KR20200125590A - 조성물 및 사용 방법 - Google Patents

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KR20200125590A
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fusion protein
amino acid
seq
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브루스 카바코프
세실리아 옹 만 사이
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제넨테크, 인크.
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Abstract

본 발명은, 예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물), 이를 제조하는 방법, 및 이를 사용하는 방법, 예를 들어, 질환(예를 들어, IBD)의 치료 방법에 관한 것이다.

Description

조성물 및 사용 방법
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 함유하며, 그 전체가 참조로 포함된다. 2019년 1월 24일에 작성된 상기 ASCII 사본의 이름은 50474-177WO3_Sequence_Listing_1.24.19_ST25이며 크기는 121,858 바이트이다.
기술 분야
본 발명은 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)을 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물) 및 이를 제조, 정제 및 사용하는 방법에 관한 것이다.
인터루킨(IL)-22는, 예를 들어, Th22 세포, NK 세포, 림프 조직 유도자(lymphoid tissue inducer, LTi) 세포, 수지상 세포 및 Th17 세포에 의해 생성되는 사이토카인의 IL-10 패밀리의 일원이다. IL-22는 선천적 세포(innate cell)(예를 들어, 상피 세포, 간세포 및 각질세포) 및 여러 기관(예를 들어, 진피, 췌장, 장 및 호흡기관)의 장벽 상피 조직에서 발현되는 IL-22R1/IL-10R2 수용체 복합체에 결합한다.
IL-22는 점막 면역에서 중요한 역할을 하고 박테리아 병원균 부착 및 제거에 대한 초기 숙주 방어를 매개한다. IL-22는 상피 세포로부터 항미생물 펩티드 및 전염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)의 생성을 촉진하고 장에서 결장 상피 세포의 증식 및 이동을 자극한다. 박테리아 감염시, IL-22 녹아웃 마우스는 장 상피 재생 장애, 높은 박테리아 부하 및 증가한 사망률을 나타냈다. 유사하게, 인플루엔자 바이러스에 의한 IL-22 녹아웃 마우스(knock-out mouse)의 감염은 심각한 체중 감소, 및 기관(tracheal) 및 기관지 상피 세포의 재생 장애를 초래하였다. 따라서, IL-22는 염증 반응에서 상피 재생에서 항염증성 보호 역할뿐만 아니라 미생물 감염을 억제하는데 있어서 전염증성 역할을 한다.
궤양성 대장염 및 크론병을 포함하는 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease, IBD), 및 미생물 감염, 급성 신장 손상, 급성 췌장염, 상처, 심혈관 병태, 대사증후군, 급성 내독소혈증(endotoxemia), 이식편대숙주병(graft-versus-host disease, GVHD) 및 패혈증을 포함한 IL-22와 관련된 다른 질병의 치료를 위한 개선된 조성물 및 방법에 대한 요구가 남아있다.
본 발명은 특히 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물), 및 이를 제조 및 사용하는 방법을 제공한다.
일 측면에서, 본 발명은 인터루킨(IL)-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 특징으로 하며, 상기 약제학적 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 36개월 이상이고, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 42개월 이상이다.
상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 0.5㎎/mL 내지 약 20㎎/mL이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 0.5㎎/mL 내지 약 5㎎/mL이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 1㎎/mL이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 8㎎/mL 내지 약 12㎎/mL이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 10㎎/mL이다.
상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 안정제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 안정제는 아미노산, 티오소르비톨, 아스코르브산, 모노티오글리세롤, 사이클로덱스트린, 트롤록스(Trolox)(6-하이드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카복실산), 피리독신, 만니톨, 금속 킬레이터 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 상기 안정제는 아미노산이다. 일부 실시양태에서, 상기 e 아미노산은 메티오닌, 시스테인, 트립토판 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 상기 아미노산은 메티오닌이다. 일부 실시양태에서, 상기 안정제의 농도는 약 1mM 내지 약 10mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 안정제의 농도는 약 2mM 내지 약 8mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 안정제의 농도는 약 5mM이다.
상기 측면의 일부 실시양태에서, 서열번호 4의 위치 M25 또는 M139에서 메티오닌의 산화는 AAPH 스트레스 시험에 의해 평가될 때 10% 미만이다. 일부 실시양태에서, 서열번호 4의 위치 M25에서 메티오닌의 산화는 5% 미만, 3% 미만 또는 2% 미만이다. 일부 실시양태에서, 서열번호 4의 위치 M139에서 메티오닌의 산화는 7% 미만, 6% 미만 또는 5% 미만이다.
상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 계면활성제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 계면활성제는 비이온성 계면활성제이다. 일부 실시양태에서, 상기 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트, 폴록사머, 폴리옥시에텔렌 알킬 에테르, 알킬 페닐 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 상기 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트이다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80이다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20이다. 일부 실시양태에서, 상기 비이온성 계면활성제는 폴록사머이다. 일부 실시양태에서, 상기 비이온성 계면활성제는 폴록사머 188이다. 일부 실시양태에서, 상기 계면활성제의 농도는 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)이다. 일부 실시양태에서, 상기 계면활성제의 농도는 약 0.01%(w/v) 내지 약 0.05%(w/v)이다. 일부 실시양태에서, 상기 계면활성제의 농도는 약 0.01%(w/v) 내지 약 0.07%(w/v)이다. 일부 실시양태에서, 상기 계면활성제의 농도는 약 0.02%(w/v)이다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리소르베이트 20의 농도는 약 0.02%(w/v)이다.
상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 완충제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 완충제는 포스페이트, 석시네이트, 아세테이트, 히스티딘 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 상기 완충제는 포스페이트이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 일염기성 인산나트륨, 이염기성 인산나트륨, 삼염기성 인산나트륨, 일염기성 인산칼륨, 이염기성 인산칼륨, 삼염기성 인산칼륨 또는 이들의 혼합물이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 일염기성 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 이염기성 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 일염기성 인산나트륨과 이염기성 인산나트륨의 혼합물이다. 일부 실시양태에서, 상기 완충제의 농도는 약 5mM 내지 약 20mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 완충제의 농도는 약 8mM 내지 약 12mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 완충제의 농도는 약 10mM이다.
상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 등장화제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제는 당(sugar), 아미노산 또는 염이다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제는 당이다. 일부 실시양태에서, 상기 당은 수크로스, 글루코스, 글리세롤 또는 트레할로스이다. 일부 실시양태에서, 상기 당은 수크로스이다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제는 염이다. 일부 실시양태에서, 상기 염은 염화나트륨 또는 염화칼륨이다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제의 농도는 약 100mM 내지 약 500mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제의 농도는 약 200mM 내지 약 300mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제의 농도는 약 240mM이다.
상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 약 6.6 내지 약 8이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 약 6.8 내지 약 7.4이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물의 pH는 약 7.1이다.
다른 측면에서, 본 발명은 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 특징으로 하며, 상기 약제학적 조성물은 1㎎/mL 내지 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질, 약 5mM 메티오닌 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10mM 인산나트륨 및 약 240mM 수크로스를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 1㎎/mL 또는 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 인산나트륨은 일염기성 인산나트륨과 이염기성 인산나트륨의 혼합물이다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 단위 투여형이다. 일부 실시양태에서, 상기 단위 투여형은 주입용 액체 제제이다. 일부 실시양태에서, 상기 주입용 액체 제제는 공칭 용적이 100mL 미만인 용기에 공급된다. 일부 실시양태에서, 상기 주입용 액체 제제의 용적은 약 1mL 내지 약 2mL이다. 일부 실시양태에서, 상기 주입용 액체 제제의 용적은 약 1mL이다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 용기에 존재하는 10㎛ 이상의 입자의 수는 6000개의 입자를 초과하지 않는다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 용기에 존재하는 25㎛ 이상의 입자의 수는 600개의 입자를 초과하지 않는다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 담체는 물이다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 하나 이상의 냉동-해동 사이클을 통해 안정하다.
일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 3회의 냉동-해동 사이클을 통해 안정하다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 25℃에서 약 2주 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 25℃에서 약 4주 이상 안정하다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 -20℃에서 약 48개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 -20℃에서 약 60개월 이상 안정하다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(size-exclusion high-performance liquid chromatography, SE-HPLC)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 90% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 5℃에서 약 36개월 이상 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 5℃에서 약 42개월 이상 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 5℃에서 약 42개월 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상이다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 모세관 전기영동 나트륨 도데실 설페이트 비-겔 체질(capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate non-gel sieving, CE-SDS-NGS)(예를 들어, 비환원(non-reduced, NR) CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 75% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 80% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 5℃에서 약 36개월 이상 동안 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 5℃에서 약 42개월 이상 동안 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 5℃에서 약 42개월 동안 CE-SDS-NGS에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다. 임의의 상기 실시양태에서, 상기 CE-SDS-NGS는 NR CE-SDS-NGS일 수 있다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 투여용으로 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 정맥 내 투여용으로 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 피하 투여용으로 제제화된다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 보존제를 함유하지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 등장성 염화나트륨 용액 및/또는 희석제로 희석한 후 주입에 의해 투여되도록 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 등장성 염화나트륨 용액으로 희석한 후 주입에 의해 투여되도록 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 희석제로 희석한 후 주입에 의해 투여되도록 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 등장성 염화나트륨 용액 및 희석제로 희석한 후 주입에 의해 투여되도록 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 등장성 염화나트륨 용액은 약 0.1% 내지 약 2% NaCl을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 등장성 염화나트륨 용액은 약 0.5% 내지 약 1.5% NaCl을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 등장성 염화나트륨 용액은 약 0.9%(w/v) NaCl을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 희석제는 완충제, 등장화제 및 계면활성제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 희석제는 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스, 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 폴리펩티드는 글리코실화된다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 폴리펩티드는 N-글리코실화된다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 글리코실화되지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기는 글리신(Gly)이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기는 알라닌(Ala)이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 299의 아미노산 잔기는 Ala, Gly 또는 발린(Val)이다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 IgG1 또는 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 95% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 96% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과 서열 동일성이 97% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 98% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 99% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 N-글리코실화되지 않는다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 이량 체성 IL-22 Fc 융합 단백질이다. 임의의 상기 측면의 다른 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 단량체성 IL-22 Fc 융합 단백질이다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 폴리펩티드는 인간 IL-22 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 폴리펩티드는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 링커는 아미노산 서열 RVESKYGPP(서열번호 44)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 링커는 아미노산 서열 RVESKYGPP(서열번호 44)로 이루어진다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 특징으로 하고, 상기 약제학적 조성물은 약 5mM 메티오닌, 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22 수용체에 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 수용체는 인간 IL-22 수용체이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22R1 및/또는 IL-10R2에 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22R1에 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 인간 IL-22 수용체는 IL-22R1 폴리펩티드 및 IL-10R2 폴리펩티드로 이루어진 이종이량체(heterodimer)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22R1 폴리펩티드는 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 IL-10R2 폴리펩티드는 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 추가 치료제를 추가로 포함한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 겔화제를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 겔화제는 다당류이다. 일부 실시양태에서, 상기 겔화제는 셀룰로오스제이다. 일부 실시양태에서, 상기 겔화제는 메틸 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 카복시메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, POE-POP 블록 중합체, 알기네이트, 히알루론산, 폴리아크릴산, 하이드록시에틸 메틸셀룰로오스 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스이다. 일부 실시양태에서, 상기 겔화제는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 제제는 국소 투여용이다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 의약으로서 사용하기 위한 것이다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 염증성 장 질환(IBD)의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 상기 IBD는 궤양성 대장염 또는 크론병이다. 일부 실시양태에서, 상기 IBD는 궤양성 대장염이다. 일부 실시양태에서, 상기 궤양성 대장염은 중등도(moderate) 내지 중증(severe)의 궤양성 대장염이다. 일부 실시양태에서, 상기 IBD는 크론병이다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 장내 미생물 감염 억제, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포 보존, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유 향상이 필요한 대상체의 장내 미생물 감염을 억제하고, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포를 보존하고, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유를 향상시키는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 상기 상피 세포는 장 상피 세포이다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염의 치료가 필요한 대상체에서 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염을 치료하는 방법을 특징으로 한다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 상처 치유 가속 또는 개선이 필요한 대상체에서 상처 치유를 가속 또는 개선하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 상기 상처는 만성 상처 또는 감염된 상처이다. 일부 실시양태에서, 상기 대상체는 당뇨병이 있다. 일부 실시양태에서, 상기 당뇨병 대상체는 II형 당뇨병이 있다. 일부 실시양태에서, 상기 상처는 당뇨성 족부 궤양(diabetic foot ulcer)이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 상기 약제학적 조성물은 완전한 상처 봉합이 일어날 때까지 투여된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 심혈관 병태의 예방 또는 치료가 필요한 대상에서 심혈관 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 병태는 죽상동맥경화성 플라크(atherosclerotic plaque) 형성 병리를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 심혈관 질환은 관상 동맥 질환, 관상 미세혈관 질환, 뇌졸중, 경동맥 질환, 말초 동맥 질환 또는 만성 신장 질환이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 죽상동맥경화성 플라크 형성의 진행을 늦추거나 죽상동맥경화증의 징후를 예방하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 죽상동맥경화증의 징후는 플라크 축적 또는 혈관 염증을 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대사증후군의 치료가 필요한 대상체에서 대사증후군을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 복부 비만, 고혈당증, 이상지질혈증(dyslipidemia) 및 고혈압 중 하나 이상을 포함하는 대사증후군과 관련된 하나 이상의 위험 인자를 감소시키는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 대상체에서 박테리아 지질다당류(lipopolysaccharide)의 수준을 감소시키는 것을 추가로 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다의 치료가 필요한 대상체에서 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다를 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 상기 대상체는 HDL/LDL 지질 프로파일의 변화가 필요하다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, GVHD의 치료가 필요한 대상체에서 GVHD를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 약 1㎎/mL 내지 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질, 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스, 약 5mM 메티오닌 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 투여된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 정맥 내 투여된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 피하 투여된다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 대상체는 하나 이상의 추가 치료제와 공동 투여된다. 일부 실시양태에서, 상기 대상체는 인간이다.
다른 측면에서, 본원에 기술된 임의의 약제학적 조성물은 IBD의 치료가 필요한 대상체에서 IBD를 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 IBD는 궤양성 대장염 또는 크론병이다. 일부 실시양태에서, 상기 IBD는 궤양성 대장염이다. 일부 실시양태에서, 상기 궤양성 대장염은 중등도 내지 중증의 궤양성 대장염이다. 일부 실시양태에서, 상기 IBD는 크론병이다.
다른 측면에서, 본원에 기술된 임의의 약제학적 조성물은 장내 미생물 감염 억제, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포 보존, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유 향상이 필요한 대상체의 장내 미생물 감염을 억제하고, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포를 보존하고, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유를 향상시키는 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 상피 세포는 장 상피 세포이다.
다른 측면에서, 본원에 기술된 임의의 약제학적 조성물은 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염의 치료가 필요한 대상체에서 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
다른 측면에서, 본원에 기재된 임의의 약제학적 조성물은 상처 치유 가속 또는 개선이 필요한 대상체에서 상처 치유를 가속 또는 개선하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 상처는 만성 상처 또는 감염된 상처이다. 일부 실시양태에서, 상기 대상체는 당뇨병이 있다. 일부 실시양태에서, 상기 당뇨병 대상체는 II형 당뇨병이 있다. 일부 실시양태에서, 상기 상처는 당뇨성 족부 궤양이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 상기 약제학적 조성물은 완전한 상처 봉합이 일어날 때까지 투여된다.
다른 측면에서, 본원에 기술된 임의의 약제학적 조성물은 심혈관 병태의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에서 심혈관 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 사용될 수 있으며, 상기 병태는 죽상동맥경화성 플라크 형성 병리를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 심혈관 질환은 관상 동맥 질환, 관상 동맥 미세혈관 질환, 뇌졸중, 경동맥 질환, 말초 동맥 질환 또는 만성 신장 질환이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 죽상동맥경화성 플라크 형성의 진행을 늦추거나 죽상동맥경화증의 징후를 예방하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 죽상동맥경화의 징후는 플라크 축적 및/또는 혈관 염증을 포함한다.
다른 측면에서, 본원에 기술된 임의의 약제학적 조성물은 대사증후군의 치료가 필요한 대상체에서 대사증후군을 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 복부 비만, 고혈당증, 이상지질혈증 및 고혈압 중 하나 이상을 포함하는 대사증후군과 관련된 하나 이상의 위험 인자를 감소시키는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 대상체에서 박테리아 지질다당류의 수준을 감소시키는 것을 추가로 포함한다.
다른 측면에서, 본원에 기술된 임의의 약제학적 조성물은 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다의 치료가 필요한 대상체에서 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다를 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
다른 측면에서, 본원에 기술된 임의의 약제학적 조성물은 GVHD의 치료가 필요한 대상체에서 GVHD를 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 대상체는 HDL/LDL 지질 프로파일의 변화가 필요하다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 IL-22 Fc 융합 단백질(예를 들어, 약 1㎎/mL 내지 약 10㎎/mL의 농도), 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스, 약 5mM 메티오닌 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 투여된다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 상기 약제학적 조성물은 정맥 내 투여된다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 상기 약제학적 조성물은 피하 투여된다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 대상체는 하나 이상의 추가 치료제와 공동 투여된다. 임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 상기 대상체는 인간이다.
문맥상 명확하게 다르게 제시하지 않는 한, 각각의 모든 실시예는 조합될 수 있다. 문맥상 명확하게 다르게 제시하지 않는 한, 각각의 모든 실시예는 본 발명의 각각의 모든 측면에 적용될 수 있다.
본 발명의 특정 실시양태는 특정 바람직한 실시양태에 대한 다음의 더욱 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.
도 1은 pH 5.5에서 20mM 히스티딘 아세테이트, 240mM 수크로스, 0.02% 폴리소르베이트 20(PS20)(w/v) 중에 10㎎/mL를 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 40℃ 및 5℃에서 4주 후 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC)의 오버레이를 나타내는 크로마토그램이다.
도 2a는 pH 5.5에서 20mM 히스티딘 아세테이트, 240mM 수크로스, 0.02% PS20(w/v) 중 시차 주사 열량측정법(differential scanning calorimetry, DSC)에 의한 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 열 안정성을 나타내는 그래프이다.
도 2b는 pH 7.4의 PBS 중 DSC에 의한 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 열 안정성을 나타내는 그래프이다. IgG4에 대한 개시 용융 온도(Tm)는, Tm이 대략 45℃인 pH 7.4의 PBS와 비교하여, 대략 34℃이다.
도 3a는 pH 5.5, 6.0, 6.5 및 7.0에서 10mM 히스티딘 아세테이트 중 IL-22 Fc 융합 단백질의 DSC 프로파일을 비교한 그래프이다.
도 3b는 pH 6.0에서 10mM 히스티딘 아세테이트 중 IL-22 Fc 융합 단백질의 DSC 및 고유 트립토판(Trp) 형광 프로파일을 나타내는 그래프이다.
도 3c는 pH 6.5에서 10mM 히스티딘 아세테이트 중 IL-22 Fc 융합 단백질의 DSC 및 Trp 형광 프로파일을 나타내는 그래프이다.
도 3d는 pH 7.0에서 10mM 히스티딘 아세테이트 중 IL-22 Fc 융합 단백질의 DSC 및 Trp 형광 프로파일을 나타내는 그래프이다.
도 3e는 pH 5.5, 6.0, 6.5 및 7.0에서 10mM 히스티딘 아세테이트 중 열 스트레스 IL-22 Fc 융합 단백질의 30℃에서 4주 후 SE-HPLC 분석을 나타내는 일련의 그래프로서, 고분자량 백분율(HMW%) 대 시간(왼쪽 패널), 메인 피크 % 대 시간(가운데 패널) 및 이량체 % 대 시간(오른쪽 패널)으로 표시된다.
도 4는 10mM 인산나트륨 중 pH 6.5, 7.0, 7.3 및 7.6, 및 20mM 트리스 중 pH 7.3의 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 DSC 프로파일을 나타내는 그래프이다.
도 5a-5b는 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 0.02% 폴리소르베이트 20, pH 7.1에서 30℃에서 T=0 및 6주 저장 후 SE-HPLC에 의한 IL-22 Fc 융합 단백질의 메인 피크의 분해 속도(5a) 및 시간에 따른 응집 백분율(5b)을 나타내는 일련의 그래프이다.
도 5c-5d는 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 0.02% 폴리소르베이트 20, pH 7.1에서 40℃에서 T=0 및 6주 저장 후 SE-HPLC에 의한 IL-22 Fc 융합 단백질의 메인 피크의 분해 속도(5c) 및 시간에 따른 응집 백분율(5d)을 나타내는 일련의 그래프이다.
도 6은 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 0.02% 폴리소르베이트 20, pH 7.1에서 30℃에서 T=0 및 4주 저장 후 IL-22 Fc 융합 단백질의 이미지 모세관 등전점 전기영동(imaged capillary isoelectric focusing, ICIEF)에 의한 산성 피크의 형성 속도를 나타내는 그래프이다.
도 7은 교반 연구 후 IL-22 Fc 융합 단백질의 SE-HPLC 프로파일을 나타내는 크로마토그램의 오버레이이다.
도 8은 액체 크로마토그래피 탠덤 질량 분광분석(liquid chromatography tandem mass spectrometry, LC-MS-MS)에 의한 2,2'-아조비스-2-메틸-프로판이미드아미드, 디하이드로클로라이드(AAPH)를 이용한 처리 및 트립신 펩티드 맵핑 후 IL-22 Fc 융합 단백질의 8개의 메티오닌 함유 트립신 펩티드의 메티오닌 산화를 나타내는 그래프이다. 각 트립신 펩티드에 대한 메티오닌 산화는 전체 트립신(고유(native) + 산화) 펩티드 비율에 대한 산화된 트립신 펩티드 비율의 백분율로 보고된다.
도 9는 상이한 포유동물 종: 인간(GenBank 수탁번호 Q9GZX6, 서열번호 4, 침팬지(GenBank 수탁번호 XP_003313906, 서열번호 48), 오랑우탄(GenBank 수탁번호 XP_002823544, 서열번호 49), 마우스(GenBank 수탁번호 Q9JJY9, 서열번호 50) 및 개(GenBank 수탁번호 XP_538274, 서열번호 51)로부터의 성숙한 IL-22의 아미노산 서열 정렬을 나타낸다.
Ⅰ. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어, 표기법 및 기타 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미인 것으로 의도된다. 일부 경우에, 일반적으로 이해되는 의미의 용어는 명확성 및/또는 간편한 참조를 위해 본 명세서에서 정의되며, 본원에서의 이러한 정의의 포함은 본 기술 분야에서 일반적으로 이해되는 것과 실질적으로 차이가 있는 것으로 반드시 해석되는 것은 아니다.
본원에 사용된 용어 "약"은 이 기술 분야의 당업자에게 쉽게 알려진 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 "약"의 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 관한 실시양태를 포함(하고 설명)한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명확하게 다르게 지시되지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 예를 들어, "단리 된 펩티드"는 하나 이상의 단리된 펩티드를 의미한다.
본 명세서 및 청구범위 전체에서, "포함하다(comprise)"라는 단어, 또는 "포함하다(comprises)" 또는 "포함하는(comprising)"과 같은 변형은 언급된 정수 또는 정수 그룹을 포함하지만 다른 정수 또는 정수 그룹을 배제하는 것을 의미하지 않는 것으로 이해될 것이다.
본원에 사용된 용어 "IL-22 Fc 융합 단백질" 또는 "IL-22 융합 단백질" 또는 "IL-22 Ig 융합 단백질"은 IL-22 단백질 또는 폴리펩티드가 직접 또는 간접적으로 IgG Fc 영역에 연결된 융합 단백질을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 단백질 또는 폴리펩티드는 글리코실화된다. 특정 바람직한 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 인간 IgG Fc 영역에 연결된 인간 IL-22 단백질 또는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 인간 IL-22 단백질은 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다. 그러나 IL-22 또는 IL-22 Fc 융합 단백질의 기능 및/또는 활성에 영향을 미치지 않는 삽입, 결실, 치환, 특히 IL-22 또는 Fc의 보존적(conservative) 아미노산 치환과 같은 작은 서열 변이가 또한 본 발명에 의해 고려된다. 본 발명의 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22 수용체에 결합할 수 있으며, 이는 IL-22 수용체 하향 신호전달(downstream signaling)을 야기할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22 수용체에 결합할 수 있고/있거나 IL-22 수용체 하향 신호전달을 유도할 수 있다. 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 기능 및/또는 활성은 ELISA, 리간드-수용체 결합 분석 및 Stat3 루시퍼라제 분석을 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 방법에 의해 검정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 IL-22 수용체에 결합하는 IL-22 Fc 융합 단백질을 제공하고, 상기 결합은 IL-22 수용체 하향 신호전달을 유발할 수 있으며, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14 및 서열번호 16으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과의 서열 동일성이 95% 이상인 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Fc 영역은 글리코실화되지 않는다. 특정의 특별한 실시양태에서, 상기 IL-22 융합 단백질의 상기 Fc 영역은 효과기(effector) 활성을 갖지 않거나(예를 들어, FcγIIIR에 결합하지 않음) 전체(예를 들어, 야생형) IgG 항체보다 실질적으로 더 낮은 효과기 활성을 나타낸다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 상기 Fc 영역은 항체-의존적 세포질 세포독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity, ADCC) 또는 보체 의존적 세포독성(complement dependent cytotoxicity, CDC)과 같은 세포독성을 유발하지 않는다. 달리 명시되지 않는 한, "IL-22 융합 단백질", "IL-22 Fc 융합", "IL-22 Ig 융합 단백질", "IL-22 Fc 융합 단백질" 또는 "IL-22 Fc"는 본 출원 전반에 걸쳐 상호교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 용어 "IL-22" 또는 "IL-22 폴리펩티드" 또는 "IL-22 단백질"은 달리 지시되지 않는 한 영장류(예를 들어, 인간) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한 임의의 포유동물 공급원으로부터의 임의의 고유 IL-22를 지칭한다. 상기 용어는 "전장"의 프로세싱되지 않은 IL-22뿐만 아니라 세포에서의 프로세싱으로 인한 임의의 형태의 IL-22를 포함한다. 예를 들어, N-말단 리더(leader) 서열을 함유하는 전장 IL-22 및 성숙 형태 IL-22 둘 다 본 발명에 포함된다. 상기 리더 서열(또는 신호 펩티드)은 내인성 IL-22 리더 서열 또는 다른 포유동물 분비 단백질(secretary protein)의 외인성 리더 서열일 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 리더 서열은 진핵생물 또는 원핵생물 분비 단백질로부터 유래할 수 있다. 상기 용어는 또한 IL-22의 자연 발생 변이체, 예를 들어, 스플라이스(splice) 변이체 또는 대립형질(allelic) 변이체를 포함한다. 예시적인 인간 IL-22의 아미노산 서열은 서열번호 4(신호 펩티드가 없는 성숙한 형태)에 제시되어 있다. 특정 실시양태에서, 내인성 리더 서열을 갖는 전장 IL-22 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 71에 제공되고; 다른 실시양태에서, 외인성 리더 서열을 갖는 성숙한 IL-22 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제공된다. 상기 IL-22의 기능 및/또는 활성(예를 들어, IL-22 수용체로의 결합)에 영향을 미치지 않는 작은 서열 변이, 특히 IL-22의 보존적 아미노산 치환도 본 발명에 의해 고려된다. 도 9는 몇몇 예시적인 포유동물 종으로부터의 성숙한 IL-22의 아미노산 서열 정렬을 보여준다. 별표는 IL-22의 기능 및/또는 활성에 중요할 것 같은 종에 걸쳐 고도로 보존된 아미노산 잔기를 나타낸다. 따라서, 특정 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 4와의 서열 동일성이 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 IL-22 폴리펩티드를 포함한다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 IL-22 단백질은 서열번호 71과의 서열 동일성이 95% 이상이거나, 서열번호 71과의 서열 동일성이 96% 이상이거나, 서열번호 71과의 서열 동일성이 97% 이상이거나; 서열번호 71과의 서열 동일성이 98% 이상이거나; 서열번호 71과의 서열 동일성이 99% 이상이다. 본원에 기재된 IL-22 폴리펩티드는 다양한 공급원, 예컨대 인간 조직 또는 다른 공급원으로부터 단리되거나, 재조합 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다.
용어 "IL-22 수용체" 또는 "IL-22R"은 IL-22R1 및 IL-10R2 또는 이의 자연 발생 대립형질 변이체로 이루어진 이종이량체를 지칭한다. 예를 들어, 문헌(Ouyang 등, 2011, Annu. Rev. Immunol. 29: 159-63) 참조. IL-10R2는 많은 세포 유형에 의해 편재적으로 발현되고, IL-22R1은 상피 세포, 간세포 및 각질세포와 같은 선천적 세포에서만 발현된다. IL-22R1은 IL-22Ra1 또는 IL-22Rα1으로도 알려져 있다. IL-22R1은 다른 폴리펩티드와 쌍을 이루어 다른 IL-10 패밀리 구성원, 예를 들어, IL-20 또는 IL-24에 대한 이종이량체 수용체를 형성할 수 있다. 예를 들어, 위 문헌(Ouyang 등, 2011) 참조. 예시적인 IL-22R1 폴리펩티드의 전장 아미노산 서열이 서열번호 81에 제시되어 있다. IL-22R1의 이 전장 서열은 최종 기능성 분자에서 절단되는 N-말단 신호 서열(아미노산 1-15)을 포함한다(이의 예시적인 아미노산 서열은 서열번호 82에 제시됨). 예시적인 IL10R2 폴리펩티드의 전장 아미노산 서열은 서열번호 83에 제시되어 있다. IL10R2의 이 전장 서열은 최종 기능성 분자에서 절단되는 N-말단 신호 서열(아미노산 1-19)을 포함한다(이의 예시적인 아미노산 서열은 서열번호 84에 제시됨).
"고유 서열 IL-22 폴리펩티드" 또는 "고유 서열 IL-22R 폴리펩티드"는 자연으로부터 유래한 상응하는 IL-22 또는 IL-22R 폴리펩티드와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 이러한 고유 서열 IL-22 또는 IL-22R 폴리펩티드는 자연으로부터 분리될 수 있거나 재조합 또는 합성 수단에 의해 생성될 수 있다. 상기 용어는 구체적으로 특정 IL-22 또는 IL-22R 폴리펩티드의 자연 발생 절단 또는 분비된 형태(예를 들어, 관련된 신호 펩티드가 없는 IL-22), 자연 발생 변이체 형태(예를 들어, 대안적으로 스플라이싱된 형태) 및 상기 폴리펩티드의 자연 발생 대립형질 변이체를 포함한다. 본 발명의 다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 고유 서열 IL-22 또는 IL-22R 폴리펩티드는 성숙한 또는 전장 고유 서열 폴리펩티이다. 예시적인 전장 고유 인간 IL-22가 서열번호 70(DNA) 및 서열번호 71(단백질)에 제시되어 있다. IL-22 및 IL-22R 폴리펩티드 서열은 본원에서 아미노산 위치 1로 지정된 메티오닌 잔기로 시작하는 것으로 나타났지만, 아미노산 위치 1의 상향(upstream) 또는 하향에 위치한 다른 메티오닌 잔기가 IL-22 또는 IL-22R 폴리펩티드에 대해 출발 아미노산 잔기로 사용될 수 있는 것이 가능하다.
"IL-22 변이체", "IL-22R 변이체", "IL-22 변이체 폴리펩티드" 또는 "IL-22R 변이체 폴리펩티드"는 전장 고유 서열 IL-22 또는 IL-22R 폴리펩티드 서열과의 서열 동일성이 약 80% 이상인 위에서 정의된 바와 같은 활성 IL-22 또는 IL-22R 폴리펩티드를 의미한다. 일반적으로, IL-22 또는 IL-22R 폴리펩티드 변이체는 전장 또는 성숙한 고유 서열 IL-22 또는 IL-22R 폴리펩티드 서열과의 아미노산 서열 동일성이 약 80% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 81% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 82% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 83% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 84% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 85% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 86% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 87% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 88% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 89% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 90% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 91% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 92% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 93% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 94% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 95% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 96% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 97% 이상, 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 98% 이상, 및 대안적으로 아미노산 서열 동일성이 약 99% 이상일 것이다.
용어 "Fc 영역", "Fc 도메인" 또는 "Fc"는 불변 영역(constant region)의 적어도 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 비항원 결합 영역을 지칭한다. 상기 용어는 고유 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226으로부터 상기 중쇄의 카복실 말단으로 연장된다. 그러나 상기 Fc 영역의 C-말단 라이신(Lys447)은 상기 Fc 영역의 구조 또는 안정성에 영향을 미치지 않으면서 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 본원에서 달리 명시되지 않는 한, IgG 또는 Fc 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌(Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)에 기술되어 있는 바와 같이, EU 지수라고도 하는 항체에 대한 EU 넘버링 시스템에 따른다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 힌지 영역(hinge region)(Cys226에서 출발), IgG CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 면역글로불린 IgG 중쇄 불변 영역을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "힌지 영역" 또는 "힌지 서열"은 링커와 CH2 도메인 사이에 위치한 아미노산 서열을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 상기 힌지 영역은 아미노산 서열 CPPCP(서열번호 31)를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-22 IgG4 Fc 융합 단백질에 대한 힌지 영역은 이량체화를 용이하게 하기 위해 고유 IgG1 힌지 영역에서 발견되는 서열인 상기 CPPCP 서열(서열번호 31)을 포함한다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 상기 힌지 영역에서 시작하여 IgG 중쇄의 C-말단으로 연장된다. 특정의 특별한 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 Fc 영역을 포함한다. 특정의 특별한 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 특정한 다른 특별한 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 IgG1의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다.
특정 실시양태에서, 상기 IgG CH2 도메인은 Ala 231에서 시작한다. 특정의 다른 실시양태에서, 상기 CH3 도메인은 Gly 341에서 시작한다. 인간 IgG의 C-말단 Lys 잔기는 선택적으로 결여될 수 있는 것으로 생각된다. Fc의 원하는 구조 및/또는 안정성에 영향을 미치지 않으면서 상기 Fc 영역의 보존적 아미노산 치환이 본 발명의 범위 내에서 고려되는 것으로 또한 생각된다.
특정 실시양태에서, 상기 IL-22는 링커를 통해 상기 Fc 영역에 연결된다. 특정의 특별한 실시양태에서, 상기 링커는 본원에 기재된 바와 같이 IL-22의 C-말단을 상기 Fc 영역에 연결하는 펩티드이다. 특정 실시양태에서, 고유 IgG 서열은 상기 링커 및/또는 힌지 영역에 존재하여 면역원성의 위험을 최소화하고/하거나 회피한다. 다른 실시양태에서, 작은 서열 변이가 제조를 용이하게 하기 위해 고유 서열에 도입될 수 있다. (예를 들어, 루시퍼라제 분석에 의해 측정되는 바와 같이) 높은 활성을 나타내는 외인성 링커 또는 힌지 서열을 포함하는 IL-22 Fc 융합 작제물 또한 본 발명의 범위 내에 있다. 특정 실시양태에서, 상기 링커는 8-20개의 아미노산, 8-16, 8-15, 8-14, 8-13, 8-12, 8-11, 8-10, 8-9, 10-11, 10-12, 10-13, 10-14, 10-15, 10-16, 11-16, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 아미노산 길이인 아미노산 서열을 포함한다. 특정의 다른 실시양태에서, 상기 링커는 아미노산 서열 DKTHT(서열번호 32)를 포함한다. 특정의 특별한 실시양태에서, 상기 링커는 서열 Gly-Gly-Ser(서열번호 45), Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 46) 또는 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(서열번호 47)을 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함한다. 용어 "연결된(linked to)" 또는 "융합된(fused to)"은 2개의 모이어티 사이에 형성된 공유 결합, 예를 들어, 펩티드 결합을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "글리코실화(glycosylation)" 및 "글리코실화된"은 생물학적 분자(예를 들어, 단백질 또는 지질)에 부착된 탄수화물(예를 들어, 올리고당(oligosaccharide) 또는 다당류, "글리칸"으로도 지칭됨)의 존재를 지칭한다. 특별한 실시양태에서, 글리코실화는 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질) 또는 관심 대상 단백질의 일부(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질의 IL-다당류 모이어티)에 부착된 글리칸(예를 들어, N-글리칸)의 존재를 지칭한다. N-연결된 글리코실화는 탄수화물 모이어티가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착되는 것을 의미한다. X가 프롤린을 제외한 임의의 아미노산인, 트리펩티드 서열인 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌은 아스파라긴 측쇄로의 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열이다. O-연결된 글리코실화는 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시라이신이 O-연결된 글리코실화에 관여할 수 있지만, 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토오스 또는 자일로스 중 하나를 하이드록시아미노산, 가장 일반적으로 세린 또는 트레오닌에 부착시키는 것을 의미한다. 글리코실화의 검토를 위해, 예를 들어, 문헌(Varki 등, Essentials of Glycobiology, 3 rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2015-2017) 참조.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "비글리코실화된(aglycosylated)" 및 "글리코실화되지 않은"은 글리코실화되지 않은(예를 들어, N-글리코실화되지 않은) 단백질 또는 관심 대상 단백질의 일부(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질의 Fc 영역)를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 관심 대상 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)의 일부(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질의 IL-22 폴리펩티드 부분)는 글리코실화되고, 반면에 관심 대상 단백질의 다른 부분(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질의 Fc 영역)은 글리코실화되지 않는다.
일부 실시양태에서, Fc 영역 또는 CH2 도메인이 글리코실화되지 않은 IL-22 Fc 융합 단백질이 본원에 제공된다. 특정 실시양태에서, CH2 도메인에서의 N-글리코실화 부위는 글리코실화를 방지하기 위해 돌연변이된다. 예를 들어, 비글리코실화된 Fc 영역을 갖는 IL-22 Fc 융합 단백질은 상기 Fc 영역의 CH2 도메인에서 EU 지수와 같은 위치 297(예를 들어, N297)의 아미노산 잔기를 돌연변이시킴으로써 제조될 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 CH2 도메인에서의 글리코실화는 글리코실화 컨센서스(consensus) 부위, 즉 위치 297의 Asn에 이어서 임의의 아미노산 잔기(인간 IgG의 경우, Ser) 및 Thr을 변경함으로써 제거될 수 있다. 글리코실화 부위는 아미노산 삽입, 결실 및/또는 치환에 의해 변경될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산 잔기가 Asn과 Ser 사이 또는 Ser와 Thr 사이에 삽입되어 원래의 글리코실화 부위를 변경시킬 수 있으며, 상기 삽입은 N-글리코실화 부위를 재생하지 않는다. 특정의 특별한 실시양태에서, 인간 IgG Fc의 CH2 도메인 내의 EU 지수와 같은 위치 297(예를 들어, Fc의 N-글리코실화 부위)에서의 아미노산 잔기는 돌연변이되어 글리코실화 부위를 없앤다. 특정의 특별한 실시양태에서, EU 지수와 같은 위치 297(예를 들어, N297)의 아미노산 잔기는 Gly, Ala, Gln, Asp 또는 Glu로 변경된다. 일부 특별한 실시양태에서, EU 지수와 같은 위치 297(예를 들어, N297)의 아미노산 잔기는 Gly 또는 Ala로 변경된다. 다른 특별한 실시양태에서, EU 지수와 같은 위치 297(예를 들어, N297)의 아미노산 잔기는 Gly로 변경된다. 다른 특정 실시양태에서, EU 지수와 같은 위치 299의 아미노산 잔기는 다른 아미노산, 예를 들어, Ala, Val 또는 Gly로 치환될 수 있다. 특정의 특별한 실시양태에서, 비글리코실화된 Fc를 초래하는 돌연변이는 IL-22 Fc 융합 단백질의 구조 및/또는 안정성에 영향을 미치지 않는다.
특정 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 CH2 도메인에서 EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기가 돌연변이되는 Fc 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기는 Gly 또는 Ala, 바람직하게는 Gly로 변경된다. 다른 특정 실시양태에서, EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기가 결실된다. 특정 실시양태에서, EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기에서 아미노산 치환이 있는 Fc를 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질은 비글리코실화되거나 글리코실화되지 않는다.
다른 실시양태에서, EU 지수와 같은 위치 297(예를 들어, N297)에서 야생형 아미노산 잔기에 부착된 N-글리칸은 효소적으로, 예를 들어, 탈글리코실화(deglycosylation)에 의해 제거될 수 있다. 적합한 당분해(glycolytic) 효소는 펩티드-N-글리코시다제(peptide-N-glycosidase, PNGase)를 제한 없이 포함한다.
용어 "아푸코실화(afucosylation)", "아푸코실화된(afucosylated)", "데푸코실화(defucosylation)" 또는 "데푸코실화된(defucosylated)"은 N-글리칸, 예를 들어, 단백질 또는 단백질의 일부(예를 들어, Fc의 CH2 도메인)에 부착된 N-글리칸으로부터의 코어-푸코스의 부재 또는 제거를 지칭한다.
용어 "이량체성 IL-22 Fc 융합 단백질"은 각 단량체가 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 이량체를 지칭한다. 용어 "단량체성 IL-22 Fc 융합 단백질"은 하나의 단량체가 IL-22 Fc 융합 단백질(IL-22 Fc 암(arm))을 포함하는 반면, 다른 단량체는 IL-22 폴리펩티드가 없는 Fc 영역(Fc 암)을 포함하는 이량체를 지칭한다. 따라서, 이량체성 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22R 결합에 대해 2가인 반면, 단량체성 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22R 결합에 대해 1가이다. 단량체성 IL-22 Fc 융합 단백질의 이종이량체화는 노브-인투-홀 기술(knob-into-hole technology)에 의한 이종이량체화를 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 방법에 의해 촉진될 수 있다. 노브-인투-홀 기술의 구조 및 조립 방법은, 예를 들어, US5,821,333, US7,642,228, US 2011/0287009 및 PCT/US2012/059810에서 찾을 수 있으며, 이들의 전문은 본원에 참조로 포함된다. 이 기술은 작은 아미노산 잔기를 하나의 Fc의 CH3 도메인에서 큰 것으로 대체함으로써 "노브"(또는 돌기(protuberance))를 도입하고, 하나 이상의 큰 아미노산 잔기를 더 작은 것으로 대체함으로써 다른 Fc의 CH3 도메인에 "홀"(또는 공동(cavity))을 도입함으로써 개발되었다. 특정 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 암은 노브를 포함하고, Fc 단독 암은 홀을 포함한다.
노브 형성을 위한 바람직한 잔기는 일반적으로 자연 발생 아미노산 잔기이고, 바람직하게는 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y) 및 트립토판(W)으로부터 선택된다. 가장 바람직한 것은 트립토판 및 티로신이다. 일 실시양태에서, 노브 형성을 위한 원래의 잔기는 알라닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글리신, 세린, 트레오닌 또는 발린과 같이 측쇄 용적이 작다. 노브 형성을 위한 CH3 도메인에서의 예시적인 아미노산 치환은 제한 없이 T366W, T366Y 또는 F405W 치환을 포함한다.
홀 형성을 위한 바람직한 잔기는 일반적으로 자연 발생 아미노산 잔기이고, 바람직하게는 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T) 및 발린(V)으로부터 선택된다. 일 실시양태에서, 홀 형성을 위한 원래의 잔기는 티로신, 아르기닌, 페닐알라닌 또는 트립토판과 같이 측쇄 용적이 크다. 홀 생성을 위한 CH3 도메인에서의 예시적인 아미노산 치환은 제한 없이 T366S, L368A, F405A, Y407A, Y407T 및 Y407V 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 노브는 T366W 치환을 포함하고, 홀은 T366S/L368A/Y407V 치환을 포함한다. 특정의 특별한 실시양태에서, 단량체성 IL-22 Fc 융합 단백질의 Fc 영역은 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 특정의 특별한 실시양태에서, 단량체성 IL-22 IgG1 Fc 융합은 IL-22 Fc 노브 암 및 Fc 홀 암을 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-22 Fc 노브 암은 T366W 치환(서열번호 61)을 포함하고, Fc 홀 암은 T366S, L368A 및 Y407V(서열번호 62)를 포함한다. 다른 특정 실시양태에서, 두 암의 Fc 영역은 N297G 또는 N297A 돌연변이를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 단량체 성 IL-22 Fc 융합 단백질은 대장균(E. coli) 세포에서 발현된다. 이종이량체화를 용이하게 하는 당업계에 공지된 Fc 영역에 대해 다른 변형이 또한 본 출원에 의해 고려되고 포함되는 것으로 이해된다.
