CN101384609A - 用于治疗rna依赖性rna病毒感染的氨基磷酸（核苷）（芳基）酯 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了结构式(I)的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯，其是RNA依赖性RNA病毒聚合酶抑制剂的前体。这些化合物是RNA依赖性的RNA病毒复制抑制剂的前体，并且可以用于治疗RNA依赖性的RNA病毒感染。它们特别可用作丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶抑制剂的前体、HCV复制抑制剂的前体和/或用于治疗丙型肝炎感染。本发明还描述了含有这种氨基磷酸(核苷)(芳基)酯的药物组合物，其中所述氨基磷酸(核苷)(芳基)酯是单独或与其它抗RNA依赖性的RNA病毒感染，尤其是HCV感染的活性剂结合使用的。本发明还公开了使用本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯抑制RNA依赖性RNA聚合酶、抑制RNA依赖性RNA病毒复制和/或治疗RNA依赖性RNA病毒感染的方法。
Description
技术领域
本发明涉及氨基磷酸(核苷)(芳基)酯、它们的合成以及作为RNA依赖性RNA病毒聚合酶抑制剂前体的用途。本发明的化合物是RNA依赖性RNA病毒复制抑制剂的前体，并且可以用于治疗RNA依赖性RNA病毒感染。它们特别可用作丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶的抑制剂的前体、HCV复制抑制剂的前体以及用于治疗丙型肝炎感染。
发明背景
丙型肝炎病毒(HCV)感染是引起慢性肝病例如肝硬化和肝细胞癌的一个主要健康问题，受感染者的人数估计占世界人口的2-15％，根据美国疾病控制中心报道，在美国估计有4.5百万人感染。根据世界卫生组织报道，全世界有超过2亿的感染人群，且每年至少有3-4百万人感染。一旦感染，约20％的人清除病毒，但在其余的受感染者中，HCV却存留一生。百分之十到二十的长期被感染者最后发展为肝脏损伤性的肝硬化或癌症。该病毒性疾病通过受污染的血液和血液制品、受污染的针而经肠胃外传播，或者通过性途径以及由受感染母体或母体携带者通过垂直途径传染给后代。目前对于HCV感染的治疗方法仅限于单独使用重组干扰素-α或组合使用重组干扰素-α与核苷类似物三氮唑核苷，它们的临床效果都是有限的。此外，对于HCV还没有已建立的疫苗。因此，急需有效抵抗慢性HCV感染的改良治疗剂。有关HCV感染治疗技术的现有技术综述参见：B.Dymock，等人，“Novel approaches to thetreatment of hepatitis C virus infection，”Antiviral Chemistry & Chemotherapy，11：79-96(2000)；H. Rosen，等人，“Hepatitis C virus：current understanding and prospects for future therapies，”Molecular Medicine Today，5：393-399(1999)；D.Moradpour，等人，“Current andevolving therapies for hepatitis C，”European J.Gastroenterol.Hepatol.，11：1189-1202(1999)；R.Bartenschlager，“Candidate Targets for HepatitisC Virus-Specific Antiviral Therapy，”Intervirology，40：378-393(1997)；G.M.Lauer和B.D.Walker，“Hepatitis C Virus Infection，”N.Engl.J.Med.，345：41-52(2001)；B.W.Dymock，“Emerging therapies for hepatitis C virusinfection，”Emerging Drugs，6：13-42(2001)；以及C.Crabb，“Hard-WonAdvances Spark Excitement about Hepatitis C，”Science：506-507(2001)；其全部内容在此被引为参考。
目前已经采取了不同的HCV治疗方法，包括抑制病毒性丝氨酸蛋白酶(NS3蛋白酶)、解旋酶和RNA依赖性BNA聚合酶(NS5B)以及开发疫苗。
HCV病毒是一种具有单个寡核糖核苷酸基因组序列的有包膜的正链RNA病毒，其中所述寡核糖核苷酸基因组序列具有约9600个碱基，其编码了一个具有约3,010个氨基酸的多蛋白。HCV基因的蛋白质产物由结构性蛋白质C、E1和E2以及非结构性蛋白质NS2、NS3、NS4A和NS4B以及NS5A和NS5B组成。据信非结构性(NS)蛋白为病毒复制提供了催化机构。NS3蛋白酶从多蛋白链释放NS5B，RNA依赖性RNA聚合酶。HCV NS5B聚合酶是由其作为HCV复制循环模板的单链病毒RNA合成双链RNA所必需的。因此，NS5B聚合酶被认为是HCV复制循环中的必要成分[参见K.Ishi，等人，“Expression of Hepatitis C VirusNS5B Protein：Characterization of Its RNA Polymerase Activity and RNABin二ng，”Hepatology，29：1227-1235(1999)以及V.Lohmann，等人，“Biochemical and Kinetic Analyses of NS5B RNA-Dependent RNAPolymerase of the Hepatitis C Virus，”Virology，249：108-118(1998)]。对HCV NS5B聚合酶的抑制阻止了双链HCVRNA的形成，并因此构成了一种诱人的开发HCV特异性抗病毒疗法的方法。
有关具有治疗HCV感染潜在作用的HCV NS5B聚合酶抑制剂的开发的综述参见M.P Walker等人，“Promising candidates for the treatmentof chronic hepatitis C，”Expert Opin.Invest.Drugs，12：1269-1280(2003)以及P.Hoffmann等人，“Recent patents on experimental therapy forhepatitis C virus infection(1999-2002)，”Expert Opin.Ther.Patents，”13：1707-1723(2003)。A.E.Eldrup等人，“Structure-Activity Relationship ofPurine Ribonucleosides for Inhibition of HCV RNA-Dependent RNAPolymerase，”J.Med.Chem.，47：2283-2295(2004)报道了嘌呤核糖核苷抗HCV聚合酶的活性。仍然需要在结构上不同的核苷衍生物，作为用于HCV治疗的治疗性疗法中的HCV聚合酶抑制剂。
现已发现本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯是RNA依赖性RNA病毒复制，特别是HCV复制的有效的抑制剂的前体。所述氨基磷酸酯在体内转化为它们的核苷5’-磷酸(核苷酸)衍生物，后者转化为相应的核苷5’-三磷酸衍生物，所述核苷5’-三磷酸衍生物是RNA依赖性RNA病毒聚合酶，特别是HCV NS5B聚合酶的抑制剂。本发明的氨基磷酸核苷酯可以用于治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是HCV感染。
因此，本发明的一个目的在于提供氨基磷酸(核苷)(芳基)酯，其被用作RNA依赖性RNA病毒聚合酶的抑制剂的前体，特别是用作HCV NS5B聚合酶的抑制剂的前体。
本发明的另一个目的在于提供氨基磷酸(核苷)(芳基)酯，其被用作RNA依赖性RNA病毒复制抑制剂的前体，特别用作丙型肝炎病毒复制抑制剂的前体。
本发明的另一个目的在于提供氨基磷酸(核苷)(芳基)酯，其被用于治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是用于治疗HCV感染。
本发明的另一个目的在于提供药物组合物，其包含与药学上可接受的载体缔合的本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯。
本发明的另一个目的在于提供药物组合物，其包含用作RNA依赖性RNA病毒聚合酶抑制剂的前体，特别是用作HCV NS5B聚合酶抑制剂的前体的本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯。
本发明的另一个目的在于提供药物组合物，其包含用作RNA依赖性RNA病毒复制抑制剂的前体，特别是用作HCV复制抑制剂的前体的本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯。
本发明的另一个目的在于提供用于治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是用于治疗HCV感染的药物组合物，其包含本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯。
本发明的另一个目的在于提供药物组合物，其包含与其它抗RNA依赖性RNA病毒，特别是抗HCV的活性剂组合的本发明氨基磷酸(核苷)(芳基)酯。
本发明的另一个目的在于提供抑制RNA依赖性RNA病毒聚合酶，特别是抑制HCV NS5B聚合酶的方法。
本发明的另一个目的在于提供抑制RNA依赖性RNA病毒复制，特别是抑制HCV复制的方法。
本发明的另一个目的在于提供治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是治疗HCV感染的方法。
本发明的另一个目的在于提供与其它的抗RNA依赖性RNA病毒活性剂组合治疗RNA依赖性RNA病毒感染的方法，特别是与其它抗HCV活性剂组合治疗HCV感染的方法。
本发明的另一个目的在于提供用作药物用于抑制RNA依赖性RNA病毒复制和/或治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是用于抑制HCV复制和/或治疗HCV感染的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯及其药物组合物。
本发明的另一个目的在于提供本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯及其药物组合物在制造用于抑制RNA依赖性RNA病毒复制和/或治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是用于抑制HCV复制和/或治疗HCV感染的药物中的用途。
通过下述详细说明，上述及其它目的将变得显而易见。
发明概述
本发明涉及下述立体化学构型所表示的结构式I化合物：
及其药学上可接受的盐；其中
n是0、1或2；
Ar是苯基、萘基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚基、喹啉基或异喹啉基，其中Ar任选地被一到五个独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、氰基、硝基、氨基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基的取代基所取代；
R1是氢或氟；
R2是氟、甲氧基或OR10；
R3选自氢、C1-16烷基羰基、C2-18烯基羰基、C1-10烷氧基羰基、C3-6环烷基羰基、C3-6环烷氧基羰基以及如下结构式的氨基酰基残基：
R10选自氢、C1-16烷基羰基、C2-18烯基羰基、C1-10烷氧基羰基、C3-6环烷基羰基、C3-6环烷氧基羰基以及如下结构式的氨基酰基残基
或者R3和R10和与它们相连的氧原子一起形成五员环状碳酸酯；
R4是氢、C1-5烷基、苯基或苄基；
其中烷基任选地被一个选自氟、羟基、甲氧基、氨基、羧基、氨基甲酰基、胍基、巯基、甲硫基、1H-咪唑基和1H-吲哚-3-基的取代基所取代；并且其中苯基和苄基任选地被一到两个独立地选自卤素、羟基和甲氧基的取代基所取代；
R5是氢或甲基；
或者R4和R5和与它们相连的碳原子一起形成3-到6-员脂肪族螺环系统；
R6是氢、C1-16烷基、C2-20烯基、(CH2)nC3-6环烷基、苯基、苄基或金刚烷基；其中烷基、烯基、环烷基和金刚烷基任选地被一到三个独立地选自卤素、羟基、羧基、C1-4烷氧基的取代基所取代；并且其中苯基和苄基任选地被一到三个独立地选自卤素、羟基、氰基、C1-4烷氧基、三氟甲基和三氟甲氧基的取代基所取代；
R7是氢、C1-5烷基或苯基C0-2烷基；
R8是氢、C1-4烷基、C1-4酰基、苯甲酰基、C1-4烷氧基羰基、苯基C0-2烷氧基羰基、C1-4烷氨基羰基、苯基C0-2烷氨基羰基、C1-4烷基磺酰基或苯基C0-2烷基磺酰基；并且
R9是氢、C1-8烷基羰基或C1-8烷氧基羰基。
式I化合物可以用作RNA依赖性RNA病毒聚合酶，特别是HCVNS5B聚合酶抑制剂的前体。它们也是RNA依赖性RNA病毒复制，特别是HCV复制的抑制剂的前体，并且可以用于治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是用于治疗HCV感染。
不限于它们的作用机制，本发明的氨基磷酸芳基酯是作为相应的核苷5’-单磷酸酯的前体而发挥作用的。内源性激酶将5’-单磷酸酯转变成其5’-三磷酸酯衍生物，后者是RNA依赖性RNA病毒聚合酶的抑制剂。因此，氨基磷酸芳基酯比核苷本身具有更有效的靶细胞穿透力，可能对代谢降解的敏感性更小，并能够靶向特定组织，例如肝脏，从而导致更广泛的治疗指数，允许降低抗病毒试剂的总剂量。
本发明还包括包含单独的化合物或与其它抗RNA依赖性RNA病毒活性剂，特别是抗HCV活性剂组合的该化合物的药物组合物，以及抑制RNA依赖性的RNA病毒复制和治疗RNA依赖性的RNA病毒感染的方法。
发明祥述
本发明涉及下述立体化学构型所表示的结构式I化合物：
及其药学上可接受的盐；其中
n是0、1或2；
Ar是苯基、萘基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚基、喹啉基或异喹啉基，其中Ar任选地被一到五个独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、氰基、硝基、氨基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基的取代基所取代；
R1是氢或氟；
R2是氟、甲氧基或OR10；
R3选自氢、C1-16烷基羰基、C2-18烯基羰基、C1-10烷氧基羰基、C3-6环烷基羰基、C3-6环烷氧基羰基以及如下结构式的氨基酰基残基：
R10选自氢、C1-16烷基羰基、C2-18烯基羰基、C1-10烷氧基羰基、C3-6环烷基羰基、C3-6环烷氧基羰基以及如下结构式的氨基酰基部分：
或者R3和R10和与它们相连的氧原子一起形成五员环状碳酸酯；
R4是氢、C1-5烷基、苯基或苄基；
其中烷基任选地被一个选自氟、羟基、甲氧基、氨基、羧基、氨基甲酰基、胍基、巯基、甲硫基、1H-咪唑基和1H-吲哚-3-基的取代基所取代；并且其中苯基和苄基任选地被一到两个独立地选自卤素、羟基和甲氧基的取代基所取代；
R5是氢或甲基；
或者R4和R5和与它们相连的碳原子一起形成3-到6-员脂肪族螺环系统；
R6是氢、C1-16烷基、C2-20烯基、(CH2)nC3-6环烷基、苯基、苄基或金刚烷基；其中烷基、烯基、环烷基和金刚烷基任选地被一到三个独立地选自卤素、羟基、羧基、C1-4烷氧基的取代基所取代；并且其中苯基和苄基任选地被一到三个独立地选自卤素、羟基、氰基、C1-4烷氧基、三氟甲基和三氟甲氧基的取代基所取代；
R7是氢、C1-5烷基或苯基C0-2烷基；
R8是氢、C1-4烷基、C1-4酰基、苯甲酰基、C1-4烷氧基羰基、苯基C0-2烷氧基羰基、C1-4烷氨基羰基、苯基C0-2烷氨基羰基、C1-4烷基磺酰基或苯基C0-2烷基磺酰基；并且
R9是氢、C1-8烷基羰基或C1-8烷氧基羰基。
式I化合物可以用作RNA依赖性RNA病毒聚合酶的抑制剂的前体。它们也是RNA依赖性RNA病毒复制的抑制剂的前体，并且可以用于治疗RNA依赖性RNA病毒感染。
在本发明化合物的一个实施方式中，R1是氢或氟，R2是羟基并且R3是氢。在该实施方式的一类中，R1是氢。
在本发明化合物的第二个实施方式中，R1是氢或氟，R2是氟并且R3是氢。在该实施方式的一类中，R1是氢。
在本发明化合物的第三个实施方式中，Ar是任选地被一到五个取代基所取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、氰基、硝基、氨基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基。在该实施方式的一类中，Ar是被三到五个取代基所取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、氰基、硝基、氨基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基。在该类的一个子类中，Ar是被三个取代基所取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、氰基、硝基、氨基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基。在该第三实施方式的另一类中，Ar是未取代的苯基。
在本发明化合物的第四个实施方式中，Ar是未取代的1-萘基。
在本发明化合物的第五个实施方式中，Ar是吲哚基。在该实施方式的一类中，Ar是1H-吲哚-5-基。
在本发明化合物的第六个实施方式中，R5是氢并且R4选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、2-甲基-1-丙基、羟甲基、氟代甲基、巯基甲基、羧基甲基、氨基甲酰基甲基、1-羟乙基、2-羧基乙基、2-氨基甲酰基乙基、2-甲硫基乙基、4-氨基-1-丁基、3-氨基-1-丙基、3-胍基-1-丙基、1H-咪唑-4-基甲基、苯基、苄基、4-羟基苄基和1H-吲哚-3-基甲基。在该实施方式的一类中，R4是甲基或苄基。在该类的一个子类中，R4是甲基。
在本发明化合物的第七个实施方式中，R6是C1-8烷基、环己基或环戊基。在该实施方式的一类中，R6是乙基或丁基。在该实施方式的另一类中，Ar是吲哚基。
在本发明化合物的第八个实施方式中，R6是C7-16烷基。在该实施方式的一类中，R6是C8-12烷基。在该类的一个子类中，R6是C8烷基。在该子类的子类中，R6是2-正丙基-戊-1-基。
在本发明化合物的第九个实施方式中，Ar是苯基或吲哚基，其各自任选地被一到三个选自卤素和C1-4烷基的取代基所取代；R6是乙基或丁基；并且R5是氢。在该实施方式的一类中，Ar是吲哚基。
在本发明化合物的第十个实施方式中，R4和R5都是甲基。
在本发明化合物的第十一个实施方式中，Ar是未取代的苯基并且R6是C8烷基。在该实施方式的一类中，R6是2-正丙基-戊-1-基。
用作RNA依赖性RNA病毒聚合酶的抑制剂的前体的本发明结构式I化合物的示例但非限定性例子如下所示：
和
及其药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施方式中，本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯可以用作正义单链RNA依赖性RNA病毒聚合酶的抑制剂、正义单链RNA依赖性RNA病毒复制的抑制剂和/或用于治疗正义单链RNA依赖性RNA病毒感染。在该实施方式的一类中，正义单链RNA依赖性RNA病毒是黄病毒科(Flaviviridae)病毒或小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)病毒。在该类的一个子类中，小核糖核酸病毒科病毒是鼻病毒、脊髓灰质炎病毒或甲型肝炎病毒，在该类的第二子类中，黄病毒科病毒包括丙型肝炎病毒、黄热病病毒、登革热病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、Banzi病毒和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)。在该子类的子类中，黄病毒科病毒为丙型肝炎病毒。
本发明的另一方面涉及在有此需要的哺乳动物中抑制RNA依赖性RNA病毒聚合酶的方法，抑制RNA依赖性BNA病毒复制的方法，和/或治疗RNA依赖性RNA病毒感染的方法，其包括用治疗有效量的结构式I化合物对所述哺乳动物进行给药。
在本发明该方面的一个实施方式中，RNA依赖性RNA病毒聚合酶是正义单链RNA依赖性RNA病毒聚合酶。在该实施方式的一类中，正义单链RNA依赖性RNA病毒聚合酶是黄病毒科病毒聚合酶或小核糖核酸病毒科病毒聚合酶。在该类的一个子类中，小核糖核酸病毒科病毒聚合酶是鼻病毒聚合酶、脊髓灰质炎病毒聚合酶或甲型肝炎病毒聚合酶。在该类的第二子类中，黄病毒科病毒聚合酶选自丙型肝炎病毒聚合酶、黄热病病毒聚合酶、登革热病毒聚合酶、西尼罗河病毒聚合酶、日本脑炎病毒聚合酶、Banzi病毒聚合酶和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)聚合酶。在该子类的子类中，黄病毒科病毒聚合酶为丙型肝炎病毒聚合酶。
在本发明该方面的第二个实施方式中，RNA依赖性RNA病毒复制是正义单链RNA依赖性RNA病毒复制。在该实施方式的一类中，正义单链RNA依赖性RNA病毒复制是黄病毒科病毒复制或小核糖核酸病毒科病毒复制。在该类的一个子类中，小核糖核酸病毒科病毒复制是鼻病毒复制、脊髓灰质炎病毒复制或甲型肝炎病毒复制。在该类的第二子类中，黄病毒科病毒复制选自丙型肝炎病毒复制、黄热病病毒复制、登革热病毒复制、西尼罗河病毒复制、日本脑炎病毒复制、Banzi病毒复制和牛病毒性腹泻病毒复制。在该子类的子类中，黄病毒科病毒复制为丙型肝炎病毒复制。
在本发明此方面的第三个实施方式中，RNA依赖性RNA病毒感染是正义单链RNA依赖性RNA病毒感染。在该实施方式的一类中，正义单链RNA依赖性RNA病毒感染是黄病毒科病毒感染或小核糖核酸病毒科病毒感染。在该类的一个子类中，小核糖核酸病毒科病毒感染是鼻病毒感染、脊髓灰质炎病毒感染或甲型肝炎病毒感染。在该类的第二子类中，黄病毒科病毒感染选自丙型肝炎病毒感染、黄热病病毒感染、登革热病毒感染、西尼罗河病毒感染、日本脑炎病毒感染、Banzi病毒感染和牛病毒性腹泻病毒感染。在该子类的子类中，黄病毒科病毒感染为丙型肝炎病毒感染。
在整个本申请中，下列术语具有如下的意义：
上述烷基意图包括具有指定长度的直链或支链构型的烷基。这样的烷基的例子是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基，戊基，异戊基、己基和异己基等。
术语“萘基”包括1-萘基(α-萘基)和2-萘基(β-萘基)。
术语“金刚烷基”包括1-金刚烷基和2-金刚烷基。
术语“任选取代的苄基”的意思是-CH2苯基，其中苯基部分是任选地被取代的。
术语“烯基”的意思是具有二到二十个总碳原子数，或该范围内任何碳原子数的直链或支链烯烃，(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基等)。
术语“环烷基”的意思是具有三到八个总碳原子数，或该范围内任何碳原子数的环状烷烃(即，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基)。
术语“烷氧基”是指具有规定碳原子数(例如，C1-4烷氧基)或该范围内任何碳原子数的直链或支链烷氧化物[即，甲氧基(MeO-)、乙氧基、异丙氧基等]。
术语“烷硫基”是指具有规定碳原子数(例如，C1-4烷硫基)或该范围内任何碳原子数的直链或支链烷基硫化物[即，甲硫基(MeS-)、乙硫基、异丙硫基等]。
术语“烷基氨基”是指具有规定碳原子数(例如，C1-4基氨基)或该范围内任何碳原子数的直链或支链烷基胺[即，甲氨基、乙氨基、异丙氨基、叔丁氨基等]。
术语“烷基磺酰基”是指具有规定碳原子数(例如，C1-6烷基磺酰基)或该范围内任何碳原子数的直链或支链烷基砜[即，甲磺酰(MeSO2-)、乙磺酰、异丙磺酰等]。
术语“烷氧基羰基”是指存在于本发明的化合物中的具有规定的碳原子数(例如，C1-8烷氧基羰基)或该范围内任何碳原子数的羧酸或氨基甲酸基团的直链或支链酯[即，甲氧基羰基(MeOCO-)、乙氧基羰基或丁氧基羰基]。
术语“烷基羰基”是指具有规定的碳原子数(例如，C1-8烷基羰基)或该范围内任何碳原子数的直链或支链烷基酰基[即，甲氧基羰基(MeOCO-)、乙氧基羰基或丁氧基羰基]。
术语“卤素”的意思是包括氟、氯、溴和碘的卤素原子。
术语“磷酰基”是指-P(O)(OH)2。
术语“二磷酰基”是指具有下列结构的基团：
术语“三磷酰基”是指具有下列结构的基团：
术语“五员环状碳酸酯环”表示通过用羰基化试剂，例如光气和1，1’-羰基二咪唑，酰化C-2和C-3羟基从而在核苷的呋喃糖环C-2和C-3位上形成的如下环系统：
在下式中，当R3和R10的氨基酰基残基的实施方式中的R7是取代基而不是氢时
该氨基酰基残基含有不对称中心，并且其意思是包括单独的R-和S-立体异构体以及RS-非对映异构体混合物。在一个实施方式中，立体碳上的立体化学对应于S-氨基酸的立体化学，即，天然存在的α-氨基酸的立体异构化学，其如下式所示：
术语“取代的”应当被认为是包括由命名的取代基进行的多重取代。当公开或要求保护了多重取代基部分时，被取代的化合物可以独立地被一个或多个公开或要求保护的取代基部分单次或多次取代。
术语“5’-三磷酸酯”是指本发明核苷化合物5’-羟基的三磷酸酯衍生物，其具有下列结构通II：
其中R1、R2、R3和R9如上所述。
术语“组合物”，例如在“药物组合物”中，意图包括：包含活性成分和构成载体的惰性成分的产品，以及通过组合、络合或聚集任何两种或多种所述成分，或者解离一种或多种所述成分，或者通过一种或多种所述成分的其它类型反应，直接或间接地得到的其它产品。因此，本发明的药物组合物包含由本发明的化合物与药学上可接受的载体混合制得的任何组合物。
术语化合物的“给药”和“给予”应当被理解为向所需个体提供本发明的化合物或本发明化合物的前药。
本发明的另一方面涉及将本发明的化合物与一种或多种用于治疗HCV感染的药剂组合使用来抑制HCV NS5B聚合酶、抑制HCV复制或者治疗HCV感染的方法。这样的抗HCV活性剂包括，但不限于：三氮唑核苷、左旋韦林、viramidine、硝唑尼特、胸腺素α-1、干扰素-β、干扰素-α、PEG化(聚乙二醇化)干扰素-α(PEG干扰素-α)、干扰素-α和三氮唑核苷的组合、PEG干扰素-α和三氮唑核苷的组合物、干扰素-α和左旋韦林的组合、PEG干扰素-α和左旋韦林的组合。干扰素-α包括，但不限于，重组干扰素-α2a(例如从Hoffmann-LaRoche，Nutley，NJ购得的Roferon干扰素)、聚乙二醇化干扰素-α2a(PegasysTM)、干扰素-α2b(例如从Schering Corp.，Kenilworth，NJ购得的Intron-A干扰素)、聚乙二醇化干扰素-α2b(PegIntronTM)、重组共有序列干扰素(consensusinterferon)(例如干扰素αcon-1)和纯化干扰素-α产品。Amgen’s重组共有序列干扰素的商品名是
。左旋韦林是三氮唑核苷的L-对映异构体，其显示具有类似于三氮唑核苷的免疫调节活性。Viramidine表示WO 01/60379(转让给ICN Pharmaceuticals)中公开的三氮唑核苷的类似物。根据本发明的方法，组合物的单个成分可以在治疗的不同时期分别给药或以分开的或单一组合物的形式同时给药。因此本发明应理解为包含这种同时或交替治疗的全部方案，且术语“给药”应做相应的解释。很明显，本发明的化合物与用于治疗HCV感染的其它药剂组合在原则上包括与任何用于治疗HCV感染的药物组合物的任何组合。当本发明的化合物或其药学上可接受的盐与第二抗HCV活性治疗剂组合使用时，每种化合物的剂量既可以与其单独使用时的剂量相同，也可以不同。
用于治疗HCV感染时，本发明的化合物还可以组合HCV NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂进行给药。HCV NS3丝氨酸蛋白酶是一种基本病毒酶，且其已经被描述为抑制HCV复制的优异标靶。HCV NS3蛋白酶抑制剂的底物和非底物基抑制剂公开于WO 98/22496、WO 98/46630、WO99/07733、WO 99/07734、WO 99/38888、WO 99/50230、WO 99/64442、WO 00/09543、WO 00/59929、GB-2337262、WO 02/18369、WO 02/08244、WO 02/48116、WO 02/48172、WO 05/037214和美国专利号6,323,180中。HCV NS3蛋白酶作为用于开发HCV复制抑制剂和用于治疗HCV感染的标靶的内容如B.W.Dymock，“Emerging therapies for hepatitis C virusinfection，”Emerging Drugs，6：13-42(2001)所述。与本发明化合物结合的具体HCV NS3蛋白酶抑制剂包括BILN2061、VX-950、SCH6、SCH7和SCH-503034。
三氮唑核苷、左旋韦林和viramidine可以通过抑制细胞内酶肌苷单磷酸酯脱氢酶(IMPDH)来调节细胞内鸟嘌呤核苷酸库，从而发挥它们的抗HCV作用。IMPDH是从头鸟嘌呤核苷酸生物合成路线上的限速酶。三氮唑核苷很容易细胞内磷酸化，且该单磷酸酯衍生物是一种IMPDH抑制剂。因此，抑制IMPDH代表了发现HCV复制抑制剂的另一个有用标靶。因此，本发明的化合物也可以与以下物质组合给药：IMPDH抑制剂，例如VX-497，其公开于WO 97/41211和WO 01/00622(转让给Vertex)中；另一种IMPDH抑制剂，如WO 00/25780(转让给Bristol-MyersSquibb)中所公开的；或mycophenolate mofetil[参见A.C.Allison和E.M.Eugui，Agents Action，44(Suppl.)：165(1993)]。
用于治疗HCV感染时，本发明的化合物还可以与抗病毒剂金刚烷胺(1-氨基金刚烷)[该药剂的详细说明参见J，Kirschbaum，Anal.Profiles Drug Subs.12：1-36(1983)]组合给药。
本发明的化合物还可与抗病毒2’-C-分支核糖核苷组合用于治疗HCV感染，所述2’-C-分支核糖核苷公开于R.E.Harry-O’kuru，等人，J.Org.Chem.，62：1754-1759(1997)；M.S.Wolfe，等人，Tetrahedron Lett.，36：7611-7614(1995)；美国专利No.3,480,613(Nov.25，1969)；美国专利No.6,777,395(Aug.17，2004)；美国专利No.6,914,054(July5，2005)；国际公开号WO 01/90121(29November2001)；WO 01/92282(6 December 2001)；WO 02/32920(25 April 2002)；WO 02/057287(25July 2002)；WO 02/057425(25 July 2002)；WO 04/002422(8 Jan.2004)；WO 04/002999(8 January 2004)；WO 04/003000(8 January 2004)；WO04/002422(8 January 2004)；美国专利申请2005/0107312；US2005/0090463；US 2004/0147464；和US 2004/0063658中；其全文在此引为参考。这样的2’-C-分支核糖核苷包括，但不限于，2’-C-甲基胞苷、2’-氟代-2’-C-甲基胞苷、2’-C-甲基尿苷、2’-C-甲基腺苷、2’-C-甲基鸟苷和9-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-2，6-二氨基嘌呤；呋喃糖C-2’、C-3’、C-5’羟基的相应氨基酸酯(例如3’-O-(L-异戊氨酰基)-2’-C-甲基胞苷二盐酸盐，也被称为valopicitabine二盐酸盐或NM-283和3’-O-(L-异戊氨酰基)-2’-氟代-2’-C-甲基胞苷)，以及它们的5’-磷酸酯衍生物相应的任选取代的环状1，3-丙二醇酯。
本发明的化合物还可与其它具有抗HCV特性的核苷组合用于治疗HCV感染，例如，美国专利号6,864,244(Mar.8，2005)；WO 02/51425(4 July 2002)，转让给Mitsubishi Pharma Corp.；WO 01/79246，WO02/32920和WO 02/48165(20 June 2002)，转让给Pharmasset，Ltd.；WO 01/68663(20 September 2001)，转让给ICN Pharmaceuticals；WO99/43691(2 Sept.1999)；WO 02/18404(7 March 2002)，转让给Hoffmann-LaRoche；U.S.2002/0019363(14 Feb.2002)；WO 02/100415(19Dec.2002)；WO 03/026589(3 Apr.2003)；WO 03/026675(3 Apr.2003)；WO 03/093290(13 Nov.2003)：US 2003/0236216(25 Dec.2003)；US 2004/0006007(8 Jan.2004)；WO 04/011478(5 Feb.2004)；WO04/013300(12 Feb.2004)；US 2004/0063658(1 Apr.2004)；和WO04/028481(8 Apr.2004)中所公开的那些。
在一个实施方式中，能够与本发明的核苷衍生物组合使用的核苷HCV NS5B聚合酶抑制剂选自如下化合物：4’-叠氮基-胞苷；4-氨基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶；4-氨基-7-(2-C-羟甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶；4-氨基-7-(2-C-氟代甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶；4-氨基-5-氟代-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶；2-氨基-7-(2-C-甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-4(3H)-酮；4-氨基-7-(2-C，2-O-二甲基-β-D-呋喃核糖基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶；及其药学上可接受的盐和前药。
本发明的化合物还可以与HCV聚合酶的非核苷抑制剂组合，用于治疗HCV感染，所述非核苷抑制剂例如是WO 01/77091(18 Oct.2001)，转让给Tularik，Inc.；WO 01/47883(5 July 2001)，转让给Japan Tobacco，Inc.；WO 02/04425(17 January 2002)，转让给Boehringer Ingelheim；WO 02/06246(24 Jan.2002)，转让给Istituto di Ricerche di BiologiaMoleculare P.Angeletti S.P.A.；WO 02/20497(3 March 2002)；WO2005/016927(尤其是JTK003)，转让给Japan Tobacco，Inc.中所公开的那些，它们每一篇的内容都被全文引入本文作为参考；以及HCV-796(Viropharma Inc.)。
在一个实施方式中，可以与本发明的核苷衍生物组合使用的非核苷HCV NS5B聚合酶抑制剂选自如下化合物：14-环己基-6-[2-(二甲基氨基)乙基]-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-6-(2-吗啉-4-基乙基)-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-6-[2-(二甲基氨基)乙基]-3-甲氧基-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-3-甲氧基-6-甲基-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；({[(14-环己基-3-甲氧基-6-甲基-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-基)羰基]氨基}磺酰基)乙酸甲酯；({[(14-环己基-3-甲氧基-6-甲基-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-基)羰基]氨基}磺酰基)乙酸；14-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-甲基-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酰胺；3-氯代-14-环己基-6-[2-(二甲基氨基)乙基]-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；N′-(11-羧基-14-环己基-7，8-二氢-6H-吲哚并[1，2-e][1，5]苯并氮杂环辛间四烯-7-基)-N，N-二甲基乙烷-1，2-二铵双(三氟代乙酸酯)；14-环己基-7，8-二氢-6H-吲哚并[1，2-e][1，5]苯并氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-6-甲基-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-3-甲氧基-6-甲基-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-6-[2-(二甲基氨基)乙基]-3-甲氧基-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-6-[3-(二甲基氨基)丙基]-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-7-氧代-6-(2-哌啶-1-基乙基)-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-6-(2-吗啉-4-基乙基)-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-6-[2-(二乙基氨基)乙基]-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-6-(1-甲基哌啶-4-基)-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-7-氧代-6-(2-哌啶-1-基乙基)-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酰胺；14-环己基-6-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酰胺；14-环戊基-6-[2-(二甲基氨基)乙基]-7-氧代-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；6-烯丙基-14-环己基-3-甲氧基-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环戊基-6-[2-(二甲基氨基)乙基]-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；14-环己基-6-[2-(二甲基氨基)乙基]-5，6，7，8-四氢吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二氮杂环辛间四烯-11-甲酸；13-环己基-5-甲基-4，5，6，7-四氢呋喃并[3′，2′:6，7][1，4]二氮杂环辛间四烯并[1，8-a]吲哚-10-甲酸；15-环己基-6-[2-(二甲基氨基)乙基]-7-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-吲哚并[2，1-a][2，6]苯并二偶氮宁-12-甲酸；15-环己基-8-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-吲哚并[2，1-a][2，5]苯并二偶氮宁-12-甲酸；13-环己基-6-氧代-6，7-二氢-5H-吲哚并[1，2-d][1，4]苯并二氮杂-10-甲酸；以及它们药学上可接受的盐。
“药学上可接受的”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其它成分相容，且对接受者无害。
含本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯与药学上可接受的载体的药物组合物也包括在本发明内。本发明的另一个例子是通过将任何上述化合物与药学上可接受的载体结合制得的药物组合物。本发明的另一个例子是制备药物组合物的方法，包括将任何上述化合物与药学上可接受的载体结合。
本发明还包括含有效量的本发明化合物和药学上可接受的载体，用于抑制RNA依赖性RNA病毒聚合酶，特别是HCV NS5B聚合酶的药物组合物。本发明还包括用于治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是HCV感染的药物组合物，以及抑制RNA依赖性RNA病毒聚合酶，特别是HCVNS5B聚合酶的方法，和治疗RNA依赖性的病毒复制，特别是HCV复制的方法。此外，本发明涉及含治疗有效量的本发明化合物与另一治疗有效量的抗RNA依赖性RNA病毒活性剂，特别是抗HCV活性剂的药物组合物。抗HCV的活性剂包括，但不限于，三氮唑核苷，左旋韦林，viramidine、胸腺素α-1、HCV NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂、干扰素-α、PEG化干扰素-α(PEG干扰素-α)、干扰素-α和三氮唑核苷的组合物，PEG干扰素-α和三氮唑核苷的组合物、干扰素-α和左旋韦林的组合物，PEG干扰素-α和左旋韦林的组合物。干扰素-α包括，但不限于，重组干扰素-α2a(例如从Hoffmann-LaRoche，Nutley，NJ)购得的Roferon干扰素)、干扰素-α2b(例如从ScheringCorp.，Kenilworth，NJ购得的Intron-A干扰素)、共有序列干扰素和纯化干扰素-α产品。对于三氮唑核苷及其抗HCV活性的论述参见J.O.Saunders和S.A.Raybuck，“InosineMonophosphate Dehydrogenase：Consideration of Structure，Kinetics，andTherapeutic Potential，”Ann.Rep.Med.Chem.，35：201-210(2000)。
本发明另一方面提供了氨基磷酸(核苷)(芳基)酯及其药物组合物用于制备抑制RNA依赖性RNA病毒复制，特别是HCV复制，和/或治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是HCV感染的药物的用途。本发明另一方面提供了氨基磷酸(核苷)(芳基)酯及其药物组合物用作抑制RNA依赖性RNA病毒复制，特别是HCV复制，和/或治疗RNA依赖性RNA病毒感染，特别是HCV感染的药物。
本发明的药物组合物包含作为活性成分的结构式I的化合物或其药学上可接受的盐，并可还包含药学上可接受的载体和任选地其它治疗成分。
所述组合物包括适合于口服，直肠、局部，肠胃外(包括皮下、肌肉内和静脉内)，眼(眼用药)、肺部(鼻或口腔吸入)或鼻给药的组合物，虽然在任何给出的情形中最合适的途径取决于所要治疗的状况的性质和严重程度，以及活性成分的特征。它们可以方便地以单元剂量的形式存在，并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。
在实际使用中，结构式I的化合物可作为活性成分根据常规的药物混配技术与药物载体紧密混合。该载体可以是各种形式，这取决于给药，例如口服或肠胃外(包括静脉内)，所需的制剂形式。在制备组合物的口服剂量形式时，可以使用任何常见的药物介质，例如在口服液体制剂例如悬浮液、酏剂和溶液情况下，使用水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂和着色剂等；或在口服固体制剂例如粉末、硬和软胶囊以及片剂的情况下，使用载体比如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成拉剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，其中相对于液体制剂更优选固体口服制剂。
由于易于给药，片剂和胶囊代表了最有利的口服剂量单元形式，在此时显然应使用固体药物载体。如果需要，可以通过标准的含水或非水工艺对片剂进行包衣。这种组合物和制剂应包含至少0.1％的活性化合物。当然，这些组合物中活性化合物的百分比可以被改变，其在约2％-约60％单元重量之间是合适的。在这样的治疗中，可用组合物中的活性化合物的量是可以获得有效剂量的量。所述活性化合物还可以鼻内给药，例如以液体滴剂或喷雾剂的形式存在。
片剂、丸剂、胶囊等还可以包含粘合剂，例如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂例如磷酸二钙；崩解剂比如玉米淀粉，马铃薯淀粉、藻酸；润滑剂比如硬脂酸镁；和甜味剂比如蔗糖，乳糖或糖精。当剂量单元形式为胶囊时，它除上述类型的材料外还可以包含液体载体，例如脂油。
多种其它材料可以作为包衣存在或用于改进剂量单元的物理形式。例如，片剂可以涂有虫胶、糖或两者皆有。糖浆或酏剂，除活性成分外，还可以包含蔗糖作为甜味剂，对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂，染料，和调味剂例如樱桃或橙味香料。
结构式I的化合物还可以肠胃外给药。可以在与表面活性剂例如羟基-丙基纤维素适当混合的水中制备这些活性化合物的溶液或悬浮液。可以在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散体。在普通的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物生长。
适合注射用的药物形式包括无菌水溶液或分散体，以及用于临时制备无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有的情况中，药物形式都必须是无菌的，且必须呈流动态并达到容易注射的程度。它在制备和储存条件下中必须稳定，且必须保存在具有抗微生物，例如细菌和真菌污染作用的条件下。载体可以是溶剂或分散介质，其中包含例如水，乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)，其适当的混合物和植物油。
可以采用任何适当的给药途径对哺乳动物，尤其是人类，提供有效剂量的本发明化合物。例如可以采用口服、直肠、局部、肠胃外、眼、肺部、鼻等途径。剂量形式包括片剂、锭剂、分散体、悬浮液、溶液、胶囊、乳剂、软膏剂、气雾剂等。优选结构式I的化合物以口服形式给药。
对于向人类口服给药，在分剂量(divided doses)中，剂量范围是0.01-1000mg/kg体重。在一个实施方式中，在分剂量中，剂量范围是0.1-100mg/kg体重。在另一个实施方式中，在分剂量中，剂量范围是0.5-20mg/kg体重。对于口服给药，组合物优选的提供形式为片剂或胶囊，其中包含1.0-1000毫克的活性成分，特别是1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、750、800、900和1000毫克的活性成分，根据需要治疗的患者的症状调整剂量。
使用的活性成分的有效剂量可以变化，其取决于使用的具体化合物、给药模式、被治疗的状况和被治疗的状况的严重程度。本领域技术人员可以很容易地确定这样的剂量。可以通过调整该剂量方案以提供最佳的治疗反应。
本发明的化合物含有一个和多个不对称中心，因此可以以外消旋物和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体的形式存在。在下式中，当R5是氢且连接到结构式I中磷原子上的氨基酰基部分中的R4是取代基而不是氢时，
氨基酸部分含有不对称中心，并且其意思是包括单独的R-和S-立体异构体以及RS-非对映异构体混合物。在一个实施方式中，立体碳上的立体化学对应于S-氨基酸的立体化学，即，天然存在的α-氨基酸的立体异构化学，其如下式所示：
结构式I化合物中的四取代磷原子构成了另一个不对称中心，并且本发明的化合物意图包括磷原子上的两种立体化学构型。
本发明意欲包括，具有如下结构式所述的五员呋喃糖环β-D立体化学构型的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯，也就是说，包括这样的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯，其中在五员呋喃糖环C-1和C-4上的取代基具有β-立体化学构型(由粗线表示的“向上”方向)。
本文中所描述的某些化合物含有烯属双键，除非另有指明，其意思是同时包括E和Z几何异构体。
本文中所描述的某些化合物可以以互变异构体例如酮-烯醇互变异构体的形式存在。单个的互变异构体以及它们的混合物都包括在结构式I化合物内。意图包括在本发明化合物内的酮-烯醇互变异构体的例子如下所示：
结构式I化合物可以被分离成它们单独的非对映异构体，例如通过从适宜溶剂中分步结晶，所述溶剂例如是甲醇或乙酸乙酯或其混合物，或者通过使用旋光活性固定相的手性色谱。
可替代地，结构式I化合物的任意立体异构体都可以通过使用已知构型的光学纯的起始原料或试剂进行立体选择合成而获得。
本发明的化合物可以以药学上可接受的盐的形式给药。术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱或酸，包括无机或有机碱和无机或有机酸制备的盐。包含在术语“药学上可接受的盐”中的碱性化合物的盐指通常由游离碱与适当的有机或无机酸反应而制备的本发明化合物的无毒盐。本发明的碱性化合物的代表性盐，包括但不限于：乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、二盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘苯砷盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚盐、哈胺、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物，异硫代硫酸盐(isothionate)、乳酸盐、乳糖醛酸盐(lactobionate)、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡萄糖胺铵盐、油酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(embonate)、棕桐酸盐、泛酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、碱式醋酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物和戊酸盐。此外，当本发明的化合物带有酸性结构部分时，其适当的药学上可接受的盐，包括但不限于，来自无机碱包括铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰、亚锰、钾、钠、锌等的盐。特别优选铵、钙、镁、钾、钠盐。来自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺、叔胺、环胺和碱离子交换树脂比如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺、异丙胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺等的盐。
此外，如果本发明的化合物中存在羧酸(-COOH)或羟基基团时，可以采用羧酸衍生物药学上可接受的前药酯类，例如甲酯，乙酯或特戊酰氧甲酯，或核糖C-2’、C-3’和C-5’羟基的前药酰基衍生物，例如O-乙酰基、O-特戊酰基、O-苯甲酰基、O-氨基酰基。用于缓释或用作前药制剂的酯和酰基包括本领域已知的用于改进生物利用率、组织分布，溶解度和水解特征的那些酯和酰基。所考虑的该衍生物可以在体内很容易地转化成所需的化合物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给药”和“用药”是指包括使用具体公开的化合物，或虽然没有具体公开但在哺乳动物，包括人类患者，给药后可以在体内转化成该指定化合物的化合物，对所描述的病毒感染进行治疗。选择和制备合适的前药衍生物的常规方法描述在例如“Design of Prodrugs，”ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中，其全文在此引为参考。
本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯的制备：
按照文献C.Pierra等人，Nucleosides，Nucleotides and Nucleic Acids，24：767(2005)或J.A.Piccirilli等人，J.Org.Chem.，64：747(1999)中的描述制备2’-C-甲基胞苷。2’-脱氧-2’-氟代-2’-C-甲基胞苷是按照J.Med.Chem.，48：5504-5508(2005)中的描述制备的。用于磷酸化反应的氯化磷酸芳基酯是按照美国专利号6,455,513中所描述的方法制备的，其内容被全文引入本文作为参考。产生氨基磷酸芳基酯的磷酸化反应是根据美国专利号6,455,513和C.McGuigan，等人，J.Med.Chem.，36：1048(1993)中所描述的方法进行的。例如，将苯酚或1-萘酚与三氯氧磷进行反应，接着与不同的氨基酸盐进行偶合从而给出苯氧基或1-萘氧基磷氯化物，其通常通过快速色谱进行纯化，然后在适宜的碱例如叔丁基氯化镁的存在下与核苷偶合(参见M.Uchiyama等人，J.Org.Chem.，58：373(1993)以及方案1)。
一般方法：
所有的溶剂都是从商业来源获得的并且在不进一步纯化的情况下使用。反应是在氮气气氛下在烘干(110℃)的玻璃器皿中进行的。将有机萃取物通过硫酸钠(Na2SO4)干燥，并且在减压条件下操作的旋转蒸发器上进行浓缩(在过滤干燥剂之后进行)。快速色谱是按照公开的方法(W.C.Still等人，J.Org.Chem.，43：2923(1978))在硅胶上或者在使用预填充柱的商业快速色谱系统(Biotage corporation and JonesFlashmaster II)上进行的。
试剂通常是直接从供应商处获得的(并且以供应状态使用的)，或者是使用科学文献中报道的或者本领域技术人员已知的常规合成步骤容易得到的。
1H和31P NMR光谱是在Bruker AM系列光谱仪上记录的，所述光谱仪是在300到600MHz之间的频率下操作(报告)的。对应于非可交换质子(以及出现的可交换质子)信号的化学位移(δ)是以相对应四甲基硅烷百万分之份(ppm)的形式记录的，并且使用剩余的溶剂峰作为基准测定的。信号是以如下顺序列表的：多重性(s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；b，宽峰，以及它们的组合)；偶合常数(s)单位为赫兹(Hz)；质子数。质谱数据(MS)是在PerkinElmer API 100或Waters MicroMass ZQ上获得的，它们是以负(ES-)或正(ES+)离子化的模式操作的，并且仅以母体离子的质荷比(m/z)的形式报告结果。制备规模的HPLC分离是在Waters2525泵上，装有2487双路吸光度检测器，在装有UV1000吸收模块的TSP光谱系统P4000上或者在自动质量触发式Waters Micromass系统上进行的，所述WatersMicromass系统带有2525泵模块、Micromass ZMD检测器和2525收集模块。用水和MeCN的线性梯度使用10到40mL/min的流量洗脱化合物，其中水和MeCN都含有0.1％的三氟乙酸或蚁酸。使用对称C18柱(7μM，19×300mm)作为固定相。
实施例、方案和表格中使用了如下缩写：aq.：含水的；Ar：芳基；atm：大气；CCl4：四氯化碳；DCM：二氯甲烷；DMF：N，N-二甲基甲酰胺；DMSO：二甲基亚砜；eq.：当量；Et3N：三乙胺；EtOAc：乙酸乙酯；Et2O：二乙醚；h：小时；Me：甲基；MeCN：乙腈；MeOH：甲醇；min：分钟；MS：质谱；N，N-DMA：N，N，-二甲基乙酰胺；PE：石油醚；Py：吡啶；quant.：定量；RP-HPLC：反相高效液相色谱；RT：室温；sec：秒；TFA：三氟乙酸；和THF：四氢呋喃。
以下实施例举例说明了用于制备本发明化合物的条件。这些实施例不以任何方式限定本发明的范围，并且它们也不应被这样解释。核苷和核苷酸合成领域的技术人员将会容易地预见以下制备程序的条件和方法的已知变化可以被用于制备本发明的这些以及其它化合物。所有的温度都是摄氏度，除非另有说明。
方案1
实施例1
5’-O-[[[(1S)-2-正丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](1-萘氧基)氧
膦基]-2’-C-甲基胞苷
步骤1：二氯代磷酸1-萘基酯
向Et2O中的1-萘酚(0.23M)中加入三氯氧磷(1.0eq.)，并且将溶液冷却到-78℃。加入纯Et3N(1.0eq.)，并且放置所形成的溶液从而使其升温到RT，过夜。在惰性气氛下将白色浆料过滤，除去所有挥发物从而产生标题化合物的无色液体，其不需要进一步的纯化就可以在下一步中使用。31P NMR(400MHz，CDCl3)：δ 3.93ppm。
步骤2：N-[氯代(1-萘氧基)磷酰基]-L-丙氨酸正丁酯
向在DCM中的二氯代磷酸1-萘基酯(0.086M)中加入(2S)-1-丁氧基-1-氧代丙烷-2-胺鎓氯化物(1.0eq.)。冷却到-78℃以后，加入纯Et3N(2.0eq.)，并且放置反应物从而使其升温到RT，过夜。除去所有挥发物，用Et2O洗涤所产生的白色固体，过滤，并且真空蒸发，从而以1:1非对映异构体混合物的形式获得一种无色油。31P NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.39和8.11ppm。
步骤3：5’-O-[[[(1S)-2-正丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](1-萘
氧基)氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
用THF(0.097M)将2’-C-甲基胞苷稀释。将所产生的浆料冷却到-78℃，然后加入氯化叔丁基镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。将混合物立即升温到0℃，搅拌三十分钟并再次冷却到-78℃，然后滴加N-[氯代(1-萘氧基)磷酰基]-L-丙氨酸丁酯(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。使反应物达到RT，过夜，然后通过加入水使其淬灭。用EtOAc将水相萃取三次，用盐水洗涤合并的有机相，并且通过Na2SO4进行干燥。粗产物通过硅胶上的柱色谱进行纯化(DCM/MeOH梯度从90:10到80:20)，将所产生的米色固体溶于DMSO，并且通过RP-HPLC进行纯化。将含有纯非对映异构体的馏分合并，并且冷冻干燥，从而以其白色TFA盐的形式得到标题化合物。
第一洗脱的非对映异构体：
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ 8.24-8.22(m，1H)，8.00(d，J＝8.09Hz，1H)，7.95-7.93(m，1H)，7.76(d，J＝8.09Hz，1H)，7.61-7.56(m，2H)，7.52(d，J＝7.84Hz，1H)，7.48(t，J＝8.08Hz，1H)，6.01(s，1H)，5.91(d，J＝7.83Hz，1H)，4.68(ddd，J＝11.75，5.05，1.89Hz，1H)，4.57(ddd，J＝11.88，6.07，3.28Hz，1H)，4.22(dd，J＝9.1，2.27Hz，1H)，4.12-4.03(m，3H)，3.84(d，J＝9.1Hz)，1.63-1.56(m，2H)，1.42-1.33(m，5H)，1.18(s，3H)，0.93(t，J＝7.33Hz，3H)，NH2，NH，2 x OH不可见，31P NMR：(400MHz，CD3OD)δ：2.77；MS(ES+)m/z 591(M+H)+
第二洗脱的非对映异构体：
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ 8.28-8.22(m，1H)，7.99-7.92(m，2H)，7.79(d，J＝8.1Hz，1H)，7.65-7.69(m，2H)，7.59-7.55(m，1H)，7.50(t，J＝8.1Hz，1H)，6.00(s，1H)，5.86(d，J＝7.83Hz，1H)，4.65(ddd，J＝11.7Hz，J＝6.3Hz，J＝1.6Hz，1H)，4.53-4.46(m，1H)，4.24-4.17(m，1H)，4.10-4.00(m，3H)，3.83(d，J＝9.3Hz，1H)，1.62-1.53(m，2H)，1.41-1.32(m，5H)，1.17(s，3H)，0.93(t，J＝7.4Hz，3H)；31P NMR：(300MHz，CD3OD)δ：4.33；MS(ES+)m/z 591(M+H)+。
实施例2
5’-O-[[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](1-萘氧基)氧膦
基]-2’-C-甲基胞苷
步骤2：N-[氯代(1-萘氧基)磷酰基]-L-丙氨酸乙酯
按照实施例1，步骤2所描述的程序，用L-丙氨酸乙酯盐酸盐(1.0eq.)和Et3N(2.0eq.)处理二氯代磷酸1-萘基酯的DCM(0.144M)溶液，从而以1:1.1*的非对映异构体混合物的形式提供了标题化合物的无色油。31P NMR(300MHz，CDCl3)δ：9.47和9.14*。
步骤3：5’-O-[[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](1-萘氧
基)氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
按照实施例1，步骤3所描述的程序，将THF中的2’-C-甲基胞苷(0.097M)冷却到-78℃，然后加入叔丁基氯化镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)，接着加入N-[氯代(1-萘氧基)磷酰基]-L-丙氨酸乙酯(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。粗产物通过硅胶上的柱色谱进行纯化(DCM:MeOH＝98:2)。将所产生的固体溶于DMSO，并且通过RP-HPLC进行纯化，从而以其白色TFA盐的形式得到标题化合物。
第二洗脱的非对映异构体：
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ 8.27-8.22(m，1H)，7.98-7.94(m，1H)，7.92(d，J＝7.83Hz，1H)，7.79(d，J＝7.83Hz，1H)，7.65-7.55(m，3H)，7.50(t，J＝7.95Hz，1H)，6.01(s，1H)，5.85(d，J＝7.83Hz，1H)，4.65(ddd，J＝11.81Hz，J＝6.12Hz，J＝1.83Hz，1H)，4.49(ddd，J＝11.87Hz，J＝5.81Hz，J＝3.53Hz，1H)，4.23-4.17(m，1H)，4.11(q，J＝7.07Hz，2H)，4.07-3.99(m，1H)，3.84(d，J＝9.09Hz，1H)，1.36(dd，J＝6.69Hz，J＝0.37Hz，3H)，1.22(t，J＝7.07Hz，3H)，1.17(s，3H)；31P NMR(400MHz，CD3OD)：δ 4.35；MS(ES+)m/z 563(M+H)+
实施例3
5’-O-[[4-氯代-5-甲基-2-(1-甲基乙基)苯氧基][[(1S)-2-乙氧基-1-
甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
步骤1：二氯代磷酸4-氯代-2-异丙基-5-甲基苯基酯
按照实施例1，步骤1描述的程序，用三氯氧磷(1.0eq.)和Et3N(1.0eq.)处理4-氯代-2-异丙基-5-甲基-苯酚的Et2O(0.174M)溶液，从而提供了标题化合物的无色油。31P NMR(300MHz，CD3OD)：δ4.54。
步骤2：N-[氯代(4-氯代-2-异丙基-5-甲基苯氧基)磷酰基]-L-丙氨
酸乙酯
按照实施例1，步骤2所描述的程序，用L-丙氨酸乙酯盐酸盐(1.0eq.)和Et3N(2.0eq.)处理4-氯代-2-异丙基-5-甲基苯基二氯代磷酸酯的DCM(0.098M)溶液，从而以1:1.35*非对映异构体混合物的形式提供了标题化合物的无色油。31P NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.5和8.8*。
步骤3：5’-O-[[4-氯代-5-甲基-2-(1-甲基乙基)苯氧基][[(1S)-2-
乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
按照实施例1，步骤3所描述的程序。将THF中的2’-C-甲基胞苷(0.097M)冷却到-78℃，然后加入叔丁基氯化镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)，接着加入N-[氯代(4-氯代-2-异丙基-5-甲基苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸乙酯(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。粗产物通过硅胶上的柱色谱进行纯化(DCM/MeOH梯度从90:10到80:20)，将所产生的固体溶于DMSO，并且通过RP-HPLC进行纯化，从而以其白色TFA盐的形式得到标题化合物。
第一洗脱的非对映异构体：
1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 8.03(d，J＝7.96Hz，1H)，7.31(s，2H)，6.07(d，J＝7.96Hz，1H)，6.01(s，1H)，4.61(ddd，J＝11.66，5.2，1.54Hz，1H)，4.49(ddd，J＝11.72，5.86，3.76Hz，1H)，4.24-4.16(m，3H)，4.01(dt，J＝16.14，7.3Hz，1H)，3.83(d，J＝9.28Hz，1H)，2.33(s，3H)，1.43(d，J＝7.08Hz，3H)，1.31-1.23(m，12H)，NH2，NH，2 x OH不可见；31P NMR：(300 MHz CD3OD)：δ5.03；MS(ES+)m/z 625和627(M+Na+)。
第二洗脱的非对映异构体：
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 7.96(d，J＝7.83Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.33(s，1H)，6.02(s，1H)，6.00(d，J＝7.83Hz，1H)，4.57(ddd，J＝11.88，6.45，1.77Hz，1H)，4.41(ddd，J＝11.81，6.45，4.04Hz，1H)，4.20-4.14(m，3H)，4.00(dt，J＝17.18，7.33Hz，1H)，3.80(d，J＝9.34Hz，1H)，2.34(s，3H)，1.43(d，J＝7.08Hz，3H)，1.29-1.25(m，9H)，1.20(s，3H)，NH2，NH，2 x OH不可见；31P NMR：(300MHz，CD3OD)：δ 5.026；MS(ES+)m/z 625和627(M+Na+)。
实施例4
5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-[(9Z)-9-十八碳烯氧基]-2-
氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
步骤2：N-[氯代(4-氯代苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸(9Z)-十八碳
-9-烯-1-基酯
按照实施例1，步骤2所描述的程序，用二氯代磷酸4-氯代苯基酯(1.0eq.)和Et3N(2.0eq.)处理N-[氯代(4-氯代苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸(9Z)-十八碳-9-烯-1-基酯的DCM(0.116M)溶液，从而以1.2*:1非对映异构体混合物的形式提供了标题化合物的无色油。
31P NMR(300MHz，CDCl3)δ：8.31*和7.97。
步骤3：5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-[(9Z)-9-十八
碳烯氧基]-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
按照实施例1，步骤3所描述的程序，将THF中的2’-C-甲基胞苷冷却到-78℃，然后加入氯化叔丁基镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)，接着加入N-[氯代(1-氯代苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸(9Z)-十八-9-烯-1-基酯。将粗混合物通过硅胶上的柱色谱进行纯化(DCM:MeOH梯度从90:10到80:20)，将所产生的固体溶于DMSO，并且通过RP-HPLC进行纯化，从而以白色粉末的形式得到标题化合物。通过1H NMR观测到在磷上1:1.4*的非对映异构体混合物。
1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 8.03和8.02*(d，J＝7.74Hz和J*＝7.96Hz，1H)，7.43-7.39(m，2H)，7.32-7.26(m，2H)，6.11和6.09*(d，J＝7.3Hz和J*＝7.52Hz，1H)，6.02和6.01*(s，1H)，5.43-5.33(m，2H)，4.65-4.54(m，1H)，4.51-4.39(m，1H)，4.22-4.07(m，2H)，4.05-3.95(m，1H)，3.83和3.82*(d，J＝9.07Hz和J*＝9.07Hz，1H)，2.07-2.00(m，4H)，1.66-1.62(m，2H)，1.42-1.33(m，26H)，1.22(s，3H)，0.94(t，J＝6.2Hz，3H)，NH2，NH，2 x OH不可见；31P NMR：(300MHz，CD3OD)：δ 5.15和5.12*(s，1P)。MS(ES+)m/z 769和771(M+H)+。
实施例5
5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]
氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
步骤2：N-[氯代(4-氯代苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸乙酯
按照实施例1，步骤2所描述的程序，用L-丙氨酸乙酯盐酸盐(1.0eq.)和Et3N(2.0eq.)处理二氯代磷酸4-氯代苯基酯的DCM(0.090M)溶液，从而以1:1*非对映异构体混合物的形式提供了标题化合物的无色油。
31P NMR(300MHz，CDCl3)δ：9.43和9.11*。
步骤3：5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙
基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
按照实施例1，步骤3所描述的程序，将THF中的2’-C-甲基胞苷(0.097M)冷却到-78℃，然后加入氯化叔丁基镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)，接着加入N-[氯代(4-氯代苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸乙酯(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。粗产物通过硅胶上的柱色谱进行纯化(DCM:MeOH＝92:8)，将所产生的固体溶于DMSO，并且通过RP-HPLC进行纯化，从而以其白色TFA盐的形式得到标题化合物。
第二洗脱的非对映异构体：
1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 8.01(d，J＝7.74Hz，1H)，7.43(d，J＝8.85Hz，2H)，7.31(d，J＝8.85Hz，2H)，6.06(d，J＝7.74Hz，1H)，6.02(s，1H)，4.58(ddd，J＝11.89Hz，，J＝6.25Hz，J＝1.82Hz，1H)，4.47-4.38(m，1H)，4.24-4.12(m，3H)，4.06-3.92(m，1H)，3.81(d，J＝9.28Hz，1H)，1.41(d，J＝6.85Hz，3H)，1.27(t，J＝7.18Hz，3H)，1.21(s，3H)；31P NMR(300MHz，CD3OD)：δ 5.10；MS(ES+)m/z 547(M+H)+。
实施例6
5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-(1-甲基乙氧基)-2-氧代
乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
步骤2：N-[氯代(4-氯代苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸异丙酯
按照实施例1，步骤2所描述的程序，将标题化合物以黄色油状和在磷处的两种非对映异构体混合物的形式分离。
31P NMR(300MHz，CDCl3)δ：9.61，9.35。
步骤3：5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-(1-甲基乙氧基)
-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
按照实施例1，步骤3所描述的程序，将标题化合物以在磷处的单一非对映异构体以及它的TFA盐的形式分离。
第二洗脱的非对映异构体：
1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ 8.0(d，J＝7.7Hz，1H)，7.41(d，J＝8.7Hz，2H)，7.3(d，J＝8.7Hz，2H)，6.05(d，J＝7.96Hz，1H)，6.0(s，1H)，5.02-4.94(m，1H)，4.56(ddd，J＝11.7，6.4，1.7Hz，1H)，4.41(ddd，J＝11.8，6.35，3.7Hz，1H)，4.21-4.14(m，1H)，3.99-3.89(m，1H)，3.80(d，J＝9.2Hz，1H)，1.39(d，J＝7.1Hz，3H)，1.25(d，J＝6.2Hz，6H)，1.20(s，3H).31PNMR(400MHz，CD3OD)：δ5.13。MS(ES+)m/z 561(M+H)+。
实施例7
5’-O-[[[(1S)-2-正丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](4-氯代苯氧基)
氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
步骤2：N-[氯代(4-氯代苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸正丁酯
按照实施例1，步骤2所描述的程序，用L-丙氨酸乙酯盐酸盐(1.0eq.)和Et3N(2.0eq.)处理商购获得的二氯代磷酸4-氯代苯基酯的DCM(0.090M)溶液，从而以1.1:1*非对映异构体混合物的形式提供了标题化合物的无色油。31P NMR(400MHz，CDCl3)δ：9.52和9.28*。
步骤3：5’-O-[[[(1S)-2-正丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](4-氯
代苯氧基)氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
按照实施例1，步骤3所描述的程序，将THF中的2’-C-甲基胞苷(0.097M)冷却到-78℃，然后加入氯化叔丁基镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)，接着加入N-[氯代(4-氯代苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸丁酯(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。粗产物通过硅胶上的柱色谱进行纯化(DCM:MeOH＝92:8)，将所产生的固体溶于DMSO，并且通过RP-HPLC进行纯化，从而以其白色TFA盐的形式得到标题化合物。
第二洗脱的非对映异构体：
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ 8.01(d，J＝7.83Hz，1H)，7.42(d，J＝8.84Hz，2H)，7.31(d，J＝8.08Hz，2H)，6.06(d，J＝7.83Hz，1H)，6.01(s，1H)，4.57(ddd，J＝11.68Hz，J＝6.25Hz，J＝1.71Hz，1H)，4.47-4.39(m，1H)，4.21-4.06(m，3H)，4.05-3.95(m，1H)，3.81(d，J＝9.35Hz，1H)，1.68-1.58(m，2H)，1.49-1.34(m，5H)，1.21(s，3H)，0.97(t，J＝7.33Hz，3H)；31P NMR(400MHz，CD3OD)：δ 3.97；MS(ES+)m/z 575(M+H)+。
实施例8
5’-O-[[2-正丁氧基-2-氧代乙基]氨基](1-萘氧基)氧膦基]-2’-C-甲基
胞苷
步骤2：N-[氯代(1-萘氧基)磷酰基]甘氨酸丁酯
用甘氨酸丁酯盐酸盐(1.0eq.)和Et3N(2.0eq.)处理二氯代磷酸1-萘基酯的DCM(0.077M)溶液，从而提供了标题化合物的无色油。31P NMR(400MHz，CDCl3)δ：9.28。
步骤3：5’-O-[[2-正丁氧基-2-氧代乙基]氨基](1-萘氧基)氧膦
基]-2’-C-甲基胞苷
按照实施例1，步骤3所描述的程序，将THF中的2’-C-甲基胞苷(0.097M)冷却到-78℃，然后加入氯化叔丁基镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)，接着加入N-[氯代(1-萘氧基)磷酰基]甘氨酸丁酯(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。粗混合物通过硅胶上的柱色谱进行纯化(DCM:MeOH＝92:8)，将所产生的固体溶于DMSO，并且通过RP-HPLC进行纯化，从而以其TFA盐的形式得到标题化合物的非对映异构体混合物。
非对映异构体：
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ 8.29-8.20(m，1H)，8.02(d，J＝7.83Hz，1H)，7.99-7.92(m，1H)，7.79(d，J＝8.04Hz，1H)，7.67-7.54(m，3H)，7.50(t，J＝7.83Hz，1H)，5.99和5.98*(s，1H)，5.89(d，J＝7.83Hz，1H)，4.69(ddd，J＝11.87Hz，J＝5.56Hz，J＝1.77Hz，1H)，4.57(ddd，J＝11.81Hz，J＝6.12Hz，J＝3.34Hz，1H)，4.25-4.18(m，1H)，4.12(t，J＝6.44Hz，2H)，3.92-3.71(m，3H)，1.66-1.56(m，2H)，1.45-1.33(m，2H)，1.17(s，3H)，0.95(t，J＝7.71Hz，3H)；31P NMR(CD3OD)δ 5.79和5.44*；MS(ES+)m/z 577(M+H)+。
实施例9
5’-O-[[[(1S)-2-(2-乙基丁氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯氧基
氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
该化合物是按照实施例1所描述的程序(由二氯代磷酸苯基酯和L-丙氨酸2-乙基丁基酯盐酸盐起始)制备的，并且通过硅胶上的柱色谱(DCM:MeOH＝92:8)和RP-HPLC(固定相：Phenomenex Luna C18(2)柱，5μm，21.2×250mm，流动相：乙腈/用NH4HCO35mM缓冲的H2O)进行纯化。将含有两种纯非对映异构体之一的馏分合并，并且冷冻干燥，从而以白色粉末的形式得到标题化合物：
第一洗脱的非对映异构体：
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ 7.73(d，J＝7.5Hz，1H)，7.41-7.37(m，2H)，7.28-7.25(m，2H)，7.22(t，J＝7.5Hz，1H)，6.08(s，1H)，5.85(d，J＝7.5Hz，1H)，4.58(ddd，J＝11.7，4.8，2.0Hz，1H)，4.43(ddd，J＝11.7，5.4，2.9Hz，1H)，4.13-3.95(m，4H)，3.75(d，J＝9.2Hz，1H)，1.56-1.50(m，1H)，1.42-1.35(m，7H)，1.10(s，3H)，0.91(t，J＝7.4Hz，6H)；31P NMR(400MHz，CD3OD)：δ 3.96；MS(ES+)m/z 569(M+H)+。
第二洗脱的非对映异构体：
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ 7.70(d，J＝7.5Hz，1H)，7.41-7.37(m，2H)，7.30-7.28(m，2H)，7.22(t，J＝7.3Hz，1H)，6.06(s，1H)，5.85(d，J＝7.5Hz，1H)，4.52(dd，J＝10.3，5.7Hz，1H)，4.39(dd，J＝9.5，5.3Hz，1H)，4.12-3.95(m，4H)，3.74(d，J＝9.2Hz，1H)，1.54-1.48(m，1H)，1.39-1.33(m，7H)，1.12(s，3H)，0.90(t，J＝7.5Hz，6H).31P NMR(400MHz，CD3OD)：δ 3.79；MS(ES+)m/z 569(M+H)+。
实施例10
5’-O-[[[(1S)-2-(2，2-二甲基丁氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯
氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
按照实施例1所描述的程序(由二氯代磷酸苯基酯和L-丙氨酸2，2-二甲基丙基酯盐酸盐起始)，并且通过硅胶上的柱色谱(DCM/MeOH梯度从90\10到80\20)进行纯化，将所产生的固体溶于DMSO并且通过RP-HPLC(固定相：对称C18柱，7μm，19×300mm，流动相：乙腈/用0.1％TFA缓冲的H2O)进行纯化。将含有纯化合物的馏分合并，并且冷冻干燥，从而以白色粉末状TFA盐的形式得到标题化合物，其是7.1:1*(根据NMR)混合物(第一洗脱:第二洗脱)。
非对映异构体的混合物：
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 8.01和7.97*(d，J＝7.8Hz和J*＝8.1Hz，1H)，7.41-7.37(m，2H)，7.30-7.20(m，3H)，6.03和6.00*(d，J＝7.8Hz和J*＝7.7Hz，1H)，5.99和5.98*(s，1H)，4.60和4.56*-4.52*(ddd，J＝11.7，4.8，2.0Hz和m*；1H)，4.45和4.42*-4.36*(ddd，J＝11.8，5.8，3.0Hz和m*，1H)，4.18-4.15(m，1H)，4.05-3.97(m，1H)，3.88-3.78(m，3H)，1.40*和1.37(d，J*＝7.8Hz和J＝7.1Hz，3H)，1.22(br s，3H)，0.96和0.95*(s，9H)，NH2，NH，2 x OH不可见。31P NMR：(300MHz，CD3OD)δ：5.09和4.96*。MS(ES+)m/z 555(M+H)+。
实施例11
步骤3：5’-O-[[[(1S)-2-(辛氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯氧
基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
按照实施例1，步骤2(由二氯代磷酸苯基酯和L-丙氨酸辛基酯盐酸盐起始)和步骤3所描述的程序，获得了一种粗产物，将其通过硅胶上的柱色谱(DCM:MeOH＝92:8)进行纯化，并且通过RP-HPLC(固定相：对称C18柱，7μm，19×300mm，流动相：乙腈/用0.1％TFA缓冲的H2O)进行纯化。将含有纯化合物的馏分合并，并且冷冻干燥，从而以其TFA盐的形式得到标题化合物(白色粉末；1:1*的磷上的非对映异构体混合物；第一洗脱:第二洗脱*)。
非对映异构体的混合物：
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 9.65(br s，1H)，8.72(br s，1H)，7.96和7.95*(d，J＝7.6Hz和J*＝7.9Hz，1H)，7.44-7.37(m，2H)，7.28-7.20(m，3H)，6.20-6.0(m，2H)，5.86和5.85(s，1H)，4.55-4.25(m，2H)，4.16-3.97(m，3H)，3.95-3.80(m，1H)，3.63(d，9.2Hz，1H)，1.61-1.45(m，2H)，1.27(br s，13H)，1.07(s，3H)，0.91-0.86(m，3H)。31P NMR：(300MHz，DMSO-d6)δ：3.82和3.67*。MS(ES+)m/z 598(M+H)+。
实施例12
5’-O-[[[(1S)-1-甲基-2-氧代-2-[(丙基戊基)氧基]乙基]氨基]苯氧
基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
步骤2：N-(氯代苯氧基氧膦基)-L-丙氨酸2-丙基戊基酯
向DCM中的二氯代磷酸苯基酯(0.086M)中加入(2S)-1-丙基戊氧基-1-氧代丙酰-2-氯化铵(1.0eq.)。冷却到-78℃以后，加入纯Et3N(2.0eq.)，并且放置反应物从而使其升温到RT，过夜。除去所有挥发物，用Et2O洗涤所产生的白色固体并且过滤。将滤出液真空蒸发，从而以1:1非对映异构体混合物的形式得到一种无色油。31P NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.22和7.93ppm。
步骤3：5’-O-[[[(1S)-1-甲基-2-氧代-2-[(丙基戊基)氧基]乙基]
氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
用THF(0.097M)将2’-C-甲基胞苷稀释。将所产生的浆料冷却到-78℃，然后加入氯化叔丁基镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。将混合物立即升温到0℃，搅拌三十分钟并再次冷却到-78℃，然后滴加N-[氯代(苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸丙基戊基酯(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。使反应物达到RT，过夜，然后通过加入水使其淬灭。用EtOAc将水相萃取三次，用盐水洗涤合并的有机相，并且通过Na2SO4进行干燥。粗产物通过硅胶上的柱色谱进行纯化(DCM/MeOH 92:8)，将所产生的米色固体溶于DMSO，并且通过RP-HPLC(固定相：对称C18柱，7μm，19×300mm。流动相：乙腈/H2O，水是用5mM AMBIC缓冲的)进行纯化。将含有纯非对映异构体的馏分合并，并且冷冻干燥，从而以白色固体的形式得到标题化合物。
第一洗脱的非对映异构体：
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ 7.70(d，J＝7.46Hz，1H)，7.45-7.30(m，2H)，7.30-7.13(m，3H)，6.06(s，1H)，5.83(d，J＝7.46Hz，1H)，4.63-4.51(m，1H)，4.48-4.35(m，1H)，4.17-3.87(m，4H)，3.73(d，J＝9.1Hz，1H)，1.67(bs，1H)，1.47-1.17(m，11H)，1.08(s，3H)，0.89(bs，6H)。NMR：(400MHz，CD3OD)δ：3.95；MS(ES+)m/z 597(M+H)+
第二洗脱的非对映异构体：
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ 7.68(d，J＝7.33Hz，1H)，7.43-7.32(m，2H)，7.31-7.16(m，3H)，6.04(s，1H)，5.83(d，J＝7.33Hz，1H)，4.55-4.45(m，1H)，4.42-4.31(m，1H)，4.14-3.90(m，4H)，3.72(d，J＝9.09Hz，1H)，1.72-1.59(m，1H)，1.43-1.20(m，11H)，1.09(s，3H)，0.89(t，J＝6.32Hz，6H)。1P NMR：(400MHz，CD3OD)δ：3.79；MS(ES+)m/z 597(M+H)+
实施例13
5’-O-[[[(1S)-2-[2-(己氧基)乙氧基]-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯
氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
步骤2：N-[氯代(苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸2-(己氧基)乙基酯
用二氯代磷酸苯基酯(1.0eq.)和三乙胺(2.0eq.)处理(2S)-1-[2-(己氧基)乙氧基]-1-氧代丙酰-2-氯化铵的DCM(0.116M)溶液，从而以1:1非对映异构体混合物的形式提供了标题化合物的无色油。
31P NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.03和7.67。
步骤3：5’-O-[[[(1S)-2-[2-(己氧基)乙氧基]-1-甲基-2-氧代乙基]
氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
将THF中的2’-C-甲基胞苷(从甲苯中蒸发两次)(0.097M)冷却到-78℃，然后加入氯化叔丁基镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)，接着加入N-[氯代(苯氧基)磷酰基]-L-丙氨酸2-(己氧基)乙基酯。粗产物通过硅胶上的柱色谱进行纯化(DCM/MeOH梯度从90/10到80/20)，将所产生的米色固体溶于DMSO，并且通过RP-HPLC(固定相：对称C18柱，7μm，19×300mm。流动相：乙腈/用0.1％TFA缓冲的H2O)进行纯化。将含有纯化合物的馏分合并，并且冷冻干燥，从而以白色粉末的形式得到标题化合物。通过31P NMR观测到1:1.8*的混合物。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ：7.85和7.82*(d，J＝7.92Hz和J*＝7.92Hz，1H)，7.24-7.18(m，2H)，7.11-7.02(m，3H)，5.87和5.83*(d，J＝7.83Hz和J*＝7.92Hz，1H)，5.81和5.80*(s，1H)，4.45-4.33(m，1H)，4.30-4.18(m，1H)，4.11-3.94(m，3H)，3.87-3.76(m，1H)，3.62和3.59*(d，J＝8.34Hz和J*＝9.30Hz，1H)，3.46(qt，J＝4.53Hz，2H)，3.28(t，J＝6.60Hz，2H)，1.41-1.32(m，2H)，1.20-1.13(m，9H)，0.99(s，3H)，0.74-0.70(m，3H)。31P NMR：(300MHz，CD3OD)δ：3.86和3.63*(s，1P)；MS(ES+)m/z 613(M+H)+。
方案2
实施例14
5’-O-[[[1-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-1H-吲哚-5-基]氧基][[(1S)
-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
步骤1：5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-1H-吲哚
向搅拌的5-羟基吲哚的DCM溶液(0.3M)中加入咪唑(2.0eq.)。将混合物冷却到0℃并用叔丁基二甲基甲硅烷氯化物(1.0eq.)进行处理。将所产生的混合物在室温下搅拌12小时，用DCM稀释，连续地用H2O、1N的HCl(aq)和最终的盐水进行洗涤。将合并的有机馏分通过Na2SO4进行干燥。粗产物通过硅胶上的柱色谱(石油醚:二乙醚90/10)进行纯化，从而以白色固体的形式得到标题化合物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 10.92(br s，1H)，7.29(t，J＝3.15Hz，1H)，7.26(d，J＝8.76Hz，1H)，6.96(d，J＝2.25Hz，1H)，6.65(dd，J＝2.25和8.76Hz，1H)，6.34-6.27(m，1H)，0.98(s，9H)，0.18(s，6H)。
步骤2：5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-1H-吲哚-1-甲酸叔丁
酯
在室温下，用DMAP(2.0eq.)和TEA(1.2eq.)处理5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-1H-吲哚的DCM溶液(0.4M)。加入Boc2O(1.0eq.)并且在室温下将混合物搅拌12小时。用DCM将反应物稀释，用1N的HCl(aq)和盐水进行洗涤，并且通过Na2SO4进行干燥。粗产物通过硅胶上的柱色谱(石油醚:二乙醚98/2)进行纯化，从而以白色固体的形式得到标题化合物(50％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 7.48(d，J＝8.85Hz，1H)，7.64(d，J＝3.60Hz，1H)，7.07(d，J＝2.22Hz，1H)，6.86(dd，J＝2.22和8.85Hz，1H)，6.63(d，J＝3.60Hz，1H)，1.63(s，9H)，0.98(s，9H)，0.20(s，6H)。
步骤3：5-羟基-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯
在0℃下，用TBAF(1.1eq.)处理5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯的THF溶液(0.18M)。在该温度下将混合物搅拌10分钟并且使其达到室温。通过加入饱和NH4Cl水溶液将反应淬灭，并且用乙酸乙酯进行萃取。用H2O和盐水洗涤有机层，并且通过Na2SO4进行干燥。粗产物通过硅胶上的柱色谱(石油醚EtOAc 92/8)进行纯化，从而以无色油状的形式得到标题化合物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.20(s，1H)，7.87(d，J＝8.85Hz，1H)，7.59(d，J＝3.63Hz，1H)，6.95(d，J＝2.13Hz，1H)，6.81(dd，J＝2.13和8.85Hz，1H)，6.58(d，J＝3.63Hz，1H)，1.65(s，9H)。
步骤4：1H-吲哚-1-甲酸5-[(二氯代氧膦基)氧基]-1，1-二甲基乙基
酯
向Et2O中的5-羟基-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(0.11M)中加入TEA(1.0eq.)，将该溶液冷却到-78℃，然后在该温度下加入三氯氧磷(1.0eq.)，放置所产生的溶液使其升温到室温，过夜。在N2气氛下过滤白色浆料，除去所有挥发物，从而以无色液体的形式产生用于下一步的标题化合物。
31P NMR(300MHz，CDCl3，300K)：δ 4.23。
步骤5：1H-吲哚-1-甲酸5-[[氯代[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙
基]氨基]氧膦基]氧基]-1，1-二甲基乙基酯
向DCM中的1H-吲哚-1-甲酸5-[(二氯代氧膦基)氧基]-1，1-二甲基乙基酯(0.18M)中加入L-丙氨酸乙基酯盐酸盐(1.0eq.)。在净-78℃下加入三乙胺(2.0eq.)，放置反应物使其升温到室温，过夜。除去所有挥发物并且用Et2O洗涤所产生的白色固体。过滤悬浮液并且真空蒸发，从而以1:1.04*非对映异构体混合物的形式得到白色固体。
31P NMR(300MHz，CDCl3)δ.-8.25*和-8.99。
步骤6：5’-O-[[[1-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-1H-吲哚-5-基]氧
基][[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
用THF(0.097M)将2’-C-甲基胞苷(从甲苯中蒸发两次)稀释。将所产生的浆料冷却到-78℃，然后加入氯化叔丁基镁(以1.0M THF溶液的形式，2.2eq.)。将混合物立即升温到0℃，搅拌三十分钟并再次冷却到-78℃，然后滴加1H-吲哚-1-甲酸5-[[氯代[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]氧基]-1，1-二甲基乙基酯(以1.0M THF溶液的形式，1.6eq.)。使反应物达到RT，过夜，然后通过加入水使其淬灭。用EtOAc将水相萃取三次，用盐水洗涤合并的有机相，并且通过Na2SO4进行干燥。将粗产物溶于DMSO，并且通过RP-HPLC(固定相：Phenomenex Luna C18(2)柱，5μm，250×21.20mm。流动相：乙腈/用5mM AMBIC缓冲的H2O)进行纯化。将含有纯化合物的馏分合并，并且冷冻干燥，从而以白色粉末的形式得到标题化合物。
第一洗脱的非对映异构体：
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 8.02(d，J＝8.91Hz，1H)，7.72(d，J＝3.63Hz，1H)，7.56(d，J＝7.45Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.17(d，J＝9.06Hz，1H)，7.16(br s，1H)，7.10(br s，1H)，6.71(d，J＝3.60Hz，1H)，6.07(dd，J＝10.17和12.66Hz，1H)，5.95(s，1H)，5.70(d，J＝7.44Hz，1H)，5.28(d，J＝6.93Hz，1H)，5.08(s，1H)，4.47-4.35(m，1H)，4.32-4.21(m，1H)，4.13-3.96(m，3H)，3.89-3.75(m，1H)，3.58(t，J＝6.96Hz，1H)，1.64(s，9H)，1.23(d，J＝6.96Hz，3H)，1.13(t，J＝7.05Hz，3H)，0.92(s，3H)；31PNMR：300MHz，DMSO-d6)δ：4.05；MS(ES+)m/z 653(M+H)+
第二洗脱的非对映异构体：
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：8.02(d，J＝8.91Hz，1H)，7.72(d，J＝3.63Hz，1H)，7.57(d，J＝7.54Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.20(d，J＝7.60Hz，1H)，7.18(br s，1H)，7.10(br s，1H)，6.71(d，J＝3.63Hz，1H)，6.00(dd，J＝10.42和12.34Hz，1H)，5.94(s，1H)，5.70(d，J＝7.44Hz，1H)，5.23(d，J＝7.05Hz，1H)，5.09(s，1H)，4.43-4.32(m，1H)，4.30-4.18(m，1H)，4.13-3.93(m，3H)，3.92-3.80(m，1H)，3.62(t，J＝7.02Hz，1H)，1.65(s，9H)，1.25(d，J＝7.02Hz，3H)，1.13(t，J＝7.11Hz，3H)，0.96(s，3H)；31PNMR(300MHz，DMSO-d6)δ：4.16；MS(ES+)m/z 653(M+H)+。
实施例15
步骤7：5’-O-[[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](1H-吲
哚-5-基氧基)氧膦基]-2’-C-甲基胞苷
在0℃下，用TFA(0.5mL)处理在DCM中的来自实施例13，步骤6的第一洗脱的5’-O-[[[1-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-1H-吲哚-5-基]氧基][[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷(0.01M)，并且在RT下搅拌2h。将反应物用H2O(0.1mL)处理并且在35℃下搅拌2h。将粗产物溶于DMSO，并且通过RP-HPLC(固定相：对称C18柱，7μm，19×300mm。流动相：乙腈/用0.1％TFA缓冲的H2O)进行纯化。将含有纯化合物的馏分合并，并且冷冻干燥，从而以白色粉末的形式得到标题化合物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：11.12(br s，1H)，8.94(br s，1H)，8.12(br s，1H)，7.88(d，J＝7.49Hz，1H)，7.44-7.31(m，3H)，6.95(d，J＝9.64Hz，1H)，6.40(s，1H)，6.03-5.91(m，2H)，5.87(s，1H)，5.43(br s，1H)，5.30(br s，1H)，4.47-4.38(m，1H)，4.38-4.22(m，1H)，4.14-4.01(m，3H)，3.91-3.74(m，1H)，3.67-3.58(m，1H)，1.22(d，J＝6.99Hz，3H)，1.17(t，J＝7.17Hz，3H)，1.00(s，3H)；31P NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：4.27；MS(ES+)m/z 553(M+H)+。
表1和表2中提供的额外实施例是按照方案1中所描绘的程序以及实施例1-15中所描述的程序制备的，并且是以在磷立体中心处的非对映异构体混合物或单独的非对映异构体的形式获得的。
表1
| Ex | 名称 | MSAr R6(M+1) |
| 16 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-甲氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph Me 533 |
| 17 | 5’-O-[[[(1S)-2-甲氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](1-萘氧基)氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 1-萘基 Me 549 |
| 18 | 5’-O-[[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | Ph Et 513 |
| 19 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-(环丙基甲氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph cPr-CH2- 573 |
| 20 | 5’-O-[[[(1S)-2-甲氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | Ph Me 499 |
| 21 | 5’-O-[[[(1S)-2-甲氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基][4-(三氟甲基)苯氧基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-CF3-Ph Me 567 |
| 22 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-氧代-2-丙氧基乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph nPr 561 |
| 23 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-氧代-2-(三环[3.3.1.13，7]癸-2-基氧基)乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 2-4-Cl-Ph 653金刚烷基 |
| 24 | 5’-O-[(2-氯代苯氧基)[[(1S)-2-甲氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 2-Cl-Ph Me 533 |
| 25 | 5’-O-[(4-溴代苯氧基)[[(1S)-2-甲氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Br-Ph Me 577 |
| 26 | 5’-O-[[[(1S)-2-甲氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](4-甲氧基苯氧基)氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-MeO-Ph Me 529 |
| 27 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-(1，1-二甲基乙氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph tBu 575 |
| 28 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-氧代-2-(2-丙烯氧基)乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph 烯丙基 559 |
| 29 | 5’-O-[[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基][4-(三氟甲氧基)苯氧基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-CF3O-Ph Et 597 |
| 30 | 5’-O-[[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](2-萘氧基)氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 2-萘基 Et 563 |
| 31 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-(2，2-二氟乙氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph CHF2CH2- 583 |
| 32 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-氧代-2-苯氧基乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph Ph 595 |
| 33 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-氧代-2-(苯基甲氧基)乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph 苯甲基 609 |
| 34 | 5’-O-[[[(1S)-2-丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](2-氯代苯氧基)氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 2-Cl-Ph nBu 575 |
| 35 | 5’-O-[[[(1S)-2-丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基][(4-氯代-1-萘基)氧基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-1-nBu 625萘基 |
| 36 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-(环己氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph nBu 601 |
| 37 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-(辛氧基)-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph nOct 631 |
| 38 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-(环戊氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph cPen 587 |
| 39 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-(2-乙基丁氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph 2Et-Bu 603 |
| 40 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-(1-萘氧基)-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph 1-萘基 645 |
| 41 | 5’-O-[[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基][5-甲基-2-(1-甲基乙基)苯氧基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 2-iPr-5-MeEt 569-Ph |
| 42 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-[(4-甲基戊基)氧基]-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph 4-Me-Pen 603 |
| 43 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-1-甲基-2-(3-甲基丁氧基)-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph 3-Me-Bu 589 |
| 44 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-(庚氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-Ph nHep 617 |
| 45 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-(2-甲氧基乙氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | MeO-4-Cl-Ph 577(CH2)2- |
| 46 | 5’-O-[(4-氯代苯氧基)[[(1S)-2-(3-甲氧基丙氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | MeO-4-Cl-Ph 591(CH2)3- |
| 47 | 5’-O-[[[(1S)-2-丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | Ph nBu 541 |
| 48 | 5’-O-[[[(1S)-2-乙氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基](2-甲基苯氧基)氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 2-Me-Ph Et 527 |
| 49 | 5’-O-[[[(1S)-2-丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基][4-氯代-5-甲基-2-(1-甲基乙基)苯氧基]氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Cl-2-iPr-nBu 6315-Me-Ph |
| 50 | 5’-O-[[[(1S)-2-(2-乙基丁氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 2-Et-Bu 569Ph |
| 51 | 5’-O-[[[(1S)-1-甲基-2-[(4-甲基戊基)氧基]-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | 4-Me-Pen 569Ph |
| 52 | 5’-O-[[[(1S)-1-甲基-2-(1-甲基乙氧基)-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | iPr 527Ph |
| 53 | 5’-O-[[[(1S)-1-甲基-2-(3-甲基丁氧基)-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | Ph 3-Me-Bu 555 |
| 54 | 5’-O-[[[(1S)-2-(2，2-二甲基丙氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | neoPen 555Ph |
| 55 | 5’-O-[[[(1S)-2-(环戊基甲氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | -CH2cPen 567Ph |
| 56 | 5’-O-[[[(1S)-2-(环己基甲氧基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | -CH2cHex 581Ph |
| 57 | 5’-O-[[[(1S)-1-甲基-2-氧代-2-丙氧基乙基]氨基]苯氧基氧膦基]-2’-C-甲基胞苷 | Ph nPr 527 |
缩写：nBu＝正丁基；Ph＝苯基；Me＝甲基；Et＝乙基；nPr＝正丙基；cPr-CH2＝环丙基甲基；cPen＝环戊基；cHex＝环己基；nOct＝正辛基；2-Et-Bu＝2-乙基丁-1-基；4-Me-Pen＝4-甲基戊-1-基；3-Me-Bu＝3-甲基丁基；nHep＝正庚基；2-nPr-Pen＝2-(n-丙基)戊-1-基
表2
生物试验
将用于测定对HCV复制抑制的试验描述如下。
A、对HCV RNA复制抑制的试验：
在含有亚基因组HCV复制子的培养的肝瘤(HuH-7)细胞中评价本发明化合物影响丙型肝炎病毒RNA复制的能力。试验详情如下所述。该复制子试验是对V.Lohmann，F.Korner，J-O.Koch，U.Herian，LTheilmann，和R.Bartenschlager，“Replication of a Sub-genomic HepatitisC Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line，”Science 285:110(1999)中所描述内容的改进。
方案：
该试验是原位核糖核酸酶保护，基于闪烁邻近的板试验(SPA)。将10000-40000个细胞置于96孔Cytostar板(Amersham)中的100-200μL培养基中，所述培养基含有0.8mg/mL的G418。在0-18小时内向细胞加入各种浓度的化合物，所述浓度最高达到100μM溶于1％的DMSO中。然后培养24-96小时。使细胞固定(20分钟，10％福尔马林)，渗透化(20分钟，0.25％Triton X-100/PBS)并使用与RNA病毒基因组中所含的(+)链NS5B(或其它基因)互补的单链33p RNA探针杂交(整夜，50℃)。洗涤细胞，用RNA酶处理，洗涤，加热至65℃，并在Top-Count中计数。以每分钟计数(cpm)的减少的形式读取对复制的抑制。
所选择的含有亚基因组复制子的人类HuH-7肝瘤细胞携带胞质RNA，所述胞质RNA由HCV 5’非翻译区(NTR)、新霉素可选标记、EMCV IRES(内部核糖体进入部位)和HCV非结构蛋白NS3至NS5B、随后是3’NTR组成。
在复制试验中测试的代表性化合物显示EC50小于100微摩尔。
B、细胞内代谢的试验：
还评价了本发明的化合物进入人类肝瘤细胞系并在细胞内转化成相应的核苷5’-单、二-和三磷酸酯的能力。
使用HuH-7和HBI10A两个细胞系进行本发明化合物的细胞内代谢研究。HuH-7是人类肝瘤细胞系，HBI10A表示衍生自携带HCV双顺反子复制子的HuH-7细胞的克隆系。将HuH-7细胞置于含10％胎牛血清的完全Dulbecco氏改良Eagle氏培养基中，HBI10A细胞置于含G418(0.8mg/mL)的同样培养基中，1.5×106细胞/60-mm皿，以致于在加入化合物时有80％的细胞汇合。将氚化物以2μM在细胞培养基中培养3或23小时。收集细胞，用磷酸盐缓冲的盐水洗涤并计数。然后在70％甲醇、20mM EDTA、20mM EGTA中提取细胞，并离心。干燥胞溶产物，在连接至在线β-RAM闪烁探测器(IN/US Systems)的WatersMillenium系统上使用离子对反相(C-18)HPLC分析放射性标记的核苷酸。HPLC的流动相由(a)含2mM四丁铵氢氧化物的10mM磷酸钾和(b)含10mM磷酸钾和2mM四丁铵氢氧化物的50％甲醇组成。通过与标准比较保留时间进行峰鉴别。活性表示为在106HuH-7或HBI10A细胞中检测到的核苷酸的皮摩尔数。
还在下述的反筛选中评价了本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯的细胞毒性和抗病毒特异性。
C、反筛选：
在下列试验中测量本发明氨基磷酸(核苷)(芳基)酯抑制人类DNA聚合酶的能力。
a、对人类DNA聚合酶α和β的抑制：
反应条件：
50μL反应体积
反应缓冲剂组分：
20mM Tris-HCl，pH7.5
200μg/mL牛血清蛋白
100mM KCl
2mM β-巯基乙醇
10mM MgCl2
1.6μM dA，dG，dC，dTTP
α-33P-dATP
酶和模板：
0.05mg/mL缺口鱼精DNA模板
U/μL DNA聚合酶α或β
缺口鱼精DNA模板的制备
将5μL1M MgCl2加入到500μL活化的鱼精DNA(USB70076)中；
升温至37℃并且加入30μL65U/μL的核酸外切酶III(GibcoBRL18013-011)；
在37℃下培养5分钟；
通过加热至65℃持续10分钟而终止反应；
将50-100μL等份试样上样到用20mM Tris-HCl，pH7.5平衡的Bio-spin 6色谱柱(Bio-Rad 732-6002)上；
通过在1000Xg下离心4分钟而洗脱；
收集洗脱物，并在260nm下测定吸光度从而测定浓度。
将DNA模板稀释到适量的20mM Tfis-HCl中，pH7.5，并且将酶稀释到适量的含有2mM β-巯基乙醇的20mM Tris-HCl，和100mM KCl中。将模板和酶移液到微量离心管或96孔板中。还分别使用酶稀释缓冲剂和测试化合物溶剂制备排除了酶的空白反应和排除了测试化合物的对照反应。使用含有上面所列组分的反应缓冲剂启动反应。将该反应在37℃下培育1小时。加入20μL0.5M EDTA猝灭反应。将50μL猝灭的反应物滴到Whatman DE81滤盘上并且风干。用150mL 0.3M甲酸铵，pH8，反复洗涤滤盘，直到1mL洗涤液<100cpm。用150mL纯乙醇洗涤盘两次，用150mL无水乙醚洗涤一次，干燥，在5ml闪烁流体中计数。
根据下列等式计算抑制百分比：抑制％＝[1-(测试反应中的cpm-空白中的cpm)/(对照反应中的cpm-空白中的cpm)]×100。
b、对人类DNA聚合酶γ的抑制：
在反应物中测量对人类DNA聚合酶γ的抑制效力，所述反应物包括：缓冲剂中的0.5ng/μL酶；10μM dATP、dGTP、dCTP和TTP；2μCi/反应[α-33P]-dATP，和0.4μg/μL活化的鱼精DNA(从US Biochemical购得)，所述缓冲剂含有20mM Tris pH8、2mM β-巯基乙醇、50Mm KCl、10mM MgCl2和0.1μg/μl BSA。该反应在37℃下进行1小时，通过加入0.5M EDTA至终浓度为142mM，从而猝灭反应。通过阴离子交换滤器结合物和闪烁计数将产物的形成进行量化。在至多50μM的浓度下测试化合物。
根据下列等式计算抑制百分比：抑制％＝[1-(测试反应中的cpm-空白中的cpm)/(对照反应中的cpm-空白中的cpm)]×100。
在下列试验中测量本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯抑制HIV感染性和HIV传播的能力。
c、HIV感染性试验
使用表达CXCR4和CCR5二者的HeLa Magi细胞变体进行反应，其中选择CXCR4和CCR5来用于低背景β-半乳糖苷酶(β-gal)的表达。细胞感染48小时，使用化学发光底物(Galactolight Plus，Tropix，Bedfofd，MA)量化由整合的HIV-1 LTR启动子产生的β-gal。在始于100μM的两倍系列稀释液中进行抑制剂滴定(平行两份)；相对于对照感染计算在每个浓度时的抑制百分比。
d、HIV传播的抑制：
本发明的化合物抑制人类免疫缺陷病毒(HIV)传播的能力是通过美国专利号5,413,999(May 9，1995)和J.P Vacta等人，Proc.Natl.Acad. Sci.，91：4096-4100(1994)中所描述的方法进行测量的，其全部内容在此引为参考。
如以下试验所述，还在基于MTS-细胞的试验中，针对含有亚基因组HCV复制子的培养肝瘤(HuH-7)细胞的细胞毒性，对本发明的氨基磷酸(核苷)(芳基)酯进行筛选。HuH-7细胞系如H Nakabayashi等人，Cancer Res.，42：3858(1982)中所述。
e、细胞毒性试验
在适当的培养基中制得细胞培养物，对于悬浮培养物，浓度约为1.5×105细胞/mL，培育3天，对于附着培养物，浓度为5.0×104细胞/mL，培育3天。将99μL细胞培养物转入96孔组织培养物处理板的孔中，加入1μL100倍终浓度的溶于DMSO的测试化合物。将该板在37℃下5％CO2中培育指定时间段。培育期过后，向每个孔中加入20μL CellTiter96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay试剂(MTS)(Promega)，并且将该板在37℃下5％CO2中再培育一段时间，最多3小时。振荡该板以充分混合，使用板读取器在490nm下读取吸光度。在加入MTS试剂前制备已知细胞数的悬浮培养细胞的标准曲线。代谢活性细胞将MTS还原为甲腊(formazan)。甲腊在490nm处吸收。比较在490nm下有化合物存在的吸光度和没有加入任何化合物的细胞中的吸光度。
参考文献：Cory，A.H.等人，“Use of an aqueous solubletetrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture，”Cancer Commun.3：207(1991)。
采用下列试验测量本发明的化合物抗其它RNA依赖性RNA病毒的活性。
a、化合物体外抗鼻病毒的抗病毒活性的测定(细胞病变效果抑制
试验)
试验条件如Sidwell和Huffman，“Use of disposable microtissueculture plates for antiviral and interferon induction studies，”Appl. Microbiol.22：797-801(1971)中所述。
病毒：
如Sidwell和Huffman参考文献中所述，鼻病毒2型(RV-2)，HGP株，与KB细胞和培养基(0.1％NaHCO3，不含抗生素)一起使用。从ATCC获得的病毒，来自于患轻度急性发热性上呼吸道疾病的成年男性的咽喉拭子。
鼻病毒9型(RV-9)、株211和鼻病毒14型(RV-14)、株TOW，也从Rockyille，MD的美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得。RV-9来自人类咽喉洗涤物，并且RV-14采自患上呼吸道疾病的年轻成人的咽喉拭子。这两种病毒与人类颈上皮样癌细胞HeLa Ohio-1细胞(Dr.FredHayden，Univ.of VA)一起使用。使用含5％胎牛血清(FBS)和0.1％NaHCO3的MEM(Eagle氏极限必需培养基)作为生长培养基。
所述三种病毒的抗病毒测试培养基均是含有5％FBS、0.1％NaHCO3、50μg庆大霉素/mL和10mM MgCl2的MEM。
用于试验本发明化合物的最大浓度为2000μg/Ml。加入测试化合物后，大约5分钟后，向试验板中加入病毒。同时进行适当的对照。将试验板在37℃下，湿润空气和5％CO2中进行培育。通过在显微镜下观察形态变化，监测对照细胞的细胞毒性。通过对病毒CPE数据和毒性对照数据的回归分析得出ED50(50％有效剂量)和CC50(50％细胞毒浓度)。通过如下公式计算选择指数(SI)：SI＝CC50÷ED50。
b、化合物在体外抗登革热、Banzi和黄热病的抗病毒活性的测定
(CPE抑制试验)
上述Sidwell和Huffman参考文献提供了试验的详情。
病毒：
从疾病控制中心获得登革热病毒2型，新几内亚株。使用两个非洲绿猴肾细胞系培养该病毒(Vero)，并进行抗病毒测试(MA-104)。由感染的小鼠脑制备的黄热病病毒，17D株，和从南非发热男孩的血清分离的Banzi病毒，H336株，均得自ATCC。Vero细胞与这两种病毒一起被用于试验。
细胞和培养基：
MA-104细胞(BioWhittaker，Inc.，Walkersville，MD)和Vero细胞(ATCC)被用于培养基199中，所述培养基199含有5％FBS和0.1％NaHCO3，并且不含抗生素。
用于登革热，黄热病和Banzi病毒试验的培养基是MEM，其含有2％FBS、0.18％NaHCO3和50μg庆大霉素/mL。
根据Sidwell和Huffman的参考文献和类似于上述鼻病毒抗病毒测试的方式进行本发明化合物的抗病毒测试。对于每种所述病毒，在5-6天后达到足够的细胞病变效应(CPE)读数。
c、化合物体外抗西尼罗河病毒的抗病毒活性的测定(CPE抑制试
验)
上述Sidwell和Huffman参考文献提供了试验的详情。西尼罗河病毒，来源于乌鸦脑的纽约分离物，是从疾病控制中心获得的。如上培养和使用Vero细胞。试验培养基是MEM，其含有1％FBS、0.1％NaHCO3和50μg庆大霉素/mL。
根据类似于用于鼻病毒活性试验方法的Sidwell和Huffman方法进行本发明化合物的抗病毒测试。在5-6天后达到足够的细胞病变效应(CPE)读数。
d、化合物在体外抗鼻病毒、黄热病病毒、登革热病毒、Banzi病毒
和西尼罗河病毒的抗病毒活性的测定(中性红摄取试验)
在进行过上述CPE抑制试验后，使用另外的细胞病变检测方法，其被描述在“Microtiter Assay for Interferon：MicrospectrophotometricOuantitation of Cvtopathic Effect，”Appl.Environ.Microbiol.31：35-38(1976)中。使用EL309型微孔板读书器(Bio-Tek Instruments Inc.)对试验板进行读数。如上所述地计算ED50和CD50。
药物制剂的实施例
作为本发明化合物的口服组合物的一个具体实施方式，将50mg实施例1实施例2的化合物与充分粉碎的乳糖进行配制，从而提供580到590mg的总量，填充到O号硬明胶胶囊中。
已经参照具体实施方式描述并举例说明了本发明，但本领域技术人员应该理解，其中可进行各种变化、改进和替换而不脱离本发明的精神和范围。例如，由于被治病人对HCV感染程度的响应度不同，所以可以使用除上文所述的优选剂量外的有效剂量。同样，观察到的药理学反应可能根据和依赖于所选特定活性化合物或是否存在药物载体以及制剂类型和使用的用药模式而变化，且遵循本发明目的和实践考虑了这样的预期变化或结果差异。因此，本发明仅仅被权利要求的范围所限制，且权利要求在合理情况下应尽可能地得到广泛的解释。
Claims (19)
1.一种结构式I的化合物:
或其药学上可接受的盐；其中
n是0、1或2；
Ar是苯基、萘基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚基、喹啉基或异喹啉基，其中Ar任选地被一到五个独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、氰基、硝基、氨基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基的取代基所取代；
R1是氢或氟；
R2是氟、甲氧基或OR10；
R3选自氢、C1-16烷基羰基、C2-18烯基羰基、C1-10烷氧基羰基、C3-6环烷基羰基、C3-6环烷氧基羰基以及如下结构式的氨基酰基残基:
R10选自氢、C1-16烷基羰基、C2-18烯基羰基、C1-10烷氧基羰基、C3-6环烷基羰基、C3-6环烷氧基羰基以及如下结构式的氨基酰基残基:
或者R3和R10和与它们相连的氧原子一起形成五员环状碳酸酯；
R4是氢、C1-5烷基、苯基或苄基；
其中烷基任选地被一个选自氟、羟基、甲氧基、氨基、羧基、氨基甲酰基、胍基、巯基、甲硫基、1H-咪唑基和1H-吲哚-3-基的取代基所取代；并且其中苯基和苄基任选地被一到两个独立地选自卤素、羟基和甲氧基的取代基所取代；
R5是氢或甲基；
或者R4和R5和与它们相连的碳原子一起形成3-到6-员脂肪族螺环系统；
R6是氢、C1-16烷基、C2-20烯基、(CH2)nC3-6环烷基、苯基、苄基或金刚烷基；其中烷基、烯基、环烷基和金刚烷基任选地被一到三个独立地选自卤素、羟基、羧基、C1-4烷氧基的取代基所取代；并且其中苯基和苄基任选地被一到三个独立地选自卤素、羟基、氰基、C1-4烷氧基、三氟甲基和三氟甲氧基的取代基所取代；
R7是氢、C1-5烷基或苯基C0-2烷基；
R8是氢、C1-4烷基、C1-4酰基、苯甲酰基、C1-4烷氧基羰基、苯基C0-2烷氧基羰基、C1-4烷氨基羰基、苯基C0-2烷氨基羰基、C1-4烷基磺酰基或苯基C0-2烷基磺酰基；并且
R9是氢、C1-8烷基羰基或C1-8烷氧基羰基。
2.权利要求1的化合物，其中R1是氢或氟，R2是羟基并且R3是氢。
3.权利要求1的化合物，其中R1是氢或氟，R2是氟并且R3是氢。
4.权利要求1的化合物，其中Ar是任选地被一到五个取代基所取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、氰基、硝基、氨基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基。
5.权利要求4的化合物，其中Ar是被三到五个取代基所取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、氰基、硝基、氨基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基。
6.权利要求5的化合物，其中Ar是被三个取代基所取代的苯基，所述取代基独立地选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、氰基、硝基、氨基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基和C1-4烷氧基羰基。
7.权利要求1的化合物，其中Ar是吲哚基。
8.权利要求1的化合物，其中R5是氢并且R4选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、2-甲基-1-丙基、羟甲基、氟代甲基、巯基甲基、羧基甲基、氨基甲酰基甲基、1-羟基乙基、2-羧基乙基、2-氨基甲酰基乙基、2-甲硫基乙基、4-氨基-1-丁基、3-氨基-1-丙基、3-胍基-1-丙基、1H-咪唑-4-基甲基、苯基、苄基、4-羟基苄基和1H-吲哚-3-基甲基。
9.权利要求8的化合物，其中R4是甲基或苄基。
10.权利要求9的化合物，其中R4是甲基。
11.权利要求1的化合物，其中R6是C7-16烷基。
12.权利要求11的化合物，其中R6是C8-12烷基。
13.权利要求12的化合物，其中R6是C8烷基。
14.权利要求1的化合物，其中Ar是苯基或吲哚基，其各自任选地被一到三个选自卤素和C1-4烷基的取代基所取代；R4是甲基；R6是乙基或丁基；并且R5是氢。
15.权利要求1的化合物，其中Ar是未取代的苯基并且R6是C8烷基。
16.权利要求1的化合物，其选自:
或其药学上可接受的盐。
17.一种包含权利要求1的化合物和药学上可接受载体的药物组合物。
18.权利要求1的化合物用于在哺乳动物中治疗丙型肝炎病毒感染的用途。
19.权利要求1的化合物用于制备用于在哺乳动物中治疗丙型肝炎病毒感染的药物的用途。
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