CN105593242B - 卷曲螺旋免疫球蛋白融合蛋白及其组合物 - Google Patents

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Abstract

本文公开了包含第一抗体区、第一治疗剂和第一连结肽的免疫球蛋白融合蛋白；其中第一治疗剂通过该连结肽附接至第一抗体区；并且其中该连结肽不包含具有β链二级结构的区域。该连结肽可包含延伸物肽。该延伸物肽可具有α螺旋二级结构。该连结肽可包含连接体肽。该连接体肽可不包含任何二级结构。本文还公开了包含该免疫球蛋白融合蛋白的组合物和使用该免疫球蛋白融合蛋白治疗或预防受试者中的疾病或病状的方法。

Description

卷曲螺旋免疫球蛋白融合蛋白及其组合物
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本申请要求2013年7月11日提交的美国临时申请号61/845,280、2013年7月11日提交的美国临时申请号61/845,287、2014年1月10日提交的美国临时申请号61/925,904和2014年6月26日提交的美国临时申请号62/017,713的权益，所有这些申请均通过引用以其全文并入于此。
序列表
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背景技术
抗体是脊椎动物免疫系统响应于外来物质(抗原)形成的天然蛋白质，主要用于防御感染。超过一个世纪以来，抗体已经在人工条件下在动物中诱导，并采集用于疾病状况的治疗或诊断，或用于生物学研究。每个单独的抗体产生细胞产生单一类型的具有在化学上确定的组成的抗体，但是，响应于抗原接种从动物血清直接获得的抗体实际上包含由单独的抗体产生细胞的总和形成的不同分子(例如，多克隆抗体)的总和。
抗体融合构建体可用来改善向靶细胞、组织和肿瘤递送药物或其他药剂。抗体融合构建体可包含化学连接体，用以将药物或其他药剂附接至抗体。示例性抗体融合构建体和产生抗体融合构建体的方法在美国专利申请号2006/0182751、2007/0160617和美国专利号7,736,652中公开。
本文公开了新型免疫球蛋白融合蛋白和产生这类免疫球蛋白融合蛋白的方法。本文还公开了所述免疫球蛋白融合蛋白在治疗各种疾病和病状中的用途。本文还公开了延长治疗剂的半衰期的方法。
发明内容
在本公开内容的一个方面，本文提供了包含第一抗体区、第一治疗剂和第一连结肽(connecting peptide)的免疫球蛋白融合蛋白；其中所述第一治疗剂通过该连结肽附接至第一抗体区；并且其中该连结肽不包含具有β链二级结构的区域。
在一个实施方案中，所述连结肽包含第一延伸物肽(extender peptide)。该第一延伸物肽可包含一个或多个具有α螺旋二级结构的区域。在一个实例中，第一延伸物肽不包含基于或衍生自牛超长CDR3氨基酸序列的多于7个连续氨基酸。
在一个实施方案中，所述连结肽包含第一连接肽(linking peptide)。该第一连接肽可以不包含α螺旋或β链二级结构。该第一连接肽可包含约0至约50个氨基酸。
在一个实施方案中，所述连结肽包含约0至约50个氨基酸。所述连结肽可包含约4至约100个氨基酸。
在一个实施方案中，第一连结肽附接至第一抗体区的CDR上。在一个实施方案中，第一治疗肽代替第一抗体区的一个或多个区域。在另一个实施方案中，第一连结肽代替第一抗体区的一个或多个区域。
在一个实施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白还包含第二连结肽。在一个实施方案中，第二连结肽不包含具有β链二级结构的区域。该第二连结肽可包含第二延伸物肽。该第二延伸物肽可包含一个或多个具有α螺旋二级结构的区域。该第二连结肽可包含第二连接肽。该第二连接肽可以不包含α螺旋或β链二级结构。
在一个实施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白还包含第二治疗剂。
在一个实施方案中，第一抗体区包含基于或衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一抗体区包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一抗体区包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。
在一个实施方案中，第一抗体区包含基于或衍生自曲妥珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一抗体区包含与曲妥珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一抗体区包含与曲妥珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。
在一个实施方案中，第一抗体区包含基于或衍生自帕利珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一抗体区包含与帕利珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一抗体区包含与帕利珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白还包含第二抗体区。在一个实例中，第一抗体区包含抗体轻链的区域，而第二抗体区包含抗体重链的区域。在一个实例中，第一抗体区包含抗体重链的区域，而第二抗体区包含抗体轻链的区域。在一个实例中，第一抗体区包含抗体轻链的第一区，而第二抗体区包含抗体轻链的第二区。在一个实例中，第一抗体区包含抗体重链的第一区，而第二抗体区包含抗体重链的第二区。在一个实施方案中，第二抗体区包含基于或衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二抗体区包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二抗体区包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。
在一个实施方案中，第二抗体区包含基于或衍生自曲妥珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二抗体区包含与曲妥珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二抗体区包含与曲妥珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二抗体区包含基于或衍生自帕利珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二抗体区包含与帕利珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二抗体区包含与帕利珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。
在一个实施方案中，第一连结肽包含基于或衍生自SEQ ID NO:144-176、179-185和275-277中任何一个的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一连结肽包含与SEQ ID NO:144-176、179-185和275-277中任何一个的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一连结肽包含与SEQ ID NO:144-176、179-185和275-277中任何一个的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。
在一个实施方案中，第二连结肽包含基于或衍生自SEQ ID NO:144-176、179-185和275-277中任何一个的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二连结肽包含与SEQ ID NO:144-176、179-185和275-277中任何一个的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二连结肽包含与SEQ ID NO:144-176、179-185和275-277中任何一个的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。
在一个实施方案中，第一连结肽包含蛋白酶切割位点。在一个实施方案中，第二连结肽包含蛋白酶切割位点。在一个实例中，第一治疗剂包含配置用于被蛋白酶识别的氨基酸序列。在一个实例中，第二治疗剂包含配置用于被蛋白酶识别的氨基酸序列。
在一个实施方案中，第一连结肽包含一个或多个延伸物肽和一个或多个连接体肽。在一个实施方案中，第一连结肽包含一个或多个延伸物肽、一个或多个连接体肽和一个或多个蛋白酶切割位点。在一个实施方案中，第一连结肽包含一个或多个延伸物肽和一个或多个蛋白酶切割位点。在一个实施方案中，第一连结肽包含一个或多个连接体肽和一个或多个蛋白酶切割位点。
在一个实施方案中，第二连结肽包含一个或多个延伸物肽和一个或多个连接体肽。在一个实施方案中，第二连结肽包含一个或多个延伸物肽、一个或多个连接体肽和一个或多个蛋白酶切割位点。在一个实施方案中，第二连结肽包含一个或多个延伸物肽和一个或多个蛋白酶切割位点。在一个实施方案中，第二连结肽包含一个或多个连接体肽和一个或多个蛋白酶切割位点。
在一个实施方案中，第一治疗剂包含基于或衍生自SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一治疗剂包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一治疗剂包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一治疗剂包含约5至约1,000个氨基酸，其包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个相同和/或同源的约5至约350个氨基酸。
在一个实施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白包含基于或衍生自SEQ ID NO:68-99中任何一个的氨基酸序列。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白包含与SEQ IDNO:68-99中任何一个的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白包含与SEQ ID NO:68-99中任何一个的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白包含约5至约3,000个氨基酸，其包含与SEQ ID NO:68-99中任何一个相同和/或同源的约50至约700个氨基酸。
在另一方面，本文提供了第一遗传构建体，其包含编码SEQ ID NO:68-99中任何一个的免疫球蛋白融合蛋白的核酸。在一个实施方案中，第一遗传构建体包含衍生自SEQ IDNO:37-67中任何一个的核酸。在一个实施方案中，第一遗传构建体包含与SEQ ID NO:37-67中任何一个的核酸序列至少约50％相同和/或同源的核酸序列。在一个实施方案中，第一遗传构建体包含与SEQ ID NO:37-67中任何一个的核酸序列至少约80％相同和/或同源的核酸序列。
在另一方面，本文提供了包含第一遗传构建体的第一表达载体，该第一遗传构建体包含编码SEQ ID NO:68-99中任何一个的免疫球蛋白融合蛋白的核酸。在一个实施方案中，本文提供了包含第一遗传构建体的第一表达载体，该第一遗传构建体包含衍生自SEQID NO:37-67中任何一个的核酸。在一个实施方案中，本文提供了包含第一遗传构建体的第一表达载体，该第一遗传构建体包含与SEQ ID NO:37-67中任何一个的核酸序列至少约50％相同和/或同源的核酸序列。在一个实施方案中，本文提供了包含第一遗传构建体的第一表达载体，该第一遗传构建体包含与SEQ ID NO:37-67中任何一个的核酸序列至少约80％相同和/或同源的核酸序列。在一个实例中，本文提供了包含第一表达载体的哺乳动物表达宿主。在一个实施方案中，本文提供了产生免疫球蛋白融合蛋白的方法，其包括(a)在哺乳动物细胞培养物中瞬时转染第一表达载体，(b)在表达培养基中以控制的温度和CO2百分比培养该细胞培养物，(c)以及收获分泌的免疫球蛋白融合蛋白。在一个实施方案中，所述产生免疫球蛋白融合蛋白的方法还包括纯化所述免疫球蛋白融合蛋白。
在另一方面，本文提供了治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的包含衍生自SEQ ID NO 68-99中任何一个的氨基酸序列的免疫球蛋白融合蛋白。在另一方面，本文提供了治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的包含与SEQ ID NO 68-99中任何一个至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列的免疫球蛋白融合蛋白。在另一方面，本文提供了治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的包含与SEQ ID NO68-99中任何一个至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列的免疫球蛋白融合蛋白。
在另一方面，本文提供了包含衍生自SEQ ID NO:68-99中任何一个的免疫球蛋白融合蛋白的药物组合物。在另一方面，本文提供了包含免疫球蛋白融合蛋白的药物组合物，该免疫球蛋白融合蛋白包含与SEQ ID NO:68-99中任何一个至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在另一方面，本文提供了包含免疫球蛋白融合蛋白的药物组合物，该免疫球蛋白融合蛋白包含与SEQ ID NO:68-99中任何一个至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，该药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
在一个实施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白包含基于或衍生自SEQ ID NO:122-143中任何一个的氨基酸序列。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白包含与SEQ IDNO:122-143中任何一个的氨基酸序列至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白包含与SEQ ID NO:122-143中任何一个的氨基酸序列至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，第一免疫球蛋白融合蛋白包含约5至约3,000个氨基酸，其包含与SEQ ID NO:122-143中任何一个相同和/或同源的约50至约700个氨基酸。
在另一方面，本文提供了第一遗传构建体，其包含编码SEQ ID NO:122-143中任何一个的免疫球蛋白融合蛋白的核酸。在一个实施方案中，第一遗传构建体包含衍生自SEQID NO:100-121中任何一个的核酸。在一个实施方案中，第一遗传构建体包含与SEQ ID NO:100-121中任何一个的核酸序列至少约50％相同和/或同源的核酸序列。在一个实施方案中，第一遗传构建体包含与SEQ ID NO:100-121中任何一个的核酸序列至少约80％相同和/或同源的核酸序列。
在另一方面，本文提供了包含第一遗传构建体的第一表达载体，该第一遗传构建体包含编码SEQ ID NO:122-143中任何一个的免疫球蛋白融合蛋白的核酸。在一个实施方案中，本文提供了包含第一遗传构建体的第一表达载体，该第一遗传构建体包含衍生自SEQID NO:100-121中任何一个的核酸。在一个实施方案中，本文提供了包含第一遗传构建体的第一表达载体，该第一遗传构建体包含与SEQ ID NO:100-121中任何一个的核酸序列至少约50％相同和/或同源的核酸序列。在一个实施方案中，本文提供了包含第一遗传构建体的第一表达载体，该第一遗传构建体包含与SEQ ID NO:100-121中任何一个的核酸序列至少约80％相同和/或同源的核酸序列。在一个实例中，本文提供了包含第一表达载体的哺乳动物表达宿主。在一个实施方案中，本文提供了产生免疫球蛋白融合蛋白的方法，其包括(a)在哺乳动物细胞培养物中瞬时转染第一表达载体，(b)在表达培养基中以控制的温度和CO2百分比生长该细胞培养物，(c)以及收获分泌的免疫球蛋白融合蛋白。在一个实施方案中，所述产生免疫球蛋白融合蛋白的方法还包括纯化所述免疫球蛋白融合蛋白。
在另一方面，本文提供了治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的包含衍生自SEQ ID NO:122-143中任何一个的氨基酸序列的免疫球蛋白融合蛋白。在另一方面，本文提供了治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的包含与SEQ ID NO:122-143中任何一个至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列的免疫球蛋白融合蛋白。在另一方面，本文提供了治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的包含与SEQID NO:122-143中任何一个至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列的免疫球蛋白融合蛋白。
在另一方面，本文提供了包含衍生自SEQ ID NO:122-143中任何一个的免疫球蛋白融合蛋白的药物组合物。在另一方面，本文提供了包含免疫球蛋白融合蛋白的药物组合物，该免疫球蛋白融合蛋白包含与SEQ ID NO:122-143中任何一个至少约50％相同和/或同源的氨基酸序列。在另一方面，本文提供了包含免疫球蛋白融合蛋白的药物组合物，该免疫球蛋白融合蛋白包含与SEQ ID NO:122-143中任何一个至少约80％相同和/或同源的氨基酸序列。在一个实施方案中，该药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗中性粒细胞减少和/或中性粒细胞减少相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗糖尿病和/或糖尿病相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗肥胖症和/或肥胖症相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗自身免疫病和/或自身免疫相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗贫血和/或贫血相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗生长激素缺乏和/或生长激素相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)和/或COPD相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗疼痛。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗肠易激综合征(IBS)和/或IBS相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗克罗恩病和/或克罗恩病相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗中性粒细胞减少和/或中性粒细胞减少相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗代谢失调和/或由所述代谢失调导致的疾病。在一个实施方案中，所述代谢失调包括脂肪营养不良、糖尿病和高甘油三酯血症。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗短肠综合征和/或短肠综合征相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗患有心力衰竭的患者。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗纤维化和/或纤维化相关的疾病。
在一个实施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗中性粒细胞减少和/或中性粒细胞减少相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗糖尿病和/或糖尿病相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗肥胖症和/或肥胖症相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗自身免疫病和/或自身免疫相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗贫血和/或贫血相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗生长激素缺乏和/或生长激素相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)和/或COPD相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗疼痛。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗肠易激综合征(IBS)和/或IBS相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗克罗恩病和/或克罗恩病相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗中性粒细胞减少和/或中性粒细胞减少相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗代谢失调和/或由所述代谢失调导致的疾病。在一个实施方案中，所述代谢失调包括脂肪营养不良、糖尿病和高甘油三酯血症。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗短肠综合征和/或短肠综合征相关的疾病。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗患有心力衰竭的患者。在一个实施方案中，该免疫球蛋白融合蛋白被配置为治疗纤维化和/或纤维化相关的疾病。在一个实施方案中，第一治疗肽被配置为治疗肺动脉高压、呼吸机诱发的未成熟肺的损伤和/或肺移植排斥。
附图说明
上述发明内容以及下述具体实施方式当与所附附图一起阅读时可以被更好地理解。为说明本公开内容的目的，在附图中显示了目前优选的实施方案。然而，应该理解，本公开内容并不限于所示的确切的布置、实例和手段。要强调的是，根据通常的做法，附图的各种特征不是按比例的。相反，为了清楚起见，各种特征的尺寸被任意放大或缩小。
在一些图中，曲妥珠单抗被称作赫赛汀(Herceptin)。应当理解，曲妥珠单抗和赫赛汀可在本公开内容的全文中互换使用。在一些图中，以下列顺序描述免疫球蛋白融合蛋白：抗体、卷曲(coil)或直接(direct)、治疗剂和治疗剂附接的抗体区；例如，曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)。可以以任何其他方式描述免疫球蛋白融合蛋白，例如，曲妥珠单抗-CDRH3-卷曲-hEPO是与曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)相同的融合体。在一些情况下，抗体在图中缩写，例如，bAb和BLVH12是牛抗体的缩写。PBS是磷酸盐缓冲盐水的缩写。在一些情况下，hAb是赫赛汀或曲妥珠单抗抗体的缩写。在一些情况下，H2是CDRH2的缩写，H3是CDRH3的缩写，而L3是CDRL3的缩写。在一些情况下，CDRH3和CDR3H表示重链的互补决定区3，CDRH2和CDR2H表示重链的互补决定区2，而CDRL3和CDR3L表示轻链的互补决定区3。
本文提供了包含术语“卷曲”的免疫球蛋白融合蛋白，其中在一些情况下，这些免疫球蛋白融合蛋白包含至少一个延伸物肽，该延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸。本文提供了包含术语“直接”的免疫球蛋白融合蛋白，其中在一些情况下，这些免疫球蛋白融合蛋白不包含延伸物肽。
附图中包含以下图。
图1描绘了具有包含α螺旋(例如，卷曲)结构的延伸物肽的各种免疫球蛋白融合蛋白的示意图。
图2A-2G描绘了各种非抗体区的示意图。
图3描绘了具有延伸物肽的各种免疫球蛋白融合蛋白的示意图。
图4描绘了牛-卷曲IgG、牛-卷曲bGCSF IgG、曲妥珠单抗IgG和曲妥珠单抗-卷曲bGCSF IgG的SDS-PAGE凝胶。
图5描绘了具有直接插入抗体区的治疗肽的各种免疫球蛋白融合蛋白的示意图。
图6描绘了牛-卷曲IgG、牛-卷曲bGCSF IgG、曲妥珠单抗IgG和曲妥珠单抗-卷曲bGCSF IgG在小鼠NFS-60细胞中的体外活性的曲线图。
图7描绘了曲妥珠单抗-卷曲bGCSF IgG对Her2受体的结合亲和力的曲线图。
图8描绘了在有和没有DTT的情况下，BLV1H12-卷曲betatrophin IgG的Western印迹。
图9描绘了不具有延伸物肽的各种免疫球蛋白融合蛋白的示意图。
图10描绘了在有和没有DTT的情况下，曲妥珠单抗-直接bGCSF融合蛋白的SDS-PAGE。
图11描绘了曲妥珠单抗-直接bGCSF融合蛋白和bGCSF在增殖小鼠NFS-60细胞中的体外活性的曲线图。
图12描绘了曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(CDRH3)融合蛋白和用因子Xa切割以生成曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4RN的曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4融合蛋白的SDS-PAGE凝胶。
图13描绘了用肽N-糖苷酶和DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(CDRH3)融合蛋白的电喷雾电离质谱法(ESI-MS)的色谱图。
图14A-14B描绘了用肽N-糖苷酶和DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4RN(CDRH3)融合蛋白的ESI-MS的色谱图，(A)N-末端片段，(B)C-末端片段。
图15描绘了毒蜥外泌肽-4(Ex-4)、曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(CDRH3)和曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(CDRH3)RN在过表达GLP-1R受体和cAMP效应元件(CRE)-萤光素酶(Luc)报道子的HEK 293细胞中的体外活性的曲线图。
图16描绘了胰高血糖素、Ex-4、曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(CDRH3)和曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(CDRH3)RN在过表达胰高血糖素受体(GCGR)和CRE-Luc报道子的HEK 293细胞中的体外活性的曲线图。
图17A-17B描绘了在小鼠中(A)静脉内注射和(B)皮下注射的曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(CDRH3)IgG的药代动力学的曲线图。
图18A-18R描绘了在不同时间点，曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(CDRH3)IgG在小鼠中的药效学。
图19A-19N描绘了在不同时间点，各种浓度的曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(CDRH3)IgG在小鼠中的药效学。
图20描绘了在有和没有DTT的情况下，曲妥珠单抗-卷曲Moka IgG和曲妥珠单抗-卷曲Vm24IgG的SDS-PAGE凝胶。
图21描绘了曲妥珠单抗-卷曲Moka IgG和曲妥珠单抗-卷曲Vm24 IgG对人外周血单核细胞(PBMC)中T细胞激活的体外活性的曲线图。
图22描绘了在有和没有DTT的情况下，曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRH2)和曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)的SDS-PAGE。
图23A-23B描绘了以下的ESI-MS：(A)用肽N-糖苷酶和DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRH2)，和(B)用肽N-糖苷酶和DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)。
图24描绘了与HER2受体结合的曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRH2)和曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)的直方图。
图25描绘了曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRH2)和曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)在增殖小鼠NFS-60细胞中的体外活性的曲线图。
图26描绘了在有和没有DTT的情况下，曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)的SDS-PAGE凝胶。
图27描绘了用肽N-糖苷酶和DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)IgG的ESI-MS。
图28描绘了与HER2受体结合的曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)的直方图。
图29描绘了曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)IgG在增殖人TF-1细胞中的体外活性的曲线图。
图30描绘了在有和没有DTT的情况下，双融合曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)-曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)IgG的SDS-PAGE凝胶。
图31A-31B描绘了用肽N-糖苷酶和DTT处理的双融合曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)-曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)IgG的轻链(A)和重链(B)的ESI-MS。
图32描绘了与HER2受体结合的双融合曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)-曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)IgG的直方图。
图33描绘了双融合曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)-曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)IgG在增殖人TF-1细胞中的体外活性的曲线图。
图34描绘了双融合曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)-曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)IgG在增殖小鼠NFS-60细胞中的体外活性的曲线图。
图35描绘了在有和没有DTT的情况下，曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)IgG纯化后、曲妥珠单抗-直接融合hGH(CDRH2)和曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH2)IgG的SDS-PAGE凝胶。
图36A-36B描绘了通过(A)静脉内注射和(B)皮下注射，曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)IgG在大鼠中的药代动力学。
图37描绘了一张曲线图，其显示注射了载体、健豪宁(genotropin)、曲妥珠单抗和曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)IgG(在图中表示为Ab-GH)的大鼠的体重变化百分比。
图38描绘了在有和没有DTT的情况下，曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)、曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)和曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRL3)的SDS-PAGE凝胶。
图39A-39B描绘了(A)hLeptin、曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)、曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)和(B)hLeptin、曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRL3)在激活人瘦素受体(LepR)中的体外活性的曲线图。
图40A-40C描绘了与野生型(wt)曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)和曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)结合的SKBR3细胞的直方图。
图41描绘了在有和没有DTT的情况下，曲妥珠单抗-卷曲elafin(CDRH3)的SDS-PAGE凝胶。
图42A-42B描绘了曲妥珠单抗-卷曲elafin(CDRH3)的体外抑制活性的曲线图。
图43描绘了在有和没有DTT的情况下，曲妥珠单抗-卷曲GLP2(CDRH3)的SDS-PAGE凝胶。
图44描绘了在有和没有DTT的情况下，曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)(CDRH3)的SDS-PAGE凝胶。
图45描绘了在有和没有DTT的情况下，与切割酶激素原转变酶2(PC2)共转染的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)的SDS-PAGE凝胶。
图46描绘了在有和没有DTT的情况下，与PC2共转染的具有6x HIS的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)(SEQ ID NO:274)(CDRH3)IgG的SDS-PAGE凝胶。
具体实施方式
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白和产生这类免疫球蛋白融合蛋白的方法。本文公开了包含抗体区和非抗体区的免疫球蛋白融合蛋白，其中该非抗体区包含：(a)包含至少一个二级结构的第一延伸物肽；和(b)治疗剂。该二级结构可以是α螺旋。在一些实施方案中，该α螺旋被配置为形成卷曲螺旋。该治疗剂可以是治疗肽。该非抗体区可进一步包含连接体。该连接体可以是肽连接体。该肽连接体可以不具有规则的二级结构。该非抗体区可进一步包含蛋白水解切割位点。在一些实施方案中，该非抗体区代替该抗体区的至少一部分。在一些实施方案中，该延伸物肽使治疗剂连接至抗体区。在一些情况下，该非抗体区连接至抗体的CDR。该CDR可以是CDR1、CDR2或CDR3。该CDR可以是轻链或重链的一部分。在示例性实施方案中，该第一延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该蛋白酶切割位点是连结肽或连结肽的一部分。
本文还公开了包含抗体区和延伸物融合区的免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含：(a)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋或卷曲螺旋二级结构的氨基酸序列，和(b)治疗剂。该治疗剂可以是治疗肽。该延伸物融合区可进一步包含连接体。该连接体可以是肽连接体。该肽连接体可以不具有规则的二级结构。该延伸物融合区可进一步包含蛋白水解切割位点。在一些实施方案中，该延伸物融合区代替抗体区的至少一部分。在一些实施方案中，该延伸物肽使治疗剂连接至抗体区。在一些情况下，该延伸物融合区连接至抗体的CDR。该CDR可以是CDR1、CDR2或CDR3。该CDR可以是轻链或重链的一部分。在示例性实施方案中，该第一延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该蛋白酶切割位点是连结肽或连结肽的一部分。
本文还公开了包含直接附接至非抗体区的抗体区的免疫球蛋白融合蛋白，其中该非抗体区包含治疗剂。在一些情况下，这些免疫球蛋白融合蛋白可被称为直接免疫球蛋白融合蛋白。在一些情况下，该治疗剂是治疗肽。在一些实施方案中，在不使用包含二级结构的肽的情况下，该治疗剂附接至抗体区。在一些实施方案中，该治疗剂代替该治疗剂所附接的抗体区的至少一部分。在一些实施方案中，该治疗肽通过一个或多个不包含规则二级结构(例如，不包含α螺旋或β链)的连接体附接至抗体区。在一些实施方案中，该连接体是肽连接体。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白还包含一个或多个蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，该治疗剂附接至抗体的CDR。该CDR可以是CDR1、CDR2或CDR3。该CDR可以是轻链或重链的一部分。在示例性的实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该蛋白酶切割位点是连结肽或连结肽的一部分。
本文还公开了包含直接附接至延伸物融合区的抗体区的免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含治疗剂。在一些情况下，这些免疫球蛋白融合蛋白可被称为直接免疫球蛋白融合蛋白。在一些情况下，该治疗剂是治疗肽。在一些实施方案中，在不使用包含二级结构的肽的情况下，该治疗剂附接至抗体区。在一些实施方案中，该治疗剂代替该治疗剂所附接的抗体区的至少一部分。在一些实施方案中，该治疗剂通过一个或多个不包含规则二级结构(例如，不包含α螺旋或β链)的连接体附接至抗体区。在一些实施方案中，该连接体是肽连接体。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白融合蛋白还包含一个或多个蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，该治疗剂附接至抗体的CDR。该CDR可以是CDR1、CDR2或CDR3。该CDR可以是轻链或重链的一部分。在示例性的实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该蛋白酶切割位点是连结肽或连结肽的一部分。
本文还公开了包含第一抗体区、第一治疗剂和第一连结肽的免疫球蛋白融合蛋白；其中第一治疗剂通过该连结肽附接至第一抗体区；并且其中该连结肽不包含具有β链二级结构的区域。在示例性的实施方案中，第一治疗剂和第一连结肽是非抗体区的组分。在示例性的实施方案中，第一治疗剂和第一连结肽是延伸物融合区的组分。在一些实施方案中，该连结肽包含一个或多个延伸物肽。在一些实施方案中，该连结肽包含一个或多个连接肽。在一些实施方案中，该连结肽包含一个或多个蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，第一连结肽包含一个或多个延伸物肽和一个或多个连接体肽。在一些实施方案中，第一连结肽包含一个或多个延伸物肽、一个或多个连接体肽和一个或多个蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，第一连结肽包含一个或多个延伸物肽和一个或多个蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，第一连结肽包含一个或多个连接体肽和一个或多个蛋白酶切割位点。
本文还公开了包含(a)非抗体区和(b)抗体区的免疫球蛋白融合蛋白，其中该非抗体区代替该抗体区所基于或衍生自的抗体的至少一部分。该非抗体区可代替互补决定区的至少一部分。该非抗体区可代替可变域的至少一部分。该非抗体区可代替恒定域的至少一部分。该非抗体区可代替重链的至少一部分。该非抗体区可代替轻链的至少一部分。该非抗体区可包含治疗肽。该非抗体区可包含连结肽。
本文还公开了包含(a)延伸物融合区和(b)抗体区的免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区代替该抗体区所基于或衍生自的抗体的至少一部分。该延伸物融合区可代替互补决定区的至少一部分。该延伸物融合区可代替可变域的至少一部分。该延伸物融合区可代替恒定域的至少一部分。该延伸物融合区可代替重链的至少一部分。该延伸物融合区可代替轻链的至少一部分。该延伸物融合区可包含治疗肽。该延伸物融合区可包含连结肽。
本文还公开了包含附接至一个或多个抗体区或其片段的两个或更多个治疗剂的双融合蛋白。至少一个治疗剂可插入或附接至抗体或其片段。两个或更多个治疗剂可插入或附接至抗体或其片段。该治疗剂可代替抗体或其片段的至少一部分。在一些情况下，双融合蛋白包含附接至重链的两个治疗剂。在一些情况下，双融合蛋白包含附接至轻链的两个治疗剂。在一些情况下，双融合蛋白包含附接至重链的一个治疗剂和附接至轻链的另一个治疗剂。
在一些实施方案中，该非抗体区是延伸物融合区。在一些情况下，该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的第一延伸物肽，和(b)治疗剂。该二级结构可以是α螺旋。该二级结构可被配置为形成卷曲螺旋。该治疗剂可以是治疗肽。在一些实施方案中，该非抗体区包含连接体。该连接体可以不具有规则的二级结构。在一些实施方案中，该非抗体区包含蛋白酶切割位点。
在一些实施方案中，包含延伸物肽的免疫球蛋白融合蛋白(其中该延伸物肽形成α螺旋以及可被配置为形成卷曲螺旋)被称为卷曲螺旋免疫球蛋白融合蛋白。在一些实施方案中，不包含具有二级结构的延伸物肽的免疫球蛋白融合蛋白被称为直接免疫球蛋白融合蛋白。
所述延伸物肽可基于或衍生自超长CDR3。该延伸物肽可包含来自超长CDR3序列的7个或更少的氨基酸。备选地，或附加地，该延伸物肽不包含基于或衍生自超长CDR3的氨基酸序列。该延伸物肽可包含一个或多个二级结构。所述一个或多个二级结构可以是α螺旋。
包含两个含有卷曲螺旋结构的延伸物肽(例如，每一个延伸物肽均具有α螺旋二级结构)的示例性免疫球蛋白融合蛋白描绘于图1中。如图1所示，包含两条免疫球蛋白重链(115，120)和两条免疫球蛋白轻链(125，130)的抗体区(110)附接至包含两个延伸物肽(140，145)和治疗剂(150)的非抗体区(135)，以产生免疫球蛋白融合蛋白(160，170，180)。如图1所示，免疫球蛋白融合蛋白(160)包含附接至抗体区的一条免疫球蛋白重链的非抗体区。如图1所示，免疫球蛋白融合蛋白(170)包含附接至抗体区的一条免疫球蛋白轻链的非抗体区。亦如图1所示，免疫球蛋白融合蛋白(180)包含附接至抗体区的两条免疫球蛋白链的两个非抗体区。这两个延伸物肽可形成卷曲螺旋。这两个延伸物肽可形成反平行的卷曲螺旋。
图5中描绘了示例性的直接免疫球蛋白融合蛋白，其中非抗体区/延伸物融合区(例如，治疗剂)直接插入抗体中，而无需具有二级结构的延伸物肽的帮助。如图5所示，包含两条免疫球蛋白重链(1015，1020)和两条免疫球蛋白轻链(1025，1030)的抗体区(1010)附接至非抗体区(1050)，以产生免疫球蛋白融合蛋白(1060，1070，1080)。如图5所示，免疫球蛋白融合蛋白(1060)包含附接至抗体区的一条免疫球蛋白重链的非抗体区。如图5所示，免疫球蛋白融合蛋白(1070)包含附接至抗体区的一条免疫球蛋白轻链的非抗体区。亦如图5所示，免疫球蛋白融合蛋白(1080)包含附接抗体区的两条免疫球蛋白链的两个非抗体区。
另外的示例性卷曲螺旋免疫球蛋白融合蛋白描绘于图3中。图3的式IA描绘了包含附接至延伸物融合区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该延伸物融合区包含附接至治疗剂(T1)的延伸物肽(E1)。
图3的式IIA描绘了包含附接至延伸物融合区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该延伸物融合区包含附接至治疗剂(T1)的两个延伸物肽(E1和E2)。
图3的式IIIA描绘了包含彼此附接的两个抗体区(A1和A2)的免疫球蛋白双融合蛋白。该免疫球蛋白双融合蛋白可包含(a)附接至第一延伸物融合区的第一抗体区(A1)，该第一延伸物融合区包含附接至第一治疗剂(T1)的两个延伸物肽(E1和E2)；和(b)附接至第二延伸物融合区的第二抗体区(A2)，该第二延伸物融合区包含附接至第二治疗剂(T2)的两个延伸物肽(E3和E4)。
图3的式IVA描绘了包含附接至延伸物融合区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该延伸物融合区包含附接至治疗剂(T1)的连接体(L1)，该连接体和治疗剂位于两个延伸物肽(E1和E2)之间。
图3的式VA描绘了包含附接至延伸物融合区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该延伸物融合区包含附接至治疗剂(T1)的蛋白水解切割位点(P1)，该蛋白水解切割位点和治疗剂位于两个延伸物肽(E1和E2)之间。图3的式VB描绘了式VA的剪切版本，其中该蛋白水解切割位点被蛋白酶切割，这导致治疗剂的一端释放。可被切割以释放治疗剂的氨基末端的免疫球蛋白融合蛋白因释放N-末端而被称为RN。例如，曲妥珠单抗-卷曲hGH RN表示在蛋白水解切割时，hGH的N-末端被释放。
图3的式VIA描绘了包含附接至延伸物融合区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该延伸物融合区包含附接至连接体(L1)和蛋白水解切割位点(P1)的治疗剂(T1)，其中该治疗剂、连接体和蛋白水解切割位点位于两个延伸物肽(E1和E2)之间。图3的式VIB描绘了式VIA的剪切版本，其中该蛋白水解切割位点被蛋白酶切割，这导致治疗剂的一端释放。可被切割以释放治疗剂的羧基末端的免疫球蛋白融合蛋白因释放C-末端而被称为RC。例如，曲妥珠单抗-卷曲hGH RC表示在蛋白水解切割时，hGH的C-末端被释放。
图3的式VIIA描绘了包含两个抗体区(A1和A2)的免疫球蛋白双融合蛋白。第一抗体区(A1)附接至第一延伸物融合区，该第一延伸物融合区包含在两端上各有一个连接体(L1和L2)的治疗剂(T1)，该治疗剂和连接体位于两个延伸物肽(E1和E2)之间。第二抗体区(A2)附接至第二延伸物融合区，该第二延伸物融合区包含附接至蛋白水解切割位点(P1)的治疗剂(T2)。第二延伸物融合区中的治疗剂和蛋白水解切割位点的两侧为两个连接体(L3和L4)。第二延伸物区的治疗剂、蛋白水解切割位点和两个连接体的两侧为两个延伸物肽(E1和E2)。
图3的式VIIIA描绘了包含附接至延伸物融合区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该延伸物融合区包含两个延伸物肽(E1和E2)、两个连接体(L1和L2)、两个蛋白水解切割位点(P1和P2)和治疗剂(T1)。图3的式VIIIB描绘了式VIIIA的剪切版本，其中位于治疗剂的N-和C-末端的蛋白水解切割位点被蛋白酶切割，这导致治疗剂从免疫球蛋白融合蛋白中释放。
不具有延伸物肽的另外的示例性免疫球蛋白融合蛋白(直接免疫球蛋白融合蛋白)描绘于图9中。图9的式IXA描绘了包含附接至非抗体区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该非抗体区包含治疗剂(T1)。
图9的式XA描绘了包含附接至非抗体区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该非抗体区包含附接至治疗剂(T1)的连接体(L1)。图9的式XIA描绘了包含彼此附接的两个抗体区(A1和A2)的免疫球蛋白双融合蛋白。该免疫球蛋白双融合蛋白可包含(a)附接至包含第一治疗剂(T1)的第一非抗体区的第一抗体区(A1)；和(b)附接至包含第二治疗剂(T2)的第二非抗体区的第二抗体区(A2)。
图9的式XIIA描绘了包含附接至非抗体区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该非抗体区包含连接体(L1)、蛋白水解切割位点(P1)和治疗剂(T1)，其中该蛋白水解切割位点位于连接体与治疗剂之间。第二非抗体区中的蛋白水解切割位点已被蛋白酶切割，导致第二治疗剂的一端释放。
图9的式XIIIA描绘了包含附接至非抗体区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该非抗体区包含附接至治疗剂(T1)的蛋白水解切割位点(P1)。图9的式XIIIB描绘了式XIIIA的剪切版本，其中该蛋白水解切割位点被蛋白酶切割，这导致治疗剂的一端释放。
图9的式XIVA描绘了包含附接至非抗体区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该非抗体区包含连接体(L1)、治疗剂(T1)和蛋白水解切割位点(P1)，其中该治疗剂位于连接体与蛋白水解切割位点之间。图9的式XIVB描绘了式XIVA的剪切版本，其中该蛋白水解切割位点被蛋白酶切割，这导致治疗剂的一端释放。
图9的式XVA描绘了包含两个抗体区(A1和A2)的免疫球蛋白双融合蛋白。第一抗体区(A1)附接至第一非抗体区，该第一非抗体区包含在两端上各有一个连接体(L1和L2)的治疗剂(T1)。第二抗体区(A2)附接至第二非抗体区，该第二非抗体区包含附接至蛋白水解切割位点(P1)的第二治疗剂(T2)。第二非抗体区中的治疗剂和蛋白水解切割位点的两侧为两个连接体(L3和L4)。第二非抗体区中的蛋白水解切割位点已被蛋白酶切割，导致第二治疗剂的一端释放。
图9的式XVIA描绘了包含附接至非抗体区的抗体区(A1)的免疫球蛋白融合蛋白，该非抗体区包含两个连接体(L1和L2)、两个蛋白水解切割位点(P1和P2)和治疗剂(T1)。图9的式XVIB描绘了式XVIA的剪切版本，其中位于治疗剂的N-和C-末端的蛋白水解切割位点被蛋白酶切割，这导致治疗剂从免疫球蛋白融合蛋白中释放。
本文还公开了治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法。该方法可包括向受试者施用包含附接至延伸物融合区的抗体区的免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含(a)延伸物肽和(b)治疗剂，并且其中该延伸物肽不具有包含β链的二级结构。该方法可包括向受试者施用包含附接至非免疫球蛋白区的抗体区的免疫球蛋白融合蛋白，其中该非免疫球蛋白区包含(a)延伸物肽和(b)治疗剂，并且其中该延伸物肽不具有包含β链的二级结构。该方法可包括向受试者施用包含附接至延伸物融合区的抗体区的直接免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含治疗剂，并且其中该治疗剂在不使用具有二级结构的延伸物肽或连接肽的情况下附接至抗体区。该方法可包括向受试者施用包含附接至非免疫球蛋白区的抗体区的免疫球蛋白融合蛋白，其中该非免疫球蛋白区包含治疗剂，并且其中该治疗剂在不使用具有二级结构的延伸物肽或连接肽的情况下附接至抗体区。该方法可包括向受试者施用包含经由连结肽附接至治疗肽的抗体区的免疫球蛋白融合蛋白。
本文还公开了延长治疗剂的半衰期的方法。该方法可包括将治疗剂附接至抗体区。该方法可包括使用一个或多个不具有规则二级结构的连接体肽将治疗剂附接至抗体区。该方法可包括使用一个或多个蛋白酶切割位点将治疗剂附接至抗体区。该方法可包括将治疗剂附接至延伸物融合肽。该方法可包括使用延伸物融合肽将治疗剂附接至抗体区。该方法可包括将治疗剂附接至连结肽。该方法可包括使用连结肽将治疗剂附接至抗体区。
