JPH05507279A - グリセロールジ―およびトリホスフェート誘導体の合成 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 グリセロールジーおよび トリホスフェート誘導体の合成 発明の分野 この発明は生物学的に重要な化合物の調製のための改良された化学合成に関する ものである。より特定的には、この発明はグリセロールジーおよびトリホスフェ ート誘導体、好ましくはヌクレオシドジホスフェートモノ−およびジグリセリド のような、グリセロール脂質のヌクレオシドジーおよびトリホスフェートエステ ルの合成のための改良された方法に関する。新しい合成のグリセロールモノホス フェートアミデート中間体は新規の化合物である。

発明の背景 グリセロールおよびグリセロール誘導体のヌクレオシドジーおよびトリホスフェ ートエステルは当該技術において既知である。それらの中で、ヌクレオシドジホ スフェートジグリセリドか生物学的プロセスにおけるその役割のために特に重要 である。脂質の生合成における天然に存在するりボヌクレオチド、シチジンジホ スフェートジグリセリド（ＣＤＰ−ＤＣ）の合成および生物学的重要性は１９６ ０年初期以来十分に論述されてきた。真核生物においてＣＤＰ−ＤＧはホスファ チジルグリセロール、カルシオリビンおよびホスファチジルイノシトールの前駆 物質であるか、原核生物において、これはホスファチジルセリンおよびホスファ チジルグリセロリン酸に転換される。これらの反応はすべでヌクレオチド、シチ ジン−５′−モノホスフェートの付随的な遊離をともなって進行する。しかし、 これらの転換に伴われる酵素の特異性はＣＤＰ−ＤＧ基質に制限されない。２′ −デオキシシチジン、アデノシン、グアノノンおよびウリジン類似体も図１に示 される生合成経路で活性化されたホスファチジン酸供与体として動き得ることか 示されている。［夕・ンユゲットらのｒＢｉｏｃｈｉｍ、　ＢｉｏｐｈＹＳ、　 Ａｃｔａ　２３９　Ｊ　、２３４−２４３　（１９７１）　、ブアスイスらのｒ Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ　４　３　１　Ｊ　、　４０８−４ １５　（１９７６）コ　。

抗悪性腫瘍剤のシトシンアラビノシド（ａｒａ−（：’）がシチジン部と置換さ れた、ＣＤＰ−ＤＬ類似体（ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−シバルミチン）の化学合成 か、レイツらによって［サイエンス　１９６　Ｊ　、３０３−３０５　（１９７ ７）で報告されている。このａｒａ−Ｃのリン脂質前駆薬が、ラットおよびヒト の肝臓中の酵素がこの類似体をホスファチジルイノシトールへ転換し、それによ ってａｒａ−Ｃ−５’−モノホスフェート（ａｒａ−ＣＭＰ）を遊離するという 点でＣＤＰ−ＤＣそのものと類似の態様で代謝されたことか示された。ａｒａ− Ｃは強力な抗腫瘍剤であるが、癌治療におけるその使用は、そのａｒａ、−ＣＭ Ｐへの転換に必要とされる噴孔類の組織に存在するキナーゼの活性によって制限 される。同様に、他の臨床に使用される抗悪性腫瘍ピリミジンヌクレオシド、た とえば５−フルオロウラシル、５−フルオロデオキシウリジン、および６−アザ ウリンンの効能かキナーゼの活性によって制限される。ホスファチジルイノシト ール合成中のａ　ｒ　ａ−ＣＤＰ−ＤＬ−シバルミチンからのａｒａ−ＣＭＰの 遊離はキナーゼの活性と関係ないのて、リン脂質前駆薬の形式のａｒａ−Ｃおよ び類似の化合物の投与は抗腫瘍活性、およびより低い毒性を向上させると予想さ れる。

潜在的抗腫瘍剤としての、シトシン−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル（ａｒａ −Ｃ）部を含む幾つかのＣＤＰ−ＤＧ類似体の合成が、ターコツトらによってｒ Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂ１０ｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ　６１９　Ｊ　、６０４−６１ ８　（１９８０）において報告されている。

マツシタらは、１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（ａｒａ−Ｃ）、９− β−Ｄ−アラビノフラノシルアデニン（ａｒａ−Ａ）、およびツベルシジン（ｔ ｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）（ＴＵ）のヌクレオシド５′−ジホスフェート−Ｌｌ、２ −シバルミチン誘導体を合成した。ヌクレオチド　ａｒａ−Ｃ，ａｒａ−Ａおよ びＴＵは、様々な型の癌治療のための既知の化学療法剤である。

抗レトロウイルス活性を育する幾つかのＣＤＰ−ＤＧ類似体を含む抗ウイルス性 ヌクレオシドの脂質誘導体の化学合成、特性評価および生物学的活性は、バイカ ル・インコーホレイテッドに譲渡された、１９８９年６月２８日に出願された同 時係属中の出願ＵＳＳＮ３７３．０８８号に開示されている。これらの類似体に おいて、ＣＤＰ−ＤＧのシチジン部分は、たとえば３′−デオキシチミジン（３ ｄＴ）、３’−アジド−３′−デオキシ−チミジン（ＡＺＴ）または２′、３′ −ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）によって置換された。これらの化合物は後天性 免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の作因である、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ’ ）の強力な抑制剤である。この出願はさらに他の多数の抗ウイルス性ホスファチ ジルヌクレオシドおよびヌクレオシドジホスフェートモノ−およびジグリセリド をそれらの合成のための方法とともに開示する。

低い収率のＣＤＰ−ＤＣ化学合成が、ポーラス、Ｈｌおよびケネデ４．Ｅ−Ｐ、 によってｒＪ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、２３５　Ｊ　、１３０３　（１９６０ ）においてまず記述され、その後アグラノフおよびスオミによって、ｒＢｉｏｃ ｈｅｍ、　Ｐｒｅｐ、　１０　Ｊ　、　４７−５１　（１，９６３）によって記 述された。後者の化学者たちは無水ピリジン中でＤＬ−ホスファチジン酸（ＤＬ −ジアシルグリセロールリン酸）とシチジン−５′−モノホスフェート−モルホ リレートを縮合して、ＣＤＰ−ＤＧを形成した。

本質的に同じ合成が、各種のＣＤＰ−ＤＧ類似体の調製のために当該技術におい て一般に続けられた。しかし、この合成ルートは未反応のホスファチジン酸か存 在するために長い反応時間と厄介な精製手順を伴い、結果として純粋精製物の収 率か低くなる。アグラノフおよびスオミによって報告された合成は６５時間を要 し、７０％純粋ＣＤＰ−ＤＬ−シバルミチンの収率が３０〜６０％の間であった と記述された。アグラノフおよびスオミ論文の５０頁の脚注に従って、追試験者 はＬ−ホスファチジン酸を使用して８９％の純度を有する精製物について３２％ の全収率を得た。

アグラノフースオミ合成に追従した後の著者は最終精製物に対して２０ないし３ ０％収率を輿望的に報告した［たとえばカーマンおよびフィッシュルのｒＪ、　 Ｆｏｏｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

４　Ｊ　、　５３−５９　（１９８０）を参照］。

さらに、アグラノフおよびスオミ合成を行なう際、ベンゼン中の反応物の凍結混 合物がまず凍結乾燥され、ベンゼンが完全に除去されると、無水ピリジンか導入 される。反応の成功は、ピリジンにおける反応物のベンゼンから凍結乾燥された 後の溶解度に関係すると思われる。もし凍結乾燥が正しく行なわれると、けば立 った白い物質が形成され、これはピリジン中に容易に溶解される。しかし、凍結 乾燥ステップはうま（いかないことが多く、その結果、反応が起こらない。これ らの問題は、カーマンおよびフィッシュルによって、上記文献において扱われ、 彼らは触媒として４−ジメチルアミノピリジンを使用して、ピリジンの代わりに クロロホルム中で反応を行なうことによってアグラノフースオミ方法を修正した 。この修正は凍結乾燥ステップを除去し、その結果約４８時間で約４０％の収率 が得られた。

英国特許出願第２．１６８．３５０号（ホン）は１−０−アルキル−２−０−ア シルグリセロ−３−リン酸から誘導された新しいヌクレオシド接合体の調製を記 述している。新しい化合物は本質的にアグラノフおよびスオミ方法に従い、かつ 他の技術に一致して主に調製され、約３０％の収率か最終精製物について報告さ れた。対応するヌクレオチドとの対応するリン脂質モルホリゾートの反応も、ホ ンの出願において提示された唯一の実例（例３、方法Ｂ）に従って考慮されたが 、この反応ルートは明らかにアグラノフおよびスオミ方法に優るいかなる利点も 提示しなかった。ａｒａ−ＣＭＰとのラセミ１−０−ヘキサデシル−２−〇−バ ルミトイルグリセロー３−ホスフェートモルホリゾートの反応は７日間進行する ことが許容され、所望のラセミ１−０−ヘキサデシル−２−〇−バルミトイルグ リセロー３−リン酸の収率は３０％であると報告された。

ホンが、ホスファチジン酸誘導体とヌクレオシド−５′−モノホスフェートモル ホリゾートを反応させる伝統的アプローチに優る特定の利点のいかなるものも、 適当なヌクレオシドとのホスファチジン酸モルホリゾートの反応に起因するとは 考えなかったという事実は、彼の後の研究によって支持される。たとえば、ホン らのｒＪ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ。

３３　Ｊ　、　１３８０−１３８６　（１９９０）に従って、千オニーチル脂質 の１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンおよびシチジン接合体がｌ−３−ア ルキルホスファチジン酸誘導体および対応するヌクレオシドモルホリゾートから 調製され、１５−３８％の全収率が報告された。

発明の概要 トジグリセリドの調製のための当該技術において周知の合成が、ホスファチジン 酸誘導体とヌクレオシド−５′−モノホスフェートモルホリゾートを反応させる 代わりに、まずホスファチジン酸誘導体が対応するアミデート、たとえばモルホ リゾートに転換され、これがその後所望のヌクレオシド−５′−一リン酸の遊離 酸、または塩の形と反応されるようなものに修正されるならば、その収率が実質 的（こ増加され、かつ反応時間が著しく短縮されるということを発見した。アミ デートの代わりに、リン酸ヒドロキシルの１つが脱離基によって置換された他の ホスファチジン酸誘導体が使用されてもよく、類似の結果を伴う。

たとえば、ヌクレオシドジホスフェートジグリセリドがこの発明の改良された方 法によって合成されたとき、その反応時間は７日間から３ないし１０時間に短縮 され、収率は約６０ないし８０％に増加された。さらに、ヌクレオシドジホスフ ェートジグリセリドの精製が極めて容易にされる。新しいルートによる標的化合 物の合成の際、ホスファチジン酸は反応混合物中にほぼ完全に存在せず、このこ とは所望の生成物の精製を大幅に簡略化し、かつスピードアップする。粗反応混 合物は単一のＨＰＬＣ手順にお（１て容易に精製されることができ、結果的に純 粋化合物のより速い溶出、およびより高い収率が得られる。

改良された結果はヌクレオシドジホスフェートジグリセリド合成に制限されない 、すなわちこの発明に従った合成ルートはヌクレオシド、ホスホノホルメートな らびにヌクレオシドホスホノホルメートおよびその類似体のような様々な化合物 のモノグリセリドジホスフェート、ジグリセリドジホスフェートおよび対応する トリホスフェート誘導体の調製に一般に適用可能であることがさらにわかった。

したかってこの発明はビロリン酸結合によって末端のリン酸基を有する化合物へ モノグリセリド、またはジグリセリドモノホスフェート種を結合するための改良 された方法を提供する。−局面において、この発明はモノ−１またはジグリセリ ドジー、またはトリホスフェート誘導体の合成のための改良された方法に関する ものであり、式８式％ この式てＲ１およびＲ２は、独立して水酸基、または１ないし２４の炭素原子と ０ないし６の不飽和部位を育する分岐された、もしくは分岐されない脂肪族基で あり、Ｌは脱離基である、リン脂質は、 無水条件下で塩基性触媒を存在させて末端のモノホスフェートまたはジホスフェ ート基を有する化合物と反応され、それによってグリセリドジーまたはトリホス フェート誘導体が形成され、 ただし、前記第２の化合物が、リボースまたはアラビノースであるペントースに 付加された、アデニン、シトシン、５−フルオロウラシル、５−アザシトシン、 ６−メルカブトプリン、もしくは７−ジアザアデニン基を含むヌクレオシドまた はヌクレオシド類似体であるとき、前記リン脂質誘導体は１−０−アルキル−２ −０−アシルグリセロ−３−ホスフェートモルホリゾートではない。

脱離基りは好ましくはアミンであり、これはモルホリへまたはイミダゾール基で あり得、このプロセスは約４℃と８０℃の間の温度で、好ましくは室温で行なわ れ、結合反応のための好ましい溶媒はピリジンであり、無水ピリジンが特に好ま しい。

別の局面において、この発明は式（Ｉ　Ｉ）Ｈ，Ｃ−Ｒ’ のグリセリドジーまたはトリホスフェート誘導体およびその塩の調製のためのプ ロセスに関し、 この式でＡは酸素、硫黄、またはメチレンであり、ｋはＯまたはｌてあり、かつ Ｎｕはヌクレオシド、またはヌクレオシド類似体であり、このプロセスは、 上に規定された式（１）のリン脂質誘導体を、式を有するモノ−またはジホスフ ェートと反応させるステ・ツブを含み、 この式でＡ、Ｎｕ、およびｋは無水条件下で塩基性触媒の存在において、上に規 定されたとおりてあり、それによってリン脂質ヌクレオシド誘導体が形成され、 ただし、Ａが酸素であり、かつｋかＯであり、前記第２の化合物が、リボース、 またはアラビノースであるペントースに付加された、アデニン、シトシン、５− フルオロウラシル、５−アザシトシン、６−メルカプトプリン、もしくは７−ジ アザアデニン基を含むヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体であるとき、前記 リン脂質誘導体はｌ−０−アルキル−２−０−アシルグリセロ−３−ホスフェー トモルホリゾートではない。

この発明の方法において、グリセリドモノホスフェート種およびヌクレオシド反 応物の間のモル比は約２．ｌと約１＝２との間であり、好ましくは２：ｌと１＝ ２との間であり、最も好ましくは約ｌ＝１である。好ましい塩基性触媒はピリジ ンであり、反応は好ましくは溶媒としての無水ピリジン中で行なわれる。反応時 間は好ましくは１０時間を超えない。反応温度は好ましくは約４°Ｃと約８０° Ｃとの間であり、最も好ましくは室温である。

この発明はたとえば高速液体クロマトグラフィーによって、またはＤＥＡＥセ’ ７７デツクス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）　（登録商標）カラム上で行なわれる、得ら れたヌクレオシドジホスフェートジグリセリドを精製するさらなるステップを含 む。

このプロセスは天然に存在する複合脂質、たとえばシトシンのジホスフェートジ グリセリド（ＣＤＰジグリセリド）を含む、アデニン、グアニン、シトシンおよ びチミンの天然に存在するリボースおよび２′−デオキシリボース誘導体の任意 のグリセリド誘導体の調製において使用されることができる。

このプロセスはヌクレオシド類似体のグリセリド誘導体の調製において使用され ることができ、ここでプリンもしくはピリミジン塩基、または糖部のいずれかは 天然に存在する塩基、または糖の類似体である。このプロセスはヌクレオシドを 含むアラビノースの脂質誘導体、たとえば１−（２′−デオキシ−２′−フルオ ロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードシトシン（ＦＩＡＣ）、１−（２’− デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウ ラシル（Ｆ　ＴＡＵ）、１−（２’　−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ −アラビノフラノシル）−５−メチルウラシル（ＦＭＡＵ）、１−　（２’−デ オキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノ−フラノシル）−５−エチルウ ラシル（ＦＥＡＵ）　、９−β−Ｄ−アラビノフラノシル−アデニン（ａｒａ− Ａ）、または１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（ａ　ｒ　ａ−Ｃ）、非 環式ヌクレオシド類似体、たとえば９−（２−ヒドロキソ−エトキシメチル）グ アニン（アシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）　、ＡＣＶ）の調製において特に 役立つ。

この発明は式 ％式％ この式てＤは−（ＣＨｔ　）、Ｃ（０）Ｏ−基であり、ｍは０またはｌてあり、 ｋはＯまたはＩであり、 Ｎｕはヌクレオシド、またはヌクレオシド類似体てあり、ｎは０または１である 、 ホスホノ酸グリセリドリン酸誘導体およびその塩の調製のための改良されたプロ セスをさらに提供し、このプロセスは、上に規定された式（１）のグリセリドモ ノホスフェート誘導体を、 式 を有するホスホノ酸と、またはカルボキシエステルによってヌクレオシドもしく はヌクレオシド類似体へ結合され、かつ式 を有し、この式でり、に、Ｎｕおよびｍは無水条件下で塩基性触媒の存在におい て、上に規定されたとおりであるホスホノ酸に反応させるステップを含む。

この発明の好ましい実施例において、Ｒ１およびＲ１の少なくとも１つは構造 ＣＨ２−（ＣＨｔ　）、−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２）、−（ＣＨ２）。−Ｙ− を有し、ここでａ、ｂおよびＣの和は１から２３であり、ｂは０ないし６であり 、ｙｉｔ−ｃ　＜ｏ＞　ｏ−１−ＣＨｚ−０−１−ＣＨ＝ＣＨ−０−１−Ｃ（０ ）Ｓ−１−ＣＨ，−８−１または−ＣＨ＝ＣＨ−５−である。

この発明に従ったプロセスのさらに好ましい実施例に従って、ヌクレオシド、ま たはヌクレオシド類似体のジグリセリドモノ−もしくはジホスフェートか、また はホスホノ酸、ホスホノヌクレオシド、もしくはホスホノヌクレオシド類似体の ジグリセリドである化合物は、公式ＣＨ３（ＣＨ，）、−Ｃ（０）Ｏ−を有しこ の式でａはｌＯから１６の整数である、Ｒ’およびＲ１の少なくとも１つを含む 。

この発明の合成に従うと、グリセリドジホスフェート、またはトリホスフェート 誘導体はそれらの塩、たとえば金属塩の形で得られ得る。このような塩の調製も この発明の範囲内である。

前述のプロセス全体において、出発リン脂質誘導体における脱離基は好ましくは アミノ基であり、最も好ましくはモルホリノ基、またはイミダゾール基のような 環式アミノ基である。

さらなる局面において、この発明は式（１）％式％ の新しいリン脂質誘導体に関し、この式でＲ１およびＲ２は、独立して水酸基、 または構造ＣＨｓ　−（ＣＨ，）、−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ，）、−（ＣＨ，）、 −Ｙ−を有する脂肪族基であり、ａ、ｂおよびＣの和は１から２３でありｂはＯ ないし６であり１．Ｙは−Ｃ（０）Ｏ−１−ＣＨｔ　−０−１−ＣＨ＝ＣＨ−０ −１−Ｃ（０）Ｓ−１−ＣＨ，−３−１または−ＣＨ＝ＣＨ−３−であり、かつ Ｌはアミノ基である。モルホリンが好ましいアミノ基である。

好ましいグリセリドモノホスフェート誘導体は、１、　２−ジラウロイル−８ｎ −グリセロ−３−ホスホロ−モルホリゾート、 １．２−シミリストイル−８ｎ−グリセロ−３−ホスホロ−モルホリゾート、 １．２−ジパルミトイル−５ｎ−グリセロ−３−ホスホロ−モルホリゾート、 １、　２−ジオレオイル−８ｎ−グリセロ−３−ホスホロ−モルホリゾート、 １−０−ヘキサデシル−３ｎ−グリセロ−３−ホスホロ−モルホリゾートである 。

さらなる実施例において、この発明は、置換置が上記に規定されるような式（１ ）の新しい中間体を、置換基が前述のものと同じ意味を有する式（Ｖｌ）ＨｔＣ Ｒ’ のリン脂質を対応するアミンと反応させることによって調製するプロセスに関し 、それによつて式Ｉのリン脂質誘導体が生成される。

図面の簡単な説明 図１はＣＤＰ−ＤＧ経路を介する哺乳類におけるホスファチジルイノシトール（ ＰＩ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）およびカルシオリビンの生合成を 示す。３つの変換はすべてシチジン−５′−モノホスフェ−１−（ＣＭＰ）の遊 離を生じる。

図２はこの発明に従ったヌクレオシドジホスフエートジグリセリドの化学合成の 好ましい実施例を示す。文字Ｘ１Ｙおよびｎは説明文に規定されるとおりである 。

図３はＡＺＴ−５’−ジホスフェート−（１，２−シミリストイル）グリセロー ル（ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＧ）の２つの異なる合成の収率および反応時間の比較で ある。点線、方法Ａ３本発明、直線、方法Ｂ：従来の手順（アグラノフおよびス オミ、上記文献）。この図は方法Ａの利点を明瞭に示す。異なる収率かＨＰＴＬ Ｃに伴うＰ、およびＵＶ強度に基づいて定量的に得られた。最終収率はＨＰＬＣ 精製後決定された。

図４は方法ＡおよびＢによってそれぞれ得られた粗反応混合物からのＡＺＴ−５ ’−ジホスフェート−（１，２−シミリストイル）グリセロール（ＡＺＴ−ＤＰ −ＤＭＧ）の精製のＨＰＬＣプロファイルを示す。溶媒：ｎ−へキサン／２−プ ロパノ−ルー２５％ＮＨＩ　／　Ｈ！　Ｏ（４３：　５７　：　３　：　７ｖ／ ｖ）ｏ　２０ｆ３ｎｍにおける検出、流れ７１４ｍ１７分。Ａ：方法Ａ、Ｂ：方 法Ｂ。ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＧ（１２分で溶出）はホスファチジン酸（ＰＡ）（２ ５−３０分で溶出）からうまく分離される。予備ＨＰＬＣ中、方法Ｂにおける多 量の残留ＰＡは生成物のピークと部分的に重なり、それによって純粋生成物の収 率がより低くなる。

図５は方法ＡおよびＢにそれぞれ従ったＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＧの合成によって得 られた粗反応混合物のＨＰＴＬＣの図を示す。プレートムニリン試薬で染色され た。プレートＢ：２５４ｎｍにおける紫外吸収検出。

レーン１：５時間後の方法Ａ レーン２：１０時間後の方法Ａ レーン３：１０時間後の方法Ｂ レーン４：５日後の方法Ｂ ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＣ生成物は矢印によって示される。

方法Ｂにおける多量の残留ＰＡに注目されたい（生成物下のプレートＡにおける レーン３および４）。

図６は、ＵＶ吸収によるＨＰＴＬＣ後に異なるスポットのリン（Ｐｉ）含量を決 定することによって分析されるような、１．　２−シミリストイルホスファチジ ン酸のモルホリゾート（ＤＭＰＡモルホリゾート）との３′−デオキシチミジン −モノホスフェート（３ｄＴＭＰ）の反応の時間推移を示す。

Ａ＝３　ｄＴ−ＤＰ−ＤＭＧ Ｂ＝未知の生成物、Ｐｉ陽性（強） Ｃ＝未知の生成物、ＵＶ陽性、Ｐｉ陽性（弱）Ｄ＝ＤＭＰＡモルホリゾート Ｅ＝３ｄＴＭＰ この明細書および請求の範囲の中で使用される用語「ヌクレオシド」は天然に存 在するヌクレオシドおよびそれらの類似体を含む。天然に存在するヌクレオシド はりポース（リボヌクレオシド）、または２′−デオキシリポース（デオキシリ ボヌクレオシド）５−炭素の環式糖基に結合されたピリミジン、またはプリン塩 基、たとえばアデニン、グアニン、シトシン、ウラシル、イノシン、またはチミ ンを含むヌクレオシド種のものである。リボヌクレオシドおよびデオキシヌクレ オシドは５′部位でリン酸化され、生体内でＲＮＡおよびＤＮＡ内のそれぞれに 酵素的に構築される。

ヌクレオシド泡似体は、天然に存在するリボース基の類似体に付加された、天然 に存在するプリンまたはピリミジン塩基、天然に存在するヌクレオシドにあるリ ボースまたは２′−デオキシリポース基に付加された、プリンまたはピリミジン 塩基の類似体を含むか、代替的にヌクレオシド類似体の塩基およびリボース部の 両方が天然に見られる部分と異なってもよい。ヌクレオシド類似体は天然に存在 する塩基、または非リボース糖部に付加された塩基類似体のいずれかを含んでも よい。プリン、またはピリミジン塩基およびリボース基の類似体は両方、新しい 置換基をそこに付加させることによって、天然に存在する置換基をそこから欠失 させることによって、または通常存在する原子を他のものと置換させることによ って、対応する天然に存在する部から異なり得る。

天然に存在するヌクレオシドはプリンの９の位置の窒素を介して、かつピリミジ ンの１の位置の窒素を介してリボース、またはリボース残基にプリン、またはと りミシン塩基を付加させる。これらの窒素はβ−Ｎ−グリコジル結合によってペ ントース残基のｌ′炭素に結合される。ヌクレオシド類似体はたとえばピリミジ ンの１の位置よりもむしろ３の位置の窒素を介するような、天然に存在しない結 合でペントース部に付加されるプリン、またはピリミジン塩基を含んでもよい。

ヌクレオシド類似体は、腫瘍細胞の増殖、またはウィルスの複製の過程において ＤＮＡ、またはＲＮＡ合成を抑制するので、細胞毒性、または抗ウイルス効果を 有すると思われる。

これらの効果を有するとわかった特定のクラスのヌクレオシド類似体は次のとお りである。

方の位置のヒドロキシル基が水素によって置換される、たとえば２’、３’−ジ デオキシシチジン（ｄｄｃ）、２’　。

３′−ジデオキシイノシン（ｄｄｉ）、２’、３’−ジデオキシアデノシン（ｄ ｄＡ）、３’−デオキシチミジン（３ｄＴ）、および２’、３’−ジデオキシグ アノシン（ｃｌｄＧ）である。ジデオキシヌクレオシドが成長するＤＮＡｊＪＩ 内に取り込まれるとき、そのリポース基土に３′−ヒドロキシル基かないために 別のヌクレオシドに付加することが不可能になり、鎖が終結される。ジデオキシ ヌクレオシドは、ＡＩＤＳ、多毛細胞白血病、局所産学性不全対麻痺およびＢ型 肝炎のようなウィルスの複製かウィルスの逆転写酵素によるＤＮＡ内へのウィル スＲＮＡの転写を必要とするレトロウィルス感染を治療するのに特に役立つ。

非環式ヌクレオシド　非環式ペントース残基は、水酸化された２−プロポキシメ チル残基、または水酸化されたエトキシメチル残基のような環式ペントースのフ ラグメントである。これらの構造を有する特定のヌクレオシド残基は２−アミノ −！、９−ジヒドロー９−’［（２−ヒドロキシ−エトキン）メチル］６Ｈ−プ リン−６−オン（アシクロビル（ａｃｙｃｌｉｖｉｒ））　、またはガンシクロ ビル（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）（ＤＨＰＣ）　、ペンシクロビル（ｐｅｎｃｙ ｃｌｏｖｉｒ）およびファムシクロビル（ｆａｍｃｙｃｌｏｖｉｒ）を含む。リ ン酸基はこの発明の方法においてヌクレオシドモノホスフェート反応物でペント ースの５′炭素に一般に結合されるが、完全なペントースではないペントース残 基を育する類似体において、もしペントースが完全であったならば５′炭素であ ったであろう炭素にリン酸基か接続されることを認識することが重要である。こ れらのペントースフラグメントにおいて、２′および／または３′炭素が失われ ているであろうか、それらはこの発明の意図するところではヌクレオシド誘導体 であると考えられ、リン酸基かそこに接続される炭素原子は一貫して使用される ために５′炭素とこの中では称されるであろう。

３′−アジド−２’、３’ジデオキシビリミジンヌクレがＮ、によって置換され る、たとえばＡＺＴ、ＡＺＴ−Ｐ−ＡＺＴ、ＡＺＴ−Ｐ−ｄｄａ、ＡＺＴ−Ｐ− ｄｄ　ｉ、ＡｚｄｄｃＩＵ、ＡｚｄｄＭｅＣ，ＡｚｄｄＭｅＣＮ４−ＯＨ，Ａｚ ｄｄＭｅＣＮ４ＭｅＳＡＺＴ−Ｐ−ＣｙＥ−ｄｄａ、ＡｚｄｄＥｔＵ　（Ｃ３− ８５）　、ＡｚｄｄＵ　（Ｃ３−８７）　、ＡｚｄｄＣ（Ｃ３−９１）　、Ａｚ ｄｄＦＣ。

ＡｚｄｄＢｒＵ、およびＡｚｄｄＩＵである。

アラビノース含有ヌクレオシド　ヌクレオシドの天然（こ存在するペントース部 、リボースかその２′−エピマ、アラビノースによって置換され、これはフラノ ース形であってもよく、たとえば、 １−　（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨー ドシトシン（Ｆ　ＩＡＣ）、１−（２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β− Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（ＦＩＡＵ）、１−（２′−デ オキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−メチルウラ シル（ＦＭＡＵ）、１−（２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラ ビノ−フラノシル）−５−エチルウラシル（ＦＥＡＵ）、９−β−Ｄ−アラビノ フラノシル−アデニン（ａｒａ−Ａ）、９−β−Ｄ−アラビノフラノシルグアニ ン（ａｒａ−Ｇ）、ｌ−β−Ｄ−アラビノフラノシルリジン（ａｒａ−Ｕ）、■ −β−Ｄ−アラビノフラノシルーチミン（ａｒａ−Ｔ）、および１−β−Ｄ−ア ラビノフラノシルシチジン（ａｒａシトペントースの３′−ヒドロキシル基がハ ロゲン、通常フッ素によって置換される、たとえば３′−フルオロ−５−メチル −デオキシシチジン（ＦｄｄＭｅＣ７ｔ）、３’−クロロ−５−メチル−デオキ シシチジン（Ｃｌ　ｄ　ｄＭｅＣｙｔ）、３−ＦｄｄＣＩＵ、３−ＦｄｄＵ、３ −ＦｄｄＴ、３−ＦｄｄＢｒＵ、および３−ＦｄｄＥｔＵである。

２’、３’、−ジデヒドロ−２’、３’　−ジデオキシヌクレオシド（Ｄ４ヌク レオシド）　たとえば２’、３’−ジデヒドロ−２’、３’−ジデオキシチミジ ン（ｄｄｅＴｈｄまたはＤ４Ｔ）　、Ｄ４Ｃ，Ｄ４ＭｅＣ１およびＤ４Ａである 。

他のヌクレオシド類似体は１つより多い類似の特徴を含み、たとえば５−Ｆ−φ ｄＣ，２’、３’−ジデオキシー３′−フルオロチミジン（ＦｄｄＴｈｄ）、３ ′−フルオロ−５−メチル−デオキシシチジン（ＦｄｄＭｅＣｙｔ）、３′−ク ロロ−５−メチル−デオキシシチジン（ＣｌｄｄＭｅＣｙｔ）、３’−アミノ− ５−メチル−デオキシシチジン（ＡｄｄＭｅＣｙｔ）　、ｄｄＤＡＰＲ（ジアミ ノプリン）　、ｄｄＭｅＡ　（Ｎ６メチル）、および糖置換されたジデオキシプ リンヌクレオシドを含むクラス、たとえば３−Ｎ、ｄｄＤＡＰＲ，３−Ｎ、ｄｄ Ｇ、３−ＦｄｄＤＡＰＲ。

３−ＦｄｄＧ、３−ＦｄｄａｒａＡ、および３−ＦｄｄＡ６−メルカブトプリン ー２′−デオキシリボシド、１゜７−シヒドロー６Ｈ−プリン−６−千オン（ブ リネトール（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ）　、バローズーウエルカム、リサーチ・ト ライアングルバーク、　Ｎ　Ｃ２７７０９）、チオグアニン、２−アミノ−１， ７−シヒドロー６Ｈ−プリン−６−チオン−２′−デオキシリボシド（タブロイ ド（Ｔａｂｌｏｉｄ）　（登録商標）、バロースーウエルカム）、ＦＵＤＲ１２ ′−デオキシ−５−フルオロウリジン（フロックスラリジン（Ｆｌｏｘｕｒｉｄ ｉｎｅ）（登録商標）、ロツシュ・ラボラトリーズ、ナラツリー、ＮＪＯ７１１ ０）。

この発明に従って脂質誘導体を調製する際使用するための好ましいヌクレオシド 類似体はＡＩＤＳ治療に使用されるものであり、３′−アジド、３′−デオキシ チミジン（アジドチミジンまたはＡＺＴ）、３′−デオキシチミジン（３ｄＴ） 、２’、３’−ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）、２’、３’−ジデオキシアデノ シン（ｄｄＡ）、および２’、３’−ジデオキシグアノシン（ｄｄＧ）を含む。

ＡＺＴ、３ｄＴ、ｄｄＣ，およびｄｄＧか現在量も好ましい類似体である。

カルボビル（ｃａｌｂｏｖｉｒ）　、炭素環式２’、３’−ジデヒドログアノシ ンと同様ジデヒドロピリミジンもまた好ましい。デオキシグアノシン（ＡＺＧ） およびピリミジンであるデオキシウリジンの３′−アジド誘導体、ならびにデオ キシチミジンおよびデオキシグアノシンの３′−フルオロ誘導体も同様に好まし い。２’、６’−ジアミノプリンの中で、２’、３’−デオキシリボシドおよび その３′フルオロならびに３′−アジド誘導体が好ましい。非環式糖誘導体の中 で、９−　（４，−ヒドロキシービ、２′−ブタジェニル）アデニン（アデナレ ン（ａｄｅｎａｌ　１ｅｎｅ））およびそのシトシン等漬物が好ましい。プリン 、またはジアミノプリン塩基を育する好ましい非環式誘導体は９−（２−ホスホ ニルメトキシエチル）アデニンおよびホスホノメトキシエチルジオキシジアミノ プリン（ＰＭＥＤＡＤＰ）である。

２′−フルオロ−ａｒａ−ｄｄＡのようなこれらのヌクレオシドの立体異性体は 、グリコンド結合の酸触媒された加水分解に対するそれらの抵抗性のために有利 であり、このことによってそれらの抗ウィルス活性が延長されるであろう。この ような場合、それらは好ましい。

抗ウイルス効果を有するヌクレオシド類似体のジグリセリドジホスフェート誘導 体は、ヘルペス、サイトメガロウィルスおよびＢ型肝炎感染の治療においてヌク レオシド類似体単独よりもより効果があることがわかっている。したがって、ア シクロビル、ガンシクロビル、ｌ（２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β− Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードシトシン（Ｆ　ＩＡＣ）、ｌ　（２′− デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウ ラシル（ＦＩＡＵ）、１−　（２’−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ− アラビノフラノシル）−５−メチルウラシル（ＦＭＡＵ）　、または１−（２′ −デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−エチル ウラシル（ＦＥＡＵ）の脂質誘導体がこれらの感染の適当な治療において使用さ れてもよい。

同時係属中の特許出願、１９８９年６月２８日に出願されたＵ　Ｓ　Ｓ　Ｎ３７ ３．０８８号、および１９８９年１１月２２日に出願されたＵ　Ｓ　Ｓ　Ｎ４４ ０．８９８号に開示されたこれらのおよび類似のヌクレオシド類似体のすべて、 特に抗ウイルス性ヌクレオシド類似体は、引用によって援用され、この発明に関 して使用されるように用語「ヌクレオシド」によって包含される。

ここに説明されるリン脂質の中で、［グリセロールモノホスフェート誘導体Ｊ、 「グリセロールジホスフェート誘導体」および「グリセロールトリホスフェート 誘導体」という言葉およびその用語上の変形物は、明細書および請求の範囲にわ たって使用されるように、グリセロール誘導体に言及し、そこでこの構造のグリ セリルヒドロキシル基の１つは１つ、２つまたは３つのホスフェート基を含む部 によって置換される。「グリセリド」は脂質部を含み、グリセロールホスフェー ト誘導体のグリセリルヒドロキシルの１つまたは双方は以下に記載されるように 脂肪族基によって置換される。

好ましいのはグリセロールモノ−、ジーおよびトリホスフェート誘導体であり、 そこではモノ−、ジーまたはトリホスフェート基によって置換されない１つまた は双方のグリセリルヒドロキシルはエステルまたはエーテル結合によってグリセ リル部に連結された脂肪族炭化水素鎖によって置換される。

「ホスファチジン酸」という言葉はグリセロール部の２つのヒドロキシル基か０ １４４脂肪酸基によってエステル化され、第３のものはホスフェート基によって エステル化されるリン脂質を説明するために非常にしばしば使用される。

明細書および請求の範囲にわたって使用されるように、この言葉は天然に存在す るホスファチジン酸、合成ホスファチジン酸種、およびラセミの、ｓｎ−グリセ ロール−１−リン酸およびＳｎ−グリセロール−３−リン酸を含むホスファチジ ン酸の合成類似体を含む。天然に存在するホスファチジン酸はホスホリパーゼＤ てのホスファチジルコリンのような植物または動物ホスホグリセリドの開裂によ って容易に入手可能であり［ケイプ、エム（Ｋａｔｅｓ、　Ｍ、）およびサスト リー、シー−ニス（Ｓａｓｔｒｙ、　Ｃ，Ｓ、）、「酵素化学における方法（Ｍ ｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ＥｎｚｙｍｏｌｏｇＶ）　Ｉ　４　Ｊ　、１９７−２０３ （１９６９年）］、たとえば当該技術分野において既知の方法によって卵レシチ ンから分離され得る。天然に存在するホスファチジン酸は単一の分子種ではなく 、むしろ様々なジアシルグリセロールホスフェートの混合物である。

「ホスファチジン酸」という言葉もまた脂肪族基によって置換されるただ１つの グリセリルヒドロキシル基を有するリゾ種を含むように使用される。それはまた エステル結合よりはむしろエーテル結合において脂肪族基によって置換される１ つまたは双方のグリセリルヒドロキシルを有する種を含む。ホスファチジン酸お よびその合成類似体は、たとえばラビドット（Ｌａｐｉｄｏｔ）他のＣｈｅｍ、 　Ｐｈｙｓ、　Ｌｉｐｉｄｓ３．１２５　（１９６９年）（グリセロ−３−ホス フェートのアンル化）、ならびにエイプル、エイチ（Ｅｉｂｌ、　Ｈ）およびブ ルーム、エイ（Ｂｌｕｍｅ、　Ａ、）、Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　 Ａｃｔａ５５３．４７６　（１９７９年）（１，２−ジアシルグリセロールまた はエーテル類似体のリン酸化）によって説明されるように合成され得る。

「脂肪族基」という言葉は非芳香族基を説明するために最も広い意味で使用され 、水素および炭素のみを含む脂肪族基に制限されない。酸素または硫黄のような １つ以上のへテロ原子を含む脂肪族基もまたこの定義内に入る。したかって、こ の定義は脂肪族炭化水素部に付加されるエステル、チオエステル、エーテルまた はチオエーテル基を含む。

ホスファチジン酸の好ましい基は以下の式（Ａ）によって包含可能であり、 ここで、Ｒ１およびＲ２は同一または異なり、Ｔから２４の炭素原子、および０ から６の不飽和部位を有する脂肪族炭化水素基である。Ｒ’およびＲ２によって 表わされる脂肪族炭化水素基は構造ＣＨ，−（ＣＨｔ　）、−（ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ Ｈ，’）、−（ＣＨ２’）　ｅを好ましくは有し、ここでａ、ｂおよびＣの和は １から２３てあり、ｂは０がら６である。式（Ａ）に示されるようにアシルエス テル結合におけるこれらの脂肪族基は、ラウリン酸、ミスチリン酸、バルミチン 酸、ステアリン酸、アラキシン酸およびリグノセリン酸のような天然に存在する 飽和脂肪酸、ならびにパルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リルン酸お よびアラキドン酸のような天然に存在する不飽和脂肪酸を含む。他の実施例にお いて、脂肪族基Ｒ１およびＲ１は同一の炭素原子数の分岐鎖てあってもよく、第 一級または第二級アルカノールまたはアルコキシ基、シクロプロパン基および内 部エーテル結合を含む。

「離脱基」という言葉はたとえばヌクレオシド−５′−モノホスフェート（遊離 酸または塩の形のいずれか）のような末端リン酸基を含む対応する化合物との凝 縮反応の条件下で、それが付加されるリン脂質誘導体（たとえばホスファチジン 酸）のリン酸部から容易に除去される任意の基に言及するために使用される。こ の発明の合成において、アミデートが好ましく使用されるので、離脱基は好まし くはアミノ基である。しかしながら、リン酸ジフェニル（ハインツ（ｆ（ｅｉｎ ｚ）他、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｊｏｃｈｅｍ、１８４．４４５（１９８９年）］、 またはビロリン酸ジフェニルのような他の離脱基もまた適切である。

「アミノ基Ｊという言葉は広い意味で使用され、第一級、第二級および第三級ア ミン、たとえばジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン（ モノ−、ジーもしくはトリーＣｌ−１１１−アルキル）アミンなどの脂肪族アミ ン、ジフェニルアミン、ベンジジンもしくはトルイジンのような芳香族アミン、 またはピリジン、ピコリン、ビロール、ピラゾール、キノリン、カルバゾールも しくはキナルジンのような複素環アミンを含み、アミノ基の窒素原子は複素環の 一部である。実際、好ましいホスファチジン酸アミデートはホスファチジン酸モ ルホリゾートであり、ここで　「アミノ基Ｊはモルホリノ基である。他の適切な アミデートはイミダゾリデート、アミンデート、ピペリデートおよび１，１′− カルボニル−ジイミダゾールを含むが、それらに制限されない。この発明のリン 脂質アミデート（式■）は新しい化合物であり、遊離酸または塩の形で対応する リン脂質を適切なアミンと反応させることによって調製され得る。ホスファチジ ン酸モルホリゾートの調製は以下の例において例示される。

この発明のプロセスで使用される塩基性触媒はホスフェート基のヒドロキシルを ０−に変換させる機能を果たし、たとえばピリジンまたは４′−ジメチルアミノ ピリジンであってもよい。

２、好ましい実施例の説明 この発明の好ましい実施例に従って、ヌクレオシドジホスフェートまたはトリホ スフェートジグリセリドは、対応するホスファチジン酸モルホリゾートを無水ピ リジン中のヌクレオシド−５′−モノホスフェートまたは一５′−ジホスフェー トと反応させることによって調製される。ホスファチジン酸モルホリゾートは調 製され、例において以下に示されるように、塩の形態、たとえば４′−モルホリ ン−Ｎ、Ｎ’　−ジシクロへ牛ジルカルボキシアミジニウム塩の形態で反応し得 る。同様に、標的ヌクレオシドジーまたはトリホスフェートジグリセリドは当業 者に既知であるように好ましくは無機塩基である塩基との処理によって、たとえ ば金属塩のようなその塩の形態で入手され得る。

ホスファチジン酸モルホリゾートは好ましくはクロロホルムおよびｔｅｒｔ−ブ タノールの溶剤混合物において、「遊離」ホスファチジン酸およびモルホリンか ら調製され得る。結果として生じるホスファチジン酸モルホリゾートは凍結乾燥 される。その後、凍結乾燥されたモルホリゾートおよび対応するヌクレオシド− ５′−モノホスフェートは無水ピリジンに溶解され、その反応は室温で進行する ようにされる。ホスファチジン酸モルホリゾートおよびヌクレオシド−５′−モ ノホスフェートのモル比は典型的に約２＝１および１：２の間であり、好ましく は約２：１およびｌ：１の間である。この反応の進展は薄層クロマトグラフィー （ＴＬＣ）によってモニタ可能である。反応の速度は実際の反応物に依存して変 化する。幾つかの例において最適の変換は１時間未満で達成される。一般に、こ の反応は約５ないし１０時間以内に完了する。収率は典型的に約６０％と約８０ ％との間である。

入手されたヌクレオシドジーおよびトリホスフェートジグリセリドは実質的にホ スファチジン酸を含まず、それはその精製を非常に単純化しかつ速度を速める。

粗反応混合物は単一のＨＰＬＣ方法で容易に精製可能であり、結果として非常に 多量の純粋な生成物およびより速い溶出をもたらす。

代替的に、ホスファチジン酸モルホリゾートはまた遊離酸形態への予めの転換な しに、ホスファチジン酸の二ナトリウム塩から直接合成され得る。これは少量の メタノール／水（１：Ｉｖ／ｖ）か透明溶液を得るために通常加えられることを 除いては、上に説明されたのと同一の反応条件下で行なわれる。このプロセスの この変形物によって得られた収率は、出発化合物として遊離ホスファチジン酸を 使用した場合に得られた収率と大きく変わらない。また、このようにｍｓされた モルホリゾートは対応するヌクレオシド−５′−モノ−またはジホスフェートと 同様によく反応する。

この発明の方法に従って調製され得るヌクレオシドジホスフェートジグリセリド の好ましい基は以下の式（ＩＩ）によって包含され、 Ｈｚ　ＣＲ’ Ｒ，およびＲ２は個々にヒドロキシル基、または１から２４の炭素原子およびＯ ないし６の不飽和部位を有する脂肪族基であり、 Ａは酸素、硫黄またはメチレンであり、ｋは０または１であり、 ｎは０またはＩであり、さらに Ｎｕはヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体である。

この発明の方法は、たとえばアデニンジホスフェートのような天然に存在するヌ クレオシドのグリセロール、モノグリセリドおよびジグリセリド誘導体を調製し 、かつ脂質代謝の天然に存在する中間体、シチジンジホスフェートジグリセリド を調製するために使用され得る。

この方法はまた細胞毒性および抗ウイルスヌクレオシド類似体のジグリセリドジ ホスフェート誘導体を調製する際にも有用である。特に好ましいのはこのグルー プ内であり、（３′−アジド−３′−デオキシ）チミジン−５′−ジホスフェー ト−（１，２−ジラウロイル）グリセロール（ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＬＧ）、 （３′−アジド−３′−デオキシ）チミジン−５′−ジホスフェート−（１，２ −シミリストイル）グリセロール（ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＧ）、 （３′−デオキシ）チミジン−５′−ジホスフェート−（ｌ、２−ジラウロイル ）グリセロール（３ｄＴ−ＤＰ−ＤＬＧ）、 （３′−デオキシ）チミジン−５′−ジホスフェート−（１，２−シミリストイ ル）グリセロール（３ｄＴ−ＤＰ−ＤＭＧ）、 （２’、３’−ジデオキシ）シチジン−５′−ジホスフェート−（１，２−ジラ ウロイル）グリセロール（ｄｄＣ−ＤＰ−ＤＬＧ）、 （２’、３’−ジデオキシ）フチジン−５′−ジホスフエー）−（１，２−シミ リストイル）グリセロール（ｄｄｅ−ＤＰ−ＤＭＧ）、 アシクロビル−ジホスフェート−（１，２−ジパルミトイル）グリセロール、 アソクロビルージホスフエ−１−−（１，２−シミリストイル）グリセロール、 アシクロビル−ジホスフェート−（１−０−ヘキサデシル）グリセロール、 １．２−ジラウロイルグリセロ−３−ホスフェート−（ピロ）−ホスホノホルメ ート、 １．２−シミリストイルグリセロ−３−ホスフェート−（ピロ）−ホスホノホル メート、 １−（２’−デオキソ−２′−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５− ヨードウラシル−５′−ジホスフェート−Ｌ−（１，２−ジパルミトイル）グリ セロール（Ｆ　ＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧ）である。

この発明の他の好ましい実施例に従って、ホスホノ酸ジアシルグリセロールリン 酸は対応するホスファチジン酸のモルホリゾートを調製し、ホスホノホルメート またはホスホノアセテートであり得る対応するホスホノ酸と結合することによっ て合成される。他の好ましい実施例において、この新しい合成はたとえばカルボ キシルエステル結合によって細胞毒性または抗ウィルス活性を有するものを含む ヌクレオシドが結合されるジアシルグリセロールホスフェートホスホノ酸の調製 に適合される。化合物のこれらのクラスは抗ウイルス特性を育し、同時係属中の 出願ＵＳＳＮ４４０．８９８　（１９８９年１１月２２日出願）において開示さ れる。好ましいホスホノ酸誘導体は１，２−ジラウロイルグリセロ−３−ホスフ ェート−（ピロ）−ホスホノホルメート、または１．　２−シミリストイルグリ セロ−３−ホスフェート−（ピロ）−ホスホノホルメートである。

上に説明された化学反応はこの発明の方法に対する最も広い適用の点から一般に 開示される。しばしば、この反応は開示された範囲内で提案される各化合物の合 成に対して説明されるように適用可能ではないかもしれない。これが現われる化 合物は当業者によって容易に認識されるであろう。すべてのかかる場合において 、いずれの反応もたとえば妨害基の適切な保護によって、代替の従来の試薬に変 えることによって、または反応条件の通常の変更によって、当業者に既知の従来 の変更によってうまく行なわれ得る。

すべての調製方法において、すべての出発材料は既知であるかまたは既知の出発 材料から容易に調製可能である。

当業者は前の説明を使用して、この発明を最大限利用可能であると考えられる。

したがって以下の好ましい実施例は単に例示的に解釈され、制限的に解釈される ものではなく、開示の残りの部分もいかなる態様においても同様である。

例１ ヌクレオシドジホスフェートジグリセリドの調製Ａ、材料および方法 ノラウロイルおよびシミリストイルホスファチジン酸、二ナトリウム塩はアバン ティ・ポーラ−・リピッズ（ＡＶａｎｔｉ　Ｐｏ１ａｒ　Ｌｉｐｉｄｓ）　（ペ ルハム（Ｐｅｌｈａｍ）　、ＡＬ、　ＵＳＡ）から入手された。

ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）５０Ｗ（５０ｘ２−２００．１００−２００メツシ ユ）、２’、３’−ジデオキシ−シチジンおよび３′−デオキシチミジンはシグ マ・ケミカル・カンパニー（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　（セン トルイス（Ｓｔ、　Ｌ。

ｕｉｓ）、ＭＯ，ＵＳＡ）からの製品てあり、３′−アジド−３′−デオキシチ ミジンおよび３′−アジド−３′−デオキシチミジン−５′−モノホスフェート はバローズーウエルカム（Ｂｕｒｒｏｕｇｈｓ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）　、リサー チ・トライアングル・パーク（Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｔｒｉａｎｇｌｅ　Ｐａｒｋ ）　、ＮＣ２７７０９）から入手された。モルホリン、ジシクロへキシルカルボ ジイミド（Ｄ　ＣＣ’）および第三級ブチルアルコール（２−メチル−２−プロ パツール、ｔＢｕＯＨ）はアルドリッチ・ケミカル・カンバー１−−（Ａｌｄｒ ｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　（ミルウォーキー（Ｍｉ　１ｗａｕｋｅ ｅ）、ＷＩ）から入手可能な最も高いグレードであった。

オキシ塩化リン、トリメチルホスフェート、シリカ６０Ｆ２５４ＨＰＴＬＣプレ ート（１０Ｘ２０ｃｍ）、シリカ６０Ｆ２５４アルミニウムブレー）　（５ｘｌ 　Ｏｃｍ）、ＨＰＬＣグレードの溶剤（リクロソルブ（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｌｖｅ ））およびすべての他の化学製品は、そうでないと述べられない限りメルク（Ｍ ｅｒｃｋ）　（ダームスタート（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ）、ＦＲＧ）からのもので あった。

はじめに、デオキシヌクレオシド−ジホスフェート−ジグリセリドの合成はアグ ラノフ（Ａｇｒａｎｏｆｆ）およびスオミ（Ｓｕｏｍｉ）　、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 　Ｐｒｅｐ、　１０．４６−５１　（１９６３年）によって報告された方法に本 質的に従って行なわれた。

精製された化合物の分析および定性はＵＶ／Ｐｉ比、ＩＲ−および’　Ｈ−ＮＭ Ｒスペクトルによって行なわれた。図２は化合物の新しく展開された合成のため の全体の反応スキームを示す。この方法を以下により詳細に説明する。

Ｂ、ヌクレオシドのリン酸化 （ＣＨｆｆ　Ｏ）！　ＰＯ中でＰＯＣＩＩを用イル保護されていないヌクレオシ ドのリン酸化は、ヨシカワ（Ｙｏｓｈｉｋａｗａ）７年）によって説明されたよ うに本質的に行なわれた。３−４　ｍ　ｌ　（ＣＨ−０）　ｓ　Ｐ　Ｏ中の２ｍ ｍｏ　Ｉ　ＰＯＣｌｚの冷却された溶液（０°Ｃ）に、ヌクレオシド（Ｉｍｍｏ ｌ）か攪拌しなから一滴ずつ加えられ、反応温度は０と５℃との間で一定に保た れた。反応の進展はＭｏｎｏ、Ｑ　ＨＲ５１５陰イオン交換カラム（ファーマシ ア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、アブサール（Ｕｌ）ｐＳａｌａ）、スウェーデン（ Ｓｗｅｄｅｎ））を使用してＨＰＬＣによってモニタされた。典型的に５μｍの 反応混合物か水酸化ナトリウム水（最終ｐＨ７）と中和され、カラム上に注入さ れた。溶出か以下のように行なわれた、つまり水て洗浄し、ヌクレオシド−５′ −モノホスフェートを溶出するＯ、ＩＭ　ＮＨ，ＨＣＯｆｆての溶出の後、幾つ かのより高いリン酸化された生成物を溶出する０、１−０．６Ｍ　ＮＨ４ＨＣＯ ｓの線状勾配が続いた。反応はこの方法によって判定されたように４５ないし７ ５分内に大半は完了し、反応生成物は加水分解され、水酸化ナトリウム水の２容 積で７の最終ｐＨに中和された。反応混合物の分析のための精製は上述のとおり てあった。この方法によって、１０−２０ｍｇのヌクレオシド−５′−モノホス フェートか精製され得る。より多くの量か同一の溶出条件を使ってセファロース （Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）　Ｑ高速流カラム上で精製された。

収率は水からの繰返しの凍結乾燥の後８０と９６％の間で変化した。ＴＬＣ分析 （シリカ６０／Ｆ２５４プレート、メルク）は単一のＵ、　Ｖ、およびＰｉ陽性 スポットを示し、展開系１−プロパツール／２５％ＮＨ，／Ｈ，Ｏ（容積で２０ ：２０＋３）：３’−アジド−３′−デオキシチミジン−５′−モノホスフェ− １−Ｒ，＝ｏ、６３　；　３’−デオキシチミジン−５′−モノホスフェートＲ ｆ＝０．６１および２’、３’　ジデオキシシチジン−５′−モノホスフェート Ｒｆ＝０．５１を使用した。

Ｃ，ホスファチジン酸塩の遊離酸形感への転換ホスファチジン酸、二ナトリウム 塩かブライ（Ｂｌｉｇｈ）およびダイヤ−（Ｄｙｅｒ）、Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｂｉ ｏｃｈｅｍ、３７．９１１−９１７（１９５９年）に従う抽出方法の適用によっ て酸性化された。Ｉｍｍｏｌの脂質が１．００ｍ１のＣＨＣＩＩ、２００ｍ１の ＭｅＯＨ，１００ｍ１の０．１Ｍ　ＨＣＩの均一混合物で溶解され、１時間室温 で攪拌された。それから１００ｍ１のＨ，Ｏおよび１００ｍ１のＣＨＣｌｔが加 えられ、分離されたＣＨＣＩＩ層は分離され、水相が２００ｍ１のＣＨＣｌ、で ２回抽出された。結合されたＣＨＣ１、抽出物は乾燥するまで蒸発され、凍結乾 燥された。収率：遊離酸として９５−１００％ホスファチデート。

ジン酸（Ｉｍｍｏｌ）は２０ｍ１のＣＨＣＩＩに溶解され、この溶液は２０ｍ１ のｔ−ＢｕＯＨ１４ｍｍｏｌのモルホリンおよび４ｍｍｏｌのＨｔＯを含む２０ 丸底フラスコ、に移された。この混合物はゆっくり還流され、２０ｍ１のｔ−Ｂ ｕＯＨ中の４ｍｍ０１のＤＣＣの溶液が２時間以内に滴下漏斗から１滴ずつ付加 された。この反応はシリカ６０Ｆ２５４８ＰＴＬＣプレートおよび展開系として ＣＨＣ１ｓ　／　Ｍ　ｅ　ＯＨ／　２５％　ＮＨｆｆ／Ｈｔ　Ｏ（７０：　３８ 　：Ｆ３　：　２Ｖ／Ｖ）を使用して、薄層クロマトグラフィーによってモニタ された。反応は主要なＰ、−陽性スポット（Ｒ１＝０．９）の出現およびＲ，＝ ０．０９でのホスファチジン酸のＰ、−陽性スポットの消失によって完了された ことか判定された。反応混合物は乾燥され、５０ｍ１のＲ２０で懸濁され、滴下 漏斗に移された。懸濁液はジエチルエーテルで３回抽出され、乾燥するまで蒸発 され、凍結乾燥された。４′−モルホリン−Ｎ、　Ｎ’−ジシクロヘキシルカル ボキシアミジニウム塩として１．２−ジアシル−８ｎ−グリセロ−３−ホスホロ −モルホリゾートの収率７０−９５％であった。この化合物はヌクレオシド−ジ ホスフェート−ジグリセリドの合成のためにさらなる精製なしに使用の反応は本 質的に上述のように行なわれた。しかしながら、ときどき反応混合物を最少量の メタノール／水（１；Ｊ、Ｖ　／　Ｖ　）を加えることによって清浄しなければ ならなかった。水相はクロロホルムまたはジエチルエーテルで抽出され、蒸発さ れ、凍結乾燥され、さらなる精製なしに縮合反応で使用された。

ホスファチジン酸モルホリゾートおよびヌクレオシド−５′モノホスフエートの 凍結乾燥された混合物は、ピリジンで溶解され、装置にＮ２を通しただけて乾燥 するまで蒸発された。この方法は数回繰返され、それから最終的な量のピリジン が透明な溶液を与えるために加えられた。ピリジンの約５０％が蒸発され、反応 容器は装置（Ｎ２流）から取り除かれ、きつく栓をされ、その反応は展開系とし てＣＨＣ１ｓ　／　Ｍ　ｅ　ＯＨ／　２５％　ＮＨ，／Ｈｔ　Ｏ（７０／３８／ ８／２、ｖ　／　ｖ　）を使用するＴ　Ｌ　Ｃｉニーよって３０分毎に調へられ た。この反応はヌクレオシドに依存して０゜２５と０．３０との間のＲ１値で主 要なＵＶおよびＰ、−陽性スポットの出現によって判定されるように５−ｉｏ時 間内に完了した。

ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＧ　（化合物ｌ）の合成反応物のモル化の反応の収率に対す る影響は、モルホリゾートに基づいて０．１４ミリモルスケールで２：１．１： １およびｌ：２の割合のシミリストイル−ホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）モルホ リゾートおよびＡＺＴ−５’　−モノホスフェートを、縮合することによって研 究された。

最終積１１’（以下を見られたい）後の重量およびＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＧ　（化 合物ｌ）に対する９５６の分子量に基づく収率は理論収率の８１％、８０％およ び約６０％であった。

以下の化合物２−５は、図２に与えられた構造に従って、示された置換基を育す る適切なＰＡモルホリゾートおよびヌクレオシドモノホスフェートを選択し、そ れらを１．１割合で反応させることによって、類似の態様で、かつ示される収率 て入手された。

化合物　収率 （２）　３ｄＴ−ジホスフェートジラウロイルグリセロール： Ｘ＝Ｈ；Ｙ＝チミン；ｎ＝１０　’　５７％（３）　３ｄＴ−ジホスフェートシ ミリストイルグリセロール： Ｘ＝Ｈ：Ｙ＝チミン：ｎ＝１２　３７％（４）　ｄｄＣ−ジホスフェートジラウ ロイルグリセロール： Ｘ＝Ｈ；　Ｙ＝シトシン；ｎ＝１０　５２％（５）　ｄｄＣ−ジホスフェートシ ミリストイルグリセロール： Ｘ＝Ｈ；Ｙ＝チミン；ｎ＝１２　６１％ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＧはまた類似の収率 でＤＭＰＡ−モルホリゾートおよびＡＺＴ−５’−モノホスフェートのｌ：１の 割合で５０μモルスケール上で合成された。

粗反応生成物はさらなる処理なしにｆｆＩｊ製された。凍結乾燥された反応混合 物は、溶出溶剤または代替的にクロロホルムとメタノールの１　：　ｌ　（ｖ、 　／ｖ。）混合物で溶解され、シリカμ登録商標ボラシル（Ｐｏｒａｓｉｌ）カ ラム（ウォーターズ・アソシエーツ・インコーホレーテッド（Ｗａｔｅｒｓ　Ａ ｓ５ｏｃｉａｔｅｓ　Ｉｎｃ、）　、ミルホード（Ｍｉｌｆｏｒｄ））　、ＭＡ 、　ＵＳＡＳ　１９ｍｍ　Ｎ、Ｄ、）ｘ３０ｃｍ　（長さ））、および溶剤系へ キサン／２−プロパツール／２５％ＮＨ，／Ｈ。

０　（４３：５７：３ニアｖ／ｖ）、［ゲルツ・パン・ケラセル（Ｇｅｕｒｔｓ 　ｖａｎ　Ｋｅｓｓｅｌ）他、Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ ４８６．５２４−５３０　（１９７７年）］を使用して、ＨＰＬＣによって精製 された。検出は２０６ｎｍでＵＶ吸収によって行なわれた。この方法によって、 ５０−１００ｍｇの粗生成物が３０分で精製された。

Ｒ１は展開系ＣＨＣ１ｓ　／　Ｍ　ｅ　ＯＨ／　２５％　ＮＨ，／Ｈ，０７０／ ３８／８／２、ｖ　／　ｖ　）を使用するＴＬＣで、ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＣ＝０． ３０　；　３ｄＴ−ＤＰ−ＤＣ＝０゜２９およびｄｄＣ−ＤＰ−ＤＧ＝０．２５ の値となった。

化合物が一２０℃で貯蔵された場合、３力月の期間にわたってほとんど分解は観 察されなかった（く５％）。

Ｇ、論議 反応物のモル比のＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＣ；の合成の収率に対する影響が決定され た。２：ｌおよびｌ：１比のＤＭＰＡ−モルホリゾート／ＡＺＴ−５’−モノホ スフェートは同等の結果を生じることが発見され、それから等モル比が日常使用 された。この結果はこれらの化合物の小規模の（５０μｍｏ　ｌ　ｅ）合成によ って確認された。

図３において、収率とＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＧの合成の反応時間との比較が、ヌク レオシド−ジホスフェート−ジグリセリドの調製のための２つの縮合方法の間で 行なわれる。

方法Ａはこの発明に従うプロセスであり、一方、方法Ｂは文献で広く使用されて きた方法、つまりホスファチジン酸およびヌクレオシド−５′−モノホスホロモ ルホリゾート（アグラノフ他、上述）の縮合である。反応は０．０５から０．５ ｍｍｏｌにおいて変化するスケール上で行なわれ、その後ＨＰＴＬＣによって質 的に追跡され、収率は説明されたようにＨＰＬＣによる精製の後生成物の重さを 測ることによって定量化された。

その図は方法Ａによって化合物を合成するのに非常に育利な２つの特徴を明らか に示す。まず、反応時間がかなり低減され、２番目に反応の収率が６０−８０％ に増大される。

化合物２−５の合成の幾分低い収率は恐らくは幾つかの残留する炭酸水素アンモ ニウムのためであり、それはヌクレオシド−５′−モノホスフェートの精製方法 の間に導入され、この現象はまた方法Ｂを使用する場合にも観察された。精製さ れたヌクレオシド−ホスフェートの完全脱塩はこの効果を恐らくはなくすであろ う。

化合物の精製を考慮すると、この方法は合成が方法Ａによって行なわれる場合に 非常に容易にされることが認められた。図４Ａおよび図４Ｂは化合物１のＨＰＬ Ｃ精製の図を示し、それらはそれぞれ方法ＡおよびＢによって合成された。図５ は反応混合物のＨＰＴＬＣ写真を示す。ＨＰＴＬＣおよびＨＰＬＣ双方のプロフ ァイルの比較は、ホスファチジン酸かほとんどまったくないこと（図４Ａおよび 図５Ａ、レーンｌおよび２）、またはそれぞれの反応混合物におけるその余分な 存在（図４Ｂおよび図５Ａ、レーン３および４）を示す。方法Ａの反応混合物に おける所望の生成物の濃縮もまた、方法Ｂのそれと比べた場合にホスフェート含 有およびＵＶポジティブ化合物の双方に対してはっきりと可視化される。

ヌクレオシド−ジホスフェート−ジグリセリドの合成に関する文献のいたるとこ ろで、これらの化合物の精製は困難であることが知られてきた。たとえばアグラ ノフ、ビー・ダブりニー（Ｂ、Ｗ、　）およびスオミ、ダブリュー・ディー（Ｗ 、　Ｄ、　）、「生化学調製物（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉ ｏｎｓ）」、　１０：４７−５１　（１９８３年）、ブロツティ、シー（Ｐｒｏ ｔｔｅｙ、　Ｃ，）およびホーソン、ジエイ・ダブリｘ−（Ｈａｗｔｈｏｒｎｅ 、　Ｊ、　Ｗ、）　、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　、１０５　：　３７９−３９１ 　（１９６７年）、マッコス、エム（ＭａｃＣｏｓｓ。

Ｍ、）他、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏａｕｎｕｎ、 、８５（２）＋７１４−７２４　：ターコッテ、ジエイ（Ｔｕｒｃｏｔｔｅ、　 Ｊ、）他、Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、６１９：６０４− ６１８　（１９８０年）、およびリュー、イー・ケイ（Ｒｙｕ、　Ｅ、　Ｋ、） 他、Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　、　２５　：　１３２２−１３２９　（１９ ８２年）を見られたい。これらの問題は主に反応混合物中の相当な量の残留ホス ファチジン酸のためである。しかしながら、新しいルートによって化合物を合成 する場合には、ホスファチジン酸はほとんどまったく存在せず、かつゆえに精製 は単純化されスピードアップされる。

結論として、本発明者らは新しい方法によって潜在的抗レトロウイルス活性を育 する幾つかの選択されたヌクレオシド−ジホスフェート−ジグリセリドを合成し 、それは１゜２−ジアシル−３Ｏ−グリセロ−３−ホスホロ−モルホリゾ−１− およびヌクレオシド−５′−モノホスフェートの縮合に基づく。この方法はヌク レオシドの性質から独立して、これらの化合物の合成に一般に適応可能であるよ うに見える。この方法は技法の状態と比べて幾つかの利点を有する。

この反応の収率は改良され（最大６０−８０％まで）、かつ反応時間は数日から ５−１０時間（またはそれ以下）までかなり低減される。同様に重要である他の 局面は精製方法の単純化であり、それは反応混合物中にホスファチジン酸が事実 上ないためである。このために、粗反応混合物は単一のＨＰＬＣ方法において容 易に精製され、より多くの量の純粋な生成物およびより速い溶出を与える。

アシクロビル−ジホスフェート（１，２ジアシル）グリセロールの合成 この発明の方法に従うアシクロビル誘導体の調製はアシクロビルモノホスフェー トの不溶性のために特に困難を示す。この困難は以下の方法によって克服される 。

方法Ａ、アシクロビル−ジホスフェート（１，２−シミリストイル）グリセロー ル（ＡＣＶ−ＤＰ−ＤＭＧ）１グラムのシミリストイルホスファチジン酸のナト リウム塩（アバンティ・ポーラ−・リビッズ、バーミンガム（Ｂｉｒｍｉｎｇｈ ａｍ）、ＡＬ）が例１、パートＣで説明されたように遊離酸に転換された。乾燥 シミリストイルホスファチジン酸は例１、バートＤに説明されたように対応する モルホリゾートに転換された。１．４８ｇの凍結乾燥されたモルホリゾート化合 物および０．６１０ｇの乾燥アシクロビルモノホスフェートが５０ｒｎｌの乾燥 ピリジンで結合され、ロータリーエバポレータ上で真空下で乾燥するまで蒸発さ れた。最後に、５０ｍ１の乾燥ピリジンが加えられ、はぼ２０ｍ１まで凝縮され た。アシクロビルモノホスフェートを溶液にするために、ｌｏｍｌの無水ジメチ ルスルホキシド（ＤＭＳ　Ｏ’）を加え、かつ反応容器を２時間８５°Ｃまで加 熱し、４５°Ｃでさらに１６時間加熱することを必要とした。精製されたアシク ロビル−５′−ジホスフェート−（Ｉ、２−シミリストイル）グリセロールは例 １で説明されたようにＨＰＬＣによって分離され、１ｇ−２０分てカラムから溶 出した。フラクションが結合され、凍結乾燥されて白い粉末を生じた。代替的に 、アシクロビルシボスフエートジグリセリドは以下の例４で認められるようにＤ ＥＡＥセファデックスカラムクロマトグラフィーによって精製されてもよい。こ の化合物はクロロホルム／メタノール（１：ｌｖ／ｖ）で溶解され、シリカゲル Ｇプレートの原点て斑点状にされ、クロロホルム／メタノール／濃縮アン％ニア 　（７０：　３　８　：　８ｖ／ｖ）で展開された。生成物は０−２３のＲｆ値 でＵ、　Ｖ、およびリン陽性スポットをルミ）イル）’ｊ’Ｊ（？ロール（ＡＣ Ｖ−ＤＰ−ＤＰＧ）ジパルミトイルホスファチジン酸モルホリゾート（ＤＰＰＡ モルホリゾート）は、直接活性化のためにホスファチジン酸のナトリウム塩を使 用して、例Ｉに説明されたように調製された。

４ｍｌメタノール中の８０μｍｏｌのＡＣＶＭＰ　（、遊離酸として）の瞥濁液 に、１６０μｍｏｌのトリブチルアミン（ＴＢＡ）またはトリオクチルアミン（ ＴＯＡ）が、ローズマン、ニス（Ｒｏｓｅｍａｎ、　Ｓ、）他、Ｊ、　Ａｍｅｒ 、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、８３：６５９−６７５　（１９６１年）の方法に従 って加えられた。混合物は室温で激しく攪拌され、１５ないし３゜分径透明な溶 液が入手された（しばしば付加的な塩基を加えなければならなかった）。メタノ ールの蒸発および凍結乾燥後、ＡＣＶＭＰのＴＢＡ−およびＴＯＡ−塩がピリジ ン中で容易に可溶性であった。

無水ピリジン中の４０μｍｏｌのＡＣＶＭＰ　（ＴＢＡ−またはＴＯＡ−塩とし て）の溶液に、２ｍｌ無水ピリジン中の４０または８０μｍｏｌのシミリストイ ルホスファチジン酸モルホリゾート（ＤＰＰＡモルホリゾート）が加えられた。

水浴中で６０℃で２０＊Ｒ加熱した後、反応はプリジンの蒸発および水相として Ｏ，ＩＮ　ＨＣＩを使用する粗混合物の抽出によって停止された。

Ｃ：反応混合物の分析 メタノール水溶液およびクロロホルム層の双方の了りコートは展開系としてクロ ロホルム／メタノール／２５％アンモニア／水（７０：５８：８：８）、ｖ／ｖ ）を使用して、ＨＰＴＬＣ（シリカ６０Ｆ２５４プレート、１０×２０ｃｍ）に よって紫外線吸収材料について分析された。ＵＶ陽性スポットはプレートからこ すり落とされ、シリカは２ｍｌのクロロホルム／メタノール１０．ＩＮ　Ｈｃｌ （１：２＋１、Ｖ　／　Ｖ　）で抽出され、両方の相における材料の量は２５６ ｎｍで分光光度的に決定された。比率Ａ（２５６、水溶液）：Ａ（２５６、クロ ロホルム）は少なくとも４５：５５であった。クロロホルム層には１つのＵＶ陽 性スポットしかなかったので、ＡＣＶＤＰ−ＤＧ−ＤＰＧの収率は約５５％であ った。

Ｄ　：ＡＣＶＤＰ−ＤＰＧの精製 上述のように約１．８ｍｍｏｌのＡＣＶＭＰ−ＴＢＡ塩の２．５ｍｍｏｌのＤＰ ＰＡモルホリゾートとの縮合によって得られるＡＣＶＤＰ−ＤＧ−ＤＰＧを含む 粗反応混合物は、ブライ、イー・ジーおよびダイヤ−、ダブリュー・ジエイ（Ｃ ａｎ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、３７：９１１−９１７（１９５９年））に従 ってクロホルムで３回抽出され、結合されたクロロホルム層は乾燥するまで蒸発 された。残渣は１５ｍ１のクロロホルム／メタノール／水（２：　３　：　１、 Ｖ／Ｖ）で分散され、この混合物は４０℃で３０秒加熱すると清浄された。この 溶液はＱ−セファロース高速流カラム（４，９ｃｍ　ｃｉ、ｄ、）Ｘ１８ｃｍに 与えられ、このカラムは６００ｍ１のクロロホルム／メタノール／水（２：３　 ：　１．ｖ／ｖ）で洗浄された。それからクロロホルム／メタノール／水（２： 　３　：Ｌ　ｖ／ｖ）からクロロホルム／メタノール１０．２５Ｍ　ＮＨ−ＨＣ Ｏｓ　（２：　３　：ＬＶ　／　Ｖ　）への２０００ｍ１の線状勾配が与えられ 、想定上の生成物は勾配の終わりで広いピークにおいて溶出する。

ＵＶＦＩｊ性フラクシミンは展開系としてクロロホルム／メタノール７２５％ア ンモニア／水（７０：５８：８：８、Ｖ／Ｖまたは７０：３８：８：２、ｖ　／ 　ｖ　）でＨＰＴＬＣ上て分析された。すべてのフラクションはＡＣＶＤＰ−Ｄ ＧのＵＶおよびＰ、陽性スポットを含んだ（７０：５８：８：８でＲｆ＝０．３ および７０：３８：８：２でＲｆ＝０．１）。主な汚染物は展開系およびホスフ ァチジン酸双方においてＲｆ＞５で識別されないＰ、陽性化合物であった（７０ ：５８：８：８でＲｆ＝０．３かつＲｆは７０：３８：８：２でＡＣＶＤＰ−Ｄ Ｃ（０，１）より少し上である）。すべての生成物含有フラクションは貯蔵され 、乾燥するまで蒸発され、凍結乾燥され、残留する炭酸水素アンモニウムを取り 除くために抽出された（ブライおよびダイヤ−）。

結合されたクロロホルム層は乾燥するまで蒸発され、展開系として１５ｍ１の温 かいクロロホルム／メタノール／２５％アンモニア／水（７０：３８：８：２、 ｖ　／　ｖ　）で溶解され、貯蔵され、乾燥するまで蒸発され、凍結乾燥された 。

この化合物は１．０５の脂肪酸対Ｐ、比率（シャピロ、ビー（Ｓｈａｐｉｒｏ、 　Ｂ、）、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　、５３　：　６６３　（１９５３年））を 有し、ＰＡがないことを確認した。

クロロホルム／メタノール／水（２：３：１、ｖ／ｖ）において２５４ｎｍ（ｍ ａｘ）でＥ＠＝１３．０００である。

赤外分析法（ＫＢｒディスク法）：　１７３５ｃｍ”’、（Ｃ＝Ｏ）エステル（ 脂肪酸）、１２３１ｃｍ−’、（Ｐ＝Ｏ）、１０６７ｃｍ”’、（Ｐ−０−＝Ｃ ）、９５７ｃｍ−’（Ｐ−０−Ｐ）および５２２ｃｍ−’、（Ｐ−０−Ｐ）。

ＡＣＶＤＰ−ＤＧおよびグリセロール−３−ホスフェートでのラットミトコンド リアのインキュベーションは化合物がホスファチジルグリセロール（ＰＧ）の生 合成において基質として活性であることを示した。

例２の方法は比較的可溶化するのが困難であるグアノシン含有ヌクレオシドまた はヌクレオシド類似体に特に適切アシクロビル−ジホスフェート （Ｉ−〇−オクタデシル）グリセロールの合成無水ピリジン中の、ＴＢＡ−また はＴＯＡ−塩としてのアシクロビルモノホスフェート（ＡＣＶ−ＭＰ）の４０μ ｍｏ１ｓの溶液に、無水ピリジンの２ｍｌ中の１−〇−オクタデシル、２−アセ チル−グリセロール−３−ホスフェートモルホリゾートの４０または８０μｍｏ ｌが添加されかつ６０°Ｃで一晩反応が行なわれた。この反応は、Ｃａｎ、　Ｊ 。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、３７：９１１−９１７　（１９５９）の、ＢｌｉｇｈとＤｙｅ ｒの方法に従い、ピリジンを蒸発させかつクロロホルム、メタノール、およびＯ ，ＩＮＨＣＬの粗混合物の抽出により停止された。ＡＣＶ−ジホスフェート（１ −０−オクタジン酸は３０ｍ１のクロロホルムに溶解されかつ得られたデシル、 ２−アセチル）グリセロールは、クロロホルム／メタノール１０．２５ＭＮＨ， Ｈｃｏｓ　（２：　３　：　ｌ。

Ｖ　／　Ｖ　）の直線的勾配で溶出されるＱ−セファロース（登録商標）のカラ ムを使用して上記のとおり精製される。純粋のＡＣＶジホスフェート（１−０− オクタデシル、２−アセチル）グリセロールを含むフラクションが混合され乾燥 状態まで蒸発させられた。生成物は少量のクロロホルム／メタノール（１：ｌ） で取出されかツＪ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２４２：６１７−６２０　（１ ９６７）にＣｈａｎｇとＫｅｎｎｅｄ’！により記載されるメタノールＫＯＨで 処理されて２−アセチル基が取除かれた。この塩基はＤｏｗｅｘ−５０Ｗ　（登 録商標）（Ｈ“型）陽イオン交換樹脂（ドライメツシュ、２００−４００）で中 和され、上記のＢｌｉｇｈとＤｙｅｒの方法による脂質抽１出の後、白い粉末の 生成物が得られた。

例４ １−　（２’−デオキシ−２′−フルオロ−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシル）−５ −ヨードウラシル−５′−ジホスフェート−５ｎ−３−（１，２−ジパルミトイ ル）グリセロール（ＦＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧ） ジパルミトイルホスファチジン酸（９５０ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）が例１のバ ートＣに本質的に記載されるような、その二ナトリウム塩から調製された。遊離 ホスファチ却されかつ注射器でオキシ塩化リン（２ｍ１．２０ｍｍ。

溶液は３０ｍ１のｔｅｒｔ−ブタノール、モルホリン（０゜５３ｍ１．６ｍｍｏ ｌ）と蒸留水（０，１ｍｌ、６ｍｍ。

１）とを含んだ二首の丸底フラスコに移された。この混合物はゆっくり還流され かつ３０ｍ１のｔｅｒｔ−ブタノール中のジシクロへキシルカルボジイミド（１ ，２０ｇ、５９ｍｍｏｆ）溶液か滴下ロートから２時間以内で段階的に添加され た。この反応はシリカ６０ＡＦ２５４ＴＬＣプレートと、溶離剤（Ｒｆ＝０．５ ３）としてのクロロホルム／メタノール／水酸化アンモニウム／水（８０：２０ ：ｌ・ｌｖ／ｖ）を利用しての薄層クロマトグラフィによりモニタされた。溶剤 は真空下に蒸発させられかつその残留物か５０ｍ１の水に加えられた。この水性 懸濁物はクロロホルムの７５−ｍ１部で５回にわたって抽出された。クロロホル ムの層が採集されかつ乾燥状態まで蒸発させられ、その後シクロヘキサンから３ 回にわたって凍結乾燥されて白い泡を発生した。引き続く合成工程において、こ の化合物がさらなる精製なしで使用された。

Ｂ、　１−（２’−デオキシ−２′−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル） −５７−モノホスフエート（ＦｒＡＵ−ＭＰ）の合成 Ｆ　ＩＡ、Ｕ　（８００ｍｇ、　２．１．６ｍｍｏ　１）が４５°Ｃで勢いよく 攪拌されてトリメチルホスフェート（２ｍｌ）内に溶解された。反応混合物はア ルゴン下に０°Ｃまで冷１）を添加された。反応混合物はまずｏ’ｃで１時間に わたって攪拌されかつその後−２０°Ｃで１２時間保存された。この反応はＴＬ Ｃ（酢酸：ｎ−ブタノール：水、ｌ：４　：　１　ｖ／ｖ）　ｌ：よりモニタさ れた。Ｆ　ＩＡＵ−ＭＰが白い結晶として沈澱した。上澄み液が捨てられかつそ の後沈＃物は無水エタノール（５ｘｌＯｍＪ）で洗浄された。沈澱物は水（２０ ｍｌ）に再溶解されかつクロロホルムで洗浄された（３Ｘ２０ｍｌ）。水の層が 混合されかつ凍結乾燥されて粗Ｆ　ＩＡＵ−ＭＰを発生させた（８００ｍｇ、１ ゜８３ｍｍｏｌ、８５％の収率）。

分析 ＦＩＡＵ−ＭＰのＨＰＬＣ保持時間はへキサン：２−プロパツール：水酸化アン モニウム：水（４３：５７：３ニア、ｖ／ｖ）で溶出される２５０Ｘ４．６ｍｍ 、５ミクロンのブラウンリー（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ）シリカカラムを利用して１５ ．３分であった。

化合物は酢酸：ｎ−ブタノール：水（＋、：４：１、Ｖ／Ｖ）で溶出したシリカ ６０ＡＦ２５４ＴＬＣプレート上で０．３２のＲｆを育していた。

Ｕ　Ｖ　−−ｘ　；　２５４　ｎ　ｍ　（ヘキサン＝２−プロパツール：水酸化 アンモニウム：水、４３：５７：３ニア、ｖ／ｖ）。

フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨートウ５０ｍ１の丸底フラス コ内に、無水１．　２−ジパルミトイル−６ｎ−グリセロ−３−ホスホロモルホ リゾート（４００ｍｇ、０．５５ｍｍｏ　１）と、Ｆ　ＩＡＵ−ＭＰ　（２００ ｍｇ、０．４８ｍｍｏ　１）か無水ピリジン（１５ｍｌ）中に溶解された。この 溶液は無水ピリジンから真空状態で５回にわたって乾燥状態まで蒸発させられ、 かつその後７ｍｌの無水ピリジンが添加された。この溶液はアルゴン下に一晩室 温で攪拌された。反応の経過はＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：水酸化アン モニウム：水、７０：３８：８：２．Ｖ／Ｖ）によりモニタされた。反応混合物 はその後トルエン（４ＸｌＯｍｌ）から蒸発させられた。この残留物カ月５ｍｌ のクロロホルム：メタノール：水（２：　３　：　Ｉ、ｖ／ｖ）中に溶解されて 、か−）０．ＩＮの塩酸でｐＨ３まで酸性化された。２つの層が形成され、かつ 水溶性の層がクロロホルム（２ＸｌＯｍｌ）で洗浄された。

混合された有機層は乾燥状態まで蒸発させられ、かつその残留物がクロロホルム ：メタノール：水（２：３：１．ｖ／Ｖ）内に溶解されかつＤＥＡＥセファデッ クス（アセテート型）カラム（２，８ｘ３０ｃｍ）に付与された。［ＤＥＡＥ− セファデックス−アセテート型はクロロフォルム：メタノール：水（２：　３　 ：　１）に充填される前に５０％のメタノール水溶液でかつその後メタノールで 洗浄されたコ。このカラムは２５０ｍ１のクロロホルム：メタノール：水（２： 　３　：　１．　ｖ／ｖ）でかつその後同じ溶剤内で製作されたＯ−０，０２Ｍ 酢酸アンモニウムの直線的な勾配で（茶液だめにＩｆ）で溶出された。ＴＬＣで 判断される生成物を含むフラクションがプールされかつ６０ｍ１まで濃縮された 。この混合物はクロロホルム（５Ｘ５０ｍｌ）で抽出されかつ有機層が蒸発させ られてニアンモニウム塩としてのＦ　ＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧを生じた。

分析 Ｆ　ＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧニアンモニウム塩のＨＰＬＣ保持時間は、展開系とし てのへキサン＝２−プロパツール：水酸化アンモニウム：水（４３：５７二３　 ：　７．　ｖ／ｖ）で溶出した２５０Ｘ４．６ｍｍ、５ミクロンブラウンリー（ Ｂ　ｒ　ｏｗｎ　１　ｅ　ｅ）シリカカラムを利用して１２．６５分であった。

この化合物は、クロロホルム：メタノール：水酸化アンモニウム：水（７０：　 ２８　：　８　＋　２．　ｖ／ｖ）で溶出したシリカ６０ＡＦ２５４ＴＬＣプレ ート上に０．２３のＲｆを有していた。

Ｐ：６．３％、ＵＶ−ｍｘ：２７５ｎｍ、Ｅ＝５．９ｘ１０３（クロロホルム中 に１０％のメタノール）。

例４ １、　２−シミリストイルグリセロ−３−ホスフェート−（ピロ）−二ホスホノ ホルメート Ａ、　ホスファチジン酸モルホリゾートの合成シミリストイルホスファチジン酸 （ＤＭＰＡ　：　２５ｍｇ）のナトリウム塩が５ｍｌのクロロホルム中に溶解さ れかつ１ｍｌの０．１ＮＨＣＬで洗浄された。有機泪は無水硫酸ナトリウム上で 乾燥させられかつ窒素下に蒸発させられた。ＤＭＰＡの酸型は５ｍｌのｔｅｒｔ −ブタノールと１ｍｌの蒸留水に溶解された。モルホリン（１’５．２ｍｇ）と ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（３６ｍｇ）か反応容器に添加され かつ９０°Ｃで５時間にわたって還流された。溶剤が真空において取除かれかつ 純粋ＤＭＰＡモルホリゾートを表わすその残留物がクロロホルム／メタノール／ アンモニア／水（容量で７０／３０／１／１）、Ｒｆｏ、７で展開される０、５ ｍｍのシリカゲルＧの層を利用しての薄層クロマトグラフィで精製された。

ホスホノ蟻酸（ＰＦＡ）のナトリウム塩はＤｏｗｅｘＡＧ５０Ｗ−Ｈ”カラム（ Ｂｉｏｒａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ。

ＣＡ）を通すことにより酸型に変換された。この酸型は一晩凍結乾燥され、かつ １２０ｍｇが５ｍｌの乾燥クロロホルムと１ｍｌの乾燥ピリジン内に溶解された ＤＭＰＡモルホリゾート（１２５ｍｇ）を含む反応容器に添加された。

この反応は窒素下に封止されかつ室温で一晩攪拌された。

この反応は１０ｍ１のクロロホルム／メタノール／水（容量で１／２１０．８） の添加により停止されかつクロロホルムの層が、クロロホルムと水それぞれ２． ５ｍｌをさらに添加した後に取除かれた。有機（下部）相は硫酸ナトリウムによ り乾燥させられ、蒸発させられ、かつクロロホルム／メタノール／２０％水性メ チルアミン（容量で６０／３０／１０）の溶媒系で展開されるシリカゲルＧ薄層 上で＃ｌ１１！された。精製された生成物は０．３３のＲｆを有していた。

例５ （３′−デオキシ）チミジン−５′−ジホスフェート−（ｌ、２−シミリストイ ツリグリセロール（３ｄｔ−ＤＰ−ＤＭＧ）の合成 シミリストイルホスファチジン酸モルホリゾート（ＤＭＰＡモルホリゾート）と 、３′−デオキシチミジンモノホスフェ−ト（３ｄＴＭＰ）とが例１に記載され た方法に本質的に従って調製された。この特定的事例においては、６５０μｍｏ ｌのＤＭＰＡモルホリゾートが１０ｍ１ピリジン中の３５０　μｍｏ　ｌ　３　 ｄＴＭＰで凝縮された。ＡＺＴＤＰ−ＤＣの合成に関しては、ＰＡモルホリゾー トとＡＺＴ−ＭＰとの２：Ｉおよび１：ｌ双方の比が同じような収率を生じさせ ることがわかった。

反応過程の分析 ｔｒ　＝Ｑ、　ｓ、　１．１．５．３．２７．７２．１２０および１６８時間で 、反応混合物の組成が、シリカ６０Ｆ２５４プレート（１０ｘ’２０ｃｍ、上下 反対）と、展開系としてのクロロホルム／メタノール／２５％アンモニア／水（ ７０：　３８　：　８　：　２．ｖ／ｖ）を使用してのＨＰＴＬＣにより分析さ れた。上記の時間間隔で、２５０μｍの反応混合物が引出されかつピリジンかゆ るやかな窒素の流れで取除かれた。残留物はクロロホルム／メタノール（１：　 １゜Ｖ　／　Ｖ　）に再び溶解されかつこの溶液が再び窒素の流れにおいて乾燥 させられた。最後に、２５０μｌのクロロホルム／メタノール（１：　１．　ｖ ／ｖ）が添加されかつこのサンプルは分析まで一２０″Ｃで保存された。５μｍ のアリコートが上記のようなＨＰＴＬＣに対して同時に分析された。反応生成物 は、紫外線吸収およびリン試薬を噴霧することにより目に見えるようにされた。

各スポット（第６図＋Ａ＋　Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ）におけるリンの量は、Ｒｏｕｓｅ ｒ他の、Ｌｉｐｉｄｓ　（脂質＞５．４９４−４９６　（１９７０）による方法 を利用して定量化された。１００１０００ｎ／分析での合計Ｐｉの絶対量を設定 することにより標定か行なわれた（回収率はすべての時点で８０％を超えた）。

結果 第６図は異なるスポットのＰｉ含有量により分析される反応の時間経過を示す。

Ａ＝　３　ｄ　ＴＤ　Ｐ−ＤＭＧ これは主に精製における損失に依存する。副産物の形成はＢ＝未知の生成物Ｐ＋ 陽性（強い） Ｃ＝未知の生成物：Ｕ、Ｖ、陽性、Ｐ１陽性（弱い）Ｄ＝ＤＭＰＡモルホリゾー ト Ｅ＝３ｄＴＭＰ。

ｏ　ｏ　ｏ　。

０．５　４７０　２３５　７１ １．０　４４０　２２０　６６ １．５　４５６　２２８　６８ ３．０　４８０　２４０　７２ この反応は、形成された３ｄＴＤＰ−ＤＧの量（Ａ）（７１％）と３ｄＴＭＰ　 （Ｅ）とＤＭＰＡモルホリゾート（Ｄ）における急激な量の減少とにより示され るとおり３０分以内に本質的に終了した。時間の経過とともに、３ｄｔＤＴ−Ｄ ＭＧの収率は改善せずかつ副産物の量はＤＭＰ八モへホリゾートのさらなる反応 の結果として増大する（下降する曲線Ｄ、上昇する曲線ＢおよびＣ）。

記載される反応の収率は約５０％と８０％の間であり、数時間以内に反応を終了 させることにより制御される。

ＦＩＧ、　２ ｎｍｏｌ　Ｐｉ 要　約　書 ホスフェート水酸基の１つが離脱基で置換されるグリセロルモノホスフエート誘 導体のホスフェート基を、無水条件下で、塩基性触媒の存在において、モノ−ま たはジホスフェート化合物もしくはその塩の末端ホスフェート基と結合させるス テップを含む、グリセロリン脂質誘導体の調製方法Ｏ 補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成　４年１１月２７ 町回

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．末端モノまたはジホスフェート基を有する化合物にリン脂質を結合させるた めの方法であって、以下の式を有するリン脂質誘導体が、 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）ここでＲ１およびＲ２は、１から２４ の炭素原子を有しかつ０から６の不飽和部位を有する、独立して水酸基、または 分枝したもしくは分枝していない脂肪族基であり、かつ Ｌは離脱基である、 無水条件化で、塩基性触媒の存在において末端モノまたはジホスフェート基を有 する第２の化合物と反応させられ、これにより、前記第２の化合物が、リボース もしくはアラビノースであるペントースに付加された、アデニン基、シトシン基 、５−フルオロウラシル基、５−アザシトシン基、６−メルカプトプリン基、ま たは７−デアザアデニン基を含むヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体である 場合に、前記リン脂質誘導体が１−Ｏ−アルキル−２−Ｏ−アシルグリセロ−３ −ホスフェートモルホリデートでないことを条件として、グリセリドジ−または トリホスフエート誘導体が形成される、方法。 ２．Ｒ１とＲ２の少なくとも１つが ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２）ｂ−（ＣＨ２）ｃ−Ｙ−という 構造を有し、但しａ、ｂおよびｃの合計が１から２３の範囲であり、ｂが０から ６の範囲であり、かつＹが−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ −、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＣＨ２−Ｓ−、または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｓ−である、請求 項１に記載の方法。 ３．前記離脱基がアミノ基である、請求項１に記載の方法。 ４．前記アミノ基がモルホリノ基である、請求項３に記載の方法。 ５．前記離脱基がイミダゾール基である、請求項３に記載の方法。 ６，前記結合反応が約４°Ｃと約８０°Ｃの間の温度で行なわれる、請求項１に 記載の方法。 ７．前記温度が室温である、請求項６に記載の方法。 ８．前記塩基性触媒がピリジンである、請求項１に記載の方法。 ９．前記反応が無水ピリジン中において行なわれる、請求項８に記載の方法。 １０．約１０時間を超えない反応時間の後に得られたグリセロールジ−またはト リホスフエート誘導体を分離する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。 １１．グリセリドジ−またはトリホスフエートヌクレオシド誘導体およびその塩 を調製する方法であって、前記誘導体は以下の式を有し、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）ここでＡは酸素、硫黄、またはメチ レンであり、ｋは０または１であり、かつ Ｎｕはヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体であり、請求項１で定義される式 （Ｉ）のリン脂質誘導体を以下の式を有するモノ−またはジホスフェートと反応 させるステップを含み、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）ここでＡ、Ｎｕ、およびｋは、無 水条件下で、塩基性触媒の存在において、上に定義されるものであり、これによ り、Ａが酸素でありかつｋが０である場合に、前記第２の化合物がリボースもし くはアラビノースであるペントースに付加された、アデニン基、シトシン基、５ −フルオロウラシル基、５−アザシトシン基、６−メルカプトプリン基、または ７−デアザアデニン基を含むヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体である場合 、前記リン脂質誘導体が１−Ｏ−アルキル−２−アシルグリセロ−３−ホスフェ ートモルホリデートでないことを条件として、前記グリセリドホスフェートヌク レオシド誘導体が形成される、方法。 １２．式（Ｉ）の、ヌクレオシド部を含む、式（ＩＩＩ）の前記化合物に対する モル比は約２：１と約１：２の間である、請求項１１に記載の方法。 １３．前記モル比が約２：１と約１：１との間である、請求項１２に記載の方法 。 １４．前記モル比が約１：１である、請求項１３に記載の方法。 １５．得られたヌクレオシドジホスフェートジグリセリドを高速液体クロマトグ ラフィ（ＨＰＬＣ）による単一の工程で精製する工程をさらに含む、請求項１１ に記載の方法。 １６．前記精製がＤＥＡＥセファデックスカラム上において行なわれる、請求項 １５に記載の方法。 １７．Ｎｕが、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシルもしくはチミンの天然 発生のリボース誘導体または２′−デオキシリボース誘導体である、請求項１１ に記載の方法。 １８．Ｎｕがシチジンでありかつ前記方法の生成物がシチジンジホスフェートジ グリセリドである、請求項１１に記載の方法。 １９．Ｎｕが、プリンまはピリミジンを含む塩基部位とペントース部を含む糖部 位とを有するヌクレオシド類似体であり、少なくとも１つの前記部位が天然発生 の塩基または糖の類似体である、請求項１１に記載の方法。 ２０．前記ペントース部がアラビノースであり、かつＮｕが１−（２′−デオキ シ−２′−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードシトシン（ＦＩＡＣ ）；１−（２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル ）−５−ヨードウラシル（ＦＩＡＵ），１−（２′−デオキシ−２′−フルオロ −１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−メチルウラシル（ＦＭＡＵ；Ｌ−（ ２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−エ チルウラシル（ＦＥＡＵ）；９−β−Ｄ−アラビノフラノシルアデニン（ａｒａ −Ａ）；または１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（ａｒａ−Ｃ）である 、請求項１９に記載の方法。 ２１．Ｎｕが９−（２−ヒドロキシエトキシメチル）グアニン（アシクロビル（ ａｃｙｃｌｏｖｉｒ），ＡＣＶ）；および（ガンシクロビル（ｇａｎｃｉｃｌｏ ｖｉｒ），ＧＣＶ）からなるグループから選択された非環式ヌクレオシド類似体 である、請求項１９に記載の方法。 ２２．Ｎｕがヌクレオシド類似体でありかつ前記ヌクレオシド類似体のグリセリ ド誘導体が、（３′−アジド−３′−デオキシ）チミジン−５′−ジホスフェー ト−（１，２−ジラウロイル）グリセロール（ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＬＧ）と、 （３′−アジド−３′−デオキシ）チミジン−５′−ジホスフェート−（１，２ −ジミリストイル）グリセロール（ＡＺＴ−ＤＰ−ＤＭＧ）と、 （３′−デオキシ）チミジン−５′−ジホスフェート−（１，２−ジラウロイル ）グリセロール（３ＤＴ−ＤＰ−ＤＬＧ）と、 （３′−デオキシ）チミジン−５′−ジホスフエート−（１，２−ジミリストイ ル）グリセロール（３ＤＴ−ＤＰ−ＤＭＧ）と、 （２′，３′−ジデオキシ）シチジン−５′−ジホスフェート−（１，２−ジラ ウロイル）グリセロール（ｄｄＣ−ＤＰ−ＤＬＧ）と、 （２′，３′−ジデオキシ）シチジン−５′−ジホスフェート−（１，２−ジミ リストイル）グリセロール（ｄｄＣ−ＤＰ−ＤＭＧ）と、 １−（２′−デオキシ−２′−フルオロ−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシル）−５− ヨードウラシル−５′−ジホスフェート−Ｌ−（１，２−ジパルミトイル）グリ セロール（ＦＩＡＵ−ＤＰ−ＤＰＧ）と、 アシクロビル−ジホスフェート−（１，２−ジパルミトイル）グリセロール（Ａ ＣＶ−ＤＰ−ＤＰＧ）と、アシクロビル−ジホスフェート−（１，２−ジミリス トイル）グリセロール（ＡＣＶ−ＤＰ−ＤＰＧ）と、アシクロビル−ジホスフェ ート−（１−Ｏ−オクタデシル）グリセロールと、およびアシクロビル−ジホス フェートー（１−Ｏ−ヘキサデシル）グリセロールとからなるグループから選択 される、請求項１９に記載の方法。 ２３．リン脂質ホスホノ酸誘導体およびその塩を調製するための方法であって、 前記誘導体が以下の式を有し、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＶ）ここで、 Ｄは−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−基であり、ｍは０または１であり、かつ ｋは０または１であり、かつ Ｎｕはヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体であり、かつ ｎは０または１であり、 請求項１に定義される式（Ｉ）のグリセロールモノホスフェート誘導体と以下の 式を有するホスホノ酸またはそのヌクレオシド誘導体と反応させるステップを含 み、▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ）ここでＤ，ｋ，ｍ，Ｎｕおよびｎ は無水条件下で塩基性触媒の存在において上記に定義されるものであり、これに より前記リン脂質ホスホノ酸誘導体が形成される。 ２４．前記方法の生成物が、 １，２−ジラウロイルグリセロ−３−ホスフェートー（ピロ）ーホスホノホルメ ートまたは１，２−ジミリストイルグリセロ−３−ホスフェートー（ビロ）ーホ スホノホルメートからなるグループから選択される、前記ホスホノ酸のグリセリ ド誘導体である、請求項２３に記載の方法。 ２５．以下の式を有するリン脂質誘導体であって、▲数式、化学式、表等があり ます▼（Ｉ）ここで式（Ｉ）の化合物が１−Ｏ−アルキル−２−Ｏ−アシルグリ セロ−３−ホスフェートモルホリデートでないことを条件として、Ｒ１およびＲ ２は独立して、水酸基またはＣＨ３−（ＣＨ２）ａ−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２）ｂ −（ＣＨ２）ｃ−Ｙ−という構造を有する分枝したまたは分枝しない脂肪族基で あり、ここでａ、ｂ、ｃの合計が１から２３であり、ｂが０から６であり、かつ Ｙが−Ｃ（Ｏ）Ｏ−，−ＣＨ２−Ｏ−，−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−，−Ｃ（Ｏ）Ｓ−， −ＣＨ２−Ｓ−，または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｓ−であり、かつＬがアミノ基である誘 導体。 ２６．Ｒ１およびＲ２のうち少なくとも１つが式ＣＨ３−（ＣＨ２）ａ−Ｃ（Ｏ ）Ｏ−を有し、但しａが１０から１６である、請求項２５に記載のグリセロルモ ノホスフェート誘導体。 ２７．Ｌがモルホリノ基である、請求項２６に記載のリン脂質誘導体。 ２８．請求項２７に記載のリン脂質誘導体であって、１，２−ジミリストイル− ｓｎ−グリセロ−３−ホスホローモルホリデートと、 １，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホロ−モルホリデートと、 １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホローモルホリデートと、 １−Ｏ−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホローモルホリデートと、 １−Ｏ−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホローモルホリデートとから なるグループから選択される、請求項２７に記載のリン脂質誘導体。 ２９．Ｍがイミダゾリソ基である、請求項２６に記載のリン脂質誘導体。 ３０．以下の式を有するグリセロールモノホスフェートアミデートの調製方法で あって、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ここでＲ１およびＲ２は、独立して水酸基またはＣＨ３−（ＣＨ２）ａ−（ＣＨ ＝ＣＨ−ＣＨ２）ｂ−（ＣＨ２）ｃ−Ｙ−という構造を有する脂肪族基であり、 ａ，ｂ，およびｃの合計が１から２３であり、ｂが０から６であり、Ｙが−Ｃ（ Ｏ）Ｏ−，−ＣＨ２−Ｏ−，−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−，−Ｃ（Ｏ）Ｓ−，−ＣＨ２− Ｓ−，または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｓ−であり、かつＬがアミノ基であり、Ｌがモルホ リノ基である場合に、リン脂質がＩ−Ｏ−アルキル−２−Ｏ−アシルグリセロ− ３−ホスフェートでないことを条件として、 以下の式を有するリン脂質またはその塩を対応するアミンと反応させるステップ を含み、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ここで、置換基は請求項１に定義されるものであり、それにより、グリセロール ホスフェートアミデートが形成される、方法。 ３１．前記アミンが環状アミンである、請求項３０に記載の方法。 ３２．前記環状アミンがモルホリンである、請求項３１に記載の方法。 ３３．前記環状アミンがカルボジイミダゾールである、請求項３１に記載の方法 。