或者，来自未免疫供体的脾细胞和/或B细胞或其它PBL的使用提供了可能的抗体全集的更佳展现，而且还容许使用CD79b在其中没有抗原性的任何动物(人或非人的)物种构建抗体文库。对于构建体外掺入抗体基因的文库，从受试者收获干细胞以提供编码未重排抗体基因区段的核酸。可以从多种动物物种(诸如人、小鼠、大鼠、兔类、luprine、犬、猫、猪、牛、马和禽类物种等)获得感兴趣的免疫细胞。
从感兴趣的细胞回收编码抗体可变基因区段(包括VH和VL区段)的核酸并扩增。就重排的VH和VL基因文库而言，可以如下获得所需DNA，即从淋巴细胞分离基因组DNA或mRNA，接着用与重排的VH和VL基因的5′和3′末端匹配的引物进行聚合酶链式反应(PCR)，如Orlandi等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)，86：3833-3837(1989)所述，由此构建多样性V基因全集供表达。可以从cDNA和基因组DNA扩增V基因，反向引物位于编码成熟V结构域的外显子的5′末端，正向引物基于J区段内部，如Orlandi等(1989)和Ward等，Nature，341：544-546(1989)所述。然而，为了从cDNA进行扩增，反向引物还可基于前导外显子内，如Jones等，Biotechnol.，9：88-89(1991)所述，正向引物基于恒定区内，如Sastry等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)，86：5728-5732(1989)所述。为了使互补性最大化，引物中可以掺入简并性，如Orlandi等(1989)或Sastry等(1989)所述。在某些实施方案中，如下将文库多样性最大化，即使用靶向每个V基因家族的PCR引物来扩增免疫细胞核酸样品中存在的所有可获得的VH和VL重排，例如如Marks等，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)的方法中所述或Orum等，Nucleic Acids Res.，21：4491-4498(1993)的方法中所述。为了将所扩增的DNA克隆入表达载体，可以在PCR引物的一端引入罕见的限制性位点作为标签，如Orlandi等(1989)所述，或者用带标签的引物进行进一步的PCR扩增，如Clackson等，Nature，352：624-628(1991)所述。
合成重排的V基因全集可以在体外从V基因区段衍生。大多数人VH基因区段已经克隆和测序(Tomlinson等，J.Mol.Biol.，227：776-798(1992))，并定位(Matsuda等，Nature Genet.，3：88-94(1993))；这些克隆的区段(包括H1和H2环的所有主要构造)可用于生成多样性VH基因全集，用到编码序列和长度多样性的H3环的PCR引物，如Hoogenboom和Winter，J.Mol.Biol.，227：381-388(1992)所述。VH全集还可如下生成，所有序列多样性集中于单一长度的长H3环，如Barbas等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4457-4461(1992)所述。人Vκ和Vλ区段已经克隆和测序(Williams和Winter，Eur.J.Immunol.，23：1456-1461(1993))，而且可用于生成合成轻链全集。基于一系列VH和VL折叠结构及L3和H3长度的合成V基因全集将编码具有可观结构多样性的抗体。扩增编码V基因的DNA后，依照Hoogenboom和Winter，J.Mol.Biol.，227：381-388(1992)的方法，可以在体外重排种系V基因区段。
抗体片段全集可以如下构建，即以数种方式将VH与VL基因全集联合在一起。可以在不同载体中创建各个全集，并在体外重组载体，例如如Hogrefe等，Gene，128：119-126(1993)所述，或者在体内通过组合感染来重组载体，例如Waterhouse等，Nucl.Acids Res.，21：2265-2266(1993)中记载的loxP系统。体内重组方法利用Fab片段的双链性质来克服因大肠杆菌转化效率施加的库容量限制。分开克隆未免疫的VH和VL全集，一个克隆入噬菌粒，另一个克隆入噬菌体载体。然后通过用噬菌体感染含噬菌粒的细菌使得每个细胞包含一种不同组合来联合两个文库，库容量只受细胞存在数的限制(约1012个克隆)。两种载体都包含体内重组信号，使得VH与VL基因重组到单一复制子上，并共包装成噬菌体病毒粒。这些巨型文库提供了大量的具有优良亲和力(Kd -1为约10-8M)的多样性抗体。
或者，可以将全集序贯克隆入同一载体，例如如Barbas等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：7978-7982(1991)所述，或者通过PCR装配到一起，然后克隆，例如如Clackson等，Nature，352：624-628(1991)所述。PCR装配还可用于将VH和VL DNA与编码柔性肽间隔物的DNA连接以形成单链Fv(scFv)全集。在另一种技术中，“细胞内PCR装配”用于通过PCR在淋巴细胞内联合VH与VL基因，然后克隆所接头因的全集，如Embleton等，Nucl.Acids Res.，20：3831-3837(1992)所述。
未免疫文库(天然的或合成的)生成的抗体可具有中等亲和力(Kd -1为约106-107M-1)，但还可以如下在体外模拟亲和力成熟，即构建次生文库并再次选择，如Winter等(1994)，见上文所述。例如，在Hawkins等，J.Mol.Biol.，226：889-896(1992)的方法或Gram等，Proc.Natl.Acad.Sci USA，89：3576-3580(1992)的方法中，使用易错聚合酶在体外随机引入突变(Leung等，Technique，1：11-15(1989))。另外，可以通过随机突变一个或多个CDR来进行亲和力成熟，例如在选定的个别Fv克隆中使用携带跨越感兴趣CDR的随机序列的引物进行PCR并筛选更高亲和力的克隆。WO 9607754(公布于1996年3月14日)记载了用于在免疫球蛋白轻链的互补决定区中诱导诱变以创建轻链基因文库的方法。另一种高效方法是将通过噬菌体展示选出的VH或VL结构域与得自未免疫供体的天然存在V结构域变体全集重组，并在数轮链改组中筛选更高亲和力，如Marks等，Biotechnol.，10：779-783(1992)所述。此技术容许生成亲和力约10-9M或更低的抗体和抗体片段。
文库的筛选可通过本领域已知的多种技术来实现。例如，CD79b可用于包被吸附板的孔，在附着至吸附板的宿主细胞上表达，或用于细胞分选，或者偶联至生物素以用链霉亲合素包被的珠捕捉，或者用于淘选噬菌体展示库的任何其它方法。
在适于至少部分噬菌体颗粒结合吸附剂的条件下，使噬菌体文库样品接触固定化的CD79b。正常情况下，选择包括pH、离子强度、温度等等的条件来模拟生理学条件。结合至固相的噬菌体进行清洗，然后用酸洗脱，例如如Barbas等，Proc.Natl.Acad.Sci USA，88：7978-7982(1991)所述，或者用碱洗脱，例如如Marks等，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)所述，或者通过CD79b抗原竞争洗脱，例如在与Clackson等，Nature，352：624-628(1991)的抗原竞争法类似的规程中。噬菌体在单轮选择中可以富集20-1,000倍。此外，富集的噬菌体可以在细菌培养物中进行培养，并进行更多轮选择。
选择的效率取决于许多因素，包括清洗过程中解离的动力学，及单个噬菌体上的多个抗体片段是否能同时结合抗原。具有较快解离动力学(和弱结合亲和力)的抗体可以通过使用短时间的清洗、多价噬菌体展示、及固相中的高抗原包被密度来保留。高密度不仅通过多价相互作用而稳定了噬菌体，而且有利于已解离的噬菌体的再结合。具有较慢解离动力学(和强结合亲和力)的抗体的选择可以通过使用长时间的清洗和单价噬菌体展示(如Bass等，Proteins，8：309-314(1990)和WO 92/09690所述)及低抗原包被密度(如Marks等，Biotechnol.，10：779-783(1992)所述)来促进。
有可能在对CD79b具有不同亲和力的噬菌体抗体之间进行选择，甚至是亲和力略有差异的。然而，选定抗体的随机突变(例如如有些亲和力成熟技术中所进行的)有可能产生许多突变体，多数结合抗原，少数具有更高的亲和力。通过限制CD79b，罕见的高亲和力噬菌体能竞争胜出。为了保留所有较高亲和力的突变体，可以将噬菌体与过量的生物素化CD79b一起温育，但是生物素化CD79b的浓度以摩尔计低于CD79b的目标摩尔亲和常数。然后可以用链霉亲合素包被的顺磁珠捕捉高亲和力的结合噬菌体。此类“平衡捕捉”容许依照结合亲和力来选择抗体，其灵敏性容许从大大过量的低亲和力噬菌体中分离出亲和力只有原值2倍的突变体克隆。还可以操作用于清洗结合至固相的噬菌体的条件来进行基于解离动力学的区分。
抗CD79b克隆可以基于活性进行选择。在某些实施方案中，本发明提供了结合天然表达CD79b的活细胞的抗CD79b抗体。在一个实施方案中，本发明提供了阻断CD79b配体与CD79b之间的结合但不阻断CD79b配体与第二蛋白质之间的结合的抗CD79b抗体。对应于此类抗CD79b抗体的Fv克隆可以如下选出：(1)如上所述从噬菌体文库分离抗CD79b克隆，并任选通过在合适的细菌宿主中培养所分离的噬菌体克隆群来扩增该群体；(2)选出分别想要阻断和不阻断其活性的第二蛋白质和CD79b；(3)使抗CD79b噬菌体克隆吸附至固定化的CD79b；(4)使用过量的第二蛋白质来洗脱任何不想要的、识别CD79b结合决定簇(其与第二蛋白质的结合决定簇交叠或共享)的克隆；并(5)洗脱在步骤(4)后仍然吸附的克隆。任选的是，具有期望的阻断/不阻断特性的克隆可以通过一次或多次重复本文所述选择规程来进一步富集。
编码本发明杂交瘤衍生单克隆抗体或噬菌体展示Fv克隆的DNA易于使用常规规程分离和测序(例如通过使用设计成自杂交瘤或噬菌体DNA模板特异性扩增感兴趣的重链和轻链编码区的寡核苷酸引物)。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将该表达载体转染入原本不生成免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞，诸如大肠杆菌细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞，以在重组宿主细胞中获得所需单克隆抗体的合成。关于编码抗体的DNA在细菌中的重组表达的综述性论文包括Skerra等，Curr.Opinion inImmunol.，5：256(1993)及Pluckthun，Immunol.Revs，130：151(1992)。
编码本发明Fv克隆的DNA可以联合编码重链和/或轻链恒定区的已知DNA序列(例如适宜的DNA序列可得自Kabat等，见上文)以形成编码全长或部分长度重链和/或轻链的克隆。应当领会，任何同种型的恒定区都可用于此目的，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE恒定区，而且此类恒定区可以得自任何人或动物物种。衍生自一种动物(诸如人)物种的可变域DNA，然后与另一动物物种的恒定区DNA融合以形成“杂合的”全长重链和/或轻链的编码序列的Fv克隆包括在本文所用“嵌合”和“杂合”抗体的定义中。在某些实施方案中，衍生自人可变DNA的Fv克隆与人恒定区DNA融合以形成全长或部分长度人重链和/或轻链的编码序列。
还可以修饰编码衍生自杂交瘤的抗CD79b抗体的DNA，例如通过替代，即用人重链和轻链恒定域的编码序列替换衍生自杂交瘤克隆的同源鼠序列(例如如Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：6851-6855(1984)中的方法)。可以进一步修饰编码杂交瘤或Fv克隆衍生抗体或片段的DNA，通过共价连接免疫球蛋白编码序列和非免疫球蛋白多肽的整个或部分编码序列。可以以该方式制备具有本发明的Fv克隆或杂交瘤克隆衍生抗体的结合特异性的“嵌合”或“杂合”抗体。
C.依赖抗体的酶介导的前体药物疗法(ADEPT)
通过将抗体与前体药物活化酶偶联，本发明的抗体还可用于ADEPT，所述前体药物活化酶将前体药物(例如肽基化疗剂，参见WO 81/01145)转变为活性抗癌药。参见例如WO 88/07378和美国专利4,975,278。
可用于ADEPT的免疫偶联物的酶组分包括能够以这样一种方式作用于前体药物从而将其转变为更有活性的细胞毒性形式的任何酶。
可用于本发明方法的酶包括但不限于可将含磷酸盐/酯的前体药物转变为游离药物的碱性磷酸酶；可将含硫酸盐/酯的前体药物转变为游离药物的芳基硫酸酯酶；可将无毒5-氟胞嘧啶转变为抗癌药5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脱氨酶；可将含肽的前体药物转变为游离药物的蛋白酶，诸如沙雷氏菌蛋白酶(serratiaprotease)、嗜热菌蛋白酶(thermolysin)、枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)、羧肽酶和组织蛋白酶(诸如组织蛋白酶B和L)；可转化含D-氨基酸替代的前体药物的D-丙氨酰羧肽酶；可将糖基化前体药物转变为游离药物的碳水化合物切割酶，诸如β-半乳糖苷酶和神经氨酸酶；可将用β-内酰胺衍生的药物转变为游离药物的β-内酰胺酶；及可将在其氨基氮处分别用苯氧乙酰基或苯乙酰基衍生的药物转变成游离药物的青霉素酰胺酶，诸如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。或者，可使用具有酶活性的抗体，本领域也称作“抗体酶”，将本发明的前体药物转变为游离活性药物(参见例如Massey，Nature 328：457-458(1987))。可如本文所述制备抗体-抗体酶偶联物，用于将抗体酶递送至肿瘤细胞群。
可通过本领域众所周知的技术将本发明的酶与抗CD79b抗体共价结合，诸如使用上文所讨论的异双功能交联剂。或者，可使用本领域众所周知的重组DNA技术构建包含与本发明酶的至少功能活性部分连接的本发明抗体的至少抗原结合区的融合蛋白(参见例如Neuberger等，Nature 312：604-608(1984))。
D.抗CD79b抗体
除了本文所述抗CD79b抗体，可制备抗CD79b抗体变体。抗CD79b抗体可通过将适宜的核苷酸改变引入编码DNA和/或通过合成期望抗体或多肽来制备。本领域技术人员将领会，氨基酸改变可改变抗CD79b抗体的翻译后加工，诸如改变糖基化位点的数目或位置或者改变膜锚定特征。
可在本文所述抗CD79b抗体中进行变异，例如使用例如美国专利5,364,934所述的保守和非保守突变的任何技术和指导方针。变异可以是编码抗体或多肽的一个或多个密码子的替代、删除或插入，其导致氨基酸序列相对于天然序列抗体的改变。任选的是，变异是通过抗CD79b抗体的一个或多个结构域中至少一个氨基酸为任何其它氨基酸所替代。通过比较抗CD79b抗体的序列与同源已知蛋白质分子的序列，并将高同源区中进行的氨基酸序列改变的数目最少化，可发现确定哪些氨基酸残基可插入、替代或删除而不会对期望活性有不利影响的方针。氨基酸替代可以是将一种氨基酸用具有相似结构和/或化学特性的另一种氨基酸替代的结果，诸如用丝氨酸替代亮氨酸，即保守氨基酸替代。插入或删除可任选在约1个至5个氨基酸的范围内。可通过在序列中系统进行氨基酸插入、替代或删除，并对所得变体测试由全长或成熟天然序列展示的活性来确定可容许的变异。
本文提供了抗CD79b抗体片段。例如，在与全长天然抗体或蛋白质比较时，此类片段可在N-末端或C-末端截短，或者可缺少内部残基。某些片段缺少对于抗CD79b抗体的期望生物学活性不是至关重要的氨基酸残基。
抗CD79b抗体可通过多种常规技术中的任一种来制备。期望肽片段可化学合成。一种备选方法牵涉通过酶促消化产生抗体或多肽片段，例如通过用已知在由特定氨基酸残基限定的位点处切割蛋白质的酶处理蛋白质，或者通过用合适的限制酶消化DNA，并分离期望片段。还有一种合适的技术牵涉分离并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增编码期望抗体或多肽片段的DNA片段。限定DNA片段期望末端的寡核苷酸在PCR中用作5′和3′引物。优选的是，抗CD79b抗体片段与本文所公开的天然抗CD79b抗体共享至少一种生物学和/或免疫学活性。
在具体实施方案中，感兴趣的保守替代见表8标题“优选替代”下所示。如果此类替代导致生物学活性的改变，那么可引入表8中称为“例示替代”的更实质性改变，或者如下文关于氨基酸类别进一步所述的，并筛选产物。
表8
原始残基例示替代优选替代
Ala(A)    val；leu；ile                        val
Arg(R)    lys；gln；asn                        lys
Asn(N)    gln；his；asp；lys；arg              gln
Asp(D)    glu；asn                             glu
Cys(C)    ser；ala                             ser
Gln(Q)    asn；glu                             asn
Glu(E)    asp；gln                             asp
Gly(G)    pro；ala                             ala
His(H)    asn；gln；lys；arg                   arg
Ile(I)    leu；val；met；ala；phe；正亮氨酸    leu
Leu(L)    正亮氨酸；ile；val；met；ala；phe    ile
Lys(K)    arg；gln；asn                        arg
Met(M)    leu；phe；ile                        leu
Phe(F)    trp；leu；val；ile；ala；tyr         leu
Pro(P)    ala                                  ala
Ser(S)    thr                                  thr
Thr(T)    val；ser                             ser
Trp(W)    tyr；phe                             tyr
Tyr(Y)    trp；phe；thr；ser                   phe
Val(V)    ile；leu；met；phe；ala；正亮氨酸    leu
对抗CD79b抗体的功能或免疫学身份的实质性修饰通过选择在保持以下方面的效果上显著不同的替代来完成：(a)替代区域的多肽主链的结构，例如作为折叠片或螺旋构象，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。根据共同的侧链特性，天然存在残基可如下分组：
(1)疏水性的：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性、亲水性的：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性的：Asp、Glu；
(4)碱性的：His、Lys、Arg；
(5)影响侧链取向的残基：Gly、Pro；和
(6)芳香族的：Trp、Tyr、Phe。
非保守替代将需要用这些类别之一中的一个成员交换另一个类别的。还可以将此类替代残基引入保守替代位点，或者更优选的是，引入剩余的(非保守)位点。
变异可使用本领域知道的方法来进行，诸如寡核苷酸介导的(定点)诱变、丙氨酸扫描、及PCR诱变。可对克隆的DNA进行定点诱变(Carter等，Nucl.Acids Res.13：4331(1986)；Zoller等，Nucl.Acids Res.10：6487(1987))、盒式诱变(Wells等，Gene 34：315(1985))、限制性选择诱变(restriction selectionmutagenesis)(Wells等，Philos.Trans.R.Soc.London SerA 317：415(1986))或其它已知技术以产生抗CD79b抗体变体DNA。
还可采用扫描氨基酸分析来鉴定沿着连续序列的一个或多个氨基酸。在优选的扫描用氨基酸中有相对较小的中性氨基酸。此类氨基酸包括丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸和半胱氨酸。丙氨酸通常是这组中的优选扫描用氨基酸，因为它消除了β-碳上的侧链，而且不大可能改变变体的主链构象(Cunningham和Wells，Science 244：1081-1085(1989))。丙氨酸通常也是优选的，因为它是最常见的氨基酸。另外，常常在隐蔽位置和暴露位置都能发现它(Creighton，The Proteins，W.H.Freeman&Co.，N.Y.；Chothia，J.Mol.Biol.150：1(1976))。如果丙氨酸替代不产生足够量的变体，那么可使用等排(isoteric)氨基酸。
任何不涉及保持抗CD79b抗体正确构象的半胱氨酸残基也可被替代，通常用丝氨酸，以改进分子的氧化稳定性和防止异常交联。相反，可向抗CD79b抗体中添加半胱氨酸键以改善其稳定性(特别是当抗体是抗体片段诸如Fv片段时)。
特别优选的一类替代变体牵涉替代亲本抗体的一个或多个高变区残基(例如人源化或人抗体)。通常，选择用于进一步开发的所得变体相对于产生它们的亲本抗体将具有改进的生物学特性。产生此类替代变体的一种便利方法牵涉使用噬菌体展示进行的亲和力成熟。简而言之，将数个高变区位点(例如6-7个位点)突变，在各个位点产生所有可能的氨基酸替代。如此产生的抗体变体以单价形式展示在丝状噬菌体颗粒上，作为与各个颗粒内包装的M13基因III产物的融合物。然后如本文所公开的对噬菌体展示的变体筛选其生物学活性(例如结合亲和力)。为了鉴定用于修饰的候选高变区位点，可进行丙氨酸扫描诱变以鉴定对抗原结合有重要贡献的高变区残基。或者/另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体和CD79b多肽之间的接触点可能是有益的。此类接触残基及邻近残基是依照本文详述技术进行替代的候选位点。一旦产生此类变体，如本文所述对该组变体进行筛选，可选择在一种或多种相关测定法中有优良特性的抗体用于进一步的开发。
编码抗CD79b抗体的氨基酸序列变体的核酸分子可通过本领域已知的多种方法来制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在氨基酸序列变体的情况中)，或者通过对早期制备的变体或非变体形式的抗CD79b抗体进行寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变来制备。
E.对抗CD79b抗体的修饰
对抗CD79b抗体的共价修饰包括在本发明的范围内。一种类型的共价修饰包括使抗CD79b抗体的靶氨基酸残基与有机衍生化试剂反应，该有机衍生化试剂能够与抗CD79b抗体的选定侧链或者N-或C-末端残基起反应。用双功能试剂进行的衍生化可用于例如使抗CD79b抗体与不溶于水的支持基质或表面交联，以用于抗CD79b抗体的纯化方法，反之亦然。常用的交联剂包括例如1，1-双(重氮-乙酰基)-2-苯乙烷、戊二醛、N-羟基琥珀酰亚胺酯例如与4-叠氮水杨酸形成的酯、同双功能亚氨酸酯包括二琥珀酰亚胺酯诸如3，3′-二硫代双(琥珀酰亚氨基丙酸酯)、双功能马来酰亚胺诸如双-N-马来酰亚胺-1，8-辛烷和诸如甲基-3-[(对-叠氮苯基)二硫代]丙酰亚胺酯等试剂。
其它修饰包括谷氨酰胺酰和天冬酰胺酰残基分别脱酰胺为谷氨酰和天冬氨酰残基，脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酰或苏氨酰残基的羟基的磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基的甲基化(T.E.Creighton，Proteins：Structure and Molecular Properties，W.H.Freeman&Co.，San Francisco，pp.79-86(1983))，N-末端胺的乙酰化，及任何C-末端羧基的酰胺化。
本发明范围内所包括的对抗CD79b抗体的另一类共价修饰包括改变抗体或多肽的天然糖基化样式。“改变天然糖基化样式”在本文中意图指删除一个或多个在天然序列抗CD79b抗体中发现的碳水化合物模块(moiety)(或是通过消除潜在糖基化位点，或是通过以化学和/或酶促手段删除糖基化)，和/或添加一个或多个在天然序列抗CD79b抗体中不存在的糖基化位点。另外，此短语包括天然蛋白质糖基化中的质的改变，牵涉所存在的多种碳水化合物模块的本质和比例的改变。
抗体和其它多肽的糖基化通常或是N-连接的或是O-连接的。N-连接指碳水化合物模块附着于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸)是将碳水化合物模块酶促附着于天冬酰胺侧链的识别序列。由此，多肽中这些三肽序列其中任一的存在产生潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化指将糖类N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附着于羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，但也可使用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸。
向抗CD79b抗体中添加糖基化位点通过改变氨基酸序列使其包含一个或多个上述三肽序列而便利地完成(用于N-连接的糖基化位点)。这种改变还可通过向原始抗CD79b抗体的序列中添加或替代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来进行(用于O-连接的糖基化位点)。可任选通过DNA水平的变化来改变抗CD79b抗体的氨基酸序列，特别是通过在预先选择的碱基处突变编码抗CD79b抗体的DNA，从而产生将翻译成期望氨基酸的密码子。
增加抗CD79b抗体上糖模块的数目的另一种方法是通过使糖苷与多肽化学或酶促偶联。本领域对此类方法有描述，例如1987年9月11日公开的WO87/05330，及Aplin和Wriston，CRC Crit.Rev.Biochem.，pp.259-306(1981)。
去除抗CD79b抗体上存在的糖模块可通过化学或酶促方法来实现，或者通过编码充当糖基化靶物的氨基酸残基的密码子的突变替代。化学脱糖基化技术是本领域已知的，而且描述于例如Hakimuddin等，Arch.Biochem.Biophys.259：52(1987)和Edge等，Anal.Biochem.118：131(1981)。酶促切割多肽上的糖模块可通过使用多种内切和外切糖苷酶来实现，如Thotakura等，Meth.Enzvmol.138：350(1987)所述。
对抗CD79b抗体的另一类共价修饰包括，以美国专利4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192或4,179,337所述方式，将抗体与多种非蛋白质性质的聚合物之一连接，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧亚烷(polyoxyalkylene)。抗体还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)、在胶状药物递送系统中(例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)或在粗滴乳状液中。此类技术公开于例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，16th edition，Osol，A.Ed.，1980。
还可以形成嵌合分子的方式修饰本发明的抗CD79b抗体，所述嵌合分子包含与另一种异源多肽或氨基酸序列融合的抗CD79b抗体。
在一个实施方案中，此类嵌合分子包括带有标签多肽的抗CD79b抗体的融合物，所述标签多肽提供了抗标签抗体可选择性结合的表位。表位标签通常位于抗CD79b抗体的氨基或羧基末端。此类表位标记形式的抗CD79b抗体的存在可使用针对所述标签多肽的抗体来检测。而且，表位标签的提供使抗CD79b抗体易于使用抗标签抗体或另一类结合所述表位标签的亲和基质通过亲和纯化来纯化。多种标签多肽及其各自抗体是本领域公知的。例子包括多组氨酸(poly-his)或多-组氨酸-甘氨酸(poly-his-gly)标签；流感HA标签多肽及其抗体12CA5(Field等，Mol.Cell.Biol.8：2159-2165(1988))；c-myc标签及其抗体8F9，3C7，6E10，G4，B7和9E10抗体(Evan等，Molecular and CellularBiology 5：3610-3616(1985))；及单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体(Paborsky等，Protein Engineering 3(6)：547-553(1990))。其它标签多肽包括Flag肽(Hopp等，BioTechnology 6：1204-1210(1988))；KT3表位肽(Martin等，Science 255：192-194(1992))；α-微管蛋白表位肽(Skinner等，J.Biol.Chem.266：15163-15166(1991))；及T7基因10蛋白肽标签(Lutz-Freyermuth等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：6393-6397(1990))。
在一个备选实施方案中，嵌合分子可包括抗CD79b抗体与免疫球蛋白或免疫球蛋白特定区域的融合物。对于二价形式的嵌合分子(也称为“免疫粘附素”)，此类融合物可以是与IgG分子Fc区的融合。Ig融合物优选包含用可溶形式(跨膜结构域删除或失活)的抗CD79b抗体置换Ig分子内至少一个可变区的替代。在一个特别优选的实施方案中，免疫球蛋白融合物包含IgG1分子的铰链区、CH2区和CH3区，或者铰链区、CH1区、CH2区和CH3区。关于免疫球蛋白融合物的制备还可参见1995年6月27日授权的美国专利5,428,130。
F.抗CD79b抗体的制备
下面的描述主要涉及通过培养用包含编码抗CD79b抗体的核酸的载体转化或转染的细胞来制备抗CD79b抗体。当然可采用本领域公知的备选方法来制备抗CD79b抗体。例如，可使用固相技术通过直接肽合成来生成适宜的氨基酸序列或其部分(参见例如Stewart等，Solid-Phase Peptide Synthesis，W.H.Freeman Co.，San Francisco，CA，1969；Merrifield，J.Am.Chem.Soc.85：2149-2154(1963))。体外蛋白质合成可使用手工技术或通过自动化来进行。自动化合成可例如使用Applied Biosystems Peptide Synthesizer(Foster City，CA)依照制造商的说明书来完成。抗CD79b抗体的多个部分可分开化学合成，并使用化学或酶促方法组合以生成期望的抗CD79b抗体。
1.编码抗CD79b抗体的DNA的分离
编码抗CD79b抗体的DNA可以从cDNA文库获得，所述cDNA文库从认为具有所述抗CD79b抗体mRNA且以可检测水平表达它的组织制备。因此，人的抗CD79b抗体DNA可以方便地从以人组织制备的cDNA文库获得。抗CD79b抗体编码基因也可从基因组文库或通过已知的合成流程(例如自动化核酸合成)获得。
可以用设计用于鉴定目的基因或由其编码的蛋白质的探针(诸如至少约20-80个碱基的寡核苷酸)筛选文库。用选定探针筛选cDNA或基因组文库可使用标准流程进行，诸如Sambrook等，Molecular Cloning：A LaboratoryManual，New York，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989所述。分离编码抗CD79b抗体的基因的一种备选方法是使用PCR方法学(Sambrook等，见上文；Dieffenbach等，PCR Primer：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，1995)。
用于筛选cDNA文库的技术是本领域公知的。选作探针的寡核苷酸序列应该足够长且足够明确(unambiguous)，使得假阳性降到最低。寡核苷酸优选是标记的，使得它在与所筛选文库中的DNA杂交时可检测出。标记方法是本领域公知的，包括使用放射标记物，像32P-标记的ATP、生物素化或酶标记。杂交条件，包括中等严格性和高度严格性，见Sambrook等，见上文。
在此类文库筛选方法中鉴定的序列可以与保藏的和公共数据库诸如GenBank或其它私有序列数据库中可得到的其它已知序列比较和对比。所述分子限定区域内的或跨越全长序列的序列同一性(或是在氨基酸水平上或是在核苷酸水平上)可使用本领域知道的和本文描述的方法来测定。
具有蛋白质编码序列的核酸可通过使用本文首次公开的推断的氨基酸序列筛选选定的cDNA或基因组文库来获得，并且必要时，使用Sambrook等，见上文所述常规引物延伸流程来检测可能不会逆转录为cDNA的mRNA的前体和加工的中间产物。
2.宿主细胞的选择和转化
将宿主细胞用本文所述用于抗CD79b抗体生成的表达或克隆载体转染或转化，并在为了诱导启动子、选择转化子或扩增编码期望序列的基因而恰当调整的常规营养培养基中培养。培养条件，诸如培养基、温度、pH等等，可以由本领域技术人员无需过多实验就选择。通常，用于使细胞培养物生产力最大化的原理、方案和实用技术可参见Mammalian Cell Biotechnology：aPractical Approach，M.Butler，ed.，IRL Press，1991和Sambrook等，见上文。
真核细胞转染和原核细胞转化(即将DNA导入宿主中，使得DNA能够进行复制，或是作为染色体外元件或是通过染色体整合)的方法是普通技术人员所知道的，例如CaCl2、CaPO4、脂质体介导的、聚乙二醇/DMSO和电穿孔。根据所用宿主细胞，转化使用对此类细胞适宜的标准技术进行。采用氯化钙的钙处理，如Sambrook等，见上文所述，或电穿孔通常用于原核细胞。用根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的感染用于某些植物细胞的转化，如Shaw等，Gene 23：315(1983)和1989年6月29日公开的WO 89/05859所述。对于没有此类细胞壁的哺乳动物细胞，可采用Graham和van der Eb，Virology 52：456-457(1978)的磷酸钙沉淀法。哺乳动物细胞宿主系统转染的一般情况参见美国专利4,399,216。进入酵母的转化通常依照Van Solingen等，J.Bact.130：946(1977)和Hsiao等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)76：3829(1979)的方法来进行。然而，也可使用用于将DNA导入细胞的其它方法，诸如核显微注射、电穿孔、细菌原生质体与完整细胞的融合或聚阳离子例如polybrene、聚鸟氨酸。关于用于转化哺乳动物细胞的多种技术见Keown等，Methods inEnzvmology 185：527-537(1990)和Mansour等，Nature 336：348-352(1988)。
适于克隆或表达本文载体中的DNA的宿主细胞包括原核生物、酵母或高等真核细胞。
a.原核宿主细胞
合适的原核生物包括但不限于古细菌和真细菌，诸如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如肠杆菌科，诸如大肠杆菌。多种大肠杆菌菌株是公众可获得的，诸如大肠杆菌K12菌株MM294(ATCC 31,446)；大肠杆菌X1776(ATCC 31,537)；大肠杆菌菌株W3110(ATCC 27,325)和K5772(ATCC53,635)。其它合适的原核生物宿主细胞包括肠杆菌科，诸如埃希氏菌属(Escherichia)例如大肠埃希氏菌(大肠杆菌)(E.coli)、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、变形菌属(Proteus)、沙门氏菌属(Salmonella)例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)、沙雷氏菌属(Serratia)例如粘质沙雷氏菌(Serratia marcescans)和志贺氏菌属(Shigella)，以及芽孢杆菌属(Bacilli)诸如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)(例如1989年4月12日出版的DD266,710中公开的地衣芽孢杆菌41P)、假单胞菌属(Pseudomonas)诸如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、根瘤菌属(Rhizobia)、透明颤菌属(Vitreoscilla)副球菌属(Paracoccus)和链霉菌属(Streptomyces)。这些例子是例示性的而非限制性的。菌株W3110是一个特别优选的宿主或亲本宿主，因为它是用于重组DNA产物发酵的常用宿主菌株。优选的是，宿主细胞分泌最小量的蛋白水解酶。例如，菌株W3110(Bachmann，Cellular and Molecular Biology，vol.2(Washington，D.C.：American Society for Microbiology，1987)，pp.1190-1219；ATCC保藏号27,325)可以修饰，在编码对宿主而言内源的蛋白质的基因中产生遗传突变，此类宿主的例子包括大肠杆菌W3110菌株1A2，其具有完整基因型tonA；大肠杆菌W3110菌株9E4，其具有完整基因型tonA ptr3；大肠杆菌W3110菌株27C7(ATCC 55,244)，其具有完整基因型tonA ptr3 phoA E15(argF-lac)169 degP ompT kanr；大肠杆菌W3110菌株37D6，其具有完整基因型tonA ptr3 phoA E15(argF-lac)169 degP ompT rbs7 ilvG kanr；大肠杆菌W3110菌株40B4，它是具有非卡那霉素抗性degP删除突变的菌株37D6；大肠杆菌W3110菌株33D3，它具有基因型W3110ΔfhuA(ΔtonA)ptr3 lac Iq lacL8ΔompTΔ(nmpc-fepE)degP41 kanR(美国专利No.5,639,635)；及具有1990年8月7日授权的美国专利4,946,783中公开的突变型周质蛋白酶的大肠杆菌菌株。其它菌株及其衍生物，诸如大肠杆菌294(ATCC 31,446)、大肠杆菌B、大肠杆菌λ1776(ATCC 31,537)和大肠杆菌RV308(ATCC 31,608)也是合适的。这些例子只是例示而非限制。本领域知道用于构建具有指定基因型的任何上述细菌衍生物的方法，参见例如Bass等，Proteins 8：309-314(1990)。通常必需考虑复制子在细菌细胞中的可复制性来选择适宜的细菌。例如，在使用众所周知的质粒诸如pBR322、pBR325、pACYC177或pKN410来提供复制子时，大肠杆菌、沙雷氏菌属或沙门氏菌属物种可能适于用作宿主。通常，宿主细胞应当分泌最小量的蛋白水解酶，而且可能希望在细胞培养中掺入额外的蛋白酶抑制剂。或者，体外克隆方法，例如PCR或其它核酸聚合酶反应也是合适的。
全长抗体、抗体片段及抗体融合物蛋白质可在细菌中制备，特别是在不需要糖基化和Fc效应器功能时，诸如当治疗用抗体与细胞毒剂(例如毒素)偶联且免疫偶联物自身显示出肿瘤细胞破坏的效力时。全长抗体在循环中具有较长半衰期。大肠杆菌中的制备更快且更加省钱。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如US 5,648,237(Carter等人)，US 5,789,199(JoIy等人)，和US 5,840,523(Simmons等人)，它们描述了用于优化表达和分泌的翻译起始区(TIR)和信号序列，在此收入这些专利作为参考。表达后，从大肠杆菌细胞糊在可溶性级分中分离抗体，并且可例如根据同种型通过蛋白A或G柱来纯化。最终的纯化可以与用于纯化例如在CHO细胞中表达的抗体的方法类似的进行。
b.真核宿主细胞
除了原核生物以外，真核微生物，诸如丝状真菌或酵母也是编码抗CD79b抗体的载体的合适克隆或表达宿主。酿酒糖酵母(Saccharomycescerevisiae)是常用的低等真核宿主微生物。其它的包括粟酒裂殖糖酵母(Schizosaccharomyces pombe)(Beach和Nurse，Nature 290：140(1981)；EP139,383，1985年5月2日公开)；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)宿主(美国专利4,943,529；Fleer等，Bio/Technology 9：968-975(1991))诸如例如乳酸克鲁维酵母(K.lactis)(MW98-8C，CBS683，CBS4574；Louvencourt等，J.Bacteriol.154(2)：737-742(1983))、脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)(ATCC 12,424)、保加利亚克鲁维酵母(K.bulgaricus)(ATCC 16,045)、威克克鲁维酵母(K.wickeramii)(ATCC 24,178)、K.waltii(ATCC 56,500)、果蝇克鲁维酵母(K.drosophilarum)(ATCC 36,906；Van den Berg等，Bio/Technology 8：135(1990))、耐热克鲁维酵母(K.thermotolerans)和马克思克鲁维酵母(K.marxianus)；亚罗酵母属(Yarrowia)(EP 402,226)；巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)(EP183,070；Sreekrishna等，J.Basic Microbiol.28：265-278(1988))；假丝酵母属(Candida)；瑞氏木霉(Trichoderma reesia)(EP 244,234)；粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)(Case等，Proc.Natl.Acad。Sci.USA 76：5259-5263(1979))；许旺酵母属(Schwanniomyces)诸如许旺酵母(Schwanniomycesoccidentalis)(EP 394,538，1990年10月31日公开)；和丝状真菌诸如例如脉孢菌属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、弯颈霉属(Tolypocladium)(WO91/00357，1991年1月10日公开)和曲霉属(Aspergillus)宿主诸如构巢曲霉(A.nidulans)(Balance等，Biochem.Biophys.Res.Commun.112：284-289(1983)；Tilburn等，Gene 26：205-221(1983)；Yelton等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：1470-1474(1984))和黑曲霉(A.niger)(Kelly和Hynes，EMBO J.4：475-479(1985))。甲基营养型酵母(Methylotropic yeast)适于本发明，包括但不限于能够在甲醇上生长的、选自以下属的酵母：汉逊氏酵母属(Hansenula)、假丝酵母属(Candida)、克勒克氏酵母属(Kloeckera)、毕赤氏酵母属(Pichia)、糖酵母属(Saccharomyces)、球拟酵母属(Torulopsis)和红酵母属(Rhodotorula)。作为这类酵母的例子的具体物种列表可参见C.Anthony，The Biochemistry ofMethylotrophs，269(1982)。
适用于表达糖基化抗CD79b抗体的宿主细胞衍生自多细胞生物体。无脊椎动物细胞的例子包括昆虫细胞诸如果蝇S2和夜蛾Sf9，以及植物细胞诸如棉、玉米、马铃薯、大豆、矮牵牛、番茄、烟草的细胞培养物。。已经鉴定了许多杆状病毒株和变体及相应的允许的昆虫宿主细胞，它们来自诸如草地夜蛾Spodoptera frugiperda(毛虫)、埃及伊蚊Aedes aegypti(蚊子)、白纹伊蚊Aedes albopictus(蚊子)、黑腹果蝇Drosophila melanogaster(果蝇)和家蚕Bombyx mori等宿主。公众可获得多种病毒株用于转染，例如苜蓿尺蠖(Autographa californica)NPV的L-1变体和家蚕(Bombyx mori)NPV的Bm-5株，而且此类病毒可依照本发明用作本文的病毒，特别是用于转染草地夜蛾细胞。
然而，对脊椎动物细胞最感兴趣，而且通过培养(组织培养)脊椎动物细胞来繁殖已经成为常规流程。有用的哺乳动物宿主细胞系的例子是用SV40转化的猴肾CV1系(COS-7，ATCC CRL 1651)；人胚肾系(293或为了在悬浮培养中生长而亚克隆的293细胞，Graham等，1977，J.Gen Virol.36：59)；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(CHO，Urlaub等，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4，Mather，1980，Biol.Reprod.23：243-251)；猴肾细胞(CV1，ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL 51)；TRI细胞(Mather等，1982，Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68)；MRC5细胞；FS4细胞；和人肝肉瘤系(Hep G2)。
用上述用于抗CD79b抗体生成的表达或克隆载体转化宿主细胞，并在为了诱导启动子、选择转化子或扩增编码期望序列的基因而恰当调整的常规营养培养基中培养。
3.复制型载体的选择和使用
为了重组生产本发明的抗体，分离编码它的核酸(例如cDNA或基因组DNA)，并将其插入可复制载体，用于进一步克隆(DNA扩增)或表达。可使用常规规程容易的分离编码抗体的DNA并测序(例如使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。可利用许多载体。载体的选择部分取决于将要使用的宿主细胞。一般而言，优选的宿主细胞或是原核或是真核(通常是哺乳动物)起源的。
载体可以是例如质粒、粘粒、病毒颗粒或噬菌体的形式。可以通过多种方法将适宜的核酸序列插入载体。通常，使用本领域已知的技术将DNA插入适宜的限制性内切酶位点。载体构件通常包括但不限于下列一种或多种：信号序列、复制起点、一种或多种标记基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。包含一种或多种这些构件的合适载体的构建采用技术人员已知的标准连接技术。
CD79b不仅可以直接重组生产，而且可以作为与异源多肽的融合多肽，所述异源多肽可以是在成熟蛋白质或多肽的N-末端具有特定切割位点的信号序列或其它多肽。通常，信号序列可以是载体的构件，或者它可以是插入载体的编码抗CD79b抗体的DNA的一部分。信号序列可以是原核信号序列，选自例如碱性磷酸酶、青霉素酶、lpp或热稳定的肠毒素II前导序列。为了酵母分泌，信号序列可以是例如酵母转化酶前导序列、α因子前导序列(包括糖酵母和克鲁维酵母的α-因子前导序列，后者见美国专利5,010,182)或酸性磷酸酶前导序列、白色假丝酵母葡糖淀粉酶前导序列(1990年4月4日公开的EP 362,179)或1990年11月15日公开的WO 90/13646中描述的信号。在哺乳动物细胞表达中，可以使用哺乳动物信号序列来指导蛋白质的分泌，诸如来自相同或相关物种的分泌型多肽的信号序列，以及病毒分泌前导序列。
a.原核宿主细胞
可使用标准重组技术来获得编码本发明抗体多肽构件的多核苷酸序列。可以从抗体生成细胞诸如杂交瘤细胞分离期望的多核苷酸序列并测序。或者，可使用核苷酸合成仪或PCR技术合成多核苷酸。一旦得到，将编码多肽的序列插入能够在原核宿主中复制并表达异源多核苷酸的重组载体。为了本发明目的，可使用本领域可获得的且知道的许多载体。适宜载体的选择会主要取决于将要插入载体的核酸的大小和将要用载体转化的具体宿主细胞。根据其功能(扩增或表达异源多核苷酸，或二者兼之)及其与它在其中驻留的具体宿主细胞的相容性，每种载体含有多种构件。
一般而言，与宿主细胞一起使用包含衍生自与这些宿主相容物种的复制子和控制序列的质粒载体。表达和克隆载体都包含使载体能够在一种或多种所选择的宿主细胞中复制的核酸序列，以及能够在转化细胞中提供表型选择的标志序列。众所周知多种细菌、酵母和病毒的此类序列。来自质粒pBR322(其包含编码氨苄青霉素(Amp)和四环素(Tet)抗性的基因，由此提供轻松鉴定转化细胞的手段)的复制起点适合于大多数革兰氏阴性细菌，2μ质粒起点适合于酵母，而各种病毒起点(SV40、多瘤病毒、腺病毒、VSV或BPV)可用于哺乳动物细胞中的克隆载体。pBR322、其衍生物或其它微生物质粒或噬菌体还可包含或经修饰而包含可被微生物生物体用于表达内源蛋白质的启动子。Carter等，美国专利No.5,648,237中详细记载了用于表达特定抗体的pBR322衍生物的例子。
另外，可以将包含与宿主微生物相容的复制子和控制序列的噬菌体载体用作这些宿主的转化载体。例如，可使用噬菌体诸如λGEM.TM.-11来构建可用于转化易感宿主细胞诸如大肠杆菌LE392的重组载体。
本发明的表达载体可包含两种或更多启动子-顺反子对，它们编码每一种多肽构件。启动子是位于顺反子上游(5′)的非翻译调控序列，它调控顺反子的表达。原核启动子通常分成两类，诱导型的和组成性的。诱导型启动子指响应培养条件的变化(例如营养物的存在与否或温度变化)而启动受其控制的顺反子的升高水平转录的启动子。
众所周知受到多种潜在宿主细胞识别的大量启动子。通过限制酶消化切下源DNA中的启动子并将分离的启动子序列插入本发明的载体，由此可以将选择的启动子与编码轻链或重链的顺反子DNA可操作连接。天然启动子序列和许多异源启动子都可用于指导靶基因的扩增和/或表达。在有些实施方案中，使用异源启动子，因为与天然靶多肽启动子相比，它们通常容许所表达靶基因的更高转录和更高产量。
众所周知受到多种潜在宿主细胞识别的启动子。适用于原核宿主的启动子包括PhoA启动子、β-半乳糖苷酶和乳糖启动子系统[Chang et al.，Nature，275：615(1978)；Goeddel et al.，Nature，281：544(1979)]、碱性磷酸酶、色氨酸(trp)启动子系统[Goeddel，Nucleic Acids Res.，8：4057(1980)；EP 36,776]和杂合启动子诸如tac或trc启动子。用于细菌系统的启动子还将包含与编码抗CD79b抗体的DNA可操作连接的Shine-Dalgarno(S.D.)序列。然而，在细菌中有功能的其它启动子(诸如其它已知的细菌或噬菌体启动子)也是合适的。它们的核苷酸序列已经发表，由此熟练工作人员能够使用提供任何所需限制性位点的接头或衔接头将它们与编码靶轻链和重链的顺反子可操作连接(Siebenlist等(1980)Cell 20：269)。
在本发明的一个方面，重组载体内的每个顺反子都包含指导所表达多肽穿膜转运的分泌信号序列构件。一般而言，信号序列可以是载体的构件，或者它可以是插入载体的靶多肽DNA的一部分。为了本发明目的而选择的信号序列应当是受到宿主细胞识别并加工(即被信号肽酶切除)的信号序列。对于不识别并加工异源多肽的天然信号序列的原核宿主细胞，将信号序列用选自例如下组的原核信号序列替代：碱性磷酸酶、青霉素酶、Ipp或热稳定的肠毒素II(STII)前导序列、LamB、PhoE、PelB、OmpA和MBP。在本发明的一个实施方案中，表达系统的两个顺反子中都使用的信号序列是STII信号序列或其变体。
在另一方面，依照本发明的免疫球蛋白的生成可以在宿主细胞的细胞质中发生，因此不需要在每个顺反子内存在分泌信号序列。在那点上，免疫球蛋白轻链和重链在细胞质内表达、折叠和装配而形成功能性免疫球蛋白。某些宿主菌株(例如大肠杆菌trxB-菌株)提供有利于二硫键形成的细胞质条件，从而容许所表达蛋白质亚基的正确折叠和装配。Proba和Pluckthun，Gene 159：203(1995)。
本发明提供了如下表达系统，其中所表达多肽构件的数量比率可以受到调控，从而将分泌且正确装配的本发明抗体的产量最大化。此类调控是至少部分通过同时调控多肽构件的翻译强度而实现的。
Simmons等，美国专利No.5,840,523中公开了用于调控翻译强度的一种技术。它在顺反子内利用翻译起始区(TIR)的变体。对于指定的TIR，可创建具有一定范围翻译强度的一系列氨基酸或核酸序列变体，由此提供针对特定链的期望表达水平调节此因素的方便手段。可通过常规诱变技术导致能改变氨基酸序列的密码子变化来生成TIR变体，尽管核苷酸序列中的沉默变化是优选的。TIR中的改变可包括例如Shine-Dalgarno序列的数目或间距的改变，及信号序列中的改变。用于生成突变型信号序列的一种方法是在编码序列的开始端生成不改变信号序列氨基酸序列的“密码子库”(即变化是沉默的)。这可通过改变每个密码子的第三个核苷酸位置来实现；另外，有些氨基酸，诸如亮氨酸、丝氨酸和精氨酸，具有多种第一个和第二个位置，这可在建库中增加复杂性。Yansura等(1992)METHODS：A Companion to Methods inEnzymol.4：151-158中详细记载了这种诱变方法。
优选的是，对于载体中的每个顺反子，生成具有一定范围TIR强度的一组载体。这个有限集合提供了每条链的表达水平以及期望抗体产物的产量在各种TIR强度组合下的比较。可通过量化报道基因的表达水平来测定TIR强度，Simmons等，美国专利No.5,840,523中有详细描述。根据翻译强度的比较，选择期望的个别TIR在本发明的表达载体构建物中进行组合。
b.真核宿主细胞
载体构件通常包括但不限于下列一种或多种：信号序列、复制起点、一种或多种标志基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。
(1)信号序列构件
在真核宿主细胞中使用的载体还可在感兴趣成熟蛋白质或多肽的N端包含信号序列或具有特异性切割位点的其它多肽。异源信号序列优选是受到宿主细胞识别并加工(即被信号肽酶切除)的。在哺乳动物细胞表达中，可利用哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导，例如单纯疱疹gD信号。
将此类前体区的DNA连接到编码抗体的DNA的读码框中。
(2)复制起点
通常，哺乳动物表达载体不需要复制起点构件。例如，通常可使用SV40起点，只因其包含早期启动子。
(3)选择基因构件
表达和克隆载体通常会包含选择基因，也称为选择标志。典型的选择基因编码如下蛋白质：(a)赋予对抗生素或其它毒素的抗性，例如氨苄青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四环素；(b)补足营养缺陷；或(c)提供不能从复合培养基获得的关键营养物，例如用于芽孢杆菌的编码D-丙氨酸消旋酶的基因。
选择方案的一个例子利用药物来阻滞宿主细胞的生长。经异源基因成功转化的那些细胞生成赋予药物抗性的蛋白质，因而幸免于选择方案。此类显性选择的例子使用药物新霉素、霉酚酸和潮霉素。
适于哺乳动物细胞的选择标志的一个例子是能够鉴定有能力摄取抗CD79b抗体编码核酸的细胞的选择标志，诸如DHFR或胸苷激酶、金属硫蛋白I和II(优选灵长类金属硫蛋白基因)、腺苷脱氨酶、鸟氨酸脱羧酶等。在采用野生型DHFR时，适宜的宿主细胞是DHFR活性缺陷的CHO细胞系(例如ATCC CRL-9096)，其制备和繁殖如Urlaub等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980)所述。例如，首先通过将所有转化子在含有甲氨蝶呤(Mtx，DHFR的一种竞争性拮抗剂)的培养基中进行培养来鉴定经DHFR选择基因转化的细胞。或者，可通过在含有针对选择标志的选择剂诸如氨基糖苷抗生素例如卡那霉素、新霉素或G418的培养基中培养细胞来选择经编码抗体、野生型DHFR蛋白和另一种选择标志诸如氨基糖苷3′-磷酸转移酶(APH)的DNA序列转化或共转化的宿主细胞(特别是包含内源DHFR的野生型宿主)。参见美国专利No，4,965,199。
适用于酵母的选择基因是存在于酵母质粒YRp7中的trp1基因[Stinchcomb et al.，Nature，282：39(1979)；Kingsman et al.，Gene，7：141(1979)；Tschemper et al.，Gene，10：157(1980)]。trp1基因为缺乏在色氨酸中生长能力的酵母突变株，例如ATCC No.44076或PEP4-1[Jones，Genetics，85：12(1977)]提供了选择标志。Jones，Genetics 85：12(1977)。
(4)启动子构件
表达和克隆载体通常包含与编码抗CD79b抗体的核酸序列可操作连接的启动子以指导mRNA合成。受到多种潜在宿主细胞识别的启动子是众所周知的。
事实上所有真核基因都具有富含AT区，它位于起始转录的位点上游约25至30个碱基处。在许多基因的转录起点上游70至80个碱基处发现的另一种序列是CNCAAT区，其中N可以是任何核苷酸。在大多数真核基因的3′端是AATAAA序列，它可能是向编码序列的3′端添加聚腺苷酸(polyA)尾的信号。将所有这些序列合适地插入真核表达载体。
适用于酵母宿主的启动子序列的例子包括3-磷酸甘油酸激酶(Hitzeman等，J.Biol.Chem.255：2073(1980))或其它糖酵解酶(Hess等，J.Adv.EnzymeReg.7：149(1968)；Holland，Biochemistry 17：4900(1978))的启动子，诸如烯醇酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡糖激酶。
作为具有由生长条件控制转录的额外优点的诱导型启动子的其它酵母启动子是醇脱氢酶2、异细胞色素C、酸性磷酸酶、与氮代谢有关的降解酶、金属硫蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、及负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子区。适用于酵母表达的载体和启动子进一步描述于EP 73,657。
在哺乳动物宿主细胞中由载体转录抗CD79b抗体受到例如从病毒(诸如多瘤病毒、禽痘病毒(1989年7月5日公布的UK 2,211,504)、腺病毒(诸如2型腺病毒)、牛乳头瘤病毒、禽类肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙肝病毒和猿病毒40(SV40))基因组获得的、来自异源哺乳动物启动子(例如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子)的和来自热休克启动子的启动子的控制，倘若此类启动子与宿主细胞系统相容的话。
方便的以SV40限制性片段的形式获得SV40病毒的早期和晚期启动子，该片段还包含SV40病毒复制起点。方便的以HindIIIE限制性片段的形式获得人巨细胞病毒的立即早期启动子。美国专利No.4,419,446中公开了使用牛乳头瘤病毒作为载体在哺乳动物宿主中表达DNA的系统。美国专利No.4,601,978中记载了该系统的一种修改。还可参见Reyes等，Nature 297：598-601(1982)，其记载了在小鼠细胞中在来自单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子的控制下表达人β-干扰素cDNA。或者，可使用劳氏肉瘤病毒长末端重复序列作为启动子。
(5)增强子元件构件
可通过在载体中插入增强子序列来提高高等真核细胞对编码抗CD79b抗体的DNA的转录。增强子是DNA的顺式作用元件，通常大约10至300bp，作用于启动子以增加转录。已知来自哺乳动物基因(球蛋白、弹性蛋白酶、清蛋白、α-胎蛋白和胰岛素)的许多增强子序列。然而，通常使用来自真核细胞病毒的增强子。例子包括SV40复制起点晚期一侧的增强子(bp100-270)、巨细胞病毒早期启动子增强子、多瘤病毒复制起点晚期一侧的增强子和腺病毒增强子。还可参见Yaniv，Nature 297：17-18(1982)，其记载了激活真核启动子的增强子元件。增强子可以剪接到载体中，位于抗CD79b抗体编码序列的5′或3′位置，但是优选位于启动子的5′位点。
(6)转录终止构件
用于真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人或来自其它多细胞生物体的有核细胞)的表达载体还将包含终止转录和稳定mRNA所必需的序列。此类序列通常可以由真核或病毒DNA或cDNA非翻译区的5′端和偶尔的3′端获得。这些区域包含在编码抗CD79b抗体的mRNA的非翻译部分中转录成聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。一种有用的转录终止构件是牛生长激素聚腺苷酸化区。参见WO94/11026及其中公开的表达载体。
适合在改动后在重组脊椎动物细胞培养物中合成抗CD79b抗体的其它方法、载体和宿主细胞见Gething等，Nature 293：620-625(1981)；Mantei等，Nature 281：40-46(1979)；EP 117,060；和EP 117,058。
4.培养宿主细胞
可以在多种培养基中培养用于生产本发明抗CD79b抗体的宿主细胞。
a.原核宿主细胞
在本领域知道的且适于培养选定宿主细胞的培养基中培养用于生成本发明多肽的原核细胞。合适培养基的例子包括添加了必需营养补充物的LB培养基(Luria broth)。在有些实施方案中，培养基还含有根据表达载体的构建而选择的选择剂，以选择性容许包含表达载体的原核细胞生长。例如，向用于培养表达氨苄青霉素抗性基因的细胞的培养基中添加氨苄青霉素。
在碳源、氮源和无机磷酸盐源以外，还可含有适当浓度的任何必需补充物，或是单独加入或是作为与另一种补充物或培养基的混合物，诸如复合氮源。任选的是，培养基可含有一种或多种选自下组的还原剂：谷胱甘肽、半胱氨酸、胱胺、巯基乙酸盐/酯、二硫赤藓糖醇和二硫苏糖醇。
在合适的温度培养原核宿主细胞。例如，对于培养大肠杆菌，优选的温度范围为约20℃至约39℃，更优选约25℃至约37℃，甚至更优选约30℃。主要取决于宿主生物体，培养基的pH可以是范围为约5至约9的任何pH。对于大肠杆菌，pH优选是约6.8至约7.4，更优选约7.0。
如果本发明的表达载体中使用诱导型启动子，那么在适于激活启动子的条件下诱导蛋白质表达。在本发明的一个方面，使用PhoA启动子来控制多肽的转录。因此，为了诱导，在磷酸盐限制培养基中培养经过转化的宿主细胞。优选的是，磷酸盐限制培养基是C.R.A.P培养基(参见例如Simmons等，J.Immunol.Methods 263：133-147(2002))。根据所采用的载体构建物，可采用多种其它诱导物，正如本领域所知道的。
在一个实施方案中，所表达的本发明多肽分泌入宿主细胞的周质并从中回收。蛋白质回收通常涉及破坏微生物，通常通过诸如渗压震扰(osmoticshock)、超声处理或裂解等手段。一旦细胞遭到破坏，可通过离心或过滤清除细胞碎片或整个细胞。可以通过例如亲和树脂层析进一步纯化蛋白质。或者，蛋白质可以转运入培养液并从中分离。可以从培养液清除细胞，并将培养物上清液过滤和浓缩，用于进一步纯化所生成蛋白质。可使用普遍知道的方法诸如聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western印迹分析进一步分离和鉴定所表达多肽。
在本发明的一个方面，通过发酵过程大量进行抗体生产。多种大规模补料-分批发酵规程可用于生产重组蛋白。大规模发酵具有至少1000升的容量，优选是约1,000至100,000升的容量。这些发酵罐使用搅拌器叶轮来分配氧和养分，尤其是葡萄糖(优选的碳源/能源)。小规模发酵通常指在体积容量不超过约100升的发酵罐中进行的发酵，范围可以是约1升至约100升。
在发酵过程中，通常在将细胞在合适条件下培养至期望密度(例如OD550约180-220，在此阶段细胞处于早期稳定期)后启动蛋白质表达的诱导。根据所采用的载体构建物，可使用多种诱导物，正如本领域知道的和上文描述的。可以在诱导前将细胞培养更短的时间。通常将细胞诱导约12-50小时，但是可使用更长或更短的诱导时间。
为了提高本发明多肽的产量和质量，可修改多项发酵条件。例如，为了改善所分泌抗体多肽的正确装配和折叠，可使用过表达伴侣蛋白诸如Dsb蛋白(DsbA、DsbB、DsbC、DsbD和/或DsbG)或FkpA(具有伴侣活性的一种肽基脯氨酰-顺式，反式-异构酶)的额外载体来共转化宿主原核细胞。已经证明伴侣蛋白促进在细菌宿主细胞中生成的异源蛋白质的正确折叠和溶解度。Chen等(1999)J.Bio.Chem.274：19601-19605；Georgiou等，美国专利No.6,083,715；Georgiou等，美国专利No.6,027,888；Bothmann和Pluckthun(2000)J.Biol.Chem.275：17100-17105；Ramm和Pluckthun(2000)J.Biol.Chem.275：17106-17113；Arie等(2001)Mol.Microbiol.39：199-210)。
为了将所表达异源蛋白质(尤其是对蛋白水解敏感的异源蛋白质)的蛋白水解降至最低，可以将蛋白水解酶缺陷的某些宿主菌株用于本发明。例如，可修饰宿主细胞菌株，在编码已知细菌蛋白酶的基因中进行遗传突变，诸如蛋白酶III、OmpT、DegP、Tsp、蛋白酶I、蛋白酶Mi、蛋白酶V、蛋白酶VI及其组合。可以获得有些大肠杆菌蛋白酶缺陷菌株，参见例如Joly等(1998)见上文；Georgiou等，美国专利No.5,264,365；Georgiou等，美国专利No.5,508,192；Hara等，Microbial Drug Resistance 2：63-72(1996)。
在一个实施方案中，在本发明的表达系统中使用蛋白水解酶缺陷且经过过表达一种或多种伴侣蛋白的质粒转化的大肠杆菌菌株作为宿主细胞。
b.真核宿主细胞
商品化培养基诸如Ham氏F10(Sigma)、极限必需培养基(MEM，Sigma)、RPMI-1640(Sigma)和Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基(DMEM，Sigma)适于培养宿主细胞。另外，可以使用下列文献中记载的任何培养基作为宿主细胞的培养基：Ham et al.，Meth.Enz.58∶44(1979)；Barnes et al.，Anal.Biochem.102∶255(1980)；美国专利No.4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655；或5,122,469；WO 90/03430；WO 87/00195；或美国专利复审30,985。任何这些培养基可以根据需要补充激素和/或其它生长因子(诸如胰岛素、运铁蛋白或表皮生长因子)、盐(诸如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、缓冲剂(诸如HEPES)、核苷酸(诸如腺苷和胸苷)、抗生素(诸如GENTAMYCINTM药物)、痕量元素(定义为通常以微摩尔范围的终浓度存在的无机化合物)和葡萄糖或等效能源。还可以以适宜浓度包含本领域技术人员知道的任何其它必需补充物。培养条件，诸如温度、pH等，就是先前为表达而选择用于宿主细胞的，这对于普通技术人员而言是显而易见的。
5.检测基因扩增/表达
基因的扩增和/或表达可以在样品中直接测量，例如根据本文提供的序列，使用适宜的标记探针，通过常规的Southern印迹、对mRNA转录定量的Northern印迹(Thomas，Proc.Natl.Acad，Sci.USA 77：5201-5205(1980))、点印迹(DNA分析)或原位杂交。或者，可采用能识别特定双链体的抗体，所述双链体包括DNA双链体、RNA双链体、及DNA-RNA杂合双链体或DNA-蛋白质双链体。继而可标记抗体，并可进行测定法，其中将双链体结合到表面上，从而在双链体在表面上形成时，可检测与双链体结合的抗体的存在。
或者，为了直接对基因产物的表达定量，可通过免疫学方法测量基因表达，诸如细胞或组织切片的免疫组化染色和细胞培养物或体液的测定法。可用于免疫组化染色和/或样品液体测定法的抗体可以是单克隆的或多克隆的，而且可以在任何哺乳动物中制备。方便的是，可针对天然序列CD79b多肽或针对基于本文提供的DNA序列的合成肽或针对与CD79b DNA融合且编码特定抗体表位的外源序列来制备抗体。
6.纯化抗CD79b抗体
可以从培养液或从宿主细胞裂解物中回收各种形式的抗CD79b抗体。如果是膜结合的，那么可使用合适的去污剂溶液(例如Triton-X 100)或通过酶促裂解使其从膜释放。抗CD79b抗体表达中所采用的细胞可通过多种物理或化学手段破裂，诸如冻融循环、超声处理、机械破裂或细胞溶解剂。
可能期望从重组细胞蛋白质或多肽纯化抗CD79b抗体。下面的流程是合适纯化流程的例示：在离子交换柱上的分级；乙醇沉淀；反相HPLC；在硅土或阳离子交换树脂诸如DEAE上的层析；层析聚焦；SDS-PAGE；硫酸铵沉淀；使用例如Sephadex G-75的凝胶过滤；蛋白A Sepharose柱以除去污染物诸如IgG；及结合抗CD79b抗体的表位标记形式的金属螯合柱。可采用多种蛋白质纯化方法，此类方法是本领域已知的，并描述于例如Deutscher，Methods in Enzymology，182(1990)；Scopes，Protein Purification：Principes andPractice，Springer-Verlag，New York(1982)。纯化步骤的选择将取决于例如所用生成方法的性质和所产生的具体抗CD79b抗体。
在使用重组技术时，可以在细胞内、在周质空间中生成抗体，或者直接分泌到培养基中。如果在细胞内生成抗体，那么作为第一步，通过例如离心或超滤清除宿主细胞或裂解片段的微粒碎片。Carter等，Bio/Technology 10：163-167，1992描述了用于分离分泌到大肠杆菌周质空间的抗体的流程。简单地说，在存在乙酸钠(pH 3.5)、EDTA和苯甲基磺酰氟(PMSF)时使细胞糊融化约30分钟。可以通过离心除去细胞碎片。如果将抗体分泌到培养基中，那么通常首先使用商品化蛋白质浓缩滤器，例如Amicon或Millipore Pellicon超滤单元浓缩来自此类表达系统的上清液。在任何上述步骤中，可以包括蛋白酶抑制剂诸如PMSF来抑制蛋白水解，而且可以包括抗生素来防止外来污染物的生长。
可以使用例如羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析和亲和层析来纯化由细胞制备的抗体组合物，优选的纯化技术是亲和层析。蛋白A作为亲和配体的适宜性取决于抗体中存在的任何免疫球蛋白Fc区的种类和同种型。蛋白A可用于纯化基于人γ1、γ2或γ4重链的抗体(Lindmark等，1983，J.Immunol.Meth.62：1-13)。蛋白G推荐用于所有小鼠同种型和人γ3(Guss等，1986，EMBO J.5：1567-1575)。亲和配体所附着的基质最常用的是琼脂糖，但是可以使用其它基质。物理稳定的基质诸如可控孔径玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯能够获得比琼脂糖更快的流速和更短的加工时间。对于包含CH3结构域的抗体而言，可使用Bakerbond ABXTM树脂(J.T.Baker，Phillipsburg，NJ)进行纯化。根据待回收的抗体，也可使用其它蛋白质纯化技术，诸如离子交换柱上的分级分离、乙醇沉淀、反相HPLC、硅土上的层析、肝素SEPHAROSETM上的层析、阴离子或阳离子交换树脂(诸如聚天冬氨酸柱)上的层析、层析聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。
在任何初步的纯化步骤后，包含目的抗体和污染物的混合物可以使用pH约2.5-4.5的洗脱缓冲液，优选在低盐浓度(例如约盐)进行低疏水相互作用层析。
G.药物配制剂
可以通过适合于待治疗疾患的任何路径来施用本发明的抗体-药物偶联物(ADC)。典型地，胃肠外施用ADC，即输注，皮下、肌肉内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外。
为了治疗这些癌症，在一个实施方案中，抗体-药物偶联物经静脉内输注来施用。经输注而施用的剂量范围为大约1μg/m2至大约10,000μg/m2每剂，一般是每周一剂，总共一剂、两剂、三剂或四剂。或者，剂量范围是大约1μg/m2至大约1000μg/m2、大约1μg/m2至大约800μg/m2、大约1μg/m2至大约600μg/m2、大约1μg/m2至大约400μg/m2、大约10μg/m2至大约500μg/m2、大约10μg/m2至大约300μg/m2、大约10μg/m2至大约200μg/m2和大约1μg/m2至大约200μg/m2。剂量施用可以每天一次、每周一次、每周多次但少于每天一次、每月多次但少于每天一次、每月多次但少于每周一次、每月一次或间歇地施用以减轻或缓解疾病的症状。施用可以以任何已公开的间隔持续进行，直至所治疗的白血病、淋巴瘤的症状或肿瘤消退。施用可以在实现症状消退或减轻后继续进行，其中所述消退或减轻因所述继续施用而延长。
本发明还提供了缓解自身免疫性疾病的方法，包括给患有自身免疫性疾病的患者施用治疗有效量的任一前述实施方案的人源化MA79b抗体-药物偶联物。在优选的实施方案中，所述抗体是静脉内或皮下施用的。该抗体-药物偶联物以大约1μg/m2至大约100mg/m2每剂范围内的剂量静脉内施用，而且在一个具体的实施方案中，剂量是大约1μg/m2至大约500mg/m2。剂量施用可以每天一次、每周一次、每周多次但少于每天一次、每月多次但少于每天一次、每月多次但少于每周一次、每月一次或间歇地施用以减轻或缓解疾病的症状。施用可以以任何已公开的间隔持续进行，直至所治疗的自身免疫性疾病的症状缓解。施用可以在实现症状减轻或缓解后继续进行，其中所述缓解或减轻因所述继续施用而延长。
本发明还提供了治疗B细胞病症的方法，包括给患有B细胞病症(诸如B细胞增殖性病症(包括但不限于淋巴瘤和白血病)或自身免疫性疾病)的患者施用治疗有效量的任一前述实施方案的人源化MA79b抗体，该抗体未偶联至细胞毒性分子或可检测分子。该抗体通常在大约1μg/m2至大约1000mg/m2的剂量范围内施用。
一方面，本发明还提供了包含至少一种本发明抗CD79b抗体和/或至少一种其免疫偶联物和/或至少一种本发明抗CD79b抗体-药物偶联物的药物配制剂。在有些实施方案中，药物配制剂包含：(1)本发明的抗CD79b抗体和/或其免疫偶联物，和(2)药学可接受载体。在有些实施方案中，药物配制剂包含：(1)本发明的抗CD79b抗体和/或其免疫偶联物，和任选的(2)至少一种别的治疗剂。别的治疗剂包括但不限于下文所述的那些。典型地，胃肠外施用ADC，即输注，皮下、肌肉内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外。
依照本发明使用的、包含抗CD79b抗体或CD79b免疫偶联物的治疗性配制剂通过将具有期望纯度的抗体或免疫偶联物与任选的药学可接受载体、赋形剂或稳定剂(《Remington′s Pharmaceutical Sciences》，第16版，Osol，A.编，1980)混合来制备成冻干剂型或水溶液的形式供贮存。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，并且包括：缓冲剂，诸如乙酸盐、Tris、磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯己双铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烃基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；张力调节剂(tonicifier)，诸如海藻糖和氯化钠；糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；表面活性剂，诸如聚山梨醇酯；成盐抗衡离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如
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或聚乙二醇(PEG)。用于体内施用的药物配制剂一般是无菌的。这易于通过无菌滤膜过滤来实现。
本文中的配制剂还可含有超过一种所治疗具体适应症所必需的活性化合物，优选活性互补且彼此没有不利影响的。例如，在抗CD79b抗体之外，可能还期望在一种配制剂中含有另一种抗体，例如结合CD79b多肽上不同表位的第二抗CD79b抗体，或针对一些其它靶物诸如影响特定癌生长的生长因子的抗体。或者/另外，所述组合物还可包含化疗剂、细胞毒剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂和/或心脏保护剂。合适的是，此类分子以对于预定目的有效的量组合存在。
活性成分还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)、在胶状药物投递系统中(例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)或在粗滴乳状液中。此类技术公开于Remington′s PharmaceuticalSciences，第16版，Osol，A.编(1980)。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质是定型产品的形式，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的例子包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利No.3,773,919)、L-谷氨酸和γ-乙基L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如
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(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然诸如乙烯-乙酸乙烯和乳酸-乙醇酸的聚合物能够释放分子达100天以上，但是某些水凝胶释放蛋白质的时间较短。当所封装的免疫球蛋白在体内长时间维持时，它们可能由于暴露于37℃的潮湿环境而变性或聚集，导致生物学活性损失和免疫原性可能改变。可以根据相关机制来设计合理的稳定化策略。例如，如果发现聚集机制是经由硫-二硫化物互换的分子间S-S键形成，那么可通过修饰巯基、自酸性溶液冻干、控制含水量、使用适宜添加剂和开发特定聚合物基质组合物来实现稳定化。
抗体可配制成任何对于投递至靶细胞/组织合适的形式。例如，抗体可配制成免疫脂质体。“脂质体”指由各种类型脂质、磷脂和/或表面活性剂构成的，可用于对哺乳动物递送药物的小囊泡。与生物膜的脂质排列相似，脂质体的成分通常排列成双层形式。含有抗体的脂质体可通过本领域已知方法来制备，诸如Epstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688(1985)；Hwang等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4030(1980)；美国专利No.4,485,045和4,544,545；及1997年10月23日公布的WO 97/38731中所述。循环时间延长的脂质体披露于美国专利No.5,013,556。
可用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂类组合物通过反相蒸发法生成特别有用的脂质体。将脂质体挤过具有设定孔径的滤器，以产生具有期望直径的脂质体。可如Martin等，J.Biol.Chem.257：286-288(1982)中所述，将本发明抗体的Fab’片段经二硫化物交换反应与脂质体偶联。任选在脂质体中包含化疗剂。参见Gabizon等，J.National Cancer Inst.81(19)：1484(1989)。
用于体内施用的配制剂必须是无菌的。这可容易地通过无菌滤膜过滤来实现。
H.使用抗CD79b抗体的治疗
为了测定癌症中的CD79b表达，可利用多种检测测定法。在一个实施方案中，可通过免疫组化(IHC)来分析CD79b多肽过表达。可对来自肿瘤活组织检查的石蜡包埋组织切片进行IHC测定法，并给予如下CD79b蛋白质染色强度标准：
得分0：未观察到染色或者在少于10％的肿瘤细胞中观察到膜染色。
得分1+：在超过10％的肿瘤细胞中检测到微弱的/刚刚可察觉的膜染色。所述细胞只在其部分膜上有染色。
得分2+：在超过10％的肿瘤细胞中观察到微弱至中等的完全膜染色。
得分3+：在超过10％的肿瘤细胞中观察到中等至强烈的完全膜染色。
那些CD79b多肽表达得分0或1+的肿瘤可鉴定为未过表达CD79b，而那些得分2+或3+的肿瘤可鉴定为过表达CD79b。
或者/另外，可对福尔马林固定、石蜡包埋的肿瘤组织进行FISH测定法诸如
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(由Ventana，Arizona销售)或
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(Vysis，Illinois)以测定肿瘤中CD79b过表达的程度(如果有的话)。
还可使用体内检测测定法来评估CD79b过表达或扩增，例如通过施用结合待检测分子且标记有可检测标记物(例如放射性同位素或荧光标记物)的分子(诸如抗体)，然后对患者进行外部扫描以定位所述标记物。
如上文所述，本发明的抗CD79b抗体具有多种非治疗性应用。本发明的抗CD79b抗体可用于表达CD79b多肽的癌症的分级(例如在放射成像中)。抗体还可用于从细胞中纯化或免疫沉淀CD79b多肽，用于CD79b多肽的体外检测和定量例如在ELISA或Western印迹中，作为纯化其它细胞的一个步骤从混合细胞群中杀死和消除表达CD79b的细胞。
现在，根据癌症的分级，癌症的治疗牵涉下列疗法中的一种或组合：手术去除癌性组织，放疗和化疗。抗CD79b抗体疗法对于不能很好承受化疗的毒性和副作用的老年患者和放疗具有有限效用的转移性疾病可能是尤其想要的。本发明的靶向肿瘤的抗CD79b抗体可用于在疾病的最初诊断时或在复发期间减轻表达CD79b的癌症。对于治疗性应用，可单独使用抗CD79b抗体，或者用于与例如激素、抗血管发生剂(antiangiogen)或放射标记的化合物，或者与手术、冷冻疗法和/或放疗的联合疗法。抗CD79b抗体的治疗可与其它形式的常规疗法联合施用，与常规疗法连续、在之前或之后。化疗药物诸如
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多西他塞(doxetaxel)、
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帕利他塞(paclitaxel)、雌莫司汀(estramustine)和米托蒽醌(mitoxantrone)用于治疗癌症，特别是无风险(goodrisk)的患者。在本发明治疗或减轻癌症的方法中，可给癌症患者施用抗CD79b抗体并联合一种或多种前述化疗剂的治疗。具体而言，设想了与紫杉醇及改良衍生物的联合疗法(参见例如EP 0600517)。将抗CD79b抗体与治疗有效剂量的化疗剂一起施用。在另一个实施方案中，联合化疗施用抗CD79b抗体以提高化疗剂例如紫杉醇的活性和功效。Physicians′Desk Reference(PDR)公开了已经在多种癌症的治疗中使用的这些药剂的剂量。这些前述化疗药物在治疗上有效的剂量给药方案和剂量将取决于所治疗的具体癌症、疾病的程度、及有本领域技术的内科医师所熟悉的其它因素、且可以由内科医师确定。
在一个具体的实施方案中，将包含与细胞毒剂偶联的抗CD79b抗体的偶联物施用于患者。优选的是，与CD79b蛋白质结合的免疫偶联物由细胞内在化，导致免疫偶联物在杀死其所结合的癌细胞方面的治疗功效提高。在一个优选的实施方案中，细胞毒剂靶向或干扰癌细胞中的核酸。此类细胞毒剂的例子上文已有描述，包括美登木素生物碱类、加利车霉素、核糖核酸酶及DNA内切核酸酶。
将抗CD79b抗体或其毒素偶联物依照已知方法施用给人类患者，诸如静脉内施用，例如作为推注或一段时间的连续输注，通过肌肉内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入路径。优选静脉内或皮下施用抗体。
抗CD79b抗体的施用可联合其它治疗方案。联合施用包括使用分开的配制剂或单一的药用配制剂的共施用，及任意顺序的连续施用，其中优选有一段时间所有两种(或多种)活性剂同时发挥其生物学活性。优选的是，此类联合疗法导致协同治疗效果。
可能还期望将一种或多种抗CD79b抗体的施用与针对与特定癌症有关的另一种肿瘤抗原的抗体的施用联合。
在另一个实施方案中，本发明的治疗性处理方法牵涉(一种或多种)抗CD79b抗体与一种或多种化疗剂或生长抑制剂的联合施用，包括不同化疗剂的混合物(cocktail)的共施用或者一种或多种也抑制肿瘤生长的其它细胞毒剂或其它治疗剂。化疗剂包括磷酸雌莫司汀(estramustine phosphate)、泼尼莫司汀(prednimustine)、顺铂、5-氟尿嘧啶、美法仑(melphalan)、环磷酰胺、羟基脲和羟基脲紫杉烷(hydroxyureataxane)(诸如紫杉醇和多西他塞(doxetaxel))和/或蒽环类(anthracycline)抗生素。此类化疗剂的制剂和剂量给药方案可依照制造商的说明书使用或由熟练从业人员根据经验确定。此类化疗的制备和剂量给药方案还可参阅Chemotherapy Service Ed.，M.C.Perry，Williams&Wilkins，Baltimore，MD(1992)。抗体可与抗激素化合物以此类分子的已知剂量联合，例如抗雌激素化合物，诸如他莫昔芬(tamoxifen)；抗孕酮化合物，诸如奥那司酮(onapristone)(见EP 616,812)；或抗雄激素化合物，诸如氟他米特(flutamide)。当待治疗癌症是雄激素非依赖性癌症时，患者可能先前已经接受过抗雄激素疗法，并在癌症变成雄激素非依赖性时，可以给患者施用抗CD79b抗体(及任选的本文所述其它药剂)。
有时，还给患者共施用心脏保护剂(以预防或降低与疗法有关的心肌功能障碍)或一种或多种细胞因子可能也是有益的。除了上述治疗方案，在抗体疗法之前、同时或之后，可给患者进行手术去除癌细胞和/或放疗(例如外部射束照射或使用放射性标记药剂诸如抗体的疗法)。任何上述共施用药剂的合适剂量就是那些目前所使用的剂量，而且可由于该药剂与抗CD79b抗体的联合作用(协同作用)而降低。
可以与优良医学实践一致的方式配制、剂量给药和施用本发明的抗体组合物。在此内容中考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、患者个体的临床状况、病症的起因、投递药剂的部位、施药的方法、施药的日程安排和医学从业人员知道的其它因素。不是必需而是任选将抗体与目前用于预防或治疗所讨论病症的一种或多种药剂一起配制。此类其它药剂的有效量取决于配制剂中存在的本发明抗体的量、病症或治疗的类型和上文讨论的其它因素。这些通常是以与上文所用相同剂量和施用路径使用，或是迄今所用剂量的大约1-99％。
为了预防或治疗疾病，施用的剂量和模式可以由内科医师依照已知标准来选择。抗体的适宜剂量将取决于如上定义的待治疗疾病的类型、疾病的严重程度和进程、是为了预防还是治疗目的施用抗体、先前的疗法、患者的临床史及对抗体的响应、及主治医师的判断。恰当的将抗体一次性或在一系列治疗中施用给患者。优选的是，将抗体通过静脉内输注或通过皮下注射来施用。根据疾病的类型和严重程度，约1μg/kg至约50mg/kg体重(例如约0.1-15mg/kg/剂)的抗体可作为初始侯选剂量施用给患者，无论是例如通过一次或多次分开的施用，或是通过连续输注。剂量给药方案可包括施用约4mg/kg的初始加载剂量，后续约2mg/kg抗CD79b抗体的每周维持剂量。然而，其它剂量方案也可使用。根据上述因素，典型的每日剂量可在约1μg/kg到100mg/kg或更多的范围内。对于持续几天或更长时间的重复施用，根据状况，维持治疗直到发生对疾病症状的期望遏制。这种疗法的进展可容易的通过常规方法和测定法，并基于内科医师或其它本领域技术人员知道的标准来监测。
除了将抗体蛋白质施用给患者，本申请设想通过基因疗法来施用抗体。编码抗体的核酸的此类施用涵盖在表述“施用治疗有效量的抗体”中。关于使用基因疗法来产生胞内抗体的用途参见例如1996年3月14日公开的WO96/07321。
有两种主要方法使核酸(任选包含在载体中)进入患者的细胞，即体内和回体(ex vivo)。对于体内投递，通常在需要抗体的部位将核酸直接注射到患者体内。对于回体治疗，采集患者的细胞，将核酸导入这些分离的细胞，并将经过修饰的细胞或是直接施用于患者，或是例如装入多孔膜内并植入患者体内(参见例如美国专利4,892,538和5,283,187)。有多种技术可用于将核酸导入活细胞。这些技术根据是将核酸转移至预期宿主的体外培养细胞还是体内细胞而有所变化。适于在体外将核酸转移到哺乳动物细胞中的技术包括使用脂质体、电穿孔、显微注射、细胞融合、DEAE-右旋糖苷、磷酸钙沉淀法等。常用于回体投递基因的载体是逆转录病毒。
目前优选的体内核酸转移技术包括用病毒载体(诸如腺病毒、I型单纯疱疹病毒或腺伴随病毒)和基于脂质的系统(可用于脂质介导的基因转移的脂质有例如DOTMA、DOPE和DC-Chol)进行的转染。关于目前已知的基因标记和基因治疗方案的综述参见Anderson et al.，Science 256：808-813(1992)。还可参见WO 93/25673及其引用的参考文献。
本发明的抗CD79b抗体可以是本文中“抗体”定义所涵盖的不同形式。因此，抗体包括全长或完整抗体，抗体片段，天然序列抗体或氨基酸变体，人源化的、嵌合的或融合抗体，免疫偶联物，及其功能性片段。在融合抗体中，抗体序列与异源多肽序列融合。可在Fc区中修饰抗体以提供期望的效应物功能。如本文的部分更为详细讨论的，凭借适宜的Fc区，结合在细胞表面上的裸抗体可诱导细胞毒性，例如经由抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)，或通过在补体依赖性细胞毒性中募集补体，或一些其它机制。或者，在期望消除或降低效应物功能从而使副作用或治疗并发症降至最低时，可使用某些其它Fc区。
在一个实施方案中，抗体与本发明抗体竞争对相同表位的结合或基本上结合相同表位。还设想了具有本发明抗CD79b抗体的生物学特征的抗体，明确包括体内肿瘤靶向和任何细胞增殖抑制或细胞毒性特征。
本文详细描述了生成上述抗体的方法。
本发明抗CD79b抗体可用于治疗哺乳动物中表达CD79b的癌症或减轻所述癌症的一种或多种症状。此类癌症包括但不限于造血癌症或血液相关癌症，诸如淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴样恶性肿瘤，但是还有脾的癌症和淋巴结的癌症。此类B细胞相关癌症的更具体例子包括例如高级、中级和低级淋巴瘤(包括B细胞淋巴瘤，诸如例如粘膜相关淋巴样组织B细胞淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、小淋巴细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和何杰金氏淋巴瘤及T细胞淋巴瘤)和白血病(包括继发性白血病、慢性淋巴细胞性白血病诸如B细胞白血病(CD5+B淋巴细胞)、髓细胞性白血病诸如急性髓细胞样白血病、慢性髓细胞样白血病、淋巴样白血病诸如急性成淋巴细胞性白血病和脊髓发育不良)和其它血液学和/或B细胞或T细胞相关癌症。癌症涵盖任何前述的转移癌。抗体能够结合哺乳动物中表达CD79b多肽的癌细胞的至少一部分。在一个优选的实施方案中，抗体在体外或在体内在结合细胞上的CD79b多肽时有效破坏或杀死表达CD79b的肿瘤细胞或抑制此类肿瘤细胞的生长。此类抗体包括裸露的抗CD79b抗体(未与任何药剂偶联)。具有细胞毒性或细胞生长抑制特性的裸抗体可以进一步与细胞毒剂合作(harness)，使得它们在破坏肿瘤细胞上更有效。可以通过例如将抗体与细胞毒剂偶联形成本文所述免疫偶联物，而赋予抗CD79b抗体以细胞毒性特性。细胞毒剂或生长抑制剂优选是小分子。优选毒素诸如加利车霉素或美登木素生物碱类及其类似物或衍生物。
本发明提供了包含本发明抗CD79b抗体及载体的组合物。为了治疗癌症的目的，可以将组合物施用于需要此类治疗的患者，其中组合物可包含一种或多种呈现为免疫偶联物或裸抗体的抗CD79b抗体。在另一个实施方案中，组合物可包含这些抗体并联合其它治疗剂诸如细胞毒剂或生长抑制剂，包括化疗剂。本发明还提供了包含本发明抗CD79b抗体及载体的配制剂。在一个实施方案中，配制剂是包含药学可接受载体的治疗用配制剂。
本发明的另一个方面是编码抗CD79b抗体的分离核酸。设想了编码重链和轻链二者，尤其是高变区残基的核酸，编码天然序列抗体以及所述抗体的变体、修饰和人源化型式的链。
本发明还提供了可用于治疗哺乳动物中表达CD79b多肽的癌症或减轻所述癌症的一种或多种症状的方法，包括给哺乳动物施用治疗有效量的抗CD79b抗体。抗体治疗用组合物可由内科医师指导，短期或长期或间断施用。还提供了抑制表达CD79b多肽的细胞生长和杀死它的方法。
本发明还提供了包含至少一种抗CD79b抗体的试剂盒和制品。包含抗CD79b抗体的试剂盒可用于例如CD79b细胞杀伤测定法，从细胞中纯化或免疫沉淀CD79b多肽。例如，为了分离和纯化CD79b，试剂盒可包含与珠子(例如sepharose珠子)偶联的抗CD79b抗体。可以提供包含抗体的试剂盒，用于CD79b的体外检测和定量，例如在ELISA或Western印迹中。可用于检测的此类抗体可以与标记物诸如荧光或放射标记物一起提供。
I.抗体-药物偶联物治疗
本发明的抗体-药物偶联物(ADC)可用于治疗各种疾病或病症，例如特征为肿瘤抗原过表达的。例示性的疾患或过度增殖性病症包括良性或恶性肿瘤；白血病和淋巴样恶性肿瘤。其它包括神经元的、神经胶质的、星形胶质细胞的、下丘脑的、腺体的、巨噬细胞的、上皮的、基质的、囊胚腔的、炎性的、血管发生性的和免疫学的(包括自身免疫性的)病症。
可以在具有肿瘤的高级灵长类和人体临床试验中进一步测试在动物模型和基于细胞的试验中鉴定的ADC化合物。可以设计人体临床试验以测试本发明的抗CD79b单克隆抗体或免疫偶联物在经历B细胞增殖性病症的患者中的功效，所述B细胞增殖性病症包括但不限于淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。可以设计临床试验以便评价ADC与已知治疗方案的组合的功效，所述的已知治疗方案诸如包括已知化疗剂和/或细胞毒性剂的放疗和/或化疗。
一般而言，所治疗的疾病或病症为过度增殖性疾病，诸如B细胞增殖性病症和/或癌症。癌症的实例包括，但不局限于B细胞增殖性病症，其选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
癌症可包含表达CD79b的细胞，使得本发明的ADC能够结合癌细胞。为了测定癌症中的CD79b表达，可利用多种诊断/预后测定法。在一个实施方案中，可通过IHC来分析CD79b过表达。可以对来自肿瘤活检的石蜡包埋组织切片进行IHC测定法并根据染色程度和所检查肿瘤细胞中的比例而给予(accord)CD79b蛋白质染色强度标准。
为了预防或治疗疾病，ADC的适当剂量取决于如上述定义的所治疗的疾病类型、疾病的严重程度和时程、给予所述分子是为了预防还是为了治疗目的、先前的治疗、患者的临床病史和对抗体的反应以及主治医师的判定。将所述的分子适当对患者给予一次或在一系列治疗过程中给予。根据疾病类型和严重程度的不同，对患者给药的分子的初始候选剂量约为1μg/kg-15mg/kg(例如0.1-20mg/kg)，例如，无论是通过一次或多次分开的给药，还是通过连续输注。典型的每日剂量可以在约1μg/kg-100mg/kg或更大的范围，这取决于上述因素。对患者给予的典型的ADC的剂量在约0.1-约10mg/kg患者体重的范围。
为了在几天或几天以上时程中反复给药，根据病情的不同，将治疗持续至对疾病症状的所需抑制发生为止。典型的给药方案包含给予约4mg/kg的起始负荷剂量，随后给予约2mg/kg抗ErbB2抗体的每周维持剂量。其它剂量方案也是有用的。该疗法的进展易于通过常规技术和测定法监测。
J.联合疗法
可以将本发明的抗体-药物偶联物(ADC)与第二种具有抗癌特性的化合物在药物组合配制剂中联合或作为联合疗法以给药方案联合。所述药物组合配制剂或给药方案中的第二种化合物优选具有对组合中的ADC的补充活性，使得它们彼此不会产生不利影响。
所述第二种化合物可以为化疗剂、细胞毒剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂和/或心脏保护剂。此类分子以对指定目的有效的量适当地联合存在。含有本发明ADC的药物组合物还可以具有治疗有效量的化疗剂，诸如微管蛋白形成抑制剂、拓扑异构酶抑制剂或DNA结合剂。
一方面，所述第一化合物是本发明的抗CD79b ADC，且所述第二化合物是抗CD20抗体(或是裸抗体或是ADC)。在一个实施方案中，所述第二化合物是抗CD20抗体利妥昔单抗(rituximab，
Figure GPA00001058503002381
)或2H7(Genentech，Inc.，South San Francisco，CA)。对于与本发明抗CD79b ADC的联合免疫疗法有用的另一种抗体包括但不限于抗VEGF(例如
Figure GPA00001058503002382
)。
可以将其它治疗方案与依照本发明所鉴定的抗癌药施用联合，包括但不限于放射疗法和/或骨髓和外周血移植和/或细胞毒剂、化疗剂或生长抑制剂。在一个这样的实施方案中，化疗剂是以下药剂或药剂组合，诸如例如环磷酰胺、羟基柔红霉素、阿霉素、多柔比星、长春新碱(OncovinTM)、泼尼松龙、CHOP、CVP或COP，或者免疫治疗剂，诸如抗CD20(例如
Figure GPA00001058503002391
)或抗VEGF(例如
Figure GPA00001058503002392
)。
联合疗法可以作为同时或序贯方案施用。当序贯施用时，可以以两次或更多次施用来施用所述组合。联合施用包括使用分开的配制剂或单一药物配制剂的共施用，和任意次序的序贯施用，其中优选有一段时间所有活性剂同时发挥其生物学活性。
在一个实施方案中，使用ADC的治疗牵涉联合施用本文中所鉴定的抗癌剂和一种或多种化疗剂或生长抑制剂，包括共施用不同化疗剂鸡尾酒样混合物。化疗剂包括紫杉烷类(诸如帕利他赛(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))和/或蒽环类抗生素。熟练从业人员可以按照制造商的说明书或凭经验确定地使用此类化疗剂的制备和剂量给药方案。此类化疗剂的制备和剂量给药方案还记载于“Chemotherapy Service”，(1992)M.C.Perry编，Williams&Wilkins，Baltimore，Md。
任何上述共施用的药剂的合适剂量就是那些当前使用的剂量，而且可以由于新鉴定的药剂和其它化疗剂或治疗的联合作用(协同作用)而降低。
联合疗法可以提供“协同作用”并且证实是“协同性”的，即当一起使用活性组分时所实现的效果大于分开使用所述化合物时所产生的效果之和。当活性组分为如下情况时可以获得协同效应：(1)共同配制和施用或在合并的单位剂量配制剂中同时投递；(2)作为分开的配制剂交替或平行投递；或(3)通过一些其它方案。当在交替疗法中投递时，在序贯施用或投递所述化合物时，例如通过不同注射器中的不同注射，可以获得协同效应。一般而言，在交替疗法中，序贯地，即依序地施用每种活性组分的有效剂量，而在联合疗法中，一起施用两种或更多活性组分的有效剂量。
K.制品和试剂盒
本发明的另一个方面是包含可用于治疗、预防和/或诊断表达CD79b的癌症的物质的制品。制品包括容器和所述容器上或与其相关的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小管、注射器等。容器可用各种材料制成，诸如玻璃或塑料。容器中装有有效治疗、预防和/或诊断癌症状况的组合物，而且可具有无菌存取口(例如容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小管)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗CD79b抗体。标签或包装插页指示该组合物用于治疗癌症。标签或包装插页进一步包含给癌症患者施用抗体组合物的说明书。另外，制品还可包括第二容器，其中装有药学可接受的缓冲剂，诸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏(Ringer)溶液和右旋糖溶液。它还可包括商业和用户立场上所需的其它物质，包括其它缓冲剂、稀释剂、滤器、针头和注射器。
还提供了可用于多种目的的试剂盒，例如用于表达CD79b的细胞的杀伤测定法，用于从细胞中纯化或免疫沉淀CD79b多肽。为了分离和纯化CD79b，试剂盒可包含与珠子(例如sepharose珠子)偶联的抗CD79b抗体。可以提供包含抗体的试剂盒，用于CD79b多肽的体外检测和定量，例如在ELISA或Western印迹中。与制品相同，试剂盒包括容器和所述容器上或与其相关的标签或包装插页。容器中装有包含至少一种本发明抗CD79b抗体的组合物。可包括另外的容器，其中装有例如稀释剂和缓冲剂、对照抗体。标签或包装插页可提供对组合物的描述以及用于预期体外或检测用途的说明书。
L.CD79b多肽的用途
本发明涵盖筛选化合物以鉴定那些模拟CD79b多肽(激动剂)或阻止CD79b多肽产生效果((拮抗剂)的化合物的方法。用于拮抗剂药物候选物的筛选测定法设计成鉴定与本文鉴定的基因所编码的CD79b多肽结合或复合，或者以其它方式干扰所编码多肽与其它细胞蛋白质相互作用的化合物，包括例如抑制细胞表达CD79b多肽。此类筛选测定法包括适应高通量筛选化学文库的测定法，使得它们特别适用于鉴定小分子药物候选物。
可以多种形式进行测定法，包括本领域已经很好表征的蛋白质-蛋白质结合测定法、生物化学筛选测定法、免疫测定法和基于细胞的测定法。
用于拮抗剂的所有测定法的共同之处在于它们需要使药物候选物接触本文鉴定的核酸所编码的CD79b多肽，其条件和时间足以使这两种组分相互作用。
在结合测定法中，相互作用指结合，所形成的复合物可在反应混合物中分离或检测。在一个具体的实施方案中，将本文鉴定的基因所编码的CD79b多肽或药物候选物通过共价或非共价附着固定在固相上，例如微量滴定板。非共价附着通常通过用CD79b多肽溶液包被固相表面并干燥来实现。或者，对待固定的CD79b多肽特异的固定化抗体例如单克隆抗体可用于将它锚定到固相表面上。测定法如下进行，将可以用可检测标记物标记的非固定化组分加到固定化组分例如包含锚定组分的包被表面上。在反应完成时，例如通过清洗除去未反应的组分，并检测锚定到固相表面上的复合物。若最初的非固定化组分携带可检测标记物，检测出固定到表面上的标记物表明发生了复合作用。若最初的非固定化组分不携带标记物，可例如通过使用特异性结合已固定复合物的标记抗体来检测复合作用。
如果候选化合物与本文鉴定的基因所编码的特定CD79b多肽相互作用但不结合，那么它与该多肽的相互作用可通过用于检测蛋白质-蛋白质相互作用的公知方法来测定。此类测定法包括传统方法，诸如例如交联、免疫共沉淀和通过梯度或层析柱的共纯化。另外，可以如Chevray and Nathans，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：5789-5793所公开的，使用Fields及其同事(Fields and Song，1989，Nature(London)340：245-246；Chien et al.，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：9578-9582)描述的基于酵母的遗传系统来监测蛋白质-蛋白质相互作用。许多转录激活物，诸如酵母GAL4，由两个空间上离散的模块结构域组成，一个起DNA结合结构域的作用，另一个起转录激活结构域的功能。上述出版物中描述的酵母表达系统(通称为“双杂交系统”)利用了此特性，采用两种杂合蛋白质，在一个中将靶蛋白质与GAL4的DNA结合结构域融合，而在另一个中将候选激活蛋白质与激活结构域融合。GAL1-lacZ报道基因在GAL4激活的启动子控制下的表达依赖于GAL4活性经由蛋白质-蛋白质相互作用的重建。用β-半乳糖苷酶的显色底物检测包含相互作用多肽的菌落。使用双杂交技术鉴定两种特定蛋白质之间的蛋白质-蛋白质相互作用的完整试剂盒(MATCHMAKERTM)可从Clontech购买。此系统还可延伸到对参与特定蛋白质相互作用的蛋白质结构域的作图以及指出对这些相互作用至关重要的氨基酸残基。
干扰本文鉴定的基因所编码的CD79b多肽与其它胞内或胞外组分相互作用的化合物可如下测试：通常在足以使两种产物相互作用和结合的条件和时间下制备包含基因产物及胞内或胞外组分的反应混合物。为了测试候选化合物抑制结合的能力，在缺乏和存在测试化合物时进行反应。另外，可以向第三份反应混合物中加入安慰剂，作为阳性对照。如上所述监测混合物中存在的CD79b多肽和胞内或胞外组分之间的结合(复合物形成)。对照反应物中形成复合物但含有测试化合物的反应混合物中没有形成复合物表明，测试化合物干扰CD79b多肽与其反应配偶体的相互作用。
为了测定拮抗剂，可将CD79b多肽与要筛选特定活性的化合物一起加到细胞中，在存在CD79b多肽时该化合物抑制目的活性的能力表明，该化合物是CD79b多肽的拮抗剂。或者，可如下检测拮抗剂，将CD79b多肽和潜在的拮抗剂与膜结合的CD79b多肽受体或重组受体在适于竞争性抑制测定法的条件下组合。CD79b多肽可进行标记，诸如通过放射性，使得与受体结合的CD79b多肽分子的数目可用于测定潜在拮抗剂的效力。编码受体的基因可通过本领域技术人员知道的多种方法来鉴定，例如配体淘选和FACS分选。Coligan et al.，1991，Current Protocols in Immun.1(2)：Chapter 5。优选的是，采用表达克隆，其中从对CD79b多肽有响应的细胞制备多腺苷酸化RNA，将从此RNA构建的cDNA文库分成几个集合，并用于转染COS细胞或对CD79b多肽没有响应的其它细胞。使在载玻片上培养的转染细胞暴露于经过标记的CD79b多肽。可通过多种手段来标记CD79b多肽，包括碘化或包含位点特异性蛋白质激酶的识别位点。固定和温育后，将载玻片进行放射自显影分析。鉴定阳性集合，制备子集，并用相互作用的子集进行再次转染和再次筛选过程，最后产生编码推定受体的单个克隆。
作为受体鉴定的备选方法，可使经标记的CD79b多肽与表达受体分子的细胞膜或提取制备物光亲和性相连。通过PAGE解析交联物质并对X-射线胶片曝光。可切下包含受体的标记复合物，解离成肽片段，并进行蛋白质微量测序。从微量测序获得的氨基酸序列可用于设计一组简并寡核苷酸探针，用于筛选cDNA文库以鉴定编码推定受体的基因。
在用于拮抗剂的另一种测定法中，在存在候选化合物时将表达受体的哺乳动物细胞或膜制备物与经过标记的CD79b多肽一起温育。然后测量所述化合物增强或阻断此相互作用的能力。
潜在拮抗剂的更具体的例子包括结合免疫球蛋白与CD79b多肽的融合物的多肽，特别是抗体，包括但不限于多克隆和单克隆抗体及抗体片段，单链抗体，抗独特型抗体，和嵌合的或人源化型式的此类抗体或片段，以及人抗体和抗体片段。或者，潜在的拮抗剂可以是密切相关的蛋白质，例如识别受体但不起作用，由此竞争性抑制CD79b多肽的作用的突变形式的CD79b多肽。
本文鉴定的特异性结合CD79b多肽的抗体以及通过上文公开的筛选测定法鉴定的其它分子可以以药用组合物的形式施用，用于治疗多种紊乱，包括癌症。
如果CD79b多肽在胞内，而且使用完整抗体作为抑制剂，那么优选使抗体内在化。然而，还可以用脂转染或脂质体将抗体或抗体片段投递到细胞中。在使用抗体片段时，优选特异性结合靶蛋白质的结合结构域的最小抑制性片段。例如，根据抗体的可变区序列，可以设计保留与靶蛋白质序列结合能力的肽分子。此类肽可以化学合成和/或通过重组DNA技术生成。参见例如Marasco et al.，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：7889-7893。
本文中的配制剂还可含有所治疗具体适应症所必需的超过一种活性化合物，优选那些活性互补且彼此没有不利影响的。或者/另外，组合物可包含增强其功能的药剂，诸如例如细胞毒剂、细胞因子、化疗剂或生长抑制剂。合适的是，此类分子以对于预定目的有效的量组合存在。
M.抗体衍生物
可进一步修饰本发明的抗体以包含本领域知道的且易于获得的额外非蛋白质性质模块。优选的是，适于抗体衍生化的模块是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖苷、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二氧戊环、聚-1，3，6-三恶烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)、右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇、及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附着于抗体的聚合物数目可以变化，而且如果附着了超过一个聚合物，那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可根据下列考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于待改进抗体的具体特性或功能、抗体衍生物是否将用于指定条件下的治疗等。
N.筛选方法
本发明的又一个实施方案致力于测定怀疑含有CD79b多肽的样品中该CD79b多肽的存在的方法，其中该方法包括使所述样品暴露于结合所述CD79b多肽的其抗体药物偶联物，并测定所述样品中所述其抗体药物偶联物与所述CD79b多肽的结合，其中此类结合的存在表明所述样品中存在所述CD79b多肽。任选的是，所述样品可包括怀疑表达CD79b多肽的细胞(可以是癌细胞)。本发明方法中所采用的抗体药物偶联物可任选被可检测地标记、附着于固相支持物，或诸如此类。
本发明的又一个实施方案致力于诊断哺乳动物中肿瘤的存在的方法，其中该方法包括(a)使包含从所述哺乳动物获得的组织细胞的测试样品接触结合CD79b多肽的其抗体药物偶联物，并(b)检测所述测试样品中所述其抗体药物偶联物和所述CD79b多肽之间复合物的形成，其中复合物的形成表明所述哺乳动物中存在肿瘤。任选的是，所采用的其抗体药物偶联物被可检测地标记，附着于固相支持物，或诸如此类，和/或所述组织细胞的测试样品是从怀疑具有癌性肿瘤的个体获得的。
IV.使用抗CD79b抗体和免疫偶联物的其它方法
A.诊断方法和检测方法
一方面，本发明的抗CD79b抗体和免疫偶联物可用于检测生物学样品中CD79b的存在。术语“检测”在用于本文时涵盖定量或定性检测。在某些实施方案中，生物学样品包含细胞或组织。在某些实施方案中，此类组织包括相对于其它组织以更高水平表达CD79b的正常的和/或癌性的组织，例如B细胞和/或B细胞相关组织。
一方面，本发明提供了检测生物学样品中CD79b的存在的方法。在某些实施方案中，所述方法包括在容许抗CD79b抗体结合CD79b的条件下使生物学样品接触抗CD79b抗体，并检测在抗CD79b抗体与CD79b之间是否形成复合物。
一方面，本发明提供了诊断与CD79b表达升高有关的病症的方法。在某些实施方案中，所述方法包括使测试细胞接触抗CD79b抗体；通过检测抗CD79b抗体对CD79b的结合，测定测试细胞的CD79b表达水平(或是定量的或是定性的)；并比较测试细胞的CD79b表达水平与对照细胞(例如与测试细胞相同组织起源的正常细胞或以与这样的正常细胞相当的水平表达CD79b的细胞)的CD79b表达水平，其中测试细胞的CD79b表达水平比对照细胞高指示存在与CD79b表达升高有关的病症。在某些实施方案中，测试细胞得自怀疑患有与CD79b表达升高有关的病症的患者。在某些实施方案中，所述病症是细胞增殖性病症，诸如癌症或肿瘤。
可以使用本发明的抗体诊断的例示性细胞增殖性病症包括B细胞病症和/或B细胞增殖性病症，包括但不限于淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
在某些实施方案中，诊断或检测方法，诸如上文所述，包括检测抗CD79b抗体对在细胞表面上表达的CD79b或在得自在其表面上表达CD79b的细胞的膜制备物中的CD79b的结合。在某些实施方案中，所述方法包括在容许抗CD79b抗体结合CD79b的条件下使细胞接触抗CD79b抗体，并检测在抗CD79b抗体与细胞表面上的CD79b之间是否形成复合物。用于检测抗CD79b抗体对在细胞表面上表达的CD79b的结合的例示性测定法是“FACS”测定法。
可以使用某些其它方法来检测抗CD79b抗体对CD79b的结合。此类方法包括但不限于本领域公知的抗原结合测定法，诸如Western印迹、放射免疫测定法、ELISA(酶联免疫吸附测定法)、“三明治/夹心式”免疫测定法、免疫沉淀测定法、荧光免疫测定法、蛋白A免疫测定法和免疫组化(IHC)。
在某些实施方案中，抗CD79b抗体是经过标记的。标记物包括但不限于直接检测的标记物或模块(诸如荧光、显色、电子密度、化学发光和放射性标记物)，以及间接检测的模块，诸如酶或配体，例如通过酶促反应或分子相互作用。例示性的标记物包括但不限于放射性同位素32P、14C、125I、3H和131I，荧光团诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物，罗丹明及其衍生物，丹酰，伞形酮，萤光素酶例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利No.4,737,456)，萤光素，2，3-二氢萘嗪二酮，辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖氧化酶例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，杂环氧化酶诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶，偶联利用过氧化氢氧化染料前体的酶HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶，生物素/亲合素，自旋标记物，噬菌体标记物，稳定自由基等等。
在某些实施方案中，抗CD79b抗体是固定在不溶性基质上的。固定化能够将抗CD79b抗体与仍然在溶液中游离的任何CD79b分开。这可以如下常规进行：或是通过在测定规程之前使抗CD79b抗体不溶解，即通过吸附至水不溶性基质或表面(Bennich et al.，U.S.3,720,760)或通过共价偶联(例如使用戊二醛交联)；或者通过在抗CD79b抗体与CD79b之间形成复合物之后使抗CD79b抗体不溶解，即例如通过免疫沉淀。
可以使用本发明的免疫偶联物来实施诊断或检测的任何上述实施方案，或是将所述免疫偶联物替换为抗CD79b抗体或是所述免疫偶联物与抗CD79b抗体一起使用。
B.治疗方法
本发明的抗体或免疫偶联物可用于例如体外、回体(ex vivo)和体内治疗方法。一方面，本发明提供了在体内或在体外抑制细胞生长或增殖的方法，所述方法包括在容许免疫偶联物结合CD79b的条件下使细胞暴露于抗CD79b抗体或其免疫偶联物。“抑制细胞生长或增殖”意味着将细胞的生长或增殖降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，而且包括诱导细胞死亡。在某些实施方案中，所述细胞是肿瘤细胞。在某些实施方案中，所述细胞是B细胞。在某些实施方案中，所述细胞是异种移植物，例如本文中所例示的。
一方面，本发明的抗体或免疫偶联物可用于治疗或预防B细胞增殖性病症。在某些实施方案中，所述细胞增殖性病症与CD79b的表达和/或活性升高有关。例如，在某些实施方案中，所述B细胞增殖性病症与B细胞表面上的CD79b表达升高有关。在某些实施方案中，所述B细胞增殖性病症是肿瘤或癌症。有待用本发明的抗体或免疫偶联物治疗的B细胞增殖性病症的实例包括但不限于淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
一方面，本发明提供了治疗B细胞增殖性病症的方法，包括给个体施用有效量的抗CD79b抗体或其免疫偶联物。在某些实施方案中，用于治疗B细胞增殖性病症的方法包括给个体施用有效量的药用组合物，其包含包含抗CD79b抗体或抗CD79b免疫偶联物和任选的至少一种别的治疗剂，诸如下文所提供的。在某些实施方案中，用于治疗B细胞增殖性病症的方法包括给个体施用有效量的药物组合物，其包含1)包含抗CD79b抗体与细胞毒剂的免疫偶联物；和任选地2)至少一种别的治疗剂，诸如下文所提供的。
一方面，本发明的至少有些抗体或免疫偶联物可结合来自人以外物种的CD79b。因而，本发明的抗体或免疫偶联物可用于结合例如包含CD79b的细胞培养物中的、人中的或具有本发明与其交叉反应的CD79b的其它哺乳动物(例如黑猩猩、狒狒、狨、猕猴和恒河猴，猪或小鼠)中的CD79b。在一个实施方案中，抗CD79b抗体或免疫偶联物可用于靶向B细胞上的CD79b，其通过使所述抗体或免疫偶联物接触CD79b以形成抗体或免疫偶联物-抗原复合物，使得免疫偶联物所偶联得细胞毒素到达细胞内部。在一个实施方案中，所述CD79b是人CD79b。
在一个实施方案中，抗CD79b抗体或免疫偶联物可用于结合患有与CD79b表达和/或活性升高有关的病症的个体中的CD79b的方法，所述方法包括给个体施用抗体或免疫偶联物使得个体中的CD79b得到结合。在一个实施方案中，CD79b结合的抗体或免疫偶联物被内化入表达CD79b的细胞中。在一个实施方案中，所述CD79b是人CD79b，所述个体是人个体。或者，所述个体可以是表达抗CD79b抗体与其结合的CD79b的哺乳动物。还有，所述个体可以是导入了CD79b的个体(例如通过施用CD79b或通过表达编码CD79b的转基因)。
可以出于治疗目的将抗CD79b抗体或免疫偶联物施用于人。此外，可以出于兽医目的或作为人类疾病的动物模型将抗CD79b抗体或免疫偶联物施用于表达抗体与其交叉反应的CD79b的非人哺乳动物(例如灵长类动物、猪、大鼠或小鼠)。关于后者，此类动物模型可用于评估本发明抗体或免疫偶联物的疗效(例如测试施用的剂量和时间进程)。
本发明的抗体或免疫偶联物可以在治疗中单独使用或联合其它组合物施用。例如，本发明的抗体或免疫偶联物可以与至少一种别的治疗剂和/或佐剂共施用。在某些实施方案中，别的治疗剂是细胞毒剂、化疗剂或生长抑制剂。在一个这样的实施方案中，化疗剂是以下药剂或药剂组合，诸如例如环磷酰胺、羟基柔红霉素、阿霉素、多柔比星、长春新碱(OncovinTM)、泼尼松龙、CHOP、CVP或COP，或者免疫治疗剂，诸如抗CD20(例如
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)或抗VEGF(例如
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)，其中所述组合疗法在以下癌症和/或B细胞病症的治疗中是有用的，包括淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
上文所述此类联合疗法涵盖联合施用(其中两种或多种治疗剂包含在同一配制剂中或分开的配制剂中)和分开施用，其中本发明抗体或免疫偶联物的施用可以在别的治疗剂和/或佐剂的施用之前、同时和/或之后进行。本发明的抗体或免疫偶联物还可以与放疗联合。
本发明的抗体或免疫偶联物(及任何别的治疗剂或佐剂)可以通过任何合适的手段来施用，包括胃肠外、皮下、腹膜内、肺内和鼻内，及损伤内施用(如果希望局部治疗的话)。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。另外，通过脉冲输注来施用抗体或免疫偶联物是合适的，特别是使用递减剂量的抗体或免疫偶联物。剂量给药可以通过任何合适的路径，例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射，这部分取决于施用是短暂的还是长时间的。
可以与优良医学实践一致的方式配制、剂量给药和施用本发明的抗体或免疫偶联物。在此内容中考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、患者个体的临床状况、病症的起因、投递药剂的部位、施药的方法、施药的日程安排和医学从业人员知道的其它因素。不是必需而是任选将抗体或免疫偶联物与目前用于预防或治疗所讨论病症的一种或多种药剂一起配制。此类其它药剂的有效量取决于配制剂中存在的抗体或免疫偶联物的量、病症或治疗的类型和上文讨论的其它因素。这些通常是以与本文所用相同剂量和施用路径使用，或是本文所述剂量的大约1-99％，或是凭经验/在临床上确定为适宜的任何剂量和任何路径。
对于疾病的预防或治疗，本发明抗体或免疫偶联物的适宜剂量(在单独使用或联合一种或多种其它别的药剂诸如化疗剂时)将取决于待治疗疾病的类型、抗体或免疫偶联物的类型、疾病的严重程度和进程、施用抗体或免疫偶联物是出于预防还是治疗目的、先前的疗法、患者的临床病史和对抗体或免疫偶联物的响应、及主治医师的判断。合适的是，一次性或通过一系列治疗将抗体或免疫偶联物施用于患者。根据疾病的类型和严重程度，施用于患者的初始候选剂量可以是约1μg/kg至100mg/kg(例如0.1mg/kg-20mg/kg)抗体或免疫偶联物，例如或是通过一次或多次分开施药或是通过连续输注。根据上文所述因素，典型日剂量的范围可以是约1μg/kg至100mg/kg或更多。对于持续数天或更长的重复施药，根据状况，通常持续治疗直至疾病症状发生期望的抑制。抗体或免疫偶联物的例示剂量的范围可以是约0.05mg/kg至约10mg/kg。如此，可对患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意组合)的一剂或多剂抗体或免疫偶联物。这些剂量可间歇施用，例如每周或每三周(例如使得患者接受约2剂至约20剂，例如约6剂抗体或免疫偶联物)。可施用一剂较高的初始加载剂量，后续一剂或多剂较低剂量。例示性剂量给药方案包括施用一剂约4mg/kg抗体的初始加载剂量，后续每周一剂约2mg/kg的维持剂量。然而，其它剂量方案也可能是有用的。这种疗法的进程易于通过常规技术和测定法来监测。
C.活性测定法
本发明的抗CD79b抗体和免疫偶联物可以通过本领域知道的各种测定法来表征其物理/化学特性和/或生物学活性。
1.活性测定法
一方面，提供了用于鉴定具有生物学活性的抗CD79b抗体或其免疫偶联物的方法。生物学活性可以包括例如抑制细胞生长或增殖的能力(例如“细胞杀伤”活性)或诱导细胞死亡(包括程序性细胞死亡(凋亡))的能力。还提供了在体内和/或在体外具有此类生物学活性的抗体或免疫偶联物。
在某些实施方案中，测试抗CD79b抗体或其免疫偶联物在体外抑制细胞生长或增殖的能力。抑制细胞生长或增殖的测定法是本领域公知的。细胞增殖的某些测定法，以本文所述“细胞杀伤”测定法为例，测量细胞存活力(viability)。一种这样的测定法是CellTiter-GloTM发光细胞存活力测定法，其可购自Promega(Madison，WI)。该测定法基于存在的ATP(有代谢活性的细胞的一项指标)的定量来测定培养物中的存活细胞数。参见Crouch et al(1993)J.Immunol.Meth.160：81-88；美国专利No.6602677。该测定法可以以96孔或384孔形式进行，使之适应自动化高通量筛选(HTS)。参见Cree et al(1995)AntiCancer Drugs 6：398-404。该测定法规程涉及直接向培养细胞添加单一试剂(CellTiter-
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试剂)。这导致细胞溶解和通过萤光素酶反应产生的发光信号的生成。发光信号与存在的ATP的量成正比，后者直接与培养物中存在的存活细胞数成正比。可以通过光度计或CCD照相机成像装置来记录数据。发光输出表述成相对光单位(RLU)。
细胞增殖的另一种测定法是“MTT”测定法，一种测量3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑氮溴化物被线粒体还原酶氧化成甲
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(formazan)的比色测定法。与CellTiter-GloTM测定法一样，此测定法指示细胞培养物中存在的有代谢活性的细胞的量。参见例如Mosmann(1983)J.Immunol.Meth.65：55-63；Zhang et al.(2005)Cancer Res.65：3877-3882。
一方面，测试抗CD79b抗体在体内诱导细胞死亡的能力。诱导细胞死亡的测定法是本领域公知的。在有些实施方案中，此类测定法测量例如膜完整性的丧失，其通过碘化丙啶(PI)、锥虫蓝(参见Moore et al.(1995)Cytotechnology，17：1-11)或7AAD的摄取来指示。在一种例示性PI摄取测定法中，将细胞在补充有10％热灭活FBS(Hyclone)和2mM L-谷氨酰胺的Dulbecco氏改良Eagle培养基(D-MEM)：Ham′s F-12(50：50)中培养。如此，该测定法在缺乏补体和免疫效应细胞时进行。将细胞以3x106个/盘接种入100x20mm盘，并容许附着过夜。除去培养基，并用单独的培养基或含有各种浓度抗体或免疫偶联物的培养基更换。将细胞温育3天时间段。处理后，将细胞单层用PBS清洗，并通过胰蛋白酶处理而脱离。然后将细胞于4℃以1200rpm离心5分钟，将沉淀物重悬于3ml冷的Ca2+结合缓冲液(10mM Hepes，pH 7.4，140mM NaCl，2.5mM CaCl2)，并等分入35mm盖有滤网(strainer-capped)的12x75mm管(1ml/管，3管/处理组)以除去细胞团快。然后向管中加入PI(10μg/ml)。使用FACSCANTM流式细胞仪和FACSCONVERTTM CellQuest软件(BectonDickinson)分析样品。根据PI摄取的测定诱导统计学显著水平的细胞死亡的抗体或免疫偶联物如此得到鉴定。
一方面，测试抗CD79b抗体或免疫偶联物诱导凋亡(程序性细胞死亡)的能力。诱导凋亡的抗体或免疫偶联物的一种例示性测定法是膜联蛋白结合测定法。在一种例示性的膜联蛋白结合测定法中，将细胞如上一段所述培养并接种入盘。除去培养基，并用单独的新鲜培养基或含有0.001-10μg/ml抗体或免疫偶联物的培养基更换。3天温育期后，将细胞单层用PBS清洗，并通过胰蛋白酶处理脱离。然后将细胞如上一段所述离心，重悬于Ca2+结合缓冲液，并等分入管。然后向管中加入标记的膜联蛋白(例如膜联蛋白V-FITC)(1μg/ml)。使用FACSCANTM流式细胞仪和FACSCONVERTTM CellQuest软件(Becton Dickinson)分析样品。相对于对照诱导统计学显著水平的膜联蛋白结合的抗体或免疫偶联物如此得到鉴定。诱导凋亡的抗体或免疫偶联物的另一种例示性测定法是组蛋白DNA ELISA比色测定法，其用于检测基因组DNA的核小体间降解。这样的测定法可使用例如细胞死亡检测ELISA试剂盒(Roche，Palo Alto，CA)来进行。
可用于任何上述体外测定法的细胞包括在正常情况下表达CD79b或经改造而表达CD79b的细胞或细胞系。此类细胞包括相对于同一组织起源的正常细胞过表达CD79b的肿瘤细胞。此类细胞还包括表达CD79b的细胞系(包括肿瘤细胞系)和在正常情况下不表达CD79b但经CD79b编码核酸转染的细胞系。
一方面，测试抗CD79b抗体或其免疫偶联物在体内抑制细胞生长或增殖的能力。在某些实施方案中，测试抗CD79b抗体其或免疫偶联物在体内抑制肿瘤生长的能力。体内模型系统，诸如异种移植物模型，可用于此类测试。在一种例示性异种移植物系统中，将人肿瘤细胞导入合适的免疫受损的非人动物，例如SCID小鼠。将本发明的抗体或免疫偶联物施用于所述动物。测量抗体或免疫偶联物抑制或降低肿瘤生长的能力。在上述异种移植物系统的某些实施方案中，所述人肿瘤细胞是来自人类患者的肿瘤细胞。此类对于制备异种移植物模型有用的细胞包括人白血病和淋巴瘤细胞系，其包括但不限于BJAB-luc细胞(一种经萤光素酶报告基因转染的EBV阴性伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)细胞系)、Ramos细胞(ATCC，Manassas，VA，CRL-1923)、SuDHL-4细胞(DSMZ，Braunschweig，Germany，AAC 495)、DoHH2细胞(参见Kluin-Neilemans，H.C.et al.，Leukemia 5：221-224(1991)，及Kluin-Neilemans，H.C.et al.，Leukemia 8：1385-1391(1994))、Granta-519细胞(参见Jadayel，D.M.et al，Leukemia 11(1)：64-72(1997))。在某些实施方案中，通过皮下注射或通过移植入合适的位点(诸如乳房脂肪垫)，将人肿瘤细胞导入合适的免疫受损的非人动物。
2.结合测定法和其它测定法
一方面，对抗CD79b抗体测试其抗原结合活性。例如，在某些实施方案中，对抗CD79b抗体测试其结合在细胞表面上表达的CD79b的能力。可以将FACS测定法用于此类测试。
一方面，可以将竞争测定法用于鉴定与鼠MA79b抗体、人源化MA79b.v17抗体和/或人源化MA79b.v18和/或人源化MA79b.v28和/或人源化MA79b.v32抗体竞争结合CD79b的单克隆抗体。在某些实施方案中，这样的竞争性抗体与鼠MA79b抗体、人源化MA79bv.17抗体和/或人源化MA79b.v18抗体和/或人源化MA79b.v28和/或人源化MA79b.v32.结合相同的表位(例如线性表位或构象表位)。例示性的竞争测定法包括但不限于常规测定法，诸如Harlow and Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual ch.14(Cold SpringHarbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY)中所提供的。定位抗体所结合表位的详细的例示性方法见Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols，”于：Methods in Molecular Biology vol.66(人a Press，Totowa，NJ)。若两种抗体各自阻断彼此50％或更多的结合，则说这两种抗体结合相同表位。
在一种例示性的竞争测定法中，将固定化的CD79b在包含能结合CD79b的第一经标记抗体(例如鼠MA79b抗体、人源化MA79b.v17抗体和/或人源化MA79b.v18抗体和/或人源化MA79b.v28和/或人源化MA79b.v32)和要测试其与第一抗体竞争结合CD79b的第二未标记抗体的溶液中温育。所述第二抗体可以存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定化的CD79b在包含第一经标记抗体但没有第二未标记抗体的溶液中温育。在容许第一抗体结合CD79b的条件下温育后，除去过量的未结合抗体，并测量与固定化的CD79b结合的标记物的量。如果测试样品中与固定化CD79b结合的标记物的量相对于对照样品有实质性降低，那么这指示所述第二抗体与所述第一抗体竞争结合CD79b。在某些实施方案中，固定化的CD79b存在于细胞表面上或得自在其表面上表达CD79b的细胞的膜制备物中。
一方面，纯化的抗CD79b抗体可以通过一系列测定法进一步表征，包括但不限于N-末端测序、氨基酸分析、非变性大小排阻、高压液相层析(HPLC)、质谱、离子交换层析和木瓜蛋白酶消化。
在一个实施方案中，本发明涵盖了改良的抗体，其具有一些但非所有效应器功能，这使之成为其中抗体体内半衰期是重要的但某些效应器功能(诸如补体和ADCC)不是必需的或有害的许多应用的期望候选物。在某些实施方案中，测量抗体的Fc活性以确保只保留了期望的特性。可进行体外和/或体内细胞毒性测定法来证实CDC和/或ADCC活性的降低/消除。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定法来确认抗体缺乏FcγR结合(从此有可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞，NK细胞，只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch and Kinet，Annu.Rev.Immunol.9：457-92(1991)第464页表3总结了造血细胞上的FcR表达。美国专利No.5,500,362或5,821,337中记载了评估感兴趣分子的ADCC活性的体外测定法的实例。可用于此类测定法的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可以在体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如Clynes et al.PNAS(USA)95：652-656(1998)中所披露的。还可以进行C1q结合测定法来证实抗体不能结合C1q及从此缺乏CDC活性。为了评估补体激活，可进行CDC测定法，例如如Gazzano-Santoro et al.，J.Immunol.Methods 202：163(1996)中所记载的。还可以使用本领域知道的方法进行FcRn结合和体内清除/半衰期测定。
提供下列实施例仅仅为了例示目的，而非意图以任何方式限制本发明的范围。
在此完整收入本说明书中引用的所有专利和文献作为参考。
实施例
除非另有说明，实施例中提及的商品化试剂依照制造商的说明书使用。实施例中使用的抗体包括商品化抗体，包括但不限于抗CD79b(购自Biomeda(Foster City，CA)或BDbioscience(San Diego，CA)或Ancell(Bayport，MN)的抗体)、抗CD79b(由1993年7月20日保藏于ATCC的杂交瘤HB11413生成的)和嵌合抗CD79b抗体(包含来自由1993年7月20日保藏于ATCC的杂交瘤HB11413生成的抗体的可变域的)。下文实施例和整篇说明书中以ATCC编号所鉴别的那些细胞的来源是美国典型培养物保藏中心(American TypeCulture Collection，VA)。
实施例1：人源化抗CD79b抗体的生成
残基编号依照Kabat(Kabat et al.，Sequences of proteins of immunologicalinterest，5th Ed.，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991))。使用单字母氨基酸缩写。使用IUB代码代表DNA简并性(N＝A/C/G/T，D＝A/G/T，V＝A/C/G，B＝C/G/T，H＝A/C/T，K＝G/T，M＝A/C，R＝A/G，S＝G/C，W＝A/T，Y＝C/T)。
A.人源化抗CD79b抗体嫁接物
生成了多种人源化抗CD79b抗体。将来自鼠MA79b抗体(MA79b)(Roswell Park Cancer Institute；Okazaki et al.，Blood，81：84-94(1993))的VL和VH域与人共有VLκI(huKI)和人亚组III共有VH(huIII)域比对。为了生成HVR嫁接物，使用有3个位置(R71A、N73T和L78A)与人亚组III共有VH域不同的受体VH框架(Carter et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：4285(1992))。将来自鼠MA79b(MA79b)的高变区改造入受体人共有框架以生成MA79b的直接HVR嫁接物(在本文中称作“MA79b嫁接物”或“MA79b-嫁接物”或“MA79b嫁接的‘人源化’抗体”或“huMA79b-嫁接物”)。在VL域中，将下列区域嫁接至人共有受体：第24-34位(L1)、第50-56位(L2)和第89-97位(L3)(图7A-B)。在VH域中，嫁接第26-35位(H1)、第49-65位(H2)和第93-102位(H3)(图8A-B)。MacCallum等人(MacCallum et al.，J.Mol.Biol.，262：732-745(1996))分析了抗体和抗原复合物晶体结构，发现重链的第49、93和94位是接触区的一部分，如此包括在将抗体人源化时HVR-H2和HVR-H3的定义中。
直接嫁接物变体(huMA79b-嫁接物(graft))是通过Kunkel诱变生成的，作为噬菌体上展示的Fab和作为IgG这两种形式，每个高变区使用分开的寡核苷酸。通过DNA测序评估了正确的克隆。
B.人源化抗CD79b抗体嫁接变体
使用噬菌体文库生成了在MA79b嫁接的“人源化”抗体的高变区中包括突变多样性的抗CD79b抗体嫁接变体。抗CD79b抗体嫁接变体包括HVR中的单一位置变异(图9)或HVR中多个位置变异(图10)。
C.噬菌体选择
为了噬菌体选择，将CD79b的胞外结构域(huCD79becd)(2μg/ml)在PBS中在MaxiSorp微量滴定板(Nunc)上于4℃固定化过夜。将板用酪蛋白封闭剂(Pierce)封闭至少1小时。自培养物上清液收获噬菌体并在含有0.5％BSA和0.05％Tween 20的PBS(PBSBT)中重悬浮。添加噬菌体文库并选择噬菌体2小时后，将微量滴定板用含有0.05％Tween 20的PBS(PBST)彻底清洗以除去未结合的噬菌体，并通过将孔与100mM HCl一起温育30分钟来洗脱结合的噬菌体。后续轮次的选择中，通过增加用PBST清洗的次数或通过洗脱前与可溶性huCD79becd一起温育逐渐延长的时间，可以提高选择严格性。
将洗脱的噬菌体用1M Tris，pH 8中和，并使用XL1-Blue细胞和M13/KO7辅助噬菌体通过在2YT，50μg/ml羧苄青霉素中于37℃培养过夜来扩增。将自含有靶物的孔洗脱的噬菌体的滴度与自含有非靶物的孔回收的噬菌体的滴度比较以评估富集情况。
D.Fab生成和IgG生成
为了表达Fab蛋白质以测量亲和力，将终止密码子引入噬菌体展示载体中重链与g3之间。将克隆转化入大肠杆菌34B8细胞，并在完全C.R.A.P.培养基中于30℃培养(Presta et al.Cancer Res.57：4593-4599(1997))。通过离心收获细胞，重悬于PBS、100μM PMSF、100μM苯甲脒、2.4mM EDTA，并用微量流化仪破碎。用蛋白G亲和层析纯化Fab。
出于筛选目的，首先在293细胞中生成IgG变体。使用FuGene系统将编码VL和VH的载体(25μg)转染入293细胞。将500μl FuGene与4.5ml不含FBS的DMEM培养基混合，并于室温温育5分钟。将每条链(25μg)添加至此混合物并于室温温育20分钟，然后转移至烧瓶，用于于37℃在5％CO2中转染过夜。次日，取出含有转染混合物的培养基，并更换成23ml含有0.1ml/L痕量元素(A0934)和10mg/L胰岛素(A0940)的PS04培养基。将细胞再温育5天，之后通过以1000rpm离心5分钟来收获培养基并使用0.22μm低蛋白质结合滤器无菌过滤。在每125ml培养基添加2.5ml 0.1％PMSF后，样品可以保存于4℃。
E.亲和力测定(Biacore分析)
为了测定MA79b嫁接的“人源化”抗体变体的亲和力，在CHO细胞中单独的(huCD79becd)或作为Fc融合物(huCD79becd-Fc)表达人CD79b的胞外结构域，并通过常规手段纯化。另外，通过常规手段合成16个氨基酸的含有MA79b表位的肽(ARSEDRYRNPKGSACK)(SEQ ID NO：16)。
MA79b抗体表位(在图19中标示为“测试肽”)的表征先前记载于2006年8月3日提交的美国申请No.11/462,336。MA79b的表位位于远离跨膜结构域的胞外肽区域中，而且在全长和截短形式的人CD79b中存在(Cragg，Blood，100(9)：3068-76(2002))，这在正常和恶性B细胞中已有记载(Hashimoto，S.etal.，Mol.Immunol.，32(9)：651-9(1995)；Alfarano et al.，Blood，93(7)：2327-35(1999))。截短形式的CD79b缺少整个胞外Ig样结构域(图19中框示了剪接截短形式的CD79b中不存在的胞外Ig样结构域)。
通过表面等离振子共振测量了MA79b、MA79b嫁接的“人源化”抗体或MA79b嫁接的“人源化”抗体变体的Fab和IgG变体对固定化huCD79becd或huCD79b-Fc或16个氨基酸的含有MA79b表位的肽的结合。亲和力测定是使用BIAcoreTM-2000通过表面等离振子共振实施的。在10mM乙酸钠pH 4.8中在CM5传感器芯片上固定化抗原huCD79becd或huCD79b-Fc(大约50-200RU)。由于较大的亲合效应，亲和力测量对固定化的huCD79becd的量敏感。因为这个原因，将在不同日子运行的样品测定的亲和力相对于作为标准品一起运行的MA79b标准化。在测量对16个氨基酸的含有MA79b表位的肽(ARSEDRYRNPKGSACK)(SEQ ID NO：16)的结合的实验中，在链霉亲和素包被的传感器芯片上捕捉生物素化的肽(大约20RU)。以30μL/min流速注射纯化的MA79b嫁接的“人源化”抗体变体(Fab或IgG形式)(在PBST中2倍连续稀释，0.5至1000nM)。每份样品分析4分钟结合和10分钟解离。每次注射后，使用10mM甘氨酸pH 1.7再生芯片。
通过自MA79b嫁接的“人源化”抗体变体(Fab或IgG形式)流动室减去对照流动室来修正结合响应。使用同时拟合kon和koff的1∶1朗格缪尔(Languir)模型来进行动力学分析。
F.结合分析(FACS分析)
为了进一步测定MA79b嫁接的“人源化”抗体或抗体变体的Fab变体的结合，使用FACS分析分析了Fab和/或IgG变体对DoHH-2细胞的结合。另外，使用FACS分析分析了MA79b嫁接的“人源化”抗体变体对BJAB-萤光素酶细胞的结合。
为了MA79b嫁接的“人源化”抗体变体的Fab变体(MA79b嫁接的“人源化”抗体(IgG形式用作对照))的FACS分析，首先将DoHH-2细胞(1x106，在100μl体积中)在有或无1μg初始小鼠抗CD79b单克隆抗体(MA79b)的情况中温育30分钟，之后添加1μg各种Fab变体(或对照抗体)。PE偶联的小鼠抗人Ig，κ轻链(克隆G20-193，BD Biosciences，San Diego，CA)用作检测二抗，因为所有Fab变体都携带κ轻链而DoHH-2细胞不在细胞表面上表达κ轻链。
为了MA79b嫁接的“人源化”抗体变体的IgG变体(IgG形式的chMA79b用作对照)的其它FACS分析，每百万个BJAB-萤光素酶细胞滴定1.0μg、0.1μg或0.01μg抗体。PE偶联的小鼠抗人Ig用作检测二抗。
G.亲和力测定(Scatchard分析)
为了进一步测定在HVR-L2和HVR-H3中具有变化的IgG变体(huMA79bL2/H3)的结合，分析了碘化IgG变体对表达人CD79b和猕猴CD79b的BJAB细胞的结合并实施了Scatchard分析。
为了Scatchard分析，在存在稳定表达猕猴CD79b和内源人CD79b的转染BJAB系的情况中分别使0.5nM I125标记的MA79b或huMA79b L2/H3与未标记的MA79b或huMA79b L2/H3竞争，范围为50至0.02nM(12步1∶2连续稀释)。于4C温育4小时后，清洗细胞并通过伽马计数仪(1470WIZARD自动伽马计数仪；Perkin Elmer，Walthem，MA)读取细胞沉淀物计数。所有点进行一式三份，并计数10分钟。将平均CPM用于使用New Ligand(Genentech，South SanFrancisco，CA)程序进行的Kd计算。
结果和讨论
A.关于人源化抗CD79b抗体生成的结果
用于生成人源化抗CD79b抗体的人受体框架包含共有人κI VL域和人亚组III共有VH域变体。变体VH域相对于人共有具有3处变化：R71A、N73T和L78A。将MA79b的VL和VH域与人κI和亚组III域比对；鉴定每个HVR，然后嫁接入人受体框架以生成HVR嫁接物，其能在噬菌体上展示成Fab(图7和8)。
展示Fab形式MA79b-嫁接物的噬菌体结合至固定化huCD79becd(数据未显示)。然而，当huMA79b-嫁接物序列表达成IgG时，其对huCD79becd的亲和力的FACS分析指明结合亲和力降低超过100倍(数据未显示)且Biacore分析指明损失超过50倍(图11)。
1.CDR修复
鉴定了能够结合固定化huCD79becd的、具有下列序列变化的MA79b嫁接的“人源化”抗体变体。
在含有单一位置变化的文库中只观察到靶向VL中HVR的序列变化，显示于图9(L1突变：Q27K(SEQ ID NO：17；SPL-2突变)、(L2突变：L54R(SEQID NO：18)、E55K(SEQ ID NO：19))和(L3突变：E93S(SEQ ID NO：20；SPL-5突变)、E93K(SEQ ID NO：21))。