本文还公开了延长治疗剂的半衰期的方法。该方法可包括将抗体区附接至该治疗剂，以产生免疫球蛋白融合蛋白。该方法可进一步包括将一个或多个连接体或蛋白水解切割位点附接至该免疫球蛋白融合蛋白。所述一个或多个连接体可附接至该治疗剂的N-和/或C-末端。所述一个或多个蛋白水解切割位点可附接至该治疗剂的N-和/或C-末端。所述一个或多个蛋白水解切割位点可插入该治疗剂内。
本文还公开了改善治疗剂的递送的方法。该方法可包括将延伸物肽附接至治疗剂。该方法可进一步包括将抗体区附接至该延伸物肽、治疗剂或延伸物融合肽。该方法可包括将治疗肽直接附接至抗体区。该方法可包括将连结肽附接至治疗剂。该方法可进一步包括将抗体区附接至该连结肽和治疗剂。
本文还公开了改善治疗剂的递送的方法。该方法可包括将抗体区附接至治疗剂，以产生免疫球蛋白融合蛋白。该方法可进一步包括将一个或多个连接体或蛋白水解切割位点附接至该免疫球蛋白融合蛋白。所述一个或多个连接体可附接至该治疗剂的N-和/或C-末端。所述一个或多个蛋白水解切割位点可附接至该治疗剂的N-和/或C-末端。所述一个或多个蛋白水解切割位点可插入该治疗剂内。
在描述本发明方法和组合物之前，应当理解，本发明并不局限于所描述的特定方法或组合物，因此当然可能会有所不同。还应当理解，本文所使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且并非旨在限制，因为本发明的范围将仅由所附的权利要求书限制。描述了实施例以便为本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完整公开内容和描述，并且并非旨在限制发明人视为其发明的发明范围，也并非旨在表示下面的实验是进行的全部或仅有的实验。已作出努力以确保关于所用数字(例如量，温度等)的准确性，但一些实验误差和偏差应该予以考虑。除非另外指出，份数是重量份数，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，而压力为大气压或接近大气压。
术语“同源的”、“同源性”或“百分同源性”当在本文中用于描述相对于参考序列的氨基酸序列或核酸序列时，可使用由Karlin和Altschul(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268,1990，如在Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877,1993中修改)所描述的公式来确定。这样的公式被并入Altschul等人(J.Mol.Biol.215:403-410,1990)的局部比对检索基本工具(BLAST)项目。序列的百分同源性可使用截止于本申请的申请日的BLAST的最新版本来确定。
当提供一个数值的范围时，应当理解，该范围的上限和下限之间的每个中间值(到下限的单位的十分之一，除非上下文另有明确说明)也得到具体公开。在所述范围中的任何所述值或中间值与在所述范围中的任何其他所述值或中间值之间的各个较小范围也包含在本发明之内。这些较小范围的上限和下限可独立地包含在该范围内或排除在该范围之外，并且其中任一、无一或两个界限均包含在较小范围内的每个范围也包含在本发明内，服从于所述范围中任何特定地排除在外的界限。当所述范围包含一个或两个界限时，除去任一或两个那些包含在内的界限的范围也包含在本发明中。
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然与本文所述的那些类似或等同的任何方法和材料可以在本发明的实行或测试中使用，但现在描述一些潜在的和优选的方法和材料。本文提及的所有出版物在此通过引用并入，以公开和描述与所引用的出版物有关的方法和/或材料。可以理解，在存在矛盾的情况下，本公开内容取代所并入的出版物的任何公开内容。
本领域技术人员在阅读本公开内容后将会明了，本文描述并说明的每个单独的实施方案具有分立的组件和特征，其可与任何其他若干实施方案的特征容易地分离或结合，而不脱离本发明的范围或实质。可以按所列举事件的顺序或按任何其他在逻辑上可能的顺序实施任何列举的方法。
必须指出，如本文和所附权利要求书中所用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数项，除非上下文另有明确说明。因此，例如，提及“一个细胞”包括多个这样的细胞，并且提及“该肽”包括提及一种或多种肽及其等价物，例如本领域技术人员已知的多肽，等等。
如本文所用，基于另一氨基酸序列的氨基酸序列包含该另一氨基酸序列的一个或多个连续氨基酸部分。连续氨基酸部分包含该另一氨基酸序列中任何数目的氨基酸。连续氨基酸可以与该另一氨基酸序列中的任何连续氨基酸区1-10％、1-20％、10-20％、10-30％、20-30％、20-40％、30-40％、40-50％、50-60％、50-100％、60-70％、60-100％、70-100％、80-100％、80-90％、90-95％、90-100％或1-100％相同。
本文所讨论的出版物仅仅提供在本申请的申请日之前的公开内容。此处没有什么可以被解释为承认本发明没有资格由于在先发明而早于这样的出版物。此外，提供的出版日期可能不同于实际的公开日期，这可能需要单独证实。
免疫球蛋白融合蛋白
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。该哺乳动物抗体可以是牛抗体。该哺乳动物抗体可以是人抗体。该哺乳动物抗体可以是鼠抗体。该哺乳动物抗体可以是非人灵长类动物抗体。
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含治疗剂，其中该治疗剂是功能肽。该免疫球蛋白融合蛋白可包含移植到抗体支架中的功能肽。该功能肽可以是线性肽。该功能肽可以是修饰的环肽。该功能肽可包含被修饰为包含β-发夹结构的肽。该β-发夹结构可通过该β-发夹结构的两个或更多个氨基酸残基之间的一个或多个键被锁定为β-发夹构象。该功能肽的N末端和/或C末端可被移植到该免疫球蛋白融合蛋白的延伸物融合区。该功能肽的N末端可被移植到该延伸物融合区的第一延伸物肽，并且该功能肽的C末端可被移植到该延伸物融合区的第二延伸物肽。该功能肽可包含被修饰为包含构象上受约束的肽的肽。构象上受约束的肽可具有相对于靶标的内源或天然存在的结合配偶体大大改善的对靶标的结合亲和力和/或特异性。靶标的内源或天然存在的结合配偶体可以是靶标的配体或底物。作为非限制性的例子，构象上受约束的肽可以是包含β-发夹结构的肽。构象上受约束的肽可包含与靶标的结合位点结合的区域。靶标可以是受体。靶标可以是酶。靶标的结合位点可以是配体结合域或底物结合域的深口袋。该功能肽或其部分可结合配体结合域或底物结合域的深口袋，使得其阻断靶配体和/或底物结合。该功能肽或其部分可结合配体结合域或底物结合域的深口袋，使得其部分阻断靶配体和/或底物结合。该功能肽或其部分可结合配体结合域或底物结合域的深口袋，使得其完全阻断靶配体或底物结合。该功能肽或其部分可结合配体结合域或底物结合域的表面。该功能肽可以是激动剂。该功能肽可以是拮抗剂。该功能肽可以是抑制剂。该功能肽可以是配体。该功能肽可以是底物。
所述免疫球蛋白融合蛋白可包含基于或衍生自SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个的氨基酸序列。该免疫球蛋白融合蛋白可包含与SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个至少约50％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白融合蛋白可包含与SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白融合蛋白可包含与SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个至少约70％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白融合蛋白可包含与SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个至少约80％同源的氨基酸序列。
该免疫球蛋白融合蛋白可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白融合蛋白可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个的125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、450、500个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白融合蛋白可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个的10个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白融合蛋白可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白融合蛋白可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白融合蛋白可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该氨基酸可以是连续的。备选地，或附加地，该氨基酸是不连续的。
该免疫球蛋白融合蛋白可由基于或衍生自SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由与SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个至少约50％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由与SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由与SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个至少约70％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由与SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个至少约80％同源的核苷酸序列编码。
该免疫球蛋白融合蛋白可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、450、500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的600、650、700、750、800、850、900、950、1000个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的1100、1200、1300、1400、1500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的100个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的1000个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白融合蛋白可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的1300个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该核苷酸可以是连续的。备选地，或附加地，该核苷酸是不连续的。
该免疫球蛋白融合蛋白可进一步包含一个或多个免疫球蛋白轻链。该免疫球蛋白融合蛋白可包含至少两个免疫球蛋白轻链。该免疫球蛋白轻链可包含免疫球蛋白轻链的一个或多个部分。该免疫球蛋白轻链可以是免疫球蛋白融合轻链。该免疫球蛋白融合轻链包含治疗剂和衍生自免疫球蛋白轻链的抗体区。该治疗剂可通过一个或多个连结肽附接至该抗体区。该免疫球蛋白轻链可包含基于或衍生自SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含与SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个至少约50％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含与SEQID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含与SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个至少约70％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含与SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个至少约80％同源的氨基酸序列。
该免疫球蛋白轻链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个的125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、450、500个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含含有基于或衍生自SEQID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个的10个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122中任何一个的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该氨基酸可以是连续的。备选地，或附加地，该氨基酸是不连续的。
该免疫球蛋白轻链可由基于或衍生自SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由与SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个至少约50％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由与SEQID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由与SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个至少约70％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由与SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个至少约80％同源的核苷酸序列编码。
该免疫球蛋白轻链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个的125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、450、500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由包含基于或衍生自SEQ IDNO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个的600、650、700、750、800、850、900、950、1000个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由包含基于或衍生自SEQ IDNO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个的1100、1200、1300、1400、1500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个的100个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个的500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个的1000个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-3、10、18、37、49、63、67和100中任何一个的1300个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该核苷酸可以是连续的。备选地，或附加地，该核苷酸是不连续的。
该免疫球蛋白融合蛋白可进一步包含一个或多个免疫球蛋白重链。该免疫球蛋白融合蛋白可包含至少两个免疫球蛋白重链。该免疫球蛋白重链可包含免疫球蛋白重链的一个或多个部分。该免疫球蛋白重链可以是免疫球蛋白融合重链。该免疫球蛋白融合重链包含治疗剂和衍生自免疫球蛋白重链的抗体区。该治疗剂可通过一个或多个连结肽附接至该抗体区。该免疫球蛋白重链可包含基于或衍生自SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个的氨基酸序列。该免疫球蛋白重链可包含与SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个至少约50％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白重链可包含与SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白重链可包含与SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个至少约70％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白重链可包含与SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个至少约80％同源的氨基酸序列。
该免疫球蛋白重链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白重链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个的125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、450、500个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白重链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个的10个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白重链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白重链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该免疫球蛋白重链可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143中任何一个的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该氨基酸可以是连续的。备选地，或附加地，该氨基酸是不连续的。
该免疫球蛋白重链可由基于或衍生自SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由与SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个至少约50％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由与SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由与SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个至少约70％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由与SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个至少约80％同源的核苷酸序列编码。
该免疫球蛋白重链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个的125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、450、500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个的600、650、700、750、800、850、900、950、1000个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个的1100、1200、1300、1400、1500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个的100个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个的500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个的1000个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:4-9、11-17、38-48、50-62、64-66和101-121中任何一个的1300个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该核苷酸可以是连续的。备选地，或附加地，该核苷酸是不连续的。
该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)包含基于或衍生自SEQ ID NO:69-79、81-93、95-97、99和123-143的氨基酸序列的第一免疫球蛋白融合重链；和(b)包含基于或衍生自SEQ ID NO:19-21、28和36的氨基酸序列的第一免疫球蛋白轻链。该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)包含与SEQ ID NO:69-79、81-93、95-97、99和123-143至少约50％相同的氨基酸序列的第一免疫球蛋白融合重链；和(b)包含与SEQ ID NO:19-21、28和36至少约50％相同的氨基酸序列的第一免疫球蛋白轻链。该第一免疫球蛋白融合重链可包含与SEQ ID NO:69-79、81-93、95-97、99和123-143至少约60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。该第一免疫球蛋白轻链包含与SEQ ID NO:19-21、28和36至少约60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。
该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)由SEQ ID NO:38-48、50-62、64-66和101-121的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白融合重链；和(b)由SEQ ID NO:1-3、10和18的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白轻链。该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)由与SEQ ID NO:38-48、50-62、64-66和101-121的核苷酸序列至少50％或更高同源的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白融合重链；和(b)由与SEQ ID NO:1-3、10和18的核苷酸序列至少50％或更高同源的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白轻链。该第一免疫球蛋白融合重链由与SEQ ID NO:38-48、50-62、64-66和101-121的核苷酸序列至少60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％或更高同源的核苷酸序列编码。该第一免疫球蛋白轻链由与SEQ ID NO:1-3、10和18的核苷酸序列至少60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％或更高同源的核苷酸序列编码。
该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)包含基于或衍生自SEQ ID NO:22-27和29-35的氨基酸序列的第一免疫球蛋白重链；和(b)包含基于或衍生自SEQ ID NO:68、80、94、98和122的氨基酸序列的第一免疫球蛋白融合轻链。该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)包含与SEQ ID NO:22-27和29-35至少约50％相同的氨基酸序列的第一免疫球蛋白重链；和(b)包含与SEQ ID NO:68、80、94、98和122至少约50％相同的氨基酸序列的第一免疫球蛋白融合轻链。该第一免疫球蛋白重链可包含与SEQ ID NO:22-27和29-35至少约60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。该第一免疫球蛋白融合轻链包含与SEQ ID NO:68、80、94、98和122至少约60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。
该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)由SEQ ID NO:4-9和11-17的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白重链；和(b)由SEQ ID NO:37、49、63、67和100的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白融合轻链。该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)由与SEQ ID NO:4-9和11-17的核苷酸序列至少50％或更高同源的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白重链；和(b)由与SEQ IDNO:37、49、63、67和100的核苷酸序列至少50％或更高同源的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白融合轻链。该第一免疫球蛋白重链由与SEQ ID NO:4-9和11-17的核苷酸序列至少60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％或更高同源的核苷酸序列编码。该第一免疫球蛋白融合轻链由与SEQ ID NO:37、49、63、67和100的核苷酸序列至少60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％或更高同源的核苷酸序列编码。
该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)包含基于或衍生自SEQ ID NO:69-79、81-93、95-97、99和123-143的氨基酸序列的第一免疫球蛋白融合重链；和(b)包含基于或衍生自SEQ ID NO:68、80、94、98和122的氨基酸序列的第一免疫球蛋白融合轻链。该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)包含与SEQ ID NO:69-79、81-93、95-97、99和123-143至少约50％相同的氨基酸序列的第一免疫球蛋白融合重链；和(b)包含与SEQ ID NO:68、80、94、98和122至少约50％相同的氨基酸序列的第一免疫球蛋白融合轻链。该第一免疫球蛋白融合重链可包含与SEQ ID NO:69-79、81-93、95-97、99和123-143至少约60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。该第一免疫球蛋白融合轻链包含与SEQ ID NO:68、80、94、98和122至少约60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。
该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)由SEQ ID NO:38-48、50-62、64-66和101-121的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白融合重链；和(b)由SEQ ID NO:37、49、63、67和100的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白融合轻链。该免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)由与SEQ IDNO:38-48、50-62、64-66和101-121的核苷酸序列至少50％或更高同源的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白融合重链；和(b)由与SEQ ID NO:37、49、63、67和100的核苷酸序列至少50％或更高同源的核苷酸序列编码的第一免疫球蛋白融合轻链。该第一免疫球蛋白融合重链由与SEQ ID NO:38-48、50-62、64-66和101-121的核苷酸序列至少60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％或更高同源的核苷酸序列编码。该第一免疫球蛋白融合轻链由与SEQ ID NO:37、49、63、67和100的核苷酸序列至少60％、70％、75％、80％、90％、95％或97％或更高同源的核苷酸序列编码。
本文还公开了免疫球蛋白双融合蛋白，其包含(a)附接至非抗体区的抗体区，其中该非抗体区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列，并且其中该第一延伸物肽不包含超长CDR3，和(ii)第一治疗剂；和(b)第二治疗剂。抗体区与非抗体区的附接可包括将非抗体区插入抗体区内。第一治疗剂和第二治疗剂可以是相同的。第一治疗剂和第二治疗剂可以是不同的。该双融合蛋白可进一步包含第二抗体区。第一和第二治疗剂可附接至第一抗体区。第一和第二治疗剂可各自附接至第一抗体区和第二抗体区。第一和第二抗体区可以是连接的。第一和第二抗体区可通过一个或多个二硫键连接。第一和第二抗体区可以是一个免疫球蛋白轻链或重链的一部分。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个连接体肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
或者，所述免疫球蛋白双融合蛋白包含(a)附接至非抗体区的抗体区，其中该非抗体区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列，并且其中该延伸物肽包含基于或衍生自超长CDR3的7个或更少的氨基酸，和(ii)第一治疗剂；和(b)第二治疗剂。抗体区与非抗体区的附接可包括将非抗体区插入抗体区内。第一治疗剂和第二治疗剂可以是相同的。第一治疗剂和第二治疗剂可以是不同的。该双融合蛋白可进一步包含第二抗体区。第一和第二治疗剂可附接至第一抗体区。第一和第二治疗剂可各自附接至第一抗体区和第二抗体区。第一和第二抗体区可以是连接的。第一和第二抗体区可通过一个或多个二硫键连接。第一和第二抗体区可以是一个免疫球蛋白轻链或重链的一部分。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个连接体肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
或者，所述免疫球蛋白双融合蛋白包含(a)附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列，并且其中该第一延伸物肽不包含超长CDR3，和(ii)第一治疗剂；和(b)第二治疗剂。抗体区与延伸物融合区的附接可包括将延伸物融合区插入抗体区内。第一治疗剂和第二治疗剂可以是相同的。第一治疗剂和第二治疗剂可以是不同的。双融合蛋白可进一步包含第二抗体区。第一和第二治疗剂可附接至第一抗体区。第一和第二治疗剂可各自附接至第一抗体区和第二抗体区。第一和第二抗体区可以是连接的。第一和第二抗体区可通过一个或多个二硫键连接。第一和第二抗体区可以是一个免疫球蛋白轻链或重链的一部分。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个连接体肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
或者，所述免疫球蛋白双融合蛋白包含(a)附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列，并且其中该延伸物肽包含基于或衍生自超长CDR3的7个或更少的氨基酸，和(ii)第一治疗剂；和(b)第二治疗剂。抗体区与延伸物融合区的附接可包括将延伸物融合区插入抗体区内。第一治疗剂和第二治疗剂可以是相同的。第一治疗剂和第二治疗剂可以是不同的。该双融合蛋白可进一步包含第二抗体区。第一和第二治疗剂可附接至第一抗体区。第一和第二治疗剂可各自附接至第一抗体区和第二抗体区。第一和第二抗体区可以是连接的。第一和第二抗体区可通过一个或多个二硫键连接。第一和第二抗体区可以是一个免疫球蛋白轻链或重链的一部分。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个连接体肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
或者，所述免疫球蛋白双融合蛋白包含(a)附接至非抗体区的抗体区，其中该非抗体区包含(i)第一连接肽，其中该第一连接肽不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列，和(ii)第一治疗剂；和(b)第二治疗剂。抗体区与非抗体区的附接可包括将非抗体区插入抗体区内。第一治疗剂和第二治疗剂可以是相同的。第一治疗剂和第二治疗剂可以是不同的。该双融合蛋白可进一步包含第二抗体区。第一和第二治疗剂可附接至第一抗体区。第一和第二治疗剂可各自附接至第一抗体区和第二抗体区。第一和第二抗体区可以是连接的。第一和第二抗体区可通过一个或多个二硫键连接。第一和第二抗体区可以是一个免疫球蛋白轻链或重链的一部分。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个附加连接体肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
或者，所述免疫球蛋白双融合蛋白包含(a)附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(i)第一连接肽，其中该第一连接肽不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列；和(ii)第一治疗剂；和(b)第二治疗剂。抗体区与延伸物融合区的附接可包括将延伸物融合区插入抗体区内。第一治疗剂和第二治疗剂可以是相同的。第一治疗剂和第二治疗剂可以是不同的。该双融合蛋白可进一步包含第二抗体区。第一和第二治疗剂可附接至第一抗体区。第一和第二治疗剂可各自附接至第一抗体区和第二抗体区。第一和第二抗体区可以是连接的。第一和第二抗体区可通过一个或多个二硫键连接。第一和第二抗体区可以是一个免疫球蛋白轻链或重链的一部分。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个附加连接体肽。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一非抗体区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一非抗体区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至第二非抗体区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该第二非抗体区包含(i)包含至少一个二级结构的第二延伸物肽和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，第一延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，第二延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，第一延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，第二延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。该双融合抗体可进一步包含一个或多个肽连接体。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一非抗体区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一非抗体区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至延伸物融合区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含(i)包含至少一个二级结构的第二延伸物肽和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，第一延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，第二延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个肽连接体。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，第一延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，第二延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一延伸物融合区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一延伸物融合区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至非抗体区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该非抗体区包含(i)包含至少一个二级结构的第二延伸物肽和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，第一延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，第二延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个肽连接体。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，第一延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，第二延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一延伸物融合区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一延伸物融合区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至第二延伸物融合区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含(i)包含至少一个二级结构的第二延伸物肽和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，第一延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，第二延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个肽连接体。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，第一延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，第二延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一非抗体区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一非抗体区包含(i)第一肽连接体，其中该第一肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至第二非抗体区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该第二非抗体区包含(i)第二肽连接体，其中该第二肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，第一连接体肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，第二连接体肽是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一非抗体区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一非抗体区包含(i)第一肽连接体，其中该第一肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至延伸物融合区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含(i)第二肽连接体，其中该第二肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，第一连接体肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，第二连接体肽是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一延伸物融合区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一延伸物融合区包含(i)第一肽连接体，其中该第一肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至非抗体区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该非抗体区包含(i)第二肽连接体，其中该第二肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，第一连接体肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，第二连接体肽是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一延伸物融合区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一延伸物融合区包含(i)第一肽连接体，其中该第一肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至第二延伸物融合区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含(i)第二肽连接体，其中该第二肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，第一连接体肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，第二连接体肽是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一非抗体区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一非抗体区包含(i)第一肽连接体，其中该第一肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至第二非抗体区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该第二非抗体区包含(i)包含至少一个二级结构的延伸物肽和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，该延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。该双融合抗体可进一步包含一个或多个附加连接体。第二免疫球蛋白融合蛋白的第二非抗体区可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一非抗体区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一非抗体区包含(i)第一肽连接体，其中该第一肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至延伸物融合区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含(i)包含至少一个二级结构的延伸物肽和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，该延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。该双融合抗体可进一步包含一个或多个附加连接体。第二免疫球蛋白融合蛋白的延伸物融合区可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一延伸物融合区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一延伸物融合区包含(i)第一肽连接体，其中该第一肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至非抗体区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该非抗体区包含(i)包含至少一个二级结构的延伸物肽和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，该延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。该双融合抗体可进一步包含一个或多个附加连接体。第二免疫球蛋白融合蛋白的非抗体区可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一延伸物融合区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一延伸物融合区包含(i)第一肽连接体，其中该第一肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至第二延伸物融合区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含(i)包含至少一个二级结构的第二延伸物肽和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，该延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。该双融合抗体可进一步包含一个或多个附加连接体。第二免疫球蛋白融合蛋白的第二延伸物融合区可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一非抗体区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一非抗体区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至第二非抗体区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该第二非抗体区包含(i)肽连接体，其中该肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，该延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。该双融合抗体可进一步包含一个或多个附加连接体。第一免疫球蛋白融合蛋白的第一非抗体区可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一非抗体区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一非抗体区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至延伸物融合区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含(i)肽连接体，其中该第二肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，该延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。该双融合抗体可进一步包含一个或多个附加连接体。第一免疫球蛋白融合蛋白的第一非抗体区可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一延伸物融合区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一延伸物融合区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至非抗体区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该非抗体区包含(i)肽连接体，其中该肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，该延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。该双融合抗体可进一步包含一个或多个附加连接体。第一免疫球蛋白融合蛋白的第一延伸物融合区可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。
所述双融合抗体可包含(a)包含附接至第一延伸物融合区的第一抗体区的第一免疫球蛋白融合蛋白，其中该第一延伸物融合区包含(i)第一延伸物肽，其中该第一延伸物肽包含含有α螺旋二级结构的氨基酸序列和(ii)第一治疗剂；和(b)包含附接至第二延伸物融合区的第二抗体区的第二免疫球蛋白融合蛋白，其中该延伸物融合区包含(i)肽连接体，其中该肽连接体不包含含有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列和(ii)第二治疗剂。在一些实施方案中，该延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，该延伸物肽是连结肽或连结肽的一部分。在一些实施方案中，该肽连接体是连结肽或连结肽的一部分。该双融合抗体可进一步包含一个或多个蛋白酶切割位点。该双融合抗体可进一步包含一个或多个附加连接体。第一免疫球蛋白融合蛋白的第一延伸物融合区可进一步包含一个或多个附加延伸物肽。
第一治疗剂和第二治疗剂可以是相同的。第一治疗剂和第二治疗剂可以是不同的。所述免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个附加治疗剂。两个或更多个治疗剂可以是相同的。备选地，或附加地，两个或更多个治疗剂可以是不同的。第一治疗剂可以是治疗肽。第二治疗剂可以是治疗肽。附加治疗剂中的一个或多个可以是治疗肽。第一治疗剂可包含治疗肽。第二治疗剂可包含治疗肽。附加治疗剂中的一个或多个可包含一个或多个治疗肽。治疗剂可包含一个或多个治疗肽或治疗肽的区域。治疗剂可包含，例如，第一治疗肽或其部分、内部肽和第二治疗肽或其部分。内部肽可包含，例如，蛋白酶切割位点或亲和标签，诸如组氨酸标签(6X HIS)(SEQ ID NO:274)。内部肽可包含，例如，另一个治疗肽或其部分。例如，治疗剂可包含第一治疗肽的第一部分、第二治疗肽的第一部分和第一治疗肽的第二部分。
第一抗体区和第二抗体区可以是相同的。例如，第一抗体区和第二抗体区包含免疫球蛋白重链。或者，第一抗体区和第二抗体区可包含免疫球蛋白轻链。第一抗体区和第二抗体区可以是不同的。例如，第一抗体区包含免疫球蛋白重链而第二抗体区包含免疫球蛋白轻链，或反之亦然。所述免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个附加抗体区。两个或更多个抗体区可以是相同的。备选地，或附加地，两个或更多个抗体区可以是不同的。
所述免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个延伸物肽。所述一个或多个延伸物肽可以是相同的。备选地，或附加地，所述一个或多个延伸物肽可以是不同的。在一些实施方案中，该延伸物肽包含基于或衍生自超长CDR3的7个或更少的氨基酸。
所述免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个附加抗体区。两个或更多个抗体区可以是相同的。备选地，或附加地，两个或更多个抗体区是不同的。
所述免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个连接体。所述免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含两个或更多个连接体。所述两个或更多个连接体可以是相同的。备选地，或附加地，所述两个或更多个连接体是不同的。
所述免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个蛋白水解切割位点。所述免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含两个或更多个蛋白水解切割位点。所述两个或更多个蛋白水解切割位点可以是相同的。备选地，或附加地，所述两个或更多个蛋白水解切割位点是不同的。
所述免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个含有内部肽的治疗剂。内部肽可包含亲和标记或标签，诸如HHHHHH(6X)(SEQ ID NO:274)组氨酸尾。内部肽可包含治疗肽的一部分。
示例性的免疫球蛋白双融合蛋白描绘于图3的式IIIA和式VIIA。如图8的式IIIA所示，该免疫球蛋白双融合蛋白可包含(a)附接至第一延伸物融合区的第一抗体区(A1)，该第一延伸物融合区包含附接至两个延伸物肽(E1，E2)的第一治疗剂(T1)；和(b)附接至第二延伸物融合区的第二抗体区(A2)，该第二延伸物融合区包含附接至两个延伸物肽(E3，E4)的第二治疗剂(T2)。该免疫球蛋白双融合蛋白可进一步包含一个或多个连接体和一个或多个蛋白水解切割位点。所述一个或多个蛋白水解切割位点可附接至治疗剂的N-和/或C-末端。蛋白水解切割位点的蛋白水解切割可将治疗剂的N-和/或C-末端从免疫球蛋白融合蛋白中释放。图3的式VIIA描绘了一种示例性的免疫球蛋白双融合蛋白，其中第二治疗剂(T2)的N-末端已经被释放。
抗体区
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白包含一个或多个抗体区。抗体区可包含免疫球蛋白或其片段。该抗体区可包含免疫球蛋白重链、免疫球蛋白轻链或其组合的至少一部分。抗体区可包含两个或更多个免疫球蛋白链或其部分。抗体区可包含三个或更多个免疫球蛋白链或其部分。抗体区可包含四个或更多个免疫球蛋白链或其部分。抗体区可包含五个或更多个免疫球蛋白链或其部分。抗体区可包含两个免疫球蛋白重链和两个免疫球蛋白轻链。
抗体区可包含整个免疫球蛋白分子或任何含有免疫球蛋白的片段的多肽，该片段包括但不限于重链、轻链、可变域、恒定域、互补决定区(CDR)、构架区、片段抗原(Fab)结合区、Fab’、F(ab’)2、F(ab’)3、Fab’、片段可结晶(Fc)区、单链可变片段(scFV)、di-scFv、单域免疫球蛋白、三功能免疫球蛋白、化学连接的F(ab’)2及其任何组合。免疫球蛋白区可包含一个或多个突变。Fc区可以是突变的Fc区。突变的Fc区可包含一个或多个消除Fc区的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)效应的突变。突变的Fc区可包含约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10个、约1至约10、约1至约20或约1至约30个突变。
在一些实施方案中，免疫球蛋白重链可包含整个重链或重链的一部分。例如，衍生自重链的可变域或其区域可被称为重链或重链的区域。在一些实施方案中，免疫球蛋白轻链可包含整个轻链或轻链的一部分。例如，衍生自轻链的可变域或其区域可被称为轻链或轻链的区域。单域免疫球蛋白包括但不限于，单一单体可变免疫球蛋白结构域，例如，鲨鱼可变新型抗原受体免疫球蛋白片段(VNAR)。
所述免疫球蛋白可衍生自本领域技术人员已知的任何类型，包括但不限于IgA、IgD、IgE、IgG、IgM、IgY、IgW。所述抗体区可包含一个或多个单元，包括但不限于1、2、3、4和5个单元。功能单元可包括但不限于非抗体区、重链、轻链、可变域、恒定域、互补决定区(CDR)、构架区、片段抗原结合(Fab)区、Fab’、F(ab’)2、F(ab’)3、Fab’、片段可结晶(Fc)区、单链可变片段(scFV)、di-scFv、单域免疫球蛋白、三功能免疫球蛋白、化学连接的F(ab’)2及其任何组合或片段。非抗体区包括但不限于碳水化合物、脂质、小分子和治疗肽。抗体区可包含通过一个或多个二硫键连接的一个或多个单元。抗体区可包含通过肽连接体连接的一个或多个单元，例如scFv免疫球蛋白。所述免疫球蛋白可以是重组免疫球蛋白，包括具有氨基酸突变、置换和/或缺失的免疫球蛋白。所述免疫球蛋白可以是包含化学修饰的重组免疫球蛋白。所述免疫球蛋白可包含免疫球蛋白-药物缀合物的整体或部分。
抗体区可包含免疫球蛋白重链的至少一部分。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白重链或其部分。抗体区可包含两个或更多个免疫球蛋白重链或其部分。抗体区可包含与免疫球蛋白重链至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与免疫球蛋白重链至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与免疫球蛋白重链至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与免疫球蛋白重链至少约80％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与免疫球蛋白重链至少约90％同源的氨基酸序列。免疫球蛋白重链可包含基于或衍生自SEQ ID NO:22-27和29-35中任何一个的氨基酸。在一些实施方案中，抗体区包含与SEQ ID NO:22-27和29-35中任何一个的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体区包含与SEQ ID NO:22-27和29-35中任何一个的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。
抗体区可包含含有免疫球蛋白重链的5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有免疫球蛋白重链的100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该氨基酸可以是连续的。备选地，或附加地，该氨基酸是不连续的。
所述免疫球蛋白重链可由基于或衍生自SEQ ID NO:4-9和11-17的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由与SEQ ID NO:4-9和11-17至少约50％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由与SEQ ID NO:4-9和11-17至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由与SEQID NO:4-9和11-17至少约75％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白重链可由与SEQ IDNO:4-9和11-17至少约85％同源的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗体区由与SEQ IDNO:4-9和11-17中任何一个的核苷酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗体区由与SEQ IDNO:4-9和11-17中任何一个的核苷酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％相同的核苷酸序列编码。
抗体区可包含免疫球蛋白轻链的至少一部分。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白轻链或其部分。抗体区可包含两个或更多个免疫球蛋白轻链或其部分。抗体区可包含与免疫球蛋白轻链至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与免疫球蛋白轻链至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与免疫球蛋白轻链至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与免疫球蛋白轻链至少约80％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与免疫球蛋白轻链至少约90％同源的氨基酸序列。该免疫球蛋白轻链可包含基于或衍生自SEQ ID NO:19-21、28和36中任何一个的氨基酸。在一些实施方案中，抗体区包含与SEQ ID NO:19-21、28和36中任何一个的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体区包含与SEQ ID NO:19-21、28和36中任何一个的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。
抗体区可包含含有免疫球蛋白轻链的5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有免疫球蛋白轻链的100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该氨基酸可以是连续的。备选地，或附加地，该氨基酸是不连续的。
所述免疫球蛋白轻链可由基于或衍生自SEQ ID NO:1-3、10和18的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由与SEQ ID NO:1-3、10和18至少约50％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由与SEQ ID NO:1-3、10和18至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由与SEQID NO:1-3、10和18至少约75％同源的核苷酸序列编码。该免疫球蛋白轻链可由与SEQ IDNO:1-3、10和18至少约85％同源的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗体区由与SEQ IDNO:1-3、10和18中任何一个的核苷酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗体区由与SEQ IDNO:1-3、10和18中任何一个的核苷酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％相同的核苷酸序列编码。
抗体区可包含可变域的至少一部分。抗体区可包含一个或多个可变域或其部分。抗体区可包含2、3、4、5个或更多个可变域或其部分。抗体区可包含含有基于或衍生自一个或多个可变域的氨基酸序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250、275、300、350、400、500个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该氨基酸可以是连续的。该氨基酸可以是不连续的。
抗体区可包含恒定域的至少一部分。抗体区可包含一个或多个恒定域或其部分。抗体区可包含2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个恒定域或其部分。抗体区可包含含有基于或衍生自一个或多个恒定域的氨基酸序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250、275、300、350、400、500、600、700、800、900、1000、1200、1400个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该氨基酸可以是连续的。该氨基酸可以是不连续的。
抗体区可包含互补决定区(CDR)的至少一部分。抗体区可包含一个或多个互补决定区(CDR)或其部分。抗体区可包含2、3、4、5个或更多个互补决定区(CDR)或其部分。抗体区可包含6、7、8个或更多个互补决定区(CDR)或其部分。抗体区可包含四个或更多个互补决定区(CDR)或其部分。抗体区可包含9、10、11个或更多个互补决定区(CDR)或其部分。所述一个或多个CDR可以是CDR1、CDR2、CDR3或其组合。所述一个或多个CDR可以是CDR1。所述一个或多个CDR可以是CDR2。所述一个或多个CDR可以是CDR3。所述CDR可以是重链CDR。所述一个或多个CDR可以是轻链CDR。
抗体区可包含含有基于或衍生自CDR的氨基酸序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有基于或衍生自CDR的氨基酸序列的3个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有基于或衍生自CDR的氨基酸序列的5个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有基于或衍生自CDR的氨基酸序列的10个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该氨基酸可以是连续的。该氨基酸可以是不连续的。
抗体区可基于或衍生自抗-T细胞受体免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可基于或衍生自抗-B细胞受体免疫球蛋白的至少一部分。
抗体区可基于或衍生自抗-T细胞共同受体免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可基于或衍生自抗-CD3免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可基于或衍生自抗-CD3免疫球蛋白。该抗-CD3免疫球蛋白可以是UCHT1。抗体区可基于或衍生自抗-CD3免疫球蛋白的Fab片段的至少一部分。抗体区可基于或衍生自抗-CD3免疫球蛋白的免疫球蛋白片段。
抗体区可基于或衍生自与细胞上受体的至少一部分结合的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段。抗体区可基于或衍生自与细胞上共同受体的至少一部分结合的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段。抗体区可基于或衍生自与抗原的至少一部分或细胞上的细胞表面标志物结合的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段。该细胞可以是造血细胞。该造血细胞可以是骨髓细胞。该骨髓细胞可以是红细胞、凝血细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞或肥大细胞。该造血细胞可以是淋巴样细胞。该淋巴样细胞可以是B细胞、T细胞或NK细胞。该造血细胞可以是白细胞。该造血细胞可以是淋巴细胞。
抗体区可基于或衍生自与T细胞上受体的至少一部分结合的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段。该受体可以是T细胞受体(TCR)。该TCR可包括TCRα、TCRβ、TCRγ和/或TCRΔ。该受体可以是T细胞受体ζ。
抗体区可基于或衍生自与淋巴细胞、B细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和/或NK细胞上受体的至少一部分结合的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段。该受体可以是Fc受体。该Fc受体可以是Fc-γ受体、Fc-α受体和/或Fc-ε受体。Fc-γ受体包括但不限于FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)、FcγRIIB(CD32)、FcγRIIIA(CD16a)和FcγRIIIB(CD16b)。Fc-α受体包括但不限于FcαRI。Fc-ε受体包括但不限于FcεRI和FcεRII。该受体可以是CD89(IgA受体的Fc片段或FCAR)。
抗体区可基于或衍生自结合T细胞上共同受体的至少一部分的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段。该共同受体可以是CD3、CD4和/或CD8。抗体区可基于或衍生自与CD3共同受体结合的免疫球蛋白片段。该CD3共同受体可包括CD3-γ、CD3-Δ和/或CD3-ε。CD8可包含CD8-α和/或CD8-β链。
在一些实施方案中，抗体区对于哺乳动物靶标不是特异性的。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白是抗病毒免疫球蛋白。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白是抗细菌免疫球蛋白。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白是抗寄生虫免疫球蛋白。在一些实施方案中，所述免疫球蛋白是抗真菌免疫球蛋白。在一些实施方案中，抗体区衍生自免疫球蛋白疫苗。
在一些实施方案中，抗体区基于或衍生自包括但不限于actoxumab、bezlotoxumab、CR6261、埃巴单抗、依芬古单抗、艾韦单抗、泛维珠单抗、福拉韦单抗、伊巴珠单抗(TMB-355、TNX-355)、利韦单抗、莫维珠单抗、奈巴库单抗、帕昔单抗、帕利珠单抗、帕诺库单抗、雷韦单抗、雷昔库单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗(MSL-109)、suvizumab、替非珠单抗、妥韦单抗和乌珠单抗的免疫球蛋白。
在一些实施方案中，抗体区基于或衍生自针对艰难梭菌(Clostridiumdifficile)、正粘病毒(Orthomyxoviruses)(甲型流感病毒(Influenzavirus A)、乙型流感病毒(Influenzavirus B)、丙型流感病毒(Influenzavirus C)、传染性鲑鱼贫血病毒(Isavirus)、索哥托病毒(Thogotovirus))、大肠杆菌(Escherichia coli)、假丝酵母(Candida)、狂犬病病毒(Rabies)、人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus)、肝炎病毒(Hepatitis)、葡萄球菌(Staphylococcus)、呼吸道合胞病毒(RespiratorySyncytial Virus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)、巨细胞病毒(Cytomegalovirus)或金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的免疫球蛋白。
抗体区可基于或衍生自抗病毒免疫球蛋白。抗病毒免疫球蛋白可针对病毒蛋白质的表位。抗细菌免疫球蛋白可靶向一种或多种病毒，包括但不限于腺病毒(Adenoviruses)、疱疹病毒(Herpesviruses)、痘病毒(Poxviruses)、细小病毒(Parvoviruses)、呼肠孤病毒(Reoviruses)、小核糖核酸病毒(Picornaviruses)、披膜病毒(Togaviruses)、正粘病毒、棒状病毒(Rhabdoviruses)、逆转录病毒(Retroviruses)和肝脱氧核糖核酸病毒(Hepadnaviruses)。病毒蛋白质可以来自呼吸道合胞病毒。病毒蛋白质可以是呼吸道合胞病毒的F蛋白。表位可以在F蛋白的A抗原位点中。抗病毒免疫球蛋白可基于或衍生自帕利珠单抗。免疫球蛋白可基于或衍生自抗病毒疫苗。抗病毒免疫球蛋白可基于或衍生自艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab。
抗体区可基于或衍生自抗病毒免疫球蛋白G。抗体区可包含抗病毒免疫球蛋白G的至少一部分。抗体区可包含与抗病毒免疫球蛋白G的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗病毒免疫球蛋白G的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗病毒免疫球蛋白G的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗病毒免疫球蛋白G的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体区包含基于或衍生自抗病毒免疫球蛋白M的氨基酸序列。
抗体区可包含含有抗病毒免疫球蛋白G序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗病毒免疫球蛋白G序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗病毒免疫球蛋白G序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗病毒免疫球蛋白G序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗病毒免疫球蛋白G序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自帕利珠单抗免疫球蛋白。抗体区可包含帕利珠单抗免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可包含与帕利珠单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与帕利珠单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与帕利珠单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与帕利珠单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。
抗体区可包含含有帕利珠单抗免疫球蛋白序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有帕利珠单抗免疫球蛋白序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有帕利珠单抗免疫球蛋白序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有帕利珠单抗免疫球蛋白序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有帕利珠单抗免疫球蛋白序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白。抗体区可包含艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可包含与艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。
抗体区可包含含有艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有艾韦单抗、福拉韦单抗、利韦单抗、雷韦单抗、瑞加韦单抗、司韦单抗、妥韦单抗、泛维珠单抗、莫维珠单抗、帕利珠单抗和/或suvizumab免疫球蛋白序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自抗细菌免疫球蛋白。该抗细菌免疫球蛋白可针对细菌蛋白质的表位。该抗细菌免疫球蛋白可靶向细菌，包括但不限于橙黄弗拉托菌(Acetobacteraurantius)、放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)、嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)、茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans)、炭疽芽孢杆菌、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、牙龈红棕色单胞菌(Bacteroides gingivalis)、产黑素拟杆菌(Bacteroides melaninogenicus)、五日热巴尔通氏体(Bartonella quintana)、支气管炎博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、流产布鲁氏菌(Brucella abortus)、马尔他布鲁氏菌(Brucella melitensis)、猪布鲁氏菌(Brucella suis)、鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia mallei)、类鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pseudomallei)、洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)、肉芽肿鞘杆菌(Calymmatobacterium granulomatis)、大肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)、胚胎弯曲杆菌(Campylobacter fetus)、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)、幽门螺杆菌(Campylobacter pylori)、砂眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、肺炎衣原体(Chlamydophila pneumoniae)、鹦鹉衣原体(Chlamydophila psittaci)、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、艰难梭菌、白喉棒杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、梭形棒状杆菌(Corynebacterium fusiforme)、伯氏考克斯氏体(Coxiella burnetii)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、(Enterococcus faecalis)、粪肠球菌(Enterococcusfaecium)、鹑鸡肠球菌(Enterococcus galllinarum)、Enterococcus maloratus、大肠杆菌、土拉热弗朗西丝氏菌(Francisella tularensis)、具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum)、阴道加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis)、流感嗜血菌(Haemophilusinfluenzae)、副流感嗜血菌(Haemophilus parainfluenzae)、百日咳巴尔通氏体(Haemophilus pertussis)、阴道加德纳氏菌(Haemophilus vaginalis)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、侵肺军团菌(Legionella pneumophila)、单核细胞增生利斯特氏菌(Listeria monocytogenes)、Methanobacterium extroquens、多形微杆菌(Microbacterium multiforme)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、粘膜炎莫拉菌(Moraxella catarrhalis)、草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)、耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、生殖道枝原体(Mycoplasma genitalium)、人型枝原体(Mycoplasma hominis)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumonie)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)、出血败血性巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)、土拉热弗朗西丝氏菌(Pasteurella tularensis)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)、牙龈红棕色单胞菌(Porphyromonas gingivalis)、产黑素拟杆菌(Prevotella melaninogenica)、铜绿假单胞菌、放射根瘤菌(Rhizobiumradiobacter)、立氏立克次氏体(Rickettsia rickettsii)、龋齿罗氏菌(Rothiadentocariosa)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphi)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、痢疾志贺氏菌(Shigelladysenteriae)、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、彻白密螺旋体(Treponemapallidum)、齿垢密螺旋体(Treponema denticola)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、逗号弧菌(Vibrio comma)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、创伤弧菌(Vibriovulnificus)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)和假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)。免疫球蛋白可基于或衍生自细菌疫苗。抗病毒免疫球蛋白可基于或衍生自奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗。
抗体区可基于或衍生自抗细菌免疫球蛋白G。抗体区可包含抗细菌免疫球蛋白G的至少一部分。抗体区可包含与抗细菌免疫球蛋白G的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗细菌免疫球蛋白G的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗细菌免疫球蛋白G的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗细菌免疫球蛋白G的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体区包含基于或衍生自抗病毒免疫球蛋白M的氨基酸序列。
抗体区可包含含有抗细菌免疫球蛋白G序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗细菌免疫球蛋白G序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗细菌免疫球蛋白G序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗细菌免疫球蛋白G序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗细菌免疫球蛋白G序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白。抗体区可包含奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可包含与奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。
抗体区可包含含有奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有奈巴库单抗、帕诺库单抗、雷昔库单抗、埃巴单抗、帕昔单抗和/或替非珠单抗免疫球蛋白序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自抗寄生虫免疫球蛋白。抗寄生虫免疫球蛋白可针对寄生虫蛋白质的表位。抗寄生虫免疫球蛋白可靶向寄生虫或寄生虫蛋白质，包括但不限于寄生虫棘阿米巴属(Acanthamoeba)、狒狒巴拉姆希阿米巴(Balamuthia mandrillaris)、巴贝虫属(Babesia)(分歧巴贝虫(B.divergens)、双芽巴贝虫(B.bigemina)、马巴贝虫(B.equi)、果氏巴贝虫(B.microfti)、B.duncani、结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)、芽囊原虫属(Blastocystis)、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、脆双核阿米巴(Dientamoebafragilis)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、蓝氏贾第鞭毛虫(Giardialamblia)、贝氏等孢子球虫(Isospora belli)、利什曼原虫属(Leishmania)、福氏耐格里变形虫(Naegleria fowleri)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、Plasmodium ovale curtisi、Plasmodium ovale wallikeri、三日疟原虫(Plasmodium malariae)、诺氏疟原虫(Plasmodium knowlesi)、西伯鼻孢子虫(Rhinosporidium seeberi)、牛-人肉孢子虫(Sarcocystis bovihominis)、猪-人肉孢子虫(Sarcocystis suihominis)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、多节绦虫亚纲(Cestoda)、多头绦虫(Taenia multiceps)、阔节裂头绦虫(Diphyllobothriumlatum)、细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)、多房棘球绦虫(Echinococcusmultilocularis)、沃氏棘球绦虫(Echinococcus vogeli)、少节棘球绦虫(Echinococcusoligarthrus)、短膜壳绦虫(Hymenolepis nana)、缩小膜壳绦虫(Hymenolepis diminuta)、牛肉绦虫(Taenia saginata)、猪肉绦虫(Taenia solium)、古巴伯特绦虫(Bertiellamucronata)、萨氏伯特绦虫(Bertiella studeri)、刺猬绦虫(Spirometraerinaceieuropaei)、华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)；(Clonorchis viverrini)、分支双腔吸虫(Dicrocoelium dendriticum)、肝片吸虫(Fasciola hepatica)、大片吸虫(Fasciola gigantica)、布氏姜片虫(Fasciolopsis buski)、棘颚口线虫(Gnathostomaspinigerum)、刚棘颚口线虫(Gnathostoma hispidum)、横川后殖吸虫(Metagonimusyokogawai)、麝后睾吸虫(Opisthorchis viverrini)、猫后睾吸虫(Opisthorchisfelineus)、华支睾吸虫、卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani)；非洲并殖吸虫(Paragonimus africanus)；卡里并殖吸虫(Paragonimus caliensis)；猫肺并殖吸虫(Paragonimus kellicotti)；斯氏并殖吸虫(Paragonimus skrjabini)；双侧宫并殖吸虫(Paragonimus uterobilateralis)、血吸虫属的种(Schistosoma sp.)、曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)、埃及血吸虫(Schistosoma haematobium)、日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、湄公河血吸虫(Schistosoma mekongi)、Echinostomaechinatum、Trichobilharzia regenti、裂体科(Schistosomatidae)、十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)、美洲板口线虫(Necator americanus)、脊形管圆线虫(Angiostrongylus costaricensis)、异尖线虫(Anisakis)、蛔虫属的种人蛔虫(Ascarissp.Ascaris lumbricoides)、浣熊拜林蛔线虫(Baylisascaris procyonis)、马来布鲁线虫(Brugia malayi)、帝汶布鲁线虫(Brugia timori)、肾膨结线虫(Dioctophyme renale)、麦地那龙线虫(Dracunculus medinensis)、蠕形住肠蛲虫(Enterobius vermicularis)、Enterobius gregorii、Halicephalobus gingivalis、罗阿丝虫(Loa filaria)、链尾曼森线虫(Mansonella streptocerca)、旋盘尾丝虫(Onchocerca volvulus)、粪类圆线虫(Strongyloides stercoralis)、加利福尼亚吸吮线虫(Thelazia californiensis)、结膜吸吮线虫(Thelazia callipaeda)、犬弓蛔虫(Toxocara canis)、猫弓蛔虫(Toxocaracati)、旋毛虫(Trichinella spiralis)、布氏旋毛虫(Trichinella britovi)、纳氏旋毛虫(Trichinella nelsoni)、Trichinella nativa、毛首鞭形线虫(Trichuris trichiura)、犬鞭虫(Trichuris vulpis)、班氏吴策线虫(Wuchereria bancrofti)、原棘头虫目(Archiacanthocephala)、念珠棘虫(Moniliformis moniliformis)、锯齿状舌形虫(Linguatula serrata)、狂蝇总科(Oestroidea)、丽蝇科(Calliphoridae)、麻蝇科(Sarcophagidae)、穿皮潜蚤(Tunga penetrans)、人肤蝇(Dermatobia hominis)、硬蜱科(Ixodidae)、隐喙蜱科(Argasidae)、温带臭虫(Cimex lectularius)、人虱(Pediculushumanus)、人体虱(Pediculus humanus corporis)、耻阴虱(Pthirus pubis)、毛囊蠕形螨/皮脂蠕形螨/犬蠕形螨(Demodex folliculorum/brevis/canis)、疥螨(Sarcoptesscabiei)、嗜人锥蝇(Cochliomyia hominivorax)和人蚤(Pulex irritans)。
抗体区可基于或衍生自抗寄生虫免疫球蛋白G。抗体区可包含抗寄生虫免疫球蛋白G的至少一部分。抗体区可包含与抗寄生虫免疫球蛋白G的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗寄生虫免疫球蛋白G的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗寄生虫免疫球蛋白G的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗寄生虫免疫球蛋白G的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体区包含基于或衍生自抗寄生虫免疫球蛋白M的氨基酸序列。
抗体区可包含含有抗寄生虫免疫球蛋白G序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗寄生虫免疫球蛋白G序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗寄生虫免疫球蛋白G序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗寄生虫免疫球蛋白G序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗寄生虫免疫球蛋白G序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自抗真菌免疫球蛋白。该抗细菌免疫球蛋白可针对真菌蛋白质的表位。该抗真菌免疫球蛋白可靶向真菌或真菌蛋白质，包括但不限于新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)、加特隐球酵母(Cryptococcus gattii)、白假丝酵母(Candida albicans)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、星形假丝酵母(Candidastellatoidea)、光滑假丝酵母(Candida glabrata)、克鲁斯假丝酵母(Candida krusei)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、季也蒙假丝酵母(Candida guilliermondii)、维斯假丝酵母(Candida viswanathii)、葡萄牙假丝酵母(Candida lusitaniae)、胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、布鲁塞尔酒香酵母(Brettanomyces bruxellensis)、星形假丝酵母(Candida stellata)、粟酒裂殖酵母、戴尔有孢圆酵母(Torulasporadelbrueckii)、拜氏接合酵母(Zygosaccharomyces bailii)、解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)、少孢酵母(Saccharomyces exiguus)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。该抗真菌免疫球蛋白可基于或衍生自依芬古单抗。
抗体区可基于或衍生自抗真菌免疫球蛋白G。抗体区可包含抗真菌免疫球蛋白G的至少一部分。抗体区可包含与抗真菌免疫球蛋白G的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗真菌免疫球蛋白G的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗真菌免疫球蛋白G的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗真菌免疫球蛋白G的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体区包含基于或衍生自抗真菌免疫球蛋白M的氨基酸序列。
抗体区可包含含有抗真菌免疫球蛋白G序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗真菌免疫球蛋白G序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗真菌免疫球蛋白G序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗真菌免疫球蛋白G序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗真菌免疫球蛋白G序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自依芬古单抗免疫球蛋白。抗体区可包含依芬古单抗免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可包含与依芬古单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与依芬古单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与依芬古单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与依芬古单抗免疫球蛋白的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。
抗体区可包含含有依芬古单抗免疫球蛋白序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有依芬古单抗免疫球蛋白序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有依芬古单抗免疫球蛋白序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有依芬古单抗免疫球蛋白序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有依芬古单抗免疫球蛋白序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白。抗体区可包含曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可包含与曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。抗体区可包含突变的曲妥珠单抗抗体。抗体区可包含在IgG1重链中包含七个突变的曲妥珠单抗抗体。抗体区可包含在IgG4重链中包含三个突变的曲妥珠单抗抗体。
抗体区可包含含有曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有曲妥珠单抗免疫球蛋白G免疫球蛋白序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自抗-Her2免疫球蛋白。抗体区可包含抗-Her2免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可包含与抗-Her2免疫球蛋白的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗-Her2免疫球蛋白的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗-Her2免疫球蛋白的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗-Her2免疫球蛋白的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。
抗体区可包含含有抗-Her2免疫球蛋白序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗-Her2免疫球蛋白序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗-Her2免疫球蛋白序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗-Her2免疫球蛋白序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗-Her2免疫球蛋白序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自抗-CD47免疫球蛋白。抗体区可包含抗-CD47免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可包含与抗-CD47免疫球蛋白的至少一部分至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗-CD47免疫球蛋白的至少一部分至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％或97％或更高同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗-CD47免疫球蛋白的至少一部分至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与抗-CD47免疫球蛋白的至少一部分至少约80％同源的氨基酸序列。
抗体区可包含含有抗-CD47免疫球蛋白序列的10、20、30、40、50、60、70、80、90个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗-CD47免疫球蛋白序列的100、200、300、400、500、600、700、800、900个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗-CD47免疫球蛋白序列的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗-CD47免疫球蛋白序列的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有抗-CD47免疫球蛋白序列的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。
抗体区可基于或衍生自抗癌免疫球蛋白。抗癌免疫球蛋白的实例包括但不限于阿昔单抗、阿达木单抗、阿仑珠单抗、巴利昔单抗、贝利木单抗、贝伐单抗、brentuximab、卡那奴单抗、赛妥珠单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、地舒单抗、依库珠单抗、依法珠单抗、吉妥珠单抗、戈利木单抗、替伊莫单抗、英夫利昔单抗、伊匹木单抗、莫罗单抗-cd3、那他珠单抗、奥法木单抗、奥马珠单抗、帕利珠单抗、帕尼单抗、雷珠单抗、利妥昔单抗、托珠单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗。
抗体区可包含人免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可包含人源化免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可包含嵌合免疫球蛋白的至少一部分。抗体区可基于或衍生自人免疫球蛋白。抗体区可基于或衍生自人源化免疫球蛋白。抗体区可基于或衍生自嵌合免疫球蛋白。抗体区可基于或衍生自单克隆免疫球蛋白。抗体区可基于或衍生自多克隆免疫球蛋白。抗体区可包含来自哺乳动物、禽类、爬行动物、两栖动物或其组合的免疫球蛋白的至少一部分。该哺乳动物可以是人。该哺乳动物可以是非人灵长类动物。该哺乳动物可以是狗、猫、绵羊、山羊、牛、兔或小鼠。
抗体区可包含基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段序列的序列。抗体区可包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同源的序列。抗体区可包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的序列至少约70％同源的序列。抗体区可包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的序列至少约80％同源的序列。抗体区可包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的序列至少约90％同源的序列。抗体区可包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的序列至少约95％同源的序列。该序列可以是肽序列。该序列可以是核苷酸序列。
抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的肽序列有少于或等于约200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、17、15、12、10、8、6、5、4个或更少的氨基酸不同的肽序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的肽序列有少于或等于约4个或更少的氨基酸不同的肽序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的肽序列有少于或等于约3个或更少的氨基酸不同的肽序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的肽序列有少于或等于约2个或更少的氨基酸不同的肽序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的肽序列有少于或等于约1个或更少的氨基酸不同的肽序列。该氨基酸可以是连续的、不连续的或其组合。例如，抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的肽序列有少于约3个连续氨基酸不同的肽序列。备选地，或附加地，抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的肽序列有少于约2个不连续氨基酸不同的肽序列。在另一个实例中，抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的肽序列有少于约5个氨基酸不同的肽序列，其中2个氨基酸是连续的而2个氨基酸中是不连续的。
抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个抗体和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于或等于约500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、40、30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4个或更少的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于或等于约15个或更少的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于或等于约12个或更少的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于或等于约9个或更少的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于或等于约6个或更少的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于或等于约4个或更少的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于或等于约3个或更少的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于或等于约2个或更少的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于或等于约1个或更少的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。该核苷酸或碱基对可以是连续的、不连续的或其组合。例如，抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于约3个连续的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。备选地，或此外，抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于约2个不连续的核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列。在另一个实例中，抗体区可以包含与基于或衍生自一个或多个免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有少于约5个核苷酸或碱基对不同的核苷酸序列，其中2个核苷酸或碱基对是连续的而2个核苷酸或碱基对是不连续的。
抗体区的肽序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的肽序列有一个或多个氨基酸取代不同。抗体区的肽序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的肽序列有两个或更多个氨基酸取代不同。抗体区的肽序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的肽序列有三个或更多个氨基酸取代不同。抗体区的肽序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的肽序列有四个或更多个氨基酸取代不同。抗体区的肽序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的肽序列有五个或更多个氨基酸取代不同。抗体区的肽序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的肽序列有六个或更多个氨基酸取代不同。抗体区的肽序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的肽序列有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、17、20、25个或更多个氨基酸取代不同。抗体区的肽序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的肽序列有约20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、80-90、90-100、100-150、150-200、200-300个或更多个氨基酸取代不同。
抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有一个或多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有两个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有三个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有四个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有五个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有六个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有九个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有十二个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有十五个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有十八个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有20、22、24、25、27、30个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。抗体区的核苷酸序列可以与它所基于的和/或衍生自的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的核苷酸序列有约30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-200、200-300、300-400个或更多个核苷酸和/或碱基对取代不同。
抗体区可包含至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸。抗体区可包含至少约125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700个或更多个氨基酸。抗体区可包含至少约100个氨基酸。抗体区可包含至少约200个氨基酸。抗体区可包含至少约400个氨基酸。抗体区可包含至少约500个氨基酸。抗体区可包含至少约600个氨基酸。
抗体区可包含少于约2000、1900、1800、1700、1600、1500、1400、1300、1200或1100个氨基酸。抗体区可包含少于约1000、950、900、850、800、750或700个氨基酸。抗体区可包含少于约1500个氨基酸。抗体区可包含少于约1000个氨基酸。抗体区可包含少于约800个氨基酸。抗体区可包含少于约700个氨基酸。
免疫球蛋白融合蛋白可进一步包含含有互补决定区3(CDR3)的30个或更少的连续氨基酸的抗体区。抗体区可包含CDR3的30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的15个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的14个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的13个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的12个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的11个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的10个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的9个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的8个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的7个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的6个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的5个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的4个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的3个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的2个或更少的连续氨基酸。抗体区可包含CDR3的1个或更少的连续氨基酸。在一些情况下，抗体区不含CDR3。
免疫球蛋白融合蛋白可包含含有互补决定区3(CDR3)的6个或更少的连续氨基酸的第一抗体区。第一抗体区可包含CDR3的5个或更少的连续氨基酸。第一抗体区可包含CDR3的4个或更少的连续氨基酸。第一抗体区可包含CDR3的3个或更少的连续氨基酸。第一抗体区可包含CDR3的2个或更少的连续氨基酸。第一抗体区可包含CDR3的1个或更少的连续氨基酸。在一些情况下，第一抗体区不含CDR3。
免疫球蛋白融合蛋白可进一步包含含有互补决定区3(CDR3)的30个或更少的连续氨基酸的第二抗体区。第二抗体区可包含CDR3的30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的15个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的14个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的13个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的12个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的11个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的10个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的9个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的8个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的7个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的6个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的5个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的4个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的3个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的2个或更少的连续氨基酸。第二抗体区可包含CDR3的1个或更少的连续氨基酸。在一些情况下，第二抗体区不含CDR3。
抗体区可包含基于或衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸序列。抗体区可包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个至少约50％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个至少约70％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个至少约80％同源的氨基酸序列。抗体区可包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个至少约50％相同的氨基酸序列。抗体区可包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。抗体区可包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个至少约70％相同的氨基酸序列。抗体区可包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个至少约80％相同的氨基酸序列。抗体区可包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体区包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体区包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。
抗体区可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、450、500个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的10个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的50个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有基于或衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的100个或更多个氨基酸的氨基酸序列。抗体区可包含含有基于或衍生自SEQID NO:19-36和271-273中任何一个的200个或更多个氨基酸的氨基酸序列。该氨基酸可以是连续的。备选地，或附加地，该氨基酸是不连续的。在一些实施方案中，抗体区可包含衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸和非衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸。在一些实施方案中，抗体区可包含衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中一个或多个的氨基酸和非衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个的氨基酸。在一些实施方案中，抗体区包含衍生自SEQ ID NO:19-36和271-273中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个的氨基酸。
抗体区可由基于或衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的核苷酸序列编码。抗体区可由与SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个至少约50％同源的核苷酸序列编码。抗体区可由与SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的核苷酸序列编码。抗体区可由与SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个至少约70％同源的核苷酸序列编码。抗体区可由与SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个至少约80％同源的核苷酸序列编码。抗体区可由与SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个至少约50％相同的核苷酸序列编码。抗体区可由与SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％相同的核苷酸序列编码。抗体区可由与SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个至少约70％相同的核苷酸序列编码。抗体区可由与SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个至少约80％相同的核苷酸序列编码。抗体区可由与SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个100％相同的核苷酸序列编码。
抗体区可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。抗体区可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、450、500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。抗体区可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的600、650、700、750、800、850、900、950、1000个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。抗体区可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的1100、1200、1300、1400、1500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。抗体区可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的100个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。抗体区可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的500个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。抗体区可由包含基于或衍生自SEQID NO:1-18和268-270中任何一个的1000个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。抗体区可由包含基于或衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的1300个或更多个核苷酸的核苷酸序列编码。该核苷酸可以是连续的。在一些实施方案中，抗体区由包含衍生自SEQ IDNO:1-18和268-270中任何一个的核苷酸和非衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的核苷酸的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗体区由包含衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中一个或多个的核苷酸和非衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中任何一个的核苷酸的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗体区由衍生自SEQ ID NO:1-18和268-270中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个的核苷酸序列编码。
非抗体区
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含一个或多个非抗体区。本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含两个或更多个非抗体区。本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个非抗体区。
所述两个或更多个非抗体区可附接至一个或多个抗体区。所述两个或更多个非抗体区可附接至两个或更多个抗体区。所述两个或更多个非抗体区可附接至一个或多个免疫球蛋白链。所述两个或更多个非抗体区可附接至两个或更多个免疫球蛋白链。所述两个或更多个非抗体区可附接至一个或多个抗体区内的一个或多个亚基。所述两个或更多个非抗体区可附接至一个或多个抗体区内的两个或更多个亚基。
非抗体区可包含一个或多个治疗剂。非抗体区可包含两个或更多个治疗剂。非抗体区可包含3、4、5、6、7个或更多个治疗剂。该治疗剂可以是不同的。该治疗剂可以是相同的。
非抗体区可包含一个或多个延伸物肽。非抗体区可包含两个或更多个延伸物肽。非抗体区可包含3、4、5、6、7个或更多个延伸物肽。该延伸物肽可以是不同的。该延伸物肽可以是相同的。在一些实施方案中，延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸序列。在一些实施方案中，延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，延伸物融合区包含两个延伸物肽，其中所述两个延伸物肽被配置为形成卷曲螺旋。在一些情况下，非抗体区不包含延伸物肽。延伸物肽可将治疗肽与抗体区直接连接。
非抗体区可包含一个或多个连接体。非抗体区可包含两个或更多个连接体。非抗体区可包含3、4、5、6、7个或更多个连接体。该连接体可以是不同的。该连接体可以是相同的。该连接体可将治疗剂与抗体区直接连接。该连接体可将治疗肽与延伸物肽连接。在一些情况下，非抗体区不包含连接体。在一些实施方案中，连接体肽不包含具有α螺旋或β链二级结构的氨基酸。
非抗体区可包含一个或多个蛋白酶切割位点。非抗体区可包含两个或更多个蛋白酶切割位点。该切割位点可以是不同的。该切割位点可以是相同的。该切割位点可将治疗剂与抗体区直接连接。该切割位点可将治疗剂与连接体肽连接。该切割位点可将治疗剂与延伸物肽连接。在一些实施方案中，该治疗剂包含蛋白酶切割位点。在一些情况下，非抗体区不包含蛋白酶切割位点。
延伸物融合区可包含一个或多个连结肽。连结肽可包括延伸物肽。连结肽可包括连接体肽。连结肽可包括蛋白酶切割位点。连结肽可包含被配置用于连接治疗剂与抗体区的氨基酸的任何序列。
非抗体区可以插入到抗体区中。非抗体区向抗体区中的插入可包括抗体区所基于或衍生自的抗体的一部分的去除或缺失。非抗体区可替代重链的至少一部分。非抗体区可替代轻链的至少一部分。非抗体区可替代V区的至少一部分。非抗体区可替代D区的至少一部分。非抗体区可替代J区的至少一部分。非抗体区可替代可变区的至少一部分。非抗体区可替代恒定区的至少一部分。非抗体区可替代互补决定区(CDR)的至少一部分。非抗体区可替代CDR1的至少一部分。非抗体区可替代CDR2的至少一部分。非抗体区可替代CDR3的至少一部分。非抗体区可替代抗体或其部分的至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多。例如，非抗体区可替代CDR的至少约50％。非抗体区可替代CDR的至少约70％。非抗体区可替代CDR的至少约80％。非抗体区可替代CDR的至少约90％。非抗体区可替代CDR的至少约95％。
非抗体区可包含(a)一个或多个延伸物肽；(b)一个或多个治疗剂；(c)任选地，一个或多个连接体；以及(d)任选地，一个或多个蛋白水解切割位点。在一些实施方案中，所述一个或多个延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸序列。在一些情况下，包含抗体区和非抗体区(其中非抗体区包含一个或多个延伸物肽，该延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸)的免疫球蛋白融合蛋白被称为卷曲免疫球蛋白融合蛋白。
非抗体区可包含(a)一个或多个连接体肽；(b)一个或多个治疗剂；以及(c)任选地，一个或多个蛋白水解切割位点。在一些实施方案中，所述一个或多个连接体肽不包含具有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列。在一些情况下，包含抗体区和非抗体区(其中一个或多个连接体肽不包含具有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列)的免疫球蛋白融合蛋白被称为直接免疫球蛋白融合蛋白。
在一些实施方案中，非抗体区是延伸物融合区。
延伸物融合区
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含一个或多个延伸物融合区。该免疫球蛋白融合蛋白可包含两个或更多个延伸物融合区。该免疫球蛋白融合蛋白可包含3、4、5、6、7、8、9、10或更多个延伸物融合区。
所述两个或更多个延伸物融合区可以附接至一个或多个抗体区。所述两个或更多个延伸物融合区可以附接至两个或更多个抗体区。所述两个或更多个延伸物融合区可以附接至一个或多个免疫球蛋白链。所述两个或更多个延伸物融合区可以附接至两个或更多个免疫球蛋白链。所述两个或更多个延伸物融合区可以附接至一个或多个抗体区内的一个或多个亚基。所述两个或更多个延伸物融合区可以附接至一个或多个抗体区内的两个或更多个亚基。
延伸物融合区可包含一个或多个延伸物肽。延伸物融合区可包含两个或更多个延伸物肽。延伸物融合区可包含3、4、5、6个或更多个延伸物肽。该延伸物肽可以是不同的。该延伸物肽可以是相同的。在一些实施方案中，该延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸序列。在一些实施方案中，该延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸。在一些实施方案中，延伸物融合区包含两个延伸物肽，其中所述两个延伸物肽被配置用于形成卷曲螺旋。在一些情况下，延伸物融合区不包含延伸物肽。在一些实施方案中，该延伸物肽直接将治疗剂与抗体区连接。
延伸物融合区可包含一个或多个治疗剂。延伸物融合区可包含两个或更多个治疗剂。延伸物融合区可包含3、4、5、6、7个或更多个治疗剂。该治疗剂可以是不同的。该治疗剂可以是相同的。
延伸物融合区可包含一个或多个连接体。延伸物融合区可包含两个或更多个连接体。延伸物融合区可包含3、4、5、6、7个或更多个连接体。该连接体可以是不同的。该连接体可以是相同的。该连接体可将治疗剂与延伸物肽连接。该连接体可直接将治疗剂与抗体区连接。在一些情况下，延伸物融合区不包含连接体。在一些实施方案中，连接体肽不包含具有α螺旋或β链二级结构的氨基酸。
延伸物融合区可包含一个或多个蛋白酶切割位点。延伸物融合区可包含两个或更多个蛋白酶切割位点。该切割位点可以是不同的。该切割位点可以是相同的。该切割位点可直接将治疗剂与抗体区连接。该切割位点可将治疗剂与延伸物肽连接。该切割位点可将治疗剂与连接体肽连接。在一些情况下，延伸物融合区不包含蛋白酶切割位点。
延伸物融合区可包含一个或多个连结肽。连结肽可包含延伸物肽。连结肽可包含连接体肽。连结肽可包含蛋白酶切割位点。连结肽可包含配置用于使治疗剂和抗体区连接的氨基酸的任何序列。
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。该延伸物融合区可附接至抗体区的N-末端、C-末端或N-末端和C-末端。该抗体区可直接附接至延伸物融合区。备选地，或附加地，该抗体区可间接附接至非抗体序列。延伸物融合区与抗体区的附接可包括共价附接。附接可包括延伸物融合区与抗体区的融合。附接可包括化学缀合。
备选地，或附加地，附接包括延伸物融合区向抗体区中的插入。延伸物融合区可插入到抗体区的重链中。延伸物融合区可插入到抗体区的轻链中。延伸物融合区可插入到抗体区的可变域中。延伸物融合区可插入到抗体区的恒定域中。延伸物融合区可插入到抗体区的互补决定区(CDR)中。
延伸物融合区可以替代抗体区所基于或衍生自的抗体的至少一部分。延伸物融合区可以替代抗体区可基于或衍生自的抗体的重链的至少一部分。延伸物融合区可以替代抗体区可基于或衍生自的抗体的轻链的至少一部分。延伸物融合区可以替代抗体区可基于或衍生自的抗体的可变域的至少一部分。延伸物融合区可以替代抗体区可基于或衍生自的抗体的可变域的至少一部分。延伸物融合区可以替代抗体区可基于或衍生自的抗体的互补决定区(CDR)的至少一部分。延伸物融合区可以替代抗体或其片段可基于或衍生自的抗体的CDR1、CDR2、CDR3或其组合的至少一部分。延伸物融合区可以替代抗体区可基于或衍生自的抗体的CDR3的至少一部分。
延伸物融合区可以替代抗体区所基于或衍生自的抗体的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9个或更多个氨基酸。延伸物融合区可以替代抗体区所基于或衍生自的抗体的至少约1个或多个氨基酸。延伸物融合区可以替代抗体区所基于或衍生自的抗体的至少约3个或更多个氨基酸。延伸物融合区可以替代抗体区所基于或衍生自的抗体的至少约5个或更多个氨基酸。
延伸物融合区可包含至少约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100个或更多个氨基酸。延伸物融合区可包含至少约150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900、1000、1500、2000个或更多个氨基酸。延伸物融合区可包含至少约10个或更多个氨基酸。延伸物融合区可包含至少约25个或更多个氨基酸。延伸物融合区可包含至少约50个或更多个氨基酸。延伸物融合区可包含至少约75个或更多个氨基酸。延伸物融合区可包含至少约100个或更多个氨基酸。
延伸物融合区可包含少于约2000、1500、1000、900、800、700、600或500个氨基酸。延伸物融合区可包含少于约450、400、350、300、275、250、225、200、175、150、125、100、90、80、70、60或50个氨基酸。延伸物融合区可包含少于约400个氨基酸。延伸物融合区可包含少于约300个氨基酸。延伸物融合区可包含少于约250个氨基酸。
延伸物融合区可包含约10到约1000个氨基酸。延伸物融合区可包含约10到约500个氨基酸。延伸物融合区可包含约10到约400个氨基酸。延伸物融合区可包含约10到约300个氨基酸。延伸物融合区可包含约10到约250个氨基酸。延伸物融合区可包含约20到约500个氨基酸。延伸物融合区可包含约20到约400个氨基酸。延伸物融合区可包含约20到约300个氨基酸。
延伸物融合区可包含(a)一个或多个延伸物肽；(b)一个或多个治疗剂；(c)任选地，一个或多个连接体；以及(d)任选地，一个或多个蛋白水解切割位点。示例性的延伸物融合区在图2A-G中示出。例如，如图2A所示，延伸物融合区包含延伸物肽(210)和治疗剂(220)。如图2B所示，延伸物融合区包含两个延伸物肽(210，230)和治疗剂(220)。如图2C所示，延伸物融合区包含由连接体(240)连接的延伸物肽(210)和治疗剂(220)。如图2D所示，延伸物融合区包含延伸物肽(210)，和两侧是两个连接体(240，250)的治疗剂(220)。如图2E所示，延伸物融合区包括延伸物肽(210)、治疗剂(220)和蛋白水解切割位点(260)，其中蛋白水解切割位点(260)插入延伸物肽和治疗剂之间。如图2F所示，延伸物融合区包含两个延伸物肽(210，230)、两个连接体(240，250)和治疗剂(220)。如图2G所示，延伸物融合区包含两个延伸物肽(210，230)、两个连接体(240，250)、蛋白水解切割位点(260)和治疗剂(220)。
延伸物融合区可包含(a)第一延伸物肽，其中第一延伸物肽包含(i)包含α螺旋二级结构的氨基酸序列；和(ii)7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸；以及(b)治疗剂。延伸物融合区还可包含一个或多个包含至少一个二级结构的附加延伸物肽。延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。延伸物融合区可包含一个或多个蛋白水解切割位点。
延伸物融合区可包含(a)第一延伸物肽，其中第一延伸物肽包含(i)包含α螺旋二级结构的氨基酸序列；和(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)第一治疗剂。延伸物融合区还可包含一个或多个包含至少一个二级结构的附加延伸物肽。延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。延伸物融合区可包含一个或多个蛋白水解切割位点。
延伸物融合区可包含(a)一个或多个延伸物肽；(b)一个或多个治疗剂；(c)任选地，一个或多个连接体；以及(d)任选地，一个或多个蛋白水解切割位点。在一些实施方案中，所述一个或多个延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸序列。在一些情况下，包含抗体区和延伸物融合区(其中该延伸物融合区包含一个或多个延伸物肽，该延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸)的免疫球蛋白融合蛋白被称为卷曲免疫球蛋白融合蛋白。
延伸物融合区可包含(a)一个或多个连接体肽；(b)一个或多个治疗剂；以及(c)任选地，一个或多个蛋白水解切割位点。在一些实施方案中，所述一个或多个连接体肽不包含具有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列。在一些情况下，包含抗体区和延伸物融合区(其中一个或多个连接体肽不包含具有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列)的免疫球蛋白融合蛋白被称为直接免疫球蛋白融合蛋白。
在一些实施方案中，延伸物融合区不包含基于或衍生自抗体的氨基酸。在一些情况下，延伸物融合区是非抗体区。
延伸物肽
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含一个或多个延伸物肽。本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含两个或更多个延伸物肽。所述一个或多个延伸物肽可附接至治疗剂的N-末端、C-末端或N-末端和C-末端。所述一个或多个延伸物肽可附接至治疗剂的每一末端。所述一个或多个延伸物肽可附接至治疗剂的不同末端。
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的延伸物融合区可包含一个或多个延伸物肽。延伸物融合区可包含2个或更多个延伸物肽。延伸物融合区可包含3个或更多个延伸物肽。延伸物融合区可包含4个或更多个延伸物肽。延伸物融合区可包含5个或更多个延伸物肽。延伸物融合区可包含第一延伸物肽和第二延伸物肽。
延伸物肽可包含一个或多个二级结构。延伸物肽可包含两个或更多个二级结构。延伸物肽可包含3、4、5、6、7个或更多个二级结构。所述两个或更多个延伸物肽可包含一个或多个二级结构。所述两个或更多个延伸物肽可包含两个或更多个二级结构。所述两个或更多个延伸物肽可包含3、4、5、6、7个或更多个二级结构。每个延伸物肽可包含至少一个二级结构。所述两个或更多个延伸物肽的二级结构可以是相同的。或者，所述两个或更多个延伸物肽的二级结构可以是不同的。
备选地，或附加地，所述一个或多个二级结构可包含一个或多个α螺旋。延伸物肽可包含两个或更多个α螺旋。例如，第一延伸物肽包含第一α螺旋而第二延伸物肽包含第二α螺旋。延伸物肽可包含3、4、5、6、7个或更多个α螺旋。所述两个或更多个α螺旋可以是反向平行的。所述两个或更多个α螺旋可以是平行的。所述两个或更多个α螺旋可形成一个或多个卷曲螺旋结构域。
所述一个或多个延伸物肽可包含至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸。所述一个或多个延伸物肽可包含至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或更多个氨基酸。所述一个或多个延伸物肽可包含至少约35、40、45、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸。
所述一个或多个延伸物肽可包含少于约100个氨基酸。所述一个或多个延伸物肽可包含少于约95、90、85、80、75、70、65、60、55或50个氨基酸。所述一个或多个延伸物肽可包含少于约90个氨基酸。所述一个或多个延伸物肽可包含少于约80个氨基酸。所述一个或多个延伸物肽可包含少于约70个氨基酸。
所述两个或更多个延伸物肽可以为相同的长度。例如，第一延伸物肽和第二延伸物肽为相同的长度。或者，所述两个或更多个延伸物肽为不同的长度。在另一个实例中，第一延伸物肽和第二延伸物肽为不同的长度。所述两个或更多个延伸物肽的长度可以相差至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个氨基酸。所述两个或更多个延伸物肽的长度可以相差至少约1个或更多个氨基酸。所述两个或更多个延伸物肽的长度可以相差至少约3个或更多个氨基酸。所述两个或更多个延伸物肽的长度可以相差至少约5个或更多个氨基酸。
延伸物肽可以与抗体区相邻。延伸物肽可附接至抗体区的N-末端、C-末端或N-末端和C-末端。延伸物肽可以与非抗体区相邻。延伸物肽可附接至非抗体区的N-末端、C-末端或N-末端和C-末端。延伸物肽可以与治疗剂相邻。延伸物肽可附接至治疗剂的N-末端、C-末端或N-末端和C-末端。延伸物肽可以与连接体相邻。延伸物肽可附接至连接体的N-末端、C-末端或N-末端和C-末端。延伸物肽可以与蛋白水解切割位点相邻。延伸物肽可附接至蛋白水解切割位点的N-末端、C-末端或N-末端和C-末端。
延伸物肽可将治疗剂与抗体区连接。延伸物肽可以在抗体区与治疗剂、连接体和/或蛋白水解切割位点之间。延伸物肽可以在两个或更多个抗体区、治疗剂、连接体、蛋白水解切割位点或其组合之间。延伸物肽可以在抗体区、治疗剂、连接体、蛋白水解切割位点或其组合的N-末端。延伸物肽可以在抗体区、治疗剂、连接体、蛋白水解切割位点或其组合的C-末端。
延伸物肽可包含基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列。延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或更高同源的氨基酸序列。延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约70％同源的氨基酸序列。延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约80％同源的氨基酸序列。延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约85％同源的氨基酸序列。
第一延伸物肽可包含基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列。第一延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。第一延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或更高同源的氨基酸序列。第一延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约75％同源的氨基酸序列。第一延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ IDNO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约80％同源的氨基酸序列。
第一延伸物肽可包含基于或衍生自SEQ ID NO:144-153中任何一个的氨基酸序列。第一延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-153中任何一个的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。第一延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-153中任何一个的氨基酸序列至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或更高同源的氨基酸序列。第一延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-153中任何一个的氨基酸序列至少约75％同源的氨基酸序列。第一延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ IDNO:144-153中任何一个的氨基酸序列至少约80％同源的氨基酸序列。
第二延伸物肽可包含基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列。第二延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。第二延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或更高同源的氨基酸序列。第二延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约70％同源的氨基酸序列。第二延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ IDNO:144-175中任何一个的氨基酸序列至少约80％同源的氨基酸序列。
第二延伸物肽可包含基于或衍生自SEQ ID NO:154-163中任何一个的氨基酸序列。第二延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:154-163中任何一个的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列。第二延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:154-163中任何一个的氨基酸序列至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或更高同源的氨基酸序列。第二延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ ID NO:154-163中任何一个的氨基酸序列至少约70％同源的氨基酸序列。第二延伸物肽可包含与基于或衍生自SEQ IDNO:154-163中任何一个的氨基酸序列至少约80％同源的氨基酸序列。
本文公开的延伸物肽可以基于或衍生自CDR3。该CDR3可以是超长CDR3。本文中可互换使用的“超长CDR3”或“超长CDR3序列”可包含非衍生自人抗体序列的CDR3。超长CDR3的长度可以为35个氨基酸或更长，例如，40个氨基酸或更长，45个氨基酸或更长，50个氨基酸或更长，55个氨基酸或更长，或者60个氨基酸或更长。超长CDR3可以是重链CDR3(CDR-H3或CDRH3)。超长CDR3可包含衍生自或基于反刍动物(例如，牛)序列的序列。超长CDR3可包含一个或多个半胱氨酸基序。超长CDR3可包含至少3个或更多个半胱氨酸残基，例如，4个或更多个半胱氨酸残基，6个或更多个半胱氨酸残基，或8个或更多个半胱氨酸残基。其他关于超长CDR3序列的详情可见于Saini SS等人(Exceptionally long CDR3H region withmultiple cysteine residues in functional bovine IgM antibodies,EuropeanJournal of Immunology,1999)、Zhang Y等人(Functional antibody CDR3 fusionproteins with enhanced pharmacological properties,Angew Chem Int Ed Engl,2013)、Wang F等人(Reshaping antibody diversity,Cell,2013)以及美国专利号6,740,747。
延伸物肽可包含7个或更少的基于或衍生自CDR的氨基酸。延伸物肽可包含6、5、4、3、2、1个或更少的基于或衍生自CDR的氨基酸。该氨基酸可以是连续的。该氨基酸可以是不连续的。该CDR可以是CDR1。该CDR可以是CDR2。该CDR可以是CDR3。该CDR可以是超长CDR。
延伸物肽可以基于或衍生自CDR，其中该CDR不是超长CDR3。延伸物肽可包含10个或更少的基于或衍生自CDR3的氨基酸。延伸物肽可包含9、8、7、6、5、4、3、2、1个或更少的基于或衍生自CDR3的氨基酸。延伸物肽可包含8个或更少的基于或衍生自CDR3的氨基酸。延伸物肽可包含7个或更少的基于或衍生自CDR3的氨基酸。延伸物肽可包含5个或更少的基于或衍生自CDR3的氨基酸。
延伸物肽可包含与包含超长CDR3的氨基酸序列低于约50％相同的氨基酸序列。延伸物肽可包含与包含超长CDR3的氨基酸序列低于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、25％或10％相同的氨基酸序列。延伸物肽可包含与包含超长CDR3的氨基酸序列低于约30％相同的氨基酸序列。延伸物肽可包含与包含超长CDR3的氨基酸序列低于约25％相同的氨基酸序列。延伸物肽可包含与包含超长CDR3的氨基酸序列低于约20％相同的氨基酸序列。
延伸物肽可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个或更多个附接至或插入延伸物肽的基于超长CDR3的部分的氨基酸。延伸物肽可包含1个或更多个附接至或插入延伸物肽的基于超长CDR3的部分的氨基酸。延伸物肽可包含3个或更多个附接至或插入延伸物肽的基于超长CDR3的部分的氨基酸。延伸物肽可包含5个或更多个附接至或插入延伸物肽的基于超长CDR3的部分的氨基酸。附接至或插入超长CDR3的两个或更多个氨基酸可以是连续的。备选地，或附加地，附接至或插入超长CDR3的两个或更多个氨基酸是不连续的。
延伸物肽可包含30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10个或更少的附接至或插入延伸物肽的基于超长CDR3的部分的氨基酸。延伸物肽可包含20个或更少的附接至或插入延伸物肽的基于超长CDR3的部分的氨基酸。延伸物肽可包含15个或更少的附接至或插入延伸物肽的基于超长CDR3的部分的氨基酸。延伸物肽可包含10个或更少的附接至或插入延伸物肽的基于超长CDR3的部分的氨基酸。附接至或插入超长CDR3的氨基酸可以是连续的。备选地，或附加地，附接至或插入超长CDR3的氨基酸是不连续的。
延伸物肽可包含序列1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQ ID NO:144)。在一些实施方案中，第一延伸物肽包含序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQ ID NO:144)。在一些情况下，第一延伸物肽位于治疗剂的氨基末端与抗体区之间。X1-X14可以独立地选自带正电荷的氨基酸或疏水氨基酸。X1-X14可以独立地选自：丙氨酸(A)、天冬酰胺(N)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、缬氨酸(V)、谷氨酰胺(Q)、谷氨酸(E)和赖氨酸(K)。X1-X14可以独立地选自：丙氨酸(A)、亮氨酸(L)和赖氨酸(K)。丙氨酸可构成总氨基酸组成的至少约30％。丙氨酸可构成总氨基酸组成的少于约70％。亮氨酸可构成总氨基酸组成的至少约20％。亮氨酸可构成总氨基酸组成的少于约50％。赖氨酸可构成总氨基酸组成的至少约20％。赖氨酸可构成总氨基酸组成的少于约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约60％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约70％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的少于约90％。
延伸物肽可包含序列(X1X2X3X4X5X6X7)n(SEQ ID NO.145)。在一些实施方案中，第一延伸物肽包含序列(X1X2X3X4X5X6X7)n(SEQ ID NO.145)。在一些情况下，第一延伸物肽位于治疗剂的氨基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。X1-X7可以独立地选自带正电荷的氨基酸或疏水氨基酸。X1-X7可以独立地选自：丙氨酸(A)、天冬酰胺(N)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、缬氨酸(V)、谷氨酰胺(Q)、谷氨酸(E)和赖氨酸(K)。丙氨酸(A)可构成总氨基酸组成的至少约30％。丙氨酸(A)可构成总氨基酸组成的少于约70％。亮氨酸可构成总氨基酸组成的至少约20％。亮氨酸可构成总氨基酸组成的少于约50％。赖氨酸可构成总氨基酸组成的至少约20％。赖氨酸可构成总氨基酸组成的少于约50％。天冬酰胺可构成总氨基酸组成的约50％。异亮氨酸可构成总氨基酸组成的约50％。缬氨酸可构成总氨基酸组成的约50％。谷氨酰胺可构成总氨基酸组成的约50％。谷氨酸可构成总氨基酸组成的约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约60％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约70％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的少于约90％。
延伸物肽可包含序列XaXbXcXd(X1X2X3X4X5X6X7)n(SEQ ID NO:146)。在一些实施方案中，第一延伸物肽包含序列XaXbXcXd(X1X2X3X4X5X6X7)n(SEQ ID NO:146)。在一些情况下，第一延伸物肽位于治疗剂的氨基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。Xa、Xb和Xd可独立地选自疏水氨基酸。Xc可以是极性的、不带电荷的氨基酸。Xa、Xb和Xd可以是相同的氨基酸。Xa、Xb和Xd可以是不同的氨基酸。X1-X7可以独立地选自带正电荷的氨基酸或疏水氨基酸。X1-X7可以独立地选自：丙氨酸(A)、天冬酰胺(N)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、缬氨酸(V)、谷氨酰胺(Q)、谷氨酸(E)和赖氨酸(K)。X1-X7可以独立地选自：A、L和K。A可构成总氨基酸组成的至少约30％。A可构成总氨基酸组成的少于约70％。L可构成总氨基酸组成的至少约20％。L可构成总氨基酸组成的少于约50％。K可构成总氨基酸组成的至少约20％。K可构成总氨基酸组成的少于约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约60％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约70％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的少于约90％。在一些实施方案中，Xa是甘氨酸(G)。在一些实施方案中，Xb是G。在一些实施方案中，Xd是甘氨酸。Xa、Xb和Xd可以是甘氨酸(G)。Xc可以是丝氨酸(S)。
