KR20050088079A - 2'-분지형 뉴클레오시드 및 플라비비리다에 돌연변이 - Google Patents

2'-분지형 뉴클레오시드 및 플라비비리다에 돌연변이 Download PDF

Info

Publication number
KR20050088079A
KR20050088079A KR1020057008621A KR20057008621A KR20050088079A KR 20050088079 A KR20050088079 A KR 20050088079A KR 1020057008621 A KR1020057008621 A KR 1020057008621A KR 20057008621 A KR20057008621 A KR 20057008621A KR 20050088079 A KR20050088079 A KR 20050088079A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
alkyl
branched
prodrug
flaviviridae
acyl
Prior art date
Application number
KR1020057008621A
Other languages
English (en)
Inventor
쟝-피에르 솜마도시
콜라 파올로 라
데이빗 스탠드링
바딤 비크코
린 쿠
Original Assignee
이데닉스 (케이만) 리미티드
유니베르시타 데글리 스투디 디 카글리아리
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=32326395&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20050088079(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 이데닉스 (케이만) 리미티드, 유니베르시타 데글리 스투디 디 카글리아리 filed Critical 이데닉스 (케이만) 리미티드
Publication of KR20050088079A publication Critical patent/KR20050088079A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/215—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/217—IFN-gamma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/706—Specific hybridization probes for hepatitis
    • C12Q1/707—Specific hybridization probes for hepatitis non-A, non-B Hepatitis, excluding hepatitis D
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
    • C12N2770/24222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
    • G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
    • G01N2333/186—Hepatitis C; Hepatitis NANB
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

본 발명은 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하는 것을 포함하는, 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법을 기술한다. 본 발명은 또한 플라비비리다에의 뮤턴트 균주를 검출하는 방법 및 그의 치료 방법을 포함한다.

