JPH07500573A - 抗ウィルス性リポヌクレオシド：ｂ型肝炎の治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、抗ウイルス性ヌクレオシド類似体の脂質誘導体を使用した、肝炎ウ ィルスの感染症の治療に関する。

より特定的には、この発明は、リポソームの構造に組込むことができ、それによ ってより多くの量の抗肝炎剤をより少ない毒性で標的細胞に配達できるより安定 したリポソーム複合体を形成する、抗ウイルス性ヌクレオシド類似体の脂質、特 にリン脂質誘導体に関する。

ここに参照した出版物および他の引用材料は引用によりここに援用され、当明細 書の最後に添付した引用文献の目録に便宜上リストにしている。

多くのヌクレオシド類似体はＢ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）に対して活性があるこ とが既知である。最近、カサニド（Ｋａｓｓａｎｉｄｅｓ）他（２）とともにり −（Ｌｅｅ）他（１）は、ジデオキシシチジン（ｄｄｅ）、ジデオキシイノシン （ｄｄ　Ｉ）　、ジデオキシアデノシン（ｄｄＡ）、ジデオキシチミジン（ｄｄ Ｔ）、ジデオキシグアノシン（ｄｄＧ）およびジデオキシジアミノプリン等のジ デオキシヌクレオシドは、アヒルのＢ型肝炎に対して試験管内および生体内で活 性があることを示した（１．　２）。これらの薬剤は、Ｂ型肝炎ウィルスがその ライフサイクルのある段階で使用する逆トランスクリプターゼを抑制するため、 効果的であると考えられている。報告によると、アシクロビル（ＡＣＶ）、ブロ モビニルデオキシウリジン（ＢＶｄＵ）、およびデオキシフルオロ−アラビノシ ルヨードシトシン（Ｆ　ＩＡＣ）等の他のヌクレオシドのトリホスフェートもま た、ヒトおよびウッドチャックからＢ型肝炎ウィルスのＤＮＡポリメラーゼを抑 制する（３）。アラビノフラノシルアデニン（ａｒａ−Ａ）およびアラビノフラ ノシルシチジン（ａｒａ−Ｃ）はヒトのＢ型肝炎のＤＮＡポリメラーゼを抑制し 、ａｒａ−Ａは、慢性Ｂ型肝炎にかかっている個体に投与されると活性を有する （４）。さらに、マテス（Ｍａｔｔｈｅｓ）他の報告によると、２’、３’−ジ デオキシ−３′−フルオロチミジン（ＦｄｄＴｈｄ）、２’、３’−ジデヒドロ −２’、３’−ジデオキシチミジン（ｄｄｅＴｈｄ）　、３’−フルオロー５− メチル−デオキシシチジン（ＦｄｄＭｅＣｙｔ）、３’−クロロ−５−メチル− デオキシシチジン（ＣｌｄｄＭｅＣｙｔ）および３′−アミノ−５−メチル−デ オキシシチジン（ＡｄｄＭｅＣｙｔ）は、試験管内においてＨＢＶ　ＤＮＡ−ト ランスフェクトされた細胞株でのＢ型肝炎ウィルス粒子の生産をほとんど完全に 阻害する。

上述の抗Ｂ型肝炎ヌクレオシド類似体は、ヒトまたは動物に遊離化合物として投 与される場合、その半減期が非常に短い。４ないし６時間後、組織およびブラス マでのそれらのレベルは非常に低いか無視できるほどである。これらのヌクレオ シド類似体はまた毒性であり、それらの毒性は治療を制限するファクタとなり得 る。明らかに、抗Ｂ型肝炎ヌクレオシド（ジデオキシヌクレオシド、非環式ヌク レオシド、およびデオキシヌクレオシド）の投与を、肝臓柔組織細胞がその標的 になり、かつより長い期間より高い組織レベルを維持できる形で行なうことが有 用であろう。

発明の概要 この発明は、１つの実施例において、プリンもしくはピリジンまたはその類似体 を含む塩基部分と、ペントース残基を含む糖質部分とを有する抗Ｂ型肝炎ヌクレ オシド類似体を含む、抗ウィルスの特性を有する化合物を提供し、もしペントー ス残基がアラビノフラノースでありかつ塩基部分がシトシンまたはアデニンであ る場合に化合物がリポソームの形であれば、少なくとも１つの部分は天然に存在 しないヌクレオシド成分であり、かつ脂質部分はペントース残基に結合される。

天然に存在しないヌクレオシド成分は、置換、欠失または復原により天然に存在 する塩基またはペントースの類似体となることが可能である。好ましい実施例で は、ペントース残基は、２’、３’−ジデオキシリボース、２’、３’−ジデヒ ドロリボースもしくはリボースのハロ誘導体、またはリボースの非環式ヒドロキ シル化フラグメントである。特に好ましい実施例では、ペントース残基は２’、 ３’−ジデオキシリボースであり、ヌクレオシド類似体は２’、３’−ジデオキ シシチジン、２′、３′−ジデオキシチミジン、２’、３’−ジデオキシグアノ シン、２’、３’−ジデオキシアデノシン、２’、３’−ジデオキシイノシン、 または２．６−ジアミツプリン。

２’、３’−ジデオキシリボシドである。他の好ましい実施例では、ペントース 基はリボースのハロ誘導体またはアミノ誘導体であり、７クレオシドは３′−フ ルオロ−５−メチル−デオキシシチジン（ＦｄｄＭｅＣｙ　ｔ）　、３’　−ク ロロ−５−メチル−デオキシシチジン（ＣｌｄｄＭｅＣｙｔ）、３’−アミノ− ５−メチル−デオキシシチジン（ＡｄｄＭｅＣｙ　ｔ）、または２’、３’−ジ デオキシ−３′−フルオロチミジンで西る。ヌクレオシド類似体は、代替的には 、アシクロビル、１−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビ ノフラノシル）−５−ヨードシトシン（Ｆ　ＩＡＣ）、またはｌ　（２′−デオ キシ−２′−フルオロ−裏−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシ ル（ＦＩＡＵ）であってもよい。特に好ましい実施例では、ヌクレオシド類似体 は、２’、３’−ジデヒドロ−２’、３’　−ジデオキシチミジンである。

上述の化合物は、ペントース残基の５′位と脂質部との間にモノホスフェ−１− 、ジホスフェートまたはトリホスフェート結合基をさらに含み得る。

化合物の脂質部は、脂肪酸、モノアルキルグリセロールもしくはジアシルグリセ ロール、ホスファチジン酸、ジホスファチジルグリセロール、ビス１．２−（ジ アシルグリセロ）−ホスフェ−１・、Ｄ、Ｌ−２，３−ジアシルオキシプロビル −（ジメチル）−β−ヒドロキシエチルアンモニウム基、または１−０−ステア リル−ｒａｃ−３−グリセロールが可能である。

他の実施例に従えば、この発明は、哺乳類のＢ型肝炎の感染症を治療するための 方法を提供し、これは開示される化合物のいずれかをＢ型肝炎ウィルスを抑制す る効果的な量だけ哺乳類に投与するステップを含む。この発明はまた、細胞内で のＢ型肝炎ウィルスの複製を抑制するための方法を提供し、開示される化合物の いずれかのＢ型肝炎ウィルスを抑制する効果的な量にその細胞を接触させるステ ップを含む。この発明のこの局面の特定的な実施例では、Ｂ型肝炎ウィルスはヒ トの細胞に感染しており、化合物は、ホスファチジル−ジデオキシシチジン（ｐ −ｄｄｅ’）、ホスファチジル−ＦＩＡＣ，ＦＴＡＣジホスフェートジグリセリ ド、ホスファチジル−ＦＴＡＵ、またはＦＩＡＵジホスフェートジグリセリトで ある。

好ましい実施例では、感染はヒトの細胞内であり、化合物は、ホスフェート基を 介して抗Ｂｆｆｉ肝炎ヌクレオシド類似体に付加される１−０−ステアリル−ｒ ａｃ−３−グリセロールを含む。

この発明のさらに他の実施例に従えば、ヌクレオシド類似体の脂質誘導体はリポ ソームに組込まれる。好ましい実施例では、実質的にすべてのリポソームの直径 は約１００ナノメートル未満てあり、平均の直径は約３０ないし８０ナノメート ルである。リポソームは、肝臓の洞様毛細血管を通過しかつ肝細胞によって選択 的に摂取されかつ病原体の保有部位を標的とするのに適切にそれに応した大きさ にされる。特に好ましい実施例では、化合物は非経口に、すなわち静脈内に、皮 下に、筋肉内にまたは腹腔内に、哺乳類に投与される。代替的な実施例では、化 合物は哺乳類に経口投与される。

この発明はまた、ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）、ＦＴＡＵ、ＦＴＡＣまたはＦ ’ＭＡＵからなる群から選択された活性モノ−、ジー、またはトリホスフェート を細胞に配達するための方法を提供し、これはヌクレオシド類似体の脂質プロド ラッグを細胞に配達するステップと、プロドラッグを酵素分解させて活性ホスフ ェートを細胞に配達するステップとを含む。

この発明はさらに、この発明の抗Ｂ型肝炎化合物および薬剤的に許容てきる担体 を含む薬剤組成物を提供する。この発明のこの局面の一実施例では、薬剤組成物 は異なる抗ウィルス剤をさらに含む。

図面の簡単な説明 図１ないし図６は、以下に示すように、ホスファチジル−ｄｄＣ（ｐ−ｄｄＣ） て処理された動物の特定の組織のジデオキシシチジンと、遊離ｄｄｅ　（ｄｄｅ ）で処理された動物のそれに対応する組織のジデオキシシチジンとの比較レベル を示している。

図１は、プラズマのｄｄｅの比較レベルを示すグラフである。

図２は、肝臓のｄｄｅの比較レベルを示すグラフである。

図３は、座骨神経のｄｄｅの比較レベルを示すグラフである。

図４は、脳のｄｄｅの比較レベルを示すグラフである。

図５は、リンパ節のｄｄｅの比較レベルを示すグラフである。

図６は、膵臓のｄｄｅの比較レベルを示すグラフである。

発明の詳細な説明 この発明は、Ｂ型肝炎ウィルスの複製を抑制する効果のあるヌクレオシド類似体 の脂質誘導体を含む。脂質誘導体またはりボヌクレオチドとして、これらの抗ウ ィルス剤はリポソームの脂質二重層に安定して組込まれ得る。これらの脂質誘導 体は構成細胞の代謝プロセスによってヌクレオシド類似体トリホスフェートに転 化することができ、かつ試験管内および生体内で抗ウイルス効果を有する。

同時係属中の出願連続番号第０７／３１９，４８５号および第０７／３７３．０ ８８号は、リポソームの脂質二重層に組込むことができる抗ウイルス性および抗 レトロウィルス性ジデオキシ−１非環式−１およびデオキシ−ヌクレオシドの脂 質類似体を開示している。これらの出願は、引用によりここに援用される。薬剤 を含むリポソーム粒子は、マクロファージまたは単球を含むレトロウィルス性病 原体を有する動物またはヒトに取込まれると、病原体の保有部位に選択的に摂取 される。

このタイプのヌクレオシド類似体、特にアジドチミジン（ＡＺＴ）およびジデオ キシシチジン（ｄｄｅ）の脂質誘導体での最近の実験によれば、非常に多くの量 の、薬剤を含む脂質粒子が肝臓に摂取される。脂質化合物が細胞内で代謝され抗 ウイルス性代謝産物になり得ることを示す以前のデータと合わせて考慮すれば、 Ｂ型肝炎に対して活性のあるヌクレオシドのりボヌクレオチドが、遊離ヌクレオ シドと比較してこの病原体に対して非常に大きな効力を持つことは明らかである 。

Ｂ型肝炎ウィルスの複製を抑制できるいかなる抗ウイルス性ヌクレオシドも、こ の発明の組成物および方法に使用するのに適切である。一般に、この発明の脂質 誘導体およびリポソームを調製する際に使用されるヌクレオシド類似体は、リボ ース、アラビノース、またはリボースもしくはアラビノース残基および／または 誘導体等のペントースに付加される、たとえばアデニン、グアニン、シトシンも しくはチミン、またはその類似体等のプリンもしくはピリミジン塩基を有する。

付加は、プリンの９位の窒素またはピリミジンの１位の窒素を介して行なわれる 。これらの窒素は、β−Ｎ−グリコジル結合によってペントース残基の炭素ｌに 結合される。

ペントース残基は、完全なペントースであるかまたはデオキシペントースまたは ジデオキシペントース等の誘導体である。さらに、ペントース残基は、ヒドロキ シル化２−プロポキシメチル残基またはヒドロキシル化エトキシメチル残基等の ペントースのフラグメントが可能である。これらの構造を存する特定のヌクレオ シド残基は、アシクロビルおよびガンシクロビルを含む。ペントースはまた、た とえばデオキシリボースの３′位に炭素原子の代わりに酸素または硫黄を存して もよい（ＢＣＨ−１８９）。

好ましいヌクレオシドは、２’、３’−ジデオキシシチジン（ｄｄｅ）　、２’ 　、３’−ジデオキシイノシン（ｄｄｌ）、２’、３’−ジデオキシアデノシン （ｄｄＡ）、２′、３′−ジデオキシチミジン（ｄｄＴ）、２’、３’−ジデオ キシグアノシン（ｄｄＧ）等のジデオキシヌクレオシド、９−（２−ヒドロキシ エトキシメチル）グアニン（７ｉｚりｏビル、ＡＣＶ）　、Ｅ−５−（２−プロ モヒニル）−２′−デオキシウリジン（ＢＶｄＵ）　、および１−（２′−デオ キシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードシトシン（ＦＩＡ Ｃ）等のヌクレオシド類似体、１−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β −Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（ＦＩＡＵ）、１−　（２’ −デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ〜アラビノフラノシル）−５−メチル ウラシル（ＦＭＡＵ）、１−　（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ −アラビノフラノシル）−５−エチルウラシル（ＦＥＡＵ）、９−β−Ｄ−アラ ビノフラノシルアデニン（ａｒａ−Ａ）、ならびに１−β−Ｄ−アラビノフラノ シルシチジン（ａｒａ−（：）である。イソｄｄＡ、イソｄｄＧ、２−ＣＤＧお よびＢＶａｒａ−Ｕとともに、２’、３’−ジデオキシ−３′−フルオロチミジ ン（ＦｄｄＴｈｄ）　、２′、３′−ジデヒドロ−２’、３’−ジデオキシチミ ジン（ｄｄｅＴｈｄン、３′−フルオロ−５−メチル−デオキシシチジン（Ｆｄ ｄＭｅＣｙｔ）　、３’−クロロ−５−メチル−デオキシシチジン（Ｃ１ｄｄＭ ｅＣｙ　ｔ）　、および３′−アミノ−５−メチル−デオキシシチジン（Ａｄｄ ＭｅＣｙｔ）のリン酸化された形を含む修飾されたピリミジンヌクレオシドもま た好ましい。特に好ましいヌクレオシドは、２’、３’−ジデオキシシチジン（ ｄｄＣ）および９−β−Ｄ−アラビノフラノシル−アデニン（ａｒａ−Ａ）であ る。

Ｂ型肝炎に対して活性かある、開示されたヌクレオシド類似体のいかなる脂質誘 導体も、この発明の範囲内である。

脂質基は、好ましくはヌクレオシド類似体と脂質との間のリン酸結合によってヌ クレオシド類似体に付加される。ホスフェート基はモノ−、ジー、またはトリホ スフェート基か可能であり、一般にこの発明の化合物においてペントースの５′ 炭素に結合されるか、しかしなから、ホスフェート基がペントースの３′ヒドロ キシル基に付加される化合物は、もしそれらにＢ型肝炎に対する活性があれば、 この発明の範囲内である。脂質がペントース基に直接結合される場合、それらの 結合はペントースの３′炭素または好ましくは５′炭素を介して行なわれ得る。

抗ウイルス性ヌクレオシドが結合される脂質は、リボヌクレオシドを脂質二重層 に固定できる疎水性アシル基を有する。適切な脂質は、たとえばモノ−もしくは ジアシルグリセリド、スフィンゴシンおよびジヒドロスフィンゴシン、ならびに 長鎖脂肪酸またはアルコールである。他の適切な脂質は、たとえば１−０−ステ アリル−ｒａｃ−３−グリセロール、バチルアルコール等のエーテル結合された 脂質の新規な構造を有するもの、またはたとえば、Ｄ、Ｌ−２゜３−ジステアロ イルオキシプロビル（ジメチル）−β−ヒドロキシエチルアンモニウム等のアン モニウム基を含むものである（６）。リボヌクレオチドは、ホスフェートリンカ −に付加される１つよりも多い膠質部を含み得る。

脂質部の脂肪族基は、好ましくは２ないし２４の炭素原子の鎖長を有し、かつ飽 和または６つまでの二重結合で不飽和であることか可能である。脂肪族基は、ア シルエステル、エーテル、千オニステル、チオエーテルまたはビニルエーテル結 合によってグリセロール部に付加され得る。

ホスファチジルヌクレオシド、ヌクレオシドジホスフェートジグリセリド、ヌク レオシドアシルホスフェートおよびセラミドホスホヌクレオシドを含むヌクレオ シド類似体の脂質誘導体のいくつかの基の構造は、同時係属中の出願連続番号第 ０７／３７３，０８８号に開示されている。

この発明の好ましい抗肝炎リボヌクレオチドは、ホスファチジル−ジデオキシア デノシン（ｐ−ｄｄＡ）、ホスファチジル−ジデオキシシチジン（ｐ−ｄｄｅ） 、ホスファチジル−ジデオキシグアノシン（ｐ−ｄｄＧ）、ホスファチジル−ジ デオキシイノシン（ｐ−ｄｄｌ）、ホスファチジル−ジデオキシチミジン（ｐ− ｄｄＴ）、ホスファチジル−９−（２−ヒドロキシメチル）−グアノシン（ｐ− ＡＣｖ）、ホスファチジル−１−（２’−デオキシ−２′−フル才ロー１−β− アラビノシル）−５−ヨードシトシン（ｐ−Ｆ　ＩＡＣ）　、ホスファチジル− １−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨード ウラシル（ｐ−Ｆ　ＩＡＵ）　、ホスファチジル−９−β−Ｄ−アラビノフラノ シルアデニン（ｐ−ａ　ｒ　ａ−Ａ）　、ジデオキシアデノノンジホスフェート ジグリセリド（ｄ　ｄＡＤＰ−ｄｇＬジデオキシシチジンジホスフエートジグリ セリト（ｄｄＣ−ＤＰ−ｄｇ）　、ジデオキシシチジンジホスフェートビス（ノ アシルグリセロール）、ジデオキシシチジンジホスフェートＤ、Ｌ２．２−ジア シルオキシプロビル−（ジメチル）−β−ヒドロキシエチルアンモニウム、ジブ オキソグアノシンジホスフェートジグリセリド（ｄｄＧＤＰ−ｄｇ）、ジデオキ シイノシンジホスフェートジグリセリド（ｄ　ｄ　ＩＤＰ−ｄｇ）　、ジデオキ シチミジンジホスフェートジグリセリド（ｄｄＴＤＰ−ｄｇ）、９−（２−ヒド ロキシメチル）グアノシンジホスフェートジグリセリド（ＡＣＶＤＰ−ｄｇ）、 １−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨード シトシンジホスフェートジグリセリド（Ｆ　ＩＡＣＤＰ−ｄｇ）、ｌ−（，２’ −デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードウラシルジ ホスフェートジグリセリド（Ｆ　ＩＡＵＤＰ−ｄｇ）　、および９−β−Ｄ−ア ラビノフラノシルアデニンノホスフエートジグリセリド（ａ　ｒ　ａ−ＡＤＰ− ｄｇ）である。

抗ウイルス性リボヌクレオチドの合成 この発明の化合物は、リン脂質をヌクレオシド類似体に結合するまたはリン脂質 をヌクレオシド類似体モノホスフェートまたはジホスフェートに結合する合成手 順に従って形成され、ヌクレオシドのホスフェート基は、３′位または好ましく は５′位で、ヌクレオシドのリボース基に配置される。合成は、同時係属中の米 国特許出願連続番号第０７／３７３，０８８号の例１ないし例７に示されている ように、記載されるすへての脂質およびすへての抗ウイルス性ヌクレオシドに適 用できる一般的な方法に従って行なうことができるが、好ましくは例１ないし例 ３に記載の合成方法に従って行なわれる。

脂肪酸、脂肪アルコール、グリセリド、およびリン脂質を含む脂質は、供給者（ アラバマ州（Ａｌａｂａｍａ）　３５１２４ベルハム（Ｐｅｌｈａｍ）のアバン テイボーラリビツド社（Ａｖａｎｔｉ　Ｐｏ１ａｒ　Ｌｉｐｉｄ、　Ｉｎｃ、） 　）から入手でき、または既知の方法に従って合成できる。抗ウイルス性ヌクレ オシド類似体は、ライスコンシン州（Ｗｉｓｃｏｎｓｔｎ）ミルウオーキー（Ｍ ｉ　１ｗａｕｋｅｅ）のアルドリッチ社（Ａｌｄｒｊｃｈ）、またはミズーリ州 （Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）セントルイス（Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ）のシグマ社（Ｓｉｇ ｍａ）から入手できる。

結合反応を進めるために、反応物から水分の痕跡をすへて取除くことが重要であ る。したがって、脂質は、まず真空下ですなわち真空オーブンでＰｓｉｓの下、 溶媒を蒸発させることによって凍結乾燥される。反応は、たとえばアルゴン、Ａ 等の不活性ガスのもとでも実行される。

抗ウイルス性ヌクレオシド類似体と脂質基との間にモノ−、ジー、またはトリホ スフェート結合を含むリボヌクレオチドは、リン脂質、リン酸化ヌクレオシド類 似体から、またはそれらの両方から調製され得る。

適切なリン脂質は、ホスホグリセリド、スフィンゴ脂質またはアシルホスフェー トを含む。リン酸化ヌクレオシド類似体は既知である。ジデオキシヌクレオシド 類似体は、ヨシカワ他（７，８）またはトーチエン（Ｔｏｏｒｃｈｅｎ）および トーパル（Ｔｏｐａｌ）　（９）のオキシ塩化リン法等の従来の手順に従ってリ ン酸化される。好ましい変形類似体は、５′−モノホスフェートである。主に長 鎖脂肪酸またはアルコール、モノグリセリドまたはジグリセリド、スフィンゴシ ンおよび以下に記載する他の脂質種は、たとえばブラウン（Ｂｒｏｗｎ）　（１ ０）の手順に従ってフェニルホスホロジクロリデートを使用して適切な薬剤で処 理することによって、またはオキシ塩化リンで処理することによって、または他 の既知のリン酸化の手順によってリン酸化され得る。

第１のタイプの合成ては、たとえばホスファチジン酸等のリン脂質は、例ＩＤに 示されるように、室温で、たとえば無水ピリジンのような塩基性触媒の存在下、 たとえば２゜４．６−ドリーイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド等の結合 剤によって、選択されたヌクレオシド類似体の３′または５′ヒドロキシルに結 合される。ジシクロへキシルー力ルポジイミＦ等の他の結合剤も使用できる。

脂質誘導体は、ビロリン酸結合によってホスファチジン酸を抗ウイルス性ヌクレ オシドモノホスフェートに結合することによっても合成できる。この手順では、 ヌクレオシドモノホスフェートまたはジホスフェートは、アグラノフ（Ａｇｒａ ｎｏｆ　ｆ　）およびスオミ（Ｓｕｏｍｉ）　（１１）の手順に従って、末端リ ン酸基に付加されるたとえばモルホリン等の脱離基を存する誘導体に転化される 。ホスファチジン酸とヌクレオシドホスフェートモルホリゾートの結合は、室温 で無水ピリジン等の塩基性触媒で２つの反応物の乾燥した混合物を処理すると起 こる。

代替的には、例２Ｄおよび例３Ａに示されているように、ホスファチジン酸は、 たとえばモルホリン等の脱離基を存する誘導体に転化できる。例２Ｅおよび例３ Ｃに示されているように、ホスファチジン酸モルホリゾートおよびヌクレオシド ホスフェートの結合は、塩基性触媒で混合物を処理すると起こる。この代替の合 成方法は、１９９１年５月２９日出願の米国特許出願連続番号第０７／７０６， ８７３号の主題である。

合成反応は、適切な溶媒とともに薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）を使用して追 跡される。ＴＬＣによって反応が終了したと判断されると、生成物は有機溶媒で 抽出されかつたとえばケイ酸等の脂質分離に適切な保持体上でクロマトグラフィ にかけることによって精製される。

反応性アミノ基を有するシチジンまたはアデニンを含む生成物の合成は、無水酢 酸での処理によって結合反応を起こす前に酢酸エステルでそれらの基を保護する ことによって進められ、最終生成物をクロマトグラフィにかけたあと、アミン基 は希水酸化アンモニウムを使用して脱保護される。

、二の発明の脂質誘導体のいずれにおいても、ヌクレオシドは抗肝炎の活性を有 するいずれの抗ウイルス性ヌクレオシドであってもよく、（ビス（ジアシルグリ セロ）ホスフェート種に関するＲ３−４と同様に）Ｒ１，は、２ないし、２４個 の炭素原子を有する飽和または不飽和のいかなる脂肪酸であってもよい。ポリ不 飽和、ヒドロキシ、分岐鎖、およびソクロプロパン脂肪酸もまた可能である。グ リセロール部の立体化学は、５ｎ−１または５ｎ−３ホスホエステル結合または そのラセミ混合物を含み得る。必要に応して、（ビス（ジアシルグリセロ）ホス フェート酸種に関する３つまたは４つだけでなく）１つまたは２つのアシルエス テル基またはアルキルエーテルもしくはビニルエーテル基かあってもよい。

ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトールに限らず、他のいか なるリン脂質をも含む種々の他のリン脂質かヌクレオシドに結合されてもよく、 そこにおいて、頭基は、イノシトール等の天然のポリヒドロキシルアルコール、 またはそれが他のポリヒドロキシアルコールもしくは糖質等の炭水化物によって 置換された天然または合成のものにおける有効な結合ヒドロキシル基を含む。こ の場合、ヌクレオシドホスフェートは、エステル化によって炭水化物またはアル コールの１つ以上のヒドロキシル基に付加される。他の糖脂質はまた、ヌクレオ チドのリン酸基が糖脂質のヒドロキシル基へのエステル化によって付加されるリ ガントとして作用し得る。天然または合成の、選択されたセレブロシドまたはガ ングリオシド等の適切な疎水性を有する他の糖脂質はまた、リン脂質であっても そうでなくても都合よく利用できる。これらは、炭水化物ヒドロキシル基の同様 なエステル化によってヌクレオチドに結合され得る。

さらに、抗ウイルス性ヌクレオシドは、ホスファチジルイノシトールモノ−、ジ ーおよびトリホスフェートのリン酸基、または天然または合成の、リン脂質また は糖脂質のリン酸置換された炭水化物部に結合できる。

ホスファチジルセリンはヌクレオシドのリボース基の５′−ヒドロキシルでその カルボキシル基をエステル化することによってヌクレオシド類似体に直接結合で きる。その構造がホスファチジルセリンに類似している合成リン脂質は、極性頭 基のカルボキシル基かあれば、同様の方法で結合され得る。

エーテルまたはビニルエーテル結合によって付加されたアルキル鎖を有するリン 脂質はまた、ヌクレオチド誘導体を調製するために使用され得る。この目的のた めの適切なリン脂質は、不飽和ビニルエーテル結合にある長鎖脂肪酸基を含む天 然に存在するアセタールホスファチド、またはプラズマローゲンを含む。代替的 には、１−０−アルキルグリセロールまたは２−０−アルキルグリセロールは合 成により調製され、選択されたヌクレオチドに結合され得る。

１−０−アルキル−グリセロ−３−ホスホ−５′−ジデオキシシチジンの誘導体 か好ましく、これはｄｄｅモノホスフェートを、グリセロールの１位で、２な（ 化２４の炭素鎖長のアルキル基を有する１−０−アルキル−グリセロールの種々 の類似体と縮合することによって調製され得る。

１−０−アルキル基は、２ないし２４炭素原子組長を存する飽和または不飽和脂 肪族基からなる。１−０−アルキルグリセロール残基は、ラセミ体または立体特 異的である。

この化合物は、脂肪酸の塩化物または無水物でアシルイヒされ、１−〇−アルキ ル、２−アシル−グリセロ−３−ホスホ−５′−ジデオキシシチジンの合成が得 られる。同様に、大過剰のジデオキシソチジンモノホスフエートを使用すること によって、１−〇−アルキル、２．３−ビス（ホスホ−５’−２’、３’−デオ キシシチジン）グリセロール類似体が合成され得る。これらの誘導体は、以下の 一般構造を有する。ここでＲ＋は、エーテルまたはビニルエーテル結合の、ｌな いし２３の炭素原子組長の不飽和または飽和アルキル鎖である。Ｒ２は、２ない し２４炭素原子の飽和もしくは不飽和脂肪酸エステルまたはＯＨである。Ｒ″で のエーテルまたはビニルエーテル結合もまた可能である。

もしＲ２がエーテル結合されたアルキル鎖であれば、グリセロールの１位の基は またＯＨが可能である。Ｎは、５′ホスホジエステル結合で結合される、Ｂ型肝 炎に対して活性を有するいかなる抗ウイルス性ヌクレオシドであってもよく、Ａ はカルコゲン（０、ＣまたはＳ）である。

リン酸化された抗ウイルス性ヌクレオシド（ヌクレオチド）かこの発明の好まし い実施例であるが、細胞代謝プロセスによって抗ウイルス性の効果を得るために 、感染細胞にヌクレオシドホスフェートを与える必要がなければ、ヌクレオシド 類似体のリンを含まない脂質誘導体を使用できる。このタイプの化合物のいくつ かの例には、アルキル結合に存在するかまたはこの発明の合成方法に従ってヌク レオシドの５′−ヒドロキシル基に直接エステル化された脂肪酸があるであろう 。

代替的には、たとえばどちらかの端にカルボキシル基を有しかつ中央に０ないし ＩＯのＣＨ，基を有する「スペーサ」分子を、抗ウイルス性ヌクレオシドの５′ −ヒドロキシルとエステル化できるであろう。「スペーサＪの他のカルボキシル は、ジアシルグリセロールまたは利用できるヒドロキシル官能基を有する他のい かなる脂質の遊離ヒドロキシル基ともエステル化され得る。端にある適切な官能 基を存する結合（「スペーサ」）基は、当業者に周知の化学的方法によってジグ リセリドまたは他の適切な脂質基をヌクレオシドに結合するために使用され得る 。

この発明の１つの局面に従えば、上述の抗ウィルス性ヌクレオシド誘導体は、リ ポソーム組成物を摂取する細胞にこれらの化合物を向けるために、リポソームに 組込まれる。

この組込みは、エクストルージョンまたは音波処理等の周知のリポソーム調製法 に従って行なうことができる。リポソームの調製の適切な従来の方法にはまた、 パンガム（Ｂａｎｇｈａｍ）他（１３）、オルソン（Ｏｌｓｏｎ）他（１４）　 、シーカ（５ｚｏｋａ）およびパパハジャボｏ　（Ｐａｐａｈａｄｊａｐｏｕｌ ｏｓ）（１５）、メイヒュー（Ｍａｙｈｅｗ）他（１６）、キム（Ｋｉｎ）池（ １７）、メイヤー（Ｍａｙｅｒ）他（Ｉ８）およびフクナガ他（１９）によって 開示されたものもあるが、それらに制限されるわけではない。この発明の方法に おいて使用するのに適切なリポソームはまた、たとえば市販の装置（マサチュー セッツ州のニュートン（Ｎｅｗｔｏｎ）の登録商標マイクロフルイダイザ−（Ｍ ｉｃｒｏｆ　１ｕｉｄｉｚｅｒ＠　）を使用して、マイクロ流体化を行なうこと によって調製され得る。リポソームの特異性にさらに焦点を当てるためにリガン ドもまた組込まれてもよい。

リポソームの大きさは、Ｂ型肝炎の感染症の治療において肝臓のＨＢＶに感染し た柔組織細胞、すなわち肝細胞への抗Ｂ型肝炎ヌクレオチド類似体の効果的な摂 取に関係する。ヌクレオチド類似体の脂質誘導体を含みかつその直径１００ナノ メートル未満のリポソームを作れば、非常に効果的にこれらの柔組織細胞を薬剤 の標的にできる。全身に投与されたリポソームの肝臓内での分布は、オランダの Ｇ−シャーホフ（Ｇ、　５ｃｈｅｒｐｈｏｆ）のグループによって、放射性イヌ リンがカプセル化されたリポソームを標識として使用して示された（１２）。こ れらの研究によると、リポソームの柔組織細胞への摂取は肝臓の洞様毛細血管の 形態によって制限されると考えられ、開窓の直径か約ｌｏａｎｍであるためＩｏ ｏｎｍよりも大きい粒子は下にある肝細胞に効果的に接近することができない。

比較的大きいリポソームは肝臓に内在するマクロファージ、すなわちクツパー　 （Ｋｕｐｆｆｅｒ）細胞によって優先的に摂取される（２０．２１）。したかっ て、抗肝炎ヌクレオシド類似体を含むリポソームの直径は２００ナノメートル未 満てなければならず、好ましくは直径１００ナノメートル未満であり、直径約３ ０ないし８０ナノメートルの範囲内である。シャーホフ（５ｈｅｒｐｈｏｆ　） の発見を考慮すると、直径１００ナノメートル未満の抗Ｂ型肝炎ヌクレオチドを 含むリポソームは、肝臓の柔組織細胞をより効果的に薬剤の標的にして肝臓が薬 剤を非常に多くかつ効果的に摂取するようにできることが予測できる。

リポソームを選択された直径に調整することは、例４に示されるように、適切な 孔径の登録商標ヌクレボア（Ｎｕｃｌｅｐｏｒｅ■）フィルタを介するエクスト ルージョンによって、またはマーティン（Ｍａｒｔｉｎ）に与えられた米国特許 番号第４．７３７．３２３号に記載のセラミックフィルタを通過させることによ って、または好ましくは例６に示されるように、マイクロ乳化装置（マサチュー セッツ州のニュートン（Ｎｅｗｔｏｎ）バイオテクノロジーデベロップメント社 （Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ ｏｎ　）の登録商標マイクロフルイダイザ−（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ■ ））で処理することによって行なわれる。

リポソームは、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホス ファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン、ホスファチジルセリン、または ホスファチジルイノシトール等の、卵、植物または動物に由来するような天然物 由来のリン脂質を含む従来の合成または天然のリン脂質リポソーム材料のいずれ かと好ましくは組合わせて、ヌクレオシド類似体の脂質誘導体から作ることがで きる。使用され得る合成リン脂質には、シミリストイルホスファチジルコリン、 ジオレオイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンおよ びジステアロイルホスファチジルコリン、ならびにそれに対応する合成ホスファ チジルエタノールアミンおよびホスファチジルグリセロールが含まれるが、それ らに制限されるわけではない。

従来的に既知であるように、コレステロールもしくは他のステロール、ヘミコハ ク酸コレステロール、糖脂質、セレブロシド、脂肪酸、ガングリオシド、スフィ ンゴ脂質、１゜２−ビス（才しオイロキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プ ロパン（ＤＯＴＡＰ）　、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイル）プロピル］−Ｎ 、Ｎ、Ｎ−トリメチルアンモニウム（クロリド）（ＤＯＴＭＡ）、Ｄ、Ｌ、−２ ，３−ジステアロイルオキシプロビル（ジメチル）−β−ヒドロキシエチルアン モニウム（アセテート）、１．２−ジオレオイル−３−ジメチル−アミノプロピ ル−β−ヒドロキシエチルアンモニウムアセテート（ＤＯＲｒジエステル）、１ ゜２−０−ジオレイル−３−ジメチルアミノプロピル−β−ヒドロキシエチルア ンモニウムアセテート（ＤＯＲＩジエステル）、（ＤＯＲＩＯＲチェステルテル ）、グルコプシコシン、またはプシコシン等の他の添加剤を添加することもでき る。必要であれば、リポソームに使用される添加物およびリン脂質の相対量を変 えてもよい。好ましい範囲は、約８０ないし９５モルパーセントのリン脂質と５ ないし２０モルパーセントのプシコシンまたは他の添加物である。

コレステロール、ヘミコハク酸コレステロール、脂肪酸またはＤＯＴＡＰを、０ ないし５０モルパーセントの範囲の量で使用してもよい。リポソームの脂質層に 組込まれる抗ウイルス性ヌクレオシド類似体の量は、それら脂質の濃度とともに 約０．Ｏｌないし約９０モルパーセント、好ましくは約４０または６０モルパー セントまでの範囲で変えることかできる。

活性化合物を取込む従来の方法を使用すると、溶液中に存在する物質の約２０な いし５０％か取込まれ、したがって約５０ないし８０％の活性化合物か浪費され る。対照的に、ヌクレオシド類似体の脂質誘導体か膠質に組込まれる場合、ヌク レオシド類似体は事実上すべてリポソームに組込まれ、活性化合物は事実上全く 浪費されない。

この発明の脂質誘導体はまた、乳化剤を使わずに、エマルションまたはミクロエ マルションとして治療に使用するために調製でき、上述の製剤は、非常に小さい 直径の分散相液滴として水性媒質に存在する。たとえば、分散相液滴の直径が約 ０．０１０μｍないし約０．２μｍの範囲であるそのようなマイクロエマルショ ンの構成を開示している、タック（Ｃｏｏｋ）他に与えられた米国特許番号第４ ，５３３゜２５４号の、そのようなエマルションを形成するための装置を参照さ れたい。

抗肝炎ヌクレオシドの脂質誘導体の治療上の使用リポソームに組込まれたリン酸 化ヌクレオシド類似体は、リポソームの投与に使用される既知の手順のいずれか によって患者に投与される。リポソームは、緩衝水溶性液として静脈内に、腹腔 内に、筋肉内に、または皮下に投与でき、その代わりに、液体または固体製剤で 口径投与してもよい。

薬剤的に許容できるいかなる水性緩衝剤または他の媒質も、それがリポソーム構 造または抗ウイルス性ヌクレオシド類似体の活性を破壊しない限り使用できる。

適切な水性緩衝剤の例は、ｐＨ約７．４の、５Ｍｍのリン酸ナトリウムを含む１ ５０ＭｍのＮａＣｌ、または他のいかなる生理学的緩衝塩溶液である。

ヒトを含む哺乳類に対する投薬量は、感染の程度および重度と投与した化合物の 活性とに応じて変わり得る。抗ウイルス性ヌクレオシド類似体の投薬量レベルは 、十分に確立されている。ヌクレオシド類似体の脂質誘導体の投薬量レベルは、 リボヌクレオチドのヌクレオシド類似体部分として計って、約０．００１ｍｇ／ ｋｇないし１０００ｍｇ／　ｋ　ｇ、好ましくは約０．ｏ５ｍｇ／ｋｇないし約 １００ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇか患者に毎日投与されるようにするべきである。

上述の誘導体は、以前に出願した同時係属中の出願連続番号第０７１０９９．７ ５５号に記載の水溶性ジデオキシヌクレオシドホスフェートに対していくつかの 固在の新規な利点を有する。第１に、それらをより効率的に調剤できることであ る。ヌクレオシド類似体の脂質誘導体を含むリポソームは、水性の中心区分に配 置される代わりにリポソームの壁に組込まれるため、薬剤対脂質の割合がはるか に高い。第２に、上述の脂肪親和性ジデオキシヌクレオシド誘導体を含むリポソ ームは、貯蔵している間に漏れず、生成物の高い安定性か得られることである。

さらに、これらの組成物は凍結乾燥され、室温で乾燥して保管され、使用する際 に再構成されるため、貯蔵寿命が長くなる。それらはまた、活性化合物をあまり 浪費せずに抗ウイルス性化合物をリポソームの製剤に効率的に混合できるように する。

それらにより、治療上の利点が得られる。リポソームに組込まれた薬剤は安定性 かあるため投与された抗ウイルス性ヌクレオシドの高いパーセンテージを意図さ れた標的に届かせることかできるとともに細胞によって摂取される量を一般に最 小にすることかできるため、ヌクレオシドの有毒な副作用を低減する。ヌクレオ シドの仔毒な副作用は、実際のまたは潜在的な感染部位に特異的に結合するりガ ントをリポソームに組込むことによってヌクレオシドか含まれるリポソームをそ の感染部位に目標付けることによりさらに低減され得る。

最後に、上述の化合物が、さらなる細胞代謝の際にリン酸化ジデオキシヌクレオ シドまたは他の抗ウイルス性ヌクレオシドを生じ得る新規な方法で構成されたこ とである。

これにより、抗ウイルス性遊離化合物の効力に対して抵抗力のあることが既知で ある細胞における抗ウイルス性の効力が向上する。実際に、この発明を使用する ことによって、生物学的に活性のあるリン酸化ヌクレオシドを細胞の内部に配達 するための方法か得られるであろう。したがってこの発明の化合物は、リン酸化 ヌクレオシド類似体の先駆物質またはプロドラッグである。

抗ウイルス剤脂質誘導体の抗ウイルス性の効力は脂質のない薬剤に比へて長く、 したがってそれらには、リポソームに組込まれていないときでも、薬剤として治 療上の利点がある。抗ウイルス性ヌクレオシド類似体のリポソームに組込まれて いない脂質誘導体は、たとえば口から、気管内からまたはそうてなければ肺経路 により、腸から、直腸から、鼻から、膣から、舌から、静脈内から、動脈内から 、筋肉内から、腹膜内から、皮肉から、または皮下から、皮膚もしくは粘膜にま たは体の内部に与えることができる。

本薬剤の調製は、活性な薬剤のみを含むか、または製薬的にさらに有用な物質を 含み得る。それらは、生物分解性のまたは他の経時的に放出する担体を含む製薬 上許容できる担体をさらに含み得る。

抗ウイルス性ヌクレオシドの脂質誘導体を含む薬剤の調製は、約０．Ｏｌないし １００重量％、好ましくは約０゜１ないし５０重量％の有効成分を含むように、 従来の溶解および凍結乾燥処理によって行なわれる。それらは、飲みやすくする ためまたは快適に使用できるようにするために効果的な補形薬、賦形剤、希釈剤 、芳香剤または香味料を加えて軟膏、膏薬、錠剤、カプセル、粉末またはスプレ ーとして調製できる。

リボヌクレオチド類似体の経口投与は、肝臓によって確実に効果的に摂取させる ことにおいて有利であろう。経口摂取のための製剤の形状は、錠剤、カプセル、 欠削、粉末状の活性な薬剤のアンプル、または油性もしくは水性の懸濁液もしく は溶液である。錠剤または他の液体でない経口組成物には、薬剤組成物の製造業 者に既知である許容できる補形薬か含まれ、これにはラクト−スまたは炭酸カル シウム等の希釈剤、ゼラチンまたは澱粉等の結合剤、および甘味料、香味料、着 色料または保存料からなる群から選択される１つ以上の薬剤が含まれ、飲みやす い調製物ができる。さらに、そのような経口調製物は、腸管での分解および吸収 をさらに遅らせるために既知の技術によってコーティングされてもよい。

水性懸濁液は、メチルセルロース等の懸濁剤およびレシチンまたは長鎖脂肪アル コール等の湿潤前を含む薬理学的に許容できる補形薬との混合物に有効成分を含 み得る。水性懸濁液はまた、工業規格に従った保存料、着色料、香味料および甘 味料を含んでもよい。製剤は、アスコルビン酸またはトコフェロール等の酸化防 止剤、およびヒドロキシ安息香酸エステル等の保存料をさらに含んでもよい。

非経口調製物は特に無菌のまたは滅菌された製品を含む。

注射可能な組成物は、活性化合物および任意の周知の注射可能な担体を含んで作 られ得る。これらは、浸透圧を制御するための塩を含み得る。

脂質誘導体の治療上効果的な量は、いかなる特定の場合に適切な投薬量を選択す る際にも、患者の体重、総合的な健康、代謝、年齢および薬剤に対する反応に影 響を及ぼす他のファクタを考慮して、活性な抗ウイルス性ヌクレオチドの勧めら れた投薬量を参照することによって判断される。

非経口投薬量は、経口投薬量の約３／４ないし！／１０であり、静脈内、皮下、 筋肉内、または腹膜経路により与えられる。

この発明の抗肝炎リボヌクレすチドの効力は、試験管内および生体内で行なわれ た試験において示された。生体内試験は例５に示されるように実行され、薬物動 体学的な結果は図１ないし図６に示されている。効力は、投与量レベル対時間の 曲線の下の面積（ＡＵＧ）を注目することによって評価された。特に、肝臓のホ スファチジル−ｄｄｅのＡＵＧは、遊離ｄｄｅのＡＵＧの４２倍であり、この新 規なりボヌクレオチドの予想された目標とする特徴を明確に示している。同時に 、座骨神経および脳のＡＵＧは、ｄｄＣに関する毒素による損傷の部位について 、遊離薬剤よりも実質的に大きくない効果的な組織レベルを示した。このデータ に基づくと、ホスファチジル−ｄｄｅ等の目的とする抗ＨＢＶ類似体は、Ｂ型肝 炎の治療において効力を増し、かつｄｄＣに関する臨床上の主要な問題である神 経毒性を減少できることが明らかである。

抗肝炎ヌクレオシドの脂質誘導体は、培養細胞においてＨＢＶに対して効果的で ある。ＦＴＡＣの３つの異なる脂質誘導体およびＦＩＡＵの３つの対応する脂質 誘導体を使用した試験管内試験は、例４、セクションＢおよび表１に示されるよ うに、ｈｅｐＧ２．２．１５ＨＢＶ惑染細胞において実行された。データは、Ｆ ＩＡＣおよびＦＩＡＵリボヌクレオチドは試験管内でかなりの活性を存すること を示している。脂質コン］・ロール、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯ ＰＣ；　４０Ｗおよび４０Ｘ）は活性がない。１，２−ジオしオイルグリセロ− ３−ホスホ−５′−（２’、３’−ジデオキシシチジン）を使用した試験管内試 験は、例４、セクションＣおよび表２に示されるように、ｈｅｐＧ２．２．１５ ＨＢＶ感染細胞において実行された。

ここても、ｄｄＣおよび対応するりポヌクレオチドは、培養細胞においてＨＢＶ に対してかなりの活性を存し、脂質コントロール、１．２−ジオレオイルホスフ ァチジルコリン（ＤＯＰＣ）は活性かない。

抗ウイルス性ヌクレオチドの脂質誘導体は、特に肝臓の特別な細胞および組織に 優先的に接近でき、このようにしてＢ型肝炎病原体の保有部位を標的にできる。

図１ａ−図Ｉｆに示されているように、例５のデータは、ｄｄｅの脂質誘導体に よってこれらの細胞および組織に配達されかつ維持されるｄｄｅの高いレベル、 およびｄｄｅの毒性の影響を受けやすい組織の対応する低いレベルという目標と する利点を示している。

示された特性に基づいて、この発明の脂質誘導体は、Ｂ型肝炎の感染症の治療の ための効果的な治療薬を提供する。

現在この病気のための一般に効果的な治療法は存在しない。

この治療法での臨床実験は、一般的な抗ウィルス剤であるインターフェロンアル ファがいくつかの選択された場合にのみ効果的であり、抗肝炎の活性があること が既知である、ジデオキシシチジン等の抗ウイルス性ジデオキシヌクレオシドの 毒性の影響は、これらの薬剤を治療に使用する際に制限的なファクタとなり得る 。

組織培養におけるＨＢＶ感染細胞のＤＮＡ生成の抑制から得られる情報および抗 ＨＢＶ剤のリポソームの脂質誘導体によってもたらされるマウスにおける的確な 配達から得られる情報を基にして、かつリボヌクレオチドが細胞内で抗ウイルス 性代謝産物に転化されることを示す、レトロウィルスに感染した細胞を用いた以 前の研究（たとえば、同時係属中の出願番号第ｏ７／３７３．０８８号の実験Ｈ ６３７−１ｂおよび図４参照）を合わせて考慮すれば、ウィルスを持っているが その病気の徴候が現れていない個体だけではなくＨＢＶに感染した患者において もＨＢＶを同様に抑制するための戦法を作ることが可能である。

ＨＢＶに感染した患者において、ウィルスは感染細胞内で増殖するため、病気を 治療しかつウィルス性ＤＮＡの複製を防ぐために、まず血流にさらに最後に細胞 に薬剤を導くことができる方法で患者に抗ウィルス剤を投与しなければならない 。このデータ、およびリポソームを適切な大きさにすれば肝臓内のＢ型肝炎の病 原体のある部位に非常に効果的に摂取されるという発見を考慮すれば、効果的な 小さい直径のリポソームに組込まれる、いかなる抗Ｂ型肝炎ヌクレオシドの脂質 誘導体も、毒性が低いと予測される少ない投与量で生体内において効果的である ことが予想される。

この発明は、以下の例示的な例を参照することによってより十分に理解できるが 、しかしながら、これらの例はこの発明を不当に制限するものではない。

興１ １．２−シミリストイルグリセロホスホ−５’　−（２’　。

３′−ジデオキシ）シチジンの合成 Ａ、扛μ： たとえば、ジラウロイル、シミリストイルおよびジパルミトイルホスファチジン 酸のようなホスファチジン酸は、アバンティボーラリビド（Ａｖａｎｔｉ　Ｐｏ １ａｒ　１ｉｐｉｄｓ　）　（米国アラバマ州ベルハム（Ｐｅｌｈａａ＋）　） からナトリウム塩として得られた。ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ　）　５０Ｗ　（ ５０Ｘ２−２００．１００−２００メツシユ）および２’、３’−ジデオキシシ チジンは、シグマケミカル社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｏ＋１ｃａｌ　Ｃ００）（米 国ミズーリ州セントルイス（Ｓｔルｏｕｉｓ）　）の製品であった。モルホリン 、ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）および第３級ブチルアルコール（ ２−メチル−２−プロパツール、ｔＢｕＯＨ）は、アルドリッチケミカル社（Ａ ｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　（米国ライスコンシン州ミルウォ ーキー　（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ　）　）から入手できる最も高いグレードのもの であった。

Ｂ、ホスファチジン酸塩の遊離酸の形への転化：ホスファチジン酸、ナトリウム 塩は、ブリ（Ｂｌｊｇｈ　）およびダイヤ−（Ｄｙｅｒ）によるＣａｎ、Ｊ、Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、３７の９１１−９１７　（１９５９）に従った抽出法を適用する ことによって酸性化された。これにより、１ｍｍｏｌの脂質は、ＣＨＣＩｚ　１ ００ｍＬ　ＭｅＯＨ２００ｍｌおよび０，１ＭのＨＣＩ　１００ｍ１の均質な混 合物中に溶解され、室温で１時間攪拌された。その後Ｈ＊　Ｏｌ　００ｍ　ｌお よびＣＨＣｌｚｌｏｏｍｌが加えられ、分離したＣ　ＨＣｌ　ｓ層が分取され、 水相が２００ｍ１のＣＨＣｌ、で２度抽出された。

合わせられたＣＨＣｌ２の抽出物は、乾燥するまで蒸発され凍結乾燥された。収 率：遊離酸として９５−１００％のホスファチデート。

無水エタノール（３５ｍｌ、まずリンディ（Ｌｉｎｄｙ　）型の４Ｘモレキユラ ーシーブで乾燥され、マグネシウムターニング下で２度蒸溜された）中２’−３ ’ジデオキシシチジン（ｄｄＣ：４００ｍｇ、ｆ、８９ｍｍｏｆ）の攪拌された 還流溶液に無水酢酸（０，４ｍｌ　５．４ｍｍｏｌ）が添加された。３時間の還 流の間に、３０分おきにさらに４回、０．４ｍ１部の無水酢酸が添加された。反 応の後には薄層クロマトグラフィー（クロロホルム中ｌθ％のメタノールで展開 されるコダッククロマグラム（Ｋｏｄａｋ　Ｃｈｒｏｍａｇｒａｍ）のシリカゲ ルＦ２５４）が行なわれた。最後の添加の後、溶液はさらに１時間還流された。

反応混合物は冷却され、かつ溶媒は低い圧力下で蒸発された。残基は、クロロホ ルム（５ｍｌ）中８％のメタノールて再び溶解され、シリカゲルカラム（２，２ ｃｍＸ３０ｃｍ、キーセルゲル（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　）　６０．７０−２３０ メツシユ、ＥＭサイエンス（８Ｍ　５ｃｉｅｎｃｅ）　、４５　ｇ）でクロマト グラフィーにかけられた。カラムは、クロロホルム中８％のメタノールで溶出さ れ、８０９６の収率で純粋な４−アセチル−２′３′−ジデオキシシチジン（ｄ ｄｅ−ＯＡＣ）を生成した。

Ｄ＝結合反応： 結合反応の前日に、（上述のＢに示されるように調製された、２５０ｍｇ、０． ４２ｍｍｏｌの）ＤＭＰＡ−Ｈは、丸底フラスコ（５０ｍＪ）でシクロヘキサン （１０ｍｌ）中に溶解され、溶媒は室温で減圧下で蒸発された。このプロセスば あと４回繰返され、ＤＭＰＡ−Ｈは真空オーブンにおいて室温て一晩Ｐ２０．で さらに乾燥された。アルゴン下で、乾燥したＤＭＰＡ−Ｈを含む５０ｍ１の丸底 フラスコに、乾燥したｄｄＣ−ＯＡＣ（真空下で一晩Ｐｒｏｓて乾燥された、８ ５ｍｇ１０．３３ｍｍｏｌ）、２．４゜６−ドリイソプロピルベンゼンスルホニ ルクロリド（ＴＰＳ）（３１５ｍｇ、１．０４ｍｍｏ　１）および無水ピリジン （２ｍ　ｌ　）をシリンジによって加えると、澄んだ溶液が得られた。反応混合 物は、室温で１８時間攪拌された。

（反応の後に薄層クロマトグラフィーが行なわれた）。余分な触媒を破壊するた めに水（１ｍｌ）が混合物に加えられた。溶媒は減圧下で蒸発され、黄色のガム を生成し、これはクロロホルム中のわずかなメタノール（体積比ｌ：９）に再び 溶解され、シリカゲル（４５ｇ、牛−セルゲル６０、ＥＭサイエンス）のカラム に与えられた。カラムの上には、試料か溶出の間に浮遊するのを防ぐために少量 の砂（５００ｍｇ）か置かれた。カラムは、クロロホルム（１，５Ｌ）中８％の メタノールで溶出された。初流（廃棄）の後に、シミリストイルホスファチジル −５’　−（２′　３′−ジデオキシ）シチジン（ＤＭＰＡ−ｄｄＣ）か得られ た。生成物を含むフラクションは合わせられ、溶媒は減圧下で蒸発された。残基 はシクロヘキサンでさらに乾燥され、純粋なりＭＰＡ−ｄｄＣ−ＯＡＣ（７０％ （７）収率、２１０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を生成した。Ｒ１０，４０（シリ カゲルＧＦ、２０Ｘ２０ｃｍ、アナルテク（Ａｎａｌｔｅｃｈ）　、容量比クロ ロホルム：メタノール：水：アンモニア＝８０：２０：１：１）。

Ｅ：９Ｎ　ＮＨ４ＯＨての脱保護： ｄｄｅ−ＯＡＣ−ＤＭＰＡ　（４０ｍｇ、０．０４ｍｍ。

１）はクロロホルム：メタノール（１：　１，２ｍ１）に溶解され、９Ｎ　ＮＨ ，０Ｈ（１０滴）かすぐに加えられた。

溶液は室温で１５分間攪拌され、その後すぐに氷酢酸でｐＨ７まで中和された。

中和溶液は、減圧下で一晩乾燥するまで蒸発され、シミリストイルホスファチジ ル５’　（２’３′−ジデオキシ）シチジン（ＤＭＰＡ−ｄｄｅ、３５ｍｇ、０ ．　０３７ｍｍｏ　ｌ）を生成した。融点：２４０°ＣでＤＭＰＡ−ｄｄＣ分解 。シリカゲルＣＦプレート上の薄層クロマトグラフィーで、Ｒｆ値は、０．１１ （クロロホルム　メタノールニ水：アンモニア＝８０：２０：Ｉ：１）、０．３ ８（クロロホルム：メタノール：アンモニア：水＝７０：３０：３・２）、０． １５（クロロホルム：メタノール、水＝６５：２５：４）、ＵＶ吸収最大２７３ ｎｍ（ｅ　５．８００）。

ＮＭＲ：　（ＣＤＣｌ２）ｄ　Ｏ，８６（６Ｈ，ｂｔ、アシルＣＨ３）、１．　 ２４　（４０Ｈ，ｂｓ、アシルＣ）！２）、ｌ、５７　（４Ｈ，ｍ、βアシルＣ Ｈ２）、２．２８　（４Ｈ。

ｍ、ａアシルＣＨ２）、３．　３６　（２１（、ｍ、リボース５’　Ｈ）　、３ ．９４　（２Ｈ，ｂｓ、５ｎ−３ＣＨ！グリセロール）、４．１９　（ＩＨ，ｍ 、５ｎ−Ｉ　ＣＨ，グリセロール）、４．２９　（ＩＨ，ｍ、５ｎ−Ｉ　ＣＨｔ グリセロール）、４．４０　（ＩＨ，ｂｓ、リボース４’Ｈ）、５゜１９　（Ｉ Ｈ，ｍ、５ｎ−２ＣＨグリセロール）、５．８９　（ＩＨ，ｍ、チミン５−Ｈ） 、７．　４４　（ＩＨ，ｂｓ。

チミンＮＨ３）、７．９４　（ＩＨ，ｂｓ、チミンＮＨＩ　）。

ホスファチジン酸対２′３′−ジデオキシシチジンのピーク面積の比率はｌであ る。

例１ａ：１．２−ジラウロイルグリセロホスホ−５′−（２’、３’−ジデオキ シシチジン）、ＤＬＰ−ｄｄＣ。

例１ｃ：１．２−ジパルミトイルグリセロホスホ−５′−（２’、３’−ジデオ キシシチジン）、ＤＰＭ−ｄｄＣ。

例１ｄ：１．２−ステアロイルグリセロホスホ−５′−（２’、３’−ジデオキ シシチジン）、ＤＳＰ−ｄｄＣ。

例１ｅ：１．２−ジラウロイルグリセロホスホ−５′−（２′−デオキシ−２′ −フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードシトシン、ＤＬＰ−Ｆ　ＩＡ Ｃ：例！ｆ；１．２−シミリストイルグリセロホスホ−５’　−（２’　−デオ キシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードシトシン、ＤＭＰ −Ｆ　ＩＡＣ；例１ｇ：１．２−ジパルミトイルグリセロホスホ−５’　−（２ ’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードツトシン 、ＤＰＭ−Ｆ　ＩＡＣ；例１ｈ：Ｉ、２−ステアロイルグリセロホスホ−５’　 −（２’−デオキシ−２′〜フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードシ トシン、ＤＳＰ−Ｆ　ＩＡＣ； 例１ｉ：Ｉ、２−ジラウロイルグリセロホスホ−５′−（２′−デオキソ−２′ −フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードウラシル、ＤＬＰ−Ｆ　ＩＡ Ｕ　；例１ｊ：１．２−シミリストイルグリセロホスホ−５’　−（２’　−デ オキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードウラシル、ＤＭ Ｐ−Ｆ　ＩＡＵ　、例１に、：１＋２−ジパルミトイルグリセロホスホ−５’　 −（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードウ ラシル、ＤＰＭ−Ｆ　ＩＡＵ　；および例ＩＩ！：１．２−ステアロイルグリセ ロホスホ−５’　−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル ）−５−ヨードウラシル、ＤＳＰ−Ｆ　ＩＡＵが、結合ステップにおいて適切な 種類のホスファチジン酸を使用すること以外は上述の方法に従って調製される。

ＦＩＡＣおよびＦＩＡＵの膠質誘導体は、結合剤として（ＴＰＳ）の代わりにジ シクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を使用して、および同じモル比の反応 物および結合剤を使用して調製される。例１ａないし例１１の化合物はすべて上 述の態様で調製されかつ精製される。

例２ 一ル（Ｆ　ＴＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧ）の合成Ａ：材料ニ オキシ塩化リン、リン酸トリメチルリン、シリカ６０Ｆ２５４ＨＰＴＬＣプレー ト（１ｏｘ２０ｃｍｌ、シリカ６０Ｆ２５４アルミニウムプレート（５Ｘ　ｌ　 Ｏｃｍ）　、ＨＰＬＣグレードの溶媒（リクロソルブ（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｌｖ） 　）および他のすべての化学薬品は、特に述べないかぎりメルク（Ｍｅｒｃｋ　 ）　（ドイツ連邦共和国、ダルムシュタット（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ　）　）から の製品であった。

Ｂ、ヌクレオシドのリン酸化： （ＣＨＩ　Ｏ）３　ＰＯにおけるＰＯＣｌ３での保護されていないヌクレオシド のリン酸化は、本質的に、ヨシカワ他によるＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ 、５０．　５０６５−５０６８　（１９６７）、およびヨシカワ、Ｍ、カトウ他 によるＢｕｌｌ、ＣｈｅＰＯ中２ｍｍｏｌのＰＯＣ］　３の冷却された溶液（０ °Ｃ）に、ヌクレオシド（１ｍｍｏｌ）が、反応温度をＯないし５°Ｃの間て一 定に保持して、攪拌しながら徐々に加えられた。反応の進行は、Ｍｏｎｏ　Ｑ　 ＨＲ５１５陰イオン交換カラム（スウェーデン、ウプサラ（Ｕｐｐｓａｌａ　） 　、ファーマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　）　）を使用してＨＰＬＣによってモ ニタリングされた。典型的には、５μｌの反応混合物が水酸化ナトリウム水溶液 で中和され（最終のｐＨ７）　、カラムに注入された。溶出は以下のように行な われた：水で洗浄し、０．１ＭのＮＨ，ＨＣＯ，で溶出し、これはヌクレオシド −５′−モノホスフェートを溶出し、次に０．１−０゜６Ｍ　ＮＨ＝　ＨＣＯ＊ の直線勾配による溶出を行ない、これにより、より高度にリン酸化された生成物 がいくらか溶出された。この方法によって判断されるように、反応は４５ないし ７５分以内にほとんど終了し、反応生成物は、加水分解されかつ２倍の容量の水 酸化ナトリウム水溶液で最終のｐＨか７になるまて中和された。反応混合物の分 析のために、精製は、上述のように行なわれた。この方法を使用すれば、１０− ２０ｍｇのヌクレオシド−５′−モノホスフェ−１〜をｍ製できた。同じ溶出の 条件を使用して、より多くの量かセファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　）　Ｑ高 速カラムて精製された。

ジパルミトイルホスファチジン酸（９５０ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）は、例１の バートＢに本質的に示されるように、そのナトリウム塩から調製された。遊離ホ スファチジン酸は、３０ｍ１のｔ　ｅ　ｒ、ｔ−ブタノール、モルホリン（０゜ ５３ｍ１．６ｍｍｏｌ）および蒸溜水（０，１ｍｌ、６ｍｍｏｌ）を含む２首丸 底フラスコに移された。この混合物は静かに還流され、３０ｍ１のｔｅｒｔ−ブ タノール中のジシクロへキシルカルボジイミド（１，２０ｇ、５．９ｍｍｏ　ｌ ）の溶液が２時間以内に滴下漏斗から徐々に加えれた。反応は、シリカ６０Ａ　 Ｆ２５４ＴＬＣプレート上、クロロホルム／メタノール／水酸化アンモニウム／ 水（８０：２０：ｌ：１．ｖ／ｖ）を溶離液（Ｒｆ＝０．５３）として使用した 薄層クロマトグラフィーによってモニタリングされた。溶媒は真空下で蒸発され 、残渣は５０ｍ１の水に加えられた。この水性懸濁液は、７５ｍ１部のクロロホ ルムで５回抽出された。クロロホルム層は集められて乾燥するまで蒸発され、そ の後シクロヘキサンから３回凍結乾燥され、白い泡を生成した。この化合物は、 それ以上精製せずに、その後の合成ステップで使用された。

Ｄ、Ｉ−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）− ５′−モノホスフェ−１−（Ｆ７ＡＵ−ＭＰ）の合成 Ｆ　ＩＡＵ　（８００ｍｇ、２．１６ｍｍｏ　Ｉ）は、４５℃で力強く攪拌して リン酸トリメチル（２ｍｌ）中に溶解された。反応混合物はアルゴン下で０°Ｃ まで冷却され、シリンジによってオキシ塩化リン（２ｍｌ、２０ｍｍｏ　１）が 加えられた。反応混合物はまず０℃で１時間攪拌され、その後１２時間−２０° Ｃに維持された。反応は、ＴＬＣ（酢酸：ｎ−ブタノール：水＝ｌ　：　４　： 　１．　ｖ／ｖ）によってモニタリングされた。Ｆ　ＩＡＵ−ＭＰか白色結晶と して沈澱した。上澄み液は捨てられ、沈澱物は無水エーテル（５ＸＩＯｍｌ）で 洗浄された。沈澱物は水（２０ｍｌ）に再び溶解され、クロロホルム（３Ｘ２０ ｍｌ）で洗浄された。

水層は集められかつ凍結乾燥されて、粗Ｆ　ＩＡＵ−ＭＰ（８００ｍｇ、１．８ ３ｍｍｏｌ、収率８５％）を生成した。

分析： Ｆ　ＩＡＵ−ＭＰのＨＰＬＣ保持時間は、ヘキサン：２−ブロバノール：水酸化 アンモニラムコ水（４３：５７：３　：　７．　ｖ／ｖ）で溶出された２５０Ｘ ４．６ｍｍ、５ミクロンのブラウンリー（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ）シリカカラムを使 用すると、１５．３分であった。

化合物は、酢酸：ｎ−ブタノール：水（１：４：４．ｖ／　ｖ　）て溶出された シリカ６０Ａ　Ｆ２５４　ＴＬＣブレ＝１・上てＲｆが０．３２である。

ＵＶ、ａ、、：　２５４ｎｍ　（ヘキサン：２−プロパツール：水酸化アンモニ ウム：水＝４３：５７：３ニア、ｖ／ｖ）。

Ｅ、Ｉ、２−ジパルミトイル−５ｎ−グリセロ−３−ホスホロモルホリゾートの １−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５− ヨードウラシル−５′−モノホスフェート（Ｆ　ＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧ２　ＮＨ ４”　）への結合： ５０ｍ１の丸底フラスコで、無水１，２−ジパルミトイル−５ｎ−グリセロ−３ −ホスホロモルホリゾート（４００ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）およびＦ　ＩＡＵ −ＭＰ　（２００ｍ　ｇ、０．４８ｍｍｏ　りが無水ピリジン（１５ｍｌ）中に 溶解された。溶液は真空中で無水ピリジンから乾燥するまで５同然発され、その 後７ｍｌの無水ピリジンが加えられた。この溶液はアルゴン下で室温で一晩攪拌 された。

反応の進行は、ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：水酸化アンモニウム：水＝ ７０　：　３８　：　８　：　２．　ｖ／ｖ）によってモニタリングされた。反 応混合物はその後、トルエン（４ＸｌＯｍｌ）から蒸発された。この残渣は、１ ５ｍ１のクロロホルム：メタノール：水（２：　３　：　ｌ、　ｖ／ｖ）中に溶 解され、Ｏ，ＩＮの塩酸でｐＨ３まで酸性化された。

２つの層が形成され、水層はクロロホルム（２ＸｆＯｍｌ）で洗浄された。合わ せられた有機層は乾燥するまで蒸発され、残渣はクロロホルム：メタノール：水 （２：　３　：１、ｖ／ｖ）中に溶解され、ＤＥＡＥセファデックス（Ｓｅｐｈ ａｄｅｘ）　（アセテート形）カラム（２，８Ｘ３０ｃｍ）に加えられた。［Ｄ ＥＡＥ−セファデックスのアセテート形は５０％のメタノール水溶液さらにその 後メタノールで洗浄され、その後クロロホルム：メタノール：水（２：　３　： Ｉ）において充填された。］カラムは２５０ｍ１のクロロホルム：メタノール： 水（２：３・ｌ、ｖ／ｖ）で、さらにその後同じ溶媒において調製されるＯ−０ ，０２Ｍ酢酸アンモニウムの直線的勾配（各々のリザーバーに１リツトル）で溶 出された。ＴＬＣによる判断に応じて、生成物を含むフラクションは、プールさ れかつ６０ｍ１に濃縮された。この混合物はクロロホルム（５Ｘ５０ｍｌ）で抽 出され、有機層は蒸発されてジアンモニウム塩としてＦＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧを 生成した。

分析： Ｆ　ＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧジアンモニウム塩のＨＰＬＣ保持時間は、ヘキサン＝ ２−プロパツール・水酸化アンモニウム：水（４３・５７　：　３　：　７．　 ｖ／ｖ）て溶出された２５０Ｘ４．６ｍｍ、５ミクロンのブラウンリー（Ｂｒｏ ｗｎｌｅｅ）シリカカラムを展開系として使用すると、１２．６５分てあった。

化合物は、クロロホルム：メタノール：水酸化アンモニウム、水（７０：　２８ 　：　８　：　２．　ｖ／ｖ）て溶出されるシリカ６０Ａ　Ｆ２５４　ＴＬＣプ レート上で、Ｒｆが０．　２３であった。

Ｐ：６．３９６、ＵＶ、、、：２７５ｎｍ、Ｅ＝５．９ｘ１０３（クロロホルム 中１０％のメタノール）。

例２ａ、ジデオキシシチジンジホスフェートジラウロイルグリセロール、ｄｄｅ −ＤＰ−ＤＬＧ　；例２ｂ　ジデオキシシチジンジホスフエートジミリストイル グリセロール、ｄｄＣ−ＤＰ−ＤＭＧ　；例２Ｃ：ジデオキシンチジンジホスフ ェートジパルミトイルグリセロール、ｄｄＣ−ＤＰ＝ＤＰＧ　；例２ｄニジデオ キシシチジンジホスフェートジステアロイルグリセロール、ｄｄｅ−ＤＰ−ＤＳ Ｇ　；例２ｅ：１−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル ）−５−ヨードシトシンジホスフェートジラウロイルグリセロール、Ｆ　ＩＡＣ −ＤＰ−ＤＬＧ　、例２ｆ　：　１−　（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１ −β−アラビノシル）−５−ヨードシトシンジホスフエートジミリストイルグリ セロール、Ｆ　ＩＡＣ−ＤＰ−ＤＭＧ　；例２ｇ：１−（２’−デオキシ−２′ −フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨートシトシンジホスフエートジパ ルミトイルグリセロール、Ｆ　ＩＡＣ−ＤＰ−ＤＬＧ　；例２ｈ：１−（２’− デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードシトシンジホ スフェートジステアロイルグリセロール、Ｆ　ＩＡＣ−ＤＰ−ＤＳＧ　；例２ｉ ：Ｉ−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨー ドウラシルジホスフェートジラウロイルグリセロール、Ｆ　？ＡＵ−ＤＰ−ＤＬ Ｇ　、例２ｊ　：　１−　（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビ ノシル）−５−ヨードウラシルジホスフェートシミリストイルグリセロール、Ｆ 　ＩＡＵ−ＤＰ−ＤＭＧ　；および例２ｆｆｉ　：　ｌ−（２’−デオキソ−２ ′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードウラシルジホスフェートジ ステアロイルグリセロール、Ｆ　ＩＡＵ−ＤＰ−ＤＬＧが、結合ステップにおい て適切な種類のホスファチジン酸を使用すること以外は上述の方法に従って調製 される。

例２ａないし例２１の（２合物はすへて、上述の態様で調製されかつ精製される 。

例３ ＨＥＰ　Ｇ２．２．１５細胞における抗ウイルス性リボヌクレオチドの試験管内 での効力 Ａ、検定プロトコル 染色体に組込まれた配列としてＨＢＶゲノムを４コピー有し、かつ絶えずＨＢＶ を生成する、ＨＢＶ　ＤＮＡ、ＨＥＰＧ２．２．１５を保有するプラスミドでト ランスフェクトされたヒト胚芽種の細胞株（アクス（Ａｃｓ　）他による米国ナ ソヨナルアカデミーサイエンス（Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ１、）の議事録 ８４・８５８１　（１９８７））は、以下の表１および表２に示されるように、 ３７°ＣてｌＯ日間種々の濃度の試験化合物でインキュベートされた。培地の試 料は定期的に集められ、後の細胞外のＨＢＶ　ＤＮＡ分析のために保存された。

ｌＯ０日目、試験細胞は細胞内のＨＢＶゲノム形の分析のために溶解された。Ｈ ＢＶ　ＤＮＡは、（ｉ）細胞内および細胞外のＤＮＡの全体のレベル、および（ ｉｉ）ＨＢＶの複製の相対速度（細胞内のＤＮＡのみ）に関して、定量分析され た。

（１）　細胞の培養および処理：ＨＥＰＧ２，２．１５細胞は６−ウェル培養プ レートに接種され、集密するまで１０日ｒＩＲ５％のＦＢＳを含む培地で育てら れた。抗ウイルス性ヌクレオチドおよび対応する抗ウイルス性リボヌクレオチド を含む試験化合物が、１％の透析されたＦＢＳを備える培地において１０日間連 続で毎日加えられた。（この低い血清レベルは、２．２．１５細胞の集密培養に おいてＨＢＶの複製に影響を及ぼさず、ＦＢＳの存在下、ヌクレオチド等の内生 的な低分子量化合物のコントロールされない変動を排除するのに役立つ）。処理 期間の間毎日取り変えられた培地は集められ、細胞外（ピリオン）ＨＢＶＤＮＡ の分析のために処理期間の０日目、３日目、６日目および１００日目保管された 。（１）試験化合物に由来する潜在的に毒性の代謝物の生成を防ぎ、かつ（２） ピリオン生成へのいかなる効果の定量的比較も可能にするような２４時間おきの ＨＢＶピリオン生成分析を行なうため、培地は処理期間の間毎日取り換えられた 。化合物は、１００倍の範囲にわたる３種類の濃度で２連の培養においてテスト された。１００日目処理の後、処理された細胞は、細胞内のＨＢＶゲノム形を分 析するために溶解された。処理されていない細胞は、ネガティブなコントロール として維持された。

（２）　ＨＢＶ　ＤＮＡ分析：ＨＢＶ　ＤＮＡ（７）分析は、プロットハイブリ ダイゼーション法（サザンおよびスロットプロット）および（’２Ｐ）標識され たＨＢＶ特異的プローブを使用して行なわれる。ＨＢＶ　ＤＮＡレベルは、すべ てのニトロセルロースフィルタ（ゲルまたはスロットプロット）に適用される既 知の量のＨＢＶ　ＤＮＡ標品と比較することによって測定された。ニトロセルロ ース膜から直接ハイブリッド形成されたプローブの放射性崩壊を測定するＡＭＢ ＩＳベータスキャナ（Ｂｅｔａ　５ｃａｎｎｅｒ）が、定量分析のために使用さ れた。複数回の分析によって生じた標準曲線は、ＣＰＭ測定値を標的ＨＢＶ　Ｄ ＮＡの相対レベルと相関させるために使用された。

細胞内のウィルス性ゲノム形の３つのクラス、すなわち組込ＨＢＶ　ＤＮＡ（Ｉ ｎｔｅｇ）、エビソームモノマーゲノム（Ｍｏ　ｎ　ｏ）およびＨＢＶ　ＤＮＡ 複製中間体（Ｒ■）の各々におけるＨＢＶ　ＤＮＡのレベルは、個々に定量化さ れた。エビソームモノマーＨＢＶ遺伝子およびＲ１のレベルは、ＨＢＶ複製の相 対レベルの指標として使用された。ＨＢＶ　ＤＮＡ複製の抑制は、組込ＤＮＡの レベルを変えない場合のＲ１の損失によって示される。培地に放出されたＨ　Ｂ 　ＶピリオンＤＮＡの１ノベルは、スロットプロットハイブリダイゼーション法 によって分析された。その後、薬剤による治療の効力を判断するために、ＨＢＶ 　ＤＮＡのレベルは０日日のレベルと比較された。

細胞内および細胞外のＨＢＶ　ＤＮＡは、（ｉ）化合物の効力を確認するため、 および（ｉ）ウィルスの複製形のパターンに関する実験から化合物のＨＢＶ複製 経路における標的部位に関する可能なデータを得るために分析された。

（３）　コントロールおよび解釈：ＨＢＶ　ＤＮＡの安定した状態のレベルが、 試験期間中、処理されていない細胞において維持された。異なるプレート間のレ ベルは３倍よりも多く変動することがわかったが、細胞外のＨＢＶＤＮＡ生成の 毎日の変動は３倍未満であった。これらは、これらの細胞に関して通常観察され る、ＨＢＶピリオン生成における通常の変動である。ＨＢＶ　ＤＮＡの固在の変 動のため、細胞外のＨＢＶ　ＤＮＡに関して１０倍未満および細胞内のＤＮＡに 関して５倍未満というＨＢＶ　ＤＮＡの細胞内および細胞外の減退は、決定的な ものであると考えられない。このクラスのＨＢＶ　ＤＮＡのレベルは細胞ごとに 一定のままであると予測され、かつ、したがってこのレベルは、等しい量の細胞 ＤＮＡが別々の試料間で確実に比較されるような確認パラメータとして使用され るのて、組込ＨＢＶ　ＤＮＡか各々のレーンのＤＮＡの相対量を正規化するため に使用された。参考のために、これらの実験のために行なわれたハイブリダイゼ ーション分析の方法によって、細胞ごと３−５の遺伝子コピーに対して約１゜０ ｐｇ／ｍ１の細胞外ＨＢＶ　ＤＮＡ、および３ＸＩＯ’ウィルス粒子／ｍｌに対 して１．Ｏｐｇ／ｍｌの細胞外ＨＢＶ　ＤＮＡか等価となる。処理されていない 細胞における細胞外ＨＢＶ　ＤＮＡの典型的な値は、一般に、５０ないし１５０ ｐｇ／ｍ＋の範囲であり、処理されていない細胞における細胞内のＨＢＶ　ＤＮ Ａ複製中間体の典型的な値は、５０ないし１０ｐｇｌμｇ細胞ＤＮＡ　（平均約 ７６０ｐｇ／μｇ）である。

上述のように、ＨＢＶ　ＤＮＡを保存しかつ絶えずＨＢＶ　ＤＮＡを生成してい る細胞は、表１に示されるような試験化合物、およびプロトコルに従って決定さ れたＨＢＶＤＮＡで処理された。

表１ ＨＥＰ　Ｇ２，２．１５細胞培養におけるＨＢＶ生成・＼の試験化合物の効果 ａｒａ−Ａ：アデノシン−９−β−Ｄ−アラビノフラノシル ＦＭＡＵ：、］−（］２’−デオキシー２′−フルオロ１−β−Ｄ−アラビノフ ラノシル）−５−メチルウラシルＦＩＡＵ：　ｔ−（２’−デオキシ−２′−フ ルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシルＦ　ＩＡＣ： 　ｌ−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノツル）−５−ヨー ドシトシンＭＰ：モノホスエート ＤＰニジホスニー１・ ＤＭＰ−Ｆ　ＩＡＵ　：ジミリストイルホスアチジルーＦＩＵ ＤＰＰ−Ｆ　ＩＡＵ　ニジバルミトイルホスファチジル−ＦＡＵ Ｆ　ＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧ　：　Ｆ　ＴＡＵ　ジホスエートジノくルミトイルグ リセロール ＤＭＰ−Ｆ　ＩＡＣニジミリストイルホスファチジル−Ｆ■八へ ＤＰＰ−Ｆ　ＩＡＣニジバルミトイルホスファチジル−ＦＡＣ Ｆ　ＩＡＣ−ＤＰ−ＤＰＧ　：　Ｆ　ＩＡＣジホスエートジノくルミトイルグリ セロール ＤＯＰＣ：コントロール：薬剤を加えていないジオレオイルホスファチジルコリ ンリポソーム 十細胞内のＨＢＶ　ＤＮＡの分析は、１０日口の処理の後２４時間に行なわれた 。

表１の結果の要約 （ａ）　ポジティブな処理コントロール、ａｒａ−Ａ（アデノシン−９−β〜Ｄ −アラビノフラノシド）、ＦＩＡＵＳＦＩＡＣおよびＦＭＡＵはすべて、ＨＢＶ 　ＤＮＡ複製をかなり減退させた。培地のＨＢＶ　ＤＮＡのレベルは３日目まで に低減され、６日目および９日目までに非常に低いかまたは検出不可能な程度と なった。

（ｂ）　Ｆ　ＩＡＣおよびＦＩＡＵの脂質プロドラッグはすべて、検定において 抗ウイルス性の活性を示した。ＤＭＰ−Ｆ　ＩＡＵ　（４０１，４０Ｊ）は最も 活性のある脂質化合物であり、培地においてウィルス性ＤＮＡを９日目に検出不 可能なレベルまて低減した。ＤＰＰ−Ｆ　ＩＡＣ（４０Ｓ、　４　０Ｔ）　、Ｄ ＰＰ−Ｆ　ＩＡＵ　（４０１（、４０Ｌ）　、ＦＩＡＣ−ＤＰ−ＤＰＧ　（４０ Ｕ、４０Ｖ）およびＦＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧ　（４０Ｍ、４　ＯＮ）もかなりの 程度の活性を示し、ＤＭＰ−ＦＩＡＣ（４０Ｓ、４０Ｒ）は活性が少なかった。

（Ｃ）　ジオレイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）脂質コントロールのみで の処理は、ＨＢＶ　ＤＮＡ複製（４０Ｗ、４０Ｘ）に効果を示さなかった。

上述のように、ＨＢＶ　ＤＮＡを保有しかつ絶えずＨＢ試験化合物およびプロト コルに従って決定されたＨＢＶＤＮＡで処理された。

表２ ＨＥＰ　Ｇ２．２．１５細胞培養におけるＨＢＶ複製への試験化合物の効果 土納脂肉のＨＢＶ　ＤＮＡの分析は、１００日目処理の後２４時間行なわれた。

データは、感度の限界が０．１ｐｇ／ｍｌであった場合のＨＢＶ　ＤＮＡの検出 不可能なレベルを示している。

ｄｄＣニジデオキシシチジン ＤＯＰＣニジオレオイルホスファチジルコリン（薬剤なしの脂質フントロール） ＤＯＰ−２’、３’　ｄｄＣニジオレオイルホスファチジル−ｄｄｅ ポジティブな処理コントロール、２’　、３’　ｄｄｅ　（２′、３′−ジデオ キシシトシン）ハ、ＨＢＶ　ＤＮＡ複製をかなり減退させた。試験化合物である ジオレオイルホスファチジル−ｄｄｅ　（ＤＯＰ−ｄｄｅ）ｌ；Ｌ、ＨＢＶ　Ｄ ＮＡ？Ｉ製の強い抑制剤である。使用した中で最も高い濃度では、細胞外のＨＢ Ｖ　ＤＮＡは９日目までに検出不可能となり（０日目の値に対して１０００倍を 越える減退）、処理の９日後に細胞内ＨＢＶ　ＤＮＡ複製中間体の約１００倍の 減退が観察された。

例４ マウスにおけるホスファチジル−［’Ｈ］ｄｄｅの薬物動懸学　− ジオレオイルホスファチジル−ｄｄｅは、例！に示されているように、［’　Ｈ ｌ　ｄｄｅ　（５Ｍｃ、／ｍｏ　Ｉ）をジオレオイルホスファチジン酸に結合す ることによって合成された。

２００ナノメートルのヌクレボア（商標Ｎｕｃｌｅｐｏｒｅ　）フィルタを使用 して、マイヤー・Ｌ−Ｄ　（Ｍａｙｅｒ、Ｌ、Ｄ、）　、ホープ−Ｍ−Ｊ　（） ｌｏｐｅ、Ｍｌ、　）およびクリス−Ｐ−Ｒ（Ｃｕｌｌｉｓ、Ｐ、Ｒ，）による 方法（１６）によってジオレオイルホスファチジルコリン／コレステロール／ホ スファチジル−［’　Ｈｌ　ｄｄＣをモル比６７／３０／３で使用して、単一ラ メラ脂質小胞が調製された。より小さい小胞は１００ナノメートルの商標ヌクレ ボアフィルタを使用して同じ方法で調製されるか、またはメイヒュー・Ｅ　（Ｍ ａｙｈｅｗ、Ｅ、　）他（Ｉ６）によって示されるマイクロ流体化によって調製 されてもよい。

マウスは、３　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇのじＨｌｄｄｅまたは等モルの量のホスファ チジル−［’　Ｈｌ　ｄｄＣで、腹膜内に（ｉ。

ｐ、）処理され、動物はさまざまなときに検体として供され、血液および組織が 分析のために得られた。結果は、図２ａないし図２ｆに、ｎｍｏ　Ｉ薬剤／ｇｍ の組織上標準偏差（ｎ＝３）として示されている。

ｄｄｅは最初の１時間にプラズマから速やかに除去され、ホスファチジル−ｄｄ ｅははるかに高いレベル（５０対１６ｎｍｏｌ／ｍｌ）に達し、はるかに長い間 循環を持続した（図２ａ）。ホスファチジル−ｄｄｅに関する曲線の下の面積（ ＡＵＧ）は、ｄｄｅのＡＵＣよりも実質的に大きかった。ｄｄｅに関する肝臓の ピークレベルは１５分で１８ｎｍｏｌ／ｇｍであり、ホスファチジル−ｄｄｅは １時間て約８０ｎｍｏｌ／ｇｍのピークレベルに達した。ホスファチジル−ｄｄ ｅに関する肝臓のＡＵＧは、ｄｄｅのＡＵＧの４２倍であった（図２ｂ）。ホス ファチジル−ｄｄＣに関する膵臓レベルもはるかに高かった（そのＡＵＧはｄｄ ｅの８５倍、図２ｆ）。

ヒトにおけるｄｄｅの毒性の標的である座骨神経および脳において、ホスファチ ジル−ｄｄｅに関するレベルはｄｄｅと比較してあまり増加せず、座骨神経のホ スファチジル−ｄｄｅに関するＡＵＧの値はｄｄｅの１．７倍であり（図２０） 、はとんどの時点においてその差はあまり大きくなかった。ホスファチジル−ｄ ｄｅの脳のレベルはわずかに増加した（２．７倍、図２ｄ）が、しかしながら、 脳は、明確な増加に寄与するであろう、血液を取除くための潅流が行なわれなか ったことに注目するべきである。

肝臓によるＡＺＴの摂取および保持の増加によって判断されるように、肝臓の細 胞を抗ウィルス剤の標的にすることを含む同様の結果が、リポソームホスファチ ジルＡＺＴ（ｐ−ＡＺＴ）がマウスの腹膜内に投与される場合に観察ヒトの患者 のＢ型肝炎感染の治療 活性Ｂ型肝炎に感染した患者は、リポソームに組込まれたＤＭＰ−Ｆ　ＴＡＵを 、Ｂ型肝炎ウィルスの生成の抑制を示す臨床的反応か観察されるまで、活性ＦＩ ＡＵ部１ｍｇ／キロ／日の投与量で非経口投与することによって治療される。Ｄ ＭＰ−Ｆ　ＩＡＵを組込むリポソームは、例６に示されるように、マイクロ乳化 装置（マサチューセッツ州ニュートンのマイクロフルイダイザー（登録商標）） を使用して調製される。ＦＩＡＵの投与量は、臨床上の判断に応じて、指示され た投与量の１／１００ないし指示された投与量の１０倍まで調整できる。ＤＭＰ −ＦＩＡＵ脂質プロドラッグでの肝炎の治療に対する効果的な反応は、患者の血 清中に検出可能なウィルス粒子がないこと、および患者が臨床的に見て改善して いることによって測定される。

例６ 抗ウイルス性リボヌクレオチドを含む リポソームの調製およびサイジング ６．４２ミクロモルのジオレオイルホスファチジルコリン、３．８５ミクロモル のコレステロール、および１．　２８ミクロモルのジオレオイルホスファチジル ジデオキシシチジン（ＤＯＰ−ｄｄｅ）は２．Ｏｍｌの無菌ガラスバイアルで混 合され、溶媒はロータリーエバポレータで真空中で除去された。いくつかの実験 では、ジオレオイルホスファチジルジデオキシシチジンは、ＤＭＰ−Ｆ　ＩＡＵ またはＦ　ＩＡＣ−ＤＰ−ＤＰＧによって置換えられ、コントロールリポソーム は抗ウイルス性リボヌクレオチドを省くことによって調製された。乾燥した膜は 、溶媒の痕跡を除去するために室温で一晩高い真空下に置かれた。脂質膜は、等 張デキストロースを含む０．３ｍｌの無菌１０Ｍｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５，０）で３０℃で水和された。

混合物は１０分間断続的にかき混ぜられ、その後出力制御設定＃９でカップホー ンジェネレータ（４３１Ｂ）とともにヒートシステムウルトラソーックス（Ｈｅ ａｔ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ）超音波処理装置を使用して９ ０ないし１２０分間超音波処理が行なわれ、このとき試料は浄化され緩衝剤で希 釈されて使用される。

代替的には、脂質膜は１．Ｏｍｌの無菌のリン酸塩緩衝塩水を加えることによっ て水和され、混合物は２０″Ｃで２０分間静かに混ぜられ、その後３０秒のサイ クルで１０回攪拌され多重層リポソームを形成した。リポソームの懸濁液に、直 径２００　ｎｍの孔を有する２つの重ねられたヌクレボア（登録商標）ポリカー ボネートフィルタを介して５サイクルのエクストルージョンが行なわれ、均一な 大きさのリポソームの集合体を形成した。おおよその平均直径が０．２μｍない し０．１μｍまたはそれ以下であるリポソームの集合体は、マイクロフルイダイ ザー（登録商標）装置で、水和された脂質懸濁液を処理することによって調製さ れる。粒子のサイズの分布は、メイヒュー・Ｅ　（Ｍａｙｈｅｗ。

Ｅ）他（１６）によって示されるように、マイクロ乳化の時間を約２ないし約１ ０分の範囲で変えることによって制御できる。

同様の結果を得るために、例において他のヌクレオシド類似体およびその脂質誘 導体を置き換えることができることは上述のことから明らかであるはずである。

この合成はこの発明に使用するための本質的にすべての抗Ｂ型肝炎ヌクレオシド から化合物を形成するために広く利用できることがさらに強調されるべきである 。

したかって、この発明は、この発明の意図または本質的な特徴から外れることな く他の特定の形で実施できる。上述の実施例は、すべての点において例示的なも のであって、この発明を制限するものではなく、したがってこの発明の範囲は上 述の説明よりむしろ添付の請求の範囲によって示される。請求の範囲の意味する ところおよびそれと法的に均等な範囲内の変更はすべて、この発明の範囲内に含 まれるべきである。

引用文献 １．　Ｌｅｅ、　Ｂ他、　Ａｎｔｉａ＋１ｃｒｏｂｉａｌ　Ａ　ｅｎｔｓ　ａｎ ｄ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐ　３３二３３６−３３９（１９８９）。

２、　Ｋａｓｓａｎ　１ｄｅｓ、　Ｃ，他、　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇ ｙ　９７：１２７５−８０（１９８９）。

３、８ａｎｔｚ、　０．他、　Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　４：１ ８７−１９９（１９８４）４、　Ｈｅ５ｓ、　Ｇ、他、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉ ａｌ　Ａ　ｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａ１９（１）４４−５０（１ ９８１）。

５、ＭａｌｔｈｅＳ、Ｅ、他、　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａ　ｅｎｔｓ　 ａｎｄ　ＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐＬ３４：１９８６−１９９０（１９９０）６、 　Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ、　Ａ、およびＧｅｙｅｒ、Ｒ，、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ 　Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ。

２３５（８）２２０２−２２０６（１９６０）。

３２０５−３０２８（１９６７）。

９、　Ｔｏｏｒｃｈｅｎ、　Ｄ、およびＴｏｐａｌ、Ｍ、Ｄ、（１９８３）　Ｃ ａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ。

４　：１５９１−１５９７゜ １０．８ｒｏｗｎ、Ｄ、Ａ、、Ｍａｌｋｉｎ　Ｔ、　およびＭａＬｉｐｈａｎｔ 、　Ｇ、　Ｋ、　（１９５５）Ｊ、ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　（Ｌｏｎｄｏｎ）　ｐ ｐ、１５８４−１５８８゜１１、　Ａｇｒａｎｏｆｆ、　Ｂ、　ｗ、および、　 ５ｕｏａｉ、Ｗ、　Ｄ、　（１９６３）　Ｂｉｏｃｈｅａ＋、　Ｐｒｅｐ。

、　１０：４６−５１゜ １２、５ｐａｎｊｅｒ、　Ｈ，他、Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔ ａ　８６３：２４−２３０（１９８６）。

１３、　Ｂａｎｇｈａａ＋、　Ａ、　Ｄ、　、　５ｔａｎｄｉｓｈ、　Ｍ、　Ｍ 、および１ｆａｔｋｉｎｓ、　Ｊ、　ｊＣ，（１９６５）Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ 、、２３：２３８−２５２゜１４、０１ｓｏｎ、Ｆ、、Ｈｕｎｔ、Ｃ，Ａ、５ｘ ｏｋａ、Ｐ、Ｃ，、Ｖａｉｌ、Ｗ、Ｊ、およびＰａｐａ７２８：３３９：３４８ ゜ １８、　Ｍａｙｅｒル、　Ｄ、　、　、　Ｈｏｐｅ、　Ｍ、　Ｊ、およびＣｕ１ ｌｉｓ、Ｐ、Ｒ，（１９８６）　Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、 ８５８：１６１−１６８゜１９、フカナガ、　Ｍ、　、　Ｍｉ　１ｉｅｒ、　Ｍ 、　Ｍ、　、　ｔｔｏｓｔｅｔ　ｌｅｒ、に、Ｙ、およびＤｅｆｔｏｓ、　Ｌ、 　Ｊ、　（１９８４）　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　１６：７５７−７６１゜２０ 、５ｈｅｒｐｈｏｆ、　Ｇ、　Ｌ、他、　ＮＡＴＯＡＳＩ　５ｅｒｉｅｓ、Ｓｅ ｒ、Ａ：ＴａｒｇｅｔｉｎｇＤｒｕｇｓ：Ａｎａｔｏｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈ ｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏｎ５ｉｄｅｒａｌｉｏｎｓ　１５５：　１０９− １２０（１９８８）。

フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３８１００ ＣＯ７Ｄ４７３／３４　３２１　８４１５−４ＣＣＯ７Ｈ１９１０６７８３１４ −４Ｃ １９１０７３８３１４−４Ｃ １９１０９８３１４−４Ｃ １９／１０　８３１４−４Ｃ １９／１６７　８３１４　＝４Ｃ Ｉ

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. １．抗ウイルス性の特性を有する化合物であって、プリンもしくはピリミジンま たはその類似体を含む塩基部分とペントース残基を含む糖質部分とを有する抗Ｂ 型肝炎ヌクレオシド類似体を含み、少なくとも１つの前記部分は天然に存在しな いヌクレオシド成分であり、さらに前記ペントース残基がアラビノフラノースで ありかつ前記塩基部分がシトシンまたはアデニンである場合に前記化合物がリポ ソームの形であれば、前記ペントース残基に結合される脂質部を含む、化合物。
2. ２．前記天然に存在しないヌクレオシド成分は、置換、欠失または復元によって 天然に存在する塩基またはペントースの類似体である、請求項１に記載の化合物 。
3. ３．前記ペントース残基は、２′，３′−ジデオキシリボース、２′，３′−ジ デヒドロリボース、もしくはリボースのハロ誘導体、またはリボースの非環式ヒ ドロキシル化フラグメントである、請求項１に記載の化合物。
4. ４．前記ペントース残基は２′，３′−ジデオキシリボースであり、前記ヌクレ オシド類似体は２′，３′−ジデオキシシチジン、２′，３′−ジデオキシチミ ジン、２′，３′−ジデオキシグアノシン、２′，３′−ジデオキシアチノシン 、２′，３′−ジデオキシイノシン、または２，６−ジアミノプリン，２′，３ ′−ジデオキシリボシドである、請求項３に記載の化合物。
5. ５．前記ペントース基はリボースのハロまたはアミノ誘導体であり、前記ヌクレ オシドは、３′−フルオロ−５−メチル−デオキシシチジン（ＦｄｄＭｅＣｙｔ ）、３′−クロロ−５−メチルーデオキシシチジン（ＣｌｄｄＭｅＣｙｔ）、３ ′−アミノ−５−メチル−デオキシシチジン（ＡｄｄＭｅＣｙｔ）、または２′ ，３′−ジデオキシ−３′−フルオロチミジンである、請求項１に記載の化合物 。
6. ６．前記ヌクレオシド類似体はアシクロビル、１−（２′−デオキシ−２′−フ ル木ロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨ−ドシトシン（ＦＩＡＣ） または１−（２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシ ル）−５−ヨ−ドウラシル（ＦＩＡＵ）である、請求項１に記載の化合物。
7. ７．前記ヌクレオシド類似体は、２′，３′−ジデヒドロ−２′，３′−ジデオ キシチミジンである、請求項１に記載の化合物。
8. ８．前記ペントース残基の５′位と前記脂質部との間にモノホスフェート、ジホ スフェートまたはトリホスフェート結合基をさらに含む、請求項１ないし７のい ずれかに記載の化合物。
9. ９．前記脂質部は脂肪酸である、請求項１ないし７のいずれかに記載の化合物。
10. １０．前記脂質部はモノアシルグリセロールまたはジアシルグリセロールである 、請求項１ないし７のいずれかに記載の化合物。
11. １１．前記脂質部はホスフアチジン酸である、請求項１ないし７のいずれかに記 載の化合物。
12. １２．前記脂質部はジホスファチジルグリセロールである、請求項１ないし７の いずれかに記載の化合物。
13. １３．前記脂質部はビス（ジアシルグリセロ）−ホスフェートである、請求項１ ないし７のいずれかに記載の化合物。
14. １４．前記脂質部は、Ｄ，Ｌ−２，３−ジアシルオキシプロピル−（ジメチル） −β−ヒドロキシエチルアンモニウム基である、請求項１ないし７のいずれかに 記載の化合物。
15. １５．前記脂質部は、１−Ｏ−ステアロイル−ｒａｃ−３−グリセロールである 、請求項１ないし７のいずれかに記載の化合物。
16. １６．哺乳類のＢ型肝炎の感染症を治療するための方法であって、請求項１ない し７のいずれかに記載の化合物のＢ型肝炎ウイルスを抑制する効果的な量を前記 哺乳類に投与するステップを含む、方法。
17. １７．細胞におけるＢ型肝炎ウイルスの複製を抑制するための方法であって、前 記細胞を、請求項１ないし７に記載の化合物のＢ型肝炎ウイルスを抑制する効果 的な量に接触させるステップを含む、方法。
18. １８．前記Ｂ型肝炎ウイルスの病原体はヒトの細胞にあり、前記化合物はホスフ ァチジルージデオキシシチジン（ｐ−ｄｄＣ）である、請求項１７に記載の方法 。
19. １９．前記Ｂ型肝炎の病原体はヒトの細胞にあり、前記化合物はホスファチジル −ＦＩＡＣ、ＦＩＡＣジホスフェートジグリセリド、ホスファチジル−ＦＩＡＵ 、またはＦＩＡＵジホスフェ−トジグリセリドである、請求項１７に記載の方法 。
20. ２０．前記病原体はヒトの細胞にあり、前記化合物はリン酸基を介して抗Ｂ型肝 炎ヌクレオシド類似体に付加された１−Ｏ−ステアロイル−ｒａｃ−３−グリセ ロールを含む、請求項１７に記載の方法。
21. ２１．ヌクレオシド類似体の前記脂質誘導体は、リポソームに組込まれる、請求 項１７に記載の方法。
22. ２２．実質的にすべての前記リポソームの直径は約１００ナノメートル未満であ り、平均の直径は約３０ないし８０ナノメートルである、請求項２１に記載の方 法。
23. ２３．前記脂質誘導体はマイクロエマルションにおいて分散相液滴の形である、 請求項１７に記載の方法。
24. ２４．前記化合物は哺乳類に非経口投与される、請求項１６に記載の方法。
25. ２５．前記化合物は静脈内に、皮下に、筋肉内に、または腹腔内に投与される、 請求項２４に記載の方法。
26. ２６．前記化合物は哺乳類に経口投与される、請求項１６に記載の方法。
27. ２７．前記リポソームは肝臓の洞様毛細血管を通過し、かつ肝細胞によって選択 的に摂取されかつ病原体の保有部位を標的にするような適切な大きさにされる、 請求項１６に記載の方法。
28. ２８．ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）、ＦＩＡＵ、ＦＩＡＣまたはＦＭＡＵから なる群から選択されるヌクレオチド類似体の活性モノ−、ジ−、またはトリホス フエートを細胞に配達するための方法であって、前記ヌクレオシド類似体の脂質 プロドラッグを前記細胞に配達するステップと、前記プロドラッグを酵素により 分乱して前記活性ホスフェートを前記細胞に配達するステップとを含む、方法。
29. ２９．請求項１ないし７のいずれかに記載の抗Ｂ型肝炎化合物と、 製薬的に許容できる担体とを含む、薬剤組成物。
30. ３０．異なる抗ウイルス剤をさらに含む、請求項２９に記載の薬剤組成物。