延伸物肽可包含序列XaXbXcXd(AKLAALK)n(SEQ ID NO.147)。在一些实施方案中，第一延伸物肽包含序列XaXbXcXd(AKLAALK)n(SEQ ID NO.147)。在一些情况下，第一延伸物肽位于治疗剂的氨基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。Xa、Xb和Xd可独立地选自疏水氨基酸。Xc可以是极性的、不带电荷的氨基酸。Xa、Xb和Xd可以是相同的氨基酸。Xa、Xb和Xd可以是不同的氨基酸。在一些实施方案中，Xa是甘氨酸(G)。在一些实施方案中，Xb是甘氨酸。在一些实施方案中，Xd是甘氨酸。Xa、Xb和Xd可以是甘氨酸(G)。Xc可以是丝氨酸(S)。
延伸物肽可包含序列(AKLAALK)n(SEQ ID NO.148)。在一些实施方案中，第一延伸物肽包含序列(AKLAALK)n(SEQ ID NO.148)。在一些情况下，第一延伸物肽位于治疗剂的氨基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。
延伸物肽可包含序列GGSG(AKLAALK)n(SEQ ID NO:149)。在一些实施方案中，第一延伸物肽包含序列GGSG(AKLAALK)n(SEQ ID NO:149)。在一些情况下，第一延伸物肽位于治疗剂的氨基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。
延伸物肽可包含序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQ ID NO:154)；其中X1-X14独立地选自带负电荷的氨基酸或疏水氨基酸。在一些实施方案中，第二延伸物肽包含序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQ ID NO:154)；其中X1-X14独立地选自带负电荷的氨基酸或疏水氨基酸。在一些情况下，第二延伸物肽位于治疗剂的羧基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。在一些实施方案中，X1-X14独立地选自：丙氨酸(A)、亮氨酸(L)和谷氨酸(E)。在一个实施方案中，A构成总氨基酸组成的至少约30％。在一个实施方案中，A构成总氨基酸组成的少于约70％。在一个实施方案中，L构成总氨基酸组成的至少约20％。在一个实施方案中，L构成总氨基酸组成的少于约50％。在一个实施方案中，E构成总氨基酸组成的至少约20％。在一个实施方案中，E构成总氨基酸组成的少于约50％。在一个实施方案中，疏水氨基酸构成总氨基酸组成的至少约50％。在一个实施方案中，疏水氨基酸构成总氨基酸组成的至少约60％。在一个实施方案中，疏水氨基酸构成总氨基酸组成的至少约70％。在一个实施方案中，疏水氨基酸构成总氨基酸组成的少于约90％。
第二延伸物肽可包含序列(X1X2X3X4X5X6X7)n(SEQ ID NO:155)。在一些实施方案中，第二延伸物肽包含序列(X1X2X3X4X5X6X7)n(SEQ ID NO:155)。在一些情况下，第二延伸物肽位于治疗剂的羧基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。X1-X7可以独立地选自带正电荷的氨基酸或疏水氨基酸。X1-X7可以独立地选自：丙氨酸(A)、天冬酰胺(N)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、缬氨酸(V)、谷氨酰胺(Q)、谷氨酸(E)和赖氨酸(K)。丙氨酸(A)可构成总氨基酸组成的至少约30％。丙氨酸(A)可构成总氨基酸组成的少于约70％。亮氨酸可构成总氨基酸组成的至少约20％。亮氨酸可构成总氨基酸组成的少于约50％。赖氨酸可构成总氨基酸组成的至少约20％。赖氨酸可构成总氨基酸组成的少于约50％。天冬酰胺可构成总氨基酸组成的约50％。异亮氨酸可构成总氨基酸组成的约50％。缬氨酸可构成总氨基酸组成的约50％。谷氨酰胺可构成总氨基酸组成的约50％。谷氨酸可构成总氨基酸组成的约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约60％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约70％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的少于约90％。
延伸物肽可包含序列(X1X2X3X4X5X6X7)n XaXbXcXd(SEQ ID NO:156)。在一些实施方案中，第二延伸物肽包含序列(X1X2X3X4X5X6X7)n XaXbXcXd(SEQ ID NO:156)。在一些情况下，第二延伸物肽位于治疗剂的羧基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。X1-X7可以独立地选自带正电荷的氨基酸或疏水氨基酸。X1-X7可以独立地选自：丙氨酸(A)、亮氨酸(L)和赖氨酸(K)。A可构成总氨基酸组成的至少约30％。A可构成总氨基酸组成的少于约70％。L可构成总氨基酸组成的至少约20％。L可构成总氨基酸组成的少于约50％。K可构成总氨基酸组成的至少约20％。K可构成总氨基酸组成的少于约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约50％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约60％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的至少约70％。疏水氨基酸可构成总氨基酸组成的少于约90％。Xa、Xb和Xd可独立地选自疏水氨基酸。Xc可以是极性的、不带电荷的氨基酸。Xa、Xb和Xd可以是相同的氨基酸。Xa、Xb和Xd可以是不同的氨基酸。在一些实施方案中，Xa是甘氨酸(G)。在一些实施方案中，Xb是甘氨酸。在一些实施方案中，Xd是甘氨酸。Xa、Xb和Xd可以是甘氨酸(G)。Xc可以是丝氨酸(S)。
延伸物肽可包含序列(ELAALEA)n XaXbXcXd(SEQ ID NO:157)。在一些实施方案中，第二延伸物肽包含序列(ELAALEA)n XaXbXcXd(SEQ ID NO:157)。在一些情况下，第二延伸物肽位于治疗剂的羧基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。Xa、Xb和Xd可独立地选自疏水氨基酸。Xc可以是极性的、不带电荷的氨基酸。Xa、Xb和Xd可以是相同的氨基酸。Xa、Xb和Xd可以是不同的氨基酸。在一些实施方案中，Xa是甘氨酸(G)。在一些实施方案中，Xb是甘氨酸。在一些实施方案中，Xd是甘氨酸。Xa、Xb和Xd可以是甘氨酸(G)。Xc可以是丝氨酸(S)。
延伸物肽可包含序列(ELAALEA)n(SEQ ID NO:158)。在一些实施方案中，第二延伸物肽包含序列(ELAALEA)n(SEQ ID NO:158)。在一些情况下，第二延伸物肽位于治疗剂的羧基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。
延伸物肽可包含序列(ELAALEA)n GGSG(SEQ ID NO:159)。在一些实施方案中，第二延伸物肽包含序列(ELAALEA)n GGSG(SEQ ID NO:159)。在一些情况下，第二延伸物肽位于治疗剂的羧基末端与抗体区之间。在一些实施方案中，n在约1到约10之间。在一些实施方案中，n在约1到约5之间。在一些实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。n可以为约1到约3。
所述免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)包含基于或衍生自SEQ ID NO:151的氨基酸序列的第一延伸物肽；和(b)包含基于或衍生自SEQ ID NO:161的氨基酸序列的第二延伸物肽。所述免疫球蛋白融合蛋白可包含(a)包含与SEQ ID NO:151的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列的第一延伸物肽；和(b)与SEQ ID NO:161的氨基酸序列至少约50％同源的氨基酸序列的第二延伸物肽。第一延伸物肽可包含与SEQ ID NO:151的氨基酸序列至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高同源的氨基酸序列。第二延伸物肽可包含与SEQ ID NO:161的氨基酸序列至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高同源的氨基酸序列。第一延伸物肽可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含3、4、5、6、7个或更多个基于或衍生自SEQ ID NO:151氨基酸序列的氨基酸。第一延伸物肽可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含5个或更多个基于或衍生自SEQ ID NO:151氨基酸序列的氨基酸。第二延伸物肽可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含3、4、5、6、7个或更多个基于或衍生自SEQ ID NO:161氨基酸序列的氨基酸。第二延伸物肽可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含5个或更多个基于或衍生自SEQ ID NO:161氨基酸序列的氨基酸。
脂肪族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约20％。脂肪族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约22％、25％、27％、30％、32％、35％、37％、40％、42％、45％或更多。脂肪族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约22％。脂肪族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约27％。
脂肪族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约50％。脂肪族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约47％、45％、43％、40％、38％、35％、33％或30％。
脂肪族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约20％到约45％。脂肪族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约23％到约45％。脂肪族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约23％到约40％。
芳香族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约20％。芳香族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％或10％。芳香族氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的0％到约20％。
非极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约30％。非极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。非极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约32％。
非极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约80％。非极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约77％、75％、72％、70％、69％或68％。
非极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约35％到约80％。非极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约38％到约80％。非极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约38％到约75％。非极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约35％到约70％。
极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约20％。极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％或更多。极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的至少约23％。
极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约80％。极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约77％、75％、72％、70％、69％或68％。极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约77％。极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约75％。极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的少于约72％。
极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约25％到约70％。极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约27％到约70％。极性氨基酸可构成延伸物肽的总氨基酸的约30％到约70％。
或者，本文公开的免疫球蛋白融合蛋白不包含延伸物肽。
治疗剂
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含一个或多个治疗剂。该治疗剂可以是肽。该治疗剂可以是小分子。本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含两个或更多个治疗剂。本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可包含3、4、5、6个或更多个治疗剂。所述两个或更多个治疗剂可以是相同的。所述两个或更多个治疗剂可以是不同的。
治疗剂可包含任何二级结构，例如α螺旋或β链，或者可不包含规则的二级结构。治疗剂可包含具有一个或多个修饰的氨基酸，该修饰包括但不限于：豆蔻酰化、棕榈酰化、异戊二烯化、糖基磷脂酰肌醇化(glypiation)、脂化、酰化、乙酰化、烷基化、甲基化、糖基化、丙二酰化、羟基化、碘化、核苷酸加成、氧化、磷酸化、腺苷酰化、丙酰化、琥珀酰化、硫酸化、硒化、生物素化、聚乙二醇化、脱亚胺化、脱酰胺化、eliminylation和氨甲酰化。治疗剂可包含一个或多个与一种或多种小分子(例如，药物)缀合的氨基酸。在一些实施方案中，治疗剂包含一个或多个非天然氨基酸。在一些实施方案中，治疗剂包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50个或更多个非天然氨基酸。在一些实施方案中，治疗剂包含一个或多个氨基酸取代。在一些实施方案中，治疗剂包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50个或更多个氨基酸取代。
治疗剂可以插入到免疫球蛋白区中。治疗剂向免疫球蛋白区中的插入可包括免疫球蛋白区所基于或衍生自的免疫球蛋白的一部分的去除或缺失。治疗剂可替代重链的至少一部分。治疗剂可替代轻链的至少一部分。治疗剂可替代可变域的至少一部分。治疗剂可替代恒定域的至少一部分。治疗剂可替代互补决定区(CDR)的至少一部分。治疗剂可替代CDR1的至少一部分。治疗剂可替代CDR2的至少一部分。治疗剂可替代CDR3的至少一部分。治疗剂可替代免疫球蛋白或其部分的至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多。
所述一个或多个治疗剂可以基于或衍生自蛋白质。该蛋白质可以是生长因子、细胞因子、激素或毒素。该生长因子可以是GCSF、GMCSF、GDF11或FGF21。该GCSF可以是牛GCSF。该GCSF可以是人GCSF。该GMCSF可以是牛GMCSF或人GMCSF。该FGF21可以是牛FGF21。该FGF21可以是人FGF21。该蛋白质可以是弹力素。该蛋白质可以是肽酶抑制剂。该蛋白酶可以是皮肤衍生的抗白细胞蛋白酶(SKALP)。
该细胞因子可以是干扰素或白介素。该细胞因子可以是基质细胞衍生的因子1(SDF-1)。该干扰素可以是干扰素-β。该干扰素可以是干扰素-α。该白介素可以是白介素11(IL-11)。该白介素可以是白介素8(IL-8)或白介素21(IL-21)。
该激素可以是毒蜥外泌肽-4、GLP-1、松弛素、泌酸调节肽、hLeptin(人瘦素)、betatrophin、牛生长激素(bGH)、人生长激素(hGH)、促红细胞生成素(EPO)或甲状旁腺素。该激素可以是促生长素抑制素。该甲状旁腺素可以是人甲状旁腺素。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。
该毒素可以是Moka1、VM24或Mamba1。该毒素可以是齐考诺肽或氯毒素。在一个实施方案中，该毒素是mu-SLPTX-Ssm6a(Ssam6)。
该蛋白质可以是血管生成素样3(ANGPTL3)。该血管生成素样3可以是人血管生成素样3。
治疗剂可以是胰高血糖素样肽2(GLP2)。
在一些实施方案中，治疗剂是胰高血糖素类似物。
在一些实施方案中，治疗剂是双激动剂。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域被配置用于治疗糖尿病和/或糖尿病相关的状况。在一些实施方案中，治疗剂的2、3、4、5个或更多个区域被配置用于治疗糖尿病和/或糖尿病相关的状况。糖尿病可包括I型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病和前驱糖尿病。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域被配置用于治疗肥胖症和/或肥胖症相关的状况。在一些实施方案中，治疗剂的2、3、4、5个或更多个区域被配置用于治疗肥胖症和/或肥胖症相关的状况。状况可包括并发症和疾病。糖尿病相关的状况的实例包括但不限于糖尿病性视网膜病、糖尿病性肾病、糖尿病性心脏病、糖尿病性足病、糖尿病性神经病、大血管病变、糖尿病性心肌病、感染以及糖尿病酮症酸中毒。糖尿病性神经病可包括但不限于对称性多神经病、自主神经病变、神经根病、颅神经病和单神经病。肥胖症相关的状况包括但不限于心脏病、卒中、高血压、糖尿病、骨关节炎、痛风、睡眠呼吸暂停、哮喘、胆囊疾病、胆结石、异常血脂(例如，LDL和HDL胆固醇水平异常)、肥胖性低通气综合征、生殖问题、肝脂肪变性和心理健康状况。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域是胰高血糖素样蛋白-1(GLP-1)受体激动剂或其制剂。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域是肠降血糖素模拟物。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自毒蜥外泌肽-4、艾塞那肽或其合成物的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域是胰高血糖素类似物或其制剂。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自胰岛素的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域是双特异性的。在一些实施方案中，治疗剂对GLP-1受体和胰高血糖素受体具有特异性。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自泌酸调节肽的氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域被配置用于治疗短肠综合征和/或短肠综合征相关的状况。在一些实施方案中，治疗剂的2、3、4、5个或更多个区域被配置用于治疗短肠综合征和/或短肠综合征相关的状况。短肠综合征相关的状况可包括但不限于小肠中细菌过度生长、代谢性酸中毒、胆结石、肾结石、营养不良、骨软化症、肠功能衰竭和体重减轻。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域被配置用于治疗炎性肠病和/或炎性肠病相关的状况。在一些实施方案中，治疗剂的2、3、4、5个或更多个区域被配置用于治疗炎性肠病和/或炎性肠病相关的状况。炎性肠病和/或炎性肠病相关的状况包括但不限于溃疡性结肠炎、克罗恩病、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、改道性结肠炎、白塞病(Behcet's disease)、不确定性结肠炎、贫血、关节炎、坏疽性脓皮病、原发性硬化性胆管炎、功能正常甲状腺病综合征；和腹痛、呕吐、腹泻、直肠出血、内部绞痛或肌肉痉挛，以及患有炎性肠病的个体的体重减轻。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自胰高血糖素、胰高血糖素类似物、胰高血糖素样肽和/或胰高血糖素样肽类似物的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自胰高血糖素样肽-2(GLP2)的氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域被配置用于治疗自身免疫病和/或自身免疫病相关的状况。在一些实施方案中，治疗剂的2、3、4、5个或更多个区域被配置用于治疗自身免疫病和/或自身免疫病相关的状况。自身免疫病和/或自身免疫病相关的状况可包括但不限于急性播散性脑脊髓炎、斑秃、抗磷脂综合征、自身免疫性心肌病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病、自身免疫性淋巴增生综合征、自身免疫性周围神经病、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性多内分泌腺病综合征、自身免疫性孕酮皮炎、自身免疫性血小板减少性紫癜、自身免疫性荨麻疹、自身免疫性葡萄膜炎、白塞病、乳糜泻、冷凝集素病、克罗恩病、皮肌炎、1型糖尿病、嗜酸性筋膜炎、胃肠类天疱疮、古德帕斯彻综合征(Goodpasture’s syndrome)、格雷夫斯病、格林-巴利综合征(Guillain-Barresyndrome)、桥本氏脑病、桥本氏甲状腺炎(Hasmimoto’s thyroiditis)、特发性血小板减少性紫癜、红斑狼疮、米勒费雪综合征、混合性结缔组织病、多发性硬化、重症肌无力、发作性睡病、寻常天疱疮、恶性贫血、多肌炎、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、复发性多软骨炎、类风湿性关节炎、风湿热、舍格伦综合征、颞动脉炎、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎、未分化结缔组织病、血管炎和韦格纳肉芽肿病。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自与钾通道结合的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自Mokatoxin-1(Moka)的氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域被配置用于治疗疼痛。在一些实施方案中，治疗剂的2、3、4、5个或更多个区域被配置用于治疗疼痛。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自作为神经毒素的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自神经毒素mu-SLPTX-Ssm6a(Ssam6)的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自mambalign-1的氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域被配置用于治疗心力衰竭和/或纤维化。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域被配置用于治疗心力衰竭和/或纤维化相关的状况。在一些实施方案中，治疗剂的2、3、4、5个或更多个区域被配置用于治疗心力衰竭和/或纤维化。在一些实施方案中，治疗剂的2、3、4、5个或更多个区域被配置用于治疗心力衰竭和/或纤维化相关的状况。心力衰竭相关的状况可包括冠心病、高血压、糖尿病、心肌病、心脏瓣膜疾病、心律不齐、先天性心脏缺损、阻塞性睡眠呼吸暂停、心肌炎、甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退、肺气肿、血色素沉着症和淀粉样变性。心力衰竭可以是左侧心力衰竭、右侧心力衰竭、收缩性心力衰竭和舒张性心力衰竭。纤维化可以包括但不限于肺纤维化、特发性肺纤维化、囊性纤维化、硬化、心内膜心肌纤维化、心肌梗塞、心房纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、进行性块状纤维化、肾源性系统纤维化、克罗恩病、瘢痕疙瘩、硬皮病/系统性硬化症、关节纤维化、佩罗尼氏病、杜普伊特伦挛缩以及粘连性囊炎。
在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自属于胰岛素超家族的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，治疗剂的一个或多个区域包含基于或衍生自胰岛素的氨基酸序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，治疗剂的氨基酸全部或部分地基于或衍生自SEQ ID NO:227-267中的任何一个。治疗剂可包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个至少约50％同源的氨基酸序列。治疗剂可包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的氨基酸序列。治疗剂可包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个至少约70％同源的氨基酸序列。治疗剂可包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个至少约80％同源的氨基酸序列。治疗剂可包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个至少约50％相同的氨基酸序列。治疗剂可包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。治疗剂可包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个至少约70％相同的氨基酸序列。治疗剂可包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个至少约80％相同的氨基酸序列。治疗剂可包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个100％相同的氨基酸序列序列。在一些实施方案中，治疗剂包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，治疗剂包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸序列至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，治疗剂包含与SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸序列100％相同的氨基酸序列。
治疗剂可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个基于或衍生自SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸。治疗剂可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、450、500个或更多个基于或衍生自SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸。治疗剂可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含10个或更多个基于或衍生自SEQID NO:227-267中任何一个的氨基酸。治疗剂可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含50个或更多个基于或衍生自SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸。治疗剂可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含100个或更多个基于或衍生自SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸。治疗剂可包含一种氨基酸序列，该氨基酸序列包含200个或更多个基于或衍生自SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸。该氨基酸可以是连续的。备选地，或附加地，该氨基酸是不连续的。在一些实施方案中，治疗剂可包含衍生自SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸和非衍生自SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸。在一些实施方案中，治疗剂可包含衍生自SEQ ID NO:227-267中的一个或多个的氨基酸以及非衍生自SEQ ID NO:227-267中任何一个的氨基酸。在一些实施方案中，治疗剂包含衍生自SEQ ID NO:227-267中的1、2、3或4个的氨基酸。
治疗剂可由基于或衍生自SEQ ID NO:186-226中任何一个的核酸序列编码。治疗剂可由可与SEQ ID NO:186-226中任何一个至少约50％同源的核酸序列编码。治疗剂可以由可与SEQ ID NO:186-226中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高同源的核酸序列编码。治疗剂可由可与SEQ ID NO:186-226中任何一个至少约70％同源的核酸序列编码。治疗剂可由可与SEQ ID NO:186-226中任何一个至少约80％同源的核酸序列编码。
治疗剂可包含蛋白酶切割位点。蛋白酶切割位点可插入到治疗剂之内。在一些实施方案中，治疗剂包含第一治疗剂区和第二治疗剂区。在一些实施方案中，治疗剂包含设置于第一治疗剂区与第二治疗剂区之间的蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，第一治疗剂区和第二治疗剂区衍生自相同的蛋白质或氨基酸序列组。在一些实施方案中，第一治疗剂区和第二治疗剂区衍生自不同的蛋白质或氨基酸序列组。一个或多个蛋白酶切割位点可附接至治疗剂区的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。
治疗剂可包含一个或多个内部连接体肽。治疗剂可包含两个或更多个内部连接体肽。治疗剂可包含3、4、5、6、7个或更多个内部连接体肽。该连接体肽可以是不同的。该连接体肽可以是相同的。该连接体肽可以插入到治疗剂之内。在一些实施方案中，治疗剂包含第一治疗区、第二治疗区和一个或多个位于第一治疗区与第二治疗区之间的连接体肽。所述一个或多个连接体肽可附接至治疗剂区的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。在一些实施方案中，该连接体肽是蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，该连接体肽是标记物，如亲和标记物。该亲和标记物的实例是6X(HHHHHH)组氨酸标签(SEQ ID NO:274)。在一些实施方案中，内部连接体包含具有重复序列的氨基酸。在一些实施方案中，内部连接体具有2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个重复序列。在一些实施方案中，内部连接体是低免疫原性的。在一些实施方案中，内部连接体是可生物降解的。
治疗剂可以插入到抗体区中。治疗剂向抗体区的插入可包括一个或多个氨基酸从抗体区的去除或缺失。
在一些实施方案中，免疫球蛋白融合蛋白包含一个或多个延伸物肽。所述一个或多个延伸物肽可附接至治疗剂的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。
在一些实施方案中，免疫球蛋白融合蛋白包含一个或多个连接体肽。所述一个或多个连接体肽可附接至治疗剂的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。
在一些实施方案中，免疫球蛋白融合蛋白包含一个或多个蛋白水解切割位点。所述一个或多个蛋白水解切割位点可附接至治疗剂的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。
在一些实施方案中，治疗剂可以在没有延伸物肽的帮助下与抗体区连接。治疗剂可以经由一个或多个连接体与抗体连接。
连接体
所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区、非抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区、非抗体区和/或延伸物融合区还可包含2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个连接体。延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。延伸物融合区还可包含2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个连接体。
所述一个或多个连接体附接至治疗剂的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。所述一个或多个连接体附接至延伸物肽的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。所述一个或多个连接体附接至蛋白水解切割位点的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。所述一个或多个连接体可以附接至治疗剂、延伸物肽、蛋白水解切割位点、延伸物融合区、抗体区或其组合。
在一些实施方案中，所述连接体肽是连结肽或连结肽的一部分。
所述一个或多个连接体可包含序列(XeXfXgXh)n(SEQ ID NO:176)。在一个实施方案中，n在约1到约20之间。在一个实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20中的任何一个。在一个实施方案中，n在约1到约10之间。在一个实施方案中，n在约1到约5之间。在一个实施方案中，n在约1到约3之间。在一个实施方案中，Xe、Xf和Xg独立地选自疏水氨基酸。Xh可以是极性的、不带电荷的氨基酸。连接体序列还可包含一个或多个半胱氨酸(C)残基。该一个或多个半胱氨酸残基在N-末端、C-末端或其组合。连接体肽可包含序列CXeXfXgXh(SEQ ID NO:177)。在一个实施方案中，Xe、Xf和Xg独立地选自疏水氨基酸。Xh可以是极性的、不带电荷的氨基酸。连接体肽可包含序列XeXfXgXhC(SEQ ID NO:178)。在一个实施方案中，Xe、Xf和Xg独立地选自疏水氨基酸。Xh可以是极性的、不带电荷的氨基酸。
所述一个或多个连接体可包含序列(GGGGS)n(SEQ ID NO:275)。在一个实施方案中，n在约1到约20之间。在一个实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20中的任何一个。在一个实施方案中，n在约1到约10之间。在一个实施方案中，n在约1到约5之间。在一个实施方案中，n在约1到约3之间。
所述一个或多个连接体可包含选自SEQ ID NO:176、179-181和275-277中任何一个的氨基酸序列。所述一个或多个连接体可包含与SEQ ID NO:176、179-181和275-277中任何一个至少约50％同源的氨基酸序列。所述一个或多个连接体可包含与SEQ ID NO:176、179-181和275-277中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高同源的氨基酸序列。所述一个或多个连接体可包含与SEQ ID NO:176、179-181和275-277中任何一个至少约70％同源的氨基酸序列。所述一个或多个连接体可包含与SEQ ID NO:176、179-181和275-277中任何一个至少约80％同源的氨基酸序列。
蛋白水解切割位点
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白还可包含一个或多个蛋白水解切割位点。本文公开的免疫球蛋白融合蛋白还可包含2个或更多个蛋白水解切割位点。本文公开的免疫球蛋白融合蛋白还可包含3个或更多个蛋白水解切割位点。本文公开的免疫球蛋白融合蛋白还可包含4、5、6、7个或更多个蛋白水解切割位点。本文公开的治疗剂还可包含一个或多个蛋白水解切割位点。
所述免疫球蛋白融合蛋白可包含在抗体区与非抗体区之间具有一个或多个切割位点的序列。所述免疫球蛋白融合蛋白可包含在抗体区与延伸物融合区之间具有一个或多个切割位点的序列。在一些实施方案中，蛋白水解切割位点是连结肽或者是连结肽的一部分。
所述一个或多个蛋白水解切割位点可附接至治疗肽的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。所述一个或多个蛋白水解切割位点可附接至延伸物肽的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。所述一个或多个蛋白水解切割位点可附接至连接体肽的N-末端、C-末端或同时附接至N-末端和C-末端。所述一个或多个蛋白水解切割位点可以附接至治疗剂、延伸物肽、连接体、延伸物融合区、免疫球蛋白区、非免疫球蛋白区或其组合。
蛋白水解切割位点的消化可导致治疗剂的N-或C-末端从免疫球蛋白融合蛋白释放。蛋白水解切割位点可以在治疗剂的N-和C-末端上。蛋白水解切割位点的消化可导致治疗剂从免疫球蛋白融合蛋白释放。
备选地，或附加地，蛋白水解切割位点位于治疗剂、延伸物肽、抗体区或其组合的氨基酸序列内。治疗剂可在氨基酸序列内包含一个或多个蛋白水解切割位点。例如，SEQ IDNO:89公开了包含两个内部蛋白水解切割位点的松弛素蛋白质。松弛素蛋白质内的蛋白水解切割位点的消化可导致松弛素蛋白质的内部片段的释放。
两个或更多个蛋白水解切割位点可围绕治疗剂、延伸物肽、连接体、抗体区或其组合。蛋白水解切割位点的消化可导致位于所述两个或更多个蛋白水解切割位点之间的肽片段的释放。例如，蛋白水解切割位点可以在治疗剂-连接体肽的侧翼。蛋白水解切割位点的消化可导致治疗剂-连接体的释放。
蛋白水解切割位点可以被一种或多种聚合酶识别。该一种或多种聚合酶可以是丝氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、谷氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、外肽酶、内肽酶或其组合。该蛋白酶可以选自因子VII或因子Xa。该蛋白酶的其他实例包括但不限于氨肽酶、羧肽酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和弹性蛋白酶。该蛋白酶可以是激素原转变酶2(PC2)。
所述一个或多个蛋白水解切割位点可包含选自SEQ ID NO:182-185中任何一个的氨基酸序列。所述一个或多个蛋白水解切割位点可包含与SEQ ID NO:182-185中任何一个至少约50％同源的氨基酸序列。所述一个或多个蛋白水解切割位点可包含与SEQ ID NO:182-185中任何一个至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高同源的氨基酸序列。所述一个或多个蛋白水解切割位点可包含与SEQ ID NO:182-185中任何一个至少约70％同源的氨基酸序列。所述一个或多个蛋白水解切割位点可包含与SEQ ID NO:182-185中任何一个至少约80％同源的氨基酸序列。
载体、宿主细胞和重组方法
如本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可通过重组方法表达。通常，可将编码免疫球蛋白融合蛋白的核酸分离并插入到可复制的载体中，以供进一步克隆(DNA的扩增)或表达。编码免疫球蛋白融合蛋白的DNA可通过PCR扩增制备并采用常规程序(例如，通过采用能够与编码免疫球蛋白融合蛋白的核苷酸特异性结合的寡核苷酸探针)进行测序。在示例性的实施方案中，编码免疫球蛋白融合蛋白的核酸被PCR扩增、限制酶消化并凝胶纯化。可将消化的核酸插入到可复制的载体中。含有消化的免疫球蛋白融合蛋白插入的可复制载体可以被转化或转导到宿主细胞中，以供进一步克隆(DNA的扩增)或表达。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。
编码免疫球蛋白融合蛋白的多肽组分(例如，抗体区、延伸物肽、治疗剂)的多核苷酸序列可以通过PCR扩增获得。可以从含有编码多肽组分的核酸的细胞中分离多核苷酸序列，并对其进行测序。备选地，或附加地，可采用核苷酸合成仪或PCR技术合成多核苷酸。一旦获得，就可以将编码多肽组分的序列插入到能够在原核和/或真核宿主中复制和表达异源多核苷酸的重组载体中。
此外，含有复制子和与宿主微生物相容的控制序列的噬菌体载体可用作与这些宿主相关的转化载体。例如，噬菌体如λGEMTM-11可在制备可用于转化易感宿主细胞(如大肠杆菌LE392)的重组载体中使用。
免疫球蛋白融合蛋白可以在细胞内(例如，细胞质)或在细胞外(例如，分泌)表达。对于细胞外表达，载体可包含能够使免疫球蛋白融合蛋白转移到细胞外的分泌信号。
用于克隆或表达编码免疫球蛋白融合蛋白的载体的合适的宿主细胞包括原核或真核细胞。宿主细胞可以是真核细胞。真核细胞的实例包括但不限于人胚肾(HEK)细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、真菌、酵母、无脊椎动物细胞(例如，植物细胞和昆虫细胞)、淋巴样细胞(例如，YO、NSO、Sp20细胞)。合适的哺乳动物宿主细胞系的其他实例为被SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利细胞；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；水牛鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TR1细胞；MRC5细胞；以及FS4细胞。宿主细胞可以是原核细胞(例如，大肠杆菌)。
可以用含有编码免疫球蛋白融合蛋白的核苷酸的载体转化宿主细胞。经转化的宿主细胞可在培养基中培养。培养基可补充有一种或多种药剂，以用于诱导启动子，选择转化体或扩增，或表达编码所需序列的基因。用于转化宿主细胞的方法是本领域已知的，并且可包括电穿孔、氯化钙或聚乙二醇/DMSO。
或者，可以用含有编码免疫球蛋白融合蛋白的核苷酸的载体转染或转导宿主细胞。经转染或转导的宿主细胞可在培养基中培养。培养基可补充有一种或多种药剂，以用于诱导启动子，选择经转染或转导的细胞，或表达编码所需序列的基因。
可以用包含编码一种或多种蛋白酶的核苷酸的载体转染或转导宿主细胞。包含蛋白酶的载体可与编码本文公开的任何免疫球蛋白融合蛋白的载体共转染。蛋白酶包括因子Xa和PC2。
所表达的免疫球蛋白融合蛋白可以被分泌到宿主细胞的周质中并且从其中回收，或者转运到培养基中。从周质回收蛋白质可包括破坏宿主细胞。宿主细胞的破坏可包括渗透冲击、超声处理或裂解。离心或过滤可用来去除细胞碎片或全细胞。例如，免疫球蛋白融合蛋白可通过亲和树脂色谱法进一步纯化。
或者，可以在培养基中分离分泌到该培养基中的免疫球蛋白融合蛋白。可从培养物中去除细胞，并产生经过过滤和浓缩以供进一步纯化蛋白质的培养上清液。可采用公知的方法如聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western印迹试验来进一步分离和鉴定所表达的多核苷酸。
可通过发酵工艺大量进行免疫球蛋白融合蛋白的生产。多种大规模补料-分批发酵流程可用于重组蛋白的生产。大规模发酵具有至少1000升的生产能力，优选约1,000到100,000升的生产能力。这些发酵罐利用搅拌器叶轮来分布氧气和营养物，特别是葡萄糖(优选的碳源/能源)。小规模发酵通常是指在体积容量不超过约100升的发酵罐中的发酵，并且可以在约1升到约100升的范围内。
在发酵过程中，通常在细胞已经在合适条件下生长到所需密度(例如，OD550约180-220)后启动蛋白质表达的诱导，在此阶段细胞处于早期稳定期。如本领域所知和本文所述的，根据所采用的载体构建体，可使用多种诱导物。细胞可在诱导前生长较短的时间。尽管可以采用更长或更短的诱导时间，但细胞通常被诱导约12-50小时。
为了提高本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的生产产率和质量，可以对多个发酵条件进行改进。例如，为了改善所分泌的免疫球蛋白融合蛋白多肽的正确装配和折叠，可以使用额外的过表达伴侣蛋白如Dsb蛋白质(DsbA、DsbB、DsbC、DsbD和/或DsbG)或FkpA(具有蛋白伴侣活性的肽基脯氨酰顺，反-异构酶)的载体来共转化宿主原核细胞。已经证明伴侣蛋白促进在细菌宿主细胞中产生的异源蛋白质的正确折叠和溶解性。
为了使表达的异源蛋白质(特别是蛋白水解敏感的那些)的蛋白水解最小化，某些缺乏蛋白水解酶的宿主菌株可用于本发明。例如，可以修饰宿主细菌菌株以在编码已知细菌蛋白酶(诸如蛋白酶III、OmpT、DegP、Tsp、蛋白酶I、蛋白酶Mi、蛋白酶V、蛋白酶VI及其组合)的基因中产生基因突变。一些缺乏蛋白酶的大肠杆菌菌株是可用的。
可以采用本领域已知的标准蛋白质纯化方法。以下程序是合适的纯化程序的示例：在免疫亲和柱或离子交换柱上分级分离、乙醇沉淀、反相HPLC、二氧化硅或阳离子交换树脂如DEAE上的色谱法、色谱聚焦、SDS-PAGE、硫酸铵沉淀、羟基磷灰石色谱法、凝胶电泳、透析和亲和色谱法以及使用例如Sephadex G-75的凝胶过滤。
可采用可商购的蛋白质浓缩过滤器，例如Amicon或Millipore
Figure GDA0000939834710001041
超滤单元来浓缩免疫球蛋白融合蛋白。
可在任意的前述步骤中包含蛋白酶抑制剂或蛋白酶抑制剂混合物，以抑制免疫球蛋白融合蛋白的蛋白水解。
在一些情况下，免疫球蛋白融合蛋白在分离后可能不具有生物活性。用于将多肽“重折叠”或转化成其三级结构并产生二硫键的多种方法，可以用来恢复生物活性。这类方法包括将溶解的多肽暴露于通常大于7的pH并且在特定浓度的离液剂的存在下。离液剂的选择与用于包涵体溶解的选择非常相似，但通常离液剂在较低的浓度下使用并且不必与用于溶解的离液剂相同。在多数情况下，重折叠/氧化溶液还将含有还原剂或特定比例的还原剂加其氧化形式，以产生特定的氧化还原电势，从而允许在蛋白质的半胱氨酸桥形成中发生二硫键改变(disulfide shuffling)。一些常用的氧化还原对包括半胱氨酸/胱胺、谷胱甘肽(GSH)/二硫基二GSH、氯化铜、二硫苏糖醇(DTT)/二噻烷DTT以及2-巯基乙醇(bME)/二硫基-b(ME)。在许多情况下，可以使用共溶剂来提高重折叠的效率，并且用于此目的的常见试剂包括甘油、各种分子量的聚乙二醇、精氨酸等。
组合物
本文公开了包含本文公开的免疫球蛋白融合蛋白和/或免疫球蛋白融合蛋白组分的组合物。该组合物可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种免疫球蛋白融合蛋白。这些免疫球蛋白融合蛋白可以是不同的。或者，这些免疫球蛋白融合蛋白可以是相同或相似的。这些免疫球蛋白融合蛋白可包含不同的抗体区、延伸物融合区、延伸物肽、治疗剂或其组合。
所述组合物还可包含一种或多种药学上可接受的盐、赋形剂或载体。用于本发明药物组合物中的药学上可接受的盐、赋形剂或载体包括载体、赋形剂、稀释剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂、调味剂和稀释剂、乳化剂、悬浮剂、溶剂、填充剂、膨胀剂、缓冲液、递送载体、张度剂、共溶剂、润湿剂、络合剂、缓冲剂、抗微生物剂和表面活性剂。
中性缓冲盐水或混有血清白蛋白的盐水是示例性的合适的载体。所述药物组合物可以包含抗氧化剂如抗坏血酸；低分子量多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖醇如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐平衡离子如钠；和/或非离子型表面活性剂如吐温(Tween)、普朗尼克(pluronics)或聚乙二醇(PEG)。还举例来说，合适的张度增强剂包括碱金属卤化物(优选氯化钠或氯化钾)、甘露糖醇、山梨糖醇等。合适的防腐剂包括苯扎氯铵、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸等。过氧化氢也可以用作防腐剂。合适的共溶剂包括甘油、丙二醇和PEG。合适的络合剂包括咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟基-丙基-β-环糊精。合适的表面活性剂或润湿剂包括失水山梨糖醇酯、聚山梨醇酯如聚山梨醇酯80、氨基丁三醇、卵磷脂、胆固醇、四丁酚醛(tyloxapal)等。缓冲液可以是常规缓冲液如乙酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐或Tris-HCl。乙酸盐缓冲液可以是大约pH4-5.5，而Tris缓冲液可以是大约pH 7-8.5。另外的药剂在Remington's PharmaceuticalSciences,18th Edition,A.R.Gennaro,ed.,Mack Publishing Company,1990中阐述。
所述组合物可以是液体形式或是冻干或冷冻干燥形式，并可以包含一种或多种冻干保护剂、赋形剂、表面活性剂、高分子量结构添加剂和/或膨胀剂(参见，例如，美国专利6,685,940、6,566,329和6,372,716)。在一个实施方案中，包括冻干保护剂，其为非还原糖如蔗糖、乳糖或海藻糖。通常包含的冻干保护剂的量使得经重建后，所得制剂将是等渗的，尽管高渗或略微低渗的制剂也可能是合适的。此外，冻干保护剂的量应足以防止蛋白质在冻干时不可接受的程度的降解和/或聚集。预冻干制剂中的糖(例如，蔗糖、乳糖、海藻糖)的示例性冻干保护剂浓度为大约10mM至大约400mM。在另一个实施方案中，包括表面活性剂，例如，非离子型表面活性剂和离子型表面活性剂如聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆188)；聚(乙二醇)苯基醚(例如，Triton)；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠(sodium octyl glycoside)；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-肌氨酸；亚油基-、肉豆蔻基-或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰胺丙基-、椰油酰胺丙基(cocamidopropyl)-、亚油酰胺丙基-、肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基-甜菜碱(例如，月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油基牛磺酸钠或甲基油酰基(ofeyl)牛磺酸二钠；MONAQUATTM系列(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)、聚乙二醇、聚丙二醇，和乙二醇和丙二醇的共聚物(例如，普朗尼克(Pluronics)、PF68等)。可以存在于预冻干制剂中的表面活性剂的示例量为大约0.001-0.5％。高分子量结构添加剂(例如，填充剂、粘合剂)可以包括，例如，阿拉伯胶、白蛋白、藻酸、磷酸钙(二碱式)、纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、葡聚糖、糊精、葡萄糖结合剂、蔗糖、侵填体(tylose)、预胶化淀粉、硫酸钙、直链淀粉、甘氨酸、膨润土、麦芽糖、山梨糖醇、乙基纤维素、磷酸氢二钠、磷酸二钠、焦亚硫酸二钠、聚乙烯醇、明胶、葡萄糖、瓜尔胶、液体葡萄糖、可压缩糖、硅酸镁铝、麦芽糖糊精、聚环氧乙烷、聚甲基丙烯酸酯、聚维酮、藻酸钠、黄蓍胶、微晶纤维素、淀粉和玉米醇溶蛋白。高分子量结构添加剂的示例浓度为0.1重量％至10重量％。在其他实施方案中，可以包括膨胀剂(例如，甘露糖醇、甘氨酸)。
组合物可以适合于肠胃外给药。示例性组合物适合于通过技术人员可用的任何途径注射或输注到动物中，该途径例如是关节内、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、脑内(脑实质内)、脑室内、肌肉内、眼内、动脉内或病灶内途径。肠胃外制剂通常是无菌的、无热原的、等渗的水溶液，任选地含有药学上可接受的防腐剂。
非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲的介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、林格氏(Ringers’)右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格液或不挥发油。静脉内载体包括流体和营养补充剂、电解质补充剂，例如基于林格氏右旋糖的那些，等等。还可以存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。总体上参见Remington's Pharmaceutical Science,16th Ed.,Mack Eds.,1980。
本文描述的组合物可以以提供产品的局部浓度(例如，团注、贮库型(depot)效果)和/或提高在特定局部环境中的稳定性或半衰期的方式配制用于控制的或持续的递送。该组合物可以包括以下成分的制剂：本文公开的免疫球蛋白融合蛋白、多肽、核酸或载体，与聚合化合物如聚乳酸、聚乙醇酸等的特定制品，以及诸如可生物降解的基质、可注射微球、微囊颗粒、微囊、可生物蚀解的颗粒珠、脂质体等试剂，和提供活性剂的控制或持续释放的可植入递送装置，其随后可以作为贮库型注射剂递送。用于配制此类持续或控制递送装置的技术是已知的，并且已经开发和使用了多种聚合物用于药物的控制释放和递送。这类聚合物一般是可生物降解的和生物相容的。聚合物水凝胶，包括通过对映体聚合物或多肽片段的复合而形成的聚合物水凝胶，以及具有温度或pH敏感性质的水凝胶，由于参与捕获生物活性蛋白剂的温和和水性条件，可以是提供药物贮库型效果所期望的。参见，例如，WO93/15722中用于递送药物组合物的控制释放多孔聚合物微粒的描述。
用于此目的的合适的材料包括聚交酯(参见，例如美国专利3,773,919)，聚-(a-羟基羧酸)的聚合物，如聚-D-(-)-3-羟基丁酸(EP133,988A)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物(Sidman等人,Biopolymers,22:547-556(1983))、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(Langer等,J.Biomed.Mater.Res.,15:167-277(1981)，和Langer,Chem.Tech.,12:98-105(1982))、乙烯乙酸乙烯酯或聚-D(-)-3-羟基丁酸。其他可生物降解的聚合物包括聚(内酯)、聚(缩醛)、聚(原酸酯)和聚(原碳酸酯)。持续释放组合物还可以包含脂质体，其可以通过本领域已知的若干方法中的任一种(参见，例如，Eppstein等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:3688-92(1985))制备。载体本身或其降解产物在靶组织内应是无毒的并且不应进一步加剧病情。这可以在目标病症的动物模型中，或者如果此类模型无法获得，则在正常动物中，通过常规筛查来确定。
本文公开的免疫球蛋白融合蛋白可以是微胶囊化的。
可通过任何适合的给药途径向受试者施用本文公开的药物组合物，该给药途径包括但不限于肠胃外(静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内、血管内、鞘内、玻璃体内、输注或局部)、局部外用、口服或经鼻给药。
适合于肌肉内、皮下、瘤周或静脉内注射的制剂可包括生理上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重建为无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油、克列莫佛等)，它们的合适的混合物、植物油(诸如橄榄油)和可注射的有机酯如油酸乙酯。例如，通过使用包衣如卵磷脂、在分散液的情况下通过保持所需颗粒大小以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。适合于皮下注射的制剂还含有任选的添加剂如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。
对于静脉内注射，活性剂可任选地在水性溶液中配制，优选地在生理上相容的缓冲液如Hank溶液、林格液或生理盐水缓冲液中配制。
肠胃外注射任选包括团注注射或连续输注。用于注射的制剂任选地以单位剂型例如在安瓿中或在添加有防腐剂的多剂量容器中提供。本文公开的药物组合物可以是作为油性或水性媒介物中的无菌悬浮液、溶液或乳液适合于肠胃外注射的形式，并且含有配制剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性剂的水性溶液。此外，悬浮液任选地制备为合适的油性注射悬浮液。
备选地，或附加地，所述组合物可以通过向患区中植入本文公开的免疫球蛋白融合蛋白已经吸附或包封于其上的膜、海绵或其他合适的物质而局部施用。当使用植入装置时，该装置可以植入到任何合适的组织或器官中，并且本文公开的免疫球蛋白融合蛋白、核酸或载体的递送可以经由团注或经由连续施用或经由使用连续输注的导管通过该装置直接进行。
包含本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的药物组合物可以配制用于吸入，例如作为干粉。也可以在液化推进剂中配制吸入溶液以供气雾剂递送。在又另一种制剂中，溶液可以雾化。用于肺给药的其他药物组合物包括例如在WO 94/20069中描述的那些，该申请公开了化学修饰的蛋白质的肺递送。对于肺递送，颗粒大小应适合于递送至肺远侧。例如，颗粒大小可以是1μm至5μm；但是，可以使用更大的颗粒，例如，如果每个颗粒是相当多孔的话。
一些包含本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的制剂可以口服施用。以此方式施用的制剂可以用或不用在固体剂型如片剂和胶囊的配混中惯常使用的那些载体一起配制。例如，可以将胶囊设计成在胃肠道中的某点释放制剂的活性部分，这时生物利用度最大化且系统前降解最小化。可以包括另外的试剂以促进选择性结合剂的吸收。还可以使用稀释剂、调味剂、低熔点蜡、植物油、润滑剂、悬浮剂、片剂崩解剂和粘合剂。
另一种制剂可以包含与适于片剂制备的无毒赋形剂混合的有效量的免疫球蛋白融合蛋白。通过将片剂溶解在无菌水中，或另外的合适载体中，可以以单位剂量的形式制备溶液。合适的赋形剂包括但不限于：惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠或碳酸氢钠、乳糖或磷酸钙；或粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；或润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。
基于本公开内容和配制技术的常识，取决于拟定的给药途径、递送形式和所需剂量，可以确定合适的和/或优选的药物制剂。无论给药方式如何，可以根据患者体重、体表面积或器官大小来计算有效剂量。
对于涉及本文描述的各种制剂的治疗，用于确定其适当剂量的计算的进一步细化在本领域中常规进行，并且处于本领域中常规实施的任务的范围内。适当的剂量可以通过使用合适的剂量-响应数据来确定。
本文公开的组合物对提供预后信息或提供诊断信息可能是有用的。
“药学上可接受的”可以指被联邦或州政府管理机构批准的或可被其批准的，或者列于美国药典或其他公认的用于动物(包括人类)的药典中的。
“药学上可接受的盐”可以指药学上可接受的并且具有母体化合物的所需药理学活性的化合物盐。
“药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂”可以指可以与本公开内容的至少一种抗体一起施用于受试者，并且在足以递送治疗量的化合物的剂量下施用时不会破坏其药理学活性且无毒的赋形剂、载体或佐剂。
“药学上可接受的媒介物”可以指与本公开内容的至少一种抗体一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。
药剂盒
本文还公开了包含一种或多种免疫球蛋白融合蛋白或其组分的药剂盒。免疫球蛋白融合蛋白可以以一种促进其应用以实施本公开内容的方法的方式包装。例如，药剂盒包含包装在容器中的本文所述的免疫球蛋白融合蛋白，该容器贴有标签或具有包装插页，其描述该免疫球蛋白融合蛋白在实施该方法中的应用。合适的容器包括，例如，瓶子、小瓶、注射器等。容器可以由多种材料如玻璃或塑料构成。容器可具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或是具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。药剂盒可包含其中容纳有免疫球蛋白融合蛋白的容器。药剂盒可包含具有以下物质的容器：(a)免疫球蛋白融合蛋白的抗体区；(b)免疫球蛋白融合蛋白的延伸物融合区；(c)延伸物融合区的延伸物肽；(d)延伸物融合区的治疗剂；或(e)a-d的组合。药剂盒还可包含包装插页，该包装插页说明第一和第二组合物可用于治疗特定状况。备选地，或附加地，药剂盒还可包含第二(或第三)容器，该容器包含药学上可接受的缓冲液(例如，抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格液和右旋糖溶液)。其还可包含从商业和用户立场出发期望的其他物质，包括但不限于其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针和注射器。免疫球蛋白融合蛋白可以以单位剂量形式包装。药剂盒还可包含适用于根据具体给药途径施用免疫球蛋白融合蛋白，或适用于实施筛选试验的装置。药剂盒可含有描述免疫球蛋白融合蛋白组合物的使用的标签。
可依照常规程序将包含免疫球蛋白融合蛋白的组合物配制成适合于向哺乳动物如人、牛、猫、犬和鼠静脉内施用的药物组合物。通常，用于静脉内施用的组合物包含在无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，该组合物还可包含增溶剂和/或局部麻醉剂如利多卡因以减轻在注射部位的疼痛。通常，成分可以以单位剂量形式单独地或混合在一起地提供。例如，免疫球蛋白融合蛋白可以作为冻干的干粉或无水浓缩物提供在指示免疫球蛋白融合蛋白的量的密闭容器如安瓿或药囊中。当组合物将要通过输注施用时，其可以用含有无菌药用级水或盐水的输液瓶进行分配。当组合物通过注射施用时，可提供具有无菌注射用水或盐水的安瓿，使得成分可以在施用前混合。
将在与治疗剂的异常表达和/或活性相关的疾病或病症治疗、抑制或预防中有效的本文所述组合物的量可通过标准的临床技术确定。此外，可任选地采用体外测定来帮助确定最佳剂量范围。制剂中将采用的精确剂量还可取决于给药途径以及疾病或病症的严重性，并且应该根据医师的判断和每个患者的情况来决定。有效剂量可以从由体外、动物模型测试系统或临床试验获得的剂量-响应曲线来外推。
治疗用途
本文还公开了用于治疗、缓解、抑制和/或预防一种或多种疾病和/或状况的免疫球蛋白融合蛋白和方法。该方法可包括向有需要的受试者施用包含一种或多种本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区。非抗体区包含一个或多个治疗剂。延伸物融合区包含一个或多个治疗剂。在一些实施方案中，非免疫球蛋白区包含一个或多个延伸物肽。在一些实施方案中，延伸物融合区包含一个或多个延伸物肽。在一个实施方案中，延伸物肽包含具有α螺旋二级结构的氨基酸序列。在一个实施方案中，延伸物肽不包含具有β链二级结构的氨基酸序列。在一些实施方案中，非免疫球蛋白区包含一个或多个连接体肽。在一些实施方案中，延伸物融合区包含一个或多个连接体肽。在一个实施方案中，连接体肽不包含具有α螺旋或β链二级结构的氨基酸序列。
所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物是牛。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。治疗剂可以是GCSF、牛GCSF、人GCSF、Moka1、Vm24、Mamba1、人GLP-1、毒蜥外泌肽-4、人EPO、人FGF21、人GMCSF、人干扰素-β、人干扰素-α、松弛素、泌酸调节肽、hLeptin、betatrophin、生长分化因子11(GDF11)、甲状旁腺素、血管生成素样3(ANGPTL3)、IL-11、人生长激素(hGH)、弹力素或其衍生物或变体。备选地，或附加地，治疗剂是白介素-8(IL-8)、IL-21、齐考诺肽、促生长素抑制素、氯毒素、SDF1α或其衍生物或变体。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。所述疾病或状况可以是自身免疫病、异种免疫疾病或状况、炎性疾病、病原性感染、血栓栓塞性病症、呼吸疾病或状况、代谢疾病、中枢神经系统(CNS)病症、骨病或癌症。在其他情况下，所述疾病或状况是血液病症。在一些情况下，所述疾病或状况是肥胖症、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。治疗剂可以是hGCSF，并且疾病或状况可以是中性粒细胞减少。治疗剂可以是hLeptin，并且疾病或状况可以是糖尿病。治疗剂可以是hGH，并且疾病或状况可以是生长障碍。治疗剂可以是IFN-α，并且疾病或状况可以是病毒感染。治疗剂可以是Mamba1，并且疾病或状况可以是疼痛。治疗剂可以是弹力素，并且疾病或状况可以是炎症。治疗剂可以是IFN-α，并且疾病或状况可以是弹性蛋白酶抑制肽，并且疾病或状况可以是慢性阻塞性肺疾病(COPD)。
疾病和/或状况可以是慢性疾病或状况。或者，疾病和/或状况是急性疾病或状况。疾病或状况可以是复发的、难治的、加速的或处于缓解期的。疾病或状况可以影响一种或多种细胞类型。一种或多种疾病和/或状况可以是自身免疫病、炎性疾病、心血管疾病、代谢失调、妊娠以及细胞增殖性病症。
疾病或状况可以是自身免疫病。在一些情况下，该自身免疫病可以是硬皮病、弥散性硬皮病或系统性硬皮病。
疾病或状况可以是炎性疾病。在一些情况下，该炎性疾病可以是肝炎、纤维肌痛或牛皮癣。
疾病或状况可以是风湿性疾病。在一些情况下，该风湿性疾病可以是强直性脊柱炎、背痛、粘液囊炎、腱炎、肩痛、腕痛、二头肌痛、下肢痛、膝痛、踝痛、髋痛、踵痛、囊炎、颈痛、骨关节炎、系统性红斑狼疮、红斑狼疮、类风湿性关节炎、幼年型关节炎、舍格伦综合征、多肌炎、白塞病、莱特尔综合征(Reiter's syndrome)或牛皮癣性关节炎。该风湿性疾病可以是慢性的。或者，该风湿性疾病是急性的。
疾病或状况可以是心血管疾病。在一些情况下，该心血管疾病可以是急性心力衰竭、充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭、失代偿性心力衰竭、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、冠心病或缺血性中风。该心血管疾病可以是心脏肥大。
疾病或状况可以是代谢失调。在一些情况下，该代谢失调可以是高胆固醇血症、低β脂蛋白血症、高甘油三酯血症、高脂血症、血脂异常、酮症、低脂血症、难治性贫血、食欲控制、胃排空、非酒精性脂肪肝疾病、肥胖症、I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病、代谢综合征。该代谢失调可以是I型糖尿病。该代谢失调可以是II型糖尿病。
疾病或状况可以是妊娠。所述免疫球蛋白融合蛋白可用于治疗先兆子痫或诱导分娩。
疾病或状况可以是细胞增殖性病症。该细胞增殖性病症可以是白血病、淋巴瘤、癌、肉瘤或其组合。该细胞增殖性病症可以是髓性白血病、成淋巴细胞白血病、髓样白血病、髓单核细胞白血病、嗜中性粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征、B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、大细胞淋巴瘤、混合细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、复发性小淋巴细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、嗜碱性粒细胞白血病、嗜酸性粒细胞白血病、巨核母细胞白血病、单核母细胞白血病、单核细胞白血病、红白血病、红系白血病、肝细胞癌、实体瘤、淋巴瘤、白血病、脂肪肉瘤(晚期的/转移的)、髓系恶性肿瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、肾癌、胰腺癌以及脑的恶性胶质瘤。
本文公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至包含治疗剂的非抗体区的抗体区。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至包含治疗剂的延伸物融合区的抗体区。在一个实施方案中，该治疗剂是泌酸调节肽。该疾病或状况可以是代谢失调。该代谢失调可以是糖尿病。糖尿病可以是II型糖尿病。糖尿病可以是I型糖尿病。该代谢失调可以是肥胖症。其他代谢失调包括但不限于代谢综合征、食欲控制或胃排空。
本文公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至包含治疗剂的非抗体区的抗体区。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至包含治疗剂的延伸物融合区的抗体区。在一个实施方案中，该治疗剂是松弛素。该疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是急性心力衰竭。其他心血管疾病包括但不限于充血性心力衰竭、代偿性心力衰竭或失代偿性心力衰竭。该疾病或状况可以是自身免疫病。该自身免疫病可以是硬皮病、弥散性硬皮病或系统性硬皮病。该疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是纤维肌痛。该疾病或状况可以是纤维化。或者，该疾病或状况是妊娠。该免疫球蛋白融合蛋白可用于治疗先兆子痫或诱导分娩。
本文公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至包含治疗剂的非抗体区的抗体区。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至包含治疗剂的延伸物融合区的抗体区。在一个实施方案中，该治疗剂是beta-trophin。该疾病或状况可以是代谢失调。该代谢失调可以是肥胖症。或者，该代谢失调是糖尿病。糖尿病可以是I型糖尿病或II型糖尿病。
本文公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至包含治疗剂的非抗体区的抗体区。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至包含治疗剂的延伸物融合区的抗体区。在一个实施方案中，该治疗剂是FGF 21。该疾病或状况可以是代谢失调。该代谢失调可以是肥胖症。该代谢失调可以是糖尿病。糖尿病可以是II型糖尿病、I型糖尿病或妊娠糖尿病。其他代谢失调包括但不限于食欲控制和非酒精性脂肪肝疾病。该疾病或状况可以是细胞增殖性病症。该细胞增殖性病症可以乳腺癌。
本文公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至包含治疗剂的非抗体区的抗体区。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至包含治疗剂的延伸物融合区的抗体区。在一个实施方案中，该治疗剂是GDF11。该疾病或状况可以是细胞增殖性病症。该细胞增殖性病症可以是急性的、慢性的、复发性的、难治性的、加速的、处于缓解期的、Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期、幼年的或成人的。该细胞增殖性病症可以是髓性白血病、成淋巴细胞白血病、髓样白血病、髓单核细胞白血病、嗜中性粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征、B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、混合细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、复发性小淋巴细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、嗜碱性粒细胞白血病、嗜酸性粒细胞白血病、巨核母细胞白血病、单核母细胞白血病、单核细胞白血病、红白血病、红系白血病、肝细胞癌、实体瘤、淋巴瘤、白血病、脂肪肉瘤(晚期的/转移的)、髓系恶性肿瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、肾癌、胰腺癌以及脑的恶性胶质瘤。该疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是年龄相关的心脏疾病。该疾病或状况可以是心脏肥大。
本文公开了治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至包含治疗剂的非抗体区的抗体区。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至包含治疗剂的延伸物融合区的抗体区。在一个实施方案中，该治疗剂是血管生成素样3。代谢失调可以是高胆固醇血症、低β脂蛋白血症、高甘油三酯血症、高脂血症、血脂异常、低脂血症或酮症。疾病或状况可以是心血管疾病。该心血管疾病可以是动脉粥样硬化、冠心病或缺血性中风。疾病或状况可以是风湿性疾病。该风湿性疾病可以是强直性脊柱炎、背痛、粘液囊炎、腱炎、肩痛、腕痛、二头肌痛、下肢痛、膝(髌)痛、踝痛、髋痛、踵痛、囊炎、颈痛、骨关节炎、系统性红斑狼疮、红斑狼疮、类风湿关节炎、幼年型关节炎、舍格伦综合征、硬皮病、多肌炎、白塞病、莱特尔综合征、牛皮癣性关节炎。在一些情况下，疾病或状况可以是细胞增殖性病症。该细胞增殖性病症可以是肝细胞癌或卵巢癌。疾病或状况可以是炎性疾病。该炎性疾病可以是肝炎。
本文公开了预防或治疗有需要的受试者的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含一种或多种本文公开的免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含一种或多种免疫球蛋白重链、轻链或其组合。
所述免疫球蛋白融合蛋白可包含与SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个的氨基酸序列共享50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的氨基酸序列同一性的序列。编码该免疫球蛋白融合蛋白的核苷酸序列可包含与SEQ ID NO:37-67和100-121中任何一个的核苷酸序列共享50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的核苷酸序列同一性的序列。
所述免疫球蛋白融合蛋白可包含与SEQ ID NO:69-79、81-93、95-97、99和123-143提供的重链序列共享50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的氨基酸序列同一性的序列。抗体区可包含免疫球蛋白重链。免疫球蛋白重链多肽可包含与SEQ IDNO:22-27和29-35提供的重链序列共享50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的氨基酸序列同一性的序列。抗体区可包含免疫球蛋白轻链。
所述免疫球蛋白融合蛋白可包含与SEQ ID NO:68、80、94、98和122提供的轻链序列共享50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的氨基酸序列同一性的序列。抗体区可包含免疫球蛋白轻链。免疫球蛋白轻链多肽可包含与SEQ ID NO:19-21、28和36提供的轻链序列共享50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高的氨基酸序列同一性的序列。抗体区可包含免疫球蛋白重链。
所述免疫球蛋白融合蛋白可由与SEQ ID NO:68-99和122-143中任何一个的核苷酸序列至少约50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高同源的核苷酸序列编码。免疫球蛋白重链可由与SEQ ID NO:22-27、29-35、69-79、81-93、95-97、99和123-143至少约50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高同源的核苷酸序列编码。免疫球蛋白轻链可由与SEQ ID NO:19-21、28、36、68、80、94、98和122至少约50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或更高同源的核苷酸序列编码。
所述免疫球蛋白融合蛋白可包含一个或多个延伸物肽。所述免疫球蛋白融合蛋白可包含一个或多个连接体。所述免疫球蛋白融合蛋白可包含一个或多个蛋白水解切割位点。所述疾病或状况可以是自身免疫病、异种免疫疾病或状况、炎性疾病、病原性感染、血栓栓塞性病症、呼吸疾病或状况、代谢疾病、中枢神经系统(CNS)病症、骨疾病或癌症。所述疾病或状况可以是血液病症。在一些情况下，所述疾病或状况可以是肥胖症、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。
本文公开了预防或治疗有需要的受试者的自身免疫病的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是Moka1或其衍生物或变体。治疗剂可以是M24或其衍生物或变体。治疗剂可以是β-干扰素或其衍生物或变体。所述免疫球蛋白融合蛋白或抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述抗体、抗体区或延伸物融合区还可包含连接体。该连接体可将Moka1、VM24、β-干扰素或其衍生物或变体附接至延伸物肽。该连接体可将抗体区附接至延伸物融合区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。所述自身免疫病可以是T-细胞介导的自身免疫病。T-细胞介导的自身免疫病包括但不限于多发性硬化、1-型糖尿病和牛皮癣。在其他情况下，该自身免疫病是狼疮、舍格伦综合征、硬皮病、类风湿性关节炎、皮肌炎、桥本氏甲状腺炎、阿狄森病(Addison’s disease)、乳糜泻、克罗恩病、恶性贫血、寻常型天疱疮、白癜风、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、奥德甲状腺炎(Ord's thyroiditis)、格雷夫斯病(Graves' disease)、格林-巴利综合征、急性播散性脑脊髓炎、眼球斜视痉挛综合征、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、自身免疫性肝炎、古德帕斯彻综合征、莱特尔综合征、高安动脉炎(Takayasu's arteritis)、颞动脉炎、韦格纳肉芽肿病、普秃、白塞病、慢性疲劳、家族性自主神经异常、子宫内膜异位症、间质性膀胱炎、神经性肌强直、硬皮病和外阴痛。狼疮可以包括但可以不限于急性皮肤红斑狼疮、亚急性皮肤红斑狼疮、慢性皮肤红斑狼疮、盘状红斑狼疮、儿童盘状红斑性狼疮、全身性盘状红斑性狼疮(generalized discoid lupus erythematosus)、局部盘状红斑性狼疮、冻疮样红斑狼疮(hutchinson)、红斑狼疮-扁平苔藓重叠综合征(lupus erythematosus-lichen planusoverlap syndrome)、红斑狼疮性脂膜炎(深在性红斑狼疮)、肿胀性红斑狼疮、疣状红斑狼疮(增殖性红斑狼疮)、补体缺陷综合征(complement deficiency syndrome)、药物诱发的红斑狼疮、新生儿红斑狼疮和系统性红斑狼疮。所述疾病或状况可以是多发性硬化。所述疾病或状况可以是糖尿病。
本文还公开了在有需要的受试者中预防或治疗将受益于钾电压-门控通道的调节的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。钾电压-门控通道可以是KCNA3或Kv1.3通道。受试者可以是哺乳动物。哺乳动物可以是人。或者，哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是Moka1or或其衍生物或变体。治疗剂可以是VM24或其衍生物或变体。免疫球蛋白融合蛋白或抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将Moka1、VM24或其衍生物或变体附接至延伸物肽。该连接体可将抗体区附接至延伸物融合区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。所述疾病或状况可以是自身免疫病。该自身免疫病可以是T-细胞介导的自身免疫病。所述疾病或状况可以是发作性共济失调、癫痫或神经性肌强直。调节钾电压-门控通道可包括抑制或阻断钾电压-门控通道。调节钾电压-门控通道可包括激活钾电压-门控通道。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的代谢疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。哺乳动物可以是人。或者，哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是GLP-1、毒蜥外泌肽-4、FGF21或其衍生物或变体。GLP-1可以是人GLP-1。FGF21可以是人FGF21。抗体或抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将GLP-1、毒蜥外泌肽-4、FGF21或其衍生物或变体附接至延伸物肽。该连接体可将抗体区附接至延伸物融合区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。代谢疾病和/或状况可包括碳水化合物代谢病症、氨基酸代谢病症、有机酸代谢(有机酸尿)病症、脂肪酸氧化和线粒体代谢病症、卟啉代谢病症、嘌呤或嘧啶代谢病症、类固醇代谢病症、线粒体功能障碍、过氧化物酶体功能障碍、尿素循环障碍、尿素循环缺陷或溶酶体贮积症。代谢疾病或状况可以是糖尿病。在其他情况下，代谢疾病或状况可以是糖原贮积病、苯丙酮尿症、枫糖尿症、Ⅰ型戊二酸血症、氨基甲酰磷酸合成酶I缺乏症、尿黑酸尿症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCADD)、急性间歇性卟啉症、莱施-尼汉(Lesch-Nyhan)综合征、类脂先天性肾上腺增生症、先天性肾上腺增生症、卡恩斯-塞尔(Kearns-Sayre)综合征、齐薇格(Zellweger)综合征、高歇病(Gaucher's disease)或尼曼匹克病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其衍生物或变体。该GLP-1可以是人GLP-1。抗体可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其衍生物或变体附接至免疫球蛋白结构域或其片段。该连接体可将抗体区附接至延伸物融合区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。CNS病症可以是阿尔茨海默病(AD)。其他CNS病症包括但不限于脑炎、脑膜炎、热带痉挛性轻截瘫、蛛网膜囊肿、亨廷顿病、闭锁综合征、帕金森病、妥瑞症(Tourette's)和多发性硬化。
本文提供了在有需要的受试者中预防或治疗受益于GLP-1R和/或胰高血糖素受体(GCGR)激动剂的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其衍生物或变体。该GLP-1可以是人GLP-1。所述免疫球蛋白融合蛋白或抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其衍生物或变体附接至延伸物肽。在其他情况下，该连接体将延伸物融合区附接至抗体区。所述疾病或状况可以是代谢疾病或病症。所述疾病或状况可以是糖尿病。在其他情况下，所述疾病或状况可以是肥胖症。其他受益于GLP-1R和/或GCGR激动剂的疾病和/或状况包括但不限于血脂异常、心血管疾病和脂肪肝疾病。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的血液病症的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是促红细胞生成素、GMCSF或其衍生物或变体。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。该GMCSF可以是人GMCSF。所述抗体可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将促红细胞生成素、GMCSF或其衍生物或变体附接至延伸物肽。该连接体可将抗体区附接至延伸物融合区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。所述血液病症可以是贫血。贫血的实例包括但不限于，遗传性干瘪细胞增多症(herditary xerocytosis)、先天性红细胞生成障碍性贫血、无Rh抗原病、传染性单核细胞增多相关贫血、药物相关贫血、再生障碍性贫血、小红细胞性贫血、大细胞性贫血、正常红细胞性贫血、溶血性贫血、异形红细胞性贫血(poikilocytic anemia)、球形红细胞性贫血、镰状细胞性贫血、正常色素性贫血、高色性贫血、低色素性贫血、大红细胞-正常色素性贫血、小红细胞-低色素性贫血、正常红细胞正常色素性贫血、缺铁性贫血、恶性贫血、叶酸盐缺乏性贫血、地中海贫血、铁粒幼红细胞性贫血、失血后贫血、镰状细胞贫血、慢性贫血、失利用性贫血、自身免疫性溶血性贫血(autoimmune haemolytic anemia)、库利贫血(Cooley's anemia)、药物诱发的免疫溶血性贫血、成红细胞性贫血、再生不良性贫血、戴-布二氏贫血(Diamond-Blackfan anemia)、皮尔森贫血(Pearson's anemia)、短暂性贫血、范科尼贫血(Fanconi's anemia)、莱德勒贫血(Lederer's anemia)、骨髓病性贫血(myelpathic anemia)、营养性贫血、刺状细胞性贫血、Von Jaksh贫血、铁粒幼红细胞贫血(sideroblatic anemia)、铁缺乏性贫血、α地中海贫血、β地中海贫血、血红蛋白H病、急性后天性溶血性贫血、温性自身免疫性溶血性贫血、冷性自身免疫性溶血性贫血、原发性冷性自身免疫性溶血性贫血、继发性冷性自身免疫性溶血性贫血、继发性自身免疫性溶血性贫血、原发性自身免疫性溶血性贫血、x-连锁的铁粒幼红细胞性贫血、吡哆醇有效性贫血、营养铁粒幼红细胞性贫血、吡哆醇缺乏诱导的铁粒幼红细胞性贫血、铜缺乏诱导的铁粒幼红细胞性贫血、环丝氨酸诱导的铁粒幼红细胞性贫血、氯霉素诱导的铁粒幼红细胞性贫血、乙醇诱导的铁粒幼红细胞性贫血、异烟肼诱导的铁粒幼红细胞性贫血、药物诱导的铁粒幼红细胞性贫血、毒素诱导的铁粒幼红细胞性贫血、小红细胞高色性贫血(microcytic hyperchromic anemia)、大红细胞高色性贫血、巨红细胞正常色素性贫血、药物诱导的免疫性溶血性贫血、非遗传性球形红细胞性贫血、遗传性球形红细胞性贫血和先天性球形红细胞性贫血。在其他情况下，该血液病症可以是疟疾。或者，该血液疾病可以是淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤或骨髓增生异常综合征。该血液病症可以是中性粒细胞减少、Shwachmann-Daimond综合征、科斯特曼综合征(Kostmann syndrome)、慢性肉芽肿病、白细胞粘附缺陷、髓过氧化物酶缺乏症(meyloperoxidase deficiency)或切-东二氏综合征(Chediak Higashi syndrome)。
本文提供了在有需要的受试者中预防或治疗受益于刺激或增加白细胞产生的疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是GMCSF或其衍生物或变体。GMCSF可以是人GMCSF。所述免疫球蛋白融合蛋白或抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将抗体区附接至延伸物融合区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。所述疾病或病症可以是中性粒细胞减少、Shwachmann-Daimond综合征、科斯特曼综合征、慢性肉芽肿病、白细胞粘附缺陷症、髓过氧化物酶缺乏症或切-东二氏综合征。
本文提供了在有需要的受试者中预防或治疗受益于刺激或增加红细胞产生的疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是促红细胞生成素或其衍生物或变体。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。所述抗体可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将促红细胞生成素或其衍生物或变体附接至延伸物肽。该连接体可将抗体区附接至延伸物融合区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。所述疾病或病症可以是贫血。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的肥胖症的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是GLP-1或其衍生物或变体。该GLP-1可以是人GLP-1。治疗剂可以是FGF21或其衍生物或变体。该FGF21可以是人FGF21。治疗剂可以是毒蜥外泌肽-4或其衍生物或变体。所述抗体可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将GLP-1、毒蜥外泌肽-4、FGF21或其衍生物或变体附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的疼痛的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。受试者可以是哺乳动物。在某些情况下，该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是Mamba1或其衍生物或变体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将Mamba1或其衍生物或变体附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。
本文提供了在有需要的受试者中预防或治疗受益于调节钠离子通道的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。受试者可以是哺乳动物。在某些情况下，哺乳动物可以是人。或者，哺乳动物可以是牛。所述一种或多种抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体还包含连接体。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。
本文提供了在有需要的受试者中预防或治疗受益于调节酸敏感离子通道(ASIC)的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。受试者可以是哺乳动物。在某些情况下，该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是Mamba 1或其衍生物或变体。治疗剂可以是嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂或其衍生物或变体。所述一种或多种抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体还包含连接体。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。调节ASIC可包括抑制或阻断ASIC。调节ASIC可包括激活ASIC。所述疾病或状况可以是中枢神经系统病症。在其他情况下，所述疾病或状况是疼痛。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的病原性感染的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是α-干扰素或其衍生物或变体。治疗剂可以是β-干扰素或其衍生物或变体。所述抗体可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将α-干扰素、β-干扰素或其衍生物或变体附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。所述病原性感染可以是细菌感染。所述病原性感染可以是真菌感染。所述病原性感染可以是寄生虫感染。所述病原性感染可以是病毒感染。该病毒感染可以是疱疹病毒。
本文提供了预防或治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。所述组合物还可包含药学上可接受的载体。受试者可以是哺乳动物。该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是β-干扰素或其衍生物或变体。抗体可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。该免疫球蛋白结构域可以来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域可以来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体可以是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。所述癌症可以是恶性血液肿瘤。该恶性血液肿瘤可以是白血病或淋巴瘤。该恶性血液肿瘤可以是B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、毛细胞白血病、慢性髓样白血病、套细胞淋巴瘤、结节状淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病或小淋巴细胞性白血病。
本文提供了在有需要的受试者中预防或治疗将受益于受体的调节的疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用本文公开的组合物。免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，所述免疫球蛋白融合蛋白包含一种或多种免疫球蛋白融合蛋白，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。受试者可以是哺乳动物。在某些情况下，该哺乳动物可以是人。或者，该哺乳动物可以是牛。治疗剂可以是hGCSF或其衍生物或变体并且受体可以是GCSFR。治疗剂可以是促红细胞生成素或其衍生物或变体并且受体可以是EPOR。治疗剂可以是毒蜥外泌肽-4或其衍生物或变体并且受体可以是GLP1R。治疗剂可以是GLP-1或其衍生物或变体并且受体可以是GLP1R。治疗剂可以是hLeptin或其衍生物或变体并且受体可以是LepR。治疗剂可以是hGH或其衍生物或变体并且受体可以是GHR。治疗剂可以是干扰素-α或其衍生物或变体并且受体可以是IFNR。治疗剂可以是干扰素-β或其衍生物或变体并且受体可以是IFNR。治疗剂可以是松弛素或其衍生物或变体并且受体可以是LGR7。治疗剂可以是GMCSF或其衍生物或变体并且受体可以是GMCSFR。所述一种或多种抗体、抗体片段或免疫球蛋白构建体还包含连接体。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。所述疾病或状况可以是自身免疫病。该自身免疫病可以是T-细胞介导的自身免疫病。所述疾病或状况可以是代谢失调。该代谢失调可以是糖尿病。所述疾病或状况可以是炎性病症。该炎性病症可以是多发性硬化。所述疾病或状况可以是细胞增殖性病症。所述疾病或状况可以是血液病症。该血液病症可以是中性粒细胞减少。该血液病症可以是贫血。所述疾病或状况可以是病原性感染。该病原性感染可以是病毒感染。所述疾病或状况可以是生长障碍。所述疾病或状况可以是心血管状况。该心血管状况可以是急性心力衰竭。调节受体可包括抑制或阻断该受体。调节受体可包括激活该受体。治疗剂可以充当受体激动剂。治疗剂可以充当受体拮抗剂。
本文提供了预防或治疗有需要的哺乳动物的疾病的方法，其包括向所述哺乳动物施用本文描述的药物组合物。在一些实施方案中，该疾病可以是传染病。在一些实施方案中，该传染病可以是乳腺炎。在一些实施方案中，该传染病可以是呼吸疾病。在一些实施方案中，该呼吸疾病可以是航运热的牛呼吸疾病。在一些实施方案中，有需要的哺乳动物可以是选自牛、骆驼、驴、山羊、马、驯鹿、绵羊、水牛、驼鹿和牦牛的食乳动物。在一些实施方案中，有需要的哺乳动物可以是牛。
本文可提供预防或治疗乳畜动物的乳腺炎的方法，该方法包括向所述乳蓄动物提供有效量的包含本文公开的一种或多种免疫球蛋白融合蛋白的组合物。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含氨基酸序列的延伸物肽，该氨基酸序列包含α螺旋和(i)包含7个或更少的基于或衍生自超长CDR3的氨基酸的氨基酸序列或(ii)不包含超长CDR3的氨基酸序列；以及(b)治疗剂。治疗剂可以是GCSF。该GCSF可以是牛GCSF。该GCSF可以是人GCSF。在一些实施方案中，乳蓄动物可以是奶牛或水牛。
本文提供了通过向受试者施用有效量的本文所述免疫球蛋白融合蛋白或药物组合物来治疗、抑制和预防有需要的受试者的疾病或状况的方法。该免疫球蛋白融合蛋白可以是基本纯化的(例如，基本不含限制其效果或产生不期望的副作用的物质)。受试者可以是动物，包括但不限于诸如牛、猪、绵羊、山羊、兔、马、鸡、猫、狗、小鼠等动物。受试者可以是哺乳动物。受试者可以是人。受试者可以是非人灵长类动物。或者，受试者可以是牛。受试者可以是禽类、爬行动物或两栖动物。
其他用途
本文还公开了免疫球蛋白融合蛋白(IFP)在制备用于治疗疾病或状况的药物中的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗疾病或状况的药物中的用途，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至非抗体区的抗体区。本文还公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗疾病或状况的药物中的用途，该IFP包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。非抗体区可插入到抗体区内。非抗体区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。非抗体区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。非抗体区可与抗体区缀合。非抗体可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可包含GCSF。该GCSF可以是人GCSF。治疗剂可以是Moka1。治疗剂可以是VM24。治疗剂可以是毒蜥外泌肽-4。治疗剂可以是促红细胞生成素。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。治疗剂可以是hLeptin。治疗剂可以是生长激素(GH)。该生长激素可以是人生长激素(hGH)。治疗剂可以是干扰素-α。治疗剂可以是干扰素-β。治疗剂可以是GLP-1。治疗剂可以是嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂。治疗剂可以是松弛素。治疗剂可以是Mamba1。治疗剂可以是弹力素。治疗剂可以是betatrophin。治疗剂可以是GDF11。治疗剂可以是GMCSF。所述疾病或状况可以是自身免疫病、异种免疫疾病或状况、炎性疾病、病原性感染、血栓栓塞性病症、呼吸疾病或状况、代谢疾病、中枢神经系统(CNS)病症、骨疾病或癌症。在其他情况下，所述疾病或状况是血液病症。在一些情况下，所述疾病或状况是肥胖症、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。所述疾病或状况可以是生长障碍。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗细胞增殖性病症的药物中的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。所述细胞增殖性病症可以是癌症。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。非抗体区可插入到抗体区内。非抗体区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。非抗体区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。非抗体区可与抗体区缀合。非抗体区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗代谢失调的药物中的用途。该代谢失调可以是糖尿病。糖尿病可以是I型糖尿病。糖尿病可以是II型糖尿病。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是毒蜥外泌肽-4。治疗剂可以是GLP-1。治疗剂可以是hLeptin。治疗剂可以是betatrophin。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗自身免疫疾病或状况的药物中的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是Moka1。治疗剂可以是VM24。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗炎性疾病或状况的药物中的用途。该炎性疾病或状况可以是多发性硬化。IFP可以是本文公开的任意IFP。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是弹力素。治疗剂可以是干扰素-β。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗中枢神经系统疾病或状况的药物中的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该中枢神经系统疾病或状况可以是疼痛。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是Mamba1。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗心血管疾病或状况的药物中的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该心血管疾病或状况可以是急性心力衰竭。该心血管疾病或状况可以是心肌肥大。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是松弛素。治疗剂可以是GDF11。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗血液疾病或状况的药物中的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该血液疾病或状况可以是贫血。该血液疾病或状况可以是中性粒细胞减少。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是GCSF。该GCSF可以是人GCSF。治疗剂可以是促红细胞生成素。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。治疗剂可以是GMCSF。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗病原性感染的药物中的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该病原性感染可以是病毒感染。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是干扰素-α。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗生长障碍的药物中的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该生长障碍的实例包括但不限于，软骨发育不全、儿童软骨发育不全、肢端肥大症、肥胖性生殖器退化、侏儒症、巨人症、Brooke Greenberg、偏侧肥大、软骨发育不良、詹森氏干骺端软骨发育异常(Jansen's metaphyseal chondrodysplasia)、科瓦尔斯基综合征(Kowarski syndrome)、Léri–Weill软骨骨生成障碍、局部巨人症、脂瘤性营养异常性巨大发育、Majewski多指综合征、II型小头骨发育不良先天性侏儒症(microcephalic osteodysplastic primordial dwarfism)、侏儒、生长过度综合征、类扭伤性侏儒、先天性侏儒症、假性软骨发育不全、心理障碍性矮小(psychosocial shortstature)、塞克尔综合征(Seckel syndrome)、短肋-多指综合征和Silver–Russell综合征。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是生长激素。该生长激素可以是人生长激素(hGH)。
本文还公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗疾病或状况的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可包含GCSF。该GCSF可以是人GCSF。治疗剂可以是Moka1。治疗剂可以是VM24。治疗剂可以是毒蜥外泌肽-4。治疗剂可以是促红细胞生成素。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。治疗剂可以是hLeptin。治疗剂可以是生长激素(GH)。该生长激素可以是人生长激素(hGH)。治疗剂可以是干扰素-α。治疗剂可以是干扰素-β。治疗剂可以是GLP-1。治疗剂可以是松弛素。治疗剂可以是嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂。治疗剂可以是Mamba1。治疗剂可以是弹力素。治疗剂可以是betatrophin。治疗剂可以是GDF11。治疗剂可以是GMCSF。所述疾病或状况可以是自身免疫病、异源免疫疾病或状况、炎性疾病、病原性感染、血栓栓塞性病症、呼吸疾病或状况、代谢疾病、中枢神经系统(CNS)病症、骨疾病或癌症。在其他情况下，所述疾病或状况是血液病症。在一些情况下，所述疾病或状况是肥胖症、糖尿病、骨质疏松症、贫血或疼痛。所述疾病或状况可以是生长障碍。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗有需要的受试者的细胞增殖性病症的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该细胞增殖性病症可以是癌症。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗有需要的受试者的代谢失调的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该代谢失调可以是糖尿病。糖尿病可以是I型糖尿病。糖尿病可以是II型糖尿病。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是毒蜥外泌肽-4。治疗剂可以是GLP-1。治疗剂可以是hLeptin。治疗剂可以是betatrophin。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗有需要的受试者的自身免疫病或状况的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是Moka1。治疗剂可以是VM24。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗有需要的受试者的炎性疾病或状况的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该炎性疾病或状况可以是多发性硬化。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是弹力素。治疗剂可以是干扰素-β。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗有需要的受试者的中枢神经系统疾病或状况的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该中枢神经系统疾病或状况可以是疼痛。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是Mamba1。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗有需要的受试者的心血管疾病或状况的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该心血管疾病或状况可以是急性心力衰竭。该心血管疾病或状况可以是心肌肥大。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是松弛素。治疗剂可以是GDF11。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗有需要的受试者的血液疾病或状况的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该血液疾病或状况可以是贫血。该血液疾病或状况可以是中性粒细胞减少。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是GCSF。该GCSF可以是人GCSF。治疗剂可以是促红细胞生成素。该促红细胞生成素可以是人促红细胞生成素。治疗剂可以是GMCSF。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗有需要的受试者的病原性感染的用途。IFP可以是本文公开的任意IFP。该病原性感染可以是病毒感染。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是干扰素-α。
本文公开了免疫球蛋白融合蛋白用于治疗有需要的受试者的生长障碍的用途。该生长障碍的实例包括但不限于，软骨发育不全、儿童软骨发育不全、肢端肥大症、肥胖性生殖器退化、侏儒症、巨人症、Brooke Greenberg、偏侧肥大、软骨发育不良、詹森氏干骺端软骨发育异常(Jansen's metaphyseal chondrodysplasia)、科瓦尔斯基综合征(Kowarskisyndrome)、Léri–Weill软骨骨生成障碍、局部巨人症、脂瘤性营养异常性巨大发育、Majewski多指综合征、II型小头骨发育不良先天性侏儒症(microcephalicosteodysplastic primordial dwarfism)、侏儒、生长过度综合征、类扭伤性侏儒、先天性侏儒症、假性软骨发育不全、心理障碍性矮小(psychosocial short stature)、塞克尔综合征(Seckel syndrome)、短肋-多指综合征和Silver–Russell综合征。IFP可以是本文公开的任意IFP。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至非抗体区的抗体区。非抗体区可包含治疗剂。非抗体区可包含延伸物肽。非抗体区可包含连接体肽。非抗体区可包含蛋白水解切割位点。该免疫球蛋白融合蛋白可包含附接至延伸物融合区的抗体区。延伸物融合区可包含治疗剂。延伸物融合区可包含延伸物肽。延伸物融合区可包含连接体肽。延伸物融合区可包含蛋白水解切割位点。IFP可以包含附接至抗体区的非抗体区，其中抗体区包含超长CDR3的6个或更少的氨基酸。非抗体区可包含一个或多个治疗剂。在一些情况下，该免疫球蛋白融合蛋白包含附接至延伸物融合区的抗体区，其中该延伸物融合区包含(a)包含至少一个二级结构的延伸物肽；和(b)治疗剂。延伸物融合区可插入到抗体区内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白重链内。延伸物融合区可插入到抗体区的免疫球蛋白轻链内。延伸物融合区可与抗体区缀合。延伸物融合区可与抗体区内的位置缀合。抗体区可包含一个或多个免疫球蛋白结构域。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白A、免疫球蛋白D、免疫球蛋白E、免疫球蛋白G或免疫球蛋白M。该免疫球蛋白结构域可以是免疫球蛋白重链区或其片段。在一些情况下，该免疫球蛋白结构域来自哺乳动物抗体。或者，该免疫球蛋白结构域来自嵌合抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自工程化抗体或重组抗体。该免疫球蛋白结构域可以来自人源化的、人工程化的或完全人的抗体。哺乳动物抗体可以是牛抗体。哺乳动物抗体可以是人抗体。在其他情况下，哺乳动物抗体是鼠抗体。所述免疫球蛋白融合蛋白、抗体区和/或延伸物融合区还可包含一个或多个连接体。该连接体可将治疗剂附接至延伸物肽。该连接体可将延伸物融合区附接至抗体区。该连接体可将蛋白水解切割位点附接至抗体区、延伸物融合区、延伸物肽或治疗剂。治疗剂可以是肽或其衍生物或变体。或者，治疗剂是小分子。治疗剂可以是生长激素。生长激素可以是人生长激素(hGH)。
药理学性质
本文还公开了改善治疗剂的一种或多种药理学性质的方法。该方法可包括产生本文公开的免疫球蛋白融合蛋白。药理学性质的实例可包括但不限于半衰期、稳定性、溶解度、免疫原性、毒性、生物利用度、吸收、释放、分布、代谢和排泄。释放可以指治疗剂从药物制剂释放的过程。吸收可以指物质进入血液循环的过程。分布可以指物质在身体的整个体液和组织中的分散或散布。代谢(或生物转化或失活)可以指生物识别出外来物质的存在并且使母体化合物不可逆地转化为子代代谢物。排泄可以指物质从身体的去除。
治疗剂的半衰期可以比未缀合的治疗剂的半衰期长。施用于受试者时，治疗剂的半衰期可以大于4小时、大于6小时、大于12小时、大于24小时、大于36小时、大于2天、大于3天、大于4天、大于5天、大于6天、大于7天、大于8天、大于9天、大于10天、大于11天、大于12天、大于13天或大于14天。施用于受试者时，治疗剂的半衰期可以大于4小时。施用于受试者时，治疗剂的半衰期可以大于6小时。
治疗剂的半衰期可以增加至少约2、4、6、8、10、12、14、16、18或20小时或更多个小时。治疗剂的半衰期可以增加至少约2小时。治疗剂的半衰期可以增加至少约4小时。治疗剂的半衰期可以增加至少约6小时。治疗剂的半衰期可以增加至少约8小时。
治疗剂的半衰期可以至少约1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10倍于未缀合的治疗肽的半衰期。包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以至少约15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50倍于未缀合的治疗肽的半衰期。包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以至少约2倍于未缀合的治疗肽的半衰期。包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以至少约5倍于未缀合的治疗肽的半衰期。包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以至少约10倍于未缀合的治疗肽的半衰期。
包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以比未缀合的治疗肽的半衰期长至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或97％。包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以比未缀合的治疗肽的半衰期长至少约10％。包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以比未缀合的治疗肽的半衰期长至少约20％。包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以比未缀合的治疗肽的半衰期长至少约30％。包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以比未缀合的治疗肽的半衰期长至少约40％。包含本文所述抗体的治疗剂的半衰期可以比未缀合的治疗肽的半衰期长至少约50％。
实施例
实施例1：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF融合蛋白载体的构建
编码牛GCSF(bGCSF)的基因(SEQ ID NO:186)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使免疫球蛋白融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ IDNO:179，n＝1)的柔性连接体添加到bGCSF片段的两端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到bGCSF-连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的bGCSF基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。对基于曲妥珠单抗-卷曲的bGCSF融合蛋白进一步修饰以用含有三个突变体(S228P、F234A和L235A)的hIgG4CH1-CH3恒定区替换曲妥珠单抗的hIgG1 CH1-CH3恒定区，以产生曲妥珠单抗-卷曲bGCSF HC(SEQ ID NO:38)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接产生基于曲妥珠单抗-卷曲的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例2：用于在哺乳动物细胞中表达的牛-卷曲-bGCSF融合蛋白载体的构建
编码牛GCSF(bGCSF)的基因(SEQ ID NO:186)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使免疫球蛋白融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ IDNO:179，n＝1)的柔性连接体添加到bGCSF片段的两端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到bGCSF-连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的bGCSF基因的PCR片段移植到牛IgG抗体(BLV1H12)的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以产生牛-卷曲bGCSF HC(SEQ ID NO:39)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接产生基于牛-卷曲的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码牛IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:18)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例3：基于曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF和基于牛-卷曲-bGCSF的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF融合蛋白重链(SEQ ID NO:38)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:1)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。基于牛-卷曲-bGCSF的融合蛋白通过采用编码牛-卷曲-bGCSF融合蛋白重链(SEQ ID NO:39)和牛轻链(SEQ ID NO:18)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析。如图4所示，泳道1示出了蛋白质分子量标记，泳道2示出了牛-卷曲IgG，泳道3示出了用DTT处理的牛-卷曲IgG，泳道4示出了牛-卷曲-bGCSF IgG，泳道5示出了用DTT处理的牛-卷曲-bGCSF IgG，泳道6示出了曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF，泳道7示出了用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF，泳道8示出了曲妥珠单抗IgG，并且泳道9示出了用DTT处理的曲妥珠单抗IgG。
实施例4：曲妥珠单抗-卷曲bGCSF融合蛋白和牛-卷曲bGCSF融合蛋白对小鼠NFS-60细胞的增殖活性的体外研究
小鼠NFS-60细胞从美国模式培养物保藏所(American Type CultureCollection)(ATCC)(VA)获得，并在补充有10％胎牛血清(FBS)、0.05mM 2-巯基乙醇和62ng/ml人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的RPMI-1640培养基中培养。为进行增殖测定，将小鼠NFS-60细胞用RPMI-1640培养基洗涤三次并以1.5×105个细胞/ml的密度重悬于具有10％FBS和0.05mM 2-巯基乙醇的RPMI-1640培养基中。在96孔板中，将100μl的细胞悬浮液添加至每个孔中，随后添加不同浓度的曲妥珠单抗IgG(SEQ ID NO:22和19)、曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF IgG(SEQ ID NO:69和19)、牛-卷曲IgG(SEQ ID NO:36和271)、牛-卷曲-bGCSFIgG(SEQ ID NO:70和36)以及bGCSF(SEQ ID NO:227)。将该板在5％CO2培养箱中在37℃下温育72小时。然后将细胞在37℃下用阿尔玛蓝(AlamarBlue)(Invitrogen)(细胞悬浮液的1/10体积)处理4小时。读取指示细胞活力的每个孔在595nm处的荧光并且其在表13中示出。图6示出了数据的图示。曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF IgG的EC50为2.49±0.26ng/mL。牛-卷曲-bGCSF IgG的EC50为2.55±0.38ng/mL。bGCSF的EC50为4.87±0.29ng/mL。
Figure GDA0000939834710001601
实施例5：曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF与Her2受体的结合
通过ELISA考察曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF融合蛋白对Her2受体的结合亲和力。在4℃下将人Her2-Fc嵌合体(5ug/mL)(R&D Systems)包被于96孔ELISA板上过夜，随后在37℃下用含1％BSA的PBS(pH7.4)封闭2小时。在用含0.05％Tween-20的PBS(pH7.4)洗涤后，将不同浓度的曲妥珠单抗IgG(SEQ ID NO:22和19)和曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF(SEQ ID NO:69和19)融合蛋白添加到每个孔中并在37℃下温育2小时。随后，添加具有HRP缀合物的山羊多克隆抗-人κ轻链抗体(Sigma)，并在37℃下温育2小时。随后对孔进行洗涤，并通过向每个孔添加荧光过氧化物酶底物，根据425nm处的荧光强度来考察结合亲和力。表2示出了曲妥珠单抗IgG和曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF IgG在425nm处的荧光强度。图7示出了表14中的数据的图示。如图7所示，泳道1代表曲妥珠单抗IgG，并且泳道2代表曲妥珠单抗-卷曲-bGCSF IgG。曲妥珠单抗IgG的EC50为110±14pM。
Figure GDA0000939834710001611
实施例6：用于在哺乳动物细胞中表达的基于BLV1H12betatrophin的融合蛋白载体的构建
编码betatrophin的基因(SEQ ID NO:198)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179，n＝1)的柔性连接体添加到betatrophin片段的两端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码感兴趣的基因的PCR片段移植到牛IgG抗体(BLV1H12)的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以产生BLV1H12-直接betatrophin融合体(SEQ ID NO:118)。为了产生基于BLV1H12-卷曲betatrophin的融合蛋白，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到betatrophin-连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将包含betatrophin、连接体和延伸物肽的PCR片段移植到BLV1H12抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以产生曲妥珠单抗-卷曲betatrophin(CDRH3)HC(SEQ ID NO:66)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接产生基于BLV1H12-betatrophin的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码BLV1H12抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:18)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例7：BLV1H12betatrophin融合蛋白的表达和纯化
BLV1H12-直接betatrophin融合蛋白通过采用编码BLV1H12-直接betatrophin融合蛋白重链(SEQ ID NO:140)和BLV1H12轻链(SEQ ID NO:36)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。BLV1H12-卷曲betatrophin融合蛋白通过采用编码BLV1H12-卷曲betatrophin融合蛋白重链(SEQ ID NO:97)和BLV1H12轻链(SEQ ID NO:36)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过蛋白质印迹法(Western blot)进行分析(图8)。如图8所示，泳道1含有蛋白质分子量标记；泳道2含有用DTT处理的BLV1H12-卷曲betatrophin融合蛋白(SEQ ID NO:97和36)；并且泳道3含有BLV1H12-卷曲betatrophin融合蛋白(SEQ ID NO:97和36)。
实施例8：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-直接bGCSF蛋白载体的构建
编码bGCSF的基因(SEQ ID NO:186)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179，n＝1)的柔性连接体添加到bGCSF片段的两端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码感兴趣的基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以产生曲妥珠单抗-直接bGCSF融合体(SEQ ID NO:101)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen，CA)的框内连接产生基于曲妥珠单抗-bGCSF的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例9：曲妥珠单抗-直接bGCSF融合蛋白的表达和纯化
曲妥珠单抗-直接bGCSF融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-直接bGCSF融合蛋白重链(SEQ ID NO:123)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析(图10)。如图10所示，泳道1含有蛋白质分子量标记；泳道2含有曲妥珠单抗-直接bGCSF融合蛋白(SEQ ID NO:123和19)；并且泳道3含有用DTT处理的曲妥珠单抗-直接bGCSF融合蛋白(SEQ ID NO:123和19)。
实施例10：曲妥珠单抗-直接bGCSF融合蛋白对小鼠NFS-60细胞的增殖活性的体外研究
小鼠NFS-60细胞从美国模式培养物保藏所(ATCC)(VA)获得，用RPMI-1640培养基洗涤三次，并以1.5x105个细胞/ml的密度重悬于补充有10％胎牛血清(FBS)和0.05mM 2-巯基乙醇的RPMI-1640培养基中。在96孔板中，将100μl的细胞悬浮液添加至每个孔中，随后添加不同浓度的曲妥珠单抗-直接bGCSF IgG(SEQ ID NO:123和19)和bGCSF(SEQ ID NO:227)。将该板在5％CO2培养箱中在37℃下温育72小时。然后将细胞在37℃下用阿尔玛蓝(Invitrogen)(细胞悬浮液的1/10体积)处理4小时。读取指示细胞活力的每个孔595nm处的荧光。图11示出了数据的图示。曲妥珠单抗-直接-bGCSF IgG的EC50为1.8±0.4ng/mL。bGCSF的EC50为1.3±0.2ng/mL。
实施例11：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4融合蛋白载体的构建
编码毒蜥外泌肽-4(Ex-4)的基因(SEQ ID NO:188)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。将因子Xa的切割位点(SEQ ID NO:182)置于Ex-4的N-末端的前方。在将因子Xa蛋白酶切割位点和GGGGSC连接体(SEQ ID NO:277)添加至Ex-4基因片段的C-末端之前，立即添加柔性CGGGGS连接体(SEQ ID NO:276)以增加融合蛋白的折叠和稳定性。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到毒蜥外泌肽-4连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码感兴趣的基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。用含有七个突变(E233P、L234V、L235A、ΔG236、A327G、A330S和P331S)的人hIgG1 CH1-CH3恒定区对基于曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4的融合蛋白进行修饰，以产生曲妥珠单抗-卷曲-Ex4HC融合体(SEQID NO:40)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen，CA)的框内连接产生基于曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例12：基于曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4融合蛋白重链(SEQ ID NO:71)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析。按照制造商的方案，用因子Xa蛋白酶(GE Healthcare)进一步处理基于曲妥珠单抗-卷曲的Ex-4融合蛋白，以释放融合的肽的N-末端。处理后，将融合蛋白通过蛋白质A/G亲和柱进行再纯化以去除蛋白酶，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析(如图12所示)。泳道1是蛋白质分子量标记。泳道2是曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4IgG(SEQ IDNO:71和19)。泳道3是用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4IgG(SEQ ID NO:71和19)。泳道4是蛋白质分子量标记。泳道5是用因子Xa切割后(从而释放Ex-4肽的N-末端以产生曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4RN IgG)的曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4IgG(SEQ ID NO:71和19)，其中RN是所释放的N-末端的缩写。泳道6是用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4RN IgG。
实施例13：曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4IgG的电喷雾电离质谱(ESI-MS)
将在PBS(pH 7.4)中的10μg纯化的曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4重链(HC)融合体(SEQ ID NO:71和19)在37℃下用1μL(500单位)的肽-N-糖苷酶(NEB)处理过夜，随后添加50mM DTT。使用来自Agilent Technology的6520Q-TOF LC/MS通过ESI-MS对融合蛋白进行分析。在图13中示出了色谱图。曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4HC的预期分子量为56,880Da。曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4HC的实测分子量为56,748Da。实测分子量与预期分子量(缺失第一氨基酸谷氨酸(E))相关。
实施例14：曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4RN IgG的电喷雾电离质谱(ESI-MS)
将在PBS(pH 7.4)中的10μg纯化的因子Xa切割的曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4重链(HC)融合体(SEQ ID NO:71和19)在37℃下用1μL(500单位)的肽-N-糖苷酶(NEB)处理过夜，随后添加50mM DTT。使用来自Agilent Technology的6520Q-TOF LC/MS通过ESI-MS对切割的融合蛋白片段进行分析。图14(A)中示出了N-末端片段的色谱图，且图14(B)中示出了C-末端片段的色谱图。曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4HC RN N-末端片段的预期分子量为13,309Da。曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4HC RN N-末端片段的实测分子量为13,307Da。曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4HC RN C-末端片段的预期分子量为43,589Da。曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4HC RN C-末端片段的实测分子量为43,458Da。
实施例15：曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4融合蛋白对GLP-1受体(GLP-1R)的激活活性的体外研究
将过表达表面GLP-1R和cAMP响应性萤光素酶报道基因的HEK293细胞以每孔5000个细胞的密度接种到384孔板中。在37℃、5％CO2下温育24小时后，将细胞用不同浓度的毒蜥外泌肽-4肽(SEQ ID NO:228)、曲妥珠单抗(SEQ ID NO:19和22)、曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(SEQ ID NO:71和19)以及曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(SEQ ID NO:71和19)RN进行处理；并再次温育24h。随后，根据制造商的说明(Promega)使用One-Glo萤光素酶试剂进行萤光素酶测定。图15示出了数据的图示。毒蜥外泌肽-4的EC50为0.03±0.004nM。曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4的EC50为3.8±0.2nM。曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4RN的EC50为0.01±0.001nM。
实施例16：曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4融合蛋白对胰高血糖素受体的激活测定的体外研究
使过表达胰高血糖素受体(GCGR)和CRE-Luc报道基因的HEK293细胞在37℃、5％CO2下在含有10％FBS的DMEM中生长。将细胞以每孔5000个细胞的密度接种到384孔板中，并用不同浓度的胰高血糖素、毒蜥外泌肽-4肽(SEQ ID NO:228)、曲妥珠单抗(SEQ ID NO:19和22)、曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(SEQ ID NO:71和19)以及曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4(SEQ ID NO:71和19)RN融合蛋白在37℃、5％CO2下处理24小时。然后按照制造商的说明，使用One-Glo(Promega，WI)萤光素酶试剂测量发光强度。图16示出了数据的图示。
实施例17：曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4RN融合蛋白在小鼠中的药代动力学
通过静脉内(i.v.)或皮下(s.c.)注射将Ex-4(SEQ ID NO:228)(1.6mg/kg)和曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4(SEQ ID NO:71和19)RN融合蛋白(2.8mg/kg)施用于CD1小鼠(N＝3)。对于Ex-4肽，在第0天到第8天收集血液样品，而对于曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4RN融合蛋白，在第0到第14天收集血液样品。采用HEK 293-GLP-1R-CRE-Luc细胞对剩余活性进行分析。对于静脉内注射，通过取第一时间点(30分钟)的最大浓度将数据归一化。对于皮下注射，通过取第二时间点(1天)的最大浓度将数据归一化。将最大浓度的百分比对血液样品收集的时间点作图，并通过将数据拟合到以下的一级方程中来确定半衰期：A＝A0e-kt，其中，A0为初始浓度，t为时间，并且k为一级速率常数。图17示出了数据的图示。图17(A)示出了静脉内注射。图17(B)示出了皮下注射。毒蜥外泌肽-4(i.v.)的t1/2为1.5±0.2小时。曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4RN(i.v.)的t1/2为2.4±0.1天。曲妥珠单抗-卷曲毒蜥外泌肽-4RN(s.c.)的t1/2为3.9±1.2天。
实施例18：曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4RN融合蛋白在小鼠中的药效学
通过皮下(s.c.)注射将单剂的Ex-4(SEQ ID NO:228)(20μg/kg)、曲妥珠单抗(SEQID NO:19和22)(8mg/kg)和不同浓度的曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4RN(SEQ ID NO:71和19)融合蛋白施用于CD1小鼠(N＝5)。在单剂处理后30分钟、24、48、72、96、120、144、168和216小时给予葡萄糖(3g/kg，经口(p.o.))，随后在葡萄糖负荷后15、30、45、60和120分钟以及在葡萄糖负荷前即时进行血糖测量。图18示出了单剂处理后30分钟、24、48、72、96、120、144、168和216小时的数据的图示。
实施例19：曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4融合蛋白在小鼠中的药效学
通过皮下(s.c.)注射将单剂的Ex-4(SEQ ID NO:228)(20μg/kg)、曲妥珠单抗(SEQID NO:19和22)(8mg/kg)和不同浓度的曲妥珠单抗-卷曲-Ex-4(SEQ ID NO:71和19)融合蛋白施用于CD1小鼠(N＝5)。在单剂处理后2、24、48、72、96、120和144小时给予葡萄糖(3g/kg，p.o.)，随后在葡萄糖负荷后15、30、45、60和120分钟以及在葡萄糖负荷前即时进行血糖测量。图19示出了单剂处理后2、24、48、72、144、168和216小时的数据的图示。
实施例20：曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4与Her2受体的结合
通过ELISA考察曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4融合蛋白对Her2受体的结合亲和力。在4℃下将人Her2-Fc嵌合体(5ug/mL)(R&D Systems)包被于96孔ELISA板上过夜，随后在37℃下用含1％BSA的PBS(pH7.4)封闭2小时。在用含0.05％Tween-20的PBS(pH7.4)洗涤后，添加不同浓度的曲妥珠单抗IgG(SEQ ID NO:19和22)和曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4(SEQ ID NO:71和19)融合蛋白，以在37℃下温育2小时。随后，添加具有HRP缀合物的山羊多克隆抗-人κ轻链抗体(Sigma)，并在37℃下温育2小时。随后对孔进行洗涤，并通过向每个孔添加荧光过氧化物酶底物，根据425nm处的荧光强度来考察结合亲和力。
实施例21：曲妥珠单抗-卷曲-毒蜥外泌肽-4与Her2受体结合的流式细胞分析
使过表达HER2的SKBR3细胞在具有10％FBS和1％青霉素和链霉素的DMEM中生长。将细胞用冷PBS洗涤三次，用在PBS中的2％BSA封闭，并与10或100nM的曲妥珠单抗(SEQ IDNO:19和22)和曲妥珠单抗-CDR融合蛋白(SEQ ID NO:71和19)一起在4℃温和混合下温育2小时。通过用在PBS中的2％BSA洗涤来去除未结合的抗体。然后，将细胞用FITC抗-人IgG Fc(KPL，Inc.，MD)在4℃温和混合下染色1小时，随后用PBS洗涤并通过流式细胞术进行分析。
实施例22：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲-Moka融合蛋白载体的构建
编码Moka的基因(SEQ ID NO:189)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179，n＝1)的柔性连接体添加到Moka片段的两端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到Moka-连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的Moka基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。对基于曲妥珠单抗-卷曲-Moka的融合蛋白进一步修饰以用含有三个突变(S228P、F234A和L235A)的hIgG4CH1-CH3恒定区替换曲妥珠单抗的hIgG1 CH1-CH3恒定区，以产生曲妥珠单抗-卷曲-Moka IgG(SEQ ID NO:41)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen，CA)的框内连接产生基于曲妥珠单抗-卷曲-Moka的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例23：基于曲妥珠单抗-卷曲-Moka的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲-Moka的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲-Moka融合蛋白重链(SEQ ID NO:72)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析(如图20所示)。泳道1示出了蛋白质分子量标记。泳道2示出了纯化的曲妥珠单抗-卷曲-Moka IgG。泳道3示出了用DTT处理的、纯化的曲妥珠单抗-卷曲-Moka IgG。
实施例24：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲-VM24融合蛋白载体的构建
编码VM24的基因(SEQ ID NO:190)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179，n＝1)的柔性连接体添加到VM24片段的两端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到VM24-连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码感兴趣的基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。对基于曲妥珠单抗-卷曲-VM24的融合蛋白进一步修饰以用含有三个突变(S228P、F234A和L235A)的hIgG4CH1-CH3恒定区替换曲妥珠单抗的hIgG1 CH1-CH3恒定区，以产生SEQ IDNO:42。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen，CA)的框内连接产生基于曲妥珠单抗-卷曲-VM24的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例25：基于曲妥珠单抗-卷曲-VM24的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲-VM24的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲-VM24融合蛋白重链(SEQ ID NO:73)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析(如图20所示)。泳道1示出了蛋白质分子量标记。泳道4示出了纯化的曲妥珠单抗-卷曲-Vm24IgG。泳道5示出了用DTT处理的、纯化的曲妥珠单抗-卷曲-Vm24IgG。
实施例26：曲妥珠单抗-卷曲-Moka融合蛋白和曲妥珠单抗-卷曲-Vm24融合蛋白对人外周血单核细胞(PBMC)/T细胞激活的抑制活性的体外研究
通过聚蔗糖梯度离心从健康供体的新鲜静脉血中分离人PBMC，随后将其重悬于含10％FBS的RPMI1640培养基中并以1×106个细胞/ml的密度接种在96孔板中。采用T细胞富集试剂盒从分离的PBMC中纯化人T细胞。将纯化的PBMC和T细胞在37℃、5％CO2下用不同浓度的纯化的曲妥珠单抗-卷曲Moka(SEQ ID NO:72和19)和曲妥珠单抗-卷曲Vm24(SEQ IDNO:73和19)融合蛋白预处理1小时，并随后用抗CD3和CD28抗体激活。在处理24h后，收集上清液以采用ELISA试剂盒测量所分泌的TNF-α的水平。图21示出了体外T细胞激活抑制数据的图示。曲妥珠单抗-卷曲Moka IgG(SEQ ID NO:72和19)的EC50为269±46nM。曲妥珠单抗-卷曲Vm24IgG(SEQ ID NO:73和19)的EC50为178±104nM。
实施例27：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF融合蛋白载体的构建
编码人GCSF(hGCSF)的基因(SEQ ID NO:187)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179，n＝1)的柔性连接体添加到hGCSF片段的两端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到hGCSF-连接体片段的N-和C-末端。为了产生CDRH3融合体，通过利用重叠延伸PCR将编码感兴趣的基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDRH3)中，以替换Trp99–Met107环。为了产生CDRH2融合体，通过利用重叠延伸PCR将编码感兴趣的基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区2(CDRH2)中，以替换Thr54-Asn55。为了产生CDRL3融合体，通过利用重叠延伸PCR将编码感兴趣的基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的互补决定区3(CDRL3)中，以替换Thr93-Pro95。用含有七个突变(E233P、L234V、L235A、ΔG236、A327G、A330S和P331S)的人hIgG1 CH1-CH3恒定区修饰基于曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF的融合蛋白。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen，CA)的框内连接产生基于曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例28：基于曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF融合蛋白(CDRH3)重链(SEQ ID NO:74)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:9)、曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF融合蛋白(CDRH2)重链和曲妥珠单抗轻链、以及曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF融合蛋白(CDRL3)轻链和曲妥珠单抗重链的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific，IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析。图22示出了纯化的基于曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF的融合蛋白。泳道1示出了纯化的曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRH2)IgG。泳道2示出了用DTT处理的、纯化的曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRH2)IgG。泳道3示出了蛋白质分子量标记。泳道4示出了纯化的曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)IgG。泳道5示出了用DTT处理的、纯化的曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)IgG。
实施例29：基于曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF的电喷雾电离质谱(ESI-MS)
将在PBS(pH 7.4)中的10μg纯化的曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRH2)在37℃下用1μL(500单位)的肽-N-糖苷酶(NEB)处理过夜，随后添加50mM DTT。使用来自AgilentTechnology的6520Q-TOF LC/MS通过ESI-MS对融合蛋白进行分析。图23(A)中示出了色谱图。曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRH2)HC的预期分子量为71,472Da。曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRH2)HC的实测分子量为72,300Da。实测分子量与hGCSF上的O-糖基化相关。将在PBS(pH7.4)中的10μg纯化的曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRL3)在37℃下用1μL(500单位)的肽-N-糖苷酶(NEB)处理过夜，随后添加50mM DTT。使用来自Agilent Technology的6520Q-TOF LC/MS通过ESI-MS对融合蛋白进行分析。图23(B)中示出了色谱图。曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRL3)LC的预期分子量为45,746Da。曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRL3)LC的实测分子量为46,692Da。实测分子量与hGCSF上的O-糖基化相关。
实施例30：基于曲妥珠单抗-卷曲hGCSF的融合蛋白与HER2受体的结合
使过表达HER2的SKBR3细胞在具有10％FBS和1％青霉素和链霉素的DMEM中生长。将细胞用冷PBS洗涤三次，用在PBS中的2％BSA封闭，并与10或100nM的曲妥珠单抗和曲妥珠单抗-CDR融合蛋白、曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRH2)和曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRL3)一起在4℃温和混合下温育2小时。通过用在PBS中的2％BSA洗涤来去除未结合的抗体。然后，将细胞用FITC抗-人IgG Fc(KPL，Inc.，MD)在4℃温和混合下染色1小时，随后用PBS洗涤并通过流式细胞术进行分析。图24示出了流式细胞术的直方图。
实施例31：曲妥珠单抗-卷曲hGCSF融合蛋白对小鼠NFS-60细胞的增殖活性的体外研究
将小鼠NFS-60细胞在补充有10％FBS、0.05mM 2-巯基乙醇和62ng/ml人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的RPMI-1640培养基中培养。为了考察曲妥珠单抗-hGCSF融合蛋白的增殖活性，将细胞用含10％FBS的RPMI-1640培养基洗涤三次，以1.5×105个细胞/ml的密度重悬于含10％FBS和0.05mM 2-巯基乙醇的RPMI-1640培养基中，与不同浓度的hGCSF、曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRH2)和曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF(CDRL3)一起接种到96孔板(每个孔1.5×104个细胞)中，并在37℃、5％CO2下温育72小时。然后，将细胞在37℃下用阿尔玛蓝(Life Technologies，CA)处理4小时。在595nm处测得的荧光强度与细胞活力成比例。图25示出了数据的图示。hGCSF的EC50为1.7±0.3ng/mL。曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRH2)的EC50为0.4±0.1ng/mL。曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)的EC50为0.9±0.1ng/mL。
实施例32：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲-hEPO融合蛋白载体的构建
编码hEPO的基因(SEQ ID NO:192)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使免疫球蛋白融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179，n＝1)的柔性连接体添加到hEPO片段的两端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到hEPO-连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的hEPO基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。用含有三个突变(S228P、F234A和L235A)的人IgG4CH1-CH3恒定区替换曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)重链的CH1-CH3恒定区，以产生曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)HC。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen，CA)的框内连接产生基于曲妥珠单抗-卷曲的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例33：曲妥珠单抗-卷曲-hEPO融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲-hEPO的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲-hEPO融合蛋白重链和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:1)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific，IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析。如图26所示，泳道1示出了蛋白质分子量标记，泳道2示出了纯化的曲妥珠单抗-卷曲-hEPO(CDRH3)和曲妥珠单抗LC，并且泳道3示出了用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲-hEPO(CDRH3)和曲妥珠单抗LC。
实施例34：基于曲妥珠单抗-卷曲-hEPO的电喷雾电离质谱(ESI-MS)
将在PBS(pH 7.4)中的10μg纯化的曲妥珠单抗-卷曲-hEPO(CDRH3)在37℃下用1μL(500单位)的肽-N-糖苷酶(NEB)处理过夜，随后添加50mM DTT。使用来自AgilentTechnology的6520Q-TOF LC/MS通过ESI-MS对融合蛋白进行分析。图27中示出了色谱图。曲妥珠单抗-卷曲-hEPO(CDRH3)HC的预期分子量为70,307Da。曲妥珠单抗-卷曲-hEPO(CDRH3)HC的实测分子量为70,177Da。实测分子量与hEPO上的O-糖基化和第一氨基酸谷氨酸(E)的缺失相关。
实施例35：基于曲妥珠单抗-卷曲hEPO的融合蛋白与HER2受体的结合
使过表达HER2的SKBR3细胞在具有10％FBS和1％青霉素和链霉素的DMEM中生长。将细胞用冷PBS洗涤三次，用在PBS中的2％BSA封闭，并与10或100nM的曲妥珠单抗和曲妥珠单抗-卷曲-hEPO(CDRH3)一起在4℃温和混合下温育2小时。通过用在PBS中的2％BSA洗涤来去除未结合的抗体。然后，将细胞用FITC抗-人IgG Fc(KPL，Inc.，MD)在4℃温和混合下染色1小时，随后用PBS洗涤，并通过流式细胞术进行分析。图28示出了流式细胞术直方图。
实施例36：曲妥珠单抗-卷曲-hEPO融合蛋白对TF-1细胞的体外增殖活性测定
将人TF-1细胞在5％CO2、37℃下在含10％胎牛血清(FBS)、青霉素和链霉素(50U/mL)和2ng/ml人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的RPMI-1640培养基中培养。为了考察曲妥珠单抗-hEPO融合蛋白的增殖活性，将细胞用具有10％FBS的RPMI-1640培养基洗涤三次，以1.5×105个细胞/ml的密度重悬于具有10％FBS的RPMI-1640培养基中，与不同浓度的hEPO、曲妥珠单抗和曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)融合蛋白一起接种到96孔板(每个孔1.5×104个细胞)中，并随后在5％CO2、37℃下温育72小时。然后将细胞在37℃下用阿尔玛蓝(Life Technologies,CA)处理4小时。在595nm处测得的荧光强度与细胞活力成比例。通过将数据拟合到以下的对数S形函数中来确定EC50值：y＝A2+(A1-A2)/(1+(x/x0)p)，其中A1为初始值，A2为最终值，x0为曲线的拐点，并且p为幂(power)。图29示出了数据的图示。hEPO的EC50为0.1±0.02nM。曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)的EC50为0.1±0.01nM。
实施例37：曲妥珠单抗hGCSF/EPO双融合蛋白的构建
编码hEPO的基因(SEQ ID NO:192)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使免疫球蛋白融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179,n＝1)的柔性连接体添加到hEPO片段的两端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到hEPO-连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的hEPO基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。用含三个突变(S228P、F234A和L235A)的人IgG4CH1-CH3恒定区替换曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)重链的CH1-CH3恒定区，以产生曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)HC(SEQ ID NO:62)。
编码人GCSF(hGCSF)的基因(SEQ ID NO:187)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179,n＝1)的柔性连接体添加到hGCSF片段的两端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到hGCSF-连接体片段的N-和C-末端。通过利用重叠延伸PCR将编码hGCSF-连接体-延伸物的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的互补决定区3(CDRL3)中，以替换Thr93-Pro95。用含七个突变(E233P、L234V、L235A、ΔG236、A327G、A330S和P331S)的人hIgG1 CH1-CH3恒定区修饰基于曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF的融合蛋白，以产生曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)LC(SEQ ID NO:63)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接产生基于曲妥珠单抗-卷曲的融合蛋白的表达载体。
实施例38：曲妥珠单抗hGCSF/EPO双融合蛋白的表达和纯化
曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF/EPO双融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)HC(SEQ ID NO:62)和曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)LC(SEQ ID NO:63)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的双融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析。如图30所示，泳道1示出了蛋白质分子量标记，泳道2示出了曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF/EPO双融合蛋白，并且泳道3示出了用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF/EPO双融合蛋白。
实施例39：基于曲妥珠单抗hGCSF/hEPO的融合蛋白的电喷雾电离质谱(ESI-MS)
将在PBS(pH 7.4)中的10μg纯化的曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF/EPO双融合蛋白(SEQID NO:62、63)在37℃下用1μL(500单位)的肽-N-糖苷酶(NEB)处理过夜，随后添加50mMDTT。使用来自Agilent Technology的6520Q-TOF LC/MS通过ESI-MS分析融合蛋白。图31(A)中示出了色谱图。曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)LC的预期分子量为45,746Da。曲妥珠单抗-卷曲hGCSF(CDRL3)LC的实测分子量为46,690Da。实测分子量与hGCSF上的O-糖基化相关。
将在PBS(pH 7.4)中的10μg纯化的曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF/EPO双融合蛋白(SEQID NO:62、63)在37℃下用1μL(500单位)的肽-N-糖苷酶(NEB)处理过夜，随后添加50mMDTT。使用来自Agilent Technology的6520Q-TOF LC/MS通过ESI-MS分析融合蛋白。图31(B)中示出了色谱法图。曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)HC的预期分子量为70,307Da。曲妥珠单抗-卷曲-hEPO(CDRH3)HC的实测分子量为70,179Da(与不具有第一氨基酸谷氨酸的曲妥珠单抗-卷曲hEPO(CDRH3)HC的质量相关)和71,126Da(与hEPO上的O-糖基化相关)。
实施例40：基于曲妥珠单抗hGCSF/hEPO的融合蛋白与HER2受体的结合
使过表达HER2的SKBR3细胞在具有10％FBS和1％青霉素和链霉素的DMEM中生长。将细胞用冷PBS洗涤三次，用在PBS中的2％BSA封闭，并与10或100nM的曲妥珠单抗和曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF/EPO双融合蛋白(SEQ ID NO:62、63)一起在4℃温和混合下温育2小时。通过用在PBS中的2％BSA洗涤去除未结合的抗体。然后，将细胞用FITC抗-人IgG Fc(KPL,Inc.,MD)在4℃温和混合下染色1小时，随后用PBS洗涤并通过流式细胞术进行分析。图32示出了流式细胞术直方图。
实施例41：曲妥珠单抗hGCSF/hEPO融合蛋白对TF-1细胞的体外增殖活性测定
将人TF-1细胞在5％CO2、37℃下在含10％胎牛血清(FBS)、青霉素和链霉素(50U/mL)和2ng/ml人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的RPMI-1640培养基中培养。为了考察曲妥珠单抗hGCSF/hEPO融合蛋白的增殖活性，将细胞用具有10％FBS的RPMI-1640培养基洗涤三次，以1.5×105个细胞/ml的密度重悬于具有10％FBS的RPMI-1640培养基中，与不同浓度的hEPO、曲妥珠单抗和曲妥珠单抗hGCSF/hEPO(CDRH3)融合蛋白(SEQ ID NO:62、63)一起接种到96孔板(每个孔1.5×104个细胞)中，并随后在5％CO2、37℃下温育72小时。然后将细胞在37℃下用阿尔玛蓝(Life Technologies,CA)处理4小时。在595nm处测得的荧光强度与细胞活力成比例。图33示出了数据的图示。hEPO的EC50为0.1±0.02nM。曲妥珠单抗-卷曲hGCSF/hEPO的EC50为0.2±0.03nM。
实施例42：曲妥珠单抗-卷曲hGCSF/hEPO融合蛋白对小鼠NFS-60细胞的增殖活性的体外研究
将小鼠NFS-60细胞在补充有10％FBS、0.05mM 2-巯基乙醇和62ng/ml人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的RPMI-1640培养基中培养。为了考察曲妥珠单抗hGCSF/hEPO融合蛋白的增殖活性，将细胞用具有10％FBS的RPMI-1640培养基洗涤三次，以1.5×105个细胞/ml的密度重悬于具有10％FBS和0.05mM 2-巯基乙醇的RPMI-1640培养基中，与不同浓度的hGCSF、曲妥珠单抗和曲妥珠单抗hGCSF/hEPO(CDRH3)融合蛋白(SEQ ID NO:62、63)一起接种到96孔板(每个孔1.5×104个细胞)中，并在5％CO2、37℃下温育72小时。然后将细胞在37℃下用阿尔玛蓝(Life Technologies,CA)处理4小时。在595nm处测得的荧光强度与细胞活力成比例。图34示出了数据的图示。hGCSF的EC50为1.7±0.3nM。曲妥珠单抗-卷曲hGCSF/hEPO的EC50为3.1±0.1nM。
实施例43：用于在哺乳动物细胞中表达的赫赛汀hGH融合蛋白载体的构建
编码hGH的基因(SEQ ID NO:201)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使免疫球蛋白融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179,n＝1)的柔性连接体添加到hGH片段的两端。为了生成赫赛汀-卷曲hGH融合蛋白，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到hGH-连接体片段的N-和C-末端。为了生成曲妥珠单抗-直接hGH(CDRH2)融合蛋白(SEQ ID NO:128)，通过利用重叠延伸PCR将编码具有连接体的hGH基因的PCR片段移植到赫赛汀IgG抗体的重链的互补决定区2(CDRH2)中。为了生成曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)融合蛋白(SEQ ID NO:75)，通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的hGH基因的PCR片段移植到赫赛汀IgG抗体的重链的互补决定区3(CDRH3)中。为了生成曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH2)融合蛋白(SEQ ID NO:76)，通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的hGH基因的PCR片段移植到赫赛汀IgG抗体的重链的互补决定区2(CDRH2)中。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接生成基于曲妥珠单抗hGH的融合蛋白的表达载体。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例44：基于曲妥珠单抗hGH的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-直接hGH的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-直接hGH(CDRH2)HC(SEQ ID NO:128)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。基于曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)HC(SEQ ID NO:75)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。基于曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH2)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH2)HC(SEQ ID NO:76)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析。如图35所示，泳道1示出了蛋白质分子量标记，泳道2示出了曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)(SEQ ID NO:75、19)，泳道3示出了用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)(SEQ ID NO:75、19)，泳道4示出了蛋白质分子量标记，泳道5示出了曲妥珠单抗-直接hGH(CDRH2)(SEQ ID NO:128和19)，泳道6示出了用DTT处理的曲妥珠单抗-直接hGH(CDRH2)(SEQ ID NO:128和19)，泳道7示出了曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH2)(SEQID NO:76、19)，并且泳道8示出了用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH2)(SEQ ID NO:76、19)。
实施例45：基于曲妥珠单抗hGH的融合蛋白的活性测定
hGHR-Ba/F3增殖测定：将鼠Ba/F3细胞系在EF1α启动子下用hGH受体(hGHR)稳定地转导。将克隆选择的hGHR-Ba/F3保持在10％FBS、RPMI1640和50ng/mL的hGH中。在96孔培养板中进行增殖测定，其中在每个孔的200μL测定培养基(RPMI1640中的10％FBS)中包含20,000个细胞。将增加浓度的hGH、曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)、曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH2)和曲妥珠单抗-直接(CDRH2)与细胞一起温育72小时。在温育期结束时，将20μl的Prestoblue添加至每个孔中，并且在550nm激发下在Spectramax荧光读板仪上记录在590nm处的荧光信号。表15中示出了hGH和曲妥珠单抗hGH融合体的EC50值。
NB2增殖测定：将大鼠Nb2-11细胞系(Sigma)保持在10％FBS、具有55μMβ-ME的RPMI中的10％马血清(HS)中。在96孔培养板中进行增殖测定，其中在每个孔的200μL测定培养基(具有55uMβ-ME的RPMI中的10％HS)中包含50,000个细胞。将增加浓度的hGH、曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)、曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH2)和曲妥珠单抗-直接(CDRH2)与细胞一起温育72小时。在温育期结束时，将20μl的Prestoblue添加至每个孔中，并且在550nm激发下在Spectramax荧光读板仪上记录在590nm处的荧光信号。表15中示出了hGH和曲妥珠单抗hGH融合体的EC50值。
Stat5磷酸化测定：将人IM9细胞(ATCC)保持在RPMI1640中的10％FBS中。在磷酸化测定的前一天晚上，将2x 10e5IM9细胞接种到V形底96孔板中的200μL测定培养基(含有1％活性炭吸附的FBS的RPMI)中并饥饿过夜。在磷酸化实验当天，将饥饿的细胞在37℃下用不同浓度的hGH、曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)、曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH2)和曲妥珠单抗-直接(CDRH2)刺激10min。刺激后，将细胞在37℃下用4％甲醛固定10min，并随后用90％甲醇渗透。随后将细胞在室温下用5％BSA封闭10min，并按照制造商建议的方案用Alexa
Figure GDA0000939834710001812
488缀合的抗-pStat5(Tyr694)(C71E5)兔mAb(Cell Signaling Technology,Inc.)染色。将细胞用PBS洗涤并通过流式细胞仪进行分析。表15中示出了hGH和曲妥珠单抗hGH融合体的EC50值。ND＝未确定。
Figure GDA0000939834710001811
实施例46：曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)药代动力学研究
在两个独立的实验组中，将曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)和健豪宁(genotropin)以在PBS中2mg/kg的浓度静脉内(i.v)或皮下(s.c.)注射至SD雌性大鼠，每次处理三只大鼠。在下列时间点采集血浆样品：30min、1hr、2hr、4hr、6hr、24hr、48hr、3天、4天、7天、10天和14天。通过hGH Human Direct ELISA试剂盒(Life Technologies)定量健豪宁的量。使用夹心式ELISA测定定量曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)。简而言之，将maxisorb ELISA板在37℃下用山羊抗-人IgG Fc(Abcam,ab98616)包被1小时，并随后用5％BSA封闭。将适当稀释的血浆添加至封闭的孔中，然后将该孔在室温下温育1小时。洗涤孔之后，将生物素化的多克隆抗-hGH抗体(R&D systems,BAF1067)施加于孔1小时。将该板洗涤并在室温下与高灵敏度链霉亲和素-HRP缀合物(Pierce,21130)一起温育1小时。彻底洗涤之后施加QuantaBlu荧光ELISA底物，并用Spectramax荧光读板仪获得信号。通过将信号外推至标准曲线的线性范围(信号对浓度)来定量血浆样品中曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)融合体的量。将各个采集时间点处的健豪宁和曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)的浓度绘图并示于图36中。图36A示出了通过静脉内注射的药代动力学。图36B示出了通过皮下注射的药代动力学。
实施例47：曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)药效学研究
在标准垂体切除的大鼠测定中评估曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)融合体的药效学表现。垂体切除的雄性大鼠购自Harlan，并在研究之前将大鼠预筛选若干天以监测手术/行进后的体重归一化。将初始体重匹配的大鼠用以下若干疗法之一进行治疗：每日皮下注射健豪宁14天(0.1mg/kg)；或每两周施用健豪宁(0.3mg/kg)或曲妥珠单抗-卷曲hGH(CDRH3)(1.0mg/kg)。每日将动物称重。在治疗期结束时，处死动物并测量骺厚度。每天将相对于第1天的体重百分比变化绘图，并示于图37中。
实施例48：用于在哺乳动物细胞中表达的基于曲妥珠单抗-卷曲hLeptin的融合蛋白载体的构建
编码hLeptin的基因(SEQ ID NO:197)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。为了使免疫球蛋白融合蛋白的折叠和稳定性最优化，将GGGGS(SEQ ID NO:179，n＝1)的柔性连接体添加到hLeptin片段的两端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到hLeptin-连接体片段的N-和C-末端。通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的hLeptin基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDRH3)中。用含七个突变(E233P、L234V、L235A、ΔG236、A327G、A330S和P331S)的人IgG1 CH1-CH3恒定区修饰曲妥珠单抗的恒定区，以生成曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)HC(SEQ ID NO:78)。为了生成CDRL3融合体，通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的hLeptin基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的互补决定区3(CDRL3)中，以替换Thr93-Pro95并生成曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRL3)(SEQ ID NO:49)。通过利用重叠延伸PCR将编码具有延伸物肽和连接体的hLeptin基因的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区2(CDRH2)中，以生成曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)HC(SEQID NO:79)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接生成基于曲妥珠单抗-卷曲hLeptin的融合蛋白的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例49：基于曲妥珠单抗-卷曲hLeptin的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)HC(SEQ ID NO:78)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。基于曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)HC(SEQ ID NO:79)和曲妥珠单抗轻链(SEQ IDNO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。基于曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRL3)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRL3)LC(SEQ ID NO:49)和曲妥珠单抗重链(SEQ ID NO:4)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析。如图38所示，泳道1示出了曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)(SEQ ID NO:79、19)，泳道2示出了用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)(SEQ ID NO:79,19)，泳道3、4和7示出了蛋白质分子量标记，泳道5示出了曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)(SEQ ID NO:78,19)，泳道6示出了用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)(SEQ ID NO:78、19)，泳道8示出了曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRL3)(SEQ ID NO:49、4)，并且泳道9示出了用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRL3)(SEQ ID NO:49、4)。
实施例50：基于曲妥珠单抗-卷曲hLeptin的融合蛋白在激活人瘦素受体(LepR)中的体外活性
将过表达人瘦素受体(LepR)的Baf3稳定细胞接种到96孔板中，用不同剂量的hLeptin(SEQ ID NO:238)、曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)(SEQ ID NO:79、19)和曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)(SEQ ID NO:78、19)处理72小时。添加1/10体积的阿尔玛蓝试剂，温育2hr，并在560nm激发下测量590nm处的荧光。使用GraphPad Prism6分析数据。图39示出了数据的图示。hLeptin的EC50为129.4±46.09ρM(图39A)。曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)的EC50为55.38±14.04ρM。曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)的EC50为99.41±18.91ρM。hLeptin的EC50为58.19±10.88ρM(图39B)。曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRL3)的EC50为665.1±62.70ρM。
实施例51：基于曲妥珠单抗-卷曲hLeptin的融合蛋白的SKBR3结合
使SKBR3细胞在具有10％FBS和1％青霉素和链霉素的DMEM中生长。将细胞用冷PBS洗涤三次，用在PBS中的2％BSA封闭，并与10或100nM的曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)(SEQ ID NO:79、19)和曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)(SEQ ID NO:78,19)一起在4℃温和混合下温育2小时。通过用在PBS中的2％BSA洗涤去除未结合的抗体。然后，将细胞用FITC抗-人IgG Fc(KPL,Inc.,MD)在4℃温和混合下染色1小时，随后用PBS洗涤并通过流式细胞术进行分析。图40示出了(A)曲妥珠单抗、(B)曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH2)和(C)曲妥珠单抗-卷曲hLeptin(CDRH3)的流式细胞术直方图。
实施例52：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲-弹力素(elafin)融合蛋白载体的构建
编码弹力素的基因(SEQ ID NO:217)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。将柔性GGGGS连接体(SEQ ID NO:179)添加至弹力素基因片段的N-末端和C-末端，以增加融合蛋白的折叠和稳定性。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到弹力素连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有连接体和延伸物片段的弹力素的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。用含七个突变(E233P、L234V、L235A、ΔG236、A327G、A330S和P331S)的人hIgG1 CH1-CH3恒定区修饰基于曲妥珠单抗-卷曲-弹力素的融合蛋白，以生成曲妥珠单抗-卷曲-弹力素HC融合体(SEQ ID NO:54)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接生成曲妥珠单抗-卷曲-弹力素(CDRH3)的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例53：基于曲妥珠单抗-卷曲-弹力素的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲-弹力素(CDRH3)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲-弹力素融合蛋白重链(SEQ ID NO:54)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析(如图41所示)。泳道1为蛋白质分子量标记。泳道2为曲妥珠单抗-卷曲-弹力素(CDRH3)IgG(SEQ ID NO:85和19)。泳道3为用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲-弹力素(CDRH3)IgG(SEQ ID NO:85和19)。
实施例54：弹性蛋白酶抑制测定
人弹性蛋白酶购自Elastin Products Company,Inc。将增加浓度的弹力素(SEQID NO:258)和曲妥珠单抗-卷曲弹力素(CDRH3)IgG(SEQ ID NO:85和19)与弹性蛋白酶在室温下一起温育，通过添加荧光弹性蛋白酶底物MeOSuc-AAPV-AMC(EMD Millipore)分析弹性蛋白酶的残留活性。通过在Spectramax荧光读板仪上在325nm激发下在420nm波长处监测来获得反应的斜率。每一个数据点一式三份并拟合到以下方程中：Q＝(Ki*(1+(S/Km)))。Y＝Vo*(1-((((Et+X+Q)-(((Et+X+Q)^2)-4*Et*X)^0.5))/(2*Et)))。图42示出了弹力素(A)和曲妥珠单抗-卷曲弹力素(CDRH3)IgG(B)对弹性蛋白酶的抑制。
实施例55：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲GLP2融合蛋白载体的构建
编码GLP2的基因(SEQ ID NO:222)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增该基因。将柔性CGGGGS连接体(SEQ ID NO:276)添加至GLP2的N-末端，并将柔性GGGGSC(SEQ ID NO:277)添加至GLP2的C-末端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到GLP2连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有连接体和延伸物片段的GLP2的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。用含七个突变(E233P、L234V、L235A、ΔG236、A327G、A330S和P331S)的人hIgG1 CH1-CH3恒定区修饰基于曲妥珠单抗-卷曲GLP2的融合蛋白，以生成曲妥珠单抗-卷曲GLP2(CDRH3)HC融合体(SEQ ID NO:65)。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接生成曲妥珠单抗-卷曲GLP2(CDRH3)的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例56：基于曲妥珠单抗-卷曲GLP2的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲GLP2(CDRH3)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲GLP2融合蛋白重链(SEQ ID NO:65)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:19)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析(如图43所示)。泳道1为蛋白质分子量标记。泳道2为曲妥珠单抗-卷曲GLP2(CDRH3)IgG(SEQ ID NO:96和19)。泳道3为用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲GLP2(CDRH3)IgG(SEQ ID NO:96和19)。
实施例57：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)融合蛋白载体的构建
编码松弛素(胰岛素c肽)的基因(SEQ ID NO:225)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。将柔性GGGGS连接体(SEQ ID NO:179)添加至松弛素的N-末端，并将柔性GGGGS(SEQ ID NO:179)添加至松弛素的C-末端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到松弛素连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有连接体和延伸物片段的松弛素(胰岛素c-肽)的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。用含七个突变(E233P、L234V、L235A、ΔG236、A327G、A330S和P331S)的人hIgG1 CH1-CH3恒定区修饰基于曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)的融合蛋白，以生成曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)(CDRH3)HC融合体。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接生成曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)(CDRH3)的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例58：基于曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)(CDRH3)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)融合蛋白重链和曲妥珠单抗轻链的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析(如图44所示)。泳道1为用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)(CDRH3)IgG。泳道2为曲妥珠单抗-卷曲松弛素(胰岛素c-肽)(CDRH3)IgG。泳道3为蛋白质分子量标记。
实施例59：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲松弛素融合蛋白载体的构建
编码包含因子Xa和PC2的内部蛋白酶切割位点(IEGRKKR(SEQ ID NO:278))的松弛素的基因由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。将柔性GGGGS连接体(SEQ ID NO:179)添加至松弛素的N-末端，并将柔性GGGGS(SEQ ID NO:179)添加至松弛素的C-末端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ IDNO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到松弛素连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有蛋白酶切割位点、连接体和延伸物片段的松弛素的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。用含七个突变(E233P、L234V、L235A、ΔG236、A327G、A330S和P331S)的人hIgG1 CH1-CH3恒定区修饰基于曲妥珠单抗-卷曲松弛素的融合蛋白，以生成曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)HC融合体。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接生成曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例60：基于曲妥珠单抗-卷曲松弛素的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲松弛素融合蛋白重链(SEQ ID NO:90)和曲妥珠单抗轻链(SEQ ID NO:18)的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析(如图45所示)。泳道1为蛋白质分子量标记。泳道2为曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)IgG。泳道3为用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)IgG。泳道4为与蛋白酶PC2共表达的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)IgG。泳道5为与PC2共表达且用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)IgG。
实施例61：用于在哺乳动物细胞中表达的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)融合蛋白载体的构建
编码包含内部6x HIS(SEQ ID NO:274)和PC2的蛋白酶切割位点(RKKR)的松弛素(XTEN35)的基因(SEQ ID NO:224)由Genscript或IDT合成，并通过聚合酶链反应(PCR)扩增。将柔性GGGGS连接体(SEQ ID NO:179)添加至松弛素(XTEN35)的N-末端，并将柔性GGGGS(SEQ ID NO:179)添加至松弛素(XTEN35)的C-末端。然后，将编码形成反向平行卷曲螺旋的延伸物肽GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)和ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)的序列添加到松弛素(XTEN35)连接体片段的N-和C-末端。随后，通过利用重叠延伸PCR将编码具有连接体和延伸物片段的松弛素(XTEN35)的PCR片段移植到曲妥珠单抗IgG抗体的重链的互补决定区3(CDR3H)中，以替换Trp99–Met107环。用含七个突变(E233P、L234V、L235A、ΔG236、A327G、A330S和P331S)的人hIgG1 CH1-CH3恒定区修饰基于曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)的融合蛋白，以生成曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)HC融合体。通过扩增的融合基因与pFuse骨架载体(InvivoGen,CA)的框内连接生成曲妥珠单抗-卷曲松弛素(CDRH3)的表达载体。相似地，将编码曲妥珠单抗IgG抗体的轻链的基因(SEQ ID NO:1)克隆到pFuse骨架载体中。所获得的表达载体通过DNA测序进行确认。
实施例62：基于曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)的融合蛋白的表达和纯化
基于曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)(CDRH3)的融合蛋白通过采用编码曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)融合蛋白重链和曲妥珠单抗轻链的载体对游离型HEK293细胞的瞬时转染进行表达。表达的融合蛋白分泌到培养基中并在转染后48和96小时收获。融合蛋白通过蛋白质A/G色谱法(Thermo Fisher Scientific,IL)进行纯化，用蛋白酶PC2切割，并通过SDS-PAGE凝胶进行分析(如图46所示)。泳道1为用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)(CDRH3)IgG。泳道2为曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)(CDRH3)IgG。泳道3为与PC2共表达且用DTT处理的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)(CDRH3)IgG。泳道4为与PC2共表达的曲妥珠单抗-卷曲松弛素(XTEN35)(CDRH3)IgG。泳道5为蛋白质分子量标记。
实施例63：曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF蛋白与Her2受体的结合
通过ELISA检测曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF融合蛋白对Her2受体的结合亲和力。在4℃下将人Her2-Fc嵌合体(5μg/mL)(R&D Systems)包被在96孔ELISA板上过夜，随后在37℃下用在PBS(pH 7.4)中的1％BSA封闭2小时。用在PBS(pH 7.4)中的0.05％Tween-20洗涤之后，将不同浓度的曲妥珠单抗IgG和曲妥珠单抗-卷曲-hGCSF融合蛋白添加至板中，以在37℃下温育2小时。随后，将具有HRP缀合物的山羊多克隆抗-人κ轻链抗体(Sigma)添加至板中，并将该板在37℃下温育2小时。随后洗涤孔，并通过向每个孔添加荧光过氧化物酶底物基于425nm处的荧光强度来检测结合亲和力。
实施例64：曲妥珠单抗-卷曲-VM24与Her2受体的结合
通过ELISA检测曲妥珠单抗-卷曲-VM24融合蛋白对Her2受体的结合亲和力。在4℃下将人Her2-Fc嵌合体(5μg/mL)(R&D Systems)包被在96孔ELISA板上过夜，随后在37℃下用在PBS(pH 7.4)中的1％BSA封闭2小时。用在PBS(pH 7.4)中的0.05％Tween-20洗涤之后，将不同浓度的曲妥珠单抗IgG和曲妥珠单抗-卷曲-VM24融合蛋白添加至板中，以在37℃下温育2小时。随后，将具有HRP缀合物的山羊多克隆抗-人κ轻链抗体(Sigma)添加至板中，并将该板在37℃下温育2小时。随后洗涤孔，并通过向每个孔添加荧光过氧化物酶底物基于425nm处的荧光强度来检测结合亲和力。
实施例65：曲妥珠单抗-卷曲hLeptin-毒蜥外泌肽-4双融合蛋白的构建
将瘦素和毒蜥外泌肽-4融合至具有工程化卷曲螺旋茎的曲妥珠单抗骨架中的CDR-3H和CDR-3L区。生成的人源化生物活性融合蛋白可改善药理性质以治疗相关疾病。此外，hLeptin和Ex-4的组合可具有协同效应。曲妥珠单抗-卷曲hLeptin/Ex4融合体含有在融合的hLeptin和Ex-4片段的每个末端的GGGGS连接体(SEQ ID NO:179)，以及用以连接卷曲螺旋与抗体的碱基的GGSG连接体(SEQ ID NO:279)。
实施例66：曲妥珠单抗-卷曲-Moka IgG与Her2受体的结合
通过ELISA检测曲妥珠单抗-卷曲-Moka融合蛋白与Her2受体的结合。在4℃下将人Her2-Fc嵌合体(5μg/mL)(R&D Systems)包被在96孔ELISA板上过夜，随后在37℃下用在PBS(pH 7.4)中的1％BSA封闭2小时。用在PBS(pH 7.4)中的0.05％Tween-20洗涤之后，将不同浓度的曲妥珠单抗IgG和曲妥珠单抗-卷曲-Moka融合蛋白添加至每个孔，并将该板在37℃下温育2小时。随后，将具有HRP缀合物的山羊多克隆抗-人κ轻链抗体(Sigma)添加至板中，并将该板在37℃下温育2小时。随后洗涤孔，并通过向每个孔添加荧光过氧化物酶底物基于425nm处的荧光强度来检测结合亲和力。
前面仅说明了本发明的原理。应理解，本领域技术人员将能够设计多种布置，这些布置尽管没有在本文中明确地描述或显示，但其体现了本发明的原理并包括在其精神和范围内。此外，本文描述的所有实例和条件性语言主要旨在帮助读者理解本发明的原理和由发明人贡献的概念以促进本领域发展，并应解释为不限于这些具体描述的实例和条件。而且，本文描述本发明的原理、方面和实施方案的所有声明以及其具体实例，旨在涵盖其结构和功能上的等同物。另外，这样的等同物旨在包括目前已知的等同物和将来研发的等同物，即，无论结构如何，研发的执行相同功能的任何元件。因此，发明的范围并非旨在限于本文所示和描述的示例性实施方案。相反，本发明的范围和精神通过所附权利要求书来体现。
尽管本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但是本领域技术人员将会明白，这些实施方案仅通过举例提供。在不偏离本发明的情况下，本领域技术人员现在将会想到许多变换、改变和替代。应理解，本文描述的本发明实施方案的多种替代方案可以用于实施本发明。下面的权利要求旨在限定本发明的范围，由此涵盖在这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
本文引用的所有参考文献均为所有目的通过引用而全文并入，其程度如同特别地和单独地指出各单独的出版物或专利或专利申请均为所有目的通过引用而全文并入。
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Claims (10)

1.一种免疫球蛋白融合蛋白，其包含位于第一抗体区的互补决定区(CDR)内的第一延伸物融合区，所述第一延伸物融合区包含治疗剂和被配置为形成反向平行卷曲螺旋的第一延伸物肽以及第二延伸物肽，所述第一延伸物肽包含GGSGAKLAALKAKLAALK(SEQ ID NO:151)，所述第二延伸物肽包含ELAALEAELAALEAGGSG(SEQ ID NO:161)，并且其中所述治疗剂位于所述第一延伸物肽和所述第二延伸物肽之间。
2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白融合蛋白，其还包含第二治疗剂。
3.根据权利要求1所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一抗体区所衍生自的抗体包含与SEQ ID NO:19-36和271-273中任何一个至少90％同源的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一抗体区所衍生自的抗体包含与曲妥珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的免疫球蛋白融合蛋白，其中所述第一抗体区所衍生自的抗体包含与帕利珠单抗免疫球蛋白的氨基酸序列至少90％同源的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的免疫球蛋白融合蛋白，其还包含第二抗体区。
7.如权利要求1-6中任意一项所述的免疫球蛋白融合蛋白在制备用于调节钾电压-门控通道的药物中的应用。
8.如权利要求1-6中任意一项所述的免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗自身免疫病和/或自身免疫相关的疾病的药物中的应用。
9.如权利要求1-6中任意一项所述的免疫球蛋白融合蛋白在制备用于治疗中枢神经系统病症的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其中所述中枢神经系统病症是帕金森氏病。
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