용어 "상처(wound)"는 부상, 특히 피부 또는 다른 외부 표면이 찢어지거나, 구멍이 뚫리거나, 절개되거나 또는 그렇지 않으면 파손된 부상을 지칭한다.
용어 "궤양"은 종종 고름의 형성, 조직 괴사가 특징이고, 빈번히 염증 반응을 동반하는 피부 또는 점막 손상 부위이다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "장(intestine)" 또는 "장(gut)"은 소장 및 대장을 광범위하게 포함한다.
용어 "상처 치유를 가속하는" 또는 "상처 치유 가속"은 치유 속도의 증가, 예를 들어, 완전한 상처 봉합이 일어날 때까지의 시간 단축 또는 상처 부위의 감소(%)가 일어날 때까지의 시간 단축을 지칭한다.
"당뇨성 상처"는 당뇨병과 관련된 상처이다.
"당뇨성 궤양"은 당뇨병과 관련된 궤양이다.
"만성 상처"는 치유되지 않는 상처를 지칭한다. 예를 들어, 문헌(Lazarus 등, Definitions and guidelines for assessment of wounds and evaluation of healing, Arch. Dermatology. 130:489-93(1994)) 참조. 만성 상처는, 예를 들어, 동맥 궤양, 당뇨성 궤양, 압박 궤양 또는 욕창, 정맥 궤양 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 급성 상처는 만성 상처로 발전할 수 있다. 급성 상처는, 예를 들어, 열 부상(예를 들어, 화상), 트라우마, 수술, 광범위한 피부암 절제, 심부 진균 및 박테리아 감염, 혈관염(vasculitis), 피부경화증, 천포창(pemphigus), 독성 표피 괴사(toxic epidermal necrolysis) 등에 의해 생기는 상처를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 문헌(Buford, Wound Healing and Pressure Sores, HealingWell.com, published on: October 24, 2001) 참조. 따라서, 특정 실시양태에서, 만성 상처는 감염된 상처이다. "정상 상처(normal wound)"는 정상 상처 치유 치료를 받는 상처를 지칭한다.
"친화도"는 분자의 단일 결합 부위(예를 들어, 리간드 또는 항체)와 그의 결합 파트너(예를 들어, 수용체 또는 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 지시되지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이, "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질 및 IL-22 수용체) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수(Kd)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 것을 포함하여 당업계에 공지된 일반적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 구체적이고 예시적인 실시양태는 하기에 기술되어 있다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 원하는 항원 결합 활성을 나타내는 한 단클론 항체, 다클론 항체, 다중특이적 항체(multispecific antibodies)(예를 들어, 이중특이적 항체) 및 항체 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 항체 구조를 포함한다.
"항체 단편"은 무손상(intact) 항체가 결합하는 항원에 결합하는 무손상 항체의 일부를 포함하는 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 디아바디(diabodies), 선형 항체, 단쇄 항체 분자(예를 들어, scFv) 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
항체의 "부류(class)"는 그의 중쇄가 보유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5가지 주요 부류의 항체: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 있으며, 이들 중 몇몇은 서브클래스(이소형), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 상이한 부류의 면역글로불린에 상응하는 중쇄 불변 도메인을 각각 α, β, ε, γ 및 μ라고 한다.
"효과기 기능" 또는 "효과기 활성"은 항체 이소형에 따라 변하는, 항체의 Fc 영역에 기인한 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 효과기 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존적 세포 매개 세포독성(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC); 식세포작용(phagocytosis); 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 임의의 효과기 기능 또는 임의의 검출 가능한 효과기 기능을 나타내지 않는다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 실질적으로 감소한 효과기 기능, 예를 들어, 약 50%, 60%, 70% 80% 또는 90% 감소한 효과기 기능을 나타낸다.
약제(agent), 예를 들어, 약제학적 제제의 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 용량 및 시간에 효과적인 양을 지칭한다.
예를 들어, 심혈관 질환 또는 병태의 경우, 치료적 유효량의 IL-22 Fc 융합 단백질은 죽상동맥경화성 플라크 형성 정도를 감소시킬 수 있고/있거나; 죽상동맥경화성 플라크(들)의 크기를 감소시킬 수 있고/있거나; 죽상동맥경화성 플라크를 억제(즉, 어느 정도 느리게 하고 바람직하게는 정지)할 수 있고/있거나; 죽상동맥경화성 플라크의 혈전증 또는 파열을 억제(즉, 어느 정도 느리게 하고 바람직하게는 정지)할 수 있고/있거나; 상기 질환 또는 병태와 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 경감시킬 수 있다.
"감소시키거나 억제하다"는 바람직하게는 20% 이상, 더욱 바람직하게는 50% 이상, 가장 바람직하게는 75%, 85%, 90%, 95% 이상의 전체 감소를 야기하는 능력을 의미한다. 감소시키거나 억제하다는 치료되는 장애의 증상, 죽상동맥경화성 플라크의 존재 또는 크기, 또는 죽상동맥경화성 플라크(들)의 수를 지칭할 수 있다.
"차선량(suboptimal amount)"은 특정 치료에 전형적으로 사용되는 치료제의 최적량보다 적은 양을 지칭한다. 2개의 치료제가 동시에 또는 순차적으로 대상체에 제공될 때, 각각의 치료제가 단독으로 제공될 때의 치료와 비교하여 각각의 치료제가 차선량으로 제공될 수 있다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, IBD 치료가 필요한 대상체에는 본 발명의 IL-22 Fc 융합 단백질 및 덱사메타손을 차선량으로 포함하는 약제학적 조성물이 투여된다.
용어 "전장 항체(full length antibody)", "무손상 항체(intact antibody)" 및 "전항체(whole antibody)"는 고유 항체 구조와 실질적으로 구조가 유사하거나 본원에서 정의된 바와 같이 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하도록 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되며, 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭하는데, 이러한 세포의 자손도 포함한다. 숙주 세포는 "형질전환체(transformants)" 및 "형질전환된 세포"를 포함하고, 여기에는 1차 형질전환된 세포 및 계대수에 관계없이 그로부터 유래한 자손이 포함된다. 형질전환된 세포는 일시적으로 또는 안정적으로 형질전환된 세포를 포함한다. 자손은 핵산 함량에서 모세포와 완전히 동일하지는 않지만 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질전환된 세포에서 선별되거나 선택된 것과 기능 또는 생물학적 활성이 동일한 돌연변이 자손이 본원에 포함된다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 외인성 핵산으로 일시적으로 형질감염된다. 다른 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 외인성 핵산으로 안정적으로 형질감염된다.
"면역접합체(immunoconjugate)"는 세포독성제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 이종 분자(들)에 접합된 항체 또는 항체의 단편이다.
"개체", "대상체" 또는 "환자"는 포유동물이다. 포유동물은 가축(예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류(예를 들어, 인간, 및 원숭이와 같은 비인간 영장류), 토끼 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 개체, 대상체 또는 환자는 인간이다.
"단리된" IL-22 Fc 융합 단백질은 상기 융합 단백질을 재조합적으로 생성하는 숙주 세포의 환경으로부터 분리된 것이다. 일부 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질은, 예를 들어, 전기영동법(예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 전기영동(IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피법(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의한 측정시, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다.
"단리된" 핵산은 그의 자연환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 통상적으로 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체 외 또는 그의 고유 염색체 위치와는 다른 염색체 위치에 존재한다.
용어 "IL-22 Fc 융합 단백질을 암호화하는 단리된 핵산"은 IL-22 Fc 융합 단백질을 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 지칭하는데, 단일 벡터 또는 별도의 벡터들에서의 이러한 핵산 분자(들), 숙주 세포 내로 일시적으로 또는 안정적으로 형질감염된 산 분자(들), 및 숙주 세포의 하나 이상의 위치에 존재하는 이러한 핵산 분자(들)를 포함한다.
용어 "제어 서열"은 특정 숙주 유기체에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 DNA 서열을 지칭한다. 원핵생물에 적합한 제어 서열은, 예를 들어, 프로모터, 선택적으로 조작자 서열 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서(enhancers)를 이용하는 것으로 알려져 있다.
핵산은 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 있을 때 "작동 가능하게 연결"된다. 예를 들어, 예비서열 또는 분비 리더를 위한 DNA는 폴리펩티드의 분비에 참여하는 예비단백질로서 발현되는 경우 폴리펩티드를 위한 DNA에 작동 가능하게 연결되고; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 코딩 서열에 작동 가능하게 연결되고; 또는 리보솜 결합 부위는 변형(translation)을 용이하게 하기 위해 위치되는 경우 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동 가능하게 연결된"은 연결된 DNA 서열이 연속적이며, 분비 리더의 경우에는 연속적이고 판독 단계임을 의미한다. 그러나 인핸서는 연속적일 필요는 없다. 연결(linking)은 편리한 제한 부위에서 라이게이션(ligation)에 의해 달성된다. 그러한 부위가 존재하지 않으면, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커는 통상적인 관례에 따라 사용된다.
본원에 사용된 용어 "단클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하는데, 즉 집단을 포함하는 개별 항체는, 예를 들어, 자연 발생 돌연변이를 함유하거나 단클론 항체 제제의 생산 동안 발생하는, 일반적으로 소량으로 존재하는 가능한 변이체 항체를 제외하고는, 동일하고/하거나 동일한 에피토프에 결합한다. 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다클론 항체 제제와 대조적으로, 단클론 항체 제제의 각각의 단클론 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 지시된다. 따라서, 수식어 "단클론"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단클론 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지 디스플레이 방법, 및 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하는 유전자 이식 동물을 이용하는 방법을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있고, 이러한 방법 및 단클론 항체를 제조하기 위한 다른 예시적인 방법이 본원에 기재되어 있다.
"고유 항체"는 다양한 구조의 자연 발생 면역글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들어, 고유 IgG 항체는 디설파이드 결합한 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 구성된 약 150,000달톤의 이종사량체(heterotetramer) 당단백질이다. N-말단에서 C-말단까지, 각각의 중쇄는 가변 중 도메인(variable heavy domain) 또는 중쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VH)을 가지며, 이어서 3개의 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3)이 있다. 유사하게, N-말단에서 C-말단까지, 각각의 경쇄는 가변 경 도메인(variable light domain) 또는 경쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VL)을 가지며, 이어서 불변 경(constant light, CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리는 2가지 유형 중 하나에 할당될 수 있다.
용어 "가변 영역(variable region)" 또는 "가변 도메인(variable domain)"은 항체를 항원에 결합시키는데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 고유 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 구조형성영역(framework regions, FRs) 및 3개의 초가변 영역(hypervariable regions, HVRs)을 포함한다(예를 들어, 문헌(Kindt 등. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91(2007)) 참조). 항원 결합 특이성을 부여하기 위해 단일 VH 또는 VL 도메인이 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리하여 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝할 수 있다. 예를 들어, 문헌(Portolano 등, J. Immunol. 150:880-887(1993); Clarkson 등, Nature 352:624-628(1991)) 참조.
본원에 사용된 용어 "벡터"는 이것이 연결된 다른 핵산을 전파할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터 및 도입되는 숙주 세포의 게놈에 포함된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터(expression vectors)"로 지칭된다.
"고유 서열 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 고유 서열 인간 Fc 영역은 고유 서열 인간 IgG1 Fc 영역(비-A 및 A 알로타입(allotype)); 고유 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 고유 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 고유 서열 인간 IgG4 Fc 영역, 및 이의 자연 발생 변이체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"변이체 Fc 영역"은 하나 이상의 아미노산 변형, 바람직하게는 하나 이상의 아미노산 치환(들)에 의해 고유 서열 Fc 영역의 것과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 고유 서열 Fc 영역 또는 모체(parent) 폴리펩티드의 Fc 영역과 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 하는데, 예를 들어, 고유 서열 Fc 영역 또는 모체 폴리펩티드의 Fc 영역에서 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 바람직하게는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 한다. 본원의 변이체 Fc 영역은 바람직하게는 고유 서열 Fc 영역 및/또는 모체 폴리펩티드의 Fc 영역과 약 80% 이상의 상동성을 가질 것이며, 가장 바람직하게는 그와 약 90% 이상의 상동성, 더욱 바람직하게는 그와 약 95% 이상의 상동성을 가질 것이다. 특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 글리코실화되지 않는다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 "장애", "질환" 또는 "병태"는 본원에 기술된 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물), 예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 이용한 치료로 이점을 얻을 수 있는 임의의 상태이다. 여기에는 포유동물이 해당 장애에 걸리기 쉬운 병리학적 상태를 포함한 만성 및 급성 장애 또는 질환이 포함된다. 일부 실시양태에서, 상기 장애는 IL-22 관련 장애이다. 예시적인 장애는 IBD(예를 들어, UC 또는 크론병), 미생물 감염, 급성 신장 손상, 급성 췌장염, 상처, 심혈관 병태, 대사증후군, 급성 내독소혈증 및 패혈증을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "염증성 장 장애", "염증성 장 질환" 또는 "IBD"는 본원에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 병인이 소장 및 결장을 포함한 장의 재발성 염증과 관련된 모든 질환 및 병리학적 상태를 포함한다. IBD는, 예를 들어, 궤양성 대장염(UC) 및 크론병을 포함한다. IBD는 UC 및 CD로 제한되지 않는다. 상기 질환의 징후는 장의 염증 및 상피 완전성 감소를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 "심혈관 질환" 또는 "심혈관 장애"는 본원에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 병인이 혈관 이상, 예를 들어, 죽상동맥경화성 플라크 형성(안정하거나 불안정한/취약한 플라크 포함), 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 세동맥경화증 및 상승된 전신 지질다당류(LPS) 노출과 관련된 모든 질환 및 병리학적 상태를 포함한다. 상기 용어는 추가로 죽상동맥경화성 플라크 형성의 억제로 이점을 얻는 질환 및 병리학적 상태를 포함한다. 심혈관 질환은 관상동맥 죽상동맥경화증, 관상동맥 미세혈관 질환, 뇌졸중, 경동맥 질환, 말초동맥 질환, 허혈, 관상동맥 질환(coronary artery disease, CAD), 급성 관상동맥 증후군(acute coronary syndrome, ACS), 관상동맥 심질환(coronary heart disease, CHD), CAD 및 CHD 관련 질환, 뇌혈관 질환, 말초혈관 질환, 동맥류(aneurysm), 혈관염, 정맥 혈전증(venous thrombosis), 당뇨병, 대사증후군만성 신장 질환, 허혈 및 재관류 후 원격 조직 손상 및 심폐 우회를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 구체적으로 발생, 진전 또는 진행이 죽상동맥경화성 플라크 형성의 억제에 의해 제어될 수 있는 관련된 모든 심혈관 질환이 이 그룹 내에 포함된다.
용어 "심혈관 병태"는 본원에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 병인이 죽상동맥경화성 플라크 형성(안정하거나 불안정한/취약한 플라크 포함), 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 세동맥경화증, 및 상승된 전신 지질다당류(LPS) 노출과 관련된 모든 심혈관 병태 및 질환을 포함한다. 구체적으로 발생, 진전 또는 진행이 죽상동맥경화성 플라크 형성의 억제에 의해 제어될 수 있는, 죽상동맥경화성 플라크 형성과 관련된 모든 심혈관 병태 및 질환이 이 그룹 내에 포함된다. 상기 용어는 구체적으로 죽상동맥경화성 플라크 형성의 억제로 이점을 얻는 질환 및 병리학적 상태를 포함한다. 심혈관 질환은 관상동맥 죽상동맥경화증, 관상동맥 미세혈관 질환, 뇌졸중, 경동맥 질환, 말초동맥 질환, 허혈, 관상동맥 질환(CAD), 관상동맥 심질환(CHD), CAD 및 CHD 관련 병태, 뇌혈관 질환 및 뇌혈관 질환과 관련된 병태, 말초혈관 질환 및 말초혈관 질환과 관련된 병태, 동맥류, 혈관염, 정맥 혈전증, 당뇨병, 대사증후군만성 신장 질환, 허혈 및 재관류 후 원격 조직 손상 및 심폐 우회를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에 사용된 "뇌혈관 질환과 관련된 병태"는, 예를 들어, 일과성 허혈성 발작(transient ischemic attack, TIA) 및 뇌졸중을 포함한다. 본원에 사용된 "말초혈관 질환과 관련된 병태"는, 예를 들어, 파행(claudication)을 포함한다. 구체적으로 발생, 진전 또는 진행이 죽상동맥경화성 플라크 형성의 억제에 의해 제어될 수 있는 관련된 모든 심혈관 질환 및 병태가 이 그룹 내에 포함된다.
죽상동맥경화성 플라크 형성은 대사 내독소혈증에 대한 선천적 면역 반응의 결과로 발생할 수 있으며, 이는 장내 미생물에서 유래한 상승된 전신 지질다당류(LPS) 수준 및 장점막 장벽에서의 기능적 완전성 상실을 특징으로 한다. 내독소혈증에 대한 선천적 면역 반응은 플라크 형성을 담당하는 덜 심각한(low-grade) 만성 염증을 초래한다.
용어 "대사증후군"은 본원에서 가장 넓은 의미로 사용된다. 대사증후군은 다음 5가지 특성 중 3가지 이상을 포함한 몇 가지 대사 위험 요소의 성인 대상체에서의 동시 발생을 포함한다: 복부 비만, 예를 들어, 90㎝ 이상의 남성의 허리둘레 및 80㎝ 이상의 여성의 허리둘레; 상승된 혈청 트리글리세라이드, 예를 들어, 150㎎/dL 이상 또는 상승된 트리글리세라이드에 대한 약물치료; 감소한 혈청 HDL 콜레스테롤 수준, 예를 들어, 남성의 경우 40㎎/dL 미만 및 여성의 경우 50㎎/dL 미만, 또는 낮은 HDL 콜레스테롤에 대한 약물치료; 고혈압, 예를 들어, 130mmHg 초과의 수축기 혈압 및 85mmHg 초과의 이완기 혈압, 또는 고혈압에 대한 약물치료; 및 상승된 공복 혈당, 예를 들어, 100㎎/dL 이상, 상승된 글루코스에 대한 약물치료, 또는 이전에 진단된 2형 당뇨병.
16세 이상의 아동은 위의 성인 기준을 사용할 수 있다. 10-16세 아동의 경우 대사증후군은 다음 5가지 특성 중 3가지 이상을 포함한 몇 가지 대사 위험 요소의 대상체에서의 동시 발생이 포함된다: 복부 비만, 예를 들어, 허리둘레가 90백분위수 초과; 상승된 혈청 트리글리세라이드, 예를 들어, 110㎎/dL 이상, 95백분위수 초과, 또는 상승된 트리글리세라이드의 약물치료; 감소한 혈청 HDL 콜레스테롤 수준, 예를 들어, 40㎎/dL 미만, 5백분위수 미만, 또는 낮은 HDL 콜레스테롤에 대한 약물치료; 고혈압, 예를 들어, 130mmHg 초과의 수축기 혈압 및 85mmHg 초과의 이완기 혈압, 90백분위수 초과, 또는 고혈압에 대한 약물치료; 및 상승된 공복 혈당, 예를 들어, 100㎎/dL 이상, 손상된 당내성(glucose tolerance), 상승된 글루코스에 대한 약물 치료, 또는 이전에 진단된 2형 당뇨병.
일반적으로, 대사증후군에서 동시 발생 위험 인자는 비만(예컨대 복부 비만), 고혈당증, 이상지질혈증, 인슐린 저항성 및/또는 고혈압을 포함한다. 이러한 모든 위험 요소는 죽상동맥경화성 심혈관 질환, 당뇨병 또는 둘 다의 발생을 촉진한다. 대사증후군은 또한 만성 지방 조직 염증을 특징으로 할 수 있다.
대사증후군은 전염증성, 프로트롬빈성 상태로 인식될 수 있으며, 하나 이상의 C-반응성 단백질, IL-6, LPS 및 플라스미노겐 활성화제 억제제 1의 상승된 수준과 관련될 수 있으며; 이러한 마커들은 죽상동맥경화성 심혈관 질환, 당뇨병 또는 둘 다의 후속 진전에 대한 위험 증가와 관련될 수 있다.
대사증후군은 지방증(steatosis), 섬유증 및 간경변이 있는 지방간 질환, 간세포 및 간 내 담관암, 만성 신장 질환, 다낭성 난소 증후군, 폐쇄성 수면무호흡증을 포함한 수면 호흡 장애, 고뇨산혈증(hyperuricemia) 및 통풍 중 하나 이상을 포함한 몇몇 비만 관련 장애와 관련될 수 있다.
용어 "인슐린 관련 장애"는 손상된 당내성을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 포함한다. 일 실시양태에서, 인슐린 관련 장애는 I형(인슐린 의존성 당뇨병(insulin-dependent diabetes mellitus) 또는 IDDM), II형(인슐린 비의존성 당뇨병(non-insulin dependent diabetes mellitus) 또는 NIDDM) 당뇨병, 임신성 당뇨병 및 인슐린 분비를 자극하는 약제에 의해 이점을 얻을 수 있는 임의의 다른 장애를 포함하나 이에 제한되지 않는 당뇨병이다. 다른 실시양태에서, 인슐린 관련 장애는 인슐린 저항성을 특징으로 한다.
용어 "패혈증"은 가장 넓은 의미로 사용되고 심각한 감염으로 인한 전신 염증 상태를 포함할 수 있다. 패혈증은 혈액, 요로, 폐, 피부 또는 기타 조직의 심각한 감염, 가장 흔하게는 박테리아뿐만 아니라 진균, 바이러스 및 기생충에 대한 면역계의 반응으로 인해 발생할 수 있다.
용어 "급성 내독소혈증"은 가장 넓은 의미로 사용되고 증가한 혈장 박테리아 지질다당류(LPS)의 상태를 포함할 수 있다. 급성 내독소혈증은 결국 패혈증을 유발할 수 있다. 전신 순환에서 증가한 LPS는 덜 심각한 만성 염증을 유도할 것이고, 이는 내인성 보호 숙주 반응을 활성화해 만성 병태에서 식이 유발 비만, 인슐린 저항성 및 죽상동맥경화증, 및 최종 CVD 이벤트에 기여하는 혈장 지질을 상승시킨다.
용어 "이식편대숙주병(GVHD)"은 동종이계 줄기세포 이식(allogeneic stem cell transplantation)의 합병증을 지칭한다. GVHD에서 공여자 조혈모세포는 이식 수용자를 이물로 인식하고 환자의 조직과 기관을 공격하여 조직이나 기관의 기능을 손상시키거나 실패되도록 한다. 본원에 사용된 GVHD는, 예를 들어, 급성 GVHD 또는 만성 GVHD를 포함한다. 또한, 비제한적인 예는 장 GVHD를 포함한다.
본원에 사용된 "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 이의 문법적 변형)는 치료되는 개체의 자연 과정을 변경하려는 시도의 임상적 개입을 말하며, 예방을 위해 또는 임상 병리 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질병의 발생 또는 재발 방지, 증상 완화, 질병의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과의 감소, 전이 예방, 질병 진행률 감소, 질병 상태의 완화 또는 경감 및 예후 개선을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
예를 들어, IBD와 관련하여, "치료"는 IBD 발병 가능성의 감소, IBD 발병률의 감소 및 상기 질환의 중증도 감소를 지칭할 수 있다. 다른 예로서, 죽상동맥경화성 플라크 형성과 관련하여, "치료"는 죽상동맥경화성 플라크 침착물 발생 가능성의 감소, 침착물 발생률의 감소, 기존 침착물의 수 또는 크기의 감소, 또는 플라크 안정성 향상을 지칭할 수 있다. 치료가 필요한 환자는 이미 장애가 있는 환자 및 장애를 예방해야 하는 환자를 포함한다. 바람직한 치료 효과는 질병의 발생 또는 재발 방지, 증상 완화, 질병의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과 감소, 질환 예방, 질환 진행률 감소, 질환 상태 개선 또는 완화 및 차도 발발 또는 예후 개선을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 IL-22 Fc 융합 단백질은 질환의 발병을 지연시키거나 질환의 진행을 늦추기 위해 사용된다.
특정 실시양태에서, 심혈관 병태의 예방 또는 치료와 관련하여 "필요한 대상체"는 심혈관 질환 또는 심혈관 병태(CVD) 또는 대사증후군으로 진단되거나 CVD 또는 대사증후군과 관련된 하나 이상의 병태를 나타내는 대상체로서, 과거에 CVD 또는 대사증후군과 관련된 하나 이상의 병태로 진단받았거나 이러한 병태가 나타난 대상체, 또는 유전적 또는 환경적 요인으로 인해 장차 CVD 또는 대사증후군, 또는 CVD 또는 대사증후군과 관련된 하나 이상의 병태로 발전할 위험이 있는 것으로 여겨지는 대상체를 지칭한다. 따라서, 특정 실시양태에서, 상기 필요한 대상체는 CVD 또는 대사증후군, 또는 CVD 또는 대사증후군과 관련된 병태를 나타내는 대상체, 또는 과거에 CVD 또는 대사증후군, 또는 CVD 또는 대사증후군과 관련된 병태를 나타낸 대상체, 또는 장차 CVD 또는 대사증후군, 또는 장차 CVD 또는 대사증후군과 관련된 병태로 발전할 위험이 있는 것으로 여겨지는 대상체일 수 있다.
심혈관 질환 또는 병태의 치료에서, 치료제는 면역 반응의 성분의 반응의 크기를 직접 변경하거나, 다른 치료제, 예를 들어, 항생제, 항진균제, 소염제, 화학요법제 등에 의한 치료에 질병이 보다 취약하게 만들 수 있다. 동맥 질환의 치료에서, 치료는, 예를 들어, 질환의 진행을 방지하거나 늦출 수 있다. 따라서, 동맥 질환의 치료는 구체적으로 병태의 진전, 또는 병태의 한 단계에서 다른 더욱 진행된 단계로의 진행 또는 더 심각한 관련 병태로의 진행의 예방, 억제 또는 둔화를 포함한다.
질환 또는 병태의 "병리학"은 대상체의 건강을 해치는 모든 현상을 포함한다. 심혈관 질환 또는 병태의 경우, 죽상동맥경화성 플라크 형성(안정성 또는 불안정성/취약성 플라크 포함), 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 세동맥경화증 및 상승된 전신성 지질다당류(LPS) 노출을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"완화", "완화하는" 또는 이의 등가물은 치료적 처치 및 예방 또는 방지 조치 둘 다를 지칭하며, 여기서 대상은 질환 또는 병태, 예를 들어, 죽상동맥경화성 플라크 형성을 개선, 예방, 둔화(감소), 감소 또는 억제하는 것이다. 치료가 필요한 대상체는 이미 질환 또는 병태가 있는 대상체뿐만 아니라 질환 또는 병태에 걸리기 쉬운 대상체 또는 질병 또는 병태가 예방되는 대상체를 포함한다.
"만성" 투여는 연장된 기간에 초기 치료 효과를 유지하기 위해 급성 모드와 대조적인 연속 모드의 약제(들)의 투여를 지칭한다.
"간헐적" 투여는 중단 없이 연속적으로 수행되지 않고 오히려 사실상 주기적으로 이루어지는 치료이다.
용어 "패키지 삽입물"은 치료 제품의 상용 패키지에 관례로 포함된 설명서를 지칭하는데 사용되며, 이러한 치료 제품의 사용에 관한 지시, 용법, 용량, 투여, 병용 요법, 금기 및/또는 경고에 관한 정보를 포함한다.
기준 폴리펩티드 서열에 대한 "아미노산 서열 동일성(%)"은 서열을 정렬하고 필요한 경우 최대 %의 서열 동일성을 달성하기 위해, 그리고 서열 동일성의 일부로서 어떠한 보존적 치환도 고려하지 않기 위해 갭을 도입한 후, 기준 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 %를 결정하기 위한 정렬은, 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 제공되는 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계 기술 내의 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 통상의 기술자는 비교될 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열 정렬을 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나 본원의 목적상 아미노산 서열 동일성 %값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에 의해 작성되었으며, 소스 코드는 U.S. Copyright Office(Washington D.C., 20559)에 사용자 문서와 함께 미국 저작권 등록 번호 TXU510087로 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 Genentech, Inc.(South San Francisco, California)로부터 공개적으로 제공되거나 상기 소스 코드에서 컴파일(compile)될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 포함한 UNIX 운영 체제에서 사용하도록 컴파일해야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며 변하지 않는다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위해 사용되는 상황에서, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 또는 주어진 아미노산 서열 B와의, 또는 주어진 아미노산 서열 B에 반한 주어진 아미노산 서열 A의 아미노산 서열 동일성 %(이는 다르게는 주어진 아미노산 서열 B에 대해, 또는 주어진 아미노산 서열 B와, 또는 주어진 아미노산 서열 B에 반해 특정 %의 아미노산 서열 동일성을 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로 표현될 수 있음)는 다음과 같이 계산된다:
100 × 분수 X/Y
여기서 X는 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2의 A 및 B 정렬에서 상기 프로그램에 의해 동일하게 일치하는 것으로 기록된 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B의 아미노산 잔기의 총수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우, B에 대한 A의 아미노산 서열 동일성 %는 A에 대한 B의 아미노산 서열 동일성 %와 동일하지 않을 것이다. 구체적으로 다르게 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 아미노산 서열 동일성 % 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 바로 앞 단락에 기재된 바와 같이 수득된다.
다음은 "IL-22"로 지정된 아미노산 서열에 대한 "비교 단백질" 또는 "기준 단백질"로 지정된 아미노산 서열의 아미노산 서열 동일성 %를 계산하는 방법의 예이며, 여기서 "IL-22"는 관심 대상인 IL-22 폴리펩티드의 아미노산 서열을 나타내고, "비교 단백질"은 관심 대상인 "IL-22" 폴리펩티드가 비교되는 폴리펩티드의 아미노산 서열을 나타내고, "X", "Y" 및 "Z" 각각은 상이한 아미노산 잔기를 나타낸다.
Figure pct00001
용어 "작용제(agonist)"는 가장 넓은 의미로 사용되고 IL-22 폴리펩티드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 모방하는 임의의 분자를 포함한다. 또한 "작용제"에는 폴리펩티드를 암호화하는 mRNA의 전사 또는 번역을 자극하는 분자가 포함된다.
적합한 작용제 분자는, 예를 들어, 작용제 항체 또는 항체 단편; 고유 폴리펩티드; 고유 폴리펩티드의 단편 또는 아미노산 서열 변이체; 펩티드; 안티센스 올리고뉴클레오티드; 유기 소분자; 및 폴리펩티드 작용제 또는 항체를 암호화하는 핵산을 포함한다. "하나의" 작용제에 대한 언급은 단일 작용제 또는 둘 이상의 상이한 작용제의 조합을 포함한다.
용어 "IL-22 작용제"는 가장 넓은 의미로 사용되고 고유 서열 IL-22 폴리펩티드의 (상기 정의된 바와 같은) 정성적 생물학적 활성을 모방하는 임의의 분자를 포함한다. IL-22 작용제는 구체적으로 IL-22-Fc 또는 IL-22 Ig 폴리펩티드(면역어드헤신(immunoadhesins))뿐만 아니라 하나 이상의 IL-22 생물학적 활성을 모방하는 소분자를 포함한다. 바람직하게는, 상기 생물학적 활성은 IL-22 수용체의 결합, IL-22BP와의 상호작용, 선천성 면역 반응 경로의 촉진이거나, 심혈관 질환 또는 병태의 경우 죽상동맥경화성 플라크의 형성에 영향을 미치는 것, 특히 죽상동맥경화성 플라크 형성을 억제하는 것이다. 플라크 형성의 억제는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 적합한 이미징 방법에 의해 평가될 수 있다.
IL-22R1은 다른 단백질과 쌍을 이루어 특정 IL-10 패밀리 구성원의 수용체로 이종이량체를 형성한다. 위 문헌(Ouyang 등, 2011) 참조. 따라서, 특정 실시양태에서, IL-22 작용제는 IL-22R1에 결합하여 IL-22R1의 하향 신호전달을 유발하는 사이토카인 (또는 이의 융합 단백질 또는 작용제)을 포함한 IL-22 수용체 작용제를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, IL-22 작용제는 항-IL-22R1 작용제 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 IL-22R1 작용제; IL-20 폴리펩티드 또는 IL-20 Fc 융합 단백질을 포함하지만 이에 제한되지 않는 IL-20 작용제; 및 IL-24 폴리펩티드 또는 IL-24 융합 단백질을 포함하지만 이에 제한되지 않는 IL-24 작용제를 포함한다. 다른 특정 실시양태에서, IL-22R1 작용제는 IL-19 폴리펩티드 또는 IL-19 Fc 융합 단백질을 포함하지만 이에 제한되지 않는 IL-19 작용제; 및 IL-26 폴리펩티드 또는 IL-26 Fc 융합 단백질을 포함하지만 이에 제한되지 않는 IL-26 작용제를 포함한다. IL-19(GenBank 수탁번호 AAG16755.1, 서열번호 77), IL-20(GenBank 수탁번호 AAH69311.1, 서열번호 78), IL-24(GenBank 수탁번호 AAH09681.1, 서열번호 79) 및 IL-26(GenBank 수탁번호 NP_060872.1, 서열번호 80)의 예시적 서열이 본원에 제공된다. 특정 실시양태에서, IL-19 폴리펩티드는 서열번호 77의 아미노산 서열 또는 신호 펩티드가 없는 성숙 단백질을 포함한다. 다른 특정 실시양태에서, IL-20 폴리펩티드는 서열번호 78의 아미노산 서열 또는 신호 펩티드가 없는 성숙 단백질을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, IL-24 폴리펩티드는 서열번호 79의 아미노산 서열 또는 신호 펩티드가 없는 성숙 단백질을 포함한다. 다른 특정 실시양태에서, IL-26 폴리펩티드는 서열번호 80의 아미노산 서열 또는 신호 펩티드가 없는 성숙 단백질을 포함한다.
"소분자"는 본원에서 분자량이 약 600달톤 미만, 바람직하게는 약 1000달톤 미만인 것으로 정의된다.
본원에 사용된 "작용제 항체"는 IL-22 폴리펩티드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 모방하는 항체이다.
용어 "약제학적 제제(pharmaceutical formulation)" 또는 "약제학적 조성물"은 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 여기에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이게 하는 형태 및 상기 제제가 투여될 대상체에 허용될 수 없이 독성인 추가 성분을 함유하지 않는 형태의 제제(preparation)를 지칭한다.
"약제학적으로 허용되는 담체"는 대상체에 무독성인, 활성 성분 이외의 약제학적 제제의 성분을 지칭한다. 약제학적으로 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 희석제, 안정제 또는 보존제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 "저장 수명"은 제품(예를 들어, 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)이 사용(예를 들어, 대상체에 투여) 또는 판매에 부적합하지 않게 저장될 수 있는 시간의 길이를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 저장 수명은 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)이 안정한 시간의 길이이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원의 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 36개월 이상이다. 일부 실시양태에서, 본원의 조성물은 -20℃에서 저장될 때 저장 수명이 48개월 이상이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 -20℃에서 저장될 때 저장 수명이 60개월 이상이다.
"안정한" 약제학적 제제는 그 안에 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)이 저장될 때 본질적으로 그의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 유지하는 것이다. 바람직하게는, 상기 제제는 저장될 때 본질적으로 그의 물리적 및 화학적 안정성뿐만 아니라 그의 생물학적 활성을 유지한다. 저장 기간은 일반적으로 상기 제제의 의도된 저장 수명에 기초하여 선택된다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술이 당해 분야에서 이용 가능하고, 예를 들어, 문헌(Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs.(1991) 및 Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90(1993))에서 검토된다. 안정성은 선택된 기간에 선택된 양의 노광 및/또는 온도에서 측정될 수 있다. 안정성은 응집체 형성의 평가(예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피, 탁도 측정 및/또는 육안 검사); (예를 들어, 광 스트레스 검정 또는 2,2'-아조비스(2-아미디노프로판)디하이드로클로라이드(AAPH) 스트레스 검정을 사용한) ROS 형성의 평가; 단백질의 특정 아미노산 잔기(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질의 Met 잔기)의 산화; 양이온 교환 크로마토그래피, 이미지 모세관 등전점 전기영동(icIEF) 또는 모세관 구역 전기영동을 사용한 전하 불균일성 평가; 아미노 말단 또는 카복시 말단 서열 분석; 질량 분석; 환원된 폴리펩티드 및 무손상 폴리펩티드(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)를 비교하기 위한 SDS-PAGE 분석; 펩티드 맵(예를 들어, 트립신 또는 LYS-C) 분석; 단백질의 생물학적 활성 또는 표적 결합 기능 평가(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질의 IL-22 수용체로의 결합) 등을 포함한 다양한 상이한 방식으로 정성적 및/또는 정량적으로 평가될 수 있다. 불안정성은 응집, 탈아미드화(예를 들어, Asn 탈아미드화), 산화(예를 들어, Met 산화 및/또는 Trp 산화), 이성질화(예를 들어, Asp 이성질화), 클리핑/가수분해/단편화(예를 들어, 힌지 영역 단편화), 석신이미드 형성, 홀시스테인(unpaired cysteine)(들), N-말단 연장, C-말단 프로세싱, 글리코실화 차이 등 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다.
단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)은 색 및/또는 선명도(clarity)의 육안 검사시, 또는 UV 광 산란 또는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정될 때, 응집, 침전, 단편화 및/또는 변성이 전혀 없거나 매우 적으면 약제학적 제제에서 "그의 물리적 안정성을 유지한다".
주어진 시간에서의 화학적 안정성으로 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)이 아래 정의된 대로 그의 생물학적 활성을 여전히 유지하는 것으로 여겨지는 경우, 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)은 약제학적 제제에서 "그의 화학적 안정성을 유지한다". 화학적 안정성은 화학적으로 변한 형태의 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)을 검출 및 정량함으로써 평가할 수 있다. 화학적 변화는, 예를 들어, 트립신 펩티드 맵핑, 역상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 및 액체 크로마토그래피-질량 분석(LC/MS)을 사용하여 평가할 수 있는 단백질 산화를 포함할 수 있다. 다른 유형의 화학적 변화는, 예를 들어, 이온-교환 크로마토그래피 또는 icIEF에 의해 평가될 수 있는 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)의 전하 변화를 포함한다.
주어진 시간에서의 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)의 생물학적 활성이, 예를 들어, 수용체 결합 분석으로 측정하였을 때, 약제학적 제제가 제조되었을 때 나타난 생물학적 활성의 약 20% 이내(예컨대 약 10% 이내)인 경우(분석 오류 내에서), 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)은 약제학적 제제에서 "그의 생물학적 활성을 유지한다."
본원에 사용된, 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)의 "생물학적 활성"은 그의 표적에 결합하는 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)의 능력, 예를 들어, IL-22 수용체에 결합하는 IL-22 Fc 융합 단백질의 능력을 지칭한다. 이는 추가로 시험관 내 또는 생체 내에서 측정될 수 있는 생물학적 반응을 포함할 수 있다. 이러한 활성은 길항적 또는 작용적일 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 활성은 작용적(예를 들어, 수용체 활성화)이다.
"산화되기 쉬운" 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)은 산화되기 쉬운 것으로 밝혀진 메티오닌(Met), 시스테인(Cys), 히스티딘(His), 트립토판(Trp) 및 티로신(Tyr)과 같은 하나 이상의 잔기(들)를 포함하는 것이다. 예를 들어, IL-22 폴리펩티드에서 하나 이상의 메티오닌 잔기는 산화되기 쉬울 수 있다.
용어 "산화 %"는 특별한 아미노산 잔기, 예를 들어, Met 잔기에서 산화되는, 제제(예를 들어, 약제학적 조성물) 중 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)의 백분율을 지칭한다. 산화 %는, 예를 들어, 산화 경향이 있는 특별한 하나 이상의 아미노산 잔기가 존재하는 하나 이상의 트립신 펩티드의 질량 분광(MS) 분석에 의해 결정될 수 있다. 산화 %는, 예를 들어, AAPH 스트레스 시험 후, 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질) 또는 이의 약제학적 조성물의 초기 생산으로부터 9개월, 12개월, 18개월 또는 2년 내에 측정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "AAPH 스트레스 시험에 의해 평가된"은 특별한 아미노산 잔기(예를 들어, Met 잔기)에서의 산화 %가, 예를 들어, 약 40℃에서 약 24시간 동안 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질, 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스, 약 0.02(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1의 제제에서 AAPH(예를 들어, 약 0mM AAPH, 약 1mM AAPH, 약 3mM AAPH, 약 3.5mM AAPH 또는 약 5mM AAPH)를 사용한 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)의 제제화 후, 트립신 펩티드의 질량 분광 분석에 의해 결정됨을 의미한다. 스트레스 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)을 트립신으로 분해하고 분해된 펩티드를 LC-MS-MS 처리하여 산화 %를 측정한다.
본원에 사용된 "완충제"는 그의 산-염기 접합체 성분(본원에서 "완충화제(buffering agents)"라고도 함)의 작용에 의해 pH의 변화에 저항하는 완충 용액을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 완충제는 pH가 약 6 내지 약 8의 범위이다. 일부 실시양태에서, 상기 완충제는 실질적으로 중성 pH이다. 상기 완충제는 바람직하게는 약 6.8 내지 약 7.4 범위의 pH(예를 들어, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3 또는 약 7.4), 예를 들어, pH 7.1일 수 있다. 본 발명에 사용하기 위한 예시적인 완충제는 포스페이트, 석시네이트, 아세테이트, 히스티딘 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 일염기성 인산나트륨, 이염기성 인산나트륨, 삼염기성 인산나트륨, 일염기성 인산칼륨, 이염기성 인산칼륨, 삼염기성 인산칼륨 또는 이들의 혼합물이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 일염기성 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 이염기성 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 일염기성 인산나트륨과 이염기성 인산나트륨의 혼합물이다.
본원에 사용된 용어 "실질적으로 중성"은 약 20℃ 내지 약 30℃(예를 들어, 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 약 30℃)의 온도에서 측정하였을 때 약 6.6 내지 약 8(예를 들어, 약 6.6, 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 약 7.5, 약 7.6, 약 7.7, 약 7.8, 약 7.9 또는 약 8.0)의 pH 범위를 지칭한다.
본원에 사용된 "계면활성제(surfactant)"는 계면 활성제(surface-active agent), 바람직하게는 비이온성 계면활성제를 지칭한다. 본원의 계면활성제의 예는 폴리소르베이트(예를 들어, 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80); 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188); TRITON®; 나트륨 옥틸 글리코사이드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사르코신; 리놀레일-, 미리스틸- 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필- 또는 이소스테아라미도프로필-베타인(예를 들어, 라우로아미도프로필); 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필- 또는 이소스테아라미도프로필-디메틸아민; 나트륨 메틸 코코일- 또는 이나트륨 메틸 올레일-타우레이트; 및 MONAQUAT™ 시리즈(Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.); 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜 및 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체(예를 들어, PLURONIC® 유형 블록 공중합체, 예를 들어, PLURONIC® F-68) 등을 포함한다. 일 실시양태에서, 본원의 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다. 또 다른 실시양태에서, 본원의 계면활성제는 폴록사머 188이다.
