EA026341B1 - Кристаллическая форма нуклеозидфосфорамидата - Google Patents

Кристаллическая форма нуклеозидфосфорамидата Download PDF

Info

Publication number
EA026341B1
EA026341B1 EA201290993A EA201290993A EA026341B1 EA 026341 B1 EA026341 B1 EA 026341B1 EA 201290993 A EA201290993 A EA 201290993A EA 201290993 A EA201290993 A EA 201290993A EA 026341 B1 EA026341 B1 EA 026341B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mixture
solution
mmol
solid
hours
Prior art date
Application number
EA201290993A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201290993A1 (ru
EA026341B9 (ru
Inventor
Брюс С. Росс
Майкл Джозеф София
Ганапати Редди Памулапати
Сугуна Рачаконда
Хай-Рен Чжан
Бионг-Квон Чун
Пэйюань Ван
Original Assignee
ГАЙЛИД ФАРМАССЕТ ЭлЭлСи
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=44354065&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA026341(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US12/783,680 external-priority patent/US8642756B2/en
Application filed by ГАЙЛИД ФАРМАССЕТ ЭлЭлСи filed Critical ГАЙЛИД ФАРМАССЕТ ЭлЭлСи
Publication of EA201290993A1 publication Critical patent/EA201290993A1/ru
Publication of EA026341B1 publication Critical patent/EA026341B1/ru
Publication of EA026341B9 publication Critical patent/EA026341B9/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic System
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/18—Compounds having one or more C—Si linkages as well as one or more C—O—Si linkages
    • C07F7/1804—Compounds having Si-O-C linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2404—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/242—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of hydroxyaryl compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2454—Esteramides the amide moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/2458—Esteramides the amide moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of aliphatic amines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/655—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms
    • C07F9/65515—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a five-membered ring
    • C07F9/65517—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a five-membered ring condensed with carbocyclic rings or carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
    • C07F9/65586—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system at least one of the hetero rings does not contain nitrogen as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/044—Pyrrole radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/052—Imidazole radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/207—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids the phosphoric or polyphosphoric acids being esterified by a further hydroxylic compound, e.g. flavine adenine dinucleotide or nicotinamide-adenine dinucleotide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/24—Heterocyclic radicals containing oxygen or sulfur as ring hetero atom

Abstract

Настоящее изобретение относится к новой кристаллической форме нуклеозидфосфорамидата и её применению в качестве агента для лечения вирусных заболеваний. Это соединение является ингибитором РНК-зависимой репликации вирусной РНК и подходит в качестве ингибитора полимеразы ВГС NS5B, ингибитора репликации ВГС и для лечения инфекции гепатита С у млекопитающих.

