JPH10511266A - ヒト・インターロイキン−１１受容体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ヒト・ＩＬ−１１受容体およびそのフラグメントをコードしているポリヌクレオチドを開示する。ＩＬ−１１受容体蛋白、それらの製造方法、ヒト・ＩＬ−１１とその受容体との結合に対する阻害剤、およびそれらの同定方法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒト・インターロイキン−１１受容体発明の分野 本発明は、ヒト・インターロイキン−１１受容体、そのフラグメントおよび組 み換えポリヌクレオチドおよびかかる蛋白の発現に有用な細胞に関する。発明の背景 インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）を包含するサイトカインとして知られ る種々の調節分子が同定されている。ＩＬ−１１の種々の蛋白形態および種々の 形態のＩＬ−１１活性をコードしているＤＮＡがBennettらのＵＳＰＮ５,２１５ ,８９５（１９９３年６月１日）；McCoyらのＵＳＰＮ５,２７０,１８１（１９９ ３年１２月１４日）；およびMcCoyらのＵＳＰＮ２,２９２,６４６（１９９４年 ３月８日）に記載されており、参照によりすべてを本明細書に記載されているも のと見なす。よって、用語「ＩＬ−１１」は、遺伝子組み換え法により生産され たかどうか、本来的それを生産する細胞にまたは他の因子による誘導によりそれ を産生する細胞から精製されたかどうか、あるいは化学合成されたかどうか；あ るいは上記方法の組み合わせにより合成されたかどうかにかかわらず、これらの 特許に記載された生物学的活性を有する蛋白を包含する。 ＩＬ−１１は、多能性造血前駆細胞分化の誘導（Musashi et al.(1991)Blood, 78,1448-1451）；巨核細胞および血小板形成の促進（Burstein et al.(1992)J.C ell.Physiol.,153,305-312）；急性フェーズ蛋白合成の刺激（Baumann et al.(1 991)J.Biol.Chem.,266,20424-20427）；脂肪細胞リポ蛋白リパーゼ活性の阻害（ Kawashima et al.(1991)FEBS Lett.,283,199-202）；および神経伝達物質表現型 に対する影響（Fann et al.(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91,43-47）を包含す るいくつかの生物学的活性に関与している多面発現性サイトカインである。 ＩＬ−１１を医薬調合物または処方に用いて免疫欠乏、詳細には造血前駆細胞 の欠乏、またはそれに関連した疾病を治療することができる。他の疾病の治療ま たはその細胞の免疫系の刺激においてもＩＬ−１１を用いることができる。ＩＬ −１１をガンおよび他の疾病の治療に使用することもできる。かかる病理学的状 態は、疾病、放射線への曝露または薬剤により生じる可能性があり、例えば、白 血球減少、細菌またはウイルス感染、貧血、骨髄移植後の免疫細胞または造血細 胞欠乏のごときＢ細胞またはＴ細胞欠乏を包含する。ＩＬ−１１を用いて、長期 かつ効果的な免疫性を作り出す種々のワクチンに対する免疫応答を有効ならしめ ることもできる。ＩＬ−１１を用いるガンおよび他の疾病の治療的処置は、現在 用いられている薬剤を用いる処置により引き起こされる望ましくない副作用を回 避することができる。 大部分のサイトカインと同様、ＩＬ−１１は、標的細胞上のＩＬ−１１受容体 （ＩＬ−１１Ｒ）と相互作用することによってある種の生物学的活性を示す。ヒ ト・受容体を同定し、配列決定して、ＩＬ−１１Ｒを種々の理由（治療薬の製造 、ＩＬ−１１の受容体への結合および受容体シグナリングに対する阻害剤のスク リーニングを包含）により製造できるようにすることが望まれるであろう。発明の概要 本発明によれば、ヒト・ＩＬ−１１受容体をコードしているポリヌクレオチド が開示される。ある具体例において、本発明は、 （ａ）配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９までのヌク レオチド配列； （ｂ）遺伝学的コードの縮重の結果として（ａ）に記載したヌクレオチド配列か ら変化しているヌクレオチド配列；および （ｃ）（ａ）に記載したヌクレオチド配列の対立遺伝子変種 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド を提供する。好ましくは、ヌクレオチド配列はヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学 的活性を有する蛋白をコードしている。ヌクレオチド配列が発現制御配列に作動 可能に連結されていてもよい。好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは配 列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド 配列またはそのフラグメント；配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオ チド１８２８までのヌクレオチド配列またはそのフラグメント；配列番号：１の ヌクレオチド１９０４からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列または そのフラグメント；配列番号：１のヌクレオチド７３４からヌクレオチド１９９ ９までのヌクレオチド配列またはそのフラグメント；配列番号：１のヌクレオチ ド１０６７からヌクレオチド１８２８までのヌクレオチド配列またはそのフラグ メント；あるいは配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１９９ ９までのヌクレオチド配列またはそのフラグメントを含んでなる。他の具体例に おいて、ポリヌクレオチドは、非常に厳密な条件下で配列番号：１のヌクレオチ ド配列にハイブリダイゼーションしうるヌクレオチド配列を含んでなる。 また本発明は、 （ａ）配列番号：２のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列； （ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列 （ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列 （ｅ）配列番号：２のアミノ酸１１２から４２２までのアミノ酸配列 （ｆ）配列番号：２のアミノ酸１１２から３６５までのアミノ酸配列；および （ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグ メント からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドまたは蛋白をコー ドしているヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチドを提供する。 該ポリヌクレオチドで形質転換された宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞も提 供される。 他の具体例において、本発明は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の製造方法を提供す る。該方法は、 （ａ）適当な培地中で本発明宿主細胞の培養を増殖させ；次いで （ｂ）培養からヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製する ことを特徴とする。これらの方法により製造された蛋白も提供される。 また本発明は、 （ａ）配列番号：２のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列； （ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列 （ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列 （ｅ）配列番号：２のアミノ酸１１２から４２２までのアミノ酸配列 （ｆ）配列番号：２のアミノ酸１１２から３６５までのアミノ酸配列；および （ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグ メント からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋 白を提供する。好ましくは、該蛋白は配列番号：２のアミノ酸；配列番号：２の アミノ酸２４から４２２までの配列；配列番号：２のアミノ酸２４から３６５ま での配列；または配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までの配列を含んで なる。本発明蛋白および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物も提供さ れる。 さらに本発明は、本発明蛋白と特異的に反応する抗体を含んでなる組成物を提 供する。 ヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合に対する阻害剤の同定方法も提 供される。これらの方法は、 （ａ）ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはそのフラグメントをＩＬ−１１またはその フラグメントと混合し、該混合により第１の結合混合物を得て； （ｂ）第１の結合混合物中の蛋白とＩＬ−１１またはそのフラグメントとの間の 結合量を測定し； （ｃ）化合物を蛋白およびＩＬ−１１またはそのフラグメントと混合して第２の 結合混合物を得て； （ｄ）第２の結合混合物中の結合量を測定し；次いで （ｅ）第１の結合混合物中の結合量と第２の結合混合物中の結合量とを比較する ことを特徴とし、第２の結合混合物の結合量の減少が起こった場合には、該化合 物はヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害しうるものである。さ らに第１および／または第２の結合混合物は、使用される請求項１３の蛋白また はＩＬ−１１または該方法で使用されるフラグメントに結合しうるｇｐ１３０ま たはそのフラグメントを含んでいてもよい。これらの方法により同定されるＩＬ −１１Ｒの阻害剤およびそれらを含有する医薬組成物も提供される。 哺乳動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合の阻害方 法も開示され、該方法は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白、ＩＬ−１１Ｒ阻害剤または ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白に対する抗体を含有する治療上有効量の組成物を投与す ることを特徴とする。これらの組成物を用いて哺乳動物対象における骨量の損失 を治療または予防する方法も提供される。図面の簡単な説明 図１は、ヒト・ＩＬ−１１受容体およびｇｐ１３０の構造をスキームで示した ものである。 図２は、可溶性形態の組み換えヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の生物学的活性を示す データである。好ましい具体例の詳細な説明 本発明者らは、ヒト・ＩＬ−１１受容体（ヒト・ＩＬ−１１Ｒ）をコードして いるポリヌクレオチドを初めて同定し、これを提供する。 配列番号：１は、ヒトＩＬ−１１ＲをコードしているｃＤＮＡのヌクレオチド 配列を示す。配列番号：２は該受容体のアミノ酸配列を示し、アミノ酸１〜２３ からなる推定シグナル配列を含む。成熟ヒト・ＩＬ−１１Ｒは配列番号：２のア ミノ酸２４〜４２２であると考えられる。 成熟受容体は少なくとも３つの明確なドメインを有している：それらは細胞外 ドメイン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸２４〜３６５を含んでなる）、 膜内外ドメイン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸３６６〜３９０を含んで なる）および細胞内ドメイン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸３９１〜 ４２２を含んでなる）である。細胞外ドメインはさらに免疫グロブリン様ドメイ ン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸２４〜１１１を含んでなる）およびタ イプ−Ｉ−サイトカインドメイン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸１１２ 〜３６５を含んでなる）に分けられる。 可溶性形態のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白も製造することができる。かかる可溶性 形態は、配列番号：２のアミノ酸１〜３６５および２４〜３６５を含んでなる蛋 白を包含するが、これらに限らない。可溶性形態のヒト・ＩＬ−１１Ｒは、好ま しくは室温において水溶液に溶解しうることによってさらに特徴づけられる。細 胞内ドメインまたはそのフラグメントのみを含んでなるヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白 も製造することができる。全長未満のヒト・ＩＬ−１１Ｒのいずれの形態も本発 明に含まれ、それらは本明細書において一括して「ヒト・ＩＬ−１１Ｒ」または 「ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白」という。全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（配列番号 ：１）をコードしているポリヌクレオチドの対応フラグメントを発現させること によって全長未満のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を製造することができる。これらの 対応ポリヌクレオチドフラグメントも本発明の一部である。上記の修飾されたポ リヌクレオチドを、標準的な分子生物学的方法（適当な所望欠失変異体の構築、 部位特異的突然変異法が含まれる）により、あるいは適当なオリゴヌクレオチド プライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応により作成することができ、 ＩＬ−６受容体の構造に対する類似性に基づくと、全長の受容体の細胞外領域 のタイプ−Ｉサイトカインドメインのみを含むＩＬ−１１Ｒ蛋白はＩＬ−１１に 結合し、受容体シグナリングを誘導しうるであろうと予想される。結果として、 配列番号：２のアミノ酸１１２から３６５までを含んでなるＩＬ−１１Ｒ蛋白、 配列番号：２のアミノ酸１１２から３９０までを含んでなるＩＬ−１１Ｒ蛋白、 および配列番号：２のアミノ酸１１２から４２２までを含んでなるＩＬ−１１Ｒ 蛋白が本発明により提供される。かかる蛋白をコードしているポリヌクレオチド （例えば、配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１８２８まで のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、配列番号：１のヌクレオチ ド１０６７からヌクレオチド１９０６までのヌクレオチド配列を含んでなるポリ ヌクレオチド、配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１９９９ までのヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド）も本発明により提供さ れる。 