"보존제"는 박테리아 작용을 본질적으로 감소시킴으로써, 예를 들어, 다용도 제제의 생산을 용이하게 하는, 제제에 선택적으로 포함될 수 있는 화합물이다. 효능 있는 보존제의 예는 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드(알킬 그룹들이 장쇄 화합물인 알킬벤질디메틸암모늄 클로라이드의 혼합물) 및 벤제토늄 클로라이드를 포함한다. 다른 유형의 보존제는 페놀, 부틸 및 벤질 알코올과 같은 방향족 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올 및 m-크레졸을 포함한다. 일 실시양태에서, 본 발명의 보존제는 벤질 알코올이다. 일부 실시양태에서, 상기 제제는 보존제를 포함하지 않는다.
본 출원 내에서, 달리 언급되지 않는 한, 이용되는 기술은 다음과 같은 몇몇 잘 알려진 참고 문헌에서 발견될 수 있다: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, 등, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press), PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis, 등, 1990. Academic Press, San Diego, CA), 및 Harlow and Lane(1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
적절한 경우, 시판되는 키트 및 시약의 사용과 관련된 절차는 달리 명시되지 않는 한 일반적으로 제조사가 정한 프로토콜 및/또는 파라미터에 따라 수행한다. 따라서 본 발명의 방법 및 용도를 기술하기에 앞서, 본 발명은 기술된 특정 방법론, 프로토콜, 세포주, 동물 종 또는 속, 구조물 및 시약으로 제한되지 않으며, 물론 다양할 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 본원에 사용된 용어는 단지 특별한 실시양태들을 설명하기 위한 목적이며, 본 발명의 범위를 첨부된 청구범위로 제한하려는 것이 아님을 이해해야 한다.
Ⅱ. 조성물 및 방법
본 발명은 단백질(예를 들어, Fc 융합 단백질, 예컨대 IL-22 Fc 융합 단백질)을 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물) 및, 예를 들어, IBD(예를 들어, 궤양성 대장염(UC) 및 크론병), 심혈관 병태, 대사증후군, GVHD와 같은 IL-22 관련 질환의 치료 및 상처 치유(예를 들어, 당뇨성 상처 치유) 가속을 위한 그의 용도를 제공한다. 또한 상기 조성물의 제조 방법이 본원에 제공된다.
본 발명은 본원에 기재된 IL-22 Fc 융합 단백질의 특별한 제제가, 예를 들어, 본 실시예에 기재된 바와 같은 유리한 특성을 제공한다는 본 발견에 적어도 부분적으로 기초한다. 특정 측면에서, 이러한 유리한 특성은 본원에 기재된 IL-22 Fc 융합 단백질 및 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 조성물의 증가한 안정성 및/또는 증가한 저장 수명을 포함한다. 또한, IL-22 Fc 단백질은, 예를 들어, 실시예 1에 기재된 바와 같이, 더 높은 pH 값에서 예기치 않게 더 높은 열 안정성을 갖는 것으로 현재 밝혀졌다. 현재 발견된 조성물의 이들 및 다른 유리한 특성은 하기에 더욱 상세하게 기재되어 있다.
A. 약제학적 조성물
본 발명은 저장 수명 및 안정성이 개선된 단백질(예를 들어, Fc 융합 단백질, 예컨대 IL-22 Fc 융합 단백질)을 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 제공한다. 본원에 기재된 임의의 IL-22 Fc 융합 단백질이 조성물에 사용될 수 있지만, 다른 Fc 융합 단백질(예를 들어, 다른 인터루킨을 포함하는 Fc 융합 단백질)도 사용될 수 있음을 이해해야 한다.
예를 들어, 일 측면에서, 본 발명은 IL-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 제공하고, 상기 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 약 12개월 이상(예를 들어, 약 12개월, 약 18개월, 약 24개월, 약 30개월, 약 36개월, 약 42개월, 약 48개월, 약 54개월, 약 60개월, 약 66개월 또는 약 72개월 이상)이고, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 36개월 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 42개월 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 48개월 이상이다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때의 상기 저장 수명은 약 1개월 내지 약 72개월(예를 들어, 약 1개월, 약 5개월, 약 10개월, 약 15개월, 약 20개월, 약 24개월, 약 25개월, 약 30개월, 약 35개월, 약 40개월, 약 45개월, 약 48개월, 약 50개월, 약 55개월, 약 60개월, 약 65개월, 약 70개월, 또는 약 72개월)이다. 일부 실시양태에서, 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때의 상기 저장 수명은 약 1개월 내지 약 72개월, 약 1개월 내지 약 70개월, 약 1개월 내지 약 65개월, 약 1개월 내지 약 60개월이다. 약 1개월 내지 약 55개월, 약 1개월 내지 약 50개월, 약 1개월 내지 약 48개월, 약 1개월 내지 약 45개월, 약 1개월 내지 약 40개월, 약 1개월 내지 약 35개월, 약 1개월 내지 약 30개월, 약 1개월 내지 약 25개월, 약 1개월 내지 약 24개월, 약 1개월 내지 약 20개월, 약 1개월 내지 약 18개월, 약 1개월 내지 약 15개월, 약 1개월 내지 약 12개월, 약 1개월 내지 약 9개월, 약 1개월 내지 약 6개월, 약 1개월 내지 약 3개월, 약 5개월 내지 약 72개월, 약 5개월 내지 약 70개월, 약 5개월 내지 약 65개월, 약 5개월 내지 약 60개월, 약 5개월 내지 약 55개월, 약 5개월 내지 약 50개월, 약 5개월 내지 약 48개월, 약 5개월 내지 약 45개월, 약 5개월 내지 약 40개월, 약 5개월 내지 약 35개월, 약 5개월 내지 약 30개월, 약 5개월 내지 약 25개월, 약 5개월 내지 약 24개월, 약 5개월 내지 약 20개월, 약 5개월 내지 약 18개월, 약 5개월 내지 약 15개월, 약 5개월 내지 약 12개월, 약 5개월 내지 약 9개월, 약 5개월 내지 약 6개월, 약 10개월 내지 약 72개월, 약 10개월 내지 약 70개월, 약 10개월 내지 약 65개월, 약 10개월 내지 약 60개월, 약 10개월 내지 약 55개월, 약 10개월 내지 약 50개월, 약 10개월 내지 약 48개월, 약 10개월 내지 약 45개월, 약 10개월 내지 약 40개월, 약 10개월 내지 약 35개월, 약 10개월 내지 약 30개월, 약 10개월 내지 약 25개월, 약 10개월 내지 약 24개월, 약 10개월 내지 약 20개월, 약 10개월 내지 약 18개월, 약 10개월 내지 약 15개월, 약 10개월 내지 약 12개월, 약 12개월 내지 약 72개월, 약 12개월 내지 약 70개월, 약 12개월 내지 약 65개월, 약 12개월 내지 약 60개월, 약 12개월 내지 약 55개월, 약 12개월 내지 약 50개월, 약 12개월 내지 약 48개월, 약 12개월 내지 약 45개월, 약 12개월 내지 약 40개월, 약 12개월 내지 약 35개월, 약 12개월 내지 약 30개월, 약 12개월 내지 약 25개월, 약 12개월 내지 약 24개월, 약 12개월 내지 약 20개월, 약 12개월 내지 약 18개월, 약 12개월 내지 약 15개월, 약 18개월 내지 약 72개월, 약 18개월 내지 약 70개월, 약 18개월 내지 약 65개월, 약 18개월 내지 약 60개월, 약 18개월 내지 약 55개월, 약 18개월 내지 약 50개월, 약 18개월 내지 약 48개월, 약 18개월 내지 약 45개월, 약 18개월 내지 약 40개월, 약 18개월 내지 약 35개월, 약 18개월 내지 약 30개월, 약 18개월 내지 약 25개월, 약 18개월 내지 약 24개월, 약 18개월 내지 약 20개월, 약 24개월 내지 약 72개월, 약 24개월 내지 약 70개월, 약 24개월 내지 약 65개월, 약 24개월 내지 약 60개월, 약 24개월 내지 약 55개월, 약 24개월 내지 약 50개월, 약 24개월 내지 약 48개월, 약 24개월 내지 약 45개월, 약 24개월 내지 약 40개월, 약 24개월 내지 약 35개월, 약 24개월 내지 약 30개월, 약 24개월 내지 약 25개월, 약 30개월 내지 약 72개월, 약 30개월 내지 약 70개월, 약 30개월 내지 약 65개월, 약 30개월 내지 약 60개월, 약 30개월 내지 약 55개월, 약 30개월 내지 약 50개월, 약 30개월 내지 약 48개월, 약 30개월 내지 약 45개월, 약 30개월 내지 약 40개월, 약 30개월 내지 약 35개월, 약 30개월 내지 약 36개월, 약 36개월 내지 약 72개월, 약 36개월 내지 약 70개월, 약 36개월 내지 약 65개월, 약 36개월 내지 약 60개월, 약 36개월 내지 약 55개월, 약 36개월 내지 약 50개월, 약 36개월 내지 약 48개월, 약 36개월 내지 약 45개월, 약 36개월 내지 약 40개월, 약 40개월 내지 약 72개월, 약 40개월 내지 약 70개월, 약 40개월 내지 약 65개월, 약 40개월 내지 약 60개월, 약 40개월 내지 약 55개월, 약 40개월 내지 약 50개월, 약 40개월 내지 약 48개월, 약 40개월 내지 약 45개월, 약 42개월 내지 약 72개월, 약 42개월 내지 약 70개월, 약 42개월 내지 약 65개월, 약 42개월 내지 약 60개월, 약 42개월 내지 약 55개월, 약 42개월 내지 약 50개월, 약 42개월 내지 약 48개월, 약 42개월 내지 약 45개월, 약 46개월 내지 약 72개월, 약 46개월 내지 약 70개월, 약 46개월 내지 약 65개월, 약 46개월 내지 약 60개월, 약 46개월 내지 약 55개월, 약 46개월 내지 약 50개월, 약 46개월 내지 약 48개월, 약 48개월 내지 약 72개월, 약 48개월 내지 약 70개월, 약 48개월 내지 약 65개월, 약 48개월 내지 약 60개월, 약 48개월 내지 약 55개월, 약 48개월 내지 약 50개월, 약 50개월 내지 약 72개월, 약 50개월 내지 약 70개월, 약 50개월 내지 약 65개월, 약 50개월 내지 약 60개월, 약 50개월 내지 약 55개월, 약 55개월 내지 약 72개월, 약 55개월 내지 약 70개월, 약 55개월 내지 약 65개월, 약 55개월 내지 약 60개월, 약 60개월 내지 약 72개월, 약 60개월 내지 약 70개월 또는 약 60개월 내지 약 65개월이다.
상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 임의의 적합한 농도의 IL-22 Fc 융합 단백질을 가질 수 있다. 예를 들어, 임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에서, IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 0.01㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 예를 들어, 약 0.01㎎/mL, 약 0.05㎎/mL, 약 0.1㎎/mL, 약 0.2㎎/mL, 약 0.3㎎/mL, 약 0.4㎎/mL, 약 0.5㎎/mL, 약 0.6㎎/mL, 약 0.7㎎/mL, 약 0.8㎎/mL, 약 0.9㎎/mL, 약 1㎎/mL, 약 2㎎/mL, 약 3㎎/mL, 약 4㎎/mL, 약 5㎎/mL, 약 6㎎/mL, 약 7㎎/mL, 약 8㎎/mL, 약 9㎎/mL, 약 10㎎/mL, 약 11㎎/mL, 약 12㎎/mL, 약 13㎎/mL, 약 14㎎/mL, 약 15㎎/mL, 약 16㎎/mL, 약 17㎎/mL, 약 18㎎/mL, 약 19㎎/mL, 약 20㎎/mL, 약 21㎎/mL, 약 22㎎/mL, 약 23㎎/mL, 약 24㎎/mL, 약 25㎎/mL, 약 26㎎/mL, 약 27㎎/mL, 약 28㎎/mL, 약 29㎎/mL 또는 약 30㎎/mL일 수 있다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, IL-22 Fc 융합의 농도는 약 1㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 2㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 3㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 4㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 5㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 6㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 7㎎/mL 내지 약 30㎎/mL 약 8㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 9㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 10㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 11㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 12㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 13㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 14㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 15㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 20㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 25㎎/mL 내지 약 30㎎/mL, 약 1㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 2㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 3㎎/mL 약 20㎎/mL, 약 4㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 5㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 6㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 7㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 8㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 9㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 10㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 11㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 12㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 13㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 14㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 15㎎/mL 내지 약 20㎎/mL, 약 1㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 2㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 3㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 4㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 5㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 6㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 7㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 8㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 9㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 10㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 11㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 12㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 13㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 14㎎/mL 내지 약 15㎎/mL, 약 1㎎/mL 내지 약 10㎎/mL, 약 2㎎/mL 내지 약 10㎎/mL, 약 3㎎/mL 내지 약 10㎎/mL, 약 4㎎/mL 내지 약 10㎎/mL, 약 5㎎/mL 내지 약 10㎎/mL, 약 6㎎/mL 내지 약 10㎎/mL, 약 7㎎/mL 내지 약 10㎎/mL, 약 8㎎/mL 내지 약 10㎎/mL, 약 9㎎/mL 내지 약 10㎎/mL, 약 1㎎/mL 내지 약 5㎎/mL, 약 2㎎/mL 내지 약 5㎎/mL, 약 3㎎/mL 내지 약 5㎎/mL 또는 약 4㎎/mL 내지 약 5㎎/mL이다.
일부 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 0.5㎎/mL 내지 약 20㎎/mL이다. 일부 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 0.5㎎/mL 내지 약 5㎎/mL이다. 일부 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 1㎎/mL이다. 다른 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 8㎎/mL 내지 약 12㎎/mL이다. 일부 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질의 농도는 약 10㎎/mL이다.
상기 임의의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 안정제를 포함할 수 있다. 임의의 적합한 안정제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 안정제는 아미노산, 티오소르비톨, 아스코르브산, 모노티오글리세롤, 사이클로덱스트린, 트롤록스(6-하이드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카복실산), 피리독신, 만니톨, 금속 킬레이터 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 상기 안정제는 아미노산이다. 일부 실시양태에서, 상기 아미노산은 메티오닌, 시스테인, 트립토판 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 상기 아미노산은 메티오닌이다.
임의의 적합한 농도의 상기 안정제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 일부 실시양태에서, 상기 안정제(예를 들어, 메티오닌)의 농도는 약 0.01mM 내지 약 30mM, 예를 들어, 약 0.01mM, 약 0.05mM, 약 0.1mM, 약 0.2mM, 약 0.3mM, 약 0.4mM, 약 0.5mM, 약 0.6mM, 약 0.7mM, 약 0.8mM, 약 0.9mM, 약 1mM, 약 2mM, 약 3mM, 약 4mM, 약 5mM, 약 6mM, 약 7mM, 약 8mM, 약 9mM, 약 10mM, 약 11mM, 약 12mM, 약 13mM, 약 14mM, 약 15mM, 약 16mM, 약 17mM, 약 18mM, 약 19mM, 약 20mM, 약 21mM, 약 22mM, 약 23mM, 약 24mM, 약 25mM, 약 26mM, 약 27mM, 약 28mM, 약 29mM 또는 약 30mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 안정제(예를 들어, 메티오닌)의 농도는 약 1mM 내지 약 30mM, 약 2mM 내지 약 30mM, 약 3mM 내지 약 30mM, 약 4mM 내지 약 30mM, 약 5mM 내지 약 30mM, 약 6mM 내지 약 30mM, 약 7mM 내지 약 30mM, 약 8mM 내지 약 30mM, 약 9mM 내지 약 30mM, 약 10mM 내지 약 30mM, 약 11mM 내지 약 30mM, 약 12mM 내지 약 30mM, 약 13mM 내지 약 30mM, 약 14mM 내지 약 30mM, 약 15mM 내지 약 30mM, 약 20mM 내지 약 30mM, 약 25mM 내지 약 30mM, 약 1mM 내지 약 20mM, 약 2mM 내지 약 20mM, 약 3mM 내지 약 20mM, 약 4mM 내지 약 20mM, 약 5mM 내지 약 20mM, 약 6mM 내지 약 20mM, 약 7mM 내지 약 20mM, 약 8mM 내지 약 20mM, 약 9mM 내지 약 20mM, 약 10mM 내지 약 20mM, 약 11mM 내지 약 20mM, 약 12mM 내지 약 20mM, 약 13mM 내지 약 20mM, 약 14mM 내지 약 20mM, 약 15mM 내지 약 20mM, 약 1mM 내지 약 15mM, 약 2mM 내지 약 15mM, 약 3mM 내지 약 15mM, 약 4mM 내지 약 15mM, 약 5mM 내지 약 15mM, 약 6mM 내지 약 15mM, 약 7mM 내지 약 15mM, 약 8mM 내지 약 15mM, 약 9mM 내지 약 15mM, 약 10mM 내지 약 15mM, 약 11mM 내지 약 15mM, 약 12mM 내지 약 15mM, 약 13mM 내지 약 15mM, 약 14mM 내지 약 15mM, 약 1mM 내지 약 10mM, 약 2mM 내지 약 10mM, 약 3mM 내지 약 10mM, 약 4mM 내지 약 10mM, 약 5mM 내지 약 10mM, 약 6mM 내지 약 10mM, 약 7mM 내지 약 10mM, 약 8mM 내지 약 10mM, 약 9mM 내지 약 10mM, 약 1mM 내지 약 5mM, 약 2mM 내지 약 5mM, 약 3mM 내지 약 5mM 또는 약 4mM 내지 약 5mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 안정제(예를 들어, 메티오닌)의 농도는 약 2mM 내지 약 8mM이다. 특별한 실시양태에서, 상기 안정제(예를 들어, 메티오닌)의 농도는 약 5mM이다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에서, (예를 들어, 서열 4의 아미노산 서열에 대한) 위치 M25 또는 M139에서 메티오닌의 산화는 AAPH 스트레스 시험에 의해 평가될 때 약 10% 미만, 예를 들어, 약 10% 미만, 약 9%, 약 8%, 약 7%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2%, 약 1% 또는 그 미만이다. 일부 실시양태에서, 서열번호 4의 위치 M25에서 메티오닌의 산화는 5% 미만, 3% 미만 또는 2% 미만이다. 일부 실시양태에서, 서열번호 4의 위치 M139에서 메티오닌의 산화는 7% 미만, 6% 미만 또는 5% 미만이다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 임의의 적합한 계면활성제가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 계면활성제는 비이온성 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트, 폴록사머, 폴리옥시에텔렌 알킬 에테르, 알킬 페닐 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 이들의 조합)이다. 일부 실시양태에서, 상기 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트(예를 들어, 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80)이다. 특정 실시양태에서, 상기 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20이다. 다른 실시양태에서, 상기 비이온성 계면활성제는 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188)이다.
임의의 적합한 농도의 상기 계면활성제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 일부 실시양태에서, 상기 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188)의 농도는 약 0.001%(w/v) 내지 약 2%(w/v), 예를 들어, 약 0.001%, 약 0.01%, 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 1.1%, 약 1.2%, 약 1.3%, 약 1.4%, 약 1.5%, 약 1.6%, 약 1.7%, 약 1.8%, 약 1.9% 또는 약 2%(w/v)이다. 일부 실시양태에서, 상기 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188)의 농도는 약 0.01%(w/v) 내지 약 0.05%(w/v)이다. 일부 실시양태에서, 상기 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188)의 농도는 약 0.01%(w/v) 내지 약 0.07%(w/v)이다. 특별한 실시양태에서, 상기 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 20 또는 폴록사머 188)의 농도는 약 0.02%(w/v)이다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 임의의 적합한 완충제가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 완충제는 포스페이트, 석시네이트, 아세테이트, 히스티딘 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 일염기성 인산나트륨, 이염기성 인산나트륨, 삼염기성 인산나트륨, 일염기성 인산칼륨, 이염기성 인산칼륨, 삼염기성 인산칼륨 또는 이들의 혼합물이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 일염기성 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 이염기성 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 상기 포스페이트는 일염기성 인산나트륨과 이염기성 인산나트륨의 혼합물이다.
임의의 적합한 농도의 상기 완충제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 일부 실시양태에서, 상기 완충제(예를 들어, 인산나트륨)의 농도는 약 0.01mM 내지 약 50mM, 예를 들어, 약 0.01mM, 약 0.05mM, 약 0.1mM, 약 0.2mM, 약 0.3mM, 약 0.4mM, 약 0.5mM, 약 0.6mM, 약 0.7mM, 약 0.8mM, 약 0.9mM, 약 1mM, 약 2mM, 약 3mM, 약 4mM, 약 5mM, 약 6mM, 약 7mM, 약 8mM, 약 9mM, 약 10mM, 약 11mM, 약 12mM, 약 13mM, 약 14mM, 약 15mM, 약 16mM, 약 17mM, 약 18mM, 약 19mM, 약 20mM, 약 21mM, 약 22mM, 약 23mM, 약 24mM, 약 25mM, 약 26mM, 약 27mM, 약 28mM, 약 29mM, 약 30mM, 약 31mM, 약 32mM, 약 33mM, 약 34mM, 약 35mM, 약 36mM, 약 37mM, 약 38mM, 약 39mM, 약 40mM, 약 41mM, 약 42mM, 약 43mM, 약 44mM, 약 45mM, 약 46mM, 약 47mM, 약 48mM, 약 49mM 또는 약 50mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 완충제(예를 들어, 인산나트륨)의 농도는 약 5mM 내지 약 20mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 완충제(예를 들어, 인산나트륨)의 농도는 약 8mM 내지 약 12mM이다. 특별한 실시양태에서, 상기 완충제(예를 들어, 인산나트륨)의 농도는 약 10mM이다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다. 임의의 적합한 등장화제가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제는 당(예를 들어, 수크로스, 글루코스, 글리세롤 또는 트레할로스), 아미노산 또는 염(예를 들어, 염화나트륨 또는 염화칼륨)이다. 특별한 실시양태에서, 상기 등장화제는 수크로스이다.
임의의 적합한 농도의 등장화제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 일부 실시양태에서, 상기 등장화제(예를 들어, 수크로스)의 농도는 약 1mM 내지 약 1M, 예를 들어, 약 1mM, 약 2mM, 약 3mM, 약 4mM, 약 5mM, 약 6mM, 약 7mM, 약 8mM, 약 9mM, 약 10mM, 약 11mM, 약 12mM, 약 13mM, 약 14mM, 약 15mM, 약 16mM, 약 17mM, 약 18mM, 약 19mM, 약 20mM, 약 21mM, 약 22mM, 약 23mM, 약 24mM, 약 25mM, 약 26mM, 약 27mM, 약 28mM, 약 29mM, 약 30mM, 약 31mM, 약 32mM, 약 33mM, 약 34mM, 약 35mM, 약 36mM, 약 37mM, 약 38mM, 약 39mM, 약 40mM, 약 41mM, 약 42mM, 약 43mM, 약 44mM, 약 45mM, 약 46mM, 약 47mM, 약 48mM, 약 49mM, 약 50mM, 약 60mM, 약 70mM, 약 80mM, 약 90mM, 약 100mM, 약 110mM, 약 120mM, 약 130mM, 약 140mM, 약 150mM, 약 160mM, 약 170mM, 약 180mM, 약 190mM, 약 200mM, 약 210mM, 약 220mM, 약 230mM, 약 240mM, 약 250mM, 약 260mM, 약 270mM, 약 280mM, 약 290mM, 약 300mM, 약 310mM, 약 320mM, 약 330mM, 약 340mM, 약 350mM, 약 360mM, 약 370mM, 약 380mM, 약 390mM, 약 400mM, 약 410mM, 약 420mM, 약 430mM, 약 440mM, 약 450mM, 약 460mM, 약 470mM, 약 480mM, 약 490mM, 약 500mM, 약 510mM, 약 520mM, 약 530mM, 약 540mM, 약 550mM, 약 560mM, 약 570mM, 약 580mM, 약 590mM, 약 600mM, 약 700mM, 약 800mM, 약 900mM 또는 약 1M이다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제의 농도는 약 100mM 내지 약 500mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제의 농도는 약 200mM 내지 약 300mM이다. 일부 실시양태에서, 상기 등장화제의 농도는 약 240mM이다.
본원에 기재된 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 임의의 적합한 pH일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 조성물의 pH는 약 5 내지 약 9, 예를 들어, 약 5, 약 5.5, 약 6, 약 6.5, 약 6.6, 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.15, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5 또는 약 9이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 pH는 약 6.0 내지 약 8.0, 약 6.0 내지 약 7.9, 약 6.0 내지 약 7.8, 약 6.0 내지 약 7.7, 약 6.0 내지 약 7.6, 약 6.0 내지 약 7.5, 약 6.0 내지 약 7.4, 약 6.0 내지 약 7.3, 약 6.0 내지 약 7.2, 약 6.0 내지 약 7.1, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5, 약 6.0 내지 약 6.4, 약 6.0 내지 약 6.3, 약 6.0 내지 약 6.2, 약 6.0 내지 약 6.1, 약 6.5 내지 약 8.0, 약 6.5 내지 약 7.9, 약 6.5 내지 약 7.8, 약 6.5 내지 약 7.7, 약 6.5 내지 약 7.6, 약 6.5 내지 약 7.5, 약 6.5 내지 약 7.4, 약 6.5 내지 약 7.3, 약 6.5 내지 약 7.2, 약 6.5 내지 약 7.1, 약 6.5 내지 약 7.0, 약 6.5 내지 약 6.9, 약 6.5 내지 약 6.8, 약 6.5 내지 약 6.7, 약 6.5 내지 약 6.6, 약 6.6 내지 약 8.0, 약 6.6 내지 약 7.9, 약 6.6 내지 약 7.8, 약 6.6 내지 약 7.7, 약 6.6 내지 약 7.6, 약 6.6 내지 약 7.5, 약 6.6 내지 약 7.4, 약 6.6 내지 약 7.3, 약 6.6 내지 약 7.2, 약 6.6 내지 약 7.1, 약 6.6 내지 약 7.0, 약 6.6 내지 약 6.9, 약 6.6 내지 약 6.8, 약 6.6 내지 약 6.7, 약 6.7 내지 약 8.0, 약 6.7 내지 약 7.9, 약 6.7 내지 약 7.8, 약 6.7 내지 약 7.7, 약 6.7 내지 약 7.6, 약 6.7 내지 약 7.5, 약 6.7 내지 약 7.4, 약 6.7 내지 약 7.3, 약 6.7 내지 약 7.2, 약 6.7 내지 약 7.1, 약 6.7 내지 약 7.0, 약 6.7 내지 약 6.9, 약 6.7 내지 약 6.8, 약 6.8 내지 약 8.0, 약 6.8 내지 약 7.9, 약 6.8 내지 약 7.8, 약 6.8 내지 약 7.7, 약 6.8 내지 약 7.6, 약 6.8 내지 약 7.5, 약 6.8 내지 약 7.4, 약 6.8 내지 약 7.3, 약 6.8 내지 약 7.2, 약 6.8 내지 약 7.1, 약 6.8 내지 약 7.0, 약 6.8 내지 약 6.9, 약 6.9 내지 약 8.0, 약 6.9 내지 약 7.9, 약 6.9 내지 약 7.8, 약 6.9 내지 약 7.7, 약 6.9 내지 약 7.6, 약 6.9 내지 약 7.5, 약 6.9 내지 약 7.4, 약 6.9 내지 약 7.3, 약 6.9 내지 약 7.2, 약 6.9 내지 약 7.1, 약 6.9 내지 약 7.0, 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.0 내지 약 7.9, 약 7.0 내지 약 7.8, 약 7.0 내지 약 7.7, 약 7.0 내지 약 7.6, 약 7.0 내지 약 7.5, 약 7.0 내지 약 7.4, 약 7.0 내지 약 7.3, 약 7.0 내지 약 7.2, 약 7.0 내지 약 7.1, 약 7.01 내지 약 7.2, 약 7.02 내지 약 7.2, 약 7.03 내지 약 7.2, 약 7.04 내지 약 7.2, 약 7.05 내지 약 7.2, 약 7.06 내지 약 7.2, 약 7.07 내지 약 7.2, 약 7.08 내지 약 7.2, 약 7.09 내지 약 7.2, 약 7.1 내지 약 7.2, 약 7.01 내지 약 7.15, 약 7.02 내지 약 7.15, 약 7.03 내지 약 7.15, 약 7.04 내지 약 7.15, 약 7.05 내지 약 7.15, 약 7.06 내지 약 7.15, 약 7.07 내지 약 7.15, 약 7.08 내지 약 7.15, 약 7.09 내지 약 7.15 또는 약 7.1 내지 약 7.15이다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 pH는 실질적으로 중성이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 pH는 약 6.6 내지 약 8(예를 들어, 약 6.6, 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.15, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 약 7.5, 약 8.0)이다. 일부 실시양태에서, 상기 pH는 약 6.8 내지 약 7.4(예를 들어, 약 6.8, 약 6.85, 약 6.9, 약 6.95, 약 7.0, 약 7.05, 약 7.1, 약 7.15, 약 7.2, 약 7.25, 약 7.3, 약 7.35 또는 약 7.4)이다. 특별한 실시양태에서, 상기 pH는 약 7.1이다.
예를 들어, 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)이 본원에 제공되고, 상기 약제학적 조성물은 약 0.01㎎/mL 내지 약 30㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질(예를 들어, 약 0.01㎎/mL, 약 0.05㎎/mL, 약 0.1㎎/mL, 약 0.2㎎/mL, 0.3㎎/mL, 약 0.4㎎/mL, 약 0.5㎎/mL, 약 0.6㎎/mL, 약 0.7㎎/mL, 약 0.8㎎/mL, 약 0.9㎎/mL, 약 1㎎/mL, 약 2㎎/mL, 약 3㎎/mL, 약 4㎎/mL, 약 5㎎/mL, 약 6㎎/mL, 약 7㎎/mL, 약 8㎎/mL, 약 9㎎/mL, 약 10㎎/mL 약 11㎎/mL, 약 12㎎/mL, 약 13㎎/mL, 약 14㎎/mL, 약 15㎎/mL, 약 16㎎/mL, 약 17㎎/mL, 약 18㎎/mL, 약 19㎎/mL, 약 20㎎/mL, 약 21㎎/mL, 약 22㎎/mL, 약 23㎎/mL, 약 24㎎/mL, 약 25㎎/mL, 약 26㎎/mL, 약 27㎎/mL, 약 28㎎/mL, 약 29㎎/mL 또는 약 30㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질), 약 5mM 메티오닌 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 10mM 인산나트륨 및 약 240mM 수크로스를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 1㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 인산나트륨은 일염기성 인산나트륨과 이염기성 인산나트륨의 혼합물이다.
본원에 제공된 임의의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 단위 투여형일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 단위 투여형은 주입용 액체 제제이다. 일부 실시양태에서, 상기 단위 투여형은 주사용 액체 제제이다. 일부 실시양태에서, 상기 액체 제제(예를 들어, 주입용 또는 주사용)는 공칭 용적이 약 100mL 미만, 예를 들어, 약 100mL 미만, 약 90mL 미만, 약 80mL 미만, 약 70mL 미만, 약 60mL 미만, 약 50mL 미만, 약 40mL 미만, 약 30mL 미만, 약 20mL 미만, 약 10mL 미만 또는 약 5mL 미만인 용기에 공급된다. 일부 실시양태에서, 상기 액체 제제(예를 들어, 주입용 또는 주사용)의 용적은 약 1mL 내지 약 2mL, 예를 들어, 약 1mL, 약 1.1mL, 약 1.2mL, 약 1.3mL, 약 1.4mL, 약 1.5mL, 약 1.6mL, 약 1.7mL, 약 1.8mL, 약 1.9mL 또는 약 2mL이다. 일부 실시양태에서, 상기 액체 제제(예를 들어, 주입용 또는 주사용)의 용적은 약 1mL이다.
본원에 제공된 임의의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 실시양태에서, 상기 용기에 존재하는 10㎛ 이상의 입자의 수는 약 10,000개의 입자를 초과하지 않는다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 용기에 존재하는 10㎛ 이상의 입자의 수는 약 10,000개의 입자, 약 9,000개의 입자, 약 7,000개의 입자, 약 6,000개의 입자, 약 5,000개의 입자, 약 4,000개의 입자, 약 3,000개의 입자, 약 2,000개의 입자, 약 1,000개의 입자, 약 900개의 입자, 약 800개의 입자, 약 700개의 입자, 약 600개의 입자, 약 500개의 입자, 약 400개의 입자, 약 300개의 입자, 약 200개의 입자 또는 약 100개의 입자를 초과하지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 용기에 존재하는 10㎛ 이상의 입자의 수는 6000개의 입자를 초과하지 않는다.
본원에 제공된 임의의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 실시양태에서, 상기 용기에 존재하는 25㎛ 이상의 입자의 수는 약 2,000개의 입자, 예를 들어, 약 2,000개의 입자, 약 1,500개의 입자, 약 1,200개의 입자, 약 1,000개의 입자, 약 900개의 입자, 약 800개의 입자, 약 700개의 입자, 약 600개의 입자, 약 500개의 입자, 약 400개의 입자, 약 300개의 입자, 약 200개의 입자 또는 약 100개의 입자를 초과하지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 용기에 존재하는 25㎛ 이상의 입자의 수는 600개의 입자를 초과하지 않는다.
임의의 적합한 담체가 본원에 제공된 임의의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 담체는 물이다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 1회 이상의 냉동-해동 사이클, 예를 들어, 1회 이상, 2회 이상, 3회 이상, 4회 이상, 5회 이상, 6회 이상, 7회 이상, 8회 이상, 9회 이상 또는 10회 이상의 냉동-해동 사이클을 통해 안정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 3회의 냉동-해동 사이클을 통해 안정하다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 5℃에서 약 1개월 이상, 예를 들어, 약 1개월 이상, 약 2개월 이상, 약 3개월 이상, 약 4개월 이상, 약 5개월 이상, 약 6개월 이상, 약 7개월 이상, 약 8개월 이상, 약 9개월 이상, 약 10개월 이상, 약 11개월 이상, 약 12개월 이상, 약 14개월 이상, 약 16개월 이상, 약 18개월 이상, 약 20개월 이상, 약 22개월 이상, 약 24개월 이상, 약 26개월 이상, 약 28개월 이상, 약 30개월 이상, 약 32개월 이상, 약 34개월 이상, 약 36개월 이상, 약 38개월 이상, 약 40개월 이상, 약 42개월 이상, 약 44개월 이상, 약 46개월 이상, 약 48개월 이상, 약 50개월 이상, 약 52개월 이상, 약 54개월 이상, 약 56개월 이상, 약 58개월 이상, 약 60개월 이상, 약 62개월 이상, 약 64개월 이상, 약 66개월 이상, 약 68개월 이상, 약 70개월 이상, 약 72개월 이상, 약 74개월 이상, 약 76개월 이상, 약 78개월 이상, 약 80개월 이상, 약 82개월 이상, 약 84개월 이상, 약 86개월 이상, 약 88개월 이상, 약 90개월 이상, 약 92개월 이상, 약 94개월 이상, 약 96개월 이상, 약 98개월 이상 또는 약 100개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 5℃에서 약 24개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 5℃에서 약 36개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 5℃에서 약 42개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 5℃에서 약 48개월 이상 안정하다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 25℃에서 약 1주 이상, 예를 들어, 약 1주 이상, 약 2주 이상, 약 3주 이상, 약 4주 이상, 약 5주 이상, 약 6주 이상, 약 7주 이상, 약 8주 이상, 약 9주 이상, 약 10주 이상, 약 12주 이상, 약 14주 이상, 약 16주 이상, 약 18주 이상, 약 20주 이상, 약 22주 이상, 약 24주 이상, 약 26주 이상, 약 28주 이상, 약 30주 이상, 약 32주 이상, 약 34주 이상, 약 36주 이상, 약 38주 이상, 약 40주 이상, 약 42주 이상, 약 44주 이상, 약 46주 이상, 약 48주 이상, 약 50주 이상 또는 약 52주 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 25℃에서 약 2주 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 25℃에서 약 4주 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 약 25℃에서 약 8주 이상 안정하다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 -20℃에서 약 12개월 이상, 예를 들어, 약 12개월 이상, 약 14개월 이상, 약 16개월 이상, 약 18개월 이상, 약 20개월 이상, 약 22개월 이상, 약 24개월 이상, 약 26개월 이상, 약 28개월 이상, 약 30개월 이상, 약 32개월 이상, 약 34개월 이상, 약 36개월 이상, 약 38개월 이상, 약 40개월 이상, 약 42개월 이상, 약 44개월 이상, 약 46개월 이상, 약 48개월 이상, 약 50개월 이상, 약 52개월 이상, 약 54개월 이상, 약 56개월 이상, 약 58개월 이상, 약 60개월 이상, 약 62개월 이상, 약 64개월 이상, 약 66개월 이상, 약 68개월 이상, 약 70개월 이상, 약 72개월 이상, 약 74개월 이상, 약 76개월 이상, 약 78개월 이상, 약 80개월 이상, 약 82개월 이상, 약 84개월 이상, 약 86개월 이상, 약 88개월 이상, 약 90개월 이상, 약 92개월 이상, 약 94개월 이상, 약 96개월 이상, 약 98개월 이상 또는 약 100개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 -20℃에서 약 48개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 -20℃에서 약 60개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 -20℃에서 약 72개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 -20℃에서 약 84개월 이상 안정하다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 -20℃에서 약 96개월 이상 안정하다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은, 예를 들어, 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC)에 의해 평가될 때, 순도가 약 70% 이상일 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 70% 이상, 약 72% 이상, 약 74% 이상, 약 76% 이상, 약 78% 이상, 약 80% 이상, 약 82% 이상, 약 84% 이상, 약 86% 이상, 약 88% 이상, 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상 또는 약 100%일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 90% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상이다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 5℃에서 약 6개월 이상, 예를 들어, 약 6개월 이상, 약 7개월 이상, 약 8개월 이상, 약 9개월 이상, 약 10개월 이상, 약 11개월 이상, 약 12개월 이상, 약 14개월 이상, 약 16개월 이상, 약 18개월 이상, 약 20개월 이상, 약 22개월 이상, 약 24개월 이상, 약 26개월 이상, 약 28개월 이상, 약 30개월 이상, 약 32개월 이상, 약 34개월 이상, 약 36개월 이상, 약 38개월 이상, 약 40개월 이상, 약 42개월 이상, 약 44개월 이상, 약 46개월 이상, 약 48개월 이상, 약 50개월 이상, 약 52개월 이상, 약 54개월 이상, 약 56개월 이상, 약 58개월 이상, 약 60개월 이상, 약 62개월 이상, 약 64개월 이상, 약 66개월 이상, 약 68개월 이상, 약 70개월 이상, 약 72개월 이상, 약 74개월 이상, 약 76개월 이상, 약 78개월 이상, 약 80개월 이상, 약 82개월 이상, 약 84개월 이상, 약 86개월 이상, 약 88개월 이상, 약 90개월 이상, 약 92개월 이상, 약 94개월 이상, 약 96개월 이상, 약 98개월 이상 또는 약 100개월 이상 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 70% 이상(예를 들어, 약 70% 이상, 약 72% 이상, 약 74% 이상, 약 76% 이상, 약 78% 이상, 약 80% 이상, 약 82% 이상, 약 84% 이상, 약 86% 이상, 약 88% 이상, 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상 또는 약 100%)일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 약 5℃에서 약 36개월 이상 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 약 5℃에서 약 42개월 이상 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 약 5℃에서 약 48개월 이상 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상이다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은, 예를 들어, 모세관 전기영동 나트륨 도데실 설페이트 비-겔 체질(CE-SDS-NGS), 예를 들어, NR CE-SDS-NGS에 의해 평가될 때 순도가 약 65% 이상일 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 65% 이상, 약 66% 이상, 약 67% 이상, 약 68% 이상, 약 69% 이상, 약 70% 이상, 약 72% 이상, 약 74% 이상, 약 76% 이상, 약 78% 이상, 약 80% 이상, 약 82% 이상, 약 84% 이상, 약 86% 이상, 약 88% 이상, 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상 또는 약 100%일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 75% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 80% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 90% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 55% 이상이다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 5℃에서 6개월 이상, 예를 들어, 약 6개월 이상, 약 7개월 이상, 약 8개월 이상, 약 9개월 이상, 약 10개월 이상, 약 11개월 이상, 약 12개월 이상, 약 14개월 이상, 약 16개월 이상, 약 18개월 이상, 약 20개월 이상, 약 22개월 이상, 약 24개월 이상, 약 26개월 이상, 약 28개월 이상, 약 30개월 이상, 약 32개월 이상, 약 34개월 이상, 약 36개월 이상, 약 38개월 이상, 약 40개월 이상, 약 42개월 이상, 약 44개월 이상, 약 46개월 이상, 약 48개월 이상, 약 50개월 이상, 약 52개월 이상, 약 54개월 이상, 약 56개월 이상, 약 58개월 이상, 약 60개월 이상, 약 62개월 이상, 약 64개월 이상, 약 66개월 이상, 약 68개월 이상, 약 70개월 이상, 약 72개월 이상, 약 74개월 이상, 약 76개월 이상, 약 78개월 이상, 약 80개월 이상, 약 82개월 이상, 약 84개월 이상, 약 86개월 이상, 약 88개월 이상, 약 90개월 이상, 약 92개월 이상, 약 94개월 이상, 약 96개월 이상, 약 98개월 이상 또는 약 100개월 이상 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 65% 이상(예를 들어, 약 65% 이상, 약 66% 이상, 약 67% 이상, 약 68% 이상, 약 69% 이상, 약 70% 이상, 약 72% 이상, 약 74% 이상, 약 76% 이상, 약 78% 이상, 약 80% 이상, 약 82% 이상, 약 84% 이상, 약 86% 이상, 약 88% 이상, 약 90% 이상, 약 91% 이상, 약 92% 이상, 약 94% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상 또는 약 100%)일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 약 5℃에서 약 36개월 이상 동안 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 약 5℃에서 약 42개월 이상 동안 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 약 5℃에서 약 48개월 이상 동안 CE-SDS-NGS(예를 들어, NR CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 임의의 적합한 투여 경로에 의해 투여되도록 제제화될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 투여용으로 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 정맥 내 투여용으로 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 피하 투여용으로 제제화된다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 보존제를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 임의의 상기 조성물은 보존제를 함유하지 않는다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 등장성 염화나트륨 용액 및/또는 희석제로 희석한 후 (예를 들어, 주입 또는 주사에 의해) 투여하도록 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 등장성 염화나트륨 용액으로 희석한 후 주입에 의해 투여되도록 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 희석제로 희석한 후 주입에 의해 투여되도록 제제화된다. 일부 실시양태에서, 상기 약제학적 조성물은 등장성 염화나트륨 용액 및 희석제로 희석한 후 주입에 의해 투여되도록 제제화된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, (예를 들어, 시린지 펌프에서) 희석제로만 희석된 IL-22 Fc 융합 단백질을 주입함으로써 IL-22 Fc 융합 단백질이 대상체에 투여된다. 다른 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 (예를 들어, IV 백에서) 희석제 및 식염수로 희석된 IL-22 Fc 융합 단백질의 주입에 의해 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 식염수(예를 들어, 등장성 식염수)로 직접 희석된 IL-22 Fc 융합 단백질을 주입함으로써 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 상기 등장성 염화나트륨 용액은 약 0.001% 내지 약 5%(w/v) NaCl을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 등장성 염화나트륨 용액은 약 0.1% 내지 약 2%(w/v) NaCl을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 등장성 염화나트륨 용액은 약 0.5% 내지 약 1.5%(w/v) NaCl을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 등장성 염화나트륨 용액은 약 0.9%(w/v) NaCl을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 희석제는 완충제, 등장화제 및/또는 계면활성제를 포함한다. 본원에 기재된 임의의 완충제, 등장화제 및/또는 계면활성제가 본원에 기재된 임의의 농도로 희석제에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 희석제는 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스, 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함한다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 일부 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질의 Fc 영역은 글리코실화되지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기는 Gly이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기는 Ala이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 299의 아미노산 잔기는 Ala, Gly 또는 Val이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 IgG1 또는 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14 및 서열번호 16으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과의 서열 동일성이 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 100%인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 96% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 97% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 98% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 99% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 N-글리코실화되지 않는다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 이량체성 IL-22 Fc 융합 단백질일 수 있다. 다른 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 단량체성 IL-22 Fc 융합 단백질일 수 있다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 인간 IL-22 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열번호 4의 아미노산 서열.