在含有多个位置变化的文库中只观察到靶向L2、L3、H1和H3中HVR的序列变化，显示于图10(L2突变：S52R、N53K、E55G和S56R(SEQ ID NO：22；L2-2突变)；N53R(SEQ ID NO：23)；S52R、N53K、E55G和S56N(SEQ IDNO：24)；S52R、N53K、E55K和S56R(SEQ ID NO：25)；S52R、N53Y、E55K和S56R(SEQ ID NO：26；L2-29突变)；S52R、N53K和E55K(SEQ ID NO：27)；S52R、N53K和E55A(SEQ ID NO：28)；S52G、N53I、E55A和S56R(SEQ IDNO：29)；S52R、N53K、E55R(SEQ ID NO：30)；S52R、N53K和E55G(SEQID NO：31；L2-38突变)；S52R、N53H、E55K和S56R(SEQ ID NO：32)；A51S、S52R、N53Y、E55S和S56R(SEQ ID NO：33)；A51G、N53K、E55L和S56R(SEQID NO：34)；L54R和E55K(SEQ ID NO：35)；N53K和E55G(SEQ ID NO：36)；S52R、N53Y、E55R和S56R(SEQ ID NO：37)；S52R、N53R、E55R和S56T(SEQID NO：38)；S52R、N53R、E55G和S56R(SEQ ID NO：39)；S52R、N53Q、L54R、E55K和S56R(SEQ ID NO：40)；S52R、N53K、E55L和S56R(SEQ IDNO：41)；S52R、N53K、E55K和S56N(SEQ ID NO：42)；S52R、N53K、E55G和S56T(SEQ ID NO：43)；S52R、N53K、E55G和S56G(SEQ ID NO：44)；及S52R、N53K、E55A和S56R(SEQ ID NO：45))、(L3突变：E93A(SEQ ID NO：46)；E93Q(SEQ ID NO：47)；无突变(SEQ ID NO：48)；E93D(SEQ ID NO：49)；E93L(SEQ ID NO：50)；Q89N、Q90N、E93G和T97N(SEQ ID NO：51)；Q90P、S91D、D94A和L96R(SEQ ID NO：52)；Q89D、S91R和E93A(SEQ ID NO：53))、(H1突变：T28P、S30T、S31R和E35S(SEQ ID NO：54)；T28P、S30R和E35Q(SEQ ID NO：55)；T28P、S30T和E35N(SEQ ID NO：56)；T28P、S30T、S31R和E36N(SEQ ID NO：57；H1-6突变)；S30N、S31R和E35N(SEQ ID NO：58)；T28S和S30K(SEQ ID NO：59)；G26P、T28S、F29L、S30C、S31T、W33F和E35D(SEQ ID NO：60)；T28Y和S30T(SEQ ID NO：61)；T28P、S30G、S31R、I34V和E35N(SEQ ID NO：62)；S30K和S31K(SEQ ID NO：63)；T28P、S30T和E35Q(SEQ ID NO：64)；T28P、S30R和S31R(SEQ ID NO：65)；T28P、F29V、S30G、S31R和E35S(SEQ ID NO：66)；T28P、S30N、S31R和E35N(SEQID NO：67；H1-1突变)；T28G、S30T和E35S(SEQ ID NO：68)；S30T、I34L和E35S(SEQ ID NO：69)；S30T(SEQ ID NO：70)；S31G和E35N(SEQ ID NO：71)；S30R、S31R和E35N(SEQ ID NO：72)；T28S、S30R和E35N(SEQ ID NO：73)；T28S、S30R、S31R和E35N(SEQ ID NO：74)；T28S、S30R和S31R(SEQID NO：75)；T28S、S30P、I34L和E35Q(SEQ ID NO：76)；T28P、S30T和S31R(SEQ ID NO：77)；T28P和S31G(SEQ ID NO：78)；T28P、S30R和E35S(SEQID NO：79)；T28P、S30R和E35N(SEQ ID NO：80)；T28P、S30R和S31G(SEQID NO：81)；T28P、S30N和S31R(SEQ ID NO：82)；T28P、S30N、S31G和E35N(SEQ ID NO：83)；T28N、F29V、I34L和E35S(SEQ ID NO：84)；Y27F、T28P、S30T和E35S(SEQ ID NO：85)；和Y27F、T28P、S30N、S31R和E35N(SEQ ID NO：86))及(H3突变：V98I和F100L(SEQ ID NO：87；H3-12突变)；无突变(SEQ ID NO：88)；Y99K和F100L(SEQ ID NO：89)；F100L(SEQ ID NO：90)；V98I(SEQ ID NO：91)；V98F、Y99C和F100L(SEQ ID NO：92)；F100L(SEQ ID NO：93)；V98I、Y99R和F100L(SEQ ID NO：94；H3-10突变)；V98I、Y99K和F100L(SEQ ID NO：95)；V98I和Y99R(SEQ ID NO：96)；V98I(SEQID NO：97)；D101S(SEQ ID NO：98)；Y99V和F100L(SEQ ID NO：99)；Y99R和F100L(SEQ ID NO：100)；Y99R(SEQ ID NO：101)；Y99F和F100L(SEQ IDNO：102)；V98I和F 100L(SEQ ID NO：103)；V98I(SEQ ID NO：104)；V96R、Y99C和F100L(SEQ ID NO：105)；及V96I(SEQ ID NO：106))。
将选定克隆重定形式成Fab(用于通过FACS进行的分析)和IgG(用于通过Biacore和Scatchard进行的进一步分析)。
a.亲和力测定(Biacore分析)
如显示Biacore分析的图11所示，此CDR修复办法鉴定了许多改进MA79b嫁接的“人源化”抗体的亲和力的各序列变化。表面等离振子共振测定法显示，根据Biacore分析的测定，在结合固定化huCD79becd或huCD79becd-Fc或16个氨基酸的含有MA79b表位的肽时，虽然所测试的具有单一HVR变化的变体无一具有与MA79b相似的亲和力，但是在HVR-L2和HVR-H3中鉴定出的变化组合(MA79b嫁接的“人源化”抗体变体L2/H3；在本文中也称作huMA79bL2/H3)导致亲和力与MA79b相似的变体(图11)。
MA79b对抗原(huCD79becd-Fc)的单体结合(Fab)和二聚体结合(IgG)的分析(图11，第1行，比较Fab与IgG列)提示亲和力改进的变体中可能缺少MA79b中存在的100倍亲合成分(avidity component)。具体而言，在与MA79b相比在单体结合方面展示5倍改进的MA79b嫁接的“人源化”抗体变体L2-2(在本文中也称作huMA79b L2-2)中(图11，第1和3行，比较Fab列)，在将huMA79b L2-2重定形式成IgG后没有获得明显亲和力(图11，第4行，比较Fab与IgG列)。另外，初始MA79b HVR嫁接的“人源化”抗体(huMA79b嫁接物)展示结合中此亲合成分的损失(图11，第2行，比较Fab与IgG列)。经由亲合增强结合的能力可能是结合细胞表面抗原中所期望的。
b.亲和力测定(Scatchard分析)
正如通过Scatchard分析所评估的，此CDR修复办法鉴定了许多改进MA79b嫁接的“人源化”抗体的亲和力的各序列变化。具体而言，细胞结合测定法显示，根据Scatchard分析的测定，MA79b和MA79b嫁接的“人源化”抗体变体L2/H3(huMA79b L2/H3)(重定形式成IgG)结合稳定表达猕猴CD79b和内源人CD79b的BJAB细胞的亲和力分别具有0.63nM(MA79b；Kd＝0.63±0.14nM)和0.52nM(huMA79b L2/H3；Kd＝0.52±0.1nM)的Kd值(数据未显示)。
c.结合测定(FACS分析)
正如通过FACS分析所评估的，此CDR修复办法鉴定了许多改进MA79b嫁接的“人源化”抗体(huMA79b嫁接物)对DoHH-2细胞的结合的各序列变化(数据未显示)。具体而言，自SP和6SR文库鉴定出的Fab变体(L2-2、H3-10和H1-1突变)对DoHH-2细胞的FACS分析显示了Fab变体和huMA79b嫁接物(重定形式成IgG)对DoHH-2细胞的结合(数据未显示)。另外，Fab变体的FACS分析显示了与鼠抗CD79b单克隆抗体(MA79b)一起预温育阻断Fab变体对DoHH-2细胞的结合(数据未显示)。
2.框架修复
在huMA79b L2/H3变体的HVR-L2中引入的HVR序列变化根本不同于那些在任何人种系中观察到的。在体内小鼠异种移植物模型中观察到huMA79bL2/H3变体在偶联至DM1时有效抑制肿瘤生长(表9)。由于huMA79b L2/H3变体对抗原的单体结合(Fab)和二聚体结合(IgG)的分析显示亲合力(avidity)的损失(图11)，因此如下所述实施框架修复。
为了探索框架位置在二聚体抗原结合中的作用，构建了“整个框架”位置变体，其中在MA79bHVR嫁接的“人源化”抗体(huMA79b嫁接物)中引入可能重要的鼠框架位置。根据Biacore分析和Scatchard分析的评估，缺少任何HVR变化的此变体(在图12中称作“整个框架”)拥有与嵌合MA79b抗体(chMA79b)相似的二聚体结合亲和力(affinity)(图12)。
生成了包括位于VL第4和/或47位和/或VH第47、48、67、69、71、73、74、78和/或80位的鼠框架残基的IgG变体以确定维持高亲和力(二聚体结合)所需要的最小框架位置集合(set)(图12)。鼠框架残基显示于图7A-B(SEQ IDNO：10)和图8A-B (SEQ ID NO：14)。根据MA79b嫁接的“人源化”抗体变体17(huMA79b.v17)(图12，标示17的行)的证明，发现位于VL中第47位及VH中第75和80位的框架是不必要的。
与变体17(图12，标示17的列)相比，MA79b嫁接的“人源化”抗体变体18(MA79b.v18；图12，标示18的行)显示出二聚体结合中另外2倍的改进(图12，标示28的行)，其包括位于VL中第4位及VH中第48、67、69、71、73和78位的鼠框架残基，且进一步包括HVR-H3中的变化(在图12中也称作“H3-10”且在上文中描述成H3-10突变)，包括V98I、Y99R和F100L。
为了避免潜在的制造问题，通过将D28转变成Glu(谷氨酸)消除了MA79b嫁接的“人源化”抗体变体HVR-L1中潜在的异天冬氨酸形成位点(Asp-Gly)(D28E；见变体28；在本文中也称作“huMA79b.v28”；图12，标示28的行)。还耐受MA79b嫁接的“人源化”抗体变体VL中为稳定性进行的其它替代，包括D28转变成Ser(丝氨酸)(D28E；见变体32；在本文中也称作“huMA79b.v32”；图12，标示32的行)。
经Biacore分析表征了MA79b嫁接的“人源化”抗体变体28(huMA79b.v28；图12，标示28的行)，其：(1)包括位于VL中第4位及VH中第48、67、69、71、73和78位的鼠框架残基，(2)进一步包括HVR-H3中的变化(在图12中称作“H3-10”且在上文中描述成H3-10突变)，包括V98I、Y99R和F100L，且(3)更进一步包括HVR-L1中的变化(D28E，上文所述)。
经Biacore分析表征了MA79b嫁接的“人源化”抗体变体32(MA79b.v32；图12，标示32的行)，其：(1)包括位于VL中第4位及VH中第48、67、69、71、73和78位的鼠框架残基，(2)进一步包括HVR-H3中的变化(在图12中称作“H3-10”且在上文中描述成H3-10突变)，包括V98I、Y99R和F100L，且(3)更进一步包括HVR-L1中的变化(D28S，上文所述)。
a.亲和力测定(Biacore分析)
如显示Biacore分析的图12所示，此框架修复办法鉴定了许多改进MA79b嫁接的“人源化”抗体对huCD79becd的亲和力的各序列变化。表面等离振子共振测定法显示，根据Biacore分析的测定，在结合固定化huCD79becd时，MA79b嫁接的“人源化”抗体变体28(huMA79b.v28；具有鼠框架VL中第4位，VH中第48、67、69、71、73和78位，以及HVR-H3中H3-10突变(V98I、Y99R和F100L(上文也有描述)和HVR-L1中D28E突变(为了稳定性，见上文所述)；图12，标示28的行)和MA79b嫁接的“人源化”抗体变体(huMA79b.v32；具有鼠框架VL中第4位，VH中第47、48、67、69、71、73和78位，以及HVR-H3中H3-10突变(V98I、Y99R和F100L(上文也有描述)和HVR-L1中D28S突变(为了稳定性，见下文所述)；图12，标示32的行)具有与嵌合MA79b抗体(chMA79b)相当的亲和力。
b.亲和力测定(Scatchard分析)
正如通过Scatchard分析所评估的，与Biacore分析类似，此框架修复办法鉴定了许多改进MA79b嫁接的“人源化”抗体(huMA79b嫁接物)的亲和力的各序列变化。细胞结合测定法显示，根据Scatchard分析的测定，MA79b、MA79b嫁接的“人源化”抗体变体28(huMA79b.v28；见图12，标示28的行)(重定形式成IgG)和MA79b嫁接的“人源化”抗体变体32(huMA79b.v32；见图12，标示32的行)结合稳定表达猕猴CD79b和内源人CD79b的BJAB细胞的亲和力分别具有0.63nM(MA79b；Kd＝0.63±0.14nM)、0.44nM(huMA79b.v28；Kd＝0.44±0.04nM)和0.24nM(huMA79b.v32；Kd＝0.24±0.02nM)的Kd值(数据未显示)。
c.结合测定(FACS分析)
正如通过FACS分析所评估的，此框架修复办法鉴定了许多改进MA79b嫁接的“人源化”抗体(huMA79b嫁接物)对BJAB-萤光素酶细胞的结合的各序列变化(数据未显示)。具体而言，MA79b嫁接的“人源化”抗体变体(变体huMA79b.v28和huMA79b.v32)的IgG变体对BJAB-萤光素酶细胞的FACS分析显示了对BJAB-萤光素酶细胞的结合(数据未显示)。
B.关于人源化抗CD79b抗体生成的讨论
自将6种鼠MA79b HVR(定义为第24-34位(L1)、第50-56位(L2)、第89-97位(L3)、第26-35位(H1)、第49-65位(H2)和第93-102位(H3))嫁接入人共有κIVL和亚组III VH(含有A71、T73和A78)开始，使用CDR修复来鉴定HVR 1-6中改进结合亲和力的变化。图10和11中鉴定的HVR序列变化或这些变化的组合导致亲和力与MA79b相似的MA79b人源化变体。
或者，通过向huMA79b嫁接物(其在VH第71、73和78位处包括鼠框架残基)添加VL中框架第4位和VH中第48、67和69位，使用框架修复来恢复二聚体结合亲合力(图12；MA79b嫁接的“人源化”抗体变体17(huMA79b.v17))。通过在HVR-H3中添加3处变化：V98I，Y99R和F100L，进一步增强了这些框架突变变体对huCD79becd抗原的亲和力(图12；MA79b嫁接的“人源化”抗体变体18(huMA79b.v18))。用D28E突变消除了HVR-L1中的一个潜在的异天冬氨酸形成位点(图12；MA79b嫁接的“人源化”抗体变体28(huMA79b.v28))。
实施例2：抗CD79b抗体药物偶联物(ADC)的生成
为了测试MA79b嫁接的“人源化”抗体变体的IgG变体的功效，将MA79b嫁接的“人源化”抗体变体偶联至药物，诸如DM1。偶联至DM1的变体包括在HVR-L2和HVR-H3中具有变化的变体(huMA79b L2/H3)，即huMA79b.v17、huMA79b.v18、huMA79b.v28和huMA79b.v32。
用于为抗CD79b抗体生成抗体药物偶联物(ADC)的药物包括美登木素生物碱DM1和多拉司他汀10衍生物monmethylauristatin E(MMAE)和monomethylauristatin F(MMAF)(US 2005/0276812；US 2005/0238649；Doronina et al.，Bioconjug.Chem.，17：114-123(2006)；Doronina et al.，Nat.Biotechnol.，21：778-784(2003)；Erickson et al.，Cancer Res.，66：4426-4433(2006)，都通过述及完整收入本文)。对生成ADC有用的接头是BMPEO、SPP或SMCC(在本文中也称作“MCC”)(用于DM1)和MC或MC-vc-PAB(用于MMAE和MMAF)。对于DM1，使用接头试剂SMCC经由赖氨酸的ε-氨基将抗体连接至DM1的硫醇基。或者，对于DM1，使用SPP接头经由赖氨酸的ε-氨基将抗体连接至DM1。SPP(N-琥珀酰亚氨基4-(2′-比啶基二硫代)戊酸酯)与赖氨酸的ε-氨基起反应，在蛋白质上留下反应性2-吡啶基二硫化物接头。凭借SPP接头，在与游离硫氢基(例如DM1)反应后，吡啶基被置换，留下经可还原的二硫键附着的DM1。经SPP接头附着的DM1在还原性条件(即例如在细胞内)被释放，而经SMCC接头附着的DM1对还原性条件中的切割有抗性。另外，如果ADC被内化并靶向溶酶体，引起赖氨酸-Nε-DM1(其是有效的抗有丝分裂剂)释放的话，SMCC-DM1 ADC诱导细胞毒性，而且在自细胞释放时，赖氨酸-Nε-DM1是无毒的(Erickson et al.，Cancer Res.，66：4426-4433(2006))。对于MMAE和MMAF，通过马来酰亚氨基己酰基-缬氨酸-瓜氨酸(vc)-对氨基苄氧羰基(MC-vc-PAB)经由半胱氨酸将抗体连接至MMAE或MMAF。对于MMAF，或者，通过马来酰亚氨基己酰基(MC)接头经由半胱氨酸将抗体连接至MMAF。MC-vc-PAB接头能被胞内蛋白酶切割，诸如组织蛋白酶B，而且在切割时，释放游离药物(Doronina et al.，Nat.Biotechnol.，21：778-784(2003))，而MC接头对胞内蛋白酶的切割有抗性。
与US 2005/0276812中记载的规程类似，使用SMCC和DM1生成了抗CD79b的抗体药物偶联物(ADC)。将抗CD79b的纯化的抗体更换缓冲液入含有50mM磷酸钾和2mM EDTA，pH 7.0的溶液中。将SMCC(PierceBiotechnology，Rockford，IL)在二甲基乙酰胺(DMA)中溶解并添加至抗体溶液以得到最终的SMCC/Ab摩尔比10∶1。容许反应在混合中于室温进行3小时。随后在含150mM NaCl和2mM EDTA，pH 6.0的35mM柠檬酸钠中平衡的GE Healthcare HiTrap脱盐柱(G-25)上纯化SMCC修饰的抗体。将在DMA中溶解的DM1添加至SMCC抗体制备物以得到DM1对抗体摩尔比10∶1。容许反应在混合中于室温进行4-20小时。将DM1修饰的抗体溶液用20倍体积的PBS透析以除去未反应的DM1，无菌过滤，并保存于4C。通常，经此方法实现40-60％的抗体产率。根据凝胶过滤和激光散射的评估，通常＞95％的制备物是单体。由于DM1在252nm处具有最大吸收，因此可以通过252和280nm处的差异吸收测量来确定结合至抗体的药物量。通常，药物对抗体的比率为3至4。
与US 2005/0276812中记载的规程类似，可以使用SPP-DM1接头生成本文所述抗CD79b抗体的抗体药物偶联物(ADC)。将抗CD79b的纯化的抗体更换缓冲液入含有50mM磷酸钾和2mM EDTA，pH 7.0的溶液中。将SPP(Immunogen)在DMA中溶解并添加至抗体溶液以得到最终的SPP/Ab摩尔比大约10∶1，精确比率取决于期望的抗体药物载荷。10∶1比率通常会导致大约3-4的药物对抗体比。容许SPP在混合中于室温反应3-4小时。随后在含150mMNaCl和2mM EDTA，pH 6.0的35mM柠檬酸钠中或磷酸盐缓冲盐水pH 7.4中平衡的GE Healthcare HiTrap脱盐柱(G-25)上纯化SPP修饰的抗体。将在DMA中溶解的DM1添加至SPP抗体制备物以得到DM1对抗体摩尔比10∶1，这导致可用的SPP接头相对于抗体3-4倍摩尔过量。容许与DM1的反应在混合中于室温进行4-20小时。将DM1修饰的抗体溶液用20倍体积的PBS透析以除去未反应的DM1，无菌过滤，并保存于4℃。通常，用此方法实现40-60％或更高的抗体产率。根据凝胶过滤和激光散射的评估，通常＞95％的抗体药物偶联物是单体。正如关于SMCC-DM1偶联物的制备所述(上文所述)，通过252和280nm处的差异吸收测量来确定所结合的药物的量。
与US 2005/0238649中记载的规程类似，还可以使用MC-MMAF、MC-MMAE、MC-val-cit(vc)-PAB-MMAE或MC-val-cit(vc)-PAB-MMAF药物接头生成本文所述抗CD79b抗体的抗体药物偶联物(ADC)。将纯化的抗CD79b抗体在500mM硼酸钠和500mM氯化钠pH 8.0中溶解并用过量的100mM二硫苏糖醇(DTT)进一步处理。于37℃温育大约30分钟后，更换缓冲液，即在Sephadex G25树脂上用含1mM DTPA的PBS洗脱。检查硫醇/抗体值，即根据溶液在280nm处的吸光度测定还原的抗体浓度，通过与DTNB(Aldrich，Milwaukee，WI)反应并测定412nm处的吸光度测定硫醇浓度。将还原的抗体在PBS中溶解，在冰上冷却。将DMSO中的药物接头(例如MC-val-cit(vc)-PAB-MMAE)在乙腈和水中溶解，并添加至冷却的、PBS中的还原的抗体。温育1小时后，添加过量的马来酰亚胺以淬灭反应并给任何未反应的抗体硫醇基加帽。将反应混合物通过离心超滤来浓缩，并将抗体药物偶联物通过经PBS中G25树脂的洗脱来纯化和脱盐，在无菌条件下经0.2μm滤器过滤，并冷冻贮存。
将抗体药物偶联物(使用本文所述抗CD79b抗体)在测定培养基中稀释至2x10μg/ml。偶联物是用交联接头SMCC连接的(或者，对于SPP，二硫化物接头可用于美登木素生物碱DMI毒素)(参见US 2005/0276812和US2005/0238649)。另外，对于多拉司他汀10衍生物，monomethylauristatin E(MMAE)毒素或monomethylauristatin F(MMAF)毒素，可以用MC-缬氨酸-瓜氨酸(vc)-PAB或MC来连接偶联物(参见2005年5月31日提交的美国申请No.11/141,344和2004年11月5日提交的美国申请No.10/983,340)。阴性对照包括基于(曲妥单抗)(抗HER2)的偶联物(SMCC-DM1或SPP-DM1或MC-vc-MMAE或MC-vc-MMAF)。阳性对照可包括相当于偶联物加载剂量的游离L-DM1。在稀释前将样品旋涡震荡以确保均质的混合物。
用于药物偶联的抗CD79b抗体包括本文所述嵌合MA79b抗体(chMA79b)和huMA79b L2/H3抗体变体和huMA79b.v17、huMA79b.v18、huMA79b.v28和huMA79b.v32(见实施例1)。用于偶联的其它抗体可包括本文所述任何抗体(见实施例1)。
实施例3：体内肿瘤细胞杀伤测定法
A.异种移植物
为了测试在HVR-L2和HVR-H3中有变化的MA79b嫁接的“人源化”抗体变体的IgG变体(huMA79b L2/H3)的功效，将huMA79b L2/H3变体偶联至DM1并分析偶联变体对小鼠中肿瘤的影响。
具体而言，可以在多种异种移植物模型中测验抗体使肿瘤消退的的能力，所述异种移植物模型包括RAMOS细胞、BJAB细胞(含有t(2；8)(p112；q24)(IGK-MYC)易位、突变的p53基因且埃巴二氏病毒(EBV)阴性的伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)细胞系)(Drexler，H.G.，The Leukemia-Lymphoma CellLine Facts Book，San Diego：Academic Press，2001)、Granta 519细胞(含有导致细胞周期蛋白D1(BCL1)过表达的t(11；14)(q13；q32)(BCL1-IGH)易位、含有P16INK4B和P16INK4A删除且EBV阳性的套细胞淋巴瘤细胞系)(Drexler，H.G.，The Leukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book，San Diego：AcademicPress，2001)、U698M细胞(成淋巴细胞淋巴肉瘤B细胞系)(Drexler，H.G.，TheLeukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book，San Diego：Academic Press，2001)和DoHH2细胞(含有导致Ig重链驱动的Bcl-2过表达的滤泡性淋巴瘤特征性易位t(14；18)(q32；q21)、含有P16INK4A删除、含有t(8；14)(q24；q32)(IGH-MYC)易位且EBV阴性的滤泡性淋巴瘤细胞系)(Drexler，H.G.，TheLeukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book，San Diego：Academic Press，2001)。
为了分析MA79b嫁接的“人源化”抗体变体的功效，经注射入CB17 ICRSCID小鼠的体侧给雌性CB17 ICR SCID小鼠(6-8周龄，来自Charles RiversLaboratories；Hollister，CA)皮下接种2X107个BJAB-萤光素酶细胞或Granta-519细胞，并容许异种移植物肿瘤生长至平均200mm2。第0天指肿瘤平均200mm2的日子，那天施用第一剂或唯一的一剂处理，除非下文明确说明。肿瘤体积是基于二维计算的，使用测径器来测量，并依照公式表述成mm3：V＝0.5aXb2，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。将自每个实验组收集的数据表述成均值+SE。以单剂静脉内(i.v.)50μg至210μg抗体连接的药物/m2小鼠(相当于约1-4mg/kg小鼠)用MA79b嫁接的“人源化”抗体变体或对照抗体-药物偶联物处理多组10只小鼠。在整个实验期间每周一次或两次测量肿瘤。在整个实验期间每周一次或两次测量小鼠的体重。在肿瘤体积达到3000mm3之前或在肿瘤显示出即将溃疡的征兆时，对小鼠处以安乐死。所有动物方案都得到了实验动物护理和使用委员会(IACUC)的批准。
所使用的、抗体与毒素之间的接头是硫醚交联接头SMCC(用于DM1)。别的接头可包括二硫化物接头SPP或硫醚交联接头SMCC(用于DM1)或MC或MC-缬氨酸-瓜氨酸(vc)-PAB(具有马来酰亚胺构件和对氨基苯基苄基氨甲酰基(PAB)自我牺牲构件的缬氨酸-瓜氨酸(vc)二肽接头试剂)(用于monomethylauristatin E(MMAE)或monomethylauristan F(MMAF))。所使用的毒素是DM1。别的毒素可包括MMAE或MMAF。用于此实验的CD79b抗体包括嵌合MA79b(chMA79b)抗体(如2006年8月3日提交的美国申请No.11/462,336中所记载的)以及本文中所描述的MA79b嫁接的“人源化”抗体变体(见实施例1A)。别的抗体可包括商品化抗体，包括抗CD79b抗体和由1993年7月20日保藏于ATCC的杂交瘤HB11413生成的MA79b单克隆抗体。
阴性对照包括基于抗HER2((曲妥单抗))的偶联物(SMCC-DM1)。
B.结果
1.BJAB-萤光素酶异种移植物
在表9所示药物偶联物和剂量的35天时程里，MA79b嫁接的“人源化”抗体变体L2/H3(huMA79b L2/H3变体)(重定形式成IgG)和嵌合抗CD79b抗体(chMA79b)偶联至DM1后(分别为huMA79b L2/H3-SMCC-DM1和chMA79b-SMCC-DM1)显示出与阴性对照
Figure GPA00001058503002671
(曲妥单抗)-SMCC-DM1(抗HER2-SMCC-DM1)相比抑制带BJAB-萤光素酶肿瘤的SCID小鼠中肿瘤生长。对于所有ADC和对照，在第0天以单剂(如表9所示)施用ADC。具体而言，huMA79b L2/H3-SMCC-DM1抗体(重定形式成IgG)和chMA79b-SMCC-DM1显著抑制肿瘤生长(图20)。另外，在表9中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目。
表9
施用的抗体(治疗)            PR      CR      剂量    剂量    药物
                                            药物-   抗体    比
                                            DM1     (mg/kg) (药物
                                            (μg/m2)        /抗体)
对照anti-HER2-SMCC-DM1      0/10    0/10    100     2       3.3
chMA79b-SMCC-DM1            3/10    3/10    100     2.4     2.9
chMA79b-SMCC-DM1            1/10    0/10    50      1.2     2.9
huMA79b                     2/10    0/10    100     2.9     2.4
L2/H3-SMCC-DM1
huMA79b                     0/10    0/10    50      1.4     2.4
L2/H3-SMCC-DM1
2.Granta-519异种移植物
在表10所示药物偶联物和剂量的14天时程里，MA79b嫁接的“人源化”抗体变体17、变体18、变体28和变体32(分别是huMA79b.v17、huMA79b.v18、huMA79b.v28和huMA79b.v32)(重定形式成IgG)和嵌合抗CD79b抗体(chMA79b)偶联至DM1(分别为huMA79b.v17-SMCC-DM1、huMA79b.v18-SMCC-DM1、huMA79b.v28-SMCC-DM1、huMA79b.v32-SMCC-DM1和chMA79b-SMCC-DM1)后显示出与阴性对照
Figure GPA00001058503002681
(曲妥单抗)-SMCC-DM1(抗HER2-SMCC-DM1)相比抑制带Granta-519肿瘤的SCID小鼠中肿瘤生长。对于所有ADC和对照，在第0天以单剂(如表10所示)施用ADC。具体而言，huMA79b.v28-SMCC-DM1、huMA79b.v32-SMCC-DM1、huMA79b.v17-SMCC-DM1和huMA79b.v18-SMCC-DM1抗体(重定形式成IgG)和chMA79b-SMCC-DM1显著抑制肿瘤生长(图21A)。
另外，用huMA79b.v28-SMCC-DM1、huMA79b.v32-SMCC-DM1、huMA79b.v17-SMCC-DM1、huMA79b.v18-SMCC-DM1和chMA79b-SMCC-DM1和对照(曲妥单抗)-SMCC-DM1(抗HER2-SMCC-DM1)处理不导致百分比小鼠体重的降低(图21B)。此外，在表10中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目。
表10
施用的抗体(治疗)        PR      CR      剂量       剂量     药物比
                                        药物-DM1   抗体     (药物
                                        (μg/m2)   (mg/kg)  /抗体)
对照anti-HER2-SMCC-DM1  0/10    0/10    208        4        3.4
chMA79b-SMCC-DM1        0/10    0/10    107        2        3.6
chMA79b-SMCC-DM1        1/10    0/10    213        4        3.6
huMA79b.v17-SMCC-DM1    0/10    0/10    202        4        3.4
huMA79b.v18-SMCC-DM1    4/10    0/10    196        4        3.3
huMA79b.v28-SMCC-DM1    0/10    0/10    101        2        3.4
huMA79b.v28-SMCC-DM1    2/10    2/10    202        4        3.4
huMA79b.v32-SMCC-DM1    0/10    0/10    172        4        2.9
根据MA79b嫁接的“人源化”抗体ADC显著抑制异种移植物中肿瘤进展的能力，CD79b分子可能是哺乳动物中肿瘤治疗的卓越靶物，所述肿瘤包括B细胞相关癌症，诸如淋巴瘤(即非何杰金氏淋巴瘤)、白血病(即慢性淋巴细胞性白血病)和造血细胞的其它癌症。此外，MA79b嫁接的“人源化”ADC对于降低肿瘤的体内肿瘤生长是有用的，所述肿瘤包括B细胞相关癌症，诸如淋巴瘤(即非何杰金氏淋巴瘤)、白血病(即慢性淋巴细胞性白血病)和造血细胞的其它癌症。
实施例4：CD79b抗体共定位
为了确定MA79b嫁接物的“人源化”抗体和抗体变体在内化入细胞后被投递至哪里，可以在Ramos细胞系中评估内化入B细胞系中的抗CD79b抗体的共定位研究。LAMP-1是晚期内体和溶酶体(包括MHC II类隔室(MIIC)，这是一种晚期内体/溶酶体样隔室)HLA-DM是MIIC的一种标志物)的一种标志物(Kleijmeer et al.，Journal of Cell Biology，139(3)：639-649(1997)；Hunziker et al.，Bioessays，18：379-389(1996)；Mellman et al.，Annu.Rev.Dev.Biology，12：575-625(1996))。
在存在10μg/ml亮肽素(leupeptin)(Roche)和5μM胃蛋白酶抑制剂(Roche)以抑制溶酶体降解的情况中，将Ramos细胞与1μg/ml MA79b嫁接的“人源化”抗体和抗体变体、FcR block(Miltenyi)和25μg/ml Alexa647-运铁蛋白(Molecular Probes)一起在不含碳酸盐的完全培养基(Gibco)于37℃温育3小时。然后将细胞清洗两次，用3％低聚甲醛(Electron Microscopy Sciences)于室温固定20分钟，用50mM NH4Cl(Sigma)淬灭，用0.4％皂苷/2％FBS/1％BSA透化20分钟，然后与1μg/ml Cy3抗小鼠(Jackson Immunoresearch)一起温育20分钟。然后将反应体系用小鼠IgG(Molecular Probes)封闭20分钟，接着与Image-iT FX信号增强剂(Molecular Probes)一起温育30分钟。最后将细胞与Zenon Alexa488标记的小鼠抗LAMP1(BD Pharmingen)(溶酶体和MIIC(一种溶酶体样隔室，其是MHC II类途径的一部分)二者的一种标志物)一起温育20分钟，并用3％PFA后固定。将细胞重悬在20μl皂苷缓冲液中，并容许它们粘附至聚赖氨酸(Sigma)包被的载玻片，之后用含DAPI的VectaShield(Vector Laboratories)封固盖玻片。为了MIIC或溶酶体的免疫荧光，将细胞固定，透化并增强，如上所述，然后依照制造商的指令(Molecular Probes)在存在过量小鼠IgG的情况中用Zenon标记的Alexa555-HLA-DM(BD Pharmingen)和Alexa488-Lamp1共染色。
因而，如通过免疫荧光所评估的，MA79b嫁接的“人源化”抗体或抗体变体与B细胞系MIIC或溶酶体的共定位可以指示该分子是哺乳动物中肿瘤治疗的卓越药剂，所述肿瘤包括B细胞相关癌症诸如淋巴瘤(即非何杰金氏淋巴瘤)、白血病(即慢性淋巴细胞性白血病)和造血细胞的其它癌症。
实施例5：半胱氨酸改造抗CD79b抗体的制备
半胱氨酸改造抗CD79b抗体的制备如本文中所公开的实施。
通过本文中所公开的方法诱变编码MA79b抗体的DNA(轻链，SEQ IDNO：4，图4；和重链，SEQ ID NO：5，图5)以修饰轻链和重链。还可以通过本文中所公开的方法诱变编码MA79b抗体的DNA(重链，SEQ ID NO：5；图5)以修饰重链Fc区。
通过本文中所公开的方法诱变编码huMA79b.v17抗体的DNA(重链，SEQ ID NO：304，图15)以修饰重链。还可以通过本文中所公开的方法诱变编码huMA79b.v17抗体的DNA(轻链，SEQ ID NO：303；图15；和重链，SEQID NO：304；图15)以修饰轻链或重链Fc区。
通过本文中所公开的方法诱变编码huMA79b.v18抗体的DNA(重链，SEQ ID NO：306，图16)以修饰重链。还可以通过本文中所公开的方法诱变编码huMA79b.v18抗体的DNA(轻链，SEQ ID NO：305；图16；和重链，SEQID NO：306；图16)以修饰轻链或重链Fc区。
通过本文中所公开的方法诱变编码huMA79b.v28抗体的DNA(重链，SEQ ID NO：308，图17)以修饰重链。还可以通过本文中所公开的方法诱变编码huMA79b.v28抗体的DNA(轻链，SEQ ID NO：307，图17；和重链，SEQID NO：308，图17)以修饰轻链或重链Fc区。
通过本文中所公开的方法诱变编码huMA79b.v32抗体的DNA(轻链，SEQ ID NO：310，图18；和重链，SEQ ID NO：309，图18)以修饰轻链和重链。
通过本文中所公开的方法诱变编码抗cyno CD79b抗体的DNA(轻链，SEQ ID NO：241；图45和重链，SEQ ID NO：243，图47)以修饰轻链和重链。还可以通过本文中所公开的方法诱变编码抗cyno CD79b抗体的DNA(重链，SEQ ID NO：243，图47)以修饰重链Fc区。
在半胱氨酸改造抗CD79b抗体的制备中，诱变编码轻链的DNA以半胱氨酸替代轻链中Kabat第205位(连续编号第209)处的缬氨酸，如图27(MA79bthioMAb的轻链SEQ ID NO：235)和图49(thioMAb抗cyno CD79b(ch10D10)的轻链SEQ ID NO：300)所示。诱变编码重链的DNA以半胱氨酸替代重链中EU第118位(连续编号第118位；Kabat编号第114位)处的丙氨酸，如图48(thioMAb抗cyno CD79b(ch10D10)抗体的重链SEQ ID NO：244)、图28(MA79b thioMAb的重链SEQ ID NO：236)、图24(thioMAb huMA79b.v17的重链SEQ ID NO：228)、图25(thioMAb huMA79b.v18的重链SEQ ID NO：230)和图26(thioMAb huMA79b.v28的重链SEQ ID NO：232)所示。可以诱变抗CD79b抗体的Fc区以半胱氨酸替代重链Fc区中EU第400位(连续编号第400位；Kabat编号第396位)处的丝氨酸，如表2-4所示。
A.制备半胱氨酸改造抗CD79b抗体，用于通过还原和再氧化进行的偶联
全长的、半胱氨酸改造的抗CD79b单克隆抗体(ThioMab)在CHO细胞中表达，并在蛋白A亲和层析接着大小排阻层析上纯化。将纯化的抗体在约pH8.0的500mM硼酸钠和500mM氯化钠中重建，并用约50-100倍摩尔过量的1mM TCEP(盐酸三(2-羧乙基)膦；Getz等(1999)Anal.Biochem.273：73-80；Soltec Ventures，Beverly，MA)在37℃还原大约1-2小时。将还原后的ThioMab稀释并加载到10mM乙酸钠pH 5中的HiTrap S柱上，并用含0.3M氯化钠的PBS洗脱。将洗脱的还原后ThioMab用2mM脱氢抗坏血酸(dbAA)在pH 7处理3小时，或用2mM硫酸铜(CuSO4)水溶液在室温处理过夜。环境空气氧化作用也可能是有效的。通过Sephadex G25树脂上的洗脱来更换缓冲液，并用含1mMDTPA的PBS洗脱。如下评估硫醇/Ab值，即根据溶液在280nm的吸光度测定还原抗体浓度，并通过与DTNB(Aldrich，Milwaukee，WI)的反应并测定412nm吸光度来测定硫醇浓度。
实施例6：通过半胱氨酸改造抗CD79b抗体和药物-接头中间体的偶联来制备半胱氨酸改造抗CD79b抗体-药物偶联物
在实施例5的还原和再氧化规程后，将半胱氨酸改造抗CD79b抗体在PBS(磷酸盐缓冲盐水)缓冲液中重建，并在冰上冷却。将相对于改造的半胱氨酸每个抗体大约1.5摩尔当量的auristatin药物-接头中间体(诸如MC-MMAE(马来酰亚氨基乙酰基-单甲基auristatin E)、MC-MMAF、MC-val-cit-PAB-MMAE或MC-val-cit-PAB-MMAF)(其具有硫醇反应性官能团(诸如马来酰亚胺))溶解于DMSO，在乙腈和水中稀释，并添加至PBS中冷却的、还原的、再氧化的抗体。在大约1小时后，添加过量的马来酰亚胺以淬灭反应，并给任何未反应的抗体硫醇基团加帽。通过离心超滤来浓缩反应混合物，并将半胱氨酸改造抗CD79b抗体-药物偶联物纯化，并通过经过PBS中G25树脂的洗脱来脱盐，在无菌条件下通过0.2μm滤器过滤，并冷冻用于贮存。
如下实施huMA79b.v18-HC(A118C)thioMAb-BMPEO-DM1的制备。通过双马来酰亚胺试剂BM(PEO)3(Pierce Chemical)修饰huMA79b.v18-HC(A118C)thioMAb上的游离半胱氨酸，在抗体表面上留下未反应的马来酰亚胺基团。这是如下实现的，即将BM(PEO)3溶解于50％乙醇/水混合物中至10mM浓度，并将10倍摩尔过量的BM(PEO)3添加至在磷酸盐缓冲盐水中含大约1.6mg/ml(10微摩尔)浓度的huMA79b.v18-HC(A118C)thioMAb的溶液，并容许其反应1小时。通过含150mM NaCl的30mM柠檬酸盐pH 6缓冲液中的凝胶过滤(HiTrap柱，Pharmacia)除去过量的BM(PEO)3。将溶解于二甲基乙酰胺(DMA)的大约10倍摩尔过量的DM1添加至huMA79b.v18-HC(A118C)thioMAb-BMPEO中间体。还可以采用二甲基甲酰胺(DMF)来溶解药物模块试剂。容许反应混合物反应过夜，之后凝胶过滤或透析入PBS以除去未反应的药物。使用PBS中S200柱上的凝胶过滤来除去高分子量聚集体，并提供纯化后的huMA79b.v18-HC(A118C)thioMAb-BMPEO-DM1。
通过相同的方案，生成了thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF、thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE和thio对照anti-CD22-HC(A118C)-MC-MMAF。
通过上文规程，制备并测试了下列半胱氨酸改造抗CD79b抗体-药物偶联物(TDC)：
1.通过A118C thio huMA79b.v18-HC(A118C)和MC-MMAF的偶联而获得的thio huMA79b.v18-HC(A118C)-MC-MMAF；
2.通过A118C thio huMA79b.v18-HC(A118C)和BMPEO-DM1的偶联而获得的thio huMA79b.v18-HC(A118C)-BMPEO-DM1；
3.通过A118C thio huMA79b.v18-HC(A118C)和MC-val-cit-PAB-MMAE的偶联而获得的thio huMA79b.v18-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE；
4.通过A118C thio huMA79b.v28-HC(A118C)和MC-MMAF的偶联而获得的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF；
5.通过thio huMA79b.v28-HC(A118C)和BMPEO-DM1的偶联而获得的thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1；
6.通过thio huMA79b.v28-HC(A118C)和MC-val-cit-PAB-MMAE的偶联而获得的thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-val-cit-PAB-MMAE；
7.通过A118C thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)和MC-MMAF的偶联而获得的thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-MC-MMAF；
8.通过A118C thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)和BMPEO-DM1的偶联而获得的thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-BMPEO-DM1；
9.通过A118C thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)和MC-val-cit-PAB-MMAE的偶联而获得的thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE；
10.通过thio MA79b-HC(A118C)和MC-MMAF的偶联而获得的thioMA79b-HC(A118C)-MC-MMAF；和
11.通过thio MA79b-LC(V205C)和MC-MMAF的偶联而获得的thioMA79b-LC(V205C)-MC-MMAF。
实施例7：半胱氨酸改造的ThioMab-药物偶联物对细胞表面抗原的结合亲和力的表征
通过FACS分析测定了huMA79b.v18、thio huMA79b.v28-药物偶联物和thio MA79b-药物偶联物对BJAB-萤光素酶细胞上所表达的CD79b的结合亲和力。另外，通过FACS分析测定了thio anti-cynoCD79b(ch10D10)药物偶联物对表达cynoCD79b的BJAB细胞上所表达的CD79b的结合亲和力
简言之，使100μl中大约1x106个细胞与不同量(1.0μg、0.1μg或0.01μg Ab每百万个BJAB-萤光素酶细胞或表达cynoCD79b的BJAB细胞(用于抗cynoCD79b thioMAb))的下列抗CD79b thioMAb药物偶联物或裸的(未偶联的Ab作为对照)之一接触：(1)thio MA79b-LC(V205C)-MC-MMAF或(2)thioMA79b-HC(A118C)-MC-MMAF(分别见图29A-B)；(3)thiohuMA79b.v18-HC(A118C)-MC-MMAF、(4)thiohuMA79b.v18-HC(A118C)-MC-vcPAB-MMAE或(5)thiohuMA79b.v18-HC(A118C)-BMPEO-DM1(分别见图30B-D)；(6)thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE、(7)thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1或(8)thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF(分别见图31B-31D)；或(9)thioanti-cynoCDb79(ch10D10)-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE、(10)thioanti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-BMPEO-DM1或(11)thioanti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-MC-MMAF(分别见图32B-32D)。使用PE偶联的小鼠抗人Ig作为检测二抗(BD产品目录#555787)。
使用PE偶联的小鼠抗人Ig检测结合至细胞表面的抗CD79b抗体。图29-32的图示表明抗原结合对所有测试的thioMAb-药物偶联物是近似相同的。
实施例8：抗CD79b ThioMab药物偶联物的体外细胞增殖降低测定
通过细胞增殖试验测定抗CD79b ThioMAb-药物偶联物(包括thiohuMA79b.v18-HC(A118C)-MCMMAF、thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE和thiohuMA79b.v18-HC(A118C)-BMPEO-DM1)的体外功效(图41A，BJAB-萤光素酶；图41B，Granta-519；图41C，WSU-DLCL2)。CellTiter-LuminescentCell Viability Assay为商购的(Promega Corp.，Madison，WI)基于鞘翅目(Coleoptera)荧光素酶的重组表达的同质性试验方法(homogeneous assaymethod)(US5583024；US 5674713；US5700670)。该细胞增殖试验基于对存在的ATP进行定量测定了培养物中存活细胞的数量，其中存在的ATP为代谢活性细胞的指示剂(Crouch等，J.Immunol.Metho.160：81-88(1993)；US6602677)。在96孔板中进行CellTiter-
Figure GPA00001058503002742
Assay，使得它易于进行自动化高流通量筛选(HTS)(Cree等，AntiCancer Drugs 6：398-404(1995))。同质性试验操作步骤包括将单一试剂(CellTiter-
Figure GPA00001058503002743
试剂)直接加入到在血清补充的培养基中培养的细胞中。
同质性“添加-混合-测定”方式导致细胞裂解并且产生与存在的ATP量成比例的发光信号。底物甲虫荧光素被重组荧火虫荧光素酶氧化脱羧化，而同时ATP转化成AMP并且产生光子。以相对发光单位(RLU)反映出存活细胞。通过发光计或CCD照相机成像装置记录数据。将发光输出表示为在一段时间内测定的RLU。％RLU是与“非药物偶联物”对照相比的标准化RLU百分比。或者，可以在有闪烁剂存在下在闪烁计数器中对来自发光的光子进行计数。然后可以将光单位表示为CPS(每秒计数)。
通过使用下列方案的细胞增殖试验测定thioMAb-药物偶联物的功效(改编自CellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay，Promega Corp.TechnicalBulletin TB288；Mendoza等，Cancer Res.62：5485-5488(2002))：
1.使在培养基中含有约3000个BJAB、Granta-519或WSU-DLCL2细胞的40μl细胞培养物等份沉积在96孔不透明壁的平板的各孔中。
2.将TDC(ThioMab药物偶联物)(10μl)添加至一式四份的实验孔至终浓度10000、3333、1111、370、123、41、13.7、4.6或1.5ng/mL，“无药物偶联物”对照孔只接受培养基，并温育3天。
3.使平板平衡至室温约30分钟。
4.添加CellTiter-Glo试剂(50μl)。
5.将内含物在定轨振荡器上混合2分钟以便诱导细胞裂解。
6.将平板于室温温育10分钟以便稳定发光信号。
7.记录发光并作为％RLU(相对发光单位)在图中报告。来自与不含药物偶联物的培养基一起温育的细胞的数据于0.51ng/ml绘图。
培养基：BJAB、Granta-519和WSU-DLCL2细胞在RPMI1640/10％FBS/2mM谷氨酰胺中生长。
实施例9：抗CD79b ThioMab药物偶联物抑制体内肿瘤生长的测定
A.Granta-519(人套细胞淋巴瘤)
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的药物偶联物和剂量，研究了thioMAb药物偶联物在CB17SCID小鼠中的Granta-519异种移植物(人套细胞淋巴瘤)中的功效。药物偶联物和剂量(所有ADC和对照都在第0天施用)显示于下文表11。
对照Ab是hu-抗HER2-MC-MMAF或MA79b-MC-MMAF。对照HC(A118C)thioMAb是thio hu-抗HER2-HC(A118C)-MMAF thioMAb。结果显示于表11和图33。
图33A的图描绘了以表11所示剂量用重链A118C或轻链V205C抗CD79bTDC处理的CB17 SCID小鼠中Granta-519异种移植物中肿瘤体积均值随时间的变化。具体而言，thio chMA79b-HC(A118C)-MC-MMAF和thiochMA79b-LC(V205C)-MC-MMAF的施用显示出与阴性对照(抗hu-HER2-MC-MMAF和thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-MC-MMAF)相比抑制肿瘤生长。其它对照包括MA79b-MC-MMAF。
另外，在同一研究中，在每个剂量组中测定了前14天的百分比体重变化。结果(图33B)表明这些thioMAb药物偶联物的施用在这段时间里不导致百分比体重的显著降低或体重减轻。
此外，在表11中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表11
体内肿瘤体积缩小，
Thio chMA79b-HC(A118C)或thio chMA79b-LC(V205C)MMAF偶联物施用CB17SCID小鼠中的Granta-519异种移植物中
施用的抗体                              PR     CR     剂量       剂量       DAR
                                                      MMAF       抗体       (药物/
                                                      (μg/m2)   (mg/kg)    抗体)
对照hu-anti-HER2-MC-MMAF                0/8    0/8    413        6.8        4.0
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF  0/9    0/9    191        6.8        1.85
对照chMA79b-MC-MMAF                     1/8    0/8    100        2.3        3.0
对照chMA79b-MC-MMAF                     8/9    1/9    300        6.8        3.0
Thio chMA79b-HC(A118C)-MC-MMAF          0/8    0/8    63         2.3        1.9
Thio chMA79b-HC(A118C)-MC-MMAF          4/9    0/9    190        6.8        1.9
Thio chMA79b-LC(V205C)-MC-MMAF          0/8    0/8    60         2.3        1.8
Thio chMA79b-LC(V205C)-MC-MMAF          5/9    4/9    180        6.8        1.8
B.BJAB-萤光素酶(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))异种移植物
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的药物偶联物和剂量，在CB17SCID小鼠中的BJAB-萤光素酶异种移植物(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))中测试了别的药物偶联物的功效。药物偶联物和剂量(所有ADC和对照都在第0天施用)显示于下文表12。
对照抗体是huMA79b.v28(偶联至SMCC-DM1)。对照HC(A118C)thioMAb是thio hu-抗HER2-HC(A118C)抗体thioMAb(偶联至BMPEO-DM1、MC-MMAF或MCvcPAB-MMAE)、thio huMA79b.v28-HC(A118C)thioMAb或thio hu-抗CD22(10F4v3)-HC(A118C)thioMAb(偶联至MC-MMAF)。结果显示于下文表12和图34。
图34A的图描绘了如表12所示用huMA79b.v28-HC(A118C)thioMAb药物偶联物处理的CB17 SCID小鼠中BJAB-萤光素酶异种移植物肿瘤体积均值随时间的变化。具体而言，thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio-huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF和thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE thioMAb药物偶联物的施用显示出与阴性对照抗体药物偶联物(thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-MC-MMAF和thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)相比抑制肿瘤生长。其它对照是thio-huMA79b.v28-HC(A118C)、huMA79b.v28-SMCC-DM1和thio-hu-抗CD22(10F4v3)-HC(A118C)-MC-MMAF。
另外，在同一研究中，在每个剂量组中测定了前7天的百分比体重变化。结果(图34B)表明这些thioMAb药物偶联物的施用在这段时间里不引起百分比体重的显著降低或体重减轻。
此外，在表12中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表12
体内肿瘤体积缩小，
Thio HuMA79b.v28-HC(A118C)MMAE、MMAF和DM1偶联物施用在CB17SCID小鼠中的BJAB-萤光素酶异种移植物中
施用的抗体            PR  CR    剂量      剂量    DAR
                                MMAF、    抗体    (药物
                                MMAE      (mg/kg)  /抗体)
                                或DM1
                                                              (μg/m2)
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1       0/10    0/10    57        2    1.86
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF         1/10    0/10    58        2    1.9
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE    0/10    0/10    46        2    1.55
对照huMA79b.v28-SMCC-DM1                       2/10    3/10    101       2    3.4
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1           3/10    2/10    55        2    1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF             0/10    10/10   57        2    1.95
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE        0/10    10/10   54        2    1.87
Thio对照huMA79b.v28-HC(A118C)                  0/10    0/10    NA        2    NA
Thio对照hu-anti-CD22(10F4v3)-HC(A118C)-MC-MMAF 1/10    4/10    59        2    1.96
C.WSU-DLCL2(弥漫性大细胞淋巴瘤)异种移植物
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的药物偶联物和剂量，研究了thioMAb药物偶联物在CB17SCID小鼠中的滤泡性淋巴瘤WSU-DLCL2异种移植物(弥漫性大细胞淋巴瘤)中的功效。药物偶联物和剂量显示于下文表13。
对照抗体是huMA79b.v28(偶联至SMCC-DM1)。对照HC(A118C)thioMAb是thio hu-抗HER2-HC(A118C)抗体thioMAb(偶联至BMPEO-DM1、MC-MMAF或MCvcPAB-MMAE)、thio huMA79b.v28-HC(A118C)thioMAb或thio anti-CD2210F4v3-HC(A118C)thioMAb(偶联至MC-MMAF)。结果显示于下文表13。
图35A的图描绘了以表13所示剂量用重链A118C抗CD79b TDC处理的CB17SCID小鼠中WSU-DLCL2(弥漫性大细胞淋巴瘤)异种移植物肿瘤体积均值随时间的变化。具体而言，thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF和thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE的施用显示出与阴性对照(thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-MC-MMAF、thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE、thio-huMA79b.v28-HC(A118C))相比抑制肿瘤生长。其它对照包括thio-huMA79b.v28-HC(A118C)、huMA79b.v28-SMCC-DM1和thio hu-抗CD22(10F4v3)-HC(A118C)-MC-MMAF。
thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE TDC表现为此研究中最有效的测试剂。
另外，在同一研究中，在每个剂量组中测定了前7天的百分比体重变化。结果(图35B)表明这些thioMAb药物偶联物的施用在这段时间里不引起百分比体重的显著降低或体重减轻。
此外，在表13中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表13
体内肿瘤体积缩小，
Thio HuMA79b.v28-HC(A118C)MMAE、MMAF和DM1偶联物施用CB17SCID小鼠中的WSU-DLCL2异种移植物中
施用的抗体                                  PR      CR     剂量  剂量   DAR
                                                           MMAF、抗体   (药物
                                                           MMAE  (mg/kg)/抗体)
                                                           或DM1
                                                           (μg/m2)
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1    0/10    0/10    114    4    1.86
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF      0/10    0/10    115    4    1.9
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE 0/10    0/10    92     4    1.55
对照huMA79b.v28-SMCC-DM1                    1/10    0/10    202    4    3.4
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1        0/10    0/10    110    4    1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF          3/10    1/10    115    4    1.95
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE     4/10    3/10    108    4    1.87
Thio对照huMA79b.v28-HC(A118C)               0/10    0/10    NA     4    NA
Thio对照10F4v3-HC(A118C)-MC-MMAF            1/10    0/10    118    4    1.96
Thio对照huMA79b.v28-HC(A118C)               0/10    0/10    NA     4    NA
D.DoHH2(滤泡性淋巴瘤)异种移植物
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的药物偶联物和剂量，研究了thioMAb药物偶联物缩小CB17SCID小鼠中DOHH2异种移植物模型中B细胞肿瘤体积的能力。药物偶联物和剂量(所有ADC和对照都在第0天施用)显示于下文表14。
对照Ab是huMA79b.v28(偶联至SMCC-DM1)。对照HC(A118C)thioMAb是thio hu-抗HER2-HC(A118C)thioMAb(偶联至BMPEO-DM1、MC-MMAF或MCvcPAB-MMAE)、thio huMA79b.v28-HC(A118C)thioMab和thio hu-抗CD22-HC(A118C)(偶联至MC-MMAF)。结果显示于表14和图36。
图36A的图描绘了以表14所示剂量用重链A118C TDC处理的CB17SCID小鼠中DOHH2细胞异种移植物肿瘤体积均值随时间的变化。具体而言，thiohuMA79b.v28-HC-(A118C)-BMPEO-DM1、thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF和thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE thioMAb药物偶联物以表14所示剂量的施用显示出与阴性对照药物偶联物(Thio对照hu-抗HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、Thio对照hu-抗HER2-HC(A118C)-MC-MMAF、Thio对照hu-抗HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)相比抑制肿瘤生长。其它对照包括Thio对照huMA79b.v28-HC(A118C)、Thio对照抗CD22-HC(A118C)-MC-MMAF和Thio对照huMA79b.v28-HC(A118C)和对照huMA79b.v28-SMCC-DM1。
此外，在表14中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表14
体内肿瘤体积缩小，
Thio HuMA79b.v28-HC(A118C)DM1、MMAF和MMAE偶联物施用CB17SCID小鼠中的DOHH2异种移植物中
施用的抗体            PR CR  剂量    剂量    DAR
                             MMAF    抗体    (药物
                             或DM1   (mg/kg) /抗体)
                                                            (μg/m2)
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1      0/9    0/9    114    4    1.86
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF        0/9    0/9    115    4    1.9
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE   0/9    0/9    92     4    1.55
对照huMA79b.v28-SMCC-DM1                      1/8    1/8    202    4    3.4
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1          1/9    1/9    110    4    1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF            5/9    4/9    115    4    1.95
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE       0/9    9/9    108    4    1.87
Thio对照huMA79b.v28-HC(A118C)                 1/9    0/9    NA     4    NA
Thio对照anti-CD22-HC(A118C)-MC-MMAF           0/9    0/9    118    4    1.96
E.BJAB-萤光素酶(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))异种移植物
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的抗体药物偶联物和剂量，研究了药物偶联物在CB17SCID小鼠中BJAB-萤光素酶(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))异种移植物中的功效。药物偶联物和剂量(所有ADC和对照都在第0天施用)显示于下文表15。
对照抗体是媒介(只是(ADC的)缓冲液)。对照HC(A118C)thioMAb是thio hu-anti-HER2-HC(A118C)抗体thioMAb(偶联至BMPEO-DM1、MCvcPAB-MMAE或MC-MMAF)、thio huMA79b.v28-HC(A118C)thioMAb或thio anti-CD2210F4v3-HC(A118C)thioMAb(偶联至MC-MMAF)。结果显示于下文表15。
图37A是描绘了以表15所示剂量用重链A118C抗CD79b TDC处理的CB17SCID小鼠中BJAB-萤光素酶异种移植物肿瘤体积均值随时间的变化的图。具体而言，thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE和thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF的施用显示出与阴性对照相比(thio-抗HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1thio-抗HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE、thio-抗HER2-HC(A118C)-MC-MMAF)相比抑制肿瘤生长。其它对照包括thio huMA79b.v28-HC(A118C)和thio-10F4v3-HC(A118C)-MC-MMAF。
此外，在表15中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表15
体内肿瘤体积缩小，
Thio HuMA79b.v28-HC(A118C)MMAE、MMAF和DM1偶联物施用CB17SCID小鼠中的BJAB-萤光素酶异种移植物中
施用的抗体                                  PR      CR      剂量      剂量     DAR
                                                            MMAF、    抗体     (药物
                                                            MMAE      (mg/kg)  /抗体)
                                                            或DM1
                                                            (μg/m2)
对照媒介                                    0/10    0/10    NA        NA       NA
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1    0/10    1/10    57        2        1.86
Thio对照                                    0/10    0/10    23        1        1.55
hu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF      0/10    0/10    29        1        1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1        2/10    0/10    27        1        1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1        4/10    0/10    55        2        1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE     4/10    1/10    27        1        1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF          3/8     1/8     28        1        1.9
Thio对照huMA79b.v28-HC(A118C)               0/10    0/10    NA        1        NA
Thio对照10F4v3-HC(A118C)-MC-MMAF            0/10    1/10    30        1        1.96
F.Granta-519(人套细胞淋巴瘤)异种移植物
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的药物偶联物和剂量，研究了thioMAb药物偶联物在CB17SCID小鼠中Granta-519异种移植物(人套细胞淋巴瘤)中的功效。药物偶联物和剂量(所有ADC和对照都在第0天施用)显示于下文表16。
对照HC(A118C)thioMAb是thio hu-抗HER2-HC(A118C)thioMAb(偶联至BMPEO-DM1或MC-MMAF)。结果显示于表16和图38。
图38A的图描绘了以表16所示剂量用重链A118C抗CD79b TDC处理的CB17SCID小鼠中Granta 519异种移植物肿瘤体积均值随时间的变化。具体而言，thio huMA79b.v28-HC-(A118C)-BMPEO-DM1和thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF thioMAb药物偶联物以表16所示剂量的施用显示出与对照药物偶联物抑制肿瘤生长。
另外，在同一研究中，在每个剂量组中测定了前14天的百分比体重变化。结果(图38B)表明这些thioMAb药物偶联物的施用在这段时间里不导致百分比体重的降低或不引起体重减轻。
在表16中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表16
体内肿瘤体积缩小，
Thio HuMA79b.v28-HC(A118C)DM1和MMAF偶联物施用CB17SCID小鼠中的Granta-519异种移植物中
施用的抗体                                PR     CR     剂量       剂量     DAR
                                                        MMAF       抗体     (药物
                                                        或DM1      (mg/kg)  /抗体)
                                                        (μg/m2)
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1  0/8    0/8    342        12       1.86
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF    0/8    0/8    346        12       1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1      0/6    0/6    55         2        1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1      0/8    0/8    110        4        1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1      4/8    4/8    219        8        1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1      3/8    5/8    329        12       1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF        1/8    1/8    57         2        1.95
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF        2/8    1/8    115        4        1.95
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF        6/8    2/8    229        8        1.95
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF     4/8    4/8    344    12    1.95
G.WSU-DLCL2(弥漫性大细胞淋巴瘤)异种移植物
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的药物偶联物和剂量，研究了thioMAb药物偶联物在CB17SCID小鼠中WSU-DLCL2异种移植物(弥漫性大细胞淋巴瘤)中的功效。药物偶联物和剂量(所有ADC和对照都在第0天施用)显示于下文表17。
对照抗体是媒介(只是(ADC的)缓冲液)。对照thio MAb是thio hu-抗HER2-HC(A118C)抗体thioMAb(偶联至BMPEO-DM1、MCvcPAB-MMAE或MC-MMAF)。结果显示于表17和图39。
图39是的图描绘了以表13所示剂量用重链A118C抗CD79b TDC处理的CB17SCID小鼠中WSU-DLCL2异种移植物肿瘤体积均值随时间的变化。具体而言，thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF和thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(以抗体剂量0.5、1.0mg/kg、2.0mg/kg和4.0mg/kg)的施用显示出与阴性对照相比(thio-hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio-hu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE、thio-hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF和A-媒介)相比抑制肿瘤生长。
此外，在表17中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表17
体内肿瘤体积缩小，
Thio HuMA79b.v28-HC(A118C)MMAE、MMAF和DM1偶联物施用CB17SCID小鼠中的WSU-DLCL2异种移植物中
施用的抗体     PR   CR  剂量    剂量    DAR
                        MMAF、  抗体    (药物
                        MMAE    (mg/kg) /抗
                                                          或DM1           体)
                                                          (μg/m2)
对照媒介                                    0/9    0/9    NA     NA       NA
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1    0/9    0/9    114    4        1.86
Thio对照                                    0/9    0/9    92     4        1.55
hu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF      0/9    0/9    115    4        1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF          5/9    2/9    112    4        1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1        4/9    0/9    110    4        1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE     1/9    0/9    14     0.5      1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE     0/9    0/9    27     1.0      1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE     2/9    1/9    55     2.0      1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE     1/9    7/9    110    4.0      1.9
H.Granta-519(人套细胞淋巴瘤)异种移植物
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的药物偶联物和剂量，研究了thioMAb药物偶联物在CB17SCID小鼠中Granta-519异种移植物(人套细胞淋巴瘤)中的功效。药物偶联物和剂量(所有ADC和对照都在第0天施用)显示于下文表18。
对照thio MAb是thio hu-抗HER2-HC(A118C)(偶联至BMPEO-DM1)和thio hu-抗HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE抗体thioMAb。结果显示于下文表18。
图40A的图描绘了以表18所示剂量用重链A118C抗CD79b TDC处理的CB17SCID小鼠中Granta-519异种移植物肿瘤体积均值随时间的变化。具体而言，thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1和thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE(以抗体剂量1.0mg/kg、2.0mg/kg和4.0mg/kg)的施用显示出与阴性对照(thio-抗HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1和thio-抗HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)相比抑制肿瘤生长。
此外，在表18中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表18
体内肿瘤体积缩小，
Thio HuMA79b.v28-HC(A118C)DM1和MMAE偶联物施用CB17SCID小鼠中的Granta-519异种移植物中
施用的抗体                               PR      CR     剂量       剂量       DAR
                                                        MMAF、     抗体       (药物
                                                        MMAE       (mg/kg)    /抗
                                                        或DM1体)
                                                        (μg/m2)
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1 0/10    0/10    114       4          1.86
Thio对照                                 2/10    1/10    92        4          1.55
hu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1     3/10    0/10    110       4          1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE  0/10    1/10    13        0.5        1.87
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE  1/10    0/10    27        1.0        1.87
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE  1/10    7/10    54        2.0        1.87
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE  0/10    10/10   108       4.0        1.87
I.BJAB-cynoCD79b异种移植物
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的药物偶联物和剂量，研究了thioMAb药物偶联物在CB17SCID中表达cynoCD79b的BJAB(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’slymphoma))细胞(BJAB-cynoCD79b)异种移植物中的功效。药物偶联物和剂量(所有ADC和对照都在第0天施用)显示于下文表18。
对照Ab是媒介(只是缓冲液)。对照thio MAb是thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-MC-MMAF和thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE抗体thioMAb。结果显示于表19和图50。
图50的图描绘了以表19所示剂量用重链A118C抗CD79b TDC处理的CB17SCID小鼠中BJAB-cynoCD79b异种移植物中随时间对肿瘤生长的抑制。具体而言，thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE和thiohuMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF以及thio-anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio-anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE和thio-anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-MC-MMAF的施用显示出与阴性对照(thio-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE和thio-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF和A-媒介)相比抑制肿瘤生长。
此外，在表19中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表19
体内肿瘤体积缩小，
Thio anti-cyno CD79b(ch10D10)-HC(A118C)DM1、MMAF或MMAE或ThioHuMA79b.v28DM1、MMAF或MMAE偶联物施用CB17SCID小鼠中的BJAB-cynoCD79b异种移植物中
施用的抗体                                     PR     CR    剂量      剂量      DAR
                                                            MMAF、    抗体      (药物
                                                            MMAE      (mg/kg)   /抗体)
                                                            或DM1
                                                            (μg/m2)
对照媒介                                       0/9    0/9    NA        NA       NA
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1       0/9    0/9    57        2        1.86
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE    0/9    0/9    23        1        1.55
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF         0/9    0/9    29        1        1.9
Thio                                           3/8    1/8    53        2        1.8
anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-BMPEO-DM1
Thio                                           1/9    2/9    27        1        1.86
anti-cynoCD79b(cn10D10)-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE
Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-MC-MMAF  0/9    1/9    28    1    1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1            3/9    0/9    55    2    1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE         2/9    2/9    27    1    1.9
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF              7/9    1/9    28    1    1.9
J.BJAB-cynoCD79b异种移植物
在相似的研究中，使用与实施例3(见上文)所公开的相同的异种移植物研究方案，改变所施用的药物偶联物和剂量，研究了thioMAb药物偶联物在CB17SCID小鼠中表达cynoCD79b的BJAB(伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’slymphoma))(BJAB cynoCD79b)异种移植物中的功效。药物偶联物和剂量(所有ADC和对照都在第0天施用)显示于下文表19。
对照thio MAb是thio-hu-抗HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1、thio-huMA79b.v28-HC(A118C)和thio-抗cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)抗体thioMAb。结果显示于表20和图51。
图51是的图描绘了以表20所示剂量用重链A118C抗CD79b TDC处理的CB17SCID小鼠中BJAB-cynoCD79b异种移植物中随时间对肿瘤生长的抑制。具体而言，thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1以及thio-抗cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-BMPEO-DM1的施用显示出与阴性对照(thio-抗HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1)相比抑制肿瘤生长。其它对照包括thio-hu-MA79b.v28-HC(A118C)和thio-抗cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)。
结果显示于下文表20。在表20中显示了所测试的小鼠总数中显示出PR＝部分消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至低于第0天测得的肿瘤体积的50％)或CR＝完全消退(其中施药后任何时间的肿瘤体积下降至0mm3)的数目，而NA＝不适用。(DAR＝药物对抗体的比率)
表20
体内肿瘤体积缩小，
Thio anti-cyno CD79b(ch10D10)-HC(A118C)DM1或ThioHuMA79b.v28-HC(A118C)DM1偶联物施用CB17SCID小鼠中的BJAB-cynoCD79b异种移植物中
施用的抗体                                          PR      CR      剂量    剂量    DAR
                                                                    MMAF、  抗体    (药物
                                                                    MMAE    (mg/kg) /抗体)
                                                                    或DM1
                                                                    (μg/m2)
Thio对照hu-anti-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1            0/10    0/10    57       2      1.86
Thio对照huMA79b.v28-HC(A118C)                       0/10    0/10    NA       2      NA
Thio对照anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)           0/10    0/10    NA       2      NA
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1                1/10    0/10    27       1      1.85
Thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1                0/10    2/10    55       2      1.85
Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-BMPEO-DM1    0/10    0/10    27       1      1.8
Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)-BMPEO-DM1    0/10    1/10    53       2      1.8
认为前述书面说明足以使本领域技术人员能够实践本发明。本发明并不限于所保藏构建体的范围，因为所保藏实施方案意图作为本发明某些方面的单一例示，而且功能上相当的任何构建物都在本发明的范围内。本文中的材料保藏并非承认本文中所包含的书面说明不足以能够实践本发明的任何方面，包括其最佳模式，也不能解释为将权利要求的范围限制于它所描述的具体例示。实际上，根据上面的描述，除了本文所显示和描述的，本发明的多种修饰对于本领域技术人员是显而易见的，而且在所附权利要求的范围内。
序列表
<110>健泰科生物技术公司(Genentech，Inc.)
Chen，Yvonne
Dennis，Mark
Dornan，David
Elkins，Kristi
Junutula，Jagath Reddy
Polson，Andrew
Zheng，Bing
 
<120>抗CD79B抗体和免疫偶联物及使用方法
 
<130>P5111R1 WO
 
<150>US 60/950,052
<151>2007-07-16
 
<150>US 61/025,137
<151>2008-01-31
 
<150>US 61/032,790
<151>2008-02-29
 
<150>US 61/054,709
<151>2008-05-20
 
<160>310
 
<210>1
<211>1270
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>1
caggggacag gctgcagccg gtgcagttac acgttttcct ccaaggagcc  50
tcggacgttg tcacgggttt ggggtcgggg acagagcagt gaccatggcc 100
aggctggcgt tgtctcctgt gcccagccac tggatggtgg cgttgctgct 150
gctgctctca gctgagccag taccagcagc cagatcggag gaccggtacc 200
ggaatcccaa aggtagtgct tgttcgcgga tctggcagag cccacgtttc 250
atagccagga aacggggctt cacggtgaaa atgcactgct acatgaacag 300
cgcctccggc aatgtgagct ggctctggaa gcaggagatg gacgagaatc 350
cccagcagct gaagctggaa aagggccgca tggaagagtc ccagaacgaa 400
tctctcgcca ccctcaccat ccaaggcatc cggtttgagg acaatggcat 450
ctacttctgt cagcagaagt gcaacaacac ctcggaggtc taccagggct 500
gcggcacaga gctgcgagtc atgggattca gcaccttggc acagctgaag 550
cagaggaaca cgctgaagga tggtatcatc atgatccaga cgctgctgat 600
catcctcttc atcatcgtgc ctatcttcct gctgctggac aaggatgaca 650
gcaaggctgg catggaggaa gatcacacct acgagggcct ggacattgac 700
cagacagcca cctatgagga catagtgacg ctgcggacag gggaagtgaa 750
gtggtctgta ggtgagcacc caggccagga gtgagagcca ggtcgcccca 800
tgacctgggt gcaggctccc tggcctcagt gactgcttcg gagctgcctg 850
gctcatggcc caaccccttt cctggacccc ccagctggcc tctgaagctg 900
gcccaccaga gctgccattt gtctccagcc cctggtcccc agctcttgcc  950
aaagggcctg gagtagaagg acaacagggc agcaacttgg agggagttct 1000
ctggggatgg acgggaccca gccttctggg ggtgctatga ggtgatccgt 1050
ccccacacat gggatggggg aggcagagac tggtccagag cccgcaaatg 1100
gactcggagc cgagggcctc ccagcagagc ttgggaaggg ccatggaccc 1150
aactgggccc cagaagagcc acaggaacat cattcctctc ccgcaaccac 1200
tcccacccca gggaggccct ggcctccagt gccttccccc gtggaataaa 1250
cggtgtgtcc tgagaaacca 1270
 
<210>2
<211>229
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>2
Met Ala Arg Leu Ala Leu Ser Pro Val Pro Ser His Trp Met Val
  1               5                  10                  15
Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ser Ala Glu Pro Val Pro Ala Ala Arg
                 20                  25                  30
Ser Glu Asp Arg Tyr Arg Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser Arg
                 35                  40                  45
Ile Trp Gln Ser Pro Arg Phe Ile Ala Arg Lys Arg Gly Phe Thr
                 50                  55                  60
Val Lys Met His Cys Tyr Met Asn Ser Ala Ser Gly Asn Val Ser
                 65                  70                  75
Trp Leu Trp Lys Gln Glu Met Asp Glu Asn Pro Gln Gln Leu Lys
                 80                  85                  90
Leu Glu Lys Gly Arg Met Glu Glu Ser Gln Asn Glu Ser Leu Ala
                 95                 100                 105
Thr Leu Thr Ile Gln Gly Ile Arg Phe Glu Asp Asn Gly Ile Tyr
                110                 115                 120
Phe Cys Gln Gln Lys Cys Asn Asn Thr Ser Glu Val Tyr Gln Gly
                125                 130                 135
Cys Gly Thr Glu Leu Arg Val Met Gly Phe Ser Thr Leu Ala Gln
                140                 145                 150
Leu Lys Gln Arg Asn Thr Leu Lys Asp Gly Ile Ile Met Ile Gln
                155                 160                 165
Thr Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ile Ile Val Pro Ile Phe Leu Leu
                170                 175                 180
Leu Asp Lys Asp Asp Ser Lys Ala Gly Met Glu Glu Asp His Thr
                185                 190                 195
Tyr Glu Gly Leu Asp Ile Asp Gln Thr Ala Thr Tyr Glu Asp Ile
                200                 205                 210
Val Thr Leu Arg Thr Gly Glu Val Lys Trp Ser Val Gly Glu His
                215                 220                 225
Pro Gly Gln Glu
 
<210>3
<211>929
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合抗体的轻链(chMA79b)
 
<400>3
cactcccagc tccaactgca cctcggttct atcgattgaa ttccaccatg  50
ggatggtcat gtatcatcct ttttctagta gcaactgcaa ctggagtaca 100
ttcagatatc gtgctgaccc aatctccagc ttctttggct gtgtctctgg 150
ggcagagggc caccatctcc tgcaaggcca gccaaagtgt tgattatgat 200
ggtgatagtt ttttgaactg gtaccaacag aaaccaggac agccacccaa 250
actcttcatc tatgctgcat ccaatctaga atctgggatc ccagccaggt 300
ttagtggcag tgggtctggg acagacttca ccctcaacat ccatcctgtg 350
gaggaggagg atgctgcaac ctattactgt cagcaaagta atgaggatcc 400
gctcacgttc ggggcaggca ccgagctgga actcaaacgg accgtggctg 450
caccatctgt cttcatcttc ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga 500
actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac ttctatccca gagaggccaa 550
agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac tcccaggaga 600
gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 650
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga 700
agtcacccat cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg 750
gagagtgtta agcttggccg ccatggccca acttgtttat tgcagcttat 800
aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt 850
tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt 900
atcatgtctg gatcgggaat taattcggc 929
 
<210>4
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合抗体的轻链(chMA79b)
 
<400>4
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu
  1               5                  10                  15
Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Gln Pro Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly
                 95                 100                 105
Thr Glu Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr Hi s Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>5
<211>1469
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合抗体的重链(chMA79b)
 
<400>5
tcggttctat cgattgaatt ccaccatggg atggtcatgt atcatccttt  50
ttctagtagc aactgcaact ggagtacatt cagaagttca gctgcagcag 100
tctggggctg aactgatgaa gcctggggcc tcagtgaaga tatcctgcaa 150
ggctactggc tacacattca gtagttactg gatagagtgg gtaaagcaga 200
ggcctggaca tggccttgag tggattggag agattttacc tggaggtggt 250
gatactaact acaatgagat tttcaagggc aaggccacat tcactgcaga 300
tacatcctcc aacacagcct acatgcaact cagcagcctg acatctgagg 350
actctgccgt ctattactgt acaagacgag taccggttta ctttgactac 400
tggggccaag gaacctcagt caccgtctcc tcagcctcca ccaagggccc 450
atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag 500
cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 550
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt 600
cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg actgtgccct 650
ctagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 700
agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag cccaaatctt gtgacaaaac 750
tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag 800
tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 850
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt 900
caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa  950
agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 1000
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt 1050
ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca 1100
aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggaa 1150
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta 1200
tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca 1250
actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1300
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt 1350
ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga 1400
gcctctccct gtctccgggt aaatgagtgc gacggcccta gagtcgacct 1450
gcagaagctt  ggccgccat 1469
 
<210>6
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合抗体的重链(chMA79b)
 
<400>6
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly
  1               5                  10                  15
Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
                 80                  85                  90
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445
 
<210>7
<211>231
<212>PRT
<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)
 
<400>7
Met Ala Arg Leu Ala Leu Se r Pro Val Ser Ser His Trp Leu Val
  1               5                  10                  15
Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ser Ala Ala Glu Pro Val Pro Ala Ala
                 20                  25                  30
Lys Ser Glu Asp Leu Tyr Pro Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser
                 35                  40                  45
Arg Ile Trp Gln Ser Pro Arg Phe Ile Ala Arg Lys Arg Gly Phe
                 50                  55                  60
Thr Val Lys Met His Cys Tyr Val Thr Asn Ser Thr Phe Ser Ile
                 65                  70                  75
Val Ser Trp Leu Arg Lys Arg Glu Thr Asp Lys Glu Pro Gln Gln
                 80                  85                  90
Val Asn Leu Glu Gln Gly His Met His Gln Thr Gln Asn Ser Ser
                 95                 100                 105
Val Thr Thr Leu Ile Ile Gln Asp Ile Arg Phe Glu Asp Asn Gly
                110                 115                 120
Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Glu Cys Ser Lys Thr Ser Glu Val Tyr
                125                 130                 135
Arg Gly Cys Gly Thr Glu Leu Arg Val Met Gly Phe Ser Thr Leu
                140                 145                 150
Ala Gln Leu Lys Gln Arg Asn Thr Leu Lys Asp Gly Ile Ile Met
                155                 160                 165
Ile Gln Thr Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ile Ile Val Pro Ile Phe
                170                 175                 180
Leu Leu Leu Asp Lys Asp Asp Ser Lys Ala Gly Met Glu Ala Asp
                185                 190                 195
His Thr Tyr Glu Gly Leu Asp Ile Asp Gln Thr Ala Thr Tyr Glu
                200                 205                 210
Asp Ile Val Thr Leu Arg Thr Gly Glu Val Lys Trp Ser Val Gly
                215                 220                 225
Glu His Pro Gly Gln Glu
                230
 
<210>8
<211>228
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus musculus)
 
<400>8
Met Ala Thr Leu Val Leu Ser Ser Met Pro Cys His Trp Leu Leu
  1               5                  10                  15
Phe Leu Leu Leu Leu Phe Ser Gly Glu Pro Val Pro Ala Met Thr
                 20                  25                  30
Ser Ser Asp Leu Pro Leu Asn Phe Gln Gly Ser Pro Cys Ser Gln
                 35                  40                  45
Ile Trp Gln His Pro Arg Phe Ala Ala Lys Lys Arg Ser Ser Met
                 50                  55                  60
Val Lys Phe His Cys Tyr Thr Asn His Ser Gly Ala Leu Thr Trp
                 65                  70                  75
Phe Arg Lys Arg Gly Ser Gln Gln Pro Gln Glu Leu Val Ser Glu
                 80                  85                  90
Glu Gly Arg Ile Val Gln Thr Gln Asn Gly Ser Val Tyr Thr Leu
                 95                 100                 105
Thr Ile Gln Asn Ile Gln Tyr Glu Asp Asn Gly Ile Tyr Phe Cys
                110                 115                 120
Lys Gln Lys Cys Asp Ser Ala Asn His Asn Val Thr Asp Ser Cys
                125                 130                 135
Gly Thr Glu Leu Leu Val Leu Gly Phe Ser Thr Leu Asp Gln Leu
                140                 145                 150
Lys Arg Arg Asn Thr Leu Lys Asp Gly Ile Ile Leu Ile Gln Thr
                155                 160                 165
Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ile Ile Val Pro Ile Phe Leu Leu Leu
                170                 175                 180
Asp Lys Asp Asp Gly Lys Ala Gly Met Glu Glu Asp His Thr Tyr
                185                 190                 195
Glu Gly Leu Asn Ile Asp Gln Thr Ala Thr Tyr Glu Asp Ile Val
                200                 205                 210
Thr Leu Arg Thr Gly Glu Val Lys Trp Ser Val Gly Glu His Pro
                215                 220                 225
Gly Gln Glu
 
<210>9
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>9
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
                 20                  25                  30
A sn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
                 35                  40                  45
Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
                 50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
                 65                  70                  75
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
                 80                  85                  90
Tyr Asn Ser Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu
                 95                 100                 105
Ile Lys Arg
 
<210>10
<211>111
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合抗体的轻链可变域(chMA79b)
 
<400>10
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu
  1               5                  10                  15
Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Lys Pro Gly Gln
                 35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly
                 50                  55                  60
Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
                 65                  70                  75
Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr
                 80                  85                  90
Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr
                 95                 100                 105
Glu Leu Glu Leu Lys Arg
                110
 
<210>11
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>源化抗体嫁接物的轻链可变域(huMA79b嫁接物)
 
<400>11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Th r Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                110
 
<210>12
<211>11
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>12
Ala Arg Ser Glu Asp Arg Tyr Arg Asn Pro Lys
                  5                  10
 
<210>13
<211>113
<212>PRT
<213>(Homo sapiens)
 
<400>13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Val Ser Val Ile Ser Gly Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr
                 50                  55                  60
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
                 95                 100                 105
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                110
 
<210>14
<211>117
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合抗体的重链可变域(chMA79b)
 
<400>14
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly
  1               5                  10                  15
Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
                 80                  85                  90
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
                110                 115
 
<210>15
<211>117
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体嫁接物的重链可变域(huMA79b嫁接物)
 
<400>15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Val Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                110                 115
<210>16
<211>16
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>16
Ala Arg Ser Glu Asp Arg Tyr Arg Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys
  1               5                  10                  15
Lys
 
<210>17
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>17
Lys Ala Ser Lys Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn
  1               5                  10                  15
 
<210>18
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>18
Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser
                  5
 
<210>19
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>19
Ala Ala Ser Asn Leu Lys Ser
                  5
 
<210>20
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>20
Gln Gln Ser Asn Ser Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>21
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>21
Gln Gln Ser Asn Lys Asp Pro Leu Thr
                  5
<210>22
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>22
Ala Ala Arg Lys Leu Gly Arg
                  5
 
<210>23
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>23
Ala Ala Ser Arg Leu Glu Ser
                  5
 
<210>24
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>24
Ala Ala Arg Lys Leu Gly Asn
                  5
 
<210>25
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>25
Ala Ala Arg Lys Leu Lys Arg
                  5
 
<210>26
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>26
Ala Ala Arg Tyr Leu Lys Arg
                  5
 
<210>27
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>27
Ala Ala Arg Lys Leu Lys Ser
                  5
<210>28
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>28
Ala Ala Arg Lys Leu Ala Ser
                  5
 
<210>29
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>29
Ala Ala Gly Ile Leu Ala Arg
                  5
 
<210>30
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>30
Ala Ala Arg Lys Leu Arg Ser
                  5
 
<210>31
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>31
Ala Ala Arg Lys Leu Gly Ser
                  5
 
<210>32
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>32
Ala Ala Arg His Leu Lys Arg
                  5
 
<210>33
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>33
Ala Ser Arg Tyr Leu Ser Arg
                  5
<210>34
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>34
Ala Gly Ser Lys Leu Leu Arg
                  5
 
<210>35
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>35
Ala Ala Ser Asn Arg Lys Ser
                  5
 
<210>36
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>36
Ala Ala Ser Lys Leu Gly Ser
                  5
 
<210>37
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>37
Ala Ala Arg Tyr Leu Arg Arg
                  5
 
<210>38
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>38
Ala Ala Arg Arg Leu Arg Thr
                  5
 
<210>39
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>39
Ala Ala Arg Arg Leu Gly Arg
                  5
<210>40
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>40
Ala Ala Arg Gln Arg Lys Arg
                  5
 
<210>41
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>41
Ala Ala Arg Lys Leu Leu Arg
                  5
 
<210>42
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>42
Ala Ala Arg Lys Leu Lys Asn
                  5
 
<210>43
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>43
Ala Ala Arg Lys Leu Gly Thr
                  5
 
<210>44
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>44
Ala Ala Arg Lys Leu Gly Gly
                  5
 
<210>45
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>45
Ala Ala Arg Lys Leu Ala Arg
                  5
<210>46
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>46
Gln Gln Ser Asn Ala Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>47
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>47
Gln Gln Ser Asn Gln Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>48
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>48
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>49
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>49
Gln Gln Ser Asn Asp Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>50
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>50
Gln Gln Ser Asn Leu Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>51
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>51
Asn Asn Ser Asn Gly Asp Pro Leu Asn
                  5
<210>52
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>52
Gln Pro Asp Asn Glu Ala Pro Arg Thr
                  5
 
<210>53
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>53
Asp Gln Arg Asn Ala Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>54
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>54
Gly Tyr Pro Phe Thr Arg Tyr Trp Ile Ser
                  5                  10
 
<210>55
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>55
Gly Tyr Pro Phe Arg Ser Tyr Trp Ile Gln
                  5                  10
 
<210>56
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>56
Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>57
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>57
Gly Tyr Pro Phe Thr Arg Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
<210>58
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>58
Gly Tyr Thr Phe Asn Arg Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>59
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>59
Gly Tyr Ser Phe Lys Ser Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>60
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>60
Pro Tyr Ser Leu Cys Thr Tyr Phe Ile Asp
                  5                  10
 
<210>61
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>61
Gly Tyr Tyr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>62
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>62
Gly Tyr Pro Phe Gly Arg Tyr Trp Val Asn
                  5                  10
 
<210>63
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>63
Gly Tyr Thr Phe Lys Lys Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
<210>64
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>64
Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gln
                  5                  10
 
<210>65
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>65
Gly Tyr Pro Phe Arg Arg Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>66
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>66
Gly Tyr Pro Val Gly Arg Tyr Trp Ile Ser
                  5                  10
 
<210>67
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>67
Gly Tyr Pro Phe Asn Arg Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>68
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>68
Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Ser
                  5                  10
 
<210>69
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>69
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Leu Ser
                  5                  10
<210>70
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>70
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>71
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>71
Gly Tyr Thr Phe Ser Gly Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>72
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>序列是合成的
 
<400>72
Gly Tyr Thr Phe Arg Arg Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>73
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>73
Gly Tyr Ser Phe Arg Ser Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>74
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>74
Gly Tyr Ser Phe Arg Arg Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>75
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>75
Gly Tyr Ser Phe Arg Arg Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
<210>76
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>76
Gly Tyr Ser Phe Pro Ser Tyr Trp Leu Gln
                  5                  10
 
<210>77
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>77
Gly Tyr Pro Phe Thr Arg Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>78
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>78
Gly Tyr Pro Phe Ser Gly Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>79
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>79
Gly Tyr Pro Phe Arg Ser Tyr Trp Ile Ser
                  5                  10
 
<210>80
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>80
Gly Tyr Pro Phe Arg Ser Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>81
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>81
Gly Tyr Pro Phe Arg Gly Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
<210>82
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>82
Gly Tyr Pro Phe Asn Arg Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>83
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>83
Gly Tyr Pro Phe Asn Gly Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>84
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>84
Gly Tyr Asn Val Ser Ser Tyr Trp Leu Ser
                  5                  10
 
<210>85
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>85
Gly Phe Pro Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Ser
                  5                  10
 
<210>86
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>86
Gly Phe Pro Phe Asn Arg Tyr Trp Ile Asn
                  5                  10
 
<210>87
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>87
Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Tyr Leu Asp
                  5                  10
<210>88
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>88
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                  5                  10
 
<210>89
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>89
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Lys Leu Asp
                  5                  10
 
<210>90
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>90
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Leu Asp
                  5                  10
 
<210>91
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>91
Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Tyr Phe Asp
                  5                  10
 
<210>92
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>92
Cys Thr Arg Arg Val Pro Phe Cys Leu Asp
                  5                  10
 
<210>93
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>93
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Leu Asp
                  5                  10
<210>94
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>94
Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp
                  5                  10
 
<210>95
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>95
Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Lys Leu Asp
                  5                  10
 
<210>96
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>96
Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Phe Asp
                  5                  10
<210>97
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>97
Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Tyr Phe Asp
                  5                  10
 
<210>98
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>98
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Ser
                  5                  10
 
<210>99
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>99
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Val Leu Asp
                  5                  10
<210>100
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>100
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Arg Leu Asp
                  5                  10
 
<210>101
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>101
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Arg Phe Asp
                  5                  10
 
<210>102
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>102
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Phe Leu Asp
                  5                  10
 
<210>103
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>103
Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Tyr Leu Asp
                  5                  10
 
<210>104
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>104
Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Tyr Phe Asp
                  5                  10
 
<210>105
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>105
Cys Thr Arg Arg Arg Pro Val Cys Leu Asp
                  5                  10
<210>106
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体
 
<400>106
Cys Thr Arg Arg Ile Pro Val Tyr Phe Asp
                  5                  10
 
<210>107
<211>10
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus musculus)
 
<400>107
Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                  5                  10
 
<210>108
<211>87
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>108
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
  1               5                  10                  15
Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
                 20                  25                  30
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg
                 35                  40                  45
Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
                 50                  55                  60
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 65                  70                  75
Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val  Ser Ser
                 80                  85
 
<210>109
<211>81
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>109
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
  1               5                  10                  15
Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gln Gly Thr
                 65                  70                  75
Leu Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>110
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>110
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
  1               5                  10                  15
Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu
                 65                  70                  75
Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>111
<211>79
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>111
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
  1               5                  10                  15
Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
                 65                  70                  75
Thr Val Ser Ser
 
<210>112
<211>86
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>112
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
  1               5                  10                  15
Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser
                 20                  25                  30
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Arg Val
                 35                  40                  45
Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu
                 50                  55                  60
Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
                 65                  70                  75
TTp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                 80                  85
 
<210>113
<211>81
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>113
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
  1               5                  10                  15
Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Arg Val Thr Ile Ser Val Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala
                 50                  55                  60
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gln Gly Thr
                 65                  70                  75
Leu Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>114
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>114
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
  1               5                  10                  15
Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Arg Val Thr Ile Ser Val Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala
                 50                  55                  60
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu
                 65                  70                  75
Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>115
<211>79
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>115
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
  1               5                  10                  15
Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Arg Val Thr Ile Ser Val Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala
                 50                  55                  60
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
                 65                  70                  75
Thr Val Ser Ser
 
<210>116
<211>87
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>116
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg
                 35                  40                  45
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
                 50                  55                  60
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 65                  70                  75
Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Va l Ser Ser
                 80                  85
 
<210>117
<211>81
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>117
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
                 35                  40                  45
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gln Gly Thr
                 65                  70                  75
Leu Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>118
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>118
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
                 35                  40                  45
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu
                 65                  70                  75
Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>119
<211>79
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>119
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
                 35                  40                  45
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
                 65                  70                  75
Thr Val  Ser Ser
 
<210>120
<211>87
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>120
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys
                 20                  25                  30
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg
                 35                  40                  45
Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
                 50                  55                  60
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
                 65                  70                  75
Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                 80                  85
 
<210>121
<211>81
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gln Gly Thr
                 65                  70                  75
Leu Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>122
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>122
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
                 65                  70                  75
Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>123
<211>86
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>123
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys
                 20                  25                  30
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg
                 35                  40                  45
Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
                 50                  55                  60
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Cys Ala Arg
                 65                  70                  75
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                 80                  85
 
<210>124
<211>81
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>124
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gln Gly Thr
                 65                  70                  75
Leu Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>125
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>125
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu
                 65                  70                  75
Val Thr Val Ser Ser
                 80
 
<210>126
<211>79
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>126
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Trp Val Arg Gln Ala
                 20                  25                  30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp
                 35                  40                  45
Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
                 50                  55                  60
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
                 65                  70                  75
Thr Val Ser Ser
 
<210>127
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>127
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 20                  25                  30
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
                 35                  40                  45
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
                 50                  55                  60
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gly Gln Gly Thr
                 65                 70                  75
Lys Val Glu Ile Lys
                 80
 
<210>128
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>128
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro
  1               5                  10                  15
Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly
                 20                  25                  30
Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
                 35                  40                  45
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val
                 50                  55                  60
Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gly Gln Gly Thr
                 65                  70                  75
Lys Val Glu Ile Lys
                 80
 
<210>129
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>129
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro
  1               5                  10                  15
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 20                  25                  30
Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
                 35                  40                  45
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu
                 50                  55                  60
Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gly Gln Gly Thr
                 65                  70                  75
Lys Val Glu Ile Lys
                 80
 
<210>130
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>130
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu
  1               5                  10                  15
Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 20                  25                  30
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
                 35                  40                  45
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
                 50                  55                  60
Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gly Gln Gly Thr
                 65                  70                  75
Lys Val Glu Ile Lys
                 80
 
<210>131
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79b嫁接物的HVR1-LC
 
<400>131
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Phe LeuAsn
  1               5                  10                  15
 
<210>132
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79b嫁接物的HVR2-LC
 
<400>132
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                  5
 
<210>133
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79b嫁接物的HVR3-LC
 
<400>133
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>134
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79b嫁接物的HVR1-HC
 
<400>134
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>135
<211>18
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79b嫁接物的HVR2-HC
 
<400>135
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile
  1               5                  10                  15
Phe Lys Gly
 
<210>136
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79b嫁接物的HVR3-HC
 
<400>136
Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp Tyr
                  5                  10
<210>137
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR1-LC(huMA79b.V28)
 
<400>137
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn
  1               5                  10                  15
 
<210>138
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR3-HC(huMA79b.V28)
 
<400>138
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr
                  5                  10
 
<210>139
<211>23
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>139
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
                 20
 
<210>140
<211>15
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>140
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
  1               5                  10                  15
 
<210>141
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>141
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
  1               5                  10                  15
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 20                  25                  30
Tyr Cys
 
<210>142
<211>11
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>142
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                  5                  10
 
<210>143
<211>25
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>143
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
                 20                  25
 
<210>144
<211>13
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>144
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
                  5                  10
 
<210>145
<211>30
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>145
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
 
<210>146
<211>11
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>146
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                  5                  10
 
<210>147
<211>30
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>由人源化抗体变体合成FR3-HC
 
<220>
<221>Xaa
<222>6
<223>Xaa是A或R
 
<220>
<221>Xaa
<222>8
<223>Xaa是T或N
 
<220>
<221>Xaa
<222>13
<223>Xaa是A或L
 
<400>147
Arg Phe Thr Ile Ser Xaa Asp Xaa Ser Lys Asn Thr Xaa Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
 
<210>148
<211>31
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>148
Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
Ala
 
<210>149
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>149
Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
Ala Arg
 
<210>150
<211>31
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>150
Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
Ser
 
<210>151
<211>32
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
 
<400>151
Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
Ser Arg
 
<210>152
<211>23
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR1-LC(huMA79b.v17)
 
<400>152
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
                 20
<210>153
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR2-LC huMA79b.v17)
 
<400>153
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
  1               5                  10                  15
 
<210>154
<211>32
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR3-LC(huMA79b.v17)
 
<400>154
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
  1               5                  10                  15
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 20                  25                  30
Tyr Cys
 
<210>155
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR4-LC(huMA79b.v17)
 
<400>155
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                  5                  10
 
<210>156
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR1-LC(huMA79b.v17)
 
<400>156
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn
  1               5                  10                  15
 
<210>157
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR2-LC(huMA79b.v17)
 
<400>157
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                  5
 
<210>158
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR3-LC(huMA79b.v17)
 
<400>158
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>159
<211>106
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的CL1-LC(huMA79b.v17)
 
<400>159
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
  1               5                  10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
                 20                  25                  30
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
                 35                  40                  45
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
                 50                  55                  60
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
                 65                  70                  75
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
                 80                  85                  90
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
                 95                 100                 105
Cys
 
<210>160
<211>25
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR1-HC(huMA79b.v17)
 
<400>160
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
                 20                  25
 
<210>161
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR2-HC(huMA79b.v17)
 
<400>161
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
                  5                  10
 
<210>162
<211>30
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR3-HC(huMA79b.v17)
 
<400>162
Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
 
<210>163
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR4-HC(huMA79b.v17)
 
<400>163
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                  5                  10
 
<210>164
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR1-HC(huMA79b.v17)
 
<400>164
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>165
<211>18
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR2-HC(huMA79b.v17)
 
<400>165
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile
  1               5                  10                  15
Phe Lys Gly
 
<210>166
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR-H3(huMA79b.v17)
 
<400>166
Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp Tyr
                  5                  10
 
<210>167
<211>108
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的CH1-HC(huMA79b.v17)
 
<400>167
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
  1               5                  10                  15
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
                 20                  25                  30
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
                 35                  40                  45
Leu Thr Ser Gly Val Hi s Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
                 50                  55                  60
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
                 65                  70                  75
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
                 80                  85                  90
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
                 95                 100                 105
Thr His Thr
 
<210>168
<211>221
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的Fc-HC(huMA79b.v17)
 
<400>168
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
  1               5                  10                  15
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                 20                  25                  30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                 35                  40                  45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                 50                  55                  60
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                 65                  70                  75
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                 80                  85                  90
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                 95                 100                 105
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                110                 115                 120
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                125                 130                 135
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                140                 145                 150
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                155                 160                 165
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                170                 175                 180
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                185                 190                 195
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu H s Asn His
                200                 205                 210
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                215                 220
 
<210>169
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的LC-HC可变域(huMA79b.v17)
 
<400>169
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
110
 
<210>170
<211>117
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HC-可变域(huMA79b.v17)
 
<400>170
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                110                 115
 
<210>171
<211>23
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR1-LC(huMA79b.v18)
 
<400>171
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
                 20
 
<210>172
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR2-LC(huMA79b.v18)
 
<400>172
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
  1               5                  10                  15
 
<210>173
<211>32
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR3-LC(huMA79b.v18)
 
<400>173
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
  1               5                  10                  15
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 20                  25                  30
Tyr Cys
 
<210>174
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR4-LC(huMA79b.v18)
 
<400>174
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                  5                  10
 
<210>175
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR1-LC(huMA79b.v18)
 
<400>175
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn
  1               5                  10                  15
 
<210>176
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR2-LC(huMA79b.v18)
 
<400>176
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                  5
 
<210>177
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR3-LC(huMA79b.v18)
 
<400>177
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>178
<211>106
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的CL1-LC(huMA79b.v18)
 
<400>178
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
  1               5                  10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
                 20                  25                  30
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
                 35                  40                  45
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
                 50                  55                  60
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
                 65                  70                  75
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
                 80                  85                  90
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
                 95                 100                 105
Cys
 
<210>179
<211>25
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR1-HC(huMA79b.v18)
 
<400>179
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
                  20                 25
 
<210>180
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR2-HC(huMA79b.v18)
 
<400>180
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
                  5                  10
 
<210>181
<211>30
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR3-HC(huMA79b.v18)
 
<400>181
Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
 
<210>182
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR4-HC(huMA79b.v18)
 
<400>182
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                  5                  10
 
<210>183
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR1-HC(huMA79b.v18)
 
<400>183
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>184
<211>18
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR2-HC(huMA79b.v18)
 
<400>184
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile
  1               5                  10                  15
Phe Lys Gly
 
<210>185
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR3-HC(huMA79b.v18)
 
<400>185
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr
                  5                  10
<210>186
<211>108
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的CH1-HC(huMA79b.v18)
 
<400>186
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
  1               5                  10                  15
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
                 20                  25                  30
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
                 35                  40                  45
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
                 50                  55                  60
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
                 65                  70                  75
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
                 80                  85                  90
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
                 95                 100                 105
Thr His Thr
 
<210>187
<211>221
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的Fc-HC(huMA79b.v18)
 
<400>187
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
  1               5                  10                  15
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                 20                  25                  30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                 35                  40                  45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                 50                  55                  60
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                 65                  70                  75
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                 80                  85                  90
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                 95                 100                 105
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                110                 115                 120
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                125                 130                 135
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                140                 145                 150
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                155                 160                 165
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                170                 175                 180
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                185                 190                 195
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                200                 205                 210
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                215                 220
 
<210>188
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的LC-可变域(huMA79b.v18)
 
<400>188
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                110
 
<210>189
<211>117
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HC-可变域(huMA79b.v18)
 
<400>189
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                110                 115
 
<210>190
<211>23
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR1-LC(huMA79b.v28)
 
<400>190
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
                 20
 
<210>191
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR2-LC(huMA79b.v28)
 
<400>191
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
  1               5                  10                  15
 
<210>192
<211>32
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR3-LC(huMA79b.v28)
 
<400>192
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
  1               5                  10                  15
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 20                  25                  30
Tyr Cys
 
<210>193
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR4-LC(huMA79b.v28)
 
<400>193
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                  5                  10
 
<210>194
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR1-LC(huMA79b.v28)
 
<400>194
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn
  1               5                  10                  15
 
<210>195
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR2-LC(huMA79b.v28)
 
<400>195
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                  5
 
<210>196
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR3-LC(huMA79b.v28)
 
<400>196
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>197
<211>106
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的CL1-LC(huMA79b.v28)
 
<400>197
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
  1               5                  10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
                 20                  25                  30
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
                 35                  40                  45
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
                 50                  55                  60
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
                 65                  70                  75
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
                 80                  85                  90
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
                 95                 100                 105
Cys
 
<210>198
<211>25
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR1-HC(huMA79b.v28)
 
<400>198
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
                 20                  25
 
<210>199
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR2-HC(huMA79b.v28)
 
<400>199
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
                  5                  10
 
<210>200
<211>30
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR3-HC(huMA79b.v28)
 
<400>200
Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
 
<210>201
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR4-HC(huMA79b.v28)
 
<400>201
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                  5                  10
 
<210>202
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR1-HC(huMA79b.v28)
 
<400>202
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>203
<211>18
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR2-HLC(huMA79b.v28)
 
<400>203
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile
  1               5                  10                  15
Phe Lys Gly
<210>204
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR3-HC(huMA79b.v28)
 
<400>204
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr
                  5                  10
 
<210>205
<211>108
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的CH1-HC(huMA79b.v28)
 
<400>205
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
  1               5                  10                  15
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
                 20                  25                  30
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
                 35                  40                  45
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
                 50                  55                  60
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
                 65                  70                  75
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
                 80                  85                  90
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
                 95                 100                 105
Thr His Thr
 
<210>206
<211>221
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的Fc-HC(huMA79b.V28)
 
<400>206
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
  1               5                  10                  15
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                 20                  25                  30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                 35                  40                  45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                 50                  55                  60
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                 65                  70                  75
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                 80                  85                  90
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                 95                 100                 105
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                110                 115                 120
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                125                 130                 135
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                140                 145                 150
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                155                 160                 165
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                170                 175                 180
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                185                 190                 195
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                200                 205                 210
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                215                 220
 
<210>207
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79b.v28)的LC-可变域
 
<400>207
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Al a Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                110
 
<210>208
<211>117
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体的HC-可变域(huMA79b.v28)
 
<400>208
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                110                 115
 
<210>209
<211>23
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR1-LC(huMA79b.v32)
 
<400>209
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
                 20
 
<210>210
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR2-LC(huMA79b.v32)
 
<400>210
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile Tyr
  1               5                  10                  15
 
<210>211
<211>32
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR3-LC(huMA79b.v 32)
 
<400>211
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
  1               5                  10                  15
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 20                  25                  30
Tyr Cys
 
<210>212
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR4-LC(huMA79b.v32)
 
<400>212
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                  5                  10
 
<210>213
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR1-LC(huMA79b.v32)
 
<400>213
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Ser Gly Asp Ser Phe Leu Asn
  1               5                  10                  15
<210>214
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR2-LC(huMA79b.v32)
 
<400>214
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                  5
 
<210>215
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR3-LC(huMA79b.v32)
 
<400>215
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
                  5
 
<210>216
<211>106
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的CL1-LC(huMA79b.v32)
 
<400>216
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
  1               5                  10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
                 20                  25                  30
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
                 35                  40                  45
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
                 50                  55                  60
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
                 65                  70                  75
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
                 80                  85                  90
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
                 95                 100                 105
Cys
 
<210>217
<211>25
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR1-HC(huMA79b.v32)
 
<400>217
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
                 20                  25
 
<210>218
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR2-HC(huMA79b.v32)
 
<400>218
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
                  5                  10
 
<210>219
<211>30
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR3-HC(huMA79b.v32)
 
<400>219
Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
  1               5                  10                  15
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 20                  25                  30
 
<210>220
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的FR4-HC(huMA79b.v32)
 
<400>220
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                  5                  10
 
<210>221
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR1-HC(huMA79b.v32)
 
<400>221
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
                  5                  10
 
<210>222
<211>18
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR2-HC(huMA79b.v32)
 
<400>222
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile
  1               5                  10                  15
Phe Lys Gly
 
<210>223
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HVR3-HC(huMA79b.v32)
 
<400>223
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr
                  5                  10
<210>224
<211>108
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的CH1-HC(huMA79b.v32)
 
<400>224
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
  1               5                  10                  15
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
                 20                  25                  30
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
                 35                  40                  45
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
                 50                  55                  60
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
                 65                  70                  75
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
                 80                  85                  90
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
                 95                 100                 105
Thr His Thr
 
<210>225
<211>221
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的Fc-HC(huMA79b.v32)
 
<400>225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
  1               5                  10                  15
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                 20                  25                  30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                 35                  40                  45
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                 50                  55                  60
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                 65                  70                  75
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                 80                  85                  90
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                 95                 100                 105
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                110                 115                 120
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                125                 130                 135
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                1401                 45                 150
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                155                 160                 165
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                170                 175                 180
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                185                 190                 195
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                200                 205                 210
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                215                 220
 
<210>226
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的LC-可变域(huMA79b.v32)
 
<400>226
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Ser Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
                110
<210>227
<211>117
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人源化抗体变体的HC-可变域(huMA79b.v32)
 
<400>227
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                110                 115
 
<210>228
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-huMA79b.v17-HC(A118C)变体-HC
 
<400>228
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445
 
<210>229
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-huMA79b.v17-HC(A118C)变体-LC
 
<400>229
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                 10                 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>230
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-huMA79b.v18-HC(A118C)变体-HC
 
<400>230
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445
 
<210>231
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-huMA79b.v18-HC(A118C)变体-LC
 
<400>231
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>232
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-huMA79b.v28-HC(A118C)变体-HC
 
<400>232
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met Hi s Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445
 
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<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-huMA79b.v28-HC(A118C)变体-LC
 
<400>233
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>234
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-chMA79b-LC(V205C)变体-HC
 
<400>234
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly
  1               5                  10                  15
Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
                 80                  85                  90
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met Hi s Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445
 
<210>235
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-chMA79b-LC(V205C)变体-LC
 
<400>235
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu
  1               5                  10                  15
Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Gln Pro Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly
                 95                 100                 105
Thr Glu Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>236
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-chMA79b-HC(A118C)变体-HC
 
<400>236
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly
  1               5                  10                  15
Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
                 80                  85                  90
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445
 
<210>237
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>ThioMAb-chMA79b-HC(A118C)变体-LC
 
<400>237
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu
  1               5                  10                  15
Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Gln Pro Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly
                 95                 100                 105
Thr Glu Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr Hi s Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>238
<211>893
<212>DNA
<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)
 
<400>238
tcatggtgat ggtgatgatg accggtacgc gtagaatcga gaccgaggag  50
agggttaggg ataggcttac cttcgaaccg cgggccctct agactcgagc 100
ggccgccact gtgctggata tctgcagaat tgcccttggg gacagagcag 150
tgaccatggc caggctggcg ttgtctcctg tgtccagcca ctggctggtg 200
gcgttgctgc tgctgctctc agcagctgag ccagtgccag cagccaaatc 250
agaggacctg tacccgaatc ccaaaggtag tgcttgttct cggatctggc 300
agagcccacg tttcatagcc aggaaacggg gcttcacggt gaaaatgcac 350
tgctacgtga ccaacagcac cttcagcatc gtgagctggc tccggaagcg 400
ggagacggac aaggagcccc aacaggtgaa cctggagcag ggccacatgc 450
atcagaccca aaacagctct gtcaccaccc tcatcatcca agacatccgg 500
tttgaggaca acggcatcta cttctgtcag caggagtgca gcaagacctc 550
ggaggtctac cggggctgcg gcacggagct gcgagtcatg gggttcagca 600
ccttggcaca gctgaagcag aggaacacgc tgaaggatgg catcatcatg 650
atccagacgc tgctgatcat cctcttcatc atcgtgccca tcttcctgct 700
gctggacaag gatgacagca aggccggcat ggaggaagat cacacctacg 750
agggcctgga cattgaccag acggccacct acgaggacat agtgacgctg 800
cggacagggg aagtgaagtg gtctgtgggt gagcacccag gtcaggagtg 850
agagccagga cctccccacg gcctgggtgc aggctcccca gcc        893
 
<210>239
<211>231
<212>PRT
<213>食蟹猴(Macaca fascicularis)
 
<400>239
Met Ala Arg Leu Ala Leu Ser Pro Val Ser Ser His Trp Leu Val
  1               5                  10                  15
Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ser Ala Ala Glu Pro Val Pro Ala Ala
                 20                  25                  30
Lys Ser Glu Asp Leu Tyr Pro Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser
                 35                  40                  45
Arg Ile Trp Gln Ser Pro Arg Phe Ile Ala Arg Lys Arg Gly Phe
                 50                  55                  60
Thr Val Lys Met His Cys Tyr Val Thr Asn Ser Thr Phe Ser Ile
                 65                  70                  75
Val Ser Trp Leu Arg Lys Arg Glu Thr Asp Lys Glu Pro Gln Gln
                 80                  85                  90
Val Asn Leu Glu Gln Gly His Met His Gln Thr Gln Asn Ser Ser
                 95                 100                 105
Val Thr Thr Leu Ile Ile Gln Asp Ile Arg Phe Glu Asp Asn Gly
                110                 115                 120
Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Glu Cys Ser Lys Thr Ser Glu Val Tyr
                125                 130                 135
Arg Gly Cys Gly Thr Glu Leu Arg Val Met Gly Phe Ser Thr Leu
                140                 145                 150
Ala Gln Leu Lys Gln Arg Asn Thr Leu Lys Asp Gly Ile Ile Met
                155                 160                 165
Ile Gln Thr Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ile Ile Val Pro Ile Phe
                170                 175                 180
Leu Leu Leu Asp Lys Asp Asp Ser Lys Ala Gly Met Glu Glu Asp
                185                 190                 195
His Thr Tyr Glu Gly Leu Asp Ile Asp Gln Thr Ala Thr Tyr Glu
                200                 205                 210
Asp Ile Val Thr Leu Arg Thr Gly Glu Val Lys Trp Ser Val Gly
                215                 220                 225
Glu His Pro Gly Gln Glu
                230
 
<210>240
<211>800
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合的抗cyno CD79b(ch10D10)-LC
 
<400>240
acctcggttc tatcgattga attccaccat gggatggtca tgtatcatcc  50
tttttctagt agcaactgca actggagtac attcagatat cgtgctgacc 100
caatctccac cctctttggc tgtgtctcta gggcagaggg ccaccatatc 150
ctgcagagcc agtgaaagtg ttgatagtta tggcaaaact tttatgcact 200
ggcaccagca gaaaccagga cagccaccca aactcctcat ctatcgtgta 250
tccaacctag aatctgggat ccctgccagg ttcagtggca gtgggtcaag 300
gacagacttc accctcacca ttaatcctgt ggaggctgat gatgttgcaa 350
cctattactg tcagcaaagt aatgaggatc cgttcacgtt cggtggaggc 400
accaagctgg aaatcaaacg gaccgtggct gcaccatctg tcttcatctt 450
cccgccatct gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc 500
tgctgaataa cttctatccc agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat 550
aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag agtgtcacag agcaggacag 600
caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg agcaaagcag 650
actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 700
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt aagcttggcc 750
gccatggccc aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca 800
 
<210>241
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合的抗cyno CD79b(ch10D10)-LC
 
<400>241
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu
  1               5                  10                  15
Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Ser Tyr Gly Lys Thr Phe Met His Trp His Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>242
<211>1500
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合的抗cyno CD79b(ch10D10)-LC
 
<400>242
cacctcggtt ctatcgattg aattccacca tgggatggtc atgtatcatc 50
ctttttctag tagcaactgc aactggagta cattcagaag ttcagctgca 100
ggagtcggga cctggcctgg tgaaaccttc tcagtctctg tccctcacct 150
gcactgtcac tggctactca atcaccagtg attatgcctg gaactggatc 200
cggcagtttc caggaaacaa actggagtgg atgggcaaca tatggtacag 250
tggtagcact acctacaacc catctctcaa aagtcgaatc tctatcactc 300
gagacacatc caagaaccag ttcttcctgc agttgaattc tgtgacttct 350
gaggacacag ccacatatta ctgttcaaga atggacttct ggggtcaagg 400
caccactctc acagtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc 450
ccctggcacc ctcctccaag agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc 500
tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc 550
aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct 600
caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ctgtgccctc tagcagcttg 650
ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa 700
ggtggacaag aaagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc 750
caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc 800
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac 850
atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact 900
ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 950
gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca 1000
ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag 1050
ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1100
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggaag agatgaccaa 1150
gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca 1200
tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1250
acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct 1300
caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg 1350
tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1400
tctccgggta aatgagtgcg acggccctag agtcgacctg cagaagcttg 1450
gccgccatgg cccaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa 1500
 
<210>243
<211>441
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>嵌合的抗cyno CD79b(ch10D10)-LC
 
<400>243
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
  1               5                  10                  15
Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr
                 20                  25                  30
Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys
                 35                  40                  45
Leu Glu Trp Met Gly Asn Ile Trp Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr
                 50                  55                  60
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Arg Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
                110                 115                 120
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
                125                 130                 135
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
                140                 145                 150
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                155                 160                 165
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
                170                 175                 180
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
                185                 190                 195
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
                200                 205                 210
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
                215                 220                 225
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
                230                 235                 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
                245                 250                 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
                260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
                275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
                290                 295                 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
                305                 310                 315
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
                320                 325                 330
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
                335                 340                 345
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
                350                 355                 360
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
                365                 370                 375
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
                380                 385                 390
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
                395                 400                 405
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
                410                 415                 420
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                425                 430                 435
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440
 
<210>244
<211>441
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-MAb-抗cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)变体-HC
 
<400>244
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
  1               5                  10                  15
Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr
                 20                  25                  30
Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys
                 35                  40                  45
Leu Glu Trp Met Gly Asn Ile Trp Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr
                 50                  55                  60
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Arg Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
                110                 115                 120
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
                125                 130                 135
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
                140                 145                 150
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                155                 160                 165
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
                170                 175                 180
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
                185                 190                 195
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
                200                 205                 210
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
                215                 220                 225
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
                230                 235                 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
                245                 250                 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
                260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
                275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
                290                 295                 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
                305                 310                 315
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
                320                 325                 330
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
                335                 340                 345
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
                350                 355                 360
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
                365                 370                 375
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
                380                 385                 390
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
                395                 400                 405
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
                410                 415                 420
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                425                 430                 435
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440
 
<210>245
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-MAb-抗cynoCD79b(ch10D10)-HC(A118C)变体-LC
 
<400>245
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu
  1               5                  10                  15
Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Ser Tyr Gly Lys Thr Phe Met His Trp His Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe
                65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr
                80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
<210>246
<211>30
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>清蛋白结合肽
 
<400>246
Cys Asp Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Ser Gln Arg Leu Met Glu
  1               5                  10                  15
Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Glu Asp Asp Phe
                 20                  25                  30
 
<210>247
<211>20
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>清蛋白结合肽
 
<400>247
Gln Arg Leu Met Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu
  1               5                  10                  15
Trp Glu Asp Asp Phe
                 20
 
<210>248
<211>20
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>清蛋白结合肽
 
<400>248
Gln Arg Leu Ile Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu
  1               5                  10                  15
Trp Glu Asp Asp Phe
                 20
 
<210>249
<211>18
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>清蛋白结合肽
 
<400>249
Arg Leu Ile Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp
  1               5                  10                  15
Glu Asp Asp
<210>250
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>清蛋白结合肽
 
<400>250
Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp
                  5                  10
 
<210>251
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b HC-变体
 
<400>251
Glu Val Gln Leu Cys Glu Ser Gly Gly Gly
                  5                  10
 
<210>252
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA 79b HC-变体
 
<400>252
Leu Arg Leu Ser Cys Cys Ala Ser Gly Tyr Thr
                  5                  10
 
<210>253
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b HC-变体
 
<400>253
Met Asn Ser Leu Arg Cys Glu Asp Thr Ala Val
                  5                  10
 
<210>254
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b HC-变体
 
<400>254
Thr Leu Val Thr Val Cys Ser Ala Ser Thr Lys
                  5                  10
 
<210>255
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b HC-变体
 
<400>255
Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro
                  5                  10
 
<210>256
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b HC-变体
 
<400>256
Val Ser Ser Ala Ser Cys Lys Gly Pro Ser Val
                  5                  10
 
<210>257
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b HC-变体
 
<400>257
Trp Tyr Val Asp Gly Cys Glu Val His Asn Ala
                  5                  10
 
<210>258
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA 79b HC-变体
 
<400>258
Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu
                  5                  10
 
<210>259
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b HC-变体
 
<400>259
Pro Pro Val Leu Asp Cys Asp Gly Ser Phe Phe
                  5                  10
 
<210>260
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA 79b HC-变体
 
<400>260
Glu Val Gln Leu Cys Gln Ser Gly Ala Glu
                  5                  10
 
<210>261
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b HC-变体
 
<400>261
Val Lys Ile Ser Cys Cys Ala Thr Gly Tyr Thr
                  5                  10
 
<210>262
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b HC-变体
 
<400>262
Leu Ser Ser Leu Thr Cys Glu Asp Ser Ala Val
                  5                  10
 
<210>263
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b HC-变体
 
<400>263
Thr Ser Val Thr Val Cys Ser Ala Ser Thr Lys
                  5                  10
 
<210>264
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b HC-变体
 
<400>264
Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro
                  5                  10
 
<210>265
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b HC-变体
 
<400>265
Val Ser Ser Ala Ser Cys Lys Gly Pro Ser Val
                  5                  10
 
<210>266
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA 79b HC-变体
 
<400>266
Trp Tyr Val Asp Gly Cys Glu Val His Asn Ala
                  5                  10
 
<210>267
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b HC-变体
 
<400>267
Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu
                  5                  10
 
<210>268
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b HC-变体
 
<400>268
Pro Pro Val Leu Asp Cys Asp Gly Ser Phe Phe
                  5                  10
 
<210>269
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>269
Glu Val Gln Leu Cys Glu Ser Gly Pro Gly
                  5                  10
 
<210>270
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>270
Leu Ser Leu Thr Cys Cys Val Thr Gly Tyr Ser
                  5                  10
 
<210>271
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>271
Leu Asn Ser Val Thr Cys Glu Asp Thr Ala Thr
                  5                  10
 
<210>272
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>272
Thr Thr Leu Thr Val Cys Ser Ala Ser Thr Lys
                  5                  10
 
<210>273
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>273
Leu Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro
                  5                  10
 
<210>274
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>274
Val Ser Ser Ala Ser Cys Lys Gly Pro Ser Val
                  5                  10
 
<210>275
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>275
Trp Tyr Val Asp Gly Cys Glu Val His Asn Ala
                  5                  10
 
<210>276
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>276
Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu
                  5                  10
 
<210>277
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>277
Pro Pro Val Leu Asp Cys Asp Gly Ser Phe Phe
                  5                  10
 
<210>278
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b LC-变体
 
<400>278
Ser Leu Ser Ala Ser Cys Gly Asp Arg Val Thr
                  5                  10
 
<210>279
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b LC-变体
 
<400>279
Glu Ile Lys Arg Thr Cys Ala Ala Pro Ser Val
                  5                  10
 
<210>280
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b LC-变体
 
<400>280
Thr Val Ala Ala Pro Cys Val Phe Ile Phe Pro
                  5                  10
 
<210>281
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b LC-变体
 
<400>281
Phe Ile Phe Pro Pro Cys Asp Glu Gln Leu Lys
                  5                  10
 
<210>282
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b LC-变体
 
<400>282
Asp Glu Gln Leu Lys Cys Gly Thr Ala Ser Val
                  5                  10
 
<210>283
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b LC-变体
 
<400>283
Val Thr Glu Gln Asp Cys Lys Asp Ser Thr Tyr
                  5                  10
 
<210>284
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-huMA79b LC-变体
 
<400>284
Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn
                  5                  10
 
<210>285
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b LC-变体
 
<400>285
Ser Leu Ala Val Ser Cys Gly Gln Arg Ala Thr
                  5                  10
 
<210>286
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b LC-变体
 
<400>286
Glu Leu Lys Arg Thr Cys Ala Ala Pro Ser Val
                  5                  10
 
<210>287
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA 79b LC-变体
 
<400>287
Thr Val Ala Ala Pro Cys Val Phe Ile Phe Pro
                  5                  10
 
<210>288
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA 79b LC-变体
 
<400>288
Phe Ile Phe Pro Pro Cys Asp Glu Gln Leu Lys
                  5                  10
 
<210>289
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b LC-变体
 
<400>289
Asp Glu Gln Leu Lys Cys Gly Thr Ala Ser Val
                  5                  10
 
<210>290
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b LC-变体
 
<400>290
Val Thr Glu Gln Asp Cys Lys Asp Ser Thr Tyr
                  5                  10
 
<210>291
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio-chMA79b LC-变体
 
<400>291
Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn
                  5                  10
 
<210>292
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>292
Ser Leu Ala Val Ser Cys Gly Gln Arg Ala Thr
                  5                  10
 
<210>293
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>293
Glu Ile Lys Arg Thr Cys Ala Ala Pro Ser Val
                  5                  10
 
<210>294
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>294
Thr Val Ala Ala Pro Cys Val Phe Ile Phe Pro
                  5                  10
 
<210>295
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>295
Phe Ile Phe Pro Pro Cys Asp Glu Gln Leu Lys
                  5                  10
 
<210>296
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>296
Asp Glu Gln Leu Lys Cys Gly Thr Ala Ser Val
                  5                  10
 
<210>297
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>297
Val Thr Glu Gln Asp Cys Lys Asp Ser Thr Tyr
                  5                  10
 
<210>298
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-变体
 
<400>298
Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn
                  5                  10
 
<210>299
<211>441
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b-LC(V205C)变体-HC
 
<400>299
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
  1               5                  10                  15
Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr
                 20                  25                  30
Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys
                 35                  40                  45
Leu Glu Trp Met Gly Asn Ile Trp Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr
                 50                  55                  60
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Arg Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
                110                 115                 120
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
                125                 130                 135
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
                140                 145                 150
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                155                 160                 165
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
                170                 175                 180
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
                185                 190                 195
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
                200                 205                 210
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
                215                 220                 225
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
                230                 235                 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
                245                 250                 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
                260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
                275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
                290                 295                 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
                305                 310                 315
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
                320                 325                 330
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
                335                 340                 345
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
                350                 355                 360
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
                365                 370                 375
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
                380                 385                 390
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
                395                 400                 405
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
                410                 415                 420
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
                425                 430                 435
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440
 
<210>300
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-LC(V205C)变体-LC
 
<400>300
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu
  1               5                  10                  15
Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Ser Tyr Gly Lys Thr Phe Met His Trp His Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>301
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC的可变域
 
<400>301
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
  1               5                  10                  15
Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr
                 20                  25                  30
Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys
                 35                  40                  45
Leu Glu Trp Met Gly Asn Ile Trp Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr
                 50                  55                  60
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Arg Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
                110
 
<210>302
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>anti-cynoCD79b(ch10D10)-LC的可变域
 
<400>302
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu
  1               5                  10                  15
Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Ser Tyr Gly Lys Thr Phe Met His Trp His Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
                110
 
<210>303
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79bv.17的轻链
 
<400>303
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>304
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79bv.17的重链
 
<400>304
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp ValArg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445
 
<210>305
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79bv.18的轻链
 
<400>305
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr Hi s Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>306
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79bv.18的重链
 
<400>306
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Hi s Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445
 
<210>307
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79bv.28的轻链
 
<400>307
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn TrpTyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>308
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79bv.28的重链
 
<400>308
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445
 
<210>309
<211>218
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79bv.32的轻链
 
<400>309
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
  1               5                  10                  15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp
                 20                  25                  30
Tyr Ser Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
                 35                  40                  45
Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
                 50                  55                  60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                 65                  70                  75
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
                 80                  85                  90
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
                 95                 100                 105
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
                110                 115                 120
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
                125                 130                 135
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
                140                 145                 150
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
                155                 160                 165
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                170                 175                 180
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys Hi s Lys Val
                185                 190                 195
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                200                 205                 210
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                215
 
<210>310
<211>446
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>huMA79bv.32的重链
 
<400>310
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
  1               5                  10                  15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
                 20                  25                  30
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                 35                  40                  45
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr
                 50                  55                  60
Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser
                 65                  70                  75
Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
                 80                  85                  90
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp
                 95                 100                 105
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
                110                 115                 120
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
                125                 130                 135
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
                140                 145                 150
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                155                 160                 165
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
                170                 175                 180
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
                185                 190                 195
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
                200                 205                 210
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
                215                 220                 225
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
                230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
                260                 265                 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
                275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
                290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                305                 310                 315
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
                320                 325                 330
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                335                 340                 345
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
                350                 355                 360
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
                365                 370                 375
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
                380                 385                 390
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                395                 400                 405
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
                410                 415                 420
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
                425                 430                 435
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                440                 445

Claims (258)

1.一种抗CD79b抗体，其包含：
(a)至少一种选自下组的HVR序列：
(i)HVR-L1，其包含序列A1-A15，其中A1-A15是KASQSVDYDGDSFLN(SEQ ID NO：131)
(ii)HVR-L2，其包含序列B1-B7，其中B1-B7是AASNLES(SEQ IDNO：132)
(iii)HVR-L3，其包含序列C1-C9，其中C1-C9是QQSNEDPLT(SEQID NO：133)
(iv)HVR-H1，其包含序列D1-D10，其中D1-D10是GYTFSSYWIE(SEQ ID NO：134)
(v)HVR-H2，其包含序列E1-E18，其中E1-E18是GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO：135)
(vi)HVR-H3，其包含序列F1-F10，其中F1-F10是TRRVPVYFDY(SEQ ID NO：136)；和
(b)至少一种变异HVR，其中所述变异HVR包含SEQ ID NO：131、132、133、134、135或136所示序列的至少一个残基的修饰。
2.权利要求1的抗体，其中变异HVR-H3中的F6是I，F7是R且F8是L。
3.权利要求1或2的抗体，其中变异HVR-L1中的A9是E或S。
4.权利要求1的抗体，其中框架序列的至少一部分是人共有框架序列。
5.权利要求1的抗体，其中所述修饰是替代、插入或删除。
6.权利要求1的抗体，其中HVR-L1变体在任何下列位置中包含一处替代：A4(K)、A9(E或S)和A10(A或S)。
7.权利要求1的抗体，其中HVR-L2变体在下列位置的任何一个或组合中包含1-5(1、2、3、4或5)处替代：B2(S或G)、B3(R或G)、B4(K、R、Y、I、H或Q)、B5(R)、B6(G、K、A、R、S或L)和B7(R、N、T或G)。
8.权利要求1的抗体，其中HVR-L3变体在下列位置的任何一个或组合中包含1-4(1、2、3或4)处替代：C1(N或D)、C2(N或P)、C3(D或R)、C5(S、K、A、Q、D、L或G)、C6(A、E或N)、C7(A)、C8(R)和C9(N)。
9.权利要求1的抗体，其中HVR-H1变体在下列位置的任何一个或组合中包含1-7(1、2、3、4、5、6或7)处替代：D1(P)、D2(F)、D3(P、S、Y、G或N)、D4(L或V)、D5(T、R、N、K、C、G或P)、D6(R、T、K或G)、D8(F)、D9(V或L)和D10(S、Q、N或D)。
10.权利要求1的抗体，其中HVR-H3变体在下列位置的任何一个或组合中包含1-3(1、2或3)处替代：F4(R或I)、F6(I或F)、F7(K、C、R、V或F)、F8(L)和F9(S)。
11.权利要求1的抗体，其包含具有序列SEQ ID NO：135的HVR-H2。
12.权利要求1的抗体，其中变异HVR-H3中的F6是I。
13.权利要求1的抗体，其中变异HVR-H3中的F7是R。
14.权利要求1的抗体，其中变异HVR-H3中的F8是L。
15.权利要求1的抗体，其中变异HVR-L1中的A9是E。
16.权利要求1的抗体，其中变异HVR-L1中的A9是S。
17.一种人源化抗CD79b抗体，其中该抗体对人CD79b的单价亲和力与包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体的单价亲和力基本上相同。
18.一种人源化抗CD79b抗体，其中该抗体对人CD79b的单价亲和力比包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的单价亲和力高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。
19.一种人源化抗CD79b抗体，其中该抗体对人CD79b的单价亲和力比包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的单价亲和力低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55或60倍。
20.权利要求17-19的人源化抗体，其中所述鼠抗体是由于1993年7月20日作为HB11413保藏于ATCC的杂交瘤细胞系生成的。
21.一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对人CD79b的亲和力与二价形式的且包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体的亲和力基本上相同。
22.一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对人CD79b的亲和力比二价形式的且包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的亲和力高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。
23.一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对人CD79b的亲和力比二价形式的且包含图7A-B(SEQ ID NO：10)和图8A-B(SEQ ID NO：14)所示轻链和重链可变序列的鼠抗体或嵌合抗体的亲和力低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55或60倍。
24.一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对人CD79b的亲和力是0.4nM。
25.权利要求24的人源化抗CD79抗体，其中二价形式的该抗体对人CD79b的亲和力是0.4nM+/-.04。
26.一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对人CD79b的亲和力是0.2nM。
27.权利要求26的人源化抗CD79抗体，其中二价形式的该抗体对人CD79b的亲和力是0.2nM+/-.02。
28.一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的该抗体对人CD79b的亲和力是0.5nM。
29.权利要求28的人源化抗CD79抗体，其中二价形式的该抗体对人CD79b的亲和力是0.5nM+/-0.1。
30.权利要求17-29任一项的抗体，其中所述结合亲和力表述成Kd值。
31.权利要求17-29任一项的抗体，其中所述结合亲和力是通过Biacore或放射免疫测定法测量的。
32.权利要求1-3任一项的抗体，其包含人κ亚组1共有框架序列。
33.权利要求1-3任一项的抗体，其包含重链人亚组III共有框架序列。
34.权利要求33的抗体，其中所述框架序列在第71位、第73位和/或第78位包含替代。
35.权利要求34的抗体，其中所述替代是R71A、N73T和/或L78A。
36.权利要求35的抗体，其中所述框架序列在第48位、第67位、第69位、第71位、第73位和/或第78位包含替代。
37.权利要求36的抗体，其中所述替代是V48I、F67A、I69F、R71A、N73T和/或L78A。
38.权利要求33的抗体，其中所述框架序列在第48位、第67位、第69位、第71位、第73位、第75位、第78位和/或第80位包含替代。
39.权利要求38的抗体，其中所述替代是V48I、F67A、I69F、R71A、N73T、K75S、L78A和/或L80M。
40.权利要求32的抗体，其中所述框架序列在第4位包含替代。
41.权利要求40的抗体，其中所述替代是M4L。
42.权利要求32的抗体，其中所述框架序列在第47位包含替代。
43.权利要求42的抗体，其中所述替代是L47F。
44.权利要求32的抗体，其中所述框架序列在第4位和/或第47位包含替代。
45.权利要求44的抗体，其中所述替代是M4L和/或L47F。
46.一种人源化抗CD79b抗体，其中该人源化抗体在偶联至细胞毒剂时抑制肿瘤细胞生长。
47.前述权利要求任一项的抗体，其中所述人源化抗体和嵌合抗体均是单价的或二价的。
48.前述权利要求任一项的抗体，其中所述人源化抗体和嵌合抗体均包含连接至Fc区的单一Fab区。
49.一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图15(SEQ ID NO：164-166)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。
50.权利要求49的抗体，其中所述可变域包含图15(SEQ ID NO：160-163)所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。
51.权利要求49或50的抗体，其中所述抗体包含图15(SEQ ID NO：167和/或168)所示CH1和/或Fc序列。
52.一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图15(SEQ ID NO：156-158)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。
53.权利要求52的抗体，其中所述可变域包含图15(SEQ ID NO：152-155)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。
54.权利要求52或53的抗体，其中所述抗体包含图15(SEQ ID NO：159)所示CL1序列。
55.包含图15(SEQ ID NO：170)所示序列的多肽。
56.包含图15(SEQ ID NO：169)所示序列的多肽。
57.通过如下方法生成的抗体：
(a)培养表达包含权利要求49-51任一项的重链可变域和权利要求52-54任一项的轻链可变域的抗体的细胞；并
(b)自所述培养细胞分离所述抗体。
58.一种抗体，其包含权利要求49-51任一项的重链可变域和权利要求52-54任一项的轻链可变域。
59.权利要求58的抗体，其中所述抗体是单价的且包含Fc区。
60.一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图16(SEQ ID NO：183-185)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。
61.权利要求60的抗体，其中所述可变域包含图16(SEQ ID NO：179-182)所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。
62.权利要求60或61的抗体，其中所述抗体包含图16(SEQ ID NO：186和/或187)所示CH1和/或Fc序列。
63.一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图16(SEQ ID NO：175-177)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。
64.权利要求63的抗体，其中所述可变域包含图16(SEQ ID NO：171-174)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。
65.权利要求63或64的抗体，其中所述抗体包含图16(SEQ ID NO：178)所示CL1序列。
66.包含图16(SEQ ID NO：189)所示序列的多肽。
67.包含图16(SEQ ID NO：188)所示序列的多肽。
68.通过如下方法生成的抗体：
(a)培养表达包含权利要求60-62任一项的重链可变域和权利要求63-65任一项的轻链可变域的抗体的细胞；并
(b)自所述培养细胞分离所述抗体。
69.一种抗体，其包含权利要求60-62任一项的重链可变域和权利要求63-65任一项的轻链可变域。
70.权利要求69的抗体，其中所述抗体是单价的且包含Fc区。
71.一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图17(SEQ ID NO：202-204)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。
72.权利要求71的抗体，其中所述可变域包含图17(SEQ ID NO：198-201)所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。
73.权利要求71或72的抗体，其中所述抗体包含图17(SEQ ID NO：205和/或206)所示CH1和/或Fc序列。
74.一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图17(SEQ ID NO：194-196)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。
75.权利要求74的抗体，其中所述可变域包含图17(SEQ ID NO：190-193)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。
76.权利要求74或75的抗体，其中所述抗体包含图17(SEQ ID NO：197)所示CL1序列。
77.包含图8A-B(SEQ ID NO：208)所示序列的多肽。
78.包含图7A-B(SEQ ID NO：207)所示序列的多肽。
79.通过如下方法生成的抗体：
(a)培养表达包含权利要求71-73任一项的重链可变域和权利要求74-76任一项的轻链可变域的抗体的细胞；并
(b)自所述培养细胞分离所述抗体。
80.一种抗体，其包含权利要求71-73任一项的重链可变域和权利要求74-76任一项的轻链可变域。
81.权利要求80的抗体，其中所述抗体是单价的且包含Fc区。
82.一种抗体，其包含重链可变域，该重链可变域包含图18(SEQ ID NO：221-223)所示HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列。
83.权利要求82的抗体，其中所述可变域包含图18(SEQ ID NO：217-220)所示FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列。
84.权利要求82或83的抗体，其中所述抗体包含图18(SEQ ID NO：224和/或225)所示CH1和/或Fc序列。
85.一种抗体，其包含轻链可变域，该轻链可变域包含图18(SEQ ID NO：213-215)所示HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列。
86.权利要求85的抗体，其中所述可变域包含图18(SEQ ID NO：209-212)所示FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列。
87.权利要求85或86的抗体，其中所述抗体包含图18(SEQ ID NO：216)所示CL1序列。
88.包含图18(SEQ ID NO：227)所示序列的多肽。
89.包含图18(SEQ ID NO：226)所示序列的多肽。
90.通过如下方法生成的抗体：
(a)培养表达包含权利要求82-84任一项的重链可变域和权利要求85-87任一项的轻链可变域的抗体的细胞；并
(b)自所述培养细胞分离所述抗体。
91.一种抗体，其包含权利要求82-84任一项的重链可变域和权利要求85-87任一项的轻链可变域。
92.权利要求91的抗体，其中所述抗体是单价的且包含Fc区。
93.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：169的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的轻链可变域。
94.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：170的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的重链可变域。
95.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：188的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的轻链可变域。
96.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：189的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的重链可变域。
97.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：207的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的轻链可变域。
98.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：208的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的重链可变域。
99.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：226的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的轻链可变域。
100.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：227的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的重链可变域。
101.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含重链可变域，该重链可变域包含一种、两种、三种或四种选自SEQ ID NO：143、144、145和146的框架氨基酸序列。
102.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含一种、两种、三种或四种选自SEQ ID NO：139、140、141和142的框架氨基酸序列。
103.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含重链可变域，该重链可变域包含一种、两种、三种或四种与选自SEQ ID NO：143、144、145和146的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的框架氨基酸序列。
104.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含轻链可变域，该轻链可变域包含一种、两种、三种或四种与选自SEQ ID NO：139、140、141和142的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的框架氨基酸序列。
105.权利要求的抗体93，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：170的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的重链可变域。
106.权利要求的抗体94，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：169的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的轻链可变域。
107.权利要求的抗体95，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：189的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的重链可变域。
108.权利要求的抗体96，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：188的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的轻链可变域。
109.权利要求的抗体97，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：208的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的重链可变域。
110.权利要求的抗体98，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：207的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的轻链可变域。
111.权利要求的抗体99，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：227的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的重链可变域。
112.权利要求100的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：226的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的轻链可变域。
113.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：170具有至少90％序列同一性的重链可变域。
114.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：169具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
115.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：170具有至少90％序列同一性的重链可变域和与氨基酸序列SEQ ID NO：169具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
116.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：189具有至少90％序列同一性的重链可变域。
117.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：188具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
118.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：189具有至少90％序列同一性的重链可变域和与氨基酸序列SEQ ID NO：188具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
119.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的重链可变域。
120.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：207具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
121.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：208具有至少90％序列同一性的重链可变域和与氨基酸序列SEQ ID NO：207具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
122.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：227具有至少90％序列同一性的重链可变域。
123.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：226具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
124.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：227具有至少90％序列同一性的重链可变域和与氨基酸序列SEQ ID NO：226具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
125.一种多核苷酸，其编码权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体。
126.一种载体，其包含权利要求125的多核苷酸。
127.一种宿主细胞，其包含权利要求126的载体。
128.一种制备抗CD79b抗体的方法，其中该方法包括：(a)在适合于编码所述抗体的多核苷酸表达的条件下培养选自下组的宿主细胞：真核细胞和CHO细胞，并(b)分离所述抗体。
129.权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体，其中所述抗体结合CD79b中SEQ ID NO：2氨基酸29-39或SEQID NO：16氨基酸1-11的区域内的表位。
130.权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体，其中所述CD79b是在细胞表面上表达的。
131.权利要求130的抗体，其中所述细胞是B细胞。
132.权利要求131的抗体，其中所述B细胞是与B细胞增殖性病症有关的。
133.权利要求132的抗体，其中所述B细胞增殖性病症是癌症。
134.权利要求133的抗体，其中所述B细胞增殖性病症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
135.权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
136.权利要求135的抗体，其中所述抗体是抗体片段，其选自Fab、Fab’-SH、Fv、scFv或(Fab’)2片段。
137.权利要求135的抗体，其中所述抗体是人源化的。
138.权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体，其中所述抗体与选自下组的抗体结合相同表位：1993年7月20日保藏于ATCC、编号HB11413的抗体；包含重链可变域SEQ ID NO：170和轻链可变域SEQ ID NO：169的抗体；包含重链可变域SEQ ID NO：189和轻链可变域SEQ ID NO：188的抗体；包含重链可变域SEQ ID NO：208和轻链可变域SEQ ID NO：207的抗体；和包含重链可变域SEQ ID NO：227和轻链可变域SEQ ID NO：226的抗体。
139.一种免疫偶联物，其包含共价附着至细胞毒剂的权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体。
140.权利要求139的免疫偶联物，其中所述细胞毒剂选自毒素、化疗剂、药物模块、抗生素、放射性同位素和溶核酶。
141.权利要求140的免疫偶联物，其中所述免疫偶联物具有式Ab-(L-D)p，其中：
(a)Ab是权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体；
(b)L是接头；
(c)D是药物模块。
142.权利要求141的免疫偶联物，其中L选自6-马来酰亚氨基己酰基(MC)、马来酰亚氨基丙酰基(MP)、缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)、对氨基苄氧羰基(PAB)、N-琥珀酰亚氨基4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(SPP)、N-琥珀酰亚氨基4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)和N-琥珀酰亚氨基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)。
143.权利要求141的免疫偶联物，其中D选自auristatin和多拉司他汀。
144.一种药物组合物，其包含权利要求141的免疫偶联物和药学可接受载体。
145.一种抑制表达CD79b的细胞生长的方法，所述方法包括使所述细胞接触权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258任一项的抗体，由此引起对所述细胞生长的抑制。
146.权利要求145的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
147.权利要求145的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
148.一种治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258任一项的抗体。
149.权利要求148的方法，其中所述癌症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
150.权利要求148的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
151.权利要求148的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
152.一种治疗受试者中增殖性病症的方法，所述方法包括给实施受试者施用有效量的权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258任一项的抗体。
153.权利要求152的方法，其中所述增殖性病症是癌症。
154.权利要求153的方法，其中所述癌症选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
155.权利要求152的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
156.权利要求152的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
157.抑制细胞生长的方法，其中所述细胞的生长至少部分依赖于CD79b的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258任一项的抗体，由此抑制所述细胞的生长。
158.权利要求157的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
159.权利要求157的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
160.一种治疗性处理哺乳动物中肿瘤的方法，其中所述肿瘤的生长至少部分依赖于CD79b的生长强化效应，所述方法包括使所述细胞接触有效量的权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258任一项的抗体。
161.权利要求160的方法，其中所述肿瘤是与淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤有关的。
162.权利要求160的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
163.权利要求160的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
164.一种抑制B细胞增殖的方法，包括在允许下述免疫偶联物结合至CD79b的条件下使细胞暴露于权利要求142的免疫偶联物。
165.权利要求164的方法，其中所述B细胞增殖选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
166.权利要求164的方法，其中所述B细胞是异种移植物。
167.权利要求164的方法，其中所述暴露发生于体外。
168.权利要求164的方法，其中所述暴露发生于体内。
169.一种测定怀疑含有CD79b的生物学样品中CD79b的存在情况的方法，所述方法包括使所述样品暴露于权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258任一项的抗体，并测定所述抗体对所述样品中CD79b的结合，其中所述抗体结合至所述样品中的CD79b指示所述样品中存在所述蛋白质。
170.权利要求169的方法，其中所述生物学样品来自怀疑患有B细胞增殖性病症的患者。
171.权利要求170的方法，其中所述B细胞增殖性病症是选自淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
172.一种使权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258任一项的抗体结合至表达CD79b的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞接触权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258任一项的抗体。
173.权利要求172的方法，其中所述抗体是偶联至细胞毒剂的。
174.权利要求172的方法，其中所述抗体是偶联至生长抑制剂的。
175.一种半胱氨酸改造抗体，其包含一个或多个游离半胱氨酸氨基酸，其中所述半胱氨酸改造抗体是通过包括用游离半胱氨酸氨基酸替换亲本抗体的一个或多个氨基酸残基的方法制备的，其中所述亲本抗体是权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体。
176.权利要求175的半胱氨酸改造抗体，其中所述一个或多个游离半胱氨酸氨基酸具有0.6-1.0范围中的硫醇反应性值。
177.权利要求175的半胱氨酸改造抗体，其中所述半胱氨酸改造抗体比亲本抗体更具与硫醇反应性试剂的反应性。
178.权利要求175的半胱氨酸改造抗体，其中所述方法进一步包括通过使半胱氨酸改造抗体与硫醇反应性试剂起反应来测定所述半胱氨酸改造抗体的硫醇反应性；其中所述半胱氨酸改造抗体比亲本抗体更具与硫醇反应性试剂的反应性。
179.权利要求175的半胱氨酸改造抗体，其中所述一个或多个游离半胱氨酸氨基酸残基位于轻链中。
180.权利要求175的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是包含共价附着至细胞毒剂的半胱氨酸改造抗体的免疫偶联物。
181.权利要求180的半胱氨酸改造抗体，其中所述细胞毒剂选自毒素、化疗剂、药物模块、抗生素、放射性同位素和溶核酶。
182.权利要求175的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是共价附着至捕捉标记物、检测标记物或固体支持物的。
183.权利要求182的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是共价附着至生物素捕捉标记物的。
184.权利要求182的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是共价附着至荧光染料检测标记物的。
185.权利要求184的半胱氨酸改造抗体，其中所述荧光染料选自荧光素型、罗丹明型、丹酰、丽丝胺、花青、藻红蛋白、德州红、及其类似物。
186.权利要求182的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是共价附着至放射性核素检测标记物的，该放射性核素选自3H、11C、14C、18F、32P、35S、64Cu、68Ga、86Y、99Tc、111In、123I、124I、125I、131I、133Xe、177Lu、211At和213Bi。
187.权利要求182的半胱氨酸改造抗体，其中所述抗体是通过螯合配体共价附着至检测标记物的。
188.权利要求187的半胱氨酸改造抗体，其中所述螯合配体是选自DOTA、DOTP、DOTMA、DTPA和TETA。
189.权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体，其包含清蛋白结合肽。
190.权利要求188的抗体，其中所述清蛋白结合肽选自SEQ ID NO：246-250。
191.一种半胱氨酸改造抗体，其在选自下组的一个或多个位置处包含一个或多个游离半胱氨酸氨基酸：亲本抗体中依照Kabat编号规则的轻链15、110、114、121、127、168和205，及依照Kabat编号规则的重链5、23、84、112和依照EU编号规则的重链118、120、282、375和400，其中所述亲本抗体是权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258的抗体。
192.权利要求191的抗体，其中半胱氨酸位于轻链第205位。
193.权利要求191的抗体，其中半胱氨酸位于重链第118位。
194.权利要求191的抗体，其中半胱氨酸是位于重链第400位。
195.权利要求191的抗体，其中所述抗体选自单克隆抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人抗体和人源化抗体。
196.权利要求191的抗体，其是抗体片段。
197.权利要求196的抗体，其中所述抗体片段是Fab片段。
198.权利要求191的抗体，其选自嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。
199.权利要求191的抗体，其是在细菌中生成的。
200.权利要求191的抗体，其是在CHO细胞中生成的。
201.一种测定怀疑含有下述蛋白质的样品中CD79b蛋白质的存在情况的方法，所述方法包括使所述样品暴露于权利要求187的抗体，并测定所述抗体对所述样品中所述CD79b蛋白质的结合，其中所述抗体结合至所述蛋白质指示所述样品中存在所述蛋白质。
202.权利要求201的方法，其中所述样品包含怀疑表达所述CD79b蛋白质的细胞。
203.权利要求201的方法，其中所述细胞是B细胞。
204.权利要求201的方法，其中所述抗体是共价附着至标记物的，该标记物选自荧光染料、放射性同位素、生物素或金属络合配体。
205.一种药物配制剂，其包含权利要求191的抗CD79b抗体和药学可接受稀释剂、载体或赋形剂。
206.权利要求191的抗体，其中所述抗体是共价附着至auristatin或美登木素生物碱药物模块的，由此抗体药物偶联物形成。
207.权利要求206的抗体-药物偶联物，其包含抗体(Ab)和auristatin或美登木素生物碱药物模块(D)，其中所述半胱氨酸改造抗体是通过接头模块(L)经一个或多个游离半胱氨酸氨基酸附着至D的；该化合物具有式I：
Ab-(L-D)p               I
其中p是1、2、3或4。
208.权利要求207的抗体-药物偶联物化合物，其中p是2。
209.权利要求207的抗体-药物偶联物化合物，其中L具有式：
-Aa-Ww-Yy-
其中：
A是延伸物单元，其共价附着至半胱氨酸改造抗体(Ab)的半胱氨酸硫醇；
a是0或1；
各个W独立地是氨基酸单元；
w是范围为0至12的整数；
Y是间隔物单元，其共价附着至药物模块；且
y是0、1或2。
210.权利要求209的抗体-药物偶联物化合物，其具有式：
Figure FPA00001058502900161
其中PAB是对氨基苄基氨甲酰基，且R17是选自(CH2)r、C3-C8碳环基、O-(CH2)r、亚芳基、(CH2)r-亚芳基、-亚芳基-(CH2)r-、(CH2)r-(C3-C8碳环基)、(C3-C8碳环基)-(CH2)r、C3-C8杂环基、(CH2)r-(C3-C8杂环基)、-(C3-C8杂环基)-(CH2)r-、-(CH2)rC(O)NRb(CH2)r-、-(CH2CH2O)r-、-(CH2CH2O)r-CH2-、-(CH2)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-、-(CH2)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2-、-(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-、-(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2CH2O)r-CH2-和-(CH2CH2O)rC(O)NRb(CH2)r-的二价基；其中Rb是H、C1-C6烃基、苯基或苄基；且r独立地是范围为1至10的整数。
211.权利要求209的抗体-药物偶联物化合物，其中Ww是缬氨酸-瓜氨酸。
212.权利要求209的抗体-药物偶联物化合物，其中R17是(CH2)5或(CH2)2。
213.权利要求209的抗体-药物偶联物化合物，其具有式：
Figure FPA00001058502900162
214.权利要求213的抗体-药物偶联物化合物，其中R17是(CH2)5或(CH2)2。
215.权利要求209的抗体-药物偶联物化合物，其具有式：
216.权利要求207的抗体-药物偶联物化合物，其中L是SMCC、SPP、SPDB或BMPEO。
217.权利要求207的抗体-药物偶联物化合物，其中D是MMAE，其具有结构：
Figure FPA00001058502900171
其中波浪线指出对接头L的附着位点。
218.权利要求207的抗体-药物偶联物化合物，其中D是MMAF，其具有结构：
其中波浪线指出对接头L的附着位点。
219.权利要求207的抗体-药物偶联物化合物，其中D是DM1或DM4，其具有结构：
Figure FPA00001058502900173
其中波浪线指出对接头L的附着位点。
220.权利要求206的抗体-药物偶联物化合物，其中所述抗体选自单克隆抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体和抗体片段。
221.权利要求206的抗体-药物偶联物化合物，其中所述抗体片段是Fab片段。
222.一种抗体-药物偶联物化合物，其选自结构：
Figure FPA00001058502900181
Ab-MC-vc-PAB-MMAF
Figure FPA00001058502900182
Ab-MC-vc-PAB-MMAE
Figure FPA00001058502900183
Ab-MC-MMAE
Figure FPA00001058502900184
Ab-MC-MMAF
Ab-BMPEO-DM1
其中Val是缬氨酸；Cit是瓜氨酸；p是1、2、3或4；且Ab是权利要求191的抗体。
223.权利要求206的抗体药物偶联物，其中所述auristatin是MMAE或MMAF。
224.权利要求207的抗体药物偶联物，其中L是MC-val-cit-PAB或MC。
225.一种用于检测B细胞的测定法，包括：
(a)使细胞暴露于权利要求206的抗体-药物偶联物化合物；并
(b)测定所述抗体-药物偶联物化合物对所述细胞的结合程度。
226.一种抑制细胞增殖的方法，包括用权利要求206的抗体-药物偶联物化合物处理细胞培养基中的哺乳动物癌性B细胞，由此所述癌性B细胞的增殖得到抑制。
227.一种药物配制剂，其包含权利要求206的抗体-药物偶联物和药学可接受稀释剂、载体或赋形剂。
228.一种治疗癌症的方法，包括给患者施用权利要求227的药物配制剂。
229.权利要求228的方法，其中所述癌症选自下组：淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
230.权利要求228的方法，其中给所述患者施用与所述抗体-药物偶联物化合物组合的细胞毒剂。
231.一种制品，其包含：
权利要求227的药物配制剂；
容器；和
包装插页或标签，其指明该化合物可用于治疗以CD79b多肽过表达为特征的癌症。
232.权利要求231的制品，其中所述癌症选自下组：淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、攻击性NHL、复发性攻击性NHL、复发性无痛性NHL、顽固性NHL、顽固性无痛性NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
233.一种用于制备抗体-药物偶联物化合物的方法，该抗体-药物偶联物化合物包含权利要求191的抗CD79b抗体(Ab)，和auristatin或美登木素生物碱药物模块(D)，其中该抗体是通过接头模块(L)经一个或多个改造的半胱氨酸氨基酸附着至D的；该化合物具有式I：
Ab-(L-D)p             I
其中p是1、2、3或4；该方法包括下列步骤：
(a)使该抗体的改造的半胱氨酸基团与接头试剂起反应以形成抗体-接头中间体Ab-L；并
(b)使Ab-L与活化的药物模块D起反应；由此抗体-药物偶联物形成；或包括下列步骤：
(c)使药物模块的亲核基团与接头试剂起反应以形成药物-接头中间体D-L；并
(d)使D-L与该抗体的改造的半胱氨酸基团起反应；由此抗体-药物偶联物形成。
234.权利要求233的方法，进一步包括在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达所述抗体的步骤。
235.权利要求233的方法，进一步包括用还原剂处理所表达的抗体的步骤。
236.权利要求235的方法，其中所述还原剂选自TCEP和DTT。
237.权利要求235的方法，进一步包括在用还原剂处理后用氧化剂处理所表达的抗体的步骤。
238.权利要求237的方法，其中所述氧化剂选自硫酸铜、脱氢抗坏血酸和空气。
239.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：304或228任一项的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链序列。
240.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：303具有至少90％序列同一性的轻链序列和与氨基酸序列SEQ ID NO：228具有至少90％序列同一性的重链序列。
241.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：306或230任一项的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链序列。
242.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：305具有至少90％序列同一性的轻链序列和与氨基酸序列SEQ ID NO：230具有至少90％序列同一性的重链序列。
243.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：308或232任一项的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链序列。
244.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：307具有至少90％序列同一性的轻链序列和与氨基酸序列SEQ ID NO：232具有至少90％序列同一性的重链序列。
245.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：6或236任一项的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链序列。
246.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：4或235任一项的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链序列。
247.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：4具有至少90％序列同一性的轻链序列和与氨基酸序列SEQ ID NO：236具有至少90％序列同一性的重链序列。
248.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：235具有至少90％序列同一性的轻链序列和与氨基酸序列SEQ ID NO：6具有至少90％序列同一性的重链序列。
249.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：301的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变域。
250.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：302的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
251.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：301的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变域和与选自SEQ ID NO：302的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
252.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：243或244任一项的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链序列。
253.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：241或300任一项的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链序列。
254.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：241具有至少90％序列同一性的轻链序列和与氨基酸序列SEQ ID NO：244具有至少90％序列同一性的重链序列。
255.权利要求191的抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO：300具有至少90％序列同一性的轻链序列和与氨基酸序列SEQ ID NO：243具有至少90％序列同一性的重链序列。
256.一种组合物，其包含权利要求1、6-10、58、69、80、91、115、118、121、124、251或258任一项的抗体。
257.权利要求256的组合物，其中所述组合物包含载体。
258.一种与CD79b结合的抗体，其中所述抗体包含与选自SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的重链可变域和与选自SEQ ID NO：10的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变域。
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