Description

2'-분지형 뉴클레오시드 및 플라비비리다에 돌연변이{2'-branched nucleosides and flaviviridae mutation}
관련 출원
본 출원은 그의 내용이 본 명세서에 참고로 인용되는 2002년 11월 15일 출원된 미국 가출원 제 60/426,675호에 대한 우선권의 이점을 청구한다.
본 발명은 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 요법 및/또는 교대 요법으로 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 치료를 필요로 하는 인간과 같은 숙주에 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 인터페론과 병용 요법 및/또는 교대 요법으로 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 치료를 필요로 하는 인간과 같은 숙주에 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법을 포함한다.
바이러스의 플라비비리다에 패밀리는 다음과 같은 적어도 세개의 상이한 속을 포함한다: 고양이 및 돼지의 질병을 야기하는 페스티바이러스; 뎅기열 및 황색 열과 같은 질병의 주요 요인인 플라비바이러스; 및 단독 구성원이 HCV인 헤파시바이러스. 플라비바이러스 속은 혈청학적 관계에 따라 각 그룹으로 분류되는 68 개 이상의 구성원을 포함한다(Calisher et al., J. Gen. Virol, 1993,70, 37-43). 임상학적 증상은 다양하며 열, 뇌염 및 출혈열을 포함한다(Fields Virology, Editors: Fields, B. N., Knipe, D. M., 및 Howley, P. M., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA, 1996, Chapter 31,931-959). 인간 질병과 연관된 세계적인 관심사의 플라비바이러스는 뎅기 출혈열 바이러스(DHF), 황색열 바이러스, 쇼크 증상 및 일본 뇌염 바이러스를 포함한다(Halstead, S. B., Rev. Infect. Dis., 1984, 6, 251-264; Halstead, S. B., Science, 239: 476-481,1988; Monath, T. P., New Eng. J. Med., 1988, 319, 641-643).
페스티바이러스 속은 소의 바이러스성 설사 바이러스(BVDV), 전통적인 돼지 열 바이러스(CSFV, 또한 돼지 콜레라 바이러스로도 불리운다)및 양의 경계질환 바이러스(BDV)를 포함한다(Moennig, V. et al. Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98). 길들여진 가축(소, 돼지 및 양)의 페스티바이러스 감염은 전세계적으로 상당한 경제적 손실을 야기한다. BVDV는 소의 점막 질환을 야기하며 가축 산업에서 경제적으로 상당한 중요성을 갖고 있다(Meyers, G. and Thiel, H.-J., Advances in Virus Research, 1996, 47, 53-118; Moennig V., et al, Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98). 인간 페스티바이러스는 동물 페스티바이러스와 같이 집중적으로 특정화되지 않았다. 그러나, 혈청학적 연구는 인간이 페스티바이러스에 상당히 노출되었음을 지적한다.
페스티바이러스 및 헤파시바이러스는 플라비비리다에 패밀리내의 밀접한 관련이 있는 바이러스 그룹이다. 이 패밀리내의 다른 밀접하게 관련된 바이러스는 GB 바이러스 A, GB 바이러스 A-류 제제, GB 바이러스-B 및 GB 바이러스-C(또한 G형 간염 바이러스로도 지칭된다, HGV)를 포함한다. 헤파시바이러스 그룹(C형 간염 바이러스; HCV)은 다수가 밀접한 관련이 있지만, 인간을 감염시키는 유전자형적으로 상이한 바이러스로 구성된다. 약 6개의 HCV 유전자형 및 50개 이상의 서브타입이 있다. 페스티바이러스와 헤파시바이러스 간에 유사성이 있고, 헤파시바이러스가 세포 배양액에서 효과적으로 성장하지 못하기 때문에, 소의 바이러스성 설사 바이러스(BVDV)가 종종 HCV 바이러스를 연구하는데 대용체로 사용되곤 한다.
페스티바이러스와 헤피시바이러스의 유전자 조직은 매우 유사하다. 이들 양성 스트랜드 RNA 바이러스는 바이러스 복제에 필요한 모든 바이러스성 단백질을 코딩하는 단일 대형 오픈 판독 프레임(ORF)을 함유한다. 이들 단백질은 세포성 및 바이러스-코딩된 프로테이나제에 의해 동시- 및 나중에 해독 프로세싱되는 폴리프로테인으로 발현되어 성숙한 바이러스 단백질을 생성한다. 바이러스 게놈 RNA 복제를 담당하고 있는 바이러스성 단백질은 거의 카복시-말단에 위치한다. ORF의 2/3가 비구조(NS)단백질로 명명된다. 페스티바이러스 및 헤파시바이러스에 대한 ORF의 비구조 단백질 부분의 유전자 조직 및 폴리프로테인 프로세싱은 매우 유사하다. 페스티바이러스 및 헤파시바이러스 둘 모두에 있어서, 성숙 비구조((NS)단백질은 비구조 단백질 코딩 영역의 아미노-말단에서부터 ORF의 카복시-말단 서열순으로 p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 NS5B로 구성된다.
페스티바이러스 및 헤파시바이러스의 NS 단백질은 특이적 단백질 기능의 특성적인 서열 도메인을 공유한다. 예를 들어, 두 그룹에서 바이러스의 NS3 단백질은 세린 프로테이나제와 헬리카제의 아미노산 서열 모티프 특성을 가진다(Gorbalenya et al. (1988)Nature 333: 22; Bazan and Fletterick (1989)Virology 171: 637-639; Gorbalenya et al. (1989)Nucleic Acid Res. 17. 3889-3897). 유사하게, 페스티바이러스 및 헤파시바이러스의 NS5B 단백질은 RNA-지향 RNA 폴리머라제의 모티프 특성을 가진다(Koonin, E. V. and Dolja, V. V. (1993)Crit. Rev. Biochem. Molec. Biol. 28: 375-430).
바이러스 라이프 사이클에서 페스티바이러스 및 헤파시바이러스의 NS 단백질의 실질적인 역할 및 기능은 직접적으로 유사하다. 두 경우, NS3 세린 프로테이나제가 ORF에서 그의 위치에 있는 폴리프로테인 전구체 다운스트림의 모든 단백질분해 프로세싱에 관여한다(Wiskerchen and Collett (1991)Virology 184: 341-350; Bartenschlager et al. (1993)J. Virol. 67: 3835-3844; Eckart et al. (1993)Biochem. Biophys. Res. Comm. 192: 399-406; Grakoui et al. (1993)J. Virol. 67: 2832-2843; Grakoui et al. (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 10583-10587; Hijikata et al. (1993)J. Virol. 67: 4665-4675; Tome et al. (1993)J. Virol. 67: 4017-4026). 두 경우, NS4A 단백질이 NS3 세린 프로테아제와 함께 조효소로 작용한다(Bartenschlager et al. (1994)J. Virol. 68: 5045-5055; Failla et al. (1994)J. Virol. 68: 3753-3760; Lin et al. (1994)68: 8147-8157; Xu et al. (1997)J. Virol. 71: 5312-5322). 두 바이러스의 NS3 단백질이 또한 헬리카제로 작용한다(Kim et al. (1995)Biochem. Biophys. Res. Comm. 215: 160-166; Jin and Peterson (1995)Arch. Biochem. Biophys., 323: 47-53; Warrener and Collett (1995)J. Virol. 69: 1720-1726). 마지막으로, 페스티바이러스 및 헤파시바이러스의 NS5B 단백질은 예측 RNA-지향 RNA 폴리머라제 활성을 갖는다(Behrens et al. (1996)EMBO J. 15: 12-22; Lchmannet al. (1997)J. Virol. 71: 8416-8428; Yuan et al. (1997)Biochem. Biophys. Res. Comm. 232: 231-235; Hagedorn, PCT WO 97/12033; Zhong et al. (1998)J. Virol. 72.9365-9369).
플라비비리다에 과의 바이러스에 대하여 활성인 것으로 확인된 항바이러스제의 예로서 하기를 포함한다:
(1)인터페론
인터페론(IFN)은 거의 10년간 만성 간염을 치료하기 위해 시판되고 있는 물질이다. IFN는 바이러스성 감염에 응답하여 면역 세포에 의해 생성되는 당단백질이다. IFN는 HCV를 포함하여 다수의 바이러스 복제를 저해하며, C형 간염 감염 치료에 단독으로 사용되는 경우, IFN는 특정의 경우에 있어서 혈청 HCV-RNA를 검출되지 않는 수준으로 억제할 수 있다. 또한, IFN는 혈청 아미노 트랜스퍼라제 수준을 노말화할 수 있다. 불행히도, IFN의 효과는 일시적이며 지속적인 응답은 HCV로 만성 감염된 환자의 8-9%에서만 일어나고 있다(Gary L. Davis. Gastroenterology 118: S104-S114, 2000).
다수의 특허는 HCV를 포함한 플라비비리다에, 인터페론에 기초한 요법을 이용한 치료법을 개시하였다. 예를 들어, Blatt 등에 의한 미국 특허 제 5,980,884호는 일련의 인터페론을 사용하여 HCV로 고통받는 환자의 재치료 방법을 개시하였다. Bazer 등에 의한 미국 특허 제 5,942,223호는 양 또는 소의 인터페론-타우를 이용한 항-HCV 요법을 개시하였다. Alber 등에 의한 미국 특허 제 5,928,636호는 HCV를 포함한 감염성 질환을 치료하기 위한 인터류킨-12 및 인터페론 알파의 병용 요법을 개시하였다. Chretien 등에 의한 미국 특허 제 5,849,696호는 HCV를 치료하기 위한 티모신 단독 또는 인터페론과의 병용 요법을 개시하였다. Valtuena 등에 의한 미국 특허 제 5,830,455호는 자유 래디칼 스캐빈저 및 인퍼페론을 사용한 병용 HCV 요법을 개시하였다. Imakawa에 의한 미국 특허 제 5,738,845호는 HCV 치료를 위한 인간 인터페론 타우 단백질의 용도를 개시하였다. 인터페론에 기초해 HCV를 치료하는 다른 치료법이 Testa 등에 의한 미국 특허 제 5,676,942호, Blatt 등에 의한 미국 특허 제 5,372,808호 및 미국 특허 제 5,849,696호에 개시되었다.
(2)리바비린(Battaglia, A. M. et al., Ann.Pharmacother, 2000,. 34, 487-494); Berenguer, M.et al. Antivir. Ther., 1998,3(Suppl. 3),125-136).
리바비린(1-β-D-리보푸라노실-1-1,2,4-트리아졸-3-카복사미드)은 비라졸 상품명으로 시판되고 있는 비-인터페론-유도된 합성의 광범위 스펙트럼 항바이러스성 뉴클레오사이드 유사체이다(The Merck Index, 11th edition, Editor: Budavari, S., Merck & Co., Inc., Rahway, NJ, pl304, 1989); Rebetol(Schering Plough)and Co-Pegasus(Roche). 미국 특허 제 3,798,209호 및 RE29,835는 리바비린을 개시하고 청구하였다. 리바비린은 구아노신과 구조적으로 유사하며, 플라비비리다에를 포함하여 수개의 DNA 및 RNA 바이러스에 대해 시험관내에서 활성을 가진다(Gary L. Davis. Gastroenterology 118: S104-S114, 2000). 미국 특허 No 4,211, 771(ICN Pharmaceuticals)에는 항바이러스제로서 리바비린의 용도를 기술하고 있다. 리바비린은 환자중 40%에서 혈청 아미노 트랜스퍼라제 수준을 정상으로 감소시키지만 HCV-RNA의 혈청 수준을 저하시키지는 못한다(Gary L. Davis.Gastroenterology 11 8 : S 104-S 114, 2000). 따라서, 리바비린 단독으로는 바이러스 RNA 수준을 감소시키는데 효능이 없다. 또한, 리바비린은 상당한 독성을 가지며 빈혈을 유도하는 것으로 알려졌다.
인터페론 및 리바비린 병용
Schering-Plough는 HCV를 갖는 환자에 투여하기 위한 RebetolR 캡슐(200 mg)로서 리바비린을 판매하고 있다. U. S. FDA는 Schering's 알파 인터페론-2b 제품 IntronR A 및 PEG-Intron의 병용 요법으로 만선 HCV 감염을 치료하기 위한 Rebetol 캡슐을 승인하였다. Intron A 및 PEG-Intron의 단일 요법(즉, 리바비린없이 투여)에 대하여 승인을 받았지만, Rebetol 캡슐의 단일 요법(즉, IntronR A 또는 PEG-Intron과 독립적으로 투여)에 대해서는 승인을 받지 못했다. Hoffman La Roche는 유럽 및 미국에서 HCV 치료를 위해 인터페론과 병용하여 사용하기 위하여 제품명 Co-Pegasus로 리바비린을 판매하고 있다. 다른 알파 인터페론 제품은 Roferon-A(Hoffmann-La Roche), InfergenR (Intermune, 이전의 Amgen's 제품), 및 WellferonR (Wellcome Foundation)를 포함하고, 이들의 HCV-단일요법에 대하여는 현재 FDA-승인된 상태이다. HCV용으로서 현재 개발중에 있는 인터페론 제품은 Roferon-A(인터페론 알파-2a)(Roche), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a)(Roche), INFERGEN(인터페론알파콘-1)(InterMune), OMNIFERON(자연발생 인터페론)(Viragen), ALBUFERON(Human Genome Sciences), REBIF(인터페론 베타-1a)(Ares-Serono), 오메가 인터페론(BioMedicine), 오랄 인터페론 알파(Amarillo Biosciences), 및 터페론 감마-1b(InterMune)를 포함한다.
HCV 감염을 치료하기 위한 인터페론과 리바비린의 병용은 인터페론을 투여받지 않았던 환자를 치료(Battaglia, A. M. et al., Ann. Pharmacother. 34: 487-494, 2000)하는데 뿐 아니라 조직학적 질환이 존재하는 환자를 치료(Berenguer, M. et al. Antivir. Ther. 3 (Suppl. 3): 125-136, 1998)하는데 효과적인 것으로 보고되었다. 연구된 바에 의하면 C형 간염에 걸린 환자가 비페길화된 인터페론 알파를 사용한 병용 요법에 비해 페길화된 인터페론-알파/리바비린 병용 요법에 보다 많이 응답하는 것으로 나타났다. 그러나, 단일요법과 마찬가지로 자가용혈, 독감 유사 증상, 빈혈 및 피로 등을 포함하여 병용 요법동안 상당한 부작용이 뒤따랐다(Gary L. Davis. Gastroenterology 118:S 104-S 114, 2000).
(3)알파케토아미드 및 히드라지노우레아를 포함한 기질에 기초한 NS3 프로테아제 저해제(Attwood et al., Antiviral peptide derivatives, PCT WO 98/22496,1998; Attwood et al., Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1999, 10, 259-273; Attwood et al., Preparation and use of amino acid derivatives as anti-viral agents, German Patent Pub. DE 19914474; Tung et al. 저해제 of serine proteases, particularly hepatitis C virus NS3 protease, PCT WO 98/17679), 및 보론산 또는 포스포네이트와 같은 친전자체로 종결된 저해제(Llinas-Brunet et al, hepatitis C inhibitor peptide analogues, PCT WO 99/07734)가 연구중에 있다.
(4)아미드가 14개의 탄소쇄로 치환된 RD3-4082 및 파라-페녹시페닐 그룹을 갖는 RD3-4078을 포함하는 2,4,6-트리하이드록시-3-니트로-벤즈아미드 유도체와 같은 비기질-기초 NS3 프로테아제 저해제(Sudo K. et al. Biochemical and Biophysical Research Communications, 1997, 238, 643-647; and Sudo K. et al. Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1998, 9, 186)가 또한 연구중에 있다.
(5)NS3/4A 융합 단백질 및 NS5A/5B 기질을 사용한 역상 HPLC 분석에서 관련 저해성을 나타내는 티아졸리딘 유도체(Sudo K. et al. Antiviral Research 1996, 32, 9-18), 특히 장 알킬 쇄에 의해 치환된 융합 신나모일 부분을 가지는 화합물 RD-1-6250, RD4 6205 및 RD4 6193.
(6)[Kakiuchi N. et al. J. EBS Letters 421, 217-220 and Takeshita N. et al. Analytical Biochemistry, 1997, 247, 242-246]에서 확인된 티아졸리딘 및 벤즈아닐라이드.
(7)SDS-PAGE 및 자가방사선 분석에서 스트렙토마이세스 종(Streptomyces sp.), Sch 68631의 발효 배양액으로부터 분리된 HCV 프로테아제(Chu M. et al. Tetrahedron Letters 1996, 37, 7229-7232)및 섬광 근접 분석(scintillation proximity assay)에서 활성이 입증된, 페니실리움 그리세오풀붐(Penicillium griseofulvum)진균으로부터 분리된 Sch 351633(Chu, M. et al Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9, 1949-1952)에 대하여 활성을 갖는 페난-트렌퀴논.
(8)선택적 NS3 저해제, 예로서, 거머리로부터 분리된 마크로분자 엘긴 씨(Qasim M. A. etal., Biochemistry, 1997, 36, 1598-1607);
(9)헬리카제 저해제(Diana, G. D. et al. Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C, 미국 특허 5,633,358 및 Diana, G. D. et al. Piperidine derivatives, pharmaceutical compositions thereof and their use in the treatment of hepatitis C, PCT WO 97/36554);
(10)뉴클레오타이드 폴리머라제 저해제 및 글리오톡신 (Ferrari, R. et al. Journal of Virology 1999, 73, 1649-1654), 및 천연 산물인 세룰레닌(Lohmann, V. et al. Virology 1998, 249, 108-118);
(11)바이러스의 5' 비-코딩 영역(NCR)에서 서열 스트레치에 상보적인 안티센스 포스포로티오에이트 올리고데옥시뉴클레오타이드(S-ODN)(Alt, M. et al. Hepatology 1995, 22, 707-717)또는 NCR의 3' 말단을 포함하는 뉴클레오타이드 326-348 및 HCV RNA의 코어 코딩 영역에 위치하는 뉴클레오타이드 371-388(Alt, M. et al. Archives of Virology 1997, 142, 589-599 and Galderisi, U. et al. Journal of Cellular Physiology 1999, 181, 251-257);
(12)IRES-의존 해독 저해제(Ikeda, N et al. Agent for the prevention and treatment of hepatitis C, 일본 특허 공개 JP-08268890 ; Kai, Y. et al Prevention and treatment of viral diseases, 일본 특허 공개 JP 10101591);
(13)뉴클레아제-내성 리보자임(예로서 Maccjak, D. J. et al., Hepatology 1999,30, abstract 995).
(14)뉴클레오시드 유사체 또한 플라비비리다에 감염 치료를 위해 개발중에 있다.
Idenix Pharmaceuticals, Ltd.는 US 특허 공개 2003/0050229 A1 및 US 특허 공개 번호 2003/0060400 A1(이는 국제 공개번호 WO01/90121 및 WO01/92282와 상응한다)에 분지형 뉴클레오시드, 및 HCV 및 플라비바이러스 및 페스티바이러스 치로에서의 용도를 기술하였다. Idenix 공개문헌에 인간 및 다른 숙주 동물에서 C형 감염(및 플라비바이러스 및 페스티바이러스)의 치료 방법은 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체중 단독으로, 또는 배합되어 투여되는 생물학적으로 활성인 1', 2', 3' 또는 4'-분지형 β-D 또는 β-L 뉴클레오시드 또는 약제학적으로 허용가능한 염 또는 프로드럭을 유효량으로 투여하는 것을 포함하는 것으로 기술되어 있다.
C형 간염 바이러스를 치료하는 특정 뉴클레오시드 유사체의 용도를 기술하는 다른 특허 출원은 하기를 포함한다: 국제 특허 공개번호 WO01/32153(PCT/CA00/01316 ; 2000년 11월 3일)및 WO01/60315(PCT/CA01/00197 ; 2001년 2월 19일)(Biochem Pharma, Inc.(현재 Shire Biochem,Inc.)에 의해 출원됨); US 특허 공개 2002/0147160 및 상응하는 국제 특허 공개번호 WO02/057425(PCT/US02/01531 ; 2002년 1월 18일 출원됨)및 WO 02/057287(PCT/US02/03086 ; 2002년 1월 18일)(Merck & Co., Inc.에 의해 출원됨); US 특허 공개번호 2003/083307 A1 및 US 2003/008841 A1, 및 상응하는 국제 특허 공개번호 WO 02/18404(PCT/EP01/09633 ; 2001년 8월 21일 공개); WO 02/100415 및 WO 02/094289(Hoffinan-LaRoche에 의해 출원됨); US 특허 공개 2003/028013 A1 및 상응하는 국제 특허 공개번호 WO03/062255 및 WO 03/061385(Ribapharm에 의해 출원됨); 및 WO01/79246 및 WO 02/32920(Pharmasset에 의해 출원됨).
(15) 1-아미노-알킬사이클로헥산(Gold 등에 의한 미국 특허 제 6,034,134호), 알킬 리피드(Chojkier 등에 의한 미국 특허 제5,922,757호), 비타민 E 및 기타 항산화제(Chojkier 등에 의한 미국 특허 제5,922,757호), 스쿠알렌, 아만타딘, 담즙산(Ozeki 등에 의한 미국 특허 제5,846,964호), N-(포스포노아세틸)-L-아스파트산(Diana 등에 의한 미국 특허 제5,830,905호), 벤젠디카복스아미드(Diana 등에 의한 미국 특허 제5,633,388호), 폴리아데닐산 유도체(Wang 등에 의한 미국 특허 제5,496,546호), 2',3'-디데옥시이노신(Yarchoan 등에 의한 미국 특허 제5,026,687호), 벤즈이미다졸(Colacino 등에 의한 미국 특허 제5,891,874호).
(16)다음 화합물들을 포함한 C형 간염 바이러스 치료용으로 현재 예비임상 또는 임상 개발중인 임의의 다른 화합물: Schering-Plough에 의한 인터류킨-10, Interneuron에 의한 IP-501, Vertex에 의한 Merimebodib(VX-497), Endo Labs Solvay에 의한 AMANTADINE(Symmetrel), RPI에 의한 HEPTAZYME, Idun Pharma.에 의한 IDN-6556, XTL.에 의한 XTL-002, Chiron에 의한 HCV/MF59, NABI에 의한 CIVACIR (C형 간염 면역 글로불린), ICN/Ribapharm에 의한 LEVOVIRIN, ICN/Ribapharm에 의한 VIRAMIDINE, Sci Clone에 의한 ZADAXIN(티모신 알파-1), Sci Clone에 의한 티모신 및 페길화 인터페론, Maxim에 의한 CEPLENE(히스타민 디하이드로클로라이드), Vertex/Eli Lilly의 VX 950/LY 570310, Isis Pharmaceutical/Elan의 ISIS 14803, Idun Pharmaceuticals, Inc.의 IDN-6556, 및 AKROS Pharma.의 JTK 003.
바이러스의 약물-내성 변이체는 항바이러스제를 사용하는 장기간의 치료후 출현할 수 있다. 약물 내성은 가장 통상적으로는 바이러스 복제에 사용되는 효소, 및 HIV의 경우 역전사 효소, 프로테아제, 또는 DNA 폴리머라제를 코딩하는 유전자의 돌연변이화에 의해 발생한다. 바이러스 퇴치에 효능이 있는 제 2, 및 아마도 제 3의 항바이러스 화합물과 병용하여 또는 교대로 화합물을 투여함으로써 바이러스 감염에 대한 약물의 효능은 연장, 증대, 또는 회복될 수 있다. 약물의 약물동력학, 생체분포(biodistribution), 또는 다른 파라미터가 상기의 병용 요법 또는 교대 요법에 의해 변경될 수 있다. 일반적으로, 병용 요법이 바이러스상에서 다중의 스트레스를 동시에 유도하기 때문에 교대 요법보다 바람직하다. 그러나, 제공된 약물에 의해 바이러스 게놈상에서 어떤 돌연변이가 유도되는지, 돌연변이가 지속적인지 또는 일시적인지, 또는 돌연변이화된 바이러스 서열을 포함하는 감염된 세포 또는 포함하지 않는 것이 다른 약제와의 병용 또는 교대 요법에 어떻게 반응을 하는지는 예측할 수 없다. 현 바이러스제로 처리된 장기간의 세포 배양물중 약물 내성의 키네틱에 대한 데이타가 부족하다는 사실로 심각화되었다.
본 발명의 목적은 HCV 감염 치료를 최적화하는 것이다.
추가의 목적은 플라비비리다에 감염 치료를 위해 2'-분지형 뉴클레오시드, 및 특히, 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드를 최적 투여를 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드의 단독 투여에 비하여 유익하거나 개선된 약물동력학, 생체분포, 대사, 내성 또는 다른 파라미터를 나타내는, 페스티바이러스, 플라비바이러스, 또는 헤파시바이러스로 감염된 환자의 치료를 위해 2'-분지형 뉴클레오시드를 포함하는 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 바이러스에 대하여 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드와 상승적으로 또는 유리하게 작용하는 하나 이상의 화합물과 함께 병용 및/또는 교대로 '-분지형 뉴클레오시드, 및 특히, 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드를 투여하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 페스티바이러스, 플라비바이러스, 또는 헤파시바이러스의 약물 내성 형태로 감염된 환자를 치료하는 방법 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목적은 플라비비리다에의 뮤턴트 균주를 확인하는 방법 및 키트를 제공하는 것이다.
발명의 요약
2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서 하기 도식된 2'-분지형 뉴클레오시드, 및 특히, 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보C, 또는 2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드(화합물 β-D-2'-CH3-리보아데노신 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸 아미노 아데노신 포함)의 장기간 사용은 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 코딩하는 뉴클레오티드(도 11)에서의 돌연변이와 관련되고, 이는 결과적으로 세린을 트레오닌과 같은 다른 아미노산 잔기로 바꾼다고 밝혀졌다. 이 영역은 HCV 게놈의 NS5B 부위, 및 다른 플라비바이러스의 게놈에서도 발견된다. 모든 헤파시-, 페스티- 및 플라비바이러스 게놈 사이에서 고도로 보존적이다(도 11; Lai et al. JVirol., 1999, 73,10129-36).
본 발명의 일면으로, 2'-분지형 뉴클레오시드는 하기 일반식의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염이다:
상기 식에서,
R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
R4는 수소, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, NO2, NH2, -NH(저급알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, 또는 -N(아실)2이고;
염기는 본 명세서에서 추가로 기술된 바와 같은 퓨린 또는 피리미딘이다.
제 2 일면으로, 2'-분지형 뉴클레오시드는 하기 일반식(II)또는 (III)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염이다:
상기 식에서,
염기는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 퓨린 또는 피리미딘이고;
R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 포함); 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬 알킬(저급 알킬 포함); 아실(저급 아실 포함); CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, CO-아릴옥시알킬, CO-치환된 아릴, 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 알킬설포닐, 아릴설포닐, 아르알킬설포닐, 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;또는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
R6은 알킬(저급 알킬 및 할로겐화된 알킬 포함), CH3, CF3, 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, 2-Br-에틸, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), CF3, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, N02, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
R7은 수소, OR3, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 불소, 염소, 브롬, 요오드, N02, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
X는 O, S, S02 또는 CH2이고;
염기는 본 명세서에서 추가로 기술된 바와 같은 퓨린 또는 피리미딘이다.
제 3의 일면으로, 2'-분지형 뉴클레오시드는 하기 일반식(IV)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염이다:
상기 식에서,
염기는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 퓨린 또는 피리미딘이고;
R6은 알킬(저급 알킬 및 할로겐화된 알킬 포함), CH3, CF3, 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, 2-Br-에틸, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), CF3, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, N02, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
R7은 OR2, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, 할로-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 불소, 염소, 브롬, 요오드, NO2, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
R9는 수소, -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 염소, 브롬, 요오드, NO2, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
R10은 H, 알킬(저급 알킬 포함), 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드이고;
R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 포함); 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬 알킬(저급 알킬 포함); 아실(저급 아실 포함); CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, CO-아릴옥시알킬, CO-치환된 아릴, 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 알킬설포닐, 아릴설포닐, 아르알킬설포닐, 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;또는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
X는 O, S, S02 또는 CH2이다.
BVDV 감염의 경우, 2'-분지형 뉴클레오시드, 및, 특히 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보C는 BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 잔기에서 구아닌(G)으로부터 시티딘(C)으로의 돌연변이를 유도하고, 이는 효소의 405번째 위치에서 아미노산 잔기를 세린에서 트레오닌으로 바꾼다. 돌연변이 분석(Lai V. C. , Kao C. C. , Ferrari E. , Park J., Uss A. S., Wright-Minogue J. , Hong Z. , and J. Y.Lau."mutational analysis of bovine virus diarrhea virus RNA-dependent RNA 폴리머라제"J Virol. 1999,73,10129-36)에 의해 확인된 바, 이 세린 잔기는 RNA 폴리머라제 영역 B의 보존공통서열(conserved consensus 서열)(XRXSGXXXT)에 위치한다(도 5 및 11).
HCV 감염에서, 2'-분지형 뉴클레오시드, 및, 특히 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보C는 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린282을 코딩하는 뉴클레오티드에서 돌연변이를 유도하고(도 11), 세린을 트레오닌과 같은 다른 아미노산으로 바꾼다.
추가로, 2'-분지형 뉴클레오시드 및 인터페론은 상승적으로(synergistically)플라비비리다에를 저해하는 작용을 한다는 것을 발견하게 되었다. 특히 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보C 또는 2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸 아미노 아데노신, 및 배합되고/거나 교대로 투여된 인터페론 알파-2b는 상승적으로 플라비비리다에를 저해하는 작용을 한다. 또한, 2'-분지형 뉴클레오시드 치료, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C 치료 후 출현하는 내성 바이러스 개체군의 인터페론을 사용하는 차후 치료에 대한 감수성은 증가되었다고 나타났다. 따라서, 2'-분지형 뉴클레오시드 및 인터페론의 순차 및/또는 병용 요법이 실질적으로 플라비비리다에 감염을 축소시킬 수 있다.
본 발명의 일면은 화합물 β-D-2'-CH3-리보C는 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 요법 및/또는 교대 요법으로 상기 치료를 필요로 하는 인간과 같은 숙주에 치료학적 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예를 들면, β-D-2'-CH3-리보C, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하여 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 고도의 보존 세린 잔기는 BVDV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 405번째 아미노산과 일치한다. 또한, HCV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 282번째 아미노산과 일치한다.(도 11; Lai et al. J Virol. , 1999, 73,10129-36).
본 발명의 추가의 일면은 치료학적 유효량의 인터페론을 투여하여 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 405번째 아미노산 또는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 282번째 아미노산과 같이 플라비비리다에의 보존 세린 잔기에서 세린에서 트레오닌으로의 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에로 감염된 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하는 방법을 제공한다. 특정 일면으로, 인터페론 알파-2b를 투여하여 돌연변이화된 플라비비리다에 바이러스에 의해 유발된 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유한다.
본 명세서에 기술된 본 발명은 적어도 하기 일면을 포함한다:
(i)RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치, 예로서, BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 405번째 Ser을 Thr으로, 또는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 HCV 게놈중 8443번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 282번째 Ser로부터 Thr로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치(도 11; Lai et al. J Virol., 1999,73, 10129-36)외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료에 효능이 있는 약제학적 조성물.
(ii)Intron-A(인터페론 알파-2b)(Schering), PEG-INTRON(페길화된 인터페론 알파-2b)(Schering), Roferon-A(인터페론 알파-2a)(Roche), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a)(Roche), INFERGEN(인터페론알파콘-1)(InterMune), OMNIFERON(자연발생 인터페론)(Viragen), ALBUFERON(Human Genome Sciences), REBIF(인터페론 베타-1a)(Ares-Serono), 오메가 인터페론(BioMedicine), 오랄 인터페론 알파(Amarillo Biosciences), 및 터페론 감마-1b(InterMune)와 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료에 효능이 있는 약제학적 조성물.
(iii)RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료에 효능이 있는 약제학적 조성물.
(iv)RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치, 예로서, BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 405번째 Ser을 Thr으로, 또는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 HCV 게놈중 8443번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 282번째 Ser로부터 Thr로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치(도 11; Lai et al. J Virol., 1999,73, 10129-36)외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 및/또는 교대 요법으로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법.
(v)Intron-A(인터페론 알파-2b)(Schering), PEG-INTRON(페길화된 인터페론 알파-2b)(Schering), Roferon-A(인터페론 알파-2a)(Roche), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a)(Roche), INFERGEN(인터페론알파콘-1)(InterMune), OMNIFERON(자연발생 인터페론)(Viragen), ALBUFERON(Human Genome Sciences), REBIF(인터페론 베타-1a)(Ares-Serono), 오메가 인터페론(BioMedicine), 오랄 인터페론 알파(Amarillo Biosciences), 및 터페론 감마-1b(InterMune)와 병용 및/또는 교대 요법으로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법.
(vi) 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 인터페론을 임의로 바이러스 부하(load)를 실질적으로 제거하는 방식으로 투여하는 것을 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 내성인 플라비비리다에 바이러스로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(iv)RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 및/또는 교대 요법으로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(v)(a)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하고;
(b)야생형으로부터 뮤턴트 바이러스로의 혈청전환(seroconversion)에 대하여 시험하기 위하여 환자의 혈액을 분석하고;
(c)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 인터페론를 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(vi)(a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플을 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 Ser을 코딩하는 코돈(도 11)에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
(b)프로브과 서열이 혼성화하도록 하고;
(c)서열과 프로브의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 내성인 플라비비리다에를 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 분석하는 방법.
(vii)(a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플을 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
(b)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(c)BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘과 프로브의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 내성인 플라비비리다에를 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 분석하는 방법.
(viii)(a)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(b)환자로부터 바이러스 샘플을 수득하고;
(c)바이러스의 복제 적합성을 결정하고;
(d)샘플중 바이러스의 복제 적합성이 야생형 바이러스의 복제 적합성보다 작은지를 결정하고(이는 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인지를 나타낸다);
(e)2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 환자에게 유효량의 인터페론을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(ix)(a)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(b)환자로부터 바이러스 배양 샘플을 수득하고;
(c)샘플을 배양하고 샘플과 야생형 바이러스 사이의 플라크 성장을 비교하고;
(d)샘플의 플라크 성장이 야생형의 플라크 성장보다 작은지를 측정하고(이는 2'-분지형 뉴클레오시드에 대하여 내성인지를 나타낸다);
(e)2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 환자에게 유효량의 인터페론을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(x)(a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 수득하고;
(b)샘플을 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 코딩하는 코돈(도 11)에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
(c)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(d)서열과 프로브의 혼성화를 검출하여 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 결정하는 것을 포함하는, 환자에서 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 진단하는 방법.
(xi)(a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 수득하고;
(b)샘플을 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
(c)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(d)BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘과 프로브의 혼성화를 검출하여 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 결정하는 것을 포함하는, 환자에서 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 진단하는 방법.
기술한 병용 및/또는 교대 요법은 BVDV, BDV, CSFV, DHF, 황열 바이러스, 쇼크 증후군, 일본 뇌염 바이러스, 및 HCV를 포함하는 플라비비리다에 감염의 치료 및 예방에 유용한다.
또한, 장기간의 2'-분지형 뉴클레오시드 치료에 대한 플라비비리다에 보균자의 반응의 진단에 도움이 되는 플라비비리다에 바이러스 마커의 상응하는 아미노산 서열을 설명한 플라비비리다에 뉴클레오티드 서열로부터 결정할 수 있다.
2'-분지형 뉴클레오시드 요법 실패와 관련되는 플라비비리다에 균주를 확인하기 위한 바이러스 마커를 확인하는 것외에도, 본 발명을 사용하여 2'-분지형 뉴클레오시드 요법에 반응하는 플라비비리다에 균주도 확인할 수 있다. 이러한 경우, 2'-분지형 뉴클레오시드 요법 실패와 관련되는 바이러스 마커가 결여된 플라비비리다에를 보균하고 있는 개체에 대한 모달리티로서 2'-분지형 뉴클레오시드를 포함하는 치료 과정으로 처방하기 위하여 2'-분지형 뉴클레오시드 요법과 관련된 바이러스 마커를 사용하지 않을 수 있다.
또다른 일면으로, 본 발명은 플라비비리다에 핵산 서열을 증폭시키기 위한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 제공한다. 일면으로, 올리고뉴클레오티드의 길이는 적어도 14개의 뉴클레오티드이고 서열-특이의 엄격한 혼성화 조건하에서 요법 실패와 관련된 마커를 포함하는 뉴클레오티드 서열과 혼성화한다.
프라이머의 혼성화 부위로서 사용되는 올리고뉴클레오티드 서열은 또한 프로브의 혼성화 부위로서 사용될 수 있다. 프라이머 서열의 프로브로서의 사용 적합성은 프라이머의 혼성화 특성에 의존한다. 유사하게, 프로브로서 사용되는 올리고뉴클레오티드는 프라이머로서 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 2'-분지형 뉴클레오시드 요법에 대한 플라비비리다에의 장기간 반응의 전조가 되는 아미노산(본 명세서에서 광범위하에 기술됨)을 포함하는 단백질, 펩티드 또는 펩티드 단편, 또는 상기 단백질, 펩티드 또는 펩티드 단편의 항체를 검출하는 방법, 물질 및 키트를 제공한다. 편의 및 아마도 진단 물질의 농도에 의존하여 숙주의 혈청 또는 조직을 단백질 또는 펩티드, 또는 단백질 또는 펩티드에 대한 항체에 대하여 시험할 수 있다. 단백질, 펩티드 또는 펩티드 단편는 예로서 웨스턴 블랏 방법을 사용하여 항체, 바람직하게 모노클로날 항체오 반응시켜 확인할 수 있다.
다르게는 단백질 또는 펩티드를 분리하고 서열화하거나, 다르게는 2D PAGE에 을 포함하는 본 분야의 공지된 방법에 의해 확인할 수 있다. 일면으로, 반응 항체는 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린, 예로서, BVDV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 405번째, 또는 HCV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 282번째이외의 트레오닌을 포함하는 플라비비리다에 단백질 또는 펩티드 서열에 결합한다.
또다른 일면으로, 반응 항체는 특히 요법 실패와 관련된 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위에서 특정 부위 돌연변이를 나타내는 반응 항체는 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린, 예로서, BVDV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 405번째, 또는 HCV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 282번째이외의 트레오닌을 포함하는 펩티드 서열에 결합한다.
특정 일면으로, 서열 번호 1-31의 핵산 서열에 의해 코딩되는 적어도 하나의 펩티드 또는 펩티드 단편에 결합하는 항체가 사용된다.
특정 일면으로, 서열 번호 32-62의 핵산 서열에 의해 코딩되는 적어도 하나의 펩티드 또는 펩티드 단편에 결합하는 항체가 사용된다.
도면의 간단한 설명
도 1은 비처리 BVDV로부터의 β-D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV 출현을 나타낸다.
도 2는 (A)야생형(wt)BVDV(균주I-N-dIns), 및 (B)β-D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV(I-N-dIns β-D-2'-CH3-리보C-R)에 의한 포커스 형성의 표현형을 나타낸다.
도 3은 야생형 BVDV I-N-dIn 및 그의 β-D-2'-CH3-리보C-내성 뮤턴트, I-N-dIns β-D-2'-CH3-리보C-R(내성 뮤턴트)의 성장 키네틱을 입증한다.
도 4는 다시 감염된 MDBK 세포에서 바이러스 실수율(yield)에 대한 β-D-2'-CH3-리보C의 효능을 나타낸다(여기에서, I-N-dIns는 wt BVDV이고, 내성 뮤턴트 는 I-N-dlns β-D-2'-CH3-리보C-R(β-D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV)이다).
도 5는 돌연변이 분석에 기초하여 제한된 기능 영역을 나타내는 BVDV NS5B 부위의 도이다(Vassilev, V. B. and R. O. Donis.(2000)Bovine virus diarrhea virus induced apoptosis correlates with increased intracellular virus RNA accumulation. virus Res. 69(2): 95-107). 큰 화살표는 D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV의 NS5B 부위에서 발견되는 유일한 아미노산 변환 위치를 나타낸다(Ser 405로부터 Thr405).
도 6은 다시 감염된 MDBK 세포에서 바이러스 실수율(yield)에 대한 인터페론 알파-2b의 효능을 나타낸다(I-N-dIns: wt BVDV; I-N-dlns β-D-2'-CH3-리보C-R: β-D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV).
도 7은 지속적으로 감염된 MDBK 세포에서 BVDV(균주I-N-dIns)에 대한 β-D-2'-CH3-리보C 및 인터페론 알파-2b의 효능을 나타낸다.
도 8은 지속적으로 감염된 MDBK 세포에서 야생형 BVDV(균주I-N-dIns)역가에 대한 인터페론 알파-2b와 배합된 β-D-2'-CH3-리보C의 효능을 나타낸다.
도 9는 지속적으로 감염된 MDBK 세포에서 BVDV(균주NY-1)역가에 대한 β-D-2'-CH3-리보C 및 인터페론 알파-2b(Intron A)의 효능을 나타낸다.
도 10은 지속적으로 감염된 MDBK 세포에서 야생형 BVDV(균주I-N-dIns)역가에 대한 β-D-2'-CH3-리보C 및 인터페론 알파-2b(Intron A)의 효능을 나타낸다.
도 11은 다양한 플라비비리다에의 영역 B에서 RNA 폴리머라제의 배열(alignment)을 도시한다; 굵은체의 대문자 표기는 100% 보존되는 아미노산이고; 밑줄로 표시된 세린 아미노산 잔기는 2'-분지형 뉴클레오시드 처리후 트레오닌으로 돌연변이화될 수 있는 것이다[100% 보존되는 세린 잔기 또한 밑줄로 표시하고 2'-분지형 뉴클레오시드 처리후 트레오닌으로 돌연변이화되는 아미노산을 나타낸다(BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 Ser405; HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 Ser282). 참조 Lai et al. J Virol. 1999,73, 10129-36.]
2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서 하기 도식된 2'-분지형 뉴클레오시드, 및 특히, 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보C, 또는 2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드(화합물 β-D-2'-CH3-리보아데노신 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸 아미노 아데노신 포함)의 장기간 사용은 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 코딩하는 뉴클레오티드(도 11)에서의 돌연변이와 관련되고, 이는 결과적으로 세린을 트레오닌과 같은 다른 아미노산 잔기로 바꾼다고 밝혀졌다. 이 영역은 HCV 게놈의 NS5B 부위, 및 다른 플라비바이러스의 게놈에서도 발견된다. 모든 헤파시-, 페스티- 및 플라비바이러스 게놈 사이에서 고도로 보존적이다(도 11; Lai et al. JVirol., 1999, 73,10129-36).
BVDV 감염의 경우, 2'-분지형 뉴클레오시드, 및, 특히 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보C는 BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 잔기에서 구아닌(G)으로부터 시티딘(C)으로의 돌연변이를 유도하고, 이는 효소의 405번째 위치에서 아미노산 잔기를 세린에서 트레오닌으로 바꾼다. 돌연변이 분석(Lai V. C. , Kao C. C. , Ferrari E. , Park J., Uss A. S., Wright-Minogue J. , Hong Z. , and J. Y.Lau."mutational analysis of bovine virus diarrhea virus RNA-dependent RNA 폴리머라제"J Virol. 1999,73,10129-36)에 의해 확인된 바, 이 세린 잔기는 RNA 폴리머라제 영역 B의 보존공통서열(conserved consensus 서열)(XRXSGXXXT)에 위치한다(도 5 및 11).
HCV 감염에서, 2'-분지형 뉴클레오시드, 및, 특히 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보C는 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린282을 코딩하는 뉴클레오티드에서 돌연변이를 유도하고(도 11), 세린을 트레오닌과 같은 다른 아미노산으로 바꾼다.
추가로, 2'-분지형 뉴클레오시드 및 인터페론은 상승적으로(synergistically)플라비비리다에를 저해하는 작용을 한다는 것을 발견하게 되었다. 특히 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보C 또는 2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서, 화합물 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸 아미노 아데노신, 및 배합되고/거나 교대로 투여된 인터페론 알파-2b는 상승적으로 플라비비리다에를 저해하는 작용을 한다. 또한, 2'-분지형 뉴클레오시드 치료, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C 치료 후 출현하는 내성 바이러스 개체군의 인터페론을 사용하는 차후 치료에 대한 감수성은 증가되었다고 나타났다. 따라서, 2'-분지형 뉴클레오시드 및 인터페론의 순차 및/또는 병용 요법이 실질적으로 플라비비리다에 감염을 축소시킬 수 있다.
본 발명의 일면은 화합물 β-D-2'-CH3-리보C는 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 요법 및/또는 교대 요법으로 상기 치료를 필요로 하는 인간과 같은 숙주에 치료학적 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예를 들면, β-D-2'-CH3-리보C, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하여 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 고도의 보존 세린 잔기는 BVDV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 405번째 아미노산과 일치한다. 또한, HCV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 282번째 아미노산과 일치한다.(도 11; Lai et al. J Virol. , 1999, 73,10129-36).
본 발명의 추가의 일면은 치료학적 유효량의 인터페론을 투여하여 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 405번째 아미노산 또는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 282번째 아미노산과 같이 플라비비리다에의 보존 세린 잔기에서 세린에서 트레오닌으로의 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에로 감염된 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하는 방법을 제공한다. 특정 일면으로, 인터페론 알파-2b를 투여하여 돌연변이화된 플라비비리다에 바이러스에 의해 유발된 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유한다.
본 명세서에 기술된 본 발명은 적어도 하기 일면을 포함한다:
(i)RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치, 예로서, BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 405번째 Ser을 Thr으로, 또는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 HCV 게놈중 8443번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 282번째 Ser로부터 Thr로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치(도 11; Lai et al. J Virol., 1999,73, 10129-36)외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료에 효능이 있는 약제학적 조성물.
(ii)Intron-A(인터페론 알파-2b)(Schering), PEG-INTRON(페길화된 인터페론 알파-2b)(Schering), Roferon-A(인터페론 알파-2a)(Roche), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a)(Roche), INFERGEN(인터페론알파콘-1)(InterMune), OMNIFERON(자연발생 인터페론)(Viragen), ALBUFERON(Human Genome Sciences), REBIF(인터페론 베타-1a)(Ares-Serono), 오메가 인터페론(BioMedicine), 오랄 인터페론 알파(Amarillo Biosciences), 및 터페론 감마-1b(InterMune)와 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료에 효능이 있는 약제학적 조성물.
(iii)RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료에 효능이 있는 약제학적 조성물.
(iv)RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치, 예로서, BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 405번째 Ser을 Thr으로, 또는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 HCV 게놈중 8443번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 282번째 Ser로부터 Thr로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치(도 11; Lai et al. J Virol., 1999,73, 10129-36)외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 및/또는 교대 요법으로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법.
(v)Intron-A(인터페론 알파-2b)(Schering), PEG-INTRON(페길화된 인터페론 알파-2b)(Schering), Roferon-A(인터페론 알파-2a)(Roche), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a)(Roche), INFERGEN(인터페론알파콘-1)(InterMune), OMNIFERON(자연발생 인터페론)(Viragen), ALBUFERON(Human Genome Sciences), REBIF(인터페론 베타-1a)(Ares-Serono), 오메가 인터페론(BioMedicine), 오랄 인터페론 알파(Amarillo Biosciences), 및 터페론 감마-1b(InterMune)와 병용 및/또는 교대 요법으로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는 인간과 같은 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법.
(vi) 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 인터페론을 임의로 바이러스 부하를 실질적으로 제거하는 방식으로 투여하는 것을 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 내성인 플라비비리다에 바이러스로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(iv)RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 및/또는 교대 요법으로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(v)(a)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하고;
(b)야생형으로부터 뮤턴트 바이러스로의 혈청전환(seroconversion)에 대하여 시험하기 위하여 환자의 혈액을 분석하고;
(c)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 인터페론를 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(vi)(a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플을 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 Ser을 코딩하는 코돈(도 11)에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
(b)프로브과 서열이 혼성화하도록 하고;
(c)서열과 프로브의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 내성인 플라비비리다에를 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 분석하는 방법.
(vii)(a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플을 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
(b)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(c)BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘과 프로브의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 내성인 플라비비리다에를 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 분석하는 방법.
(viii)(a)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(b)환자로부터 바이러스 샘플을 수득하고;
(c)바이러스의 복제 적합성을 결정하고;
(d)샘플중 바이러스의 복제 적합성이 야생형 바이러스의 복제 적합성보다 작은지를 결정하고(이는 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인지를 나타낸다);
(e)2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 환자에게 유효량의 인터페론을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(ix)(a)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(b)환자로부터 바이러스 배양 샘플을 수득하고;
(c)샘플을 배양하고 샘플과 야생형 바이러스 사이의 플라크 성장을 비교하고;
(d)샘플의 플라크 성장이 야생형의 플라크 성장보다 작은지를 측정하고(이는 2'-분지형 뉴클레오시드에 대하여 내성인지를 나타낸다);
(e)2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 환자에게 유효량의 인터페론을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
(x)(a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 수득하고;
(b)샘플을 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 코딩하는 코돈(도 11)에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
(c)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(d)서열과 프로브의 혼성화를 검출하여 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 결정하는 것을 포함하는, 환자에서 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 진단하는 방법.
(xi)(a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 수득하고;
(b)샘플을 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
(c)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(d)BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘과 프로브의 혼성화를 검출하여 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 결정하는 것을 포함하는, 환자에서 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 β-D-2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드, 예로서 β-D-2'-CH3-리보A 또는 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린 또는 프로드럭, 예로서, 3'-발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 진단하는 방법.
기술한 병용 및/또는 교대 요법은 BVDV, BDV, CSFV, DHF, 황열 바이러스, 쇼크 증후군, 일본 뇌염 바이러스, 및 HCV를 포함하는 플라비비리다에 감염의 치료 및 예방에 유용한다.
