RU2650788C2 - Композиция, содержащая два антитела, сконструированных так, чтобы они обладали пониженной и повышенной эффекторной функцией - Google Patents
Композиция, содержащая два антитела, сконструированных так, чтобы они обладали пониженной и повышенной эффекторной функцией Download PDFInfo
- Publication number
- RU2650788C2 RU2650788C2 RU2015107889A RU2015107889A RU2650788C2 RU 2650788 C2 RU2650788 C2 RU 2650788C2 RU 2015107889 A RU2015107889 A RU 2015107889A RU 2015107889 A RU2015107889 A RU 2015107889A RU 2650788 C2 RU2650788 C2 RU 2650788C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- variable region
- light chain
- heavy chain
- Prior art date
Links
- 239000012636 effector Substances 0.000 title claims abstract description 293
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 title claims abstract description 120
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 title description 59
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 28
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims abstract description 272
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 102
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 93
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 67
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 64
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 56
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 38
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 31
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 claims abstract description 25
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 108700004922 F42A Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102220505697 Palmitoyl-protein thioesterase 1_Y45F_mutation Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 102220495631 Putative uncharacterized protein LOC645739_F42A_mutation Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 102220610852 Thialysine N-epsilon-acetyltransferase_L72G_mutation Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 263
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 83
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 66
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 65
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 64
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 64
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 32
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 32
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 24
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 63
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 abstract description 29
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 abstract description 29
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract description 22
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract description 22
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 abstract description 9
- 229940087463 proleukin Drugs 0.000 abstract description 9
- -1 fucose oligosaccharides Chemical class 0.000 abstract description 7
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 abstract description 5
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 abstract description 5
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 230000003915 cell function Effects 0.000 abstract description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 180
- 230000006870 function Effects 0.000 description 115
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 104
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 72
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 71
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 66
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 61
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 59
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 59
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 55
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 55
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 54
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 54
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 47
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 39
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 39
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 37
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 37
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 36
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 33
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 33
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 32
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 30
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 30
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 27
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 24
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 23
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 21
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 19
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 19
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 19
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 19
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 description 18
- 101710184277 Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 description 18
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 17
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 17
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 15
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 15
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 15
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 14
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 14
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 13
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 13
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 13
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 13
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 102100028757 Chondroitin sulfate proteoglycan 4 Human genes 0.000 description 12
- 101000916489 Homo sapiens Chondroitin sulfate proteoglycan 4 Proteins 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 12
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 11
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 11
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 11
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 11
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 10
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 10
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 10
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 9
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 9
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 8
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 8
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 8
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 8
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 8
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 101710146120 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 7
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 7
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 7
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 7
- 102100020870 La-related protein 6 Human genes 0.000 description 7
- 108050008265 La-related protein 6 Proteins 0.000 description 7
- 108010008125 Tenascin Proteins 0.000 description 7
- 102000007000 Tenascin Human genes 0.000 description 7
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 7
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 7
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 7
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 6
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 6
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 6
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 6
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 6
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 6
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 6
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 6
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 description 5
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 description 5
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 5
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 5
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 5
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 5
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 5
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 5
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 5
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 5
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 5
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 5
- 101001059701 Spodoptera frugiperda Alpha-mannosidase 2 Proteins 0.000 description 5
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 5
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 238000012552 review Methods 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 5
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 108010059480 Chondroitin Sulfate Proteoglycans Proteins 0.000 description 4
- 102000005598 Chondroitin Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 4
- 101000668058 Infectious salmon anemia virus (isolate Atlantic salmon/Norway/810/9/99) RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 4
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 4
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 4
- 102100038126 Tenascin Human genes 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 102000045442 glycosyltransferase activity proteins Human genes 0.000 description 4
- 108700014210 glycosyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108010083819 mannosyl-oligosaccharide 1,3 - 1,6-alpha-mannosidase Proteins 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 3
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 3
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 3
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 3
- 101000935587 Homo sapiens Flavin reductase (NADPH) Proteins 0.000 description 3
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 3
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 3
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 3
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- KYIKRXIYLAGAKQ-UHFFFAOYSA-N abcn Chemical compound C1CCCCC1(C#N)N=NC1(C#N)CCCCC1 KYIKRXIYLAGAKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000011224 anti-cancer immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004405 cytokine-induced killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 102100022622 Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 102100021761 Alpha-mannosidase 2 Human genes 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical group OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 2
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 102100040578 G antigen 7 Human genes 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 101000972916 Homo sapiens Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 101000893968 Homo sapiens G antigen 7 Proteins 0.000 description 2
- 101001076292 Homo sapiens Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 2
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100025947 Insulin-like growth factor II Human genes 0.000 description 2
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 2
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 2
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 2
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 2
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 2
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 102100022430 Melanocyte protein PMEL Human genes 0.000 description 2
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 description 2
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003815 abdominal wall Anatomy 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 208000018459 dissociative disease Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 102000057266 human FCGR3A Human genes 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940068935 insulin-like growth factor 2 Drugs 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 229950008001 matuzumab Drugs 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 230000031942 natural killer cell mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 229950010203 nimotuzumab Drugs 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004308 thiabendazole Substances 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N (4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[(2S)-2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(1S)-4-carbamimidamido-1-carboxybutyl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEYNBWVKOYCCQT-UHFFFAOYSA-N 1-(3-chloro-4-methylphenyl)-3-{2-[({5-[(dimethylamino)methyl]-2-furyl}methyl)thio]ethyl}urea Chemical compound O1C(CN(C)C)=CC=C1CSCCNC(=O)NC1=CC=C(C)C(Cl)=C1 WEYNBWVKOYCCQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000504 3C-like protease Proteins 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 101710137115 Adenylyl cyclase-associated protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100021879 Adenylyl cyclase-associated protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710137132 Adenylyl cyclase-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000003730 Alpha-catenin Human genes 0.000 description 1
- 108090000020 Alpha-catenin Proteins 0.000 description 1
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 1
- 101710098531 Alpha-mannosidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710186585 Alpha-mannosidase 2x Proteins 0.000 description 1
- 101100504181 Arabidopsis thaliana GCS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035526 B melanoma antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100455063 Caenorhabditis elegans lmp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039510 Cancer/testis antigen 2 Human genes 0.000 description 1
- 101800001318 Capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 102100028906 Catenin delta-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 102000011413 Chondroitinases and Chondroitin Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108010023736 Chondroitinases and Chondroitin Lyases Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 108010025464 Cyclin-Dependent Kinase 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000013701 Cyclin-Dependent Kinase 4 Human genes 0.000 description 1
- 102000001493 Cyclophilins Human genes 0.000 description 1
- 108010068682 Cyclophilins Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 101100216227 Dictyostelium discoideum anapc3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100118548 Drosophila melanogaster Egfr gene Proteins 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 108010069621 Epstein-Barr virus EBV-associated membrane antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 108010019236 Fucosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000006471 Fucosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102100039717 G antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039699 G antigen 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100039698 G antigen 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710092267 G antigen 5 Proteins 0.000 description 1
- 102000040452 GAGE family Human genes 0.000 description 1
- 108091072337 GAGE family Proteins 0.000 description 1
- 102100029974 GTPase HRas Human genes 0.000 description 1
- 101710091881 GTPase HRas Proteins 0.000 description 1
- 102100030525 Gap junction alpha-4 protein Human genes 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 102100024025 Heparanase Human genes 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 101000874316 Homo sapiens B melanoma antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000889345 Homo sapiens Cancer/testis antigen 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 1
- 101000908391 Homo sapiens Dipeptidyl peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000886137 Homo sapiens G antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000886678 Homo sapiens G antigen 2D Proteins 0.000 description 1
- 101000886136 Homo sapiens G antigen 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 1
- 101000878602 Homo sapiens Immunoglobulin alpha Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 1
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001036406 Homo sapiens Melanoma-associated antigen C1 Proteins 0.000 description 1
- 101001057156 Homo sapiens Melanoma-associated antigen C2 Proteins 0.000 description 1
- 101001057159 Homo sapiens Melanoma-associated antigen C3 Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001114057 Homo sapiens P antigen family member 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000692455 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 101000880770 Homo sapiens Protein SSX2 Proteins 0.000 description 1
- 101001062222 Homo sapiens Receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells Proteins 0.000 description 1
- 101100043112 Homo sapiens SERPINB3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 101150088952 IGF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010043496 Immunoglobulin Idiotypes Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102100038005 Immunoglobulin alpha Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 238000012695 Interfacial polymerization Methods 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004560 Interleukin-12 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010017515 Interleukin-12 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 239000004907 Macro-emulsion Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 102100039447 Melanoma-associated antigen C1 Human genes 0.000 description 1
- 102100027252 Melanoma-associated antigen C2 Human genes 0.000 description 1
- 102100027248 Melanoma-associated antigen C3 Human genes 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 206010050513 Metastatic renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010050619 Monokines Proteins 0.000 description 1
- 102000013967 Monokines Human genes 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000014736 Notch Human genes 0.000 description 1
- 108010070047 Notch Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 1
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 102100023219 P antigen family member 1 Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100034640 PWWP domain-containing DNA repair factor 3A Human genes 0.000 description 1
- 108050007154 PWWP domain-containing DNA repair factor 3A Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 1
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102100037686 Protein SSX2 Human genes 0.000 description 1
- 102100029165 Receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 102100036383 Serpin B3 Human genes 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004584 Somatomedin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010017622 Somatomedin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102100036234 Synaptonemal complex protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710143177 Synaptonemal complex protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000019361 Syndecan Human genes 0.000 description 1
- 108050006774 Syndecan Proteins 0.000 description 1
- 230000037453 T cell priming Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 1
- 102100033082 TNF receptor-associated factor 3 Human genes 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 244000000188 Vaccinium ovalifolium Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-mannose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000008228 bacteriostatic water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 229950006647 cixutumumab Drugs 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 108010015408 connexin 37 Proteins 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 108010031971 delta catenin Proteins 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000009365 direct transmission Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940082789 erbitux Drugs 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229950008085 figitumumab Drugs 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 108010006620 fodrin Proteins 0.000 description 1
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 102000054078 gamma Catenin Human genes 0.000 description 1
- 108010084448 gamma Catenin Proteins 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 125000002566 glucosaminyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000003911 head and neck carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 108010037536 heparanase Proteins 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 108010048296 hyaluronidase PH-20 Proteins 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 229940044700 hylenex Drugs 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 108040006858 interleukin-6 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000022275 macrophage chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 150000008146 mannosides Chemical class 0.000 description 1
- 108010009689 mannosyl-oligosaccharide 1,2-alpha-mannosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000028550 monocyte chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- PUPNJSIFIXXJCH-UHFFFAOYSA-N n-(4-hydroxyphenyl)-2-(1,1,3-trioxo-1,2-benzothiazol-2-yl)acetamide Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1NC(=O)CN1S(=O)(=O)C2=CC=CC=C2C1=O PUPNJSIFIXXJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N n-butylhexane Natural products CCCCCCCCCC DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000607 p15 Proteins 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 208000015768 polyposis Diseases 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 229950001808 robatumumab Drugs 0.000 description 1
- 102200013599 rs452472 Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010088201 squamous cell carcinoma-related antigen Proteins 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000012090 tissue culture technique Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000402 unacceptable toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 229950008250 zalutumumab Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2013—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6853—Carcino-embryonic antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
- C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биохимии. Описана комбинация иммуноконъюгата, который содержит
(i) первое антитело, направленное на фибробласт-активирующий белок (FAP) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 12 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 11, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 17 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 47 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 46, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 62 или вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 67 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 66 или направленное на карциноэмбриональный антиген (СЕА) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 114 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 115, где первое антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса и включает аминокислотные замены L234A, L235A и P329G (EU-нумерация, представленная у Кэбота) в тяжелых цепях иммуноглобулина, и
(ii) молекулу мутантного человеческого IL-2, содержащую аминокислотные замены F42A, Y45A и L72G,
и второго антитела, выбранного из группы
(i) антитела IgG-класса, направленного на рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 102 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 103, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом,
(ii) антитела IgG-класса к HER3, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 142 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 146, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом, и
(iii) цетуксимаба,
для применения при лечении рака у нуждающегося в этом индивидуума. Кроме того, описаны фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая описанную комбинацию, и способы применения описанной комбинации, такие как способы лечения рака и стимуляции функции эффекторных клеток у индивидуума. Изобретение позволяет удлинить медиану выживаемости и/или общей выживаемости по сравнению с индивидуальными компонентами или комбинациями с Пролейкином. 6 н. и 7 з.п. ф-лы, 8 ил., 6 табл., 7 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение в целом относится к иммунотерапии. Более конкретно изобретение относится к направленным против антигенов иммуноконъюгатам и к антителам со сконструированной Fc-областью, предназначенным для совместного применения в качестве иммунотерапевтических агентов. Кроме того, изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим комбинации указанных иммуноконъюгатов и антител, и к способам их применения для лечения заболевания.
Предпосылки создания изобретения
В различных клинических ситуациях часто требуется деструкция индивидуальной клетки или конкретного типа клеток. Например, основной задачей при терапии рака является специфическое разрушение опухолевых клеток с сохранением при этом в интактном и неповрежденном состоянии здоровых клеток и тканей.
Перспективным путем достижения этой цели является индукция иммунного ответа против опухоли, который принуждает иммунные эффекторные клетки, такие как естественные клетки-киллеры (NK) или цитотоксические Т-лимфоциты (CTL), атаковать и разрушать опухолевые клетки. Эффекторные клетки можно активировать с помощью различных стимулов, включая целый ряд цитокинов, которые индуцируют передачу сигналов посредством связывания с их рецепторами на поверхности иммунных клеток. Например, применение интерлейкина-2 (IL-2), который среди прочего стимулирует пролиферацию и активацию цитотоксических Т-клеток и NK-клеток, разрешено для лечения метастатической почечно-клеточной карциномы и злокачественной меланомы. Однако быстрый клиренс из крови и отсутствие специфичности в отношении опухоли обусловливают необходимость системного введения высоких доз цитокинов для достижения достаточной для активации иммунного ответа или противоопухолевого действия концентрации цитокина в области локализации опухоли. Такие высокие уровни обладающих системным действием цитокинов могут приводить к проявлению серьезной токсичности и нежелательных реакций, что имеет место также в случае IL-2. Таким образом, для применения в противораковой терапии требуется специфическое введение цитокинов в опухоль или микроокружение опухоли. Для этой цели можно конъюгировать цитокин с обеспечивающим направленный перенос фрагментом, например, антителом или фрагментом антитела, специфическим в отношении опухолевого антигена. Дополнительным преимуществом указанных иммуноконъюгатов является их удлиненное время полужизни в сыворотке по сравнению с неконъюгированным цитокином. Их способность повышать до максимума иммуностимулирующую активность в области опухоли, при этом сводя до минимума их системные побочные действия при применении в низкой дозе, делает содержащие цитокины иммуноконъюгаты оптимальными иммунотерапевтическим агентами.
Другой путь активации эффекторных клеток включает вовлечение активирующих Fc-рецепторов, которые находятся на их поверхности, с помощью Fc-фрагмента иммуноглобулинов или рекомбинантных слитых белков, содержащих Fc-область. Так называемые эффекторные функции антитела, которые опосредуются его Fc-областью, являются важным механизмом действия противораковой иммунотерапии на основе антител. Антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность, т.е. деструкция сенсибилизированных антителом клеток-мишеней (например, опухолевых клеток) с помощью NK-клеток, запускается, когда антитело, связанное с поверхностью клетки, взаимодействует с Fc-рецепторами на NK-клетке. NK-клетки экспрессируют FcγRIIIa (CD16a), который распознает иммуноглобулины IgG1- или IgG3-подкласса. Другие эффекторные функции включают антитело-обусловленный клеточнозависмый фагоцитоз (ADCP) и комплементзависимую цитотоксичность (CDC), а варьируют в зависимости от класса и подкласса антитела, поскольку различные типы иммунных клеток несут различные группы Fc-рецепторов, которые распознают различные типы и подтипы константных доменов тяжелых цепей иммуноглобулинов (например, константные домены тяжелых цепей α, δ, γ, ε или μ, соответствующие IgA-, IgD-, IgE-, IgG- или IgM-классу антител соответственно). Для повышения эффекторных функций антител применяли различные стратегии. Например, у Shields и др., J Biol Chem 9(2), 2001, сс. 6591-6604 продемонстрировано, что аминокислотные замены в положениях 298, 333 и/или 334 Fc-области (EU-нумерация остатков) повышает связывание антител с FcγIIIa-рецептором и ADCC. Другие варианты антител, имеющие аминокислотные модификации в Fc-области и обладающие повышенной способностью связываться с Fc-рецептором и эффекторной функцией, описаны например, в US №6737056, WO 2004/063351 и WO 2004/099249. Альтернативно этому, для достижения повышенной способности связываться с Fc-рецептором и эффекторной функции можно изменять гликозилирование антитела. Антитела IgG1-типа, которые представляют собой антитела, наиболее часто применяемые для противораковой иммунотерапии, имеют консервативный N-связанный сайт гликозилирования на Asn 297 в каждом СН2-домене Fc-области. Два комплексных биантенных олигосахарида, присоединенных к Asn 297, «спрятаны» между СН2-доменами, образуя обширные контакты с полипептидным каркасом, и их присутствие имеет решающее значение для антитела касательно эффекторных функций, включая антитело-обусловленную клеточнозависимую цитотоксичность (ADCC) (Lifely и др., Glycobiology 5, 1995, сс. 813-822; Jefferis и др., Immunol Rev 163, 1998, сс. 59-76; Wright и Morrison, Trends Biotechnol 15, 1997, сс. 26-32). В опытах по конструированию белков установлено, что FcγR взаимодействует с нижней шарнирной областью СН2-домена IgG (Lund и др., J Immunol 157, 1996, сс. 4963-4969)). Однако для связывания FcγR требуется также присутствие олигосахаридов в СН2-области (Lund и др., J Immunol 157, 1996, сс. 4963-4969; Wright и Morrison, Trends Biotech 15, 1997, сс. 26-31), это позволяет предположить, что либо олигосахарид и полипептид оба непосредственно входят в сайт взаимодействия, либо олигосахарид требуется для поддержания активной конформации полипептида СН2. Таким образом, модификацию олигосахаридной структуры можно использовать в качестве средств повышения аффинности взаимодействия между IgG1 и FcγR и для повышения ADCC-активности антитела IgG1-подтипа. У Umaña и др., Nat Biotechnol 17, 1999, сс. 176-180 и в US №6602684 (WO 99/54342) (содержание которых полностью включено в настоящее описании в качестве ссылок) продемонстрировано, что сверхэкспрессия β(1,4)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы III (GnTIII), т.е. гликозилтрансферазы, которая катализирует образование бисекционных олигосахаридов в клетках яичника китайского хомячка (СНО), существенно повышает in vitro ADCC-активность антител, продуцируемых в этих клетках. Сверхэкспрессия GnTIII в клеточных линиях-продуцентах приводит к получению антител, обогащенных бисекционными олигосахаридами, которые, как правило, являются также нефукозилированными и относятся к гибридному типу. Если помимо GnTIII в клеточных линиях-продуцентах имеет место сверхэкспрессия маннозидазы II (ManII), то получают антитела, обогащенные бисекционными нефукозилированными олигосахаридами комплексного типа (Ferrara и др., Biotechn Bioeng 93, 2006, сс. 851-861). Для обоих типов антител характерна значительно повышенная ADCC по сравнению с антителами и немодифицированными гликанами, но только антитела, в которых большинство N-гликанов относятся к комплексному типу, обладают способностью индуцировать значительную комплементзависимую цитотоксичность (Ferrara и др., Biotechn Bioeng 93, 2006, сс. 851-861). Имеющим решающим значение фактором для повышения ADCC-активности, по-видимому, является элиминация фукозы из наиболее глубоко лежащего N-ацетилглюкозаминного остатка олигосахаридного ядра, что повышает связывание Fc-домена IgG с FcγRIIIa (Shinkawa и др., J Biol Chem 278, 2003, сс. 3466-3473). Другие методы получения антител со сниженным фукозилированием включают, например, экспрессию в клетках-хозяевах с дефицитом α(1,6)-фукозилтрансферазы (Yamane-Ohnuki и др., Biotech Bioeng 87, 2004, сс. 614-622; Niwa и др., J Immunol Methods 306, 2006, сс. 151-160).
Несмотря на успехи, достигнутые в области противораковой терапии благодаря применению свободных цитокинов, в области противораковой терапии существует постоянная необходимость в иммуноконъюгатах или сконструированных антителах в качестве новых эффективных и безопасных путей лечения.
Краткое изложение сущности изобретения
При создании настоящего изобретения было обнаружено, что комбинация этих двух стратегий, т.е. одновременная стимуляция эффекторных клеток содержащими цитокины иммуноконъюгатами и антителами, сконструированными таким образом, чтобы они обладали повышенными эффекторными функциями, значительно повышает эффективность противораковой иммунотерапии.
Таким образом, в настоящем изобретении предложена комбинация (а) иммуноконъюгата, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для применения при лечении заболевания у индивидуума, который нуждается в этом. В одном из вариантов осуществления изобретения цитокин выбирают из группы, состоящей из IL-2, GM-CSF, IFN-α и IL-12. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент представляет собой IL-2. В другом варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент представляет собой IL-12. В другом конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент IL-2 представляет собой мутантный эффекторный фрагмент IL-2, который содержит по меньшей мере одну аминокислотную мутацию, прежде всего аминокислотную замену, которая снижает или элиминирует аффинность мутантного эффекторного фрагмента IL-2 к α-субъединице рецептора IL-2, но сохраняет аффинность мутантного эффекторного фрагмента IL-2 к рецептору IL-2 с промежуточной аффинностью по сравнению с немутантным эффекторным фрагментом IL-2. В конкретном варианте осуществления изобретения мутантный эффекторный фрагмент IL-2 содержит одну, две или три аминокислотные замены в одном, двух или трех положении(ях), выбранном(ых) из положений, которые соответствуют остатку 42, 45 и 72 человеческого IL-2 (SEQ ID NO: 1). В более конкретном варианте осуществления изобретения мутантный эффекторный фрагмент IL-2 содержит три аминокислотные замены, в положениях, которые соответствуют остатку 42, 45 и 72 человеческого IL-2. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения мутантный эффекторный фрагмент IL-2 представляет собой человеческий IL-2, содержащий аминокислотные замены F42A, Y45A и L72G. В некоторых вариантах осуществления изобретения мутантный эффекторный фрагмент IL-2 дополнительно содержит аминокислотную мутацию в положении, соответствующем положению 3 человеческого IL-2, которая элиминирует сайт O-гликозилирования IL-2. В конкретном варианте осуществления изобретения мутантный эффекторный фрагмент IL-2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент представляет собой одноцепочечный эффекторный фрагмент.
В одном из вариантов осуществления изобретения первое антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса, прежде всего полноразмерное антитело IgG1-подкласса. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент объединен амино- или карбоксиконцевой пептидной связью с первым антителом. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент объединен аминоконцевой пептидной связью с первым антителом. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент слит на его N-конце с С-концом одной из тяжелых цепей первого антитела. В конкретном варианте осуществления изобретения иммуноконъюгат содержит не более одного эффекторного фрагмента. В одном из вариантов осуществления изобретения иммуноконъюгат практически состоит из эффекторного фрагмента и первого антитела, которые сцеплены с помощью одной или нескольких пептидных связей. В конкретном варианте осуществления изобретения иммуноконъюгат содержит эффекторный фрагмент, прежде всего одноцепочечный эффекторный фрагмент, и первое антитело, прежде всего полноразмерное антитело IgG-класса, в котором эффекторный фрагмент слит на его аминоконцеовой аминокислоте с карбоксиконцом одной из тяжелых цепей первого антитела, необязательно через пептидный линкер. В некоторых вариантах осуществления изобретения первое антитело содержит в Fc-области модификацию, усиливающую гетеродимеризацию двух неидентичных тяжелых цепей иммуноглобулина. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная модификация представляет собой модификацию типа «knob-in-hole» (обеспечение взаимодействия по типу «выступ-во впадину»), которая включает модификацию, приводящую к образованию «выступа» в одной из тяжелых цепей иммуноглобулина, и модификацию, приводящую к образованию «впадины» в другой одной из двух тяжелых цепей иммуноглобулина. В одном из вариантов осуществления изобретения первое антитело содержит модификацию в поверхности раздела между двумя тяжелыми цепями иммуноглобулина в СН3-домене, при этом, I) в СН3-домене одной тяжелой цепи аминокислотный остаток заменяют на аминокислотной остаток, имеющий больший объем боковой цепи, создавая тем самым выпуклость («выступ») на поверхности раздела СН3-домена одной тяжелой цепи, которая может помещаться в полость «впадина» в поверхности раздела СН3-домена другой тяжелой цепи, и II) в СН3-домене другой тяжелой цепи аминокислотный остаток заменяют на аминокислотный остаток, имеющий меньший объем боковой цепи, создавая тем самым полость («впадину») в поверхности раздела второго СН3-домена, в которую может помещаться выпуклость («выступ») на поверхности раздела первого СН3-домена. В одном из вариантов осуществления изобретения первое антитело содержит аминокислотную замену T366W и необязательно аминокислотную замену S354C в одной из тяжелых цепей иммуноглобулина, и аминокислотные замены T366S, L368A, Y407V и необязательно Y349C в другой одной тяжелой цепи иммуноглобулина. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент слит с амино- или карбоксиконцевой аминокислотой тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит модификацию, приводящую к образованию «выступа».
В одном из вариантов осуществления изобретения пониженную эффекторную функцию первого антитела выбирают из группы, включающей пониженную способность связываться с активирующим Fc-рецептором, пониженную ADCC, пониженный ADCP, пониженную CDC и пониженную секрецию цитокинов. В одном из вариантов осуществления изобретения пониженная эффекторная функция представляет собой пониженную способность связываться с активирующим Fc-рецептором. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Fc-рецептор представляет собой человеческий рецептор. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Fc-рецептор представляет собой Fcγ-рецептор. В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Fc-рецептор выбирают из группы, включающей FcγRIIIa, FcγRI и FcRγIIa. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Fc-рецептор представляет собой FcγRIIIa, прежде всего человеческий FcγRIIIa. В одном из вариантов осуществления изобретения пониженная эффекторная функция представляет собой пониженную ADCC. В одном из вариантов осуществления изобретения пониженная эффекторная функция представляет собой пониженную способность связываться с активирующим Fc-рецептором и пониженную ADCC.
В одном из вариантов осуществления изобретения первое антитело конструируют путем интродукции одной или нескольких аминокислотных мутаций в Fc-область. В конкретном варианте осуществления изобретения аминокислотные мутации представляют собой аминокислотные замены. В конкретном варианте осуществления изобретения первое антитело, прежде всего человеческое полноразмерное антитело IgG1-подкласса, содержит аминокислотную замену в положении Р329 тяжелых цепей иммуноглобулина (EU нумерация). В более конкретном варианте осуществления изобретения аминокислотная замена представляет собой Р329А или P329G, прежде всего P329G. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело содержит дополнительную аминокислотную замену в положении, выбранном из S228,
Е233, L234, L235, N297 и Р331 тяжелых цепей иммуноглобулина. В более конкретном варианте осуществления изобретения дополнительная аминокислотная замена представляет собой S228P, Е233Р, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D или P331S. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит аминокислотные замены в положениях Р329, L234 и L235 тяжелых цепей иммуноглобулина (EU нумерация). В более конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит аминокислотные замены L234A, L235A и P329G (LALA P329G) в тяжелых цепях иммуноглобулина.
В некоторых вариантах осуществления изобретения первое антитело направлено против антигена, присутствующего на опухолевой клетке или в окружении опухолевой клетки. В конкретном варианте осуществления изобретения первое антитело направлено против антигена, выбранного из группы, включающей фибробласт-активирующий белок (FAP), А1-домен тенасцина-С (TNC A1), А2-домен тенасцина-С (TNC А2), экстра-домен В фибронектина (EDB), карциноэмбриональный антиген (СЕА) и ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (MCSP). В конкретном варианте осуществления изобретения первое антитело направлено против СЕА. В другом конкретном варианте осуществления изобретения первое антитело направлено против FAP.
В одном из вариантов осуществления изобретения повышенную эффекторную функцию второго антитела выбирают из группы, включающей повышенную способность связываться с активирующим Fc-рецептором, повышенную ADCC, повышенный ADCP, повышенную CDC и повышенную секрецию цитокинов. В одном из вариантов осуществления изобретения повышенная эффекторная функция представляет собой повышенную способность связываться с активирующим Fc-рецептором. В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Fc-рецептор выбирают из группы, включающей FcγRIIIa, FcγRI и FcRγIIa. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Fc-рецептор представляет собой FcγRIIIa. В одном из вариантов осуществления изобретения повышенная эффекторная функция представляет собой повышенную ADCC. В одном из вариантов осуществления изобретения повышенная эффекторная функция представляет собой повышенную способность связываться с активирующим Fc-рецептором и повышенную ADCC.
В одном из вариантов осуществления изобретения второе антитело конструируют путем интродукции одной или нескольких аминокислотных мутаций в Fc-область. В конкретном варианте осуществления изобретения аминокислотные мутации представляют собой аминокислотные замены. В одном из вариантов осуществления изобретения второе антитело конструируют путем модификации гликозилирования в Fc-области. В конкретном варианте осуществления изобретения модификация гликозилирования в Fc-области представляет собой повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области составляет по меньшей мере 20%, предпочтительно по меньшей мере 50%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 70% нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области. В другом конкретном варианте осуществления изобретения модификация гликозилирования в Fc-области представляет собой повышенное относительное содержание бисекционнных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения повышенное относительное содержание бисекционных олигосахаридов в Fc-области составляет по меньшей мере 20%, предпочтительно по меньшей мере 50%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 70% бисекционных олигосахаридов в Fc-области. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения модификация гликозилирования в Fc-области представляет собой повышенное относительное содержание бисекционных нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. Предпочтительно второе антитело содержит по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 35% или по меньшей мере примерно 50% бисекционных нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области. В конкретном варианте осуществления изобретения второе антитело конструируют таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. Повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области антитела приводит к получению антитела, обладающего повышенной эффекторной функцией, прежде всего повышенной ADCC. В конкретном варианте осуществления изобретения нефукозилированные олигосахариды представляет собой бисекционные нефукозилированные олигосахариды.
В одном из вариантов осуществления изобретения второе антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса, прежде всего полноразмерное антитело IgG1-подкласса. В некоторых вариантах осуществления изобретения второе антитело направлено против антигена, присутствующего на опухолевой клетке. В конкретном варианте осуществления изобретения второе антитело направлено против антигена, выбранного из группы, включающей CD20, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), HER2, HER3, рецептор инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF-1R), c-Met, содержащий CUB-домен белок-1 (CDCP1), карциноэмбриональный антиген (СЕА) и ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (MCSP).
В конкретном варианте осуществления изобретения второе антитело представляет собой антитело к CD20, сконструированное таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. Пригодные антитела к CD20 описаны в WO 2005/044859, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. В другом конкретном варианте осуществления изобретения второе антитело представляет собой антитело к EGFR, сконструированное таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. Пригодные антитела к EGFR описаны в WO 2006/082515 и WO 2008/017963, каждая из которых полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. В другом конкретном варианте осуществления изобретения второе антитело представляет собой антитело к IGF-1R, сконструированное таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. Пригодные антитела к IGF-1R описаны в WO 2008/077546, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. В другом конкретном варианте осуществления изобретения второе антитело представляет собой антитело к СЕА, сконструированное таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. Пригодные антитела к СЕА описаны в публикации РСТ WO 2011/023787, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. В еще одном конкретном варианте осуществления изобретения второе антитело представляет собой антитело к HER3, сконструированное таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. Пригодные антитела к HER3 описаны в публикации РСТ WO 2011/076683, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. В еще одном конкретном варианте осуществления изобретения второе антитело представляет собой антитело к CDCP1, сконструированное таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. Пригодные антитела к CDCP1 описаны в публикации РСТ WO 2011/023389, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. В одном из вариантов осуществления изобретения второе антитело конструируют так, чтобы оно имело модифицированное гликозилирование в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом, путем получения антитела в клетке-хозяине, обладающей измененной активностью одной или нескольких гликозилтрансфераз.
В одном из вариантов осуществления изобретения второе антитело конструируют таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом, путем получения антитела в клетке-хозяине, обладающей повышенной активностью β(1,4)-N-ацетилглюкозамилтрансферазы III (GnTIII). В конкретном варианте осуществления изобретения клетка-хозяин дополнительно обладает повышенной активностью α-маннозидазы II (ManII). В другом варианте осуществления изобретения второе антитело конструируют таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом, путем получения антитела в клетке-хозяине, обладающей пониженной активностью α(1,6)-фукозилтрансферазы.
В одном из вариантов осуществления изобретения заболевание представляет собой нарушение, которое можно лечить путем стимуляции функции эффекторных клеток. В одном из вариантов осуществления изобретения заболевание представляет собой нарушение пролиферации клеток. В конкретном варианте осуществления изобретения заболевание представляет собой рак. В конкретном варианте осуществления изобретения рак выбирают из группы, включающей рак легкого, колоректальный рак, рак почки, рак предстательной железы, рак молочной железы, рак головы и шеи, рак яичника, рак головного мозга, лимфому, лейкоз и рак кожи. В одном из вариантов осуществления изобретения индивидуум представляет собой млекопитающее. В конкретном варианте осуществления изобретения индивидуум представляет собой человека.
Конкретным вариантом осуществления изобретения является комбинация
(а) иммуноконъюгата, содержащего первое полноразмерное антитело IgG-класса, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, путем интродукции одной или нескольких аминокислотных мутаций в Fc-область, и цитокин, в котором эффекторный фрагмент слит на его аминоконцевой аминокислоте с карбоксиконцом одной из тяжелых цепей первого антитела, необязательно через пептидный линкер, и
(б) второго полноразмерного антитела IgG-класса, сконструированного таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, путем модификации гликозилирования в Fc-области, предназначенная для применения при лечении заболевания у индивидуума, который нуждается в этом. Другим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, в фармацевтически приемлемом носителе.
Изобретение относится также к применению (а) иммуноконъюгата, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второго антитела, сконструированного таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания у индивидуума.
В изобретении предложен также способ лечения заболевания у индивидуума, заключающийся в том, что вводят индивидууму комбинацию (а) иммуноконъюгата, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второго антитела, сконструированного таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, в терапевтически эффективном количестве.
В изобретении предложен также способ стимуляции функции эффекторных клеток у индивидуума, заключающийся в том, что вводят индивидууму комбинацию (а) иммуноконъюгата, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второго антитела, сконструированного таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, в количестве, эффективном в отношении стимуляции функции эффекторных клеток.
Следующим объектом изобретения является набор, предназначенный для лечения заболевания, который содержит в одном и том же или в различных контейнерах (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, и (в) необязательно листовку-вкладыш в упаковку с напечатанными инструкциями по применению комбинированного лечения в качестве способа лечения заболевания.
Должно быть очевидно, что иммуноконъюгат и второе антитело, используемые в фармацевтической композиции, применении, способах и наборе, предлагаемых в изобретении, могут обладать любой из особенностей, индивидуально или в сочетании, описанной в предыдущих параграфах касательно вторых антител и иммуноконъюгатов, предлагаемых в изобретении.
Краткое описание чертежей
На чертежах показано:
на фиг. 1 - данные, полученные для иммуноконъюгата 28Н1 IgG-IL-2, мишенью которого является FAP (А), или не имеющего специфической мишени («ненаправленного») иммуноконъюгата DP47GS IgG-IL-2 (Б), содержащих четырехмутантный (qm) IL-2, у которого отсутствует способность связываться с CD25, и анти-EGFR GlycoMab (созданное с использованием гликоинженерии МАт), при тестировании в отношении SCID-мышей, которым инъецировали интралингвально клетки человеческой карциномы головы и шеи линии FaDu. Из представленных данных следует, что комбинация, включающая иммуноконъюгат 28Н1 IgG-IL2 qm, но не иммуноконъюгат DP47GS IgG-IL2, и анти-EGFR GlycoMab, опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости по сравнению с индивидуальным применением соответствующего иммуноконъюгата или анти-EGFR GlycoMab (см. пример 1);
на фиг. 2 - данные о полном уничтожении опухолевых клеток линии А549 с использованием РВМС (Е : Т = 10:1, 4 ч), которые предварительно обрабатывали 0,57 нМ (А) или 5,7 нМ (Б) иммуноконъюгатом 28Н1 IgG-IL2 qm, мишенью которого является FAP или IL-2 (пролейкин) или не обрабатывали указанными субстанциями, в присутствии применяемого в различных концентрациях анти-EGFR GlycoMab (см. пример 2);
на фиг. 3 - данные, полученные для иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL-2, мишенью которого является СЕА, содержащего четырехмутантный (qm) IL-2, у которого отсутствует способность связываться с CD25, и анти-EGFR GlycoMab (А) или цетуксимаба (Б), при тестировании в отношении трансгенных по FcγRIII SCID-мышей, которым инъецировали внутрь селезенки клетки человеческой колоректальной карциномы линии LS174T. Из представленных данных следует, что комбинация иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости и общей выживаемости по сравнению с индивидуальным применением соответствующего иммуноконъюгата, анти-EGFR GlycoMab или цетуксимаба, а также комбинации иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и цетуксимаба (см. пример 3);
на фиг. 4 - данные, полученные для иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL-2, мишенью которого является СЕА, содержащего четырехмутантный (qm) IL-2, у которого отсутствует способность связываться с CD25, и анти-EGFR GlycoMab (А) или цетуксимаба (Б), при тестировании в отношении трансгенных по FcγRIII SCID-мышей, которым инъецировали внутривенно клетки человеческой карциномы легкого линии А549. Из представленных данных следует, что комбинация иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости и общей выживаемости по сравнению с индивидуальным применением соответствующего иммуноконъюгата или анти-EGFR GlycoMab, a также комбинации иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и цетуксимаба (см. пример 4);
на фиг. 5 - данные, полученные для иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL-2, содержащего четырехмутантный (qm) IL-2, мишенью которого является СЕА, у которого отсутствует способность связываться с CD25, и анти-Her3 GlycoMab при тестировании в отношении трансгенных по FcγRIII SCID-мышей, которым инъецировали внутрь селезенки клетки человеческой колоректальной карциномы линии LS174Т. Из представленных данных следует, что комбинация иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-Her3 GlycoMab опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости по сравнению с индивидуальным применением соответствующего иммуноконъюгата или анти-Her3 GlycoMab (см. пример 5);
на фиг. 6 - данные, полученные для иммуноконъюгата 28Н1 IgG-IL-2, мишенью которого является FAP, содержащего четырехмутантный (qm) IL-2, у которого отсутствует способность связываться с CD25, и анти-EGFR GlycoMab, при тестировании в отношении трансгенных по FcγRIII SCID-мышей, которым инъецировали внутрь почки клетки человеческой почечной карциномы линии ACHN. Из представленных данных следует, что комбинация иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости и общей выживаемости по сравнению с индивидуальным применением анти-EGFR GlycoMab или анти-EGFR GlycoMab в комбинации с Proleukin® (см. пример 6);
на фиг. 7 - обобщенные данные об уничтожении LS174Т-клеток с использованием РВМС после обработки только анти-Her3 GlycoMab (левая панель), только иммуноконъюгатом СН1А1А IgG-IL-2 qm (правая панель) или комбинацией иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL-2 qm с анти-Her3 GlycoMab (правая панель);
на фиг. 8 - данные об экспрессии CD25 (А) или CD69 (Б) на NK-клетках после обработки только анти-Her3 GlycoMab (левая панель), только иммуноконъюгатом СН1А1А IgG-IL-2 qm (правая панель) или комбинацией иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL-2 qm с анти-Her3 GlycoMab (правая панель).
Подробное описание изобретения
Первым объектом настоящего изобретения является комбинация (а) иммуноконъюгата, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второго антитела, сконструированного таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, предназначенная для применения при лечении заболевания у индивидуума, который нуждается в этом.
В изобретении предложен также способ лечения заболевания у индивидуума, заключающийся в том, что вводят индивидууму комбинацию (а) иммуноконъюгата, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второго антитела, сконструированного таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, в терапевтически эффективном количестве.
В изобретении предложен также способ стимуляции функции эффекторных клеток у индивидуума, заключающийся в том, что вводят индивидууму комбинацию (а) иммуноконъюгата, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второго антитела, сконструированного таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, в количестве, эффективном в отношении стимуляции функции эффекторных клеток.
Определения
Понятия, применяемые в настоящем описании, имеют значения, общепринятые в данной области, если ниже специально не указано иное.
В контексте настоящего описания понятие «иммуноконъюгат» относится к молекуле полипептида, которая включает по меньшей один эффекторный фрагмент и антитело. В некоторых вариантах осуществления изобретения иммуноконъюгат содержит не более одного эффекторного фрагмента. В частности, иммуноконъюгаты, предлагаемые в изобретении, практически состоят из одного эффекторного фрагмента и антитела, сцепленных с помощью одного или нескольких пептидных линкеров. Конкретные иммуноконъюгаты, предлагаемые в изобретении, представляют собой слитые белки, т.е. компоненты иммуноконъюгата сцеплены пептидными связями.
В контексте настоящего описания понятие «контрольное антитело» относится к антителу, которое может существовать без эффекторных фрагментов. Например, при осуществлении сравнения иммуноконъюгата IgG-IL2, представленного в настоящем описании, с контрольным антителом в качестве контрольного антитела применяют свободный IgG, если иммуноконъюгат IgG-IL2 и молекула свободного IgG могут оба спецфически связываться с одной и той же антигенной детерминантой.
В контексте настоящего описания понятие «антигенная детерминанта» является синонимом понятий «антиген» и «эпитоп» и относится к сайту (например, участку, состоящему из смежных аминокислот, или конформационной конфигурации, состоящей из различных областей несмежных аминокислот) на полипептидной макромолекуле, с которой связывается антитело с образованием комплекса антитело-антиген. Пригодные антигенные детерминанты могут присутствовать, например, на поверхностях опухолевых клеток, на поверхностях инфицированных вирусом клеток, на поверхностях других больных клеток, в свободном состоянии в сыворотке крови и/или во внеклеточном матриксе (ЕСМ).
Понятие «специфически связывается» означает, что связывание является избирательным в отношении антигена и его можно отличать от нежелательных или неспецифических взаимодействий. Способность антитела связываться со специфической антигенной детерминантой можно определять с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) или других методик, известных специалисту в данной области, например, с помощью методики на основе поверхностного плазменного резонанса (осуществляя анализ с помощью устройства BIAcore) (Liljeblad и др., Glyco J 17, 2000, сс. 323-329), и традиционных анализов связывания (Heeley, Endocr Res 28, 2002, сс. 217-229).
Понятия «анти- [антиген] антитело (антитело к антигену)» и «антитело, которое связывается с [антигеном]» относятся к антителу, которое обладает способностью связываться с соответствующим антигеном с достаточной аффинностью, в результате чего антитело можно применять в качестве диагностического и/или терапевтического агента для направленного воздействия на антиген. В одном из вариантов осуществления изобретения уровень связывания антитела к антигену с неродственным белком составляет менее чем примерно 10% от связывания антитела с антигеном при оценке, например, с помощью радиоиммуноанализа (РИА). В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело, которое связывается с [антигеном], имеет константу диссоциации (KD) ≤1 мкМ, ≤100 нМ, ≤10 нМ, ≤1 нМ, ≤0,1 нМ, ≤0,01 нМ или ≤0,001 нМ (например, 10-8 М или менее, например, от 10-8 М до 10-12 М, например, от 10-9 М до 10-13 М).
Понятие «аффинность» относится к суммарной силе всех нековалентных взаимодействий между индивидуальным сайтом связывания молекулы (например, антитела) и ее партнера по связыванию (например, антигена). Если не указано иное, то в контексте настоящего описания понятие «аффинность связывания» относится к присущей компонентам связывающейся пары (например, антителу и антигену) аффинности связывания, отражающей взаимодействие по типу 1:1. Аффинность молекулы Х к ее партнеру Y можно, как правило, характеризовать с помощью константы диссоциации (KD), которая представляет собой отношение констант скорости реакции диссоциации и ассоциации (koff и kon соответственно). Так, эквивалентные аффинности могут соответствовать различным константам скорости, если соотношение констант скорости остается таким же. Аффинность можно оценивать общепринятыми методами, известными в данной области, включая представленные в настоящем описании. Конкретным методом измерения аффинности является поверхностный плазменный резонанс (SPR).
Согласно одному из вариантов осуществления изобретения величину KD измеряли методом поверхностного плазменного резонанса с помощью устройства BIACORE® T100 (фирма GE Healthcare) при 25°C с использованием лиганда (например, рецептора эффекторного фрагмента, Fc-рецептора или антигена-мишени), иммобилизованного на СМ5-чипах. В целом, метод состоял в следующем: биосенсорные чипы из карбоксиметилированного декстрана (СМ5, фирма GE Healthcare) активировали с помощью гидрохлорида N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и N-гидроксисукцинимида (NHS) согласно инструкциям поставщика. Рекомбинантный лиганд разводили 10 мМ ацетатом натрия, рН 5,5 до концентрации 0,5-30 мкг/мл перед инъекцией со скоростью потока 10 мкл/мин для достижения примерно 100-5000 единиц ответа (RU) связанного белка. После инъекции лиганда инъецировали 1 М этаноламин для блокады непрореагировавших групп. Для кинетических измерений инъецировали трех- или пятикратные серийные разведения иммуноконъюгата (диапазон от ~0,01 до 300 нМ) в буфере HBS-EP+ (фирма GE Healthcare, 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТК, 0,05% сурфактанта Р20, рН 7,4) при 25°С со скоростью потока примерно 30-50 мкл/мин. Скорость реакции ассоциации (kon) и реакции диссоциации (koff) рассчитывали с использованием простой модели связывания Ленгмюра 1:1 (программа BIACORE® T100 Evaluation Software, версия 1.1.1) путем одновременной аппроксимации сенсограмм ассоциации и диссоциации. Константу равновесия реакции диссоциации (KD) рассчитывали как соотношение koff/kon (см., например, Chen и др., J Mol Biol 293, 1999, сс. 865-881).
Понятие «пониженное связывание (пониженная способность к связыванию)», например, пониженная способность к связыванию с Fc-рецептором или CD25, относится к снижению аффинности касательно соответствующего взаимодействия, измеренной, например, с помощью SPR. Для ясности следует отметить, что понятие включает также снижение аффинности до нуля (или ниже предела обнаружения аналитического метода), т.е. полную элиминацию взаимодействия. И, наоборот, «повышенное связывание (повышенная способность к связыванию)» относится к повышению аффинности связывания касательно соответствующего взаимодействия.
В контексте настоящего описания понятия «первый» и «второй» касательно антител, эффекторных фрагментов и т.д. применяют с целью удобства разделения, когда присутствует более одного типа каждого из фрагментов. Применение этих понятий не подразумевает их конкретный порядок или ориентацию в иммуноконъюгате, если специально не указано иное.
В контексте настоящего описания понятие «эффекторный фрагмент» относится к полипептиду, например, белку или гликопротеину, который оказывает влияние на клеточную активность, например, через трансдукцию сигналов или посредством других клеточных путей. Таким образом, эффекторный фрагмент, предлагаемый в изобретении, может быть ассоциирован с опосредуемой рецептором передачей сигналов, что приводит к передаче сигнала от наружной части клеточной мембраны, модулируя ответ в клетке, которая несет один или несколько рецепторов для эффекторного фрагмента. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент может вызывать цитотоксический ответ в клетках, несущих рецепторы для эффекторного фрагмента. В другом варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент может вызывать пролиферативный ответ в клетках, несущих один или несколько рецепторов для эффекторного фрагмента. В другом варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент может вызывать дифференцировку клеток, несущих один или несколько рецепторов эффекторного фрагмента. В другом варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент может изменять экспрессию (т.е. может обладать способностью осуществлять повышающую регуляцию или понижающую регуляция) эндогенного клеточного белка в клетках, несущих рецепторы для эффекторного фрагмента. Примерами эффекторных фрагментов являются (но, не ограничиваясь только ими) цитокины, факторы роста, гормоны, ферменты, субстраты и кофакторы. Эффекторный фрагмент может быть ассоциирован с антителом в различных конфигурациях с образованием иммуноконъюгата.
В контексте настоящего описания понятие «цитокин» относится к молекуле, которая опосредует и/или регулирует биологическую или клеточную функцию или процесс (например, иммунитет, воспаление и гематопоэз). Понятие «цитокин» в контексте настоящего описания относится к «лимфокинам», «хемокинам», «монокинам» и «интерлейкинам». Примерами пригодных для применения цитокинов являются (но, не ограничиваясь только ими) GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α и TNF-β. Конкретные цитокины представляют собой IL-2 и IL-12. В контексте настоящего описания подразумевается также, что понятие «цитокин» включает также варианты цитокина, содержащие одну или несколько аминокислотных мутаций в аминокислотных последовательностях соответствующего цитокина дикого типа, такие, например, как варианты IL-2, описанные у Sauvé и др., Proc Nati Acad Sci USA 88, 1991, сс. 4636-4640; Ни и др., Blood 101, 2003, сс. 4853-4861 и в публикации патента США №2003/0124678; у Shanafelt и др., Nature Biotechnol 18, 2000, сс. 1197-1202; Heaton и др., Cancer Res 53, 1993, сс. 2597-2602 и в US №5229109; в публикации патента США №2007/0036752; WO 2008/0034473; WO 2009/061853; или указанные выше или ниже в настоящем описании.
В контексте настоящего описания понятие «одноцепочечная» относится к молекуле, содержащей аминокислотные мономеры, связанные линейно посредством пептидных связей. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент представляет собой одноцепочечный эффекторный фрагмент. Примерами одноцепочечных эффекторных фрагментов являются (но, не ограничиваясь только ими) цитокины, факторы роста, гормоны, ферменты, субстраты и кофакторы. Когда эффекторный фрагмент представляет собой цитокин, и представляющий собой интерес цитокин в норме в естественных условиях существует в виде мультимера, то каждая субъединица мультимерного цитокина последовательно кодируется одной цепью эффекторного фрагмента. Таким образом, примерами пригодных для применения одноцепоченых эффекторных фрагментов являются (но, не ограничиваясь только ими) GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α и TNF-β.
В контексте настоящего описания понятие «применяемый в качестве контроля эффекторный фрагмент» относится к неконъюгированному эффекторному фрагменту. Например, при осуществлении сравнения содержащего IL-2 иммуноконъюгата, предлагаемого в настоящем изобретении, и применяемого в качестве контроля эффекторного фрагмента, применяемый в качестве контроля эффекторный фрагмент представляет собой свободный неконъюгированный IL-2. Аналогично этому, например, при осуществлении сравнения содержащего IL-12 иммуноконъюгата и применяемого в качестве контроля эффекторного фрагмента, применяемый в качестве контроля эффекторный фрагмент представляет собой свободный неконъюгированный IL-12 (например, существующий в виде гетеродимерного белка, в котором субъединицы р40 и р35 соединены только дисульфидной(ыми) связью(ями)).
В контексте настоящего описания понятие «рецептор (для) эффекторного фрагмента» относится к полипептидной молекуле, которая обладает способностью специфически связываться с эффекторным фрагментом. Например, когда эффекторный фрагмент представляет собой IL-2, рецептор для эффекторного фрагмента, который связывается с IL-2 (например, с иммуноконъюгатом, который содержит IL-2), представляет собой рецептор IL-2. Аналогично этому, например, когда IL-12 представляет собой эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, то рецептором для эффекторного фрагмента является рецептор IL-12. Когда рецепторный фрагмент специфически связывается более чем с одним рецептором, все рецепторы, которые специфически связываются с эффекторным фрагментом, представляют собой «рецепторы эффекторного фрагмента» для указанного эффекторного фрагмента.
В контексте настоящего описания понятие «антитело» применяют в его наиболее широком смысле, и оно включает антитела различной структуры, включая (но, не ограничиваясь только ими) моноспецифические антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), и фрагменты антител, если они сохраняют требуемую антигенсвязывающую активность и содержат Fc-область или область, эквивалентную Fc-области иммуноглобулина.
Понятия «полноразмерное антитело», «интактное антитело» и «полное антитело» в контексте настоящего описания применяют взаимозаменяемо, и они относятся к антителу, имеющему структуру практически сходную со структурой нативного иммуноглобулина.
Понятие «иммуноглобулин» относится к белку, имеющему структуру встречающегося в естественных условиях антитела. Например, иммуноглобулины IgG-класса представляют собой гетеротетрамерные гликопротеины с молекулярной массой примерно 150000 Да, состоящие из двух легких цепей и двух тяжелых цепей, связанных дисульфидными мостиками. В направлении от N-конца к С-концу каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область (VH), которую называют также вариабельным тяжелым доменом или вариабельным доменом тяжелой цепи, за которой расположены три константных домена (СН1, СН2 и СН3), которые называют также константной областью тяжелой цепи. Аналогично этому, в направлении от N- конца к С-концу каждая легкая цепь содержит вариабельную область (VL), которую называют также вариабельным легким доменом или вариабельным доменом легкой цепи, за которой расположен константный домен легкой цепи (CL), который называют также константной областью легкой цепи. Тяжелая цепь иммуноглобулина может относиться к одному из пяти типов, обозначенных как α (IgA), δ (IgD), ε (IgE), γ (IgG) или μ (IgM), некоторые из которых дополнительно подразделяют на подтипы, например, γ1 (IgG1), γ2 (IgG2), γ3 (IgG3), γ4 (IgG4), α1 (IgA1) и α2 (IgA2). Легкая цепь иммуноглобулина может относиться к одному из двух типов, обозначенных как каппа (κ) и лямбда (λ), на основе аминокислотной последовательности ее константного домена. Иммуноглобулин, как правило, состоит из двух молекул Fab и Fc-области, которые соединены через шарнирную область иммуноглобулина.
Понятие «фрагмент антитела» относится к молекуле, отличной от интактного антитела, которая содержит часть интактного антитела, связывающуюся с антигеном, с которым связывается интактное антитело. Примерами фрагментов антител являются (но, не ограничиваясь только ими) Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, димерные антитела, линейные антитела, одноцепочечные молекулы антител (например, scFv), однодоменные антитела и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител. Обзор некоторых фрагментов антител см., например, у Hudson и др., Nat Med 9, 2003, сс. 129-134. Обзор scFv-фрагментов см., например, у Plückthun в: The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, т. 113, под ред. Rosenburg и Moore, изд-во Springer-Verlag, New York, 1994, сс. 269-315; см. также WO 93/16185; и US №№5571894 и 5587458. Обсуждение Fab- и F(ab')2-фрагментов, содержащих остатки эпитопа, связывающегося с рецептором спасения, и обладающих удлиненным временем полужизни in vivo, см. в US №5869046. Димерные антитела (диабоди) представляют собой фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут быть двухвалентными или биспецифическими (см., например, ЕР 404097; WO 1993/01161; Hudson и др., Nat Med 9, 2003, сс. 129-134; и Hollinger и др., Proc Nati Acad Sci USA 90, 1993, сс. 6444-6448. Тримерные (триабоди) и тетрамерные (тетрабоди) антитела описаны также у Hudson и др., Nat Med 9, 2003, сс. 129-134. Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антител, содержащие весь вариабельный домен тяжелой цепи или его часть или весь вариабельный домен легкой цепи антитела или его часть. В некоторых вариантах осуществления изобретения однодоменное антитело представляет собой человеческое однодоменное антитело (фирма Domantis, Inc., Waltham М.А.; см., например, US №6248516 В1). Фрагменты антител можно создавать с помощью различных методик, включая (но, не ограничиваясь только ими) протеолитическое расщепление интактного антитела, а также получать с использованием рекомбинантных клеток-хозяев (например, Е.coli или фага), как указано в настоящем описании.
Понятие «антигенсвязывающий домен» относится к части антитела, которая содержит область, специфически связывающуюся и являющуюся комплементарной части антигена или полному антигену. Антигенсвязывающий домен может представлять собой, например, один или несколько вариабельных доменов антитела (которые называют также вариабельными областями антитела). Предпочтительно антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи (VL) антитела и вариабельную область тяжелой цепи (VH) антитела.
Понятие «вариабельная область» или «вариабельный домен» относится к домену тяжелой или легкой цепи антитела, который участвует в связывании антитела с антигеном. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи (VH и VL соответственно) нативного антитела, как правило, имеют сходные структуры, при этом каждый домен содержит четыре консервативных каркасных участка (FR) и три гипервариабельных участка (HVR) (см., например, Kindt и др., Kuby Immunology, 6-ое изд., изд-во W.H. Freeman and Co., 2007, с. 91). Одного VH- или VL-домена может быть достаточно для обеспечения специфичности связывания антигена.
Понятие «гипервариабельный участок» или «HVR» в контексте настоящего описания относится к каждому из участков вариабельного домена антитела, последовательности которых являются гипервариабельными, и/или которые образуют структуры в виде петель («гипервариабельные петли»). Как правило, нативные четырехцепочечные антитела содержат шесть HVR; три в VH (H1, H2, Н3) и три в VL (L1, L2, L3). HVR, как правило, содержат аминокислотные остатки из гипервариабельных петель и/или из «определяющих комплементарность участков» (CDR), последние отличаются наиболее выраженной вариабельностью последовательности и/или участвуют в распознавании антигенов. Кроме CDR1, присутствующего в VH, CDR, как правило, содержат аминокислотные остатки, которые образуют гипервариабельные петли. Понятие «гипервариабельные участки» (HVR) относится также к «определяющим комплементарность участкам» (CDR), и в контексте настоящего описания эти понятия используются взаимозаменяемо касательно положений вариабельной области, которые формируют антигенсвязывающие области. Эта конкретная область описана у Kabat и др., U.S. Dept. of Health and Human Services, «Sequences of Proteins of Immunological Interest», 1983 и у Chothia и др., J. Mol. Biol. 196, 1987, сс. 901-917, причем эти определения относятся к перекрывающимся аминокислотным остаткам или поднаборам аминокислотных остатков при их сравнении друг с другом. Однако в контексте настоящего описания подразумевается возможность применения любого определения CDR антитела или его вариантов. Соответствующие аминокислотные остатки, из которых состоят CDR, как они определены в каждой из процитированных выше ссылок, представлены в сравнении ниже в таблице 1. Точные номера остатков, которые образуют конкретный CDR, могут варьироваться в зависимости от последовательности и размера CDR. Специалисты в данной области на основе данных об аминокислотной последовательности вариабельной области антитела легко могут определять, какие остатки входят в конкретный CDR.
Кэбот с соавторами предложили также систему нумерации (номенклатуру) последовательностей вариабельных областей, которую можно применять для любого антитела. Обычный специалист в данной области может однозначно применять эту систему «нумерации по Кэботу» к любой последовательности вариабельной области, не имея никаких экспериментальных данных, кроме сведений о самой последовательности. В контексте настоящего описания понятие «нумерация по Кэботу» относится к системе нумерации, описанной у Kabat и др., «Sequence of Proteins of Immunological Interest», изд-во U.S. Dept. of Health and Human Services, 1983. Если не указано иное, то ссылки на нумерацию положений конкретных аминокислотных остатков в вариабельной области антитела даны в соответствии с системой нумерации по Кэботу.
Нумерация полипептидных последовательностей в «Перечне последовательностей» (т.е. SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и т.д.) не представляет собой нумерацию в соответствии с системой Кэбота. Однако в компетенции обычного специалиста в данной области является превращение нумерации последовательностей в «Перечне последовательностей» в нумерацию по Кэботу.
«Каркасный участок» или «FR» включает остатки вариабельного домена, отличные от остатков гипервариабельных участков (HVR). FR вариабельного домена, как правило, представлены четырьмя FR-доменами: FR1, FR2, FR3 и FR4. Таким образом, последовательности HVR и FR, как правило, расположены в VH (или VL) в следующем порядке: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
Понятие «класс» антитела относится к типу константного домена или константной области, содержащегося(щейся) в тяжелой цепи. Существует пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, а некоторые из них можно дополнительно подразделять на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные домены тяжелых цепей, соответствующие различным классам иммуноглобулинов, обозначают как α, δ, ε, γ и μ соответственно.
В контексте настоящего описания понятие «Fc-домен» или «Fc-область» относится к С-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит по меньшей мере часть константной области. Понятие относится к последовательностям нативных Fc-областей и вариантов Fc-областей. Хотя пограничные последовательности Fc-области в тяжелой цепи IgG могут слегка варьироваться, как правило, Fc-область тяжелой цепи человеческого IgG простирается от Cys226 или от Pro230 до карбоксильного конца тяжелой цепи. Однако С-концевой лизин (Lys447) Fc-области может либо присутствовать, либо отсутствовать. Если специально не указано иное, то нумерация аминокислотных остатков в Fc-области или константном участке соответствует системе EU-нумерации, которую называют также EU-индекс, описанной у Kabat и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-ое изд., изд-во Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
Подразумевается, что «область, эквивалентная Fc-области иммуноглобулина» включает встречающиеся в естественных условиях аллельные варианты Fc-области иммуноглобулина, а также варианты, имеющие изменения, приводящие к заменам, добавлениям или делециям, но которые не снижают существенно способность иммуноглобулина опосредовать эффекторные функции (такие как антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность). Например, одну или несколько аминокислот можно изымать путем делеции из N-конца или С-конца Fc-области иммуноглобулина без существенной потери биологической функции. Указанные варианты можно отбирать согласно общим правилам, известным в данной области, так, чтобы они оказывали минимальное воздействие на активность (см., например, Bowie и др., Science 247, 1990, сс. 1306-1310).
«Модификация, усиливающая гетеродимеризацию» представляет собой манипуляцию с пептидным каркасом или посттрансляционные модификации полипептида, например, тяжелой цепи иммуноглобулина, которая уменьшает или препятствует ассоциации полипептида с идентичным полипептидом с образованием гомодимера. В контексте настоящего описания модификация, усиливающая гетеродимеризацию, включает, прежде всего, различные модификации, осуществляемые с каждым из двух полипептидов, которые требуются для образования димера, при этом, модификации дополняют друг друга таким образом, чтобы усиливать ассоциацию двух полипептидов. Например, модификация, усиливающая гетеродимеризацию, может изменять структуру или заряд одного или обоих полипептидов, требуемых для образования димера, таким образом, чтобы улучшать их ассоциацию стерически или электростатически соответственно. Гетеродимеризация имеет место между двумя неидентичными полипептидами, такими как две тяжелые цепи иммуноглобулина, при этом дополнительные компоненты иммуноконъюгата слитых с каждой из тяжелых цепей (например, эффекторного фрагмента) не являются одинаковыми. В иммуноконъюгатах, предлагаемых в настоящем изобретении, модификация, усиливающая гетеродимеризацию, затрагивает тяжелую(ые) цепь(и), в частности, в Fc-области. В некоторых вариантах осуществления изобретения модификация, усиливающая гетеродимеризацию, представляет собой аминокислотную мутацию, в частности, аминокислотную замену. В конкретном варианте осуществления изобретения модификация, усиливающая гетеродимеризацию, представляет собой индивидуальную аминокислотную мутацию, в частности, аминокислотную замену, в каждой из двух тяжелых цепей иммуноглобулина.
Понятие «эффекторные функции», используемое в настоящем описании, относится к видам биологической активности, присущим Fc-области антитела, которые варьируются в зависимости от изотипа антитела. Примерами эффекторных функций антитела являются: способность связываться с C1q и комплементзависимая цитотоксичность (CDC), способность связываться с Fc-рецептором, антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность (ADCC), антитело-обусловленный клеточнозависимый фагоцитоз (ADCP), секреция цитокинов, опосредованное иммунным комплексом поглощение антигена антигенпрезентирующими клетками, понижающая регуляция рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора); и активация В-клеток.
В контексте настоящего описания понятие «эффекторные клетки» относится к популяции лимфоцитов, которые экспонируют рецепторы для эффекторного фрагмента, например, рецепторы для цитокинов, и/или Fc-рецепторы на своей поверхности, через которые они связывают эффекторный фрагмент, например, цитокин и/или Fc-область антитела и принимают участие в деструкции клеток-мишеней, например, опухолевых клеток. Эффекторные клетки могут, например, опосредовать цитотоксические действия или фагоцитоз. Эффекторные клетки включают (но, не ограничиваясь только ими) эффекторные Т-клетки, такие как цитотоксические CD8+-Т-клетки, CD4+-Т-клетки-хелперы, γδ-Т-клетки, NK-клетки, лимофкинактивированные клетки-киллеры (LAK) и макрофаги/моноциты. В зависимости от схемы экспрессии их рецептора могут встречаться различные подпопуляции эффекторных клеток, т.е. (а) клетки, которые экспрессируют рецепторы для конкретного эффекторного фрагмента, но не экспрессируют Fc-рецепторы и которые стимулируются иммуноконъюгатами, но не антителами, предлагаемыми в изобретении (например, Т-клетки, экспрессирующие IL-2-рецепторы); (б) клетки, которые экспрессируют Fc-рецепторы, но не экспрессируют рецепторы для конкретного эффекторного фрагмента и которые стимулируются антителами, но не стимулируются иммуноконъюгатами, предлагаемыми в изобретении; и (в) клетки, которые экспрессируют и Fc-рецепторы, и рецепторы для конкретного эффекторного фрагмента и которые одновременно стимулируются антителами и иммуноконъюгатами, предлагаемыми в изобретении (например, NK-клетки, которые экспрессируют FcγIII-рецепторы и IL-2-рецепторы).
В контексте настоящего описания подразумевается, что понятия «конструирование, сконструированный, инженерия» включают любую манипуляцию с пептидным каркасом или посттрансляционные модификации встречающегося в естественных условиях или рекомбинантного полипептида или его фрагмента. Инженерия включает модификации аминокислотной последовательности, схемы гликозилирования или группы боковых цепей индивидуальных аминокислот, а также комбинации указанных подходов. Инженерия, прежде всего с приставкой «глико», а также «инженерия гликозилирования (гликоинженерия)» (конструирование схемы гликозилирования) включает метаболическое конструирование механизма гликозилирования клетки, в том числе генетические манипуляции, касающиеся путей олигосахаридного синтеза, с целью получения измененного гликозилирования гликопротеинов, экспрессируемых в клетках. Кроме того, конструирование схемы гликозилирования включает воздействия мутаций и клеточного окружения на гликозилирование. В одном из вариантов осуществления изобретения инженерия гликозилирования представляет собой изменение гликозилтрансферазной активности. В конкретном варианте осуществления изобретения инженерия позволяет изменять активность глюкозаминилтрансферазы и/или активность фукозилтрансферазы. Инженерию гликозилирования можно использовать для получения «клетки-хозяина, обладающей повышенной GnTIII-активностью» (например, клетки-хозяина, которую подвергали манипуляции с целью экспрессии повышенных уровней одного или нескольких полипептидов, обладающих активностью β(1,4)-N-ацетилглюкозамилтрансферазы III (GnTIII), «клетки-хозяина, обладающей повышенной ManII-активностью» (например, клетки-хозяина, которую подвергали манипуляции с целью экспрессии повышенных уровней одного или нескольких полипептидов, обладающих активностью α-маннозидазы II (ManII)) или «клетки-хозяина, обладающей пониженной α(1,6) фукозилтрансферазной активностью» (например, клетки-хозяина, которую подвергали манипуляции с целью экспрессии пониженных уровней α(1,6)-фукозилтрансферазы).
В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие «аминокислотная мутация» относится к аминокислотным заменам, делециям, инсерциям и модификациям. Можно применять любую комбинацию замены, делеции, инсерции и модификации для создания конечной конструкции при условии, что конечная конструкция обладает требуемыми характеристиками, например, пониженной способностью связываться с Fc-рецептором. Аминокислотная последовательность с делениями и инсерциями включает амино- и/или карбоксиконцевые делеции и инсерции аминокислот. Конкретными аминокислотными мутациями являются аминокислотные замены. Для изменения, например, характеристик связывания с Fc-областью, наиболее предпочтительными являются неконсервативные аминокислотные замены, т.е. замена одной аминокислоты на другую аминокислоту, имеющую другие структурные и/или химические свойства. Аминокислотные замены включают замену на не встречающиеся в естественных условиях аминокислоты или на производные встречающихся в естественных условиях двадцати стандартных аминокислот (например, на 4-гидроксипролин, 3-метилгистидин, орнитин, гомосерин, 5-гидроксилизин). Аминокислотные мутации можно создавать с помощью генетических или химических методов, хорошо известных в данной области. Генетические методы могут включать сайтнаправленный мутагенез, ПЦР, синтез генов и т.п. Подразумевается, что можно применять также методы изменения боковой группы аминокислоты, отличные от методов генетической инженерии, такие как химическая модификация. Для обозначения одной и той же аминокислотной мутации можно использовать различные обозначения. Например, замену пролина в положении 329 Fc-домена на глицин можно обозначать как 329G, G329, G329. P329G или Pro329Gly.
«Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» относительно полипептидной референс-последовательности определяют как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в полипептидной референс-последовательности, после выравнивания последовательностей и интродукции при необходимости брешей для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и при этом какие-либо консервативные замены не учитываются при оценке идентичности последовательностей. Сравнительный анализ для определения процента идентичности аминокислотных последовательностей можно осуществлять различными путями, которые находятся в компетенции специалиста в данной области, например, с использованием публично доступных компьютерных программ, таких как программа BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определять соответствующие параметры для выравнивания последовательностей, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Однако для целей настоящего изобретения величину % идентичности аминокислотных последовательностей получают с использованием предназначенной для сравнения последовательностей компьютерной программы ALIGN-2. Предназначенная для сравнения последовательностей компьютерная программа ALIGN-2 разработана фирмой Genentech, Inc., и исходный код помещен на хранение вместе с документацией для пользователя в U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559, где он зарегистрирован под регистрационным номером U.S. Copyright Registration № TXU510087. Программа ALIGN-2 представляет собой публично доступную программу фирмы Genentech, Inc., Южный Сан-Франциско, шт. Калифорния, или ее можно компилировать из исходного кода. Программу ALIGN-2 можно компилировать для применения в операционной системе UNIX, включая цифровую версию UNIX V4.0D. В программе ALIGN-2 все параметры для сравнения последовательностей являются заданными и не должны изменяться. В ситуациях, когда ALIGN-2 применяют для сравнения аминокислотных последовательностей, % идентичности аминокислотных последовательностей данной аминокислотной последовательности А относительно или по сравнению с данной аминокислотной последовательностью Б (которую другими словами можно обозначать как данная аминокислотная последовательность А, которая имеет или отличается определенным % идентичности аминокислотной последовательности относительно или по сравнению с данной аминокислотной последовательностью Б), рассчитывают следующим образом:
100 × частное X/Y,
где Х обозначает количество аминокислотных остатков, оцененных программой сравнительного анализа последовательностей ALIGN-2 как идентичные совпадения при сравнительном анализе последовательностей А и Б с помощью указанной программы, и где Y обозначает общее количество аминокислотных остатков в Б. Должно быть очевидно, что, когда длина аминокислотной последовательности А не равна длине аминокислотной последовательности Б, то % идентичности аминокислотной последовательности А относительно аминокислотной последовательности Б не должен быть равен % идентичности аминокислотной последовательности Б относительно аминокислотной последовательности А. Если специально не указано иное, то в контексте настоящего описания все величины % идентичности аминокислотных последовательностей получают согласно процедуре, описанной в последнем из предшествующих параграфов, с помощью компьютерной программы ALIGN-2.
В контексте настоящего описания понятия «клетка-хозяин», «клеточная линия-хозяин» и «клеточная культура-хозяин» используются взаимозаменяемо, и они относятся к клеткам, в которые интродуцирована экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство указанных клеток. К клеткам-хозяевам относятся «трансформанты» и «трансформированные клетки», которые включают первичные трансформированные клетки, а также потомство, выведенное из них, независимо от количества пересевов. Потомство может не быть строго идентичным родительской клетке по составу нуклеиновых кислот, а может нести мутации. Под данное понятие подпадает мутантное потомство, которое обладает такой же функцией или биологической активностью, что и отобранная путем скрининга или селекции исходная трансформированная клетка. Клетка-хозяин представляет собой клеточную систему любого типа, которую можно применять для создания антител и иммуноконъюгатов, предлагаемых в настоящем изобретении. В одном из вариантов осуществления изобретения клетку-хозяина конструируют так, чтобы можно было получать антитело с модифицированными олигосахаридами. В некоторых вариантах осуществления изобретения клетки-хозяева можно подвергать манипуляциям для экспрессии повышенных уровней одного или нескольких полипептидов, обладающих активностью β(1,4)-N-ацетилглюкозамилтрансферазы III (GnTIII). В некоторых вариантах осуществления изобретения клетки-хозяева подвергают дополнительным манипуляциям для экспрессии повышенных уровней одного или нескольких полипептидов, обладающих активностью α-маннозидазы II (ManII). Клетки-хозяева включают культивируемые клетки, например, культивируемые клетки млекопитающих, такие как (но, не ограничиваясь только ими) СНО-клетки, BHK-клетки, NS0-клетки, SP2/0-клетки, клетки миеломы линии YO, клетки мышиной миеломы линии Р3Х63, PER-клетки, РЕR.С6-клетки или клетки гибридомы, клетки дрожжей, клетки насекомых и клетки растений, но также клетки, находящиеся в трансгенном животном, трансгенном растении или в культивируемой растительной или животной ткани.
В контексте настоящего описания понятие «полипептид, обладающий GnTIII-активностью» относится к полипептидам, которые обладают способностью катализировать добавление остатка N-ацетилглюкозамина (GlcNAc) в β-1-4-связи к β-связанному маннозиду триманнозильного ядра N-связанных олигосахаридов. Понятие относится к слитым полипептидам, которые обладают ферментативной активностью, подобной, но не обязательно идентичной, активности β(1,4)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазы III, также известной под названием β-1,4-маннозил-гликопротеин-4-бета-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза (КФ 2.4.1.144) согласно номенклатуре Комитета Международного союза по биохимии и молекулярной биологии (Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUBMB)), при оценке с помощью конкретного биологического анализа как в случае зависимости от дозы, так и без зависимости от дозы. В случае, когда существует зависимость от дозы, фермент не должен быть обязательно идентичен GnTIII, а скорее он должен быть практически подобен ей в отношении зависимости данной активности от дозы по сравнению с GnTIII (т.е. полипептид-«кандидат» должен обладать более высокой активностью или не более чем примерно в 25 раз пониженной активностью, предпочтительно не более чем примерно в 10 раз пониженной активностью, и еще более предпочтительно не более чем примерно в 3 раза пониженной активностью по сравнению с GnTIII.). В конкретных вариантах осуществления изобретения полипептид, обладающий GnTIII-активностью, представляет собой слитый полипептид, содержащий каталитический домен GnTIII и домен локализации в комплексе Гольджи гетерологичного полипептида, присутствующего в комплексе Гольджи. В частности, домен локализации в комплексе Гольджи представляет собой домен локализации маннозидазы II или GnTI, наиболее предпочтительно домен локализации маннозидазы II. Альтернативно этому, домен локализации в комплексе Гольджи выбирают из группы, включающей: домен локализации маннозидазы I, домен локализации GnTII и домен коровой α1,6-фукозилтрансферазы. Методы создания указанных слитых полипептидов и их применение для получения антител с повышенными эффекторными функциями описаны в WO 2004/065540, предварительной заявке на патент США №60/495142 и в публикации заявки на патент США №2004/0241817, полное содержание которых специально включено в настоящее описание в качестве ссылки.
В контексте настоящего описания понятие «домен локализации в комплексе Гольджи» относится к аминокислотной последовательности расположенного в комплексе Гольджи полипептида, который ответствен за «заякоривание» полипептида в области, находящейся внутри комплекса Гольджи. Как правило, домены локализации содержат аминоконцевые «хвосты» фермента.
В контексте настоящего описания понятие «полипептид, обладающий ManII-активностью» относится к полипептидам, которые обладают способностью катализировать гидролиз концевых 1,3- и 1,6-связанных остатков α-D-маннозы в разветвленном промежуточном продукте, т.е. GlcNAcMan5GlcNAc2-меннозе, N-связанных олигосахаридов. Они включают полипептиды, которые обладают ферментативной активностью, сходной, но не обязательно идентичной с активностью α-маннозидазы II комплекса Гольджи, известной также как маннозилолигосахарид 1,3-1,6-α-маннозидаза II (КФ 3.2.1.114) согласно номенклатуре Комитета Международного союза по биохимии и молекулярной биологии (NC-IUBMB).
«Активирующий Fc-рецептор» представляет собой Fc-рецептор, который после взаимодействия с Fc-областью антитела осуществляет процесс передачи сигналов, которые стимулируют несущую рецептор клетку осуществлять эффекторные функции. Активирующие Fc-рецепторы включают FcγRIIIa (CD16a), FcγRI (CD64), FcγRIIa (CD32) и FcαRI (CD89).
Антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность (ADCC) представляет собой иммунный механизм, приводящий к лизису сенсибилизированных антителом клеток-мишеней иммунными эффекторными клетками. Клетки-мишени представляют собой клетки, с которыми антитела или их фрагменты, содержащие Fc-область, специфически связываются, как правило, через область белка, которая является N-концевой относительно Fc-области. В контексте настоящего описания понятие «повышенная/пониженная ADCC» относится или к увеличению/снижению количества лизированных в данный момент времени клеток-мишеней при данной концентрации антитела в среде, окружающей клетки-мишени, путем указанного выше механизма ADCC, и/или к снижению/повышению концентрации антитела в среде, окружающей клетки-мишени, необходимой для достижения лизиса данного количества клеток-мишеней в данное время с помощью механизма ADCC. Повышение/понижение ADCC-активности сравнивают относительно ADCC, опосредуемой таким же антителом, которое получено с помощью такого же типа клеток-хозяев с использованием одинаковых стандартных методов получения, очистки, приготовления композиций и хранения (которые известны специалистам в данной области), но которые не подвергали инженерии. Например, повышение ADCC, опосредуемой антителом, полученным в клетках-хозяевах, сконструированных так, чтобы они имели измененную схему гликозилирования (например, так, чтобы они экспрессировали гликозилтрансферазу, GnTIII или другие гликозилтрансферазы), с помощью методов, указанных в настоящем описании, сравнивают с ADCC, опосредуемой таким же антителом, полученным с помощью такого же типа не подвергнутых инженерии клеток-хозяев.
Под «антителом, обладающим повышенной/пониженной антитело-обусловленной клеточнозависимой цитотоксичностью (ADCC)» подразумевается антитело, обладающее повышенной/пониженной ADCC при определении с помощью любого приемлемого метода, известного обычным специалистам в данной области. Один из приемлемых методов анализа in vitro ADCC заключается в том, что:
1) для анализа применяют клетки-мишени, для которых известно, что они экспрессируют антиген-мишень, распознаваемый антигенсвязывающим фрагментом антитела;
2) для анализа в качестве эффекторных клеток используют человеческие мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС), выделенные из крови произвольно выбранных здоровых доноров;
3) анализ осуществляют с помощью следующего протокола:
I) РВМС выделяют с помощью стандартных методов центрифугирования в градиенте плотности и суспендируют 5×106 клеток/мл в RPMI-среде для культуры клеток;
II) выращивают клетки-мишени с помощью стандартных методов культивирования тканей, собирают на экспоненциальной фазе роста, когда жизнеспособность составляет более 90%, промывают в RPMI-среде для культуры клеток, меченной 100 мкКи 51Cr, дважды промывают с помощью среды для культуры клеток и ресуспендируют в среде для культуры клеток с плотностью 105 клеток/мл;
III) переносят по 100 мкл указанной выше конечной суспензии клеток-мишеней в каждую лунку 96-луночного титрационного микропланшета;
IV) готовят серийные разведения с концентрацией антитела от 4000 до 0,04 нг/мл в среде для культуры клеток и добавляют 50 мкл образовавшихся растворов антитела к клеткам-мишеням в 96-луночном титрационном микропланшете, оценивая в трех повторностях различные концентрации антител, охватывающие весь указанный выше диапазон концентраций;
V) для создания контролей с максимальным высвобождением (MR) используют 3 дополнительные лунки в планшете, которые содержат меченые клетки-мишени, с добавлением 50 мкл 2 об. % водного раствора неионогенного детергента (Nonidet, фирма Sigma, Сент-Луис), вместо раствора антитела (указанного в п. IV, выше);
VI) для создания контролей со спонтанным высвобождением (SR), используют 3 дополнительные лунки в планшете, которые содержат меченые клетки-мишени, с добавлением 50 мкл RPMI-среды для культуры клеток вместо раствора антитела (указанного в п. IV, выше);
VII) затем 96-луночный титрационный микропланшет центрифугируют при 50×g в течение 1 мин и инкубируют в течение 1 ч при 4°С;
VIII) добавляют в каждую лунку по 50 мкл суспензии РВМС (указанной в п. I, выше), получая соотношение эффекторные клетки : клетки-мишени 25:1, и планшеты помещают в инкубатор в атмосферу, содержащую 5% СО2, и выдерживают при 37°С в течение 4 ч;
IX) собирают бесклеточный супернатант из каждой лунки и количественно оценивают выделенную в процессе эксперимента радиоактивность (ER) с помощью счетчика гамма-лучей;
X) рассчитывают процент специфического лизиса для каждой концентрации антитела согласно формуле (ER-MR)/(MR-SR)×100, где ER обозначает среднюю радиоактивность, рассчитанную (см. п. IX, выше) для указанной концентрации антитела, MR означает среднюю радиоактивность, рассчитанную (см. п. IX, выше) для MR-контролей (см. п. V, выше), а SR означает среднюю радиоактивность, рассчитанную (см. п. IX, выше) для SR-контролей (см. п. VI, выше);
4) «повышенную/пониженную ADCC» определяют либо как увеличение максимального процента специфического лизиса, обнаруженного для указанного выше диапазона концентраций антитела, и/или как снижение/повышение концентрации антитела, необходимой для достижения половины от максимального процента специфического лизиса, обнаруженного для указанного выше диапазона концентраций антитела. Повышение/понижение ADCC оценивают относительно измеренной тем же самым методом ADCC, опосредованной таким же антителом, продуцированным в том же типе клеток-хозяев, с использованием одних и тех же стандартных методов получения, очистки, приготовления композиций и хранения, которые хорошо известны специалистам в данной области, но который не подвергали инженерии.
В контексте настоящего описания понятие «комбинация» (и его грамматические вариации, такие как «объединять» или «объединение») относится к комбинациям иммуноконъюгата и антитела, предлагаемого в изобретении, в которой иммуноконъюгат и антитело находятся в одном и том же или различных контейнерах, в одной и той же или разных фармацевтических препаративных формах, которые вводят вместе или раздельно, вводят одновременно или последовательно, в любом порядке и вводят одинаковыми или различными путями, при условии, что иммуноконъюгат и антитело могут одновременно проявлять их биологические действия в организме, т.е. одновременно стимулировать эффекторные клетки. Например, «объединение» иммуноконъюгата и антитела, предлагаемого в изобретении, может подразумевать первоначальное введение иммуноконъюгата в конкретной фармацевтической препаративной форме с последующим введением антитела в другой фармацевтической препаративной форме или наоборот.
Понятие «эффективное количество» агента относится к количеству, необходимому для обеспечения физиологического изменения в клетке или ткани, в которую его вводят.
Понятие «терапевтически эффективное количество» агента, например, фармацевтической композиции, относится к количеству, эффективному при применении в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения требуемого терапевтического или профилактического результата. Терапевтически эффективное количество агента, например, элиминирует, снижает, замедляет, минимизирует или предупреждает нежелательные явления заболевания. Терапевтически эффективное количество комбинации нескольких действующих веществ может представлять собой терапевтически эффективное количество каждого из действующих веществ. Альтернативно этому, для снижения побочных действий, вызываемых лечением, терапевтически эффективное количество комбинации нескольких действующих веществ может представлять собой количества индивидуальных действующих веществ, которые являются эффективными в отношении достижения аддитивного, сверхаддитивного или синергетического действия, и которые в комбинации являются терапевтически эффективными, но которые могут представлять собой субтерапевтические количества одного или нескольких действующих веществ при их индивидуальном применении.
«Индивидуум» или «субъект» представляет собой млекопитающее. Млекопитающие представляют собой (но, не ограничиваясь только ими) одомашненных животных (например, коровы, овцы, кошки, собаки и лошади), приматов (например, люди и приматы кроме человека, такие как мартышки), кроликов и грызунов (например, мыши и крысы). Предпочтительно индивидуум или субъект представляет собой человека.
Понятие «фармацевтическая композиция» относится к препарату, который находится в такой форме, что он обеспечивает биологическую активность входящего в его состав действующего вещества, которое должно обладать эффективностью, и который не содержит дополнительных компонентов, обладающих неприемлемой токсичностью для индивидуума, которому следует вводить композицию.
«Фармацевтически приемлемый носитель» относится к ингредиенту в фармацевтической композиции, отличному от действующего вещества, который является нетоксичным для индивидуума. Фармацевтически приемлемые носители включают (но, не ограничиваясь только ими) буфер, эксципиент, стабилизатор или консервант.
В контексте настоящего описания понятие «лечение» (и его грамматические вариации, такие как «лечить» или «процесс лечения») относится к клиническому вмешательству с целью изменения естественного течения болезни у индивидуума, подлежащего лечению, и его можно осуществлять либо для профилактики или в процессе развития клинической патологии. Требуемыми действиями лечения являются (но, не ограничиваясь только ими) предупреждение возникновения или рецидива болезни, облегчение симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий болезни, предупреждение метастазов, снижение скорости развития болезни, облегчение или временное ослабление болезненного состояния и ремиссия или улучшение прогноза. В некоторых вариантах осуществления изобретения иммуноконъюгаты, предлагаемые в изобретении, применяют для задержки развития болезни или замедления прогрессирования болезни.
Понятие «листовка-вкладыш в упаковку» в контексте настоящего описания относится к инструкциям, которые обычно помещают в поступающие в продажу упаковки терапевтических продуктов и которые содержат информацию о показаниях, применении, дозе, пути введения, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или мерах предосторожности при применении указанных терапевтических продуктов.
Иммуноконъюгаты
Иммуноконъюгаты, которые можно применять согласно изобретению, представляют собой полипептидные молекулы, которые содержат эффекторный фрагмент и антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией по сравнению с соответствующим не подвергнутым инженерии антителом.
Иммуноконъюгаты можно получать путем химической конъюгации или путем экспрессии эффекторного фрагмента с антителом, или путем экспрессии эффекторного фрагмента и антитела в виде слитого белка (см., например, Nakamura и Kubo, Cancer 80, 1997, сс. 2650-2655 и Becker и др., Рrос Nati Acad Sci USA 93, 1996, сс. 7826-7831). Для применения согласно настоящему изобретению, как правило, предпочтительными являются иммуноконъюгаты, экспрессируемые в виде слитых белков. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения эффекторный фрагмент объединен амино- или карбоксиконцевой пептидной связью с антителом (т.е. иммуноконъюгат представляет собой слитый белок). В таких иммуноконъюгатах эффекторный фрагмент может, например, быть слит с тяжелой или легкой цепью иммуноглобулина. Наиболее предпочтительными согласно настоящему изобретению являются иммуноконъюгаты, содержащие полноразмерное антитело IgG-класса, прежде всего полноразмерное антитело IgG1-подкласса.
В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент представляет собой одноцепочечный эффекторный фрагмент. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент представляет собой цитокин. Антитела и эффекторные фрагменты иммуноконъюгата включают антитела и эффекторные фрагменты, подробно описанные выше и ниже в настоящем описании. Антитело иммуноконъюгата может быть направлено против различных молекул-мишеней (например, антигенной детерминанты на белковой молекуле, которая экспрессируется на опухолевой клетке или в строме опухоли). Примерами антител являются (но, не ограничиваясь только ими) антитела, представленные в настоящем описании. Как указано в настоящем описании, наиболее предпочтительные иммуноконъюгаты, как правило, обладают одним или несколькими из следующих свойств: высокая специфичность действия, пониженная токсичность, хорошая технологичность и/или повышенная стабильность, прежде всего по сравнению с иммуноконъюгатами различных конфигурацией, мишенью которых являются те же самые антигенные детерминанты и которые несут одинаковые эффекторные фрагменты. Конкретные иммуноконъюгаты, предназначенные для применения согласно настоящему изобретению, описаны также в публикации РСТ WO 2012/146628, полное содержании которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Форматы иммуноконъюгатов
Иммуноконъюгаты, описанные в публикации РСТ WO 2012/146628, содержат не более одного эффекторного фрагмента. Таким образом, в конкретном варианте осуществления изобретения иммуноконъюгат, предназначенный для применения согласно настоящему изобретению, содержит не более одного эффекторного фрагмента. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент представляет собой одноцепочечный эффекторный фрагмент. Антитело, входящее в иммуноконъюгаты, предлагаемые в изобретении, представляет собой, прежде всего полноразмерное антитело IgG-класса, более конкретно полноразмерное антитело IgG1-подкласса. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело является человеческим. В других вариантах осуществления изобретения антитело является гуманизированным или химерным. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело содержит человеческую Fc-область, более предпочтительно Fc-область человеческого IgG, наиболее предпочтительно Fc-область человеческого IgG1. Антитела, которые можно применять согласно изобретению, могут содержать константную область тяжелой гамма-1-цепи человеческого Ig, представленную в SEQ ID NO: 124 (т.е. антитела представляют собой человеческие антитела IgG1-подкласса).
В одном из вариантах осуществления изобретения эффекторный фрагмент объединен амино- или карбоксиконцевой пептидной связью с антителом. В одном из вариантов осуществления изобретения иммуноконъюгат практически состоит из эффекторного фрагмента и антитела, прежде всего антитела IgG-класса, более конкретно антитела IgG1-подкласса, которые сцеплены с помощью одного или нескольких пептидных линкеров. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент слит на его аминоконцевой аминокислоте с карбоксиконцевой аминокислотой одной из тяжелых цепей иммуноглобулина, необязательно через пептидный линкер.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, прежде всего, в которых иммуноконъюгат содержит только один эффекторный фрагмент, антитело содержит в Fc-области модификацию, усиливающую гетеродимеризацию двух неидентичных тяжелых цепей иммуноглобулина. Сайт наиболее сильного белок-белкового взаимодействия двух полипептидных цепей Fc-области человеческого IgG находится в СН3-домене Fc-области. Таким образом, в одном из вариантов осуществления изобретения указанная модификация находится в СН3-домене Fc-области. В конкретном варианте осуществления изобретения указанная модификация представляет собой модификацию типа «knob-in-hole», которая включает модификацию, приводящую к образованию «выступа» в одной из тяжелых цепей иммуноглобулина и к образованию «впадины» в другой одной из тяжелых цепей иммуноглобулина. Технология «knob-into-hole» описана, например, в US №5731168; US №7695936; у Ridgway и др., Prot Eng 9, 1996, сс. 617-621 и Carter, J Immunol Meth 248, 2001, cc. 7-15). В целом, метод включает интродукцию выпуклости («выступ») на поверхности раздела первого полипептида и соответствующей полости («впадина») в поверхности раздела второго полипептида, в результате выпуклость может помещаться в полость, усиливая тем самым образование гетеродимера и препятствуя образованию гомодимера. Выпуклости конструируют путем замены аминокислот с небольшими боковыми цепями на поверхности раздела первого полипептида на аминокислоты с более крупными боковыми цепями (например, на тирозин или триптофан). Компенсирующие полости идентичного или сходного размера с выпуклостями конструируют в поверхности раздела второго полипептида путем замены аминокислот с крупными боковыми цепями на аминокислоты с менее крупными боковыми цепями (например, аланин или треонин). Выпуклость и полость можно создавать путем изменения нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептиды, например, с помощью сайтнаправленного мутагенеза, или посредством синтеза пептидов. В конкретном варианте осуществления изобретения модификация, приводящая к получению «выступа», представляет собой аминокислотную замену T366W в одной из двух тяжелых цепей иммуноглобулина, а модификация, приводящая к получению «впадины», представляет собой аминокислотные замены T366S, L368A и Y407V в другой одной из двух тяжелых цепей иммуноглобулина (EU нумерация). В более конкретном варианте осуществления изобретения тяжелая цепь иммуноглобулина, содержащая модификацию, приводящую к получению «выступа», дополнительно содержит аминокислотную замену S354C, а тяжелая цепь иммуноглобулина, содержащая модификацию, приводящую к образованию «впадины», дополнительно содержит аминокислотную замену Y349C. Интродукция этих двух остатков цистеина приводит к образованию дисульфидного мостика между двумя тяжелыми цепями, дополнительно стабилизирующего димер (Carter, J Immunol Methods 248, 2001, cc. 7-15).
В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент слит с карбоксиконцевой аминокислотой тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит модификацию, приводящую к образованию «выступа».
В альтернативном варианте осуществления изобретения модификация, усиливающая гетеродимеризацию двух неидентичных полипептидных цепей, представляет собой модификацию, опосредующую определяемые электростатическим действием воздействия, например, описанные в публикации РСТ WO 2009/089004. В целом, указанный метод включает замену одного или нескольких аминокислотных остатков на поверхности раздела двух полипептидных цепей на заряженные аминокислотные остатки, в результате чего образование гомодимера становится электростатически невыгодным, а гетеродимеризация становится электростатически выгодной.
Fc-область придает иммуноконъюгату предпочтительные фармакокинетические свойства, включая продолжительное время полужизни в сыворотке, что обеспечивает хорошее накопление в ткани-мишени и предпочтительное соотношение распределений в ткани-крови. Однако в то же время она может приводить к нежелательной направленности иммуноконъюгата к клеткам, которые экспрессируют Fc-рецепторы, а не к предпочтительным несущим антиген клеткам. Кроме того, совместная активация путей передачи сигналов Fc-рецептора может приводить к высвобождению цитокинов, что в сочетании с эффекторным фрагментом и продолжительным временем полужизни иммуноконъюгата, приводит к избыточной активации цитокиновых рецепторов и серьезным побочным действиям при системном введении. В соответствии с этим описано, что с иммуноконъюгатами, содержащими канонический IgG-IL-2, связаны реакции на инфузию (см., например. King и др., J Clin Oncol 22, 2004, сс. 4463-4473).
Таким образом, антитело, входящее в иммуноконъюгат, создают таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией о сравнению с соответствующим не подвергнутым инженерии антителом. В конкретных вариантах осуществления изобретения пониженная эффекторная функция представляет собой пониженную способность связываться с активирующим Fc-рецептором. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения антитело содержит в его Fc-области одну или несколько аминокислотных мутаций, которые снижают аффинность связывания иммуноконъюгата с активирующим Fc-рецептором. Как правило, одна или несколько одинаковых аминокислотных мутаций присутствует(ют) в каждой из двух тяжелых цепей иммуноглобулина. В одном из вариантов осуществления изобретения указанная аминокислотная мутация снижает аффинность связывания иммуноконъюгата с активирующим Fc-рецептором по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 5 раз или по меньшей мере в 10 раз. Согласно вариантам осуществления изобретения, в которых имеет место более одной аминокислотной мутации, которые снижают аффинность связывания иммуноконъюгата с активирующим Fc-рецептором, комбинация указанных аминокислотных мутаций может снижать аффинность связывания иммуноконъюгата с активирующим Fc-рецептором по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 20 раз или даже по меньшей мере в 50 раз. В одном из вариантов осуществления изобретения иммуноконъюгат, содержащий сконструированное антитело, характеризуется аффинностью, составляющей менее чем 20%, в частности, менее чем 10%, более предпочтительно менее чем 5% от аффинности связывания с активирующим Fc-рецептором, характерной для иммуноконъюгата, содержащего не подвергнутое инженерии антитело. В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Fc-рецептор представляет собой Fcγ-рецептор, более конкретно FcγRIIIa-, FcγRI- или FcγRIIa-рецептор. Предпочтительно уменьшается связывание с каждым из этих рецепторов. Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения снижается также аффинность связывания с компонентом системы комплемента, в частности, аффинность связывания с C1q. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения не снижается аффинность связывания с неонатальным Fc-рецептором (FcRn). Практически такое же связывание с FcRn, т.е. сохранение аффинности связывания антитела с указанным рецептором, достигается, когда антитело (или иммуноконъюгат, содержащий указанное антитело) характеризуется аффинностью связывания с FcRn, составляющей более чем примерно 70% от аффинности связывания с FcRn не подвергнутого инженерии антитела (или иммуноконъюгата, содержащего не подвергнутую инженерии форму антитела). Антитела или иммуноконъюгаты, содержащие указанные антитела, могут характеризоваться аффинностью, составляющей более чем примерно 80% и даже более чем примерно 90% от указанной выше аффинности. В одном из вариантов осуществления изобретения аминокислотная мутация представляет собой аминокислотную замену. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело, прежде всего человеческое антитело IgG1-подкласса, содержит аминокислотную замену в положении Р329 в тяжелой цепи иммуноглобулина (EU нумерация). В более конкретном варианте осуществления изобретения аминокислотная замена представляет собой Р329А или P329G, прежде всего P329G. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело содержит дополнительную аминокислотную замену в положении, выбранном из S228, Е233, L234, L235, N297 и Р331, в тяжелой цепи иммуноглобулина. В более конкретном варианте осуществления изобретения дополнительная аминокислотная замена представляет собой S228P, Е233Р, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D или P331S. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит аминокислотные замены в положениях Р329, L234 и L235 в тяжелой цепи иммуноглобулина (EU нумерация). В более конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит аминокислотные замены L234A, L235A и P329G (LALA P329G) в тяжелой цепи иммуноглобулина. Такая комбинация аминокислотных замен практически полностью аннулирует связывание с Fcγ-рецептором молекулы человеческого IgG и, как следствие, понижает эффекторную функцию, включая антитело-обусловленную клеточно-зависимую цитотоксичность (ADCC), как это описано в публикации WO 2012/130831, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки. В WO 2012/130831 описаны также методы получения указанных мутантных антител и методы определения их свойств, таких как связывание с Fc-рецептором или эффекторные функции.
Мутантные антитела можно получать с помощью аминокислотной делеции, замены, инсерции или модификации, используя генетические или химические методы, хорошо известные в данной области. Генетические методы могут включать сайтспецифический мутагенез кодирующей последовательности ДНК, ПЦР, синтез генов и т.п. Правильность нуклеотидных замен можно подтверждать, например, секвенированием.
Связывание с Fc-рецепторами можно легко определять, например, с помощью ELISA или с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR) с использованием стандартной инструментальной базы, такой как устройство BIAcore (фирма GE Healthcare), и Fc-рецепторов, которые можно получать путем рекомбинантной экспрессии. В настоящем описании представлен приемлемый указанный анализ связывания. Альтернативно этому, аффинность связывания антител или иммуноконъюгатов, содержащих антитело, которое связывается с Fc-рецепторами, можно оценивать, используя клеточные линии, которые, как известно, экспрессируют конкретные Fc-рецепторы, такие как NK-клетки, экспрессирующие FcγIIIa-рецептор.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата конструируют так, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, в частности, пониженной ADCC, по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом.
Эффекторную функцию антитела или иммуноконъюгата, содержащего антитело, можно измерять методами, известными в данной области. Приемлемый анализ для оценки ADCC представлен в настоящем описании. Другие примеры анализов in vitro, предназначенных для оценки ADCC-активности представляющей интерес молекулы, описаны в US №5500362; у Hellstrom и др., Proc Nati Acad Sci USA 83, 1986, сс. 7059-7063 и Hellstrom и др., Proc Nati Acad Sci USA 82, 1985, сс. 1499-1502; US №5821337; у Bruggemann и др., J Exp Med 166, 1987, сс. 1351-1361. Альтернативно этому, можно применять методы, основанные на нерадиоактивном анализе (см., например, ACTI™ - нерадиоактивный анализ цитотоксичности с помощью проточной цитометрии (фирма CellTechnology, Inc. Маунтин-Вью, шт. Калифорния); и CytoTox 96® - нерадиоактивный анализ цитотоксичности (фирма Promega, Мэдисон, шт. Висконсин)). Приемлемыми эффекторными клетками для таких анализов являются мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и естественные клетки-киллеры (NK). В альтернативном или дополнительном варианте ADCC-активность представляющей интерес молекулы можно оценивать in vivo, например, например, с использованием созданных на животных моделей, описанных у Clynes и др., Proc Nati Acad Sci USA 95, 1998, сс. 652-656.
В некоторых вариантах осуществления изобретения изменяют связывание антитела с компонентом системы комплемента, в частности с C1q. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения, в которых антитело конструируют так, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, указанная пониженная эффекторная функция включает пониженную CDC. Можно осуществлять анализы связывания C1q для решения вопроса о том, может ли иммуноконъюгат связываться с C1q и, как следствие, обладает ли он CDC-активностью (см., например, анализы связывания с C1q и С3с с помощью ELISA, описанные в WO 2006/029879 и WO 2005/100402). Для оценки активации комплемента можно осуществлять анализ CDC (см., например, Gazzano-Santoro и др., J Immunol Methods 202, 1996, с. 163; Cragg и др., Blood 101, 2003, сс. 1045-1052 и Cragg и Glennie, Blood 103, 2004, сс. 2738-2743).
В некоторых вариантах осуществления изобретения иммуноконъюгат содержит один или несколько сайтов протеолитического расщепления, локализованных между эффекторным фрагментом и антителом. Компоненты иммуноконъюгата можно соединять непосредственно или через различные линкеры, прежде всего пептидные линкеры, содержащие одну или несколько аминокислот, как правило, примерно 2-20 аминокислот, которые указаны в настоящем описании или известны в данной области. Приемлемыми неиммуногенными пептидными линкерами являются, например, пептидные линкеры (G4S)n, (SG4)n or G4(SG4)n, в которых n, как правило, обозначает число между 1 и 10, как правило, между 2 и 4.
Антитела иммуноконъюгатов
Входящее в иммуноконъюгат антитело, предлагаемое в изобретении, как правило, представляет собой молекулу иммуноглобулина, которая связывается со специфической антигенной дереминантной и обладает способностью направлять субстанцию, с которой оно связано (например, эффекторный фрагмент) к сайту-мишени, например, к специфическому типу опухолевой клетки или стромы опухоли, которая несет антигенную детерминанту. Иммуноконъюгат может связываться с антигенными детерминантами, которые присутствуют, например, на поверхности опухолевых клеток, на поверхности инфицированных вирусом клеток, на поверхности других больных клеток, которые находятся в свободном состоянии в сыворотке крови и/или во внеклеточном матриксе (ЕСМ).
Примерами опухолевых антигенов являются (но, не ограничиваясь только ими) MAGE, MART-1/Melan-A, gp100, дипептидилпептидаза IV (DPPIV), белок, связывающий аденозиндеаминазу (ADAbp), циклофилин 0, антиген, ассоциированный с колоректальным раком (CRC)-C017-1A/GA733, карциноэмбриональный антиген (СЕА) и его иммуногенные эпитопы САР-1 и CAP-2, etv6, aml1, простатический антиген (PSA) и его иммуногенные эпитопы PSA-1, PSA-2 и PSA-3, простатический специфический мембранный антиген (PSMA), Т-клеточный рецептор/CD3-зета-цепь, семейство MAGE опухолевых антигенов (например, MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A6, MAGE-A7, MAGE-A8, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-АН, MAGE-А12, MAGE-Xp2 (MAGE-B2), MAGE-Хр3 (MAGE-B3), MAGE-Xp4 (MAGE-B4), MAGE-C1, MAGE-C2, MAGE-C3, MAGE-C4, MAGE-C5), семейство GAGE опухолевых антигенов (например, GAGE-1, GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4, GAGE-5, GAGE-6, GAGE-7, GAGE-8, GAGE-9), BAGE, RAGE, LAGE-1, NAG, GnT-V, MUM-1, CDK4, тирозиназа, р53, семейство MUC, HER2/neu, p21ras, RCAS1, α-фетопротеин, Е-кадхерин, α-катенин, β-катенин и γ-катенин, p120ctn, gp100 Pmel117, FRAME, NY-ESO-1, cdc27, белок аденоматозного полипоза coli (АРС), фодрин, коннексин 37, Ig-идиотип, p15, gp75, ганглиозиды GM2 и GD2, вирусные продукты, такие как белки человеческого вируса папилломы, семейство Smad опухолевых антигенов, lmp-1, P1A, кодируемый EBV ядерный антиген (EBNA)-l, гликогенфосфолипаза головного мозга, SSX-1, SSX-2 (НОМ-MEL-40), SSX-1, SSX-4, SSX-5, SCP-1 и СТ-7 и с-erbB-2. Примерами вирусных антигенов являются (но, не ограничиваясь только ими) гемагглютинин вируса гриппа, LMP-1 вируса Эпштейна-Барра, гликопротеин вируса гепатита С Е2, gp160 ВИЧ, и gp120 ВИЧ. Примерами антигенов ЕСМ являются (но, не ограничиваясь только ими) синдекан, гепараназа, интегрины, остеопонтин, белки семейства link, кадхерины, ламинин, ламинин типа EGF, лектин, фибронектин, белки семейства notch, тенасцин и матриксин. Иммуноконъюгаты, предлагаемые в изобретении, могут связываться со следующими специфическими антигенами клеточной поверхности, включающими (но, не ограничиваясь только ими): FAP, Her2, EGFR, IGF-1R, CD2 (Т-клеточный поверхностный антиген), CD3 (гетеромультимер, ассоциированный с TCR), CD22 (В-клеточный рецептор), CD23 (низкоаффинный IgE-рецептор), CD25 (α цепь IL-2 рецептора), CD30 (цитокиновый рецептор), CD33 (поверхностный антиген клеток миелоидного ряда), CD40 (рецептор фактора некроза опухолей), IL-6R (1b6-рецептор), CD20, MCSP, c-Met, содержащий CUB-домен белок-1 (CDCP1) и PDGFβR (рецептор тромбоцитарного фактора роста β).
В некоторых вариантах осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент направлен против антигена, присутствующего на опухолевой клетке или в окружении опухолевой клетки. В конкретном варианте осуществления изобретения антигенсвязывающий фрагмент направлен против антигена, выбранного из группы, включающей фибробласт-активирующий белок (FAP), А1-домен тенасцина-С (TNC A1), A2-домен тенасцина-С (TNC A2), экстрадомен В фибронектина (EDB), карциноэмбриональный антиген (СЕА) и ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (MCSP).
Антитело может представлять собой антитело любого типа или его фрагмент, который сохраняет специфичность связывания с антигенной детерминантой и содержит Fc-область. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело представляет собой полноразмерное антитело. Наиболее предпочтительными антителами являются иммуноглобулины IgG-класса, в частности, IgG1-подкласса.
В одном из вариантов осуществления изобретения иммуноконъюгат содержит антитело, которое является специфическим в отношении A1- и/или А4-домена тенасцина (TNC-A1 или TNC-A4, или TNC-A1/A4). В конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична либо SEQ ID NO: 8, либо SEQ ID NO: 9, либо их сохраняющим функциональность вариантам. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична либо SEQ ID NO: 6, либо SEQ ID NO: 7, либо их сохраняющим функциональность вариантам. В более конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична либо SEQ ID NO: 8, либо SEQ ID NO: 9, либо их сохраняющим функциональность вариантам, и последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична либо SEQ ID NO: 6, либо SEQ ID NO: 7, либо их сохраняющим функциональность вариантам.
В одном из вариантов осуществления изобретения иммуноконъюгат содержит антитело, которое является специфическим в отношении А2-домена тенасцина (TNC-A2). В конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 83 и SEQ ID NO: 85, или их сохраняющим функциональность вариантам. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82 и SEQ ID NO: 84, или их сохраняющим функциональность вариантам. В более конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 83 и SEQ ID NO: 85, или их сохраняющим функциональность вариантам, и последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82 и SEQ ID NO: 84, или их сохраняющим функциональность вариантам.
В одном из вариантов осуществления изобретения иммуноконъюгат содержит антитело, которое является специфическим в отношении фибробласт-активирующего белка (FAP). В конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 67 и SEQ ID NO: 69, или их сохраняющим функциональность вариантам. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID N0: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66 и SEQ ID NO: 68, или их сохраняющим функциональность вариантам. В более конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 67 и SEQ ID NO: 69, или их сохраняющим функциональность вариантам, и последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66 и SEQ ID NO: 68, или их сохраняющим функциональность вариантам. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 12 и последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 17 и последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 16. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 47 и последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 46. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 и последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 62. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 67 и последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 66. В другом конкретном варианте осуществления изобретения иммуноконъюгат, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 125 или ее сохраняющим функциональность вариантам, и полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% идентична SEQ ID NO: 126 или ее сохраняющим функциональность вариантам, и полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 129 или ее сохраняющим функциональность вариантам. В другом конкретном варианте осуществления изобретения иммуноконъюгат, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 127 или ее сохраняющим функциональность вариантам, полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 128 или ее сохраняющим функциональность вариантам, и полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 129 или ее сохраняющим функциональность вариантам. В другом конкретном варианте осуществления изобретения иммуноконъюгат, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 130 или ее сохраняющим функциональность вариантам, полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 131 или ее сохраняющим функциональность вариантам, и полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 132 или ее сохраняющим функциональность вариантам.
В одном из вариантов осуществления изобретения иммуноконъюгат содержит антитело, которое является специфическим в отношении ассоциированного с меланомой хондроитинсульфат-протеогликана (MCSP). В конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности либо SEQ ID NO: 86, либо SEQ ID NO: 122, либо их сохраняющим функциональность вариантам. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности либо SEQ ID NO: 87, либо SEQ ID NO: 123, либо их сохраняющим функциональность вариантам. В более конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательность либо SEQ ID NO: 86, либо SEQ ID NO: 122, либо их сохраняющим функциональность вариантам, и последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% идентична последовательности либо SEQ ID NO: 87, либо SEQ ID NO: 123, либо их сохраняющим функциональность вариантам. В более конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 86, и последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 87. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 122, и последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 123.
В одном из вариантов осуществления изобретения иммуноконъюгат содержи антитело, которое является специфическим в отношении карциноэмбрионального антигена (СЕА). В конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 114 или ее сохраняющему функциональность варианту. В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 115 или ее сохраняющему функциональность варианту. В более конкретном варианте осуществления изобретения антитело иммуноконъюгата содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 114 или ее сохраняющему функциональность варианту, и последовательность вариабельной области легкой цепи, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 115 или ее сохраняющему функциональность варианту. В другом конкретном варианте осуществления изобретения иммуноконъюгат, предлагаемый в настоящем изобретении, содержит полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 136 или ее сохраняющему функциональность варианту, полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 137 или ее сохраняющему функциональность варианту, и полипептидную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 138 или ее сохраняющему функциональность варианту.
Иммуноконъюгаты, предлагаемые в изобретении, включают иммуноконъюгаты, содержащие последовательности, которые по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичны последовательностям, представленным в SEQ ID NO: 3-87, 108-132 и 136-138, включая их функциональные фрагменты или варианты. Иммуноконъюгаты, предлагаемые в изобретении, содержат также антитела, содержащие последовательности SEQ ID NO: 3-127 с консервативными аминокислотными заменами. Как должно быть очевидно, в последовательностях SEQ ID NO: 126, 128, 131, 134 и 137 последовательность представленного в настоящем описании мутанта IL-2 (см. SEQ ID NO: 2) можно заменять на последовательность человеческого IL-2 (см. SEQ ID NO: 1).
Эффекторные фрагменты иммуноконъюгатов
Эффекторные фрагменты, предназначенные для применения в изобретении, представляют собой, как правило, полипептиды, которые влияют на клеточную активность, например, через пути трансдукции сигналов. Таким образом, эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, применяемого согласно изобретению, может быть ассоциирован с опосредуемой рецептором передачей сигналов, что приводит к передаче сигнала от наружной части клеточной мембраны, модулируя ответ в клетке. Например, эффекторный фрагмент иммуноконъюгата может представлять собой цитокин. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент представляет собой одноцепочечный эффекторный фрагмент, представленный в настоящем описании. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент, как правило, одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, предлагаемого в изобретении, представляет собой цитокин, выбранный из группы, состоящей из: IL-2, GM-CSF, IFN-α и IL-12. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент представляет собой IL-2. В другом варианте осуществления изобретения одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата представляет собой цитокин, выбранный из группы, состоящей из: IL-8, MIP-1α, MIP-1β и TGF-β.
В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент, прежде всего одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, представляет собой IL-2. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент IL-2 может обусловливать один или несколько клеточных ответов, выбранных из группы, включающей: пролиферацию активированного Т-лимфоцита, дифференцировку активированного Т-лимфоцита, активность цитотоксической Т-клетки (CTL), пролиферацию активированной В-клетки, дифференцировку активированной В-клетки, пролиферацию естественной клетки-киллера (NK), дифференцировку NK-клетки, секрецию цитокинов активированной Т-клеткой или NK-клеткой и противоопухолевую цитотоксичность NK/лимфоцит-активированных клеток-киллеров (LAK). В некоторых вариантах осуществления изобретения эффекторный фрагмент IL-2 представляет собой мутантный эффекторный фрагмент IL-2, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную мутацию, которая снижает или элиминирует аффинность мутантного эффекторного фрагмента IL-2 к α-субъединице IL-2-рецептора (которую обозначают также как CD25), но сохраняет аффинность мутантного эффекторного фрагмента IL-2 к IL-2-рецептору с промежуточной аффинностью (который состоит из β- и γ-субъединиц IL-2-рецептора), по сравнению с немутантным эффекторным фрагментом IL-2. В одном из вариантов осуществления изобретения аминокислотные мутации представляют собой аминокислотные замены. В конкретном варианте осуществления изобретения мутантный эффекторный фрагмент IL-2 содержит одну, две или три аминокислотные замены в одной, двух или трех положении(ях), выбранных из положений, которые соответствуют остаткам 42, 45 и 72 человеческого IL-2 (SEQ ID NO: 1). В более конкретном варианте осуществления изобретения мутантный эффекторный фрагмент IL-2 содержит три аминокислотные замены в положениях, соответствующих остаткам 42, 45 и 72 человеческого IL-2. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения, мутантный эффекторный фрагмент IL-2 представляет собой человеческий IL-2, содержащий аминокислотные замены F42A, Y45A и L72G. В одном из вариантов осуществления изобретения мутантный эффекторный фрагмент IL-2 дополнительно содержит аминокислотную мутацию в положении, соответствующем положению 3 человеческого IL-2, которая элиминирует сайт 0-гликозилирования IL-2. Конкретно, указанная дополнительная аминокислотная мутация представляет собой аминокислотную замену, приводящую к замещению остатка треонина на остаток аланина. Последовательность четырехмутантного (QM) IL-2, содержащего аминокислотные замены Т3А, F42A, Y45A и L72G, представлена в SEQ ID NO: 2. Приемлемые мутантные молекулы IL-2 описаны более подробно в публикации PCT WO 2012/107417.
Мутантные молекулы IL-2, которые можно применять в качестве эффекторных фрагментах в иммуноконъюгатах, можно получать путем делеции, инсерции или модификации, используя генетические или химические методы, известные в данной области. Генетические методы могут включать сайтнаправленный мутагенез, ПЦР, синтез генов и т.п. Правильность нуклеотидных замен можно подтверждать, например, секвенированием. Пригодная для этой цели нуклеотидная последовательность нативного IL-2 описана в Taniguchi и др.. Nature 302, 1983, сс. 305-310), а нуклеиновую кислоту, кодирующую человеческий IL-2, можно получать из публичных депозитариев, таких как Американская коллекция типовых культур (Роквилл, шт. Мэриленд). Приведенная в качестве примера последовательность человеческого IL-2 представлена в SEQ ID NO: 1. Замена или инсерция может затрагивать встречающиеся в естественных условиях, а также не встречающиеся в естественных условиях аминокислотные остатки. Для аминокислотной модификации применяют хорошо известные методы химической модификации, такие как добавление или удаление сайтов гликозилирования или присоединений углеводов и т.п.
В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент, прежде всего одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, представляет собой GM-CSF. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент GM-CSF может вызывать пролиферацию и/или дифференцировку гранулоцита, моноцита или дендритной клетки. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент, прежде всего одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, представляет собой IFN-α. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент IFN-α может вызывать один или несколько клеточных ответов, выбранных из группы, включающей: ингибирование вирусной репликации в зараженной вирусом клетке и повышающую регуляцию экспрессии молекул главного комплекса гистосовместимости I (ГКГ I). В другом конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент IFN-α может ингибировать пролиферацию опухолевой клетки. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент, прежде всего одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, представляет собой IL-12. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент IL-12 может вызывать один или несколько клеточных ответов, выбранных из группы, включающей: пролиферация NK-клетки, дифференцировка NK-клетки, пролиферация Т-клетки и дифференцировка Т-клетки. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент, прежде всего одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, представляет собой IL-8. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент IL-8 может вызывать хемотаксис нейтрофилов. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент, прежде всего одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, представляет собой MIP-1α. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент MIP-1α может вызывать хемотаксис моноцитов и Т-лимфоцитов. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент, прежде всего одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, представляет собой MIP-1β. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент MIP-1β может вызывать хемотаксис моноцитов и Т-лимфоцитов. В одном из вариантов осуществления изобретения эффекторный фрагмент, прежде всего одноцепочечный эффекторный фрагмент иммуноконъюгата, представляет собой TGF-β. В конкретном варианте осуществления изобретения эффекторный фрагмент TGF-β может вызывать один или несколько клеточных ответов, выбранных из группы, включающей: хемотаксис моноцитов, хемотаксис макрофагов, повышающую регуляцию экспрессии IL-1 в активированных макрофагах и повышающую регуляцию экспрессии IgA в активированных В-клетках.
Антитела для комбинации с иммуноконъюгатами
Согласно изобретению антитела, предназначенные для применения в комбинации с иммуноконъюгатами, конструируют таким образом, чтобы они обладали повышенной эффекторной функцией. Антитела, которые согласно настоящему изобретению, применяют в комбинации с иммуноконъюгатами, включают антитела или фрагменты антител, которые связываются со специфической антигенной детерминантной, например, специфическим опухолевым антигеном, и содержат Fc-область. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело направлено против антигена, присутствующего на опухолевой клетке. Конкретными антигенами-мишенями антител, которые можно применять согласно настоящему изобретению, являются антигены, экспрессируемые на поверхности опухолевых клеток, включая (но, не ограничиваясь только ими) расположенные на клеточной поверхности рецепторы, такие как рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), рецепторы инсулиноподобного фактора роста (IGFR) и рецепторы тромбоцитарного фактора роста (PDGFR), простатический специфический мембранный антиген (PSMA), карциноэмбриональный антиген (СЕА), дипептидилпептидазу IV (DPPIV), (CD26, DPPIV), FAP, HER2/neu, HER-3, Е-кадхерин, CD20, ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (MCSP), c-Met, содержащий CUB-домен белок-1 (CDCP1) и антиген карциномы сквамозных клеток (плоскоклеточной карциномы) (SCCA).
В конкретном варианте осуществления изобретения антитело направлено против антигена, выбранного из группы, включающей CD20, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), HER2, HER3, рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (IGF-1R), карциноэмбриональный антиген (СЕА), c-Met, содержащий CUB-домен белок-1 (CDCP1) и ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (MCSP). В одном из вариантов осуществления изобретения антитело представляет собой мультиспецифическое антитело, направленное против двух или большего количества антигенов, выбранных из группы, включающей CD20, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), HER2, HER3, рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (IGF-1R), карциноэмбриональный антиген (СЕА), c-Met, содержащий CUB-домен белок-1 (CDCP1) и ассоциированный с меланомой хондроитинсульфат-протеогликан (MCSP).
Специфические антитела к CD20, которые можно применять согласно настоящему изобретению, представляют собой гуманизированные антитела IgG-класса к CD20 типа II, которые имеют связывающую специфичность мышиного антитела B-Lyl (Poppema и Visser, Biotest Bulletin 3, 1987, сс. 131-139). Наиболее предпочтительным является гуманизированное антитело IgG-класса к CD20 типа II, которое содержит
а) в вариабельном домене тяжелой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 88, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 89, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 90, и
б) в вариабельном домене легкой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 91, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 92, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 93.
В частности, каркасные участки вариабельной области тяжелой цепи (FR) FR1, FR2 и FR3 указанного антитела представляют собой последовательности человеческого FR, кодируемые последовательностью человеческой зародышевой линии VH1_10, FR4 вариабельной области тяжелой цепи указанного антитела представляет собой последовательность человеческого FR, кодируемую последовательностью человеческой зародышевой линии JH4, каркасные участки (FR) FR1, FR2 и FR3 вариабельной области легкой цепи антитела представляют собой последовательности человеческого FR, кодируемые последовательностью человеческой зародышевой линии VK_2_40, FR4 вариабельной области легкой цепи антитела представляет собой человеческую последовательность FR, кодируемую последовательностью человеческой зародышевой линии JK4.
Более конкретно, антитело к CD20, которое можно применять согласно настоящему изобретению, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 94, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 95.
Указанные антитела к CD20 описаны в WO 2005/044859, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки.
Специфические антитела к EGFR, которые можно применять согласно настоящему изобретению, представляют собой гуманизированные антитела IgG-класса, которые имеют связывающую специфичность крысиного антитела ICR62 (Modjtahedi и др., Br J Cancer 67, 1993, сс. 247-253). Наиболее ценным является гуманизированное антитело к EGFR IgG-класса, которое содержит
а) в вариабельном домене тяжелой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 96, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 97, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 98, и
б) в вариабельном домене легкой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 99, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 100, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 101.
Более конкретно, антитело к EGFR, которое можно применять согласно настоящему изобретению, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 102, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 103.
Указанные антитела к EGFR описаны в WO 2006/082515 и WO 2008/017963, каждая из которых полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки.
Другие приемлемые гуманизированные антитела к EGFR IgG-класса, которые можно применять согласно изобретению, включают цетуксимаб/IMC-С225 (Erbitux®, описан у Goldstein и др., Clin Cancer Res 1, 1995, сс. 1311-1318), панитумумаб/ABX-EGF (Vectibix®, описан у Yang и др., Cancer Res 59, 1999, сс. 1236-1243, Yang и др., Critical Reviews in Oncology/Hematology 38, 2001, cc. 17-23 (2001)), нимотузумаб/h-R3 (TheraCim®, описан у Mateo и др., Immunotechnology 3, 1997, сс. 71-81; Crombet-Ramos и др., Int J Cancer 101, 2002, сс. 567-575, Boland и Bebb, Expert Opin Biol Ther 9, 2009, сс. 1199-1206), матузумаб/EMD 72000 (описан у Bier и др., Cancer Immunol Immunother 46, 1998, сс. 167-173, Kirn, Curr Opin Mol Ther 6, 2004, сс. 96-103), и залутумумаб/2F8 (описан у Bleeker и др., J Immunol 173, 2004, сс. 4699-4707, Lammerts van Bueren, PNAS 105, 2008, сс. 6109-6114).
Специфические антитела к IGF-1R, которые можно применять согласно настоящему изобретению, описаны в WO 2005/005635 и WO 2008/077546, полное содержание каждой из которых включено в настоящее описание в качестве ссылки, и ингибируют связывание инсулиноподобного фактора роста-1 (IGF-1) и инсулиноподобного фактора роста-2 (IGF-2) с рецептором инсулиноподобного фактора роста-1 (IGF-1R).
Антитела к IGF-1R, которые можно применять согласно изобретению, предпочтительно представляют собой моноклональные антитела, а также химерные антитела (человеческий константный домен), гуманизированные антитела и наиболее предпочтительно полностью человеческие антитела. Конкретные антитела к IGF-1R, которые можно применять согласно изобретению, связываются с человеческим IGF-1R, конкурируя с антителом 18, т.е. они связываются с тем же эпитопом IGF-1R, что и антитело 18, которое описано в WO 2005/005635. Конкретные антитела к IGF-1R отличаются также аффинностью к IGF-1R, составляющей 10-8 М (KD) или менее, прежде всего, примерно от 10-9 до 10-13 М, и предпочтительно отличается не поддающимся выявлению ингибированием в зависимости от концентрации связывания инсулина с инсулиновым рецептором.
Конкретные антител к IGF-1R, которые можно применять согласно изобретению, содержат гипервариабельные участки (определяющие комплементарность области (CDR), имеющие следующие последовательности:
а) тяжелой цепи антитела, которая содержит в качестве CDR CDR1, CDR2 и CDR3, имеющие SEQ ID NO: 104 или 106;
б) легкой цепи антитела, которая содержит в качестве CDR CDR1, CDR2 и CDR3, имеющие SEQ ID NO: 105 или 107.
В частности, антитела к IGF-1R, которые можно применять согласно изобретению, содержат аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи антитела SEQ ID NO: 104 и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи антитела SEQ ID NO: 105 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи антитела SEQ ID NO: 106 и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи антитела SEQ ID NO: 107.
Конкретные антитела к IGF-1R, которые можно применять согласно изобретению, можно получать из клеточных линий гибридом <IGF-1R> HUMAB-клон 18 и <IGF-1R> HUMAB-клон 22, которые депонированы в Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур ГмбХ (DSMZ), Германия под регистрационными номерами DSM АСС 2587 и DSM АСС 2594 соответственно.
Другими пригодными антителами к IGF-1R, которые можно применять согласно изобретению, являются, например, полностью человеческое МАт IgG1-подкласса циксутумумаб/IMC-А12 (описан у Burtrum и др., Cancer Res 63, 2003, сс. 8912-8921; Rowinsky и др., Clin Cancer Res 13, 2007, сс. 5549-5555, полностью человеческое МАт IgG1-подкласса AMG-479 (описано у Beltran и др., Mol Cancer Ther 8, 2009, сс. 1095-1105; Tolcher и др., J Clin Oncol 27, 2009, сс. 5800-5807), гуманизированное МАт IgG1-подкласса MK-0646/h7C10 (описано у Goetsch и др., hit J Cancer 113, 2005, сс. 316-328; Broussas и др., Int J Cancer 124, 2009, сс. 2281-2293; Hidalgo и др., J Clin Oncol 26, 2008, реферат 3520; Atzori и др., J Clin Oncol 26, 2008, реферат 3519), гуманизированное МАт IgG1-подкласса AVE1642 (описано у Descamps и др., Br J Cancer 100, 2009, сс. 366-369; Tolcher и др., J Clin Oncol 26, 2008, реферат 3582; Moreau и др., Blood 110, 2007, реферат 1166; Maloney и др., Cancer Res 63, 2003, сс. 5073-5083), полностью человеческое МАт IgG2-подкласса фигитумумаб/СР-751,871 (Cohen и др., Clin Cancer Res 11, 2005, сс. 2063-2073; Haluska и др., Clin Cancer Res 13, 2007, сс. 5834-5840; Lacy и др., J Clin Oncol 26, 2008, сс. 3196-3203; Gualberto и Karp, Clin Lung Cancer 10, 2009, сс. 273-280, полностью человеческое МАт IgG1 SCH-717454 (описано в WO 2008/076257 или у Kolb и др., Pediatr Blood Cancer 50, 2008, cc. 1190-1197), МАт 2.13.2. (описано в US №7037498 (WO 2002/053596)) или полностью человеческое МАт IgG4-подкласса BIIB022.
Специфические антитела к СЕА, которые можно применять согласно настоящему изобретению, представляют гуманизированные антитела IgG-класса, которые имеют связывающую специфичность мышиного антитела PR1A3 (Richman и Bodmer, Int J Cancer 39, 1987, сс. 317-328). Наиболее предпочтительным является гуманизированное антитело к СЕА IgG-класса, которое содержит
а) в вариабельном домене тяжелой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 108, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 109, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 111, и
б) в вариабельном домене легкой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 111, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 112, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 113.
Более конкретно, антитело к СЕА, которое можно применять согласно настоящему изобретению, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 114, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 115.
Указанные антитела к СЕА описаны в публикации РСТ WO 2011/023787, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки.
Специфические антитела к HER3, которые можно применять согласно настоящему изобретению, представляют собой гуманизированные антитела IgG-класса, такие как МАт 205.10.1, МАт 205.10.2 и МАт 205.10.3, прежде всего МАт 205.10.2, описанные в публикации РСТ WO 2011/076683. Наиболее предпочтительным является гуманизированное антитело к HER3 IgG-класса, которое содержит
а) в вариабельном домене тяжелой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 139, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 140, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 141, и
б) в вариабельном домене легкой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 143, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 145.
Более конкретно, антитело к HER3, которое можно применять согласно настоящему изобретению, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 142, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 146.
Специфические антитела к CDCP1, которые можно применять согласно настоящему изобретению, представляют собой гуманизированные антитела IgG-класса, выведенные из антитела CUB4 (регистрационный номер DSM АСС 2551 (DSMZ), которое описано в публикации РСТ WO 2011/023389.
Примеры антител к MCSP, которые можно применять согласно настоящему изобретению, описаны в европейской заявке на патент ЕР 11178393.2. Наиболее предпочтительным является гуманизированное антитело к MCSP IgG-класса, которое содержит
а) в вариабельном домене тяжелой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 116, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 117, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 118, и
б) в вариабельном домене легкой цепи CDR1, имеющий SEQ ID NO: 119, CDR2, имеющий SEQ ID NO: 120, и CDR3, имеющий SEQ ID NO: 121.
Более конкретно, антитело к MCSP, которое можно применять согласно настоящему изобретению, содержит вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 122, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 123.
В одном из вариантов осуществления изобретения антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело представляет собой антитело IgG1-подкласса. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело содержит человеческую Fc-область, более предпочтительно Fc-область человеческого IgG, наиболее предпочтительно Fc-область человеческого IgG1. Антитела, которые можно применять согласно изобретению, такие как антитела к IGF-1R, к EGFR и к CD20, описанные выше, могут содержать константную область тяжелой гамма-1-цепи человеческого Ig, представленную в SEQ ID NO: 124 (т.е. антитела представляют собой человеческие антитела IgG1-подкласса).
Антитела, которые можно применять согласно настоящему изобретению, конструируют таким образом, чтобы они обладали повышенной эффекторной функцией по сравнению с соответствующим не подвергнутым инженерии антителом. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело конструируют таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, т.е. повышенной по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 10 раз или даже по меньшей мере в 100 раз эффекторной функцией, по сравнению с соответствующим не подвергнутым инженерии антителом. Повышенная эффекторная функция может представлять собой (но, не ограничиваясь только ими) повышенную(ые) одну или несколько из следующих функций: повышенная способность связываться с Fc-рецептором, повышенная способность связываться с C1q и комплементзависимая цитотоксичность (CDC), повышенная антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность (ADCC), повышенный антитело-обусловленный клеточнозависимый фагоцитоз (ADCP), повышенная секреция цитокинов, повышенное опосредованное иммунным комплексом поглощение антигена антигенпрезентирующими клетками, повышенная способность связываться с NK-клетками, повышенная способность связываться с макрофагами, повышенная способность связываться с моноцитами, повышенная способность связываться с полиморфоядерными клетками, повышенная непосредственная передача сигнала, индуцирующего апоптоз, повышенное перекрестное связывание связанных с мишенью антител, повышенное созревание дендритных клеток или повышенное Т-клеточное примирование.
В одном из вариантов осуществления изобретения одну или несколько повышенных эффекторных функций выбирают из группы, включающей повышенную способность связываться с Fc-рецептором, повышенную CDC, повышенную ADCC, повышенный ADCP и повышенную секрецию цитокинов. В одном из вариантов осуществления изобретения повышенная эффекторная функция представляет собой повышенную способность связываться активирующим с Fc-рецептором. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения аффинность связывания с активирующим Fc-рецептором повышают по меньшей мере в 2 раза, прежде всего по меньшей мере в 10 раз по сравнению с аффинностью связывания соответствующего не подвергнутого инженерии антитела. В конкретном варианте осуществления изобретения активирующий Fc-рецептор выбирают из группы, включающей FcγRIIIa, FcγRI и FcγRIIa. В одном из вариантов осуществления изобретения активирующий Fc-рецептор представляет собой FcγRIIIa, прежде всего человеческий FcγRIIIa. В другом варианте осуществления изобретения повышенная эффекторная функция представляет собой повышенную ADCC. В одном из указанных вариантов осуществления изобретения ADCC повышают по меньшей мере в 10 раз, прежде всего по меньшей мере в 100 раз по сравнению с ADCC, опосредуемой соответствующим не подвергнутым инженерии антителом. В следующем варианте осуществления изобретения повышенная эффекторная функция представляет собой повышенную способность связываться с активирующим Fc-рецептором и повышенную ADCC.
Повышенную эффекторную функцию можно измерять методами, известными в данной области. Приемлемый анализ для оценки ADCC представлен в настоящем описании. Другие примеры анализов in vitro, предназначенных для оценки ADCC-активности представляющей интерес молекулы, описаны в US №5500362; у Hellstrom и др., Proc Nati Acad Sci USA 83, 1986, сс. 7059-7063 и Hellstrom и др., Proc Nati Acad Sci USA 82, 1985, сс. 1499-1502; US №5821337; у Bruggemann и др., J Exp Med 166, 1987, сс. 1351-1361. Альтернативно этому, можно применять методы, основанные на нерадиоактивном анализе (см., например, ACTI™ - нерадиоактивный анализ цитотоксичности с помощью проточной цитометрии (фирма CellTechnology, Inc. Маунтин-Вью, шт. Калифорния); и CytoTox 96® - нерадиоактивный анализ цитотоксичности (фирма Promega, Мэдисон, шт. Висконсин)). Приемлемыми эффекторными клетками для таких анализов являются мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и естественные клетки-киллеры (NK). В альтернативном или дополнительном варианте ADCC-активность представляющей интерес молекулы можно оценивать in vivo, например, например, с использованием созданных на животных моделей, описанных у Clynes и др., Proc Nati Acad Sci USA 95, 1998, сс. 652-656. Связывание с Fc-рецепторами можно легко определять, например, с помощью ELISA или с помощью поверхностного плазменного резонанса (SPR) с использованием стандартной инструментальной базы, такой как устройство BIAcor (фирма GE Healthcare), и Fc-рецепторов, которые можно получать путем рекомбинантной экспрессии. Согласно конкретному варианту осуществления изобретения аффинность связывания с активирующим Fc-рецептором измеряют с помощью поверхностного плазменного резонанса, используя устройство BIACORE® Т 100 (фирма GE Healthcare) при 25°С. Альтернативно этому, аффинность связывания антител с Fc-рецепторами можно оценивать с использованием клеточных линий, которые, как известно, экспрессируют конкретные Fc-рецепторы, таких как NK-клетки, которые экспрессируют FcγIIIa-рецептор. Можно осуществлять анализы связывания C1q для решения вопроса о том, может ли антитело связываться с C1q и, как следствие, обладает ли оно CDC-активностью (см., например, анализы связывания с C1q и С3с с помощью ELISA, описанные в WO 2006/029879 и WO 2005/100402). Для оценки активации комплемента можно осуществлять анализ CDC (см., например, Gazzano-Santoro и др., J Immunol Methods 202, 1996, с. 163; Cragg и др., Blood 101, 2003, сс. 1045-1052 и Cragg и Glennie, Blood 103, 2004, сс. 2738-2743).
Повышенная эффекторная функция может являться, например, результатом гликоинженерии Fc-области или интродукции аминокислотных мутаций в Fc-область антитела. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело конструируют путем интродукции одной или нескольких аминокислотных мутаций в Fc-область. В конкретном варианте осуществления изобретения аминокислотные мутации представляют собой аминокислотные замены. В еще более конкретном варианте осуществления изобретения аминокислотные замены находятся в положениях 298, 333 и/или 334 Fc-области (EU-нумерация остатков). Другие приемлемые аминокислотные мутации описаны, например, у Shields и др., J Biol Chem 9(2), 2001, сс. 6591-6604; US №6737056; WO 2004/063351 и WO 2004/099249. Мутантные Fc-области можно получать путем аминокислотной делеции, замены, инсерции или модификации с помощью генетических или химических методов, хорошо известных в данной области. Генетические методы могут включать сайтнаправленный мутагенез, ПЦР, синтез генов и т.п. Правильность нуклеотидных замен можно подтверждать, например, секвенированием.
В другом варианте осуществления изобретения антитело конструируют путем модификации гликозилирования в Fc-области. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело конструируют таким образом, чтобы оно обладало повышенным относительным содержанием нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. Повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области антитела приводит к созданию антитела, обладающего повышенной эффекторной функцией, прежде всего повышенной ADCC.
В более конкретном варианте осуществления изобретения по меньшей мере примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90%, примерно 95% или примерно 100%, предпочтительно по меньшей мере примерно 50%, более предпочтительно по меньшей мере примерно 70% N-связанных олигосахаридов в Fc-домене антитела являются нефукозилированными. Нефукозилированные олигосахариды могут быть гибридного или комплексного типа.
В другом конкретном варианте осуществления изобретения антитело конструируют таким образом, чтобы оно обладало повышенным относительным содержанием бисекционных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. В более конкретном варианте осуществления изобретения по меньшей мере примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90%, примерно 95% или примерно 100%, предпочтительно по меньшей мере примерно 50%, более предпочтительно по меньшей мере примерно 70% N-связанных олигосахаридов в Fc-домене антитела являются бисекционными. Бисекционные олигосахариды могут быть гибридного или комплексного типа.
В следующем конкретном варианте осуществления изобретения антитело конструируют таким образом, чтобы оно обладало повышенным относительным содержанием бисекционных нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом. В более конкретном варианте осуществления изобретения по меньшей мере примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90%, примерно 95% или примерно 100%, предпочтительно по меньшей мере примерно 15%, более предпочтительно по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 35% или по меньшей мере примерно 50% N-связанных олигосахаридов в Fc-домене антитела являются бисекционными нефукозилированными. Бисекционные нефукозилированные олигосахариды могут быть гибридного или комплексного типа.
Структуры олигосахаридов в Fc-области антитела можно анализировать методами, хорошо известными в данной области, например, методом MALDI TOF-масс-спектрометрии, описанным у Umana и др., Nat Biotechnol 17, 1999, сс. 176-180 или Ferrara и др., Biotechn Bioeng 93, 2006, сс. 851-861. Процент нефукозилированных олигосахаридов представляет собой количество олигосахаридов, у которых отсутствуют остатки фукозы, относительно всех олигосахаридов, присоединенных к Asn 297 (например, комплексных, гибридных, с высоким содержанием маннозы структур), и идентифицированных в обработанном N-гликозидазой F образце, которое измеряют с помощью MALDI-TOF-MC. Asn297 обозначает остаток аспарагина, локализованный в положении 297 в Fc-области (согласно EU-нумерации остатков в Fc); однако Asn297 может быть локализован в пределах примерно ±3 аминокислоты в обратном или прямом направлении относительно положения 297, т.е. между положениями 294 и 300, что связано с минорными вариациями последовательностей антител. Аналогично определяют процент бисекционных или бисекционных нефукозилированных олигосахаридов.
В одном из вариантов осуществления изобретения антитело конструируют таким образом, чтобы оно обладало модифицированным гликозилированием в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом, путем получения антитела в клетке-хозяине с измененной активностью одной или нескольких гликозилтрансфераз. Гликозилтрансферазы включают, например, β(1,4)-N-ацетилглюкозамилтрансферазу III (GnTIII), β(1,4)-галактозилтрансферазу (GalT), β(1,2)-N-ацетилглюкозамилтрансферазу I (GnTI), β(1,2)-N-ацетилглюкозамилтрансферазу II (GnTII) и α(1,6)-фукозилтрансферазу. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело конструируют таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом, путем получения антитела в клетке-хозяине, обладающей повышенной активностью β(1,4)-N-ацетилглюкозамилтрансферазы III (GnTIII). В еще более предпочтительном варианте осуществления изобретения клетка-хозяин имеет также повышенную активность α-маннозидазы II (ManII). Методология гликоинженерии, которую можно использовать для создания путем гликоинженерии антител, предлагаемых в настоящем изобретении, описана более подробно у Umana и др., Nat Biotechnol 17, 1999, сс. 176-180; Ferrara и др., Biotechn Bioeng 93, 2006, сс. 851-861; WO 99/54342 (U.S. №6602684; EP 1071700); WO 2004/065540 (публикация патента США №2004/0241817; ЕР 1587921), WO 03/011878 (публикация патента США №2003/0175884), содержание каждого из которых полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки. Антитела, подвергнутые гликоинженерии с использованием указанной методологии, в контексте настоящего описании обозначают как GlycoMab.
Как правило, любой тип линии культивируемых клеток, включая указанные в настоящем описании клеточные линии, можно применять для получения антител к TNC A2 с измененной схемой гликозилирования. Конкретные клеточные линии включают СНО-клетки, BHK-клетки, NSO-клетки, SP2/0-клетки, клетки миеломы линии YO, клетки мышиной миеломы линии Р3Х63, PER-клетки, PER.С6-клетки или клетки гибридомы и другие клетки млекопитающих. В некоторых вариантах осуществления изобретения клетки-хозяева подвергали манипуляциям, приводящим к экспрессии повышенных уровней одного или нескольких полипептидов, обладающих активностью β(1,4)-N-ацетилглюкозамилтрансферазы III (GnTIII). В некоторых вариантах осуществления изобретения клетки-хозяева подвергали дополнительным манипуляциям для обеспечения повышенных уровней экспрессии одного или нескольких полипептидов, обладающих активностью α-маннозидазы II (ManII). В конкретном варианте осуществления изобретения полипептид, обладающий GnTIII-активностью, представляет собой слитый полипептид, который сдержит каталитический домен GnTIII и домен локализации в комплексе Гольджи гетерологичного полипептида, присутствующего в комплексе Гольджи. В частности, указанный домен локализации в комплексе Гольджи представляет собой домен локализации в комплексе Гольджи маннозидазы II. Методы создания указанных слитых полипептидов и их применение для получения антител с повышенными эффекторными функциями описаны у Ferrara и др., Biotechn Bioeng 93, 2006, сс. 851-861 и в WO 2004/065540, полное содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Клетки-хозяева, которые содержат кодирующую последовательность антитела, которое можно применять согласно изобретению, и/или кодирующую последовательность полипептидов, обладающих гликозилтрансферазной активностью, и которые экспрессируют биологически активные генные продукты, можно идентифицировать, например, с помощью гибридизации ДНК-ДНК или ДНК-РНК; по присутствию или отсутствию функций определенных «маркерных» генов; путем оценки уровня транскрипции, измеряемого по экспрессии соответствующих мРНК-транскриптов в клетке-хозяине; или путем выявления генного продукта с помощью иммуноанализа или по его биологической активности, т.е. с помощью методов, хорошо известных в данной области. Активность GnTIII или ManII можно определять, например, применяя лектин, который связывается с продуктами биосинтеза GnTIII или ManII соответственно. Примером указанного пектина является лектин Е4-РНА, который связывается предпочтительно с олигосахаридами, содержащими двурассекающий GlcNAc. Продукты биосинтеза (т.е. специфические олигосахаридные структуры) полипептидов, обладающих активностью GnTIII или ManII, можно выявлять также с помощью масс-спектрометрического анализа олигосахаридов, высвобождающихся из гликопротеинов, которые продуцируются клетками, экспрессирующими указанные полипептиды. В альтернативном варианте можно использовать функциональный анализ, в котором измеряют повышенную эффекторную функцию и/или повышенную способность связываться с Fc-рецептором, опосредуемую антителами, которые продуцируются клетками, созданными с использованием полипептидов, обладающих активностью GnTIII или ManII.
В другом варианте осуществления изобретения антитело конструируют таким образом, чтобы оно имело повышенное относительное содержание нефукозилированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с не подвергнутым инженерии антителом, путем получения антитела в клетке-хозяине с пониженной α(1,6)-фукозилтрансферазной активностью. Клетка-хозяин с пониженной α(1,6)-фукозилтрансферазной активностью может представлять собой клетку, в которой ген α(1,6)-фукозилтрансферазы разрушен или деактивирован иным образом, например, «выключен» (см. Yamane-Ohnuki и др., Biotech Bioeng 87, 2004, с. 614; Kanda и др., Biotechnol Bioeng 94(4), 2006, сс. 680-688; Niwan др., J Immunol Methods 306, 2006, сс. 151-160).
Другими примерами клеточных линий, которые обладают способностью продуцировать дефукозилированные антитела, являются Lee 13 СНО-клетки с дефицитом белкового фукозилирования (Ripka и др., Arch. Biochem. Biophys. 249, 1986, сс. 533-545; заявка на патент США № US 2003/0157108 и WO 2004/056312, прежде всего в примере 11). Антитела, которые можно применять согласно настоящему изобретению, можно подвергать гликоинженерии, приводящей к присутствию у них пониженного количества фукозных остатков в Fc-области, с использованием методик, описанных в ЕР 1176195 Al, WO 03/084570, WO 03/085119 и опубликованных заявках на патент США №№2003/0115614, 2004/093621, 2004/110282, 2004/110704, 2004/132140, US №6946292 (на имя фирмы Kyowa), например, путем снижения или элиминации активности белка-транспортера ГДФ-фукозы, в клетках-хозяевах, которые применяют для получения антитела.
Подвергнутые гликоинженерии антитела, которые можно применять согласно изобретению, можно получать также в системах экспрессии, которые продуцируют модифицированные гликопротеины, например, описанных в WO 2003/056914 (фирма GlycoFi, Inc.) или WO 2004/057002 и WO 2004/024927 (на имя фирмы Greenovation).
Методы рекомбинации
Методы получения антител и иммуноконъюгатов, которые можно применять согласно настоящему изобретению, хорошо известны в данной области и описаны, например, в WO 2012/146628, WO 2005/044859, WO 2006/082515, WO 2008/017963, WO 2005/005635, WO 2008/077546, WO 2011/023787, WO 2011/076683, WO 2011/023389 и WO 2006/100582. Принятые методы получения поликлональных антител и моноклональных антител хорошо известны в данной области (см., например, Harlow и Lane, «Antibodies: a Laboratory Manual», изд-во Cold Spring Harbor Laboratory, 1988).
He встречающиеся в естественных условиях антитела или их фрагменты можно создавать с помощью твердофазного пептидного синтеза, можно получать с помощью методов рекомбинации (например, описанных в US №4186567) или можно получать, например, путем скрининга комбинаторных библиотек, содержащих вариабельные области тяжелых цепей и вариабельные области легких цепей (см., например, US №5969108 на имя McCafferty). Для рекомбинантного получения иммуноконъюгатов и антител, которые можно применять согласно настоящему изобретению, один или несколько полинуклеотидов, кодирующих иммуноконъюгат или антитело, выделяют и встраивают в один или несколько векторов для дополнительного клонирования и/или экспрессии в клетке-хозяине. Указанные полинуклеотиды легко можно выделять и секвенировать с помощью общепринятых процедур. Методы, хорошо известные специалистам в данной области, можно применять для конструирования экспрессионных векторов, содержащих кодирующую последовательность иммуноконъюгата или антитела наряду с приемлемыми контролирующими транскрипцию/трансляцию сигналами. Эти методы включают технологии рекомбинантной ДНК in vitro, методы синтеза и рекомбинации/генетической рекомбинации in vivo (см., например, методы, описанные у Maniatis и др., Maniatis и др., Molecular Cloning A Laboratory Manual, изд-во Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y., 1989; и Ausubel и др., Current Protocols in Molecular Biology, изд-во Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y., 1989).
Иммуноконъюгаты, которые можно применять согласно изобретению, можно экспрессировать с одного полинуклеотида, который кодирует полный иммуноконъюгат, или с нескольких (например, с двух или большего количества) полинуклеотидов, которые совместно экспрессируют. Полипептиды, кодируемые совместно экспрессируемыми полинуклеотидами, можно объединять, например, дисульфидными мостками или другими путями с получением функционального иммуноконъюгата. Например, компонент антитела, представляющий собой легкую цепь, можно кодировать с помощью полинуклеотида, отделенного от того, который кодирует компонент иммуноконъюгата, содержащий тяжелую цепь антитела и эффекторный фрагмент. При совместной экспрессии полипептиды тяжелой цепи должны объединяться с полипептидами легкой цепи для образования антитела.
Клетки-хозяева, пригодные для репликации и для поддержания экспрессии рекомбинантных белков, хорошо известны в данной области. Такие клетки можно трансфектировать или трансдуцировать соответствующим образом конкретным экспрессионным вектором и можно выращивать в большем количестве содержащие вектор клетки с целью внесения в ферментеры для крупномасштабных процессов получения белков в достаточных для клинических применений количествах. Приемлемыми клетками-хозяевами являются прокариотические микроорганизмы, такие как Е.coli, или различные эукариотические клетки, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки насекомых или т.п.Например, рекомбинантные белки можно получать в бактериях, в частности, когда отсутствует потребность в гликозилировании. После экспрессии белок можно выделять из пасты бактериальных клеток в растворимую фракцию и можно дополнительно очищать. Помимо прокариот, в качестве хозяев для клонирования или экспрессии векторов, которые кодируют белок, можно использовать эукариотические микроорганизмы, такие как нитчатые грибы или дрожжи, включая штаммы грибов и дрожжей, пути гликозилирования которых были «гуманизированы», что позволяет получать белок с частично или полностью человеческой схемой гликозилирования (см. Gemgross, Nat. Biotech. 22, 2004, сс. 1409-1414 и Li и др., Nat. Biotech. 24, 2006, сс. 210-215). Клетки-хозяева, которые можно использовать для экспрессии (гликозилированных) белков, получают также из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных животных). Примерами клеток беспозвоночных являются клетки насекомых, а также можно применять клетки растений. Были идентифицированы многочисленные бакуловирусные штаммы и соответствующие пригодные для них в качестве хозяев клетки насекомых, прежде всего для трансфекции клеток Spodoptera frugiperda. В качестве хозяев можно применять также культуры растительных клеток (см., например, US №№5959177, 6040498, 6420548, 7125978 и 6417429 (описание технологии PLANTIBODIES™ для получения антител в трансгенных растениях). В качестве хозяев можно применять также клетки позвоночных животных. Например, можно использовать клеточные линии млекопитающих, которые адаптированы к росту в суспензии. Другими примерами приемлемых линий клеток-хозяев млекопитающих являются линия клеток почки обезьяны С VI, трансформированная с помощью SV40 (COS-7); линия клеток почки эмбриона человека (293 или клетки линии 293, субклонированные с целью выращивания в суспензионной культуре, Graham и др., J. Gen. Virol., 36, 1977, с. 59); клетки почки детеныша хомяка (ВНК); клетки Сертоли мыши (ТМ4-клетки, описанные, например, у Mather, Biol. Reprod., 23, 1980, сс. 243-251); клетки почки обезьяны (CV1); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO-76,); клетки карциномы шейки матки человека (HELA); клетки почки собаки (MDCK); клетки печени бычьей крысы (BRL 3А); клетки легкого человека (W138); клетки печени человека (Нер G2); клетки опухоли молочной железы мыши (ММТ 060562); клетки TRI, описанные, например, у Mather и др., Annals N.Y. Acad. ScL, 383, 1982, сс. 44-68); клетки MRC 5 и клетки FS4. Другими ценными линиями клеток-хозяев млекопитающих являются клетки яичника китайского хомячка (СНО), включая dhfr--CHO-клетки (Urlaub и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 1980, с. 4216); и клеточные линии миеломы, такие как Y0, NS0, P3X63 и Sp2/0. Обзор конкретных линий клеток-хозяев млекопитающих, которые можно применять для производства белка, см., например, у Yazaki и Wu, в: Methods in Molecular Biology под ред. В.K.С. Lo, изд-во Humana Press, Totowa, NJ, т. 248, 2003, сс. 255-268. Клетки-хозяева включают культивируемые клетки, например, культивируемые клетки млекопитающих, клетки дрожжей, клетки насекомых, клетки бактерий и клетки растений (но не ограничиваясь только ими), а также клетки, находящиеся в организме трансгенного животного, трансгенного растения или культивируемой растительной или животной ткани. В одном из вариантов осуществления изобретения клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку, предпочтительно клетку млекопитающего, такую как клетка яичника китайского хомячка (СНО), клетка почки человеческого эмбриона (HEK) или лимфоидная клетка (например, клетка Y0, NS0, Sp20).
Если антитело или иммуноконъюгат предназначено/предназначен для применения на человеке, то можно использовать химерные формы антител, в которых константные области антитела получают из человеческого антитела. Гуманизированную или полностью человеческую форму антитела можно получать также с помощью методов, хорошо известных в данной области (см., например, US №5565332 на имя Winter). Для осуществления гуманизации можно применять различные методы, такие как (но, не ограничиваясь только ими) (а) трансплантация нечеловеческих (например, из антитела-донора) CDR в человеческий (например, антитело-реципиент) каркасный участок и константные области, сохраняющие или не сохраняющие имеющие решающее значение остатки каркасного участка (например, остатки, важные для сохранения хорошей антигенсвязывающей аффинности или функций антитела), (б) трансплантация только нечеловеческих определяющих специфичность участков (SDR или а-CDR; остатки имеют решающее значение для взаимодействия антитело-антиген) в человеческий каркасный участок и константные области, или (в) трансплантация полных нечеловеческих вариабельных доменов, но их «маскировка» напоминающим человеческий сегментом путем замены поверхностных остатков. Обзор гуманизированных антител и методов их получения см., например, у Almagro и Fransson, Front Biosci 13, 12008, сс. 1619-1633, и они описаны также, например, у Riechmann и др.. Nature 332, 1988, сс. 323-329; Queen и др., Proc Nati Acad Sci USA 86, 1989, сс. 10029-10033; US №№5821337, 7527791, 6982321 и 7087409; Jones и др., Nature 321, 1986, сс. 522-525; Morrison и др., Proc Nati Acad Sci 81, 1984, сс. 6851-6855; Morrison и Oi, Adv Immunol 44, 1988, сс. 65-92; Verhoeyen и др., Science 239, 1988, сс. 1534-1536; Padlan, Molec Immun 31(3), 1994, сс. 169-217; Kashmiri и др., Methods 36, 2005, сс. 25-34) (описание трансплантации SDR (a-CDR)); Padlan, Mol Immunol 28, 1991, сс. 489-498 (описание «повторного покрытия»); Dall'Acqua и др.. Methods 36, 2005, сс. 43-60 (описание «перестановки FR») и Osbourn и др.. Methods 36, 2005, сс. 61-68, и Klimka и др., Br J Cancer 83, 2000, сс. 252-260 (описание подхода на основе «целенаправленной селекции» для перестановки FR). Человеческие антитела и человеческие вариабельные области можно получать с помощью различных методик, известных в данной области. Человеческие антитела описаны в целом у van Dijk и van de Winkel, Curr Opin Pharmacol 5, 2001, сс. 368-374 и Lonberg, Curr Opin Immunol 20, 2008, сс. 450-459. Человеческие вариабельные области могут образовывать часть человеческих моноклональных антител или могут быть получены из них с помощью метода гибридом (см., например. Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, изд-во Marcel Dekker, Inc., New York, 1987, сс. 51-63). Человеческие антитела и человеческие вариабельные области можно получать также путем введения иммуногена трансгенному животному, которое модифицировано таким образом, что может продуцировать интактные человеческие антитела или интактные антитела с человеческими вариабельными областями в ответ на контрольное заражение антигеном (см., например, Lonberg, Nat Biotech 23, 2005, cc. 1117-1125). Человеческие антитела и человеческие вариабельные области можно создавать также путем выделения последовательностей вариабельных областей Fv-клона, отобранных из человеческих фаговых дисплейных библиотек (см., например, Hoogenboom и др. в: Methods in Molecular Biology, под ред. O'Brien и др., изд-во Human Press, Totowa, NJ, 178, 2001, cc. 1-37); и McCafferty и др., Nature 348, 552-554; Clackson и др., Nature 352, 1991, сс. 624-628). Фаг, как правило, экспонирует фрагменты антител либо в виде одноцепочечных Fv-(scFv)-фрагментов, либо в виде Fab-фрагментов.
В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела, которые можно применять согласно настоящему изобретению, конструируют таким образом, чтобы они обладали повышенной аффинностью связывания, используя например, методы, которые описаны в публикации заявки на патент США №2004/0132066, полное содержание которой включено в настоящее описании в качестве ссылки. Способность антител, которые можно применять согласно изобретению, связываться со специфической антигенной детерминантной, можно определять либо с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), либо других методик, известных специалисту в данной области, например, с помощью метода поверхностного плазмонного резонанса (осуществляя анализ с использованием системы BIACORE T100) (Liljeblad и др., Glyco J 17, 2000, сс. 323-329), и традиционных анализов связывания (Heeley, Endocr Res 28, 2002, сс. 217-229).
Антитела и иммуноконъюгаты, полученные с помощью представленных в настоящем описании методов, можно очищать с использованием известных в данной области методик, таких как жидкостная хроматография высокого разрешения, ионообменная хроматография, гель-электрофорез, аффинная хроматография, гель-фильтрация и т.п.Фактические условия, применяемые для очистки конкретного белка, должны зависеть, в частности, от таких факторов, как чистый заряд, гидрофобность, гидрофильность и т.д., и они должны быть очевидны специалисту в данной области.
Фармацевтические композиции
Другим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, в фармацевтически приемлемом носителе. Указанные фармацевтические композиции можно применять, например, в любом из терапевтических способов, описанных ниже.
Фармацевтические композиции иммуноконъюгата и антитела, обладающего повешенной эффекторной функцией, представленные в настоящем описании, получают путем смешения указанного иммуноконъюгата и антитела, имеющих требуемую степень чистоты, с одним или несколькими необязательными фармацевтически приемлемыми носителями (Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-e изд., изд-во Mack Printing Company, 1990), в форме лиофилизированных композиций или водных растворов. Фармацевтически приемлемые носители, как правило, являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях, они включают (но, не ограничиваясь только ими): буферы, такие как фосфатный, цитратный буферы, а также буферы на основе других органических кислот; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония; хлорид бензетония; фенол; бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол и мета-крезол); полипептиды с низкой молекулярной массой (содержащие менее приблизительно 10 остатков); белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поли(винилпирролидон); аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТК; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; содержащие металл комплексы (например, комплексы Zn-белок); и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (ПЭГ). В контексте настоящего описания примеры фармацевтически приемлемых носителей включают также диспергирующие агенты интерстициальных лекарственных средств, такие как растворимые активные в нейтральной среде гликопротеины гиалуронидаз (sHASEGP), например, человеческие растворимые гликопротеины гиалуронидазы РН-20, такие как rhuPH20 (HYLENEX®, фирма Baxter International, Inc.). Некоторые примеры sHASEGP и методы их применения, в том числе rhuPH20, описаны в публикациях патентов США 2005/0260186 и 2006/0104968. Согласно одному из объектов изобретения sHASEGP объединяют с одним или несколькими дополнительными гликозаминогликаназами, такими как хондроитиназы.
Примеры лиофилизированных препаративных форм описаны в US №6267958. Водные препаративные формы включают описанные в US №6171586 и WO 2006/044908, указанные в последнем документе препаративные формы включают гистидин-ацетатный буфер.
Фармацевтическая композиция, представленная в настоящем описании, может содержать дополнительные действующие вещества, если это необходимо для конкретного подлежащего лечению показания, предпочтительно вещества с дополнительными видами активности, которые не оказывают отрицательного воздействия друг на друга. Например, если заболевание, подлежащее лечению, представляет собой рак, то может оказаться желательным дополнительно включать одно или несколько противораковых средств, например, химиотерапевтическое средство, ингибитор пролиферации опухолевых клеток или активатор апоптоза опухолевых клеток. Такие действующие вещества должны присутствовать в комбинации в количествах, эффективных для решения поставленной задачи.
Действующие вещества можно включать также в микрокапсулы, например, полученные с помощью методов коацервации или межфазной полимеризации, например в гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли(метилметакрилатные) микрокапсулы соответственно, в коллоидные системы введения лекарственного средства (например, в липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методы описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, 16-е изд., под ред. A. Osol, 1980.
Можно приготавливать препараты с замедленным высвобождением. Приемлемыми примерами препаратов с замедленным высвобождением являются полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, включающие антитело, такие матрицы представляют собой изделия определенной формы, например, пленки или микрокапсулы.
Композиции, предназначенные для применения in vivo, как правило, должны быть стерильными. Стерильность можно легко обеспечивать, например, путем фильтрации через стерильные фильтрующие мембраны.
Способы лечения
Представленную в настоящем описании комбинацию, содержащую (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, можно применять в терапевтических методах.
Одним из объектов изобретения является комбинация, содержащая (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для применения в качестве лекарственного средства. Следующими объектами изобретения является комбинация, содержащая (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для применения при лечении заболевания. Некоторыми вариантами осуществления изобретения является комбинация, содержащая (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладают пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для применения в способе лечения. Некоторыми вариантами осуществления изобретения является комбинация, содержащая (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для применения в способе лечения страдающего заболеванием индивидуума, заключающемся в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве комбинацию. В одном из таких вариантов осуществления способ заключается также в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, например, указанное ниже. Следующими вариантами осуществления изобретения является комбинация, содержащая (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для применения с целью стимуляции функции эффекторных клеток. Некоторыми вариантами осуществления изобретения является комбинация, содержащая (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для применения в способе стимуляции функции эффекторных клеток у индивидуума, заключающемся в том, что вводят индивидууму в эффективном количестве комбинацию для стимуляции функции эффекторных клеток. «Индивидуум» в контексте любого из указанных выше вариантов осуществления изобретения представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека. «Заболевание» в контексте любого из указанных выше вариантов осуществления изобретения представляет собой заболевание, которое можно лечить путем стимуляции функции эффекторных клеток. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевание представляет собой нарушение клеточной пролиферации, прежде всего рак.
Следующим объектом изобретения является применение комбинации, содержащей (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для приготовления или создания препарата лекарственного средства. В одном из вариантов осуществления изобретения лекарственное средство предназначено для лечения заболевания. В другом варианте осуществления изобретения лекарственное средство предназначено для применения в способе лечения заболевания, заключающегося в том, что вводят лекарственное средство страдающему заболеванием индивидууму в терапевтически эффективном количестве. В одном из таких вариантов осуществления изобретения способ заключается также в том, что в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, например, описанное ниже. В другом варианте осуществления изобретения лекарственное средство предназначено для стимуляции функции эффекторных клеток. В следующем варианте осуществления изобретения лекарственное средство предназначено для применения в способе стимуляции функции эффекторных клеток у индивидуума, заключающемся в том, что вводят индивидууму лекарственное средство в количестве, эффективном для стимуляции функции эффекторных клеток. «Индивидуум» в контексте любого из указанных выше вариантов осуществления изобретения представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека. «Заболевание» в контексте любого из указанных выше вариантов осуществления изобретения представляет собой заболевание, которое можно лечить путем стимуляции функции эффекторных клеток. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевание представляет собой нарушение клеточной пролиферации, прежде всего рак.
Следующим объектом изобретения является способ лечения заболевания. В одном из вариантов осуществления изобретения способ заключается в том, что вводят страдающему заболеванием индивидууму в терапевтически эффективном количестве комбинацию, содержащую (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией. В одном из таких вариантов осуществления изобретения способ заключается также в том, что вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, описанное ниже. «Индивидуум» в контексте любого из указанных выше вариантов осуществления изобретения представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека. «Заболевание» в контексте любого из указанных выше вариантов осуществления изобретения представляет собой заболевание, которое можно лечить путем стимуляции функции эффекторных клеток. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевание представляет собой нарушение клеточной пролиферации, прежде всего рак.
Следующим объектом изобретения является способ стимуляции функции эффекторных клеток у индивидуума. В одном из вариантов осуществления изобретения способ заключается в том, что вводят индивидууму в эффективном количестве комбинацию, содержащую (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, для стимуляции функции эффекторных клеток. В одном из вариантов осуществления изобретения «индивидуум» представляет собой млекопитающее, прежде всего человека.
Следующим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая любую из комбинаций, содержащих (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, представленных в настоящем описании, например, для применения в любом из вышеуказанных терапевтических способов. В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит комбинацию, содержащую (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, и фармацевтически приемлемый носитель. В другом варианте осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит любую из комбинаций, представленных в настоящем описании, и по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, например, указанное ниже.
Согласно любому из указанных выше вариантов осуществления изобретения заболевание представляет собой нарушение, которое можно лечить путем стимуляции функции эффекторных клеток. Комбинации, предлагаемые в изобретении, можно применять для лечения болезненных состояний, на которые оказывает благоприятное воздействие стимуляция иммунной системы хозяина, прежде всего состояний, при которых требуется повышенный клеточный иммунный ответ. Они могут включать болезненные состояния, при которых иммунный ответ хозяина является недостаточным или имеет место его дефицит. Болезненные состояния, при которых можно применять комбинации, предлагаемые в изобретении, представляют собой, например, опухоль или инфекцию, при которых клеточный иммунный ответ может представлять собой имеющий решающее значение механизм для специфического иммунитета. Конкретные болезненные состояния, при которых можно применять комбинации, предлагаемые в настоящем изобретении, включают рак, в частности, почечно-клеточную карциному или меланому; иммунодефицит, в частности у ВИЧ-положительных пациентов, пациентов с иммуносупрессией, хроническую инфекцию и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения заболевание представляет собой нарушение клеточной пролиферации. В конкретном варианте осуществления изобретения заболевание представляет собой рак, в частности, рак, выбранный из группы, включающей рак легкого, колоректальный рак, рак почки, рак предстательной железы, рак молочной железы, рак головы и шеи, рак яичника, рак головного мозга, лимфому, лейкоз и рак кожи.
Комбинации, предлагаемые в изобретении, при лечении можно применять индивидуально или в сочетании с другими средствами. Например, комбинацию, предлагаемую в изобретении, можно применять совместно по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления изобретения дополнительное терапевтическое средство представляет собой противораковое средством, например, химиотерапевтическое средство, ингибитор пролиферации опухолевых клеток или активатор апоптоза опухолевых клеток.
Комбинированные терапии, указанные в настоящем описании, предусматривают совместное введение антитела и иммунокоъюгата (когда два или большее количество терапевтических средств включены в одну и ту же или различные композиции) и раздельное введение, в каждом случае введение антитела можно осуществлять до, одновременно и/или после введения дополнительного терапевтического средства и/или адъюванта. Комбинации, предлагаемые в изобретении, можно объединять также с лучевой терапией.
Комбинацию, предлагаемую в изобретении (и любое дополнительное терапевтическое средство) можно вводить любыми приемлемыми путями, включая парентеральный, внутрилегочный и интраназальный и при необходимости применять для местной обработки, введения в повреждение. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. Антитело и иммуноконъюгат можно вводить одинаковыми или различными путями. Дозирование можно осуществлять любым приемлемым путем, например, путем инъекций, таких как внутривенные или подкожные инъекции, в зависимости, в том числе, от того, является ли лечение кратковременным или хроническим. Можно применять различные схемы дозирования, включая (но, не ограничиваясь только ими) однократное введение или несколько введений в различные моменты времени, болюсное введение и пульсирующую инфузию.
Комбинации, предлагаемые в изобретении, можно включать в состав композиций, дозировать и вводить в соответствии с надлежащей клинической практикой. Рассматриваемые в этом контексте факторы включают конкретное нарушение, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние индивидуального пациента, причину нарушения, область введения агента, метод введения, схему введения и другие факторы, известные практикующим медикам. Комбинации можно, но это не является обязательным, включать в препаративную форму в сочетании с одним или несколькими другими агентами, которые в настоящее время применяют для предупреждения или лечения рассматриваемого нарушения. Эффективное количество указанных других агентов зависит от количества антитела и иммуноконъюгата, присутствующих в препаративной форме, типа нарушения или лечения и других указанных выше факторов. Их, как правило, применяют в таких же дозах и с использованием таких же путей введения, которые указаны в настоящем описании, или в количестве, составляющем от 1 до 99% от дозы, указанной в настоящем описании, или в любой дозе и с помощью любого пути, которые по данным эмпирической/клинической оценки являются пригодными.
Для предупреждения или лечения заболевания приемлемая доза антитела и иммуноконъюгата (при их применении в комбинациях, предлагаемых изобретении, необязательно в сочетании с одним или несколькими другими дополнительными терапевтическими средствами), должна зависеть от типа заболевания, подлежащего лечению, типа антитела и иммуноконъюгата, серьезности и течения болезни, применяют ли комбинацию для профилактических или терапевтических целей, предшествующей терапии, истории болезни пациента и ответа на антитело и/или иммуноконъюгат и предписания лечащего врача. Антитело и иммуноконъюгат можно вводить пациенту однократной или в виде серий обработок.
В зависимости от типа и серьезности заболевания возможная начальная доза антитела для введения пациенту, например, с использованием одного или нескольких индивидуальных введений или с помощью непрерывной инфузии, может составлять примерно от 1 мкг/кг до 15 мг/кг (например, 0,1-10 мг/кг). Типичная суточная доза может составлять от примерно 1 мкг/кг до 100 мг/кг или более в зависимости от отмеченных выше факторов. Для повторных введений в течение нескольких дней или более продолжительного периода в зависимости от состояния лечение, как правило, должно продолжаться до достижения требуемого подавления имеющихся симптомов заболевания. В качестве примера, доза антитела может составлять от примерно 0,05 до примерно 10 мг/кг. Так, пациенту можно вводить одну или несколько доз, составляющих примерно 0,5, 2,0, 4,0 или 10 мг/кг (или любую их комбинацию). Указанные дозы можно вводить прерывисто, например, каждую неделю или каждые три недели (например, таким образом, чтобы пациент получал от примерно двух до примерно двадцати или, например, примерно шесть доз антитела). Можно вводить начальную более высокую ударную дозу, после которой применять одну или несколько более низких доз. Примером схемы дозирования является введение начальной ударной дозы, составляющей примерно 4 мг/кг, с последующим еженедельным введением поддерживающей дозы антитела, составляющей примерно 2 мг/кг. Указанное относится и к дозе иммуноконъюгата, подлежащего применению в комбинациях, предлагаемых в изобретении. Однако можно использовать другие схемы введения доз. Успех такой терапии легко оценивать с помощью общепринятых методик и анализов.
Изделия
Другим объектом изобретения является изделие, которое содержит продукты, применяемые для лечения, предупреждения и/или диагностирования указанных выше нарушений. Изделие представляет собой контейнер и этикетку или листовку-вкладыш в упаковку, которая размещена на контейнере или прилагается к нему. Приемлемыми контейнерами являются, например банки, пузырьки, шприцы, пакеты для внутривенного (IV) раствора и т.д. Контейнеры можно изготавливать из различных материалов, таких как стекло или пластмасса. Контейнер содержит композицию, которая сама по себе или в сочетании с другой композицией является эффективной для лечения, предупреждения и/или диагностирования состояния, и может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или пузырек, снабженный пробкой, которую можно прокалывать с помощью иглы для подкожных инъекций). По меньшей мере одно действующее вещество в композиции представляет собой антитело, предлагаемое в изобретении, подлежащее применению в комбинациях, предлагаемых в изобретении. Другим действующим веществом является иммуноконъюгат, подлежащий применению в комбинациях, предлагаемых в изобретении, который может входить в ту же композицию и контейнер, что и антитело, или может находиться в другой композиции и в другом контейнере. На этикетке или листовке-вкладыше в упаковку указано, что композицию применяют для лечения выбранного состояния.
Одним из объектов изобретения является набор, предназначенный для лечения заболевания, содержащий в одном и том же или в отдельных контейнерах (а) иммуноконъюгат, который содержит первое антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент, и (б) второе антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной эффекторной функцией, и необязательно дополнительно содержит (в) листовку-вкладыш в упаковку, которая содержит напечатанные инструкции по применению комбинированной терапии в качестве метода лечения заболевания. Кроме того, набор может содержать (а) первый контейнер с композицией, находящейся в нем, где композиция содержит антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало повышенной; (б) второй контейнер с композицией, находящейся в нем, где композиция содержит иммуноконъюгат, который содержит антитело, сконструированное таким образом, чтобы оно обладало пониженной эффекторной функцией, и эффекторный фрагмент; и необязательно (в) третий контейнер с композицией, находящейся в нем, где композиция содержит дополнительное цитотоксическое или другое терапевтическое средство. В этом варианте осуществления изобретения набор, предлагаемый в изобретении, может дополнительно содержать листовку-вкладыш в упаковку, которая содержит информацию о том, что композиции можно использовать для лечения конкретного состояния. В альтернативном или дополнительном варианте изделие может включать также третий (или четвертый) контейнер с фармацевтически приемлемым буфером, таким как бактериостатическая вода для инъекций (БСВИ), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Кроме того, оно может включать другие продукты, необходимые с коммерческой точки зрения и с точки зрения потребителя, в частности, другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
Примеры
Ниже представлены примеры способов и композиций, предлагаемых в изобретении. Как должно быть очевидно, при воплощении изобретения на практике можно применять различные другие варианты осуществления изобретения с учетом представленного выше описания изобретения в целом.
Общие методы
Гликоинженерия Fc-области антитела позволяет обеспечивать повышенную аффинность связывания с человеческими FcγRIII-рецепторами, что в свою очередь транслируется в индукцию повышенной ADCC и противоопухолевой эффективности. Человеческие FcγRIII-рецепторы экспрессируются на макрофагах, нейтрофилах и естественных клетках-киллерах (NK), дендритных клетках и γδ Т-клетках. У мышей, которые представляет собой вид, наиболее широко применяемый для доклинического тестирования эффективности, мышиный FcγRIV, т.е. мышиный гомолог человеческого FcγRIIIa, присутствует на макрофагах и нейтрофилах, но отсутствует на NK-клетках. Таким образом, эти модели не в полной степени отражают любое ожидаемое повышение эффективности созданных с помощью гликоинженерии антител. При создании изобретения были созданы мыши, трансгенные по человеческому FcγRIIIa (CD16a), отличающиеся стабильной экспрессией человеческого CD16a на мышиных NK-клетках в крови, лимфоидной ткани и опухолях. Кроме того, уровень экспрессии человеческого CD16a на нестимулированных NK-клетках в крови указанных трансгенных мышей отражает уровень экспрессии, обнаруженный у человека. При создании изобретения было также установлено, что понижающая регуляции человеческого FcγRIIIa на ассоциированных с опухолью NK-клетках после терапии с использованием антитела, коррелирует с противоопухолевой активностью. И, наконец, при создании изобретения была выявлена существенно более высокая эффективность лечения с использованием созданных с помощью гликоинженерии антител на моделях опухолей при применении указанной новой линии мышей по сравнению с их негативными по человеческому CD16 однопометниками.
Пример 1
Модель, полученная с помощью ксенотрансплантата карциномы головы и шеи линии FaDu
Иммуноконъюгаты 28Н1 IgG-IL2, мишенью которых является FAP, и «ненаправленные» иммуноконъюгаты DP47GS IgG-IL2, содержащие четырехмутантный (qm) IL-2 (SEQ ID NO: 125, 126, 129 и SEQ ID NO: 133-135, соответственно) и анти-EGFR GlycoMab (SEQ ID NO: 102 и 103) тестировали в отношении клеточной линии карциномы головы и шеи линии FaDu, которую интралингвально инъецировали SCID-мышам. С помощью ИГХ (иммуногистохимии) свежезамороженной ткани установлено, что эта модель опухоли является FAP-позитивной. Клетки FaDu первоначально получали из АТСС (Американская коллекция типовых культур) и после размножения помещали во внутренний банк клеток фирмы Glycart. Линию опухолевых клеток культивировали общепринятым методом в среде DMEM, содержащей 10% FCS (фирма Gibco), при 37°С в насыщенной водяными парами атмосфере с 5% СО2. Полученный in vitro пассаж 9, жизнеспособность клеток в котором составляла 95,8%, применяли для осуществления интралингвальной инъекции. Двадцать мкл клеточной суспензии (2×105 FaDu-клеток в среде AimV (фирма Gibco)) инъецировали интралингвально. Самок мышей линии SCID (фирма Taconics, Дания), возраст которых в начале эксперимента составлял 8-9 недель, содержали в специальных условиях без патогенов с суточными циклами 12 ч света/12 ч темноты согласно принятым руководствам (GV-Solas; Felasa; TierschG). Протокол экспериментального исследования был рассмотрен и одобрен местными органами управления (Р 2008016). После доставки животных выдерживали в течение одной недели для акклиматизации к новому окружению и для обследования. В течение всего периода времени регулярно осуществляли мониторинг состояния здоровья. Мышам инъецировали интралингвально в день 0 опыта по 2×105 FaDu-клеток, их произвольно разделяли на группы и взвешивали. Через 1 неделю после инъекции опухолевых клеток мышам инъецировали i.v. иммуноконъюгат 28Н1 IgG-IL2 qm, иммуноконъюгат DP47GS IgG-IL2 qm, анти-EGFR GlycoMab, комбинацию иммуноконъюгата 28Н1 IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab или комбинацию иммуноконъюгата DP47GS IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab один раз в неделю в течение 4 недель. Всем мышам инъецировали i.v. по 200 мкл соответствующего раствора. Информация о дозах представлена в таблице 2. Мышам из обработанной наполнителем группы инъецировали ЗФР, а мышам из групп обработки инъецировали иммуноконъюгат 28Н1 IgG-IL2 qm, иммуноконъюгат DP47GS IgG-IL2 qm, анти-EGFR GlycoMab, комбинацию иммуноконъюгата 28Н1 IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab или комбинацию иммуноконъюгата DP47GS IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab. Для получения соответствующего количества иммуноконъюгата в 200 мкл маточные растворы разводили при необходимости ЗФР. На фиг. 1А продемонстрировано, что только комбинация иммуноконъюгата 28Н1 IgG-IL2, мишенью которого является FAP, и анти-EGFR GlycoMab опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости по сравнению с индивидуальным применением иммуноконъюгата 28Н1 IgG-IL2 qm или анти-EGFR GlycoMab. В противоположность этому, комбинация «ненаправленного» DP47GS IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab не превышала эффективность агентов при их индивидуальном применении (фиг. 1Б).
Пример 2
In vitro усиление киллерной активности NK-клетки с помощью содержащих IL-2 иммуноконъюгатов
Для определения воздействия иммуноконъюгатов на NK-клетки при создании изобретения оценивали уничтожение опухолевых клеток с помощью обработки иммуноконъюгатами, прежде всего иммуноконъюгатами, содержащими IL-2 в качестве эффекторного фрагмента. Для этой цели мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли с помощью стандартных процедур, используя Histopaque-1077 (фирма Sigma Diagnostics Inc., Сент-Луис, шт.Миссури, США). В целом, метод состоял в следующем: венозную кровь собирали с помощью гепаринизированных шприцев у здоровых доноров. Кровь разводили в соотношении 2:1 ЗФР, не содержащим кальций и магний, и наслаивали на Histopaque-1077. Градиент центрифугировали при 450×g в течение 30 мин при комнатной температуре (КТ) без перерыва. Собирали содержащую РВМС интерфазу, и отмывали в целом три раза ЗФР (350×g, затем 300×g в течение 10 мин при КТ).
Выделенные РВМС инкубировали в течение 45 ч с IL-2 (пролейкин) или с содержащими IL-2 иммуноконъюгатами, добавленными к клеточному супернатанту. Затем РВМС выделяли и применяли для оценки опосредуемой анти-EGFR GlycoMab ADCC в отношении А549-клеток при соотношении Е : Т 10:1 в течение 4 ч. Уничтожение клеток-мишеней оценивали путем количественного определения выделения лактатдегидрогеназы (LDH) в клеточные супернатанты (набор фирмы Roche для оценки цитотоксичности на основе LDH). На фиг. 2 представлены данные об уничтожении в целом опухолевых клеток А549 с помощью РВМС, которые предварительно обрабатывали 0,57 нМ (А) или 5,7 нМ (Б) иммуноконъюгатом 28Н1 IgG-IL2 qm, мишенью которого является FAP, или IL-2 (пролейкин), или оставляли без предварительной обработки, в присутствии взятого в различных концентрациях анти-EGFR GlycoMab. На графиках продемонстрировано, что предварительная обработка эффекторных клеток иммуноконъюгатом приводила при возрастании концентраций GlycoMab к значительному повышению уничтожения клеток-мишеней по сравнению с необработанными эффекторными клетками.
Пример 3
Модель, полученная с помощью ксенотрансплантата колоректальной карциномы линии LS174T
Иммуноконъюгат СН1А1А IgG-IL2 qm, мишенью которого является СЕА (SEQ ID NO: 136-138), анти-EGFR GlycoMab (SEQ ID NO: 102 и 103) и цетуксимаб тестировали в отношении клеточной линии человеческой колоректальной карциномы LS174T, которую инъецировали внутрь селезенки мышам линии SCID, трансгенным по человеческому FcγRIII. С помощью ИГХ свежезамороженной ткани установлено, что эта модель опухоли является СЕА-позитивной. Клетки LS174T (клетки человеческой карциномы ободочной кишки) первоначально получали из ЕСАСС (Европейская коллекция клеточных культур) и после размножения помещали во внутренний банк клеток фирмы Glycart. Клеки LS174T культивировали в среде Игла MEM, содержащей 10% FCS (фирма РАА Laboratories, Австрия), 1% глютамакса и 1% содержащей заменяемые аминокислоты среды MEM (фирма Sigma). Клетки культивировали при 37°С в насыщенной водяными парами атмосфере с 5% СО2. Полученный in vitro пассаж 9 или 23, жизнеспособность клеток в котором составляла 99%, применяли для осуществления внутриселезеночной инъекции. Делали небольшой разрез в левой брюшной области анестезированных SCID-мышей, трангенных по FcγRIII. По 30 мкл клеточной суспензии (2×106 LSI 74Т-клеток в среде AimV) инъецировали через брюшную стенку непосредственно под капсулу селезенки. Кожные ранения закрывали с помощью скобок или рассасывающихся швов. Самок трансгенных по FcγRIII мышей линии SCID (фирма Taconics, Дания), возраст которых в начале эксперимента составлял 8-9 недель, содержали в специальных условиях без патогенов с суточными циклами 12 ч света/12 ч темноты согласно принятым руководствам (GV-Solas; Felasa; TierschG). Протокол экспериментального исследования был рассмотрен и одобрен местными органами управления (Р 2008016). После доставки животных выдерживали в течение одной недели для акклиматизации к новому окружению и для обследования. В течение всего периода времени регулярно осуществляли мониторинг состояния здоровья. Мышам инъецировали внутриселезеночно в день 0 опыта 2×106 LS174Т-клеток, их произвольно разделяли на группы и взвешивали. Через 1 неделю после инъекции опухолевых клеток мышам инъецировали i.v. иммуноконъюгат СН1А1А IgG-IL2 qm, анти-EGFR GlycoMab, цетуксимаб, комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab или комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и цетуксимаба один раз в неделю в течение 3 недель. Всем мышам инъецировали i.v. по 200 мкл соответствующего раствора. Информация о дозах представлена в таблице 3. Мышам из обработанной наполнителем группы инъецировали ЗФР, а мышам из групп обработки инъецировали иммуноконъюгат СН1А1А IgG-IL2 qm или анти-EGFR GlycoMab, цетуксимаб, комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab или комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и цетуксимаба. Для получения соответствующего количества иммуноконъюгата в 200 мкл маточные растворы разводили при необходимости ЗФР. На фиг. 3 и в таблицах 3А и 3Б продемонстрировано, что комбинация иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости и общей выживаемости по сравнению с индивидуальным применением иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm, индивидуальным применением анти-EGFR GlycoMab, индивидуальным применением цетуксимаба или применением комбинации иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и цетуксимаба.
Пример 4
Модель, полученная с помощью ксенотрансплантата рака легкого линии А549
Иммуноконъюгат СН1А1А IgG-IL2 qm, мишенью которого является СЕА (SEQ ID NO: 136-138), анти-EGFR GlycoMab (SEQ ID NO: 102 и 103) и цетуксимаб тестировали в отношении клеточной линии человеческого немелкоклеточного рака легких (NSCLC) А549, которую инъецировали i.v. мышам линии SCID, трансгенным по человеческому FcγRIII.
Клетки немелкоклеточного рака легких линии А549 сначала получали из АТСС (CCL-185) и после размножения помещали во внутренний банк клеток фирмы Roche-Glycart. Линию опухолевых клеток культивировали общепринятым методом в среде DMEM, содержащей 10% FCS (фирма Gibco), при 37°С в насыщенной водяными парами атмосфере с 5% СО2. Полученный in vitro пассаж 8, жизнеспособность клеток в котором составляла 97-98%, применяли для трансплантации. 5×106 клеток на животное инъецировали i.v. в хвостовую вену в 200 мкл среды для культуры клеток Aim V (фирма Gibco).
Самок мышей SCID-FcγRIII (фирма Roche-Glycart; Швейцария), возраст которых в начале эксперимента составлял 8-9 недель (выведены на фирме Charles Rivers, Лион, Франция) содержали в специальных условиях без патогенов с суточными циклами 12 ч света/12 ч темноты согласно принятым руководствам (GV-Solas; Felasa; TierschG). Протокол экспериментального исследования был рассмотрен и одобрен местными органами управления (Р 2008016). После доставки животных выдерживали в течение одной недели для акклиматизации к новому окружению и для обследования. В течение всего периода времени регулярно осуществляли мониторинг состояния здоровья.
Мышам инъецировали i.v. в день 0 опыта 5×106 А549-клеток, их произвольно разделяли на группы и взвешивали. Через 1 неделю (фиг. 4А) или две недели (фиг. 4Б) после инъекции опухолевых клеток мышам инъецировали i.v. иммуноконъюгат СН1А1А IgG-IL2 qm, анти-EGFR GlycoMab, цетуксимаб, комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab или комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и цетуксимаба один раз в неделю в течение 3 недель. Всем мышам инъецировали i.v. по 200 мкл соответствующего раствора. Информация о дозах представлена в таблице 4. Мышам из обработанной наполнителем группы инъецировали ЗФР, а мышам из групп обработки инъецировали иммуноконъюгат СН1А1А IgG-IL2 qm или анти-EGFR GlycoMab, цетуксимаб, комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab или комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и цетуксимаба. Для получения соответствующего количества иммуноконъюгата в 200 мкл маточные растворы разводили при необходимости ЗФР.
На фиг. 4 и в таблицах 4А и 4Б продемонстрировано, что комбинация иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-EGFR GlycoMab опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости и общей выживаемости по сравнению с индивидуальным применением соответствующего иммуноконъюгата, анти-EGFR GlycoMab или цетуксимаба, а также применением комбинации иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и цетуксимаба.
Пример 5
Модель, полученная с помощью ксенотрансплантата колоректальной карциномы линии LS174T
Иммуноконъюгат СН1А1А IgG-IL2 qm, мишенью которого является СЕА (SEQ ID NO: 136-138), анти-Her3 GlycoMab (SEQ ID NO: 142 и 146) тестировали в отношении клеточной линии человеческой колоректальной карциномы LS174T, которую инъецировали внутрь селезенки мышам линии SCID, трансгенным по человеческому FcγRIII.
Клетки LS174T (клетки человеческой карциномы ободочной кишки) первоначально получали из ЕСАСС (Европейская коллекция клеточных культур) и после размножения помещали во внутренний банк клеток фирмы Roche-Glycart. Клетки LS174T культивировали в среде Игла MEM, содержащей 10% FCS (фирма РАА Laboratories, Австрия), 1% глютамакса и 1% содержащей заменяемые аминокислоты среды MEM (фирма Sigma). Клетки культивировали при 37°С в насыщенной водяными парами атмосфере с 5% СО2. Полученный in vitro пассаж 21, жизнеспособность клеток в котором составляла 97,9%, применяли для осуществления внутриселезеночной инъекции. Делали небольшой разрез в левой брюшной области анестезированных SCID-мышей, трангенных по FcγRIII. По 30 мкл клеточной суспензии (2×106 LS174T-клеток в среде AimV) инъецировали через брюшную стенку непосредственно под капсулу селезенки. Кожные ранения закрывали с помощью рассасывающихся швов.
Самок трансгенных по FcγRIII мышей линии SCID (фирма Roche-Glycart, Швейцария), возраст которых в начале эксперимента составлял 8-9 недель, содержали в специальных условиях без патогенов с суточными циклами 12 ч света/12 ч темноты согласно принятым руководствам (GV-Solas; Felasa; TierschG). Протокол экспериментального исследования был рассмотрен и одобрен местными органами управления (Р 2008016). После доставки животных выдерживали в течение одной недели для акклиматизации к новому окружению и для обследования. В течение всего периода времени регулярно осуществляли мониторинг состояния здоровья.
Мышам инъецировали внутриселезеночно в день 0 опыта 2×106 LS174Т-клеток, их произвольно разделяли на группы и взвешивали. Через 1 неделю после инъекции опухолевых клеток мышам инъецировали i.v. иммуноконъюгат СН1А1А IgG-IL2 qm, анти-Her3 GlycoMab, комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти- Her3 GlycoMab один раз в неделю в течение 3 недель.
Всем мышам инъецировали i.v. по 200 мкл соответствующего раствора. Информация о дозах представлена в таблице 5. Мышам из обработанной наполнителем группы инъецировали ЗФР, а мышам из групп обработки инъецировали иммуноконъюгат СН1А1А IgG-IL2 qm или анти-Her3 GlycoMab или комбинацию иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-Her3 GlycoMab. Для получения соответствующего количества иммуноконъюгата в 200 мкл маточные растворы разводили при необходимости ЗФР.
На фиг. 5 и в таблице 5А продемонстрировано, что комбинация иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm и анти-Her3 GlycoMab опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости по сравнению с индивидуальным применением иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm или анти-Her3
Пример 6
Модель, полученная с помощью ксенотрансплантата почечной карциномы линии ACHN
Иммуноконъюгаты 28Н1 IgG-IL2, мишенью которых является FAP, содержащие четырехмутантный (qm) IL-2 (SEQ ID NO: 125, 126, 129) и анти-EGFR GlycoMab (SEQ ID NO: 102 и 103) тестировали в отношении клеточной линии почечной карциномы ACHN, которую инъецировали внутрь почки мышам линии SCID, трансгенных по человеческому FcγRIII.
ACHN-клетки (клетки человеческой почечной аденокарциномы) первоначально получали из АТСС (Американская коллекция типовых культур) и после размножения помещали во внутренний банк клеток фирмы Roche-Glycart. ACHN-клетки культивировали в DMEM, содержащей 10% FCS. Клетки культивировали при 37°С в насыщенной водяными парами атмосфере с 5% СО2. Полученный in vitro пассаж 22, жизнеспособность клеток в котором составляла 96,4%, применяли для осуществления инъекции внутрь почки. Делали небольшой разрез (2 см) в правой боковой области и перитонеальной стенке анестезированных SCID-мышей, трангенных по FcγRIII. По 50 мкл клеточной суспензии (1×106 ACHN-клеток в среде AimV) инъецировали в область, расположенную ниже на 2 мм относительно капсулы почки. Ранения кожи и перитонеальной стенки закрывали с помощью рассасывающихся швов.
Самок трансгенных по FcγRIII мышей линии SCID (фирма Roche-Glycart, Швейцария), возраст которых в начале эксперимента составлял 8-9 недель, содержали в специальных условиях без патогенов с суточными циклами 12 ч света/12 ч темноты согласно принятым руководствам (GV-Solas; Felasa; TierschG). Протокол экспериментального исследования был рассмотрен и одобрен местными органами управления (Р 2008016). После доставки животных выдерживали в течение одной недели для акклиматизации к новому окружению и для обследования. В течение всего периода времени регулярно осуществляли мониторинг состояния здоровья.
Мышам инъецировали внутрь почки в день 0 опыта 1×106 ACHN-клеток, их произвольно разделяли на группы и взвешивали. Через 1 неделю после инъекции опухолевых клеток мышам инъецировали i.v. наполнитель, анти-EGFR GlycoMab, комбинацию иммуноконъюгата 28Н1 IgG-IL2 и анти-EGFR GlycoMab или комбинацию Proleukin® и анти-EGFR GlycoMab. Анти-EGFR GlycoMab и иммунокоъюгат 28Н1 IgG-IL2 вводили один раз в неделю в течение 3 недель. Proleukin® инъецировали ежедневно с понедельника по пятницу в течение 3 недель.
Всем мышам инъецировали i.v. по 200 мкл соответствующего раствора. Информация о дозах представлена в таблице 6. Мышам из обработанной наполнителем группы инъецировали ЗФР, а мышам из групп обработки инъецировали анти-EGFR GlycoMab, комбинацию иммуноконъюгата 28Н1 IgG-IL2 и анти-EGFR GlycoMab или комбинацию Proleukin® и анти-EGFR GlycoMab.
Для получения соответствующего количества иммуноконъюгата в 200 мкл маточные растворы разводили при необходимости ЗФР.
На фиг. 6 и в таблице 6А продемонстрировано, что комбинация иммуноконъюгата 28Н1 IgG-IL2 и анти-EGFR GlycoMab опосредовала повышенную эффективность в понятиях удлиненной медианы выживаемости и общей выживаемости по сравнению с индивидуальным применением анти-EGFR GlycoMab и комбинации Proleukin® и анти-EGFR GlycoMab.
Пример 7
In vitro усиление киллерной активности NK-клетки и экспрессии CD25 и CD69 на NK-клетке с помощью содержащих IL-2 иммуноконъюгатов
Также как в примере 2, при создании изобретения оценивали уничтожение опухолевых клеток (LS174T) с помощью NK-клеток при обработке иммуноконъюгатом, прежде всего иммуноконъюгатом, содержащими IL-2 в качестве эффекторного фрагмента, и GlycoMab, в данном случае анти-Her3 GlycoMab. Уничтожение клеток-мишеней определяли, оценивая высвобождение LDH в клеточный супернатант.
РВМС выделяли из свежей крови. В целом, метод состоял в следующем: кровь разводили в соотношении 3:1 ЗФР. Примерно 30 мл смеси кровь/ЗФР наслаивали на 15 мл Histopaque (фирма Sigma) и центрифугировали при 450×g в течение 30 мин без перерыва. Лимфоциты собирали с помощью 5-миллилитровой пипетки в 50-миллилитровые пробирки, содержащие ЗФР. Пробирки заполняли до 50 мл ЗФР и центрифугировали при 350×g в течение 10 мин. Супернатант отбрасывали, дебрис ресуспендировали в 50 мл ЗФР и центрифугировали при 300×g в течение 10 мин. Стадию промывки однократно повторяли. Клетки подсчитывали и ресуспендировали в предварительно нагретой среде RPMI, содержащей 1% глутамина и 10% FCS, из расчета 1×106 клеток на мл. Клетки инкубировали в течение ночи при 37°С. На следующий день клетки собирали и подсчитывали.
Клетки LS174T (ЕСАСС №87060401) представляют собой клеточную линию аденокарциномы ободочной кишки человека кавказской расы. Клетки культивировали в среде ЕМЕМ, содержащей 1% глутамина, 1% заменимых аминокислот и 10% FCS, и разделяли каждые 2-3 дня до достижения конфлюэнтности. LS174T-клетки отделяли с помощью трипсина. Клетки подсчитывали и определяли их жизнеспособности. Жизнеспособность клеток до анализа составляла 99,4%. Клетки ресуспендировали в соответствующей среде из расчета 0,3×106 на мл. 100 мкл клеточной суспензии высевали в 96-луночный планшет для культуры клеток и инкубировали в течение ночи при 37°С. На следующий день супернатант удаляли из клеток. Затем в соответствующие лунки добавляли по 50 мкл разведенного анти-Her3 GlycoMab (SEQ ID NO: 142 и 146) в концентрации 1000 нг/мл, 100 нг/мл и 10 нг/мл или среду. Затем добавляли из расчета 50 мкл на лунку иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL2 qm, мишенью которого является СЕА (SEQ ID NO: 136-138), в указанных концентрациях (см. фиг. 7) или среду. После инкубации в течение 10 мин при комнатной температуре добавляли по 100 мкл РВМС из расчета 3×106 клеток на лунку или среду до достижения конечного объема 200 мкл на лунку. Клетки инкубировали в течение 24 ч в инкубаторе. После инкубации планшет центрифугировали в течение 4 мин при 400×g и супернатант собирали. Использовали по 50 мкл на лунку супернатанта для оценки высвобождения LDH (набор фирмы Roche для оценки цитотоксичности на основе LDH). Оставшийся супернатант хранили при -20°С до дальнейшего применения. Клетки ресуспендировали в FACS-буфере и хранили при 4°С до начала FACS-окрашивания (см. ниже).
На фиг. 7 представлены обобщенные данные об уничтожении LS174T-клеток с использованием РВМС после обработки только анти-Her3 GlycoMab (левая панель), только иммуноконъюгатом СН1А1А IgG-IL-2 qm (правая панель) или комбинацией иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL-2 qm с анти-Her3 GlycoMab (правая панель).
РВМС собирали через 24 ч и применяли для FACS-анализа экспрессии CD25 и CD69 на NK-клетках. Клетки центрифугировали в течение 4 мин при 400×g и однократно промывали ЗФР, содержащим 0,1% БСА (FACS-буфер). Затем к клеткам добавляли по 20 мкл на лунку смеси антител. Клетки инкубировали в течение 30 мин в холодильнике. Затем клетки промывали дважды FACS-буфером и ресуспендировали, добавляя по 200 мкл на лунку FACS-буфера, содержащего 2% PFA. Анализ осуществляли, используя устройство фирмы BD FACS Fortessa и следующую смесь антител: CD3 РЕ/Cy7 (фирма BioLegend, №300420; разведенное в соотношении 1:40), CD56 АРС (фирма BioLegend, №318310; разведенное в соотношении 1:20), CD69 Brilliant Violet 421 (фирма BioLegend, №310929; разведенное в соотношении 1:40), CD25 РЕ (фирма BD Bioscience, №557138; разведенное в соотношении 1:20).
На фиг. 8 представлены данные об экспрессии CD25 (А) или CD69 (Б) на NK-клетках после обработки только анти-Her3 GlycoMab (левая панель), только иммуноконъюгатом СН1А1А IgG-IL-2 qm (правая панель) или комбинацией иммуноконъюгата СН1А1А IgG-IL-2 qm с анти-Her3 GlycoMab (правая панель).
Хотя выше изобретение описано достаточно подробно с помощью иллюстраций и примеров, приведенных для целей лучшего его понимания, описание и примеры не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения. Все процитированные в настоящем описании патентные и научные публикации полностью включены в него в качестве ссылки.
Claims (58)
1. Комбинация (а) иммуноконъюгата, который содержит
(i) первое антитело, направленное на фибробласт-активирующий белок (FAP) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 12 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 11, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 17 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 47 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 46, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 62 или вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 67 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 66 или направленное на карциноэмбриональный антиген (СЕА) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 114 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 115, где первое антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса и включает аминокислотные замены L234A, L235A и P329G (EU-нумерация, представленная у Кэбота) в тяжелых цепях иммуноглобулина, и
(ii) молекулу мутантного человеческого IL-2, содержащую аминокислотные замены F42A, Y45A и L72G,
и (б) второго антитела, выбранного из группы
(i) антитела IgG-класса, направленного на рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 102 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 103, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом,
(ii) антитела IgG-класса к HER3, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 142 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 146, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом, и
(iii) цетуксимаба,
для применения при лечении рака у нуждающегося в этом индивидуума.
2. Комбинация по п. 1, где молекула мутантного человеческого IL-2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
3. Комбинация по п. 1 или 2, в которой первое антитело представляет собой антитело IgG1-подкласса.
4. Комбинация по любому из пп. 1-3, где первое антитело содержит Fc область человеческого IgG1.
5. Комбинация по любому из пп. 1-4, в которой молекула мутантного человеческого IL-2 связана амино- или карбоксиконцевой пептидной связью с первым антителом.
6. Комбинация по любому из пп. 1-5, в которой иммуноконъюгат практически состоит из молекулы мутантного человеческого IL-2 и первого антитела, где молекула мутантного человеческого IL-2 слита на его аминоконцевой аминокислоте с карбоксиконцом одной из тяжелых цепей первого антитела, необязательно через пептидный линкер.
7. Комбинация по любому из пп. 1-6, в которой второе антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса, более конкретно антитело IgG1-подкласса.
8. Комбинация по любому из пп. 1-7, где индивидуум представляет собой млекопитающее, в частности человека.
9. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая
(а) иммуноконъюгат, который содержит
(i) первое антитело, направленное на фибробласт-активирующий белок (FAP) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 12 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 11, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 17 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 47 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 46, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 62 или вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 67 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 66 или направленное на карциноэмбриональный антиген (СЕА) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 114 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 115, где первое антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса и включает аминокислотные замены L234A, L235A и P329G (EU-нумерация, представленная у Кэбота) в тяжелых цепях иммуноглобулина, и
(ii) молекулу мутантного человеческого IL-2, содержащую аминокислотные замены F42A, Y45A и L72G, и
(б) второе антитело, выбранное из группы
(i) антитела IgG-класса, направленного на рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 102 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 103, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом,
(ii) антитела IgG-класса к HER3, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 142 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 146, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом, и
(iii) цетуксимаба,
в фармацевтически приемлемом носителе.
10. Применение (а) иммуноконъюгата, который содержит
(i) первое антитело, направленное на фибробласт-активирующий белок (FAP) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 12 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 11, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 17 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 47 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 46, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 62 или вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 67 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 66 или направленное на карциноэмбриональный антиген (СЕА) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 114 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 115, где первое антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса и включает аминокислотные замены L234A, L235A и P329G (EU-нумерация, представленная у Кэбота) в тяжелых цепях иммуноглобулина, и
(ii) молекулу мутантного человеческого IL-2, содержащую аминокислотные замены F42A, Y45A и L72G, и
(б) второе антитело, выбранное из группы
(i) антитела IgG-класса, направленного на рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 102 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 103, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом,
(ii) антитела IgG-класса к HER3, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 142 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 146, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом, и
(iii) цетуксимаба,
для приготовления лекарственного средства для лечения рака у индивидуума.
11. Способ лечения рака у индивидуума, включающий введение индивидууму комбинации
(а) иммуноконъюгата, который содержит
(i) первое антитело, направленное на фибробласт-активирующий белок (FAP) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 12 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 11, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 17 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 47 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 46, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 62 или вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 67 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 66 или направленное на карциноэмбриональный антиген (СЕА) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 114 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 115, где первое антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса и включает аминокислотные замены L234A, L235A и P329G (EU-нумерация, представленная у Кэбота) в тяжелых цепях иммуноглобулина, и
(ii) молекулу мутантного человеческого IL-2, содержащую аминокислотные замены F42A, Y45A и L72G, и
(б) второе антитело, выбранное из группы
(i) антитела IgG-класса, направленного на рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 102 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 103, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом,
(ii) антитела IgG-класса к HER3, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 142 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 146, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом, и
(iii) цетуксимаба.
12. Способ стимуляции функции эффекторных клеток у индивидуума, включающий введение индивидууму комбинации
(а) иммуноконъюгата, который содержит
(i) первое антитело, направленное на фибробласт-активирующий белок (FAP) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 12 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 11, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 17 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 47 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 46, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 62 или вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 67 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 66 или направленное на карциноэмбриональный антиген (СЕА) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 114 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 115, где первое антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса и включает аминокислотные замены L234A, L235A и P329G (EU-нумерация, представленная у Кэбота) в тяжелых цепях иммуноглобулина, и
(ii) молекулу мутантного человеческого IL-2, содержащую аминокислотные замены F42A, Y45A и L72G, и
(б) второе антитело, выбранное из группы
(i) антитела IgG-класса, направленного на рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 102 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 103, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом,
(ii) антитела IgG-класса к HER3, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 142 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 146, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом, и
(iii) цетуксимаба,
в количестве, эффективном для стимуляции функции эффекторных клеток.
13. Набор, предназначенный для лечения рака, содержащий в одном и том же или в отдельных контейнерах
(а) иммуноконъюгат, который содержит
(i) первое антитело, направленное на фибробласт-активирующий белок (FAP) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 12 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 11, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 17 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 47 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 46, вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 62 или вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 67 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 66 или направленное на карциноэмбриональный антиген (СЕА) и включающее вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 114 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 115, где первое антитело представляет собой полноразмерное антитело IgG-класса и включает аминокислотные замены L234A, L235A и P329G (EU-нумерация, представленная у Кэбота) в тяжелых цепях иммуноглобулина, и
(ii) молекулу мутантного человеческого IL-2, содержащую аминокислотные замены F42A, Y45A и L72G, и
(б) второе антитело, выбранное из группы
(i) антитела IgG-класса, направленного на рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 102 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 103, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом,
(ii) антитела IgG-класса к HER3, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 142 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO: 146, где антитело сконструировано таким образом, чтобы оно имело повышенное соотношение нефуколизированных олигосахаридов в Fc-области по сравнению с несконструированным антителом, и
(iii) цетуксимаба, и
(с) необязательно пакет вкладку, содержащий напечатанную инструкцию, относящуюся к применению комбинированного лечения в качестве способа лечения рака.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP12179473 | 2012-08-07 | ||
EP12179473.9 | 2012-08-07 | ||
PCT/EP2013/066351 WO2014023679A1 (en) | 2012-08-07 | 2013-08-05 | Composition comprising two antibodies engineered to have reduced and increased effector function |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015107889A RU2015107889A (ru) | 2016-09-27 |
RU2650788C2 true RU2650788C2 (ru) | 2018-04-17 |
Family
ID=48916069
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015107889A RU2650788C2 (ru) | 2012-08-07 | 2013-08-05 | Композиция, содержащая два антитела, сконструированных так, чтобы они обладали пониженной и повышенной эффекторной функцией |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US9526797B2 (ru) |
EP (2) | EP2882777B1 (ru) |
JP (1) | JP6290209B2 (ru) |
KR (2) | KR102163588B1 (ru) |
CN (1) | CN104662045B (ru) |
AR (1) | AR092044A1 (ru) |
AU (2) | AU2013301582B2 (ru) |
BR (1) | BR112014030414A2 (ru) |
CA (1) | CA2872195A1 (ru) |
ES (2) | ES2848732T3 (ru) |
HK (1) | HK1210789A1 (ru) |
IL (1) | IL236892B (ru) |
MX (2) | MX365382B (ru) |
MY (1) | MY175687A (ru) |
NZ (1) | NZ702241A (ru) |
PL (2) | PL3434695T3 (ru) |
RU (1) | RU2650788C2 (ru) |
SG (2) | SG11201407580YA (ru) |
TR (1) | TR201816437T4 (ru) |
WO (1) | WO2014023679A1 (ru) |
Families Citing this family (51)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
UA113712C2 (xx) | 2010-08-13 | 2017-02-27 | Антитіло до fap і способи його застосування | |
EP3075745B1 (en) | 2011-02-10 | 2018-09-05 | Roche Glycart AG | Mutant interleukin-2 polypeptides |
EA029300B1 (ru) * | 2011-03-02 | 2018-03-30 | Роше Гликарт Аг | Антитело к связанному с мембраной человеческому карциноэмбриональному антигену, его получение и применение |
EA201892619A1 (ru) | 2011-04-29 | 2019-04-30 | Роше Гликарт Аг | Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2 |
CN107586340B (zh) | 2011-08-23 | 2022-01-21 | 罗切格利卡特公司 | 对t细胞活化性抗原和肿瘤抗原特异性的双特异性抗体及使用方法 |
WO2014023679A1 (en) * | 2012-08-07 | 2014-02-13 | Roche Glycart Ag | Composition comprising two antibodies engineered to have reduced and increased effector function |
KR20150064068A (ko) | 2012-10-08 | 2015-06-10 | 로슈 글리카트 아게 | 2개의 Fab 단편을 포함하는 FC-부재 항체 및 이용 방법 |
WO2014122144A1 (en) | 2013-02-05 | 2014-08-14 | Engmab Ag | BISPECIFIC ANTIBODIES AGAINST CD3ε AND BCMA |
CN105143270B (zh) | 2013-02-26 | 2019-11-12 | 罗切格利卡特公司 | 双特异性t细胞活化抗原结合分子 |
MY192312A (en) | 2013-02-26 | 2022-08-17 | Roche Glycart Ag | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
DK3608337T3 (da) | 2014-08-04 | 2024-06-17 | Hoffmann La Roche | Bispecifikke T-celleaktiverende antigenbindende molekyler |
DK3186283T3 (da) * | 2014-08-29 | 2020-03-02 | Hoffmann La Roche | Kombinationsbehandling med tumormålrettede IL-2- immuncytokinervarianter og antistoffer mod humant PD-L1 |
PL3221355T3 (pl) | 2014-11-20 | 2021-03-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Terapia skojarzona składająca się z dwuswoistych aktywujących limfocyty T cząsteczek wiążących antygen CD3 i receptor folianowy 1 (FolR1) oraz antagonistów wiązania osi PD-1 |
AR106188A1 (es) | 2015-10-01 | 2017-12-20 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización |
CR20180162A (es) | 2015-10-02 | 2018-05-25 | Hoffmann La Roche | Moléculas biespecíficas de unión a antígeno activadoras de células t |
MY192202A (en) | 2015-10-02 | 2022-08-06 | Hoffmann La Roche | Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3 |
US10144768B2 (en) | 2015-12-04 | 2018-12-04 | Novartis Ag | Antibody cytokine engrafted compositions and methods of use for immunoregulation |
CA2997406C (en) | 2015-12-09 | 2024-05-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies or cytokine release |
AU2017205089B2 (en) | 2016-01-08 | 2023-10-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods of treating CEA-positive cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-CEA/anti-CD3 bispecific antibodies |
CN108699155B (zh) | 2016-03-01 | 2023-03-21 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 具有改变的细胞死亡诱导的奥滨尤妥珠单抗变体 |
DK3433280T3 (da) | 2016-03-22 | 2023-06-19 | Hoffmann La Roche | Protease-aktiverede T-celle-bispecifikke molekyler |
US9567399B1 (en) | 2016-06-20 | 2017-02-14 | Kymab Limited | Antibodies and immunocytokines |
US10696722B2 (en) | 2016-08-10 | 2020-06-30 | Ajou University Industry-Academic Cooperation Foundation | Heterodimeric Fc-fused cytokine and pharmaceutical composition comprising the same |
JP7022123B2 (ja) | 2016-09-30 | 2022-02-17 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | Cd3に対する二重特異性抗体 |
EP3534947A1 (en) | 2016-11-03 | 2019-09-11 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods |
CA3056630A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Pandion Therapeutics, Inc. | Targeted immunotolerance |
PT3616720T (pt) | 2017-03-29 | 2021-03-11 | Shionogi & Co | Composição medicinal para tratamento de cancro |
BR112019017329A2 (pt) | 2017-04-03 | 2020-04-14 | Hoffmann La Roche | imunoconjugados, um ou mais polinucleotídeos e vetores, métodos para a produção de um imunoconjugado, tratamento de uma doença e para a estimulação do sistema imunológico, composição, uso do imunoconjugado, invenção e usos da composição |
WO2018184965A1 (en) * | 2017-04-03 | 2018-10-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Immunoconjugates of il-2 with an anti-pd-1 and tim-3 bispecific antibody |
CA3053358A1 (en) * | 2017-04-04 | 2018-10-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Novel bispecific antigen binding molecules capable of specific binding to cd40 and to fap |
US11285207B2 (en) | 2017-04-05 | 2022-03-29 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific antibodies specifically binding to PD1 and LAG3 |
CN111010866A (zh) | 2017-05-24 | 2020-04-14 | 潘迪恩治疗公司 | 靶向免疫耐受性 |
EP3630813A1 (en) | 2017-05-24 | 2020-04-08 | Novartis AG | Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer |
JOP20190271A1 (ar) | 2017-05-24 | 2019-11-21 | Novartis Ag | بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة |
CN118126157A (zh) | 2017-08-03 | 2024-06-04 | 美国安进公司 | 白介素-21突变蛋白和治疗方法 |
US10946068B2 (en) | 2017-12-06 | 2021-03-16 | Pandion Operations, Inc. | IL-2 muteins and uses thereof |
US10174091B1 (en) | 2017-12-06 | 2019-01-08 | Pandion Therapeutics, Inc. | IL-2 muteins |
TW201930344A (zh) | 2018-01-12 | 2019-08-01 | 美商安進公司 | 抗pd-1抗體及治療方法 |
US11866498B2 (en) | 2018-02-08 | 2024-01-09 | Genentech, Inc. | Bispecific antigen-binding molecules and methods of use |
US11845797B2 (en) * | 2018-07-03 | 2023-12-19 | Marengo Therapeutics, Inc. | Anti-TCR antibody molecules and uses thereof |
WO2020086758A1 (en) | 2018-10-23 | 2020-04-30 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | Heterodimeric fc-fused proteins |
EP3898682A1 (en) | 2018-12-21 | 2021-10-27 | F. Hoffmann-La Roche AG | Tumor-targeted agonistic cd28 antigen binding molecules |
US11529402B2 (en) | 2019-01-14 | 2022-12-20 | Ignite Immunotherapy, Inc. | Recombinant vaccinia virus and methods of use thereof |
AU2020279240A1 (en) | 2019-05-20 | 2021-12-23 | Pandion Operations, Inc. | MAdCAM targeted immunotolerance |
CA3164731A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Novel il2 agonists and methods of use thereof |
US11981715B2 (en) | 2020-02-21 | 2024-05-14 | Pandion Operations, Inc. | Tissue targeted immunotolerance with a CD39 effector |
AU2021273009A1 (en) | 2020-05-13 | 2022-12-15 | Bonum Therapeutics, Inc. | Compositions of protein complexes and methods of use thereof |
AU2021291011A1 (en) | 2020-06-19 | 2023-01-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies binding to CD3 and CD19 |
CN116323672A (zh) * | 2020-08-11 | 2023-06-23 | 治纳辅医药科技有限公司 | 包含il-12和抗fap抗体的融合蛋白及其应用 |
JP2023548045A (ja) | 2020-10-23 | 2023-11-15 | アッシャー バイオセラピューティクス, インコーポレイテッド | 免疫細胞機能をモジュレートするためのcd8抗原結合分子を有する融合物 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005100402A1 (en) * | 2004-04-13 | 2005-10-27 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Anti-p-selectin antibodies |
RU2337107C2 (ru) * | 2003-05-02 | 2008-10-27 | Ксенкор, Инк. | ОПТИМИЗИРОВАННЫЕ Fc-ВАРИАНТЫ, ИМЕЮЩИЕ ИЗМЕНЕННОЕ СВЯЗЫВАНИЕ С FcγR, И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ |
WO2011001276A1 (en) * | 2009-06-30 | 2011-01-06 | Philogen S.P.A. | Immunocytokines in combination with anti-erbb antibodies for the treatment of cancer |
EA015009B1 (ru) * | 2003-11-05 | 2011-04-29 | Гликарт Биотехнологи Аг | АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ |
Family Cites Families (76)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US6548640B1 (en) | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
JP2919890B2 (ja) | 1988-11-11 | 1999-07-19 | メディカル リサーチ カウンスル | 単一ドメインリガンド、そのリガンドからなる受容体、その製造方法、ならびにそのリガンドおよび受容体の使用 |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
CA2103059C (en) | 1991-06-14 | 2005-03-22 | Paul J. Carter | Method for making humanized antibodies |
GB9114948D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-08-28 | Pfizer Ltd | Process for preparing sertraline intermediates |
US5565332A (en) | 1991-09-23 | 1996-10-15 | Medical Research Council | Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach |
US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
CA2129663C (en) | 1992-02-06 | 2005-07-05 | James S. Huston | Biosynthetic binding protein for cancer marker |
US5229109A (en) | 1992-04-14 | 1993-07-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Low toxicity interleukin-2 analogues for use in immunotherapy |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
US6171586B1 (en) | 1997-06-13 | 2001-01-09 | Genentech, Inc. | Antibody formulation |
US6040498A (en) | 1998-08-11 | 2000-03-21 | North Caroline State University | Genetically engineered duckweed |
DK1034298T3 (da) | 1997-12-05 | 2012-01-30 | Scripps Research Inst | Humanisering af murint antistof |
ATE458007T1 (de) | 1998-04-20 | 2010-03-15 | Glycart Biotechnology Ag | Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
CA2704600C (en) | 1999-04-09 | 2016-10-25 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | A method for producing antibodies with increased adcc activity |
US7125978B1 (en) | 1999-10-04 | 2006-10-24 | Medicago Inc. | Promoter for regulating expression of foreign genes |
DE60022369T2 (de) | 1999-10-04 | 2006-05-18 | Medicago Inc., Sainte Foy | Verfahren zur regulation der transkription von fremden genen in gegenwart von stickstoff |
WO2003056914A1 (en) | 2001-12-27 | 2003-07-17 | Glycofi, Inc. | Methods to engineer mammalian-type carbohydrate structures |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
OA12589A (en) | 2001-01-05 | 2006-06-08 | Abgenix Inc | Antibodies to insulin-like growth factor i receptor. |
CA2838062C (en) | 2001-08-03 | 2015-12-22 | Roche Glycart Ag | Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity |
JP2005507870A (ja) | 2001-08-13 | 2005-03-24 | ユニバーシティ・オブ・サザン・カリフォルニア | 低毒性のインターロイキン−2突然変異体 |
HUP0600342A3 (en) | 2001-10-25 | 2011-03-28 | Genentech Inc | Glycoprotein compositions |
MXPA04005266A (es) | 2001-12-04 | 2004-10-11 | Merck Patent Gmbh | Inmunocitocinas con selectividad modulada. |
US20040093621A1 (en) | 2001-12-25 | 2004-05-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Antibody composition which specifically binds to CD20 |
US7432063B2 (en) | 2002-02-14 | 2008-10-07 | Kalobios Pharmaceuticals, Inc. | Methods for affinity maturation |
US20040132101A1 (en) | 2002-09-27 | 2004-07-08 | Xencor | Optimized Fc variants and methods for their generation |
WO2003084570A1 (fr) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Medicament contenant une composition d'anticorps appropriee au patient souffrant de polymorphisme fc$g(g)riiia |
US20040259150A1 (en) | 2002-04-09 | 2004-12-23 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Method of enhancing of binding activity of antibody composition to Fcgamma receptor IIIa |
AU2003236020B2 (en) | 2002-04-09 | 2009-03-19 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Cell with depression or deletion of the activity of protein participating in GDP-fucose transport |
BR0309145A (pt) | 2002-04-09 | 2005-02-01 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Células das quais o genoma é modificado |
JPWO2003085118A1 (ja) | 2002-04-09 | 2005-08-11 | 協和醗酵工業株式会社 | 抗体組成物の製造方法 |
SI1539966T1 (sl) | 2002-09-12 | 2010-10-29 | Greenovation Biotech Gmbh | Postopek za produkcijo proteinov |
TWI335821B (en) | 2002-12-16 | 2011-01-11 | Genentech Inc | Immunoglobulin variants and uses thereof |
JP4559358B2 (ja) | 2002-12-20 | 2010-10-06 | グリーンオベーション バイオテク ゲーエムベーハー | コケ細胞における異種グリコシル化タンパク質の産生 |
WO2004063351A2 (en) | 2003-01-09 | 2004-07-29 | Macrogenics, Inc. | IDENTIFICATION AND ENGINEERING OF ANTIBODIES WITH VARIANT Fc REGIONS AND METHODS OF USING SAME |
AU2004205802B2 (en) | 2003-01-22 | 2009-11-05 | Roche Glycart Ag | Fusion constructs and use of same to produce antibodies with increased Fc receptor binding affinity and effector function |
US7871607B2 (en) | 2003-03-05 | 2011-01-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases |
US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
AR046071A1 (es) | 2003-07-10 | 2005-11-23 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos contra el receptor i del factor de crecimiento de tipo insulinico y los usos de los mismos |
AU2005230848B9 (en) | 2004-03-31 | 2011-06-02 | Genentech, Inc. | Humanized anti-TGF-beta antibodies |
TWI380996B (zh) | 2004-09-17 | 2013-01-01 | Hoffmann La Roche | 抗ox40l抗體 |
JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
AR052285A1 (es) | 2005-02-07 | 2007-03-07 | Glycart Biotechnology Ag | Moleculas de union al antigeno que fijan egfr, vectores que las codifican y usos de las mismas |
RU2007139283A (ru) | 2005-03-25 | 2009-04-27 | Гликарт Биотехнологи Аг (Ch) | АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, НАПРАВЛЕННЫЕ К MCSP И ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ СВЯЗЫВАНИЯ Fc-РЕЦЕПТОРА И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ |
DE102006031143A1 (de) | 2006-07-04 | 2008-01-24 | Merck Patent Gmbh | Fluortenside |
CA2656700A1 (en) | 2006-07-06 | 2008-01-10 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung | Compositions and methods for enhancing the efficacy of il-2 mediated immune responses |
AR062223A1 (es) | 2006-08-09 | 2008-10-22 | Glycart Biotechnology Ag | Moleculas de adhesion al antigeno que se adhieren a egfr, vectores que los codifican, y sus usos de estas |
US8231706B2 (en) | 2006-09-20 | 2012-07-31 | Mt-Biomethan Gmbh | Method and device for separating methane and carbon dioxide from biogas |
WO2008076257A2 (en) | 2006-12-13 | 2008-06-26 | Schering Corporation | Treating cancer with anti-igflr antibody 19d12 = sch 717454 |
US20080226635A1 (en) | 2006-12-22 | 2008-09-18 | Hans Koll | Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof |
BRPI0811857A2 (pt) * | 2007-05-14 | 2014-10-21 | Biogen Idec Inc | Regiões fc (scfc) de cadeia simples, polipeptídeos de aglutinação que as compreendem e métodos relacionados. |
WO2009061853A2 (en) | 2007-11-05 | 2009-05-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Mutant interleukin-2 (il-2) polypeptides |
DK2235064T3 (en) | 2008-01-07 | 2016-01-11 | Amgen Inc | A process for the preparation of heterodimeric Fc molecules using electrostatic control effects |
CA2769619C (en) * | 2009-08-17 | 2019-04-30 | Roche Glycart Ag | Targeted immunoconjugates |
TWI412375B (zh) | 2009-08-28 | 2013-10-21 | Roche Glycart Ag | 人類化抗cdcp1抗體 |
PE20121552A1 (es) | 2009-08-31 | 2012-11-26 | Roche Glycart Ag | Anticuerpos monoclonales anti cea humanizados de afinidad madura |
CN102711810B (zh) * | 2009-11-30 | 2015-04-22 | 詹森生物科技公司 | 效应子功能已消除的抗体Fc区突变体 |
SI2516469T1 (sl) | 2009-12-22 | 2016-05-31 | Roche Glycart Ag | Protitelesa proti her3 in uporabe le-teh |
US20110200595A1 (en) * | 2010-02-18 | 2011-08-18 | Roche Glycart | TREATMENT WITH A HUMANIZED IgG CLASS ANTI EGFR ANTIBODY AND AN ANTIBODY AGAINST INSULIN LIKE GROWTH FACTOR 1 RECEPTOR |
CN102341946B (zh) * | 2010-03-12 | 2013-05-01 | 住友电气工业株式会社 | 氧化还原液流电池 |
UA113712C2 (xx) * | 2010-08-13 | 2017-02-27 | Антитіло до fap і способи його застосування | |
RU2584597C2 (ru) * | 2010-08-13 | 2016-05-20 | Рош Гликарт Аг | Антитела против а2 тенасцина с и способы их применения |
EP3075745B1 (en) | 2011-02-10 | 2018-09-05 | Roche Glycart AG | Mutant interleukin-2 polypeptides |
JP2014511147A (ja) * | 2011-02-10 | 2014-05-12 | ロシュ グリクアート アーゲー | 改善された免疫療法 |
KR20160044598A (ko) * | 2011-03-29 | 2016-04-25 | 로슈 글리카트 아게 | 항체 Fc 변이체 |
EA201892619A1 (ru) * | 2011-04-29 | 2019-04-30 | Роше Гликарт Аг | Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2 |
WO2014023679A1 (en) * | 2012-08-07 | 2014-02-13 | Roche Glycart Ag | Composition comprising two antibodies engineered to have reduced and increased effector function |
-
2013
- 2013-08-05 WO PCT/EP2013/066351 patent/WO2014023679A1/en active Application Filing
- 2013-08-05 SG SG11201407580YA patent/SG11201407580YA/en unknown
- 2013-08-05 PL PL18187423T patent/PL3434695T3/pl unknown
- 2013-08-05 ES ES18187423T patent/ES2848732T3/es active Active
- 2013-08-05 MY MYPI2015700356A patent/MY175687A/en unknown
- 2013-08-05 PL PL13745096T patent/PL2882777T3/pl unknown
- 2013-08-05 CA CA2872195A patent/CA2872195A1/en not_active Abandoned
- 2013-08-05 NZ NZ702241A patent/NZ702241A/en unknown
- 2013-08-05 SG SG10201800535XA patent/SG10201800535XA/en unknown
- 2013-08-05 TR TR2018/16437T patent/TR201816437T4/tr unknown
- 2013-08-05 AU AU2013301582A patent/AU2013301582B2/en active Active
- 2013-08-05 KR KR1020157003238A patent/KR102163588B1/ko active IP Right Grant
- 2013-08-05 ES ES13745096T patent/ES2700978T3/es active Active
- 2013-08-05 RU RU2015107889A patent/RU2650788C2/ru active
- 2013-08-05 EP EP13745096.1A patent/EP2882777B1/en active Active
- 2013-08-05 KR KR1020207028135A patent/KR102231723B1/ko active IP Right Grant
- 2013-08-05 JP JP2015525848A patent/JP6290209B2/ja active Active
- 2013-08-05 CN CN201380029551.4A patent/CN104662045B/zh active Active
- 2013-08-05 EP EP18187423.1A patent/EP3434695B1/en active Active
- 2013-08-05 BR BR112014030414-9A patent/BR112014030414A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-08-05 AR ARP130102775A patent/AR092044A1/es unknown
- 2013-08-05 MX MX2015001630A patent/MX365382B/es active IP Right Grant
- 2013-08-07 US US13/961,649 patent/US9526797B2/en active Active
-
2015
- 2015-01-22 IL IL236892A patent/IL236892B/en active IP Right Grant
- 2015-02-05 MX MX2019006362A patent/MX2019006362A/es unknown
- 2015-11-23 HK HK15111524.5A patent/HK1210789A1/xx unknown
-
2016
- 2016-11-16 US US15/353,587 patent/US10603360B2/en active Active
-
2018
- 2018-12-03 AU AU2018274836A patent/AU2018274836B2/en active Active
-
2020
- 2020-03-02 US US16/807,129 patent/US20200197492A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2337107C2 (ru) * | 2003-05-02 | 2008-10-27 | Ксенкор, Инк. | ОПТИМИЗИРОВАННЫЕ Fc-ВАРИАНТЫ, ИМЕЮЩИЕ ИЗМЕНЕННОЕ СВЯЗЫВАНИЕ С FcγR, И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ |
EA015009B1 (ru) * | 2003-11-05 | 2011-04-29 | Гликарт Биотехнологи Аг | АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ |
WO2005100402A1 (en) * | 2004-04-13 | 2005-10-27 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Anti-p-selectin antibodies |
WO2011001276A1 (en) * | 2009-06-30 | 2011-01-06 | Philogen S.P.A. | Immunocytokines in combination with anti-erbb antibodies for the treatment of cancer |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20200197492A1 (en) | Combination il-2 immunoconjugate therapy | |
US20140065097A1 (en) | Immunotherapy | |
CN103649114B (zh) | 新的免疫缀合物 | |
US20240092853A1 (en) | Ph-dependent mutant interleukin-2 polypeptides | |
TW201247221A (en) | Improved immunotherapy | |
NZ614955B2 (en) | Novel immunoconjugates |