CN106674318B

CN106674318B - 一种ns5b聚合酶抑制剂

Info

Publication number: CN106674318B
Application number: CN201510747302.XA
Authority: CN
Inventors: 袁建栋; 黄仰青; 池建文; 袁芳
Original assignee: Brightgene Bio Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Brightgene Bio Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2015-11-06
Filing date: 2015-11-06
Publication date: 2020-04-21
Anticipated expiration: 2035-11-06
Also published as: CN106674318A

Abstract

本发明公开了一种如下式所示的化合物或其可药用盐：

Description

一种NS5B聚合酶抑制剂

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种NS5B聚合酶抑制剂，具体涉及一种化合物，及其制备方法及用途。

背景技术

索非布韦(Sofosbuvir)是一种NS5B聚合酶抑制剂，由 Pharmasset 公司研制、后被吉利德(Gilead)于2011年收购，并由吉利德公司开发上市的一种用于治疗丙肝的药物。该药2013年12月获得美国FDA批准，作为抗病毒治疗方案的一部分，用于慢性丙型肝炎(HCV)的治疗，其商品名为Sovaldi。索非布韦是首个获批可用于丙型肝炎全口服治疗方案的药物，在用于特定基因型慢性丙型肝炎治疗时，可消除对传统注射药物干扰素的需求。索非布韦的结构如下：

。

虽索非布韦治疗丙肝效果较好，但治疗费用极其昂贵，且其化合物专利在中国到期日远至2030年，中国丙肝患者无法早日接受相对便宜的仿制药的治疗，因此迫切需要研发具有自主知识产权的治疗丙肝的良药，以使患者尽早接受价格相对合理的药物治疗。

WO2008121634还公开了以下一种索非布韦类似物：

但该化合物的活性仍不甚理想。

发明内容

本发明的目的在于提供一种NS5B聚合酶抑制剂。具体来说，本发明提供了一种索非布韦类似物，以使中国患者接受价格相对合理的拥有自主知识产权的治疗丙肝的药物。

本发明所提供的索非布韦类似物，具有优于索非布韦的治疗丙肝的效果，且毒副作用与索非布韦类似，并无明显的不良反应。

本发明一方面提供了以下索非布韦类似物BG40202或其可药用盐：

BG40202。

本发明另一方面提供了该化合物的用途：在制备作为NS5B聚合酶抑制剂的药物中的用途；在制备用于丙型肝炎病毒相关的疾病和 / 或症状的药物中的用途；在制备用于丙型肝炎病毒感染的药物中的用途。

本发明第三方面提供了该化合物的制备方法：

。

本发明第四方面提供了包括上述化合物或其可药用盐以及任选的药学可接受的载体组成的组合物。

本发明第五方面提供了上述组合物的用途：在制备作为NS5B聚合酶抑制剂的药物中的用途；在制备用于丙型肝炎病毒相关的疾病和 / 或症状的药物中的用途；在制备用于丙型肝炎病毒感染的药物中的用途。

本发明技术人员意外的发现，本发明化合物抗HCV（丙型肝炎病毒）的活性优于索非布韦，更远远优于其异构体BG40203：

BG40203

本发明化合物BG40202磷酸酯的构型为（S）构型时，活性优于（R）构型的BG40203。

附图说明

图1：BG40202及阳性对照对HCV GT1b复制子细胞的毒性及对HCV复制子剂量依赖性抑制（Inhibition%）活性（viability%）拟合曲线。

图2：BG40203及阳性对照对HCV GT1b复制子细胞的毒性及对HCV复制子剂量依赖性抑制（Inhibition%）活性（viability%）拟合曲线。

图3：GS-7977及阳性对照对HCV GT1b复制子细胞的毒性及对HCV复制子剂量依赖性抑制（Inhibition%）活性（viability%）拟合曲线。

图4：BG40202正离子质谱 MS(ESI⁺,m/e)：578

图5：BG40202负离子质谱 MS(ESI^-,m/e)：576

图6：BG40202氢谱图1H-NMR。

具体实施例

实施例1 BG40202的合成

化合物2的合成

氮气保护下，500mL三口瓶中加入10g（52.8mmol，1.0eq）Boc-L-丙氨酸，再加入200mL二氯甲烷，室温下搅拌至溶清。再降温至-5℃，加入10.9g（52.8mmol，1.0eq）DCC，反应液移至室温，搅拌反应2小时。再加入6.86g（63.4mmol，1.2eq）苯甲醇，室温搅拌24小时。过滤，滤液依次用水、饱和NaHCO₃溶液、1M盐酸溶液、饱和氯化钠溶液洗涤。分层，所得有机相加入无水硫酸钠干燥2小时。过滤，旋蒸浓缩，得25.0g浅色固体化合物2。

化合物3的合成

氮气保护下，500mL三口瓶中加入25g（31.5mmol，1.0eq）化合物2，再加入50 mL乙酸乙酯，搅拌得浑浊溶液。将该悬浊液降温至0℃，加入100mL 乙酸乙酯/盐酸（6N）溶液。滴加完毕，反应液移至室温，搅拌反应30min。旋蒸至干，得油状物。加入100 mL水，用1N HCl溶液调节pH=~2，乙酸乙酯萃取三次，弃去有机相。水相用1M氢氧化钠溶液调节pH=~8，乙酸乙酯萃取三次，所得有机相用饱和氯化钠溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥2小时。过滤，旋蒸浓缩，得15.2g油状液体3。

化合物4的合成

氮气保护下，500mL三口瓶中加入15g（83.7mmol，1.0eq）化合物3，加入100mL二氯甲烷，室温下搅拌溶清。再降温至-80℃，滴加17.7g（83.7mmol，1.0eq）二氯磷酸苯酯，滴加过程中控制温度不超-70℃。滴加完毕，再滴加17.0g（167mmol，2.0eq）三乙胺的二氯甲烷溶液（40mL）。反应液移至室温，搅拌反应2小时。再降温至0℃，滴加15.4g（83.7mmol，1.0eq）五氟苯酚的二氯甲烷溶液（40ml）。再滴加17.0g（167mmol，2.0eq）三乙胺的二氯甲烷溶液（40mL）。控制反应温度0℃，搅拌反应3小时。过滤，所得滤液旋干，得油状物。柱层析纯化（PE/EA=1:1），收集纯品部分，旋干，得浅色固体。

向述固体中加入300mL乙酸乙酯，室温下搅拌溶清，再加入900mL石油醚，有固体析出。过滤、干燥，得19.4g白色固体4。

BG40202的合成

氮气保护下，500mL三口瓶中加入6.1g（23.3mmol，1.0eq）2’-脱氧-2’-氟-2’-甲基-尿嘧啶，再加入75mL无水THF，室温下搅拌至溶清。再降温至-15℃，滴加70mL（70mmol，3.0eq）1M的t-BuMgCl/THF溶液，滴加完毕，反应液升温至室温，搅拌反应4小时。在12小时内分6批加入18g（35mmol，1.5eq）化合物4，TLC监控反应至无化合物4剩余。反应完毕，向反应液中倾入饱和氯化铵溶液淬灭反应。真空浓缩除去THF，所得液体用乙酸乙酯萃取三次，分层，有机相用饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥2小时。过滤，旋蒸浓缩，得浅色固体，称重15g。

向上述固体中加入150mL乙酸乙酯，升温至回流，固体溶清。再加入150mL叔丁基甲基醚，降温至室温，搅拌析晶过夜。过滤并干燥，得13g目标化合物白色固体。

MS(ESI⁺,m/e)：578

MS(ESI^-,m/e)：576

¹H NMR：7.60 (1H, s), 7.38-7.21 (9H, m), 6.20-6.10 (1H, m), 5.63 (1H,d), 5.15 (2H, d), 4.51 (1H, m), 4.97 (1H, m), 4.41-3.76 (3H, m), 1.40-1.20(6H, m)

实施例2：

以下为本发明化合物与索非布韦对照的药理试验：

其中，BG40202为本发明化合物；BG40203为BG40202的异构体，如上定义；GS-7977为药理研发公司提供的标准索非布韦原料药，作为对照。

1.研究目的

运用丙型肝炎病毒（HCV）基因型1b复制子细胞系统，对博瑞生物医药（苏州）股份有限公司的2个化合物进行抗HCV复制子活性检测。实验中采用GS-7977作为阳性对照。

2 实验材料

2.1 HCV 1b复制子细胞：即Huh7细胞系稳定转入HCV基因型1b复制子。

2.2 待测化合物：由博瑞生物医药技术（苏州）有限公司提供，用 100% DMSO配制成20 mM母液暂存氮气柜。

2.3 试剂：见表1.

表1. 试剂列表

。

3.实验方法

3.1 化合物处理：根据表2化合物稀释信息，对化合物DMSO母液进行稀释，三副孔，并加入96孔实验板中。细胞培养液中DMSO终浓度为0.5%。

表2. 化合物列表

。

3.2 细胞处理：在上述96孔细胞板中种入HCV-1b复制子细胞（8,000 细胞/孔），随后置于37℃，5% CO₂培养箱中培养3天。

3.3 细胞活性检测：每孔加入细胞生长荧光滴定检测试剂，37℃，5% CO₂培养箱培养细胞1小时后，用分光光度仪检测系统Envision检测Luminescence信号值，原始数据（RFU）用于化合物细胞毒性计算。

3.4 抗HCV复制子活性检测：每孔加荧光素酶发光底物Bright-Glo，5分钟内用化学发光检测系统Envision检测Luminescence信号值，原始数据（RLU）用于化合物抑制活性计算。

3.5 数据处理：使用如下公式将原始数据处理为细胞活力百分比：

使用如下公式将原始数据处理为抑制百分数：

CPD：化合物孔的信号值

HPE (Hundred percent effect): 100% 有效作用对照孔信号值，孔中只有DMEM培养液

ZPE (Zero percent effect): 无效作用对照孔信号值，用0.5%DMSO代替化合物

将细胞活力百分数、抑制百分数分别导入GraphPad Prism软件进行数据处理得出化合物对应的曲线及其细胞毒性（CC₅₀）和对HCV复制子的抑制活性（EC₅₀）数值。

4. 实验结果与讨论

表3. 化合物抗HCV GT1b复制子细胞的EC₅₀和CC₅₀值

。

在测试浓度范围内，化合物BG40202、BG40203对HCV复制子显示出不同程度的抑制活性，其EC₅₀值分别为0.035 μM、0.357 μM。且所有受试化合物在测定浓度范围内均没有显示出细胞毒性，CC₅₀值均大于最高检测浓度。

附图显示受试化合物及阳性对照对HCV GT1b复制子细胞的毒性及对HCV复制子剂量依赖性抑制活性拟合曲线。

从结果可知，本发明BG40202的活性远大于其异构体BG40203（EC₅₀0.035 vs0.357），而且也优于索非布韦（EC₅₀0.035 vs 0.097），且在测定浓度范围内均没有显示出细胞毒性，CC₅₀值均大于最高检测浓度。

Claims

1.一种如下式所示的化合物或其可药用盐：

2.如权利要求1所述的化合物或其可药用盐的用途，其为：在制备作为NS5B聚合酶抑制剂的药物中的用途。

3.如权利要求1所述的化合物或其可药用盐的用途，其为：在制备用于丙型肝炎病毒相关的疾病和/或症状的药物中的用途。

4.如权利要求1所述的化合物或其可药用盐的用途，其为：在制备用于丙型肝炎病毒感染的药物中的用途。

5.如权利要求1所述的化合物或其可药用盐的制备方法，其为：

6.一种药物组合物，其包括如权利要求1所述的化合物或其可药用盐以及任选的药学可接受的载体。

7.如权利要求6所述的药物组合物的用途，其为：在制备作为NS5B聚合酶抑制剂的药物中的用途。

8.如权利要求6所述的药物组合物的用途，其为：在制备用于丙型肝炎病毒相关的疾病和/或症状的药物中的用途。

9.如权利要求6所述的药物组合物的用途，其为：在制备用于丙型肝炎病毒感染的药物中的用途。