임의의 적합한 링커가 본원에 기재된 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에 함유된 IL-22 Fc 융합 단백질에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 링커는 아미노산 서열 RVESKYGPP(서열번호 44)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 링커는 아미노산 서열 RVESKYGPP(서열번호 44)로 이루어진다.
임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22 수용체에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 수용체는 인간 IL-22 수용체이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22R1 및/또는 IL-10R2에 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22R1에 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 인간 IL-22 수용체는 IL-22R1 폴리펩티드 및 IL-10R2 폴리펩티드로 이루어진 이종이량체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22R1 폴리펩티드는 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 IL-10R2 폴리펩티드는 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함한다.
하나의 비제한적인 예로서, 본 발명은 서열번호 8 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질 및 담체(예를 들어, 물)를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, 상기 약제학적 조성물은 약 5mM 메티오닌, 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함한다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에 함유된 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22 Fc 융합 단백질의 발현에 적합한 조건하에서 IL-22 Fc 융합 단백질을 발현할 수 있는 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 세포 배양물 또는 배양 배지로부터 IL-22 Fc 융합 단백질을 얻는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 CHO 세포이다.
본원의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 우수한 의료 행위와 일치하는 방식으로 제제화, 투약 및 투여될 것이다. 이러한 맥락에서 고려할 요소는 치료되는 특정 장애, 치료되는 특정 포유동물, 개별 대상체의 임상 상태, 장애의 원인, 약제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄 및 의료 종사자에게 알려진 기타 요인을 포함한다. 일 실시양태에서, 상기 조성물은 질환 또는 병태 질환에 걸리거나 진단될 수 있는 인간 대상체의 생존 기간을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 생존 기간은 약물의 첫 투여부터 사망까지의 시간으로 정의된다. 일 실시양태에서, 상기 조성물은 질환 또는 병태 질환, 예를 들어, 본원에 기재된 임의의 장애(예를 들어, IBD, 예를 들어, UC 또는 크론병)에 걸리거나 진단될 수 있는 인간 대상체의 하나 이상의 증상을 감소시키기 위해 사용될 수 있다.
약제학적 제제는 원하는 순도의 활성 성분을 하나 이상의 선택적인 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합함으로써 당업계에 공지된 표준 방법을 사용하여(예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.(1980) 및 Remington's Pharmaceutical Sciences 20th edition, ed. A. Gennaro, 2000, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa) 냉동건조된 제제 또는 수용액의 형태로 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 일반적으로 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알 코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신과 같은 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염 형성 카운터이온; 금속 착물(예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에서 예시적인 약제학적으로 허용되는 담체는 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질(sHASEGP)과 같은 개재성 약물 분산제, 예를 들어, rHuPH20(HYLENEX®, Baxter International, Inc.)과 같은 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질을 포함한다. rHuPH20을 포함한 특정 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공개 제2005/0260186호 및 제2006/0104968호에 기재되어 있다. 일 측면에서, sHASEGP는 하나 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제, 예컨대 콘드로이티나제와 조합된다.
임의로, 상기 제제는 약제학적으로 허용되는 염, 바람직하게는 염화나트륨을, 바람직하게는 대략 생리학적 농도로 함유된다.
임의로, 본 발명의 제제는 약제학적으로 허용되는 보존제를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 보존제 농도는 0.1 내지 2.0%, 전형적으로 v/v의 범위이다. 적합한 보존제는 제약 기술 분야에 공지된 것을 포함한다. 벤질 알코올, 페놀, m-크레졸, 메틸파라벤, 벤즈알코늄 클로라이드 및 프로필파라벤이 바람직한 보존제이다. 선택적으로, 본 발명의 제제는 약제학적으로 허용되는 계면활성제를 0.005 내지 0.02%의 농도로 포함할 수 있다.
본원의 제제는 또한 치료되는 특정 징후에 필요한 하나 이상의 활성 화합물, 바람직하게는 서로 불리한 영향을 미치지 않는 상보적 활성이 있는 화합물을 함유할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
예시적인 냉동건조된 제제는 미국 특허 제6,267,958호에 기재되어 있다. 수성 제제는 미국 특허 제6,171,586호 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하며, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.
본원의 제제는 또한 치료되는 특정 징후에 필요한 하나 이상의 활성 성분, 바람직하게는 서로 불리한 영향을 미치지 않는 상보적 활성이 있는 성분을 함유할 수도 있다. 예를 들어, 스테로이드, TNF 길항제 또는 다른 소염제를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
활성 성분은, 예를 들어, 콜로이드 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼에서 코아세르베이션(coacervation) 기술 또는 계면중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어, 각각 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.(1980))에 기술되어 있다.
서방성 제제가 제조될 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 IL-22 Fc 융합 단백질을 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐 형태이다. 서방성 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알코올)), 폴리락타이드(미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산과 γ-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, LUPRON DEPOT™(락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤라이드 아세테이트로 이루어진 주사용 미소구)와 같은 분해성 락트산-글리콜산 공중합체 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산과 같은 중합체가 100일 이상 동안 분자의 방출을 가능하게 하는 반면, 특정 하이드로겔은 더 짧은 시간 동안 단백질을 방출한다. 캡슐화된 항체가 오랫동안 체내에 남아있으면, 37℃에서 수분에 노출된 결과로서 변성 또는 응집되어 생물학적 활성이 상실되고 면역원성이 변할 수 있다. 관련된 메커니즘에 따라 안정화를 위한 합리적인 전략을 고안할 수 있다. 예를 들어, 응집 메커니즘이 티오-디설파이드 교환을 통한 분자 간 S-S 결합 형성인 것으로 밝혀지면, 설프하이드릴 잔기를 변형하고, 산성 용액으로부터 냉동 건조시키고, 수분 함량을 조절하고, 적절한 첨가제를 사용하고, 특이적 중합체 매트릭스 조성물을 개발함으로써 안정화를 달성할 수 있다.
국소 투여용 약제학적 조성물은, 예를 들어, 국소 겔 형태로 제제화될 수 있다. 예를 들어, US 4,717,717; US 5,130,298; US 5,427,778; US 5,457,093; US 5,705,485; US 6,331,309; 및 WO2006/138,468 참조. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 셀룰로오스 유도체의 존재하에 제제화될 수 있다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 국소 제제는 투여 전에 충분한 완충제 또는 희석제를 함유한 냉동건조된 제제로부터 재구성될 수 있다. 특정 실시양태에서, IL-22 폴리펩티드 또는 IL-22 Fc 융합 단백질은 상피 상처 치유에 결함이 있는 대상체에 국소 투여하기 위해 제제화된다. 특정의 특별한 실시양태에서, 상기 상피 상처 치유는 피부에서 일어난다. 특정의 다른 특별한 실시양태에서, 상기 대상체는 상처 치유에 결함이 있는 인간이다. 다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 국소 제제는 내과적 또는 외과적 수술 절개 후 상처 치유를 개선하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시양태에서, 상처 치유를 가속, 촉진 또는 개선하는데 사용하기 위한 IL-22 폴리펩티드 또는 IL-22 Fc 융합 단백질은 국소 겔 제제 내에, 예를 들어, 미리 채워진 주사기 또는 용기 내에 있거나, 또는 대안적으로, 본 발명의 화합물은 환자에게 국소 투여 직전에 겔 매트릭스와 혼합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 추가 치료제가 또한 동시에 또는 순차적으로 국소 투여된다. 다른 투여 경로도 선택적으로 사용될 수 있는데, 예를 들어, 비경구, 피하, 복강 내, 폐 내, 뇌내피 내, 피하, 관절 내, 활막 내, 척추강 내, 경구 및 비강 내 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하 투여를 포함한다.
전형적으로 상처 치유를 위해, IL-22 Fc 융합 단백질은 부위 특이적 전달을 위해 제제화된다. 국소 적용시, IL-22 Fc 융합 단백질은 담체 및/또는 보조제와 같은 다른 성분과 적절히 조합된다. 이러한 다른 성분의 본질에는, 약제학적으로 허용되고 의도된 투여에 효과적이어야 하며 조성물의 활성 성분의 활성을 떨어뜨릴 수 없다는 점을 제외하고는, 제한이 없다. 적합한 비히클의 예는 정제된 콜라겐이 있거나 없는 연고, 크림, 겔, 스프레이 또는 현탁액을 포함한다. 상기 조성물은 또한 선택적으로 액체 또는 반액체 형태로 멸균 드레싱, 경피 패치, 플라스터 및 붕대에 함침될 수 있다. 산화된 재생 셀룰로오스/콜라겐 매트릭스, 예를 들어, PROMOGRAN 매트릭스 상처 드레싱 또는 PROMOGRAN PRISMA 매트릭스도 사용될 수 있다.
겔 제제를 얻기 위해, 액체 조성물로 제제화된 IL-22 폴리펩티드 또는 IL-22 Fc 융합 단백질을 유효량의 수용성 다당류 또는 합성 중합체와 혼합하여 폴리에틸렌 글리콜과 같은 겔(예를 들어, 겔화제)을 형성하여 국소 적용되는 적절한 점도의 제제를 형성할 수 있다. 사용될 수 있는 다당류 또는 겔화제는, 예를 들어, 알킬 셀룰로오스, 하이드록시알킬 셀룰로오스 및 알킬하이드록시알킬 셀룰로오스를 포함하는 에테르화된 셀룰로오스 유도체와 같은 셀룰로오스 유도체, 예를 들어, 메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 카복시메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 및 하이드록시프로필 셀룰로오스; 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스; POE-POP 블록 중합체: 다양한 등급의 폴록사머 USP; 히알루론산; 카보폴(carbopol) 940와 같은 폴리아크릴산; 전분 및 분별 전분; 한천; 알긴산 및 알기 네이트; 아라비아 고무; 풀룰란(pullullan); 아가로스; 카라기난; 덱스트란; 덱스트린; 프룩탄(fructan); 이눌린(inulin); 만난(mannan); 자일란(xylan); 아라비난(arabinan); 키토산; 글리코겐; 글루칸; 및 합성 바이오폴리머; 및 크산탄검; 구아 검; 로커스트빈검; 아라비아 고무; 트라가칸트검; 및 카라야검과 같은 검; 및 이들의 유도체, 조합 및 혼합물을 포함한다. 본 발명의 일 실시양태에서, 본원의 겔화제는, 예를 들어, 생물학적 시스템에 불활성이고, 무독성이며, 제조가 간단하고/하거나 너무 묽거나 또는 점성이 아니고, IL-22 폴리펩티드 또는 IL-22 Fc 융합을 불안정화시키지 않고 그 안에 유지하는 것이다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 상기 다당류는 에테르화된 셀룰로오스 유도체이고, 다른 실시양태에서 USP에 잘 정의되고 정제되고 열거된 것, 예를 들어, 메틸셀룰로오스 및 하이드록시알킬 셀룰로오스 유도체, 예컨대 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스 및 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스(모두 셀룰로오스제로 지칭됨)이다. 일부 실시양태에서, 상기 다당류는 하이드록시에틸 메틸셀룰로오스 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스이다.
겔화에 유용한 폴리에틸렌 글리콜은 전형적으로 적절한 점도를 얻기 위해 저 분자량 폴리에틸렌 글리콜과 고분자량 폴리에틸렌 글리콜의 혼합물이다. 예를 들어, 분자량 400-600의 폴리에틸렌 글리콜과 분자량 1500의 폴리에틸렌 글리콜의 혼합물이 적절한 비율로 혼합되어 페이스트를 수득할 때 이러한 목적에 효과적일 것이다.
다당류 및 폴리에틸렌 글리콜에 적용되는 용어 "수용성"은 콜로이드 용액 및 분산액을 포함하는 것을 의미한다. 일반적으로, 상기 셀룰로오스 유도체의 용해도는 에테르 그룹의 치환도에 의해 결정되며, 본원에서 유용한 안정화 유도체는 그 유도체를 수용성으로 만들기 위해 셀룰로오스 쇄의 무수 글루코스(anhydroglucose) 단위당 충분한 양의 에테르 그룹을 가져야 한다. 무수 글루코스 단위당 0.35 이상의 에테르 그룹의 에테르 치환도가 일반적으로 충분하다. 또한, 상기 셀룰로오스 유도체는 알칼리 금속 염, 예를 들어, Li, Na, K 또는 Cs 염의 형태일 수 있다.
특정 실시양태에서, 메틸셀룰로오스는 상기 겔에 사용되며, 예를 들어, 상기 겔의 약 1-5%, 또는 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4% 또는 약 5%를 구성하고 IL-22 Fc 융합 단백질은 겔 mL당 약 50-2000㎍, 100-2000㎍ 또는 100-1000㎍의 양으로 존재한다. 특정 실시양태에서, 국소 투여에 의한 상처 치유를 위한 유효량의 IL-22 Fc 융합 단백질은 상처 부위 ㎠당 약 25㎍ 내지 약 500㎍, 약 50㎍ 내지 약 300㎍, 약 100㎍ 내지 약 250㎍, 약 50㎍ 내지 약 250㎍, 약 50㎍ 내지 약 150㎍, 약 75㎍, 약 100㎍, 약 125㎍, 약 150㎍, 약 175㎍, 약 200㎍, 약 225㎍, 약 250㎍, 약 300㎍ 또는 약 350㎍일 수 있다.
생체 내 투여에 사용되는 제제는 일반적으로 멸균성이다. 멸균은, 예를 들어, 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
본 발명은 IL-22 Fc 융합 단백질계 치료제에 대한 투여량을 제공한다. 예를 들어, 질환의 유형 및 중증도에 따라, 약 1㎍/㎏ 내지 15㎎/㎏(예를 들어, 0.1-20㎎/㎏)의 폴리펩티드가, 예를 들어, 1회 이상의 개별 투여에 의한 것이든 연속주입에 의한 것이든, 대상체에 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 전형적인 일일 투여량은 상기 언급된 인자에 따라 약 1㎍/㎏ 내지 100㎎/㎏ 이상의 범위일 수 있다. 수 일 또는 그 이상에 걸쳐 반복 투여되는 경우, 병태에 따라, 원하는 질환 증상 억제가 발생할 때까지 치료를 지속한다. 그러나 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 기존의 기술 및 분석에 의해 쉽게 모니터링된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 폴리펩티드(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)의 적절한 투여량(단독으로 사용되거나 하나 이상의 다른 추가 치료제와 조합하여 사용되는 경우)은 치료될 질환 유형, 폴리펩티드 유형, 질환의 중증도 및 경과, 폴리펩티드가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지, 이전 요법, 폴리펩티드에 대한 대상체의 임상 이력 및 반응, 및 주치의의 재량에 좌우될 것이다. 폴리펩티드는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상체에 적합하게 투여된다. 질환의 유형 및 중증도에 따라, 약 1㎍/㎏ 내지 20㎎/㎏(예를 들어, 0.1㎎/㎏-15㎎/㎏)의 폴리펩티드가, 예를 들어, 1회 이상의 개별 투여에 의한 것이든 연속주입에 의한 것이든, 대상체에 투여하기 위한 초기 후보 투여량일 수 있다. 하나의 전형적인 일일 투여량은 상기 언급된 인자에 따라 약 1㎍/㎏ 내지 100㎎/㎏ 또는 그 이상일 수 있다. 수 일 또는 그 이상에 걸쳐 반복 투여되는 경우, 병태에 따라, 원하는 질환 증상의 억제가 발생할 때까지 치료는 일반적으로 지속될 것이다. 폴리펩티드의 하나의 예시적인 투여량은 약 0.05㎎/㎏ 내지 약 20㎎/㎏의 범위일 것이다. 따라서, 약 0.5㎎/㎏, 2.0㎎/㎏, 4.0㎎/㎏, 10㎎/㎏, 12㎎/㎏, 15㎎/㎏ 또는 20㎎/㎏ 중 하나 이상의 용량 (또는 이들의 임의의 조합)이 대상체에 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 약 0.5㎎/㎏, 1.0㎎/㎏, 2.0㎎/㎏, 3.0㎎/㎏, 4.0㎎/㎏, 5.0㎎/㎏, 6.0㎎/㎏, 7.0㎎/㎏, 8.0㎎/㎏, 9.0㎎/㎏, 10㎎/㎏, 12㎎/㎏, 15㎎/㎏ 또는 20㎎/㎏ (또는 이들의 임의의 조합)이 대상체에 투여될 수 있다. 이러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어, 매주, 격주 또는 3주마다(예를 들어, 대상체가 약 2회 내지 약 20회, 또는, 예를 들어, 약 6회 용량의 폴리펩티드를 수용하도록) 투여될 수 있다. 초기의 더 높은 로딩 용량에 이어 1회 이상 더 낮은 용량이 투여될 수 있다. 예시적인 투여 요법은 항체 약 4㎎/㎏의 초기 로딩 용량에 이어서 약 2㎎/㎏의 매주 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 그러나 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 기존의 기술 및 분석에 의해 쉽게 모니터링된다.
심혈관 질환 또는 병태, 대사증후군, 급성 내독소혈증 또는 패혈증, GVHD 또는 당뇨병의 예방 또는 치료를 위한 본 발명의 화합물은 전형적으로 정맥 주사에 의해 투여된다.
국소, 비경구, 정맥 내, 피하, 복강 내, 폐 내, 비강 내, 눈, 안 내, 유리체 내, 병변 내, 뇌척수 내, 관절 내, 활막 내, 척추강 내, 경구 또는 흡입 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 투여 방법도 사용할 수 있다. 비경구 주입은 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하 투여를 포함한다. 또한, 본원에 기술된 화합물은 공지된 방법에 따라, 예를 들어, 볼러스로서 정맥 내 투여 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입으로 인간 대상체에 투여된다.
1. 조성물에 사용하기 위한 예시적인 IL-22 Fc 융합 단백질
임의의 적합한 IL-22 Fc 융합 단백질이 상기 조성물에 사용될 수 있다. 일반적으로, IL-22 Fc 융합 단백질은 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함한다. 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함되는 미국 특허 제9,815,880호에 기재된 IL-22 Fc 융합 단백질 중 어느 것이나 본원에 기술된 조성물에 사용될 수 있다. 임의의 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 일부 실시양태에서, Fc 영역은 글리코실화되지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기는 Gly이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 297의 아미노산 잔기는 Ala이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 299의 아미노산 잔기는 Ala, Gly 또는 Val이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 IgG1 또는 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다.
임의의 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 일부 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14 및 서열번호 16으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과의 서열 동일성이 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 98% 이상 또는 100%인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 96% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 97% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 98% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 99% 이상인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 16의 아미노산 서열로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 N-글리코실화되지 않는다.
임의의 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 이량체성 IL-22 Fc 융합 단백질일 수 있다. 다른 실시양태에서, 임의의 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 단량체성 IL-22 Fc 융합 단백질일 수 있다.
임의의 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 인간 IL-22 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열번호 4의 아미노산 서열.
임의의 적합한 링커가 본원에 기재된 IL-22 Fc 융합 단백질에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 링커는 아미노산 서열 RVESKYGPP(서열번호 44)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 링커는 아미노산 서열 RVESKYGPP(서열번호 44)로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22 수용체에 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 수용체는 인간 IL-22 수용체이다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22RA1 및/또는 IL-10R2에 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22RA1에 결합한다.
일부 실시양태에서, 임의의 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22 Fc 융합 단백질의 발현에 적합한 조건하에서 IL-22 Fc 융합 단백질을 발현할 수 있는 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 세포 배양물 또는 배양 배지로부터 IL-22 Fc 융합 단백질을 얻는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 CHO 세포이다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22 수용체에 결합하고 IL-22 수용체 활성 또는 신호전달을 유도하고/하거나 IL-22 수용체 활성의 작용제이다.
다른 측면에서, 본원에 제공된 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 4의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 100%인 폴리펩티드를 포함한다. 다른 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 서열 동일성이 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상인 폴리펩티드를 포함하고 기준 서열에 대한 치환(예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질은 IL-22 수용체에 결합하는 능력을 유지한다. 특정 실시양태에서, 서열번호 8, 10, 12, 14, 16, 24 또는 26에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 IL-22 외부 영역(즉, Fc)에서 발생한다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 IL-22 Fc 융합 단백질의 링커, 힌지, CH2 도메인, CH3 도메인에 있을 수 있다. 특정의 특별한 실시양태에서, Fc의 C-말단 Lys 잔기는 결실된다. 다른 특정 실시양태에서, Fc의 C-말단 Gly 및 Lys 잔기는 모두 결실된다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환이 있는 IL-22 Fc 융합 단백질 변이체가 제공된다. 보존적 치환은 "바람직한 치환"이라는 제목하에 표 A에 제시되어 있다. 더욱 실질적인 변화는 "예시적 치환"이라는 표제하에 표 A에 제공되며, 아미노산 측쇄 부류와 관련하여 아래에 추가로 설명된다. 아미노산 치환은 IL-22 Fc 융합 단백질에 도입될 수 있고, 생성물은 원하는 활성, 예를 들어, 유지/개선된 IL-22 수용체 결합, 감소한 면역원성 또는 개선된 IL-22 수용체 신호전달을 스크리닝할 수 있다.
[표 A]
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아미노산은 공통의 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다.
(1) 소수성: 노르로이신(norleucine), Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비보존적 치환은 이러한 부류 중 하나의 멤버를 다른 부류로 교환하는 것을 수반한다.
돌연변이유발(mutagenesis)을 표적으로 할 수 있는 단백질의 잔기 또는 영역을 확인하기 위한 유용한 방법은 문헌(Cunningham 및 Wells(1989) Science, 244: 1081-1085)에 기술된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 이 방법에서, 표적 잔기의 잔기 또는 그룹(예컨대 Arg, Asp, His, Lys 및 Glu와 같은 하전 된 잔기)을 확인하고 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 치환하여 단백질과 이의 결합 파트너의 상호작용이 영향을 받는지를 결정한다. 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 나타내는 아미노산 위치에 추가 치환이 도입될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 단백질 복합체(예를 들어, 사이토카인-수용체 복합체)의 결정 구조를 사용하여 단백질과 이의 결합 파트너 사이의 접촉점을 확인할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃 잔기는 치환 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체가 원하는 특성을 포함하는지를 결정하기 위해 변이체를 스크리닝할 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 하나 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열 내 삽입뿐만 아니라 하나의 잔기에서 수백 또는 그 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드까지의 길이에 이르는 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합을 포함한다.
본원에는 IL-22 Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 핵산은 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 24 또는 서열번호 26, 바람직하게는 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16, 더욱 바람직하게는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질을 암호화한다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 핵산은 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 23 또는 서열번호 25의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정의 특별한 실시양태에서, 상기 핵산은 서열번호 7 또는 서열번호 11, 바람직하게는 서열번호 7의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 단리된 핵산은 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 23 또는 서열번호 25의 폴리뉴클레오티드 서열과의 서열 동일성이 80% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 100%인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 단리된 핵산은 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 23 또는 서열번호 25의 폴리뉴클레오티드 서열과의 서열 동일성이 80% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 100%인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 단리된 핵산은 IL-22R에 결합할 수 있고/있거나 IL-22R 활성을 유발할 수 있는 IL-22 Fc 융합 단백질을 암호화할 수 있고 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 Fc 영역은 글리코실화되지 않는다. 특정 실시양태에서, 단리된 핵산은 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 23 또는 서열번호 25의 폴리뉴클레오티드 서열과의 서열 동일성이 80% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 100%인 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 단리된 핵산은 서열번호 8, 10, 12 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질을 암호화할 수 있다. 관련 측면에서, 본 발명은 전술한 핵산을 포함하는 벡터 및 이 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포이다. 특정의 특별한 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 대장균 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는 원핵 세포이다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 CHO 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는 진핵 세포이다. 특정 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다.
a) 글리코실화 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 IL-22 Fc 융합 단백질은 이 융합 단백질 또는 이의 일부(예를 들어, 상기 융합 단백질의 Fc 부분)가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 감소시키도록 변경된다. 단백질에 대한 글리코실화 부위의 첨가 또는 결실은 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성 또는 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성할 수 있다.
상기 융합 단백질이 Fc 영역을 포함하면, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생성된 고유 항체는 일반적으로 N-결합에 의해 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 부착된 분지형, 바이안테너리(biantennary) 올리고당을 포함한다. 예를 들어, 문헌(Wright 등, TIBTECH 15: 26-32(1997)) 참조. 올리고당은 다양한 탄수화물, 예를 들어, 만노스, N-아세틸 글루코사민(GlcNAc), 갈락토스 및 시알산뿐만 아니라 상기 바이안테너리 올리고당 구조 "줄기"의 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 특정의 개선된 특성이 있는 Fc 변이체를 생성하기 위해 항체 또는 항체의 Fc 영역에서 상기 올리고당의 변형이 이루어질 수 있다.
상기 Fc 영역의 CH2 도메인에 부착된 푸코스의 양은, 예를 들어, WO 2008/077546에 기재된 바와 같이, MALDI-TOF 질량 분석법으로 측정한 Asn297 또는 N297에 부착된 모든 당구조(예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 고 만노스 구조)의 합에 대해 Asn297의 당 쇄 내의 푸코스의 평균량을 계산함으로써 결정할 수 있다. Asn297은 Fc 영역에서 대략 위치 297에 위치한 아스파라긴 잔기(Fc 영역 잔기의 EU 넘버링)를 지칭하지만; Asn297은 또한 항체의 작은 서열 변이로 인해 위치 297의 상향 또는 하향으로 ±3개의 아미노산, 즉 위치 294와 300 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 제US 2003/0157108호; 제US 2004/0093621호 참조. "탈푸코실화" 또는 "푸코스 결핍" 항체 변이체와 관련된 출판물의 예는 다음을 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki 등, J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki 등, Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). 탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포(Ripka 등, Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원 제US 2003/0157108 A1호; 및 WO　2004/056312 A1, 특히 실시예 11에), 및 녹아웃 세포주(knockout cell lines), 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포를 포함한다(예를 들어, 문헌(Yamane-Ohnuki 등, Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. 등, Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)); 및 WO2003/085107 참조).
항체 변이체에는, 예를 들어, 항체의 Fc 영역에 부착된 바이안테너리 올리고당이 GlcNAc에 의해 이등분된, 이등분된 올리고당이 추가로 제공된다. 이러한 항체 변이체는 푸코실화 감소 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예는, 예를 들어, WO 2003/011878; 미국 특허 제6,602,684호; 및 US 2005/0123546에 기술되어 있다. Fc 영역에 부착된 올리고당에서 하나 이상의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는, 예를 들어, WO 1997/30087; WO 1998/58964; 및 WO 1999/22764에 기술되어 있다.
b) Fc 영역 변이체
특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 Fc 융합 단백질의 Fc 영역으로 도입되어 Fc 영역 변이체를 생성할 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형(예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 힌지는, 예를 들어, CP P CP의 아미노산 서열(서열번호 31)에서 굵게 기재한 밑줄 친 Pro 잔기로 나타낸 바와 같은, Ser 대 Pro 치환을 포함할 수 있다. 이러한 Ser 대 Pro 치환은 분자의 안정성을 증가시킬 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 전부는 아닌 일부 효과기 기능을 갖는 Fc 변이체를 고려하며, 이는 생체 내에서 Fc 영역을 포함하는 항체 또는 융합 단백질의 반감기가 중요하지만 특정 효과기 기능(예컨대 보체 및 ADCC)은 불필요하거나 유해한 응용에 바람직한 후보가 되도록 한다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관 내 및/또는 생체 내 세포독성 분석을 수행할 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 분석은 항체 또는 Fc가 FcγR 결합은 부족하지만(이에 따라 ADCC 활성이 결여될 수 있음), FcRn 결합 능력은 보유하도록 실행될 수 있다. ADCC를 매개하기 위한 1차 세포, NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포에서의 FcR 발현은 문헌(Ravetch 등, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991))의 464면의 표 3에 요약되어 있다. 관심 대상 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관 내 분석의 비제한적 예는 미국 특허 제5,500,362호에 기재되어 있다(예를 들어, 문헌(Hellstrom 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83: 7059-7063 (1986) 및 Hellstrom 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502 (1985)); 미국 특허 제5,821,337호(참조: Bruggemann 등, J. Exp. Med. 166: 1351-1361 (1987)) 참조). 대안적으로, 비방사성 분석법이 사용될 수 있다(예를 들어, 유세포 분석(flow cytometry)을 위한 ACTI™ 비방사성 세포독성 분석(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; 및 CYTOTOX 96® 비방사성 세포독성 분석(Promega, Madison, WI) 참조). 이러한 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cells, PBMC) 및 자연 살해(Natural Killer, NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 대상 분자의 ADCC 활성은 생체 내, 예를 들어, 문헌(Clynes 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998))에 기술된 동물 모델에서 평가할 수 있다. C1q 결합 분석은 또한 항체 또는 Fc가 C1q에 결합할 수 없고, 따라서 CDC 활성이 결여되어 있음을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA 참조. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 분석을 수행할 수 있다(예를 들어, 문헌(Gazzano-Santoro 등, J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg 등, Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg 등, Blood 103:2738-2743 (2004)) 참조). FcRn 결합 및 생체 내 클리어런스/반감기 측정은 또한 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수행할 수 있다(예를 들어, 문헌(Petkova 등, Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)) 참조).
효과기 기능이 감소한 항체는 하나 이상의 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329로 치환된 항체를 포함한다(미국 특허 제6,737,056호). 이러한 Fc 돌연변이체는 잔기 265 및 297이 알라닌으로 치환된 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하여 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환된 Fc 돌연변이체를 포함한다(미국 특허 제7,332,581호).
FcRs에 대한 결합이 개선되거나 감소한 특정 항체 또는 Fc 변이체가 기재되어 있다(예를 들어, 미국 특허 제6,737,056호; WO 2004/056312, 및 문헌(Shields 등, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)) 참조).
특정 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 ADCC를 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어, N-글리코실화 부위를 제거하면서 FcRn 결합 활성을 유지하기 위해 Fc 영역의 위치 297에서 치환된 Fc 변이체를 포함한다(잔기의 EU 넘버링).
일부 실시양태에서, 예를 들어, 미국 특허 제6,194,551호, WO 99/51642 및 문헌(Idusogie 등, J. Immunol 164: 4178-4184 (2000))에 기술된 것과 같이, C1q 결합 및/또는 보체 의존적 세포독성(CDC)의 감소를 초래하는 Fc 영역에서의 변형이 이루어진다.
반감기가 증가하고 모체 IgG를 태아(fetus)에게 전이시키는 역할을 하는 신생아(neonatal) Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합이 개선된 항체(Guyer 등, J. Immunol. 117: 587 (1976) 및 Kim 등, J. Immunol. 24: 249 (1994))는 US2005/0014934A1(Hinton 등)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선하는 하나 이상의 치환을 하는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에서 치환된 것, 예를 들어, Fc 영역 잔기 434의 치환을 포함한다(미국 특허 제7,371,826호).
또한, Fc 영역 변이체의 다른 예에 관해 문헌(Duncan & Winter, Nature 322: 738-40 (1988)); 미국 특허 제5,648,260호; 미국 특허 제5,624,821호; 및 WO 94/29351 참조.
c) 시스테인 조작된 변이체
특정 실시양태에서, 항체의 Fc 영역의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 시스테인 조작된 Fc 융합 단백질을 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 특별한 실시양태에서, 상기 치환된 잔기들은 Fc의 접근 가능한 부위에서 발생한다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 본원에 추가로 설명된 바와 같이, 반응성 티올 그룹은 이에 의해 Fc의 접근 가능한 위치에 위치되고, Fc를 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티와 접합시켜 면역접합체를 생성하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 중쇄 Fc 영역의 S400(EU 넘버링)은 Cys로 치환될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제7,521,541호 참조.
2. 예시적 IL-22 폴리펩티드
임의의 적합한 IL-22 폴리펩티드가 본원에 기재된 IL-22 Fc 융합 단백질에 포함될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 임의의 IL-22 Fc 융합 단백질에서, IL-22 폴리펩티드는 서열번호 71을 포함하는 아미노산 서열(내인성 IL-22 리더 서열을 갖는 인간 IL-22)을 포함하는 폴리펩티드를 포함하거나 서열번호 71과의 서열 동일성이 80% 이상(예를 들어, 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성)인 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 IL-22 폴리펩티드는 서열번호 4를 포함하는 아미노산 서열(리더 서열이 없는 인간 IL-22)을 포함하거나 서열번호 4와의 서열 동일성이 80% 이상(예를 들어, 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성)인 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, IL-22 폴리펩티드는 서열번호 4를 포함하는 아미노산 서열을 포함한다.
핵산 및 폴리펩티드 서열과 함께 고유 IL-22 분자의 제조는 통상의 기술자에게 공지된 방법을 통해 달성될 수 있다. 예를 들어, IL-22 폴리펩티드는 IL-22 핵산을 함유하는 벡터로 형질전환되거나 형질감염된 세포를 배양함으로써 생성될 수 있다. 물론, 당업계에 널리 공지된 대안적 방법이 IL-22를 제조하는데 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 예를 들어, IL-22 서열 또는 이의 일부는 고상 기술을 사용하여 직접 펩티드 합성으로 생성할 수 있다(예를 들어, 문헌(Stewart 등, 1969, Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, Calif. (1969); Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 1963, 85:2149-2154) 참조). 시험관 내 단백질 합성은 수동 기술 또는 자동화에 의해 수행될 수 있다. 자동화된 합성은, 예를 들어, 제조사의 지침을 사용하여 Applied Biosystems Peptide Synthesizer(Foster City, California)를 사용하여 달성할 수 있다. IL-22의 다양한 부분은 화학적 또는 효소적 방법을 사용하여 별도로 화학적으로 합성하고 조합하여 전장 IL-22를 생성할 수 있다.
IL-22 변이체는 고유 서열 IL-22 폴리펩티드를 암호화하는 DNA에 적절한 뉴클레오티드 변화를 도입하거나, 원하는 IL-22 폴리펩티드를 합성함으로써 제조할 수 있다. 통상의 기술자는 아미노산 변화가 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변경하거나 막 고정 특성을 변경하는 것과 같은 IL-22의 번역 후 과정을 변경할 수 있음을 이해할 것이다.
본원에 기재된 고유 서열 IL-22 폴리펩티드의 변형은, 예를 들어, 미국 특허 제5,364,934호에 제시된 보존적 및 비보존적 돌연변이에 대한 기술 및 지침 중 임의의 것을 사용하여 이루어질 수 있다. 변형은 상응하는 고유 서열 또는 변이체 IL-22와 비교하여 아미노산 서열의 변화를 초래하는 고유 서열 또는 변이체 IL-22를 암호화하는 하나 이상의 코돈의 치환, 결실 또는 삽입일 수 있다. 선택적으로, 상기 변형은 고유 서열 IL-22 폴리펩티드의 하나 이상의 도메인에서 하나 이상의 아미노산을 임의의 다른 아미노산으로 치환함으로써 이루어진다. 원하는 활성에 악영향을 미치지 않으면서 삽입, 치환 또는 결실될 수 있는 아미노산 잔기를 결정하는 지침은 IL-22의 서열을 공지된 단백질 분자의 서열과 비교하고 높은 상동성 영역에서 이루어진 아미노산 서열 변화의 수를 최소화함으로써 찾을 수 있다. 아미노산 치환은 하나의 아미노산을 구조적 및/또는 화학적 특성이 유사한 다른 아미노산으로 치환, 예를 들어, 로이신을 세린으로 치환, 즉 보존적 아미노산 치환한 결과일 수 있다. 삽입 또는 결실은 임의로 1 내지 5개의 아미노산 범위일 수 있다. 허용되는 변이는 서열에서 아미노산을 체계적으로 삽입, 결실 또는 치환하고, 예를 들어, 아래 실시예에 기재된 시험관 내 분석으로 생성된 변이체의 활성을 시험함으로써 결정될 수 있다.
특별한 실시양태에서, 관심 대상인 보존적 치환은 바람직한 치환이라는 표제하에 표 A에 제시되어 있다. 이러한 치환이 생물학적 활성의 변화를 초래한다면, 표 A에서 예시적 치환으로 명명되거나 아미노산 부류와 관련하여 아래에 추가로 기술되는 바와 같이 더욱 실질적인 변화가 도입되고 생성물이 스크리닝된다.
본 발명의 범위 내에 포함된 IL-22 폴리펩티드의 다른 유형의 공유결합적 변형(covalent modification)은 폴리펩티드의 고유 글리코실화 패턴을 변경시키는 것을 포함한다. "고유 글리코실화 패턴 변경"은 본원의 목적상 고유 서열 IL-22에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 부분을 결실시키고/시키거나 고유 서열 IL-22에 존재하지 않은 하나 이상의 글리코실화 부위를 첨가하고/하거나 글리코실화 부위(들)에 부착된 당 잔기의 비율 및/또는 조성을 변경하는 것을 의미하는 것으로 의도된다.
폴리펩티드의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결되는 것이다. 글리코실화 부위의 IL-22 폴리펩티드로의 첨가는 아미노산 서열을 변경함으로써 달성될 수 있다. 상기 변경은, 예를 들어, 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 고유 서열 IL-22에 첨가 또는 치환하거나(N-연결된 글리코실화 부위의 경우), O-연결된 글리코실화에 대한 인식 서열을 첨가함으로써 이루어질 수 있다. IL-22 아미노산 서열은 DNA 수준에서의 변화를 통해, 특히 원하는 아미노산으로 번역될 코돈이 생성되도록 미리 선택된 염기에서 IL-22 폴리펩티드를 암호화하는 DNA를 돌연변이시킴으로써 선택적으로 변경될 수 있다.
IL-22 폴리펩티드에서 탄수화물 모이어티의 수를 증가시키는 다른 수단은 글리코사이드를 폴리펩티드에 화학적으로 또는 효소적으로 커플링시키는 것이다. 이러한 방법은 당업계, 예를 들어, WO 87/05330 및 문헌(Aplin 등, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981))에 기술되어 있다.
IL-22 폴리펩티드 상에 존재하는 탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소적으로 또는 글리코실화의 표적으로서 작용하는 아미노산 잔기를 암호화하는 코돈의 돌연변이 치환에 의해 달성될 수 있다. 화학적 탈글리코실화 기술은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌(Hakimuddin 등, Arch. Biochem. Biophys. 259:52 (1987) 및 Edge 등, Anal. Biochem. 118:131 (1981))에 기술되어 있다. 폴리펩티드 상의 탄수화물 모이어티의 효소적 절단은 문헌(Thotakura 등, Meth. Enzymol. 138:350 (1987))에 기술된 바와 같이 다양한 엔도- 및 엑소-글리코시다제의 사용에 의해 달성될 수 있다.
올리고뉴클레오티드 매개된(부위 특이적) 돌연변이유발, 알라닌 스캐닝(alanine scanning) 및 PCR 돌연변이유발과 같은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 변형이 이루어질 수 있다. 부위-지정된 돌연변이유발(Carter 등, 1986, Nucl. Acids Res. 13:4331; Zoller 등, 1987, Nucl. Acids Res. 10:6487), 카세트 돌연변이유발(cassette mutagenesis)(Wells 등, 1985, Gene 34:315), 제한 선택 돌연변이 유발(Wells 등, 1986, Philos. Trans. R. Soc. London A 317:415) 또는 다른 공지 된 기술이 IL-22 변이체 DNA를 생성하기 위해 클로닝된 DNA로 수행될 수 있다.
IL-22 폴리펩티드의 단편이 또한 본원에 제공된다. 이러한 단편은 N-말단 또는 C-말단에서 절단될 수 있거나, 예를 들어, 전장 고유 단백질과 비교할 때 내부 잔기가 결여될 수 있다. 특정 단편에는 본 발명의 IL-22 폴리펩티드의 바람직한 생물학적 활성에 필수적이지 않은 아미노산 잔기가 결여되어 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, IL-22 폴리펩티드의 단편은 생물학적으로 활성이다. 특정 실시양태에서, 전장 IL-22의 단편에는 N-말단 신호 펩티드 서열이 결여되어 있다.
고유 서열 및 변이체 IL-22 폴리펩티드의 공유결합적 변형이 본 발명의 범위 내에 포함된다. 공유결합적 변형의 한 유형은 IL-22의 표적화된 아미노산 잔기를 IL-22 폴리펩티드의 선택된 측쇄나 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시키는 것을 포함한다. 이작용제(bifunctional agent)를 이용한 유도체화는, 예를 들어, IL-22를 수불용성 지지체 매트릭스 또는 표면에 가교결합시키는데, 예를 들어, 항-IL-22 항체의 정제 방법에 사용하는데 유용하다. 통상적으로 사용되는 가교결합제는, 예를 들어, 1,1-비스(디아조-아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데히드, N-하이드록시석신이미드 에스테르, 예를 들어, 4-아지도살리실산을 갖는 에스테르, 3,3'-디티오비스(석신이미딜-프로피오네이트)와 같은 디석신이미딜 에스테르를 포함하는 동종이작용성 이미도에스테르, 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄과 같은 이작용성 말레이미드, 및 메틸-3-[(p-아지도페닐)디티오]프로피오이미데이트와 같은 작용제를 포함한다.
다른 변형은 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기의 각각 상응하는 글루타밀 및 아스파틸 잔기로의 탈아미드화, 프롤린 및 라이신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 그룹의 인산화, 라이신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노 그룹의 메틸화(T.E. Creighton, 1983, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86i), N-말단 아민의 아세틸화 및 C-말단 카복실 그룹의 아미드화를 포함한다.
IL-22의 다른 유형의 공유결합적 변형은 IL-22 폴리펩티드를 다양한 비단백질성 중합체 중 하나, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌에, 예를 들어, 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호; 또는 제4,179,337호에 제시된 방식으로 연결하는 것을 포함한다. 고유 서열 및 변이체 IL-22는 또한 다른 이종성 폴리펩티드 또는 아미노산 서열에 융합된, IL-22의 단편을 포함하여 IL-22를 포함하는 키메라 분자를 형성하는 방식으로 변형될 수 있다.
일 실시양태에서, 이러한 키메라 분자는 안티-태그 항체(anti-tag antibody)가 선택적으로 결합할 수 있는 에피토프(epitope)를 제공하는 태그 폴리펩티드와 IL-22의 융합을 포함한다. 에피토프 태그는 일반적으로 IL-22 폴리펩티드의 아미노- 또는 카복실-말단에 위치한다. 이러한 에피토프 태그된 형태의 IL-22 폴리펩티드의 존재는 태그 폴리펩티드에 대한 항체를 사용하여 검출될 수 있다. 또한, 에피토프 태그의 제공은 안티-태그 항체를 사용하거나 에피토프 태그에 결합하는 다른 유형의 친화성 매트릭스를 사용하여 친화성 정제에 의해 IL-22 폴리펩티드를 용이하게 정제할 수 있게 한다. 다양한 태그 폴리펩티드 및 이들의 각각의 항체는 당업계에 잘 알려져 있다. 예는 폴리-히스티딘(poly-his) 또는 폴리-히스티딘-글리신(poly-his-gly) 태그; flu HA 태그 폴리펩티드 및 이의 항체 12CA5(Field 등, 1988, Mol. Cell. Biol., 8:2159-2165); c-myc 태그 및 이에 대한 8F9, 3C7, 6E10, G4 및 9E10 항체(Evan 등, 1985, Mol. Cell. Biol. 5:3610-3616); 및 단순포진바이러스(Herpes Simplex virus) 당단백질 D(gD) 태그 및 이의 항체(Paborsky 등, 1990, Protein Engineering 3(6):547-553)를 포함한다. 다른 태그 폴리펩티드는 Flag-펩티드(Hopp 등, 1988, BioTechnology 6:1204-1210); KT3 에피토프 펩티드(Martin 등, 1992, Science 255:192-194); 튜불린(tubulin) 에피토프 펩티드(Skinner 등, 1991, J. Biol. Chem. 266:15163-15166); 및 T7 유전자 10 단백질 펩티드 태그(Lutz-Freyermuth 등, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6393-6397)를 포함한다.
다른 실시양태에서, 키메라 분자는 면역글로불린 또는 면역글로불린의 특별한 영역과 IL-22 폴리펩티드 또는 이의 단편의 융합을 포함할 수 있다. 2가 형태의 키메라 분자는, 이러한 융합이 IgG 분자의 Fc 영역에 대한 것일 수 있다. 이들 융합 폴리펩티드는 이종 단백질의 결합 특이성을 면역글로불린 불변 도메인의 효과기 기능과 결합시키는 항체-유사 분자("어드헤신(adhesin)")이며, 종종 면역어드헤신으로 지칭된다. 구조적으로, 면역어드헤신은 IL-22의 아미노산 서열 또는 이의 변이체 및 면역글로불린 불변 도메인 서열의 융합을 포함한다. 면역어드헤신의 어드헤신은 전형적으로 적어도 수용체 또는 리간드의 결합 부위를 포함하는 인접한 아미노산 서열이다. 면역어드헤신에서 면역글로불린 불변 도메인 서열은 임의의 면역글로불린, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 서브 타입, IgA(IgA1 및 IgA2 포함), IgE, IgD 또는 IgM으로부터 얻을 수 있다. 특정 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 변형된 효과기 활성을 나타낸다.
IL-22 폴리펩티드 또는 이의 단편은, 예를 들어, 면역글로불린 중쇄 불변 영역 서열에 융합되어 IL-22-Ig 융합 단백질(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)을 생성할 수 있다. IL-22 폴리펩티드는 인간 또는 쥐과(murine) IL-22일 수 있다. 면역글로불린 중쇄 불변 영역 서열은 인간 또는 쥐과 면역글로불린 중쇄 불변 영역일 수 있다.
B. 조성물에 사용하기 위한 IL-22 Fc 융합 단백질의 제조 방법
본원에 기재된 IL-22 Fc 융합 단백질은 임의의 적합한 방법, 예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질, 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 핵산을 함유하는 벡터로 형질전환되거나 형질감염된 세포를 배양하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 이러한 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 임의의 적합한 숙주 세포, 예를 들어, 포유동물 세포(예를 들어, CHO 세포), 대장균 또는 효모가 사용될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 IL-22 Fc 융합 단백질을 생산하는 방법이 추가로 제공되며, 일반적으로, 원하는 IL-22 Fc 융합 단백질의 발현에 적합한 조건하에서 숙주 세포를 배양하고, 원하는 IL-22 Fc 융합 단백질을 세포 배양물로부터 회수하고, 선택적으로 정제하는 것을 포함한다. 예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함된 미국 가특허 출원 제62/622,762호에 기술된 임의의 방법이 사용될 수 있다.
숙주 세포는 IL-22 폴리펩티드 생산을 위해 본원에 기술된 발현 또는 클로닝 벡터로 형질감염되거나 형질전환되고, 프로모터를 유도하거나 형질전환체를 선택하거나 원하는 서열을 암호화하는 유전자를 증폭시키기 위해 적절하게 변형된 통상적인 영양 배지에서 배양된다. 배지, 온도, pH 등과 같은 배양 조건은 과도한 실험 없이 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다. 일반적으로, 세포 배양의 생산성을 최대화하기 위한 원리, 프로토콜 및 실제 기술은 문헌(Mammalian Cell Biotechnology: A Practical Approach, M. Butler, ed. (IRL Press, 1991) 및 위의 Sambrook 등))에서 찾을 수 있다.
형질감염 방법은, 예를 들어, CaPO4 및 전기천공법에 의해 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 사용된 숙주 세포에 따라, 형질전환은 이러한 세포에 적합한 표준 기술을 사용하여 수행된다. 상기 언급한 Sambrook 등에 의해 기술된 바와 같은 염화칼슘을 사용하는 칼슘 처리, 또는 전기천공법은 일반적으로 실질적인 세포벽 장벽을 함유하는 원핵생물 또는 다른 세포에 사용된다. 근두암종균(Agrobacterium tumefaciens)에 의한 감염은 문헌(Shaw 등, Gene, 23: 315(1983)) 및 1989년 6월 29일에 공개된 WO 89/05859에 기술된 바와 같이 특정 식물 세포의 형질전환에 사용된다. 이러한 세포벽이 없는 포유동물 세포의 경우, 문헌(Graham and van der Eb, Virology, 52:456-457(1978))의 인산칼슘 침전법을 사용할 수 있다. 포유동물 세포 숙주 시스템 형질전환의 일반적인 측면은 미국 특허 제4,399,216호에 기재되어 있다. 효모로의 형질전환은 전형적으로 문헌(Van Solingen 등, J. Bact, 130:946 (1977) 및 Hsiao 등, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 76:3829 (1979))의 방법에 따라 수행될 수 있다. 그러나 DNA를 세포에 도입하는 다른 방법, 예컨대 핵 미세주입, 전기천공, 무손상 세포 또는 폴리양이온, 예를 들어, 폴리브렌(polybrene), 폴리오르니틴(polyornithine)과의 박테리아 원형질체(protoplast) 융합에 의한 것도 사용될 수 있다. 포유동물 세포를 형질전환시키는 다양한 기술에 대해서는 문헌(Keown 등, Methods in Enzymology, 185:527-537 (1990) 및 Mansour 등, Nature, 336:348-352 (1988)) 참조.
본 발명의 재조합 발현 폴리펩티드는 배양 배지 또는 숙주 세포 용해물로부터 회수될 수 있다. 다음 절차는 적합한 정제 절차의 예이다: 이온-교환 칼럼 상에서의 분별; 에탄올 침전; 역상 HPLC; 실리카 또는 양이온 교환 수지, 예컨대 DEAE상의 크로마토그래피; 크로마토포커싱(chromatofocusing); SDS-PAGE; 황산암모늄 침전; 예를 들어, 세파덱스(Sephadex) G-75를 사용한 겔 여과; IgG와 같은 오염 물질을 제거하기 위한 단백질 A 세파로스(Sepharose) 칼럼; 및 본 발명의 폴리펩티드의 에피토프-태그된 형태에 결합하기 위한 금속 킬레이팅 칼럼. 다양한 단백질 정제 방법이 사용될 수 있으며, 이러한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌(Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990); Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982))에 기술되어 있다. 선택된 정제 단계(들)는, 예를 들어, 사용된 생산 공정의 특성 및 생산된 특별한 폴리펩티드에 따라 달라질 것이다.
당업계에 잘 공지된 대안적 방법을 사용하여 본 발명의 폴리펩티드를 제조할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 또는 이의 일부를 암호화하는 서열은 고상 기술을 사용하여 직접 펩티드 합성에 의해 생성될 수 있다(예를 들어, 문헌(Stewart 등, 1969, Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA; Merrifield, J. 1963, Am. Chem. Soc., 85:2149-2154) 참조). 시험관 내 단백질 합성은 수동 기술 또는 자동화에 의해 수행될 수 있으며, 자동화된 합성은, 예를 들어, 제조사의 지침을 사용하여 Applied Biosystems Peptide Synthesizer(Foster City, CA)를 사용하여 달성할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드의 다양한 부분 또는 이의 일부를 화학적 또는 효소적 방법을 사용하여 별도로 화학적으로 합성하고 조합하여 전장 폴리펩티드 또는 이의 일부를 제조할 수 있다.
다른 실시양태에서, 본 발명은 이종성 폴리펩티드 또는 아미노산 서열에 융합된 본원에 기재된 임의의 폴리펩티드를 포함하는 키메라 분자를 제공한다. 이러한 키메라 분자의 예는 에피토프 태그 서열 또는 면역글로불린의 Fc 영역에 융합된 본원에 기재된 임의의 폴리펩티드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원의 벡터에서 DNA를 클로닝하거나 발현시키기에 적합한 숙주 세포는 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵생물 세포를 포함한다. 적합한 원핵생물은 그람-음성 또는 그람-양성 유기체와 같은 진정세균(eubacteria), 예를 들어, 대장균과 같은 장내 세균(Enterobacteriaceae)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다양한 대장균 균주, 예컨대 대장균 K12 균주 MM294(ATCC 31,446); 대장균 X1776(ATCC 31,537); 대장균 균주 W3110(ATCC 27,325) 및 K5 772(ATCC 53,635)가 공개적으로 제공된다.
원핵생물에 더하여, 필라멘트 진균 또는 효모와 같은 진핵생물 미생물이 IL-22 암호화 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)는 통상 사용되는 하등 진핵 숙주 미생물이다.
글리코실화 IL-22의 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체로부터 유래한다. 무척추동물 세포의 예는 식물 세포뿐만 아니라 드로소필라(Drosophila) S2 및 스포도프테라(Spodoptera) Sf9와 같은 곤충 세포를 포함한다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 차이니즈 햄스터 난소(Chinese hamster ovary, CHO) 및 COS 세포를 포함한다. 더욱 구체적인 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포(현탁 배양물에서 성장을 위해 서브클로닝된 293 또는 293 세포, Graham 등, J. Gen Virol., 36:59 (1977)); 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR(CHO, Urlaub 및 Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)); 마우스 세르톨리 세포(sertoli cells)(TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(Hep G2, HB 8065); 및 마우스 유선 종양 세포(MMT 060562, ATCC CCL51)를 포함한다. 적절한 숙주 세포의 선택은 당업계 기술 내에 있는 것으로 간주한다.
IL-22를 암호화하는 핵산(예를 들어, cDNA 또는 게놈 DNA)은 클로닝(DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제 가능한 벡터에 삽입될 수 있다. 다양한 벡터가 공개적으로 제공된다. 벡터는, 예를 들어, 플라스미드(plasmid), 코스미드(cosmid), 바이러스 입자 또는 파지 형태일 수 있다. 적절한 핵산 서열은 다양한 절차에 의해 벡터에 삽입될 수 있다. 일반적으로, 당업계에 공지된 기술을 사용하여 DNA를 적절한 제한 엔도뉴클레아제 부위(들)에 삽입한다. 벡터 성분은 일반적으로 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이들 성분 중 하나 이상을 함유하는 적합한 벡터의 구축은 통상의 기술자에게 공지된 표준 결찰(ligation) 기술을 사용한다.
IL-22 폴리펩티드는 직접적으로 뿐만 아니라 이종성 폴리펩티드를 갖는 융합 폴리펩티드로서도 재조합적으로 생성될 수 있으며, 이는 IL-22 Fc 융합 단백질일뿐만 아니라 성숙 단백질 또는 폴리펩티드의 N-말단에 특이적 절단 부위를 갖는 신호 서열 또는 다른 폴리펩티드일 수 있다. 일반적으로, 신호 서열은 벡터의 성분일 수 있거나, 벡터에 삽입되는 IL-22 DNA의 일부일 수 있다. 상기 신호 서열은, 예를 들어, 알칼리성 포스파타제, 페니실리나제, 1pp 또는 열-안정성 엔테로톡신 II 리더의 군으로부터 선택된 원핵생물 신호 서열일 수 있다. 효모 분비의 경우, 상기 신호 서열은, 예를 들어, 효모 인버타제 리더, 알파 요인 리더(alpha factor leader)(사카로마이세스 및 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 알파 요인 리더, 후자는 미국 특허 제5,010,182호에 기술됨) 또는 산 포스파타제 리더, C. 알비칸스 글루코아밀라제 리더(1990년 4월 4일에 공개된 EP 362,179) 또는 1990년 11월 15일에 공개된 WO 90/13646에 기술된 신호일 수 있다. 포유동물 세포 발현에서, 바이러스 분비 리더뿐만 아니라 포유동물 신호 서열, 예컨대 동일하거나 관련된 종의 분비된 폴리펩티드로부터의 신호 서열이 단백질의 직접 분비를 지시하기 위해 사용될 수 있다.
발현 벡터 및 클로닝 벡터는 둘 다 벡터가 하나 이상의 선택된 숙주 세포에서 복제될 수 있게 하는 핵산 서열을 함유한다. 이러한 서열은 다양한 박테리아, 효모 및 바이러스에 대해 잘 알려져 있다. 플라스미드 pBR322로부터의 복제 기원은 대부분의 그람-음성 박테리아에 적합하고, 2:플라스미드 기원은 효모에 적합하고, 다양한 바이러스 기원(SV40, 폴리오마(polyoma), 아데노바이러스(adenovirus), VSV 또는 BPV)은 포유동물 세포에서 벡터를 클로닝하는데 유용하다.
발현 벡터 및 클로닝 벡터는 전형적으로 선택 가능한 마커로도 불리는 선택 유전자를 함유할 것이다. 전형적인 선택 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어, 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트 또는 테트라사이클린에 내성을 부여하거나, (b) 영양요구성(auxotrophic) 부족을 보완하거나, (c) 복잡한 배지에서 얻을 수 없는 중요한 영양소를 공급하는 단백질을 암호화하는데, 예를 들어, 바실러스(Bacilli)에 대한 D-알라닌 라세미화 효소(racemase)를 암호화하는 유전자이다.
포유동물 세포에 적합한 선택 가능한 마커의 예는 DHFR 또는 티미딘 키나제와 같이 IL-22 핵산을 흡수할 수 있는 세포의 확인을 가능하게 하는 것이다. 야생형 DHFR이 사용될 때 적절한 숙주 세포는 문헌(Urlaub 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980))에 기술된 대로 제조되고 증식된, DHFR 활성이 결핍된 CHO 세포주이다. 효모에 사용하기에 적합한 선택 유전자는 효모 플라스미드 YRp7에 존재하는 trp1 유전자이다(예를 들어, 문헌(Stinchcomb 등, Nature, 282:39(1979); Kingsman 등, Gene, 7:141 (1979); Tschemper 등, Gene, 10:157 (1980)) 참조). trp1 유전자는 트립토판에서 성장하는 능력이 없는 효모의 돌연변이 균주, 예를 들어, ATCC No. 44076 또는 PEP4-1에 대한 선택 마커를 제공한다(Jones, Genetics, 85:12 (1977)).
발현 및 클로닝 벡터는 보통 mRNA 합성을 지시하기 위해 IL-22 핵산 서열에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 함유한다. 다양한 잠재적 숙주 세포에 의해 인식되는 프로모터는 잘 알려져 있다. 원핵생물 숙주와 함께 사용하기에 적합한 프로모터는 직교-락타마제(quadrature-lactamase) 및 락토스 프로모터 시스템(예를 들어, 문헌(Chang 등, Nature, 275:615 (1978); Goeddel 등, Nature, 281:544 (1979)) 참조), 알칼리성 포스파타제, 트립토판(trp) 프로모터 시스템(예를 들어, 문헌(Gjoeddel, Nucleic Acids Res., 8:4057 (1980); EP 36,776) 참조), 및 tac 프로모터와 같은 하이브리드 프로모터(예를 들어, 문헌(deBoer 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80:21-25 (1983)) 참조)를 포함한다. 박테리아 시스템에 사용하기 위한 프로모터는 또한 IL-22를 암호화하는 DNA에 작동 가능하게 연결된 샤인-달가노 서열(Shine-Dalgarno(S.D.) sequence)을 함유할 것이다.
효모 숙주와 함께 사용하기에 적합한 프로모터 서열의 예는 3-포스포글리세레이트 키나제(예를 들어, 문헌(Hitzeman 등, J. Biol. Chem, 255:2073 (1980)) 참조) 또는 다른 당분해 효소(예를 들어, 문헌(Hess 등, J. Adv. Enzyme Reg., 7:149 (1968); Holland, Biochemistry, 17:4900 (1978)) 참조), 예컨대 에놀라제, 글리세르알데히드-3-포스페이트 탈수소효소, 헥소키나제, 피루베이트 데카복실라제, 포스포프럭토키나제, 글루코스-6-포스페이트 이소머라제, 3-포스포글리세레이트 뮤타제, 피루베이트 키나제, 트리오스포스페이트(triosephosphate) 이소머라제, 포스포글루코스 이소머라제 및 글루코키나제를 포함한다.
성장 조건에 의해 제어되는 전사의 추가 이점이 있는 유도성 프로모터인 다른 효모 프로모터는 알코올 탈수소효소 2, 이소사이토크롬 C, 산 포스파타제, 질소 대사와 관련된 분해 효소, 메탈로티오네인(metallothionein), 글리세르알데히드-3-포스페이트 탈수소효소, 및 말토스 및 갈락토스 이용을 담당하는 효소에 대한 프로모터 영역이다. 효모 발현에 사용하기에 적합한 벡터 및 프로모터는 EP 73,657에 추가로 기재되어 있다.
포유동물 숙주 세포에서 벡터로부터의 IL-22 전사는, 예를 들어, 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스(fowlpox virus)(1989년 7월 5일에 공개된 UK 2,211,504), 아데노바이러스(예컨대 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스(bovine papilloma virus), 조류 육종 바이러스(avian sarcoma virus), 거대세포바이러스(cytomegalovirus), 레트로바이러스(retrovirus), B형 간염 바이러스 및 유인원 바이러스(Simian Virus) 40(SV40)과 같은 바이러스의 게놈으로부터 수득된 프로모터, 이종 포유동물 프로모터로부터 수득된 프로모터, 예를 들어, 액틴 프로모터 또는 면역글로불린 프로모터, 및 숙주 세포 시스템과 상용되는 프로모터가 제공된 열 충격 프로모터로부터 수득된 프로모터에 의해 제어된다.
고등 진핵생물에 의해 IL-22 폴리펩티드를 암호화하는 DNA의 전사는 벡터에 인핸서 서열을 삽입함으로써 증가할 수 있다. 인핸서는 전사를 증가시키기 위해 프로모터에 작용하는, 보통 약 10 내지 300bp의 DNA의 시스-작용 요소이다. 많은 인핸서 서열이 현재 포유동물 유전자(글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-태아단백(α-fetoprotein) 및 인슐린)로부터 알려져 있다. 그러나 전형적으로, 진핵 세포 바이러스로부터의 인핸서를 사용할 것이다. 예는 복제 기점의 후반에 SV40 인핸서(bp 100-270), 거대세포바이러스 조기 프로모터 인핸서, 복제 기점의 후반에 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서를 포함한다. 상기 인핸서는 IL-22 코딩 서열의 5' 또는 3' 위치에서 벡터 내로 스플라이싱될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터 5' 위치에 위치한다.
진핵생물 숙주 세포(효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 인간 또는 다른 다세포 유기체로부터의 유핵 세포)에 사용된 발현 벡터는 또한 전사 종결 및 mRNA 안정화에 필요한 서열을 함유할 것이다. 이러한 서열은 진핵생물 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 5' 및 때때로 3'의 비번역 영역으로부터 통상적으로 입수 가능하다. 이들 영역은 IL-22를 암호화하는 mRNA의 비번역 부분에서 폴리아데닐화된 단편으로서 전사된 뉴클레오티드 세그먼트를 함유한다.
재조합 척추동물 세포 배양물에서의 IL-22의 합성에 적응시키기에 적합한 또 다른 방법, 벡터 및 숙주 세포는 문헌(Gething 등, Nature, 293:620-625 (1981); Mantei 등, Nature, 281:4046 (1979)); EP 117,060; 및 EP 117,058에 기술되어 있다.
유전자 증폭 및/또는 발현은, 예를 들어, mRNA의 전사를 정량하기 위한 통상적인 서던 블롯팅(Southern blotting), 노던 블롯팅(Northern blotting)(예를 들어, Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:5201-5205 (1980) 참조), 도트 블롯팅(dot blotting)(DNA 분석), 또는 본원에 제공된 서열에 기초한, 적절한 표지된 프로브를 사용하는 원위치 하이브리드화에 의해 샘플에서 직접 측정될 수 있다. 대안적으로, DNA 이중체(duplexe), RNA 이중체, 및 DNA-RNA 하이브리드 이중체 또는 DNA-단백질 이중체를 포함한 특정 이중체를 인식할 수 있는 항체가 사용될 수 있다. 이어서, 상기 항체가 표지될 수 있고, 상기 이중체가 표면에 결합한 곳에서 분석이 수행될 수 있어서, 상기 표면 상에 이중체가 형성될 때, 상기 이중체에 결합한 항체의 존재가 검출될 수 있다.
대안적으로, 유전자 발현은 세포 또는 조직 섹션의 면역조직화학적 염색 및 세포 배양물 또는 체액의 검정과 같은 면역학적 방법에 의해 측정되어 유전자 생성물의 발현을 직접 정량할 수 있다. 샘플 유체의 면역조직화학적 염색 및/또는 분석에 유용한 항체는 단클론 또는 다클론일 수 있으며, 임의의 포유동물에서 제조될 수 있다. 편리하게는, 상기 항체는 고유 서열 IL-22 폴리펩티드에 반해 또는 본원에 제공된 DNA 서열에 기초한 고유 서열 IL-22 폴리펩티드에 반해 또는 IL-22 DNA에 융합되고 특이적 항체 에피토프를 암호화하는 외인성 서열에 반해 제조될 수 있다.
IL-22 Fc 융합 단백질은 배양 배지 또는 숙주 세포 용해물로부터 회수될 수 있다. 막 결합한 경우, 적합한 세제 용액(예를 들어, TRITON® X-100)을 사용하거나 효소 절단에 의해 막으로부터 방출될 수 있다. IL-22의 발현에 사용된 세포는 냉동-해동 사이클링, 초음파 처리, 기계적 파괴 또는 세포 용해제와 같은 다양한 물리적 또는 화학적 수단에 의해 파괴될 수 있다.
재조합 세포 단백질 또는 폴리펩티드로부터 IL-22Fc 융합 단백질을 정제하는 것이 바람직할 수 있다. 다음 절차는 적합한 정제 절차의 예이다: 이온-교환 칼럼 상에서의 분별; 에탄올 침전; 역상 HPLC; 실리카 또는 양이온 교환 수지, 예컨대 DEAE 상의 크로마토그래피; 크로마토포커싱; SDS-PAGE; 황산암모늄 침전; 예를 들어, 세파덱스 G-75를 사용한 겔 여과; IgG와 같은 오염 물질을 제거하기 위한 단백질 A 세파로스 칼럼; 및 IL-22 폴리펩티드의 에피토프-태그된 형태에 결합하기 위한 금속 킬레이팅 칼럼. 다양한 단백질 정제 방법이 사용될 수 있으며, 이러한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌(Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990); Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982))에 기술되어 있다. 선택된 정제 단계(들)는, 예를 들어, 사용된 생산 공정의 특성 및 생산된 특정 IL-22에 의존할 것이다. 상술한 일반적인 방법은 IL-2 Fc 융합 단백질의 제조에도 적용될 수 있다.
유사하게, IL-22 Fc 융합 단백질은, 예를 들어, 문헌(Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, 등, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press) 및 PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis, 등, 1990. Academic Press, San Diego, CA))에 기술된 바와 같은 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생성될 수 있다. 일 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-22 Fc 융합 단백질을 암호화하는 단리된 핵산이 제공된다. 추가의 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가의 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 하나의 이러한 실시양태에서, 숙주 세포는 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 아미노산 서열을 코드화하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다(예를 들어, 이러한 벡터로 형질전환되었다). 특정 실시양태에서, 상기 벡터는 발현 벡터이다. 일 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 진핵생물, 예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 림프계 세포(예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 일 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질을 제조하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 위에 제공된 바와 같은 IL-22 Fc 융합 단백질을 이 Fc 융합 단백질의 발현에 적합한 조건하에서 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하고, 선택적으로 상기 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 상기 Fc 융합 단백질을 회수하는 단계를 포함한다.
IL-22 Fc 융합 단백질의 재조합 생산을 위해, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 단리하고 숙주 세포에서의 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 이러한 핵산은 통상적인 절차를 사용하여 (예를 들어, 상기 융합 단백질을 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 쉽게 단리하고 서열 분석할 수 있다. 특정 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질을 제조할 때, IL-22 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 또는 이의 단편은 불변 도메인 상의 특정 위치에서 면역글로불린 불변 도메인 서열을 암호화하는 핵산에 결찰되어 IL-22의 C-말단에서 Fc 융합을 초래할 수 있으나; N-말단 융합도 가능하다.
IL-22 Fc 융합 단백질을 구축하는 예로서, IL-22를 암호화하는 DNA는 IL-22를 암호화하는 DNA의 3' 말단 또는 그 부근에서 및 성숙한 폴리펩티드의 N-말단 끝(다른 리더의 사용이 고려되는 곳)을 암호화하는 DNA 또는 그 근처에서, 또는 IL-22 전장 단백질에 대한 N-말단 코딩 영역 또는 그 부근에서(고유 신호가 사용되는 곳) 제한 효소에 의해 절단된다. 이 DNA 단편은 면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA에 용이하게 삽입되고, 필요한 경우, 결실 돌연변이 유발에 의해 조정된다. 바람직하게는, 이는 상기 융합 단백질이 인간에 대한 생체 내 치료를 위해 의도될 때 인간 면역글로불린이다.
일부 실시양태에서, IL-22-면역글로불린 키메라는 단량체, 이종- 또는 동종--다량체, 또는 이량체 또는 사량체로 조립된다. 일반적으로, 이들 조립된 면역글로불린은 하기 다이어그램으로 표시되는 공지된 단위 구조를 가질 것이다. 기본 4쇄 구조 단위는 IgG, IgD 및 IgE가 존재하는 형태이다. 고분자량 면역글로불린에서 4쇄 단위가 반복되고; IgM은 일반적으로 디설파이드 결합에 의해 함께 유지되는 기본 4쇄 단위의 오량체(pentamer)로서 존재한다. IgA 글로불린, 및 때때로 IgG 글로불린은 또한 혈청에서 다량체 형태로 존재할 수 있다. 다량체의 경우, 각각의 4쇄 단위는 동일하거나 상이할 수 있다. 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 Capon 등의 미국 특허 제5,116,964호 참조.
면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA는 공지되어 있거나 cDNA 라이브러리로부터 쉽게 이용 가능하거나 합성된다. 예를 들어, 문헌(Adams 등, Biochemistry 19:2711-2719 (1980); Gough 등, Biochemistry 19:2702-2710 (1980); Dolby 등; P.N.A.S. USA, 77:6027-6031 (1980); Rice 등, P.N.A.S USA 79:7862-7865 (1982); Falkner 등; Nature 298:286-288 (1982); 및 Morrison 등; Ann. Rev. Immunol. 2:239-256 (1984)) 참조. 내인성 리더 서열이 있는 인간 IL-22를 암호화하는 DNA 서열이 본원에 제공된다(서열번호 70). cDNA 라이브러리로부터 공지되거나 쉽게 이용 가능한 다른 바람직한 결합 파트너를 암호화하는 DNA 서열이 본 발명의 실시에 적합하다.
본 발명의 IL-22 Fc 융합 단백질을 암호화하는 DNA는 발현을 위해 숙주 세포로 형질감염된다. 다량체가 바람직하다면, 숙주 세포는 다량체를 구성할 각 쇄를 암호화하는 DNA로 형질전환되는데, 숙주 세포는 원하는 방식으로 다량체의 쇄를 조립할 수 있도록 최적으로 선택된다. 형질감염 전에 숙주 세포가 면역글로불린을 생산한다면, 이종항체를 생성하기 위해 경쇄 또는 중쇄에 융합된 결합 파트너에 의한 형질감염만이 필요하다. 결합 파트너 도메인을 보유하는 하나 이상의 암 및 동반 가변 영역을 보유하는 하나 이상의 암을 갖는 상기 언급된 면역글로불린은 결합 파트너 리간드 및 항원 또는 치료적 모이어티에 대해 이중 특이성을 초래한다. 다중 공형질전환된 세포는 위에 논의된 이종사량체성 면역글로불린과 같은 다중 특이성을 갖는 폴리펩티드를 생성하기 위해 상술된 재조합 방법과 함께 사용된다.
면역글로불린 경쇄의 존재가 본 발명의 면역어드헤신에서 필요하지는 않지만, 면역글로불린 경쇄는 IL-22-면역글로불린 중쇄 융합 폴리펩티드와 공유적으로 관련되어 존재할 수 있다. 이 경우에, 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 DNA는 전형적으로 IL-22-면역글로불린 중쇄 융합 단백질을 암호화하는 DNA와 공동-발현된다. 분비시, 하이브리드 중쇄 및 경쇄는 2개의 디설파이드 연결된 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍을 포함하는 면역글로불린 유사 구조를 제공하기 위해 공유결합할 것이다. 이러한 구조의 제조에 적합한 방법은, 예를 들어, 1989년 3월 28일에 허여된 미국 특허 제4,816,567호에 개시되어 있다. 표적 단백질 암호화 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질은 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 기능이 필요하지 않거나 유해하면 박테리아에서 생성될 수 있다. 박테리아에서의 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예를 들어, 미국 특허 제5,648,237호, 제5,789,199호 및 제5,840,523호 참조. 또한, 대장균에서의 항체 단편의 발현을 기술하고 있는 문헌(Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254) 참조. 발현 후, Fc 융합 단백질은 가용성 분획 내 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다. 실시예 섹션에서 예시된 바와 같이, 추가의 정제 방법은 단백질 A 칼럼을 사용한 정제를 제한 없이 포함한다.
원핵생물에 더하여, 필라멘트 진균 또는 효모와 같은 진핵생물 미생물(microbes)은 글리코실화 경로가 "인간화된" 진균 및 효모 균주를 포함한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이며, 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체를 생성시킨다. 문헌(Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li 등, Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)) 참조.
글리코실화된 단백질의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래한다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와 함께, 특히 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질감염에 사용될 수 있는 다수의 배큘로바이러스(baculoviral) 균주가 확인되었다.
식물 세포 배양물이 또한 숙주로서 이용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,959,177호; 제6,040,498호; 제6,420,548호; 제7,125,978호; 및 제6,417,429호(형질전환 식물에서 항체를 생산하기 위한 PLANTIBODIES™ 기술을 설명함) 참조.
척추동물 세포가 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40(COS-7)에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1계(COS-7); 인간 배아 신장계(예를 들어, 문헌(Graham 등, J. Gen Virol. 36:59 (1977))에 기술된 293 또는 293 세포); 아기 햄스터 신장 세포(baby hamster kidney cells, BHK); 마우스 세르톨리 세포(예를 들어, 문헌(Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980))에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁 경부암종 세포(human cervical carcinoma cells, HELA); 개 신장 세포(MDCK; 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유선 종양(MMT 060562); 예를 들어, 문헌(Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982))에 기재된 것과 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR-CHO 세포를 포함한 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 Y0, NS0 및 Sp2/0과 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주를 검토하기 위해, 예를 들어, 문헌(Yazaki 및 Wu, Methods in Molecular Biology, Vol.248 (BKC Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)) 참조.
C. 검정
본원에 제공된 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물) 또는 그의 구성 성분은 당업계에 공지된 다양한 검정에 의해 그의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성을 확인, 스크리닝 또는 특성화할 수 있다.
1. 결합 검정 및 기타 검정
일 측면에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 이의 수용체 결합 활성에 대해, 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블롯팅 분석(western blotting analysis), 스캐차드(Scatchard)에 의한 세포 표면 결합, 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance)과 같은 공지된 방법에 의해 시험된다. 다른 측면에서, IL-22 수용체에 결합하기 위해 IL-22 Fc 융합 단백질과 경쟁하는 항체를 확인하기 위해 경쟁 분석법이 사용될 수 있다. 추가의 측면에서, 본 발명의 IL-22 Fc 융합 단백질은 생물학적 샘플에 존재하는 IL-22 수용체 또는 IL22-결합 단백질(가용성 수용체)의 존재 또는 양을 검출하는데 사용될 수 있다. 추가의 측면에서, 본 발명의 IL-22 Fc 융합 단백질은 생물학적 샘플에 존재하는 IL-22 수용체의 존재 또는 양을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 생물학적 샘플은 먼저 이 샘플의 임의의 Fc 수용체를 포화시키기 위해 비특이적 이소형 대조군 항체로 차단된다. 예시적인 검정은 하기 실시예에 기재되어 있다(예를 들어, 실시예 1에 기재된 효능 검정).
2. 활성 검정
일 측면에서, 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)의 생물학적 활성을 확인하기 위한 분석이 제공된다. 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에서 IL-22 폴리펩티드 또는 IL-22 Fc 융합 단백질의 생물학적 활성은, 예를 들어, IL-22 수용체로의 결합, IL-22 신호전달 자극, 및 STAT3, RegIII 및/또는 PancrePAP 발현 유도를 포함할 수 있다. 또한, 심혈관 질환 또는 병태의 경우, 생물학적 활성은 죽상동맥경화성 플라크의 형성에 영향을 미치고, 특히 죽상동맥경화성 플라크 형성의 형성을 억제하는 것을 포함할 수 있다. 플라크 형성의 억제는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 적합한 이미징 방법에 의해 평가될 수 있다.
3. 안정성 검정
일 측면에서, 조성물의 안정성을 측정하기 위한 분석법이 제공된다. 예를 들어, 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 응집체 형성의 평가(예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여, 탁도를 측정함으로써 및/또는 육안 검사에 의해); ROS 형성의 평가(예를 들어, 광 스트레스 검정 또는 2,2'-아조비스(2-아미디노프로판)디하이드로클로라이드(AAPH) 스트레스 검정을 사용하여); 단백질의 특정 아미노산 잔기(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질의 Met 잔기)의 산화; 양이온 교환 크로마토그래피, 이미지 모세관 등전점 전기영동(icIEF) 또는 모세관 영역 전기영동을 사용한 전하 불균일성 평가; 아미노-말단 또는 카복시-말단 서열 분석; 질량 분석; 환원된 폴리펩티드 및 무손상 폴리펩티드(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질)를 비교하기 위한 SDS-PAGE 분석; 펩티드 맵(예를 들어, 트립신 또는 LYS-C) 분석; 단백질의 생물학적 활성 또는 표적 결합 기능(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질의 IL-22 수용체로의 결합) 평가 등을 포함한 다양한 상이한 방식으로 정성적으로 및/또는 정량적으로 평가될 수 있다. 불안정성은 응집, 탈아미드화(예를 들어, Asn 탈아미드화), 산화(예를 들어, Met 산화 및/또는 Trp 산화), 이성질화(예를 들어, Asp 이성질화), 클리핑/가수분해/단편화(예를 들어, 힌지 영역 단편화), 석신이미드 형성, 홀시스테인(들), N-말단 연장, C-말단 프로세싱, 글리코실화 차이 등 중 하나 이상을 수반할 수 있다. 예시적 검정이 하기 실시예, 예를 들어, 실시예 1 및 실시예 3에 기재되어 있다.
D. 조성물에 사용하기 위한 접합체
본 발명은 또한 검출, 제제, 반감기 연장, 면역원성 완화 또는 조직 침투를 위한 하나 이상의 약제에 접합된 본원에 기재된 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 접합체를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 제공한다. 예시적 접합체는 페길화(PEGylation) 및 방사성 동위원소로의 부착을 제한 없이 포함한다.
다른 실시양태에서, 접합체는 방사성 접합체(radioconjugate)를 형성하기 위해 방사성 원자에 접합된 본원에 기재된 바와 같은 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함한다. 방사성 접합체의 생산을 위해 다양한 방사성 동위원소가 이용 가능하다. 예는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212, 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사선 접합체가 검출을 위해 사용될 때, 섬광조영술(scintigraphic) 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들어, tc99m 또는 I123, 또는 핵자기 공명(NMR) 이미징(자기 공명 영상, MRI라고도 함)을 위한 스핀 라벨(spin label), 예컨대 다시 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다.
E. 치료 방법 및 조성물의 용도
본원에 제공된 임의의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 치료 방법 및 용도, 예를 들어, 아래에 기재된 임의의 치료 방법 및 용도에 사용될 수 있다.
a) 염증성 장 질환
일 측면에서, 의약으로서 사용하기 위한 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)이 제공된다. 추가의 측면에서, UC 및 CD를 포함한 IBD를 치료하는데 사용하기 위한 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)이 제공된다. 특정 실시양태에서, 치료 방법에 사용하기 위한 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)이 제공된다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 개체에 유효량의 IL- 22 Fc 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, UC 또는 CD가 있는 개체를 치료하는 방법에 사용하기 위한 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 제공한다. 하나의 이러한 실시양태에서, 상기 방법은, 예를 들어, 아래에 기재된 바와 같이, 유효량의 하나 이상의 추가 치료제를 개체에 투여하는 것을 추가로 포함한다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 상피 증식, 분화 및/또는 이동을 향상시키는 데 사용하기 위한 조성물 (예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 제공한다. 특정의 특별한 실시양태에서, 상기 상피 조직은 장 상피 조직이다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 개체에 유효량의 조성물을 투여하여 상피 증식, 분화 및/또는 이동을 향상시키는 것을 포함하는, 개체에서 상피 증식, 분화 및/또는 이동을 향상시키는 방법에 사용하기 위한 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 당뇨병, 특히 II형 당뇨병, 당뇨성 상처 치유, 대사증후군 및 죽상동맥경화증의 치료에 사용하기 위한 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 개체에 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 당뇨병, 특히 II형 당뇨병, 당뇨성 상처 치유, 대사증후군 및 죽상동맥경화증을 치료하는 방법에 사용하기 위한 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 제공한다. 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된 국제 특허 출원 공개 제WO 2014/145016호 참조. 임의의 상기 실시양태에 따른 "개체" 또는 "대상체" 또는 "환자"는 바람직하게는 인간이다.
추가의 측면에서, 본 발명은 약제의 생산 또는 제조에서의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)의 용도를 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 의약은 IBD 및 상처 치유의 치료를 위한 것이다. 추가의 실시양태에서, 상기 의약은 IBD가 있는 개체에 유효량의 의약을 투여하는 것을 포함하는, IBD 및 상처 치유의 치료 방법에 사용하기 위한 것이다. 하나의 이러한 실시양태에서, 상기 방법은, 예를 들어, 아래에 기재된 바와 같이, 유효량의 하나 이상의 추가 치료제를 개체에 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 추가의 실시양태에서, 상기 의약은 장 상피 세포에서 염증 반응을 억제하기 위한 것이다. 추가의 실시양태에서, 상기 의약은 개체에 유효량의 의약을 투여하여 상피 증식, 분화 및/또는 이동을 향상시키는 것을 포함하는, 개체에서 상피 증식, 분화 및/또는 이동을 향상시키는 방법에 사용하기 위한 것이다. 임의의 상기 실시양태에 따른 "개체"는 인간일 수 있다.
추가의 측면에서, 본 발명은 UC 및 CD를 포함한 IBD의 치료 방법을 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 방법은 IBD가 있는 개체에 유효량의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 투여하는 것을 포함한다. 하나의 이러한 실시양태에서, 상기 방법은 아래에 기재된 바와 같이 유효량의 하나 이상의 추가 치료제를 개체에 투여하는 것을 추가로 포함한다. 임의의 상기 실시양태에 따른 "개체"는 인간일 수 있다.
추가의 측면에서, 본 발명은 개체에서 상피 증식, 분화 및/또는 이동을 향상시키는 방법을 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 방법은 개체에 유효량의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 투여하여 상피 증식, 분화 및/또는 이동을 향상시키는 것을 포함한다. 일 실시양태에서, "개체"는 인간이다.
b) 다른 치료적 적응증
본 발명은 심혈관 질환 및 병태, 대사증후군, 급성 내독소혈증 및 패혈증, 이식편대숙주병(GVHD) 및 당뇨병을 위한 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 제공한다. 주어진 질환 또는 병태의 예방, 치료 또는 중증도의 감소를 위해, 본 발명의 조성물의 적절한 투여량은 작용제가 위에 정의된 바와 같이 치료될 질환 또는 병태의 유형, 상기 질환 또는 병태의 중증도 및 경과, 작용제가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지, 이전 요법, 대상체의 임상 이력 및 화합물에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따라 달라질 것이다. 화합물은 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상체에 적합하게 투여된다. 바람직하게는, 용량-반응 곡선 및 본 발명의 약제학적 조성물을 먼저 시험관 내에서, 이어서 인간에 시험하기 전에 유용한 동물 모델에서 측정하는 것이 바람직하다.
일 측면에서, 본 발명은 심혈관 질환 또는 장애, 대사증후군, 급성 내독소혈증 및 패혈증, GVHD 및 인슐린 관련 장애의 치료 방법을 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 방법은 치료 유효량의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 이것이 필요한 대상체에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 측면에서, 본 발명은 심혈관 질환 또는 장애, 대사증후군, GVHD 및 인슐린 관련 장애의 진행을 지연시키거나 늦추는 방법을 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 방법은 질환, 병태 또는 장애로 진단된 대상체에 유효량의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 투여하는 단계를 포함한다. 다른 측면에서, 본 발명은 심혈관 질환 또는 장애, GVHD 및 인슐린 관련 장애의 징후를 예방하는 방법을 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 방법은 유효량의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 질환, 병태 또는 장애의 위험이 있는 대상체에 투여하는 단계를 포함하며, 상기 조성물은 질환, 병태 또는 장애의 징후의 진전에 대항하여 효과적이다. 일 측면에서, 본 발명은 GVHD의 치료 방법을 제공한다. 다른 측면에서, 본 발명은 GVHD의 진행을 지연시키거나 늦추기 위한 방법을 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 방법은 질환, 병태 또는 장애로 진단된 대상체에 유효량의 IL-22 Fc 융합 단백질을 투여하는 단계를 포함한다.
심혈관 질환 및 병태
일 측면에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 대상체에서 심혈관 질환 또는 병태의 임상적 및/또는 조직학적 및/또는 생화학적 및/또는 병리학적 징후(증상 및 징후(sign) 둘 다 포함)의 진전 또는 진행에 대항하여 치료, 방지(preventative) 또는 예방(prophylactic) 효과를 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 질환 또는 병태는 죽상동맥경화증이다. 일 실시양태에서, 상기 징후는 죽상동맥경화성 플라크 형성 및/또는 혈관 염증을 포함한다. 다른 실시양태에서, 상기 대상체는 심혈관 질환의 위험이 있다. 일반적으로, 위험이 있는 대상체는 본원에 기술된 바와 같은 심혈관 질환 또는 병태가 이전에 있었거나, 심혈관 질환 또는 병태에 대한 유전적 소인이 있을 것이다.
심혈관 질환 및 병태의 치료 효능은 심혈관 질환을 평가하는데 일반적으로 사용되는 다양한 평가에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 심혈관 건강을 평가할 수 있다. 심혈관 건강은, 예를 들어, 혈액 검사(예를 들어, 총 콜레스테롤, LDL-C, HDL-C, 트리글리세라이드, C-반응성 단백질, 섬유소원, 호모시스테인, 공복 인슐린, 페리틴, 지단백 및 LPS), 혈압, 청진, 심전도, 심장 스트레스 테스트, 심장 이미징(예를 들어, 관상 동맥 카테터 삽입, 초음파심도, 혈관 내 초음파, 양전자 방출 단층 촬영, 컴퓨터 단층촬영 혈관조영술 및 자기 공명 영상)에 의해 평가될 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
대사증후군
일 측면에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 대상체에서 대사증후군 (또는 대사 장애 또는 질환)의 임상적 및/또는 조직학적 및/또는 생화학적 및/또는 병리학적 징후(증상 및 징후 둘 다 포함)의 진전 또는 진행에 대항하여 치료, 방지 또는 예방 효과를 제공한다. 하나 이상의 실시양태에서, 상기 대상체는 대사증후군에 걸릴 위험이 있다.
대사증후군의 치료 효능은 대사증후군 평가에 일반적으로 사용되는 다양한 평가에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 비만을 측정할 수 있다. 추가의 예로서, 고혈당증, 이상지질혈증, 인슐린 저항성, 만성 지방 조직 염증 및/또는 고혈압을 측정할 수 있다. C-반응성 단백질, IL-6, LPS 및 플라스미노겐 활성화제 억제제 1 중 하나 이상의 수준에서의 감소를 측정할 수 있다. 이들 측정은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 수행될 수 있다.
인슐린 관련 장애
인슐린 관련 장애의 경우, 용어 "치료"는 장애에 대한 치료적 처치 및 예방 또는 방지 조치 둘 다를 지칭하며, 목적은 표적화된 병리학적 병태 또는 장애를 방지하거나 늦추는(줄이는) 것이다. 치료가 필요한 환자는 이미 인슐린 관련 장애가 있는 환자뿐만 아니라 그러한 장애의 경향이 있거나 그 장애를 예방해야 하는 환자를 포함한다.
일 측면에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 대상체에서 인슐린 관련 장애의 임상적 및/또는 조직학적 및/또는 생화학적 및/또는 병리학적 징후(증상 및 징후 모두 포함)의 진전 또는 진행에 대항하여 방지 또는 예방 효과를 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 장애는 I형 당뇨병, II형 당뇨병 또는 임신성 당뇨병이다. 일 실시양태에서, 병리 또는 병리학적 징후는 췌장(예를 들어, 섬 세포(islet cells))에 의한 인슐린 생성이 거의 없거나 전혀 없음, 인슐린 저항성 및 고혈당증 중 하나 이상을 포함한다. 다른 실시양태에서, 상기 대상체는 인슐린 관련 장애의 위험이 있다. 일반적으로, 위험이 있는 대상체는 인슐린 관련 장애에 대한 유전적 소인이 있거나, 섬 세포의 자가면역 파괴를 유발하는 바이러스(예를 들어, 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr virus), 콕삭키바이러스(coxsackievirus), 유행성 이하선염 바이러스(mumps virus) 또는 거대세포바이러스)에 노출되었거나, 비만이거나, 당뇨병 전 상태(정상 혈당 수치보다 높음)이거나 임신성 당뇨병이 있다.
인슐린 관련 장애의 치료 효능은 이러한 장애를 평가하는데 일반적으로 사용되는 다양한 평가에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, I형 및 II형 당뇨병은 당화 혈색소(glycated hemoglobin) 검사(A1C), 규칙적인 혈당 검사 및 공복 혈당 검사 중 하나 이상으로 평가할 수 있다. I형은 또한 혈액의 자가항체 및/또는 소변의 케톤을 검사함으로써 평가할 수 있다. II형은 또한 경구 당내성을 시험함으로써 평가할 수 있다.
급성 내독소혈증 및 패혈증
일 측면에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 대상체에서 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다의 임상적 및/또는 조직학적 및/또는 생화학적 및/또는 병리학적 징후(증상 및 징후 둘 다 포함)의 진전 또는 진행에 대항하여 치료, 방지 또는 예방 효과를 제공한다. 하나 이상의 실시양태에서, 상기 대상체는 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다의 위험이 있다.
급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다의 치료 효능은 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다를 평가하는데 일반적으로 사용되는 다양한 평가에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, LPS 또는 염증성 마커 수준의 감소를 측정할 수 있다. 이들 측정은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 수행될 수 있다.
상처 치유
상처 치유를 측정하는 다양한 방법이 있다. 선형 치수, 둘레 및 면적을 계산하기 위해 이미지를 찍는 경우가 많다. NIH에는 이미지에서 상처 부위를 측정할 수 있는 무료 프로그램인 Image J가 있다. 최종 치유 예후는 주변이 중심을 향해 이동하는 것에 기초한 초기 치유 속도로부터 추정될 수 있다. 이것은 많은 수학적 방정식을 사용하여 이루어지며, 가장 일반적인 것은 길만 방정식(Gilman's equation)이다. 육안 검사 이외에도, 상처 치유 측정은 분광법 또는 MRI에 의해서도 지원을 받을 수 있다. 예를 들어, 문헌(Dargaville 등, Biosensors Bioelectronics, 2013, 41:30-42, Tan 등, 2007, British J. Radiol. 80:939-48) 참조. 치유가 느리거나 부적절하면, 상처 가장자리의 생물검정을 통해 감염 및 악성 종양을 배제하거나 결정할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상처 치유의 가속 또는 개선은 IL-22로 치료된 상처 및 대조군 상처의 상처 봉합을 비교함으로써 평가할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상처 치유의 가속 또는 개선은 대조군보다 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상 또는 90% 이상 빠르거나 더 우수하다.
특정 측면에서, 본 발명은 상처에서의 활성 감염, 미생물 오염 또는 집락화의 존재 또는 부재하에 상처의 치유를 촉진/가속/개선하는 방법을 제공한다. 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)이 감염된 상처를 치료하거나 감염된 상처 치유를 촉진/가속/개선하기 위해 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)이 감염의 존재하에 상처를 치료하거나 상처 치유를 촉진/가속/개선하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)이 감염의 위험이 있는 미생물 오염 또는 집락화의 존재하에 상처를 치료하거나 상처 치유를 촉진/가속/개선하기 위해 사용될 수 있다. 추가의 실시양태에서, 상처 치유 치료가 필요한 환자는 당뇨병 환자일 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 상기 상처는 당뇨성 상처, 예를 들어, 당뇨성 족부 궤양이다. 일부 추가의 실시양태에서, 상기 상처는 감염된 당뇨성 상처, 예를 들어, 감염된 당뇨성 족부 궤양이다.
GVHD
일 측면에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 GVHD의 임상적 및/또는 조직학적 및/또는 생화학적 및/또는 병리학적 징후(증상 및 징후 둘 다 포함)의 진전에 대항하여 예방적 효과 또는 진행에 대항하여 치료적 효과를 제공할 수 있다. 예를 들어, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 유효량의 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 이의 조성물(약제학적 조성물 포함)을 이것이 필요한 대상체에 투여하는 것을 포함하는, GVHD의 치료 방법을 제공한다. 본원에 기술된 바와 같은 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 이의 조성물의 투여는 통증, 발진, 피부 두께, 황색 피부 또는 황달, 구강 건조 또는 궤양, 맛 이상, 안구 건조증, 감염 또는 체중 감소를 포함한 하나 이상의 GVHD 증상을 감소시킬 수 있다. IL-22 Fc 융합 단백질 또는 이의 조성물은, 예를 들어, 면역억제제(예를 들어, 사이클로스포린, 미코페놀레이트 모페틸(mycophenolate mofetil, MMF) 또는 타크롤리무스(tacrolimus)), mTOR 억제제(예를 들어, 시롤리무스(sirolimus) 또는 에베롤리무스(everolimus)), 화학요법제(예를 들어, 이마티닙(imatinib), 펜토스타틴(pentostatin), 메토트렉세이트(methotrexate) 또는 탈리도마이드(thalidomide)), TNF 길항제(예를 들어, 에타너셉트(etanercept)), 스테로이드(예를 들어, 프레드니솔론(prednisolone), 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 국소 스테로이드 또는 스테로이드 점안제), 광선 치료(예를 들어, 체외 광성분 채취술(extracorporeal photopheresis)), 하이드록시클로로퀸(hydroxychloroquine), 항섬유증제(예를 들어, 할로푸지논(halofuginone)), 단클론 항체(예를 들어, 알렘투주맙(alemtuzumab), 인플릭시맙(infliximab) 또는 리툭시맙(rituximab)) 또는 이들의 조합을 포함한 추가 GVHD 요법과 병용 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 치료에 단독으로 또는 다른 작용제와 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 하나 이상의 추가 치료제와 공동 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 추가 치료제는 메토트렉세이트, TNF 억제제, TNF 길항제, 메살라진(mesalazine), 스테로이드, 덱사메타손(dexamethasone), 아자티오프린(azathioprine) 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 염증 반응을 감소시키는 면역억제제이다. 염증 반응을 감소시키는 적합한 추가 치료제는 5-아미노살리실산(5-ASA), 머캅토퓨린(6-머캅토퓨린 또는 6-MP라고도 함) 또는 이들의 조합을 제한 없이 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 IBD의 치료를 위해 염증 반응을 감소시키는 하나 이상의 추가 치료제(예를 들어, 5-ASA, 6-MP 또는 TNF 길항제)와 공동 투여될 수 있다. 다른 특정 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 IBD의 치료를 위해 에트롤리주맙(etrolizumab)과 같은 인테그린 길항제와 공동 투여될 수 있다. 일 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 IL-22 작용제와 병용된다.
만성 상처 치유의 가속을 위해, 예컨대 당뇨성 족부 궤양의 치료를 위해 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)의 투여는 하나 이상의 추가 상처 치유제와 병용될 수 있다. 적합한 추가 상처 치유제는 성장 인자(예를 들어, EGF, FGF, IGF, PDGF, TGF 및 VEGF), 신경 성장 인자(nerve growth factor, NGF), 혈관신생 인자(예를 들어, HGF, TNF-α, 안지오게닌, IL-8, 안지오포이에틴 1 및 2, Tie-2, 인테그린 α5, 매트릭스 메탈로프로테이나제, 산화질소 및 COX-2), 혈소판 유래 성장 인자(platelet derived growth factor, PDGF) 패밀리의 구성원(예를 들어, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C 및 PDGF-D), 인슐린 성장 인자(insulin growth factor, IGF) 패밀리의 구성원(예를 들어, IGF-I 및 IGF-II), 형질전환 성장 인자(transforming growth factor, TGF) 패밀리의 구성원(예를 들어, TGF-α 및 TGF-β) 및 동화작용 산소(anabolic oxygen)(진공 요법)를 제한 없이 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 본원에 기재된 하나 이상의 추가 상처 치유제 및/또는 국소 투여에 사용하기에 적합한 하나 이상의 항균제 또는 항생제와 공동 투여될 수 있다. 예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함된 WO 2006/138468 참조. 이러한 실시양태에서, 상기 항생제는 은 설파디아진(silver sulfadiazine), 즉 실바덴(silvadeen)을 제한 없이 포함하는 황 항생제일 수 있다. 공동 투여되는 하나 이상의 추가 약제는 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)과 동시에, 교대로 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
추가의 예시적인 실시양태에서, 표적이 심혈관 질환 또는 병태 또는 대사증후군의 예방 또는 치료라면, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)의 투여는 스타틴(예를 들어, 로바스타틴(lovastatin), 로수바스타틴(rosuvastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토르바스타틴(atorvastatin), 프라바스타틴(pravastatin) 및 심바스타틴(simvastatin)), 담즙산 결합 수지(콜레스티폴(colestipol), 콜레스티라민 수크로스(cholestyramine sucrose) 및 콜레세벨람(colesevelam)), 에제티미브(ezetimibe) 또는 에제티미브-심바스타틴 조합과 같은 콜레스테롤 저하제; 항혈소판제, 예컨대 사이클로옥시게나제 억제제(예를 들어, 아스피린), 아데노신 디포스페이트(ADP) 수용체 억제제(예를 들어, 클로피도그렐(clopidogrel), 프라수그렐(prasugrel), 티카그렐로(ticagrelor) 및 티클로피딘(ticlopidine)), 포스포디에스테라제 억제제(예를 들어, 실로스타졸(cilostazol)), 당단백질 IIB/IIIA 억제제(예를 들어, 엡시시마브(abciximab), 엡티피바티드(eptifibatide) 및 티로피반(tirofiban)), 아데노신 재흡수 억제제(예를 들어, 디피리다몰(dipyridamole)), 트롬복산 억제제(예를 들어, 트롬복산 신타제 억제제, 트롬복산 수용체 길항제 및 테루트로반(terutroban)); 베타 차단제, 예컨대 알프레놀롤(alprenolol), 부신돌롤(bucindolol), 카테올롤(carteolol), 카베딜롤(carvedilol), 라베탈롤(labetalol), 나돌롤(nadolol), 옥스프레놀롤(oxprenolol), 펜부톨롤(penbutolol), 핀돌롤(pindolol), 프로프라놀롤(propranolol), 소탈롤(sotalol), 티몰롤(timolol), 두충(eucommia bark), 아세부톨롤(acebutolol), 아테놀롤(atenolol), 베탁솔롤(betaxolol), 비소프롤롤(bisoprolol), 셀리프롤롤(celiprolol), 에스몰롤(esmolol), 메토프롤롤(metoprolol), 네비볼롤(nebivolol), 부탁사민(butaxamine), ICI-118,551 및 SR 59230A; 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제, 예컨대 캅토프릴(captopril), 조페노프릴(zofenopril), 디카복실레이트 함유 제제(예를 들어, 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril), 퀴나프릴(quinapril), 페린도프릴(perindopril), 리시노프릴(lisinopril), 베나제프릴(benazepril), 이미다프릴(imidapril) 및 조페노프릴(zofenopril)), 포스포네이트 함유 제제(예를 들어, 포시노프릴(fosinopril)), 카소키닌스(casokinins), 락토키닌스(lactokinins), 락토트리펩티드(예를 들어, 프로바이오틱 락토바실러스 헬베티쿠스(probiotic Lactobacillus helveticus)에 의해 생산되거나 카제인으로부터 유래한 Val-Pro-Pro 및 Ile-Pro-Pro); 칼슘 채널 차단제, 예컨대 디하이드로피리딘(예를 들어, 암로디핀(amlodipine), 아라니디핀(aranidipine), 아젤니디핀(azelnidipine), 바니디핀(barnidipine), 베니디핀(benidipine), 실니디핀(cilnidipine), 클레비디핀(clevidipine), 이스라디핀(isradipine), 에포니디핀(efonidipine), 펠로디핀(felodipine), 락시디핀(lacidipine), 레카니디핀(lercanidipine), 마니디핀(manidipine), 니카디핀(nicardipine), 니페디핀(nifedipine), 닐바디핀(nilvadipine), 니모디핀(nimodipine), 니솔디핀(nisoldipine), 니트렌디핀(nitrendipine) 및 프라니디핀(pranidipine)), 페닐알킬아민(예를 들어, 베라파밀(verapamil)), 벤조티아제핀(예를 들어, 딜티아젬(diltiazem)), 미베프라딜(mibefradil), 베프리딜(bepridil), 플루스피릴렌(fluspirilene) 및 펜디린(fendiline); 이뇨제, 예컨대 고효능 루프 이뇨제(high ceiling loop diuretics)(예를 들어, 푸로세미드(furosemide), 에타크릴산(ethacrynic acid), 토세미드(torsemide) 및 부메타니드(bumetanide)), 티아지드(예를 들어, 하이드로클로로티아지드산(hydrochlorothiazide acid)), 탄산 탈수효소 억제제(예를 들어, 아세타졸아미드(acetazolamide) 및 메타졸아미드(methazolamide)), 칼륨 보존 이뇨제(potassium-sparing diuretics)(예를 들어, 알도스테론 길항제: 스피로놀락톤(spironolactone), 및 상피 나트륨 채널 차단제: 아밀로라이드 및 트리암테렌(triamterene)), 및 칼슘 보존 이뇨제, 및 상기 중 임의의 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체의 투여와 병용되거나 보충될 수 있다.
인슐린 관련 장애 또는 대사증후군의 경우, 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)의 투여는 다양한 치료제의 투여와 병용되거나 보충될 수 있다. I형 당뇨병(인슐린 의존성 당뇨병 또는 IDDM)의 경우, 본원에 기재된 IL-22 Fc 융합 단백질은 속효성 인슐린(regular insulin) 대체 요법(신속 작용 인슐린 및 지속성 인슐린 포함), 면역억제 치료, 췌도 이식(islet transplantation) 및 줄기세포 치료 중 하나 이상과 병용될 수 있다. 일 실시양태에서, 속효성 인슐린 대체 요법은 속효성 인슐린(예를 들어, HUMULIN R®, NOVOLIN R®), 인슐린 아이소페인(insulin isophane)(예를 들어, HUMULIN N®, NOVOLIN N®), 인슐린 라이스프로(insulin lispro)(예를 들어, HUMALOG®), 인슐린 아스파트(insulin aspart)(예를 들어, NOVOLOG®), 인슐린 글라진(insulin glargine)(예를 들어, LANTUS®) 및 인슐린 디터머(insulin detemir)(예를 들어, LEVEMIR®)를 제한 없이 포함한다. 다른 실시양태에서, 인슐린 대체 요법은 프람린타이드(pramlintide)(SYMLIN®)를 추가로 포함한다.
II형 당뇨병(인슐린 비의존성 당뇨병 또는 NIDDM) 또는 대사증후군의 경우, 본원에 기술된 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 (상기 논의된 바와 같은) 인슐린 대체 요법, 간에 의한 글루코스 생성을 낮추는 약제, 인슐린의 췌장 생성 및 방출을 자극하는 약제, 탄수화물의 효소적 분해를 차단하는 약제 또는 인슐린 감수성을 증가시키는 약제 중 하나 이상과 병용될 수 있다. 일 실시양태에서, 글루코스 생성을 낮추는 약제는 메트포르민(metformin)(예를 들어, GLUCOPHAGE® 및 GLUMETZA®)이다. 다른 실시양태에서, 인슐린의 췌장 생성 및 방출을 자극하는 약제는 글리피지드(glipizide)(예를 들어, GLUCOTROL® 및 GLUCOTROL XL®), 글리부리드(glyburide)(예를 들어, DIABETA® 및 GLYNASE®) 또는 글리메피리드(glimepiride)(예를 들어, AMARYL®)이다. 다른 일 실시양태에서, 탄수화물의 효소적 분해를 차단하거나 인슐린 감수성을 증가시키는 약제는 피오글리타존(pioglitazone)(예를 들어, Actos)이다. 다른 실시양태에서, IL-22 Fc 융합 단백질은 메트포르민에 대한 다음 대체물 중 하나와 병용될 수 있다: 시타글립틴(sitagliptin)(예를 들어, JANUVIA®), 삭사글립틴(saxagliptin)(예를 들어, ONGLYZA®), 레파글리니드(repaglinide)(예를 들어, PRANDIN®) 및 나테글리니드(nateglinide)(예를 들어, STARLIX®), 엑세나티드(exenatide)(예를 들어, BYETTA®) 및 리라글루티드(liraglutide)(예를 들어, VICTOZA®). 다른 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 경구 저혈당제, 예를 들어, 설포닐우레아와 병용될 수 있다.
임신성 당뇨병 또는 대사증후군의 경우, 본원에 기술된 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 경구 혈당 조절 약물과 병용될 수 있다. 일 실시양태에서, 상기 약물은 글리부리드이다.
병용 요법은 "시너지(synergy)"를 제공하고 "상승작용(synergistic)"을 입증할 수 있는데, 즉 함께 사용된 활성 성분이 그 화합물을 개별적으로 사용함으로써 초래되는 효과의 합보다 클 때 달성되는 효과이다. 상승작용 효과는 활성 성분이 (1) 조합된 단위 투여 제제로 공동 제제화되고 공시에 투여 또는 전달될 때; (2) 교대로 또는 동시에 개별 제제로 전달될 때; 또는 (3) 다른 요법에 의해 달성될 수 있다. 교대 요법으로 전달될 때, 화합물이, 예를 들어, 별도 주사기의 다른 주사로 순차적으로 투여되거나 전달될 때 상승작용 효과가 달성될 수 있다. 일반적으로, 교대 요법 동안, 각 활성 성분의 유효량은 순차적으로, 즉 연속적으로 투여되는 반면, 병용 요법에서는 2종 이상의 활성 성분의 유효량이 함께 투여된다.
위에 언급된 이러한 병용 요법은 조합 투여(2종 이상의 치료제가 동일한 또는 별도의 제제에 포함된 경우) 및 개별 투여를 포함하고, 이 경우 본 발명의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합을 포함하는 약제학적 조성물)은 추가 치료제 또는 약제의 투여 전에, 투여와 동시에 및/또는 투여 후에 투여할 수 있다. 일 실시양태에서, 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합을 포함하는 약제학적 조성물)의 투여 및 추가 치료제의 투여는 서로 약 1개월 내에, 또는 약 1, 2 또는 3주 내에, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일 내에 한다.
본 발명의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물) (및 임의의 추가 치료제)은 비경구, 폐 내, 국소 및 비강을 포함한 임의의 적합한 수단에 의해, 및 원한다면 국소 치료를 위해 병변 내 투여에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하 투여가 포함된다. 투여는 어느 정도는 투여가 짧은 동안이지 만성인지에 따라 임의의 적합한 경로, 예를 들어, 정맥 내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의한 것일 수 있다. 단일 투여 또는 다양한 시점에 걸친 다중 투여, 일시 투여(bolus administration) 및 펄스 주입을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
본 발명의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 우수한 의료 행위에 일치하는 방식으로 제제화, 투약 및 투여될 것이다. 이러한 맥락에서 고려할 요소는 치료되는 특정 장애, 치료되는 특정 포유동물, 개별 환자의 임상 상태, 장애의 원인, 약제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄 및 의료 종사자에게 알려진 기타 요인을 포함한다. 상기 조성물 (예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 해당 장애를 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 약제와 함께 제제화될 필요는 없지만, 선택적으로 제제화된다. 이러한 다른 약제의 유효량은 제제에 존재하는 융합 단백질의 양, 장애 또는 치료의 유형 및 상기 논의된 다른 인자에 의존한다. 이들은 일반적으로 본원에 기재된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%로, 또는 임의의 투여량으로 및 경험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 경로로 사용된다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)의 적절한 투여량(단독으로 사용되거나 하나 이상의 다른 추가 치료제와 병용되는 경우)은 치료될 질환의 유형, Fc 영역의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 융합 단백질이 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지, 이전 요법, 환자의 임상 이력 및 IL-22에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존할 것이다. 상기 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)은 한 번에 또는 일련의 치료를 통해 환자에게 적합하게 투여된다. 질병의 유형과 중증도에 따라 약 1㎍/㎏ 내지 15㎎/㎏(예를 들어, 0.1㎎/㎏-10㎎/㎏) 또는 약 0.1㎍/㎏ 내지 1.5㎎/㎏(예를 들어, 0.01㎎/㎏-1㎎/㎏)의 IL-22 Fc 융합 단백질이, 예를 들어, 1회 이상의 개별 투여인지 또는 연속 주입에 의한 것인지에 따라 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량일 수 있다. 하나의 전형적인 일일 투여량은 상기 언급된 인자에 따라 약 1㎍/㎏ 내지 100㎎/㎏ 이상일 수 있다. 수일 또는 그 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 병태에 따라 치료는 질환 증상의 바람직한 억제가 발생할 때까지 일반적으로 지속될 것이다. IL-22 Fc 융합 단백질의 하나의 예시적인 투여량은 약 0.05㎎/㎏ 내지 약 10㎎/㎏의 범위일 것이다. 특정의 다른 투여량은 약 0.01㎎/㎏ 내지 약 10㎎/㎏, 약 0.02㎎/㎏ 내지 약 10㎎/㎏, 및 약 0.05㎎/㎏ 내지 약 10㎎/㎏의 범위를 포함한다. 따라서, 약 0.01㎎/㎏, 0.02㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.04㎎/㎏, 0.05㎎/㎏, 0.06㎎/㎏, 0.07㎎/㎏, 0.08㎎/㎏, 0.09㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.2㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 0.4㎎/㎏, 0.5㎎/㎏, 0.6㎎/㎏, 0.7㎎/㎏, 0.8㎎/㎏, 0.9㎎/㎏, 1.0㎎/㎏, 2.0㎎/㎏, 3.0㎎/㎏, 4.0㎎/㎏, 5㎎/㎏, 6㎎/㎏, 7㎎/㎏, 8㎎/㎏, 9㎎/㎏ 또는 10㎎/㎏ (또는 이들의 임의의 조합) 중 하나 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 국소 상처 치유를 위해, 약 0.001㎎/㎠ 내지 약 10㎎/㎠ 상처 면적, 약 0.05㎎/㎠ 내지 약 5㎎/㎠ 상처 면적, 약 0.01㎎/㎠ 내지 약 1㎎/㎠ 상처 면적, 약 0.05㎎/㎠ 내지 약 0.5㎎/㎠ 상처 면적, 약 0.01㎎/㎠ 내지 약 0.5㎎/㎠ 상처 면적, 약 0.05㎎/㎠ 내지 약 0.2㎎/㎠ 상처 면적 또는 약 0.1㎎/㎠ 내지 약 0.5㎎/㎠ 상처 면적 (또는 이들의 임의의 조합) 중 하나 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 약 0.01㎎/㎠, 0.02㎎/㎠, 0.03㎎/㎠, 0.04㎎/㎠, 0.05㎎/㎠, 0.06㎎/㎠, 0.07㎎/㎠, 0.08㎎/㎠, 0.09㎎/㎠, 0.1㎎/㎠, 0.15㎎/㎠, 0.2㎎/㎠, 0.25㎎/㎠, 0.3㎎/㎠, 0.4㎎/㎠ 또는 0.5㎎/㎠ 상처 면적 중 하나 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어, 매주 또는 3주마다(예를 들어, 환자가 약 2회 내지 약 20회, 또는 예를 들어, 약 6회 용량의 IL-22 Fc 융합 단백질을 수용하도록) 투여될 수 있다. 초기에 더 높은 로딩 용량에 이어 1회 이상의 더 낮은 용량이 투여될 수 있다. 그러나 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 기존의 기술 및 분석에 의해 쉽게 모니터링된다.
상기 제제 또는 치료 방법 중 임의의 것이 IL-22 Fc 융합 단백질 대신에 또는 이에 추가하여 본 발명의 접합체를 사용하여 수행될 수 있는 것으로 이해된다.
F. 제조품
본 발명의 다른 측면에서, 위에 기술된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 함유하는 제조품이 제공된다. 상기 제조품은 본원에 제공된 임의의 조성물(예를 들어, IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물)을 포함할 수 있다. 상기 제조품은 용기와 용기 상의 라벨 또는 용기와 관련된 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등을 포함한다. 상기 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 상기 용기는 조성물만 또는 병태를 치료, 예방 및/또는 진단하기에 효과적인 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유하며, 무균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 상기 용기는 정맥 내 용액 백 또는 피하 주사 바늘에 의해 마개가 뚫릴 수 있는 바이알일 수 있다). 일부 실시양태에서, 상기 조성물에서 하나 이상의 활성제는 IL-22 Fc 융합 단백질이다. 상기 라벨 또는 패키지 삽입물은 상기 조성물이 선택된 병태를 치료하는데 사용됨을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 상기 제조품 또는 상기 용기는 차광된다. 상기 제조품은 본원에 기재된 임의의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 제조품은 용적이 약 1mL 이상, 예를 들어, 약 1mL, 약 2mL, 약 3mL, 약 4mL, 약 5mL, 약 6mL, 약 7mL, 약 8mL, 약 9mL, 약 10mL 또는 그 이상인 바이알을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 용기는 용적이 약 2mL인 바이알이다. 일부 실시양태에서, 상기 바이알은 일회용이다. 일부 실시양태에서, 상기 바이알은 약 1㎎, 약 2㎎, 약 3㎎, 약 4㎎, 약 5㎎, 약 6㎎, 약 7㎎, 약 8㎎, 약 9㎎, 약 10㎎, 약 11㎎, 약 12㎎, 약 13㎎, 약 14㎎, 약 15㎎, 약 16㎎, 약 17㎎, 약 18㎎, 약 19㎎, 약 20㎎ 또는 그 이상의 IL-22 Fc 융합 단백질을 함유한다. 일부 실시양태에서, 상기 바이알은 약 10㎎의 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 바이알은 10mM 인산나트륨, 5mM 메티오닌, 240mM 수크로스, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1로 제제화된 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 용기 밀폐 시스템은 유리 바이알, 마개 및 캡 중 하나 이상 또는 전부를 포함한다.
또한, 상기 제조품은 (a) IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 본 발명의 조성물이 함유된 제1 용기; 및 (b) 추가 치료제를 포함하는 조성물이 함유된 제2 용기를 포함할 수 있다. 본 발명의 이 실시양태에서 상기 제조품은 상기 조성물이 특정 병태(예를 들어, IBD, 예를 들어, UC 또는 크론병) 또는 본원에 기술된 임의의 다른 장애를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 상기 제조품은 약제학적으로 허용되는 완충제, 예컨대 주사용 정균수(bacteriostatic water for injection, BWFI), 포스페이트 완충 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 제조품은 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 포함한 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
상기 제조품 중 임의의 것이 IL-22 Fc 융합 단백질 대신에 또는 이에 추가하여 본 발명의 접합체를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
실시예
다음은 본 발명의 방법 및 조성물의 예이다. 위에 제공된 일반적인 설명을 고려하여 다양한 다른 실시양태가 실시될 수 있으며, 실시예는 청구범위의 범위를 제한하려는 것이 아님을 이해해야 한다.
실시예 1: IL-22 Fc 융합 단백질 안정성 연구
이 연구의 목적은 IL-22 Fc 융합 단백질 안정성, 및 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 5mM 메티오닌, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20(PS20), pH 7.1의 액체 제제의 제조 가능성을 조사하는 것이었다. -70℃, -20℃ 및 5℃의 의도된 저장 온도, 및 25℃, 30℃ 및 40℃의 스트레스 온도에서 전체 pH 스크린을 pH 5.5-7.6에서 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질에 대해 수행하였다. 결과는 pH 7.1에서의 제제가 색상, 외관 및 선명도(CAC), 농도, pH, 크기 배제-고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC), DSC, 이미지 모세관 등전점 전기영동(ICIEF) 및 효능에 의해 적합하다는 것을 입증하였다.
10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질과 0.0%, 0.01%, 0.02% 및 0.04%(w/v) 폴리소르베이트 20의 교반 연구를 완료하여 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물을 교반 스트레스로부터 보호하기 위한 적절한 폴리소르베이트 20 농도 사양을 결정하였다. 0.01% 폴리소르베이트 20이 IL-22 Fc 융합 단백질에 적합한 것으로 결정되었지만, 표적 권장 사항은 사양 범위를 설명하기 위해 0.02%였다. 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 제제 스크린에 추가하여, 상술된 동일한 제제에서 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질에 대한 냉동-해동 안정성 연구를 완료하였다. 1주 동안 -20℃ 및 5℃에서 3회의 냉동-해동 사이클로 저장된 IL-22 Fc 융합 단백질의 SE-HPLC에 의한 유의한 변화는 없었다. 주요 수용체 결합 메티오닌의 산화 가능성 및 첨가된 메티오닌의 보호 값을 평가하기 위해 메티오닌의 부재 또는 메티오닌의 존재(3mM, 3.5mM 및 5mM)하에 AAPH 스트레스 안정성 연구를 수행하였다. 이들 연구는 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 5mM 메티오닌, 0.02% 폴리소르베이트 20, pH 7.1을 함유하는 약제학적 조성물에 대해 10㎎/mL로 제제화된 IL-22 Fc 융합 단백질의 물리적 및 화학적 안정성이 약제학적 조성물로서의 용도에 허용되고 IL-22 Fc 융합 단백질의 제조가 이 제제에서 지원될 수 있음을 입증한다.
재료 및 방법
재료
10mM 인산나트륨 및 pH 5.5에서 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 출발 물질을 연구 개시 전에 5℃에서 저장하였다. 이 물질을 제제 스크린 1-3 및 교반 및 냉동/해동 연구에 사용하였다. 예비 AAPH 연구를 분석 표준(메티오닌 없음)으로 수행하였고, 후속 연구를 0mM, 3mM, 3.5mM 및 5mM 메티오닌으로 제제화된 IL-22 Fc 융합 단백질로 수행하였다.
IL-22 Fc 융합 단백질 제제 스크린 1
20mM 히스티딘 아세테이트, 240mM 수크로스, pH 5.5, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20(PS20) 중 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질의 초기 약제학적 조성물 제제에서의 안정성을 예비 제제 스크린에 대해 평가하였다. 재료를 멸균 여과하고 1.0mL를 층류 후드(laminar flow hood)에서 오토클레이빙된 2cc Forma Vitrum 바이알에 무균성으로 채웠다. 바이알을 Daikyo 13㎜ 지름 마개로 막고, 알루미늄 플립-탑 실(flip-top seals)로 밀봉하고, -20℃, 5℃, 25℃ 및 40℃에서 똑바로 세워 저장하였다. 샘플을 SE-HPLC 및 DSC로 분석하였다.
IL-22 Fc 융합 단백질 제제 스크린 2
Thermo Scientific 투석 카세트를 사용하여 10㎎/mL의 출발 물질을 각각 10mM 히스티딘 아세테이트 및 240mM 수크로스, pH 5.5, pH 6.0, pH 6.5 및 pH 7.0에 대해 투석하였다. 투석 후 PS20을 0.02%(w/v)의 최종 농도로 첨가하였다. 투석 및 희석 단계 후 단백질 농도를 용적 측정하였다. 제제 스크린을 설정하기 위해, pH 5.5, 6.0, pH 6.5 및 pH 7.0에서 재료를 멸균 여과하고, 1.0mL를 층류 후드에서 오토클레이빙된 2cc Forma Vitrum 바이알에 무균성으로 채웠다. 바이알을 Daikyo 13㎜ 지름 마개로 막고, 알루미늄 플립-탑 실로 밀봉하고, -20℃, 5℃, 25℃ 및 30℃에서 똑바로 세워 저장하였다. 이 스크린의 개요는 표 1에 나타낸다.
[표 1]
Figure pct00003
IL-22 Fc 융합 단백질 제제 스크린 3
Thermo Scientific 투석 카세트를 사용하여 10㎎/mL의 출발 물질을 각각 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 0.02%(w/v) PS20, pH 6.5, pH 7.0, pH 7.3, 7.6 및 20mM 트리스(Tris) pH 7.3에 대해 투석하였다. 투석 및 희석 단계 후 단백질 농도를 용적 측정하였다. 제제 스크린을 설정하기 위해, pH 6.5, pH 7.0, pH 7.3, pH 7.6 및 트리스 pH 7.3의 재료를 멸균 여과하고 1.0mL를 층류 후드에서 오토클레이빙된 2cc Forma Vitrum 바이알에 무균성으로 채웠다. 바이알을 Daikyo 13㎜ 지름 마개로 막고, 알루미늄 플립-탑 실로 밀봉하고, -20℃, 5℃, 25℃ 및 30℃에서 똑바로 세워 저장하였다. 이 스크린의 개요는 표 2에 나타낸다.
[표 2]
Figure pct00004
IL-22 Fc 융합 단백질 교반 연구
다양한 수준의 PS20으로 실온에서 교반 연구를 수행하였다. 10㎎/mL의 출발 물질을 0.0%, 0.01%, 0.02% 및 0.04%(w/v) PS20을 함유하는 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, pH 7.1에서 제제화하였다. 단백질 제형을 멸균 여과하고 1.0mL를 상기한 바와 같이 2cc 바이알에 채웠다. 바이알을 수평 방향으로 놓고, 실온에서 24시간 동안 분당 50사이클의 속도(모터 속도 70)로 벤치 탑 셰이커(Bench Top Shaker)를 사용하여 연속 진탕시켰다. 대조군 샘플(0.0% PS20)을 흔들지 않고 실온에서 교반된 샘플 옆에 놓았다.
IL-22 Fc 융합 단백질 냉동-해동 안정성 연구
바이알에서 냉동-해동된 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 안정성을 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 0.02%(w/v) PS20을 함유하는 pH 6.5, 7.0, 7.3 및 7.6의 제제, 및 pH 7.3의 20mM 트리스 완충제를 제외하고는 동일한 부형제를 함유하는 하나의 제제에 대해 평가하였다. 단백질 제제를 멸균 여과하고 1.0mL를 상기한 바와 같이 2cc 바이알에 채웠다. 바이알을 -20℃에서 T = 0 및 1주 동안 두었다. 바이알을 총 3회 냉동시키고 실온까지 해동시켰다. T = 0 및 세 번째 냉동-해동 사이클만 분석되었다.
제제 내의 메티오닌 수준을 측정하기 위한 AAPH 스트레스 안정성 연구
이 연구의 목적은 검정 개발을 지원하고 IL-22 Fc 융합 단백질의 산화를 탐색하기 위해 2,2'-아조비스-2-메틸-프로판이미드아미드, 디하이드로클로라이드(AAPH)를 사용하여 분해된 샘플을 생성하는 것이었다. 0mM, 3mM 및 3.5mM의 메티오닌을 함유하는 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 0.02%(w/v) PS20, pH 7.1에서 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물 제제에 AAPH 스트레스를 가하였다. 샘플을 40℃에서 24시간 동안 1mM AAPH와 함께 배양하였다. AAPH 스트레스의 완료시, 샘플을 제제 완충제 내로 완충제 교환하고, 분취하고, 후속 분석을 위해 -70℃에서 냉동시켰다. 상기 샘플을 이전에 동일한 방식으로 스트레스를 받은 IL-22 Fc 융합 단백질, 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 0.02% PS20, pH 7.1, 5mM 메티오닌과 비교하였다.
검정
색상, 모양 및 선명도
샘플의 색상, 외관 및 선명도는 흑백 배경의 광 검사 스테이션을 사용하여 백색 형광등하에서 시각적으로 평가하였다.
pH
용액 pH는 Beckman Coulter 미세전극이 있는 SevenMulti Mettler Toledo pH 측정기를 사용하여 측정하였다. 시험 전에, pH 측정기 표준화를 수행하였다. pH 7.0 및 pH 4.0의 표준 용액을 보정에 사용하였다.
용적 단백질 농도(강도)
Agilent 8453을 사용하여 흡수에 의한 단백질 농도 또는 강도를 측정했다. 측정 전에, 샘플을 각각의 제제 완충제로 ~ 0.5㎎/mL로 용적 희석하였다. 경로 길이가 1.0㎝인 석영 큐벳에서 흡수를 측정하였다. 기기를 각각의 제제 완충제로 블랭킹하였다. 280nm(Amax) 및 320nm(A320)에서의 흡광도 및 0.98(㎎/mL)-1㎝-1의 흡광 계수(ε)를 사용하여 단백질 농도를 계산하였다.
Figure pct00005
크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC)
크기 배제 크로마토그래피를 Agilent 1100 HPLC로 수행하였다. 주변 온도에서 TOSOH Bioscience TSKgel G3000SWXL 30㎝ 칼럼에서 분리를 수행하였다. 이동상을 0.5mL/분의 유량으로 유지하였다. 샘플을 제제 스크린 1의 경우 희석하지 않고 주입하였지만, 후속 스크린을 위해 주입 전에 0.20M 인산칼륨, 0.25M 염화칼륨, pH 6.2±0.1의 이동상으로 2㎎/mL로 희석하였다. 샘플당 50㎍의 단백질의 주입을 280nm에서 검출하였다. 각 샘플 실행 시간은 30분이었다. 시약 블랭크를 각각의 제제 완충제로 수행하였다. 피크 영역은 기준선에 대해 통합하였다.
이미지 모세관 등전점 전기영동(ICIEF)
PrinCE 미량주입기(microinjector) 및 100㎛×5㎝의 플루오로카본 코팅된 모세관 카트리지(ProteinSimple)가 있는 iCE280 분석기(ProteinSimple)로 전하 변형 분포(charge variant distribution)를 평가하였다. 중쇄 C-말단 라이신 잔기를 제거하기 위해, 카복시펩티다제 B(CpB)를 1:1000(w/w)의 효소 대 기재 비율로 희석하는 단계 후 각 샘플에 첨가하였다. 또한, 시알리다제(sialidase) A를 첨가하여 시알산을 제거하였다. CpB 및 시알리다제 A를 첨가한 후, 샘플을 37℃에서 10분 동안 배양하였다. 배양된 샘플을 700㎕의 1% 메틸 셀룰로오스, 1218㎕의 정제수, 8㎕의 Pharmalyte 8-10.5, 55㎕의 Pharmalyte 5-8, 15㎕의 pI 마커 5.12, 4㎕의 pI 마커 7.05의 혼합물로 구성된 양쪽성 용액과 혼합하였다. 0.1% 메틸 셀룰로오스 중에서, 1분 동안 1500V의 전위, 이어서 5분 동안 3000V의 전위를 80mM 인산의 애노드액(anolyte) 및 100mM 수산화나트륨의 캐소드액(catholyte)으로 도입함으로써 샘플을 포커싱하였다. 280nm 자외선(UV) 광을 모세관을 통해 전하 결합 장치 디지털 카메라의 렌즈에 통과시킴으로써 포커싱된 전하 변형체의 이미지를 얻었다.
시차 주사 열량 측정(DSC) 및 고유 트립토판 형광에 의한 열 안정성
DSC는 샘플의 온도를 높이는 데 필요한 열의 양의 차이를 온도의 함수로 선형적으로 측정하는 열분석 기술이다. 융점 Tm 및 융해 개시 온도는 열 전개에 대한 단백질의 민감성을 측정할 수 있다. 융합 분자는 전장 단클론 항체보다 훨씬 낮은 온도에서 용융된다. 따라서, DSC는 열 안정성에 대한 pH의 영향을 신속하게 평가하여 추가로 제제 개발을 하는데 사용되었다. IL-22 Fc 융합 단백질을 상이한 pH 제제 완충제(pH 5.5-7.6)에 1㎎/mL로 희석하였다. 샘플을 96웰 플레이트에 로딩하고, 상응하는 pH의 제제 완충제 500㎕를 함유하는 웰로 교대하였다. 기기는 15-95℃의 온도 범위에 걸쳐 각각의 샘플-완충제 쌍을 1℃/분의 속도로 스캔했다. Origin 소프트웨어(Originlab, Northampton, MA)를 사용하여 데이터 분석을 수행하였다.
고유 트립토판 형광 방출 스펙트럼을 사용한 열 변성 연구를 Thermo Scientific NESLAB RTE 7 순환 수조와 함께 Horiba Jobin Yvon Fluoromax-4 분광계를 사용하여 수행하였다. 295nm에서 여기시 300 내지 450nm에서 트립토판 방출 스펙트럼을 수집하였다. 대략 5 내지 65℃에서 2℃ 간격으로 측정을 반복하였다. 350nm에서의 형광 강도(λmax)를 모니터링하여 열 램프 전체에 걸쳐 피크 형광의 변화를 평가하였다. 수득된 모든 스펙트럼의 주요 성분 분석을 사용하여 비접힘 곡선(unfolding curve)을 생성하였고 Tonset을 비접힘 곡선에서 기울기의 첫 번째 변화로 정의하였다.
트립신 펩티드 맵(메티오닌 산화)
메티오닌의 산화를 평가하기 위해 고해상도 액체 크로마토그래피 탠덤 질량 분석법(LC-MS-MS)에 의한 펩티드 맵 분석을 사용하였다. IL-22 Fc 융합 펩티드 샘플을 구아니디늄 하이드로클로라이드를 이용한 변성 조건에 적용한 후, 디티오트레이톨(dithiothreitol, DTT)로 환원시키고 요오도아세트산(iodoacetic acid, IAA)으로 시스테인의 카복시메틸화를 수행하였다. 이어서 환원되고 카복시메틸화된 샘플을 트립신 효소로 37℃에서 4시간 동안 분해하여 트립신 펩티드를 생성하였다. 생성된 트립신 펩티드를 Thermo OrbiTrap Elite III MS-MS 가능 질량 분석기에 연결된 Agilent 1200 RP HPLC로 분리했다. 분리된 트립신 펩티드 혼합물의 데이터 분석을 Thermo Xcalibur 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. IL-22 Fc 융합 단백질에는 8개의 메티오닌 함유 트립신 펩티드가 있다. 고유 메티오닌 함유 트립신 펩티드의 질량에 대한 추출된 이온 크로마토그램(Extracted ion chromatograms, EIC)을 산화된 메티오닌 함유 펩티드 질량의 EIC와 비교하였다(관찰되는 경우). 각 트립신 펩티드에 대한 메티오닌 산화는 전체 트립신(고유 + 산화) 펩티드 비율에 대한 산화된 트립신 펩티드 비율의 백분율로 보고된다.
효능 검정
IL-22 Fc 융합 단백질 효능 검정은 IL22-R1a 세포외 도메인(extracellular domain, ECD)에 결합하는 IL-22 Fc 융합 단백질의 능력을 측정한다. 상기 검정에서, 다양한 농도의 IL-22 Fc 융합 단백질 기준 표준(Reference Standard), 대조군 및 샘플을 IL22-R1a ECD로 코팅된 96웰 플레이트에 첨가하였다. 결합한 IL-22 Fc 융합 단백질을 염소 항-인간 IgG HRP 항체 및 테트라메틸벤지딘 기질 용액으로 검출하였다. 광학 밀도(optical density, OD) 단위로 표현된 결과를 IL-22 Fc 융합 단백질 농도에 대해 플롯팅하고, 평행 곡선 프로그램을 사용하여 기준 표준에 대한 IL-22 Fc 융합 단백질 샘플(들)의 측정된 효능을 계산하였다.
보정된 상대 효능(relative potency) 값을 결정하기 위해: 먼저, 샘플에 대한 SA 값(x)을 입력하고 상관관계 선(correlation line)의 방정식(y = 178.25 - 10.604x)을 풀어서 샘플의 예측된 상대 효능(y)을 결정하였다. 그런 다음 예측된 상대 효능(y)을 100에서 뺐다. 그런 다음 이 값을 측정된 상대 효능에 더하여 샘플의 보정된 상대 효능을 얻었다. 보정된 상대 효능 = 측정된 상대 효능 + (100 - y).
제어 시스템에서 SA에 특이적 분석 방법을 사용하여 샘플(들)의 SA 수준을 모니터링하고 제어하였다. SA 함량에 대한 제어 시스템의 허용 기준은 8-12mol/mol이다. 기준 표준의 SA 함량은 8mol/mol이며, SA에 대한 허용 기준의 가장 낮은 값이다. 따라서 오로지 SA와 효능 사이의 부적 상관관계(negative correlation)로 인해 SA 함량이 8mol/mol을 초과하는 샘플은 인위적으로 유력한 것처럼 보일 수 있다. 보정된 상대 효능 값을 생성하기 위해 상관관계 선을 사용하면 각 샘플의 SA 함량에 특이적 보정이 제공된다. 각 샘플에 대한 보정의 특이성은 효능에 대한 SA의 영향을 과도하게 보상할 수 있는 고정된 보정 값에 의해 가려질 수 있는 분자 변화를 검출하는 효능 검정 능력을 유지한다.
결과
IL-22 Fc 융합 단백질 제제 스크린 1
20mM 히스티딘 아세테이트, 240mM 수크로스, pH 5.5, 0.02%(w/v) PS20 중 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질을 함유하는 약제학적 조성물을 초기 시험으로서 사용하였다. 40℃에서 1주 후, SE-HPLC 분석에 의한 결과는 열 변성을 나타내는 매우 높은 분자량 종(very high molecular weight species, vHMWS)의 증가를 입증하였다(표 3 및 도 1). 이것은 IL-22 Fc 융합 단백질의 개시 용융 온도(Tm)의 DSC 측정에 의해 확인되었고, 대략 34℃였다(도 2a). 이는 투여 후 IL-22 Fc 융합 단백질의 물리적 안정성에 대한 우려로 이어졌다. 따라서, pH 7.4의 포스페이트 완충 식염수(PBS) 중의 IL-22 Fc 융합 단백질에 대해 Tm을 측정하여 생리학적 조건을 모방하였다(도 2b).
[표 3]
Figure pct00006
IL-22 Fc 융합 단백질 제제 스크린 2
pH 7.4의 PBS를 사용한 DSC 결과는 예기치 않게 IL-22 Fc 융합 단백질이 더 높은 pH에서 더 우수한 열 안정성을 가질 수 있음을 시사하였다. 이로 인해 pH 5.5, pH 6.0, pH 6.5 및 pH 7.0에서 10mM 히스티딘 아세테이트로 제제화된 물질로 DSC의 2차 라운드가 발생하였다. 형광 모니터링(Trp 형광)을 이용한 열 변성 연구뿐만 아니라 DSC 결과는 제제의 pH가 증가함에 따라 Tm은 pH 7.0에서 ~ 12℃까지 증가함을 보여주었다(표 4 및 도 3a-3d). SE-HPLC에 의한 이들 제제에서의 열 스트레스 IL-22 Fc 융합 단백질의 분석은 IL-22 Fc 융합 단백질이 약 pH 6.5 및 7.0에서 물리적 안정성을 달성하는 반면, HMWS의 증가는 pH 5.5 및 6.0에서 관찰됨을 입증하였다(도 3e). 따라서, IL-22 Fc 융합 단백질에 대한 허용 가능한 pH 범위를 확립하기 위해 더욱 적절한 pKa의 완충액에서 표적 pH 7.0으로 최종 스크린을 개시하였다.
[표 4]
Figure pct00007
IL-22 Fc 융합 단백질 제제 스크린 3
최종 제제 스크린을 pH 6.5, 7.0, 7.3 및 7.6의 10mM 인산나트륨, 및 pH 7.3의 20mM 트리스에서 설정하였다. 이들 제제는 먼저 개시 Tm을 결정하기 위해 DSC로 평가하였다(도 4). DSC에 의해, pH 7.3 초과에서 열 안정성이 더 작게 증가한 것으로 나타났다. 5℃의 권장되는 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물 저장 온도에서, 6주 저장 후 pH 6.5, 7.0, 7.3 및 7.6의 모든 제제에 대한 변화는 SE-HPLC 및 ICIEF에 의해 관찰되지 않았다(표 5-9). 모든 시점에 대해 -70℃, -20℃, 5℃, 25℃, 30℃ 및 40℃에서 모든 제제에 대해 시각적 외관, pH 및 강도에서 변화가 관찰되지 않았다. 30℃에서 6주 후(도 5a-5b) 및 40℃에서 2주 후(도 5c-5d), pH 7.0, 7.3 및 7.6의 제제에 대한 SE-HPLC에 의한 분해 속도는 비슷하였다. 30℃ 데이터로부터, 분해 속도는 pH 6.5에서 더 높았고 DSC 결과와 일치하였다. 메인(main) 피크 손실은 주로 LMWF(저분자량 형태)에서 관찰된 작은 증가와 함께 HMWF(고분자량 형태)의 증가로 인한 것이었다. 30℃에서 4주 후(도 6), pH가 7.0에서 7.3 내지 7.6으로 증가함에 따라 더 빠른 분해 및 더 빠른 산성 피크 형성 속도에 대한 ICIEF에 의한 뚜렷한 추세가 있었다. 분해 속도에서 pH 6.5와 7.0 사이에는 거의 차이가 없었다. 30℃에서 4주 동안 및 40℃, pH 7.0에서 1주 동안 저장한 후 효능 분석에서 손실이 관찰되지 않았다(표 10). 이 제제 스크린은 pH 7.1에서 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 0.02% 폴리소르베이트 20 중 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질을 함유하는 약제학적 조성물이 물리적 및 화학적 안정성 둘 다를 유지하는데 균형을 제공할 것이라고 제안하였다. 따라서, 약제학적 제제에 대해 pH 7.1을 선택하였다.
[표 5]
Figure pct00008
[표 6]
Figure pct00009
[표 7]
Figure pct00010
[표 8]
Figure pct00011
[표 9]
Figure pct00012
[표 10]
Figure pct00013
IL-22 Fc 융합 단백질 교반 연구
단백질 안정성에 대한 PS20의 효과를 측정하기 위해, IL-22 Fc 융합 단백질로 단백질 교반 연구를 수행하였다. 교반 연구 결과는 교반 없는 대조군과 비교하여 24시간 동안 교반한 후 0.01%, 0.02% 및 0.04% PS20을 함유하는 샘플 간에 차이가 없음을 CAC, SE-HPLC, ICIEF 및 탁도로 입증하였다(표 11 및 도 7). 계면활성제를 함유하지 않은 교반된 샘플에서 약간의 응집체 증가가 관찰되었으며 탁도는 거의 증가하지 않았고 시각적 미립자는 관찰되지 않았다. 이 연구는 0.01%의 PS20은 교반 동안 IL-22 Fc 융합 단백질을 보호하기에 충분함을 시사한다. 0.01%-0.03%(w/v) PS20의 사양 범위에서 제조성을 보장하기 위해 최종 제형에서 0.02%(w/v) PS20을 선택하였다.
[표 11]
Figure pct00014
IL-22 Fc 융합 단백질 냉동-해동
-20℃에서 냉동시키고 실온에서 해동시키는 3회의 사이클 후 CAC, pH, 강도 및 SE-HPLC에 의한 변화는 없었다(표 12). 따라서, IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물은 제조 공정 동안 반복된 냉동-해동 사이클에 충분히 견딜 수 있다.
[표 12]
Figure pct00015
AAPH 스트레스 연구
IL-22 Fc 융합 단백질 분석 표준의 AAPH 처리에 대한 초기 연구는 주요 메티오닌(M25 및 M139)의 산화에 대한 감수성(susceptibility)을 보여 주었다(도 8). 따라서, 이들 메티오닌 잔기를 보호하기 위해 5mM 메티오닌을 제제에 첨가하였다. 또한, 3.5mM 및 3mM 메티오닌을 함유하는 샘플에 AAPH로 스트레스를 가하고 분석하여 표적 수준인 5mM 메티오닌보다 낮은 수준이 메티오닌 산화로부터 보호되는지를 측정하였다. 메티오닌의 산화를 평가하기 위해 고해상도 액체 크로마토그래피 탠덤 질량 분석(LC-MS-MS)에 의한 트립신 펩티드 맵 분석을 사용하였다. 3.5mM 및 3mM AAPH 처리된 샘플로 제제화된 기준 배치로부터의 트립신 펩티드 맵 데이터를 5mM 메티오닌으로 제제화되고 AAPH로 처리되거나 처리되지 않은 기준 배치와 비교하였다. 데이터는 5mM 메티오닌으로 제제화된 물질과 비교할 때 메티오닌 산화가 3mM 또는 3.5mM 메티오닌 샘플에서 유의하게 증가하지 않음을 나타낸다(표 13). 따라서, 3mM 메티오닌은 허용 기준을 설정하기 위해 허용 가능한 농도의 최저값으로 설정되었다.
[표 13]
Figure pct00016
결론
이 연구는 IL-22 Fc 융합 단백질이 10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 5mM 메티오닌 및 0.02% 폴리소르베이트 20, pH 7.1을 함유하는 약제학적 조성물에 대해 10㎎/mL로 제제화될 때 사용하기에 적합하다는 것을 보여준다. 교반 스트레스로부터 IL-22 Fc 융합 단백질을 보호하기 위해, 0.01 내지 0.04%의 폴리소르베이트 농도가 적합하다. 이 제제에서 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질은 -20℃ 및 5℃에서 6주 동안, 그리고 -20℃에서 냉동되고 실온에서 해동되는 3회의 사이클 후에 안정하였다.
실시예 2: 본 발명의 약제학적 조성물의 개발
본 발명의 약제학적 조성물의 설명 및 조성(IL-22 Fc 융합 단백질, 멸균 액체, 10㎎/mL)
IL-22 Fc 융합 단백질은 정맥 내 주입을 위한 약간 황갈색의 멸균 용액으로서 제공되며 보존제를 함유하지 않는다. 각각의 일회용 2mL 바이알은 표적 pH 7.1에서 10㎎(공칭)의 IL-22 Fc 융합 단백질을 함유한다. 본 발명의 약제학적 조성물은 표 14에 주어진 조성으로 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질로서 제제화된다.
[표 14]
Figure pct00017
IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물
IL-22 Fc 융합 단백질은 약제학적 조성물에서 유일한 활성 성분이다. IL-22 Fc 융합 단백질 및 약제학적 조성물 안정성 데이터에 의해 입증된 바와 같이, 제제 중의 부형제와 활성 약물 사이에는 비상용성이 존재하지 않는다.
부형제
표 15는 본 발명의 약제학적 조성물에 사용되는 부형제 목록을 상응하는 기능 및 농도와 함께 함유한다.
[표 15]
Figure pct00018
약제학적 제제 개발
IL-22 Fc 융합 단백질의 정맥 내(IV) 주입용 용액으로서 설계된 일회용 약제학적 제제가 개발되었다. 본 발명의 약제학적 조성물은 10mM 인산나트륨, 5mM 메티오닌, 240mM 수크로스, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1 중의 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질로 구성된다.
IL-22 Fc 융합 단백질에 대한 약제학적 제제를 선택하기 위해, pH 7.1에서 인산나트륨, 메티오닌, 수크로스 및 폴리소르베이트 20을 함유하는 용액에서 IL-22 Fc 융합 단백질의 안정성이 허용 가능함을 입증하는 제제 연구가 수행되었다. 이 연구의 결과에 기초하여, 약제학적 조성물의 제제는 10mM 인산나트륨, 5mM 메티오닌, 240mM 수크로스, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1 중의 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질로 정의되었다.
초과분
IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 제제는 초과분을 함유하지 않는다.
물리화학적 및 생물학적 특성
모든 특성화 시험을 IL-22 Fc 융합 단백질로 수행하였다. 상기 조성물은 차광될 때 권장 저장 조건인 2℃-8℃에서 안정하게 유지된다. 예방 조치로 인라인 필터(0.2㎛)가 임상 물질의 IV 투여에 사용된다.
(제어 전략의 일부인 10㎛ 이상 및 25㎛ 이상 이외에도) 크기가 2㎛ 이상 및 5㎛ 이상인 육안으로 보이지 않는 입자(subvisible particles)의 모니터링은 개발을 거쳐 차광 방법을 사용하여 연장된 특성 분석으로서 수행될 것이다. 이러한 평가는 방출 시점에서 안정성에 대해 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물로 수행된 연장된 특성 규명의 일부로서 수행될 것이다.
냉동/해동 안정성 연구 결과
-20℃에서 냉동시키고 실온에서 해동시키는 3회의 사이클 후 IL-22 Fc 융합 단백질 기준 표준 배치에 대해 냉동/해동 안정성을 모니터링하였다. 3회의 냉동/해동 사이클 후에 제품 품질의 변화는 관찰되지 않았다.
미생물적 속성
IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물 액체 제제는 보존제를 함유하지 않는다.
상용성
정맥 주입
IV 투여를 위해, IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 제제(10㎎/mL)가 등장성 염화나트륨 용액(0.9% NaCl) 및 희석제를 사용한 희석 후 투여될 것인데, 이는 메티오닌이 없는 제제 완충제다(10mM 인산나트륨, 240mM 수크로스, 0.02%[w/v] 폴리소르베이트 20, pH 7.1). 활성 성분의 상용성 및 안정성을 다음의 시뮬레이션된 제조/투여 조건하에 시험하였다.
a) 희석제를 사용하여 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 제제 임상 배치 1을 임상 연구에서 IV 투여를 위한 용량 범위를 커버하기 위해 0.025-0.5㎎/mL 범위로 식염수 백에 희석.
b) 등장성 염화나트륨 용액(IV 상용성을 위해 폴리비닐 클로라이드[PVC] 및 폴리올레핀[PO]으로 구성된 백 제품 접촉 표면 물질)을 함유하는 주입 백에 단기 노출.
c) 폴리비닐 클로라이드(PVC), 폴리에틸렌(PE), 폴리카보네이트(PC) 및 폴리에테르우레탄(PEU)의 제품 접촉 표면과 IV 주입 라인 및 주입 보조제 사용.
d) IV 상용성을 위해 0.2㎛의 인라인 필터 사용(폴리에테르설폰[PES] 필터 막).
IV 투여의 경우, 식염수 백 샘플을 확산 광에 노출하면서 2℃-8℃에서 24시간 저장하고 30℃에서 24시간 저장한 다음 주입 라인 및 인라인 필터를 통과시켜 시험하였다. 식염수 백에서 가장 낮은 농도에서, 제품 안정성을 유지하기에 충분한 pH를 보장하기 위해 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물을 식염수 백에 첨가하기 전에 희석제로 사전 희석할 필요가 있었다.
상기 샘플을 다음과 같이 제품 품질을 평가하기 위해 적절한 방법을 사용하여 시험하였다: 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC) 및 이미지 모세관 등전점 전기영동(cIEF)에 의한 순도(1㎎/mL 이상의 샘플의 경우), 단백질 농도(자외선에 의해), 광 차폐에 의한 육안으로 보이지 않는 입자, 색상, 선명도/유백광(opalescence) 및 pH. 하나의 샘플을 식염수 백에 2㎎/mL로 구성하고 이미지 cIEF로 분석하여 식염수가 제품 화학적 안정성에 부정적인 영향을 미치지 않음을 증명했다.
배치 공식(IL-22 Fc 융합 단백질, 멸균 액체, 10㎎/mL)
제제화된 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물 용액은 IL-22 Fc 융합 단백질 용액과 비교하여 농도 및 조성과 관련하여 변하지 않은 상태로 유지되는데, 즉 상기 약제학적 조성물 제조 공정 동안 추가의 배합 또는 희석이 수행되지 않는다. 벌크 약제학적 조성물의 크기는 5리터이다. 실제 배치 크기는 변경될 수 있다. 표 16은 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물에 대한 배치 제제 정보를 함유한다.
[표 16]
Figure pct00019
실시예 3: IL-22 Fc 융합 단백질의 연장된 안정성 시험
IL-22 Fc 융합 단백질 임상 배치 2 및 기준 표준 배치의 연장된 안정성 시험
절차 및 수용 기준
모든 샘플을 표 17에 나열된 시험 절차를 사용하여 분석하였다. 대표적인 안정성은 표 18에 제공된 프로토콜을 사용하여 지정된 시간 간격으로 평가하였다.
[표 17]
Figure pct00020
[표 18]
Figure pct00021
결과
상술한 바와 같이 -20℃ 및 5℃에서 수행된 임상 배치 2 및 기준 표준 배치로부터의 IL-22 Fc 융합 단백질의 연장된 안정성 시험 결과가 표 19 및 표 20에 제시되어 있다.
[표 19]
Figure pct00022
[표 19]
Figure pct00023
[표 20]
Figure pct00024
[표 20]
Figure pct00025
저장 수명 및 권장 저장
IL-22 Fc 융합 단백질의 권장 저장 조건은 -20℃ 이하이다. -20℃에서 최대 48개월 동안 및 5℃에서 최대 6개월 동안 저장하면, 단백질 농도, pH, 색상, 선명도, 효능, 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 이미지 모세관 등전점 전기영동(icIEF) 및 비환원(NR) 모세관 전기영동-나트륨 도데실 설페이트(CE-SDS)에서 유의한 변화가 관찰되지 않았다(표 20). 여기에 제시된 안정성 시험 결과는 IL-22 Fc 융합 단백질이 -20℃에서 48개월 동안 안정적임을 보여준다. 이 데이터는 -20℃에서 60개월 이상의 저장 수명을 뒷받침한다. 또한, IL-22 Fc 융합 단백질은 5℃에서 최대 1개월 저장될 수 있다.
IL-22 Fc 융합 단백질을 50cc 바이오프로세스 백(bioprocess bag)에 저장하고, -20℃에서 냉동시키고 주위 온도에서 해동시키는 3회의 사이클 후 냉동-해동 안정성을 모니터링하였다. 상기 바이오프로세스 백을 1, 2 및 3개월 시점에서 해동하여 3개월의 데이터가 3회의 냉동/해동 사이클을 나타내도록 하였다. -20℃에서 냉동시키고 주위 온도에서 해동시키는 3회의 사이클 후 단백질 농도, pH, 색상, 선명도, 효능, SEC, icIEF 및 CE-SDS에서 유의한 변화는 관찰되지 않았다. 따라서, IL-22 Fc 융합 단백질은 적어도 3회의 사이클로 약 -20℃에서 냉동되고 해동될 수다.
IL-22 Fc 융합 단백질 임상 배치 1 및 기준 표준 배치의 연장된 안정성 시험
IL-22 Fc 융합 단백질의 약제학적 조성물은 10㎎(공칭)의 IL-22 Fc 융합 단백질을 함유하는 일회용 2mL 미국 약전/유럽 약전 유리 타입 I 바이알로 제공되는 액체 제제이다. 본 발명의 약제학적 제제는 10mM 인산나트륨, 5mM 메티오닌, 240mM 수크로스, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1 중 10㎎의 IL-22 Fc 융합 단백질로서 제제화된다.
IL-22 Fc 융합 단백질 임상 배치 1을 사용하여 약제학적 조성물 안정성 연구를 개시하였다. 또한, 기준 표준 배치를 사용하여 대표적인 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물 안정성 연구를 개시하였다(표 21). 두 배치 모두에 대해 5℃ 및 25℃의 온도에서 안정성을 모니터링하였다.
장기 저장은 5℃±3℃에서 시험하고, 25℃±2℃(60% 상대 습도[RH]±5% RH)에서 가속 안정성 연구를 수행하였다. 하기에서, 온도는 각각 5℃ 및 25℃로 표시된다.
절차 및 수용 기준
모든 샘플을 표 21에 나열된 시험 절차를 사용하여 분석하였다. 대표적인 안정성은 표 22 및 표 23에 제공된 프로토콜을 사용하여 특정 시간 간격으로 평가하였다.
[표 21]
Figure pct00026
[표 22]
Figure pct00027
[표 23]
Figure pct00028
결과
상술한 바와 같이 -20℃ 및 5℃에서 수행된 임상 배치 1 및 기준 표준 배치로부터의 IL-22 Fc 융합 단백질의 연장된 안정성 시험의 결과는 표 24 및 표 25에 제시되어 있다.
일차 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물 안정성 데이터는 지원 안정성 연구에서 관찰된 것과 유사한 경향을 나타냈다. 상기 안정성 데이터는 IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물에 대해 5℃에서 42개월(36개월 실시간 데이터 + 6개월 가날짜(provisional dating))의 만료 날짜를 뒷받침한다.
지원 안정성 연구의 결과는 주로 이량체 농도의 증가와 함께 36개월에 관찰된 SE-HPLC에 의한 메인 피크의 0.7% 감소를 보여 주었다. 주로 산성 피크의 증가와 함께 iCIEF에 의한 메인 피크의 5% 감소가 관찰되었다. IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 변화는 5℃에서 최대 36개월의 저장 동안 다른 방법에 의해 관찰되지 않았다. IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 변화는 25℃에서 최대 1개월 저장 동안 관찰되지 않았다. IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 변화는 25℃에서 6개월 저장한 후에 관찰되었다. 이미지 cIEF는 주로 산성 피크의 18.3% 증가와 함께 메인 피크의 17.6% 감소를 보여 주었다. 주로 고분자량 종(HMWS)에서 1.2% 증가와 함께 SE-HPLC에 의한 메인 피크의 1.3% 감소가 관찰되었다. 주로 프리피크의 합계에서 보정된 피크 면적(CPA%)의 2.1% 증가와 함께 비환원 CE-SDS에 의한 메인 피크의 2.7% 감소가 관찰되었다. 25℃에서 6개월 저장한 후 29%의 상대 효능 손실이 관찰되었고, 25℃에서 3개월 저장한 후에는 효능 변화가 관찰되지 않았다. 25℃에서 6개월 동안 나머지 분석에서는 변화가 관찰되지 않았다.
[표 24]
Figure pct00029
[표 24]
Figure pct00030
[표 25]
Figure pct00031
[표 25]
Figure pct00032
IL-22 Fc 융합 단백질 임상 배치 3 및 기준 표준 배치의 비교 스트레스 안정성 시험
IL-22 Fc 융합 단백질 기준 표준 배치 약제학적 조성물 및 임상 약제학적 조성물의 비교는 IL-22 Fc 융합 단백질 기준 표준 배치 및 임상 배치 3을 사용하여 확립하였다(표 26). 두 배치로부터의 물질을 2mL 유리 바이알에 수동으로 1mL의 용적으로 채웠다. 이 물질을 40℃의 스트레스 조건에서 평가하였다.
[표 26]
Figure pct00033
[표 26]
Figure pct00034
결과
이 연구의 결과는 두 물질의 분해율이 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC)에 의한 메인 피크의 2-4% 감소, 이미지 모세관 등전점 전기영동(cIEF)에 의한 메인 피크의 15-16% 감소, 모세관 전기영동 나트륨 도데 실 설페이트-비-겔 체질(CE SDS-NGS)에 의한 메인 피크의 2%의 감소, 및 40℃에서 2주 저장한 후 상대 효능의 28-33% 감소에 근거하여 비슷하다는 것을 보여준다. 또한, 크로마토그래피 프로파일이 비슷하고, 40℃에서 2주 저장한 후 전개 배치와 비교할 때 임상 배치에서 새로운 피크가 관찰되지 않았다. IL-22 Fc 융합 단백질 기준 표준 및 임상 약제학적 조성물 배치는 제시된 데이터에 기초하여 안정성이 유사하다. 따라서, 기준 표준 배치로부터의 안정성 데이터를 사용하여 임상 약제학적 조성물의 저장 수명을 할당하였다.
저장 수명 및 권장 저장
IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 권장 저장 조건은 차광되는 5℃±3℃이다. 사용 가능한 안정성 데이터에 따라 저장 수명이 연장될 것이다. IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물은 5℃±3℃에서 36개월에 걸쳐 안정하다. 이용 가능한 데이터에 기초하여, IL-22 Fc 융합 단백질 약제학적 조성물의 초기 저장 수명은 차광되는 5℃±3℃에서 저장되는 경우 현재 42개월로 설정된다.
분석 절차의 검증 결과
표 27은 분석 절차의 검증 결과를 보여준다.
[표 27]
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
다른 실시양태
본원에 기재된 기술의 일부 실시양태는 다음의 번호가 부여된 실시양태 중 임의의 것에 따라 정의될 수 있다:
1. 인터루킨(IL)-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 36개월 이상이고, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함하는 약제학적 조성물.
2. 실시양태 1에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 42개월 이상인 약제학적 조성물.
3. 실시양태 1 또는 2에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도가 약 0.5㎎/mL 내지 약 20㎎/mL인 약제학적 조성물.
4. 실시양태 3에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도가 약 0.5㎎/mL 내지 약 5㎎/mL인 약제학적 조성물.
5. 실시양태 4에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도가 약 1㎎/mL인 약제학적 조성물.
6. 실시양태 3에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도가 약 8㎎/mL 내지 약 12㎎/mL인 약제학적 조성물.
7. 실시양태 6에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도가 약 10㎎/mL인 약제학적 조성물.
8. 실시양태 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 안정제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
9. 실시양태 8에 있어서, 상기 안정제가 아미노산, 티오소르비톨, 아스코르브산, 모노티오글리세롤, 사이클로덱스트린, 트롤록스(Trolox)(6-하이드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카복실산), 피리독신, 만니톨, 금속 킬레이터 또는 이들의 조합인 약제학적 조성물.
10. 실시양태 9에 있어서, 상기 안정제가 아미노산인 약제학적 조성물.
11. 실시양태 9 또는 10에 있어서, 상기 아미노산이 메티오닌, 시스테인, 트립토판 또는 이들의 조합인 약제학적 조성물.
12. 실시양태 11에 있어서, 상기 아미노산이 메티오닌인 약제학적 조성물.
13. 실시양태 8 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 상기 안정제의 농도가 약 1mM 내지 약 10mM인 약제학적 조성물.
14. 실시양태 13에 있어서, 상기 안정제의 농도가 약 2mM 내지 약 8mM인 약제학적 조성물.
15. 실시양태 14에 있어서, 상기 안정제의 농도가 약 5mM인 약제학적 조성물.
16. 실시양태 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 4의 위치 M25 또는 M139에서 메티오닌의 산화가 AAPH 스트레스 시험에 의해 평가될 때 10% 미만인 약제학적 조성물.
17. 실시양태 16에 있어서, 서열번호 4의 위치 M25에서 메티오닌의 산화가 5% 미만, 3% 미만 또는 2% 미만인 약제학적 조성물.
18. 실시양태 16 또는 17에 있어서, 서열번호 4의 위치 M139에서 메티오닌의 산화가 7% 미만, 6% 미만 또는 5% 미만인 약제학적 조성물.
19. 실시양태 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 계면활성제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
20. 실시양태 19에 있어서, 상기 계면활성제가 비이온성 계면활성제인 약제학적 조성물.
21. 실시양태 20에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트, 폴록사머, 폴리옥시에텔렌 알킬 에테르, 알킬 페닐 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 이들의 조합인 약제학적 조성물.
22. 실시양태 21에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트인 약제학적 조성물.
23. 실시양태 22에 있어서, 상기 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80인 약제학적 조성물.
24. 실시양태 23에 있어서, 상기 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 20인 약제학적 조성물.
25. 실시양태 21에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제가 폴록사머인 약제학적 조성물.
26. 실시양태 25에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제가 폴록사머 188인 약제학적 조성물.
27. 실시양태 19 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 계면활성제의 농도가 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)인 약제학적 조성물.
28. 실시양태 27에 있어서, 상기 계면활성제의 농도가 약 0.01%(w/v) 내지 약 0.05%(w/v)인 약제학적 조성물.
29. 실시양태 27에 있어서, 상기 계면활성제의 농도가 약 0.01%(w/v) 내지 약 0.07%(w/v)인 약제학적 조성물.
30. 실시양태 28 또는 29에 있어서, 상기 계면활성제의 농도가 약 0.02%(w/v)인 약제학적 조성물.
31. 실시양태 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 완충제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
32. 실시양태 31에 있어서, 상기 완충제가 포스페이트, 석시네이트, 아세테이트, 히스티딘 또는 이들의 조합인 약제학적 조성물.
33. 실시양태 32에 있어서, 상기 완충제가 포스페이트인 약제학적 조성물.
34. 실시양태 33에 있어서, 상기 포스페이트가 일염기성 인산나트륨, 이염기성 인산나트륨, 삼염기성 인산나트륨, 일염기성 인산칼륨, 이염기성 인산칼륨, 삼염기성 인산칼륨 또는 이들의 혼합물인 약제학적 조성물.
35. 실시양태 34에 있어서, 상기 포스페이트가 일염기성 인산나트륨인 약제학적 조성물.
36. 실시양태 34에 있어서, 상기 포스페이트가 이염기성 인산나트륨인 약제학적 조성물.
37. 실시양태 34에 있어서, 상기 포스페이트가 일염기성 인산나트륨과 이염기성 인산나트륨의 혼합물인 약제학적 조성물.
38. 실시양태 31 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 완충제의 농도가 약 5mM 내지 약 20mM인 약제학적 조성물.
39. 실시양태 38에 있어서, 상기 완충제의 농도가 약 8mM 내지 약 12mM인 약제학적 조성물.
40. 실시양태 39에 있어서, 상기 완충제의 농도가 약 10mM인 약제학적 조성물.
41. 실시양태 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 등장화제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
42. 실시양태 41에 있어서, 상기 등장화제가 당, 아미노산 또는 염인 약제학적 조성물.
43. 실시양태 42에 있어서, 상기 등장화제가 당인 약제학적 조성물.
44. 실시양태 43에 있어서, 상기 당이 수크로스, 글루코스, 글리세롤 또는 트레할로스인 약제학적 조성물.
45. 실시양태 44에 있어서, 상기 당이 수크로스인 약제학적 조성물.
46. 실시양태 42에 있어서, 상기 등장화제가 염인 약제학적 조성물.
47. 실시양태 46에 있어서, 상기 염이 염화나트륨 또는 염화칼륨인 약제학적 조성물.
48. 실시양태 41 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 상기 등장화제의 농도가 약 100mM 내지 약 500mM인 약제학적 조성물.
49. 실시양태 48에 있어서, 상기 등장화제의 농도가 약 200mM 내지 약 300mM인 약제학적 조성물.
50. 실시양태 49에 있어서, 상기 등장화제의 농도가 약 240mM인 약제학적 조성물.
51. 실시양태 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 6.6 내지 약 8인 약제학적 조성물.
52. 실시양태 51에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 6.8 내지 약 7.4인 약제학적 조성물.
53. 실시양태 52에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 7.1인 약제학적 조성물.
54. 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 약 1㎎/mL 내지 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질, 약 5mM 메티오닌 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함하는 약제학적 조성물.
55. 실시양태 54에 있어서, 약 10mM 인산나트륨 및 약 240mM 수크로스를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
56. 실시양태 54 또는 55에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 1㎎/mL 또는 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물.
57. 실시양태 55 또는 56에 있어서, 상기 인산나트륨이 일염기성 인산나트륨과 이염기성 인산나트륨의 혼합물인 약제학적 조성물.
58. 실시양태 1 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 단위 투여형인 약제학적 조성물.
59. 실시양태 58에 있어서, 상기 단위 투여형이 주입용 액체 제제인 약제학적 조성물.
60. 실시양태 59에 있어서, 상기 주입용 액체 제제가 공칭 용적이 100mL 미만인 용기 내에 제공되는 약제학적 조성물.
61. 실시양태 60에 있어서, 상기 주입용 액체 제제의 용적이 약 1mL 내지 약 2mL인 약제학적 조성물.
62. 실시양태 61에 있어서, 상기 주입용 액체 제제의 용적이 약 1mL인 약제학적 조성물.
63. 실시양태 60 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 상기 용기에 존재하는 10㎛ 이상의 입자의 수가 6000개의 입자를 초과하지 않는 약제학적 조성물.
64. 실시양태 60 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 상기 용기에 존재하는 25㎛ 이상의 입자의 수가 600개의 입자를 초과하지 않는 약제학적 조성물.
65. 실시양태 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 담체가 물인 약제학적 조성물.
66. 실시양태 1 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 1회 이상의 냉동-해동 사이클을 통해 안정한 약제학적 조성물.
67. 실시양태 66에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 3회의 냉동-해동 사이클을 통해 안정한 약제학적 조성물.
68. 실시양태 1 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 25℃에서 약 2주 이상 안정한 약제학적 조성물.
69. 실시양태 68에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 25℃에서 약 4주 이상 안정한 약제학적 조성물.
70. 실시양태 1 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 -20℃에서 약 48개월 이상 안정한 약제학적 조성물.
71. 실시양태 1 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상인 약제학적 조성물.
72. 실시양태 71에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 90% 이상인 약제학적 조성물.
73. 실시양태 72에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상인 약제학적 조성물.
74. 실시양태 71 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 5℃에서 약 36개월 이상 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상인 약제학적 조성물.
75. 실시양태 74에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 5℃에서 약 42개월 이상 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상인 약제학적 조성물.
76. 실시양태 75에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 5℃에서 약 42개월 동안 SE-HPLC에 의해 평가될 때 순도가 약 95% 이상인 약제학적 조성물.
77. 실시양태 1 내지 76 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 비환원(NR) 모세관 전기영동 나트륨 도데실 설페이트 비-겔 체질(CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 75% 이상인 약제학적 조성물.
78. 실시양태 77에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 NR CE-SDS-NGS에 의해 평가될 때 순도가 약 80% 이상인 약제학적 조성물.
79. 실시양태 78에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 NR CE-SDS-NGS에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상인 약제학적 조성물.
80. 실시양태 77 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 5℃에서 약 36개월 이상 동안 NR CE-SDS-NGS에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상인 약제학적 조성물.
81. 실시양태 80에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 5℃에서 약 42개월 이상 동안 NR CE-SDS-NGS에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상인 약제학적 조성물.
82. 실시양태 81에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 5℃에서 약 42개월 동안 NR CE-SDS-NGS에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상인 약제학적 조성물.
83. 실시양태 1 내지 82 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 투여용으로 제제화된 약제학적 조성물.
84. 실시양태 83에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥 내 투여용으로 제제화된 약제학적 조성물.
85. 실시양태 83에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 피하 투여용으로 제제화된 약제학적 조성물.
86. 실시양태 1 내지 85 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 보존제를 함유하지 않는 약제학적 조성물.
87. 실시양태 1 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 등장성 염화나트륨 용액 및/또는 희석제로 희석한 후 주입에 의해 투여되도록 제제화된 약제학적 조성물.
88. 실시양태 87에 있어서, 상기 등장성 염화나트륨 용액이 약 0.1% 내지 약 2% NaCl을 포함하는 약제학적 조성물.
89. 실시양태 88에 있어서, 상기 등장성 염화나트륨 용액이 약 0.5% 내지 약 1.5% NaCl을 포함하는 약제학적 조성물.
90. 실시양태 89에 있어서, 상기 등장성 염화나트륨 용액이 약 0.9%(w/v) NaCl을 포함하는 약제학적 조성물.
91. 실시양태 87 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 상기 희석제가 완충제, 등장화제 및 계면활성제를 포함하는 약제학적 조성물.
92. 실시양태 87 내지 91 중 어느 하나에 있어서, 상기 희석제가 약 10mM 인산나트륨 및 약 240mM 수크로스, 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함하는 약제학적 조성물.
93. 실시양태 1 내지 92 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 폴리펩티드가 글리코실화된 약제학적 조성물.
94. 실시양태 1 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 폴리펩티드가 N-글리코실화된 약제학적 조성물.
95. 실시양태 1 내지 94 중 어느 하나에 있어서, 상기 Fc 영역이 글리코실화되지 않은 약제학적 조성물.
96. 실시양태 95에 있어서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 297에서의 아미노산 잔기가 Gly인 약제학적 조성물.
97. 실시양태 95에 있어서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 297에서의 아미노산 잔기가 Ala인 약제학적 조성물.
98. 실시양태 95 내지 97 중 어느 하나에 있어서, 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 299에서의 아미노산 잔기가 Ala, Gly 또는 Val인 약제학적 조성물.
99. 실시양태 1 내지 98 중 어느 하나에 있어서, 상기 Fc 영역이 IgG1 또는 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 약제학적 조성물.
100. 실시양태 99에 있어서, 상기 Fc 영역이 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 약제학적 조성물.
101. 실시양태 1 내지 100 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 95% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
102. 실시양태 101에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 96% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
103. 실시양태 102에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 97% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
104. 실시양태 103에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 98% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
105. 실시양태 104에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 99% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
106. 실시양태 1 내지 105 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
107. 실시양태 106에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
108. 실시양태 107에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8의 아미노산 서열로 이루어진 약제학적 조성물.
109. 실시양태 106에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
110. 실시양태 109에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진 약제학적 조성물.
111. 실시양태 106에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
112. 실시양태 111에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 16의 아미노산 서열로 이루어진 약제학적 조성물.
113. 실시양태 95 내지 112 중 어느 하나에 있어서, 상기 Fc 영역이 N-글리코실화되지 않은 약제학적 조성물.
114. 실시양태 1 내지 113 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 이량체성 IL-22 Fc 융합 단백질인 약제학적 조성물.
115. 실시양태 1 내지 113 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 단량체성 IL-22 Fc 융합 단백질인 약제학적 조성물.
116. 실시양태 1 내지 115 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 폴리펩티드가 인간 IL-22 폴리펩티드인 약제학적 조성물.
117. 실시양태 116에 있어서, 상기 IL-22 폴리펩티드가 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
118. 실시양태 1 내지 117 중 어느 하나에 있어서, 상기 링커가 아미노산 서열 RVESKYGPP(서열번호 44)를 포함하는 약제학적 조성물.
119. 실시양태 118에 있어서, 상기 링커가 아미노산 서열 RVESKYGPP(서열번호 44)로 이루어진 약제학적 조성물.
120. 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 약 5mM 메티오닌, 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함하는 약제학적 조성물.
121. 실시양태 1 내지 120 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 IL-22 수용체에 결합한 약제학적 조성물.
122. 실시양태 121에 있어서, 상기 IL-22 수용체가 인간 IL-22 수용체인 약제학적 조성물.
123. 실시양태 121 또는 122에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 IL-22RA1 및/또는 IL-10R2에 결합한 약제학적 조성물.
124. 실시양태 123에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 IL-22RA1에 결합한 약제학적 조성물.
125. 실시양태 1 내지 124 중 어느 하나에 있어서, 추가 치료제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
126. 실시양태 1 내지 125 중 어느 하나에 있어서, 겔화제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
127. 실시양태 126에 있어서, 상기 겔화제가 다당류인 약제학적 조성물.
128. 실시양태 126 또는 127에 있어서, 상기 겔화제가 셀룰로오스제인 약제학적 조성물.
129. 실시양태 126 내지 128 중 어느 하나에 있어서, 상기 겔화제가 메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 카복시메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, POE-POP 블록 중합체, 알기네이트, 히알루론산, 폴리아크릴산, 하이드록시에틸 메틸셀룰로오스 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스인 약제학적 조성물.
130. 실시양태 129에 있어서, 상기 겔화제가 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스인 약제학적 조성물.
131. 실시양태 126 내지 130 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 제제가 구소 투여용인 약제학적 조성물.
132. 실시양태 1 내지 131 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 약제학적 조성물.
133. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 염증성 장 질환(IBD)의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환(IBD)을 치료하는 방법.
134. 실시양태 133에 있어서, 상기 IBD가 궤양성 대장염 또는 크론병인 방법.
135. 실시양태 134에 있어서, 상기 IBD가 궤양성 대장염인 방법.
136. 실시양태 135에 있어서, 상기 궤양성 대장염이 중등도 내지 심각한 궤양성 대장염인 방법.
137. 실시양태 134에 있어서, 상기 IBD가 크론병인 방법.
138. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 장내 미생물 감염 억제, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포보존, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유 향상이 필요한 대상체의 장내 미생물 감염을 억제하고, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포를 보존하고, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유를 향상시키는 방법.
139. 실시양태 138에 있어서, 상기 상피 세포가 장 상피 세포인 방법.
140. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염의 치료가 필요한 대상체에서 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염을 치료하는 방법.
141. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 상처 치유의 가속 또는 개선이 필요한 대상체에서 상처 치유를 가속 또는 개선하는 방법.
142. 실시양태 141에 있어서, 상기 상처가 만성 상처 또는 감염된 상처인 방법.
143. 실시양태 141 또는 142에 있어서, 상기 대상체가 당뇨병이 있는 방법.
144. 실시양태 143에 있어서, 상기 당뇨병 대상체가 II형 당뇨병이 있는 방법.
145. 실시양태 141 내지 144 중 어느 하나에 있어서, 상기 상처가 당뇨성 족부 궤양인 방법.
146. 실시양태 141 내지 145 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 상기 약제학적 조성물이 완전한 상처 봉합이 일어날 때까지 투여되는 방법.
147. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 심혈관 병태의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에서 심혈관 병태를 예방 또는 치료하는 방법으로서, 상기 병태가 죽상동맥경화성 플라크 형성 병리를 포함하는 방법.
148. 실시양태 147에 있어서, 상기 심혈관 질환이 관상동맥 질환, 관상동맥 미세혈관 질환, 뇌졸중, 경동맥 질환, 말초동맥 질환 또는 만성 신장 질환인 방법.
149. 실시양태 147 또는 148에 있어서, 죽상동맥경화성 플라크 형성의 진행을 늦추거나 죽상동맥경화증의 징후를 예방하는 것을 추가로 포함하는 방법.
150. 실시양태 149에 있어서, 상기 죽상동맥경화증의 징후가 플라크 축적 또는 혈관 염증을 포함하는 방법.
151. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대사증후군의 치료가 필요한 대상체에서 대사증후군을 치료하는 방법.
152. 실시양태 151에 있어서, 복부 비만, 고혈당증, 이상지질혈증 및 고혈압 중 하나 이상을 포함하는 대사증후군과 관련된 하나 이상의 위험 인자를 감소시키는 것을 추가로 포함하는 방법.
153. 실시양태 151 또는 152에 있어서, 상기 대상체에서 박테리아 지질다당류의 수준을 감소시키는 것을 추가로 포함하는 방법.
154. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다의 치료가 필요한 대상체에서 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다를 치료하는 방법.
155. 실시양태 151 내지 154 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 HDL/LDL 지질 프로파일의 변화가 필요한 방법.
156. 실시양태 133 내지 155 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이 약 1㎎/mL 내지 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질, 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스, 약 5mM 메티오닌 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함하는 방법.
157. 실시양태 133 내지 156 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
158. 실시양태 157에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
159. 실시양태 157에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
160. 실시양태 133 내지 159 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 투여되는 방법.
161. 실시양태 160에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥 내 투여되는 방법.
162. 실시양태 160에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 피하 투여되는 방법.
163. 실시양태 133 내지 162 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에 하나 이상의 추가 치료제와 공동 투여되는 방법.
164. 실시양태 133 내지 163 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 인간인 방법.
165. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 염증성 장 질환(IBD)의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환(IBD)을 치료하는 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
166. 실시양태 165에 있어서, 상기 IBD가 궤양성 대장염 또는 크론병인 약제학적 조성물.
167. 실시양태 166에 있어서, 상기 IBD가 궤양성 대장염인 약제학적 조성물.
168. 실시양태 167에 있어서, 상기 궤양성 대장염이 중등도 내지 심각한 궤양성 대장염인 약제학적 조성물.
169. 실시양태 166에 있어서, 상기 IBD가 크론병인 약제학적 조성물.
170. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 장내 미생물 감염 억제, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포 보존, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유 향상이 필요한 대상체의 장내 미생물 감염을 억제하고, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포를 보존하고, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유를 향상시키는 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
171. 실시양태 170에 있어서, 상기 상피 상처가 장 상피 상처인 약제학적 조성물.
172. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염의 치료가 필요한 대상체에서 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염을 치료하는 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
173. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 상처 치유의 가속 또는 개선이 필요한 대상체에서 상처 치유를 가속 또는 개선하는 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
174. 실시양태 173에 있어서, 상기 상처가 만성 상처 또는 감염된 상처인 약제학적 조성물.
175. 실시양태 173 또는 174에 있어서, 상기 대상체가 당뇨병이 있는 약제학적 조성물.
176. 실시양태 175에 있어서, 상기 당뇨병 대상체가 II형 당뇨병인 약제학적 조성물.
177. 실시양태 173 내지 176 중 어느 하나에 있어서, 상기 상처가 당뇨성 족부 궤양인 약제학적 조성물.
178. 실시양태 173 내지 177 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 상기 약제학적 조성물이 완전한 상처 봉합이 일어날 때까지 투여되는 약제학적 조성물.
179. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 심혈관 병태의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에서 심혈관 병태를 예방 또는 치료하는 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 상기 병태가 죽상동맥경화성 플라크 형성 병리를 포함하는 약제학적 조성물.
180. 실시양태 179에 있어서, 상기 심혈관 질환이 관상동맥 질환, 관상동맥 미세혈관 질환, 뇌졸중, 경동맥 질환, 말초동맥 질환 또는 만성 신장 질환인 약제학적 조성물.
181. 실시양태 179 또는 180에 있어서, 죽상동맥경화성 플라크 형성의 진행을 늦추거나 죽상동맥경화증의 징후를 예방하는 것을 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
182. 실시양태 181에 있어서, 상기 죽상동맥경화증의 징후가 플라크 축적 또는 혈관 염증을 포함하는 약제학적 조성물.
183. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 대사증후군의 치료가 필요한 대상체에서 대사증후군을 치료하는 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
184. 실시양태 183에 있어서, 복부 비만, 고혈당증, 이상지질혈증 및 고혈압 중 하나 이상을 포함하는 대사증후군과 관련된 하나 이상의 위험 인자를 감소시키는 것을 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
185. 실시양태 183 또는 184에 있어서, 상기 대상체에서 박테리아 지질다당류 수준을 감소시키는 것을 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
186. 실시양태 1 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다의 치료가 필요한 대상체에서 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다를 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
187. 실시양태 183 내지 186 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 HDL/LDL 지질 프로파일의 변화가 필요한 약제학적 조성물.
188. 실시양태 165 내지 187 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물이 약 1㎎/mL 내지 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질, 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스, 약 5mM 메티오닌 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함하는 약제학적 조성물.
189. 실시양태 165 내지 188 중 어느 하나에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
190. 실시양태 189에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
191. 실시양태 189에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질이 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
192. 실시양태 165 내지 191 중 어느 하나에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 투여되는 약제학적 조성물.
193. 실시양태 192에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 상기 약제학적 조성물이 정맥 내 투여되는 약제학적 조성물.
194. 실시양태 193에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질 또는 상기 약제학적 조성물이 피하 투여되는 약제학적 조성물.
195. 실시양태 165 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체에 하나 이상의 추가 치료제와 공동 투여되는 약제학적 조성물.
196. 실시양태 165 내지 195 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 인간인 약제학적 조성물.
본 명세서는 통상의 기술자가 본 발명을 실시하기에 충분한 것으로 간주한다. 전술한 발명이 이해의 명확성을 목적으로 예시 및 예로써 일부 상세하게 설명되었지만, 상기 설명 및 예는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 실제로, 본원에 제시되고 설명된 것들에 추가하여 본 발명의 다양한 변형이 전술한 설명으로부터 통상의 기술자에게 명백해질 것이며 첨부된 청구범위의 범주 내에 속할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> Genentech, Inc. <120> COMPOSITIONS AND METHODS OF USE <130> 50474-177WO3 <150> US 62/697,372 <151> 2018-07-12 <150> US 62/622,704 <151> 2018-01-26 <160> 84 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 495 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Human IL-22 <400> 1 atgggatggt catgtatcat cctttttcta gtagcaactg caactggagt acattcagcg 60 cccatcagct cccactgcag gcttgacaag tccaacttcc agcagcccta tatcaccaac 120 cgcaccttca tgctggctaa ggaggctagc ttggctgata acaacacaga cgttcgtctc 180 attggggaga aactgttcca cggagtcagt atgagtgagc gctgctatct gatgaagcag 240 gtgctgaact tcacccttga agaagtgctg ttccctcaat ctgataggtt ccagccttat 300 atgcaggagg tggtgccctt cctggccagg ctcagcaaca ggctaagcac atgtcatatt 360 gaaggtgatg acctgcatat ccagaggaat gtgcaaaagc tgaaggacac agtgaaaaag 420 cttggagaga gtggagagat caaagcaatt ggagaactgg atttgctgtt tatgtctctg 480 agaaatgcct gcatt 495 <210> 2 <211> 165 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Human IL-22 <400> 2 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala 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tatccagagg aatgtgcaaa agctgaagga cacagtgaaa 360 aagcttggag agagtggaga gatcaaagca attggagaac tggatttgct gtttatgtct 420 ctgagaaatg cctgcattga gcccaaatct agtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 480 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 540 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 600 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 660 aagccgcggg aggagcagta cggaagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 720 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 780 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 840 accctgcccc catcccggga agagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 900 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 960 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1020 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1080 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg t 1131 <210> 12 <211> 377 <212> PRT <213> Artificial 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG1 (minus C-terminal Lys) N297A <400> 13 gcgcccatca gctcccactg caggcttgac aagtccaact tccagcagcc ctatatcacc 60 aaccgcacct tcatgctggc taaggaggct agcttggctg ataacaacac agacgttcgt 120 ctcattgggg agaaactgtt ccacggagtc agtatgagtg agcgctgcta tctgatgaag 180 caggtgctga acttcaccct tgaagaagtg ctgttccctc aatctgatag gttccagcct 240 tatatgcagg aggtggtgcc cttcctggcc aggctcagca acaggctaag cacatgtcat 300 attgaaggtg atgacctgca tatccagagg aatgtgcaaa agctgaagga cacagtgaaa 360 aagcttggag agagtggaga gatcaaagca attggagaac tggatttgct gtttatgtct 420 ctgagaaatg cctgcattga gcccaaatct agtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 480 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 540 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 600 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 660 aagccgcggg aggagcagta cgctagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 720 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 780 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 840 accctgcccc catcccggga agagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 900 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 960 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1020 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1080 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg t 1131 <210> 14 <211> 377 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG1 (minus C-terminal Lys) N297A <400> 14 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro 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attgaaggtg atgacctgca tatccagagg aatgtgcaaa agctgaagga cacagtgaaa 360 aagcttggag agagtggaga gatcaaagca attggagaac tggatttgct gtttatgtct 420 ctgagaaatg cctgcattcg cgttgagtcc aaatatggtc ccccatgccc accatgccca 480 gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact 540 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac 600 cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 660 ccgcgggagg agcagttcgg aagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 720 caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc 780 tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc 840 ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa 900 ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 960 tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta 1020 accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag 1080 gctctgcaca accactacac acagaagagc ctctccctgt ctctgggtaa a 1131 <210> 16 <211> 377 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG4 (full) N297G <400> 16 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile 115 120 125 Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala 130 135 140 Cys Ile Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 145 150 155 160 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175 Pro Lys Asp Thr Leu 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG4 (full) N297A <400> 17 gcgcccatca gctcccactg caggcttgac aagtccaact tccagcagcc ctatatcacc 60 aaccgcacct tcatgctggc taaggaggct agcttggctg ataacaacac agacgttcgt 120 ctcattgggg agaaactgtt ccacggagtc agtatgagtg agcgctgcta tctgatgaag 180 caggtgctga acttcaccct tgaagaagtg ctgttccctc aatctgatag gttccagcct 240 tatatgcagg aggtggtgcc cttcctggcc aggctcagca acaggctaag cacatgtcat 300 attgaaggtg atgacctgca tatccagagg aatgtgcaaa agctgaagga cacagtgaaa 360 aagcttggag agagtggaga gatcaaagca attggagaac tggatttgct gtttatgtct 420 ctgagaaatg cctgcattcg cgttgagtcc aaatatggtc ccccatgccc accatgccca 480 gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact 540 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac 600 cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 660 ccgcgggagg agcagttcgc tagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 720 caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc 780 tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc 840 ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa 900 ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 960 tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta 1020 accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag 1080 gctctgcaca accactacac acagaagagc ctctccctgt ctctgggtaa a 1131 <210> 18 <211> 377 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG4 (full) N297A <400> 18 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile 115 120 125 Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala 130 135 140 Cys Ile Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 145 150 155 160 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 180 185 190 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 195 200 205 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 210 215 220 Gln Phe Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 225 230 235 240 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 245 250 255 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 260 265 270 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 275 280 285 Thr Lys 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agctgaagga cacagtgaaa 360 aagcttggag agagtggaga gatcaaagca attggagaac tggatttgct gtttatgtct 420 ctgagaaatg cctgcattga gcccaaatct agtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 480 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 540 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 600 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 660 aagccgcggg aggagcagta cggaagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 720 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 780 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 840 accctgcccc catcccggga agagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 900 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 960 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1020 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1080 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 1134 <210> 20 <211> 378 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG1 (full) N297G <400> 20 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile 115 120 125 Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala 130 135 140 Cys Ile Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 145 150 155 160 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 165 170 175 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 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Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG1 (full) N297A <400> 21 gcgcccatca gctcccactg caggcttgac aagtccaact tccagcagcc ctatatcacc 60 aaccgcacct tcatgctggc taaggaggct agcttggctg ataacaacac agacgttcgt 120 ctcattgggg agaaactgtt ccacggagtc agtatgagtg agcgctgcta tctgatgaag 180 caggtgctga acttcaccct tgaagaagtg ctgttccctc aatctgatag gttccagcct 240 tatatgcagg aggtggtgcc cttcctggcc aggctcagca acaggctaag cacatgtcat 300 attgaaggtg atgacctgca tatccagagg aatgtgcaaa agctgaagga cacagtgaaa 360 aagcttggag agagtggaga gatcaaagca attggagaac tggatttgct gtttatgtct 420 ctgagaaatg cctgcattga gcccaaatct agtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 480 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 540 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 600 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 660 aagccgcggg aggagcagta cgctagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 720 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 780 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 840 accctgcccc catcccggga agagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 900 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 960 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1020 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1080 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 1134 <210> 22 <211> 378 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG1 (full) N297A <400> 22 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val 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cacagtgaaa 360 aagcttggag agagtggaga gatcaaagca attggagaac tggatttgct gtttatgtct 420 ctgagaaatg cctgcattcg cgttgagtcc aaatatggtc ccccatgccc accatgccca 480 gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact 540 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac 600 cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 660 ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 720 caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc 780 tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc 840 ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa 900 ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 960 tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta 1020 accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag 1080 gctctgcaca accactacac acagaagagc ctctccctgt ctctgggt 1128 <210> 24 <211> 376 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG4 (wt N297, minus Lys) <400> 24 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile 115 120 125 Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala 130 135 140 Cys Ile Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 145 150 155 160 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 180 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Synthetic polynucleotide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG1 (wt N297, minus Lys) <400> 25 gcgcccatca gctcccactg caggcttgac aagtccaact tccagcagcc ctatatcacc 60 aaccgcacct tcatgctggc taaggaggct agcttggctg ataacaacac agacgttcgt 120 ctcattgggg agaaactgtt ccacggagtc agtatgagtg agcgctgcta tctgatgaag 180 caggtgctga acttcaccct tgaagaagtg ctgttccctc aatctgatag gttccagcct 240 tatatgcagg aggtggtgcc cttcctggcc aggctcagca acaggctaag cacatgtcat 300 attgaaggtg atgacctgca tatccagagg aatgtgcaaa agctgaagga cacagtgaaa 360 aagcttggag agagtggaga gatcaaagca attggagaac tggatttgct gtttatgtct 420 ctgagaaatg cctgcattga gcccaaatct agtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 480 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 540 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 600 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 660 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 720 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 780 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Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG4 (N297 wt) <400> 28 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu Ile 115 120 125 Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn Ala 130 135 140 Cys Ile Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 145 150 155 160 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 165 170 175 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 180 185 190 Val Val Asp 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polynucleotide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG1 (N297 wt) <400> 29 gcgcccatca gctcccactg caggcttgac aagtccaact tccagcagcc ctatatcacc 60 aaccgcacct tcatgctggc taaggaggct agcttggctg ataacaacac agacgttcgt 120 ctcattgggg agaaactgtt ccacggagtc agtatgagtg agcgctgcta tctgatgaag 180 caggtgctga acttcaccct tgaagaagtg ctgttccctc aatctgatag gttccagcct 240 tatatgcagg aggtggtgcc cttcctggcc aggctcagca acaggctaag cacatgtcat 300 attgaaggtg atgacctgca tatccagagg aatgtgcaaa agctgaagga cacagtgaaa 360 aagcttggag agagtggaga gatcaaagca attggagaac tggatttgct gtttatgtct 420 ctgagaaatg cctgcattga gcccaaatct agtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 480 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 540 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 600 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 660 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 720 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 780 gcccccatcg agaaaaccat 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic linker peptide <400> 45 Gly Gly Ser 1 <210> 46 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic linker peptide <400> 46 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic linker peptide <400> 47 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 48 <211> 146 <212> PRT <213> Pan troglodytes <400> 48 Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Ser Phe Gln Gln 1 5 10 15 Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser Leu 20 25 30 Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe His 35 40 45 Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu Asn 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln Pro 65 70 75 80 Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg Leu 85 90 95 Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn Val 100 105 110 Gln Lys Leu 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54 ttgaattcca ccatgggatg gtcatgtatc atcctttttc tagtagcaac tgcaactgga 60 gtacattcag cgcccatcag ctcccactgc aggc 94 <210> 55 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic IL-22 Fc fusion IgG4 reverse primer <400> 55 aggtcgactt atttacccag agacagggag agg 33 <210> 56 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic IgG1 N297G forward primer <400> 56 gcgggaggag cagtacggaa gcacgtaccg tgtgg 35 <210> 57 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic IgG1 N297G reverse primer <400> 57 ccacacggta cgtgcttccg tactgctcct cccgc 35 <210> 58 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic IgG4 N297G forward primer <400> 58 acaaagccgc gggaggagca gttcggaagc acgtaccgtg tggtcagcgt c 51 <210> 59 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic IgG4 N297G reverse primer <400> 59 gacgctgacc acacggtacg tgcttccgaa ctgctcctcc cgcggctttg t 51 <210> 60 <211> 411 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> IL-22 Fc fusion IgG2a <400> 60 Met Ala Val Leu Gln Lys Ser Met Ser Phe Ser Leu Met Gly Thr Leu 1 5 10 15 Ala Ala Ser Cys Leu Leu Leu Ile Ala Leu Trp Ala Gln Glu Ala Asn 20 25 30 Ala Leu Pro Val Asn Thr Arg Cys Lys Leu Glu Val Ser Asn Phe Gln 35 40 45 Gln Pro Tyr Ile Val Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser 50 55 60 Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe 65 70 75 80 Arg Gly Val Ser Ala Lys Asp Gln Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu 85 90 95 Asn Phe Thr Leu Glu Asp Val Leu Leu Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln 100 105 110 Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Thr Lys Leu Ser Asn Gln 115 120 125 Leu Ser Ser Cys His Ile Ser Gly Asp Asp Gln Asn Ile Gln Lys Asn 130 135 140 Val Arg Arg Leu Lys Glu Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser 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primer <400> 76 ccaccccaca ctcacaccgg 20 <210> 77 <211> 177 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Met Lys Leu Gln Cys Val Ser Leu Trp Leu Leu Gly Thr Ile Leu Ile 1 5 10 15 Leu Cys Ser Val Asp Asn His Gly Leu Arg Arg Cys Leu Ile Ser Thr 20 25 30 Asp Met His His Ile Glu Glu Ser Phe Gln Glu Ile Lys Arg Ala Ile 35 40 45 Gln Ala Lys Asp Thr Phe Pro Asn Val Thr Ile Leu Ser Thr Leu Glu 50 55 60 Thr Leu Gln Ile Ile Lys Pro Leu Asp Val Cys Cys Val Thr Lys Asn 65 70 75 80 Leu Leu Ala Phe Tyr Val Asp Arg Val Phe Lys Asp His Gln Glu Pro 85 90 95 Asn Pro Lys Ile Leu Arg Lys Ile Ser Ser Ile Ala Asn Ser Phe Leu 100 105 110 Tyr Met Gln Lys Thr Leu Arg Gln Cys Gln Glu Gln Arg Gln Cys His 115 120 125 Cys Arg Gln Glu Ala Thr Asn Ala Thr Arg Val Ile His Asp Asn Tyr 130 135 140 Asp Gln Leu Glu Val His Ala Ala Ala Ile Lys Ser Leu Gly Glu Leu 145 150 155 160 Asp Val Phe Leu Ala Trp Ile Asn Lys Asn His Glu Val Met Ser Ser 165 170 175 Ala <210> 78 <211> 176 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Met Lys Ala Ser Ser Leu Ala Phe Ser Leu Leu Ser Ala Ala Phe Tyr 1 5 10 15 Leu Leu Trp Thr Pro Ser Thr Gly Leu Lys Thr Leu Asn Leu Gly Ser 20 25 30 Cys Val Ile Ala Thr Asn Leu Gln Glu Ile Arg Asn Gly Phe Ser Glu 35 40 45 Ile Arg Gly Ser Val Gln Ala Lys Asp Gly Asn Ile Asp Ile Arg Ile 50 55 60 Leu Arg Arg Thr Glu Ser Leu Gln Asp Thr Lys Pro Ala Asn Arg Cys 65 70 75 80 Cys Leu Leu Arg His Leu Leu Arg Leu Tyr Leu Asp Arg Val Phe Lys 85 90 95 Asn Tyr Gln Thr Pro Asp His Tyr Thr Leu Arg Lys Ile Ser Ser Leu 100 105 110 Ala Asn Ser Phe Leu Thr Ile Lys Lys Asp Leu Arg Leu Cys His Ala 115 120 125 His Met Thr Cys His Cys Gly Glu Glu Ala Met Lys Lys Tyr Ser Gln 130 135 140 Ile Leu Ser His Phe Glu Lys Leu Glu Pro Gln Ala Ala Val Val Lys 145 150 155 160 Ala Leu Gly Glu Leu Asp Ile Leu Leu Gln Trp Met Glu Glu Thr Glu 165 170 175 <210> 79 <211> 207 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Met Asn Phe Gln Gln Arg Leu Gln Ser Leu Trp Thr Leu Ala Ser Arg 1 5 10 15 Pro Phe Cys Pro Pro Leu Leu Ala Thr Ala Ser Gln Met Gln Met Val 20 25 30 Val Leu Pro Cys Leu Gly Phe Thr Leu Leu Leu Trp Ser Gln Val Ser 35 40 45 Gly Ala Gln Gly Gln Glu Phe His Phe Gly Pro Cys Gln Val Lys Gly 50 55 60 Val Val Pro Gln Lys Leu Trp Glu Ala Phe Trp Ala Val Lys Asp Thr 65 70 75 80 Met Gln Ala Gln Asp Asn Ile Thr Ser Ala Arg Leu Leu Gln Gln Glu 85 90 95 Val Leu Gln Asn Val Ser Asp Ala Glu Ser Cys Tyr Leu Val His Thr 100 105 110 Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Lys Thr Val Phe Lys Asn Tyr His Asn Arg 115 120 125 Thr Val Glu Val Arg Thr Leu Lys Ser Phe Ser Thr Leu Ala Asn Asn 130 135 140 Phe Val Leu Ile Val Ser Gln Leu Gln Pro Ser Gln Glu Asn Glu Met 145 150 155 160 Phe Ser Ile Arg Asp Ser Ala His Arg Arg Phe Leu Leu Phe Arg Arg 165 170 175 Ala Phe Lys Gln Leu Asp Val Glu Ala Ala Leu Thr Lys Ala Leu Gly 180 185 190 Glu Val Asp Ile Leu Leu Thr Trp Met Gln Lys Phe Tyr Lys Leu 195 200 205 <210> 80 <211> 171 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Met Leu Val Asn Phe Ile Leu Arg Cys Gly Leu Leu Leu Val Thr Leu 1 5 10 15 Ser Leu Ala Ile Ala Lys His Lys Gln Ser Ser Phe Thr Lys Ser Cys 20 25 30 Tyr Pro Arg Gly Thr Leu Ser Gln Ala Val Asp Ala Leu Tyr Ile Lys 35 40 45 Ala Ala Trp Leu Lys Ala Thr Ile Pro Glu Asp Arg Ile Lys Asn Ile 50 55 60 Arg Leu Leu Lys Lys Lys Thr Lys Lys Gln Phe Met Lys Asn Cys Gln 65 70 75 80 Phe Gln Glu Gln Leu Leu Ser Phe Phe Met Glu Asp Val Phe Gly Gln 85 90 95 Leu Gln Leu Gln Gly Cys Lys Lys Ile Arg Phe Val Glu Asp Phe His 100 105 110 Ser Leu Arg Gln Lys Leu Ser His Cys Ile Ser Cys Ala Ser Ser Ala 115 120 125 Arg Glu Met Lys Ser Ile Thr Arg Met Lys Arg Ile Phe Tyr Arg Ile 130 135 140 Gly Asn Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Ile Ser Glu Leu Asp Ile Leu Leu 145 150 155 160 Ser Trp Ile Lys Lys Leu Leu Glu Ser Ser Gln 165 170 <210> 81 <211> 574 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 81 Met Arg Thr Leu Leu Thr Ile Leu Thr Val Gly Ser Leu Ala Ala His 1 5 10 15 Ala Pro Glu Asp Pro Ser Asp Leu Leu Gln His Val Lys Phe Gln Ser 20 25 30 Ser Asn Phe Glu Asn Ile Leu Thr Trp Asp Ser Gly Pro Glu Gly Thr 35 40 45 Pro Asp Thr Val Tyr Ser Ile Glu Tyr Lys Thr Tyr Gly Glu Arg Asp 50 55 60 Trp Val Ala Lys Lys Gly Cys Gln Arg Ile Thr Arg Lys Ser Cys Asn 65 70 75 80 Leu Thr Val Glu Thr Gly Asn Leu Thr Glu Leu Tyr Tyr Ala Arg Val 85 90 95 Thr Ala Val Ser Ala Gly Gly Arg Ser Ala Thr Lys Met Thr Asp Arg 100 105 110 Phe Ser Ser Leu Gln His Thr Thr Leu Lys Pro Pro Asp Val Thr Cys 115 120 125 Ile Ser Lys Val Arg Ser Ile Gln Met Ile Val His Pro Thr Pro Thr 130 135 140 Pro Ile Arg Ala Gly Asp Gly His Arg Leu Thr Leu Glu Asp Ile Phe 145 150 155 160 His Asp Leu Phe Tyr His Leu Glu Leu Gln Val Asn Arg Thr Tyr Gln 165 170 175 Met His Leu Gly Gly Lys Gln Arg Glu Tyr Glu Phe Phe Gly Leu Thr 180 185 190 Pro Asp Thr Glu Phe Leu Gly Thr Ile Met Ile Cys Val Pro Thr Trp 195 200 205 Ala Lys Glu Ser Ala Pro Tyr Met Cys Arg Val Lys Thr Leu Pro Asp 210 215 220 Arg Thr Trp Thr Tyr Ser Phe Ser Gly Ala Phe Leu Phe Ser Met Gly 225 230 235 240 Phe Leu Val Ala Val Leu Cys Tyr Leu Ser Tyr Arg Tyr Val Thr Lys 245 250 255 Pro Pro Ala Pro Pro Asn Ser Leu Asn Val Gln Arg Val Leu Thr Phe 260 265 270 Gln Pro Leu Arg Phe Ile Gln Glu His Val Leu Ile Pro Val Phe Asp 275 280 285 Leu Ser Gly Pro Ser Ser Leu Ala Gln Pro Val Gln Tyr Ser Gln Ile 290 295 300 Arg Val Ser Gly Pro Arg Glu Pro Ala Gly Ala Pro Gln Arg His Ser 305 310 315 320 Leu Ser Glu Ile Thr Tyr Leu Gly Gln Pro Asp Ile Ser Ile Leu Gln 325 330 335 Pro Ser Asn Val Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ser Pro Leu Ser Tyr Ala 340 345 350 Pro Asn Ala Ala Pro Glu Val Gly Pro Pro Ser Tyr Ala Pro Gln Val 355 360 365 Thr Pro Glu Ala Gln Phe Pro Phe Tyr Ala Pro Gln Ala Ile Ser Lys 370 375 380 Val Gln Pro Ser Ser Tyr Ala Pro Gln Ala Thr Pro Asp Ser Trp Pro 385 390 395 400 Pro Ser Tyr Gly Val Cys Met Glu Gly Ser Gly Lys Asp Ser Pro Thr 405 410 415 Gly Thr Leu Ser Ser Pro Lys His Leu Arg Pro Lys Gly Gln Leu Gln 420 425 430 Lys Glu Pro Pro Ala Gly Ser Cys Met Leu Gly Gly Leu Ser Leu Gln 435 440 445 Glu Val Thr Ser Leu Ala Met Glu Glu Ser Gln Glu Ala Lys Ser Leu 450 455 460 His Gln Pro Leu Gly Ile Cys Thr Asp Arg Thr Ser Asp Pro Asn Val 465 470 475 480 Leu His Ser Gly Glu Glu Gly Thr Pro Gln Tyr Leu Lys Gly Gln Leu 485 490 495 Pro Leu Leu Ser Ser Val Gln Ile Glu Gly His Pro Met Ser Leu Pro 500 505 510 Leu Gln Pro Pro Ser Arg Pro Cys Ser Pro Ser Asp Gln Gly Pro Ser 515 520 525 Pro Trp Gly Leu Leu Glu Ser Leu Val Cys Pro Lys Asp Glu Ala Lys 530 535 540 Ser Pro Ala Pro Glu Thr Ser Asp Leu Glu Gln Pro Thr Glu Leu Asp 545 550 555 560 Ser Leu Phe Arg Gly Leu Ala Leu Thr Val Gln Trp Glu Ser 565 570 <210> 82 <211> 559 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 His Ala Pro Glu Asp Pro Ser Asp Leu Leu Gln His Val Lys Phe Gln 1 5 10 15 Ser Ser Asn Phe Glu Asn Ile Leu Thr Trp Asp Ser Gly Pro Glu Gly 20 25 30 Thr Pro Asp Thr Val Tyr Ser Ile Glu Tyr Lys Thr Tyr Gly Glu Arg 35 40 45 Asp Trp Val Ala Lys Lys Gly Cys Gln Arg Ile Thr Arg Lys Ser Cys 50 55 60 Asn Leu Thr Val Glu Thr Gly Asn Leu Thr Glu Leu Tyr Tyr Ala Arg 65 70 75 80 Val Thr Ala Val Ser Ala Gly Gly Arg Ser Ala Thr Lys Met Thr Asp 85 90 95 Arg Phe Ser Ser Leu Gln His Thr Thr Leu Lys Pro Pro Asp Val Thr 100 105 110 Cys Ile Ser Lys Val Arg Ser Ile Gln Met Ile Val His Pro Thr Pro 115 120 125 Thr Pro Ile Arg Ala Gly Asp Gly His Arg Leu Thr Leu Glu Asp Ile 130 135 140 Phe His Asp Leu Phe Tyr His Leu Glu Leu Gln Val Asn Arg Thr Tyr 145 150 155 160 Gln Met His Leu Gly Gly Lys Gln Arg Glu Tyr Glu Phe Phe Gly Leu 165 170 175 Thr Pro Asp Thr Glu Phe Leu Gly Thr Ile Met Ile Cys Val Pro Thr 180 185 190 Trp Ala Lys Glu Ser Ala Pro Tyr Met Cys Arg Val Lys Thr Leu Pro 195 200 205 Asp Arg Thr Trp Thr Tyr Ser Phe Ser Gly Ala Phe Leu Phe Ser Met 210 215 220 Gly Phe Leu Val Ala Val Leu Cys Tyr Leu Ser Tyr Arg Tyr Val Thr 225 230 235 240 Lys Pro Pro Ala Pro Pro Asn Ser Leu Asn Val Gln Arg Val Leu Thr 245 250 255 Phe Gln Pro Leu Arg Phe Ile Gln Glu His Val Leu Ile Pro Val Phe 260 265 270 Asp Leu Ser Gly Pro Ser Ser Leu Ala Gln Pro Val Gln Tyr Ser Gln 275 280 285 Ile Arg Val Ser Gly Pro Arg Glu Pro Ala Gly Ala Pro Gln Arg His 290 295 300 Ser Leu Ser Glu Ile Thr Tyr Leu Gly Gln Pro Asp Ile Ser Ile Leu 305 310 315 320 Gln Pro Ser Asn Val Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ser Pro Leu Ser Tyr 325 330 335 Ala Pro Asn Ala Ala Pro Glu Val Gly Pro Pro Ser Tyr Ala Pro Gln 340 345 350 Val Thr Pro Glu Ala Gln Phe Pro Phe Tyr Ala Pro Gln Ala Ile Ser 355 360 365 Lys Val Gln Pro Ser Ser Tyr Ala Pro Gln Ala Thr Pro Asp Ser Trp 370 375 380 Pro Pro Ser Tyr Gly Val Cys Met Glu Gly Ser Gly Lys Asp Ser Pro 385 390 395 400 Thr Gly Thr Leu Ser Ser Pro Lys His Leu Arg Pro Lys Gly Gln Leu 405 410 415 Gln Lys Glu Pro Pro Ala Gly Ser Cys Met Leu Gly Gly Leu Ser Leu 420 425 430 Gln Glu Val Thr Ser Leu Ala Met Glu Glu Ser Gln Glu Ala Lys Ser 435 440 445 Leu His Gln Pro Leu Gly Ile Cys Thr Asp Arg Thr Ser Asp Pro Asn 450 455 460 Val Leu His Ser Gly Glu Glu Gly Thr Pro Gln Tyr Leu Lys Gly Gln 465 470 475 480 Leu Pro Leu Leu Ser Ser Val Gln Ile Glu Gly His Pro Met Ser Leu 485 490 495 Pro Leu Gln Pro Pro Ser Arg Pro Cys Ser Pro Ser Asp Gln Gly Pro 500 505 510 Ser Pro Trp Gly Leu Leu Glu Ser Leu Val Cys Pro Lys Asp Glu Ala 515 520 525 Lys Ser Pro Ala Pro Glu Thr Ser Asp Leu Glu Gln Pro Thr Glu Leu 530 535 540 Asp Ser Leu Phe Arg Gly Leu Ala Leu Thr Val Gln Trp Glu Ser 545 550 555 <210> 83 <211> 325 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 83 Met Ala Trp Ser Leu Gly Ser Trp Leu Gly Gly Cys Leu Leu Val Ser 1 5 10 15 Ala Leu Gly Met Val Pro Pro Pro Glu Asn Val Arg Met Asn Ser Val 20 25 30 Asn Phe Lys Asn Ile Leu Gln Trp Glu Ser Pro Ala Phe Ala Lys Gly 35 40 45 Asn Leu Thr Phe Thr Ala Gln Tyr Leu Ser Tyr Arg Ile Phe Gln Asp 50 55 60 Lys Cys Met Asn Thr Thr Leu Thr Glu Cys Asp Phe Ser Ser Leu Ser 65 70 75 80 Lys Tyr Gly Asp His Thr Leu Arg Val Arg Ala Glu Phe Ala Asp Glu 85 90 95 His Ser Asp Trp Val Asn Ile Thr Phe Cys Pro Val Asp Asp Thr Ile 100 105 110 Ile Gly Pro Pro Gly Met Gln Val Glu Val Leu Ala Asp Ser Leu His 115 120 125 Met Arg Phe Leu Ala Pro Lys Ile Glu Asn Glu Tyr Glu Thr Trp Thr 130 135 140 Met Lys Asn Val Tyr Asn Ser Trp Thr Tyr Asn Val Gln Tyr Trp Lys 145 150 155 160 Asn Gly Thr Asp Glu Lys Phe Gln Ile Thr Pro Gln Tyr Asp Phe Glu 165 170 175 Val Leu Arg Asn Leu Glu Pro Trp Thr Thr Tyr Cys Val Gln Val Arg 180 185 190 Gly Phe Leu Pro Asp Arg Asn Lys Ala Gly Glu Trp Ser Glu Pro Val 195 200 205 Cys Glu Gln Thr Thr His Asp Glu Thr Val Pro Ser Trp Met Val Ala 210 215 220 Val Ile Leu Met Ala Ser Val Phe Met Val Cys Leu Ala Leu Leu Gly 225 230 235 240 Cys Phe Ala Leu Leu Trp Cys Val Tyr Lys Lys Thr Lys Tyr Ala Phe 245 250 255 Ser Pro Arg Asn Ser Leu Pro Gln His Leu Lys Glu Phe Leu Gly His 260 265 270 Pro His His Asn Thr Leu Leu Phe Phe Ser Phe Pro Leu Ser Asp Glu 275 280 285 Asn Asp Val Phe Asp Lys Leu Ser Val Ile Ala Glu Asp Ser Glu Ser 290 295 300 Gly Lys Gln Asn Pro Gly Asp Ser Cys Ser Leu Gly Thr Pro Pro Gly 305 310 315 320 Gln Gly Pro Gln Ser 325 <210> 84 <211> 306 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Met Val Pro Pro Pro Glu Asn Val Arg Met Asn Ser Val Asn Phe Lys 1 5 10 15 Asn Ile Leu Gln Trp Glu Ser Pro Ala Phe Ala Lys Gly Asn Leu Thr 20 25 30 Phe Thr Ala Gln Tyr Leu Ser Tyr Arg Ile Phe Gln Asp Lys Cys Met 35 40 45 Asn Thr Thr Leu Thr Glu Cys Asp Phe Ser Ser Leu Ser Lys Tyr Gly 50 55 60 Asp His Thr Leu Arg Val Arg Ala Glu Phe Ala Asp Glu His Ser Asp 65 70 75 80 Trp Val Asn Ile Thr Phe Cys Pro Val Asp Asp Thr Ile Ile Gly Pro 85 90 95 Pro Gly Met Gln Val Glu Val Leu Ala Asp Ser Leu His Met Arg Phe 100 105 110 Leu Ala Pro Lys Ile Glu Asn Glu Tyr Glu Thr Trp Thr Met Lys Asn 115 120 125 Val Tyr Asn Ser Trp Thr Tyr Asn Val Gln Tyr Trp Lys Asn Gly Thr 130 135 140 Asp Glu Lys Phe Gln Ile Thr Pro Gln Tyr Asp Phe Glu Val Leu Arg 145 150 155 160 Asn Leu Glu Pro Trp Thr Thr Tyr Cys Val Gln Val Arg Gly Phe Leu 165 170 175 Pro Asp Arg Asn Lys Ala Gly Glu Trp Ser Glu Pro Val Cys Glu Gln 180 185 190 Thr Thr His Asp Glu Thr Val Pro Ser Trp Met Val Ala Val Ile Leu 195 200 205 Met Ala Ser Val Phe Met Val Cys Leu Ala Leu Leu Gly Cys Phe Ala 210 215 220 Leu Leu Trp Cys Val Tyr Lys Lys Thr Lys Tyr Ala Phe Ser Pro Arg 225 230 235 240 Asn Ser Leu Pro Gln His Leu Lys Glu Phe Leu Gly His Pro His His 245 250 255 Asn Thr Leu Leu Phe Phe Ser Phe Pro Leu Ser Asp Glu Asn Asp Val 260 265 270 Phe Asp Lys Leu Ser Val Ile Ala Glu Asp Ser Glu Ser Gly Lys Gln 275 280 285 Asn Pro Gly Asp Ser Cys Ser Leu Gly Thr Pro Pro Gly Gln Gly Pro 290 295 300 Gln Ser 305

Claims (31)

  1. 인터루킨(IL)-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 5℃±3℃에서 저장되고 차광될 때 저장 수명이 36개월 이상이고, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함하는 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질의 농도가 약 0.5㎎/mL 내지 약 20㎎/mL인 약제학적 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    (i) 안정제;
    (ii) 계면활성제;
    (iii) 완충제; 및/또는
    (iv) 등장화제(tonicity agent)를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    (i) 상기 안정제가 아미노산, 티오소르비톨, 아스코르브산, 모노티오글리세롤, 사이클로덱스트린, 트롤록스(Trolox)(6-하이드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카복실산), 피리독신, 만니톨, 금속 킬레이터 또는 이들의 조합이고/이거나;
    (ii) 상기 안정제의 농도가 약 1mM 내지 약 10mM, 특히 약 5mM인 약제학적 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 아미노산이 메티오닌, 시스테인, 트립토판 또는 이들의 조합인 약제학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 4의 위치 M25 또는 M139에서 메티오닌의 산화가 AAPH 스트레스 시험에 의해 평가될 때 10% 미만인 약제학적 조성물.
  7. 제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제가 비이온성 계면활성제인 약제학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    (i) 상기 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트, 폴록사머, 폴리옥시에텔렌 알킬 에테르, 알킬 페닐 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 이들의 조합이고/이거나;
    (ii) 상기 계면활성제의 농도가 약 0.001%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v), 특히 약 0.02%(w/v)인 약제학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서, (i) 상기 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80이거나 (ii) 상기 폴록사머가 폴록사머 188인 약제학적 조성물.
  10. 제3항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 포스페이트, 석시네이트, 아세테이트, 히스티딘 또는 이들의 조합인 약제학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    (i) 상기 포스페이트가 일염기성 인산나트륨, 이염기성 인산나트륨, 삼염기성 인산나트륨, 일염기성 인산칼륨, 이염기성 인산칼륨, 삼염기성 인산칼륨 또는 이들의 혼합물이고/이거나;
    (ii) 상기 완충제의 농도가 약 5mM 내지 약 20mM, 특히 약 10mM인 약제학적 조성물.
  12. 제3항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 등장화제가 당(sugar), 아미노산 또는 염인 약제학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서,
    (i) 상기 당이 수크로스, 글루코스, 글리세롤 또는 트레할로스이고/이거나;
    (ii) 상기 염이 염화나트륨 또는 염화칼륨이고/이거나;
    (iii) 상기 등장화제의 농도가 약 100mM 내지 약 500mM, 특히 약 240mM인 약제학적 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 6.6 내지 약 8인 약제학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 7.1인 약제학적 조성물.
  16. 링커에 의해 Fc 영역에 연결된 IL-22 폴리펩티드를 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 약 1㎎/mL 내지 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질, 약 5mM 메티오닌 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함하는 약제학적 조성물.
  17. 제16항에 있어서,
    (i) 상기 약제학적 조성물은 약 10mM 인산나트륨 및 약 240mM 수크로스를 추가로 포함하고/하거나;
    (ii) 상기 약제학적 조성물은 약 1㎎/mL 또는 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질을 포함하고/하거나;
    (iii) 상기 인산나트륨은 일염기성 인산나트륨과 이염기성 인산나트륨의 혼합물인 약제학적 조성물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 상기 약제학적 조성물은 단위 투여형이고/이거나;
    (ii) 상기 담체는 물이고/이거나;
    (iii) 상기 약제학적 조성물은 1회 이상의 냉동-해동 사이클을 통해 안정하고/하거나;
    (iv) 상기 약제학적 조성물은 약 25℃에서 약 2주 이상 안정하고/하거나;
    (v) 상기 약제학적 조성물은 -20℃에서 약 48개월 이상 안정하고/하거나;
    (vi) 상기 약제학적 조성물은 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(size-exclusion high-performance liquid chromatography, SE-HPLC)에 의해 평가될 때 순도가 약 85% 이상이고/이거나;
    (vii) 상기 약제학적 조성물은 비환원(non-reduced, NR) 모세관 전기영동 나트륨 도데실 설페이트 비-겔 체질(capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate non-gel sieving, CE-SDS-NGS)에 의해 평가될 때 순도가 약 75% 이상이고/이거나;
    (viii) 상기 약제학적 조성물은 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 투여용으로 제제화되고/되거나;
    (ix) 상기 약제학적 조성물은 보존제를 함유하지 않고/않거나;
    (x) 상기 약제학적 조성물은 등장성 염화나트륨 용액 및/또는 희석제로 희석한 후 주입에 의해 투여되도록 제제화된 약제학적 조성물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 상기 IL-22 폴리펩티드는 글리코실화되고/되거나;
    (ii) 상기 Fc 영역은 글리코실화되지 않고/않거나;
    (iii) 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 297에서 상기 아미노산 잔기는 Gly 또는 Ala이고/이거나 상기 Fc 영역의 EU 지수와 같은 위치 299에서 상기 아미노산 잔기는 Ala, Gly 또는 Val이고/이거나;
    (iv) 상기 Fc 영역은 IgG1 또는 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함하고/하거나;
    (v) 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8의 아미노산 서열과의 서열 동일성이 95% 이상인 아미노산 서열을 포함하는 약제학적 조성물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-22 Fc 융합 단백질은 서열번호 8, 서열번호 10 또는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 약제학적 조성물.
  21. 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 IL-22 Fc 융합 단백질 및 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 약 5mM 메티오닌, 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함하는 약제학적 조성물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 추가 치료제 및/또는 겔화제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 약제학적 조성물.
  24. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서
    (i) 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease, IBD)의 치료,
    (ii) 장내 미생물 감염 억제, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포(goblet cell) 보존, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 장에서의 상피 상처 치유 향상,
    (iii) 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염의 치료
    (iv) 상처 치유 가속 또는 개선, 또는
    (v) 심혈관 병태의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
  25. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 염증성 장 질환(IBD)의 치료가 필요한 대상체에서 염증성 장 질환(IBD)을 치료하는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 IBD가 궤양성 대장염 또는 크론병인 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 궤양성 대장염이 중등도(moderate) 내지 중증(severe)의 궤양성 대장염인 방법.
  28. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 장내 미생물 감염 억제, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포 보존, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유 향상이 필요한 대상체의 장내 미생물 감염을 억제하고, 미생물 감염 동안 장내 술잔 세포를 보존하고, 상피 세포 완전성, 상피 세포 증식, 상피 세포 분화, 상피 세포 이동 또는 상피 상처 치유를 향상시키는 방법.
  29. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서
    (i) 급성 신장 손상 또는 급성 췌장염;
    (ii) 죽상동맥경화성 플라크(atherosclerotic plaque) 형성의 병리를 포함하는 심혈관 병태;
    (iii) 대사증후군; 및/또는
    (iv) 급성 내독소혈증, 패혈증 또는 둘 다를 치료하는 방법.
  30. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 상처 치유 가속 또는 개선이 필요한 대상체에서 상처 치유를 가속 또는 개선하는 방법.
  31. 제25항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 상기 조성물이 약 1㎎/mL 내지 약 10㎎/mL의 IL-22 Fc 융합 단백질, 약 10mM 인산나트륨, 약 240mM 수크로스, 약 5mM 메티오닌 및 약 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 7.1, 최종 농도를 포함하고/하거나;
    (ii) 상기 약제학적 조성물이 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 투여되고/되거나;
    (iii) 상기 대상체가 하나 이상의 추가 치료제와 공동 투여되고/되거나;
    (iv) 상기 대상체가 인간인 방법.
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