또한, 장기간의 2'-분지형 뉴클레오시드 치료에 대한 플라비비리다에 보균자의 반응의 진단에 도움이 되는 플라비비리다에 바이러스 마커의 상응하는 아미노산 서열을 설명한 플라비비리다에 뉴클레오티드 서열로부터 결정할 수 있다.
2'-분지형 뉴클레오시드 요법 실패와 관련되는 플라비비리다에 균주를 확인하기 위한 바이러스 마커를 확인하는 것외에도, 본 발명을 사용하여 2'-분지형 뉴클레오시드 요법에 반응하는 플라비비리다에 균주도 확인할 수 있다. 이러한 경우, 2'-분지형 뉴클레오시드 요법 실패와 관련되는 바이러스 마커가 결여된 플라비비리다에를 보균하고 있는 개체에 대한 모달리티로서 2'-분지형 뉴클레오시드를 포함하는 치료 과정으로 처방하기 위하여 2'-분지형 뉴클레오시드 요법과 관련된 바이러스 마커를 사용하지 않을 수 있다.
또다른 일면으로, 본 발명은 플라비비리다에 핵산 서열을 증폭시키기 위한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 제공한다. 일면으로, 올리고뉴클레오티드의 길이는 적어도 14개의 뉴클레오티드이고 서열-특이의 엄격한 혼성화 조건하에서 요법 실패와 관련된 마커를 포함하는 뉴클레오티드 서열과 혼성화한다.
프라이머의 혼성화 부위로서 사용되는 올리고뉴클레오티드 서열은 또한 프로브의 혼성화 부위로서 사용될 수 있다. 프라이머 서열의 프로브로서의 사용 적합성은 프라이머의 혼성화 특성에 의존한다. 유사하게, 프로브로서 사용되는 올리고뉴클레오티드는 프라이머로서 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 2'-분지형 뉴클레오시드 요법에 대한 플라비비리다에의 장기간 반응의 전조가 되는 아미노산(본 명세서에서 광범위하에 기술됨)을 포함하는 단백질, 펩티드 또는 펩티드 단편, 또는 상기 단백질, 펩티드 또는 펩티드 단편의 항체를 검출하는 방법, 물질 및 키트를 제공한다. 편의 및 아마도 진단 물질의 농도에 의존하여 숙주의 혈청 또는 조직을 단백질 또는 펩티드, 또는 단백질 또는 펩티드에 대한 항체에 대하여 시험할 수 있다. 단백질, 펩티드 또는 펩티드 단편는 예로서 웨스턴 블랏 방법을 사용하여 항체, 바람직하게 모노클로날 항체오 반응시켜 확인할 수 있다.
다르게는 단백질 또는 펩티드를 분리하고 서열화하거나, 다르게는 2D PAGE에 을 포함하는 본 분야의 공지된 방법에 의해 확인할 수 있다. 일면으로, 반응 항체는 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린, 예로서, BVDV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 405번째, 또는 HCV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 282번째이외의 트레오닌을 포함하는 플라비비리다에 단백질 또는 펩티드 서열에 결합한다.
또다른 일면으로, 반응 항체는 특히 요법 실패와 관련된 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위에서 특정 부위 돌연변이를 나타내는 반응 항체는 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린, 예로서, BVDV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 405번째, 또는 HCV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 위치 282번째이외의 트레오닌을 포함하는 펩티드 서열에 결합한다.
특정 일면으로, 서열 번호 1-31의 핵산 서열에 의해 코딩되는 적어도 하나의 펩티드 또는 펩티드 단편에 결합하는 항체가 사용된다.
특정 일면으로, 서열 번호 32-62의 핵산 서열에 의해 코딩되는 적어도 하나의 펩티드 또는 펩티드 단편에 결합하는 항체가 사용된다.
I. 정의
본 명세서에서 사용되는 바, 용어 "내성 바이러스"는 원(native)바이러스와 비교하여 EC50가 3배 및 더욱 전형적으로 5배 이상 증가한 바이러스를 나타낸다.
용어 "아미노산"은 자연 발생 및 합성 α, β, γ 또는 δ 아미노산을 포함하고, 단백질에서 발견되는 아미노산, 즉, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트립토판, 프롤린, 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴, 글루타민, 아스파테이트, 글루타메이트, 라이신, 아르기닌 및 히스티딘을 포함하나, 이들에만 한정되는 것은 아니다. 바람직한 구체예로, 아미노산은 L-배열로 존재하나, D-배열로도 사용될 수 있다. 또한, 아미노산은 알라닐, 발리닐, 류시닐, 이소류시닐, 프롤리닐, 페닐알라니닐, 트립토파닐, 메티오니닐, 글리시닐, 세리닐, 트레오니닐, 시스테이닐, 티로시닐, 아스파라기닐, 글루타미닐, 아스파토일, 글루타로일, 라이시닐, 아르기니닐, 히스티디닐, β-알라닐, β-발리닐, β-류시닐, β-이소류시닐, β-프롤리닐, β-페닐알라니닐, β-트립토파닐, β-메티오니닐, β-글리시닐, β-세리닐, β-트레오니닐, β-시스테이닐, β-티로시닐, β-아스파라기닐, β-글루타미닐, β-아스파토일, β-글루타로일, β-라이시닐, β-아르기니닐 또는 β-히스티디닐의 유도체일 수 있다.
표 1에 본 명세서에서 사용되는 아미노산의 약어를 기술한다.
표 1
"증폭제"는 선택된 증폭 공정을 수행하기 위하여 사용되는 다양한 완충액, 효소, 프라이머, 데옥시뉴클레오시드 트리포스페이트(통상 및 통상적이지 않은 것 모두), 및 프라이머를 언급한다.
"증폭화" 또는 "증폭"은 전형적으로 표적 핵산의 "기하급수적인" 증가를 언급하고, 본 명세서에서 핵산 선별된 표적 서열의 갯수가 1차 및 기하급수적으로 증가한 것을 언급하기 위하여 사용된다.
"실질적으로 결합"은 올리고뉴클레오티드 및 표적 서열 사이의 상보적인 혼성화를 언급하고, 혼성화 조건의 엄격성을 감소시킴으로써 수용될 수 있는 소수의 불일치(mismatches)를 포함하므로써 PCR 폴리머라제에 대하여 바람직하게 기폭화(priming)하거나 혼성화 시그날을 검출할 수 있다.
"혼성화"는 상보적인 염기쌍에 의한 두개의 싱글 스트랜드 핵산의 결합을 언급한다.
"핵산"은 싱글-또는 더블-스트랜드 형태의 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 폴리머를 언급하고, 달리 제한하지 않는 한, 자연발생된 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 작용할 수 있는 공지된 자연발생 뉴클레오티드의 유사체를 포함할 것이다.
"뉴클레오티드 폴리머라제"는 뉴클레오시드 트리포스페이트 전구체로부터 DNA 또는 RAN 합성을 촉진시킬 수 있는 효소를 언급한다. 증폭 반응에서 폴리머라제는 주형에 의존하고, 전형적으로 뉴클레오티드를 형성되는 폴리머의 3'-말단에 가한다. 폴리머라제는 U. S. Pat. Nos. 4,889, 818 및 5,079, 352에 기술된 바와 같이 열안정성일 수 있다.
용어 "올리고뉴클레오티드"는 두개 이상의 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드로 구성된 분자로서, 예를 들면, 프라이머, 프로브, 검출하고자 하는 핵산 단편, 및 핵산 컨트롤을 언급한다. 올리고뉴클레오티드의 정확한 크기는 다수의 인자 및 올리고뉴클레오티드의 결정적인 작용 또는 용도에 의존한다. 올리고뉴클레오티드는 적절한 방법, 예로서, 클로닝 및 적절한 서열의 제한 및 Narang et al.,Meth. Enzymol. 1979, 68 : 90-99의 포스포트리에스테르 방법; Brown et al, Meth. Enzymol., 1979,68 : 109-151의 포스포디에스테르 방법; Beaucage et al., Tetrahedron Lett., 1981,22 : 1859-1862의 디에틸포스포르아미다이트 방법; 및 U. S. Pat. No. 4,458, 066의 고체 지지체 방법와 같은 직접적인 화합 합성법에 의해 제조될 수 있다.
용어 "프라이머"는 적절한 온도의 적절한 완충액중에서 4개의 상이한 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 중합화제(즉, DNA 폴리머라제 또는 역전사효소)의 존재하에서 핵산 스트랜드에 상보적인 프라이머 신장 산물의 합성이 유도되는 조건하에서 DNA 합성의 개시점으로서 작용할 수 있는 자연발생 또는 합성된 올리고뉴클레오티드를 언급한다. 프라이머의 적절한 길이는 의도하는 프라이머의 용도에 의존하지만, 전형적으로는 약 14 약 약 15 내지 25 또는 30개 범위의 뉴클레오티드이다. 단쇄의 프라이머 분자는 일반적으로 주형과 함께 충분하게 적절한 하이브리드를 형성하기 위하여 좀 더 낮은 온도를 요한다. 프라이머는 주형의 정확한 서열을 반영할 필요는 없지만, 주형과 혼성화하기 위하여 충분히 상보적이어야 한다.
용어 "프라이머"는 특히 증폭되는 표적 부위의 한쪽 말단 또는 양쪽 말단과 관련된 정보에 있어 다소 애매한 경우 하나 이상의 프라이머를 언급할 수 있다. 예를 들면, 부위가 집단으로 상당 수준의 다형태를 보이는 경우 대체 서열을 증폭시키는 프라이머 혼합물이 제조될 수 있다. 원하는 경우, 프라이머는 분광, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 또는 화학적 수단에 의해 검출될 수 있는 라벨을 혼입하여 표지될 수 있다. 예로서, 유용한 라벨은 32P, 형광 염료, 전자-과밀도 시약, 효소(통상 ELISA로 사용됨), 바이오틴, 또는 합텐 및 항혈청 또는 모노클로날 항체로 이용가능한 단백질을 포함한다. 또한 라벨을 사용하여 프라이머를 "포착(capture)"하여 고체 지지체상에서 프라이머 또는 프라이머 신장 산물, 예로서 증폭된 DNA의 고정화를 촉진시킬 수 있다.
"프로브"는 상보적인 염기쌍을 통해 표적 핵산의 서브시퀀스에 결합하는 올리고뉴클레오티드를 언급한다. 본 분야의 기술자는 전형적으로 혼성화 조건의 엄격성에 의존하여 프로브 서열과 완전한 상보성이 결여되어 있는 표적 서열과 프로브가 실질적으로 결합할 것이라는 것을 이해할 것이다. 프로브는 바람직하게 직접 동위원소로 표지되거나, 예로서 이후 스트렙타비딘이 결합할 수 있는 바이오틴으로 간접적으로 표지될 수 있다. 프로브의 존재 또는 부재를 분석하여 표적의 존재 여부를 검출할 수 있다.
"서브시퀀스(subsequence)"는 좀더 긴 핵산 서열의 일부를 포함하는 핵산 서열을 언급한다.
용어 "표적 부위"는 분석하고자 하는 핵산 부위를 언급하고, 다형태 부위를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는, 용어 "알킬"은, 다르게 특정되지 않는 한, 전형적으로 C1 내지 C10의 포화된 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭의 일차, 이차, 또는 삼차 탄화수소를 의미하고, 특히 CF3, CC13, CFC12, CF2Cl, CH2CF3, CF2CF3, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 사이클로프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, 펜틸, 사이클로펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, 헥실, 이소헥실, 사이클로헥실, 사이클로헥실메틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸 및 2,3-디메틸부틸을 포함한다. 이들 용어는 치환 및 비치환 알킬 그룹 둘다를 포함하고, 특히 할로겐화된 알킬 그룹, 및 보다 특히 불소화 알킬 그룹을 포함한다. 알킬 그룹이 치환될 수 있는 부분의 비한정적인 예는 예를 들어 본 명세서에서 참고 문헌으로 인용되는 [Greene, et al., "Protective groups in Organic Synthesis" John Wiley and Sjons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 당업자들에게 공지된 바에 따라, 할로겐(플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도), 하이드록실, 아미노, 알킬아미노, 아릴아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 설폰산, 설페이트, 인산, 포스페이트 및 포스포네이트(이들은 보호되지 않거나, 또는 필요에 따라 보호된다)로 구성된 그룹중에서 선택된다.
용어 저급 알킬이 본원 에 사용되는 경우, 이 용어는 다르게 특정되지 않는 한, 치환 및 비치환 형태 둘다를 포함하여 C1 내지 C4의 포화된 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭(예: 사이클로프로필)알킬 그룹을 의미한다. 본 출원에서 다르게 특정되지 않는 한, 알킬이 적합한 부위인 경우, 저급 알킬이 바람직하다. 유사하게, 알킬 또는 저급 알킬 적합한 부분인 경우, 비치환 알킬 또는 저급 알킬이 바람직하다.
용어 알킬아미노 또는 아릴아미노는 각각 하나 또는 두개의 알킬 또는 아릴 치환체를 가지는 아미노 그룹을 의미한다.
본 명세서에 사용된 용어 "보호된"은 다르게 특정되지 않는 한, 추가의 반응을 방지하거나 또는 다른 목적을 위하여 산소, 질소 또는 인 원자에 부가된 그룹을 의미한다. 다양한 산소 및 질소 보호 그룹이 유기합성 업계의 숙련자들에게 공지되었다.
본 명세서에 사용된 용어 아릴은 다르게 특정되지 않는 한, 페닐, 비페닐 또는 나프틸 및 바람직하게는 페닐을 의미한다. 이 용어는 치환 및 비치환된 부분 둘다를 포함한다. 아릴 그룹은 예를 들어 본 명세서에서 참고 문헌으로 인용되는 [Greene, et al., "Protective groups in Organic Synthesis" John Wiley and Sjons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 당업자들에게 공지된 바에 따라, 할로겐(플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도), 하이드록실, 아미노, 알킬아미노, 아릴아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 설폰산, 설페이트, 포스폰산, 포스페이트 및 포스포네이트(이들은 보호되지 않거나, 또는 필요에 따라 보호된다)로 구성된 그룹중에서 선택되나, 이들에만 한정되지 않는 하나 이상의 부분에 의해 치환될 수 있다.
용어 알크아릴 또는 알킬아릴은 아릴 치환체를 가지는 알킬 그룹을 의미한다. 용어 아르알킬 또는 아릴알킬은 알킬 치환체를 가지는 아릴 그룹을 의미한다.
본 명세서에 사용된 용어 할로는 개별적으로 클로로, 브로모, 요오도 및 플루오로의 특정 기술이다.
용어 염기는 퓨린 또는 피리미딘 염기를 포함하고 제한하는 것은 아니지만, 구아닌, 아데닌, 하이포크산틴, 2,6-디아미노퓨린, 6-클로로퓨린, N6-알킬퓨린, N6-아실퓨린(여기에서, 아실은 C(O)(알킬, 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이다), N6-벤질퓨린, N6-할로퓨린, N6-비닐퓨린, N6-아세틸렌성 퓨린, N6-아실 퓨린, N6-알킬아미노퓨린, N6-티오알킬 퓨린, N2-알킬퓨린, N2-알킬-6-티오퓨린, 티민, 사이토신, 5-플루오로사이토신, 5-메틸사이토신, 6-아자피리미딘(6-아자사이토신 포함), 2- 및/또는 4-머캅토피리미딘, 우라실, 5-할로우라실(5-플루오로우라실 포함), C5-알킬피리미딘, C5-벤질피리미딘, C5-할로피리미딘, C5-비닐피리미딘, C5-아세틸렌성 피리미딘, C5-아실 피리미딘, C5-하이드록시알킬 퓨린, C5-아미도피리미딘, C5-시아노피리미딘, C5-니트로피리미딘, C5-아미노피리미딘, N2-알킬퓨린, N2-알킬-6-티오퓨린, 5-아자사이티디닐, 5-아자우라실릴, 트리아졸로피리디닐, 이미다졸로피리디닐, 피롤로피리미디닐, 및 피라졸로피리미디닐, 하기 식의 염기를 포함한다:
여기에서,
G 및 L은 각각 독립적으로 CH 또는 N이고;
D는 N, CH, C-CN, C-NO2, C-C1-3알킬, C-NHCONH2, C-CONQ11Q11, C-CSNQ11Q11, CCOOQ11, C-C(=NH)NH2, C-하이드록시, C-C1-3알콕시, C-아미노, C-C1-4알킬-아미노, C-디(C1-4알킬)아미노, C-할로겐, C-(1,3-옥사졸-2-일), C-(1,3-티아졸-2-일), 또는 C-(이미다졸-2-일)이고; 여기에서, 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시, 및 C1-3알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 그룹으로 치환되고;
E는 N 또는 CQ5이고;
W는 O, S, 또는 NR이고;
R은 H, OH, 알킬이고;
Q6는 H, OH, SH, NH2, C1-4 알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, C3-6 사이클로알킬아미노, 할로겐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 또는 CF3이고;
Q5는 H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C1-4알킬아미노, CF3, 할로겐, N, CN, NO2, NHCONH2, CONQ11Q11, CSNQ11Q11, COOQ11, C(=NH)NH2, 하이드록시, C1-3알콕시, 아미노, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, 할로겐, 1,3-옥사졸-2-일, 1,3-티아졸-2-일, 또는 이미다졸-2-일이고; 여기에서, 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시, 및 C1-3알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 그룹으로 치환되고;
Q7 및 Q14 는 각각 독립적으로 H, CF3, OH, SH, OR, SR C1-4알킬, 아미노, C1-4 알킬아미노, C3-6사이클로알킬아미노, 및 디(C1-4알킬)아미노로부터 선택되고;
Q11은 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이고;
Q8는 H, 할로겐, CN, 카복시, C1-4알킬옥시카노닐, N3, 아미노, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, 하이드록시, C1-6알콕시, C1-6알킬티오, C1-6알킬설포닐, (C1-4알킬)0-2아미노메틸, NH2, CN, NO2, C1-3알킬, NHCONH2, CONQ11Q11, CSNQ11Q11, COOQ11, C(=NH)NH2, 1,3-옥사졸-2-일, 1,3-티아졸-2-일, 또는 이미다졸-2-일이고, 여기에서, 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시, 및 C1-3알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 그룹으로 치환되고;
하기의 염기:
상기 식에서,
T1 및 T2는 N, CH, 또는 C-Q16으로부터 독립적으로 선택되고;
Q16, U 및 Y는 H, OH, 치환 또는 비치환된 알킬, 치환 또는 비치환된 알케닐, 치환 또는 비치환된 알키닐, 사이클로알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5, Br-비닐, -O-알킬, -O-알케닐, -O-알키닐, -O-아릴, -O-아르알킬, -O-아실, -O-사이클로알킬, NH2, NH-아릴, N-디알킬, NH-아실, N-아릴, N-아르알킬, NH-사이클로알킬, SH, S-알킬, S-아실, S-아릴, S-사이클로알킬, S-아르알킬, CN, N3, COOH, CONH2, CO2-알킬, CONH-알킬, CON-디알킬, OH, CF3, CH2OH, (CH2)mOH, (CH2)mNH2, (CH2)mCOOH, (CH2)mCN, (CH2)mNO2, (CH2)mCONH2, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, C3-6사이클로알킬아미노, C1-4알콕시, C1-4알콕시카보닐, C1-6알킬티오, C1-6알킬설포닐, (C1-4알킬)0-2아미노메틸, 또는 -NHC(=NH)NH2로부터 독립적으로 선택되고;
R4 및 R5는 수소, 아실(저급 아실 포함), 또는 알킬(제한하는 것을 아니지만, 메틸, 에틸, 프로필 및 사이클로프로필을 포함)로부터 독립적으로 선택되고;
m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
Z는 S, SO, SO2, C=O, 또는 NQ20이고;
Q20은 H 또는 알킬이고;
V1 및 V2는 CH 또는 N로부터 독립적으로 선택되고;
하기 식의 염기:
상기 식에서,
T3 및 T4는 N 또는 CQ22 으로부터 독립적으로 선택되고;
Q22는 H, OH, 치환된 또는 비치환된 알킬, 치환된 또는 비치환된 알케닐, 치환된 또는 비치환된 알키닐, 사이클로알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5, Br-비닐, -O-알킬, -O-알케닐, -O-알키닐, -O-아릴, -O-아르알킬, -O-아실, -O-사이클로알킬, NH2, NH-알킬, N-디알킬, NH-아실, N-아릴, N-아르알킬, NH-사이클로알킬, SH, S-알킬, S-아실, S-아릴, S-사이클로알킬, S-아르알킬, CN, N3, COOH, CONH2, CO2-알킬, CONH-알킬, CON-디알킬, OH, CF3, CH2OH, (CH2)mOH, (CH2)mNH2, (CH2)mCOOH, (CH2)mCN, (CH2)mNO2, (CH2)mCONH2, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, C3-6사이클로알킬아미노, C1-4알콕시, C1-4알콕시카보닐, C1-6알킬티오, C1-6알킬설포닐, (C1-4알킬)0-2아미노메틸, 또는 -NHC(=NH)NH2로부터 독립적으로 선택되고;
T5는 NH이고;
R4 및 R5는 수소, 아실(저급 아실 포함), 또는 알킬(제한하는 것을 아니지만, 메틸, 에틸, 프로필 및 사이클로프로필을 포함)로부터 독립적으로 선택되고;
m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
T6, T7, T8, T9, T10, T11, 및 T12는 독립적으로 N 또는 CH으로부터 독립적으로 선택되고;
U2는 H, 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5이고;
Y2는 0, S, NH, NR 또는 CQ24Q26이고(여기에서, R은 H, OH, 또는 알킬이다);
Q24 및 Q26는 H, 알킬, 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5으로부터 독립적으로 선택된다.
추가로 퓨린 염기의 예로서 제한하는 것은 구아닌, 아데닌, 하이포크산틴, 2,6-디아미노퓨린, 6-클로로퓨린, 및 6-N-메틸아미노 퓨린을 포함한다. 염기상의 작용 산소 및 질소 그룹은 필요 또는 원하는 바에 따라 보호될 수 있다. 적절한 보호 그룹는 본 분야의 기술자에게 공지되어 있고, 트리메틸실릴, 디메틸헥실실릴, t-부틸디메틸실릴, 및 t-부틸디페닐실릴, 트리틸, 알킬 그룹, 및 아실 그룹 예로서, 아세틸 및 프로피오닐, 메탄설포닐, 및 p-톨루엔설포닐을 포함한다.
용어 아실 또는 0-결합된 에스테르는 식 C(O)R'(여기에서, R'는 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭알킬(저급 알킬 포함), 아미노산의 카복실레이트 잔기, 아릴(페닐 포함), 헤테로아릴, 알크아릴, 아르알킬(벤질 포함), 알콕시알킬(메톡시메틸 포함), 아릴옥시알킬, 예컨대 페녹시메틸; 또는 치환된 알킬(저급 알킬 포함), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시에 의해 임의로 치환된 아릴(페닐 포함), 설포네이트 에스테르, 예컨대 알킬 또는 아르알킬 설포닐(메탄설포닐 포함), 모노, 디 또는 트리포스페이트 에스테르, 트리틸 또는 모노메톡시-트리틸, 치환된 벤질, 알크아릴, 아르알킬(벤질 포함), 알콕시알킬(메톡시메틸 포함), 아릴옥시알킬, 예컨대 페녹시메틸을 나타낸다)의 그룹을 의미한다. 에스테르내 아릴 그룹은 가장 좋게는 페닐 그룹을 포함한다. 비한정적인 구체예로, 아실 그룹은 아세틸, 트리플루오로아세틸, 메틸아세틸, 사이클로프로필아세틸, 사이클로프로필카복시, 프로피오닐, 부티릴, 이소부티릴, 헥사노일, 헵타노일, 옥타노일, 네오-헵타노일, 페닐아세틸, 2-아세톡시-2-페닐아세틸, 디페닐아세틸, α-메톡시-α-트리플루오로메틸페닐아세틸, 브로모아세틸, 2-니트로벤젠아세틸, 4-클로로벤젠아세틸, 2-클로로-2,2-디페닐아세틸, 2-클로로-2-페닐아세틸, 트리메틸아세틸, 클로로디플루오로아세틸, 퍼플루오로아세틸, 플루오로아세틸, 브로모디플루오로아세틸, 메톡시아세틸, 2-티오펜아세틸, 클로로설포닐아세틸, 3-메톡시페닐아세틸, 페녹시아세틸, t-부틸아세틸, 트리클로로아세틸, 모노클로로아세틸, 디클로로아세틸, 7H-도데카플루오로헵타노일, 퍼플루오로헵타노일, 7H-도데카플루오로헵타노일, 7-클로로도데카플루오로헵타노일, 7-클로로도데카플루오로헵타노일, 7H-도데카플루오로헵타노일, 7H-도데카플루오로헵타노일, 노나플루오로-3,6-디옥사헵타노일, 노나플루오로-3,6-디옥사헵타노일, 퍼플루오로헵타노일, 메톡시벤조일, 메틸 3-아미노-5-페닐티오펜-2-카복실, 3,6-디클로로-2-메톡시-벤조일, 4-(1,1,2,2-테트라플루오로에톡시)벤조일, 2-브로모프로피오닐, 오메가아미노카프릴, 데카노일, n-펜타데카노일, 스테아릴, 3-사이클로펜틸프로피오닐, 1-벤젠카복실, 0-아세틸만델릴, 피발로일 아세틸, 1-아다만탄카복실, 사이클로헥산카복실, 2,6-피리딘디카복실, 사이클로펜탄카복실, 사이클로부탄카복실, 퍼플루오로사이클로헥실 카복실, 4-메틸벤조일, 클로로메틸 이속사졸릴 카보닐, 퍼플루오로사이클로헥실 카복실, 크로토닐, 1-메틸-lH-인다졸-3-카보닐, 2-프로페닐, 이소발레릴, 1-피롤리딘카보닐, 4-페닐벤조일을 포함하나, 이들에만 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 바, "실질적으로 결여" 또는 "실질적으로 부재"는 적어도 약 95% 내지 98%, 또는 더욱 바람직하게는 99% 내지 100%의 상기 뉴클레오시드의 단일 에난티오머를 포함하는 뉴클레오시드 조성물을 언급한다. 바람직한 일례로, 본 발명의 방법 및 화합물에서 화합물에는 실질적으로 에난티오머가 결여되어 있다.
유사하게, 용어 "분리된" 이란 뉴클레오사이드를 적어도 약 85 또는 90 중량%, 바람직하게는 95% 내지 98중량%, 더욱더 바람직하게 99% 내지 100중량%의 뉴클레오사이드이고, 나머지는 다른 화학물 종류 또는 에난티오머를 포함하는 뉴클레오사이드 조성물을 언급한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "숙주"는 세포주 및 동물, 및 바람직하게 인간을 포함하여 바이러스가 복제할 수 있는 단세포 또는 다세포 유기체를 의미한다. 또한, 숙주는 플라비비리다에 바이러스 게놈의 일부를 운반할 수 있고, 그의 복제 또는 작용은 본 발명의 화합물에 의해 변화될 수 있다. 용어 숙주는 특히 감염된 세포, 플라비비리다에 바이러스 게놈 전체 또는 일부에 의해 형질감염된 세포 및 동물, 특히, 영장류(침팬지 포함)및 인간을 의미한다. 본 발명의 대부분의 동물 적용예에 있어, 숙주는 인간 환자이다. 그러나, 특별한 지시가 있는 경우 본 발명에 의해 수의학적 적용도 명확하게 기대된다(예: 침팬지).
II. 2'-분지형 뉴클레오시드 및 그의 프로드럭
가장 광범위한 일면으로 본 발명은 2'-분지형 뉴클레오시드에 내성인 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 일면으로, 2'-분지형 뉴클레오시드는 퓨린, 또는 퓨린 유도체 예로서, 피롤로-퓨린이다. 바람직한 일면으로, 2'-분지형 뉴클레오시드는 피리미딘이다. 다른 하위-일면으로 2'-알킬 및 2'-메틸-분지형 피리미딘 뉴클레오시드를 포함하고, 예로서 2'-분지형 우라실 및 2'-분지형 시토신 뉴클레오시드를 포함한다. 또다른 일면으로, 2'-분지형 뉴클레오시드는 퓨린이다. 다른 하위-일면으로 2'-알킬 및 2'-메틸-분지형 퓨린 뉴클레오시드를 포함하고, 예로서 2'-분지형 아데노신 뉴클레오시드 및 2'-분지형 6-N-메틸아미노 퓨린 뉴클레오시드를 포함한다.
특정 일면으로, 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드는 하기 식의 화합물 β-D-2'-CH3-리보C이다:
상기 식에서,
R3은 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R3이 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이다.
또다른 일면으로, 2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드는 하기 식의 화합물 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린이다:
상기 식에서,
R3은 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R3이 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이다.
본 발명의 일면으로, 2'-분지형 뉴클레오시드는 하기 일반식의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염이다:
상기 식에서,
R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
R4는 수소, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, NO2, NH2, -NH(저급알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, 또는 -N(아실)2이고;
염기는 본 명세서에서 추가로 기술된 바와 같은 퓨린 또는 피리미딘이다.
또다른 일면으로, 2'-분지형 뉴클레오시드는 하기 일반식(II)또는 (III)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염이다:
상기 식에서,
염기는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 퓨린 또는 피리미딘이고;
R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 포함); 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬 알킬(저급 알킬 포함); 아실(저급 아실 포함); CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, CO-아릴옥시알킬, CO-치환된 아릴, 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 알킬설포닐, 아릴설포닐, 아르알킬설포닐, 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;또는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
R6은 알킬(저급 알킬 및 할로겐화된 알킬 포함), CH3, CF3, 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, 2-Br-에틸, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), CF3, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, N02, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
R7은 수소, OR3, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 불소, 염소, 브롬, 요오드, N02, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
X는 O, S, S02 또는 CH2이고;
염기는 본 명세서에서 추가로 기술된 바와 같은 퓨린 또는 피리미딘이다.
또다른 일면으로, 2'-분지형 뉴클레오시드는 하기 일반식(IV)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염이다:
상기 식에서,
염기는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 퓨린 또는 피리미딘이고;
R6은 알킬(저급 알킬 및 할로겐화된 알킬 포함), CH3, CF3, 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, 2-Br-에틸, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), CF3, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, N02, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
R7은 OR2, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, 할로-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 불소, 염소, 브롬, 요오드, NO2, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
R9는 수소, -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 염소, 브롬, 요오드, NO2, NH2, -NH(저급 알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, -N(아실)2이고;
R10은 H, 알킬(저급 알킬 포함), 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드이고;
R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 포함); 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬 알킬(저급 알킬 포함); 아실(저급 아실 포함); CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, CO-아릴옥시알킬, CO-치환된 아릴, 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 알킬설포닐, 아릴설포닐, 아르알킬설포닐, 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;또는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
X는 O, S, S02 또는 CH2이다.
2'-분지형 뉴클레오시드의 일반 합성 방법:
1. 적절한게 변형된 당을 사용한 뉴클레오베이스의 글리코실화
본 공정에서 중요한 출발 물질은 2'-OH 및 2'-H, 적절한 이탈 그룹(LG), 예로서, 아실 그룹 또는 클로로, 브로모, 플루오로 또는 요오도를 포함하는 적절하게 치환된 당일 수 있다. 당은 구입할 수 있거나 표준 에피머화, 치환, 산화 및 환원 기술을 포함하는 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 이어서 치환된 당은 적절한 온도하에 적절한 용매중에서 적절한 산화제로 산화시켜 2'-변형된 당을 수득할 수 있다. 가능한 산화제는 Jones 시약(크롬산 및 황산의 혼합물), Collins's 시약(디피리딘 Cr(VI)옥사이드, Corey's 시약(피리디늄 클로로크로메이트), 피리디늄 디크로메이트, 디크로메이트 산, 과망간산 칼륨 , MnO2, 루테늄 테트라옥사이드, 상 이동 촉매제 예로서, 크롬산 또는 폴리머상에 지지된 과망간산염, C12-피리딘, H202-몰리브덴산암모늄, NaBr02-CAN, HOAc중 NaOCl, 구리크롬산염, 산화구리, Raney 니켈, 팔라듐 아세테이트, Meerwin-Pondorf-Verley 시약(또다른 케톤을 포함하는 알루미늄 t-부톡시드)및 N-브롬로숙신이미드이다.
이어서 유기금속성 탄소 친핵체(organometallic carbon nucleophile), 예로서 그리나드 시약, 유기 리튬, 리튬 디알킬코퍼 또는 TBAF중 R4-SiMe3(R4는 이하 정의되는 바와 같다)을 적절한 온도에서 적절한 비-양성자성 용매를 사용하여 케톤과 커플링하여 2'-알킬화된 당을 수득한다. [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 적절하게 보호된 그룹, 바람직하게 아실 또는 실릴 그룹으로 알킬화된 당을 임의로 보호할 수 있다.
[Townsend 화학 of nucleoside and nucleotide, Plenum Press, 1994]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 임의로 보호화된 당을 BASE와 커플링할 수 있다. 예를 들면, 아실화된 당은 적절한 온도에서 적절한 용매중 루이스산, 예로서 틴 테트라클로라이드, 티타늄 테트라클로라이드 또는 트리메틸실릴트리플레이트와 실릴화된 염기로 커플링될 수 있다.
연속하여, [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 뉴클레오시드를 탈보호화할 수 있다.
특정 일례에서, 2'-C-분지형 리보뉴클레오시드가 바람직하다. 리보뉴클레오시드의 합성을 도식 1에 나타낸다. 또한, 데옥시리보-뉴클레오시드가 사용될 수 있다. 이 뉴클레오시드를 얻기 위하여, 형성된 리보뉴클레오시드를 [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 임의로 보호화한 후, 2'-OH를 적절한 환원제로 환원시킬 수 있다. 임의로, 2'-하이드록실은 활성화되어 환원, 즉 Barton 환원을 촉진시킬 수 있다.
도식 1
상기 식에서,
LG는 이탈 그룹이고;
R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
R4는 수소, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, NO2, NH2, -NH(저급알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, 또는 -N(아실)2이다.
2. 미리 형성된 뉴클레오시드의 변형
본 공정을 위해 중요한 출발 물질은 적절하게 2'-OH 및 2'-H로 치환된 뉴클레오시드일 수 있다. 뉴클레오시드는 구입가능하거나 표준 커플링 기술을 포함하는 공지된 수단을 통해 제조할 수 있다. 뉴클레오시드는 [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 적절하게 보호된 그룹, 바람직하게 아실 또는 실릴 그룹으로 알킬화된 당을 임의로 보호할 수 있다.
이어서 적절하게 보호된 뉴클레오시드는 적절한 온도하에 적절한 용매중에서 적절한 산화제로 산화시켜 2'-변형된 당을 수득할 수 있다. 가능한 산화제는 Jones 시약(크롬산 및 황산의 혼합물), Collins's 시약(디피리딘 Cr(VI)옥사이드, Corey's 시약(피리디늄 클로로크로메이트), 피리디늄 디크로메이트, 디크로메이트 산, 과망간산 칼륨 , MnO2, 루테늄 테트라옥사이드, 상 이동 촉매제 예로서, 크롬산 또는 폴리머상에 지지된 과망간산염, C12-피리딘, H202-몰리브덴산암모늄, NaBr02-CAN, HOAc중 NaOCl, 구리크롬산염, 산화구리, Raney 니켈, 팔라듐 아세테이트, Meerwin-Pondorf-Verley 시약(또다른 케톤을 포함하는 알루미늄 t-부톡시드)및 N-브롬로숙신이미드이다.
연속하여, [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 뉴클레오시드를 탈보호화할 수 있다.
특정 일례에서, 2'-C-분지형 리보뉴클레오시드가 바람직하다. 리보뉴클레오시드의 합성을 도식 2에 나타낸다. 또한, 데옥시리보-뉴클레오시드가 사용될 수 있다. 이 뉴클레오시드를 얻기 위하여, 형성된 리보뉴클레오시드를 [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 임의로 보호화한 후, 2'-OH를 적절한 환원제로 환원시킬 수 있다. 임의로, 2'-하이드록실은 활성화되어 환원, 즉 Barton 환원을 촉진시킬 수 있다.
도식 2
상기 식에서,
R1, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
R4는 수소, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, NO2, NH2, -NH(저급알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, 또는 -N(아실)2이다.
2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드의 일반 합성
1. 적절하게 변형된 당을 사용한 피리미딘의 글리코실화
2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드의 대표적인 일반 제조 방법을 도식 3에 기술한다. β-D-리보 배위의 2'분지형 피리미딘 뉴클레오시드가 이 도식에 기술되어 있다. 다르게는, 본 분야의 기술자는 2'-β-L-피리미딘 뉴클레오시드를 제조하기 위하여 일반 도식을 변형시킬 있다. 본 공정을 위해 중요한 출발 물질은 적절한 이탈 그룹(LG), 예로서, 아실 그룹 또는 클로로, 브로모, 플루오로 또는 요오도를 갖는 2'-OH 및 2'-H로 적절하게 치환된 당일 수 있다. 당은 구입할 수 있거나 표준 에피머화, 치환, 산화 및 환원 기술을 포함하는 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 이어서 치환된 당은 적절한 온도하에 적절한 용매중에서 적절한 산화제로 산화시켜 2'-변형된 당을 수득할 수 있다. 가능한 산화제는 Jones 시약(크롬산 및 황산의 혼합물), Collins's 시약(디피리딘 Cr(VI)옥사이드, Corey's 시약(피리디늄 클로로크로메이트), 피리디늄 디크로메이트, 디크로메이트 산, 과망간산 칼륨 , MnO2, 루테늄 테트라옥사이드, 상 이동 촉매제 예로서, 크롬산 또는 폴리머상에 지지된 과망간산염, C12-피리딘, H202-몰리브덴산암모늄, NaBr02-CAN, HOAc중 NaOCl, 구리크롬산염, 산화구리, Raney 니켈, 팔라듐 아세테이트, Meerwin-Pondorf-Verley 시약(또다른 케톤을 포함하는 알루미늄 t-부톡시드)및 N-브롬로숙신이미드이다.
이어서 유기금속성 탄소 친핵체(organometallic carbon nucleophile), 예로서 그리나드 시약, 유기 리튬, 리튬 디알킬코퍼 또는 TBAF중 R4-SiMe3(R4는 이하 정의되는 바와 같다)을 적절한 온도에서 적절한 비-양성자성 용매를 사용하여 케톤과 커플링하여 2'-알킬화된 당을 수득한다. [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 적절하게 보호된 그룹, 바람직하게 아실 또는 실릴 그룹으로 알킬화된 당을 임의로 보호할 수 있다.
[Townsend 화학 of nucleoside and nucleotide, Plenum Press, 1994]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 임의로 보호화된 당을 피리미딘 염기와 커플링할 수 있다. 예를 들면, 아실화된 당은 적절한 온도에서 적절한 용매중 루이스산, 예로서 틴 테트라클로라이드, 티타늄 테트라클로라이드 또는 트리메틸실릴트리플레이트와 실릴화된 피리미딘으로 커플링될 수 있다. 또한, 할로-당은 트리메틸실릴트리플레이트의 존재에서 시티딘과 같은 실릴화된 피리미딘으로 커플링될 수 있다.
도식 3
상기 식에서,
R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
R4는 수소, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, NO2, NH2, -NH(저급알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, 또는 -N(아실)2이
2. 미리 형성된 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드의 변형
본 공정을 위해 중요한 출발 물질은 적절하게 2'-OH 및 2'-H로 치환된 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드일 수 있다. 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드는 구입가능하거나 표준 커플링 기술을 포함하는 공지된 수단을 통해 제조할 수 있다. 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드는 [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 적절하게 보호된 그룹, 바람직하게 아실 또는 실릴 그룹으로 알킬화된 당을 임의로 보호할 수 있다.
이어서 적절하게 보호된 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드는 적절한 온도하에 적절한 용매중에서 적절한 산화제로 산화시켜 2'-변형된 당을 수득할 수 있다. 가능한 산화제는 Jones 시약(크롬산 및 황산의 혼합물), Collins's 시약(디피리딘 Cr(VI)옥사이드, Corey's 시약(피리디늄 클로로크로메이트), 피리디늄 디크로메이트, 디크로메이트 산, 과망간산 칼륨 , MnO2, 루테늄 테트라옥사이드, 상 이동 촉매제 예로서, 크롬산 또는 폴리머상에 지지된 과망간산염, C12-피리딘, H202-몰리브덴산암모늄, NaBr02-CAN, HOAc중 NaOCl, 구리크롬산염, 산화구리, Raney 니켈, 팔라듐 아세테이트, Meerwin-Pondorf-Verley 시약(또다른 케톤을 포함하는 알루미늄 t-부톡시드)및 N-브롬로숙신이미드이다.
연속하여, [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드를 탈보호화할 수 있다.
특정 일례에서, 2'-C-분지형 리보뉴클레오시드가 바람직하다. 리보뉴클레오시드의 합성을 도식 4에 나타낸다. 또한, 데옥시리보-뉴클레오시드가 사용될 수 있다. 이 뉴클레오시드를 얻기 위하여, 형성된 리보뉴클레오시드를 [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 임의로 보호화한 후, 2'-OH를 적절한 환원제로 환원시킬 수 있다. 임의로, 2'-하이드록실은 활성화되어 환원, 즉 Barton 환원을 촉진시킬 수 있다.
도식 4
상기 식에서,
R1, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
R4는 수소, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, NO2, NH2, -NH(저급알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, 또는 -N(아실)2이다.
2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드의 일반 합성
1. 적절하게 변형된 당을 사용한 피리미딘의 글리코실화
2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드의 대표적인 일반 제조 방법을 이하 도식 5에 기술한다. β-D-리보 배위의 2'분지형 퓨린 뉴클레오시드가 이 도식에 기술되어 있다. 다르게는, 본 분야의 기술자는 적절한 출발 물질을 사용하여 β-D-리보를 제조할 수 있을 것으로 이해된다. 출발 물질은 구조식(i)의 3,5-비스 보호된 알킬 푸라노시드, 예로서, 메틸 푸라노시드이다. 이어서 C-2 하이드록실 그룹을 적절한 산화제, 예로서, 크롬 트리옥사이드 또는 크로산염 시약 또는 Dess-Martin 페리오디난으로 산화시키거나 Swern 산화에 의해 구조식(ii)의 C-2 케톤을 수득한다. 적절한 유기 용매, 예로서, 테트라하이드로푸란, 디에틸 에테르 등의 존재하에 Grignard 시약, 예로서, 알킬, 알케닐, 또는 알키닐 마그네슘 할라이드(예로서, MeMgBr, EtMgBr, 비닐MgBr, 알릴MgBr, 및 에티닐MgBr)또는 알킬, 알케닐, 또는 알키닐 리튬, 예로서, MeLi를 (ii)의 카보닐 이중 결합 맞은편에 가하여 구조식(iii)의 C-2 3급 알코올을 수득한다. 적절한 용기 용매중 수소 할랑리드, 예로서 아세트산중 수소 브로마이드로 식(iii)의 푸라노시드를 처리하여 푸라노스 당 유도체의 C-1(C-1(아노르네릭(anorneric))위치에 우수한 이탈 그룹(예로서, F, Cl, Br, 및 I)을 도입하여 중간체 푸라노실 할라이드(iv)를 수득한다. C-설포네이트, 예로서, 메탄설포네이트(MeSO2O-), 트리플루오로메탄설포네이트(CF3S020-)또는 p-톨루엔설포네이트(-OTs)는 다음 반응에서 또한 유용한 이탈 그룹으로서 작용하여 글리코실(뉴클레오시드)결합을 형성할 수 있다. 뉴클레오드 결합은 적절하게 치환된 1H-피롤로 [2,3-d] 피리미딘(v), 예로서, 적절하게 치환된 4-할로-IH-피롤로 [2,3-d] 피리미딘의 금속염(예로서, 리튬, 나트륨 또는 칼륨)으로 구조식(iv)의 중간체를 처리하여 구성되고, 이는 적절한 무수 유기 용매, 예로서, 아세토니트릴, 테트라하이드로푸란, 1-메틸-2-피롤리디논, 또는 N, N-디메틸-포름아미드(DMF)중 알칼리 하이드라이드(예로서, 수소화나트륨), 알칼리 하이드로옥사이드(예로서, 수산화칼륨), 알칼리 카보네이트(예로서, 탄산칼륨), 또는 알칼리 헥사메틸디실아지드(예로서,NaHMDS)로 처리하여 동소에서 형성될 수 있다. 치환 반응은 2상 시스템(고체-액상 또는 액상-액상)으로 상 이동 촉매, 예로서, TDA-1 또는 트리에틸벤질염화암모늄을 사용하여 촉매화할 수 있다. 이어서 구조식(vi)의 보호된 뉴클레오시드의 임의의 보호 그룹은 통상의 탈보호 방법, 예로서, [W. Greene'and P. G. M. Wuts,"Protective Groups in Organic Synthesis, "P ed. , John Wiley & Sons, 1999]에 따라 절단된다. 4-할로 중간체(vi)를 적절한 아민, 예로서, 알코올 암모니아 또는 액상 암모니아로 처리하여 피롤로 [2,3-d] 피리미딘 중심(nucleus)의 4번 위치상의 아미노 그룹을 임의로 도입하여 C-4번 위치(-NH2)에 1차 아민을 형성하고, 알킬아민을 도입하여 2차 아민(-NHR), 또는 디알킬아민을 도입하여 3차 아민(-NRR')을 형성한다. 7H-피롤로 [2,3-d] 피리미딘-4(3H)온 화합물은 수성 염기, 예로서 수산화나트륨으로 (vi)를 가수분해하여 유도될 수 있다. 1-6의 알코올분해(예로서, 메탄올분해)로 C-4 알콕사이드(-OR)를 수득하고, 알킬 머캅티드의 처리로 C-4 알킬티오(-SR)유도체를 수득한다. 이어서 유기/의료 화학 분야의 당업자에게 잘 공지되어 있는 화학적 조작법이 본 발명의 바람직한 화합물을 수득하기 위하여 요구될 수 있다.
도식 5
상기 식에서,
P1 및 P2는 독립적으로 보호 그룹이고; 다르게는, P1 및 P2는 함께 사이클릭 보호 그룹을 형성할 수 있고;
R5 및 R6은 독립적으로 알킬 그룹이고;
M은 Li, Na, 또는 K이고;
X1 및 X2는 독립적으로 F, Cl, Br, orI ; R7,R8, andR9 are 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, 알콕시, 아미노, 알킬아미노, 또는 알킬이다.
β-D-2'-CH 3 -리보C의 합성
β-D-2'-CH3-리보C
제공되는 하기 합성법은 화합물 β-D-2'-CH3-리보C를 수득하기 위한 비제한적인 방법이다. 본 분야의 기술자는 공지된 방식으로 합성법을 변형하여 화합물 β-D-2'-CH3-리보C를 수득할 수 있다.
1. 적절하게 변형된 당을 사용한 뉴클레오베이스의 글리코실화
본 공정을 위해 중요한 출발 물질은 적절한 이탈 그룹(LG), 예로서, 아실 그룹 또는 클로로, 브로모, 플루오로 또는 요오도를 갖는 2'-OH 및 2'-H로 적절하게 치환된 당일 수 있다. 당은 구입할 수 있거나 표준 에피머화, 치환, 산화 및 환원 기술을 포함하는 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 치환된 당은 적절한 온도하에 적절한 용매중에서 적절한 산화제로 산화시켜 2'-변형된 당을 수득할 수 있다. 가능한 산화제는 Jones 시약(크롬산 및 황산의 혼합물), Collins's 시약(디피리딘 Cr(VI)옥사이드, Corey's 시약(피리디늄 클로로크로메이트), 피리디늄 디크로메이트, 디크로메이트 산, 과망간산 칼륨 , MnO2, 루테늄 테트라옥사이드, 상 이동 촉매제 예로서, 크롬산 또는 폴리머상에 지지된 과망간산염, C12-피리딘, H202-몰리브덴산암모늄, NaBr02-CAN, HOAc중 NaOCl, 구리크롬산염, 산화구리, Raney 니켈, 팔라듐 아세테이트, Meerwin-Pondorf-Verley 시약(또다른 케톤을 포함하는 알루미늄 t-부톡시드)및 N-브롬로숙신이미드이다.
이어서 유기금속성 탄소 친핵체(organometallic carbon nucleophile), 예로서 그리나드 시약, 유기 리튬, 리튬 디알킬코퍼 또는 TBAF중 R4-SiMe3(R4는 이하 정의되는 바와 같다)을 적절한 온도에서 적절한 비-양성자성 용매를 사용하여 케톤과 커플링하여 2'-메틸 당을 수득한다. [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 적절하게 보호된 그룹, 바람직하게 아실 또는 실릴 그룹으로 메틸 당을 임의로 보호할 수 있다.
[Townsend Chemistry of nucleoside and nucleotide, Plenum Press, 1994]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 임의로 보호화된 당을 염기와 커플링할 수 있다. 예를 들면, 아실화된 당은 적절한 온도에서 적절한 용매중 루이스산, 예로서 틴 테트라클로라이드, 티타늄 테트라클로라이드 또는 트리메틸실릴트리플레이트와 실릴화된 염기로 커플링될 수 있다. 또한, 할로-당은 트리메틸실릴트리플레이트의 존재에서 실릴화된 염기로 커플링될 수 있다.
연속하여, [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 2'-메틸-뉴클레오시드를 탈보호화할 수 있다.
도식 6에 2'-메틸-뉴클레오시드의 합성을 나타낸다.
도식 6
상기 식에서,
LG는 이탈 그룹이고;
R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이다.
2. 미리 형성된 2'-메틸 뉴클레오시드의 변형
본 공정을 위해 중요한 출발 물질은 적절하게 2'-OH 및 2'-H로 치환된 2'-메틸 시티딘일 수 있다. 뉴클레오시드는 구입가능하거나 표준 커플링 기술을 포함하는 공지된 수단을 통해 제조할 수 있다. 뉴클레오시드는 [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 적절하게 보호된 그룹, 바람직하게 아실 또는 실릴 그룹으로 알킬화된 당을 임의로 보호할 수 있다.
이어서 적절하게 보호된 2'-메틸 뉴클레오시드는 적절한 온도하에 적절한 용매중에서 적절한 산화제로 산화시켜 2'-메틸 당을 수득할 수 있다. 가능한 산화제는 Jones 시약(크롬산 및 황산의 혼합물), Collins's 시약(디피리딘 Cr(VI)옥사이드, Corey's 시약(피리디늄 클로로크로메이트), 피리디늄 디크로메이트, 디크로메이트 산, 과망간산 칼륨 , MnO2, 루테늄 테트라옥사이드, 상 이동 촉매제 예로서, 크롬산 또는 폴리머상에 지지된 과망간산염, C12-피리딘, H202-몰리브덴산암모늄, NaBr02-CAN, HOAc중 NaOCl, 구리크롬산염, 산화구리, Raney 니켈, 팔라듐 아세테이트, Meerwin-Pondorf-Verley 시약(또다른 케톤을 포함하는 알루미늄 t-부톡시드)및 N-브롬로숙신이미드이다.
연속하여, [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 뉴클레오시드를 탈보호화할 수 있다.
도식 7에 2'-메틸-시티딘의 합성을 나타낸다.
도식 7
상기 식에서,
R1, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이다.
약제학적으로 허용가능한 프로드럭
용어 "약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭"은 본 명세서에서 환자에게 투여되는 경우 뉴클레오시드 화합물을 제공하는 개시된 뉴클레오시드의 모든 약제학적으로 허용되는 형태(예로서, 에스테르, 포스페이트 에스테르, 에스테르 염 또는 관련 그룹의 염)를 기술하기 위하여 사용된다. 약제학적으로 허용되는 염은 약제학적으로 허용되는 무기 또는 유기 염기 및 산으로부터 유도된 것을 포함한다. 적합한 염은 제약 업계에 공지된 다수의 다른 산 중에서도 포타슘 및 소듐과 같은 알칼리 금속, 칼슘 및 마그네슘과 같은 알칼리 토금속으로부터 유도된 것을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 프로드럭은 예를 들어 숙주에서 대사되어 예컨대 가수분해 또는 산화되어 본 발명의 화합물을 형성하는 화합물을 의미한다. 프로드럭의 전형적인 예는 활성 화합물의 작용 부위상에 생물학적으로 불안정한 보호 그룹을 갖는 화합물을 포함한다. 프로드럭은 산화, 환원, 아민화, 탈아민화, 하이드록실화, 탈하이드록실화, 가수분해, 탈가수분해, 알킬화, 탈알킬화, 아실화, 탈아실화, 포스포릴화, 탈포스포릴화하여 활성 화합물을 생성할 수 있는 화합물을 포함한다. 본 발명의 화합물은 예를 들어 플라비비리다에 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 보유하거나, 이러한 활성을 나타내는 화합물로 대사된다.
2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예로서,β-D-2'-CH3-리보C를 포함하는 2'-분지형 뉴클레오시드 또는 아실화되거나 또는 뉴클레오시드 프로드럭로서 투여되는 관련 화합물을 병용 요법 또는 교대 요법에서 사용할 수 있다.
본 명세서에 기술된 모든 뉴클레오시드 또는 하이드록실 또는 아민 기능을 포함하는 다른 화합물은 뉴클레오시드의 활성, 생체이용율, 안정성을 증가시키거나 다르게는 성질을 변화시키기 위하여 프로드럭으로서 투여될 수 있다. 다수의 뉴클레오타이드 프로드럭 리간드가 공지되어 있다. 일반적으로, 뉴클레오시드의 모노-, 디-또는 트리포스페이트의 알킬화, 아실화 또는 다른 친유성 변형에 의해 극성이 감소되고, 세포로 유입되는 것이 가능해 진다. 포스포네이트 부위상의 하나 이상의 수소를 치환시킬 수 있는 치환체 그룹의 예에 알킬, 아릴, 스테로이드, 당을 포함하는 카보하이드레이트, 1,2-디아실글리세롤과 같은 알콜이 있다. 다수가 [R. Jone 및 N. Bischofberger, Anti바이러스 Research, 27(1995)1-17]에 기재되어 있다. 목적하는 효과를 얻기 위하여 이들중 어느 것을 개시된 뉴클레오시드와 배합하여 사용할 수 있다.
본 명세서에 참고로 인용되는 하기의 참고 문헌에 기술된 바와 같이 활성 뉴클레오시드 또는 다른 하이드록실 포함 화합물은 또한 에테르 리피드(특히 뉴클레오시드에 대하여 5'-에테르 리피드)로 제공될 수 있다[Kucera, L. S., N. Iyer, E. Leake, A. Raben, Modest E. K., D. L. W., and C. Piantadosi. 1990. "Novel membrane-interactive ether lipid analog that inhibit infectious HIV-1 Production and induce defective virus formation." AIDS Res. Hum. Retro virus. 6: 491-501; Piantadosi, C., J. Marasco C. J., S. L. Morris-Natschke, K. L. Meyer, F. Gumus, J. R. Surles, K. S. Ishaq, L. S. Kucera, N. Iyer, C. A. Wallen, S. Piantadosi, and E. J. Modest. 1991. "Synthesi and evaluation of novel ether lipid necleoside conjugates for anti-HIV activity." J. Med. Chem. 34:1408.1414; Hosteller, K. Y., D. D. Richman, D. A. Carson, L. M. Stuhmiller, G. M. T. van Wijk, and H. van den Bosch. 1992. "Greatly enhanced Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication in CEM and HT4-6C cell by 3'-deoxythimidine diphosphate dimyristoylglycerol, a lipid prodrug of 3'-deoxythimidine." Ahtimicrob. Agents Chemother. 36:2025.2029; Hosetler, K. Y., L. M. Stuhmiller, H. B. Lenting, H. van den Bosch, and D. D. Richman, 1990. "Synthesi and antiretrovirus activity of phospholipid analogs of azidothimidine and other antivirus nucleoside." J. Biol. Chem. 265: 61127]. 뉴클레오시드 또는 다른 하이드록실 또는 아민 포함 화합물, 바람직하게는 뉴클레오시드 또는 친유성 제제의 5'-OH 위치에 공유적으로 도입될 수 있는 적합한 친유성 치환체를 기술한 미국 특허의 비제한적인 예로는 다음과 같은 특허들이 포함되고, 이 모두는 본 명세서에서 참고로 인용된다: 미국 특허 5,149,794(Sep. 22, 1992, Yatvin 등); 5,194,654(Mar. 16, 1993, Hostetler 등), 5,223,263(June 29, 1993,. Hostetler 등); 5,256,641(Oct. 26, 1993, Yatvin 등); 5,411,947(May 2, 1995, Hostetler 등); 5,463,092(Oct. 31, 1995, Hostetler 등); 5,543,389(Aug. 6, 1996, Yatvin 등); 5,543,390(Aug. 6, 1996, Yatvin 등); 5,543,391(Aug. 6, 1996, Yatvin 등); 및 5,554,728(Sep. 10, 1996; Basava 등). 본 발명의 뉴클레오시드에 결합될 수 있는 친유성 치환체, 또는 친유성 제제를 기술하고 있는 외국 특허 출원은 WO 89/02733, WO 90/00555, WO 91/16920, WO 91/18914, WO 93/00910, WO 94/26273, WO 96/15132, EP 0 350 287, EP 93917054.4 및 WO 91/19721을 포함한다.
2'-분지형 β-D 뉴클레오시드의 2', 3' 및 5'-프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 이들 화합물들을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 제제를 사용하여 플라비비리다에 감염을 치료할 수 있다. 특히, 하기 식의 β-D-2'-CH3-리보C의 3'-발린 에스테르 프로드럭 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 플라비비리다에 감염 치료를 위하여 대상에 투여할 수 있다:
일면에서, 2'-분지형 β-D 뉴클레오시드의 프로드럭은 2' 및/또는 5'번 위치에 생물학적으로 절단가능한 부위를 포함한다. 바람직한 부위는 자연발생 또는 합성 D 또는 L 아미노산 에스테르, 예로서, D 또는 L-발릴이고 바람직하게 L-아미노산 에스테르, 예로서 L-발릴, 및 알킬 에스테르, 아세틸을 포함한다. 그러므로, 본 발명은 특히 어느 바람직한 퓨린 또는 피리미딘 염기를 포함하는 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 2'-L 또는 D-아미노산 에스테르 및 2',5'-L 또는 D-디아미노산 에스테르, 바람직하게 L-아미노산 에스테르(여기에서, 모체(parent)약물은 임의로 15 마이크로몰랄 미만, 더욱더 바람직하게 10 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다); 어느 바람직한 퓨린 또는 피리미딘 염기를 포함하는 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 2'-(알킬 또는 아릴)에스테르 또는 2',5'-L-디(알킬 또는 아릴)에스테르(여기에서, 모체 약물은 임의로 10 또는 15 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다); 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 2',5'-디에스테르의 프로드럭(여기에서, (i)2' 에스테르는 자연발생 또는 합성 D 또는 L-아미노산 에스테르, 바람직하게 L-아미노산 에스테르이고, 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (ii)양 에스테르 모두 독립적으로 자연발생 또는 합성 D 또는 L-아미노산 에스테르, 바람직하게 모두 L-아미노산 에스테르이고; (iii)양 에스테르는 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (iv)2' 에스테르는 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5'-에스테르는 자연발생 또는 합성 D 또는 L-아미노산 에스테르, 바람직하게 L-아미노산 에스테르(모체 약물은 임의로 10 또는 15 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다)을 포함한다.
본 발명에 포함되는 프로드럭의 예는 β-D-2'-메틸-시티딘의 2'-D 또는 L-발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-시티딘; β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 2'-L-발린 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-아데노신의 2'-L-발린 에스테르; β-D-2',8-디메틸-구아노신의 2'-L-발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로시티딘의 2'-L-발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-우리딘의 2'-L-발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-시티딘의 2'-아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 2'-아세틸 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-아데노신의 2'-아세틸 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-구아노신의 2'-아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로-시티딘의 2'-아세틸 에스테르; 및 β-D-2', 6-디메틸-(시티딘, 5-플루오로시티딘, 우리딘 또는 티미딘)의 2'-에스테르 또는 β-D-2'-메틸-시티딘 또는 β-D-2', 8-디메틸-(구아노신, 아데노신 또는 이노신)의 2'-에스테르(여기에서, (i)2' 에스테르는 아미노산 에스테르이거나; (ii)2'에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이다)이다.
본 발명에 포함되는 프로드럭의 또다른 예는 β-D-2'-메틸 시티딘의 2', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2',6-디메틸-시티딘(디발-2', 6-디Me-L-dC); β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 2', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-아데노신의 2', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-구아노신의 2', 5'-L-디발린 에스테르 ; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로-시티딘의 2', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-우리딘의 2', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-시티딘의 2', 5'-디아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 2', 5'-디아세틸 에스테르; β-D'-2',8-디메틸-아데노신의 2', 5'-디아세틸 에스테르 ; β-D-2', 8-디메틸-구아노신의 2', 5'-디아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로-시티딘의 2', 5'-디아세틸 에스테르; 및 β-D-2', 6-디메틸-(시티딘, 5-플루오로-시티딘, 우리딘 또는 티미딘)의 2', 5'-디에스테르 또는 β-D-2'-메틸 시티딘 또는 β-D-2', 8-디메틸-(구아노신, 아데노신 또는 이노신)의 2', 5'-디에스테르(여기에서,(i)2' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (ii)두개의 에스테르 모두 아미노산 에스테르이고: (iii)두개의 에스테르 모두 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이거나; (iv)2'에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5'-에스테르는 아미노산 에스테르이다.
또다른 일면에서, 2'-분지형 β-D 뉴클레오시드 3'-프로드럭은 3' 및/또는 5'번 위치에 생물학적으로 절단가능한 부위를 포함한다. 바람직한 부위는 자연발생 또는 합성 D 또는 L 아미노산 에스테르, 예로서, 발릴이고 바람직하게 L-아미노산, 예로서 L-발릴, 및 아세틸을 포함하는 알킬 에스테르이다. 그러므로, 본 발명은 특히 어느 바람직한 퓨린 또는 피리미딘 염기를 포함하는 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 3'-L-아미노산 에스테르 및 3',5'-L-디아미노산 에스테르, 바람직하게 L-아미노산 에스테르(여기에서, 모체(parent)약물은 임의로 15 마이크로몰랄 미만, 더욱더 바람직하게 10 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다); 어느 바람직한 퓨린 또는 피리미딘 염기를 포함하는 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 3'-(알킬 또는 아릴)에스테르 또는 3',5'-L-디(알킬 또는 아릴)에스테르(여기에서, 모체 약물은 임의로 10 또는 15 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다); 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 3',5'-디에스테르의 프로드럭(여기에서, (i)3' 에스테르는 자연발생 또는 합성 D 또는 L-아미노산 에스테르이고, 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (ii)양 에스테르 모두 독립적으로 자연발생 또는 합성 D 또는 L-아미노산 에스테르이고; (iii)양 에스테르는 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (iv)3' 에스테르는 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5'-에스테르는 자연발생 또는 합성 D 또는 L-아미노산 에스테르(모체 약물은 임의로 10 또는 15 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다)을 포함한다.
본 발명에 포함되는 프로드럭의 예는 β-D-2'-메틸-시티딘의 3'-L-발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-시티딘; β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 3'-L-발린 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-아데노신의 3'-L-발린 에스테르; β-D-2',8-디메틸-구아노신의 3'-L-발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로시티딘의 3'-L-발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-우리딘의 3'-L-발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-시티딘의 3'-아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 3'-아세틸 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-아데노신의 3'-아세틸 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-구아노신의 3'-아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로-시티딘의 3'-아세틸 에스테르; 및 β-D-2', 6-디메틸-(시티딘, 5-플루오로시티딘, 우리딘 또는 티미딘)의 3'-에스테르 또는 β-D-2'-메틸-시티딘 또는 β-D-2', 8-디메틸-(구아노신, 아데노신 또는 이노신)의 3'-에스테르(여기에서, (i)3' 에스테르는 아미노산 에스테르이거나; (ii)3'에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이다)이다.
본 발명에 포함되는 프로드럭의 또다른 예는 β-D-2'-메틸 시티딘의 3', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2',6-디메틸-시티딘(디발-2', 6-디Me-L-dC); β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 3', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-아데노신의 3', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-구아노신의 3', 5'-L-디발린 에스테르 ; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로-시티딘의 3', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-우리딘의 3', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-시티딘의 3', 5'-디아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 3', 5'-디아세틸 에스테르; β-D'-2',8-디메틸-아데노신의 3', 5'-디아세틸 에스테르 ; β-D-2', 8-디메틸-구아노신의 3', 5'-디아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로-시티딘의 3', 5'-디아세틸 에스테르; 및 β-D-2', 6-디메틸-(시티딘, 5-플루오로-시티딘, 우리딘 또는 티미딘)의 3', 5'-디에스테르 또는 β-D-2'-메틸 시티딘 또는 β-D-2', 8-디메틸-(구아노신, 아데노신 또는 이노신)의 3', 5'-디에스테르(여기에서,(i)3' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (ii)두개의 에스테르 모두 아미노산 에스테르이고: (iii)두개의 에스테르 모두 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이거나; (iv)3'에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5'-에스테르는 아미노산 에스테르이다.
또다른 일면에서, 2'-분지형 β-D 뉴클레오시드의 프로드럭은 2', 3' 및/또는 5'번 위치에 생물학적으로 절단가능한 부위를 포함한다. 바람직한 부위는 자연발생 또는 합성 D 또는 L 아미노산 에스테르, 예로서, D 또는 L-발릴이고 바람직하게 L-아미노산 에스테르, 예로서 L-발릴, 및 아세틸을 포함하는 알킬 에스테르이다. 그러므로, 본 발명은 특히 어느 바람직한 퓨린 또는 피리미딘 염기를 포함하는 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 2',3'-L 또는 D-디아미노산 에스테르 및 2',3',5'-L 또는 D-트리아미노산 에스테르, 바람직하게 L-아미노산(여기에서, 모체(parent)약물은 임의로 15 마이크로몰랄 미만, 더욱더 바람직하게 10 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다); 어느 바람직한 퓨린 또는 피리미딘 염기를 포함하는 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 2',3'-디(알킬 또는 아릴)에스테르 또는 2',3',5'-L-트리(알킬 또는 아릴)에스테르(여기에서, 모체 약물은 임의로 10 또는 15 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다); 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 2',3'-디에스테르의 프로드럭(여기에서, (i)2' 에스테르는 아미노산 에스테르이고, 3'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (ii)양 에스테르 모두 아미노산 에스테르이고; (iii)양 에스테르는 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (iv)2' 에스테르는 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이고 3'-에스테르는 아미노산 에스테르(모체 약물은 임의로 10 또는 15 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다)을 포함한다. 추가로, 2'-분지형 β-D 또는 β-L뉴클레오시드의 2',3',5'-트리에스테르(여기에서, (i)세개 모두가 아미노산 에스테르이고; (ii)세개 모두 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (iii)2' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 3' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (iv)2' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 3'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (v)2'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 3'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 ; (vi)2'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 3' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 5' 에스테르는 아미노산 에스테르이고; (vii)2'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 3' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (viii)2' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 3'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5' 에스테르는 아미노산 에스테르((모체 약물은 임의로 10 또는 15 마이크로몰랄 미만의 EC50를 갖는다)을 포함한다.
본 발명에 포함되는 프로드럭의 예는 β-D-2'-메틸-시티딘의 2',3'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-시티딘(디발-2',6-디Md-L-dC); β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 2',3'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-아데노신의 2',3'-L-디발린 에스테르; β-D-2',8-디메틸-구아노신의 2',3'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로시티딘의 2',3'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-우리딘의 2',3'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-시티딘의 2',3'-디아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 2',3'-디아세틸 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-아데노신의 2',3'-디아세틸 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-구아노신의 2',3'-디아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로-시티딘의 2',3'-디아세틸 에스테르; 및 β-D-2', 6-디메틸-(시티딘, 5-플루오로시티딘, 우리딘 또는 티미딘)의 2',3'-디에스테르 또는 β-D-2'-메틸-시티딘 또는 β-D-2', 8-디메틸-(구아노신, 아데노신 또는 이노신)의 2',3'-디에스테르(여기에서, (i)2' 에스테르는 아미노산 에스테르이고 3' 에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르; (ii)두개의 에스테르 모두 아미노산 에스테르; (iii)2' 에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 3' 에스테르는 아미노산 에스테르이다)을 포함한다.
추가로, 본 발명에 포함되는 프로드럭의 또다른 예는 β-D-2'-메틸 시티딘의 2',3', 5'-L-트리발린 에스테르; β-D-2',6-디메틸-시티딘(트리발-2', 6-디Me-L-dC); β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 2',3', 5'-L-트리발린 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-아데노신의 2',3', 5'-L-트리발린 에스테르; β-D-2', 8-디메틸-구아노신의 2',3', 5'-L-트리발린 에스테르 ; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로-시티딘의 3', 5'-L-디발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-우리딘의 2',3', 5'-L-트리발린 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-시티딘의 2',3', 5'-트리아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-티미딘의 2',3', 5'-트리아세틸 에스테르; β-D'-2',8-디메틸-아데노신의 2',3', 5'-트리아세틸 에스테르 ; β-D-2', 8-디메틸-구아노신의 2',3', 5'-트리아세틸 에스테르; β-D-2', 6-디메틸-5-플루오로-시티딘의 2',3', 5'-트리아세틸 에스테르; 및 β-D-2', 6-디메틸-(시티딘, 5-플루오로-시티딘, 우리딘 또는 티미딘)의 2',3', 5'-트리에스테르 또는 β-D-2'-메틸 시티딘 또는 β-D-2', 8-디메틸-(구아노신, 아데노신 또는 이노신)의 2',3', 5'-트리에스테르(여기에서,(i)세개의 에스테르 모두 아미노산 에스테르이고; (ii)세개의 에스테르 모두 독립적으로 알킬 또는 아릴 에스테르이고: (iii)2' 에스테르는 아미노산 에스테르이고, 3'에스테르는 아미노산 에스테르이고 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고;(iv)2'에스테르는 아미노산 에스테르이고, 3'에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (v)2'에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고, 3' 에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5'-에스테르는 아미노산 에스테르이고;(vi)2'에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고, 3'에스테르는 아미노산 에스테르이고 5'-에스테르는 아미노산 에스테르이고; (vii)2'에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고, 3'에스테르는 아미노산 에스테르이고 5'-에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고; (viii)2'에스테르는 아미노산 에스테르이고, 3'에스테르는 알킬 또는 아릴 에스테르이고 5'-에스테르는 아미노산 에스테르이다)를 포함한다.
본 발명에 포함되는 프로드럭의 추가의 예는 미국 특허 Nos. 6,284, 748 및 6,312, 662에 기술되어 있는 프로드러을 포함한다. 특히, 본 발명의 프로드럭은 하기 구조식의 화합물을 포함한다:
상기 식에서,
V, W 및 W'는 --H, 알킬, 아르알킬, 알리사이클릭, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 1-알케닐, 및 1-알키닐로 구성된 그룹으로부터 독립적으로 선택되거나
V 및 Z와 함께 추가의 3-5개의 원자를 통해 하이드록시, 아실옥시, 알콕시카보닐옥시, 또는 포스포러스에 결합된 두개의 0 그룹으로부터의 3개의 원자중 하나의 탄소 원자에 결합된 아릴옥시카보닐옥시로 치환된, 5-7개의 원자, 임의로 1개의 헤테로원자를 포함하는 사이클릭 그룹을 형성하거나;
V 및 Z와 함께 추가의 3-5개의 원자를 통해 포스포러스에 결합된 O에 대하여 베타 및 감마 위치에 있는 아릴 그룹에 융합된 임의로 1개의 헤테로원자를 포함하는 사이클릭 그룹을 형성하거나;
V 및 W와 함께 추가의 3개의 원자를 통해 하이드록시, 아실옥시, 알콕시카보닐옥시, 알킬티오카보닐옥시, 및 포스포러스에 결합된 0 그룹으로부터의 3개의 원자중 하나의 탄소 원자에 결합된 알킬티오카보닐옥시로 구성된 그룹으로부터 선택되는 하나의 치환체로 치환되고 6개의 탄소 원자를 포함하는 임의로 치환된 사이클릭 그룹을 형성하거나;
V 및 W와 함께 추가의 3-5개의 원자를 통해 임의로 1개의 헤테로원자를 포함하는 사이클릭을 그룹을 형성하고, V는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 또는 치환된 헤테로아릴이어야 하고;
W 및 W'와 함께 추가의 2-5개의 원자를 통해 임의로 0-2개의 헤테로원자를 포함하는 사이클릭 그룹을 형성하고, V는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로아릴이어야 하고;
Z는 -CHR20H, -CHR2OC(O)R3, -CHR2OC(S)R3, -CHR20C(S)OR3, -CHR20C(O)SR3, -CHR2OCO2R3, -OR2, -SR2, -CHR2N3, -CH2아릴, -CH(아릴)OH, -CH(CH=CR2 2)OH, -CH(C=CR2)OH, -R2, -NR2 2, -OCOR3, -OC02R3, -SCOR3, -SC02R3, -NHCOR2, -NHC02R3, -CH2NH아릴, -(CH2)p-OR12 및 -(CH2)p-SR12로 구성된 그룹으로부터 선택되고;
p는 정수 2 또는 3이고;
R2는 R3 및 --H으로 구성된 그룹으로부터 선택되고;
R3은 알킬, 아릴, 알리사이클릭, 및 아르알킬구성된 그룹으로부터 선택되고;
R12는 --H, 및 저급 아실구성된 그룹으로부터 선택되고;
M은 PO3 2-, P206 3-또는 P309 4-에 결합한 그룹이 2'-분지형 뉴클레오시드이고, 탄소, 산소, 황 또는 질소 원자를 통해 포스포러스에 결합된 그룹으로부터 선택된다.
비제한적인 예로서, 프로드럭은 하기 화합물로서 뉴클레오시드에 결합한다.
2' 및/또는 3'-프로드럭의 일반 합성
본 공정에서 중요한 출발 물질은 적절하게 치환된 2'-분지형 β-D 뉴클레오시드이다. 분지형 뉴클레오시드는 구입할 수 있거나 본 명세서에 기술된 기술을 포함하는 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 분지형 뉴클레오시드는 [Greene et al. Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시된 바와 같이 본 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있는 방법에 의해 적절하게 보호된 그룹, 바람직하게 실릴 그룹으로 임의로 보호될 수 있다. 이어서 보호된 분지형 뉴클레오시드는 적절한 온도에서 적절한 양성자성 또는 비양성자 용매를 사용하여 적절한 아실 공여자, 예로서, 아실 클로라이드 및/또는 아실 안하이드라이드와 커플링하여 2'-분지형β-D 뉴클레오시드의 2' 및/또는 3'프로드럭를 수득할 수 있다. 다르게는 보호된 분지형 뉴클레오시드를 적절한 온도에서 임의로 적절한 커플링제를 사용하여 적절한 비양성자 용매를 사용하여 적절한 아실, 예로서 카복실산, 예로서 알카노산 및/또는 아미노산 잔기와 커플링하여 2'-분지형β-D 뉴클레오시드의 2' 및/또는 3'프로드럭를 수득할 수 있다. 가능한 커플링제는 제한하는 것은 아니지만, Mitsunobu 시약(예: 디이소프로필 아조디카복실레이트 및 디에틸 아조디카복실레이트)을 포함하여 트리페닐포스핀 또는 다양한 카보디이미드와의 커플링을 촉진시키는 시약이다.
예로서, 단순한 아미노-알코올은 아세토니트릴-벤젠 혼합물의의 환류시 산 클로라이드를 사용하여 에스테르화될 수 있다(참고 하기 도식 8: Synthetic Communications, 1978, 8(5), 327-333(참고 문헌으로서 인용된다). 또한, 에스테르화는 안하이드라이드를 사용하여 수행될 수 있다{J. Am. Chem.Soc., 1999,121(24), 5661-5664]
도식 8
III. 플라비비리다에 게놈에서 β-D-2'-CH 3 -리보C 유도된 돌연변이의 검출
일면으로, (i)유효량의 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3' 발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(ii)환자에서 β-D-2'-CH3-리보C에 대한 바이러스 내성을 확인하고;
(iii)RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 요법 및/또는 교대 요법으로 유효량의 하나 이상의 약물을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
또다른 일면으로,
(i)유효량의 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3' 발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(ii)환자에서 β-D-2'-CH3-리보C에 대한 바이러스 내성을 확인하고;
(iii)유효량의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 282번째 위치의 세린을 다른 아미노산, 트레오닌으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물을 투여하는 것을 포함하는, HVC로 감염된 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
(i)유효량의 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3' 발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(ii)환자에서 β-D-2'-CH3-리보C에 대한 바이러스 내성을 확인하고;
(iii)유효량의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 405번째 위치의 세린을 다른 아미노산, 트레오닌으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물을 투여하는 것을 포함하는, BVDV로 감염된 숙주를 치료하는 방법을 제공한다.
또다른 일면으로,
(i)유효량의 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3' 발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(ii)환자에서 β-D-2'-CH3-리보C에 대한 바이러스 내성을 확인하고;
(iii)유효량의 인터페론 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염됨 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
특정 일면으로, 환자에서 β-D-2'-CH3-리보C에 대한 바이러스 내성의 확인은 바이러스 플라크 성장의 표현형 분석을 통해 결정될 수 있다. 또다른 일면으로, 환자에서 β-D-2'-CH3-리보C에 대한 바이러스 내성의 확인은 바이러스의 복제 적합성(fitness)에 의해 결정될 수 있다. 추가의 일면으로, 환자에서 β-D-2'-CH3-리보C에 대한 바이러스 내성의 확인은 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위중 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘, 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘의 존재를 검출하여 결정할 수 있다.
일면에서,
(i)유효량의 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3' 발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(ii)환자로부터 바이러스 배양 샘플을 수득하고;
(iii)샘플을 배양하고 샘플과 야생형 바이러스 사이의 플라크 성장을 비교하고;
(iv)β-D-2'-CH3-리보C에 대한 내성을 나타내는 샘플의 플라크 성장이 야생형의 플라크 성장보다 작은지를 측정하고;
(v)β-D-2'-CH3-리보C에 대하여 내성인 환자에게 유효량의 인터페론을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법을 포함한다.
또다른 일면으로, 본 발명은
(i)유효량의 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3' 발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(ii)환자로부터 바이러스 샘플을 수득하고;
(iii)바이러스의 복제 적합성을 결정하고;
(iv)β-D-2'-CH3-리보C에 대한 내성을 나타내는 샘플의 복제 적합성이 야생형 바이러스의 복제 적합성보다 적은지를 결정하고;
(v)β-D-2'-CH3-리보C에 대하여 내성인 환자에게 유효량의 인터페론을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법을 포함한다.
일면으로, 바이러스 플라크 성장 및/또는 바이러스 복제 적합성은 바이러스 플라크 에세이에 의해 측량될 수 있다. 다를 일면으로, 다른 에세이, 예로서, 감염 센터 에세이, 바이러스-유도성 리포터 에세이, 형질전환 에세이, 엔드 포인트 희석 에세이, 또는 RT-PCR 기술을 사용하여 바이러스 역가를 측량할 수 있다(Flint et al. Principles of Virology(ASM)Chapter 2; Wagner & Hewlett. Basic Virology(Blackwell), Chapters 9 & 10).
플라크 에세이는 바이러스 플라크 성장 및/또는 복제 적합성을 측량하여 수행될 수 있다. 바이러스 희석액을 단층의 숙주 세포를 포함하는 배양 디쉬에 적용할 수 있다. 세포를 반고형 층(예로서, 점성 배지, 예: 아가)으로 오버레핑하여 바이러스가 하나의 감염된 세포로부터 또다른 것으로 확산되지 못하도록 한다. 인큐베이션시킨 후 '플라크'를 인지될 수 있고, 원 현탁액내의 감염 바이러스 입자의 수는 추정할 수 있다. 플라크를 인지하는 방법은 단층의 감염된 세포내의 바이러스 항원을 검출하는 항원 염색법의 사용이다. 이어서 이들 감염된 세포는 바이러스-특이 항체상에서 크로마젠 또는 형광 라벨을 사용하여 가시화될 수 있다. 표현형 분석으로 플라크를 관찰할 수 있고/거나 계수하여 바이러스 역가를 측정할 수 있다. 바이러스 역가는 하기 식을 사용하여 포커스 형성 단위(focus forming units)(FFU)/mL로 산출될 수 있다:TFFU/mL = N x 5 x D(여기에서, T는 바이러스 역가(FFU/mL)이고; N은 웰당 플라크의 수이고; D는 상응하는 바이러스 샘플에 대한 희석 인자이다). (예로서, 12개의 플라크가 10-5의 희석된 바이러스 샘플에 상응하는 웰에서 발견되었을 때 T = 12x5x105=6x106 PFU/mL)이고, 제한된 숙주 환경에서 감염된 자손을 생산하는 전체적인 복제 능력인 바이러스 복제 적합성은 이후 측정될 수 있다.
본 발명의 또다른 일면은 BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 뉴클레오티드의 G 로부터 C로의 돌연변이(405번째 아미노산에서 세린을 트레오닌으로의 돌연변이를 유발)의 존재를 검출하는 방법이다. BVDV의 추정의 기능성 NS5B 영역 B중 아미노산 위치인 Ser405는 모든 헤파시-, 페스티- 및 플라비바이러스 게놈 사이에서 고도로 보존적인 것으로 인지되어 있는 바(도 11; Lai et al. JVirol., 1999, 73,10129-36), 돌연변이화된 다른 플라비비리다에의 추정의 기능성 NS5B 영역 B중 상응하는 세린 잔기는 본 발명의 일면에 따라 검출할 수 있다. 예로서, BVDV의 RNA 폴리머라제 영역중 Ser405는 HCV의 RNA 폴리머라제 영역중 Ser282에 상응한다. 따라서, 번 발명의 일면은 또한 (BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드에 상응하는)HCV 게놈중 8443번째 뉴클레오티드의 G로부터 C로의 돌연변이를 포함한다.
일면으로, 본 발명은 플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플을 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에 게놈 부분(section)에 상보적인 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시킨 후; 올리고뉴클레오티드가 바이러스 핵산과 혼성화되는지를 측정하는 것을 포함하는, β-D-2'-CH3-리보C에 대한 내성을 나타내는 돌연변이를 검출하는 방법을 제공한다.
다른 일면에서, 본 발명은
(i)유효량의 β-D-2'-CH3-리보C 또는 프로드럭, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C의 3' 발린 에스테르 프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하고;
(ii)야생형으로부터 뮤턴트 바이러스로의 혈청전환에 대하여 시험하기 위하여 환자의 혈액을 분석하고;
(iii)유효량의 인터페론를 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
또다른 일면으로
(i)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플을 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드 또는 HCV 게놈중 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
(ii)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(iii)BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드 또는 HCV 게놈중 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘과 프로브의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, β-D-2'-CH3-리보C에 대한 내성 플라비비리다에를 포함하는 것으로 추정되는(suspected)샘플을 분석하는 방법을 제공한다.
추가의 일면으로, 본 발명은
(i)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 Thr을 코딩하는 코돈에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드와 접촉시키고;
(ii)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(iii)서열과 프로브의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 Ser 대신 Thr를 포함할 것으로 추정되는 샘플을 분석하는 방법을 제공하고, 이는 인터페론 치료에 대한 과민성인 바이러스를 나타낸다.
또다른 일면으로, 본 발명은 BVDV 핵산 서열을 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 RNA 폴리머라제 부위중 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드와 접촉시키고;
(ii)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(iii)프로브와 BVDV RNA 폴리머라제 부위중 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, BVDV의 RNA 폴리머라제 부위중 위치 405번째 아미노산의 Ser 또는 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 대신 Thr을 포함할 것으로 추정되는 샘플을 분석하는 방법을 제공하고, 이는 인터페론 치료에 대한 과민성인 바이러스를 나타낸다.
또다른 일면은, 본 발명은
(i)BVDV 핵산 서열을 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드와 접촉시키고;
(ii)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
(iii)프로브와 HCV 게놈의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 282번째 아미노산에 고도로 보존적인 Ser 또는 HCV 게놈의 8443번째 뉴클레오디트의 시티딘 대신 Thr을 포함할 것으로 추정되는 샘플을 분석하는 방법을 제공하고, 이는 인터페론 치료에 대한 과민성인 바이러스를 나타낸다.
올리고뉴클레오티드 프로브
올리고뉴클레오티드 프로브는 플라비비리다에의 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드-유도된 돌연변이의 존재를 검출할 수 있는 것으로 제공도니다. 프로브는 돌연변이를 포함하는 바이러스 핵산 서열에 상보적이다. 이들 프로브는 프로세스 및 키트에서 사용될 수 있다. 올리고뉴클레오티드 프로브는 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위중 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘, 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘, 또는 플라비비리다에 게놈내 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 보존성 세린을 코딩하는 플라비비리다에의 다른 뉴클레오티드를 검출할 수 있다(도 11).
올리고뉴클레오티드 프로브의 길이는 바람직하게 적어도 14개의 뉴클레오티드, 바람직한 일면에서 적어도 15, 20, 25 또는 30개의 뉴클레오티드이다. 통상 길이가 대략 25 또는 30개의 뉴클레오티드 초과인 프로브를 사용하는 것은 바람직하지 않다. 일면으로, BVDV의 RNA 폴리머라제 부위중 1214번째 뉴클레오티드의 구아닌으로부터 시티딘 염기로의 변화를 확인하기 위하여 올리고뉴클레오티드 프로브를디자인할 수 있다. 또다른 일면으로, HCV의 8443번째 뉴클레오티드의 구아닌으로부터 시티딘 염기로의 변화를 확인하기 위하여 올리고뉴클레오티드 프로브를디자인할 수 있다. 돌연변이 부위가 혼성화된 세그먼트의 안쪽 부분에 위치하거나, 다르게는 혼성화된 세그먼트의 3' 또는 5' 말단상에 존재할 수 있도록 올리고뉴클레오티드 프로브를 디자인할 수 있다. 돌연변이 부위가 프로브의 중앙 근처에 위치하도록 하여 혼성화를 효율적으로 수행할 수 있도록 하는 것이 바람직하다.
이하 표 2에 RNA 폴리머라제 부위의 위치 1214번째의 뉴클레오티드(다르게는 뉴클레오티드 위치 11,136으로 언급됨)(참조Genebank accession numberAJ133739 ; Vassilev and Donis(2000)바이러스 Res 69(2)95-107)를 포함하는 BVDV 뉴클레오티드 서열의 일면을 도시한다. 주어진 서열하에서 표준 알고리즘을 사용하여 당업자중 한명은 하기 뉴클레오티드 서열에 상보적이거나 실질적으로 상보적인 올리고뉴클레오티드 프로브를 작제할 수 있다. 상보적으로 쌍을 이루는 법칙은 잘 알려져 있다: 시티딘("C")는 항상 구아닌("G")과 쌍을 이루고 티민("T")또는 우라실("U")은 항상 아데닌("A")과 쌍을 이룬다. 프로브가 진단 뉴클레오티드와 충분하게 혼성화되고 그를 인지할 수 있는 한 프로브가 표적 핵산 서열에 대하여 100% 상보적일 필요는 없다고 판단된다. 어느 정도의 염기쌍의 불일치(mismatch)는 통상 수용될 수 있다.
표 2: BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 뉴클레오티드(11,136으로도 언급됨)의 단일 점 돌연변이를 포함하는 핵산 서열의 비제한적인 예(참조 Genebank accession number AJ133739; Vassilev and Donis, virus Res 2000, 69(2), 95-107)
따라서, 일면으로, 올리고뉴클레오티드는 플라비비리다에 뉴클레오티드 서열에 상보적인 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 불일치를 갖는다.
본 발명의 다른 일면은 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 트레오닌으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 요법 및/또는 교대 요법으로 상기 치료를 필요로 하는 인간과 같은 숙주에 치료학적 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예를 들면, β-D-2'-CH3-리보C, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하여 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 또한 트레오닌을 코딩할 수 있 코돈 ACA, ACG 또는 ACU는 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 중 영역 B에서 트레오닌의 존재를 검출하기 위하여 상기 표 2의 코돈 ACC(굵은체)로 대체될 수 있다.
본 발명의 또다른 일면은 치료학적 유효량의 인터페론을 투여하여 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린으로부터 트레오닌으로의 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에로 감염된 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명의 일면으로 트레오닌을 코딩할 수 있 코돈 ACA, ACG 또는 ACU는 예를 들면, BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 중 405번째 잔지의 트레오닌의 존재를 검출하기 위하여 상기 표 2에서 코돈 ACC(굵은체)로 대체될 수 있다.
하기 표 3은 HCV 게놈의 위치 8443번째의 뉴클레오티드를 포함하는 HCV 뉴클레오티드 서열의 일면을 도시한다(Genebank accession number AJ238799; Lohmann et al.(1999)Science 285(5424)110-113). HCV 게놈의 위치 8443번째의 뉴클레오티드는 HCV 게놈의 위치 11,136번째의 뉴클레오티드와 상응하고, 이는 β-D-2'-CH3-리보C 치료에 의해 돌연변이화되는 플라비비리다에 RNA 폴리머라제의 보존된 세린 잔기(BVDV 게놈의 Ser405, 이는 HCV 게놈의 Ser82와 상응한다)를 나타낸다. 주어진 서열하에서 표준 알고리즘을 사용하여 당업자중 한명은 하기 뉴클레오티드 서열에 상보적이거나 실질적으로 상보적인 올리고뉴클레오티드 프로브를 작제할 수 있다.
표 3: HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 8443번째 뉴클레오티드의 단일 점 돌연변이를 포함하는 핵산 서열의 비제한적인 예(Genebank accession number AJ238799; Lohmann et al.(1999)Science 285(5424)110-113)
따라서, 일면으로, 올리고뉴클레오티드는 플라비비리다에 뉴클레오티드 서열에 상보적인 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 불일치를 갖는다.
본 발명의 다른 일면은 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 트레오닌으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 요법 및/또는 교대 요법으로 상기 치료를 필요로 하는 인간과 같은 숙주에 치료학적 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드, 예를 들면, β-D-2'-CH3-리보C, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하여 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 또한 트레오닌을 코딩할 수 있 코돈 ACA, ACG 또는 ACU는 HVC의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B에서 트레오닌의 존재를 검출하기 위하여 상기 표 3의 코돈 ACC(굵은체)로 대체될 수 있다.
본 발명의 또다른 일면은 치료학적 유효량의 인터페론을 투여하여 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린으로부터 트레오닌으로의 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에로 감염된 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하는 방법을 제공한다. 따라서, 트레오닌을 코딩할 수 있 코돈 ACA, ACG 또는 ACU는 예를 들면, HCV의 RNA 폴리머라제 부위중 282번째 잔지의 트레오닌의 존재를 검출하기 위하여 상기 표 3에서 코돈 ACC(굵은체)로 대체될 수 있다.
또다른 일면으로, 본 발명은 플라비비리다에 핵산 서열을 증폭시키기 위한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 제공한다. 일면으로, 올리고뉴클레오티드의 길이는 적어도 14개의 뉴클레오티드이고 서열-특이의 엄격한 혼성화 조건하에서 돌연변이를 포함하는 뉴클레오티드 서열에 혼성화한다.
프라이머의 혼성화 부위로서 사용되는 올리고뉴클레오티드 서열은 또한 프로브의 혼성화 부위로서 사용될 수 있다. 프라이머 서열의 프로브로서의 사용 적합성은 프라이머의 혼성화 특성에 의존한다. 유사하게, 프로브로서 사용되는 올리고뉴클레오티드는 프라이머로서 사용될 수 있다.
일면과 함께 제공되는 바, 특이 프라이머 및 프로브는 예를 들면, 표적 서열에 상보적이거나 표적 서열에 상보적이지 않은 뉴클레오티드를 5'-또는 3'-말단에 가하여 제조할 수 있다는 것을 본 분야의 기술자는 이해할 것이다. 프라이머 조성물이 표적 서열의 신장을 위한 개시점으로서 작용하는 한, 프라이머 및 프로브가 예시된 일면내 포함되어 있는 적어도 14개의 연속된 뉴클레오티드를 포함하는 한, 상기 조성물은 본 발명의 범주내 포함된다.
본 명세서에서 프로브(들)은 하기의 비제한적인 기준(이는 배타적이거나 확정적인 것은 아닌 것으로 판단된다)에 의해 선별될 수 있다: (1)프로브는 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에 게놈 부위로부터 선별되고; (2)프로브는 시험을 소상시킬 것으로 예측되는 바이러스 게놈의 어느 서열과 상동성이 결여되어 있고; (3)프로브는 증폭되는 핵산내 예를 들면, 증폭 효소 예로서, E. coli DNA 폴리머라제, 예로서, Klenow 단편으로서 언급되는 DNA 폴리머라제의 부분에 의한 핵산의 신장을 방해할 수 있는 2차 구조의 형성이 결여되어 있다. 증폭 배지중 약 15중량% 이하, 바람직하게 5-10중량%의 디메틸 설폭사이드(DMSO)를 사용하고/거나 증폭 온도를 30-40℃까지 승온시켜 2차 구조의 형성을 방지할 수 있다.
추가로, 프로브는 약 50% 함량의 구아닌 및 시티딘을 가질 수 있고, 하이브리드를 다소 덜 안정적으로 만드는 프라이머의 3'-말단에는 다중의 연속적인 아데닌 및 티민 잔기를 포함하지 않을 수 있다.
본 발명의 프로브의 길이는 약 10 내지 30개의 뉴클레오티드, 바람직하게 적어도 14, 15, 20, 25, 또는 30개의 뉴클레오티드일 수 있다. 본 발명에서 사용되는 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오티드 및 변형된 뉴클레오티드 예로서, 본질적으로 그의 혼성화 성질은 바꾸지 않는 변형된 그룹들을 포함하는 뉴클레오티드 또는 이노신일 수 있다. 본 명세서에서 프로브 서열은 5'-로부터 3'-말단의 싱글 스트랜드 DNA 올리고뉴클레오티드로 나타낸다. 어느 프로브는 그 자체로서, 또는 상보적인 형태로, 또는 그의 RNA 형태(여기에서, T는 U로 대체됨)로 사용될 수 있다.
본 발명의 프로브는 상응하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 인서트를 포함하는 재조합 플라스미드를 클로닝하고, 임의로 적절한 뉴클레아제를 사용하여 클로닝된 플라스미터로부터 후미를 절단하고 예로서 분자량에 따른 분획법에 의해 그들을 회수하여 제조할 수 있다. 본 발명에 따른 프로브는 또한 예를 들면, 통상의 포스포트리에스테르 또는 포스포디에스테르 방법 또는 그의 자동화 방법을 통해 화학적으로 합성될 수 있다. 그의 자동화 방법에서 디에틸포스포르아미다이트를 출발물질로서 사용하고 Beaucage 등에 의해 기술된 바와 같이 [Tetrahedron Letters(1981), 22: 1859-1862]에 따라 합성될 수 있다. 변현된 고체 지지체상에 올리고뉴클레오티드를 합성하는 방법은 U. S. Pat. No. 4,458, 066에 기술되어 있다. 또한 생물학적 원(예: 제한 엔도뉴클레아제 분해물)로부터 분리된 프라이머를 사용할 수 있다.
프라이머 또는 프로브로서 사용되는 올리고뉴클레오티드는 또는 뉴클레오티드 유사체 예로서, 포스포로티에이트(Matsukura et al. , 1 967), 알킬포스포로티에이트(Miller et al. , 1979), 펩티드 핵산(Nielsen et al., 1991 ; Nielsen et al. , 1993), 모르폴리노 핵산, 잠긴(locked)핵산, 슈도사이클릭(pseudocyclic)올리고뉴클레오베이스, 2'-0-4'-C-에틸렌 가교결합된(bridged)핵산을 포함하거나 삽입제를 포함할 수 있다(Asseline et al., 1984).
원하는 특성을 갖는 프로브를 디자인하기 위하여 본 분야의 기술자에게 공지되어 있는 하기의 유용한 가이드라인을 적용시킬 있다. 혼성화 반응의 특이성 및 범위는 다수의 인자에 의해 영향을 받기 때문에 그의 표적에 완전하게 상보적인지에는 상관없이 하나 이상의 인자를 조절하여 특정 프로브의 정확한 감수성 및 특이성을 결정하게 될 것이다. 본 명세서에서 추가로 설명하는 바 다양한 에세이 조건의 중요성 및 효과는 본 분야의 기술자에게 공지되어 있다.
표적 핵산 하이브리드에 대한 프로브의 안정성은 에세이 조건에 적합하도록 선택되어야 한다. 이는 장쇄의 AT-풍부 서열은 피하고, 하이브리드는 GC 염기쌍으로 종결시키고, 적절한 Tm을 갖는 프로브를 디자인하므로써 수행될 수 있다. 프로브의 시작과 끝은 길이 및 GC(%)에 의해 최종 에세이가 수행되는 온도보다 약 2-10℃ 높은 Tm 이 되도록 선택되어야 한다. 추가의 수소 결합에 의해 G-C 염기쌍은 A-T 염기쌍과 비교하여 더욱 우수한 열 안정성을 나타내기 때문에 프로브의 염기 조성이 중요하다. 따라서, G-C 함량이 높은 상보적인 핵산을 포함하는 혼성화가 고온에서 안정적일 것이다. 프로브를 디자인할 때, 프로브가 사용되는 조건, 예로서, 이온 세기 및 인큐베이션 온도 또한 고려되어야 한다. 반응 혼합물의 이온 세기를 증가시킴에 따라 혼성화는 증가할 수 있고, 하이브리드의 열 안정성은 이온 세기를 증가시킴에 따라 증가할 수 있다는 점이 공지되어 있다. 한편, 수소 결합을 파괴하는 화학적 시약, 예로서, 포름아미드, 우레아, DIVISO 및 알코올이 혼성화의 엄격성을 증가시킬 수 있다. 상기 시약에 의한 수소 결합의 불안정성이 Tm을 현저히 저하시킬 있다. 통상, 길이가 약 10-50 염기인 합성 올리고뉴클레오티드 프로브의 최적의 혼성화는 제공되는 이중나선(duplex)의 융점 온도보다 약 5℃ 낮은 온도에서 수행된다. 최적 온도에서 낮은 온도에서 인큐베이션할 경우 불일치하는 염기 서열이 혼성화할 수 있고, 이로써 특이성은 저하될 수 있다. 고도로 상보적인 핵산 하이브리드만이 형성되고/거나 충분한 정도의 상보성을 갖지 않은 하이브리드는 형성되지 못하는 고도의 엄격한 조건하에서만 혼성화되는 프로브를 갖는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 에세이 조건의 엄격성을 통해 하이브리드를 형성하는 두개의 핵산 스트랜드 사이에 요구되는 상보성 정도를 결정한다. 예를 들면, 표적 및 비-표적 핵산과 형성된 하이브리드 사이의 안정성의 차이를 최대화하기 위하여 엄격성 정도를 선택한다. 이러한 경우, 싱글 염기쌍 변화를 검출할 필요가 있고, 이는 극도로 고도한 염격한 조건을 필요로 한다.
표적 핵산 서열의 길이 및 프로브 서열의 길이 또한 고려되어야 한다. 몇몇 경우에 있어, 위치 및 길이를 다양화하여 특정 부위로부터 수개의 서열을 가질 수 있고, 이는 원하는 혼성화 특성을 갖는 프로브를 수득케 할 것이다. 다른 경우에 있어 하나의 서열은 오직 하나의 염기만이 상이한 또다른 것보다 현저히 우수할 수 있다.
완전하게 상보적이지 못한 핵산이 혼성화할 수 있지만, 완전하게 상보적인 가장 긴 염기 서열이 하이브리드 안정성을 결정할 것이다. 길이 및 염기 조성이 상이한 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용할 수 있고, 바람직하게 본 발명의 올리고뉴클레오티드 프로브의 길이는 약 14 내지 30개의 염기이고 임의로 충분한 길이의 표적 핵산 서열에 완전하게 상보적인 서열을 갖는다.
혼성화를 저해하는 강력한 내부 구조를 형성하는 것으로 공지된 표적 DNA 또는 RNA상의 부위는 덜 바람직하다. 일면으로, 광범위한 자가-상보성을 갖는 프로브는 피한다. 상기 설명한 바와 같이, 혼성화는 수소 결합의 더블 스트랜드를 형성하는 2개의 싱글 스트랜드의 상보적인 핵산 결합이다. 두개의 스트랜즈 중 하나가 전제적으로 또는 부분적으로 하이브리드에 관여한다면 새로운 하이브리드의 형성에는 덜 관여하게 될 것음 의미한다. 충분한 자가-상보성이 존재하는 경우 싱글 프로브의 분자내에서 분자내 및 분자간의 하이브리드는 형성될 수 있다. 철저한 프로브 디자인을 통해 상기 구조는 피할 수 있다. 관심의 대상이 되는 서열중 상당 부분이 싱글 스트랜드가 되도록 프로브를 디자인하여 혼성화 속도 및 범위를 현저히 증가시킬 수 있다. 이러한 타입의 상호작용을 조사하기 위하여 컴퓨터 프로그램을 사용할 수 있다. 그러나, 특별한 경우 이러한 타입의 상호작용을 피하지 못할 수 있다.
특이 프라이머 및 서열 특이 올리고뉴클레오티드 프로브를 바이러스 게놈 서열을 증폭시키고 검출할 수 있는 중합효소 연쇄반응에 사용할 수 있다.
본 발명의 일면은 특이 올리고뉴클레오티드 프라이머에 관한 것이다. 본 발명은 플라비비리다에 핵산 증폭용의, 플라비비리다에 돌연변이로부터의 핵산 서브시퀀스(subsequence)을 증폭시키기에 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 포함하는 조성물을 제공한다. 예를 들면, 프라이머는 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드의 G로부터 C로의 뉴클레오티드 변화를 검출할 수 있다. 또다른 일례로, 프라이머는 HCV 게놈의 8443번째 뉴클레오티드의 G로부터 C로의 뉴클레오티드 변화를 검출할 수 있다.
플라비비리다에 돌연변이의 증폭 및 검출
본 발명의 또다른 일면은 플라비비리다에 돌연변이를 증폭 및 검출하는 방법에 관한 것이다.
DNA 또는 RNA는 본 분야에 공지된 다양한 기술에 의해 인체 샘플, 예로서, 혈액 또는 조직 물질, 예로서, 간으로부터 추출할 수 있다. 혈장, 혈청 또는 혈액으로부터 채위된 샘플과 같은 정제되지 않은 샘플을 증폭시키기 앞서 세포, 체액, 조직, 바이러스 캡시드 또는 샘플의 동물 세포 막을 열고, 핵산(들)의 스트랜드(들)을 노출시키고/거나 분리함에 효과적인 다량의 시약으로 처리할 수 있다. 스트랜드를 노출시키고 분리하는 용혈(lysing)및 핵산 변성 단계는 더욱더 용이하게 증폭될 수 있도록 할 것이다.
일면으로, 본 발명은 플라비비리다에 핵산 서열(들)을 포함할 것으로 추정된 샘플을 증폭시키고; 증폭된 서열을 돌연변이의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고; 프로브를 서열에 혼성화시켜 서열을 검출하는, 돌연변이를 검출하는 방법을 제공한다. 일면으로, 중합효소연쇄반응을 사용하여 증폭을 수행한다. 또다른 일면으로, 돌연변이는 BVDV 게놈의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 위치의 G로부터 C로의 뉴클레오티드 변화이다. 또다른 일면으로 돌연변이는 HVC 게놈의 8443번째 위치의 G로부터 C로의 뉴클레오티드 변화이다.
증폭
사용되는 증폭 방법은 중합효소 연쇄반응(PCR; Saiki et al. , 1988), 리가제 연쇄반응(LCR; Landgren et al. , 1988; Wu & Wallace, 1989; Barany, 1991), 핵산 서열-기초 증폭(NASBA; Guatelli et al., 1990; Compton, 1991), 전사-기초 증폭 시스템(TAS; Kwoh et al., 1989), 스트랜드 치환 증폭(SDA; Duck, 1990 ; Walker et al. , 1992), Q9 리플리카제에 의한 증폭(Lizardi et al. , 1988; Lomeli et al. , 1989), 또는 본 분야에 공지된 분자를 증폭시키는 적절한 다른 방법일 수 있다.
중합효소 연쇄반응
증폭을 위한 PCR 방법은 통상 본 분야에 잘 공지되어 있다(참조, 예: U. S. Pat. Nos. 4,683, 202 및 4,683, 194). 요구되는 서열의 말단이 그들과 혼성화하는 올리고뉴클레오티드 프라이머가 합성될 수 있다는 충분한 설명으로 공지되어 있고, 소량의 서열이 연쇄 반응을 사용하여 개시할 수 있는 한, 포함된 반응 단계에 비하야 기하급수적인 양의 특이 핵산 서열을 제조하는 효소 연쇄반응을 포함할 수 있다. 하나의 프라이머는 (-)스트랜드에 상보적이고 다른 하나는 (+)스트랜드에 상보적이다. 프라이머를 변성된 핵산으로 어닐이한 후 효소, 예로서 DNA 폴리머라제 I(Klenow)의 거대 단편 및 뉴클레오티드로 신장시켜 표적 핵산을 포함하는 (+)및 (-)스트랜드를 새로 합성한다. 새로 합성된 서열은 또한 프라이머의 주형이기 때문에 변성, 프라이머 어닐링, 및 신장의 반복된 사이클을 통해 프라이머로 제한된 부위을 기하급수적으로 축적시킨다. 연쇄반응의 산물은 사용되는 특이 프라이머의 말단에 상응하는 종결부를 갖는 분리형의 핵산 이중나선일 것이다.
본 방법을 통해 특이 핵산 서열이을 생산할 수 있다. 원하는 서열의 상이한 스트랜드 및 서열에 따라 상대적인 위치에 혼성화하는 두개의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 제조하여 그의 주형(보체)로부터 분리되었을 때 하나의 프라이머로부터 합성된 산물이 다른 프라이머를 길이가 한정된 핵산으로 신장시키기 위한 주형으로서 사용할 수 있다는 충분한 설명으로 단지 충분한 갯우의 서열 양 말단의 염기가 공지되어야 할 필요가 있다. 서열 양 말단의 염기에 대하여 더욱 잘 공지되면 될수록 표적 핵산 서열에 대한 프라이머의 특이성은 증가되고, 따라서, 방법의 효능도 증가하게 된다. 이하 사용되는 용어 프라이머는 특히 증폭시키고자 하는 단편의 종결 서열(들)과 관련된 정보가 일부 모호한 경우 하나 이상의 프라이머를 언급할 수 있다. 예를 들면, 핵산 서열을 단백질 서열 정보로부터 추정하는 경우 유전자 코등의 축퇴에 기초하여 모든 가능한 코돈 변이를 나타내 z 서열을 포함하는 프라미머 콜렉션을 각 스트랜드에 사용할 수 있다. 이 콜렉션으로부터 하나의 프라이머를 증폭시키고자 하는 원하는 서열의 말단과 함께 실질적으로 유지시킬 수 있다.
특이 핵산 서열은 주형으로서의 서열을 포함하는 진단용 마커 핵산을 사용하여 제조한다. 샘플의 표적 핵산 서열이 두개의 스트랜드를 포함하는 경우 분리 단계 또는 프라이머 신장 산물을 동시에 합성하는 것과 같이, 주형으로서 사용하기 전에 핵산의 스트랜드를 분리하는 것이 필요하다. 스트랜드 분리는 물리, 화학적, 또는 효소적 방법을 포함하는 적절한 변성 기술을 사용하여 수행될 수 있고, 여기에서, 본 명세서에서 사용되는 바 용어 "변성"은 모든 방법을 포함한다. 핵산의 스트랜드를 분리하는 물리적 방법은 변성될 때까지 핵산 유니트를 가열하는 것을 포함한다. 통상의 열 변성은 약 80-150℃ 범위의 온도에서 약 1 내지 10분 범위의 시간을 포함할 수 있다. 스트랜드 분리는 또한 헬리카제 또는 헬리카제 활성을 갖고, 리보ATP의 존재하에 DNA를 변성시키는 것으로 고지되어 있는 효소 RecA로서 공지된 효소 종류로부터의 효소에 의해 유도될 수 있다. 헬리카제로 핵산 스트랜드를 분리하기에 적절한 반응 조건은 [KuhnHoffmann-Berling, CSH-Quantitative Biology, 43: 63(1978)]은 기술되어 있고 RecA 사용 기술은 [C. Radding, Ann. Rev. Genetics, 16: 405-37(1982)]에서 리뷰된다.
증폭시키고자 하는 서열을 포함하는 원 핵산이 싱글 스트랜드인 경우, 하나 또는 두개의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 그에 가하여 그의 보체를 합성한다. 적절한 싱글 프라이머를 가한 경우, 프라이머 신장 산물은 프라이머, 중합제, 및 하기 기술하는 4개의 뉴클레오시드 트리포스페이트의 존재하에 합성된다. 산물은 싱글-스트랜드 핵산에 부분적으로 상보적이고, 핵산 스트랜드와 혼성화하여 길이가 다른 스트랜드의 이중나선을 형성한 상기 기술한 바와 같은 싱글 스트랜드로 분리되어 두개의 분리된 상보적 스트랜드를 생산할 수 있다. 다르게는 두개의 적절한 프라이머를 싱글-스트랜드 핵산에 가할 수 있고, 반응을 수행할 수 있다.
원 핵산이 증폭시키고자 하는 서열인 경우 생산되는 프라이머 신장 산물(들)은 원 핵산의 스트랜드에 완전하게 또는 실질적으로 완전하게 상보적이고 그와 혼성화하여 싱글-스트랜드 분자로 분리되는 길이가 동일한 스트랜드의 이중 나선을 형성하게 될 것이다.
핵산이 원래 더블 또는 싱글 스트랜드인지에 상관없이 핵산 또는 핵산들의 상보적인 스트랜드가 분리될 때 스트랜드는 추가의 핵산 스트랜드 합성을 위한 주형으로서 사용하기 쉽다. 프라이머와 주형을 혼성화시키는 조건하에서 상기 합성이 실행된다. 일반적으로 예로서, pH 범위 7-9를 얻기 위하여 완충 처리된 수용액에서 수행된다. 분리된 주형 스트랜드를 포함하는 완충액에 과다한 몰량(게놈 핵산에 대하여; 일반적을 약 108 : 1 프라이머: 주형)의 두개의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 가할 수 있다. 그러나, 진단 적용을 위해 본 방법을 사용하는 경우 상보적인 스트랜드의 양을 알 수 없고, 따라서 상보적인 스트랜드 양에 상대적인 프라이머 양도 정확하게 결정될 수 없다. 그러나, 실제로 첨가되는 프라이머의 양은 통상 증폭시키고자 하는 서열이 복잡한 장쇄 핵산 스트랜드 혼합물에 포함되어 있는 경우 상보적인 스트랜드(주형)의 양에 비하여 과다하게 많은 몰량이 것이다. 본 방법의 효능을 개선시키기 위하여 과다하게 많은 몰량이 바람직하다.
데옥시리보뉴클레오시드 트리포스페이트 dATP, dCTP, dGTP 및 TTP를 또한 적절한 양으로 프라이머와 별깨로, 또는 함께 합성 혼합물에 가하고, 생성된 용액을 약 1 내지 10분, 예로서 약 1 내지 4분동안 약 90-100℃으로 가열한다. 이 가열 기간 후 용액을 실온으로 냉각시키고, 이는 프라이머 혼성화에 바람직하다. 냉각된 혼합물에 프라이머 신장 반응에 작용하는 적절한 시약(이하, "중합화제"로 명명함)을 가하고, 본 분야에 공지된 조건하에서 반응시킨다. 열 안정성인 경우 다른 시약과 함께 중합화제를 가할 수 있다. 이 합성 반응은 실온 내지 중합화제가 더이상 작용하지 못하는 온도 이상의 온도에서 수행될 수 있다. 따라서, 예를 들면, DNA 폴리머라제를 시약으로서 사용하는 경우 온도는 통상 약 40℃ 이하이다. 가장 통상적으로 반응은 실온에서 수행된다.
중합화제는 프라이머 신장 산물의 합성을 수행시킬 수 있는 작용을 갖는 어느 화합물 또는 시스템일 수 있고, 이는 효소를 포함한다. 이러한 목적을 위한 적절한 효소는 예를 들면 E. coli DNA 폴리머라제 I, E. coli DNA 폴리머라제 I의 Klenow 단편, T4 DNA 폴리머라제, 다른 이용가능한 DNA 폴리머라제, 폴리머라제 뮤테인, 역전사효소(들), 및 열-안정성 효소(즉, 변성을 일으키기 위하여 충분하게 승온된 온도에 적용된 후 프라이머 신장을 수행하는 효소)를 포함하고, 이는 각 핵산 스트랜드에 상보적인 프라이머 신장 산물을 형성하는 적절한 방식으로 뉴클레오시드 결합(병용)을 촉진시킬 수 있다. 일반적으로, 합성은 각 프라이머의 3'-말단에서 개시되고 상이한 길이의 분자를 생산하면서 합성을 종결될 때까지 주형 스트랜드를 따라 5' 방향으로 진행될 것이다. 다르게는, 5''-말단에서 합성을 개시하고 상기 기술한 바와 같은 동일한 방식으로 3'-말단쪽으로 진행하는 중합화제를 사용할 수 있다.
표적 서열이 존재하는 경우 상기 기술한 혼성화 조건하에서 새로 합성된 스트랜드 및 그의 상보적인 핵산 스트랜드는 더블-스트랜드 분자를 형성하고, 이 하이브리드는 본 과정의 차후 단계에 사용된다. 표적 서열이 존재하는 경우 다음 단계에서 혼성화 조건하에 처리된 샘플을 상기 기술된 바와 같은 어느 방법을 사용하여 변성 조건에 가하여 싱글 스트랜드 분자를 제공한다.
새로운 핵산은 싱글-스트랜드 분자상에 합성된다. 상기 지정된 조건하에 진행되는 반응에 필요한 경우 추가의 중합화제, 뉴클레오시드 및 프라이머를 가할 수 있다. 다시, 합성은 각 올리고뉴클레오티드 프라이머의 한쪽 말단에서 개시되고 주형의 싱글 스트랜드를 따라 진행되므로써 추가의 핵산을 생산하게 될 것이다. 이 단계 후, 신장 산물중 1/2은 두개의 프라이머에 결합된 특이 핵산 서열로 구성될 것이다.
변성 및 신장 산물 합성 단계는 감출에 필요한 범위까지 표적 핵산 서열을 증폭시키기에 필요한 만큼 반복될 수 있다. 추가로 이하 기술하는 바, 생상되는 특이 핵산 서열의 양은 기하급수적인 양식으로 축적될 것이다.
맨 첫번째 핵산 또는 핵산 혼합물로부터 하나 이상의 특이 핵산 서열을 생산하는 것이 바람직한 경우 적절한 갯수의 상이한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한다. 예를 들면, 두개의 상이한 특이 핵산 서열을 생산하고자 할 때, 4개의 프라이머가 사용된다. 프라이머중 2개는 특이 핵산 서열중 하나에 특이적이고 다른 2개의 프라이머는 두번째 특이 핵산 서열에 특이적이다. 이러한 방식으로, 각각의 2개의 상이한 특이 서열을 본 방법에 따라 기하급수적으로 생산할 수 있다.
본 발명은 각 단계 후 새로운 시약을 가하는 단계적 방식으로 시행되거나, 모든 시약을 개시 단계에서 가하는 동시 또는 1 단계 방식으로 수행되거나, 지정된 수의 단계 후 새로운 시약을 가하는 부분 단계식 및 부분 동시 방식으로 시행된다. 열-민감 효소의 경우와 같이 중합화제를 불활성화시킬 수 있는 열과 같은 변성 방법을 사용하는 경우, 매회의 스트랜드 분리 단계 후 시약을 보충해주어야 한다. 스트랜드 분리 단계에 효소 수단이 사용될 때 동시 방법을 사용할 수 있다. 동시 방법에서, 반응 혼합물은 원하는 서열을 포함하는 핵산 스트랜드(들)외에 스트랜드-분리 효소(예: 헬리카제), 스트랜드-분리 효소를 위한 적절한 에너지원(예: rATP), 4개의 뉴클레오시드 트리포스페이트, 과다한 몰랴의 올리고뉴클레오티드 프라이머, 및 중합화제(예: E. coli DNA 폴리머라제I의 Klenow 단편)을 포함할 수 있다.
동시 방법에서 변성을 위해 열을 사용하는 경우 열-안정성 시약, 예로서, 승온, 예를 들면, 핵산이 싱글 및 더블 스트랜드로 균형있게 구성되는 온도인 약 50-105℃에서 작동하는 열안정성 폴리머라제를 사용할 수 있다. 핵산의 길이가 짧을수록, 약 40-50℃의 낮은 온도를 사용할 수 있다. 더욱 높은 온도 범위는 효소가 분해되는 온도 또는 불충분한 수준의 프라이머 혼성화가 발생하는 온도 이상의 온도에 의존할 것이다. 그러한 열-안정성 효소는 예를 들면 [A. S. Kaledin et al. , 생khimiya, 45,644-651(1980)]에 기술되어 있다. 이렇게 일정한 온도 반응이 진행되도록 하기 위하여 프라이머는 서로 6-8개의 염기쌍애 3' 말단을 갖는다. 모든 시약이 개시점에 존재함에도 불구하고 본 공정의 각 단계는 순차적으로 진행될 것이다. 추가의 물질이 필요에 따라 첨가될 수 있다. 원하는 양의 특이 핵산 서열을 생산할 수 있을 만큼 적절한 기간이 경과한 후 공지된 방법에 의해 효소를 불활성화시키거나 반응의 성분을 분리하여 반응을 중지시킬 수 있다.
증폭은 또한 온도-사이클릭 반응을 사용하여 수행될 수 있고, 상기 온도는 신장, 어닐링 및 열-안정성 효소를 사용하는 변성을 위해 증분적(incrementally)으로 증가하게 된다.
본 발명의 공정은 연속적으로 수행될 수 있다. 자동환 공정의 일면으로, 변성 부위, 시약 첨가 부위, 및 반응 부위를 통해 반응으 사이클링할 수 있다. 또다른 일면으로, 프라이머 신장 산물 합성에 사용되는 효소는 칼럼에 고정화될 수 있다. 다른 반응 성분은 연속하여 칼럼 및 열 코일을 통해 펌프에 의해 연속적으로 순환시킴으로써 효소를 불활성화시키지 않고 생산되는 핵산을 반복적으로 변성시킬 수 있다.
PCR 기술을 사용하는 플라비비리다에 유전자형이 본 분야에 통상적으로 공지되어 있다. 추가로 플라비비리다에를 포함할 것으로 추정되는 샘플상에서 PCR을 수행한 후 플라비비리다에 게놈을 서열화할 수 있다.
프로브 및 표적 서열의 혼성화 검출
샘플중 프로브 및 표적 핵산 서열 사이에 형성된 하이브리드를 검출하기 위한 적절한 에세이 포맷은 분 분야에 공지되어 있다(Sambrook et al. , 1985). 핵산의 증폭 여부와 상관없이 혼성화 검출을 수행할 수 있다.
하나의 검출 방법은 증폭되지 않거나 증폭된 핵산 서열와 혼성화할 수 있고 프로브가 혼성화되었는지를 결정할 수 있는 표지된 프로브를 사용하는 것이다. 그러한 프로브는 필수적으로 돌연변이화된 것으로 추정되는 뉴클레오티드, 예로서, BVDV의 RNA 폴리머라제 부위중 1214번째, 또는 HCV 게놈의 8443번째 뉴클레오티드를 포함하여야 한다.
분광, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 또는 화학적 수단에 의해 검출가능한 라벨을 혼입시켜 올리고뉴클레오티드를 표지화할 수 있다. 유용한 라벨은 32P, 형광 염료, 전자-과밀도(electron-dense)시약, 효소(통상 ELISA로 사용됨), 바이오틴, 또는 합텐 및 항혈청 또는 모노클로날 항체로 이용가능한 단백질을 포함한다.
핵산은 방사능 프로브를 사용하거나 사용하지 않고 노던 또는 서던 블랏에 의한 분석을 통해 검출될 수 있다. 일면으로, 예를 들면, 플라비비리다에를 포함할 것으로 추정된 말초 혈액으로부터의 소량의 DNA 샘플을 특이 핵산 바이러스 마커를 검출하기 위한 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 서던 블랏 기술에 의해 분석한다. 예를 들면, 플라비비리다에를 포함할 것으로 추정된 말초 혈액으로부터의 소량의 DNA 샘플을 먼저 증폭시킨 후 특이 핵산 바이러스 마커를 검출하기 위한 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 서던 블랏 기술에 의해 분석한다.
또다른 방법은 올리고머 제한 기술(예: U. S. Pat. No. 4,683, 194)을 포함한다. 이 방법에서 증폭된 핵산을 변성시키고 용액중에서 표적 서열에 특이적으로 혼성화되고(즉, 프라이머에 의해 포함된 특정의 보존 부위를 포함), 적어도 하나의 관심의 대상이 되는 제한 부위를 포함하는 표지된 올리오뉴클레오티드에 혼성화시킨다. 표적 및 프로브 사이에 형성된 이중나전은 제한 부위를 재구성하고, 제한 효소, 예로서, Bg1I, PvuII, 또는 HifI으로 절단될 때 겔 전기영동에 의해 전장의 프로브로부터 분할될 수 있는 표지된 프로브 단편을 유리시킨다. 생성된 겔은 자가방사기록된다. 이 방법에 의해 증폭된 산물의 분석은 몇시간내 신속하게 수행될 수 있다.
증폭된 산물을 분석하기 위하여 사용할 수 있는 또다른 방법은 도트-블랏 방법이다. 도트-블랏 방법에서, 증폭된 표적 DNA를 고체 지지체, 예로서 나일론 막상에 고정화시킨다. 막-표적 컴플렉스를 적절한 혼성화 조건하에 표지된 프로브와 함께 인큐베이션시키고 혼성화하지 못한 프로브는 적절하게 엄격한 조건하에서 세척하여 제거하고 결합된 프로브의 존재에 대하여 막을 모니터한다.
다른 포맷은 증폭된 표적 DNA를 표지하고 프로브를 고체 지지체, 예로서 나일론 막상에 고정화시키는 "역전" 도트-블랏 포맷이다(참조 Saiki et al. , 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 6230, and PCT 특허 공개 89/11548). 하나 이상의 표지된 프라이머를 혼입시켜 증폭시 표적 DNA를 통상적으로 표지한다. 하나 또는 두개의 프라이머 모두를 표지할 수 있다. 막-프로브를 적절한 혼성화 조건하에 표지된 프로브와 함께 인큐베이션시키고 혼성화하지 못한 프로브는 적절하게 엄격한 조건하에서 세척하여 제거한 후 결합된 프로브의 존재에 대하여 필터를 모니터한다.
다르게는, 복수개의 프로브 혼성화 사이트 또는 웰을 갖는 고체 지지체를 사용하여 역전 도트-블랏 에세이를 수행할 수 있다. 예로서, 대량의 본 방법의 임상 적용에 마이크로웰 플레이트가 특히 유용하다. 프로브는 수동 결합 또는 마이크로웰 플레이트에 부착될 수 있는 소혈청알부민(BSA)와 같은 단백질 중간체를 통해 마이크로웰 플레이트에 고정화될 수 있다. 마이크로웰 플레이트에서 수행되는 역전 도트-블랏 에세이는 [U. S. Pat. No. 5,232, 829, and Loeffelholz et al, 1992, J. Clin. Microbiol. 30(11): 2847-2851]에 기술되어 있다. 본 발명의 또다른 일면으로으로 마이크로웰 플레이트를 사용하여 역전 도트-블랏 에세이를 수행하고, [Levenson and Chang, 1989, in PCR Protocols: A Guide to Method 및pplications,(Innis et al. , eds., Academic Press. San Diego)pages 99-112]에 기술된 바와 같이 프라이머를 바이오틴으로 표지한다. 프로브를 BSA와 컨쥬게이트시키고(참조 Tung et al. , 1991, Bio컨쥬게이트 Chem. 2: 464-465, 참고문헌으로서 인용됨)마이크로웰 플레이트상에 고정시킨다. 표지된 프라이머를 사용하여 증폭시키고 고정된 프로브와 혼성화시킨 후 먼저 바이오틴을 아비딘-허스래디시페록시다제(A-HRP)또는 스트렙타비딘-허스래디시페록시다제(SAHRP)와 결합시킨 후 HRP가 색소원의 색 변화를 촉진시키는 반응을 수행하여 증폭된 핵산을 검출한다.
검출을 위한 혼성화 이중나선을 고정화시키는 다른 방법에서 BSA-컨쥬게이트된 프로브를 자기 미세입자에 결합시킨다. 결합된 프로브는 용액내에서 표지된 증폭 산물과 혼성화된다. 혼성화 후, 용액으로부터 프로브-표적 이중나선을 자기적으로 제거하고 자기적으로 고정화된 혼성화 이중나선을 검출한다.
또다른 검출 방법은 PCR 증폭 공정시 표지된 검출 프로브가 첨가되는 5'-뉴클레아제 에세이로 언급된다. 프로브를 변형시켜 DNA 합성을 위한 프라이머로서 작용하지 못하도록 한다. 각 합성 단계, 즉 프라이머 신장동안 표적 DNA에 혼성화되는 어느 프로브는 Taq DNA 폴리머라제와 같은 DNA 폴리머라제의 5'로부터 3'으로의 엑소뉴클레아제 활성에 의해 분해된다. 프로브로부터의 분해 산물을 검출한다. 따라서 프르브의 분해 산물의 존재가 프로브 및 표적 DNA 사이의 혼성화 발생 및 증폭 반응 발생을 나타낸다. 참조, 예: U. S. Pat. No. 5,210, 015.
상기 기술된 에세이 포맷은 전형적으로 하이브리드 이중나선의 검출을 촉진시키기 위하여 표지된 올리고뉴클레오티드를 이용한다. 분광, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 또는 화학적 수단에 의해 검출가능한 라벨을 혼입시켜 올리고뉴클레오티드를 표지화할 수 있다. 유용한 라벨은 32P, 형광 염료, 전자-과밀도 시약, 효소(통상 ELISA로 사용됨), 바이오틴, 또는 합텐 및 항혈청 또는 모노클로날 항체로 이용가능한 단백질을 포함한다.
플라비비리다에 핵산의 증폭을 검출하는 다른 방법은 반응 혼합물중 더블-스트랜드 DNA의 총 양의 증가 여부를 모니터하는 것이다(Higuchi et al. , 1992, 생/Technology 10: 413-417 ; Higuchi et al. , 1993, Bio/Technology 11:1026-1030 ; and European 특허 공개번호 487,218 and 512,334).
에티듐 브롬마이드(EtBr)및 다른 DNA 결합 라벨이 트랜더블-스드 DNA에 결합하였을 때 나타내는 형광의 증가를 통해 더블-스트랜드 표적 DNA를 검출한다. 표적 서열로부터 합성된 더블-스트랜드 DNA의 증가로 검출가능하게 형광은 증가한다.
플라비비리다에 돌연변이 검출에 유용한 또다른 방법은 역 혼성화 에세이이다. 다수의 프로브가 관여하는 경우 이는 특히 유용하다. 일면으로 선택된 세트의 프로브를 알고 있는 별개의 위치(도트, 선 또는 다른 선)의 고체 지지체에 고정화시킨다. 또다른 일면으로 선택된 세트의 프로브를 한줄 방식으로 막 스트립에 고정화시킬 수 있다. 언급한 프로브는 고체 지지체 상의 기술된 위치에 개별적으로 또는 혼합물로서 고정화될 수 있다. 특정 일면으로, 라인(line)프로브 에세이를 사용하여 본 발명의 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에 유전자형을 선별할 수 있다. 라인 프로브 에세이는 막에 평행선으로 고정화되는 다숭의 프로브를 포함하고, 이후 증폭된 핵산 단편의 역 혼성화를 수행한다. 이어서 비방사능 발색 시스템을 사용하여 바이오틴-스트렙타비딘 커플링을 통해 하이브리드를 검출할 수 있다. 참조, 예: WO 97/40193.
플라비비리다에 유전자 검사 기술은 또한 플라비비리다에 돌연변의 존재를 분석하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 계통발생학적 분석, 분별 혼성화, PCR 또는 단편 길이 다형태에 기초한 서열을 사용할 수 있다.
플라비비리다에 단백질/펩티드 마커의 검출
또다른 일면으로, 본 발명은 플라비비리다에 단백질, 펩티드, 또는 펩티드 단편을 포함하는 샘플을 바이러스 마커를 위해 분석하는, 플라비비리다에 감염에 대한 장기간의 2'-분지형 뉴클레오시드 요법 실패에 대해 진단에 도움이 되는 바이러스 마커를 검출하는 방법을 제공한다. 치료의 실패와 관련된 단백질, 펩티드, 또는 펩티드 단편은 웨스턴 블랏, 2차원 겔 전기영동, 효소 면역측정법(ELISA), 증강화학발광(enhance chemiluminescence)(ECL), 면역조직화학, ELI-Spot 에세이, 펩티드 서열화, 또는 항체 기초 단백질 어레이 기술을 포함하는 본 분야의 공지된 통상 적용가능한 단백질 검출 기술에 의해 검출할 수 있다. 예를 들면, 2'-분지형 뉴클레오시드 치료에 대한 진단에 도움이 되는 플라비비리다에 바이러스 마커의 단백질 발현은 통상의 면역조직학적 방법으로 분석할 수 있다. 특이 바이러스 마커에 대한 1차 항체(폴리클로날 또는 모노클로날)에 의해 특이적인 인식이 제공되지만, 2차 검출 시스템은 형광, 효소, 또는 다른 컨쥬게이트된 2차 항체을 사용할 수 있다. 결과, 병리학적 조사를 위한 플라비비리다에에 의해 감염된 조직 부위의 면역조직학적 염색이 제공된다.
2'-분지형 뉴클레오시드 요법에 대한 플라비비리다에 보균자의 장기간의 반응에 대한 진단에 도움이 되는 단백질, 펩티드, 또는 펩티드 단편을 검출하는 또다른 방법은 웨스턴 블랏이다. 간단하게, 플라비비리다에 단백질, 펩티드, 또는 펩티드 단편을 포함하는 샘플을 전기영동 겔 방법에 의해 분리한다. 이어서 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스와 같은 배지로 이동시킨다. 2'-분지형 뉴클레오시드 실패와 관련된 특이 플라비비리다에 아미노산 서열에 반응성인 스트렙타비딘-알칼린 포스파타제와 같은 검출가능한 라벨을 갖는 항체를 플라비비리다에 아미노산서열을 포함하는 니트로셀룰로오스 배지상에 접촉시킨다. 반응 항체는 상응하는 플라비비리다에 아미노산서열과 결합할 것이고, 시약 예로서, 니토블루 테트라졸륨 및 5-브로모-4-클로로-3-인딜 포스페이트(BCIP)을 사용하여 검출할 수 있다. 참조, 예:, Jalkanen, M. , et al. , J. Cell. Biol. 101: 976-985(1985); Jalkanen, M. , et al. , J. Cell. Biol. 105: 3087-3096(1987).
다르게는, 플라비비리다에 보균자의 혈청에 존재하는 반응 항체를 사용하여 2'-분지형 뉴클레오시드 치료에 대한 진단에 도움이 되는 플라비비리다에 바이러스 마커의 존재를 검출할 수 있다. 효소 면역법(EIA)을 포함하는 본 분야의 기술자에게 공지되어 있는 항체 에세이 기술을 사용할 수 있다. 예를 들면, 일면으로 플라비비리다에 특이 항체를 포함하는 플라비비리다에 보균자로부터의 샘플을 2'-분지형 뉴클레오시드 요법의 성공 및/또는 실패와 관련된 특이 플라비비리다에 펩티드를 포함하는 고체 지지체 어레이와 접촉시킨다. 이어서
반응 항체를 스트렙타비딘-알칼리성 포스파타제 및 니토블루 테트라졸륨 및 5-브로모-4-클로로-3-인딜 포스페이트을 포함하는 시약으로 표지된 래빗 항-인간 IgG 항체를 사용하여 검출한다.
2'-분지형 뉴클레오시드 요법에 대한 플라비비리다에 보균자의 장기간의 반응에 대한 진단에 도움이 되는 단백질, 펩티드, 또는 펩티드 단편을 검출하는 또다른 방법은 본 분야의 기술자에게 공지되어 있는 기술을 사용하여 단백질, 펩티드, 또는 펩티드 단편을 서열화하는 것이다(참조, 예:, Matsudaira, P. , J Biol Chem 262: 10035-10038,(1987); Salinovich,O. and Montelano, R. , Anal. Biochem. 156: 341,(1986); Tarr, G. E.: Manual Edman Sequencing System. In: Shively, J. E. ,(ed. )Methods of Protein Microcharacterization. The Humana Press Inc. , Clifton, NJ, 1986, pp. 155-194; and Fernandez, J. , Andrews, L. and Mische, S. , Anal. Biochem. 218: 112-117,(1994)). 예를 들면, Edman 기술을 사용하여 펩티드의 아미노산 서열을 결정할 수 있다. 간단하게 Edman 화학은 한번에 서여렝서 단백질/펩티드의 N-말단으로부터 아미노산 잔기를 제거한다. 각 아미노산 잔기의 제거를 위해 필요한 Edman 화학의 각 사이클은 하기 3개의 단계로 구성된다: 중간정도의 알칼리 조건하에서 페닐 이소티오시아네이트(PITC)과 커플링하여 페닐티오카바밀(PTC)-펩티드를 형성하고; 절단하여 첫번째 잔기를 그의 아닐리노티아졸리논(ATZ)-아미노산 유도체로서 유리시키고; ATZ 유도체를 더욱 안정적인 페닐티오하이단토인(PTH)-아미노산 유도체로 전환시킨다. 각 사이클의 Edman 분해에서 제거된 PTH-아미노산 잔기는 작은 또는 미세 천구 RP-HPLC에 의해 확인된다. 공정 및 가능한 문제점에 대한 전체적인 기술은 [Tarr, G. E.: Manual Edman Sequencing System. In: Shively, J. E. ,(ed. )Methods of protein Microcharacterization. The Humana Press Inc. , Clifton, NJ, 1986, pp. 155-194]에서 제공된다. 다르게는, 샘플이 N-말단 서열을 포함하지 않는 경우 N-말단 잔기는 차단되고, 제조 공정시 Edman 화학 시약으로 이용할 수 없는 입체적인 이유로 분해되고, 샘플을 조절형 특이 단백질 분해시켜 펩티드를 분할하고 분석한다. 이 분할 방법은 [Fernandez, J. , Andrews, L. and Mische, S.: An improved procedure for enzymatic digestion of polyvinylidene difluoride-bound Proteins for internal Sequence분석. Anal. Biochem. 218: 112-117,1994]에 기술되어 있다.
어레이
본 발명의 또다른 일면은 플라비비리다에 핵산 바이러스 마커를 검출하기 위한 DNA, RNA 또는 펩티드 어레이의 용도를 제공한다. 그러한 어레이는 DNA 마크로어레이, DNA 마이크로어레이, 및 DNA 마이크로칩을 포함한다. DNA 어레이는 예를 들면 U. S. Pat. No. 5,837, 832, U. S. Pat. No. 5,807, 522, U. S. Pat. No. 6,007, 987, U. S. Pat. No. 6,110, 426, WO 99/05324,99/05591, WO 00/58516, WO 95/11995, WO95/35505A1, WO 99/42813, JP10503841T2, GR3030430T3,ES2134481T3, EP804731B1,DE69509925C0, CA2192095AA, AU2862995A1, AU709276B2, AT180570, EP 1066506, 및 AU 2780499에 기술되어 있다. 제조된 샘플 뉴클레오티드와 어레이를 접촉시킬 때 혼성화 결과를 분석하는 전산화 방법에 상기 어레이를 포함시킬 수 있다[예: PCT Publication WO 99/05574, and U. S. Pat. Nos. 5,754, 524; 6,228, 575; 5,593, 839; 및 5,856, 101]. 질환 마커를 선별하는 방법은 본 분야에 공지되어 있고, 예로서 U. S. Pat. Nos. 6,228, 586; 6,160, 104; 6,083, 698; 6,268, 398;6,228, 578; 및 6,265, 174에 기술되어 있다. DNA 어레이 방법에 대한 추가의 기술은 예를 들면 하기에서 볼 수 있다: Shoemaker D. D. etal., Nature 409(6822): 922-927(2001); Kane M. D. , etal., nucleic aicd Res 28(22): 4552-7(2000); Taton TA, etal., Science. 289(5485): 1757-60(2000);Jorg Reichert etal., Anal. Chem. , 72(24): 6025-6029(2000); Reinke V, Mol Cell 6(3): 605-16(2000); Marx J. Science 289: 1670-1672(2000); Lockhart D. J. et al., Nature 405(6788): 827-836(2000); Cortese J. D. , The Scientist 14 [17]: 25(2000); Cortese J. D. , The Scientist 14 [11]: 26(2000); Fritz J. etal., Science. 288(5464): 316-8(2000); Mark Schena(Ed. ), Microarray Biochip Technology, Eaton Publishing Company, Distributed by TeleChem/arrayit. com; Scherf U., et al. , Nat Genet. 24(3): 236-44(2000); Ross D. T. et al. , Nat Genet. 24(3): 227-35(2000); Walt D. R., Science 287: 451-452(2000); Afshari C. A. etal., Cancer Res 59(19): 4759-60(1999); Gwynne P. and Page G., Science, 1999 August 6.(special advertising supplement; has a list of microarray-related companies); Baldwin D. et al. , CurrOpin Plant Biol 2(2): 96-103(1999); Pollack J. R. et al. , Nat Genet 23(1): 41-6(1999); Khan J. et al. , Electrophoresis 20(2): 223-9(1999); Gerhold D. etal., Trends Biochem Sci 24(5): 168-73(1999); Ekins R. and Chu F. W., Trends in biotechnology 17: 217-218(1999); Nuwaysir, E. F. etal., Molecular Carcinogenesis 24: 153-159(1999); Sinclair, B. The Scientist, 13(11): 18-20(1999); The Chipping Forecast, Nature Genetics(January 1999 Supplement); Schena, M. and Davis, R. W. Genes, genome and Chips. In DNA microarray: A Practical Approach(ed. M. Schena), Oxford University Press, Oxford, UK, 1999; Marton M. J. et al. , Nat Med. 4(11): 1293-301(1998); Wang D. G. etal., Science 280(5366): 1077-82(1998); Schena, M. and R. W. Davis. Parallel 분석 with Biological Chips. in PCR Methods Manual(eds. M. Innis, D. Gelfand, J. Sninsky), Academic Press, San Diego, 1998; Lemieux, B. etal., Molecular Breeding 4: 277-289(1998); Schena, M. etal., Trends in biotechnology 16: 301-306(1998); Service, R. F. , Science 282(5388): 396-399(1998); Service, R. F., Science 282(5388): 399-401(1998); Kricka, L. , Nature biotechnology 16: 513(1998); Housman, D. , Nature biotechnology 16(6): 492-493(1998); Ramsay, G. , Nature biotechnology 16(1): 40-44(1998); Marshall, A. etal., Nature biotechnology 16(1): 27-31(1998); Kononen J. et al. , Nat. Med. 4(7): 844-847(19998); Blanchard, A. P.(1998)Synthetic DNA array; in Genetic Engineering, Vol. 20, pp. 111-123, edited by J. K. Setlow, Plenum Press, New York; Proudnikov D. etal., Anal Biochem 259(1): 34-41(1998); Chen J. J. et al. , Genomics 51(3): 313-24(1998); Wallace R. W. , Molecular Medicine Today 3: 384-389(1998); Covacci, A. etal., Drug Development Research 41: 180-192(1997); Forozan, F. et al. , Trends in Genetics 13: 405-409(1997); Blanchard, A. P. & L. Hood, Nature biotechnology 14: 1649(1996); Blanchard, A. P. et al., biosensors & bioelectronics 11: 687-690(1996); DeRisi J. et al. , Nat Genet 14(4): 457-60(1996); Shalon D. et al. , Genome Res 6(7): 639-45(1996); Schena M. et al. , Proc Natl Acad Sci U S A 93(20): 10614-9(1996); and Schena M. etal., Science 270(5235): 467-70(1995).
어레이상의 프로브의 길이는 다양할 수 있고, 제한하는 것은 아니지만, 약 10-30개의 뉴클레오티드만큼 짧거나 전자의 플라비비리다에 유전자 또는 플라비비리다에 클론만큼 길 수 있고, 이는 수 킬로베이스 이하일 수 있다. 추가로, 표 2 및 3에 기술한 다양한 길이의 서열(Seq 서열 번호 1-62)을 프로브로서 사용할 수 있다. 어레이상의 모든 프로브가 거의 동일한 혼성화 엄격성(hybrization stringency)로 그의 상응한 유전자에 혼성화할 수 있도록 어레이를 디자인할 수 있다. 어레이에 대한 프로브는 사용되는 혼성화 엄격성에서 유일하여야 한다. 유일한 프로브만이 표적당 1 타입의 핵산과 혼성화할 수 있다. 사용되는 혼성화 엄격성에서 두개의 상이한 유전자, 즉 관련 유전자로부터 유래된 핵산, 또는 비-상동성 서열과 혼성화한다면 프로브는 유일한 것이 아니다. 프로브의 서열과 유전자의 상동성 및 사용되는 혼성화 엄격성이 선택된 샘플을 시험할 때 프로브가 유일한지를 결정한다. 프로브는 또한 동일한 유전자로부터 유래된 상이한 핵산, 즉, 스플라이스 변이체와 혼성화할 수 없다. 관심의 대상이 되는 스플라이스 변이체가 공지되어 있기 때문에 수개의 상이한 프로브 서열은 어레이에 대하여 관심의 대상이 되는 표전 유전자 서열로부터 선택될 수 있고, 이로써 각 프로브는 스플라이스 변이체중 하나로부터 유래된 핵산과만 혼성화할 수 있다. 일면으로, Seq 서열 번호 1-62을 포함하는 어레이를 특이적 혼성화를 가능케하는 혼성화 조건에서 사용한다. 특이적 혼성화 조건에서, 프로브는 오직 하나의 확인된 서열로부터의 핵산과 혼성화한다. 특이적 혼성화 조건에서, 프로브는 오직 하나의 확인된 서열로부터의 핵산과 혼성화한다. 또다른 일면으로, 관심의 대상이 되는 어느 플라비비리다에 서열을 포함하는 어레이를 특이적 혼성화를 가능케하는 혼성화 조건에서 사용한다. 특이적 혼성화 조건에서, 프로브는 오직 하나의 확인된 서열로부터의 핵산과 혼성화한다.
일면으로, 마이크로어레이의 사용은 우선 예로서, 본 분야에 공지된 방법을 사용하는 mRNA 또는 전체 RNA의 역전사 후 이어서 중합효소 연쇄반응에 의한 관심의 대상이 되는 유전자의 증폭을 요한다. 핵산이 카피될 때 이는 본 분야에 공지된 검출 및 측량법에서 사용될 수 있는 라벨로 태그된다. 핵산은 방사능 또는 비방사능 라벨로 표지될 수 있지만, 바람직하게는 형광 라벨을 포함한다. 표지된 핵산을 관심의 대상의 되는 서열 프로브를 포함하는 마이크로어레이에 도입하고 일정 시간동안 반응시킨다. 이후, 기질을 세척하여 고정된 프로브 분자에 결합한 표적상의 핵산은 남겨둔 채 무관한 물질을 제거하여 예로서, 자가방사기록법, 액체섬광계수, 및/또는 형광법과 같은 본 분야의 공지 방법에 의해 검출 및 측량할 수 있도록 한다. 혼성화 및 검출 기술이 개선됨에 따라 본 분야의 기술자자는 용이하게 사용할 수 있다. 본 분야에 잘 공지되어 있기 때문에, 프로브 분자 및 표적 분자가 두 분자 사이에 강한 비공유 결합을 형성하여 혼성화한다면, 어닐링 및 세척 단게를 고도로 엄격한 조건하에서 수행할 때도 프로브 및 표적 핵산은 본질적으로 완전하게 상보적인 것으로 가정하는 것도 당연할 수 있다. 검출가능한 라벨은 혼성화가 일어나는지를 결정하는 수단을 제공한다. 예로서, 자가방사기록법, 액체섬광계수, 또는 형광법과 같은 본 분야에 공지된 검출 및 측량 방법으로 어레이의 이미지를 수득하여 어레이상의 특이 위치에 세기를 비교하므로써 플라비비리다에 유전자 서열이 존재하는지, 어는 정도로 존재하는지를 결정할 수 있다. 높은 측량 시그날은 특정 서열이 표본 샘플에 존재한다는 것을 의미하고, 측량 시그날이 나타나지 않는 것은 특정 서열이 존재하지 않음을 의미한다. 2'-분지형 뉴클레오시드 처리 전 및 2'-분지형 뉴클레오시드 처리동안과 같인 상이한 조건하에서 다양한 유전자 서열의 존재를 직접 비교할 수 있다. 유사하게, 예를 들면, 2'-분지형 뉴클레오시드과 같은 특정 자극에 대한 반응으로 어떤 서열이 존재하는지를 결정할 수 있다.
일면으로, DNA 어레이 기술을 사용하여 시간에 따라 환자의 플라비비리다에 서열 프로파일을 추적할 수 있다. 다른 일면으로, 모달리티(modality)로서 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 다른 항-플라비비리다에 모달리티를 받은 플라비비리다에를 포함하는 환자를 처리에 대한 반응으로 상기 언급한 플라비비리다에 게놈 서열에 대한 반응에 대하여 시간에 따라 모니터하였다.
Seq 서열 번호 1-62, 또는 관심의 대상이 되는 다른 확인된플라비비리다에 서열을 포함하는 어레이는 예로서 사진 석판술에 의한 고체상 합성 또는 스폿팅 기술과 같은 본 분야에 공지된 어레이 합성 방법에 의해 제조할 수 있다. 어레이는 또한 고체 기질, 예로서 유리 현미경 슬라이드상에 프린팅될 수 있다. 프린팅하기 전에 본 분야에 공지된 바와 같이 결합용 기질을 제공하기 위하여 슬라이드를 제조한다. 본 분야에 공지된 프린팅 기술 및 기기를 사용하여 어레이를 프린팅할 수 있다. 본 분야에 공지된 바와 같이 프린팅은 프로브를 기질상에 놓고, 프로브를 기질에 부착시키고, 기질이 비-특이 혼성화를 막는 것을 차단하는 것을 포함한다. 바람직하게 본 발명의 어레이는 사진석판술 및 결합 화합물의 조합을 사용하여 고체상 합성에 의해 합성할 수 있다. 프로브 선택 및 어레이 디자인의 몇몇 중요한 요소는 모든 어레이 생산에 보편화되어 있다. 프로브 혼성화를 최적화하는 전략은 예를 들면, 항상 프로브 선택 공정에 포함되어 있다. 특정 pH, 염, 및 온도 조건하의 혼성화는 융점을 고려하고 원하는 혼성화 양식과 관련되는 실험상 법칙을 사용하여 최적화될 수 있다(Keller, G. H. , and M. M. Manak(1987)DNA probes, Stockton Press, New York, N. Y. , pp. 169-170, (본 명세서에서 참고문헌으로 인용됨)). 프로브-혼성화의 농도-의존성 및 세기를 예측하기 위하여 컴퓨터 모델을 사용할 수 있다.
혼성화에 대한 중간 내지 고도의 엄격한 조건은 본 분야에 공지되어 있다. 블랏에 대한 고도의 엄격한 조건의 일례는 68℃에서 5 x SSC/5x Denhardt's 용액/0.1% SDS중에서 혼성화시키고 실온에서 0.2 X SSC/0. 1% SDS중에서 세척하는 것이다. 중간 정도의 엄격한 조건의 일례는 68℃에서 5 x SSC/5x Denhardt's 용액/0.1% SDS중에서 혼성화시키고 42℃에서 3 x SSC중에서 세척하는 것이다. 프로브 및 표적 핵산 사이에 원하는 수준의 서열 아이덴티티(identity)를 얻기 위하여 온도 및 염 농도 파라미터를 다양화할 수 있다. 혼성화 조건에 대한 추가의 가이드라인, 참조, 예: usubel et al.(1995)Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY, N. Y. 융점은 하기 식으로 기술한다(Beltz, G. A. et al.,[1983] Methodsof Enzymology, R. Wu, L. Grossman and K. Moldave [Eds. ] Academic Press, New York 100: 266-285). Tm=81.5℃ + 16.6 로그 [Na+] + 0.41(+G+C)-0.61(포름아미드(%))-600/염기쌍의 이중나선 길이.
본 발명에서 유용한 핵산은 중합효소 연쇄반응(PCR)증폭에 의해 제조된다. PCR 산물은 아가로스 겔 전기영동으로 확인할 수 있다. PCR은 반복적이고, 효소에 의한 우수한 핵산 서열의 합성법이다. 이 방법은 잘 공지되어 있고, 본 분야의 기술자에 의해 보편적으로 사용된다(참조, 예:, Mullis, U. S. Pat. Nos. 4,683, 195,4, 683,202, and 4,800, 159; Saiki et al. , Science 230: 1350-1354(1985)). PCR을 사용하여 표적 서열의 반대 스트랜드에 혼성화하는 2개의 올리고뉴클레오티드 프라이머 측면에 위치하는 관심의 대상이 되는 DNA 단편을 효소적으로 증폭시킨다. 프라이머는 3'-말단을 가리키면서 서로를 향한다. 주형의 열 변성, 프라이머와 그의 상보적 서열의 어닐링, 및 DNA 폴리머라제를 사용하는 어닐링된 프라이머의 신장의 반복적 사이클을 통해 PCR 프라이머의 5'-말단으로 제한된 세그먼트를 증폭시킨다. 각 프라이머의 신장 산물이 다른 프라이머에 대한 주형으로서 작용할 수 있기 때문에 각 사이클은 실질적으로 이전 사이클에서 생산된 DNA 주형의 양을 2배로 한다. 이로써 특이 표적 단편은 몇시간내 수백만배까지 기하급수적으로 축적된다. 호열성 세균 써무스 아쿠아티쿠스(Thermus aquaticus)로부터 분리된 Taq 폴리머라제와 같은 열안정성 DNA 폴리머라제를 사용하여 증폭 공정은 완전하게 자동화될 수 있다. 사용될 수 있는 다른 효소는 본 분야의 기술자에게 공지되어 있다.
다르게는, Taq 폴리머라제로 제조된 프로브를 상기 기술한 바와 동일한 용도로 올리고뉴클레오티드로 제조된 프로브의 치환체로서 사용할 수 있다. 올리고뉴클레오티드를 PNAs로 치환하는 것은 본 분야에 잘 공지되어 있다: 미리 형성된 모노머를 통한 펩티드 핵산의 합성이 예를 들면 PCT patent applications WO 92/20702 및 WO 92/20703에 기술되어 있다. PNAs의 용도, 생물학적 성질, 구조, 및 합성에 대한 최근 진보되었다고 보고되었다. 참조, 예:, PCT Patent application WO 93/12129, U. S. Pat. No. US6617422 to Neilsen P. E. et al. , U. S. Pat. No. 5,539, 083 to Cook et al. , 미국 특허 applicationUS20030059789A1, U. S. Pat. No. US6475721 to Kleiber et al. , Egholm etal., Nature : 365,566-568(1993), Nielsen etal., Science 254: 1497-1500(1991); and Egholm et al., J. Am. Chem. Soc. , 114: 1895-1897(1992).
키트
본 발명의 일면에 따른 방법을 사용하는 2'-분지형 뉴클레오시드에 대한 플라비비리다에 샘플의 내성 상태를 결정하는 에세이에서 사용하기 위한 적절한 시험 키트는 (1)야생형 DNA 서열(또는 그의 상응하는 RNA)부위 또는 본 명세서에 기술된 뮤턴트 DNA 서열 부위에 상보적인 올리고뉴클레오티드; (2)올리고뉴클레오티드의 3'-말단으로부터 핵산을 중합화시키기 위하여 요구되는 물질; 및 (3)올리고뉴클레오티드 프라이머 신장 산물의 존재를 측정하는 수단을 포함한다. 중합화 물질은 적절한 효소, 완충액, 세척액, 라벨 및 필요한 경우 라벨용 기질을 포함한다. PCR을 사용하여 핵산을 증폭시킬 경우 추가의 물질 예로서, 야생형 DNA 서열(또는 그의 상응하는 RNA)부위 또는 본 명세서에 기술된 뮤턴트 DNA 서열(또는 그의 상응하는 RNA)부위를 증폭시키는 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 dNTP's(데옥시뉴클레오시드 트리포스페이트)를 포함하여야 한다. 에세이를 수행하기 위한 사용 설명서 또한 포함할 수 있다.
본 발명의 또다른 일면에 따른 방법을 사용하는 인터페론에 대한 플라비비리다에 샘플의 감수성을 결정하는 에세이에서 사용하기 위한 적절한 시험 키트는 혼성화를 위해 요구되는 물질과 함께 야생형 DNA 서열(또는 그의 상응하는 RNA)부위 또는 본 명세서에 기술된 뮤턴트 DNA 서열 부위에 상보적인 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 물질은 적절한 완충액, 세척액, 라벨 및 필요한 경우 라벨용 기질을 포함한다. 일면으로, 올리고뉴클레오티드는 표지된다. 혼성화에 앞서 PCR을 사용하여 핵산을 증폭시킬 경우 추가의 물질 예로서, 야생형 DNA 서열(또는 그의 상응하는 RNA)부위 또는 뮤턴트 DNA 서열, 적절한 효소 및 dNTP's(데옥시뉴클레오시드 트리포스페이트)를 포함하여야 한다. 에세이를 수행하기 위한 사용 설명서 또한 포함할 수 있다.
또다른 일면으로, 본 발명은 플라비비리다에 감염의 장기간의 2'-분지형 뉴클레오시드 치료에 대한 내성의 마커를 검출하기 위한 키트를 제공한다. 키트는 진단 마커를 포함하는 플라비비리다에 핵산 서브시퀀스에 실질적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드 프로브를 포함하는 구획을 포함할 수 있다. 또한, 키트는 올리고뉴클레오티드의 치환으로 펩티드 핵산(PNA)또는 다른 안티센스 모사(mimic)프로브를 포함한다. 키트는 또한 프로브오 플라비비리다에 핵산 바이러스 마커의 혼성화를 검출하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 플라비비리다에 핵산의 PCR 증폭용 프라이머를 포함하는 키트를 포함한다. 키트는 또한 증폭된 플라비비리다에 핵산, 예로서, 올리고뉴클레오티드 또는 펩티드 핵산 프로브을 검출하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 몇몇 경우에 있어, 프로브를 적절한 지지체 막에 고정시킨다. 키트의 다른 임의의 성분으로서 예를 들면 프라이머 신장 산물의 합성을 촉진시키는 시약, 기질 뉴클레오시드 트리포스페이트, 표지화에 사용되는 수단(예로서, 아비딘-효소 컨쥬게이트 및 효소 기질 및 색소원(라벨이 바이오틴인 경우)), PCR 또는 혼성화 반응을 위한 적절한 완충액, 및 본 방법을 수행하기 위한 사용 설명서를 포함한다.
또한, 키트는 요법 실패와 관련되는 플라비비리다에 바이러스 게놈의 서열과 함께 하나 이상의 핵산을 포함하는 양성 대조군을 포함하는 용기, 및/또는 핵산을 포함하지 않는 음성 대조군을 포함하는 용기를 가질 수 있다. 또한, 키트는
표적 서열을 포함하는 핵산을 프로브내 서열에 포함된 사이트에서 절단할 수 있는 제한 효소에 대한 용기를 가질 수 있다.
본 발명은 또한 성분 (i)적절한 때, 샘플에 존재하는 핵산을 유리시키고, 분리하거나 농축시키는 수단; (ii)적절한 때, 적어도 하나의 적절한 프라이머 쌍; (iii)가능하게는 고체 지지체에 고정된, 상기 정의된 바와 같은 적어도 두개의 프로브; (iv)혼성화 완충액, 또는 상기 완충액 제조에 필요한 성분;(v)세척액, 또는 상기 세척액제조에 필요한 성분; (vi)적절한 때, 이전 혼성화로부터 생성된 하이브리드를 검출하는 수단; (vii)적절한 때, 고체 지지체상의 알려진 위치에 상기 프로브를 부착시키기 위한 수단; 및/또는 (viii)본 발명을 수행하기 위한 사용 설명서를 포함하는, 생물학적 샘플내 존재할 수 있는 요법 실패와 관련되는 하나 이상의 플라비비리다에 바이러스 마커의 검출 및/또는 유전자 분석을 위한 키트를 제공한다.
추가로, 본 발명은 샘플중 반응성 항체의 존재를 검출하는 면역에세이에서 사용될 수 있는, 2'-분지형 뉴클레오시드 요법 실패와 관련된 바이러스 마커에 상응하는 펩티드 또는 펩티드 단편을 포함하는 키트를 제공한다. 펩티드는 안정화된 용액으로 존재하거나 동결될 수 있다. 상기 키트는 동결 펩티드를 혼성화시키기 위한 적절한 용액을 포함할 수 있다. 키트는 또한 상기 언급한 펩티드를 그 위에 블랏팅하기 위한 적절한 고체 매질을 포함할 수 있다. 키트는 또한 스트렙타비딘-알칼리성 포스파타제로 표지된 항-인간 IgG 항체와 같은 펩티드에 대한 반응성 항체의 존재를 검출하기 위한 적절한 시약을 포함할 수 있다. 추가로, 키트는 예로서, 니토블루 테트라졸륨 및 5-브로모-4-클로로-3-인딜 포스페이트(BCIP)와 같은 검출용 시약을 포함할 수 있다.
또한, 키트는 2'-분지형 뉴클레오시드 요법과 관련된 특이 펩티드 서열에 반응성이 항체를 포함할 수 있다.
IV. 플라비비리다에 감염 치료
항-플라비비리다에제를 사용하는 병용 또는 교대 치료법
플라비비리다에의 약물-내성 변이체는 항바이러스제를 사용하는 장기간의 치료후 출현할 수 있다. 약물 내성은 가장 통상적으로는 바이러스 복제에 사용되는 효소를 코딩하는 유전자의 돌연변이화에 의해 발생한다. 제 1 약물에 의해 유발되는 것과 상이한 돌연변이를 유도하는 제 2, 및 아마도 제 3의 항바이러스 화합물과 병용하여 또는 교대로 화합물을 투여함으로써 플라비비리다에 감염에 대한 약물의 효능은 연장, 증대, 또는 회복될 수 있다. 병용 요법은 바이러스에 대하여 동시에 다중의 스트레스를 유도한다. 약물의 약물동력학, 생체분포(biodistribution), 또는 다른 파라미터가 상기의 병용 요법 또는 교대 요법에 의해 변경될 수 있다.
본 발명은 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 바이러스 게놈에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 요법 및/또는 교대 요법으로 상기 요법을 필요로 하는 인간에 치료학적 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하여 플라비비리다에 감염을 치료하는 최적의 방법을 제공한다.
뮤턴트 플라비비리다에 감염의 인터페론 치료법
본 발명의 추가의 일면은 치료학적 유효량의 인터페론을 투여하여 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 보존되는 세린 아미노산 잔기(도 11)에서 세린에서 트레오닌으로의 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에로 감염된 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하는 방법을 제공한다. 일면으로, 본 방법은 치료학적 유효량의 인터페론을 투여하여 RNA 폴리머라제 부위의 405번째 위치의 아미노산에서 세린에서 트레오닌으로의 돌연변이를 포함하는 BVDV 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하는 방법을 제공한다. 또다른 일면으로, 본 방법은 치료학적 유효량의 인터페론을 투여하여 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 282번째 위치의 아미노산에서 세린에서 트레오닌으로의 돌연변이를 포함하는 HCV 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하는 방법을 제공한다. 특정 일면으로, 인터페론 알파-2b는 플라비비리다에 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하기 위하여 투여된다.
추가의 일면으로, 방법은 (i)숙주로부터 바이러스 샘플을 수득하고; (ii)샘플중 플라비비리다에가 RNA 폴리머라제의 405번째 아미노산 잔기에 트레오닌을 포함하는지를 확인하고; (iii)치료학적 유효량의 인터페론을 RNA 폴리머라제 부위의 405번째 위치의 아미노산에서 세린에서 트레오닌으로의 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에에 의해 감염된 숙주에 투여하는 것을 포함하는, BVDV로 감염되었을 것으로 추정되는 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하는 방법을 제공한다.
또다른 일면으로, (i)숙주로부터 바이러스 샘플을 수득하고; (ii)샘플중 플라비비리다에가 RNA 폴리머라제의 282번째 아미노산 잔기에 트레오닌을 포함하는지를 확인하고; (iii)치료학적 유효량의 인터페론을 RNA 폴리머라제 부위의 282번째 위치의 아미노산에서 세린에서 트레오닌으로의 돌연변이를 포함하는 플라비비리다에에 의해 감염된 숙주에 투여하는 것을 포함하는, HCV로 감염되었을 것으로 추정되는 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하고/거나 실질적으로 치유하는 방법을 제공한다.
인터페론은 Intron-A(인터페론 알파-2b)(Schering), PEG-INTRON(페길화된 인터페론 알파-2b)(Schering), Roferon-A(인터페론 알파-2a)(Roche), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a)(Roche), INFERGEN(인터페론알파콘-1)(InterMune), OMNIFERON(자연발생 인터페론)(Viragen), ALBUFERON(Human Genome Sciences), REBIF(인터페론 베타-1a)(Ares-Serono), 오메가 인터페론(BioMedicine), 오랄 인터페론 알파(Amarillo Biosciences), 및 터페론 감마-1b(InterMune)를 포함한다.
BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 405번째 위치의 아미노산, 또는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 282번째 위치의 아미노산에서 세린에서 트레오닌으로의 돌연변이를 확인하는 것은 세린에서 트레오닌으로의 아미노산 변환을 허용하는 플라비비리다에 게놈내 돌연변이의 존재를 검출하므로써 수행될 수 있다. 일면으로, BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드(여기에서, RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드는 BVDV 게놈의 11, 136번째 뉴클레오티드에 상응한다)위치의 시티딘의 존재를 사용하여 아미노산 변환을 검출할 수 있다. 다른 일면에서 이중 돌연변이: 1214(G로부터 C로의)및 1215(C로부터 A로의); 1214(G로부터 C로의)및 1215(C로부터 G로의); 또는 1214(G로부터 C로의)및 1215(C로부터 U로의)를 검출할 수 있고, 이는 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 405번째 위치의 아미노산에서 세린에서 트레오닌으로의 아미노산 변환을 일으킨다. HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 8443번째 뉴클레오티드 위치의 시티딘의 존재를 사용하여 아미노산 변환을 검출할 수 있다. 다른 일면에서 이중 돌연변이: 8443(G로부터 C로의)및 8444(C로부터 A로의); 8443(G로부터 C로의)및 8444(C로부터 G로의); 또는 8443(G로부터 C로의)및 8444(C로부터 U로의)를 검출할 수 있고, 이는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 282번째 위치의 아미노산에서 세린에서 트레오닌으로의 아미노산 변환을 일으킨다. 돌연변이는 상기 기술된 바와 같은 검출 기술, 예로서, 표지된 프로브, 역 혼성화 에세이, 서던 블랏 또는 본 분야의 기술자에게 공지되어 있는 다른 검출 기술을 사용하여 검출할 수 있다.
V. 약제학적 조성물의 제조
RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 바이러스 게놈에 돌연변이를 유도하는 약물과 배합 요법 및/또는 교대 요법으로, 본 명세서의 상세한 설명에 기술된 바와 같은 투여 모드 또는 필요한 조치를 위해 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제의 존재하에 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C 또는 그의 3' 발린을 환자에게 투여하여 플라비비리다에 바이러스에 의해 유발된 감염을 나타내는 인간을 포함하는 숙주를 치료할 수 있다. 2'-분지형 뉴클레오시드, 예로서, β-D-2'-CH3-리보C 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염은 단독으로 또는 본 명세서에 기술된 다른 항바이러스제와 병용 또는 교대로 투여될 수 있다. 활성 물질은 적절한 경로, 예를 들면, 경구, 비경구, 정맥내, 진피내, 피하, 또는 국소로 액상 또는 고체 형태로 투여될 수 있다.
화합물의 바람직한 투여량은 1일당 수혜자의 체중 1kg당 약 1 내지 50mg/kg, 바람직하게 1 내지 20 mg/kg, 더욱 일반적으로 0.1 내지 약 100 mg 범위일 것이다. 약제학적으로 허용가능한 프로드럭의 유효량 범위는 전달되는 모 뉴클레오시드의 중량에 기초하여 산출될 수 있다. 프로드럭이 그 자체로서 활성을 나타내는 경우 유효량은 프로드럭의 중량을 사용하여 상기와 같이 추정될 수 있거나, 본 분야의 기술자에게 공지된 다른 방법에 의해 추정될 수 있다.
본 화합물은 제한하는 것은 아니지만 복용 단위 형태 당 7 내지 3000 mg, 바람직하게는 70 내지 1400 mg의 활성 성분을 포함하는 것을 포함하여 적절한 복용 단위 형태로 편리하게 투여된다. 50-1000 mg의 경구 투여량이 보통 편리하다.
이상적으로, 유효 성분은 약 0.2 내지 70μM, 바람직하게는 약 1.0 내지 10 μM의 활성 성분의 피크 혈장 농도가 이루어지도록 투여되어야 한다. 이것은, 예를 들면 임의적으로 식염수 내에 있는, 활성 성분의 0.1 내지 5% 용액을 정맥내 주사하여 이루어지거나 활성 성분의 볼루스(bolus)로서 투여된다.
의약 조성물 내의 활성 성분의 농도는 약물의 흡수도, 불활성화 및 배설 속도 및 당업자에게 공지된 다른 인자에 따라 달라질 것이다. 또한 투여량은 경감시키기 위한 상태의 중증도에 따라 달라질 수 있음에 주의하여야 한다. 특정 대상자의 경우는 조성물을 투여하고 이를 감독하는 사람의 판단 및 개인의 요구에 따라 특정 투여 요법 및 스케줄이 시간에 따라 조성되어야 함을 이해하여야 하고, 본 명세서에서 기술된 농도 범위는 단지 일례이며 청구하는 조성물의 범위 또는 실시를 제한하고자 하는 것은 아님을 이해하여야 한다. 활성 성분은 한번에 투여되거나, 다양한 시간 간격으로 투여되는 다수의 더 작은 용량으로 나누어질 수 있다.
활성 화합물 투여의 바람직한 모드는 경구이다. 경구용 조성물은 통상 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함한다. 이들은 젤라틴 캡슐에 싸여 있거나 정제로 압착된다. 치료적 경구 투여 목적을 위해, 활성 화합물은 부형제와 혼입될 수 있고 정제, 트로키, 또는 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 약제학적으로 적절한 결합제, 및/또는 어쥬반트 물질이 본 조성물의 일부로서 포함될 수 있다.
정제, 환제, 캅셀제, 트로키 등은 하기 성분중 어느 것, 또는 유사한 성질의 화합물을 포함할 수 있다: 미결정 셀룰로즈, 검 트라가칸트 또는 젤라틴과 같은 결합제; 전분 또는 락토스같은 부형제, 알긴산, 프리모겔(Primogel), 또는 옥수수 전분과 같은 붕해제; 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로테스(Sterotes)와 같은 활택제; 콜로이드성 실리콘 옥사이드와 같은 윤활제; 수크로스 또는 사카린과 같은 감미제; 또는 페파민트, 메틸 살리실레이트, 또는 오렌지 향료와 같은 풍미제. 복용 단위 형태가 캡슐인 경우, 상기 유형의 물질외에, 지방성 오일과 같은 액상 담체를 포함할 수 있다. 또한, 복용 단위 형태는 투여 단위의 물리적 형태를 변화시키는 다양한 다른 물질, 예를 들면, 당 코팅, 셀락, 또는 다른 장용제를 함유할 수 있다.
본 화합물이 엘릭서(elixir), 현탁제, 시럽, 웨이퍼, 츄잉검 등의 성분으로서 투여될 수 있다. 시럽은, 활성 성분에 부가적으로, 감미제로서 수크로스 및 특정 보존제, 염료 및 착색제 및 풍미제를 포함할 수 있다.
본 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 또는 염은 또한 다른 뉴클레오사이드 화합물을 포함하여 소기의 작용에 손상을 주지 않는 다른 활성 물질, 또는 소기의 작용을 보충하는 물질, 예를 들면, 항생제, 항균제, 항염증제, 또는 다른 항바이러스제와 혼합될 수 있다. 비경구, 경피, 피하, 또는 국소 투여용으로 사용되는 액제 또는 현탁제는 하기의 성분을 포함할 수 있다: 주사용 물, 식염수 용액, 비휘발성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매과 같은 무균 희석제; 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤과 같은 항박테리아제; 아스코르브산 또는 소듐 바이설파이트와 같은 항산화제; 에틸렌디아민테트라아세트산과 같은 킬레이트제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충액 및 염화나트륨 또는 덱스트로스와 같은 등장도 조절용 시약. 비경구용 제제는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 시린지 또는 다용량 바이알 내에 포함될 수 있다.
정맥내 투여되는 경우, 바람직한 담체는 생리학적 식염수 또는 포스페이트 완충된 식염수(PBS)이다.
바람직한 실시예에서, 활성 화합물은 임플란트 및 마이크로캡슐화된 전달계를 포함하는 방출 조절형 제제와 같이 본 화합물이 인체로부터 급속히 제거되는 것으로부터 보호하는 담체와 함께 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안하이드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리아세트산과 같은 생분해성, 생체적합성 중합체가 사용될 수 있다. 그러한 제제의 제조 방법은 당업자에게 명백하다. 이러한 물질은 알자 사(Alza Corporation)로부터 상업적으로 얻을 수도 있다.
리포좀 현탁액(바이러스성 항원에 대한 모노클론 항체로 감염된 세포를 표적으로하는 리포좀을 포함하는)이 약제학적으로 허용되는 담체로서 또한 바람직하다. 이들은 당업자에게 공지된 방법, 예를 들면 미국특허 제 4,522,811호(전체가 본 명세서에 참고문헌으로서 포함됨)에 기술된 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들면, 리포좀 제제는 적절한 액체(예를 들면 스테로일포스파티딜 에탄올아민, 스테로일 포스파티딜 콜린, 아라키도일 포스파티딜 콜린, 및 콜레스테롤과 같은)를 이후에 증발되어 용기의 표면에 건조된 지방의 박막을 남기는 무기 용매 내에 용해시켜 제조될 수 있다. 활성 화합물 또는 그 모노포스페이트, 디포스페이트, 및/또는 트리포스페이트 유도체의 수성 용액은 이후 용기에 도입된다. 용기는 이후 손으로 저어 지방 물질이 용기 측면으로부터 유리되어 지방 응집물로서 분산되고, 이에 의해 리포좀 현탁액을 형성하도록 한다.
활성 화합물은 치료받는 환자에 심각한 독성 효과를 일으키지 않으면서 치료학적 유효량의 화합물을 환자에 전달하여 생체내에서 바이러스 복제, 특히 플라비비리다에 복제를 저해하기에 충분한 양으로 약제학적으로 허용가능한 담체내 포함된다. "저해량"은 예를 들면 본 명세서에 기술된 것과 같은 에세이에 의해 측정된 바와 같은 저해 효과를 발휘하기에 충부한 활성 성분의 양을 의미한다.
서방성 제제
생체분해성 폴리머의 분자는 폴리락트산의 합성 및 생체분해능이 Kulkami et al. ("Polylactic acid for surgicalimplants,"Arch. Surg, 1966, 93, 839)에 의해 보고된 후 신속하게 발전하게 되었다. 전달 장치용 매트릭스 물질로서 유용한 것으로 보고된 다른 폴리머의 예로서 폴리안하이드라이드, 폴리에스테르 예: 폴리글리콜라이드 및 폴리락티드-코-글리콜라이드, 폴리아미노산 예: 폴리라이신, 폴리에틸렌 옥사이드의 폴리머 및 코폴리머, 아크릴 종결 폴리에틸렌 옥사이드, 폴리아미드, 폴리우레탄, 폴리오르토에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 및 폴리포스파젠을 포함한다. 참조, 예를 들면, 미국 특허 4,891, 225 and 4,906, 474 to Langer (폴리an하이드라이드s), 4,767, 628 to Hutchinson (폴리락티드,폴리락티드-코-글리콜리드산), and 4,530, 840 to Tice, et al. (폴리락티드, 폴리글리콜리드, 및 코폴리머). 참조: 미국 특허 5,626, 863 to Hubbell, et al (상기에는 조직 접촉 물질 및 서방성 캐리어로서의 광폴리머화(photopolymerizable)생체분해성 하이드로겔(생체분해성 모노머 또는 올리고머 신장을 갖는 친수성 올리고머를 포함하는 폴리머화되고 가교결합된 마크로머의 하이드로겔로서, 이는 폴리머화 및 가교결합이 가능한 말단에 캡핑된 모노머 또는 올리고머이다)이 기술되어 있다); 및 Focal, Inc.의 PCT WO 97/05185(상기에는 약물 전달을 위한 서방성 제제 및 조직 치료제로서 사용하기 위한 다중 차단 생체분해성 하이드로겔이 기술되어 있다).
생체 기원의 분해성 물질이 잘 공지되어 있고, 예로서 가교결합된 젤라틴을 들 수 있다. 히알루론산은 가교결합되어 있고, 생물 의학 적용을 위한 분해성 팽윤 폴리머로서 사용된다(미국 특허 4,957, 744 to Della Valle et. al. ;"Surface modification of polymeric biomaterials for reducedthrombogenicity,"polym. Mater. Sci. Ezlg., 1991,62,731-735]).
다수의 분산계가 물질, 특히 생물학적으로 활성인 화합물의 캐리어로서 현재 사용중에 있거나 개발중에 있다. 약제 및 화장품에서 사용되는 분산계는 현탁액 또는 유액으로 분류될 수 있다. 현탁액은 현탁제를 사용하여 액상 매질내 분산되어 있는 크기가 나모미터 내지 수백 마이크론 범위인 고체 입자로서 정의된다. 고체 입자는 중심체, 미세캡슐, 및 나노스피어를 포함한다. 유제는 계면활성제 및 리피드와 같은 유화제의 계면 필름에 의해 안정화된 또다른 액상중의 하나의 액상의 분산액으로 정의된다. 유제 제형은 유중수 및 수중유 유제, 다중 유제, 미세유제, 마이크로드로플릿, 리포좀을 포함한다. 드로플릿은 단층 포스포리피드 비히클로서 Haynes의 미국 특허 4,622, 219 및 4,725, 442에 의해 정의된 바와 내부에 오일상과 함께 구형의 리피드 층으로 구성되어 있다. 리포좀은 불수용성의 극성 리피드를 수용액과 혼합하여 제조된 포스포리피드 비히클이다. 물에 불용성 리피드를 혼합하여 형성된 바람직하지 못한 엔트로피는 포획 수용액과 함께 집중적인 포스포리피드의 클로징 막의 고도한 어셈블리을 형성하게 한다.
Dunn, et al.의 미국 특허 4,938, 763에는 생체적합성, 수용성 용매에 비반응성 불수용성 열가소성 폴리머를 용해시켜 액체을 형성하고, 체내에 상기 액체를 놓고 용매를 산재시켜 고체 임플란트를 제조하는 방법이 기술되어 있다. 임플란트는 그를 둘러싼 캐비티의 모형으로 가정될 수 있다. 다른 일면에서, 임플란트는 용매를 포함하지 않고 고체를 형성하기 않고 통상 경화(cure)촉매를 가함으로서 경화시키는 반응성 액상 올리고머 폴리머로부터 형성된다.
다수의 특허에는 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 바이러스 게놈에 돌연변이를 유도하는 약물과 배합 요법 및/또는 교대 요법으로 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 그의 염을 투여하기 위하여 사용될 수 있는 약물전달 시스템이 기술되어 있다. 미국 특허 5,749, 847에는 전기충격(electrophoration)에 의해 뉴클레오시드를 그의 유기체내로 전달하는 방법이 기술되어 있다. 미국 특허 5,718, 921에는 폴리머 및 그 내부에 분산되어 있는 약물을 포함하는 중심체가 기술되어 있다. 미국 특허 5,629, 009에는 생체활성 인자의 서방성 방출을 위한 전달 시스템이 기술되어 있다. 미국 특허 No, 5,578, 325에는 나노입자 및 마이크로입자의 비선형 친수성 친유성 다중블락 코폴리머가 기술되어 있다. 미국 특허 5,545, 409에는 생체활성 인자의 서방성 방출을 위한 전달 시스템이 기술되어 있다. 미국 특허 5,494, 682에는 이온 가교결합된 폴리머 미세캡슐이 기술되어 있다.
Andrx Pharmaceuticals, Inc.의 미국 특허 5,728, 402에는 하이드로겔 형성제와 함께 활성 약물, 그의 염, 에스테르 또는 프로드럭을 포함하는 내부 상, 및 위에서의 용해되지 못하도록 하는 코팅을 포함하는 외부 상을 포함하는 서방성 제제에 대하여 기술되어 있다. Andrx Pharmaceuticals, Inc.의 미국 특허 5,736, 159 및 5,558, 879에는 동소에 통로가 형성되어 있는 거의 불수용성인 약물의 서방성 제제에 대하여 기술되어 있다. Andrx Pharmaceuticals, Inc.의 미국 특허 5,567, 441에는 1일 1회 투여용의 서방성 약제가 기술되어 있다. 미국 특허 5,508, 040에는 다중미립자 박동성 전달 시스템에 대하여 기술되어 있다. 미국 특허 5,472, 708에는 박동성 입자 기초 약물 전달 시스템에 대하여 기술되어 있다. 미국 특허 5,458, 888에는 평균 분자량이 3,000 내지 10,000인 폴리에틸렌 글리콜 폴리머를 포함하는 외부 상 및 내부 약물 포함 상을 갖는 혼화물을 사용하여 제조될 수 있는 서방성 정제에 대하여 기술되어 있다. 미국 특허 5,419, 917에는 실질적으로 하이드로겔로부터 약물을 0차의 속도로 방출할 수 있도록 하는 유효량의 약제학적으로 허용가능한 이온화 화합물을 사용하는 것에 기초하여 하이드로겔로부터 약물을 방출하는 속도를 변화시키는 방법에 대하여 기술되어 있다. 미국 특허 5,458, 888에는 서방성 정제에 대하여 기술되어 있다.
Elan Corporation, plc의 미국 특허 5,641, 745에는 생체분해성 폴리머중 활성 약물을 포함하여 중심체 또는 나노스피어를 형성하는 서방성 약제가 기술되어 있다. 생체분해성 폴리머는 적절하게 폴리-D, L-락티드 또는 폴리-D,L-락티드 및 폴리-D, L-락티드-코-글리콜리드의 혼화물이다. E1an Corporation, plc의의 미국 특허 5,616, 345에는 유기산과 결합된 활성 화합물 및 대다수의 코어를 둘러싸고, 약제학적으로 허용가능한 필름-형성, 불수용성 합성 폴리머 및 소수의 약제학적으로 허용가능한 필름-형성, 수용성 합성 폴리머를 포함하는 다층막을 포함하는, 1일 1회 투여용의 서방성 약제가 기술되어 있다. 미국 특허 5,641, 515에는 생체분해성 나노입자에 기초한 서방성 약제가 기술되어 있다. 미국 특허 5,637, 320에는 1일 1회 투여용의 서방성 약제가 기술되어 있다. 미국 특허 5,580, 580 및 5,540, 938는 신경 질환 치료에서의 용도 및 제제에 관한 것이다. 미국 특허 5,533, 995는 서방성 약물 전달을 위한 수동 경피 장치에 관한 것이다. 미국 특허 5,505, 962는 서방성 약제가 기술되어 있다.
하기 실시예는 본 발명의 다양한 일면을 기술하지만 어는 방면으로도 그로써 제한하고자 하는 것은 아니다.
실시예 1 : β-D-2'-CH 3 -리보C-내성 BVDV의 분리
시험관내에서 투여받은 바 없은(naive)세포를 비세포변성(ncp)BVDV(균주 I-N-dlns ; Dr. R. Donis, U. of Nebraska, Lincoln, NE)로 감염시켜 지속적인 BVDV 감염을 MDBK 세포주(ATCC, Manassas, VA, Cata로그 #; : CCL-22)에 정착시켰다. 감염다중도(MOI)는 0.01이었다. 포커스 에세이에 의해 측정된 바 안정적으로 높은 수준에 감염(1mL당 106 ~ 107 포커스 형성 단위(FFU))에 도달할 때까지 1주에 2회씩 세포를 계대배양하였다(분리 비율 1: 15). 이어서 지속적으로 감염된 세포를 8 μM의 β-D-2'-CH3-리보C(Idenix Pharmaceuticals)를 포함하거나 포함하지 않는 6-웰 배양 플레이트에서 배양하였다. 1: 15 내지 1: 20의 분리 비율로 매 3 내지 4일마다 세포 배양물을 계대배양하였다. 8회에 걸쳐 계대배양한 후 β-D-2'-CH3-리보C의 존재하에 배양된 세포 배양물을 T-75 배양 플라스크로 확장시키고 2회에 걸쳐 냉동/해동시키고 추가의 특서을 위한 β-D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV의 바이러스 저장액으로서 사용하였다. 세패 배양액이 바이러스 역가는 바이러스 포커스 에세이에 의해 각 계대배양 종결시 모니터하였다.
바이러스 포커스 에세이를 수행하기 위하여 MDBK 세포를 각 웰당 2 x 105의 세포를 포함하는 6-웰 플레이트상에 시딩하고, 사용전 적어도 5시간동안 37℃/5% C02에서 배양하였다. 시험 샘플(세포 모노레이어와 결합된 배양 상등액)을 2회에 걸쳐 냉동/해동시키고 배지에서 연속하여 10배로 희석하고 웰당 0.2ml로 6-웰 플레이트에 시험 세포를 접종하기 위하여 사용하였다. 흡착 후 1 시간째 접종물을 제거하고 세포를 완전 성장 배지(1 X DMEM(Cellgro), 8% 말 혈청, 페니실린, 스트렙토마이신, L-글루타민, 소듐 피루베이트, 및 25 mM HEPES으로 보충됨)중 3 mL의 0.5% 아가로스로 오버레이시켰다. 3일간 37℃/5% C02에서 인큐베이션시킨 후 플레이트를 1시간동안 PBS중 3 mL의 7.4% 포름알데히드로 고정시키고 PBS로 세척하였다. 세포 모노레이어를 10분간 웰당 1 mL의 PBS-0.25% Triton X-100으로 투과시키고 0.5mL 의 고트 항-BVDV 항혈청(VMDR, Inc.; PBS-0.25% Triton X-100중 1: 1000로 희석됨)과 함께 1시간동안 인큐베이션시켰다. 이어서 항혈청을 제거하고 세포 모노레이어를 PBS(15분간 2회)로 세척하고 0.5mL의 퍼옥시다아제-컨쥬게이트된 동키 항-고트 항체(PBS-0.25% Triton X-100중 1: 1000로 희석됨)와 함께 추가의 1시간동안 인큐베이션시켰다. 항체를 제거한 후 세포 모노레이어를 PBS(15분간 2회)로 세척하고 바이러스 포커스가 관찰될 때까지(약 15분)0.5mL의 디아미노벤지딘(DAB)퍼옥시다아제 기질 용액(Vector Laboratories)과 함께 실온에서 인큐베이션시켰다. 모든 인큐베이션을 요동시키면서 수행하였다. 물로 세척하여 염색을 중단하고 플레이트를 대기 건조시켰다. 바이러스 역가는 하기 식을 사용하여 포커스 형성 단위(focus forming units)(FFU)/mL로 산출하였다:TFFU/mL = N x 5 x D(여기에서, T는 바이러스 역가(FFU/mL)이고; N은 웰당 플라크의 수이고; D는 상응하는 바이러스 샘플에 대한 희석 인자이다). (예로서, 12개의 플라크가 10-5의 희석된 바이러스 샘플에 상응하는 웰에서 발견되었을 때 T = 12x5x105=6x106 PFU/mL).
통상적으로 바이러스 역가는 2-3회 계대배양한 후 106-107FFU/mL에 도달하였지만, 적어도 2개월간에 걸쳐 추가로 계대배양한 후에는 현저한 변함은 없었다. 지속적으로 감염된 세포주를 8μM β-D-2'-CH3-리보C로 처리하였을 때, 바이러스 역가는 급격하게 감소하고 2회 계대배양한 후에는 바이러스를 더이상 검출할 수 없었다(도 1). 그러나, 저해제의 존재하에 추가로 계대배양한 후 바이러스는 배양액에 재출현하였고(통상, 계대배양 3 내지 5회째), 바이러스 역가는 비처리 배양액의 것보다 10배 낮은 105 FFU/mL로 플래토(plateau)에 도달하였다(도 1). 처리 후 28일째에도 바이러스 역가상의 10배 차이는 관찰되었다. 이 실험을 3회 반복하고, 유사한 결과를 수득하였다. 재출현한 바이러스의 표현형은 초기 야생형 바이러스와 현저히 상이하였다: 야생형 바이러스의 것보다 더욱더 작은, 통상 지름이 3 내지 10배 작은 포커스를 나타내었다(도 2). 적어도 72일동안 저해제의 존재하에 배양액에서 장기간동안 계대배양한 후에도 이러한 표현형에는 변함이 없었지만, 처리를 중단한 후 야생형 표현형(포커스가 큼)으로 신속하게 복귀되었다.
함께 이 데이트를 통해 야생형 바이러스는 처리 후 세포 배양물으로부터 사라지고, β-D-2'-CH3-리보C-내성 바이러스 변이체는 조직 배양액에서 복제 적합성이더욱 낮다고 입증되었다.
실시예 2 : 바이러스 성장 키네틱
야생형 및 β-D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV 모두의 성장 키네틱을 비교하였다. MDBK 세포를 각 웰당 2 x 105의 세포를 포함하는 6-웰 플레이트상에 시딩하고, 밤새도록 37℃/5% C02에서 배양하였다. 세포를 0.1의 다중감염도로 BVDV I-N-dIn 또는 β-D-2'-CH3-리보C-내성 뮤턴트, I-N-dIns β-D-2'-CH3-리보C-R를 사용하여 감염시켰다. 흡착 후 1 시간째 접종물을 제거하고 세포를 PBS로 세척하고, 2 mL의 새로운 성장 배지로 오러베이하였다. BVDV I-N-dIns β-D-2'-CH3-리보C-R에 대하여, 복제 웰을 8 μM의 β-D-2'-CH3-리보C의 존재 또는 부재하에 제조하였다. 세포 배양물을 37℃/5% C02에서 인큐베이션시켰다. 0(흡착 기간의 종결점), 감염 후 6, 12, 24, 36, 48, 60, 72시간째, 배양액을 2회에 걸쳐 냉동/해동시키고, 바이러스 역가를 상기 기술한 포커스 에세이에 의해 측량하였다.
감염 후 12시간째, 야생형 바이러스 자손은 104 FFU/mL 초과의 상당 수준에 도달하였고, 이는 8-14시간동안 BVDV의 완전한 생활주기과 일치한다. 반대로, 내성 바이러스 변이체의 자손은 어느 시점에서도 검출할 수 없었다(도 3). 내성 바이러스의 복제는 감염 후 24시간째 처음 검출되었다. 감염 후 36시간째에도 내성 바이러스의 복제는 야생형 바이러스의 것보다 약 100배 낮은 효능을 나타내었다. 이 데이타를 통해 β-D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV가 야생형 바이러스보다 특히 감염 초기 단계에 현저히 느린 속도로 복제한다고 입증되었다. 또한 이 데이타는 도 1 및 2에 나타낸 결과와 일치한다.
실시예 3 β-D-2'-CH 3- 리보C 내성에 대한 평가
β-D-2'-CH3-리보C에 대하여 선택된 BVDV 변이체(I-N-dIns β-D-2'-CH3-리보C-R)는 장기간동안(적어도 72시간)화합물의 존재하에서 표현형을 바꾼거나 바이러스 역가 수준을 바꾸지 않으면서 MDBK 세포에서 적절하게 높은 수준으로 안정적으로 복제할 수 있기 때문에 야생형 BVDV보다도 더욱 내성을 띤다. 이 내성을 측량을 하기 위하여 야생형 및 변이체 바이러스 모두를 사용하여 바이러스 실수율 감소 에세이(virus yield reduction assay)를 시행하였다.
바이러스 실수율 감소 에세이를 수행하기 위하여 MDBK 세포를 24-웰 플레이트(각 웰당 1 x 105의 세포)상에 시딩하고, 밤새도록 37℃/5% C02에서 배양하였다. 0.1의 다중감염도로 세포를 BVDV로 감염시켰다. 흡착 후 1 시간째 접종물을 제거하고 세포를 PBS로 세척하고, 일련의 2배 희석된 시험 화합물(0-32 μM의 β-D-2'-CH3-리보C 및 0-800 IU/mL의 IntronR A)을 포함하는 1 mL의 새로운 성장 배지로 오러베이하였다. 37℃/5% C02에서 48시간동안 인큐베이션시킨 후, 플레이트를 -70℃에서 2회에 걸쳐 냉동/해동시켜 세포 배양물을 분해하였다. 바이러스 역가를 상기 기술한 포커스 에세이에 의해 측량하였다. 시험 화합물의 50%, 90%, 및 4-로그 유효 농도(평균값±표준편차)는 이중 웰에 기초하였다. EC50, EC90 및 EC4로그 값은 XLFit 소프트웨어를 사용하여 곡선 피팅에 의해 유도하였다. EC50, EC90 및 EC4로그는 시험 화합물의 농도이고, 이는 각각 50%, 90%, 및 99.99%까지 바이러스 역가를 감소시킬 것이다.
감염성 야생형 BVDV 입자의 생성은 β-D-2'-CH3-리보C에 의해 각각 0.59±0.12μM 및 1.49±0.28μM의 EC50 및 EC90 값으로 매우 효과적으로 저해되었다(도 4 및 표 4). 농도 7. 14±1.26 μM 의 β-D-2'-CH3-리보C으로 야생형 바이러스 실수율은 4 로그까지 감소하였고 16 μM에서 바이러스 역가는 검출 한도 미만까지 떨어졌다( < 10FFU/mL). 반대로, 시험된 농도중 가장 높은 농도(32μM)의 β-D-2'-CH3-리보C에 의한 내성 바이러스 실수율에 대한 효능은 관찰되지 않았다. 따라서, 바이러스 실수율 감소 에세이에 의해 수득된 EC50 값에 기초하여 I-N-dIns β-D-2'-CH3-리보C-R 바이러스가 야생형 바이러스보다 저해제에 대하여 적어도 54배 더욱 내성을 나타냈다( > 32 μM 대 0.59± 0.12μM).
표 4 : 실수율 감소 에세이
1cp = 세포변성; ncp = 비세포변성
실시예 4
핵산 서열 분석 : β-D-2'-CH 3 -리보C-R-내성 표현형을 초래하는 유전자 돌연변이의 확인
저해제, 즉 뉴클레오시드 유사체의 성질에 기초하여 바이러스 폴리머라제를 가능성이 있는(plausible)분자 표적으로서 주시하였다. 따라서, 본 발명자는 먼저 야생형 및 β-D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV 모두의 NS5B 부위를 서열화하였다. β-D-2'-CH3-리보C로 처리하거나, 처리하지 않고 8회에 걸쳐 계대배양한 후 바이러스 RNA를 조직 배양 분해물로부터 추출하고(도 1)전체 NS5B 부위를 RT-PCR 및 서열화하였다. 바이러스 RNA를 제조사의 프로토콜에 따라 QIAampR Viral RNA Mini Kit(QIAGEN)를 사용하여 세포 배양물로부터 추출하였다. 전체 NS5B 부위를 전사시키고 QIAGENR OneStep RT-PCR Kit를 사용하여 증폭시켰다. PCR 산물을 QIAquickR PCR Purification Kit(QIAGEN)를 사용하여 정제하고 Tufts Core Facility(Boston, MA)에서 자동 ABI DNA Suquencer(Perkin-Elmer)상에서 ABIPRISMR Sequencing 프로토콜을 사용하여 서열화하였다.
각 부위는 적어도 두개의 독립적인 RT-PCR 산물을 사용하여 양 방향으로 서열화하였다. 앞서 공개된 BVDV(균주 I-N-dIns)의 전장의 게놈 서열(Vassilev, V. B. and R.O. Donis.(2000)Virus Res. 69(2): 95-107)과 비교할 때 야생형 바이러스에서는 어떤 돌연변이도 관찰되지 않았다. 소 바이러스 설사 바이러스(BVDV)에 의해 유도된 세포자멸은 세포내 바이러스 RNA 축적과 관련된다. 405번째 위치에서 아미노산 잔기를 Ser로부터 Thr로 바꾸는 1214의 G로부터 C로의 오직 하나의 뉴클레오티드 치환만이 I-N-dIns β-D-2'-CH3-리보C-R 바이러스에서 발견되었다. 흥미롭게도, 돌연변이 분석(Lai V. C. , Kao C. C. , Ferrari E. , Park J., Uss A. S. , Wright-Minogue J. , Hong Z. , and J. Y. Lau. "Mutitional Analysis of bovine virus diarrhea virus RNA-dependent RNA polymerase "J Virol., 1999,73, 10129-36)에 의해 확인된 바 상기 아미노산 위치는 추정되는 작용 NS5B 영역 B(도 5)에 위치한다. 이 영역은 또한 다른 플라비바이러스 게놈 및 HCV 게놈의 NS5B 부위에서도 발견되었다. 또한, 아미노산 위치 Ser405는 모드 페스티- 및 플라비바이러스 게놈에서 고도로 보존된다.
실시예 5
Intron A에 대한 과민성
상기 기술된 바와 같은 바이러스 실수율 감소 에세이를 사용하여 다시 감염된 MDBK 세포에서 Intron A에 대한 과민성에 대하여 야생형 I-N-dIns 바이러스 및 I-N-dIns β-D-2'-CH3-리보C-R 변이체를 비교하였다. 다시, 본 발명자는 두개의 바이러스 사이의 현저한 차이를 발견하게 되었다. 야생형 바이러스는 119 ±34.1μM의 EC90의 값으로 Intron A에 의해 중간정도로 저해되었고, 시험된 농도중 가장 높은 농도에서 바이러스 실수율은 대략 1.5 로그로 감소하였다(도 6). 반대로, I-N-dIns β-D-2'-CH3-리보C-R 변이체 바이러스는 3.15±0.72μM의 EC90의 값으로 Intron A에 대하여 더욱더 감수성이고, 바이러스 실수율은 최대로 거의 4로그까지 감소한 것으로 나타났다(도 6). EC90 값 비교에 기초하여 β-D-2'-CH3-리보C-내성 바이러스는 야생형 BVDV보다 Intron A에 대하여 대략 40배 정도 더 감소성이었다.
실시예 6
β-D-2'-CH 3 -리보C 및 Intron A의 병용 요법
추가로 Intron A 단독 또는 β-D-2'-CH3-리보C와 배합된 Intron A의 야생형 BVDV에 대한 효능을 지속적으로 감염된 MDBK 세포에서 연구하였다. 하나의 실험 세팅에서, 수개 농도의 저해제로 단일 또는 이중으로 처리한 후 7일째(2회 계대배양)바이러스 역가를 측정하였다. 표 5A 및 5B, 및 도 7 및 8에 나타낸 바와 같이 이 실험 결과를 하기와 같이 요약할 수 있다. 기술한 실험 조건하에서 β-D-2'-CH3-리보C는 단독으로 용량-의존 방식으로 BVDV(균주 I-N-dIns)의 증식을 강력하게 저해시켰다. 8 μM의 β-D-2'-CH3-리보C로 처리한 결과 바이러스 역가는 6.2로그로 감소하였다(도 7). 인터페론 알파-2b을 단독으로 사용한 경우 최소의 항바이러스 효ㅕ능(바이러스 역가가 0.1로그-감소)을 나타냈다. 2 μM의 β-D-2'-CH3-리보C 또는 2000 IU/mL 인터페론 알파-2b로 단일 처리한 결과 바이러스 역가를 각각 1.61 로그 및 0.1 로그로 감소시켰다. 동일한 농도로 병용 처리한 효과는 2.22 로그로, 이는 산출된 추가의 효능보다 0.51 로그 더 높았다(1.71 로그). 4μM의 β-D-2'-CH3-리보C 또는 2000 IU/mL 인터페론 알파-2b로 단일 처리한 결과 바이러스 역가를 각각 2.06 로그 및 0.1 로그로 감소시켰다(표 5B, 도 8). 동일한 농도로 병용 처리한 효과는 4.56 로그로 이는 산출된 추가의 효능보다 2.4 로그 더 높았다(2.16 로그). 따라서, 특히 농도 4μM의 β-D-2'-CH3-리보C를 사용할 때 β-D-2'-CH3-리보C 및 인터페론 알파-2b는 BVDV를 상승적으로 저해시켰다.
표 5A. 지속적으로 감염된 MDBK 세포에서 BVDV(균주 I-N-dIns)역가에 대한 β-D-2'-CH3-리보C 및 인터페론 알파-2b의 효능. 숫자는 BVDV 역가 값(FFU/mL)을 나타낸다.
표 5B. 지속적으로 감염된 MDBK 세포에서 BVDV(균주 I-N-dIns)역가에 대한 β-D-2'-CH3-리보C 및 인터페론 알파-2b의 효능. 숫자는 BVDV 역가 로그 값을 나타낸다.
또다른 실험 세팅에서, 처리 시간을 10일로 연장하고 바이러스 역가(균주 NY-1)를 매 계대배양 후 모니터하였다(매 3 내지 4일마다). 다시 β-D-2'-CH3-리보C 및 인터페론 알파-2b의 유사한 상승적 저해 효능에 대하여 관찰하였다(도 9). 특히, 세포 배양물을 200IU/mL의 Intron A와 배합된 8 μM의 β-D-2'-CH3-리보C로 처리한 결과 처리후 7일째 바이러스를 검출할 수 없었고, 추가로 적어도 27일간 계대배양한 후에도 재출현하지 않았다. 이 데이타는 지속적으로 감염된 세포에서 처리된 후 발생한 B-D-2'-CH3-리보C-내성 BVDV 변이체는 Intron A에 대한 감수성이라는 앞의 기술한 발견과 일치한다. 함께 이 데이타는 추가로 지속적으로 감염된 세포를 B-D-2'-CH3-리보C로 처리한 후 출현하는 내성 바이러스 군집은 Intron A으로 연속 처리하여 제거할 수 있다는 것을 제안한다.
본 발명으 특정 일례를 참고로 하여 기술되었다. 본 발명의 변형 및 수정은 본 분야의 기술자에게는 본 발명의 상기 기술한 상세한 설명으로부터 명확히 이해될 것이다.

Claims (92)

  1. RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 포함하는, 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료에 효능이 있는 약제학적 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 약물이 BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 405번째 Ser을 Thr으로, 또는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 HCV 게놈중 8443번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 282번째 Ser로부터 Thr로의 그 외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물인 약제학적 조성물.
  3. 인터페론과 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 포함하는, 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료에 효능이 있는 약제학적 조성물.
  4. 제 3항에 있어서, 인터페론이 Intron-A(인터페론 알파-2b), PEG-INTRON(페길화된 인터페론 알파-2b), Roferon-A(인터페론 알파-2a), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a), INFERGEN(인터페론알파콘-1), OMNIFERON(자연발생 인터페론), ALBUFERON, REBIF(인터페론 베타-1a), 오메가 인터페론, 오랄 인터페론 알파, 및 터페론 감마-1b로 구성된 그룹으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  5. 제 1항 내지 제 4항중 어느 한 항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드인 약제학적 조성물.
  6. 제 5항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보C인 약제학적 조성물.
  7. 제 5항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보C의 3'-아미노산 프로드럭인 약제학적 조성물.
  8. 제 7항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보C의 3'-L-발리닐 프로드럭인 약제학적 조성물.
  9. 제 1항 내지 제 4항중 어느 한 항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드인 약제학적 조성물.
  10. 제 9항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보A인 약제학적 조성물.
  11. 제 9항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보A의 3'-아미노산 프로드럭인 약제학적 조성물.
  12. 제 11항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보A의 3'-L-발리닐 프로드럭인 약제학적 조성물.
  13. 제 9항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린인 약제학적 조성물.
  14. 제 9항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-아미노산 프로드럭인 약제학적 조성물.
  15. 제 14항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-L-발리닐 프로드럭인 약제학적 조성물.
  16. 제 1항 내지 제 4항중 어느 한 항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 하기 식의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염인 약제학적 조성물:
    상기 식에서,
    R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
    R4는 수소, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, NO2, NH2, -NH(저급알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, 또는 -N(아실)2이고;
    염기는 퓨린 또는 피리미딘이다.
  17. 제 16항에 있어서, 염기가 아데닌, N6-알킬퓨린, N6-아실퓨린(여기에서, 아실은 C(O)(알킬, 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이다), N6-벤질퓨린, N6-할로퓨린, N6-비닐퓨린, N6-아세틸렌성 퓨린, N6-아실 퓨린, N6-하이드록시알킬 퓨린, N6-티오알킬 퓨린, N2-알킬퓨린, N2-알킬-6-티오퓨린, 티민, 사이토신, 5-플루오로사이토신, 5-메틸사이토신, 6-아자피리미딘(6-아자사이토신 포함), 2- 및/또는 4-머캅토피리미딘, 우라실, 5-할로우라실(5-플루오로우라실 포함), C5-알킬피리미딘, C5-벤질피리미딘, C5-할로피리미딘, C5-비닐피리미딘, C5-아세틸렌성 피리미딘, C5-아실 피리미딘, C5-하이드록시알킬 퓨린, C5-아미도피리미딘, C5-시아노피리미딘, C5-니트로피리미딘, C5-아미노피리미딘, N2-알킬퓨린, N2-알킬-6-티오퓨린, 5-아자사이티디닐, 5-아자우라실릴, 트리아졸로피리디닐, 이미다졸로피리디닐, 피롤로피리미디닐, 및 피라졸로피리미디닐로 구성된 그룹으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  18. 제 16항에 있어서, 염기가 하기 식의 화합물인 약제학적 조성물:
    여기에서,
    G 및 L은 각각 독립적으로 CH 또는 N이고;
    D는 N, CH, C-CN, C-NO2, C-C1-3알킬, C-NHCONH2, C-CONQ11Q11, C-CSNQ11Q11, CCOOQ11, C-C(=NH)NH2, C-하이드록시, C-C1-3알콕시, C-아미노, C-C1-4알킬-아미노, C-디(C1-4알킬)아미노, C-할로겐, C-(1,3-옥사졸-2-일), C-(1,3-티아졸-2-일), 또는 C-(이미다졸-2-일)이고; 여기에서, 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시, 및 C1-3알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 그룹으로 치환되고;
    E는 N 또는 CQ5이고;
    W는 O, S, 또는 NR이고;
    R은 H, OH, 알킬이고;
    Q6는 H, OH, SH, NH2, C1-4 알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, C3-6 사이클로알킬아미노, 할로겐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 또는 CF3이고;
    Q5는 H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C1-4알킬아미노, CF3, 할로겐, N, CN, NO2, NHCONH2, CONQ11Q11, CSNQ11Q11, COOQ11, C(=NH)NH2, 하이드록시, C1-3알콕시, 아미노, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, 할로겐, 1,3-옥사졸-2-일, 1,3-티아졸-2-일, 또는 이미다졸-2-일이고; 여기에서, 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시, 및 C1-3알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 그룹으로 치환되고;
    Q7 및 Q14 는 각각 독립적으로 H, CF3, OH, SH, OR, SR C1-4알킬, 아미노, C1-4 알킬아미노, C3-6사이클로알킬아미노, 및 디(C1-4알킬)아미노로부터 선택되고;
    Q11은 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이고;
    Q8는 H, 할로겐, CN, 카복시, C1-4알킬옥시카노닐, N3, 아미노, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, 하이드록시, C1-6알콕시, C1-6알킬티오, C1-6알킬설포닐, (C1-4알킬)0-2아미노메틸, NH2, CN, NO2, C1-3알킬, NHCONH2, CONQ11Q11, CSNQ11Q11, COOQ11, C(=NH)NH2, 1,3-옥사졸-2-일, 1,3-티아졸-2-일, 또는 이미다졸-2-일이고, 여기에서, 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시, 및 C1-3알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 그룹으로 치환된다.
  19. 제 16항에 있어서, 염기가 하기 식의 화합물인 약제학적 조성물:
    상기 식에서,
    T1 및 T2는 N, CH, 또는 C-Q16으로부터 독립적으로 선택되고;
    Q16, U 및 Y는 H, OH, 치환 또는 비치환된 알킬, 치환 또는 비치환된 알케닐, 치환 또는 비치환된 알키닐, 사이클로알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5, Br-비닐, -O-알킬, -O-알케닐, -O-알키닐, -O-아릴, -O-아르알킬, -O-아실, -O-사이클로알킬, NH2, NH-아릴, N-디알킬, NH-아실, N-아릴, N-아르알킬, NH-사이클로알킬, SH, S-알킬, S-아실, S-아릴, S-사이클로알킬, S-아르알킬, CN, N3, COOH, CONH2, CO2-알킬, CONH-알킬, CON-디알킬, OH, CF3, CH2OH, (CH2)mOH, (CH2)mNH2, (CH2)mCOOH, (CH2)mCN, (CH2)mNO2, (CH2)mCONH2, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, C3-6사이클로알킬아미노, C1-4알콕시, C1-4알콕시카보닐, C1-6알킬티오, C1-6알킬설포닐, (C1-4알킬)0-2아미노메틸, 또는 -NHC(=NH)NH2로부터 독립적으로 선택되고;
    R4 및 R5는 수소, 아실(저급 아실 포함), 또는 알킬(제한하는 것을 아니지만, 메틸, 에틸, 프로필 및 사이클로프로필을 포함)로부터 독립적으로 선택되고;
    m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    Z는 S, SO, SO2, C=O, 또는 NQ20이고;
    Q20은 H 또는 알킬이고;
    V1 및 V2는 CH 또는 N로부터 독립적으로 선택된다.
  20. 제 16항에 있어서, 염기가 하기 식의 화합물인 약제학적 조성물:
    상기 식에서,
    T3 및 T4는 N 또는 CQ22 으로부터 독립적으로 선택되고;
    Q22는 H, OH, 치환된 또는 비치환된 알킬, 치환된 또는 비치환된 알케닐, 치환된 또는 비치환된 알키닐, 사이클로알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5, Br-비닐, -O-알킬, -O-알케닐, -O-알키닐, -O-아릴, -O-아르알킬, -O-아실, -O-사이클로알킬, NH2, NH-알킬, N-디알킬, NH-아실, N-아릴, N-아르알킬, NH-사이클로알킬, SH, S-알킬, S-아실, S-아릴, S-사이클로알킬, S-아르알킬, CN, N3, COOH, CONH2, CO2-알킬, CONH-알킬, CON-디알킬, OH, CF3, CH2OH, (CH2)mOH, (CH2)mNH2, (CH2)mCOOH, (CH2)mCN, (CH2)mNO2, (CH2)mCONH2, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, C3-6사이클로알킬아미노, C1-4알콕시, C1-4알콕시카보닐, C1-6알킬티오, C1-6알킬설포닐, (C1-4알킬)0-2아미노메틸, 또는 -NHC(=NH)NH2로부터 독립적으로 선택되고;
    T5는 NH이고;
    R4 및 R5는 수소, 아실(저급 아실 포함), 또는 알킬(제한하는 것을 아니지만, 메틸, 에틸, 프로필 및 사이클로프로필을 포함)로부터 독립적으로 선택되고;
    m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    T6, T7, T8, T9, T10, T11, 및 T12는 독립적으로 N 또는 CH으로부터 독립적으로 선택되고;
    U2는 H, 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5이고;
    Y2는 0, S, NH, NR 또는 CQ24Q26이고(여기에서, R은 H, OH, 또는 알킬이다);
    Q24 및 Q26는 H, 알킬, 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5으로부터 독립적으로 선택된다.
  21. RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 배합된, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료에 효능이 있는 약제학적 조성물.
  22. 제 21항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 약제학적 조성물.
  23. 제 22항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 β-D-2'-CH3-리보C의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 약제학적 조성물.
  24. 제 23항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 β-D-2'-CH3-리보C의 3'-아미노산 프로드럭인 약제학적 조성물.
  25. 제 24항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 β-D-2'-CH3-리보C의 3'-L-발리닐 프로드럭인 약제학적 조성물.
  26. 제 21항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 약제학적 조성물.
  27. 제 26항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 β-D-2'-CH3-리보A의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 약제학적 조성물.
  28. 제 27항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 β-D-2'-CH3-리보A의 3'-아미노산 프로드럭인 약제학적 조성물.
  29. 제 28항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 β-D-2'-CH3-리보A의 3'-L-발리닐 프로드럭인 약제학적 조성물.
  30. 제 26항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 약제학적 조성물.
  31. 제 30항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-아미노산 프로드럭인 약제학적 조성물.
  32. 제 31항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-L-발리닐 프로드럭인 약제학적 조성물.
  33. RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 및/또는 교대 요법으로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하는 것을 포함하는, 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법.
  34. 제 33항에 있어서, 약물이 BVDV의 RNA 폴리머라제의 1214번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 405번째 Ser을 Thr으로, 또는 HCV의 RNA 폴리머라제 부위의 HCV 게놈중 8443번째 뉴클레오티드(G로부터 C)또는 282번째 Ser로부터 Thr로의 그 외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물인 방법.
  35. 인터페론과 병용 및/또는 교대로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염을 투여하는 것을 포함하는, 숙주에서 플라비비리다에 감염을 치료하는 방법.
  36. 제 35항에 있어서, 인터페론이 Intron-A(인터페론 알파-2b), PEG-INTRON(페길화된 인터페론 알파-2b), Roferon-A(인터페론 알파-2a), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a), INFERGEN(인터페론알파콘-1), OMNIFERON(자연발생 인터페론), ALBUFERON, REBIF(인터페론 베타-1a), 오메가 인터페론, 오랄 인터페론 알파, 및 터페론 감마-1b로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
  37. 제 33항 내지 제 36항중 어느 한 항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드인 방법.
  38. 제 37항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보C인 방법.
  39. 제 37항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보C의 3'-아미노산 프로드럭인 방법.
  40. 제 39항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보C의 3'-L-발리닐 프로드럭인 방법.
  41. 제 33항 내지 제 36항중 어느 한 항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드인 방법.
  42. 제 41항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보A인 방법.
  43. 제 41항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보A의 3'-아미노산 프로드럭인 방법.
  44. 제 43항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보A의 3'-L-발리닐 프로드럭인 방법.
  45. 제 41항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린인 방법.
  46. 제 41항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-아미노산 프로드럭인 방법.
  47. 제 46항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-L-발리닐 프로드럭인 방법.
  48. 제 33항 내지 제 36항중 어느 한 항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 하기 식의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염인 방법:
    상기 식에서,
    R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
    R4는 수소, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, NO2, NH2, -NH(저급알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, 또는 -N(아실)2이고;
    염기는 퓨린 또는 피리미딘이다.
  49. 제 48항에 있어서, 염기가 아데닌, N6-알킬퓨린, N6-아실퓨린(여기에서, 아실은 C(O)(알킬, 아릴, 알킬아릴, 또는 아릴알킬이다), N6-벤질퓨린, N6-할로퓨린, N6-비닐퓨린, N6-아세틸렌성 퓨린, N6-아실 퓨린, N6-하이드록시알킬 퓨린, N6-티오알킬 퓨린, N2-알킬퓨린, N2-알킬-6-티오퓨린, 티민, 사이토신, 5-플루오로사이토신, 5-메틸사이토신, 6-아자피리미딘(6-아자사이토신 포함), 2- 및/또는 4-머캅토피리미딘, 우라실, 5-할로우라실(5-플루오로우라실 포함), C5-알킬피리미딘, C5-벤질피리미딘, C5-할로피리미딘, C5-비닐피리미딘, C5-아세틸렌성 피리미딘, C5-아실 피리미딘, C5-하이드록시알킬 퓨린, C5-아미도피리미딘, C5-시아노피리미딘, C5-니트로피리미딘, C5-아미노피리미딘, N2-알킬퓨린, N2-알킬-6-티오퓨린, 5-아자사이티디닐, 5-아자우라실릴, 트리아졸로피리디닐, 이미다졸로피리디닐, 피롤로피리미디닐, 및 피라졸로피리미디닐로 구성된 그룹으로부터 선택되는 방법.
  50. 제 49항에 있어서, 염기가 하기 식의 화합물인 방법:
    여기에서,
    G 및 L은 각각 독립적으로 CH 또는 N이고;
    D는 N, CH, C-CN, C-NO2, C-C1-3알킬, C-NHCONH2, C-CONQ11Q11, C-CSNQ11Q11, CCOOQ11, C-C(=NH)NH2, C-하이드록시, C-C1-3알콕시, C-아미노, C-C1-4알킬-아미노, C-디(C1-4알킬)아미노, C-할로겐, C-(1,3-옥사졸-2-일), C-(1,3-티아졸-2-일), 또는 C-(이미다졸-2-일)이고; 여기에서, 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시, 및 C1-3알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 그룹으로 치환되고;
    E는 N 또는 CQ5이고;
    W는 O, S, 또는 NR이고;
    R은 H, OH, 알킬이고;
    Q6는 H, OH, SH, NH2, C1-4 알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, C3-6 사이클로알킬아미노, 할로겐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 또는 CF3이고;
    Q5는 H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C1-4알킬아미노, CF3, 할로겐, N, CN, NO2, NHCONH2, CONQ11Q11, CSNQ11Q11, COOQ11, C(=NH)NH2, 하이드록시, C1-3알콕시, 아미노, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, 할로겐, 1,3-옥사졸-2-일, 1,3-티아졸-2-일, 또는 이미다졸-2-일이고; 여기에서, 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시, 및 C1-3알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 그룹으로 치환되고;
    Q7 및 Q14 는 각각 독립적으로 H, CF3, OH, SH, OR, SR C1-4알킬, 아미노, C1-4 알킬아미노, C3-6사이클로알킬아미노, 및 디(C1-4알킬)아미노로부터 선택되고;
    Q11은 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이고;
    Q8는 H, 할로겐, CN, 카복시, C1-4알킬옥시카노닐, N3, 아미노, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, 하이드록시, C1-6알콕시, C1-6알킬티오, C1-6알킬설포닐, (C1-4알킬)0-2아미노메틸, NH2, CN, NO2, C1-3알킬, NHCONH2, CONQ11Q11, CSNQ11Q11, COOQ11, C(=NH)NH2, 1,3-옥사졸-2-일, 1,3-티아졸-2-일, 또는 이미다졸-2-일이고, 여기에서, 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시, 및 C1-3알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 그룹으로 치환된다.
  51. 제 49항에 있어서, 염기가 하기 식의 화합물인 방법:
    상기 식에서,
    T1 및 T2는 N, CH, 또는 C-Q16으로부터 독립적으로 선택되고;
    Q16, U 및 Y는 H, OH, 치환 또는 비치환된 알킬, 치환 또는 비치환된 알케닐, 치환 또는 비치환된 알키닐, 사이클로알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5, Br-비닐, -O-알킬, -O-알케닐, -O-알키닐, -O-아릴, -O-아르알킬, -O-아실, -O-사이클로알킬, NH2, NH-아릴, N-디알킬, NH-아실, N-아릴, N-아르알킬, NH-사이클로알킬, SH, S-알킬, S-아실, S-아릴, S-사이클로알킬, S-아르알킬, CN, N3, COOH, CONH2, CO2-알킬, CONH-알킬, CON-디알킬, OH, CF3, CH2OH, (CH2)mOH, (CH2)mNH2, (CH2)mCOOH, (CH2)mCN, (CH2)mNO2, (CH2)mCONH2, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, C3-6사이클로알킬아미노, C1-4알콕시, C1-4알콕시카보닐, C1-6알킬티오, C1-6알킬설포닐, (C1-4알킬)0-2아미노메틸, 또는 -NHC(=NH)NH2로부터 독립적으로 선택되고;
    R4 및 R5는 수소, 아실(저급 아실 포함), 또는 알킬(제한하는 것을 아니지만, 메틸, 에틸, 프로필 및 사이클로프로필을 포함)로부터 독립적으로 선택되고;
    m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    Z는 S, SO, SO2, C=O, 또는 NQ20이고;
    Q20은 H 또는 알킬이고;
    V1 및 V2는 CH 또는 N로부터 독립적으로 선택된다.
  52. 제 49항에 있어서, 염기가 하기 식의 화합물인 방법:
    상기 식에서,
    T3 및 T4는 N 또는 CQ22 으로부터 독립적으로 선택되고;
    Q22는 H, OH, 치환된 또는 비치환된 알킬, 치환된 또는 비치환된 알케닐, 치환된 또는 비치환된 알키닐, 사이클로알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5, Br-비닐, -O-알킬, -O-알케닐, -O-알키닐, -O-아릴, -O-아르알킬, -O-아실, -O-사이클로알킬, NH2, NH-알킬, N-디알킬, NH-아실, N-아릴, N-아르알킬, NH-사이클로알킬, SH, S-알킬, S-아실, S-아릴, S-사이클로알킬, S-아르알킬, CN, N3, COOH, CONH2, CO2-알킬, CONH-알킬, CON-디알킬, OH, CF3, CH2OH, (CH2)mOH, (CH2)mNH2, (CH2)mCOOH, (CH2)mCN, (CH2)mNO2, (CH2)mCONH2, C1-4알킬아미노, 디(C1-4알킬)아미노, C3-6사이클로알킬아미노, C1-4알콕시, C1-4알콕시카보닐, C1-6알킬티오, C1-6알킬설포닐, (C1-4알킬)0-2아미노메틸, 또는 -NHC(=NH)NH2로부터 독립적으로 선택되고;
    T5는 NH이고;
    R4 및 R5는 수소, 아실(저급 아실 포함), 또는 알킬(제한하는 것을 아니지만, 메틸, 에틸, 프로필 및 사이클로프로필을 포함)로부터 독립적으로 선택되고;
    m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    T6, T7, T8, T9, T10, T11, 및 T12는 독립적으로 N 또는 CH으로부터 독립적으로 선택되고;
    U2는 H, 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5이고;
    Y2는 0, S, NH, NR 또는 CQ24Q26이고(여기에서, R은 H, OH, 또는 알킬이다);
    Q24 및 Q26는 H, 알킬, 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, CO-알킬, CO-아릴, CO-알콕시알킬, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, OR4, NR4R5 또는 SR5으로부터 독립적으로 선택된다.
  53. 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 인터페론을 임의로 바이러스 부하(load)를 실질적으로 제거하는 방식으로 투여하는 것을 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드에 내성인 플라비비리다에 바이러스로 감염된 환자를 치료하는 방법.
  54. RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 다른 아미노산으로 바꾸는 뉴클레오티드 돌연변이 위치외의 다른 곳에서 플라비비리다에에 돌연변이를 직접 또는 간접적으로 유도하는 하나 이상의 약물, 및/또는 상기 돌연변이와 관련되는 하나 이상의 약물과 병용 및/또는 교대 요법으로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
  55. 제 54항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 방법.
  56. 제 55항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이β-D-2'-CH3-리보C의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 방법.
  57. 제 56항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이β-D-2'-CH3-리보C의 3'-아미노산 프로드럭인 방법.
  58. 제 57항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이β-D-2'-CH3-리보C의 3'-L-발리닐 프로드럭인 방법.
  59. 제 54항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 방법.
  60. 제 59항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이β-D-2'-CH3-리보A의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 방법.
  61. 제 60항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이β-D-2'-CH3-리보A의 3'-아미노산 프로드럭인 방법.
  62. 제 61항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이β-D-2'-CH3-리보A의 3'-L-발리닐 프로드럭인 방법.
  63. 제 59항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭인 방법.
  64. 제 63항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-아미노산 프로드럭인 방법.
  65. 제 64항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드의 2', 3' 및/또는 5'-프로드럭이β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-L-발리닐 프로드럭인 방법.
  66. (a)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 프로드럭을 환자에게 투여하고;
    (b)야생형으로부터 뮤턴트 바이러스로의 혈청전환(seroconversion)에 대하여 시험하기 위하여 환자의 혈액을 분석하고;
    (c)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 인터페론를 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
  67. (a)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 프로드럭을 투여하고;
    (b)환자로부터 바이러스 샘플을 수득하고;
    (c)바이러스의 복제 적합성을 결정하고;
    (d)샘플중 바이러스의 복제 적합성이 야생형 바이러스의 복제 적합성보다 작은지를 결정하고(이는 β-D-2'-CH3-리보C에 대하여 내성인지를 나타낸다);
    (e)β-D-2'-CH3-리보C에 대하여 내성인 환자에게 유효량의 인터페론을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
  68. (a)임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 유효량의 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 프로드럭을 투여하고;
    (b)환자로부터 바이러스 배양 샘플을 수득하고;
    (c)샘플을 배양하고 샘플과 야생형 바이러스 사이의 플라크 성장을 비교하고;
    (d)샘플의 플라크 성장이 야생형의 플라크 성장보다 작은지를 측정하고(이는 β-D-2'-CH3-리보C에 대하여 내성인지를 나타낸다);
    (e)β-D-2'-CH3-리보C에 대하여 내성인 환자에게 유효량의 인터페론을 투여하는 것을 포함하는, 플라비비리다에로 감염된 환자를 치료하는 방법.
  69. 제 66항 내지 제 68항중 어느 한 항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 2'-분지형 피리미딘 뉴클레오시드인 방법.
  70. 제 69항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보C인 방법.
  71. 제 69항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보C의 3'-아미노산 프로드럭인 방법.
  72. 제 71항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보C의 3'-L-발리닐 프로드럭인 방법.
  73. 제 66항 내지 제 68항중 어느 한 항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 2'-분지형 퓨린 뉴클레오시드인 방법.
  74. 제 73항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보A인 방법.
  75. 제 73항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보A의 3'-아미노산 프로드럭인 방법.
  76. 제 75항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보A의 3'-L-발리닐 프로드럭인 방법.
  77. 제 73항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린인 방법.
  78. 제 73항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-아미노산 프로드럭인 방법.
  79. 제 78항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 β-D-2'-CH3-리보-6-N-메틸아미노퓨린의 3'-L-발리닐 프로드럭인 방법.
  80. 제 66항 내지 제 68항중 어느 한 항에 있어서, 2'-분지형 뉴클레오시드가 하기 식의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염인 방법:
    상기 식에서,
    R1, R2, 및 R3은 독립적으로 H, 포스페이트(모노-, 디-또는 트리포스페이트 및 안정화된 포스페이트 프로드럭 포함); 아실(저급 아실 포함); 알킬(저급 알킬 포함); 설포네이트 에스테르(메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아릴알킬 설포닐 포함); 벤질(여기에서, 페닐 그룹은 본 명세서에서 주어진 아릴의 정의에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된다); 리피드(포스포리피드 포함); 아미노산; 카보하이드레이트; 펩티드; 콜레스테롤; 또는 생체내 투여되었을 때 R1, R2, 또는 R3이 독립적으로 H 또는 포스페이트인 화합물을 제공하는 약제학적으로 허용가능한 이탈 그룹이고;
    R4는 수소, 하이드록시, 알킬(저급 알킬 포함), 아지도, 시아노, 알케닐, 알키닐, Br-비닐, -C(O)O(알킬), -C(O)O(저급 알킬), -O(아실), -O(저급 아실), -O(알킬), -O(저급 알킬), -O(알케닐), 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, NO2, NH2, -NH(저급알킬), -NH(아실), -N(저급 알킬)2, 또는 -N(아실)2이고;
    염기는 퓨린 또는 피리미딘이다.
  81. (a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플을 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 Ser을 코딩하는 코돈에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
    (b)프로브과 서열이 혼성화하도록 하고;
    (c)서열과 프로브의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드에 내성인 플라비비리다에를 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 분석하는 방법.
  82. (a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플을 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
    (b)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
    (c)BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘과 프로브의 혼성화를 검출하는 것을 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 및/또는 염에 내성인 플라비비리다에를 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 분석하는 방법.
  83. (a)플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 코딩하는 코돈에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드와 플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플;
    (b)프로브와 서열의 혼성화를 검출하기 위한 수단;
    (c)임의로 사용 설명서를 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드에 내성인 플라비비리다에를 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 분석하기 위한 키트.
  84. (a)BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드 프로브와 플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 샘플;
    (b)프로브와 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘의 혼성화를 검출하기 위한 수단;
    (c)임의로 사용 설명서를 포함하는, 2'-분지형 뉴클레오시드에 내성인 플라비비리다에를 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 분석하기 위한 키트.
  85. (a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 수득하고;
    (b)샘플을 플라비비리다에의 RNA 폴리머라제 부위중 영역 B의 고도의 보존공통서열, XRXSGXXXT에서 세린을 코딩하는 코돈에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
    (c)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
    (d)서열과 프로브의 혼성화를 검출하여 β-D-2'-CH3-리보C에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 결정하는 것을 포함하는, 환자에서 2'-분지형 뉴클레오시드에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 진단하는 방법.
  86. (a)플라비비리다에 핵산 서열을 포함하는 것으로 추정되는 샘플을 수득하고;
    (b)샘플을 BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘에 상보적인 서열을 갖는 검출가능한 올리고뉴클레오티드 프로브와 접촉시키고;
    (c)프로브와 서열이 혼성화하도록 하고;
    (d)BVDV의 RNA 폴리머라제 부위의 1214번째 뉴클레오티드인 시티딘 또는 HCV의 8443번째 뉴클레오티드인 시티딘과 프로브의 혼성화를 검출하여 β-D-2'-CH3-리보C에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 결정하는 것을 포함하는, 환자에서 2'-분지형 뉴클레오시드에 대하여 내성인 플라비비리다에의 존재를 진단하는 방법.
  87. 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료를 위한 제 1항 내지 제 32항중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 용도.
  88. 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 2'-분지형 뉴클레오시드에 대하여 내성인 플라비비리다에로 감염된 숙주의 치료를 위한 인터페론의 용도.
  89. 제 86항에 있어서, 인터페론이 Intron-A(인터페론 알파-2b), PEG-INTRON(페길화된 인터페론 알파-2b), Roferon-A(인터페론 알파-2a), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a), INFERGEN(인터페론알파콘-1), OMNIFERON(자연발생 인터페론), ALBUFERON, REBIF(인터페론 베타-1a), 오메가 인터페론, 오랄 인터페론 알파, 및 터페론 감마-1b로 구성된 그룹으로부터 선택되는 용도.
  90. 숙주에서 플라비비리다에 감염 치료를 위한 약제의 제조에서 제 1항 내지 제 32항중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 용도.
  91. 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중 2'-분지형 뉴클레오시드에 대하여 내성인 플라비비리다에로 감염된 숙주의 치료용 약제의 제조에서 인터페론의 용도.
  92. 제 91항에 있어서, 인터페론이 Intron-A(인터페론 알파-2b), PEG-INTRON(페길화된 인터페론 알파-2b), Roferon-A(인터페론 알파-2a), PEGASYS(페길화된 인터페론 알파-2a), INFERGEN(인터페론알파콘-1), OMNIFERON(자연발생 인터페론), ALBUFERON, REBIF(인터페론 베타-1a), 오메가 인터페론, 오랄 인터페론 알파, 및 터페론 감마-1b로 구성된 그룹으로부터 선택되는 용도.
KR1020057008621A 2002-11-15 2003-11-17 2'-분지형 뉴클레오시드 및 플라비비리다에 돌연변이 KR20050088079A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US42667502P 2002-11-15 2002-11-15
US60/426,675 2002-11-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20050088079A true KR20050088079A (ko) 2005-09-01

Family

ID=32326395

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020057008621A KR20050088079A (ko) 2002-11-15 2003-11-17 2'-분지형 뉴클레오시드 및 플라비비리다에 돌연변이

Country Status (21)

Country Link
US (4) US7824851B2 (ko)
EP (1) EP1576138B1 (ko)
JP (4) JP2006519753A (ko)
KR (1) KR20050088079A (ko)
CN (1) CN1849142A (ko)
AU (1) AU2003298658A1 (ko)
BR (1) BR0316363A (ko)
CA (1) CA2506129C (ko)
CY (1) CY1118931T1 (ko)
DK (1) DK1576138T3 (ko)
ES (1) ES2624353T3 (ko)
HU (1) HUE033832T2 (ko)
LT (1) LT1576138T (ko)
MX (1) MXPA05005192A (ko)
NO (1) NO20052920L (ko)
PL (1) PL377342A1 (ko)
PT (1) PT1576138T (ko)
RU (1) RU2005118421A (ko)
SI (1) SI1576138T1 (ko)
WO (1) WO2004046331A2 (ko)
ZA (1) ZA200503834B (ko)

Families Citing this family (138)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
KR20030036189A (ko) 2000-05-26 2003-05-09 이데닉스(케이만)리미티드 플라비바이러스 및 페스티바이러스의 치료방법 및 조성물
AU2003209045B2 (en) 2002-02-13 2006-12-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of inhibiting orthopoxvirus replication with nucleoside compounds
US7608600B2 (en) 2002-06-28 2009-10-27 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Modified 2′ and 3′-nucleoside prodrugs for treating Flaviviridae infections
CN101172993A (zh) * 2002-06-28 2008-05-07 埃迪尼克斯(开曼)有限公司 用于治疗黄病毒感染的2′－c－甲基－3′－o－l－缬氨酸酯核糖呋喃基胞苷
AU2003248748A1 (en) * 2002-06-28 2004-01-19 Idenix (Cayman) Limited 2'-c-methyl-3'-o-l-valine ester ribofuranosyl cytidine for treatment of flaviviridae infections
AU2003256619A1 (en) 2002-07-24 2004-02-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolopyrimidine thionucleoside analogs as antivirals
DE10238722A1 (de) 2002-08-23 2004-03-11 Bayer Ag Selektive Phosphodiesterase 9A-Inhibitoren als Arzneimittel zur Verbesserung kognitiver Prozesse
KR20050088079A (ko) 2002-11-15 2005-09-01 이데닉스 (케이만) 리미티드 2'-분지형 뉴클레오시드 및 플라비비리다에 돌연변이
EP2319853B1 (en) * 2002-12-12 2014-03-12 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Process for the production of 2'-branched nucleosides
RU2005123395A (ru) * 2002-12-23 2006-01-27 Айденикс (Кайман) Лимитед (Ky) Способ получения 3-нуклеозидных пролекарств
US7429572B2 (en) 2003-05-30 2008-09-30 Pharmasset, Inc. Modified fluorinated nucleoside analogues
US20050075309A1 (en) 2003-07-25 2005-04-07 Richard Storer Purine nucleoside analogues for treating Flaviviridae including hepatitis C
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
AU2005254057B2 (en) 2004-06-15 2011-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
CN101023094B (zh) * 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
WO2006031725A2 (en) 2004-09-14 2006-03-23 Pharmasset, Inc. Preparation of 2'­fluoro-2'- alkyl- substituted or other optionally substituted ribofuranosyl pyrimidines and purines and their derivatives
AU2005289517A1 (en) * 2004-09-24 2006-04-06 Centre National De La Recherche Scientifique Methods and compositions for treating flaviviruses, pestiviruses and hepacivirus
US7524831B2 (en) 2005-03-02 2009-04-28 Schering Corporation Treatments for Flaviviridae virus infection
EP1910367A2 (en) * 2005-05-20 2008-04-16 Alantos Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine or triazine fused bicyclic metalloprotease inhibitors
US20070155738A1 (en) * 2005-05-20 2007-07-05 Alantos Pharmaceuticals, Inc. Heterobicyclic metalloprotease inhibitors
NZ568909A (en) 2005-12-09 2011-10-28 Hoffmann La Roche Antiviral 4-fluoro-4-methyl nucleoside prodrugs
US7781576B2 (en) * 2005-12-23 2010-08-24 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Process for preparing a synthetic intermediate for preparation of branched nucleosides
CN101460488A (zh) 2006-04-04 2009-06-17 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于hcv治疗的3’,5’-二-o-酰化核苷
ES2530716T3 (es) * 2006-04-21 2015-03-04 Intervet Int Bv Especies de pestivirus
WO2008024763A2 (en) * 2006-08-25 2008-02-28 Wyeth Identification and characterization of hcv replicon variants with reduced susceptibility to hcv-796, and methods related thereto
SI2084174T1 (sl) 2006-10-10 2013-10-30 Gilead Pharmasset Llc Priprava nukleozidov ribofuranozil pririmidinov
JP2010505902A (ja) 2006-10-10 2010-02-25 メディヴィル・アクチエボラーグ Ｈｃｖヌクレオシド阻害剤
KR101165936B1 (ko) 2006-11-09 2012-07-19 에프. 호프만-라 로슈 아게 티아졸 및 옥사졸-치환된 아릴아마이드
US20080261913A1 (en) 2006-12-28 2008-10-23 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of liver disorders
EP2125819B1 (en) 2007-03-21 2014-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Fused heterocyclic compounds useful for the treatment of proliferative, allergic, autoimmune or inflammatory diseases
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
PE20091211A1 (es) 2007-11-30 2009-09-14 Boehringer Ingelheim Int Derivados de pirazolopirimidina como moduladores de pde9a
KR101405746B1 (ko) 2007-12-17 2014-06-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 트리아졸 치환된 아릴아미드 유도체 및 ｐ２ｘ３ 및/또는 ｐ２ｘ２／３ 퓨린성 수용체 길항제로서의 용도
CA2708228C (en) 2007-12-17 2016-06-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Tetrazole-substituted arylamide derivatives and their use as p2x3 and/or p2x2/3 purinergic receptor antagonists
SI2234976T1 (sl) 2007-12-17 2013-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Novi s pirazolom substituirani arilamidi
WO2009077365A1 (en) 2007-12-17 2009-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel imidazole-substituted arylamides
UA105362C2 (en) 2008-04-02 2014-05-12 Бьорингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх 1-heterocyclyl-1, 5-dihydro-pyrazolo [3, 4-d] pyrimidin-4-one derivatives and their use as pde9a modulators
PT2268642E (pt) 2008-04-23 2015-06-02 Gilead Sciences Inc Análogos de carba-nulceósidos 1¿-substituídos para tratamento antiviral
US8173621B2 (en) * 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
EP2313102A2 (en) 2008-07-03 2011-04-27 Biota Scientific Management Bycyclic nucleosides and nucleotides as therapeutic agents
PE20110383A1 (es) 2008-09-08 2011-07-15 Boehringer Ingelheim Int Pirazolopirimidinonas como inhibidores de la fosfodiesterasa 9a (pde9a)
US9052321B2 (en) * 2008-10-03 2015-06-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Flavivirus-based system for production of hepatitis C virus (HCV)
TWI491610B (zh) 2008-10-09 2015-07-11 必治妥美雅史谷比公司 作為激酶抑制劑之咪唑并嗒腈
AR074830A1 (es) 2008-12-19 2011-02-16 Cephalon Inc Pirrolotriazinas como inhibidores de alk y jak2
US8551973B2 (en) 2008-12-23 2013-10-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
EP2376088B1 (en) 2008-12-23 2017-02-22 Gilead Pharmasset LLC 6-O-Substituted-2-amino-purine nucleoside phosphoramidates
EA019295B1 (ru) 2008-12-23 2014-02-28 Джилид Фармассет, Ллс. Соединения пуриновых нуклеозидов и способ их получения
ES2628842T3 (es) 2009-02-10 2017-08-04 Gilead Sciences, Inc. Método para la preparación de tieno[3,4-d]pirimidin-7-il ribósidos
BRPI1009324A2 (pt) * 2009-03-20 2015-11-24 Alios Biopharma Inc compostos e/ou farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, composição farmacêutica e respectivos usos
CA2757231A1 (en) 2009-03-31 2010-10-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh 1-heterocyclyl-1,5-dihydro-pyrazolo [3,4-d] pyrimidin-4-one derivatives and their use as pde9a modulators
TWI576352B (zh) 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
US8476457B2 (en) 2009-06-22 2013-07-02 Roche Palo Alto Llc Indole, indazole and benzimidazole arylamides as P2X3 and P2X2/3 antagonists
JP5465782B2 (ja) 2009-06-22 2014-04-09 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 新規オキサゾロン及びピロリジノン置換アリールアミド
CA2764956A1 (en) 2009-06-22 2010-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel biphenyl and phenyl-pyridine amides
WO2011035250A1 (en) 2009-09-21 2011-03-24 Gilead Sciences, Inc. Processes and intermediates for the preparation of 1'-substituted carba-nucleoside analogs
US8455451B2 (en) 2009-09-21 2013-06-04 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
KR101818779B1 (ko) 2009-09-21 2018-01-15 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 항바이러스 치료용 ２'―플루오로 치환된 카바-뉴클레오사이드 유사체
US7973013B2 (en) 2009-09-21 2011-07-05 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
MX2012004990A (es) 2009-10-30 2012-06-12 Janssen Pharmaceutica Nv Deribados de imidazo [1,2-b] pirimideazina y su uso como inhibidores de la enzima fosfodiesterasa 10.
BR112012011221A2 (pt) 2009-11-14 2016-04-05 Hoffmann La Roche biomarcadores para prever resposta rápida ao tratamento de hcv
RU2012127201A (ru) 2009-12-02 2014-01-20 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Биомаркеры для прогнозирования устойчивого ответа на лечение вируса гепатита с
AR080754A1 (es) 2010-03-09 2012-05-09 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de imidazo (1,2-a) pirazina y su uso como inhibidores de pde10
JP2013527145A (ja) 2010-03-31 2013-06-27 ギリード・ファーマセット・エルエルシー リン含有活性化剤の立体選択的合成
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
TW201201815A (en) 2010-05-28 2012-01-16 Gilead Sciences Inc 1'-substituted-carba-nucleoside prodrugs for antiviral treatment
KR101995598B1 (ko) 2010-07-19 2019-07-02 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 부분입체 이성질성으로 순수한 포스포라미데이트 전구약물의 제조 방법
PL2595980T3 (pl) 2010-07-22 2015-03-31 Gilead Sciences Inc Sposoby i związki do leczenia infekcji wirusowych Paramyxoviridae
PL2603511T3 (pl) 2010-08-12 2017-08-31 Boehringer Ingelheim Int Pochodne 6-cykloalkilo-1,5-dihydropirazolo[3,4-d]pirymidyn-4-onu i ich zastosowanie jako inhibitorów PDE9A
PE20171624A1 (es) 2010-09-20 2017-11-02 Gilead Sciences Inc Analogos de carba-nucleosidos sustituidos con 2'-fluoro para tratamiento antiviral
BR112013005872A2 (pt) 2010-09-22 2019-09-24 Alios Biopharma Inc compostos, composição farmacêutica e respectivos usos
AR084044A1 (es) 2010-11-30 2013-04-17 Pharmasset Inc Compuestos 2’-espiro-nucleosidos
US8809345B2 (en) 2011-02-15 2014-08-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh 6-cycloalkyl-pyrazolopyrimidinones for the treatment of CNS disorders
US20120238837A1 (en) * 2011-03-16 2012-09-20 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware System, devices, and methods for real-time monitoring of cerebrospinal fluid for markers of progressive conditions
JP2014514295A (ja) 2011-03-31 2014-06-19 アイディニックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ウイルス感染の治療のための化合物および薬学的組成物
WO2012142523A2 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Gilead Sciences, Inc. 1'-substituted pyrimidine n-nucleoside analogs for antiviral treatment
WO2013000924A1 (en) 2011-06-27 2013-01-03 Janssen Pharmaceutica Nv 1-ARYL-4-METHYL-[1,2,4]TRIAZOLO[4,3-a]QUINOXALINE DERIVATIVES
EP2755983B1 (en) 2011-09-12 2017-03-15 Idenix Pharmaceuticals LLC. Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
JP6073897B2 (ja) 2011-09-16 2017-02-01 ギリアド ファーマセット エルエルシー Ｈｃｖを処置するための方法
EP2768838A1 (en) 2011-10-14 2014-08-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3',5'-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
AU2012358804B2 (en) 2011-12-22 2018-04-19 Alios Biopharma, Inc. Substituted phosphorothioate nucleotide analogs
US8916538B2 (en) 2012-03-21 2014-12-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of a thiophosphoramidate nucleotide prodrug
EP2827876A4 (en) 2012-03-22 2015-10-28 Alios Biopharma Inc PHARMACEUTICAL COMBINATIONS WITH A THIONUCLEOTIDE ANALOG
SG11201407674TA (en) 2012-05-22 2014-12-30 Idenix Pharmaceuticals Inc D-amino acid compounds for liver disease
WO2013177188A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
EP2852605B1 (en) 2012-05-22 2018-01-31 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection
PL2861611T3 (pl) 2012-05-25 2017-08-31 Janssen Sciences Ireland Uc Nukleozydy uracylowe spirooksetanu
US9669035B2 (en) 2012-06-26 2017-06-06 Janssen Pharmaceutica Nv Combinations comprising PDE 2 inhibitors such as 1-aryl-4-methyl-[1,2,4]triazolo-[4,3-A]]quinoxaline compounds and PDE 10 inhibitors for use in the treatment of neurological of metabolic disorders
RU2667058C2 (ru) 2012-07-09 2018-09-14 Янссен Фармацевтика Нв Ингибиторы фермента фосфодиэстеразы 10
WO2014052638A1 (en) 2012-09-27 2014-04-03 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Esters and malonates of sate prodrugs
TR201809048T4 (tr) 2012-10-08 2018-07-23 Centre Nat Rech Scient Hcv enfeksiyonu için 2'-kloro nükleosit analogları.
US10723754B2 (en) 2012-10-22 2020-07-28 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-bridged nucleosides for HCV infection
WO2014099941A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
ES2771458T3 (es) 2013-01-31 2020-07-06 Gilead Pharmasset Llc Formulación de combinación de dos compuestos antivirales
US10052389B2 (en) * 2013-02-13 2018-08-21 Agency For Science, Technology And Research Polymeric system for release of an active agent
EP2970358B1 (en) 2013-03-04 2021-06-30 Idenix Pharmaceuticals LLC 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
US9339541B2 (en) 2013-03-04 2016-05-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiophosphate nucleosides for the treatment of HCV
EP2970357A1 (en) 2013-03-13 2016-01-20 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Amino acid phosphoramidate pronucleotides of 2'-cyano, azido and amino nucleosides for the treatment of hcv
RU2534613C2 (ru) 2013-03-22 2014-11-27 Александр Васильевич Иващенко Алкил 2-{ [(2r,3s,5r)-5-(4-амино-2-оксо-2н-пиримидин-1-ил)- -гидрокси-тетрагидро-фуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино} -пропионаты, нуклеозидные ингибиторы рнк-полимеразы hcv ns5b, способы их получения и применения
US9187515B2 (en) 2013-04-01 2015-11-17 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
WO2014197578A1 (en) 2013-06-05 2014-12-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv
US20150037282A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
PL3650014T3 (pl) 2013-08-27 2022-01-31 Gilead Pharmasset Llc Preparat złożony dwóch związków przeciwwirusowych
EP3105238A4 (en) 2014-02-13 2017-11-08 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and their uses
US20170135990A1 (en) 2014-03-05 2017-05-18 Idenix Pharmaceuticals Llc Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection
WO2015134560A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof
EP3131914B1 (en) 2014-04-16 2023-05-10 Idenix Pharmaceuticals LLC 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
EP3164136A4 (en) 2014-07-02 2018-04-04 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and uses therof
TWI687432B (zh) 2014-10-29 2020-03-11 美商基利科學股份有限公司 絲狀病毒科病毒感染之治療
IL295418B2 (en) 2015-03-06 2023-10-01 Atea Pharmaceuticals Inc Cell-D-2'-deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-cell-C-modified-2-different-N6-purine modified nucleotides for the treatment of hepatitis C virus
JP2018523665A (ja) 2015-08-06 2018-08-23 キメリックス インコーポレイテッド 抗ウイルス剤として有用なピロロピリミジンヌクレオシドおよびその類縁体
WO2017040766A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Abbvie Inc. Anti-viral tetrahydrofurane derivatives
ES2918585T3 (es) 2015-09-16 2022-07-19 Gilead Sciences Inc Métodos para el tratamiento de infecciones por el virus Arenaviridae
WO2017106710A1 (en) * 2015-12-17 2017-06-22 Emory University Nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
PE20190175A1 (es) 2016-03-28 2019-02-01 Incyte Corp Compuestos de pirrolotriazina como inhibidores de tam
WO2017197046A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. C3-carbon linked glutarimide degronimers for target protein degradation
EP3454856A4 (en) 2016-05-10 2019-12-25 C4 Therapeutics, Inc. HETEROCYCLIC DEGRONIMERS FOR TARGET PROTEIN REDUCTION
WO2017197036A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. Spirocyclic degronimers for target protein degradation
US10202412B2 (en) 2016-07-08 2019-02-12 Atea Pharmaceuticals, Inc. β-D-2′-deoxy-2′-substituted-4′-substituted-2-substituted-N6-substituted-6-aminopurinenucleotides for the treatment of paramyxovirus and orthomyxovirus infections
LU100724B1 (en) 2016-07-14 2018-07-31 Atea Pharmaceuticals Inc Beta-d-2'-deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-beta-c-substituted-4'-fluoro-n6-substituted-6-amino-2-substituted purine nucleotides for the treatment of hepatitis c virus infection
PT3512863T (pt) 2016-09-07 2022-03-09 Atea Pharmaceuticals Inc Nucleótidos de purina 2'-substituídos-n6-substituídos para tratamento de vírus de rna
KR102335193B1 (ko) 2017-02-01 2021-12-03 아테아 파마슈티컬즈, 인크. C형 간염 바이러스를 치료하기 위한 뉴클레오티드 헤미-술페이트 염
EP3595672B1 (en) 2017-03-14 2023-09-06 Gilead Sciences, Inc. Compounds for use in methods of treating feline coronavirus infections
ES2938859T3 (es) 2017-05-01 2023-04-17 Gilead Sciences Inc Una forma cristalina de (S)-2-etilbutilo 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato
EP3651734A1 (en) 2017-07-11 2020-05-20 Gilead Sciences, Inc. Compositions comprising an rna polymerase inhibitor and cyclodextrin for treating viral infections
EP3684771A1 (en) 2017-09-21 2020-07-29 Chimerix, Inc. MORPHIC FORMS OF 4-AMINO-7-(3,4-DIHYDROXY-5-(HYDROXYMETHYL)TETRAHYDROFURAN-2-YL)-2-METHYL-7H-PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINE-5-CARBOXAMIDE AND USES THEREOF
CN111788196A (zh) 2018-01-09 2020-10-16 配体药物公司 缩醛化合物及其治疗用途
CN112351799A (zh) 2018-04-10 2021-02-09 阿堤亚制药公司 具有硬化的hcv感染患者的治疗
JP2023512656A (ja) 2020-01-27 2023-03-28 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２感染を治療するための方法
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
TWI785528B (zh) 2020-03-12 2022-12-01 美商基利科學股份有限公司 1’-氰基核苷之製備方法
KR20220164784A (ko) 2020-04-06 2022-12-13 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 1'-시아노 치환된 카르바뉴클레오시드 유사체의 흡입 제형
EP4157272A1 (en) 2020-05-29 2023-04-05 Gilead Sciences, Inc. Remdesivir treatment methods
TWI819321B (zh) 2020-06-24 2023-10-21 美商基利科學股份有限公司 1'-氰基核苷類似物及其用途
TW202228722A (zh) 2020-08-27 2022-08-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療病毒感染之化合物及方法
EP4320128A1 (en) 2022-03-02 2024-02-14 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections

Family Cites Families (401)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE140254C (ko)
US6458772B1 (en) 1909-10-07 2002-10-01 Medivir Ab Prodrugs
GB924246A (en) 1958-12-23 1963-04-24 Wellcome Found Purine derivatives and their preparation
US3116282A (en) 1960-04-27 1963-12-31 Upjohn Co Pyrimidine nucleosides and process
GB984877A (en) 1962-08-16 1965-03-03 Waldhof Zellstoff Fab Improvements in and relating to 6-halonucleosides
GB1163103A (en) 1965-11-15 1969-09-04 Merck & Co Inc Ribofuranosyl Purine Derivatives
FR1498856A (ko) 1965-11-15 1968-01-10
FR1521076A (fr) 1966-05-02 1968-04-12 Merck & Co Inc Nucléosides de purines substituées
DE1695411A1 (de) 1966-05-02 1971-04-15 Merck & Co Inc Substituierte Purin-Nucleoside und Verfahren zu deren Herstellung
US3480613A (en) 1967-07-03 1969-11-25 Merck & Co Inc 2-c or 3-c-alkylribofuranosyl - 1-substituted compounds and the nucleosides thereof
DE2122991C2 (de) * 1971-05-04 1982-06-09 Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen Verfahren zur Herstellung von Cytosin- und 6-Azacytosinnucleosiden
USRE29835E (en) 1971-06-01 1978-11-14 Icn Pharmaceuticals 1,2,4-Triazole nucleosides
US4211771A (en) 1971-06-01 1980-07-08 Robins Ronald K Treatment of human viral diseases with 1-B-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide
US3798209A (en) * 1971-06-01 1974-03-19 Icn Pharmaceuticals 1,2,4-triazole nucleosides
JPS4848495A (ko) 1971-09-21 1973-07-09
US4022889A (en) * 1974-05-20 1977-05-10 The Upjohn Company Therapeutic compositions of antibiotic U-44,590 and methods for using the same
DE2508312A1 (de) 1975-02-24 1976-09-02 Schering Ag Neues verfahren zur herstellung von nucleosiden
US4058602A (en) 1976-08-09 1977-11-15 The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education And Welfare Synthesis, structure, and antitumor activity of 5,6-dihydro-5-azacytidine
DE2757365A1 (de) * 1977-12-20 1979-06-21 Schering Ag Neues verfahren zur herstellung von nucleosiden
DD140254A1 (de) 1978-12-04 1980-02-20 Dieter Baerwolff Verfahren zur herstellung von 4-substituierten pyrimidin-nucleosiden
DE2852721A1 (de) 1978-12-06 1980-06-26 Basf Ag Verfahren zur reindarstellung von kaliumribonat und ribonolacton
US4239753A (en) 1978-12-12 1980-12-16 The Upjohn Company Composition of matter and process
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4522811A (en) * 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4530840A (en) 1982-07-29 1985-07-23 The Stolle Research And Development Corporation Injectable, long-acting microparticle formulation for the delivery of anti-inflammatory agents
US4906474A (en) 1983-03-22 1990-03-06 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible polyanhydrides for controlled drug delivery
US4725442A (en) 1983-06-17 1988-02-16 Haynes Duncan H Microdroplets of water-insoluble drugs and injectable formulations containing same
US4622219A (en) 1983-06-17 1986-11-11 Haynes Duncan H Method of inducing local anesthesia using microdroplets of a general anesthetic
US5364620A (en) 1983-12-22 1994-11-15 Elan Corporation, Plc Controlled absorption diltiazem formulation for once daily administration
FR2562543B1 (fr) 1984-04-10 1987-09-25 Elf Aquitaine Nouveaux phosphonites cycliques, leur preparation et applications
US4891225A (en) 1984-05-21 1990-01-02 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible polyanhydrides for controlled drug delivery
US4683194A (en) 1984-05-29 1987-07-28 Cetus Corporation Method for detection of polymorphic restriction sites and nucleic acid sequences
NL8403224A (nl) * 1984-10-24 1986-05-16 Oce Andeno Bv Dioxafosforinanen, de bereiding ervan en de toepassing voor het splitsen van optisch actieve verbindingen.
KR880000094B1 (ko) 1984-12-07 1988-02-23 보령제약 주식회사 뉴클레오시드 유도체의 제조방법
JPS61204193A (ja) 1985-03-05 1986-09-10 Takeda Chem Ind Ltd シトシンヌクレオシド類の製造法
US6448392B1 (en) 1985-03-06 2002-09-10 Chimerix, Inc. Lipid derivatives of antiviral nucleosides: liposomal incorporation and method of use
US5223263A (en) 1988-07-07 1993-06-29 Vical, Inc. Liponucleotide-containing liposomes
JPS61212592A (ja) 1985-03-19 1986-09-20 Tokyo Tanabe Co Ltd Ｄ−リボ−スの製造方法
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4605659A (en) 1985-04-30 1986-08-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Purinyl or pyrimidinyl substituted hydroxycyclopentane compounds useful as antivirals
JPS61263995A (ja) 1985-05-16 1986-11-21 Takeda Chem Ind Ltd シトシンヌクレオシド類の製造法
US4754026A (en) * 1985-06-04 1988-06-28 Takeda Chemical Industries, Ltd. Conversion of uracil derivatives to cytosine derivatives
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
US4889818A (en) 1986-08-22 1989-12-26 Cetus Corporation Purified thermostable enzyme
US5079352A (en) 1986-08-22 1992-01-07 Cetus Corporation Purified thermostable enzyme
IT1198449B (it) 1986-10-13 1988-12-21 F I D I Farmaceutici Italiani Esteri di alcoli polivalenti di acido ialuronico
JPH0699467B2 (ja) 1987-03-04 1994-12-07 ヤマサ醤油株式会社 ２▲’▼−デオキシ−２▲’▼（ｓ）−アルキルピリミジンヌクレオシド誘導体
US5718921A (en) 1987-03-13 1998-02-17 Massachusetts Institute Of Technology Microspheres comprising polymer and drug dispersed there within
DE3714473A1 (de) 1987-04-30 1988-11-10 Basf Ag Kontinuierliches verfahren zur epimerisierung von zuckern, insbesondere von d-arabinose zu d-ribose
GB8719367D0 (en) 1987-08-15 1987-09-23 Wellcome Found Therapeutic compounds
US5246924A (en) 1987-09-03 1993-09-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method for treating hepatitis B virus infections using 1-(2'-deoxy-2'-fluoro-beta-D-arabinofuranosyl)-5-ethyluracil
JPH03501253A (ja) 1987-09-22 1991-03-22 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア エイズ（ａｉｄｓ）治療を目的とするリポソームによるヌクレオシド類似物質
US4880784A (en) 1987-12-21 1989-11-14 Brigham Young University Antiviral methods utilizing ribofuranosylthiazolo[4,5-d]pyrimdine derivatives
US5749847A (en) 1988-01-21 1998-05-12 Massachusetts Institute Of Technology Delivery of nucleotides into organisms by electroporation
IE60383B1 (en) 1988-05-27 1994-07-13 Elan Corp Plc Controlled release pharmaceutical formulation
US5122517A (en) * 1988-06-10 1992-06-16 Regents Of The University Of Minnesota Antiviral combination comprising nucleoside analogs
NZ229453A (en) 1988-06-10 1991-08-27 Univ Minnesota & Southern Rese A pharmaceutical composition containing purine derivatives with nucleosides such as azt, as antiviral agents
GB8815265D0 (en) * 1988-06-27 1988-08-03 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
US6252060B1 (en) * 1988-07-07 2001-06-26 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Antiviral liponucleosides: treatment of hepatitis B
US6599887B2 (en) 1988-07-07 2003-07-29 Chimerix, Inc. Methods of treating viral infections using antiviral liponucleotides
SE8802687D0 (sv) 1988-07-20 1988-07-20 Astra Ab Nucleoside derivatives
US4938763B1 (en) 1988-10-03 1995-07-04 Atrix Lab Inc Biodegradable in-situ forming implants and method of producing the same
US5744600A (en) * 1988-11-14 1998-04-28 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Phosphonomethoxy carbocyclic nucleosides and nucleotides
US5616702A (en) 1988-11-15 1997-04-01 Merrell Pharmaceuticals Inc. 2-'-ethenylidene cytidine, uridine and guanosine derivatives
US5356630A (en) 1989-02-22 1994-10-18 Massachusetts Institute Of Technology Delivery system for controlled release of bioactive factors
US5705363A (en) 1989-03-02 1998-01-06 The Women's Research Institute Recombinant production of human interferon τ polypeptides and nucleic acids
US5194654A (en) * 1989-11-22 1993-03-16 Vical, Inc. Lipid derivatives of phosphonoacids for liposomal incorporation and method of use
US5411947A (en) * 1989-06-28 1995-05-02 Vestar, Inc. Method of converting a drug to an orally available form by covalently bonding a lipid to the drug
US5463092A (en) 1989-11-22 1995-10-31 Vestar, Inc. Lipid derivatives of phosphonacids for liposomal incorporation and method of use
US5026687A (en) 1990-01-03 1991-06-25 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Treatment of human retroviral infections with 2',3'-dideoxyinosine alone and in combination with other antiviral compounds
US6060592A (en) * 1990-01-11 2000-05-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine nucleoside compounds and oligonucleoside compounds containing same
IE66933B1 (en) 1990-01-15 1996-02-07 Elan Corp Plc Controlled absorption naproxen formulation for once-daily administration
US5200514A (en) * 1990-01-19 1993-04-06 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Synthesis of 2'-deoxypyrimidine nucleosides
US5204466A (en) * 1990-02-01 1993-04-20 Emory University Method and compositions for the synthesis of bch-189 and related compounds
IE82916B1 (en) 1990-11-02 2003-06-11 Elan Corp Plc Formulations and their use in the treatment of neurological diseases
AU7872491A (en) 1990-05-07 1991-11-27 Vical, Inc. Lipid prodrugs of salicylate and nonsteroidal anti-inflammatory drugs
FR2662165B1 (fr) 1990-05-18 1992-09-11 Univ Paris Curie Derives nucleosidiques branches, leur procede de preparation et leur utilisation a titre de medicament.
CA2083961A1 (en) * 1990-05-29 1991-11-30 Henk Van Den Bosch Synthesis of glycerol di- and triphosphate derivatives
EP0531452A4 (en) 1990-05-29 1993-06-09 Vical, Inc. Synthesis of glycerol di- and triphosphate derivatives
ES2083580T3 (es) 1990-06-13 1996-04-16 Arnold Glazier Profarmacos de fosforo.
US5627165A (en) 1990-06-13 1997-05-06 Drug Innovation & Design, Inc. Phosphorous prodrugs and therapeutic delivery systems using same
US5210015A (en) 1990-08-06 1993-05-11 Hoffman-La Roche Inc. Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase
US5149543A (en) 1990-10-05 1992-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Ionically cross-linked polymeric microcapsules
US5626863A (en) 1992-02-28 1997-05-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Photopolymerizable biodegradable hydrogels as tissue contacting materials and controlled-release carriers
US5372808A (en) 1990-10-17 1994-12-13 Amgen Inc. Methods and compositions for the treatment of diseases with consensus interferon while reducing side effect
EP0487218B1 (en) 1990-10-31 1997-12-29 Tosoh Corporation Method for detecting or quantifying target nucleic acid
US5256641A (en) 1990-11-01 1993-10-26 State Of Oregon Covalent polar lipid-peptide conjugates for immunological targeting
US5149794A (en) 1990-11-01 1992-09-22 State Of Oregon Covalent lipid-drug conjugates for drug targeting
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
US5543389A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of The Oregon Health Sciences University, A Non Profit Organization Covalent polar lipid-peptide conjugates for use in salves
US5827819A (en) 1990-11-01 1998-10-27 Oregon Health Sciences University Covalent polar lipid conjugates with neurologically active compounds for targeting
IL100502A (en) 1991-01-03 1995-12-08 Iaf Biochem Int PHARMACEUTICAL PREPARATIONS CONTAINING CIS-4-AMINO-1-) 2-HYDROXIMETHIL-1,3-OXETYOLEN-5-IL (-
JPH04266880A (ja) * 1991-02-22 1992-09-22 Japan Tobacco Inc ３　−ｄｐａ−　ラクトンの製造方法
IL101144A (en) 1991-03-06 1996-09-12 Wellcome Found Pharmaceutical preparations containing 1 -) 2 -) hydroxymethyl (- 1, 3 - oxathiolan-5 - il (5) fluorescitosin and its derivatives for the treatment of their hepatitis B virus infections
WO1992018517A1 (en) 1991-04-17 1992-10-29 Yale University Method of treating or preventing hepatitis b virus
US5994056A (en) 1991-05-02 1999-11-30 Roche Molecular Systems, Inc. Homogeneous methods for nucleic acid amplification and detection
US5157027A (en) 1991-05-13 1992-10-20 E. R. Squibb & Sons, Inc. Bisphosphonate squalene synthetase inhibitors and method
DK51092D0 (da) 1991-05-24 1992-04-15 Ole Buchardt Oligonucleotid-analoge betegnet pna, monomere synthoner og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelser deraf
JPH07500573A (ja) 1991-07-12 1995-01-19 ネクススター・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗ウィルス性リポヌクレオシド：ｂ型肝炎の治療
JPH0525152A (ja) 1991-07-22 1993-02-02 Japan Tobacco Inc ３−ｄｐａ−ラクトンの製造法
US5554728A (en) 1991-07-23 1996-09-10 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Lipid conjugates of therapeutic peptides and protease inhibitors
TW224053B (ko) 1991-09-13 1994-05-21 Paul B Chretien
ATE155045T1 (de) 1991-11-13 1997-07-15 Elan Corp Plc Vorrichtung zur verabreichung von heilmitteln
JP3091492B2 (ja) 1991-11-14 2000-09-25 ダイジーン ダイアグノスティクス，インコーポレイテッド 非放射性ハイブリダイゼーションアッセイおよびキット
MX9207334A (es) 1991-12-18 1993-08-01 Glaxo Inc Acidos nucleicos peptidicos y formulacion farma- ceutica que los contiene
US5676942A (en) 1992-02-10 1997-10-14 Interferon Sciences, Inc. Composition containing human alpha interferon species proteins and method for use thereof
DE4207363A1 (de) 1992-03-04 1993-09-09 Max Delbrueck Centrum Antivirale nucleosidanaloga, ihre herstellung und ihre pharmazeutische verwendung
US5260068A (en) 1992-05-04 1993-11-09 Anda Sr Pharmaceuticals Inc. Multiparticulate pulsatile drug delivery system
US5256797A (en) 1992-06-22 1993-10-26 Eli Lilly And Company Process for separating 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl alkylsulfonate anomers
US5371210A (en) 1992-06-22 1994-12-06 Eli Lilly And Company Stereoselective fusion glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides
US5606048A (en) * 1992-06-22 1997-02-25 Eli Lilly And Company Stereoselective glycosylation process for preparing 2'-Deoxy-2', 2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides
US5821357A (en) 1992-06-22 1998-10-13 Eli Lilly And Company Stereoselective glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoropurine and triazole nucleosides
US5401861A (en) * 1992-06-22 1995-03-28 Eli Lilly And Company Low temperature process for preparing alpha-anomer enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl sulfonates
WO1994001117A1 (en) 1992-07-02 1994-01-20 The Wellcome Foundation Limited Therapeutic nucleosides
DE4224737A1 (de) 1992-07-27 1994-02-03 Herbert Prof Dr Schott Neue Cytosinnucleosidanaloga, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
HU214980B (hu) 1992-09-01 1998-08-28 Eli Lilly And Co. Eljárás nukleozidok anomerizálására
US6433159B1 (en) 1992-09-10 2002-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of Hepatitis C virus associated diseases
US6174868B1 (en) 1992-09-10 2001-01-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of hepatitis C virus-associated diseases
DE69330372T2 (de) 1992-09-10 2002-03-14 Isis Pharmaceuticals Inc ZUSAMMENSETZUNGEN UND VERFAHREN FüR DIE BEHANDLUNG VON MIT HEPATITIS C VIREN ASSOZIIERTEN KRANKHEITEN
US6391542B1 (en) 1992-09-10 2002-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of Hepatitis C virus-associated diseases
US6423489B1 (en) 1992-09-10 2002-07-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of Hepatitis C virus-associated diseases
JPH06135988A (ja) 1992-10-22 1994-05-17 Toagosei Chem Ind Co Ltd ヌクレオシド誘導体
US5260069A (en) 1992-11-27 1993-11-09 Anda Sr Pharmaceuticals Inc. Pulsatile particles drug delivery system
GB9226729D0 (en) 1992-12-22 1993-02-17 Wellcome Found Therapeutic combination
JPH06211890A (ja) 1993-01-12 1994-08-02 Yamasa Shoyu Co Ltd ２’−デオキシ−２’（ｓ）−置換アルキルシチジン誘導体
JPH06228186A (ja) 1993-01-29 1994-08-16 Yamasa Shoyu Co Ltd ２’−デオキシ−（２’ｓ）−アルキルピリミジンヌクレオシド誘導体
EP0686043B1 (en) 1993-02-24 1999-06-23 WANG, Jui, H. Compositions and methods of application of reactive antiviral polymers
GB9307043D0 (en) 1993-04-05 1993-05-26 Norsk Hydro As Chemical compounds
JP3693357B2 (ja) 1993-04-09 2005-09-07 峯郎 実吉 逆転写酵素阻害剤
WO1994026273A1 (en) 1993-05-12 1994-11-24 Hostetler Karl Y Acyclovir derivatives for topical use
CA2167537A1 (en) 1993-07-19 1995-02-02 Tsuneo Ozeki Hepatitis c virus proliferation inhibitor
US5565215A (en) 1993-07-23 1996-10-15 Massachusettes Institute Of Technology Biodegradable injectable particles for imaging
US6156501A (en) 1993-10-26 2000-12-05 Affymetrix, Inc. Arrays of modified nucleic acid probes and methods of use
US5587362A (en) 1994-01-28 1996-12-24 Univ. Of Ga Research Foundation L-nucleosides
US5419917A (en) 1994-02-14 1995-05-30 Andrx Pharmaceuticals, Inc. Controlled release hydrogel formulation
US5539083A (en) 1994-02-23 1996-07-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide nucleic acid combinatorial libraries and improved methods of synthesis
US5458888A (en) 1994-03-02 1995-10-17 Andrx Pharmaceuticals, Inc. Controlled release tablet formulation
JPH0821872A (ja) 1994-07-07 1996-01-23 Nec Corp レーザ・レーダ装置
DE4432623A1 (de) 1994-09-14 1996-03-21 Huels Chemische Werke Ag Verfahren zur Bleichung von wäßrigen Tensidlösungen
US5696277A (en) 1994-11-15 1997-12-09 Karl Y. Hostetler Antiviral prodrugs
US5728402A (en) 1994-11-16 1998-03-17 Andrx Pharmaceuticals Inc. Controlled release formulation of captopril or a prodrug of captopril
US5763418A (en) 1994-12-13 1998-06-09 Akira Matsuda 3'-substituted nucleoside derivatives
US6475721B2 (en) 1995-03-04 2002-11-05 Boston Probes, Inc. Sequence specific detection of nucleic acids using a solid carrier bound with nucleic acid analog probes
GB9505025D0 (en) 1995-03-13 1995-05-03 Medical Res Council Chemical compounds
US5567441A (en) 1995-03-24 1996-10-22 Andrx Pharmaceuticals Inc. Diltiazem controlled release formulation
JP3786447B2 (ja) 1995-03-31 2006-06-14 エーザイ株式会社 Ｃ型肝炎の予防・治療剤
DE19513330A1 (de) * 1995-04-03 1996-10-10 Schering Ag Neues Verfahren zur Herstellung von Nucleosiden
IE75744B1 (en) 1995-04-03 1997-09-24 Elan Corp Plc Controlled release biodegradable micro- and nanospheres containing cyclosporin
IE80468B1 (en) 1995-04-04 1998-07-29 Elan Corp Plc Controlled release biodegradable nanoparticles containing insulin
US5977061A (en) 1995-04-21 1999-11-02 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic N6 - substituted nucleotide analagues and their use
US5558879A (en) 1995-04-28 1996-09-24 Andrx Pharmaceuticals, Inc. Controlled release formulation for water soluble drugs in which a passageway is formed in situ
US5736159A (en) 1995-04-28 1998-04-07 Andrx Pharmaceuticals, Inc. Controlled release formulation for water insoluble drugs in which a passageway is formed in situ
DE69636626T2 (de) 1995-07-28 2007-08-30 Genzyme Corp., Cambridge Biologische abbaubare multiblokhydrogene und ihre verwendung wie trägerstoffe fur kontrollierte freisetzung pharmakologisch activen werstoffe und gewebekontaktmaterialen
JPH0959292A (ja) 1995-08-25 1997-03-04 Yamasa Shoyu Co Ltd ４−アミノピリミジンヌクレオシドの製造法
WO1997009052A1 (en) 1995-09-07 1997-03-13 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Therapeutic azide compounds
DE69635864T2 (de) 1995-09-27 2006-10-26 Emory University Rekombinante rna-replikase von hepatitis-c-virus
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5980884A (en) 1996-02-05 1999-11-09 Amgen, Inc. Methods for retreatment of patients afflicted with Hepatitis C using consensus interferon
US5830905A (en) 1996-03-29 1998-11-03 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
US5633388A (en) 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
GB9609932D0 (en) * 1996-05-13 1996-07-17 Hoffmann La Roche Use of IL-12 and IFN alpha for the treatment of infectious diseases
US5891874A (en) 1996-06-05 1999-04-06 Eli Lilly And Company Anti-viral compound
JP3927630B2 (ja) 1996-09-27 2007-06-13 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ウイルス感染症の予防・治療剤
US5922757A (en) 1996-09-30 1999-07-13 The Regents Of The University Of California Treatment and prevention of hepatic disorders
ATE238328T1 (de) 1996-10-16 2003-05-15 Ribapharm Inc Monozyklische l-nukleoside, analoga und ihre anwendungen
KR100412480B1 (ko) 1996-10-16 2003-12-31 아이씨엔 파마슈티컬스, 인코포레이티드 푸린 ｌ-누클레오시드, 이의 유사체 및 이들의 용도
UA66767C2 (uk) 1996-10-18 2004-06-15 Вертекс Фармасьютикалс Інкорпорейтед Інгібітори серин-протеаз, фармацевтична композиція, спосіб інгібування активності та спосіб лікування або профілактики вірусної інфекції гепатиту с
NZ335000A (en) * 1996-10-28 2000-12-22 Univ Washington Induction of viral mutation by incorporation of miscoding ribonucleoside analogs into viral RNA
GB9623908D0 (en) 1996-11-18 1997-01-08 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
US6248878B1 (en) * 1996-12-24 2001-06-19 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleoside analogs
GB9708611D0 (en) 1997-04-28 1997-06-18 Univ Cardiff Chemical compounds
US6617422B1 (en) 1997-05-23 2003-09-09 Peter Nielsen Peptide nucleic acid monomers and oligomers
DK1009732T3 (da) 1997-06-30 2003-09-22 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa 1-Amino-alkylcyclohexan NMDA receptor antagonister
JP4452401B2 (ja) 1997-08-11 2010-04-21 ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド Ｃ型肝炎ウイルス阻害ペプチドアナログ
US6172046B1 (en) * 1997-09-21 2001-01-09 Schering Corporation Combination therapy for eradicating detectable HCV-RNA in patients having chronic Hepatitis C infection
US6472373B1 (en) 1997-09-21 2002-10-29 Schering Corporation Combination therapy for eradicating detectable HCV-RNA in antiviral treatment naive patients having chronic hepatitis C infection
ES2162393T3 (es) 1997-09-21 2001-12-16 Schering Corp Terapia de combinacion para erradicar el hcv-rna detectable en pacientes con infeccion de hepatitis c cronica.
WO1999023104A2 (en) 1997-10-30 1999-05-14 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary Of Health And Human Services Antitumour uridine analogues
US6265174B1 (en) 1997-11-03 2001-07-24 Morphochem, Inc. Methods and compositions for identifying and modulating ctionprotein-interactions
EA200700564A1 (ru) 1998-02-25 2007-08-31 Эмори Юниверсити 2`-фторнуклеозиды
US6312662B1 (en) 1998-03-06 2001-11-06 Metabasis Therapeutics, Inc. Prodrugs phosphorus-containing compounds
WO1999045016A2 (en) 1998-03-06 1999-09-10 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel prodrugs for phosphorus-containing compounds
KR100389853B1 (ko) * 1998-03-06 2003-08-19 삼성전자주식회사 카타로그정보의기록및재생방법
GB9806815D0 (en) 1998-03-30 1998-05-27 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
TW466112B (en) 1998-04-14 2001-12-01 Lilly Co Eli Novel use of 2'-deoxy-2',2'-difluorocytidine for immunosuppressive therapy and pharmaceutical composition comprising the same
TWI277424B (en) 1998-05-15 2007-04-01 Schering Corp Combination therapy for eradicating detectable NCV-RNA in antiviral treatment naive patients having chronic hepatitis C infection
US6833361B2 (en) * 1998-05-26 2004-12-21 Ribapharm, Inc. Nucleosides having bicyclic sugar moiety
AU767131B2 (en) 1998-06-08 2003-10-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of PEG-IFN-alpha and ribavirin for the treatment of chronic hepatitis C
US6444652B1 (en) 1998-08-10 2002-09-03 Novirio Pharmaceuticals Limited β-L-2'-deoxy-nucleosides for the treatment of hepatitis B
DK2415776T3 (en) 1998-08-10 2016-07-04 Novartis Ag Beta-L-2'-deoxy nucleosides for the treatment of Hepatitis B
GB9821058D0 (en) 1998-09-28 1998-11-18 Univ Cardiff Chemical compound
US6277830B1 (en) 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
CA2252144A1 (en) 1998-10-16 2000-04-16 University Of Alberta Dual action anticancer prodrugs
FR2784892B1 (fr) 1998-10-23 2001-04-06 Smith & Nephew Kinetec Sa Attelle de mobilisation passive repliable pour membre inferieur
KR100618028B1 (ko) 1998-11-05 2006-08-30 쌍트르 나쉬오날 드 라 르쉐르스 쉬앙티피끄 항-ｂ형 간염 활성을 가진 뉴클레오시드
CA2348948C (en) 1998-11-05 2007-09-18 Gilles Gosselin .beta.-l-2'-deoxy-nucleosides for the treatment of hiv infection
EP1140143A2 (en) 1998-12-18 2001-10-10 Schering Corporation Ribavirin-pegylated interferon alfa induction hcv combination therapy
AU777040B2 (en) 1999-02-22 2004-09-30 Shire Biochem Inc. (1,8) naphthyridine derivatives having antiviral activity
WO2000052015A2 (en) 1999-03-05 2000-09-08 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel phosphorus-containing prodrugs
US6831069B2 (en) 1999-08-27 2004-12-14 Ribapharm Inc. Pyrrolo[2,3-d]pyrimidine nucleoside analogs
AU7361400A (en) * 1999-09-08 2001-04-10 Metabasis Therapeutics, Inc. Prodrugs for liver specific drug delivery
US6566365B1 (en) * 1999-11-04 2003-05-20 Biochem Pharma Inc. Method for the treatment of Flaviviridea viral infection using nucleoside analogues
CN1740182A (zh) 1999-12-22 2006-03-01 症变治疗公司 新的双氨基化膦酸酯前药
AU2338101A (en) 1999-12-30 2001-07-16 Biochem Pharma Inc. Imidazopyrimidine nucleoside analogues with anti-hiv activity
US7056895B2 (en) * 2000-02-15 2006-06-06 Valeant Pharmaceuticals International Tirazole nucleoside analogs and methods for using same
US6495677B1 (en) 2000-02-15 2002-12-17 Kanda S. Ramasamy Nucleoside compounds
US6455508B1 (en) 2000-02-15 2002-09-24 Kanda S. Ramasamy Methods for treating diseases with tirazole and pyrrolo-pyrimidine ribofuranosyl nucleosides
JP2003523978A (ja) 2000-02-18 2003-08-12 シャイアー・バイオケム・インコーポレイテッド ヌクレオシドアナログを用いるｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ感染の処置もしくは予防するための方法
US6962906B2 (en) 2000-03-14 2005-11-08 Active Motif Oligonucleotide analogues, methods of synthesis and methods of use
JP2003532643A (ja) * 2000-04-13 2003-11-05 フアーマセツト・リミテツド 肝炎ウイルス感染症を治療するための３’−または２’−ヒドロキシメチル置換ヌクレオシド誘導体
GB0009486D0 (en) 2000-04-17 2000-06-07 Univ Cardiff Chemical compounds
US6924270B2 (en) * 2000-04-20 2005-08-02 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable HCV-RNA in patients having chronic hepatitis C infection
GB0011203D0 (en) 2000-05-09 2000-06-28 Univ Cardiff Chemical compounds
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
US6787526B1 (en) 2000-05-26 2004-09-07 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating hepatitis delta virus infection with β-L-2′-deoxy-nucleosides
KR100854398B1 (ko) * 2000-05-26 2008-08-26 이데닉스 (케이만) 리미티드 베타-ｌ-2'-데옥시-뉴클레오사이드를 이용한 델타형 간염바이러스 감염의 치료방법
KR20030036189A (ko) 2000-05-26 2003-05-09 이데닉스(케이만)리미티드 플라비바이러스 및 페스티바이러스의 치료방법 및 조성물
US6875751B2 (en) * 2000-06-15 2005-04-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′-prodrugs of 2′-deoxy-β-L-nucleosides
MY141594A (en) 2000-06-15 2010-05-14 Novirio Pharmaceuticals Ltd 3'-PRODRUGS OF 2'-DEOXY-ß-L-NUCLEOSIDES
US6815542B2 (en) * 2000-06-16 2004-11-09 Ribapharm, Inc. Nucleoside compounds and uses thereof
UA72612C2 (en) 2000-07-06 2005-03-15 Pyrido[2.3-d]pyrimidine and pyrimido[4.5-d]pyrimidine nucleoside analogues, prodrugs and method for inhibiting growth of neoplastic cells
US20030008841A1 (en) 2000-08-30 2003-01-09 Rene Devos Anti-HCV nucleoside derivatives
EP2180064A3 (en) 2000-10-18 2010-08-11 Pharmasset, Inc. Multiplex quantification of nucleic acids in diseased cells
WO2002032414A2 (en) 2000-10-18 2002-04-25 Schering Corporation Ribavirin-pegylated interferon alfa hcv combination therapy
PT1411954E (pt) 2000-10-18 2011-03-16 Pharmasset Inc Nucleosídeos modificados para o tratamento de infecções virais e proliferação celular anormal
EP1366055A2 (en) 2000-12-15 2003-12-03 Pharmasset Limited Antiviral agents for treatment of flaviviridae infections
US7105499B2 (en) * 2001-01-22 2006-09-12 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
CN1267446C (zh) * 2001-01-22 2006-08-02 默克公司 作为依赖于rna的rna病毒聚合酶的抑制剂的核苷衍生物
IL157478A0 (en) 2001-03-01 2004-03-28 Pharmasset Ltd Method for the synthesis of 2', 3'-didehydronucleosides
GB0112617D0 (en) 2001-05-23 2001-07-18 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
GB0114286D0 (en) 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
EP1478322A4 (en) 2001-06-22 2007-08-08 Pharmasset Ltd Beta 2'-OR 3'-HALONUCLEOSIDE
WO2003024461A1 (en) * 2001-09-20 2003-03-27 Schering Corporation Hcv combination therapy
WO2003026675A1 (en) 2001-09-28 2003-04-03 Idenix (Cayman) Limited Methods and compositions for treating flaviviruses and pestiviruses using 4'-modified nucleoside
WO2003026589A2 (en) 2001-09-28 2003-04-03 Idenix (Cayman) Limited Methods and compositions for treating hepatitis c virus using 4'-modified nucleosides
AU2002351077A1 (en) 2001-11-05 2003-05-19 Exiqon A/S Oligonucleotides modified with novel alpha-l-rna analogues
KR100978904B1 (ko) 2001-12-14 2010-08-31 파마셋 인코포레이티드 바이러스 감염 치료용 ｎ4-아실사이토신 뉴클레오사이드
AU2002353165A1 (en) 2001-12-17 2003-06-30 Ribapharm Inc. Deazapurine nucleoside libraries and compounds
US6965066B1 (en) 2002-01-16 2005-11-15 Actodyne General, Inc. Elongated string support for a stringed musical instrument
EP1572705A2 (en) 2002-01-17 2005-09-14 Ribapharm, Inc. Sugar modified nucleosides as viral replication inhibitors
WO2003061385A1 (en) 2002-01-17 2003-07-31 Ribapharm Inc. Tricyclic nucleoside library compounds, synthesis, and use as antiviral agents
WO2003062256A1 (en) 2002-01-17 2003-07-31 Ribapharm Inc. 2'-beta-modified-6-substituted adenosine analogs and their use as antiviral agents
AU2003209045B2 (en) 2002-02-13 2006-12-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of inhibiting orthopoxvirus replication with nucleoside compounds
MXPA04007876A (es) 2002-02-14 2005-06-20 Pharmasset Ltd Analogos de nucleosido fluorado modificados.
RU2004128943A (ru) 2002-02-28 2005-04-20 Байота, Инк. (Us) Средства, имитирующие нуклеотиды, и их пролекарственные формы
AU2003214199A1 (en) 2002-03-18 2003-10-08 Massachusetts Institute Of Technology Event-driven charge-coupled device design and applications therefor
US7247621B2 (en) * 2002-04-30 2007-07-24 Valeant Research & Development Antiviral phosphonate compounds and methods therefor
KR20050006221A (ko) 2002-05-06 2005-01-15 제네랩스 테크놀로지스, 인코포레이티드 Ｃ형 간염 바이러스 감염 치료용의 뉴클레오시드 유도체
US20040014957A1 (en) 2002-05-24 2004-01-22 Anne Eldrup Oligonucleotides having modified nucleoside units
WO2003100017A2 (en) 2002-05-24 2003-12-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having modified nucleoside units
JP2005533777A (ja) 2002-06-17 2005-11-10 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド Ｒｎａ抗ウイルス剤としての炭素環ヌクレオシドアナログ
DE10226932A1 (de) 2002-06-17 2003-12-24 Bayer Ag Strahlenhärtende Beschichtungsmittel
CA2488534A1 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
US20060234962A1 (en) 2002-06-27 2006-10-19 Olsen David B Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
CN101172993A (zh) 2002-06-28 2008-05-07 埃迪尼克斯(开曼)有限公司 用于治疗黄病毒感染的2′－c－甲基－3′－o－l－缬氨酸酯核糖呋喃基胞苷
DE14169110T1 (de) 2002-06-28 2022-05-12 Centre National De La Recherche Scientifique -Cnrs- Modifizierte 2'- und 3'-Nukleosid-Prodrugs zur Behandlung von Flaviridae-Infektionen
US7608600B2 (en) 2002-06-28 2009-10-27 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Modified 2′ and 3′-nucleoside prodrugs for treating Flaviviridae infections
AU2003248748A1 (en) * 2002-06-28 2004-01-19 Idenix (Cayman) Limited 2'-c-methyl-3'-o-l-valine ester ribofuranosyl cytidine for treatment of flaviviridae infections
US20060264389A1 (en) 2002-07-16 2006-11-23 Balkrishen Bhat Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
AU2003256619A1 (en) 2002-07-24 2004-02-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolopyrimidine thionucleoside analogs as antivirals
US20040067877A1 (en) 2002-08-01 2004-04-08 Schinazi Raymond F. 2', 3'-Dideoxynucleoside analogues for the treatment or prevention of Flaviviridae infections
AU2003261659A1 (en) 2002-09-16 2004-04-30 Kyeong Ho Kim Decoration band
MXPA05003400A (es) 2002-09-30 2005-06-22 Genelabs Tech Inc Derivados de nucleosidos para tratar la infeccion por el virus de la hepatitis c.
US7094768B2 (en) * 2002-09-30 2006-08-22 Genelabs Technologies, Inc. Nucleoside derivatives for treating hepatitis C virus infection
US20040229840A1 (en) 2002-10-29 2004-11-18 Balkrishen Bhat Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
US7265096B2 (en) 2002-11-04 2007-09-04 Xenoport, Inc. Gemcitabine prodrugs, pharmaceutical compositions and uses thereof
AU2003291755A1 (en) 2002-11-05 2004-06-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomers comprising modified bases for binding cytosine and uracil or thymine and their use
AU2003291682A1 (en) 2002-11-05 2004-06-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-methoxy substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
KR20050088079A (ko) 2002-11-15 2005-09-01 이데닉스 (케이만) 리미티드 2'-분지형 뉴클레오시드 및 플라비비리다에 돌연변이
TWI332507B (en) 2002-11-19 2010-11-01 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
EP2319853B1 (en) * 2002-12-12 2014-03-12 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Process for the production of 2'-branched nucleosides
RU2005123395A (ru) 2002-12-23 2006-01-27 Айденикс (Кайман) Лимитед (Ky) Способ получения 3-нуклеозидных пролекарств
WO2004065398A2 (en) 2003-01-15 2004-08-05 Ribapharm Inc. Synthesis and use of 2'-substituted-n6-modified nucleosides
AR043006A1 (es) 2003-02-12 2005-07-13 Merck & Co Inc Proceso para preparar ribonucleosidos ramificados
AU2003225705A1 (en) 2003-03-07 2004-09-30 Ribapharm Inc. Cytidine analogs and methods of use
WO2004084453A2 (en) 2003-03-20 2004-09-30 Microbiologica Quimica E Farmaceutica Ltd. METHODS OF MANUFACTURE OF 2'-DEOXY-β-L-NUCLEOSIDES
RU2005133093A (ru) 2003-03-28 2006-07-27 Фармассет, Инк. (Us) Соединения для лечения флавивирусных инфекций
WO2005002626A2 (en) 2003-04-25 2005-01-13 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic phosphonate compounds
WO2004096285A2 (en) 2003-04-25 2004-11-11 Gilead Sciences, Inc. Anti-infective phosphonate conjugates
US7452901B2 (en) 2003-04-25 2008-11-18 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate analogs
CA2523083C (en) 2003-04-25 2014-07-08 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonate analogs
KR20060015542A (ko) 2003-04-28 2006-02-17 이데닉스 (케이만) 리미티드 산업 규모의 뉴클레오시드 합성
US20040259934A1 (en) 2003-05-01 2004-12-23 Olsen David B. Inhibiting Coronaviridae viral replication and treating Coronaviridae viral infection with nucleoside compounds
EP1656093A2 (en) 2003-05-14 2006-05-17 Idenix (Cayman) Limited Nucleosides for treatment of infection by corona viruses, toga viruses and picorna viruses
US20040229839A1 (en) 2003-05-14 2004-11-18 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Substituted nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
WO2005020885A2 (en) 2003-05-21 2005-03-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of severe acute respiratory syndrome (sars)
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
US7429572B2 (en) 2003-05-30 2008-09-30 Pharmasset, Inc. Modified fluorinated nucleoside analogues
EP1644395B1 (en) * 2003-06-19 2006-11-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Processes for preparing 4'azido nucleoside derivatives
GB0317009D0 (en) 2003-07-21 2003-08-27 Univ Cardiff Chemical compounds
CA2537114C (en) 2003-08-27 2012-10-02 Biota, Inc. Tricyclic nucleosides or nucleotides as therapeutic agents
AU2004275770A1 (en) 2003-09-22 2005-04-07 Acidophil Llc Small molecule compositions and methods for increasing drug efficiency using compositions thereof
US7144868B2 (en) * 2003-10-27 2006-12-05 Genelabs Technologies, Inc. Nucleoside compounds for treating viral infections
US20050137141A1 (en) * 2003-10-24 2005-06-23 John Hilfinger Prodrug composition
NZ546201A (en) 2003-10-27 2009-05-31 Genelabs Tech Inc Nucleoside compounds for treating viral infections
US7157434B2 (en) 2003-10-27 2007-01-02 Genelabs Technologies, Inc. Nucleoside compounds for treating viral infections
GB0401088D0 (en) 2004-01-19 2004-02-18 Univ Cardiff Phosphoramidate derivatives
WO2006016930A2 (en) 2004-05-14 2006-02-16 Intermune, Inc. Methods for treating hcv infection
AU2005254057B2 (en) 2004-06-15 2011-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
US7560434B2 (en) 2004-06-22 2009-07-14 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. AZA nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
BRPI0512360A (pt) 2004-06-23 2008-03-11 Idenix Cayman Ltd derivados de 5-aza-7-deazapurina para o tratamento de flaviviridae
CA2571079A1 (en) 2004-06-24 2006-02-02 Merck & Co., Inc. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
CN101023094B (zh) 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
RU2407747C2 (ru) 2004-07-21 2010-12-27 Фармассет, Инк. Способ получения алкилзамещенных 2-дезокси-2-фтор-d-рибофуранозил-пиримидинов и пуринов и их производных
PT1778251E (pt) 2004-07-27 2011-06-29 Gilead Sciences Inc Análogos de fosfonato de compostos inibidores de vih
CA2577526A1 (en) * 2004-08-23 2006-03-02 Joseph Armstrong Martin Antiviral 4'-azido-nucleosides
AU2005289517A1 (en) 2004-09-24 2006-04-06 Centre National De La Recherche Scientifique Methods and compositions for treating flaviviruses, pestiviruses and hepacivirus
CA2583351A1 (en) 2004-10-06 2006-04-13 Migenix Inc. Combination anti-viral compositions comprising castanospermine and methods of use
US20080280842A1 (en) 2004-10-21 2008-11-13 Merck & Co., Inc. Fluorinated Pyrrolo[2,3-D]Pyrimidine Nucleosides for the Treatment of Rna-Dependent Rna Viral Infection
WO2006121468A1 (en) * 2004-11-22 2006-11-16 Genelabs Technologies, Inc. 5-nitro-nucleoside compounds for treating viral infections
WO2006063717A2 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Febit Biotech Gmbh Polymerase-independent analysis of the sequence of polynucleotides
CA2597213A1 (en) 2005-02-09 2006-09-14 Migenix Inc. Compositions and methods for treating or preventing flaviviridae infections
US20100279974A1 (en) 2005-03-09 2010-11-04 Claire Pierra Nucleosides With Non-Natural Bases as Anti-Viral Agents
WO2006097323A1 (en) 2005-03-18 2006-09-21 Lutz Weber TETRAHYDRO-ISOQUINOLIN-l-ONES FOR THE TREATMENT OF CANCER
DE102005012681A1 (de) 2005-03-18 2006-09-21 Weber, Lutz, Dr. Neue 1,5-Dihydro-pyrrol-2-one
GT200600119A (es) 2005-03-24 2006-10-25 Composiciones farmaceuticas
AR056327A1 (es) 2005-04-25 2007-10-03 Genelabs Tech Inc Compuestos de nucleosidos para el tratamiento de infecciones virales
WO2006121820A1 (en) 2005-05-05 2006-11-16 Valeant Research & Development Phosphoramidate prodrugs for treatment of viral infection
KR20080003933A (ko) 2005-05-31 2008-01-08 노파르티스 아게 철이 발병에 관여하는 간질환의 치료
CA2615626A1 (en) 2005-07-18 2007-01-25 Novartis Ag Small animal model for hcv replication
CA2618560A1 (en) 2005-08-09 2007-02-22 Merck & Co., Inc. Ribonucleoside cyclic acetal derivatives for the treatment of rna-dependent rna viral infection
US20090118223A1 (en) 2005-08-12 2009-05-07 Erion Mark D Novel 2'-c-methyl and 4'c-methyl nucleoside derivatives
AR057096A1 (es) 2005-08-26 2007-11-14 Chancellors Masters And Schola Proceso para preparar acidos y lactonas sacarinicos
EP1937825B1 (en) 2005-09-26 2016-12-21 Gilead Pharmasset LLC Modified 4'-nucleosides as antiviral agents
NZ568909A (en) 2005-12-09 2011-10-28 Hoffmann La Roche Antiviral 4-fluoro-4-methyl nucleoside prodrugs
US7781576B2 (en) 2005-12-23 2010-08-24 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Process for preparing a synthetic intermediate for preparation of branched nucleosides
EP1987050A2 (en) 2006-02-14 2008-11-05 Merck & Co., Inc. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
US7842672B2 (en) 2006-07-07 2010-11-30 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate inhibitors of HCV
KR101251707B1 (ko) 2006-09-27 2013-04-11 콜리 파마슈티칼 게엠베하 면역 자극 활성이 증강된 소수성 Ｔ 유사체를 함유하는 ＣｐＧ 올리고뉴클레오티드 유사체
SI2084174T1 (sl) 2006-10-10 2013-10-30 Gilead Pharmasset Llc Priprava nukleozidov ribofuranozil pririmidinov
GB0623493D0 (en) 2006-11-24 2007-01-03 Univ Cardiff Chemical compounds
CA2672613A1 (en) 2006-12-20 2008-07-03 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Nucleoside cyclic phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
US20080261913A1 (en) 2006-12-28 2008-10-23 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of liver disorders
US8324179B2 (en) 2007-02-09 2012-12-04 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside analogs for antiviral treatment
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
CA2685748A1 (en) 2007-05-14 2008-11-14 Rfs Pharma, Llc. Azido purine nucleosides for treatment of viral infections
US20090048189A1 (en) 2007-08-15 2009-02-19 Genelabs Technologies, Inc. Tricyclic-nucleoside compounds for treating viral infections
GB0718575D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases
US20090318380A1 (en) 2007-11-20 2009-12-24 Pharmasset, Inc. 2',4'-substituted nucleosides as antiviral agents
US20090176732A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Alios Biopharma Inc. Protected nucleotide analogs
PT2268642E (pt) 2008-04-23 2015-06-02 Gilead Sciences Inc Análogos de carba-nulceósidos 1¿-substituídos para tratamento antiviral
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
CA2729168A1 (en) 2008-07-02 2010-02-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
GB0815968D0 (en) 2008-09-03 2008-10-08 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
US8551973B2 (en) 2008-12-23 2013-10-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
EA019295B1 (ru) 2008-12-23 2014-02-28 Джилид Фармассет, Ллс. Соединения пуриновых нуклеозидов и способ их получения
EP2376088B1 (en) 2008-12-23 2017-02-22 Gilead Pharmasset LLC 6-O-Substituted-2-amino-purine nucleoside phosphoramidates
GB0900914D0 (en) 2009-01-20 2009-03-04 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
CA2751458C (en) 2009-02-06 2018-06-05 Rfs Pharma, Llc Purine nucleoside monophosphate prodrugs for treatment of cancer and viral infections
ES2628842T3 (es) 2009-02-10 2017-08-04 Gilead Sciences, Inc. Método para la preparación de tieno[3,4-d]pirimidin-7-il ribósidos
TWI576352B (zh) 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
US7973013B2 (en) 2009-09-21 2011-07-05 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
US8455451B2 (en) 2009-09-21 2013-06-04 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
BR112012007122A2 (pt) 2009-09-29 2016-07-12 Janssen Products Lp derivados de fosforamidatos de nucleosídeos
EA201270632A1 (ru) 2009-11-16 2013-01-30 Юниверсити Оф Джорджия Рисерч Фаундейшн, Инк. 2'-фтор-6'-метилен карбоциклические нуклеозиды и способы лечения вирусных инфекций
US8816074B2 (en) 2009-11-16 2014-08-26 University of Georgia Foundation, Inc. 2′-fluoro-6′-methylene carbocyclic nucleosides and methods of treating viral infections
JP2013527145A (ja) 2010-03-31 2013-06-27 ギリード・ファーマセット・エルエルシー リン含有活性化剤の立体選択的合成
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
US8680071B2 (en) 2010-04-01 2014-03-25 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
TW201201815A (en) 2010-05-28 2012-01-16 Gilead Sciences Inc 1'-substituted-carba-nucleoside prodrugs for antiviral treatment
WO2011156757A1 (en) 2010-06-10 2011-12-15 Gilead Sciences, Inc. Combination of anti-hcv compounds with ribavirin for the treatment of hcv
KR101995598B1 (ko) 2010-07-19 2019-07-02 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 부분입체 이성질성으로 순수한 포스포라미데이트 전구약물의 제조 방법
TW201305185A (zh) 2010-09-13 2013-02-01 Gilead Sciences Inc 用於抗病毒治療之２’－氟取代之碳－核苷類似物
AR084044A1 (es) 2010-11-30 2013-04-17 Pharmasset Inc Compuestos 2’-espiro-nucleosidos
WO2012087596A1 (en) 2010-12-20 2012-06-28 Gilead Sciences, Inc. Combinations for treating hcv
EP2658857B1 (en) 2010-12-29 2016-11-02 Inhibitex, Inc. Substituted purine nucleosides, phosphoroamidate and phosphorodiamidate derivatives for treatment of viral infections
CN103403014B (zh) 2011-01-03 2016-07-06 河南美泰宝生物制药有限公司 O-(经取代的苯甲基)氨基磷酸酯化合物及其治疗用途
JP2014514295A (ja) 2011-03-31 2014-06-19 アイディニックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ウイルス感染の治療のための化合物および薬学的組成物
EP2697242B1 (en) 2011-04-13 2018-10-03 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-azido substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2012142093A2 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-cyano substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2012142523A2 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Gilead Sciences, Inc. 1'-substituted pyrimidine n-nucleoside analogs for antiviral treatment
BR112013026345A2 (pt) 2011-04-13 2019-04-24 Merck Sharp & Dohe Corp. composto, composição farmacêutica, uso de um composto, e, método para tratar um paciente infectado com hcv
CN103687866A (zh) 2011-05-19 2014-03-26 Rfs制药公司 用于治疗病毒性感染的嘌呤单磷酸酯前药
EP2755983B1 (en) 2011-09-12 2017-03-15 Idenix Pharmaceuticals LLC. Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
JP2014526474A (ja) 2011-09-12 2014-10-06 アイディニックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ウイルス感染の治療のための化合物および薬学的組成物
US8575119B2 (en) 2011-09-23 2013-11-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc. 2′-chloroacetylenyl substituted nucleoside derivatives
EP2768838A1 (en) 2011-10-14 2014-08-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3',5'-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
EP2852605B1 (en) 2012-05-22 2018-01-31 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection
WO2013177188A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
SG11201407674TA (en) 2012-05-22 2014-12-30 Idenix Pharmaceuticals Inc D-amino acid compounds for liver disease
WO2014052638A1 (en) 2012-09-27 2014-04-03 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Esters and malonates of sate prodrugs
TR201809048T4 (tr) 2012-10-08 2018-07-23 Centre Nat Rech Scient Hcv enfeksiyonu için 2'-kloro nükleosit analogları.
WO2014059902A1 (en) 2012-10-17 2014-04-24 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-disubstituted substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for treatment of viral diseases
AR092959A1 (es) 2012-10-17 2015-05-06 Merck Sharp & Dohme Derivados de nucleosidos 2-metil sustituidos y metodos de uso de los mismos para el tratamiento de enfermedades virales
US9242988B2 (en) 2012-10-17 2016-01-26 Merck Sharp & Dohme Corp. 2′-cyano substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
US20140112886A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Dinucleotide compounds for hcv infection
US10723754B2 (en) 2012-10-22 2020-07-28 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-bridged nucleosides for HCV infection
WO2014078436A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of sp-nucleoside analog
EP2920195A1 (en) 2012-11-14 2015-09-23 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of rp-nucleoside analog
WO2014099941A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
US9339541B2 (en) 2013-03-04 2016-05-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiophosphate nucleosides for the treatment of HCV
EP2970358B1 (en) 2013-03-04 2021-06-30 Idenix Pharmaceuticals LLC 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
EP2970357A1 (en) 2013-03-13 2016-01-20 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Amino acid phosphoramidate pronucleotides of 2'-cyano, azido and amino nucleosides for the treatment of hcv
US9187515B2 (en) 2013-04-01 2015-11-17 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
WO2014197578A1 (en) 2013-06-05 2014-12-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv
EP3010512B1 (en) 2013-06-18 2017-12-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Cyclic phosphonate substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
US20150037282A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease

Also Published As

Publication number Publication date
US20160166597A1 (en) 2016-06-16
EP1576138B1 (en) 2017-02-01
EP1576138A2 (en) 2005-09-21
RU2005118421A (ru) 2006-01-20
HUE033832T2 (en) 2018-01-29
JP2011024578A (ja) 2011-02-10
DK1576138T3 (en) 2017-05-01
CA2506129A1 (en) 2004-06-03
EP1576138A4 (en) 2008-09-03
US20050031588A1 (en) 2005-02-10
JP2014166183A (ja) 2014-09-11
NO20052920D0 (no) 2005-06-15
CY1118931T1 (el) 2018-01-10
BR0316363A (pt) 2005-10-04
JP6104845B2 (ja) 2017-03-29
PT1576138T (pt) 2017-05-03
MXPA05005192A (es) 2005-09-08
CN1849142A (zh) 2006-10-18
US10525072B2 (en) 2020-01-07
AU2003298658A1 (en) 2004-06-15
US8674085B2 (en) 2014-03-18
WO2004046331A2 (en) 2004-06-03
SI1576138T1 (sl) 2017-07-31
CA2506129C (en) 2015-02-17
PL377342A1 (pl) 2006-01-23
ES2624353T3 (es) 2017-07-13
WO2004046331A3 (en) 2006-03-02
ZA200503834B (en) 2009-05-27
NO20052920L (no) 2005-08-15
US20140286900A1 (en) 2014-09-25
US7824851B2 (en) 2010-11-02
LT1576138T (lt) 2017-06-26
JP6063073B2 (ja) 2017-01-18
US20110129813A1 (en) 2011-06-02
JP5936176B2 (ja) 2016-06-15
JP2016136946A (ja) 2016-08-04
JP2006519753A (ja) 2006-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6063073B2 (ja) ２’−分枝ヌクレオシドおよびフラビウイルス科ウイルス突然変異
JP6309590B2 (ja) フラビウィルス科ウィルス感染治療用の修飾２’および３’−ヌクレオシドプロドラッグ
US7456155B2 (en) 2′-C-methyl-3′-O-L-valine ester ribofuranosyl cytidine for treatment of flaviviridae infections
US7582618B2 (en) 2′-C-methyl-3′-O-L-valine ester ribofuranosyl cytidine for treatment of flaviviridae infections
JP5080973B2 (ja) Ｒｎａ依存性ｒｎａウイルスの感染を処置するためのヌクレオシドアリールホスホルアミダート
EP1656093A2 (en) Nucleosides for treatment of infection by corona viruses, toga viruses and picorna viruses
JP2006512288A (ja) Ｒｎａ依存性ｒｎａウィルスポリメラーゼ阻害薬としてのヌクレオシド誘導体
JP2005533108A (ja) Ｒｎａ依存性ｒｎａウイルスポリメラーゼの阻害剤としてのヌクレオシド誘導体

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid