JP7345479B2 - 組成物及び使用方法 - Google Patents

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Description

配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１９年１月２４日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、５０４７４－１７７ＷＯ３＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１．２４．１９＿ＳＴ２５という名称であり、１２１，８５８バイトのサイズである。
本発明は、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）を含む組成物（例えば、医薬組成物）、ならびにそれを作製、精製、及び使用する方法に関する。
インターロイキン（ＩＬ）－２２は、例えば、Ｔｈ２２細胞、ＮＫ細胞、リンパ組織誘導（ＬＴｉ）細胞、樹状細胞、及びＴｈ１７細胞によって生成されるサイトカインのＩＬ－１０ファミリーのメンバーである。ＩＬ－２２は、自然細胞（ｉｎｎａｔｅ ｃｅｌｌｓ）（例えば、上皮細胞、肝細胞、及びケラチノサイト）及びいくつかの臓器（例えば、真皮、膵臓、腸管、及び呼吸器系）の上皮バリア組織において発現するＩＬ－２２Ｒ１／ＩＬ－１０Ｒ２受容体複合体に結合する。
ＩＬ－２２は粘膜免疫において重要な役割を果たし、細菌性病原体の付着及び除去に対する早期の宿主防御を媒介する。ＩＬ－２２は、上皮細胞からの抗菌ペプチド及び炎症促進性サイトカインの生成を促進し、腸内の結腸上皮細胞の増殖及び遊走を刺激する。細菌感染すると、ＩＬ－２２ノックアウトマウスは、腸上皮再生障害、高い細菌負荷、及び死亡率の増加を示した。同様に、ＩＬ－２２ノックアウトマウスにインフルエンザウイルスが感染すると、重度の体重減少ならびに気管及び気管支の上皮細胞の再生障害が起こった。したがって、ＩＬ－２２は微生物感染の抑制において炎症促進性の役割を果たすだけでなく、炎症応答における上皮再生において抗炎症性保護の役割も果たす。
潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ならびに微生物感染、急性腎傷害、急性膵炎、創傷、心血管状態、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、及び敗血症を含むＩＬ－２２に関連する他の障害を処置するための改善された組成物及び方法が、依然として必要とされている。
本発明は、とりわけ、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物（例えば、医薬組成物）、ならびにそれを作製及び使用する方法を提供する。
一態様において、本発明は、インターロイキン（ＩＬ）－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む医薬組成物であって、該医薬組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも３６か月の貯蔵寿命を有し、該ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含む、該医薬組成物を特色とする。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも４２か月の貯蔵寿命を有する。
前述の態様のいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約８ｍｇ／ｍＬ～約１２ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬである。
前述の態様のいくつかの実施形態では、医薬組成物は、安定剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、安定剤は、アミノ酸、チオソルビトール、アスコルビン酸、モノチオグリセロール、シクロデキストリン、トロロックス（６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）、ピリドキシン、マンニトール、金属キレート剤、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、安定剤はアミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、メチオニン、システイン、トリプトファン、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、アミノ酸はメチオニンである。いくつかの実施形態では、安定剤の濃度は、約１ｍＭ～約１０ｍＭである。いくつかの実施形態では、安定剤の濃度は、約２ｍＭ～約８ｍＭである。いくつかの実施形態では、安定剤の濃度は、約５ｍＭである。
前述の態様のいくつかの実施形態では、配列番号４のＭ２５位またはＭ１３９位にあるメチオニンの酸化は、ＡＡＰＨストレス試験によって評価した場合に１０％未満である。いくつかの実施形態では、配列番号４のＭ２５位にあるメチオニンの酸化は、５％未満、３％未満、または２％未満である。いくつかの実施形態では、配列番号４のＭ１３９位にあるメチオニンの酸化は、７％未満、６％未満、または５％未満である。
前述の態様のいくつかの実施形態では、医薬組成物は、界面活性剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。いくつかの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート、ポロクサマー、ポリオキシエテレンアルキルエーテル、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベートである。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０である。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０である。いくつかの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポロクサマーである。いくつかの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポロクサマー１８８である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の濃度は、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約０．１％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．０５％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．０７％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の濃度は、約０．０２％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０２％（ｗ／ｖ）である。
前述の態様のいくつかの実施形態では、医薬組成物は、緩衝剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、リン酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、ヒスチジン、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、緩衝剤はリン酸塩である。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、三塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、二塩基性リン酸カリウム、三塩基性リン酸カリウム、またはそれらの混合物である。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウムである。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、二塩基性リン酸ナトリウムである。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウムとの混合物である。いくつかの実施形態では、緩衝剤の濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの実施形態では、緩衝剤の濃度は、約８ｍＭ～約１２ｍＭである。いくつかの実施形態では、緩衝剤の濃度は、約１０ｍＭである。
前述の態様のいくつかの実施形態では、医薬組成物は、等張化剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、等張化剤は、糖、アミノ酸、または塩である。いくつかの実施形態では、等張化剤は糖である。いくつかの実施形態では、糖は、スクロース、グルコース、グリセロール、またはトレハロースである。いくつかの実施形態では、糖はスクロースである。いくつかの実施形態では、等張化剤は塩である。いくつかの実施形態では、塩は、塩化ナトリウムまたは塩化カリウムである。いくつかの実施形態では、等張化剤の濃度は、約１００ｍＭ～約５００ｍＭである。いくつかの実施形態では、等張化剤の濃度は、約２００ｍＭ～約３００ｍＭである。いくつかの実施形態では、等張化剤の濃度は、約２４０ｍＭである。
前述の態様のいくつかの実施形態では、医薬組成物は、約６．６～約８のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約６．８～約７．４のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約７．１のｐＨを有する。
別の態様では、本発明は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む医薬組成物であって、該ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含み、該医薬組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、約５ｍＭのメチオニン、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、該医薬組成物を特色とする。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム及び約２４０ｍＭのスクロースをさらに含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１ｍｇ／ｍＬまたは約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、リン酸ナトリウムは、一塩基性リン酸ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウムとの混合物である。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、単位剤形である。いくつかの実施形態では、単位剤形は、注入用の液体配合物である。いくつかの実施形態では、注入用の液体配合物は、公称容積が１００ｍＬ未満の容器で供給される。いくつかの実施形態では、注入用の液体配合物の体積は、約１ｍＬ～約２ｍＬである。いくつかの実施形態では、注入用の液体配合物の体積は、約１ｍＬである。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、容器内に存在する１０μｍ以上の粒子の数は、６０００粒子を超えない。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、容器内に存在する２５μｍ以上の粒子の数は、６００粒子を超えない。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、担体は水である。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、１回以上の凍結解凍サイクルを通して安定である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、３回の凍結解凍サイクルを通して安定である。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、約２５℃で約２週間以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約２５℃で約４週間以上にわたって安定である。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、－２０℃で約４８か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、－２０℃で約６０か月以上にわたって安定である。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９０％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を、約５℃で約３６か月以上にわたって有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を、約５℃で約４２か月以上にわたって有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を、約５℃で約４２か月にわたって有する。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動非ゲルふるい（ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）（例えば、非還元（ＮＲ）ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約７５％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約８０％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を、約５℃で約３６か月以上にわたって有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を、約５℃で約４２か月以上にわたって有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳによって評価した場合に約８５％以上の純度を、約５℃で約４２か月にわたって有する。前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳは、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳであり得る。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または局所投与用に配合されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与用に配合されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮下投与用に配合されている。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、保存剤を含まない。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、等張塩化ナトリウム溶液及び／または希釈剤で希釈した後に注入によって投与するように配合されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、等張塩化ナトリウム溶液で希釈した後に注入によって投与するように配合されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、希釈剤で希釈した後に注入によって投与するように配合されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、等張塩化ナトリウム溶液及び希釈剤で希釈した後に注入によって投与するように配合されている。いくつかの実施形態では、等張塩化ナトリウム溶液は、約０．１％～約２％のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、等張塩化ナトリウム溶液は、約０．５％～約１．５％のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、等張塩化ナトリウム溶液は、約０．９％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、希釈剤は、緩衝剤、等張化剤、及び界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、希釈剤は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ポリペプチドは、グリコシル化されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ポリペプチドは、Ｎ－グリコシル化されている。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、グリコシル化されていない。いくつかの実施形態では、ＥＵインデックスでＦｃ領域の２９７位にあるアミノ酸残基は、グリシン（Ｇｌｙ）である。いくつかの実施形態では、ＥＵインデックスでＦｃ領域の２９７位にあるアミノ酸残基は、アラニン（Ａｌａ）である。いくつかの実施形態では、ＥＵインデックスでＦｃ領域の２９９位にあるアミノ酸残基は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはバリン（Ｖａｌ）である。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｎ－グリコシル化されていない。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、二量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質である。前述の態様のうちのいずれかの他の実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、単量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質である。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ポリペプチドは、ヒトＩＬ－２２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）からなる。
別の態様では、本発明は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む医薬組成物であって、該ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、該医薬組成物は、約５ｍＭのメチオニン、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、該医薬組成物を特色とする。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２受容体は、ヒトＩＬ－２２受容体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２Ｒ１及び／またはＩＬ－１０Ｒ２に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２Ｒ１に結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ－２２受容体は、ＩＬ－２２Ｒ１ポリペプチド及びＩＬ－１０Ｒ２ポリペプチドからなるヘテロ二量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２Ｒ１ポリペプチドは、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１０Ｒ２ポリペプチドは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、追加の治療剤をさらに含む。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、ゲル化剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、ゲル化剤は多糖である。いくつかの実施形態では、ゲル化剤はセルロース系薬剤である。いくつかの実施形態では、ゲル化剤は、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ＰＯＥ－ＰＯＰブロックポリマー、アルギン酸塩、ヒアルロン酸、ポリアクリル酸、ヒドロキシエチルメチルセルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースである。いくつかの実施形態では、ゲル化剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである。いくつかの実施形態では、医薬配合物は、局所投与のためのものである。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬物として使用するためのものである。
別の態様では、本発明は、処置を必要とする対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を処置する方法であって、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、方法を特色とする。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎またはクローン病である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、中等度から重度の潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは、クローン病である。
別の態様では、本発明は、腸管内の微生物感染の阻害、微生物感染中の腸管内の杯細胞の維持、腸管内の上皮細胞の完全性、上皮細胞増殖、上皮細胞分化、上皮細胞遊走または上皮創傷治癒の強化を必要とする対象に、それを行う方法であって、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、方法を特色とする。いくつかの実施形態では、上皮細胞は、腸上皮細胞である。
別の態様では、本発明は、処置を必要とする対象の急性腎傷害または急性膵炎を処置する方法であって、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、方法を特色とする。
別の態様では、本発明は、創傷治癒の加速または向上を必要とする対象の創傷治癒を加速または向上させる方法であって、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、方法を特色とする。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷または感染創傷である。いくつかの実施形態では、対象は糖尿病である。いくつかの実施形態では、糖尿病の対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性足部潰瘍である。いくつかの実施形態では、完全な創傷閉鎖があるまでＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物が投与される。
別の態様では、本発明は、防止または処置を必要とする対象において、アテローム硬化性プラーク形成の病状を含む心血管状態を防止または処置する方法であって、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、方法を特色とする。いくつかの実施形態では、心血管疾患は、冠動脈疾患、冠状動脈細小血管疾患、卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患である。いくつかの実施形態では、本方法は、アテローム硬化性プラーク形成の進行を減速させること、またはアテローム性硬化症の兆候を防止することをさらに含む。いくつかの実施形態では、アテローム性硬化症の兆候は、プラーク蓄積または血管炎症を含む。
別の態様では、本発明は、処置を必要とする対象のメタボリックシンドロームを処置する方法であって、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、方法を特色とする。いくつかの実施形態では、本方法は、腹部肥満、高血糖症、脂質異常症、及び高血圧症のうちの１つ以上を含む、メタボリックシンドロームに関連する１つ以上のリスク因子を低減させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象における細菌性リポ多糖のレベルを低下させることをさらに含む。
別の態様では、本発明は、処置を必要とする対象の急性内毒素血症、敗血症、またはその両方を処置する方法であって、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、方法を特色とする。いくつかの実施形態では、対象は、ＨＤＬ／ＬＤＬ脂質プロファイルの変化を必要とする。
別の態様では、本発明は、処置を必要とする対象のＧＶＨＤを処置する方法であって、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、方法を特色とする。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、約５ｍＭのメチオニン、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、もしくは配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または局所投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮下投与される。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１つの追加の治療剤を共投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
別の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかは、処置を必要とする対象のＩＢＤを処置する方法で使用することができる。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎またはクローン病である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、中等度から重度の潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは、クローン病である。
別の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかは、腸管内の微生物感染の阻害、微生物感染中の腸管内の杯細胞の維持、腸管内の上皮細胞の完全性、上皮細胞増殖、上皮細胞分化、上皮細胞遊走または上皮創傷治癒の強化を必要とする対象に、それを行う方法で使用することができる。いくつかの実施形態では、上皮細胞は、腸上皮細胞である。
別の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかは、処置を必要とする対象の急性腎傷害または急性膵炎を処置する方法で使用することができる。
別の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかは、創傷治癒の加速または向上を必要とする対象の創傷治癒を加速または向上させる方法で使用することができる。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷または感染創傷である。いくつかの実施形態では、対象は糖尿病である。いくつかの実施形態では、糖尿病の対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性足部潰瘍である。いくつかの実施形態では、完全な創傷閉鎖があるまでＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物が投与される。
別の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかは、防止または処置を必要とする対象において、アテローム硬化性プラーク形成の病状を含む心血管状態を防止または処置する方法で使用することができる。いくつかの実施形態では、心血管疾患は、冠動脈疾患、冠状動脈細小血管疾患、卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患である。いくつかの実施形態では、本方法は、アテローム硬化性プラーク形成の進行を減速させること、またはアテローム性硬化症の兆候を防止することを含む。いくつかの実施形態では、アテローム性硬化症の兆候は、プラーク蓄積及び／または血管炎症を含む。
別の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかは、処置を必要とする対象のメタボリックシンドロームを処置する方法で使用することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、腹部肥満、高血糖症、脂質異常症、及び高血圧症のうちの１つ以上を含む、メタボリックシンドロームに関連する１つ以上のリスク因子を低減させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象における細菌性リポ多糖のレベルを低下させることをさらに含む。
別の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかは、処置を必要とする対象の急性内毒素血症、敗血症、またはその両方を処置する方法で使用することができる。
別の態様では、本明細書に記載される医薬組成物のうちのいずれかは、処置を必要とする対象のＧＶＨＤを処置する方法で使用することができる。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ＨＤＬ／ＬＤＬ脂質プロファイルの変化を必要とする。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質（例えば、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの濃度）、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、約５ｍＭのメチオニン、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または局所投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物は、皮下投与される。
前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１つの追加の治療剤を共投与されることになる。前述の態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象はヒトである。
文脈上特に明記されていない限り、あらゆる実施形態を組み合わせることができる。文脈上特に明記されていない限り、あらゆる実施形態を、本発明のあらゆる態様に適用することができる。
本発明の特定の実施形態は、ある好ましい実施形態に関する以下のより詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
酢酸ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）０．０２％（ｗ／ｖ）、ｐＨ５．５において１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を４０℃及び５℃で４週間おいた後のサイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）のオーバーレイを示すクロマトグラムである。 酢酸ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ＰＳ２０ ０．０２％（ｗ／ｖ）、ｐＨ５．５において１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）による熱安定性を示すグラフである。 ｐＨ７．４におけるＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物のＤＳＣによる熱安定性を示すグラフである。ＩｇＧ４の融解開始温度（Ｔｍ）はおよそ３４℃であり、これに対してｐＨ７．４のＰＢＳはおよそ４５℃のＴｍを有する。 ｐＨ５．５、６．０、６．５、及び７．０で酢酸ヒスチジン１０ｍＭにおけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＤＳＣプロファイルを比較するグラフである。 ｐＨ６．０で酢酸ヒスチジン１０ｍＭにおけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＤＳＣ及びトリプトファン（Ｔｒｐ）自家蛍光プロファイルを示すグラフである。 ｐＨ６．５で酢酸ヒスチジン１０ｍＭにおけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＤＳＣ及びＴｒｐ蛍光プロファイルを示すグラフである。 ｐＨ７．０で酢酸ヒスチジン１０ｍＭにおけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＤＳＣ及びＴｒｐ蛍光プロファイルを示すグラフである。 ｐＨ５．５、６．０、６．５、及び７．０で酢酸ヒスチジン１０ｍＭにおける熱ストレスを受けたＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を３０℃で４週間おいた後の、パーセント高分子量（％ＨＭＷ）対時間（左パネル）、％メインピーク対時間（中央パネル）、及び％二量体対時間（右パネル）として表される、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析を示す一連のグラフである。 リン酸ナトリウム１０ｍＭでｐＨ６．５、７．０、７．３、及び７．６、ならびにトリス２０ｍＭでｐＨ７．３における、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物のＤＳＣプロファイルを示すグラフである。 ＳＥ－ＨＰＬＣによる、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０ ０．０２％、ｐＨ７．１におけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の、３０℃でＴ＝０及び６週間の保管後のメインピーク分解速度を示すグラフである。 ＳＥ－ＨＰＬＣによる、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０ ０．０２％、ｐＨ７．１におけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の、３０℃でＴ＝０及び６週間の保管後の経時的な凝集率を示すグラフである。 ＳＥ－ＨＰＬＣによる、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０ ０．０２％、ｐＨ７．１におけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の、４０℃でＴ＝０及び６週間の保管後のメインピーク分解速度を示すグラフである。 ＳＥ－ＨＰＬＣによる、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０ ０．０２％、ｐＨ７．１におけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の、４０℃でＴ＝０及び６週間の保管後の経時的な凝集率を示すグラフである。 画像キャピラリー等電点電気泳動（ＩＣＩＥＦ）による、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０ ０．０２％、ｐＨ７．１におけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の、３０℃でＴ＝０及び４週間の保管後の酸性ピークの形成速度を示すグラフである。 撹拌試験後のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＳＥ－ＨＰＬＣプロファイルを示すクロマトグラムのオーバーレイである。 ２，２’－アゾビス－２－メチル－プロパンイミドアミド二塩酸塩（ＡＡＰＨ）で処理し、液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ－ＭＳ）によるトリプシンペプチドマッピングを行った後の、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の８つのメチオニン含有トリプシンペプチドのメチオニン酸化を示すグラフである。各トリプシンペプチドのメチオニン酸化は、酸化したトリプシンペプチドの、全トリプシンペプチド（天然＋酸化型）に対する比からパーセンテージとして報告したものである。 異なる哺乳動物種：ヒト（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｑ９ＧＺＸ６、配列番号４、チンパンジー（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＸＰ＿００３３１３９０６、配列番号４８）、オランウータン（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＸＰ＿００２８２３５４４、配列番号４９）、マウス（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｑ９ＪＪＹ９、配列番号５０）、及びイヌ（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＸＰ＿５３８２７４、配列番号５１）に由来する成熟ＩＬ－２２のアミノ酸配列アライメントを示す。
Ｉ．定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用される専門用語、表記法、及び他の科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味を有するよう意図される。場合によっては、一般的に理解されている意味をもつ用語を、明確化及び／または容易な参照のために本明細書において定義するが、そのような定義の本明細書における包含は、当該分野で一般に理解されているものに対する実質的な違いを必ずしも表すものと解釈されてはならない。
本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野の当業者であれば容易に分かるそれぞれの値に対する通常の誤差範囲を指す。本明細書において「約」のついた値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体に関する実施形態を含む（かつ説明する）。
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、文脈上明らかに別異に解される場合を除き、複数の指示対象を含む。例えば、「単離されたペプチド（ａｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）」への言及は、１つ以上の単離されたペプチドを意味する。
本明細書及び特許請求の範囲の随所において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変形は、記載される整数または整数の群の包含を意味するが、任意の他の整数または整数の群の除外を意味するものではないと理解されたい。
本明細書で使用される「ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質」または「ＩＬ－２２融合タンパク質」または「ＩＬ－２２ Ｉｇ融合タンパク質」という用語は、ＩＬ－２２タンパク質またはポリペプチドが直接的または間接的にＩｇＧ Ｆｃ領域に連結している融合タンパク質を指す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２タンパク質またはポリペプチドは、グリコシル化されている。ある好ましい実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域に連結したヒトＩＬ－２２タンパク質またはポリペプチドを含む。ある実施形態では、ヒトＩＬ－２２タンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。しかしながら、挿入、欠失、置換等のわずかな配列変化、特に、ＩＬ－２２もしくはＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の機能及び／または活性に影響を及ぼさないＩＬ－２２もしくはＦｃの保存的アミノ酸置換もまた、本発明によって企図されることが理解される。本発明のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２受容体に結合することができ、これは、ＩＬ－２２受容体の下流シグナル伝達をもたらし得る。ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２受容体に結合することができ、及び／またはＩＬ－２２受容体の下流シグナル伝達をもたらすことができる。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の機能及び／または活性は、限定されるものではないが、ＥＬＩＳＡ、リガンド－受容体結合アッセイ、及びＳｔａｔ３ルシフェラーゼアッセイを含む、当該分野で公知の方法によってアッセイすることができる。ある実施形態では、本発明は、ＩＬ－２２受容体に結合するＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を提供し、この結合は、ＩＬ－２２受容体の下流シグナル伝達をもたらし得、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、及び配列番号１６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｆｃ領域は、グリコシル化されていない。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２２融合タンパク質のＦｃ領域は、エフェクター活性を有しない（例えば、ＦｃγＩＩＩＲに結合しない）か、または全ＩｇＧ抗体（例えば、野生型ＩｇＧ抗体）よりも実質的に低いエフェクター活性を呈する。ある他の実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）等の細胞傷害性を誘発しない。特に規定しない限り、「ＩＬ－２２融合タンパク質」、「ＩＬ－２２ Ｆｃ融合物」、「ＩＬ－２２ Ｉｇ融合タンパク質」、「ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質」、または「ＩＬ－２２ Ｆｃ」は、本願の随所で交換可能に使用される。
本明細書で使用される「ＩＬ－２２」または「ＩＬ－２２ポリペプチド」または「ＩＬ－２２タンパク質」という用語は、特記なき限り、霊長類（例えばヒト）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）を含む任意の哺乳動物源由来の任意の天然ＩＬ－２２を広く指す。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＩＬ－２２だけでなく、細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のＩＬ－２２をも包含する。例えば、Ｎ末端リーダー配列を含む全長ＩＬ－２２及び成熟型ＩＬ－２２の両方が、本発明に包含される。リーダー配列（またはシグナルペプチド）は、内因性ＩＬ－２２リーダー配列であってもよいし、または別の哺乳動物分泌タンパク質の外因性リーダー配列であってもよい。ある実施形態では、リーダー配列は、真核生物または原核生物の分泌タンパク質に由来し得る。この用語はまた、ＩＬ－２２の天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体または対立遺伝子変異体も包含する。例示的なヒトＩＬ－２２のアミノ酸配列は、配列番号４に示してある（成熟型、シグナルペプチドを含まない）。ある実施形態では、内因性リーダー配列を含む全長ＩＬ－２２タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号７１に提示してあり、他の実施形態では、外因性リーダー配列を含む成熟ＩＬ－２２タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２に提示してある。わずかな配列変化、特に、ＩＬ－２２の機能及び／または活性（例えば、ＩＬ－２２受容体への結合）に影響を及ぼさないＩＬ－２２の保存的アミノ酸置換も、本発明により企図される。図９は、いくつかの例示的な哺乳動物種に由来する成熟ＩＬ－２２のアミノ酸配列アライメントを示す。アスタリスクは、ＩＬ－２２の機能及び／または活性にとって重要である可能性が高い、種間で高度に保存されたアミノ酸残基を示す。したがって、ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ－２２ポリペプチドを含む。ある他の実施形態では、ＩＬ－２２タンパク質は、配列番号７１に対して９５％以上の配列同一性、配列番号７１に対して９６％以上の配列同一性、配列番号７１に対して９７％以上の配列同一性、配列番号７１に対して９８％以上の配列同一性、または配列番号７１に対して９９％以上の配列同一性を有する。本明細書に記載されるＩＬ－２２ポリペプチドは、ヒト組織もしくは別の源等の多様な源から単離することもできるし、または組換え方法もしくは合成方法によって調製することもできる。
「ＩＬ－２２受容体」または「ＩＬ－２２Ｒ」という用語は、ＩＬ－２２Ｒ１及びＩＬ－１０Ｒ２またはそれらの天然に存在する対立遺伝子変異体からなるヘテロ二量体を指す。例えば、Ｏｕｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：１５９－６３を参照されたい。ＩＬ－１０Ｒ２は、多くの細胞型で遍在的に発現し、ＩＬ－２２Ｒ１は、上皮細胞、肝細胞、及びケラチノサイト等の自然細胞でのみ発現する。ＩＬ－２２Ｒ１は、ＩＬ－２２Ｒａ１またはＩＬ－２２Ｒα１としても知られている。ＩＬ－２２Ｒ１は、他のポリペプチドと対になって、他のＩＬ－１０ファミリーメンバー、例えばＩＬ－２０またはＩＬ－２４のヘテロ二量体受容体を形成し得る。例えば、上記のＯｕｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１を参照されたい。例示的なＩＬ－２２Ｒ１ポリペプチドの全長アミノ酸配列は、配列番号８１に示してある。ＩＬ－２２Ｒ１のこの全長配列には、最終的な機能性分子において切断されるＮ末端シグナル配列（アミノ酸１～１５）が含まれる（その例示的なアミノ酸配列は、配列番号８２に示してある）。例示的なＩＬ１０Ｒ２ポリペプチドの全長アミノ酸配列は、配列番号８３に示してある。ＩＬ１０Ｒ２のこの全長配列には、最終的な機能性分子において切断されるＮ末端シグナル配列（アミノ酸１～１９）が含まれる（その例示的なアミノ酸配列は、配列番号８４に示してある）。
「天然配列ＩＬ－２２ポリペプチド」または「天然配列ＩＬ－２２Ｒポリペプチド」とは、自然に由来する対応するＩＬ－２２またはＩＬ－２２Ｒポリペプチドと同じアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。このような天然配列ＩＬ－２２またはＩＬ－２２Ｒポリペプチドは、自然から単離することもできるし、または組換え手段もしくは合成手段によって生成することもできる。これらの用語は、特定のＩＬ－２２またはＩＬ－２２Ｒポリペプチドの天然に存在するトランケート型または分泌型（例えば、関連するシグナルペプチドが欠如しているＩＬ－２２）、ポリペプチドの天然に存在する変異体形態（例えば、選択的スプライシング形態）、及び天然に存在する対立遺伝子変異体を明確に包含する。本発明の様々な実施形態において、本明細書に開示される天然配列ＩＬ－２２またはＩＬ－２２Ｒポリペプチドは、成熟型または全長の天然配列ポリペプチドである。例示的な全長の天然ヒトＩＬ－２２は、配列番号７０（ＤＮＡ）及び配列番号７１（タンパク質）に示してある。ＩＬ－２２及びＩＬ－２２Ｒポリペプチド配列は、本明細書ではアミノ酸１位と指定するメチオニン残基から始まるように示されているが、アミノ酸１位の上流あるいは下流に位置する他のメチオニン残基を、ＩＬ－２２またはＩＬ－２２Ｒポリペプチドの開始アミノ酸残基として用いてもよいことが考えられ、かつ可能である。
「ＩＬ－２２変異体」、「ＩＬ－２２Ｒ変異体」、「ＩＬ－２２変異体ポリペプチド」、または「ＩＬ－２２Ｒ変異体ポリペプチド」は、全長天然配列ＩＬ－２２またはＩＬ－２２Ｒポリペプチド配列に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する、上に定義した活性ＩＬ－２２またはＩＬ－２２Ｒポリペプチドを意味する。通常、ＩＬ－２２またはＩＬ－２２Ｒポリペプチド変異体は、全長または成熟型の天然配列ＩＬ－２２またはＩＬ－２２Ｒポリペプチド配列に対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有する。
「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」、または「Ｆｃ」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端の非抗原結合性領域を指す。この用語は、天然Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。ある実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、重鎖のカルボキシル末端まで及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、Ｆｃ領域の構造または安定性に影響を及ぼすことなく、存在する場合もあれば、しない場合もある。本明細書において特に規定しない限り、ＩｇＧまたはＦｃ領域内のアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも呼ばれる抗体のＥＵ付番システムに従う。