本発明の目的からすると、蛋白が１またはそれ以上の下記特徴を有する場合に は、蛋白は「ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性」を有する：（１）ＩＬ− １１またはそのフラグメント（好ましくは、その生物学的活性のあるフラグメン ト）への結合能；（２）ヒト・ＩＬ−１１ＲへのＩＬ−１１の結合により発動さ れるシグナリング経路に含まれる細胞質ゾル蛋白または分子に結合する能力；（ ３）ヒト・ＩＬ−１１ＲへのＩＬ−１１の結合の特徴的なシグナルを生じる能力 （ここに、問題となっている蛋白はＩＬ−１１に結合しうる部分を含むか、ある いはＩＬ−１１に結合しうる別の蛋白の結合した場合にかかるシグナルを生じる ）；（４）ｇｐ１３０またはそのフラグメントへの結合能（ＩＬ−１１の存在下 または不存在下いずれかにおいて）；（５）ｇｐ１３０のチロシンのホスホリレ ーションを誘導する能力；（６）ＪＡＫキナーゼのチロシンのホスホリレーショ ンを誘導する能力；または（７）ＤＮＡ結合蛋白のＳＴＡＴファミリーのチロシ ンのホスホリレーションを誘導する能力（Zhong et al.(1994)Science 264,95-9 8）。好ましくは、該蛋白が有する生物学的活性は、ＩＬ−１１またはそのフラ グメントへの結合能であり、より好ましくは約０.１ないし約１００ｎＭのＫ_D、 最も好ましくは約１ないし約１０ｎＭのＫ_Dを有する。 ヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその活性フラグメント（ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白） を免疫グロブリンのごとき担体分子に融合させてもよい。例えば、可溶性形態の ヒト・ＩＬ−１１Ｒを、「リンカー」配列を介して免疫グロブリンのＦｃ部分に 融合させてもよい。ＧＳＴ、Ｌｅｘ−ＡまたはＭＢＰとの融合蛋白のごとき他の 融合蛋白を用いてもよい。 また本発明は、配列番号：１に示すヌクレオチド配列の対立遺伝子変種、すな わち、配列番号：１の単離ポリヌクレオチドの自然に発生する別形態を含み、対 立遺伝子変種もまた、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白、好ましくはヒト・ＩＬ−１１Ｒ の生物学的活性を有する蛋白をコードしている。非常に厳密な条件下（例えば、 ０.１ｘＳＳＣ、６５℃）において配列番号：１に示すヌクレオチド配列にハイ ブリダイゼーションする単離ポリヌクレオチドも本発明に含まれる。ヒト・ＩＬ −１１Ｒ蛋白をコードしているが、遺伝学的コードの縮重のため配列番号：１に 示すヌクレオチド配列とは異なる単離ポリヌクレオチドも本発明に含まれる。点 突然変異または誘導された修飾により生じる、配列番号：１に示すヌクレオチド 配列の変種も本発明に含まれる。 本発明の単離ポリヌクレオチドを、Kaufman et al.,Nucleic Acids Res.19,44 85-4490(1991)に開示されたｐＭＴ２またはｐＥＤ発現ベクターのごとき発現制 御配列に作動可能に連結してヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を組み換え法により製造し てもよい。多くの適当な発現調節配列が当該分野において知られている。組み換 え蛋白の発現方法も知られており、R.Kaufman,Methods in Enzymology 185,537- 566(1990)において説明されている。本明細書の「作動可能に連結」は、本発明 単離ポリヌクレオチドと発現制御配列との間の共有結合を形成するために酵素的 または化学的に連結されて、そのようにして、連結されたポリヌクレオチド／発 現制御配列で形質転換（トランスフェクション）された宿主細胞によりヒト・Ｉ Ｌ−１１Ｒ蛋白が発現されることを意味する。 多くのタイプの細胞は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の発現に適する宿主細胞とし て活動しうる。機能的なヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を発現しうるいずれの細胞タイ プを用いてもよい。適当な哺乳動物宿主細胞は、例えば、サル・ＣＯＳ細胞、チ ャイニーズハムスター・卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト・腎臓２９３細胞、ヒト・上 皮Ａ４３１細胞、ヒト・Ｃｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の 形質転換された霊長類細胞系、正常２倍体細胞、霊長類組織、霊長類外植物のin vitro培養により得られた細胞株、ＨｅＬａ細胞、マウス・Ｌ細胞、ＢＨＫ、Ｈ Ｌ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫ、Ｒａｔ２、ＢａＦ３、３２Ｄ、ＦＤＣＰ−１、Ｐ Ｃ１２、Ｍ１ｘまたはＣ２Ｃ１２細胞を包含する。 本発明の単離ポリヌクレオチドを１またはそれ以上の昆虫発現ベクター中の適 当な制御配列に作動可能に連結させ、次いで、昆虫発現系を用いることにより、 ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を製造することができる。バキュロウイルス／昆虫細胞 発現系のための材料および方法はキットの形で市販されており、例えば、Invitr ogen,San Diego,California,U.S.A.のMaxBac^Rキットがあり、かかる方法は当該 分野においてよく知られており、例えばSummers and Smith,Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No.1555(1987)（参照により本明細書に記載され ているものとみなす）に記載されている。可溶性形態のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白 を、適当な上記単離ポリヌクレオチドを用いて昆虫細胞において製造してもよい 。 別法として、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を、酵母のごとき下等真核細胞または細 菌のごとき原核細胞において製造してもよい。適当な酵母株は、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe、Kluyveromyces株、Candida、または 異種蛋白を発現できる酵母株を包含する。適当な細菌株は、Escerichia coli、B acillus subtilis、Salmonella typhimurium、または異種蛋白を発現できる細菌 株を包含する。 細菌における発現は、組み換え蛋白を含む封入体を生じる可能性がある。よっ て、活性のある、あるいはより活性のある物質を得るためには組み換え蛋白の再 生が必要であるかもしれない。細菌封入体からの正しく折り畳まれた異種蛋白の 取得方法は当該分野において知られている。一般的には、これらの方法は、封入 体からの蛋白の可溶化、次いで、カオトロピック剤を用いる蛋白の完全な変性を 包含する。システイン残基が蛋白の１次アミノ酸配列に存在する場合、ジスルフ ィド結合の正しい形成を可能にする環境（酸化還元系）において再生を行うこと がしばしば必要である。再生の一般的方法は、Kohno,Meth.Enzym.,185,187-195( 1990)に開示されている。ＥＰ ０４３３２２５および同時係属出願ＵＳＳＮ ０８／１６３,８７７には他の適当な方法が記載されている。 本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白をコードしている ポリヌクレオチド配列を含む体細胞または生殖細胞により特徴づけられるトラン スジェニック動物の生産物として、例えば、トランスジェニックなウシ、ヤギ、 ブタまたはヒツジの乳の成分として発現させてもよい。 所望蛋白の発現に必要な培養条件下で形質転換宿主細胞の培養を増殖させるこ とにより、本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を調製することができる。次いで、得 られた発現蛋白を培地または細胞抽出物から精製することができる。可溶性形態 の本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白をならし培地から精製することができる。発現 細胞から全膜フラクションを調製し、Triton X-100のごとき非イオン性界面活性 剤で膜を抽出することにより、膜結合形態の本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精 製することができる。 当業者に知られた方法を用いてヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製することができ る。例えば、市販蛋白濃縮フィルター、例えば、AmiconまたはMillipore Pellic on限界濾過ユニットを用いて本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を濃縮することがで きる。濃縮工程後、濃縮物をゲル濾過媒体のごとき精製マトリックスに適用する ことができる。別法として、例えば、懸垂ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）ま たはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリックまたは基材のごときア ニオン交換樹脂を用いることができる。マトリックスはアクリルアミド、アガロ ース、デキストラン、セルロースまたは蛋白精製において通常に使用される他の タイプのものであってよい。別法として、カチオン交換工程を用いてもよい。適 当なカチオン交換体は、スルホプロピルまたはカルボキシメチル基を含んでなる 種々の不溶性マトリックスを包含する。スルホプロピル基が好ましい（例えば、 S-Sepharose^Rカラム）。培養上清から得たヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の精製はさら に１またはそれ以上のカラム工程を要するかもしれず、それらはコンカナバリン Ａ−アガロース、ヘパリン−トヨパール^RまたはCiacrom blue 3GA Sepharose^Rの ようなアフィニティー樹脂によるカラム；あるいはフェニルエーテル、ブチルエ ーテルまたはプロピルエーテルのような樹脂を用いる疎水性相互作用クロマトグ ラフィー；あるいは免疫アフィニティークロマトグラフィーである。最後に、疎 水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体、例えば、懸垂メチルまたは他の脂肪族基を有するシリ カゲルを用いる１またはそれ以上の逆相高品質液体クロマトグラフィー（ＰＲ− ＨＰＬＣ）工程を用いてさらにヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製することができる 。ＩＬ−１１またはそのフラグメントを含むアフィニティーカラム、あるいはＩ Ｌ−１１Ｒ蛋白に対する抗体を含むアフィニティーカラムを既 知方法による精製に使用することもできる。上記精製工程のいくつかまたはすべ てを種々組み合わせて、あるいは他の既知方法と組み合わせて用いて実質的に精 製された単離組み換え蛋白を得ることができる。好ましくは、単離ＩＬ−１１Ｒ 蛋白を、実質的に他の哺乳動物蛋白を含まないように精製する。 本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を用いて、ヒト・ＩＬ−１１Ｒに結合しうるか あるいはヒト・ＩＬ−１１Ｒ（細胞外または細胞内ドメインのいずれか）へのＩ Ｌ−１１の結合を妨害して正常な結合およびサイトカイン作用の阻害剤として作 用しうる剤（ＩＬ−１１Ｒ阻害剤）のスクリーニングを行ってもよい。固定化さ れた、あるいは固定化されていない所望結合蛋白を用いる結合アッセイは当該分 野でよく知られており、該アッセイを本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を用いるこ の目的のために使用することができる。精製細胞に基づく、あるいは蛋白に基づ く（無細胞）スクリーニングアッセイを用いてかかる剤を同定することができる 。例えば、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製形態で担体上に固定化し、阻害剤であ りうる剤の存在下または不存在下で精製ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白への結合を測定 することができる。別法として、適当な結合アッセイは可溶性形態の本発明ヒト ・ＩＬ−１１Ｒを用いるものであってもよい。 かかるスクリーニングアッセイにおいて、ＩＬ−１１またはそのフラグメント とヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白とを混合することにより第１の結合混合物を得て、第 １の結合混合物中の結合量（Ｂ_o）を測定する。ＩＬ−１１またはそのフラグメ ント、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白、およびスクリーニングすべき化合物または剤を 混合することにより第２の結合混合物を得て、第２の結合混合物中の結合量（Ｂ ）を測定する。例えば、Ｂ／Ｂ_o比の計算を行うことにより、第１および第２の 結合混合物の結合量を比較する。第１の結合混合物と比較して第２の結合混合物 中の結合の減少が観察される場合に、化合物または剤は結合を阻害しうると考え られる。ｇｐ１３０を結合混合物の一方または両方に添加してもよい。結合混合 物の処方および最適化は当業者のレベルの範囲内であり、かかる結合混合物は、 結合を促進または最適化するのに必要なバッファーおよび塩を含んでいてもよく 、さらに対照アッセイを本発明スクリーニングアッセイに含ませてもよい。 ＩＬ−１１またはそのフラグメントへのヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の結合活性を ある程度、好ましくは少なくとも約１０％、より好ましくは約５０％以上減少さ せることが見いだされる化合物をこのようにして同定し、次いで、他の結合アッ セイおよびin vivoアッセイにおいて２次スクリーニングすることができる。こ れらの手段により、ＩＬ−１１Ｒ結合に対する阻害活性を有する化合物であって 治療剤として適当でありうる化合物を同定することができる。 ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１１の発現または存在を検出、あるいはＩＬ−１１また はＩＬ−１１を発現する細胞を検出するための診断薬としてヒト・ＩＬ−１１Ｒ 蛋白、およびそれらをコードしているポリヌクレオチドを用いてもよい。これら のタイプの材料を用いる診断アッセイのための標準的手順において、蛋白または ポリヌクレオチドをかかる目的に用いてもい。適当な方法は当業者によく知られ ている。 ヒト・ＩＬ−１１Ｒは、ＩＬ−１１の知られた生物学的活性のメディエイタと して作用する。結果として、単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白およびＩＬ−１１Ｒ阻 害剤は、ＩＬ−１１が関与している種々の医学的症状、あるいはＩＬ−１１の活 性（またはその欠乏）により生じる種々の医学的症状（一括して「ＩＬ−１１関 連症状」という）の治療または転調において有用でありうる。ＩＬ−１１関連症 状は、免疫欠乏、詳細には造血前駆細胞の欠乏、またはそれに関連した疾病、ガ ンおよび他の疾病を包含するが、これらに限らない。かかる病理学的状態は、疾 病、放射線への曝露または薬剤により生じる可能性があり、例えば、白血球減少 、細菌もしくはウイルス感染、貧血、骨髄移植後の免疫細胞もしくは造血細胞欠 乏のごときＢ細胞もしくはＴ細胞欠乏を包含する。 ＩＬ−１１およびＩＬ−１１Ｒは、骨の成熟および修復において役割を果たし ている可能性があると考えられている（Girasole et al.(1994)J.Clin.Invest,9 3,1516-1524；Passeri et al.(1992)J.Bone Miner.Res.,7(S1),S110 Abst.；Pas seri et al.(1993)J.Bone Miner.Res.,8(S1),S162 Abst.）。結果として、ヒト ・ＩＬ−１１Ｒ蛋白およびＩＬ−１１Ｒ阻害剤は、骨の損失（骨粗鬆症、閉経後 の骨粗鬆症、老人性骨粗鬆症、突発性骨粗鬆症、パジェット病、多発性ミエロ ーマおよび性機能低下症状を包含）の治療において有用でありうる。 細胞から精製された、または組み換え法により製造されたヒト・ＩＬ−１１Ｒ 蛋白およびＩＬ−１１Ｒ阻害剤を、医薬上許容される担体と混合して医薬組成物 として用いてもよい。かかる組成物は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはリガンドおよ び担体のほかに、希釈剤、充填剤、塩類、バッファー、安定化剤、可溶化剤およ び当該分野で知られた他の物質を含有していてもよい。用語「医薬上許容される 」は、有効成分の生物学的活性の有効性を妨害しない無毒の物質を意味する。担 体の特性は投与経路に依存する。 本発明医薬組成物は、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ −３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ− １０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、Ｇ−ＣＳＦ、幹細胞因子およびエ リトロポエチンのごときサイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子を含 有してもよいよい。医薬組成物は、プラスミノゲンアクチベーターおよびファク ターＶＩＩＩのごとき血栓溶解または抗血栓因子を含有していてもよい。医薬組 成物はさらに他の抗炎症剤を含有していてもよい。かかるさらなる因子および／ または剤を医薬組成物に含ませて、単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１ １Ｒ阻害剤との相互作用を生じるようにしてもく、あるいは単離ヒト・ＩＬ−１ １ＲまたはＩＬ−１１Ｒ阻害剤により引き起こされる副作用を最小にするように してもよい。逆に、単離ヒト・ＩＬ−１１ＲまたはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を、特定 のサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解または抗血栓因子、ま たは抗炎症剤の処方に含ませて、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、 血栓溶解または抗血栓因子、または抗炎症剤の副作用を最小化してもよい。 本発明医薬組成物は、単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤 が他の医薬上許容される担体とともに脂質のごとき両親媒性剤と混合されている リポソームの形態であってもよく、脂質は水溶液中のミセル、不溶性単層、液状 結晶またはラメラ層のような凝集形態で存在している。かかるリポソーム処方の 調製は当業者のレベルの範囲内であり、例えば米国特許第４,２３５,８７１号； 米国特許第４,５０１,７２８号；米国特許第４,８３７,０２８号；および米国特 許第４,７３７,３２３号（参照によりこれらすべてを本明細書に記載されている ものと見なす）に開示されている。 本明細書の用語「治療上有効量」は、医薬組成物の各有効成分の合計量、ある いは患者に対する有意な有益性（例えば、かかる症状の徴候の改善、治癒、また は治癒速度の上昇）を示すに十分な方法を意味する。単独で投与される個々の有 効成分についてこの語を用いる場合には、この語は当該成分のみについていう。 組み合わせついてこの語を用いる場合には、この語は、組み合わせ投与、逐次投 与あるいは同時投与にかかわらず、治療効果を生じる有効成分の合計量について いう。 本発明治療方法または使用を実施する場合、単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白また はＩＬ−１１Ｒ阻害剤の治療上有効量を哺乳動物に投与する。単離ヒト・ＩＬ− １１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を、それのみ、あるいはサイトカイン、リ ンホカインまたは他の造血因子を用いる治療のごとき他の治療と組み合わせて、 本発明方法に従って投与することができる。１またはそれ以上のサイトカイン、 リンホカインまたは他の造血因子と共投与する場合、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白ま たはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓 溶解または抗血栓因子と同時投与、あるいは逐次投与することができる。逐次投 与する場合、担当医は、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解 または抗血栓因子と組み合わせるヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻 害剤の順序を決定するであろう。 本発明医薬組成物または本発明方法の実施に用いるヒト・ＩＬ−１１Ｒまたは ＩＬ−１１Ｒ阻害剤の投与を、経口摂取、吸入、あるいは皮内、皮膚、または静 脈注射のごとき種々の慣用的経路で行うことができる。患者への静脈投与が好ま しい。 治療上有効量のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を経口投与 する場合、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤は錠剤、カプセル 、粉末、溶液またはエリキシルの形態であろう。錠剤形態で投与する場合、本発 明医薬組成物はさらにゼラチンのごとき固体担体またはアジュバントを含有して い てもよい。錠剤、カプセル、および粉末は、約５ないし９５％のヒト・ＩＬ−１ １Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤、好ましくは約２５ないし９０％のヒト・Ｉ Ｌ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を含有する。液体形態で投与する場合 、水、石油、ピーナッツ油、鉱油、大豆油またはゴマ油のごとき動物または植物 起源の油、あるいは合成油のごとき液体担体を添加してもよい。医薬組成物の液 体形態はさらに生理学的セイライン溶液、デキストロースまたは他の糖類の溶液 、あるいはエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリ コールのごときグリコール類を含有していてもよい。液体形態で投与する場合、 医薬組成物は約０.５ないし９０重量％のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ− １１Ｒ阻害剤、好ましくは約１ないし５０％のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩ Ｌ−１１Ｒ阻害剤を含有する。 治療上有効量のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を静脈、皮 膚または皮下注射により投与する場合、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１ １Ｒ阻害剤はパイロジェン不含かつ非経口的に許容される水溶液の形態であろう 。ｐＨ、等張性、安定性等を考慮したかかる非経口的に許容される蛋白溶液の調 製は当該分野の技術の範囲内である。静脈、皮膚または皮下注射に好ましい医薬 組成物は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤のほかに、注射用 塩化ナトリウム、注射用リンゲル溶液、注射用デキストロース、注射用デキスト ロースおよび塩化ナトリウム、注射用ラクテートリンゲル溶液、または当業者に 知られた他の担体を含有すべきである。本発明医薬組成物は、安定化剤、保存料 、バッファー、抗酸化剤、または当業者に知られた他の添加物を含有していても よい。 本発明医薬組成物中のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤の量 は、治療すべき症状の性質および重さならびに患者がすでに受けている治療によ るであろう。最終的には、担当医が、個々の患者を治療するためのヒト・ＩＬ− １１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤の量を決定するであろう。まず、担当医は 低用量のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を投与し、患者の応 答を観察するであろう。患者に対する最適治療効果が得られるまで、より高用量 のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を投与してもよく、一般的 には、最適治療効果が得られた時点で用量をさらに増加させない。本発明方法の 実施に用いる種々の医薬組成物は体重１ｋｇにつき約０.１μｇないし約１００ ｍｇのヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を含有すべきであると 考えられる。 本発明医薬組成物を用いる静脈投与による治療期間は、治療すべき疾病の重さ および症状および個々の患者の潜在的特徴的応答により変化させられるであろう 。ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤の各投与期間は、連続的静 脈投与の場合１２ないし２４時間の範囲であろうと考えられる。最終的には、担 当医が、本発明を用いる静脈投与による適当な治療期間を決定するであろう。 本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を用いて動物を免疫して、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ 蛋白と特異的に反応し、ＩＬ−１１またはそのフラグメントの受容体への結合を 阻害しうるポリクローナルおよびモノクローナル抗体を得てもよい。ヒト・ＩＬ −１１Ｒ全体を免疫原として用いて、あるいは可溶性成熟ヒト・ＩＬ−１１Ｒの ごときヒト・ＩＬ−１１Ｒのフラグメントを用いることにより、かかる抗体を得 てもよい。ヒト・ＩＬ−１１Ｒのより小型のフラグメントを用いて動物を免疫し てもよい。さらにペプチド免疫原はカルボキシル末端においてシステイン残基を 含んでいてもよく、キーホール・リムペット・ヘモシアニン（keyhole limpet h emocyamin）（ＫＬＨ）と抱合したものである。チロシン残基を硫酸化チロシン 残基に置き換えることにより、さらなるペプチド免疫原を得てもよい。かかるペ プチドの合成方法は当該分野において知られており、例えば、R.P.Merrifield,J .Amer.Chem.Soc.85,2149-2154(1963)；J.L.Krstenansky,et al.,FEBS Lett.211, 10(1987)に記載されている。 ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白に結合する中和または非中和抗体（好ましくはモノク ローナル抗体）は、ある種の腫瘍および上記症状の治療のための有用な治療薬で ありうる。これらの中和モノクローナル抗体は、ヒト・ＩＬ−１１ＲへのＩＬ− １１の結合をブロックする能力を有しうる。 実施例１ ヒト・ＩＬ−１１Ｒ ｃＤＮＡの単離 ＤＮＡプローブの調製 ： マウス・Ｅｔ１−２配列由来のＤＮＡプローブ（配列番号：３）をマウス・胎 盤ｃＤＮＡからＰＣＲにより得た。アミノ末端プローブはＥｔ１−２配列の塩基 対４１８〜５７０に対応し、カルボキシ末端プローブはＥｔ１−２配列の塩基対 ８４７〜１０３８に対応する。ＤＮＡプローブをゲル精製し、α³²Ｐ−ｄＡＴＰ およびα³²Ｐ−ｄＣＴＰを用いて放射性標識した。ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング ： Superscript Choice Systemを用いて活性化ヒト・ＰＢＭＣからｃＤＮＡを得 て、ＺＡＰ ＩＩ（Stratagene）のＥｃｏＲＩ部位中にクローンした。得られた ファージを用いてE.coli BB4株に感染させた。百万個のファージを１５０ｍｍの ＮＺＣＹＭプレートに１５０００ｐｆｕ／プレートの密度で撒いた。プラークを 複製用Duraloseニトロセルロースフィルター（Stratagene）に移した。アルカリ 変性および熱固定後、５Ｘ ＳＳＣ、５Ｘデンハーツ、０.１％ ＳＤＳ、および ５０μｇ／ｍｌ 酵母・ｔＲＮＡ中、６５℃で２時間フィルターをプレハイブリ ダイゼーションさせた。プレハイブリダイゼーションバッファー中、５５℃で４ ８時間、１セットのフィルターをアミノ末端プローブとハイブリダイゼーション させ、他のセットをカルボキシ末端プローブ（５ｘ１０⁵ｃｐｍ／ｍｌ）とハイ ブリダイゼーションさせた。フィルターを４Ｘ ＳＳＣ、０.１％ ＳＤＳにて、 ２５℃で１回、５５℃で２回洗浄した。両プローブにハイブリダイゼーションし たプラークをオートラジオグラフィーにより同定した。 スクリーニングした百万個のプラークのうち、２個のプラークが両プローブに ハイブリダイゼーションした。これらのプラークを拾い、クロロホルム含有ＳＭ 培地中にファージを溶出させた。得られたファージを用いてE.coli BB4株に再感 染させ、２次スクリーニング用にＮＺＣＹＭプレートに１００〜３００ｐｆｕ／ プレートの密度で撒いた。 ２次スクリーニング後、ヘルパーファージ（Stratagene）を用いる切断により プラスミドＤＮＡをＺＡＰ ＩＩプラークから単離した。Applied Biosystemsの ＤＮＡシークエンサーによりインサートのＤＮＡ配列を決定した。 配列番号：１の配列を有するポリヌクレオチドを含むクローンｐｈＩＬ１１Ｒ １４−２は、１９９４年１２月２２日に受託番号 としてＡＴＣＣに寄 託された。 実施例２ 可溶性ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の発現および活性のアッセイ 可溶性形態のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を哺乳動物細胞において発現させた。発 現された組み換え蛋白はＢＡＦ１３０−９細胞においてシグナル変換する能力が あった。 可溶性形態に対応する、全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒ配列の一部（配列番号：２ のアミノ酸１〜３６５をコードしている配列番号：１のヌクレオチド７３４〜１ ８２８）を哺乳動物発現ベクターｐＥＤ中にクローンし、ＣＯＳＭ６細胞をトラ ンスフェクションするために用いた。トランスフェクションから４０時間後、な らし培地を取り、５倍に濃縮し、マウス・細胞系ＢＡＦ１３０−９（ヒト・ｇｐ １３０シグナルトランスデューサーを発現するＢＡＦＢ０３細胞系の誘導体であ り、Hibi,M.et al.(1990)Cell 63,1149-1157に記載されている）を用いる増殖ア ッセイに使用した。ＢＡＦ１３０−９細胞はＩＬ−１１のみまたはＩＬ−６のみ に応答して増殖しないが、ＩＬ−６および可溶性ＩＬ−６Ｒの組み合わせに応答 して増殖する（Hibiらの上記文献）。