CN105801646B - 炔基取代的核苷氨基磷酸酯 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种核苷氨基磷酸酯类化合物及其立体异构体、盐、水合物、溶剂合物或结晶，用于治疗HCV病毒感染引起的疾病，其中取代基R1、R2、R3、R4如说明书中所定义。本发明还公开了包括所示式(Ⅰ)化合物的制备方法、药物组合物，以及这些化合物在治疗HCV感染方面的用途。
Description
技术领域
本发明属于医药化学领域，具体涉及带有炔基的核苷氨基磷酸酯类化合物、含有该核苷氨基磷酸酯类化合物的组合物，以及这些化合物单独或与其他用于治疗HCV感染的抗病毒剂联合用于治疗病毒性疾病的药物的用途。这些化合物可用于治疗哺乳动物的丙型肝炎感染。
背景技术
丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的病毒性肝炎。丙型肝炎属于传染性肝炎，主要通过血液、性生活、母婴垂直传播，如通过献血和血液制品进行传播，女性在分娩过程中将丙肝病毒传染给婴儿等。据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约为3％，估计约1.8亿人感染了HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。丙型肝炎呈全球性流行，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌(HCC)。而且，由于丙型肝炎的缓慢进展，现存的感染人群在数十年内将继续呈现出一种严重的医疗和经济负担。未来20年内与HCV感染相关的死亡率(肝衰竭及肝细胞癌导致的死亡)将继续增加，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。
但是非常遗憾的是医学界目前尚未研制出有效预防丙肝的疫苗。因为丙肝病毒是RNA病毒，极易变异，研制疫苗的难度很大，因为除了人和黑猩猩以外，其他动物都不会患上丙肝，因此疫苗研制难以找到动物模型，所以惟一的有效的处理方式是高危人群及早做丙肝抗体检测，及早发现疾病并积极治疗。
抗病毒治疗目前得到公认的最有效的方案是：长效干扰素PEG-IFNα联合应用利巴韦林，也是现在EASL已批准的慢性丙型病毒性肝炎治疗的标准方案(SOC)。聚乙二醇(PEG)干扰素α(PEG-IFNα)是在IFNα分子上交联无活性、无毒性的PEG分子，延缓IFNα注射后的吸收和体内清除过程，其半衰期较长，每周1次给药即可维持有效血药浓度。但是，这种联合疗法除对HCV基因型1的有限功效外，在很多患者中具有明显的副作用并且难以忍受。主要的副作用包括流感症状、消化系统反应、骨髓抑制、脱发、诱发自身免疫性疾病和精神系统症状等。因此，丙肝患者需要一种更有效、方便且更好耐受的药物或疗法。
HCV是具有呈球形包膜的正单链RNA病毒。HCV基因组为单股正链RNA，全长约9500个碱基。其基因组分为结构区和非结构区。结构区包括核心蛋白区(C)和两个包膜蛋白区(E1、E2)，分别编码核心蛋白和包膜蛋白。非结构蛋白区包括NS2、NS3、NS4和NS5区，编码功能蛋白，如蛋白酶(NS2、NS3和NS4A区)，螺旋酶(NS3)以及依赖RNA的RNA多聚酶(NS5B区)。虽然非结构蛋白不是病毒颗粒的组成部分，但在病毒复制中起到非常重要的作用。非结构蛋白(NS)提供病毒复制的催化作用，NS3蛋白酶释放出多聚蛋白链RNA依赖性聚合酶NS5B。NS5B是从单链病毒RNA合成双链RNA所必需的聚合酶，是HCV复制复合体中的重要组成部分。HCV NS5B聚合酶具有抑制HCV RNA形成的作用，对HCV特异性抗病毒药物的开发具有重要意义。
核苷类似物可与核苷酸竞争结合于NS5B聚合酶，并导致聚合酶合成的链终止，进而抑制HCV RNA的形成。目前作为NS5B聚合酶抑制剂的核苷类似物都是非天然的产物。为了起链终止剂的作用，核苷类似物必须被细胞摄取并在体内转化为三磷酸酯以竞争聚合酶核苷酸结合部位。核苷三磷酸酯的这种转化通常由细胞激酶介导，该细胞激酶对潜在的核苷聚合酶抑制剂的结构提出额外要求。此外，核苷类似物较差的理化性质和药代动力学性质也限制了其在人体消化系统的吸收以及靶组织或细胞的摄取。为了改善核苷类似物的性质，提高其吸收和转运的能力，本专利合成了一种核苷磷酸酯类的前药，并且在此前药中引入炔基，使其在人体内吸收和转运的过程中具有更好的稳定性和安全性。
发明内容
本发明公开了一种核苷氨基磷酸酯类化合物及其立体异构体、盐、水合物、溶剂合物或结晶，用于治疗HCV病毒感染引起的疾病，其结构可用以下通式Ⅰ表示：
其中
R1a是氢，烷基，苯基，所述的烷基或苯基可以被任意地卤素、羟基、氨基取代；
R1b、R1c分别选自氢，烷基，苯基；
R2选自H，C1-C6的烷基，被氨基，羟基，取代的烷基；
R3是芳基或被卤素、羟基、C1-C6的烷基、烷氧基、硝基取代的芳基；
R4是氢或卤素。
本发明所述化合物(Ⅰ)优选自：
式I化合物具有数个手性中心，在本发明中作为特定立体异构体呈现。它还适用于制备式I化合物中使用的某些中间体，所述中间体可包含一或多个手性中心。但是，式I化合物或其制备中使用的可具有至少一个手性中心的任何中间体可包含少量的其它立体异构体，即具有一或多个不对称中心上不同手性的立体异构体。
手性还可以存在于取代基上，例如在R1，或带有R3和R4的碳(其中R3和R4不同)或磷原子。磷中心可以RP或SP或者这些立体异构体的混合物(包括外消旋物)形式存在，也可存在由手性磷中心和手性碳原子引起的非对映异构体。
各手性中心的绝对构型可使用本领域已知的方法测定，例如X-射线衍射法或NMR和/或通过由已知立体化学的原料推断。本发明所述化合物和中间体的纯立体化学异构形式可通过应用本领域已知的程序获得。例如，可通过用光学活性的酸或碱选择性结晶其非对映体盐来使各对映体彼此分离。其实例为酒石酸、二苄酰基酒石酸、二甲苯酰基酒石酸和樟脑磺酸。或者，对映体可通过使用手型固定相的色谱技术拆分。所述纯的立体化学异构形式还可由对应的纯立体化学异构体形式的适当原料衍生，前提是反应立体有择地进行。优选地，如果要求一种特定的立体异构体，则所述化合物通过立体有择地制备方法合成。这些方法将有利地使用对映体纯的原料。
式I化合物的非对映体外消旋物可通过常规方法分别获得。可有利地使用的适合的物理拆分方法是，例如选择结晶法和色谱法，例如柱色谱法。
除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体。包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。所有立体异构体均属于本发明的范围。本发明的化合物的单独立体异构体可基本上不含其它异构体或可以混合成例如外消旋体，或者与所有其它的立体异构体混合。
术语“盐”是指本发明所述的化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸可选自：磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸、磺酸、对甲苯磺酸、苹果酸、甲烷磺酸或其类似物。
术语“溶剂合物”是指通过与溶剂分子配位形成固态或液态的配合物的本发明化合物的形式。水合物是溶剂合物的特殊形式，其中与水发生配位。在本发明范围内，溶剂合物优选是水合物。
术语“结晶”是指本发明所述的化合物形成的各种固体形态，包括晶型、无定形。
术语“烷基”是指直链、支链或环状的饱和烃基，优选6个碳原子以下的烃基。烷基的实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、正戊基、异戊基、新戊基、环己基、正己基、异己基、2,2,-甲基丁基和2,3-二甲基丁基。术语“C1-6烷基”是指含有1-6个碳原子的直链、支链或环状的饱和烃基。术语“C1-4烷基”是指含有1-4个碳原子的直链、支链或环状的饱和烃基。
术语“炔基”指是指含有一个或多个碳碳三键(C≡C)的直链或支链不饱和烃基，优选含有2至6个碳原子的炔基，更优选含有2至4个碳原子的炔基。
术语“烷氧基”是指-O-烷基。
本文所用术语“(＝O)”或“氧代”当与碳原子连接时形成羰基。应注意的是当原子的价键允许时，此原子可仅被一个氧代基团取代。
术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。
术语“卤代”通常指氟代、氯代、溴代和碘代。
术语“卤代烷基”是指至少被一个卤素原子取代的烷基。
本发明提供了一种制备包括本发明通式Ⅰ在内的核苷氨基磷酸酯类化合物及其立体异构体、盐、水合物、溶剂合物或结晶的方法。本发明提供的制备通式Ⅰ的方法包括以下步骤：
(i)本发明涉及用于制备式I化合物的方法，包括使用适宜取代的磷酸酯化合物(a)与核苷类似物(b)反应。其反应方程式为：
其中取代基R1、R2、R3、R4、R5、R7具有它们在发明详述中所披露的含义，R6为氢，X为离去基团，包括Cl、Br、I、甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、三氟乙酸酯、三氟磺酸酯、五氟苯氧化物、p-NO2-苯氧化物等基团。优选地，该离去基团为Cl。该反应在无水的乙醚、四氢呋喃、1，4-二氧六环或者二氯甲烷等非质子性溶剂中进行。优选地，反应溶剂为四氢呋喃。该反应所用的碱一般为含胺基碱，如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、N-甲基咪唑等；或烷基格氏试剂，如t-BuMgCl、t-BuMgBr、MeMgCl、MeMgBr等。反应的一般过程是将磷酰氯(3-10当量)溶于反应溶剂中并加至核苷与碱的混合物，然后允许反应物在一段时间内于室温到40℃之间的温度搅拌30min到24h的时间。从反应混合物除去溶剂，并通过硅胶色谱纯化产物。
(ii)本发明中所述的化合物(a)一般通过以下方案制备：
在反应惰性溶剂，如乙醚、四氢呋喃、二氯甲烷中，POCl3与醇R4OH的羟基反应，提供烷氧基或芳氧基二氯磷酸酯(phosphorodichloridate)(c)。随后与氨基酸衍生物(d)反应，其中R1按以上定义或者R1可以是可被除去的及被所要求的R1置换的羧基酸保护基，得到氯代氨基磷酸酯(a)。
(iii)本发明中所述化合物(d)是一种氨基酸酯，其中R1是带有炔基的基团。其合成方法为本领域常用的方法，如在酸(如盐酸、硫酸、对甲苯磺酸等)的催化下，氨基酸与醇(R1OH)直接反应；或将氨基酸通过二氯亚砜制成酰氯后，与醇(R1OH)反应制得。
本发明还涉及用于治疗本文所公开的病毒剂中任一种的组合物，该组合物包括选自赋形剂、载体、稀释剂和等效介质的药学上可接受的介质以及由式I所示的化合物，该化合物意欲包括其可以获得的盐(酸或碱加成盐)、水合物、溶剂合物和结晶形式。
本发明的化合物可与载体配制成多种口服给药的剂型。口服给药可以是片剂、包衣片、硬明胶胶囊和软明胶胶囊、溶液剂、乳剂、糖浆或混悬剂的形式。本发明的化合物在通过栓剂给药施用以及其他施用途径时是有效的。最方便的给药方式通常是使用了便利的每日剂量给药方案的口服，其可根据疾病的严重程度以及患者对抗病毒药物的反应而进行调节。
本发明的一种或多种化合物以及它们的药学上可接受的盐与一种或多种常规赋形剂、载体或稀释剂一起可配制成药物组合物和单位剂量的形式。所述药物组合物和单位剂型可以包含惯用比例的常规成分，可以含或不含其它活性化合物，单位剂型可包含与要使用的所需每日剂量范围相当的任何合适有效量的活性成分。对于口服使用，所述药物组合物可以作为固体使用，例如片剂或填充的胶囊，半固体、粉末、缓释制剂，或液体，例如混悬液、乳液或填充胶囊的形式；或者对于直肠或阴道给药，可以是栓剂形式。典型的制剂含有约5％到约95％的一种或多种活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”旨在包括活性化合物的固体和液体制剂，并且本领域技术人员将意识到取决于期望的剂量和药物动力学参数，活性成分可存在于不同的制剂中。
本文中使用的术语“赋形剂”是指用于制备药物组合物的化合物，并且其通常是安全无毒的，既非生物活性的也非不期望的，包括对于兽医使用以及人类药学使用都可接受的赋形剂。本发明的化合物可单独施用，但通常将和一种或多种合适的药学上的赋形剂、稀释剂或载体混合施用。
活性成分的“药学上可接受的盐”形式也可初始赋予活性成分(其不以非盐形式存在)期望的药物动力学性能，并且甚至可关于其体内治疗活性对活性成分的药效学产生积极的影响。本文中使用的化合物的措词“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的并且具有母体化合物的期望的药理学活性的盐。这些盐包括：(1)酸加成盐，其和无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成；或和有机酸形成，例如羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙烷磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、樟脑酸、十二烷基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、水杨酸、粘康酸等；或(2)碱加成盐，其和上述无机酸的任一种的共轭碱形成，其中共轭碱包含选自Na+，K+，Mg2+，Ca2+，中的阳离子组分。应该理解，所有涉及药学上可接受的盐都包括相同酸加成盐的本文中所定义的溶剂加成形式(溶剂化物)或结晶形式(多晶型物)。
固体形式的制剂包括例如粉末、片剂、丸剂、胶囊、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以是还可用作稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或封装材料的一种或多种物质。在粉末中，载体通常是微细的固体，其是含微细的活性组分的混合物。在片剂中，活性组分通常与适当比例的具有所需结合能力的载体混合，并包装成所需形状和大小。合适的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、葡萄糖、淀粉、明胶、黄耆胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低融点蜡、可可油等。除了活性组分，固体形式的制剂还含有着色剂、调味品、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、稠化剂、增溶剂等。
液体制剂也适合于口服给药，液体制剂包括乳液、糖浆、酏剂和水性悬液。这些制剂包括在使用前不久转换成液体形式制品的固体形式制剂。乳液可制成溶液，例如丙二醇水溶液或可含有乳化剂，例如卵磷脂、失水山梨糖醇酐单油酸酯或阿拉伯胶。可将微细的活性组分分散在含粘性物质，例如天然或合成的胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它熟知悬浮剂的水中来制备水性悬液。
本发明还公开了通式I所示化合物、立体异构体、盐、水合物、溶剂合物或结晶与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的化合物可配制用于作为栓剂施用。低熔点蜡(例如甘油脂肪酸酯或可可油的混合物)首先熔融，然后活性成分例如通过搅拌而均匀地分散。然后熔融的均匀混合物倒入便捷尺寸的模具中，并使之冷却和固化。
本发明的化合物可配制成用于阴道施用。本领域己知除活性组分以外还含有例如载体的阴道栓剂、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫剂或喷剂是合适的。
修饰本发明的化合物以赋予它们在水中或其他媒介物中更加可溶例如可通过微小改良(例如盐制剂)而容易地实现，这是本领域技术人员熟知的。本领域技术人员还熟知修饰特定化合物的给药途径和剂量方案，以管理本发明的化合物的药物动力学用于在患者中的最大有益效果。
另外，本发明的纯化化合物可联合脂质体或胶束来配制。
本发明涉及由式I表示的化合物在制备治疗任意病症的药物中的用途，所述病症是由下列病毒剂中的任一种感染引起的：丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus)，西尼罗河病毒(West Nile virus)，黄热病病毒(yellow fever virus)，登革热病毒(degue virus)，鼻病毒(rhinovirus)，脊髓灰质炎病毒(polio virus)，甲型肝炎病毒(hepatitis A virus)，牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus)和日本脑炎病毒(Japaneseencephalitis virus)。
本发明提供药物组合物，其包含通式I所示化合物、立体异构体、盐、水合物、溶剂合物或结晶，还包含选自下列组成的一种或多种另外的抗HCV治疗剂：HCV NS3蛋白酶抑制剂、HCV NS5B RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂、核苷类似物、干扰素α、聚乙二醇化的干扰素、利巴韦林、左旋韦林、韦拉米啶、TLR7激动剂、TLR9激动剂、亲环蛋白抑制剂、α葡萄糖苷酶抑制剂、NS5A抑制剂和NS3解螺旋酶抑制剂。
术语“药物”是指在需要的受试者的治疗和/或预防方法中使用的物质，其中所述物质包括但不限于组合物、制剂、剂型等，其包含式I化合物。涵盖由式I表示的化合物单独或联合本文中公开的另一化合物在制备治疗本文中公开的抗病毒病症的任一种的药物中的用途。药物包括但不限于本文中公开的第七实施方案所涵盖的组合物中的任一种。
本发明涉及在需要的受试者中的治疗和/或预防方法，其包括向受试者施用治疗有效量的式I表示的化合物。
本发明涉及在需要的受试者中的治疗和/或预防方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的落入式I表示的化合物的范围内的至少两种化合物。
本发明涉及在需要的受试者中的治疗和/或预防方法，所述方法包括向受试者交替地或同时地施用治疗有效量的落入式I表示的化合物的范围内的至少两种化合物。应理解，交替施用之间的时间可以为1-24小时，这包括2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22和23小时之间包括的任何子范围。
旨在需要的受试者是具有任意病症者，所述病症是由本文中公开的病毒剂中的任一种感染引起的，包括但不限于丙型肝炎病毒，西尼罗河病毒，黄热病病毒，登革热病毒，鼻病毒，脊髓灰质炎病毒，甲型肝炎病毒，牛病毒性腹泻病毒或日本脑炎病毒，黄病毒科或瘟病毒或丙型肝炎病毒属、或引起与上述病毒中的任一种等同或可比的症状的病毒剂。
术语“受试者”是指哺乳动物，其包括但不限于牛、猪、羊、小鸡、水牛、鸵鸟、犬、猫和人，优选受试者是人。涵盖在本发明中的治疗受试者的方法中的可以是本文中涵盖的单独或与本文的另一化合物联合的任何化合物。
本文中使用的术语“治疗有效量”是指降低个体疾病症状所需的用量。在各种具体情况中，可按个体需要调整剂量。该剂量的变化范围可较广，这取决于许多因素，例如待治疗疾病的严重程度，患者的年龄和总体健康状况，治疗患者的其它药物，给药途径和形式以及参与医师的偏好和经验。对于口服给药，单一疗法和/或联合疗法中介于每日约0.001至约10g之间的每日剂量应是适宜的，包括例如0.001，0.0025，0.005，0.0075，0.01，0.025，0.050，0.075，0.1，0.125，0.150，0.175，0.2，0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，4.5，5，5.5，6，6.5，7，7.5，8，8.5，9和9.5之间的所有数值。特定的每日剂量介于每日约0.01至约1g之间，包括其间0.01g(即10mg)的所有增量值，优选的每日剂量介于每日约0.01至约0.8g之间，更优选介于每日约0.01至约0.6g之间，最优选介于每日约0.01至约0.25g之间，其均包括其间0.01g的所有增量值。一般以大的起始“加载剂量”开始治疗，从而能快速降低或消除病毒，然后将剂量降低至足以防止感染复发的水平。对于给定的疾病和患者，本领域技术人员在治疗本文所述疾病时无需过多实验，只依靠个人知识、经验和本申请的公开即能确定本发明的化合物的治疗有效量。
通过肝功能检验可确定疗效，所述检验包括但不限于蛋白水平，例如血清蛋白(如白蛋白、凝血因子、碱性磷酸酶、氨基转移酶(如丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶)、5′-核苷酶、γ-谷氨酰胺酰基转肽酶等)、胆红素的合成、胆固醇的合成和胆汁酸的合成；肝代谢功能，包括但不限于碳水化合物代谢、氨基酸和氨代谢。或者，可通过检测HCV-RNA来监测疗效。可利用这些检验的结果优化剂量。
应该注意对于本文中公开的化合物，代谢物可在施用至需要的受试者时产生。例如对于由式I表示的化合物，涵盖的是可发生磷酸酯(-OR4)或羰基酯(-OR1)的水解；并且所得水解产物可本身体内进行水解以形成单磷酸酯，其可转化为二磷酸酯和/或三磷酸酯。涵盖的是所附提供的权利要求书包括合成化合物和体内产生的化合物。作为本文中涵盖的是代谢物或代谢物盐，作为备选实施方案，还涵盖的是在需要的患者中的治疗方法，包括使由式I表示的至少一种化合物接触至少一种丙型肝炎病毒感染的细胞。
应当理解的是，本文所提及的治疗延伸至预防和治疗存在的病症。此外，如本文所使用的术语HCV感染的“治疗”还包括治疗或预防与HCV感染相关或由HCV感染介导的疾病或病症或其临床症状。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细阐述，但本发明不限于下述实施例。
实施例1
步骤1：
在带有尾气吸收装置的三口烧瓶中加入5.6克炔丙醇和50ml二氯甲烷，搅拌溶解，用冰浴降温后，滴加14.3g SOCl2，滴加完成后，搅拌30min。然后将8.9克L-丙氨酸用50ml二氯甲烷溶解，加入上述溶液中，撤去冰浴，在室温下反应过夜。反应结束后，减压蒸去溶剂，得到粘稠的黄色液体。该液体用甲醇-乙醚混合溶剂重结晶多次，得到产物L-丙氨酸炔丙酯盐酸盐13.5g，收率82.5％。
步骤2：
在三口烧瓶中加入L-丙氨酸炔丙酯盐酸盐(8.18g，0.05mol)和干燥的二氯甲烷(100ml)，冰盐浴降温，通入氮气，搅拌30min后加入二氯磷酸苯酯(8.7g，0.045mol)，搅拌混合后保持温度在0℃，加入N-甲基咪唑(25g，0.3mol)的二氯甲烷(25ml)溶液。在该温度下搅拌1h后，加入(2'R)-2'-脱氧-2'-氟-2'-甲基尿苷(8g，0.03mol)，加完后搅拌1h，然后撤去冰盐浴，反应温度升到环境温度，继续搅拌3h。TLC显示反应基本完成后，反应混合物中加入10ml甲醇进行淬灭。
反应混合物分别用1N HCl(50mlX2)和饱和碳酸氢钠溶液(50mlX2)洗涤。分离的有机层经无水硫酸镁干燥，过滤。溶液在减压和然后在高真空下蒸发至干，以得到粘性油状粗产物(17g)。粗产物用柱色谱进行梯度洗脱，洗脱剂为含有1％-4％甲醇的二氯甲烷溶液。提纯后得到目标产物，该产物是磷对应体的外消旋混合物。其1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，8H)，2.51(s，1H)，1.39-1.22(m，6H，CH3)。LR-MS：C22H25FN3O9P，计算值：525.13。实测值：526.12[M+H]。
以下实施例按照相同的方法制备：
实施例2
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.14(s，1H，NH)，7.59(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，2.49(s，1H)，1.47-1.22(m，9H，CH3)。
LR-MS：C23H27FN3O9P，计算值：539.15。实测值：540.11[M+H]。
实施例3
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，5H)，2.54(s，1H)，1.47-1.22(m，12H，CH3)。
LR-MS：C24H29FN3O9P，计算值：554.16。实测值：555.13[M+H]。
实施例4
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，5H)，2.54(s，1H)，1.82(m，2H，CH2)，1.67-1.02(m，12H，CH3)。
LR-MS：C25H31FN3O9P，计算值：567.18。实测值：568.14[M+H]。
实施例5
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.28-3.63(m，8H)，2.03-1.28(m，15H)。
LR-MS：C26H33FN3O9P，计算值：581.19。实测值：582.14[M+H]。
实施例6
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.28-3.63(m，8H)，2.88(m，1H，CH)，2.03-1.28(m，12H，CH3)。
LR-MS：C25H31FN3O9P，计算值：567.18。实测值：568.11[M+H]。
实施例7
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.28-3.63(m，7H)，2.51(s，1H，CH-C三键)，2.03-1.28(m，13H，CH2，CH3)。
LR-MS：C25H31FN3O9P，计算值：567.18。实测值：568.17[M+H]。
实施例8
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，6H)，2.54(s，1H，CH-C三键)，1.83-1.01(m，18H，CH，CH2，CH3)。
LR-MS：C27H35FN3O9P，计算值：595.21。实测值：596.17[M+H]。
实施例9
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，12H)，1.47-1.28(m，6H，CH3)，1.33(s，1H，CH-C三键)。
LR-MS：C23H27FN3O10P，计算值：555.14。实测值：556.11[M+H]。
实施例10
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，11H)，1.47-1.28(m，9H，CH3)，1.33(s，1H，CH-C三键)。
LR-MS：C25H31FN3O10P，计算值：583.17。实测值：584.11[M+H]。
实施例11
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，10H)，2.11(s，1H，OH)，1.47-1.28(m，6H，CH3)。
LR-MS：C23H27FN3O10P，计算值：555.14。实测值：556.11[M+H]。
实施例12
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.19(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.29(s，1H)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.55(s，1H)，4.28-4.33(m，6H)，2.51(s，1H)，1.39-1.22(m，6H，CH3)。
LR-MS：C28H29FN3O9P，计算值：601.16。实测值：602.16[M+H]。
实施例13
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.42-7.24(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.45(s，1H)，4.28-4.33(m，8H)，1.39-1.22(m，6H，CH3)。
LR-MS：C28H29FN3O9P，计算值：601.16。实测值：602.16[M+H]。
实施例14
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.61(d，3H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.28-4.58(m，8H)，1.39-1.22(m，6H，CH3)。
LR-MS：C30H27F7N3O9P，计算值：737.14。实测值：738.10[M+H]。
实施例15
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.28-4.58(m，8H)，3.05(m，2H)，2.40(m，4H)，1.39-1.05(m，12H，CH3)。
LR-MS：C27H36FN4O9P，计算值：610.22。实测值：611.20[M+H]。
实施例16
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，8H)，2.51(s，1H)，1.47(s，3H，CH3)。
LR-MS：C21H23FN3O9P，计算值：511.13。实测值：512.12[M+H]。
实施例17
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.14(s，1H，NH)，7.59(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，2.49(s，1H)，1.47-1.22(m，6H，CH3)。
LR-MS：C22H25FN3O9P，计算值：525.15。实测值：526.11[M+H]。
实施例18
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，5H)，2.54(s，1H)，1.47-1.22(m，9H，CH3)。
LR-MS：C23H27FN3O9P，计算值：539.15。实测值：540.13[M+H]。
实施例19
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，5H)，2.54(s，1H)，1.82(m，2H，CH2)，1.67-1.02(m，9H，CH3)。
LR-MS：C24H29FN3O9P，计算值：553.18。实测值：554.14[M+H]。
实施例20
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.28-3.63(m，8H)，2.03-1.28(m，12H)。
LR-MS：C25H31FN3O9P，计算值：567.19。实测值：568.14[M+H]。
实施例21
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.28-3.63(m，8H)，2.88(m，1H，CH)，2.03-1.28(m，9H，CH3)。
LR-MS：C24H29FN3O9P，计算值：553.18。实测值：554.11[M+H]。
实施例22
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.28-3.63(m，7H)，2.51(s，1H，CH-C三键)，2.03-1.28(m，10H，CH2，CH3)。
LR-MS：C24H29FN3O9P，计算值：553.18。实测值：554.17[M+H]。
实施例23
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，6H)，2.54(s，1H，CH-C三键)，1.83-1.01(m，15H，CH，CH2，CH3)。
LR-MS：C26H33FN3O9P，计算值：581.21。实测值：582.17[M+H]。
实施例24
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，12H)，1.48(s，3H，CH3)，1.33(s，1H，CH-C三键)。
LR-MS：C23H27FN3O10P，计算值：555.14。实测值：556.11[M+H]。
实施例25
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，11H)，1.47-1.38(m，6H，CH3)，1.33(s，1H，CH-C三键)。
LR-MS：C24H29FN3O10P，计算值：569.16。实测值：570.10[M+H]。
实施例26
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，10H)，2.11(s，1H，OH)，1.47(s，3H，CH3)。
LR-MS：C22H25FN3O10P，计算值：541.14。实测值：542.12[M+H]。
实施例27
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.19(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.29(s，1H)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.55(s，1H)，4.28-4.33(m，6H)，2.51(s，1H)，1.39(s，3H，CH3)。
LR-MS：C28H29FN3O9P，计算值：587.15。实测值：588.16[M+H]。
实施例28
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.42-7.24(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.45(s，1H)，4.28-4.33(m，8H)，1.33(s，3H，CH3)。
LR-MS：C27H27FN3O9P，计算值：587.16。实测值：588.14[M+H]。
实施例29
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.61(d，3H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.28-4.58(m，8H)，1.39(s，3H，CH3)。
LR-MS：C29H25F7N3O9P，计算值：723.14。实测值：724.10[M+H]。
实施例30
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.28-4.58(m，8H)，3.05(m，2H)，2.40(m，4H)，1.39-1.05(m，9H，CH3)。
LR-MS：C26H34FN4O9P，计算值：596.22。实测值：597.20[M+H]。
实施例31
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.08-7.21(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，3.30(d，2H，CH2)，2.47(s，1H)，1.47(s，3H，CH3)。
LR-MS：C28H29FN3O9P，计算值：601.16。实测值：602.12[M+H]。
实施例32
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.14(s，1H，NH)，7.59(d，1H，嘧啶)，7.08-7.21(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，6H)，3.41(d，2H，CH2)，2.49(s，1H)，1.47-1.22(m，6H，CH3)。
LR-MS：C29H31FN3O9P，计算值：615.18。实测值：616.11[M+H]。
实施例33
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.08-7.21(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，5H)，3.31(d，2H，CH2)，2.54(s，1H)，1.47-1.22(m，9H，CH3)。
LR-MS：C30H33FN3O9P，计算值：629.16。实测值：630.13[M+H]。
实施例34
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.01-7.17(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，5H)，3.11(d，2H，CH2)，2.54(s，1H)，1.82(m，2H，CH2)，1.67-1.02(m，9H，CH3)。
LR-MS：C31H35FN3O9P，计算值：643.18。实测值：644.14[M+H]。
实施例35
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.01-7.17(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.28-3.63(m，8H)，3.81(d，2H，CH2)，2.03-1.28(m，12H)。
LR-MS：C32H37FN3O9P，计算值：657.22。实测值：658.14[M+H]。
实施例36
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.14(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.01-7.15(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.28-3.63(m，8H)，3.53(d，2H，CH2)，2.88(m，1H，CH)，2.03-1.28(m，9H，CH3)。
LR-MS：C31H35FN3O9P，计算值：643.18。实测值：644.11[M+H]。
实施例37
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.01-7.15(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.28-3.63(m，7H)，3.53(d，2H，CH2)，2.51(s，1H，CH-C三键)，2.03-1.28(m，10H，CH2，CH3)。
LR-MS：C31H35FN3O9P，计算值：643.18。实测值：644.17[M+H]。
实施例38
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.00-7.17(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，6H)，3.59(d，2H，CH2)，2.54(s，1H，CH-C三键)，1.83-1.01(m，15H，CH，CH2，CH3)。
LR-MS：C33H39FN3O9P，计算值：671.21。实测值：672.17[M+H]。
实施例39
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.09-7.17(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，12H)，3.33(d，2H，CH2)，1.48(s，3H，CH3)，1.33(s，1H，CH-C三键)。
LR-MS：C30H33FN3O10P，计算值：645.14。实测值：646.11[M+H]。
实施例40
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.09-7.17(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，11H)，3.43(d，2H，CH2)，1.47-1.38(m，6H，CH3)，1.33(s，1H，CH-C三键)。
LR-MS：C31H35FN3O10P，计算值：659.2。实测值：670.15[M+H]。
实施例41
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.01-7.17(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，10H)，3.43(d，2H，CH2)，2.11(s，1H，OH)，1.47(s，3H，CH3)。
LR-MS：C29H31FN3O10P，计算值：631.14。实测值：632.12[M+H]。
实施例42
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.29(m，5H，苯环)，7.21-7.07(m，5H，苯环)，6.82-6.73(m，5H，苯环)，6.29(s，1H)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.55(s，1H)，4.35-4.26(m，6H)，3.32(d，2H，CH2)，2.51(s，1H)，1.39(s，3H，CH3)。
LR-MS：C35H35FN3O9P，计算值：677.15。实测值：678.16[M+H]。
实施例43
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.07(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.42-7.24(m，5H，苯环)，7.20-7.07(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.45(s，1H)，4.28-4.33(m，8H)，3.32(d，2H，CH2)，1.33(s，3H，CH3)。
LR-MS：C34H33FN3O9P，计算值：677.16。实测值：678.14[M+H]。
实施例44
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.61(d，3H，苯环)，7.17-7.07(m，5H，苯环)，6.81-6.62(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.58-4.28(m，8H)，3.12(d，2H，CH2)，1.39(s，3H，CH3)。
LR-MS：C36H31F7N3O9P，计算值：813.14。实测值：814.10[M+H]。
实施例45
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.17-7.07(m，5H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.28-4.58(m，8H)，3.12(d，2H，CH2)，3.05(m，2H)，2.40(m，4H)，1.39-1.05(m，9H，CH3)。
LR-MS：C33H40FN4O9P，计算值：686.22。实测值：687.20[M+H]。
实施例46
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，10H)，3.85(d，1H)，2.51(s，1H)，1.47(s，3H，CH3)。
LR-MS：C22H25FN3O10P，计算值：541.13。实测值：542.12[M+H]。
实施例47
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.14(s，1H，NH)，7.59(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，9H)，3.88(d，1H)，2.49(s，1H)，1.47-1.22(m，6H，CH3)。
LR-MS：C23H27FN3O10P，计算值：555.15。实测值：556.11[M+H]。
实施例48
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，12H)，3.78(d，1H)，1.48(s，3H，CH3)，1.33(s，1H，CH-C三键)。
LR-MS：C24H29FN3O11P，计算值：585.15。实测值：586.11[M+H]。
实施例49
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.61(d，3H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.28-4.58(m，10H)，3.80(d，1H)，1.39(s，3H，CH3)。
LR-MS：C30H27F7N3O10P，计算值：753.14。实测值：754.05[M+H]。
实施例50
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.28-4.58(m，10H)，3.89(d，1H)，3.05(m，2H)，2.40(m，4H)，1.39-1.05(m，9H，CH3)。
LR-MS：C27H36FN4O10P，计算值：626.22。实测值：627.10[M+H]。
实施例51
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，10H)，2.51(s，1H)，1.47-1.11(m，9H，CH3)。
LR-MS：C24H29FN3O9P，计算值：553.16。实测值：554.12[M+H]。
实施例52
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.14(s，1H，NH)，7.59(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，11H)，2.49(s，1H)，1.47-1.22(m，12H，CH3)。
LR-MS：C25H31FN3O9P，计算值：567.18。实测值：568.15[M+H]。
实施例53
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.10(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，14H)，1.48(s，3H，CH3)，1.33(s，1H，CH-C三键)，1.08(s，6H，CH3)。
LR-MS：C26H33FN3O9P，计算值：597.19。实测值：598.12[M+H]。
实施例54
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.61(d，3H，苯环)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.28-4.58(m，10H)，1.39-1.05(m，9H，CH3)。
LR-MS：C32H31F7N3O9P，计算值：765.20。实测值：766.05[M+H]。
实施例55
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.11(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，5.52(s，1H)，4.28-4.58(m，10H)，3.05(m，2H)，2.40(m，4H)，1.39-1.05(m，15H，CH3)。
LR-MS：C29H40FN4O9P，计算值：638.22。实测值：639.10[M+H]。
实施例56
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.82-6.73(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.35-4.22(m，8H)，2.59(s，1H)，2.44-2.09(m，7H)，1.47(s，3H，CH3)。
LR-MS：C24H29FN3O9PS，计算值：585.13。实测值：584.12[M+H]。
实施例57
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.14(s，1H，NH)，7.59(d，1H，嘧啶)，6.85-6.72(m，5H，苯环)，6.28(d，1H，C-1’)，5.67(d，1H，嘧啶)，5.18(m，1H)，4.32-4.20(m，6H)，2.49(s，1H)，2.44-2.09(m，7H)，1.62-1.48(m，6H，CH3)。
LR-MS：C25H31FN3O9PS，计算值：599.15。实测值：600.15[M+H]。
实施例58
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.01(s，1H，NH)，7.79(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.21(d，1H，C-1’)，5.76(d，1H，嘧啶)，5.51(s，1H)，4.30-3.63(m，12H)，2.44-2.09(m，7H)，1.30(s，1H，CH-C三键)，1.08(s，3H，CH3)。
LR-MS：C26H33FN3O9PS，计算值：629.16。实测值：630.11[M+H]。
实施例59
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.14(s，1H，NH)，7.59(d，1H，嘧啶)，6.85-6.72(m，5H，苯环)，6.45(d，1H，C-1’)，5.67(d，1H，嘧啶)，5.78(m，1H)，4.32-4.20(m，6H)，3.61(s，1H)，2.44-1.67(m，6H)，1.62-1.37(m，6H，CH3)。
LR-MS：C25H29FN3O9P，计算值：565.16。实测值：566.15[M+H]。
实施例60
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.59(d，1H，嘧啶)，6.85-6.72(m，5H，苯环)，6.45(d，1H，C-1’)，5.60(d，1H，嘧啶)，5.78(m，1H)，4.32-4.20(m，6H)，3.65(s，1H)，2.44-1.69(m，6H)，1.60-1.37(m，9H，CH3)。
LR-MS：C26H31FN3O9P，计算值：579.18。实测值：580.13[M+H]。
实施例61
1H-NMR数据(300MHz，DMSO-d6)：δ10.11(s，1H，NH)，7.77(s，4H，胍基)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.82(s，2H)，4.28-3.98(m，5H)，3.45(m，1H)，2.43-1.44(m，10H)。
LR-MS：C25H32FN6O9P，计算值：610.20。实测值：611.05[M+H]。
实施例62
1H-NMR数据(300MHz，DMSO-d6)：δ10.01(s，1H，NH)，7.71(s，4H，胍基)，7.46(d，1H，嘧啶)，6.83-6.71(m，5H，苯环)，6.16(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.82(s，1H)，4.28-3.98(m，5H)，3.45(m，1H)，2.43-1.47(m，13H)。
LR-MS：C26H34FN6O9P，计算值：621.22。实测值：622.10[M+H]。
实施例63
在N2保护下，向三口烧瓶中加入无水二氯甲烷50ml和三氯氧磷(15.3g，0.1mol)，降温到-78℃，缓慢滴加对氟苯酚(11.2g，0.1mol)和三乙胺(10.1g，0.1mol)的二氯甲烷(30ml)溶液，滴加完成后升至室温，反应过夜。然后加入L-丙氨酸炔丙酯盐酸盐，再将反应液冷却到-78℃，滴加三乙胺(22.2g，2.2mol)的二氯甲烷(30ml)溶液，滴完后升温至0℃，搅拌1h。真空除去溶剂后，加入干燥的乙酸乙酯(200ml)，充分溶解后过滤，滤渣用乙酸乙酯洗涤，合并滤液，减压浓缩，得到浅黄色油状物，供下一步合成使用。
将(2'R)-2'-脱氧-2'-氟-2'-甲基尿苷(26g，0.1mol)溶于THF(200ml)，降温到-60℃后，加入N-甲基咪唑(24g，0.3mol)，在此温度下滴加上一步得到的油状物的THF(200ml)溶液，滴完后，缓慢升温至室温，反应2h后结束。减压浓缩后所得残留物经采用甲醇的二氯甲烷溶液(0-10％)阶式梯度洗脱的柱色谱纯化，得到目标产物的外消旋混合物。
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，4H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，8H)，2.51(s，1H)，1.39-1.22(m，6H，CH3)。
LR-MS：C22H24F2N3O9P，计算值：543.12。实测值：544.12[M+H]。
实施例64
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.07(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.10-6.67(m，4H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，8H)，2.51(s，1H)，1.39-1.22(m，6H，CH3)。
LR-MS：C22H24ClFN3O9P，计算值：559.09。实测值：560.02[M+H]。
实施例65
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.06(s，1H，NH)，7.45(d，1H，嘧啶)，7.26-6.62(m，4H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，8H)，2.51(s，1H)，1.47-1.28(m，6H，CH3)。
LR-MS：C22H24BrFN3O9P，计算值：603.04。实测值：604.02[M+H]。
实施例66
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，4H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，2.51(s，1H)，1.39-1.22(m，9H，CH3)。
LR-MS：C23H26F2N3O9P，计算值：557.12。实测值：558.12[M+H]。
实施例67
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.07(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.10-6.67(m，4H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，2.51(s，1H)，1.39-1.22(m，9H，CH3)。
LR-MS：C23H26ClFN3O9P，计算值：573.09。实测值：574.02[M+H]。
实施例68
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.06(s，1H，NH)，7.45(d，1H，嘧啶)，7.26-6.62(m，4H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，2.51(s，1H)，1.47-1.28(m，9H，CH3)。
LR-MS：C23H26BrFN3O9P，计算值：617.04。实测值：618.02[M+H]。
实施例69
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.05(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，8.01-6.99(m，4H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，2.51(s，1H)，1.39-1.22(m，9H，CH3)。
LR-MS：C23H26FN4O11P，计算值：584.13。实测值：584.12[M+H]。
实施例70
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.07(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，7.10-6.67(m，4H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，2.51(s，1H)，2.35(s，3H)，1.39-1.22(m，9H，CH3)。
LR-MS：C24H29ClFN3O9P，计算值：553.16。实测值：554.12[M+H]。
实施例71
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.06(s，1H，NH)，7.45(d，1H，嘧啶)，7.26-6.62(m，4H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，2.59(m，2H)，2.51(s，1H)，1.52-1.28(m，12H，CH3)。
LR-MS：C25H31FN3O9P，计算值：567.18。实测值：568.12[M+H]。
实施例72
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.06(s，1H，NH)，7.45(d，1H，嘧啶)，7.26-6.62(m，4H，苯环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，3.73(s，3H)，2.59(m，2H)，2.51(s，1H)，1.52-1.28(m，12H，CH3)。
LR-MS：C24H29FN3O10P，计算值：569.16。实测值：570.11[M+H]。
实施例73
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.06(s，1H，NH)，7.45(d，1H，嘧啶)，8.08-6.64(m，7H，萘环)，6.11(d，1H，C-1’)，5.63(d，1H，嘧啶)，4.28-4.33(m，7H)，2.51(s，1H)，1.52-1.28(m，9H，CH3)。
LR-MS：C27H29FN3O9P，计算值：589.16。实测值：590.10[M+H]。
实施例74
1H-NMR数据(300MHz，CDCl3)：δ10.04(s，1H，NH)，7.49(d，1H，嘧啶)，6.73-6.82(m，5H，苯环)，6.18(d，1H，C-1’)，4.28-4.33(m，7H)，2.50(s，1H)，1.39-1.22(m，9H，CH3)。
LR-MS：C23H26F2N3O9P，计算值：557.14。实测值：558.10[M+H]。
实施例75 HCV复制子试验
本发明采用细胞试验检测式I化合物抑制HCV RNA复制的活性。该细胞试验在多靶点筛选方案中可基于双向表达构建物(bicistronic expression construct)，见Lohmannet al.(1999)Science vol.285pp.110-113所述，Krieger et al.(2001)Journal ofVirology 75：4614-4624进行修改。
本试验使用稳定转染的细胞系Huh-7luc/neo。该细胞系包含编码一种双向表达构建物的RNA，其包含脑心肌炎病毒(EMCV)中内核糖体进入位点(IRES)翻译的HCV 1b型的野生型NS3-NS5B区域，以及一种可选择性标记部分(neoR，新霉素磷酸转移酶)。在G418(neoR)存在下，复制子细胞的继续培养依赖于HCVRNA的复制。筛选抗病毒化合物可使用所述表达HCV RNA的稳定转染的复制子细胞，其自主复制到高水平，特别是编码萤光素酶。
用POD810全自动微孔板预处理系统(LabCyte公司，美国)将所测化合物和对照样品(索菲布韦，根据WO 2010/135569制备)分别加入到孔板中，化合物起始终浓度均为10μM，每个化合物做双复孔，3倍稀释10个点，DMSO终浓度0.5％。分别种Huh71b细胞到96孔板，125μl体系，8×103个细胞/孔，37℃，5％CO2培养箱培养细胞72小时。每孔加30μl细胞生长荧光滴定检测试剂，37℃，5％CO2培养箱培养细胞1小时，分光光度仪上检测荧光信号值，所得数据用于化合物细胞毒性计算。每孔加100μl荧光素酶发光底物Bright-Glo，5分钟内用化学发光检测系统EnVision(PerkinElmer公司，美国)检测荧光信号值，所得数据用于化合物效力计算。作出各试验化合物剂量-响应曲线，然后计算EC50值，该值表示降低50％所检测的萤光素酶活性水平所需要的化合物的量。当在该复制子试验中测定一次以上的式(I)化合物时，在表1中给出所有测试结果的平均值。
表1HCV复制子试验结果
以上实验结果表明，本发明的化合物具有高效的抑制HCV病毒的能力，与阳性对照样品相比，EC50具有相当或更优异的效果。
Claims (4)
1.一种通式Ⅰ所表示的核苷氨基磷酸酯类化合物及其盐：
其中
R1a是氢；
R1b、R1c分别选自氢，甲基，乙基，丙基，3-甲基丙基，苯基；
R2选自H，甲基，异丙基，苄基，3-胍基丙基；
R3是苯基，被卤素、甲基、甲氧基取代的苯基；
R4是氢。
2.根据权利要求1所述的化合物，选自：
3.一种药用组合物，其包含权利要求1或2定义的式I化合物和药学上可接受的载体。
4.根据权利要求1或2的化合物在制备用于治疗或预防HCV感染所引起的疾病的药物的用途。
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| "Discovery of a β-D-2’-Deoxy-2’-α-fluoro-2’-β-C-methyluridine Nucleotide Prodrug (PSI-7977) for the treatment of Hepatitis C Virus";Michael J. Sofia，et al.;《J. Med. Chem.》;20100916;第53卷(第19期);7202-7218 |
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