ある実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒンジ領域（Ｃｙｓ２２６から始まる）、ＩｇＧ ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む免疫グロブリンＩｇＧ重鎖定常領域を指す。本明細書で使用される「ヒンジ領域」または「ヒンジ配列」という用語は、リンカーとＣＨ２ドメインとの間に位置するアミノ酸配列を指す。ある実施形態では、ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＣＰＰＣＰ（配列番号３１）を含む。ある実施形態では、ＩＬ－２２ ＩｇＧ４ Ｆｃ融合タンパク質のヒンジ領域は、二量体化を容易にする、天然ＩｇＧ１ヒンジ領域に見出される配列である、ＣＰＰＣＰ配列（配列番号３１）を含む。ある他の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒンジ領域から始まり、ＩｇＧ重鎖のＣ末端まで及ぶ。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のＦｃ領域を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。ある他の特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
ある実施形態では、ＩｇＧ ＣＨ２ドメインは、Ａｌａ ２３１から始まる。ある他の実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｇｌｙ ３４１から始まる。ヒトＩｇＧのＣ末端のＬｙｓ残基は、場合によっては存在しない可能性があることが理解される。Ｆｃの所望の構造及び／または安定性に影響を及ぼさないＦｃ領域の保存的アミノ酸置換が、本発明の範囲内で企図されることも理解される。
ある実施形態では、ＩＬ－２２は、リンカーを介してＦｃ領域に連結している。ある特定の実施形態では、リンカーは、本明細書に記載されるように、ＩＬ－２２のＣ末端をＦｃ領域に接続するペプチドである。ある実施形態では、免疫原性のリスクを最小限に抑え、及び／または回避するように、天然ＩｇＧ配列がリンカー及び／またはヒンジ領域内に存在する。他の実施形態では、製造を容易にするために、わずかな配列変化を天然配列に導入することができる。高い活性を（例えば、ルシフェラーゼアッセイによって測定した場合に）呈する外因性リンカーまたはヒンジ配列を含むＩＬ－２２ Ｆｃ融合構築物もまた、本発明の範囲内である。ある実施形態では、リンカーは、８～２０アミノ酸、８～１６、８～１５、８～１４、８～１３、８～１２、８～１１、８～１０、８～９、１０～１１、１０～１２、１０～１３、１０～１４、１０～１５、１０～１６、１１～１６、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６アミノ酸長のアミノ酸配列を含む。ある他の実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴ（配列番号３２）を含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４５）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４６）、またはＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号４７）を含まない。
ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含む。「に連結した」または「に融合した」という用語は、２つの部分の間に形成される共有結合、例えば、ペプチド結合を指す。
本明細書で使用される「グリコシル化」及び「グリコシル化される」という用語は、生体分子（例えば、タンパク質または脂質）に結合した炭水化物（例えば、オリゴ糖または多糖、「グリカン」ともいう）の存在を指す。特定の実施形態において、グリコシル化は、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）または目的のタンパク質の一部分（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ－２２ポリペプチド部分）に結合したグリカン（例えば、Ｎ－グリカン）の存在を指す。Ｎ結合型グリコシル化とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－スレオニン（式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合の認識配列である。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類であるＮ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの結合を指すが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリジンもＯ結合型グリコシル化に関与し得る。グリコシル化の概説については、例えば、Ｖａｒｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２０１５－２０１７を参照されたい。
本明細書で交換可能に使用される「非グリコシル化」及び「グリコシル化されていない」という用語は、グリコシル化されていない（例えば、Ｎ－グリコシル化されていない）タンパク質または目的のタンパク質の一部分（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域）を指す。いくつかの実施形態では、目的のタンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）の一部分（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ－２２ポリペプチド部分）は、グリコシル化されている一方で、目的のタンパク質の別の部分（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域）は、グリコシル化されていないと理解されたい。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域またはＣＨ２ドメインがグリコシル化されていないＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質が本明細書において提供される。ある実施形態では、ＣＨ２ドメイン内のＮ－グリコシル化部位は、グリコシル化を防止するように突然変異している。例えば、非グリコシル化Ｆｃ領域を有するＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおいて、ＥＵインデックスで２９７位にあるアミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）の突然変異誘発を行うことにより、作製することができる。ある実施形態では、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるグリコシル化は、グリコシル化コンセンサス部位、すなわち、任意のアミノ酸残基（ヒトＩｇＧの場合はＳｅｒ）及びＴｈｒが続く２９７位のＡｓｎを変更することによって排除することができる。グリコシル化部位は、アミノ酸挿入、欠失、及び／または置換によって変更することができる。例えば、１つ以上のアミノ酸残基を、ＡｓｎとＳｅｒとの間またはＳｅｒとＴｈｒとの間に挿入して、元のグリコシル化部位を変更することができ、この挿入は、Ｎ－グリコシル化部位を再生しない。ある特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ ＦｃのＣＨ２ドメインにおいて、ＥＵインデックスで２９７位（例えば、Ｆｃ内のＮ－グリコシル化されている部位）にあるアミノ酸残基は、グリコシル化部位を無効にするように突然変異している。ある特定の実施形態では、ＥＵインデックスで２９７位にあるアミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、またはＧｌｕに変化している。いくつかの特定の実施形態では、ＥＵインデックスで２９７位にあるアミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）は、ＧｌｙまたはＡｌａに変化している。他の特定の実施形態では、ＥＵインデックスで２９７位にあるアミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）は、Ｇｌｙに変化している。ある他の実施形態では、ＥＵインデックスで２９９位にあるアミノ酸残基は、別のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＧｌｙで置換されていてもよい。ある特定の実施形態では、非グリコシル化Ｆｃをもたらす突然変異は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の構造及び／または安定性に影響を及ぼさない。
ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＥＵインデックスでＣＨ２ドメイン内の２９７位にあるアミノ酸残基が突然変異しているＦｃ領域を含む。ある実施形態では、ＥＵインデックスで２９７位にあるアミノ酸残基は、ＧｌｙまたはＡｌａに、好ましくはＧｌｙに変化している。ある他の実施形態では、ＥＵインデックスで２９７位にあるアミノ酸残基は、欠失している。ある実施形態では、ＥＵインデックスで２９７位にあるアミノ酸残基にアミノ酸置換を有するＦｃを含むＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、非グリコシル化されている（すなわちグリコシル化されていない）。
他の実施形態では、ＥＵインデックスで２９７位にある野生型アミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）に結合したＮ－グリカンは、例えば、脱グリコシル化によって酵素的に除去することができる。好適な解糖酵素は、限定されるものではないが、ペプチド－Ｎ－グリコシダーゼ（ＰＮＧａｓｅ）を含む。
「非フコシル化」、「非フコシル化された」、「脱フコシル化」、または「脱フコシル化された」という用語は、Ｎ－グリカン、例えば、タンパク質もしくはタンパク質の一部分（例えば、ＦｃのＣＨ２ドメイン）に結合したＮ－グリカンにコアフコースがないこと、またはＮ－グリカンからコアフコースを除去することを指す。
「二量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質」という用語は、各単量体がＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を指す。「単量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質」という用語は、一方の単量体が、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含み（ＩＬ－２２ Ｆｃアーム）、他方の単量体が、ＩＬ－２２ポリペプチドを含まないＦｃ領域を含む（Ｆｃアーム）、二量体を指す。したがって、二量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２Ｒ結合に関して二価であるが、単量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２Ｒ結合に関して一価である。単量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のヘテロ二量体化は、限定されるものではないが、ノブイントゥホール技術によるヘテロ二量体化を含む、当該分野で公知の方法によって容易にすることができる。ノブイントゥホール技術の構造及びアセンブリ方法は、例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ５，８２１，３３３、ＵＳ７，６４２，２２８、ＵＳ２０１１／０２８７００９、及びＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５９８１０に見出すことができる。この技術は、一方のＦｃのＣＨ３ドメインにおいて、小さなアミノ酸残基を大きなものに置き換えることによって、「ノブ」（または隆起）を導入し、他方のＦｃのＣＨ３ドメインに、１つ以上の大きなアミノ酸残基を小さなものに置き換えることによって、「ホール」（または空洞）を導入することにより、開発された。ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合アームはノブを含み、Ｆｃのみのアームはホールを含む。
ノブの形成に好ましい残基は、一般に、天然に存在するアミノ酸残基であり、好ましくはアルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される。トリプトファン及びチロシンが最も好ましい。一実施形態において、ノブを形成するための元の残基は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン、またはバリン等、小さい側鎖体積を有する。ノブを形成するためのＣＨ３ドメインにおける例示的なアミノ酸置換は、限定されるものではないが、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｙ、またはＦ４０５Ｗ置換を含む。
ホールの形成に好ましい残基は、通常、天然に存在するアミノ酸残基であり、好ましくはアラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される。一実施形態において、ホールを形成するための元の残基は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、またはトリプトファン等、大きな側鎖体積を有する。ホールを生成するためのＣＨ３ドメインにおける例示的なアミノ酸置換は、限定されるものではないが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｔ、及びＹ４０７Ｖ置換を含む。ある実施形態では、ノブはＴ３６６Ｗ置換を含み、ホールはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換を含む。ある特定の実施形態では、単量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。ある特定の実施形態では、単量体ＩＬ－２２ ＩｇＧ１ Ｆｃ融合物は、ＩＬ－２２ Ｆｃノブアーム及びＦｃホールアームを含む。ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃノブアームは、Ｔ３６６Ｗ置換（配列番号６１）を含み、Ｆｃホールアームは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（配列番号６２）を含む。ある他の実施形態では、両アームのＦｃ領域は、Ｎ２９７ＧまたはＮ２９７Ａ突然変異をさらに含む。ある実施形態では、単量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞内で発現する。ヘテロ二量体化を容易にする、当該分野で公知のＦｃ領域への他の修飾も企図され、本願に包含されることが理解される。
「創傷」という用語は、傷害、特に皮膚または別の外表面が断裂した、突き刺された、切られた、または別様に壊れたものを指す。
「潰瘍」という用語は、多くの場合、膿の形成、組織の死を特徴とし、炎症反応を伴うことが多い、皮膚または粘膜の損傷部位である。
本明細書で交換可能に使用される「腸管」または「腸」という用語は、小腸及び大腸を広く包含する。
「創傷治癒を加速させる」または「創傷治癒の加速」という用語は、治癒速度の増加、例えば、完全な創傷閉鎖が生じるまでの時間の低減、または創傷面積率（％）の低減が生じるまでの時間の低減を指す。
「糖尿病性創傷」は、糖尿病に関連する創傷である。
「糖尿病性潰瘍」は、糖尿病に関連する潰瘍である。
「慢性創傷」は、治癒しない創傷を指す。例えば、Ｌａｚａｒｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｗｏｕｎｄｓ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅａｌｉｎｇ，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３０：４８９－９３（１９９４）を参照されたい。慢性創傷としては、例えば、動脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍、褥瘡または床ずれ、静脈性潰瘍等が挙げられるが、これらに限定されない。急性創傷は、慢性創傷に発展する可能性がある。急性創傷としては、例えば、熱傷（例えば、火傷）、外傷、手術、広範囲の皮膚癌の切除、深在性真菌感染及び細菌感染、血管炎、強皮症、天疱瘡、中毒性表皮壊死症等によって引き起こされる創傷が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、２００１年１０月２４日に公開されたＢｕｆｏｒｄ，Ｗｏｕｎｄ Ｈｅａｌｉｎｇ ａｎｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｓｏｒｅｓ、ＨｅａｌｉｎｇＷｅｌｌ．ｃｏｍを参照されたい。したがって、ある実施形態では、慢性創傷は感染創傷である。「通常の創傷」とは、通常の創傷治癒修復の過程をたどる創傷を指す。
「親和性」は、分子（例えば、リガンドまたは抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、受容体または抗原）との間の非共有性相互作用の総計の強度を指す。特記なき限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及びＩＬ－２２受容体）間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、概して、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含め、当該分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の例証的かつ例示的な実施形態を以下に記載する。
本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、及び抗体断片を含むがこれらに限定されない様々な抗体構造を包含する。
「抗体断片」は、インタクト抗体が結合する抗原に結合するインタクト抗体の一部分を含む、インタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
抗体の「クラス」とは、その重鎖が有する定常ドメインまたは定常領域のタイプを指す。抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
「エフェクター機能」または「エフェクター活性」は、抗体アイソタイプにより様々である、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、エフェクター機能または検出可能なエフェクター機能を呈さない。ある他の実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、実質的に低減したエフェクター機能、例えば、約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％低減したエフェクター機能を呈する。
薬剤、例えば、医薬配合物の「有効量」または「治療有効量」は、必要な投与量及び期間で、所望の治療的または予防的な結果を達成するのに有効な量を指す。
例えば、心血管疾患または状態の場合、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の治療有効量は、アテローム硬化性プラーク形成の程度を低減し、アテローム硬化性プラーク（複数可）のサイズを低減し、アテローム硬化性プラークを阻害し（すなわち、ある程度減速し、好ましくは停止させ）、アテローム硬化性プラークの血栓形成もしくは破裂を阻害し（すなわち、ある程度減速し、好ましくは停止させ）、及び／または疾患もしくは状態に関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減することができる。
「低減または阻害」とは、好ましくは２０％以上、より好ましくは５０％以上、最も好ましくは７５％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の全体的減少を引き起こす能力を意味する。低減または阻害は、処置されている障害の症状、アテローム硬化性プラークの存在もしくはサイズ、またはアテローム硬化性プラーク（複数可）の数に言及する場合がある。
「次善の量」とは、ある処置に通常使用される治療剤の最適量より少ない量を指す。同時か連続的かを問わず、２つの治療剤が対象に投与される場合、各治療剤は、各治療剤が単独で投与される場合の処置と比較して次善の量で投与され得る。例えば、ある実施形態では、ＩＢＤ処置を必要とする対象に、次善の量で本発明のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質とデキサメタゾンとを含む医薬組成物が投与される。
「全長抗体」、「インタクト抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書では、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書で定義するＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指すように、交換可能に使用される。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、交換可能に使用され、外因性核酸が導入されている細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含み、これらには、初代形質転換細胞及び継代数にかかわらずそれに由来する子孫が含まれる。形質転換細胞には、一過性または安定に形質転換された細胞が含まれる。子孫は、核酸含有量が親細胞と完全に同一ではない場合があるが、突然変異を含んでもよい。最初に形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同一の機能的または生物学的活性を有する突然変異子孫が、本明細書に含まれる。ある実施形態では、宿主細胞に、外因性核酸が一過性にトランスフェクトされる。ある他の実施形態では、宿主細胞に、外因性核酸が安定にトランスフェクトされる。
「イムノコンジュゲート」は、細胞傷害性薬剤を含むがこれに限定されない、１つ以上の異種性分子（複数可）にコンジュゲートされた抗体または抗体の断片である。
「個体」、「対象」、または「患者」は哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、個体、対象、または患者は、ヒトである。
「単離された」ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、融合タンパク質を組換えにより生成する宿主細胞の環境から分離されたものである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）のアプローチによって判定した場合に、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％超の純度まで精製される。
「単離された」核酸とは、その自然環境の構成成分から分離されている核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞内に含まれる核酸分子を含むが、この核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体上の位置とは異なる染色体上の位置に存在する。
「ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードする単離された核酸」という用語は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター内のかかる核酸分子（複数可）、宿主細胞に一過性または安定にトランスフェクトされたかかる核酸分子（複数可）、及び宿主細胞内の１つ以上の位置に存在するかかる核酸分子（複数可）を含む。
「制御配列」という用語は、特定の宿主生物において作動可能に連結したコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。例えば、原核生物に好適な制御配列は、プロモーター、場合によりオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを利用することが公知である。
核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれたときに「作動可能に連結」している。例えば、プレ配列もしくは分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結しており、プロモーターもしくはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に作動可能に連結しており、または、リボソーム結合部位は、翻訳を促進するように位置付けられる場合に、コード配列に作動可能に連結している。一般に、「作動可能に連結した」とは、連結しているＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的であり、かつ読み取り相（ｒｅａｄｉｎｇ ｐｈａｓｅ）にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、連続的である必要はない。連結は、簡便な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の慣例に従って使用される。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団（すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一であり、及び／または同じエピトープに結合するもの）から得られた抗体を指すが、但し、例えば、天然に存在する突然変異を含むか、またはモノクローナル抗体調製物の生成中に生じる可能性のある変異体抗体を除く。このような変異体は概して、少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象とする。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の性質を示すものであり、いずれかの特定の方法による抗体の生成を必要とするものと解釈されてはならない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない、多様な技術によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのこのような方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
「天然抗体」は、様々な構造を有する、天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖からなる約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）と、それに続く３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）とを有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）と、それに続く定常軽（ＣＬ）ドメインとを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプのうちの１つに割り当てられ得る。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般に、各ドメインが４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む、同様の構造を有する。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい）。抗原結合特異性を与えるためには、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分である場合がある。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、その抗原に結合する抗体のＶＨまたはＶＬドメインを使用して、それぞれ相補的なＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることで単離することができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照されたい。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが結合している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクターだけでなく、それが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターも含まれる。あるベクターは、それらが動作可能に連結している核酸の発現を指向することができる。そのようなベクターを、本明細書では「発現ベクター」という。
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、限定されるものではないが、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然に存在する変異体を含む。
「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）によって天然配列Ｆｃ領域の配列とは異なる、アミノ酸配列を含む。好ましくは、変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１個のアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域内の約１～約１０個のアミノ酸置換、好ましくは約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書における変異体Ｆｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくはそれらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくはそれらと少なくとも約９５％の相同性を有する。ある実施形態では、変異体Ｆｃ領域は、グリコシル化されていない。
本明細書で交換可能に使用される「障害」、「疾患」、または「状態」とは、本明細書に記載される組成物（例えば、医薬組成物）、例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物（例えば、医薬組成物）での処置が有効となる、あらゆる状態である。これには、哺乳動物を問題の障害に罹りやすくする病理学的状態を含め、慢性及び急性の障害または疾患が含まれる。いくつかの実施形態では、障害は、ＩＬ－２２関連障害である。例示的な障害としては、ＩＢＤ（例えば、ＵＣまたはクローン病）、微生物感染、急性腎傷害、急性膵炎、創傷、心血管状態、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症、及び敗血症が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で交換可能に使用される「炎症性腸障害」、「炎症性腸疾患」、または「ＩＢＤ」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、小腸及び結腸を含む腸管における再発性炎症が病態形成に関わるすべての疾患及び病理学的状態を含む。ＩＢＤには、例えば、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）及びクローン病が含まれる。ＩＢＤは、ＵＣ及びＣＤに限定されない。疾患の徴候としては、腸管内の炎症及び上皮の完全性の低下が挙げられるが、これらに限定されない。
「心血管疾患」または「心血管障害」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、例えば、アテローム硬化性プラーク形成（安定または不安定／脆弱性プラークを含む）、アテローム性硬化症、動脈硬化症、細動脈硬化症、及び全身性リポ多糖（ＬＰＳ）曝露の増加等の、血管の異常が病態形成に関わるすべての疾患及び病理学的状態を含む。この用語はさらに、アテローム硬化性プラークの形成の阻害が有効である疾患及び病理学的状態を含む。心血管疾患は、限定されるものではないが、冠状動脈アテローム性硬化症、冠状動脈細小血管疾患、卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、虚血、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、ＣＡＤ及びＣＨＤに関連する状態、脳血管疾患、末梢血管疾患、動脈瘤、血管炎、静脈血栓症、真性糖尿病、メタボリックシンドローム慢性腎疾患、虚血及び再灌流後の遠隔組織傷害、ならびに心肺バイパスを含む。この群には、アテローム硬化性プラーク形成の阻害によって発生、発症、または進行を制御することができるものに関連するすべての心血管疾患が明確に含まれる。
「心血管状態」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、アテローム硬化性プラーク形成（安定または不安定／脆弱性プラークを含む）、アテローム性硬化症、動脈硬化症、細動脈硬化症、及び全身性リポ多糖（ＬＰＳ）曝露の増加が病状に関わるすべての心血管状態及び疾患を含む。この群には、アテローム硬化性プラーク形成の阻害によって発生、発症、または進行を制御することができるアテローム硬化性プラーク形成に関連するすべての心血管状態及び疾患が明確に含まれる。この用語は、アテローム硬化性プラークの形成の阻害が有効である疾患及び病理学的状態を明確に含む。心血管状態は、限定されるものではないが、冠状動脈アテローム性硬化症、冠状動脈細小血管疾患、卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、虚血、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、ＣＡＤ及びＣＨＤに関連する状態、脳血管疾患及び脳血管疾患に関連する状態、末梢血管疾患及び末梢血管疾患に関連する状態、動脈瘤、血管炎、静脈血栓症、真性糖尿病、メタボリックシンドローム慢性腎疾患、虚血及び再灌流後の遠隔組織傷害、ならびに心肺バイパスを含む。本明細書で使用される「脳血管疾患に関連する状態」には、例えば、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）及び卒中が含まれる。本明細書で使用される「末梢血管疾患に関連する状態」には、例えば、跛行が含まれる。この群には、アテローム硬化性プラーク形成の阻害によって発生、発症、または進行を制御することができるものに関連するすべての心血管疾患及び状態が明確に含まれる。
アテローム硬化性プラーク形成は、腸内微生物叢に起因する全身性リポ多糖（ＬＰＳ）のレベルの上昇、及び腸粘膜バリアの機能的完全性の喪失を特徴とする、代謝性内毒素血症に対する自然免疫応答の結果として生じ得る。内毒素血症に対する自然免疫応答は、プラーク形成の原因である軽度の慢性炎症を引き起こす。
「メタボリックシンドローム」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用される。メタボリックシンドロームには、成人対象における次の５つの特徴のうち少なくとも３つを含むいくつかの代謝リスク因子の併存が含まれる：腹部肥満（これは例えば、男性で９０ｃｍ以上、女性で８０ｃｍ以上の腹囲であり得る）；高い血清トリグリセリド値（これは例えば、１５０ｍｇ／ｄＬ以上であり得る）、または高いトリグリセリド値の薬物処置；低い血清ＨＤＬコレステロールレベル（これは例えば、男性で４０ｍｇ／ｄＬ未満、女性で５０ｍｇ／ｄＬ未満であり得る）、または低いＨＤＬコレステロールの薬物処置；高血圧症（これは例えば、１３０ｍｍＨｇ超の収縮期血圧及び８５ｍｍＨｇ超の拡張期血圧であり得る）、または高血圧症の薬物処置；及び高い空腹時血漿グルコース値（これは例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上であり得る）、高いグルコース値の薬物処置、または２型糖尿病の診断歴。
１６歳を超える子供には、上記の成人用判断基準を使用することができる。１０～１６歳の子供の場合、メタボリックシンドロームには、対象における次の５つの特徴のうち少なくとも３つを含むいくつかの代謝リスク因子の併存が含まれる：腹部肥満（これは例えば、９０パーセンタイル超の腹囲であり得る）；高い血清トリグリセリド値（これは例えば、１１０ｍｇ／ｄＬ以上、９５パーセンタイル超であり得る）、または高いトリグリセリド値の薬物処置；低い血清ＨＤＬコレステロールレベル（これは例えば、４０ｍｇ／ｄＬ未満、５パーセンタイル未満であり得る）、または低いＨＤＬコレステロールの薬物処置；高血圧症（これは例えば、１３０ｍｍＨｇ超の収縮期血圧及び８５ｍｍＨｇ超の拡張期血圧、９０パーセンタイル超であり得る）、または高血圧症の薬物処置；及び高い空腹時血漿グルコース値（これは例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上であり得る）、耐糖能異常、高いグルコース値の薬物処置、または２型糖尿病の診断歴。
一般的に言えば、メタボリックシンドロームにおいて併存するリスク因子には、肥満（例えば腹部肥満）、高血糖症、脂質異常症、インスリン抵抗性、及び／または高血圧症が含まれる。これらのリスク因子はすべて、アテローム硬化性心血管疾患、糖尿病、またはその両方の発症を促進する。メタボリックシンドロームは、慢性脂肪組織炎症を特色とする場合もある。
メタボリックシンドロームは、炎症促進性の血栓形成促進性状態として認識することができ、Ｃ反応性タンパク質、ＩＬ－６、ＬＰＳ、及びプラスミノーゲン活性化因子阻害因子１のうちの１つ以上の高いレベルに関連し得る；このようなマーカーは、後にアテローム硬化性心血管疾患、糖尿病、またはその両方を発症するリスクの増加に関連し得る。
メタボリックシンドロームは、脂肪肝、線維症、及び硬変を伴う脂肪性肝疾患、肝細胞性及び肝内の胆管癌、慢性腎疾患、多嚢胞性卵巣症候群、閉塞性睡眠時無呼吸を含む睡眠呼吸障害、ならびに高尿酸血症及び痛風のうちの１つ以上を含む、いくつかの肥満関連障害に関連し得る。
「インスリン関連障害」という用語は、耐糖能異常を特徴とする疾患または状態を包含する。一実施形態において、インスリン関連障害は、限定されるものではないが、Ｉ型糖尿病（インスリン依存性真性糖尿病すなわちＩＤＤＭ）、ＩＩ型糖尿病（インスリン非依存性真性糖尿病すなわちＮＩＤＤＭ）、妊娠糖尿病、及びインスリン分泌を刺激する薬剤が有効となる任意の他の障害を含む真性糖尿病である。別の実施形態では、インスリン関連障害は、インスリン抵抗性を特徴とする。
「敗血症」という用語はその最も広い意味で使用され、重度の感染によって引き起こされる全身性炎症状態を包含する場合がある。敗血症は、血液、尿路、肺、皮膚、または他の組織における深刻な感染（最も一般的には細菌だが、真菌、ウイルス、及び寄生虫の場合もある）に対する免疫系の応答によって引き起こされる場合がある。
「急性内毒素血症」という用語は、その最も広い意味で使用され、血漿細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）が増加した状態を包含する場合がある。急性内毒素血症は、結果的に敗血症を引き起こす可能性がある。体循環におけるＬＰＳの増加は、低度慢性炎症を誘発し、内因性の保護的宿主応答を活性化して血漿脂質を増加させ、これが慢性状態になると、食事性肥満、インスリン抵抗性及びアテローム性硬化症、ならびに最終的なＣＶＤ事象に寄与する。
「移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）」という用語は、同種幹細胞移植の合併症を指す。ＧＶＨＤでは、ドナーの造血幹細胞が移植レシピエントを異物として認識し、患者の組織及び臓器を攻撃し、これにより、組織もしくは臓器の機能が損なわれたり、または機能不全になったりする場合がある。本明細書で使用される場合、ＧＶＨＤは例えば、急性ＧＶＨＤまたは慢性ＧＶＨＤを含む。さらに、非限定的な例には、腸管内のＧＶＨＤが含まれる。
本明細書で使用される場合、「処置」（及び「処置する」または「処置すること」等のその文法上の変形）は、処置されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のため、または臨床病理過程中のいずれで行われてもよい。処置の望ましい効果としては、疾患の発生または再発の防止、症状の緩和、疾患のいずれかの直接的または間接的な病理学的帰結の減少、転移の防止、疾患進行速度の減少、病態の寛解または軽快、及び緩解または予後の向上が挙げられるが、これらに限定されない。
例えば、ＩＢＤに関して、「処置」は、ＩＢＤを発症する可能性の減少、ＩＢＤの発症率の減少、及び疾患の重症度の減少を指し得る。別の例として、アテローム硬化性プラーク形成に関して、「処置」は、アテローム硬化性プラーク沈着が発生する可能性の減少、沈着物の発生速度の減少、存在する沈着物の数またはサイズの減少、プラーク安定性の向上を指し得る。処置を必要とする者には、障害を既に有する者だけでなく、障害を防止しようとする者が含まれる。処置の望ましい効果としては、疾患の発生または再発を防止すること、症状を緩和すること、疾患のいずれかの直接的または間接的な病理学的帰結を減少させること、疾患を防止すること、疾患進行速度を減少させること、病態を寛解または軽快させること、及び緩解または予後の向上をもたらすことが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、疾患の発症を遅延させるため、または疾患の進行を減速させるために使用される。
ある実施形態では、心血管状態の防止または処置の文脈における「それを必要とする対象」とは、心血管疾患もしくは心血管状態（ＣＶＤ）もしくはメタボリックシンドロームと診断されたか、またはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する１つ以上の状態を呈する対象、過去にＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームと診断されたことがあるか、またはそれらに関連する１つ以上の状態を呈したことがある対象、あるいは遺伝的または環境的な要因に起因してＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームまたはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する１つ以上の状態を将来発症するリスクがあるとみなされている対象を指す。したがって、ある実施形態では、それを必要とする対象は、ＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームまたはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する状態を呈する対象、あるいはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームまたはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する状態を過去に呈したことがある対象、あるいはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームまたはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する状態を将来発症するリスクがあるとみなされている対象であり得る。
心血管疾患または状態の処置において、治療剤は、免疫応答の成分の応答の大きさを直接的に変更するか、または、疾患が他の治療剤、例えば、抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤、化学療法剤等による処置の影響をより受けやすいものにする場合がある。動脈疾患の処置の場合、処置は、例えば、疾患を防止するか、または疾患の進行を減速させる可能性がある。したがって、動脈疾患の処置は、状態が発達すること、または状態がある段階から別のより進行した段階へ、もしくはより重篤な関連する状態へ進行することの防止、阻害、または減速を明確に含む。
疾患または状態の「病状」には、対象の健康状態を損なうすべての現象が含まれる。心血管疾患または状態の場合、これには、限定されるものではないが、アテローム硬化性プラーク形成（安定または不安定／脆弱性プラークを含む）、アテローム性硬化症、動脈硬化症、細動脈硬化症、及び全身性リポ多糖（ＬＰＳ）曝露の増加が含まれる。
「緩和」、「緩和する」、またはそれらの均等物は、疾患もしくは状態、例えば、アテローム硬化性プラークの形成を寛解、防止、減速（減弱）、減少、または阻害することを目的とする、治療的処置と予防的または防止的手段との両方を指す。処置を必要とする者には、疾患もしくは状態を既に有する者だけでなく、疾患もしくは状態を有する傾向にある者、または疾患もしくは状態を防止しようとする者が含まれる。
「慢性」投与とは、急性の形態に対して、初期の治療効果を長期間にわたって維持するような連続形態における薬剤（複数可）の投与を指す。
「間欠」投与とは、中断なく連続的に行われるのではなく、むしろ本質的に周期的な処置である。
「添付文書」という用語は、治療用生成物の商用パッケージに習慣的に含まれ、かかる治療用生成物の適応症、使用法、投与量、投与、併用療法、禁忌症、及び／またはその使用に関する警告についての情報を含む、説明書を指すように使用される。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大配列同一性パーセントを達成するように配列をアラインし、必要に応じてギャップを導入した後に、いずれの保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、候補配列において参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一であるアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当業者が備えている技能の範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインするための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的において、アミノ酸配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成されている。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ）、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であり、またはソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルすべきである。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変更されない。
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に用いられる状況において、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それと比較した、またはそれと対比したアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂに対して、それと比較して、またはそれと対比して、あるアミノ酸配列同一性％を有するかまたは含む、所与のアミノ酸配列Ａと表現してもよい）は、次のように計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によるＡ及びＢのアライメントにおいて、このプログラムによって同一マッチとしてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％が、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくならないことは理解されよう。特に明記しない限り、本明細書で使用されるアミノ酸配列同一性％の値はすべて、直前の段落に記載したように、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して得られたものである。
以下は、「比較タンパク質」または「参照タンパク質」と呼ばれるアミノ酸配列の、「ＩＬ－２２」と呼ばれるアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性％の計算方法の例であり、ここで、「ＩＬ－２２」は、目的のＩＬ－２２ポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「比較タンパク質」は、目的の「ＩＬ－２２」ポリペプチドの比較対象であるポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「Ｘ」、「Ｙ」、及び「Ｚ」は各々、異なるアミノ酸残基を表す。
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「アゴニスト」という用語は、最も広い意味で使用され、ＩＬ－２２ポリペプチドの生物学的活性を部分的または完全に模倣するあらゆる分子を含む。「アゴニスト」には、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの転写または翻訳を刺激する分子も包含される。
好適なアゴニスト分子には、例えば、アゴニスト抗体または抗体断片、天然ポリペプチド、天然ポリペプチドの断片またはアミノ酸配列変異体、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、有機小分子、及びポリペプチドアゴニストまたは抗体をコードする核酸が含まれる。「１つの」アゴニストへの言及は、単一のアゴニストまたは２つ以上の異なるアゴニストの組み合わせを包含する。
「ＩＬ－２２アゴニスト」という用語は、最も広い意味で使用され、天然配列ＩＬ－２２ポリペプチドの定性的な生物学的活性（上記に定義したとおり）を模倣するあらゆる分子を含む。ＩＬ－２２アゴニストには、ＩＬ－２２－ＦｃまたはＩＬ－２２ Ｉｇポリペプチド（イムノアドヘシン）だけでなく、少なくとも１つのＩＬ－２２生物学的活性を模倣する小分子も明確に含まれる。好ましくは、生物学的活性は、ＩＬ－２２受容体に結合すること、ＩＬ－２２ＢＰと相互作用すること、自然免疫応答経路を促進すること、または心血管疾患もしくは状態の場合は、アテローム硬化性プラークの形成に影響を及ぼすこと、特にアテローム硬化性プラーク形成の形成を阻害することである。プラーク形成の阻害は、当業者に公知である任意の好適な画像法によって評価することができる。
ＩＬ－２２Ｒ１は他のタンパク質と対になり、あるＩＬ－１０ファミリーメンバーの受容体としてヘテロ二量体を形成する。上記のＯｕｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１を参照されたい。したがって、ある実施形態では、ＩＬ－２２アゴニストは、ＩＬ－２２Ｒ１に結合しその下流シグナル伝達を誘発するサイトカイン（またはその融合タンパク質もしくはアゴニスト）を含む、ＩＬ－２２受容体アゴニストを含み得る。ある実施形態では、ＩＬ－２２アゴニストは、抗ＩＬ－２２Ｒ１アゴニスト抗体を含むがこれに限定されないＩＬ－２２Ｒ１アゴニスト、ＩＬ－２０ポリペプチドまたはＩＬ－２０ Ｆｃ融合タンパク質を含むがこれに限定されないＩＬ－２０アゴニスト、及びＩＬ－２４ポリペプチドまたはＩＬ－２４融合タンパク質を含むがこれに限定されないＩＬ－２４アゴニストを含む。ある他の実施形態では、ＩＬ－２２Ｒ１アゴニストは、ＩＬ－１９ポリペプチドまたはＩＬ－１９ Ｆｃ融合タンパク質を含むがこれに限定されないＩＬ－１９アゴニスト、及びＩＬ－２６ポリペプチドまたはＩＬ－２６ Ｆｃ融合タンパク質を含むがこれに限定されないＩＬ－２６アゴニストを含む。ＩＬ－１９（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＧ１６７５５．１、配列番号７７）、ＩＬ－２０（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＨ６９３１１．１、配列番号７８）、ＩＬ－２４（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＨ０９６８１．１、配列番号７９）、及びＩＬ－２６（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿０６０８７２．１、配列番号８０）の例示的な配列を、本明細書において提示する。ある実施形態では、ＩＬ－１９ポリペプチドは、配列番号７７のアミノ酸配列、またはシグナルペプチドを含まない成熟タンパク質を含む。ある他の実施形態では、ＩＬ－２０ポリペプチドは、配列番号７８のアミノ酸配列、またはシグナルペプチドを含まない成熟タンパク質を含む。さらに他の実施形態では、ＩＬ－２４ポリペプチドは、配列番号７９のアミノ酸配列、またはシグナルペプチドを含まない成熟タンパク質を含む。ある他の実施形態では、ＩＬ－２６ポリペプチドは、配列番号８０のアミノ酸配列、またはシグナルペプチドを含まない成熟タンパク質を含む。
「小分子」は、約６００未満、好ましくは約１０００ダルトン未満の分子量を有すると本明細書では定義される。
本明細書で使用される「アゴニスト抗体」は、ＩＬ－２２ポリペプチドの生物学的活性を部分的または完全に模倣する抗体である。
「医薬配合物」または「医薬組成物」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、中に含まれる活性成分の生物学的活性が有効になるような形態にあり、かつ配合物が投与される対象にとって許容できないほど毒性のある追加の成分を含まない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、医薬配合物中の活性成分以外の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、限定されないが、緩衝液、賦形剤、安定剤、または保存剤が挙げられる。
「貯蔵寿命」という用語は、生成物（例えば、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質））が、使用（例えば、対象への投与）または販売に適さなくなることなく保管され得る時間の長さを指す。いくつかの実施形態では、貯蔵寿命は、組成物（例えば、医薬組成物）が安定している時間の長さである。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書における組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも３６か月の貯蔵寿命を有する。いくつかの実施形態では、本明細書における組成物は、－２０℃で保管された場合、少なくとも４８か月の貯蔵寿命を有する。いくつかの実施形態では、本明細書における組成物は、－２０℃で保管された場合、少なくとも６０か月の貯蔵寿命を有する。
「安定な」医薬配合物とは、内部のタンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）が保管時にその物理的安定性及び／または化学的安定性及び／または生物学的活性を本質的に保持するものである。好ましくは、配合物は、保管時に、その物理的及び化学的安定性、ならびにその生物学的活性を本質的に保持する。保管期間は、一般に、配合物の想定貯蔵寿命に基づいて選択される。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当該分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０（１９９３）に概説されている。安定性は、選択された露光量及び／または温度で選択された期間にわたって測定され得る。安定性は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することにより、及び／または目視検査により）；ＲＯＳ形成の評価（例えば、光ストレスアッセイまたは２，２’－アゾビス（２－アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）ストレスアッセイを使用することにより）；タンパク質の特定のアミノ酸残基（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＭｅｔ残基）の酸化；カチオン交換クロマトグラフィー、画像キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）、またはキャピラリーゾーン電気泳動を使用した電荷不均一性の評価；アミノ末端またはカルボキシ末端配列分析；質量分光分析；還元されたポリペプチド及びインタクトなポリペプチド（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）を比較するＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；ペプチドマップ（例えば、トリプシンまたはＬＹＳ－Ｃ）分析；タンパク質の生物学的活性または標的結合機能（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ－２２受容体に対する結合）の評価等を含む、多様な異なる方法で定性的及び／または定量的に評価することができる。不安定性には、凝集、脱アミド（例えば、Ａｓｎ脱アミド）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化及び／またはＴｒｐ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン（複数可）、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化差異等のうちのいずれか１つ以上が関わり得る。
タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）は、色及び／または透明度の目視検査時に、またはＵＶ光散乱もしくはサイズ排除クロマトグラフィーによって測定したときに、凝集、沈殿、断片化、及び／または変性の兆候をほとんどまたは全く示さない場合、医薬配合物中で「その物理的安定性を保持する」。
タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）は、所与の時点での化学的安定性が、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）が以下に定義されるその生物学的活性を依然として保持しているとみなされるようなものである場合、医薬配合物中で「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）の化学的に改変された形態を検出及び数量化することによって評価することができる。化学的改変は、例えば、トリプシンペプチドマッピング、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、及び液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を使用して評価することができるタンパク質の酸化を含み得る。他のタイプの化学的改変としては、例えばイオン交換クロマトグラフィーまたはｉｃＩＥＦによって評価することができるタンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）の電荷改変が挙げられる。
タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）は、所与の時点でのタンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）の生物学的活性が、例えば受容体結合アッセイにおいて判定した場合に、医薬配合物が調製された時点で呈する生物学的活性の約２０％以内（例えば約１０％以内）（アッセイの誤差範囲内）である場合、医薬配合物中で「その生物学的活性を保持する」。
本明細書で使用される場合、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）の「生物学的活性」は、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）がその標的に結合する能力、例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質がＩＬ－２２受容体に結合する能力を指す。これは、インビトロまたはインビボで測定され得る生物学的応答をさらに含み得る。かかる活性は、アンタゴニスト活性またはアゴニスト活性であり得る。特定の実施形態において、この活性はアゴニスト活性（例えば、受容体活性化）である。
「酸化感受性がある」タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）は、メチオニン（Ｍｅｔ）、システイン（Ｃｙｓ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、及びチロシン（Ｔｙｒ）等だがこれらに限定されない、酸化しやすいことが見出されている１つ以上の残基（複数可）を含むものである。例えば、ＩＬ－２２ポリペプチド中の１つ以上のメチオニン残基は、酸化感受性がある場合がある。
「酸化パーセント」という用語は、配合物（例えば、医薬組成物）中の、特定のアミノ酸残基、例えばＭｅｔ残基が酸化している、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）のパーセンテージを指す。酸化パーセントは、例えば、１つ以上の特定の酸化しやすいアミノ酸残基が存在する１つ以上のトリプシンペプチドの質量分析（ＭＳ）による分析によって決定することができる。酸化パーセントは、例えば、ＡＡＰＨストレス試験後、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）またはその医薬組成物の最初の生成から９か月、１２か月、１８か月、または２年以内に決定され得る。
本明細書で使用される「ＡＡＰＨストレス試験によって評価した場合に」という用語は、特定のアミノ酸残基（例えば、Ｍｅｔ残基）における酸化パーセントが、例えば、約４０℃で約２４時間にわたり、約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、約０．０２（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０からなる配合物（ｐＨ約７．１）中、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）をＡＡＰＨ（例えば、約０ｍＭのＡＡＰＨ、約１ｍＭのＡＡＰＨ、約３ｍＭのＡＡＰＨ、約３．５ｍＭのＡＡＰＨ、または約５ｍＭのＡＡＰＨ）と配合した後の、トリプシンペプチドの質量分析による分析によって決定されることを意味する。ストレスを受けたタンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）をトリプシンで消化し、消化されたペプチドをＬＣ－ＭＳ－ＭＳに供して、酸化のパーセンテージを決定する。
本明細書で使用される場合、「緩衝液」とは、その酸－塩基コンジュゲート成分（本明細書では「緩衝剤」ともいう）の作用によりｐＨの変化に抵抗する緩衝溶液を指す。いくつかの実施形態では、本発明の緩衝液は、約６～約８の範囲内のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、緩衝液は、実質的に中性であるｐＨを有する。緩衝液は、好ましくは、約６．８～約７．４の範囲内（例えば、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、または約７．４）のｐＨ、例えば、約ｐＨ７．１を有する。本発明で使用される例示的な緩衝剤としては、リン酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、ヒスチジン、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、三塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、二塩基性リン酸カリウム、三塩基性リン酸カリウム、またはそれらの混合物である。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウムである。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、二塩基性リン酸ナトリウムである。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウムとの混合物である。
本明細書で使用される「実質的に中性」という用語は、約２０℃～約３０℃（例えば、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃）の温度で測定した場合に、約６．６～約８（例えば、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、または約８．０）のｐＨ範囲を指す。
本明細書で使用される場合、「界面活性剤」とは、表面活性剤、好ましくは非イオン性界面活性剤を指す。本明細書における界面活性剤の例としては、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０）；ポロクサマー（例えば、ポロクサマー１８８）；ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、またはステアリルスルホベタイン；ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシン、またはステアリルサルコシン；リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、またはセチルベタイン；ラウロアミドプロピルベタイン、コカミドプロピルベタイン、リノールアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルミドプロピルベタイン、またはイソステアラミドプロピルベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピルジメチルアミン、パルミドプロピルジメチルアミン、またはイソステアラミドプロピルジメチルアミン；メチルココイルタウリン酸ナトリウム、またはメチルオレイルタウリン酸二ナトリウム；ならびにＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）；ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、及びエチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー（例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）タイプのブロックコポリマー、例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ－６８）等が挙げられる。一実施形態において、本明細書における界面活性剤は、ポリソルベート２０である。さらに別の実施形態では、本明細書における界面活性剤は、ポロクサマー１８８である。
「保存剤」とは、内部の細菌作用を本質的に低減させることにより、例えば多目的配合物の生成を容易にするために、配合物に場合により含まれ得る化合物である。可能性のある保存剤の例としては、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム（アルキル基が長鎖化合物である塩化アルキルベンジルジメチルアンモニウムの混合物）、及び塩化ベンゼトニウムが挙げられる。他のタイプの保存剤としては、フェノール、ブチルアルコール及びベンジルアルコール等の芳香族アルコール、メチルパラベンまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾールが挙げられる。一実施形態において、本明細書における保存剤は、ベンジルアルコールである。いくつかの実施形態では、配合物は保存剤を含まない。
本願では、特記なき限り、利用される技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．１９９０．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、及びＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）等の、いくつかの周知の参考文献のうちのいずれかに見出すことができる。
必要に応じて、市販のキット及び試薬の使用を伴う手順は概して、特に断りのない限り、製造元が定義したプロトコール及び／またはパラメータに従って実行される。したがって、本方法及び使用を説明する前に、方法論、プロトコール、細胞株、動物の種または属、構築物、及び試薬は当然ながら異なってもよいため、記載される特定のものに本発明が限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用される専門用語が、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定する意図はないことも理解されたい。
ＩＩ．組成物及び方法
本発明は、タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質等のＦｃ融合タンパク質）を含む組成物（例えば、医薬組成物）、ならびに、例えばＩＢＤ（例えば、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）及びクローン病）、心血管状態、メタボリックシンドローム、ＧＶＨＤ等のＩＬ－２２関連疾患の処置、及び創傷治癒（例えば、糖尿病性創傷治癒）の加速のためのその使用を提供する。本明細書では、組成物を作製する方法も提供される。
本発明は、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の特定の配合物が、例えば本件実施例に記載されるような有利な特性を提供するというこの度の発見に少なくとも部分的に基づく。ある態様において、そのような有利な特性は、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及びＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物の増加した安定性及び／または延長された貯蔵寿命を含む。さらに、ＩＬ－２２ Ｆｃタンパク質は、例えば、実施例１に記載するように、比較的高いｐＨ値で比較的高い熱安定性を予想外に有することがこの度発見された。この度発見された組成物のこれらの特性及び他の有利な特性について、以下により詳細に記載する。
Ａ．医薬組成物
本発明は、貯蔵寿命及び安定性が向上したタンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質等のＦｃ融合タンパク質）を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のいずれも組成物に使用できるが、他のＦｃ融合タンパク質（例えば、他のインターロイキンを含むＦｃ融合タンパク質）も使用できることを理解されたい。
例えば、一態様において、本発明は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供し、この組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも約１２か月（例えば、少なくとも約１２か月、約１８か月、約２４か月、約３０か月、約３６か月、約４２か月、約４８か月、約５４か月、約６０か月、約６６か月、または約７２か月）の貯蔵寿命を有し、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも３６か月の貯蔵寿命を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも４２か月の貯蔵寿命を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも４８か月の貯蔵寿命を有する。
例えば、いくつかの実施形態では、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合の貯蔵寿命は、約１か月～約７２か月（例えば、約１か月、約５か月、約１０か月、約１５か月、約２０か月、約２４か月、約２５か月、約３０か月、約３５か月、約４０か月、約４５か月、約４８か月、約５０か月、約５５か月、約６０か月、約６５か月、約７０か月、または約７２か月）である。いくつかの実施形態では、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合の貯蔵寿命は、約１か月～約７２か月、約１か月～約７０か月、約１か月～約６５か月、約１か月～約６０か月、約１か月～約５５か月、約１か月～約５０か月、約１か月～約４８か月、約１か月～約４５か月、約１か月～約４０か月、約１か月～約３５か月、約１か月～約３０か月、約１か月～約２５か月、約１か月～約２４か月、約１か月～約２０か月、約１か月～約１８か月、約１か月～約１５か月、約１か月～約１２か月、約１か月～約９か月、約１か月～約６か月、約１か月～約３か月、約５か月～約７２か月、約５か月～約７０か月、約５か月～約６５か月、約５か月～約６０か月、約５か月～約５５か月、約５か月～約５０か月、約５か月～約４８か月、約５か月～約４５か月、約５か月～約４０か月、約５か月～約３５か月、約５か月～約３０か月、約５か月～約２５か月、約５か月～約２４か月、約５か月～約２０か月、約５か月～約１８か月、約５か月～約１５か月、約５か月～約１２か月、約５か月～約９か月、約５か月～約６か月、約１０か月～約７２か月、約１０か月～約７０か月、約１０か月～約６５か月、約１０か月～約６０か月、約１０か月～約５５か月、約１０か月～約５０か月、約１０か月～約４８か月、約１０か月～約４５か月、約１０か月～約４０か月、約１０か月～約３５か月、約１０か月～約３０か月、約１０か月～約２５か月、約１０か月～約２４か月、約１０か月～約２０か月、約１０か月～約１８か月、約１０か月～約１５か月、約１０か月～約１２か月、約１２か月～約７２か月、約１２か月～約７０か月、約１２か月～約６５か月、約１２か月～約６０か月、約１２か月～約５５か月、約１２か月～約５０か月、約１２か月～約４８か月、約１２か月～約４５か月、約１２か月～約４０か月、約１２か月～約３５か月、約１２か月～約３０か月、約１２か月～約２５か月、約１２か月～約２４か月、約１２か月～約２０か月、約１２か月～約１８か月、約１２か月～約１５か月、約１８か月～約７２か月、約１８か月～約７０か月、約１８か月～約６５か月、約１８か月～約６０か月、約１８か月～約５５か月、約１８か月～約５０か月、約１８か月～約４８か月、約１８か月～約４５か月、約１８か月～約４０か月、約１８か月～約３５か月、約１８か月～約３０か月、約１８か月～約２５か月、約１８か月～約２４か月、約１８か月～約２０か月、約２４か月～約７２か月、約２４か月～約７０か月、約２４か月～約６５か月、約２４か月～約６０か月、約２４か月～約５５か月、約２４か月～約５０か月、約２４か月～約４８か月、約２４か月～約４５か月、約２４か月～約４０か月、約２４か月～約３５か月、約２４か月～約３０か月、約２４か月～約２５か月、約３０か月～約７２か月、約３０か月～約７０か月、約３０か月～約６５か月、約３０か月～約６０か月、約３０か月～約５５か月、約３０か月～約５０か月、約３０か月～約４８か月、約３０か月～約４５か月、約３０か月～約４０か月、約３０か月～約３５か月、約３０か月～約３６か月、約３６か月～約７２か月、約３６か月～約７０か月、約３６か月～約６５か月、約３６か月～約６０か月、約３６か月～約５５か月、約３６か月～約５０か月、約３６か月～約４８か月、約３６か月～約４５か月、約３６か月～約４０か月、約４０か月～約７２か月、約４０か月～約７０か月、約４０か月～約６５か月、約４０か月～約６０か月、約４０か月～約５５か月、約４０か月～約５０か月、約４０か月～約４８か月、約４０か月～約４５か月、約４２か月～約７２か月、約４２か月～約７０か月、約４２か月～約６５か月、約４２か月～約６０か月、約４２か月～約５５か月、約４２か月～約５０か月、約４２か月～約４８か月、約４２か月～約４５か月、約４６か月～約７２か月、約４６か月～約７０か月、約４６か月～約６５か月、約４６か月～約６０か月、約４６か月～約５５か月、約４６か月～約５０か月、約４６か月～約４８か月、約４８か月～約７２か月、約４８か月～約７０か月、約４８か月～約６５か月、約４８か月～約６０か月、約４８か月～約５５か月、約４８か月～約５０か月、約５０か月～約７２か月、約５０か月～約７０か月、約５０か月～約６５か月、約５０か月～約６０か月、約５０か月～約５５か月、約５５か月～約７２か月、約５５か月～約７０か月、約５５か月～約６５か月、約５５か月～約６０か月、約６０か月～約７２か月、約６０か月～約７０か月、または約６０か月～約６５か月である。
組成物（例えば、医薬組成物）は、任意の好適な濃度のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を有し得る。例えば、前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかにおいて、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．９ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、または約３０ｍｇ／ｍＬであり得る。
例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合物の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬ、または約４ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬである。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約８ｍｇ／ｍＬ～約１２ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬである。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、安定剤を含み得る。任意の好適な安定剤を使用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、安定剤は、アミノ酸、チオソルビトール、アスコルビン酸、モノチオグリセロール、シクロデキストリン、トロロックス（６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）、ピリドキシン、マンニトール、金属キレート剤、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、安定剤はアミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、メチオニン、システイン、トリプトファン、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、アミノ酸はメチオニンである。
任意の好適な濃度の安定剤を使用してよい。例えば、前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、安定剤（例えば、メチオニン）の濃度は、約０．０１ｍＭ～約３０ｍＭ、例えば、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、または約３０ｍＭである。いくつかの実施形態では、安定剤（例えば、メチオニン）の濃度は、約１ｍＭ～約３０ｍＭ、約２ｍＭ～約３０ｍＭ、約３ｍＭ～約３０ｍＭ、約４ｍＭ～約３０ｍＭ、約５ｍＭ～約３０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約３０ｍＭ、約８ｍＭ～約３０ｍＭ、約９ｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約３０ｍＭ、約１１ｍＭ～約３０ｍＭ、約１２ｍＭ～約３０ｍＭ、約１３ｍＭ～約３０ｍＭ、約１４ｍＭ～約３０ｍＭ、約１５ｍＭ～約３０ｍＭ、約２０ｍＭ～約３０ｍＭ、約２５ｍＭ～約３０ｍＭ、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約２ｍＭ～約２０ｍＭ、約３ｍＭ～約２０ｍＭ、約４ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約６ｍＭ～約２０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約２０ｍＭ、約９ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１１ｍＭ～約２０ｍＭ、約１２ｍＭ～約２０ｍＭ、約１３ｍＭ～約２０ｍＭ、約１４ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１ｍＭ～約１５ｍＭ、約２ｍＭ～約１５ｍＭ、約３ｍＭ～約１５ｍＭ、約４ｍＭ～約１５ｍＭ、約５ｍＭ～約１５ｍＭ、約６ｍＭ～約１５ｍＭ、約７ｍＭ～約１５ｍＭ、約８ｍＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１５ｍＭ、約１０ｍＭ～約１５ｍＭ、約１１ｍＭ～約１５ｍＭ、約１２ｍＭ～約１５ｍＭ、約１３ｍＭ～約１５ｍＭ、約１４ｍＭ～約１５ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約２ｍＭ～約１０ｍＭ、約３ｍＭ～約１０ｍＭ、約４ｍＭ～約１０ｍＭ、約５ｍＭ～約１０ｍＭ、約６ｍＭ～約１０ｍＭ、約７ｍＭ～約１０ｍＭ、約８ｍＭ～約１０ｍＭ、約９ｍＭ～約１０ｍＭ、約１ｍＭ～約５ｍＭ、約２ｍＭ～約５ｍＭ、約３ｍＭ～約５ｍＭ、または約４ｍＭ～約５ｍＭである。いくつかの実施形態では、安定剤（例えば、メチオニン）の濃度は、約２ｍＭ～約８ｍＭである。特定の実施形態において、安定剤（例えば、メチオニン）の濃度は、約５ｍＭである。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかにおいて、Ｍ２５位またはＭ１３９位（例えば、配列番号４のアミノ酸配列に関して）にあるメチオニンの酸化は、ＡＡＰＨストレス試験によって評価した場合に約１０％未満、例えば、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％、約１％未満、またはそれ以下である。いくつかの実施形態では、配列番号４のＭ２５位にあるメチオニンの酸化は、５％未満、３％未満、または２％未満である。いくつかの実施形態では、配列番号４のＭ１３９位にあるメチオニンの酸化は、７％未満、６％未満、または５％未満である。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、界面活性剤をさらに含んでもよい。任意の好適な界面活性剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート、ポロクサマー、ポリオキシエテレンアルキルエーテル、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル、またはそれらの組み合わせ）である。いくつかの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０）である。特定の実施形態において、ポリソルベートは、ポリソルベート２０である。他の実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポロクサマー（例えば、ポロクサマー１８８）である。
任意の好適な濃度の界面活性剤を使用してよい。例えば、前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０またはポロクサマー１８８）の濃度は、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約２％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．００１％、約０．０１％、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、または約２％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０またはポロクサマー１８８）の濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．０５％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０またはポロクサマー１８８）の濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．０７％（ｗ／ｖ）である。特定の実施形態において、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０またはポロクサマー１８８）の濃度は、約０．０２％（ｗ／ｖ）である。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、緩衝剤をさらに含んでもよい。任意の好適な緩衝剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、リン酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、ヒスチジン、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、三塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、二塩基性リン酸カリウム、三塩基性リン酸カリウム、またはそれらの混合物である。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウムである。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、二塩基性リン酸ナトリウムである。いくつかの実施形態では、リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウムとの混合物である。
任意の好適な濃度の緩衝剤を使用することができる。例えば、前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、緩衝剤（例えば、リン酸ナトリウム）の濃度は、約０．０１ｍＭ～約５０ｍＭ、例えば、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、または約５０ｍＭである。いくつかの実施形態では、緩衝剤（例えば、リン酸ナトリウム）の濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの実施形態では、緩衝剤（例えば、リン酸ナトリウム）の濃度は、約８ｍＭ～約１２ｍＭである。特定の実施形態において、緩衝剤（例えば、リン酸ナトリウム）の濃度は、約１０ｍＭである。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、等張化剤をさらに含んでもよい。任意の好適な等張化剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、等張化剤は、糖（例えば、スクロース、グルコース、グリセロール、またはトレハロース）、アミノ酸、または塩（例えば、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム）である。特定の実施形態において、等張化剤はスクロースである。
任意の好適な濃度の等張化剤を使用することができる。例えば、前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、等張化剤（例えば、スクロース）の濃度は、約１ｍＭ～約１Ｍ、例えば、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２１０ｍＭ、約２２０ｍＭ、約２３０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２６０ｍＭ、約２７０ｍＭ、約２８０ｍＭ、約２９０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３１０ｍＭ、約３２０ｍＭ、約３３０ｍＭ、約３４０ｍＭ、約３５０ｍＭ、約３６０ｍＭ、約３７０ｍＭ、約３８０ｍＭ、約３９０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４１０ｍＭ、約４２０ｍＭ、約４３０ｍＭ、約４４０ｍＭ、約４５０ｍＭ、約４６０ｍＭ、約４７０ｍＭ、約４８０ｍＭ、約４９０ｍＭ、約５００ｍＭ、約５１０ｍＭ、約５２０ｍＭ、約５３０ｍＭ、約５４０ｍＭ、約５５０ｍＭ、約５６０ｍＭ、約５７０ｍＭ、約５８０ｍＭ、約５９０ｍＭ、約６００ｍＭ、約７００ｍＭ、約８００ｍＭ、約９００ｍＭ、または約１Ｍである。いくつかの実施形態では、等張化剤の濃度は、約１００ｍＭ～約５００ｍＭである。いくつかの実施形態では、等張化剤の濃度は、約２００ｍＭ～約３００ｍＭである。いくつかの実施形態では、等張化剤の濃度は、約２４０ｍＭである。
本明細書に記載される組成物（例えば、医薬組成物）は、任意の好適なｐＨを有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、約５～約９、例えば、約５、約５．５、約６、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．１５、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約８．０、約８．５、または約９である。例えば、いくつかの実施形態では、ｐＨは、約６．０～約８．０、約６．０～約７．９、約６．０～約７．８、約６．０～約７．７、約６．０～約７．６、約６．０～約７．５、約６．０～約７．４、約６．０～約７．３、約６．０～約７．２、約６．０～約７．１、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５、約６．０～約６．４、約６．０～約６．３、約６．０～約６．２、約６．０～約６．１、約６．５～約８．０、約６．５～約７．９、約６．５～約７．８、約６．５～約７．７、約６．５～約７．６、約６．５～約７．５、約６．５～約７．４、約６．５～約７．３、約６．５～約７．２、約６．５～約７．１、約６．５～約７．０、約６．５～約６．９、約６．５～約６．８、約６．５～約６．７、約６．５～約６．６、約６．６～約８．０、約６．６～約７．９、約６．６～約７．８、約６．６～約７．７、約６．６～約７．６、約６．６～約７．５、約６．６～約７．４、約６．６～約７．３、約６．６～約７．２、約６．６～約７．１、約６．６～約７．０、約６．６～約６．９、約６．６～約６．８、約６．６～約６．７、約６．７～約８．０、約６．７～約７．９、約６．７～約７．８、約６．７～約７．７、約６．７～約７．６、約６．７～約７．５、約６．７～約７．４、約６．７～約７．３、約６．７～約７．２、約６．７～約７．１、約６．７～約７．０、約６．７～約６．９、約６．７～約６．８、約６．８～約８．０、約６．８～約７．９、約６．８～約７．８、約６．８～約７．７、約６．８～約７．６、約６．８～約７．５、約６．８～約７．４、約６．８～約７．３、約６．８～約７．２、約６．８～約７．１、約６．８～約７．０、約６．８～約６．９、約６．９～約８．０、約６．９～約７．９、約６．９～約７．８、約６．９～約７．７、約６．９～約７．６、約６．９～約７．５、約６．９～約７．４、約６．９～約７．３、約６．９～約７．２、約６．９～約７．１、約６．９～約７．０、約７．０～約８．０、約７．０～約７．９、約７．０～約７．８、約７．０～約７．７、約７．０～約７．６、約７．０～約７．５、約７．０～約７．４、約７．０～約７．３、約７．０～約７．２、約７．０～約７．１、約７．０１～約７．２、約７．０２～約７．２、約７．０３～約７．２、約７．０４～約７．２、約７．０５～約７．２、約７．０６～約７．２、約７．０７～約７．２、約７．０８～約７．２、約７．０９～約７．２、約７．１～約７．２、約７．０１～約７．１５、約７．０２～約７．１５、約７．０３～約７．１５、約７．０４～約７．１５、約７．０５～約７．１５、約７．０６～約７．１５、約７．０７～約７．１５、約７．０８～約７．１５、約７．０９～約７．１５、または約７．１～約７．１５である。
例えば、いくつかの実施形態では、ｐＨは実質的に中性である。例えば、いくつかの実施形態では、ｐＨは、約６．６～約８（例えば、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．１５、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約８．０）である。いくつかの実施形態では、ｐＨは、約６．８～約７．４（例えば、約６．８、約６．８５、約６．９、約６．９５、約７．０、約７．０５、約７．１、約７．１５、約７．２、約７．２５、約７．３、約７．３５、または約７．４）である。特定の実施形態において、ｐＨは約７．１である。
例えば、本明細書では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む組成物（例えば、医薬組成物）であって、該ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含み、該医薬組成物は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質（例えば、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．９ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、または約３０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）、約５ｍＭのメチオニン、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、組成物が提供される。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム及び約２４０ｍＭのスクロースを含む。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）は、約１ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）は、約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、リン酸ナトリウムは、一塩基性リン酸ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウムとの混合物である。
本明細書において提供される組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、単位剤形であり得る。いくつかの実施形態では、単位剤形は、注入用の液体配合物である。いくつかの実施形態では、単位剤形は、注射用の液体配合物である。いくつかの実施形態では、液体配合物（例えば、注入または注射用のもの）は、公称容積が約１００ｍＬ未満、例えば、約１００ｍＬ未満、約９０ｍＬ未満、約８０ｍＬ未満、約７０ｍＬ未満、約６０ｍＬ未満、約５０ｍＬ未満、約４０ｍＬ未満、約３０ｍＬ未満、約２０ｍＬ未満、約１０ｍＬ未満、または約５ｍＬ未満の容器で供給される。いくつかの実施形態では、液体配合物（例えば、注入または注射用のもの）の体積は、約１ｍＬ～約２ｍＬ、例えば、約１ｍＬ、約１．１ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．３ｍＬ、約１．４ｍＬ、約１．５ｍＬ、約１．６ｍＬ、約１．７ｍＬ、約１．８ｍＬ、約１．９ｍＬ、または約２ｍＬである。いくつかの実施形態では、液体配合物（例えば、注入または注射用のもの）の体積は、約１ｍＬである。
本明細書において提供される組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかの諸実施形態において、容器内に存在する１０μｍ以上の粒子の数は、約１０，０００粒子を超えない。例えば、いくつかの実施形態では、容器内に存在する１０μｍ以上の粒子の数は、約１０，０００粒子、約９，０００粒子、約７，０００粒子、約６，０００粒子、約５，０００粒子、約４，０００粒子、約３，０００粒子、約２，０００粒子、約１，０００粒子、約９００粒子、約８００粒子、約７００粒子、約６００粒子、約５００粒子、約４００粒子、約３００粒子、約２００粒子、または約１００粒子を超えない。いくつかの実施形態では、容器内に存在する１０μｍ以上の粒子の数は、６０００粒子を超えない。
本明細書において提供される組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかの諸実施形態において、容器内に存在する２５μｍ以上の粒子の数は、約２，０００粒子、例えば、約２，０００粒子、約１，５００粒子、約１，２００粒子、約１，０００粒子、約９００粒子、約８００粒子、約７００粒子、約６００粒子、約５００粒子、約４００粒子、約３００粒子、約２００粒子、または約１００粒子を超えない。いくつかの実施形態では、容器内に存在する２５μｍ以上の粒子の数は、６００粒子を超えない。
本明細書において提供される組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれにおいても、任意の好適な担体を使用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、担体は水である。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、１回以上の凍結解凍サイクル、例えば、１回以上、２回以上、３回以上、４回以上、５回以上、６回以上、７回以上、８回以上、９回以上、または１０回以上の凍結解凍サイクルを通して安定であり得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、３回の凍結解凍サイクルを通して安定である。
いくつかの実施形態では、前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、約５℃で約１か月以上、例えば、約１か月以上、約２か月以上、約３か月以上、約４か月以上、約５か月以上、約６か月以上、約７か月以上、約８か月以上、約９か月以上、約１０か月以上、約１１か月以上、約１２か月以上、約１４か月以上、約１６か月以上、約１８か月以上、約２０か月以上、約２２か月以上、約２４か月以上、約２６か月以上、約２８か月以上、約３０か月以上、約３２か月以上、約３４か月以上、約３６か月以上、約３８か月以上、約４０か月以上、約４２か月以上、約４４か月以上、約４６か月以上、約４８か月以上、約５０か月以上、約５２か月以上、約５４か月以上、約５６か月以上、約５８か月以上、約６０か月以上、約６２か月以上、約６４か月以上、約６６か月以上、約６８か月以上、約７０か月以上、約７２か月以上、約７４か月以上、約７６か月以上、約７８か月以上、約８０か月以上、約８２か月以上、約８４か月以上、約８６か月以上、約８８か月以上、約９０か月以上、約９２か月以上、約９４か月以上、約９６か月以上、約９８か月以上、または約１００か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、５℃で約２４か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、５℃で約３６か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、５℃で約４２か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、５℃で約４８か月以上にわたって安定である。
いくつかの実施形態では、前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、約２５℃で約１週間以上、例えば、約１週間以上、約２週間以上、約３週間以上、約４週間以上、約５週間以上、約６週間以上、約７週間以上、約８週間以上、約９週間以上、約１０週間以上、約１２週間以上、約１４週間以上、約１６週間以上、約１８週間以上、約２０週間以上、約２２週間以上、約２４週間以上、約２６週間以上、約２８週間以上、約３０週間以上、約３２週間以上、約３４週間以上、約３６週間以上、約３８週間以上、約４０週間以上、約４２週間以上、約４４週間以上、約４６週間以上、約４８週間以上、約５０週間以上、または約５２週間以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約２５℃で約２週間以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約２５℃で約４週間以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約２５℃で約８週間以上にわたって安定である。
いくつかの実施形態では、前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、約－２０℃で約１２か月以上、例えば、約１２か月以上、約１４か月以上、約１６か月以上、約１８か月以上、約２０か月以上、約２２か月以上、約２４か月以上、約２６か月以上、約２８か月以上、約３０か月以上、約３２か月以上、約３４か月以上、約３６か月以上、約３８か月以上、約４０か月以上、約４２か月以上、約４４か月以上、約４６か月以上、約４８か月以上、約５０か月以上、約５２か月以上、約５４か月以上、約５６か月以上、約５８か月以上、約６０か月以上、約６２か月以上、約６４か月以上、約６６か月以上、約６８か月以上、約７０か月以上、約７２か月以上、約７４か月以上、約７６か月以上、約７８か月以上、約８０か月以上、約８２か月以上、約８４か月以上、約８６か月以上、約８８か月以上、約９０か月以上、約９２か月以上、約９４か月以上、約９６か月以上、約９８か月以上、または約１００か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、－２０℃で約４８か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、－２０℃で約６０か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、－２０℃で約７２か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、－２０℃で約８４か月以上にわたって安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、－２０℃で約９６か月以上にわたって安定である。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、例えば、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって評価した場合に、約７０％以上の純度を有し得る。例えば、組成物（例えば、医薬組成物）は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約７０％以上、約７２％以上、約７４％以上、約７６％以上、約７８％以上、約８０％以上、約８２％以上、約８４％以上、約８６％以上、約８８％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、または約１００％の純度を有し得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約８５％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９０％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を有する。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約７０％以上（例えば、約７０％以上、約７２％以上、約７４％以上、約７６％以上、約７８％以上、約８０％以上、約８２％以上、約８４％以上、約８６％以上、約８８％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、または約１００％）の純度を、約５℃で約６か月以上、例えば、約６か月以上、約７か月以上、約８か月以上、約９か月以上、約１０か月以上、約１１か月以上、約１２か月以上、約１４か月以上、約１６か月以上、約１８か月以上、約２０か月以上、約２２か月以上、約２４か月以上、約２６か月以上、約２８か月以上、約３０か月以上、約３２か月以上、約３４か月以上、約３６か月以上、約３８か月以上、約４０か月以上、約４２か月以上、約４４か月以上、約４６か月以上、約４８か月以上、約５０か月以上、約５２か月以上、約５４か月以上、約５６か月以上、約５８か月以上、約６０か月以上、約６２か月以上、約６４か月以上、約６６か月以上、約６８か月以上、約７０か月以上、約７２か月以上、約７４か月以上、約７６か月以上、約７８か月以上、約８０か月以上、約８２か月以上、約８４か月以上、約８６か月以上、約８８か月以上、約９０か月以上、約９２か月以上、約９４か月以上、約９６か月以上、約９８か月以上、または約１００か月以上にわたって有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を、約５℃で約３６か月以上にわたって有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を、約５℃で約４２か月以上にわたって有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を、約５℃で約４８か月以上にわたって有する。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、例えば、ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動非ゲルふるい（ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）、例えばＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳによって評価した場合に、約６５％以上の純度を有し得る。例えば、組成物（例えば、医薬組成物）は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７２％以上、約７４％以上、約７６％以上、約７８％以上、約８０％以上、約８２％以上、約８４％以上、約８６％以上、約８８％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、または約１００％の純度を有し得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約７５％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約８０％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約９０％以上の純度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約５５％以上の純度を有する。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約６５％以上（例えば、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７２％以上、約７４％以上、約７６％以上、約７８％以上、約８０％以上、約８２％以上、約８４％以上、約８６％以上、約８８％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、または約１００％）の純度を、約５℃で約６か月以上、例えば、約６か月以上、約７か月以上、約８か月以上、約９か月以上、約１０か月以上、約１１か月以上、約１２か月以上、約１４か月以上、約１６か月以上、約１８か月以上、約２０か月以上、約２２か月以上、約２４か月以上、約２６か月以上、約２８か月以上、約３０か月以上、約３２か月以上、約３４か月以上、約３６か月以上、約３８か月以上、約４０か月以上、約４２か月以上、約４４か月以上、約４６か月以上、約４８か月以上、約５０か月以上、約５２か月以上、約５４か月以上、約５６か月以上、約５８か月以上、約６０か月以上、約６２か月以上、約６４か月以上、約６６か月以上、約６８か月以上、約７０か月以上、約７２か月以上、約７４か月以上、約７６か月以上、約７８か月以上、約８０か月以上、約８２か月以上、約８４か月以上、約８６か月以上、約８８か月以上、約９０か月以上、約９２か月以上、約９４か月以上、約９６か月以上、約９８か月以上、または約１００か月以上にわたって有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を、約５℃で約３６か月以上にわたって有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を、約５℃で約４２か月以上にわたって有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ（例えば、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を、約５℃で約４８か月以上にわたって有する。
組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれも、任意の好適な投与経路による投与用に配合され得る。例えば、いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または局所投与用に配合されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与用に配合されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮下投与用に配合されている。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、保存剤を含み得る。他の実施形態では、前述の組成物のうちのいずれかは、保存剤を含まない。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかは、等張塩化ナトリウム溶液及び／または希釈剤で希釈した後に（例えば、注入または注射によって）投与するように配合することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、等張塩化ナトリウム溶液で希釈した後に注入によって投与するように配合されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、希釈剤で希釈した後に注入によって投与するように配合されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、等張塩化ナトリウム溶液及び希釈剤で希釈した後に注入によって投与するように配合されている。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、希釈剤のみで希釈したＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を注入することによって（例えば、シリンジポンプにおいて）対象に投与される。他の実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、希釈剤及び食塩水で希釈したＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の注入によって（例えば、ＩＶバッグにおいて）対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、食塩水（例えば、等張食塩水）に直接希釈したＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を注入することによって対象に投与される。いくつかの実施形態では、等張塩化ナトリウム溶液は、約０．００１％～約５％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、等張塩化ナトリウム溶液は、約０．１％～約２％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、等張塩化ナトリウム溶液は、約０．５％～約１．５％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、等張塩化ナトリウム溶液は、約０．９％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、希釈剤は、緩衝剤、等張化剤、及び／または界面活性剤を含む。本明細書に記載される緩衝剤、等張化剤、及び／または界面活性剤のうちのいずれも、本明細書に記載される任意の濃度で、希釈剤中に使用することができる。いくつかの実施形態では、希釈剤は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はグリコシル化されていない。いくつかの実施形態では、ＥＵインデックスでＦｃ領域の２９７位にあるアミノ酸残基は、Ｇｌｙである。いくつかの実施形態では、ＥＵインデックスでＦｃ領域の２９７位にあるアミノ酸残基は、Ａｌａである。いくつかの実施形態では、ＥＵインデックスでＦｃ領域の２９９位にあるアミノ酸残基は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＶａｌである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、及び配列番号１６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｎ－グリコシル化されていない。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかにおいて、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、二量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質であり得る。他の実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、単量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質であり得る。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかにおいて、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－２２ポリペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、配列番号４アミノ酸配列。
本明細書に記載される組成物（例えば、医薬組成物）に含まれるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質において、任意の好適なリンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）からなる。
前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかにおいて、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２受容体に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２受容体は、ヒトＩＬ－２２受容体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２Ｒ１及び／またはＩＬ－１０Ｒ２に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２Ｒ１に結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ－２２受容体は、ＩＬ－２２Ｒ１ポリペプチド及びＩＬ－１０Ｒ２ポリペプチドからなるヘテロ二量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２Ｒ１ポリペプチドは、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、ＩＬ－１０Ｒ２ポリペプチドは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。
非限定的な一例として、本発明は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体（例えば、水）を含む医薬組成物であって、該ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８または配列番号１６のアミノ酸配列を含み、該医薬組成物は、約５ｍＭのメチオニン、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、該医薬組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、前述の組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかに含まれるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の発現に好適な条件下でＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を発現させることができる宿主細胞を培養するステップを含む方法によって生成される。いくつかの実施形態では、本方法は、細胞培養物または培養培地からＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を得るステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。
本明細書における組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、適切な医療行為と一致した様式で配合、投薬、及び投与される。この文脈において考慮すべき要素としては、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の対象の臨床的状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、及び医療従事者に公知の他の要素が挙げられる。一実施形態において、組成物は、疾患もしくは病状に対する感受性があるか、またはその診断を受けたヒト対象の生存期間を延長するために使用することができる。生存期間は、薬物の最初の投与から死亡までの時間として定義される。一実施形態において、組成物は、疾患もしくは病状、例えば本明細書に記載される任意の障害（例えば、ＩＢＤ、例えば、ＵＣまたはクローン病）に対する感受性があるか、またはその診断を受けたヒト対象の１つ以上の症状を低減させるために使用することができる。
医薬配合物は、当該分野で公知の標準的方法を使用し、所望の純度を有する活性成分を、１つ以上の任意選択による薬学的に許容される担体（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａを参照されたい）と混合することにより、凍結乾燥配合物または水溶液の形態で調製することができる。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸等の緩衝液、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、保存剤（例えば塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルアルコールもしくはベンジルアルコール、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等のタンパク質、ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸、グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖、ナトリウム等の塩形成対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）、及び／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えばヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等の介在性（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
場合により、配合物は、薬学的に許容される塩、好ましくは塩化ナトリウムを、好ましくはおよそ生理学的な濃度で含む。
場合により、本発明の配合物は、薬学的に許容される保存剤を含んでもよい。いくつかの実施形態では、保存剤濃度は、０．１～２．０％（典型的にはｖ／ｖ）の範囲である。好適な保存剤としては、薬学分野で公知のものが挙げられる。ベンジルアルコール、フェノール、ｍ－クレゾール、メチルパラベン、塩化ベンザルコニウム、及びプロピルパラベンが、好ましい保存剤である。場合により、本発明の配合物は、薬学的に許容される界面活性剤を０．００５～０．０２％の濃度で含んでもよい。
本明細書における配合物はまた、処置される特定の適応症に必要な場合、２種以上の活性化合物、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する化合物を含むことができる。そのような分子は、好適には、意図される目的に有効な量で組み合わさって存在する。
例示的な凍結乾燥配合物は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性配合物は、米国特許第６，１７１，５８６及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものを含み、後者の配合物は、ヒスチジン－酢酸緩衝液を含む。
本明細書における配合物はまた、処置される特定の適応症に必要な場合、２種以上の活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含んでもよい。例えば、ステロイド、ＴＮＦアンタゴニストまたは他の抗炎症治療薬をさらに提供することが望ましい場合がある。そのような活性成分は、好適には、意図される目的に有効な量で組み合わさって存在する。
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）中またはマクロエマルション中の、ヒドロキシメチルセルロースマイクロカプセルまたはゼラチンマイクロカプセル、及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入されていてもよい。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例には、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態にある。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸とγ－エチル－Ｌ－グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注射用マイクロスフェア）、及びポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン－酢酸ビニル及び乳酸－グリコール酸等のポリマーは１００日超にわたる分子の放出を可能にするが、あるヒドロゲルは、より短い期間にわたってタンパク質を放出する。カプセル封入された抗体が体内に長時間留まると、３７℃の水分への曝露の結果として抗体が変性または凝集し、生物学的活性の喪失、及び免疫原性の変化の可能性をもたらす場合がある。関与する機構に応じて、安定化のための合理的な方策を講じることができる。例えば、凝集機構がチオ－ジスルフィド相互変換による分子間Ｓ－Ｓ結合形成であることが見出された場合、スルフヒドリル残基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥させ、水分含有量を制御し、適切な添加剤を使用し、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することにより、安定化が達成され得る。
局所投与のための医薬組成物は、例えば、局所ゲルの形態で配合され得る。例えば、ＵＳ４，７１７，７１７、ＵＳ５，１３０，２９８、ＵＳ５，４２７，７７８、ＵＳ５，４５７，０９３、ＵＳ５，７０５，４８５、ＵＳ６，３３１，３０９、及びＷＯ２００６／１３８，４６８を参照されたい。ある実施形態では、組成物は、セルロース誘導体の存在下で配合することができる。ある他の実施形態では、局所配合物は、投与前に十分な緩衝液または希釈剤を用いて凍結乾燥配合物から再構成することができる。ある実施形態では、ＩＬ－２２ポリペプチドまたはＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、上皮創傷治癒に異常がある対象に局所投与されるように配合される。ある特定の実施形態では、上皮創傷治癒は皮膚で起こる。ある他の特定の実施形態では、対象は、創傷治癒に異常があるヒトである。ある他の実施形態では、本発明のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む局所配合物は、内部または外部の外科的切除後の創傷治癒を向上させるために使用され得る。
本発明の一実施形態において、創傷治癒を加速、促進、または向上させることに使用するためのＩＬ－２２ポリペプチドまたはＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、プレフィルドシリンジもしくは容器内の、局所ゲルの配合物中にあるか、あるいは、本発明の化合物を患者への局所投与の直前にゲルマトリックスと混合してもよい。ある実施形態では、追加の治療剤もまた、同時か連続的かを問わず、局所投与される。他の投与経路を場合により使用することもでき、例えば、非経口投与、皮下投与、腹腔内投与、肺内投与、脳脊髄内投与、皮下投与、関節内投与、滑液嚢内投与、くも膜下腔内投与、経口投与、及び鼻腔内投与を含むがこれらに限定されない、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または皮下投与が含まれる。
創傷治癒のためには典型的に、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、部位特異的送達用に配合される。局所に適用する場合、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、担体及び／またはアジュバント等の他の成分と好適に組み合わされる。そのような他の成分の性質には、かかる成分が薬学的に許容され、かつ意図される投与で有効でなければならず、組成物の活性成分の活性を低下させてはならないということ以外に制限はない。好適なビヒクルの例としては、精製されたコラーゲンを含むかまたは含まない、軟膏、クリーム、ゲル、スプレー、または懸濁液が挙げられる。組成物を、場合により液体または半液体の形態で、滅菌包帯、経皮パッチ、硬膏剤、及び絆創膏に含浸させてもよい。酸化再生セルロース／コラーゲンマトリックス、例えば、ＰＲＯＭＯＧＲＡＮ Ｍａｔｒｉｘ Ｗｏｕｎｄ ＤｒｅｓｓｉｎｇまたはＰＲＯＭＯＧＲＡＮ ＰＲＩＳＭＡ ＭＡＴＲＩＸを使用することもできる。
ゲル配合物を得るためには、液体組成物に配合されたＩＬ－２２ポリペプチドまたはＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を、有効量の水溶性多糖または合成ポリマーと混合して、ポリエチレングリコール等のゲル（例えば、ゲル化剤）を形成し、局所に適用するのに適切な粘度をもつ配合物を形成してもよい。使用され得る多糖またはゲル化剤としては、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、及びアルキルヒドロキシアルキルセルロース、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びヒドロキシプロピルセルロースを含むエーテル化セルロース誘導体等のセルロース誘導体、カルボキシメチルセルロースナトリウム、様々なグレードのＰＯＥ－ＰＯＰブロックポリマー：ポロクサマーＵＳＰ、ヒアルロン酸、カーボポール９４０等のポリアクリル酸、デンプン及び分別したデンプン、寒天、アルギン酸及びアルギン酸塩、アラビアガム、プルラン、アガロース、カラゲナン、デキストラン、デキストリン、フルクタン、イヌリン、マンナン、キシラン、アラビナン、キトサン、グリコーゲン、グルカン、及び合成生体高分子、ならびにキサンタンガム、グアーガム、ロカストビーンガム、アラビアガム、トラガントガム、及びカラヤガム等のガム、ならびにそれらの誘導体、組み合わせ及び混合物が挙げられる。本発明の一実施形態において、本明細書におけるゲル化剤は、例えば、生物系に対して不活性であり、無毒であり、調製が簡単であり、及び／または粘度が低すぎることも高すぎることもなく、その中に保持されるＩＬ－２２ポリペプチドもしくはＩＬ－２２ Ｆｃ融合物を不安定化しないものである。
本発明のある実施形態では、多糖は、エーテル化セルロース誘導体であり、別の実施形態では、明確に定義され、精製され、ＵＳＰに記載されているもの、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース等のメチルセルロース及びヒドロキシアルキルセルロース誘導体である（すべてセルロース系薬剤という）。いくつかの実施形態では、多糖は、ヒドロキシエチルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースである。
ゲル化に有用なポリエチレングリコールは、典型的には、適切な粘度を得るための低分子量及び高分子量のポリエチレングリコールの混合物である。例えば、分子量４００～６００のポリエチレングリコールと、分子量１５００のものとの混合物は、ペーストを得るために適切な比で混合した場合、この目的のために有効である。
多糖及びポリエチレングリコールに適用される「水溶性」という用語は、コロイド溶液及び分散液を含むことを意図する。一般に、セルロース誘導体の溶解度は、エーテル基の置換度によって決定され、ここで有用な安定化誘導体は、かかるエーテル基を、セルロース鎖の無水グルコース単位当たり、誘導体を水溶性にするのに十分な量で有するべきである。無水グルコース単位当たりのエーテル基が少なくとも０．３５のエーテル置換度で一般には十分である。さらに、セルロース誘導体は、アルカリ金属塩、例えば、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、またはＣｓの塩形態にあってもよい。
ある実施形態では、メチルセルロースが例えばゲル中に用いられ、メチルセルロースは、ゲルの約１～５％、または約１％、約２％、約３％、約４％、もしくは約５％を構成し、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ゲル１ｍｌ当たり約５０～２０００μｇ、１００～２０００μｇ、または１００～１０００μｇの量で存在する。ある実施形態では、局所投与による創傷治癒のためのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、創傷面積１ｃｍ２当たり、約２５μｇ～約５００μｇ、約５０μｇ～約３００μｇ、約１００μｇ～約２５０μｇ、約５０μｇ～約２５０μｇ、約５０μｇ～約１５０μｇ、約７５μｇ、約１００μｇ、約１２５μｇ、約１５０μｇ、約１７５μｇ、約２００μｇ、約２２５μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、または約３５０μｇであり得る。
インビボ投与のために使用される配合物は、一般に、無菌のものである。無菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を介する濾過によって、容易に達成され得る。
本発明は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質ベースの治療薬の投与量を提供する。例えば、疾患のタイプ及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別々の投与によるか、または連続注入によるかを問わず、ポリペプチド約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１～２０ｍｇ／ｋｇ）が、対象に投与するための初回候補投与量である。典型的な一日投与量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲であり得る。数日以上にわたる反復投与の場合は、状態に応じて、疾患症状の所望される抑制が生じるまで処置を持続させる。しかしながら、他の投薬レジメンが有用な場合がある。この療法の進捗は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
疾患の防止または処置に関して、本発明のポリペプチド（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）の適切な投与量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、処置される疾患のタイプ、ポリペプチドのタイプ、疾患の重症度及び経過、ポリペプチドが防止目的で投与されるか治療目的で投与されるか、治療歴、対象の病歴及びポリペプチドへの応答、ならびに主治医の裁量に左右される。ポリペプチドは、一度に、または一連の処置にわたって対象に好適に投与される。疾患のタイプ及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別々の投与によるか、または連続注入によるかを問わず、ポリペプチド約１μｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ）が、対象に投与するための初回候補投与量であり得る。１つの典型的な一日投与量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲であり得る。数日以上にわたる反復投与の場合は、状態に応じて、通常、疾患症状の所望される抑制が生じるまで処置を持続させることになる。ポリペプチドの例示的な投与量の１つは、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇのうちの１つ以上の用量（またはそれらの任意の組み合わせ）を対象に投与してもよい。ある実施形態では、約０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ．ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）を対象に投与してもよい。かかる用量は、間欠的に、例えば毎週、２週間毎、または３週間毎に（例えば、約２～約２０、または例えば約６用量のポリペプチドを対象が受けるように）投与されてもよい。より高い初回負荷用量に続いて、１回以上のより低い用量が投与されてもよい。例示的な投薬レジメンは、約４ｍｇ／ｋｇの初回負荷用量を投与した後、約２ｍｇ／ｋｇの維持用量の抗体を毎週投与することを含む。しかしながら、他の投薬レジメンも有用であり得る。この療法の進捗は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
心血管疾患もしくは状態、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症もしくは敗血症、ＧＶＨＤ、または糖尿病の防止または処置のための本発明の化合物は、典型的には、静脈内注射によって投与される。
局所、非経口、静脈内、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、眼内、眼球内、硝子体内、病巣内、脳脊髄内、関節内、滑液嚢内、くも膜下腔内、経口、または吸入投与を含むがこれらに限定されない、他の投与方法を使用することもできる。非経口注入には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または皮下投与が含まれる。さらに、本明細書に記載される化合物は、例えばボーラスとしての静脈内投与、または一定期間にわたる連続注入による公知の方法に従って、ヒト対象に投与される。
１．組成物中に使用するための例示的なＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質
任意の好適なＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を組成物中に使用することができる。概して、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含む。参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第９，８１５，８８０号に記載されているＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のいずれも、本明細書に記載される組成物中に使用することができる。前述のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、グリコシル化されていない。いくつかの実施形態では、ＥＵインデックスでＦｃ領域の２９７位にあるアミノ酸残基は、Ｇｌｙである。いくつかの実施形態では、ＥＵインデックスでＦｃ領域の２９７位にあるアミノ酸残基は、Ａｌａである。いくつかの実施形態では、ＥＵインデックスでＦｃ領域の２９９位にあるアミノ酸残基は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＶａｌである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
前述のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、及び配列番号１６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｎ－グリコシル化されていない。
前述のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかは、二量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質であり得る。他の実施形態では、前述のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかは、単量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質であり得る。
前述のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかは、ヒトＩＬ－２２ポリペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、配列番号４アミノ酸配列。
本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質において、任意の好適なリンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）からなる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかは、ＩＬ－２２受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２受容体は、ヒトＩＬ－２２受容体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２ＲＡ１及び／またはＩＬ－１０Ｒ２に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２ＲＡ１に結合する。
いくつかの実施形態では、前述のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかは、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の発現に好適な条件下でＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を発現させることができる宿主細胞を培養するステップを含む方法によって生成される。いくつかの実施形態では、本方法は、細胞培養物または培養培地からＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を得るステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。
ある実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかは、ＩＬ－２２受容体に結合し、その活性もしくはシグナル伝達を誘導し、及び／またはＩＬ－２２受容体活性のアゴニストである。
別の態様では、本明細書において提供されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。他の実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含み、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含むＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２受容体に結合する能力を保持する。ある実施形態では、配列番号８、１０、１２、１４、１６、２４、または２６において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。ある実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＩＬ－２２の外側の領域で（すなわち、Ｆｃにおいて）生じる。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のリンカー、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインに存在することができる。ある特定の実施形態では、ＦｃのＣ末端Ｌｙｓ残基は欠失している。ある他の実施形態では、ＦｃのＣ末端Ｇｌｙ及びＬｙｓ残基の両方が欠失している。
ある実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有するＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質変異体が提供される。保存的置換を、表Ａの「好ましい置換」の見出しの下に示す。より実質的な変化を、表Ａの「例示的な置換」の見出しの下に提示し、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載する。アミノ酸置換をＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質に導入し、この生成物を、所望の活性、例えば、保持された／向上したＩＬ－２２受容体結合、減少した免疫原性、または向上したＩＬ－２２受容体シグナル伝達についてスクリーニングしてもよい。
Figure 0007345479000002
アミノ酸は、以下の一般的な側鎖特性に従って分類することができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴う。
突然変異誘発のための標的となり得るタンパク質の残基または領域を特定するのに有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載される「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれるものである。この方法では、残基または標的残基群（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕ等の荷電残基）を特定し、中性または負に帯電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置き換えて、タンパク質とその結合パートナーとの相互作用が影響を受けるかどうかを判定する。最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に、さらなる置換を導入してもよい。あるいは、またはさらに、タンパク質複合体（例えば、サイトカイン受容体複合体）の結晶構造を使用して、タンパク質とその結合パートナーとの間の接触点を特定することができる。かかる接触残基及び隣接残基を、置換の候補として標的とするか、または排除してもよい。変異体をスクリーニングして、それらが所望の特性を有するかどうかを判定してもよい。
アミノ酸配列挿入としては、長さが１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまで及ぶアミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。
本明細書では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号２４、または配列番号２６、好ましくは配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６、より好ましくは配列番号８のアミノ酸配列を含むＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードする。ある他の実施形態では、核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号２３、または配列番号２５のポリヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施形態では、核酸は、配列番号７または配列番号１１、好ましくは配列番号７のポリヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、単離された核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号２３、または配列番号２５のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性であるポリヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、単離された核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号２３、または配列番号２５のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性であるポリヌクレオチド配列を含み、この単離された核酸は、ＩＬ－２２Ｒに結合すること及び／またはＩＬ－２２Ｒ活性を誘発することができるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードすることができ、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域は、グリコシル化されていない。ある実施形態では、単離された核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号２３、または配列番号２５のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性であるポリヌクレオチド配列を含み、この単離された核酸は、配列番号８、１０、１２、または１４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードすることができる。関連する態様において、本発明は、上述の核酸を含むベクター、及びベクターを含む宿主細胞を提供する。ある実施形態では、宿主細胞は、原核細胞または真核細胞である。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、限定されるものではないが、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を含む原核細胞である。ある他の実施形態では、宿主細胞は、限定されるものではないが、ＣＨＯ細胞を含む真核細胞である。ある実施形態では、宿主細胞は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含むベクターを含む。
ａ）グリコシル化変異体
ある実施形態では、本明細書において提供されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、融合タンパク質またはその一部分（例えば、融合タンパク質のＦｃ部分）がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。タンパク質へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作出または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって簡便に達成され得る。
融合タンパク質がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物を変更してもよい。哺乳動物細胞によって生成される天然抗体は、典型的には、一般にＮ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合している分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」におけるＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ある向上した特性を有するＦｃ変異体を作出するために、抗体または抗体のＦｃ領域におけるオリゴ糖の修飾を行ってもよい。
Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインに結合したフコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７またはＮ２９７に結合したすべての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の和と比べた、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって判定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体におけるわずかな配列変化に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位～３００位の間に位置していてもよい。かかるフコシル化変異体は、向上したＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異体に関する公開文献の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を生成することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８号Ａ１、及びＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
さらに、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分オリゴ糖を有する抗体変異体が提供される。かかる抗体変異体は、低減したフコシル化及び／または向上したＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８、米国特許第６，６０２，６８４号、及びＵＳ２００５／０１２３５４６に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。かかる抗体変異体は、向上したＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７、ＷＯ１９９８／５８９６４、及びＷＯ１９９９／２２７６４に記載されている。
ｂ）Ｆｃ領域変異体
ある実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾を、本明細書において提供されるＦｃ融合タンパク質のＦｃ領域に導入することにより、Ｆｃ領域変異体を生成することができる。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。例えば、ヒンジは、例えば、
Figure 0007345479000003
（配列番号３１）のアミノ酸配列における太字で下線が引かれたＰｒｏ残基に示されるように、ＳｅｒからＰｒｏへの置換を含み得る。そのようなＳｅｒからＰｒｏへの置換は、分子の安定性を高める可能性がある。
ある実施形態では、本発明は、すべてではなくいくつかのエフェクター機能を有し、それにより、Ｆｃ領域を含む抗体または融合タンパク質のインビボでの半減期は重要であるが、あるエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣ）は不必要または有害である用途に対して望ましい候補となる、Ｆｃ変異体を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを実施して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／欠乏を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体またはＦｃがＦｃγＲ結合を欠いている（よって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）を参照されたい）、米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣＹＴＯＴＯＸ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されているもの等の動物モデルにおいて評価することができる。抗体またはＦｃがＣ１ｑに結合できず、よってＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを行ってもよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３ （１９９６）、Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３ （２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の判定も、当該分野で公知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）を参照されたい）。
エフェクター機能が低減した抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの１つ以上が置換されているものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、残基２６５及び２９７がアラニンに置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含め、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７位のうちの２つ以上が置換されているＦｃ突然変異体が含まれる。
ＦｃＲへの結合が向上または減少している、ある抗体またはＦｃ変異体については説明されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい）。
ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＤＣＣを低減させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｎ－グリコシル化部位を除去するがＦｃＲｎ結合活性を保持するＦｃ領域の２９７位（残基のＥＵ付番）における置換を有する、Ｆｃ変異体を含む。
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されるように、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の減少をもたらす変更が、Ｆｃ領域において行われる。
半減期が増加し、母体ＩｇＧの胎児への移入の原因である新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））への結合が向上した抗体は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。こうした抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を向上させる１つ以上の置換を中に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。
Ｆｃ領域変異体の他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
ｃ）システイン操作された変異体
ある実施形態では、抗体のＦｃ領域の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作されたＦｃ融合タンパク質を作出することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、置換残基は、Ｆｃの利用しやすい部位において生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基はＦｃの利用しやすい部位に位置付けられ、これを使用して、Ｆｃを他の部分（例えば薬物部分またはリンカー－薬物部分）にコンジュゲートして、本明細書にさらに記載されるイムノコンジュゲートを作出してもよい。例えば、重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）をＣｙｓで置換することができる。例えば、米国特許第７，５２１，５４１号を参照されたい。
２．例示的なＩＬ－２２ポリペプチド
任意の好適なＩＬ－２２ポリペプチドが、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質に含まれ得る。例えば、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかにおいて、ＩＬ－２２ポリペプチドは、配列番号７１（内因性ＩＬ－２２リーダー配列を含むヒトＩＬ－２２）を含むアミノ酸配列を含むポリペプチド、または配列番号７１に対して少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み得る。ある実施形態では、ＩＬ－２２ポリペプチドは、配列番号４（リーダー配列を含まないヒトＩＬ－２２）を含むアミノ酸配列、または配列番号４に対して少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。ある実施形態では、ＩＬ－２２ポリペプチドは、配列番号４を含むアミノ酸配列を含む。
天然のＩＬ－２２分子の調製は、それらの核酸及びポリペプチド配列と共に、当業者に公知の方法によって達成することができる。例えば、ＩＬ－２２核酸を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた細胞を培養することによって、ＩＬ－２２ポリペプチドを生成することができる。当然ながら、ＩＬ－２２を調製するために当該分野で周知の代替的な方法が用いられ得ることが企図される。例えば、ＩＬ－２２配列、またはその一部分は、固相技術を使用した直接ペプチド合成によって生成することができる（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｓｏｌｉｄ－Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９６９）、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６３，８５：２１４９－２１５４を参照されたい）。インビトロでのタンパク質合成は、手作業の技術を使用して、または自動化によって行われ得る。自動化された合成は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）を使用し、製造元の説明を使用して達成することができる。ＩＬ－２２の様々な部分を別々に化学合成し、化学的または酵素的な方法を使用して組み合わせて、全長ＩＬ－２２を生成してもよい。
ＩＬ－２２変異体は、天然配列ＩＬ－２２ポリペプチドをコードするＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによって、または所望のＩＬ－２２ポリペプチドの合成によって調製することができる。当業者には、アミノ酸変化が、グリコシル化部位の数もしくは位置の変化または膜固定特性の変化等、ＩＬ－２２の翻訳後プロセスを変化させ得ることが理解されよう。
本明細書に記載される天然配列ＩＬ－２２ポリペプチドの変化は、例えば米国特許第５，３６４，９３４号に記載される、例えば保存的及び非保存的な突然変異のための技術及びガイドラインのうちのいずれかを使用して行うことができる。変化は、対応する天然配列または変異体ＩＬ－２２と比較して、そのアミノ酸配列に変化をもたらす、天然配列または変異体ＩＬ－２２をコードする１つ以上のコドンの置換、欠失、または挿入であり得る。場合により、この変化は、天然配列ＩＬ－２２ポリペプチドのドメインのうちの１つ以上において、少なくとも１つのアミノ酸を任意の他のアミノ酸で置換することによる。どのアミノ酸残基が所望の活性に悪影響を及ぼすことなく挿入、置換、または欠失され得るかを判定する際の指針は、ＩＬ－２２の配列を同種の既知のタンパク質分子の配列と比較し、相同性の高い領域にできたアミノ酸配列変化の数を最小限に抑えることによって見出すことができる。アミノ酸置換は、１つのアミノ酸を、同様の構造及び／または化学特性を有する別のアミノ酸に置き換えること、例えば、ロイシンからセリンへの置換、すなわち、保存的アミノ酸置換の結果であり得る。挿入または欠失は、場合により、アミノ酸１～５個の範囲であり得る。許容される変化は、配列内でアミノ酸の挿入、欠失、または置換を体系的に行い、結果として得られる変異体の活性を、例えば以下の実施例に記載されるインビトロアッセイで試験することにより、判定することができる。
特定の実施形態において、目的の保存的置換は、表Ａの好ましい置換の見出しの下に示すものである。かかる置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表Ａに例示的な置換と示されるか、またはアミノ酸クラスを参照して以下でさらに説明される、より実質的な変化を導入し、生成物をスクリーニングする。
本発明の範囲内に含まれるＩＬ－２２ポリペプチドの別のタイプの共有結合修飾は、ポリペプチドの天然のグリコシル化パターンの変更を含む。「天然のグリコシル化パターンの変更」は、本明細書の目的では、天然配列ＩＬ－２２に見出される１つ以上の炭水化物部分の欠失、及び／または天然配列ＩＬ－２２に存在しない１つ以上のグリコシル化部位の付加、及び／またはグリコシル化部位（複数可）に結合した糖残基の比及び／または組成の変更を意味することを意図する。
ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。ＩＬ－２２ポリペプチドへのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を変更することによって達成することができる。この変更は、例えば、天然配列ＩＬ－２２への１つ以上のセリンもしくはスレオニン残基の付加またはそれらの置換（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）、あるいはＯ結合型グリコシル化のための認識配列の付加によって行うことができる。ＩＬ－２２アミノ酸配列は、場合により、特に、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンが生成されるように、予め選択された塩基でＩＬ－２２ポリペプチドをコードするＤＮＡを突然変異させることにより、ＤＮＡレベルでの変化によって変更することができる。
ＩＬ－２２ポリペプチドの炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、グリコシドをポリペプチドに化学的または酵素的にカップリングすることによる。そのような方法は、当該分野で、例えば、ＷＯ８７／０５３３０及びＡｐｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９－３０６（１９８１）に記載されている。
ＩＬ－２２ポリペプチドに存在する炭水化物部分の除去は、化学的もしくは酵素的に、またはグリコシル化の標的としての機能を果たすアミノ酸残基をコードするコドンの突然変異置換によって達成することができる。化学的脱グリコシル化技術は当該分野で公知であり、例えば、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２（１９８７）及びＥｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８：１３１（１９８１）に記載されている。ポリペプチドの炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０（１９８７）に記載されているように、多様なエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼの使用によって達成され得る。
こうした変化は、オリゴヌクレオチド媒介性（部位特異的）突然変異誘発、アラニンスキャニング、及びＰＣＲ突然変異誘発等、当該分野で公知の方法を使用して行うことができる。クローン化されたＤＮＡに、部位特異的突然変異誘発（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：４３３１、Ｚｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７）、カセット突然変異誘発（Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｇｅｎｅ ３４：３１５）、制限選択突然変異誘発（Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄｏｎ Ａ ３１７：４１５）、または他の公知の技術を行って、ＩＬ－２２変異体ＤＮＡを生成することができる。
ＩＬ－２２ポリペプチドの断片も、本明細書において提供される。そのような断片は、Ｎ末端もしくはＣ末端でトランケートされていてもよいし、または、例えば全長天然タンパク質と比較した場合に内部残基を欠いていてもよい。ある断片は、本発明のＩＬ－２２ポリペプチドの所望の生物学的活性にとって必須ではないアミノ酸残基を欠いている。したがって、ある実施形態では、ＩＬ－２２ポリペプチドの断片は、生物学的に活性である。ある実施形態では、全長ＩＬ－２２の断片は、Ｎ末端シグナルペプチド配列を欠いている。
天然配列及び変異体ＩＬ－２２ポリペプチドの共有結合修飾は、本発明の範囲内に含まれる。共有結合修飾の１つのタイプには、ＩＬ－２２ポリペプチドの選択された側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と、ＩＬ－２２の標的アミノ酸残基を反応させることが含まれる。二官能性剤による誘導体化は、例えば、ＩＬ－２２を、例えば抗ＩＬ－２２抗体を精製する方法に使用される水不溶性支持マトリックスまたは表面に架橋するために有用である。一般的に使用される架橋剤には、１，１－ビス（ジアゾ－アセチル）－２－フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば、４－アジドサリチル酸とのエステル、３，３’－ジチオビス（スクシンイミジル－プロピオネート）等のジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、ビス－Ｎ－マレイミド－１，８－オクタン等の二官能性マレイミド、及びメチル－３－［（ｐ－アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデート等の薬剤が含まれる。
他の修飾としては、グルタミニル及びアスパラギニル残基のそれぞれ対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミド、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα－アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９－８６ｉ）、Ｎ末端アミンのアセチル化、ならびに任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
ＩＬ－２２の共有結合修飾の別のタイプは、ＩＬ－２２ポリペプチドを、多様な非タンパク質性ポリマーのうちの１つ、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンに、例えば米国特許第４，６４０，８３５号、同第４，４９６，６８９号、同第４，３０１，１４４号、同第４，６７０，４１７号、同第４，７９１，１９２号、または同第４，１７９，３３７号に記載の様式で結合させることを含む。天然配列及び変異体ＩＬ－２２はまた、別の異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列に融合した、ＩＬ－２２の断片を含むＩＬ－２２を含むキメラ分子を形成するように修飾され得る。
一実施形態において、そのようなキメラ分子は、ＩＬ－２２と、抗タグ抗体が選択的に結合し得るエピトープを提供するタグポリペプチドとの融合物を含む。エピトープタグは、概して、ＩＬ－２２ポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシル末端に位置する。このようなエピトープタグが付いた形態のＩＬ－２２ポリペプチドの存在は、タグポリペプチドに対する抗体を使用して検出され得る。また、エピトープタグの提供により、抗タグ抗体またはエピトープタグに結合する別のタイプの親和性マトリックスを使用した親和性精製によってＩＬ－２２ポリペプチドを容易に精製することが可能になる。様々なタグポリペプチド及びそれらのそれぞれの抗体は、当該分野で周知である。例としては、ポリ－ヒスチジン（ｐｏｌｙ－ｈｉｓ）またはポリ－ヒスチジン－グリシン（ｐｏｌｙ－ｈｉｓ－ｇｌｙ）タグ、インフルエンザＨＡタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５（Ｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，８：２１５９－２１６５）、ｃ－ｍｙｃタグならびにそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、及び９Ｅ１０抗体（Ｅｖａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３６１０－３６１６）、ならびに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグ及びその抗体（Ｐａｂｏｒｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ３（６）：５４７－５５３）が挙げられる。他のタグポリペプチドとしては、Ｆｌａｇ－ペプチド（Ｈｏｐｐ ｅｔ ａｌ．，１９８８，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１２０４－１２１０）、ＫＴ３エピトープペプチド（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：１９２－１９４）、チューブリンエピトープペプチド（Ｓｋｉｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１５１６３－１５１６６）、及びＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ（Ｌｕｔｚ－Ｆｒｅｙｅｒｍｕｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３９３－６３９７）が挙げられる。
別の実施形態では、キメラ分子は、ＩＬ－２２ポリペプチドまたはその断片と、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンの特定の領域との融合物を含み得る。二価形態のキメラ分子の場合、そのような融合物は、ＩｇＧ分子のＦｃ領域に対するものであり得る。これらの融合ポリペプチドは、異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性を免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能と組み合わせた抗体様分子であり、イムノアドヘシンということが多い。構造的に、イムノアドヘシンは、ＩＬ－２２またはその変異体のアミノ酸配列と、免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物を含む。イムノアドヘシン分子のアドヘシン部分は、典型的には、受容体またはリガンドの結合部位を少なくとも含む連続したアミノ酸配列である。イムノアドヘシンにおける免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＭ等の任意の免疫グロブリンから得ることができる。ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、改変されたエフェクター活性を呈する。
ＩＬ－２２ポリペプチドまたはその断片を、例えば、免疫グロブリン重鎖定常領域配列に融合させて、ＩＬ－２２－Ｉｇ融合タンパク質（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）を生成してもよい。ＩＬ－２２ポリペプチドは、ヒトまたはマウスのＩＬ－２２であり得る。免疫グロブリン重鎖定常領域配列は、ヒトまたはマウスの免疫グロブリン重鎖定常領域であり得る。
Ｂ．組成物中に使用するためのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を作製する方法
本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、任意の好適な方法、例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、その断片、または変異体をコードする核酸を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた細胞を培養することによって調製することができる。任意のかかるベクターを含む宿主細胞も提供される。任意の好適な宿主細胞、例えば、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）、Ｅ．ｃｏｌｉ、または酵母を使用することができる。本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれかを生成するためのプロセスがさらに提供され、このプロセスは概して、所望のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の発現に好適な条件下で宿主細胞を培養し、所望のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を細胞培養物から回収し、場合により精製することを含む。例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる米国仮特許出願第６２／６２２，７６２号に記載されている方法のうちのいずれを使用してもよい。
ＩＬ－２２ポリペプチドの生成のためには、本明細書に記載される発現ベクターもしくはクローニングベクターを宿主細胞にトランスフェクトするか、またはそれで宿主細胞を形質転換させ、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅に適切なものとして改変された従来の栄養培地中で培養する。培地、温度、ｐＨ等の培養条件は、過度の実験をすることなく当業者により選択され得る。概して、細胞培養の生産性を最大化するための原理、プロトコール、及び実用的な技術は、Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｂｕｔｌｅｒ，ｅｄ．（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９９１）及びＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（上記）に見出すことができる。
例えば、ＣａＰＯ４及び電気穿孔によるトランスフェクションの方法が当業者に公知である。使用される宿主細胞によっては、かかる細胞に適切な標準的技術を使用して形質転換を行う。原核細胞または実質的な細胞壁バリアを含む他の細胞には、一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（上記）に記載の塩化カルシウムを用いるカルシウム処理、または電気穿孔が使用される。ある植物細胞の形質転換には、Ｓｈａｗ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，２３：３１５（１９８３）及び１９８９年６月２９日に公開されたＷＯ８９／０５８５９に記載されるように、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓによる感染が使用される。そのような細胞壁のない哺乳動物細胞には、Ｇｒａｈａｍ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６－４５７（１９７８）のリン酸カルシウム沈殿法を用いることができる。哺乳動物細胞宿主系の形質転換の一般的な態様は、米国特許第４，３９９，２１６号に記載されている。酵母への形質転換は、典型的には、Ｖａｎ Ｓｏｌｉｎｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔ，１３０：９４６（１９７７）及びＨｓｉａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），７６：３８２９（１９７９）の方法に従って行われる。しかしながら、核マイクロインジェクション、電気穿孔、インタクトな細胞との細菌プロトプラスト融合、またはポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチン等による、ＤＮＡを細胞に導入する他の方法を使用することもできる。哺乳動物細胞を形質転換させるための様々な技術については、Ｋｅｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８５：５２７－５３７（１９９０）及びＭａｎｓｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３６：３４８－３５２（１９８８）を参照されたい。
組換え発現された本発明のポリペプチドは、培養培地または宿主細胞溶解物から回収され得る。次の手段：イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカまたはＤＥＡＥ等のカチオン交換樹脂でのクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿法；例えばＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５を使用するゲル濾過；ＩｇＧ等の混入物を除去するためのプロテインＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム；及びエピトープタグが付いた形態の本発明のポリペプチドに結合する金属キレートカラムは、好適な精製手段の例示的なものである。様々なタンパク質精製方法を用いることができ、そのような方法は当該分野で公知であり、例えばＤｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８２（１９９０）、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８２）に記載されている。選択される精製ステップ（複数可）は、例えば、使用される生成プロセス及び生成される特定のポリペプチドの性質に左右される。
当該分野で周知の代替的な方法を用いて、本発明のポリペプチドを調製してもよい。例えば、ポリペプチドまたはその一部分をコードする配列は、固相技術を使用した直接ペプチド合成によって生成することができる（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｓｏｌｉｄ－Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．１９６３，Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９－２１５４を参照されたい）。インビトロでのタンパク質合成は、手作業の技術を使用して、または自動化によって行われ得る。自動化された合成は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用し、製造元の説明を使用して達成することができる。本発明のポリペプチドの様々な部分またはその一部分を別々に化学合成し、化学的または酵素的な方法を使用して組み合わせて、全長ポリペプチドまたはその一部分を生成してもよい。
他の実施形態では、本発明は、異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列に融合した、本明細書に記載されるポリペプチドのうちのいずれかを含むキメラ分子を提供する。そのようなキメラ分子の例としては、エピトープタグ配列または免疫グロブリンのＦｃ領域に融合した、本明細書に記載されるポリペプチドのうちのいずれかが挙げられるが、これに限定されない。
本明細書におけるベクター中のＤＮＡのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞としては、原核生物、酵母、または高等真核生物の細胞が挙げられる。好適な原核生物としては、グラム陰性またはグラム陽性の生物等の真正細菌、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ等のＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅが挙げられる。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ１２株ＭＭ２９４（ＡＴＣＣ ３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ ３１，５３７）、Ｅ．ｃｏｌｉ株Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ ２７，３２５）及びＫ５ ７７２（ＡＴＣＣ ５３，６３５）等の様々なＥ．ｃｏｌｉ株が公的に入手可能である。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物が、ＩＬ－２２コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、一般的に使用される下等真核生物の宿主微生物である。
グリコシル化されたＩＬ－２２の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２及びＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９等の昆虫細胞ならびに植物細胞が挙げられる。有用な哺乳動物宿主細胞株の例としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及びＣＯＳ細胞が挙げられる。より具体的な例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１細胞（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児由来腎臓細胞（２９３細胞、または懸濁培養における増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９（１９７７））；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３－２５１（１９８０））；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；及びマウス乳房腫瘍細胞（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）が挙げられる。適切な宿主細胞の選択は、当業者が備えている技能の範囲内にあると見なされる。
ＩＬ－２２をコードする核酸（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）は、クローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のための複製可能なベクターに挿入され得る。様々なベクターが公的に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、またはファージの形態にあってもよい。適切な核酸配列は、多様な手段によってベクターに挿入され得る。一般にＤＮＡは、当該分野で公知の技術を使用して適切な制限エンドヌクレアーゼ部位（複数可）に挿入される。ベクター成分は一般に、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列のうちの１つ以上を含むが、これらに限定されない。これらの成分のうち１つ以上を含む好適なベクターの構築には、当業者に公知の標準的なライゲーション技術が用いられる。
ＩＬ－２２ポリペプチドは、直接的のみならず、異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても組換えによって生成することができ、この異種ポリペプチドは、シグナル配列、または成熟タンパク質もしくはポリペプチドのＮ末端に特異的な切断部位を有する他のポリペプチド、ならびにＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質であり得る。一般に、シグナル配列は、ベクターの成分であり得るか、またはベクターに挿入されるＩＬ－２２ ＤＮＡの一部であり得る。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、１ｐｐ、または熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列であり得る。酵母分泌に関し、シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、アルファ因子リーダー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ及びＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓアルファ因子リーダーを含む。後者は米国特許第５，０１０，１８２号に記載されている）、または酸性ホスファターゼリーダー、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓグルコアミラーゼリーダー（１９９０年４月４日に公開されたＥＰ３６２，１７９）、または１９９０年１１月１５日に公開されたＷＯ９０／１３６４６に記載されているシグナルであり得る。哺乳動物細胞の発現では、同じまたは関連する種の分泌されたポリペプチド由来のシグナル配列等の哺乳動物シグナル配列、ならびにウイルス分泌リーダーを使用して、タンパク質の分泌を指示することができる。
発現ベクター及びクローニングベクターはいずれも、１種以上の選択された宿主細胞においてベクターの複製を可能にする核酸配列を含む。かかる配列は、多様な細菌、酵母、及びウイルスに関して周知である。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製起点がほとんどのグラム陰性細菌に好適であり、２：プラスミド起点が酵母に好適であり、様々なウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ、またはＢＰＶ）が哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。
発現ベクター及びクローニングベクターは、典型的には、選択可能なマーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含む。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、もしくはテトラサイクリンへの抵抗性を与えるか、（ｂ）栄養要求性欠損を補完するか、または（ｃ）複合培地から得ることができない必須の栄養素、例えば、ＢａｃｉｌｌｉのためのＤ－アラニンラセマーゼをコードする遺伝子を供給する、タンパク質をコードする。
哺乳動物細胞に好適な選択可能なマーカーの一例は、ＤＨＦＲまたはチミジンキナーゼ等のＩＬ－２２核酸を取り込む能力のある細胞の特定を可能にするものである。野生型ＤＨＦＲが用いられる場合に適切な宿主細胞は、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０）に記載されるように調製及び増殖した、ＤＨＦＲ活性が欠損したＣＨＯ細胞株である。酵母での使用に好適な選択遺伝子は、酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である（例えば、Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８２：３９（１９７９）、Ｋｉｎｇｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，７：１４１（１９７９）、Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１０：１５７（１９８０）を参照されたい）。ｔｒｐ１遺伝子は、トリプトファン中で成長する能力を欠く酵母の突然変異株、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６またはＰＥＰ４－１（Ｊｏｎｅｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８５：１２（１９７７））の選択マーカーとなる。
発現ベクター及びクローニングベクターは通常、ｍＲＮＡ合成を指示するようにＩＬ－２２核酸配列に作動可能に連結したプロモーターを含む。多様な潜在的宿主細胞によって認識されるプロモーターが周知である。原核宿主での使用に好適なプロモーターとしては、直交型（ｑｕａｄｒａｔｕｒｅ）ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７５：６１５（１９７８）、Ｇｏｅｄｄｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：５４４（１９７９）を参照されたい）、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系（例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，８：４０５７（１９８０）、ＥＰ３６，７７６を参照されたい）、及びｔａｃプロモーター等のハイブリッドプロモーター（例えば、ｄｅＢｏｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：２１－２５（１９８３）を参照されたい）が挙げられる。細菌系で使用されるプロモーターは、ＩＬ－２２をコードするＤＮＡに作動可能に連結したＳｈｉｎｅ－Ｄａｌｇａｒｎｏ（Ｓ．Ｄ．）配列も含む。
酵母宿主で使用するのに好適なプロモーター配列の例としては、３－ホスホグリセリン酸キナーゼ（例えば、Ｈｉｔｚｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２５５：２０７３（１９８０）を参照されたい）または他の解糖酵素（例えば、Ｈｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇ．，７：１４９（１９６８）、Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７：４９００（１９７８）を参照されたい）、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース－６－リン酸イソメラーゼ、３－ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼのプロモーターが挙げられる。
成長条件によって制御された転写のさらなる利点を有する誘導性プロモーターである他の酵母プロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソシトクロムＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関連する分解酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ、ならびにマルトース及びガラクトース利用に関与する酵素のプロモーター領域である。酵母発現での使用に好適なベクター及びプロモーターは、ＥＰ７３，６５７にさらに記載されている。
哺乳動物宿主細胞中のベクターからのＩＬ－２２の転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス（１９８９年７月５日公開のＵＫ２，２１１，５０４）、アデノウイルス（例えばアデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）等のウイルスのゲノムから得られるプロモーター、異種哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーター、ならびに熱ショックプロモーターによって制御されるが、但し、かかるプロモーターが宿主細胞系と適合することを条件とする。
高等真核生物によるＩＬ－２２ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増加し得る。エンハンサーは、プロモーターに作用してその転写を増加させる、通常約１０～３００ｂｐのＤＮＡのシス作用性エレメントである。哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、及びインスリン）由来の多くのエンハンサー配列が現在公知である。しかしながら、典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用される。例としては、複製起点の後側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００～２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。エンハンサーは、ＩＬ－２２コード配列の５’位または３’位でベクターにスプライスされ得るが、好ましくは、プロモーターから５’側の部位に位置する。
真核宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または他の多細胞生物由来の有核細胞）で使用される発現ベクターは、転写終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含有する。かかる配列は一般に、真核生物またはウイルスのＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’非翻訳領域、そして時には３’非翻訳領域から入手可能である。これらの領域は、ＩＬ－２２をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分内にポリアデニル化断片として転写されたヌクレオチドセグメントを含む。
組換え脊椎動物細胞培養におけるＩＬ－２２の合成への適用に好適なさらに他の方法、ベクター、及び宿主細胞は、Ｇｅｔｈｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２９３：６２０－６２５（１９８１）、Ｍａｎｔｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：４０４６（１９７９）、ＥＰ１１７，０６０、及びＥＰ１１７，０５８に記載されている。
遺伝子増幅及び／または発現は、例えば、従来のサザンブロッティング、ｍＲＮＡの転写を定量化するためのノーザンブロッティング（例えば、Ｔｈｏｍａｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：５２０１－５２０５（１９８０）を参照されたい）、ドットブロッティング（ＤＮＡ分析）、またはインサイチュハイブリダイゼーションにより、適切に標識されたプローブを使用し、本明細書において提供される配列に基づいて、試料中で直接的に測定することができる。あるいは、ＤＮＡ二本鎖、ＲＮＡ二本鎖、及びＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド二本鎖またはＤＮＡ－タンパク質二本鎖を含む特定の二本鎖を認識することができる抗体を用いてもよい。次にこの抗体を標識してもよく、アッセイを行ってもよい。このアッセイでは、表面上で二本鎖が形成されると、二本鎖に結合している抗体の存在を検出することができるように、二本鎖を表面に結合させる。
あるいは、遺伝子発現を、細胞または組織切片の免疫組織化学染色及び細胞培養物または体液のアッセイ等の免疫学的方法によって測定して、遺伝子産物の発現を直接的に定量化することができる。試料流体の免疫組織化学染色及び／またはアッセイに有用な抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれであってもよく、任意の哺乳動物において調製することができる。好都合なことには、抗体は、天然配列ＩＬ－２２ポリペプチドに対して、または本明細書において提供されるＤＮＡ配列に基づく合成ペプチドに対して、またはＩＬ－２２ ＤＮＡに融合し特定の抗体エピトープをコードする外因性配列に対して調製することができる。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、培養培地または宿主細胞溶解物から回収され得る。膜に結合している場合は、好適な界面活性物質溶液（例えばＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ－１００）を使用して、または酵素的切断によって、膜から遊離させることができる。ＩＬ－２２の発現に用いられる細胞は、様々な物理的または化学的手段、例えば、凍結解凍サイクル、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤によって破壊され得る。
組換え細胞タンパク質またはポリペプチドからＩＬ－２２Ｆｃ融合タンパク質を精製することが望ましい場合がある。次の手段：イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカまたはＤＥＡＥ等のカチオン交換樹脂でのクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿法；例えばＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５を使用するゲル濾過；ＩｇＧ等の混入物を除去するためのプロテインＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム；及びエピトープタグが付いた形態のＩＬ－２２ポリペプチドに結合する金属キレートカラムは、好適な精製手段の例示的なものである。様々なタンパク質精製方法を用いることができ、そのような方法は当該分野で公知であり、例えばＤｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８２（１９９０）、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８２）に記載されている。選択される精製ステップ（複数可）は、例えば、使用される生成プロセス及び生成される特定のＩＬ－２２の性質に左右される。上記の一般的な方法は、ＩＬ－２ Ｆｃ融合タンパク質の調製にも同様に適用することができる。
同様に、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）及びＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．１９９０．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に記載されている組換え方法及び組成物を使用して生成してもよい。一実施形態において、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードする単離された核酸が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクターを含む（例えば、それで形質転換されている）。ある実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。一実施形態において、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を作製する方法が提供され、本方法は、上述されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を、Ｆｃ融合タンパク質の発現に好適な条件下で培養することと、場合により、Ｆｃ融合タンパク質を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の組換え生成のためには、例えば、本明細書に記載されるＦｃ融合タンパク質をコードする核酸を単離し、１つ以上のベクターに挿入して、宿主細胞においてさらにクローニング及び／または発現させる。かかる核酸は、通常の手段を使用して（例えば、融合タンパク質をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離及びシーケンシングされ得る。ある実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を調製する際、ＩＬ－２２ポリペプチドをコードする核酸またはその断片を、定常ドメインの規定の位置で免疫グロブリン定常ドメイン配列をコードする核酸にライゲートして、ＩＬ－２２のＣ末端におけるＦｃ融合をもたらすことができる。しかしながら、Ｎ末端融合も可能である。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を構築する一例として、ＩＬ－２２をコードするＤＮＡは、制限酵素により、ＩＬ－２２をコードするＤＮＡの３’末端もしくはその近位、及び成熟ポリペプチドのＮ末端をコードするＤＮＡの点もしくはその近位（異なるリーダーの使用が企図される場合）で、またはＩＬ－２２全長タンパク質Ｎ末端コード領域もしくはその近位（天然シグナルが用いられる場合）で切断される。次いでこのＤＮＡ断片は、免疫グロブリン軽鎖または重鎖定常領域をコードするＤＮＡに容易に挿入され、必要に応じて、欠失突然変異誘発によって調整される。これは、融合タンパク質がヒトのインビボ療法を目的とする場合、ヒト免疫グロブリンであることが好ましい。
いくつかの実施形態では、単量体、ヘテロ多量体もしくはホモ多量体、または二量体もしくは四量体として、ＩＬ－２２－免疫グロブリンキメラがアセンブルされる。概して、これらのアセンブルされた免疫グロブリンは、次の図に表されるような既知の単位構造を有する。基本的な４本鎖の構造単位は、ＩｇＧ、ＩｇＤ、及びＩｇＥが存在する形態である。高分子量の免疫グロブリンでは４本鎖単位が繰り返される。ＩｇＭは一般に、基本的な４本鎖単位がジスルフィド結合によって結び付いた五量体として存在する。ＩｇＡグロブリン、そして時にはＩｇＧグロブリンも、多量体形態で血清中に存在することがある。多量体の場合、各４本鎖単位は同じであっても異なっていてもよい。参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｃａｐｏｎらの米国特許第５，１１６，９６４号も参照されたい。
免疫グロブリン軽鎖または重鎖定常領域をコードするＤＮＡは、公知であるか、またはｃＤＮＡライブラリーから容易に入手可能であるか、または合成される。例えば、Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９：２７１１－２７１９（１９８０）、Ｇｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９：２７０２－２７１０（１９８０）、Ｄｏｌｂｙ ｅｔ ａｌ；Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ，７７：６０２７－６０３１（１９８０）、Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ ＵＳＡ ７９：７８６２－７８６５（１９８２）、Ｆａｌｋｎｅｒ ｅｔ ａｌ；Ｎａｔｕｒｅ ２９８：２８６－２８８（１９８２）、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ；Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：２３９－２５６（１９８４）を参照されたい。本明細書では、内因性リーダー配列を含むヒトＩＬ－２２をコードするＤＮＡ配列が提供される（配列番号７０）。公知であるか、またはｃＤＮＡライブラリーから容易に入手可能である、他の所望の結合パートナーをコードするＤＮＡ配列は、本発明の実践に好適である。
本発明のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡは、発現のために宿主細胞にトランスフェクトされる。多量体が所望される場合、宿主細胞は、多量体を構成する各鎖をコードするＤＮＡで形質転換され、宿主細胞は、所望の様式で多量体の鎖をアセンブルすることができるように最適に選択される。宿主細胞がトランスフェクション前に免疫グロブリンを生成している場合、ヘテロ抗体を生成するには、軽鎖または重鎖に融合した結合パートナーをトランスフェクトするだけで済む。結合パートナードメインを有する１つ以上のアームと、相手の（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ）可変領域を有する１つ以上のアームとを有する前述の免疫グロブリンは、結合パートナーリガンド及び抗原または治療部分に対する二重特異性をもたらす。多重同時形質転換細胞を上述の組換え法に使用すると、上記に詳解したヘテロ四量体免疫グロブリン等の複数の特異性を有するポリペプチドが生成される。
本発明のイムノアドヘシンにおいて免疫グロブリン軽鎖の存在は必要ではないが、免疫グロブリン軽鎖は、ＩＬ－２２－免疫グロブリン重鎖融合ポリペプチドに共有結合で会合して存在する場合がある。この場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、典型的に、ＩＬ－２２－免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡと共発現する。分泌されると、ハイブリッド重鎖及び軽鎖が共有結合で会合して、２つのジスルフィドで結合した免疫グロブリン重鎖－軽鎖ペアを含む免疫グロブリン様構造をもたらす。そのような構造の調製に好適な方法は、例えば、１９８９年３月２８日に発行された米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている。標的タンパク質をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞としては、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が挙げられる。例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされないか、または有害である場合、細菌において生成され得る。細菌におけるポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照されたい。発現後、Ｆｃ融合タンパク質は、可溶性画分において細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製することもできる。実施例のセクションに例示するように、さらなる精製方法としては、限定されるものではないが、プロテインＡカラムを使用した精製が挙げられる。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、好適なクローニング宿主または発現宿主であり、これには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。
グリコシル化されたタンパク質の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
植物細胞培養物も宿主として利用され得る。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を生成するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について説明している）を参照されたい。
脊椎動物細胞を宿主として使用してもよい。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）；ヒト胎児由来腎臓細胞（２９３細胞、または例えばＧｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されている２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されているＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載されているＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体生成に好適なある哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。
Ｃ．アッセイ
本明細書において提供される組成物（例えば、医薬組成物）、またはそれらの構成成分は、当該分野で公知の様々なアッセイにより、それらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について特定されるか、スクリーニングされるか、または特徴付けられ得る。
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様において、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング分析、スキャッチャードによる細胞表面結合、表面プラズモン共鳴等の公知の方法により、その受容体結合活性について試験される。別の態様では、競合アッセイを使用して、ＩＬ－２２受容体への結合についてＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質と競合する抗体を特定してもよい。さらなる態様において、本発明のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、生体試料中に存在するＩＬ－２２受容体またはＩＬ２２結合タンパク質（可溶性受容体）の存在または量を検出するために使用され得る。さらなる態様において、本発明のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、生体試料中に存在するＩＬ－２２受容体の存在または量を検出するために使用され得る。ある実施形態では、生体試料を最初に非特異的アイソタイプ対照抗体でブロックして、試料中のあらゆるＦｃ受容体を飽和させる。例示的なアッセイについては、以下の実施例に記載する（例えば、実施例１に記載される効力アッセイ）。
２．活性アッセイ
一態様において、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）の生物学的活性を特定するためのアッセイが提供される。組成物（例えば、医薬組成物）中のＩＬ－２２ポリペプチドまたはＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の生物学的活性は、例えば、ＩＬ－２２受容体への結合、ＩＬ－２２シグナル伝達の刺激、ならびにＳＴＡＴ３、ＲｅｇＩＩＩ及び／またはＰａｎｃｒｅＰＡＰ発現の誘導を含み得る。さらに、心血管疾患または状態の場合、生物学的活性は、アテローム硬化性プラークの形成に影響を及ぼすこと、特にアテローム硬化性プラーク形成の形成阻害を含み得る。プラーク形成の阻害は、当業者に公知である任意の好適な画像法によって評価することができる。
３．安定性アッセイ
一態様において、組成物の安定性を判定するためのアッセイが提供される。例えば、組成物（例えば、医薬組成物）は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することにより、及び／または目視検査により）；ＲＯＳ形成の評価（例えば、光ストレスアッセイまたは２，２’－アゾビス（２－アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）ストレスアッセイを使用することにより）；タンパク質の特定のアミノ酸残基（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＭｅｔ残基）の酸化；カチオン交換クロマトグラフィー、画像キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）、またはキャピラリーゾーン電気泳動を使用した電荷不均一性の評価；アミノ末端またはカルボキシ末端配列分析；質量分光分析；還元されたポリペプチド及びインタクトなポリペプチド（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質）を比較するＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；ペプチドマップ（例えば、トリプシンまたはＬＹＳ－Ｃ）分析；タンパク質の生物学的活性または標的結合機能（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ－２２受容体に対する結合）の評価等を含む、多様な異なる方法で定性的及び／または定量的に評価することができる。不安定性には、凝集、脱アミド（例えば、Ａｓｎ脱アミド）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化及び／またはＴｒｐ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン（複数可）、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化差異等のうちのいずれか１つ以上が関わり得る。例示的なアッセイについては、以下の実施例、例えば、実施例１及び実施例３に記載する。
Ｄ．組成物中に使用するためのコンジュゲート
本発明はまた、検出、配合、半減期延長、免疫原性の軽減、または組織浸透のための１つ以上の薬剤にコンジュゲートされた、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含むコンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。例示的なコンジュゲーションとしては、限定されるものではないが、ＰＥＧ化及び放射性同位元素への結合が挙げられる。
別の実施形態では、コンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされて放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む。放射性コンジュゲートの生成には、多様な放射性同位元素が利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位元素が挙げられる。放射性コンジュゲートを検出のために使用する場合、これは、シンチグラフィー試験のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（別名、磁気共鳴画像法、ＭＲＩ）のためのスピン標識、例えば、再びヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄を含み得る。
Ｅ．治療方法及び組成物の使用
本明細書において提供される組成物（例えば、医薬組成物）のいずれかは、治療方法及び使用、例えば、以下に記載する治療方法及び使用のいずれかで使用され得る。
ａ）炎症性腸疾患
一態様において、薬物として使用するための組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）が提供される。さらなる態様において、ＵＣ及びＣＤを含むＩＢＤを処置することに使用するための組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）が提供される。ある実施形態では、処置方法において使用するための組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）が提供される。ある実施形態では、本発明は、有効量のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を個体に投与することを含む、ＵＣまたはＣＤを有する個体を処置する方法において使用するための組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を提供する。そのような一実施形態では、本方法は、例えば以下に記載されるような、少なくとも１つの追加の治療剤を有効量で個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、本発明は、上皮の増殖、分化、及び／または遊走を強化することに使用するための組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を提供する。ある特定の実施形態では、上皮組織は、腸上皮組織である。ある実施形態では、本発明は、上皮の増殖、分化、及び／または遊走を強化するために有効量の組成物を個体に投与することを含む、個体における上皮の増殖、分化、及び／または遊走を強化する方法において使用するための組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を提供する。さらに他の実施形態において、本発明は、糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、糖尿病性創傷治癒、メタボリックシンドローム及びアテローム性硬化症を処置することに使用するための組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を提供する。ある実施形態では、本発明は、有効量の組成物を個体に投与することを含む、個体の糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、糖尿病性創傷治癒、メタボリックシンドローム及びアテローム性硬化症を処置する方法において使用するための組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を提供する。全体が参照により本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／１４５０１６号を参照されたい。上記の実施形態のうちのいずれかによる「個体」または「対象」または「患者」は、好ましくはヒトである。
さらなる態様において、本発明は、薬物の製造または調製における組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）の使用を提供する。一実施形態において、薬物は、ＩＢＤの処置及び創傷治癒のためのものである。さらなる実施形態において、薬物は、ＩＢＤを有する個体に有効量の薬物を投与することを含む、ＩＢＤの処置及び創傷治癒の方法において使用するためのものである。そのような一実施形態では、本方法は、例えば以下に記載されるような、少なくとも１つの追加の治療剤を有効量で個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態において、薬物は、腸上皮細胞における炎症応答を抑制するためのものである。さらなる実施形態において、薬物は、上皮の増殖、分化、及び／または遊走を強化するために有効な量の薬物を個体に投与することを含む、個体における上皮の増殖、分化、及び／または遊走を強化する方法において使用するためのものである。上記の実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
さらなる態様において、本発明は、ＵＣ及びＣＤを含むＩＢＤを処置する方法を提供する。一実施形態において、本方法は、ＩＢＤを有する個体に有効量の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を投与することを含む。そのような一実施形態では、本方法は、以下に記載されるような、少なくとも１つの追加の治療剤を有効量で個体に投与することをさらに含む。上記の実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
さらなる態様において、本発明は、個体における上皮の増殖、分化、及び／または遊走を強化する方法を提供する。一実施形態において、本方法は、上皮の増殖、分化、及び／または遊走を強化するために有効量の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を個体に投与することを含む。一実施形態において、「個体」は、ヒトである。
ｂ）他の治療適応症
本発明は、心血管疾患及び状態、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症及び敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、ならびに糖尿病のための組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を提供する。所与の疾患もしくは状態の防止、処置、または重症度の低減のために適切な本発明の組成物の投与量は、上に定義したような、処置される疾患または状態のタイプ、疾患または状態の重症度及び経過、薬剤が防止目的で投与されるか治療目的で投与されるか、治療歴、対象の病歴及び化合物への応答、ならびに主治医の裁量に左右される。化合物は、一度に、または一連の処置にわたって対象に好適に投与される。好ましくは、ヒトにおける試験前に、最初にインビトロで、次に有用な動物モデルにおいて、用量－応答曲線及び本発明の医薬組成物を決定することが望ましい。
一態様において、本発明は、心血管疾患または障害、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症及び敗血症、ＧＶＨＤ、ならびにインスリン関連障害の処置方法を提供する。一実施形態において、本方法は、治療有効量の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を、それを必要とする対象に投与することを含む。別の態様では、本発明は、心血管疾患または障害、メタボリックシンドローム、ＧＶＨＤ、及びインスリン関連障害の進行を遅延または減速させる方法を提供する。一実施形態において、本方法は、疾患、状態、または障害と診断された対象に、有効量の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を投与することを含む。別の態様では、本発明は、心血管疾患または障害、ＧＶＨＤ、及びインスリン関連障害の兆候を防止する方法を提供する。一実施形態において、本方法は、有効量の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を、疾患、状態、または障害のリスクがある対象に投与することを含み、この組成物は、疾患、状態、または障害の兆候の発生に対して有効である。一態様において、本発明は、ＧＶＨＤの処置方法を提供する。別の態様では、本発明は、ＧＶＨＤの進行を遅延または減速させる方法を提供する。一実施形態において、本方法は、疾患、状態、または障害と診断された対象に、有効量のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。
心血管疾患及び状態
一態様において、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、対象における心血管疾患もしくは状態の臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的な兆候（症状及び兆候の両方を含む）の発生または進行に対する治療効果、防止効果、または予防効果をもたらす。一実施形態において、疾患または状態は、アテローム性硬化症である。一実施形態において、兆候は、アテローム硬化性プラーク形成及び／または血管炎症を含む。別の実施形態では、対象には、心血管疾患のリスクがある。概して、リスクのある対象は、過去に本明細書に記載される心血管疾患もしくは状態になったことがある者か、または心血管疾患もしくは状態の遺伝的素因を有する者である。
心血管疾患及び状態の処置の有効性は、心血管疾患の評価に一般的に使用される様々な評価手段によって測定することができる。例えば、心血管の健康状態を評価することができる。心血管の健康状態は、限定されるものではないが、例えば、血液検査（例えば、総コレステロール、ＬＤＬ－Ｃ、ＨＤＬ－Ｃ、トリグリセリド、Ｃ反応性タンパク質、フィブリノーゲン、ホモシステイン、空腹時インスリン、フェリチン、リポタンパク質、及びＬＰＳ）、血圧、聴診、心電図、心臓負荷試験、心臓画像診断（例えば、冠状動脈カテーテル法、心エコー図、血管内超音波、陽電子放射断層撮影、コンピュータ断層血管造影、及び磁気共鳴画像法）によって評価することができる。
メタボリックシンドローム
一態様において、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、対象におけるメタボリックシンドローム（または代謝障害もしくは疾患）の臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的な兆候（症状及び兆候の両方を含む）の発生または進行に対する治療効果、防止効果、または予防効果をもたらす。１つ以上の実施形態において、対象には、メタボリックシンドロームのリスクがある。
メタボリックシンドロームの処置の有効性は、メタボリックシンドロームの評価に一般的に使用される様々な評価手段によって測定することができる。例えば、肥満を測定することができる。さらなる例として、高血糖症、脂質異常症、インスリン抵抗性、慢性脂肪組織炎症、及び／または高血圧症を測定してもよい。Ｃ反応性タンパク質、ＩＬ－６、ＬＰＳ、及びプラスミノーゲン活性化因子阻害因子１のうちの１つ以上のレベルの低下を測定してもよい。これらの測定は、当該分野で周知の任意の方法によって行うことができる。
インスリン関連障害
インスリン関連障害に関しては、「処置」という用語は、障害の治療的処置と予防的または防止的な手段との両方を指し、その目的は、標的とする病的状態または障害を防止または減速（減弱）することである。処置を必要とする者には、インスリン関連障害を既に有する者だけでなく、かかる障害を有する傾向にある者、または障害を防止しようとする者が含まれる。
一態様において、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、対象におけるインスリン関連障害の臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的な兆候（症状及び兆候の両方を含む）の発生または進行に対する防止効果または予防効果をもたらす。一実施形態において、障害は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、または妊娠糖尿病である。一実施形態において、病状または病理学的な兆候は、膵臓（例えば、島細胞）によるインスリン生成がほとんどまたは全くないこと、インスリン抵抗性、及び高血糖症のうちの１つ以上を含む。別の実施形態では、対象には、インスリン関連障害のリスクがある。概して、リスクのある対象は、インスリン関連障害の遺伝的素因を有するか、島細胞の自己免疫破壊を誘発するウイルス（例えば、エプスタインバーウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス、もしくはサイトメガロウイルス）に曝露されたことがあるか、肥満であるか、前糖尿病性である（血糖値が正常より高い）か、または妊娠糖尿病を有する。
インスリン関連障害の処置の有効性は、かかる障害の評価に一般的に使用される様々な評価手段によって測定することができる。例えば、Ｉ型糖尿病及びＩＩ型糖尿病はいずれも、糖化ヘモグロビン検査（Ａ１Ｃ）、通常の血糖検査、及び空腹時血糖検査のうちの１つ以上を用いて評価することができる。Ｉ型は、血液中の自己抗体及び／または尿中のケトンを検査することによって評価することもできる。ＩＩ型は、経口グルコース負荷試験によって評価することもできる。
急性内毒素血症及び敗血症
一態様において、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、対象における急性内毒素血症、敗血症、またはその両方の臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的な兆候（症状及び兆候の両方を含む）の発生または進行に対する治療効果、防止効果、または予防効果をもたらす。１つ以上の実施形態において、対象には、急性内毒素血症、敗血症、またはその両方のリスクがある。
急性内毒素血症、敗血症、またはその両方の処置の有効性は、急性内毒素血症、敗血症、またはその両方の評価に一般的に使用される様々な評価手段によって測定することができる。例えば、ＬＰＳまたは炎症性マーカーのレベルの低下を測定することができる。これらの測定は、当該分野で周知の任意の方法によって行うことができる。
創傷治癒
創傷治癒を測定するには多様な方法がある。多くの場合、画像を撮って線寸法、周囲長、及び面積を計算する。ＮＩＨには、画像から創傷面積の測定を可能にする無料プログラムのＩｍａｇｅ Ｊがある。中心に向かう外縁の移動に基づいて、最終的な治癒の予後を、初期の治癒速度から推定することができる。これはいくつかの数学的方程式を使用して行われ、その中で最も一般的なものは、改変されたギルマンの方程式である。目視検査に加えて、分光法またはＭＲＩにより、創傷治癒の測定を補助することもできる。例えば、Ｄａｒｇａｖｉｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，２０１３，４１：３０－４２、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．Ｒａｄｉｏｌ．８０：９３９－４８を参照されたい。治癒が遅い／不十分である場合、感染及び悪性病変の可能性を排除または判定するために、創縁の生検を取ってもよい。ある実施形態では、創傷治癒の加速または向上は、ＩＬ－２２で処置された創傷及び対照創傷における創傷閉鎖を比較することによって評価され得る。ある実施形態では、創傷治癒の加速または向上は、対照よりも少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％もしくは９０％速いかまたは良好である。
ある態様において、本発明は、創傷における活動性感染、微生物汚染、またはコロニー形成の有無にかかわらず創傷の治癒を促進／加速／向上させる方法を提供する。組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、感染創傷の処置または感染創傷治癒の促進／加速／向上のために使用され得る。ある実施形態では、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、感染の存在下における、創傷の処置または創傷治癒の促進／加速／向上のために使用され得る。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、感染リスクがある微生物汚染またはコロニー形成の存在下における、創傷の処置または創傷治癒の促進／加速／向上のために使用され得る。さらなる実施形態では、創傷治癒処置を必要とする患者は、糖尿病患者であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷、例えば、糖尿病性足部潰瘍である。いくつかのさらなる実施形態では、創傷は、感染した糖尿病性創傷、例えば、感染した糖尿病性足部潰瘍である。
ＧＶＨＤ
一態様において、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＧＶＨＤの臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的な兆候（症状及び兆候の両方を含む）の発生に対する予防効果、またはその進行に対する治療効果をもたらし得る。例えば、本方法は、処置を必要とする対象に、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物（医薬組成物を含む）を有効量で投与することを含む、ＧＶＨＤを処置する方法を提供する。本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物の投与は、疼痛、発疹、皮膚肥厚、皮膚もしくは目の黄変、口腔内の乾燥もしくは潰瘍、味覚異常、ドライアイ、感染、または体重減少を含むＧＶＨＤの１つ以上の症状を低減させ得る。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物は、例えば、免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、またはタクロリムス）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、シロリムスまたはエベロリムス））、化学療法剤（例えば、イマチニブ、ペントスタチン、メトトレキサート、またはサリドマイド）、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト）、ステロイド（例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、局所ステロイド、またはステロイド点眼薬）、光線処置（例えば、体外循環式光化学療法）、ヒドロキシクロロキン、抗線維化剤（例えば、ハロフジノン）、モノクローナル抗体（例えば、アレムツズマブ、インフリキシマブ、またはリツキシマブ）、またはそれらの組み合わせを含む、追加のＧＶＨＤ療法と組み合わせて投与され得る。
本発明の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用してもよい。例えば、本発明の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、少なくとも１つの追加の治療剤と共投与されてもよい。ある実施形態では、追加の治療剤は、限定されるものではないが、メトトレキサート、ＴＮＦ阻害剤、ＴＮＦアンタゴニスト、メサラジン、ステロイド、デキサメタゾン、アザチオプリン、及びそれらの組み合わせを含む、炎症応答を低減させる免疫抑制剤である。炎症応答を低減させる好適な追加の治療剤としては、限定されるものではないが、５－アミノサリチル酸（５－ＡＳＡ）、メルカプトプリン（別称、６－メルカプトプリンまたは６－ＭＰ）、またはそれらの組み合わせが挙げられる。ある実施形態では、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、ＩＢＤの処置のために、炎症応答を低減させる１つ以上の追加の治療剤（例えば、５－ＡＳＡ、６－ＭＰ、またはＴＮＦアンタゴニスト）と共投与されてもよい。ある他の実施形態では、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、ＩＢＤの処置のために、エトロリズマブ等のインテグリンアンタゴニストと共投与されてもよい。一実施形態において、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、ＩＬ－２２アゴニストと組み合わせて使用される。
糖尿病性足部潰瘍の処置等、慢性創傷治癒を加速するために、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）の投与を、１つ以上の追加の創傷治癒剤と組み合わせてもよい。好適な追加の創傷治癒剤としては、限定されるものではないが、成長因子（例えば、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ、及びＶＥＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、血管形成因子（例えば、ＨＧＦ、ＴＮＦ－α、アンジオゲニン、ＩＬ－８、アンジオポエチン１及び２、Ｔｉｅ－２、インテグリンα５、マトリックスメタロプロテイナーゼ、一酸化窒素、ならびにＣＯＸ－２）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）ファミリーのメンバー（例えば、ＰＤＧＦ－Ａ、ＰＤＧＦ－Ｂ、ＰＤＧＦ－Ｃ、及びＰＤＧＦ－Ｄ）、インスリン成長因子（ＩＧＦ）ファミリーのメンバー（例えば、ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）ファミリーのメンバー（例えば、ＴＧＦ－α及びＴＧＦ－β）、ならびに同化酸素（真空療法）が挙げられる。ある実施形態では、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、本明細書に記載される１つ以上の追加の創傷治癒剤及び／または局所投与に使用するのに好適な１つ以上の抗菌剤もしくは抗生物質と共投与され得る。例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００６／１３８４６８を参照されたい。そのような実施形態では、抗生物質は、限定されるものではないが、スルファジアジン銀、すなわちシルバデン（ｓｉｌｖａｄｅｅｎ）を含む硫黄抗生物質であり得る。共投与される１つ以上の追加の薬剤は、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）と同時に投与されてもよいし、あるいは連続的に投与されてもよい。
さらなる例示的な実施形態において、心血管疾患もしくは状態またはメタボリックシンドロームの防止または処置が標的である場合、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）の投与は、スタチン類（例えば、ロバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、及びシンバスタチン）、胆汁酸結合樹脂（コレスチポール、コレスチラミンスクロース、及びコレセベラム）、エゼチミブ、またはエゼチミブ－シンバスタチン合剤等のコレステロール低下剤；シクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えば、アスピリン）、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）受容体阻害剤（例えば、クロピドグレル、プラスグレル、チカグレロル、及びチクロピジン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、シロスタゾール）、糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡ阻害剤（例えば、アブシキシマブ、エプチフィバチド、及びチロフィバン）、アデノシン再取り込み阻害剤（例えば、ジピリダモール）、トロンボキサン阻害剤（例えば、トロンボキサンシンターゼ阻害剤、トロンボキサン受容体アンタゴニスト、及びテルトロバン）等の抗血小板剤；アルプレノロール、ブシンドロール、カルテオロール、カルベジロール、ラベタロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、トチュウ、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、セリプロロール、エスモロール、メトプロロール、ネビボロール、ブタキサミン、ＩＣＩ－１１８，５５１、及びＳＲ ５９２３０Ａ等のベータ遮断薬；カプトプリル、ゾフェノプリル、ジカルボン酸含有剤（例えば、エナラプリル、ラミプリル、キナプリル、ペリンドプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、イミダプリル、及びゾフェノプリル）、ホスホン酸含有剤（例えば、ホシノプリル）、カソキニン、ラクトキニン、ラクトトリペプチド（例えば、生菌のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓにより生成される、またはカゼインに由来する、Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ、及びＩｌｅ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ）等のアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤；ジヒドロピリジン類（例えば、アムロジピン、アラニジピン、アゼルニジピン、バルニジピン、ベニジピン、シルニジピン、クレビジピン、イスラジピン、エホニジピン、フェロジピン、ラシジピン、レルカニジピン、マニジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニルバジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、及びプラニジピン）、フェニルアルキルアミン（例えば、ベラパミル）、ベンゾチアゼピン類（例えば、ジルチアゼム）、ミベフラジル、ベプリジル、フルスピリレン、及びフェンジリン等のカルシウムチャネル遮断薬；高限界ループ利尿薬（例えば、フロセミド、エタクリン酸、トルセミド及びブメタニド）、チアジド類（例えば、ヒドロクロロチアジド酸）、炭酸脱水酵素阻害剤（例えば、アセタゾラミド及びメタゾラミド）、カリウム節約型利尿薬（例えば、アルドステロンアンタゴニスト：スピロノラクトン、ならびに上皮性ナトリウムチャネル遮断薬：アミロライド及びトリアムテレン）、及びカルシウム節約型利尿薬等の利尿薬、ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体の投与と組み合わせたものか、またはそれを補うものであり得る。
インスリン関連障害またはメタボリックシンドロームの場合、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）の投与は、様々な治療剤の投与と組み合わせたものか、またはそれを補うものであり得る。Ｉ型糖尿病（インスリン依存性真性糖尿病すなわちＩＤＤＭ）の場合、本明細書に記載されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を、レギュラーインスリン補充療法（速効型インスリン及び持効性インスリンを含む）、免疫抑制処置、膵島移植、及び幹細胞療法のうちの１つ以上と組み合わせてもよい。一実施形態において、レギュラーインスリン補充療法は、限定されるものではないが、レギュラーインスリン（例えば、ＨＵＭＵＬＩＮ Ｒ（登録商標）、ＮＯＶＯＬＩＮ Ｒ（登録商標））、インスリンイソフェン（例えば、ＨＵＭＵＬＩＮ Ｎ（登録商標）、ＮＯＶＯＬＩＮ Ｎ（登録商標））、インスリンリスプロ（例えば、ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））、インスリンアスパルト（例えば、ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））、インスリングラルギン（例えば、ＬＡＮＴＵＳ（登録商標））、及びインスリンデテミル（例えば、ＬＥＶＥＭＩＲ（登録商標））を含む。他の実施形態では、インスリン補充療法は、プラムリンチド（ＳＹＭＬＩＮ（登録商標））をさらに含む。
ＩＩ型糖尿病（インスリン非依存性真性糖尿病すなわちＮＩＤＤＭ）またはメタボリックシンドロームの場合、本明細書に記載される組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を、インスリン補充療法（上記に詳解したとおり）、肝臓によるグルコース生成を低下させる薬剤、膵臓によるインスリンの生成及び放出を刺激する薬剤、炭水化物の酵素分解を遮断する薬剤、またはインスリン感受性を高める薬剤のうちの１つ以上と組み合わせてもよい。一実施形態において、グルコース生成を低下させる薬剤は、メトホルミン（例えば、ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ（登録商標）及びＧＬＵＭＥＴＺＡ（登録商標））である。別の実施形態では、膵臓によるインスリンの生成及び放出を刺激する薬剤は、グリピジド（例えば、ＧＬＵＣＯＴＲＯＬ（登録商標）及びＧＬＵＣＯＴＲＯＬ ＸＬ（登録商標））、グリブリド（例えば、ＤＩＡＢＥＴＡ（登録商標）及びＧＬＹＮＡＳＥ（登録商標））またはグリメピリド（例えば、ＡＭＡＲＹＬ（登録商標））である。他の一実施形態では、炭水化物の酵素分解を遮断するか、またはインスリン感受性を高める薬剤は、ピオグリタゾン（例えば、Ａｃｔｏｓ）である。別の実施形態では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を、次のメトホルミン代替物：シタグリプチン（例えば、ＪＡＮＵＶＩＡ（登録商標））、サキサグリプチン（例えば、ＯＮＧＬＹＺＡ（登録商標））、レパグリニド（例えば、ＰＲＡＮＤＩＮ（登録商標））及びナテグリニド（例えば、ＳＴＡＲＬＩＸ（登録商標））、エキセナチド（例えば、ＢＹＥＴＴＡ（登録商標））及びリラグルチド（例えば、ＶＩＣＴＯＺＡ（登録商標））のうちの１つと組み合わせてもよい。別の実施形態では、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を、経口血糖降下剤、例えば、スルホニル尿素と組み合わせてもよい。
妊娠糖尿病またはメタボリックシンドロームの場合、本明細書に記載される組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を、経口血糖制御薬と組み合わせてもよい。一実施形態において、この薬物はグリブリドである。
併用療法は、「相乗効果」をもたらし、「相乗的」である、すなわち、活性成分を合わせて使用した場合に達成される効果が、化合物を別々に使用することから生じる効果の総和を上回ることが証明され得るものである。相乗的効果は、活性成分が、（１）組み合わされた単位用量配合物に共配合され、投与もしくは送達される場合、（２）別々の配合物として交互もしくは並行して送達される場合、または（３）何らかの他のレジメンによって送達される場合に実現され得る。交互療法で送達される場合、相乗的効果は、化合物が、例えば別々のシリンジでの異なる注射により、連続的に投与または送達される場合に実現され得る。概して、交互療法の間は、有効投与量の各活性成分が連続的に、すなわち順次投与されるが、併用療法では、有効投与量の２種以上の活性成分が一緒に投与される。
上述のかかる併用療法は、併用投与（同じまたは別々の配合物中に２種以上の治療剤が含まれる）、及び別々の投与を包含し、別々の投与の場合、本発明の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）の投与は、追加の治療剤もしくは薬剤の投与前、投与と同時に、及び／または投与後に行うことができる。一実施形態において、組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）の投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約１か月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に行われる。
本発明の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、局所、及び鼻腔内、ならびに局所処置に所望される場合は病巣内投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短時間であるかまたは慢性であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば静脈内注射または皮下注射等の注射によるものであり得る。単回投与または様々な時点にわたる複数投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない、様々な投薬スケジュールが本明細書では企図される。
本発明の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、適切な医療行為と一致した様式で配合、投薬、及び投与される。この文脈において考慮すべき要素としては、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、及び医療従事者に公知の他の要素が挙げられる。組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、必ずしもそうである必要はないが、場合により、問題の障害を防止または処置するために現在使用されている１種以上の薬剤と共に配合される。かかる他の薬剤の有効量は、配合物中に存在する融合タンパク質の量、障害または処置のタイプ、及び上記に詳解した他の要素に左右される。これらは概して、本明細書に記載されるものと同じ投与量及び投与経路で、または本明細書に記載される投与量の約１～９９％、もしくは適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投与量及び任意の経路で使用される。
疾患の防止または処置に関して、本発明の組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）の適切な投与量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、処置される疾患のタイプ、Ｆｃ領域のタイプ、疾患の重症度及び経過、融合タンパク質が防止目的で投与されるか治療目的で投与されるか、治療歴、患者の病歴及びＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質への応答、ならびに主治医の裁量に左右される。組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）は、一度に、または一連の処置にわたって患者に好適に投与される。疾患のタイプ及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別々の投与によるか、または連続注入によるかを問わず、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）または約０．１μｇ／ｋｇ～１．５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ）が、患者に投与するための初回候補投与量であり得る。１つの典型的な一日投与量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲であり得る。数日以上にわたる反復投与の場合は、状態に応じて、通常、疾患症状の所望される抑制が生じるまで処置を持続させることになる。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の例示的な投与量の１つは、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。ある他の投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、及び約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲を含む。したがって、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇのうちの１つ以上の用量（またはそれらの任意の組み合わせ）を患者に投与してもよい。局所創傷治癒のためには、約０．００１ｍｇ／ｃｍ２～約１０ｍｇ／ｃｍ２創傷面積、約０．０５ｍｇ／ｃｍ２～約５ｍｇ／ｃｍ２創傷面積、約０．０１ｍｇ／ｃｍ２～約１ｍｇ／ｃｍ２創傷面積、約０．０５ｍｇ／ｃｍ２～約０．５ｍｇ／ｃｍ２創傷面積、約０．０１ｍｇ／ｃｍ２～約０．５ｍｇ／ｃｍ２創傷面積、約０．０５ｍｇ／ｃｍ２～約０．２ｍｇ／ｃｍ２創傷面積、または約０．１ｍｇ／ｃｍ２～約０．５ｍｇ／ｃｍ２創傷面積のうちの１つ以上の用量（またはそれらの任意の組み合わせ）を患者に投与してもよい。ある実施形態では、約０．０１ｍｇ／ｃｍ２、０．０２ｍｇ／ｃｍ２、０．０３ｍｇ／ｃｍ２、０．０４ｍｇ／ｃｍ２、０．０５ｍｇ／ｃｍ２、０．０６ｍｇ／ｃｍ２、０．０７ｍｇ／ｃｍ２、０．０８ｍｇ／ｃｍ２、０．０９ｍｇ／ｃｍ２、０．１ｍｇ／ｃｍ２、０．１５ｍｇ／ｃｍ２、０．２ｍｇ／ｃｍ２、０．２５ｍｇ／ｃｍ２、０．３ｍｇ／ｃｍ２、０．４ｍｇ／ｃｍ２、または０．５ｍｇ／ｃｍ２創傷面積のうちの１つ以上の用量を患者に投与してもよい。かかる用量は、間欠的に、例えば毎週または３週間毎に（例えば、約２～約２０、または例えば約６用量のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を患者が受けるように）投与されてもよい。より高い初回負荷用量に続いて、１回以上のより低い用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投薬レジメンも有用であり得る。この療法の進捗は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
上記の配合または治療方法のうちのいずれも、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の代わりに、またはそれに加えて、本発明のコンジュゲートを使用して行われてもよいことが理解される。
Ｆ．製品
本発明の別の態様では、上述の障害の処置、防止、及び／または診断に有用な材料を含む製品が提供される。本製品は、本明細書において提供される組成物（例えば、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）のうちのいずれかを含み得る。本製品は、容器と、容器に付いた、もしくは容器に関連付けられた、ラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の多様な材料から形成されていてよい。容器は、単独または別の組成物との組み合わせで状態の処置、防止及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグ、または皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。いくつかの実施形態では、組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質である。ラベルまたは添付文書は、選定された状態を処置するために組成物が使用されることを示す。いくつかの実施形態では、製品または容器は光から保護される。本製品は、本明細書に記載される組成物（例えば、医薬組成物）のうちのいずれかを含み得る。
いくつかの実施形態では、本製品は、約１ｍＬ以上、例えば、約１ｍＬ、約２ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、約５ｍＬ、約６ｍＬ、約７ｍＬ、約８ｍＬ、約９ｍＬ、約１０ｍＬ、またはそれ以上の容積を有するバイアルを含む。いくつかの実施形態では、容器は、約２ｍＬの容積を有するバイアルである。いくつかの実施形態では、バイアルは使い捨てである。いくつかの実施形態では、バイアルは、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、またはそれ以上のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、バイアルは、約１０ｍｇのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、バイアルは、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、５ｍＭのメチオニン、２４０ｍＭのスクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（ｐＨ７．１）に配合されたＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、容器閉鎖システムは、ガラスバイアル、ストッパー、及びキャップのうちの１つ以上、またはすべてを含む。
さらに、本製品は、（ａ）ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む本発明の組成物を内部に収容した第１の容器と、（ｂ）追加の治療剤を含む組成物を内部に収容した第２の容器とを含み得る。本発明のこの実施形態における製品は、組成物が特定の状態（例えば、ＩＢＤ、例えば、ＵＣもしくはクローン病）または本明細書に記載される任意の他の障害を処置するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含んでもよい。あるいは、またはさらに、本製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液といった薬学的に許容される緩衝液を含む第２（または第３）の容器をさらに含んでもよい。本製品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含め、商業及び使用者の立場から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
上記の製品のうちのいずれも、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の代わりに、またはそれに加えて、本発明のコンジュゲートを含み得ることが理解される。
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上記に提示した総説を考慮すると、様々な他の実施形態が実践され得ることが理解され、実施例は、特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。
実施例１：ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の安定性試験
これらの試験の目的は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の安定性と、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、２４０ｍＭのスクロース、５ｍＭのメチオニン、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０（ＰＳ２０）の液体配合物（ｐＨ７．１）の製造可能性を調査することであった。－７０、－２０、及び５℃の想定保管温度、ならびに２５、３０、及び４０℃のストレス温度における完全なｐＨスクリーニングを、ｐＨ５．５～７．６で１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質について行った。結果は、色、外観、及び透明度（ＣＡＣ）、濃度、ｐＨ、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）、ＤＳＣ、画像キャピラリー等電点電気泳動（ＩＣＩＥＦ）、ならびに効力により、ｐＨ７．１の配合物が好適であることを示した。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物を撹拌ストレスから保護するために適切なポリソルベート２０濃度仕様を決定するために、０．０％、０．０１％、０．０２％及び０．０４％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０と合わせた１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の撹拌試験を遂行した。０．０１％のポリソルベート２０がＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質に好適であると決定されたが、仕様範囲を考慮して、標的推奨量は０．０２％であった。１０ｍｇ／ｍＬにおけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の配合物スクリーニングに加えて、同じ前述の配合物中で１０ｍｇ／ｍＬにおけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の凍結解凍安定性試験を遂行した。－２０℃及び５℃で１週間保管し、３回の凍結解凍サイクルを経たＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質について、ＳＥ－ＨＰＬＣによる有意な変化はなかった。メチオニンの非存在下またはメチオニン（３、３．５、及び５ｍＭ）の存在下でＡＡＰＨストレス安定性試験を実施して、主要な受容体結合メチオニンの酸化電位及び付加されたメチオニンの保護価値を評価した。これらの試験は、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、２４０ｍＭのスクロース、５ｍＭのメチオニン、０．０２％のポリソルベート２０を含むｐＨ７．１の医薬組成物に１０ｍｇ／ｍＬで配合されたＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の物理的及び化学的安定性が、医薬組成物として使用するのに許容可能であり、この配合物におけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の製造が支持できるものであることを示す。
材料及び方法
材料
リン酸ナトリウム１０ｍＭで１０ｍｇ／ｍＬ及びｐＨ５．５におけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の出発材料を、試験開始前に５℃で保管した。この材料を、配合物スクリーニング１～３、ならびに撹拌及び凍結／解凍試験に使用した。分析標準（メチオニンなし）を用いて予備的なＡＡＰＨ試験を実施し、０、３、３．５、及び５ｍＭのメチオニンと配合したＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を用いて後続試験を実施した。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質配合物スクリーニング１
予備的な配合物スクリーニングでは、酢酸ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ｐＨ５．５、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）０．０２％（ｗ／ｖ）における最初の医薬組成物配合物中で１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の安定性を評価した。材料を滅菌濾過し、ラミナーフローフード内のオートクレーブ処理された２ｃｃのＦｏｒｍａ Ｖｉｔｒｕｍバイアルに１．０ｍＬを無菌的に充填した。バイアルにＤａｉｋｙｏの直径１３ｍｍのストッパーで栓をし、アルミニウム製フリップトップシールで封止し、－２０℃、５℃、２５℃、及び４０℃で直立させて保管した。試料をＳＥ－ＨＰＬＣ及びＤＳＣによって分析した。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質配合物スクリーニング２
１０ｍｇ／ｍＬの出発材料を、それぞれ、１０ｍＭの酢酸ヒスチジン及び２４０ｍＭのスクロース（ｐＨ５．５、ｐＨ６．０、ｐＨ６．５、及びｐＨ７．０）に対して、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ透析カセットによって透析した。透析後、ＰＳ２０を最終濃度０．０２％（ｗ／ｖ）になるように添加した。透析及び希釈ステップ後のタンパク質濃度を体積的に決定した。配合物スクリーニングの準備をするため、ｐＨ５．５、６．０、ｐＨ６．５、及びｐＨ７．０の材料を滅菌濾過し、ラミナーフローフード内のオートクレーブ処理された２ｃｃのＦｏｒｍａ Ｖｉｔｒｕｍバイアルに１．０ｍＬを無菌的に充填した。バイアルにＤａｉｋｙｏの直径１３ｍｍのストッパーで栓をし、アルミニウム製フリップトップシールで封止し、－２０℃、５℃、２５℃、及び３０℃で直立させて保管した。このスクリーニングの概要を表１に示す。
Figure 0007345479000004
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質配合物スクリーニング３
１０ｍｇ／ｍＬの出発材料を、それぞれ、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、２４０ｍＭのスクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）のＰＳ２０（ｐＨ６．５、ｐＨ７．０、ｐＨ７．３、７．６）、及び２０ｍＭのトリス（ｐＨ７．３）に対して、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ透析カセットによって透析した。透析及び希釈ステップ後のタンパク質濃度を体積的に決定した。配合物スクリーニングの準備をするため、ｐＨ６．５、ｐＨ７．０、ｐＨ７．３、ｐＨ７．６の材料、及びトリス（ｐＨ７．３）を滅菌濾過し、ラミナーフローフード内のオートクレーブ処理された２ｃｃのＦｏｒｍａ Ｖｉｔｒｕｍバイアルに１．０ｍＬを無菌的に充填した。バイアルにＤａｉｋｙｏの直径１３ｍｍのストッパーで栓をし、アルミニウム製フリップトップシールで封止し、－２０℃、５℃、２５℃、及び３０℃で直立させて保管した。このスクリーニングの概要を表２に示す。
Figure 0007345479000005
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の撹拌試験
撹拌試験は、様々なレベルのＰＳ２０を用い、室温で実施した。１０ｍｇ／ｍＬの出発材料を、０．０％、０．０１％、０．０２％、及び０．０４％（ｗ／ｖ）のＰＳ２０を含む１０ｍＭのリン酸ナトリウム、２４０ｍＭのスクロース（ｐＨ７．１）に配合した。タンパク質配合物を滅菌濾過し、１．０ｍＬを上述の２ｃｃバイアルに充填した。バイアルを水平方向に配置し、室温で２４時間にわたり、ベンチトップシェーカーを５０サイクル毎分の速度（モーター速度７０）で使用する連続振盪に供した。対照試料（０．０％ ＰＳ２０）を振盪せずに、室温で撹拌した試料の隣に置いた。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の凍結解凍安定性試験
１０ｍＭのリン酸ナトリウム、２４０ｍＭのスクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）のＰＳ２０を含むｐＨ６．５、７．０、７．３、及び７．６の配合物、ならびに２０ｍＭのトリス緩衝液を含むことを除いては同じ賦形剤を含むｐＨ７．３の１つの配合物において、バイアル中で凍結解凍したＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の安定性を評価した。タンパク質配合物を滅菌濾過し、１．０ｍＬを上述の２ｃｃバイアルに充填した。Ｔ＝０及び１週間にわたり、バイアルを－２０℃に置いた。バイアルを凍結し、合計３回室温まで解凍した。Ｔ＝０及び３回目の凍結解凍サイクルのみを分析した。
配合物中のメチオニンレベルを判定するためのＡＡＰＨストレス安定性試験
この試験の目的は、２，２’－アゾビス－２－メチル－プロパンイミドアミド二塩酸塩（ＡＡＰＨ）を使用して分解試料を生成して、アッセイ開発の裏付けとし、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の酸化を調査することであった。リン酸ナトリウム１０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ＰＳ２０ ０．０２％（ｗ／ｖ）、ｐＨ７．１で、メチオニン０、３、及び３．５ｍＭにおいて、１０ｍｇ／ｍｌのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物を、ＡＡＰＨストレスに供した。これらの試料を、１ｍＭのＡＡＰＨと共に４０℃で２４時間インキュベートした。ＡＡＰＨストレスが完了したら、試料を配合物緩衝液へと緩衝液交換し、アリコートを取り、後の分析のために－７０℃で凍結させた。上記の試料を、同一の様式で事前にストレスを与えた、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、２４０ｍＭのスクロース、０．０２％のＰＳ２０、ｐＨ７．１、５ｍＭのメチオニンと比較した。
アッセイ
色、外観、及び透明度
黒及び白の背景を有する光検査ステーションを使用して、白色蛍光灯の下で試料の色、外観、及び透明度を視覚的に評価した。
ｐＨ
溶液のｐＨは、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ微小電極を備えたＳｅｖｅｎＭｕｌｔｉ Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ｐＨメーターを使用して測定した。試験前に、ｐＨメーターの標準化を行った。較正には、ｐＨ７．０及びｐＨ４．０の標準溶液を使用した。
体積的なタンパク質濃度（強度）
Ａｇｉｌｅｎｔ ８４５３を使用して、吸収によるタンパク質濃度または強度を測定した。測定前に、試料をそれぞれの配合物緩衝液で体積的に約０．５ｍｇ／ｍＬまで希釈した。光路長１．０ｃｍの石英キュベットで吸収を測定した。それぞれの配合物緩衝液を用いて計器をブランクにした。タンパク質濃度は、２８０ｎｍ（Ａｍａｘ）及び３２０ｎｍ（Ａ３２０）における吸光度、ならびに０．９８（ｍｇ／ｍＬ）－１ｃｍ－１の消衰係数（ε）を使用して計算した。
Figure 0007345479000006
サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣを用いてサイズ排除クロマトグラフィーを行った。分離は、ＴＯＳＯＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬ ３０ｃｍカラムにて、周囲温度で行った。移動相は０．５ｍＬ／分の流速に維持した。配合物スクリーニング１では試料を希釈せずに注入したが、後続のスクリーニングでは、注入前に０．２０Ｍリン酸カリウム、０．２５Ｍ塩化カリウム、ｐＨ６．２±０．１の移動相中２ｍｇ／ｍＬに希釈した。試料当たりタンパク質５０μｇの注入を２８０ｎｍで検出した。各試料の分析時間は３０分であった。試薬ブランクは、それぞれの配合物緩衝液を用いて行った。ピーク面積はベースラインを基準として統合した。
画像キャピラリー等電点電気泳動（ＩＣＩＥＦ）
ＰｒｉｎＣＥ微量注入器及びフルオロカーボン被覆キャピラリーカートリッジ（１００μｍ×５ｃｍ）（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ）を備えたｉＣＥ２８０分析器（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ）により、電荷変異体分布を評価した。重鎖Ｃ末端リジン残基を除去するために、希釈ステップ後、１：１０００（ｗ／ｗ）の酵素：基質比で、カルボキシペプチダーゼＢ（ＣｐＢ）を各試料に添加した。さらに、シアリダーゼＡを添加してシアル酸を除去した。ＣｐＢ及びシアリダーゼＡを添加した後、試料を３７℃で１０分間インキュベートした。インキュベートした試料を、７００μＬの１％メチルセルロース、１２１８μＬの精製水、８μＬのファーマライト（ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ）８－１０．５、５５μＬのファーマライト５－８、１５μＬのｐＩマーカー５．１２、４μＬのｐＩマーカー７．０５の混合物からなる両性電解質溶液と混合した。８０ｍＭリン酸の陽極液及び１００ｍＭ水酸化ナトリウムの陰極液（いずれも０．１％のメチルセルロース中）を用い、１５００Ｖの電位を１分間、続いて３０００Ｖの電位を５分間導入することにより、試料に集光した。キャピラリーを通して電荷結合素子デジタルカメラのレンズに２８０ｎｍの紫外（ＵＶ）光を通過させることにより、集光された電荷変異体の画像を得た。
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及びトリプトファン自家蛍光による熱安定性
ＤＳＣは、試料の温度を上げるために必要な熱量の差が温度の関数として直線的に測定される熱分析技術である。融点Ｔｍ及び融解の開始温度は、タンパク質の熱変性に対する感受性を決定し得る。融合分子は、全長モノクローナル抗体よりも大幅に低い温度で融解する。したがって、熱安定性に対するｐＨの影響を迅速に評価して配合物開発のさらなる指針とするために、ＤＳＣを用いた。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を、様々なｐＨの配合物緩衝液（ｐＨ５．５～７．６）中で１ｍｇ／ｍＬに希釈した。対応するｐＨの配合物緩衝液５００μＬを含むウェルと交互になるように、試料を９６ウェルプレートにロードした。計器により、１５～９５℃の温度範囲にわたって１℃／分の速度で、各試料－緩衝液ペアをスキャンした。データ分析は、Ｏｒｉｇｉｎソフトウェア（Ｏｒｉｇｉｎｌａｂ、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）を使用して行った。
Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＮＥＳＬＡＢ ＲＴＥ ７循環水浴を備えたＨｏｒｉｂａ Ｊｏｂｉｎ Ｙｖｏｎ Ｆｌｕｏｒｏｍａｘ－４ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを使用し、トリプトファンの自家蛍光の発光スペクトルを使用した熱変性試験を実施した。トリプトファン発光スペクトルは、２９５ｎｍでの励起時に３００～４５０ｎｍから収集した。測定はおよそ５℃から６５℃まで２℃の間隔で繰り返した。３５０ｎｍにおける蛍光強度（λｍａｘ）をモニタリングして、熱勾配の全体を通したピーク蛍光の変化を評価した。得られたスペクトルのすべての主成分分析を使用して変性曲線を生成し、Ｔｏｎｓｅｔを変性曲線中の傾きにおける第１の変化として定義した。
トリプシンペプチドマップ（メチオニン酸化）
高解像度液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ－ＭＳ）によるペプチドマップ分析を使用して、メチオニンの酸化を評価した。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合ペプチド試料を、塩酸グアニジニウムによる変性条件、続いてジチオスレイトール（ＤＴＴ）による還元、及びヨード酢酸（ＩＡＡ）によるシステインのカルボキシメチル化に供した。次いで、還元及びカルボキシメチル化された試料を３７℃で４時間にわたってトリプシン酵素で消化して、トリプシンペプチドを生成した。結果として得られたトリプシンペプチドを、Ｔｈｅｒｍｏ ＯｒｂｉＴｒａｐ Ｅｌｉｔｅ ＩＩＩ ＭＳ－ＭＳ対応の質量分析計に接続されたＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＲＰ－ＨＰＬＣによって分離した。分離したトリプシンペプチド混合物のデータ分析は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアを使用して行った。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質には、８つのメチオニン含有トリプシンペプチドがある。天然のメチオニン含有トリプシンペプチドの質量の抽出イオンクロマトグラム（ＥＩＣ）を、酸化したメチオニン含有ペプチド（観察された場合）の質量のＥＩＣと比較した。各トリプシンペプチドのメチオニン酸化は、酸化したトリプシンペプチドの、全トリプシンペプチド（天然＋酸化型）に対する比からパーセンテージとして報告したものである。
効力アッセイ
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の効力アッセイは、ＩＬ２２－Ｒ１ａ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合するＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の能力を測定する。このアッセイでは、様々な濃度のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の参照標準、対照、及び試料を、ＩＬ２２－Ｒ１ａ ＥＣＤで被覆された９６ウェルプレートに加えた。結合したＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を、ヤギ抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰ抗体及びテトラメチルベンジジン基質溶液によって検出した。光学密度（ＯＤ）単位で表された結果を、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度に対してプロットし、平行曲線プログラムを使用して、参照標準に対するＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質試料（複数可）の効力測定値を計算した。
補正された相対効力値を決定するには、まず、試料のＳＡ値（ｘ）を入力し、相関線の方程式（ｙ＝１７８．２５－１０．６０４ｘ）を解くことにより、試料の相対効力予測値（ｙ）を決定した。次いで、相対効力予測値（ｙ）を１００から減算した。次いで、この値を相対効力測定値に加えて、試料の補正された相対効力値を求めた：補正された相対効力＝相対効力測定値＋（１００－ｙ）。
試料（複数可）中のＳＡレベルをモニタリングし、制御システムでＳＡに特異的な分析方法を使用して制御した。制御システムにおけるＳＡ含有量の許容判断基準は８～１２ｍｏｌ／ｍｏｌである。参照標準は、ＳＡの許容判断基準の下限である８ｍｏｌ／ｍｏｌのＳＡ含有量を有する。したがって、ＳＡと効力との間の負の相関のみを理由に、ＳＡ含有量が８ｍｏｌ／ｍｏｌを超える試料は人為的に効力が通常より低いように見える可能性がある。相関線を使用して、補正された相対効力値を生成すると、各試料のＳＡ含有量に特異的な補正がもたらされる。各試料の補正の特異性により、効力に対するＳＡの影響を過度に補償し得る固定補正値によって不明瞭になる可能性のある分子変化を検出する効力アッセイの能力が維持される。
結果
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質配合物スクリーニング１
酢酸ヒスチジン２０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ｐＨ５．５、ＰＳ２０ ０．０２％（ｗ／ｖ）において、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を１０ｍｇ／ｍＬで有する医薬組成物を、最初の試験として使用した。４０℃で１週間後、ＳＥ－ＨＰＬＣ分析による結果は、熱変性を示す、超高分子量種（ｖＨＭＷＳ）の増加を示した（表３及び図１）。これは、およそ３４℃であったＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の融解開始温度（Ｔｍ）のＤＳＣ測定によって確認された（図２Ａ）。これにより、投与後のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の物理的安定性に関する懸念が生じた。したがって、生理的条件を模倣するために、ｐＨ７．４のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）におけるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質のＴｍを測定した（図２Ｂ）。
Figure 0007345479000007
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質配合物スクリーニング２
ｐＨ７．４のＰＢＳを用いたＤＳＣ結果は、予期せぬことに、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質が比較的高いｐＨで比較的良好な熱安定性を有し得ることを示唆した。そのため、ｐＨ５．５、ｐＨ６．０、ｐＨ６．５、及びｐＨ７．０で１０ｍＭの酢酸ヒスチジンに配合した材料を用いる２回目のＤＳＣを行った。ＤＳＣ結果だけでなく、蛍光モニタリング（Ｔｒｐ蛍光）を利用した熱変性試験も、配合物のｐＨが上昇すると、ＴｍもｐＨ７．０で最大約１２℃上昇したことを示した（表４及び図３Ａ～３Ｄ）。これらの配合物における熱ストレスを受けたＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質をＳＥ－ＨＰＬＣによって分析すると、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は約ｐＨ６．５及び７．０で物理的安定性を達成することが示されたが、ＨＭＷＳの増加はｐＨ５．５及び６．０で観察された（図３Ｅ）。したがって、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の許容可能なｐＨ範囲を確立するために、より適切なｐＫａの緩衝液中でｐＨ７．０を標的として、最終スクリーニングを開始した。
Figure 0007345479000008
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質配合物スクリーニング３
最終的な配合物スクリーニングは、１０ｍＭリン酸ナトリウムでｐＨ６．５、７．０、７．３、及び７．６、ならびに２０ｍＭトリスでｐＨ７．３に設定した。これらの配合物をまずＤＳＣによって評価して、開始Ｔｍを決定した（図４）。ＤＳＣによると、ｐＨ７．３を超えると熱安定性の向上は小さくなるようである。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の推奨保管温度である５℃において、ｐＨ６．５、７．０、７．３、及び７．６で６週間保管した後のすべての配合物について、ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＩＣＩＥＦによって観察された変化はなかった（表５～９）。－７０℃、－２０℃、５℃、２５℃、３０℃、及び４０℃において、すべての時点で、すべての配合物について、視覚的外観、ｐＨ、及び強度の変化は観察されなかった。３０℃で６週間後（図５Ａ～５Ｂ）及び４０℃で２週間後（図５Ｃ～５Ｄ）、ｐＨ７．０、７．３、及び７．６における配合物のＳＥ－ＨＰＬＣによる分解速度は同等であった。３０℃のデータから、分解速度はｐＨ６．５で高く、ＤＳＣ結果と一致していた。メインピークの損失は主にＨＭＷＦ（高分子量形態）の増加によるものであり、ＬＭＷＦ（低分子量形態）では比較的わずかな増加が観察された。ＩＣＩＥＦによると、４週間後の３０℃では（図６）、ｐＨが７．０から７．３に、また７．６に上昇するにつれて、酸性ピークの分解速度及び形成速度が上がるという明確な傾向があった。ｐＨ６．５と７．０との間で、分解速度の差はほとんどなかった。ｐＨ７．０では、３０℃で４週間及び４０℃で１週間保管した後、効力アッセイにおいて損失は観察されなかった（表１０）。この配合物スクリーニングは、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０ ０．０２％、ｐＨ７．１で、１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物が、物理的安定性と化学的安定性との両方を維持するバランスをもたらすことを示唆した。したがって、７．１のｐＨを医薬配合物に選択した。
Figure 0007345479000009
Figure 0007345479000010
Figure 0007345479000011
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Figure 0007345479000014
Figure 0007345479000015
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の撹拌試験
タンパク質の安定性に対するＰＳ２０の影響を判定するために、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を用いてタンパク質撹拌試験を行った。撹拌試験の結果は、２４時間撹拌した後の０．０１％、０．０２％、及び０．０４％のＰＳ２０を含む試料において、撹拌なしの対照と比較して、ＣＡＣ、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＩＣＩＥＦ、及び濁度による差がないことを示した（表１１及び図７）。界面活性剤を含まない撹拌した試料では、凝集体のわずかな増加が観察され、濁度の増加はほとんどなく、目に見える微粒子は観察されなかった。この試験は、撹拌中にＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を保護するには０．０１％のＰＳ２０で十分であることを示唆している。最終的な配合物では、ＰＳ２０ ０．０１％～０．０３％（ｗ／ｖ）の仕様範囲における製造可能性を確保するため、０．０２％（ｗ／ｖ）のＰＳ２０を選択した。
Figure 0007345479000016
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の凍結解凍
－２０℃での凍結及び室温での解凍を３サイクル行った後、ＣＡＣ、ｐＨ、強度、及びＳＥ－ＨＰＬＣによる変化はなかった（表１２）。したがって、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物は、製造プロセス中に繰り返される凍結解凍サイクルに対して十分に耐性がある。
Figure 0007345479000017
ＡＡＰＨストレス試験
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の分析標準のＡＡＰＨ処理を用いた初期試験では、主要なメチオニン（Ｍ２５及びＭ１３９）の酸化に対する感受性が示された（図８）。したがって、これらのメチオニン残基を保護するために、５ｍＭのメチオニンを配合物に添加した。さらに、メチオニン５ｍＭの標的レベルより低いレベルがメチオニン酸化からの保護をもたらすかどうかを判定するために、３．５ｍＭ及び３ｍＭのメチオニンを含む試料にＡＡＰＨを負荷し、分析した。高解像度液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ－ＭＳ）によるトリプシンペプチドマップ分析を使用して、メチオニンの酸化を評価した。３．５ｍＭ及び３ｍＭのＡＡＰＨ処理試料を配合した参照バッチと、５ｍＭのメチオニンを配合し、ＡＡＰＨで処理したかまたは処理しなかった参照バッチとで、トリプシンペプチドマップデータを比較した。データは、メチオニン３ｍＭまたは３．５ｍＭの試料中で、５ｍＭのメチオニンを配合した材料と比較して、メチオニン酸化が有意に増加しないことを示す（表１３）。したがって、許容判断基準を設定する目的で、メチオニン３ｍＭを許容濃度の下限として設定した。
Figure 0007345479000018
結論
この試験は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質が、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、２４０ｍＭのスクロース、５ｍＭのメチオニン、及び０．０２％のポリソルベート２０をｐＨ７．１で含む医薬組成物に、１０ｍｇ／ｍＬで配合された場合、使用に好適であることを示す。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を撹拌ストレスから保護するには、０．０１～０．０４％のポリソルベート濃度が好適である。この配合物中の１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、－２０℃及び５℃で６週間にわたり、かつ－２０℃での凍結及び室温での解凍を３サイクル行った後に安定であった。
実施例２：本発明の医薬組成物の開発
本発明の医薬組成物（ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、滅菌液、１０ｍｇ／ｍＬ）の説明及び組成
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、静脈内注入用のやや褐色がかった黄色の無菌溶液として準備され、保存剤を含まない。使い捨ての２ｍＬバイアル各々には、標的のｐＨ７．１で１０ｍｇ（公称）のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質が含まれる。本発明の医薬組成物には、表１４に示す組成で１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質が配合される。
Figure 0007345479000019
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、医薬組成物中の唯一の活性成分である。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び医薬組成物の安定性データによって示されるように、配合物中の賦形剤と活性薬物との間の不適合性は存在しない。
賦形剤
表１５は、本発明の医薬組成物に使用される賦形剤と、対応する機能及び濃度のリストを含む。
Figure 0007345479000020
医薬配合物の開発
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の静脈内（ＩＶ）注入用の溶液として設計された使い捨ての医薬配合物を開発した。本発明の医薬組成物は、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、メチオニン５ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０ ０．０２％（ｗ／ｖ）、ｐＨ７．１における１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質からなる。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の医薬配合物を選択するために、配合物試験を行ったところ、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質が、リン酸ナトリウム、メチオニン、スクロース、及びポリソルベート２０をｐＨ７．１で含む溶液中で許容可能な安定性を有することが示された。この試験の結果に基づき、医薬組成物の配合を、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、メチオニン５ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０ ０．０２％（ｗ／ｖ）、ｐＨ７．１において１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質と定義した。
過剰量
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬配合物は、過剰量を含まない。
生理化学的及び生物学的特性
すべての特性評価試験をＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質に対して行った。光から保護した場合、組成物は２℃～８℃の推奨保管条件で安定した状態を保つ。万一に備えて、臨床材料のＩＶ投与にはインラインフィルター（０．２μｍ）を使用する。
開発期間中、光遮蔽法を使用して、サイズが≧２μｍ及び≧５μｍの目に見えない粒子のモニタリングを、拡張された特性評価として（制御方策の一部である≧１０μｍ及び≧２５μｍに加えて）実施する。これらの評価は、放出時のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物に行われる拡張された特性評価の一環として、また安定性に対して実施する。
凍結／解凍安定性試験結果
－２０℃での凍結及び室温での解凍を３サイクル行った後の、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチの凍結／解凍安定性をモニタリングした。３回の凍結／解凍サイクル後、生成物の質の変化は観察されなかった。
微生物学的属性
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の液体配合物は、いかなる保存剤も含まない。
適合性
静脈内注入
ＩＶ投与では、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬配合物（１０ｍｇ／ｍＬ）を、等張塩化ナトリウム溶液（０．９％ＮａＣｌ）と、メチオニンを含まない配合物緩衝液（１０ｍＭリン酸ナトリウム、２４０ｍＭスクロース、０．０２％［ｗ／ｖ］ポリソルベート２０、ｐＨ７．１）である希釈剤とで希釈した後、注入によって投与する。活性成分の適合性及び安定性を、次の模擬調製／投与条件下で試験した。
ａ）ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬配合物の臨床バッチ１を希釈剤で希釈し、臨床試験におけるＩＶ投与の用量範囲をカバーするため、食塩水バッグにおいて０．０２５～０．５ｍｇ／ｍＬの範囲内で希釈する。
ｂ）等張塩化ナトリウム溶液を含む注入バッグに短期間曝露する（バッグの生成物接触面材料は、ＩＶ適合性のためにポリ塩化ビニル［ＰＶＣ］及びポリオレフィン［ＰＯ］からなる）。
ｃ）ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、及びポリエーテルウレタン（ＰＥＵ）からなる生成物接触面を備えるＩＶ注入ライン及び注入補助具を使用する。
ｄ）ＩＶ適合性のため、０．２μｍのインラインフィルター（ポリエーテルスルホン［ＰＥＳ］のフィルター膜）を使用する。
ＩＶ投与では、食塩水バッグ試料を、拡散光に曝露しながら２℃～８℃で２４時間、３０℃で２４時間保管した後、注入ライン及びインラインフィルターに通してから試験した。食塩水バッグにおいて最も低い濃度では、生成物の安定性を維持するのに十分なｐＨを確保するために、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物を食塩水バッグに加える前に希釈剤で予め希釈することが必要であった。
次のように、生成物の質を評価するのに適切な方法を使用して試料を試験した：純度（サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）及び画像キャピラリー電気泳動等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）（≧１ｍｇ／ｍＬの試料の場合）による）、タンパク質濃度（紫外線による）、目に見えない粒子（光遮蔽による）、色、透明度／乳白光、及びｐＨ。１つの試料を食塩水バッグ中２ｍｇ／ｍＬで準備し、画像ｃＩＥＦによってアッセイしたところ、食塩水は生成物の化学的安定性に悪影響を及ぼさなかったことが示された。
バッチ処方（ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、滅菌液、１０ｍｇ／ｍＬ）
配合されるＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物溶液は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質溶液と比較して、濃度及び組成に関して変更しない。すなわち、医薬組成物製造プロセス中にさらなる調合または希釈は行われない。バルク医薬組成物のサイズは５リットルである。実際のバッチサイズは変更される場合がある。表１６には、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物のバッチ処方情報が含まれる。
Figure 0007345479000021
実施例３：ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の長期安定性試験
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチ２及び参照標準バッチの長期安定性試験
手順及び許容判断基準
表１７に記載する試験手順を使用してすべての試料を分析した。代表的な安定性は、表１８に提示するプロトコールを使用して、規定の時間間隔で評価したものである。
Figure 0007345479000022
Figure 0007345479000023
結果
上述のように－２０℃及び５℃で実施した、臨床バッチ２及び参照標準バッチからのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の長期安定性試験の結果を、表１９及び表２０に提示する。
Figure 0007345479000024
Figure 0007345479000025
Figure 0007345479000026
Figure 0007345479000027
Figure 0007345479000028
貯蔵寿命及び推奨保管条件
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の推奨保管条件は≦－２０℃である。－２０℃で最長４８か月、及び５℃で最長６か月にわたって保管したところ、タンパク質濃度、ｐＨ、色、透明度、効力、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、画像キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）、及び非還元（ＮＲ）ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ）における有意な変化は観察されなかった（表２０）。ここに提示する安定性試験結果は、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質が－２０℃で４８か月にわたって安定であることを示す。これらのデータは、－２０℃で６０か月以上にわたる貯蔵寿命を裏付ける。さらに、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、５℃で最長１か月にわたって保管され得る。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を５０ｃｃのバイオプロセスバッグ内で保管し、－２０℃での凍結及び周囲温度での解凍を３サイクル行った後、凍結解凍安定性をモニタリングした。バイオプロセスバッグは、１、２、及び３か月の時点で解凍した。したがって、３か月時点でのデータは３回の凍結／解凍サイクルを表す。－２０℃での凍結及び周囲温度での解凍を３サイクル行った後、タンパク質濃度、ｐＨ、色、透明度、効力、ＳＥＣ、ｉｃＩＥＦ、及びＣＥ－ＳＤＳにおける有意な変化は観察されなかった。したがって、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも３サイクルにわたって－２０℃で凍結され、解凍され得る。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチ１及び参照標準バッチの長期安定性試験
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の医薬組成物は、１０ｍｇ（公称）のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む使い捨ての２ｍＬのＵＳＰ／Ｐｈ．Ｅｕｒ．ガラスタイプＩバイアルにおいて供給される液体配合物である。本発明の医薬配合物には、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、メチオニン５ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ポリソルベート２０ ０．０２％（ｗ／ｖ）、ｐＨ７．１において１０ｍｇのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質が配合される。
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチ１を用い、医薬組成物の安定性試験を開始した。さらに、参照標準バッチを用い、代表的なＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の安定性試験を開始した（表２１）。両方のバッチについて、５℃及び２５℃の温度で安定性をモニタリングした。
５℃±３℃で長期保管について試験し、２５℃±２℃（６０％相対湿度［ＲＨ］±５％ ＲＨ）で加速安定性試験を行った。以下では、温度をそれぞれ５℃及び２５℃と示す。
手順及び許容判断基準
表２１に記載する試験手順を使用してすべての試料を分析した。代表的な安定性は、表２２及び表２３に提示するプロトコールを使用して、規定の時間間隔で評価した。
Figure 0007345479000029
Figure 0007345479000030
Figure 0007345479000031
結果
上述のように－２０℃及び５℃で実施した、臨床バッチ１及び参照標準バッチからのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の長期安定性試験の結果を、表２４及び表２５に提示する。
一次的なＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の安定性データは、支持的な安定性試験において観察されたものと同様の傾向を示した。この安定性データは、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の５℃における４２か月（３６か月の実時間データと６か月の暫定的日付）の有効期限を裏付ける。
支持的な安定性試験の結果は、主に二量体濃度の増加と共に、３６か月において観察されたＳＥ－ＨＰＬＣによるメインピークに対する割合の０．７の減少を示した。ｉＣＩＥＦでは、主に酸性ピークの増加と共に、メインピークに対する割合の５の減少が観察された。他の方法では、５℃で最長３６か月にわたる保管に関するＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の変化は観察されなかった。２５℃で最長１か月にわたる保管に関するＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の変化は観察されなかった。２５℃で６か月間保管した後、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の変化が観察された。画像ｃＩＥＦは、主に酸性ピークに対する割合の１８．３の増加と共に、メインピークに対する割合の１７．６の減少を示した。ＳＥ－ＨＰＬＣにより、主に高分子量種（ＨＭＷＳ）に対する割合の１．２の増加と共に、メインピークに対する割合の１．３の減少が観察された。非還元ＣＥ－ＳＤＳでは、主にピーク前の和の補正後ピーク面積に対する割合（％ＣＰＡ）の２．１の増加と共に、メインピークに対する割合の２．７の減少が観察された。２５℃で６か月保管した後、相対効力の２９％の損失が観察されたが、２５℃で３か月保管した後、効力の変化は観察されなかった。残りのアッセイでは、２５℃で６か月にわたり、変化は観察されなかった。
Figure 0007345479000032
Figure 0007345479000033
Figure 0007345479000034
Figure 0007345479000035
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチ３及び参照標準バッチのストレス安定性比較試験
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチ及び臨床バッチ３を使用して、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチ医薬組成物と臨床医薬組成物との間の比較可能性を確立した（表２６）。両方のバッチの材料を手作業で２ｍＬガラスバイアルに充填し、１ｍＬの充填量にした。次いで、これらの材料を４０℃のストレス条件下で評価した。
Figure 0007345479000036
Figure 0007345479000037
結果
この試験の結果は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によるメインピークに対する割合の２～４の減少、画像キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）によるメインピークに対する割合の１５～１６の減少、ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動－非ゲルふるい（ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によるメインピークに対する割合の２の減少、及び４０℃で２週間保管した後の％相対効力の２８～３３の減少に基づいて、２つの材料の分解速度が同等であることを示す。さらに、クロマトグラフィープロファイルは同等であり、４０℃で２週間保管した後に開発バッチと比較した場合、臨床バッチで新しいピークは観察されなかった。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチ及び臨床医薬組成物バッチは、提示したデータに基づいて同等の安定性を有する。したがって、参照標準バッチの安定性データを使用して、臨床医薬組成物の貯蔵寿命を指定した。
貯蔵寿命及び推奨保管条件
ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の推奨保管条件は、光から保護した状態で５℃±３℃である。貯蔵寿命は、入手可能な安定性データに基づいて延長される。ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物は、５℃±３℃で３６か月にわたって安定である。入手可能なデータに基づいて、ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質医薬組成物の初期貯蔵寿命は現在、光から保護した状態で５℃±３℃で保管された場合に４２か月に設定されている。
分析手順のバリデーション結果
表２７は、分析手順のバリデーション結果を示す。
Figure 0007345479000038
Figure 0007345479000039
Figure 0007345479000040
Figure 0007345479000041
他の実施形態
本明細書に記載される技術のいくつかの実施形態は、以下の付番された実施形態のいずれかに従って定義され得る。
１．インターロイキン（ＩＬ）－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む医薬組成物であって、前記医薬組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも３６か月の貯蔵寿命を有し、前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含む、前記医薬組成物。
２．前記医薬組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも４２か月の貯蔵寿命を有する、実施形態１に記載の医薬組成物。
３．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬである、実施形態１または２に記載の医薬組成物。
４．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬである、実施形態３に記載の医薬組成物。
５．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬである、実施形態４に記載の医薬組成物。
６．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約８ｍｇ／ｍＬ～約１２ｍｇ／ｍＬである、実施形態３に記載の医薬組成物。
７．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬである、実施形態６に記載の医薬組成物。
８．安定剤をさらに含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
９．前記安定剤は、アミノ酸、チオソルビトール、アスコルビン酸、モノチオグリセロール、シクロデキストリン、トロロックス（６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチルクロマン－２－カルボン酸）、ピリドキシン、マンニトール、金属キレート剤、またはそれらの組み合わせである、実施形態８に記載の医薬組成物。
１０．前記安定剤はアミノ酸である、実施形態９に記載の医薬組成物。
１１．前記アミノ酸は、メチオニン、システイン、トリプトファン、またはそれらの組み合わせである、実施形態９または１０に記載の医薬組成物。
１２．前記アミノ酸はメチオニンである、実施形態１１に記載の医薬組成物。
１３．前記安定剤の濃度は、約１ｍＭ～約１０ｍＭである、実施形態８～１２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１４．前記安定剤の濃度は、約２ｍＭ～約８ｍＭである、実施形態１３に記載の医薬組成物。
１５．前記安定剤の濃度は、約５ｍＭである、実施形態１４に記載の医薬組成物。
１６．配列番号４のＭ２５位またはＭ１３９位にあるメチオニンの酸化は、ＡＡＰＨストレス試験によって評価した場合に１０％未満である、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１７．配列番号４のＭ２５位にあるメチオニンの酸化は、５％未満、３％未満、または２％未満である、実施形態１６に記載の医薬組成物。
１８．配列番号４のＭ１３９位にあるメチオニンの酸化は、７％未満、６％未満、または５％未満である、実施形態１６または１７に記載の医薬組成物。
１９．界面活性剤をさらに含む、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２０．前記界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である、実施形態１９に記載の医薬組成物。
２１．前記非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート、ポロクサマー、ポリオキシエテレンアルキルエーテル、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル、またはそれらの組み合わせである、実施形態２０に記載の医薬組成物。
２２．前記非イオン性界面活性剤は、ポリソルベートである、実施形態２１に記載の医薬組成物。
２３．前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０である、実施形態２２に記載の医薬組成物。
２４．前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、実施形態２３に記載の医薬組成物。
２５．前記非イオン性界面活性剤は、ポロクサマーである、実施形態２１に記載の医薬組成物。
２６．前記非イオン性界面活性剤は、ポロクサマー１８８である、実施形態２５に記載の医薬組成物。
２７．前記界面活性剤の濃度は、約０．００１％（ｗ／ｖ）～約０．１％（ｗ／ｖ）である、実施形態１９～２６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２８．前記界面活性剤の濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．０５％（ｗ／ｖ）である、実施形態２７に記載の医薬組成物。
２９．前記界面活性剤の濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．０７％（ｗ／ｖ）である、実施形態２７に記載の医薬組成物。
３０．前記界面活性剤の濃度は、約０．０２％（ｗ／ｖ）である、実施形態２８または２９に記載の医薬組成物。
３１．緩衝剤をさらに含む、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
３２．前記緩衝剤は、リン酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、ヒスチジン、またはそれらの組み合わせである、実施形態３１に記載の医薬組成物。
３３．前記緩衝剤はリン酸塩である、実施形態３２に記載の医薬組成物。
３４．前記リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、三塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、二塩基性リン酸カリウム、三塩基性リン酸カリウム、またはそれらの混合物である、実施形態３３に記載の医薬組成物。
３５．前記リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウムである、実施形態３４に記載の医薬組成物。
３６．前記リン酸塩は、二塩基性リン酸ナトリウムである、実施形態３４に記載の医薬組成物。
３７．前記リン酸塩は、一塩基性リン酸ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウムとの混合物である、実施形態３４に記載の医薬組成物。
３８．前記緩衝剤の濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである、実施形態３１～３７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
３９．前記緩衝剤の濃度は、約８ｍＭ～約１２ｍＭである、実施形態３８に記載の医薬組成物。
４０．前記緩衝剤の濃度は、約１０ｍＭである、実施形態３９に記載の医薬組成物。
４１．等張化剤をさらに含む、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
４２．前記等張化剤は、糖、アミノ酸、または塩である、実施形態４１に記載の医薬組成物。
４３．前記等張化剤は糖である、実施形態４２に記載の医薬組成物。
４４．前記糖は、スクロース、グルコース、グリセロール、またはトレハロースである、実施形態４３に記載の医薬組成物。
４５．前記糖はスクロースである、実施形態４４に記載の医薬組成物。
４６．前記等張化剤は塩である、実施形態４２に記載の医薬組成物。
４７．前記塩は、塩化ナトリウムまたは塩化カリウムである、実施形態４６に記載の医薬組成物。
４８．前記等張化剤の濃度は、約１００ｍＭ～約５００ｍＭである、実施形態４１～４７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
４９．前記等張化剤の濃度は、約２００ｍＭ～約３００ｍＭである、実施形態４８に記載の医薬組成物。
５０．前記等張化剤の濃度は、約２４０ｍＭである、実施形態４９に記載の医薬組成物。
５１．前記医薬組成物は、約６．６～約８のｐＨを有する、実施形態１～５０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
５２．前記医薬組成物は、約６．８～約７．４のｐＨを有する、実施形態５１に記載の医薬組成物。
５３．前記医薬組成物は、約７．１のｐＨを有する、実施形態５２に記載の医薬組成物。
５４．ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む医薬組成物であって、前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含み、前記医薬組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、約５ｍＭのメチオニン、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、前記医薬組成物。
５５．約１０ｍＭのリン酸ナトリウム及び約２４０ｍＭのスクロースをさらに含む、実施形態５４に記載の医薬組成物。
５６．前記医薬組成物は、約１ｍｇ／ｍＬまたは約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む、実施形態５４または５５に記載の医薬組成物。
５７．前記リン酸ナトリウムは、一塩基性リン酸ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウムとの混合物である、実施形態５５または５６に記載の医薬組成物。
５８．前記医薬組成物は、単位剤形である、実施形態１～５７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
５９．前記単位剤形は、注入用の液体配合物である、実施形態５８に記載の医薬組成物。
６０．注入用の前記液体配合物は、公称容積が１００ｍＬ未満の容器で供給される、実施形態５９に記載の医薬組成物。
６１．注入用の前記液体配合物の体積は、約１ｍＬ～約２ｍＬである、実施形態６０に記載の医薬組成物。
６２．注入用の前記液体配合物の体積は、約１ｍＬである、実施形態６１に記載の医薬組成物。
６３．前記容器内に存在する１０μｍ以上の粒子の数は、６０００粒子を超えない、実施形態６０～６２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
６４．前記容器内に存在する２５μｍ以上の粒子の数は、６００粒子を超えない、実施形態６０～６３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
６５．前記担体は水である、実施形態１～６４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
６６．前記医薬組成物は、１回以上の凍結解凍サイクルを通して安定である、実施形態１～６５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
６７．前記医薬組成物は、３回の凍結解凍サイクルを通して安定である、実施形態６６に記載の医薬組成物。
６８．前記医薬組成物は、約２５℃で約２週間以上にわたって安定である、実施形態１～６７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
６９．前記医薬組成物は、約２５℃で約４週間以上にわたって安定である、実施形態６８に記載の医薬組成物。
７０．前記医薬組成物は、－２０℃で約４８か月以上にわたって安定である、実施形態１～６９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
７１．前記医薬組成物は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を有する、実施形態１～７０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
７２．前記医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９０％以上の純度を有する、実施形態７１に記載の医薬組成物。
７３．前記医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を有する、実施形態７２に記載の医薬組成物。
７４．前記医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を、約５℃で約３６か月以上にわたって有する、実施形態７１～７３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
７５．前記医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を、約５℃で約４２か月以上にわたって有する、実施形態７４に記載の医薬組成物。
７６．前記医薬組成物は、ＳＥ－ＨＰＬＣによって評価した場合に約９５％以上の純度を、約５℃で約４２か月にわたって有する、実施形態７５に記載の医薬組成物。
７７．前記医薬組成物は、非還元（ＮＲ）ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動非ゲルふるい（ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約７５％以上の純度を有する、実施形態１～７６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
７８．前記医薬組成物は、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳによって評価した場合に約８０％以上の純度を有する、実施形態７７に記載の医薬組成物。
７９．前記医薬組成物は、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳによって評価した場合に約８５％以上の純度を有する、実施形態７８に記載の医薬組成物。
８０．前記医薬組成物は、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳによって評価した場合に約８５％以上の純度を、約５℃で約３６か月以上にわたって有する、実施形態７７～７９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
８１．前記医薬組成物は、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳによって評価した場合に約８５％以上の純度を、約５℃で約４２か月以上にわたって有する、実施形態８０に記載の医薬組成物。
８２．前記医薬組成物は、ＮＲ ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳによって評価した場合に約８５％以上の純度を、約５℃で約４２か月にわたって有する、実施形態８１に記載の医薬組成物。
８３．前記医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または局所投与用に配合されている、実施形態１～８２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
８４．前記医薬組成物は、静脈内投与用に配合されている、実施形態８３に記載の医薬組成物。
８５．前記医薬組成物は、皮下投与用に配合されている、実施形態８３に記載の医薬組成物。
８６．前記医薬組成物は、保存剤を含まない、実施形態１～８５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
８７．前記医薬組成物は、等張塩化ナトリウム溶液及び／または希釈剤で希釈した後に注入によって投与するように配合されている、実施形態１～８６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
８８．前記等張塩化ナトリウム溶液は、約０．１％～約２％のＮａＣｌを含む、実施形態８７に記載の医薬組成物。
８９．前記等張塩化ナトリウム溶液は、約０．５％～約１．５％のＮａＣｌを含む、実施形態８８に記載の医薬組成物。
９０．前記等張塩化ナトリウム溶液は、約０．９％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌを含む、実施形態８９に記載の医薬組成物。
９１．前記希釈剤は、緩衝剤、等張化剤、及び界面活性剤を含む、実施形態８７～９０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
９２．前記希釈剤は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、実施形態８７～９１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
９３．前記ＩＬ－２２ポリペプチドは、グリコシル化されている、実施形態１～９２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
９４．前記ＩＬ－２２ポリペプチドは、Ｎ－グリコシル化されている、実施形態１～９３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
９５．前記Ｆｃ領域は、グリコシル化されていない、実施形態１～９４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
９６．ＥＵインデックスで前記Ｆｃ領域の２９７位にあるアミノ酸残基は、Ｇｌｙである、実施形態９５に記載の医薬組成物。
９７．ＥＵインデックスで前記Ｆｃ領域の２９７位にあるアミノ酸残基は、Ａｌａである、実施形態９５に記載の医薬組成物。
９８．ＥＵインデックスで前記Ｆｃ領域の２９９位にあるアミノ酸残基は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＶａｌである、実施形態９５～９７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
９９．前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態１～９８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１００．前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態９９に記載の医薬組成物。
１０１．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～１００のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１０２．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０１に記載の医薬組成物。
１０３．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０２に記載の医薬組成物。
１０４．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０３に記載の医薬組成物。
１０５．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０４に記載の医薬組成物。
１０６．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１０５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１０７．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
１０８．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列からなる、実施形態１０７に記載の医薬組成物。
１０９．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
１１０．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列からなる、実施形態１０９に記載の医薬組成物。
１１１．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態１０６に記載の医薬組成物。
１１２．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列からなる、実施形態１１１に記載の医薬組成物。
１１３．前記Ｆｃ領域は、Ｎ－グリコシル化されていない、実施形態９５～１１２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１１４．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、二量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質である、実施形態１～１１３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１１５．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、単量体ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質である、実施形態１～１１３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１１６．前記ＩＬ－２２ポリペプチドは、ヒトＩＬ－２２ポリペプチドである、実施形態１～１１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１１７．前記ＩＬ－２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含む、実施形態１１６に記載の医薬組成物。
１１８．前記リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を含む、実施形態１～１１７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１１９．前記リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）からなる、実施形態１１８に記載の医薬組成物。
１２０．ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む医薬組成物であって、前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記医薬組成物は、約５ｍＭのメチオニン、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、前記医薬組成物。
１２１．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２受容体に結合する、実施形態１～１２０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１２２．前記ＩＬ－２２受容体は、ヒトＩＬ－２２受容体である、実施形態１２１に記載の医薬組成物。
１２３．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２ＲＡ１及び／またはＩＬ－１０Ｒ２に結合する、実施形態１２１または１２２に記載の医薬組成物。
１２４．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－２２ＲＡ１に結合する、実施形態１２３に記載のＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質。
１２５．追加の治療剤をさらに含む、実施形態１～１２４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１２６．ゲル化剤をさらに含む、実施形態１～１２５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１２７．前記ゲル化剤は多糖である、実施形態１２６に記載の医薬組成物。
１２８．前記ゲル化剤はセルロース系薬剤である、実施形態１２６または１２７に記載の医薬組成物。
１２９．前記ゲル化剤は、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ＰＯＥ－ＰＯＰブロックポリマー、アルギン酸塩、ヒアルロン酸、ポリアクリル酸、ヒドロキシエチルメチルセルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースである、実施形態１２６～１２８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１３０．前記ゲル化剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである、実施形態１２９に記載の医薬組成物。
１３１．前記医薬配合物は、局所投与のためのものである、実施形態１２６～１３０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１３２．薬物として使用するための、実施形態１～１３１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１３３．処置を必要とする対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を処置する方法であって、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
１３４．前記ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎またはクローン病である、実施形態１３３に記載の方法。
１３５．前記ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎である、実施形態１３４に記載の方法。
１３６．前記潰瘍性大腸炎は、中等度から重度の潰瘍性大腸炎である、実施形態１３５に記載の方法。
１３７．前記ＩＢＤは、クローン病である、実施形態１３４に記載の方法。
１３８．腸管内の微生物感染の阻害、微生物感染中の腸管内の杯細胞の維持、腸管内の上皮細胞の完全性、上皮細胞増殖、上皮細胞分化、上皮細胞遊走もしくは上皮創傷治癒の強化を必要とする対象に、それを行う方法であって、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
１３９．前記上皮細胞は、腸上皮細胞である、実施形態１３８に記載の方法。
１４０．処置を必要とする対象の急性腎傷害または急性膵炎を処置する方法であって、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
１４１．創傷治癒の加速または向上を必要とする対象の創傷治癒を加速または向上させる方法であって、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
１４２．前記創傷は、慢性創傷または感染創傷である、実施形態１４１に記載の方法。
１４３．前記対象は糖尿病である、実施形態１４１または１４２に記載の方法。
１４４．前記糖尿病の対象は、ＩＩ型糖尿病を有する、実施形態１４３に記載の方法。
１４５．前記創傷は、糖尿病性足部潰瘍である、実施形態１４１～１４４のいずれか１つに記載の方法。
１４６．完全な創傷閉鎖があるまで前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質または前記医薬組成物が投与される、実施形態１４１～１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４７．防止または処置を必要とする対象において、アテローム硬化性プラーク形成の病状を含む心血管状態を防止または処置する方法であって、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
１４８．前記心血管疾患は、冠動脈疾患、冠状動脈細小血管疾患、卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患である、実施形態１４７に記載の方法。
１４９．アテローム硬化性プラーク形成の進行を減速させること、またはアテローム性硬化症の兆候を防止することをさらに含む、実施形態１４７または１４８に記載の方法。
１５０．アテローム性硬化症の前記兆候は、プラーク蓄積または血管炎症を含む、実施形態１４９に記載の方法。
１５１．処置を必要とする対象のメタボリックシンドロームを処置する方法であって、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
１５２．腹部肥満、高血糖症、脂質異常症、及び高血圧症のうちの１つ以上を含む、メタボリックシンドロームに関連する１つ以上のリスク因子を低減させることをさらに含む、実施形態１５１に記載の方法。
１５３．前記対象における細菌性リポ多糖のレベルを低下させることをさらに含む、実施形態１５１または１５２に記載の方法。
１５４．処置を必要とする対象の急性内毒素血症、敗血症、またはその両方を処置する方法であって、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
１５５．前記対象は、ＨＤＬ／ＬＤＬ脂質プロファイルの変化を必要とする、実施形態１５１～１５４のいずれか１つに記載の方法。
１５６．前記組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、約５ｍＭのメチオニン、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、実施形態１３３～１５５のいずれか１つに記載の方法。
１５７．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態１３３～１５６のいずれか１つに記載の方法。
１５８．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１５７に記載の方法。
１５９．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態１５７に記載の方法。
１６０．前記医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または局所投与される、実施形態１３３～１５９のいずれか１つに記載の方法。
１６１．前記医薬組成物は、静脈内投与される、実施形態１６０に記載の方法。
１６２．前記医薬組成物は、皮下投与される、実施形態１６０に記載の方法。
１６３．前記対象は、少なくとも１つの追加の治療剤を共投与される、実施形態１３３～１６２のいずれか１つに記載の方法。
１６４．前記対象はヒトである、実施形態１３３～１６３のいずれか１つに記載の方法。
１６５．処置を必要とする対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を処置する方法において使用するための、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１６６．前記ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎またはクローン病である、実施形態１６５に記載の使用のための医薬組成物。
１６７．前記ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎である、実施形態１６６に記載の使用のための医薬組成物。
１６８．前記潰瘍性大腸炎は、中等度から重度の潰瘍性大腸炎である、実施形態１６７に記載の使用のための医薬組成物。
１６９．前記ＩＢＤは、クローン病である、実施形態１６６に記載の使用のための医薬組成物。
１７０．腸管内の微生物感染の阻害、微生物感染中の腸管内の杯細胞の維持、腸管内の上皮細胞の完全性、上皮細胞増殖、上皮細胞分化、上皮細胞遊走または上皮創傷治癒の強化を必要とする対象に、それを行う方法において使用するための、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１７１．前記上皮細胞は、腸上皮細胞である、実施形態１７０に記載の使用のための医薬組成物。
１７２．処置を必要とする対象の急性腎傷害または急性膵炎を処置する方法において使用するための、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１７３．創傷治癒の加速または向上を必要とする対象の創傷治癒を加速または向上させる方法において使用するための、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１７４．前記創傷は、慢性創傷または感染創傷である、実施形態１７３に記載の使用のための医薬組成物。
１７５．前記対象は糖尿病である、実施形態１７３または１７４に記載の使用のための医薬組成物。
１７６．前記糖尿病の対象は、ＩＩ型糖尿病を有する、実施形態１７５に記載の使用のための医薬組成物。
１７７．前記創傷は、糖尿病性足部潰瘍である、実施形態１７３～１７６のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物。
１７８．完全な創傷閉鎖があるまで前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質または前記医薬組成物が投与される、実施形態１７３～１７７のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物。
１７９．防止または処置を必要とする対象において、アテローム硬化性プラーク形成の病状を含む心血管状態を防止または処置する方法において使用するための、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１８０．前記心血管疾患は、冠動脈疾患、冠状動脈細小血管疾患、卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患である、実施形態１７９に記載の使用のための医薬組成物。
１８１．アテローム硬化性プラーク形成の進行を減速させること、またはアテローム性硬化症の兆候を防止することをさらに含む、実施形態１７９または１８０に記載の使用のための医薬組成物。
１８２．アテローム性硬化症の前記兆候は、プラーク蓄積または血管炎症を含む、実施形態１８１に記載の使用のための医薬組成物。
１８３．処置を必要とする対象のメタボリックシンドロームを処置する方法において使用するための、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１８４．腹部肥満、高血糖症、脂質異常症、及び高血圧症のうちの１つ以上を含む、メタボリックシンドロームに関連する１つ以上のリスク因子を低減させることをさらに含む、実施形態１８３に記載の使用のための医薬組成物。
１８５．前記対象における細菌性リポ多糖のレベルを低下させることをさらに含む、実施形態１８３または１８４に記載の使用のための医薬組成物。
１８６．処置を必要とする対象の急性内毒素血症、敗血症、またはその両方を処置する方法において使用するための、実施形態１～１３２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１８７．前記対象は、ＨＤＬ／ＬＤＬ脂質プロファイルの変化を必要とする、実施形態１８３～１８６のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物。
１８８．前記組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、約５ｍＭのメチオニン、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、実施形態１６５～１８７のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物。
１８９．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態１６５～１８８のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物。
１９０．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９に記載の使用のための医薬組成物。
１９１．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９に記載の使用のための医薬組成物。
１９２．前記医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または局所投与される、実施形態１６５～１９１のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物。
１９３．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質または前記医薬組成物は、静脈内投与される、実施形態１９２に記載の医薬組成物。
１９４．前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質または前記医薬組成物は、皮下投与される、実施形態１９３に記載の医薬組成物。
１９５．前記対象は、少なくとも１つの追加の治療剤を共投与されることになる、実施形態１６５～１９４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１９６．前記対象はヒトである、実施形態１６５～１９５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
本明細書は、当業者が本発明を実践することを可能にするのに十分であると考えられる。前述の発明は、明確な理解のために例証及び例によっていくらか詳細に記載されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。実際、本明細書に示され、記載されるものに加えて、本発明の様々な改変が前述の説明から当業者に明らかとなり、これらは添付の特許請求の範囲内にある。

Claims (20)

  1. インターロイキン（ＩＬ）－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む医薬組成物であって、前記医薬組成物は、５℃±３℃で保管され、かつ光から保護された場合、少なくとも３６か月の貯蔵寿命を有し、前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含み、
    約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、約５ｍＭのメチオニン、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び約２４０ｍＭのスクロース、及び０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０を含む、前記医薬組成物。
  2. 配列番号４のＭ２５位またはＭ１３９位にあるメチオニンの酸化は、ＡＡＰＨストレス試験によって評価した場合に１０％未満である、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 前記医薬組成物は、約６．６～約８のｐＨを有する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
  4. 前記医薬組成物は、約７．１のｐＨを有する、請求項３に記載の医薬組成物。
  5. ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む医薬組成物であって、前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結したＩＬ－２２ポリペプチドを含み、前記医薬組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、約５ｍＭのメチオニン、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び約２４０ｍＭのスクロース、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、前記医薬組成物。
  6. （ｉ）前記医薬組成物は、約１ｍｇ／ｍＬもしくは約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質を含む、及び／または
    （ｉｉ）前記リン酸ナトリウムは、一塩基性リン酸ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウムとの混合物である、
    請求項５に記載の医薬組成物。
  7. （ｉ）前記医薬組成物は、単位剤形である、
    （ｉｉ）前記担体は、水である、
    （ｉｉｉ）前記医薬組成物は、１回以上の凍結解凍サイクルを通して安定である、
    （ｉｖ）前記医薬組成物は、約２５℃で約２週間以上にわたって安定である、
    （ｖ）前記医薬組成物は、－２０℃で約４８か月以上にわたって安定である、
    （ｖｉ）前記医薬組成物は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって評価した場合に約８５％以上の純度を有する、
    （ｖｉｉ）前記医薬組成物は、非還元（ＮＲ）ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動非ゲルふるい（ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＧＳ）によって評価した場合に約７５％以上の純度を有する、
    （ｖｉｉｉ）前記医薬組成物は、静脈内、皮下、腹腔内、もしくは局所投与用に配合されている、
    （ｉｘ）前記医薬組成物は、保存剤を含まない、及び／または
    （ｘ）前記医薬組成物は、等張塩化ナトリウム溶液及び／または希釈剤で希釈した後に注入によって投与するように配合されている、
    請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  8. （ｉ）前記ＩＬ－２２ポリペプチドは、グリコシル化されている、
    （ｉｉ）前記Ｆｃ領域は、グリコシル化されていない、
    （ｉｉｉ）ＥＵインデックスで前記Ｆｃ領域の２９７位にあるアミノ酸残基は、ＧｌｙもしくはＡｌａであり、及び／またはＥＵインデックスで前記Ｆｃ領域の２９９位にあるアミノ酸残基は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、もしくはＶａｌである、
    （ｉｖ）前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、及び／または
    （ｖ）前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
    請求項１～７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  9. 前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、もしくは配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  10. ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質及び担体を含む医薬組成物であって、前記ＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記医薬組成物は、約５ｍＭのメチオニン、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、前記医薬組成物。
  11. 追加の治療剤及び／またはゲル化剤をさらに含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  12. 医薬として使用するための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  13. （ｉ）炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を処置すること、
    （ｉｉ）腸管内の微生物感染を阻害すること、微生物感染中の腸管内の杯細胞を維持すること、腸管内の上皮細胞の完全性、上皮細胞増殖、上皮細胞分化、上皮細胞遊走もしくは上皮創傷治癒を強化すること、
    （ｉｉｉ）急性腎傷害もしくは急性膵炎を処置すること、
    （ｉｖ）創傷治癒を加速もしくは向上させること、または
    （ｖ）防止もしくは処置を必要とする対象の心血管状態を防止もしくは処置すること
    に使用するための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  14. 対象において炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を処置するための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、前記対象に投与される、前記医薬組成物。
  15. 前記ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎またはクローン病である、請求項１４に記載の医薬組成物。
  16. 前記潰瘍性大腸炎は、中等度から重度の潰瘍性大腸炎である、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. それを必要とする対象の、腸管内の微生物感染の阻害、微生物感染中の腸管内の杯細胞の維持、腸管内の上皮細胞の完全性、上皮細胞増殖、上皮細胞分化、上皮細胞遊走または上皮創傷治癒の強化のための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、前記対象に投与される、前記医薬組成物。
  18. 処置を必要とする対象の、
    （ｉ）急性腎傷害もしくは急性膵炎、
    （ｉｉ）アテローム硬化性プラーク形成の病状を含む心血管状態、
    （ｉｉｉ）メタボリックシンドローム、及び／または
    （ｉｖ）急性内毒素血症、敗血症、もしくはその両方
    を処置するための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
    前記医薬組成物は、前記対象に投与される、前記医薬組成物。
  19. 創傷治癒の加速または向上を必要とする対象の創傷治癒を加速または向上させるための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、前記対象に投与される、前記医薬組成物。
  20. （ｉ）前記組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのＩＬ－２２ Ｆｃ融合タンパク質、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約２４０ｍＭのスクロース、約５ｍＭのメチオニン、及び約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、ｐＨ７．１、最終濃度で含む、
    （ｉｉ）前記医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、もしくは局所投与される、
    （ｉｉｉ）前記対象は、少なくとも１つの追加の治療剤を共投与される、及び／または
    （ｉｖ）前記対象はヒトである、
    請求項１４～１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
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