CN104995211B - Il-11r结合蛋白及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了包含结合白介素‑11(IL‑11)受体α(IL‑11Rα)的抗体的抗原结合位点的蛋白及其应用，例如在治疗中的应用。

Description

IL-11R结合蛋白及其应用
相关申请信息
本发明要求2013年2月7日提交的标题为“IL-11R结合蛋白及其应用”的澳大利亚专利申请号2013900389和2013年2月14日提交的标题为“IL-11R结合蛋白及其应用”的美国专利申请号61/764,756的优先权。这些文献的全部内容通过引用纳入本文。
序列表
本申请附有电子格式提交的序列表。该序列表的全部内容通过引用纳入本文。
技术领域
本发明涉及包含结合白介素-11(IL-11)受体α(IL-11Rα)的抗体的抗原结合位点的蛋白及其应用，例如在治疗中的应用。
背景
IL-11是IL-6细胞因子家族的成员，该家族还包括IL-27、IL-31、白血病抑制因子(LIF)、制瘤素M(OSM)和睫状神经营养因子(CNTF)等。IL-6家族细胞因子诱导经由常见信号转导受体β亚基gp130和特异性受体α亚基的信号转导。对于IL-11，该细胞因子与其特异性受体α亚基IL-11Rα的结合诱导gp130同二聚化。gp130的二聚化激活JAK/STAT信号通路并导致激活信号转导和转录激活因子(STAT)3(STAT3)以及较低程度地激活STAT1。
已知IL-11信号转导在造血作用、免疫应答、炎症、脂肪形成、破骨细胞形成、神经形成、巨核细胞成熟和血小板生产中起作用。IL-11在临床上使用或正被开发用于治疗多种病症，例如化疗诱导的血小板减少症和多种炎性疾病，包括关节炎、炎性肠病、辐射诱导的肺损伤、脓毒血症和银屑病。然而，IL-11的临床使用受到限制，因为报道了严重的不良事件(包括水肿)。此外，已显示IL-11在多种病症中具有有害效果。
例如，已发现IL-11作为骨形成的抑制因子起作用，且其对破骨细胞形成和活性以及骨再吸收至关重要。因此，已提出通过阻断IL-11的活性来治疗骨质疏松和 预防骨再吸收/促进其他病症(如转移性骨癌、骨髓瘤、佩吉特骨病以及骨折和愈合)中的骨形成。
已显示IL-11信号转导在结核病的早期具有致病作用。显示使用抗IL-11抗体阻断IL-11削弱了结核分枝杆菌感染的小鼠中肺组织的组织病理学和中性白细胞浸润。
还提出将IL-11的拮抗作用作为一种治疗Th2介导疾病(包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、鼻炎、过敏和特应性皮炎)的方法。在这方面，显示使用不诱导信号转导的IL-11突变体形式阻断IL-11信号转导在小鼠哮喘模型中具有治疗益处。
IL-11和/或IL-11Rα在肝癌、胰腺癌、胃癌、成骨肉瘤、子宫内膜癌和卵巢癌中过表达。此外，如上文所述，IL-11诱导的gp130二聚化导致STAT3的激活，其诱导血管形成相关基因(如VEGF)、细胞周期进展相关基因(如细胞周期蛋白D1)和细胞存活相关基因(如Bcl-XL，存活)的表达。持续的STAT3活性似乎与血液恶性肿瘤和上皮来源的肿瘤相关。过量的STAT3激活促进胃细胞的生长和存活，与增加胃血管生成相关并导致小鼠中的胃肿瘤发生。然而，胃炎症、增生和肿瘤形成在IL-11无应答小鼠或使用IL-11的非信号转导突变体治疗的小鼠中得到抑制。
IL-11还涉及其他生物过程，例如脂肪形成的抑制、恶病质(如癌症恶病质)的诱导、发热反应的诱导、胞外基质代谢的调节、急性期反应物的刺激和胚胎移植。
本领域技术人员应从前文中理解，需要中和IL-11信号转导的试剂，因为其具有在多种多样性病症的任一种中提供治疗益处的潜能。还需要结合IL-11Rα的试剂，因为其具有能够在体内特异性靶向细胞的优势，而不需要结合并中和对象中溶解的IL-11。
尽管有此需要，但许多结合IL-11Rα的试剂(如抗体)不中和IL-11信号转导。例如，Blanc等(Journal of Immunological Methods 241:43-59,2000)描述了一组14种针对人IL-11Rα产生的鼠单克隆抗体，但其中无一能够抑制IL-11诱导的BaF3/gp130/IL-11R细胞的增殖，表明这些抗体不中和IL-11信号转导。市售可得的抗IL-11Rα抗体(如可获自圣克鲁斯生物技术公司(Santa Cruz Biotechnology,Inc.)的4D12)也不中和IL-11信号转导。
发明内容
在生产本发明的过程中，发明人希望生产结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导的试剂(例如抗体或包含其抗原结合结构域的蛋白)。发明人生产了一系列具有这类活性的抗体，其中一些有力地中和IL-11信号转导，例如阻止IL-11依赖性BaF3细胞增殖。已显示这些抗体与人IL-11Rα(hIL-11Rα)和短尾猴IL-11Rα(cynoIL-11Rα)交叉反应，表明其可用于人疾病的灵长类动物模型。还发现这些抗体结合重叠的表位。发明人随后使这些抗体中的一种亲和成熟并生产了一系列具有其他所需性质的其他抗体，所述性质是例如中和IL-11信号转导和/或改进的亲和力和/或类似于人种系的序列(例如，给予人时诱导免疫应答的可能性降低)。
基于前文，以下事实对本领域技术人员而言显而易见：发明人生产了包含抗体的抗原结合结构域的蛋白，该抗原结合结构域能够结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导。
在一个实施例中，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导，该抗原结合结构域能够结合hIL-11Rα和cynoIL-11Rα。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白中和人IL-11(hIL-11)和/或短尾猴IL-11Rα(cynoIL-11Rα)信号转导。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋白抑制IL-11(如hIL-11或cynoIL-11)介导的表达IL-11Rα和gp130的BaF3细胞的增殖，其IC50为10μg/ml或更低。在一个实施例中，该IC50为5μg/ml或更低。例如，该IC50为4μg/ml或更低或者3.5μg/ml或更低。在一个实施例中，该IC50为3μg/ml或更低或者2μg/ml或更低。例如，该IC50为1g/ml或更低。例如，该IC50为0.9μg/ml或更低或者0.8μg/ml或更低或者0.7μg/ml。在一个实施例中，该IC50为0.7μg/ml或更低。在一个实施例中，与各前述实施例相关，该IC50可以是10pg/ml或更高或者10ng/ml或更高。
在一个实施例中，该IC50为10nM或更低。例如，该IC50为8nM或更低或者7nM或更低。在一个实施例中，该IC50为6nM或更低或者6.5nM或更低。例如，该IC50为5nM或更低。例如，该IC50为4.5nM或更低。例如，该IC50为4nM或更低。在一个实施例中，与各前述实施例相关，该IC50可以是10pM或更高。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白抑制IL-11(如hIL-11或cynoIL-11)介导的表达IL-11Rα和gp130的BaF3细胞的增殖，其IC50为抗体8E2(其重链含有SEQ ID NO:83所列序列且其轻链含有SEQ ID NO:84所列序列)的至少约1.5倍。在一个实施例中，该IC50为抗体8E2的至少约2倍或至少约2.5倍或至少约3倍。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白抑制IL-11(如hIL-11)介导的表达IL-11Rα和gp130的BaF3细胞的增殖，其IC50为拮抗性hIL-11突变蛋白(例如，包含SEQ ID NO:110所列序列)的至少约1.5倍(即IC50值低约1.5倍)或2倍或3倍，其中IC50以nM为单位测量。在一个实施例中，该IC50为该突变蛋白的至少约3.5倍或至少约4倍。
在一个实施例中，通过在约0.3ng/mL hIL-11至约5ng/mL hIL-11存在的情况下(例如在约0.3ng/mL hIL-11或约0.5ng/mL hIL-11或约5ng/mL hIL-11存在的情况下)对表达IL-11Rα和gp130的BaF3细胞(例如，经遗传修饰以表达IL-11Rα和/或gp130)(例如约1x104个细胞)培养约48-50小时或约48小时或约50小时来测定IC50。在一个实施例中，在添加IL-11前在本发明的蛋白存在的情况下培养这些细胞(例如持续约30分钟)。在一个实施例中，通过测量最近6小时培养期间掺入DNA的3H-胸苷来测定增殖。在用于测定cynoIL-11的中和的试验中，可以在约0.5ng/mL cynoIL-11至约5ng/mL cynoIL-11存在的情况下(例如在约0.5ng/mL cynoIL-11或约5ng/mL cynoIL-11存在的情况下)培养这些细胞。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:86多肽的结合水平低于该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合水平。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:89多肽的结合水平低于该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合水平。
在一个实施例中，通过Western印迹和/或通过表达该多肽的细胞的荧光激活的细胞分选(FACS)来测定结合水平。
在一个实施例中，与该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合水平相比，该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:86或89多肽的结合水平降低了至少约10倍或20倍或50倍或100倍或150倍或200倍。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白无法可测知地结合SEQ ID NO:86或89多肽。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白结合SEQ ID NO:87或88多肽。例如，该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:87或88多肽的结合水平与该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合水平类似或大致相同(例如，在约20％或15％或10％或5％以内)。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域结合包含IL-11Rα的第一纤连蛋白III型结构域内残基的表位。
在一个实施例中，该表位包含IL-11Rα的第一纤连蛋白III型结构域和免疫球蛋白样结构域内的残基。
在一个实施例中，该表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸111-215之间的残基。
在一个实施例中，该表位包含SEQ ID NO:1的氨基酸1-215之间的残基。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋白竞争性抑制抗体8E2(其VH含有SEQ ID NO:37所列序列且其VL含有SEQ ID NO:5所列序列)与hIL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋白竞争性抑制抗体8E4(其VH含有SEQ ID NO:74所列序列且其VL含有SEQ ID NO:73所列序列)与hIL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋白竞争性抑制抗体8D10(其VH含有SEQ ID NO:76所列序列且其VL含有SEQ ID NO:75所列序列)与hIL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋 白竞争性抑制抗体8E2(包含重链和轻链，该重链含有SEQ ID NO:37所列序列的VH和人IgG4恒定区，该轻链含有SEQ ID NO:5所列序列的VL和人轻链恒定区)与hIL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋白竞争性抑制抗体8E4(包含重链和轻链，该重链含有SEQ ID NO:74所列序列的VH和人IgG4恒定区，该轻链含有SEQ ID NO:73所列序列的VL和人轻链恒定区)与hIL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋白竞争性抑制抗体8D10(包含重链和轻链，该重链含有SEQ ID NO:76所列序列的VH和人IgG4恒定区，该轻链含有SEQ ID NO:75所列序列的VL和人轻链恒定区)与hIL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋白竞争性抑制抗体8E2(其重链含有SEQ ID NO:83所列序列且其轻链含有SEQ ID NO:84所列序列)与hIL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋白竞争性抑制抗体8E4(其重链含有SEQ ID NO:92所列序列且其轻链含有SEQ ID NO:91所列序列)与hIL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该蛋白竞争性抑制抗体8D10(其重链含有SEQ ID NO:94所列序列且其轻链含有SEQ ID NO:93所列序列)与hIL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:95多肽的结合水平低于该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:85多肽的结合水平。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:96多肽的结合水平低于该IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:85多肽的结合水平。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白与包含取代的多肽的结合水平降低了至少约1.5倍或2倍。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白与包含取代的多肽的结合水平降低了至少3倍或4倍或5倍或10倍。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白无法可测知地结合包含取代的多肽。
在一个实施例中，使用生物传感器(例如通过表面等离振子共振)评估结合水平。例如，固定IL-11Rα结合蛋白并测定其与SEQ ID NO:85、95或96多肽的结合水平。如本文所示例，通过评估若干浓度下的结合水平，可测定亲和力。
在另一个实施例中，使用FACS评估结合水平。例如，该IL-11Rα结合蛋白与表达SEQID NO:85、95或96多肽的细胞或者与本文所述包含取代的IL-11Rα的形式的结合。
在一个实施例中，相对于其结合SEQ ID NO:95或96的能力，该IL-11Rα结合蛋白优先结合SEQ ID NO:85多肽。
在一个实施例中，相对于其结合SEQ ID NO:95的能力，该IL-11Rα结合蛋白优先结合SEQ ID NO:85多肽。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白竞争性抑制抗体8E2(其VH含有SEQ ID NO:37所列序列且其VL含有SEQ ID NO:5所列序列)和/或8E4(其VH含有SEQ ID NO:74所列序列且其VL含有SEQ ID NO:73所列序列)和/或8D10(其VH含有SEQ ID NO:76所列序列且其VL含有SEQ ID NO:75所列序列)与SEQ ID NO:3和/或85多肽的结合。
在一个实施例中，该抗原结合结构域与以下多肽交叉反应：
(i)SEQ ID NO:97多肽；和/或
(ii)SEQ ID NO:98多肽；和/或
(iii)SEQ ID NO:99多肽。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白无法可测知地结合小鼠IL-11Rα(SEQ IDNO:82或102)和/或SEQ ID NO:90多肽。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白与小鼠IL-11Rα(SEQ ID NO:82或102)和/或SEQ ID NO:90多肽交叉反应。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白对人IL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的亲和常数(KD)为约9x10-9M或更低。例如，该KD为约8x10-9M或更低或者约7x10-9M或更低或者约6x10-9M或更低或者约5x10-9M或更低。在一个实施例中，该KD是约4.8x10-9M或更低。
在另一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白对人IL-11Rα和/或SEQ ID NO:3和/或85多肽的亲和常数(KD)为约2x10-9M或更低。例如，该KD为约1x10-9M或更低或者约9x10-10M或更低或者约8x10-10M或更低或者约7x10-10M或更低。在一个实施例中，该KD为约5x10-10M或更低。在一个实施例中，该KD为约4x10-10M或更低。在一个实施例中，该KD为约3x10-10M或更低。在一个实施例中，该KD为约2x10-10M或更低。在一个实施例中，该KD为约1.5x10-10M或更低。
在一个实施例中，与各前述实施例相关，该KD可以是0.1x10-12M或更高或者1x10- 12M或更高。
在一个实施例中，使用生物传感器(例如通过表面等离振子共振)评估KD。例如，固定IL-11Rα结合蛋白并测定其与SEQ ID NO:85多肽的结合水平。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白的热转变中点(Tm)为约60℃或更高。例如，该Tm是约61℃或更高，例如约62℃或更高，例如约63℃或更高。例如，该Tm是约65℃或更高。例如，该Tm是约69℃或更高。例如，该Tm是约70℃或更高。具有较高Tm的蛋白被认为较稳定，从而提供更好的储存和/或降低得给药后例如由于聚集而产生的影响。
此外或或者，本发明提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域包含以下之一：
(i)包含互补决定区(CDR)1、CDR2和CDR3的VH，所述CDR1包含与SEQ ID NO:37的氨基酸31-35之间所列序列至少约40％相同(或50％相同或60％相同或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列，所述CDR2包含与SEQID NO:37的氨基酸50-66之间所列序列至少约76％相同(或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列，且所述CDR3包含与SEQ ID NO:37的氨基酸99-107之间所列序 列至少约55％相同(或60％相同或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列；
(ii)包含与SEQ ID NO:37所列序列至少约95％或96％或97％或98％或99％相同的序列的VH；
(iii)包含CDR1、CDR2和CDR3的VL，所述CDR1包含与SEQ ID NO:5的氨基酸24-34之间所列序列至少约45％相同(或50％相同或55％相同或60％相同或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列，所述CDR2包含SEQ IDNO:5的氨基酸50-56之间所列序列，且所述CDR3包含与SEQ ID NO:5的氨基酸89-97之间所列序列至少约44％相同(或56％相同或60％相同或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列；
(iv)包含与SEQ ID NO:5所列序列至少约94％相同(或95％相同或96％相同或97％相同或98％相同或99％相同)的序列的VL；
(v)包含CDR1、CDR2和CDR3的VH，所述CDR1包含SEQ ID NO:74的氨基酸31-35之间所列序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:74的氨基酸50-66之间所列序列，且所述CDR3包含SEQID NO:74的氨基酸99-115之间所列序列；
(vi)包含SEQ ID NO:74所列序列的VH；
(vii)包含CDR1、CDR2和CDR3的VL，所述CDR1包含SEQ ID NO:73的氨基酸23-36之间所列序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:73的氨基酸52-58之间所列序列，且所述CDR3包含SEQ ID NO:73的氨基酸91-101之间所列序列；
(viii)包含SEQ ID NO:73所列序列的VL；
(ix)包含CDR1、CDR2和CDR3的VH，所述CDR1包含SEQ ID NO:76的氨基酸31-35之间所列序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:76的氨基酸50-66之间所列序列，且所述CDR3包含SEQID NO:76的氨基酸99-107之间所列序列；
(x)包含SEQ ID NO:76所列序列的VH；
(xi)包含CDR1、CDR2和CDR3的VL，所述CDR1包含SEQ ID NO:75的氨基酸24-34之间所列序列，所述CDR2包含SEQ ID NO:75的氨基酸50-57之间所列序列，且所述CDR3包含SEQID NO:75的氨基酸89-97之间所列序列；
(xii)包含SEQ ID NO:75所列序列的VL；
(xiii)(i)中所列VH和(iii)中所列VL；
(xiv)(i)中所列VH和(iv)中所列VL；
(xv)(ii)中所列VH和(iii)中所列VL；
(xvi)(ii)中所列VH和(iv)中所列VL；
(xvii)(v)中所列VH和(vii)中所列VL；
(xviii)(v)中所列VH和(viii)中所列VL；
(xix)(vi)中所列VH和(vii)中所列VL；
(xx)(vi)中所列VH和(viii)中所列VL；
(xxi)(ix)中所列VH和(xi)中所列VL；
(xxii)(ix)中所列VH和(xii)中所列VL；
(xxiii)(x)中所列VH和(xi)中所列VL；或者
(xxiv)(x)中所列VH和(xii)中所列VL。
在一个实施例中，该抗原结合结构域包含：
(i)包含CDR1、CDR2和CDR3的VH(其中CDR1包含SEQ ID NO:37的氨基酸31-35之间所列序列，CDR2包含与SEQ ID NO:37的氨基酸50-66之间所列序列至少约80％相同(或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列，且CDR3包含与SEQ ID NO:37的氨基酸99-107之间所列序列至少约55％相同(或60％相同或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列)以及包含CDR1、CDR2和CDR3的VL(其中CDR1包含SEQ ID NO:5的氨基酸24-34之间所列序列，CDR2包含SEQ ID NO:5的氨基酸50-56之间所列序列，且CDR3包含SEQ ID NO:5的氨基酸89-97之间所列序列)或者包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(ii)包含CDR1、CDR2和CDR3的VH(其中CDR1包含SEQ ID NO:37的氨基酸31-35之间所列序列，CDR2包含与SEQ ID NO:37的氨基酸50-66之间所列序列至少约80％相同(或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列，且CDR3包含SEQ ID NO:37的氨基酸99-107之间所列序列)以及包含CDR1、CDR2和CDR3的VL(其中CDR1包含SEQ ID NO:5的氨基酸24-34之间所列序列，CDR2包含SEQ ID NO:5的氨基酸50-56之间所列序列，且CDR3包含SEQ ID NO:5的氨基酸89-97之间所列序列)或者包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；或者
(iii)包含CDR1、CDR2和CDR3的VH(其中CDR1包含SEQ ID NO:37的氨基酸31-35之间所列序列，CDR2包含SEQ ID NO:37的氨基酸50-66之间所列序列，且CDR3包含与SEQ IDNO:37的氨基酸99-107之间所列序列至少约55％相同(或60％相同或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列)以及包含CDR1、CDR2和CDR3的VL(其中CDR1包含SEQ ID NO:5的氨基酸24-34之间所列序列，CDR2包含SEQ IDNO:5的氨基酸50-56之间所列序列，且CDR3包含SEQ ID NO:5的氨基酸89-97之间所列序列)或者包含SEQ ID NO:5所列序列的VL。
在一个实施例中，该抗原结合结构域包含：
(i)包含CDR1、CDR2和CDR3的VH(其中CDR1包含SEQ ID NO:37的氨基酸31-35之间所列序列，CDR2包含SEQ ID NO:37的氨基酸50-66之间所列序列，且CDR3包含SEQ ID NO:37的氨基酸99-107之间所列序列)或者包含SEQ ID NO:37所列序列的VH以及包含CDR1、CDR2和CDR3的VL(其中CDR1包含与SEQ ID NO:5的氨基酸24-34之间所列序列至少约54％相同(或60％相同或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列，CDR2包含SEQ ID NO:5的氨基酸50-56之间所列序列，且CDR3包含与SEQID NO:5的氨基酸89-97之间所列序列至少约66％相同(或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列)；
(ii)包含CDR1、CDR2和CDR3的VH(其中CDR1包含SEQ ID NO:37的氨基酸31-35之间所列序列，CDR2包含SEQ ID NO:37的氨基酸50-66之间所列序列，且CDR3包含SEQ ID NO:37的氨基酸99-107之间所列序列)或者包含SEQ ID NO:37所列序列的VH以及包含CDR1、CDR2和CDR3的VL(其中CDR1包含与SEQ ID NO:5的氨基酸24-34之间所列序列至少约54％相同(或60％相同或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列，CDR2包含SEQ ID NO:5的氨基酸50-56之间所列序列，且CDR3包含SEQID NO:5的氨基酸89-97之间所列序列)；或者
(iii)包含CDR1、CDR2和CDR3的VH(其中CDR1包含SEQ ID NO:37的氨基酸31-35之间所列序列，CDR2包含SEQ ID NO:37的氨基酸50-66之间所列序列，且CDR3包含SEQ ID NO:37的氨基酸99-107之间所列序列)或者包含SEQ ID NO:37所列序列的VH以及包含CDR1、CDR2和CDR3的VL(其中CDR1包 含SEQ ID NO:5的氨基酸24-34之间所列序列，CDR2包含SEQID NO:5的氨基酸50-56之间所列序列，且CDR3包含与SEQ ID NO:5的氨基酸89-97之间所列序列至少约66％相同(或70％相同或80％相同或90％相同或95％相同或98％相同或99％相同或100％相同)的序列)。
在一个实施例中，该蛋白的VL含有抗体8E2的VL的CDR1、CDR2和CDR3且该蛋白的VH含有抗体8E2的VH的CDR1和CDR2。
在一个实施例中，该蛋白的VL含有抗体8E2的VL的CDR1、CDR2和CDR3且该蛋白的VH含有抗体8E2的VH的CDR1和CDR3。
在一个实施例中，该蛋白的VL含有抗体8E2的VL的CDR1、CDR2和CDR3且该蛋白的VH含有抗体8E2的VH的CDR2和CDR3。
在一个实施例中，该蛋白的VL含有抗体8E2的VL的CDR1和CDR3且该蛋白的VH含有抗体8E2的VH的CDR1、CDR2和CDR3。
在一个实施例中，该抗原结合结构域包含：
(i)包含SEQ ID NO:71所列序列的VH和包含SEQ ID NO:35所列序列的VL；或
(ii)包含SEQ ID NO:72所列序列的VH和包含SEQ ID NO:36所列序列的VL。
这类IL-11Rα结合蛋白可显示任意一种或多种本文所述功能活性，例如，相对于包含上文所述取代的SEQ ID NO:3多肽的结合水平，优先结合SEQ ID NO:3多肽。
在一个实施方式中，列举的序列与IL-11Rα结合蛋白之间的区别是取代。
本领域技术人员能够确定本发明的IL-11Rα结合蛋白的突变位点，例如在含可变区蛋白的框架区内。此外，发明人鉴定到了VH CDR1、CDR2和/或CDR3以及VL CDR1和/或CDR3中的多个可以被突变的位点以及维持或改进本发明的IL-11Rα结合蛋白的活性的多个突变。例如，突变(例如取代)是位于抗体8E2的HCDR1和/或HCDR2的一个或多个(如2或3或4个)和/或HCDR3的六个N末端或六个C末端残基的一个或多个(如2或3或4或5或6个)内。例如，突变(例如取代)是位于抗体8E2的LCDR1的六个C末端氨基酸的至少一个(如2或3或4或5或6个)和/或LCDR3的五个N末端氨基酸的一个或多个(如2或3或4或5个)内。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白的轻链CDR1含有以下序列：
QASQDX1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:77)
其中，X1＝I或V；X2＝N或D或G或S或A或H；X3＝N或Y或I或K或M或Q或G或H；X4＝Y或W；X5＝L或V或I或M且X6＝N或E。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白的轻链CDR3含有以下序列：
X1QX2X3X4X5X6PX7(SEQ ID NO:78)
其中X1＝Q或E或S或T；X2＝Y或H或F或N或S或W；X3＝D或E；X4＝N、D、F、S、E或T；X5＝L或Q；X6＝S或A或W或T或M或Q且X7＝T或E或F或A或L或F或N或Q。
在一个实施例中，X1是Q且X2是Y。
在一个实施例中，X6是S且X7是T。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白的重链CDR1含有以下序列：
X1X2SX3X4
其中X1＝W或R；X2＝Y或W或F；X4＝M或I或V或T或L且X5＝T或A
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白的重链CDR2含有以下序列：
SIVPX1X2X3X4TQYADSVKG
其中X1＝S或W或Y或H；X2＝G或A；X3＝G或D或T且X4＝H或Y或L或I或F
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白的重链CDR3含有以下序列：
X1X2X3WGX4FX5X6
其中X1＝G或P；X2＝P或E或V或L或N或H；X3＝G或D；X4＝S或M或R或L；X5＝D或A或W且X6＝L或V或F或Q或E或Y或T
在一个实施例中，X1是G、X2是P且X3是G。
在一个实施例中，X5是D且X6是L。
在一个实施例中，该IL-11Rα结合蛋白包含前述共有序列之一作为一个CDR且剩余CDR来自抗体8E2。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37-70、74或76中任一条所列序列和/或该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:5-34、73或75中任一条所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域包含：
(i)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(ii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(iii)包含SEQ ID NO:38所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(iv)包含SEQ ID NO:38所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(v)包含SEQ ID NO:39所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(vi)包含SEQ ID NO:39所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(vii)包含SEQ ID NO:40所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(viii)包含SEQ ID NO:40所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(ix)包含SEQ ID NO:41所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(x)包含SEQ ID NO:41所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xi)包含SEQ ID NO:42所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xii)包含SEQ ID NO:42所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xiii)包含SEQ ID NO:43所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xiv)包含SEQ ID NO:43所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xv)包含SEQ ID NO:44所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xvi)包含SEQ ID NO:44所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xvii)包含SEQ ID NO:45所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xviii)包含SEQ ID NO:45所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xix)包含SEQ ID NO:46所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xx)包含SEQ ID NO:46所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxi)包含SEQ ID NO:47所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xxii)包含SEQ ID NO:47所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxiii)包含SEQ ID NO:48所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xxiv)包含SEQ ID NO:48所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxv)包含SEQ ID NO:49所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xxvi)包含SEQ ID NO:49所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxvii)包含SEQ ID NO:50所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xxviii)包含SEQ ID NO:50所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxix)包含SEQ ID NO:51所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xxx)包含SEQ ID NO:51所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxi)包含SEQ ID NO:52所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xxxii)包含SEQ ID NO:52所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxiii)包含SEQ ID NO:53所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xxxiv)包含SEQ ID NO:53所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxv)包含SEQ ID NO:54所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xxxvi)包含SEQ ID NO:54所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxvii)包含SEQ ID NO:55所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xxxviii)包含SEQ ID NO:55所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxix)包含SEQ ID NO:56所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xl)包含SEQ ID NO:56所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xli)包含SEQ ID NO:57所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xlii)包含SEQ ID NO:57所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xliii)包含SEQ ID NO:58所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xliv)包含SEQ ID NO:58所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xlv)包含SEQ ID NO:59所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xlvi)包含SEQ ID NO:59所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xlvii)包含SEQ ID NO:60所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xlviii)包含SEQ ID NO:60所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xlix)包含SEQ ID NO:61所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(l)包含SEQ ID NO:61所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(li)包含SEQ ID NO:62所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lii)包含SEQ ID NO:62所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(liii)包含SEQ ID NO:63所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(liv)包含SEQ ID NO:63所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(lv)包含SEQ ID NO:64所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lvi)包含SEQ ID NO:64所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(lvii)包含SEQ ID NO:65所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lviii)包含SEQ ID NO:65所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(lix)包含SEQ ID NO:66所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lx)包含SEQ ID NO:66所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(lxi)包含SEQ ID NO:67所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxii)包含SEQ ID NO:67所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(lxiii)包含SEQ ID NO:68所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxiv)包含SEQ ID NO:68所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(lxv)包含SEQ ID NO:69所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxvi)包含SEQ ID NO:69所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(lxvii)包含SEQ ID NO:70所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(lxix)包含SEQ ID NO:70所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxx)包含SEQ ID NO:70所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(lxxi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:6所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxxii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:6所列序列的VL；
(lxxiii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:7所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxxiv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:7所列序列的VL；
(lxxv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:8所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxxvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:8所列序列的VL；
(lxxvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:9所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxxviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:9所列序列的VL；
(lxxix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:10所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxxx)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:10所列序列的VL；
(lxxxi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:11所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxxxii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:11所列序列的VL；
(lxxxiii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:12所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxxxiv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:12所列序列的VL；
(lxxxv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:13所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxxxvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:13所列序列的VL；
(lxxxvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:14所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(lxxxviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:14所列序列的VL；
(lxxxix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:15所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xc)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:15所列序列的VL；
(xci)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:16所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xcii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:16所列序列的VL；
(xciii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:17所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xciv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:17所列序列的VL；
(xcv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:18所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xcvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:18所列序列的VL；
(xcvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:19所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xcviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:19所列序列的VL；
(xcix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:20所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(c)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:20所列序列的VL；
(ci)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:21所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:21所列序列的VL；
(ciii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:22所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(civ)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:22所列序列的VL；
(cv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:23所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:23所列序列的VL；
(cvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:24所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:24所列序列的VL；
(cix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:25所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cx)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:25所列序列的VL；
(cxi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:26所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cxii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:26所列序列的VL；
(cxiii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:27所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cxiv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:27所列序列的VL；
(cxv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:28所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cxvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:28所列序列的VL；
(cxvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:29所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cxviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:29所列序列的VL；
(cxix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:30所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cxx)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:30所列序列的VL；
(cxxi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:31所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cxxii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:31所列序列的VL；
(cxxiii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:32所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cxxiv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:32所列序列的VL；
(cxxv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:33所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(cxxvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:33所列序列的VL；
(cxxvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:34所列序列的CDR 1、2和3的VL；或者
(cxxviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:34所列序列的VL。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域包含：
(i)包含SEQ ID NO:49所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(ii)包含SEQ ID NO:49所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(iii)包含SEQ ID NO:53所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(iv)包含SEQ ID NO:53所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(v)包含SEQ ID NO:57所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(vi)包含SEQ ID NO:57所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(vii)包含SEQ ID NO:58所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(viii)包含SEQ ID NO:58所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(ix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:8所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(x)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:8所列序列的VL；
(xi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:15所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:15所列序列的VL；
(xiii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:16所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xiv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:16所列序列的VL；
(xv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:18所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:18所列序列的VL；
(xvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:29所列序列的CDR 1、2和3的VL；或者
(xviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:29所列序列的VL。
在一个实施例中，这些CDR如下：
(i)重链CDR1：列举的序列的氨基酸31-35；
(ii)重链CDR2：列举的序列的氨基酸50-66(任选地，五个C末端氨基酸中的任意一个或多个被另一个天然产生的氨基酸取代)；
(iii)重链CDR3：列举的序列的氨基酸99-107；
(iv)轻链CDR1：列举的序列的氨基酸24-34；
(v)轻链CDR2：列举的序列的氨基酸50-56；以及
(vi)轻链CDR3：列举的序列的氨基酸89-97。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:49所列序列的CDR 1、2和3且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:49所列序列且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:5所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:53所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:53所列序列且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:5所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:57所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:57所列序列且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:5所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:58所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:58所列序列该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:5所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:8所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:8所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:15所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:15所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:16所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:16所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:18所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构 域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:18所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:29所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:29所列序列。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VH含有SEQ ID NO:37所列序列。在一个实施例中，VL含有SEQ ID NO:18所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，该抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且该抗原结合结构域的VL含有SEQ ID NO:18所列序列。在一个实施例中，VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3。
在一个实施例中，这些CDR如下：
(i)重链CDR1：列举的序列的氨基酸31-35；
(ii)重链CDR2：列举的序列的氨基酸50-66(任选地，五个C末端氨基酸中的任意一个或多个被另一个天然产生的氨基酸取代)；
(iii)重链CDR3：列举的序列的氨基酸99-107；
(iv)轻链CDR1：列举的序列的氨基酸24-34；
(v)轻链CDR2：列举的序列的氨基酸50-56；以及
(vi)轻链CDR3：列举的序列的氨基酸89-97。
在一个实施例中，本文所述的IL-11Rα结合蛋白包含至少一个VH和一个VL，其中该VH和VL结合形成包含抗原结合结构域的Fv。本领域技术人员应理解，该抗原结合结构域包含抗体的结合位点。
在一个实施例中，该VH和该VL是同处单条多肽链中。例如，该蛋白是：
(i)单链Fv片段(scFv)；
(ii)二聚体scFv(di-scFv)；
(iii)与抗体的恒定区Fc或重链恒定结构域(CH)2和/或CH3相连的(i)或(ii)之一；或者
(iv)与结合免疫效应细胞的蛋白相连的(i)或(ii)之一。
在一个实施例中，该VL和VH是单独的多肽链。
例如，该蛋白是：
(i)双抗体；
(ii)三抗体；
(iii)四抗体；
(iv)Fab；
(v)F(ab’)2；
(vi)Fv；
(vii)与抗体的恒定区Fc或重链恒定结构域(CH)2和/或CH3相连的(i)至(vi)之一；
(viii)与结合免疫效应细胞的蛋白相连的(i)至(vi)之一。
前述蛋白(描述于前文两个列表中)还可称作抗体的抗原结合结构域。
在一个实施例中，该蛋白是抗体，例如，单克隆抗体。在一个实施例中，该抗体是裸抗体。
在一个实施例中，蛋白(或抗体)是嵌合的、去免疫化的、人源化的、人的或灵长化的。
在一个实施例中，该蛋白或抗体是人的。
此外或或者，本发明提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体包含：
(i)包含SEQ ID NO:49所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(ii)包含SEQ ID NO:49所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(iii)包含SEQ ID NO:53所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(iv)包含SEQ ID NO:53所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(v)包含SEQ ID NO:57所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(vi)包含SEQ ID NO:57所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(vii)包含SEQ ID NO:58所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(viii)包含SEQ ID NO:58所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(ix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:8所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(x)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:8所列序列的VL；
(xi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:15所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:15所列序列的VL；
(xiii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:16所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xiv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:16所列序列的VL；
(xv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1 N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:18所列序列的CDR 1、2和3的VL；
(xvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:18所列序列的VL；
(xvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3的VH(任选地，还包含处于CDR1N末端方向的氨基酸)和包含SEQ ID NO:29所列序列的CDR 1、2和3的VL；或者
(xviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:29所列序列的VL。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列。在一个实施例中，VL含有SEQ ID NO:18所列序列的CDR 1、2和3。
(xix)本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VL含有SEQ ID NO:18所列序列。在一个实施例中，VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3。
在一个实施例中，这些CDR如下：
(i)重链CDR1：列举的序列的氨基酸31-35；
(ii)重链CDR2：列举的序列的氨基酸50-66(任选地，五个C末端氨基酸中的任意一个或多个被另一个天然产生的氨基酸取代)；
(iii)重链CDR3：列举的序列的氨基酸99-107；
(iv)轻链CDR1：列举的序列的氨基酸24-34；
(v)轻链CDR2：列举的序列的氨基酸50-56；以及
(vi)轻链CDR3：列举的序列的氨基酸89-97。
示例性VH和VL的序列描述于表1。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:49所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还含有处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗体的VL含有SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:49所列序列且该抗体的VL含有SEQ ID NO:5所列序列。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:53所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还含有处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗体的VL含有SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:53所列序列且该抗体的VL含有SEQ ID NO:5所列序列。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:57所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还含有处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗体的VL含有SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:57所列序列且该抗体的VL含有SEQ ID NO:5所列序列。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:58所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还含有处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗体的VL含有SEQ ID NO:5所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:58所列序列且该抗体的VL含有SEQ ID NO:5所列序列。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还含有处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗体的VL含有SEQ ID NO:8所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗体的VL含有SEQ ID NO:8所列序列。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还含有处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗体的VL含有SEQ ID NO:15所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗体的VL含有SEQ ID NO:15所列序列。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还含有处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗体的VL含有SEQ ID NO:16所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗体的VL含有SEQ ID NO:16所列序列。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还含有处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗体的VL含有SEQ ID NO:18所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗体的VL含有SEQ ID NO:18所列序列。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列的CDR 1、2和3(任选地，还含有处于CDR1N末端方向的氨基酸)且该抗体的VL含有SEQ ID NO:29所列序列的CDR 1、2和3。
本发明还提供了一种结合IL-11Rα且中和IL-11信号转导的抗体，该抗体的VH含有SEQ ID NO:37所列序列且该抗体的VL含有SEQ ID NO:29所列序列。
在一个实施例中，这些CDR如下：
(i)重链CDR1：列举的序列的氨基酸31-35；
(ii)重链CDR2：列举的序列的氨基酸50-66(任选地，五个C末端氨基酸中的任意一个或多个被另一个天然产生的氨基酸取代)；
(iii)重链CDR3：列举的序列的氨基酸99-107；
(iv)轻链CDR1：列举的序列的氨基酸24-34；
(v)轻链CDR2：列举的序列的氨基酸50-56；以及
(vi)轻链CDR3：列举的序列的氨基酸89-97。
本文提及“结合”IL-11Rα的蛋白或抗体为“特异地结合”或“特异性结合”IL-11R的蛋白或抗体提供文字支持。
本发明还提供了前述抗体的抗原结合结构域或抗原结合片段。
在一个实施例中，本文所述蛋白或抗体包含人恒定区，例如IgG恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区或其混合物。对于包含VH和VL的抗体或蛋白，该VH可与重链恒定区相连且该VL可与轻链恒定区相连。
本发明的全抗体(或包含恒定区或CH3的IL-11Rα结合蛋白)的重链恒定区的C末端赖氨酸可以除去，例如在抗体或蛋白生产或纯化期间，或者通过重组改造编码该抗体重链的核酸。因此，全抗体(或IL-11R结合蛋白)可包含其中全部C末端赖氨酸残基都被除去的群体、没有C末端赖氨酸残基被除去的群体，和/或包含具有和不具有C末端赖氨酸残基的蛋白的混合物的群体。在一些实施例中，这些群体还可包含其中重链恒定区之一中C末端赖氨酸残基被除去的蛋白。类似 地，全抗体的组合物可包含具有或不具有C末端赖氨酸残基的抗体群体的相同或类似的混合物。
在一个实施例中，本文所述的蛋白或抗体包含IgG4抗体的恒定区或IgG4抗体的稳定化的恒定区。在一个实施例中，该蛋白或抗体包含在241位处具有脯氨酸的IgG4恒定区(根据Kabat编码系统(Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫学感兴趣的蛋白质序列)，华盛顿特区，美国，健康与人类服务部，1987和/或1991))。
在一个实施例中，该重链恒定区包含SEQ ID NO:83的119位至445位的序列。在一个实施例中，本文所述的蛋白或抗体或者本文所述的蛋白或抗体的组合物包含重链恒定区，包括稳定化的重链恒定区，包括全部或部分具有或不具有C末端赖氨酸残基的序列的混合物。
在一个实施例中，本发明的抗体包含与IgG4恒定区或稳定化的IgG4恒定区(例如，如上文所述)相连或相融合的本文所述VH且VL与κ轻链恒定区相连或相融合。
本发明的IL-11Rα结合蛋白的功能特性将经必要的修改以适用于本发明的抗体。
在一个实施例中，本文所述IL-11Rα结合蛋白或抗体是分离的和/或重组的。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白或抗体与另一化合物偶联，例如可检测标签或延长蛋白或抗体的半衰期的化合物，如聚乙二醇或白蛋白结合蛋白。本文描述了其他合适的化合物。
本发明还提供了一种编码本发明的IL-11Rα结合蛋白或抗体或其多肽的核酸。
在一个实施例中，这类核酸被包含在表达构建体中，其中该核酸可操作地连接于启动子。这类表达构建体可以在载体(如质粒)中。
在涉及单条多肽链IL-11Rα结合蛋白的本发明的实施例中，该表达构建体可包含与编码该多肽链的核酸相连的启动子。
在涉及多条多肽链IL-11Rα结合蛋白的本发明的实施例中，表达构建体包含编码可操作性连接于启动子的包含例如VH的多肽的核酸以及编码可操作性连接于启动子的包含例如VL的多肽的核酸。
在另一个实施例中，该表达构建体是双顺反子表达构建体，例如包含以下以5’至3’顺序可操作性连接的组分：
(i)启动子
(ii)编码第一多肽的核酸；
(iii)内部核糖体进入位点；以及
(iv)编码第二多肽的核酸，
其中，该第一多肽包含VH且该第二多肽包含VL，反之亦然。
本发明还考虑独立的表达构建体，其中之一编码包含VH的第一多肽且另一个编码包含VL的第二多肽。例如，本发明还提供了一种组合物，其包含：
(i)第一表达构建体，其包含编码可操作性连接于启动子的包含VH的多肽的核酸；以及
(ii)第二表达构建体，其包含编码可操作性连接于启动子的包含VL的多肽的核酸。
本发明还提供了一种分离或重组的细胞，其表达本发明的IL-11Rα结合蛋白。
在一个实施例中，该细胞包含本发明的表达构建体或者：
(i)第一表达构建体，其包含编码可操作性连接于启动子的包含VH的多肽的核酸；以及
(ii)第二表达构建体，其包含编码可操作性连接于启动子的包含VL的多肽的核酸，
其中，第一和第二多肽结合形成本发明的IL-11Rα结合蛋白。
本发明的细胞的示例包括细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。
本发明还提供了生产本发明的IL-11Rα结合蛋白或抗体的方法。例如，这类方法涉及在足以生产IL-11Rα结合蛋白或抗体的条件下维持本发明的表达构建体。
在一个实施例中，生产本发明的IL-11Rα结合蛋白或抗体的方法包括在足以生产和任选地分泌IL-11Rα结合蛋白或抗体的条件下培养本发明的细胞。
在一个实施例中，生产本发明的IL-11Rα结合蛋白或抗体的方法还包括分离该蛋白或抗体并任选地将该IL-11Rα结合蛋白或抗体配制为药物组合物。
本发明还提供了一种组合物，其包含本发明的IL-11Rα结合蛋白或抗体和药学上可接受的运载体。
在一些实施例中，该组合物包含：
(i)包含来自重链的C末端赖氨酸残基的本发明的抗体；
(ii)缺少来自重链的C末端赖氨酸残基的本发明的抗体；和/或
(iii)在一条重链上包含C末端赖氨酸残基且在另一条(或其他)重链上缺少C末端赖氨酸残基的本发明的抗体，
以及(任选的)药学上可接受的运载体。
本发明还提供了一种治疗或预防对象中IL-11介导的病症的方法，该方法包括给予本发明的IL-11Rα结合蛋白、抗体或组合物。在该方面，IL-11Rα结合蛋白、抗体或组合物可用于预防病症的复发，且这被认为是预防该病症。
在一个实施例中，该IL-11介导的病症可以是自身免疫病症、炎性病症、消耗病症、骨病症或癌症。
示例性自身免疫病症包括关节炎、炎性肠病和银屑病。
示例性炎性病症包括感染诱导的炎症(例如结核分枝杆菌诱导的炎症)、胃炎(例如与胃癌相关)、炎性气管病症(例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、鼻炎或过敏)或炎性皮炎(例如特应性皮炎)。
示例性消耗病症包括恶病质(例如癌症恶病质或肾衰竭导致的恶病质)或肌肉减少症。
示例性骨病症包括骨质疏松(包括绝经后骨质疏松)、骨折、癌症(例如转移性骨癌、骨髓瘤或佩吉特骨病)导致的骨再吸收/损伤和癌症治疗(例如化疗、激素去除或激素抑制)导致的骨再吸收/损伤。
示例性癌症包括血液癌症、上皮来源的癌症、肝癌、胰腺癌、胃癌、成骨肉瘤、子宫内膜癌和卵巢癌。
在一个实施例中，该癌症或骨病症是癌向骨的转移。
本发明还提供了一种抑制或中和对象中IL-11的方法，该方法包括给予本发明的IL-11Rα结合蛋白、抗体或组合物。在一个实施例中，该对象患有IL-11介导的病症。
本发明还提供了一种防止对象怀孕的方法，该方法包括给予本发明的IL-11Rα结合蛋白、抗体或组合物。
在一个实施例中，本文所述方法包括给予约0.05mg/kg至30mg/kg的IL-11Rα结合蛋白或抗体。例如，该方法包括给予约0.1mg/kg至10mg/kg或约0.2mg/kg至5mg/kg的IL-11Rα结合蛋白或抗体。在一个实施例中，该方法包括给予约0.5-2.0mg/kg的IL-11Rα结合蛋白或抗体。
本发明还提供了任何实施例中所述IL-11Rα结合蛋白或抗体在药物中的应用。
本发明还提供了任何实施例中所述IL-11Rα结合蛋白或抗体在制造治疗IL-11介导的病症的药物中的应用。本文描述了示例性病症。
本发明还提供了一种定位和/或检测和/或诊断和/或预测与表达IL-11Rα的细胞相关的IL-11介导的病症的方法，该方法包括在体内检测与表达IL-11Rα的细胞结合的本文所述IL-11Rα结合蛋白或抗体(如果存在)，其中该IL-11Rα结合蛋白或抗体与可检测标签偶联。
在一个实施例中，该方法还包括向对象给予该IL-11Rα结合蛋白。
本发明还提供了一种检测样品中IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞的方法，该方法包括使样品接触任何实施例所述的蛋白或抗体以形成复合物并检测该复合物，其中检测到该复合物表示样品中存在IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞。在一个实施例中，该方法离体进行或在体外进行。
本发明还提供了一种诊断或预测IL-11介导的病症的方法，该方法包括进行任何实施例所述的方法以检测IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞，其中，检测到IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞是对该病症的诊断或预测。在一个实施例中，该方法离体进行或在体外进行。本文描述了示例性IL-11Rα介导的病症。
本发明还提供了一种药盒(例如包装或制品)，其包含任何实施例所述的IL-11Rα结合蛋白或抗体，任选地装有使用说明书，用于本文所述方法。
序列表要点
SEQ ID NO 1：智人(Homo sapiens)IL-11Rα前体的氨基酸序列
SEQ ID NO 2：食蟹猴(Macaca fascicularis)IL-11Rα前体的氨基酸序列
SEQ ID NO 3：包含SEQ ID NO:1的氨基酸23-363、8xHIS标签和位于对应于SEQ IDNO:1的248位的位置处的丝氨酸的多肽(也称作“WT F/L”)的氨基酸序列
SEQ ID NO 4：智人gp130的氨基酸序列
SEQ ID NO 5：抗体8E2的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 6：抗体TS-303的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 7：抗体TS-305的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 8：抗体TS-306的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 9：抗体TS-307的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 10：抗体TS-310的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 11：抗体TS-311的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 12：抗体TS-312的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 13：抗体TS-313的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 14：抗体TS-322的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 15：抗体TS-2的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 16：抗体TS-4的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 17：抗体TS-6的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 18：抗体TS-7的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 19：抗体TS-9的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 20：抗体TS-13的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 21：抗体TS-14的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 22：抗体TS-17的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 23：抗体TS-20的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 24：抗体TS-21的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 25：抗体TS-22的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 26：抗体TS-29的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 27：抗体TS-32的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 28：抗体TS-49的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 29：抗体TS-51的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 30：抗体TS-55的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 31：抗体TS-57的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 32：抗体TS-58的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 33：抗体TS-63的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 34：抗体TS-64的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 35：8E2抗体和衍生物的VL链的共有氨基酸序列
SEQ ID NO 36：8E2抗体和经选择的衍生物的VL链的共有氨基酸序列
SEQ ID NO 37：抗体8E2的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 38：抗体TS-66的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 39：抗体TS-69的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 40：抗体TS-71的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 41：抗体TS-76的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 42：抗体TS-79的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 43：抗体TS-82的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 44：抗体TS-88的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 45：抗体TS-89的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 46：抗体TS-91的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 47：抗体TS-92的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 48：抗体TS-97的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 49：抗体TS-101的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 50：抗体TS-103的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 51：抗体TS-104的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 52：抗体TS-107的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 53：抗体TS-108的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 54：抗体TS-115的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 55：抗体TS-129的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 56：抗体TS-133的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 57：抗体TS-134的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 58：抗体TS-135的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 59：抗体TS-136的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 60：抗体TS-140的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 61：抗体TS-143的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 62：抗体TS-151的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 63：抗体TS-156的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 64：抗体TS-213的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 65：抗体TS-214的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 66：抗体TS-215的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 67：抗体TS-218的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 68：抗体TS-221的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 69：抗体TS-222的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 70：抗体TS-224的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 71：8E2抗体和衍生物的VH链的共有氨基酸序列
SEQ ID NO 72：8E2抗体和经选择的衍生物的VH链的共有氨基酸序列
SEQ ID NO 73：抗体8E4的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 74：抗体8E4的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 75：抗体8D10的VL链的氨基酸序列
SEQ ID NO 76：抗体8D10的VH链的氨基酸序列
SEQ ID NO 77：8E2抗体和衍生物的VL链的CDR1的共有氨基酸序列
SEQ ID NO 78：8E2抗体和衍生物的VL链的CDR3的共有氨基酸序列
SEQ ID NO 79：8E2抗体和衍生物的VH链的CDR1的共有氨基酸序列
SEQ ID NO 80：8E2抗体和衍生物的VH链的CDR2的共有氨基酸序列
SEQ ID NO 81：8E2抗体和衍生物的VH链的CDR3的共有氨基酸序列
SEQ ID NO 82：小家鼠(Mus musculus)IL-11Rα前体的氨基酸序列
SEQ ID NO 83：抗体8E2的重链的氨基酸序列
SEQ ID NO 84：抗体8E2的轻链的氨基酸序列
SEQ ID NO 85：包含智人IL-11Rα(SEQ ID NO:1)的氨基酸23-318、8xHIS标签和位于对应于SEQ ID NO:1的248位的位置处的丝氨酸的多肽(也称作“WT D1/2”)的氨基酸序列
SEQ ID NO:86：包含智人IL-11Rα(SEQ ID NO:1)的氨基酸23-110和小家鼠IL-11Rα(SEQ ID NO:82)的氨基酸111-367(其中在对应于SEQ ID NO:82的206位的位置处存在丝氨酸)和8xHIS标签的多肽的氨基酸序列
SEQ ID NO:87：包含智人IL-11Rα(SEQ ID NO:1)的氨基酸23-215和小家鼠IL-11Rα(SEQ ID NO:82)的氨基酸216-367和8xHIS标签的多肽的氨基酸序列
SEQ ID NO:88：包含智人IL-11Rα(SEQ ID NO:1)的氨基酸23-318(其中在对应于SEQ ID NO:1的248位的位置处存在丝氨酸)和小家鼠IL-11Rα(SEQ ID NO:82)的氨基酸319-367和8xHIS标签的多肽的氨基酸序列
SEQ ID NO:89：包含小家鼠IL-11Rα(SEQ ID NO:82)的氨基酸24-215(其中在对应于SEQ ID NO:82的206位的位置处存在丝氨酸)和智人IL-11Rα(SEQ ID NO:1)的氨基酸216-363和8xHIS标签的多肽的氨基酸序列
SEQ ID NO 90：包含小家鼠sIL-11Rα(SEQ ID NO:82)的氨基酸24-318、8xHIS标签和位于对应于SEQ ID NO:82的206位的位置处的丝氨酸的多肽的氨基酸序列
SEQ ID NO 91：抗体8E4的轻链的氨基酸序列
SEQ ID NO 92：抗体8E4的重链的氨基酸序列
SEQ ID NO 93：抗体8D10的轻链的氨基酸序列
SEQ ID NO 94：抗体8D10的重链的氨基酸序列
SEQ ID NO:95：在对应于SEQ ID NO:1的117位的位置处包含谷氨酸的SEQ ID NO:85的氨基酸序列
SEQ ID NO:96：在对应于SEQ ID NO:1的66位的位置处包含精氨酸的SEQ ID NO:85的氨基酸序列
SEQ ID NO:97：在对应于SEQ ID NO:1的65位的位置处包含丝氨酸的SEQ ID NO:85的氨基酸序列
SEQ ID NO:98：在对应于SEQ ID NO:1的101位的位置处包含丝氨酸的SEQ ID NO:85的氨基酸序列
SEQ ID NO:99：在对应于SEQ ID NO:1的178位的位置处包含丙氨酸的SEQ ID NO:85的氨基酸序列
SEQ ID NO:100：成熟的智人IL-11Rα的氨基酸序列
SEQ ID NO:101：成熟的食蟹猴IL-11Rα的氨基酸序列
SEQ ID NO:102：成熟的小家鼠sIL-11Rα的氨基酸序列
SEQ ID NO:103：图1所示8E2L1的共有氨基酸序列
SEQ ID NO:104：图1所示8E2L3.1的共有氨基酸序列
SEQ ID NO:105：图1所示8E2L3.2的共有氨基酸序列
SEQ ID NO:106：图2所示8E2H1的共有氨基酸序列
SEQ ID NO:107：图2所示8E2H2的共有氨基酸序列
SEQ ID NO:108：图2所示8E2H3.1的共有氨基酸序列
SEQ ID NO:109：图2所示8E2H3.2的共有氨基酸序列
SEQ ID NO:110：拮抗性IL-11突变蛋白的氨基酸序列
附图说明
图1显示抗体8E2及其亲和成熟形式的VL的各CDR的比对。所列共有序列 (SEQ IDNO:103-105)代表各位置处最经常出现的氨基酸并使用MegAlign软件确定。共有序列以外，来源于抗体的序列列于表1。
图2显示抗体8E2及其亲和成熟形式的VH的各CDR的比对。所列共有序列(SEQ IDNO:106-109)代表各位置处最经常出现的氨基酸并使用MegAlign软件确定。共有序列以外，来源于抗体的序列列于表1。
图3A、B、C和D显示8E2抗体和衍生物的可变区的序列。图3A显示8E2及其抗体衍生物的VL区的序列和8E2及其抗体衍生物的VL区的共有序列。图3B显示8E2和经选择的抗体衍生物的VL区的序列以及8E2和经选择的抗体衍生物的VL区的共有序列。图3C显示8E2及其抗体衍生物的VH区的序列和8E2及其抗体衍生物的VH区的共有序列。图3D显示8E2和经选择的抗体衍生物的VH区的序列以及8E2和经选择的抗体衍生物的VH区的共有序列。加框区域含有Kabat编码系统所定义的CDR(如图所示)。
图4包括一系列示意图，其显示IL-11刺激人结肠直肠腺癌细胞系DLD-1和胃腺癌细胞系MKN-28中STAT-3的磷酸化，且本发明的抗体可抑制该IL-11介导的磷酸化。组图A和B分别显示在使用递增浓度的hIL-11刺激15分钟后DLD-1和MKN-28细胞中STAT-3磷酸化的水平。组图C和D分别显示递增浓度的8E2抗IL-11R抗体(O)对DLD-1和MKN-28细胞中IL-11介导的STAT-3磷酸化的抑制。相反地，BM4同种型对照抗体(Δ)对IL-11介导的STAT-3磷酸化没有影响。(向细胞中添加抗体，随后使用hIL-11刺激(50ng/ml)。显示了平均值和标准差。)
发明详述
概述
通篇中，除非另有说明或上下文另有要求，应认为单个步骤、物质的组成、步骤的组或物质的组成的组包括一个和多个(即一个或多个)这些步骤、物质的组成、步骤的组或物质的组成的组。
本领域技术人员应理解，本发明易于进行除说明书中所述的那些以外的变化和修改。应理解本发明包含所有这些变化和修改。本发明还包括说明书中单独或共同提到或指出的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及所述步骤或特征中任意两种或更多种或任意和全部组合。
本发明的范围不限于本文所述的具体实施例，实施例仅用于示例目的。功能上等同的产品、组合物和方法清楚地包含于本发明的范围内。
本发明的任何实施例都将经必要的修改以适用于本发明的任何其他实施例，除非另有明确说明。
除非另有明确定义，本文使用的所有技术和科学术语都具有与本领域普通技术人员的常规理解相同的含义(例如在细胞培养、分子遗传学、免疫学、免疫组化、蛋白质化学和生物化学领域)。
除非另有说明，本发明中使用的重组蛋白、细胞培养和免疫技术是标准方法，其是本领域技术人员熟知的。这类技术描述并解释于文献中，例如J.Perbal，A PracticalGuide to Molecular Cloning(《分子克隆实践指南》)，约翰韦利森出版社(John Wileyand Sons)(1984)，J.Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual(《分子克隆：实验室指南》)，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbour Laboratory Press)(1989)，T.A.Brown(编)，Essential Molecular Biology:A Practical Approach(《精编分子生物学：实践指南》)，卷1和2，IRL出版社(1991)，D.M.Glover和B.D.Hames(编)，DNA Cloning:APractical Approach(《DNA克隆：实践指南》)，卷1-4，IRL出版社(1995和1996)，以及F.M.Ausubel等(编)，Current Protocols in Molecular Biology(《新编分子生物学实验指南》)，格林出版联合公司和韦利科学公司(Greene Pub.Associates and Wiley-Interscience)(1988，包括直至今日的所有更新)，Ed Harlow和David Lane(编)，Antibodies:A Laboratory Manual(《抗体：实验室手册》)，冷泉港实验室出版社(1988)，以及J.E.Coligan等(编)，Current Protocols in Immunology(《新编免疫学实验指南》)，约翰韦利森出版社(包括直至今日的所有更新)。
本文中可变区及其部分、免疫球蛋白、抗体及其片段的描述和定义由以下文献中的讨论进一步阐明：Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(感兴趣的免疫蛋白序列)，马里兰州贝塞斯达，1987和1991，Bork等，J Mol.Biol.242,309-320,1994，Chothia和Lesk J.Mol Biol.196:901-917,1987，Chothia等，Nature342,877-883,1989和/或Al-Lazikani等，J Mol Biol 273,927-948,1997。
术语“和/或”(例如“X和/或Y”)应理解为表示“X和Y”或“X或Y”且应提供对全部两种含义或各种含义的明确支持。
整篇说明书中，词语“包括”或变体如“包含”或“含有”应理解为意味着包括所指的元素、整数或步骤，或成组的元素、整数或步骤，但不排除任何其它元素、整数或步骤，或成组的元素、整数或步骤。
本文所用术语“来源于”表示特定整数可获自特定来源，但不需要直接来自该来源。
本文中提及的范围(如残基)应理解为包含性的。例如，“包含氨基酸56-65的区域”应以包含性的方式理解，即该区域包含特定序列中氨基酸编码为56、57、58、59、60、61、62、63、64和65的序列。
选择的定义
仅出于命名而非限制的目的，人前体IL-11Rα(IL-11Rα前体)的示例性序列列于NCBI参考序列NP_001136256.1(并列于SEQ ID NO:1)。成熟人IL-11Rα的序列列于SEQ IDNO:100。在NP_001136256.1所列序列的情况中，成熟的蛋白缺少氨基酸1-22。本文中通常根据IL-11Rα前体来定义氨基酸的位置。通过算上信号序列(SEQ ID NO:1的情况中的氨基酸1-22)可容易地确定成熟IL-11Rα中的位置。短尾猴IL-11Rα前体的示例性序列列于SEQ IDNO:2且成熟的IL-11Rα列于SEQ ID NO:101。小鼠IL-11Rα前体的示例性序列列于SEQ IDNO:82且成熟的IL-11Rα列于SEQ ID NO:102。可使用本发明提供的序列和/或公众可得的数据库和/或使用标准技术(例如参见Ausubel等(编)，Current Protocols in MolecularBiology(《新编分子生物学实验指南》)，格林出版联合公司和韦利科学公司或J.Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual(《分子克隆：实验室指南》)，冷泉港实验室出版社(1989))来确定来自其他物种的IL-11Rα的序列。人IL-11Rα缩写为hIL-11Rα，短尾猴IL-11Rα缩写为cynoIL-11Rα，且小鼠IL-11Rα缩写为mIL-11Rα。可溶性IL-11Rα指包含IL-11Rα的胞外区(例如SEQ ID NO:1的氨基酸23-363或23-318)的多肽。在本研究中，使用了在248位处具有丝氨酸取代的包含SEQ ID NO:1的氨基酸23-363或23-318的受体的可溶形式(例如SEQ ID NO:3或85)且在对应于SEQ ID NO:82的206位的位置处具有丝氨酸取代的mIL-11Rα的相应区段(例如SEQ ID NO 90)被用于小鼠受体的研究。这些丝氨酸突变被导入可溶性多肽中以改善多肽表达并防止多肽聚集。还使用了SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:85的可溶性受体的多个点突变(例如参见SEQ ID NO:95-99)。这些可溶性多肽是hIL-11Rα或mIL-11Rα的代表，如在细胞表面上表达时本发明的 IL-11Rα结合蛋白结合相关受体的能力所示。因此，使用突变多肽的研究是使用hIL-11Rα和/或mIL-11Rα的研究的模型。
本文中IL-11包括IL-11的天然形式及其突变形式，所述突变形式保留了结合IL-11Rα(如hIL-11Rα)并诱导信号转导的能力。
本文中hIL-11Rα的特定结构域应理解为表示以下：
·免疫球蛋白样(IG样)结构域：SEQ ID NO:1的氨基酸23-110；
·第一纤连蛋白III型结构域：SEQ ID NO:1的氨基酸111-215；
·第二纤连蛋白III型结构域：SEQ ID NO:1的氨基酸216-370；
·跨膜结构域：SEQ ID NO:1的氨基酸371-391；以及
·胞质结构域：SEQ ID NO:1的氨基酸392-422。
本文所用术语“hIL-11突变蛋白”包括hIL-11的突变形式，其中58-62位处的野生型残基(AMSAG)被PAIDY替代且残基147处的色氨酸被丙氨酸替代(W147A)。例如，该突变蛋白包含SEQ ID NO:110所列序列或由其组成。hIL-11突变蛋白的其他示例可参见WO2009/052588。任选地，该突变蛋白包含额外的序列，例如六HIS标签。
术语“分离的蛋白”或“分离的多肽”是具有以下特征的蛋白或多肽：从本义或派生含义上说，其与天然状态下伴随其的天然相关组分不相关；基本不含有来自相同来源的其他蛋白。使用本领域已知的蛋白质纯化技术，还可通过分离使蛋白基本不含天然相关的组分或成为基本纯化的。“基本纯化的”指该蛋白基本不含污染剂，例如至少约70％或75％或80％或85％或90％或95％或96％或97％或98％或99％不含污染剂。
术语“重组”应理解为指人工遗传重组的产物。因此，对于包含抗体抗原结合结构域的重组蛋白，该术语不包括作为B细胞成熟期间发生的天然重组的产物的在对象体内天然产生的抗体。然而，如果这类抗体被分离，其应被认为是包含抗体抗原结合结构域的分离的蛋白。类似地，如果编码蛋白的核酸被分离并使用重组方法表达，所得蛋白是包含抗体抗原结合结构域的重组蛋白。重组蛋白还包括当其处于细胞、组织或对象(例如蛋白在其中表达的细胞、组织或对象)内时通过人工重组方式表达的蛋白。
术语“蛋白”应包括单条多肽链(即通过肽键连接的一系列相邻氨基酸)或彼此共价或非共价连接的一系列多肽链(即多肽复合物)。例如，可使用合适的化 学键或二硫键共价连接该一系列多肽链。非共价键的示例包括氢键、离子键、范德华力和疏水相互作用。
术语“多肽”或“多肽链”应从前述段落中理解为表示通过肽键连接的一系列相邻氨基酸。
本文所用术语“抗原结合结构域”应理解为表示能够特异性结合抗原的抗体区域，即VH或VL或包含VH和VL的Fv。该抗原结合结构域无需在整个抗体中，例如，其可以是分离形式(如结构域抗体)或其他形式，例如如上文所述，如scFv。
出于本发明的目的，术语“抗体”包括能够通过Fv内含有的抗原结合结构域特异性结合一个或多个紧密相关的抗原(如IL-11Rα)的蛋白。该术语包括四链抗体(如两条轻链和两条重链)、重组或修饰的抗体(如嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、CDR移植抗体、灵长类动物化抗体、去免疫化抗体、同人源化抗体(synhumanized antibody)、半抗体、双特异性抗体)。抗体通常包含恒定区，其可被排列为恒定区或恒定片段或可结晶片段(Fc)。抗体的示例性形式包含四链结构作为其基本单元。全长抗体包含两条重链(约50-70kD)，其与两条轻链(各自约23kDa)共价连接。轻链通常包含可变区(如果存在)和恒定区且在哺乳动物中是κ轻链或λ轻链。重链通常包含可变区和一个或两个恒定结构域，其通过铰链区与其他恒定结构域相连。哺乳动物的重链是以下类型之一：α、δ、ε、γ或μ。各轻链也与重链之一共价连接。例如，两条重链以及重链与轻链通过链间二硫键并通过非共价相互作用固定在一起。链间二硫键的数目可在不同抗体类型间变化。各链具有N末端可变区(VH或VL，其各自的长度都是约110个氨基酸)以及一个或多个C末端处的恒定结构域。轻链的恒定结构域(CL，其长度为约110个氨基酸)与重链的第一恒定结构域(CH1，其长度为330-440个氨基酸)对准并通过二硫键连接。轻链可变区与重链的可变区对准。抗体重链可包含2个或多个其他CH结构域(如CH2、CH3等)并可包含CH1和CH2恒定结构域之间的铰链区。抗体可以是任何类型(如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类(如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或小类。在一个实施例中，该抗体是鼠(小鼠或大鼠)抗体或灵长类动物(如人)抗体。在一个实施例中，抗体重链缺失C末端赖氨酸残基。在一个实施例中，该抗体是人源化的、同人源化的、嵌合的、CDR移植的或去免疫的。
术语“全长抗体”、“完整的抗体”或“全抗体”互换使用以指基本完整形式的抗体，与抗体的抗原结合片段相对。具体而言，全抗体包含具有重链和轻链(包含Fc区)的那些抗体。该恒定结构域可以是野生型序列恒定结构域(如人野生型序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。
如本文所用，“可变区”指本文所定义抗体的轻链和/或重链的部分，其能够特异性结合抗原并包含互补决定区(CDR)(即CDR1、CDR2和CDR3)和框架区(FR)的氨基酸序列。例如，可变区包含三个或四个FR(如FR1、FR2、FR3和任选的FR4)以及三个CDR。VH指重链的可变区。VL指轻链的可变区。
本文所用术语“互补决定区”(同义词CDR；即CDR1、CDR2和CDR3)指抗体可变区的氨基酸残基，其存在是特异性抗原结合的主要原因。各可变区结构域(VH或VL)通常具有三个CDR，其被鉴定为CDR1、CDR2和CDR3。在一个实施例中，分配给CDR和FR的氨基酸位置是根据Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest(《免疫学感兴趣的蛋白质序列》)，国立卫生研究院(National Institutes of Health)，马里兰州贝塞斯达，1987和1991(本文中也称作“Kabat编码系统”)来定义的。在另一个实施例中，分配给CDR和FR的氨基酸位置是根据加强版Chothia编码方案(http://www.bioinfo.org.uk/mdex.html)来定义的。根据Kabat的编码系统，VH FR和CDR的位置如下：残基1至30(FR1)、31至35(CDR1)、36至49(FR2)、50至65(CDR2)、66至94(FR3)、95至102(CDR3)和103至113(FR4)。根据Kabat的编码系统，VL FR和CDR的位置如下：残基1至23(FR1)、24至34(CDR1)、35至49(FR2)、50至56(CDR2)、57至88(FR3)、89至97(CDR3)和98至107(FR4)。本发明不限于Kabat编码系统所定义的FR和CDR，而是包括所有编码系统，包括规范编码系统或Chothia和LeskJ.Mol.Biol.196:901-917,1987；Chothia等，Nature 342:877-883,1989；和/或Al-Lazikani等，J.Mol.Biol.273:927-948,1997的编码系统；Honnegher和PlükthunJ.Mol.Biol.309:657-670,2001的编码系统；或者Giudicelli等，Nucleic Acids Res.25:206-2111997所讨论的编码系统。在一个实施例中，这些CDR是根据Kabat编码系统定义的。任选地，根据Kabat编码系统的重链CDR2不包含本文所列五个C末端氨基酸或者那些氨基酸的任意一个或多个被另一种天然产生的氨基酸取代。在这方面，Padlan等，FASEB J.,9:133-139,1995确定重链CDR2的五个C末端氨基酸通常不参与抗原结合。
“框架区”(FR)是除CDR残基以外的其他可变区残基。
本文所用术语“Fv”应理解为指任何蛋白，无论其由多个多肽或单个多肽组成，其中VL和VH连接并形成具有抗原结合结构域(即能够特异性结合抗原)的复合物。形成抗原结合结构域的VH和VL可以同处单条多肽链中或分处不同多肽链中。此外，本发明的Fv(以及本发明的任何蛋白)可具有多个抗原结合结构域，其可结合或不结合相同的抗原。该术语应理解为包括直接来源于抗体的片段以及对应于使用重组方法生产的这类片段的蛋白。在一些实施例中，VH不与重链恒定结构域(CH)1相连和/或VL不与轻链恒定结构域(CL)相连。示例性含Fv多肽或蛋白包括Fab片段、Fab’片段、F(ab’)片段、scFv、双抗体、三抗体、四抗体或更高级的复合物，或者与恒定区或其结构域(如CH2或CH3结构域)相连的任意前述物质，如小抗体。“Fab片段”由免疫球蛋白的单价抗原结合片段组成且可通过使用木瓜蛋白酶消化全抗体以生成由完整轻链和一部分重链组成的片段来生产或者可使用重组方法来生产。通过使用胃蛋白酶处理全抗体随后还原以生成由完整轻链和一部分重链(包含VH和单个恒定结构域)组成的分子，可获得抗体的“Fab'片段”。通过该方式处理，每个抗体可获得两个Fab'片段。还可通过重组方法生产Fab'片段。抗体的“F(ab')2片段”由通过两个二硫键固定在一起的两个Fab'片段的二聚体组成，并通过使用胃蛋白酶处理全抗体分子而不进行后续还原来获得。“Fab2”片段是包含两个Fab片段的重组片段，这两个Fab片段使用例如亮氨酸拉链或CH3结构域连接。“单链Fv”或“scFV”是含有抗体的可变区片段(Fv)的重组分子，其中轻链的可变区和重链的可变区通过合适、灵活的多肽接头共价连接。
对于IL-11Rα结合蛋白或其抗原结合结构域与抗原的相互作用，本文所用术语“结合”指该相互作用取决于抗原上是否存在特定结构(如抗原决定簇或表位)。例如，抗体识别并结合特定蛋白结构而非普遍的蛋白。如果抗体结合表位“A”，在含有标记的“A”和蛋白的反应中存在含有表位“A”(或游离、未结合的“A”)的分子会降低与该抗体结合的标记的“A”的量。
本文所用术语“特异性结合”或“特异地结合”应理解为表示：与同替代性抗原或细胞的反应或连接相比，本发明的IL-11Rα结合蛋白更频繁、更快速、更久和/或亲和力更高地与特定抗原或表达IL-11Rα的细胞反应或连接。例如，与同其他白介素受体或被多反应性天然抗体(即已知结合人中多种天然发现的抗原的天然产生的抗体)普遍识别的抗原的结合相比，IL-11Rα结合蛋白以显著较高的亲和力 (例如1.5倍或2倍或5倍或10倍或20倍或40倍或60倍或80倍至100倍或150倍或200倍)结合IL-11Rα(例如hIL-11Rα或包含其区域的多肽，例如SEQ ID NO:3或85多肽)。在本发明的一个实施例中，与同包含SEQ ID NO:95所列序列的SEQ ID NO:3的突变形式相比，IL-11Rα结合蛋白以至少1.5倍或2倍或更高(如5倍或10倍或20倍或50倍或100倍或200倍)的亲和力“特异性结合”一种形式的hIL-11Rα或包含其区域的多肽(例如hIL-11Rα的胞外区)或SEQ ID NO:3或85所列序列的多肽。通常，但非必须，提及结合时指特异性结合，且各术语应理解为对其他术语提供明确支持。
本文所用术语“无法可测知地结合”应理解为指IL-11Rα结合蛋白(如抗体)以高于背景小于10％或8％或6％或5％的水平结合候选抗原。该背景可以是不存在该蛋白和/或存在阴性对照蛋白(如同种型对照抗体)的情况下检测的结合信号水平和/或存在阴性对照抗原的情况下检测的结合水平。使用生物传感器分析(如Biacore)检测结合水平，其中将IL-11Rα结合蛋白固定并使之接触抗原。
本文所用术语“不显著结合”应理解为指本发明的IL-11Rα结合蛋白与多肽的结合水平没有统计学上显著地高于背景，该背景是例如不存在该蛋白和/或存在阴性对照蛋白(如同种型对照抗体)的情况下检测的结合信号水平和/或存在阴性对照多肽的情况下检测的结合水平。使用生物传感器分析(如Biacore)检测结合水平，其中将IL-11Rα结合蛋白固定并使之接触抗原。
本文所用与抗原相关的短语“降低的结合”或“在较低水平下结合”应理解为指与对照表位或抗原(如SEQ ID NO:3)相比，IL-11Rα结合蛋白(如抗体)以低至少约1.5倍或2倍或5倍或10倍或20倍或50倍或100倍或200倍的亲和力结合抗原(如本文所述SEQ ID NO:3的突变体，如包含SEQ ID NO:95所列序列的突变体)。
如果IL-11Rα结合蛋白或抗体与多肽结合的解离常数(KD)小于该蛋白或抗体对另一种多肽结合的KD，则认为该IL-11Rα结合蛋白或抗体“优先结合”该多肽。在一个实施例中，如果IL-11Rα结合蛋白或抗体与多肽结合的亲和力(KD)比该蛋白或抗体对另一种多肽结合的亲和力高至少1.5倍或2倍或5倍或10倍或20倍或50倍或100倍或200倍，则认为该IL-11Rα结合蛋白或抗体优先结合该多肽。
本文所用术语“能够结合hIL-11Rα和cynoIL-11Rα”应理解为指IL-11Rα结合蛋白与hIL-11Rα和cynoIL-11Rα交叉反应，即结合任一种蛋白。
出于解释的目的且本领域技术人员基于本文的示例性主题内容应理解，该说明书中的“亲和力”是指蛋白或抗体的KD。
出于解释的目的且本领域技术人员基于本文的示例性主题内容应理解，“亲和力为至少约”应理解为指亲和力(或KD)等于所列数值或更高(即列举作为亲和力的数值较低)，即2nM的亲和力高于3nM的亲和力。换言之，该术语可以是“X或更低的亲和力”，其中X是本文所列数值。
“IC50为至少约”应理解为指IC50等于所列数值或更低(即列举作为IC50的数值较低)，即2μg/ml的IC50为大于1μg/ml的IC50。换言之，该术语可以是“X或更低的IC50”，其中X是本文所列数值。
本文所用术语“表位”(同义词“抗原决定簇”)应理解为指IL-11Rα的某一区域，其被包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白结合。该术语不必然限于IL-11Rα结合蛋白接触的特定残基或结构。例如，该术语包括跨IL-11Rα结合蛋白接触的氨基酸的区域和该区域外的5-10(或更多)或2-5或1-3个氨基酸。在一些实施例中，当IL-11Rα结合蛋白折叠时，该表位包含一系列位置彼此接近的不连续氨基酸，即“构型表位”。本领域技术人员应理解，术语“表位”不限于肽或多肽。例如，术语“表位”包括有化学活性的成组表面分子(例如糖侧链、磷酰基侧链或磺酰基侧链)，且在某些实施例中，表位决定簇可具有特定的三维结构特点和/或特定的荷电特点。
术语“竞争性抑制”应理解为指本发明的IL-11Rα结合蛋白(或其抗原结合结构域)降低或阻止所列抗体或IL-11Rα结合蛋白与IL-11Rα(如与hIL-11Rα)的结合。这可能是由于IL-11Rα结合蛋白(或抗原结合结构域)和抗体结合相同或重叠的表位。从前文中显而易见的是，IL-11Rα结合蛋白无需完全抑制抗体的结合，而是，其仅需使结合降低统计学显著的量，例如降低至少约10％或20％或30％或40％或50％或60％或70％或80％或90％或95％。优选地，该IL-11Rα结合蛋白使抗体的结合降低至少约30％，更优选地降低至少约50％，更优选地降低至少约70％，更优选地降低至少约75％，更优选地降低至少约80％或85％，且更优选地降低至少约90％。确定结合的竞争性抑制的方法是本领域已知的和/或描述于本文中。例如，在IL-11Rα结合蛋白存在或不存在的情况下使抗体暴露于IL-11Rα。如果在IL-11Rα结合蛋白存在的情况下结合的抗体少于在IL-11Rα结合蛋白不存在的情况 下结合的抗体，则该蛋白被认为竞争性抑制抗体结合。在一个实施例中，该竞争性抑制不是因为空间位阻。
对于两种表位而言，“重叠”应理解为指两种表位共有足够数目的氨基酸残基以允许结合一种表位的IL-11Rα结合蛋白(或其抗原结合结构域)竞争性抑制结合另一种表位的IL-11Rα结合蛋白(或抗原结合结构域)的结合。例如，“重叠”的表位共有至少1或2或3或4或5或6或7或8或9或20个氨基酸。
本文所用术语“中和”应理解为指蛋白能够通过IL-11Rα阻碍、降低或阻止细胞中IL-11介导的信号转导。确定中和的方法是本领域已知的和/或描述于本文中。
本文所用术语“病症”指对正常功能的破坏或干扰，并不限于任何特定病症，且包括疾病或紊乱。
如本文所用，“IL-11相关病症”指由过量IL-11或表达IL-11的细胞或给予IL-11导致或与其相关的任何病症。本领域技术人员能够容易地确定这类病症。本文描述了示例性病症。
本文所用术语“预防”包括给予本发明的IL-11Rα结合蛋白从而停止或阻止至少一种病症症状的发展。该术语还包括治疗缓解期的患者以预防或阻止复发。
本文所用术语“治疗”包括给予本发明的IL-11Rα结合蛋白从而降低或消除特定疾病或病症的至少一种症状。
本文所用术语“对象”应理解为指包括人的任何动物，例如哺乳动物。示例性对象包括但不限于人和非人灵长类动物。例如，该对象是人。
抗体
在一个实施例中，本文任意实施例所述的IL-11Rα结合蛋白是抗体。
用于生成抗体的方法是本领域已知的和/或描述于Harlow和Lane(编)Antibodies:A Laboratory Manual(《抗体：实验室手册》)，冷泉港实验室(1988)。通常，在这类方法中，将IL-11Rα(如hIL-11Rα)或其区域(如胞外区)或其免疫原性片段或表位或表达或展示该物质(即免疫原)的细胞(其任选与任何合适或需要的运载体、佐剂或药学上可接受的赋形剂一起配制)给予非人动物(如小鼠、鸡、大鼠、兔、豚鼠、犬、马、奶牛、山羊或猪)。该免疫原可以经鼻内、肌肉内、皮下、静脉内、皮内、腹膜内或通过其他已知途径给予。
通过在免疫后各点对免疫的动物的血液进行取样来监测多克隆抗体的产生。需要时，可给予一次或多次进一步免疫以达到所需抗体效价。重复加强和效价测定的过程直至达到合适的效价。在获得所需免疫原性水平时，对免疫的动物取血并分离和储存血清，和/或将该动物用于生成单克隆抗体(mAb)。
单克隆抗体是本发明所述抗体的一种示例性形式。术语“单克隆抗体”或“mAb”指能够结合相同抗原(例如结合抗原内的相同表位)的同质性抗体群体。该术语不旨在限制抗体来源或制备抗体的方式。
对于mAb的生产，可以使用多种已知技术中的任一种，例如US4196265或Harlow和Lane(1988)同上所例示的方法。
例如，在足以刺激生产抗体的细胞的条件下使用免疫原免疫合适的动物。啮齿类动物(如兔、小鼠和大鼠)是示例性动物。经遗传工程改造以表达人抗体且例如不表达鼠抗体的小鼠也可被用于生成本发明的抗体(例如，参见WO2002/066630)。
免疫后，选择具有生产抗体潜能的体细胞(特别是B淋巴细胞(B细胞))用于mAb生成方案。这些细胞可获自脾、扁桃体或淋巴结的活检样品，或者来自外周血样品。随后将来自免疫的动物的B细胞与永生骨髓瘤细胞的细胞融合，其通常来源于与使用免疫原免疫的动物相同的物种。
通过在选择性培养基中培养来扩增杂交体，该选择性培养基包含阻止组织培养基中核苷酸从头合成的试剂。示例性试剂是氨基蝶呤、氨甲蝶呤和重氮丝氨酸。
针对抗体特异性和/或效价对扩增的杂交瘤进行功能性选择，例如通过流式细胞术和/或免疫组化和/或免疫试验(例如放射性免疫试验、酶免疫试验、细胞毒性试验、空斑试验、斑点免疫试验等)。
或者，使用ABL-MYC技术(新克隆公司(Neoclone)，威斯康星州麦迪逊53713，美国)以生产分泌MAb的细胞系(例如，参见Largaespada等，J.Immunol.Methods.197:85-95,1996)。
还可通过筛选展示文库(如噬菌体展示文库)来生产或分离抗体，例如US6300064和/或US5885793中所述。例如，发明人从噬菌体展示文库中分离了全人抗体。
如本文所述，本发明的一些结合hIL-11Rα的IL-11Rα结合蛋白与cynoIL-11Rα交叉反应和/或结合包含已被突变和/或没有的hIL-11Rα的区域的多肽或hIL-11Rα的一些突变形式。这些特性可用于生成抗体或IL-11Rα结合蛋白。
例如，使用包含SEQ ID NO:3多肽筛选噬菌体展示文库以鉴定与该多肽结合的蛋白。随后使用IL-11Rα结合蛋白无法可测知地结合的多肽的突变形式(例如，其中对应于SEQID NO:1的117位的位置处的缬氨酸被谷氨酸取代(例如包含SEQ ID NO:95的序列))以除去交叉反应性蛋白和/或使用IL-11Rα结合蛋白结合的多肽的突变形式(例如包含SEQ ID NO:97、98或99的序列)以分离具有正确交叉反应性的蛋白。还可基于前文涉及用于非人哺乳动物免疫的筛选过程。
在另一个实施例中，使用包含cynoIL-11Rα的胞外域(或对应于SEQ ID NO:1的氨基酸23-215或110-215的区域)的多肽免疫动物或筛选噬菌体展示文库并筛选鉴定的IL-11Rα结合蛋白和/或抗体以鉴定与SEQ ID NO:3和/或85多肽和/或hIL-11Rα具有交叉反应性的那些。
在其他实施例中，使IL-11Rα或其胞外区(任选的8E2或8D10或8E4结合的突变形式)接触前述抗体中的一种。随后使噬菌体展示文库接触IL-11Rα或区域和表达可与抗体竞争用于选择的结合的蛋白的噬菌体。
在其他实施例中，嵌合蛋白包含例如小鼠IL-11Rα，其中来自hIL-11Rα的感兴趣的表位取代了相应的小鼠序列。随后使用该嵌合蛋白来免疫小鼠(其较不可能诱导针对该小鼠蛋白的免疫应答)和/或筛选噬菌体展示文库。随后筛选所得抗体/蛋白以鉴定结合hIL-11Rα(特别在感兴趣的位点处)而不结合小鼠IL-11Rα的那些。
本发明的抗体可以是合成的抗体。例如，该抗体是嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、同人源化抗体、灵长类动物化抗体或去免疫化抗体。
去免疫化、嵌合、CDR移植、人源化、同人源化、灵长类动物化、人和复合IL-11Rα结 合蛋白
本发明的IL-11Rα结合蛋白可以是CDR移植蛋白，其包含移植于来自人抗体的FR上或插入来自人抗体的FR中的来自非人物种(如小鼠或大鼠或非人灵长类动物)的抗体的CDR，或者其包含移植于来自一种抗体类型(如一种人抗体类型)的FR上或插入来自一种抗体类型的FR中的来自另一种抗体类型(如另一种人抗体类型)的抗体的CDR。该术语还包括复合IL-11Rα结合蛋白，其包含例如 一种或多种CDR移植可变区和一种或多种例如人可变区、嵌合可变区、同人源化可变区或灵长类动物化可变区。
本发明的IL-11Rα结合蛋白可以是人源化蛋白。
术语“人源化蛋白”应理解为指包含人样可变区(human-like variable region)的蛋白，其包含移植于来自人抗体的FR上或插入来自人抗体的FR中的来自非人物种(如小鼠或大鼠或非人灵长类动物)的抗体的CDR(该抗体类型落入“CDR移植抗体”类)。人源化IL-11Rα结合蛋白还包含下述蛋白：其中人蛋白的一个或多个残基被一个或多个氨基酸取代修饰和/或人蛋白的一个或多个FR残基被相应非人残基替代。人源化蛋白还可包含不是在人抗体也不是在非人抗体中发现的残基。该蛋白的任何其他区域(如Fc区)通常是人的。可使用本领域已知的方法进行人源化，例如US5225539、US6054297、US7566771或US5585089。术语“人源化蛋白”还包括超人源化蛋白，例如US7732578中所述。该术语还包括复合蛋白，其包含例如一种或多种人源化可变区和一种或多种例如人可变区、嵌合可变区、同人源化可变区或灵长类动物化可变区。
本发明的IL-11Rα结合蛋白可以是人IL-11Rα结合蛋白。本文所用术语“人蛋白”指具有人中发现(例如人种系或体细胞中或来自使用这类区域生产的文库)的可变和任选的恒定抗体区的蛋白。该“人”蛋白可包含不是由人序列编码的氨基酸残基，例如通过体外随机或定点突变导入的突变(特别是涉及少量蛋白残基(例如该蛋白的残基中的1、2、3、4或5个)中的突变或保守性取代的突变)。这些“人蛋白”无需作为人免疫应答的结果而生成，而是，可使用重组方法(如筛选噬菌体展示文库)和/或通过包含编码人抗体恒定和/或可变区的转基因动物(如小鼠)和/或使用指导选择(例如US5565332中所述)来生成。该术语还包括这类抗体的亲和成熟形式。出于本发明的目的，人抗体可被认为包含以下蛋白，该蛋白包含来自人抗体的FR或含有来自人FR的共有序列的序列的FR且其中一个或多个CDR是随机或半随机的，例如US6300064和/或US6248516中所述。
示例性人IL-11Rα结合蛋白是包含以下可变区对的抗体：
(i)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(ii)包含SEQ ID NO:38所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(iii)包含SEQ ID NO:39所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(iv)包含SEQ ID NO:40所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(v)包含SEQ ID NO:41所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(vi)包含SEQ ID NO:42所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(vii)包含SEQ ID NO:43所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(viii)包含SEQ ID NO:44所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(ix)包含SEQ ID NO:45所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(x)包含SEQ ID NO:46所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xi)包含SEQ ID NO:47所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xii)包含SEQ ID NO:48所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xiii)包含SEQ ID NO:49所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xiv)包含SEQ ID NO:50所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xv)包含SEQ ID NO:51所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xvi)包含SEQ ID NO:52所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xvii)包含SEQ ID NO:53所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xviii)包含SEQ ID NO:54所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xix)包含SEQ ID NO:55所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xx)包含SEQ ID NO:56所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxi)包含SEQ ID NO:57所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxii)包含SEQ ID NO:58所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxiii)包含SEQ ID NO:59所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxiv)包含SEQ ID NO:60所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxv)包含SEQ ID NO:61所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxvi)包含SEQ ID NO:62所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxvii)包含SEQ ID NO:63所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxviii)包含SEQ ID NO:64所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxix)包含SEQ ID NO:65所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxx)包含SEQ ID NO:66所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxi)包含SEQ ID NO:67所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxii)包含SEQ ID NO:68所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxiii)包含SEQ ID NO:69所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxiv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxv)包含SEQ ID NO:70所列序列的VH和包含SEQ ID NO:5所列序列的VL；
(xxxvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:6所列序列的VL；
(xxxvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:7所列序列的VL；
(xxxviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:8所列序列的VL；
(xxxix)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:9所列序列的VL；
(xl)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:10所列序列的VL；
(xli)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:11所列序列的VL；
(xlii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:12所列序列的VL；
(xliii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:13所列序列的VL；
(xliv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:14所列序列的VL；
(xlv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:15所列序列的VL；
(xlvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:16所列序列的VL；
(xlvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:17所列序列的VL；
(xlviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:18所列序列的VL；
(xlix)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:19所列序列的VL；
(l)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:20所列序列的VL；
(li)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:21所列序列的VL；
(lii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:22所列序列的VL；
(liii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:23所列序列的VL；
(liv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:24所列序列的VL；
(lv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:25所列序列的VL；
(lvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:26所列序列的VL；
(lvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:27所列序列的VL；
(lviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:28所列序列的VL；
(lix)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:29所列序列的VL；
(lx)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:30所列序列的VL；
(lxi)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:31所列序列的VL；
(lxii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:32所列序列的VL；
(lxiii)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:33所列序列的VL；或
(lxiv)包含SEQ ID NO:37所列序列的VH和包含SEQ ID NO:34所列序列的VL。
任选地，VH与重链恒定区(如IgG4重链恒定区)相连。在一个实施例中，该重链恒定区缺少C末端赖氨酸残基。
任选地，VL与轻链恒定区相连。
本发明的IL-11Rα结合蛋白可以是同人源化蛋白。术语“同人源化蛋白”指通过WO2007/019620中所述方法制备的蛋白。同人源化IL-11Rα结合蛋白包含抗体的可变区，其中该可变区包含来自新世界(New World)灵长类动物抗体可变区的FR和来自非新世界灵长类动物抗体可变区的CDR。例如，同人源化IL-11Rα结合蛋白包含抗体的可变区，其中该可变区包含来自新世界灵长类动物抗体可变区的FR和来自小鼠或大鼠抗体的CDR。在一个实施例中，该同人源化IL-11Rα结合蛋白是其中一个或全部两个可变区是同人源化的IL-11Rα结合抗体。该术语还包括复合蛋白，其包含例如一种或多种同人源化可变区和一种或多种例如人可变区或人源化可变区或嵌合可变区。
本发明的IL-11Rα结合蛋白可以是灵长类动物化蛋白。“灵长类动物化蛋白”包含来自抗体的可变区，其在非人灵长类动物(如猕猴)的免疫后生成。任选地，该非人灵长类动物抗体的可变区与人恒定区相连以生成灵长类动物化抗体。用于生产灵长类动物化抗体的示例性方法描述于US6113898。该术语还包括复合蛋白，其包含例如一种或多种灵长类动物化可变区和一种或多种例如人可变区或人源化可变区或嵌合可变区。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白是嵌合蛋白。术语“嵌合蛋白”指以下蛋白，其中抗原结合结构域来自特定物种(如鼠，如小鼠或大鼠)或属于特定抗体类或亚类，而该蛋白的剩余部分来自来源于其他物种(例如人或非人灵长类动物)的蛋白或属于另一抗体类或亚类。在一个实施例中，嵌合蛋白是嵌合抗体，其包含来自非人抗体(如鼠抗体)的VH和/或VL且该抗体的剩余部分来自人抗体。这类嵌合蛋白的生产是本领域已知的且可通过标准方法实现(描述于例如US6331415；US5807715；US4816567和US4816397)。该术语还包括复合蛋白，其包含例如一种或多种嵌合可变区和一种或多种例如人可变区或人源化可变区或嵌合可变区。
本发明还涉及去免疫化IL-11Rα结合蛋白，例如WO2000/34317和WO2004/108158中所述。去免疫化抗体和蛋白除去(即突变)了一个或多个表位(如B细胞表位或T细胞表位)，从而降低对象产生针对该抗体或蛋白的免疫应答的可能性。例如，对本发明的IL-11Rα结合蛋白进行分析以鉴定一个或多个B 或T细胞表位且对该表位内的一个或多个氨基酸残基进行突变从而降低该IL-11Rα结合蛋白的免疫原性。
本领域技术人员应从前文中理解，“复合”蛋白包含一种形式的VH(如人)和另一种形式的VL(如人源化)。本发明明确地包括所有VH和VL形式的组合。
含有抗体结合结构域的蛋白
单结构域抗体
在一些实施例中，本发明的抗体是或包含单结构域抗体(其可与术语“结构域抗体”或“dAb”互换使用)。单结构域抗体是包含抗体的重链可变区的全部或一部分的单多肽链。在某些实施例中，单结构域抗体是人单结构域抗体(多玛提斯公司(Domantis,Inc.)，马萨诸塞州沃特汉姆市；参见例如US6248516)。
双抗体、三抗体、四抗体
在一些实施例中，本发明的蛋白是或包含双抗体、三抗体、四抗体或更高级的蛋白复合物，例如WO98/044001和/或WO94/007921中所述。
例如，双抗体是包含两个相连多肽链的蛋白，各多肽链包含结构VL-X-VH或VH-X-VL，其中VL是抗体轻链可变区，VH是抗体重链可变区，X是包含不足残基以允许单条多肽链中VH和VL连接(或形成Fv)的接头或者是缺失的，且一条多肽链的VH结合另一条多肽链的VL以形成抗原结合结构域，即形成能够特异性结合一种或多种抗原的Fv分子。各多肽链中VL和VH可以是相同的或者各多肽链中VL和VH可以是不同的，从而形成双特异性双抗体(即包含具有不同特异性的两个Fv)。
单链Fv(scFv)
本领域技术人员应意识到，scFv包含单条多肽链中的VH和VL区以及VH和VL之间的多肽接头(其促使scFV形成用于抗原结合的所需结构，即用于使单条多肽链的VH和VL彼此连接以形成Fv)。例如，该接头包含超过12个氨基酸残基与(Gly4Ser)3，其是scFV的较有利接头之一。
本发明还涉及二硫键稳定化的Fv(或diFv或dsFv)，其中单个半胱氨酸残基被导入VH的FR和VL的FR并通过二硫键连接半胱氨酸残基以生成稳定的Fv。
或者或此外，本发明包括二聚体scFv，即包含通过非共价或共价连接(例如通过亮氨酸拉链结构域(如来源于Fos或Jun))相连的两个scFV分子。或者， 通过足够长的肽接头连接两个scFv以允许两个scFv形成并结合抗原，如US20060263367中所述。
重链抗体
重链抗体与许多其他抗体形式在结构上不同，虽然其包含重链，但不包含轻链。因此，这些抗体也称为“仅重链抗体”。重链抗体发现于例如驼科动物和软骨鱼中(也称作IgNAR)。
天然产生的重链抗体中存在的可变区通常称作驼科动物抗体中的“VHH结构域”和IgNAR中的V-NAR，从而将其与常规4链抗体中存在的重链可变区(其称作“VH结构域”)和常规4链抗体中存在的轻链可变区(其称作“VL结构域”)区分。
来自驼科动物的重链抗体及其可变区和其生产和/或分离和/或使用方法的一般描述参见以下参考文献(但不限于此)：WO94/04678、WO97/49805和WO97/49805。
来自软骨鱼的重链抗体及其可变区和其生产和/或分离和/或使用方法的一般描述参见WO2005/118629(但不限于此)。
其他抗体或包含其抗原结合结构域的蛋白
本发明还涉及其他抗体和包含其抗原结合结构域的蛋白，例如：
(i)“钥匙和孔”双特异性抗体，如US5731168中所述；
(ii)异源偶联蛋白，如US4676980中所述；
(iii)使用化学交联剂生产的异源偶联蛋白，如US4676980中所述；以及
(iv)Fab3(如EP19930302894中所述)。
蛋白的突变
本发明还提供了一种IL-11Rα结合蛋白或编码IL-11Rα结合蛋白的核酸，其与本文所公开的序列至少80％相同。在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白或核酸包含与本文所公开序列至少约85％或90％或95％或97％或98％或99％相同的序列，该蛋白特异性结合本文任何实施例所述的IL-11Rα。
或者或此外，该IL-11Rα结合蛋白包含与本文任何实施例所述的VH或VL的CDR至少约80％或85％或90％或95％或97％或98％或99％相同的CDR(如三个CDR)，该蛋白能够特异性结合本文任何实施例所述的IL-11Rα。在该方面，发明 人生产了其CDR内具有多种不同序列的数种抗体。本文描述了测定蛋白与IL-11Rα结合的方法。
例如，发明人鉴定了根据Kabat编码系统在其HCDR1(和任选的处于HCDR1N末端方向的氨基酸)中共至少40％相同的一组IL-11Rα结合蛋白以及在其HCDR1中共至少80％相同的另一蛋白亚组。
发明人还鉴定了根据Kabat编码系统在其HCDR2中共77％相同的一类IL-11Rα结合蛋白以及根据Kabat编码系统在其HCDR2中共至少约82％相同的一亚类IL-11Rα结合蛋白。
如本文所述，本领域中还已知重链CDR2的五个C末端残基可被突变为保守性或非保守性氨基酸取代(31％的残基)(Padlan等，FASEB J.9:133-139,1995)。因此，蛋白可包含与本文所公开的重链CDR2序列至少约47％相同的CDR2。
例如，发明人鉴定了根据Kabat编码系统在其HCDR3中共至少约44％相同的一组IL-11Rα结合蛋白。
例如，发明人鉴定了包含SEQ ID NO:37所列序列的VH中的若干残基，其可被取代而不丧失功能或导致改善的功能。在一个实施例中，与SEQ ID NO:37相比，该IL-11Rα结合蛋白包含1-11个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:37相比，该IL-11Rα结合蛋白包含1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:37相比，该IL-11Rα结合蛋白包含3个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:37相比，该IL-11Rα结合蛋白包含4个氨基酸取代。
在一个实施例中，与SEQ ID NO:37相比，该IL-11Rα结合蛋白在CDR3中包含1-4个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:37相比，该IL-11Rα结合蛋白在CDR3中包含1或2或3或4个氨基酸取代。
在一个实施例中，与SEQ ID NO:37相比，该IL-11Rα结合蛋白在CDR2中包含1-3个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:37相比，该IL-11Rα结合蛋白在CDR2中包含1或2或3个氨基酸取代。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的54位处的色氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的56位处的苏氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的57位处的天冬氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的57位处的色氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的57位处的亮氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的99位处的脯氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的100位处的谷氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的100位处的亮氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的101位处的天冬氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的104位处的亮氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:37的104位处的精氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含54位处的色氨酸、56位处的天冬氨酸和57位处的亮氨酸，其各自都相对于SEQ ID NO:37。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含54位处的色氨酸、56位处的天冬氨酸和57位处的亮氨酸，其各自都相对于SEQ ID NO:37。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含54位处的色氨酸、56位处的苏氨酸和57位处的亮氨酸，其各自都相对于SEQ ID NO:37。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含99位处的脯氨酸、100位处的谷氨酸、101位处的天冬氨酸和104位处的亮氨酸，其各自都相对于SEQ ID NO:37。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:37所列序列的突变体，该突变序列至少包含99位处的脯氨酸、100位处的亮氨酸、101位处的天冬氨酸和104位处的精氨酸，其各自都相对于SEQ ID NO:37。
例如，发明人鉴定了根据Kabat编码系统在其LCDR1中共至少约45％相同的一组IL-11Rα结合蛋白和在其LCDR1中共约54％相同的另一蛋白亚组。
例如，发明人还鉴定了根据Kabat编码系统在其LCDR3中共至少约55％或56％相同的一类IL-11Rα结合蛋白。
例如，发明人鉴定了包含SEQ ID NO:5所列序列的VL中的若干残基，其可被取代而不丧失功能或导致改善的功能。在一个实施例中，与SEQ ID NO:5相比，该IL-11Rα结合蛋白包含1-11个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:5相比，该IL-11Rα结合蛋白包含1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:5相比，该IL-11Rα结合蛋白包含3个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:5相比，该IL-11Rα结合蛋白包含4个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:5相比，该IL-11Rα结合蛋白包含5个氨基酸取代。
在一个实施例中，与SEQ ID NO:5相比，该IL-11Rα结合蛋白在CDR3中包含1-4个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:5相比，该IL-11Rα结合蛋白在CDR3中包含1或2或3或4个氨基酸取代。
在一个实施例中，与SEQ ID NO:5相比，该IL-11Rα结合蛋白在CDR1中包含1-5个氨基酸取代。例如，与SEQ ID NO:5相比，该IL-11Rα结合蛋白在CDR3中包含1或2或3或4或5个氨基酸取代。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的29位处的缬氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的30位处的天冬氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的31位处的赖氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的33位处的缬氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的34位处的谷氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的91位处的丙氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的91位处的组氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的91位处的谷氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的93位处的天冬氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的93位处的苯丙氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的93位处的丝氨酸。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含SEQ ID NO:5的94位处的谷氨酰胺。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含29位处的缬氨酸、30位处的天冬氨酸、31位处的赖氨酸、33位处的缬氨酸和34位处的谷氨酸，其各自都相对于SEQ ID NO:5。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含91位处的丙氨酸、92位处的谷氨酸、93位处的天冬氨酸和94位处的谷氨酰胺，其各自都相对于SEQ ID NO:5。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含91位处的组氨酸、92位处的谷氨酸、93位处的苯丙氨酸和94位处的谷氨酰胺，其各自都相对于SEQ ID NO:5。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含91位处的组氨酸、92位处的谷氨酸和94位处的谷氨酰胺，其各自都相对于SEQ ID NO:5。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含91位处的组氨酸、92位处的谷氨酸和94位处的谷氨酰胺，其各自都相对于SEQ ID NO:5。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白包含SEQ ID NO:5所列序列的突变体，该突变序列至少包含92位处的谷氨酸、93位处的丝氨酸和94位处的谷氨酰胺，其各自都相对于SEQ ID NO:5。
在一个实施例中，本发明的核酸包含与本文所列序列至少约80％或85％或90％或95％或97％或98％或99％相同且编码具有本文任何实施例所述功能的IL-11Rα结合蛋白的序列。本发明还包括编码本发明的IL-11Rα结合蛋白的核酸，其因遗传编码的简并而不同于本文所例示的序列。
核酸或多肽的相同性百分比通过GAP(Needleman和Wunsch.Mol.Biol.48,443-453,1970)分析(GCG程序)测定，其中缺口生成罚分＝5且缺口延伸罚分＝0.3。查询序列的长度为至少50个残基，且GAP分析在至少50个残基的区域上比对两条序列。例如，查询序列的长度为至少100个残基，且GAP分析在至少100个残基的区域上比对两条序列。例如，在整个长度上比对两条序列。
本发明还涉及在严谨杂交条件下与编码本文所述IL-11Rα结合蛋白的核酸杂交的核酸。“中等严谨性”在本文中定义为在45-65℃的温度范围下在2x SSC缓冲液、0.1％(w/v)SDS中或等同条件下进行杂交和/或清洗。“高严谨性”在本文中定义为在至少65℃的温度下在0.1x SSC缓冲液、0.1％(w/v)SDS中或更低盐浓度或等同条件下进行杂交和/或清洗。本文中特定的严谨性水平包括使用本领域技术人员已知的除SSC外的清洗/杂交溶液的等同条件。例如，计算双链核酸的各链解离的温度(也称为解链温度或Tm)的方法是本领域已知的。类似(如在5℃以内或在10℃以内)或等于核酸Tm的温度被认为是高严谨性。中度严谨性被认为是计算的核酸Tm的10℃至20℃或10℃至15℃内。
本发明还涉及本发明的IL-11Rα结合蛋白的突变形式，其与本文所列序列相比包含一个或多个保守性氨基酸取代。在一些实施例中，该IL-11Rα结合蛋白包含10个或更少(如9或8或7或6或5或4或3或2或1个)保守性氨基酸取代。“保守性氨基酸取代”是氨基酸残基被具有类似侧链和/或水亲性(hydropathicity)和/或亲水性(hydrophilicity)的氨基酸残基取代。
本领域中已定义了具有类似侧链的氨基酸残基家族，包括碱性侧链(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、 色氨酸)、β-分支侧链(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香侧链(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。水亲性指数(hydropathicindices)描述于例如Kyte和Doolittle J.Mol.Biol.,157:105-132,1982，且亲水性指数(hydrophylic indices)描述于例如US4554101。
本发明还涉及非保守性氨基酸变化。例如，特别感兴趣的是使用一种带电荷的氨基酸和使用中性或带正电荷的氨基酸取代另一种带电荷的氨基酸。在一些实施例中，该IL-11Rα结合蛋白包含10个或更少(如9或8或7或6或5或4或3或2或1个)非保守性氨基酸取代。
在一个实施例中，突变发生在本发明的IL-11Rα结合蛋白的抗原结合结构域的FR内。在另一个实施例中，突变发生在本发明的IL-11Rα结合蛋白的CDR内。
生产IL-11Rα结合蛋白的突变形式的示例性方法包括：
·DNA诱变(Thie等，Methods Mol.Biol.525:309-322,2009)或RNA诱变(Kopsidas等，Immunol.Lett.107:163-168,2006；Kopsidas等，BMC Biotechnology,7:18,2007；和WO1999/058661)；
·将编码多肽的核酸导入增变细胞(mutator cell)，例如XL-1Red、XL-mutS和XL-mutS-Kanr细菌细胞(司查塔基公司(Stratagene))；
·DNA改组(例如Stemmer,Nature 370:389-91,1994中所述)；以及
·定点诱变，例如参见Dieffenbach(编)和Dveksler(编)(刊于PCR Primer:ALaboratory Manual(《PCR引物：实验室手册》)，冷泉港实验室，纽约，1995)。
测定本发明的突变体IL-11Rα结合蛋白的生物活性的示例性方法是本领域技术人员显而易见的和/或在本文中描述，例如抗原结合。例如，本文中描述了用于测定抗原结合、结合的竞争性抑制、亲和力、结合、解离和治疗功效的方法。
恒定区
本发明包括包含抗体的恒定区的本文所述抗体和/或IL-11Rα结合蛋白。这包括与Fc融合的抗体的抗原结合片段。
用于生产本发明的蛋白的恒定区的序列可获自数种不同来源。在一些实施方式中，蛋白的恒定区或其部分来源于人抗体。恒定区或其部分可来源于包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE在内的任何抗体类型和包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4在内的任何抗体同种型。在一个实施例中，该恒定区是人同种型IgG4或稳定化的IgG4恒定区。
在一个实施例中，恒定区的Fc区具有降低的诱导效应功能的能力，例如与天然或野生型人IgG1或IgG3Fc区相比。在一个实施例中，该效应功能是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。评估含有蛋白的Fc区的效应功能水平的方法是本领域已知的和/或描述于本文中。
在一个实施例中，该Fc区是IgG4Fc区(即来自IgG4恒定区)，例如人IgG4Fc区。合适的IgG4Fc区的序列对本领域技术人员而言显而易见和/或可获自公众可得的数据库(例如获自国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information))。
在一个实施例中，该恒定区是稳定化的IgG4恒定区。术语“稳定化的IgG4恒定区”应理解为指经修饰以降低Fab臂交换或经历Fab臂交换的倾向或形成半抗体或形成半抗体的倾向的IgG4恒定区。“Fab臂交换”指针对人IgG4的一种蛋白修饰类型，其中IgG4重量和相连的轻链(半分子)被交换成来自另一IgG4分子的重链-轻链对。因此，IgG4分子可能需要识别两个不同抗原的两个不同的Fab臂(导致双特异性分子)。Fab臂交换在体内天然发生并可在体外被纯化的血细胞或还原剂(如还原型谷胱甘肽)诱导。当IgG4抗体解离以形成两个分子(各分子含有单条重链和单条轻链)时，形成“半抗体”。
在一个实施例中，稳定化的IgG4恒定区包含根据Kabat的系统的铰链区的241位处的脯氨酸(Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫学感兴趣的蛋白质序列)，华盛顿特区，美国，健康与人类服务部，1987和/或1991)。该位置对应于根据EU编码系统的铰链区的228位(Kabat等，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(免疫学感兴趣的蛋白质序列)，华盛顿特区，美国，健康与人类服务部，2001和Edelman等，Proc.Natl.Acad.USA,63,78-85,1969)。在人IgG4中，该残基通常是丝氨酸。在使用脯氨酸取代丝氨酸后，该IgG4铰链区包含序列CPPC。在该方面，本领域技术人员应理解，“铰链区”是连接Fc和Fab区的抗体重链恒定区的富脯氨酸部分，其赋予抗体的两个Fab臂移动性。该铰链区包含半胱氨酸残基，其涉及重链间二硫键。根据Kabat的编码系统，其通常定义为从人IgG1的Glu226延伸至Pro243。可通过将形成重链间二硫(S-S)键的第一和最后一个半胱氨酸残基置于相同位置来将其他IgG同种型的铰链区与IgG1序列对齐(参见例如WO2010/080538)。
稳定化IgG4抗体的其他示例是以下抗体：其中人IgG4的重链恒定区中409位的精氨酸(根据EU编码系统)被赖氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸或亮氨酸取代(例如描述于WO2006/033386)。此外或或者，恒定区的Fc区可包含选自下组的残基：对应于405(EU编码系统)的位置处的丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、异亮氨酸和亮氨酸。任选地，该铰链区包含241位处的脯氨酸(即CPPC序列)(如上文所述)。
在另一个实施例中，Fc区是经修饰具有降低的效应功能的区域，即“非免疫刺激性Fc区”。例如，该Fc区是包含一个或多个位置(选自268、309、330和331)处取代的IgG1Fc区。在另一个实施例中，该Fc区是IgG1Fc区，其包含一个或多个下述变化E233P、L234V、L235A和G236的缺失和/或一个或多个下述变化A327G、A330S和P331S(Armour等，Eur JImmunol.29:2613-2624,1999；Shields等，J Biol Chem.276(9):6591-604,2001)。非免疫刺激性Fc区的其他示例描述于例如Dall'Acqua等，J Immunol.177:1129-11382006；和/或Hezareh J Virol；75:12161-12168,2001。
在另一个实施例中，该Fc区是嵌合Fc区，例如包含来自IgG4抗体的至少一个CH2结构域和来自IgG1抗体的至少一个CH3结构域，其中该Fc区包含选自下组的一个或多个氨基酸位置处的取代：240、262、264、266、297、299、307、309、323、399、409和427(EU编码)(例如描述于WO2010/085682)。示例性取代包括240F、262L、264T、266F、297Q、299A、299K、307P、309K、309M、309P、323F、399S和427F。
增强效应功能
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白可诱导效应功能或增强的效应功能。
在本发明的上下文中，“效应功能”指由结合抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的细胞或蛋白介导的那些生物学活性，其导致细胞的杀死。由抗体诱导的效应功能的示例包括补体依赖性细胞毒性；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)；和B细胞激活。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白以其能够诱导效应功能(如ADCC或CDC)的方式结合细胞表面上的IL-11Rα。
例如，该IL-11Rα结合蛋白与细胞表面上的IL-11Rα维持足够时间的结合以诱导效应功能(如ADCC和/或CDC)。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白能够诱导增强的效应功能，例如凭借修饰的Fc区或凭借包含能够结合免疫效应细胞的区域。例如，与人IgG1或IgG3Fc区诱导的水平相比，效应功能的水平提高。本发明的IL-11Rα结合蛋白所诱导的增强的效应功能可导致增强的治疗或预防效果，例如不仅通过阻断IL-11Rα的作用还通过杀死或消耗导致病症的细胞，例如通过杀死自身反应性T细胞。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白的Fc区经修饰以与无修饰的Fc区相比提高其诱导的效应功能的水平。这类修饰可以针对Fc区的糖基化和/或三级结构水平和/或二级结构水平和/或氨基酸水平。
本领域技术人员应理解，可以多种方法中的任一种来证实增强的效应功能，例如较高的效果水平、较久效果持续时间或较快的效果速率。
在一个实施例中，该Fc区包含一个或多个氨基酸修饰，提高了其诱导增强的效应功能的能力。在一个实施例中，该Fc区以较高的亲和力结合一种或多种FcγR(如FcγRIII)。在一个实施例中，该Fc区包含选自下组的位置处的至少一个氨基酸取代：230、233、234、235、239、240、243、264、266、272、274、275、276、278、302、318、324、325、326、328、330、332和335，根据Kabat的EU指数编码。在一个实施例中，该Fc区包含下述氨基酸取代S239D/I332E，根据Kabat的EU指数编码。与野生型Fc区相比，该Fc区对FcγRIIIa的亲和力具有约14倍的增加，且与野生型Fc区相比，该Fc区诱导ADCC的能力增加了约3.3倍。在一个实施例中，该Fc区包含下述氨基酸取代S239D/A330L/I332E，根据Kabat的EU指数编码。与野生型Fc区相比，该Fc区对FcγRIIIa的亲和力具有约138倍的增加，且与野生型Fc区相比，该Fc区诱导ADCC的能力增加了约323倍。
提高Fc区诱导效应功能的能力的其他氨基酸取代是本领域已知的和/或描述于例如US6737056或US7317091。
在一个实施例中，改变了Fc区的糖基化以提高其诱导增强的效应功能的能力。在这方面，哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分支、双分枝(biantennary)寡糖，其通常通过N-连接与Fc区的CH2结构域的Asn297相连。该寡糖可包含多种碳水化合物，例如甘露糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及与双分枝寡糖结构的“茎”中的GlcNAc相连的岩藻糖。在一些实施例中，本发明所述Fc区包含缺少与Fc区(直接或间接)相连的岩藻糖的碳水化合物结构，即该 Fc区是“非岩藻糖基化的”。这类变体可具有改进的诱导ADCC的能力。生产非岩藻糖基化抗体的方法包括：在无法表达α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)的细胞系中表达抗体或其抗原结合片段(例如参见Yumane-Ohnuki等，Biotechnol.Bioengineer.87:614-622,2004)，在表达针对FUT8的小干扰RNA的细胞中表达抗体或其抗原结合片段(例如参见Mori等，Biotechnol.Bioengineer.,88:901-908,2004)，在无法表达鸟苷二磷酸(GDP)-甘露糖4,6-脱水酶(GMD)的细胞中表达抗体或其抗原结合片段(例如参见Kanda等，J.Biotechnol.,130:300-310,2007)。本发明还涉及使用具有减低的岩藻糖基化水平的蛋白，例如使用经修饰以表达β—(1,4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnT-III)的细胞系中生产的蛋白(例如参见Umāna等，Nat.Biotechnol.17:176-180,1999)。
其他方法包括使用固有地生产能够诱导增强的Fc介导的效应功能的抗体的细胞系(例如用于生产病毒疫苗的鸭胚胎来源的干细胞，WO2008/129058；禽细胞中的重组蛋白生产，WO 2008/142124)。
本发明的IL-11Rα结合蛋白还包括具有截开的寡糖的那些，例如其中与Fc区相连的双分枝寡糖被GlcNAc截开。这类蛋白可具有降低的岩藻糖基化和/或改进的ADCC功能。这类蛋白的示例描述于例如US6602684和US20050123546。
还考虑了在与Fc区相连的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的IL-11Rα结合蛋白。这类蛋白可具有改进的CDC功能。这类蛋白描述于例如WO1997/30087和WO1999/22764。
IL-11Rα结合蛋白还可包含能够诱导增强的CDC水平的Fc区。例如，IgG1和IgG3的杂交体生产具有增强的CDC活性的抗体(Natsume等，Cancer Res.68:3863-3872,2008)。
作为附加或者替代的情况，IL-11Rα结合蛋白可与结合免疫效应细胞的蛋白(如抗体可变区)融合或偶联，例如凭借结合CD3或CD16。
测定效应功能的方法是本领域已知的。在一个实施例中，使用51Cr释放试验、铕释放试验或35S释放试验来评估ADCC活性水平。在这些试验的每一种中，都将表达IL-11Rα的细胞与一种或多种所列举的化合物在一定条件下培养一段时间，所述条件和时间足以使该化合物被细胞摄取。在35S释放试验中，可将细胞与35S标记的甲硫氨酸和/或半胱氨酸培养足以使标记的氨基酸掺入新合成的蛋白中的一段时间。随后在存在或不存在IL-11Rα结合蛋白和存在免疫效应细胞(如PBMC和/ 或NK细胞)的情况下培养细胞。随后检测细胞培养基中51Cr、铕和/或35S的量，与不存在蛋白的情况相比，存在蛋白的情况下上述量的增加表示结合分子/试剂具有效应功能。公开用于评估蛋白诱导的ADCC水平的试验的示例性出版物包括Hellstrom等，Proc.Natl Acad.Sci.USA 83:7059-7063,1986和Bruggemann等，J.Exp.Med.166:1351-1361,1987。
用于评估蛋白诱导的ADCC水平的其他试验包括用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性试验(细胞科技公司(CellTechnology,Inc.)，美国加利福尼亚州)或CytoTox非放射性细胞毒性试验(普洛麦格公司(Promega)，美国威斯康星州)。
或者或此外，通过测定IL-11Rα结合蛋白对一种或多种FcγR的亲和力来评估其效应功能，例如US7317091中所述。
还可进行C1q结合试验以确认IL-11Rα结合蛋白能够结合C1q并可诱导CDC。为了评估补体激活，可进行CDC试验(参见例如Gazzano-Santoro等，J.Immunol.Methods 202:163,1996)。
其他修饰
本发明还涉及对包含Fc区或恒定区的IL-11Rα结合蛋白或抗体的其他修饰。
例如，该抗体包含提高蛋白半衰期的一个或多个氨基酸取代。例如，该抗体包含Fc区，该Fc区包含提高Fc区对新生Fc区(FcRn)的亲和力的一个或多个氨基酸取代。例如，该Fc区在较低pH(例如约pH 6.0)下对FcRN具有较高的亲和力以促进内体中Fc/FcRn结合。在一个实施例中，与约pH 7.4下的亲和力相比，该Fc区在约pH 6.0下对FcRn具有提高的亲和力，其促进细胞循环后Fc再释放至血液中。这些氨基酸取代可用于通过降低从血液中的清除来延长蛋白的半衰期。
示例性氨基酸取代包括T250Q和/或M428L或T252A，T254S和T266F或M252Y，S254T和T256E或H433K和N434F(根据EU编码系统)。其他或替代性氨基酸取代描述于例如US20070135620或US7083784。
示例性IL-11Rα结合蛋白
由发明人生产的示例性含有可变区的IL-11Rα结合蛋白描述于表1。
表1：示例性IL-11Rα结合蛋白的序列
抗体名称 V<sub>L</sub>氨基酸 V<sub>H</sub>氨基酸
SEQ ID NO SEQ ID NO
1 8E2 5 37
2 TS-303 6 37
3 TS-305 7 37
4 TS-306 8 37
5 TS-307 9 37
6 TS-310 10 37
7 TS-311 11 37
8 TS-312 12 37
9 TS-313 13 37
10 TS-322 14 37
11 TS-2 15 37
12 TS-4 16 37
13 TS-6 17 37
14 TS-7 18 37
15 TS-9 19 37
16 TS-13 20 37
17 TS-14 21 37
18 TS-17 22 37
19 TS-20 23 37
20 TS-21 24 37
21 TS-22 25 37
22 TS-29 26 37
23 TS-32 27 37
24 TS-49 28 37
25 TS-51 29 37
26 TS-55 30 37
27 TS-57 31 37
28 TS-58 32 37
29 TS-63 33 37
30 TS-64 34 37
31 TS-66 5 38
32 TS-69 5 39
33 TS-71 5 40
34 TS-76 5 41
35 TS-79 5 42
36 TS-82 5 43
37 TS-88 5 44
38 TS-89 5 45
39 TS-91 5 46
40 TS-92 5 47
41 TS-97 5 48
42 TS-101 5 49
43 TS-103 5 50
44 TS-104 5 51
45 TS-107 5 52
46 TS-108 5 53
47 TS-115 5 54
48 TS-129 5 55
49 TS-133 5 56
50 TS-134 5 57
51 TS-135 5 58
52 TS-136 5 59
53 TS-140 5 60
54 TS-143 5 61
55 TS-151 5 62
56 TS-156 5 63
57 TS-213 5 64
58 TS-214 5 65
59 TS-215 5 66
60 TS-218 5 67
61 TS-221 5 68
62 TS-222 5 69
63 TS-224 5 70
64 8E4 73 74
65 8D10 75 76
蛋白生产
在一个实施例中，本文任何实施例所述的IL-11Rα结合蛋白是通过在足以生产蛋白的条件下培养杂交瘤来生产的，例如本文所述和/或本领域已知的那样。
重组表达
在另一个实施例中，本文任何实施例所述的IL-11Rα结合蛋白是重组的。
在重组蛋白的情况下，可将编码IL-11Rα结合蛋白的核酸克隆至表达构建体或载体，随后转染至宿主细胞，例如大肠杆菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞(如猿COS细胞、中华仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚胎肾(HEK)细胞或不另外生产该蛋白的骨髓瘤细胞)。用于表达蛋白的示例性细胞是CHO细胞、骨髓瘤细胞或HEK细胞。实现这些目的的分子克隆技术是本领域已知的且描述于例如Ausubel等(编)，Current Protocols inMolecular Biology(《新编分子生物学实验指南》)，格林出版联合公司和韦利科学公司(1988，包括直至今日的所有更新)或Sambrook等，Molecular Cloning:A LaboratoryManual(《分子克隆：实验室手册》)，冷泉港实验室出版社(1989)。多种克隆和体外扩增方法适用于重组核酸的构建。生产重组抗体的方法是本领域已知的，参见例如US4816567或US5530101。
分离后，插入核酸使其可操作地连接于表达构建体或表达载体中的启动子以用于进一步克隆(DNA的扩增)或用于在无细胞系统或细胞中表达。
本文所用术语“启动子”应取其最广泛的含义并包括基因组基因的转录调控序列，包括TATA盒或精确的转录起始所必需的起始元件，其具有或不具有改变核酸表达的其他调控元件(如上游激活序列、转录因子结合位点、增强子和沉默子)，例如在对发育和/或外部刺激的应答中，或以组织特异性方式。本文中，术语“启动子”还用于描述重组、合成或融合核酸或衍生物，其对所可操作地连接的核酸赋 予、激活或增强其表达。示例性启动子可含有一个或多个特定调控元件的其他拷贝以进一步增强表达和/或改变所述核酸的空间表达和/或时间表达。
本文所用术语“可操作地连接”指相对于核酸定位启动子，使得该核酸的表达受该启动子的控制。
可以获得用于在细胞中表达的许多载体。载体组分通常包括但不限于以下一种或多种：信号序列、编码蛋白(例如来源于本文提供的信息)的序列、增强子元件、启动子和转录终止序列。本领域技术人员应理解用于蛋白表达的合适序列。示例性信号序列包括原核分泌信号(如pelB、碱性磷酸酶、青霉素酶、Ipp或热稳定肠毒素II)、酵母分泌信号(如转化酶前导物、α因子前导物或酸性磷酸酶前导物)或哺乳动物分泌信号(如单纯疱疹gD信号)。
哺乳动物细胞中有活性的示例性启动子包括巨细胞病毒立即早期启动子(CMV-IE)、人延伸因子1-α启动子(EF1)、小核RNA启动子(U1a和U1b)、α-肌球蛋白重链启动子、猿病毒40启动子(SV40)、劳氏肉瘤病毒启动子(RSV)、腺病毒主要晚期启动子、β-肌动蛋白启动子；包含CMV增强子/β-肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子或其活性片段的杂交体调控元件。有用的哺乳动物宿主细胞系的示例是通过SV40转化的猴肾CV1系(COS-7，ATCC CRL1651)；人胚胎肾系(293或亚克隆的293细胞，用于在悬浮培养物中生长)；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；中华仓鼠卵巢细胞(CHO)。
适用于酵母细胞(例如选自下组的酵母细胞：毕赤酵母(Pichia pastoris)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和粟酒裂殖酵母(S.pombe))中表达的典型启动子包括但不限于：ADH1启动子、GAL1启动子、GAL4启动子、CUP1启动子、PHO5启动子、nmt启动子、RPR1启动子或TEF1启动子。
将分离的核酸或包含分离的核酸的表达构建体导入细胞用于表达的方法是本领域技术人员已知的。用于给定细胞的技术依赖于已知的成功技术。将重组DNA导入细胞的方法包括微注射、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂质体介导的转染(如通过使用脂质转染胺试剂(美国马里兰州的吉布科公司(Gibco))和/或细胞转染试剂(美国马里兰州的吉布科公司))、PEG介导的DNA摄取、电穿孔和微粒轰击(例如通过使用DNA包覆的钨或金颗粒(美国威斯康星州的安哥路斯特公司(Agracetus Inc.)))等。
用于生产该蛋白的宿主细胞可在多种培养基中培养，这取决于使用的细胞类型。市售可得的培养基(如Ham's F10(西格玛公司)、极限必需培养基(MEM)(西格玛公司)、RPMl-1640(西格玛公司)和达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)(西格玛公司))适用于培养哺乳动物细胞。用于培养本文所讨论的其他细胞类型的培养基是本领域已知的。
蛋白的分离
分离蛋白的方法是本领域已知的和/或描述于本文中。
当IL-11Rα结合蛋白被分泌到培养基中时，通常先采用市售蛋白质浓缩滤器(例如阿米康(Amicon)或MP(Millipore Pellicon)超滤装置)浓缩这类表达系统的上清液。任何上述步骤中都可包含蛋白酶抑制剂(如PMSF)以抑制蛋白酶解，还可包含抗生素以防止外来污染物的生长。或者或此外，可对上清液进行过滤和/或与表达蛋白的细胞分离，例如使用连续离心。
可使用例如离子交换、羟基磷灰石色谱、疏水相互作用色谱、凝胶电泳、透析、亲和色谱(例如蛋白A亲和色谱或蛋白G色谱)或前述方法的任意组合来纯化由细胞制备的IL-11Rα结合蛋白。这些方法是本领域已知的和/或描述于WO99/57134或Ed Harlow和DavidLane(编)Antibodies:A Laboratory Manual(《抗体：实验室手册》)，冷泉港实验室(1988)。
本领域技术人员还应理解，可对蛋白进行修饰以包含标签来促进纯化或检测，例如聚组氨酸标签(如六组氨酸标签)或流感病毒血凝素(HA)标签或猴病毒5(V5)标签或FLAG标签或谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签。随后使用本领域已知方法纯化所得蛋白，例如亲和纯化。例如，通过以下方法纯化包含六his标签的蛋白：使包含蛋白的样品接触固定在固体或半固体支持物上的特异性结合六His标签的镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)，清洗样品以除去未结合的蛋白，随后洗脱结合的蛋白。或者或此外，在亲和纯化方法中使用结合标签的抗体或配体。
偶联物
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白与化合物偶联。例如，该化合物选自放射性同位素、可检测标签、治疗性化合物、胶体、毒素、核酸、肽、蛋白、提高对象中IL-11Rα结合蛋白半衰期的化合物，及其混合物。
其他化合物可直接或间接地与IL-11Rα结合蛋白结合(例如间接结合的情况下可以包含接头)。化合物的示例包括放射性同位素(如碘-131、钇-90或铟-111)、 可检测标签(如荧光团或荧光纳米晶体或量子点)、治疗性化合物(如化疗剂或抗炎剂)、胶体(如金)、毒素(如蓖麻毒蛋白或破伤风类毒素)、核酸、肽(如结合血清白蛋白的肽)、蛋白(如包含抗体的抗原结合结构域的蛋白或血清白蛋白)、提高对象中IL-11Rα结合蛋白半衰期的化合物(如聚乙二醇或具有该活性的其他水溶性聚合物)，及其混合物。可与本发明的IL-11Rα结合蛋白偶联的示例性化合物和用于这类偶联的方法是本领域已知的且描述于例如WO2010/059821。
该IL-11Rα结合蛋白可与纳米颗粒偶联(例如综述于Kogan等，Nanomedicine(Lond).2:287-306,2007)。该纳米颗粒可以是金属纳米颗粒。
该IL-11Rα结合蛋白可包含在抗体靶向的细菌微细胞中(例如描述于PCT/IB2005/000204)。
可与本发明的IL-11Rα结合蛋白偶联的一些示例性化合物列于表2。
表2.用于偶联的化合物。
IL-11Rα结合蛋白的试验活性
与IL-11Rα及其突变体的结合
从本发明中，本领域技术人员应理解，本发明的一些IL-11Rα结合蛋白结合hIL-11Rα的胞外区(如本文所述区域)并结合hIL-11Rα的胞外区的特定突变形式(例如不具有或具有某些点突变的SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:85)和/或结合人和短尾猴IL-11Rα。评估与蛋白结合的方法是本领域已知的，例如Scopes所述(刊于：Protein purification:principles and practice(《蛋白纯化：原理和实践》)，第三版，施普林格弗莱格公司(Springer Verlag)，1994)。这类方法通常涉及固定IL-11Rα结合蛋白并使其接触标记的抗原。清洗以除去非特异性结合的蛋白后，检测标签的量和作为结果的结合的抗原。当然，可以标记该IL-11Rα结合蛋白并固定抗原。还可使用平移型试验(Panning-type assay)。或者或此外，可以使用表面等离振子共振试验。
上文所述试验还可用于检测蛋白与hIL-11Rα或其胞外区(例如包含在SEQ ID NO:3内)或与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:85多肽或其突变形式的结合。
在一个实施例中，本发明的IL-11Rα结合蛋白与SEQ ID NO:95多肽的结合水平比与SEQ ID NO:85多肽的结合水平低至少约1.5倍或2倍或5倍或10倍或50倍或100倍或150倍或160倍或200倍。
在一个实施例中，本发明的蛋白与SEQ ID NO:96多肽的结合水平比与SEQ ID NO:85多肽的结合水平低至少约1.5倍或2倍或5倍或10倍或50倍或100倍或150倍或160倍或200倍。
在一个实施例中，本发明的蛋白与SEQ ID NO:86多肽的结合水平比与SEQ ID NO:85多肽的结合水平低至少约1.5倍或2倍或5倍或10倍或50倍或100倍或150倍或160倍或200倍。
在一个实施例中，本发明的蛋白与SEQ ID NO:89多肽的结合水平比与SEQ ID NO:85多肽的结合水平低至少约1.5倍或2倍或5倍或10倍或50倍或100倍或150倍或160倍或200倍。
使用生物传感器便利地测定结合水平。
本发明涉及前述特性的任意组合。在一个实施例中，本文所述蛋白具有前述五段中所列举的全部结合特性。
表位作图
在另一个实施例中，对本文所述蛋白结合的表位进行作图。表位作图方法对本领域技术人员而言显而易见。例如，生产了一系列重叠的肽，其跨包含感兴趣的表位的IL-11Rα序列或其区域，例如包含10-15个氨基酸的肽。随后使该IL-11Rα结合蛋白接触各肽并测定其结合的肽。这允许测定包含蛋白所结合表位的肽。如果蛋白结合多个非连续肽，该蛋白可结合构象表位。
或者或此外，对IL-11Rα内的氨基酸残基进行突变，例如通过丙氨酸扫描诱变或进化上保守的氨基酸的取代，并测定降低或阻止IL-11Rα结合蛋白的结合的突变。任何降低或阻止IL-11Rα结合蛋白的结合的突变都可能处于IL-11Rα结合蛋白所结合的表位中。
在该方面，如本文所述，相对于SEQ ID NO:1的IL-11R的117位处的缬氨酸的突变降低或阻止了8E2和8D10的结合。8E2的亲和成熟变体的其他测试确认，相对于通过突变分析的其他残基，IL-11R的V117残基对于结合而言更重要。
另一种确定包含IL-11Rα结合蛋白所结合表位的区域的方法涉及使用IL-11Rα结合蛋白不结合的IL-11Rα形式(如mIL-11Rα)的相应区域取代hIL-11Rα的区域。如果该IL-11Rα结合蛋白不结合该突变形式的IL-11Rα，则形成蛋白表位一部分的残基可以处于被取代的区域内。
用于确定包含表位的区域的其他方法涉及使IL-11Rα或其区域与固定的本发明的IL-11Rα结合蛋白结合并使用蛋白酶消化所得复合物。随后分离并分析(例如使用质谱)维持与固定的IL-11Rα结合蛋白结合的肽以确定其序列。
其他方法涉及将IL-11Rα或其区域中的氢转换为氘核并使所得蛋白结合固定的本发明的IL-11Rα结合蛋白。随后将氘核转换回氢，分离、使用酶消耗并分析(例如使用质谱)该IL-11Rα或其区域以鉴定包含氘核的那些区域，这些氘核由于本文所述IL-11Rα结合蛋白的结合而被保护无法转换为氢。
任选地，测定针对IL-11Rα或其表位的固定的IL-11Rα结合蛋白的解离常数(Kd)、结合常数(Ka)和/或亲和常数(KD)。在一个实施例中，通过放射性标记或荧光标记的IL-11Rα结合试验测量IL-11Rα结合蛋白的“Kd”或“Ka”或“KD”。在“Kd”的情况下，该试验在未标记IL-11Rα的滴定系列(titration series)存在的情况下使用最低浓度的标记的IL-11Rα平衡IL-11Rα结合蛋白。清洗以除去未结合的IL-11Rα后，测定标签的量，其表示该蛋白的Kd。
根据另一个实施例，通过使用表面等离振子共振试验(例如使用BIAcore表面等离振子共振(新泽西州皮斯卡特维的BIAcore公司))来测定Kd、Ka或KD，其中使用固定的IL-11Rα或其区域或固定的IL-11Rα结合蛋白。
在一些实施例中，与抗体8E2相比，该IL-11Rα结合蛋白具有类似的KD或改进的KD(即KD值较低)，因为其可能竞争结合IL-11Rα。
测定竞争性结合
测定竞争性抑制抗体8E2和/或8D10和/或8E4的结合的蛋白的试验对本领域技术人员而言显而易见。本文中例示了一种这类方法。
例如，使抗体偶联至可检测标签，如荧光标签或放射性标签。随后混合标记的抗体与测试IL-11Rα结合蛋白并接触IL-11Rα或其区域(例如包含在包含SEQ ID NO:3多肽内)或表达IL-11Rα或其区域的细胞。随后测定标记的抗体的水平并将其与不存在IL-11Rα结合蛋白的情况下标记的抗体接触该IL-11Rα、区域或细胞时测定的水平比较。如果与不存在IL-11Rα结合蛋白的情况相比，存在测试IL-11Rα结合蛋白的情况下标记的抗体的水平降低，则该IL-11Rα结合蛋白被认为竞争性抑制抗体与IL-11Rα的结合。
任选地，将测试IL-11Rα结合蛋白与抗体的不同标签偶联。该替代性标记允许检测测试IL-11Rα结合蛋白与IL-11Rα或其区域或细胞的结合水平。
在另一个实施例中，允许IL-11Rα结合蛋白结合IL-11Rα或其区域(例如包含在包含SEQ ID NO:3多肽内)或表达IL-11Rα或其区域的细胞，随后使该IL-11Rα、区域或细胞接触抗体。与不存在IL-11Rα结合蛋白的情况相比，存在IL-11Rα结合蛋白的情况下结合的抗体的量的减少表示该抗体竞争性抑制抗体与IL-11Rα的结合。还可使用标记的IL-11Rα结合蛋白进行互补试验(reciprocal assay)并首先允许抗体结合IL-11Rα。在该情况下，与不存在抗体的情况相比，存在抗体 的情况下与IL-11Rα结合的标记的IL-11Rα结合蛋白的量降低表示该IL-11Rα结合蛋白竞争性抑制抗体与IL-11Rα的结合。
可使用SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:85和/或IL-11Rα的突变形式和/或8E2和/或8D10和/或8E4结合的胞外区来进行任意上述试验，例如如本文所述。
测定中和
在本发明的一些实施例中，蛋白能够中和IL-11信号转导。
对于评估蛋白中和配体通过受体的信号转导的能力，多种试验是本领域已知的。
在一个实施例中，该蛋白减少或阻止IL-11结合IL-11Rα。这些试验可以本文所述竞争性结合试验的形式进行，其中使用标记的IL-11和/或标记的IL-11Rα结合蛋白。
在其他实施例中，该IL-11Rα结合蛋白降低表达IL-11Rα和gp130的细胞(如BaF3细胞)(例如经修饰以表达全部两种蛋白的细胞)的增殖，所述细胞是在IL-11存在的情况下培养的。在IL-11存在的情况下(例如约0.3ng/mL至约5ng/mL(如0.3ng/mL或0.5ng/mL或5ng/mL(对于hIL-11)或0.5ng/mL或5ng/mL(对于cynoIL-11))或对于mIL-11约1ng/mL至约5ng/mL(如1ng/mL或3ng/mL或5ng/mL))和测试的IL-11Rα结合蛋白存在或不存在的情况下培养细胞(如约1x104个细胞)。评估细胞增殖的方法是本领域已知的且包括例如MTT还原和/或胸苷掺入。与不存在IL-11Rα结合蛋白的情况下所观察到的水平相比，降低增殖水平的IL-11Rα结合蛋白被认为中和IL-11R信号转导。通过测试IL-11Rα结合蛋白的多种浓度，确定了IC50，即发生最大细胞增殖抑制的50％时的浓度。IC50为10μg/ml或更低。在一个实施例中，该IC50为9μg/ml或更低。例如，该IC50为8μg/ml或更低。例如，该IC50为7μg/ml或更低。例如，该IC50为6μg/ml或更低。例如，该IC50为5μg/ml或更低。例如，该IC50为4μg/ml或更低。例如，该IC50为3μg/ml或更低。在一个实施例中，与各前述实施例相关，该IC50可以是10pg/ml或更高或者10ng/ml或更高。
可使用B9细胞或T10细胞进行前述段落中描述的类似试验(Dams-Kozlowska等，BMC Biotechnol,12:8,2012；以及Yokote等，J AOAC,83:1053-1057,2000)。在使用T10细胞的试验中，可通过比色检测四唑化合物4-[3-(4-碘苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-5-四唑]-1,3-苯二磺酸盐(WST-1)的减少来测量增殖。
在其他实施例中，评估了IL-11Rα结合蛋白抑制IL-11介导的红细胞生成的能力。例如，在存在或不存在IL-11Rα结合蛋白的情况下使Lin-CD34+细胞(如来自脐带血)接触IL-11。通过检测表达CD235a的细胞的数目(例如使用FACS)来测定红细胞生成的量。与不存在IL-11Rα结合蛋白的情况下表达CD235a的细胞的数目相比，减少表达CD235a的细胞的数目的IL-11Rα结合蛋白被认为中和IL-11R信号转导。
在其他实施例中，评估了IL-11Rα结合蛋白抑制IL-11介导的STAT3磷酸化的能力。例如，在IL-11存在且IL-11Rα结合蛋白存在或不存在的情况下培养表达IL-11Rα和gp130的细胞。随后使用特异性针对磷酸化的STAT3的抗体通过Western印迹或FASC评估STAT3磷酸化的水平。利用FACS的示例性试验描述于Dams-Kozlowska等，BMC Biotechnol,12:8,2012。
在另一个实施例中，评估了IL-11Rα结合蛋白抑制癌细胞(如胃癌细胞或急性髓细胞性白血病(AML)细胞)的IL-11介导的增殖的能力。在这些试验中，在IL-11存在且IL-11Rα结合蛋白存在或不存在的情况下培养癌细胞(如AGN或MKN45胃癌细胞)。在AML细胞的情况中，还在G-CSF存在的情况下培养细胞。随后使用标准技术测量细胞增殖，例如上文所述和/或通过评估AML细胞中L-CFU的形成。适用于本发明的示例性试验包括Zhang等，Int J BiolSci.,8:383-393,2012和Kimura等，Leukemia,13:1018-1027,1999。
本发明考虑了评估IL-11信号转导的中和的其他方法。
测定效应功能
如本文所述，本发明的一些IL-11Rα结合蛋白具有降低的效应功能或具有效应功能(或增强的效应功能)。评估ADCC活性的方法是本领域已知的。
在一个实施例中，使用51Cr释放试验、铕释放试验或35S释放试验来评估ADCC活性水平。在这些试验的每一种中，都将表达IL-11R的细胞与一种或多种所列举的化合物在一定条件下培养一段时间，所述条件和时间足以使该化合物被细胞摄取。在35S释放试验中，可将表达IL-11Rα的细胞与35S标记的甲硫氨酸和/或半胱氨酸培养足以使标记的氨基酸掺入新合成的蛋白中的一段时间。随后在存在或不存在IL-11Rα结合蛋白和存在免疫效应细胞(如外周血单核细胞(PBMC)和/或NK细胞)的情况下培养细胞。随后检测细胞培养基中51Cr、铕和/或35S的量，与不存在IL-11Rα结合蛋白的情况相比，存在IL-11Rα结合蛋白的情况下变化少或 没有变化表示与不存在IL-11Rα结合蛋白的情况相比该蛋白具有降低的效应功能和增加的量(或与存在包含IgG1Fc区的IL-11Rα结合蛋白的情况相比增加)(显示效应功能或增强的效应功能)。公开用于评估蛋白诱导的ADCC水平的试验的示例性出版物包括Hellstrom等，Proc.Natl Acad.Sci.USA 83:7059-7063,1986和Bruggemann等，J.Exp.Med.166:1351-1361,1987。
用于评估蛋白诱导的ADCC水平的其他试验包括用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性试验(细胞科技公司(CellTechnology,Inc.)，美国加利福尼亚州)或CytoTox非放射性细胞毒性试验(普洛麦格公司(Promega)，美国威斯康星州)。
还可进行C1q结合试验以确认IL-11Rα结合蛋白能够结合C1q并可诱导CDC。为了评估补体激活，可进行CDC试验(参见例如Gazzano-Santoro等，J.Immunol.Methods 202:163,1996)。
测定半衰期
本发明中包括的一些IL-11Rα结合蛋白具有改善的半衰期，例如经修饰从而与未修饰的IL-11Rα结合蛋白相比延长其半衰期。测定具有改善的半衰期的IL-11Rα结合蛋白的方法对本领域技术人员而言是显而易见的。例如，评估IL-11Rα结合蛋白结合新生Fc受体(FcRn)的能力。在这方面，FcRn结合亲和力的提高增加了IL-11Rα结合蛋白的血清半衰期(参见例如Kim等，Eur J Immunol.,24:2429,1994)。
还可通过药代动力学研究测量本发明的IL-11Rα结合蛋白的半衰期，例如根据Kim等，Eur J Immunol.,24:542,1994中所述方法。按照这种方法，将放射性标记的IL-11Rα结合蛋白静脉内注射到小鼠中，定期测定血浆浓度与时间，例如，注射后3分钟至72小时的关系。如此获得的清除曲线应该是双相的，即有α-相和β-相。为了测定该蛋白的体内半衰期，计算β-相中的清除速率，并与野生型或未修饰的蛋白作比较。
评估治疗功效
相对于通过IL-11Rα结合蛋白确定中和，在上文中描述了用于评估治疗功效的试验。
在另一个实施例中，使用体内试验评估蛋白治疗病症的功效。
例如，在关节炎的动物模型中测试IL-11Rα结合蛋白。示例性模型包括小鼠的SKG种系(Sakaguchi等，Nature,426:454-460)、大鼠II型胶原关节炎模型、小鼠II型胶原关节炎模型或若干物种中抗原诱导的关节炎模型(Bendele J Musculoskel Neuron Interact；1(4):377-385,2001)。在这些试验中，诱导了关节炎并评估了IL-11Rα结合蛋白减少关节炎的一种或多种症状(如关节炎症和/或滑液中炎症的标记物)的能力。减少关节炎症状的IL-11Rα结合蛋白被认为可用于治疗该病症或IL-11介导的病症(如IL-11介导的炎性病症)。
作为附加或者替代，可在COPD的模型中测试IL-11Rα结合蛋白，例如其中非人哺乳动物(如啮齿类动物，如小鼠)暴露于香烟烟雾的模型。暴露后，给予该哺乳动物IL-11Rα结合蛋白并使用标准技术预测或评估肺中嗜中性粒细胞的数目和/或肺炎水平。减少肺炎和/或嗜中性粒细胞数目的IL-11Rα结合蛋白被认为可用于治疗肺炎或COPD或IL-11介导的病症(如IL-11介导的炎性病症，如IL-11介导的炎性肺病症)。
作为附加或者替代，可在Th2-炎性病症(如哮喘或气道反应过度)中测试IL-11Rα结合蛋白。过敏性哮喘的示例性模型是小鼠OVA模型，例如Wang等，J.Immunol.165:2222,2000中所述。诱导炎症后，将IL-11Rα结合蛋白给予小鼠并评估哮喘的症状，如支气管肺泡灌洗液(BAL)中嗜酸性粒细胞数目、粘液分泌和/或杯状细胞增生。其他哮喘模型是本领域已知的且包括WO2002/098216中所述炎性哮喘的绵羊模型、过敏性哮喘的小鼠模型(如由宿主尘螨蛋白诱导(Fattouh等，Am J Respir Crit Care Med 172:314–321,2005))、其中IL-5和嗜伊红粒细胞趋化蛋白过表达的严重哮喘的小鼠模型，或者接受聚-l-赖氨酸的气管滴注的小鼠(其在以气溶胶形式给予时对乙酰甲胆碱超敏)(Homma等，Am J Physiol LungCell Mol Physiol 289:L413–L418,2005)。
或者或此外，可在癌症(如胃癌)的模型中测试IL-11Rα结合蛋白。例如，gp130的Y757F突变体的小鼠纯合子(gp130Y757F/Y757F)发生胃肿瘤(Jenkins等，Blood 109:2380-2388,2007)。使用IL-11Rα结合蛋白处理小鼠(如八周龄小鼠)并评估胃息肉的重量和/或数目。降低息肉尺寸和/或重量的IL-11Rα结合蛋白被认为可用于治疗癌症。可使用类似的试验来测试对直肠癌的效果，其中使用氧化偶氮甲烷(AOM)并随后使用葡聚糖硫酸钠(DSS)治疗gp130Y757F/Y757F小鼠(基本如 Greten等，Cell,118:285-296,2004中所述)以诱导直肠癌，随后使用IL-11Rα结合蛋白进行治疗。
此外或或者，可在癌症转移或癌症相关骨疾病的模型中测试IL-11Rα结合蛋白，例如Li等，Oncol.Lett.3:802-806,2012中所述。
待治疗病症
本发明涉及对象中由IL-11导致或恶化的任何病症的治疗或预防。
在一个实施例中，该病症是自身免疫或炎性病症。
在一个实施例中，该自身免疫病症是自身免疫关节病症，如炎性关节炎、类风湿性关节炎或特发性关节炎(如青少年特发性关节炎)。在一个实施例中，该病症是类风湿性关节炎。
在一个实施例中，该自身免疫病症是自身免疫肠道病症，如炎性肠道疾病，如溃疡性结肠炎或克罗恩病。
在一个实施例中，该自身免疫病症是自身免疫皮肤病症，如牛皮癣。
在一个实施例中，该炎性病症是炎性肺病症，如嗜中性粒细胞浸润相关的肺病。例如，该病症是哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、鼻炎或过敏。在一个实施例中，该病症是哮喘。
其他示例性炎性病症包括感染诱导的炎症(如结核分枝杆菌诱导的炎症)、胃炎症(如与胃癌相关)或炎性皮炎(如特应性皮炎)。
在一个实施例中，该病症是消耗病症，如恶病质或肌肉减少症。在一个实施例中，该消耗病症是恶病质。例如，该恶病质与选自下组的病症相关或由其导致：类风湿性关节炎、糖尿病、心脏病、慢性肾病、慢性肺炎、肠炎、炎性肠道病症、衰老、脓毒血症或AIDS。在一个实施例中，该恶病质与癌症相关或由癌症导致。
在一个实施例中，该病症是骨病症，例如由不充分的骨形成和/或过量的骨代谢导致。示例性骨病症包括骨质疏松(包括绝经后骨质疏松)、骨折、癌症(例如转移性骨癌、骨髓瘤或佩吉特骨病)导致的骨再吸收/损伤和癌症治疗(例如化疗、激素去除或激素抑制)导致的骨再吸收/损伤。
在一个实施例中，该病症是癌症。示例性癌症包括血液癌症、上皮来源的癌症、胃癌、胰腺癌、肝癌、成骨肉瘤、子宫内膜癌和卵巢癌。
在一个实施例中，该对象对用于治疗该病症的另一种化合物具有抗性、无法合适地对用于治疗该病症的另一种化合物产生应答，或不适用于使用用于治疗该病 症的另一种化合物进行治疗。例如，患有自身免疫或炎性病症的对象对以下物质具有抗性、无法合适地对以下物质产生应答，或不适用于使用以下物质进行治疗：皮质类固醇和/或免疫抑制剂和/或环磷酰胺和/或氨甲蝶呤和/或抗TNF抗体或可溶性TNF受体和/或抗CD20抗体和/或抗IL6抗体和/或抗CD22抗体。
组合物
在一些实施例中，可口服、胃肠道外、通过吸入喷雾、吸收、吸收、外敷、经直肠、经鼻、经颊、经阴道、心室内、经由植入的储器(在含有常规非毒性药学上可接受的运载体的制剂中)或通过任何其他便利的剂型给予本文所述IL-11Rα结合蛋白。本文所用术语“肠胃道外”包括皮下、静脉内、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输注技术。
将IL-11Rα结合蛋白制备为用于给予对象的合适形式(如药物组合物)的方法是本领域已知的且包括例如Remington's Pharmaceutical Sciences(《雷明顿药物科学》)(第18版，马克出版公司(Mack Publishing Company)，宾夕法尼亚州伊斯顿，1990)和U.S.Pharmacopeia:National Formulary(《美国药典：国家药品集》)(马克出版公司，宾夕法尼亚州伊斯顿，1984)中描述的方法。
本发明的药物组合物特别适用于胃肠道外给药，如静脉内给药或给药至关节或器官的空腔或体腔内。用于给药的组合物通常包含溶解在药学上可接受的运载体(如水性运载体)中的IL-11Rα结合蛋白的溶液。可以使用多种水性运载体，如缓冲的盐水等。该组合物可含有模拟生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如，乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。这些制剂中的本发明的IL-11Rα结合蛋白的浓度可广泛变化，主要根据液体体积、粘度、体重等因素，按照所选的特定给药方式和患者需要进行选择。示例性运载体包括水、盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和5％人血清白蛋白。还可以使用非水性载剂，如混合的油和油酸乙酯。脂质体也可用作运载体。该载剂可含有少量增强等张性和化学稳定性的添加剂，如缓冲剂和防腐剂。
配制后，以与剂型相容的方式并以治疗/预防有效的量给予本发明的IL-11Rα结合蛋白。可以多种剂型容易地给予各制剂，如上文所述可注射溶液的类型，但也包括其他药学上可接受的形式，例如片剂、丸剂、胶囊剂或其他用于口服给予的固体、栓剂、阴道栓、鼻溶液或喷雾、气雾剂、吸入剂、脂质体形式等。还可使用药 学“缓释”胶囊或组合物。缓释制剂通常设计为在延长的时间内给予恒定的药物水平并可用于递送本发明的IL-11Rα结合蛋白。
WO2002/080967描述了组合物和给予雾化组合物的方法，该组合物包含用于治疗例如哮喘的抗体，其也适用于给予本发明的IL-11Rα结合蛋白。
联合治疗
在一个实施方式中，本发明的IL-11Rα结合蛋白与用于治疗本文所述病症的另一种化合物联合给予，给予方式为合并或额外的治疗步骤或者治疗制剂的额外组分。
例如，其他化合物是抗炎化合物。或者或此外，其他化合物是免疫抑制剂。或者或此外，其他化合物是皮质类固醇，如氯泼尼松和/或泼尼松龙。或者或此外，其他化合物是氨甲蝶呤。或者或此外，其他化合物是环磷酰胺。或者或此外，其他化合物是麦考酚酸吗乙酯。或者或此外，其他化合物是抗CD20抗体(如利妥昔单抗或奥法木单抗)。或者或此外，其他化合物是抗CD22抗体(如依帕珠单抗)。或者或此外，其他化合物是抗TNF抗体(如英利昔单抗或阿达木单抗或戈利木单抗)或可溶性TNF受体(如依那西普)。或者或此外，其他化合物是CTLA-4拮抗剂(如阿巴西普、CTLA4-Ig)。或者或此外，其他化合物是抗IL-6抗体。或者或此外，其他化合物是BLys拮抗剂，如抗BLys抗体(如贝利木单抗)。
在另一个实施例中，其他化合物是化疗药物或用于治疗癌症的其他药物。
在另一个实施例中，在用于治疗癌症的放疗之前或之后给予本文所述蛋白。
给药的时机和剂量
本发明的IL-11Rα结合蛋白的合适剂量会根据特定的IL-11Rα结合蛋白、待治疗的病症和/或治疗的对象而变化。本领域技术人员能够确定合适的剂量，例如通过从未达到最佳的剂量开始并逐步改变剂量以确定最佳或有用的剂量。或者，为确定治疗/预防的适当剂量，使用了来自细胞培养试验或动物研究的数据，其中合适的剂量处于包含毒性很小或无毒性的活性化合物的ED50的循环浓度范围内。该剂量可根据所用的剂型和所用的给药途径在此范围内变化。最初可通过细胞培养试验预测治疗/预防有效的剂量。可以配制动物模型中的剂量，以实现包括IC50(即，化合物实现半数最大症状抑制的浓度或含量)的循环血浆浓度范围(经细胞培养测定)。可利用这些信息更精确地确定人用剂量。例如，可通过高效液相色谱测定血浆水平。
在一些实施例中，本发明的方法包括给予预防或治疗有效量的本文所述蛋白。
术语“治疗有效量”是下述量：其在给予需要治疗的对象时改善对象的状态和/或预后和/或将一种或多种本文所述临床病症的症状减少或抑制至低于经观察并接受为该病症的临床诊断或临床特性的水平。待给予对象的量取决于待治疗病症的特定性质、所治疗病症的类型和阶段、给药模式和对象的特性(如总体健康程度、其他疾病、年龄、性别、基因型和体重)。本领域技术人员能够根据这些和其他因素确定适当剂量。因此，该术语不应被认为将本发明限制为特定量，如蛋白的含量或重量，而是，本发明包括在对象中足以实现所示结果的任何量的IL-11Rα结合蛋白。
本文所用术语“预防有效量”应理解为指足以预防或抑制或延迟临床病症的一种或多种可检测症状发生的蛋白量。本领域技术人员应理解，这类量会根据例如给予的特定IL-11Rα结合蛋白和/或特定对象和/或病症的类型或严重程度或水平和/或发生病症的倾向(遗传或其他)而变化。因此，该术语不应被认为将本发明限制为特定量，如IL-11Rα结合蛋白的含量或重量，而是，本发明包括在对象中足以实现所示结果的任何量的IL-11Rα结合蛋白。
对于上文所述IL-11Rα结合蛋白的体内给药，正常剂量可在约10ng/kg个体体重/天至最高约100mg/kg个体体重/天或更高之间变化。对于若干天或更长的重复给药，取决于待治疗疾病或病症的严重程度，可维持治疗直至实现所需抑制症状。
在一些实施例中，以约1mg/kg至约30mg/kg(如约1mg/kg至约10mg/kg，或约1mg/kg或约2mg/kg或5mg/kg)的初始(或加载)剂量给予IL-11Rα结合蛋白。随后可以较低的约0.01mg/kg至约2mg/kg(如约0.05mg/kg至约1mg/kg，例如0.1mg/kg至约1mg/kg，如约0.1mg/kg或0.5mg/kg或1mg/kg)的维持剂量给予IL-11Rα结合蛋白。该维持剂量可每7-30天(例如每10-15天，例如每10或11或12或13或14或15天)给予一次。
在一些实施例中，以约0.01mg/kg至约50mg/kg(如约0.05mg/kg至约30mg/kg，如约0.1mg/kg至约20mg/kg，如约0.1mg/kg至约10mg/kg，如约0.1mg/kg至约2mg/kg)的剂量给予IL-11Rα结合蛋白。例如，以约0.01mg/kg至约5mg/kg(如约0.1mg/kg至约2mg/kg，如约0.2mg/kg或0.3mg/kg或0.5mg/kg或1mg/kg或1.5mg/kg)的剂量给予IL-11Rα结合蛋白(例如不具有较高的加载剂量或较低的 维持剂量)。在一些实施例中，给予多次剂量，例如每7-30天给予一次，如每10-22天给予一次，例如每10-15天给予一次，例如每10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21或22天给予一次。例如，每7天或每14天或每21天给予一次IL-11Rα结合蛋白。
在一些实施例中，在开始治疗时，给予哺乳动物IL-11Rα结合蛋白，持续不超过连续7天或连续6天或连续5天或连续4天。
在哺乳动物未对治疗产生适当应答的情况下，可在一周内给予多重剂量。或者或此外，可给予递增的剂量。
在另一个实施例中，对于经历不良反应的哺乳动物，可将初始(或加载)剂量分割为一周内的数天或连续数天。
根据本发明的方法给予IL-11Rα结合蛋白可以是连续或间断的，取决于例如接受者的生理状态(无论给药的目的是治疗性还是预防性)和本领域技术人员已知的其他因素。IL-11Rα结合蛋白的给药可以是在预定时间内基本连续的，或者可以是一系列间隔的剂量，例如在病症发展期间或之后。
IL-11Rα检测试验
可使用本发明的IL-11Rα结合蛋白(例如，本文所述与可检测标签偶联的IL-11Rα结合蛋白)来进行以下试验。使用本文所述试验检测IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞对于诊断或预测病症是有用的。
免疫试验是用于诊断对象中病症或检测样品中IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞的示例性试验形式。本发明涉及任何免疫试验形式，包括Western印迹、酶连免疫吸附试验(ELISA)、荧光连免疫吸附试验(FLISA)、竞争试验、放射性免疫试验、侧流免疫试验、流通免疫试验、电化学发光试验、基于比浊分析的试验、基于浊度分析的试验和基于荧光激活细胞分选(FACS)的试验。
一种形式的合适的免疫试验是例如ELISA或FLISA。
在一种形式中，这类试验涉及将本发明的IL-11Rα结合蛋白固定在固体基质上，例如聚苯乙烯或聚碳酸酯微孔或浸渍条、膜或者玻璃支持物(如玻璃载玻片)。随后将测试样品直接与IL-11Rα结合蛋白接触并结合或捕获样品中的IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞。清洗以除去样品中任何未结合的蛋白后，使在不同表位处与IL-11Rα结合或结合细胞上不同抗原的IL-11Rα结合蛋白与捕获的IL-11Rα或细胞直接接触。通常使用可检测的报告分子标记该检测蛋白，在ELISA中该报告分子 是例如酶(如辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)或β-半乳糖苷酶)，在FLISA中该报告分子是荧光团。或者，可以使用结合该检测蛋白的第二标记的蛋白。清洗以除去样品中任何未结合的蛋白后，通过添加底物检测该可检测的报告分子，在ELISA中该底物是例如过氧化氢、TMB或甲苯胺或5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(x-gal)。当然，固定的(捕获)蛋白和检测蛋白可以相反的方式使用。
随后使用标准曲线或通过与对照样品比较来确定样品中抗原的水平，该标准曲线已使用已知量的标记物生成。
可容易地修改上述试验以使用化学发光或电化学发光作为检测基础。
本领域技术人员应理解，基于免疫吸附试验的其他检测方法可用于进行本发明。例如，使用用于检测的放射性标签或用于检测的金标签(如胶体金)或脂质体(例如包封用于检测的NAD+)的基于上文的免疫吸附方法或者吖啶联免疫吸附试验。
在本发明的一些实施例中，使用以下方式测定IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞的水平：表面等离振子共振检测器(如BIAcoreTM，GE医疗集团(GE healthcare)，新泽西州皮斯卡特维)；流通装置(如US7205159中所述)；微米或纳米免疫试验装置(如US20030124619中所述)；测流装置(如US20040228761或US20040265926中所述)；荧光偏振免疫试验(FPIA，如US4593089或US4751190中所述)；或者免疫比浊试验(如US5571728或US6248597中所述)。
样品和对照样品
本领域技术人员应理解，本文描述的一些实施例需要一定程度的定量以确定IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞的水平。可通过在本发明的试验中纳入合适的对照样品来确定这类定量。
在一个实施例中，合适的对照样品是来源于健康对象或正常对象的样品。
在本文中，术语“健康对象”应理解为表示已知未患有IL-11Rα相关病症(如炎性病症)的个体。
术语“正常对象”应理解为表示与个体群体相比在样品中具有正常的IL-11Rα或表达IL-11Rα的细胞的水平的个体。
本发明还包括数据组形式的对照样品，其获自正常和/或健康对象或正常和/或健康对象的群体。
在一个实施例中，本发明的方法还包括测定对照样品中的IL-11Rα水平，例如使用上文所述方法。
在一个实施例中，大约或基本同时测定来自对象的样品和对照样品。
在一个实施例中，使用相同的本发明任意一个或多个实施例中所述方法测定来自对象的样品和对照样品，以允许对结果进行比较。
药盒
本发明还包括一种药盒，其包含以下一种或多种：
(i)本发明的IL-11Rα结合蛋白或编码该蛋白的表达构建体；
(ii)本发明的细胞；或
(iii)本发明的药物组合物。
在用于检测IL-11Rα的药盒中，该药盒还可包含检测方法，例如与本发明的IL-11Rα结合蛋白相连。
在用于治疗性/预防性应用的药盒中，该药盒还可包含药学上可接受的运载体。
任选地，本发明的药盒配备用于在任何实施例所述方法中使用的说明书。
本发明包括以下非限制性实施例。
非限制性实施例
材料与方法
噬菌体展示
从人Fab-噬菌粒抗体文库中分离人IL-11Rα特异性抗体。在野生型hIL-11或hIL-11突变蛋白存在的情况下洗脱与固定的hIL-11Rα-Fc(R&D系统公司(R&D Systems)目录号1977-MR)结合的噬菌体。将多个阳性克隆(通过噬菌粒ELISA确认)重建为人IgG4抗体。
IL-11反应性细胞增殖试验
使用hIL-11、cynoIL-11和mIL-11反应性BaF3细胞系来测试抗体阻断IL-11生物活性的能力。mIL-11反应性BaF3细胞系描述于WO2009/052588。
使用分别编码野生型人IL-11Rα和cynoIL-11Rα和分别编码人gp130和短尾猴gp130的构建体稳定地转染hIL-11和cynoIL-11反应性BaF3细胞系。通过在含有hIL-11或cynoIL-11的培养基中生长来选择细胞并通过限制稀释克隆得到克隆细胞系。在hIL-11或cynoIL-11存在的情况下培养时，分析多个稳定转染的克隆的剂 量反应性增殖(使用胸苷掺入试验)。选择一个hIL-11反应性克隆和一个cynoIL-11反应性克隆用于分析抗体。
以200μL/孔的总体积在次极大浓度的IL-11(hIL-11：0.3ng/mL或0.5ng/mL或5ng/mL；mIL-11：1ng/mL、3ng/mL或5ng/mL；cyno IL-11：0.5ng/mL或5ng/mL)和递增浓度的纯化的单克隆抗体或hIL-11突变蛋白(包含SEQ ID NO:110且具有N末端六HIS标签)存在的情况下将IL-11反应性BaF3细胞以约1x 104个细胞/孔接种于含有RPMI/10％FCS/Glutamax/PenStrep的96孔板中。最初在抗体或hIL-11突变蛋白存在的情况下将细胞培养30分钟，之后加入细胞因子。将细胞在37℃下培养约48-50小时并在培养的最后6个小时内使用3H-胸苷进行脉冲处理。将细胞收获至玻璃纤维滤板上并通过液体闪烁计数测定纳入DNA的放射性胸苷的水平。试验重复两次并随后使用各试验点的平均值进行作图。
抗体8E2的亲和成熟
使用以下方法使抗体8E2亲和成熟。将编码8E2的VH和VL的序列插入噬菌粒构建体中以编码种系化Fab并通过使用TAA终止密码子取代所有CDR(CDR-L2除外)中的18个密码子(6个氨基酸残基)来建立种系终止模板。使用基本如Sidhu等(Methods in Enzymology:238:333-336,2000)所述的方法构建文库。各终止模板被用作Kunkel诱变方法的模板(Kunkel等，Methods in Enzymology:154:367-382,1987)，其中诱变的寡核苷酸被设计为同时修复终止密码子并在设计的位点处导入突变。通过电穿孔将诱变反应导入大肠杆菌，并通过添加辅助噬菌体来起始噬菌体生产。30℃下生长过夜后，使用PEG/NaCl沉淀来收获噬菌体。
使用浓度递减的包含SEQ ID NO:3的生物素化多肽通过若干轮选择使文库循环。各轮中将目标浓度降低10倍。
抗体与结构域交换的IL-11R突变多肽的结合
包含hIL-11R和mIL-11R的区域的多种可溶形式的IL-11R被生产且包含SEQ IDNO:3和86-90所列序列，并使用Western印迹或Biacore分析测定抗体8E2、8D10和8E4与那些多肽的结合。
对于Biacore分析，以约10,000-12,000RU将抗人IgG固定在传感器表面上并以每循环0.2μg/ml至0.5μg/ml持续120秒来捕获各抗体。以不同浓度(从1μM向下至2.5nM)在捕获的抗体上注射IL-11受体，包括注射缓冲液空白。对结合监测 3-5分钟，对解离监测3-10分钟。通过将各相互作用的结合曲线拟合至1:1动力学模型来测定近似的亲和力。
抗体与可溶性hIL-11R的点突变体的结合
生成了可溶形式的IL-11R的多个点突变体，其中将来自mIL-11的氨基酸导入可溶形式的hIL-11(SEQ ID NO:85)(对于相对于SEQ ID NO:1的突变位置和各多肽的SEQ IDNO:，参见表5)并使用Biacore分析或FACS测定抗体与那些多肽或SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:85多肽的结合。
将抗人IgG Fc特异性抗体化学固定在CM5芯片上至约9000RU。在各流动槽中的2个点上以约0.3-1μg/ml对抗体捕获120秒。仅由抗人IgG组成的相邻点被用作参考。以40、10、5和2.5nM将IL-11受体注射在捕获的抗体和参考点上，重复两次。仅缓冲液的空白注射物也重复两次。注射持续3分钟并对解离另外监测5分钟。
对结合曲线扣除对照并删去缓冲液，之后拟合至1:1动力学模型。
癌细胞中IL-11信号转导的抗体介导的抑制
使用浓度递增的hIL-11对DLD-1(结直肠癌细胞系)和MKN-28(胃癌细胞系)细胞刺激15分钟或在浓度递增的8E2抗IL-11R或BM4同种型对照抗体存在的情况下孵育随后使用huIL-11(50ng/ml)进行刺激。将细胞固定并透化，随后使用PE偶联的抗磷酸STAT-3抗体染色。用流式细胞术分析细胞。双份重复进行试验。
实施例1：抗体分离和表征
基于抗体抑制hIL-11依赖性转染的BaF3细胞增殖的能力从Fab-噬菌粒抗体文库中分离三种抗体8E2、8D10和8E4。8E4还抑制小鼠IL-11依赖性BaF3细胞增殖。
8E2、8D10和8E4与使用hIL-11Rα或cynoIL-11Rα转染的细胞结合。8E4(而非8E2和8D10)与使用mIL-11Rα转染的细胞结合。
在这三种抗体中，通过差示扫描量热法评估，8E2具有最佳的热稳定性(其Tm为69.8-76.6℃，而8D10和8E4为63.2-71.4℃)。
选择8E2并进行亲和成熟。使用重链和轻链文库来生成具有突变的CDR的克隆(图1、2和3)。通过Biacore评估这些亲和变体中的62种与hIL-11R的结合并测定抑制hIL-11诱导的BaF3细胞增殖的相对能力。结果见表3。
表3：亲和成熟的抗体的表征
1抗体VH和VL的序列列于表1
2效力(g/ml)由BaF人IL-11R细胞增殖试验测定
3在pH 8.5和37℃下生成Biacore数据
NP表示无效力；N/D表示未测定
*观察到的一些异质性，难以测定精确的KD
选择了十种亲和成熟的抗体(TS-306、TS-2、TS-4、TS-7、TS-14、TS-51、TS-101、TS-108、TS-134和TS-136)，选择是基于与8E2、8D10和8E4相比改进的抑制hIL-11诱导的BaF3细胞增殖的能力，以及与8E2相比改进的与人IL-11R的亲和力。在选择这些亲和成熟的抗体时还考虑CDR序列。选择了一些克隆，其具有与相关共有序列接近或相同的CDR序列。
针对人、短尾猴和/或小鼠IL-11诱导的使用人、短尾猴或小鼠IL-11R转染 的BaF3细胞的增殖对这些抗体进行测试。还测定了与人和短尾猴IL-11R转染的细胞的结合并通过流式细胞术测量平均荧光强度。与亲本8E2克隆相比，各经选择的克隆更有力地抑制hIL-11和cyno-IL-11诱导的增殖并以更高的亲和力结合人和短尾猴IL-11R。
实施例2：hIL-11突变蛋白与抗体的拮抗作用的比较
使用上文所述试验比较若干抗体与hIL-11突变蛋白(包含SEQ ID NO:110且具有N末端六HIS标签)的拮抗活性，其中采用使用编码人IL-11R和人gp130的核酸和0.3ng/mL人IL-11转染的BaF3细胞系。结果示于表4。
表4：抗IL11R抗体与hIL-11突变蛋白之间IL-11信号转导拮抗作用的比较
表4所示数据显示，与hIL-11突变蛋白相比，测试的所有抗体都能更有效地抑制IL-11信号转导。由于突变蛋白与抗体之间分子量的巨大差异，IC50值以nM表示。
实施例3：表位作图
竞争性ELISA和Biacore数据显示，8E2、8E4和8D10彼此竞争结合hIL-11Rα并可识别hIL-11Rα的相同区域。
结构域交换(突变蛋白-人)Biacore数据显示，至少hIL-11Rα(SEQ ID NO:1)的氨基酸111-215(Fn 3型结构域1)是8E2和8D10结合所需的，并在该区域中使用小鼠序列替代人序列降低了8E4结合的亲和力(表5)。
表5.IL-11受体与抗体的结合
N/A：未评估
N/B：无结合或结合脱落
4E5是一种小鼠单克隆抗体，其与小鼠IL-11R具有强结合亲和力。
在表5所示的结果中，“强结合”指亲和力(KD)为约10nM或更低。“弱结合”指亲和力(KD)为约50nM或更高。
通过使用相应小鼠氨基酸残基替换天然人氨基酸，构建了在覆盖hIL-11Rα的Ig样结构域和纤连蛋白3型结构域1的区域中具有单个氨基酸取代的28个构建体。表达并纯化了截短的hIL-11R(SEQ ID NO:85)的五个突变体(P65S、K66R、L101S、V117E、A178S)(相对于SEQ ID NO:1中的氨基酸位置进行编码)。相应的构建体被用于转染细胞，其随后使用8E2、8E4和8D10进行染色。通过流式细胞术证明8E2和8E10结合在V117E转染的细胞中降低。
通过Biacore确认流式数据。所有Biacore传感图都与1:1结合模型拟合良好且衍生的KD值示于表6。
在该试验中使用的浓度下V117E突变体不结合8E2和8D10，且无法测定该相互作用的KD。该残基参与这两个抗体的结合相互作用。
K66R突变导致抗体8E2和8D10的KD降低为仅WT D1/2(SEQ ID NO:85)的两倍，表明该残基在某种程度上参与抗体结合。
突变体V117E和K66R也以显著低于WT D1/2(SEQ ID NO:85)的亲和力结合抗体8E4。这些残基可能参与抗体8E4与hIL-11Rα的结合相互作用。
ANOVA和Tukey多重比较测试显示，对于所有测试的抗体，V95E和K44R亲和力都与WT D1/2(SEQ ID NO:85)显著不同(p<0.05)。
该实施例中测试的所有IL-11R突变形式都可结合IL-11，表明该突变不诱导受体中显著的构型变化。
表6：可溶性人IL-11Rα(SEQ ID NO:85)的点突变体的抗体的亲和力
多种受体突变体的抗体的亲和力。对于WT D1/2(SEQ ID NO:85)而言N＝2，两个值都显示。所有其他值是平均值±SE。对于WT F/L(SEQ ID NO:3)而言N＝3，对于其他而言N＝4。粗体显示的数值具有与WT D1/2显著不同的KD值(p<0.05)。突变的位置相对于SEQ IDNO:1。*显示不可检测的结合。
实施例4：比较数据
通过ELISA证明非中和抗IL-11R抗体(4D12，来自圣克鲁兹公司的市售可得的抗体)结合人IL-11Rα。证明4D12结合使用人IL-11Rα转染的BaF3细胞并结合使用人或小鼠IL-11Rα转染的293细胞。
4D12不中和使用0.5ng/mL hIL-11或3ng/mL mIL-11R孵育的BaF3细胞中人或小鼠IL-11诱导的细胞增殖。
使用竞争性ELISA以证明4D12不与8D10或8E2竞争结合IL-11Rα。
实施例5：抗IL-11R抗体抑制癌细胞中的IL-11信号转导
如图4所示，IL-11诱导DLD-1结肠癌细胞和MKN-28胃癌细胞中的STAT-3磷酸化。图4还显示抗体8E2抑制这些细胞中的STAT-3磷酸化，而同种型对照抗体不抑制。

Claims (14)

1.一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，所述抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且所述蛋白抑制IL-11介导的表达IL-11Rα和gp130的BaF3细胞增殖，其IC50为3μg/ml或更低，并且其中所述抗原结合结构域包含：
(i)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(ii)包含SEQ ID NO:38所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(iii)包含SEQ ID NO:39所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(iv)包含SEQ ID NO:40所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(v)包含SEQ ID NO:41所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(vi)包含SEQ ID NO:42所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(vii)包含SEQ ID NO:43所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(viii)包含SEQ ID NO:44所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(ix)包含SEQ ID NO:45所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(x)包含SEQ ID NO:46所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xi)包含SEQ ID NO:47所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xii)包含SEQ ID NO:48所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xiii)包含SEQ ID NO:49所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xiv)包含SEQ ID NO:50所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xv)包含SEQ ID NO:51所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xvi)包含SEQ ID NO:52所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xvii)包含SEQ ID NO:53所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xviii)包含SEQ ID NO:54所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xix)包含SEQ ID NO:55所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xx)包含SEQ ID NO:56所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxi)包含SEQ ID NO:57所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxii)包含SEQ ID NO:58所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxiii)包含SEQ ID NO:59所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxiv)包含SEQ ID NO:60所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxv)包含SEQ ID NO:61所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxvi)包含SEQ ID NO:62所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxvii)包含SEQ ID NO:63所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxviii)包含SEQ ID NO:64所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxix)包含SEQ ID NO:65所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxx)包含SEQ ID NO:66所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxxi)包含SEQ ID NO:67所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxxii)包含SEQ ID NO:68所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxxiii)包含SEQ ID NO:69所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxxiv)包含SEQ ID NO:70所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxxv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:6所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxxvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ IDNO:7所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxxvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:8所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxxviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:9所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xxxix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:10所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xl)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:11所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xli)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:12所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xlii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:13所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xliii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:14所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xliv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:15所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xlv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:16所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xlvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:17所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xlvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:18所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xlviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:19所列序列的CDR1、2和3的VL；
(xlix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:21所列序列的CDR1、2和3的VL；
(l)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:22所列序列的CDR1、2和3的VL；
(li)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:23所列序列的CDR1、2和3的VL；
(lii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:24所列序列的CDR1、2和3的VL；
(liii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:25所列序列的CDR1、2和3的VL；
(liv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:26所列序列的CDR1、2和3的VL；
(lv)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:27所列序列的CDR1、2和3的VL；
(lvi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:28所列序列的CDR1、2和3的VL；
(lvii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:29所列序列的CDR1、2和3的VL；
(lviii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:30所列序列的CDR1、2和3的VL；
(lix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:31所列序列的CDR1、2和3的VL；
(lx)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:32所列序列的CDR1、2和3的VL；
(lxi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:33所列序列的CDR1、2和3的VL；或者
(lxii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:34所列序列的CDR1、2和3的VL，
其中根据Kabat的编码系统，VH的CDR1、2和3分别位于氨基酸31至35，50至66，和99至107，
其中根据Kabat的编码系统，VL的CDR1、2和3分别位于氨基酸24至34，50至56，和89至97。
2.如权利要求1所述的IL-11Rα结合蛋白，其中所述抗原结合结构域包含：
(i)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(ii)由SEQ ID NO:38所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(iii)由SEQ ID NO:39所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(iv)由SEQ ID NO:40所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(v)由SEQ ID NO:41所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(vi)由SEQ ID NO:42所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(vii)由SEQ ID NO:43所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(viii)由SEQ ID NO:44所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(ix)由SEQ ID NO:45所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(x)由SEQ ID NO:46所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xi)由SEQ ID NO:47所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xii)由SEQ ID NO:48所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xiii)由SEQ ID NO:49所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xiv)由SEQ ID NO:50所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xv)由SEQ ID NO:51所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xvi)由SEQ ID NO:52所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xvii)由SEQ ID NO:53所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xviii)由SEQ ID NO:54所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xix)由SEQ ID NO:55所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xx)由SEQ ID NO:56所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxi)由SEQ ID NO:57所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxii)由SEQ ID NO:58所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxiii)由SEQ ID NO:59所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxiv)由SEQ ID NO:60所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxv)由SEQ ID NO:61所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxvi)由SEQ ID NO:62所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxvii)由SEQ ID NO:63所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxviii)由SEQ ID NO:64所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxix)由SEQ ID NO:65所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxx)由SEQ ID NO:66所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxxi)由SEQ ID NO:67所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxxii)由SEQ ID NO:68所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxxiii)由SEQ ID NO:69所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxxiv)由SEQ ID NO:70所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(xxxv)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:6所列序列组成的VL；
(xxxvi)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:7所列序列组成的VL；
(xxxvii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:8所列序列组成的VL；
(xxxviii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:9所列序列组成的VL；
(xxxix)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:10所列序列组成的VL；
(xl)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:11所列序列组成的VL；
(xli)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:12所列序列组成的VL；
(xlii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:13所列序列组成的VL；
(xliii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:14所列序列组成的VL；
(xliv)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:15所列序列组成的VL；
(xlv)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:16所列序列组成的VL；
(xlvi)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:17所列序列组成的VL；
(xlvii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:18所列序列组成的VL；
(xlviii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:19所列序列组成的VL；
(xlix)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:21所列序列组成的VL；
(l)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:22所列序列组成的VL；
(li)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:23所列序列组成的VL；
(lii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:24所列序列组成的VL；
(liii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:25所列序列组成的VL；
(liv)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:26所列序列组成的VL；
(lv)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:27所列序列组成的VL；
(lvi)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:28所列序列组成的VL；
(lvii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:29所列序列组成的VL；
(lviii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:30所列序列组成的VL；
(lix)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:31所列序列组成的VL；
(lx)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:32所列序列组成的VL；
(lxi)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:33所列序列组成的VL；或者
(lxii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:34所列序列组成的VL。
3.一种包含抗体的抗原结合结构域的IL-11Rα结合蛋白，所述抗原结合结构域结合或特异性结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导且所述蛋白抑制IL-11介导的表达IL-11Rα和gp130的BaF3细胞增殖，其IC50为3μg/ml或更低，并且其中所述抗原结合结构域包含：
(i)包含SEQ ID NO:49所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(ii)包含SEQ ID NO:53所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(iii)包含SEQ ID NO:57所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(iv)包含SEQ ID NO:58所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(v)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:8所列序列的CDR1、2和3的VL；
(vi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:15所列序列的CDR1、2和3的VL；
(vii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:16所列序列的CDR1、2和3的VL；
(viii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:18所列序列的CDR1、2和3的VL；或者
(ix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:29所列序列的CDR1、2和3的VL，
其中根据Kabat的编码系统，VH的CDR1、2和3分别位于氨基酸31至35，50至66，和99至107，
其中根据Kabat的编码系统，VL的CDR1、2和3分别位于氨基酸24至34，50至56，和89至97。
4.如权利要求3所述的IL-11Rα结合蛋白，其中所述抗原结合结构域包含：
(i)由SEQ ID NO:49所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(ii)由SEQ ID NO:53所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(iii)由SEQ ID NO:57所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(iv)由SEQ ID NO:58所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(v)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:8所列序列组成的VL；
(vi)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:15所列序列组成的VL；
(vii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:16所列序列组成的VL；
(viii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:18所列序列组成的VL；或者
(ix)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:29所列序列组成的VL。
5.如权利要求1-4中任一项所述的IL-11Rα结合蛋白，其包含至少一个重链可变区(VH)和一个轻链可变区(VL)，所述VH和VL结合形成包含抗原结合结构域的Fv，所述VH和所述VL同处单条多肽链中或者所述VL和VH分处分开的多肽链中。
6.如权利要求5所述的IL-11Rα结合蛋白，其中，如果所述VH和VL同处单条多肽链中，则所述蛋白是：
(i)单链Fv片段(scFv)；
(ii)二聚体scFv(di-scFv)；
(iii)与抗体的恒定区Fc或重链恒定结构域(CH)2和/或CH3相连的(i)或(ii)之一；或
(iv)与结合免疫效应细胞的蛋白相连的(i)或(ii)之一，或者
如果所述VH和VL分处分开的多肽链中，则所述蛋白是：
(v)Fab；
(vi)F(ab’)2；
(vii)Fv；
(viii)与抗体的恒定区Fc或重链恒定结构域(CH)2和/或CH3相连的(v)至(vii)之一；
(ix)与结合免疫效应细胞的蛋白相连的(v)至(vii)之一；或
(x)抗体。
7.一种结合IL-11Rα并中和IL-11信号转导的抗体，其中所述抗体抑制IL-11介导的表达IL-11Rα和gp130的BaF3细胞增殖，其IC50为3μg/ml或更低，所述抗体包含：
(i)包含SEQ ID NO:49所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(ii)包含SEQ ID NO:53所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(iii)包含SEQ ID NO:57所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(iv)包含SEQ ID NO:58所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:5所列序列的CDR1、2和3的VL；
(v)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:8所列序列的CDR1、2和3的VL；
(vi)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:15所列序列的CDR1、2和3的VL；
(vii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:16所列序列的CDR1、2和3的VL；
(viii)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:18所列序列的CDR1、2和3的VL；或者
(ix)包含SEQ ID NO:37所列序列的CDR1、2和3的VH，和包含SEQ ID NO:29所列序列的CDR1、2和3的VL，
其中根据Kabat的编码系统，VH的CDR1、2和3分别位于氨基酸31至35，50至66，和99至107，
其中根据Kabat的编码系统，VL的CDR1、2和3分别位于氨基酸24至34，50至56，和89至97。
8.如权利要求7所述的抗体，其中所述抗体包含：
(i)由SEQ ID NO:49所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(ii)由SEQ ID NO:53所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(iii)由SEQ ID NO:57所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(iv)由SEQ ID NO:58所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:5所列序列组成的VL；
(v)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:8所列序列组成的VL；
(vi)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:15所列序列组成的VL；
(vii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:16所列序列组成的VL；
(viii)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:18所列序列组成的VL；或者
(ix)由SEQ ID NO:37所列序列组成的VH和由SEQ ID NO:29所列序列组成的VL。
9.一种核酸，所述核酸编码权利要求1-4中任一项所述的IL-11Rα结合蛋白或权利要求7或8所述的抗体。
10.一种表达构建体，其包含权利要求9所述的核酸。
11.一种分离的或重组的细胞，其表达权利要求1-4中任一项所述的IL-11Rα结合蛋白或权利要求7或8所述的抗体。
12.一种组合物，其包含权利要求1-4中任一项所述的IL-11Rα结合蛋白或权利要求7或8所述的抗体和药学上可接受的运载体。
13.权利要求1-4中任一项所述的IL-11Rα结合蛋白或权利要求7或8所述的抗体在制备治疗IL-11介导的病症的药物中的应用。
14.如权利要求13所述的应用，所述IL-11介导的病症是自身免疫病症、炎性病症、消耗病症、骨病症或癌症。
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