Description

Настоящее изобретение относится к кристаллической форме нуклеозидфосфорамидата и её применению в качестве агента для лечения вирусных заболеваний. Это соединение является ингибитором РНК-зависимой репликации вирусной РНК и подходит в качестве ингибитора полимеразы ВГС Ν85Β, ингибитора репликации ВГС и для лечения инфекции гепатита С у млекопитающих.
Уровень техники
Инфекция вируса гепатита С (ВГС) представляет собой одну из крупнейших проблем здравоохранения, приводящую к хроническим заболеваниям печени, например, циррозу и гепатоцеллюлярной карциноме, у значительного количества инфицированных, оцениваемого как 2-15% населения мира. Только в США, по оценкам Государственного центра санитарно-эпидемического надзора США, насчитывается 4,5 млн инфицированных. Согласно Всемирной организации здравоохранения, в мире насчитывается более 200 млнов инфицированных, при этом каждый год инфицируются по меньшей мере от 3 до 4 млн человек. После инфицирования приблизительно 20% людей избавляются от вируса, однако остальные могут являться носителями ВГС всю оставшуюся жизнь. У десяти-двадцати процентов хронически инфицированных лиц в конечном итоге развивается цирроз или рак, разрушающий печень. Это вирусное заболевание передается парентерально через зараженную кровь и препараты крови, загрязненные иглы либо половым путем или вертикально от инфицированных матерей или матерей-носителей их плоду. Современная терапия инфекции ВГС, ограниченная иммунотерапией рекомбинантным интерфероном-α отдельно или в комбинации с аналогом нуклеозида рибавирином, дает ограниченное клиническое улучшение. Кроме того, в настоящее время не существует утвержденной вакцины ВГС. Следовательно, существует неотложная необходимость в разработке усовершенствованных терапевтических агентов, способных эффективно бороться с хронической инфекцией ВГС.
Вирион ВГС представляет собой оболочечный вирус, содержащий +-цепь РНК с одиночной олигорибонуклеотидной геномной последовательностью длиной около 9600 оснований, кодирующей полипротеин из приблизительно 3010 аминокислот. Белковые продукты гена ВГС состоят из структурных белков С, Е1 и Е2 и неструктурных белков N82, N83, Ν34Α и Ν34Β, а также Ν35Α и Ν35Β. Считается, что неструктурные (Ν8) белки обеспечивают каталитический механизм репликации вируса. Протеаза Ν83 высвобождает из полипротеиновой цепи Ν85Β РНК-зависимую РНК-полимеразу. Полимераза Ν85Β ВГС необходима для синтеза двуцепочечной РНК из одноцепочечной вирусной РНК, которая служит матрицей в цикле репликации ВГС. Таким образом, полимераза Ν85Β считается необходимым компонентом комплекса репликации ВГС (К. ШШ, е! а1, Нера!о1оду, 1999, 29: 1227-1235; V. ЬоЬтапп е! а1., VIто1оду, 1998, 249: 108-118). Ингибирование полимеразы Ν85Β ВГС предотвращает образование двуцепочечной РНК ВГС и поэтому представляет собой перспективный подход к разработке ВГСспецифической противовирусной терапии.
ВГС принадлежит к более крупному семейству вирусов, обладающих многими общими свойствами.
Вирусы Π;ινϊνϊΐΊ(Ι;ιο
Семейство вирусов Р1ау1утбае включает, по меньшей мере, три различных рода: рекйу1тикек, вызывающие заболевания крупного рогатого скота и свиней; йау1У1гикек, являющиеся основной причиной таких заболеваний, как лихорадка денге и желтая лихорадка; и Ьераауиикек, единственным членом которого является ВГС. Род йау1У1тик включает более 68 членов, разделенных на группы на основе серологического родства (СаНкЬег е! а1., 1. Оеп. УиоЕ 1993,70,37-43). Клинические симптомы различаются и включают лихорадку, энцефалит и геморрагическую лихорадку (Р|е1бк ^то1оду, Ебботк: Р1е1бк, В. Ν., Кшре, Ό. М., апб НоМеу, Р. М., Ырршсой-Кауеп РиЬйкйетк, РЫ1абе1рЫа, РА, 1996, Сйар!ет 31, 931-959). Флавивирусы, имеющие мировое значение, ассоциированные с заболеваниями человека, включают вирусы геморрагической лихорадки денге (ЭНР), вирус желтой лихорадки, удара, вирус японского энцефалита (На1к!еаб 8. В., Кеу. 1пГсс1. Όίκ., 1984, 6, 251-264; На1к!еаб 8. В., 8с1епсе, 239:476-481, 1988; МопаШ Т. Р., \ем Епд. 1. Меб, 1988, 319, 641-643).
Род рекйуиик включает вирус диареи крупного рогатого скота (Βνον), вирус классической чумы свиней (ίΈΡν, также называемый вирусом холеры свиней) и вирус пограничной болезни овец (ΒΌν) (Моептд V. е! а1. Абу. νίτ. Кек. 1992, 41, 53-98). Пестивирусные инфекции домашнего скота (крупного рогатого скота, свиней и овец) причиняют значительные убытки мировой экономике. Βνον вызывает вирусную диарею крупного рогатого скота и имеет существенное экономическое значение для промышленного животноводства (Меуегк, О. апб ТЫе1, Н.Е, Абуапсек ίη Ыгик Кекеатсй, 1996, 47, 53-118; Моепшд ν., е! а1, Абу. νίτ. Кек. 1992, 41, 53-98). Пестивирусы человека описаны не столь хорошо, как пестивирусы животных. Однако серологические обследования указывают на значительные контакты человека с пестивирусами.
Пестивирусы и гепацивирусы являются близкородственными группами вирусов в пределах семейства Р1ау1утбае. Другие близкородственные вирусы этого семейства включают вирус ΟΒ А, вирус ΟΒ А-подобные агенты, вирус ΟΒ В и вирус ΟΒ С (также называемый вирусом гепатита О, НОУ). Группа гепацивирусов (вирус гепатита С; ВГС) состоит из ряда близкородственных, но генетически различающихся вирусов, способных инфицировать человека. Существует по меньшей мере 6 генотипов ВГС и более 50 подтипов. Из-за сходства между пестивирусами и гепацивирусами, а также низкой способности
- 1 026341 гепацивирусов эффективно расти в культуре клеток, в качестве суррогата для изучения вируса ВГС часто используют вирус диареи крупного рогатого скота (ВУЭУ).
Генетическая организация пестивирусов и гепацивирусов очень сходна. Эти вирусы, содержащие цепь РНК, обладают единственной большой открытой рамкой считывания (ОКЕ), кодирующей все вирусные белки, необходимые для репликации вируса. Эти белки экспрессируются в виде полипротеина, который подвергается процессингу во время и после трансляции как клеточными, так и вирусными протеиназами, что приводит к получению зрелых вирусных белков. Вирусные белки, ответственные за репликацию геномной РНК вируса, располагаются приблизительно в пределах С-конца. Две трети ОКЕ называются неструктурными (N8) белками. Генетическая организация и процессинг полипротеина неструктурной белковой части ОКЕ у пестивирусов и гепацивирусов очень сходны. Как у пестивирусов, так и у гепацивирусов зрелые неструктурные (N8) белки по порядку с Ν-конца кодирующей области неструктурных белков до С-конца ОКЕ состоят из р7, N82, N83, Ν84Α, Ν84Β, Ν85Α и Ν85Β.
Ж-белки пестивирусов и гепацивирусов содержат домены последовательности, характерные для белков со специфическими функциями. Например, белки N83 вирусов обеих групп обладают аминокислотными мотивами, характерными для сериновых протеиназ и хеликаз (ОотЬа1еиуа е! а1., №!ите, 1988, 333, 22; Ва/аи аиб ПеИейск Убо1оду, 1989, 171, 637-639; ОогЬа1епуа е! а1., ΝιιοΚία Αοίά Кек., 1989, 17, 3889-3897). Аналогично, белки Ν85Β пестивирусов и гепацивирусов содержат мотивы, характерные для РНК-зависимых РНК-полимераз (Κοοηίη Е.У. апб ЭоЦа У.У., Стб. Кеу. Вюсйеш. Мо1ес. Βίο1. 1993, 28, 375-430).
Фактические роли и функции Ж-белков пестивирусов и гепацивирусов в жизненном цикле вирусов прямо аналогичны. В обоих случаях сериновая протеиназа Ν83 отвечает за все варианты протеолитического процессинга полипротеиновых предшественников ниже своего положения в ОКЕ (ХУккегсНеп апб Со11еб, У1го1оду, 1991, 184, 341-350; Βа^ιеηксЫаде^ е! а1., 1. Убо1. 1993, 67, 3835-3844; Ескаг! е! а1. ΒΛсЬет. Βώρ^δ. Кек. Сошш. 1993,192, 399-406; Огакош е! а1., 1. Убо1. 1993, 67, 2832-2843; Огакош е! а1., Ргос. №И. Асаб 8ск И8А 1993, 90, 10583-10587; Нтрка1а е! а1., 1. Убо1. 1993, 67, 4665-4675; Тоте е! а1., 1. У1то1., 1993, 67, 4017-4026). Белок Ν84Α в обоих случаях действует как кофактор вместе с сериновой протеазой N83 (Βа^ιеηксЫаде^ е! а1., 1. Убо1. 1994, 68, 5045-5055; ЕаШа е! а1., 1. Убо1. 1994, 68, 3753-3760; Хи е! а1., 1. Убо1, 1997,71:53 12-5322). Белок N83 обоих вирусов также действует как хеликаза (К1т е! а1., Β^οсЬет. Βώρ^κ. Кек. Сотт., 1995, 215, 160-166; Лп апб Ре!егкоп, ΑιόΙι. Β^οсЬет. Βώρ^κ., 1995, 323, 47-53; ХУаггепег апб Со11е!!, 1. Убо1. 1995, 69, 1720-1726). Наконец, белки Ν85Β пестивирусов и гепацивирусов обладают предсказанной активностью РНК-зависимых РНК-полимераз (НеНгепк е! а1., ΕΜΒΟ,
1996, 15, 12-22; Ьесйтапп е! а1., 1. Убо1., 1997, 71, 8416-8428; Уиап е! а1., Β^οсЬет. Βώρ^κ. Кек. Сотт.
1997, 232, 231-235; Надебогп, РСТ \УО 97/12033; 2йопд е! а1, 1. Убо1., 1998, 72, 9365-9369).
В настоящее время существуют ограниченные возможности лечения лиц, инфицированных вирусом гепатита С. Современные утвержденные способы лечения представляют собой иммунотерапию рекомбинантным интерфероном-α отдельно или в комбинации с аналогом нуклеозида рибавирином. Клиническая эффективность этой терапии ограничена; лишь 50% пациентов, подвергаемых лечению, отвечают на терапию. Поэтому существует выраженная потребность в более эффективных новых способах лечения для удовлетворения медицинских нужд, вызванных ВГС-инфекцией.
В настоящее время идентифицирован ряд потенциальных молекулярных мишеней для разработки противовирусных лекарств прямого действия, способных функционировать как средства лечения ВГС, включая аутопротеазу Ν82-Ν83, протеазу N3, хеликазу N3 и полимеразу Ν85Β. РНК-зависимая РНКполимераза абсолютно необходима для репликации одноцепочечного, положительно-смыслового РНКгенома и вызывает значительный интерес медицинских химиков.
Выполнен обзор ингибиторов Ν85Β ВГС как потенциальных терапевтических агентов для лечения инфекции ВГС: Тап 8.-Ь., е! а1., №!ите Кеу. Эгид Нбсоу., 2002, 1, 867-881; \Уа1кег М.Р. е! а1., Εχρ. Ορπι. 1пуекПда!юпа1 Этидк, 2003, 12, 1269-1280; Νί Ζ-Т, е! а1., Сигтеп! Ορώ^ ш Эгид Оксоуегу апб Эсус^теп!, 2004, 7, 446-459; Βеаи1^еи Р. Ь., е! а1., Сиггеп! Ορω^ ш 1пуекЛда!юпа1 Этидк, 2004, 5, 838-850; Уи, 1., е! а1., Сиггеп! Эгид Татде!к-1пГес!юик Нкогбетк, 2003, 3, 207-219; ОпПбб К.С., е! а1, Αηηиа1 Кеροйк ш Мебюша1 СЬеткЛу, 2004, 39, 223-237; Сагго1, 8., е! а1., 1пТес!юик Нкотбегк-Огид Тагде!к, 2006, 6, 17-29. Потенциальная возможность появления устойчивых штаммов ВГС и необходимость идентификации агентов с широким диапазоном генотипов поддерживает необходимость продолжения попыток идентификации новых, более эффективных нуклеозидов в качестве ингибиторов Ν85Β ВГС.
Нуклеозидные ингибиторы полимеразы Ν85Β могут действовать либо на субстрат неприродного происхождения, что приводит к терминации цепи, либо в качестве конкурентного ингибитора, конкурирующего с нуклеотидами, связывающимися с полимеразой. Для функционирования в качестве терминатора цепи аналог нуклеозида должен поглощаться клеткой и преобразовываться ш У1уо в трифосфат, конкурирующий с полимеразным сайтом связывания нуклеотидов. Это преобразование в трифосфат обычно опосредовано клеточными киназами, придающими потенциальному нуклеозидному ингибитору полимераз дополнительные структурные характеристики. К сожалению, это ограничивает прямую оценку нуклеозидов в качестве ингибиторов репликации ВГС клеточным анализом, способным обнаруживать фосфорилирование ш кби.
- 2 026341
В некоторых случаях биологическая активность нуклеозида затруднена его плохими субстратными характеристиками по отношению к одной или более киназ, необходимых для его преобразования в активную форму трифосфата. Образование монофосфата нуклеозидкиназой обычно рассматривают в качестве скоростьограничивающего этапа трех событий фосфорилирования. Для обхода необходимости начального этапа фосфорилирования в метаболизме нуклеозида в аналог активного трифосфата сообщали об изготовлении стабильных фосфатных пролекарств. Показано, что нуклеозидфосфорамидатные пролекарства являются предшественниками активных нуклеозидтрифосфатов и ингибируют репликацию вируса при введении в целые клетки, инфицированные вирусом (МсОшдап С., с1 а1., 1. Мей. Сйет., 1996, 39, 1748-1753; Уа1ейе О., е! а1., 1. Мей. Сйет., 1996, 39, 1981-1990; Вакапш 1., е! а1., Ргос. Ыайоиа1 Асай 8с1 И8А, 1996, 93, 7295-7299; 81йй1дш А. О., е! а1., 1. Мей. Сйет., 1999, 42, 4122-4128; Е15епЬегд Е. 1., е! а1., Мис1ео81йе8, Ыискоййек апй Ыис1ею Ас1Й8, 2001, 20, 1091-1098; Ьее А.А., е! а1., АпйтюгоЫа1 Адепк апй Сйето!йегару, 2005, 49, 1898); И8 2006/0241064; и АО 2007/095269.
Кроме того, применимость нуклеозидов в качестве терапевтических агентов иногда ограничивается их плохими физико-химическими и фармакокинетическими свойствами. Эти свойства могут ограничивать всасывание агента в кишечнике и поглощение тканью или клеткой-мишенью. Для улучшения свойств можно использовать пролекарства нуклеозидов.
Продемонстрировано, что изготовление нуклеозидфосфорамидатов усиливает системное всасывание нуклеозида и, кроме того, фосфорамидатная группа этих пронуклеотидов маскируется нейтральными липофильными группами, что приводит к получению подходящего коэффициента распределения, оптимизации поглощения и транспорта в клетку, резко повышающим внутриклеточную концентрацию аналога нуклеозидмонофосфата по сравнению с введением исходного нуклеозида самого по себе. Ферментативный гидролиз фосфатной группы сложных эфиров приводит к получению нуклеозидмонофосфата, причем начальное скоростьлимитирующее фосфорилирование не является необходимым. В связи с этим в патентной заявке США 12/053015, соответствующей АО 2008/121634 и И8 2010/0016251, описан ряд нуклеозидфосфорамидатных пролекарств, многие из которых демонстрируют активность при анализе ВГС. Несколько соединений, описанных в И8 2010/0016251, тестировали в качестве потенциальных клинических кандидатов на аттестацию в Управлении по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к кристаллическому (8)-изопропиловому эфиру 2-(((8)(((2К,3К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропионовой кислоты, представленному формулой 8р-4
имеющему следующие значения угла отражения 2θ(±0,2°) на дифрактограмме ΧΚΡΌ: 6,1 и 12,7.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения вирусной инфекции гепатита С, содержащей терапевтически эффективное количество указанного выше кристаллического 8Р-4 и фармацевтически приемлемый носитель.
В ещё одном другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции гепатита С у нуждающегося в этом пациента, который включает введение пациенту терапевтически эффективной дозы указанного выше кристаллического 8р-4.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1- рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения соединения 4.
Фиг. 2 - рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения КР-4.
Фиг. 3 - рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения 8Р-4 (формы 1).
Фиг. 4 - рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения 8Р-4 (формы 1).
Фиг. 5 - рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения 8Р-4 СН2С12 (формы 2).
Фиг. 6 - рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения 8Р-4 СНС13 (формы 3).
Фиг. 7 - рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения 8р-4 (формы 4).
Фиг. 8 - рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения 8Р-4 (формы 5).
Фиг. 9 - рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения 8Р-4 (аморфного).
Фиг. 10 - рентгеновская кристаллическая структура 8Р-4 (формы 1).
Фиг. 11 - рентгеновская кристаллическая структура (изотропная) 8Р-4 СН2С12 (формы 2).
Фиг. 12 - рентгеновская кристаллическая структура (анизотропная) 8Р-4 СН2С12 (формы 2).
Фиг. 13 - рентгеновская кристаллическая структура 8Р-4 СНС13 (формы 3).
Фиг. 14 - ИК-спектр с преобразованием Фурье соединения 4.
- 3 026341
Фиг. 15 - ИК-спектр с преобразованием Фурье КР-4.
Фиг. 16 - ИК-спектр с преобразованием Фурье 8Р-4.
Фиг. 17 - термогравиметрический и дифференциальный сканирующий калориметрический анализ соединения 4.
Фиг. 18 - термогравиметрический и дифференциальный сканирующий калориметрический анализ
КР-4.
Фиг. 19 - термогравиметрический и дифференциальный сканирующий калориметрический анализ
8р-4.
Фиг. 20А - рентгеновская кристаллическая структура соединения 8 (8Р-изомера) (молекула № 1 асимметричной единицы).
Фиг. 20В - рентгеновская кристаллическая структура соединения 8 (8р-изомера) (молекула № 2 асимметричной единицы).
Фиг. 21 - рентгеновская дифрактограмма высокого разрешения 8Р-4 (формы 6).
Фиг. 22А - рентгеновская кристаллическая структура (8)-изопропил 2-(((8)-(перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноата (молекула № 1 асимметричной единицы).
Фиг. 22В - рентгеновская кристаллическая структура (8)-изопропил 2-(((8)-(перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноата (молекула № 2 асимметричной единицы).
Подробное описание изобретения Определения
Термины необязательный или необязательно здесь означают, что описанное событие или обстоятельство может происходить, но не обязательно происходит, и что описание включает варианты, в которых событие или обстоятельство происходит, и варианты, в которых оно не происходит. Например, необязательная связь означает, что связь может присутствовать или не присутствовать, и что описание включает одинарные, двойные или тройные связи.
Термин Р* означает, что атом фосфора является хиральным и имеет соответствующее обозначение К или 8 согласно правилу Кана-Ингольда-Прелонга, причем смысл этих обозначений соответствует общепринятому.
Термин очищенный здесь относится к чистоте данного соединения. Например, соединение является очищенным, если данное соединение представляет собой основной компонент композиции, т.е. является чистым по меньшей мере на 50% (мас./мас.). Таким образом, термин очищенный охватывает по меньшей мере 50% (мас./мас.) чистоту, по меньшей мере 60% (мас./мас.) чистоту, по меньшей мере 70% чистоту, по меньшей мере 80% чистоту, по меньшей мере 85% чистоту, по меньшей мере 90% чистоту, по меньшей мере 92% чистоту, по меньшей мере 94% чистоту, по меньшей мере 96% чистоту, по меньшей мере 97% чистоту, по меньшей мере 98% чистоту, по меньшей мере 99% чистоту, по меньшей мере 99,5% чистоту и по меньшей мере 99,9% чистоту, причем термин практически чистый охватывает по меньшей мере 97% чистоту, по меньшей мере 98% чистоту, по меньшей мере 99% чистоту, по меньшей мере 99,5% чистоту и по меньшей мере 99,9% чистоту.
Термин метаболит здесь относится к соединению, продуцируемому ίη νίνο после введения субъекту, нуждающемуся в этом.
Термин приблизительно (также представленный знаком ~) означает, что указанное численное значение является частью диапазона, колеблющегося в пределах стандартной ошибки эксперимента.
Выражение практически, как показано на... указанной порошковой дифрактограмме (ХКРЭ) означает, что положения пиков, показанных на дифрактограмме, практически совпадают при визуальной оценке или обращении к перечню выбранных пиков (±0,2 °2θ). Для специалиста понятно, что интенсивности могут варьировать в зависимости от образца.
Термин практически безводный означает, что соединение содержит не более 10 мас.% воды, предпочтительно не более 1 мас.% воды, более предпочтительно не более 0,5 мас.% воды и наиболее предпочтительно не более 0,1 мас.% воды.
Растворитель или антирастворитель (при использовании в реакциях, при кристаллизации и т.д. или структурные и/или адсорбированные растворители) включает по меньшей мере одно соединение из Οι -С8 спирта, С2-С8 простого эфира, С3-С7 кетона, С3-С7 сложного эфира, С1-С2 хлоруглерода, С2-С7 нитрила, прочие растворители, С5-С!2 насыщенного углеводорода и С6-С!2 ароматического углеводорода.
С1-С8 спирт относится к линейному/разветвленному и/или циклическому/ациклическому спирту, содержащему такое количество атомов углерода. С1-С8 спирт включает метанол, этанол, η-пропанол, изопропанол, изобутанол, гексанол и циклогексанол, но не ограничивается ими.
С2-С8 простой эфир относится к линейному/разветвленному и/или циклическому/ациклическому эфиру, содержащему такое количество атомов углерода. С2-С8 простой эфир включает диметиловый эфир, диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, ди-п-бутиловый эфир, метил-кбутиловый эфир (МТБЭ), тетрагидрофуран и диоксан, но не ограничивается ими.
С3-С7 кетон относится к линейному/разветвленному и/или циклическому/ациклическому кетону, содержащему такое количество атомов углерода. С3-С7 кетон включает ацетон, метилэтилкетон, пропа- 4 026341 нон, бутанон, метилизобутилкетон, метилбутилкетон и циклогексанон, но не ограничивается ими.
С3-С7 сложный эфир относится к линейному/разветвленному и/или циклическому/ациклическому сложному эфиру, содержащему такое количество атомов углерода. С3-С7 сложный эфир включает этилацетат, пропилацетат, η-бутилацетат и т.д., но не ограничивается ими.
С1-С2 хлоруглерод относится к хлоруглероду, содержащему такое количество атомов углерода. ЦС2 хлоруглерод включает хлороформ, метиленхлорид (ДХМ), тетрахлорид углерода, 1,2-дихлорэтан и тетрахлорэтан, но не ограничивается ими.
С2-С7 нитрил относится к нитрилу, содержащему такое количество атомов углерода. С2-С7 нитрил включает ацетонитрил, пропионитрил и т.д., но не ограничивается ими.
Термин прочие растворители относится к растворителям, широко используемым в органической химии, которые включают диэтиленгликоль, простой диметиловый эфир диэтиленгликоля, 1,2диметоксиэтан, диметилформамид, диметилсульфоксид, этиленгликоль, глицерин, гексаметилфосфорамид, гексаметилфосфортриамид, Ы-метил-2-пирролидон, нитрометан, пиридин, триэтиламин и уксусную кислоту, но не ограничиваются ими
Термин С5-С12 насыщенный углеводород относится к линейному/разветвленному и/или циклическому/ациклическому углеводороду. С5-С12 насыщенный углеводород включает η-пентан, петролейный эфир (лигроин), η-гексан, η-гептан, циклогексан и циклогептан, но не ограничивается ими.
Термин С6-С12 ароматический углеводород относится к замещенным или незамещенным углеводородам, каркас которых содержит фенильную группу. Предпочтительные углеводороды включают бензол, ксилол, толуол, хлорбензол, о-ксилол, т-ксилол, р-ксилол, ксилолы, причем более предпочтительным является толуол.
Термин гало или галоген здесь включает хлор-, бром-, йод- и фтор-.
Термин блокирующая группа относится к химической группе, проявляющей следующие характеристики. Группа является производной от защитного соединения. Группы, селективные по отношению к первичным гидроксилам по сравнению со вторичными гидроксилами, которые можно присоединить при условиях, согласующихся со стабильностью фосфорамидата (рН 2-8) и которые придают итоговому продукту значительно отличающиеся физические свойства, дающие возможность облегченного отделения продукта 3'-фосфорамидат-5'-новая группа от непрореагировавшего желательного соединения. Группа должна селективно вступать в реакцию с хорошим выходом, приводящую к получению защищенного субстрата, стабильного в ходе планируемых реакций (см. Ргсйссйус Сгоирв ίη Огдашс 8уйЪе515, 3гй ей. Т. А. Сгсспс апй Р. С. М. АиК ίοΐιη Айеу & δοη5, №\у Уотк, Ν.Υ., 1999). Примеры групп включают бензоил, ацетил, фенил-замещенный бензоил, тетрагидрофуранил, тритил, ΌΜΤ (4,4'диметокситритил), ММТ (4-монометокситритил), триметокситритил, пиксильную (9-фенилксантен-9ильную) группу, тиопиксил (9-фенилтиоксантен-9-ил) или 9-(р-метоксифенил)ксантин-9-ил (МОХ) и т.д.; С(О)-алкил, С(О)Рй. С(О)арил, СН2О-алкил, СН2О-арил, 8О2-алкил, 8О2-арил, третбутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил. Ацетали, например, МОМ или ТНР и т.п. рассматриваются в качестве возможных групп. Кроме того, в этом качестве рассматриваются фторированные соединения, поскольку их можно присоединять к соединению и селективно удалять путем пропускания через фтористую среду для твердофазной экстракции (ИиогоИавк®). Конкретный пример включает фторированный аналог тритила, аналог тритила 1-[4-(1Н,1Н,2Н,2Н-перфтордецил)фенил)-1,1-дифенилметанол. Кроме того, рассматриваются другие фторированные аналоги тритила - ВОС, РМОС, СВ/ и т.д. Сульфонилхлориды, подобные р-толуолсульфонилхлориду, можно селективно присоединять по 5'-положению. Можно селективно образовывать сложные эфиры, например, ацетаты и бензоаты. Ангидриды дикарбоновых кислот, например янтарный ангидрид и его производные, можно использовать для получения сложноэфирной связи со свободной карбоновой кислотой; такие примеры включают оксалил, малонил, сукцинил, глутарил, адипил, пимелил, суберил, азелаоил, себацил, фталил, изофталил, терефталил и т.д., но не ограничиваются ими. Свободная карбоновая кислота резко увеличивает полярность; ее также можно использовать в качестве основы для экстракции продукта реакции в умеренно щелочную водную фазу, например, растворы бикарбоната натрия. Фосфорамидатная группа относительно стабильна в кислых средах, поэтому также можно использовать группы, для которых необходимы кислые условия реакции, например тетрагидропиранил.
Термин защитная группа, являющийся производным от защитного соединения, имеет прямое и общепринятое значение, т.е. означает по меньшей мере одну защитную или блокирующую группу, связанную по меньшей мере с одной функциональную группой (например, -ОН, -ΝΗ2 и т.д.), что дает возможность химической модификации по меньшей мере одной другой функциональной группы. Примеры защитных групп включают бензоил, ацетил, фенил-замещенный бензоил, тетрагидропиранил, тритил, ЭМТ (4,4'-диметокситритил), ММТ (4-монометокситритил), триметокситритил, пиксильную (9фенилксантен-9-ильную) группу, тиопиксил (9-фенилтиоксантен-9-ил) или 9-(р-метоксифенил)ксантин9-ил (МОХ) и т.д.; С(О)-алкил, С(О)РН, С(О)арил, С(О)О(низший алкил), С(О)О(низший алкилен)арил (например, -С(О)ОСН2РЬ), С(О)О-арил, СН2О-алкил, СН2О-арил, 8О2-алкил, 8О2-арил, защитную группу, включающую по меньшей мере один атом кремния, например, трет-бутилдиметилсилил, третбутилдифенилсилил, §1(низший алкил)2О8Днизший алкил)2ОН (например, -δί (1Рг)2О81(‘Рг)2ОН), но не
- 5 026341 ограничиваются ими.
Термин защитное соединение, если не указано иное, относится здесь к соединению, содержащему защитную группу и способному вступать в реакцию с соединением, содержащим функциональные группы, которые могут быть защищены.
Термин уходящая группа здесь имеет то же значение для специалиста (Айуаисей Отдашс СЬешй1гу: геасйопк, тесЬатктк апй кйисШге-РоипЬ ЕйШои Ьу .Тепу МагсЬ, 1оЬи Айеу апй 8ои8 Ей.; 1992 радек 351-357) и представляет группу, являющуюся частью молекулы субстрата и присоединенную к ней; в ходе реакции, в которой молекула субстрата подвергается замещению (например, нуклеофилом), уходящая группа замещается. Примеры уходящих групп включают но не ограничиваются ими, галоген (Р, С1, Вг и I), предпочтительно С1, Вг или I; тозилат, мезилат, трифлат, ацетат, камфорсульфонат, арилоксид и арилоксид, замещенный по меньшей мере одной электроноакцепторной группой (например, рнитрофеноксидом, 2-хлорфеноксидом, 4-хлорфеноксидом, 2,4-динитрофеноксидом, пентафторфеноксидом и т.д.) и т.д. Термин электроноакцепторная группа употребляется здесь в прямом значении. Примеры электроноакцепторных групп включают галоген, -ΝΟ2, -С(О)(низший алкил), -С(О)(арил), С(О)О(низший алкил), -С(О)О(арил) и т.д., но не ограничиваются ими.
Термин основный реагент здесь относится к соединению, способному депротонировать гидроксильную группу. Примеры основных реагентов включают, но не ограничиваются ими (низший алк)оксид ((низший алкил)ОМ) в комбинации со спиртовым растворителем, причем (низшие алк)оксиды включают МеО-, ЕЮ-, иРгО-, ‘РтО-, 'ВиО-, ‘ЛтО-(изоамилоксид) и т.д., но не ограничиваются ими, а М представляет собой катион щелочного металла, например, Ы4, №4, К4, и т.д.. Спиртовые растворители включают (низший алкил)ОН, например, МеОН, ЕЮН, иРгОН, ‘РтОН, 'ВиОН, 2АтОН и т.д. Кроме того, можно использовать основания, не содержащие алкоксигрупп, например гидрид натрия, гексаметилдисилазан натрия, гексаметилдисилазан лития, диизопропиламид лития, гидрид кальция, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, ОВИ, ЭВИ реактивы Гриньяра, например, (низший алкил)Мд(галоген), которые включают МеМдС1, МеМдВг, 'ВиМдСк 'ВиМдВг и т.д., но не ограничиваются ими.
Термин основание охватывает термин основный реагент и означает соединение, способное депротонировать протонсодержащее соединение, т.е. основание Брэнстеда. В дополнение к вышеперечисленным примерам, примеры оснований включают пиридин, коллидин, 2,6-(низший алкил)пиридин, диметиланилин, имидазол, Ν-метилимидазол, пиразол, Ν-метилпиразол, триэтиламин, диизопропилэтиламин и т.д., но не ограничиваются ими.
Термин ненуклеофильное основание относится к соединению, способному действовать как основание Брэнстеда, но обладающему низкой нуклеофильностью. Примеры ненуклеофильных оснований включают карбонат калия, карбонат цезия, диизопропиламин, диизопропилэтиламин, триэтиламин, хинукледин, нафталин-1,8-диамин, 2,2,6,6-тетраметилпиперидин, 1,8-диазабициклоундец-7-ен, 4-диметиламинопиридин, пиридин, 2,6-ди-С1-6-алкилпиридин, 2,4,6-три-С1-6-алкилпиридин, 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен и 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан, но не ограничиваются ими.
Термин электроноакцепторная группа соответствует своему прямому значению. Примеры электроноакцепторных групп включают галоген (Р, С1, Вг или I), АО2, -С(О)(низший алкил), -С(О)О-арил, -С(О)О(низший алкил), -С(О)О(арил) и т.д., но не ограничиваются ими.
Термин сокристаллаты включает сокристаллаты 4, КР-4 или §Р-4 в комбинации с солями, и охватывает фармацевтически приемлемые соли.
Термин соли здесь относится к соединению, включающему катион и анион, которое можно получить путем протонирования протоноакцепторной группы и/или депротонирования протонодонорной группы. Следует отметить, что протонирование протоноакцепторной группы приводит к образованию катионной разновидности, в которой заряд уравновешен присутствием физиологического аниона, в то время как депротонирование протонодонорной группы приводит к образованию анионной разновидности, в которой заряд уравновешен присутствием физиологического катиона.
Термин фармацевтически приемлемая соль означает соль, являющуюся фармацевтически приемлемой. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, не ограничиваясь ими: (1) соли добавления кислот, образованные неорганическими кислотами, например, соляной кислотой, бромоводородной кислотой, серной кислотой, азотной кислотой, фосфорной кислотой и т.п.; или образованные органическими кислотами, например, гликолевой кислотой, пировиноградной кислотой, молочной кислотой, малоновой кислотой, яблочной кислотой, малеиновой кислотой, фумаровой кислотой, винной кислотой, лимонной кислотой, 3-(4-гидроксибензоил)бензойной кислотой, коричной кислотой, миндальной кислотой, метансульфоновой кислотой, этансульфоновой кислотой, 1,2-этандисульфоновой кислотой, 2гидроксиэтансульфоновой кислотой, бензолсульфоновой кислотой, 4-хлорбензолсульфоновой кислотой, 2-нафталинсульфоновой кислотой, 4-толуолсульфоновой кислотой, камфорсульфоновой кислотой, лаурилсульфоновой кислотой, глюконовой кислотой, глутаминовой кислотой, салициловой кислотой, муконовой кислотой и т.п., либо (2) соли добавления оснований, образованные основаниями, сопряженными с любой из вышеперечисленных неорганических кислот, причем сопряженные основания включают катионный компонент, выбранный из №4, К4, Мд24, Са24, КНдК'4_д4, где К' представляет собой С1-3 алкил, а д представляет собой число, выбранное из 0, 1, 2, 3 или 4. Следует понимать, что все ссылки на фармацев- 6 026341 тически приемлемые соли включают формы добавления растворителей (сольваты) или кристаллические формы (вещества, кристаллизующиеся в различных формах) согласно определению, приведенному здесь, или аналогичную соль добавления кислоты.
Термин алкил относится к неразветвленному или разветвленному насыщенному одновалентному остатку углеводорода, содержащему от 1 до 30 атомов углерода. Термин 'Ό1-Μ алкил относится к алкилу, включающему от 1 до М атомов углерода, где М представляет собой целое число, принимающее следующие значения: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30. Термин С1-4 алкил относится к алкилу, включающему от 1 до 4 атомов углерода. Термин низший алкил обозначает линейный или разветвленный остаток углеводорода, включающий от 1 до 6 атомов углерода. С1.20 алкил здесь относится к алкилу, включающему от 1 до 20 атомов углерода. С1-10 алкил здесь относится к алкилу, включающему от 1 до 10 атомов углерода. Примеры алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы низших эфиров, включающие метил, этил, пропил, ίпропил, п-бутил, ί-бутил, 1-бутил или пентил, изопентил, неопентил, гексил, гептил и октил, но не ограничиваются ими. Термин (ар)алкил или (гетероарил)алкил означают алкильную группу, необязательно замещенную арильной или гетероарильной группой соответственно.
Термин алкенил относится к незамещенному углеводородному радикалу, содержащему от 2 до 10 атомов углерода и одну или две олефиновых двойных связи, предпочтительно одну этиленовую двойную связь. Термин С2-к алкенил относится к алкенилу, включающему от 2 до N атомов углерода, где N представляет собой целое число, принимающее следующие значения: 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. Термин С2-10 алкенил2 относится к алкенилу, включающему от 2 до 10 атомов углерода. Термин С2-4 алкенил относится к алкенилу, включающему от 2 до 4 атомов углерода. Примеры включают винил, 1-пропенил, 2-пропенил (аллил) или 2-бутенил (кротил), но не ограничиваются ими.
Термин арил, если не указано иное, относится здесь к замещенному или незамещенному фенилу (РЬ), бифенилу или нафтилу, в предпочтительном случае термин арил относится к замещенному или незамещенному фенилу. Арильная группа может быть замещена одной или более группами, выбранными из гидроксила, Р, С1, Вг, I, амино, алкиламино, ариламино, алкокси, арилокси, нитро, циан, сульфоновой кислоты, сульфата, фосфоновой кислоты, фосфата и фосфоната, незащищенных или, при необходимости защищенных, как известно специалистам, например, согласно Т.^. Стеепе апй Р.С.М. \Уи15. РгоЮсбуе Стоирк ίη Отдашс 8уп1Ьек1к, 3гй ей., 1оЬп \УПеу & 8опк, 1999.
Термин арилоксид, если не указано иное, относится здесь к замещенному или незамещенному феноксиду (РЬО-), р-фенилфеноксиду (р-РЬ-РЬО-) или нафтоксиду, в предпочтительном случае термин арилоксид относится к замещенному или незамещенному феноксиду. Арилоксидная группа может быть замещена одной или более группами, выбранными из гидроксила, Р, С1, Вг, I, -С(О)(низшего алкила), -С(О)О(низшего алкила), амино, алкиламино, ариламино, алкокси, арилокси, нитро, циано, сульфоновой кислоты, сульфата, фосфоновой кислоты, фосфата и фосфоната, незащищенных или, при необходимости, защищенных, как известно специалистам, например, согласно Т.^. Сгеепе апй Р.С.М. ^и1к, Рто1есйуе Стоирк ш Отдашс 8уп1Ьек1к, 3гй ей., 1оЬп \УПеу & 8опк, 1999.
Термин препарат или дозированное лекарственное средство включает как твердые, так и жидкие составы активного соединения, причем специалист должен учитывать, что активный ингредиент может существовать в виде различных препаратов в зависимости от желательной дозы и фармакокинетических параметров.
Термин вспомогательное вещество здесь относится к соединению, используемому для изготовления фармацевтической композиции, являющемуся в целом безопасным, нетоксическим и не являющемуся ни биологически, ни в ином смысле нежелательным, и включает вспомогательные вещества, приемлемые как для ветеринарного использования, так и для фармацевтического использования в препаратах, предназначенных для лечения людей.
Термин кристаллический относится к ситуации, когда твердый образец 8Р-4 или РР-4 обладает кристаллическими характеристиками, определяемыми путем рентгеновской порошковой дифракции или монокристальной рентгеновской методики.
Термин кристаллоподобный относится к ситуации, когда твердый образец 8Р-4 или РР-4 обладает кристаллическими характеристиками, определяемыми одним из способов, например, визуально или с помощью оптической или поляризационной микроскопии, но не обладает кристаллическими характеристиками при использовании других средств, например, рентгеновской порошковой дифракции. Способы визуального определения степени кристаллизации твердого образца визуально или с помощью оптической или поляризационной микроскопии описаны в патентах США <695> и <776>, оба из которых включены посредством ссылки. Твердый образец 8Р-4 или РР-4, являющийся кристаллоподобным может являться кристаллическим при определенных условиях, но становиться некристаллическим при других условиях.
Термин аморфный относится к ситуации, когда твердый образец 8Р-4 или РР-4 не является ни кристаллическим, ни кристаллоподобным.
Варианты воплощения
Первый вариант воплощения направлен на кристаллический (8)-изопропиловый эфир 2-(((8)- 7 026341 (((2К,3К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропионовой кислоты, представленный формулой 8р-4
5Р-4 имеющий следующие значения угла отражения 2θ(±0,2°) на дифрактограмме ΧΚΡΌ: 6,1 и 12,7.
В предпочтительное варианте указанный выше кристаллический 8Ρ-4 имеет значения угла отражения 2θ(°) на дифрактограмме ΧΚΡΌ приблизительно: 6,1, 8,2, 10,4, 12,7, 17,2, 17,7, 18,0, 18,8, 19,4, 19,8, 20,1, 20,8, 21,8 и 23,3.
В ещё одном предпочтительнов варианте указанный выше кристаллический 8Ρ-4 имеет по существу такую же дифрактограмму порошкового рентгеноструктурного анализа (ΧΚΡΌ), как показанная на фиг. 21.
Дозировка, введение и применение
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения вирусной инфекции гепатита С, содержащей терапевтически эффективное количество указанного выше кристаллического 8р-4 и фармацевтически приемлемый носитель.
В предпочтительном варианте указанная фармацевтическая композиция может дополнительно включать другой противовирусный агент.
В предпочтительных вариантах другой противовирусный агент представляет собой ингибитор протеазы N83 ВГС или ингибитор протеазы Ν85Α ВГС.
Соединение 8Ρ-4 можно составлять в виде разнообразных препаратов для перорального введения и носителей. Пероральное введение может быть в форме таблеток, таблеток с оболочкой, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий, сиропов или суспензий. Соединение 8Ρ-4 эффективно при введении в виде суппозиториев, среди прочих путей введения. Наиболее удобным путем введения в общем случае является пероральный при использовании подходящей схемы ежедневного приема, которую можно корректировать согласно степени тяжести заболевания и реакции пациента на противовирусные медикаменты.
Соединение 8Ρ-4 вместе с одним или более подходящих вспомогательных веществ, носителей или разбавителей можно составлять в виде фармацевтических композиций и лекарственных форм. Фармацевтические композиции и дозированные лекарственные формы могут состоять из стандартных ингредиентов в стандартных пропорциях, включать или не включать дополнительные активные соединения; дозированные лекарственные формы могут содержать любое подходящее эффективное количество активного ингредиента, соизмеримое с предполагаемым используемым диапазоном ежедневной дозы. Фармацевтические композиции можно использовать в виде твердых веществ, например, таблеток или капсул, полужидких препаратов, порошков, составов с замедленным высвобождением или жидкостей, например, суспензий, эмульсий или капсул для перорального применения; либо в форме суппозиториев для ректального или вагинального введения. Типичный препарат содержит от приблизительно 5% до приблизительно 95% активного соединения или соединений (мас./мас.).
Соединение 8Ρ-4 можно вводить в чистом виде, однако в общем случае их следует вводить в смеси с одним или более подходящих фармацевтических вспомогательных веществ, разбавителей или носителей, выбранных в соответствии с предполагаемым путем введения и стандартной фармацевтической практикой.
Твердые формы препаратов включают, например, порошки, таблетки, пилюли, капсулы, суппозитории и диспергируемые гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или несколько веществ, которые также могут действовать как разбавители, вкусовые агенты, солюбилизаторы, смазывающие вещества, суспендирующие вещества, связующие вещества, консерванты, разрыхлители для таблеток или капсулирующий материал. В порошках носитель обычно представляет собой тонко измельченное твердое вещество, находящееся в смеси с тонко измельченным активным компонентом. В таблетках активный компонент обычно смешивают с носителем, обладающим необходимой связующей емкостью в подходящих пропорциях, и прессуют в таблетки желательной формы и размера. Подходящие носители включают карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактозу, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакантовую камедь, метилцеллюлозу, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, легкоплавкий воск, масло какао и т.п., но не ограничиваются ими. Твердые формы препаратов могут содержать, в дополнение к активному компоненту, красители, вкусоароматические добавки, стабилизаторы, буферы, искусственные и натуральные подсластители, разрыхлители, загустители, солюбилизаторы и т.п. Примеры твердых составов приведены в ЕР 0524579; И8 2002/0142050; И8 2004/0224917; И8 2005/0048116; И8 2005/0058710; И8 2006/0034937; И8 2006/0057196; И8 2006/0188570; И8 2007/0026073; И8 2007/0059360;
- 8 026341
И8 2007/0077295; И8 2007/0099902; И8 2008/0014228; И8 6267985; И8 6294192; И8 6383471; И8 6395300; И8 6 569463; И8 6635278; И8 6645528; И8 6923988; И8 6932983; И8 7060294 и И8 7462608, каждый из которых включен посредством ссылки.
Жидкие составы, включая эмульсии, сиропы, эликсиры и водные суспензии, также подходят для перорального введения. Они включают твердые формы препаратов, которые предназначены для преобразования в жидкие формы препаратов незадолго до применения. Примеры жидких составов приведены в патентах США № 3994974; 5695784 и 6977257. Эмульсии могут быть приготовлены в растворах, например, водных растворах пропиленгликоля, или могут содержать эмульгаторы, например лецитин, сорбитанмоноолеат или гуммиарабик. Водные суспензии можно получить путем диспергирования тонкоизмельченного активного компонента в воде с вязким материалом, например, натуральными или синтетическими камедями, смолами, метилцеллюлозой, натрий-карбоксиметилцеллюлозой и другими широко известными суспендирующими агентами.
Соединение δρ-4 можно составлять для введения в виде суппозиториев. Вначале плавят легкоплавкий воск, например смесь глицеридов жирных кислот или масло какао, и гомогенно диспергируют в нем активный компонент, например, путем перемешивания. Затем расплавленную гомогенную смесь разливают в формы подходящего размера, позволяют ей остыть и затвердеть.
Соединение δΡ-4 можно составлять для вагинального введения. Вагинальные суппозитории, тампоны, кремы, гели, пасты, пены или спреи, содержащие в дополнение к активному ингредиенту носители, известные в данной области техники в качестве подходящих. Некоторые из этих составов также можно использовать в сочетании с презервативом со спермицидным агентом или без него.
Подходящие составы наряду с фармацевтическими носителями, разбавителями и вспомогательными веществами описаны в ВспипдЮп: Тйе 8с1еисе аиб Ртасйсе о£ РЬаттасу 1995, ебйеб Ьу Е. Майш, Маск РиЬЬкЫид Сотрапу, 191й ебйюи, Еак1ои, Реиикуйата, включенной в настоящий документ посредством ссылки. Специалист в области составов может модифицировать составы в пределах идеи спецификации для обеспечения ряда составов для конкретного пути введения без расчета композиций, содержащих соединения, рассматриваемые здесь как нестабильные или способные потерять терапевтическую активность.
Кроме того, очищенное соединение 3Р-4 можно независимо друг от друга составлять в сочетании с липосомами или мицеллами. В отношении липосом имеется в виду, что очищенные соединения можно составлять согласно описанию в патентах США №№ 4797285; 5013556; 5077056; 5077057; 5154930; 5192549; 5213804; 5225212; 5277914; 5316771; 5376380; 5549910; 5567434; 5736155; 5827533; 5882679; 5891468; 6060080; 6132763; 6143321; 6180134; 6200598; 6214375; 6224903; 6296870; 6653455; 6680068; 6726925; 7060689 и 7070801, каждый из которых включен посредством ссылки. В отношении мицелл имеется в виду, что очищенные соединения можно составлять согласно описанию в патентах США №№ 5145684 и 5091188, которые включены посредством ссылки.
В ещё одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции гепатита С у нуждающегося в этом пациента, где способ включает введение пациенту терапевтически эффективной дозы указанного выше кристаллического 8р-4.
Предпочтительно пациентом является человек.
В ещё одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения вирусной инфекции гепатита С у нуждающегося в этом пациента, где способ включает введение пациенту терапевтически эффективной дозы указанного выше кристаллического Зр-4 в сочетании с другим противовирусным агентом.
В предпочтительных вариантах другой противовирусный агент представляет собой ингибитор протеазы N83 вирусной инфекции гепатита С (ВГС) или ингибитор протеазы Ν85Α ВГС.
Термин субъект означает млекопитающее, включающее крупный рогатый скот, свиней, овец, цыплят, индюшку, буйвола, ламу, страуса, собак, кошек и человека, но не ограничивающееся ими, причем в предпочтительном случае субъект является человеком. Имеется в виду, что способ лечения субъекта согласно девятому варианту воплощения может включать использование любого из соединений, рассматриваемых здесь, по отдельности или в комбинации с еще одним соединением, описанным здесь.
Термин терапевтически эффективное количество здесь означает количество, необходимое для снижения симптомов заболевания у индивида. Дозу следует корректировать согласно индивидуальным требованиям в каждом конкретном случае. Дозировка может меняться в широких пределах в зависимости от различных факторов, например, тяжести заболевания, подлежащего лечению, возраста и общего состояния здоровья пациента, других медикаментов, с помощью которых осуществляют лечение пациента, путь и форму введения, а также предпочтения и опыт лечащего врача. Для перорального введения ежедневная дозировка между приблизительно 0,001 и приблизительно 10 г, включая все значения, находящиеся между этими величинами, например, 0,001, 0,0025, 0,005, 0,0075, 0,01, 0,025, 0,050, 0,075, 0,1, 0,125, 0,150, 0,175, 0,2, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9 и 9,5, в сутки должна соответствовать монотерапии и/или комбинированной терапии.
Конкретная ежедневная дозировка находится между приблизительно 0,01 и приблизительно 1 г в сутки, включая все значения приращения на 0,01 г (т.е. 10 мг) между ними, причем предпочтительная
- 9 026341 ежедневная дозировка находится между приблизительно 0,01 и приблизительно 0,8 г в сутки, более предпочтительно между приблизительно 0,01 и приблизительно 0,6 г в сутки и наиболее предпочтительно между приблизительно 0,01 и приблизительно 0,25 г в сутки, каждая из которых включает все значения приращения на 0,01 г между ними. В общем случае лечение начинают крупной начальной ударной дозой для быстрого снижения или устранения вируса, с последующим снижением дозы до уровня, достаточного для предотвращения рецидива заболевания. Специалист по лечению заболеваний, описанных здесь, способен без лишних экспериментов, полагаясь на свои знания, опыт и описание в настоящей заявке, установить терапевтически эффективное количество соединения, описанного здесь, для заданного заболевания и пациента.
Терапевтическую эффективность можно установить на основе тестов функции печени, включая уровни белка, например, белков сыворотки (например, альбумина, факторов свертывания, щелочной фосфатазы, аминотрансфераз (например, аланинтрансаминазы, аспартаттрансаминазы), 5'-нуклеозидазы, γ глутаминилтранспептидазы и т.д.), синтеза билирубина, синтеза холестерина и синтеза желчных кислот, но не ограничиваясь ими; функции метаболизма печени, включая метаболизм углеводов, аминокислот и аммиака, но не ограничиваясь ими. В качестве альтернативы терапевтическую эффективность можно отслеживать, измеряя РНК ВГС. Результаты этих тестов дадут возможность оптимизации дозы.
Следует понимать, что время между альтернативным введением противовирусных агентов может колебаться в пределах 1-24 ч, включая любой поддиапазон, находящийся между этими значениями, включая 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23 ч.
Примеры еще одного противовирусного агента включают ингибиторы протеазы N83 ВГС (см. ЕР 1881001, И8 2003187018, И8 2005267018, АО 2003006490, АО 200364456, АО 2004094452, АО 2005028502, АО 2005037214, АО 2005095403, АО 2007014920, АО 2007014921, АО 2007014922, АО 2007014925, АО 2007014926, АО 2007015824, АО 2008010921 и АО 2008010921); ингибиторы Ν85Β ВГС (см. И8 2004229840, И8 2005154056, И8 2005-98125, И8 20060194749, И8 20060241064, И8 20060293306, И8 2006040890, И8 2006040927, И8 2006166964, И8 2007275947, И8 6784166, И820072759300, АО 2002057287, АО 2002057425, АО 2003010141, АО 2003037895, АО 2003105770,
АО 2004000858, АО 2004002940, АО 2004002944, АО 2004002977, АО 2004003138, АО 2004041201,
АО 2004065367, АО 2004096210, АО 2005021568, АО 2005103045, АО 2005123087, АО 2006012078,
АО 2006020082, АО 2006065335, АО 2006065590, АО 2006093801, АО 200702602, АО 2007039142,
АО 2007039145, АО 2007076034, АО 2007088148, АО 2007092000 и А02007095269); ингибиторы N84 ВГС (см. АО 2005067900 и АО 2007070556); ингибиторы Ν85α ВГС (см. И8 2006276511, АО 2006035061, АО 2006100310, АО 2006120251 и АО 2006120252); агонисты То11-подобного рецептора (см. АО 2007093901) и другие ингибиторы (см. АО 2000006529, АО 2003101993, АО 2004009020, АО 2004014313, АО 2004014852 и АО 2004035571); и соединения, описанные в патентной заявке США № 12/053015, поданной 21 марта 2008 г. (И8 2010/0016251) (содержание которой включено посредством ссылки), интерферон-α, интерферон-β, ПЭГилированный интерферон-α, рибавирин, левовирин, вирамидин, другой нуклеозидный ингибитор полимеразы ВГС, ненуклеозидный ингибитор полимеразы ВГС, ингибитор протеазы ВГС, ингибитор хеликазы ВГС или ингибитор слияния ВГС, но не ограничиваются ими.
Если соединение 8Р-4 вводят в комбинации с еще одним противовирусным агентом, активность может быть увеличена по сравнению с исходным соединением. Если лечение представляет собой комбинированную терапию, такое введение может быть одновременным или последовательным по отношению к введению производных нуклеозида. Одновременное введение здесь, таким образом, включает введение агентов в одно и то же время или в разное время. Введение двух или более агентов в одно и то же время может достигаться за счет единственного состава, содержащего два или более активных ингредиентов или за счет практически одновременного введения двух или более лекарственных форм с одиночным активным агентом.
Следует понимать, что ссылки, приведенные здесь на лечение, распространяются как на профилактику, так и на лечение существующих состояний. Кроме того, термин лечение инфекции ВГС здесь также включает лечение или профилактику заболевания или состояния, ассоциированных с или опосредованных инфекцией ВГС, или их клинических симптомов.
Получение
Далее описан способ изготовления любого из соединений 4, КР-4 или 8Р-4
- 10 026341
ϊρ-4 Λρ-4 который включает:
а) реакцию изопропилаланата, А, ди-ЬО-фенилфосфата. В, 2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридина, 3, и основания, с целью получения первой смеси, включающей по меньшей мере один из 8Р-4 и КР-4
Р ν НО Р
А в 3 где X представляет собой основание, сопряженное с кислотой, η составляет 0 или 1, а ЬО представляет собой уходящую группу;
b) реакцию первой смеси с защитным соединением, позволяющую получить вторую смесь, включающую по меньшей мере один из защищенного 8Р-4 и защищенного КР-4; и
c) необязательное воздействие на вторую смесь путем кристаллизации, хроматографии или экстракции с целью получения 4, 8Р-4 или КР-4.
Предпочтительно изопропилаланат присутствует в виде соли соляной кислоты, предпочтительно практически безводной.
Предпочтительно основание представляет собой Ν-метилимидазол.
Предпочтительно молярное соотношение А:В:3 составляет приблизительно 1,6:1,3:1. Предпочтительно защитное соединение представляет собой ΐ-бутилдиметилсилилхлорид.
Далее описан ещё один способ получения 8Р-4 или КР-4, включающий:
а) реакцию изопропилаланата, А, ди-ЬО-фенилфосфата, В, 2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридина, 3, и основания, с целью получения первой смеси, включающей по меньшей мере один из 8Р-4 и КР-4 о
у но р
А В 3 где X представляет собой основание, сопряженное с кислотой, η составляет 0 или 1, а ЬО представляет собой уходящую группу; и Ь) необязательное воздействие на вторую смесь путем кристаллизации, хроматографии или экстракции с целью получения очищенных 8Р-4 или КР-4.
Предпочтительно способ включает очистку второй смеси или очищенного КР-4 путем растворения или суспендирования второй смеси или смеси очищенного КР-4 в растворителе; с последующей необязательной затравкой кристаллическим КР-4; и внесение соответствующего антирастворителя для получения кристаллического КР-4.
Предпочтительно способ включает очистку второй смеси или очищенного 8Р-4 путем б) растворения или суспендирования второй смеси или очищенного 8Р-4 в растворителе с последующей затравкой кристаллическим 8Р-4 при приблизительно комнатной температуре; сбор первого твердого вещества, большую часть которого составляет 8Р-4; растворение первого твердого вещества в растворителе при температуре его перегонки; и охлаждение или внесение антирастворителя для получения второго твердого вещества.
Предпочтительно способ включает дальнейшую очистку 8Р-4 путем б) растворения или суспендирования второй смеси или смеси очищенного 8Р-4 в первом растворителе с последующим внесением антирастворителя для получения первой композиции, в которой остаточный растворитель/антирастворитель удаляют декантацией, получая остаток; обработку остатка раствором, содержащим первый растворитель и антирастворитель для получения второй композиции, что позволяет при понижении давления получить первое твердое вещество; растворение или суспендирование первого твердого вещества с помощью второго растворителя с целью получения третьей композиции; внесение затравочных кристаллов 8Р-4 в третью композицию; сбор второго твердого вещества; растворение или суспендирование второго твердого вещества в третьем растворителе, необязательно нагретом до температуры перегонки третьего растворителя, для получения четвертой композиции и, при необходимости, охла- 11 026341 ждение четвертой композиции с целью получения третьего твердого вещества, включающего 8Р-4, которое собирают фильтрацией.
Предпочтительно 8Р-4, 8Р-4 подвергают дальнейшей очистке второй смесью или очищенного 8Р-4 путем ά) внесения силикагеля во вторую смесь или очищенный 8Р-4 с последующим выпариванием растворителя с целью получения сухой пасты; перемешивания сухой суспензии в первой комбинации растворителя/антирастворителя с целью получения первой влажной пасты; декантации первой комбинации растворителя/антирастворителя из первой влажной пасты с целью получения второй влажной пасты и первой композиции; добавления второй комбинации растворителя/антирастворителя ко второй влажной пасте с последующим перемешиванием; декантации второй комбинации растворителя/антирастворителя из второй влажной пасты с целью получения третьей влажной пасты и второй композиции; необязательного повторения этапов §)-Ь) по отношению к третьей влажной пасте или дополнительным влажным пастам; выпаривания растворителя из второй композиции и, необязательно, из любой дополнительной композиции, полученной в ходе необязательного этапа ί) с целью получения первого твердого вещества; растворения или суспендирования первого твердого вещества в растворе, содержащем третий растворитель и, необязательно, четвертый растворитель, с целью получения третьей композиции; необязательного внесения затравочных кристаллов 8Р-4 в третью композицию; получения второго твердого вещества, включающего 8Р-4, из третьей композиции; и необязательной перекристаллизации второго твердого вещества с использованием третьего растворителя с целью получения третьего твердого вещества, включающего 8Р-4.
Специалист должен учитывать, что соединения можно разделять путем традиционной экстракции, традиционной кристаллизации или традиционных хроматографических методик. Традиционные хроматографические методики включают хроматографию на силикагеле (используя, например, 3-5% метанол в ДХМ или 4-6% изопропанол в ДХМ) с целью получения повышенных уровней одного изомера (50100%) и его дальнейшей кристаллизации, но не ограничиваются ей. В качестве альтернативы можно использовать обращенно-фазную хроматографию (используя, например, 1-30% ацетонитрил-водную подвижную фазу). Кроме того, соединения можно выделять с помощью сверхкритической жидкостной хроматографии (СЖХ) с диоксидом углерода в качестве основного растворителя и спиртами, например, метанолом, в качестве модификатора, предпочтительно используя подходящие хиральные среды, например, Оаюе1 СПга1раск ΙΑ. В качестве альтернативы можно применить хроматографию на псевдоподвижном слое, используя подходящие хиральные среды, например, Паюе1 СПта1Раск ΙΑ, и смесь растворителей, например гексан/изопропанол, или одиночные растворители, например этилацетат.
Далее описан ещё один способ изготовления 8Р-4, включающий:
а) реакцию изопропилаланилфосфорамидата с 3'-О-защищенным или незащищенным 3 и основным реагентом с целью получения композиции, включающей защищенный или незащищенный 8Р-4
где изопропилаланилфосфорамидат состоит из смеси диастереомеров, представленных следующими структурами:
о о
II + II
Р··,, + Р-.„ ъож <'<№1А1а-!Рг ьо·/ \ 0№
ΟΡΗ ΝΗΑΙα-ίΡτ
С С' где соотношение С:С' составляет приблизительно 1:1.
Предпочтительно реагент представляет собой ΐ-бутилмагнийхлорид, а соотношение С:С' больше или равно приблизительно 1:1.
Предпочтительно реагент представляет собой ΐ-бутилмагнийхлорид, а соотношение С:С' больше приблизительно 1:1.
Предпочтительно реагент представляет собой ΐ-бутилмагнийхлорид, а соотношение С:С' приблизительно 1,5:1, приблизительно 2,3:1, приблизительно 4:1, приблизительно 5,7:1, приблизительно 9:1, приблизительно 19:1, приблизительно 32,3:1, приблизительно 49:1 или приблизительно 99:1.
Предпочтительно ЬС выбирают из 2,4-динитрофеноксида, 4-нитрофеноксида, 2-нитрофеноксида, 2-хлор-4-нитрофеноксида, 2,4-дихлорфеноксида и пентафторфеноксида, основный реагент представляет собой ΐ-бутилмагнийхлорид, а соотношение С:С' больше приблизительно 1,5:1, приблизительно 2,3:1, приблизительно 4:1, приблизительно 5,7:1, приблизительно 9:1, приблизительно 19:1, приблизительно 32,3:1, приблизительно 49:1 или приблизительно 99:1.
Предпочтительно способ получения 8Р-4 включает:
а) реакцию изопропилаланилфосфорамидата (С) с 3'-О-защищенным или незащищенным 3 и основ- 12 026341 ным реагентом с целью получения композиции, включающей защищенный или незащищенный 8Р-4
з с где Ζ представляет собой защитную группу или атом водорода;
ЬС' представляет собой уходящую группу; и
Ь) необязательного воздействия на полученный защищенный или незащищенный 8Р-4 путем хроматографии, экстракции или кристаллизации с целью получения очищенного защищенного или незащищенного 8Р-4. В подварианте воплощения ЬС' представляет собой тозилат, камфорсульфонат или арилоксид, замещенный по меньшей мере одной электроноакцепторной группой; более предпочтительно ЬС' выбирают из 2,4-динитрофеноксида, 4-нитрофеноксида, 2-нитрофеноксида, 2-хлор-4-нитрофеноксида, 2,4-дихлорфеноксида или пентафторфеноксида. В другом подварианте воплощения, если 8Р-4 является защищенным, т.е. Ζ не является атомом водорода, способ согласно девятому варианту воплощения направлен, кроме того, на удаление защитной группы с защищенного 8Р-4. В другом подварианте воплощения реакцию осуществляют в полярном апротонном растворителе, например, тетрагидрофуране или другом эфирном растворителе, по отдельности или в комбинации друг с другом или с С2-С7 нитрилом, например ацетонитрилом.
Предпочтительно способ, кроме того, включает:
1) реакцию (ЬС')Р(О) (ЬС)2, где ЬС, независимо от ЬС', представляет собой уходящую группу, с (ί) изопропилаланатом и первым основанием с целью получения (ЬС')Р(О) (ЬС) (ΝΗΛΙπ-Ργ). с последующей реакцией (ЪС')Р(О)(ЪС)(РНЛ1а-'Рг) с фенолом и вторым основанием с целью получения смеси, включающей С и С', (ίί) фенолом и первым основанием с целью получения (ЬС')Р(О)(ЬС)(ОРН), с последующей реакцией (ЬС')Р(О)(ЬС)(ОРН) с изопропилаланатом и вторым основанием с целью получения смеси, включающей С и С', либо (ίίί) объединенными изопропилаланатом, фенолом и, по меньшей мере, одним основанием с целью получения смеси, включающей С и С'; либо
2) реакцию (РНО)Р(О)2, (ЬС)2, где ЬС представляет собой уходящую группу, с (ί) изопропилаланатом и первым основанием с целью получения (Р11О)Р(О)(ЬС)(РНЛ1а-'Рг). с последующей реакцией (Р11О)Р(О)(ЬС)(РНЛ1а-'Рг) с предшественником уходящей группы (ЬС'Н) и вторым основанием с целью получения смеси, включающей С и С' о о Е0,А-'Р’^',,ИНА1а-1Рг
ОРИ '\''0РЬ
ИНАЫРг
С' и воздействия на смесь путем хроматографии или кристаллизации смеси с целью получения С. В аспекте девятого варианта воплощения изопропилаланат присутствует в виде соли соляной кислоты, предпочтительно, практически безводной.
Примеры
Следующие примеры служат не для ограничения, а для лучшего понимания настоящего описания.
Аспекты синтеза.
Для получения уридинового нуклеозида можно было использовать трибензоилцитидин в качестве улучшенного интермедиата при синтезе некоторых 3',5'-диацилированных аналогов соединения 3 (см. ниже), полученный ранее в масштабах опытно-промышленного производства (см. \УО 2006/031725 или И8 2006/0122146, полностью включенные посредством ссылки). Обнаружено, что следующий способ являлся масштабируемым и рентабельным.
ΝΗΒζ о о
2 3
3',5'-О-дибензоил-2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метил-^-бензоилцитидин (1) получали согласно способу, описанному в \УО 2006/031725 и \УО 2008/045419, полностью включенных посредством ссылки. Соединение 1 обрабатывали 70% водной уксусной кислотой с целью образования 3',5'-О-дибензоил-2'-дезокси2'-фтор-2'-С-метилуридин (2). Бензойные эфиры можно было гидролизовать различными способами с равным успехом, например алкоксидами в спиртовых растворителях, например метоксидом натрия в метаноле, карбонатом калия в метаноле или аналогах этанола, алкиламинами, например, метиламином в метаноле, бутиламином и т.д. Для работ в промышленном масштабе выбрали метанольный аммиак. Ури- 13 026341 диновый продукт (3) можно было очистить кристаллизацией, получая 70% выход от трибензоилцитидина (1).
В ряде литературных источников подробно описаны различные пути и условия получения фосфорамидатов при использовании многократных эквивалентов реагентов. См., например, МсОшдап с1 а1. 1. Меб. СЬет. 2005, 48, 3504-3515 и МсОшдап е) а1. 1. Меб. СЬет. 2006, 49, 7215. Для работ в промышленном масштабе в настоящее время известен только один пример, описанный в ЬеЙ81еп е) а1., Огд. Ргосе88 Кеч Эеу. 2002, 6, 819-822 (ЬеЙ81еп). В этом источнике авторы ввели концепцию одностадийной процедуры, в которой гидрохлорид аминокислоты и фенилдихлорфосфат совместно реагировали с Νметилимидазолом в дихлорметане. Затем вносили нуклеозид, образуя искомый 5'-О-фосфорамидатный продукт, который в данном случае должен был давать на выходе соединение, представленное формулой 4. К сожалению, процедура ЬеНЧеп имела недостатки. Например, в ходе процедуры ЬеЙ81еп использовалось избыточное количество реагентов, значительно превышавшее необходимое количество, что увеличивало стоимость и трудоемкость хроматографической очистки. Кроме того, ЬеЙ81еп предполагал, что можно управлять селективностью реакции по отношению к 5'-гидроксилу по сравнению с 3'гидроксилом в большей степени, чем это описано в литературных источниках, за счет использования низких температур и медленного внесения нуклеозида.
5 6
5'-О-фосфорамидат (2 диастереомера)
З'-О-фосфорамидат (2 диастереомера)
3',5'-бис-О-фосфорамидат (4 диастереомера)
Использование процедуры ЬеНЧеп для соединений, описанных здесь, обеспечивало получение приблизительно 1-5% монозамещенных 3'-О-фосфорамидатных диастереомеров (5) и приблизительно 1030% бис-замещенного продукта (6). Поскольку полярность 3'-диастереомеров была очень близка к полярности целевых 5'-диастереомеров (4), хроматографическое разделение представляло очень сложную задачу. Масштабирование способа было практически невозможным без потери значительной части менее полярных 5'-диастреомеров (4) или допущения высокого уровня загрязненности 3'-диастереомерами (5). При исходном 50-г масштабе итоговый продукт был загрязнен 3'-диастереомером (5), совместно элюировавшимся с менее полярной частью 5'-диастереомера (4), приблизительно на 3%.
Здесь описаны условия реакции, использующие меньшее количество реагентов, и способ селективного удаления примеси 3'-О-фосфорамидатных диастереомеров (5) с более легким хроматографическим разделением, что позволяло получить целевые 5'-О-фосфорамидатные диастереомеры значительно большей чистоты (4).
В отношении стехиометрии реагентов выполнили исследование, в котором систематически меняли стехиометрический состав реагентов и отслеживали результаты по фосфор-ЯМР необработанного продукта реакции, как сообщал ЬеНЧеп. В более успешных прогонах сравнивали полученный выход и чистоту целевого продукта. Обнаружено, что первичный 5'-гидроксил реагировал с большей скоростью, чем вторичный 3'-гидроксил. Это создавало конкурентную ситуацию между ходом реакций использования всех исходных нуклеотидов и превращения 5'- и 3'-монозамещенных продуктов (4 и 5) в 5',3'-бисзамещенные продукты (6). 3'-монозамещенный продукт превращался в бис-продукт с большей скоростью, чем 5'-монозамещенный продукт, что давало возможность снизить уровень загрязненности 3'диастереомером за счет сдвига реакции в сторону бис-замещенных продуктов. В то же время более эффективный способ удаления 3'-диастереомеров заключался в оптимизации реакции в сторону получения большего количества целевого 5'-диастереомера без необходимости превращения столь большого количества 5'-диастереомера в бис-замещенный продукт (6). Кроме того, обнаружено, что гидрохлорид аминокислоты был очень гигроскопичен. Поскольку присутствующая вода должна была расходовать эквивалентное количество фенилдихлорфосфата, следовало принять меры для поддержания аминокислоты в практически безводном состоянии или для ее практически полного обезвоживания перед использованием. Вкратце, ЬеНЧеп сообщил, что оптимальное соотношение аминокислоты к фенилдихлорфосфату к нуклеозиду составляло 3,5:2,5:1 соответственно. Обнаружено, что оптимальное соотношение аминокислоты к фенилдихлорфосфату к нуклеозиду, составлявшее приблизительно 1,6 к приблизительно 1,3 к приблизительно 1 было оптимальным при условиях, в которых существовала возможность эффективного удаления 3'-диастереомера, а гидрохлорид аминокислоты был практически безводным. За счет использования меньшего количества реагентов достигалось снижение издержек наряду с упрощением хромато- 14 026341 графического разделения целевого продукта от побочных продуктов и сниженного уровня бисдиастереомеров.
В одной из альтернативных процедур в два этапа получили 3'-гидроксиблокированное производное соединения 3, используя !-бутилдиметилсилильную блокирующую группу. Указанное производное преобразовали в его 5'-фосфорамидатное производное. Желательная цель состояла в возможности удаления силильной группы впоследствии и в отсутствии 3'-изомеров (5) или 3',5'-бис-фосфорамидатов (6). Аналогичный подход продемонстрирован Вогсй апй Рпек (патент США 5233031) при низком общем выходе алкилфосфорамидата.
Еще один альтернативный подход состоял в использовании прямого синтеза, а затем - химических методик, помогающих дифференцировать примеси 3'-диастереомера 5 от целевых 5'-диастереомеров 4 и облегчающих разделение. Желательной являлась группа, способная селективно реагировать со свободным первичным гидроксилом 3'-О-фосфорамидатной примеси 5 по сравнению со свободным вторичным гидроксилом целевого 5'-О-фосфорамидата 4. Также было желательно, чтобы блокирующая группа значительно изменяла полярность полученного 5'-О-блокированного 3'-О-фосфорамидатного продукта по сравнению с целевым 5'-О-фосфорамидатом 4. Дополнительного этапа для удаления блокирующей группы не требовалось, поскольку целевые 5'-диастереомеры 4 не изменялись. Затем химически модифицированные 3'-диастереомеры должны давать возможность облегченного хроматографического разделения или разделения с помощью специальных очищающих носителей или путем экстракции.
В частности, этим требованиям отвечает блокирующая группа трет-бутилдиметилсилил (1ВЭМ8); она была первой группой, использованной для демонстрации и дальнейшего применения в многокилограммовом масштабе. При определенных условиях, например, при использовании пиридина в качестве растворителя и основания, 1ВЭМ8-группа реагировала по положению первичного гидроксила с высокой селективностью по сравнению с положением 3'-вторичного гидроксила. Фосфорамидатная реакция использовала в качестве основания Ν-метилимидазол (ЯМ1). В присутствии НМ1 силилирование было менее селективным. В предпочтительном случае количество Ш1 следовало уменьшить. Это можно было легко осуществить после фосфорамидатной реакции путем промывки реакционного раствора 1 н. соляной кислотой. Ш1 и остаточный исходный нуклеозид удаляли, оставляя необработанную смесь моно-и бис-замещенных продуктов и побочных продуктов реакции. Указанную смесь затем растворяли в пиридине и обрабатывали трет-бутилдиметилсилилхлоридом. 3'-монозамещенный продукт 5 в течение нескольких часов или меньшего времени превращали в 5'-О-1ВЭМ8-3'-О-фосфорамидат 7. Ход реакции отслеживали с помощью ВЭЖХ. Полярность этого силилированного продукта 7 была меньше, чем полярность бис-фосфорамидата 6, и он легко удалялся с помощью хроматографии. Этот способ позволял снизить уровень 3'-монофосфорамидата 5 до величины менее 0,1% от уровня 5'-продукта 4 по сравнению с 1-3% без силилирования. Аналогичным образом, такое же влияние оказывала обработка диметокситрифенилметилхлоридом (ЭМТ-С1) при тех же условиях. Кроме того, этот способ обеспечивал упрощенную идентификацию продукта ЭМТ-реакции с помощью ТСХ, поскольку ЭМТ-содержащие молекулы при нагревании или воздействии кислоты приобретали светло-оранжевую окраску. Кроме того, можно предполагать возможность использования многих других блокирующих групп, как отмечено выше.
Как управление условиями реакции, так и очистка 3'-примесей являются общепринятыми способами и их можно использовать для большинства нуклеозидфосфорамидатов со свободным 3'-гидроксилом. Фосфорамидатная группа может представлять собой любую комбинацию эфира аминокислоты и ароматического спирта. Нуклеозидная группа может представлять собой любой нуклеозид, в котором 5'фосфорамидат будет приводить к образованию 5'-монофосфата и впоследствии может быть метаболизирован в форму 5'-трифосфата.
Следующая схема представляет собой схему основной реакции, иллюстрирующую получение изопропил-Ь-аланатфенилфосфорамидата 2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридина с основным продуктом целевым 5'-О-фосфорамидатом (4, два диастереомера) и побочными продуктами - 3'-О-фосфорамидатом (5, два диастереомера) и 3',5'-бис-О-фосфорамидатом (6, четыре диастереомера). Реагенты вносили в стехиометрических соотношениях, как описано в способе в разделе получения. Реакцию проводили, пока количество исходного материала не снижалось до приблизительно 5%, согласно УФ-визуализации при тонкослойной хроматографии (ТСХ). Кроме того, СЭЖХ/МС определяла, что количество образованного 3',5'-бис-фосфорамидата 6 составляло приблизительно 10% по сравнению с целевым 5'-продуктом. После остановки реакции и обработки кислой водной средой неочищенный остаток из органического слоя подготавливали для силилирования. При желательных условиях реакции силильная группа, предпочтительно, реагировала со свободным 5'-гидроксилом 3'-О-фосфорамидата, образуя соединение 7. Реакцию продолжали, пока 3'-О-фосфорамидат не переставал обнаруживаться с помощью СЭЖХ/МС.
- 15 026341
После проведения реакции силилирования целевой продукт подвергали хроматографии на силикагеле и элюировали градиентом метанола в дихлорметане (1-4%). Целевой 5'-монофосфорамидат 4 элюировался последним.
Способ получения
Пример 1. Получение 2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридина (3)
В 10-л колбу вносили 3',5'-О-дибензоил-2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилЮ4-бензоилцитидин (500 г, 0,874 моль) и 70% водную уксусную кислоту (7,5 л). Раствор нагревали с обратным холодильником (110°С) в течение 20 ч. Полноту реакции отслеживали с помощью ТСХ (Κί 0,6 в 5% метаноле в дихлорметане (ДХМ)). Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой (2 л). После перемешивания в течение 2 ч полученный осадок собирали фильтрованием, твердое вещество промывали водой (5 л) и высушивали на воздухе при комнатной температуре в течение 12 ч, получая 360 г (88%). Этот интермедиат дибензоилуридина полностью использовали непосредственно на следующем этапе путем его внесения в свежеприготовленный метанольный аммиак (5,4 л, приблизительно 25%) при 0°С. Эту температуру поддерживали в течение 3 ч и затем позволяли нагреться до 15°С в течение 24 ч. Полноту реакции отслеживали с помощью ТСХ (Κί 0,4 в 10% метаноле в ДХМ). Реакционную смесь фильтровали через фильтрующую подушку из целита и концентрировали при пониженном давлении, получая неочищенный продукт (216 г). Неочищенный продукт перемешивали с этилацетатом (325 мл) в течение 3 ч при комнатной температуре. Полученное твердое вещество собирали фильтрованием и промывали этилацетатом (216 мл). Твердое вещество высушивали в вакууме при комнатной температуре в течение 4 ч, получая 160 г (78%) целевого продукта с 98,7% чистотой согласно ВЭЖХ.
Ή-ЯМР (ДМСО-а6) δ 11,44 (шс, 1Н, ΝΗ), 7,95 (д, 1Н, С-6Н), 5,97 (д, 1Н, С-1'Н), 5,64 (д, 1Н, С-5Н), 3,84-3,77 (м, 3Н, С-5'-На, С-3'Н. С-4'Н), 3,63-3,60 (м, 1Н, С5'-НЬ), 1,23 (д, 3Н, С-2'-СН3). Е8-М8 М-1 259.
Пример 2. Получение изопропилового эфира (8)-2-{[(1Κ,4Κ,5Κ)-5-(2,4-Диоксо-3,4-дигидро-2Нпиримидин-1-ил)-4-(Κ)-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагцдрофуран-2-илметокси]феноксифосфориламино}пропионовой кислоты (4)
Синоним: Смесь диастереомеров 5'-О-(изопропил-Ь-аланатфенилфосфорамидил)-2'-дезокси-2'фтор-2'-С-метилуридина.
5-л 3-горлую колбу оборудовали механической мешалкой, ледяной баней с концентрированным солевым раствором, внутренним термометром и атмосферой азота. В колбу загружали гидрохлорид сложного изопропилового эфира Ь-аланина (82,0 г, 0,490 моль) и безводный дихлорметан (0,80 л). В процессе
- 16 026341 перемешивания этой смеси однократно вносили фенилдихлорфосфат (85,0 г, 0,40 моль) и перемешивали. Поддерживая температуру внутри колбы в диапазоне от -5 до 5°С, в течение получаса вносили раствор Ν-метилимидазола (ΝΜΙ, 250 г, 3,07 моль) в дихлорметане (250 мл). Раствор оставляли перемешиваться в течение 1 ч при этом диапазоне температур. В один прием вносили 2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридин (3, 80,0 г, 0,307 моль) при 0°С и затем позволяли реакционной колбе медленно нагреться на бане с концентрированным солевым раствором. Спустя 1 ч температура внутри колбы возрастала до -2°С. ТСХ (5% Метанол в ДХМ) в момент времени 1 ч показала, что было израсходовано более 50% нуклеозида. Баню удаляли, реакционная колба нагревалась до комнатной температуры в течение следующего 1 ч. Спустя 3 и 5 ч ТСХ показала, что было израсходовано 95% исходного нуклеозида. Реакцию останавливали внесением метанола (100 мл) и перемешиванием реакционной смеси в течение 5 мин.
Реакционную смесь промывали 1 н. НС1 (2x500 мл), а затем насыщенным раствором бикарбоната натрия (2x500 мл). Отделенный органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия (50 г) и фильтровали. Раствор выпаривали при пониженном давлении, а затем при глубоком вакууме досуха, получая неочищенный продукт в виде вязкого масла (170 г). Выполняли ЯМР неочищенного продукта (31Р и 1Н). 31Р-ЯМР показал, что приблизительно 1% общего связанного фосфора был обусловлен присутствием 3'-изомера 5.
К неочищенному продукту добавляли безводный пиридин (17 00 мл). Раствор выпаривали при пониженном давлении, а затем при глубоком вакууме с целью снижения содержания воды в неочищенной смеси путем совместного выпаривания. Полученное масло повторно растворяли в безводном пиридине (500 мл), а затем вносили избыток 1-бутилдиметилсилилхлорида (9,0 г, 60 мМ). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Ход реакции отслеживали с помощью СЭЖХ/МС. Спустя 3 ч 3'-примесь 5 более не обнаруживалась, и реакцию останавливали внесением метанола (50 мл).
Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении до состояния масла. Остаток растворяли в этилацетате (1,5 л) и промывали 1 н. НС1 (2x500 мл), а затем насыщенным раствором бикарбоната натрия (2x500 мл). Органический слой высушивали безводным сульфатом натрия (50 г), фильтровали и выпаривали при пониженном давлении, получая неочищенный продукт в виде бледно-желтого масла.
Неочищенное масло разбавляли равным объемом дихлорметана и помещали на 2,5 Кд картридж с силикагелем в модуле центробежного компрессора при давлении воздуха 100 фунтов на квадратный дюйм (ρδί). Используя градиентный насос при 60 ρδί и скорость потока 400 мл/мин, картридж промывали метиленхлоридом (4 л), а затем градиентом 1-4% метанола в метиленхлориде (48 л). Большую часть основных примесей (ди-(изопропилаланил)фенилфосфата, 3',5'-бис-фосфорамидата (6), аддукта 3'фосфорамидат-5'-ТВИМ§ (7)) элюировали -3% градиентом. Целевой продукт элюировался между 3 и 4% метанола. Фракции, содержавшие продукт, сортировали на две партии. Первая содержала небольшое количество верхних примесей, а последняя представляла собой чистый продукт. Первый набор фракций содержал небольшое количество менее полярных примесей (верхних примесей), например 3',5'-бисфосфорамидата и диаланилфенилфосфата, и главным образом - диастереомер Кр, и требовал очистки на второй колонке. (Относительная терминология верхний - нижний относится к элюированию при нормально-фазовой хроматографии на силикагеле, причем верхний изомер означает первый элюирующийся изомер). Второй набор фракций не содержал значительного количества примесей - только оставшийся диастереомер КР, и главным образом- диастереомер 8Р. Затем его рекомбинировали с фракциями после двойной колоночной очистки. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, полученную белую пену высушивали (0,20 мм рт.ст.) в течение 1 ч, получая 42 г загрязненной партии (соотношение верхнего и нижнего изомера 4:1 согласно 31Р-ЯМР) и 38 г чистой партии (соотношение верхнего и нижнего изомера 1:3). Загрязненную партию повторно пропускали через колонку аналогичным образом, получая 3,8 г верхнего изомера, чистого на 97% (отдельная фракция) и 36 г чистого продукта в соотношении 4:1. Две основные партии растворяли в ДХМ, объединяли, выпаривали при пониженном давлении и высушивали (50°С, 0,2 мм рт.ст., 24 ч), получая 74 г (45,7%) чистого продукта 4 с соотношением диастереомеров 48:51 в виде белой пены с температурой плавления приблизительно 75-85°С.
Для получения аморфного твердого вещества смеси диастереомеров 74 г белой пены перемешивали с ΐ-бутилметиловым эфиром (750 мл), что приводило к частичному растворению и образованию клейкого твердого остатка. При перемешивании медленно вносили гептан (750 мл) и механически перемешивали суспензию в течение 1 ч до превращения клейкой массы в белое твердое вещество. Твердое вещество соскребали шпателем и фильтровали полученную суспензию. Твердое вещество промывали гептаном (4x50 мл) и высушивали в вакууме (50°С, 0,2 мм рт.ст., 24 ч), получая белый аморфный порошок (64 г) с широким диапазоном плавления, приблизительно равным 70-80°С. 1Н и 31Р ЯМР соответствовали структуре; ВЭЖХ определяла степень чистоты 99,8% при соотношении диастереомеров 46:54 (также подтвержденным 31Р ЯМР).
Альтернативный способ получения твердой смеси 4. После хроматографии остаток дважды совместно выпаривали с дихлорметаном (5 мл/г) и высушивали в течение 24 ч при 35-40°С и 35-45 мторр. Остаток пены просеивали через сетку с размером ячейки 250 мкм, а затем высушивали при тех же условиях, пока содержание остаточного дихлорметана не снижалось до величины менее 400 м.д., согласно ГХ в
- 17 026341 паровой фазе. Полученный аморфный порошок с цветом от грязно-белого до белого характеризовался температурным интервалом стеклования от 53,7 до 63,5°С.
Оценка характеристик смеси изомеров (4) : Ή-ЯМР (СЭС13) δ 10,05 (шс, 1Н, ΝΗ, 8Р), 10,00 (шс, 1Н, ΝΗ, КР), 7,49 (д, 1Н, С6-Н, 8Р), 7,36 (м, 5Н, С6-Н, КР, ароматический), 7,23-7,14 (м, 6Н, КР/8Р, ароматический), 6,18 (шд, 2Н, С1'-Н, КР/8Р), 5,63 (д, 1Н, С5-Н, 8Р), 5,58 (д, 1Н, С5-Н, КР), 5,01 (м, 2Н, СН-(СН3)2, КР/8Р), 4,46-4,33 (м, 8Н, С-5'-Н2, ай-ΝΗ, С3'-ОН, КР/8Р), 4,12 (м, 2Н, а1а-СН-СН3, КР/8Р), 4,01-3,85 (м, 4Н, С3'-Н, С4'-Н, КР/8Р), 1,39-1,22 (м, 12Н, все СН3, КР/8Р).
31Р-ЯМР (СйС13) δ 3,60 (КР), 3,20 8Р относительно трифенилфосфата при - 17,80 м.д. Е8-М8 М+1530,2. Элементный анализ: Рассчитанный % (включая 0,29% воды согласно анализу Карла Фишера) С, 49,75; Н, 5,54; Ν, 7,90, Р, 3,58, Р, 5,84. Обнаруженный %: С, 49,50; Н, 5,44; Ν, 7,85; Р, 3,62; Р, 6,05.
Обсуждение разделения изомеров
Соединение 4 вследствие хиральности фосфора включало два диастереомера, обозначенные как 8Р4 и КР-4. Оценку стереохимических свойств выполняли на основе монокристального рентгеноструктурного анализа 8Р-4. Как КР-4, так и 8Р-4 давали кристаллический продукт.
Процедуры кристаллизации описаны ниже.
Пример 3. Кристаллизация изомера КР-4.
Хроматографическую фракцию, содержавшую элюирующийся первый менее полярный изомер КР-4 (3,8 г, 97% чистоты) растворяли в изопропаноле (36 г) и разбавляли гептаном до непрозрачности (72 г). В раствор вносили затравку и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Полученное твердое вещество собирали вакуумной фильтрацией, промывали гептаном (2x20 мл) и высушивали (50°С, 0,2 мм, 24 ч), получая 2,3 г очень мелких белых игловидных кристаллов с температурой плавления 136,2137,8°С. Чистота полученного материала согласно ВЭЖХ составляла 99,02%.
КР-4: Ή-ЯМР (СОС13) δ 9,10 (шс, 1Н, ΝΗ), 7,36 (м, 2Н, о-ароматический), 7,26-7,16 (м, 4 Н, С6-Н, т,р-ароматический), 6,16 (шд, 1Н, С1'-Н), 5,58 (д, 1Н, С5-Н), 5,01 (септ, 1Н, СН-(СН3)2), 4,52-4,47 (м, 2Н, С-5'-Н2), 4,10 (д, 1Н, С3'-Н), 4,02-3,76 (м, 4Н, ай-ΝΗ, С3'-ОН, С4'-Н, а1а-СН-СН3), 1,37-1,20 (м, 12Н, все СН3).
Пример 4. Получение и кристаллизация 8Р-4.
Способ 1: Прямое осаждение из неочищенного соединения 4:
В перемешиваемый раствор гидрохлорида изопропилового эфира Ь-аланина (10,5 г, 61,5 ммоль, двукратно азеотропно высушенного с 50 мл толуола каждый раз) в дихлорметане (100 мл) вносили фенилдихлорфосфат (7,5 мл, 50 ммоль) при комнатной температуре. Смесь охлаждали до -10°С и затем вносили раствор ΝΜΙ (30,5 мл, 384,3 ммоль) в 30 мл дихлорметана в течение 30 мин. После завершения внесения смесь перемешивали при температуре между -10 и -15°С в течение 1 ч. В вышеупомянутую смесь в один прием вносили 2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридин (3) (10 г, 38,4 ммоль), перемешивали смесь при температуре ниже -10°С в течение 3 ч и позволяли медленно нагреться до 20°С (6 ч). Смесь перемешивали при этой температуре в течение ночи (15 ч) и затем останавливали реакцию 10 мл метанола. Растворитель выпаривали, а остаток повторно растворяли в ЕЮАс (200 мл). Слой ЕЮАс промывали водой (100 мл), 1 н. ΗΟ (3x75 мл), 2% водным раствором NаΗСО3 (50 мл) и насыщенным раствором №0 (50 мл). Органический слой высушивали над №28О4, фильтровали и концентрировали. Остаток высушивали в глубоком вакууме в течение 2 ч, получая белую пену (22 г).
Вышеупомянутую пену растворяли в 33 мл ДХМ, а затем вносили 65 мл 1РЕ (изопропилового эфира), получая насыщенный раствор. Раствор фильтровали через небольшую фильтрующую подушку из целита, фильтрат перемешивали с затравкой 8Р-4 в течение 72 ч при комнатной температуре (приблизительно 22°С - отметим, что охлаждение суспензии до 0°С приводило к превращению неочищенного продукта в масло). Белое твердое вещество фильтровали, промывали 1РЕ (20 мл) и высушивали, получая 4,58 г (~85:15 смесь 8Р-4:КР-4, соответственно, согласно 31Р ЯМР) белого порошка. Вышеупомянутое твердое вещество суспендировали в 23 мл ДХМ и затем кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Раствор охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 ч. Белое твердое вещество фильтровали, промывали 4,5 мл холодного ДХМ и высушивали в глубоком вакууме при 45°С, получая чистый 8Р-4 с температурой плавления 93,9-104,7°С, 99,74% чистоты согласно ВЭЖХ (3,11 г, 15,2% от количества уридинового нуклеозида).
8Р-4 Ή-ЯМР (СОС13) δ 8,63 (шс, 1Н, ΝΗ), 7,47 (д, 1Н, С6-Н), 7,30 (м, 2Н, о-ароматический), 7,267,18 (м, 3Н, т,р-ароматический), 6,18 (шд, 1Н, С1'-Н), 5,70 (д, 1Н, С5-Н), 5,02 (септ, ОТ-ССН^), 4,53 (м, 2Н, С-5'-Н2), 4,11 (д, 1Н, С3'-Н), 3,97 (м, 3Н, С3'-ОН, С4'-Н, ай-ОТ-СН), 3,77 (шс, 1Н, ай-ΝΗ), 1,39 (д,
- 18 026341
3Н, С2'-СН3), 1,37 (д, 3Н, а1а-СН3), 1,24 (д, 6Н, СН-(СН3)2).
Способ 2: Получение масла из неочищенного соединения 4
В перемешиваемый раствор гидрохлорида изопропилового эфира Ь-аланина (20,6 г, 123 ммоль, двукратно азеотропно высушенного с 75 мл толуола каждый раз) в дихлорметане (200 мл) вносили фенилдихлорфосфат (14,9 мл, 100 ммоль) при комнатной температуре. Смесь охлаждали до -10°С и затем вносили раствор ΝΜΙ (61,3 мл, 769 ммоль) в 60 мл дихлорметана в течение 30 мин. После завершения внесения смесь перемешивали при температуре между -10 и -15°С в течение 1ч. В вышеупомянутую смесь в один прием вносили 2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридин (3) (20 г, 76,9 ммоль), перемешивали смесь при температуре ниже -10°С в течение 3 ч и позволяли медленно нагреться до 20°С (6 ч). Смесь перемешивали при этой температуре в течение ночи (15 ч) и затем останавливали реакцию 10 мл метанола. Растворитель выпаривали, а остаток повторно растворяли в ЕЮАс (400 мл). Слой ЕЮАс промывали водой (200 мл), 1 н. НС1 (3x100 мл), 2% водным раствором NаНСО3 (100 мл) и насыщенным раствором №Ю1 (50 мл). Органический слой высушивали над №28О4, фильтровали и концентрировали. Остаток высушивали в глубоком вакууме в течение 2 ч, получая белую пену (43 г). Вышеупомянутую пену растворяли в 86 мл ЕЮАс в двугорлой круглодонной колбе, оборудованной механической мешалкой. При перемешивании медленно вносили 100 мл гептана и перемешивали суспензию в течение 1 ч. Верхний слой декантировали и остаток повторно перемешивали с 50 мл растворов ЕЮАс/гептан в соотношении 2:3 в течение 10 мин, а затем декантировали. Остаток высушивали в глубоком вакууме, получая белую пену (31 г).
Вышеупомянутую пену растворяли в 46 мл ДХМ, а затем вносили 95 мл 1РЕ, получая насыщенный раствор. Раствор фильтровали через небольшую фильтрующую подушку из целита, фильтрат перемешивали с затравкой 8Р-4 в течение 72 ч при комнатной температуре. Белое твердое вещество фильтровали, промывали 1РЕ (30 мл) и высушивали, получая 7,33 г (~85:15 смесь 8Р-4:РР-4, соответственно, согласно 31Р ЯМР) белого порошка. Вышеупомянутое твердое вещество суспендировали в 36 мл ДХМ и затем кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Раствор охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 ч. Белое твердое вещество фильтровали, промывали 7,5 мл холодного ДХМ и высушивали в глубоком вакууме при 45°С, получая >99% чистый 8Р-4 (4,78 г, 11,6% от количества уридинового нуклеозида).
Способ 3: Загрузка неочищенного соединения 4 силикагелем
5,0 г неочищенного соединения 4 получали аналогично смеси диастереомеров до начала этапа колоночной хроматографии с использованием приблизительно 2,5 г 2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридина (3). Неочищенное соединение растворяли в 10 мл ДХМ и в раствор вносили 10 г силикагеля. Растворитель выпаривали, получая сухую пасту. Пасту перемешивали с 40 мл 50% ЕЮАс/гексан в течение 15 мин, а затем фильтровали. Силикагель промывали дополнительными 10 мл 50% ЕЮАс/гексан. Затем силикагель промывали 15% МеОН/ДХМ (100 мл) и собирали раздельно. Растворитель выпаривали и высушивали в глубоком вакууме, получая 4,0 г остатка (пены). Остаток растворяли в ДХМ (6 мл), а затем вносили ~9 мл 1РЕ, получая насыщенный раствор. Затем смесь аккуратно перемешивали в течение ночи с затравкой 8Р-4 при комнатной температуре. Белое твердое вещество отфильтровывали и промывали 1РЕ (5 мл), получая 1,28 г продукта. 31Р ЯМР выявил, что вышеупомянутый продукт содержал 77:23 смесь 8Р4:РР-4 соответственно. Продукт перекристаллизовывали из 20 мл ДХМ, получая 0,75 г >99% чистого 8Р4 (приблизительно 12% от количества уридинового нуклеозида). Получение 8Р-4 не требовало этапа силилирования, как для смеси, поэтому выше показана полная реакционная процедура. Аспекты одиночной кристаллической и полиморфной форм 8Р-4 представлены ниже.
Способ 4:
40,0 г 1:1 смеси 4 растворяли в 90 мл дихлорметана. В вышеупомянутый раствор вносили диизопропиловый эфир (70 мл), получая насыщенный раствор. (Количество диизопропилового эфира может меняться в зависимости от чистоты продукта). В раствор вносили затравку чистого 8Р-4 (>99%), смесь аккуратно перемешивали магнитной мешалкой при комнатной температуре в течение 20 ч (образование твердого вещества наблюдали после 2 ч). Твердое вещество фильтровали, промывали 40 мл смеси диизопропилового эфира/дихлорметана (1:1) и высушивали, получая белое твердое вещество (16,6 г, 89,35% чистый 8Р-4 согласно ЯМР). Это твердое вещество суспендировали в 83 мл ДХМ и кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Суспензию охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Твердое вещество отфильтровывали и промывали 10 мл холодного ДХМ. Твердое вещество высушивали в вакууме, получая 8Р-4 (13,1 г, 99,48% чистоты согласно ВЭЖХ). 11 г этого твердого вещества повторно растворяли в 330 мл ДХМ в условиях нагревания. Раствор охлаждали до комнатной температуры и оставляли при этой температуре в течение ночи. Кристаллический продукт отфильтровывали и высушивали, получая 10,5 г 8Р-4 (99,74% чистоты согласно ВЭЖХ).
Соединения 8Р-4 и РР-4 можно получить альтернативным путем согласно девятому и десятому вариантам воплощения путем реакции нуклеозида (защищенного или незащищенного) 3 с изопропилаланилфосфорамидатом (смесью С и С', С или С'), как показано в следующем уравнении.
- 19 026341 о
•ί
ΖΟ Р ' с· -► Яр-4
В Р.Э. Но^ек е1 а1. ОТс1ео51бе5, ОТс1еойбе5 & ОТсШс Аибк 2003, νοί. 22, Νοκ. 5-8, рр. 687-689 (Нотек) описаны 2'- и 5'-фосфорамидаты, полученные реакцией с ΐ-бутилмагнийхлоридом. В этом источнике Но\уек описал, что при реакции 3'-дезоксицитидинового нуклеозида с метиловым эфиром (8)-2[хлорфеноксифосфориламино]пропионовой кислоты в присутствии 1,2 эквивалентов ΐбутилмагнийхлорида происходило селективное фосфорилирование по 2'-положению, однако в присутствии дополнительного эквивалента ΐ-бутилмагнийхлорида происходило селективное фосфорилирование по 5'-положению. Это описание следует сопоставить с данными, описанными в Схеме 1 Но\уек.
Пример 5-1. Получение изопропилового эфира (8)-2-[(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты
В перемешиваемый раствор 4-нитрофенилфосфордихлоридата (12,8 г, 50 ммоль) в дихлорметане (100 мл) вносили раствор фенола и триэтиламина (7,7 мл, 55 ммоль) в дихлорметане (100 мл) при -78°С в течение 20 мин. Смесь перемешивали при этой температуре в течение 30 мин, а затем переносили в другую круглодонную колбу, содержавшую гидрохлорид изопропилового эфира Ь-аланина (8,38 г, 50 ммоль) в дихлорметане (100 мл) при 0°С. В смесь вносили вторую порцию триэтиламина (14,6 мл, 105 ммоль) в течение 15 мин. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, а затем выпаривали растворитель. Остаток гомогенизировали с этилацетатом (150 мл) и отфильтровывали белое твердое вещество. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая бледно-желтое масло. Неочищенное соединение хроматографировали, используя 0-20% градиент этилацетата/гексана, получая продукт (17 г, 83% выход) в виде смеси диастереомеров в соотношении приблизительно 1:1.
31Р ЯМР (162 МГц, ДМСО-б6) :δ -0,31, -0,47; !Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 8,31-8,27 (м, 2Н), 7,517,37 (м, 4Н), 7,27-7,19 (м, 3Н), 6,70-6,63 (м, 1Н), 4,85-4,78 (м, 1Н), 3,97-3,86 (м, 1Н), 1,21-1,19 (м, 3Н), 1,11-1,09 (м, 6Н); М8 (Е81) т/ζ 407 (М-1)+, 31Р ЯМР (162 МГц, СЭС13): δ -2,05, -2,10; !Н ЯМР (400 МГц,
СЭС13): δ 8,22 (д, 1=9,2 Гц, 2Н), 7,41-7,33 (м, 4Н), 7,26-7,18 (м, 3Н), 5,05-4,96 (м, 1Н), 4,14-4,05 (м, 1Н), 3,93-3,88 (м, 1Н), 1,38 (д, 1=6, 8 Гц, 3Н), 1,22 (дд, 1=6,2 и 3,0 Гц, 6Н); М8 (Е81) т/ζ 407 (М-1)+.
Пример 5-2. Получение 8Р-4/КР-4.
&р-4 Ί- /?р-4 ~3 Ч
В перемешиваемый раствор 1-((2К,3К,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-гидроксиметил-3метилтетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пиримидин-2,4-диона (130 мг, 0,5 ммоль) в безводном ТГФ (1,5 мл) вносили 1,0 М раствор трет-бутилмагнийхлорида (1,05 мл, 1,05 ммоль, 2,1 экв.)) при комнатной температуре в течение 5 мин. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(4нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (смесь изомеров 1:1, 408 мг, 1 ммоль) в ТГФ (1,5 мл) в течение 5 мин. Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 48 ч и останавливали реакцию насыщенным водным ИН4С1 (20 мл). Смесь фракционировали между этилацетатом (50 мл) и водой (20 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая бледно-желтый остаток. Колоночная хроматография остатка с помощью 0-2% градиента МеОН/дихлорметана позволяла получить белое пенистое твердое вещество (125 мг, 47% выход, смесь 8Р-4/КР-4 в соотношении приблизительно 3,05:1,0.
Пример 6. Получение и нехроматографическое выделение изопропилового эфира (8)-2-[(8)-(4нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты
Гидрохлорид изопропилового эфира Ь-аланина (330 г, 1,97 моль) предварительно высушивали путем совместного выпаривания с толуолом (2x400 мл) при пониженном давлении, а затем высушивали в вакуумной печи (50°С, 0,2 мм рт.ст., 17 ч). В перемешиваемый раствор 4-нитрофенилфосфордихлоридата (500,0 г, 1,953 моль) в безводном дихлорметане (3,0 л) вносили раствор фенола (183,8 г, 1,953 моль) и
- 20 026341 триэтиламина (300 мл, 2,15 моль) в дихлорметане (900 мл) при внутренней температуре -60°С в течение 3 ч. Смесь перемешивали при этой температуре в течение следующих 30 мин и затем позволяли нагреться до -5°С в течение 2,5 ч. Предварительно высушенный эфир аминокислоты вносили при -5-0°С в атмосфере азота в течение 10 мин. Остаток соли аминоэфира в колбе добавления переносили в реакционную смесь путем промывки дихлорметаном (2x100 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 40 мин и вносили вторую порцию триэтиламина (571 мл, 4,10 моль) в течение 40 мин при 0°С. Смесь перемешивали при 0~10°С в течение 3 ч, а затем отфильтровывали белое твердое вещество (гидрохлорид триэтиламина) и промывали его дихлорметаном (3x300 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и гомогенизировали остаток с метил-Рбутиловым эфиром (МТВЕ, 4 л). Образовывавшуюся при этом дополнительную твердую соль отфильтровывали и промывали МТВЕ (3x150 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая прозрачное светло-коричневое масло. Остаток совместно выпаривали с гексаном (2x140 мл) с целью удаления остаточного МТВЕ, а затем высушивали в вакууме при 40°С в течение 2 ч. Сухой остаток смешивали с диизопропиловым эфиром (1РЕ, 1,1 л) и перемешивали при 5°С на водно-ледяной бане. В раствор вносили небольшое количество кристаллической затравки целевого 8Р-изомера продукта и перемешивали смесь при 5°С в течение 22 ч, образуя суспензию средней густоты. Суспензию оставляли в морозильной камере (-10°С) в течение 44 ч. Осажденный продукт собирали фильтрацией и промывали предварительно охлажденными смешанными растворителями 1РЕ и гексаом (1:1, х190 мл). Твердое вещество высушивали в вакууме (0,5 мм рт.ст.) при комнатной температуре до постоянной массы, получая 227,23 г (выход: 28,5%) белого твердого порошка. Соотношение двух диастереомеров 8Р:КР составляло 9,65/1 согласно 31Р ЯМР (162 МГц, ДМСО-б6, δ -0,31 (8Р), -0,47). Продукт перекристаллизовывали растворением в 1РЕ (840 мл) при нагревании на бане при 60°С. Вышеупомянутый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем вносили небольшое количество затравки кристаллического 8р-изомера. В течение 2 ч образовывался белый твердый порошок; затем колбу хранили в морозильной камере (-10°С) в течение 16 ч. Полученное белое тонкодисперсное кристаллическое твердое вещество отфильтровывали, промывали предварительно охлажденным 1РЕ (3x50 мл) и высушивали в вакууме (комнатная температура, 0,5 мм рт.ст.) до постоянной массы, получая белое рыхлое твердое вещество (177,7 г, 22% общий выход или 44% общий выход на основе теоретического выхода 8Р-изомера) с соотношением диастереомеров 48/1 согласно 31Р-ЯМР. Температура плавления 62-66°С.
31Р ЯМР (162 МГц, ДМСО-66): δ -0,31; Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ 8,30-8,27 (м, 2Н), 7,49 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,41-7,37 (м, 2Н), 7,23-7,19 (м, 3Н), 6,66 (дд, 1=13,6, 10,0 Гц, 1Н), 4,86-4,78 (м, 1Н), 3,973,86 (м, 1Н), 1,19 (д, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,10 (д, 1=6,4 Гц, 6Н);
31Р ЯМР (162 МГц, СИС13)Д -2,05; (162 МГц, ДМСО-66): δ -0,31; Ή ЯМР (400 МГц, СОС1;) : δ 8,22 (д, 1=9,2 Гц, 2Н), 7,41-7,33 (м, 4Н), 7,26-7,18 (м, 3Н), 5,05-4,96 (м, 1Н), 4,14-4,05 (м, 1Н), 3,93-3,88 (м, 1Н), 1,38 (д, 1=6, 8 Гц, 3Н), 1,22 (дд, 1=6,2 и 3,0 Гц, 6Н); Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ 8,30-8,27 (м, 2Н), 7,49 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,41-7,37 (м, 2Н), 7,23-7,19 (м, 3Н), 6,66 (дд, 1=13,6, 10,0 Гц, 1Н), 4,86-4,78 (м, 1Н), 3,97-3,86 (м, 1Н), 1,19 (д, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,10 (д, 1=6,4 Гц, 6Н);
М8 (Е81) т/ζ 407 (М-1)+.
Стереохимию соединения 8 (8Р-изомера) подтверждали монокристальной рентгеновской кристаллографией, подробности см. ниже.
Пример 7. Разделение смеси диастереомеров изопропилового эфира (8)-2-[(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты с помощью сверхкритической жидкостной хроматографии
Образец смеси диастереомеров (4,8 г), обогащенный КР-изомером, подвергали сверхкритической жидкостной хроматографии (8РС), используя колонку СЫга1Рак ΛΌ-Η (2x15 см) и элюировали 35% изопропанолом в диоксиде углерода при 100 бар. Использовали инъекционную загрузку 4 мл образца в концентрации 17 мг/мл метанола. КР-изомер изопропилового эфира [(8)-2-[(К)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты элюировался первым. Соответствующие фракции множественных прогонов объединяли и концентрировали при пониженном давлении, получая 2,9 г КР-изомера изопропилового эфира (8)-2-[(К)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты в виде светло-желтого вязкого масла и 1,9 г 8Р-изомера изопропилового эфира [(8)-2-[(К)-(8)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты в виде белого твердого вещества. Аналитические данные КР-изомера были аналогичны данным продукта, выделенного с помощью вышеописанного способа кристаллизации.
Аналитические данные изопропилового эфира (8)-2-[(К)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (8, КР-изомер).
31Р ЯМР (162 МГц, ДМСО-б6): δ -0,47;
1Η ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) : δ 8,30-8,27 (м, 2Н), 7,46-7,38 (м, 4Н), 7,27-7,20 (м, 3Н), 6,68 (дд, 1=13,8, 10,2 Гц, 1Н), 4,86-4,77 (м, 1Н), 3,97-3,86 (м, 1Н), 1,20 (д, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,10 (дд, 1=6,2, 2,2 Гц, 6Н); М8 (Е81) т/ζ 407 (М-1)+.
- 21 026341
Пример 8-1. Получение рацемического изопропилового эфира 2-[(4-хлорфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (±)
Ο, θ„α Υ : РЬОН, Εί3Ν, ДМХ, -78 °С Υ Ϊ о __ όι + °'П МЕНС1 -* ογ'ΥΓΡ-ο4^)-σ о о орь '—
В перемешиваемый раствор 4-хлорфенилфосфордихлоридата (2,45 г, 10,0 ммоль) в дихлорметане (20 мл) вносили раствор фенола (0,94 г, 10 ммоль) и триэтиламина (1,56 мл, 11 ммоль) в дихлорметане (20 мл) при -78°С в течение 20 мин. Смесь перемешивали при этой температуре в течение 30 мин, а затем переносили в другую круглодонную колбу, содержавшую гидрохлорид изопропилового эфира Ь-аланина (1,67 г, 10 ммоль) в дихлорметане (50 мл) при 0°С. В смесь вносили вторую порцию триэтиламина (2,92 мл, 21 ммоль) в течение 15 мин. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, а затем выпаривали растворигель. Остаток гомогенизировали с этилацетатом (30 мл) и отфильтровывали белое твердое вещество. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая бледно-желтое масло. Неочищенное соединение хроматографировали, используя 10-20% градиент этилацетата/гексана, получая продукт (2,0 г, 50% выход) в виде смеси диастереомеров в соотношении приблизительно 1:1.
31Р ЯМР (162 МГц, С1)С1;) : δ -1,58, -1,62; ΊI ЯМР (400 МГц, СПС13): δ 7,06-7,51 (м, 8Н), 7,15-7,28 (м, 2Н), 7,29-7,47 (м, 2Н), 4,0-4,10 (м, 1Н), 3,82-3,88 (м, 3Н), 1,35-1,36 (дд, 6Н); 1,19-1,22 (м, 3Н). М8 (ΕδΙ) т/ζ 398 (М-1)+.
Полученный продукт очищали экстракцией, кристаллизацией или хроматографией, как отмечено выше.
Пример 8-2. Получение (8)-Изопропил 2-((2К,3К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламин)пропаноата (4).
В перемешиваемый раствор 1-((2К,3К,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-гидроксиметил-3метилтетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пиримидин-2,4-диона (3, 2,6 г, 10 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида (12,4 мл, 21 ммоль, 2,1 экв.)) при комнатной температуре в течение 15 мин. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор рацемического сложного изопропилового эфира 2-[(4-хлорфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (4,08 г, 10 ммоль) в ТГФ (15 мл) в течение 10 мин. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 72 ч. ТСХ с эталонным продуктом показала, что образовывалось приблизительно 5% целевого продукта по сравнению с исходным нуклеозидом.
Пример 9-1. Получение рацемического изопропилового эфира 2-[(2-хлорфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (±).
В перемешиваемый раствор 2-хлорфенилфосфордихлоридата (9,8 г, 40 ммоль) в дихлорметане (80 мл) вносили раствор фенола (3,76 г, 40 ммоль) и триэтиламина (6,16 мл, 44 ммоль) в дихлорметане (80 мл) при -78°С в течение 20 мин. Смесь перемешивали при этой температуре в течение 30 мин, а затем переносили в другую круглодонную колбу, содержавшую гидрохлорид изопропилового эфира Ь-аланина (6,7 г, 40 ммоль) в дихлорметане (150 мл) при 0°С. В смесь вносили вторую порцию триэтиламина (11,6 мл, 84 ммоль) в течение 15 мин. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, а затем выпаривали растворитель. Остаток гомогенизировали с этилацетатом (100 мл) и отфильтровывали белое твердое вещество. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая бледно-желтое масло. Неочищенное соединение хроматографировали, используя 10-20% градиент этилацетата/гексана, получая продукт (11,3 г, 72% выход) в виде смеси диастереомеров в соотношении приблизительно 1:1.
31Р ЯМР (162 МГц, СОС13): δ -1,58, -1,61; Ίί ЯМР (400 МГц, СПС13): δ 7,06-7,51 (м, 8Н), 5,02-5,94 (м, 1Н), 4,10-4,16 (м, 1Н), 3,31-3,94 (м, 1Н), 1,18-1,35 (м, 3Н), 1,38-1,40 (дд, 6Н); М8 (ΕδΙ) т/ζ 398 (М-1)+. Полученный продукт очищали экстракцией, кристаллизацией или хроматографией, как отмечено выше.
Пример 9-2. Получение (Я)-изопропил 2-((^)-(((2К,3К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноата.
В перемешиваемый раствор 1-((2К,3К,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-гидроксиметил-3метилтетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пиримидин-2, 4-диона (3, 2,6 г, 10 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида (12,4 мл, 21 ммоль, 2,1 экв.)) при комнатной температуре в течение 15 мин. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор изопропилового эфира 2-[(2-хлорфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (рацемический, 4,08 мг, 10 ммоль) в ТГФ (15 мл) в течение 10 мин. Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 72 ч. ТСХ с эталонным продуктом показала, что образовывалось приблизительно 5-10% целевого продукта по сравнению с исходным нуклеозидом.
- 22 026341
Пример 10-1. Получение рацемического изопропилового эфира 2-[(2,3,4,5,6-пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (±).
В перемешиваемый раствор пентафторфенилфосфордихлоридата (6,0 г, 20 ммоль) в дихлорметане (40 мл) вносили раствор фенола и триэтиламина (3,08 мл, 22 ммоль) в дихлорметане (40 мл) при -78°С в течение 20 мин. Смесь перемешивали при этой температуре в течение 30 мин, а затем переносили в другую круглодонную колбу, содержавшую гидрохлорид изопропилового эфира Ь-аланина (3,35 г, 20 ммоль) в дихлорметане (100 мл) при 0°С. В смесь вносили вторую порцию триэтиламина (5,84 мл, 42 ммоль) в течение 15 мин. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, а затем выпаривали растворитель. Остаток гомогенизировали с этилацетатом (60 мл) и отфильтровывали белое твердое вещество. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая бледно-желтое масло в виде смеси диастереомеров в соотношении приблизительно 1:1. 31Р ЯМР (162 МГц, СОС13): δ -0,49, - 0,58. Полученный продукт очищали экстракцией, кристаллизацией или хроматографией, как отмечено выше.
Пример 10-2. Получение смеси диастереомеров изопропилового эфира (8)-2-[(2,3,4,5,6пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты и выделение одиночного диастереомера изопропилового эфира (8)-2-[(8)-(2,3,4,5,6-пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты с помощью многопроходного динамического разделения, вызванного кристаллизацией.
В 2-л трехгорлую круглодонную колбу, оснащенную механической мешалкой и низкотемпературным термометром, вносили 60 г (284 ммоль) фенилдихлорфосфата и 300 мл безводного дихлорметана. Раствор охлаждали до 0°С в атмосфере азота и быстро вносили соль гидрохлорида изопропилаланата (высушенного в вакуумной печи, 47,7 г, 284 ммоль) в виде твердого вещества. Смесь перемешивали и охлаждали до -55°С на бане с ацетоном и сухим льдом. Через капельную воронку вносили раствор 60,32 г триэтиламина (596 ммоль) в 300 мл дихлорметана в течение 70 мин. Белую непрозрачную смесь перемешивали при -55°С в течение получаса, а затем медленно повышали температуру до -5°С в течение 1,5 ч. В смесь через капельную воронку вносили предварительно охлажденную (до комнатной температуры) смесь пентафторфенола (52,42 г, 284 ммоль) и триэтиламина (32,11 г, 317 ммоль) в 180 мл дихлорметана в течение 1 ч при 0°С, полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 4 ч. Белый осадок (ТЭА.НС1) отфильтровывали и промывали дихлорметаном (3x50 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и гомогенизировали белый твердый остаток с 880 мл !-бутилметилового эфира (ТВМЕ) при комнатной температуре в течение часа. Белую суспензию фильтровали и промывали твердое вещество ТВМЕ (3x150 мл). Твердое вещество распределяли в смеси этилацетата (600 мл) и воды (150 мл). Органический слой отделяли и промывали водой (3x100 мл). Органический слой высушивали над М§804 и концентрировали, получая 29,92 г (66 ммоль) продукта (8Р-изомер, подтверждено рентгеновской кристаллографией, ниже) в виде белого легкого твердого вещества.
Фильтрат вышеупомянутого гомогенизата с ТВМЕ концентрировали при пониженном давлении до белого твердого остатка и гомогенизировали твердое вещество с 450 мл смеси этилацетата и гексана (20:80 об/об) при комнатной температуре в течение 75 мин. Твердое вещество (твердое вещество 1) собирали фильтрованием и промывали 20% этилацетатом в гексане (75 мл, 2x30 мл). Маточный раствор концентрировали до образования грязно-белого твердого вещества, которое затем гомогенизировали с 20% этилацетатом в гексане (185 мл) при комнатной температуре в течение 17 ч. Белое твердое вещество (твердое вещество 2) собирали фильтрованием и промывали 20% этилацетатом в гексане (2x10 мл). Твердое вещество 1 и твердое вещество 2 объединяли и растворяли в 1,2 л этилацетата. Раствор промы- 23 026341 вали водой (3x150 мл), насыщенным раствором №Ю1 (50 мл) и высушивали над Мд§О4. Раствор концентрировали при пониженном давлении, получая 72,8 г (161 ммоль) чистого продукта. Общее количество продукта составило 102,72 г (226 ммоль, 80%). Ή ЯМР (СПС13, 400 МГц) δ: 7,38-7,33 (м, 2Н), 7,27-7,24 (м, 2Н), 7,23-7,19 (м, 1 Н), 5,04 (гепт, 1 Н), 4,18-4,09 (м, 1Н), 4,01-3,96 (м, 1Н), 1,45 (д, 3Н), 1,25 (дд, 6Н). 31Р ЯМР (СОС13, 162 МГц) δ: -0,50.
Пример 10-3: Получение смеси диастереомеров изопропилового эфира (8)-2-[(2,3,4,5,6пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты и выделение одиночного диастереомера изопропилового эфира (8)-2-[(§)-(2,3,4,5,6-пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты с помощью однопроходного динамического разделения, вызванного кристаллизацией.
В 1-л сухую трехгорлую колбу, оборудованную низкотемпературным термометром и механической мешалкой, загружали фенилфосфордихлоридат (25 г, 118,5 ммоль). Вносили безводный дихлорметан (12 5 мл) и охлаждали раствор до 0°С. При встряхивании в атмосфере Ν2 быстро вносили соль эфира аланина (высушенную в печи) (19,86 г, 1 экв.). Раствор охлаждали приблизительно до -50°С (внутренняя температура (в бане с ацетоном/сухим льдом в атмосфере Ν2). Через капельную воронку по каплям при -50°С вносили раствор триэтиламина (25,2 г, 2,1 экв.) в ДХМ (125 мл) в течение 0,5 ч; полученную белую суспензию перемешивали приблизительно при -50°С в течение 0,5 ч. Смеси позволяли нагреться до 0°С в течение 1,5 ч, а затем через капельную воронку вносили предварительно смешанный охлажденный раствор пентафторфенола (21,82 г, 1 экв.) и ТЭА (13,2 г, 1,1 экв.) (внимание: выделение тепла при смешивании пентафторфенола и ТЭА) в 75 мл ДХМ в течение 0,5 ч при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение следующих 4 ч.
Смесь фильтровали через воронку Бюхнера, собранный твердый гидрохлорид триэтиламина промывали ДХМ (3x40 мл). Фильтрат проверяли с помощью 31Р-ЯМР (соотношение приблизительно 1,14:1 в пользу 8Р-диастереомера - сдвиг пика в сторону слабого поля) и делили на две части равной массы. Одну из них концентрировали при пониженном давлении. Белый твердый остаток (31 г) гомогенизировали в смеси ЕЮАс и гексана (150 мл, 20:80, об/об) при кт в течение 17 ч, давая время для динамического разделения менее растворимого 8Р-изомера. Белую суспензию фильтровали и промывали твердое вещество 20% ЕЮАс в гексане (2x25 мл). Твердое вещество (22,58 г) проверяли с помощью Ή-ЯМР и 31Р-ЯМР; оно содержало продукт в виде одного изомера, загрязненного солью гидрохлорида триэтиламина. Твердое вещество растворяли и фракционировали в 310 мл ЕЮАс и 100 мл воды. После отделения органического слоя водный слой подвергали обратной экстракции ЕЮАс (50 мл). Объединенный органический слой промывали водой (3x80 мл), насыщенным раствором №С1 (50 мл) и высушивали над Мд§О4. Раствор концентрировали при пониженном давлении, а затем высушивали в глубоком вакууме при кт до постоянной массы, получая 17,36 г продукта в виде белого твердого вещества из половины реакционной смеси. Выход составил 64%. Упоминавшийся выше маточный раствор концентрировали до клейкого остатка (7,89 г), содержавшего реагенты в соотношении 1:1,2 (целевой/нецелевой) согласно 31Р-ЯМР.
Пример 10-4. Получение изопропилового эфира (8)-2-[(2,3,4,5,6-пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты
В чистый и сухой стеклянный реактор загружали ДХМ (11,5 л). В атмосфере азота в реактор загружали фенилдихлорфосфат (2,3 кг, 10,9 моль). Раствор охлаждали до 0°С. Затем в один прием при непрерывном перемешивании в течение 30 мин вносили гидрохлорид изопропилового эфира Ь-аланина (1,83 кг, 10,9 моль). Реакционную массу охлаждали до внутренней температуры -50°С с помощью бани с ацетоном/сухим льдом. В вышеупомянутый реакционный раствор медленно вносили смесь ТЭА (2,1 экв., 3,17 л) в ДХМ (11,5 л) в течение 8 ч, поддерживая внутреннюю температуру между -40 и -50°С. После завершения внесения температуру смеси поддерживали в этом же диапазоне в течение приблизительно 1 ч. Смеси позволяли нагреться до 0°С в течение приблизительно 4 ч.
Одновременно в другой реактор загружали ДХМ (6,9 л) и вносили пентафторфенол (2,0 кг, 10,9 моль) в атмосфере азота. Раствор охлаждали до 0°С, затем вносили в раствор пентафторфенола ТЭА (1,1 экв., 1,65 л) (экзотермическая реакция) в течение приблизительно 2 ч. Полученный раствор, в свою очередь, медленно вносили в первый раствор, содержащий фенилдихлорфосфат и эфир аминокислоты, поддерживая температуру между 0 и 5°С, в течение приблизительно 7 ч. После завершения внесения продолжали перемешивание при этом диапазоне температур в течение приблизительно 4 ч. Ход реакции отслеживали с помощью ВЭЖХ. Когда оставалось менее 5% пентафторфенола, реакцию останавливали. Следует отметить, что в этот момент хиральная ВЭЖХ указывала на однородность смеси диастереомеров продукта.
Реакционную суспензию фильтровали через нутч-фильтр для удаления большей части суспендированной соли гидрохлорида триэтиламина. Сгусток соли промывали избыточным количеством ДХМ (9л) и эту жидкость добавляли к основному фильтрату. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении при 35°С, получая твердый остаток. Твердый остаток совместно выпаривали с гексаном (4 л) для дальнейшего снижения уровней остаточного ДХМ. К твердому остатку добавляли 6 л 20% МТВЕ/гексана и перемешивали суспензию в течение приблизительно 17 ч при комнатной температуре под контролем ВЭЖХ. рН раствора оставался щелочным из-за остаточного ТЭА. В это время происходи- 24 026341 ло динамическое разделение, при котором осаждаемое твердое вещество представляло собой целевой 8Рдиастереомер, а в надосадочной жидкости сохранялось равновесие между 8Р- и КР-диастереомерами.
Суспензию пропускали через нутч-фильтр и промывали твердый целевой продукт, все еще загрязненный гидрохлоридом ТЭА, 5% МТВЕ/гексаном (1 л). Твердое вещество растворяли в этилацетате (35 л) и промывали водой (3x35 л) и насыщенным раствором ЫаС1 (10 л), а затем высушивали над твердым сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, поддерживая температуру реактора ниже 44°С. Твердый остаток совместно выпаривали с гексаном (4 л). Реактор охлаждали до комнатной температуры и вносили 5% МТВЕ/гексан (5 л). Густую суспензию перемешивали в течение 15 мин и затем собирали твердое вещество фильтрацией. Собранное твердое вещество промывали гексаном (2,5 л) и высушивали в глубоком вакууме при комнатной температуре до постоянной массы, получая конечный продукт (8Р-4) в виде белого твердого вещества, 2,6 кг (53%); 99,5% чистоты согласно ВЭЖХ, содержащий 0,4% КР-4.
Пример 10-5. Получение (8)-изопропил 2-(((8)-(((2К,3К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноата.
В перемешиваемый раствор 1-((2К,3К,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-гидроксиметил-3-метилтетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пиримидин-2,4-диона (3, 2,6 г, 10 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида (12,4 мл, 21 ммоль, 2,1 экв.)) при комнатной температуре в течение 15 мин. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор неочищенного рацемического изопропилового эфира 2-([2,3,4,5,6-пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (4,08 мг, 10 ммоль) в ТГФ (15 мл) в течение 10 мин. Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 72 ч. ТСХ с эталонным продуктом показала, что образовывалось приблизительно 40-50% целевого продукта по сравнению с исходным нуклеозидом.
Пример 10-6. Получение (8)-изопропил 2-((8)-(((2К,3К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноата (8Р-4), используя изопропиловый эфир (8)-2-[(8)-(2,3,4,5,6-пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты и очистку только путем кристаллизации.
В перемешиваемый раствор соединения 3 (10 г, 38,46 ммоль, высушенный в вакууме при 50°С в течение 20 ч) в безводном ТГФ (165 мл) вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида в ТГФ (47,5 мл, 80,77 ммоль) в течение 20 мин на холодной водяной бане (5°С) в атмосфере азота. После завершения внесения охлаждающую баню удаляли и перемешивали белую суспензию при комнатной температуре (20°С) в течение 30 мин. Затем в реакционную смесь вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(8)(2,3,4,5,6-пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (20,9 г, 46,11 ммоль) в безводном ТГФ (165 мл) в течение 30 мин. Смесь перемешивали при комнатной температуре (20°С) в течение 3,5 ч. Перемешивание продолжали в течение дополнительных 1,5 ч; на этом этапе ТСХ указывал на >95% конверсию и отсутствие значимых различий в количестве примеси 3',5'-бис-фосфорамидата с момента времени 2 ч. Реакцию останавливали насыщенным водным раствором ЫН4С1(10 мл), а затем выпаривали растворитель при 25°С. Остаток фракционировали между этилацетатом (400 мл) и смесью насыщенный раствор хлорида аммония (60 мл)/вода (20 мл). Органический слой отделяли, промывали насыщенным раствором хлорида аммония (80 мл) и водой (3x60 мл). Водный слой хранили отдельно. Органический слой промывали 5% водным раствором карбоната натрия (3x50 мл) и водой (2x60 мл). Первый водный слой экстрагировали дополнительным количеством этилацетата (100 мл), промывали водой (2x20 мл), а затем этим же этилацетатным экстрактом экстрагировали водный слой, полученный после промывки карбонатом натрия. Органический слой промывали водой (2x20 мл) и объединяли с основной партией. Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали, получая пенистое твердое вещество (19,32 г). Остаток растворяли в 60 мл дихлорметана (выпадал белый твердый осадок и образовывался осажденный слой в течение приблизительно пяти минут), а затем вносили 25 мл 1РЕ. Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Белое твердое вещество фильтровали, промывали 1: 1 смесью холодного (0°С) 1РЕ/дихлорметана (20 мл) и высушивали, получая 11,77 г (выход 58%) продукта в виде аморфного белого твердого вещества. Вышеупомянутое твердое вещество повторно растворяли в дихлорметане (350 мл), фильтровали и выпаривали при атмосферном давлении (температура бани 45°С) до объема ~120 мл. Раствор оставляли при комнатной температуре (21°С) в течение 20 ч. Белое кристаллическое твердое вещество (сольват дихлорметана) собирали фильтрацией, промывали холодным (0°С) дихлорметаном (10 мл) и высушивали в глубоком вакууме в течение 4 ч при комнатной температуре, получая чистый несольватированный про- 25 026341 дукт (10,62 г, выход 52%) в виде белых игл. Чистота согласно ВЭЖХ 99,8%. Спектральные свойства соответствовали значениям, приведенным здесь.
Пример 10-7. Получение (8)-изопропил 2-((8)-(((2Κ,3Κ,4Κ,5Κ)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноата (8Ρ-4), используя изопропиловый эфир (8)-2-[(8)-(2,3,4,5,6-пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты, модифицированные условия и отработку реакции и очистку только путем кристаллизации.
В перемешиваемую суспензию 1-((2Κ,3Κ,4Κ,5Κ)-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)-3метилтетрагидрофуран-2-ил)-пиримидин-2,4(1Н,3Н)-диона (3, 5,0 г, 19,1 ммоль, высушенного в вакууме при 50°С в течение 20 ч) в безводном ТГФ (75 мл) с помощью капельной воронки вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида в ТГФ (23,7 мл, 40,35 ммоль) в течение 30 мин при -5°С. Белую суспензию перемешивали при этой температуре в течение 30 мин и затем позволяли нагреться до комнатной температуры (20°С), при которой перемешивали в течение дополнительных 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до 5°С, а затем вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(8)-(2,3,4,5,6-пентафторфенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (10,45 г, 23,06 ммоль) в ТГФ (50 мл) в течение 30 мин. Смесь перемешивали при 5°С в течение 18 ч, охлаждали до -5°С, а затем останавливали реакцию 2 н. НС1 (25 мл). В смесь вносили толуол (100 мл) и нагревали до комнатной температуры. Спустя 20 минут разделяли слои. Органический слой промывали 1 н. НС1 (2x10 мл), водой (10 мл), 5% водным раствором №-ьСО3, (4x10 мл), водой (2x10 мл) и насыщенным раствором ΝαΟ (10 мл). Все водные слои повторно экстрагировали толуолом (20 мл), промывали 5% водным раствором №-ьСО3, (2x5 мл), водой (10 мл) и насыщенным раствором ΝαΟ (5 мл). Объединенный органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали до приблизительного объема 20 мл. В раствор вносили дихлорметан (20 мл) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Твердое вещество фильтровали, промывали 1:1 смесью МТВЕ/ДХМ (2x10 мл) и высушивали в глубоком вакууме, получая белое твердое вещество (7,7 г). ВЭЖХ твердого вещества на этом этапе определяла содержание 98,21% 8Ρ-4, 0,18% непрореагировавшего соединения 3 и 0,67% примеси 3',5'-бис-фосфорамидата. Вышеупомянутое твердое вещество 8Ρ-4 повторно растворяли в дихлорметане (77 мл, нагретом в сосуде высокого давления при 55°С) и оставляли при комнатной температуре на 20 ч. Кристаллическое твердое вещество фильтровали, промывали холодным дихлорметаном (5 мл, 0°С) и высушивали в глубоком вакууме, получая чистый продукт в виде белого твердого вещества (6,9 г, выход 68%, 99,79 чистоты согласно ВЭЖХ).
Получение и очистка С или С' обеспечивали прямой доступ к 8Ρ-4 или ΚΡ-4, как иллюстрировано следующими примерами.
Пример 11. Получение 8Ρ-4 (32-мг масштаб)
В перемешиваемый раствор 1-((2Κ,3Κ,4Κ,5Κ)-3-фтор-4-гидрокси-5-гидроксиметил-3-метилтетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пиримидин-2,4-диона 3 (32 мг, 0,12 ммоль) в безводном ТГФ (1 мл) вносили 1 М раствор ΐ-бутилмагнийхлорида (0,26 мл, 0,26 ммоль, 2,1 экв.)) при комнатной температуре в течение 3 мин. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(8)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (8, 8^изомер) в ТГФ (0,5 мл) в течение 3 мин. Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 42 ч и останавливали реакцию насыщенным водным ΝΗ.·|0 (10 мл). Смесь фракционировали между этилацетатом и водой. Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Остаток хроматографировали с 0-4% градиентом метанола/дихлорметана, получая 8Ρ-4 в виде пенистого твердого вещества (29 мг, выход 44,5%). Ή и 31Р ЯМР согласовывались с описанием, приведенным здесь.
Пример 12. Получение 8Ρ-4 (2,6-г масштаб, без хроматографии)
В перемешиваемый раствор 1-((2Κ,3Κ,4Κ,5Κ)-3-фтор-4-гидрокси-5-гидроксиметил-3-метилтетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пиримидин-2,4-диона (2,6 г, 10 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида (12,4 мл, 21 ммоль, 2,1 экв.)) при комнатной температуре в течение 15 мин. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(8)-(4-нитрофенокси)- 26 026341 феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (8, 8р-изомер, 4,08 г, 10 ммоль) в ТГФ (15 мл) в течение 10 мин. Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 60 ч и останавливали реакцию насыщенным водным ΝΗ^ί (20 мл). Смесь фракционировали между этилацетатом (150 мл) и последовательно 10% водным раствором №зСО3 (3x20 мл) и водой (20 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая бледно-желтый остаток (3,8 г). Остаток растворяли в дихлорметане (7,6 мл) и затем перемешивали в течение 20 ч при комнатной температуре. Белое твердое вещество фильтровали, промывали 1:1 1РЕ/дихлорметаном (5 мл) и высушивали в вакууме, получая чистый продукт в виде белого твердого вещества (1,85 г, выход 35%).
Пример 13. Получение 8р-4 с использованием ΝαΗΜΏ8
В перемешиваемый раствор 1-((2К,3К,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-гидроксиметил-3-метилтетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пиримидин-2,4-диона (71 мг, 0,27 ммоль) в безводном ТГФ (2,0 мл) вносили 2,0 М раствор бис(триметилсилил)амида натрия (ΝαΗΜΏ8) в ТГФ (270 мкл, 0,54 ммоль) при -78°С в течение 2 мин. Спустя 30 мин в смесь вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(8)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (8, 8р-изомер, 111 мг, 0,2 7 ммоль) в ТГФ (1 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при этой температуре в течение 2 ч, затем нагревали до -20°С и перемешивали при этой температуре в течение дополнительных 20 ч. ТСХ определяла ~30% непрореагировавшего исходного нуклеозидного материала. Поэтому в реакционную смесь вносили дополнительные 0,5 экв. реагента (55 мг, 0,14 ммоль) в ТГФ (0,5 мл) и перемешивали еще в течение 6 ч. Реакцию останавливали насыщенным водным раствором хлорида аммония, а затем фракционировали между этилацетатом и водой. Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали, получая светло-коричневый остаток. Колоночная хроматография неочищенного продукта с 0-5% градиента метанола/дихлорметана позволяла получить 8ρ-4 (22 мг, выход 15%), 3'фосфорамидат (5, 8р-изомер, 11,5 мг, выход 16%) и бис-фосфорамидат (6, 8ρ, 8р-изомер, 12,6 мг).
Пример 14. Получение Κρ-4 (260-мг масштаб)
В перемешиваемый раствор 1-((2К,3К,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-гидроксиметил-3-метилтетрагидрофуран-2-ил)-1Н-пиримидин-2,4-диона (260 мг, 1 ммоль) в безводном ТГФ (6 мл) вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида (1,23 мл, 2,1 ммоль, 2,1 экв.)) при комнатной температуре в течение 5 мин. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(К)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (8, Κρ-изомер) в ТГФ (3 мл) в течение 3 мин. Смесь оставляли перемешиваться при этой температуре в течение 96 ч, а затем останавливали насыщенным водным раствором ΝΗ^ί (10 мл). Остаток фракционировали между этилацетатом (50 мл) и водой (2x20 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая бледно-желтый остаток (490 мг). Остаток хроматографировали с 0-5% градиентом метанола/дихлорметана, получая продукт в виде белого твердого вещества (160 мг, выход 30%).
Соединения 8ρ-4 и Κρ-4, кроме того, можно получить путем реакции 3'-защищенного соединения 3 с соответствующим реагентом С и С' или смесью, содержащей С и С', как показано в следующих примерах.
Пример 15. Получение 8ρ-4 с использованием соединения 3а в качестве интермедиата синтеза
о ,5 ιΒιιΜ8(Ί/ΤΓΦ |4а;8О,:
ТГФ/Н,О
но1 г δ,-·*
- 27 026341
Пример 15-1. Синтез 5'-О-трет-бутилдиметилсилил-2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридина (9)
В перемешиваемый раствор 2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридина (3, 81,1 г, 312 ммоль) в безводном пиридине (750 мл) по каплям вносили раствор ТΒ^Μ8С1 (103,19 г, 685,6 ммоль) в безводном пиридине (500 мл) при комнатной температуре в течение 45 мин. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 24 ч. В реакционную смесь вносили метанол (85 мл) и оставляли смесь перемешиваться в течение 10 мин, а затем отгоняли растворитель при пониженном давлении. В реакционную массу вносили горячую воду (45°С) (1 л) и экстрагировали смесь этилацетатом (2x500 мл), промывали водой (1x500 мл). Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия. Отгоняли этилацетат и совместно выпаривали полученный остаток с толуолом (2x500 мл), получая неочищенное соединение 9 в качестве белой пены. Выход=116,9 г (количественный).
Ή ЯМР (СБС1з, 300 МГц): δ 0,1 (с, 6Н), 0,91 (с, 9Н), 1,22 (д, 3Н, 1=21 Гц), 2,50 (с, 2Н), 3,75-4,05 (м, 4Н), 5,54 (д, 1Н, 1=9 Гц), 5,73 (с, 1Н), 6,0 (д, 1Н, 1=18 Гц), 7,81 (д, 1Н, 1=9 Гц), 8,57 (шс, 1Н), 11,1 (с, 1Н).
Пример 15-2. Синтез 5'-О-(трет-бутилдиметилсилил)-3'-О-левулинил-2'-дезокси-2'-фтор-2'-Сметилуридина (10)
В перемешиваемый раствор нуклеозида 9 (116,9 г, 312,1 ммоль) в ДХМ (1 л) вносили ΌΜΑΓ (30,5 г, 249,7 ммоль) и оставляли перемешиваться при кт в течение 20 мин. В смесь вносили раствор левулинового ангидрида (133,6 г, 642,3 ммоль) в ДХМ (200 мл) и оставляли перемешиваться в течение 24 ч. ТСХ смеси указывала на завершение реакции. Вносили холодную воду (500 мл) и перемешивали смесь в течение 20 мин. Слои разделяли, органический слой промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (2x250 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, а затем отгоняли растворитель при пониженном давлении, получая желтое масло. Выход неочищенного продукта: 197,6 г (135%). Этот материал использовали на следующем этапе без обработки.
Ή ЯМР (СБС1з, 300 МГц) δ 0,11 (с, 6Н), 0,94 (с, 9Н), 1,34 (д, 3Н, 1=21 Гц), 2,22 (с, 3Н), 2,6-2,89 (м, 4Н), 3,72 (м, 1Н), 4,01 (д, 1Н, 1=12 Гц), 4,23 (д, 1Н, 1=9 Гц), 5,33 (дд, 1Н, 1=15 Гц), 5,73 (д, 1Н, 1=6 Гц), 6,26 (д, 1Н, 1=15 Гц), 8,12 (д, 1Н, 1=12 Гц), 8,72 (шс, 1Н).
Пример 15-3. Синтез 3'-О-левулинил-2'-дезокси-2'-фтор-2'-С-метилуридина (3а)
Неочищенное соединение 10 (197,6 г, ~312,1 ммоль) растворяли в ДХМ (1л), в который вносили ТЭА.3НЕ (50,3 г, 312,1 ммоль) и оставляли перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре. ТСХ смеси указывала на приблизительно 50% завершение реакции. Вносили еще один эквивалент ТЭА.3НЕ (50,3 г, 312,1 ммоль) и оставляли реакционную смесь перемешиваться в течение 6 ч. ТСХ в этот момент указывала на приблизительно 10% непрореагировавшего исходного материала. Вносили еще 0,25 экв. ТЭА.3НЕ (12,5 г, 78,0 ммоль) и оставляли реакционную смесь перемешиваться в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали досуха, получая желтое масло. Неочищенный продукт всех партий очищали колоночной хроматографией на силикагеле (0-2% МеОН в ДХМ), получая 124,1 г 3'левулината в виде белого пенистого твердого вещества (выход очистки в три этапа 90% от 2'-дезокси-2'фтор-2'-С-метилуридина).
Ή ЯМР: (СБС1з, 400 МГц) δ 1,55 (д, 3Н, СН3, 1=20 Гц), 2,36 (с, 3Н, СН3), 2,8-3,03 (м, 5Н, СН2СН3), 3,91-3,96 (дд, 1Н, СН), 4,2-4,25 (м, 1Н, СН'), 4,34 (дд, 1Н, СН, 1=8 Гц), 5,25 (дд, 1Н, 1=16 Гц), 5,93 (д, 1Н, 1=8 Гц), 8,20 (д, 1Н, 1=8 Гц), 9,18 (с, 1Н).
Пример 15-4. Стереоселективный синтез (8)-изопропилового эфира (8)-2-{[(1К,4К,5К)-5-(2,4диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-4-(К)-фтор-3 -(4-оксопентаноил)-4-метилтетрагидрофуран-2илметокси]-феноксифосфориламино}-пропионовой кислоты (11)
В раствор нуклеозида (3а, 1,00 ммоль, 358 мг) в 5 мл безводного ТГФ, охлажденный до 0°С, вносили ШиМдС1 (1,7 М в ТГФ, 2 экв.), позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение получаса. В эту смесь в один прием вносили реагент (приблизительно 97% хиральной чистоты) изопропиловый эфир (8)-2-[(8)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (8, 8Ризомер) (408 мг, 1,00 ммоль, 1,00 экв.) и оставляли перемешиваться при кт. Спустя 16 ч оставалось ~30% исходного материала. Реакцию останавливали 10 мл насыщенного раствора МН4С1 и экстрагировали водную фазу этилацетатом (3x25 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным раствором №С1, высушивали над безводным сульфатом натрия и выпаривали досуха, получая бледножелтую пену (500 мг). Продукт очищали хроматографией на силикагеле, используя 2-5% метанол в метиленхлориде, получая продукт в виде белой пены (275 мг) приблизительно 97% хиральной чистоты относительно Р и непрореагировавший исходный материал (162 мг). Основываясь на израсходованном исходном материале, выход составлял 76%.
31Р ЯМР (СОС1з, 162 МГц): 3,7 м.д.; Ή ЯМР (СОС13, 400 МГц): δ 1,22 (дд, 6Н, 1=6,4 Гц), 1,37 (с, 3Н), 1,58 (с, 3Н), 2,18 (с, 3Н), 2,63-2,9 (м, 4Н), 4,0 (д, 1Н, 1=8 Гц), 4,2-4,33 (м, 1Н), 4,57 (д, 1Н, 1=8 Гц), 4,96-5,00 (септ, 1Н), 5,2 (дд, 1Н, 1=9 Гц), 5,42 (д, 1Н, 1=8 Гц), 6,19 (д, 1Н, 1=18 Гц), 7,15-7,35 (м, 5Н), 7,5 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 8,2 (шс, 1Н).
- 28 026341
Пример 15-5. Синтез (8)-изопропилового эфира (8)-2-{[(1К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Нпиримидин-1-ил)-4-(К)-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-илметокси]феноксифосфориламино}пропионовой кислоты (8Р-4)
Раствор сульфита натрия получали, внося №-138303 (1,51 г) и №-138303 (0,57 г) в воду (25 мл). 1,0 мл раствора сульфита натрия вносили в раствор левулината (11, 250 мг, 0,40 ммоль) в безводном ТГФ (2,5 мл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь вливали в воду (15 мл), экстрагировали этилацетатом (3x25 мл) и выпаривали, количественно получая белый твердый продукт приблизительно 97% хиральной чистоты относительно Р, соответствовавший физическим и химическим свойствам 8Р-4, полученного непосредственно из незащищенного нуклеозида.
Пример 16. Альтернативная процедура получения 8Р-4 из 3 а.
В перемешиваемый раствор (2К,3К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-4-фтор2-гидроксиметил-4-метилтетрагидрофуран-3-илового эфира 4-оксопентановой кислоты (За, 210 мг, 0,59 ммоль) в безводном ТГФ (1,5 мл) вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида (1,07 мл, 1,82 ммоль) при комнатной температуре в течение 2 мин. Вначале наблюдали белый осадок, а спустя 10 мин реакционная смесь превращалась в темно-желтый раствор. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(8)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (8 (8Ризомер), 382 мг, 0,94 ммоль) в ТГФ (1,5 мл) в течение 3 мин. Смесь нагревали до 40°С в течение 5 ч; в этот момент времени ТСХ и 'Н ЯМР определяли менее 2% непрореагировавшего исходного материала. Реакцию останавливали насыщенным водным раствором хлорида аммония, а затем фракционировали между этилацетатом и водой. Объединенный органический слой промывали 10% водным раствором №2С03 (3x10 мл), а затем водой. Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали, получая коричневый остаток (410 мг). Неочищенный продукт растворяли в тетрагидрофуране (1,0 мл), а затем вносили водный раствор смеси сульфита натрия (37 мг, 0,295 ммоль) и метабисульфита натрия (224 мг, 1,18 ммоль) в 1 мл воды. Смесь нагревали до 45°С в течение 20 ч; на этом этапе согласно ТСХ наблюдали лишь 10% конверсию, вследствие чего вносили дополнительное количество сульфита натрия (74 мг) и метабисульфита натрия (448 мг) и продолжали нагревание в течение дополнительных 52 ч. В этот момент наблюдали приблизительно 40% конверсию согласно ТСХ. Реакционную смесь фракционировали между водой и этилацетатом. Объединенный органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали, получая коричневый остаток (210 мг). Колоночная хроматография остатка в 0-5% градиенте МеОН/ДХМ позволяла получить непрореагировавший исходный материал (89 мг) и 8Р-4 (57 мг, выход 18% или 24%, основываясь на выделенном исходном материале).
Пример 17. Получение 8Р-4 с использованием соединения 3с в качестве интермедиата синтеза
Пример 17-1. Получение 1-[(2К,3К,4К,5К)-4-(трет-бутилдиметилсиланокси)-3-фтор-5гидроксиметил-3-метилтетрагидрофуран-2-ил]-1Н-пиримидин-2,4-диона, 12.
В раствор соединения 3 (10,0 г, 38,43 ммоль) в пиридине (50 мл) вносили дихлорметан (50 мл). Раствор охлаждали до 0°С. В раствор вносили 4,4'-диметокситритилхлорид (14,32 г, 42,27 ммоль) и перемешивали раствор при 0°С в течение 5 ч. Для остановки реакции вносили метанол (5 мл). Раствор концентрировали досуха при пониженном давлении и фракционировали остаток между этилацетатом (500 мл) и водой (50 мл). Органический раствор промывали насыщенным раствором №С1 (50 мл) и высушивали (сульфатом натрия, 4 г). Растворитель удаляли при пониженном давлении, а остаток растворяли в дихлорметане (100 мл). В раствор вносили имидазол (7,83 г, 115 ммоль) и !-бутилдиметилсилилхлорид (8,68 г, 57,6 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Для остановки реакции вносили метанол (5 мл), раствор удаляли при пониженном давлении, а остаток фракционировали между этилацетатом (500 мл) и водой (50 мл). Органический раствор высушивали (сульфатом натрия, 4 г) и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией (10-40% Е!0Ас в гексане), получая промежуточный продукт 5'-0-ЭМТ-3'-0-1БПМ8. Его, в свою очередь, обрабатывали 1% трифторуксусной кислотой в дихлорметане (200 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Вносили воду (20 мл) и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение еще 1 ч. Медленно вносили метанол (5 мл) и перемешивали раствор при комнатной температуре
- 29 026341 в течение еще 1 ч. С целью подгонки рН раствора до 7 вносили гидроксид аммония. Органический раствор отделяли, высушивали (сульфатом натрия, 4 г) и выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (1-5% метанол в дихлорметане), получая соединение 12 в виде белого твердого вещества (7,5 г, выход 50% в три стадии).
!Н ЯМР (ДМСО-б6) δ (м.д.) 11,48 (шс, 1Н, ΝΗ), 7,94 (д, 1Н, Н-6), 6,00 (д, 1Н, Н-1'), 5,69 (д, 1Н, Н-5), 4,06 (дд, 1Н, 3'-Н), 3,85 (м, 2Н, Н-5'а, Н-4'), 3,58 (шд, 1Н, Η-5'Ь), 1,27 (д, 3 Н, 2-СН3), 0,89 (с, 9Н, С(СН3)3), 0,12 (с, 6Н, 8ί (СН3)2).
Пример 17-2. Получение 8Р-4 с использованием 1-[(2К,3К,4К,5К)-4-(трет-бутилдиметилсиланокси)3-фтор-5-гидроксиметил-3-метилтетрагидрофуран-2-ил]-1Н-пиримидин-2,4-диона (3с).
В перемешиваемый раствор 1-[(2К,3К,4К,5К)-4-(трет-бутилдиметилсиланокси)-3-фтор-5гидроксиметил-3-метилтетрагидрофуран-2-ил]-1Н-пиримидин-2,4-диона (12, 374 мг, 1 ммоль) в безводном ТГФ (3 мл) вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида (1,8 мл, 3,1 ммоль) при комнатной температуре в течение 2 мин. Вначале наблюдали белый осадок, а спустя 10 мин реакционная смесь превращалась в прозрачный темно-желтый раствор. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(8)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (8, 8Р-изомер, 653 мг, 1,6 ммоль) в ТГФ (2,5 мл) в течение 3 мин. Смесь нагревали до 40°С в течение 20 ч; в этот момент времени ТСХ и 'Н ЯМР определяли менее 5% непрореагировавшего исходного материала. Реакцию останавливали насыщенным водным раствором хлорида аммония, а затем фракционировали между этилацетатом и водой. Органический слой промывали 10% водным раствором №2СО3 (3x10 мл), а затем водой (20 мл). Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали, получая коричневый остаток, содержавший 3с (850 мг). Неочищенный продукт растворяли в тетрагидрофуране (2 мл) и вносили 0,8 мл 8 0% водного раствора муравьиной кислоты при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали при 50°С в течение 96 ч. С помощью ТСХ наблюдали приблизительно 70% конверсию. Реакционную смесь вливали в холодный насыщенный водный раствор бикарбоната натрия, а затем фракционировали между этилацетатом и водой. Объединенный органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали, получая коричневый остаток (220 мг). Колоночная хроматография остатка в 0-5% градиенте МеОН/ДХМ позволяла получить непрореагировавший исходный материал (21 мг) и 8Р-4 (77 мг, выход 35 или 39%, основываясь на выделенном исходном материале).
Пример 18. Получение 8Р-4 с использованием соединения 3б в качестве интермедиата синтеза
Υρ-4
Пример 18-1. Получение соединения 3б
В перемешиваемый раствор соединения 3 в пиридине (20 мл) при 0°С по каплям вносили Т1РЭ8-С1 в течение 15 мин. Смеси позволяли медленно нагреться до комнатной температуры, при которой ее перемешивали в течение 16 ч. Пиридин выпаривали, а остаток совместно выпаривали с толуолом (50 мл). Остаток гомогенизировали с гексаном и отфильтровывали белый осадок с помощью целитной фильтровальной подушки. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая пенистое твердое вещество (12,97 г). Неочищенный продукт (13) растворяли в тетрагидрофуране (75 мл), а затем вносили водный раствор ТФУК (75 мл, 1:1 ТФУК/вода) при 0°С в течение 20 мин. Смесь перемешивали при этой температуре в течение 6 ч. ТСХ определяла ~5% исходного материала. Реакцию останавливали насыщенным водным раствором NаΗСО3 до достижения рН 8, а за- 30 026341 тем экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический экстракт промывали водой, высушивали и концентрировали, получая белое кристаллическое твердое вещество. Дальнейшая гомогенизация этого твердого вещества с гексаном (30 мл) позволяла получить белое твердое вещество, которое фильтровали и высушивали в глубоком вакууме, получая соединение 3й (10,1 г, выход 84% в 2 этапа). 1Н ЯМР (400 МГц, СЮСЬ) : δ 8,83 (шс, 1Н), 7,94 (шд, 1=6,0 Гц, 1Н), 6,10 (шд, 1=18,4 Гц, 1Н), 5,71 (д, 1=8,2 Гц, 1Н), 4,43 (шс, 1Н), 4,36 (дд, 1=22,6, 9,0 Гц, 1Н), 4,27 (шс, 1Н), 4,10 (д, 1=13,2 Гц, 1Н), 4,03 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 3,92 (д, 1=13,2 Гц, 1Н), 1,39 (д, 1=22,0 Гц, 3Н), 1,11-0,92 (м, 28Н).
Пример 18-2. Получение 8Р-4
В перемешиваемый раствор 3й (520 мг, 1 ммоль) в безводном ТГФ (5 мл) вносили 1,7 М раствор трет-бутилмагнийхлорида (1,8 мл, 3,1 ммоль, 3,1 экв.)) при комнатной температуре в течение 15 мин. Спустя 30 мин по каплям вносили раствор изопропилового эфира (8)-2-[(8)-(4-нитрофенокси)феноксифосфориламино]пропионовой кислоты (8, 8Р-изомер, 653 мг, 1,6 ммоль) в ТГФ (1 мл) в течение 3 мин. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 60 ч. 1Н и 31Р ЯМР необработанного образца определяли смесь диастереомеров в соотношении приблизительно 1:0,76. Реакцию останавливали насыщенным водным раствором ΝΉ40 (20 мл). Смесь фракционировали между этилацетатом (150 мл) и последовательно 10% водным раствором №-ьСО3 (3x20 мл) и водой (20 мл). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая бледно-желтый остаток (14, 878 мг).
Вышеуказанное соединение 14 повторно растворяли в тетрагидрофуране (3 мл), а затем вносили 80% водный раствор муравьиной кислоты. Смесь нагревали при 55°С в течение 20 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, а затем останавливали реакцию насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (рН 7,0. Затем реакционную смесь фракционировали между этилацетатом и водой. Объединенный органический слой высушивали над сульфатом натрия и концентрировали, получая 560 мг остатка. Остаток хроматографировали с 0-5% градиентом метанола/дихлорметана, получая непрореагировавший исходный материал (14, 242 мг) и 8Р-4 (80 мг, выход 15%) в виде белого твердого вещества.
Пример 19. Получение изотопно меченого 8Р-4
Пример 19-1. Получение 1-((6аК,8К,9К,9а8)-9-гидрокси-2,2,4,4-тетраизопропилтетрагидро-6Нфуро[3,2-Г][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8-ил)пиримидин-2,4(1Н,3Н)-диона, 16
Уридин (15, 100,0 г, 409,5 ммоль) совместно выпаривали досуха с безводным пиридином (600 мл) и ресуспендировали в безводном пиридине (700 мл). В эту перемешиваемую тонкодисперсную суспензию вносили 1,3-дихлор-1,1,3,3-тетраизопропилдисилоксан (135,7 г, 482,5 ммоль) в течение 60 мин при комнатной температуре. После перемешивания тонкодисперсной суспензии в течение 17 ч при комнатной температуре реакцию останавливали внесением метанола (20 мл), а затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток фракционировали между этилацетатом (1,5 л) и водой (2 л). Затем органический слой промывали 5% соляной кислотой (2x1 л), насыщенным раствором Ν;·ιΟ (500 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия (50 г), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении до неочищенного продукта в количестве приблизительно 250 г. Остаток подвергали фильтрации на колонке с силикагелем (1,75 кг) в градиенте этилацетата в гексане 20-65%. Фракции чистого продукта, отобранные согласно гомогенной ТСХ (Κί 0,55 в 1:1 смеси гексана-этилацетата) объединяли, концентрировали при пониженном давлении и высушивали (40°С, 0,2 мм рт.ст., 24 ч), получая 145,5 г (76%) соединения 16 в виде белого пенистого твердого вещества. Кроме того, собирали дополнительную фракцию (35 г) слег- 31 026341 ка загрязненного соединения 16. 1Н ЯМР (ДМСО-й6) δ (м.д.) 11,35 (с, 1Н, ΝΗ), 7,66 (д, 1Н, 1=7,6 Гц, Н-6), 5,57 (д, 1Н, 1=4,8 Гц, 2'-ОН), 5,50-5,49 (м, 2Н, 1'-Н и Н-5), 4,14-4,18 (м, 3Н, 2',3',4'-Н), 3,97-3,87 (м, 2Н, 5'На и НЬ), 1,02-0,95 (м, 28Н, СН(СН3)2).
Пример 19-2. Получение 1-((6аР,8Р,9аР)-2,2,4,4-тетраизопропил-9-оксотетрагидро-6Н-фуро[3,21][1,3,5,2,4]триоксадисилоцин-8-ил)пиримидин-2,4(1Н,3Н)-диона, 17
В сухую трехгорлую круглую колбу вносили безводный ДХМ (600 мл) и ДМСО (30,82 г, 394,5 ммоль). Раствор охлаждали до -78°С на бане сухим льдом/ацетоном в атмосфере азота. Трифторуксусный ангидрид (чистый, 77,7 г, 369,8 ммоль) вносили с помощью шприца в течение 40 мин и получали мутную смесь. В смесь через капельную воронку вносили по каплям раствор производного уридина 16 в ДХМ (600 мл) в течение 75 мин при -78°С. Эту гетерогенную смесь перемешивали в течение 2 ч при -78—65°С, а затем с помощью шприца быстро вносили безводный триэтиламин (92 мл), образуя прозрачный светло-желтый раствор. Спустя 1 ч при низкой температуре реакция завершалась согласно ТСХ (30% Е1ОАс в гексане). Охлаждающую баню удаляли, а реакционную смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение 1 ч. Реакцию останавливали добавлением насыщенного ΝΉ40 (180 мл). Вносили воду (200 мл) и отделяли органический слой. Водный слой повторно экстрагировали ДХМ (300 мл). Объединенный органический слой промывали водой (3x400 мл), насыщенным раствором №·ιθ (150 мл) и высушивали над №28О4.
Удаление растворителя позволяло получить клейкий коричневый остаток.
Неочищенный маслянистый остаток (содержавший следовые количества ДХМ) хранили в течение ночи в морозильной камере. После ночи в масле наблюдали некоторое количество кристаллического твердого вещества. Масло растворяли в 500 мл гексана при комнатной температуре. Раствор хранили в морозильной камере в течение 24 ч, в результате чего образовывалось большее количество твердого вещества. Твердое вещество собирали фильтрованием и промывали холодным 10% ДХМ в гексане (1 л) с целью удаления большей части оранжевого окрашивания. Твердое вещество (17) высушивали в вакууме в течение 2 ч, а затем высушивали воздухом в течение 24 ч. Твердое вещество весило 21 г после высушивания в вакууме при 50°С. Фильтрат концентрировали, остаток очищали колоночной хроматографией (10-70% этилацетат в гексане), получая дополнительные 37 г (объединенный выход 97%) соединения 17 в виде светло-оранжевого твердого вещества.
Пример 19-3. Получение 1-((2Р,38,4Р,5Р)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)-3-13С-пердейтериометилтетрагидрофуран-2-ил)пиримидин-2,4(1Н,3Н)-диона, 18
Магний (3,53 г, 147 ммоль), промытый 5% водным раствором соляной кислоты и высушенный (50°С, 0,2 мм рт.ст., 24 ч), помещали в двугорлую круглодонную колбу, оснащенную магнитной мешалкой и холодильником. Колбу заполняли газообразным аргоном, а затем вносили безводный эфир (80 мл). К магнию в эфире медленно добавляли пердейтерио-13С-метилиодид (15,06 г, 110,3 ммоль), что приводило к экзотермической реакции. После охлаждения реакционной смеси надосадочную жидкость переносили в раствор высушенного соединения 17 (50°С, 0,2 мм рт.ст., 15 ч) (10,0 г, 20,63 ммоль) в безводном ТГФ (1 л) при -50°С в течение 20 мин. Температуре позволяли повыситься до -40°С и перемешивали смесь при диапазоне температур от -40 до -25°С в течение 4 ч. После завершения реакции смесь разбавляли Е1ОАс (1 л) при -50°С, а затем медленно вносили насыщенный раствор №С1 (300 мл). Органический слой отделяли, промывали насыщенным раствором хлорида аммония (300 млх2) и высушивали сульфатом натрия. После фильтрации и концентрирования при пониженном давлении остаток растворяли в МеОН (250 мл). Вносили фторид аммония (12 г) и ТВАР (400 мг). Полученную смесь перемешивали при 90°С в течение 7 ч, а затем концентрировали с силикагелем (20 г) при пониженном давлении. После тщательной вакуумной сушки полученный остаток очищали флэш-колоночной хроматографией на силикагеле (МеОН:СН2С12=1:20-1:10), получая соединение 18 (5 г, 46%) в виде белого твердого вещества.
Ή ЯМР (ДМСО-й6) δ (м.д.) 11,26 (с, 1Н, ΝΉ), 7,65 (д, 1Н, 1=8,4 Гц, Н-6), 5,77 (д, 1Н, 1=2,4 Гц, Н-1'), 5,57 (д, 1Н, 1=8,0 Гц, Н-5), 5,46 (д, 1Н, 1=5,2 Гц, НО-3'), 5,24 (д, 1Н, 1=2,4 Гц, НО-2'), 5,14 (т, 1Н, 1=5,6 Гц, НО-5'), 3,74-3,56 (м, 4Н, Н-3',4',5',5).
Пример 19-4. Получение ((2Р,3Р,48,5Р)-3-ацетокси-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)ил)-4-гидрокси-4-13С-пердейтериометилтетрагидрофуран-2-ил)метилацетата, 19
В раствор соединения 18 (5,00 г, 19,1 ммоль) в безводном пиридине (100 мл) вносили уксусный ангидрид (3 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч, разбавляли Е1ОАс (250 мл), промывали водой (50 млх3) и высушивали сульфатом натрия. После фильтрации и концентрирования остаток очищали флэш-колоночной хроматографией (МеОН от 0 до 5% в СН2С12), получая соединение 19 (4,0 г, 68%) в виде серого твердого вещества.
Пример 19-5. Получение ((2Р,3Р,4Р,5Р)-3-ацетокси-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)ил)-4-фтор-4-13С-пердейтериометилтетрагидрофуран-2-ил)метилацетата, 20
В раствор соединения 19 (2,33 г, 6,73 ммоль) в безводном СН2С12 (60 мл) медленно вносили ЭА8Т (1,33 мл, 10,1 ммоль) при -78°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин после помещения в условия с комнатной температурой. Дополнительные две реакции в масштабе 2,33 г и одну реакцию в масштабе 1,00 г проводили точно таким же образом. Смеси, полученные в результате всех четырех реакций, объединяли, разбавляли СН2С12 (300 мл), промывали водой со льдом (100 млх2), а затем холодным
- 32 026341 водным раствором NаНСΟз (100 млx2). После высушивания, фильтрации и концентрирования остаток очищали флэш-колоночной хроматографией на силикагеле (ЕЮАс от 0 до 50% в гексане, выход соединения приблизительно 48%), получая соединение 20 (2,0 г, 24% от общих 7,99 г соединения 19) в виде белого твердого вещества.
Ή ЯМР (СБС13) δ (м.д.) 8,27 (с, 1Н, ΝΗ), 7,55 (д, 1Н, 1=8,4 Гц, Н-6), 6,17 (д, 1Н, 1=18,8 Гц, Н-1'), 5,78 (дд, 1Н, 1=1,2, 8,4 Гц, Н-5), 5,12 (дд, 1Н, 1=9, б, 21,6 Гц, Н-3'), 4,40-4,31 (м, 3Н, Н-4',5',5), 2,19 (с, 3Н, СН3), 2, 15 (с, 3Н, СН3).
Пример 19-6. Получение 1-((2К,3К,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)-3-1ЭСпердейтериометилтетрагидрофуран-2-ил)пиримидин-2,4(1Н,3Н)-диона, 21
В раствор соединения 20 (2 г, 5,74 ммоль) в метаноле (20 мл) вносили п-бутиламин (6 мл). Полученную смесь перемешивали при кт в течение 15 ч, а затем концентрировали с силикагелем ίη уасио. Полученный остаток очищали флэш-колоночной хроматографией с силикагелем (МеОН от 0 до 10% в СН2С12), получая соединение 21 (1,3 г, 85%) в виде белого твердого вещества.
Ή ЯМР (СО3ОЭ) δ (м.д.) 8,08 (д, 1Н, 1=8,0 Гц, Н-6), 6,13 (д, 1Н, 1=18,4 Гц, Н-1'), 5,70 (д, 1Н, 1=8,0
2Н, Н-3',4'), 3,80 (дд, 1Н, 1=2,0, 12,8 Гц, Н-5), Ε8Μ8
Гц, Н-5), 3,99 (д, 1Н, 1=13,6 Гц, Н-5'), 3,97-3,91 (м, (М+1) расчетное 265, наблюдаемое значение 265.
Пример 19-7. Получение (8)-изопропил 2-((((2К,3К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-13С-пердейтериометилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноата, 22
В раствор незащищенного нуклеозида 21 (207 мг, 0,783 ммоль) и Ν-метилимидазола (0,4 мл, 5 ммоль) в ТГФ (4 мл) по каплям вносили предварительно изготовленный фосфорхлоридат в ТГФ (1,0 М, 2,35 мл, 2,35 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение 1 ч, а затем вносили воду (1 мл) и ЕЮАс (5 мл). Органический раствор промывали насыщенным водным раствором одноосновного цитрата натрия (2x2 мл), насыщенным водным раствором NаΗСО3 (1x2 мл), высушивали (Мд8О4) и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией с силикагелем, используя 0-5% ‘РгОН в СН2С12 в качестве элюента, получая фосфорамидат 22 (216 мг, 52%, смесь Р-диастереомеров 1:1) в виде белого твердого вещества. Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 11,54 (с, 1Н), 7,56 (д, 1=6,8 Гц, 1Н), 7,40-7,35 (м, 2Н), 7,23-7,18 (м, 3Н), 6,14-5,96 (м, 2Н), 5,89 (дд, 1=5, 6, 25,6 Гц, 1Н), 5,55 (т, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,85 (дк, 1=1,6, 6,0 Гц, 1Н), 4,444,32 (м, 1Н), 4,25 (м, 1Н), 4,06-3,98 (м, 1Н), 3,86-3,70 (м, 2Н), 1,30-1,08 (м, 9Н); 31Р ЯМР (162 МГц, ДМСО-б6) δ 4,90, 4,77; ЬКМ8 (Ε8Ι) [М+Н]+ рассчитанное значение для С2113СН27П3Р^О9Р 534,5, найденное значение 534,4.
Пример 19-8. Получение (28)-2-(((((2К,3К,4К,5К)-5-(2, 4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2Н)-ил)4-фтор-3-гидрокси-4-13С-пердейтериометилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(гидрокси)фосфорил)амино)пропионовой кислоты, 23
Фосфорамидат 22 (147 мг, 0,276 ммоль) суспендировали в триэтиламине (2 мл) и воде (0,5 мл) и нагревали при 60°С в течение 30 ч. Затем выпаривали при пониженном давлении летучие компоненты. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией с силикагелем, элюируя его 50-70% 1РгОН в СН2С12, а затем 0-20% ЯН4ОН в ‘РгОН, получая соединение 23 в виде белого твердого вещества (95 мг, 83%): Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 8,00 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 5,98 (д, 1=19,2 Гц, 1Н), 5,52 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 4,02-3,81 (м, 4Н), 1,10 (д, 1=6, 8 Гц, 3Н); 31Р ЯМР (162 МГц, ДМСО-б6) δ 8,12; ЬКМ8 (Ε8Ι) [М+Н]+ рассчитанное значение для С1213СН17П3Р^О9Р 416,3, найденное значение 416,4.
Свойства образцов КР-4, 4 и 8Р-4
Образцы КР-4, 4 и 8Р-4 анализировали с помощью рентгеновской порошковой дифрактометрии (ХРРЭ). спектрометрии ядерного магнитного резонанса (ЯМР), инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье (Фурье-ИК), дифференциальной сканирующей калориметрии (Э8С), термогравиметрического анализа (ТСА), гравиметрической сорбции паров (СУ8), анализа термодинамической растворимости в воде и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Пример 20. Рентгеновская порошковая дифрактометрия
Образцы КР-4, 4 и 8Р-4 анализировали с помощью рентгеновской порошковой дифрактометрии (ХРРЭ) по следующей схеме.
- 33 026341
a. Вгикег АХ8/81етеи8 Ό5000
Порошковые дифрактограммы собирали на дифрактометре 81етеи5 Ό5000, используя Си Καизлучение (40 кВ, 40 мА), угломер θ-θ, расхождение У20 и приемных щелей, графитовый вторичный монохроматор и сцинцилляционный счетчик.
Производительность инструмента проверяли согласно сертифицированному стандарту Согиибит (ΝΙ8Τ 1976). Программное обеспечение, использованное для сбора данных, представляло собой ЭТ&ас Р1ик ХКРЭ Соттаибег ν2.3.1; данные анализировали и представляли с помощью ЭТТгас Р1ик ЕУА ν 11.0.0.2 или ν 13.0.0.2.
Условия окружающей среды
Образцы, запускавшиеся при условиях окружающей среды, были изготовлены как плоские пластинчатые препараты, использующие порошок непосредственно после получения. Приблизительно 35 мг образца аккуратно упаковывали в углубление в полированной кремниевой пластине с нулевым шумом (510). Во время анализа образец вращали в его плоскости. Подробности сбора данных были следующими: угловой диапазон: от 2 до 42°2θ; размер шага: 0,05°2θ; время сбора: 4 с.шаг-1.
b. Вгикег АХ8 С2 ΟΑΌΌ8
Порошковые дифрактограммы собирали на дифрактометре Вгикег АХ8 С2 ΟΑΌΌ8, используя Си Κα-излучение (40 кВ, 40 мА), автоматический ΧΥΖ-предметный столик, лазерный видеомикроскоп для автоматического позиционирования образца и двумерный детектор площади Ш81аг. Рентгеновская оптика состояла из единственного многослойного зеркала ОбЬе1, сопряженного с точечным 0,3-мм коллиматором.
Расходимость луча, т.е. эффективный размер рентгеновского луча на образце, составляла приблизительно 4 мм. При расстоянии образец-детектор 20 см, позволявшем получить эффективный 26-диапазон 3,2°-29,7°, использовали непрерывный режим сканирования θ-θ. Обычно образец экспонировали для рентгеновского пучка в течение 120 с. Программное обеспечение, использованное для сбора данных, представляло собой ОАЭЭ8 для νΝΤ 4.1.16; данные анализировали и представляли с помощью ЭйГтас Р1ик ЕУА ν 9.0.0.2 или ν 13.0.0.2.
Условия окружающей среды
Образцы, запускавшиеся при условиях окружающей среды, были изготовлены как плоские пластинчатые препараты без шлифовки, использующие порошок непосредственно после получения. Приблизительно 1-2 мг образца слегка запрессовывали в предметное стекло, получая плоскую поверхность.
Рентгеновская порошковая дифрактометрия (ΧΚΡϋ)
С помощью ХКРЭ обнаружили, что соединение 4 являлось аморфным (см. фиг. 1). ХКРЭ-анализ высокого разрешения образца КР-4, полученного согласно примеру 3, подтвердил кристаллическую природу твердого вещества, порошковая дифрактограмма которого отличалась от дифрактограммы 8Р-4 (полученного согласно примеру 4, способу 4), кристаллическая природа которого также подтверждалась. Результаты ХКРЭ для КР-4 и 8Р-4 показаны в табл. 1, причем все пики, обладавшие интенсивностью <5% (КР-4) и <3% (8Р-4), исключены.
Таблица 1. Данные ХКРЭ для КР-4 и 8Р-4
Данные ΧΚΡϋ для КР-4 Данные ΧΚΡϋ для $Р-4 (Форма 1)
Угол 2-тета ° Интенсивность ΐ Угол 2-тета ° Интенсивность %
6, 616 51,1 4,900 6, 8
7, 106 40,5 5, 190 19, 8
8, 980 30,0 7,501 100,0
- 34 026341
11,020 21,7 8,355 4,1
11,559 77, 1 8,965 7,7
11,950 12,8 9, 619 21,2
13,023 5,2 10,145 3, 6
14,099 6,2 14,393 4,9
15,121 5,7 16,300 7,0
15,624 5, 4 16,688 10, 6
16,003 17,8 17,408 5, 5
17,882 100, 0 17,820 8,2
18,567 8, 8 18,262 31, 5
19,564 22,7 18,600 6, 3
20,280 5, 6 18,900 7,3
20,728 42,5 19,150 6,1
21,047 19, 9 19,696 4,8
21,671 22,0 20,398 4,4
21,943 23,3 20,710 6,9
22,214 18,9 21,950 6,1
23,074 28,5 22,175 12,2
24,145 30,3 22,511 5, 6
24,355 39, 1 22,924 3, 1
25,366 7, 6 23,360 6, 5
26,146 36,2 23,538 7, 1
27,000 9, 0 23,910 7,4
27,313 15, 6 24,873 3,7
27,677 22,7 25,123 4,9
28,219 12,8 25,649 4,2
28,661 6,2 26,748 5,2
29,450 6, 8 27,339 3,7
29,735 9, 4 27,646 3,5
31,372 8,2 28,066 3,1
31,967 10,9 29,050 3,0
32,295 6, 4 29,541 3, 6
33,001 11,4 30,178 3,8
33,774 11,8 31,648 3, 1
34,385 6, 6 32,721 3,5
Образец 8Ρ-4 измельчали с помощью ступки и пестика, а затем последовательно пропускали через сита с размером ячейки 500 и 250 мкм с целью получения образца в виде тонкодисперсного порошка.
- 35 026341
Этот образец повторно анализировали ХРРЭ высокого разрешения, которая подтвердила отсутствие изменений формы.
Пример 21. Исследования кристаллизации 8Р-4
Кристаллический 8Р-4 обладал полиморфизмом. Таким образом, аспект был направлен на кристаллический 8Р-4 и его отдельные полиморфные формы. 8Р-4 мог существовать, по меньшей мере, в виде пяти полиморфных форм, обозначенных как Формы 1-5. Кроме того, также можно было получить аморфный 8Р-4. Типичная кристаллизация обеспечивала для растворения приблизительно 100 мг 8Р-4 в соответствующем объеме растворителя для кристаллизации (ацетонитрил (5 объемов), хлороформ (5 объемов), п-бутилацетат (7 объемов), дихлорметан (50 объемов), метоксибензол (7 объемов) и 1:1 МТВЕ/гептан (50 объемов)), и, таким образом, позволяла выпаривать раствор при 5°С. Получали различные кристаллические формы, однако каждая форма после фильтрации и/или высушивания образовывала Форму 1.
Формы 1, 2 и 3 представляли собой несольватированную форму, 1:1 сольват ДХМ и 1:1 сольват хлороформа, соответственно, что подтвердили монокристальным рентгеновским и ХКРИ-анализом. Формы 4 и 5 получали при кристаллизации 8Р-4 из растворов ацетонитрила и метоксибензола соответственно. Достаточных данных для определения того, являлись ли Формы 4 и 5 несольватированными, гидратированными или сольватированными, не было получено, поскольку не были получены одиночные кристаллы достаточного качества. Формы 4 и 5 при фильтрации превращались в Форму 1. При кристаллизации 8Р-4 из п-бутилацетата (пВиАс) и раствора, содержавшего метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ) и гептан, получили две дополнительные кристаллические формы; при фильтрации обе эти кристаллические формы превращались в форму 1. Формы 2 и 3 также превращались в Форму 1 при выделении. Форма 1 представляла собой несольватированную форму, обладавшую широкой эндотермой плавления с температурой начала 94,3°С и АН(и 24,0 кДж моль-1. Дополнительная ХКРИ-дифрактограмма Формы 1 8Р-4 изображена на фиг. 4.
Превращение Формы 1 8Р-4 в Форму 6 8Р-4
Форму 1 можно было преобразовать в форму 6, по меньшей мере, двумя путями.
Во-первых, воздействием атмосферной влажности на тонкодисперсные кристаллы Формы 1 в течение нескольких суток получали моногидрат Формы 1 с появлением затвердевающей смолы. После измельчения моногидрата твердого вещества в тонкодисперсный порошок дифрактограмма оставалась соответствующей Форме 1. При нахождении в открытом сосуде в течение 6-10 недель молотый материал медленно превращался в Форму 6 в виде безводного твердого вещества. В герметичном контейнере Форма 1 была стабильной по меньшей мере в течение 2 лет.
В альтернативном случае Форму 1 можно было суспендировать в воде в количестве 5-50 мг/мл при комнатной температуре и через несколько часов преобразовать в Форму 6. Эффективность процесса преобразования в воде можно было улучшить за счет нагревания воды до определенного значения, при котором или выше которого можно растворить большее количество Формы 1 и увеличить текучесть несмешивающейся части 8Р-4 от плотной смолы до суспендированного масла. Со временем Форма 6 могла начать кристаллизоваться при 50°С. Дальнейшее охлаждение суспензии до 0-10°С приводило к большему восстановлению твердого вещества. Кристаллизация из воды также удаляла большее количество полярных следовых примесей, приводя к повышению общей чистоты.
Повторное растворение Формы 6 в органическом растворителе, например, дихлорметане или ацетонитриле, с последующей кристаллизацией приводило к получению Формы 1 даже при затравке кристаллической Формой 6.
В сухую 100-мл одногорлую круглодонную колбу, оснащенную резиновой перегородкой и магнитной мешалкой, загружали 1,04 г Формы 1 8Р-4. Чистота согласно ВЭЖХ 99,7%. Загружали 40 мл деионизованной воды. Начинали энергичное перемешивание суспензии при нагревании до 50°С. После достижения температуры 50°С раствор поддерживали в наиболее гомогенном состоянии в течение 60 мин; в это время твердые вещества начинали осаждаться из раствора, образуя тонкодисперсную суспензию. Суспензию охлаждали до 20°С в течение 90 мин и поддерживали в течение 16 ч при 20°С, после чего охлаждали до 0-5°С в течение 30 мин и поддерживали при 0-5°С в течение 2,5 ч. Суспензию фильтровали через воронку из среднепористого стекла и промывали 10 мл воды, охлажденной льдом. Влажный осадок высушивали отсасыванием в течение 2 ч, а затем высушивали в вакуумной печи в течение ночи (23 ч) при 50°С. Выделяли 0,88 г (восстановление 84,6%) Формы 6 8Р-4.
Наблюдаемая температура плавления Формы 6 составляла приблизительно 124,5-126°С.
Пример 21-1. Форма 1 8Р-4
Список пиков Формы 1 8Р-4 представлен в табл. 2
- 36 026341
Пример 21-2. Форма 2 §Р-4
ХКРО-дифрактограмма Формы 2 §Р-4 изображена на фиг. 5. Список пиков Формы 2 §Р-4 представлен в табл. 3.
- 37 026341
Пример 21-3. Форма 3 §Р-4
ХКРО-дифрактограмма Формы 3 §Р-4 изображена на фиг. 6. Список пиков Формы 3 §Р-4 представлен в табл. 4.
Пример 21-4. Форма 4 §Р-5
ХКРО-дифрактограмма Формы 4 §Р-4 изображена на фиг. 7. Список пиков Формы 4 §Р-4 представлен в табл. 5.
- 38 026341
Угол Интенсивность ϊ
2-тета ° а о
5, 0 29, 8
6, 8 100, 0
8,2 4, 8
8,7 5,2
9, 9 3, 8
13,7 1,7
14,9 4, 8
19, 9 22, 5
20,4 2, 1
20, 6 20, 0
20,9 20, 0
24,7 3, 4
24,9 29, 9
25, 1 1, 5
36, 8 3,1
Пример 21-5. Форма 5 δ^4
ХКРО-дифрактограмма Формы 5 δρ-4 изображена на фиг. 8. Список пиков Формы 5 δ^4 представлен в табл. 6.
Угол Интенсивность %
2-тета ° о. 'й
5, 2 52, 9
6, 6 100, 0
N 1 25, 9
9,7 12,1
10,4 16, 4
13,4 11,4
15, 7 25, 8
19, 1 31,1
19, 9 12,9
20,0 9, 0
21,3 3, 5
25, 0 22, 3
25, 6 2,3
26, 3 5,9
26, 9 2, 0
31,7 2,1
Пример 21-5. Форма 6 δ^4
ХКРО-дифрактограмма Формы 6 δ^4 изображена на фиг. 21. Список пиков Формы 6 δР-4 представлен в следующей таблице.
- 39 026341
Угол2-тета ° ά-интервал А Интенсивность %
6, 08 14, 51 66, 7
8,2 10, 77 62, 1
10,38 8,52 29, 8
10,85 8, 14 10, 4
12,17 7,26 12, 0
12, 7 6, 96 66, 4
13,73 6, 44 14, 9
14, 1 6,27 13, 8
15, 91 5, 57 3, 1
16, 83 5,26 8,7
17,17 5, 16 19, 7
17,66 5, 01 56, 2
17, 95 4, 93 37,7
18,79 4, 72 59, 0
19, 1 4, 64 14,3
19, 41 4, 57 37,2
19, 8 4,48 46, 0
20, 11 4,41 68,8
20, 82 4,26 100, 0
21,81 4, 07 36, 8
22, 03 4, 03 7, 4
23, 03 3, 86 14,2
23, 26 3, 82 21,6
23, 64 3, 76 6, 3
23, 89 3, 72 7, 0
24,73 3, 6 3, 3
Пример 21-7. 8Р-4 (аморфный)
ΧΚΓΌ-дифрактограмма аморфного 8Р-4 изображена на фиг. 9.
Пример 22. Монокристальная рентгеновская кристаллография 8Р-4 и его сольватов Пример 22-1. Монокристальная рентгеновская кристаллография 8Р-4 (Формы 1)
На фиг. 10 показана рентгеновская кристаллическая структура Формы 1 8Р-4. На фигуре показан вид молекул Формы 1 согласно кристаллической структуре, показывающий использованную схему нумерации. Эллипсоиды анизотропного смещения атомов, не являющихся атомами водорода, показаны с уровнем вероятности 50%. Атомы водорода изображены с произвольно малым радиусом. Расчет структуры получили с использованием прямых способов, оптимизации полной матрицы наименьших квадратов по Р2 с весовыми коэффициентами
1>-Р- (Г/) + (О, 0592Р) + (О, 6950Р) где
параметров анизотропного смещения, эмпирической коррекции поглощения с помощью сферических гармоник, реализованных в алгоритме масштабирования 8САЬЕ3 АВ8РАСК. Конечный кк2= { ς [ [/(гВ-Гс2)2] /2 [ »<го2)2]1/2}=о, 0871 для всех данных, традиционный ^=0,0329 по значениям Р 7090 отражений с Ρο>4σ(Ρο), 8=1,016 для всех данных и 870 параметров. Конечный Д/п(макс.) 0,001, Д/п(средний), 0,000. Конечное различие располагается между +0,534 и -0,36 е/А-3.
- 40 026341
Таблица 7. Параметры элементарной ячейки Формы 1
Молекулярная формула С22Н29Г1ЩО9Р1
Молекулярная масса 529,45
Кристаллическая система Моноклинная
Пространственная группа Р2, а 20, 0898(5) А, О 90°,
Ь 6,10290(10) А, Р 112,290 (3) \
с 23, 0138(6) А, У 90°
V 2610,79(10)
Ζ 4
Ос 1,347 г.сьГ1
μ 1, 475 мм’1
Источник, λ Си Κα, 1,54178 А
0(000) 1112
Т 100(1) К
Кристалл Бесцветная пластина, 0,12*0,09*0,03 мм
Цанные усечены до 0, 80 А
Θ,Π,,Χ 74,48°
Завершенность 99, 41
Отражения 14354
Уникальные отражения 7513
0,0217
Пример 22-2. Монокристальная рентгеновская кристаллография 8Р-4 (Формы 2)
На фиг. 11 показана рентгеновская кристаллическая структура Формы 2 8Р-4. На этой фигуре показан вид молекул Формы 2 согласно кристаллической структуре, показывающий использованную схему нумерации. Гетероатомы разрешали изотропно вследствие крайне недостаточных данных. Атомы водорода не изображены.
Решение структуры получили с использованием прямых способов, оптимизации полной матрицы наименьших квадратов по Р2 с весовыми коэффициентами ы =σ (ί° ’+ (0,0Э75р) + (10, бЭбЭР), где ^(-^+2^/)/3, параметров анизотропного смещения, эмпирической коррекции поглощения с помощью сферических гармоник, реализованных в алгоритме масштабирования §САЬЕ3 АВ8РАСК. Конечный йЖ2=Ш1Иг1,2-г/)2]ти(г’./)2]1/2)=о, 1883 для всех данных, традиционный ^=0,0741 по значениям Р 2525 отражений с Ро>4п(Ро), 8=1,05 для всех данных и 158 параметров. Конечный Д/п(макс.) 0,000, Д/п(средний), 0,000. Конечное различие располагается между +1,388 и -0,967 е/А-3.
Таблица 8. Параметры элементарной ячейки Формы 2
Молекулярная формула С2зН31С12ГЫ3О9Р
Молекулярная масса 614,38
Кристаллическая система Моноклинная
Пространственная группа Р21 а 12,8315(3 )А, а 90°,
ь б, 14530 (10)А, Р 91, 752 (2)°,
с 17,6250(4)А, У 90й
7 1389, 14(5) А'
Ξ 2
А 1,469 г, см’1
μ 3,196 мм’1
Источник, λ Си-К, 1,54178 А
0(000) 640
т 293(2) К
Цанные усечены до 0,80 А
Этак 62,23°
Завершенность 91, 1¾
Отражения 3528
Уникальные отражения 2562
0,0227
- 41 026341
Пример 22-3. Монокристальная рентгеновская кристаллография 8Р-4 (Формы 2)
На фиг. 12 показана рентгеновская кристаллическая структура (ОКТЕР - анизотропный) 8Р-4 (Формы 2).
Кристаллическая структура метиленхлоридного сольвата 8Р-4 (Формы 2), С23Н31Ы3РО9РС12, давала моноклинную пространственную группу Р2! (систематические отсутствия 0к0: к=нечетное) с а=12,8822 (14) А, Ь=6, 1690(7) А, с=17,733(2) А, β=92,045(3)°, У=1408,4(3) А3
449 г/см3. Данные рентгеновской интенсивности получали на ПЗС-детекторе площади Ктдаки Мегсигу, используя графитмонохроматизированное излучение Мо-Κα (λ=0,71073 А) при температуре 143 К. Предварительный расчет индексов выполняли на основе серии из двенадцати снимков при повороте на 0,5° с временем экспозиции 30 с. Всего было собрано 648 снимков поворота при расстоянии от кристалла до детектора 35 мм, угле отклонения 2Θ -12°, интервале поворота 0,5° и времени экспозиции 30 с: скан № 1 представлял собой φ-скан от 315° до 525° при ω=10° и χ=20°; скан № 2 представлял совместный скан от -20° до 5° при χ=-90° и φ=315°; скан № 3 представлял собой ω-скан от -20 до 4° при χ=-90° и φ=135°; скан № 4 представлял собой ω-скан от -20° до 5° при χ=~90° и φ=225°; скан № 5 представлял собой ω-скан от -20° до 20° при χ=-90° и φ=45°. Снимки поворота обрабатывали с помощью Сгу§1а1С1еаг (Сгу§1а1С1еаг: Шдаки СогрогаПоп, 1999), генерировавшего список неусредненных значений Р2 и о(Р2), которые затем передавали в программный пакет Сгу81а181гис1иге (Сгу81а181гис1иге: программный пакет анализа кристаллической структуры, Юдаки Согр. Юдаки/МЗС (2002)) для дальнейшей обработки и расчета структуры на компьютере Эе11 РепПит III. Всего измерили 7707 отражений в диапазонах 5,48<2Θ<50,04°, 14<Ь<15, -7<к<6, -19<1<21, что позволило получить 4253 уникальных отражений (К1п1=0,0180). Данные интенсивности скорректировали с учетом эффектов Лоренца и поляризации и поглощения с помощью РЕРЛВ (минимальное и максимальное пропускание 0,824, 1,000).
Структуру рассчитывали с помощью прямых способов (8ΙΚ97, 8ΙΚ97: АИотаге, А., М. Виг1а, М. СатаШ, О. Саксагапо, С. О^асоνаζζо, А. СиадПагбк А. МоШегт, О. РоПбоп & К. Зрадпа (1999). I. Арр1. СгукГ, 32, 115-119). Оптимизацию выполняли с помощью полной матрицы наименьших квадратов по Р2, используя 8НЕЬХЬ-97 (ЗНЕЬХЬ-97: 8Ье1бпск, О.М. (2008) Ас1а СгукГ, А64, 112-122). Во время оптимизации использовали все отражения. Схема расчета весовых коэффициентов представляла собой н=1/[о2(Ро 2 )+ 0,0472Р2+0,4960Р] где
Р= (Го +2ГС ) /3 . Атомы, не являющиеся атомами водорода, оптимизировали анизотропно, а атомы водорода оптимизировали с помощью модели верховой езды. Оптимизация сошлась при ^=0,0328 и теК2=0,0817 для 4046 отражений, для которых Ρ>4σ(Ρ) и ^=0,0348, теК2=0,0838 и ООР=1,056 для всех 4253 уникальных, ненулевых отражений и 358 переменных (Κι=Σ | | Го| - | Η /Σ | Го| · -+2 { Σνί (Г..2-^2) 2/Σμ (%2) 2}1
60Γ={Σ«(Γο Г/ (η-р) )1 где п=количество отражений, а р=количество оптимизированных параметров). Максимальный Δ/σ в конечном цикле расчета наименьших квадратов составил 0,000, а два наиболее выраженных пика при конечной разности Фурье составляли +0,312 и -0,389 е/А3. Оптимизированный параметр абсолютной структуры Флака составлял -0,06(6), тем самым подтверждая стереохимию соединения.
В табл. 1 перечислены сведения о ячейке, параметры сбора данных и данные оптимизации. Конечные параметры положения и эквивалентные изотропные тепловые параметры приведены в табл. 2. Анизотропные тепловые параметры представлены в табл. 3.
(ОКТЕР-ΙΙ: А РоЛгап ТПегта1 ЕШрШб Р1о1 Ргодгат Гог Сгу81а1 81гис1иге ШикЛаЛопк. С.К. 1оПп5оп (1976) ОКЫЕ-5138.) показано представление молекулы с 30% вероятностью эллипсоидов теплового смещения.
Таблица 9. Краткие сведения об определении структуры соединения 8Р-4-СН2С12 Формула:
Молекулярная масса по 614,38 формуле:
Класс кристалла: моноклинный
Пространственная группа: Ρ2ι (#4)
Ζ 2
- 42 026341
Константы ячейки
а 12,8822(14) А
Ъ 6,1690(7) А
с 17,733(2) А
Р 92,045 (3) °
V 1408,4(3) А3
μ 3,48 см1
размер кристалла, мм 0,42x0,12x0,10
Ирасч 1,449 г/см3
Е(000) 640
Излучение: Мо-К« (λ=0,71073 А)
диапазон 2Θ 5,48-50,04°
собранные Пк1: -14<Ь<15;-7<к<б; -19<1<21
Количество измеренных отражений: 7707
Количество уникальных отражений: 4253 (К1пе=0,0180)
Количество наблюдаемых отражений 4046 (Ε>4σ)
Количество отражений, использованных при оптимизации 4253
Количество параметров 358
Показатели К (Γ>4σ) Κι=0,0328 мК2=0,0817
Показатели К (все данные) Κι=0,0348 иП2=0,0838
СОЕ: 1,056
Пики конечных различий, +0,312, -0,389
е/А3
Пример 22-4. Монокристальная рентгеновская кристаллография 8Р-4 (Формы 3)
На фиг. 13 показана рентгеновская кристаллическая структура Формы 3 8Р-4. На этой фигуре показан вид молекул.
Формы 3 согласно кристаллической структуре, показывающий использованную схему нумерации. Эллипсоиды анизотропного смещения атомов, не являющихся атомами водорода, показаны с уровнем вероятности 50%. Атомы водорода изображены с произвольно малым радиусом.
Решение структуры получили с использованием прямых способов, оптимизации полной матрицы наименьших квадратов по Р2 с весовыми коэффициентами ^=^(^7) + (0,0512^+(0,6810^, где = ' т7-~'т7 /3 параметров анизотропного смещения, эмпирической коррекции поглощения с помощью сферических гармоник, реализованных в алгоритме масштабирования 8САЬЕ3 АВ8РАСК. Конечный
-г7> ] /Σ[К(к7) : }=о,0796.
для всех данных, традиционный Κι=0,0294 по значениям Р 2486 отражений с Ρο>4σ(Ρο), 8=1,068 для всех данных и 377 параметров. Конечный А/п(макс.) 0,001, А/п(средний), 0,000. Конечное различие располагается между +0,211 и -0,334 е/А-3.
- 43 026341
Таблица 10. Параметры элементарной ячейки Формы 3
Молекулярная формула СгзНзоСГзПКзС^Р!
Молекулярная масса 648,82
Кри с т аллич е с к а я Моно клинна я
система
Пространственная Р21 а 12,9257(4) А, а 90°,
группа Ь 6,18080(10) Α, β 96,399(2)°,
с 18,0134(4)А, γ 90°
V 1430, 15(6) А1
Ζ 2
Рс 1,507 г. см”1
μ 3,977 ни’1
Источник, λ Си Ка, 1,54178 А
Е(000) 672
Т 100(1? к
Кристалл Бесцветная игла, 0,22*0,03*0,02 мм
Данные усечены до 0,80 А
θπι^χ 74,41’
Завершенность 69, 1%
Отражения 3062
Уникальные отражения 2607
0,0198
Пример 23. Стабильность при повышенных температурах и относительной влажности
Образец КР-4 хранили в камере влажности при 40°С и 75% относительной влажности в течение недели, после чего повторно анализировали с помощью ХИРО. Порошковая дифрактограмма, полученная для КР-4, не показала существенных изменений в ходе эксперимента, что означало отсутствие наблюдаемых изменений формы твердого вещества. Это составляло контраст с образцом соединения 4, который разжижался в течение приблизительно 16 ч при хранении при 40°С и 75% относительной влажности. На практике разжижающаяся природа соединения 4 иллюстрировалась следующим экспериментом. Образец соединения 4 пропускали через сито с размером ячеек 250 мкм, после чего образцы хранили при 40°С/75% относительной влажности и 25°С/53% относительной влажности и через регулярные интервалы выполняли визуальное обследование. Результаты представлены в табл. 4.
Таблица 11. Стабильность соединения 4 при повышенной относительной влажности
Условия ¢=1,5 ч ί=4,5 ч 1:=6, 5 ч 1:=8,5 ч ¢=7 3 ч
40°С/75%
относитель-
Разжижение - - - -
ной
влажности
25°С/534 Частич-
Вязкое Почти
относитель- Разжижение ное
твердое полное Разжижение
ной отсутствует разжиже-
вещество разжижение
влажности ние
При хранении при 40°С и 75% относительной влажности образец 8Р-4 разжижался в пределах 16 часов. Например, образец 8Р-4 измельчали с помощью ступки и пестика, а затем последовательно пропускали через сита с размером ячейки 500 и 250 мкм с целью получения образца в виде тонкодисперсного порошка. Образцы этого материала хранили при 40°С и 75% относительной влажности и 25°С и 53% относительной влажности и через регулярные интервалы выполняли визуальное обследование. Результаты представлены в табл. 5.
Таблица 12. Стабильность 8Р-4 при повышенной относительной влажности.
Условия ¢=1, 5 ч ¢=4,5 ч 1:=104 ч
40°С/75% Разжижение
относительной влажности отсутствует Разжижение
25°С/534
относительной Разжижение Разжижение Разжижение
влажности отсутствует отсутствует отсутствует
- 44 026341
ХКРО-анализ образца после хранения при 25°С и 53% относительной влажности в течение 104 ч не показал существенных изменений полученных дифрактограмм, что означало отсутствие изменений формы.
Пример 24. Инфракрасная спектроскопия с преобразованием Фурье (Фурье-ИК)
Данные получали на Регкш-Е1тег 8ресйит 0пе, оснащенном универсальным пробооотборным приспособлением затухающего полного отражения (АТК). Данные получали и анализировали с помощью программного обеспечения 8рес1гнт ν5.0.1.
ИК-спектры, полученные для 4, КР-4 и 8Р-4, показаны на фиг. 5-7, соответственно. Выбранные пики, выраженные в волновых числах (см-1), приведены ниже:
4: -1680, -1454, -1376, -205, -1092, -1023 (фиг. 14);
КР-4: -1742, -1713, -1679, -1460, -1377, -1259, -1157, -1079 (фиг. 15); и
8Р-4 (Форма 1): -1743, -1713, -1688, -1454, -1378, -1208, -1082 (фиг. 16).
Пример 25. Дифференциальная сканирующая калориметрия (Όί'.’8).
Термогравиметрический анализ (ТОА)
Данные О8С получали на ТА 1пк!гитеп!к 02000, оснащенном 50-позиционным автоматическим пробоотборником. Калибровку теплоемкости осуществляли с помощью сапфира, а калибровку энергии и температуры - с помощью сертифицированного индия.
О8С с регулируемой температурой обычно выполняли, используя 0,8-1,2 мг каждого образца, в алюминиевой кювете с микроотверстиями, с помощью исходной скорости нагревания 2°С-мин-1 и параметрами регулировки температуры ±0,2°С-мин-1 и 40 с. Образец продували сухим азотом со скоростью 50 мл-мин-1.
Для управления прибором использовали программное обеспечение АбхаШаде Гог О 8епек ν2.8.0.392 и Тйегта1 АбхаШаде ν4.8.3, данные анализировали с помощью ишуегка1 Апа1ук1к у4.3А.
Данные Э8С получали на Мей1ег Э8С 823е, оснащенном 34-позиционным автоматическим пробоотборником. Прибор калибровали по энергии и температуре, используя сертифицированный индий. Обычно 0,8-1,2 мг каждого образца в алюминиевой кювете с микроотверстиями нагревали при 10°С-мин-1 с 25 до 250°С. Образец продували азотом со скоростью 50 мл-мин-1. Для управления прибором и анализа данных использовали программное обеспечение 8ТАКе ν9.20.
Данные Ό8ί’ для 8Р-4 (Формы 6) получали с помощью прибора Э8С (ТА 02000), используя скорость нагревания 10°С/мин в непрерывном потоке сухого газообразного азота (100 мл/мин). Приблизительно 2,2 мг образца аккуратно взвешивали и нагревали в негерметичной кювете 'Т/его' с неплотно прилегающей крышкой. Прибор калибровали (по энтальпии и температуре), используя индиевый стандарт и (по теплоемкости) сапфировый стандарт. Факторы неопределенности оценивали как ±0,1°С для температуры и ±5% для измеренных значений энтальпии. Для измерения температуры начала разложения использовали программное обеспечение ТА ИпКег^ Апа1ук1к.
Данные ТОА получали на Мей1ег ТОА/8ЭТА 851е, оснащенном 34-позиционным автоматическим пробоотборником. Прибор калибровали по температуре, используя сертифицированный индий. Обычно 8-12 мг каждого образца помещали в предварительно взвешенный алюминиевый тигель и нагревали при 10°С. мин-1 ОТ комнатной температуры до 350°С. Образец продували азотом со скоростью 50 мл-мин-1. Для управления прибором и анализа данных использовали программное обеспечение 8ТАКе ν9.20.
О8С-анализ соединения 4 показал наличие единственной широкой эндотермы с началом при 58,7°С (АН 14 Дж.г-1), которая, согласно дальнейшему регулируемому ОС8-анализу, была обусловлена молекулярной релаксацией во время стеклования (фиг. 17). ТОА-анализ соединения 4 не показал потери массы до разложения при температуре свыше 240°С, подтверждая, что материал был несольватированным. Поскольку ХКРО-анализ соединения 4 подтвердил, что материал являлся аморфным, выполнили регулируемый О8С-анализ с целью попытки расчета температуры стеклования, которая оказалась равна 57°С.
О8С-анализ показал наличие единственной остроконечной эндотермы с началом при 136,2°С (ДН 76 Дж.г-1), которая согласно высокотемпературной микроскопии представляла собой плавление. См. фиг.
18. ТОА-анализ КР-4 не показал потери массы до разложения при температуре свыше 240°С, подтверждая, что материал был несольватированным.
О8С-анализ 8Р-4 показал наличие единственной широкой эндотермы с началом при 93,9°С (ДН 43 Дж.г-1), которая, согласно высокотемпературной микроскопии, представляла собой плавление. См. фиг.
19. ТОА-анализ 8Р-4 не показал потери массы до разложения при температуре свыше 240°С, подтверждая, что материал был несольватированным.
О8С-анализ 8Р-4 (Формы 6) показал наличие широкой эндотермы с началом при 120,7°С (АН 79 Дж-г-1).
Пример 26. Гравиметрическая сорбция паров (Ον8) 8М8 Όν8 1п1гшкю
Изотермы сорбции получали с помощью анализатора сорбции влажности 8М8 Όν8 1пйткю, контролируемого программным обеспечением 8М8 Апа1ук1к 8ш!е. Температуру образца поддерживали при 25°С с помощью прибора. Влажность контролировали, смешивая потоки сухого и влажного азота при
- 45 026341 общей скорости потока 200 мл· мин-1. Относительную влажность измеряли калиброванным зондом Койоте (динамический диапазон 1,0-100% относительной влажности), расположенным около образца. Изменение массы (релаксацию массы) образца в зависимости от относительной влажности (%) непрерывно отслеживали с помощью микровесов (точность ±0,005 мг).
Обычно 5-20 мг образца помещали в тарированную сетчатую корзину из нержавеющей стали при условиях окружающей среды. Образец помещали и извлекали при 40% относительной влажности и 25°С (типичные комнатные условия). Изотерму сорбции влажности получали, как описано ниже (за 2 скана, составлявшие один полный цикл). Стандартную изотерму получали при 25°С с 10% интервалами относительной влажности в диапазоне относительной влажности 0,5-90%.
Таблица 13. Параметры способа для экспериментов с 8М8 ΌΥ8 йИппйс
Параметры Значения
Адсорбция - скан 1 40-90
Цесорбция/Адсорбция - скан 2 90-0/ 0-40
Интервалы (% относительной влажности) 10
Количество сканов 2
Скорость потока (мл.мин’1) 200
Температура (°С) 25
Стабильность (°С.мин_1) 0/ 2
Время сорбции (часов) таймаут 6 часов
После завершения изотермы образец восстанавливали и повторно анализировали ХКРЭ.
ОУ8-анализ показал, что КР-4 являлся негигроскопическим и демонстрировал обратимое поглощение приблизительно 0,2 мас.% воды при увеличении относительной влажности от 0 до 90%. Повторный анализ образца с помощью ХКРЭ после ОУ8-эксперимента не показал изменений формы.
Образец 8Р-4 измельчали с помощью ступки и пестика, а затем последовательно пропускали через сита с размером ячейки 500 и 250 мкм с целью получения образца в виде тонкодисперсного порошка, который затем анализировали с помощью способа модифицированного одиночного цикла. Образец переносили с 40% относительной влажности (приблизительно комнатной) в условия с 60% относительной влажности вместо 90% для стандартного способа, а затем изменяли относительную влажность до 0% и обратно до 40% относительной влажности. Этот анализ показал, что 8Р-4 являлся негигроскопическим до 60% относительной влажности, обратимо поглощая ~0,2 мас.% воды при увеличении относительной влажности от 0 до 60%.
Пример 27. Термодинамическая растворимость в воде
Растворимость в воде определяли путем суспендирования достаточного количества соединения в воде, получая максимальную конечную концентрацию исходной произвольной формы соединения >10 мимл1. Суспензию уравновешивали при 25°С в течение 24 ч, а затем измеряли рН. Затем фильтровали суспензию через стекловолоконный фильтр С в 96-луночный планшет. Затем фильтрат разбавляли в 101 раз. Количественное определение выполняли с помощью ВЭЖХ по отношению к стандартному раствору приблизительно 0,1 мг^мл-1 в ДМСО. Вводили различные объемы стандарта, разбавленного и неразбавленного раствора образца. Растворимость рассчитывали на основе площадей пиков, определенных слиянием пика, наблюдаемого при том же времени удерживания, что и основной пик при введении стандарта.
Таблица 14. Параметры ВЭЖХ-способа для измерений растворимости
Тип способа: Обращенно-фазная хроматография с градиентным элюированием
Колонка: РЬепошепех Ьипа, С18 (2) 5 мкм 50>=4,б мм
Температура колонки (°С) 25
Введения стандарта (мкл) 1, 2, 3, 5, 7, 10
Введения тестируемого 1, 2, 3, 10, 20, 50
- 46 026341
образца, (мкл)
Обнаружение: Длина волны/ полоса пропускания (нм): 260, 80
Скорость потока (мл.мин-1) : 2
Фаза А: 0,1% ТФУК в воде
Фаза В: 0,085% ТФУК в ацетонитриле
График; Время (мин) % фазы А: % фазы В:
0, 0 95 5
1, о 80 20
2,3 5 95
3, 3 5 95
3, 5 95 5
4, 4 95 5
Анализ выполняли при вышеуказанных условиях с помощью системы ЛдПсШ ΗΡ1100 5СПС5. оборудованной детектором на диодной матрице, используя программное обеспечение СЬет81айоп νΒ.02.018Κ1.
Таблица 15. Результаты растворимости в воде для ΚΡ-4, 4 и 8Ρ-4
ΙΏ образца рН неотфильтрованной смеси Растворимость/ мг. мл-1 Комментарии
АР-4 7, 12 1, 58 Суспензия
4 7, 03 б, 11 Остаточное твердое вещество
Яр-4 6, 88 5, 65 Остаточное твердое вещество
Пример 28. ВЭЖХ-определение химической чистоты
Для определения химической чистоты соединений, описанных здесь, использовали различные условия ВЭЖХ. Один из таких примеров описан здесь по отношению к исследованиям термодинамической растворимости в воде. Другие примеры описаны ниже.
Условия ВЭЖХ:
ЖХ: Модуль разделения \Уа1ег5 АШаисе 2695 8ерагайои5 Моби1е, детектор \Уа1ег5 2996 ΡΌΆ и программное обеспечение \Уа1ег5 Етротег 2 (версия 6.00)
Колонка: БНепотепех Ьипа С18(2); 4,6χ50 мм; 3 мкм
Скорость потока: 1,2 мл/мин
Вводимый объем: 10 мкл
Подвижная фаза: Растворитель А: 95% воды с 5% метанола и 10 мм ацетата аммония; рН~5,3
Растворитель В: МеОН с 10 мМ ацетата аммония
Градиент: поддерживание при 0%В 3 мин
0-47%В 3-4 мин поддерживание при 47%В 4-10 мин
47%-74%В 10-11 мин поддерживание при 74%В 11-13,5 мин возвращение к 0%В 13,5-13,6 мин поддерживание при 0%В 13,6-15,5 мин
При этих условиях определили, что чистота 4, ΚΡ-4 и 8Ρ-4 составляла ~99,6, ~99% и ~99,5% соответственно. Следует отметить, что при оптимизации вышеописанных способов можно достичь более высокой чистоты.
Обследование ΧΚΡΌ-дифрактограмм показало, что два кристаллических отдельных диастереомера давали однозначно разные ΧΚΡΌ-дифрактограммы. Кроме того, температуры плавления этих двух кристаллических диастереомеров были безусловно различными, причем ΚΡ-4 характеризовался существенно более высокой температурой начала плавления, чем 8Ρ-4 (136°С по сравнению с 94°С).
- 47 026341
Пример 29. Дополнительные способы разделения
Следующие 8ЕС-разделения (условия перечислены ниже) обеспечивали адекватное разделение смеси диастереомеров КР-4 и 8Р-4.
Препаративный способ: Аналитический способ:
СЫга1рак АЗ-Н (2*25 см) 3Ν# 07- СЫга1рак АЗ-Н
5656 (25Ό, 46 см)
20% метанол/СОг (100 бар) 20% метанол/СОг (100 бар)
50 мл/мин, 220 нм. 3 мл/мин, 220 нм.
Концентрация: 260 мг/30 мл метанола/· вводимый объем: 1, 5 мл
Следующие 8ЕС-разделения (условия перечислены ниже) обеспечивали адекватное разделение смеси диастереомеров КР-4 и 8Р-4.
Препаративный способ: Аналитический способ:
СЫга1рак ΙΑ (2*15 см) 802091 СЫга1рак ΙΑ (15x0,46 см)
30% изопропанол (0,1% РЕА)/СО2, 40% метанол (СЕА)/СО2> 100
100 бар бар
60 мл/мин, 220 нм. 3 мл/мин, 220 нм.
Вводимый объем: 2 мл, 20 мг/мл
метанола
Таблица 16. Сводка результатов оценки характеристик КР-4, 4 и 8Р-4
Анализ АР-4 4 5Р-4
Смесь
Протонный ЯМР Одиночный диастереомеров Одиночный
диастереомер 1:1 диастереомер
Кри с т аллич е с кий Кри с т аллич е с кий
ΧΚΡϋ - отличающийся Аморфный - отличающийся
от 5Р-4. от Ар-4.
Эндотерма; Эндотерма;
И5С плавление - Эндотерма; 59 С плавление - 94^0
136°С
Потери массы Потери массы Потери массы
отсутствуют, отсутствуют, отсутствуют,
ТСА разложение разложение разложение
>240°С >240°С >240°С
ИК См. выше См. выше См. выше
Растворимость
в воде 1,58 6, 11 5, 65
(мг.мл-1)
Чистота 96, 9% 99, 6% 99, 5%
согласно ВЭЖХ
40°С/75% Изменение Разжижение в Разжижение в
относительной формы пределах 1,5 ч пределах 4,5 ч
влажности отсутствует
25°С/53% Изменение формы
относительной Разжижение отсутствует
влажности Негигроскопичен Негигроскопичен
до 90% до 60%
СУ5 относительной относительной
влажности влажности
Пример 30. Рентгеновская кристаллография соединения 8 (8Р-изомер)
Соединение 8 (8Р-изомер), С18Н21^РО7, кристаллизовалось в моноклинную пространственную группу Р2! (систематические отсутствия 0к0: к=нечетное) с а=5,3312(4) А, Ь=15,3388(8) А, с=23,7807 (13) Α, β=92,891(3)°, У=1942, 2 (2) А3, Ζ=4 и =1,397 г/см3. Данные рентгеновской интенсивности получали на ПЗС-детекторе площади ΒγιιΙ^γ ΑΒΕΧΙΙ брасч, используя графит-монохроматизированное излучение МоΚα (λ=0,71073 А) при температуре 100(1)К. На фиг. 20А и 20В показаны молекулы асимметричной единицы номер 1 и 2 соответственно.
Предварительный расчет индексов выполняли на основе серии из тридцати шести снимков при повороте на 0,5° с временем экспозиции 30 с. Всего было собрано 3608 снимков при расстоянии от кристалла до детектора 70,00 мм, интервале поворота 0,5° и времени экспозиции 20 с.
- 48 026341
тип скана 2Θ ω <Р X СНИМКИ
ф -35, 50 279, 40 27,32 48,96 725
<Р 24,50 22,31 35, 56 69, 08 692
ω -13,00 321,63 247,79 69, 08 95
Ф 34,50 204,08 28,21 -92,80 293
Ф -30,50 310,60 214,10 54,21 361
ф 32,00 304,67 24, 47 50,72 722
ф -35, 50 122,14 316, 59 -78,84 720
Снимки поворота объединяли с помощью 8ΑΙΝΤ (Вгикег (2009) 8ΑΙΝΤ. Вгикег АХ8 1пс., Мадисон, штат Висконсин, США), позволяющей получить список неусредненных значений Р2 и σ(Ρ2), которые затем передавали в программный пакет 8НЕЬХТЬ (Вгикег (2009) 8НЕЬХТЬ. Вгикег ΑΧ8 1пс., Мадисон, штат Висконсин, США) для дальнейшей обработки и расчета структуры на компьютере Эе11 Репйит 4. Всего измерили 6909 отражений в диапазонах 1,58<θ<25,09°, -6<й<6, -18<к<18, -28<1.<28, что позволило получить 6909 уникальных отражений (Κίηί=0,0581). Данные интенсивности скорректировали с учетом эффектов Лоренца и поляризации и поглощения с помощью 8Α^ΑВ8 (8йе14пск, О.М. (2007) 8Α^ΑВ8. ишуегзйу оР ОоГОпдеп, Оегтапу) (минимальное и максимальное пропускание 0,6093, 0,7452).
Структуру рассчитывали с помощью прямых способов (8НЕЕХЕ-97(8йе14пск, О.М. (2008) Αθ^ С'гуЛ.. А64, 112-122)). Оптимизацию выполняли с помощью полной матрицы наименьших квадратов по Р2, используя 8НЕЬХЬ-97 (8йе14пск, О.М. (2008) Αθ^ Сгуз!., А64, 112-122). Во время оптимизации использовали все отражения. Схема расчета весовых коэффициентов представляла собой ы=1/[о2(Ро2) + (0,0000Р)2+14,0738Р] где р= (ро2+2Рс 2)/3
Атомы, не являющиеся атомами водорода, оптимизировали анизотропно, а атомы водорода оптимизировали с помощью модели верховой езды. Оптимизация сошлась при К1=0,0847 и \\Л2=(),1899 для 6173 отражений, для которых Ρ>4σ(Ρ) и К1=0,0963, \\'К2=0,1963 и ООР=1,119 для всех 6909 уникальных, ненулевых отражений и 512 переменных (κι=ς ι ++-++ ι/ς++·
44,„.Γ 2,2,1/2 . ΰΟρ= 2/ (η_ρ) ] 1/2 μκ2=[ςμ(ϊ·ο -г,) /2М(г„) . , , щ-р/ .ι ; где п=количество отражений, а р=количество оптимизированных параметров). Максимальный Δ/σ в конечном цикле расчета наименьших квадратов составил 0,000, а два наиболее выраженных пика при конечной разности Фурье составляли +0,402 и -0,559 е/А3. Фиг. 20А и 20В представляют собой ОК.ТЕР (30% вероятность тепловых эллипсоидов) молекул асимметричной единицы номер 1 и 2.
Таблица 17. Краткие сведения об определении структуры соединения 8 (8Р-изомер)
Эмпирическая формула Οι8Η2ιΝ2Ρθ7
Молекулярная масса по формуле 408,34
Температура 100(1) к
Длина волны 0,71073 А
Сингония Моноклинная
Пространственная группа Ρ2ι
Константы ячейки:
а 5,3312(4) А
Ь 15, 3388(8) А
с 23, 7807(13) А
β 92,891(3)°
- 49 026341
Объем 1942,2(2) Ά3
Ζ 4
Плотность (рассчитанная) 1/397 Мг/м5
Коэффициент поглощения 0, 185 мм-1
Е (ООО) 856
Размер кристалла 0, 40x0, 10x0, 08 мм3
Тета-диапазон для получения данных от 1,58 до 25,09°
Диапазоны индекса -6<П<6, -18<к<18, -28<1<28
Собранные отражения 6909
Независимые отражения 6909 [К(ίηΡ)=0,0581]
Завершенность до тета=25,09^ 99, 6%
Коррекция поглощения Полуэмпирическая на основе эквивалентов
Макс, и мин. пропускание 0,7452 и 0,6093
Способ оптимизации: Полная матрица наименьших квадратов по Г2
Цанные/ограничения/ параметры 6909/1/512
Критерий согласия по Εζ 1, 119
Конечные показатели В. [1>2 сигма (I) ] 81=0,0847, N82=0,1899
Показатели К (все данные) 81=0, 0963, N8.2 = 0,1963
Параметр абсолютной структуры 0,1(2)
Наибольшая разность пика и впадины 0, 402 и -0, 559 е.А~2
Пример 32. Рентгеновская кристаллография (8)-изопропил 2-(((8)-(перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноата.
(8)-изопропил 2-(((8)-(перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат, С18Н17№О5Р5, кристаллизовался в триклинную пространственную группу Р1 с 5,2641(6) А, Ь=12,0548(13) А, с=16,4307(15) Α, α=74,960(4)°, β=83,959(4)°, γ=80,275(4)°, У=990,40(18) А3, Ζ=2 и йрасч= 1,520 г/см3. Данные рентгеновской интенсивности получали на ПЗС-детекторе площади Вгикег АРЕХ11, используя графитмонохроматизированное излучение Мо-Κα (λ=0,71073 А) при температуре 143(1) К. Предварительный расчет индексов выполняли на основе серии из тридцати шести снимков при повороте на 0,5° с временем экспозиции 20 с. Всего было собрано 3593 снимка при расстоянии от кристалла до детектора 37,600 мм, интервале поворота 0,5° и времени экспозиции 20 с.
тип скана 2Θ ω Ф X снимки
Ф -15,50 258,48 -351,72 19, 46 739
Ф -20,50 -17,45 -37,67 -73,06 725
ω -10,50 -53,05 -87,93 99, 72 80
Ф 19, 50 -32,21 -88,94 36, 30 219
ω -10,50 -14,33 80, 80 -60,33 122
ω 17, 00 -38,90 -41,64 83,36 116
ω 17, 00 -37,69 -175,56 82, 07 114
Ф 19, 50 59, 55 -11,29 -26, 26 739
Ф -10,50 318,39 -335,56 52, 47 739
Снимки поворота объединяли с помощью 8АЮТ (Вгикег (2009) 8АЮТ. Вгикег АХ8 1пс., Мадисон, штат Висконсин, США), позволяющей получить список неусредненных значений Р2 и о(Р2), которые затем передавали в программный пакет 8НЕЬХТЬ (Вгикег (2009) 8НЕЬХТЬ. Вгикег АХ8 1пс., Мадисон, штат Висконсин, США) для дальнейшей обработки и расчета структуры на компьютере Юе11 Репйит 4. Всего измерили 17880 отражений в диапазонах 1,77<θ<25,12°, -6<Ь<6, -14<к<14, -19<1<19, что позволило получить 6897 уникальных отражений (Рт1=0„0212). Данные интенсивности скорректировали с учетом эффектов Лоренца и поляризации и поглощения с помощью 8АЭАВ8 (8Ье1йпск, С.М. (2007) 8АОАВ8. Итуегкйу оГ СоШпдеп, Сегтапу) (минимальное и максимальное пропускание 0,6887, 0,7452).
Структуру рассчитывали с помощью прямых способов (8НЕЬХЬ-97 (8Ье1йпск, С.М. (2008) Ас1а Сгукк, А64, 112-122)). Оптимизацию выполняли с помощью полной матрицы наименьших квадратов по Р2, используя 8НЕЬХЬ-97 (8Ье1йпск, С.М. (2008) Ас1а Сгук1., А64, 112-122). Во время оптимизации использовали все отражения. Схема расчета весовых коэффициентов представляла собой
Η=1/[σ2(Ρο2) + <0,0344Р)2+0,1102Р] где Р= (Го2+2Гс2)/3
- 50 026341
Атомы, не являющиеся атомами водорода, оптимизировали анизотропно, а атомы водорода оптимизировали с помощью модели верховой езды. Оптимизация сошлась при К1=0,0259 и тсК2=0,0609 для 6527 отражений, для которых Ρ>4σ(Ρ) и К1=0,0284, \уК2=0,0621 и СОР=1,040 для всех 6897 уникальных, ненулевых отражений и 548 переменных.
еог= [е«(го 2-гс 2) 2/ (η-р) ]1/2; где ^количество отражений, а р=количество оптимизированных параметров). Максимальный Δ/σ в конечном цикле расчета наименьших квадратов составил 0,001, а два наиболее выраженных пика при конечной разности Фурье составляли +0,254 и -0,236 е/А3. Фиг. 22А и 22В представляют собой ОКТЕР (30% вероятность тепловых эллипсоидов) молекул асимметричной единицы номер 1 и 2.
Таблица 18. Краткие сведения об определении структуры (Ь)-изопропил 2-(((δ)(перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноата
Эмпирич е с к а я формул а Ο18Η17ΝΡΟ5Γ5
Молекулярная масса по формуле 453,30
Температура 143 (1)К
Длина волны 0,71073 А
Сингония Триклинная
Пространственная группа Р1
Константы ячейки:
а 5,2641(6) А
Ь 12,0548(13) А
с 16,4307(15) А
о 74,960 (4) °
Р 83,959 (4) °
У 80,275(4)°
Объем 990,40 (18) А3
Ζ 2
Плотность (рассчитанная) 1,520 Мг/мй
Коэффициент поглощения 0,216 мм-1
Г(000) 464
Размер кристалла 0, 45x0,05x0,04 мм'
Тета-диапазон для получения данных 1,77-25,12°
Диапазоны индекса -6<Ь<6, -14<к<14, -19<1<19
Собранные отражения 17880
Независимые отражения 6897 [Ρ(ίηΐ)=0,0212]
Завершенность до тета=25,120 99, 5¾
Коррекция поглощения Полуэмпирическая на основе эквивалентов
Макс, и мин. пропускание 0,7452 и 0,6887
Способ оптимизации Полная матрица наименьших квадратов по Г2
Данные/ограничения/ параметры 6897/3/548
Критерий согласия по 1, 040
Конечные показатели К [1>2 сигма (I)] 8.1=0,0259, мР2=0,0609
Показатели В. (все данные) Р1=0,0284, иР2=0,0621
Параметр абсолютной структуры -0,01 (5)
Наибольшая разность пика и впадины 0,254 и -0,236 е.А-3
Пример 33. Биологическая активность
Клетки, содержавшие репликон, высевали по 3000 клеток/лунку (50 мкл) в 96-луночные белые/непрозрачные планшеты либо по 1500 клеток/лунку (25 мкл) в 384-луночные белые/непрозрачные планшеты. 50 мкл 2Х соединения вносили в 96-луночный планшет или 25 мкл 2Х соединения вносили в 384-луночный планшет. Планшеты инкубировали при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% СО2 в течение 4 суток. После инкубирования вносили реагент ВпдШ-С1о (50 мкл в 9б-луночный планшет или 25
- 51 026341 мкл в 384-луночный планшет) для измерения репортера репликации ВГС на основе люциферазы светляка. Рассчитывали процент ингибирования по сравнению с контролем при отсутствии лекарства.
Соединение Активность репликона ВГС (мкМ)
Оу 58
ДР-4 2,8 7
5Р-4 0,13
Продемонстрировали, что КР-4 и 8Р-4 имели широкий охват генотипов. Например, показано, что оба изотопа были активны против генотипов 1-4 вируса гепатита С.
Настоящая заявка представляет собой заявку с частичным продолжением заявки на патент США № 12/783680, поданной 20 мая 2010 г., которая претендует на приоритет предварительных заявок на патенты США №№ 61/179923, поданной 20 мая 2009 г. и 61/319513, поданной 31 марта 2010 г., содержание которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.
Объект изобретения заявок на патенты США №№ 12/783680 и 12/053015 и предварительных заявок на патенты США №№ 61/179923, поданной 20 мая 2009 г. и 61/319513, поданной 31 марта 2010 г. полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. Объект всех цитированных ссылок включен в настоящий документ в качестве ссылки. В случае если значение включенного термина конфликтует со значением термина, определенного здесь, значения терминов, содержащиеся в настоящем описании, имеют преимущественную силу перед значением включенных терминов.

Claims (14)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Кристаллический (8)-изопропиловый эфир 2-(((8)-(((2К,3К,4К,5К)-5-(2,4-диоксо-3,4дигидропиримидин-1(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропионовой кислоты, представленный формулой 8р-4 о
    5'р-4 имеющий следующие значения угла отражения 2θ(±0,2°) на дифрактограмме ХКРЭ: 6,1 и 12,7.
  2. 2. Кристаллический 8Р-4 по п.1, имеющий значения угла отражения 2θ(°) на дифрактограмме ХКРЭ приблизительно 6,1, 8,2, 10,4, 12,7, 17,2, 17,7, 18,0, 18,8, 19,4, 19,8, 20,1, 20,8, 21,8 и 23,3.
  3. 3. Кристаллический 8р-4 по п.1 или 2, имеющий, по существу, такую же дифрактограмму порошкового рентгеноструктурного анализа (ХКРЭ), как показанная на фиг. 21.
  4. 4. Фармацевтическая композиция для лечения вирусной инфекции гепатита С, содержащая терапевтически эффективное количество кристаллического 8р-4 по любому из пп.1-3 и фармацевтически приемлемый носитель.
  5. 5. Способ лечения вирусной инфекции гепатита С у нуждающегося в этом пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективной дозы кристаллического 8р-4 по любому из пп.1-3.
  6. 6. Способ по п.5, в котором пациентом является человек.
  7. 7. Способ лечения вирусной инфекции гепатита С у нуждающегося в этом пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективной дозы кристаллического 8р-4 по п. 1 или 2 в сочетании с другим противовирусным агентом.
  8. 8. Способ по п.1, где другой противовирусный агент представляет собой ингибитор протеазы N83 вирусной инфекции гепатита С (ВГС).
  9. 9. Способ по п.7, где другой противовирусный агент представляет собой ингибитор протеазы Ν85Λ
    ВГС.
  10. 10. Фармацевтическая композиция по п.4, дополнительно включающая другой противовирусный агент.
  11. 11. Фармацевтическая композиция по п.10, где другой противовирусный агент представляет собой ингибитор протеазы Ν83 ВГС.
  12. 12. Фармацевтическая композиция по п.10, где другой противовирусный агент представляет собой ингибитор протеазы ОТ5А ВГС.
  13. 13. Таблетка, содержащая кристаллический 8р-4 по п.1 или 2.
  14. 14. Применение таблетки по п.13 для лечения вирусной инфекции гепатита С.
EA201290993A 2010-03-31 2011-03-31 Кристаллическая форма нуклеозидфосфорамидата EA026341B9 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31951310P 2010-03-31 2010-03-31
US31954810P 2010-03-31 2010-03-31
US12/783,680 US8642756B2 (en) 2009-05-20 2010-05-20 Nucleoside phosphoramidates
PCT/US2011/030725 WO2011123645A2 (en) 2010-03-31 2011-03-31 Nucleoside phosphoramidates

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA201290993A1 EA201290993A1 (ru) 2013-04-30
EA026341B1 true EA026341B1 (ru) 2017-03-31
EA026341B9 EA026341B9 (ru) 2021-12-27

Family

ID=44354065

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201290988A EA201290988A1 (ru) 2010-03-31 2011-03-31 Стереоселективный синтез фосфорсодержащих активных соединений
EA201290993A EA026341B9 (ru) 2010-03-31 2011-03-31 Кристаллическая форма нуклеозидфосфорамидата

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201290988A EA201290988A1 (ru) 2010-03-31 2011-03-31 Стереоселективный синтез фосфорсодержащих активных соединений

Country Status (37)

Country Link
US (1) US8859756B2 (ru)
EP (3) EP2752422B1 (ru)
JP (3) JP2013527145A (ru)
KR (2) KR101759369B1 (ru)
CN (3) CN102906102A (ru)
AP (2) AP3515A (ru)
AR (2) AR080870A1 (ru)
AU (2) AU2011235112B2 (ru)
BR (2) BR112012024884A2 (ru)
CA (1) CA2794671C (ru)
CL (2) CL2011000716A1 (ru)
CO (2) CO6630167A2 (ru)
CR (2) CR20120532A (ru)
CY (1) CY1119273T1 (ru)
DK (2) DK2609923T3 (ru)
EA (2) EA201290988A1 (ru)
EC (1) ECSP12012282A (ru)
ES (5) ES2551944T3 (ru)
HK (4) HK1178171A1 (ru)
HR (2) HRP20151075T1 (ru)
HU (2) HUE034239T2 (ru)
IL (2) IL222099A (ru)
LT (1) LT2609923T (ru)
MX (3) MX2012011324A (ru)
NZ (1) NZ603232A (ru)
PE (2) PE20130151A1 (ru)
PL (1) PL2552930T3 (ru)
PT (4) PT2752422T (ru)
RS (1) RS54368B1 (ru)
SG (3) SG10201702025SA (ru)
SI (1) SI3290428T1 (ru)
SM (1) SMT201500285B (ru)
TW (2) TW201139457A (ru)
UA (1) UA122959C2 (ru)
UY (1) UY33311A (ru)
WO (2) WO2011123668A2 (ru)
ZA (3) ZA201207800B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11963973B2 (en) 2019-02-01 2024-04-23 Hemispherian As Deoxy-cytidine or uridine derivatives for use in cancer therapies

Families Citing this family (158)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
EP1576138B1 (en) 2002-11-15 2017-02-01 Idenix Pharmaceuticals LLC. 2'-methyl nucleosides in combination with interferon and flaviviridae mutation
BR122018015050B1 (pt) 2003-05-30 2021-07-13 Gilead Pharmasset Llc Derivados fosfatados de nucleosídeo e composição farmacêutica dos mesmos
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
KR20110104074A (ko) 2008-12-23 2011-09-21 파마셋 인코포레이티드 퓨린 뉴클레오시드의 합성
AU2009329867B2 (en) 2008-12-23 2015-01-29 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
CN102753563A (zh) 2008-12-23 2012-10-24 吉利德制药有限责任公司 核苷类似物
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI576352B (zh) * 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
PL2480559T3 (pl) 2009-09-21 2013-11-29 Gilead Sciences Inc Sposoby i związki pośrednie do wytwarzania analogów 11cyjanokarbanukleozydowych
EP2752422B1 (en) 2010-03-31 2017-08-16 Gilead Pharmasset LLC Stereoselective synthesis of phosphorus containing actives
WO2012012465A1 (en) * 2010-07-19 2012-01-26 Clarke, Michael, O'neil Hanrahan Methods for the preparation of diasteromerically pure phosphoramidate prodrugs
CN103052631B (zh) 2010-07-22 2015-11-25 吉里德科学公司 用于治疗副黏病毒科病毒感染的方法和化合物
EP2646453A1 (en) 2010-11-30 2013-10-09 Gilead Pharmasset LLC Compounds
TW201701876A (zh) 2010-12-20 2017-01-16 吉李德科學股份有限公司 治療ｃ型肝炎病毒（ｈｃｖ）之方法
WO2012154321A1 (en) * 2011-03-31 2012-11-15 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
TW201329096A (zh) 2011-09-12 2013-07-16 Idenix Pharmaceuticals Inc 經取代羰氧基甲基磷酸醯胺化合物及用於治療病毒感染之藥學組成物
EP2709613B2 (en) 2011-09-16 2020-08-12 Gilead Pharmasset LLC Methods for treating hcv
TW201331221A (zh) 2011-10-14 2013-08-01 Idenix Pharmaceuticals Inc 嘌呤核苷酸化合物類之經取代的３’，５’－環磷酸酯及用於治療病毒感染之醫藥組成物
PT107924A (pt) * 2011-10-21 2014-12-03 Abbvie Inc Tratamento de combinação de daa (eg. com abt-072 ou abt-333) para utilização no tratamento de hcv
WO2013059630A1 (en) 2011-10-21 2013-04-25 Abbvie Inc. Methods for treating hcv comprising at least two direct acting antiviral agent, ribavirin but not interferon.
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
CA2856529C (en) * 2011-11-29 2018-03-06 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis c virus
CN104470939B (zh) 2012-05-22 2017-04-26 埃迪尼克斯医药有限责任公司 用于肝脏疾病的d型氨基酸化合物
WO2013177188A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
EP2852605B1 (en) 2012-05-22 2018-01-31 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection
ES2597757T3 (es) 2012-05-25 2017-01-20 Janssen Sciences Ireland Uc Nucleósidos de uracilespirooxetano
WO2014008236A1 (en) 2012-07-03 2014-01-09 Bristol-Myers Squibb Company Process for preparing diastereomerically enriched phosphoramidate derivatives of nucleoside compounds for treatment of viral infections
US9192621B2 (en) 2012-09-27 2015-11-24 Idenix Pharmaceuticals Llc Esters and malonates of SATE prodrugs
ES2674980T3 (es) 2012-10-08 2018-07-05 Idenix Pharmaceuticals Llc Análogos de 2'-cloro nucleósidos para infección por VHC
US10723754B2 (en) 2012-10-22 2020-07-28 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-bridged nucleosides for HCV infection
US9211300B2 (en) 2012-12-19 2015-12-15 Idenix Pharmaceuticals Llc 4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
WO2014120981A1 (en) 2013-01-31 2014-08-07 Gilead Pharmasset Llc Combination formulation of two antiviral compounds
WO2014137930A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv
WO2014137926A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
WO2014160484A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Amino acid phosphoramidate pronucleotides of 2'-cyano, azido and amino nucleosides for the treatment of hcv
EP2981542B1 (en) 2013-04-01 2021-09-15 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
EP2984098A2 (en) 2013-04-12 2016-02-17 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Deuterated nucleoside prodrugs useful for treating hcv
EP3004130B1 (en) 2013-06-05 2019-08-07 Idenix Pharmaceuticals LLC. 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv
US20150037282A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
EP3038601B1 (en) * 2013-08-27 2020-04-08 Gilead Pharmasset LLC Combination formulation of two antiviral compounds
CN104650171A (zh) * 2013-11-25 2015-05-27 天津市汉康医药生物技术有限公司 索氟布韦倍半水合物化合物
TW201609785A (zh) * 2013-12-23 2016-03-16 吉李德製藥公司 固體型之抗病毒化合物
WO2015126995A1 (en) 2014-02-20 2015-08-27 Ratiopharm Gmbh Solid state forms of sofosbuvir
CN103804446A (zh) * 2014-02-27 2014-05-21 苏州东南药业股份有限公司 一种3,5-二苯甲酰基-2-去氧-2-氟-2甲基-D-核糖-γ-内酯的制备方法
JP2017512811A (ja) 2014-04-03 2017-05-25 サンド・アクチエンゲゼルシヤフト 非晶質ソホスブビルを含む固体組成物
CZ307789B6 (cs) 2014-04-15 2019-05-09 Zentiva, K.S. Způsob výroby biologicky účinných fosforamidátových léčiv
EP3131914B1 (en) 2014-04-16 2023-05-10 Idenix Pharmaceuticals LLC 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
EP3524234B1 (en) 2014-06-13 2020-12-09 Ratiopharm GmbH Solid state forms of sofosbuvir
CN105273022A (zh) * 2014-06-16 2016-01-27 深圳翰宇药业股份有限公司 一种索非布韦中间体以及由其制备索非布韦的方法
CN105267232A (zh) * 2014-06-30 2016-01-27 康普药业股份有限公司 一种用于治疗丙型肝炎的药物制剂及其制备方法
CZ2014502A3 (cs) 2014-07-17 2016-01-27 Zentiva, K.S. Nová forma sofosbuviru a způsob její přípravy
CN104151352B (zh) * 2014-07-23 2017-05-10 上海彩迩文生化科技有限公司 一种索非布韦的中间体的制备方法
CA2954940A1 (en) * 2014-07-31 2016-02-04 Sandoz Ag Synthesis of phosphoramidates
TW201609709A (zh) * 2014-08-01 2016-03-16 Ｈｃ製藥公司 呈晶形之索非布弗（Ｓｏｆｏｓｂｕｖｉｒ）及其製備方法
CN104130302B (zh) * 2014-08-08 2017-02-15 乳源东阳光药业有限公司 一种核苷药物的晶型及其制备方法
WO2016023906A1 (en) * 2014-08-13 2016-02-18 Sandoz Ag A crystalline form of sofosbuvir
WO2016023905A1 (en) * 2014-08-13 2016-02-18 Sandoz Ag New and efficient process for the preparation of crystalline form 6 of sofosbuvir
CN104230985B (zh) * 2014-09-01 2017-01-18 北京天弘天达医药科技有限公司 (s)‑2‑[(s)‑(4‑硝基‑苯氧基)‑苯氧基‑磷酰基氨基]丙酸异丙酯的制备方法
WO2016042576A1 (en) 2014-09-16 2016-03-24 Cadila Healthcare Limited Co-crystal of sofosbuvir and amino acid and process for preparation thereof
CN104974205A (zh) * 2014-09-19 2015-10-14 苏州晶云药物科技有限公司 索非布韦的晶型a及其制备方法
CN105461773B (zh) * 2014-09-30 2020-12-01 江苏豪森药业集团有限公司 索非布韦的制备方法及其中间体
CN105461774B (zh) * 2014-09-30 2020-11-24 江苏豪森药业集团有限公司 索非布韦的制备方法
US10251903B2 (en) * 2014-10-20 2019-04-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Process for making nucleoside phosphoramidate compounds
TWI687432B (zh) 2014-10-29 2020-03-11 美商基利科學股份有限公司 絲狀病毒科病毒感染之治療
CN106188195B (zh) * 2014-11-07 2019-03-08 南京旗昌医药科技有限公司 索氟布韦的晶型h4及其制备方法
CN104478976A (zh) * 2014-11-12 2015-04-01 苏州明锐医药科技有限公司 索非布韦的制备方法
CN105732751A (zh) * 2014-12-09 2016-07-06 北京万生药业有限责任公司 索非布韦新晶体
JP6735751B2 (ja) * 2014-12-15 2020-08-05 エモリー ユニバーシティー Ｂ型肝炎ウイルスの治療のためのホスホルアミデート
WO2016098123A2 (en) * 2014-12-16 2016-06-23 Laurus Labs Private Ltd A recycling process for preparing (s)-2-[(substituted-phenoxy)-phenoxy- phosphorylamino] propionic acid isopropyl ester diastereomers
WO2016097173A1 (en) * 2014-12-17 2016-06-23 Sandoz Ag A process for preparing a crystalline form of sofosbuvir
CN105801645B (zh) * 2014-12-29 2019-01-04 浙江海正药业股份有限公司 制备索非布韦晶型6的方法
CN104558079B (zh) * 2015-01-30 2017-06-16 南京正大天晴制药有限公司 一种高纯度索氟布韦化合物及有关物质的制备方法
CN106132972B (zh) * 2015-02-06 2018-08-31 银杏树药业(苏州)有限公司 用于治疗hcv感染的氨基磷酸酯
WO2016128453A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Sandoz Ag Pharmaceutical compositions comprising ledipasvir and sofosbuvir
CN105985394B (zh) * 2015-02-26 2020-09-22 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种索非布韦新晶型及其制备方法
CN107427530B (zh) 2015-03-06 2020-09-08 阿堤亚制药公司 用于HCV治疗的β-D-2’-脱氧-2’α-氟-2’-β-C-取代的-2-改性的-N6-取代的嘌呤核苷酸
CN104829673B (zh) * 2015-03-12 2017-10-27 南京旗昌医药科技有限公司 一种索氟布韦晶型6的制备方法
EP3274356A1 (en) 2015-03-26 2018-01-31 Química Sintética, S.A. Nucleoside phosphoramidates useful for the treatment of viral infections and preparation thereof
CN106146588A (zh) * 2015-03-26 2016-11-23 常州制药厂有限公司 一种索非布韦的制备方法
WO2016156512A1 (en) 2015-04-01 2016-10-06 Sandoz Ag A process for preparing a crystalline form of sofosbuvir
WO2016181313A1 (en) 2015-05-11 2016-11-17 Lupin Limited A process for the preparation of sofosbuvir intermediates & its polymorph
CN104829668B (zh) * 2015-05-19 2017-05-31 江苏福瑞生物医药有限公司 一种核苷氨基磷酸酯类药物母液回收的方法
EP3303360A1 (en) 2015-05-26 2018-04-11 Sandoz AG Selective process for synthesis of nucleoside phosphoramidates
EP3303362B1 (en) 2015-06-03 2022-10-19 Teva Pharmaceuticals International GmbH Improved processes for the preparation of sofosbuvir and intermediates thereof
WO2016207194A1 (en) 2015-06-22 2016-12-29 Sandoz Ag Synthesis of phosphoramidates
CZ2015443A3 (cs) 2015-06-26 2017-01-04 Zentiva, K.S. Farmaceutická formulace sofosbuviru
CN106397515B (zh) * 2015-07-28 2021-05-11 广东东阳光药业有限公司 一种改良的索菲布韦制备方法
WO2017029408A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Ratiopharm Gmbh Solid state forms of sofosbuvir
MX2018002707A (es) * 2015-09-02 2018-08-01 Abbvie Inc Derivados de tetrahidrofurano antivirales.
CN106543252A (zh) * 2015-09-16 2017-03-29 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 核苷氨基磷酸酯类前药的制备方法及其中间体
CN106543220A (zh) * 2015-09-16 2017-03-29 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 氨基磷酸酯化合物及其制备方法和晶体
CN105218607A (zh) * 2015-09-16 2016-01-06 重庆康施恩化工有限公司 抗丙肝病毒药物索氟布韦中间体制备方法
CN112156102B (zh) 2015-09-16 2023-10-03 济南高合医疗科技有限公司 一种nuc-1031单一异构体的晶型及其制备方法
DK3785717T3 (da) 2015-09-16 2022-03-21 Gilead Sciences Inc Fremgangsmåder til behandling af coronaviridae-infektioner
CA2999215A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Sandoz Ag Solid pharmaceutical composition comprising amorphous sofosbuvir
CN106674319B (zh) * 2015-11-06 2020-04-21 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 一种治疗丙肝的化合物
CN106674318B (zh) * 2015-11-06 2020-04-21 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 一种ns5b聚合酶抑制剂
CN106674320B (zh) * 2015-11-06 2020-04-21 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 一种hcv的治疗药物
RS62593B1 (sr) * 2015-12-11 2021-12-31 NuCana plc Dijastereoselektivna sinteza derivata fosfata i proleka gemcitabina nuc-1031
EP3430023A1 (en) * 2016-03-17 2019-01-23 Mylan Laboratories, Limited Polymorphic forms of sofosbuvir
WO2017189978A1 (en) 2016-04-28 2017-11-02 Emory University Alkyne containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
CN107337702B (zh) * 2016-04-29 2021-11-05 江苏豪森药业集团有限公司 结晶型hcv抑制剂及其制备方法和应用
CZ2016257A3 (cs) 2016-05-05 2017-11-15 Zentiva, K.S. Amorfní forma sofosbuviru, způsob její přípravy a její stabilizace
BR112018073858A2 (pt) 2016-05-27 2019-02-26 Gilead Sciences, Inc. métodos para tratamento de infecções pelo vírus da hepatite b usando inibidores de ns5a, ns5b ou ns3
BR102017011025A2 (pt) 2016-06-02 2017-12-19 Gilead Pharmasset Llc Formulation of combination of three antiviral compounds
CN106083963A (zh) * 2016-06-08 2016-11-09 上海现代制药海门有限公司 一种索非布韦晶型6的制备方法
CN107522763B (zh) * 2016-06-22 2020-10-02 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 (2′r)-2′-脱氧-2′-氟-2′-甲基脲苷的制备方法
SG11201811316YA (en) 2016-06-24 2019-01-30 Univ Emory Phosphoramidates for the treatment of hepatitis b virus
US10239910B2 (en) * 2016-07-20 2019-03-26 Optimus Drugs (P) Limited Process for the preparation of sofosbuvir
US20190169221A1 (en) * 2016-08-12 2019-06-06 Janssen Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
WO2018029262A1 (en) 2016-08-12 2018-02-15 Sandoz Ag Solid pharmaceutical composition comprising amorphous sofosbuvir
MX2019002017A (es) 2016-08-19 2019-06-06 Sandoz Ag Derivados de sofosbuvir para el tratamiento de la hepatitis c.
LT3512863T (lt) 2016-09-07 2022-03-10 Atea Pharmaceuticals, Inc. 2'-pakeistieji-n6-pakeistieji purino nukleotidai, skirti gydymui rnr virusu
CN106432328B (zh) * 2016-09-14 2019-03-22 江苏福瑞生物医药有限公司 一种索非布韦中间体的制备方法
TWI794190B (zh) 2016-11-07 2023-03-01 加拿大商愛彼特生物製藥公司 含有取代的吡啶酮之三環化合物及其使用方法
MX2019005675A (es) * 2016-11-18 2019-08-14 Neurovive Pharmaceutical Ab Profarmacos hepaticos de ionoforos de protones mitocondriales.
CN108084237A (zh) * 2016-11-23 2018-05-29 广东东阳光药业有限公司 索非布韦的一水合物及其制备方法
CN106674321A (zh) * 2016-12-19 2017-05-17 上海博志研新药物技术有限公司 索非布韦晶型6的制备方法
CN111202744A (zh) * 2016-12-26 2020-05-29 上海博志研新药物技术有限公司 一种雷迪帕韦和索非布韦复方片剂及其制备方法和应用
GEP20237457B (en) 2017-02-01 2023-01-10 Atea Pharmaceuticals Inc Nucleotide hemi-sulfate salt for treatment of hepatitis c virus
JP6824434B2 (ja) 2017-03-14 2021-02-03 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ネココロナウイルス感染を処置する方法
US11098010B2 (en) 2017-03-21 2021-08-24 Arbutus Biopharma Corporation Substituted dihydroindene-4-carboxamides and analogs thereof, and methods using same
EP4219513A1 (en) 2017-05-01 2023-08-02 Gilead Sciences, Inc. Crystalline form of (s)-2-ethylbutyl 2-(((s)-(((2r,3s,4r,5r)-5-(4-aminopyrrolo[2,1-f] [1,2,4]triazin-7-yl)-5-cyano-3,4-dihydroxytetrahydrofuran2-yl)methoxy)(phenoxy) phosphoryl)amino)propanoate
GB201709471D0 (en) 2017-06-14 2017-07-26 Nucana Biomed Ltd Diastereoselective synthesis of hosphate derivatives
CN107200757B (zh) * 2017-06-29 2020-06-02 上海泓博智源医药股份有限公司 一种桥环氟代酯及其制备方法和应用
CN111093627B (zh) 2017-07-11 2024-03-08 吉利德科学公司 用于治疗病毒感染的包含rna聚合酶抑制剂和环糊精的组合物
CN107253971A (zh) * 2017-07-18 2017-10-17 江苏正济药业股份有限公司 一种索非布韦的制备方法
CN107449842A (zh) * 2017-07-25 2017-12-08 江苏工程职业技术学院 一种正相高效液相色谱法测定索氟布韦原料药对映异构体含量的方法
CN107402267A (zh) * 2017-07-25 2017-11-28 江苏工程职业技术学院 一种正相高效液相色谱法测定索氟布韦原料药非对映异构体及杂质含量的方法
EP3661944A1 (en) 2017-08-03 2020-06-10 Sandoz AG Sofosbuvir hydrate
WO2019030387A1 (en) 2017-08-11 2019-02-14 Sandoz Ag SOLID COMPOSITION COMPRISING AMORPHOUS SOFOSBUVIR AND AMORPHOUS DACLATASVIR
TW202012001A (zh) 2018-04-10 2020-04-01 美商亞堤製藥公司 C型肝炎病毒(hcv)感染硬化之患者的治療
CN108840908A (zh) * 2018-07-10 2018-11-20 刘凤娟 特拉匹韦的一种新晶型及其制备方法
CN109369757B (zh) * 2018-11-12 2020-12-29 浙江外国语学院 一种制备索非布韦晶型6的方法
CN111233956B (zh) * 2018-11-29 2023-04-28 北京凯因科技股份有限公司 索非布韦的晶型及其制备方法
TWI827760B (zh) 2018-12-12 2024-01-01 加拿大商愛彼特生物製藥公司 經取代之芳基甲基脲類及雜芳基甲基脲類、其類似物及其使用方法
MX2022000450A (es) 2019-07-10 2022-04-25 Cybrexa 3 Inc Conjugados peptídicos de agentes dirigidos a microtúbulos como terapéuticos.
US11634508B2 (en) 2019-07-10 2023-04-25 Cybrexa 2, Inc. Peptide conjugates of cytotoxins as therapeutics
CN111040010A (zh) * 2019-12-23 2020-04-21 上海红蓝医药科技有限公司 一种索非布韦中间体的合成方法
CN110981910B (zh) * 2019-12-23 2023-03-24 南京正大天晴制药有限公司 一种用于治疗丙肝的无引湿性低变异性新晶型
CN111072742B (zh) * 2019-12-23 2022-12-02 南京正大天晴制药有限公司 一种治疗丙肝药物的新晶型及其组合物
RU2745293C1 (ru) * 2019-12-26 2021-03-23 Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств" Способ получения кристаллической формы 8 софосбувира (варианты)
CN114641299A (zh) 2020-01-27 2022-06-17 吉利德科学公司 用于治疗SARS CoV-2感染的方法
TWI791193B (zh) 2020-02-18 2023-02-01 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
TW202245800A (zh) 2020-02-18 2022-12-01 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
CN111303226B (zh) * 2020-02-25 2021-11-23 石家庄四药有限公司 利用索非布韦晶型i制备索非布韦晶型vi的方法
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
AU2021234308C1 (en) 2020-03-12 2024-02-22 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing 1'-cyano nucleosides
CA3172483A1 (en) 2020-04-06 2021-10-14 Scott Ellis Inhalation formulations of 1'-cyano substituted carbanucleoside analogs
WO2021203409A1 (zh) * 2020-04-10 2021-10-14 南京正大天晴制药有限公司 一种用于治疗丙肝的无引湿性低变异性新晶型
TW202203941A (zh) 2020-05-29 2022-02-01 美商基利科學股份有限公司 瑞德西韋之治療方法
CA3187821A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Gilead Sciences, Inc. 1'-cyano nucleoside analogs and uses thereof
TW202233204A (zh) 2020-08-27 2022-09-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療病毒感染之化合物及方法
EP4320128A1 (en) 2022-03-02 2024-02-14 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070042988A1 (en) * 2005-08-15 2007-02-22 Roche Palo Alto Llc Antiviral phosphoramidates
WO2008121634A2 (en) * 2007-03-30 2008-10-09 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
WO2010135569A1 (en) * 2009-05-20 2010-11-25 Pharmasset, Inc. N- [ (2 ' r) -2 ' -deoxy-2 ' -fluoro-2 ' -methyl-p-phenyl-5 ' -uridylyl] -l-alanine 1-methylethyl ester and process for its production

Family Cites Families (443)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2512572A (en) 1950-06-20 Substituted pteridines and method
US2563707A (en) 1947-12-12 1951-08-07 American Cyanamid Co Process for preparing pteridines
GB768821A (en) 1954-05-17 1957-02-20 Gruenenthal Chemie Novel products of the amino-piperidine-2, 6-dione series
US2759300A (en) 1954-08-11 1956-08-21 Pest Control Ltd Method and means for introducing a predetermined amount of a poisonous material beneath the surface of the soil
US3053865A (en) 1958-03-19 1962-09-11 Merck & Co Inc Novel 16-alkyl and 16-alkylene steroids and processes
US3116282A (en) 1960-04-27 1963-12-31 Upjohn Co Pyrimidine nucleosides and process
US3097137A (en) 1960-05-19 1963-07-09 Canadian Patents Dev Vincaleukoblastine
US3104246A (en) 1961-08-18 1963-09-17 Roussel Uclaf Process of preparation of beta-methasone
FR1533151A (fr) 1962-05-18 1968-07-19 Rhone Poulenc Sa Nouvel antibiotique et sa préparation
NL6613143A (ru) 1965-09-21 1967-03-22
YU33730B (en) 1967-04-18 1978-02-28 Farmaceutici Italia Process for preparing a novel antibiotic substance and salts thereof
US3480613A (en) 1967-07-03 1969-11-25 Merck & Co Inc 2-c or 3-c-alkylribofuranosyl - 1-substituted compounds and the nucleosides thereof
CH514578A (de) 1968-02-27 1971-10-31 Sandoz Ag Verfahren zur Herstellung von Glucosiden
JPS5246150Y2 (ru) 1971-03-23 1977-10-20
USRE29835E (en) 1971-06-01 1978-11-14 Icn Pharmaceuticals 1,2,4-Triazole nucleosides
US3798209A (en) 1971-06-01 1974-03-19 Icn Pharmaceuticals 1,2,4-triazole nucleosides
US3994974A (en) 1972-02-05 1976-11-30 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. α-Aminomethylbenzyl alcohol derivatives
US3852267A (en) 1972-08-04 1974-12-03 Icn Pharmaceuticals Phosphoramidates of 3{40 ,5{40 -cyclic purine nucleotides
ZA737247B (en) 1972-09-29 1975-04-30 Ayerst Mckenna & Harrison Rapamycin and process of preparation
BE799805A (fr) 1973-05-23 1973-11-21 Toyo Jozo Kk Nouvel agent immunosuppresseur et sa preparation
US3991045A (en) 1973-05-30 1976-11-09 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha N4 -acylarabinonucleosides
JPS535678B2 (ru) 1973-05-30 1978-03-01
US3888843A (en) 1973-06-12 1975-06-10 Toyo Jozo Kk 4-carbamoyl-1-' -d-ribofuranosylimidazolium-5-olate
SU508076A1 (ru) 1973-07-05 1976-10-05 Институт По Изысканию Новых Антибиотиков Амн Ссср Способ получени карминомицина 1
GB1457632A (en) 1974-03-22 1976-12-08 Farmaceutici Italia Adriamycins
US3923785A (en) 1974-04-22 1975-12-02 Parke Davis & Co (R)-3-(2-deoxy-{62 -D-erythro-pentofuranosyl)-3,6,7,8-tetrahydroimidazo{8 4,5-d{9 {8 1,3{9 diazepin-8-ol
GB1467383A (en) 1974-06-12 1977-03-16 Farmaceutici Italia Daunomycin analogues
US4199574A (en) 1974-09-02 1980-04-22 Burroughs Wellcome Co. Methods and compositions for treating viral infections and guanine acyclic nucleosides
GB1523865A (en) 1974-09-02 1978-09-06 Wellcome Found Purine compunds and salts thereof
GB1509875A (en) 1976-06-14 1978-05-04 Farmaceutici Italia Optically active anthracyclinones and anthracycline glycosides
US4197249A (en) 1977-08-15 1980-04-08 American Cyanamid Company 1,4-Bis(substituted-amino)-5,8-dihydroxyanthraquinones and leuco bases thereof
SE445996B (sv) 1977-08-15 1986-08-04 American Cyanamid Co Nya atrakinonderivat
US4203898A (en) 1977-08-29 1980-05-20 Eli Lilly And Company Amide derivatives of VLB, leurosidine, leurocristine and related dimeric alkaloids
US4210745A (en) 1978-01-04 1980-07-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education And Welfare Procedure for the preparation of 9-β-D-arabinofuranosyl-2-fluoroadenine
US4303785A (en) 1978-08-05 1981-12-01 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Antitumor anthracycline antibiotics
US4307100A (en) 1978-08-24 1981-12-22 Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) Nor bis-indole compounds usable as medicaments
DK160616C (da) 1979-02-03 1991-09-02 Zaidan Hojin Biseibutsu Fremgangsmaade til fremstilling af anthracyclinderivater eller syreadditionssalte deraf
US4418068A (en) 1981-04-03 1983-11-29 Eli Lilly And Company Antiestrogenic and antiandrugenic benzothiophenes
EP0062503A1 (en) 1981-04-03 1982-10-13 Eli Lilly And Company Benzothiophene compounds and process for preparing them
US4355032B2 (en) 1981-05-21 1990-10-30 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)guanine as antiviral agent
JPS58219196A (ja) 1982-06-15 1983-12-20 Nippon Kayaku Co Ltd ４′−デメチル−エピポドフイロトキシン−β−Ｄ−エチリデングルコシドの製造法
JPS5976099A (ja) 1982-10-22 1984-04-28 Sumitomo Chem Co Ltd アミノナフタセン誘導体とその製造方法
IT1155446B (it) 1982-12-23 1987-01-28 Erba Farmitalia Procedimento per la purificazione di glucosidi antraciclinonici mediante adsobimento selettivo su resine
US4526988A (en) 1983-03-10 1985-07-02 Eli Lilly And Company Difluoro antivirals and intermediate therefor
JPS6019790A (ja) 1983-07-14 1985-01-31 Yakult Honsha Co Ltd 新規なカンプトテシン誘導体
EP0141927B1 (en) 1983-08-18 1991-10-30 Beecham Group Plc Antiviral guanine derivatives
JPS6051189A (ja) 1983-08-30 1985-03-22 Sankyo Co Ltd チアゾリジン誘導体およびその製造法
US4894366A (en) 1984-12-03 1990-01-16 Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same
US4760137A (en) 1984-08-06 1988-07-26 Brigham Young University Method for the production of 2'-deoxyadenosine compounds
CA1269659A (en) 1984-08-06 1990-05-29 Brigham Young University Method for the production of 2'-deoxyadenosine compounds
US5736155A (en) 1984-08-08 1998-04-07 The Liposome Company, Inc. Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
US5077056A (en) 1984-08-08 1991-12-31 The Liposome Company, Inc. Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
NL8403224A (nl) 1984-10-24 1986-05-16 Oce Andeno Bv Dioxafosforinanen, de bereiding ervan en de toepassing voor het splitsen van optisch actieve verbindingen.
DK173350B1 (da) 1985-02-26 2000-08-07 Sankyo Co Thiazolidinderivater, deres fremstilling og farmaceutisk paæparat indeholdende dem
US5223263A (en) 1988-07-07 1993-06-29 Vical, Inc. Liponucleotide-containing liposomes
US4724232A (en) 1985-03-16 1988-02-09 Burroughs Wellcome Co. Treatment of human viral infections
CS263951B1 (en) 1985-04-25 1989-05-12 Antonin Holy 9-(phosponylmethoxyalkyl)adenines and method of their preparation
FI87783C (fi) 1985-05-15 1993-02-25 Wellcome Found Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara 2',3'-dideoxinukleosider
US5246937A (en) 1985-09-18 1993-09-21 Beecham Group P.L.C. Purine derivatives
US4751221A (en) 1985-10-18 1988-06-14 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research 2-fluoro-arabinofuranosyl purine nucleosides
US4797285A (en) 1985-12-06 1989-01-10 Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Lipsome/anthraquinone drug composition and method
NZ219974A (en) 1986-04-22 1989-08-29 Goedecke Ag N-(2'-aminophenyl)-benzamide derivatives, process for their preparation and their use in the control of neoplastic diseases
FR2601675B1 (fr) 1986-07-17 1988-09-23 Rhone Poulenc Sante Derives du taxol, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US4753935A (en) 1987-01-30 1988-06-28 Syntex (U.S.A.) Inc. Morpholinoethylesters of mycophenolic acid and pharmaceutical compositions
US5154930A (en) 1987-03-05 1992-10-13 The Liposome Company, Inc. Pharmacological agent-lipid solution preparation
WO1988007045A1 (en) 1987-03-09 1988-09-22 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Derivatives of physiologically active substance k-252
GB8719367D0 (en) 1987-08-15 1987-09-23 Wellcome Found Therapeutic compounds
JPH03501253A (ja) 1987-09-22 1991-03-22 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア エイズ（ａｉｄｓ）治療を目的とするリポソームによるヌクレオシド類似物質
US5004758A (en) 1987-12-01 1991-04-02 Smithkline Beecham Corporation Water soluble camptothecin analogs useful for inhibiting the growth of animal tumor cells
US5041426A (en) 1987-12-21 1991-08-20 Brigham Young University Immune system enhancing 3-β-d-ribofuranosylthiazolo[4,5-d]pyridimine nucleosides and nucleotides
US4880784A (en) 1987-12-21 1989-11-14 Brigham Young University Antiviral methods utilizing ribofuranosylthiazolo[4,5-d]pyrimdine derivatives
US5130421A (en) 1988-03-24 1992-07-14 Bristol-Myers Company Production of 2',3'-dideoxy-2',3'-didehydronucleosides
GB8815265D0 (en) 1988-06-27 1988-08-03 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
IL91664A (en) 1988-09-28 1993-05-13 Yissum Res Dev Co Ammonium transmembrane gradient system for efficient loading of liposomes with amphipathic drugs and their controlled release
US6132763A (en) 1988-10-20 2000-10-17 Polymasc Pharmaceuticals Plc Liposomes
US5705363A (en) 1989-03-02 1998-01-06 The Women's Research Institute Recombinant production of human interferon τ polypeptides and nucleic acids
US5277914A (en) 1989-03-31 1994-01-11 The Regents Of The University Of California Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5077057A (en) 1989-04-05 1991-12-31 The Regents Of The University Of California Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5549910A (en) 1989-03-31 1996-08-27 The Regents Of The University Of California Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5411947A (en) 1989-06-28 1995-05-02 Vestar, Inc. Method of converting a drug to an orally available form by covalently bonding a lipid to the drug
US5194654A (en) 1989-11-22 1993-03-16 Vical, Inc. Lipid derivatives of phosphonoacids for liposomal incorporation and method of use
US5225212A (en) 1989-10-20 1993-07-06 Liposome Technology, Inc. Microreservoir liposome composition and method
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5463092A (en) 1989-11-22 1995-10-31 Vestar, Inc. Lipid derivatives of phosphonacids for liposomal incorporation and method of use
GB8927913D0 (en) 1989-12-11 1990-02-14 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
US5026687A (en) 1990-01-03 1991-06-25 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Treatment of human retroviral infections with 2',3'-dideoxyinosine alone and in combination with other antiviral compounds
US5041246A (en) 1990-03-26 1991-08-20 The Babcock & Wilcox Company Two stage variable annulus spray attemperator method and apparatus
JPH05506230A (ja) 1990-04-06 1993-09-16 ジーンラブス　テクノロジイズ　インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルスエピトープ
US5091188A (en) 1990-04-26 1992-02-25 Haynes Duncan H Phospholipid-coated microcrystals: injectable formulations of water-insoluble drugs
GB9009861D0 (en) 1990-05-02 1990-06-27 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
AU7872491A (en) 1990-05-07 1991-11-27 Vical, Inc. Lipid prodrugs of salicylate and nonsteroidal anti-inflammatory drugs
RU2142937C1 (ru) 1990-05-18 1999-12-20 Хехст АГ Амиды органических кислот, способ их получения и фармацевтическая композиция
JPH05507279A (ja) 1990-05-29 1993-10-21 ネクススター・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド グリセロールジ―およびトリホスフェート誘導体の合成
ES2083580T3 (es) 1990-06-13 1996-04-16 Arnold Glazier Profarmacos de fosforo.
US6060080A (en) 1990-07-16 2000-05-09 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Liposomal products
JP2599492B2 (ja) 1990-08-21 1997-04-09 第一製薬株式会社 リポソーム製剤の製造法
US5372808A (en) 1990-10-17 1994-12-13 Amgen Inc. Methods and compositions for the treatment of diseases with consensus interferon while reducing side effect
US5206244A (en) 1990-10-18 1993-04-27 E. R. Squibb & Sons, Inc. Hydroxymethyl (methylenecyclopentyl) purines and pyrimidines
US5543389A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of The Oregon Health Sciences University, A Non Profit Organization Covalent polar lipid-peptide conjugates for use in salves
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
US5256641A (en) 1990-11-01 1993-10-26 State Of Oregon Covalent polar lipid-peptide conjugates for immunological targeting
US5149794A (en) 1990-11-01 1992-09-22 State Of Oregon Covalent lipid-drug conjugates for drug targeting
US5925643A (en) 1990-12-05 1999-07-20 Emory University Enantiomerically pure β-D-dioxolane-nucleosides
US5179104A (en) 1990-12-05 1993-01-12 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Process for the preparation of enantiomerically pure β-D-(-)-dioxolane-nucleosides
JP3008226B2 (ja) 1991-01-16 2000-02-14 第一製薬株式会社 六環性化合物
US5145684A (en) 1991-01-25 1992-09-08 Sterling Drug Inc. Surface modified drug nanoparticles
NZ250842A (en) 1991-02-22 1996-03-26 Univ Emory Resolution of a racemic mixture of nucleoside enantiomers such as 2-hydroxymethyl-5-(5-fluorocytosin-1-yl)-1,3-oxathiolane (ftc)
NZ241868A (en) 1991-03-08 1995-05-26 Univ Vermont 6,9-bis(substituted-amino)benzo[g]isoquinoline-5,10-diones, preparation and pharmaceutical compositions thereof
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
US5157027A (en) 1991-05-13 1992-10-20 E. R. Squibb & Sons, Inc. Bisphosphonate squalene synthetase inhibitors and method
AU668873B2 (en) 1991-07-12 1996-05-23 Chimerix, Inc. Antiviral liponucleosides: treatment of hepatitis B
NZ243567A (en) 1991-07-22 1995-04-27 Bristol Myers Squibb Co Pharmaceutical oral formulation of a dideoxy purine nucleoside comprising the nucleoside together with a water-insoluble antacid buffering composition
US5554728A (en) 1991-07-23 1996-09-10 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Lipid conjugates of therapeutic peptides and protease inhibitors
GB9116601D0 (en) 1991-08-01 1991-09-18 Iaf Biochem Int 1,3-oxathiolane nucleoside analogues
TW224053B (ru) 1991-09-13 1994-05-21 Paul B Chretien
US5233031A (en) 1991-09-23 1993-08-03 University Of Rochester Phosphoramidate analogs of 2'-deoxyuridine
US5369108A (en) 1991-10-04 1994-11-29 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Potent inducers of terminal differentiation and methods of use thereof
US5700811A (en) 1991-10-04 1997-12-23 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Potent inducers of terminal differentiation and method of use thereof
DE4200821A1 (de) 1992-01-15 1993-07-22 Bayer Ag Geschmacksmaskierte pharmazeutische mittel
US5676942A (en) 1992-02-10 1997-10-14 Interferon Sciences, Inc. Composition containing human alpha interferon species proteins and method for use thereof
US5405598A (en) 1992-02-24 1995-04-11 Schinazi; Raymond F. Sensitizing agents for use in boron neutron capture therapy
JP3102945B2 (ja) 1992-02-27 2000-10-23 財団法人野田産業科学研究所 肝炎治療剤
US5610054A (en) 1992-05-14 1997-03-11 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic RNA molecule targeted against Hepatitis C virus
US5426183A (en) 1992-06-22 1995-06-20 Eli Lilly And Company Catalytic stereoselective glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides
US5256798A (en) 1992-06-22 1993-10-26 Eli Lilly And Company Process for preparing alpha-anomer enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl sulfonates
BR9302427A (pt) 1992-06-22 1994-01-11 Lilly Co Eli Processo estereo seletivo para a preparacao de um derivado de riboturanosila
US5719147A (en) 1992-06-29 1998-02-17 Merck & Co., Inc. Morpholine and thiomorpholine tachykinin receptor antagonists
US5301508A (en) 1992-08-14 1994-04-12 Rubbermaid Incorporated Thermoelectric portable container
CA2105112C (en) 1992-09-01 2005-08-02 Thomas C. Britton A process for anomerizing nucleosides
GB9221220D0 (en) 1992-10-09 1992-11-25 Sandoz Ag Organic componds
GB9226729D0 (en) 1992-12-22 1993-02-17 Wellcome Found Therapeutic combination
US5484926A (en) 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
WO1994019012A2 (en) 1993-02-24 1994-09-01 Wang Jui H Compositions and methods of application of reactive antiviral polymers
US6180134B1 (en) 1993-03-23 2001-01-30 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Enhanced ciruclation effector composition and method
EP0746319A4 (en) 1993-05-12 1997-11-05 Karl Y Hostetler ACYCLOVIR DERIVATIVES FOR TOPICAL USE
EP0773029A4 (en) 1993-07-19 1997-09-03 Tokyo Tanabe Co HEPATITIS C VIRUS PROLIFERATION INHIBITOR
FR2707988B1 (fr) 1993-07-21 1995-10-13 Pf Medicament Nouveaux dérivés antimitotiques des alcaloïdes binaires du catharantus rosesus, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques les comprenant.
US6156501A (en) 1993-10-26 2000-12-05 Affymetrix, Inc. Arrays of modified nucleic acid probes and methods of use
US7375198B2 (en) 1993-10-26 2008-05-20 Affymetrix, Inc. Modified nucleic acid probes
US5951974A (en) 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
ES2174915T3 (es) 1993-11-10 2002-11-16 Enzon Inc Productos de conjugacion mejorados de un interferon con un polimero.
GB9324864D0 (en) 1993-12-03 1994-01-19 Minnesota Mining & Mfg Joint implants
IL111960A (en) 1993-12-17 1999-12-22 Merck & Co Inc Morpholines and thiomorpholines their preparation and pharmaceutical compositions containing them
WO1995024185A1 (en) 1994-03-11 1995-09-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Novel pyrimidine nucleosides
DE4415539C2 (de) 1994-05-03 1996-08-01 Osama Dr Dr Med Omer Pflanzen mit virustatischer und antiviraler Wirkung
IL129871A (en) 1994-05-06 2003-11-23 Pharmacia & Upjohn Inc Process for preparing 4-phenyl-substituted octanoyl-oxazolidin-2-one intermediates that are useful for preparing pyran-2-ones useful for treating retroviral infections
WO1995035102A1 (en) 1994-06-22 1995-12-28 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Novel method of preparation of known and novel 2'-modified nucleosides by intramolecular nucleophilic displacement
DE4432623A1 (de) 1994-09-14 1996-03-21 Huels Chemische Werke Ag Verfahren zur Bleichung von wäßrigen Tensidlösungen
US5738846A (en) 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5703058A (en) 1995-01-27 1997-12-30 Emory University Compositions containing 5-fluoro-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxycytidine or a mono-, di-, or triphosphate thereof and a second antiviral agent
US6391859B1 (en) 1995-01-27 2002-05-21 Emory University [5-Carboxamido or 5-fluoro]-[2′,3′-unsaturated or 3′-modified]-pyrimidine nucleosides
GB9505025D0 (en) 1995-03-13 1995-05-03 Medical Res Council Chemical compounds
GB9618952D0 (en) 1996-09-11 1996-10-23 Sandoz Ltd Process
US6504029B1 (en) 1995-04-10 2003-01-07 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Condensed-hexacyclic compounds and a process therefor
DE19514523A1 (de) 1995-04-12 1996-10-17 Schering Ag Neue Cytosin- und Cytidinderivate
US5981247A (en) 1995-09-27 1999-11-09 Emory University Recombinant hepatitis C virus RNA replicase
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5767097A (en) 1996-01-23 1998-06-16 Icn Pharmaceuticals, Inc. Specific modulation of Th1/Th2 cytokine expression by ribavirin in activated T-lymphocytes
GB9602028D0 (en) 1996-02-01 1996-04-03 Amersham Int Plc Nucleoside analogues
US5980884A (en) 1996-02-05 1999-11-09 Amgen, Inc. Methods for retreatment of patients afflicted with Hepatitis C using consensus interferon
WO1997032018A2 (en) 1996-02-29 1997-09-04 Immusol, Inc. Hepatitis c virus ribozymes
US5633388A (en) 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
US5830905A (en) 1996-03-29 1998-11-03 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
US5990276A (en) 1996-05-10 1999-11-23 Schering Corporation Synthetic inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
US5849733A (en) 1996-05-10 1998-12-15 Bristol-Myers Squibb Co. 2-thio or 2-oxo flavopiridol analogs
GB9609932D0 (en) 1996-05-13 1996-07-17 Hoffmann La Roche Use of IL-12 and IFN alpha for the treatment of infectious diseases
US5891874A (en) 1996-06-05 1999-04-06 Eli Lilly And Company Anti-viral compound
US5837257A (en) 1996-07-09 1998-11-17 Sage R&D Use of plant extracts for treatment of HIV, HCV and HBV infections
US6214375B1 (en) 1996-07-16 2001-04-10 Generex Pharmaceuticals, Inc. Phospholipid formulations
US5635517B1 (en) 1996-07-24 1999-06-29 Celgene Corp Method of reducing TNFalpha levels with amino substituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-YL)-1-oxo-and 1,3-dioxoisoindolines
AU4090697A (en) 1996-09-03 1998-03-26 Bristol-Myers Squibb Company Improved process for preparing the antiviral agent {1s-(1alpha, 3alpha, 4beta)}-2-amino-1,9-dihydro-9-{4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2 -methylenecyclopentyl}-6h-purin-6-one
US5908934A (en) 1996-09-26 1999-06-01 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of chiral ketone intermediates useful for the preparation of flavopiridol and analogs
US6174905B1 (en) 1996-09-30 2001-01-16 Mitsui Chemicals, Inc. Cell differentiation inducer
US5922757A (en) 1996-09-30 1999-07-13 The Regents Of The University Of California Treatment and prevention of hepatic disorders
TW520297B (en) 1996-10-11 2003-02-11 Sequus Pharm Inc Fusogenic liposome composition and method
US6224903B1 (en) 1996-10-11 2001-05-01 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Polymer-lipid conjugate for fusion of target membranes
DK1132393T3 (da) 1996-10-16 2003-07-21 Ribapharm Inc L-Ribavirin og anvendelser heraf
SI20024A (sl) 1996-10-16 2000-02-29 Icn Pharmaceuticals, Inc. Purinovi L-nukleozidi, analogi in uporaba od teh
US6509320B1 (en) 1996-10-16 2003-01-21 Icn Pharmaceuticals, Inc. Purine L-nucleosides, analogs and uses thereof
US6455690B1 (en) 1996-10-16 2002-09-24 Robert Tam L-8-oxo-7-propyl-7,8-dihydro-(9H)-guanosine
SK286105B6 (sk) 1996-10-18 2008-03-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibítory serínových proteáz, najmä NS3 proteázyvírusu hepatitídy C, farmaceutická kompozícia a použitie
GB9623908D0 (en) 1996-11-18 1997-01-08 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
IL119833A (en) 1996-12-15 2001-01-11 Lavie David Hypericum perforatum extracts for the preparation of pharmaceutical compositions for the treatment of hepatitis
US5827533A (en) 1997-02-06 1998-10-27 Duke University Liposomes containing active agents aggregated with lipid surfactants
US20020127371A1 (en) 2001-03-06 2002-09-12 Weder Donald E. Decorative elements provided with a circular or crimped configuration at point of sale or point of use
US6004933A (en) 1997-04-25 1999-12-21 Cortech Inc. Cysteine protease inhibitors
AU8210798A (en) 1997-05-29 1998-12-30 Novartis Ag 2-amino-7-(1-substituted-2-hydroxyethyl)-3,5-dihydro-pyrrolo (3,2-d)pyrimidin-4-ones
AU724974B2 (en) 1997-06-30 2000-10-05 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa 1-amino-alkylcyclohexane NMDA receptor antagonists
EP1012180B1 (en) 1997-08-11 2004-12-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor peptide analogues
ES2162393T3 (es) 1997-09-21 2001-12-16 Schering Corp Terapia de combinacion para erradicar el hcv-rna detectable en pacientes con infeccion de hepatitis c cronica.
US6703374B1 (en) 1997-10-30 2004-03-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Nucleosides for imaging and treatment applications
US5981709A (en) 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US6245750B1 (en) 1998-01-23 2001-06-12 Newbiotics, Inc. Enzyme catalyzed therapeutic agents
PT1058686E (pt) 1998-02-25 2007-01-31 Raymond F Schinazi 2'-fluoronucleósidos
US6787305B1 (en) 1998-03-13 2004-09-07 Invitrogen Corporation Compositions and methods for enhanced synthesis of nucleic acid molecules
WO1999049873A1 (en) 1998-03-27 1999-10-07 Regents Of The University Of Minnesota Nucleosides with antiviral and anticancer activity
GB9806815D0 (en) 1998-03-30 1998-05-27 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
CN1230198C (zh) 1998-05-15 2005-12-07 先灵公司 给首次接受抗病毒疗法的G慢性丙型肝炎感染患者施用包括利巴韦林和α干扰素的联合疗法
US20010014352A1 (en) 1998-05-27 2001-08-16 Udit Batra Compressed tablet formulation
WO1999064016A1 (en) 1998-06-08 1999-12-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of peg-ifn-alpha and ribavirin for the treatment of chronic hepatitis c
US6200598B1 (en) 1998-06-18 2001-03-13 Duke University Temperature-sensitive liposomal formulation
US6726925B1 (en) 1998-06-18 2004-04-27 Duke University Temperature-sensitive liposomal formulation
US6320078B1 (en) 1998-07-24 2001-11-20 Mitsui Chemicals, Inc. Method of producing benzamide derivatives
DE69925918T2 (de) 1998-07-27 2006-05-11 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Diketosäure-derivate als hemmstoffe von polymerasen
AU5475799A (en) 1998-08-10 2000-03-06 Centre National De La Recherche Scientifique Beta-l-2'-deoxy-nucleosides for the treatment of hepatitis
US6323180B1 (en) 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
EP1122260B1 (en) 1998-10-16 2004-12-15 Mercian Corporation Crystallization of doxorubicin hydrochloride
FR2784892B1 (fr) 1998-10-23 2001-04-06 Smith & Nephew Kinetec Sa Attelle de mobilisation passive repliable pour membre inferieur
GB9826555D0 (en) 1998-12-03 1999-01-27 Univ Nottingham Microemulsion compositions
US6635278B1 (en) 1998-12-15 2003-10-21 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations
AU2157000A (en) 1998-12-18 2000-07-12 Schering Corporation Ribavirin-pegylated interferon alfa induction hcv combination therapy
US6267985B1 (en) 1999-06-30 2001-07-31 Lipocine Inc. Clear oil-containing pharmaceutical compositions
US6248363B1 (en) 1999-11-23 2001-06-19 Lipocine, Inc. Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions
US6294192B1 (en) 1999-02-26 2001-09-25 Lipocine, Inc. Triglyceride-free compositions and methods for improved delivery of hydrophobic therapeutic agents
US6383471B1 (en) 1999-04-06 2002-05-07 Lipocine, Inc. Compositions and methods for improved delivery of ionizable hydrophobic therapeutic agents
US7919119B2 (en) 1999-05-27 2011-04-05 Acusphere, Inc. Porous drug matrices and methods of manufacture thereof
US6395300B1 (en) 1999-05-27 2002-05-28 Acusphere, Inc. Porous drug matrices and methods of manufacture thereof
WO2001005433A2 (en) 1999-07-14 2001-01-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Delivery and retention of activity agents to lymph nodes
HUP0400540A3 (en) 1999-07-30 2004-09-28 Abbott Gmbh & Co Kg 2-pyrazolin-5-one derivatives, their use and pharmaceutical compositions containing them
EP1225899A2 (en) 1999-11-04 2002-07-31 Virochem Pharma Inc. Method for the treatment or prevention of flaviviridae viral infection using nucleoside analogues
KR100789162B1 (ko) 1999-11-12 2007-12-28 파마셋 인코포레이티드 2'-데옥시-ｌ-뉴클레오사이드의 합성
US20060034937A1 (en) 1999-11-23 2006-02-16 Mahesh Patel Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions
US6495677B1 (en) 2000-02-15 2002-12-17 Kanda S. Ramasamy Nucleoside compounds
CN1427722A (zh) 2000-02-18 2003-07-02 希拉生物化学股份有限公司 用核苷类似物治疗或预防黄病毒感染的方法
ATE414520T1 (de) 2000-04-13 2008-12-15 Pharmasset Inc 3 oder 2 hydroxymethyl substituierte nucleoside derivate und ihre verwendung zur behandlung von virusinfektionen
WO2001081359A1 (en) 2000-04-20 2001-11-01 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable hcv-rna in patients having chronic hepatitis c infection
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
EA005890B1 (ru) 2000-05-26 2005-06-30 Айденикс (Кайман) Лимитед СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ВИРУСОМ ГЕПАТИТА ДЕЛЬТА, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ β-L-2'-ДЕЗОКСИНУКЛЕОЗИДОВ
US6787526B1 (en) 2000-05-26 2004-09-07 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating hepatitis delta virus infection with β-L-2′-deoxy-nucleosides
KR20080021797A (ko) 2000-05-26 2008-03-07 이데닉스(케이만)리미티드 플라비바이러스 및 페스티바이러스의 치료방법 및 조성물
FR2810322B1 (fr) 2000-06-14 2006-11-10 Pasteur Institut PRODUCTION COMBINATOIRE D'ANALOGUES DE NUCLEOTIDES ET NUCLEOTIDES (XiTP)
MY141594A (en) 2000-06-15 2010-05-14 Novirio Pharmaceuticals Ltd 3'-PRODRUGS OF 2'-DEOXY-ß-L-NUCLEOSIDES
US6815542B2 (en) 2000-06-16 2004-11-09 Ribapharm, Inc. Nucleoside compounds and uses thereof
UA72612C2 (en) 2000-07-06 2005-03-15 Pyrido[2.3-d]pyrimidine and pyrimido[4.5-d]pyrimidine nucleoside analogues, prodrugs and method for inhibiting growth of neoplastic cells
US6680068B2 (en) 2000-07-06 2004-01-20 The General Hospital Corporation Drug delivery formulations and targeting
JP2004504407A (ja) 2000-07-21 2004-02-12 コルバス・インターナショナル・インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルスのｎｓ３−セリンプロテアーゼ阻害剤としての新規ペプチド
PL365695A1 (en) 2000-07-21 2005-01-10 Novel peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
DK1301519T4 (da) 2000-07-21 2021-12-20 Gilead Sciences Inc Prodrugs af phosphonatnukleotidanaloger og fremgangsmåder til udvælgelse og fremstilling heraf
AR034127A1 (es) 2000-07-21 2004-02-04 Schering Corp Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
US6897201B2 (en) 2000-08-21 2005-05-24 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of glaucoma or ocular hypertension
US7018985B1 (en) 2000-08-21 2006-03-28 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Composition and method for inhibiting platelet aggregation
AR039558A1 (es) 2000-08-21 2005-02-23 Inspire Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodo para el tratamiento de glaucoma o hipertension ocular
US20030008841A1 (en) 2000-08-30 2003-01-09 Rene Devos Anti-HCV nucleoside derivatives
CN1646141B (zh) 2000-10-18 2014-06-25 吉利德制药有限责任公司 用于治疗病毒感染和异常细胞增殖的修饰核苷类化合物
AU2002213343A1 (en) 2000-10-18 2002-04-29 Schering Corporation Ribavirin-pegylated interferon alfa HCV combination therapy
US6555677B2 (en) 2000-10-31 2003-04-29 Merck & Co., Inc. Phase transfer catalyzed glycosidation of an indolocarbazole
JP3889708B2 (ja) 2000-11-20 2007-03-07 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｃ型肝炎トリペプチド阻害剤
DE20019797U1 (de) 2000-11-21 2001-04-05 Mala Verschlussysteme Gmbh Verschlußkappe
AR031905A1 (es) 2000-12-12 2003-10-08 Schering Corp Peptidos diarilicos como inhibidores de ns3-serina proteasa en hepatitis de virus c
AU2002230763A1 (en) 2000-12-13 2008-01-03 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US6727366B2 (en) 2000-12-13 2004-04-27 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Imidazolidinones and their related derivatives as hepatitis C virus NS3 protease inhibitors
US6750396B2 (en) 2000-12-15 2004-06-15 Di/Dt, Inc. I-channel surface-mount connector
CA2429352A1 (en) 2000-12-15 2002-06-20 Lieven Stuyver Antiviral agents for treatment of flaviviridae infections
MY134070A (en) 2001-01-22 2007-11-30 Isis Pharmaceuticals Inc Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
US7105499B2 (en) 2001-01-22 2006-09-12 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
MY129350A (en) 2001-04-25 2007-03-30 Bristol Myers Squibb Co Aripiprazole oral solution
GB0112617D0 (en) 2001-05-23 2001-07-18 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
GB0114286D0 (en) 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
WO2003000713A1 (en) 2001-06-21 2003-01-03 Glaxo Group Limited Nucleoside compounds in hcv
IL159087A0 (en) 2001-07-11 2004-05-12 Vertex Pharma Bridged bicyclic compounds and pharmaceutical compositions containing the same
EP2335700A1 (en) 2001-07-25 2011-06-22 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C virus polymerase inhibitors with a heterobicylic structure
ATE394409T1 (de) 2001-08-02 2008-05-15 Ilex Oncology Inc Verfahren zur herstellung von purinnukleosiden
US6962991B2 (en) 2001-09-12 2005-11-08 Epoch Biosciences, Inc. Process for the synthesis of pyrazolopyrimidines
US7227019B2 (en) 2001-09-13 2007-06-05 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of rebeccamycin and analogs thereof
WO2003024461A1 (en) 2001-09-20 2003-03-27 Schering Corporation Hcv combination therapy
AU2002330154A1 (en) 2001-09-28 2003-04-07 Centre National De La Recherche Scientifique Methods and compositions for treating hepatitis c virus using 4'-modified nucleosides
DE60221875T2 (de) 2001-11-02 2007-12-20 Glaxo Group Ltd., Greenford 4-(6-gliedrige)-heteroaryl-acyl-pyrrolidinderivate als hcv-inhibitoren
EP1448170A4 (en) 2001-11-27 2010-05-12 Bristol Myers Squibb Co EFAVIRENZ STAMP PREPARATIONS HAVING UNIQUE BIOPHARMACEUTICAL CHARACTERISTICS
GB0129945D0 (en) 2001-12-13 2002-02-06 Mrc Technology Ltd Chemical compounds
WO2003063771A2 (en) 2001-12-14 2003-08-07 Pharmasset Ltd. N4-acylcytosine nucleosides for treatment of viral iinfections
WO2003051899A1 (en) 2001-12-17 2003-06-26 Ribapharm Inc. Deazapurine nucleoside libraries and compounds
US20030153744A1 (en) 2001-12-21 2003-08-14 Micrologix Biotech Inc. Anti-viral 7-deaza L-nucleosides
WO2003062256A1 (en) 2002-01-17 2003-07-31 Ribapharm Inc. 2'-beta-modified-6-substituted adenosine analogs and their use as antiviral agents
US7070801B2 (en) 2002-01-30 2006-07-04 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Sugar-modified liposome and products comprising the liposome
CA2370396A1 (en) 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
US6642204B2 (en) 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US20050118596A1 (en) 2002-02-08 2005-06-02 Asselbergs Fredericus Alphonsus M. Method for screening for compounds having hdac inhibitory activity
EP1476169B1 (en) 2002-02-13 2013-03-20 Merck Sharp & Dohme Corp. Inhibiting orthopoxvirus replication with nucleoside compounds
JP2005525358A (ja) 2002-02-28 2005-08-25 ビオタ インコーポレーティッド ヌクレオチド模倣体およびそのプロドラッグ
AU2003213628A1 (en) 2002-02-28 2003-09-16 Biota, Inc. Nucleoside 5'-monophosphate mimics and their prodrugs
JP2005523922A (ja) 2002-04-26 2005-08-11 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤
US20040014108A1 (en) 2002-05-24 2004-01-22 Eldrup Anne B. Oligonucleotides having modified nucleoside units
CN1671710A (zh) 2002-06-04 2005-09-21 新创世纪药品公司 用作抗病毒药物的吡唑并[1,5－a]嘧啶化合物
US7906491B2 (en) 2002-06-07 2011-03-15 Univisitair Medisch Centrum Utrecht Compounds for modulating the activity of exchange proteins directly activated by cAMP (Epacs)
AU2003248708A1 (en) 2002-06-17 2003-12-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds that include carbocyclic nucleosides and their use in gene modulation
CA2488842A1 (en) 2002-06-17 2003-12-24 Merck & Co., Inc. Carbocyclic nucleoside analogs as rna-antivirals
CA2488534A1 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
CA2488484A1 (en) 2002-06-27 2004-01-08 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
PL374781A1 (en) 2002-06-28 2005-10-31 Idenix (Cayman) Limited 2'-c-methyl-3'-o-l-valine ester ribofuranosyl cytidine for treatment of flaviviridae infections
KR20050055630A (ko) 2002-06-28 2005-06-13 이데닉스 (케이만) 리미티드 플라비비리다에 감염 치료를 위한 1'-, 2'- 및 3'-변형된뉴클레오시드 유도체
US7608600B2 (en) 2002-06-28 2009-10-27 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Modified 2′ and 3′-nucleoside prodrugs for treating Flaviviridae infections
CN104193791A (zh) 2002-06-28 2014-12-10 埃迪尼克斯医药公司 用于治疗黄病毒感染的修饰的2’和3’-核苷前药
US6973905B2 (en) 2002-07-01 2005-12-13 Cinetic Automation Corporation Valve lash adjustment apparatus and method
BR0305426A (pt) 2002-07-01 2004-08-24 Upjohn Co Compostos inibidores de ns5b polimerase de hcv, bem como composição farmacêutica compreendendo os mesmos
US20040142993A1 (en) 2002-07-01 2004-07-22 Carlo Battistini Inhibitors of HCV NS5B polymerase
US20060264389A1 (en) 2002-07-16 2006-11-23 Balkrishen Bhat Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
AU2003261237A1 (en) 2002-07-24 2004-02-09 Ptc Therapeutics, Inc. Use of nucleoside compounds for nonsense suppression and the treatment of genetic diseases
US7323449B2 (en) 2002-07-24 2008-01-29 Merck & Co., Inc. Thionucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
US20050026853A1 (en) 2002-07-25 2005-02-03 Micrologix Biotech Inc. Anti-viral 7-deaza D-nucleosides and uses thereof
US7183302B2 (en) 2002-08-12 2007-02-27 Bristol-Myers Squibb Company Iminothiazolidinones as inhibitors of HCV replication
ES2547002T3 (es) 2002-09-13 2015-09-30 Novartis Ag Beta-L-2' desoxinucleósidos para el tratamiento de cepas de VHB resistentes
AU2003287160A1 (en) 2002-10-15 2004-05-04 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoles and their use as hcv inhibitors
US20040229840A1 (en) 2002-10-29 2004-11-18 Balkrishen Bhat Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
UA79834C2 (en) 2002-11-01 2007-07-25 Viropharma Inc Benzofuran compounds, compositions and methods for treatment and prophylaxis of hepatitis c viral infections and associated diseases
EP1576138B1 (en) 2002-11-15 2017-02-01 Idenix Pharmaceuticals LLC. 2'-methyl nucleosides in combination with interferon and flaviviridae mutation
TWI332507B (en) 2002-11-19 2010-11-01 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
JP5116972B2 (ja) 2002-12-12 2013-01-09 イデニクス（ケイマン）リミテツド ２’−分枝ヌクレオシドの製造方法
NZ540913A (en) 2002-12-23 2008-02-29 Idenix Cayman Ltd Process for the production of 3'-nucleoside prodrugs
JP4996241B2 (ja) 2003-01-14 2012-08-08 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 組み合わせ抗ウイルス治療のための組成物および方法
US7223785B2 (en) 2003-01-22 2007-05-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
NZ523970A (en) 2003-02-04 2005-02-25 Ind Res Ltd Process for preparing inhibitors of nucleoside phoshorylases and nucleosidases
WO2004080466A1 (en) 2003-03-07 2004-09-23 Ribapharm Inc. Cytidine analogs and methods of use
CN101415719A (zh) 2003-03-20 2009-04-22 微生物化学及药品有限公司 生产2’-脱氧-β-L-核苷的方法
US20040202993A1 (en) 2003-04-10 2004-10-14 Poo Ramon E. Apparatus and method for organ preservation and transportation
ATE422895T1 (de) 2003-04-16 2009-03-15 Bristol Myers Squibb Co Makrocyclische isochinolinpeptidinhibitoren des hepatitis-c-virus
SG182849A1 (en) 2003-04-25 2012-08-30 Gilead Sciences Inc Antiviral phosphonate analogs
US7452901B2 (en) 2003-04-25 2008-11-18 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate analogs
US7470724B2 (en) 2003-04-25 2008-12-30 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate compounds having immuno-modulatory activity
US7407965B2 (en) 2003-04-25 2008-08-05 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate analogs for treating metabolic diseases
US20050261237A1 (en) 2003-04-25 2005-11-24 Boojamra Constantine G Nucleoside phosphonate analogs
EP1620109A2 (en) 2003-04-25 2006-02-01 Gilead Sciences, Inc. Kinase inhibitor phosphonate conjugates
WO2004096235A2 (en) 2003-04-25 2004-11-11 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate analogs
WO2005002626A2 (en) 2003-04-25 2005-01-13 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic phosphonate compounds
US20040259934A1 (en) 2003-05-01 2004-12-23 Olsen David B. Inhibiting Coronaviridae viral replication and treating Coronaviridae viral infection with nucleoside compounds
WO2004096210A1 (en) 2003-05-01 2004-11-11 Glaxo Group Limited Acylated indoline and tetrahydroquinoline derivatives as hcv inhibitors
US20040229839A1 (en) 2003-05-14 2004-11-18 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Substituted nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
EP1656093A2 (en) 2003-05-14 2006-05-17 Idenix (Cayman) Limited Nucleosides for treatment of infection by corona viruses, toga viruses and picorna viruses
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
BR122018015050B1 (pt) 2003-05-30 2021-07-13 Gilead Pharmasset Llc Derivados fosfatados de nucleosídeo e composição farmacêutica dos mesmos
EP1644479A4 (en) 2003-06-16 2008-04-23 Mark W Grinstaff MACROMOLECULES AND FUNCTIONAL SYNTHETIC MOLECULES FOR GENES ADMINISTRATION
CN1809582A (zh) 2003-06-19 2006-07-26 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 制备4＇－叠氮基核苷衍生物的方法
DE10331239A1 (de) 2003-07-10 2005-02-03 Robert Bosch Gmbh Überwachungselektronik für einen Elektromotor und Verfahren zur Überwachung eines Elektromotors
GB0317009D0 (en) 2003-07-21 2003-08-27 Univ Cardiff Chemical compounds
CN1852915A (zh) 2003-07-25 2006-10-25 艾登尼科斯（开曼）有限公司 治疗包括丙型肝炎的黄病毒科病毒所致疾病的嘌呤核苷类似物
EP1660511B1 (en) 2003-08-27 2010-11-03 Biota Scientific Management Pty. Ltd. Novel tricyclic nucleosides or nucleotides as therapeutic agents
TW200526686A (en) 2003-09-18 2005-08-16 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
US20050148534A1 (en) 2003-09-22 2005-07-07 Castellino Angelo J. Small molecule compositions and methods for increasing drug efficiency using compositions thereof
US7491794B2 (en) 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
BRPI0415373A (pt) 2003-10-14 2006-12-12 Intermune Inc ácidos carboxìlicos macrocìclicos e acilsulfonamidas como inibidores de replicação de hcv
US7026339B2 (en) 2003-11-07 2006-04-11 Fan Yang Inhibitors of HCV NS5B polymerase
TW200528459A (en) 2004-01-06 2005-09-01 Achillion Pharmaceuticals Inc Azabenzofuran substituted thioureas; inhibitors of viral replication
US20070155731A1 (en) 2004-01-28 2007-07-05 Gabor Butora Aminocyclopentyl pyridopyrazinone modulators of chemokine receptor activity
AU2005216971A1 (en) 2004-02-25 2005-09-09 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Office Of Technology Transfer Methylation inhibitor compounds
CN100384237C (zh) 2004-02-28 2008-04-23 鸿富锦精密工业（深圳）有限公司 音量调整装置及方法
WO2005087788A2 (en) 2004-03-04 2005-09-22 The Regents Of The University Of California Methods for preparation of nucleoside phosphonate esters
GEP20104926B (en) 2004-03-30 2010-03-25 Intermune Inc Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
GB0408995D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Glaxo Group Ltd Compounds
CA2568379A1 (en) 2004-06-15 2005-12-29 Merck & Co., Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
US20060040944A1 (en) 2004-06-23 2006-02-23 Gilles Gosselin 5-Aza-7-deazapurine derivatives for treating Flaviviridae
CN1972696B (zh) * 2004-06-24 2010-08-11 默沙东公司 用于治疗rna依赖性rna病毒感染的核苷氨基磷酸芳基酯
US7217523B2 (en) 2004-07-02 2007-05-15 Regents Of The University Of Minnesota Nucleoside phosphoramidates and nucleoside phosphoramidases
PL1773856T3 (pl) 2004-07-21 2013-01-31 Gilead Pharmasset Llc Sposób otrzymywania alkilo-podstawionych 2-deoksy-2-fluoro-D-rybofuranozylo-pirymidyn i -puryn oraz ich pochodnych
CN101023094B (zh) 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
US7871991B2 (en) 2004-07-27 2011-01-18 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate analogs of HIV inhibitor compounds
US7153848B2 (en) 2004-08-09 2006-12-26 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of HCV replication
US7348425B2 (en) 2004-08-09 2008-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of HCV replication
KR100847181B1 (ko) 2004-08-23 2008-07-17 에프. 호프만-라 로슈 아게 이종환 항바이러스 화합물
ES2327252T3 (es) 2004-08-23 2009-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag 4'-azido nucleosidos antivirales.
WO2006029081A2 (en) 2004-09-02 2006-03-16 Neopharm, Inc. Nucleoside-lipid conjugates, their method of preparation and uses thereof
ES2725457T3 (es) 2004-09-14 2019-09-24 Gilead Pharmasset Llc Preparación de ribofuranosil pirimidinas y purinas 2'fluoro-2'-alquil-sustituidas u otras opcionalmente sustituidas y sus derivados
AU2005289517A1 (en) 2004-09-24 2006-04-06 Centre National De La Recherche Scientifique Methods and compositions for treating flaviviruses, pestiviruses and hepacivirus
CN100594903C (zh) 2004-09-30 2010-03-24 泰博特克药品有限公司 Hcv抑制性双环嘧啶
AU2005317081A1 (en) 2004-10-21 2006-06-22 Merck & Co., Inc. Fluorinated pyrrolo[2,3-d]pyrimidine nucleosides for the treatment of RNA-dependent RNA viral infection
WO2006050161A2 (en) 2004-10-29 2006-05-11 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic furopyrimidines and thienopyrimidines
WO2006063149A1 (en) 2004-12-09 2006-06-15 Regents Of The University Of Minnesota Nucleosides with antiviral and anticancer activity
GB0427123D0 (en) 2004-12-11 2005-01-12 Apv Systems Ltd Food item coating apparatus and method
WO2006065590A2 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Xtl Biopharmaceuticals Inc. Pyridine and pyrimidine antiviral compositions
WO2006063717A2 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Febit Biotech Gmbh Polymerase-independent analysis of the sequence of polynucleotides
WO2006093801A1 (en) 2005-02-25 2006-09-08 Abbott Laboratories Thiadiazine derivatives useful as anti-infective agents
CN101142226A (zh) 2005-02-28 2008-03-12 健亚生物科技公司 用于治疗病毒感染的三环核苷化合物
GB0505781D0 (en) 2005-03-21 2005-04-27 Univ Cardiff Chemical compounds
WO2006100310A1 (en) 2005-03-25 2006-09-28 Tibotec Pharmaceuticals Ltd Heterobicylic inhibitors of hcv
WO2006116557A1 (en) 2005-04-25 2006-11-02 Genelabs Technologies, Inc. Nucleoside compounds for treating viral infections
WO2006121820A1 (en) 2005-05-05 2006-11-16 Valeant Research & Development Phosphoramidate prodrugs for treatment of viral infection
AR056347A1 (es) 2005-05-12 2007-10-03 Tibotec Pharm Ltd Uso de compuestos de pteridina para fabricar medicamentos y composiciones farmaceuticas
TW200716631A (en) 2005-05-12 2007-05-01 Tibotec Pharm Ltd Pyrido[2,3-d]pyrimidines useful as HCV inhibitors, and methods for the preparation thereof
WO2007027248A2 (en) 2005-05-16 2007-03-08 Valeant Research & Development 3', 5' - cyclic nucleoside analogues for treatment of hcv
US8143288B2 (en) 2005-06-06 2012-03-27 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of HCV replication
TWI375560B (en) 2005-06-13 2012-11-01 Gilead Sciences Inc Composition comprising dry granulated emtricitabine and tenofovir df and method for making the same
TWI471145B (zh) 2005-06-13 2015-02-01 Bristol Myers Squibb & Gilead Sciences Llc 單一式藥學劑量型
WO2007002191A2 (en) 2005-06-22 2007-01-04 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Methods for the preparation of 9-deazapurine derivatives
US20060293752A1 (en) 2005-06-27 2006-12-28 Missoum Moumene Intervertebral disc prosthesis and associated methods
CN101263156A (zh) 2005-07-25 2008-09-10 因特蒙公司 C型肝炎病毒复制的新颖大环抑制剂
CN101277682B (zh) 2005-07-28 2015-07-29 Isp投资有限公司 无定形依发韦仑及其生产
CN101282978B (zh) 2005-07-29 2012-07-11 泰博特克药品有限公司 丙型肝炎病毒的大环抑制剂
WO2007013047A2 (en) 2005-07-29 2007-02-01 Ranbaxy Laboratories Limited Water-dispersible anti-retroviral pharmaceutical compositions
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
WO2007014920A1 (en) 2005-07-29 2007-02-08 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus
US7666834B2 (en) 2005-07-29 2010-02-23 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Macrocyclic inhibitors of hepatitis C virus
JP5171624B2 (ja) 2005-07-29 2013-03-27 テイボテク・フアーマシユーチカルズ Ｃ型肝炎ウイルスの大環状阻害剤
GB0519488D0 (en) 2005-09-23 2005-11-02 Glaxo Group Ltd Compounds
GB0519478D0 (en) 2005-09-23 2005-11-02 Glaxo Group Ltd Compounds
JP2009510075A (ja) 2005-09-26 2009-03-12 ファーマセット，インコーポレイティド 抗ウイルス剤としての修飾４’−ヌクレオシド
NZ568909A (en) 2005-12-09 2011-10-28 Hoffmann La Roche Antiviral 4-fluoro-4-methyl nucleoside prodrugs
AU2006326494A1 (en) 2005-12-12 2007-06-21 Genelabs Technologies, Inc. N-(6-membered aromatic ring)-amido anti-viral compounds
NZ544187A (en) 2005-12-15 2008-07-31 Ind Res Ltd Deazapurine analogs of 1'-aza-l-nucleosides
NZ569817A (en) 2005-12-21 2011-10-28 Abbott Lab Anti-viral compounds
GB0602046D0 (en) 2006-02-01 2006-03-15 Smithkline Beecham Corp Compounds
WO2007092000A1 (en) 2006-02-06 2007-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hcv replication
WO2007095269A2 (en) 2006-02-14 2007-08-23 Merck & Co., Inc. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
CN101384609A (zh) * 2006-02-14 2009-03-11 默克公司 用于治疗rna依赖性rna病毒感染的氨基磷酸（核苷）（芳基）酯
KR20080085232A (ko) 2006-02-17 2008-09-23 화이자 리미티드 Ｔｌｒ7 조절제로서 3-데아자퓨린 유도체
US8895531B2 (en) 2006-03-23 2014-11-25 Rfs Pharma Llc 2′-fluoronucleoside phosphonates as antiviral agents
JP5205370B2 (ja) 2006-05-25 2013-06-05 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー シクロプロピル縮合インドロベンゾアゼピンｈｃｖｎｓ５ｂ阻害剤
CA2653374A1 (en) 2006-07-07 2008-01-24 Manoj C. Desai Modulators of pharmacokinetic properties of therapeutics
EP2043613A1 (en) 2006-07-14 2009-04-08 Fmc Corporation Solid form
EP1881001A1 (en) 2006-07-20 2008-01-23 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. HCV NS-3 serine protease inhibitors
TW200815384A (en) 2006-08-25 2008-04-01 Viropharma Inc Combination therapy method for treating hepatitis C virus infection and pharmaceutical compositions for use therein
US8912321B2 (en) 2006-10-10 2014-12-16 Gilead Pharmasset Llc Preparation of nucleosides ribofuranosyl pyrimidines
PL216525B1 (pl) 2006-10-17 2014-04-30 Ct Badań Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk 5'-O-[(N-acylo)amidoditiofosforano] nukleozydy oraz sposób wytwarzania 5'-O-[(N-acylo)amidofosforano]-,5'-O-[(N-acylo)amidotiofosforano]-, 5'-O-[(N-acylo)amidoditiofosforano]nukleozydów
GB0623493D0 (en) 2006-11-24 2007-01-03 Univ Cardiff Chemical compounds
JP2010513484A (ja) 2006-12-20 2010-04-30 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション Ｒｎａ依存性ｒｎａウイルス感染治療用ヌクレオシド環状ホスホロアミデート
US7951789B2 (en) 2006-12-28 2011-05-31 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
WO2008085508A2 (en) 2007-01-05 2008-07-17 Merck & Co., Inc. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
CN101765369A (zh) 2007-03-19 2010-06-30 俄勒冈州由俄勒冈州立大学代表州高等教育委员会行使 曼尼希碱n-氧化物药物
GB0709791D0 (en) 2007-05-22 2007-06-27 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
CN100532388C (zh) 2007-07-16 2009-08-26 郑州大学 2’-氟-4’-取代-核苷类似物、其制备方法及应用
CN101108870A (zh) * 2007-08-03 2008-01-23 冷一欣 核苷磷酸酯类化合物及制备方法和应用
EP2188296A1 (en) 2007-08-31 2010-05-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Compounds for inhibiting wip1, prodrugs and compositions thereof, and related methods
JO2778B1 (en) 2007-10-16 2014-03-15 ايساي انك Certain vehicles, installations and methods
US20090318380A1 (en) 2007-11-20 2009-12-24 Pharmasset, Inc. 2',4'-substituted nucleosides as antiviral agents
WO2009086192A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Alios Biopharma, Inc. Biodegradable phosphate protected nucleotide derivatives and their use as cancer, anti viral and anti parasitic agents
US8227431B2 (en) 2008-03-17 2012-07-24 Hetero Drugs Limited Nucleoside derivatives
US20110130440A1 (en) 2008-03-26 2011-06-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Non-natural ribonucleotides, and methods of use thereof
EP3042660A3 (en) 2008-04-15 2016-10-26 RFS Pharma, LLC. Nucleoside derivatives for treatment of caliciviridae infections, including norovirus infections
PL2937350T3 (pl) 2008-04-23 2018-06-29 Gilead Sciences, Inc. 1'-podstawione analogi karba-nukleozydów do leczenia przeciwwirusowego
US7964560B2 (en) 2008-05-29 2011-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
WO2010042834A1 (en) 2008-10-09 2010-04-15 Anadys Pharmaceuticals, Inc. A method of inhibiting hepatitis c virus by combination of a 5,6-dihydro-1h-pyridin-2-one and one or more additional antiviral compounds
AU2009329867B2 (en) * 2008-12-23 2015-01-29 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
CN102753563A (zh) 2008-12-23 2012-10-24 吉利德制药有限责任公司 核苷类似物
KR20110104074A (ko) 2008-12-23 2011-09-21 파마셋 인코포레이티드 퓨린 뉴클레오시드의 합성
WO2010080878A1 (en) 2009-01-07 2010-07-15 Scynexis, Inc. Combination of a cyclosporine derivative and nucleosides for treating hcv
JP2012514657A (ja) * 2009-01-09 2012-06-28 ユニバーシテイ・カレツジ・オブ・カーデイフ・コンサルタンツ・リミテツド ウィルス感染を治療するためのグアノシンヌクレオシド化合物のホスホルアミダート誘導体
WO2010133569A1 (en) 2009-05-20 2010-11-25 Glaxo Group Limited Azabicyclo[4.1.0]heptane derivatives
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
US8719767B2 (en) 2011-03-31 2014-05-06 Commvault Systems, Inc. Utilizing snapshots to provide builds to developer computing devices
US7973013B2 (en) 2009-09-21 2011-07-05 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
ME02656B (me) * 2009-09-21 2017-06-20 Gilead Sciences Inc 2' -fluoro supstituisani karba-nukleozidni analozi za antiviralno lečenje
US8563530B2 (en) 2010-03-31 2013-10-22 Gilead Pharmassel LLC Purine nucleoside phosphoramidate
EP2752422B1 (en) 2010-03-31 2017-08-16 Gilead Pharmasset LLC Stereoselective synthesis of phosphorus containing actives
US20120107278A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Pharmasset, Inc. Abbreviated hcv therapy for hcv infected patients with il28b c/c genotype

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070042988A1 (en) * 2005-08-15 2007-02-22 Roche Palo Alto Llc Antiviral phosphoramidates
WO2008121634A2 (en) * 2007-03-30 2008-10-09 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
WO2010135569A1 (en) * 2009-05-20 2010-11-25 Pharmasset, Inc. N- [ (2 ' r) -2 ' -deoxy-2 ' -fluoro-2 ' -methyl-p-phenyl-5 ' -uridylyl] -l-alanine 1-methylethyl ester and process for its production

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MICHAEL J. SOFIA, BAO DONGHUI, CHANG WONSUK, DU JINFA, NAGARATHNAM DHANAPALAN, RACHAKONDA SUGUNA, REDDY P. GANAPATI, ROSS BRUCE S.: "Discovery of a beta-D-2'-Deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-beta-C-methyluridine Nucleotide Prodrug (PSI-7977) for the Treatment of Hepatitis C Virus", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 53, no. 19, 14 October 2010 (2010-10-14), pages 7202 - 7218, XP055004442, ISSN: 00222623, DOI: 10.1021/jm100863x *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11963973B2 (en) 2019-02-01 2024-04-23 Hemispherian As Deoxy-cytidine or uridine derivatives for use in cancer therapies

Also Published As

Publication number Publication date
MX350725B (es) 2017-09-14
CN104017020B (zh) 2017-04-12
SG184324A1 (en) 2012-11-29
NZ603232A (en) 2015-02-27
KR20130064064A (ko) 2013-06-17
CL2011000716A1 (es) 2012-04-20
EA201290988A1 (ru) 2013-04-30
ES2638350T3 (es) 2017-10-19
CR20120534A (es) 2013-02-05
WO2011123668A3 (en) 2012-05-24
CO6630166A2 (es) 2013-03-01
HK1251578A1 (zh) 2019-02-01
IL222174A (en) 2016-06-30
EA201290993A1 (ru) 2013-04-30
KR101715981B1 (ko) 2017-03-13
CO6630167A2 (es) 2013-03-01
ZA201207799B (en) 2014-03-26
ZA201400249B (en) 2016-08-31
ES2516466T3 (es) 2014-10-30
WO2011123668A2 (en) 2011-10-06
UA122959C2 (uk) 2021-01-27
JP2013527145A (ja) 2013-06-27
JP2013523767A (ja) 2013-06-17
HK1181775A1 (en) 2013-11-15
CY1119273T1 (el) 2018-02-14
EP2752422A1 (en) 2014-07-09
AR080819A1 (es) 2012-05-09
ES2644990T3 (es) 2017-12-01
AU2011235112B2 (en) 2015-07-09
RS54368B1 (en) 2016-04-28
CA2794671C (en) 2018-05-01
JP2015205903A (ja) 2015-11-19
JP6106716B2 (ja) 2017-04-05
AP3515A (en) 2016-01-11
DK2609923T3 (en) 2017-09-18
WO2011123645A2 (en) 2011-10-06
TW201136593A (en) 2011-11-01
TWI498117B (zh) 2015-09-01
CA2794671A1 (en) 2011-10-06
HRP20151075T1 (hr) 2015-12-04
WO2011123645A3 (en) 2011-12-29
SG184323A1 (en) 2012-11-29
TW201139457A (en) 2011-11-16
HK1178171A1 (en) 2013-09-06
PE20130183A1 (es) 2013-02-21
CN104017020A (zh) 2014-09-03
LT2609923T (lt) 2017-09-11
MX2012011171A (es) 2013-02-01
ECSP12012282A (es) 2013-05-31
BR112012024923A2 (pt) 2016-06-14
ES2900773T3 (es) 2022-03-18
AP2012006543A0 (en) 2012-10-31
US8859756B2 (en) 2014-10-14
CN102906102A (zh) 2013-01-30
JP6058528B2 (ja) 2017-01-11
PL2552930T3 (pl) 2016-02-29
CL2011000718A1 (es) 2012-04-09
IL222099A (en) 2017-09-28
HUE034239T2 (en) 2018-02-28
CR20120532A (es) 2013-02-05
ES2551944T3 (es) 2015-11-24
ZA201207800B (en) 2013-05-29
EP2552930B1 (en) 2015-08-26
CN102858790A (zh) 2013-01-02
AR080870A1 (es) 2012-05-16
MX2012011324A (es) 2013-02-21
DK2552930T3 (en) 2015-12-07
EA026341B9 (ru) 2021-12-27
UY33311A (es) 2011-10-31
PT3290428T (pt) 2021-12-27
PT2552930E (pt) 2015-11-17
EP2552931A2 (en) 2013-02-06
AP2012006535A0 (en) 2012-10-31
EP2552930A2 (en) 2013-02-06
AU2011235044A1 (en) 2012-11-22
KR20120138242A (ko) 2012-12-24
SMT201500285B (it) 2016-01-08
BR112012024884A2 (pt) 2016-10-18
PE20130151A1 (es) 2013-02-21
HUE026235T2 (en) 2016-06-28
US20110245484A1 (en) 2011-10-06
EP2552931B1 (en) 2014-07-23
HRP20171267T1 (hr) 2017-10-20
KR101759369B1 (ko) 2017-07-18
HK1199645A1 (en) 2015-07-10
SI3290428T1 (sl) 2022-01-31
PT2752422T (pt) 2017-11-07
SG10201702025SA (en) 2017-04-27
EP2752422B1 (en) 2017-08-16
PT2609923T (pt) 2017-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA026341B1 (ru) Кристаллическая форма нуклеозидфосфорамидата
ES2927501T3 (es) Forma cristalina de sofosbuvir
EP2609923B1 (en) Process for the crystallisation of (s)-isopropyl 2-(((s)-(perfluorophenoxy)(phenoxy)phosphoryl)amino)propanoate
CA2794669C (en) Nucleoside phosphoramidates
AU2014274548B2 (en) N- [ (2 &#39; R) -2 &#39; -deoxy-2 &#39; -fluoro-2 &#39; -methyl-p-phenyl-5 &#39; -uridylyl] -L-alanine 1-methylethyl ester and process for its production
BR122013004621A2 (pt) fosforamidatos de nucleosídeo, seus processos de preparação, sua composição e seu uso
BR122013007556A2 (pt) compostos de fosforamidatos de nucleosídeo e processos para preparação destes compostos

Legal Events

Date Code Title Description
ND4A Extension of term of a eurasian patent
ND4A Extension of term of a eurasian patent
QB4A Registration of a licence in a contracting state
QB4A Registration of a licence in a contracting state
TH4A Publication of the corrected specification to eurasian patent