疑似トランスフェクションされた細胞また は可溶性ヒト・ＩＬ−１１Ｒ配列でトランスフェクションされた細胞により得ら れたならし培地１０μｌの不存在下または存在下にて組み換えヒト・ＩＬ−１１ 濃度を増加させつつ、ＢＡＦ１３０−９細胞（０.１ｍｌ中１ｘ１０⁴個）をＲＰ ＭＩ １６４０培地／１０％ＦＣＳ中で培養した。４０時間後、細胞を³Ｈ− チミジン（０.５μＣｉ／ウェル）で８時間パルス標識し、取り込まれたヌクレ オチドを調べた。図２に示すように、ＢＡＦ１３０−９細胞はＩＬ−１１のみま たは可溶性ＩＬ−１１Ｒのみに応答して増殖しなかったが、ＩＬ−１１および可 溶性ＩＬ−１１Ｒの両方の存在下では増殖した。 他のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白をこのモデルにおいて試験して、それらが本明細 書定義のヒト・ＩＬ−１１Ｒの「生物学的活性」を示すかどうかを調べた。 実施例３ ヒト・ＩＬ−１１Ｒの生物学的活性を調べるための他の系 蛋白 他の系を用いて個々のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白が本明細書定義のヒト・ＩＬ− １１Ｒの「生物学的活性」を示すかどうかを調べることができる。かかる系の例 を以下に示す。ＩＬ−１１結合についてのアッセイ 結合を検出できる適当なアッセイにより、ＩＬ−１１またはそのフラグメント へのヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の結合能を調べることができる。いくつかの適当な 例を以下に示す。 ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の細胞外領域へのＩＬ−１１の結合は、受容体蛋白上 のホスホチロシンの迅速な誘導を特異的に引き起こすであろう。ホスホリレーシ ョンの誘導により測定されるリガンド結合活性に関するアッセイを以下に説明す る。 別法として、ヒト・Ｌ−１１Ｒ蛋白（例えば、可溶性形態の細胞外ドメインの ような）を得て、これを用いてＩＬ−１１の結合を検出する。例えば、細胞外ド メイン（予想膜内外ドメインの前、好ましくは直前で切断されている）がヒト・ 免疫グロブリン（Ｉｇ）γ１のヒンジＣ_H２およびＣ_H３ドメインをコードしてい るｃＤＮＡにイン・フレームで連結されているＤＮＡ構築物を調製する。この構 築物を、ｐＥＤΔＣまたはｐＭＴ２のごときＣＯＳ細胞用の適当な発現ベクター 中に挿入された形で得る。プラスミドをＣＯＳ細胞中に一時的にトランスフェク ションする。分泌されたＩＬ−１１Ｒ−Ｉｇ融合蛋白をならし培地中に集め、プ ロテインＡクロマトグラフィーにより精製する。 多くの用例においてＩＬ−１１の結合を示すために精製ＩＬ−１１Ｒ−Ｉｇ融 合蛋白が用いられる。ＩＬ−１１を酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）プレー ト表面上にコーティングすることができ、次いで、標準的なＥＬＩＳＡバッファ ーを用いてウシ・血清アルブミンまたはカゼインでさらなる結合部位をブロック する。次いで、ＩＬ−１１Ｒ−Ｉｇ融合蛋白を固相ＩＬ−１１に結合させ、セイ ヨウワサビ・ペルオキシダーゼに抱合した２次ヤギ・抗−ヒトＩｇを用いて結合 を検出する。テトラメチルベンジジンのごとき比色法で測定される基質および吸 光度の読みを用いて、特異的に結合した酵素の活性を測定することができる。 例えば、膜内外ドメインまたはグルコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰ Ｉ）結合を提供することにより、ＩＬ−１１を細胞表面に発現させてもよい。Ｉ Ｌ−１１Ｒ−Ｉｇ融合蛋白を用いて膜結合ＩＬ−１１を発現する細胞を同定する ことができる。可溶性ＩＬ−１１Ｒ−Ｉｇ融合蛋白をこれらの細胞の表面に結合 させ、フルオレセインイソチオシアネートのごとき蛍光色素に抱合したヤギ・抗 −ヒト・Ｉｇおよびフローサイトメトリーを用いて検出する。相互作用罠 酵母の遺伝学的選択法「相互作用罠」［Gyuris et al,Cell 75,791-803,1993 ］を用いて、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白は本明細書定義のヒト・ＩＬ−１１Ｒの生 物学的活性を有しているかどうかを調べることができる。この系において、Ｌｅ ｘＡｏｐ−Ｌｅｕ２およびＬｅｘＡｏｐ−ＬａｃＺ双方からのレポーター遺伝子 の発現は、エサ蛋白（例えば、この場合にはヒト・ＩＬ−１１Ｒと相互作用する 種）と、えじき（例えば、この場合にはヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白）との間の相互 作用に依存する。よって、Ｌｅｕ２またはＬａｃＺ発現レベルにより相互作用の 強さを測定することができる。最も単純な方法は、ＬａｃＺによりコードされる 蛋白 β−ガラクトシダーゼの活性を測定することである。Ｘ−Ｇａｌ含有培地または フィルターの青さの程度によりこの活性を判定することができる。β−ガラクト シダーゼ活性の定量的測定のためには、標準的アッセイは"Methods in Yeast Ge netics"Cold Spring Harbor,New York,1990（Rose,M.D.,Winston,F.およびHiete r,P.による）中に見いだされる。 かかる方法において、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白が特定の種（例えば、in vivo でヒト・ＩＬ−１１Ｒの細胞内ドメインに結合する細胞質ゾル蛋白）と相互作用 するかどうかを調べたい場合には、そのような種を相互作用罠における「エサ」 として用い、試験すべきヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を「えじき」として用いること ができ、その逆も可能である。ＣＡＴ誘導系 ラット・β−フィブリノーゲンのごとき急性フェーズの血漿蛋白遺伝子の転写 は、種々の細胞系において、ＩＬ−１１により活性化される。１の典型的な系に おいて、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその可溶性 形態のごとき）、ヒト・ｇｐ１３０シグナルトランスデューサーおよびレポータ ー遺伝子ＣＡＴ（Baumann et al.(1991)J.Biol.Chem.266,20424-20427）に融合 したラット・ｂ−フィブリノーゲン遺伝子の３５０塩基対のプロモーター領域を 含むレポーター遺伝子をコードしているプラスミドでＣＯＳＭ６細胞をトランス フェクションする。組み換えヒト・ＩＬ−１１濃度を上昇させていって細胞を刺 激し、ＣＡＴ活性の存在についてアッセイすることによりレポーター遺伝子の転 写をモニターする。ｇｐ１３０のホスホリレーション ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその可溶性形態の ごとき）をコードしている配列でトランスフェクションされた細胞におけるｇｐ １３０のチロシンのホスホリレーションを誘導するＩＬ−１１の能力（Luttcken et al.(1994)Science 263,89-92）を試験することにより活性を調べ てもよい。ＳＴＡＴｓのホスホリレーション ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその可溶性形態の ごとき）をコードしている配列でトランスフェクションされた細胞におけるＳＴ ＡＴｓ（転写のシグナルトランスデューサーおよびアクチベーター、ＤＮＡ結合 蛋白のファミリー）のチロシンのホスホリレーションを誘導するＩＬ−１１の能 力（Zhong et al.(1994)Science 264,95-98）を試験することにより活性を調べ てもよい。ＪＡＫキナーゼのホスホリレーション ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその可溶性形態の ごとき）をコードしている配列でトランスフェクションされた細胞におけるＪＡ Ｋキナーゼのチロシンのホスホリレーションを誘導するＩＬ−１１の能力（Yin et al.(1993)J.Immunol.151:2555-2561）を試験することにより活性を調べても よい。 本明細書に引用された特許および文献は、参照により全体が本明細書に記載さ れているものと見なされる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＥＤ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．（ａ）配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９まで のヌクレオチド配列； （ｂ）遺伝学的コードの縮重の結果として（ａ）に記載したヌクレオチド配列 から変化しているヌクレオチド配列；および （ｃ）（ａ）に記載したヌクレオチド配列の対立遺伝子変種 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド 。 ２．ヌクレオチド配列がヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する蛋白 をコードしている請求項１のポリヌクレオチド。 ３．ヌクレオチド配列が発現制御配列に作動可能に連結されている請求項１の ポリヌクレオチド。 ４．配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９までのヌク レオチド配列を含んでなる請求項２のポリヌクレオチド。 ５．配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１８２８までのヌク レオチド配列またはそのフラグメントを含んでなる請求項２のポリヌクレオチド 。 ６．配列番号：１のヌクレオチド１９０７からヌクレオチド１９９９までのヌ クレオチド配列またはそのフラグメントを含んでなる請求項２のポリヌクレオチ ド。 ７．配列番号：１のヌクレオチド７３４からヌクレオチド１９９９までのヌク レオチド配列を含んでなる請求項１のポリヌクレオチド。 ８．配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１８２８までのヌ クレオチド配列を含んでなる請求項１のポリヌクレオチド。 ９．配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１９９９までのヌ クレオチド配列を含んでなる請求項１のポリヌクレオチド。 １０．請求項３のポリヌクレオチドで形質転換された宿主細胞。 １１．哺乳動物細胞である請求項１０の宿主細胞。 １２．（ａ）適当な培地中で請求項１０の宿主細胞の培養を増殖させ；次いで （ｂ）培養からヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製する ことを特徴とするヒト・ＩＬ−１１Ｒの製造方法。 １３．（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列； （ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列 （ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列 （ｅ）配列番号：２のアミノ酸１０２から４２２までのアミノ酸配列 （ｆ）配列番号：２のアミノ酸１０２から３６５までのアミノ酸配列；および （ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグ メント からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋 白。 １４．配列番号：２のアミノ酸配列を含んでなる請求項１３の蛋白。 １５．配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までの配列を含んでなる請求項 １３の蛋白。 １６．請求項１３の蛋白および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物 。 １７．請求項１２の方法に従って製造される蛋白。 １８．請求項１３の蛋白と特異的に反応する抗体を含んでなる組成物。 １９．ヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合に対する阻害剤の同定方 法であって、 （ａ）請求項１３の蛋白をＩＬ−１１またはそのフラグメントと混合し、該混合 により第１の結合混合物を得て； （ｂ）第１の結合混合物中の蛋白とＩＬ−１１またはそのフラグメントとの間の 結合量を測定し； （ｃ）化合物を蛋白およびＩＬ−１１またはそのフラグメントと混合して第２の 結合混合物を得て； （ｄ）第２の結合混合物中の結合量を測定し；次いで （ｅ）第１の結合混合物中の結合量と第２の結合混合物中の結合量とを比較する ことを特徴とし、第２の結合混合物の結合量の減少が起こった場合には、該化合 物はヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害しうるものである方法 。 ２０．第１および第２の混合物が、請求項１３の蛋白またはＩＬ−１１または 請求項１９で使用されるフラグメントに結合しうるｇｐ１３０またはそのフラグ メントを含んでなる請求項１９の方法。 ２１．請求項１９の方法により同定される阻害剤。 ２２．請求項２１の阻害剤および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成 物。 ２３．治療上有効量の請求項２２の組成物を投与することを特徴とする、哺乳 動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害する方法 。 ２４．治療上有効量の請求項１６の組成物を投与することを特徴とする、哺乳 動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害する方法 。 ２５．治療上有効量の請求項１８の組成物を投与することを特徴とする、哺乳 動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害する方法 。 ２６．治療上有効量の請求項２２の組成物を投与することを特徴とする、哺乳 動物対象における骨量の損失を治療または予防する方法。 ２７．治療上有効量の請求項１６の組成物を投与することを特徴とする、哺乳 動物対象における骨量の損失を治療または予防する方法。 ２８．治療上有効量の請求項１８の組成物を投与することを特徴とする、哺乳 動物対象における骨量の損失を治療または予防する方法。 ２９．厳密な条件下で請求項４のポリヌクレオチドにハイブリダイゼーション しうるヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド。 ３０．（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列； （ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列 （ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列 （ｅ）配列番号：２のアミノ酸１１２から４２２までのアミノ酸配列 （ｆ）配列番号：２のアミノ酸１１２から３６５までのアミノ酸配列；および （ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグ メント からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドまたは蛋白をコー ドしているヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド。