MXPA06011219A - Tratamiento efectivo de tumores y cancer con triciribina y compuestos relacionados. - Google Patents

Abstract

Los inventores han determinado, contrario a la tecnica anterior y la experiencia, como usar exitosamente triciribina para tratar tumores y cancer mediante uno o una combinacion de (i) administrar triciribina solo a pacientes que de acuerdo a una prueba de diagnostico descrita mas adelante, exhiben sensibilidad aumentada al farmaco; (ii) uso de un nivel de dosis descrito que minimiza la toxicidad del farmaco, pero que todavia exhibe eficacia; o (iii) uso de un regimen de dosis descrito que minimiza la toxicidad del farmaco.

Description

TRATAMIENTO EFECTIVO DE TUMORES Y CÁNCER CON TRICIRIBI NA Y COMPU ESTOS RELACIONADOS REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama prioridad a la Solicitud Provisional de E. U.A. No. 60/557, 599, presentada el 29 de marzo de 2004, la descripción de la cual se incorpora a la presente por referencia.

CAMPO TÉCNICO Esta solicitud provee regímenes terapéuticos particulares de triciribina y compuestos relacionados y composiciones con toxicidad reducida para el tratamiento de tumores, cáncer, y otras enfermedades asociadas con proliferación celular anormal.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El cáncer es un crecimiento de células anormal. Las células de cáncer se reproducen rápidamente a pesar de la restricción de espacio, nutrientes compartidos por otras células, o señales enviadas desde el cuerpo para detener la reproducción. Las células de cáncer a menudo son de forma diferente de las células sanas, no funcionan propiamente, y se pueden extender en muchas áreas del cuerpo. Los crecimientos de tejidos anormales, llamados tumores, son grupos de células que son capaces de crecer y dividirse incontrolablemente. Los tumores pueden ser benignos (no cancerosos) o malignos (cancerosos). Los tumores benignos tienden a crecer lentamente y no se extienden. Los tumores malignos pueden crecer con rapidez, invadir y destruir tejidos normales cercanos, y extenderse por todo el cuerpo. Los cánceres se clasifican de acuerdo a la clase de fluido o tejido del que se originan, o de acuerdo a la ubicación en el cuerpo en donde se desarrollaron primero. Además, algunos cánceres son de tipos mixtos. Los cánceres se pueden agrupar en cinco categorías am plias, carcinomas, sarcomas, linfomas, leucemias y mielomas, que indican las clasificaciones de tejido y sangre del cáncer. Los carcinomas son cánceres encontrados en el tejido del cuerpo conocido como tejido epitelial que cubre o delinea superficies de órganos, glándulas, o estructuras del cuerpo. Por ejemplo, un cáncer del forro del estomago es llamado un carcinoma. Muchos carcinomas afectan órganos o glándulas que están involucrados con la secreción , tales como los senos que producen leche. Los carcinomas explican aproximadamente ochenta a noventa por ciento de todos los casos de cáncer. Los sarcomas son tumores malignos que crecen de tejidos conectivos, tales como cartílago, grasa, músculo, tendones y huesos. El sarcoma más común, un tumor en el hueso, usualmente ocurre en adultos jóvenes. Ejemplos de sarcoma incluyen osteosarcoma (hueso) y condrosarcoma (cartílago). Linfoma se refiere a un cáncer que se origina en los nodulos o glándulas del sistema linfático, cuyo trabajo es producir glóbulos blancos y fluidos del cuerpo limpios, o en órganos tales como el cerebro y senos. Los linfomas se clasifican en dos categorías: linfoma de Hodgkin y linfoma de no Hodgkin. La leucemia, también conocida como cáncer de la sangre, es un cáncer de la médula ósea que evita que la médula produzca glóbulos rojos y blancos normales y plaquetas. Los glóbulos blancos se necesitan para resistir la infección. Los glóbulos rojos se necesitan para prevenir anemia. Las plaquetas evitan que el cuerpo tenga moretones y sangrado con facilidad. Ejemplos de leucemia incluyen leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocitaria aguda, y leucemia línfocítaria crónica. Los términos mielógena y linfocitaria indican el tipo de células que están involucradas. Finalmente, los mielomas crecen en las células de plasma de la médula ósea. En algunos casos, las células de mieloma se recolectan en un hueso y forman un solo tumor, llamado un plasmacitoma. Sin embargo, en otros casos, las células de mieloma se recolectan en muchos huesos, formando muchos tumores de hueso. Esto se llama mieloma múltiple. La inducción y progresión de tumor a menudo son el resultado de cambios acumulados en el genoma de tumor-célula. Dichos cambios pueden incluir la inactivación de genes inhibidores de crecimiento de célula, o genes supresores de tumor, así como la activación de genes promotores de crecimiento de célula, u oncogenes. Cientos de oncogenes celulares activados han sido identificados a la fecha en modelos animales, no obstante, sólo una pequeña minoría de estos genes han probado ser relevantes a cánceres de humano (Weinberg y otros 1989 Oncogenes and the Molecular Origins of Cáncer Cold Spring Harbor, NY, Stanbridge y Novell 1990 Cell 63 867-874, Godwín y otros 1992 Oncogenes and anticongenes in gynecological malignancies. En J Hoskins, CA Pérez y RC Young (eds) , Gynecological oncology: principies and practice, pp 87-1 16, Lippincott, Philadelphia). La activación de oncogenes en cánceres de humano puede resultar de factores tales como número de copia de genes aumentado o cam bios estructurales. Estos factores pueden causar numerosos efectos celulares, por ejemplo, pueden resultar en sobre expresión de un producto de gen. Varios oncogenes involucrados en cáncer de humano se pueden activar a través de sobre expresión de gen. Ha sido evidente que las aberraciones genéticas sucesivas adquiridas por células de cáncer resultan en defectos en circuitos de transducción de señal reguladores que gobiernan la proliferación de célula normal, diferenciación y muerte de célula programada (Hanahan, D. y R.A. Weinberg , Cell, 2000. 100(1 ) : p. 57-700). Esto, a su vez, resulta en defectos fundamentales en fisiología de célula que dicta la malignidad. Estos defectos incluyen: a) auto suficiencia en señales de crecimiento (es decir, sobre expresión de tirosina kinasas receptoras de factor de crecimiento tales como EFGR y activación aberrante de vías de transducción de señal descendentes tales como Ras/Raf/Mek/Erk A y Ras/PI3K/Akt), b) resistencia a señales de anti-crecimíento (es decir, expresión menor de TGFß y su receptor) , c) evadir apoptosis (es decir, pérdida de p53 proapóptico; sobre expresión de Bcl-2 pro-supervivencia; hiperactivación de vías ae supervivencia tales como aquellas mediadas por PI3K/Akt) , d) ntiogénesis sostenida (es decir, niveles altos de secreción de VEGF) y f) invasión de tejido y metástasis (es decir, proteasas extracelulares e integrinas prometastásicas) (Hanahan, D. y R.A. Weinberg , Cell , 2000. 100(1 ): p. 57-700). Las tirosina kinasas receptoras tales como EGFR, ErbB2, VEGFR y receptor de factor I de crecimiento tipo insulina (IGF-1 R) están íntimamente involucrados en el desarrollo de muchos cánceres de humano incluyendo cánceres pancreático colorrectal, de mama y de ovario (Khaleghpour, K. , y otros Carcinogenesis, 2004. 25(2) : p. 241 -8; Sekharam , M. , y otros, Cáncer Res, 2003. 63(22): p. 7708-16). La unión de ligandos tales como EGF, VEGF e 1GF-1 a sus receptores promueve la estimulación de la actividad intrínseca de tírosina kinasa, autofosforilación de tirosinas específicas en el dominio citoplásmico de los receptores y reclutamiento de proteínas de señal que disparan una variedad de vías de transducción de señal complejas (Olayioye, M.A. , y otros, Embo J, 2000. 19(1 3): p. 3159-67, Porter, A.C. y R. R. Vaillancourt, Oncogene, 1 998. 17(1 1 Revisiones): p. 1343-52). Esto, a su vez, conduce a la activación de muchas vías de supervivencia de tumor y oncogénicas tales como las vías Ras/Raf/Mek/Erk Á, JAK/STAT3 y PI3K/Akt. Aunque todas las tres vías han estado implicadas en oncogénesis de colon, páncreas, mama y ovario, aquellas que son mediadas por Akt han mostrado ser críticas en muchos pasos de transformación maligna incluyendo proliferación de célula, anti-apoptosis/supervlvencia, invasión y metástasis y angiogénesis (Datta, S.R. y otros, Genes Dev, 1999. 13(22): p.2905-27). Akt es una proteína kinasa de serina/treonina (también conocida como PKB), que tiene 3 miembros de familia Aktl, Akt2 y Akt3. La estimulación de células con factores de crecimiento o supervivencia resulta en reclutamiento a los receptores de la fosfoinositida-3-OH-kinasa de kinasa de lípido (PI3K) que fosforila fosfoinosito-4,5-bifosfato (PIP2) a PIP3 que recluta Akt a la membrana de plasma en donde se puede activar mediante fosforilación en Thr308 andSer473 (Aktl), Thr308 andSer474 (Akt2) y Thr308 andSer472 (Akt 3) (Datta, S.R. y otros, Genes Dev, 1999. 13(22): p. 2905-27). De esta manera, PI3K activa Akt al fosforilar PIP2 y convertir a PIP3. La fosfatasa PTEN desfosforila PIP3 a PIP2 y así previene la activación de Akt. La mayoría de cánceres de humano contienen Akt hiperactivado (Datta, S.R., y otros, Genes Dev, 1999. 13(22): p. 2905-27, Bellacosa, A., y otros, Int J Cáncer, 1995.64(4): p.280-5; Sun, M., y otros, Am J Pathol, 2001. 159(2): p. 431-7). En particular, Akt se sobre expresa y/o hiperacttva en 57%, 32%, 27% y 36% de cánceres de humano colorrectal, pancreático, de mama y ovario, respectivamente (Roy, H.K., y otros, Carcinogenesis, 2002. 23(1): p. 201-5, Altomare, D.A., y otros, J Cell Biochem, 2003. 88(1): p. 470-6., Sun, M., y otros, Cáncer Res, 2001. 61(16): p. 5985-91., Stal, O., y otros, Breast Cáncer Res, 2003. 5(2): p. R37-44, Cheng , J .Q. , y otros, Proc Nati Acad Sci USA, 1992. 89(19): p. 9267-71 , Yuan, Z. Q. , y otros, Oncogene, 2000. 19(19): p. 2324-30). La hiperactivación de Akt se debe a la amplificación y/o sobre expresión de Akt por sí mismo así como alteraciones genéticas ascendentes de Akt incluyendo sobre expresión de tirosina kinasas receptoras y/o sus ligandos (Khaleghpour, K. , y otros, Carcinogenesis, 2004. 25(2): p. 241 -8, ; Sekharam, M. , y otros, Cáncer Res, 2003. 63(22): p. 7708-16, Cohén, B. D. , y otros, Biochem Soc Symp, 1 998. 63: p. 199-210. , Muller, W.J. , y otros, Biochem Soc Symp, 1998. 63: p. 149-57, Miíler, W. E. , y otros, J Virol, 1995. 69(7): p. 4390-8, Salmón, D.J. , y otros, Science, 1987. 235(4785): p. 177-82, Andrulis, I.L. , y otros, J Clin Oncol, 1998. 16(4): p. 1340-9) y la omisión de la fosfatasa PTEN. La prueba de concepto del involucro de Akt en oncogénesis ha sido demostrada preclínicamente al mostrar que la expresión ectópica de Akt induce transformación maligna y promueve la supervivencia de célula (Sun, M. , y otros, Am J Pathol, 2001 . 159(2): p. 431 -7, Cheng, J .Q. , y otros, Oncogene, 1997. 14(23): p. 2793-801 ) y que la disrupción de vías de Akt inhibe el crecimiento de célula e induce apoptosls (Jetzt, A. , y otros, Cáncer Res, 2003. 63(20): p. 6697-706).

Los tratamientos actuales para cáncer y enfermedades relacionadas tienen efectividad limitada y numerosos efectos laterales no deseados serios. A pesar de la eficacia clínica demostrada de muchos fármacos anti-cáncer, la toxicidad sistémica severa detiene el desarrollo clínico de prometer agentes quimioterapéuticos. Además, la sobre expresión de tirosina kinasas receptoras tales como EGFR y sus ligandos tales como IGF-1 , la sobre expresión de Akt y/o pérdida de PTEN (todos de los cuales resultan en hiperactivación de Akt) se asocian con prognosis pobre, resistencia a quimioterapia y tiempo de supervivencia acortado de pacientes con cáncer. Las estrategias de investigación actuales enfatizan la búsqueda por modos terapéuticos efectivos con menos riesgo.

Triciribina La acción anti-cáncer de triciribina (TCN, NSC-154202, 3-am ino- 1 , 5-dihid ro-5-meti 1-1 -ß-ri bof uranos i I- 1 ,4, 5,6, 8-pentaazaacena-ftileno) y su éster de 5'-fosfato, fosfato de triciribina (TCN-P, NSC-280594) se identificó inicialmente en los 1970 (Townsend & Milne (1975) Ann NY Acad Sci, 255: 92-103) . TCN-P fue la entidad química avanzada en pruebas clínicas ya que es más soluble que el fármaco original. A principios de los ochenta, TCN-P había mostrado actividad preclínica contra leucemias y carcinomas. A principios de los ochenta, TCN-P había sido identificado como un inhibidor de ADN, ARN y síntesis de proteína, que demostraron selectividad hacia células en la fase S del ciclo de célula (Roti-Roti y otros 1978 Proc Am Assoc Cáncer Res y ASCO 19:40) . También se había propuesto que a diferencia de otros agentes antltumor de nucleósido en ese momento, TCN-P no está fosforilado más allá del nivel del monofosfato y no se incorpora en polinucleótidos (Bennett y otros 1978 Biochem Pharmacol 27:233-241 , Plagemann JNCI 1976 57: 1283-95) . También se estableció que TCN-P in vivo se desfosforila a TCN por una enzima de plasma y por ecto-5'-nucleotidasa celular. Dentro de las células, TCN se puede refosforilar a TCN-P por adenosina kinasa (Wotring y otros 1981 Proc Am Assoc Cáncer Res 22: 257, Basseches y otros J Chromatogr 1982 233: 227-234) . En 1 982, TCN-P entró en las pruebas clínicas de Fase I por Mittelman y colegas en veinte pacientes con malignidades refractarias avanzadas (Mittelman y otros, 1983 Cáncer Treat Rep 67: 159-1 62). TCN-P se administró como una infusión intravenosa (i.v.) durante 15 minutos una vez cada tres semanas a dosis de 25 a 350 mg/m2. Los pacientes en la prueba fueron diagnosticados con cáncer de mama, cabeza/cuello, pulmón, páncreas, tiroides, melanoma o indeterminado. Sólo se encontraron respuestas terapéuticas limitadas y fue evidente toxicidad significativa. EJ grupo de Mittelman concluyó que las pruebas clínicas adicionales que emplean su horario de dosificación no estaban garantizadas, pero exhortaron a otros grupos a examinar los efectos de TCN-P en ciertos tipos de cáncer específico. También en 1983, Lu y otros (ASCO Abstracts, Clinical Pharmacology, p 34 C-133) examinaron la farmacología clínica de TCN en pacientes que recibieron 30-40 mg/m2 intravenosamente por infusión continua durante cinco d ías. Lu y otros registraron que TCN contribuyó a toxicidad de hígado y anemia y sugirieron que los pacientes deben ser monitoreados para estas toxicidades.

Cobb y otros (Cáncer Treat Reports 1983 67: 173) registraron la actividad de TCN-P contra explantes quirúrgicos de tumores de humano en la prueba de cápsula subrenal de seis días en ratones. Examinaron ochenta tipos de tumor que representaban mama, pulmón, colon, ovario y cervical. Cobb y otros registraron que TCN produjo velocidades de respuesta variables en los diferentes tumores, variando de 21 % (mama) a 88% (cervical). Otra Fase I también se registró por Feun y otros en 1984 (Cáncer Research 44 (8) 3608-12) . Feun y otros administraron 10, 20, 30, y/o 40 mg/m2 intravenosamente por infusión continua durante cinco días, cada tres a cuatro o seis semanas. Los pacientes en la prueba habían sido diagnosticados con cáncer de colon, sarcoma, melanoma, pulmón u otro. Feun y otros registraron que se observó toxicidad significativa, incluyendo hiperglicemia, hepatoxicidad y trombocitopenia. Los autores recomendaron un horario para las pruebas de Fase I I de 20 mg/m2 por día durante cinco días por seis semanas y también recomendaron debido a la toxicidad que los pacientes se deban monitorear con atención para función de hígado y páncreas, y que se deban excluir los pacientes con diabetes, disfunción del hígado o metástasis hepática masiva. En 1986, Schilcher y otros (Cáncer Research 1986 46: 3147-3151 ) registraron los resultados de una evaluación de Fase I de TCN-P usando un régimen intravenoso semanal. El estudio se condujo en veinticuatro pacientes con cánceres sólidos avanzados vía una inyección intravenosa lenta durante cinco minutos en los días 1 , 8, 1 5 y 22 de un ciclo de 42 días con un descanso de dos semanas. Cinco niveles de dosis variando de 12 a 96 mg/m2 se estudiaron con 3-12 pacientes tratados en cada nivel con un total de 106 dosis administradas. Los pacientes en la prueba habían sido diagnosticados con cáncer de colon, rectal, vejiga, adrenal, ovario, páncreas, sarcoma, melanoma, pulmón u otro. Schilcher y otros concluyeron "Este horario semanal produjo toxicidad clínica inesperada y no se debe seguir." "A estas alturas nuestro grupo se desalienta para conducir más estudios con TCN-P dado en horarios semanales o intermitentes. Un estudio futuro de Fase I I usando un régimen diferente (por ejemplo, una sola aplicación una vez al mes) se puede reasumir si TCN-P dem uestra una actividad in vitro pronunciada contra tumores pancreáticos y hepáticos primarios resistentes terapéuticos." En 1986, Powis y otros (Cáncer Treatment Reports 70: 359-362) registraron la disposición de TCN-P en sangre y plasma de pacientes durante las pruebas clínicas de Fase I y I I . La prueba de Fase I empleó una dosis diaria de 24-55 mg/m2 durante 5 días, mientras que la prueba clínica de Fase I I empleó una sola dosis de 250 mg/m2. Powis y otros no pudieron identificar una correlación entre los parámetros farmacocinéticos de TCN-P y toxicidad de TCN-P. A finales de 1980s, principios de 1990s, TCN-P avanzó a pruebas de Fase I I para adenocarcinoma colorrectal metastásico, cáncer de pulmón de célula no pequeña, carcinoma de célula escamosa avanzado del cuello del útero y cáncer de mama metastásico. En 1987, O'Connell y otros (Cáncer Treat Reports 71 , No. 3, 333-34) publicaron los resultados de una prueba de Fase I I en pacientes con adenocarcinoma colorrectal metastásico. Los pacientes fueron administrados TCN-P i.v. durante 15 minutos 165 ó 250 mg/m2 una vez por semana en intervalos de tres semanas. O'Connell y otros concluyeron que las pruebas muestran una falta de utilidad clínica de TCN-P en el tratamiento de pacientes con adenocarcinoma colorrectal metastásíco. Además, en 1991 , Lyss y otros (Proc Annu Meet Am Soc Clin Oncol, (1996) 15 A1 151 ) registraron los resultados preliminares de una prueba de la administración de 35 mg/m2 por día durante cinco días una vez cada seis semanas a pacientes con cáncer pulmonar de célula no pequeña avanzado. Feun y otros (Am J Clin Oncol 1993 16: 506-508) registraron los resultados de una prueba de Fase I I de TCN-P en pacientes con carcinoma de célula escamosa avanzado del cuello del útero. Una infusión continua de 5 días de por lo menos 35 mg/m2 se repitió cada seis semanas. Entre los veinte pacientes evaluables, sólo se observaron dos respuestas. Fuen y otros concluyeron "al usar esta dosis y horario, TCN-P parece tener actividad limitada en cáncer de célula escamosa metastásico o recurrente del cuello del útero." En 1996, Hoffman y otros (Cáncer Chemother Pharmacol 37: 254-258) registraron los resultados de un estudio de Fase l-l l de TCN-P para cáncer de mama metastásico. En un estudio, catorce pacientes se trataron con 20 mg/m2 por día vía infusión continua durante cinco días cada seis semanas. Cuando los autores no pudieron ver una respuesta a esta dosis, la dosis se escaló a por lo menos 35 mg/m2 usando el mismo horario de infusión continua de 5 d ías. Hoffman y otros concluyeron que "TCN es inefectivo a todas las dosis probadas y a dosis mayores que o iguales a 35 mg/m2 tiene efectos tóxicos inaceptables." De esta manera, la combinación de eficacia limitada y toxicidad inaceptable previnieron desarrollo clínico adicional de TCN-P y compuestos relacionados. WO 03/079748 para los Regentes de la Universidad de California describió ciertos inhibidores ZNF217, tales como triciribina, en combinación con agentes quimioterapéuticos adicionales, tal como doxorubicón . Un objeto de la presente invención es proveer para |a administración de triciribina y compuestos relacionados y composiciones con toxicidad reducida para el tratamiento de tumores, cáncer, y otros trastornos asociados con la proliferación celular anormal. Otro objeto de la presente invención es proveer métodos mejorados para tratar tumores o cáncer en el sujeto con triciribina y compuestos relacionados.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA I NVENCIÓN La presente invención provee regímenes terapéuticos novedosos de triciribina, fosfato de triciribina y compuestos relacionados para tratar tumores o cáncer en un sujeto al mismo tiempo limitando la toxicidad sistémica. La invención se basa en el descubrimiento de q ue los tumores o cánceres que sobre expresan Akt kinasa son particularmente sensibles a los efectos citotóxicos de TCN y compuestos relacionados. Los inventores han determinado, contrario a la técnica anterior y experiencia, cómo usar con éxito tricibirina para tratar tumores y cáncer por uno o una combinación de (i) administrar triciribina sólo a pacientes que de acuerdo a una prueba diagnóstica descrita más adelante, exhiben sensibilidad realzada al fármaco; (ii) usar un nivel de dosis descrito que minimiza la toxicidad del fármaco, pero todavía exhibe eficacia; o (iii) usar un régimen de dosis descrito que minimiza la toxicidad del fármaco. En un aspecto de la presente invención, se proveen métodos para identificar tumores y cánceres que son particularmente susceptibles a los efectos tóxicos de TCN , TCN-P y/o compuestos relacionados. En una modalidad, se proveen métodos para tratar un tumor en un mamífero, en particular un humano, que incluye (i) obtener una muestra biológica del tumor; (ii) determinar si el tumor sobre expresa una Akt kinasa, y (iii) tratar el tumor que sobre expresa Akt kinasa con triciribina, fosfato de triciribina o un compuesto relacionado como se describe en la presente. En una modalidad, el nivel de expresión de Akt kinasa se puede determinar al probar el tumor o cáncer para la presencia de una Akt kinasa fosforilada, por ejemplo, al usar un anticuerpo que puede detectar la forma fosforilada. En otra modalidad, el nivel de expresión de Akt se puede determinar al probar una célula de tumor o cáncer obtenida de un sujeto y que com prende los niveles a un tejido de control. En ciertas modalidades, Akt se puede sobre expresar por lo menos 2, 2.5, 3 ó 5 pliegues en la muestra de cáncer en comparación con el control. En ciertas modalidades, la Akt kinasa sobre expresada puede ser una Akt kinasa hiperactivada y fosforilada. En otro aspecto de la presente invención, se proveen regímenes de dosificación que limitan los efectos laterales tóxicos de TCN y compuestos relacionados. En una modalidad, dichos regímenes dé dosificación minim izan o eliminan efectos laterales tóxicos, incluyendo, pero sin limitación a, hepatoxicidad, trombocitopenía, hiperglicemia, vómito, hipoalcemia, anemia, hipoalbunemia, mielosupreslón, hipertrigliceridem ia, hiperamilasemia, diarrea, estomaquitis y/o fiebre. En otra modalidad, la administración de TCN , TCN-P o compuestos relacionados provee por lo menos una respuesta parcial, tal como por lo menos 15, 20 o ó 30%, o completa in vivo en por lo menos 15, 20 ó 25% de los sujetos.

En una modalidad, se provee un método para tratar un sujeto que ha sido diagnosticado con un tumor al administrar al sujeto una cantidad efectiva de TCN, TCN-P o un compuesto relacionado, por ejemplo, compuestos descritos en la presente, de acuerdo a un horario de dosificación que incluye administrar el fármaco aproximadamente una vez por semana durante aproximadamente tres semanas seguido por un periodo de una semana en donde el fármaco no se administra. En otra modalidad, se proveen métodos para tratar un tumor o cáncer en un sujeto al administrar al sujeto un régimen de dosificación de 10 mg/m2 o menos de TCN, TCN-P o un compuesto relacionado una vez por semana. En una modalidad, el compuesto se puede administrar como una sola dosis de pildora sobre un periodo de tiempo corto, por ejemplo, aproximadamente 5, 10 ó 15 minutos. En otras modalidades, se proveen horarios de dosificación en donde los compuestos se administran vía infusión continua durante por lo menos 24, 48, 72, 96 ó 120 horas. En ciertas modalidades, la administración continua se puede repetir por lo menos una vez a la semana, una vez cada dos semanas y/o una vez al mes. En otras modalidades, los compuestos se pueden administrar por lo menos una vez cada tres semanas. En otras modalidades, los compuestos se pueden administrar por lo menos una vez al día durante al menos 2, 3, 4 ó 5 días. En otras modalidades, TCN, TCN-P y compuestos relacionados como se describe en la presente se pueden administrar a pacientes en una cantidad que es efectiva en provocar regresión de tumor. La adm inistración de TCN , TCN-P o compuestos relacionados pueden proveer por lo menos una respuesta parcial, tal como por lo menos 15, 20 ó 30%, o completa in vivo en por lo menos 15-20% de los sujetos. En ciertas modalidades, por lo menos 2, 5, 510, 15, 20, 30 ó 50 mg/m2 de un compuesto descrito en la presente se puede administrar a un sujeto. La administración del compuesto se puede conducir de acuerdo con cualquiera de los regimenes terapéuticos descritos en la presente. En modalidades particulares, el régimen de dosificación puede incluir administrar menos de 20 mg/m2 de TCN y compuestos relacionados. En una modalidad, menos de 1 0 mg/m2 de TCN o compuestos relacionados se puede administrar una vez a la semana. En otras modalidades, dosis de menos de 2 mg/m2, 5 mg/m2, 10 mg/m2, y/o 15 mg/m2 de TCN o un compuesto relacionado se puede administrar a un sujeto. Én otra modalidad, menos de 10 mg/m2 se puede administrar a un sujeto vía infusión continua durante por lo menos cinco días. En modalidades particulares, TCN o un compuesto relacionado como se describe en la presente se puede usar para el tratamiento de cáncer de páncreas, próstata, colorrectal y/o ovario. En una modalidad, los com puestos y/o regimenes terapéuticos de la presente invención se pueden usar pare prevenir y/o tratar un carcinoma, sarcoma, linfoma, leucem ia y/o mieloma. En otras modalidades de la presente ¡nvención, los compuestos descritos en la presente se pueden usar para tratar tumores sólidos. Todavía en otras modalidades, los compuestos y composiciones descritos en la presente se pueden usar para el tratam iento de un tumor o cáncer, tal como, pero sin limitación a, cáncer de los siguientes órganos o tejidos: mama, próstata, hueso, pulmón, colon, incluyendo, pero sin limitación a, colorrectal, urinario, vejiga, linfoma de no Hodgkin, melanoma, riñon, renal, páncreas, faringe, tiroides, estómago, cerebro y/o ovarios. Én modalidades particulares, TCN o un compuesto relacionado como se describe en la presente se puede usar para el tratamiento de cáncer de páncreas, mama, colorrectal y/o ovario. En otras modalidades de la presente invención, los compuestos descritos en la presente se pueden usar en el tratamiento de enfermedades relacionadas con angiogénesis. En ciertas modalidades, se proveen métodos para tratar leucemia vía infusión continua de TCN, TCN-P o un compuesto relacionado vía infusión continua durante por lo menos 24, 48, 72 ó 96 horas. En otras modalidades, la infusión continua se puede repetir, por ejemplo, por lo menos una vez cada dos, tres o cuatro semanas. En una modalidad particular, se provee un método para el tratamiento de tumores, cáncer y otros trastornos asociados con una proliferación celular anormal en un huésped, el método que comprende administrar al huésped una cantidad efectiva de un compuesto descrito en la presente opcionalmente en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. En un aspecto, los compuestos y composiciones se pueden administrar en combinación o alternancia con por lo menos un agente quimioterapéutico adicional. Los fármacos pueden formar parte de la misma composición, o se pueden proveer como una composición separada para la administración al mismo tiempo o a diferente tiempo. En una modalidad, las composiciones de la invención se pueden combinar con agentes antiangiogénicos. En otras modalidades de la presente invención, los compuestos y composiciones descritos en la presente se pueden usar en combinación o alternancia con los siguientes tipos de fármacos, incluyendo, pero sin limitación a: fármacos antiproliferantes, agentes antimicóticos, fármacos antimetabolito, agentes alquilantes o mostaza nitrogenada, fármacos que buscan topoisomerasas, fármacos que buscan transducción de señal en células de tumor, terapia de genes y agentes antisentido, terapéuticos de anticuerpo, esteroides, análogos de esteroide, fármacos anti-eméticos y/o agentes no esteroides. En otras modalidades, TCN , TCN-P o un compuesto relacionado como se describe en la presente se puede usar para tratar tumores o cánceres resistentes a uno o más fármacos, incluyendo las modalidades de tumores o cánceres y fármacos descritos en la presente. En una modalidad, TCN , TCN-P o un compuesto relacionado como se describe en la presente se administra en una cantidad efectiva para e| tratamiento de un paciente con un tumor o cáncer resistente a fármaco, por ejemplo, tumores o cáncer resistente a múltiples fármacos, incluyendo, pero sin limitación a, aquellos resistentes a taxol, rapamicina, tamoxifen, cisplatin, y/o gefitinib (iressa). En una modalidad, el TCN, TCN-P o compuesto relacionado como se describe en la presente se puede administrar con un agente quimioterapéutico adicional que puede ser un inhibidor de P-glicoproteína, tal como verapamil, ciclosporin (tal como ciclosporin A), tamoxifen, antagonistas de calmodulin , dexverapamil, dexniguldipina, vaspodar (PSC 833), biricodar (VX-710), tariquidar (XR9576), zosuquidar (LY335979), laniquidar (R101933), y/o ONT-093. En ciertas modalidades, se provee un método que incluye administrar a un huésped en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un compuesto descrito en la presente, o composición farmacéutica que comprende el compuesto, en una cantidad efectiva para el tratamiento del tratamiento de tumores, cáncer, y otros trastornos asociados con una proliferación celular anormal en un huésped. En una modalidad, se provee un método para el tratamiento de un tumor o cáncer que incluye una cantidad efectiva de un compuesto descrito en la presente, o una sal, isómero, profármaco o éster del mismo, a un individuo en necesidad del mismo, en donde el cáncer es, por ejemplo, carcinoma, sarcoma, línfoma, leucemia o mieloma. El compuesto, o sal, isómero, profármaco o éster del mismo, se provee opcionalmente en una composición farmacéuticamente aceptable que incluye los portadores apropiados, tales como agua, que se formula para la vía de administración deseada a un individuo en necesidad del mismo. Opcionalmente, el compuesto se administra en combinación o alternancia alternancia con por lo menos un agente terapéutico adicional para el tratamiento de tumores o cáncer. También dentro del alcance de la invención está el uso de un compuesto descrito en la presente o una sal, profármaco o éster del mismo en el tratamiento de un tumor o cáncer, opcionaímente en un portador farmacéuticamente aceptable; y el uso de un compuesto descrito en la presente o una sal, profármaco o éster del mismo en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer o tumor, opcionalmente en un portador farmacéuticamente aceptable.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La figura 1 demuestra la identificación de API-2 (triciribina) como un candidato de inhibidor de Akt de la Serie de Diversidad NCI . A ilustra la estructura química de API-2 (triciribina). B demuestra que API-2 inhibe los niveles de fosforilación de AKT2 en células de N I H3T3 transformadas por AKT2. Se trataron células de NI H3T3 transformadas por AKT2 def tipo silvestre con API-2 (1 D ) por tiempos indicados y se sometieron a análisis de inmunotransferencia con anticuerpos anti-fosfo-Akt-T308 y -S473 (paneles superior y medio). El panel inferior muestra expresión de AKT2 total. En C, se muestra que API-2 inhibe tres isoformas de Akt. Se transfectaron células HEK293 con HA-Akt1 , -AKT2 y -AKT3 y se trataron con API-2 (1 uM) o wortmannin (1 5 uM) antes de estimulación de EGF, las células se usaron e inmunoprecipitaron con anticuerpo anti-HA. Los inmunoprecipitados se sometieron a prueba de kinasa in vivo (superior) y análisis de inmunotransferencia con anticuerpo anti-fosfo-Akt-T308 (inferior). El panel medio muestra expresión de Aktl , AKT2 y AKT3 transfectados. D ilustra que API-2 no inhibió Akt in vitro. La prueba de kinasa in vitro de proteína recombinante de AKT2 activo constitutivamente en un regulador de kinasa que contiene 1 uM de API-2 (línea 3). La figura 2 demuestra que API-2 no inhibe PI3K, PDK1 y los miembros muy relacionados de la familia de AGC kinasa. A demuestra una prueba de kinasa PI3K in vitro. Células HEK293 fueron privadas de suero y tratadas con API-2 (1 uM) o Wortmannin (15 uM) durante 30 minutos antes de la estimulación EGF. Las células se Usaron e inmunoprecipitaron con anticuerpo anti-p1 10a. Los inmunoprecipitados se sometieron a prueba de kinasa in vitro usando PI-4-P como substrato. B ilustra el efecto de API-2 en activación PDK1 in vitro (panel superior), los círculos cerrados muestran inhibición por API-2. Los círculos abiertos muestran inhibición por la estaurosporina de control positivo, que es un inhibidor de PDK1 potente (IC50 = 5 nM). Los paneles inferiores son análisis de inmunotransferencia de células HEK293 que se transfectaron con Myc-PDK1 y se trataron con wortmannin o API-2 antes de estim ulación EGF. Las inmunotransferencias se detectaron con anticuerpos indicados. C ilustra un análisis de inmunotransferencia de niveles de fosforilación de PKCa con anticuerpos anti-fosfo-PKCa-T638 (superior) y PKCa total (inferior) después del tratamiento con API-2 o un inhibidor Ro31 -8220 de PKC no selectivo. D muestra una prueba de kinasa SGK in vitro. Las células HEK293 se transfectaron con HA-SGK y se trataron con API-2 o wortmannin antes de estimulación EGF. Se realizó k?nasa in vitro con inmunoprecipitados de HA-SGK usando MBP como substrato (superior) . El panel inferior muestra la expresión de HA-SGK transfectado. E ilustra los resultados de una prueba de kinasa PKA. PKA inmunopurificado se incubó en regulador de ADB (Upstate Biotechnology Inc) que contiene inhibidores indicados (API-2 o PKAI) y substrato Kemptide. La actividad de kinasa se cuantificó. En F, se muestra un western blot. Las células OVCAR3 se trataron con API-2 por tiempos indicados. Los lisatos de célula se inmunotransfirieron con anticuerpos anti-fosfo indicados (paneles 1 -4) y anticuerpo anti-actin (inferior). La figura 3 demuestra que API-2 inhibe actividad de Akt y crecimiento celular e induce apoptosis en células de cáncer humano con Akt elevado. A es un western blot, siguiendo tratamiento con API-2, los niveles de fosforilación de Akt se detectaron con anticuerpo anti-fosfo-Akt-T308 en líneas celulares de cáncer de humano. Las transferencias se volvieron a probar con anticuerpo de Akt anti-total (paneles inferiores). En B, se muestra una prueba de proliferación celular. Las líneas celulares como se indica en la figura fueron tratadas con dosis diferentes de API-2 durante 24 horas y 48 horas y después se analizaron con el equipo de Prueba de Proliferación Celular CellTiter 96 (Promega). C provee un análisis de apoptosis. Se trataron células con API-2 y se mancharon con anexin V y Pl y se analizaron por FACScan. La figura 4 muestra que API-2 inhibe objetivos descendentes de Akt y exhibe actividad anti-tumor en líneas celulares de cáncer con Akt elevado en injerto heterólogo de ratón. En A, se demuestra que API-2 inhibe la fosforilación de Akt de tuberin, Bad, AFX y GSK-3ß. Siguiendo el tratamiento con API-2, las células OVAR3 se usaron e inmunotransfirieron con anticuerpos indicados. B muestra que API-2 inhibe crecimiento de tumor. Las células de tumor se inyectaron subcutáneamente en ratones desnudos con nivel bajo de células de Akt en el lado izquierdo y el nivel elevado de células de Akt en el lado derecho. Cuando los tumores alcanzaron un tamaño promedio de aproximadamente 100-150 mm3, los animales fueron tratados con vehículo o 1 mg/kg/día de API-2. Cada medida representa un promedio de 1 0 tumores. C ilustra una representación de los ratones con injerto heterólogo de OVCAR3 (derecha) y OVCAR5 (izquierda) tratados con API-2 o vehículo (control). D muestra ejemplos de tamaño de tumor (inferior) y peso (superior) al final del experimento. En E, el análisis de inmunotransferencia de lisatos de tumor se realizó con anticuerpos anti-fosfo-Akt-S473 (superior) y anti-AKT2 (inferior) en tumores derivados de OVCAR3 que se trataron (T3 y T4) y no trataron (T1 y T2) con API-2. La figura 5 muestra que API-2 (triciribina) inhibe actividad de kinasa Akt in vitro. La prueba de kinasa in vitro se realizó con recombinante de PDK1 y Akt en un regulador de kinasa que contiene fosfatidilinositoI-3,4, 5-P3 (PI P3) , API-2 e histona H2B como substrato. Después de la incubación de 30 minutos, las reacciones fueron separadas por SDS-PAGE y se expusieron en una película.

La figura 6 provee el ARNm y también señala la secuencia de aminoácido de sitios de enzima de restricción de Aktl humano. La figura 7 provee el ARNm y también señala la secuencia de aminoácido de sitios de enzima de restricción de Akt2 humano. La figura 8 provee el ARNm y también señala la secuencia de aminoácido de sitios de enzima de restricción de Akt3 humano.

DESCRIPCIÓN DETALLADA Los inventores han determinado, contrario a la técnica anterior y experiencia, cómo usar con éxito triciribina para tratar tumores y cáncer por uno o una combinación de (i) administración triciribina sólo a pacientes que de acuerdo a una prueba diagnóstica descrita más adelante, exhiben sensibilidad realzada al fármaco; (ii) usar un nivel de dosis que minimiza la toxicidad del fármaco pero todavía exhibe eficacia; o (iii) usar un régimen de dosificación descrito que minimiza la toxicidad del fármaco.

I. Compuestos La presente invención provee para el uso de TCN, TCN-P y compuestos relacionados para usarse en regimenes terapéuticos particulares para el tratamiento de trastornos proliferantes. En una modalidad, los compuestos provistos en la presente invención tienen las siguientes estructuras: en donde cada R2', R3' y R5' son independientemente hidrógeno, fosfato o fosfonato opcionalmente sustituido (incluyendo mono-, di- o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado); acilo (incluyendo acilo inferior); alquilo (incluyendo alquilo inferior); amida, éster de sulfonato incluyendo alquilo o arilalquilo; sulfonilo, incluyendo metanosulfonilo y bencilo, en donde el grupo fenilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustitutos como, por ejemplo, se describe en la definición de un arilo dado en la presente; opcionalmente arilsulfonilo sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otros grupo de olvido farmacéuticamente aceptable que, in vivo, provee un compuesto en donde R2' , R3' o R5' es independientemente H o mono-, di- o trifosfato; en donde Rx y Ry son independientemente hidrógeno, fosfato opcionalmente sustituido; acilo (incluyendo acilo inferior); amida, alquilo (incluyendo alquilo inferior); polioxialquileno aromático tal como polietilenglicol, arilsulfonllo opcionalmente sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otro grupo de olvido farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, el compuesto se administra como un lípido de 5'-fosfoéter o un lípido de 5'-éter. Ri y R2 cada uno es independientemente H, alquilo de cadena recta, ramificada o cíclico opcionaímente sustituido (incluyendo alquilo inferior), alquenilo, o alquinilo, CO-alquilo, CO-alquenilo, CO-alquinilo, CO-arilo o heteroarilo, CO-alcoxialqu¡lo, CO-ariloxialquilo, arilo CO-sustituido, sulfonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo. En una modalidad, R2' y R3' son hidrógeno. En otra modalidad, R2' y R5' son hidrógeno. Todavía en otra modalidad, R2', R3' y R5' son hidrógeno. Todavía en otra modalidad, R2', R3', R5', R1 y R2 son hidrógeno.

En otra modalidad, el compuesto tiene la siguiente estructura: en donde R3 es H, alquilo de cadena recta, ramificada o cíclico opcionalmente sustituido (incluyendo alquilo inferior), alquenilo, o alquinilo, NH2, NHR4, N(R4)2, arilo, alcoxialquilo, ariloxialquilo, o arilo sustituido; y cada R4 independientemente es H, acilo incluyendo acilo inferior, alquilo incluyendo alquilo inferior tal como, pero sin limitarse a, metilo, etilo, propilo y ciclopropilo, alquenilo, alquinilo, cícloalquilo, alcoxi, alcoxialquilo, hidroxialquilo, o arilo. En una submodalidad, R3 es un alquilo, ¡so-propilo, t-butilo o fenilo de C1-11 de cadena recta.

En una modalidad, los compuestos provistos en la presente tienen la siguiente estructura: En otra modalidad, los com puestos provistos en la presente tienen la siguiente estructura: En otra modalidad, los compuestos provistos en la presente tienen la siguiente estructura: en donde R6 es H, alquilo (incluyendo alquilo inferior), alquenilo, alquinilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo, arilalquilo, cicloalquílo, NH2, NHR4, NR4R4, CF3, CH2OH, CH2F, CH2CI, CH2CF3, C(Y3)3, C(Y3)2C(Y3)3, C(=O)OH, C(=O)OR4, C(=O)-alquilo, C(=O)-arilo, C(=O)-alcoxialquilo, C(=O)NH2, C(=O)NHR4, C(=O)N(R4)2, en donde Y3 es independientemente H o halo; y cada R4 independientemente es H, acilo incluyendo acilo inferior, alquilo incluyendo alquilo inferior tal como, pero sin limitación a, metilo, etilo, propilo y ciclopropilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alcoxi, alcoxialquilo, hidroxialquilo o arilo. En una submodalidad, R& es etilo, CH2CH2OH, o CH2-fenilo.

En otra modalidad, los compuestos provistos en la presente tienen la siguiente estructura: en donde R7 es H, halo, alquilo (incluyendo alquilo inferior), alquenilo, alquinilo, alcoxi, alcoxialquilo, hidroxialquilo, cicloalquilo, nitro, ciano, OH, OR4, NH2, NHR4, NR4R4, SH, SR4, CF3, CH2OH, CH2F, CH2CI, CH2CF3, C(Y3)3, C(Y3)2C(Y3)3, C( = O)OH, C(=O)OR4, C(=O)-alquilo, C(=O)-ariIo, C(=O)-alcoxialquilo, C(=O)NH2, 0(=O)NHR4, C(=O)N(R4)2, o N3, en donde cada Y3 es independientemente H o halo; y cada R4 es independientemente H, acilo incluyendo alquilo inferior, alquilo incluyendo alquilo inferior tal como, pero sin limitación a, metilo, etilo, propilo y ciclopropilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alcoxi, alcoxialquilo, hidroxialquilo. En una submodalidad, R7 es metilo, etilo, fenílo, cloro o NH2.

En otra modalidad, los compuestos provistos en la presente tienen la siguiente estructura: En otra modalidad, los compuestos provistos en la presente tienen la siguiente estructura: Se debe entender que los com puestos descritos en la presente pueden contener centros quirales. Dichos centros quirales pueden ser de la configuración de (R) o (S), o pueden ser una mezcla de los m ismos. De esta manera, los compuestos provistos en la presente pueden ser enantioméricamente puros, o mezclas estereoisoméricas o diaestreoméricas . Se debe entender q ue la descripción de un com puesto en la presente abarca cualqu ier forma racémica, ópticamente activa, polimórfica, o esteroisomérica, o mezclas de las m ismas, q ue de preferencia posee las propiedades útiles descritas en la presente, siendo bien conocido en la técnica cóm o preparar formas ópticamente activas y cómo determinar la actividad usando las pruebas estándar descritas en la presente, o usando otras pruebas sim ilares que son bien conocidas en la técnica . Ejem plos de métodos que se pueden usar para obtener isómeros ópticos de los compuestos incluyen los siguientes: i) separación física de cristales - una técnica por la que cristales microscópicos de los enantiómeros ind ividuales se separan manual mente. Esta técn ica se puede usar si existen cristales de los enantiómeros separados, es deci r, el material es un cong lomerado, y los cristales son visualmente distintos; ii) cristalización simultánea - una técnica por la q ue los enantiómeros individuales se cristalizan por separado de u na solución del racemato, posible sólo si el último es un cong lomerado en el estado sólido; ii i) resoluciones enzimáticas - una técnica por la q ue la separación parcial o completa de un racemato en virtud de diferentes velocidades de reacción para los enantiómeros con una enzima iv) síntesis asimétrica enzimática - una técnica sintética por la que por lo menos un paso de la síntesis usa una reacción enzimática para obtener un precursor enantioméricamente puro o sintético enriquecido del enantiómero deseado; v) síntesis asimétrica química - una técnica sintética por la que el enantiómero deseado se sintetiza de un precursor aquiral bajo condiciones que producen asimetría (es decir, quiralidad) en el producto, que se puede lograr usando catalizadores quirales o auxiliares quirales; vi) separaciones de diaestereómero - una técnica por la que un compuesto racémico se hace reaccionar con un reactivo enantioméricamente puro (el auxiliar quiral) que convierte los enantiómeros individuales a diaestereómeros. Los diaestereómeros resultantes se separan entonces por cromatografía o cristalización en virtud de su ahora diferencias estructurales más distintas y el auxiliar quiral eliminado después para obtener el enantiómero deseado; vii) transformaciones asimétricas de primer y segundo orden - una técnica por la que diaestereómeros del racemato equilibran para dar una preponderancia en solución del diaestereómero del enantiómero deseado o en donde la cristalización preferencial del diaestereómero del enantiómero deseado perturba el equilibrio de modo que finalmente en principio todo el material se convierte al diaestereómero cristalino del enantiómero deseado. El enantiómero deseado entonces se libera del diaestereómero; viii) resoluciones cinéticas - esta técnica se refiere a la obtención de resolución parcial o completa de un racemato (o de una resolución adicional de un compuesto parcialmente resuelto) en virtud de velocidades de reacción desiguales de los enantiómeros con un reactivo quiral, no racémico o catalizador bajo condiciones cinéticas; ix) síntesis enantioespecífica de precursores no racémicos - una técnica sintética por la que el enantiómero deseado se obtiene de materiales iniciales no quirales y en donde la integridad estereoquímica no está o sólo se compromete lo mínimo sobre el curso de la síntesis; x) cromatografía líquida quiral - una técnica por la que los enantiómeros de un racemato se separan en una fase móvil líquida en virtud de sus interacciones que difieren con una fase estacionaria. La fase estacionaria se puede hacer de material quiral o la fase móvil puede contener un material quiral adicional para provocar las interacciones que difieren; xi) cromatografía de gas quiral - una técnica por la que el racemato se volatiza y los enantiómeros se separan en virtud de sus interacciones que difieren en la fase móvil gaseosa con una columna que contiene una fase adsorbente quiral no racémica fija; xii) extracción con solventes quirales - una técnica por la que los enantiómeros se separan en virtud de disolución preferencial de un enantiómero en un solvente quiral particular; xiii) membranas quirales de transporte - una técnica por la que un racemato se coloca en contacto con una barrera de membrana delgada. Esta barrera típicamente separa dos fluidos miscibles, uno conteniendo el racemato, y una fuerza impulsora tal como concentración o presión diferencial provoca transporte preferencial sobre la barrera de membrana. La separación ocurre como un resultado de la naturaleza quiral no racémica de la membrana que permite que pase sólo un enantiómero del racemato. En algunas modalidades, se provee triciribina, fosfato de triciribina (TCN-P), 5'-fosfato de triciribina (TCN-P), o la aducción de DMF de triciribina (TCN-DMF). TCN se puede sintetizar por cualquier técnica conocida a un experto en la técnica, por ejemplo, como se describe en Tetrahedron Letters, vol. 49, pp. 4757-4760 (1971). TCN-P se puede preparar por cualquier técnica conocida a un experto en la técnica, por ejemplo, como se describe en la Patente de E. U.A. No. 4, 123,524. La síntesis de TCN-DMF se describe, por ejemplo, en I NSERM , vol. 81 , pp. 37-82 (1978). Otros compuestos relacionados a TCN como se describe en la presente se pueden sintetizar, por ejemplo, de conformidad con los métodos descritos en Gudmundsson , K.S. , y otros, "Synthesis of carbocycl ic analogs of 2', 3'-dideoxysangivamycin, 2',3'-dideoxytoyocamycin, and 2', 3'-dideoxytriciribine," Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, 20(10-1 1 ) 1823-1830 (octubre - noviembre 2001 ); Porcari, A. R. , y otros, "6-N-Acyltriciribine analogues: structure-activity relationship between acyl carbón chain length and activity against HIV-1 ," J. Med. Chem. , 43(12):2457-2463 (15 de junio de 200); Porcari, A. R. , y otros, "Acyclic sugar analogs of tricibirine: lack of antiviral and antiproliferative activity correlate with low intracellular phosphorylation, " Nucleosides Nucleotides, 18 (1 1 -12):2475-2497 (noviembre - diciembre 1999), Porcari, A. 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Sales Farmacéuticamente Aceptables y Profármacos En casos donde los compuestos son suficientemente básicos o ácidos para formar sales acidas o básicas no tóxicas estables, quizá sea apropiada la administración del compuesto como una sal farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas derivadas de bases y ácidos inorgánicos u orgánicos farmacéuticamente aceptables. Las sales adecuadas incluyen aquellas derivadas de metales alcalinos tales como potasio y sodio, metales alcalino térreos tales como calcio y magnesio, entre numerosos otros ácidos bien conocidos en la técnica farmacéutica. En particular, ejem plos de sales farmacéuticamente aceptables son sales de adición acidas orgánicas formadas con ácidos, que forman un anión fisiológicamente aceptable, por ejemplo, tosilato, metanosulfonato, acetato, citrato, malonato, tartarato, succinato, benzoato, ascorbato, a-ketoglutarato y a-glicerofosfato. También se pueden formar sales inorgánicas adecuadas, incluyendo, sulfato, nitrato, bicarbonato y sales de carbonato. Se pueden obtener sales farmacéuticamente aceptables usando procedimientos estándar bien conocidos en la técnica, por ejemplo, al hacer reaccionar un compuesto suficientemente básico tal como una amina con un ácido adecuado que proporciona un anión fisiológicamente aceptable. También se pueden hacer sales de metal alcalino (por ejemplo, sodio, potasio o litio) o de metal alcalino terreo (por ejemplo, calcio) de ácidos carboxílicos. Cuaiquiera de los nucleótidos descritos en la presente se puede administrar como un profármaco de nucleótido para aumentar la actividad, biodisponibilidad, estabilidad o de lo contrario alterar las propiedades del nucleósido. Se conoce un número de ligandos de profármaco de nucleótido. En general, la alquilación, acilación u otra modificación lipofílica del mono, di o trifosfato del nucleósido aumentará la estabilidad del nucleótido. Ejemplos de grupos sustitutos que pueden reemplazar uno o más hidrógenos en la porción de fosfato son alquilo, arilo, esteroides, carbohidratos, incluyendo azúcares, 1 ,2-diacilglicerol y alcoholes. Muchos se describen en R. Jones y N. Bischofberger, Antiviral Research, 27 (1995) 1 -17. Cualquiera de estos se puede usar en combinación con los nucleósidos descritos para lograr un efecto deseado. En una modalidad, se provee la triciribina o un compuesto relacionado como profármaco lipofílico de 5'-hidroxilo. Ejemplos no limitantes de patentes de E.U.A. que describen sustitutos lipofílicos adecuados que se pueden incorporar covalentemente en el nucleósido, de preferencia en la posición 5'-OH del nucleósido o preparaciones lipof ílicas, incluyen las Patentes de E.U.A. Nos. 5,149,794 (22 de septiembre de 1992, Yatvin y otros); 5,194,654 (16 de marzo de 1993, Hostetler y otros); 5,223,263 (29 de junio de 1993, Hostetler y otros); 5,256,641 (26 de octubre de 1993, Yarvin y otros); 5,411,947 (2 de mayo de 1995, Hostetler y otros); 5,463,092 (31 de octubre de 1995, Hostetler y otros); 5,543,389 (6 de agosto de 1996, Yatvin y otros); 5,543,390 (6 de agosto de 1996, Yatvin y otros); 5,543,391 (6 de agosto de 1996, Yatvin y otros); y 5,554,728 (10 de septiembre de 1996, Basava y otros), todas se incorporan a la presente por referencia. Las solicitudes de patente extranjeras que describen sustitutos lipofílicos que se pueden fijar a la triciribina o un compuesto relacionado de la presente invención, o preparaciones lipofílicas, incluyen WO 89/02733, WO 90/00555, WO 91/18914, WO 93/00910, WO 94/26273, WO/15132, EP 0 350 287, EP 93917054.4 y WO 91/19721. Ejemplos no limitantes adicionales de derivados de triciribina o un compuesto relacionado son aquellos que contienen sustitutos como se describe en las siguientes publicaciones. Esta triciribina derivada o un compuesto relacionado se puede usar para las indicaciones descritas en la prueba o de lo contrario como agentes antivirales, incluyendo como agentes anti-VIH o anti-VHB. Ho, D.H.W. (1973) "Distribution of Kinase and deaminase of 1ß-D-arabinofuranosylcytosine in tissues of man and mouse." Cáncer Res. 33, 2816-2820; Holy, A. (1993) "Isopolar phosphorous-modified nucleotide analogues. In: De Clercq" (ed.), Advances in Antiviral Drug Design, vol. I, JAI Press, pp. 179-231; Hong, C.I., Nechaev, A., y West, C.R. (1979a) "Synthesis and antitumor activity of 1ß-3-arabinofuranosylcytosine conjugates of cortisol and cortisone." Biochem. Biophys. Rs. Común. 88, 1223-1229; Hong, C.I., Nechaev, A., Kirisits, A.J., Buchleit, D.J. y West, C.R. 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Definiciones Como se usa en la presente, los términos "cáncer" y "canceroso" se refieren a o describen la condición fisiológica en mam íferos que típicamente se caracteriza por crecimiento celular no regulado, es decir, trastornos proliferantes. Ejemplos de dichos trastornos proliferantes incluyen cánceres tales como carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia, así como otros cánceres descritos en la presente. Ejemplos más particulares de dichos cánceres incluyen cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de colon, cáncer de célula escamosa, cáncer de pulmón de célula pequeña, cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, cáncer cervical, cáncer de ovario, cáncer de hígado, por ejemplo, carcinoma hepático, cáncer de vejiga, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial, cáncer de riñon, y cáncer de tiroides. Otros ejemplos no limitantes de cánceres son carcinoma de las células básales, cáncer del tracto biliar; cáncer de huesos; cáncer cerebral y de CNS; coriocarcinoma; cáncer del tejido conector; cáncer del esófago; cáncer de ojos; cáncer de la cabeza y cuello; cáncer gástrico; neoplasma intra-epitelial; cáncer de laringe; linfoma incluyendo linfoma de Hodgkin y no Hodgkin; melanoma; mieloma; neuroblastoma; cáncer de la cavidad oral (por ejemplo, labio, lengua, boca y faringe) ; cáncer pancreático; retinoblastoma; rabdomiosarcoma; cáncer rectal; cáncer del sistema respiratorio; sarcoma; cáncer de piel ; cáncer del estómago; cáncer testicular; cáncer uterino; cáncer del sistema urinario, así como otros carcinomas y sarcomas. Como se usa en la presente, el término "tumor" se refiere a todo el crecimiento y proliferación celular neoplásticos, ya sea maligno o benigno, y todas las células y tejidos pre-cancerosos y cancerosos. Por ejemplo, un cáncer particular se puede caracterizar por un tumor de masa sólida. La masa de tumor sólida, si está presente, puede ser una masa de tumor primaria. Una masa de tumor primaria se refiere a un crecim iento de células cancerosas en un tejido que resulta de la transformación de una célula normal de ese tejido. En la mayoría de los casos, la masa de tumor primaria se identifica por la presencia de un quiste, que se puede encontrar a través de métodos visuales o de palpitación, o por irregularidad en forma, textura o peso del tejido. Sin embargo, algunos tumores primarios no son palpables y se pueden detectar sólo a través de técnicas de imagen médica tales como rayos X (por ejemplo, mamografía), o por aspiraciones de aguja. El uso de estas últimas técnicas es más común en la detección temprana. El análisis molecular y fenotípico de células cancerosas dentro de un tejido usualmente confirmará si el cáncer es endógeno para el tejido o si la lesión se debe a metástasis de otro sitio.

El término alquilo, como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, incluye un hidrocarburo saturado, recto, ramificado, o cíclico, primario, secundario o terciario de, por ejemplo, C-¡ a C24, y específicamente incluye metilo, trifluorometilo, etilo, propilo, isopropilo, ciclopropilo, butilo, isobutilo, f-buti'lo, pentilo, ciclopentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, isohexilo, ciciohexilo, ciclohexilmetilo, 3-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, y 2,3-dímetilbutilo. El alquilo se sustituye opcionalmente, por ejemplo, con uno o más sustitutos tales como halo (F, Cf, Br o I), (por ejemplo, CF3, 2-Br-etilo, CH2F, CH2CI, CH2CF3 o CF2CF3), hidroxilo (por ejemplo, CH2OH), amino (por ejemplo, CH2NH2, CH2NHCH3 o CH2N(CH3)2), alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, azido (por ejemplo, CH2N3), ciano (por ejemplo, CH2CN), ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, fosfato o fosfonato, ya sea no protegido o protegido, según sea necesario, como es conocido a aquellos expertos en la técnica, por ejemplo, como se enseña en Greene, y otros, Protective Groups in Organic Svnthesis, John Wiley and Sons, segunda edición, 1991, incorporado a la presente por referencia. El término alquilo inferior, como se usa en la presente, y a menos que se especifique lo contrario, se refiere a un grupo alquilo de Ci a C saturado recto, ramificado, o si es apropiado, cíclico (por ejemplo, ciclopropilo), incluyendo ambas formas sustituidas y no sustituidas. El término alquilamino o arilamino incluye un grupo amino que tiene uno o dos sustitutos de alquilo o arilo, respectivamente.

El término amino ácido incluye a, ß, y o d aminoácidos que ocurren de manera natural y sintéticos, e incluye, pero no se limita a, aminoácidos encontrados en proteínas, es decir, glicina, alanita, valina, leucina, isoleucina, metionina, fenilalanina, triptofan, prolina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, aspartato, glutamato, lisina, arginina e histidina. En una modalidad preferida, el amino ácido está en la configuración L. Alternativamente, el amino ácido puede ser un derivado de alanilo, valinilo, leucinilo, isoleuccinilo, prolinilo, fenilalanilo, triptofanilo, metioninilo, glicinilo, seriniio, treoninílo, cisteinilo, tirosinilo, asparaginilo, glutaminilo, aspartoilo, glutaroilo, I isi ni lo , arginilo, hidtidinilo, ß-alanilo, ß-valinllo, ß-leucinilo, ß-isoleuccinilo, ß-prolinilo, ß-fenilalanilo, ß-triptofanilo, ß-metioninilo, ß-glicinilo, ß-serinilo, ß-treoninilo, ß-cisteinilo, ß-tirosinilo, ß-asparaginilo, ß-glutaminilo, ß-aspartoílo, ß-glutaroilo, ß-lisinilo, ß-argininilo o ß-histidinilo. Cuando se usa el término amino ácido, se considera ser una descripción específica e independiente de cada uno de los esteres de un amino ácido natural o sintético, incluyendo, pero sin limitación a, a, ß, y o d glicina, alanita, valina, leucina, isoleucina, metionina, fenilalanina, triptofan, prolina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, aspartato, glutamato, lisina, arginina e histidina en las configuraciones D y L. El término "protegido" como se usa en la presente y a menos que se defina lo contrario, incluye un grupo que se agrega a un átomo de oxígeno, nitrógeno, sulfuro o fósforo para prevenir su reacción adicional o para otros propósitos. Una amplia variedad de grupos protectores de oxígeno y nitrógeno es conocida a aquellos expertos en la técnica de síntesis orgánica (ver Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a ed., John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, NY, 1999). El término arilo, como se usa en la presente, y a menos que se especifique lo contrario, incluye fenilo, bifenilo, o naftilo, y de preferencia fenilo. El grupo arilo se sustituye opcionalmente con una o más porciones tales como halo, hidroxilo, amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, fosfato o fosfonato, ya sea protegido o no protegido, según sea necesario, como es conocido a aquellos expertos en la técnica, por ejemplo, como se enseña en Greene, y otros, Protective Groups in Organic Svnthesis. John Wiley and Sons, 3a ed., 1999. El término alcarilo o alquilarilo incluye un grupo alquilo con un sustituto arilo. El término aralquilo o arilalquilo incluye un grupo arilo con un sustituto alquilo. El término halo, como se usa en la presente, incluye cloro, bromo, yodo y flúor. El término acilo incluye un éster de ácido carboxílico en donde la porción no carbonilo del grupo éster se selecciona a partir de alquilo o alquilo inferior recto, ramificado o cíclico, alcoxialquilo incluyendo metoximetilo, aralquilo incluyendo bencilo, ariloxialquilo tal como fenoximetilo, arilo incluyendo fenilo opcionalmente sustituido con halógeno, alquilo de Ci a C o alcoxi de d a C4, esteres de sulfonato tales como sulfonií alquilo o aralquilo incluyendo metanosulfonilo, el éster de mono, di o trifosfato, tritilo o monometoxitritilo, bencilo sustituido, tria iqu i Isi li lo (por ejemplo, dimetil-t-butilsililo) o difenilmetilsililo. Los grupos arilo en los esteres óptimamente comprenden un grupo fenilo. El término "acilo inferior" se refiere a un grupo acilo en donde la porción de no carbonilo es alquilo Inferior. Como se usa en la presente, el término "sustancialmente libre de" o "sustancialmente en la ausencia de" con respecto a pureza enantiomérica, se refiere a una composición que ¡ncluye por lo menos 85% ó 90% en peso, de preferencia 95% a 98% en peso, y todavía más preferible 99% a 100% en peso, del enantiómero designado. En una modalidad preferida, en los métodos y compuestos de esta invención , los compuestos están sustancialmente libres de otros enantíómeros. De manera similar, el término "aislado" se refiere a una composición de compuesto que incluye por lo menos 85% ó 90% en peso, de preferencia 95% a 98% en peso, y todavía más preferible 99% a 100% en peso, del compuesto, el resto comprendiendo otras especies o enantiómeros químicos. El término "independientemente" se usa en la presente para indicar que el variable, que se aplica independientemente, varía independientemente de aplicación a aplicación. De esta manera, en un compuesto tal como R"XYR", en donde R" es "independientemente carbono o nitrógeno", ambas R" pueden ser carbono, ambas R" pueden ser nitrógeno, o una R" puede ser carbono y las otras R" nitrógeno. El término "sal o profármaco farmacéuticamente aceptable" se usa en toda la especificación para describir cualquier forma farmacéuticamente aceptable (tal como un éster, éster de fosfato, sal de un éster o un grupo relacionado) de un compuesto, que, al administrar a un paciente, provee el compuesto. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas derivadas de bases y ácidos inorgánicos u orgánicos farmacéuticamente aceptables. Las sales adecuadas incluyen aquellas derivadas de metales alcalinos tales como potasio y sodio, metales alcalino térreos tales como calcio y magnesio, entre muchos otros ácidos bien conocidos en la técnica farmacéutica. Los profármacos farmacéuticamente aceptables se refieren a un compuesto que se metaboliza, por ejemplo hidroliza u oxida, en el huésped para formar el compuesto de la presente ¡nvención. Ejemplos típicos de profármacos incluyen compuestos que tienen grupos protectores biológicamente volubles en una porción funcional del compuesto activo. Los profármacos incluyen compuestos que pueden ser oxidados, reducidos, aminados, desam inados, hidroxilados, deshidroxilados, hidrolizados, deshidrolizados, alquilados, desalquilados, acilados, desacilados, fosforllados, desfosforilados para producir el compuesto activo. El término "esteres farmacéuticamente aceptables" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, incluye aquellos esteres de uno o más compuestos, que son, dentro del alcance de sano juicio médico, adecuados para usarse en contacto con los tejidos de huéspedes sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica indebida y similares, son proporcionales con una relación razonable de beneficio/riesgo, y son efectivos para su uso destinado. El término "sujeto" como se usa en la presente se refiere a un animal, de preferencia un mamífero, muy preferible un humano. Los mam íferos pueden incluir mamíferos no humanos, incluyendo, pero sin limitación a, cerdos, ovejas, cabras, vacas (bovino), venados, muías, caballos, monos y otros primates no humanos, perros, gatos, ratas, ratones, conejos y cualquier otro conocido o descrito en la presente.

II. Regimenes de Eficacia/Dosificación In Vivo En otro aspecto de la presente invención, se proveen regimenes de dosificación que limitan los efectos laterales tóxicos de TCN y compuesto relacionados. En una modalidad, dichos regimenes de dosificación minimizan los siguientes efectos laterales tóxicos, incluyendo, pero sin limitación a, hepatoxicidad, trombocitopenía, hiperglicemia, vómito, hipoalcemia, anemia, hipoalbunemia, mielosupresión, hipertrígliceridemia, hiperamilasemia, diarrea, estomaquitis y/o fiebre. En otra modalidad, la administración de TCN , TCN-P o compuestos relacionados provee por lo menos una respuesta parcial o completa in vivo en por lo menos 15-20% de los sujetos. En modalidades particulares, una respuesta parcial puede ser por lo menos 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80 u 85% de regresión de tumor. En otras modalidades, esta respuesta puede ser evidente en por lo menos 15, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 ó 90% de los sujetos tratados con la terapia. En otras modalidades, dichas velocidades de respuesta se pueden obtener por cualquier régimen terapéutico descrito en la presente. En otras modalidades, se proveen métodos para tratar un sujeto que ha sido diagnosticado con cáncer al administrar al sujeto una cantidad efectiva de TCN, TCN-P o un compuesto relacionado de acuerdo con un horario de dosificación que incluye administrar el fármaco una vez por semana durante tres semanas seguido por un periodo de una semana en donde el fármaco no se administra (es decir, vai un ciclo de 28 días). En otras modalidades, dichos ciclos de 28 días se pueden repetir por lo menos 2, 3, 4, ó 5 veces o hasta que la regresión de tumor sea evidente. En otras modalidades, se provee un ciclo de 42 días en donde los compuestos descritos en la presente se pueden adm inistrar una vez a la semana durante cuatro semanas seguido por un periodo de dos semanas en donde no se administra el fármaco. En otras modalidades, dicho ciclo de 42 días se puede repetir por lo menos 2, 3, 4 ó 5 veces o hasta que la regresión de tumor sea evidente. En una modalidad particular, menos de 12, menos de 1 1 o menos de 10 mg/m2 de TCN , TNC-P o un compuesto relacionado se puede administrar de acuerdo con un ciclo de 42 días. En otras modalidades particulares, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 u 1 1 mg/m2 de TCN, TCN-P o un compuesto relacionado se puede administrar de acuerdo con un ciclo de 42 días. En otra modalidad, se proveen métodos para tratar cáncer en un sujeto al administrar al sujeto un régimen de dosificación de 10 mg/m2 o menos de TCN, TCN-P o un compuesto relacionado una vez por semana. En modalidades particulares, 0.5, 1 , 1 .5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 ó 10 mg/m2 de TCN, TCN-P o un compuesto relacionado como se describe en la presente se puede administrar una vez por semana. En modalidades de la presente invención, el compuesto descrito en la presente se puede administrar como una sola dosis de pildora sobre un periodo de tiempo corto, por ejemplo, aproximadamente 5, 10, 15, 20, 30 ó 60 minutos. En otras modalidades, se proveen horarios de dosificación en donde los compuestos se administran vía infusión continua durante por lo menos 24, 48, 72, 96 ó 120 horas. En ciertas modalidades, la administración del fármaco vía infusiones continuas o de pildora se pueden repetir a una cierta frecuencia por lo menos: una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez al mes, una vez cada cinco semanas, una vez cada seis semanas, una vez cada ocho semanas, una vez diez semanas y/o una vez cada doce semanas. El tipo y frecuencia de administraciones se puede combinar en cualquier manera descrita en la presente para crear un ciclo de dosificación. Los fármacos se pueden administrar repetidamente vía unos ciertos ciclos de dosificación, por ejemplo como una inyección de pildora una vez cada dos semanas durante tres meses. Los ciclos de dosificación se pueden administrar por lo menos: uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o veinticuatro meses. Alternativamente, por lo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 15 ó 20 ciclos de dosificación se pueden administrar a un paciente. El fármaco se puede administrar de acuerdo con cualquier combinación descrita en la presente, por ejemplo, el fármaco se puede administrar una vez a la semana cada tres semanas por 3 ciclos. En otras modalidades, los compuestos se pueden administrar por lo menos una vez al día durante al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10 días. Dicha administración se puede seguir por periodos correspondientes en donde no se administra el fármaco. El TCN , TCN-P y compuestos relacionados como se describe en la presente se pueden administrar a pacientes en una cantidad que es efectiva en provocar regresión de tumor. La administración de TCN, TCN-P o compuestos relacionados pueden proveer por lo menos una parcial, tal como por lo menos 15, 20 ó 30%, o respuesta completa in vivo en por lo menos 15-20% de los sujetos. En ciertas modalidades, por lo menos 2, 5, 10, 1 5, 20, 30 ó 50 mg/m2 de un compuesto descrito en la presente se puede administrar a un sujeto. En ciertas modalidades, por lo menos aproximadamente 0.5, 1 , 1 .5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 12, 15, 17, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 165, 175, 200, 250, 300 ó 350 mg/m2 de TCN, TCN-P o un compuesto relacionado descrito en la presente se puede administrar a un sujeto. La administración del compuesto se puede conducir de conformidad con cualquiera de los regimenes terapéuticos descritos en la presente. En modalidades particulares, el régimen de dosificación incluye administrar menos de 20 mg/m2 de TCN y compuestos relacionados. En una modalidad, menos de 20 mg/m2 de TCN o compuestos relacionados se puede administrar una vez a la semana. En otras modalidades, 2 mg/m2, 5 mg/m2, 10 mg/m2 de TCN o un com puesto relacionado se puede administrar a un sujeto. En otra modalidad, menos de 10 mg/m2 se puede administrar a un sujeto vía infusión continua durante al menos cinco días. La presente invención provee para cualquier combinación de tipo de dosificación, frecuencia, número de ciclos y cantidad de dosificación descritos en la presente. lll. Selección de Poblaciones de Pacientes En otro de la presente invención, se proveen métodos para identificar cánceres o tumores que son susceptibles a los efectos tóxicos de triciribina (TCN) y compuestos relacionados. En una modalidad, se proveen métodos para tratar un cáncer o tumor en un mamífero al (i) obtener una muestra biológica del tumor; (ii) determinar si el cáncer o tumor sobre expresa Akt kinasa o Akt kinasa hiperactivada y fosforilada, y (iii) tratar el cáncer o tumor con triciribina o un compuesto relacionado como se describe en la presente. En una modalidad, la muestra biológica puede ser una biopsia. En otras modalidades, la muestra biológica puede ser fluido, células y/o aspiratos obtenidos del tumor o cáncer. La muestra biológica se puede obtener de conformidad con cualquier técnica conocida a un experto en la técnica. En una modalidad, se puede conducir una biopsia para obtener la muestra biológica. Una biopsia es un procedimiento realizado para eliminar tejido o células del cuerpo para examinación. Algunas biopsias se pueden realizar en la oficina de un médico, mientras que otras se necesitan hacer en un hospital. Además, algunas biopsias requieren uso de un anestésico para dormir el área, mientras que otras no requieren ninguna sedación. En ciertas modalidades, se puede realizar una biopsia endoscópica. Este tipo de biopsia se realiza a través un endoscopio de fibra óptica (un tubo largo, delgado que tiene un telescopio de enfoque cercano en el extremo para ver) a través de un orificio del cuerpo natural (es decir, recto) o una pequeña incisión (es decir, artroscopia). El endoscopio se usa para ver el órgano en cuestión para áreas anormales o sospechosas, a fin de obtener una pequeña cantidad de tejidos para estudio. Los procedimientos endoscópicos son identificados por el órgano o área del cuerpo que se va a visualizar y/o tratar. El médico puede insertar el endoscopio en el tracto gastrointestinal (endoscopia del tracto alimentario), vejiga (cistoscopia) , cavidad abdominal (laparoscopia), cavidad articulación (artroscopia) , porción media del pecho (mediastinoscopia), o sistema de la tráquea y bronquios (laringoscopia y broncoscopia) . En otra modalidad, se puede realizar una biopsia de la médula ósea. Este tipo de biopsia se puede realizar ya sea del esternón o la cadera de la cresta ilíaca (el área de hueso en cualquier lado de la pelvis en el área de la espalda inferior) . La piel se limpia y se da un anestésico local para dormir el área. Se inserta una aguja larga, rígida en la médula ósea, y se aspiran células para estudio; este paso ocasionalmente es incomodo. Una biopsia de núcleo (que elimina un "chip" de hueso pequeño de la médula ósea) puede seguir la aspiración. En otra modalidad, se puede realizar una biopsia excisional o incisional en el mam ífero. Este tipo de biopsia a menudo se usa cuando se necesita una porción más amplia o más profunda de la piel . Usando un escalpelo (cuchilla quirúrgico), se elimina un grosor completo de piel para examinación adicional, y la herida se sutura (cosida con hilo quirúrgico). Cuando se elimina todo el tumor, se refiere como una técnica de biopsia excisional. Si se elimina sólo una porción del tumor, se refiere como una técnica de biopsia incisional. La biopsía excisional a menudo es el método usualmente preferido, por ejemplo, cuando se sospecha de melanoma (un tipo de cáncer de la piel). Todavía en otra modalidad , se puede usar una biopsia de aspiración de aguja fina (FNA). Este tipo de biopsia involucra usar una aguja delgada para eliminar piezas muy pequeñas de un tumor. A veces se usa anestésico local para dormir el área, pero la prueba raramente provoca incomodidad y no deja cicatriz. FNA, por ejemplo, no se usa para la diagnosis de un lunar sospechoso, pero se puede usar, por ejemplo para la biopsia de nodulos linfáticos grandes cerca de un melanoma para ver si el melanoma se ha metastizado (extendido). Se puede usar una tomografía computarizada (CT o CAT sean) para guiar una aguja en un tumor en un órgano interno tal como el pulmón o hígado. En otras modalidades, se pueden conducir biopsias por afeitado, con punch y/o de piel. Las biopsias con punch involucran tomar una muestra de piel más profunda con un instrumento de biopsia que elimina un cilindro corto, o "núcleo de manzana," de tejido. Después de administrar un anestésico local, el instrumento se rota en la superficie de la piel hasta que corta a través de todas las capas, incluyendo la dermis, epidermis, y las partes más superficiales del subcutis (grasa). Una biopsia por afeitado involucra quitar las capas superiores de piel al afeitarla. Las biopsias por afeitado también se realizan con un anestésico local. Las biopsias de piel involucran quitar una muestra de piel para examinación bajo el microscopio para determinar si, por ejemplo, está presente melanoma. La biopsia se realiza bajo anestesia local. En una modalidad particular, se proveen métodos para determinar si el tumor sobre expresa una Akt kinasa. La sobre expresión de Akt kinasa se puede referir al estado de fosforilación de la kinasa. Se puede detectar hiperfosforilación de Akt de conformidad con los métodos descritos en la presente. El tejido de control puede ser un tejido normal del mam ífero en donde se obtuvo la biopsia o un tejido normal de un mamífero sano. La sobre expresión de Akt kinasa o hiperfosforilación se puede determinar si la biopsia de tumor contiene cantidades mayores de Akt kinasa y/o fosforilación de Akt kinasa que el tejido de control , tal como, por ejemplo, por lo menos cantidades mayores de aproximadamente 1 .5, 2, 2.25, 2.5, 2.75, 3, 3.25, 3.5, 3.75, 4, 4.25, 4.5, 4.75, 5, 5.5, 6, 7, 8, 9 ó 10 veces de Akt kinasa que contenía en el tejido de control . En una modalidad, la presente invención provee un método para detectar expresión de Akt kinasa aberrante en un sujeto o en una muestra biológica del sujeto al contactar células, extractos de célula, suero u otra muestra de los sujetos o dicha muestra biológica con una molécula inmunointeractiva específica para una Akt kinasa o porción antigénica de la misma y seleccionar el nivel de formación del complejo de molécula-Akt-kinasa inmunointeractiva, en donde una presencia elevada del complejo relativo a una célula normal es indicativo de una célula aberrante que expresa o sobre expresa Akt. En un ejemplo, las células o extractos de célula se pueden seleccionar inmunológicamente para la presencia de niveles elevados de Akt kinasa. En una modalidad alternativa, la expresión aberrante de Akt en una célula se detecta al nivel genético al seleccionar el nivel de expresión de un gen que codifica una Akt kinasa en donde un nivel elevado de un producto de expresión de trascripción (es decir, ARNm) en comparación con una célula normal es indicativo de una célula aberrante. En ciertas modalidades, PCR de tiempo real así como otros procedimientos de PCR se pueden usar para determinar actividad de trascripción. En una modalidad, se puede obtener ARNm de células de un sujeto o de una muestra biológica de un sujeto y ADNc opcionalmente generado. Entonces se puede contactar el ARNm o ADNc con una sonda genética capaz de hibridar a y/o amplificar toda o parte de una secuencia de nucleótído que codifica Akt kinasa o su secuencia de nucleótído complementaria y después el nivel del ARNm o ADNc se puede detectar en donde se puede evaluar la presencia de niveles elevados del ARNm o ADNc en comparación con controles normales. Todavía otra modalidad de la presente invención contempla el uso de un anticuerpo, monoclonal o policlonal , a Akt kinasa en un equipo diagnóstico cuantitativo o semi-cuantitativo para determinar niveles relativos de Akt kinasa en células cancerosas sospechosas de un paciente, que puede incluir todos los reactivos necesarios para realizar la prueba. En una modalidad, se provee un equipo que utiliza reactivos y materiales necesarios para realizar una prueba ELISA. Los reactivos pueden incluir, por ejemplo, regulador de lavado, regulador de dilución de anticuerpo, regulador de bloqueo, solución de manchado de célula, solución de desarrollo, solución de paro, anticuerpos específicos anti-fosfo-proteína, anticuerpos específicos anti-Pan proteína, anticuerpos secundarios, y ag ua destilada. El equipo también puede incluir instrucciones para usarse y opcionalmente poder ser automatizado o semi-automatizado o en una forma que sea compatible con máquina automatizada o software. En una modalidad, un anticuerpo de fosfo-ser-473 Akt que detecta la forma activada de AKT (Akt fosforilado en serina 473) se puede utilizar como el anticuerpo en un equipo diagnóstico. Ver, por ejemplo, Yuan y otros (2000) "Frequent Activation of AKT2 and induction of apoptosis by inhibition of phosphoinositide-3-OH kinase/Akt pathway in human ovarian cáncer," Oncogene 19:2324-2330.

Akt Kinasas Akt, también llamado PKB3, representa una subfamilia de la serina/treonina kinasa. Tres miembros, AKT1 , AKT2 y AKT3, han sido identificados en esta subfamilia. Akt se activa por estímulo extracelular en una manera PI3K-dependiente (Datta, S. R. , y otros, Genes Dev. 13: 2905-2927, 1999). La activación completa de Akt requiere fosforilación de TH308 en el circuito de activación y Ser473 en el dominio de activación de terminal C. Se han identificado mutaciones en PTEN en varios tumores, que conducen a activación de vía Akt (Datta, S. R. , y otros, Genes Dev 13: 2905-2927, 1999). Además, la amplificación, sobre expresión y/o activación de Akt se han detectado en un número de malignidades humanas (Datta, S. R. , y otros, Genes Dev. 13; 2905-2927, 1999, Cheng, J. Q. , y Nicosia, S. V. "AKT signal transduction pathway in oncogenesis." En Schwab D, editor. Encyclopedic Referente of Cáncer. Berlín Heidelberg y Nueva York: Springer; 2001 , pp 35-7). La expresión ectópica de Akt, en especial Akt constitutivamente activo, induce supervivencia celular y transformación maligna mientras que la inhibición de actividad de Akt estimula apoptosis en una escala de células de mamífero (Datta, S. R. , y otros, Genes Dev. 13: 2905-2927, 1999, Cheng, J. Q. , y Nicosia, S. V. "AKT signal transduction pathway in oncogenesis. " En Schwab D, editor. Encyclopedic Referent of Cáncer. Berlín Heidelberg y Nueva York: Springer; 2001 , pp 35-7, Sun, M. , y otros, Am. J. Path. , 159: 431 -437, 2001 , Cheng, J . Q. , y otros. Oncogene, 14: 2793-2801 , 1997). Además, se ha mostrado que la activación de Akt se asocia con invasión y quimisresistencia (West, K. A. , y otros. Drug Resist. Updat. , 5: 234-248, 2002). La activación de la vía de Akt desempeña un papel crucial en transformación maligna y quimioresistencia al inducir supervivencia celular, crecimiento, migración y angiogénesis. La presente invención provee métodos para determinar niveles de sobre expresión de Akt kinasa y/o Akt kinasa hiperactivada y fosforilada. La Akt kinasa puede ser cualquier kinasa de la familia Akt conocida, o kinasa relacionada a la misma, incluyendo, pero sin limitación a, Akt 1 , Akt 2, Akt 3. Las secuencias de ARNm y aminoácido de Aktl , Akt2 y Akt3 humano se ilustran en las figuras 6a-7, 7a-d y 8a-c, respectivamente.

Pruebas Diagnósticas Pruebas Inmunológicas En una modalidad, se provee un método para detectar la expresión aberrante de una Akt kinasa en una célula en un mamífero o en una muestra biológica del mamífero, al contactar células, extractos de célula o suero u otra muestra del mamífero o muestra biológica con una molécula inmunointeractiva específica para una Akt kinasa o porción antigénica de la misma y seleccionar el nivel de formaciones del complejo de molécula-Akt-kinasa inmunointeractiva y determinar si está presente una presencia elevada del complejo relativo a una célula normal. La molécula inmunointeractiva puede ser una molécula que tiene especificidad y afinidad de unión para una Akt kinasa o sus partes antigénicas o sus homólogos o derivados de los mismos. En una modalidad, la molécula inmunointeractiva puede ser una molécula de ¡nmunoglobulina. En otras modalidades, las moléculas inmunointeractivas pueden ser un fragmento de anticuerpo, anticuerpos de una sola cadena, y/o moléculas desinmunizadas que incluyen anticuerpos humanizados y moléculas de antígeno-unión asociadas con célula T (TABMs). En una modalidad particular, el anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal. En otra modalidad particular, el anticuerpo puede ser un anticuerpo policlonal. La molécula inmunointeractiva puede exhibir especificidad para una Akt kinasa o más en particular un determinante antigén?co o epitopo en una Akt kinasa ¡ncluye esa parte de la molécula a la que se dirige una respuesta inmune. El determinante antigénico o epitopo puede ser un epitopo de célula B o en donde sea apropiado un epitopo de célula T. En una modalidad, el anticuerpo es un anticuerpo fosfor-ser 473 Akt. Una modalidad de la presente ¡nvención provee un método para diagnosticar la presencia de cáncer o crecimiento de tipo cáncer en un mamífero, en donde está presente la actividad de Akt aberrante, al contactar células o extractos de célula del mamífero o una muestra biológica del sujeto con una cantidad efectiva de Akt kinasa-unión de un anticuerpo que tiene especificidad para la Akt kinasa o un determinante antigénico o epitopo ahí y después determinar cuantitativa o cualitativamente el nivel de un complejo de Akt-kinasa-anticuerpo en donde se determina la presencia de niveles elevados de dicho complejo comparado a una célula normal. Se pueden preparar anticuerpos por cualquiera de un número de medios conocidos a un experto en la técnica. Por ejemplo, para la detección de Akt kínasa humana, por lo general pero no necesariamente se pueden derivar anticuerpos de animales no humanos como primates, animales de ganado (por ejemplo, ovejas, vacas, cerdos, cabras, caballos) , animales para prueba de laboratorio (por ejemplo, ratones, ratas, conejillos de indias, conejos) y/o animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos) . También se pueden producir anticuerpos recombinantemente en células huésped procarióticas y eucarióticas. Por lo general, se pueden conducir pruebas a base de anticuerpos in vitro en biopsias de célula o tejido. Sin embargo, si se desinmuniza adecuadamente un anticuerpo o, en el caso de uso humano, se humaniza, entonces el anticuerpo se puede marcar con, por ejemplo, una etiqueta nuclear, administrada a un paciente y el sitio de acum ulación de marca nuclear determinado por técnicas radiológicas. El anticuerpo de Akt kinasa puede ser un agente dirigido a cáncer. Por consiguiente, otra modalidad de la presente invención provee desinmunizar formas de los anticuerpos para usarse en diagnosticar cáncer en pacientes humanos y no humanos. En general, para la generación de anticuerpos a una Akt kinasa, la enzima se requiere extraer de una muestra biológica ya sea que ésta sea de animal incluyendo tejido de humano o de cultivo celular si se produce por medios recombinantes. La Akt kinasa se puede separar de la muestra biológica por cualquier medio adecuado. Por ejem plo, la separación puede tener ventaja de cualquiera de una o más propiedades de carga superficial de la Akt kinasa, tamaño, densidad, actividad biológica y su afinidad para otra entidad (por ejemplo, otra proteína o compuesto químico al que se uno o de lo contrario se asocia). De esta manera, por ejemplo, la separación de Akt kinasa del fluido biológico se puede lograr por cualquier uno o más de ultra-centrifugación, cromatografía de intercambio de iones (por ejemplo, cromatografía de intercambio de aniones, cromatografía de intercambio de cationes), electroforesis (por ejemplo, electroforesis de gel de poliacrilamida, enfoque isoeléctrico), separación de tamaño (por ejemplo, filtración de gel, ultra-filtración) y separación mediada por afinidad (por ejemplo, separación de inmunoafinidad incluyendo, pero sin limitación a, separación de nodulo magnético tal como separación Dynabead (marca registrada), inmunocromatografía, inmuno-precipitación). La separación de Akt kinasa del fluido biológico puede conservar epitopos conformes presentes en la kinasa y, así, evita adecuadamente técnicas que provocan desnaturalización de la enzima. En otra modalidad, la kinasa se puede separar del fluido biológico usando cualquier uno o más de separación de afinidad, filtración de gel y/o ultra-filtración. La inmunización y producción posterior de anticuerpos monoclonales se puede llevar a cabo usando protocolos estándar conocidos en la técnica, tales como, por ejemplo, descritos pro Kohier y Milstein (Kohier y Milstein, Nature 256: 495-499, 1975; Kohier y Milstein, Eur. J. I mmunol. 6(7): 51 1 -519, 1976), Coligan y otros ("Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, I nc. , 1991 -1997) o Toyama y otros ("Monoclonal Antibody, Experiment Manual," publicado por Kodansha Scientific, 1987). Esencialmente, se inmuniza un animal con un fluido biológico que contiene Akt kinasa o fracción del mismo o una forma recombinante de Akt kinasa por métodos estándar para producir células que producen anticuerpo, en particular células somáticas que producen anticuerpo (por ejemplo, B linfocitos). Estas células después se pueden elim inar del animal inmunizado para inmortalización. En cierta modalidad, se puede usar un fragmento de una Akt kinasa a los anticuerpos generados. El fragmento se puede asociar con un portador. El portador puede ser cualquier sustancia de peso molecular típicamente alto al que una sustancia no o pobremente inmunogénica (por ejemplo, un hapteno) se liga natural o artificialmente para realzar su inmunogenicidad. La inmortalización de células productoras de anticuerpo se puede llevar a cabo usando métodos que son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la inmortalización se puede lograr por el método de transformación usando virus Epstein-Barr (EBV) (Kozbor y otros, "Methods in Enzymology" 121 : 140, 1986) . En otra modalidad, las células productoras de anticuerpo se inmortalizan usando el método de fusión de célula (descrito en Coligan y otros, 1991 -1997, supra), que se emplea ampliamente para la producción de anticuerpos monoclonales. En este método, las células productoras de anticuerpo somáticas con el potencial a producir anticuerpos, en particular células B, se fusionan con una línea celular de mieloma. Estas células somáticas se pueden derivar de los nodulos linfáticos, bazos y sangre periférica de animales preparados, de preferencia animales roedores tales como ratones y ratas. En una modalidad particular, se pueden usa células de bazo de ratón. En otras modalidades, también se pueden usar células de rata, conejo, oveja o cabra. Se han desarrollado líneas celulares de mieloma especializadas de tumores linfocíticos para usarse en procedimientos de fusión productores de hibridoma (Kohier y Milstein, 1976, supra; Shulman y otros, Nature 276: 269-270, 1978; Volk y otros, J. Viro!. 42(1): 220-227, 1982). También se pueden usar muchas líneas celulares de mieloma para la producción de híbridos de célula fusionados, incluyendo, por ejemplo, P3. veces.63-Ag8, P3. veces.63-AG8.653, P3/NS1 -Ag4-1 (NS-1 ), Sp2/0-Ag14 y S194/5.XXO.Bu.1. Las líneas celulares P3. veces.63. Ag8 y NS-1 se han descrito por Kohier y Milstein (1976, supra). Shulman y otros (1978, supra) desarrollaron la línea de mieloma Sp2/0-Ag 14. La línea S1 94/5.XXO. Bu .1 se registró por Trowbridge (J. Exp. Med. 148(1 ): 313-323, 1978). Los métodos para generar híbridos de células de bazo o de nodo linfático productoras de anticuerpos y células de mieloma usualmente involucran mezclar células somáticas con células de mieloma en una proporción de 10: 1 (aunque la proporción puede variar de alrededor de 20: 1 a aproximadamente 1 : 1 ), respectivamente, en la presencia de un agente o agentes (químicos, virales o eléctricos) que promueve la fusión de membranas celulares. Se han descrito métodos de fusión (Kohier y Milstein, 1975, supra; Kohier y Milstein, 1976, supra; Gefter y otros, "Somatic Cell Genet." 3: 231 -236, 1977; Volk y otros, 1 982, supra). Los agentes promotores de fusión usados por aquellos investigadores fueron virus Sendai y polietilenglicol (PEG). En ciertas modalidades, se proveen medios para seleccionar los híbridos celulares fusionados de las células no fusionadas restantes, en particular las células de mieloma no fusionadas. Por lo general, la selección de híbridos celulares fusionados se puede lograr al cultivar las células en medios que soportan el crecimiento de hibridomas, pero previenen el crecimiento de las células de mieloma no fusionadas, que normalmente continuaría dividiendo indefinidamente. Las células somáticas usadas en la fusión no mantienen viabilidad a largo plazo en un cultivo in vitro y por lo tanto no plantean un problema. Se requieren varias semanas para cultivar selectivamente los híbridos celulares fusionados. Al principio de este periodo, es necesario identificar aquellos híbridos que producen el anticuerpo deseado, de modo que se pueden clonar y propagar posteriormente. Por lo general, alrededor de 10% de los híbridos obtuvieron el anticuerpo deseado, aunque una escala de alrededor de 1 a aproximadamente 30% no es poco común. La detección de híbridos productores de anticuerpo se puede lograr por cualquiera de los varios métodos de prueba estándar, incluyendo técnicas de inmunoprueba y radíoinmunoprueba ligada a enzima como, por ejemplo, se describe en Kennet y otros ("Monoclonal Antibodies and Hibridomas: A New Dimensión in Biological Analices," pp 376-384, Plenum Press, Nueva York, 1980) y por análisis FACS (O'Reilly y otros, " Biotechniques" 25: 824-830, 1998). Una vez seleccionados y clonados los h íbridos celulares fusionados deseados en líneas celulares productoras de anticuerpo individuales, cada línea celular se puede propagar en cualquiera de dos maneras estándar. Una suspensión de las células de hibridoma se puede inyectar en un animal histocompatible. El animal inyectado después desarrollará tumores que segregan el anticuerpo monoclonal específico producido por el híbrido de célula fusionado. Los fluidos corporales del animal, tales como suero o fluido ascites, se pueden tapar para proveer anticuerpos monoclonales en alta concentración. Alternativamente, las líneas celulares individuales se pueden propagar in vitro en recipientes de cultivo de laboratorio. El medio de cultivo que contiene altas concentraciones de un solo anticuerpo monoclonal específico se puede cultivar por decantación, filtración o centrifugación, y posteriormente purificar. Las líneas celulares después se pueden probar para su especificidad para detectar la Akt kinasa de interés por cualquier medio de inmunodetección adecuado. Por ejemplo, se pueden alicuotar líneas celulares en un número de pozos e incubar y el sobrenadante de cada pozo se analiza por prueba inmunosorbente ligada a enzima (ELISA), técnica de anticuerpo fluorescente indirecta, o similares. La(s) línea(s) celular(es) que producen un anticuerpo monoclonal capaz de reconocer la kinasa LI M de objetivo pero que no reconoce epitopos de no objetivo se identifican y después cultivan directamente in vitro o se inyectan en un animal histocompatible para formar tumores y para producir, recolectar y purificar los anticuerpos requeridos. Por lo tanto, la presente invención provee un método de detectar en una muestra una Akt kinasa o fragmento, variante o derivado de la misma que comprende contactar la muestra con un anticuerpo o fragmento o derivado de la misma y detectar el nivel de un complejo que contiene el anticuerpo y Akt kinasa o fragmento, variante o derivado del mismo en comparación con controles normales en donde se determinan los niveles elevados de Akt kinasa.

Se puede usar cualquier técnica adecuada para determinar la formación del complejo. Por ejemplo, un anticuerpo de conformidad con la invención, teniendo una molécula reportera asociada con el mismo, se puede utilizar en inmunopruebas. Dichas inmunopruebas incluyen, pero no se limitan a, radioinmunopruebas (RIAs), pruebas inm unosorbentes ligadas a enzima (ELISAs), técnicas inm unocromatográficas (ICTs), y selección por Western blot que son bien conocidas a aquellos expertos en la técnica. Las inmunopruebas también pueden incluir pruebas competitivas. La presente invención abarca inmunopruebas cualitativas y cuantitativas. Se describen técnicas de inm unoprueba adecuadas, por ejemplo, en las Patentes de E. U.A. Nos. 4,016,043, 4,424,279 y 4,018,653. Éstas incluyen ambas pruebas de un solo sitio y de dos sitios de los tipos no competitivos, así como las pruebas de unión competitivas tradicionales. Estas pruebas también incluyen unión directa de una molécula de unión a antígeno marcada a un antígeno de objetivo. La invención además provee métodos para cuantificar la expresión de proteína Akt y los niveles de activación en células o muestras de tejido obtenidas de un animal, tal como un paciente con cáncer humano o un individuo sospechoso de tener cáncer. En una modalidad , la invención provee métodos para cuantificar la expresión de proteína Akt o los niveles de activación usando un sistema de imagen cuantitativamente. El sistema de imagen se puede usar para recibir, realzar y procesar imágenes de células o muestras de tejido, que se han manchado con manchas específicas de proteína Akt, a fin de determinar la cantidad o nivel de activación de proteína AKT expresada en las células o muestras de tejido de dicho animal. En modalidades de los métodos de la invención, se puede generar una curva de calibración de expresión de proteína AKT1 y AKT2 para al menos dos líneas celulares que expresan cantidades diferentes de proteína AKT. La curva de calibración entonces se puede usar para determinar cuantitativamente la cantidad de proteína AKT que se expresa en una célula o muestra de tejido. Las curvas de calibración análogas se pueden hacer para proteínas AKT activadas usando reactivos específicos para las características de activación. También se puede usar para determinar cambios en cantidades y el estado de activación de AKT antes y después de tratamiento de cáncer clínico.

En una modalidad particular de los métodos de la invención, la expresión de proteína AKT en una célula o muestra de tejido se puede cuantificar usando una prueba inmunoabsorbente ligada a enzima (ELISA) para determinar la cantidad de proteína AKT en una muestra. Dichos métodos se describen, por ejemplo, en la Publicación de Patente de E. U .A. No. 2002/0015974. En otras modalidades, se pueden usar inmunopruebas de enzima para detectar la Akt kinasa. En dichas pruebas, se conjuga una enzima al segundo anticuerpo, por lo general por medio de un glutaraldehído o periodato. Los substratos a usarse con las enzimas específicas por lo general se eligen para la producción de, al momento de hidrólisis por la enzima correspondiente, un cambio de color detectable. También es posible emplear sustratos fluorogénicos, que dan un producto fluorescente en vez de los sustratos cromogénicos. El anticuerpo marcado con enzima se puede agregar al primer complejo de anticuerpo-antígeno, dejándolo unir, y después el reactivo en exceso se lava. Una solución conteniendo el sustrato apropiado se puede agregar entonces al complejo de anticuerpo-antígeno-anticuerpo. El sustrato se puede hacer reaccionar con la enzima ligada al segundo anticuerpo, dando una señal visual cualitativa, que se pueden cuantificar más, usualmente espectrofotométricamente, para dar una indicación de la cantidad de antígeno que estuvo presente en la muestra. Alternamente, compuestos fluorescentes, tales como fluoresceína, rodamina y la lantanida, europio (EU), se pueden acoplar químicamente a anticuerpos sin alterar su capacidad de unión. Cuando se activa por iluminación con luz de una longitud de onda particular, el anticuerpo marcado con fluorocromo adsorbe la energía de luz, induciendo un estado a excitabilidad en la molécula, seguido por la emisión de la luz a un color característico visualmente detectable con un microscopio de luz. El anticuerpo marcado con fluorescente se deja unir al primer complejo de anticuerpo-antígeno. Después de lavar el reactivo no unido, el complejo terciario restante entonces se expone a luz de una longitud de onda apropiada. La fluorescencia observada indica la presencia del antígeno de interés. Las pruebas inmunofluorométricas (1 FMA) son bien establecidas en la técnica y son particularmente útiles para el presente método. Sin embargo, otras moléculas reporteras, tales como radioisótopo, moléculas quem iluminiscentes o bioluminiscentes también se pueden emplear. En una modalidad particular, también se pueden usar anticuerpos para Akt kinasa en la detección mediada por ELISA de Akt kinasa en especial en suero u otro fluido circulatorio. Esto se puede lograr al inmovilizar anticuerpos anti-Akt kinasa a un soporte sólido y contactar estos con un extracto biológico tales como suero, sangre, fluido linfático u otro fluido del cuerpo, extracto celular o biopsia de célula. Entonces se pueden usar anticuerpos anti-Akt kinasa marcados para detectar Akt kinasa inmovilizada. Esta prueba se puede variar en cualquier número de maneras y todas las variaciones se abarcan por la presente invención y son conocidas a un experto en la técnica. Esta propuesta puede permitir la detección y cuantíficación rápidas de los niveles de Akt kinasa usando, por ejemplo, una prueba a base de suero. En una modalidad, se puede usar un equipo de prueba Elisa de Akt en la presente invención. Por ejemplo, una equipo de activación celular de señalar ELISA para Akt S473 de SuperArray Bioscience se puede utilizar en la presente invención. En una modalidad , el anticuerpo puede ser un anticuerpo antí-pan que reconoce Akt S473. El equipo de prueba Elisa que contiene un anticuerpo anti-Akt y reactivos adicionales, incluyendo, pero sin limitación a, regulador de lavado, regulador de dilución de anticuerpo, regulador bloqueador, solución manchadora de célula, solución de desarrollo, solución de paro, anticuerpos secundarios, y agua destilada.

Detección de Nucleótido En otra modalidad, se provee un método para detectar Akt kinasa al detectar el nivel de expresión en una célula de un polinucleótido que codifica una Akt kinasa. La expresión del polinucleótido se puede determinar usando cualquier técnica adecuada conocida a un experto en la técnica. En una modalidad, se puede utilizar un polinucleótido marcado que codifica Akt kinasa como una sonda en un Northern blot de un extracto de ARN obtenido de la célula. En otras modalidades, se puede utilizar un extracto de ácido nucleico de un animal conjuntamente con cebadores de oligonucleótido correspondientes a secuencias de sentido y antisentido de un poiinucleótido que codifica la kinasa, o secuencias de flanqueo del mismo, en una reacción de amplificación de ácido nucleico tal como RT PCR. U na variedad de técnicas de detección de fase sólida automatizadas también están disponibles a un experto en la técnica, por ejemplo, como se describe por Fodor y otros (Science 251 : 767-777, 1991 ) y Kazal y otros (Nature Medicine 2: 753-759, 1996). En otras modalidades, se proveen métodos para detectar transcriptos de ARN codificadores de Akt kinasa. El ARN se puede aislar de una muestra celular sospechosa de contener ARN de Akt kinasa, por ejemplo, ARN total aislado de tejido canceroso humano. ARN se puede aislar mediante métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, usando reactivo TRIZOL (GIBCO-BRL/Life Technologies, Gaithersburg, Md.). Oligo-dT, u ollgonucleótidos de secuencia aleatoria, así como oligonucleótidos de secuencia específica se pueden emplear como un cebador en una reacción de transcriptasa de reversa para preparar ADNc's de primera cadena del ARN aislado. Los ADNc's de primera cadena resultantes después se pueden amplificar con oligonucleótidos de secuencia específica en reacciones de PCR para dar un producto amplificado. La reacción en cadena de polimerasa o "PCR" se refiere a un procedimiento o técnica en donde cantidades de un fragmento preseleccionado de ácido nucleico, ARN y/o ADN , se amplifican como se describe, por ejemplo, en la Patenté de E. U .A. No. 4,683, 195. Por lo general, la información de secuencia de los extremos de la región de interés o más allá se emplea para diseñar cebadores de oligonucleótído. Estos cebadores serán idénticos o similares en secuencia a cadenas opuestas de ADN molde que se van a amplificar. PCR se puede usar para amplificar secuencias de ARN específicas y ADNc trascrito del ARN celular total. Ver por lo general Mullís y otros (Quant. Biol. 51 : 263, 1987; Erlich, eds. , PCR Technology, Stockton Press, NY, 1989). De esta manera, la amplificación de secuencias de ácido nucleico específicas por PCR depende de oligonucleótidos o "cebadores" que tienen secuencias de nucleótido conservadas en donde las secuencias conservadas se deducen de alineaciones de secuencias de gen o proteína relacionadas, por ejemplo, una comparación de secuencia de genes de Akt kinasa de mam ífero. Por ejemplo, se prepara un cebador que se predice templa la cadena antisentido y otro cebador preparado que se predice templa la cadena sentido de una molécula de ADNc que codifica una Akt kinasa. Para detectar el producto amplificado, la mezcla de reacción típicamente se somete a electroforesis de gel de azarosa u otra técnica de separación conveniente y la presencia relativa del ADN amplificado específico de Akt kínasa detectado. Por ejemplo, ADN amplificado de Akt kinasa se puede detectar usando hibridación Southern con una sonda de oligonucleótido específica o comparando su movilidad electroforética con estándares de ADN de peso molecular conocido. El aislamiento, purificación y caracterización del ADN de Akt kinasa amplificado se pueden lograr al extirpar o eluir el fragmento del gel (por ejemplo, ver referencias Lawn otros, Nucleic Acids Res. 2: 6103, 1981 ; Goeddel y otros, Nucleic Acids Res. 8: 4057-1980), clonando el producto am plificado en un sitio de clonación de un vector adecuado, tal como el vector pCRI l (I nvitrogen), secuenciando el inserto clonado y com parando la secuencia de ADN con la secuencia conocida de LI M kinasa. Entonces, se pueden determinar las cantidades relativas de ARN de LI M kinasa. En una modalidad , se puede usar PCR en tiempo real para determinar los niveles de transcripción de nucleótidos de Akt. La determinación de actividad de transcripción también incluye una medida de actividad de traducción potencial basada en transcriptos de ARNm disponibles. PCR en tiempo real así como otros procedim ientos de PCR usan un número de químicas para la detección de producto de PCR incluyendo la unión de fluoroforos de unión a ADN, la 5' endonucleasa, oligosondas de horquilla y forro adyacentes y los amplímeros auto-fluorescentes. Estas químicas y PCR en tiempo real en general se discuten, por ejemplo, en Mackay y otros, Nucleic Acids Res 30(6): 1292-1305, 2002; Walter, J. Biochem. Mol. Toxicology 15(3): 121 -127, 2001 ; Lewis y otros, J. Pathol. 195: 66-71 , 2001. En una modalidad alterna, la expresión aberrante de Akt se puede identificar al contactar una secuencia de nucleótido aislada de una muestra biológica con una sonda de oligonucleótido que tiene una secuencia complementaria a una secuencia de Akt seleccionada de las secuencias de nucleótido de las figuras 6a-c, 7a-d u 8a-c, o fragmento de las mismas, y después al detectar la secuencia al hibridar la sonda a la secuencia, y comparar los resultados con una muestra normal. La hibridación de la sonda a la muestra biológica se puede detectar al marcar la sonda usando cualquier agente detectable. La sonda se puede marcar, por ejemplo, con un radioisótopo, o con biotin, colorante fluorescente, reactivo electro-denso, enzima, hapteno y proteína para los que están disponibles los anticuerpos. La marca detectable se puede probar por cualquier medio deseado, incluyendo medios espectroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, inmunoquímicos, radioisotópicos o químicos. La sonda también se puede detectar usando técnicas tales como una técnica de restricción de olígómero, una prueba de transferencia de puntos, una prueba de transferencia de puntos en reversa, una prueba de sonda de línea, una prueba de 5' nucleasa. Alternativamente, la sonda se puede detectar usando cualquiera de las tecnologías de distribución de ADN por lo general aplicables, incluyendo macrodistribución, microdistribución y tecnologías de microchip de ADN. La sonda de oligonucleótido típicamente incluye aproximadamente por lo menos 14, 15, 16, 18, 20, 25 ó 28 nucleótidos que hibridan a los nucleótidos seleccionados de las figuras 6a-c, 7a-d y 8a-c, o un fragmento de los mismos. Por lo general, no se prefiere usar una sonda que sea mayor que aproximadamente 25 ó 28 nucleótidos en longitud. La sonda de oligonucleótido está diseñada para identificar una secuencia de nucleótido de Akt.

Pruebas de Kinasa La actividad de Akt kinasas se puede medir usando cualquier prueba de kinasa adecuada conocida en la técnica. Por ejemplo, y no por medio de limitación, se pueden usar los métodos descritos en How y otros (Oncogene 1994 9: 98-96), Mills y otros (J. Biol. Chem. 1992 267: 16000-006) y Tomizawa y otros 2001 (FEBS Lett. 2001 492: 221 -7), Schmandt y otros, (J. I mmunol. 1994, 152: 96-105). Se describen pruebas de serina, treonina y tirosina kinasas adicionales en Ausubel y otros ("Short Protocols ¡n Molecular Biology," 1999, unidad 17.6). Las pruebas de Akt kinasa por lo general pueden usar un polipéptido de Akt, un sustrato donador marcado, y un sustrato receptor que sea específico o no específico para Akt. En dichas pruebas, Akt transfiere una porción marcada del sustrato donador al sustrato receptor, y la actividad de kinasa se mide por la cantidad de porción marcada transferida del sustrato donador al sustrato receptor. Se puede producir polipéptido de Akt usando varios sistemas de expresión , se puede purificar de células, puede estar en la forma de una proteína de fusión recombinante desprendida o no desprendida y/o puede tener secuencias de polipéptido de no Akt, por ejemplo una His tag o .beta.-galactosidadas en su terminal N— o C. La actividad de Akt se puede probar en líneas celulares cancerosas si las líneas celulares cancerosas se usan como una fuente del Akt a ensayarse. Los sustratos donadores adecuados para pruebas de Akt incluyen cualquier molécula que sea susceptible a desfosforilacíón por Akt, tai como, por ejemplo, incluyen análogos de ATP marcado con .gamma, y ATP, en donde la marca es 33P, 32P, 35S o cualquier isótopo radioactivo o un marcador fluorescente adecuado. Los sustratos recipientes adecuados para pruebas de Akt incluyen cualquier polipéptido u otra molécula que sea susceptible a fosforilación por Akt. Los sustratos recipientes se pueden derivar de fragmentos de objetivos in vivo de Akt. Los fragmentos de sustratos recipientes pueden ser de 8 a 50 aminoácidos en longitud, usualmente 10 a 30 aminoácidos y en particular de aproximadamente 10, 12, 15, 18, 20 y 25 aminoácidos en longitud. Otros sustratos recipientes se pueden determinar empíricamente usando un juego de polipéptidos diferentes u otras moléculas. Los Blancos de sustratos Recipientes para TTK pueden ser capaces de purificarse de otros componentes de la reacción una vez que se ha realizado la reacción. Esta purificación usualmente se hace a través de una interacción molecular, en donde los sustratos recipientes se biotinilan y purifican a través de su interacción con estreptavidin, o un anticuerpo específico está disponible que puede reconocer específicamente los sustratos recipientes. La reacción se puede realizar en una variedad de condiciones, tal como en un soporte sólido, en un gel, en solución o en células vivientes. La elección de métodos de detección depende del tipo de marca usado para la molécula donadora y puede incluir, por ejemplo, medición de radiación incorporada o fluorescencia por autoradlog rafía, centelleo, escaneo u fluorografía.

IV. Métodos de Tratamiento Los compuestos y composiciones farmacéuticas provistos en la presente se pueden usar en el tratam iento de una condición incluyendo tumores, cánceres, y otros trastornos asociados con proliferación celular anormal. En una modalidad, los compuestos de la presente invención se pueden usar para tratar un carcinoma, sarcoma, linfoma, leucemia y/o m ieloma. En otras modalidades de la presente invención, los compuestos descritos en la presente se pueden usar para tratar tumores sólidos. Los compuestos de la presente invención se pueden usar para el tratamiento de cáncer, tales como, pero sin limitación a, cáncer de los siguientes órganos o tejidos: mama, próstata, pulmón, bronquios, colon, vías urinarias, vejiga, linfoma de no Hodgkin, melanoma, riñon, renal, páncreas, faringe, tiroides, estómago, cerebro, mieloma múltiple, esófago, hígado, ducto biliar intrahepático, cuello del útero, laringe, leucemia de mieloide aguda, leucemia linfática crónica, tejido blando, tales como corazón, linfoma de Hodgkin, testis, intestino delgado, leucemia mieloide crónica, leucemia linfática aguda, ano, canal anal, anorectal , tiroides, vulva, vesícula biliar, pleura, ojo, cavidad nasal, oído medio, nasofaringe, uréter, peritoneo, omento, mesenterio, y gastrointestinal, glioma de grado alto, glioblastoma, colon, rectal, pancreático, gástrico, carcinoma hepatocelular; cánceres de cabeza y cuello, carcinomas; carcinoma de célula renal; adenocarcinoma; sarcomas; hemangioendotelioma; linfomas, leucemias, fungoides micosis. En modalidades adicionales, los compuestos de la presente invención se pueden usar para tratar enfermedades de la piel incluyendo, pero sin limitación a, las enfermedades malignas angiosarcoma, hemangioendotelioma, carcinoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa, melanoma maligno y sarcoma de Kaposi, y las enfermedades o condiciones no malignas tales como soriasis, linfangiogénesís, hemangíoma infantil, síndrome de Sturge-Weber, verruga vulgar, neurofibromatosís, esclerosis tuberosa, granulomas biogénicos, bulosa epidermolisis distrófico recesivo, úlceras venosas, acné, eczema, molusco contagioso, keratosis seborréico, y karatosis actínico. Las composiciones de esta invención se pueden usar para tratar estos cánceres y otros cánceres en cualquier etapa del descubrimiento del cáncer a etapas avanzadas. Además, las composiciones de esta invención se pueden usar en el tratamiento del cáncer primario y metástasis del mismo. En otras modalidades de la presente invención, los compuestos descritos en la presente se pueden usar para el tratamiento de cáncer, incluyendo, pero sin limitación a los cánceres listados en la Tabla 2 a continuación. de la pelvis renal y uréter Sarcoma, de Kaposi Tumor trofoblástico, Sarcoma, tejido blando, adulto gestacional Sarcoma, tejido blando, o Sitio primario desconocido, infantil Carcinoma de, adulto Sarcoma, uterino Sitio primario desconocido, Síndrome de Sézary Cáncer de, infantil Cáncer de piel (no melanoma) Cánceres inusuales infantiles Cáncer de piel, infantil Cáncer de uréter y pelvis renal, célula de transición Cáncer uretral Cáncer uterino, endometrio Sarcoma uterino a Cáncer vaginal Glioma de vía visual e hipotalámico, infantil Cáncer de vulva a Macroglobulinemia de Waldenstrdrfi Tumor de Wilms En otras modalidades de la presente invención, los compuestos descritos en la presente se pueden usar en el tratamiento de enfermedades relacionadas con angiogénesis.

Las moléculas pequeñas antiangiogénicas incluyen talidomida, que actúa en parte al inhibir NFkB, 2-metoxiestradiol, que influye en la activación microtubular y activación de factor inductor de hipoxia (HIF1 a), inhibidores de ciclo-oxigenasa 2 (COX2), y dosis bajas de agentes quimioterapéuticos convencionales, incluyendo ciclofosfamida, taxanos, y vinca alcaloides (vincristina, vinblastlna) (D'Amato, R. J. y otros (1994) Proc. Nati. Acad. Sci, E. U.A. 91 , 3964-3968, D'Amato, R. J . y otros ( 1994) Proc. Nati. Acad. Sci. E. U .A. 91 , 4082-4085). Además, ciertos inhibidores de tirosina kinasa disminuyen indirectamente la angiogénesis al disminuir la producción de VEG F y otros factores proangiogénicos por células de tumor y estromales. Estos fármacos incluyen Herceptin, imatinib (Glivec), e I ressa (Bergers, G. y otros (2003) Journal of Clinical Investigation 1 1 1 , 1287-1295, Ciardiello, F. y otros (2001 ) Clinical Cáncer Research 7, 1459-1465, Pium, S. M. y otros (2003) Clinical Cáncer Research 9, 4619-4626). Recientemente, los inhibidores de angiogénesis se han cambiado de modelos animales a pacientes humanos. Los inhibidores de angiogénesis representan un tratamiento prometedor para una variedad de cánceres. Recientemente, Avastin un anticuerpo de alta afinidad contra el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), ha mostrado prolongar la vida como un solo agente en carcinoma de célula renal avanzado y prolongar la vida en combinación con quimioterapia en cáncer de colon avanzado (Yang. J. C. y otros (2003) New England Journal of Medicine 349, 427-434, Kabbinavar, F. y otros (2003) Journal of Clinical Oncology 21 , 60-65). Las enfermedades relacionadas con angiogénesis incluyen, pero no se limitan a, enfermedades inflamatorias, autoinmunes e infecciosas; cáncer dependiente de ang iogénesis, incluyendo, por ejemplo, tumores sólidos, tumores nacidos de sangre tales como leucemias, y metástasis de tumor; tumores benignos, por ejemplo, hemangiomas, neuromas acústicos, neurofibromas, tracomas, y granulomas biogénicos; artritis reumatoide; soriasis; eccema; enfermedades angiogénicas oculares, por ejemplo, retinopatía diabética, retinopatía de prematuridad, degeneración macular, rechazo de injerto de córnea, glaucoma neovascular, fibroplasia retrolental, rubeosis; Síndrome de Osler-Webber; angiogénesis del miocardio; neovascularización de placa; telangiectasia; articulaciones hemofílicas; angiofibroma; y granulación de heridas. Además, se pueden usar las composiciones de esta invención para tratar enfermedades tales como, pero sin limitación a, adhesiones intestinales, aterosclerosis, escieroderma, verrugas y cicatrices hipertróficas (es decir, keloides) . Las composiciones de esta invención también se pueden usar en el tratamiento de enfermedades que tienen angiogénesis como una consecuencia patológica tal como enfermedad del arañazo de gato (Róchele minalia quíntosa), úlceras (Helobacter pylori), tuberculosis y lepra.

Tumores o cánceres resistentes a fármacos La invención provee compuestos que se pueden usar para tratar cáncer resistente a fármaco, incluyendo las modalidades de cánceres y fármacos descritos en la presente. En una modalidad, el compuesto, tal como TCN, TCN-P o un compuesto relacionado como se describe en la presente, se puede co-administrar con un segundo fármaco. La resistencia a multifármaco (MDR) ocurre en cáncer humano y puede ser un obstáculo significativo al éxito de quimioterapia. La resistencia a multifármaco es un fenómeno por el que las células de tumor in vitro han sido expuestas a una resistencia cruzada a desarrollo de agente citotóxico a una escala de compuestos estructural y funcionalmente no relacionados. Además, MDR puede ocurrir intrínsecamente en algunos cánceres sin exposición previa a agentes de quimioterapia. De esta manera, en una modalidad, la presente invención provee métodos para el tratamiento de un paciente con un cáncer resistente a fármaco, por ejemplo, cáncer resistente a multifármaco, por la adm inistración de TCN , TCN-P o un compuesto relacionado como se describe en la presente. En ciertas modalidades, TCN, TCN-P y compuestos relacionados se pueden usar para tratar cánceres que sean resistentes a taxol, rapamicina, tamoxifen, cisplatin y/o gefitinib (iressa) . En una modalidad, TCN, TCN-P o un compuesto relacionado como se describe en la presente se puede usar para el tratamiento de cánceres resistentes a fármaco del colon, huesos, riñon, adrenal, páncreas, hígado y/o cualquier otro cáncer conocido en la técnica o descrito en la presente.

Terapia de combinación En un aspecto de la presente invención, los compuestos y composiciones descritos en la presente se pueden combinar con al menos un agente quimioterapéutico adicional. Los agentes adicionales se pueden administrar en combinación o alternancia con los compuestos descritos erv la presente. Los fármacos pueden formar parte de la misma composición, o se pueden proveer como una composición separada para la administración al mismo tiempo o un momento diferente. En una modalidad, los compuestos descritos en la presente se pueden combinar con agentes antiangiogénicss para realzar su efectividad, o combinarse con otros agentes antiangiogénicos y administrados juntos con otros agentes citotóxicos. En otra modalidad, los compuestos y composiciones, cuando se usan en el tratamiento de tumores sólidos, se pueden administrar con los agentes seleccionados de, pero no limitados a I L-12, retinoides, interferones, angiostatina, endostatina, talidomida, trombospondina-1 , trombospondina-2, captopril, agentes anti-neoplásticos tales como alfa interferón COMP (ciclofosfam ida, vincristina, metotrexato y prednisona), etoposida, mBACOD (metortrexato, bleomicina, dexorubicina, ciclofosfamida, vincristina y dexametasona), PRO-MACE/MOPP (prednisona, metotrexato (con rescate de leucovina), doxorubicina, ciclofosfamída, taxol, etoposida/mecloretamina, vincristina, prednisona y procarbazina) , vincristina, vinblastina, angioinhibins, TNP-470, pentosan polisulfato, plaqueta factor 4, angiostatina, LM-609, SU-101 , CM- 101 , Techgalan, talidomida, SP-PG y radiación. En otras modalidades, los compuestos y composiciones descritos en la presente se pueden administrar en combinación o alternancia con, por ejemplo, fármacos con efectos antimicóticos, tales como aquellos elementos citoesqueletos blanco, incluyendo moduladores microtubulares tales como fármacos de taxano (tales como taxol, paclitaxel, taxotere, docetaxel) , podofilotoxinas o vinca alcaloides (vincristina, vinblastina); fármacos antimetabólicos (tales como 5-flourouracil, citarabina, gemcitabina, análogos de purina tales como pentostatina, metotrexato); agentes alquilantes o mostazas de nitrógeno (tales como nitrosoureas, ciclofosfamida o ifosfamida); fármacos que buscan ADN tales como los fármacos de antraciclina adríamicina, doxorubicina, farmorubicina o epirubicina; fármacos con topoisomerasas blanco tal como etoposida; hormonas y agonistas o antagonistas de hormona tales como estrógenos, antiestrógenos (tamoxifen y compuestos relacionados) y andrógenos, flutamida, leuprorelina, goserelina, ciprotrona u octreotida; fármacos que buscan transducción de señal en células de tumor incluyendo derivados de anticuerpo tal como herceptina; fármacos alquilantes tales como fármacos de platino (cisplatin, carbonplatina, oxaliplatina, paraplatina) o nitrosoureas; fármacos potencialmente afectando metástasis de tumores tales como inhibidores de metaloproteinasa de matriz; terapia de genes y agentes antisentido; terapéuticos de anticuerpo; otros compuestos bioactivos de origen marino, notablemente los didemnins tales como aplidina; análogos de esteroide, en particular dexametasona; fármacos anti-inflamatorios, incluyendo agentes no esteroides (tales como acetaminofeno o ibuprofeno) o esteroides y sus derivados en particular dexametasona; fármacos anti-eméticos, incluyendo inhibidores 5HT-3 (tales como gramisetrón u ondasetrón), y esteroides y sus derivados en particular dexametasona. Todavía en otras modalidades, los compuestos y composiciones se pueden usar en combinación o alternancia con los agentes quimioterapéuticos descritos más adelante en la Tabla 3.

Tabla 3: Agentes químoterapéuticos - Acido 13-cis-retinoico - Neosar - 2-amino-6-mercaptopurina - Neulasta - 2-CdA - Neumega - 2-Clorodesoxiadenosina - Neupogen - 5-fluorouracil - Nilandron - 5-FU - Nilutamida - 6-TG - Mostaza de nitrógeno - 6-Tioguanina - Novaldex - 6-Mercaptopurina - Novantrona - 6-MP - Octreotida En ciertas modalidades, se pueden usar interferones (IFNs) en combinaciones con los compuestos de la presente invención. I nterferones adecuados incluyen: interferón alfa-2a, ¡nterferón alfa- 2b, interferón alfa pegilado, incluyendo interferón alfa-2a e interferón alfa 2b, interferón beta, interferón gamma, interferón tau, interferón omega, I NFERG EN (interferón alfacón- 1 ) por InterMune, OMNI FERON (inteferón natural) por Víragen, ALBU FERON por Human Genome Sciences, REBI F (interferón beta-1 a) por Ares-Serono, Omega Interferon por Biomedicina, Oral Interferon Alpha por Amarillo Biosciences, e interferón gamma, interferón tau, y/o interferón gamma-1 b por I ntermune. En una modalidad, TCN, TCN-P o un compuesto relacionado como se describe en la presente se puede usar en combinación o alternancia con agentes quimioterapéuticos adicionales, tales como aquellos descritos en la presente o en la Tabla 3, para el tratamiento de cáncer resistente a fármaco, por ejemplo, cáncer resistente a múltiples fármacos. Los cánceres resistentes a fármacos pueden incluir cánceres del colon, huesos, riñon, adrenal, páncreas, hígado y/o cualquier otro cáncer conocido en la técnica o descrito en la presente. En una modalidad, el agente quimioterapéutico adicional puede ser un inhibidor de P-glicoproteína. En ciertas modalidades no limitantes, el inhibidor de P-glicoproteína se puede seleccionar de los siguientes fármacos: verapamil, ciclosporin (tales como ciclosporin A), tamoxifen, antagonistas de calmodulina, dexverapamil, dexniguldipina, valspodar (PSC 833), biricodar (VX-710), tariquidar (XR9576), zosuquidar (LY335979), laniquidar (R101 933) , y/o ONT-093.

V. Composiciones farmacéuticas Portadores farmacéuticos adecuados para la administración de los compuestos provistos en la presente incluyen cualquiera de dichos portadores conocidos a aquellos expertos en la técnica como adecuados para el modo particular de administración. Los compuestos se pueden formular como el único ingrediente farmacéuticamente activo en la composición o se puede combinar con otros ingredientes activos. Las composiciones que comprenden los compuestos descritos en la presente pueden ser adecuados para administración oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal, o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, subcutánea, intravenosa, intradérmica, infraocular, intratráquea, intracisternal, intraperitoneal y epidural). Las composiciones pueden estar presentes de manera conveniente en forma de dosis unitaria y se pueden preparar mediante técnicas farmacéuticas convencionales. Dichas técnicas incluyen el paso de llevar en asociación una o más composiciones de la presente invención y uno o más portadores o excipientes farmacéuticos. Los compuestos se pueden formular en preparaciones farmacéuticas adecuadas tales como soluciones, suspensiones, tabletas, tabletas dispersíbles, pildoras, cápsulas, polvos, formulaciones o elíxires de liberación sostenida, para la administración oral o en soluciones o suspensiones estériles para la administración parenteral, así como preparación de parche transdérmico e inhaladores de polvo seco. En una modalidad, los compuestos descritos antes se formulan en composiciones farmacéuticas usando técnicas y procedimientos bien conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Ansel Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, cuarta edición, 1985, 126). En las composiciones, las concentraciones efectivas de uno o más compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos se pueden mezclar con uno o más portadores farmacéuticos adecuados. Los compuestos se pueden derivar como las sales correspondientes, esteres, éteres o esteres de enol, acétales, ketales, ortoésteres, hemiacetales, hemiketales, ácidos, bases, solvatos, hidratos o profármacos antes de la formulación. Las concentraciones de los compuestos en las composiciones son efectivas para surtir una cantidad, al momento de la administración, que trata, previene o mejora uno o más de los síntomas de la enfermedad o trastorno blanco. En una modalidad, las composiciones se formulan para administración de una sola dosis. Para formular una composición, la fracción de peso del compuesto se disuelve, suspende, dispersa o de lo contrario se mezcla en un portador seleccionado a una concentración efectiva de modo que la condición tratada se alivia, previene, o se mejoran uno o más síntomas. Las composiciones adecuadas para administración oral se pueden presentar como unidades discretas tales como, pero sin limitación a, tabletas, capletas, pildoras o cápsulas de confite, o sellos para medicamentos, cada uno conteniendo una cantidad predeterminada de una o más de las composiciones; como un polvo o granulos; como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; o como una emulsión liquida de aceite en agua o una em ulsión de agua en aceite o como una pildora, etc. Las composiciones farmacéuticamente administrables se pueden preparar, por ejemplo, al disolver, dispersar o de lo contrario mezclar un compuesto activo como se definió antes y adyuvantes farmacéuticos opcionales en un portador, tales como, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa acuosa, glicerol, glicoles, etanol, y similares, para así formar una solución o suspensión. Si se desea, la composición farmacéutica a administrarse también puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humidificantes, agentes emulsificantes, agentes solubilizantes, agentes reguladores de pH , conservadores, agentes saborizantes, y similares, por ejemplo, acetato, citrato de sodio, derivados de ciclodextrina, monolaurato de sorbito, acetato de sodio de trietanolamina, oleato de trietanolamina, y otros dichos agentes. Se conocen métodos para preparar dichas formas de dosis, o serán evidentes a aquellos expertos en la técnica, por ejemplo, ver Pharmaceutical Sciences de Remington, Mack Publishing Company, Easton, Pa. , 15a edición , 1975. Las composiciones de la presente invención adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen, por ejemplo, pastillas, teniendo los ingredientes en una base de sabor, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas, teniendo una o más de las composiciones de la presente invención en una base inerte tales como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia; y enjuagues bucales, teniendo una o más de las composiciones de la presente invención administradas en un portador líquido adecuado. Las tabletas, pildoras, cápsulas, y similares pueden contener uno o más de los siguientes ingredientes, o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante; un lubricante; un diluyente; un glidante; un agente desintegrante; un agente colorante; un agente edulcorante; un agente saborizante; un agente humidificante; un revestimiento emético; y un revestimiento de película. Ejemplos de aglutinantes incluyen celulosa microcristalina, tragacanto de goma, solución de glucosa, mucina de acacia, solución de gelatina, melaza, polivinilpirrolidona, povidona, crospovidonas, sacarosa y pasta de almidón. Lubricantes incluyen, por ejemplo, lactosa, sacarosa, almidón, kaolina, sal, manitol y fosfato de dicalcio. Glidantes incluyen, pero no se limitan a, dióxido de silicio coloidal. Agentes desintegrantes incluyen sodio croscarameloso, glicolato de almidón de sodio, ácido algínico, almidón de maíz, almidón de papa, bentonita, metilcelulosa, agar y carboximetilcelulosa. Agentes colorantes incluyen, por ejemplo, cualquiera de los colorantes FD y C solubles en agua certificados aprobados, mezclas de los mismos; y colorantes FD y C insolubles en agua suspendidos en hidrato de alúmina. Agentes edulcorantes incluyen sacarosa, lactosa, manitol y agentes edulcorantes artificiales tales como sacarina, y cualquier número de sabores secos. Agentes saborizantes incluyen sabores naturales extraídos de plantas tales como frutas y mezclas sintéticas de compuestos que producen una sensación agradable, tales como, pero sin limitación a, menta y metil salicilato. Agentes humidificantes incluyen monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbito, monolaurato de dietilenglicol y éter de polioxietilen laural. Revestimientos eméticos incluyen ácidos grasos, grasas, ceras, gomas laca, goma laca amoniada y ftalatos de acetato celuloso. Revestimientos de película incluyen hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, polietilenglicol 4000 y ftalato de acetato celuloso.

Composiciones adecuadas para lá administración tópica a la piel se pueden presentar como ungüentos, cremas, geles y pastas, teniendo una o más de las composiciones administradas en un portador farmacéutico aceptable. Composiciones para la administración rectal se pueden presentar como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato. Composiciones adecuadas para la administración nasal, cuando el portador es un sólido, incluyen un polvo áspero que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en la escala de 20 a 500 mieras que se administra en ia manera en que se aspira (es decir, por inhalación rápida a través del paso nasal de un contenedor del polvo sostenido cerca de la nariz). Cuando el portador es un líquido (por ejemplo, un aspersor nasal o como gotas nasales), una o más de las composiciones se puede mezclar en una solución acuosa o aceitosa, e inhalarse o rociarse en el paso nasal. Composiciones adecuadas para la administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de aspersión que contienen una o más de las composiciones y portadores apropiados. Composiciones adecuadas para la administración parenteral incluyen soluciones de inyección estériles acuosas y no acuosas que pueden contener anti-oxidantes, reguladores, bacteriostatos, y solutos que hacen a la formulación isotónica con la sangre del recipiente destinado; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las composiciones pueden presentarse en contenedores de dosis unitaria o dosis múltiple, por ejemplo, ampollas y frascos sellados, y se pueden almacenar en una condición congelada en seco (liofilizada) requiriendo sólo la adición del portador líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de usarse. Se pueden preparar soluciones y suspensiones de inyección extemporáneas de polvos estériles, granulos y tabletas del tipo descrito previamente. Se pueden usar medios portadores sólidos o líquidos orgánicos o inorgánicos farmacéuticos adecuados para la administración enteral o parenteral para fabricar las composiciones. Gelatina, lactosa, almidón, estearato de magnesio, talco, grasas y aceites vegetales y animales, goma, polialquilenglicol, agua, u otros portadores conocidos pueden ser todos adecuados como medios portadores. Las composiciones se pueden usar como el ingrediente activo en combinación con uno o más medios y/o excipientes portadores farmacéuticamente aceptables. Como se usa en la presente, "medio portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los portadores, solventes, diluyentes, u otros vehículos líquidos, auxiliares de dispersión o suspensión, agentes se superficie activos, agentes isotónicos, agentes espesantes o emulsificantes, conservadores, aglutinantes sólidos, lubricantes, adyuvantes, vehículos, sistemas de surtido, desintegrantes, absorbentes, conservadores, agentes tensioactivos, colorantes, saborizantes, o edulcorantes y similares, adecuados a la forma de dosis particular deseada. Adicionalmente, las composiciones se pueden combinar con excipientes farmacéuticamente aceptables, y, opcionalmente, matrices de liberación sostenida, tales como polímeros biodegradables, para formar composiciones terapéuticas. Un "excipiente farmacéuticamente aceptable" incluye un llenador sólido no tóxico, semi-sólido o líquido, diluyente, material encapsulante o formulación auxiliar de cualquier tipo. Sin embargo, se entenderá que el uso diario total de las composiciones se decidirá por el médico que atiende dentro del alcance de su sano juicio médico. El nivel de dosis terapéuticamente efectivo específico para cualquier huésped particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo, por ejemplo, el trastorno siendo tratado y la severidad del trastorno; actividad de la composición específica empleada; la composición específica em pleada, la edad, peso .corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración; vía de administración; velocidad de excreción del. compuesto específico empleado; la duración del tratamiento; fármacos usados en combinación o coincidentes con la composición específica empleada; y factores similares bien conocidos en las técnicas medicas. Por ejemplo, está bien dentro de la experiencia de la técnica iniciar con dosis de la composición a niveles menores que aquellos requeridos para lograr el efecto terapéutico deseado y para aumentar gradualmente la dosis hasta que se logra el efecto deseado. Las composiciones de preferencia se formulan en forma de dosis unitaria para facilidad de administración y uniformidad de dosis. " Forma unitaria de dosis" como se usa en la presente se refiere a una unidad físicamente discreta de la composición apropiada para el huésped a ser tratado. Cada dosis debe contener la cantidad de composición calculada para producir el afecto terapéutico deseado ya sea como tal, o en asociación con el medio portador farmacéutico seleccionado. Las formulaciones de dosis unitarias son aquellas que contienen una dosis o unidad diaria, sub-dosis diaria, o una fracción apropiada de la misma, del ingrediente administrado. Por ejemplo, aproximadamente 1 -5 mg por d ía de un compuesto descrito en la presente puede reducir el volumen de un tumor sólido en ratones. La dosis dependerá de factores huésped tales como peso, edad, área superficial, metabolismo, distribución de tejido, velocidad de absorción y velocidad de excreción. En una modalidad, aproximadamente 0.5 a 7 gramos por día de un compuesto descrito en la presente se puede administrar a humanos. Opcionalmente, aproximadamente 1 a 4 gramos por día del compuesto se puede administrar a humanos. En ciertas modalidades 0.01 -5 mg/día se administra a un humano. El nivel de dosis terapéuticamente efectivo dependerá de m uchos factores como se señaló antes. Además, está bien dentro de la técnica iniciar dosis de la composición a niveles relativamente bajos, y aumentar la dosis hasta que se logra el efecto deseado. Se pueden usar composiciones que comprenden un compuesto descrito en la presente con una matriz de liberación sostenida, que se puede hacer de materiales, usualmente polímeros, que son degradables por hidrólisis enzimática o a base de ácido o por disolución. Una vez insertada en el cuerpo, la matriz es actuada por enzimas y fluidos corporales. Una matriz de liberación sostenida, por ejemplo, se elige de materiales biocompatibles tales como liposomas, polilactidas (ácido poliláctico), poliglicolida (polímero de ácido glicólico), co-glicolida de polilaCtida (copolímeros de ácido láctico y ácido glicólico), polianhídridos, poli(orto)ésteres, polipéptidos, ácido hialurónico, colágeno, sulfato de condroitina, ácidos carboxílicos, ácidos grasos, fosfolípidos, polisacáridos, ácidos nucleicos, ácidos de poliamino, aminoácidos tales como fenilalanina, tirosina, isoleucina, polinucleótidos, polivinil propileno, polivinilpirrolidona y silicio. Una matriz biodegradable preferida es una matriz de uno de polilactida, poliglicolida, o co-glicolida de polilactida (co-polímeros de ácido láctico y ácido glicólico). Los compuestos también se pueden administrar en la forma de liposomas. Como es sabido en la técnica, las liposomas por lo general se derivan de fosfolípidos u otras sustancias de lípido. Las liposomas se forman por cristales líquidos hidratados mono- o multi-lamelares que se dispersan en un medio acuoso. Se puede usar cualquier lípido no tóxico, fisiológicamente aceptable y metabolizable capaz de formar liposomas de formación. La liposoma puede contener, además de una o más composiciones de la presente invención, estabilizadores, conservadores, excipientes y similares. Ejemplos de lípidos son los fosfolípidos y las fosfatidil colinas (lecitinas), tanto naturales como sintéticas. Se conocen en la técnica métodos para formar liposomas. Los compuestos se pueden formular como aerosoles para aplicación, tal como por inhalación. Estas formulaciones para la administración al tracto respiratorio pueden estar en la forma de un aerosol o solución para un nebulizador, o como un polvo microfino para insuflación , sólo o en combinación con un portador inerte tal como lactosa. En dicho caso, las partículas de la formulación, en una modalidad, tendrán diámetros de menos de 50 mieras, en una modalidad menos de 10 mieras. Se pueden usar composiciones que com prenden los compuestos descritos en la presente en combinación con otras composiciones y/o procedimientos para el tratam iento de las condiciones descritas antes. Por ejemplo, un tumor se puede tratar convencionalmente con cirug ía, radiación, o quimioterapia combinada con una o más composiciones de la presente invención y después una o más composiciones de la presente invención se puede administrar posteriormente al paciente para extender la dormancia de micrometástasis y para estabilizar, inhibir, o reducir el crecimiento de cualquier tumor primario residual.

Modalidades adicionales Las composiciones farmacéuticas de la invención sujeto se pueden formular de conformidad con métodos conocidos para preparar composiciones farmacéuticamente útiles. Las formulaciones se pueden describir en un número de fuentes que son bien conocidos y prontamente disponibles a aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences (Martin EW

[1995] Easton Pennsylvania, Mack Publishing Company, 19a ed.) describe formulaciones que se pueden usar en conexión con la presente invención . Las formulaciones adecuadas para la administración incluyen, por ejemplo, soluciones de inyección estériles acuosas, que pueden contener antioxídantes, reguladores, bacteriostatos, y solutos que hacen a la formulación isotónica con la sangre del recipiente destinado; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones pueden estar presentes en contenedores de dosis unitaria o dosis múltiple, por ejemplo ampollas y frascos sellados, y se pueden almacenar en una condición congelada en seco (liofilizada) requiriendo sólo la condición del portador líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, antes de usarse. Se pueden preparar soluciones y suspensiones de inyección extemporáneas de polvo estéril, granulos, tabletas, etc. Cabe señalar que además de los ingredientes particularmente mencionados antes, las formulaciones de la presente invención pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica teniendo con respecto al tipo de formulación en cuestión . Los métodos de la presente invención , por ejemplo, para inhibir el crecimiento de una célula cancerosa, se pueden combinar de manera ventajosa con al menos un método terapéutico adicional, incluyendo, pero sin limitación a, quimioterapia, terapia de radiación , terapia que inhibe selectivamente señalamiento oncogéníco Ras, o cualquier otra terapia conocida a aquellos expertos en la técnica del tratamiento y manejo de cáncer, tal como la administración de un agente anti-cáncer. Se puede llevar a cabo administración de API-2 (triciribina) como una sal. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables son sales de adición acidas orgánicas formadas con ácidos que forman un anión fisiológicamente aceptable, por ejemplo, tosilato, metanosulfonato, acetato, citrato, malonato, tartarato, succinato, benzoato, ascorbato, alfa-ketoglutarato, y alfa-glicerofosfato. También se pueden formar sales inorgánicas adecuadas, incluyendo clorhidrato, sulfato, nitrato, bicarbonato y sales de carbonato. Se pueden obtener sales farmacéuticamente aceptables usando procedimientos estándar bien conocidos en la técnica, por ejemplo, al hacer reaccionar un compuesto suficientemente básico tal como una amina con un ácido adecuado que se puede permitir un anión fisiológicamente aceptable. También se pueden hacer ácidos carboxílicos de sales de metal alcalino (por ejemplo, sodio, potasio o litio) o de metal alcalino terreo (por ejemplo, calcio) .

Los compuestos de la presente invención se pueden formular como composiciones farmacéuticas y administrarse a un sujeto, tal como un paciente humano o veterinario, en una variedad de formas adaptadas a la vía de administración elegida, es decir, oral o parenteralmente, por vías intravenosas, intramusculares, tópicas o subcutáneas. De esta manera, los compuestos de la presente invención se pueden administrar sistémicamente, por ejemplo, oralmente, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable (es decir, portador) tal como un diluyente inerte o un portador comestible asimilable. Se pueden encerrar en cápsulas de gelatina de armazón duro o blando, se pueden comprimir en tabletas, o se pueden incorporar directamente con los alimentos de la dieta del paciente. Para la administración terapéutica oral, los compuestos se pueden combinar con uno o más excipientes y usarse en la forma de tabletas ingeribles, tabletas bucales, cápsulas, elíxires, suspensiones, jarabes, obleas, y similares. Dichas composiciones y preparaciones deben contener por lo menos 0.1 % de agente activo. El porcentaje de las composiciones y preparaciones, desde luego, se pueden variar y convenientemente estar entre alrededor de 2 y aproximadamente 60% en peso de una forma de dosis unitaria dada. La cantidad del compuesto activo en dichas composiciones terapéuticamente útiles es tal que se obtendrá un nivel de dosis efectivo. Las tabletas, pildoras, cápsulas, y similares también pueden contener los siguientes: aglutinantes tales como goma tragacanto, acacia, almidón de maíz o gelatina; excipientes tal como fosfato de dicalcio; un agente desintegrante tales como almidón de maíz, almidón de papa, ácido alg ínico y sim ilares; un lubricante tal como estearato de magnesio; y un agente edulcorante tales como sacarosa, fructosa, lactosa o aspartame o un agente saborizante tales como menta, aceite de té de Canadá, o se puede agregar sabor a cereza. Cuando la forma de dosis unitaria es una cápsula, puede contener, además de los materiales del tipo anterior, un portador líquido, tal como un aceite vegetal o un polietilenglicol. Varios otros materiales pueden estar presentes como revestimientos o para de lo contrario modificar la forma física de la forma de dosis unitaria sólida. Por ejemplo, tabletas, pildoras o cápsulas se pueden revestir con gelatina, cera, goma laca o azúcar y similares. Un jarabe o elíxir puede contener los compuestos de la invención, sacarosa o fructosa como un agente edulcorante, metilo y propilparabenos como conservadores, un colorante y saborizante tal como sabor a cereza o naranja. Desde luego, cualquier material usado en preparar cualquier forma de dosis unitaria debe ser farmacéuticamente aceptable y sustancialmente no tóxico en las cantidades empleadas. Además, los compuestos de la invención se pueden incorporar en preparaciones y dispositivos de liberación sostenida. El agente activo (es decir, API-2 o sales farmacéuticamente aceptables del mismo) también se puede administrar intravenosa o intraperitonalmente por infusión o inyección. Se pueden preparar soluciones del agente activo o sus sales en agua, opcionalmente mixtas con un agente tensioactivo no tóxico. También se pueden preparar dispersiones en glicerol , polietilenglicoles líquidos, triacetina, y mezclas de los mismos y en aceites. Bajo condiciones y uso de almacenamiento ordinarias, estas preparaciones contienen un conservador para prevenir el crecimiento de microorganismos. Las formas de dosis farmacéuticas adecuadas para inyección o infusión pueden incluir soluciones o dispersiones acuosas estériles o polvos estériles que comprenden el ingrediente activo que se adaptan para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones estériles que se pueden inyectar o infundir, encapsuladas opcionalmente en líposomas. En todos los casos, la forma de dosis final debe ser estéril, fluida y estable bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento. El portador o vehículo líquido puede ser un solvente o medio de dispersión líquido que comprende, por ejemplo, agua, etanol, un poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicoles líquidos, y similares) , aceites vegetales, esteres de glicerilo no tóxicos, y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez propia se puede mantener, por ejemplo, por la formación de liposomas, por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones o por el uso de agentes tensíoactivos. La prevención de la acción de microorganismos se puede llevar por varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejem plo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal, y similares. En muchos casos, se prefiere incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, reguladores o cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se puede llevar por el uso en las composiciones de agentes que retrasan la absorción , por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Se preparan soluciones inyectables estériles al incorporar compuestos de la invención en la cantidad requerida en el solvente apropiado con varios de los otros ingredientes enumerados antes, según se requiera, seguido por esterilización de filtro. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son técnicas de secado al vacío y liofilización, que dan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional presente en las soluciones previamente filtradas estériles. Para la administración tópica, los compuestos de la invención se pueden aplicar en forma pura, es decir, cuando son líquidos. Sin embargo, por lo general será deseable administrarlos a la piel como composiciones o formulaciones, en combinación con un portador dermatológicamente aceptable, que puede ser un sólido o un líquido.

Los portadores sólidos útiles incluyen sólidos finamente divididos tales como talco, arcilla, celulosa microcristalina, sílice, alúmina y similares. Los portadores líquidos útiles incluyen agua, alcoholes o glicoles o mezclas de agua-alcohol/glicol, en donde los compuestos de la invención se pueden disolver o dispersar a niveles efectivos, opcionalmente con la ayuda de agentes tensioactivos no tóxicos. Adyuvantes tales como fragancias y agentes antimicrobianos adicionales se pueden agregar optimizar las propiedades para un uso dado. Las composiciones líquidas resultantes se pueden aplicar de almohadillas absorbentes, usadas para impregnar vendas y otros vendajes, o rociarse en el área afectada usando aspersores de tipo bomba o aerosol. Espesantes tales como polímeros sintéticos, ácidos grasos, sales y esteres de ácido graso, alcoholes grasos, celulosas modificadas o materiales minerales modificados también se pueden emplear con portadores líquidos para formar pastas, geles, ungüentos, jabones que se pueden untar y similares, para aplicación directamente en la piel del usuario. Ejemplos de composiciones dermatológicas útiles que se pueden usar para surtir los compuestos de la invención a la piel se describen en Jacquet y otros (Patente de E.U.A. No. 4,608,392), Geria (Patente de E.U.A. No. 4,992,478) , Smith y otros (Patente de E. U.A. No. 4,559, 157) y Woltzman (Patente de E. U.A. No. 4,820,508). Se pueden determinar dosis útiles de las composiciones farmacéuticas de la presente invención al comparar su actividad in vitro, y actividad in vivo en modelos animales. Métodos para la extrapolación de dosis efectivas en ratones, y otros animales, a humanos son conocidos en la técnica; por ejemplo, ver Patente de E. U.A. No. 4, 938,949. En una modalidad no limitante, la concentración del agente activo en una composición líquida, tal como una loción , puede ser de aproximadamente 0.1-25% en peso, o de aproximadamente 0.5-10% en peso. En una modalidad, la concentración en una composición semi-sólida o sólida tal como un gel o un polvo puede ser aproximadamente 0.1 -5% en peso, de preferencia aproximadamente 0.5-2.5% en peso. En una modalidad, las dosis individuales para inyección, infusión o ingestión por lo general variarán entre 5-1500 mg , y se pueden administrar, es decir, 1 -3 veces al día, para dar niveles de aproximadamente 0.1 -50 mg/kg, para adultos. Una dosis no limitante de la presente invención puede ser entre 7.5 y 45 mg por arcilla, administrada oralmente, con ajuste apropiado para el peso corporal de un Individuo. Por consiguiente, la presente invención incluye una composición farmacéutica que comprende APJ-2, como se describe en la presente, o sales farmacéuticamente aceptables de la m isma, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración oral, tópica o parenteral, que comprenden una cantidad de API-2, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, constituyen una modalidad preferida de lá invención. La dosis administrada a un sujeto, en particular un humano, en el contexto de la presente invención debe ser suficiente para efectuar una respuesta terapéutica en el paciente sobre un marco de tiempo razonable. U n experto en la técnica reconocerá que la dosis dependerá de una variedad de factores incluyendo la condición del animal, el peso corporal del animal, así como la severidad y etapa del cáncer.

Una dosis adecuada es aquella que resultará en una concentración del agente activo en tejido de tumor que es conocido para efectuar la respuesta deseada. La dosis preferida es la cantidad que resulta en inhibición máxima de crecimiento celular de cáncer, sin efectos laterales no manejables. La administración de API-2 (o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma) puede ser continua o a intervalos distintos, según se pueda determinar por una persona de experiencia ordinaria en a técnica. Especies mamíferas que se benefician de los métodos descritos para la inhibición de crecimiento celular de cáncer, incluyen, pero no se limitan a, primates, tales como simios, chimpancés, orangutanes, humanos, monos; anímales domesticados (por ejemplo, mascotas) tales como perros, gatos, conejillos de indias, hámsters, cerdos de barriga vietnamita, conejos, y hurones; animales de granja domesticados tales como vacas, búfalo, bisón, caballos, burros, cerdos, ovejas, y cabras; animales exóticos típicamente encontrados en zoológicos, tales como osos, leones, tigres, panteras, elefantes, hipopótamos, rinocerontes, jirafas, antílopes, osos besudos, gacelas, cebras, ñus, marmotas, osos koala, canguros, zarigüeyas, mapaches, pandas, hienas, focas, leones marinos, elefantes marinos, nutrias, marsopas, delfines y ballenas. Los términos "paciente" y "sujeto" se usan en la presente de manera intercambiable y están destinados para incluir dichas especies mamíferas humanas y no humanas. Asimismo, los métodos in vitro de la presente invención se pueden llevar a cabo en células de dichas especies mamíferas.

Los pacientes en necesidad de tratamiento usando los métodos de la presente invención se pueden identificar usando técnicas estándar conocidas a aquellos en la profesión médica. Los siguientes ejemplos se ofrecen por medio de ilustración y no por medio de limitación.

EJEMPLOS EJ EMPLO 1 : SELECCIÓN /Af VITRO Materiales Juego de Diversidad de Líneas Celulares y NCI . Todas las líneas celulares usadas en este estudio fueron adquiridas de ATCC o descritas previamente (Cheng, J . Q., y otros, Oncogene, 14: 2793-2801 , 1 997, West, K. A. , y otros. Drug Resist. Updat. , 5: 234-248, 2002, Satyamoorthy, K. , y otros, Cáncer Res. 61 : 7318-7324, 2001 ). El Juego de Diversidad Estructural de NCI es una biblioteca de 1 , 992 compuestos seleccionados del depositario de fármaco de NCI de aproximadamente 140, 000 compuestos. Datos exhaustivos sobre la selección, estructuras y actividades de estos compuestos de juego de diversidad se pueden encontrar en la página web del programa "NCI Development Therapeutics Program" . Selección para la Inhibición de Crecimiento de Célula Akt-transformada. Las células NIH3T3 AKT2-transformadas o células de control NIH3TE vector-transfectadas de LXSN (Cheng , J. Q. , y otros, Oncogene, 14: 2793-2801 , 1997) se emplacaron en placa de cultivo de tejido de 96 pozos. Después del tratamiento con 5 µM de compuesto del Juego de Diversidad de NCI , se detectó crecimiento celular con el equipo CelITier 96 One Solution Cell Proliferation (Promega). Los compuestos que inhiben crecimiento en células NIH3T3 AKT2-transformadas pero no LXSN-transfectadas fueron consideradas como candidatos de inhibidor de Akt y se sometieron a análisis adicional. Pruebas In Vitro de Proteína Kinasa. Supervivencia de Célula y Apoptosis. Se realizó kinasa in vitro como se describió previamente (ver, por ejemplo, Jiang , K. , Coppola, y otros, Mol. Cell. Biol. , 20: 1 39-148, 2000). Se probó la supervivencia celular con MTS (Promega). Se detectó apoptosis con anexina V, que se realizó como se describió previamente (Jiang, K. , Coppola, y otros, Mol. Cell. Biol. , 20: 139-148, 2000). Se adquirieron Akt y PDK1 recombinantes de Upstate Biotechnology I nc.

Resultados Identificación de Inhibidor de Molécula Pegueña de Paso de Señalamiento de Akt. API-2. Se han detectado alteraciones frecuentes de Akt en cáncer humano y la disrupción de paso de Akt induce apoptosis e inhibe el crecimiento de tumor (Jetzt, A. , y otros, Cáncer Res. , 63: 697-706, 2003). De esta manera, Akt ha sido considerada como un blanco molecular atractivo para el desarrollo de terapéuticos novedosos para cáncer. Para identificar inhibidor(es) de molécula pequeña de Akt, una biblioteca química de 1 , 992 compuestos del NCl (el Juego de Diversidad de NCI) se evaluó para agentes capaces de inhibir el crecimiento en células N I H3T3 AKT2-transformadas pero no LXSN-transfectadas como se describe en "Materials and Methods." Los experimentos repetidos mostraron que 32 compuestos inhibieron el crecimiento sólo en células AKT2-transformadas. El más potente de estos compuestos, API-2 (identificador de NCl : NSC 1 54020), suprimió el crecimiento celular a una concentración de nM. La figura 1A muestra la estructura química de API-2, que también se conoce como triciribina (Schweinsberg, P. D. , y otros, Biochem . Pharmacol. , 30: 2521 -2526, 1981 ). El hecho de que API-2 Inhibió selectivamente células AKT-2 transformadas sobre las células parentales no transformadas provocó que determináramos si API-2 es un inhibidor de AKT2 kinasa. A este extremo, AKT2 se inm unoprecipitó con anticuerpo anti-AKT2 de células NI H3T3 AKT-2 transformadas siguiendo tratam iento con API-2. Los inmunoprecipitados de AKT2 se inmunotransfirieron con anticuerpos anti-fosfo-Akt. Como se muestra en la figura 1 B, API-2 inhibió significativamente fosforilación de AKT2 tanto a treonina-309 como serina0474, que se requieren para la activación completa de AKT2 (Datta, S. R. , y otros, Genes Dev. , 13: 2905-2927, 1999). Ya que tres ¡soformas de Akt comparten homolog ía alta y estructura similar, se evaluó el efecto de API-2 en sus actividades de kinasa. Las células HEK293 se transfectaron con HA-Akt1 , -AKT2 y -AKT3, privadas con suero durante la noche y tratadas con API-2 durante 60 minutos antes de estimulación de EGF (50 ng/ml). Los experimentos triples mostraron que API-2 suprimió actividad de kinas inducida con EGF y fosforilación de Aktl , AKT2 y AKT3 (figura 1 C). Sin embargo, la actividad de kinasa de AKT2 constitutivamente activa recombinante (Myr-AKT2) no se inhibió por API-2 en una reacción de kinasa in vitro (figura 1 D), sugiriendo que API-2 no inhibe directamente Akt in vitro y q ue API-2 no funciona como competidor de ATP ni como el competidor de sustrato que se une al sitio activo de Akt. API-2 No Inhibe Activadores Ascendentes Conocidos de Akt. Se ha documentado bien que Akt se logra por estímulo extracelular y moléculas de señal intracelular, tales como Ras y Src activas, a través de una manera dependiente de PI3K. Por lo tanto, la inhibición con API-2 de Akt podría resultar de buscar molécula(s) ascendente(s) de Akt. Ya que PI3K y PDK1 son reguladores ascendentes directos de Akt (Datta, S. R. , y otros, Genes Dev. , 13: 2905-2927, 1999), se examinó si API-2 inhibe PI3K y/o PDK1 . Las células HEK293 fueron privadas con suero y después tratadas con API-2 o inhibidor PI3K, wortmannin, durante 30 m inutos antes de estimulación con EGF. Se inmunoprecipitó PI3K con anticuerpo anti-p 1 10a. Los inmunoprecipitados se sometieron a prueba de kinasa P13K in vitro usando PI-4-P como un sustrato. Como se muestra en la figura 2A, la actividad de PI3K inducida con EGF se inhibió por wortmannin pero no por API-2. Para evaluar el efecto de API-2 en PDK1 , una prueba en donde PDK1 recombinante promueve la fosforilación con treonina-309 de péptidos de AKT2 se usó en presencia de vesículas de lípido que contienen fosfotidilinositol.

Como se muestra ea la figura 2B, la prueba se inhibió potentemente por la estaurosporina de inhibidor PDK1 de control (IC50 = 5 nM) . En contraste, API-2 sólo exhibió 21 % de inhibición de la prueba a la concentración más alta probada (5.1 µM). Estos datos demuestran que API-2 no es un inhibidor potente de PDK1 . Para evaluar más el efecto de API-2 en activación de PDK1 , el nivel de autofósforilación de PDK1 en serina-241 , un residuo que se fosforila por sí mismo y es crítico por su actividad se examinó (Datta, S. R. , y otros, Genes Dev. , 13: 2905-2927, 1999), siguiendo tratamiento con API-2 de células H EK293. Los experimentos en triplicado muestran que los niveles de fosforilación de PDK1 no fueron inhibidos por AP1-2 (figura 2B). Sin embargo, el inhibidor de PI3K, wortmannin, como se espera, inhibió PDK1 estimulado con EGF (figura 2B). API-2 es altamente selectivo para el Akt sobre PKC, PKA, SGK. STAT, JN K, p38. v Pasos de Señalamiento de ERK. Art pertenece a la familia de AGC kinasa (PKA/PKG/PKC), que también incluyen PKA, PKC, kinasa inducible con suero y glucocorticoide (SGK), S6 kinasa ribosomal p90, p70S6K, proteína kinasa activada con mitogen y estrés, y kinasa relacionada con PKC. Entre la familia de AGC kinasa, las estructuras de proteína de PKA, PKC y SGK son están más cerca de Akt kinasa que otros miembros. Por lo tanto, después se examinaron los efectos de API-2 en las actividades enzimáticas de estas 3 kinasas. Las células HEK293 se transfectaron con PKA, PKC D O SGK marcadas con HA. La prueba de kinasa in vitro y el análisis de inmunotransferencia mostraron que las actividades de kinasa de PKA y PKCa se inhibieron por PKAI y Ro 31 -8220, un inhibidor de PKC, respectivamente, mientras que API-2 exhibió ningún efecto en sus actividades (Figura 2C y 2E). Además, la actividad de SGK kinasa inducida con suero se atenuó por wortmannin, pero no por API-2 (figura 2D) . Además, se determinó si API-2 tiene efecto en otras vías de supervivencia oncogénica. Análisis de transferencia Western blot con anticuerpos anti-fosfo comercialmente disponibles revelaron que los niveles de fosforilación de Stat3, JN K, p38 y Erk1/2 no fueron afectados por tratamiento con API-2 (figura 2F). Estos datos indican que API-2 inhibe específicamente la vía de señalamiento de Akt. API-2 Suprime Crecimiento Celular e nduce Apoptosis en Sobre Expresión/Activación de Akt de Líneas Celulares de Cáncer Humano. La habilidad de API-2 para inhibir selectivamente la vía de Akt sugiere que debe inhibir la proliferación y/o inducir apoptosis de preferencia en aquellas células de tumor con expresión/activación aberrante de Akt. Ya que la activación de Akt en malignidades humanas resulta comúnmente de la sobre expresión de Akt o mutaciones de PTEN, API-2 se usó para tratar las células que expresan Akt constitutivamente activo, provocado por la sobre expresión de AKT2 (NI H3T3 OVCAR3, OVCAR8, PANC1 y AKT2-transformada) o mutaciones del gen PTEN (PC-3, LNCaP, MDA-MB-468), y células que no (OVAR5, DU-145, T47D, COLO357 y LXSN-NI H3T3) así como células de melanoma que se activan por IGF-1 para activar Akt o no responden a estimulación de crecimiento por IGF-1 (Satyamoorthy, K. , y otros, Cáncer Res. , 61: 7318-7324, 2001 ) . El análisis de inmunotransferencia mostró que los niveles de fosforilación de Akt se inhibieron por API-2 sólo en las células que expresan Akt elevada o responden a estimulación de IGF-1 (figura 3A). Por consiguiente, API-2 inhibió el crecimiento celular a un grado mucho mayor en sobre expresión/activación con Akt de células en comparación con aquellas con niveles bajos de Akt. Como se muestra en la figura 3B, el tratamiento con API-2 inhibió la proliferación celular por aproximadamente 50-60% en líneas celulares de sobre expresión/activación con Akt, LNCaP, PC-3, OVCAR3, OVCA8, PANC1 , M DA-MB-468, y WM35, mientras que sólo por aproximadamente 10-20% en células de DU 145, OVCAR5, COLO357, T47D y WM852, que exhiben niveles bajos de Akt o no responden a estimulación de crecimiento por IGF-1 . Además, API-2 induce apoptosis por 8 veces (OVCAR3), 6 veces (OVCAR8), 6 veces (PANC1 ), y 3 veces (AKT2-NI H3T3). Ninguna diferencia significativa de apoptosis se observó entre API-2 y tratamiento con vehículo (DMSO) en células N I H3T3 de OVCAR5, COLO357 y LXSN. De esta manera, API-2 inhibe el crecimiento celular e induce apoptosis preferencialmente en células que expresan Akt aberrante. API-2 I nhibe Blancos Descendentes de Akt. Se ha mostrado que Akt ejerce sus efectos celulares a través de fosforilación de un número de proteínas (Datta, S. R. , y otros, Genes Dev. , 13: 2905-2927, 1999). Se han identificado más de 20 proteínas como sustratos de Akt, incluyendo los miembros de la familia de protéína Forkhead (FKHR, AFX y FKHRL1 ), tuberlina/TSC2, p70S6 K, GSK-3ß, p2 1 wAFi c¡ P i ? p27ki 1 , MDM2, Bad, ASK1 e I KKa, etc. Después se examinó si API-2 inhibe blancos descendentes de Akt. Ya que los anticuerpos anti-fosfo-tuberlina, -Bad, -AFX y -GSK3ß están comercialmente disponibles, por lo tanto, se determinó el efecto de APl-2 en su fosforilación inducida por Akt. Después de tratamiento con API-2 (1 pM), las células OVCAR3 se usaron e inmunotransfirieron con el anticuerpo anti-fosfo individual. La figura 4A muestra que API-2 inhibió considerablemente los niveles de fosforilación de turbelina conduciendo a estabilización y regulación por incremento de tiberina (Dan, H. C , y otros, J. Biol. Chem. , 227: 35367-35370, 2002). Los niveles de fosforilación de Bad, GSK-3ß, y AFX se atenuaron parcialmente por API-2. Estos datos sugieren que API-2 induce muerte celular y arresto crecimiento celular al inhibir fosforilación de sus blancos descendentes. La inhibición con API-2 de blancos descendentes de Akt a grados diferentes se podría deber al hecho de que los sitios de fosforilación de estos blancos también se regulan por otra(s) kinasa(s), por ejemplo, Bad serina-136 fosforilada por PAK1 además de Akt (Schurmann, A. , y otros, Mol. Cell. Biol. , 20: 453-461 , 2000).

EJEMPLO 2: ACTIVIDAD ANTITUMOR EN EL MODELO DE INJERTO HETERÓLOGO DE TUMOR EN RATÓN DESN U DO Se cultivaron, resuspendieron en PBS, e inyectaron s.c. células de tumor en los flancos derecho e izquierdo (2 x 106 células/flanco) de ratones desnudos hembra de ocho semanas de edad según se registró previamente (Sun, J. , Blaskovic, y otros, Cáncer Res. , 59: 4919-4926, 1999). Cuando los tumores alcanzaron 100-150 mm3, los animales distribuidos al azar y dosificados i. p. con 0.2 ml de vehículo de fármaco diario. Los animales de control recibieron vehículo de DMSO (20%), mientras que los animales tratados fueron inyectados con API-2 (1 mg/kg/día) en 20% de DMSO. API-2 nhibe el Crecimiento de Tumores en Ratones Desnudos gue Sobre Expresan Akt. La sobre expresión/activación y/o amplificación frecuente de AKT1 y AKT2 en cáncer de ovario y páncreas humano se mostró (Cheng, J . Q. , y Nicosia, S. V. "AKT signal transduction pathway in oncogenesis." En Schwab D. Editor, Encyclopedic Referente of Cáncer. Berlín Heidelberg and New York: Springer; 2001 . pp. 35/7) . La inhibición de la vía de Akt por inhibidores de PI3K, HSP70, Src y farnesiltransferasa resultó en arresto de crecimiento celular e inducción de apoptosis (Solit, D. B. , y otros, Cáncer Res. , 63: 2139-2144, 2003, Xu, W. , y otros, Cáncer Res. , 63: 7777-7784, 2003). Un estudio reciente mostró que el crecimiento de tumor de injertos heterólogos con Akt elevado también se inhibió significativamente por inyección intratumoral de adenovirus de Akt negativo dominante (Jetzt, A. , y otros, Cáncer Res. , 63: 697-706, 2003). Ya que API-2 inhibe señalamiento de Akt e induce apoptosis y arresto de crecimiento celular sólo en células de cáncer con niveles elevados de Akt (figura 3), el crecimiento de tumores con niveles elevados de Akt debe ser más sensible a API-2 que aquél de tumores con niveles bajos de Akt en ratones desnudos. A este extremo, las células que sobre expresan Akt s.c. (OVCAR3, OVAR8 y PANC-1 ) se implantaron s. c. en el flanco derecho, y aquellas líneas celulares que expresan niveles bajos de Akt (OVCAR 5 y COLO357) en el flanco izquierdo de ratones. Cuando los tumores alcanzaron un tamaño promedio de aproximadamente 1 00- 1 50 mm3, los animales fueron distribuidos al azar y tratados i. p. con cualquier vehículo o API-2 (1 mg/kg/día). Como se ilustra en la figura 4B, los tumores de OVCAR-5 y COLO357 tratados con vehículo crecieron a aproximadamente 800-1 , 000 mm3 49 días después de implantación de tumor. Los tumores de OVCAR3, OVCAR8 y PANC1 tratados con control de vehículo crecieron a aproximadamente 700-900 mm3 49 días después de implantación de tumor. API-2 inhibió el crecimiento de tumor de OVCAR3, OVCAR8 y PANC1 por ?0%, 88% y 80%, respectivamente. En contraste, API-2 tuvo poco efecto en el crecimiento de células de OVCAR5 y COLO357 en ratones desnudos (figuras 4B-4D y datos no mostrados) . A dosis de 1 mg/kg/día, API-2 no tuvo efecto en nivel de glucosa de sangre, peso corporal, actividad e ingestión de alimentos de ratones. En muestras de tumor tratadas, la actividad de Akt se inhibió por API-2 sin cam bio de contenido de Akt total (figura 4E). Tomados juntos, estos resultados indican que API-2 inhibe selectivamente el crecimiento de tumores con niveles de Akt elevados.

EJEMPLO 3: TCN INHI BE DIRECTAM ENTE ACTIVI DAD DE AKT KINASA DEL TIPO SILVESTRE API-2 (TCN) puede inhibir directamente actividad de Akt kinasa del tipo silvestre por PDK1 ín vitro (figura 1 ). Este resultado soporta que APl-2 sea un inhibidor de Akt directo y que el mecanismo fundamental pueda ser API-2 uniendo a dom inio de pH y/o treonina-308 de Akt. Una prueba de kinasa in vitro se realizó con recombinante de PDK1 y Akt en un regulador de kinasa que contiene fosfatidilinositol-3,4,5-P3 (PI P3), API-2 e histona H2B como sustrato. Después de la incubación de 30 minutos, las reacciones se separaron por SDS-PAGE y se expusieron en una película.

EJEMPLO 4: TCN ES EFECTIVO EN CÉLULAS RESISTENTES A CÁNCER Los efectos de TCN (API-2) se probaron en resistencia a cisplatin, paclitaxel y tamoxifen en estas células. Esta invención se ha descrito con referencia a sus modalidades preferidas. Variaciones y modificaciones de la invención, serán obvias a aquellos expertos en la técnica a partir de la siguiente descripción detallada de la ¡nvención. Se pretende que todas estas variaciones y modificaciones se incluyan dentro del alcance de esta invención.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1 .- Un método para tratar un tumor o cáncer en un mamífero que comprende (i) obtener una muestra biológica del tumor o cáncer; (ii) determinar si el tumor o cáncer sobre expresa una Akt kinasa, (iii) si el tumor o cáncer sobre expresa Akt kinasa, tratando el tumor o cáncer con una cantidad efectiva de un compuesto de la formula: en donde cada R2', R3' y R5' son independientemente hidrógeno, fosfato o fosfonato opcionalmente sustituido (incluyendo mono-, di- o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado); acilo (incluyendo acilo inferior) ; alquilo (incluyendo alquilo inferior) ; amida, éster de sulfonato incluyendo alquilo o arilalquilo; sulfonilo, incluyendo metanosulfonilo y bencilo, en donde el grupo fenilo se sustituye opcionaimente con uno o más sustitutos como, por ejemplo, se describe en la definición de un arilo dado en la presente; opcionalmente arilsulfonilo sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otros grupo de olvido farmacéuticamente aceptable que, in vivo, provee un compuesto en donde R2', R3' o R5' es independientemente H o mono-, di- o trifosfato; - en donde Rx y Ry son independientemente hidrógeno, fosfato opcionalmente sustituido; acilo (incluyendo acilo inferior); amida, alquilo (incluyendo alquilo inferior); polioxialquileno aromático tal como políetilenglicol, arilsulfonilo opcionalmente sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otro grupo de olvido farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, el compuesto se administra como un lípido de 5'-fosfoéter o un lípido de 5'-éter. Ri y R2 cada uno es independientemente H, alquilo de cadena recta, ramificada o cíclico opcionalmente sustituido (incluyendo alquilo inferior), alquenilo, o alquinilo, CO-alquilo, CO-alquenilo, CO-alquinilo, CO-arilo o heteroarllo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, arilo CO-sustituido, sulfonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo. 2.- El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el sujeto ha sido diagnosticado con un cáncer seleccionado a partir del grupo que consiste de mama, pancreático, ovario y colorectal. 3.- El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el nivel de expresión de Akt kinasa se determina al probar el cáncer para la presencia de una Akt kinasa fosforilada. 4.- El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el nivel de expresión de Akt kinasa se determina al probar el cáncer para la presencia de una Akt kinasa fosforilada con un anticuerpo. 5.- Un método para tratar un tumor o cáncer en un mam ífero que comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un compuesto de la formula: en donde cada R2', R3' y R5' son independientemente hidrógeno, fosfato o fosfonato opcionalmente sustituido (incluyendo mono-, di- o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado); acilo (incluyendo acilo inferior); alquilo (incluyendo alquilo inferior); amida, éster de sulfonato incluyendo alquilo o arilalquilo; sulfonilo, incluyendo metanosulfonilo y bencilo, en donde el grupo fenilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustitutos como, por ejemplo, se describe en la definición de un arilo dado en la presente; opcionalmente arilsulfonilo sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otros grupo de olvido farmacéuticamente aceptable que, in vivo, provee un compuesto en donde R2', R3' o R5' es independientemente H o mono-, di- o trifosfato; en donde Rx y Ry son independientemente hidrógeno, fosfato opcionalmente sustituido; acilo (incluyendo acilo inferior); amida, alquilo (incluyendo alquilo inferíor); polioxialquileno aromático tal como políetilenglicol, arilsulfonilo opcionalmente sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otro grupo de olvido farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, el compuesto se administra como un lípido de 5'-fosfoéter o un lípido de 5'-éter. Ri y R2 cada uno es independientemente H, alquilo de cadena recta, ramificada o cíclico opcionalmente sustituido (incluyendo alquilo inferior), alquenilo, o alquinílo, CO-alquílo, CO-alquenilo, CO-alquinilo, CO-arilo o heteroarllo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, arilo CO-sustituido, sulfonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo; en donde el compuesto se administra una vez por semana durante tres semanas seguido por un periodo de una semana en donde el compuesto no se administra. 6.- El método de conformidad con la reivindicación 5, en donde el horario de dosificación se repite por lo menos dos veces. 7.- El método de conformidad con la reivindicación 5, en donde el horario de dosificación se repite por lo menos 4 veces. 8.- El método de conformidad con la reivindicación 5, en donde el tumor se selecciona a partir del grupo que consiste de tumores de mama, pancreático, ovario y colorectal. 9.- El método de conformidad con la reivindicación 5, en donde se administra por lo menos 10 mg/m2 del compuesto. 10.- El método de conformidad con la reivindicación 5, en donde se administra por lo menos 10 mg/m2 o menos del compuesto. 1 1 .- Un método para tratar un tumor en un mamífero que comprende administrar al mamífero una dosis de 10 mg/m2 o menos de un compuesto de la fórmula: en donde cada R2', R3' y R5' son independientemente hidrógeno, fosfato o fosfonato opcionalmente sustituido (incluyendo mono-, di- o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado); acilo (incluyendo acilo inferior); alquilo (incluyendo alquilo inferior); amida, éster de sulfonato incluyendo alquilo o arilalquilo; sulfonilo, incluyendo metanosulfonilo y bencilo, en donde el grupo fenilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustitutos como, por ejemplo, se describe en la definición de un arilo dado en la presente; opcionalmente arilsulfonilo sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otros grupo de olvido farmacéuticamente aceptable que, in vivo, provee un compuesto en donde R2', R3' o R5' es independientemente H o mono-, di- o trifosfato; en donde Rx y Ry son independientemente hidrógeno, fosfato opcionalmente sustituido; acilo (incluyendo acilo inferior); amida, alquilo (incluyendo alquilo inferior); polioxialquileno aromático tal como polietilenglicol, arilsulfonilo opcionalmente sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otro grupo de olvido farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, el compuesto se administra como un lípido de 5'-fosfoéter o un lípido de 5'-éter. Ri y R2 cada uno es independientemente H, alquilo de cadena recta, ramificada o cíclico opcionalmente sustituido (incluyendo alquilo inferior), alquenilo, o alquinilo, CO-alquilo, CO-alquenilo, CO-alquinilo, CO-arilo o heteroarilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, ariío CO-sustituido, sulfonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo; en donde el compuesto se administra una vez por semana. 12.- El método de conformidad con la reivindicación 11, en donde el régimen de dosificación se repite durante por lo menos dos semanas. 13.- El método de conformidad con la reivindicación 11, en donde el régimen de dosificación se repite durante tres semanas, y en donde el periodo de tres semanas es seguido por un periodo de una semana en donde no se administra ningún fármaco. 14.- El método de conformidad con la reivindicación 12, en donde el régimen de dosificación representa un ciclo de dosificación. 15.- El método de conformidad con la reivindicación 14, en donde el ciclo de dosificación se repite por lo menos dos veces. 16.- El método de conformidad con la reivindicación 14, en donde el ciclo de dosificación se repite hasta que se logra regresión del cáncer. 17.- El método de conformidad con la reivindicación 1, 5, u 11, en donde el fármaco se administra intravenosamente. 18.- El método de conformidad con la reivindicación 1, 5, u 11, en donde el sujeto ha sido diagnosticado con un carcinoma, sarcoma, linfoma, leucemia o mieloma. 19.- El método de conformidad con la reivindicación 1, 5, u 11, en donde el mamífero es un humano. 20.- El método de conformidad con la reivindicación 1, 5, u 11, en donde el compuesto es el compuesto de la fórmula IB: IB. 21.- El método de conformidad con la reivindicación 1, 5, u 11, en donde el compuesto es el compuesto de la fórmula NA: 22.- Uso de un compuesto de la fórmula a continuación para tratar un tumor o cáncer, dicho uso que también incluye (i) obtener una muestra biológica def tumor o cáncer, (ii) determinar si el tumor o cáncer sobre expresa una Akt kinasa, (iii) si el tumor o cáncer sobre expresa Akt kinasa, tratando el tumor o cáncer con una cantidad efectiva de un com puesto de la fórmula: W en donde cada R2', R3' y R5' son independientemente hidrógeno, fosfato o fosfonato opcionalmente sustituido (incluyendo mono-, di- o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado); acilo (incluyendo acilo inferior); alquilo (incluyendo alquilo inferior); amida, éster de sulfonato incluyendo alquilo o arilalquilo; sulfonilo, incluyendo metanosulfonilo y bencilo, en donde el grupo fenilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustitutos como, por ejemplo, se describe en la definición de un arilo dado en la presente; opcionalmente arilsulfonilo sustituido; un l ípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otros grupo de olvido farmacéuticamente aceptable que, in vivo, provee un compuesto en donde R2', R3' o R5' es independientemente H o mono-, di- o trifosfato; en donde Rx y Ry son independientemente hidrógeno, fosfato opcionalmente sustituido; acilo (incluyendo acilo inferior); amida, alquilo (incluyendo alquilo inferior); polioxialquileno aromático tal como polietilenglicol, arilsulfonilo opcionalmente sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un am inoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otro grupo de olvido farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, el compuesto se administra como un lípido de 5'-fosfoéter o un lípido de 5'-éter. Ri y R2 cada uno es independientemente H, alquilo de cadena recta, ramificada o cíclico opcionalmente sustituido (incluyendo alquilo inferior) , alquenilo, o alquinilo, CO-alquilo, CO-alquenilo, CO-alquinilo, CO-arilo o heteroarilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, arilo CO-sustituido, sulfonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo. 23.- El uso de conformidad con la reivindicación 22, en donde el sujeto ha sido diagnosticado con un cáncer seleccionado a partir del grupo que consiste de mama, páncreas, ovario y colorectal. 24.- El uso de conformidad con la reivindicación 22, en donde el nivel de expresión de Akt kinasa se determina al probar el cáncer para la presencia de una Akt kinasa fosforilada. 25.- El uso de conformidad con la reivindicación 22, en donde el nivel de expresión de Akt kinasa se determina al probar el cáncer para la presencia de Akt klnasa fosforilada con un anticuerpo. 26.- Uso de un compuesto de la fórmula a continuación para tratar un tumor o cáncer en donde cada R2', R3' y R5' son independientemente hidrógeno, fosfato o fosfonato opcionalmente sustituido (incluyendo mono-, di- o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado); acilo (incluyendo acilo inferior); alquilo (incluyendo alquilo inferior); amida, éster de sulfonato incluyendo alquilo o arilalquilo; sulfonilo, incluyendo metanosulfonilo y bencilo, en donde el grupo fenilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustitutos como, por ejemplo, se describe en la definición de un arilo dado en la presente; opcionalmente arilsulfonilo sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otros grupo de olvido farmacéuticamente aceptable que, in vivo, provee un compuesto en donde R2', R3' o R5' es independientemente H o mono-, di- o trifosfato; en donde Rx y Ry son independientemente hidrógeno, fosfato opcionalmente sustituido; acilo (incluyendo aciio inferior); amida, alquilo (incluyendo alquilo inferior); polioxíalquiieno aromático tal como polietilenglicol, arilsulfonilo opcionalmente sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otro grupo de olvido farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, el compuesto se administra como un lípido de 5'-fosfoéter o un lípido de 5'-éter. R1 y R2 cada uno es independientemente H, alquilo de cadena recta, ramificada o cíclico opcionalmente sustituido (incluyendo alquilo inferior), alquenilo, o alquinilo, CO-alquilo, CO-alquenilo, CO-alquinilo, CO-arilo o heteroarilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, ariio CO-sustituido, sulfonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo; en donde el compuesto se administra una vez por semana durante tres semanas seguido por un periodo de una semana en donde el compuesto no se administra. 27.- El uso de conformidad con la reivindicación 26, en donde el horario de dosificación se repite por lo menos dos veces. 28.- El uso de conformidad con la reivindicación 26, en donde el horario de dosificación se repite por lo menos 4 veces. 29.- El uso de conformidad con la reivindicación 26, en donde el tumor se selecciona a partir del grupo que consiste de tumores de mama, páncreas, ovario y colorectal. 30.- El uso de conformidad con la reivindicación 26, en donde se administra por lo menos 1 0 mg/m2 del compuesto. 31 .- El uso de conformidad con la reivindicación 26, en donde se administra 10 mg/m2 o menos del compuesto. 32.- Uso de un compuesto de la fórmula a continuación para tratar un tumor o cáncer a una dosis de 10 mg/m2 o menos en donde cada R2', R3' y R5' son independientemente hidrógeno, fosfato o fosfonato opcionalmente sustituido (incluyendo mono-, di- o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado); acilo (incluyendo acilo inferior); alquilo (incluyendo alquilo inferíor); amida, éster de sulfonato incluyendo alquilo o arilalquilo; sulfonilo, incluyendo metanosulfonilo y bencilo, en donde el grupo fenilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustitutos como, por ejemplo, se describe en la definición de un arilo dado en la presente; opcionalmente arilsulfoniio sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otros grupo de olvido farmacéuticamente aceptable que, in vivo, provee un compuesto en donde R2', R3' o R5' es independientemente H o mono-, di- o trifosfato; en donde Rx y Ry son independientemente hidrógeno, fosfato opcionalmente sustituido; acilo (incluyendo acilo inferior); amida, alquilo (incluyendo alquilo inferior); polioxialquileno aromático tal como polietilenglicol, arilsulfonilo obcionalmente sustituido; un lípido, incluyendo un fosfolípido; un aminoácido; un carbohidrato; un péptido; o colesterol; u otro grupo de olvido farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, el compuesto se administra como un lípido de 5'-fosfoéter o un lípido de 5'-éter. Ri y R2 cada uno es independientemente H, alquilo de cadena recta, ramificada o cíclico opcionalmente sustituido (incluyendo alquilo inferior), alquenilo, o alquinilo, CO-alquilo, CO-alquenilo, CO-alquinilo, CO-arílo 0 heteroarilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxíalquilo, arilo CO-sustituido, sulfonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo; en donde el compuesto se administra una vez por semana. 33,- El uso de conformidad con la reivindicación 32, en donde el régimen de dosificación se repite durante por lo menos dos semanas. 34.- El uso de conformidad con la reivindicación 32, en donde el régimen de dosificación se repite durante tres semanas, y en donde el periodo de tres semanas es seguido por un periodo de una semana en donde no se administra ningún fármaco. 35.- El uso de conformidad con la reivindicación 32, en donde el régimen de dosificación representa un ciclo de dosificación. 36.- El uso de conformidad con la reivindicación 32, en donde el ciclo de dosificación se repite por lo menos dos veces. 37.- El uso de conformidad con la reivindicación 36, en donde el ciclo de dosificación se repite hasta que se logra regresión del cáncer. 38.- El uso de conformidad con la reivindicación 26, 32, ó 36, en donde el fármaco se administra intravenosamente. 39.- El uso de conformidad con la reivindicación 26, 32, ó 36, en donde el sujeto ha sido diagnosticado con un carcinoma, sarcoma, linfoma, leucemia o mieloma. 40.- El uso de conformidad con la reivindicación 26, 32, ó 36, en donde el mamífero es un humano. 41 .- El uso de conformidad con la reivindicación 26, 32, ó 36, en donde el compuesto es el compuesto de la fórmula IB: I B. 42.- El uso de conformidad con la reivindicación 26, 32, ó 36, en donde el compuesto es el compuesto de la fórmula HA: