KR20140084242A - Ｐｓｍａ 항체-약물 접합체 - Google Patents

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당서 마
폴 제이. 마돈
윌리암 씨. 올손
스베틀라나 오. 도로니나
브라이언 이. 토키
피터 디. 센터
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피에스엠에이 디벨롭먼트 캄파니, 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 일반적으로 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 전립선-특이적 막 항원 (PSMA)에 결합하고 모노메틸라우리스타틴 노레페드린 또는 모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌에 접합되는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 ADC에 관한 것이다. 항체-약물 접합체는 적어도 250의 PC-3™ 세포 대 C4-C2 또는 LNCaP™ 세포 선택성을 갖는다. 본 발명은 또한 부분적으로 ADC를 사용한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 방법은 예를 들어 PSMA-매개 질병을 치료하기 위한 방법을 포함한다.

Description

ＰＳＭＡ 항체-약물 접합체 {PSMA ANTIBODY-DRUG CONJUGATES}
관련 출원
본 출원은 35 U.S.C §119 하에서 미국 임시출원 60/692,399호 (2005년 6월 20일 출원) 및 미국 임시출원 60/792,360호 (2006년 4월 14일 출원) (이들의 각각의 내용은 그 전체가 참고문헌으로 포함된다)의 권리를 청구한다.
정부 지원
본 발명의 측면은 미국 국립보건원 보조금 CA107653 (DM) 및 CA96075 (GPD)으로부터의 자금조달을 사용하여 행해질 수도 있다. 따라서, 정부는 본 발명에 대한 권리를 가질 수도 있다.
본 발명은 일반적으로 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 전립선-특이적 막 항원(PSMA)에 결합하고 모노메틸라우리스타틴 노레페드린 (MMAE) 또는 모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌(MMAF)에 접합되는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 ADC에 관한 것이다. 항체-약물 접합체는 적어도 250의 PC-3™ 세포 대 C4-2 또는 LNCaP™ 세포 선택성을 갖는다. 본 발명은 부분적으로 ADC를 사용한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 방법은 예를 들어 PSMA-매개 질병의 치료 방법을 포함한다.
전립선 암은 가장 일반적인 악성종양이고 미국에서 남성의 암 사망의 두 번째로 주된 원인이다 [Jemal A, 등, CA Cancer J Clin 2005; 55:10-30]. 국소화 전립선 암은 전형적으로 수술 또는 방사선으로 치료되고, 재발 질병은 안드로겐 절제로 일시적으로 제어될 수 있다 [Klein EA, 등, Urol Clin North Am 2003; 30:315-30]. 그러나, 대부분의 모든 전립선 암종은 결국 호르몬 불응성이 되고 이어서 빠르게 진행한다 [Denmeade SR 등, Nat Rev Cancer 2002; 2:389-96]. 호르몬-불응성 또는 안드로겐-비의존성 전립선 암은 종래의 화학요법에 대해 고 저항성인 것으로 입증되었다. 완화시키는 간호를 제외하고, 유일하게 승인된 화학요법은 프레드니존과 조합된 도세탁셀이고, 이것은 약간의 (2.4개월) 생존 장점을 제공한다 [Gulley J. 등, Am J Ther. 2004; 351:1513-20; Petrylak DP, 등, New Engl J Med 2004; 351: 1513-20]. 신규의 분자 표적 요법이 요구되고 있다.
발명의 요약
여기에 제공된 본 발명은 특히 높은 선택성을 나타내는 ADC에 관한 것이다. 본 발명의 한가지 측면에서, PSMA에 결합하고 모노메틸라우리스타틴 노레페드린 또는 모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌에 접합된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체가 제공되며, 여기에서 항체-약물 접합체는 적어도 250의 PC-3™ 세포 대 C4-2 또는 LNCaP™ 세포 선택성을 갖는다. 하나의 구현양태에서, 선택성은 적어도 500, 1000, 2500, 6000 또는 13,000이다. 다른 구현양태에서, 선택성은 1567, 6286 또는 13,636이다. 일부 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 적어도 3, 4 또는 5개 모노메틸라우리스타틴 노레페드린 또는 모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌 분자에 접합된다.
일부 구현양태에서, 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있는 항체의 예가 제공된다. 다른 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PSMA에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 또 다른 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PSMA의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 추가의 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PSMA의 입체형태적 에피토프에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (i) PSMA 상에서 표적 에피토프에 대한 두 번째 항체의 특이적 결합을 경쟁적으로 억제하거나, 또는 (ii) PSMA 3.7, PSMA 3.8, PSMA 3.9, PSMA 3.11, PSMA 5.4, PSMA 7.1, PSMA 7.3, PSMA 10.3, PSMA 1.8.3, PSMA A3.1.3, PSMA A3.3.1, 애브게닉스(Abgenix) 4.248.2, 애브게닉스 4.360.3, 애브게닉스 4.7.1, 애브게닉스 4.4.1, 애브게닉스 4.177.3, 애브게닉스 4.16.1, 애브게닉스 4.22.3, 애브게닉스 4.28.3, 애브게닉스 4.40.2, 애브게닉스 4.48.3, 애브게닉스 4.49.1, 애브게닉스 4.209.3, 애브게닉스 4.219.3, 애브게닉스 4.288.1, 애브게닉스 4.333.1, 애브게닉스 4.54.1, 애브게닉스 4.153.1, 애브게닉스 4.232.3, 애브게닉스 4.292.3, 애브게닉스 4.304.1, 애브게닉스 4.78.1 및 애브게닉스 4.152.1로 구성된 군에서 선택된 항체에 의해 한정되는 PSMA 상의 에피토프에 결합한다. 다른 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은, (a) 서열 2-7에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 (b) 서열 8-13에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한 항체들로 구성된 군에서 선택되는 항체에 의해 한정되는 PSMA 상의 에피토프에 결합한다.
일부 구현양태에서, 두 번째 항체는 PSMA 3.7, PSMA 3.8, PSMA 3.9, PSMA 3.11, PSMA 5.4, PSMA 7.1, PSMA 7.3, PSMA 10.3, PSMA 1.8.3, PSMA A3.1.3, PSMA A3.3.1, 애브게닉스(Abgenix) 4.248.2, 애브게닉스 4.360.3, 애브게닉스 4.7.1, 애브게닉스 4.4.1, 애브게닉스 4.177.3, 애브게닉스 4.16.1, 애브게닉스 4.22.3, 애브게닉스 4.28.3, 애브게닉스 4.40.2, 애브게닉스 4.48.3, 애브게닉스 4.49.1, 애브게닉스 4.209.3, 애브게닉스 4.219.3, 애브게닉스 4.288.1, 애브게닉스 4.333.1, 애브게닉스 4.54.1, 애브게닉스 4.153.1, 애브게닉스 4.232.3, 애브게닉스 4.292.3, 애브게닉스 4.304.1, 애브게닉스 4.78.1 및 애브게닉스 4.152.1 및 (a) 서열 2-7에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 (b) 서열 8-13에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한 항체로 구성된 군에서 선택된다.
다른 구현양태에서, 두 번째 항체는 AB-PG1-XG1-006, AB-PG1-XG1-026 및 (a) 서열 2 및 3에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 (b) 서열 8 및 9에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한 항체로 구성된 군에서 선택된다. 하나의 구현양태에서, 두 번째 항체는 (a) 서열 2에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 (b) 서열 8에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한다. 추가의 구현양태에서, 두 번째 항체는 (a) 서열 3에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 (b) 서열 9에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한다.
일부 구현양태에서, 항체-약물 접합체의 항체는, AB-PG1-XG1-006, AB-PG1-XG1-026, 및 (a) 서열 2 및 3에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄 및 (b) 서열 8 및 9에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한 항체로 구성된 군에서 선택되는 항체를 코드화하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 항체이다. 하나의 구현양태에서, 항체는 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 다른 구현양태에서, 항체는 적어도 97% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 또 다른 구현양태에서, 항체는 적어도 98% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 추가의 구현양태에서, 항체는 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다.
다른 구현양태에서, 여기에 제공된 항체-약물 접합체의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 AB-PG1-XG1-006, AB-PG1-XG1-026 또는 그의 항원-결합 단편이다. 또 다른 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 (a) 서열 2에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 (b) 서열 8에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한 항체, 및 그의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다. 하나의 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (a) 서열 2 및 3에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 (b) 서열 8 및 9에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄, 및 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 다른 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (a) 서열 3에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 (b) 서열 9에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄, 및 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD, IgE이거나 또는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD 또는 IgE의 면역글로불린 불변 및/또는 가변 도메인을 갖는다.
추가의 구현양태에서, 항체는 단클론성 항체이다. 또 다른 구현양태에서, 항체는 인간화 항체이다. 또 다른 구현양태에서, 항체는 인간 항체이다. 또 다른 구현양태에서, 항체는 재조합 항체이다. 추가의 구현양태에서, 항체는 키메라 항체이다. 추가의 구현양태에서, 항체는 이특이적 또는 다특이적 항체이다. 또 다른 구현양태에서, 항체는 단일 사슬 항체이다.
다른 구현양태에서, 항원-결합 단편은 Fab 단편, F(ab')2 단편 또는 Fv 단편이다. 또 다른 구현양태에서, 항원-결합 단편은 CDR3-함유 단편이다.
일부 구현양태에서, 모노메틸라우리스타틴 노레페드린(MMAE) 또는 모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌(MMAF)이 화학식 1의 화합물:
<화학식 1>
-An-Ym-Zm-Xn-Wn-
(상기 식에서, A는 카르복실 아실 단위이고; Y는 아미노산이고; Z는 아미노산이고; X 및 W는 각각 자기-희생 스페이서이고; n은 0 또는 1의 정수이고; m은 0 또는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 정수이다)
과 함께 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합된다. 일부 구현양태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 2로 표시된다.
<화학식 2>
L-{An-Ym-Zm-Xn-Wn-D}p
(상기 식에서,
L은 PSMA에 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고, D는 MMAE 또는 MMAF이고, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8의 정수이다)
접합체의 성분들의 나머지는 상기 정의된 바와 같다.
하나의 구현양태에서, 카르복실 단위 "An"가 항체 또는 그의 항원-결합 단편으로부터 유래된 황 원자를 통해 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 연결된다.
Figure pat00001
하나의 구현양태에서, A는 다음과 같다.
Figure pat00002
(상기 식에서, q는 1 내지 10이다)
따라서, 하나의 구현양태에서, 화학식 2의 접합체는 다음과 같다.
Figure pat00003
(상기 식에서, L, Y, Z, X, W, D, n, m, q 및 p는 상기 정의된 바와 같다)
다른 구현양태에서, A는 4-(N-숙신이미도메틸)시클로헥산-1-카르보닐, m-숙신이미도벤조일, 4-(p-숙신이미도페닐)-부티릴, 4-(2-아세트아미도)벤조일, 3-티오프로피오닐, 4-(1-티오에틸)-벤조일, 6-(3-티오프로피오닐아미도)-헥사노일 또는 말레이미드 카프로일이다. 추가의 구현양태에서, A는 말레이미드 카프로일이다.
다른 구현양태에서, Y는 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트립토판 또는 프롤린이다. 또 다른 구현양태에서, Y는 발린이다. 추가의 구현양태에서, Z은 리신, 아세틸 또는 포르밀로 보호된 리신, 아르기닌, 토실 또는 니트로 기로 보호된 아르기닌, 히스티딘, 오르니틴, 아세틸 또는 포르밀로 보호된 오르니틴, 또는 시트룰린이다. 추가의 구현양태에서, Z은 시트룰린이다. 하나의 구현양태에서, Ym-Zm은 발린-시트룰린이다. 다른 구현양태에서, Ym-Zm은 프로테아제에 의해 선택적으로 절단될 수 있는 단백질 서열이다.
추가의 구현양태에서, X는 하기 화학식을 가진 화합물이다.
Figure pat00004
상기 식에서, T는 O, N 또는 S이다. 다른 구현양태에서, X는 화학식 -HN-R1-COT (상기 식에서, R1은 C1-C5 알킬이고, T는 O, N 또는 S이다)을 가진 화합물이다. 추가의 구현양태에서, X는 하기 화학식을 가진 화합물이다.
Figure pat00005
상기 식에서, T는 O, N 또는 S이고, R2는 H 또는 C1-C5 알킬이다. 하나의 구현양태에서, X는 p-아미노벤질카르바모일옥시이다. 다른 구현양태에서, X는 p-아미노벤질알콜이다. 추가의 구현양태에서, X는 p-아미노벤질카르바메이트이다. 추가의 구현양태에서, X는 p-아미노벤질옥시카르보닐이다. 다른 구현양태에서, X는 γ-아미노부티르산; α,α-디메틸 γ-아미노부티르산 또는 β,β-디메틸 γ-아미노부티르산이다.
일부 구현양태에서, W는 하기 화학식이다.
Figure pat00006
상기 식에서, T는 O, S 또는 N이다.
다른 구현양태에서, m 및 n은 0이다.
하나의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 AB-PG1-XG1-006-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 노레페드린이다. 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 AB-PG1-XG1-006-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌이다. 추가의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 AB-PG1-XG1-006-말레이미드 카프로일-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌이다. 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 AB-PG1-XG1-026-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 노레페드린이다. 또 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 AB-PG1-XG1-026-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌이다. 추가의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 AB-PG1-XG1-026-말레이미드 카프로일-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌이다. 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 도 6A, 도 6B 또는 도 6C에 나타낸 바와 같이 화합물에 접합된 PSMA-결합 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
일부 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 생 세포에 결합된다. 하나의 구현양태에서, 세포는 종양 세포이다. 다른 구현양태에서, 종양 세포는 전립선 종양 세포이다. 추가의 구현양태에서, 종양 세포는 비-전립선 종양의 신혈관계의 세포이다. 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 PSMA에 결합하기 위해 세포 용해를 필요로 하지 않는다. 또 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 세포-주기 정지를 유도한다. 추가의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 PSMA-발현 세포의 성장을 억제한다. 하나의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 1×10-10M 미만의 IC50를 가진 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개한다. 다른 구현양태에서, IC50는 1×10-11 M 미만이다. 또 다른 구현양태에서, IC50는 1×10-12 M 미만이다. 추가의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 11 내지 208×10-12 M의 IC50을 가진 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개한다. 추가의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 42 내지 208×10-12 M의 IC50을 가진 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개한다. 추가의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 60 내지 208×10-12 M의 IC50을 가진 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개한다. 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 65 내지 208×10-12 M의 IC50을 가진 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개한다. 하나의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 11×10-12 M의 IC50을 가진 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개한다. 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 42×10-12 M의 IC50을 가진 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개한다. 또 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 60×10-12 M의 IC50을 가진 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개한다. 추가의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 83×10-12 M의 IC50을 가진 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개한다.
다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 6mg/kg의 투여량으로 q4d × 6의 섭생법으로 생쥐에게 투여될 때 적어도 20%, 30%, 40% 또는 50%의 치료율을 달성한다. 하나의 구현양태에서, 치료율은 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 그 이상이다. 하나의 구현양태에서, 생쥐는 안드로겐-비의존성 인간 전립선 암의 모델이다. 다른 구현양태에서, 생쥐는 왼쪽 뒷다리에서 C4-2 세포로 근육내 이식된 누드 생쥐이다. 추가의 구현양태에서, 생쥐는 실시예에 제공된 것과 같다.
일부 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 표지에 결합된다. 다른 구현양태에서, 표지는 형광 표지, 효소 표지, 방사능 표지, 핵자기 공명 활성 표지, 발광 표지 또는 발색단 표지이다.
일부 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 동결건조 형태로 포장된다. 다른 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 수성 매질 중에 포장된다. 추가의 구현양태에서, 항체-약물 접합체는 무균 형태이다.
또한, 하나 이상의 항체-약물 접합체를 포함하는 조성물이 제공된다. 일부 구현양태에서, 조성물은 2 이상의 상이한 항체-약물 접합체를 포함한다. 다른 구현양태에서, 하나 이상의 항체-약물 접합체 및 하나 이상의 비접합된 항-PSMA 항체를 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 구현양태에서, 조성물은 제약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제를 더욱 포함한다. 다른 구현양태에서, 조성물은 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합을 더욱 포함한다. 하나의 구현양태에서, 항종양제는 세포독성제, 종양 신혈관계에 작용하는 약제 또는 이들의 조합이다. 다른 구현양태에서, 항종양제는 도세탁셀이다. 또 다른 구현양태에서, 면역조절제는 사이토카인, 케모카인, 아주반트 또는 이들의 조합이다. 또 다른 구현양태에서, 면역조절제는 인터류킨-2, α-인터페론, γ-인터페론, 종양 괴사 인자-α, 면역자극 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합이다. 추가의 구현양태에서, 코르티코스테로이드는 프레드니존 또는 히드로코르티존이다. 추가의 구현양태에서, 조성물은 프레드니존 및 도세탁셀을 포함한다.
본 발명의 항체-약물 접합체 및 조성물을 사용하는 다양한 방법이 제공된다. 하나의 구현양태에서, PSMA-발현 세포를 PSMA-발현 세포의 성장을 억제하기 위해 효과적인 양의 항체-약물 접합체와 접촉시키는 것을 포함하는, PSMA-발현 세포의 성장을 억제하는 방법이 제공된다. 다른 구현양태에서, PSMA-발현 세포에서 세포-주기 정지를 유도하기에 효과적인 양의 항체-약물 접합체와 PSMA-발현 세포를 접촉시키는 것을 포함하는, PSMA-발현 세포에서 세포-주기 정지를 달성하는 방법이 제공된다. 또 다른 구현양태에서, PSMA-매개 질병을 치료하기 위해 효과적인 양의 항체-약물 접합체를 PSMA-매개 질병을 가진 피험자에게 투여하는 것을 포함하는 PSMA-매개 질병의 치료 방법이 제공된다. 추가의 구현양태에서, 종양의 성장을 억제하기에 효과적인 양의 항체-약물 접합체과 종양의 신혈관계의 PSMA-발현 세포를 접촉시키는 것을 포함하는, 종양의 성장을 억제하는 방법이 제공된다.
하나의 구현양태에서, PSMA-매개 질병은 암이다. 다른 구현양태에서, 암은 전립선 암이다. 또 다른 구현양태에서, 암은 비-전립선 암이다. 일부 구현양태에서, 비-전립선 암은 방광암, 췌장암, 폐암, 신장암, 육종, 유방암, 뇌암, 신경내분비 암종, 결장암, 고환암 또는 흑색종이다.
일부 구현양태에서, 방법은 PSMA-매개 질병을 치료하기 위해 다른 치료제를 공동-투여하는 것을 더욱 포함한다. 다른 구현양태에서, 방법은 PSMA-발현 세포를 다른 치료제와 접촉시키는 것을 더욱 포함한다. 일부 구현양태에서, 다른 치료제는 항체-약물 접합체의 투여 전, 동안 또는 후에 투여된다. 하나의 구현양태에서, 다른 치료제는 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 그의 조합이다. 다른 구현양태에서, 항종양제는 세포독성제, 종양 신혈관계에 작용하는 약제 또는 이들의 조합이다. 또 다른 구현양태에서, 항종양 제는 도세탁셀이다. 또 다른 구현양태에서, 면역조절제는 사이토카인, 케모카인, 아주반트 또는 이들의 조합이다. 또 다른 구현양태에서, 면역자극제는 인터류킨-2, α-인터페론, γ-인터페론, 종양 괴사 인자-α, 면역자극 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합이다. 추가의 구현양태에서, 코르티코스테로이드는 프레드니존 또는 히드로코르티존이다. 하나의 구현양태에서, 치료제는 백신이다. 다른 구현양태에서, 백신은 PSMA에 대해 피험자를 면역화한다. 다른 구현양태에서, 방법은 또 다른 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구현양태에서, 또 다른 치료제는 프레드니존이다. 따라서, 하나의 구현양태에서, 도세탁셀 및 프레드니존 양쪽 모두가 투여된다.
일부 구현양태에서, PSMA-발현 세포는 전립선 종양 세포 또는 비-전립선 종양의 신혈관계의 세포이다. 일부 구현양태에서, PSMA-발현 세포는 안드로겐-의존성 세포 또는 안드로겐-비의존성 세포이다.
본 발명의 각각의 한정은 본 발명의 다양한 구현양태를 포함할 수 있다. 따라서, 어느 하나의 요소 또는 요소들의 조합을 수반하는 본 발명의 각각의 한정이 본 발명의 각각의 측면에 포함될 수 있는 것으로 예상된다.
도 1은 C4-2 세포 상에서 111In-표지화 PSMA mAb의 내재화율 및 총 결합을 나타내는 그래프이다. C4-2 세포를 37℃, 5% CO2에서 111In-표지화 mAb와 함께 배양하였다. 표시된 시간에, 세포를 세척하여 비결합 mAb를 제거하고, 낮은 pH 완충액을 사용하여 표면 결합 mAb를 떼어내었다. 감마 계수기를 사용하여, 낮은 pH 용출물 및 세포 펠릿의 방사능 (분 당 수 (CPM))를 별도로 계수하였다. 내재화율 (도 1A)을 CPM 세포 펠릿/(CPM 세포 펠릿 + CPM 낮은 pH 용출물) X 100으로 계산하였다. 총 결합 (도 1B)은 세포 펠릿의 CPM + 낮은 pH 용출물의 CPM을 나타낸다.
도 2는 3T3™-PSMA 세포에 대한 PSMA mAb 및 ADC의 결합을 나타내는 그래프이다. 3T3™-PSMA 세포를 증가하는 농도의 PSMA mAb (채워진 사각형), PSMA ADC (빈 사각형) 또는 이소형-대조 ADC (빈 삼각형)와 함께 배양하였다. 세포를 얼음 위에서 1시간 동안 배양한 다음 세척하여 비결합 mAb 또는 ADC를 제거하였다. 이어서, 세포를 염소 항-인간 IgG-FITC와 함께 배양하고 다시 세척하고 유동 세포측정법에 의해 검사하였다. 평균 형광 강도(MFI)를 mAb 또는 ADC 농도의 함수로서 그래프화하였다.
도 3은 PSMA-양성 및 PSMA-음성 전립선 암 세포주에 대한 PSMA ADC 및 대조 ADC의 시험관내 세포독성을 나타내는 그래프이다. 96웰 마이크로플레이트에서 PSMA-양성 C4-2 세포 (도 3A) 및 PSMA-음성 PC-3™ 세포 (도 3B)를 다양한 농도에서 ADC에 노출시켰다. 96 시간 후에, 알라마르 블루를 사용하여 처리 및 비처리 배양물에서 세포 생존을 분석하였다.
도 4는 이종이식 연구에서 카플란-메이어 생존 및 혈청 PSA 수준을 나타내는 그래프이다. 누드 생쥐를 C4-2 세포로 근육내 이식하고, 17일에 혈청 PSA에 따라 처리 군 (군 당 6마리 생쥐)으로 무작위로 배정한 다음, PSMA ADC 또는 부형제로 q4d x 3으로 처리하였다. 도 4A는 0 (부형제 대조, 점선), 2 mg/kg (가는 실선) 및 10 mg/kg PSMA ADC로 처리된 동물의 생존을 나타낸다. 도 4B는 0 (채워진 기둥), 2 mg/kg (줄무늬 기둥) 및 10 mg/kg (빈 기둥) PSMA ADC로 처리된 생쥐에서 30일에 걸친 평균 PSA 값을 제공한다. 대조 군을 위한 30일 데이타는 30일간 생존하지 않은 2마리 생쥐에 대한 27일 평가를 포함한다.
도 5는 다른 이종이식 연구에서 처리된 동물의 카플란-메이어 생존 곡선을 나타낸다. 누드 생쥐를 C4-2 세포로 근육내 이식하고, 14일에 혈청 PSA에 따라 처리 군 (군 당 5마리)으로 무작위로 배정한 다음, PSMA ADC 및 대조로 q4d x 6으로 처리하였다. 생쥐를 0 (부형제 대조, 채워진 원), 6 mg/kg 비변형 PSMA mAb (채워진 삼각형), 6 mg/kg 대조 ADC (빈 삼각형) 3 mg/kg PSMA ADC (빈 사각형) 및 6 mg/kg PSMA ADC (채워진 사각형)으로 처리하였다.
도 6은 3개의 상이한 약물-링커의 화학 구조를 나타낸다. 도 6A는 vcMMAE (말레이미도카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 E)의 구조를 제공한다. 도 6B는 vcMMAF (말레이미도카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 F)의 구조를 제공한다. 도 6C는 mcMMAF (말레이미도카프로일-모노메틸라우리스타틴 F)의 구조를 제공한다.
도 7은 PSMA-양성 (C4-2) 및 PSMA-음성 (PC-3™) 전립선 암 세포 주에 대한 PSMA ADC (vcMMAE (도 7A)), vcMMAF (도 7B), mcMMAF (도 7C))의 시험관내 세포독성을 증명한다. 96웰 마이크로플레이트에서의 세포를 다양한 농도에서 ADC에 노출시켰다. 4일 후에, 처리 및 비처리 배양물에서의 세포 생존을 알라마르 블루를 사용하여 분석하였다.
도 8은 세포 주기에 대한 PSMA ADC의 효과를 나타낸다. 각각의 패널에서, 좌측 피크는 G1 단계에 상응하고 우측 피크는 G2/M 단계에 상응한다. G2/M에서의 세포 백분율은 PSMA ADC로의 처리 시에 현저히 증가하고, DNA 합성 후에 일어나는 세포 분열의 저지와 일치한다. PSMA ADC는 모 3T3™ 세포의 주기에 영향을 미치지 않았다.
도 9는 PSMA ADC vcMMAE v. vcMMAF의 비교로부터의 결과를 나타낸다.
본 발명은 부분적으로, MMAE (또한, 모노메틸라우리스타틴 E 및 모노메틸라우리스타틴 노레페드린이라 일컬어짐) 또는 MMAF (또한 모노메틸라우리스타틴 F 및 모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌이라 일컬어짐)에 접합된 PSMA-결합 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 ADC가, PSMA-발현 세포를 사멸시키기 위해 특히 유용하다는 놀라운 연구결과에 관한 것이다. ADC는 적어도 250의 PC-3™ 세포 대 C4-2 또는 LNCaP™ 세포 선택성을 가질 수 있다. 일부 구현양태에서, ADC는 (PSMA-발현 세포의) 특정한 수준의 세포 사멸, 예를 들어 피코몰 농도 또는 그 근처의 IC50 값을 나타낸다. 다른 구현양태에서, ADC는 6mg/kg의 투여량에서 q4d×6의 섭생법으로 ADC로 처리된 생쥐에서 적어도 20%, 30%, 40% 또는 50%의 치료율을 나타낸다. 따라서, 이러한 ADC를 사용하는 조성물 및 방법이 제공된다. 일부 구현양태에서, 생쥐는 실시예에 제공된 것이다. 하나의 구현양태에서, 생쥐는 안드로겐-비의존성 인간 전립선 암의 모델이다. 다른 구현양태에서, 생쥐는 왼쪽 뒷다리에서 C4-2 세포로 근육내 이식된 누드 생쥐이다.
ADC의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PSMA에 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 하나의 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 특이적으로 PSMA에 결합하고 (예, PSMA의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하고, PSMA의 입체형태적 에피토프에 특이적으로 결합하는 등등), PSMA 상의 표적 에피토프에 두 번째 항원의 특이적 결합을 경쟁적으로 억제할 수 있으며, 여기에서 두 번째 항체는 PSMA 3.7, PSMA 3.8, PSMA 3.9, PSMA 3.11, PSMA 5.4, PSMA 7.1, PSMA 7.3, PSMA 10.3, PSMA 1.8.3, PSMA A3.1.3, PSMA A3.3.1, 애브게닉스(Abgenix) 4.248.2, 애브게닉스 4.360.3, 애브게닉스 4.7.1, 애브게닉스 4.4.1, 애브게닉스 4.177.3, 애브게닉스 4.16.1, 애브게닉스 4.22.3, 애브게닉스 4.28.3, 애브게닉스 4.40.2, 애브게닉스 4.48.3, 애브게닉스 4.49.1, 애브게닉스 4.209.3, 애브게닉스 4.219.3, 애브게닉스 4.288.1, 애브게닉스 4.333.1, 애브게닉스 4.54.1, 애브게닉스 4.153.1, 애브게닉스 4.232.3, 애브게닉스 4.292.3, 애브게닉스 4.304.1, 애브게닉스 4.78.1, 애브게닉스 4.152.1, 및 (a) 서열 2-7에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄 및 (b) 서열 8-13에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함하는 항체로 구성된 군에서 선택된다. 따라서, 두 번째 항체는 하이브리도마에 의해 생성되거나 표 1에 나타낸 플라스미드에 의해 코드화되는 항체를 포함한다. 이러한 하이브리도마 및 플라스미드는 특허 절차의 목적을 위해 국제 미생물 기탁 승인에 관한 부다페스트 조약의 요건에 따라 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 ("ATCC")에 국제 기탁 인가로서 기탁되어 있고 이행되며, 상기 나타낸 특허 기탁 명칭을 표 1에 나타낸다.
Figure pat00007
Figure pat00008
경쟁적 억제를 결정하기 위하여, 당업자에게 공지된 각종 분석방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 다른 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 의해 PSMA에 대한 결합을 경쟁적으로 억제하는지를 결정하기 위하여교차-경쟁 분석이 사용될 수 있다. 이들은 유동 세포측정법 또는 고체상 결합 분석을 사용한 세포-기초 방법을 포함한다. 고체 상 또는 용액 상에서, 세포의 표면위에서 발현되지 않는 PSMA 분자에 대해 교차-경쟁하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 능력을 평가하는 다른 분석방법이 또한 사용될 수 있다.
일부 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 PSMA 위에서 그의 표적 에피토프에 대한 두 번째 항체의 특이적 결합을 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%만큼 경쟁적으로 억제한다. 다양한 몰비 또는 질량비로 억제를 평가할 수 있다; 예를 들어 두 번째 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 비하여 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배 또는 그 이상의 몰 과량의 첫 번째 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용하여 경쟁적 결합 실험을 수행할 수 있다.
다른 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PSMA 3.7, PSMA 3.8, PSMA 3.9, PSMA 3.11, PSMA 5.4, PSMA 7.1, PSMA 7.3, PSMA 10.3, PSMA 1.8.3, PSMA A3.1.3, PSMA A3.3.1, 애브게닉스(Abgenix) 4.248.2, 애브게닉스 4.360.3, 애브게닉스 4.7.1, 애브게닉스 4.4.1, 애브게닉스 4.177.3, 애브게닉스 4.16.1, 애브게닉스 4.22.3, 애브게닉스 4.28.3, 애브게닉스 4.40.2, 애브게닉스 4.48.3, 애브게닉스 4.49.1, 애브게닉스 4.209.3, 애브게닉스 4.219.3, 애브게닉스 4.288.1, 애브게닉스 4.333.1, 애브게닉스 4.54.1, 애브게닉스 4.153.1, 애브게닉스 4.232.3, 애브게닉스 4.292.3, 애브게닉스 4.304.1, 애브게닉스 4.78.1, 애브게닉스 4.152.1, 및 (a) 서열 2-7에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄 및 (b) 서열 8-13에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함하는 항체로 구성된 군에서 선택되는 항체에 의해 한정되는 PSMA 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 따라서, ADC의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은, 하이브리도마에 의해 생성되거나 표 1에 제공된 플라스미드에 의해 코드화되는 항체에 의해 한정되는 PSMA 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 포함한다.
에피토프를 결정하기 위하여, 당 기술분야에 공지된 표준 에피토프 지도화 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 후보 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 동일한 에피토프에 결합하는지의 여부를 결정하기 위하여, 항체에 결합하는 PSMA 항원 (예, 합성 펩티드)의 단편 (펩티드)이 사용될 수 있다. 선형 에피토프를 위하여, 한정된 길이의 중복 펩티드 (예를 들어 8개 이상의 아미노산)가 합성된다. 펩티드는 1개 아미노산에 의해 상쇄될 수 있고, 그 결과 PSMA 단백질 서열의 모든 8개 아미노산 단편을 포함하는 일련의 펩티드들이 제조된다. 더욱 큰 상쇄, 예를 들어 2 또는 3개 아미노산을 사용함으로써 더욱 적은 펩티드가 제조될 수 있다. 또한, 더욱 긴 펩티드 (예를 들어, 9-, 10- 또는 11-량체)가 합성될 수 있다. 표면 플라스몬 공명 (BIACORE) 및 ELISA 분석을 포함한 표준 방법을 사용하여 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 대한 펩티드의 결합이 결정될 수 있다. 입체형태적 에피토프의 시험을 위하여, 더욱 큰 PSMA 단편이 사용될 수 있다. 입체형태적 에피토프를 한정하기 위해 질량 분광법을 사용하는 다른 방법이 설명되어 있고 사용될 수 있다 (예를 들어, [Baerga-Ortiz 등, Protein Science 11: 1300-1308, 2002] 및 그에 인용된 참고문헌). 문헌 [Current Protocols in Immunology, Coligan 등, John WIley & Sons]의 단원 6.8 ("Phage Display Selection and Analysis of B-cell Epitopes") 및 단원 9.8 ("Identification of Antigenic Determinants Using Synthetic Peptide Combinatorial Libraries") 과 같은 표준 실험 참고 서류에 에피토프 결정을 위한 다른 방법이 제공된다. 점 돌연변이 또는 결실을 공지된 에피토프에 도입한 다음, 돌연변이가 항체 또는 항원-결합 단편의 결합을 감소시키는지를 결정하기 위하여 하나 이상의 항체 또는 항원-결합 단편과의 결합을 시험함으로써 에피토프가 입증될 수 있다.
특별한 구현양태에서, ADC의 항체 또는 ADC의 항원-결합 단편이 유래되는 항체는 PSMA 3.7, PSMA 3.8, PSMA 3.9, PSMA 3.11, PSMA 5.4, PSMA 7.1, PSMA 7.3, PSMA 10.3, PSMA 1.8.3, PSMA A3.1.3, PSMA A3.3.1, 애브게닉스(Abgenix) 4.248.2, 애브게닉스 4.360.3, 애브게닉스 4.7.1, 애브게닉스 4.4.1, 애브게닉스 4.177.3, 애브게닉스 4.16.1, 애브게닉스 4.22.3, 애브게닉스 4.28.3, 애브게닉스 4.40.2, 애브게닉스 4.48.3, 애브게닉스 4.49.1, 애브게닉스 4.209.3, 애브게닉스 4.219.3, 애브게닉스 4.288.1, 애브게닉스 4.333.1, 애브게닉스 4.54.1, 애브게닉스 4.153.1, 애브게닉스 4.232.3, 애브게닉스 4.292.3, 애브게닉스 4.304.1, 애브게닉스 4.78.1, 애브게닉스 4.152.1으로 일컬어지는 하이브리도마에 의해 생성되는 것이다. 다른 구현양태에서, 항체는 표 1에 나타낸 플라스미드에 의해 코드화되는 것이다. 또 다른 특별한 구현양태에서, 항체는 서열 2-7에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 서열 8-13에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함하는 것이다.
여기에서 사용된 바와 같이, 침착된 하이브리도마 또는 플라스미드의 명칭은 항체의 명칭과 서로 바꾸어 사용될 수 있다. 명칭이 항체를 가리킬 때, 또는 명칭이 항체를 코드화하거나 생성하는 플라스미드 또는 하이브리도마를 가리킬 때가 당업자에게 명백할 것이다. 추가로, 항체 명칭은 표 1에 나타낸 명칭의 약칭 형태일 수도 있다. 예를 들어, 항체 AB-PG1-XG1-006은 AB-PG1-XG1-006, PG1-XG1-006, XG1-006, 006, 등으로 일컬어질 수 있다. 다른 예에서, 항체 명칭 PSMA 4.232.3은 PSMA 4.232.1, 4.232.3, 4.232.1, 4.232 등으로 일컬어질 수 있다. 항체의 명칭에서 모든 변형은 동일한 항체를 가리키고 상이한 것이 아닌 것으로 해석된다.
ADC의 항체 또는 ADC의 항원-결합 단편이 유래되는 항체는 중쇄 및 경쇄 서열의 특정한 세트에 의해 코드화되는 것을 포함한다. 하나의 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-006)은 서열 2 및 8에 기재된 코드화 영역 또는 핵산 서열의 영역을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 다른 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-026)은 서열 3 및 9에 기재된 핵산 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 또 다른 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-051)은 서열 4 및 10에 기재된 핵산 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 또 다른 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-069)는 서열 5 및 11에 기재된 핵산 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 다른 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-077)은 서열 6 및 12에 기재된 핵산 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 또 다른 구현양태에서, 항체 (PSMA 10.3)는 서열 7 및 13에 기재된 핵산 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 다른 구현양태에서, ADC의 항체 또는 ADC의 항원-결합 단편이 유래되는 항체는 서열 14, 18, 22, 26 및 30에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄 가변 영역, 및 서열 16, 20, 24, 28 및 32에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-006)는 서열 14 및 16에 기재된 핵산 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화되는 면역글로불린 가변 서열을 포함한다. 유사하게, 항체는 서열 15 및 17에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 가변 서열을 포함하는 것일 수 있다. 다른 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-026)는 서열 18 및 20에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화되는 면역글로불린 가변 서열을 포함하거나, 또는 서열 19 및 21에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로브린 가변 서열을 포함한다. 또 다른 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-051)는 서열 22 및 24에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화되는 면역글로불린 가변 서열을 포함하거나, 또는 서열 23 및 25에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로브린 가변 서열을 포함한다. 또 다른 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-069)는 서열 26 및 28에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화되는 면역글로불린 가변 서열을 포함하거나, 또는 서열 27 및 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로브린 가변 서열을 포함한다. 다른 구현양태에서, 항체 (AB-PG1-XG1-077)은 서열 30 및 32에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화되는 면역글로불린 가변 서열을 포함하거나, 또는 서열 31 및 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로브린 가변 서열을 포함한다. 다른 구현양태에서, 항체는 서열 15, 19, 23, 27 및 31에 기재된 아미노산 서열로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 17, 21, 25, 29 및 33에 기재된 아미노산 서열로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
여기에서 사용된 바와 같이, "코드화 영역"은 폴리펩티드 서열을 코드화하는 뉴클레오티드 서열의 영역을 가리킨다. 여기에서 그의 사용은 당 기술분야에 알려진 인식된 의미와 일치한다.
특정한 구현양태에서, ADC의 항체 또는 ADC의 항원-결합 단편이 유래되는 항체는 상기 핵산에 매우 상동성인 핵산 분자에 의해 코드화되는 것이다. 상동성 핵산 분자는, 일부 구현양태에서, 여기에 제공된 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 90% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 다른 구현양태에서, 뉴클레오티드 서열은 여기에 제공된 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99% 동일하다. 당업자에게 공지된 다양하고 공공 이용가능한 소프트웨어 도구를 사용하여 상동성을 계산할 수 있다. 일례의 도구는 국립보건원의 국립 바이오테크놀로지 정보 센터(NCBI) 웹사이트로부터 입수가능한 BLAST 시스템을 포함한다.
고 상동성 뉴클레오티드 서열을 확인하는 한가지 방법은 핵산 하이브리드화를 통해서이다. 따라서, 본 발명은 PSMA-결합 성질 및 여기에 기재된 다른 작용 성질을 가진 항체를 포함하고, 이것은 고 엄격성 조건 하에서 상기 핵산 분자에 하이브리드형성되는 핵산 분자에 의해 코드화된다. 관련된 서열의 동정은 폴리머라제 사슬 반응 (PCR) 및 관련된 핵산 서열을 클론화하기 위해 적절한 기타 증폭 기술을 사용하여 달성될 수 있다. PCR 프라이머는 CDR과 같은 주요 핵산 서열의 일부를 증폭하기 위해 선택될 수 있다.
여기에서 사용된 용어 "고 엄격성 조건"이란 당 기술분야가 친숙한 매개변수를 가리킨다. 핵산 하이브리드화 매개변수는 이러한 방법을 편집한 참고문헌, 예를 들어 [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, J.Sambrook 등, 제2판, Cold Spring Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989] 또는 [Current Protocols in Molecular Biology, F.M.Ausubel 등, eds. John Wiley & Sons, Inc., New York]에서 찾아볼 수 있다. 고-엄격성 조건의 한 가지 예는 하이브리드형성 완충액 (3.5X SSC, 0.02% 피콜, 0.02% 폴리비닐 피롤리돈, 0.02% 소 혈청 알부민, 2.5mM NaH2PO4 (pH 7), 0.5% SDS, 2mM EDTA)중에서 65℃에서의 하이브리드형성이다. SSC는 0.15M 염화나트륨/0.015M 시트르산나트륨, pH7이고; SDS는 소듐 도데실 설페이트이고; EDTA는 에틸렌디아민테트라아세트산이다. 하이브리드형성 후에, 핵산이 전달되는 막을 예를 들어 실온에서 2X SSC로 세척하고, 이어서 68℃ 이하의 온도에서 0.1-0.5X SSC/0.1X SDS로 세척한다.
여기에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"란 디설파이드 결합에 의해 서로 연결된 적어도 2개의 중(H) 쇄 및 2개의 경(L) 쇄를 포함하는 당단백질을 가리킨다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (이하, HCVR 또는 VH로 약기) 및 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (이하 LCVR 또는 VL로 약기) 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, CL로 이루어진다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이라 일컬어지는 더욱 보존된 영역이 산재된 초가변성 영역 (상보성 결정 영역(CDR)이라 일컬어짐)으로 더욱 세분될 수 있다. VH 및 VL의 각각은 하기 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 아미노-말단으로부터 카르복시-말단으로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은, 면역 체계의 다양한 세포 (예, 효과기 세포) 및 전통적인 상보 체계의 첫 번째 성분(C1q)을 포함하여, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
여기에서 사용된 항체의 "항원-결합 단편"이란 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 부분을 가리킨다 (즉, PSMA). 항체의 항원-결합 기능은 전체-길이 항체의 단편에 의해 달성될 수 있음이 밝혀졌다. 용어 항체의 "항원-결합 단편" 에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) Fab 단편, VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 경첩 영역에서 디설파이드 다리에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 팔의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 구성된 dAb 단편 [Ward 등 (1989) Nature 341: 544-546]; 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. CDR, 특히 CDR3 영역, 더욱 특별하게는 중쇄 CDR3은 항체 선택성에 기여한다. 이러한 CDR 영역, 특히 CDR3 영역은 항체에 항원 특이성을 제공하기 때문에, 그러한 항체 또는 펩티드 위에 동일한 항원 특이성을 제공하기 위하여 이러한 영역을 다른 항체 또는 항원-결합 단편 내에 통합할 수도 있다. 또한, Fv 단편의 2개 도메인, V 및 VH는 별개의 유전자에 의해 코드화되긴 하지만, 이들은 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 사슬로서 만들어지게 할 수 있는 합성 링커에 의해 재조합 방법을 사용하여 연결될 수 있다 (단일 사슬 Fv (scFv)로 알려짐; 예를 들어 [Bird 등 (1988) Science 242: 423-426; 및 Huston 등 (1988) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 85: 5879-5883] 참조). 이러한 단일 사슬 항체는 항체의 "항원-결합 단편" 내에 포함되는 것으로 해석된다. 문헌 [J.Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.98-118 (N.Y.Academic Press 1983)] (여기에서 참고문헌으로 포함됨)에 기재된 바와 같이 단백질분해 단편화 절차와 같은 통상적인 절차 뿐만 아니라 당 기술분야에 공지된 기타 기술에 의하여 이러한 항체 단편이 수득된다. 유용성에 관하여, 원상태 항체와 동일한 방식으로 단편을 선별한다.
일부 구현양태에서, ADC의 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 단리된다. 여기에서 사용된 "단리된"은 상이한 항원 특이성을 가진 다른 항체 (또는 그의 항원-결합 단편)를 실질적으로 갖지 않은 항체 (또는 그의 항원-결합 단편)를 가리킨다 (예를 들어, PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 PSMA 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 실질적으로 갖지 않는다). 그러나, PSMA의 에피토프, 이소형 또는 변형체에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 예를 들어 다른 종 (예, PSMA 종 상동체)으로부터의 관련된 항체에 교차-반응성을 가질 수도 있다. 또한, 단리된 항체 (또는 그의 항원-결합 단편)는 다른 세포 물질 및/또는 화합물을 실질적으로 갖지 않을 수도 있다. 여기에서 사용된 바와 같이 "특이적 결합"이란 미리결정된 항원, 이 경우에 PSMA에 대한 항체 결합을 가리킨다. 전형적으로, 항체는 PSMA 이외의 항원, PSMA의 이소형 또는 변형체, 또는 밀접하게 관련된 항원인 비-특이적 항원 (예, BSA, 카제인)에 결합하기 위한 친화성에 비하여 적어도 2배 더욱 큰 친화성으로 결합한다.
항체는 다양한 항체 이소형, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD, IgE를 포함한다. 여기에서 사용된 "이소형"이란 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 코드화되는 항체 부류 (예, IgM 또는 IgG1)를 가리킨다. 항체는 전체 길이일 수 있거나, 또는 단지 항원-결합 단편, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD 또는 IgE의 항체 불변 및/또는 가변 도메인 만을 포함할 수 있거나, 또는 Fab 단편, F(ab')2 단편 및 Fv 단편으로 구성될 수 있다.
일부 구현양태에서, ADC의 항체, 또는 ADC의 항원-결합 단편이 유래되는 항체는 단클론성이다. 당 기술분야에 공지된 다양한 기술에 의해 항체가 생성될 수 있다. 단클론성 항체 생성은 당 기술분야에 공지된 기술에 의해 달성될 수 있다. 여기에서 사용된 바와 같이 용어 "단클론성 항체"란 단일 분자 조성의 항체 분자의 제제를 가리킨다. 단클론성 항체는 특별한 에피토프를 위해 하나의 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다. 단클론성 항체 생성 과정은, 생체내 또는 시험관내에서 주요 항원으로 미리 면역화되고 B-세포 골수종 주와의 융합을 위해 적절한 항체 생성의 잠재력을 가진 면역 체세포, 특히 B 림프구를 수득하는 것을 포함한다.
포유동물 림프구는 전형적으로 바람직한 단백질 또는 폴리펩티드와 함께 동물 (예, 생쥐)의 생체내 면역화에 의해 면역화된다. 이러한 면역화는 필요에 따라서 충분한 역가의 항체를 수득하기 위하여 수 주일 이하의 간격으로 반복된다. 일단 면역화되면, 동물은 항체-생성 림프구의 원천으로서 사용될 수 있다. 마지막 항원 추가 후에, 동물을 희생시키고 비장 세포를 꺼낸다. 생쥐 림프구는 여기에 기재된 예를 들어, BALB/c 생쥐의 생쥐 골수종 주와 함께 높은 퍼센트의 안정한 융합을 제공한다. 그러나, 생쥐 세포주 이외의 토끼, 햄스터, 양 및 개구리를 항체-생성 세포를 제조하기 위한 숙주로서 사용할 수도 있다. [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 제2판, 60-61면, Orlando, Fla., Academic Press, 1986] 참조. 특히, 게놈에 삽입된 인간 면역글로불린 유전자를 가진 (그리고, 생쥐 면역글로불린을 생성할 수 없는) 생쥐 세포주가 사용될 수 있다. 그의 예는 메다렉스/겐팜 (Medarex/GenPharm) 인터내셔날에 의해 생성된 HuMAb 생쥐 세포주, 및 애브게닉스(Abgenix)에 의해 생성된 제노마우스(XenoMouse) 세포주를 포함한다. 이러한 생쥐는 면역화에 반응하여 전체 인간 면역글로불린 분자를 생성한다. 따라서, 일부 구현양태에서, ADC는 PSMA에 결합하는 전체 인간 단클론성 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
형질모세포 분화 단계에 있는 항체-생성 세포가 우선적으로 융합한다. 체세포는 항원-초회감작된 동물의 림프절, 비장 및 말초 혈액으로부터 수득될 수 있고, 선택되는 림프 세포는 특정한 융합 체계에서 경험적 유용성에 상당히 의존된다. 항체-분비 림프구가 (생쥐) B 세포 골수종 세포 또는 형질전환된 세포와 융합되고, 이것은 세포 배양액에서 무한으로 복제할 수 있으며 이에 의해 불후의 면역글로불린-분비 세포 주를 생성한다. 얻어지는 융합된 세포 또는 하이브리도마를 배양하고, 원하는 단클론성 항체의 생성을 위해 콜로니를 선별한다. 이러한 항체를 생성하는 콜로니를 클론화하고, 생체내 또는 시험관내에서 생육시켜 다량의 항체를 생성한다. 이론적 기초 및 이러한 세포를 융합하는 실제 방법의 설명이 문헌 [Kohler and Milstein, Nature 256: 495 (1975)] (이것은 참고문헌으로 포함된다)에 개시되어 있다.
대안적으로, 항체를 생성할 수 있는 인간 체세포, 특이적으로 B 림프구는 골수종 세포 주와의 융합을 위해 적절하다. 개인의 생검된 비장, 편도 또는 림프절로부터의 B 림프구가 사용될 수도 있긴 하지만, 더욱 쉽게 입수가능한 말초 혈액 B 림프구가 또한 사용될 수 있다. 림프구는 전립선 암종 또는 다른 PSMA-발현 암이 진단된 환자로부터 유래될 수도 있다. 또한, 인간 B 세포는 엡스테인-바르 바이러스에 의해 직접적으로 무한증식될 수도 있다 [Cole 등, 1995, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96]. 체세포 하이브리드화 절차가 사용될 수도 있긴 하지만, 원칙적으로, B 림프구의 바이러스성 또는 발암성 형질전환과 같은 단클론성 항체를 생성하기 위한 다른 기술이 사용될 수 있다.
하이브리도마-생성 융합 절차에서 사용하기 위해 적절한 골수종 세포는 비-항체-생성일 수 있고, 고 융합 효율을 가질 수 있고, 원하는 하이브리도마의 생육을 지탱하는 특정한 선택 매질 중에서 성장할 수 없도록 효소 결핍성을 가질 수 있다. 융합된 세포 주의 생성을 위해 사용될 수도 있는 이러한 골수종 세포 주의 예는 P3-X63/Ag8, X63-Ag8.653, NS1/1.Ag 4.1, Sp2/0-Ag14, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7, S194/5XX0 Bul (모두 생쥐로부터 유래됨); R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F 및 4B210 (쥐로부터 유래됨) 및 U-266, GM1500-GRG2, LICR-LON-HMy2, UC729-6 (모두 인간으로부터 유래됨)을 포함한다 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 제2판, p65-66, Orlando, Fla., Academic Press, 1986; Campbell, Monoclonal Antibody Technology, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology Vol. 13, Burden and Von Knippenberg, eds. p. 75-83, Amsterdam, Elseview, 1984].
포유동물 골수종 세포와의 융합 또는 세포 배양액에 무한 복제할 수 있는 기타 융합 파트너와의 융합은 표준 및 공지된 기술에 의해, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG") 또는 기타 융합 제를 사용함으로써 실행된다 [Milstein and Kohler, Eur J.Immunol. 6:511 (1976) (여기에서 참고문헌으로 포함된다)].
다른 구현양태에서, ADC의 항체 또는 ADC의 항원-결합 단편이 유래되는 항체는 재조합 항체이다. 여기에서 사용된 용어 "재조합 항체"는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리되는 항체, 예컨대 다른 종의 면역글로불린 유전자에 대해 유전자이식된 동물 (예, 생쥐로부터 단리된 항체), 숙주 세포로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합 복합 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 또는 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 잘라잇는 것을 포함한 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나 생성되거나 단리된 항체를 포함하는 것으로 해석된다.
또 다른 구현양태에서, 항체는 키메라 또는 인간화 항체이다. 당 기술분야에 알려진 바와 같이, "키메라 항체"는 항체를 가리키고, 생쥐 가변 또는 초가변 영역을 인간 불변부 또는 불변 및 가변 프레임워크 영역과 조합한다. 여기에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간화 항체"는 인간 프레임워크 영역과 결합된 모 항체로부터 단지 항원-결합 CDR을 보유하는 항체를 가리킨다 (Waldmann, 991, Science 252: 1657]. 생쥐 항체의 결합 특이성을 보유하는 이러한 키메라 또는 인간화 항체는 본 발명에 따른 응용을 위하여 생체내 투여될 때 감소된 면역원성을 갖는 것으로 기대된다.
대안적인 구현양태에 따르면, 본 발명의 단클론성 항체가 이특이성 항체 또는 다특이성 항체의 형태가 되도록 변형시킬 수 있다. 용어 "이특이성 항체"란 예를 들어, (a) 세포 표면 항원 및 (b) 효과기 세포의 표면 상의 Fc 수용체에 결합하거나 이들과 상호작용하는 2개의 상이한 결합 특이성을 가진 작인, 예를 들어 단백질, 펩티드, 또는 단백질 또는 펩티드 착물을 포함하는 것으로 해석된다. 용어 "다특이성 항체"란 예를 들어 (a) 세포 표면 항원, (b) 효과기 세포 표면 상의 Fc 수용체 및 (c) 적어도 하나의 다른 성분에 결합하거나 이들과 상호작용하는 2개 이상의 상이한 결합 특이성을 가진 작인, 예를 들어 단백질, 펩티드 또는 단백질 또는 펩티드 착물을 포함하는 것으로 해석된다. 따라서, 항체는 이에 한정되지 않지만 PSMA 및 효과기 세포 상의 Fc 수용체에 지정되는 이특이성, 삼특이성, 사특이성, 및 기타 다특이성 항체를 포함한다. 용어 "이특이성 항체"는 다이아바디(diabody)를 더욱 포함한다. 다이아바디는, 동일한 사슬 상의 2개 도메인 사이에서 쌍을 이루기에는 너무 짧은 링커를 사용하여 VH 및 VL 도메인이 단일 폴리펩티드 사슬 위에 발현되는 2가, 이특이성 항체이고, 이에 의해 도메인이 다른 사슬의 상보성 도메인과 쌍을 이루게 되고 2개의 항원-결합 부위를 생성한다 (예를 들어 [Holliger,P. 등 (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Poijak,R.J. 등 (1994) Structure 2:1121-1123] 참조).
이특이성 항체는 PSMA에 대해 특이성인 항원-결합 영역 및 종양파괴성 또는 종양 억제 활성을 가진 효과기 세포에 특이성인 항원-결합 영역으로 이루어질 수 있다. 이특이성 항체의 2개 항원-결합 영역은 화학적으로 연결될 수 있거나, 또는 이특이성 항체를 생성하도록 유전자 조작된 세포에 의해 발현될 수 있다 (일반적으로 [Fanger 등, 1995 Drug News & Perspec. 8(3): 133-137] 참조). 종양파괴성 활성을 가진 적절한 효과기 세포는, 이에 한정되지 않지만 세포독성 T-세포 (주로 CD8+ 세포), 천연 킬러 세포 등을 포함한다. 본 발명에 따른 이특이성 항체의 효과적인 양을 암을 가진 피험자에게 투여할 수 있고, 이특이성 항체는 PSMA를 가진 원발성 또는 전이 종양의 부위에 국소화 후에 암 세포를 사멸시키고/거나 암 세포 증식을 억제한다.
특정한 구현양태에서, ADC의 항체 또는 ADC의 항원-결합 단편이 유래되는 항체는 인간 항체이다. 여기에서 사용된 용어 "인간 항체"는 인간 배아 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 가진 항체를 포함하는 것으로 해석된다 본 발명의 인간 항체는 인간 배아 면역글로불린 서열에 의해 코드화되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다 (예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 유도된 돌연변이). 그러나, 여기에서 사용된 용어 "인간 항체"는 생쥐와 같은 다른 포유동물 종의 배아로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 내에 이식되어진 항체 (여기에서 "인간화 항체"라 일컬어짐)를 포함하는 것으로 해석되지 않는다. 생쥐 체계 이외의 인간 면역 체계의 일부를 보유하는 유전자이식 생쥐를 사용하여, PSMA에 대해 지정된 인간 항체가 생성될 수 있다. 그의 일부 예는 상기 기재되어 있다.
인간 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 대부분에 대해 유전자이식 생쥐를 면역화함으로써 전체 인간 단클론성 항체가 제조될 수 있다. 예를 들어 미국 특허 5,591,669호, 5,598,369호, 5,545,806호, 5,545,807호, 6,150,584호 및 여기에 인용된 참고문헌 참조 (그의 내용은 여기에서 참고문헌으로 포함된다). 내인성 (예, 생쥐) 항체의 생성에서 기능적 결실이 존재하도록 이러한 동물들은 유전자 변형되어진다. 동물들은 인간 배아 면역글로불린 유전자 좌의 전부 또는 일부를 함유하도록 더욱 변형되며, 이러한 동물의 면역화의 결과로 주요 항원에 대한 전체 인간 항체가 생성된다. 생쥐의 면역화 후에 (예를 들어, 제노마우스 (애브게닉스), HuMAb 생쥐 (메다렉스/겐팜)), 표준 하이브리도마 기술에 따라서 단클론성 항체를 제조한다. 이러한 단클론성 항체는 인간 면역글로불린 아미노산 서열을 갖고, 따라서 인간에게 투여될 때 인간 항-생쥐 항체(HAMA) 반응을 일으키지 않는다. 일반적으로, 제한적인 것으로 해석되지 않지만, 생쥐는 첫 번째 면역화 시에 6 내지 16주 령이다. 예를 들어, 당업자에게 공지된 다른 면역화 경로가 또한 가능하긴 하지만, 생쥐를 복강내 (IP) 면역화하기 위하여 PSMA 항원의 정제되거나 농축된 제제 (예, 재조합 PSMA 또는 PSMA-발현 세포)가 사용된다. PSMA 항원을 아주반트, 예컨대 완전 프로인트 아주반트와 조합하여 주사하고, 일부 구현양태에서 초기 주사를 행한 다음에 아주반트, 예컨대 불완전 프로인트 아주반트 중의 항원으로 추가 면역화한다. 예를 들어 눈뒤(retroorbital) 출혈에 의하여 수득되는 혈장 샘플로의 면역화 프로토콜 과정에 걸쳐 면역 반응을 검사한다. 혈장을 ELISA에 의해 선별하고, 융합을 위하여 충분한 역가의 항-PSMA 면역글로불린을 가진 생쥐를 사용한다. 희생시키고 비장을 꺼내기 전 3일에 항원으로 생쥐를 정맥내 추가면역한다.
일부 구현양태에서, 생 PSMA-발현 세포에 결합하는 능력에 대해 ADC의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 선택할 수 있다. 생 PSMA-발현 세포에 대한 결합을 증명하기 위하여, 유동 세포측정법을 사용할 수 있다. 예를 들어, PSMA-발현 세포 주 (표준 성장 조건 하에서 성장됨) 또는 PSMA를 발현하는 전립선 암 세포를 0.1% 트윈 80 및 20% 생쥐 혈청을 함유하는 PBS 중에서 다양한 농도의 단클론성 항체와 혼합하고, 37℃에서 1시간 동안 배양한다. 세척 후에, 세포를 원발성 항체 염색과 동일한 조건 하에서 플루오레세인-표지화 항-인간 IgG 2차 항체와 반응시킨다 (인간 항-PSMA 항체가 사용된다면). 단일 세포 상에서 게이트에 대한 광 및 측방 산란 성질을 사용하여 형광 활성화 세포 분류기 (FACS) 장치에 의하여 샘플을 분석할 수 있다. 유동 세포측정 분석에 추가로 또는 대신에, 형광 현미경을 사용한 대안적인 분석법이 사용될 수 있다. 세포를 염색하고 형광 현미경에 의해 시험할 수 있다. 이러한 방법은 개개의 세포를 가시화할 수 있지만, 항원의 밀도에 의존하여 감소된 감도를 가질 수도 있다. 일부 구현양태에서, ADC가 생 세포에 결합하는 것으로 추정된다. 따라서, 일부 구현양태에서, ADC는 PSMA에 결합하기 위해 세포 용해를 필요로 하지 않는다.
일부 구현양태에서, 항체는 PSMA-발현 세포의 세포용해를 촉진할 수 있다. 세포용해는 보체-매개될 수 있거나 효과기 세포에 의해 매개될 수 있다. 하나의 구현양태에서, 세포용해는 포유동물과 같은 생체 유기체에서 수행되고, 생 세포는 종양 세포이다. 항체 또는 그의 항원-결합 단편으로 표적화될 수 있는 종양의 예는, PSMA를 발현하는 종양 (이것은 PSMA를 발현하는 신혈관계를 가진 종양을 포함한다), 예컨대 전립선, 방광, 췌장, 폐, 결장, 신장, 흑색종 및 육종의 종양을 포함한다. 하나의 구현양태에서, 종양 세포는 전립선 암 세포이다.
크롬 방출 분석에 의한 시험관내 세포용해 활성의 시험은 생체내 모델을 시험하기에 앞서서 초기 선별을 제공할 수 있다. 이러한 시험은 표준 크롬 방출 분석을 사용하여 달성될 수 있다. 간략하게, 건강한 공여자로부터의 다형핵 세포(PMN) 또는 다른 효과기 세포를 피콜 하이파크(Ficoll Hypaque) 밀도 원심분리에 이어서 오염 적혈구의 용혈에 의해 정제할 수 있다. 세척된 PMN은 10% 열-불활성화 태아 소 혈청으로 보충된 RPMI에서 현탁될 수 있고, 효과기 세포 대 종양 세포 (효과기 세포:종양 세포)의 다양한 비율에서 PSMA를 발현하는 51Cr 표지화 세포와 혼합된다. 정제된 항-PSMA IgG를 다양한 농도로 첨가할 수 있다. 네가티브 대조로서 부적절한 IgG가 사용될 수 있다. 37℃에서 0 내지 120 분 동안 분석을 수행할 수 있다. 배양 상층액 내로의 51Cr 방출을 측정함으로써 세포용해에 대해 샘플을 분석할 수 있다. 여러 개의 단클론성 항체 및/또는 ADC에 의해 세포용해가 증진되는지의 여부를 결정하기 위하여, 항-PSMA 단클론성 항체 및/또는 ADC를 서로 조합하여 시험할 수 있다. 세포용해를 매개하고 PSMA를 발현하는 세포, 예를 들어 종양 세포를 사멸시키는데 있어서의 효능을 결정하기 위하여, PSMA 및/또는 ADC에 결합하는 항체를 생체내 모델 (예, 생쥐)에서 시험할 수 있다.
한정적인 것으로 해석되지 않지만 하기 기준을 기초로 하여, ADC의 항체 또는 ADC의 항원-결합 단편이 유래되는 항체를 선택할 수 있다:
1) PSMA를 발현하는 생 세포에 결합;
2) PSMA에 결합하는 고 친화성;
3) PSMA 상의 특유의 에피토프 (즉, 앞서 생성된 항체에 의해 인지되지 않는 에피토프)에 결합;
4) PSMA를 발현하는 세포의 옵소닌화;
5) 생육 억제, 포식작용 및/또는 효과기 세포의 존재하에서 PSMA를 발현하는세포의 사멸의 매개;
6) NAALAD아제, 폴레이트 히드롤라제, 디펩티딜 펩티다제 IV 및/또는 γ-글루타밀 히드롤라제 활성의 조절 (억제 또는 증진);
7) 효과기 세포의 부재 하에서 생육 억제, 세포 주기 정지 및/또는 세포독성;
8) PSMA의 내재화;
9) PSMA 상의 입체형태적 에피토프에 결합;
10) PSMA를 발현하지 않는 세포 또는 조직과의 최소 교차-반응성; 및
11) PSMA의 단량체 형태보다는 오히려 PSMA의 이량체 형태로의 우선적 결합.
항체는 이러한 기준의 하나 이상, 가능하다면 전부를 충족할 수 있다.
하나의 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PSMA의 세포외 도메인 내에서 입체형태적 에피토프에 결합한다. 항-PSMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 입체형태적 에피토프에 결합하는지를 결정하기 위하여, 천연 단백질을 사용한 분석 (예, 비-변성 면역침전, 세포 표면 결합의 유동 세포측정 분석) 및 변성 단백질을 사용한 분석 (예, 웨스턴 블롯, 변성된 단백질의 면역침전)에서 각각의 항체를 시험할 수 있다. 이러한 결과의 비교는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 입체형태적 에피토프에 결합하는지의 여부를 나타낸다. 일부 구현양태에서, 천연 단백질에 결합하지만 변성 단백질에 결합하지 않는 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 입체형태적 에피토프에 결합하는 것이다. 일부 구현양태에서, ADC는 PSMA의 입체형태적 에피토프에 결합하는 것으로 추정된다.
다른 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PSMA 상의 이량체-특이적 에피토프에 결합된다. 일반적으로, 이량체-특이적 에피토프에 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PSMA 단량체 보다는 오히려 PSMA 이량체에 우선적으로 결합한다. 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 PSMA 이량체에 우선적으로 (즉, 선택적으로 및/또는 특이적으로) 결합하는지의 여부를 결정하기 위하여, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 천연 이량체 PSMA 단백질 및 해리된 단량체 PSMA 단백질을 사용하는 분석 (예, 면역침전법에 이어서 웨스턴 블롯팅)에서 시험될 수 있다. 결과의 비교는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 이량체에 우선적으로 결합하는지의 여부를 나타낼 것이다. 일부 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 PSMA 이량체에 결합하지만 단량체 PSMA 단백질에 결합하지 않는다. 일부 구현양태에서, ADC는 PSMA 상의 이량체-특이적 에피토프에 결합하는 것으로 추정된다.
따라서, 본 발명은 PSMA 다량체에 특이적으로 결합하는 ADC를 포함한다. 여기에서 사용된 바와 같이, 특히 ADC에 의한 PSMA 다량체의 결합에 관하여, "선택적으로 결합"은 항체가 PSMA 단백질 단량체보다는 오히려 PSMA 단백질 다량체에 우선적으로 (예를 들어, 높은 총 결합력, 높은 결합 친화력으로) 결합하는 것을 의미한다. 일부 구현양태에서, 본 발명의 ADC는 PSMA 단백질 단량체에 대해 ADC에 의해 나타나는 것의 1.1배, 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 1.6배, 1.7배, 1.8배, 1.9배, 2배, 3배, 4배, 5배, 7배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 70배, 100배, 200배, 300배, 500배, 1000배 또는 그 이상의 총 결합력 및/또는 결합 친화력으로 PSMA 단백질 다량체에 결합한다. 일부 구현양태에서, ADC는 PSMA 단백질 다량체에 선택적으로 결합할 수 있고 PSMA 단백질 단량체에 결합하지 않으며, 다시 말해서 PSMA 단백질 다량체에 독점적으로 결합할 수 있다. 일부 구현양태에서, ADC는 PSMA 단백질 이량체에 선택적으로 결합한다.
여기에서 사용된 바와 같이 PSMA 단백질 다량체는 적어도 2개의 PSMA 단백질 또는 그의 단편의 단백질 착물이다. PSMA 단백질 다량체는 전체-길이 PSMA 단백질 (예, 서열 1), 재조합 가용성 PSMA (rsPSMA, 예를 들어 서열 1의 아미노산 44-750) 및 다량체를 형성하는 단편 (즉, 이량체 및/또는 PSMA의 고급 다량체를 형성하기 위해 필요한 단백질 도메인을 보유함)의 다양한 조합으로 이루어질 수 있다. 일부 구현양태에서, 다량체를 형성하는 PSMA 단백질의 적어도 하나는 재조합, 가용성 PSMA (rsPSMA) 폴리펩티드이다. PSMA 단백질 다량체는 재조합 가용성 PSMA 단백질로부터 형성된 것과 같은 이량체일 수 있다. 하나의 구현양태에서, 이량체는 rsPSMA 단독이량체이다. 여기에서 일컬어지는 PSMA 단백질 다량체는 천연 형태를 취하는 것으로 생각되고, 이러한 형태를 가질 수 있다. 특정한 구현양태에서 PSMA 단백질은 PSMA 단백질 다량체를 형성하기 위하여 함께 비공유 결합된다. 예를 들어, 비-변성 조건 하에서 이량체를 형성하기 위해 PSMA 단백질이 비공유 결합되는 것을 알아내었다. PSMA 단백질 다량체는 PSMA의 활성을 보유할 수 있다. PSMA 활성은 효소 활성, 예컨대 폴레이트 히드롤라제 활성, NAALAD아제 활성, 디펩티딜 펩티다제 IV 활성 또는 γ-글루타밀 히드롤라제 활성일 수 있다. 다량체의 PSMA 활성의 시험 방법이 당 기술분야에 공지되어 있다 [O'Keefe 등: Prostate Cancer: Biology, Genetics and the New Therapeutics, L.W.K. Chung, W.B.Isaacs 및 J.W.Simons (eds.) Humana Press, Totowa, NJ, 2000, pp.307-326] 참조.
ADC의 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 결합될 수 있고 세포 위에 발현된 PSMA와 함께 내재화된다. 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 PSMA과 함께 내재화되는 메카니즘은 본 발명의 실행에 중요하지 않다. 예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PSMA의 내재화를 유도할 수 있다. 대안적으로, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 내재화는 PSMA의 일반적인 내재화의 결과일 수 있다. ADC는 세포 위에 발현된 PSMA와 함께 내재화될 수 있는 것으로 추정된다.
항체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 따라서 본 발명의 ADC는 서브-나노몰 친화력으로 세포-표면 PSMA 및/또는 rePSMA에 특이적으로 결합할 수 있다. 결합 친화력은 약 1×10-9M 이하, 약 1×10-10M 이하, 또는 약 1×10-11M 이하일 수 있다. 특별한 구현양태에서, 결합 친화력은 약 5×10-10M 미만이다.
항체 또는 그의 항원-결합 단편은 일부 구현양태에서 PSMA의 적어도 하나의 효소 활성을 조절할 수 있다. 활성은 시험관내 또는 생체내에서 N-아세틸화 α-결합 산성 디펩티다제(NAALAD아제), 폴레이트 히드롤라제, 디펩티딜 디펩티다제 IV, γ-글루타밀 히드롤라제 활성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 조절은 PSMA의 적어도 하나의 효소 활성을 증진 또는 억제할 수도 있다.
균질화 조직을 세제 가용화하고, 불용성 물질을 원심분리에 의해 펠릿화하고, 나머지 상층액에서 NAALAD아제 활성을 측정함으로써 NAALAD아제의 조직 수준을 결정할 수 있다. 유사하게, 원심분리에 의해 세포 물질을 첫 번째로 펠릿화하고, 상층액에서 NAALAD아제 활성에 관해 전형적인 효소 분석을 수행함으로써 체액에서의 NAALAD아제 활성을 측정할 수 있다. NAALAD아제 효소 분석은 문헌 [Frieden, 1959, J.Biol.Chem.,234:2891]에 기재되어 있다. 이러한 분석에서, NAALAD아제 효소의 반응 생성물은 글루탐산이다. 이것은 N-아세틸아스파르트산 및 글루탐산을 수득하기 위하여 N-아세틸아스파르틸글루타메이트의 효소 촉매화 절단으로부터 유래된다. NAD(P)+ 요구 단계에서 글루탐산은 글루타메이트 탈수소효소에 의해 촉매화되는 반응에서 2-옥소글루타레이트 + NAD(P)H를 생성한다. 반응의 진행은 NAD(P)+의 NAD(P)H로의 전환에 기인하여 340nm에서의 흡광도 변화에 의해 쉽고 편리하게 측정될 수 있다.
PSMA의 폴레이트 히드롤라제 활성은 문헌 [Heston 등등, 예를 들어, Clin.Cancer.Res. 2(9): 1445-51, 1996; Urology 49(3A Suppl): 104-12, 1997]에 기재된 것과 같이 효소 분석을 수행함으로써 측정될 수 있다. PSMA와 같은 폴레이트 히드롤라제는 폴리글루타메이트화 폴레이트로부터 감마-결합 글루타메이트를 제거한다. 메토트렉세이트 트리-감마 글루타메이트 (MTXGlu3), 메토트렉세이트 디-감마 글루타메이트(MTXGlu2) 또는 프테로일펜타글루타메이트(PteGlu 5)와 같은 기질을 사용하여 예를 들어 모세관 전기영동을 사용하여 폴레이트 히드롤라제 활성을 측정할 수 있다 ([Clin. Cancer Res 2(9): 1445-51, 1996] 참조). 폴리글루타메이트화 기질과 PSMA의 시간지연 배양에 이어서, 가수분해 생성물을 분리하고 검출한다.
본 발명의 ADC는 MMAE 또는 MMAF에 접합된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구현양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기 화학식 1을 가진 화합물과 함께 MMAE 또는 MMAF에 접합될 수 있다:
<화학식 1>
-An-Ym-Zm-Xn-Wn-
(상기 식에서, A는 카르복실 아실 단위이고; Y는 아미노산이고; Z는 아미노산이고; X 및 W는 각각 자기-희생 스페이서이고; n은 0 또는 1의 정수이고; m은 0 또는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 정수이다). 일부 구현양태에서, 본 발명의 접합체는 화학식 2로 표시된다.
<화학식 2>
L-{An-Ym-Zm-Xn-Wn-D}p
(상기 식에서, L은 PSMA에 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고, D는 MMAE 또는 MMAF이고, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8의 정수이다). 다른 성분들은 상기 기재된 바와 같다. 하나의 구현양태에서, 카르복실 단위 "An"는 항체 또는 항원-결합 단편으로부터 유래된 황 원자를 통해 항체 또는 항원-결합 단편에 연결된다.
Figure pat00009
하나의 구현양태에서, A는 하기 화학식이다.
Figure pat00010
(상기 식에서, q는 1 내지 10이다). 따라서, 하나의 구현양태에서, 접합체는 다음과 같다.
Figure pat00011
(상기 식에서, L, Y, Z, X, W, D, n, m, q 및 p는 상기 정의된 바와 같다)
다른 구현양태에서, A는 4-(N-숙신이미도메틸)시클로헥산-1-카르보닐, m-숙신이미도벤조일, 4-(p-숙신이미도페닐)-부티릴, 4-(2-아세트아미도)벤조일, 3-티오프로피오닐, 4-(1-티오에틸)-벤조일, 6-(3-티오프로피오닐아미도)-헥사노일 또는 말레이미드 카프로일이다. 추가의 구현양태에서, A는 말레이미드 카프로일이다. 다양한 카르복실 아실 단위의 대표 예 및 그들의 합성 및 부착 방법이 미국 특허 6,214,345호 (그의 전체내용이 여기에서 참고문헌으로 포함된다)에 기재되어 있다.
다른 구현양태에서, Y는 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트립토판 또는 프롤린이다. 또 다른 구현양태에서, Y는 발린이다. 추가의 구현양태에서, Z는 리신, 아세틸 또는 포르밀로 보호된 리신, 아르기닌, 토실 또는 니트로기로 보호된 아르기닌, 히스티딘, 오르니틴, 아세틸 또는 포르밀로 보호된 오르니틴, 또는 시트룰린이다. 추가의 구현양태에서, Z는 시트룰린이다. 하나의 구현양태에서, Ym-Zm은 발린-시트룰린이다. 다른 구현양태에서, Ym-Zm는 프로테아제에 의해 선택적으로 절단가능한 단백질 서열이다.
추가의 구현양태에서, X는 하기 화학식을 가진 화합물이다.
Figure pat00012
상기 식에서, T는 O, N 또는 S이다. 다른 구현양태에서, X는 화학식 -HN-R1-COT (상기 식에서, R1은 C1-C5 알킬이고, T는 O, N 또는 S이다)를 가진 화합물이다. 추가의 구현양태에서, X는 하기 화학식을 가진 화합물이다.
Figure pat00013
상기 식에서, T는 O, N 또는 S이고, R2는 H 또는 C1-C5 알킬이다. 하나의 구현양태에서, X는 p-아미노벤질카르바모일옥시이다. 다른 구현양태에서, X는 p-아미노벤질알콜이다. 추가의 구현양태에서, X는 p-아미노벤질카르바메이트이다. 추가의 구현양태에서, X는 p-아미노벤질옥시카르보닐이다. 다른 구현양태에서, X는 γ-아미노부티르산; α,α-디메틸 γ-아미노부티르산 또는 β,β-디메틸 γ-아미노부티르산이다.
일부 구현양태에서, W는 하기 화학식이다.
Figure pat00014
상기 식에서, T는 O, S 또는 N이다.
하나의 구현양태에서, 화학식 1의 화합물은 말레이미도카프로일이다. 항-CD30 mAb (AC10)에 대해 2개의 특정한 아우리스타틴의 접합을 위하여 말레이미도카프로일이 사용되었다 [Doronina, Svetlana 등 "Novel Linkers for Monoclonal Antibody-Mediated Delivery of Anticancer Agents", AACR, Anaheim, CA, Abstract No. 1421, 2005년 4월 16-20일]. 말레이미도카프로일은 티올 기와 반응하여 티오에테르를 형성한다.
MMAE 또는 MMAF는 당업자에게 공지된 방법 (예를 들어, [Niemeyer, CM, Bioconjugation Protocols, Strategies and Methods, Humana Press, 2004] 참조)을 사용하여 또는 여기에 기재된 바와 같이 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합될 수 있다. 일부 구현양태에서, 하나 이상의 MMAE 또는 MMAF 분자가 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합된다. 다른 구현양태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개 MMAE 또는 MMAF 분자를 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합된다. 또 다른 구현양태에서, 적어도 3, 4 또는 5개 MMAE 또는 MMAF 분자가 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합된다. 추가의 구현양태에서, 3, 4 또는 5개 MMAE 또는 MMAF 분자가 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합한다.
비-PSMA-발현 세포의 사멸이 PSMA-발현 세포의 사멸과 비교될 때, 본 발명의 ADC는 특히 높은 수준의 선택성을 가진 것으로 밝혀졌다. 따라서, 일부 구현양태에서, ADC는 적어도 250의 PC-3™ 세포 대 C4-2 세포 또는 LNCaP™ 세포 선택성을 갖는다. 다른 구현양태에서, 선택성은 적어도 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2250, 2500, 2750, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500, 10000, 11000, 12000, 13000, 14000, 15000, 17500, 20000 또는 그 이상이다. 일부 구현양태에서, 선택성은 250-500, 500-750, 750-1000, 1000-2000, 2000-5000, 5000-10000, 10000-15000 또는 15000-20000이다. 여기에서 정의된 "선택성"은 PC-3™ 세포 (비-PSMA-발현 세포) 대 C4-2 세포 또는 LNCaP™ 세포 (PSMA-발현 세포) 상에서 ADC의 IC50 값의 비율을 가리킨다.
또한, 일부 구현양태에서, 본 발명의 ADC는 매우 낮은 농도, 예컨대 피코몰 농도 또는 그 근처에서 PSMA-발현 특이적 세포 사멸을 매개한다는 것을 밝혀내었다. 일부 구현양태에서, ADC는 약 1×10-10M 미만, 약 1×10-11M 미만 또는 약 1×10-12M 미만의 농도에서 IC50을 나타낸다. 특정한 구현양태에서, IC50은 약 1.5×10-11M 미만의 농도로 달성된다. 다른 구현양태에서, 제공된 ADC는 10-210, 40-210, 60-210 또는 65-210 pM의 IC50을 나타낸다. 다른 구현양태에서, 제공된 ADC는 약 10, 40, 60 또는 80pM의 IC50을 나타낸다. 또 다른 구현양태에서, 제공된 ADC는 약 11, 42, 60 또는 83pM의 IC50을 나타낸다.
일부 구현양태에서, ADC가 생쥐에서 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%의 치료율을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 다른 구현양태에서, 생쥐에서의 치료율은 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%이다. 또 다른 구현양태에서, 치료율은 20-40%, 40-60% 또는 60-80%이다. 여기에서 사용된 "치료율"은 연구 기간의 시작으로부터 약 500일 후에 종양의 증거 및 측정가능한 PSA 수준을 갖지 않는 살아있는 생쥐의 수를 치료 기간의 시작 시의 생쥐의 수로 나눈 것을 가리킨다. 치료율을 평가하기 위하여, q4d×6의 섭생법으로 생쥐에게 6 mg/kg ADC를 투여한다. 일부 구현양태에서, 연구의 시작 시에 생쥐의 수는 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17, 20, 25, 30 또는 그 이상의 생쥐이다. 이러한 연구의 예에 관한 세부사항은 실시예에 하기 제공된다. 하나의 구현양태에서, 생쥐는 안드로겐-비의존성 인간 전립성 암의 모델이다. 다른 구현양태에서, 생쥐는 왼쪽 뒷다리에서 C4-2 세포로 근육내 주입된 누드 생쥐이다. 종양의 존재를 결정하고 PSA 수준을 측정하기 위한 기술이 당업자에게 공지되어 있다.
생 PSMA-발현 세포에 대한 본 발명의 ADC의 결합은 PSMA-발현 세포의 생육을 억제할 수 있고, 그 결과 세포-주기 정지 (예를 들어, G2/M 정지)가 일어나고 PSMA-발현 세포의 세포 고사를 촉진한다. 여기에서 사용된 바와 같이, "세포-주기 정지가 일어난다"란 ADC의 투여에 기인하여 G2/M 단계에 있는 세포의 수 증가를 가리킨다. 일부 구현양태에서, ADC는 세포고사를 초래할 수 있다. 다른 구현양태에서, ADC는 세포 주기 정지 및 이후의 세포 고사를 양쪽 모두 일으킨다. 따라서, 이러한 가능한 종료점을 실행하기 위해 다양한 시험관내 및 생체내 방법에서 본 발명의 ADC가 사용될 수 있다. 특히, PSMA-매개 질병을 치료하기 위한 방법에서 본 발명의 ADC가 사용될 수 있다.
여기에서 사용된 "PSMA-매개 질병"은 PSMA가 질병의 원인 또는 증상인 질병이다. PSMA-매개 질병은 PSMA의 이상 (예를 들어, 과다발현)이 존재하는 질병 또는 질환을 포함한다. PSMA는 전립선 조직에서 발현된 100kD 유형 II 막 당단백질이다 [Horoszewicz 등, 1987, Anticancer Res. 7:927-935; 미국 특허 5,162,504호]. PSMA는 트랜스페린 수용체와 서열 동일성 [Israeli 등, 1994, Cancer Res. 54: 1807-1811] 및 NAALAD아제 활성 [Carter 등, 1996, Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A. 93:749-753]을 가진 유형 II 막횡단 단백질로서 특징화된다. 더욱 중요하게는, PSMA는 전립선 암에서 증가된 양으로 발현되고, PSMA의 높은 수준이 이러한 환자의 혈청에서 검출될 수 있다 [Horoszewicz 등, 1987; Rochon 등, 1994, Prostate 25: 219-223; Murphy 등, 1995, Prostate 26: 164-168; 및 Murphy 등, 1995, Anticancer Res. 15: 1473-1479]. 따라서, PSMA-매개 질병은 예를 들어 전립선 암이다. PSMA 발현은 질병 진행에 따라 증가되고, 치료법이 존재하지 않는 전이성, 호르몬-불응성 질병에서 가장 높아진다. 또한, 자극성 데이타는, PSMA가 정상 혈관계에 있지 않은 방광, 췌장, 육종, 흑색종, 폐 및 신장 종양 세포를 포함하여 다양한 다른 중요한 종양의 신혈관계에서 풍부하게 발현된다는 것을 나타낸다. 따라서, PSMA-매개 질병은 종양 또는 종양 신혈관계의 세포에서 PSMA가 발현되는 암을 포함한다.
따라서, PSMA-매개 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있는 조성물 및 방법이 제공된다. 예를 들어, 종양의 신혈관신생을 억제하기 위하여 ADC가 사용될 수 있다. 다른 예에서, 종양 세포를 사멸시키기 위하여 PSMA ADC가 사용될 수 있다. 일부 구현양태에서, 2 이상의 상이한 ADC가 조합하여 사용된다. 다른 구현양태에서, 원하는 치료 효과를 달성하기 위하여, 하나 이상의 비접합 항-PSMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하나의 치료법에서 하나 이상의 ADC와 조합될 수 있다. 예증으로서, 효과기 세포의 존재 하에서 표적 세포의 매우 효과적인 사멸을 매개하고/하거나 PSMA를 발현하는 세포의 생육을 억제하는 비접합 항-PSMA 항체가 하나 이상의 ADC와 함께 사용될 수 있다. 또 다른 구현양태에서, ADC를 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 조합할 수 있다. 이러한 치료제는 항종양제, 예컨대 도세탁셀; 코르티코스테로이드, 예컨대 프레드니존 또는 히드로코르티존; 면역자극제; 면역조절제; 또는 이들의 일부 조합을 포함한다.
항종양제는 세포독성제, 화학요법제 및 종양 신혈관계에 작용하는 약제를 포함한다. 세포독성제는 세포독성 방사핵, 화학 독소 및 단백질 독소를 포함한다. 세포독성 방사핵 또는 방사능치료 동위원소는 225Ac, 211At, 212Bi, 213Bi, 212Pb, 224Ra 또는 223Ra와 같은 알파-방출 동위원소일 수 있다. 대안적으로, 세포독성 방사핵은 186Rh, 188Rh, 177Lu, 90Y, 131I, 67Cu, 64Cu, 153Sm 또는 166Ho와 같은 베타-방출 동위원소일 수 있다. 또한, 세포독성 방사핵은 Auger 및 저 에너지 전자를 방출할 수 있고, 동위원소 125I, 123I 또는 77Br을 포함한다.
적절한 화학 독소 또는 화학요법 제는 칼리케아미신 및 에스퍼아미신과 같은 분자의 에네디인 계 요소를 포함한다. 화학 독소는 메토트렉세이트, 독소루비신, 멜파란, 클로람부실, ARA-C, 빈데신, 미토마이신 C, 시스-플라티눔, 에토포시드, 블레오마이신 및 5-플루오로우라실로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 다른 항신생물제는 돌라스타틴 (미국 특허 6,034,065호 및 6,239,104호) 및 그의 유도체를 포함한다. 돌라스타틴 및 그의 유도체는 돌라스타틴 10 (돌라발린-발린-돌라이소류신-돌라프로인-돌라페닌) 및 유도체 아우리스타틴 PHE (돌라발린-발린-돌라이소류신-돌라프로인-페닐알라닌-메틸 에스테르)를 포함한다 [Pettit, G.R. 등, Anticancer Drug Des. 13(4): 243-277, 1998; Woyke, T 등, Antimicrob. Agents Chemother. 45(12): 3580-3584, 2001] 및 아우라스타틴 E 등을 포함한다. 독소는 유독성 렉틴, 식물 독소, 예컨대 리신, 아브린, 모덱신, 보투리나 및 디프테리아 독소를 포함한다. 다른 화학요법 제는 당업자에게 공지되어 있다.
종양 혈관계에 작용하는 약제는 투블린-결합 약제, 예컨대 콤브레스타틴 A4 [Griggs 등, Lancet Oncol. 2:82, 2001], 안기오스타틴 및 엔도스타틴 ([Rosen, Oncologist 5:20, 2000]에 검토됨, 여기에서 참고문헌으로 포함됨) 및 인터페론 유도성 단백질 10 (미국 특허 5,994,292)을 포함한다. 다수의 다른 항혈관형성 약제가 계획되고, 2ME2, 안기오스타틴, 안기오자임, 항-VEGF RhuMAb, 아프라(Apra) (CT-2584), 아비신, 베네핀, BMS275291, 카르복시아미도트리아졸, CC4047, CC5013, CC7085, CDC801, CGP-41251 (PKC 412), CM101, 콤브레타스타틴 A-4 전구약물, EMD 121974, 엔도스타틴, 플라보피리돌, 게니스테인 (GCP), 녹차 추출물, IM-862, ImmTher, 인터페론 알파, 인터페론-12, 이레사(Iressa) (ZD 1839), 마리마스타트, 메타스타트 (Col-3), 네오바스타트, 옥트레오티드, 파클리탁셀, 페니실아민, 포토프린, 포토포인트, PI-88, 프리노마스타트 (AG-3340), PTK 787 (ZK22584), RO 317453, 솔리마스타트, 스쿠알라민, SU 101, SU 5416, SU-6668, 수라디스타(Suradista) (FCE 26644), 수라민 (Metaret), 테트라티오몰리브데이트, 탈리도미드, TNP-470 및 비탁신을 포함한다. 추가의 항혈관형성 약제는 문헌 [Kerbel, J.Clin.Oncol. 19(18s): 45s-51s, 2001] (여기에서 참고문헌으로 포함됨)에 기재되어 있다.
ADC는 IL-2 및 면역자극성 올리고뉴클레오티드 (예를 들어 CpG 모티프를 함유하는 것)와 같이 면역 반응을 유도하거나 증진시키는 하나 이상의 면역자극제와 함께 투여될 수 있다. 일부 구현양태에서, 면역자극 제는 면역 체계의 특정한 팔, 예컨대 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)을 매개하는 천연 킬러(NK) 세포를 자극할 수 있다. 면역자극제는 인터류킨-2, α-인터페론, γ-인터페론, 종양 괴사 인자 알파(TNFα), 면역자극 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합을 포함한다. 면역조절제는 사이토카인, 케모카인, 아주반트 또는 이들의 조합을 포함한다. 면역 반응을 증가시키는데 유용한 케모카인은 이에 한정되지 않지만 SLC, ELC, MIP3α, MIP3β, IP-10, MIG 및 이들의 조합을 포함한다.
다른 치료제는 백신일 수 있다. 일부 구현양태에서, 백신은 PSMA에 대해 피험자를 면역화한다. 일부 구현양태에서, 이러한 백신은 면역 반응을 유도하거나 증진시키기 위하여 임의로 하나 이상의 아주반트와 함께 항원, 예컨대 PSMA 이량체를 포함한다. 아주반트는 면역 반응을 증강시키는 물질이다. 많은 종류의 아주반트가 당 기술분야에 공지되어 있다. 아주반트의 특정한 예는 모노포스포릴 지질 A (MPL, 스미쓰클라인 비참); QS21을 포함하는 사포닌 (스미쓰클라인 비참); 면역자극 올리고뉴클레오티드 (예, CpG 올리고뉴클레오티드, [Kreig 등, Nature 374: 546-9, 1995] 참조); 불완전 프로인트 아주반트; 완전 프로인트 아주반트; 몬타니드; 비타민 E 및 스쿠알렌 및/또는 토코페롤과 같은 생분해성 유부터 제조된 각종 유-중-수 에멀젼, Quil A, 리비 데톡스(Ribi Detox). CRL-1005, L-121, 및 이들의 조합을 포함한다. 여기에 제공된 방법에서 백신으로서 사용하기 위하여 미국 출원 일련 번호 10/976352호에 기재된 것과 같은 제제가 계획된다. 이러한 제제의 개시내용은 여기에서 참고문헌으로 포함된다.
일부 구현양태에서, 백신은 여기에 기재된 하나 이상의 단리된 PSMA 단백질 다량체, 예컨대 PSMA 단백질 이량체를 포함할 수 있다. 일부 구현양태에서, PSMA 단백질 다량체 조성물은 (조성물 중의 PSMA 단백질의 총 량의) 적어도 약 10% PSMA 단백질 다량체를 함유한다. 다른 구현양태에서, PSMA 단백질 다량체 조성물은 적어도 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 99.5% PSMA 단백질 다량체를 함유한다. 하나의 구현양태에서, PSMA 단백질 다량체 조성물은 실질적으로 순수한 PSMA 단백질 다량체를 함유하고 실질적으로 PSMA 단백질 단량체를 갖지 않는다. 특정한 퍼센트의 목록은 인용된 퍼센트 사이에 명명되지 않은 모든 퍼센트를 추정으로 포함하는 것으로 이해된다.
사이토카인은 그들의 림프구 조절 성질의 결과로서 백신화 프로토콜에서 사용될 수 있다. 인터류킨-2 (IL-2); IL-4; IL-5; IL-12 (백신의 보호 효과를 증진시키는 것으로 밝혀짐) (예를 들어 [Science 268: 1432-1434, 1995]); GM-CSF; IL-15; IL-18; 이들의 조합 등을 포함하여, 이러한 목적을 위해 유용한 많은 사이토카인이 당업자에게 공지될 것이다. 따라서, 면역 반응을 증가시키기 위하여 사이토카인은 항원, 케모카인 및/또는 아주반트와 함께 투여될 수 있다.
다른 치료제가 본 발명의 조성물에 존재할 수 있거나 본 발명의 방법에서 비접합 형태 또는 접합 형태, 예컨대 항-PSMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합된 형태로 사용될 수 있다. 항-PSMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 대한 하나 이상의 독소 분자의 결합은 많은 화학 메카니즘, 예를 들어 공유 결합, 친화력 결합, 삽입, 배위 결합 및 착물화를 포함할 수 있다.
존재하는 측 쇄의 직접적인 축합에 의해 또는 외부의 다리걸친 분자의 혼입에 의해 공유 결합이 달성될 수 있다. 단백질 분자를 다른 단백질, 펩티드 또는 아민 작용기 등에 결합시키는데 있어서 많은 2가 또는 다가 작인이 유용할 수 있다. 예를 들어, 문헌에 카르보디이미드, 디이소시아네이트, 글루타르알데히드, 디아조벤젠 및 헥사메틸렌 디아민과 같은 결합제가 기재되어 있다. 이러한 목록은 당 기술분야에 공지된 다양한 결합제를 총망라한 것으로 해석되지 않지만, 일반적인 결합제의 일례이다.
일부 구현양태에서, 먼저 항체를 유도체화한 다음 유도체화 생성물에 치료제를 부착시키는 것을 원할 수도 있는 것으로 생각된다. 이러한 방식으로 사용하기 위해 적절한 가교제는 예를 들어 SPDP (N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트) 및 SMPT, 4-숙신이미딜-옥시카르보닐-메틸-(2-피리딜디티오)톨루엔을 포함한다.
또한, 하이브리드 면역독소 융합 단백질을 형성하기 위하여 유전자 방법에 의해 항-PSMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 단백질 독소를 융합시킬 수 있다. 이러한 추가의 서열이 융합 단백질의 표적화 또는 독소 활성에 인지가능한 영향을 미치지 않는 이상, 융합 단백질은 추가의 펩티드 서열, 예컨대 작동가능하게 부착된 펩티드 스페이서, 예를 들어 항-PSMA 항체 및 독소를 포함할 수 있다. 당 기술분야에 공지된 바와 같이, 펩티드 링커 또는 스페이서, 예컨대 글리신-세린 스페이서 펩티드, 또는 펩티드 경첩에 의하여 단백질이 부착될 수 있다. 예를 들어, 항-PSMA 항체의 결합 성질을 보유하는 면역독소를 형성하기 위하여, 항-PSMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 C-말단을 단백질 독소 분자의 N-말단에 융합시킬 수 있다. 다른 융합 배열이 당업자에게 공지될 것이다. 융합 면역독소를 발현하기 위하여, 융합 단백질을 코드화하는 핵산을, CHO 세포와 같은 포유류 세포에서 융합 단백질의 안정한 발현을 위한 표준 방법에 따라서 발현 벡터 내에 삽입한다. PSMA 친화력 컬럼과 같은 표준 방법을 사용하여 세포 또는 배양물 상층액으로부터 융합 단백질을 단리하고 정제할 수 있다.
방사핵은 전형적으로 킬레이트화에 의해 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 결합된다. 예를 들어, 금속성 방사핵의 경우에, 항체 또는 다른 단백질에 동위원소를 연결하기 위하여 이작용성 킬레이터가 보통 사용된다. 전형적으로, 킬레이터가 항체에 먼저 부착되고, 킬레이터-항체 접합체가 금속성 방사핵과 접촉된다. 이러한 목적을 위하여, 미국 특허 5,124,471호, 5,286,850호 및 5,434,287호 (여기에서 참고문헌으로 포함됨)에 기재된 아미노산의 디에틸렌트리아민 펜타아세트산(DTPA) 계열을 포함하는 다수의 이작용성 킬레이터가 개발되었다. 다른 예로서, 히드록삼산-기재 이작용성 킬레이트화제가 미국 특허 5,756,825호 (그의 내용이 여기에서 참고문헌으로 포함된다)에 기재되어 있다. 다른 예는 p-SCN-Bz-HEHA (1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로-옥타데칸-N,N',N",N"',N"", N"'"-헥사아세트산)이라 명명되는 킬레이트화 제이고 [Deal 등, J.Med.Chem. 42:2988, 1999], 이것은 225Ac와 같은 방사능금속의 효과적인 킬레이터이다. 또 다른 예는 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸 N,N',N",N"'-테트라아세트산)이고, 이것은 표지화에 이어 접합의 2-단계 방법에서 사용될 수 있는 이작용성 킬레이트화 제이다 ([McDevitt 등, Science 294: 1537-1540, 2001] 참조).
다른 치료제는 복제-선택성 바이러스를 포함한다. 복제-컴피턴트 바이러스, 예컨대 p53 경로 표적화 아데노바이러스 돌연변이체 dl1520, ONYX-015는 종양 세포를 선택적으로 사멸시킨다 [Biederer, C. 등, J.Mol.Med. 80(3): 163-175, 2002]. 일부 구현양태에서, 바이러스가 PSMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합될 수 있다.
본 발명의 제공된 조성물을 다른 치료 양식과 함께 사용할 수 있다. 이러한 기타 치료법은 수술, 방사능요법, 저온수술, 열수술, 호르몬 요법, 화학요법, 백신 및 기타 면역요법을 포함한다.
본 발명의 ADC는 예컨대 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 통하여 표지에 연결될 수 있다. 표지는 예를 들어 형광 표지, 효소 표지, 방사능 표지, 핵자기 공명 활성 표지, 발광 표지 또는 발색단 표지를 포함한다.
제공된 조성물은 ADC와 혼합된 생리적으로 또는 제약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제를 포함할 수 있다. 일부 구현양태에서, 조성물이 2 이상의 상이한 ADC를 포함할 때, ADC의 항체 또는 항원-결합 단편의 각각은 PSMA의 뚜렷한 입체형태적 에피토프에 결합한다.
여기에서 사용된 바와 같이, "표적 세포"는 본 발명의 ADC에 의해 표적화될 수 있는 피험자 (예, 인간 또는 동물)에서 바람직하지 못한 세포를 의미한다. 일부 구현양태에서, 표적 세포는 PSMA을 발현 또는 과다발현하는 세포이다. PSMA를 발현하는 세포 또는 PSMA-발현 세포는 전형적으로 종양 세포, 예컨대 전립선, 방광, 췌장, 폐, 신장, 결장 종양 세포 뿐만 아니라 흑색종 및 육종 세포를 포함한다.
본 발명의 제약학적 조성물은 조합 요법으로, 다시 말해서 다른 약제와 조합하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 조합 요법은 적어도 하나의 항-종양 제, 면역조절제, 면역자극제 또는 기타 통상적인 요법을 가진 본 발명의 조성물을 포함할 수 있다. 다른 약제는 PSMA-발현 세포에 대한 약제의 표적화를 지정하기 위하여 PSMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합되거나 이들과 함께 재조합체 융합 분자로서 형성될 수 있다. 다른 구현양태에서, 다른 치료제가 비접합될 수 있다. 추가의 치료제는 공동-투여를 통해 PSMA-발현 세포와 함께 투여되거나 접촉될 수 있다. 여기에서 사용된 "공동-투여"는 2 이상의 치료제들을 단일 조성물 중의 혼합물로서 동시에 또는 화합물들이 첨가 또는 심지어 상승 효과를 발휘할 수 있도록 충분히 가까운 시간에 연속적으로 투여하는 것을 가리킨다. 또 다른 구현양태에서, 추가의 치료제는 하나 이상의 ADC 또는 그의 조성물의 투여 전, 동안 또는 후에 투여될 수 있다.
여기에서 사용된 "제약학적으로 허용가능한 담체" 또는 "생리학적으로 허용가능한 담체"는 생리학적으로 상용성인 임의의 및 모든 염, 용매, 분산 매질, 코팅, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 일부 구현양태에서, 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척추 또는 표피 투여를 위해 적절하다 (예를 들어, 주사 또는 주입에 의해). 투여 경로에 의존하여, 화합물을 불활성화할 수도 있는 산 및 기타 자연 조건의 작용으로부터 화합물을 보호하기 위하여 활성 화합물을 물질에 코팅할 수도 있다.
투여될 때, 본 발명의 제약학적 제제는 제약학적으로 허용가능한 양 및 제약학적으로 허용가능한 조성물로 적용된다. 용어 "제약학적으로 허용가능한"은 활성 성분의 생물학적 활성의 효과를 방해하지 않는 비-독성 물질을 의미한다. 이러한 제제는 일상적으로 염, 완충제, 보존제, 상용성 담체, 및 임의로 기타 치료제, 예컨대 아주반트, 케모카인 및 사이토카인을 포함하는 보충 면역 증강제를 함유한다. 의약에서 사용될 때, 염은 제약학적으로 허용가능해야 하지만, 제약학적으로 허용가능한 염을 제조하기 위하여 제약학적으로 허용불가능한 염이 편리하게 사용될 수도 있고 본 발명의 범위로부터 제외되지 않는다.
염은 모 화합물의 바람직한 생물학적 활성을 유지하고, 바람직하지 못한 독성학적 효과를 부여하지 않는다 (예를 들어, [Berge, S.M. 등 (1997) J. Pharm. Sci. 66:1-19] 참조). 이러한 염의 예는 산 부가 염 및 염기 부가 염을 포함한다. 산 부가 염은 비독성 무기 산, 예컨대 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 인산 등 뿐만 아니라 비독성 유기 산, 예컨대 지방족 모노- 및 디카르복실산, 페닐 치환된 알카논산, 히드록시 알카논산, 방향족 산, 지방족 및 방향족 술폰산 등으로부터 유래된 것을 포함한다. 염기 부가 염은 알칼리 토류 금속, 예컨대 나트륨, 포타슘, 마그네슘, 칼슘 등 뿐만 아니라 비독성 유기 아민, 예컨대 N,N'-디벤질에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 키오로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 프로카인 등으로부터 유래된 것을 포함한다.
원한다면, ADC는 제약학적으로 허용가능한 담체와 조합될 수 있다. 용어 "제약학적으로 허용가능한 담체"는 인간에게 투여하기 위해 적절한 하나 이상의 상용성 고체 또는 액체 충진제, 희석제 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 용어 "담체"는 유기 또는 무기 성분, 천연 또는 합성을 나타내고, 활성 성분이 이것과 조합하여 적용을 수월하게 한다. 제약학적 조성물의 성분은 원하는 제약학적 효능을 실질적으로 손상시키는 상호작용이 존재하지 않는 방식으로 공동-혼합될 수 있다.
제약학적 조성물은 염으로의 아세트산; 염으로의 시트르산; 염으로의 붕산; 및 염으로의 인산을 포함하여 적절한 완충제를 함유할 수도 있다.
제약학적 조성물은 임의로 적절한 보존제, 예컨대 벤즈알코늄 클로라이드; 클로로부탄올; 파라벤 및 티메로살을 함유할 수도 있다.
제약학적 조성물은 단위 투여 형태로 편리하게 존재할 수도 있고 제약 분야에서 공지된 방법에 의해 제조될 수도 있다. 모든 방법은 활성 약제를 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 결합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 조성물은 활성 화합물을 액체 담체, 미세 분할된 고체 담체 또는 양쪽 모두와 균일하고 긴밀하게 결합시키고 이어서 필요하다면 생성물을 형태화함으로써 제조된다.
비경구 투여를 위해 적절한 조성물은 화합물의 무균 수성 또는 비-수성 제제를 편리하게 포함하고, 일부 구현양태에서 이것은 수용자의 혈액과 등장성이다. 이러한 제제는 적절한 분산 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 공지된 방법에 따라 제형될 수도 있다. 무균 주사 제제는 비-독성의 비경구적으로 허용가능한 희석제 또는 용매 중의 무균 주사 용액 또는 현탁액, 예를 들어 1,3-부탄 디올 중의 용액 일 수도 있다. 사용될 수 있는 허용가능한 부형제 및 용매 중에서 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 추가로, 무균의 불활성 유가 용매 또는 현탁 매질로서 편리하게 사용된다. 이러한 목적을 위하여, 합성 모노- 또는 디-글리세리드를 포함한 순한 불활성 유가 사용될 수도 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산이 주사제의 제조에서 사용될 수도 있다. 경구, 피하, 정맥내, 근육내 투여 등을 위해 적절한 담체 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., 펜실바니아주 이스턴]에서 찾아볼 수 있다.
빠른 방출에 대해 화합물을 보호하는 담체와 함께, 예컨대 이식물, 경피 패치 및 마이크로캡슐화 전달 체계를 포함한 조절 방출 제제로 활성 화합물을 제조할 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안히드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체친화성 중합체가 사용될 수 있다. 이러한 제제의 제조를 위한 많은 방법들이 특허되어 있거나 당 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어 [Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R.Robinson, ed, Marcel Dekker, Inc., New York, 1978] 참조.
본 발명의 치료제는 주사 또는 시간에 걸쳐 점진적인 주입을 포함하는 통상적인 경로에 의해 투여될 수 있다. 투여는 예를 들어 경구, 정맥내, 복강내, 근육내, 강내, 종양내 또는 경피 투여일 수도 있다. 항체를 함유하는 화합물이 치료적으로 사용될 때, 투여 경로는 정맥내 및 폐 에어로졸에 의한 것을 포함한다. 항체를 함유하는 에어로졸 전달 체계를 제조하기 위한 기술이 당업자에게 공지되어 있다. 일반적으로, 이러한 체계는 예컨대 파라토프 결합 능력과 같은 항체의 생물학적 성질을 상당히 손상시키지 않는 성분을 사용해야 한다 (예를 들어, 문헌 [Sciarra and Cutie, "Aerosols" Remington's Pharmaceutical Sciences, 제18판, 1990, pp. 1694-1712] (참고문헌으로 포함됨) 참조). 당업자라면 부당한 실험을 의지하지 않으면서 항체 에어로졸을 생성하기 위해 다양한 매개변수 및 조건을 쉽게 결정할 수 있을 것이다.
본 발명의 조성물은 효과적인 양으로 투여된다. "효과적인 양"이란, 원하는 반응을 일으키고, 예를 들어 피험자에서 PSMA-매개 질병을 치료하는, 단독으로 제공되거나 또는 추가의 투여량 및/또는 기타 치료제와 함께 제공된 ADC의 양을 가리킨다. 이것은, 일부 구현양태에서 질병의 진행을 영구적으로 정지시키는 것과 연관되긴 하지만, 질병의 진행을 일시적으로 단지 느리게 하는 것을 포함할 수 있다. 이것은 통상적인 방법에 의해 검사될 수 있다. 질병 또는 상태의 치료에 대해 바람직한 반응은 질병 또는 상태의 개시를 지연시키거나 개시를 방지할 수 있다. 효과적인 양은 바람직한 치료 종료점을 일으키는 ADC 단독의 양일 수 있다. 효과적인 양은 바람직한 결과를 가져오는 다른 약제와 조합된 ADC의 양일 수 있다.
이러한 양은, 의학 전문가의 지식 및 경험 내에서, 치료되어지는 특정한 PSMA-매개 질병, 상태의 심각성, 환자의 연령, 신체 조건, 체격 및 체중을 포함한 개인 환자 매개변수, 치료 지속기간, 동반 요법의 성질 (존재한다면), 특정한 투여 경로 등의 요인에 의존될 것이다. 이러한 요인은 당업자에게 공지되어 있고 단지 일상적인 실험에 의해 해결될 수 있다. 일반적으로, 개별 성분 또는 조합의 최대 투여량이 사용되는 것이 바람직하고, 다시 말해서 정상적인 의학적 판단에 따라 가장 높은 안전한 투여량을 사용한다. 그러나, 당업자라면 의학적 이유, 심리적 이유 또는 사실상의 다른 이유에서 환자들이 낮은 투여량 또는 허용가능한 투여량을 요구할 수도 있다는 것을 이해할 것이다.
상기 방법에서 사용되는 제약학적 조성물은 바람직하게는 무균이고, 환자에게 투여하기 위해 적절한 중량 또는 부피의 단위에서 원하는 반응을 일으키기 위하여 효과적인 양의 ADC를 단독으로 또는 다른 약제와 조합하여 함유한다. 반응은 예를 들어 ADC 조성물의 생리학적 효과, 예컨대 종양의 억제 또는 질병 증상의 감소를 결정함으로써 측정될 수 있다. 다른 분석이 당업자에게 공지되어 있으며 반응 수준을 측정하기 위해 사용될 수 있다.
특히, 사용되는 투여 방식 및 피험자의 상태에 따라서 상이한 매개변수에 따라 피험자에게 투여되는 ADC의 투여량이 선택될 수 있다. 다른 요인들은 원하는 치료 기간을 포함한다. 적용된 초기 투여량에서 피험자에서의 반응이 불충분한 경우에, 환자 내약성이 허용되는 정도까지 더욱 높은 투여량 (또는, 상이하고 더욱 국소화된 전달 경로에 의해 효과적으로 더욱 높은 투여량)이 사용될 수 있다.
일반적으로, 투여량은 약 10 ㎍/kg 내지 약 100,000 ㎍/kg의 범위일 수 있다. 일부 구현양태에서, 투여량은 약 0.1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 범위일 수 있다. 또 다른 구현양태에서, 투여량은 약 0.1 mg/kg 내지 5 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg 또는 0.1 mg/kg 내지 15 mg/kg의 범위이다. 또 다른 구현양태에서, 투여량은 약 1 mg/kg 내지 5 mg/kg, 5 mg/kg 내지 10 mg/kg, 10 mg/kg 내지 15 mg/kg, 또는 15 mg/kg 내지 20 mg/kg의 범위이다. 추가의 구현양태에서, 투여량은 약 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 12 mg/kg, 15 mg/kg, 17 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg 또는 30 mg/kg이다. 다른 구현양태에서, 투여량은 약 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg 또는 6 mg/kg이다. 조성물을 기초로 하여, 투여량은 연속적으로, 예컨대 연속 펌프에 의해 또는 주기적 간격으로 전달될 수 있다. 일부 구현양태에서, ADC가 정맥내 투여될 때, 투여량은 약 0.1 내지 20 mg/kg 또는 이 사이의 값이다. 특정한 조성물의 다수 투여량의 바람직한 시간 간격은 당업자에 의해서 부당한 실험 없이 결정될 수 있다. 제공된 조성물을 투여하기 위해 다른 프로토콜은 당업자에게 공지되어 있으며, 여기에서 투여량, 투여 스케쥴, 투여 부위, 투여 방식 등은 다양하다. 일부 구현양태에서, q4d×3 또는 q4d×6의 투여 섭생법에 따라 피험자에게 ADC를 투여한다. 하나의 구현양태에서, 투여량을 정맥내 투여한다. 다른 구현양태에서, 투여 섭생법은 단일 정맥내 투여이다.
예를 들어 시험 목적을 위해 또는 수의학 치료 목적을 위해 인간 이외의 포유동물에 ADC 조성물을 투여하는 것은 상기 기재된 것과 실질적으로 동일한 조건 하에서 수행된다.
본 발명의 조성물은 시험관내 및 생체내 진단 및 치료 용도를 갖는다. 예를 들어, 다양한 PSMA-매개 질병을 치료하거나 예방하거나 진단하기 위하여, 이러한 분자를 배양액 중의 세포에, 예를 들어 시험관내 또는 생체외 투여하거나, 또는 피험자에서, 예를 들어 생체내 투여할 수 있다. 여기에서 사용된 바와 같이, 용어 "피험자"는 인간 및 비-인간 동물을 포함하는 것으로 해석된다. 피험자는 PSMA의 발현, 전형적으로 PSMA의 이상 발현 (예를 들어, 과다발현)을 특징으로 하는 질병을 가진 인간 환자를 포함한다. 이러한 질병은 "PSMA-매개 질병"의 정의에 포함된다.
여기에서 제공된 조성물은 암의 생체내 요법에서 사용될 수 있다. 접합체의 투여 및 국소화 후에 악성 세포 또는 조직의 증식을 억제하기 위하여 ADC가 사용될 수 있다. 제공된 조성물은 항-PSMA 항체를 포함할 수 있고, 일부 구현양태에서 보체 고정화 또는 항체-의존성 세포 세포독성에 의한 종양 파괴를 매개할 수도 있다. 대안적으로, 조성물은 상승적인 치료 효과를 가져오도록 추가의 치료제를 함유할 수 있다 [Baslya and Mendelsohn 1994, Breast Cancer Res. and Treatment 29: 127-138].
본 발명의 조성물을 일부 구현양태에서 보체 및/또는 비접합 항-PSMA 항체와 함께 투여할 수도 있다. 따라서, ADC 및 혈청 또는 보체를 포함하는 조성물이 본 발명의 범위 내에 있다. 이러한 조성물은 보체가 인간 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 근접하게 위치한다는 점에서 유리하다. 대안적으로, ADC 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및/또는 보체 또는 혈청이 별도로 투여될 수 있다.
본 발명의 치료법의 사용은 다수의 장점을 갖는다. ADC가 예를 들어 전립선 암 세포에서 PSMA를 우선적으로 표적으로 하기 때문에, 다른 조직들이 손상되지 않을 수 있다. 그 결과, 생물학적 약제로의 치료가 특히 성인 환자를 위해 더욱 안전하다. 암 전이, 예컨대 전립선 암 전이가 우세한 경우에 골수 및 림프절에 높은 수준의 ADC를 지정할 수 있기 때문에, 본 발명에 따른 치료는 일부 경우에 특히 효과적인 것으로 기대된다. 본 발명에 따른 치료는, 단계, 분화도(Gleason score), 관절막외, 정액, 소포체 또는 신경주위 침범, 절제연의 침윤, 관련된 림프절 등을 포함하여, 혈청 전립선 특이적 항원 및/또는 환자의 암의 병리학적 특징과 같은 임상적 매개변수에 의해 효과적으로 검사될 수 있다. 대안적으로, 이러한 치료가 사용되어야 할 때를 나타내기 위하여 이러한 매개변수가 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물, 예를 들어 하나 이상의 ADC를 포함하는 키트 및 사용 지시가 본 발명의 범위 내이다. 키트는 적어도 하나의 추가의 시약, 예컨대 보체, 화학요법제, 코르티코스테로이드 또는 PSMA에 결합하는 하나 이상의 항체를 더욱 함유할 수 있다. 다른 키트는 PSMA 다량체를 포함할 수도 있다. 다른 구현양태에서, 키트는 그 안에 밀접하게 국한되어 시험관, 바이알, 플라스크, 병, 주사기 등과 같은 하나 이상의 용기 수단 또는 일련의 용기 수단을 수용하도록 구획화된 운반용기를 포함할 수 있다. 상기 용기 수단의 첫 번째 또는 일련의 용기 수단은 하나 이상의 항-PSMA 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 함유할 수도 있다. 일부 구현양태에서, 두 번째 용기 수단 또는 일련의 용기 수단은 MMAE 또는 MMAF 또는 MMAE 또는 MMAF에 접합된 화학식 1의 화합물을 함유할 수 있다. 일부 구현양태에서, 세 번째 용기 수단 또는 일련의 용기 수단은 화학식 1의 화합물을 함유한다. ADC를 함유하는 생체내 종양 국소화 및 치료 방법에서 사용하기 위한 키트를 제조할 수 있다. 키트의 성분들을 수성 매질 중에서 또는 동결건조된 형태로 포장할 수 있다. ADC 접합체의 성분들을 완전히 접합된 형태로, 중간체의 형태로 또는 키트의 사용에 의해 접합되어지는 별개의 부분으로서 공급할 수 있다.
폴리펩티드, 단백질 또는 그의 단편에 관해 사용된 바와 같이, "단리된"은 자연 환경으로부터 분리되어 그의 동정 또는 사용이 가능하도록 충분한 양으로 존재하는 것을 의미한다. 단백질 또는 폴리펩티드를 일컬을 때, "단리된"은 예를 들어 (i) 발현 클론화에 의해 선택적으로 제조되거나, 또는 (ii) 크로마토그래피 또는 전기영동에 의해 정제된 것을 의미한다. 단리된 단백질 또는 폴리펩티드는 실질적으로 순수할 수도 있지만 반드시 그럴 필요는 없다. 용어 "실질적으로 순수한"은, 단백질 또는 폴리펩티드가, 원하는 용도를 위해 실용적이고 적절한 정도까지 자연 또는 생체내 체계에서 발견될 수도 있는 다른 물질을 필수적으로 갖지 않음을 의미한다. 실질적으로 순수한 폴리펩티드는 당 기술분야에 공지된 기술에 의해 생성될 수도 있다. 단리된 단백질을 제약학적 제제 중에서 제약학적으로 허용가능한 담체와 혼합할 수도 있기 때문에, 단백질은 제제 중량의 단지 작은 퍼센트 만을 차지할 수도 있다. 그럼에도 불구하고, 단백질은 생체 체계에 관련될 수도 있는 물질로부터 분리되거나, 다시 말해서 다른 단백질로부터 단리된다는 점에서 단리된다.
여기에 제공된 조성물은 동결건조된 형태이거나 수성 매질 중에서 제공될 수 있다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 더욱 예증되고, 어떠한 방식으로도 제한적인 것으로 해석되어서는 안된다. 본 출원에 인용된 모든 참고문헌의 전체 내용 (참고문헌, 특허, 공개된 특허출원 및 동시-계류 중인 특허 출원 포함)이 여기에서 참고문헌으로 포함된다.
<실시예>
실시예 1: 전립선-특이적 막 항원에 대해 아우리스타틴 - 접합된 전체 인간 단클론성 항체의 강력한 항종양 활성
재료 및 방법
세포주 및 항체
LNCaP™ (CRL-1740), PC-3™ (CRL-1435) 및 3T3™ (CRL-2752)을 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (미국 미들랜드주 록빌)으로부터 수득하였다. LNCaP™로부터의 부-세포주인 C4-2 세포주는 더 클리브랜드 클리닉 파운데이션(The Cleveland Clinic Foundation) (미국 오하이오주 클리브랜드)로부터 수득되었다. PSMA 세포주인 3T3™는 메모리얼 슬로언-케터링 암 센터(Memorial Sloan-Kettering Cancer Center) (미국 뉴욕)으로부터 수득되었다. LNCaP™, C4-2 및 PC-3™ 을 RPMI 1640 (라이프 테크놀로지스, 미국 미들랜드주 게이터스버그)에 배양하고, 3T3™ 및 3T3™-PSMA를 DMEM (라이프 테크놀로지스)에 배양하였다. 배양 배지를 10% 태아 소 혈청 (하이클론, 미국 유타주 로간), L-글루타민, 페니실린 및 스트렙토마이신(라이프 테크놀로지스)로 보충하였다. C4-2, LNCaP™ 및 3T3™-PSMA 세포는, 공개된 방법 [Ma D 등, Leukemia 2002; 16: 60-6]에 따라서, 대략 2×105, 6×105 및 >1×106 카피/세포의 수준으로 PSMA를 발현하는 것으로 결정되었다. C4-2는 안드로겐-의존성 LNCaP™ 세포의 안드로겐-비의존성 서브클론이다. PC-3™은 PSMA를 발현하지 않는 비-분화된 전립선 암 세포주이다. 미국 특허출원 10/395,894호 및 문헌 [Schulke N 등, PNAS USA 2003; 100: 12590-5] (이것의 각각은 그 전체내용이 참고문헌으로 포함된다)에 기재된 바와 같이, PSMA mAbs (AB-PG1-XG1-006 (PTA-4403 및 PTA-4404) 및 애브게닉스 4.40.2 (PTA-4360)을 제조하였다. 애브게닉스 4.40.2를 대조로서 사용하였다. 인간 면역글로불린 유전자 좌에서 유전자이식되고 (제노마이스(XenoMice)™ 미국 캘리포니아주 프레몬트 애브게닉스 인코포레이티드) 이어서 앞서 기재된 바와 같이 재조합 가용성 PSMA 및 LNCaP 세포로 면역화된 생쥐에서 전체 인간 PSMA mAb (IgG1, κ)이 증가되었다 [Schulke N 등, PNAS USA 2003; 100: 12590-5].
PSMA 내재화
국립 암 연구소 (미국 미들랜드주 베데스다)로부터 수득된 시클로헥실-디에틸렌트리아민 펜타아세트산(CHX-DTPA)의 이작용성 킬레이트로 mAbs를 변형시키고, 앞서 기재된 바와 같이 111In (미국 매사츄세츠주 보스턴 퍼킨엘머)로 표지화하였다 [Ma D, 등, Leukemia 2002; 16:60-6; Nikula TK 등, J Nucl.Med. 1999; 40: 166-76]. 방사능접합체를 과량의 3T3™-PSMA 세포와 배양하고 공개된 방법 [Ma D 등, Leukemia 2002; 16: 60-6; Nikula TK 등, J Nucl. Med 1999; 40: 166-76]에 따라 결합된 비율을 측정함으로써, 111In-표지화 mAb가 90% 초과의 면역반응성인 것으로 결정되었다. 내재화 분석을 위하여, 111In-표지화 mAb를 2×105 C4-2 세포와 함께 5% CO2 중에서 37℃에서 배양하였다. 연속된 시점에서, PBS 중에서 세척함으로써 비결합 mAb를 제거하고, 낮은 pH 완충액 (pH 2.4, 글리신/NaCl)을 사용하여 세포-표면 mAb를 용출시켰다. 세포 펠릿으로부터 낮은 pH 용출물을 별도로 계산하고, 앞서 기재된 바와 같이 내재화율을 계산하였다 [McDevitt MR 등, Cancer Res 2000; 60: 6095-100].
항체-약물 접합체의 제조
미국 특허 6,884,889호 및 미국 특허 6,214,345호 (이들의 각각은 그 전체내용이 참고문헌으로 포함됨)에 기재된 바와 같이, 링커의 합성 및 구조와 세포독성 약물에 대한 링커의 접합을 수행하였다. 문헌 [Doronina SO 등, Nat.Biotechnology 2003: 21: 778-84]에 기재된 바와 같이, mAb와 말레이미도카프로일(mc)-발린(Val)-시트룰린(Cit)-모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE)의 접합을 수행하였다. 50 mM 보레이트를 함유하는 PBS, pH 8.0 중의 PSMA mAb 및 이소형-대조 인간 IgG1 [미국 캘리포니아주 샌디에고 칼바이오켐)을, 37℃에서 30분 동안 디티오트레이톨 (DTT) (10mM 최종)로 처리하였다. 최종 반응 농도는 7.5mL-8.0mL, 1mL 0.5M 붕산나트륨 pH 8 및 0.5M NaCl, 1mL 100mM DTT, 및 각각 0.5mL 또는 0mL의 PBS이다. 이러한 용액을 40℃에서 1시간 동안 배양하고 겔 여과 컬럼 상에서 항체를 정제하였다. 컬럼을 10mL/분에서 PBS 중의 10mM DTPA와 평형화하고, 10.0mL의 항체 환원 혼합물로 부하하고, PBS/DTPA 완충액 중에서 8mL/분으로 용출시켰다. 5,5'-디티오-비스-(2-니트로벤조산) (DTNB) (미국 일리노이주 락포드 피어스 케미칼 컴퍼니)로 적정함으로써 생성된 항체-시스테인 티올의 농도를 결정하였다. 시그마(Sigma, 미국 미조리주 세인트루이스)로부터 등량의 화합물을 수득할 수 있다.
충분히 환원된 mAb 애브게닉스 4.40.2 (22.6mL의 7.8 μM mAb, 75.6 μM 시스테인 티올)을 35.43 ㎕의 10mM DTNB와 부분적으로 재산화시키고, 충분히 환원된 mAb AB-PG1-XG1-006 (25.1mL의 11.2 μM mAb, 95.8 μM 시스테인 티올)을 56.27 ㎕의 10mM DTNB와 재산화시켰다. 용액의 색이 즉시 황색으로 변하였다.
약물 mc-Val-Cit-파라아미도벤질 카르바메이트-MMAE (vcMMAE)를 다음과 같이 부분 재산화 mAb에 접합시켰다: mAbs를 먼저 0℃로 냉각하였다. vcMMAE (항체 당 5 몰 당량: vcMMAE의 10mM 원액의 각각 89.7 및 140.6 ㎕)를 5mL 아세토니트릴에 용해시킨 다음 조심스럽게 와류시키면서 항체 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 얼음 위에서 항온 처리하였다. 추가의 색 변화가 관찰되지 않았다. 20몰 당량의 시스테인/약물로 반응 혼합물을 정지시켰다. 겔-여과 컬럼을 사용하여 4℃에서 접합체를 정제하고 8.0mL/분에서 PBS로 용출시켰다. ADC는 공개된 방법을 사용하여 mAb 당 3.0-3.5 약물을 함유하는 단량체 Ab를 98% 이상 갖는 것으로 결정되었다 [Doronina SO 등, Nat Biotechnol. 2003; 21: 778-84].
대안적으로, 기재된 바와 같이 말레이미도카프로일(mc)-발린(Val)-시트룰린(Cit)-모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE)와 mAbs의 접합을 수행하였다 [Doronina SO, 등, Nat.Biotechnology 2003; 21: 778-84]. 50mM 보레이트를 함유하는 PBS, pH 8.0에서 PSMA mAb 및 이소형-대조 인간 IgG1 (칼바이오켐, 미국 캘리포니아주 샌디에고)를 37℃에서 30분 동안 디티오트레이톨(DTT) (10mM 최종)으로 처리하였다. 세파덱스 G-25 컬럼 (아머샴 바이오사이언스, 미국 뉴저지주 피스카타웨이)을 통해 통과시킴으로써, mAbs를 1mM DTPA를 함유하는 PBS (알드리치, 미국 위스콘신주 밀워키) 내로 교환하였다. mAb 용액을 4℃로 냉각하고, 냉 CH3CN 중에서 말레이미도 약물 유도체와 조합하였다. 1시간 후에, 반응을 과량의 시스테인으로 정지시키고, 접합체를 농축하고 PBS 완충액 내로 교환하였다. ADC는 공개된 방법을 사용하여 mAb 당 3.0-3.5 약물을 함유하는 단량체 mAb를 98% 이상 갖는 것으로 결정되었다 [Doronina SO 등, Nat Biotechnol. 2003; 21: 778-84].
세포-표면 PSMA 와 ADC 와의 반응성
FACS칼리버 유동 세포측정기 (BD 바이오사이언스, 미국 캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 3T3™-PSMA 및 모 3T3™ 세포에 대한 PSMA mAb 및 ADC의 결합을 분석하였다. 간략하게, 2×105 3T3™-PSMA (또는 3T3™) 세포를 얼음 위에서 1시간 동안 상이한 농도의 mAb 또는 ADC와 함께 배양하였다. 세척 후에, 염소 항-인간 IgG-FITC (칼태그 래보러토리즈, 미국 캘리포니아주 버링게임)을 사용하여 결합된 항체의 존재를 검출하였다. 이소형-대조 항체 및 ADC를 병행하여 시험하였다.
시험관내 세포독성 분석
PSMA-양성 세포 (C4-2, LNCaP™ 또는 3T3™-PSMA) 및 PSMA-음성 세포 (PC-3™ 또는 3T3™)을 96-웰 마이크로플레이트 (팔콘, 미국 캘리포니아주 산요세 BD 바이오사이언스)에 2.5×103 세포/웰로 첨가하고, 37℃ 및 5% CO2에서 밤새 배양하였다. 이어서, 세포를 연속 희석된 ADC와 함께 4일간 배양하였다. 세포 배양 배지를 10% 알라마르 블루 (바이오소스 인터내셔날, 미국 캘리포니아주 카마릴로)를 함유하는 새로운 배지로 대체하고, 세포를 4시간 동안 배양하였다. 530nm의 여기 파장 및 590nm의 방출 파장을 사용하여 플레이트를 형광 플레이트 판독기에서 판독하였다. 처리 및 비처리 배양액에서 세포 생존을 비교하고, 50% 세포 사멸을 위해 필요한 ADC의 농도 (IC50)를 결정하였다.
안드로겐- 비의존성 전립선 암의 이종이식 모델
동물 보호 및 사용 위원회 지침에 따라서 모든 동물 연구를 수행하였다. 기재된 바와 같이 [McDevitt MR 등, Cancer Res 2000; 60: 6095-100], 6 내지 8주령의 가슴샘없는 수컷 누드 생쥐 (국립 암 연구소, 미국 미들랜드주 프레더릭)에게 50% 마트리겔 (벡콘 딕킨슨 랩웨어, 미국 매사츄세츠주 베드포드)과 혼합된 5×106 C4-2 세포를 근육내 주사에 의해 왼쪽 뒷다리 내에 이식하였다. 치료 개시 전 대략 1일에, ELISA (메디코프, 캐나다 퀘벡 몬트레알)에 의해 측정되는 것과 같이 전립선-특이적 항원(PSA)의 혈청 수준에 따라서 동물을 무작위 추출하였다. 첫 번째 일련의 실험에서, 생쥐를 6개 군에서 2 또는 10 mg/kg PSMA ADC로 또는 부형제 대조로 치료하였다. 이식 후 17일에 치료를 개시하였으며 4일 간격으로 3회 주사로 구성되었다 (q4d×3). 두 번째 일련의 실험은 0, 3 또는 6mg/kg의 투여량 수준으로 시험하였다. 이식 후 14일에 치료를 개시하였으며 4-일 간격으로 6회 주사로 구성되었다 (q4d×6). 신체적 외관, 체중, PSA 수준 및 종양 크기에 관해 동물을 검사하였다. 연구 전체에 걸쳐 생존율을 기록하였다.
통계적 분석
2-꼬리, 쌍합 분석을 사용하여, t-시험 (PSA 수준에 대해) 또는 로그-랭크 시험 (동물 생존에 대해)을 통하여 유의값에 대해 처리 효과를 시험하였다. 데이타는 P<0.05일 때 중요한 것으로 간주되었다.
결과
인간 전립선 암 세포 내에 PSMA mAb 의 내재화
111In-표지화 PSMA mAb 및 C4-2 세포를 사용하여 내재화를 시험하였다. 시간에 걸친 총 결합 및 내재화율을 도 1에 나타낸다. 결합된 mAb의 반 이상이 2 시간 이내에 내재화된다 (도 1A). 아마도 PSMA 재순환에 기인하여 시간에 걸쳐 총 결합이 증가된다 (도 1B). 따라서, PSMA mAb가 PSMA-발현 세포 내에 쉽게 내재화된다.
PSMA ADC 와 PSMA -발현 세포의 반응성
PSMA mAb와 ADC의 결합을 비교하기 위해 유동 세포측정법을 사용하였다. 비변형 mAb 및 ADC는, 넓은 범위의 희석에 걸쳐서 3T3™-PSMA에 대해 필적하는 결합 수준을 나타내었다 (도 2). 최대 결합 양 또는 1/2-최대 결합을 위해 필요한 농도 양쪽 모두가 접합에 의해 상당히 영향을 받지 않았다. 3T3™-PSMA 세포 상의 이소형-대조 ADC 또는 항체에 대하여, 또는 모 3T3™ 세포 상의 PSMA mAb 또는 ADC에 대하여 의미있는 결합이 관찰되지 않았다.
PSMA ADC 의 시험관내 효능 및 선택성
인간 전립선 암 세포주 및 3T3™-PSMA 세포에 대하여 시험관내에서 세포독성에 대해 PSMA 및 대조 ADC를 시험하였다. 도 3은 대표적인 실험에서 PSMA-양성 C4-2 세포 및 PSMA-음성 PC-3™ 세포에 대해 투여량-반응 곡선을 나타내고, 다양한 세포주에 대해 IC50 값을 표 2에 나타낸다. PSMA ADC는 65 내지 210 pM의 IC50 값에서 시험된 모든 PSMA-양성 세포 주를 강력하게 제거하는 반면, 이러한 농도는 PSMA-음성 세포에 아무런 영향을 미치지 않았다. 반대로, 대조 ADC에 대하여 거의 1000배 더 높은 농도가 요구되었으며, 그의 활성은 PSMA 발현과 무관하다 (도 3 및 표 2).
시험관내 세포독성의 요약 (pM로의 IC50 값)
C4-2 LNCaP™T 3T3™-PSMA
PSMA ADC 65±19 (n=3) 83±21 (n=2) 208±37 (n=3)
대조 ADC 54,954 (n=1) 72,444 (n=1) 154,880 (n=1)
선택성* 848 877 744
* 선택성은 PSMA ADC와 대조 ADC에 대해 관찰된 IC50 값의 비율과 같다
안드로겐- 비의존성 전립선 암의 이종이식 모델에서 PSMA ADC 의 효능
안드로겐-비의존성 인간 전립선 암의 생쥐 모델에서 PSMA ADC의 생체내 효능을 평가하였다. 누드 생쥐에게 왼쪽 뒷 다리에서 C4-2 세포를 근육내 이식하였다. 대략 14 내지 17일 후에, 혈청 PSA 수준을 측정하고, 동물을 치료 군에 무작위로 배정하기 위해 사용하였다. PSMA ADC로 동물을 정맥내 치료하고, 500일 정도의 기간 동안 종양 량, PSA 수준 및 기타 매개변수에 대해 동물을 검사하였다.
첫 번째 실험에서, 동물을 0, 2 또는 10mg/kg PSMA ADC로 q4d×3 처리하였다. 치료되지 않은 채로 놓아두면 종양이 빠르게 성장하고, 동물은 32일의 생존 중앙값을 가졌다. 반대로, 2 mg/kg 및 10 mg/kg PSMA ADC로 처리된 군은 각각 58일 (P=0.0035) 및 94.5일 (P=0.0012)의 생존 중앙값을 가졌다 (표 3, 도 4A). PSMA ADC 처리는 투여량-의존성 방식으로 4.5배까지 생존 중앙값을 상당히 개선하였다. 치료-관련 독성의 증거는 존재하지 않았다.
ELISA에 의해 시간에 걸쳐 혈청 PSA 수준을 측정하였다. 도 4B는 연구 17, 23 및 30일에 각각의 군에서 평균 PSA 농도를 나타낸다. 10 mg/kg에서의 처리는 17일에 8.8±11.7 ng/mL으로부터 30일에 0.7±0.9 ng/mL로 10배 초과로 PSA 수준을 감소시키는 반면, 대조 군에서 PSA 수준은 동일한 기간에 걸쳐 60배 초과로 증가되었다. 2 mg/kg PSMA ADC에서 중간 반응이 관찰되었다. 30일에 PSA 수준에서의 차이는 2 mg/kg (P=0.0048) 및 10 mg/kg (P=0.0006) 투여 군 양쪽 모두에서 중요하였다. 10 mg/kg 군에서 6마리 동물 중 3 마리가 52일의 연구에 걸쳐 검출불가능한 PSA를 가졌다.
이러한 연구를 연장하기 위하여, 비변형 mAb 및 이소형-대조 ADC를 포함하는 두 번째 PSMA ADC 연구를 수행하였다. 각각의 군(n=5)에서 2.0±1.1 ng/mL의 평균 PSA 수준에서 14일에 무작위 추출 후에, 동물을 q4d×6의 섭생법으로 처리하였다. 각각의 군에 대하여 카플란-메이어(Kaplan-Meier) 생존 곡선을 도 5에 나타낸다. 부형제 대조, 6 mg/kg 비변형 PSMA mAb 및 6 mg/kg 대조 ADC로 처리된 동물들은 각각 29, 31 및 31일의 유사한 생존 중앙값 시간을 가졌으며; 이러한 차이는 중요하지 않았다. 그러나, 생존 중앙값은 각각 3 mg/kg 및 6 mg/kg PSMA ADC로 처리된 동물에 대해서 49일 및 148일로 연장되었다 (표 3). 6 mg/kg으로 PSMA ADC 군을 처리하면, 대조 ADC 군에 비하여 무작위추출 후 생존율이 7.9배 개선되었다 (P=0.0018). 500일에, 5마리 동물의 2마리는 종양의 증거 및 측정가능한 PSA를 갖지 않았으며, 처리에 의해 치료된 것으로 간주되었다. 첫 번째 연구에서와 같이, 치료는 29일에 PSA 수준에 대해 상당한 영향을 미쳤다 (6 mg/kg PSMA 및 부형제 군에 대해 P=0.0068). 또한, 6 mg/kg PSMA ADC 군에서, 혈청 PSA는 처리 후에 검출불가능한 수준으로 저하되었으며 5 마리 동물 중 4 마리에서 63일에 걸쳐 검출불가능하게 유지되었다. ADC 요법과 관련된 명백한 독성이 존재하지 않았다. 신체적 외관 및 활성은 치료에 의해 영향을 받지 않았으며, 치료 및 부형제-대조 동물의 체중은 어느 시점에서도 상당히 다르지 않았다.
PSMA ADC로 치료된 C4-2 종양-함유 동물의 생존 중앙값 시간의 요약
시험 항목 투여량 (mg/kg) 생존 중앙값 (일) P 값*
연구 # 1 부형제 NA 32 NA
PSMA ADC 2 58 0.0035
PSMA ADC 10 95 0.0010
연구 # 2 부형제 NA 29 NA
PSMA mAb 6 31 0.1869
대조 ADC 6 31 0.2970
PSMA ADC 3 49 0.0018
PSMA ADC 6 148 0.0018
* 2면 로그-랭크 분석에서 부형제 대조군에 비교, NA=적용되지 않음
실시예 2: 3개의 상이한 약물-링커에 접합된 PSMA mAb 의 평가
vcMMAE 및 2개의 상이한 약물-링커, vcMMAF 및 mcMMAF에 접합될 때 PSMA mAb를 평가하였다. 3가지 상이한 약물-링커의 전체 화학 구조를 도 6에 나타낸다.
PSMA mAb 의 3가지 약물-링커 접합체의 제조
항체 접합체 당 대략 4개 약물을 제조하기 위하여 티오에테르 결합을 통해 3가지 약물-링커를 PSMA mAb에 직접 접합시켰다. mAb 내부사슬 디설파이드의 부분 환원을 약간 과량의 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP)과 함께 pH 7.2 및 37℃에서 진행하였으며, 약물-링커와 자유 티올의 접합은 정량적이었다. 간략하게, PSMA mAb (10 mg, PBS 중의 67.5 나노몰)을 37℃에서 1 mM DTPA 및 169 나노몰의 TCEP와 함께 90분 동안 항온처리하였다. 항온 처리 동안에 3개의 시점에서 (30분, 60분 및 90분), 50㎍ mAb의 분취량을 제거하고, 과량의 vcMMAE와 함께 반응시켰다. 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의한 ADC의 분석은 환원 진행 정도를 검사할 수 있었다. 결과는, mAb가 상기 조건 하에서 빠르게 환원되고 1 시간 후에 필수적으로 완결됨을 나타내었다. 또한, 환원의 정도는 5 약물/mAb의 평균 약물 부하를 가져왔다.
상기 부분 환원된 mAb로부터 약물-링커와 함께 4-부하된 ADC를 제조하기 위하여, 0.5 당량의 DTNB를 첨가하여 mAb 집단을 원하는 수준으로 다시 산화시켰다. 이어서, 3mg의 이 물질 (20.3 나노몰)을 15% 디메틸 술폭시드 (DMSO) 반응 용액 중에서 101 나노몰의 vcMMAE, vcMMAF 또는 mcMMAF와 반응시켰다. 이러한 반응을 0℃에서 1시간 동안 진행시킨 다음, 20배 과량의 N-아세틸 시스테인으로 정지시켰다. PD-10 컬럼 (아머샴 바이오사이언스/GE 헬쓰케어, 미국 뉴저지주 피스카타웨이) 위에서의 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의하여 반응되지 않은 약물 및 다른 소 분자 불순물로부터 ADC를 분리하고, 원심분리 농축 장치 (30kD MWCO) (아미콘 바이오세퍼레이션스, 밀리포어 코포레이션, 미국 메사츄세츠주 베드포드)로 농축하였다.
3가지 약물-링커 접합체의 특징화의 요약을 각각 vcMMAE, vcMMAF 및 mcMMAF에 대하여 표 4 내지 6에 제공한다. 3가지 약물-링커의 각각에 대하여, ADC는 H/L-사슬 부하 분포 및 종 분포에 의해 결정될 때 mAb 당 대략 4가지 약물을 함유하고, 역상(RP) HPLC를 사용하여 결정될 때 2% 미만의 유리 약물을 함유한다. 모든 접합체에 대하여, SEC-HPLC에 의해 응집체가 검출되지 않았다. 또한, 전체 mAb 수율은 70 내지 80%였다.
접합체 시험 확인서
699028A
PSMA mAb vcMMAE
부분 환원
분석 방법 결과
mAb 농도
mg/mL		 UV 3.3
약물/mAb
몰/몰		 H/L 사슬 부하 분포 (PLRP)
종 분포 (HIC)		 4.3
비접합 약물
전체 약물의 %		 RP-HPLC <0.5
크기 상동성
% 응집체		 SEC-HPLC 비 검출
몰 비율 분포
전체의 %		 HIC-HPLC 3.5% 0 약물/Ab
19.4% 2 약물/Ab
39.6% 4 약물/Ab
21.0% 6 약물/Ab
11.7% 8 약물/Ab
변성된 항체 PLRP-HPLC 31.3% L0
68.7% L1
10.7% H0
40.4% H1
25.1% H2
23.7% H3
접합체 시험 확인서
699028B
PSMA mAb vcMMAF
부분 환원
분석 방법 결과
mAb 농도
mg/mL		 UV 3.1
약물/mAb
몰/몰		 H/L 사슬 부하 분포 (PLRP)
종 분포 (HIC)		 4.4
비접합 약물
전체 약물의 %		 RP-HPLC <0.5
크기 상동성
% 응집체		 SEC-HPLC 비 검출
몰 비율 분포
전체의 %		 HIC-HPLC 3.3% 0 약물/Ab
18.5% 2 약물/Ab
39.0% 4 약물/Ab
22.2% 6 약물/Ab
13.5% 8 약물/Ab
변성된 항체 PLRP-HPLC 29.0% L0
71.0% L1
9.9% H0
40.2% H1
24.9% H2
25.0% H3
접합체 시험 확인서
699028C
PSMA mAb vcMMAF
부분 환원
분석 방법 결과
mAb 농도
mg/mL		 UV 3.7
약물/mAb
몰/몰		 H/L 사슬 부하 분포 (PLRP)
종 분포 (HIC)		 4.4
비접합 약물
전체 약물의 %		 RP-HPLC 1.8
크기 상동성
% 응집체		 SEC-HPLC 비 검출
몰 비율 분포
전체의 %		 HIC-HPLC 3.8% 0 약물/Ab
22.4% 2 약물/Ab
36.3% 4 약물/Ab
23.1% 6 약물/Ab
14.4% 8 약물/Ab
변성된 항체 PLRP-HPLC 32.7% L0
67.3% L1
14.7% H0
39.6% H1
23.8% H2
21.9% H3
인간 전립선 암 세포에 대한 PSMA mAb 접합체의 효능 및 선택성
PSMA-양성 및 PSMA-음성 세포 주를 가지고 시험관내 세포독성 연구를 수행하였다. 간략하게, PSMA-양성 세포 (C4-2, LNCaP™ 또는 3T3™-PSMA) 및 PSMA-음성 세포 (PC-3™ 또는 3T3™)를 96웰 마이크로플레이트에 2.5×103 세포/웰로 첨가하고, 37℃ 및 5% CO2에서 밤새 배양하였다. 이어서, 세포를 연속 희석된 ADC와 함께 4일 동안 배양하고, 10% 알라마르 블루를 사용하여 처리되지 않은 대조에 비교하여 세포 사멸 퍼센트에 대해 분석하였다. 50% 세포 사멸을 위해 필요한 ADC의 농도 (IC50 값)를 결정하였다.
도 7은 대표적인 실험에서 PSMA-양성 C4-2 세포 및 PSMA-음성 PC-3™ 세포에 대하여 vcMMAE (도 7A), vcMMAF (도 7B) 및 mcMMAF (도 7c)의 투여량-반응 곡선을 나타낸다. C4-2 및 PC-3™ 세포 주에 대한 효능 (IC50) 및 선택성의 요약을 표 7에 나타낸다. PSMA-발현 C4-2 세포에 대한 IC50은 vcMMAF, mcMMAF 및 vcMMAE 접합체에 대해 각각 11, 42 및 60의 피코몰 농도였다. 반대로, PC-3™ PSMA-음성 세포에 대한 IC50은 94 내지 264 nM 범위로 90 nM보다 컸다. PC-3™ 및 C4-2에 대한 각각의 접합체의 효능을 기준으로 하여, 선택성은 각각 vcMMAF, mcMMAF 및 vcMMAE 접합체에 대하여 13,636; 6,286 및 1,567인 것으로 계산되었다. vcMMAF 접합체는 C4-2 PSMA 양성 세포주에 대해 가장 효능이 있고, mcMMAF는 PC-3™ 대조 세포 주에 비해 최소의 독성이었다. vcMMAE 접합체에 비하여, mcMMAF 및 vcMMAF 접합체에 대해 각각 4배 및 9배의 선택성 향상이 존재하였다.
시험관내 효능 (pM에서 IC50 값) 및 선택성의 요약
약물-링커
 효능 (pM) 선택성
(PC-3/C4-2)		 vcMMAE에 비해 향상
C4-2 (n=3) PC-3 (n=2)
vcMMAF 11 150,000 13636 9배
mcMMAF 42 264,000 6286 4배
vcMMAE 60 94,000 1567 -
PSMA mAb 약물 접합체에 의한 세포 사멸의 메카니즘
MMAE-접합된 mAb에 의해 매개되는 세포독성의 메카니즘을 결정하기 위하여 세포-주기 분석을 수행하였다. 3T3™-PSMA 또는 C4-2 세포를 0.2nM PSMA ADC 또는 20 nM 비변형 PSMA mAb의 존재 하에서 배양하였다. 비처리된 세포는 대조 배양물로서 작용하였다. 12시간, 24시간 및 48시간에, 세포를 요오드화 프로피듐(PI)으로 염색하여 총 DNA를 검출하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 도 8에 나타낸 것과 같이, PSMA ADC로 처리된 세포를 G2 단계에서 정지시켰다. 48시간 처리 후에, 염색체의 중복 세트를 가진 세포의 퍼센트는 PSMA ADC 배양액에 대해 50% 초과이고 비처리된 배양액에 대해 2%이다. 비변형 mAb로 처리된 세포의 단지 3%가 48시간에 G2/M 단계에 있을 때, 세포 주기 정지는 독소, 이 경우에 MMAE의 존재를 필요로 하였다. 데이타는, 전립선 암 세포를 MMAE ADC로 처리하는 것이 G2/M 정지를 유도하고 이어서 표적 세포의 세포고사를 유도한다는 것을 증명한다.
본 출원에 인용된 상기 특허, 특허 출원 및 참고문헌의 각각은 그 전체내용이 참고문헌으로 포함된다. 참고문헌의 인용은 이들의 어느 것이라도 선행 기술임을 시인한 것으로 해석되어서는 안된다. 본 발명에 따라서 바람직한 구현양태를 설명하고 있기 때문에, 여기에 기재된 교시내용에 비추어 다른 변형, 변경 및 변화가 당 업자에게 제시될 것으로 생각된다. 따라서, 모든 변경, 변형 및 변화들이 청구의 범위에 의해 한정되는 것과 같은 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 이해되어야 한다.
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SEQUENCE LISTING <110> PSMA DEVELOPMENT COMPANY, L.L.C. MA, Dangshe MADDON, Paul J. OLSON, William C. DORONINA, Svetlana TOKI, Brian SENTER, Peter <120> PSMA ANTIBODY-DRUG CONJUGATES <130> P0741.70008WO00 <150> US 60/792,360 <151> 2006-04-14 <150> US 60/692,399 <151> 2005-06-20 <160> 33 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 750 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Trp Asn Leu Leu His Glu Thr Asp Ser Ala Val Ala Thr Ala Arg 1 5 10 15 Arg Pro Arg Trp Leu Cys Ala Gly Ala Leu Val Leu Ala Gly Gly Phe 20 25 30 Phe Leu Leu Gly Phe Leu Phe Gly Trp Phe Ile Lys Ser Ser Asn Glu 35 40 45 Ala Thr Asn Ile Thr Pro Lys His Asn Met Lys Ala Phe Leu Asp Glu 50 55 60 Leu Lys Ala Glu Asn Ile Lys Lys Phe Leu Tyr Asn Phe Thr Gln Ile 65 70 75 80 Pro His Leu Ala Gly Thr Glu Gln Asn Phe Gln Leu Ala Lys Gln Ile 85 90 95 Gln Ser Gln Trp Lys Glu Phe Gly Leu Asp Ser Val Glu Leu Ala His 100 105 110 Tyr Asp Val Leu Leu Ser Tyr Pro Asn Lys Thr His Pro Asn Tyr Ile 115 120 125 Ser Ile Ile Asn Glu Asp Gly Asn Glu Ile Phe Asn Thr Ser Leu Phe 130 135 140 Glu Pro Pro Pro Pro Gly Tyr Glu Asn Val Ser Asp Ile Val Pro 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cggttatcca cagaatcagg 4260 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa 4320 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg 4380 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc 4440 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc 4500 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcaatgctca cgctgtaggt atctcagttc 4560 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg 4620 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc 4680 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga 4740 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc 4800 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac 4860 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg 4920 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 4980 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa 5040 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag 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aagggaataa gggcgacacg 5940 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta 6000 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc 6060 gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtc 6094 <210> 14 <211> 481 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 14 ggatctcacc atggagttgg gactgcgctg gggcttcctc gttgctcttt taagaggtgt 60 ccagtgtcag gtgcaattgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct 120 gagactctcc tgtgcagcgt ctggattcgc cttcagtaga tatggcatgc actgggtccg 180 ccaggctcca ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tggtatgatg gaagtaataa 240 atactatgca gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac 300 gcagtatctg caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag 360 aggcggtgac ttcctctact actactatta cggtatggac gtctggggcc aagggaccac 420 ggtcaccgtc tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctctag 480 c 481 <210> 15 <211> 142 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Met Glu Leu Gly Leu Arg Trp Gly Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 20 25 30 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe 35 40 45 Ser Arg Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Gln Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Asp Phe Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly 115 120 125 Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 <210> 16 <211> 463 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 16 ggatctcacc atgagggtcc ctgctcagct cctgggactc ctgctgctct ggctcccaga 60 taccagatgt gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga 120 cagagtcacc atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc aattatttag cctggtatca 180 gcagaaaaca gggaaagttc ctaagttcct gatctatgaa gcatccactt tgcaatcagg 240 ggtcccatct cggttcagtg gcggtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag 300 cctgcagcct gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaat tataacagtg ccccattcac 360 tttcggccct gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccct ctgtcttcat 420 cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agc 463 <210> 17 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro 1 5 10 15 Asp Thr Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly 35 40 45 Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Lys Val Pro 50 55 60 Lys Phe Leu Ile Tyr Glu Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Tyr Asn 100 105 110 Ser Ala Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 115 120 125 <210> 18 <211> 508 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 18 ggatctcacc atggggtcaa ccgccatcct caccatggag ttggggctgc gctgggttct 60 cctcgttgct cttttaagag gtgtccagtg tcaggtgcag ctggtggagt ctgggggagg 120 cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca gcgtctggat tcaccttcag 180 taactatgtc atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag gggctggagt gggtggcaat 240 tatatggtat gatggaagta ataaatacta tgcagactcc gtgaagggcc gattcaccat 300 ctccagagac aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg aacagcctga gagccgagga 360 cacggctgtg tattactgtg cgggtggata taactggaac tacgagtacc actactacgg 420 tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tcagcctcca ccaagggccc 480 atcggtcttc cccctggcac cctctagc 508 <210> 19 <211> 143 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Met Glu Leu Gly Leu Arg Trp Val Leu Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 20 25 30 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Asn Tyr Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Tyr Asn Trp Asn Tyr Glu Tyr His Tyr Tyr 115 120 125 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 <210> 20 <211> 463 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 20 ggatctcacc atgagggtcc ccgctcagct cctggggctc ctgctgctct gtttcccagg 60 tgccagatgt gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga 120 cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggcattacc aattatttag cctggtttca 180 gcagaaacca gggaaagccc ctaagtccct tatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg 240 ggtcccatca aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcagtctca ccatcagcag 300 cctgcagcct gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgatcac 360 cttcggccaa gggacacgac tggagattaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat 420 cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agc 463 <210> 21 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Pro 1 5 10 15 Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly 35 40 45 Ile Thr Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60 Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Lys Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn 100 105 110 Ser Tyr Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 22 <211> 490 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 22 ggatctcacc atggagttgg gacttagctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt 60 ccagtgtcag gtccagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct 120 gagactctcc tgtgcagcgt ctggattcac cttcagtagc tatggcatgc actgggtccg 180 ccaggctcca ggcaaggggc tggactgggt ggcaattatt tggcatgatg gaagtaataa 240 atactatgca gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaagac 300 gctgtacctg caaatgaaca gtttgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag 360 agcttgggcc tatgactacg gtgactatga atactacttc ggtatggacg tctggggcca 420 agggaccacg gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc 480 accctctagc 490 <210> 23 <211> 145 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Met Glu Leu Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 20 25 30 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Asp Trp Val Ala Ile Ile Trp His Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Lys 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Trp Ala Tyr Asp Tyr Gly Asp Tyr Glu Tyr 115 120 125 Tyr Phe Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 130 135 140 Ser 145 <210> 24 <211> 463 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 24 ggatctcacc atgagggtcc ctgctcagct cctggggctc ctgctgctct gtttcccagg 60 tgccagatgt gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga 120 cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggcattagc cattatttag cctggtttca 180 gcagaaacca gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg 240 ggtcccatca aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag 300 cctacagcct gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt tcccgctcac 360 tttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat 420 cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agc 463 <210> 25 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Pro 1 5 10 15 Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly 35 40 45 Ile Ser His Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60 Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Lys Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn 100 105 110 Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 26 <211> 469 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 26 ggatcccacc atggggtcaa ccgtcatcct cgccctcctc ctggctgttc tccaaggagt 60 ctgtgccgag gtgcagctgg tgcagtctgg agcagaggtg aaaaagcccg gggagtctct 120 gaagatctcc tgtaagggtt ctggatacag ctttaccagt tactggatcg gctgggtgcg 180 ccagatgccc gggaaaggcc tggagtggat ggggatcatc tatcctggtg actctgatac 240 cagatacagc ccgtccttcc aaggccaggt caccatctca gccgacaagt ccatcagcac 300 cgcctacctg cagtggagca gcctgaaggc ctcggacacc gccatgtatt actgtgcgag 360 acggatggca gcagctggcc cctttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc 420 ctcagcctcc accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctctagc 469 <210> 27 <211> 138 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Met Gly Ser Thr Val Ile Leu Ala Leu Leu Leu Ala Val Leu Gln Gly 1 5 10 15 Val Cys Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser 65 70 75 80 Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Met Ala Ala Ala Gly Pro Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 28 <211> 466 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 28 ggatctcacc atgagggtcc ccgctcagct tctcttcctt ctgctactct ggctcccaga 60 taccactgga ggaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga 120 aagagccacc ctctcctgca ggaccagtca gagtattggc tggaacttag cctggtacca 180 acagaaacct ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatcttcca ggaccactgg 240 tatcccagcc aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag 300 cctgcagtct gaagattctg cagtttatta ctgtcagcat tatgataact ggcccatgtg 360 cagttttggc caggggaccg agctggagat caaacgaact gtggctgcac catctgtctt 420 catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gctagc 466 <210> 29 <211> 128 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro 1 5 10 15 Asp Thr Thr Gly Gly Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30 Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser 35 40 45 Ile Gly Trp Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 50 55 60 Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Thr Thr Gly Ile Pro Ala 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asp 100 105 110 Asn Trp Pro Met Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Glu Leu Glu Ile Lys 115 120 125 <210> 30 <211> 487 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 30 ggatctcacc atggagtttg ggctgtgctg gattttcctc gttgctcttt taagaggtgt 60 ccagtgtcag gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct 120 gagactctcc tgtgcagcct ctggattcac cttcattagc tatggcatgc actgggtccg 180 ccaggctcca ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tcatatgatg gaagtaataa 240 atactatgca gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac 300 gctgtatctg caaatgaaca gcctgagagc tgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag 360 agtattagtg ggagctttat attattataa ctactacggg atggacgtct ggggccaagg 420 gaccacggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc 480 ctctagc 487 <210> 31 <211> 144 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Met Glu Phe Gly Leu Cys Trp Ile Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 20 25 30 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ile Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Leu Val Gly Ala Leu Tyr Tyr Tyr Asn Tyr 115 120 125 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 <210> 32 <211> 478 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Includes BamHI/Bg1II cloning junction, signal peptide, V region, portion of C region and 3’XbaI/NheI (heavy) or NheI (light) cloning junction <400> 32 ggatctcacc atgagggtcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct ggatacctgg 60 atccagtgca gatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca 120 gccggcctcc atctcctgca agtctagtca gagcctcctg catagtgatg gaaagacctt 180 tttgtattgg tatctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct atgaggtttc 240 caaccggttc tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac 300 actgaaaatc agccgggtgg aggctgagga tgttgggctt tattactgca tgcaaagtat 360 acagcttccg ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaacgaa ctgtggctgc 420 accatctgtc ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgctagc 478 <210> 33 <211> 132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Ile Pro 1 5 10 15 Gly Ser Ser Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser 20 25 30 Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser 35 40 45 Leu Leu His Ser Asp Gly Lys Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys 50 55 60 Pro Gly Gln Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr 100 105 110 Cys Met Gln Ser Ile Gln Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 115 120 125 Val Glu Ile Lys 130

Claims (52)

  1. 전립선-특이적 막 항원(PSMA)에 결합하고 2, 3 또는 4개 분자의 모노메틸라우리스타틴 노레페드린 또는 모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌에 접합된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하고, 적어도 250의 PC-3™ 세포 대 C4-2 또는 LNCaP™ 세포 선택성을 갖는 항체-약물 접합체.
  2. 제1항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이
    (a) PSMA;
    (b) PSMA의 세포외 도메인; 또는
    (c) PSMA의 입체형태적 에피토프
    에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  3. 제1항에 있어서, 항체가 AB-PGI-XG1-006, AB-PGI-XG1-026, 및
    (a) 서열 2 및 3에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및
    (b) 서열 8 및 9에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한 항체; 또는
    (c) 서열 14 및 18에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄 가변 영역, 및
    (d) 서열 16 및 20에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄 가변 영역을 포함한 항체
    로 구성된 군에서 선택되는 항체를 코드화하는 뉴클레오티드 서열과 90, 95, 97, 98 또는 99% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화되는 것인 항체-약물 접합체.
  4. 제1항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 AB-PGI-XG1-006, AB-PGI-XG1-026 또는 그의 항원-결합 단편인 항체-약물 접합체.
  5. 제1항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이
    (a) 서열 2 및 3에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 서열 8 및 9에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한 항체 및 그의 항원-결합 단편;
    (b) 서열 2에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 서열 8에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한 항체 및 그의 항원-결합 단편;
    (c) 서열 3에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄, 및 서열 9에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄를 포함한 항체 및 그의 항원-결합 단편;
    (d) 서열 14 및 18에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄 가변 영역, 및 서열 16 및 20에 기재된 뉴클레오티드 서열로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄 가변 영역을 포함한 항체 및 그의 항원-결합 단편;
    (e) 서열 14에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄 가변 영역, 및 서열 16에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄 가변 영역을 포함한 항체 및 그의 항원-결합 단편; 및
    (f) 서열 18에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 중쇄 가변 영역, 및 서열 20에 기재된 뉴클레오티드 서열의 코드화 영역 또는 영역들을 포함하는 핵산 분자에 의해 코드화된 경쇄 가변 영역을 포함한 항체 및 그의 항원-결합 단편
    으로 구성된 군에서 선택되는 것인 항체-약물 접합체.
  6. 제1항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD, IgE이거나 또는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD 또는 IgE의 면역글로불린 불변 및/또는 가변 도메인을 갖는 것인 항체-약물 접합체.
  7. 제1항에 있어서, 항체가 단클론성 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 재조합 항체, 키메라 항체, 이특이성 항체 또는 다특이성 항체인 항체-약물 접합체.
  8. 제1항에 있어서, 항원-결합 단편이 Fab 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편 또는 CDR3-함유 단편인 항체-약물 접합체.
  9. 제1항에 있어서, PC-3™ 세포 대 C4-2 또는 LNCaP™ 세포 선택성이 적어도 500, 1000, 2500, 6000 또는 13,000인 것인 항체-약물 접합체.
  10. 제1항에 있어서, 모노메틸라우리스타틴 노레페드린 또는 모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌이 하기 화학식의 화합물과 함께 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 접합되는 것인 항체-약물 접합체.
    -An-Ym-Zm-Xn-Wn-
    상기 식에서,
    A는 카르복실 아실 단위이고;
    Y는 아미노산이고;
    Z는 아미노산이고;
    X 및 W는 각각 자기-희생(immolative) 스페이서이고;
    n은 각각 0 또는 1의 정수이고;
    m은 각각 0 또는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 정수이다.
  11. 제10항에 있어서, A가
    (a) 하기 화학식
    Figure pat00015

    (상기 식에서, q는 1 내지 10이다)
    (b) 4-(N-숙신이미도메틸)시클로헥산-1-카르보닐,
    (c) m-숙신이미도벤조일,
    (d) 4-(p-숙신이미도페닐)-부티릴,
    (e) 4-(2-아세트아미도)벤조일,
    (f) 3-티오프로피오닐,
    (g) 4-(1-티오에틸)-벤조일,
    (h) 6-(3-티오프로피오닐아미도)-헥사노일, 또는
    (i) 말레이미드 카프로일인 항체-약물 접합체.
  12. 제10항에 있어서, Y가 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트립토판 또는 프롤린인 항체-약물 접합체.
  13. 제10항에 있어서, Z이 리신, 아세틸 또는 포르밀로 보호된 리신, 아르기닌, 토실 또는 니트로기로 보호된 아르기닌, 히스티딘, 오르니틴, 아세틸 또는 포르밀로 보호된 오르니틴, 또는 시트룰린인 항체-약물 접합체.
  14. 제10항에 있어서, Ym-Zm이 발린-시트룰린인 항체-약물 접합체.
  15. 제10항에 있어서, Ym-Zm이 프로테아제에 의해 선택적으로 절단될 수 있는 단백질 서열인 항체-약물 접합체.
  16. 제10항에 있어서, X가
    (a) 하기 화학식
    Figure pat00016

    (상기 식에서, T는 O, N 또는 S이다);
    (b) 하기 화학식
    -HN-R1-COT
    (상기 식에서, R1은 C1-C5 알킬이고, T는 O, N 또는 S이다);
    (c) 하기 화학식
    Figure pat00017

    (상기 식에서, T는 O, N 또는 S이고, R2은 H 또는 C1-C5 알킬이다);
    (d) p-아미노벤질카르바모일옥시;
    (e) p-아미노벤질알콜;
    (f) p-아미노벤질카르바메이트;
    (g) p-아미노벤질옥시카르보닐; 또는
    (h) γ-아미노부티르산; α,α-디메틸 γ-아미노부티르산 또는 β,β-디메틸 γ-아미노부티르산인 항체-약물 접합체.
  17. 제10항에 있어서, W가 하기 화학식인 항체-약물 접합체.
    Figure pat00018

    (상기 식에서, T는 O, S 또는 N이다)
  18. 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, m 각각 및 n 각각이 0인 항체-약물 접합체.
  19. 제1항에 있어서, AB-PGI-XG1-006-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 노레페드린, AB-PGI-XG1-006-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌, AB-PGI-XG1-006-말레이미드 카프로일-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌, AB-PGI-XG1-006-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르바메이트-모노메틸라우리스타틴 노레페드린, AB-PGI-XG1-006-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질카르바메이트-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌, AB-PGI-XG1-026-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 노레페드린, AB-PGI-XG1-026-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌, AB-PGI-XG1-026-말레이미드 카프로일-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌, AB-PGI-XG1-026-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질카르바메이트-모노메틸라우리스타틴 노레페드린, 또는 AB-PGI-XG1-026-말레이미드 카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질카르바메이트-모노메틸라우리스타틴 페닐알라닌인 항체-약물 접합체.
  20. 제1항에 있어서, 종양 세포, 바람직하게 전립선 종양 세포에 결합하는 항체-약물 접합체.
  21. 제1항에 있어서, 종양의 신혈관계의 내피 세포에 결합하고/하거나, PSMA에 결합하기 위해 세포 용해를 필요로 하지 않고/않거나, 세포-주기 정지를 유도하고/하거나, PSMA-발현 세포의 성장을 억제하는 항체-약물 접합체.
  22. 제1항에 있어서, 항체-약물 접합체가 하기의 IC50로 PSMA-발현 세포의 특이적 세포 사멸을 매개하는 것인 항체-약물 접합체.
    (a) 1×10-10 M, 1×10-11 M, 또는 1×10-12 M;
    (b) 11 내지 208×10-12 M, 42 내지 208×10-12 M, 60 내지 208×10-12 M, 또는 65 내지 208×10-12 M; 또는
    (c) 11 ×10-12 M, 42 ×10-12 M, 60 ×10-12 M 또는 83 ×10-12 M
  23. 제1항에 있어서, 6mg/kg의 투여량에서 q4d×6의 섭생법으로 생쥐에게 투여될 때 항체-약물 접합체가 적어도 20%, 30%, 40% 또는 50%의 치료율을 달성하는 것인 항체-약물 접합체.
  24. 제1항에 있어서, 표지, 바람직하게 형광 표지, 효소 표지, 방사능 표지, 핵 자기 공명 활성 표지, 발광 표지 또는 발색단 표지에 결합되는 항체-약물 접합체.
  25. 제1항에 있어서, 동결건조된 형태 또는 수성 형태로 포장된 항체-약물 접합체.
  26. 제1항에 있어서, 무균 형태의 항체-약물 접합체.
  27. (a) 제1항의 항체-약물 접합체 및 제약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제; 또는
    (b) 제1항에 따른 2 이상의 상이한 항체-약물 접합체 및 제약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제의 조합
    을 포함하는 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합을 추가로 포함하는 조성물.
  29. 제28항에 있어서, 항종양제가 세포독성제, 종양 신혈관계에 작용하는 약제 또는 이들의 조합, 바람직하게 도세탁셀인 조성물.
  30. 제28항에 있어서, 면역조절제가 사이토카인, 케모카인, 아주반트 또는 이들의 조합인 조성물.
  31. 제28항에 있어서, 면역자극제가 인터류킨-2, α-인터페론, γ-인터페론, 종양 괴사 인자-α, 면역자극 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 조성물.
  32. 제28항에 있어서, 코르티코스테로이드가 프레드니존 또는 히드로코르티존인 조성물.
  33. 제1항의 하나 이상의 항체-약물 접합체 및 하나 이상의 비접합 항-PSMA 항체를 포함하는 조성물.
  34. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에서, PSMA-발현 세포의 성장을 억제하기 위해 PSMA-발현 세포와 접촉되는 항체-약물 접합체.
  35. 제34항에 있어서, PSMA-발현 세포가 전립선 종양 세포, 비-전립선 종양의 신혈관계의 세포, 안드로겐-의존성 세포 또는 안드로겐-비의존성 세포인 항체-약물 접합체.
  36. 제34항에 있어서, PSMA-발현 세포가 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합과 추가로 접촉되는 것인 항체-약물 접합체.
  37. PSMA-발현 세포를, PSMA-발현 세포의 성장을 억제하기에 효과적인 양의 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체와 접촉시키는 것을 포함하는, PSMA-발현 세포의 성장을 억제하는 생체외 방법.
  38. 제37항에 있어서, PSMA-발현 세포가 전립선 종양 세포, 비-전립선 종양의 신혈관계의 세포, 안드로겐-의존성 세포 또는 안드로겐-비의존성 세포인 방법.
  39. 제37항에 있어서, PSMA-발현 세포가 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합과 추가로 접촉되는 것인 방법.
  40. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에서, PSMA-발현 세포와 접촉되어, PSMA-발현 세포에서 세포-주기 정지를 달성하기 위한 항체-약물 접합체.
  41. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에서, 암, 선택적으로 전립선암 또는 비전립선암을 치료하기 위한 항체-약물 접합체로서, 비-전립선 암이 선택적으로 방광 암, 췌장 암, 폐 암, 신장 암, 육종, 유방 암, 뇌 암, 신경내분비계 암종, 결장 암, 고환 암 또는 흑색종인 항체-약물 접합체.
  42. 제41항에 있어서, 암을 치료하기 위해 다른 치료제와 공동-투여되고, 공동-투여가 항체-약물 접합체의 투여 전, 동안 또는 후에 이루어지는 것인 항체-약물 접합체.
  43. 제42항에 있어서, 다른 치료제가 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합인 항체-약물 접합체.
  44. 제36항, 제43항 및 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 항종양제가 세포독성제, 종양 신혈관계에 작용하는 약제, 또는 이들의 조합, 바람직하게 도세탁셀인 항체-약물 접합체 또는 방법.
  45. 제36항, 제43항 및 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 면역조절제가 사이토카인, 케모카인, 아주반트 또는 이들의 조합인 항체-약물 접합체 또는 방법.
  46. 제36항, 제43항 및 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 면역자극제가 인터류킨-2, α-인터류킨, γ-인터류킨, 종양 괴사 인자-α, 면역자극 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 항체-약물 접합체 또는 방법.
  47. 제36항, 제43항 및 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 코르티코스테로이드가 프레드니존 또는 히드로코르티존인 항체-약물 접합체 또는 방법.
  48. 제42항에 있어서, 치료제가 백신, 바람직하게 PSMA에 대해 피험자를 면역화하는 백신인 항체-약물 접합체.
  49. 제42항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 또 다른 치료제, 바람직하게 프레드니존과 투여되는 항체-약물 접합체 또는 방법.
  50. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에서, 종양의 신혈관계의 PSMA-발현 세포와 접촉하여 종양의 성장을 억제하기 위한 항체-약물 접합체.
  51. 제50항에 있어서, PSMA-발현 세포를 항종양제, 면역자극제, 면역조절제, 코르티코스테로이드 또는 이들의 조합과 추가로 접촉시키는 항체-약물 접합체.
  52. 제51항에 있어서,
    (a) 항종양제가 세포독성제, 종양 신혈관계에 작용하는 약제 또는 이들의 조합이고/이거나;
    (b) 면역조절제가 사이토카인, 케모카인, 아주반트 또는 이들의 조합이고/이거나;
    (c) 면역자극제가 인터류킨-2, α-인터류킨, γ-인터류킨, 종양 괴사 인자-α, 면역자극 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 항체-약물 접합체.
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