ES2942636T3

ES2942636T3 - Proteínas de unión a IL-11R y usos de las mismas

Info

Publication number: ES2942636T3
Application number: ES14749445T
Authority: ES
Inventors: Kirsten Mae Edwards; Matthew Philip Hardy; Veronika Rayzman; Michael Wilson
Original assignee: CSL Ltd
Current assignee: CSL Ltd
Priority date: 2013-02-07
Filing date: 2014-02-06
Publication date: 2023-06-05
Anticipated expiration: 2034-02-06
Also published as: FI2953971T3; HK1217502A1; AU2014214530A1; US20160031999A1; CN104995211A; CN110551217B; KR102489953B1; JP6545105B2; JP2016515094A; EP4219552A3; SG11201505762XA; DK2953971T3; EP2953971A4; WO2014121325A1; EP4219552A2; AU2014214530B2; CN110551217A; PT2953971T; EP2953971A1; CN117843785A

Abstract

La presente descripción proporciona proteínas que comprenden sitios de unión a antígeno de anticuerpos que se unen al receptor alfa de interleucina-11 (IL-11) (IL-11Rα) y usos de las mismas, por ejemplo, en terapia. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Proteínas de unión a IL-11R y usos de las mismas

CAMPO

La presente divulgación se refiere a proteínas que comprenden sitios de unión a antígeno de anticuerpos que se unen al receptor alfa de interleucina-11 (IL-11) (IL-11Ra) y usos de las mismas, por ejemplo, en terapia. ANTECEDENTES IL-11 es un miembro de la familia de citoquinas IL-6 que también comprende IL-27, IL-31, factor inhibidor de la leucemia (LIF), oncostatina M (OSM) y factor neurotrófico ciliar (CNTF), entre otros. Las citoquinas de la familia IL-6 inducen la transducción de señales a través de una subunidad p del receptor transductor de señales común, gp130 y una subunidad a del receptor específico. En el caso de IL-11, la unión de esta citoquina a su subunidad a del receptor específico, IL-11Ra, induce la homodimerización de gp130. La dimerización de gp130 activa la vía de señalización de JAK/STAT y lleva a la activación del transductor de señales y activador de la transcripción (STAT) 3 (STAT3) y, en menor medida, STAT1.

Se sabe que la señalización de IL-11 desempeña un papel en la hematopoyesis, la respuesta inmunitaria, la inflamación, la adipogénesis, la osteoclastogénesis, la neurogénesis, la maduración de megacariocitos y la producción de plaquetas. IL-11 se usa clínicamente o está en desarrollo para tratar una variedad de afecciones, por ejemplo, trombocitopenia inducida por quimioterapia y varios trastornos inflamatorios que incluyen artritis, enfermedad inflamatoria intestinal, daño pulmonar inducido por radiación, sepsis y psoriasis. Sin embargo, el uso clínico de la IL-11 se ha restringido debido a informes de eventos adversos graves, incluyendo edemas. Además, se ha demostrado que la IL-11 tiene efectos nocivos en varias condiciones.

Por ejemplo, se ha descubierto que la IL-11 actúa como un inhibidor de la formación ósea y es fundamental para la formación y actividad de los osteoclastos y la resorción ósea. Por tanto, se ha propuesto el bloqueo de la actividad de IL-11 como tratamiento para la osteoporosis y para prevenir la reabsorción ósea/promover la formación ósea en otras afecciones como cáncer óseo metastásico, mieloma, enfermedad ósea de Paget y fractura y curación de huesos.

Se ha implicado que la señalización de IL-11 tiene un papel patogénico durante la fase temprana de la tuberculosis. Se ha demostrado que el bloqueo de IL-11 con un anticuerpo anti-IL-11 disminuye la histopatología y la infiltración neutrofílica del tejido pulmonar en ratones infectados con Mycobacterium tuberculosis.

También se ha propuesto el antagonismo de IL-11 como un método para tratar trastornos mediados por Th2 que incluyen asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), rinitis, alergias y dermatitis atópica. En este sentido, se ha demostrado que el bloqueo de la señalización de IL-11 usando una forma mutante de IL-11 que no induce la transducción de señales tiene un beneficio terapéutico en un modelo de asma de ratones.

IL-11 y/o IL-11Ra se sobreexpresan en cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, osteosarcoma, cáncer de endometrio y cáncer de ovario. Además, como se ha analizado anteriormente, la dimerización de gp130 inducida por IL-11 lleva a la activación de STAT3, que induce la expresión de genes asociados con la angiogénesis (por ejemplo, VEGF), la progresión del ciclo celular (por ejemplo, ciclina D1) y la supervivencia celular (por ejemplo, Bcl-XL, supervivencia). La actividad persistente de STAT3 parece estar asociada con enfermedades malignas hematológicas y tumores de origen epitelial. La activación excesiva de STAT3 promueve el crecimiento y la supervivencia de las células gástricas, se asocia con un aumento de la angiogénesis gástrica y lleva a la tumorigénesis gástrica en ratones. Sin embargo, la inflamación gástrica, la hiperplasia y la formación de tumores se suprimen en ratones que no responden a IL-11 o en ratones tratados con un mutante de IL-11 sin señalización.

La IL-11 también está implicada en otros procesos biológicos, como la inhibición de la adipogénesis, la inducción de caquexia (por ejemplo, caquexia por cáncer), la inducción de una respuesta febril, la modulación del metabolismo de la matriz extracelular, la estimulación de los reactivos de fase aguda y la implantación embrionaria.

Será evidente para el experto en la técnica a partir de lo anterior que los reactivos que neutralizan la señalización de IL-11 son deseables por su potencial para proporcionar un beneficio terapéutico en cualquiera de una serie de condiciones diversas. Los reactivos que se unen a la IL-11Ra también son deseables ya que tienen la ventaja de ser capaces de dirigirse específicamente a las células in vivo en lugar de necesitar unirse y neutralizar la IL-11 soluble en todo el sujeto.

A pesar de esta conveniencia, muchos reactivos (por ejemplo, anticuerpos) que se unen a IL-11Ra no neutralizan la señalización de IL-11. Por ejemplo, Blanc et al (Journal of Immunological Methods 241: 43-59, 2000) describieron un panel de 14 anticuerpos monoclonales de ratón producidos contra IL-11Ra humana, pero ninguno de ellos fue capaz de inhibir la proliferación de células BaF3/gp130/IL-11R inducida por IL-11, lo que indica que los anticuerpos no neutralizan la señalización de IL-11. Los anticuerpos anti-IL-11Ra comercialmente disponibles, por ejemplo, 4D12 disponible de Santa Cruz Biotechnology, Inc., tampoco neutralizan la señalización de IL-11.

Cardo Cila et al., (PLOS One, 20 de octubre de 2018 vol. 3(10), página e3452) analiza un motivo de péptido ligando seleccionado de un paciente con cáncer que es un sitio de interacción con receptores dentro la interleucina-¹¹humana.

Blanc et al., (Journal of Immunological Methos, 31 de julio del 2000, vol. 241 páginas 43-59) analiza anticuerpos monoclonales contra la cadena alfa del receptor de interleucina-11 humana (IL-11 Ralfa) y sus usos en estudios de células mononucleares humanas.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona una proteína de unión a IL-11Ra que comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, en donde el dominio de unión a antígeno se une a IL-11Ra e inhibe la proliferación mediada por IL-11 de células BaF3 que expresan IL-11Ra y gp130, y en donde:

(i) el dominio de unión a antígeno se une a un epítopo que comprende los residuos entre los aminoácidos ^{1 1 1} 215 de la SEQ ID NO: 1;

(ii) el dominio de unión a antígeno comprende una V^hque comprende la secuencia:

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFX1X2X3SX4X5WVRQAPGKGLE

WVSSIVPXeXyXsXgTQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTA VYYCAKX10X11X12WGX13FX14X15WGRGTLVTVSS

en donde: X¹= S, A, G o W; X²= W o R; X³= Y, W o F; X⁴= M, I, V, T o L; X⁵= T o A; X⁶= S, W, Y, o H; X⁷= G o A; Xa = G, D o T; X⁹= H, Y, L, I o F; X¹⁰= G o P; X¹⁰= P, E, V, L, N o H; X¹²= G o D; X¹³= S, M, R, L, Q o T; X¹⁴= D, A o W; y X¹⁵= L, V, F, Q, E, Y o T;

(iii) el dominio de unión a antígeno comprende una V^lque comprende la secuencia:

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDX1X2X3X4X5X6WYQQKPGKAPK

LLIYDASNLQTGYPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCXyQXsXgXio

Xi 1X12PX13F GPGTKVDIK,

en donde X¹= I o V; X²= N, D, G, S, A o H; X³= N, Y, I, K, M, Q, G o H; X⁴= Y o W; X⁵= L, V, I, o M; X6 = No E; X⁷= Q, E, S, o T; Xa = Y, A, H, F, N, S, o W; X⁹= Do E; X¹⁰= N, D, F, S, E o T; X¹¹= Lo Q; X¹²= S, A, W, T, M o Q; y X¹³= T, E, F, A, L, N, o Q; y

(iv) el dominio de unión a antígeno comprende una secuencia de Vh por lo menos aproximadamente un 95%, o un 96%, o un 97%, o un 98% o un 99% idéntica a una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y el dominio de unión a antígeno comprende una secuencia de V^lpor lo menos aproximadamente un 94% o un 95%, o un 96%, o un 97%, o un 98%, o un 99% idéntica a una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

La invención también proporciona un anticuerpo que se une a IL-11Ra e inhibe la proliferación mediada por IL-11 de BaF3 que expresan IL-11Ra y gp130, el anticuerpo comprendiendo:

(i) una VH que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una VL que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(ii) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iii) una VH que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una VL que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iv) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(v) una VH que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una VL que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vi) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vii) una VH que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una VL que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(viii) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(ix) una VH que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una VL que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8;

(x) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8;

(xi) una VH que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una VL que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15;

(xii) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15;

(xiii) una VH que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una VL que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16;

(xiv) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16;

(xv) una VH que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una VL que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18;

(xvi) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18;

(xvii) una VH que comprende las CDR 1,2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una VL que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29; o

(xviii) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29.

La invención proporciona además un ácido nucleico que codifica la proteína de unión a IL-11Ra o el anticuerpo de la invención o un polipéptido de los mismos.

La invención proporciona además un constructo de expresión que comprende el ácido nucleico de la invención.

La invención proporciona además una célula aislada o recombinante que expresa la proteína de unión a IL-11Ra o el anticuerpo de la invención.

La invención proporciona además una composición que comprende una proteína de unión a IL-11Ra o el anticuerpo de la invención y un portador farmacéuticamente aceptable.

La invención proporciona además la proteína de unión a IL-11Ra, el anticuerpo o la composición de la invención para su uso en el tratamiento de una afección mediada por IL-11, en donde la afección mediada por IL-11 es una afección autoinmune, una afección inflamatoria, una afección de desgaste, una afección ósea o un cáncer.

La invención está definida por las reivindicaciones y cualquier otro aspecto, configuración o realización expuesta en la presente que no entre dentro del alcance de las reivindicaciones se proporciona solamente por información.

Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento (o diagnóstico) se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

BREVE DESCRIPCIÓN

Al producir la presente invención, los inventores buscaron producir reactivos (por ejemplo, anticuerpos y proteínas que comprenden dominios de unión a antígeno de los mismos) que se unen a IL-11Ra y neutralizan la señalización de IL-11. Los inventores produjeron una serie de anticuerpos que tienen tal actividad, algunos de los cuales neutralizan potentemente la señalización de IL-11, por ejemplo, previenen la proliferación de células BaF3 dependientes de IL-11. Se demostró que estos anticuerpos tienen reactividad cruzada con IL-11Ra humana (hIL-11Ra) e IL-11Ra de mono cynomolgus (cynoIL-11Ra), lo que significa que pueden usarse en modelos de enfermedad humana en primates. También se descubrió que los anticuerpos se unían a epítopos superpuestos.

Luego, los inventores maduraron por afinidad uno de estos anticuerpos y produjeron una serie de anticuerpos adicionales que tenían propiedades deseables adicionales, por ejemplo, la neutralización de la señalización de IL-11 y/o afinidad mejorada y/o secuencias similares a la línea germinal humana (por ejemplo, que tienen una probabilidad reducida de inducir una respuesta inmune cuando se administran a un humano).

Sobre la base de lo anterior, será evidente para el experto en la técnica que los inventores han producido una proteína que comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, el dominio de unión a antígeno capaz de unirse o unirse específicamente a IL-11Ray neutralizar la señalización de IL-11.

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo como se define en la reivindicación 1. El dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, y el dominio de unión a antígeno es capaz de unirse a hIL-11Ra y cynoIL-11Ra.

La proteína de unión a IL-11Ra neutraliza la señalización de IL-11 humana (hIL-11) y/o IL-11 de mono cynomolgus (cynoIL-11).

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y la proteína inhibe la proliferación mediada por IL-11 (por ejemplo, hIL-11 o cynoIL-11) de células BaF3 que expresan IL-11Ra y gp130 con una IC⁵⁰de 10 pg/ml o menos. En un ejemplo, la IC⁵⁰es de 5 pg/ml o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 4 pg/ml o menos o de 3,5 pg/ml o menos. En un ejemplo, la IC⁵⁰es de 3 pg/ml o menos o de 2 pg/ml o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 1 pg/ml o menos. Por ejemplo, la IC⁵oes de 0,9 pg/ml o menos o de 0,8 pg/ml o menos o de 0,7 pg/ml. En un ejemplo, la IC⁵⁰es de 0,7 pg/ml o menos. En un ejemplo, en relación con cada uno de los ejemplos anteriores, la IC⁵⁰puede ser de 10 pg/ml o más o de 10 ng/ml o más.

En un ejemplo, la IC⁵⁰es de 10nM o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 8nM o menos o de 7 nM o menos. En un ejemplo, la IC⁵⁰es de 6 nM o menos o 6,5nM o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 5nM o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 4,5nM o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 4nM o menos. En un ejemplo, en relación con cada una de los ejemplos anteriores, la IC⁵⁰puede ser de 10pM o más.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra inhibe la proliferación mediada por IL-11 (por ejemplo, hIL-11 o cynoIL-11) de células BaF3 que expresan IL-11Ra y gp130 con una IC⁵⁰por lo menos aproximadamente 1,5 veces mayor que la del anticuerpo 8E2 (que comprende una cadena pesada que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 83 y una cadena ligera que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 84). En un ejemplo, la IC⁵⁰es por lo menos aproximadamente 2 veces mayor o por lo menos aproximadamente 2,5 veces mayor o por lo menos aproximadamente 3 veces mayor que la del anticuerpo 8E2.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra inhibe IL-11 la proliferación mediada por IL-11 (por ejemplo, hIL-11 o cynoIL-11) de células BaF3 que expresan IL-11Ra y gp130 con una IC⁵⁰por lo menos aproximadamente 1,5 veces mayor (es decir, el valor de IC⁵⁰es de aproximadamente 1,5 veces menos) o 2 veces mayor o 3 veces mayor que una muteína de hIL-11 antagonista (por ejemplo, que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 110), en donde la IC⁵⁰se mide en nM. En un ejemplo, la IC⁵⁰es por lo menos aproximadamente 3,5 veces mayor o por lo menos aproximadamente 4 veces mayor que la de la muteína.

En un ejemplo, la IC⁵⁰se determina cultivando células BaF3 que expresan IL-11Ra y gp130 (por ejemplo, modificadas genéticamente para expresar IL-11Ra y/o gp130) (por ejemplo, aproximadamente 1 x 104 células) en presencia de aproximadamente 0,3 ng/ml de hIL-11 a aproximadamente 5 ng/ml de hIL-11 (por ejemplo, en presencia de aproximadamente 0,3 ng/ml de hIL-11 o aproximadamente 5 ng/ml de hIL-11) durante aproximadamente 48-50 horas, o aproximadamente 48 horas o aproximadamente 50 horas. En un ejemplo, las células se cultivan en presencia de una proteína de la invención (por ejemplo, durante aproximadamente 30 minutos) antes de la adición de la IL-11. En un ejemplo, la proliferación se determina midiendo la incorporación de 3H-timidina en el ADN durante las últimas 6 horas de cultivo. En los ensayos realizados para determinar la neutralización de cynoIL-11, las células pueden cultivarse en presencia de aproximadamente 0,5 ng/ml de cynoIL-11 a aproximadamente 5 ng/ml de cynoIL-11 (por ejemplo, en presencia de aproximadamente 0,5 ng/ml cynoIL-11 o aproximadamente 5 ng/ml de cynoIL-11).

La proteína de unión a IL-11Ra comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ray neutraliza la señalización de IL-11 y el nivel de unión de la proteína de unión de IL-11Ra a un polipéptido de la SEQ ID NO: 86 puede ser menor que el nivel de unión de la proteína de unión de IL-11Ra a un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y el nivel de unión de la proteína de unión de IL-11Ra a un polipéptido de la SEQ ID NO: 89 puede ser menor que el nivel de unión de la proteína de unión de IL-11Ra a un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

En un ejemplo, el nivel de unión se determina mediante transferencia Western y/o mediante clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) de células que expresan el polipéptido.

En un ejemplo, el nivel de unión de la proteína de unión a IL-11Ra al polipéptido de la SEQ ID NO: 86 u 89 se reduce por lo menos aproximadamente 10 veces o 20 veces o 50 veces o 100 veces o 150 veces o 200 veces en comparación con la unión de la proteína de unión a IL-11Ra al polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra no se une de manera detectable al polipéptido de la SEQ ID NO: 86 u 89.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 87 u 88. Por ejemplo, el nivel de unión con el que la proteína de unión a IL-11Ra se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 87 o 88 es similar o aproximadamente igual (por ejemplo, dentro de aproximadamente el 20% o el 15% o el 10% o el 5%) del nivel de unión al polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y el dominio de unión a antígeno se une a un epítopo que comprende residuos dentro del primer dominio de fibronectina III de IL-11Ra.

En epítopo puede comprender residuos dentro del dominio similar a inmunoglobulina y el primer dominio de fibronectina III de IL-11Ra

El epítopo comprende residuos entre los aminoácidos 111-215 de la SEQ ID NO: 1.

En un ejemplo, el epítopo comprende residuos entre los aminoácidos 1-215 de la SEQ ID NO: 1.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8E2 (que comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5) a hIL-11Ra y/o un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8E4 (que comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 74 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 73) a hIL-11Ra y/o un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8D10 (que comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 76 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 75) a hIL-11Ra y/o un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8E2 (que comprende una cadena pesada que comprende una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera que comprende una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5 y una región constante de cadena ligera humana) a hIL-11Ra y/o a un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8E4 (que comprende una cadena pesada que comprende una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 74 y una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera que comprende una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 73 y una región constante de cadena ligera humana) a hIL-11Ra y/o a un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8D10 (que comprende una cadena pesada que comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 76 y una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera que comprende una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 75 y una región constante de cadena ligera humana) a hIL-11Ra y/o a un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8E2 (que comprende una cadena pesada que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 83 y una cadena ligera que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 84) a hIL-11Ra y/o un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o ^{8 5}.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8E4 (que comprende una cadena pesada que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 92 y una cadena ligera que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 91) a hIL-11Ra y/o un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o ^{8 5}.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8D10 ((que comprende una cadena pesada que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 94 y una cadena ligera que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 93) a hIL-11Ra y/o un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o ^{8 5}.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ray neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el nivel de unión de la proteína de unión a IL-11Ra a un polipéptido de la SEQ ID NO: 95 es menor que el nivel de unión de la proteína de unión a IL-11Ra a un polipéptido de la S^eQ ID NO: 85.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ray neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el nivel de unión de la proteína de unión a IL-11Ra a un polipéptido de la SEQ ID NO: 96 es menor que el nivel de unión de la proteína de unión a IL-11Ra a un polipéptido de la Se Q ID NO: 85.

En un ejemplo, el nivel de unión de la proteína de unión a IL-11Ra al polipéptido que comprende la sustitución se reduce por lo menos aproximadamente 1,5 veces o 2 veces.

En un ejemplo, el nivel de unión de la proteína de unión a IL-11Ra al polipéptido que comprende la sustitución se reduce por lo menos aproximadamente 3 veces o 4 veces o 5 veces o 10 veces.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra no se une detectablemente al polipéptido que comprende la sustitución.

En un ejemplo, el nivel de unión se evalúa usando un biosensor, por ejemplo, mediante resonancia de plasmones superficiales. Por ejemplo, se inmoviliza la proteína de unión a IL-11Ra y se determina el nivel de unión a un polipéptido de la SEQ ID NO: 85, 95 o 96. Como se ejemplifica en la presente, al evaluar el nivel de unión a varias concentraciones puede determinarse una afinidad.

En otro ejemplo, el nivel de unión se evalúa usando FACS. Por ejemplo, la unión de la proteína de unión a IL-11Ra a una célula que expresa un polipéptido de la SEQ ID NO: 85, 95 o 96 o a una forma de IL-11Ra que comprende una sustitución descrita en la presente.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra se une preferiblemente a un polipéptido de la SEQ ID NO: 85 con respecto a su capacidad para unirse a un polipéptido de la SEQ ID NO: 95 o 96.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8E2 (que comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5) y /o 8E4 (que comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 74 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 73) y/o 8D10 (que comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 76 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 75) a un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/u 85.

En un ejemplo, el dominio de unión al antígeno reacciona de manera cruzada con:

(i) un polipéptido de la SEQ ID NO: 97; y/o

(ii) un polipéptido de la SEQ ID NO: 98; y/o

(iii) un polipéptido de la SEQ ID NO: 99.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra no se une de manera detectable a IL-11Ra de ratón (SEQ ID NO: 82 o 102) y/o a un polipéptido de la SEQ ID NO: 90.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra reacciona de manera cruzada con IL-11Ra de ratón (SEQ ID NO: 82 o 102) y/o con un polipéptido de la SEQ ID NO: 90.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra tiene una constante de afinidad (Kd) por IL-11Ra humana y/o el polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85 de aproximadamente 9x10-9M o menos. Por ejemplo, la Kd es aproximadamente 8x10-9 M o menos o aproximadamente 7x10-9 M o menos o aproximadamente 6xl0-9 M o menos o aproximadamente 5x10-9 M o menos. En un ejemplo, la Kd es aproximadamente 4,8x10-9 M o menos.

En otro ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra tiene una constante de afinidad (K^d) por IL-11Ra humana y/o el polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o 85 de aproximadamente 2x10-9 M o menos. Por ejemplo, la K^des aproximadamente 1x10-9 M o menos o aproximadamente 9x10-10 M o menos o aproximadamente 8x10-10 M o menos o aproximadamente 7x10-10 M o menos. En un ejemplo, la K^des de aproximadamente 5x10-10 M o menos. En un ejemplo, la K^des aproximadamente 4x10-10 M o menos. En un ejemplo, la K^des aproximadamente 3x10-10 M o menos. En un ejemplo, la Kd es aproximadamente 2x10-10 M o menos. En un ejemplo, la Kd es aproximadamente 1,5x10-10 M o menos.

En un ejemplo, en relación con cada uno de los ejemplos anteriores, la Kd puede ser de 0,1x10-12 M o más o 1x10-12 M o más.

En un ejemplo, la Kd se evalúa usando un biosensor, por ejemplo, mediante resonancia de plasmones superficiales. Por ejemplo, se inmoviliza la proteína de unión a IL-llR a y se determina el nivel de unión a un polipéptido de la SEQ ID NO: 85.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra tiene un punto medio de transición térmica (Tm) de aproximadamente 60° C o más. Por ejemplo, la Tm es de aproximadamente 61° C o mayor, por ejemplo, aproximadamente 62° C o más, como aproximadamente 63° C o más. Por ejemplo, la Tm es de aproximadamente 65° C o más. Por ejemplo, la Tm es de aproximadamente 69° C o más. Por ejemplo, la Tm es de aproximadamente 70° C o más. Se considera que las proteínas que tienen Tm más altas son más estables, proporcionando de este modo un mejor almacenamiento y/o efectos reducidos tras la administración, por ejemplo, debido a la agregación.

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende:

(i) una V^hque comprende una secuencia por lo menos aproximadamente un 95% o 96% o 97% o 98% o 99% idéntica a una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37;

(ii) una Vl que comprende una secuencia por lo menos aproximadamente un 94% idéntica (o 95% idéntica o 96% idéntica o 97% idéntica o 98% idéntica o 99% idéntica) a una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iii) una Vh como se expone en (i) y una Vl como se expone en (ii).

En un ejemplo, el dominio de unión a antígeno comprende

(i) una V^hque comprende una CDR1 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 31-35 de la SEQ ID NO: 37, una CDR2 que comprende una secuencia por lo menos aproximadamente un 80% idéntica (o 90% idéntica o 95% idéntica o 98% idéntica o 99% idéntica o 100% idéntica) a una secuencia expuesta entre los aminoácidos 50-66 de la SEQ ID NO: 37 y una CDR3 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 99-107 de la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una CDR1 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 24-34 de la SEQ ID NO: 5, una CDR2 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 50-56 de la SEQ ID NO: 5 y una CDR3 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 89-97 de la SEQ ID NO: 5 o una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5; o (ii) una Vh que comprende una CDR1 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 31-35 de la SEQ ID NO: 37, una CDR2 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 50-66 de la SEQ ID NO: 37 y una CDR3 que comprende una secuencia por lo menos aproximadamente un 55% idéntica (o 60% idéntica o 70% idéntica o 80% idéntica o 90% idéntica o 95% idéntica o 98% idéntica o 99% idéntica o 100% idéntica) a una secuencia expuesta entre aminoácidos 99-107 de la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una CDR1 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 24-34 de la SEQ ID NO: 5, una CDR2 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 50-56 de la SEQ ID NO: 5 y una CDR3 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 89-97 de la SEQ ID NO: 5 o una VLque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, el dominio de unión a antígeno comprende:

(i) una V^hque comprende una CDR1 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 31-35 de la SEQ ID NO: 37, una CDR2 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 50-66 de la SEQ ID NO: 37 y una CDR3 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 99-107 de la SEQ ID NO: 37 o una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una VLque comprende una CDR1 que comprende una secuencia por lo menos aproximadamente un 54% idéntica (o 60% idéntica o 70% idéntica o 80% idéntica o 90% idéntica o 95% idéntica o 98% idéntica o 99% idéntica o 100% idéntica) a una secuencia expuesta entre los aminoácidos 24-34 de la SEQ ID NO: 5, una CDR2 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 50-56 de la SEQ ID NO: 5 y una CDR3 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 89-97 de SEQ ID NUMERO 5; o

(iii) una Vh que comprende una CDR1 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 31-35 de la SEQ ID NO: 37, una CDR2 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 50-66 de la SEQ ID NO: 37 y una CDR3 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 99-107 de la SEQ ID NO: 37 o una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una CDR1 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 24-34 de la ^sE^qID NO: 5, una CDR2 que comprende una secuencia expuesta entre los aminoácidos 50-56 de la SEQ ID NO: 5 y una CDR3 que comprende una secuencia por lo menos aproximadamente un 66% idéntica (o 70% idéntica o 80% idéntica o 90% idéntica o 95% idéntica o 98% idéntica o 99% idéntica o 100% idéntica) a una secuencia expuesta entre los aminoácidos 89-97 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, la proteína comprende una Vl que comprende una CDR1, CDR2 y CDR3 de una Vl del anticuerpo 8E2 y una VH que comprende una CDR1 y una CDR2 de una VH del anticuerpo 8E2.

En un ejemplo, la proteína comprende una V^lque comprende un CDR1, CDR2 y CDR3 de una V^ldel anticuerpo 8E2 y una CDR1 y una VH que comprende una CDR1 y una CDR3 de una VH del anticuerpo 8E2.

En un ejemplo, la proteína comprende una Vl que comprende una CDR1, CDR2 y CDR3 de una Vl del anticuerpo 8E2 y una VH que comprende una CDR2 y una CDR3 de una VH del anticuerpo 8E2.

En un ejemplo, la proteína comprende una VL que comprende una CDR1 y una CDR3 de una VL del anticuerpo 8E2 y una V^hque comprende una CDR1, una ^cDR2 y una CDR3 de una V^hdel anticuerpo 8E2.

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno comprende:

(i) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 71 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 35; o

(ii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 72 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 36.

Tal proteína de unión a IL-11Ra puede mostrar una o más de las actividades funcionales descritas en la presente, por ejemplo, unión preferencial a un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 con respecto al nivel de unión de un polipéptido de la ^sE^qID NO: 3 que comprende una sustitución como se ha descrito anteriormente.

En un ejemplo, las diferencias entre la secuencia enumerada y la proteína de unión a IL-11Ra son sustituciones.

Los inventores han identificado numerosos sitios en una CDR1, CDR2 y/o CDR3 de Vh y una CDR1 y/o CDR3 de Vl que pueden mutarse, así como numerosas mutaciones que mantienen o mejoran la actividad de una proteína de unión a IL-11Ra. Por ejemplo, una mutación, por ejemplo, una sustitución está dentro de HCDR1 y/o uno o más (por ejemplo, 2 o 3 o 4) de HCDR2 y/o uno o más (por ejemplo, 2 o 3 o 4 o 5 o 6) de los seis residuos Nterminales o los seis residuos C-terminales de la HCDR3 del anticuerpo 8E2. Por ejemplo, una mutación, por ejemplo, una sustitución está dentro de por lo menos uno (por ejemplo, 2 o 3 o 4 o 5 o 6) de los seis aminoácidos C-terminales de LCDR1 y/o uno o más (por ejemplo, 2 o 3 o 4 o 5) de los cinco N-terminales de LCDR3 del anticuerpo 8E2.

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende una CDR1 de cadena ligera que comprende la secuencia:

QASQDX

en donde

X6 =N o La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende una CDR3 de cadena ligera que comprende la secuencia:

X¹QX²X³X⁴X⁵X⁶PX⁷(SEQ ID NO: 78)

en donde Xi = Q o E o S o T; X²= Y o H o F o N o S o W; X³= D o E; X⁴=N, D, F, S, E o T; X⁵= L o Q; X6 =S o A o W o T o M o Q y X ⁷= T o E o F o A o L o F o N o Q .

En un ejemplo, Xi es Q y X²es Y.

En un ejemplo, X6 es S y X⁷es T.

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende una CDR1 de cadena pesada que comprende la secuencia:

X¹X²SX³X⁴

en donde X¹= W o R ; X ²= Y o W o F ; X ⁴= M o I o V o T o L y X a = T o A

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende una CDR2 de cadena pesada que comprende la secuencia:

SIVPX¹X²X³X⁴TQYADSVKG

en donde X¹= S o W o Y o H ; X ²= G o A ; X ³= G o D o T y X ⁴= H o Y o L o I o F

La proteína de unión a IL-1Ra de la invención comprende una CDR3 de cadena pesada que comprende la secuencia:

X¹X²X³WGX⁴FX⁵X⁶

en donde X¹= G o P ; X ²= P o E o V o L o N o H ; X ³= G o D ; X ⁴= S o M o R o L ; X ⁵= D o A o W y X ⁶= L o V o F o Q o E o Y o T

En un ejemplo, X¹es G, X²es P y X³es G.

En un ejemplo, X⁵es D y X6 es L.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende una de las secuencias de consenso anteriores como una CDR y las CDR restantes son del anticuerpo 8E2.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en cualquiera de las SEQ ID NO: 37 a 70 y/o una V^lque comprende una secuencia expuesta en cualquiera de las SEQ ID NO: 5 a 34.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende:

(i) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(ii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 38 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 38 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(v) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 39 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 39 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 40 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(viii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 40 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(ix) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 41 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(x) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 41 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xi) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 42 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 42 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xiii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 43 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xiv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 43 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 44 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xvi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 44 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xvii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 45 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 45 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 46 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xx) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 46 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxi) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 47 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 47 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxiii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 48 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxiv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 48 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxv) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxvi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxvii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 50 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 50 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 51 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxx) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 51 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxi) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 52 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 52 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxiii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxiv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxv) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 54 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxvi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 54 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxvii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 55 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxviii) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 55 y una VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxix) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 56 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xl) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 56 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xli) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xlii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xliii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xliv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xlv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 59 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xlvi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 59 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xlvii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 60 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1,2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xlviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 60 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xlix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 61 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(l) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 61 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SeQ ID NO: 5;

(li) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 62 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 62 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(liii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 63 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(liv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 63 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 64 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lvi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 64 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lvii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 65 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 65 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 66 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lx) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 66 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxi) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 67 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 67 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxiii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 68 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxiv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 68 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxv) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 69 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxvi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 69 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxvii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 70 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxviii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 70 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxx) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 70 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(lxxi) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 6;

(lxxii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 6;

(lxxiii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 7;

(lxxiv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 7;

(lxxv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8;

(lxxvi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8;

(lxxvii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 9;

(lxxviii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 9;

(lxxix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 10;

(lxxx) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 10;

(lxxxi) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 11;

(lxxxii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 11;

(Ixxxiii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las c Dr 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 12;

(lxxxiv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 12;

(lxxxv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 13;

(lxxxvi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 13;

(lxxxvii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las ^cD^r1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 14;

(lxxxviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 14;

(lxxxix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDr 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15;

(xc) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15;

(xci) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16;

(xcii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16;

(xciii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 17;

(xciv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 17;

(xcv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18;

(xcvi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18;

(xcvii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 19;

(xcviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 19;

(xcix) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 20;

(c) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 20;

(ci) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 21;

(cii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 21;

(ciii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 22;

(civ) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 22;

(cv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 23;

(cvi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 23;

(cvii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 24;

(cviii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 24;

(cix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 25;

(cx) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 25;

(cxi) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 26;

(cxii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 26;

(cxiii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 27;

(cxiv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 27;

(cxv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 28;

(cxvi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 28;

(cxvii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29;

(cxviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29;

(cxix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 30;

(cxx) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 30;

(cxxi) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 31;

(cxxii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 31;

(cxxiii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 32;

(cxxiv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 32;

(cxxv) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 33;

(cxxvi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 33;

(cxxvii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las ^cD^r1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 34; o

(cxxviii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 34.

(i) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(ii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(v) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(viii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(ix) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8;

(x) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8;

(xi) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15;

(xii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15;

(xiii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16;

(xv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18;

(xvii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29; o

En un ejemplo, las CDR son las siguientes:

(i) CDR1 de cadena pesada: aminoácidos 31-35 de la secuencia enumerada;

(ii) CDR2 de cadena pesada: aminoácidos 50-66 de la secuencia enumerada (opcionalmente, en donde uno cualquiera o más de los cinco aminoácidos C-terminales están sustituidos con otro aminoácido de origen natural);

(iii) CDR3 de cadena pesada: aminoácidos 99-107 de la secuencia enumerada;

(iv) CDR1 de cadena ligera: aminoácidos 24-34 de la secuencia enumerada;

(v) CDR2 de cadena ligera: aminoácidos 50-56 de la secuencia enumerada; y

(vi) CDR3 de cadena ligera: aminoácidos 89-97 de la secuencia enumerada.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37. En un ejemplo, la Vl comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la S^eQ ID NO: 18.

En algunas realizaciones, la proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, como se define en la reivindicación 1, en donde el dominio de unión a antígeno se une o se une específicamente a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 y en donde el dominio de unión a antígeno comprende una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18. En un ejemplo, la V^hcomprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, las CDR son las siguientes:

(i) CDR1 de cadena pesada: aminoácidos 31-35 de la secuencia enumerada;

(iii) CDR3 de cadena pesada: aminoácidos 99-107 de la secuencia enumerada;

(iv) CDR1 de cadena ligera: aminoácidos 24-34 de la secuencia enumerada;

(v) CDR2 de cadena ligera: aminoácidos 50-56 de la secuencia enumerada; y

(vi) CDR3 de cadena ligera: aminoácidos 89-97 de la secuencia enumerada.

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende por lo menos una Vh y una Vl, en donde la Vh y la Vl se unen para formar un Fv que comprende un dominio de unión a antígeno. El experto en la técnica entenderá que el dominio de unión a antígeno comprende el sitio de unión del anticuerpo.

En un ejemplo, la Vh y la Vl están en una única cadena polipeptídica. Por ejemplo, la proteína es:

(i) un fragmento Fv de cadena sencilla (scFv);

(ii) un scFv dimérico (di-scFv);

(iii) uno de (i) o (ii) enlazado a una región constante de un anticuerpo, Fc o un dominio constante de cadena pesada (Ch) 2 y/o Ch3; o

(iv) uno de (i) o (ii) enlazado a una proteína que se une a una célula efectora inmunitaria.

En un ejemplo, la Vl y la Vh están en cadenas polipeptídicas separadas.

Por ejemplo, la proteína es:

(i) un diacuerpo;

(ii) un tricuerpo;

(iii) un tetracuerpo;

(iv) un Fab;

(v) un F(ab')²;

(vi) un Fv;

(vii) uno de (i) a (vi) enlazado a una región constante de un anticuerpo, Fc o un dominio constante de cadena pesada (Ch) 2 y/o Ch3;

(viii) uno de (i) a (vi) enlazado a una proteína que se une a una célula efectora inmunitaria.

Las proteínas anteriores (descritas en las dos listas anteriores) también pueden denominarse dominios de unión a antígeno de anticuerpos.

En un ejemplo, la proteína es un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal. En un ejemplo, el anticuerpo es un anticuerpo desnudo.

En un ejemplo, la proteína o anticuerpo es humano. En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención, que se une a IL-1lRa y neutraliza la señalización de IL-11, puede comprender:

(i) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(v) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(ix) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8;

(xi) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15;

(xiii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16;

(xiv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16;

(xv) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18;

(xvi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18;

(xvii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29; o

(xviii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37. En un ejemplo, la V^lcomprende CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18. (xix) En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11 comprende una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18. En un ejemplo, la V^hcomprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, las CDR son las siguientes:

(i) CDR1 de cadena pesada: aminoácidos 31-35 de la secuencia enumerada;

(iii) CDR3 de cadena pesada: aminoácidos 99-107 de la secuencia enumerada;

(iv) CDR1 de cadena ligera: aminoácidos 24-34 de la secuencia enumerada;

(v) CDR2 de cadena ligera: aminoácidos 50-56 de la secuencia enumerada; y

(vi) CDR3 de cadena ligera: aminoácidos 89-97 de la secuencia enumerada.

Las secuencias de V^hy V^lejemplares se describen en la Tabla 1.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, el anticuerpo comprendiendo una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 (opcionalmente, que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1) y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29.

En algunas realizaciones, el anticuerpo de la invención que se une a IL-11Ra y neutraliza la señalización de IL-11, comprende una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29.

En un ejemplo, las CDR son las siguientes:

(i) CDR1 de cadena pesada: aminoácidos 31-35 de la secuencia enumerada;

(iii) CDR3 de cadena pesada: aminoácidos 99-107 de la secuencia enumerada;

(iv) CDR1 de cadena ligera: aminoácidos 24-34 de la secuencia enumerada;

(v) CDR2 de cadena ligera: aminoácidos 50-56 de la secuencia enumerada; y

(vi) CDR3 de cadena ligera: aminoácidos 89-97 de la secuencia enumerada.

La referencia en la presente a una proteína o anticuerpo que "se une a" IL-11Ra proporciona un apoyo literal para una proteína o anticuerpo que "se une específicamente a" IL-11R.

En algunas realizaciones , la invención proporciona dominios de unión a antígeno o fragmentos de unión a antígeno de los anticuerpos anteriores.

En un ejemplo, una proteína o anticuerpo como se describe en la presente comprende una región constante humana, por ejemplo, una región constante de IgG, como una región constante de IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 o mezclas de las mismas. En el caso de un anticuerpo o proteína que comprenda una Vh y una Vl, la Vh puede enlazarse a una región constante de cadena pesada y la V^lpuede enlazarse a una región constante de cadena ligera.

La lisina C-terminal de la región constante de la cadena pesada de un anticuerpo completo (o una proteína de unión a IL-11Ra que comprende una región constante o una Ch3) de la invención puede eliminarse, por ejemplo, durante la producción o purificación del anticuerpo o la proteína, o manipulando recombinantemente el ácido nucleico que codifica una cadena pesada del anticuerpo. Por consiguiente, los anticuerpos completos (o proteínas de unión a IL-11R) pueden comprender poblaciones con todos los residuos de lisina C-terminal eliminados, poblaciones sin residuos de lisina C-terminal eliminados y/o poblaciones que tienen una mezcla de proteínas con y sin el residuo de lisina C-terminal.. En algunos ejemplos, las poblaciones pueden comprender adicionalmente proteína en la que el residuo de lisina C-terminal se elimina en una de las regiones constantes de la cadena pesada. De manera similar, una composición de anticuerpos completos puede comprender la misma o una mezcla similar de poblaciones de anticuerpos con o sin el residuo de lisina C-terminal.

En un ejemplo, una proteína o un anticuerpo como se describe en la presente comprende una región constante de un anticuerpo de IgG4 o una región constante estabilizada de un anticuerpo de IgG4. En un ejemplo, la proteína o el anticuerpo comprende una región constante de IgG4 con una prolina en la posición 241 (de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 1987 y/o 1991)).

En un ejemplo, la región constante de cadena pesada comprende una secuencia de la posición 119 a la posición 445 de la s Eq ID NO: 83. En un ejemplo, una proteína o anticuerpo como se describe en la presente o una composición de una proteína o anticuerpo como se describe en la presente, comprende una región constante de cadena pesada, que incluye una región constante de cadena pesada estabilizada, que comprende una mezcla de secuencias total o parcialmente con o sin el residuo de lisina C-terminal.

En un ejemplo, un anticuerpo de la invención comprende una V^hdivulgada en la presente enlazada o fusionada con una región constante de IgG4 o una región constante de IgG4 estabilizada (por ejemplo, como se ha analizado anteriormente) y la V^lestá enlazada o fusionada con una región constante de cadena ligera kappa.

Las características funcionales de una proteína de unión a IL-11Ra de la invención se tomarán para aplicar mutatis mutandis a un anticuerpo de la invención.

En un ejemplo, se aísla y/o se recombina una proteína o anticuerpo que se une a IL-11Ra como se describe en la presente.

En un ejemplo, una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra de la invención se conjuga con otro compuesto, por ejemplo, un marcador detectable o un compuesto que prolonga la vida media de la proteína o el anticuerpo, como polietilenglicol o una proteína de unión a albúmina. En la presente se describen otros compuestos adecuados.

La invención también proporciona un ácido nucleico que codifica la proteína o el anticuerpo de unión a IL-11Ra de la presente invención.

En un ejemplo, dicho ácido nucleico se incluye en un constructo de expresión en el que el ácido nucleico está operativamente enlazado a un promotor. Tal constructo de expresión puede estar en un vector, por ejemplo, un plásmido.

En ejemplos de la invención dirigidos a proteínas de unión a IL-11Ra de única cadena polipeptídica, el constructo de expresión puede comprender un promotor enlazado a un ácido nucleico que codifica esa cadena polipeptídica.

En ejemplos dirigidos a cadenas polipeptídicas múltiples que forman una proteína de unión a IL-11Ra, un constructo de expresión comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende, por ejemplo, una Vh enlazada operativamente a un promotor y un ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende, por ejemplo, una Vl enlazada operativamente a un promotor.

En otro ejemplo, el constructo de expresión es un constructo de expresión bicistrónico, por ejemplo, que comprende los siguientes componentes enlazados operativamente en orden 5' a 3':

(i) un promotor

(ii) un ácido nucleico que codifica un primer polipéptido;

(iii) un sitio de entrada al ribosoma interno; y

(iv) un ácido nucleico que codifica un segundo polipéptido,

en donde el primer polipéptido comprende una V^hy el segundo polipéptido comprende una V^l, o viceversa.

La presente invención también contempla constructos de expresión separados, uno de las cuales codifica un primer polipéptido que comprende una Vh y otro que codifica un segundo polipéptido que comprende una Vl. Por ejemplo, la presente invención también proporciona una composición que comprende:

(i) un primer constructo de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una Vh enlazada operativamente a un promotor; y

(ii) un segundo constructo de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una Vl enlazada operativamente a un promotor.

La presente invención también proporciona una célula aislada o recombinante que expresa una proteína de unión a IL-llR a de la invención.

En un ejemplo, la célula comprende el constructo de expresión de la invención o:

(i) un primer constructo de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una V^henlazada operativamente a un promotor; y

(ii) un segundo constructo de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una Vl operativamente enlazada a un promotor,

en donde el primer y el segundo polipéptidos se asocian para formar una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención.

Los ejemplos de células de la presente invención incluyen células bacterianas, células de levadura, células de insecto o células de mamífero.

La presente invención proporciona además métodos para producir una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra de la invención. Por ejemplo, dicho método implica mantener el o los constructos de expresión de la invención en condiciones suficientes para que se produzca la proteína o el anticuerpo de unión a IL-11Ra.

En un ejemplo, un método para producir una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra de la invención comprende cultivar la célula de la divulgación en condiciones suficientes para producir y, opcionalmente, secretar la proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra.

En un ejemplo, el método para producir una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra de la invención comprende adicionalmente aislar la proteína o anticuerpo y, opcionalmente, formular la proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra en una composición farmacéutica.

La presente invención proporciona además una composición que comprende una proteína o anticuerpo de unión a IL-llR a de la invención y un portador farmacéuticamente aceptable.

En algunos ejemplos, la composición comprende:

(i) un anticuerpo de la invención que comprende un residuo de lisina C-terminal de la cadena pesada;

(ii) un anticuerpo de la invención que carece de un residuo de lisina C-terminal de la cadena pesada; y/o (iii) un anticuerpo de la invención que comprende un residuo de lisina C-terminal en una cadena pesada y que carece de un residuo de lisina C-terminal en otra (u otra) cadena pesada y,

opcionalmente, un portador farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también proporciona una proteína, anticuerpo o composición de unión a IL-11Ra para su uso en un método para tratar o prevenir una afección mediada por IL-11 en un sujeto, el método comprendiendo administrar la proteína, el anticuerpo o la composición de unión a IL-11Ra de la invención. A este respecto, puede usarse una proteína, anticuerpo o composición de unión a IL-11Ra para prevenir una recaída de una afección, y esto se considera prevenir la afección.

En un ejemplo, la afección mediada por IL-11 es una afección autoinmune, una afección inflamatoria, una afección de desgaste, afecciones óseas o cáncer.

Las afecciones autoinmunes ejemplares incluyen artritis, enfermedad inflamatoria intestinal y psoriasis. Las afecciones inflamatorias ejemplares incluyen inflamación inducida por infección (por ejemplo, inflamación inducida por M. tuberculosis), inflamación gástrica (por ejemplo, asociada con cáncer gástrico), afecciones inflamatorias de las vías respiratorias (por ejemplo, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), rinitis o alergia) o dermatitis inflamatoria (por ejemplo, dermatitis atópica).

Las afecciones de desgaste ejemplares incluyen caquexia (por ejemplo, caquexia por cáncer o caquexia provocada por insuficiencia renal) o sarcopenia.

Las afecciones óseas ejemplares incluyen osteoporosis (incluyendo la osteoporosis posmenopáusica), fractura ósea, reabsorción/daño óseo provocado por cáncer (por ejemplo, cáncer óseo metastásico, mieloma o enfermedad ósea de Paget) y reabsorción/daño óseo provocado por el tratamiento del cáncer (por ejemplo, quimioterapia, ablación hormonal o inhibición hormonal).

Los cánceres ejemplares incluyen cánceres hematológicos, cánceres de origen epitelial, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, osteosarcoma, cáncer de endometrio y cáncer de ovario.

En un ejemplo, el cáncer o la afección ósea es la metástasis de un cáncer al hueso.

La invención también proporciona una proteína, anticuerpo o composición de unión a IL-11Ra para su uso en un método para inhibir o neutralizar IL-11 en un sujeto, el método comprendiendo administrar la proteína, el anticuerpo o la composición de unión a IL-11Ra de la invención. En un ejemplo, el sujeto padece una afección mediada por IL-11.

La presente invención también proporciona una proteína, anticuerpo o composición de unión a IL-11Ra para su uso en un método para prevenir el embarazo en un sujeto, el método comprendiendo administrar la proteína, el anticuerpo o la composición de unión a IL-11Ra de la invención.

En un ejemplo, un método descrito en la presente comprende administrar entre aproximadamente 0,05 mg/kg y 30 mg/kg de la proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra. Por ejemplo, el método comprende administrar entre 0,1 mg/kg y 10 mg/kg o entre 0,2 mg/kg y 5 mg/kg de la proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra. En un ejemplo, el método comprende administrar aproximadamente 0,5-2,0 mg/kg de la proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra.

La presente invención también proporciona una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra como se describe en la presente para su uso en cualquier ejemplo en medicina.

La presente invención también proporciona una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra como se describe en la presente para su uso de acuerdo con cualquier ejemplo en la fabricación de un medicamento para tratar una afección mediada por IL-11. Las afecciones ejemplares se describen en la presente.

La presente invención también proporciona una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra como se describe en la presente para su uso en un método para localizar y/o detectar y/o diagnosticar y/o pronosticar una afección mediada por IL-11 asociada con una célula que expresa IL-11Ra, el método comprendiendo detectar in vivo una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra como se describe en la presente unido a la célula que expresa IL-11Ra, si está presente, en donde la proteína o el anticuerpo de unión a IL-11Ra está conjugado con una etiqueta detectable.

En un ejemplo, el método comprende adicionalmente administrar al sujeto la proteína de unión a IL-11Ra. La presente invención también proporciona un método para detectar IL-11Ra o una célula que expresa la misma en una muestra, el método comprendiendo poner en contacto la muestra con una proteína o anticuerpo como se describe en la presente de acuerdo con cualquier ejemplo de tal manera que se forma un complejo y detectar el complejo, en donde la detección del complejo es indicativa de IL-11Ra o de una célula que expresa la misma en la muestra. En un ejemplo, el método se realiza ex vivo o in vitro.

La presente invención también proporciona un método para diagnosticar o pronosticar una afección mediada por IL-11, el método comprendiendo realizar un método como se describe en la presente de acuerdo con cualquier ejemplo para detectar IL-11Ra o una célula que expresa la misma, en donde la detección de IL-11Ra o la célula que expresa la misma es diagnóstico o pronóstico de la afección. En un ejemplo, el método se realiza ex vivo o in vitro. En la presente se describen afecciones ejemplares mediadas por IL-11Ra.

La presente invención también proporciona un kit (por ejemplo, un paquete o artículo de fabricación) que comprende una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra como se describe en la presente de acuerdo con cualquier ejemplo, opcionalmente, empaquetado con instrucciones para su uso en un método como se describe en la presente.

CLAVE PARA EL LISTADO DE SECUENCIAS SEQ ID NO 1: secuencia de aminoácidos de pre-IL-11Ra de Homo sapiens

SEQ ID NO 2: secuencia de aminoácidos de pre-IL-11 Ra de Macaca fascicularis

SEQ ID NO 3: secuencia de aminoácidos del polipéptido que comprende los aminoácidos 23 a 363 de la SEQ ID NO: 1, una etiqueta de 8xHIS y una serina en una posición correspondiente a la posición 248 de la SEQ ID NO: 1 (también denominada "WT F/L")

SEQ ID NO 4 secuencia de aminoácidos de gp130 de Homo sapiens

SEQ ID NO 5 secuencia de aminoácidos de la cadena Vl del anticuerpo 8E2

SEQ ID NO 6 secuencia de aminoácidos de la cadena Vl del anticuerpo TS-303

SEQ ID NO 7 secuencia de aminoácidos de la cadena V^ldel anticuerpo TS-305

SEQ ID NO 8 secuencia de aminoácidos de la cadena V^ldel anticuerpo TS-306

SEQ ID NO 9 secuencia de aminoácidos de la cadena V^ldel anticuerpo TS-307

SEQ ID NO 10 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-310

SEQ ID NO 11 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-311

SEQ ID NO 12 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-312

SEQ ID NO 13 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-313

SEQ ID NO 14 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-322

SEQ ID NO 15 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-2

SEQ ID NO 16 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-4

SEQ ID NO 17 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-6

SEQ ID NO 18 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-7

SEQ ID NO 19 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-9

SEQ ID NO 20 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-13

SEQ ID NO 21 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-14

SEQ ID NO 22 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-17

SEQ ID NO 23 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-20

SEQ ID NO 24 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-21

SEQ ID NO 25 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-22

SEQ ID NO 26 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-29

SEQ ID NO 27 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-32

SEQ ID NO 28 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-49

SEQ ID NO 29 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-51

SEQ ID NO 30 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-55

SEQ ID NO 31 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-57

SEQ ID NO 32 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-58

SEQ ID NO 33 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-63

SEQ ID NO 34 secuencia de aminoácidos de la cadena V_ldel anticuerpo TS-64

SEQ ID NO 35 secuencia de aminoácidos de consenso de la cadena Vl del antici

SEQ ID NO 36: secuencia de aminoácidos de consenso de la cadena Vl del anticuerpo 8E2 y derivados seleccionados

SEQ ID NO 37: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo 8E2

SEQ ID NO 38: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-66

SEQ ID NO 39: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-69

SEQ ID NO 40: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-71

SEQ ID NO 41 : secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-76

SEQ ID NO 42: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-79

SEQ ID NO 43: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-82

SEQ ID NO 44: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-88

SEQ ID NO 45: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-89

SEQ ID NO 46: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-91

SEQ ID NO 47: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-92

SEQ ID NO 48: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-97

SEQ ID NO 49: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-101

SEQ ID NO 50: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-103

SEQ ID NO 51 : secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-104

SEQ ID NO 52: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-107

SEQ ID NO 53: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-108

SEQ ID NO 54: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-115

SEQ ID NO 55: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-129

SEQ ID NO 56: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-133

SEQ ID NO 57: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-134

SEQ ID NO 58: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-135

SEQ ID NO 59: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-136

SEQ ID NO 60: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-140

SEQ ID NO 61 : secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-143

SEQ ID NO 62: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-151

SEQ ID NO 63: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-156

SEQ ID NO 64: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-213

SEQ ID NO 65: secuencia de aminoácidos de la cadena V_hdel anticuerpo TS-214

SEQ ID NO 66: secuencia de aminoácidos de la cadena V^hdel anticuerpo TS-215

SEQ ID NO 67: secuencia de aminoácidos de la cadena Vh del anticuerpo TS-218

SEQ ID NO 68: secuencia de aminoácidos de la cadena Vh del anticuerpo TS-221

SEQ ID NO 69: secuencia de aminoácidos de la cadena V^hdel anticuerpo TS-222

SEQ ID NO 70: secuencia de aminoácidos de la cadena Vh del anticuerpo TS-224

SEQ ID NO 71: secuencia de aminoácidos de consenso de la cadena V^hdel anticuerpo 8E2 y derivados SEQ ID NO 72: secuencia de aminoácidos de consenso de la cadena V^hdel anticuerpo 8E2 y derivados seleccionados

SEQ ID NO 73: secuencia de aminoácidos de la cadena Vl del anticuerpo 8E4

SEQ ID NO 74: secuencia de aminoácidos de la cadena VH del anticuerpo 8E4

SEQ ID NO 75: secuencia de aminoácidos de la cadena Vl del anticuerpo 8D10

SEQ ID NO 76: secuencia de aminoácidos de la cadena V^hdel anticuerpo 8D10

SEQ ID NO 77: secuencia de aminoácidos de consenso de CDR1 de la cadena VL del anticuerpo 8E2 y derivados

SEQ ID NO 78: secuencia de aminoácidos de consenso de CDR3 de la cadena VL del anticuerpo 8E2 y derivados

SEQ ID NO 79: secuencia de aminoácidos de consenso de CDR1 de la cadena VH del anticuerpo 8E2 y derivados

SEQ ID NO 80: secuencia de aminoácidos de consenso de CDR2 de la cadena VH del anticuerpo 8E2 y derivados

SEQ ID NO 81: secuencia de aminoácidos de consenso de CDR3 de la cadena Vh del anticuerpo 8E2 y derivados

SEQ ID NO 82: secuencia de aminoácidos de pre-IL-11Ra de Mus musculus

SEQ ID NO 83: secuencia de aminoácidos de la cadena pesada del anticuerpo 8E2

SEQ ID NO 84: secuencia de aminoácidos de la cadena ligera del anticuerpo 8E2

SEQ ID NO 85: secuencia de aminoácidos de un polipéptido que comprende los aminoácidos 23 a 318 de IL-11Ra de Homo sapiens (SEQ ID NO: 1), una etiqueta 8xHIS y una serina en una posición correspondiente a la posición 248 de la SEQ ID NO:1 (también conocido como "WT D1/2")

SEQ ID NO: 86: secuencia de aminoácidos de un polipéptido que comprende los aminoácidos 23-110 de IL-11Ra de Homo sapiens (SEQ ID NO: 1) y los aminoácidos 111-367 de IL-11Ra de Mus musculus (SEQ ID NO: 82) (en el que hay una serina en una posición correspondiente a la posición 206 de la SEQ ID NO: 82) y una etiqueta 8xHIS

SEQ ID NO: 87: secuencia de aminoácidos de un polipéptido que comprende los aminoácidos 23-215 de IL-11Ra de Homo sapiens (SEQ ID NO: 1) y los aminoácidos 216-367 de IL-11Ra de Mus musculus (SEQ ID NO: 82) y una etiqueta 8xHIS

SEQ ID NO: 88: secuencia de aminoácidos de un polipéptido que comprende los aminoácidos 23-318 de IL-11Ra de Homo sapiens (SEQ ID NO: 1) (en el que hay una serina en una posición correspondiente a la posición 248 de la SEQ ⁱD NO: 1) y los aminoácidos 319-367 de IL-11Ra de Mus musculus (S^eQ ID NO: 82) y una etiqueta 8xHIS

SEQ ID NO: 89: secuencia de aminoácidos de un polipéptido que comprende los aminoácidos 24-215 de IL-11Ra de Mus musculus (SEQ ID NO: 82) (en el que hay una serina en una posición correspondiente a la posición 206 de la SEQ ID NO: 82) y los aminoácidos 216-363 de IL-11Ra de Homo sapiens (SEQ ID NO: 1) y una etiqueta 8xHIS

SEQ ID NO: 90: secuencia de aminoácidos de un polipéptido que comprende los aminoácidos 24 a 367 de slL-11Ra de Mus musculus (SEQ ID NO: 82), una etiqueta 8xHIS y una serina en una posición correspondiente a la posición 206 de SEQ ID NO: 82

SEQ ID NO 91: secuencia de aminoácidos de la cadena ligera del anticuerpo 8E4

SEQ ID NO 92: secuencia de aminoácidos de la cadena pesada del anticuerpo 8E4

SEQ ID NO 93: secuencia de aminoácidos de la cadena ligera del anticuerpo 8D10

SEQ ID NO 94: secuencia de aminoácidos de la cadena pesada del anticuerpo 8D10

SEQ ID NO: 95: secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 85 que comprende un ácido glutámico en una posición correspondiente a la posición 117 de la SEQ ID NO: 1.

SEQ ID NO: 96: secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 85 que comprende una arginina en una posición correspondiente a la posición 66 de la SEQ ID NO: 1.

SEQ ID NO: 97: secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 85 que comprende una serina en una posición correspondiente a la posición 65 de la SEQ ID NO: 1.

SEQ ID NO: 98: secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 85 que comprende una serina en una posición correspondiente a la posición 101 de la SEQ ID NO: 1.

SEQ ID NO: 99: secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 85 que comprende una alanina en una posición correspondiente a la posición 178 de la SEQ ID NO: 1.

SEQ ID NO: 100: secuencia de aminoácidos de IL-11Ra de Homo sapiens madura

SEQ ID NO: 101: secuencia de aminoácidos de IL-11 Ra de Macaca fascicularis madura

SEQ ID NO: 102: secuencia de aminoácidos de sIL-11Ra de Mus musculus madura

SEQ ID NO: 103: secuencia de aminoácidos de consenso de 8E2L1 como se representa en la Figura 1 SEQ ID NO: 104: secuencia de aminoácidos de consenso de 8E2L3.1 como se representa en la Figura 1 SEQ ID NO 105: secuencia de aminoácidos de consenso de 8E2L3.2 como se representa en la Figura 1 SEQ ID NO 106: secuencia de aminoácidos de consenso de 8E2H1 como se representa en la Figura 2 SEQ ID NO 107: secuencia de aminoácidos de consenso de 8E2H2 como se representa en la Figura 2 SEQ ID NO 108: secuencia de aminoácidos de consenso de 8E2H3.1 como se representa en la Figura 2 SEQ ID NO 109: secuencia de aminoácidos de consenso de 8E2H3.2 como se representa en la Figura 2 BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 es una representación esquemática que muestra una alineación de las CDR de la V^ldel anticuerpo 8E2 y formas maduradas por afinidad de las mismas. Las secuencias de consenso enumeradas (SEQ ID NO: 103-105) representan el aminoácido que aparece más comúnmente en cada posición y se determinó usando el software MegAlign. Aparte de las secuencias de consenso, las secuencias se derivan de los anticuerpos expuestos en la Tabla 1.

La Figura 2 es una representación esquemática que muestra una alineación de las CDR de la Vh del anticuerpo 8E2 y las formas maduradas por afinidad de las mismas. Las secuencias de consenso enumeradas (SEQ ID NO: 106-109) representan el aminoácido que aparece más comúnmente en cada posición y se determinó usando el software MegAlign. Aparte de las secuencias de consenso, las secuencias se derivan de los anticuerpos expuestos en la Tabla 1.

Las Figuras 3A, B, C y D son representaciones esquemáticas que muestran secuencias de regiones variables del anticuerpo 8E2 y derivados. La Figura 3A muestra secuencias de regiones Vl de 8E2 y sus derivados de anticuerpos y la secuencia de consenso de regiones Vl de 8E2 y sus derivados de anticuerpos. La Figura 3B muestra secuencias de regiones V^lde 8E2 y derivados de anticuerpos seleccionados y la secuencia consenso de regiones V^lde 8E2 y derivados de anticuerpos seleccionados. La Figura 3C muestra secuencias de regiones V^hde 8E2 y sus derivados de anticuerpos y la secuencia consenso de regiones V^hde 8E2 y sus derivados de anticuerpos. La Figura 3D muestra secuencias de regiones V^hde 8E2 y derivados de anticuerpos seleccionados y la secuencia consenso de regiones V^hde 8E2 y derivados de anticuerpos seleccionados. Las regiones encuadradas contienen las CDR (como se indica) de acuerdo con la definición del sistema de numeración de Kabat.

La Figura 4 incluye una serie de representaciones gráficas que muestran que la IL-11 estimula la fosforilación de STAT-3 en la línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano DLD-1 y la línea celular de adenocarcinoma de estómago MKN-28, y que un anticuerpo de la invención puede inhibir esta fosforilación mediada por IL-11. Los paneles A y B muestran el nivel de fosforilación de STAT-3 en células DLD-1 y MKN-28, respectivamente, después de la estimulación con concentraciones crecientes de hIL-11 durante 15 minutos. Los paneles C y D muestran la inhibición de la fosforilación de STAT-3 mediada por IL-11 en células DLD-1 y MKN-28, respectivamente, aumentando las concentraciones de anticuerpo 8E2 anti-IL-11R (O). Por el contrario, el anticuerpo de control de isotipo BM4 (A) no tuvo efecto sobre la fosforilación de STAT-3 mediada por IL-11. (Se añadieron anticuerpos a las células antes de la estimulación con hIL-11 (50 ng/ml). Se muestran la media y las desviaciones estándar).

DESCRIPCIÓN DETALLADA

General

A lo largo de esta memoria descriptiva, a menos que se indique específicamente lo contrario o el contexto requiera lo contrario, la referencia a un solo paso, composición de la materia, grupo de pasos o grupo de composiciones de la materia se considerará que abarca uno y una pluralidad (es decir, uno o más) de esos pasos, composiciones de materia, grupos de pasos o grupos de composiciones de materia.

Cualquier ejemplo de la presente invención en la presente se considerará aplicable mutatis mutandis a cualquier otro ejemplo de la invención a menos que se indique específicamente lo contrario.

A menos que se defina específicamente lo contrario, se considerará que todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado que el entendido comúnmente por un experto en la técnica (por ejemplo, en cultivo celular, genética molecular, inmunología, inmunohistoquímica, química de proteínas y bioquímica).

A menos que se indique lo contrario, la proteína recombinante, el cultivo celular y las técnicas inmunológicas utilizadas en la presente invención son procedimientos estándar, bien conocidos por los expertos en la técnica. Tales técnicas se describen y explican a lo largo de la bibliografía en fuentes como, J. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984), J. Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989), T. A. Brown (editor), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volúmenes 1 y 2, IRL Press (1991), D. M. Glover y B. D. Hames (editores), DNA Cloning: A Practical Approach, Volúmenes 1-4, IRL Press (1995 y 1996), y F. M. Ausubel et al. (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988, incluyendo todas las actualizaciones hasta la actualidad), Ed Harlow y David Lane (editores) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory, (1988), y J. E. Coligan et al. (editores) Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (incluyenod todas las actualizaciones hasta la actualidad).

La descripción y definiciones de regiones variables y partes de las mismas, inmunoglobulinas, anticuerpos y fragmentos de los mismos en la presente pueden aclararse adicionalmente mediante el análisis en Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 y 1991, Bork et al., J. Mol. Biol. 242, 309-320, 1994, Chothia y Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987, Chothia et al. Nature 342, 877-883, 1989 y/o Al-Lazikani et al., J Mol Biol 273, 927-948, 1997.

Se entenderá que el término "y/o", por ejemplo, "X y/o Y" significa "X e Y" o "X o Y" y se considerará que proporciona apoyo explícito para ambos significados o para cualquier significado.

A lo largo de esta memoria descriptiva, se entenderá que la palabra "comprender", o variaciones como "comprende" o "que comprende", implica la inclusión de un elemento, número entero o paso, o grupo de elementos, números enteros o pasos indicados, pero no la exclusión de cualquier otro elemento, número entero o paso, o grupo de elementos, números enteros o pasos.

Como se usa en la presente, se interpretará que el término "derivado de" indica que un número entero específico puede obtenerse de una fuente en particular, aunque no necesariamente directamente de esa fuente.

Se entenderá que la referencia en la presente a un intervalo de, por ejemplo, residuos, es inclusiva. Por ejemplo, la referencia a "una región que comprende los aminoácidos 56 a 65" se entenderá de manera inclusiva, es decir, la región comprende una secuencia de aminoácidos como los numerados 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 y 65 en una secuencia especificada.

Definiciones seleccionadas

Con propósitos de nomenclatura solamente y sin limitación, se expone una secuencia ejemplar de una IL-11Ra precursora humana (pre-IL-11Ra) en la secuencia de referencia de NCBI: NP_001136256.1 (y se expone en la SEQ ID NO: 1). Una secuencia de un IL-11Ra humana madura se expone en la SEQ ID NO: 100. En el caso de la secuencia expuesta en NP_001136256.1, una proteína madura carece de los aminoácidos 1 a 22. Las posiciones de los aminoácidos se denominan a menudo en la presente por referencia a pre-IL-11Ra. Las posiciones en la IL-11Ra madura se determinan fácilmente teniendo en cuenta la secuencia señal (aminoácidos 1-22 en el caso de la SEQ ID NO: 1). Una secuencia ejemplar de una pre-IL-11Ra de mono cynomolgus se expone en la SEQ ID NO: 2 y de una IL-11Ra madura en la ^sE^qID NO: 101. Una secuencia ejemplar de una pre-IL-11Ra de ratón se expone en la SEQ ID NO: ID NO: 82 y de una IL-11Ra madura en la SEQ ID NO: 102. La secuencia de IL-11Ra de otras especies puede determinarse usando las secuencias proporcionadas en la presente y/o en bases de datos disponibles públicamente y/o puede determinarse usando técnicas estándar (por ejemplo, como se describe en Ausubel et al., (editores), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates y Wiley-Interscience (1988, incluyendo todas las actualizaciones hasta la actualidad) o Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)) La referencia a la IL-11Ra humana puede abreviarse como hIL-11Ra, la referencia a IL-11Ra de mono cynomolgus puede abreviarse como cynoIL-11Ra, y la referencia a IL-11Ra de ratón puede abreviarse como mIL-11Ra. La referencia a IL-11Ra soluble se refiere a polipéptidos que comprenden la región extracelular de IL-11Ra, por ejemplo, los aminoácidos 23-363 o 23-318 de la SEQ ID NO: 1. En los presentes estudios se usaron formas solubles del receptor que comprenden los aminoácidos 23-363 o 23-318 de la SEQ ID NO: 1 con una sustitución de serina en la posición 248 (por ejemplo, SEQ ID NO: 3 o 85) y el segmento correspondiente de mIL-11Ra con la sustitución de serina en una posición correspondiente a la posición 206 de la SEQ ID NO: 82 (por ejemplo, SEQ ID NO 90) para estudios sobre el receptor de ratón. Estas mutaciones de serina se introdujeron en los polipéptidos solubles para mejorar la expresión y evitar la agregación de los polipéptidos. También se han usado varias mutaciones puntuales del receptor soluble de la SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 85 (por ejemplo, ver las SEQ ID NO: 95-99). Estos polipéptidos solubles son representativos de hIL-11Ra o mIL-11Ra como lo demuestra la capacidad de las proteínas de unión a IL-11Ra de la invención para unirse al receptor relevante cuando se expresan en la superficie de una célula. Por consiguiente, los estudios que usan polipéptidos mutantes son un modelo de estudios que usan hIL-11Ra y/o mIL-11Ra.

La referencia en la presente a IL-11 incluye formas nativas de IL-11 y formas mutantes de la misma que retienen la capacidad de unirse a IL-11Ra (por ejemplo, hIL-11Ra) e inducen la señalización.

Se entenderá que la referencia en la presente a un dominio particular de hIL-11Ra significa lo siguiente: • Dominio similar a inmunoglobulina (similar a IG): aminoácidos 23-110 de la SEQ ID NO: 1;

• Primer dominio de fibronectina III: aminoácidos 111-215 de la SEQ ID NO: 1;

• Segundo dominio de fibronectina III: aminoácidos 216-370 de la SEQ ID NO: 1;

• Dominio transmembrana: aminoácidos 371-391 de la SEQ ID NO: 1;y

• Dominio citoplasmático: aminoácidos 392-422 de la SEQ ID NO: 1.

Como se usa en la presente, el término "muteína de hIL-11" incluye una forma mutante de hIL-11 en la que los residuos de tipo salvaje en las posiciones 58-62 (AMSAG) se reemplazan con PAIDY y el triptófano en el residuo 147 se reemplaza con una alanina (W147A) . Por ejemplo, la muteína comprende o consiste en una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 110. Otros ejemplos de muteínas de hIL-11 pueden encontrarse en la WO2009/052588. Opcionalmente, la muteína comprende una secuencia adicional, por ejemplo, una etiqueta hexa-HIS.

El término "proteína aislada" o "polipéptido aislado" es una proteína o polipéptido que en virtud de su origen o fuente de derivación no está asociado con componentes asociados de manera natural que lo acompañan en su estado nativo; está sustancialmente libre de otras proteínas de la misma fuente. Una proteína puede volverse sustancialmente libre de componentes asociados de manera natural o puede purificarse sustancialmente mediante aislamiento, usando técnicas de purificación de proteínas conocidas en la técnica. Por "sustancialmente purificada" se entiende que la proteína está sustancialmente libre de agentes contaminantes, por ejemplo, por lo menos aproximadamente un 70% o 75% o 80% o 85% o 90% o 95% o 96% o 97% o 98% o 99% libre de agentes contaminantes.

Se entenderá que el término "recombinante" significa el producto de la recombinación genética artificial. Por consiguiente, en el contexto de una proteína recombinante que comprende un dominio de unión a antígeno de anticuerpo, este término no abarca un anticuerpo de origen natural dentro del cuerpo de un sujeto que es el producto de la recombinación natural que se produce durante la maduración de las células B. Sin embargo, si se aísla dicho anticuerpo, debe considerarse una proteína aislada que comprende un dominio de unión a antígeno del anticuerpo. De manera similar, si el ácido nucleico que codifica la proteína se aísla y se expresa usando medios recombinantes, la proteína resultante es una proteína recombinante que comprende un dominio de unión a antígeno del anticuerpo. Una proteína recombinante también abarca una proteína expresada por medios recombinantes artificiales cuando está dentro de una célula, tejido o sujeto, por ejemplo, en el que se expresa.

Se considerará que el término "proteína" incluye una única cadena polipeptídica, es decir, una serie de aminoácidos contiguos enlazados por enlaces peptídicos o una serie de cadenas polipeptídicas enlazadas entre sí covalente o no covalentemente (es decir, un complejo polipeptídico). Por ejemplo, la serie de cadenas polipeptídicas pueden enlazarse covalentemente usando un enlace químico o un disulfuro adecuados. Los ejemplos de enlaces no covalentes incluyen enlaces de hidrógeno, enlaces iónicos, fuerzas de Van der Waals e interacciones hidrófoas.

Se entenderá del párrafo anterior que el término "polipéptido" o "cadena polipeptídica" significa una serie de aminoácidos contiguos enlazados por enlaces peptídicos.

Como se usa en la presente, el término "dominio de unión a antígeno" significará una región de un anticuerpo que es capaz de unirse específicamente a un antígeno, es decir, una V^ho una V^lo un Fv que comprende tanto una V^hcomo una V^l. El dominio de unión a antígeno no necesita estar en el contexto de un anticuerpo completo, por ejemplo, puede estar aislado (por ejemplo, un dominio de anticuerpo) o en otra forma, por ejemplo, como se describe en la presente, como un scFv.

Para los propósitos de la presente divulgación, el término "anticuerpo" incluye una proteína capaz de unirse específicamente a uno o unos pocos antígenos estrechamente relacionados (por ejemplo, lL-11Ra) en virtud de un dominio de unión a antígeno contenido dentro de un Fv. Este término incluye anticuerpos de cuatro cadenas (por ejemplo, dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas), anticuerpos recombinantes o modificados (por ejemplo, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos, anticuerpos injertados con CDR, anticuerpos primatizados, anticuerpos desinmunizados, anticuerpos sinhumanizados, semianticuerpos, anticuerpos biespecíficos). Un anticuerpo generalmente comprende dominios constantes, que pueden organizarse en una región constante o un fragmento constante o un fragmento cristalizable (Fc). Las formas ejemplares de anticuerpos comprenden una estructura de cuatro cadenas como su unidad básica. Los anticuerpos de longitud completa comprenden dos cadenas pesadas (~50 a 70 kD) enlazadas covalentemente y dos cadenas ligeras (~23 kDa cada una). Una cadena ligera generalmente comprende una región variable (si está presente) y un dominio constante y en los mamíferos es una cadena ligera k o una cadena ligera A. Una cadena pesada generalmente comprende una región variable y uno o dos dominios constantes enlazados por una región bisagra a dominios constantes adicionales. Las cadenas pesadas de los mamíferos son de uno de los siguientes tipos a, 6, £, ^yo p. Cada cadena ligera también está enlazada covalentemente a una de las cadenas pesadas. Por ejemplo, las dos cadenas pesadas y las cadenas pesada y ligera se mantienen unidas por enlaces disulfuro entre cadenas y por interacciones no covalentes. El número de enlaces disulfuro entre cadenas puede variar entre los diferentes tipos de anticuerpos. Cada cadena tiene una región variable N-terminal (Vh o Vl en donde cada una tiene una longitud de ~110 aminoácidos) y uno o más dominios constantes en el extremo C-terminal. El dominio constante de la cadena ligera (Cl que tiene una longitud de ~110 aminoácidos) se alinea con el primer dominio constante de la cadena pesada (Ch1 que tiene una longitud de 330 a 440 aminoácidos) y se une por enlaces disulfuro. La región variable de la cadena ligera está alineada con la región variable de la cadena pesada. La cadena pesada del anticuerpo puede comprender 2 o más dominios Ch adicionales (como Ch2, Ch3 y similares) y puede comprender una región bisagra entre los dominios constantes de Ch1 y Ch2. Los anticuerpos pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), clase (por ejemplo, IgGi, IgG², IgG³, IgG⁴, IgAi e IgA²) o subclase. En un ejemplo, el anticuerpo es un anticuerpo murino (ratón o rata) o un anticuerpo de primate (como humano). En un ejemplo, a la cadena pesada del anticuerpo le falta un residuo de lisina C-terminal. En un ejemplo, el anticuerpo está humanizado, sinhumanizado, es quimérico, injertado con CDR o desinmunizado.

Los términos "anticuerpo de longitud completa", "anticuerpo intacto" o "anticuerpo completo" se usan indistintamente para referirse a un anticuerpo en su forma sustancialmente intacta, en contraposición a un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo. Específicamente, los anticuerpos completos incluyen aquellos con cadenas pesadas y ligeras que incluyen una región Fc. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia de tipo salvaje (por ejemplo, dominios constantes de secuencia de tipo salvaje humanos) o variantes de secuencia de aminoácidos de los mismos.

Como se usa en la presente, "región variable" se refiere a las porciones de las cadenas ligera y/o pesada de un anticuerpo como se define en la presente que son capaces de unirse específicamente a un antígeno e incluye secuencias de aminoácidos de regiones determinantes de la complementariedad (CDR); es decir, CDR1, CDR2 y CDR3, y regiones marco (FR). Por ejemplo, la región variable comprende tres o cuatro FR (por ejemplo, FR1, FR2, FR3 y opcionalmente FR4) junto con tres CDR. V^hse refiere a la región variable de la cadena pesada. V^lse refiere a la región variable de la cadena ligera.

Como se usa en la presente, el término "regiones determinantes de la complementariedad" (sin. CDR; es decir, CDR1, CDR2 y CDR3) se refiere a los residuos de aminoácidos de una región variable de anticuerpo cuya presencia son los principales contribuyentes a la unión específica del antígeno. Cada dominio de región variable (Vh 0 Vl) típicamente tiene tres CDR identificadas como CDR1, CDR2 y CDR3. En un ejemplo, las posiciones de aminoácidos asignadas a las CDR y las FR se definen de acuerdo con Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 y 1991 (también denominado en la presente como "el sistema de numeración Kabat"). En otro ejemplo, las posiciones de aminoácidos asignadas a las CDR y las FR se definen de acuerdo con el esquema de numeración mejorado de Chothia (http://www.bioinfo.org.uk/mdex.html). De acuerdo con el sistema de numeración de Kabat, las FR y las CDR de V^hse colocan de la siguiente manera: residuos 1 a 30 (FR1), 31 a 35 (CDR1), 36 a 49 (FR2), 50 a 65 (CDR2), 66 a 94 (FR3), 95 a 102 (CDR3) y 103 a 113 (FR4). De acuerdo con el sistema de numeración de Kabat, las FR y las CDR de VLse colocan de la siguiente manera: residuos 1 a 23 (FR1), 24 a 34 (CDR1), 35 a 49 (FR2), 50 a 56 (C^dR2), 57 a 88 (FR3), 89 a 97 (CDR3) y 98 a 107 (FR4). La presente divulgación no se limita a las FR y las CDR definidas por el sistema de numeración de Kabat, sino que incluye todos los sistemas de numeración, incluyendo el sistema de numeración canónico o de Chothia y Lesk J. Mol. Biol. 196: 901-917, 1987; Chothia et al., Nature 342: 877-883, 1989; y/o Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273: 927-948, 1997; el sistema de numeración de Honnegher y Plükthun J. Mol. Biol. 309: 657-670, 2001; o el sistema IMGT analizado en Giudicelli et al., Nucleic Acids Res.25: 206-211 1997. En un ejemplo, las CDR se definen de acuerdo con el sistema de numeración Kabat. Opcionalmente, la CDR2 de cadena pesada de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat no comprende los cinco aminoácidos C-terminales enumerados en la presente o uno cualquiera o más de esos aminoácidos se sustituyen con otro aminoácido de origen natural. A este respecto, Padlan et al., FASEB J., 9: 133-139, 1995 establecieron que los cinco aminoácidos C-terminales de la CDR2 de cadena pesada generalmente no están implicados en la unión al antígeno.

Las "regiones marco" (FR) son aquellos residuos de región variable distintos de los residuos de CDR.

Como se usa en la presente, el término "Fv" significará cualquier proteína, ya esté compuesta por múltiples polipéptidos o por un solo polipéptido, en la que una Vl y una Vh se asocian y forman un complejo que tiene un dominio de unión a antígeno, es decir, capaz de unirse específicamente a un antígeno. La Vh y la VLque forman el dominio de unión al antígeno pueden estar en una sola cadena polipeptídica o en diferentes cadenas polipeptídicas. Además, un Fv de la divulgación (así como cualquier proteína de la invención) puede tener múltiples dominios de unión a antígeno que pueden unirse o no al mismo antígeno. Se entenderá que este término abarca fragmentos derivados directamente de un anticuerpo así como proteínas correspondientes a tal fragmento producido usando medios recombinantes. En algunos ejemplos, la Vh no está enlazada a un dominio constante de cadena pesada (Ch) 1 y/o la V^lno está enlazada a un dominio constante de cadena ligera (C^l). Los polipéptidos o proteínas que contienen Fv ejemplares incluyen un fragmento Fab, un fragmento Fab', un fragmento F(ab'), un scFv, un diacuerpo, un triacuerpo, un tetracuerpo o complejo de orden superior, o cualquiera de los anteriores enlazados a una región constante o dominio del mismo, por ejemplo, dominio C^h2 o C^h3, por ejemplo, un minicuerpo. Un "fragmento Fab" consiste en un fragmento de unión a antígeno monovalente de una inmunoglobulina y puede producirse mediante la digestión de un anticuerpo completo con la enzima papaína, para proporcionar un fragmento que consiste en una cadena ligera intacta y una porción de una cadena pesada o puede ser producido usando medios recombinantes. Puede obtenerse un "fragmento Fab'" de un anticuerpo tratando un anticuerpo completo con pepsina, seguido de reducción, para producir una molécula que consiste en una cadena ligera intacta y una porción de una cadena pesada que comprende una Vh y un único dominio constante. Se obtienen dos fragmentos Fab' por anticuerpo tratado de esta manera. También puede producirse un fragmento Fab' por medios recombinantes. Un "fragmento F(ab')2" de un anticuerpo consiste en un dímero de dos fragmentos Fab' unidos por dos enlaces disulfuro, y se obtiene tratando una molécula de anticuerpo completo con la enzima pepsina, sin reducción posterior. Un fragmento "Fab/ es un fragmento recombinante que comprende dos fragmentos Fab enlazados usando, por ejemplo, una cremallera de leucina o un dominio C^h3. Un "Fv de cadena sencilla" o "scFv" es una molécula recombinante que contiene el fragmento de la región variable (Fv) de un anticuerpo en el que la región variable de la cadena ligera y la región variable de la cadena pesada están enlazadas covalentemente por un conector polipeptídico flexible adecuado.

Como se usa en la presente, el término "se une" en referencia a la interacción de una proteína de unión a IL-11Ra o un dominio de unión a antígeno de la misma con un antígeno significa que la interacción depende de la presencia de una estructura particular (por ejemplo, un determinante antigénico o epítopo) sobre el antígeno. Por ejemplo, un anticuerpo reconoce y se une a una estructura de proteína específica en lugar de a las proteínas en general. Si un anticuerpo se une al epítopo "A", la presencia de una molécula que contenga el epítopo "A" (o "A" libre, no marcado), en una reacción que contenga "A" marcado y la proteína, reducirá la cantidad de "A" marcado unido al anticuerpo.

Como se usa en la presente, se entenderá que el término "se une específicamente" significa que una proteína de unión a IL-11Ra de la divulgación reacciona o se asocia con más frecuencia, más rápidamente, con mayor duración y/o con mayor afinidad con un antígeno o célula particular que expresa el mismo que con antígenos o células alternativos. Por ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra se une a IL-11Ra (por ejemplo, hIL-11Ra o un polipéptido que comprende una región de la misma, por ejemplo, un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 u 85) con una afinidad considerablemente mayor (por ejemplo, 1,5 veces o 2 veces o 5 veces o 10 veces o 20 veces o 40 veces o 60 veces o de 80 veces a 100 veces o de 150 veces o 200 veces) que lo que lo hace a otros receptores de interleucina o a antígenos comúnmente reconocidos por anticuerpos naturales polirreactivos (es decir, por anticuerpos de origen natural que se sabe que se unen a una variedad de antígenos que se encuentran de manera natural en humanos). En un ejemplo de la presente invención, una proteína de unión a IL-11Ra que "se une específicamente" a una forma de hIL-11Ra o un polipéptido que comprende una región de la misma (por ejemplo, la región extracelular de hIL-11Ra) o un polipéptido una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 3 u 85 con una afinidad de por lo menos 1,5 veces o 2 veces o mayor (por ejemplo, 5 veces o 10 veces o 20 veces o 50 veces o 100 veces o 200 veces) con la que lo hace a una forma mutante de la SEQ ID NO: 3 que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 95. En general, pero no necesariamente, la referencia a unión significa unión específica, y se entenderá que cada término proporciona apoyo explícito para el otro término.

Como se usa en la presente, e se entenderá que l término "no se une de manera detectable" significa que una proteína de unión a IL-11Ra, por ejemplo, un anticuerpo, se une a un antígeno candidato a un nivel inferior al 10%, al 8% o al 6% o al 5% por encima del fondo. El fondo puede ser el nivel de la señal de unión detectada en ausencia de la proteína y/o en presencia de una proteína de control negativo (por ejemplo, un anticuerpo de control de isotipo) y/o el nivel de unión detectado en presencia de un antígeno de control negativo. El nivel de unión se detecta usando un análisis de biosensor (por ejemplo, Biacore) en el que la proteína de unión a IL-11Ra se inmoviliza y se pone en contacto con un antígeno.

Como se usa en la presente, se entenderá que el término "no se une significativamente" significa que el nivel de unión de una proteína de unión a IL-11Ra de la invención a un polipéptido no es estadísticamente significativamente mayor que el fondo, por ejemplo, el nivel de señal de unión detectada en ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra y/o en presencia de una proteína de control negativo (por ejemplo, un anticuerpo de control de isotipo) y/o el nivel de unión detectado en presencia de un polipéptido de control negativo. El nivel de unión se detecta usando un análisis de biosensor (por ejemplo, Biacore) en el que la proteína de unión a IL-11Ra se inmoviliza y se pone en contacto con un antígeno.

Como se utiliza en la presente, se entenderá que las frases que se refieren a "unión reducida" o "unión a un nivel más bajo" en relación con un antígeno significan que una proteína de unión a IL-11Ra, por ejemplo, un anticuerpo, se une a un antígeno (por ejemplo, un mutante de la SEQ ID NO: 3 como se describe en la presente, como un mutante que comprende la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 95) con una afinidad por lo menos aproximadamente 1,5 veces o 2 veces o 5 veces o 10 veces o 20 veces o 50 veces o 100 veces o 200 veces menos que un epítopo o antígeno de control (por ejemplo, SEQ ID NO: 3).

Puede considerarse que una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra se "une preferiblemente" a un polipéptido si se une a ese polipéptido con una constante de disociación (K^d) que es menor que la K^dde la proteína o el anticuerpo para otro polipéptido. En un ejemplo, se considera que una proteína o anticuerpo de unión a IL-11Ra se une preferiblemente a un polipéptido si se une al polipéptido con una afinidad (es decir, Kd) que es por lo menos aproximadamente 1,5 veces o 2 veces o 5 veces o 10 veces o 20 veces o 50 veces o 100 veces o 200 veces más que la K^dde la proteína o el anticuerpo para otro polipéptido.

Como se usa en la presente, se entenderá que el término "capaz de unirse a hIL-11Ra y cynoIL-11Ra" significa que una proteína de unión a IL-11Ra reacciona de manera cruzada con hIL-11Ra y cynoIL-11Ra, es decir, se une a cualquiera de las proteínas.

Para propósitos de aclaración y como será evidente para el experto en la técnica basándose en la materia ejemplificada en la presente, la referencia a "afinidad" en esta memoria descriptiva es una referencia a la K^dde una proteína o anticuerpo.

Para propósitos de aclaración y como será evidente para el experto en la técnica basándose en la descripción de la presente, se entenderá que la referencia a una "afinidad de por lo menos aproximadamente" significa que la afinidad (o K^d) es igual al valor indicado o mayor (es decir, el valor indicado como afinidad es menor), es decir, una afinidad de 2 nM es mayor que una afinidad de 3 nM. Expresado de otra manera, este término podría ser "una afinidad de X o menos", donde X es un valor enumerado en la presente.

Se entenderá que una "IC⁵⁰de por lo menos aproximadamente" significa que la IC⁵⁰es igual al valor enumerado o menor (es decir, el valor enumerado como la IC⁵⁰es menor), es decir, una IC⁵⁰de ²pg/ml es mayor que una IC⁵⁰de 1 pg/ml. Expresado de otra manera, este término podría ser "una IC⁵⁰de X o menos", en donde X es un valor enumerado en la presente.

Como se usa en la presente, se entenderá que el término "epítopo" (sin. "determinante antigénico") significa una región de IL-11Ra a la que se une una proteína de unión a IL-11Ra que comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo. Este término no se limita necesariamente a los residuos o estructuras específicos con los que entra en contacto la proteína de unión a IL-11Ra. Por ejemplo, este término incluye la región que abarca los aminoácidos con los que entra en contacto la proteína de unión a IL-11Ra y 5-10 (o más) o 2-5 o 1-3 aminoácidos fuera de esta región. En algunos ejemplos, el epítopo comprende una serie de aminoácidos discontinuos que se colocan cerca uno del otro cuando se pliega la proteína de unión a IL-11Ra, es decir, un "epítopo conformacional". El experto en la técnica también se dará cuenta que el término "epítopo" no se limita a péptidos o polipéptidos. Por ejemplo, el término "epítopo" incluye agrupaciones de superficie químicamente activas de moléculas como cadenas laterales de azúcar, cadenas laterales de fosforilo, o cadenas laterales de sulfonilo y, en ciertos ejemplo, pueden tener características estructurales tridimensionales específicas, y/o características de carga específicas.

Se entenderá que el término "inhibe competitivamente" significa que una proteína de unión a IL-11Ra de la invención (o un dominio de unión a antígeno de la misma) reduce o previene la unión de un anticuerpo enuemrado o proteína de unión a IL-11Ra con IL-11Ra, por ejemplo, con hIL-11Ra. Esto puede deberse a la proteína de unión a IL-11Ra (o dominio de unión a antígeno) y la unión del anticuerpo al mismo epítopo o a uno superpuesto. Será evidente a partir de lo anterior que la proteína de unión a IL-11Ra no necesita inhibir completamente la unión del anticuerpo, sino que solo necesita reducir la unión en una cantidad estadísticamente significativa, por ejemplo, en por lo menos aproximadamente un 10% o un 20% o un 30%.% o 40% o 50% o 60% o 70% o 80% o 90% o 95%. Preferiblemente, la proteína de unión a IL-11Ra reduce la unión del anticuerpo en por lo menos aproximadamente un 30%, más preferiblemente en por lo menos aproximadamente un 50%, más preferiblemente en por lo menos aproximadamente un 70%, aún más preferiblemente en por lo menos aproximadamente un 75%, aún más preferiblemente en por lo menos aproximadamente un 80% o un 85% e incluso más preferiblemente en por lo menos aproximadamente un 90%. Los métodos para determinar la inhibición competitiva de la unión se conocen en la técnica y/o se describen en la presente. Por ejemplo, el anticuerpo se expone a IL-11Ra en presencia o ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra. Si se une menos anticuerpo en presencia de la proteína de unión a IL-11Ra que en ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra, se considera que la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo. En un ejemplo, la inhibición competitiva no se debe al impedimento estérico.

Se entenderá que "superposición" en el contexto de dos epítopos significa que dos epítopos comparten un número suficiente de residuos de aminoácidos para permitir que una proteína de unión a IL-11Ra (o dominio de unión a antígeno de la misma) que se une a un epítopo inhiba competitivamente la unión de una proteína de unión a IL-11Ra (o dominio de unión a antígeno) que se une al otro epítopo. Por ejemplo, los epítopos "superpuestos" comparten por lo menos 1 o 2 o 3 o 4 o 5 o ⁶o 7 o ⁸o 9 o 20 aminoácidos.

Como se usa en la presente, se entenderá que el término "neutralizar" significa que una proteína es capaz de bloquear, reducir o prevenir la señalización mediada por IL-11 en una célula a través de IL-11Ra. Los métodos para determinar la neutralización se conocen en la técnica y/o se describen en la presente.

Como se usa en la presente, el término "afección" se refiere a una interrupción o interferencia con la función normal, y no se limita a ninguna afección específica, e incluirá enfermedades o trastornos.

Como se usa en la presente, una "afección asociada con IL-11" se refiere a cualquier afección provocada o asociada con un exceso de IL-11 o células que expresan IL-11 o con la administración de IL-11. El experto en la técnica será capaz de determinar fácilmente tales afecciones. Las afecciones ejemplares se describen en la presente.

Como se usa en la presente, los términos "que previene", "prevenir" o "prevención" incluyen administrar una proteína de unión a IL-11Ra de la descripción para detener o dificultar de este modo el desarrollo de por lo menos un síntoma de una afección. Este término también abarca el tratamiento de un sujeto en remisión para prevenir o dificultar la recaída.

Como se usa en la presente, los términos "que trata", "tratar" o "tratamiento" incluyen administrar una proteína de unión a IL-11Ra descrita en el presente para reducir o eliminar de este modo por lo menos un síntoma de una enfermedad o afección especificada.

Como se usa en la presente, se entenderá que el término "sujeto" significa cualquier animal, incluyendo los humanos, por ejemplo, un mamífero. Los sujetos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, humanos y primates no humanos. Por ejemplo, el sujeto es un humano.

Anticuerpos

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra como se describe en la presente de acuerdo con cualquier ejemplo es un anticuerpo.

Los métodos para generar anticuerpos se conocen en la técnica y/o se describen en Harlow y Lane (editores) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988). Generalmente, en tales métodos, IL-11Ra (por ejemplo, hIL-11Ra) o una región de la misma (por ejemplo, una región extracelular) o fragmento inmunogénico o epítopo de la misma o una célula que expresa y muestra la misma (es decir, un inmunógeno), formulada opcionalmente con cualquier portador, adyuvante o excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado o deseado se administra a un animal no humano, por ejemplo, un ratón, pollo, rata, conejo, cobaya, perro, caballo, vaca, cabra o cerdo. El inmunógeno puede administrarse por vía intranasal, intramuscular, subcutánea, intravenosa, intradérmica, intraperitoneal o por otra vía conocida.

La producción de anticuerpos policlonales puede monitorizarse tomando muestras de sangre del animal inmunizado en varios puntos después de la inmunización. Pueden administrarse una o más inmunizaciones adicionales, si es necesario para lograr un título de anticuerpos deseado. El proceso de refuerzo y titulación se repite hasta que se logra un título adecuado. Cuando se obtiene un nivel deseado de inmunogenicidad, se extrae sangre del animal inmunizado y se aísla y almacena el suero, y/o se usa el animal para generar anticuerpos monoclonales (mAb).

Los anticuerpos monoclonales son una forma ejemplar de anticuerpo contemplada por la presente invención. El término "anticuerpo monoclonal" o "mAb" se refiere a una población de anticuerpos homogénea capaz de unirse al mismo antígeno o antígenos, por ejemplo, al mismo epítopo dentro del antígeno. No se pretende que este término esté limitado con respecto a la fuente del anticuerpo o la forma en que se produce.

Para la producción de mAbs pueden usarse cualquiera de varias técnicas conocidas, como, por ejemplo, el procedimiento ejemplificado en la US4196265 o Harlow y Lane (1988), como antes.

Por ejemplo, se inmuniza un animal adecuado con un inmunógeno en condiciones suficientes para estimular las células productoras de anticuerpos. Los animales ejemplares son roedores como conejos, ratones y ratas. También pueden usarse ratones manipulados genéticamente para expresar anticuerpos humanos y, por ejemplo, que no expresan anticuerpos murinos, para generar un anticuerpo de la presente invención (por ejemplo, como se describe en la WO2002/066630).

Después de la inmunización, se seleccionan las células somáticas con potencial para producir anticuerpos, específicamente linfocitos B (células B), para su uso en el protocolo de generación de mAb. Estas células pueden obtenerse de biopsias de bazo, amígdalas o ganglios linfáticos, o de una muestra de sangre periférica. Luego las células B del animal inmunizado se fusionan con células de una célula de mieloma inmortal, generalmente derivada de la misma especie que el animal que fue inmunizado con el inmunógeno.

Los híbridos se amplifican mediante cultivo en un medio selectivo que comprende un agente que bloquea la síntesis de novo de nucleótidos en los medios de cultivo de tejidos. Los agentes ejemplares son aminopterina, metotrexato y azaserina.

Los hibridomas amplificados se someten a una selección funcional para la especificidad y/o el título de anticuerpos como, por ejemplo, mediante citometría de flujo y/o inmunohistoquímica y/o inmunoensayo (por ejemplo, radioinmunoensayo, inmunoensayo enzimático, ensayo de citotoxicidad, ensayo de placa, inmunoensayo de punto, y similares).

Alternativamente, se usa la tecnología ABL-MYC (NeoClone, Madison Wis. 53713, USA) para producir líneas celulares que secretan MAbs (por ejemplo, como se describe en Largaespada et al, J. Immunol. Methods.

197: 85-95, 1996).

Los anticuerpos también pueden producirse o aislarse seleccionando una biblioteca de presentación, por ejemplo, una biblioteca de presentación en fagos, por ejemplo, como se describe en la US6300064 y/o la US 5885793. Por ejemplo, los presentes inventores han aislado anticuerpos completamente humanos de una biblioteca de presentación en fagos.

Como se describe en la presente, algunas proteínas de unión a IL-11Ra de la presente invención que se unen a hIL-11Ra reaccionan de forma cruzada con cynoIL-11Ra y/o se unen a algunas formas mutantes de hIL-11Ra o polipéptidos que comprenden regiones de hIL-11Ra que han sido mutadas y/o no a otras. Estas características pueden usarse en la generación de un anticuerpo o una proteína de unión a IL-11Ra.

Por ejemplo, se selecciona una biblioteca de presentación en fagos con un polipéptido que comprende la SEQ ID NO: 3 para identificar las proteínas que se unen al mismo. Luego se usan formas mutantes del polipéptido (por ejemplo, en donde la valina en una posición correspondiente a la posición 117 de la SEQ ID NO: 1 está sustituida con ácido glutámico (por ejemplo, que comprende una secuencia de la SEQ ID NO: 95)) a la que se une la proteína de unión a IL-11Ra de manera no detectable para eliminar proteínas de reacción cruzada y/o se usan formas mutantes del polipéptido (por ejemplo, que comprende una secuencia de la SEQ ID NO: 97, 98 o 99) a la que va a unir la proteína de unión a IL-11Ra para aislar proteínas que tienen una reactividad cruzada correcta. Basándose en lo anterior también puede idearse un proceso de selección para la inmunización de un mamífero no humano.

En otro ejemplo, se selecciona una biblioteca de presentación en fagos o se inmuniza un animal con un polipéptido que comprende el dominio extracelular (o una región correspondiente a los aminoácidos 23-215 o 110 215 de la s Eq ID NO: 1) de cynoIL-11Ra y se seleccionan la proteína de unión a IL-11Ra y/o los anticuerpos para identificar aquellos que tienen reactividad cruzada con hIL-11Ra y/o un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/u 85.

En un ejemplo adicional, una IL-11Ra o una región extracelular de la misma (opcionalmente una forma mutante a la que se une 8E2, 8D10 o 8E4) se pone en contacto con uno de los anticuerpos anteriores. Luego, se pone en contacto una biblioteca de presentación en fagos con la IL-11Ra o región y se seleccionan proteínas que expresan fagos que pueden competir con el anticuerpo por la unión.

En otro ejemplo más, una proteína quimérica que comprende, por ejemplo, una IL-11Ra de ratón en la que un epítopo de interés de un hIL-11Ra se sustituye por la secuencia de ratón correspondiente. Luego esta proteína quimérica se usa para inmunizar ratones (que tienen menos probabilidades de inducir una respuesta inmunitaria contra la proteína de ratón) y/o para seleccionar una biblioteca de presentación en fagos. Luego se analizan los anticuerpos/proteínas resultantes para identificar aquellos que se unen a hIL-11Ra (particularmente en el epítopo de interés) y no a IL-11Ra de ratón.

El anticuerpo de la presente invención puede ser un anticuerpo sintético. Por ejemplo, el anticuerpo es un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo sinhumanizado de anticuerpo humano, un anticuerpo primatizado o un anticuerpo desinmunizado.

Proteínas de unión a IL-11Ra desinmunizadas, quiméricas, injertadas con CDR, humanizadas, sinhumanizadas, primatizadas, humanas y compuestas

Las proteínas de unión a IL-11Ra divulgadas pero no reivindicadas como se describe en la presente pueden ser proteínas injertadas con CDR que incluyen las CDR de un anticuerpo de una especie no humana (por ejemplo, ratón, rata o primate no humano) injertadas o insertadas en FR de un anticuerpo humano o que incluyen CDR de un anticuerpo de un tipo de anticuerpo (por ejemplo, un tipo de anticuerpo humano) injertado o insertado en FR de otro tipo de anticuerpo (por ejemplo, otro tipo de anticuerpo humano). Este término también abarca una proteína de unión a IL-11Ra compuesta que comprende, por ejemplo, una o más regiones variables injertadas con CDR y una o más, por ejemplo, regiones variables humanas, regiones variables quiméricas, regiones variables sinhumanizadas o regiones variables primatizadas.

Las proteínas de unión a IL-11Ra divulgadas pero no reivindicadas como se describe en la presente pueden ser una proteína humanizada.

Se entenderá que el término "proteína humanizada" se refiere a una proteína que comprende una región variable similar a la humana, que incluye CDR de un anticuerpo de una especie no humana (por ejemplo, ratón o rata o primate no humano) injertadas o insertadas en FR de un anticuerpo humano (este tipo de anticuerpo pertenece a la clase de "anticuerpo injertado con CDR"). Las proteínas de unión a IL-11Ra humanizadas también incluyen proteínas en las que uno o más residuos de la proteína humana se modifican mediante una o más sustituciones de aminoácidos y/o uno o más residuos FR de la proteína humana se reemplazan por residuos no humanos correspondientes. Las proteínas humanizadas también pueden comprender residuos que no se encuentran ni en el anticuerpo humano ni en el anticuerpo no humano. Cualquier región adicional de la proteína (por ejemplo, la región Fc) es generalmente humana. La humanización puede realizarse usando un método conocido en la técnica, por ejemplo, la US5225539, la US6054297, la US7566771 o la US5585089. El término "proteína humanizada" también abarca una proteína superhumanizada, por ejemplo, como se describe en la US7732578. Este término también abarca una proteína compuesta que comprende, por ejemplo, una o más regiones variables humanizadas y una o más, por ejemplo, regiones variables humanas, regiones variables quiméricas, regiones variables sinhumanizadas o regiones variables primatizadas.

Las proteínas de unión a IL-11Ra de la presente invención son proteínas de unión a IL-11Ra humanas. El término "proteína humana" como se usa en la presente se refiere a proteínas que tienen regiones de anticuerpo variables y, opcionalmente, constantes encontradas en humanos, por ejemplo, en la línea germinal humana o células somáticas o de bibliotecas producidas usando tales regiones. Las proteínas "humanas" pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias humanas, por ejemplo, mutaciones introducidas por mutaciones aleatorias o dirigidas al sitio in vitro (en particular, mutaciones que implican sustituciones conservadoras o mutaciones en un pequeño número de residuos de la proteína, por ejemplo, en 1, 2, 3, 4 o 5 de los residuos de la proteína). Estas "proteínas humanas" no tienen que generarse necesariamente como resultado de una respuesta inmunitaria de un humano, sino que pueden generarse usando medios recombinantes (por ejemplo, selección de una biblioteca de presentación en fagos) y/o por un animal transgénico (por ejemplo, un ratón) que comprende ácido nucleico que codifica regiones constantes y/o variables de anticuerpos humanos y/o usando selección guiada (por ejemplo, como se describe en la US5565332). Este término también abarca formas maduradas por afinidad de tales anticuerpos. Para los propósitos de la presente invención, también se considerará que una proteína humana incluye una proteína que comprende FR de un anticuerpo humano o FR que comprenden secuencias de una secuencia consenso de FR humanas y en las que una o más de las CDR son aleatorias o semialeatorias, por ejemplo, como se describe en la US6300064 y/o la US6248516.

Las proteínas de unión a IL-11Ra humanas ejemplares son anticuerpos que comprenden los siguientes pares de regiones variables:

(i) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SeQ ID NO: 5;

(ii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 38 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 39 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 40 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(v) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 41 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 42 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 43 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(viii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 44 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(ix) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 45 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(x) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 46 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 47 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 48 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xiii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xiv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 50 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 51 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xvi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 52 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xvii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xviii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 54 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xix) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 55 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xx) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 56 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxiii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 59 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxiv) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 60 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 61 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxvi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 62 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxvii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 63 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 64 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxix) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 65 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxx) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 66 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 67 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 68 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxiii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 69 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxiv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 70 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(xxxvi) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 6;

(xxxvii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 7;

(xxxviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8;

(xxxix) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 9;

(xl) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 10;

(xli) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 11;

(ilii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 12;

(xliii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 13;

(xliv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 14;

(xlv) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15;

(xlvi) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16;

(xlvii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 17;

(xlviii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18;

(xlix) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 19;

(l) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la S^eQ ID NO: 20;

(li) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 21;

(lii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 22;

(liii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 23;

(liv) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 24;

(lv) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 25;

(lvi) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 26;

(lvii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 27;

(lviii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 28;

(lix) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29;

(lx) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 30;

(lxi) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 31;

(lxii) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 32;

(lxiii) una V^hque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 33; o

(lxiv) una VH que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 _yuna VL que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 34.

Opcionalmente, la Vh está enlazada a una región constante de cadena pesada, por ejemplo, una región constante de cadena pesada de IgG4. En un ejemplo, la región constante de la cadena pesada carece del residuo de lisina C-terminal.

Opcionalmente, la V^lestá enlazada a una región constante de cadena ligera.

Las proteínas de unión a IL-11Ra divulgadas pero no reivindicadas como se describe en la presente pueden ser proteínas sinhumanizadas. El término "proteína sinhumanizada" se refiere a una proteína preparada mediante un método descrito en la WO2007/019620. Una proteína de unión a IL-11Ra sinhumanizada incluye una región variable de un anticuerpo, en donde la región variable comprende FR de una región variable de anticuerpo de primate del Nuevo Mundo y CDR de una región variable de anticuerpo de primate que no es del Nuevo Mundo. Por ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra sinhumanizada incluye una región variable de un anticuerpo, en donde la región variable comprende FR de una región variable de anticuerpo de primate del Nuevo Mundo y CDR de un anticuerpo de ratón o rata. En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra sinhumanizada es un anticuerpo de unión a IL-1lRa en el que una o ambas regiones variables están sinhumanizadas. Este término también abarca una proteína compuesta que comprende, por ejemplo, una o más regiones variables sinhumanizadas y una o más, por ejemplo, regiones variables humanas o regiones variables humanizadas o regiones variables quiméricas.

Las proteínas de unión a IL-11Ra divulgadas pero no reivindicadas como se describe en la presente pueden ser proteínas primatizadas. Una "proteína primatizada" comprende región o regiones variables de un anticuerpo generado después de la inmunización de un primate no humano (por ejemplo, un macaco cynomolgus). Opcionalmente, las regiones variables del anticuerpo de primate no humano se enlazan a regiones constantes humanas para producir un anticuerpo primatizado. Los métodos ejemplares para producir anticuerpos primatizados se describen en la US6113898. Este término también abarca una proteína compuesta que comprende, por ejemplo, una o más regiones variables primatizadas y una o más, por ejemplo, regiones variables humanas o regiones variables humanizadas o regiones variables quiméricas.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la divulgación es una proteína quimérica. El término "proteínas quiméricas" se refiere a proteínas en las que un dominio de unión a antígeno es de una especie particular (por ejemplo, murina, como ratón o rata) o pertenece a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la proteína es de una proteína derivada de otra especie (como, por ejemplo, primate humano o no humano) o perteneciente a otra clase o subclase de anticuerpos. En un ejemplo, una proteína quimérica es un anticuerpo quimérico que comprende una Vh y/o una Vl de un anticuerpo no humano (por ejemplo, un anticuerpo murino) y las regiones restantes del anticuerpo son de un anticuerpo humano. La producción de tales proteínas quiméricas se conoce en la técnica y puede lograrse mediante medios estándar (como se describe, por ejemplo, en la US6331415; la US5807715; la US4816567 y la US4816397). Este término también abarca una proteína compuesta que comprende, por ejemplo, una o más regiones variables quiméricas y una o más, por ejemplo, regiones variables humanas o regiones variables humanizadas o regiones variables quiméricas.

La presente invención también contempla una proteína de unión a IL-11Ra desinmunizada, por ejemplo, como se describe en la WO2000/34317 y la WO2004/108158. Los anticuerpos y proteínas desinmunizados tienen uno o más epítopos, por ejemplo, epítopos de células B o epítopos de células T eliminados (es decir, mutados) para reducir de este modo la probabilidad de que un sujeto provoque una respuesta inmunitaria contra el anticuerpo o la proteína. Por ejemplo, se analiza una proteína de unión a IL-11Ra de la invención para identificar uno o más epítopos de células B o T y uno o más residuos de aminoácidos dentro del epítopo se mutan para reducir de este modo la inmunogenicidad de la proteína de unión a IL-11Ra..

A partir de la invención anterior será evidente para los expertos en la técnica que una proteína "compuesta" comprende una forma de Vh (por ejemplo, humana) y otra forma de Vl (por ejemplo, humanizada).

Proteínas que contienen el dominio de unión al anticuerpo

Anticuerpos de dominio único

En algunos ejemplos, una proteína de la invención es o comprende un anticuerpo de dominio único (que se usa indistintamente con el término "anticuerpo de dominio" o "dAb"). Un anticuerpo de dominio único es una cadena polipeptídica única que comprende la totalidad o una parte de la región variable de la cadena pesada de un anticuerpo. En ciertos ejemplos, un anticuerpo de dominio único es un anticuerpo de dominio único humano (Domantis, Inc., Waltham, ^mA; ver, por ejemplo, la US6248516).

Diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos

En algunos ejemplos, una proteína de la invención es o comprende un complejo de proteína de orden de diacuerpo, triacuerpo, tetracuerpo o superior como los descritos en la WO98/044001 y/o la WO94/007921.

Por ejemplo, un diacuerpo es una proteína que comprende dos cadenas polipeptídicas asociadas, cada cadena polipeptídica comprendiendo la estructura Vl-X-Vh o Vh-X-Vl, en donde Vl es una región variable de cadena ligera de anticuerpo, Vh es una región variable de cadena pesada de anticuerpo, X es un conector que comprende residuos insuficientes para permitir que la Vh y la Vl se asocien en una sola cadena polipeptídica (o formen un Fv) o está ausente, y en donde la V^hde una cadena polipeptídica se une a una V^lde la otra cadena polipeptídica para formar un dominio de unión a antígeno, es decir, para formar una molécula Fv capaz de unirse específicamente a uno o más antígenos. La Vl y la Vh pueden ser iguales en cada cadena polipeptídica o la Vl y la Vh pueden ser diferentes en cada cadena polipeptídica para formar un diacuerpo biespecífico (es decir, que comprende dos Fv que tienen diferente especificidad).

Fv de cadena sencilla Fv (scFv)

El experto en la técnica sabrá que los scFv comprenden las regiones Vh y Vl en una única cadena polipeptídica y un conector polipeptídico entre la V^hy la V^lque permite que el scFv forme la estructura deseada para la unión al antígeno (es decir, para que la Vh y la Vl de la única cadena polipeptídica se asocien entre sí para formar un Fv). Por ejemplo, el conector comprende más de 12 residuos de aminoácidos, siendo (Gly⁴Ser⁾³uno de los conectores más favorecidos para un scFv.

La presente invención también contempla un Fv estabilizado con disulfuro (o diFv o dsFv), en el que se introduce un solo residuo de cisteína en una Fr de Vh y una FR de Vl y los residuos de cisteína se enlazan mediante un enlace disulfuro para proporcionar un Fv estable.

Alternativamente, o adicionalmente, la presente invención abarca un scFv dimérico, es decir, una proteína que comprende dos moléculas de scFv enlazadas por un enlace covalente o no covalente, por ejemplo, por un dominio de cremallera de leucina (por ejemplo, derivado de Fos o Jun). Alternativamente, dos scFv se enlazan mediante un conector peptídico de longitud suficiente para permitir que ambos scFv se formen y se unan a un antígeno, por ejemplo, como se describe en la US20060263367.

Anticuerpos de cadena pesada

Los anticuerpos de cadena pesada difieren estructuralmente de muchas otras formas de anticuerpos, en la medida en que comprenden una cadena pesada, pero no comprenden una cadena ligera. Por consiguiente, a estos anticuerpos también se hace referencia como "anticuerpos solo de cadena pesada". Los anticuerpos de cadena pesada se encuentran, por ejemplo, en camélidos y peces cartilaginosos (también llamados IgNAR).

A las regiones variables presentes en los anticuerpos de cadena pesada de origen natural generalmente se hace referencia como "dominios Vhh" en los anticuerpos de camélidos y V-NAR en IgNAR, para distinguirlas de las regiones variables de cadena pesada que están presentes en los anticuerpos convencionales de 4 cadenas (a los que se hace referencia como "dominios V^h") y de las regiones variables de cadena ligera que están presentes en los anticuerpos convencionales de 4 cadenas (a los que se hace referencia como "dominios V^l").

Una descripción general de anticuerpos de cadena pesada de camélidos y las regiones variables de los mismos y los métodos para su producción y/o aislamiento y/o uso se encuentra, entre otras, en las siguientes referencias WO94/04678, WO97/49805 y WO 97/49805.

Una descripción general de anticuerpos de cadena pesada de peces cartilaginosos y las regiones variables de los mismos y los métodos para su producción y/o aislamiento y/o uso se encuentra, entre otros, en la WO2005/118629.

Otros anticuerpos y proteínas que comprenden dominios de unión a antígeno de los mismos

La presente invención también contempla otros anticuerpos y proteínas que comprenden dominios de unión a antígeno de los mismos, como:

(i) proteínas biespecíficas de "llave y agujero" como se describe en la US5731168;

(ii) proteínas heteroconjugadas, por ejemplo, como se describe en la US4676980;

(iii) proteínas heteroconjugadas producidas usando un reticulante químico, por ejemplo, como se describe en la US4676980; y

(iv) Fab³(por ejemplo, como se describe en la EP19930302894).

Mutaciones en proteínas

Los inventores han identificado un grupo de proteínas de unión a IL-11Ra que comparten por lo menos un 40% de identidad en su HCDR1 (y opcionalmente, el aminoácido N-terminal de HCDR1) de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat y otro subgrupo de proteínas que comparten el 80% de identidad en su HCDR1.

Los inventores también han identificado una clase de proteína de unión a IL-11Ra que comparte un 77% de identidad en su HCDR2 de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat y una subclase de proteínas de unión a IL-11Ra que comparte por lo menos aproximadamente un 82% de identidad en su HCDR2 de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat.

Como se analiza en la presente, también se sabe en la técnica que los cinco residuos C-terminales de la CDR2 de cadena pesada pueden mutarse a sustituciones de aminoácidos conservadoras o no conservadoras (31% de los residuos) (Padlan et al., FASEB J. 9: 133-139, 1995). Por tanto, una proteína puede comprender una CDR2 que tiene por lo menos aproximadamente un 47% de identidad con una secuencia de CDR2 de cadena pesada divulgada en la presente.

Por ejemplo, los inventores han identificado un grupo de proteínas de unión a IL-11Ra que comparten por lo menos aproximadamente un 44% de identidad en su HCDR3 de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat.

Por ejemplo, los inventores han identificado varios residuos en una Vh que comprenden una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 que pueden sustituirse sin pérdida de función o que dan como resultado una función mejorada. En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende 1 o 2 o 3 o 4 o 5 sustituciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NO: 37. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende 3 sustituciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NO: 37. Por ejemplo, a proteína de unión a IL-11Ra l comprende 4 sustituciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende entre 1 y 4 sustituciones de aminoácidos en la CDR3 en comparación con la SEQ ID NO: 37. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende 1 o 2 o 3 o 4 sustituciones de aminoácidos en la CDR3 en comparación con la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende entre 1 y 3 sustituciones de aminoácidos en la CDR2 en comparación con la SEQ ID NO: 37. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende 1 o 2 o 3 sustituciones de aminoácidos en la CDR3 en comparación con la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un triptófano en la posición 54 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una treonina en la posición 56 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un ácido aspártico en la posición 57 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un triptófano en la posición 57 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una leucina en la posición 57 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una prolina en la posición 99 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un ácido glutámico en la posición 100 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una leucina en la posición 100 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un ácido aspártico en la posición 101 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una leucina en la posición 104 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una arginina en la posición 104 de la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un triptófano en la posición 54, un ácido aspártico en la posición 56 y un leucina en la posición 57 cada uno con respecto a la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un triptófano en la posición 54, una treonina en la posición 56 y una leucina en la posición 57 cada uno con respecto a la SEQ ID NO: 37. En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una prolina en la posición 99, un ácido glutámico en la posición 100, un ácido aspártico en la posición 101 y una leucina en la posición 104 cada uno con respecto a la SEQ ID NO: 37.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una prolina en la posición 99, una leucina en la posición 100, un aspártico ácido en la posición 101 y una arginina en la posición 104 cada uno con respecto a la SEQ ID NO: 37.

Por ejemplo, los inventores han identificado un grupo de proteínas de unión a IL-11Ra que comparten por lo menos un 45% de identidad en su LCDR1 de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat y otro subgrupo de proteínas que comparten aproximadamente un 54% de identidad en su LCDR1.

Los inventores también han identificado una clase de proteína de unión a IL-11Ra que comparte por lo menos aproximadamente un 55% o un 56% de identidad en su LCDR3 de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat.

Por ejemplo, los inventores han identificado varios residuos en una V^lque comprenden una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5 que pueden sustituirse sin pérdida de función o que dan como resultado una función mejorada. En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende 1 o 2 o 3 o 4 o 5 o 6 sustituciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NO: 5. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende 3 sustituciones de aminoácidos en comparación con la SEQ iD NO: 5. Por ejemplo, la IL-11Ra -la proteína de unión comprende 4 sustituciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NO: 5. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende 5 sustituciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende entre 1 y 4 sustituciones de aminoácidos en la CDR3 en comparación con la SEQ ID NO: 5. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende 1 o 2 o 3 o 4 sustituciones de aminoácidos en la CDR3 en comparación con la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra comprende entre 1 y 5 sustituciones de aminoácidos en la CDR1 en comparación con la SEQ ID NO: 5. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11 Ra comprende 1 o 2 o 3 o 4 o 5 aminoácidos sustituciones de ácido en la CDR3 en comparación con la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una valina en la posición 29 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un ácido aspártico en la posición 30 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una lisina en la posición 31 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una valina en la posición 33 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un ácido glutámico en la posición 34 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una alanina en la posición 91 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una histidina en la posición 91 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un ácido glutámico en la posición 91 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un ácido aspártico en la posición 93 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una fenilalanina en la posición 93 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una serina en la posición 93 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una glutamina en la posición 94 de la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una valina en la posición 29, un ácido aspártico en la posición 30 y una lisina en la posición 31, una valina en la posición 33 y un ácido glutámico en la posición 34 cada uno con respecto a la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una alanina en la posición 91, un ácido glutámico en la posición 92, un ácido aspártico en la posición 93 y una glutamina en la posición 94 cada uno con respecto a la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una histidina en la posición 91, un ácido glutámico en la posición 92, un fenilalanina en la posición 93 y una glutamina en la posición 94 cada uno con respecto a la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos una histidina en la posición 91, un ácido glutámico en la posición 92 y un glutamina en la posición 94 cada uno con respecto a la SEQ ID NO: 5.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la invención comprende un mutante de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5, en donde la secuencia mutante comprende por lo menos un ácido glutámico en la posición 92, una serina en la posición 93 y un glutamina en la posición 94 cada uno con respecto a la SEQ ID NO: 5.

La presente invención también abarca ácidos nucleicos que codifican una proteína de unión a IL-11Ra de la invención, que difiere de una secuencia ejemplificada en la presente como resultado de la degeneración del código genético.

El % de identidad de un ácido nucleico o polipéptido se determina mediante análisis GAP (Needleman y Wunsch. Mol. Biol. 48, 443-453, 1970) (programa G^cG) con una penalización de creación de huecos = 5 y una penalización de extensión de huecos = 0,3. La secuencia de consulta tiene una longitud de por lo menos 50 residuos y el análisis GAP alinea las dos secuencias en una región de por lo menos 50 residuos. Por ejemplo, la secuencia de consulta tiene una longitud de por lo menos 100 residuos y el análisis GAP alinea las dos secuencias en una región de por lo menos 100 residuos. Por ejemplo, las dos secuencias se alinean en toda su longitud.

La presente invención también contempla un ácido nucleico que hibrida en condiciones de hibridación rigurosas con un ácido nucleico que codifica una proteína de unión a IL-11Ra descrita en la presente. Una "rigurosidad moderada" se define en la presente como una hibridación y/o lavado llevado a cabo en tampón 2 x SSC, SDS al 0,1% (p/v) a una temperatura en el intervalo de 45° C a 65° C, o condiciones equivalentes. Una " rigurosidad alta" se define en la presente como una hibridación y/o lavado llevado a cabo en tampón SSC 0,1x, SDS al 0,1% (p/v) o una concentración de sal más baja, y a una temperatura de por lo menos 65° C o condiciones equivalentes. La referencia en la presente a un nivel particular de rigurosidad abarca condiciones equivalentes usando soluciones de lavado/hibridación distintas de SSC conocidas por los expertos en la técnica. Por ejemplo, en la técnica se conocen métodos para calcular la temperatura a la que se disociarán las cadenas de un ácido nucleico de doble cadena (también conocida como temperatura de fusión, o Tm). Se considera que una temperatura que es similar (por ejemplo, dentro de 5° C o dentro de 10° C) o igual a la Tm de un ácido nucleico es de rigurosidad alta. Debe considerarse que la rigurosidad media está dentro de 10° C a 20° C o de 10° C a 15° C de la Tm calculada del ácido nucleico.

En la técnica se han definido familias de residuos de aminoácidos que tienen cadenas laterales similares, incluyendo cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares sin carga (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano), cadenas laterales p-ramificadas (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina). Los índices hidropáticos se describen, por ejemplo, en Kyte y Doolittle J. Mol. Biol., 157: 105-132, 1982 y los índices hidrófilos se describen, por ejemplo, en la US4554101.

Los métodos ejemplares para producir formas mutantes de una proteína de unión a IL-11Ra incluyen: • mutagénesis de ADN (Thie et al., Methods Mol. Biol. 525: 309-322, 2009) o ARN (Kopsidas et al., Immunol.

Lett. 107:163-168, 2006; Kopsidas et al. BMC Biotechnology, 7: 18, 2007 y WO1999/058661);

• introducir un ácido nucleico que codifica el polipéptido en una célula mutadora, por ejemplo, células bacterianas XL-1Red, XL-mutS y XL-mutS-Kanr (Stratagene);

• transposición de ADN, por ejemplo, como se describe en Stemmer, Nature 370: 389-91, 1994; y

• mutagénesis dirigida al sitio, por ejemplo, como se describe en Dieffenbach (ed) y Dveksler (ed) (En: PCR Primer: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, NY, 1995).

Los métodos ejemplares para determinar la actividad biológica de las proteínas de unión a IL-11Ra mutantes de la invención serán evidentes para los expertos en la técnica y/o se describen en la presente, por ejemplo, unión a antígeno. Por ejemplo, en la presente se describen métodos para determinar la unión al antígeno, la inhibición competitiva de la unión, la afinidad, la asociación, la disociación y la eficacia terapéutica.

Regiones constantes

La presente invención abarca proteínas y/o anticuerpos de unión a IL-11Ra descritos en la presente que comprenden una región constante de un anticuerpo. Esto incluye fragmentos de unión a antígeno de un anticuerpo fusionado con un Fc.

Las secuencias de regiones constantes útiles para producir las proteínas de la presente invención pueden obtenerse de varias fuentes diferentes. En algunos ejemplos, la región constante o parte de la misma de la proteína se deriva de un anticuerpo humano. La región constante o parte de la misma puede derivarse de cualquier clase de anticuerpo, incluyendo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, y cualquier isotipo de anticuerpo, incluyendo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. En un ejemplo, la región constante es el isotipo humano IgG4 o una región constante de IgG4 estabilizada.

En un ejemplo, la región Fc de la región constante tiene una capacidad reducida para inducir la función efectora, por ejemplo, en comparación con una región Fc de IgG1 o IgG3 humana nativa o de tipo salvaje. En un ejemplo, la función efectora es la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) y/o la fagocitosis mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCP) y/o la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). Los métodos para evaluar el nivel de función efectora de una proteína que contiene la región Fc se conocen en la técnica y/o se describen en la presente.

En un ejemplo, la región Fc es una región Fc de IgG4 (es decir, de una región constante de IgG4), por ejemplo, una región Fc de IgG4 humana. Las secuencias de regiones Fc de IgG4 adecuadas serán evidentes para el experto en la técnica y/o estarán disponibles en bases de datos disponibles públicamente (por ejemplo, disponibles del National Center for Biotechnology Information).

En un ejemplo, la región constante es una región constante de IgG4 estabilizada. Se entenderá que el término "región constante de IgG4 estabilizada" significa una región constante de IgG4 que ha sido modificada para reducir el intercambio de brazos Fab o la propensión a sufrir un intercambio de brazos Fab o la formación de un semi anticuerpo o una propensión a formar un medio anticuerpo. El "intercambio de brazos Fab" se refiere a un tipo de modificación de proteína para la IgG4 humana, en la que una cadena pesada de IgG4 y una cadena ligera unida (media molécula) se intercambian por un par de cadenas pesadas y ligeras de otra molécula de IgG4. Por tanto, las moléculas de IgG4 pueden adquirir dos brazos Fab distintos que reconocen dos antígenos distintos (lo que da como resultado moléculas biespecíficas). El intercambio de brazos Fab se produce de manera natural in vivo y puede inducirse in vitro mediante células sanguíneas purificadas o agentes reductores como el glutatión reducido. Un "semi anticuerpo" se forma cuando un anticuerpo de IgG4 se disocia para formar dos moléculas que contienen cada una, una única cadena pesada y una única cadena ligera.

En un ejemplo, una región constante de IgG4 estabilizada comprende una prolina en la posición 241 de la región bisagra de acuerdo con el sistema de Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 1987 y/o 1991). Esta posición se corresponde a la posición 228 de la región bisagra de acuerdo con el sistema de numeración de EU (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 2001 y Edelman et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85, 1969). En la IgG4 humana, este residuo es generalmente una serina. Tras la sustitución de la serina por prolina, la región bisagra de IgG4 comprende una secuencia CPPC. A este respecto, el experto en la técnica sabrá que la "región bisagra" es una porción rica en prolina de una región constante de cadena pesada de anticuerpo que enlaza las regiones Fc y Fab que confiere movilidad a los dos brazos Fab de un anticuerpo. La región bisagra incluye residuos de cisteína que están implicados en enlaces disulfuro entre cadenas pesadas. Generalmente se define como la extensión de Glu226 a Pro243 de IgG1 humana de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat. Las regiones bisagra de otros isotipos de IgG pueden alinearse con la secuencia de IgG1 colocando los primeros y últimos residuos de cisteína que forman enlaces disulfuro (S-S) entre cadenas pesadas en las mismas posiciones (ver, por ejemplo, la WO2010/080538).

Ejemplos adicionales de anticuerpos de IgG4 estabilizados son anticuerpos en los que la arginina en la posición 409 en una región constante de cadena pesada de IgG4 humana (de acuerdo con el sistema de numeración EU) se sustituye por lisina, treonina, metionina o leucina (por ejemplo, como se describe en la WO2006/033386). La región Fc de la región constante puede comprender adicional o alternativamente un residuo seleccionado del grupo que consiste en: alanina, valina, glicina, isoleucina y leucina en la posición correspondiente a 405 (de acuerdo con el sistema de numeración EU). Opcionalmente, la región bisagra comprende una prolina en la posición 241 (es decir, una secuencia CPPC) (como se ha descrito anteriormente).

En otro ejemplo, la región Fc es una región modificada para tener una función efectora reducida, es decir, una "región Fc no inmunoestimuladora". Por ejemplo, la región Fc es una región Fc de IgG1 que comprende una sustitución en una o más posiciones seleccionadas del grupo que consiste en 268, 309, 330 y 331. En otro ejemplo, la región Fc es una región Fc de IgG1 que comprende uno o más de los siguientes cambios E233P, L234V, L235A y la deleción de G236 y/o uno o más de los siguientes cambios A327G, A330S y P331S (Armour et al., EurJ Immunol.

29:2613-2624, 1999; Shields et al., J Biol. Chem. 276(9):6591-604, 2001). Ejemplos adicionales de regiones Fc no inmunoestimuladoras se describen, por ejemplo, en Dall'Acqua et al., J Immunol. 177: 1129-11382006; y/o Hezareh J Virol; 75: 12161-12168, 2001).

En otro ejemplo, la región Fc es una región Fc quimérica, por ejemplo, que comprende por lo menos un dominio Ch2 de un anticuerpo de IgG4 y por lo menos un dominio Ch3 de un anticuerpo de IgG1, en donde la región Fc comprende una sustitución en una o más posiciones de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en 240, 262, 264, 266, 297, 299, 307, 309, 323, 399, 409 y 427 (numeración de EU) (por ejemplo, como se describe en la WO2010/085682). Las sustituciones ejemplares incluyen 240F, 262L, 264T, 266F, 297Q, 299A, 299K, 307P, 309K, 309M, 309P, 323F, 399S y 427F.

Potenciación de la función efectora

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención puede inducir la función efectora o potenciar la función efectora.

En el contexto de la presente invención, las "funciones efectoras" se refieren a aquellas actividades biológicas mediadas por células o proteínas que se unen a la región Fc (una región Fc de secuencia nativa o una región Fc variante de secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo que dan como resultado la destrucción de una célula. Los ejemplos de funciones efectoras inducidas por anticuerpos incluyen: citotoxicidad dependiente del complemento; citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC); fagocitosis de células dependientes de anticuerpos (ADCP); y activación de células B.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención se une a IL-11Ra en la superficie de una célula de tal manera que es capaz de inducir una función efectora, como ADCC o CDC.

Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra permanece unida a la IL-11Ra en la superficie de la célula durante un tiempo suficiente para inducir una función efectora, como ADCC y/o CDC.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención es capaz de inducir una función efectora mejorada, por ejemplo, en virtud de una región Fc modificada o en virtud de comprender una región capaz de unirse a una célula efectora inmunitaria. Por ejemplo, el nivel de función efectora aumenta en comparación con el nivel inducido por una región Fc de IgG1 o IgG3 humana. Potenciar la función efectora inducida por una proteína de unión a IL-11Ra de la invención puede dar como resultado efectos terapéuticos o profilácticos mejorados, por ejemplo, no solo bloqueando la acción de IL-11Ra sino también matando o agotando las células que provocan una afección, por ejemplo, matando a las células T autorreactivas.

En un ejemplo, la región Fc de una proteína de unión a IL-11Ra de la invención se modifica para aumentar el nivel de función efectora que es capaz de inducir en comparación con la región Fc sin la modificación. Tales modificaciones pueden ser a nivel de aminoácidos y/o a nivel estructural secundario y/o a nivel estructural terciario y/o a la glicosilación de la región Fc.

El destinatario experto apreciará que una mayor función efectora puede manifestarse de varias maneras, por ejemplo, como un mayor nivel de efecto, un efecto más sostenido o una tasa de efecto más rápida.

En un ejemplo, la región Fc comprende una o más modificaciones de aminoácidos que aumentan su capacidad para inducir una función efectora potenciada. En un ejemplo, la región Fc se une con mayor afinidad a uno o más FcyR, como FcyRIII. En un ejemplo, la región Fc comprende por lo menos una sustitución de aminoácidos en una posición seleccionada del grupo que consiste en: 230, 233, 234, 235, 239, 240, 243, 264, 266, 272, 274, 275, 276, 278, 302, 318, 324, 325, 326, 328, 330, 332 y 335, numerados de acuerdo con el índice EU de Kabat. En un ejemplo, la región Fc comprende las siguientes sustituciones de aminoácidos S239D/I332E, numeradas de acuerdo con el índice EU de Kabat. Esta región Fc tiene un aumento de aproximadamente 14 veces en la afinidad por FcYRIIIa en comparación con una región Fc de tipo salvaje y una capacidad aumentada en aproximadamente 3,3 veces para inducir la ADCC en comparación con una región Fc de tipo salvaje. En un ejemplo, la región Fc comprende las siguientes sustituciones de aminoácidos S239D/A330L/I332E, numeradas de acuerdo con el índice EU de Kabat. Esta región Fc tiene un aumento de aproximadamente 138 veces en la afinidad por FcYRIIIa en comparación con una región Fc de tipo salvaje y una capacidad aumentada en aproximadamente 323 veces para inducir la ADCC en comparación con una región Fc de tipo salvaje.

En la técnica se conocen las sustituciones de aminoácidos adicionales que aumentan la capacidad de una región Fc para inducir la función efectora y/o se describen, por ejemplo, en la US6737056 o la US7317091.

En un ejemplo, se altera la glicosilación de la región Fc para aumentar su capacidad para inducir una función efectora potenciada. A este respecto, los anticuerpos nativos producidos por células de mamíferos típicamente comprenden un oligosacárido biantenario ramificado que generalmente se une mediante un enlace N a Asn297 del dominio Ch2 de la región Fc. El oligosacárido puede incluir varios carbohidratos, por ejemplo, manosa, N-acetil glucosamina (GlcNAc), galactosa y ácido siálico, así como una fucosa unida a una GlcNAc en el "tallo" de la estructura del oligosacárido biantenario. En algunos ejemplos, las regiones Fc de acuerdo con la presente invención comprenden una estructura de carbohidratos que carece de fucosa unida (directa o indirectamente) a una región Fc, es decir, la región Fc está "afucosilada". Tales variantes pueden tener una capacidad mejorada para inducir ADCC. Los métodos para producir anticuerpos afucosilados incluyen expresar el anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo en una línea celular incapaz de expresar a-1,6-fucosiltransferasa (FUT8) (por ejemplo, como se describe en Yumane-Ohnuki et al., Biotechnol. Bioengineer.87: 614-622, 2004), expresar el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo en células que expresan un ARN interferente pequeño contra FUT8 (por ejemplo, como se describe en Mori et al., Biotechnol. Bioengineer., 88: 901-908, 2004), expresar el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo en células incapaces de expresar guanosina difosfato (GDP)-manosa 4,6-deshidratasa (GMD) (por ejemplo, como se describe en Kanda et al., J. Biotechnol., 130: 300-310, 2007). La presente invención también contempla el uso de proteínas que tienen un nivel reducido de fucosilación, por ejemplo, producidas usando una línea celular modificada para expresar p-(1,4)-N-acetilglucosaminiltransferasa III (GnT-III) (por ejemplo, como se describe en Umanaetal., Nat. Biotechnol. 17: 176-180, 1999).

Otros métodos incluyen el uso de líneas celulares que producen inherentemente anticuerpos capaces de inducir una función efectora mediada por Fc potenciada (por ejemplo, células madre derivadas de embriones de pato para la producción de vacunas virales, WO2008/129058; producción de proteínas recombinantes en células aviares EBX®, WO 2008 /142124).

Las proteínas de unión a IL-11Ra de la presente invención también incluyen aquellas con oligosacáridos bisecados, por ejemplo, en los que un oligosacárido biantenario unido a la región Fc es bisecado por GlcNAc. Tales proteínas pueden tener fucosilación reducida y/o función ADCC mejorada. Los ejemplos de tales proteínas se describen, por ejemplo, en la US6602684 y la US20050123546.

También se contemplan proteínas de unión a IL-11Ra con por lo menos un residuo de galactosa en el oligosacárido unido a la región Fc. Tales proteínas pueden tener una función de CDC mejorada. Tales proteínas se describen, por ejemplo, en la WO1997/30087 y la WO1999/22764.

Las proteínas de unión a IL-11Ra también pueden comprender una región Fc capaz de inducir niveles potenciados de CDC. Por ejemplo, los híbridos de IgG1 e IgG3 producen anticuerpos que tienen actividad CDC potenciada (Natsume et al., Cáncer Res. 68: 3863-3872, 2008).

Las proteínas de unión a IL-11Ra también pueden, o alternativamente, fusionarse o conjugarse con proteínas (por ejemplo, regiones variables de anticuerpos) que se unen a células efectoras inmunitarias, por ejemplo, en virtud de la unión a CD3 o CD16.

En la técnica se conocen los métodos para determinar la función efectora. En un ejemplo, el nivel de actividad de ADCC se evalúa usando un ensayo de liberación de 51Cr, un ensayo de liberación de europio o un ensayo de liberación de35S. En cada uno de estos ensayos, las células que expresan IL-11Ra se cultivan con uno o más de los compuestos enumerados durante un tiempo y en condiciones suficientes para que la célula absorba el compuesto. En el caso de un ensayo de liberación de 35S, las células pueden cultivarse con metionina y/o cisteína marcadas con 35S durante un tiempo suficiente para que los aminoácidos marcados se incorporen en las proteínas recién sintetizadas. Luego, las células se cultivan en presencia o ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra y en presencia de células efectoras inmunitarias, por ejemplo, células PBMC y/o NK. Luego se detecta la cantidad de 51Cr, europio y/o 35S en el medio de cultivo celular, y un aumento en la presencia de la proteína en comparación con la ausencia de proteína indica que la molécula/agente de unión tiene una función efectora. Las publicaciones ejemplares que divulgan ensayos para evaluar el nivel de ADCC inducida por una proteína incluyen Hellstrom et al. Poc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 7059-7063, 1986 y Bruggemann et al., J. Exp. Med.166: 1351-1361, 1987.

Otros ensayos para evaluar el nivel de ADCC inducido por una proteína incluyen el ensayo de citotoxicidad no radiactiva ACTI™ para citometría de flujo (CellTechnology, Inc. CA, USA) o el ensayo de citotoxicidad no radiactiva CytoTox 96® (Promega, WI, USA).

Alternativamente, o adicionalmente, la función efectora de una proteína de unión a IL-11Ra se evalúa determinando su afinidad por uno o más FcyR, por ejemplo, como se describe en la US7317091.

También pueden llevarse a cabo ensayos de unión a C1q para confirmar que la proteína de unión a IL-11Ra es capaz de unirse a C1q y puede inducir CDC. Para evaluar la activación del complemento, puede realizarse un ensayo CDC (ver, por ejemplo, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163, 1996).

Modificaciones Adicionales

La presente invención también contempla modificaciones adicionales a un anticuerpo o proteína de unión a IL-11Ra que comprende una región Fc o una región constante.

Por ejemplo, el anticuerpo comprende una o más sustituciones de aminoácidos que aumentan la vida media de la proteína. Por ejemplo, el anticuerpo comprende una región Fc que comprende una o más sustituciones de aminoácidos que aumentan la afinidad de la región Fc por la región Fc neonatal (FcRn). Por ejemplo, la región Fc tiene una afinidad aumentada por FcRn a un pH más bajo, por ejemplo, aproximadamente pH 6,0, para facilitar la unión de Fc/FcRn en un endosoma. En un ejemplo, la región Fc tiene una afinidad aumentada por FcRn a un pH de aproximadamente 6 en comparación con su afinidad a un pH de aproximadamente 7,4, lo que facilita la liberación de Fc en la sangre después del reciclaje celular. Estas sustituciones de aminoácidos son útiles para prolongar la vida media de una proteína, reduciendo la depuración de la sangre.

Las sustituciones de aminoácidos ejemplares incluyen T250Q y/o M428l o T252A, T254S y T266F o M252Y, S254T y T256E o H433K y N434F de acuerdo con el sistema de numeración EU. Sustituciones de aminoácidos adicionales o alternativas se describen, por ejemplo, en la US20070135620 o la US7083784.

Proteínas de unión a IL-11Ra ejemplares

En la Tabla 1 se describen regiones variables ejemplares que contienen proteínas de unión a IL-11Ra producidas por los inventores.

T l 1: n i r ín ni n IL-11R m l r

continuación

continuación

Producción de proteínas

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra descrita en la presente de acuerdo con cualquier ejemplo se produce cultivando un hibridoma en condiciones suficientes para producir la proteína, por ejemplo, como se describe en la presente y/o como se conoce en la técnica.

Expresión recombinante

En otro ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra descrita en la presente de acuerdo con cualquier ejemplo es recombinante.

En el caso de una proteína recombinante, el ácido nucleico que la codifica puede clonarse en constructos de expresión o vectores, que luego se transfectan en células huésped, como células de E. coli., células de levadura, células de insecto o células de mamífero, como células COS de simio, células de ovario de hámster chino (CHO), células de riñón embrionario humano (HEK) o células de mieloma que de otro modo no producen la proteína. Las células ejemplares usadas para expresar una proteína son células CHO, células de mieloma o células HEK. Las técnicas de clonación molecular para lograr estos fines se conocen en la técnica y se describen, por ejemplo, en Ausubel et al., (editores), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates y Wiley-Interscience (1988, incluyendo todas las actualizaciones hasta la fecha) o Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989). Una amplia variedad de métodos de clonación y amplificación in vitro son adecuados para la construcción de ácidos nucleicos recombinantes. También se conocen en la técnica métodos para producir anticuerpos recombinantes, ver, por ejemplo, la US4816567 o la US5530101.

Después del aislamiento, el ácido nucleico se inserta enlazado operativamente a un promotor en un constructo de expresión o vector de expresión para clonación adicional (amplificación del ADN) o para expresión en un sistema libre de células o en células.

Como se usa en la presente, el término "promotor" debe tomarse en su contexto más amplio e incluye las secuencias reguladoras de la transcripción de un gen genómico, incluyendo la caja TATA o el elemento iniciador, que se requiere para el inicio preciso de la transcripción, con o sin elementos reguladores adicionales (por ejemplo, secuencias de activación en sentido ascendente, sitios de unión de factores de transcripción, potenciadores y silenciadores) que alteran la expresión de un ácido nucleico, por ejemplo, en respuesta a un estímulo externo y/o de desarrollo, o de una manera específica de tejido. En el presente contexto, el término "promotor" también se usa para describir un ácido nucleico recombinante, sintético o de fusión, o un derivado que confiere, activa o potencia la expresión de un ácido nucleico al que está enlazado operativamente. Los promotores ejemplares pueden contener copias adicionales de uno o más elementos reguladores específicos para potenciar aún más la expresión y/o alterar la expresión espacial y/o la expresión temporal de dicho ácido nucleico.

Como se usa en la presente, el término "enlazado operativamente a" significa colocar un promotor en relación con un ácido nucleico de tal manera que la expresión del ácido nucleico esté controlada por el promotor.

Están disponibles muchos vectores para la expresión en células. Los componentes del vector generalmente incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: una secuencia señal, una secuencia que codifica una proteína (por ejemplo, derivada de la información proporcionada en la presente), un elemento potenciador, un promotor y una secuencia de terminación de la transcripción. El experto en la técnica conocerá las secuencias adecuadas para la expresión de una proteína. Las secuencias señal ejemplares incluyen señales de secreción procariótica (por ejemplo, pelB, fosfatasa alcalina, penicilinasa, Ipp o enterotoxina estable al calor II), señales de secreción de levadura (por ejemplo, líder de invertasa, líder de un factor o líder de fosfatasa ácida) o señales de secreción de mamíferos (por ejemplo, señal gD de herpes simplex).

Los promotores ejemplares activos en células de mamíferos incluyen el promotor temprano inmediato de citomegalovirus (CMV-IE), el promotor del factor de elongación 1-a humano (EF1), promotores de ARN nuclear pequeño (U1a y U1b), promotor de cadena pesada de a-miosina, promotor del virus simio 40 (SV40), promotor del virus del sarcoma de Rous (RSV), promotor tardío principal de adenovirus, promotor de p-actina; elemento regulador híbrido que comprende un potenciador de CMV/promotor de p-actina o un promotor de inmunoglobulina o un fragmento activo de los mismos. Los ejemplos de líneas de células huésped de mamífero útiles son la línea CV1 de riñón de mono transformada por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); línea de riñón embrionario humano (293 o 293 células subclonadas para crecimiento en cultivo en suspensión; células de riñón de cría de hámster (BHK, ATCC CCL10); o células de ovario de hámster chino (CHO).

Los promotores típicos adecuados para la expresión en células de levadura como, por ejemplo, una célula de levadura seleccionada del grupo que comprende Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae y S. pombe, incluyen, pero no se limitan a, el promotor ADH1, el promotor GAL1, el promotor GAL4, el promotor CUP1, el promotor PHOS, el promotor nmt, el promotor RPR1 o el promotor TEF1.

Los medios para introducir el ácido nucleico aislado o el constructo de expresión que comprende el mismo en una célula para la expresión son conocidos por los expertos en la técnica. La técnica usada para una célula dada depende de las técnicas exitosas conocidas. Los medios para introducir ADN recombinante en las células incluyen la microinyección, la transfección mediada por DEAE-dextrano, la transfección mediada por liposomas, como mediante el uso de lipofectamina (Gibco, MD, USA) y/o cellfectina (Gibco, MD, USA), captación de ADN mediada por PEG, electroporación y bombardeo de micropartículas, como mediante el uso de partículas de tungsteno u oro recubiertas de Ad N (Agracetus Inc., WI, USA), entre otros.

Las células huésped usadas para producir la proteína pueden cultivarse en una variedad de medios, dependiendo del tipo de célula usado. Los medios disponibles comercialmente como Ham's F10 (Sigma), Medio Mínimo Esencial ((MEM), (Sigma), RPMl-1640 (Sigma) y medio de Eagle modificado de Dulbecco ((Dm EM), Sigma) son adecuados para el cultivo de células de mamíferos. Los medios para cultivar otros tipos de células analizadas en la presente se conocen en la técnica.

Aislamiento de Proteínas

Los métodos para aislar una proteína se conocen en la técnica y/o se describen en la presente.

Cuando se secreta una proteína de unión a IL-11Ra en el medio de cultivo, los sobrenadantes de tales sistemas de expresión pueden concentrarse primero usando un filtro de concentración de proteína disponible comercialmente, por ejemplo, una unidad de ultrafiltración Amicon o Millipore Pellicon. En cualquiera de los pasos anteriores puede incluirse un inhibidor de proteasas como PMSF para inhibir la proteólisis y pueden incluirse antibióticos para prevenir el crecimiento de contaminantes accidentales. Alternativamente, o adicionalmente, los sobrenadantes pueden filtrarse y/o separarse de las células que expresan la proteína, por ejemplo, usando centrifugación continua.

La proteína de unión a IL-11Ra preparada a partir de las células puede purificarse usando, por ejemplo, intercambio iónico, cromatografía de hidroxiapatita, cromatografía de interacción hidrófoba, electroforesis en gel, diálisis, cromatografía de afinidad (por ejemplo, cromatografía de afinidad con proteína A o cromatografía de proteína G), o cualquier combinación de los anteriores. Estos métodos son conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en la WO99/57134 o Ed Harlow y David Lane (editores) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988).

Los expertos en la técnica también sabrán que una proteína puede modificarse para incluir una etiqueta para facilitar la purificación o la detección, por ejemplo, una etiqueta de polihistidina, por ejemplo, una etiqueta de hexahistidina o una etiqueta de hemaglutinina (HA) del virus de la gripe, o una etiqueta de virus simio 5 (V5), o una etiqueta FLAG, o una etiqueta de glutatión S-transferasa (GST). Luego, la proteína resultante se purifica usando métodos conocidos en la técnica, como purificación por afinidad. Por ejemplo, una proteína que comprende una etiqueta hexa-his se purifica poniendo en contacto una muestra que comprende la proteína con ácido níquelnitrilotriacético (Ni-NTA) que se une específicamente a una etiqueta hexa-his inmovilizada en un soporte sólido o semisólido, lavando la muestra para eliminar la proteína no unida y, posteriormente, eluyendo la proteína unida. Alternativamente, o adicionalmente, en un método de purificación por afinidad se usa un ligando o anticuerpo que se une a una etiqueta.

Conjugados

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención se conjuga con un compuesto. Por ejemplo, el compuesto se selecciona del grupo que consiste en un radioisótopo, un marcador detectable, un compuesto terapéutico, un coloide, una toxina, un ácido nucleico, un péptido, una proteína, un compuesto que aumenta la vida media de la proteína de unión a IL-11Ra en un sujeto y mezclas de los mismos.

El otro compuesto puede unirse directa o indirectamente a la proteína de unión a IL-11Ra (por ejemplo, puede comprender un conector en el caso de unión indirecta). Los ejemplos de compuestos incluyen un radioisótopo (por ejemplo, yodo-131, itrio-90 o indio-111), un marcador detectable (por ejemplo, un fluoróforo o un nanocristal fluorescente o un punto cuántico), un compuesto terapéutico (por ejemplo, un agente quimioterapéutico o un antiinflamatorio), un coloide (por ejemplo, oro), una toxina (por ejemplo, ricino o toxoide tetánico), un ácido nucleico, un péptido (por ejemplo, un péptido de unión a la albúmina sérica), una proteína (por ejemplo, una proteína que comprende un antígeno dominio de unión de un anticuerpo o albúmina sérica), un compuesto que aumenta la vida media de la proteína de unión a IL-11Ra en un sujeto (por ejemplo, polietilenglicol u otro polímero soluble en agua que tenga esta actividad) y mezclas de los mismos. Los compuestos ejemplares que pueden conjugarse con una proteína de unión a IL-11Ra de la invención y los métodos para tal conjugación se conocen en la técnica y se describen por ejemplo, en la WO2010/059821.

La proteína de unión a IL-11Ra puede conjugarse con nanopartículas (por ejemplo, como se revisa en Kogan et al., Nanomedicine (Lond). 2: 287-306, 2007). Las nanopartículas pueden ser nanopartículas metálicas.

La proteína de unión a IL-11Ra puede estar comprendida en minicélulas bacterianas dirigidas a anticuerpos (por ejemplo, como se describe en el PCT/IB2005/000204).

En la Tabla 2 se enumeran algunos compuestos ejemplares que pueden conjugarse con una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención.

T l 2: m il n l n i n

Ensayo de la actividad de una proteína de unión a IL-11Ra

Unión a IL-11Ra y mutantes de la misma

Para el experto en la técnica será evidente a partir de la divulgación de la presente que algunas proteínas de unión a IL-11Ra de la presente invención se unen a la región extracelular (por ejemplo, una región como se describe en la presente) de hIL-11Ra y a formas mutantes específicas de la región extracelular de hIL-11Ra (por ejemplo, SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 85 sin o con ciertas mutaciones puntuales) y/o se une a IL-11Ra tanto humana como de mono cynomolgus. Los métodos para evaluar la unión a una proteína se conocen en la técnica, por ejemplo, como se describe en Scopes (En: Protein purification: Principles and Practice, Tercera Edición, Springer Verlag, 1994). Tal método generalmente implica inmovilizar la proteína de unión a IL-11Ray ponerla en contacto con el antígeno marcado. Después del lavado para eliminar la proteína unida no específica, se detecta la cantidad de marcador y, como consecuencia, se detecta el antígeno unido. Por supuesto, la proteína de unión a IL-11Ra puede marcarse y el antígeno inmovilizarse. También pueden usarse ensayos de tipo adsorción. Alternativamente, o adicionalmente, pueden usarse ensayos de resonancia de plasmones superficiales.

Los ensayos descritos anteriormente también pueden usarse para detectar el nivel de unión de una proteína a hIL-11Ra o una región extracelular de la misma (por ejemplo, como la contenida dentro de la SEQ ID NO: 3) o a un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 85 o forma mutante del mismo.

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 95 a un nivel por lo menos aproximadamente 1,5 veces o 2 veces o 5 veces o 10 veces o 50 veces o 100 veces o 150 veces. veces o 160 veces o 200 veces menor de lo que se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 85.

En un ejemplo, una proteína de la presente invención se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 96 a un nivel por lo menos aproximadamente 1,5 veces o 2 veces o 5 veces o 10 veces o 50 veces o 100 veces o 150 veces o 160 veces o 200 veces menor de lo que se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 85.

En un ejemplo, una proteína de la presente descripción se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 86 a un nivel por lo menos aproximadamente 1,5 veces o 2 veces o 5 veces o 10 veces o 50 veces o 100 veces o 150 veces o 160 veces o 200 veces menor de lo que se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 85.

En un ejemplo, una proteína de la presente invención se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 89 a un nivel por lo menos aproximadamente 1,5 veces o 2 veces o 5 veces o 10 veces o 50 veces o 100 veces o 150 veces o 160 veces o 200 veces menor de lo que se une a un polipéptido de la SEQ ID NO: 85.

El nivel de unión se determina convenientemente usando un biosensor.

La presente invención contempla cualquier combinación de las características anteriores. En un ejemplo, una proteína descrita en la presente tiene todas las características de unión expuestas en los cinco párrafos anteriores.

Mapeo de epítopos

En otro ejemplo, se mapea el epítopo unido por una proteína descrita en la presente. Los métodos de mapeo de epítopos serán evidentes para los expertos en la técnica. Por ejemplo, se produce una serie de péptidos superpuestos que abarcan la secuencia de IL-11Ra o una región de la misma que comprende un epítopo de interés, por ejemplo, péptidos que comprenden 10-15 aminoácidos. Luego, la proteína de unión a IL-11Ra se pone en contacto con cada péptido y se determina el o los péptidos a los que se une. Esto permite la determinación del péptido o péptidos que comprenden el epítopo al que se une la proteína. Si la proteína se une a múltiples péptidos no contiguos, la proteína puede unirse a un epítopo conformacional.

Alternativamente, o adicionalmente, se mutan los residuos de aminoácidos dentro de IL-11Ra, por ejemplo, mediante mutagénesis de barrido de alanina o sustitución de aminoácidos conservados evolutivamente, y se determinan las mutaciones que reducen o previenen la unión de la proteína de unión a IL-11Ra. Es probable que cualquier mutación que reduzca o prevenga la unión de la proteína de unión a IL-11Ra esté dentro del epítopo al que se ha unido la proteína de unión a IL-11Ra.

A este respecto, como se muestra en la presente, la mutación de la valina en la posición 117 de IL-11R relativa a la SEQ ID NO: 1 redujo o evito la unión de 8E2 y 8D19. Pruebas adicionales de variantes maduradas por afinidad de 8E2 confirmaron que el residuo V117 de IL-11R era más importante para la unión con respecto a otros residuos que se analizaron por mutación.

Otro método para determinar una región que comprende un epítopo al que se ha unido una proteína de unión a IL-11Ra implicó la sustitución de una región de hIL-11Ra por la región correspondiente de una forma de IL-11Ra a la que no se une la proteína de unión a IL-11Ra. por ejemplo, mIL-11Ra). Si la proteína de unión a IL-11Ra no se une a la forma mutante de IL-11Ra, entonces los residuos que forman parte del epítopo de la proteína pueden estar dentro de la región sustituida.

Un método adicional para determinar una región que comprende un epítopo implica unir IL-11Ra o una región de la misma a una proteína de unión a IL-11Ra inmovilizada de la presente invención y digerir el complejo resultante con proteasas. Luego el péptido que permanece unido a la proteína de unión a IL-11Ra inmovilizada se aísla y analiza, por ejemplo, usando espectrometría de masas, para determinar su secuencia.

Un método adicional implica convertir hidrógenos en IL-11Ra o una región de la misma en deutrones y unir la proteína resultante a una proteína de unión a IL-11Ra inmovilizada de la presente invención. Luego, los deutrones se vuelven a convertir en hidrógeno, se aísla la IL-11Ra o la región de la misma, se digiere con enzimas y se analiza, por ejemplo, usando espectrometría de masas para identificar aquellas regiones que comprenden deutrones, que habrían estado protegidas de la conversión a hidrógeno mediante la unión de un proteína de unión a IL-11Ra descrita en la presente.

Opcionalmente, se determina la constante de disociación (Kd), la constante de asociación (Ka) y/o la constante de afinidad (KD)de una proteína de unión a IL-11Ra inmovilizada para IL-11Ra o un epítopo de la misma. La "Kd" o "Ka" o "K^d" para una proteína de unión a IL-11Ra se mide en un ejemplo mediante un ensayo de unión a IL-11Ra marcado radiactivamente o marcado con fluorescencia. En el caso de una "Kd", este ensayo equilibra la proteína de unión a IL-11Ra con una concentración mínima de IL-11Ra marcada en presencia de una serie de titulación de IL-11Ra no marcada. Después del lavado para eliminar la IL-11Ra no unida, se determina la cantidad de marcador, que es indicativa de la Kd de la proteína.

De acuerdo con otro ejemplo, la Kd, la Ka o la Kd se miden usando ensayos de resonancia de plasmones de superficie, por ejemplo, usando resonancia de plasmones de superficie BIAcore (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) con IL-11Ra inmovilizada o una región de la misma o proteína de unión a IL-11Ra inmovilizada.

En algunos ejemplos, la proteína de unión a IL-11Ra tiene una Kd similar o una Kd mejorada (es decir, un valor de Kd menor que) que el anticuerpo 8E2, porque es probable que compitan por la unión a IL-11Ra.

Determinación de la unión competitiva

Los ensayos para determinar una proteína que inhibe competitivamente la unión del anticuerpo 8E2 y/o 8D10 y/o 8E4 serán evidentes para los expertos en la técnica. En la presente se ejemplifica uno de tales métodos.

Por ejemplo, el anticuerpo se conjuga con un marcador detectable, por ejemplo, un marcador fluorescente o un marcador radiactivo. El anticuerpo marcado y la proteína de unión a IL-11Ra de prueba luego se mezclan y se ponen en contacto con IL-11Ra o una región de la misma (por ejemplo, contenida dentro de un polipéptido que comprende la SEQ ID NO: 3) o una célula que expresa la misma. A continuación, se determina el nivel de anticuerpo marcado y se compara con el nivel determinado cuando el anticuerpo marcado se pone en contacto con la IL-11Ra , la región o las células en ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra. Si el nivel de anticuerpo marcado se reduce en presencia de la proteína de unión a IL-11Ra de prueba en comparación con la ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra, se considera que la proteína de unión a IL-11Ra inhibe competitivamente la unión del anticuerpo a IL-11Ra.

Opcionalmente, la proteína de unión a IL-11Ra de prueba se conjuga con un marcador diferente al del anticuerpo. Este marcado alternativo permite la detección del nivel de unión de la proteína de unión a IL-11Ra de prueba a IL-11Ra o a la región de la misma o a la célula.

En otro ejemplo, se permite que la proteína de unión a IL-11Ra se una a IL-11Ra o a una región de la misma (por ejemplo, contenida dentro de un polipéptido que comprende la SEQ ID NO: 3) o una célula que expresa la misma antes de poner en contacto la IL-11Ra, región o célula con el anticuerpo. Una reducción en la cantidad de anticuerpo unido en presencia de la proteína de unión a IL-11Ra en comparación con la ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra indica que la proteína inhibe competitivamente la unión del anticuerpo a IL-11Ra. También puede realizarse un ensayo recíproco usando la proteína de unión a IL-11Ra marcada y permitiendo primero que el anticuerpo se una a IL-1lRa. En este caso, una cantidad reducida de proteína de unión a IL-11Ra marcada unida a IL-11Ra en presencia del anticuerpo en comparación con en ausencia del anticuerpo indica que la proteína de unión a IL-11Ra inhibe competitivamente la unión del anticuerpo a IL-11Ra.

Cualquiera de los ensayos anteriores puede realizarse con una forma mutante de IL-11Ra y/o la SEQ ID NO: 3 y/o la SeQ ID NO: 85 y/o una región extracelular de IL-11Ra a la que se une 8E2 y/o 8D10 y /o 8E4, por ejemplo, como se describe en la presente.

Determinación de la neutralización

La proteína de unión a IL-11Ra de la invención es capaz de neutralizar la señalización de IL-11.

En la técnica se conocen varios ensayos para evaluar la capacidad de una proteína para neutralizar la señalización de un ligando a través de un receptor.

En un ejemplo, la proteína reduce o previene la unión de IL-11 a IL-11Ra. Estos ensayos pueden realizarse como un ensayo de unión competitiva como se describe en la presente usando IL-11 marcada y/o proteína de unión a IL-11Ra marcada.

En un ejemplo adicional, la proteína de unión a IL-11Ra reduce la proliferación de células (por ejemplo, células BaF3) que expresan IL-11Ra y gp130 (por ejemplo, células modificadas para expresar ambas proteínas) que se cultivan en presencia de IL-11. Las células (por ejemplo, aproximadamente 1x104 células) se cultivan en presencia de IL-11 (por ejemplo, entre aproximadamente 0,3 ng/ml y aproximadamente 5 ng/ml (como 0,3 ng/ml o 0,5 ng/ml o 5 ng/ml para hIL-11 o 0,5 ng/ml o 5 ng/ml para cynoIL-11 o entre aproximadamente 1ng/ml a aproximadamente 5 ng/ml (como 1 ng/ml o 3 ng/ml o 5 ng/ml) para mIL-11) y la presencia o ausencia de una proteína de unión a IL-11Ra de prueba. Los métodos para evaluar la proliferación celular se conocen en la técnica e incluyen, por ejemplo, la reducción de MTT y/o la incorporación de timidina. Se considera que una proteína de unión a IL-11Ra que reduce el nivel de proliferación en comparación con el nivel observado en ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra neutraliza la señalización de IL-11R. Probando múltiples concentraciones de la proteína de unión a IL-11Ra se determina una IC⁵⁰, es decir, una concentración a la que se produce el 50% de la inhibición máxima de la proliferación celular. La IC⁵⁰de 10 pg/ml o menos. En un ejemplo, la IC⁵⁰es de 9 pg/ml o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 8 pg/ml o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 7 pg/ml o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 6 pg/ml o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 5 pg/ml o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 4 pg/ml o menos. Por ejemplo, la IC⁵⁰es de 3 pg/ml o menos. En un ejemplo, en relación con cada uno de los ejemplos anteriores, la IC⁵⁰puede ser de 10 pg/ml o más o de 10 ng/ml o más.

Puede realizarse un ensayo similar al descrito en el párrafo anterior con células B9 o células T10 (Dams-Kozlowska et al., BMC Biotechnol, 12: 8, 2012; y Yokote et al., J AOAC, 83: 1053-1057, 2000). En el caso de un ensayo que use células T10, la proliferación puede medirse mediante la detección colorimétrica de la reducción del compuesto de tetrazolio, 4-[3-(4-yodofenil)-2-(4-nitrofenil)-2H-5-tetrazolio]-1,3-benceno disulfonato (WST-1).

En un ejemplo adicional, se evalúa la capacidad de la proteína de unión a IL-11Ra para suprimir la eritropoyesis mediada por IL-11. Por ejemplo, se ponen en contacto células Lin-CD34+ (por ejemplo, de la sangre del cordón umbilical) con IL-11 en presencia o ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra. La cantidad de eritropoyesis se determina detectando el número de células que expresan CD235a, por ejemplo, usando FACS. Se considera que una proteína de unión a IL-11Ra que reduce el número de células que expresan CD235a en comparación con el número en ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra neutraliza la señalización de IL-11.

En un ejemplo adicional más, se evalúa la capacidad de la proteína de unión a IL-11Ra para suprimir la fosforilación de STAT3 mediada por IL-11. Por ejemplo, se cultivan células que expresan IL-11Ra y gp130 en presencia de IL-11 en presencia o ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra. Luego, se evalúa el nivel de fosforilación de STAT3 mediante transferencia Western o FACS usando un anticuerpo específico para STAT3 fosforilado. Un ensayo ejemplar que usa FACS se describe en Dams-Kozlowska et al., ^bM^cBiotechnol, 12: 8, 2012.

En otro ejemplo, se evalúa la capacidad de la proteína de unión a IL-11Ra para suprimir la proliferación de células cancerosas mediada por IL-11, por ejemplo, células de cáncer gástrico o células de leucemia mielógena aguda (AML). En estos ensayos, se cultivan células cancerosas (por ejemplo, células de cáncer gástrico AGN o MKN45) en presencia de IL-11 en presencia o ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra. En el caso de células AML, las células también pueden cultivarse en presencia de G-CSF. Luego se mide la proliferación de las células usando técnicas estándar, por ejemplo, como se ha analizado anteriormente y/o evaluando la formación de L-CFU en el caso de células de a Ml . Ensayos ejemplares adaptables a la presente invención se incluyen en Zhang et al., Int J Biol Sci., 8: 383-393, 2012 y Kimura et al., Leukemia, 13: 1018-1027, 1999.

La presente invención contempla otros métodos para evaluar la neutralización de la señalización de IL-11.

Determinación de la función efectora

Como se analiza en la presente, algunas proteínas de unión a IL-11Ra de la presente invención tienen una función efectora reducida o tienen una función efectora (o función efectora potenciada). Los métodos para evaluar la actividad de ADCC se conocens en la técnica.

En un ejemplo, el nivel de actividad de ADCC se evalúa usando un ensayo de liberación de 51Cr, un ensayo de liberación de europio o un ensayo de liberación de35S. En cada uno de estos ensayos, las células que expresan IL-11R se cultivan con uno o más de los compuestos enumerados durante un tiempo y en condiciones suficientes para que la célula absorba el compuesto. En el caso de un ensayo de liberación de 35S, las células que expresan IL-11Ra pueden cultivarse con metionina y/o cisteína marcadas con 35 S durante un tiempo suficiente para que los aminoácidos marcados se incorporen a las proteínas recién sintetizadas. Luego las células se cultivan en presencia o ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra y en presencia de células efectoras inmunitarias, por ejemplo, células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y/o células NK. Luego se detecta la cantidad de 51Cr, europio y/o 35S en el medio de cultivo celular, y poco o ningún cambio en presencia de la proteína de unión a IL-11Ra en comparación con la ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra indica que la proteína tiene una función efectora reducida y una cantidad mayor en comparación con la proteína de unión a IL-11Ra en ausencia de la proteína de unión a IL-11Ra (o aumentada en comparación con la presencia de la proteína de unión a IL-11Ra que comprende una región Fc de IgG1) indicando una función efectora o función efectora potenciada. Publicaciones ejemplares que describen ensayos para evaluar el nivel de ADCC inducida por una proteína incluyen Hellstrom, et al. Proc. Natl Acad. Sci.

USA 83:7059-7063, 1986 y Bruggemann, etal., J. Exp. Med. 166:1351-1361, 1987.

Otros ensayos para evaluar el nivel de ADCC inducida por una proteína incluyen el ensayo de citotoxicidad no radiactiva ACTI™ para citometría de flujo (CellTechnology, Inc. CA, USA) o el ensayo de citotoxicidad no radiactiva CytoTox 96® (Promega, WI, USA).

También pueden llevarse a cabo ensayos de unión a C1q para confirmar que la proteína de unión a IL-11Ra es capaz de unirse a C1q y puede inducir CDC. Para evaluar la activación del complemento, puede realizarse un ensayo CDC (ver, por ejemplo, Gazzano-Santoro et al, J. Immunol. Methods 202: 163, 1996).

Determinación de la vida media

Algunas proteínas de unión a IL-11Ra abarcadas por la presente invención tienen una vida media mejorada, por ejemplo, se modifican para extender su vida media en comparación con las proteínas de unión a IL-11Ra que no están modificadas. Los métodos para determinar una proteína de unión a IL-11Ra con una vida media mejorada serán evidentes para los expertos en la técnica. Por ejemplo, se evalúa la capacidad de una proteína de unión a IL-11Ra para unirse a un receptor Fc neonatal (FcRn). A este respecto, la afinidad de unión aumentada por FcRn aumenta la vida media en suero de la proteína de unión a IL-11Ra (ver, por ejemplo, Kim et al., Eur J. Immunol., 24:2429, 1994).

La vida media de una proteína de unión a IL-11Ra de la invención también puede medirse mediante estudios farmacocinéticos, por ejemplo, de acuerdo con el método descrito por Kim et al, Eur J of Immunol 24:542, 1994. Según este método, la proteína de unión a IL-11Ra se inyecta por vía intravenosa en ratones y se mide periódicamente su concentración en plasma en función del tiempo, por ejemplo, de 3 minutos a 72 horas después de la inyección. La curva de depuración obtenida de este modo debe ser bifásica, es decir, una fase alfa y una fase beta. Para la determinación de la vida media in vivo de la proteína, se calcula la tasa de depuración en la fase beta y se compara con la de la proteína de tipo salvaje o no modificada.

Evaluación de la eficacia terapéutica

Los ensayos para evaluar la eficacia terapéutica se han descrito anteriormente en la presente en relación con la determinación de la neutralización por una proteína de unión a IL-11Ra.

En otro ejemplo, la eficacia de una proteína para tratar una afección se evalúa usando un ensayo in vivo. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra se prueba en un modelo animal de artritis. Los modelos ejemplares incluyen una cepa SKG de ratón (Sakaguchi et al., Nature, 426: 454-460), modelo de artritis por colágeno tipo II de rata, modelo de artritis por colágeno tipo II de ratón o modelos de artritis inducida por antígeno en varias especies (Bendele J Musculoskel Neuron Interact; 1(4):377-385, 2001). En estos ensayos, se induce la artritis y se evalúa la capacidad de la proteína de unión a IL-11Ra para reducir uno o más síntomas de artritis, por ejemplo, inflamación de las articulaciones y/o marcadores de inflamación en el líquido sinovial. Una proteína de unión a IL-11Ra que reduce un síntoma de artritis se considera útil para tratar esta afección o una afección mediada por IL-11 (por ejemplo, una afección inflamatoria mediada por IL-11).

La proteína de unión a IL-11Ra también puede o alternativamente probarse en un modelo de EPOC, por ejemplo, en el que un mamífero no humano (por ejemplo, un roedor, como un ratón) se expone al humo de un cigarrillo. Después de la exposición, se administra al mamífero una proteína de unión a IL-11Ray se evalúa o estima el nivel de inflamación pulmonar y/o el número de neutrófilos en el pulmón usando técnicas estándar. Una proteína de unión a IL-11Ra que reduce la inflamación pulmonar y/o el número de neutrófilos se considera útil para tratar la inflamación pulmonar o la EPOC o una afección mediada por IL-11 (por ejemplo, una afección inflamatoria mediada por IL-11, como una afección pulmonar inflamatoria mediada por IL-11).

La proteína de unión a IL-11Ra también puede o alternativamente probarse en un afección inflamatoria Th2, como el asma o la hiperreactividad de las vías respiratorias. Un modelo ejemplar de asma alérgica es el modelo OVA de ratón, por ejemplo, como se describe en Wang et al, J. Immunol. 165: 2222, 2000. Después de la inducción de la inflamación, se administra una proteína de unión a IL-11Ra a los ratones y se evalúan síntomas de asma, como el número de eosinófilos en el líquido de lavado broncoalveolar (BAL), secreción de moco y/o hiperplasia de células caliciformes. En la técnica se conocen otros modelos de asma e incluyen un modelo ovino de asma inflamatoria como se describe en la WO2002/098216, un modelo de ratón de asma alérgica, por ejemplo, inducida por la proteína del ácaro del polvo del huésped (Fattouh et al., Am J Respir Crit. ACare Med 172: 314-321, 2005), un modelo de ratón con asma grave en el que se sobreexpresan IL-5 y eotaxina, o ratones que reciben una instilación intratraqueal de poli-1-lisina que son hipersensibles a la metacolina cuando se administran en forma de aerosol (Homma et al.., Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 289: L413-L418, 2005).

La proteína de unión a IL-11Ra puede probarse adicional o alternativamente en un modelo de cáncer, por ejemplo, cáncer gástrico. Por ejemplo, ratones homólogos para el mutante Y757F de gp130 (gp130Y757F/Y757F) desarrollan tumores gástricos Jenkins et al, Blood 109: 2380-2388, 2007). Los ratones (por ejemplo, ratones de ocho semanas de edad) se tratan con una proteína de unión a IL-11Ra y se evalúa el número y/o el peso de los pólipos gástricos. Una proteína de unión a IL-11Ra que reduce el tamaño y/o el peso de los pólipos se considera útil para tratar el cáncer. Puede usarse un ensayo similar para probar un efecto sobre el cáncer de colon, en el que los ratones gp130 Y757F/Y757F se tratan con azoximetano (AOM) seguido de sulfato de sodio dextrano (DSS) esencialmente como se describe en Greten (et al, Cell, 118: 285-296, 2004) para inducir cáncer de colon antes del tratamiento con la proteína de unión a IL-11Ra.

La proteína de unión a IL-11Ra puede probarse adicional o alternativamente en un modelo de metástasis de cáncer o enfermedad ósea relacionada con el cáncer, por ejemplo, como se describe en Li et al., Oncol. Lett. 3: 802-806, 2012.

Condiciones a tratar

La presente invención contempla proteínas de unión a IL-11Ra para su uso en el tratamiento o la prevención de cualquier afección que esté provocada o sea exacerbada por la IL-11 en un sujeto.

En un ejemplo, la afección es una afección autoinmune o inflamatoria.

En un ejemplo, la afección autoinmune es una afección articular autoinmune, como artritis inflamatoria, artritis reumatoide o artritis idiopática, por ejemplo, artritis idiopática juvenil. En un ejemplo, la afección es la artritis reumatoide.

En un ejemplo, la afección autoinmune es una afección intestinal autoinmune, como una enfermedad inflamatoria del intestino, como colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn.

En un ejemplo, la afección autoinmune es una afección cutánea autoinmune, como la psoriasis.

En un ejemplo, la afección inflamatoria es una afección pulmonar inflamatoria, como una enfermedad pulmonar asociada con la infiltración de neutrófilos. Por ejemplo, la afección es asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), rinitis o alergia. En un ejemplo, la afección es asma.

Otras afecciones inflamatorias ejemplares incluyen inflamación inducida por infección (por ejemplo, inflamación inducida por M. tuberculosis), inflamación gástrica (por ejemplo, asociada con cáncer gástrico) o dermatitis inflamatoria (por ejemplo, dermatitis atópica).

En un ejemplo, la afección es una afección por desgaste, como caquexia o sarcopenia. En un ejemplo, la afección por desgaste es caquexia. Por ejemplo, la caquexia está asociada o provocada por una afección seleccionada de artritis reumatoide, diabetes, enfermedad cardiaca, enfermedad renal crónica, inflamación pulmonar crónica, inflamación intestinal, enfermedad inflamatoria intestinal, edad, sepsis o SIDA. En un ejemplo, la caquexia está asociada o es provocada por el cáncer.

En un ejemplo, la afección es una afección ósea, por ejemplo, provocada por una formación ósea insuficiente y/o un catabolismo óseo excesivo. Las afecciones óseas ejemplares incluyen osteoporosis (incluyendo la osteoporosis posmenopáusica), fractura ósea, reabsorción/daño óseo provocado por cáncer (por ejemplo, cáncer óseo metastásico, mieloma o enfermedad ósea de Paget) y reabsorción/daño óseo provocado por el tratamiento del cáncer (por ejemplo, quimioterapia, ablación hormonal o inhibición hormonal).

En un ejemplo, la afección es cáncer. Los cánceres ejemplares incluyen cánceres hematológicos, cánceres de origen epitelial, cáncer gástrico, cáncer de páncreas, cáncer de hígado, osteosarcoma, cáncer de endometrio o cáncer de ovario.

En un ejemplo, el sujeto es resistente, no responde adecuadamente o no es adecuado para el tratamiento con otro compuesto usado para tratar la afección. Por ejemplo, el sujeto que padece una afección autoinmune o inflamatoria es resistente, no responde adecuadamente o no es adecuado para el tratamiento con un corticosteroide y/o un inmunosupresor y/o ciclofosfamida y/o metotrexato y/o un anticuerpo anti-TNF o receptor de TNF soluble y/o un anticuerpo anti-CD20 y/o un anticuerpo anti-IL6 y/o un anticuerpo anti-CD22.

Composiciones

En algunos ejemplos, una proteína de unión a IL-11Ra como se describe en la presente puede administrarse por vía oral, parenteral, mediante inhalación en aerosol, adsorción, absorción, por vía tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal, intraventricular, a través de un depósito implantado en formulaciones de dosificación que contienen portadores no tóxicos farmacéuticamente aceptables, o mediante cualquier otra forma de dosificación conveniente. El término "parenteral", como se usa en la presente, incluye técnicas de infusión o inyección subcutáneas, intravenosas, intramusculares, intraperitoneales, intratecales, intraventriculares, intraesternales e intracraneales.

Los métodos para preparar una proteína de unión a IL-11Ra en una forma adecuada para la administración a un sujeto (por ejemplo, una composición farmacéutica) se conocen en la técnica e incluyen, por ejemplo, métodos como los descritos en Remington's Pharmaceutical Sciences (18a ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990) y la U.S. Pharmacopia National Formulary (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1984).

Las composiciones farmacéuticas de esta invención son particularmente útiles para la administración parenteral, como la administración intravenosa o la administración en una cavidad corporal o luz de un órgano o articulación. Las composiciones para administración comprenderán comúnmente una solución de una proteína de unión a IL-11Ra disuelta en un portador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, un portador acuoso. Pueden usarse una variedad de portadores acuosos, por ejemplo, solución salina tamponada y similares. Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables según se requiera para aproximarse a las condiciones fisiológicas como agentes tamponadores y de ajuste del pH, agentes reguladores de la toxicidad y similares, por ejemplo, acetato sódico, cloruro sódico, cloruro potásico, cloruro cálcico, lactato sódico y similares. La concentración de proteínas de unión a IL-11Ra de la presente invención en estas formulaciones puede variar ampliamente y se seleccionará principalmente en función de los volúmenes de fluidos, viscosidades, peso corporal y similares de acuerdo con el modo particular de administración seleccionado y las necesidades del paciente. Los portadores ejemplares incluyen agua, solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa y albúmina de suero humano al 5%. También pueden usarse vehículos no acuosos como aceites mixtos y oleato de etilo. También pueden usarse como portadores liposomas. Los vehículos pueden contener cantidades menores de aditivos que mejoran la isotonicidad y la estabilidad química, por ejemplo, tampones y conservantes.

Tras la formulación, se administrará una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención de una manera compatible con la formulación de dosificación y en tal cantidad que sea terapéutica/profilácticamente eficaz. Las formulaciones se administran fácilmente en una variedad de formas de dosificación, como el tipo de soluciones inyectables descritas anteriormente, pero también se contemplan otras formas farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, comprimidos, píldoras, cápsulas u otros sólidos para administración oral, supositorios, pesarios, soluciones nasales o espráis, aerosoles, inhalantes, formas liposomales y similares. También pueden usarse cápsulas o composiciones farmacéuticas de "liberación lenta". Las formulaciones de liberación lenta generalmente se diseñan para proporcionar un nivel constante de fármaco durante un período prolongado y pueden usarse para administrar una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención.

La WO2002/080967 describe composiciones y métodos para administrar composiciones en aerosol que comprenden anticuerpos para el tratamiento de, por ejemplo, asma, que también son adecuados para la administración de una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención.

Terapias de combinación

En un ejemplo, una proteína de unión a IL-11Ra de la presente invención es para su uso en un métodos para tratar una afección descrita en la presente en donde la proteína de unión a IL-11Ra se administra en combinación con otro compuesto útil para tratar una afección descrita en la presente, ya sea como pasos de tratamiento combinados o adicionales o como componentes adicionales de una formulación terapéutica.

Por ejemplo, el otro compuesto es un compuesto antiinflamatorio. Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es un inmunosupresor. Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es un corticosteroide, como prednisona y/o prednisolona. Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es metotrexato. Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es ciclofosfamida. Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es micofenolato de mofetilo. Como alternativa, o adicionalmente, el otro compuesto es un anticuerpo anti-CD20 (por ejemplo, rituximab u ofatumumab). Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es un anticuerpo anti-CD22 (por ejemplo, epratuzumab). Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es un anticuerpo anti-TNF (por ejemplo, infliximab o adalimumab o golimumab) o un receptor de TNF soluble (por ejemplo, etanercept). Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es un antagonista de CTLA-4 (por ejemplo, abatacept, CTLA4-Ig). Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es un anticuerpo anti-lL-6. Alternativamente, o adicionalmente, el otro compuesto es un antagonista de BLys, como un anticuerpo anti-BLys (por ejemplo, belimumab).

En otro ejemplo, el otro compuesto es un fármaco de quimioterapia u otro fármaco usado para tratar el cáncer.

En otro ejemplo, la proteína descrita en la presente se administra antes o después de la radioterapia para el tratamiento del cáncer.

Dosificaciones y cadencia de administración

Las dosificaciones adecuadas de proteínas de unión a IL-11Ra de la presente invención variarán dependiendo de la proteína de unión a IL-11Ra específica, la afección a tratar y/o el sujeto que se está tratando. Está dentro de la capacidad de un médico experto determinar una dosificación adecuada, por ejemplo, comenzando con una dosificación subóptima y modificando incrementalmente la dosificación para determinar una dosificación óptima o útil. Alternativamente, para determinar una dosificación apropiada para el tratamiento/profilaxis, se usan datos de ensayos de cultivos celulares o estudios en animales, en donde una dosificación adecuada está dentro de un intervalo de concentraciones circulantes que incluyen la EDsüdel compuesto activo con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. Una dosis terapéutica/profilácticamente eficaz puede estimarse inicialmente a partir de ensayos de cultivos celulares. Puede formularse una dosis en modelos animales para lograr un intervalo de concentración de plasma circulante que incluya la IC⁵⁰(es decir, la concentración o cantidad del compuesto que logra una inhibición de los síntomas media máxima) determinada en cultivo celular. Dicha información puede usarse para determinar con mayor precisión las dosis útiles en humanos. Los niveles en plasma pueden medirse, por ejemplo, mediante cromatografía líquida de alto rendimiento.

En algunos ejemplos, las proteínas de unión a IL-11Ra de la invención son para su uso en un método de tratamiento que comprende administrar una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz de una proteína descrita en la presente.

El término "cantidad terapéuticamente eficaz" es la cantidad que, cuando se administra a un sujeto que necesita tratamiento, mejora el pronóstico y/o el estado del sujeto y/o que reduce o inhibe uno o más síntomas de una afección clínica descrita en la presente para un nivel que está por debajo del observado y aceptado como clínicamente diagnóstico o clínicamente característico de esa afección. La cantidad a administrar a un sujeto dependerá de las características particulares de la afección a tratar, el tipo y etapa de la afección que se esté tratando, el modo de administración y las características del sujeto, como salud general, otras enfermedades, edad, sexo, genotipo y peso corporal. Un experto en la técnica podrá determinar las dosificaciones apropiadas dependiendo de estos y otros factores. Por consiguiente, no debe interpretarse que este término limita la presente invención a una cantidad específica, por ejemplo peso o cantidad de proteína o proteínas, más bien la presente invención abarca cualquier cantidad de proteína o proteínas de unión a IL-11Ra suficiente para lograr el resultado indicado en un sujeto.

Como se usa en la presente, se entenderá que el término "cantidad profilácticamente eficaz" significa una cantidad suficiente de una proteína para prevenir, inhibir o retrasar la aparición de uno o más síntomas detectables de una afección clínica. El experto en la técnica será consciente de que dicha cantidad variará dependiendo, por ejemplo, de la proteína o proteínas de unión a IL-11Ra específicas administradas y/o del sujeto particular y/o del tipo o gravedad o nivel de la afección y/o predisposición (genética o de otro tipo) a la afección. Por consiguiente, no debe interpretarse que este término limita la presente invención a una cantidad específica, por ejemplo, peso o cantidad de proteína o proteínas de unión a IL-11Ra, sino que la presente invención abarca cualquier cantidad de la proteína o proteínas de unión a IL-11Ra suficiente para lograr el resultado indicado en un sujeto.

Para la administración in vivo de la proteína de unión a IL-11Ra descrita en la presente, las cantidades de dosificación normales pueden variar de aproximadamente 10 ng/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg del peso corporal de un individuo o más por día. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la gravedad de la enfermedad o trastorno a tratar, el tratamiento puede mantenerse hasta que se logre la supresión deseada de los síntomas.

En algunos ejemplos, la proteína de unión a IL-11Ra se administra a una dosis inicial (o de carga) de entre aproximadamente 1 mg/kg y aproximadamente 30 mg/kg, como de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg o de aproximadamente 1 mg/kg o de aproximadamente 2 mg/kg o de 5 mg/kg. La proteína de unión a IL-11Ra puede administrarse luego a una dosis de mantenimiento más baja de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, como de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg, por ejemplo, de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg, como aproximadamente 0,1 mg/kg o 0,5 mg/kg o 1 mg/kg. Las dosis de mantenimiento pueden administrarse cada 7-30 días, como cada 10-15 días, por ejemplo, cada 10 o 11 o 12 o 13 o 14 o 15 días.

En algunos ejemplos, la proteína de unión a IL-11Ra se administra a una dosis de entre aproximadamente 0,01 mg/kg y aproximadamente 50 mg/kg, como entre aproximadamente 0,05 mg/kg y aproximadamente 30 mg/kg, por ejemplo, entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 20 mg/kg, por ejemplo, entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 10 mg/kg, como entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 2 mg/kg. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra se administra a una dosis de entre aproximadamente 0,01 mg/kg y aproximadamente 5 mg/kg, como de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, como de aproximadamente 0,2 mg/kg o 0,3 mg/kg o 0,5 mg/kg o 1 mg/kg o 1,5 mg/kg (por ejemplo, sin una dosis de carga más alta o una dosis de mantenimiento más baja). En algunos ejemplos, se administran numerosas dosis, por ejemplo, cada 7-30 días, como cada 10-22 días, por ejemplo, cada 10-15 días, por ejemplo, cada 10 o 11 o 12 o 13 o 14 o 15 o 16 o 17 o 18 o 19 o 20 o 21 o 22 días. Por ejemplo, la proteína de unión a IL-11Ra se administra cada 7 días o cada 14 días o cada 21 días.

En algunos ejemplos, en el momento de comenzar la terapia, al mamífero se le administra la proteína de unión a IL-11Ra en no más de 7 días consecutivos o 6 días consecutivos o 5 días consecutivos o 4 días consecutivos.

En el caso de un mamífero que no responda adecuadamente al tratamiento, pueden administrarse múltiples dosis en una semana. Alternativamente, o adicionalmente, pueden administrarse dosis crecientes.

En otro ejemplo, para los mamíferos que experimentan una reacción adversa, la dosis inicial (o de carga) puede dividirse en varios días en una semana o en varios días consecutivos.

La administración de una proteína de unión a IL-11Ra de la invención para su uso en un método de tratamiento de acuerdo con los métodos descritos en la presente puede ser continua o intermitente dependiendo, por ejemplo, de la condición fisiológica del receptor, si el propósito de la administración es terapéutico o profiláctico, y otros factores conocidos por practicantes calificados. La administración de una proteína de unión a IL-11Ra puede ser esencialmente continua durante un período de tiempo preseleccionado o puede ser en una serie de dosis espaciadas, por ejemplo, durante o después del desarrollo de una afección.

Ensayos de detección de IL-11Ra

Los siguientes ensayos pueden realizarse con una proteína de unión a IL-11Ra de la invención, por ejemplo, una proteína de unión a lL-11Ra conjugada con un marcador detectable como se analiza en la presente. La detección de IL-11Ra o células que expresan la misma con un ensayo descrito en la presente es útil para diagnosticar o pronosticar una afección.

Un inmunoensayo es un formato de ensayo ejemplar para diagnosticar una afección en un sujeto o detectar IL-11Ra y células que expresan la misma en una muestra. La presente invención contempla cualquier forma de inmunoensayo, incluyendo transferencia Western, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), ensayo inmunoabsorbente ligado a fluorescencia (FLISA), ensayo competitivo, radioinmunoensayo, inmunoensayo de flujo lateral, inmunoensayo de flujo continuo, ensayo electroquimioluminiscente, ensayo basados en nefelométrica, ensayos basados en turbidometría y ensayos basados en clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS).

Una forma de inmunoensayo adecuado es, por ejemplo, ELISA o FLISA.

En una forma, dicho ensayo implica la inmovilización de una proteína de unión a IL-11Ra de la invención en una matriz sólida, como, por ejemplo, un micropocillo o tira reactiva de poliestireno o policarbonato, una membrana, o un soporte de vidrio (por ejemplo, un portaobjetos de vidrio). A continuación, una muestra de prueba se pone en contacto directo con la proteína de unión a IL-11Ra y se une o captura la IL-11Ra o las células que expresan la misma en la muestra. Después del lavado para eliminar cualquier proteína no unida en la muestra, una proteína de unión a IL-11Ra que se une a IL-11Ra en un epítopo distinto o se une a un antígeno diferente en una célula se pone en contacto directo con la IL-11Ra capturada o la célula. Esta proteína detectora generalmente se marca con una molécula informadora detectable, como por ejemplo, una enzima (por ejemplo, peroxidasa de rábano picante (HRP), fosfatasa alcalina (AP) o p-galactosidasa) en el caso de un ELISA o un fluoróforo en el caso de un FLISA. Alternativamente, puede usarse una segunda proteína marcada que se une a la proteína detectora. Después del lavado para eliminar cualquier proteína no unida, la molécula informadora detectable se detecta mediante la adición de un sustrato en el caso de un ELISA, como por ejemplo peróxido de hidrógeno, TMB o toluidina, o 5-bromo-4-cloro-3-indol-beta-D-galactopiranósido (x-gal). Por supuesto, la proteína inmovilizada (capturada) y la proteína detectora pueden usarse de manera opuesta.

Luego se determina el nivel del antígeno en la muestra usando una curva estándar que se ha producido usando cantidades conocidas del marcador o por comparación con una muestra de control.

Los ensayos descritos anteriormente se modifican fácilmente para usar quimioluminiscencia o electroquimioluminiscencia como base para la detección.

Como será evidente para los expertos en la técnica, otros métodos de detección basados en un ensayo inmunoabsorbente son útiles en la realización de la presente invención. Por ejemplo, un método inmunoabsorbente basado en la descripción anterior que usa un radiomarcador para la detección, o un marcado de oro (por ejemplo, oro coloidal) para la detección, o un liposoma, por ejemplo, que encapsula NAD+ para la detección o un ensayo inmunoabsorbente ligado a acridinio.

En algunos ejemplos de la invención, el nivel de IL-11Ra o la expresión celular de la misma se determina usando un detector de resonancia de plasmones superficiales (por ejemplo, BIAcore™, GE Healthcare, Piscataway, NJ), un dispositivo de flujo directo, por ejemplo, como se describe en la US7205159; un dispositivo de micro- o nanoinmunoensayo (por ejemplo, como se describe en la US20030124619); dispositivos de flujo lateral (por ejemplo, como se describe en la US20040228761 o la US20040265926); un inmunoensayo de polarización de fluorescencia (FPIA, por ejemplo, como se describe en la US4593089 o la US4751190); o un ensayo inmunoturbidimétrico (por ejemplo, como se describe en la US5571728 o la US6248597).

Muestras y muestras de control

Como será evidente para los expertos en la técnica, algunos de los ejemplos descritos en la presente requieren cierto grado de cuantificación para determinar el nivel de IL-11Ra o las células que expresan la misma. Tal cuantificación puede determinarse mediante la inclusión de una muestra de control adecuada en un ensayo como se describe en la presente.

En un ejemplo, una muestra de control adecuada es una muestra que se deriva de un sujeto sano o un sujeto normal.

En el presente contexto, se entenderá que el término "sujeto sano" significa un individuo que se sabe que no padece una afección asociada con IL-11Ra, por ejemplo, una afección inflamatoria.

Se entenderá que el término "sujeto normal" significa un individuo que tiene un nivel normal de IL-11Ra o una célula que expresa la misma en una muestra en comparación con una población de individuos.

La presente invención también contempla la muestra de control como un conjunto de datos obtenidos de un sujeto normal y/o sano o una población de sujetos normales y/o sanos.

En un ejemplo, un método de la invención comprende adicionalmente determinar el nivel de IL-11Ra en una muestra de control, por ejemplo, usando un método descrito en la presente.

En un ejemplo, una muestra del sujeto y una muestra de control se analizan aproximadamente o sustancialmente al mismo tiempo.

En un ejemplo, la muestra del sujeto y la muestra de control se analizan usando el mismo método como se describe en la presente en uno o más ejemplos para permitir la comparación de resultados.

Kits

La presente invención comprende adicionalmente un kit que comprende uno o más de los siguientes: (i) una proteína de unión a IL-11Ra de la invención o constructo o constructos de expresión que codifican la misma;

(ii) una célula de la invención; o

(iii) una composición farmacéutica de la invención.

En el caso de un kit para detectar IL-11Ra, el kit puede comprender adicionalmente un medio de detección, por ejemplo, enlazado a una proteína de unión a IL-11Ra de la invención.

En el caso de un kit para uso terapéutico/profiláctico, el kit puede comprender adicionalmente un portador farmacéuticamente aceptable.

Opcionalmente, un kit de la invención se envasa con instrucciones para usar en un método descrito en la presente de acuerdo con cualquier ejemplo.

Ejemplos no limitativos

Materiales y métodos

Presentación en fagos

Los anticuerpos específicos de IL-11Ra humana se aislaron de una biblioteca de anticuerpos Fabfagémidos humanos. El fago que se unía a hIL-11Ra-Fc inmovilizado (R&D Systems N° de Cat. 1977-MR) se eluyó en presencia de hIL-11 de tipo salvaje o una muteína de hIL-11. Una serie de clones positivos (según se confirmó por ELISA de fagémidos) se reformatearon a anticuerpos de IgG4 humanos.

Ensayo de proliferación celular sensible a IL-11

Se usaron líneas celulares de BaF3 sensibles a hIL-11, cynoIL-11 y mIL-11 para probar la capacidad de los anticuerpos para bloquear la bioactividad de IL-11. La línea celular BaF3 sensible a mIL-11 se describe en la WO2009/052588.

Las líneas celulares BaF3 sensibles a hIL-11 y cynoIL-11 se transfectaron de manera estable con constructos que codifican humanos de tipo salvaje y cynoIL-11Ra, respectivamente, y gp130 humana y gp130 de mono cynomolgus, respectivamente. Las células se seleccionaron mediante crecimiento en medios que contenían hIL-11 o cynoIL-11 y las líneas celulares clonales se derivaron mediante clonación por dilución límite. Se analizó una serie de clones transfectados de manera estable para determinar su proliferación sensible a la dosis (usando un ensayo de incorporación de timidina) cuando se cultivaron en presencia de hIL-11 o cyno IL-11. Para el análisis de anticuerpos se seleccionaron un clon sensible a hIL-11 y un clon sensible a cynoIL-11.

Se sembraron células BaF3 sensibles a IL-11 a aproximadamente 1x104 células/pocillo en placas de 96 pocillos en RPMI/FCS al 10%/Glutamax/PenStrep en presencia de una concentración submáxima de IL-11 (hIL-11: 0,3 ng/ml o 0,5 ng/ml o 5 ng /ml; mIL-11: 1 ng/ml, 3 ng/ml o 5 ng/ml; cyno IL-11: 0,5 ng/ml o 5 ng/ml) y concentraciones crecientes de anticuerpos monoclonales purificados o una muteína de hIL-11 (que comprende la SEQ ID NO: 110 y que tiene una etiqueta hexa HIS N-terminal) en un volumen total de 200 pl/pocillo. Las células se cultivaron inicialmente en presencia de anticuerpo o muteína de hIL-11 durante 30 minutos antes de la adición de la citoquina. Las células se cultivaron durante 48-50 horas a 37° C y se sometieron a pulsos con 3H-timidina durante las últimas 6 horas de cultivo. Las células se recogieron en filtros de fibra de vidrio y el nivel de timidina radiactiva incorporada en el ADN se determinó mediante recuento de centelleo líquido. Los ensayos se realizaron por duplicado y luego se trazaron los valores medios para cada punto de ensayo.

Maduración por afinidad del anticuerpo 8E2

El anticuerpo 8E2 se maduró por afinidad usando el siguiente método. Las secuencias que codifican la Vh y la V^lde 8E2 se insertaron en un constructo de fagémido para codificar un Fab de línea germinal y se crearon plantillas de parada de línea germinal reemplazando 18 codones (6 residuos de aminoácidos) en todas las CDR, excepto la CDR-L2, con codones de parada TAA. Las bibliotecas se construyeron usando métodos esencialmente como los descritos por Sidhu et al. (Methods in Enzymology: 238: 333-336, 2000). Cada plantilla de parada se usó como plantilla para el método de mutagénesis de Kunkel (Kunkel et al., Methods in Enzymology:154: 367-382, 1987) con oligonucleótidos mutagénicos diseñados para reparar simultáneamente los codones de parada e introducir mutaciones en los sitios diseñados. Las reacciones de mutagénesis se introdujeron en E. coli mediante electroporación y la producción de fagos se inició con la adición de fagos auxiliares. Después de crecer durante la noche a 30° C, los fagos se recogieron por precipitación con PEG/NaCl.

Las bibliotecas se sometieron a ciclos a través de varias rondas de selección con una concentración decreciente de polipéptido biotinilado que comprende la SEQ ID NO: 3. La concentración objetivo se redujo 10 veces con cada ronda.

Unión de anticuerpos a polipéptidos mutantes de IL-11R con dominio intercambiado

Se produjeron varias formas solubles de IL-11R que comprenden regiones de hIL-11R y mIL-11R y comprenden secuencias como se expone en las SEQ ID NO: 3 y 86-90 y se determinó la unión de los anticuerpos 8E2, 8D10 y 8E4 a esos polipéptidos. usando transferencia Western o análisis Biacore.

Para el análisis de Biacore, se inmovilizó IgG antihumano en la superficie del sensor a ~10.000-12.000 RU y cada anticuerpo se capturó entre 0,2 pg/ml y 0,5 pg/ml en cada ciclo durante 120 segundos. Los receptores de IL-11 se inyectaron sobre los anticuerpos capturados a concentraciones variables, desde 1 pM hasta 2,5 nM, incluyendo las inyecciones de tampones en blanco. La asociación se monitorizó durante 3-5 minutos, la disociación se monitorizó durante 3-10 minutos. Las afinidades aproximadas se determinaron ajustando las curvas de unión de cada interacción a un modelo cinético 1:1.

Unión de anticuerpos a mutantes puntuales de hIL-11R soluble

Se produjeron varios mutantes puntuales de formas solubles de IL-11R en los que se introdujeron aminoácidos de mIL-11 en una forma soluble de hIL-11 (SEQ ID NO: 85) (consultar la Tabla 5 para conocer las posiciones de las mutaciones con respecto a la SEQ ID NO: 1 y para referencia a la SEQ ID NO: de cada polipéptido) y se determinó la unión de anticuerpos a esos polipéptidos o a polipéptidos de la SEQ ID NO: 3 o la SeQ ID NO: 85 usando análisis Biacore o FACS.

El anticuerpo específico Fc anti- IgG humana se inmovilizó químicamente en un chip CM5 a ~9000 RU. Los anticuerpos se capturaron a aproximadamente 0,3-1 ng/ml durante 120 segundos en 2 puntos en cada celda de flujo.

Como referencia se usaron manchas adyacentes que consistían únicamente en anti-IgG humana. Los receptores de IL-11 se inyectaron sobre los anticuerpos capturados y los puntos de referencia a 40, 10, 5 y 2,5 nM por duplicado. También se realizaron por duplicado inyecciones en blanco de tampón solamente. La inyección se realizó durante 3 minutos y se monitorizó la disociación durante 5 minutos adicionales.

Las curvas de unión se restaron de referencia y se borraron con tampón antes de ajustarlas a un modelo cinético 1:1.

Inhibición mediada por anticuerpos de la señalización de IL-11 en células cancerosas

Se estimularon células DLD-1 (línea celular de cáncer colorrectal) y MKN-28 (línea celular de cáncer gástrico) con concentraciones crecientes de hIL-11 durante 15 minutos o se incubaron en presencia de concentraciones crecientes de anti-IL-11R de 8E2 o anticuerpos de control de isotipo BM4 antes de la estimulación con huIL-11 (50 ng/ml). Las células se fijaron y permeabilizaron, luego se tiñeron con anticuerpos anti-fosfoSTAT-3 conjugados con PE. Las células se analizaron mediante citometría de flujo. Los ensayos se realizaron por duplicado. Ejemplo 1: Aislamiento y caracterización de anticuerpos

Se aislaron tres anticuerpos, 8E2, 8D10 y 8E4, de una biblioteca de anticuerpos fagémidos Fab en función de su capacidad para inhibir la proliferación de células BaF3 transfectadas dependiente de hIL-11. 8E4 también inhibió la proliferación de células BaF3 dependientes de IL-11 de ratón.

8E2, 8D10 y 8E4 se unieron a células transfectadas con hIL-11Ra o cynoIL-11Ra. 8E4, pero no 8E2 y 8D10, se unieron a células transfectadas con mIL-11Ra.

De los tres anticuerpos, 8E2 tenía la mejor estabilidad térmica evaluada por calorimetría diferencial de barrido (con una Tm de entre 69,8° C y 76,6° C en comparación con entre 63,2° C y 71,4° C para 8D10 y 8E4).

Se seleccionó 8E2 y se maduró por afinidad. Se usaron bibliotecas de cadenas pesadas y ligeras para generar clones con CDR mutadas (Figuras 1, 2 y 3). La unión de 62 de estas variantes de afinidad para hIL-11R se evaluó por Biacore y se determinó la capacidad relativa para inhibir la proliferación de células BaF3 inducida por hlL-11. Los resultados se muestran en la Tabla 3.

T l : r rí i ni r m r r fini

Continuación

Continuación

Se seleccionaron diez anticuerpos madurados por afinidad (TS-306, TS-2, TS-4, TS-7, TS-14, TS-51, TS-101, TS-108, TS-134 y TS-136) sobre la base de su capacidad mejorada para inhibir la proliferación inducida por hIL-11 en células BaF3 en comparación con 8E2, 8D10 y 8E4, y su afinidad mejorada por IL-11Ra humana en comparación con 8E2. La secuencia de CDR también se consideró al seleccionar estos anticuerpos madurados por afinidad. Se seleccionaron algunos clones que tenían una secuencia de CDR cercana o igual a la secuencia de consenso relevante.

Se probaron estos anticuerpos para determinar la inhibición de la proliferación inducida por IL-11 humana, cyno y/o de ratón de células BaF3 transfectadas con IL-11R humana, cyno o de ratón. También se realizó la unión a células transfectadas con IL-11R humana y de cyno y la medición de la intensidad de fluorescencia media mediante citometría de flujo. En comparación con el clon parental 8E2, cada uno de los clones seleccionados inhibía con más potencia la proliferación inducida por hIL-11 y cyno-IL-11 y se unía con mayor afinidad a IL-11R humano y cyno. Ejemplo 2: Comparación de antagonismo por muteína de hIL-11 y anticuerpos

Se comparó la actividad antagónica de varios anticuerpos con la de una muteína de hIL-11 (que comprende la SEQ ID NO: 110 y tiene una etiqueta hexa HIS N-terminal) usando el ensayo descrito anteriormente usando la línea celular BaF3 transfectada con ácido nucleico que codifica IL-11R humana y gp130 humana y 0,3 ng/ml de IL-11 humana. Los resultados se presentan en la Tabla 4.

Tabla 4: Comparación del antagonismo de señalización de IL-11 entre anticuerpos anti-IL11R y una muteína de hIL-11

Continuación

Los datos presentados en la Tabla 4 indican que todos los anticuerpos probados inhiben la señalización de IL-11 con más eficacia que la muteína de hIL-11. Debido a la gran diferencia de peso molecular entre la muteína y los anticuerpos, los valores de IC⁵⁰se expresan en nM.

Ejemplo 3: Mapeo de epítopos

Los datos de ELISA competitivo y Biacore indican que 8E2, 8E4 y 8D10 compiten entre sí para unirse a hIL-11Ra y pueden reconocer la misma región de hIL-11Ra.

Los datos de Biacore de intercambio de dominio (murino-humano) mostraron que por lo menos eran necesarios los aminoácidos 111-215 (dominio 1de Fn tipo 3) de hIL-11Ra (^sE^qID NO: 1) para la unión de 8E2 y 8D10 y la sustitución del ratón por la secuencia humana en esta región redujo la afinidad de la unión de 8E4 (Tabla 5).

Tabla 5: Unión de rece tores de IL-11 a anticuer os

En los resultados presentados en la Tabla 5, la referencia a "unión fuerte" indica afinidades (K^d) de aproximadamente 10 nM o menores. La referencia a "unión débil" indica afinidades (K^d) de aproximadamente 50 nM o mayores.

Se prepararon veintiocho constructos que tenían una única sustitución de aminoácidos en la región que cubre tanto el dominio similar a Ig como el dominio 1 de fibronectina tipo 3 de hIL-11Ra reemplazando el aminoácido humano nativo con el residuo de aminoácido de ratón correspondiente. Se expresaron y purificaron cinco mutantes de un hIL-11R truncada (SEQ ID NO: 85) (P65S, K66R, L101S, V117E, A178^s) (numeración relativa a la posición del aminoácido en la SEQ ID NO: 1). Se usaron constructos correspondientes para transfectar células, que posteriormente se tiñeron con 8E2, 8E4 y 8D10. Se demostró que la unión de 8E2 y 8E10 se reducía en células transfectadas con V117E mediante citometría de flujo.

Los datos de flujo fueron confirmados por Biacore. Todos los sensogramas de Biacore se ajustaron bien a un modelo de enlace 1:1 y los valores de K^dderivados se dan en la Tabla 6.

El mutante V117E no se unió a 8E2 y 8D10 a las concentraciones usadas en este ensayo, y no se pudo determinar una KDpara esta interacción. Este residuo contribuye a la interacción de unión de estos dos anticuerpos.

La mutación K66R llevó a una disminución en la K^dde poco más del doble en comparación con WT D1/2 (SEQ ID NO: 85) para los anticuerpos 8E2 y 8D10, lo que indica cierta participación de este residuo en la unión del anticuerpo.

Los mutantes V117E y K66R también se unieron al anticuerpo 8E4 con una afinidad significativamente menor que WT D1/2(SEQ ID NO: 85). Estos residuos pueden contribuir a la interacción de unión del anticuerpo 8E4 con hIL-11Ra.

Las pruebas de comparaciones múltiples de ANOVA y Tukey indicaron que las afinidades de V95E y K44R eran significativamente diferentes (p<0,05) para WT D1/2 (SEQ ID NO: 85) para todos los anticuerpos probados.

Todas las formas mutantes de IL-11R probadas en este ejemplo fueron capaces de unirse a IL-11, lo que indica que las mutaciones no inducen un cambio conformacional sustancial en el receptor.

Tabla 6: Afini ni r r m i n n l IL-11R h m n l l E ID NO: 85)

Afinidades de anticuerpos por varios receptores mutantes. N = 2 para WT D1/2 (SEQ ID NO: 85), se muestran ambos valores. Todos los demás valores son medias ± SE. N = 3 para WT F/L (SEQ ID NO: 3), N = 4 para todos los demás. Los valores resaltados en negrita tienen valores de Kd significativamente diferentes a los de WT D1/2 (p<0,05). Las posiciones de las mutaciones son con respecto a la SEQ ID NO: 1. * indica unión indetectable

Ejemplo 4: Datos comparativos

Se demostró que un anticuerpo anti-IL-11R no neutralizante (4D12; anticuerpo disponible comercialmente de Santa Cruz) se unía a IL-11Ra humana mediante ELISA. Se demostró que 4D12 se unía a células BaF3 transfectadas con IL-11Ra humana y se demostró que se unía a células 293 transfectadas con IL-11Ra humana o de ratón.

4D12 no neutralizó la proliferación celular inducida por IL-11 humana o de ratón en células BaF3 incubadas con 0,5 ng/ml de hIL-11 o 3 ng/ml de mIL-11R.

Se usaron ELISA competitivos para demostrar que 4D12 no compite por la unión a IL-11Ra ni con 8D10 ni con 8E2.

Ejemplo 5: Los anticuerpos anti-IL-11R inhiben la señalización de IL-11 en células cancerosas

Como se muestra en la Figura 4, la IL-11 induce la fosforilación de STAT-3 en células de cáncer de colon DLD-1 y células de cáncer de estómago MKN-28. La Figura 4 también muestra que el anticuerpo 8E2 inhibe la fosforilación de STAT-3 en estas células, mientras que un anticuerpo de control de isotipo no lo hace.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una proteína de unión a IL-11Ra que comprende un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo, en donde el dominio de unión a antígeno se une a IL-11Ra e inhibe la proliferación mediada por IL-11 de células BaF3 que expresan IL-11Ra y gp130, y en donde:

(i) el dominio de unión a antígeno se une a un epítopo que comprende los residuos entre los aminoácidos 111 215 de la SEQ ID NO: 1;

(ii) el dominio de unión a antígeno comprende una V^hque comprende la secuencia EYQLLESGGGLYQPGGSLRLSCAASGFTFXiXzXsSXíXsWVRQAPGKGLEWVSSIVPXgXvXsX 9TQYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKX10X11X12WGX13FX14X15WGR GTLVTVSS

en donde: X¹= S, A, G o W; X²= W o R; X³= Y, W o F; X⁴= M, I, V, T o L; X⁵= T o A; X⁶= S, W, Y, o H; X⁷= G o A; X⁸= G, D o T; X⁹= H, Y, L, I o F; X¹⁰= G o P; X¹⁰= P, E, V, L, N o H; X¹²= G o D; X¹³= S, M, R, L, Q o T; X¹⁴= D, A o W; y X¹⁵= L, V, F, Q, E, Y o T;

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDX1X2X3X4X5X6WYQQKPGKAPKLLIYDASNLQTGV PSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCX7QX8X9X10X11X12PX13FGPGTKVDIK,

en donde

X¹= I o V; X²= N, D, G, S, A o H; X³= N, Y, I, K, M, Q, G o H; X⁴= Y o W; X⁵= L, V, I, o M; X⁶= No E; X⁷= Q, E, S, o T; X⁸= Y, A, H, F, N, S, o W; X⁹= Do E; X¹⁰= N, D, F, S, E o T; X¹¹= Lo Q; X¹²= S, A, W, T, M o Q; y X¹³= T, E, F, A, L, N, o Q; y

(iv) el dominio de unión a antígeno comprende una secuencia de Vh por lo menos aproximadamente un 95%, o un 96%, o un 97%, o un 98% o un 99% idéntica a una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y el dominio de unión a antígeno comprende una secuencia de Vl por lo menos aproximadamente un 94% o un 95%, o un 96%, o un 97%, o un 98%, o un 99% idéntica a una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5.

2. La proteína de unión a IL-11Rade la reivindicación 1 en donde:

(i) el nivel de unión de la proteína de unión a IL-11Ra con un polipéptido de la SEQ ID NO: 95 es por lo menos 1,5 veces menor que el nivel de unión de la proteína de unión a IL-11 Ra con un polipéptido de la SEQ ID NO: 85; (ii) el dominio de unión a antígeno inhibe competitivamente la unión de un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 83 y una cadena ligera que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 84 y/o un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 92 y una cadena ligera que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 91 y/o un anticuerpo que comprende una cadena pesada que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 94 y una cadena ligera que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 93 con un polipéptido de la SEQ ID NO: 3 y/o la SEQ ID NO: 85; y

(iii) el dominio de unión a antígeno reacciona de manera cruzada con:

(a) un polipéptido de la SEQ ID NO: 97; y/o

(b) un polipéptido de la SEQ ID NO: 98; y/o

(c) un polipéptido de la SEQ ID NO: 99.

3. La proteína de unión a IL-11Ra de las reivindicaciones 1 o 2, en donde el dominio de unión a antígeno comprende:

(i) una Vh que comprende las CDR 1,2 y 3 de una secuencia expuesta en cualquiera de las SEQ ID NO: 37-70, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5; o

(ii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en cualquiera de las SEQ ID NO: 6-34,

en donde las CDR se definen por la numeración de Kabat.

4. La proteína de unión a IL-11Ra de las reivindicaciones 1 o 2, en donde el dominio de unión a antígeno comprende:

(i) una V^hque comprende una secuencia expuesta en cualquiera de las SEQ ID NO: 37-70 y una V^lque comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5; o

(ii) una Vh que comprende una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37 y una Vl que comprende una secuencia expuesta en cualquiera de las SEQ ID NO: 6-34.

5. La proteína de unión a IL-11Ra de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que comprende por lo menos una V^hy una Vl, en donde la Vh y la Vl se unen para formar un Fv que comprende un dominio de unión a antígeno, en donde la Vh y la Vl están en una única cadena polipeptídica y la Vh y la Vl están en cadenas polipeptídicas separadas, y en donde si la V^hy la V^lestán en una cadena polipeptídica, la proteína es:

(i) un scFv;

(ii) un scFv dimérico;

(iii) uno de (i) o (ii) enlazado a una región constante de un anticuerpo, Fc o un C^h2 y/o C^h3; o

(iv) uno de (i) o (ii) enlazado a una proteína que se une a una célula efectora inmunitaria, o

si la Vl y la Vh están en cadenas polipeptídicas separadas la proteína es:

(a) un diacuerpo;

(b) un tricuerpo;

(c) un tetracuerpo;

(d) un Fab;

(e) un F(ab')²;

(f) un Fv;

(g) uno de (i) a (vi) enlazado a una región constante de un anticuerpo, Fc o un Ch2 y/o Ch3;

(h) uno de (i) a (vi) enlazado a una proteína que se une a una célula efectora inmunitaria; o

(i) un anticuerpo.

6. Un anticuerpo de las reivindicaciones 1 o 2 que se une a IL-11Ra e inhibe la proliferación mediada por IL-11 de células BaF3 que expresan IL-11Ra y gp130, el anticuerpo comprendiendo:

(i) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 49, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(iii) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 53, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(v) una Vh que comprende las CDR 1,2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 57, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(vii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 58, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5;

(ix) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 8;

(xi) una Vh que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 15;

(xiii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una Vl que comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 16;

(xv) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 18;

(xvii) una V^hque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 37, opcionalmente que también comprende el aminoácido N-terminal para la CDR1, y una V^lque comprende las CDR 1, 2 y 3 de una secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 29; o

en donde las CDR se definen mediante la numeración de Kabat.

7. La proteína de unión a IL-11Ra de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o el anticuerpo de la reivindicación 6, que está conjugado con otro compuesto.

8. Un ácido nucleico que codifica la proteína de unión a IL-11Ra de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o el anticuerpo de la reivindicación 6.

9. Un constructo de expresión que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 8.

10. Una célula aislada o recombinante que expresa la proteína de unión a IL-11Ra de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o el anticuerpo de la reivindicación 6.

11. Una composición que comprende la proteína de unión a IL-11Ra de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o 7 o el anticuerpo de la reivindicación 6 o 7 y un portador farmacéuticamente aceptable.

12. La proteína de unión a IL-11Ra de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o 7 o el anticuerpo de la reivindicación 6 o 7 o la composición de la reivindicación 11 para su uso en el tratamiento de una afección mediada por IL-11, en donde la afección mediada por IL-11 es una afección autoinmune, una afección inflamatoria, una afección por desgaste, una afección ósea o un cáncer.