PT1058686E - 2'-fluoronucleósidos - Google Patents

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PT1058686E
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J Jeffrey Mcatee
Junxing Shi
Dennis C Liotta
Raymond F Schinazi
Chung K Chu
Yongseok Choi
Kyeong Lee
Joon H Hong
Original Assignee
Raymond F Schinazi
Univ Georgia
J Jeffrey Mcatee
Junxing Shi
Dennis C Liotta
Univ Emory
Chung K Chu
Yongseok Choi
Kyeong Lee
Joon H Hong
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Description

DESCRIÇÃO "2'-FLUORONUCLEÓSIDOS"
Esta invenção está na área da química farmacêutica e refere-se, em particular, à utilização de 2'-fluoronucleósidos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Os nucleósidos sintéticos, tais como 5-iodo-2'-desoxiuridina e 5-fluoro-2'-desoxiuridina têm sido utilizados para o tratamento de cancro e vírus herpes há já alguns anos. Desde os anos 80, os nucleósidos sintéticos também têm sido um ponto de interesse para o tratamento de VIH, hepatite e vírus Epstein-Barr.
Em 1985, foi descrito que o nucleósido sintético 3'-azido-3'-desoxitimidina (AZT) inibe a replicação do vírus da imunodeficiência humana. Desde então, vários outros nucleósidos sintéticos, incluindo 2',3'-didesoxiinosina (DDI), 2' , 3' -didesoxicitidina (DDC) e 2' , 3' -didesoxi-2',3'-didesidrotimidina (D4T), provaram ser eficazes contra o VIH. Após fosforilação celular ao 5'-trifosfato por cinases celulares, estes nucleósidos sintéticos são incorporados numa cadeia crescente de ADN virai, provocando a terminação da cadeia devido à ausência do grupo 3'-hidroxilo. Também podem inibir a enzima transcriptase reversa virai. 1 0 sucesso de vários nucleósidos sintéticos na inibição da replicação de VIH in vivo ou in vitro conduziu vários investigadores a projectar e testar nucleósidos que substituam um heteroátomo para o átomo de carbono na posição 3' do nucleósido. A Publicação do Pedido de Patente Europeia N°. 0337713 e Patente U.S. N°. 5041449, registada por BioChem
Pharma, Inc., divulga 2-substituido-4-substituido-l,3-dioxolanos racémicos que apresentam actividade antiviral. A patente U.S. N°. 5047407 e Pedido de Patente Europeia N°. 0382526, também registada por BioChem Pharma, Inc., divulgam que vários nucleósidos 2-substituido-5-substituido-l,3-oxatiolanos racémicos têm actividade antiviral e divulgam, especificamente, que a mistura racémica de 2-hidroximetil-5-(citosin-l-il)-1,3-oxatiolano (referido a seguir como BCH-189) tem, aproximadamente, a mesma actividade contra o VIH como o AZT, com baixa toxicidade. O (-)-enantiómero do racemato BCH-189, conhecido como 3TC, que está no âmbito da Patente U.S. N°. 5539116 de Liotta et al., é actualmente vendido, nos EUA, para o tratamento de VIH em combinação com AZT em humanos.
Também foi descrito que o cis-2-hidroximetil-5-(5-fluorocitosin-l-il)-1,3-oxatiolano ("FTC") tem uma actividade potente para o VIH. Schinazi, et al., "Selective Inhibition of Human Immunodeficiency viruses by Racemates and Enantiomers of cis-5-Fluoro-l-[2-(Hydroxymethyl)-1,3-Oxathiolane-5-il]Cytosine" Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Novembro de 1992, pp. 2423-2431. Ver também Patente U.S. N°. 5210085; documentos WO 91/11186 e WO 92/14743.
Outro virus que provoca um problema de saúde humana grave é o virus da hepatite B (referido a seguir como "HBV"). HBV é apenas ultrapassado pelo tabaco como causa de cancro humano. O 2 mecanismo pelo qual o HBV induz o cancro é desconhecido. É suposto que poderá desencadear directamente o desenvolvimento tumoral ou, indirectamente, desencadear o desenvolvimento tumoral através de inflamação crónica, cirrose e regeneração celular associada à infecção, semelhante à da sindrome da imunodeficiência adquirida, que explica o porquê da infecção por HBV ser comum entre doentes infectados com VIH ou SIDA. No entanto, o HBV é mais contagioso do que o VIH.
Ambos FTC e 3TC exibem actividade contra o HBV. Furman, et al., "The Anti-Hepatitis B Virus Activities, Cytotoxicities, and Anabolic Profiles of the (-) and (+) Enantiomers of cis-5-
Fluoro-1-[2-(Hydroxymethyl)-1,3-oxathiolane-5-yl]-Cytosine" Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Dezembro de 1992, pp. 2686-2692; e Cheng, et al., Journal of Biological Chemistry, Volume 267(20), pp. 13938-13942 (1992). O virus da hepatite C ("HCV") é o principal agente causativo após transfusão e em hepatite não-A, não-B esporádica (Alter, H. J. (1990) J. Gastro. Hepatol. 1: 78-94; Dienstag, J.L. (1983) Gastro 85: 439-462). Apesar da monitorização melhorada, o HCV ainda é responsável por, pelo menos, 25% da hepatite virai aguda em vários paises (Alter, H.J. (1990) supra; Dienstag, J.L. (1983) supra; Alter M.J. et al. (1990a) J.A.M.A. 264: 2231-2235; Alter M.J. et al (1992) N. Engl. J. Med. 327:
1899-1905; Alter, M.J. et al. (1990b) N. Engl. J. Med. 321: 1494-1500). A infecção pelo HCV é insidiosa numa elevada proporção de portadores cronicamente infectados (e infecciosos), que podem não sentir sintomas clinicos durante vários anos. A elevada velocidade de progressão da infecção aguda para infecção crónica (70-100%) e doença hepática (> 50%), a sua distribuição 3 a nível mundial e a falta de uma vacina torna o HCV uma factor importante de morbilidade e mortalidade.
Foram identificados vários nucleósidos sintéticos que exibem actividade anti-cancerígena. Um derivado nucleósido bem conhecido, com uma actividade anti-cancerígena elevada, é o 5-fluorouracilo. 0 5-fluorouracilo tem sido utilizado clinicamente no tratamento de tumores malignos, incluindo, por exemplo, carcinomas, sarcomas, cancro de pele, cancro dos órgãos digestivos e cancro da mama. No entanto, o 5-fluorouracilo provoca várias reacções adversas, tais como náusea, alopecia, diarreia, estomatite, trombocitopenia leucocitária, anorexia, pigmentação e edema. Os derivados de 5-fluorouracilo com actividade anti-cancerígena estão descritos na Patente N°. 4336381, e nas publicações de patentes japonesas N°. 50-50383, 50-50384, 50-64281, 51-146482 e 53-84981. A patente U.S. N°. 4000137 divulga que o produto da oxidação pelo peroxidato de inosina, adenosina ou citidina com metanol, ou etanol, tem actividade contra a leucemia linfocítica. A citosina arabinósido (também conhecida por Citarabina, araC e Cytosar) é um análogo de nucleósido da desoxicitidina que foi inicialmente sintetizada em 1950 e introduzida em medicina clínica em 1963. Actualmente é um fármaco importante no tratamento de leucemia mielóide aguda. Também é activa contra a leucemia linfocitária aguda e, em menor grau, é útil na leucemia mielocitária crónica e linfoma não-Hodgkin. A acção principal da araC é a inibição da síntese de ADN nuclear. Handschumacher, R. and Cheng, Y., "Purine and Pyrimidine Antimetabolites", Câncer 4
Medicine, Chapter XV-1, 3a Edição, Editado por J. Holland, et ai., Lea and Febigol, editores. A 5-azacitidina é um análogo de citidina gue é principalmente utilizada no tratamento de leucemia mielocitária aguda e sindrome mielodisplásica. 0 2-fluoroadenosina-5'-fosfato (Fludara, também conhecido por FaraA) ) é um dos agentes mais activos no tratamento de leucemia linfocitária crónica. 0 composto actua por inibição da sintese de ADN. 0 tratamento de células com F-araA está associado à acumulação de células na fronteira da fase Gl/S e na fase S; assim, é um fármaco especifico da fase S do ciclo celular. A incorporação do metabolito activo, F-araATP, retarda a elongação da cadeia de ADN. 0 F-araA também é um potente inibidor de ribonucleótido redutase, a enzima chave responsável pela formação de dATP. A 2-clorodesoxiadenosina é útil no tratamento de neoplasmas de células B de baixo grau, tais como leucemia linfocitária crónica, linfoma não-Hodgkins e leucemia de células pilosas.
No desenho de novos nucleósidos biologicamente activos, tem havido várias tentativas de introduzir um substituinte fluoro no anel hidrato de carbono do nucleósido. 0 flúor tem sido sugerido como substituinte uma vez que deve funcionar como um mimico isopolar e isostérico de um grupo hidroxilo visto o comprimento da ligação C-F (1,35 Â) ser tão semelhante ao comprimento da ligação C-0 (1,43 Â) e porque o flúor é um aceitador de ligação de hidrogénio. 0 flúor é capaz de produzir variações electrónicas importantes numa molécula com o minimo de perturbação estérica. A substituição do flúor por outro grupo 5 numa molécula pode provocar variações no metabolismo do substrato devido à elevada energia da ligação C-F (116 kcal/mol vs. C-H = 100 kcal/mol) . Várias referências divulgaram a sintese e utilização de 2' -arabinofluoro-nucleósidos (i. e., nucleósidos em que um grupo 2'-fluoro está na configuração "para cima do plano"). Tem sido publicadas vários artigos de 2-fluoro-p-D-arabinofuranosil-nucleósidos que exibem actividade contra a hepatite B e herpes. Ver, por exemplo, Patente U.S. N°. 4666892 de Fox, et al. ;
Patente U.S. N°. 4211773 de Lopez, et al.; Su, et al.,
Nucleosides, 136, "Synthesis and Antiviral Effects of Several 1-(2-Deoxy-2-fluoro-p-D-arabinofuranosyl)-5-alkyluracils." "Some Structure-Activity Relationships." J. Med. Chem., 1986, 29, 151-154; Borthwick, et al., "Synthesis and Enzymatic Resolution of Carbocyclic 2'-Ara-fluoro-Guanosine: A Potent New Anti-Herpetic Agent", J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1988; Wantanabe, et al., "Synthesis and Anti-HIV Activity of 2'-"Up"-Fluoro Analogues of Active Anti-Aids Nucleosides 3'-Azido-3'- deoxythymidine (AZT) and 2',3'-dideoxycytidine (DDC)." J. Med. Chem. 1990, 33, 2145-2150; Martin, et al., "Synthesis and
Antiviral Activity of Monofluoro and Difluoro Analogues of Pyrimidine Deoxyribonucleosides against Human Immunodeficiency Virus (HIV-1)," J. Med. Chem. 1990, 33, 2137-2145; Sterzycki, et al., "Synthesis and Anti-HIV Activity of Several 2'-Fluoro-Containing Pyrimidine Nucleosides," J. Med. Chem. 1990, bem como a EPA 0316017 também apresentada por Sterzycki, et al.; e Montgomery, et al., "9-(2-Deoxy-2-fluoro-β-Ό- arabinofuranosyl)guanine: A Metabolically Stable Cytotoxic
Analogue of 2'-Deoxyguanosine." A patente U.S. N°. 5246924 descreve um método para tratar uma infecção da hepatite que inclui a administração de 1-(2'-desoxi-2'-fluoro-β-ϋ- 6 arabinofuranosil)-3-etiluracilo) , também referido como "FEAU". A patente U.S. N° . 5034518 divulga nucleósidos de 2-fluoro-9-(2-desoxi-2-fluoro-β-D-arabino-furanosil)adenina que exibem actividade anti-cancerigena por alteração do metabolismo de nucleósidos de adenina, reduzindo a capacidade do composto de funcionar como substrato para a adenosina. O documento EP A 0292023 divulga que determinados β-ϋ-2'-fluoroarabinonucleósidos são activos contra infecções virais. A patente U.S. N° . 5128458 divulga β-Ό-2',3'-didesoxi-4'-tioribonucleósidos como agentes anti-virais. A patente U.S. N° . 5446029 divulga que 2',3'-didesoxi-3'-fluoronucleósidos têm actividade anti-hepatite. O Pedido de Patente Europeia N°. 0409227 A2 divulga determinados β-D-pirimidina substituídos em 3' e nucleósidos de purina para o tratamento de hepatite B.
Também foi descrito que o L-FMAU (2'-f luoro-5-metil^-L-arabinofuranosiluracilo) é um potente agente anti-HBV e anti-EBV. Ver Chu, et ai., "Use of 2'-Fluoro-5-methyl^-L-arabinofuranosyluracil as a Novel Antiviral Agent for Hepatitis B Virus and Epstein-Barr Virus" Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Abril de 1995 páginas. 979-981; Balakrishna, et al., "Inhibition of Hepatitis B Virus by a Novel L-Nucleoside, 2'-Fluoro-5-Methyl^-L-arabinofuranosyl Uracil," Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Fev. de 1996, páginas 380-356; Patentes U.S. N°. 5587362; 5567688; e 5565438.
As patentes U.S. N°. 5426183 e 5424416 divulgam processos para preparar 2'-desoxi-2',2'-difluoronucleósidos e 2'-desoxi- 7 2'-fluoronucleósidos. Ver também "Kinetic Studies of 2' ,2'-difluorodeoxycytidine (Gemcitabine) with Purified Human Deoxycytidine Kinase and Cytidine Deaminase," BioChemical Pharmacology, Vol. 45 (N°. 9) páginas 4857-1861, 1993. A patente U.S. N°. 5446029 de Eriksson, et al., divulga que determinados 2',3'-didesoxi-3'-fluoronucleósidos têm actividade hepatite B. A patente U.S. N°. 5128458 divulga determinados 2',3'-didesoxi-4'-tioribonucleósidos em que o substituinte 3' é H, azida ou fluoro, o documento WO 94/14831 divulga determinados nucleósidos de 3'-fluoro-di-hidropirimidina. O documento WO 92/08727 divulga nucleósidos de uridina β-]Ι-2'-desoxi-3'-fluoro-5-substituída para o tratamento de herpes simplex 1 e 2. A Publicação EPA N°. 0352248 divulga uma vasta classe de nucleósidos de L-ribofuranosilpurina para o tratamento de VIH, herpes, e hepatite. A especificação divulga o modo de preparar 3'-ribofuranosil-nucleósidos fluorados. Uma especificação semelhante é encontrada no documento WO 88/09001, apresentada pela Aktiebolaget Astra. O Pedido de Patente Europeia 0357571 divulga um vasto grupo de nucleósidos de β-D e α-D pirimidina para o tratamento de SIDA, que no âmbito da classe alargada inclui, de um modo genérico, nucleósidos que podem estar substituídos na posição 2’ ou 3' com um grupo flúor. No entanto, no âmbito desta classe alargada não existe nenhuma divulgação especifica de nucleósidos fluorados em 2' ou um método para a sua produção. O documento EPA 0463470 divulga um processo para a preparação de (5S)-3-fluoro-tetra-hidro-5-[(hidroxi)metil]-2-(3H)-furanona, um conhecido intermediário na produção de 2'-fluoro-2',3'-didesoxinucleósidos, tal como a 2'-fluoro-2',3'-didesoxicitidina. A patente U.S. N°. 5817799 divulga β-ϋ-2'-fluoroarabinofuranosil-nucleósidos e um método para a sua produção, que são intermediários na sintese de 2’,3'-didesoxi-2'-fluoroarabinosil-nucleósidos. A patente U.S. N°. 4625020 divulga um método de produzir derivados l-halo-2-desoxi-2-fluoroarabinofuranosilo contendo grupos éster protectores a partir de 1,3,5-tri-O-acil-ribofuranose.
Parece haver uma ausência de divulgação de β-]7-2'-f luoro-ribofuranosil-nucleósidos para utilizações medicinais, incluindo para VIH, hepatite (B ou C) ou condições proliferativas. Pelo menos no que diz respeito a 2'-ribofuranosil-nucleósidos, tal pode ser devido à dificuldade anterior observada, em colocar um grupo fluoro na configuração 2'-ribofuranosilo. Relativamente aos nucleósidos da purina L-2'-fluoro-2',3'-insaturado, pode ser porque os nucleósidos da purina são instáveis em meio ácido, resultando na clivagem da ligação glicosilo.
Devido ao facto de o virus da hepatite C ter atingido niveis epidémicos a nivel mundial e ter efeitos trágicos no doente infectado, permanece uma grande necessidade de proporcionar novos agentes farmacêuticos eficazes para tratar estas doenças que tenham baixa toxicidade para o hospedeiro.
Assim, é um objectivo da presente invenção proporcionar um método e composição para o tratamento de doentes humanos infectados com hepatite C. 9
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Numa forma de realização da invenção, a invenção proporciona a utilização de um 2'-fluoronucleósido na preparação de um medicamento útil no tratamento da infecção por hepatite C em humanos, em que o 2'-fluoronucleósido é um composto da fórmula:
Base
em que
Base é uma base de purina ou pirimidina como definido aqui a seguir; R'é OH, H, OR3, N3, CN, halogéneo, incluindo F, ou CF3, alquilo inferior, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, ou alcoxilo, e base refere-se a uma base de purina ou pirimidina; R2 é H, fosfato, incluindo monofosfato, difosfato, trifosfato, ou um pró-fármaco de fosfato estabilizado; acilo, um lipido, incluindo um fosfolipido, um aminoácido; e R3 é acilo, alquilo, fosfato, ou outro grupo abandonante farmaceuticamente aceitável que, quando administrado in vivo, é capaz de sofrer clivagem ao composto parental. 10
Estes 2'-fluoronucleósidos podem estar na configuração β-L ou β-D. A configuração β-L é preferida.
Os 2'-fluoronucleósidos são moléculas biologicamente activas que são úteis no tratamento de hepatite C.
Pode determinar-se facilmente o espectro de actividade por avaliação do composto nos ensaios aqui descritos ou por outro ensaio de confirmação.
Noutra forma de realização, para o tratamento de hepatite, o composto activo, ou o seu derivado ou sal, adequado para administração em combinação ou alternadamente com outro agente antiviral, tal como um agente anti-VIH ou agente anti-hepatite, incluindo os da fórmula acima. Em geral, em terapêutica de combinação, uma dosagem eficaz de dois ou mais agentes são administrados em conjunto, ao passo que durante a terapêutica alternada, uma dosagem eficaz de cada agente é administrada em série. As dosagens irão depender das taxas de absorção, inactivação e excreção do fármaco, bem como de outros factores conhecidos pelos peritos na técnica. É de notar que os valores da dosagem também irão variar com a gravidade do estado a ser tratado. Entender-se-á também que, para qualquer indivíduo em particular, os regimes e horários de dosagem devem ser ajustados ao longo do tempo, de acordo com a necessidade individual e a opinião profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das composições.
Exemplos não limitativos de agentes antivirais que podem ser utilizados em combinação com os compostos aqui divulgados incluem 2-hidroximetil-5-(5 — fluorocitosin-l-il)-1,3-oxatiolano 11 (FTC)/ ο (-)-enantiómero de 2-hidroximetil-5(citosin-l-il)-1,3-oxatiolano (3TC); carbovir, aciclovir, interferão, famciclovir, penciclovir, AZT, DDI, DDC, D4T, abacavir, L-(-)-FMAU, pró-fármacos de fosfato L-DDA, e β-D-dioxolano-nucleósidos, tais como β-D-dioxolanil-guanina (DG), β-D-dioxolanil-2,6-diaminopurina (DAPD) , e β-0-άίοχοΐ3ηί1-β-ο1θΓοριΐΓίη3 (ACP) , inibidores de RT não-nucleósidos, tais como nevirapina, MKC-442, DMP-266 (sustiva) e também inibidores de proteases, tais como indinavir, saquinavir, AZT, DMP-450 e outros.
Também se divulga um método completamente diastereosselectivo para a introdução de flúor num precursor de anel de açúcar não-hidrato de carbono. O método inclui reagir um precursor de anel de açúcar não-hidrato de carbono, quiral, o (4S)-5-(oxi protegido)-pentan-4-olido, que pode ser preparado a partir de ácido L-glutâmico, com uma fonte electrófila de flúor incluindo, mas sem estar limitado a, N-fluoro-(bis)benzenossulfonimida, para dar o intermediário chave fluorolactona 6. A fluorolactona sofre redução ao lactol e é acetilado para dar o acetato anomérico e, em seguida, é utilizado para a sintese de vários β-ύ-α-2'-fluoronucleósidos novos. 0 D-enantiómero correspondente também pode ser sintetizado utilizando ácido D-glutâmico como um material de partida.
Em alternativa, um glical fluorado pode ser preparado que é desidrogenado e, em seguida, convertido num 2',3'-didesoxi-2',3'-didesidro-2'-fluoronucleósido ou num β-L ou β-ϋ-3η3ΕίηοΞί1-2'-fluoronucleósido, como referido a seguir.
Um método para a preparação fácil de 2',3'-didesoxi-2',3' -didesidro-2'-fluoronucleósidos também é apresentada que inclui a 12 condensação directa da 6-cloropurina sililada com o intermediário chave, que é preparado a partir de L-2,3-0-isopropilideno gliceraldeido.
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO A invenção, como aqui divulgada, é a utilização de um 2'-fluoronucleótido da fórmula citada na reivindicação 1, na preparação de um medicamento para o tratamento de hepatite em humanos e outros animais hospedeiros, em que o composto está opcionalmente em combinação com um veiculo farmaceuticamente aceitável. I. Composto Activo, e Seus Derivados e Sais
Fisiologicamente Aceitáveis
Um 2'-α-fluoronucleósido utilizado na invenção tem a estrutura:
Base
em que R1 é H, OH, OR3, N3, CN, halogéneo, incluindo F, ou CF3, alquilo inferior, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior, ou alcoxilo, e base refere-se a uma base de purina ou pirimidina. R2 é H, fosfato, incluindo monofosfato, difosfato, trifosfato, ou um 13 pró-fármaco de fosfato estabilizado; acilo, um lípido, ou um aminoácido; e R3 é acilo, alquilo, fosfato, ou outro grupo abandonante farmaceuticamente aceitável que, quando administrado in vivo, é capaz de sofrer clivagem ao composto parental. 0 termo alquilo, como aqui utilizado, a não ser que de outro modo especificado, refere-se a um hidrocarboneto de Ci a Cio, primário, secundário, ou terciário, linear, ramificado ou cíclico, saturado, e inclui especificamente metilo, etilo, propilo, isopropilo, ciclopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, ciclopentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, iso-hexilo, ciclo-hexilo, ciclo-hexilmetilo, 3-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, e 2,3-dimetilbutilo. 0 grupo alquilo pode estar opcionalmente substituído com um ou mais unidades seleccionadas do grupo que consiste em hidroxilo, amino, alquilamino, arilamino, alcoxilo, ariloxilo, nitro, ciano, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, fosfato, ou fosfonato, desprotegido, ou protegido se necessário, como conhecido pelos peritos na técnica, por exemplo, como ensinado em Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Segunda Edição, 1991. 0 termo alquilo inferior, como aqui utilizado, e a não ser que de outro modo especificado, refere-se a um grupo alquilo Ci a C4 saturado, linear, ramificado, ou se adequado cíclico (por exemplo, ciclopropilo). 14 0 termo alquilamino ou arilamino refere-se a um grupo amino que tem um ou dois substituintes alquilo ou arilo, respectivamente. 0 termo "protegido", como aqui utilizado, e a não ser que de outro modo definido, refere-se a um grupo que é adicionado a um átomo de oxigénio, azoto, ou fósforo para evitar o prolongamento da reacção ou para outro fins. São conhecidos, pelos peritos na técnica de sintese orgânica, uma grande variedade de grupos protectores de oxigénio e azoto. 0 termo arilo, como aqui utilizado, e a não ser que de outro modo especificado, refere-se a fenilo, bifenilo, ou naftilo, e de um modo preferido fenilo. 0 grupo arilo pode estar opcionalmente substituído com uma ou mais unidades seleccionadas do grupo que consiste em hidroxilo, amino, alquilamino, arilamino, alcoxilo, ariloxilo, nitro, ciano, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, fosfato, ou fosfonato, desprotegido, ou protegido se necessário, como conhecido pelos peritos na técnica, por exemplo, como discutido em Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Segunda Edição, 1991. 0 termo alcarilo ou alquilarilo refere-se a um grupo alquilo com um substituinte arilo. 0 termo aralquilo ou arilalquilo refere-se a um grupo arilo com um substituinte alquilo. 0 termo halo, como aqui utilizado, inclui cloro, bromo, iodo e fluoro. 0 termo base de purina ou pirimidina inclui, mas não está limitado a, adenina, N6-alquilpurinas, N6-acilpurinas (em que acilo é C(0) (alquilo, arilo, alquilarilo ou arilalquilo), 15 N -benzilpurina, N6-halopurina, N6-vinilpurina, N6-acetilénicopurina, N6-acilpurina, N6-hidroxialquilpurina, N6-tioalquilpurina, N2-alquilpurinas, N2-alquil-6-tiopurinas, timina, citosina, 5-fluorocitosina, 5-metilcitosina, 6-azapirimidina, incluindo 6-azacitosina, 2- e/ou 4- mercaptopirimidina, uracilo, 5-halouracilo, incluindo 5- fluorouracilo, C5-alquilpirimidinas, C5-benzilpirimidinas, C5-halopirimidinas, C5-vinilpirimidina, C5-acetilénicopirimidina, C5-acilpirimidina, C5-hidroxialquilpurina, C5-amidopirimidina, C5-cianopirimidina, C5-nitropirimidina, C5-aminopirimidina, N -alquilpurinas, N -alquil-6-tiopurinas, 5-azacitidinilo, 5-azauracililo, triazolopiridinilo, imidazolopiridinilo, pirrolopirimidinilo e pirazolopirimidinilo. As bases de purina incluem, mas não estão limitadas a, guanina, adenina, hipoxantina, 2,β-diaminopurina, e 6-cloropurina. Os grupos de oxigénio e azoto funcionais na base podem estar protegidos se necessário ou desejado. Os grupos protectores adequados são bem conhecidos pelos peritos na técnica e incluem trimetilsililo, dimetil-hexilsililo, t-butildimetilsililo e t-butildifenilsililo, tritilo, grupos alquilo, grupos acilo, tais como acetilo e propionilo, metanossulfonil, e p-toluenossulfonilo. 0 composto activo pode ser utilizado como qualquer derivado que, após a administração ao receptor, é capaz de proporcionar, directa ou indirectamente, o composto parental, ou que por si só exibe actividade. Exemplos não limitativos são os sais farmaceuticamente aceitáveis (também referidos como "sais fisiologicamente aceitáveis"), e um composto que foi alquilado ou acilado na posição 5' ou na base de purina ou pirimidina (também referidos como "derivados farmaceuticamente aceitáveis"). Além disso, as modificações podem afectar a 16 actividade biológica do composto, em alguns casos aumentar a actividade relativamente ao composto parental. Isto pode facilmente ser avaliado por preparação do derivado e testar a sua actividade antiviral, de acordo com os métodos agui descritos ou outro método conhecido pelos peritos na técnica. 0 termo acilo refere-se a um éster de ácido carboxilico em que a unidade não carbonilo do grupo éster é seleccionada de alquilo linear, ramificado ou cíclico, ou alquilo inferior, alcoxialquilo incluindo metoximetilo, aralquilo incluindo benzilo, ariloxialquilo, tal como fenoximetilo, arilo incluindo fenilo opcionalmente substituído com halogéneo, Ci a C4 alquilo ou Ci a C4 alcoxilo, ésteres sulfonato, tais como alquilo ou aralquilsulfonilo incluindo metanossulfonilo, o éster mono, di ou trifosfato, tritilo ou monometoxitritilo, benzilo substituído, trialquilsililo (e. g., dimetil-t-butilsililo) ou difenilmetilsililo. Os grupos arilo nos ésteres compreendem opcionalmente um grupo fenilo.
Como aqui utilizado, o termo "praticamente isento de" ou "praticamente na ausência de" refere-se a uma composição de nucleósido que inclui pelo menos 95% a 98% ou, de um modo mais preferido, 99% a 100%, do enantiómero designado desse nucleósido.
Formulações do Pró-fármaco Nucleótido
Qualquer um dos nucleósidos aqui descritos podem ser utilizados como um pró-fármaco nucleótido para aumentar a actividade, biodisponibilidade, estabilidade ou, de outro modo, alterar as propriedades do nucleósido. São conhecidos vários 17 ligandos de pró-fármaco nucleótido. Em geral, alquilação, acilação ou outra modificação lipófila do mono, di ou trifosfato do nucleósido irá aumentar a estabilidade do nucleótido. Exemplos de grupos substituintes que podem substituir um ou mais hidrogénios na unidade fosfato são alquilo, arilo, esteróides, hidrato de carbonos, incluindo açúcares, 1,2-diacilglicerol e álcoois. São descritos vários em R. Jones e N. Bischofberger, Antiviral Research, 27 (1995) 1-17. Qualquer um destes pode ser utilizado em combinação com os nucleósidos descritos para alcançar o efeito desejado. 0 nucleósido activo também pode ser utilizado como um lip ido de 5'-fosfoéter ou um lipido de 5'-éter, como descrito nas seguintes referências, que estão aqui incorporadas por referência: Kucera, L.S., N. Iyer, E. Leake, A. Raben, Modest E.K., D.L. W., e C. Piantadosi. 1990. "Novel membrane-interactive ether lipid analogs that inhibit infectious HIV-1 production and induce defective virus formation." AIDS Res. Hum. Retro Viruses. 6: 491-501; Piantadosi, C., J. Marasco C.J., S.L. Morris-Natschke, K.L. Meyer, F. Gumus, J.R. Surles, K.S. Ishaq, L.S. Kucera, N. Iyer, C.A. Wallen, S. Piantadosi, e E.J. Modest. 1991. "Synthesis and evaluation of novel ether lipid nucleoside conjugates for anti-HIV activity." J. Med Chem. 34: 1408-1414; Hosteller, K.Y., D.D. Richman, D.A. Carson, L.M. Stuhmiller, G.M.T. van Wijk, e H. van den Bosch. 1992. "Greatly enhanced inhibition of human immunodeficiency virus type I replication in CEM and HT4-6C cells by 3'-deoxythymidine diphosphate dimyristoylglycerol, a lipid prodrug of 3'-deoxythymidine." Antimicrob. Agents Chemother. 36: 2025-2029; Hosetler, K.Y., L.M. Stuhmiller, H.B. Lenting, H. van den Bosch, e D.D. Richman, 1990. "Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid 18 analogs of azidothymidine and other antiviral nucleosides." J. Biol. Chem. 2 65: 61127.
Exemplos não limitativos de patentes US que divulgam substituintes lipofílicos adequados que podem ser incorporados covalentemente no nucleósido, de um modo preferido, na posição 5'-OH do nucleósido ou preparações lipofílicas, incluem as Patentes U.S. N°. 5149794 (22 de Set., 1992, Yatvin et al.) ; 5194654 (16 de Mar., 1993, Hostetler et al., 5223263 (29 de
Junho, 1993, Hostetler et al.); 5256641 (26 de Out., 1993,
Yatvin et al.); 5411947 (2 de Maio, 1995, Hostetler et al.); 5463092 (31 de Out., 1995, Hostetler et al.); 5543389 (6 de
Ago., 1996, Yatvin et al.); 5543390 (6 de Ago., 1996, Yatvin et al.); 5543391 (6 de Ago., 1996, Yatvin et al.); e 5554728 (10 de
Set., 1996; Basava et al.). Os pedidos de patente internacionais que divulgam substituintes lipofílicos que podem ser ligados aos nucleósidos da presente invenção, ou preparações lipofílicas, incluem os documentos WO 89/02733, WO 90/00555, WO 91/16920, WO 91/18914, WO 93/00910, WO 94/26273, WO 96/15132, EP 0350287, EP 93917054.4 e WO 91/19721.
Os exemplos não limitativos de pró-fármacos nucleótidos estão descritos nas seguintes referências: Ho, D.H.W. (1973) "Distribution of Kinase and deaminase of Ιβ-D-arabinofuranosylcytosine in tissues of man and muse." Câncer Res. 33, 2816-2820; Holy, A. (1993) "Isopolar phosphorous-modified nucleotide analogues," Em: De Clercq (Ed.), Advances in Antiviral Drug Design, Vol. I, JAI Press, pp. 17 9-231; Hong, C.I., Nechaev, A., and West, C.R. (1979a) "Synthesis and antitumor activity of Ι-β-D-arabino-furanosylcytosine conjugates of cortisol and cortisone." Biochem. Biophys. Rs. Commun. 88, 1223-1229; Hong, C.I., Nechaev, A., Kirisits, A.J. 19
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Pode ser utilizada uma reacção diastereosselectiva para realizar a introdução de flúor na porção de açúcar de novos análogos de nucleósidos. Esta sintese pode ser utilizada para preparar derivados de purina e pirimidina. 0 passo chave na via de sintese é a fluoração de um precursor, anel de açúcar não hidrato de carbono quiral, (45)-5-(oxi-protegido)-pentan-4-ólido, por exemplo, (45)-5-(t-butildifenilsiloxi)-pentan-4-ólido 4 utilizando uma fonte de flúor electrófilo, incluindo, mas sem estar limitado a, N-fluoro-(bis)benzenossulfonimida 5. Esta classe, relativamente recente, de reagentes N-fluorossulfonimida foi originalmente desenvolvida por Barnette em 1984 e, desde então, foi objecto de várias melhorias e utilização como uma fonte adequada e altamente reactiva de flúor electrófilo (Barnette, W. E. J. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 452.; Davis, F. A.; Han; W., Murphy, C.K.J. Org. Chem. 1995, 60, 4730; Snieckus, V.; Beaulieu, F.; Mohri, K.; Han, W.; Murphy, C. K.; Davis, F.A. Tetrahedron Lett. 1994, 35(21), 3465). Muito frequentemente, estes reagentes são utilizados para entregar flúor aos nucleófilos, tais como enolatos e aromáticos metálicos (Davis, F.A.; Han; W., Murphy, C.K. J. Org. Chem. 1995, 60, 4730). Especificamente, a N-fluoro-(bis)benzenossulfonimida (NFSi) é um sólido estável ao ar, de fácil manuseamento, com volume estérico suficiente para fluorar, de modo estereosselectivo, o enolato da lactona 4 protegida com sililo. Como um exemplo deste processo, a sintese da fluorolactona 6 e a sua utilização como um intermediário comum na sintese de uma série de novos oí-2'-fluoronucleósidos está descrita em pormenor a seguir. Dada esta descrição, um perito na técnica pode modificar o processo, de um modo rotineiro, como desejado, para alcançar um objectivo desejado e para preparar um composto de interesse. 26
Pode ser utilizada qualquer fonte de flúor electrófilo para fluorar o precursor (4S)-5-(oxi-protegido)-pentan-4-ólido, por exemplo, (4S)-5-(t-butil-difenilsiloxi)-pentan-4-ólido. Fontes alternativas de flúor electrófilo incluem N-fluorossulfamas (Differding, et al., Tet. Lett. Vol. 29, N°. 47 pp 6087-6090 (1988); Chemical Reviews, 1992, Vol 92, N°. 4 (517)), N-fluoro- 0- benzenodissulfonimida (Tet. Lett. Vol. 35, páginas 3456-3468 (1994), Tet. Lett. Vol 35. N°. 20, páginas 3263-3266 (1994)); J. Org. Chem. 1995, 60, 4730-4737), 1-fluoroeteno e equivalentes sintéticos (Matthews, Tet. Lett. Vol. 35, N°. 7, páginas 1027-1030 (1994); Agentes de fluoração Accufluor vendidos pela Allied Signal, Inc., Buffalo Research Laboratory, Buffalo, New York (NFTh (bis (tetrafluoroborato) de 1-fluoro-4-hidroxi-l,4-diazoa-biciclo[2.2.2]octano), NFPy (heptafluorodiborato de N-fluoropiridinio piridina), e NFSi (N-fluorobenzenossulfonimida); reagentes de fluoração electrófilos vendidos pela Aldrich Chemical Company, Inc., incluindo sais de N-fluoropiridinio (triflato de 1-fluoro-2,4,6-trimetilpiridínio, triflato de 3,5-dicloro-l-fluoropiridinio, triflato de 1-fluoropiridinio, tetrafluoroborato de 1- fluoropiridinio e heptafluorodiborato de 1-fluoropiridinio piridina) ver também J. Am. Chem. Soc., Vol 112, N°. 23 1990); N-fluorossulfonimidas e -amidas (N-fluoro-N-metil-p-toluenossulfonamida, N-fluoro-N-propil-p-toluenossulfonamida e N-fluorobenzenossulfonimida); fluoreto de N-fluoro-quinuclidinio (J. Chem. Soc. Perkin Trans I 1988, 2805-2811); perfluoro-2,3,4,5-tetra-hidropiridina e perfluoro-(1-metilpirrolidina), Banks, Cheng, e Haszeldine, Heterocyclic Polyfluoro-Compounds Part II (1964); 1-f luoro-2-piridona, J. Org. Chem., 1983 48, 761-762; centros estereogénicos quaternários contendo um átomo de flúor (J. Chem. Soc. Perkin Trans. páginas 221-227 (1992)); 27 triflato de N-fluoro-2,4,6-piridínio, Shimizu, Tetrahedron Vol 50(2), páginas 487-495 (1994); heptafluorodiborato de N-fluoropiridínio piridina, J. Org. Chem. 1991, 56, 5962-5964;
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Uma vantagem significativa desta metodologia é a capacidade de aceder separadamente tanto ao enantiómero D (la) "natural" ou ao enantiómero L (lb) "não natural" dos nucleósidos, por escolha adequada do material de partida ácido L- ou D-glutâmico, respectivamente.
Fla
Βτ = H, CH3, F R2 - OH, NH2, NHAc A lactona 4 foi sintetizada pela via apresentada no Esquema 1 a partir do ácido L-glutâmico como descrito por Ravid et ai. (Tetrahedron 1978, 34, 1449) e Taniguchi et ai. (Tetrahedron 1974, 30, 3547) . 28
Esquema 1
HO
2 H^COOH ^NHa .
NaN02 / HCI HOOC- o 50 - 70 %
3 TBDPSO—* 0 xy° 4
Sabe-se que o enolato da lactona 4, preparado a -7 8 °C com LiHMDS em THF, é estável. Foram realizadas várias sínteses utilizando este enolato, incluindo a adição de electrófilos, tais como difenildisselenido, difenildissulfureto e haletos de alquilo com elevado rendimento (Liotta, D.C.; Wilson, L.J. Tetrahedron Lett. 1990, 31(13), 1815; Chu, C.K.; Babu, J.R.;
Beach, J.W.; Ahn, S.K.; Huang, H.; Jeong, L.S.; Lee, S.J. J. Org. Chem., 1990, 55, 1418; Kawakami, H.; Ebata, T.; Koseki, K.; Matsushita, H.; Naoi, Y.; Itoh, K. Chem. Lett. 1990, 1459) . No entanto, a adição de uma solução de THF de 5 ao enolato de 4 proporcionou rendimentos baixos do produto monofluorado desejado 6. Formaram-se vários produtos secundários incluindo o que se presumiu ser uma lactona difluorada que não se separa das outras impurezas. Por esta razão, a ordem de adição dos reagentes foi alterada de modo a que a lactona 4 e o NFSi 5 fossem conjuntamente dissolvidos em THF e arrefecidos a -78 °C. A adição lenta de LiHMDS resultou numa reacção que proporcionou 6 como o único produto, além de uma pequena quantidade de material de partida que não reagiu (eq 1). 29 (1)
Equação 1
2. LÍHMDS A fluorolactona 6 poderia ser obtida com um rendimento de 50-70% após cromatografia em coluna de silica gel e cristalização. Esta reacção proporcionou um único diastereoisómero de 6, presumivelmente devido à interacção do grupo TBDPS estericamente volumoso e do reagente de fluoração 5 volumoso. A identificação da fluorolactona 6 como o isómero fluoro α ou "para baixo do plano" foi conseguida por comparação com dados de RMN publicados anteriormente e por determinação da estrutura cristalina por raio-X do seu enantiómero 20. A lactona 6 foi transformada no acetato 8 anomérico, como apresentado no Esquema 2. É importante notar que o lactol 7 existe exclusivamente como o anómero β e que o acetato 8 não apresenta nenhum anómero α detectável por RMN, como descrito por Niihata et al. (Buli. Chem. Soc. Jpn. 1995, 68, 1509). 30 6
Esquema 2
DIBALH
TBDPSO 98%
Ac20 , DMAP
TBDPSO F 7
F8 O acoplamento de 8 com bases de pirimidina sililadas foi realizado por metodologia de Vorbruggen corrente (Tetrahedron Lett. 1978, 15, 1339) utilizando triflato de TMS como o ácido de Lewis. Em alternativa, pode utilizar-se qualquer outro ácido de Lewis que se saiba útil na condensação de uma base com um hidrato de carbono para formar um nucleósido, incluindo cloreto de estanho, cloreto de titânio e outros compostos de estanho ou de titânio. Várias bases foram acopladas com sucesso, com elevados rendimentos desde 72%-100%, após cromatografia em coluna (eq 2, Tabela 1).
Equação 2
(2) triflato de TMS 72-100% F F β:α = 2:1 9,10,11,12,13 31 8
Tabela 1. Glicosilação de Pirimidinas Substituídas com 8
Comp. Ri r2 rendimento 9 F OH 87% 10 F nh2 99% 11 H NHAc 91% 12 H nh2 72% 13 ch3 OH 89% 0 RMN de protão indicou que a razão entre os anómeros de nucleósido β e α foi de aproximadamente 2:1 em todos os casos. Os nucleósidos protegidos com sililo não puderam ser resolvidos por cromatografia em coluna nos anómeros separados. No entanto, após desprotecção do 5'-oxigénio com NH4F em metanol (eq 3), os anómeros a e β já puderam ser prontamente separados e os resultados estão resumidos na Tabela 2.
Equação 3 TBDPSCL l| l Fβ:α = 2:1 9,10,11,12,13
<3) 14a, 15a, 16a, 17a, 18a 14b, 15b, 16b, 17b, 18b 32
Tabela 2. Desprotecção de Nucleósidos
Ri r2 a rendimento b rendimento F OH 14a 19% 14b 48% F nh2 15a 27% 15b 51% H NHAc 16a 17% 16b 31% H nh2 17a — 17b — ch3 OH 18a 12 18b 33% A classificação dos nucleósidos livres como α ou β teve como base o desvio químico do protão anomérico (Tabela 3) e a polaridade dos nucleósidos como observado por cromatografia em camada fina. Foi observada uma tendência para todos os pares α/β de nucleósidos livres em que o composto menos polar dos dois tinha um desvio químico do protão anomérico para campo consideravelmente mais alto do que o do composto mais polar.
Tabela 3. Desvio Quimico do Protão Anomérico (ppm)
Comp. α β 14 a,b 6, 11 5,89 15 a,b 6, 08 5, 92 16 a,b 6, 09 5, 90 17 a,b 6, 05 5, 92 18 a,b 6, 11 5, 93 A correlação entre o desvio químico do protão anomérico e a estrutura absoluta foi verificada por comparação de 18a (Niihata, S.; Ebata, T.; Kawakami, H.; Matsushida, H. Buli. 33
Chem. Soc. Jpn. 1995, 68, 1509) e 18b (Aerschot, A.V.;
Herdewijn, P.; Balzarini, J.; Pauwels, R.; De Clercq, E. J. Med. Chem. 1989, 32, 1743) com dados espectroscópicos previamente publicados e através da determinação da estrutura cristalina por raio-X de 14b e 15b. Esta constatação é o oposto da tendência habitual para os nucleósidos, nos quais o anómero α é normalmente o menos polar dos dois. Presumivelmente, nos nucleósidos 2'-fluorados "para baixo do plano", o dipolo forte da liqação C-F opõe-se ao dipolo da liqação anomérica C-N no isómero β e reduz o dipolo molecular total. Contrariamente, o anómero α tem uma geometria que permite o reforço do dipolo molecular através da adição de dipolos da ligação C-F e C-N. Assim, o anómero α é mais polar do que anómero β no caso de a-2'-fluoronucleósidos.
Os anómeros α e β 17a e 17b não puderam ser separados por cromatografia em coluna uma vez que o grupo amino livre provocou a deslocação rápida dos nucleósidos na silica gel. Assim, foi necessário utilizar T^-acetilcitosina para preparar 11 e, em seguida, resolver 16a e 16b. O grupo A^-acetilo foi removido quantitativamente com uma solução saturada de amoníaco em metanol de modo a obter 17a e 17b separados. Quando se utilizou 5-fluorocitosina como a base (composto 10) , os anómeros 15a e 15b fo ram facilmente separados e não se observou nenhum descida rápida na sílica gel.
Dos dez nucleósidos apresentados na Tabela 2, parece que apenas o 17b (Martin, J. A.; Bushnell, D.J.; Duncan, I.B.; Dunsdon, S.J.; Hall, M.J.; Machin, P.J.; Merrett, J.H.; Parkes, K.E.B.; Roberts, N.A.; Thomas, G.J.; Galpin, S.A.; Kinchington, D. J. Med. Chem. 1990, 33 (8), 2137; Zenchoff, G.B.; Sun, R.;
Okabe, M. J Org. Chem. 1991, 56, 4392), 18a (Niihata, S.; Ebata, 34 T.; Kawakami, H.; Matsushida , H. Buli. Chem. Soc. Jpn. 1995, 68, 1509) e 18b (Aerschot, A. V.; Herdewijn, P.; Balzarini, J. ; Pauwels, R.; De Clercq, E. J. Med. Chem. 1989, 32, 1743), tal como os vários análogos de 2'-β ou "para cima do plano" fluoronucleósido conhecidos foram sintetizados a partir de precursores naturais (i. e., estão na configuração β-D). 0 flúor é normalmente introduzido nestas moléculas por ataque nucleófilo num nucleósido anidro (Mengel, R.; Guschlbauer, W. Angew. Chem. , Int. Ed. Engl. 1978, 17, 525) ou por substituição e inversão de um grupo hidroxilo fixado estereoquimicamente com trifluoreto de dietilaminoenxofre (DAST) (Herdewijn, P.; Aerschot, A.V.; Kerremans, L. Nucleosides Nucleotides 1989, 8(1), 65). Uma vantagem da presente metodologia é a de que não é necessário nenhum grupo hidroxilo para a introdução do flúor. Assim, o processo não está limitado a nucleósidos naturais ou açúcares como materiais de partida, e proporciona um meio fácil de aceder a enantiómeros não naturais dos 2'-fluoronucleósidos.
Em conformidade, vários nucleósidos não naturais foram sintetizados utilizando esta via sintética com ácido D-glutâmico 19 como o material de partida (Esquema 3) . 0 precursor do anel de açúcar 20 foi fluorado do modo descrito acima e acoplado com várias bases sililadas (Tabela 4). 35
Esquema 3
TBDPSO ácido D-glutâmico 19
Yk TBDPSO. nw DIBALH —‘ OH -> Y>° TBDPSO*. Ac20 1/—kOAc °F 20 base sililada 21
DMAP r 22 UL -► TBDPSO. Ç1 ° triflato de TMS y—i í „ 23,24,25
NH<F HO.>3··. ocr> 'v^n + R2 26a, 27a, 28a ,-ο.X? 26b, 27b, 28b
Tabela 4. Rendimentos para Análogos de Nucleósideos Não Naturais
Comp. rendimento (23-25) Ri r2 a rendimento b rendimento 23 87% ch3 OH 26a 24% 26b 61% 24 85% F OH 27a 35% 27b 51% 25 99% F nh2 28a 34% 28b 52%
TBDPSO
1. Cloreto de metanossulfonilo2. Trietilamina
F
36 7 A síntese com sucesso de 29, como apresentado no Esquema 4, permite o acesso a duas categorias de nucleósidos. A primeira é a classe de compostos conhecida como 2',3'-didesoxi-2' , 3' -didesidro-2-2'-fluoronucleósidos, 30, e a segunda é os análogos "para cima do plano"-fluoro ou arabino, 31, dos nucleósidos descritos no Esquema 5 a seguir.
Esquema 5
30
Ri = H, CH3, F, Cl, etc. R2 = OH, NH2 H31
Os compostos 30 e 31 podem ser sintetizados a partir de um intermediário comum 32, que pode ser obtido por selenilação do fluoroglical 29. O composto 30 não é utilizado na invenção reivindicada. O composto 31, por outro lado, pode ser utilizado na invenção reivindicada. 37
Esquema 6
TBDPSO
29 1. PhSeCI 2. base sililada
F
0 composto 32 selenilado pode ser transformado no análogo "para cima do plano" fluoro 31 através de redução com níquel de Raney. Em alternativa, a oxidação do selenido 32 com NaICh ou peróxido de hidrogénio, seguido de eliminação térmica do intermediário selenóxido conduziu a 30. Ambas as transformações nos sistemas não fluorados estão bem documentadas e foram descritas (Wurster, J.A.; Tese de doutoramento, Universidade de Emory, 1995; Wilson, L.J.; Tese de doutoramento, Universidade de Emory, 1992).
Além disso, a sintese dos enantiómeros dos nucleósidos 30 e 31 também é possível uma vez que são preparados a partir do enantiómero de 29. 38
Esquema 8
A mesma série de transformações químicas que foram utilizadas para a síntese de 30 e 31 também podem ser utilizadas para a síntese de 34 e 35. O composto 34 não é utilizado na invenção reivindicada. O composto 35, por outro lado, pode ser utilizado na invenção reivindicada.
Secção Experimental
Processos Gerais:
A N-fluoro-(bis)benzenossulfonimida 5 foi obtida da Allied Signal e foi utilizada sem mais purificação. Todos os outros reagentes foram obtidos da Aldrich Chemical Company e foram utilizados sem mais purificação. Os pontos de fusão foram determinados num dispositivo de ponto de fusão em capilar Thomas Hoover e não estão corrigidos. Os espectros de IV foram obtidos num espectrómetro de FT-IR Nicolet Impact 400. Os espectros de RMN de ΧΗ e RMN de 13C foram registados num espectrómetro NT-360 ou Varian 400 MHz. As placas de TLC eram de sílica gel 60 F254 (0,25 mm de espessura) adquiridas da EM Science. A cromatografia flash foi realizada em sílica gel 60 (230-400 mesh ASTM) da EM 39
Science. Todas as reacções foram realizadas em material de vidro seco com chama, sob uma atmosfera de árgon seco. Os solventes foram removidos por evaporação em rotavapor. As análises elementares foram realizadas no Atlantic Microlab, Inc, Atlanta, GA. (2S,4J?) -5- (t-butildifenilsiloxi) -2-fluoropentan-4-ólido (20) . Foi adicionado, a um balão, em 250 mL de THF anidro, (4R)-5-(t-butildifenilsiloxi)-pentan-4-ólido (20,0 g, 0,0564 mol, 1,0 eq.) e N-fluoro- (bis)benzenossulfonimida (NFSi) 5 (17,80 g, 0,0564 mol, 1,0 eq.). A solução foi arrefecida a -78 °C e foi adicionado, gota a gota, durante um periodo de 1 hr, 68,0 mL (0,0680 mol, 1,2 eq.) de uma solução de LiHMDS a 1,0 M em THF. Esta foi deixada a agitar a -78 °C durante mais 2 hrs. e, em seguida, foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante uma hora. Após a reacção estar completa, foi parada com 10 mL de solução saturada de NH4C1. A mistura foi diluída com três volumes de éter dietílico e foi vertida num volume igual de NaHCCç saturado. A camada orgânica foi lavada uma segunda vez com NaHCCç saturado e uma vez com NaCl saturado. A camada orgânica foi seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada para dar um óleo amarelo claro. O óleo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel utilizando um sistema de solvente éter dietílico a 30%/hexanos a 70%. O sólido branco resultante foi então cristalizado de hexanos a quente para proporcionar 13,04 g (rendimento de 62%) de um sólido transparente cristalino:
Rf (éter dietílico a 30%/hexanos a 70%) = 0,26/ p. f. 115-116 °C. RMN de XH (360 MHz, CDC13) d 7 O r- 1 00 KO (m, 4H) , 7,45-7,35 (m, 6H) , 5,49 (dt, J = 52,9 e 7,9 Hz, 1H) , 4, 69 (d, J = 9,36 Hz, 1H) , 3,91 (d, J = 11 , 5 Hz, 1H), 3, 60 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 2, 72- 2,40 (m, 2H) , 1,05 (s, 9H); RMN de 13C (100 MHz, CDCI3) d 172,1 (d, J = 20,5 Hz) , 135,5, 135,4, 132 ,3, 131,7, 130,1, 128,0, 127, 9, 85,6 (d, J = 186,6 Hz), 77,3 (d, J = 5 ,3 Hz), 65,0, 31,8 (d, J = 20,5 Hz), 26 ,7, 19,1/ IV (películ a fina) 2958, 40 1796, 1252, 1192, 1111, 1016 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C21H25O3FSÍLÍ: 379, 1717. Encontrada: 379, 1713. Anal. Cale. CHAFFS: C, 67,71; H, 6,76. Encontrada: C, 67,72; H, 6,78. 5-0-(t-butildifenilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-(L)-eritron-pentofuranose (21). Foi adicionado, a um balão, lactona
20 (12,12 g, 0, 0325 mol, 1,0 eq.) e 240 mL de THF anidro. A solução foi arrefecida a -78 °C e foi adicionado, gota a gota, durante um periodo de 30 min, 65 mL (0,065 mol, 2,0 eq.) de uma solução de DIBALH a 1,0 M em hexanos. Esta foi deixada a agitar a -78 °C durante 3 h, tempo após o qual a reacção foi parada pela adição lenta de 2,93 mL de água (0,163 mol, 5,0 eq.). A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 1 h, tempo após o qual se formou um sólido gelatinoso límpido em todo o balão. A mistura reaccional foi diluída com dois volumes de éter dietílico e foi vertida num volume igual de solução aquosa saturada de tartarato de sódio e potássio num Erlenmeyer. Esta foi agitada durante 20 min. até quebrar a emulsão. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída três vezes com 250 mL de éter dietílico. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas, para dar um óleo amarelo claro. 0 produto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel, utilizando um sistema de solvente hexanos/acetato de etilo 6:1. O óleo claro resultante foi cristalizado de hexanos a ferver, para dar 11,98 g (rendimento de 98%) de um sólido branco cristalino:
Rf (éter dietílico a 30%/hexanos a 70%) = 0 ,33; p. f . i 56- 67 °C. RMN de ΧΗ (360 MHz, CDCI3) d 7, 68- 7, 66 (m, 4H) , 7,55- 7, 38 (m, 6H) , 5,39 (t, J = 7, 6 Hz, 11H) , 4, 99 (dd, J = 52,2 e 4 ,3 Hz, 1H) , 4,52 (m, 11H), 3 ,88 (dd , J = = 10 , 8 e 2,5 Hz, 1H), 3, , 65 (d , J = 7 ,9 Hz, 1H) , 3,49 (dd, J = 7, 9 e 1,8 Hz, 1H) , 2,44- -2, 07 (m, 2H) , 1,07 (s, 9H) ; RMN de : L3C (] L 0 0 MHz, CDCI3) d 135,7, 135 ,5, 41 132,2, 132,1, 130,2, 130,0, 129,8, 127,9, 127,7, 99,8 (d, J = 31,1 Hz), 96,6 (d, J = 178,3 Hz), 79, 4, 64, 8, 29, 9 (d, J = 21,2
Hz), 26,8, 19,2; IV (película fina) 3423, 2932, 1474, 1362, 1113 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C21H27O3FSÍLÍ: 381,1874.
Encontrada: 381,1877, Anal. Cale., C21H27O3FSÍ: C, 67,35; H, 7,27. Encontrada: C, 67,42; H, 7,31. l-O-Acetil-5-O-(t-butildifenilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-(L)-eritron-pentofuranose (22). Foi adicionado, a um balão, lactol 21 (8,50 g, 0,0227 mol, 1,0 eq.) e 170 mL de CH2CI2 anidro. Em seguida, foram adicionados DMAP (0,277 g, 0,00277 mol, 0,1 eq.) e anidrido acético (13,5 mL, 0,143 mol, 6,3 eq.) e agitados à temperatura ambiente durante a noite. Após estar completa, a reacção foi vertida numa solução saturada de NaHCC>3. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída três vezes com clorofórmio. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04, filtradas e o solvente removido para proporcionar um óleo amarelo claro. O óleo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel utilizando um sistema de solvente hexanos/acetato de etilo 8:1 para dar 9,85 g (rendimento de 99%) de um óleo claro incolor: Rf (éter diet í lico a 30% /hexanos a 70% ) = 0,44 ; RMN de XH (360 MHz, CDCI3) d 7, 69-7, 67 (m , 4H) , 7,4 3-7, 38 (m, 1 6H), 6, 30 (d, J = 10 ,4 Hz, 1H) r 5,06 > (d, J = 54, 9 Hz, 1H) , 4, 53 (m, 1H) , , 3,81 (dd, J = 10, 8 e 4, 3 Hz, 1H) , 3,72 (dd, , J = 10 , 8 e 4, 3 Hz , 1H), 2,38-2,12 (m, 2H) , 1,89 (s, 3H) , 1, 07 (s, 9H) ; RMN de 13c (100 MHz, CDCI3) d 1 6 9,4, 135,6, 135, 5, 133,2, 133,1, 129, 8, 129, 7, 127,8, 127,7, 99, 3 (d, J = 34,1 Hz) , 95, 5 (d, J = 178 ,2 Hz), 81,4, 65, 3, 31, 6 (d, J = 20,5 Hz) , 26, 8, 21,1, 19,3; IV (película fina) 3074, 2860, 1750, 1589, 1229, 1113 cm-1; HRMS calculada para [M- OCOCH3] C21H26O2FSÍ: 357,1686, Encontrada: 357,1695. Anal. Cale., C23H29O4FSÍ: C, 66, 32; H, 7,02. Encontrada: C, 66, 30; H, 7,04. 42
Processo representativo para o acoplamento de uma base sililada com 22: (L)-5'-O-(t-butildifenilsilil)-2',3-didesoxi- 2'-fluoro-5-fluorocitidina (25). Foi adicionado, a um balão equipado com uma cabeça de destilação pequena, 5-fluorocitosina (2,01 g, 15,6 mmol, 5,0 eq) , 35 mL de 1,1,1,3,3,3- hexametildissilazano e uma quantidade catalítica (~ 1 mg) de
(NH4)2S04. A suspensão branca foi aquecida à ebulição durante 1 h até que a base fosse sililada e a reacção fosse uma solução límpida. O excesso de HMDS foi removido por destilação e o resíduo oleoso que restou foi colocado sob vácuo durante 1 h para remover os últimos vestígios de HMDS. Resultou um sólido branco que foi dissolvido, sob árgon, em 5 mL de 1,2-dicloroetano anidro. Foi adicionado, a esta solução límpida, uma solução de acetato 22 (1,30 g, 3,12 mmol, 1,0 eq.) em 5 mL de 1,2-dicloroetano anidro. Foi adicionado, a esta, à temperatura ambiente, trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (3,32 mL, 17,2 mmol, 5,5 eq.). A reacção foi seguida por TLC (metanol a 10%/CH2Cl2 a 90%) e foi observado estar completa em 4 h. A mistura reaccional foi vertida em NaHCCb saturado. Em seguida, a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída três vezes com clorofórmio. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04, filtradas e o solvente removido para proporcionar uma espuma branca. O composto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel utilizando um sistema de solvente gradiente desde CH2C12 a 100% até metanol a 10% em CH2C12. O composto foi isolado como 1,51 g (rendimento de 99%) de uma espuma branca: mistura de anómeros Rf (EtOAc a 100%) = 0,36/ p.f. 74-80 °C. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) d 8,84 (sl, 1H) , 8,04 (d, J = 6,4 Hz, 0,67H), 7, 67-7, 63 (m, 4H) , 7,51-7,39 (m, 6, 33H) , 6,11 (d, J = 20 Hz, 0,33H) , 5,98 (d, J = 16,4 Hz, 0,67H), 5,88 (sl, 1H) , 5, 41 (d, J = 52,4 Hz, 0,33H), 5,23 (dd, J = 50,4 e 4 Hz, 0, 67H) , 4,56 43 (m, 0,33Η) , 4,45 (m, 0,67Η), 4,23 (dd, J = 12,0 e 1,6 Hz, 0,67H), 3,89 (dd, J = 11,2 e 3,2 Hz, 0,33H), 3,74-3,66 (m, 1H), 2,45- 1, 96 (m, 2H) , 1,09 ( s, 6H) , 1, 06 (s, 3H), ; RMN de 13C (100 MHz, CDCI3) d 158,6 (d , J = 14,4 Hz) , 158,4 (d, J = 14,4 Hz) , 153, 9, , 153,8, 136,6 (d, J = 240,5 Hz) , 136,3 (d, J = 239,7 Hz) , 135, 6 , 135, 56, 135, 5, 135 ,4, 133 ,1, 132,9, 132,5, 132,4, 130,1 , 130, .0, 129, 9, 127,9, 127, 8, 125, 8 (d, J = 33 ,4 Hz) , 124,6 (d, J ' = 32 ,6 Hz) , 96,5 (d, J = 182,0 Hz), 91,7 (d , J = 185,1), 90,7 (d, J = 35, 6 Hz), 87,7 (d, J = 15 ,2 H !z), 81,5 , 79,5 , 64,9, O OO KO 33, 5 (d , J = = 20,5 Hz) , , 30 ,6 (d, J = 20,4 Hz) , 26,9 , 26,8, 19,22 , 19, 18; IV (película fina) 3300, 2960, 1682, , 1608 , 1513, 1109 cm1; HRMS calculada para [M+Li] C25H29N3O3SÍF2LÍ: 492,2106.
Encontrada: 492,2085. Anal. Cale. C25H29N3O3SÍF2 · 1/2 H20: C, 60,71; H, 6,11; N, 8,50. Encontrada: C, 60,67; H, 6,03; N, 8,44.
Processo Representativo para a desprotecção de nucleósidos protegidos com sililo: a- e β-(L)-2' ,3'-didesoxi-2'-fluoro-5-fluorocitidina (28a e 28b): O nucleósido 25 (1,098 g, 2,26 mmol, I, 0 eq.) foi dissolvido em 15 mL de metanol ao qual foi adicionado fluoreto de amónio (0,838 g, 22,6 mmol, 10,0 eq.). Este foi vigorosamente agitado durante 24 h, tempo após o qual a TLC (etanol a 15%/acetato de etilo a 85%) revelou que a reacção estava completa. A mistura reaccional foi diluida com três volumes de acetato de etilo e foi filtrada por uma pequena camada de silica gel (1 cm) . A camada foi enxaguada com 200 mL de solução de etanol a 15%/acetato de etilo a 85% e o solvente foi removido para proporcionar uma espuma branca. O composto foi purificado por cromatografia em coluna de silica gel utilizando um sistema de solvente etanol a 15%/acetato de etilo a 85% que também efectuou a separação dos anómeros α e β. O rendimento de α como uma espuma branca foi de 0,190 g (0,768 mmol, rendimento de 34%) e o rendimento de β como uma espuma branca foi de 0,290 44
EtOAc a g (1,17 mmol, rendimento de 52%): (28a) Rf (EtOH a 15%, 85%) 0,22 ; p. f. 199-2 03 °C (dec. ) · RMN de XH (4 ( D0 MHz , CD3OD) d 7,78 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6, 07 (d, J = 19,2 Hz , 1H) , r 5,37 (d, J = 54,0 Hz, 1H), 4, 60 (m, 1H) , 3 , 80 (dd, J = 12,0 e 3,2 Hz, 1H) , 3, 56 (dd , J = 12 ,4 e 4,4 Hz, 1H) , 2,40-2, 00 (m, 2H) ; RMN de 13c 1 [100 MHz, DMSO-de) d 157,7 (d, J = 13,6 Hz) , : 153,2, 135,9 (d, J = 239, 0 Hz) , 126,2 (d , J = 31, 1 Hz) , 92,4 (d, J = 183,6 Hz), 86,7 (d, J = = 15,2 Hz) , 79, 6, 62, 7, 33,3 (d, J = 2 0,5 Hz) ; IV (KBr) 334 Í3, 3100 r 1683, 1517, 1] L 04 cm 1 . r HRMS calculada para [M+Li] C9H11N3O3F2LÍ: 254,0929. Encontrada: 254,0919.
Anal. Cale.; C9H11N3O3F2· 1/2 H20: C, 42,19; H, 4,72; N, 16,40. Encontrada: C, 42,44; H, 4,56; N, 16, 56. (28b) Rf (EtOH a 15%,
EtOAc a 85%) = 0,37; p.f. 182-186 °C (dec.). RMN de 3H (400 MHz, DMSO-de) d 8,32 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,79 (sl, 1H), 7,53 (sl, 1H) , 5,81 (d, J = 16,8 Hz, 1H) , 5,37 (t, J = 4,8 Hz), 5,18 (dd, J = 51, 6 e 3,2 Hz, 1H), 4, . 32 (m, 1H) , 3, 88 (dd, J = 12,0 e 2,8 Hz, 1H) , 3 ,59 (dd, J = 12 ,4 e 2, 4 Hz, 1H) , 2,20-1, 99 (m, r 2H) ; RMN de 13C (100 MHz, . DMSO- d6) d 1 57,7 (d, J = 13,7 Hz) , 153,2, 136, 1 (d, J = 237, 4 Hz) , 125,3 (d, J = 33,4 Hz) , 97, 3 (d, J = 176, 8 Hz) , 89, 9 (d, J = 35 , 7 Hz ) , 81 ,6, 60,2 Ϊ, 30, 3 (d, J = 19, 7 Hz) ; IV (KBr) 34 87, 2948, 1678 , 1509, 1122 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C9H11N3O3F2LÍ: 254,0929. Encontrada: 254,0935. Anal. Cale., C9H11N3O3F2: C, 43,73; H, 4,49; N, 17,00. Encontrada: C, 43,69; H 4,53; N, 16,92. (D)-5'-O-(t-butildifenilsilil)-2',3'-didesoxi-2'-fluoro-5-fluorouridina (9), mistura de anómeros Rf (hexanos/EtOAc 1:1) 0,48; p.f. 65-70 °C. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC1 3) d 10,0 (ml, 1H) , 7, 99 (d, J = 5, 6 Hz, 0,63H), 7,65 (m, 4H) , 7, 42 (m, 6,37H), 6, 12 (dd, J = 18,0 e 1 , 6 Hz, 0,37H), 6,00 (d, J = 16 Hz, 0,63H), 5,37 (dd, J = 54,6 e 2,4 Hz, 0,37H), 5,22 (dd, J = 50,4 e 4 Hz, 0, 63H) , 4,57 (m, 0,37H) , 4,44 (m, 0,63H) , 4, 22 (dd, J = 12 , 2 e 45 2,0 Hz, 0, 63H), 3, 92 (dd, J = 11, 2 e 3,2 Hz , 0,37 H) , 3, 70 (m, 1H) , 2,22 (m, 2H) , 1,09 (s, 5,67H) , 1, 074 (s , 3,3 3 H) ; RMN de 13c (100 MHz, CDCI3) d 157,2 (d, , J = 31,7 Hz) r 157,1 (d, . J = 25,8 Hz) , 149, 1, , 148,8, 140,4 (d, J = = 236, 6 Hz) r 140,1 (d, J = ^ 235,2 Hz) , 135, , 6 ·, 135,5, , 135,4, 132, 9, 132 ,7, 132,4, 132 ,3, 130 ,1, 130, 0, 129 ,9, 127, 9, 127,8, 125 ,1 (d, J = = 34,9 Hz), 123 , 6 (d, J = 34, Hz), 96,4 (d, J = 182, 0 Hz) , 92, 0 (d, J = 185, 9 Hz) , 90,2 (d, J = 37,2 Hz) , 87,0 (d, J = 15 i,2 Hz) , 81,7 , 79,8, 64 ,8, 63, 0 , 33, 3 (d, J = 21,2 Hz), 31, 0 (d, J = 21 ,2 Hz) , 26,9, 26 ,8, 19,2; IV (película fina) 3185, 1722, 1117 cm-1; HRMS calculada para [M+l] C25H29N2O4SÍF2: 487, 1866. Encontrada: 487,1853. Anal.
Cale. C25H28N2O4SÍF2: C, 61,71: H, 5,80: N, 5,76. Encontrada: C, 61,72: H, 5,86; N, 5,72. (D)-5'-O-(t-butildifenilsilil)-2' ,3'-didesoxi-2'-fluoro-5-fluorocitidina (10). mistura de anómeros Rf (EtOAc a 100%) = 0,36; p.f. 75- 81 °C. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3) d 8,50 (ml, 1H) , 8,05 (d, J = 6, 0 Hz, 0, 67H), 7, 67-7, 63 (m, 4H) , 7,51-7,39 (m, 6, 33H) , 6,10 (d, J = 20 Hz, 0,33H) , 5,98 (d, J = 16,4 Hz, 0, 67H) , 5,62 (ml, 1H) , 5,41 (d, J = 52,4 Hz, 0,33H), 5,23 (dd, J = 51,6 e 4 Hz, 0,67H), 4,57 (m, 0,33H), 4,48 (m, 0,67H), 4,24 (dd, J = 12,4 e 2,0 Hz, 0,67H), 3,89 (dd, J = 11,2 e 3,2 Hz, 0,33H) , 3, 74-3, 66 (m, 1H) , 2,39-1, 95 (m, 2H) , 1,09 (s, 6H) , 1,06 (s, 3H) ; RMN de 13C (100 MHz, CDCI3) d 158,4 (d, J = 14,4
Hz), 158,3 (d, J = 15,2 Hz), 153, 8, 153, 7, 136, 5 (d, J = 240,5
Hz), 136,2 (d, J = 241,8 Hz), 135,59, 135,56, 135,4, 133,0, 132, 9, 132,5, 132,4, 130,1, 130,0, 129, 9, 127, 9, 127,8, 124,8 (d, J = 31,9 Hz), 96,5 (d, J = 181,3 Hz), 91,8 (d, J = 175,2
Hz), 90,7 (d, J = 24,9 Hz), 87,8 (d, J = 21,2 Hz), 81,6, 79,6, 64, 9, 63, 0 33, 5 (d, J = 19,7 Hz), 30,6 (d, J = 21,3 Hz), 26,9, 26,8, 19,2, 14,2; IV (película fina) 3304, 2959, 1680, 1621, 1508, 1105 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C25H29N3O3SÍF2LÍ: 46 492,2106. Encontrada: 492,2110. Anal. Cale. C25H29N3O3SÍF2: C, 61,84/ H, 6,02/ N, 8,65. Encontrada: C, 61,86/ H, 6,09/ N, 8,55. (D) -í^-acetil-S' -O- (t-butildifenilsilil) -2' ,3' -didesoxi-2' -fluoro-citidina (11). mistura de anómeros Rf (EtOH a 15%, EtOAc a 85%) = 0,75/ p.f. 81-86 °C. RMN de (400 MHz, CDC13) d 10,58 (sl, 1H) , 8,40 (d, J = 7,2 Hz, 0,61H), 7,86 (d, J = 7,6 Hz, 0,38H) , 7, 67-7, 65 (m, 4H) , 7,51-7,4 (m, 6H) , 7,27 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,12 (t, J = 15,8 Hz, 1H) , 5,51 (d, J = 52,6 Hz, 0,38H) , 5,21 (dd, J = 50,8 e 2,9 Hz, 0,61H), 4,62 (m, 0,38H), 4,54 (m, 0,61H), 4,28 (d, J = 11,5 Hz, 0, 61H), 3,95 (dd, J = 11,9 e 3,2 Hz, 0,38H), 3,79-3,70 (m, 1H), 2,46-2,04 (m, 5H), 1,12 (s, 5,49H) , 1,07 (s, 3,42H)/ RMN de 13C (100 MHz, CDC13) d 171,5, 171,3, 163,4, 154,9, 144,9, 144,1, 135,5, 135,4, 133,0, 132,8, 132,5, 132,2, 130,2, 130,1, 129,9, 128,0, 127,8, 96,8 (d, J = 91,1 Hz), 96,2 (d, J = 147,9 Hz), 92,3, 91,2 (d, J = 35,7
Hz), 90,5, 88,5 (d, J = 15,9 Hz), 81, 9, 80,1, 64,7, 62,9, 33,5 (d, J = 20,5 Hz), 30,5 (d, J = 20,5 Hz), 26, 9, 26, 8, 24, 9, 24,8, 19,3, 19,2/ IV (película fina) 3237, 2932, 1722, 1671, 1559, 1493, 1107 cm'1/ HRMS calculada para [M+Li] C27H32N3O4FSÍLÍ: 516, 2306. Encontrada: 516,2310. Anal. Cale. C27H32N3O4FS1: C, 63,63/ H, 6,33/ N, 8,24. Encontrada: C, 63,45/ H, 6,42/ N, 8,09. (D)-5'-O-(t-butildifenilsilil)-2’ ,3'-didesoxi-2'-fluoro-citidina (12), mistura de anómeros Rf (EtOH a 15%, EtOAc a 85%) = 0,50/ p.f. 98-104 °C. RMN de ΧΗ (360 MHz, CDC13) d 7,97 (d, J = 7,2 Hz, 0,64H, H-6) , 7,65 (m, 4H) , 7,47-7,38 (m, 6,36H), 6,15 (d, J = 20,5 Hz, 0, 36H), 6,05 (d, J = 16, 6 Hz, 0, 64H) , 5,83 (d, J = 7,9 Hz, 0 ,36H), 5,46 (d, J = 7,2 Hz, 0 , 64H), 5,30-5,10 (m, 1H) , 4,55 (m, 0,36H) , 4,44 (m, 0,64H), 4,22 (d, J = 9,7 Hz, 0,64H), 3,88-3,63 (m, 1,3 6H), 2,38-1,95 (m, 2H) , 1,09 (s, 5, 76H), 1,06 (s, 3,24H) / RMN de 13C (100 MHz, CDCI3) d 166,1, 47 155, 8, 141 ,5, 140, r 5 , 135,6, 135,4, 133, 1, 132 ,9, , 132,8, 132,4, 130, 1, 130 ,0, 129 ,8, 128,0, 127,9, 127 ,8, 96 ,7 (d, J = 181,3 Hz) , 93 ,4 (d, J = 140, 3 Hz) , 94,5, 90,8 (d, , J = 35,6 Hz) , 90,8, 87,8 (d , J = 15, 9 Hz) , 81,2, 79, 4, 65, 0, 63 ,2, 33 ,7 (d, J = 21,2 Hz) , 30 ,8 (d, J = 20,4 Hz) , 26, 9, 26, 8, 19, 3, : L 9, 2; IV (pelicula fina) 3470, 3339, 1644, 1487, 1113 cm 1; HRMS calculada para [M+Li] C25H30N3O3FSÍLÍ: 474,2201. Encontrada: 474,2198.
Anal. Cale. C25H30N3O3FSÍ: C, 64,21; H, 6,47; N, 8,99. Encontrada: C, 64,04; H, 6,58; N, 8,76. a-(D)-2',3'-Didesoxi-2'-fluoro-5-fluorouridina (14a), Rf (EtOAc a 100%) = 0,38; p.f. 153-155 °C. RMN de XH (360 MHz, CD3OD) d 7,80 (d, J = 6,8 Hz, 1H) , 6,11 (d, J = 18,7 Hz, 1H) , 5,35 (d, J = 52,9, 1H) , 4,59 (m, 1H) , 3,81 (d, J = 11,9 Hz, 1H) ,
3,57 (dd, J = 12,6 e 3,6 Hz, 1H), 2,36-2,15 (m, 2H) ; RMN de 13C (100 MHz, CD3OD) d 159,6 (d, J = 25,8 Hz), 150,7, 141,5 (d, J = 230, 6 Hz), 127,0 (d, J = 34,9 Hz), 93,9 (d, J = 185,1 Hz), 88,5 (d, J = 15,1 Hz), 81, 8, 64,3, 34,3 (d, J = 20,5 Hz); IV (KBr) 3421, 3081, 1685, 1478, 1111 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C9H10N2O4F2LÍ: 255, 0769. Encontrada: 255, 0778. Anal. Cale. C9H10N2O4F2: C, 43,56; H, 4,06; N, 11,29. Encontrada: C, 43, 59; H, 4,11; N, 11,17. β-(D)-2',3'-Didesoxi-2'-fluoro-5-fluorouridina (14b). Rf (EtOAc a 100%) = 0,54; p.f. 152-154 °C. RMN de XH (360 MHz, CD3OD) d 8,41 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 5,89 (d, J = 16,6 Hz, 1H) , 5,21 (dd, J = 51,5 e 3,6 Hz, 1H) , 4,41 (m, 1H) , 4,00 (d, J = 12,6 Hz, 1H) , 3,67 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 2,25-2,09 (m, 2H); RMN de 13C (100 MHz, CD3OD) d 159,7 (d, J = 25,8 Hz), 150,7, 141,8 (d, J = 229, 8 Hz), 126,3 (d, J = 36,4 Hz), 98,3 (d,
J = 179 Hz), 91,9 (d, J = 37,1 Hz), 83,6, 61,9, 31,9 (d, J = 20,5 Hz); IV (KBr) 3417, 3056, 1684, 1474, 1105 cm"1; HRMS 48 255,0769.
Encontrada: 4,06; N, 11,29. calculada para [Μ-Li] C9H10N2O4F2LÍ: 255, 0764. Anal. Cale. C9H10N2O4F2: C, 43, 56; H, Encontrada: C, 43,37; H, 3,98; N, 11,22. a-(D)-2',3'-Didesoxi-2'-fluoro-5-fluorocitidina (15a). Rf (EtOH a 15%, EtOAc a 85%) = 0,22; p.f. 198-202 °C (dec.). RMN de 1R (400 MHz, CD3OD) d 7,78 (d, J = 6,8 Hz, 1H) , 6,07 (d, J = 18,8
Hz, 1H) , 5,37 (d, J = 54, Γ0 Hz, 1H) , 4 ,59 (m, 1H) , 3,80 (dd J = 12,0 e 3 ,2 Hz, 1H) , 3,57 (dd, J = 12,4 e 4,4 Hz, 1H) 2,38 -2,14 (m, 2H) ; RMN de 13C (100 MHz, CD3OD) d 159, 9 (d, J : 13,6 Hz), 156, 5, 138,3 (d, J = 240,4 Hz), 127,5 (d, J = 33,4
Hz), 93,6 (d, J = 184,3 Hz), 89,5 (d, J = 15,9 Hz), 81,8, 64,4, 34,5 (d, J = 20,5 Hz); IV (KBr) 3486, 3098, 1681, 1519, 1108 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C9HHN3O3F2LÍ: 254, 0929.
Encontrada: 254,0929. Anal. Cale., C9H11N3O3F2 · 1/2H20: C, 42,19; H, 4,72; N, 16,40. Encontrada: C, 41,86; H, 4,75; N, 16,36. β-(D)-2',3'-Didesoxi-2'-fluoro-5-fluorocitidina (15b). Rf (EtOH a 15%, EtOAc a 85%) = 0,37; p.f. 181-183 °C (dec.). RMN de XH (400 MHz, CD3OD) α 00 ,45 (d, J = 7,2 Hz, \—1 5, 92 (dd f J = 16, 2 e 1, 2 Hz, 1H) , 5,1 8 (dd, J = 50,8 e 4, 0 Hz , 1H), 4,4 6 (m, 1H) , 4, 05 (dd, J = 12,4 e 2,4 Hz, 1H), 3,72 (dd, J ’ = 12 ,8 e 2,4 Hz, 1H) r 2,27- 2,05 (m, 2H) ; RMN de 13C (100 MHz, CD3OD) d 1 59, 9 (d, J = 13, 6 Hz) , 156, 5, 138,5 (d, J = 2L. [0,5 Hz) , 126, 9 (d, J = = 33, r 4 Hz) , 98,4 (d, J = 179,0 Hz), 92,5 (d, J = 3 6, 4 Hz) , 83, 6, 61, 9, 31 ,6 (d, J = 20,5 Hz); IV (KBr ) 34 94, 294 4, 1 689, 1522, 1106 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C9H11N3O3F2LÍ : 254,0929. Encontrada: 254,0936. Anal. Cale. C9H11N3O3F2: C, 43, 73; H, 4,49; N, 17,00. Encontrada: C, 43,84; H, 4,47; N, 17,05. a- (D) -í^-acetil^' ,3' -didesoxi-2' -fluoro-citidina (16a). Rf (EtOH a 15%, EtOAc a 85%) = 0,40; p.f. 208-212 °C. RMN de 3Η (360 49 MHz, DMSO-de) d (10,91, sl, 1H) , 8,05 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 7,25 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 6,08 (dd, J = 19,1 e 2,9 Hz, 1H) , 5,42 (d, J = 52,2 Hz, 1H) , 4,97 (sl, 1H) , 4,54 (m, 1H) , 3,63 (d, J = 13,0
Hz, 1H) , 3,47 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 2,35-2,15 (m, 2H), 2,11 (s, 3H) ; RMN de 13C (100 MHz, DMSO-d6) d 171,0, 162, 6, 154,3, 145, 7, 94, 9, 92,0 (d, J = 183,6 Hz), 87,5 (d, J = 15,9 Hz), 80,2, 62,6, 33,3 (d, J = 19,7 Hz), 24,4; IV (KBr) 3436, 3227, 1702, 1661, 1442, 1102 cm’1; HRMS calculada para [M+Li] C11H14N3O4FLÍ: 278,1128. Encontrada: 278,1136. Anal. Cale. C11H14N3O4F: C, 48,71; H, 5,20; N, 15,49. Encontrada: C, 48,73; H, 5,23; N, 15,52.
Rf β- (D) -J^-aceti1-2',3'-didesoxi-2'-fluoro-citidina (16b) (EtOH a 15%, EtOAc a 85%) = 0, 50; p .f. 174-178 °C. RMN de 3] (360 MHz , DMSO-de) d (10,90, sl, 1H) , 8,46 (d, J = 7,2 Hz, 1H) 7,18 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 5, 90 (d, J = 16,9 Hz, 1H) , 5,27 (d J = 52,9 Hz, 1H) , 5,27 (sl, 1H) , 4,39 (m, 1H), 3, 88 (d, J = 13,
Hz, 1H) , 3,61 (d, J = 13,0 Hz, 1H), 2,09 (s, 3H), 2,20-1, 85 (m, 2H) ; RMN de 13C (100 MHz, DMSO-d6) d 171, 0, 162, 6, 154,4, 144,7, 97,0 (d, J = 177,5 Hz), 95,0, 90,7 (d, J = 36,6 Hz), 82,2, 60,3, 30,3 (d, J = 19,7 Hz), 24,3; IV (KBr) 3447, 3245, 1703, 1656, 1497, 1122 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C11H14N3O4FLÍ: 278,1128. Encontrada: 278,1133. Anal. Cale. C11H14N3O4F: C, 48,71; H, 5,20; N, 15,49. Encontrada: C, 48,65; H, 5,22; N, 15,46. a-(D)-2',3'-Didesoxi-2'-fluoro-citidina (17a). Rf (EtOH a 15%, EtOAc a 85%) = 0,08; p.f. 234-237 °C (dec.). RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) d 7,52 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,21 (ml, 2H) , 6,05 (dd, J = 20,4 e 3,2 Hz, 1H) , 5,73 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 5,28 (d, J = 52,4 Hz, 1H) , 4,93 (t, J = 5,6 Hz, 1H) , 4,45 (m, 1H) , 3,58 (m, 1H) , 3,43 (m, 1H) , 2,26-2,13 (m, 2H) ; RMN de 13C (100 MHz, DMSO-de) d 165, 8, 155, 0, 141, 6, 93, 3, 92,2 (d, J = 182,8 Hz),
86,6 (d, J = 15,1 Hz), 79, 4, 62, 8, 33, 3 (d, J = 19,7 Hz); IV 50 (KBr) 3366, 3199, 1659, 1399, 1122 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C9H12N3O3FLÍ: 236, 1023. Encontrada: 236, 1014. Anal. Cale. C9H12N3O3F: C, 47,16; H, 5,28; N, 18,33. Encontrada: C, 47,40; H, 5,34; N, 18,51. β-(D)-2',3'-Didesoxi-2'-fluoro-citidina (17b). O nucleósido 25 (0, 160 g, 0,59 mmol) foi dissolvido em 10 mL de amoníaco saturado em metanol. Após agitação durante 5 min, a reacção estava completa. O amoníaco em metanol foi removido e o sólido branco resultante foi colocado sob vácuo e aquecido devagar num banho de água a 60 °C durante 2 h para remover o produto secundário acetamida por sublimação. O sólido branco foi cristalizado de metanol a 5%/cloreto de metileno a 95% para dar um rendimento quantitativo de um sólido branco cristalino. Rf (EtOH a 15%, EtOAc a 85%) = 0,18; p.f. 191-195 °C (dec.). RMN de (360 MHz, CD3OD) d 8,10 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 5,92 (d, J = 17,3 Hz, 1H) , 5,82 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 5,13 (d, J = 50,0 Hz, 1H) , 4, 39 (m, 1H) , 3,97 (d, J = 12,2 Hz, 1H) , 3, 68 (dd, J = 13,0 e 2, 5 Hz, 1H) , 2,21-2,00 (m, 2H) ; RMN de 13C (100 MHz, CD3OD) d 163, 9, 155, 0, 140, 8, 97,3 (d, J = 176,8 Hz), 93, 6, 90,3 (d, J = 35,6 Hz), 81,3, 60,7, 31,0 (d, J = 20,5 Hz); IV (KBr) 3397, 3112, 1680, 1400, 1178, 1070 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C9H12N3O3FLÍ: 236, 1024. Encontrada: 236, 1028. Anal. Cale. C9H12N3O3F: C, 47,16; H, 5,28; N, 18,33. Encontrada: C, 47,01; H, 5,21; N, 18,29. (L)-5'-O-(t-butildifenilsilil)-2',3'-didesoxi-2'-fluoro-timidina (23) . mistura de anómeros Rf (MeOH a 10%/CH2Cl2 a 90%) = 0,56; p.f. 61-65 °C. RMN de ΧΗ (360, MHz, CDC13) d 9,48 (sl, 1H), 7,67 (m, 4H) , 7,45-7,37 (m, 7H) , 6, 15 (dd, J — 20,2 e 3,2 Hz, 0,36H) , 5,99 (dn, J = 18,4 Hz, 0,64H) , 5,34 (d, J = 51,8 Hz, 0,36H), 5,24 (dd, J = 52,2 e 4,3 Hz, 0,64H), 4,59 (m, 0,36H), 51 4,45 (m, 0,64η), 4,17 (dd, J = 12,2 e 2,5 Hz, 0,64H) , 3,91 (dd, J = 11,9 e 2,9 Hz, 0,36H), 3,8 (dd, J = 11,5 e 2,9 Hz, 0,64H), 3,68 (dd, J = 10,8 e 3,6 Hz, 0,36H), 2,40-2,12 (m, 2H) , 1,94 (s, 1, 0 8H) , 1,61 (s, 1, 92H) , 1,10 (s, 5,76H), 1,07 (s, 3,24H); RMN de 13C (100 MHz, CDC13) d 164, 1, 164, 0, 150,4, 150,2, 136, 4, 135,6, 135,5, 135,4, 135,3, 135,2, 133,0, 132,8, 132,6, 130,1, 130,0, 129, 9, 127, 94, 127, 90, 127,8, 110, 8, 109, 8, 96, 4 (d, J =
181,3 Hz), 92,1 (d, J = 185,8 Hz), 90,7 (d, J = 36,4 Hz), 86,6 (d, J = 15,2 Hz), 80, 9, 79, 4, 64, 9, 63, 6, 33,4 (d, J = 20,5 Hz), 32,0 (d, J = 21,2 Hz), 27,0, 26, 8, 19, 4, 19, 2, 12, 6, 12,2; IV (película fina) 3183, 3050, 1696, 1506, 1188 cm-1; HRMS calculada para [M+Li] C26H31N2O4SÍF: 489,2197. Encontrada: 489, 2175. Anal.
Cale. C26H31N2O4SÍF: C, 64,71; H, 6,47; N, 5,80. Encontrada: C, 64, 88; H, 6,56; N, 5,76. (L)-5'-O-(t-butildifenilsilil)-2',3'-didesoxi-2'-fluoro-5-fluorouridina (24). mistura de anómeros Rf (hexanos/EtOAc 1:1) = 0, 48 ; e ).f. 65-71 °C. RMN de XH (400 MHz, CDCI3) d 9, 08 (sl 0, 4H) , 9, 00 (sl, 0,6H) 8,01 (d, J ' = 5, 4 Hz, 0, 6H), 7, 65 (m, 4H) 7, 42 (m , 6, 4H) , 6,10 (dd, J = 20, 2 e 1 ,4 Hz, 0, 4H) , 6, 00 (d, J : 16 ,0 Hz , 0, 6H) , 5, 35 (dd, J = 52, 4 e 1 , 6 Hz, 0, 4H) , (5,22 , dd, = 51 ,2 e 4 Hz, 0, 6H), 4,57 (m, 0 r 4H) , 4,44 (m, 0,6H), 4, 22 (dd J = 12, 4 e 2,0 Hz, 0 , 6H) , 3, 91 (dd, J = 11 -,2 e 2 ,9 Hz, 0, 4H) 3, 70 (m , 1H), 2, 45-2, 00 (m, 2H) , 1,09 (s, 5, 4H) , 1, 07 (s, 3, 6H) RMN de 13C (100 MHz, cdci3: ) d 156,9 (d, J = 26,5 Hz) , 148,8 148, 6, 140, 3 (d, J = 236, 7 Hz) , 140,1 (d, J = 235, 1 Hz) , 135, 6 135, 5, 135, 4, 132,9, 132,7, 132, 4, 132,3, 130 ,2, 130,1, 129, 9 127, 9, 127,8, 125,1 (d , J = = 34, 9 Hz) , 123, 6 (d, J = 34,2 Hz) , 96,4 (d, J = 182,9 Hz) 92,0 (d, J = 186, 6 Hz) , , 90,2 (d, J = 36, 0 Hz) , 86,9 (d, J = 15,1 Hz) , 81,7, 79,8, 64,8, 63,0, 33, 2 (d, J = 20,5 Hz), 30, 9 (d, J = 20,4 Hz) , 26,9, 26, 8, 19,2; IV (película fina) 3191, 1719, 1113 cm1; HRMS calculada para [M+Li] 52 C25H28N2O4SÍF2LÍ: 493, 1946. Encontrada: 493, 1952. Anal. Cale. C25H28N2O4SÍF2: C, 61,71; H, 5,80; N, 5,76. Encontrada: C, 61,73; H, 5,83; N, 5,77. a-(L)-2' ,3'-Didesoxi-2'-fluoro-timidina (26a). Rf (EtOAc a 100%) = 0,25; p.f. 147-149 °C. RMN de ΧΗ (360 MHz, CD3OD) d 7,45 (s, 1H) , 6,11 (dd, J = 19,4 e 2,9 Hz, 1H) , 5,30 (d, J = 53,6 Hz,
1H), 4,58 (m, 1H), 3,79 (dd, J = 12,2 e 2,2 Hz, 1H), 3,55 (dd, J = 12,2 e 3,6 Hz, 1H) , 2,40-2,15 (m, 2H) , 1,87 (s, 3H) . RMN de 13C (100 MHz, CD3OD) d 166, 6, 152,3, 138,6, 110,5, 93, 9 (d, J = 185,1 Hz), 88,3 (d, J = 15,1 Hz), 81,7, 64,4, 34,5 (d, J = 20,5 Hz),
12,6; IV (KBr) 3436, 3166, 1727, 1667, 1362, 1186 cm’1; HRMS calculada para [M+Li] C10H13N2O4FLÍ: 251,1019. Encontrada: 251,1014. Anal. Cale. Ci0H13N2O4F: C, 49,18; H, 5,37; N, 11,47,
Encontrada: C, 49,32; H, 5,40; N, 11,29. β-(L)-2',3'-didesoxi-2'-fluoro-timidina (26b). Rf (EtOAc a 100%) = 0,38; p.f. 186-188 °C. RMN de ΧΗ (360 MHz, CD3OD) d 7,94 (s, 1H) , 5,93 (d, J = 17,6 Hz, 1H) , 5,20 (d, J = 51,8 Hz, 1H) , 4,40 (m, 1H) , 3,98 (d, J = 11,9 Hz, 1H) , 3,68 (d, J = 13,0 Hz, 1H) , 2,37-2,10 (m, 2H) , 1,83 (s, 3H) ; RMN de 13C (100 MHz, CD3OD) d 166,7, 152,3, 138,2, 111,0, 98,4 (d, J = 178,3 Hz), 92,1 (d, J = 36,4 Hz), 83, 1, 62,4, 32,5 (d, J = 20,5 Hz), 12,6; IV (KBr) 3478, 3052, 1684, 1363, 1192, 1005 cm-1; Anal. Cale. Ci0Hi3N2O4F: C, 49,18; H, 5,37; N, 11,47, Encontrada: C, 49,29; H, 5,44; N, 11,36. a-(L)-2' ,3'-didesoxi-2'-fluoro-5-fluorouridina (27a). Rf (EtOAc a 100%) = 0,38 ; p. f. 155-157 °C . RMN de ΧΗ (400 MHz, CD3OD) d 7,80 (d, J = 6, 8 Hz, 1H), 6, 13 (d, J = 20,0 Hz, 1H) , 5,35 (d, J = 54,4 Hz, 1H) , 4, 63 (m, 1H) , 3,81 (dd, J = 11,9 e 3,2 Hz, 1H) , 3,58 (dd, J : = 12,4 e 2,0 Hz, 1H) , 2,41 -2, 15 (m, 53 2Η) / RMN de 13C (100 MHz, CD3OD) d 159,6 (d, J = 25,8 Hz), 150,7, 141,5 (d, J = 230, 6 Hz), 127,0 (d, J = 34,9 Hz), 93,9 (d, J = 184,3 Hz), 88,5 (d, J = 15,1 Hz), 81, 9, 64,3, 34,3 (d, J = 20,5 Hz); IV (KBr) 3401, 3098, 1661, 1458, 1018 cirf1; HRMS calculada para [M+Li] C9H10N2O4F2LÍ: 255, 0769. Encontrada: 255, 0771. Anal.
Cale., C9H10N2O4F2: C, 43,56; H, 4,06; N, 11,29. Encontrada: C, 43,70; H, 4,17; N, 11,15.
P-(L)-2' ,3'- didesoxi-2' -fluoro-5-fluorouridina (27b). Rf (EtOAc a 100% ) = 0,54; 153- -156 °C . RMN de 3H (400 MHz, CD3OD) d 8,46 (d, J = 6, 8 Hz, 1H) , 5 , 94 (d, J = 16,4 H z, 1H) , 5,25 (dd, J = 51,6 e 4,0 Hz, 1H), 4, 41 (m, 1H) , 4,0 5 (dd, J = 12,8 e 2,4 H [z, 1H), 3,72 (dd , J = 12,4 e 2 ,4 H z, 1H) , 2,34-2 ,09 (m , 2H); RMN de 13C (100 MHz, CD3OD) d 15 '9, 7 (d, J = 25, 8 Hz) , 150,7 , 141,8 (d, J = 230,6 Hz) , 126,3 (d, J = = 35 ,1 Hz) , 98,3 (d, J = 184,6 Hz ;), 91,9 (d J = 36, 4 Hz), 83, 6, 1 61, ! 9, 31 ,9 (d, J = 2 0,5 Hz) ; IV (KBr) 3482, 3037, 1702, 1654, 1402, 1103 cm1; HRMS calculada para [M+Li] C9H10N2O4F2LÍ: 255, 0769. Encontrada: 255, 0764. Anal.
Cale. C9H10N2O4F2: C, 43,56; H, 4,06; N, 11,29. Encontrada: C, 43,59; H, 4,06; N, 11,17.
PREPARAÇÃO DE NUCLEÓSIDOS L-2'-FLUORO-2',3'-INSATURADOS
Uma segunda síntese fácil de nucleósidos 2'-fluoro-insaturados está descrita a seguir. A síntese envolve a reacção de uma base de pirimidina ou purina protegida com o intermediário chave 309 na presença de um ácido Lewis, como descrito, de um modo geral, no Esquema 9 a seguir. Os compostos representativos preparados de acordo com esta síntese estão descritos nas Tabelas 5-6. 54
Esquema 9 |-0H—OHL-Gulonic-Y-lactona p* i^fPR^s=0301
302 (H>303W-303 iv „ rORo^T ♦F 307 (R «= TBDMS)
v
COjEt 304 305 vi
Reagentes: (i) 2-metoxipropeno, DMF, p-TsOH (ii) Nal04, H20 (iii) (EtO),P(0)CHFC02Et, NaHMDS, THF, -78 °C (iv) c-HCI, EtOH (v) TBDMSCI, imidazole, CH2CI2 (vi) DIBAL-H, CH2CI2", -78 °C (vii) AczO, piridina, CH2CI2. 55
Esquema 9
309
312 ; Λ = Νγίβζ, T = 313 t A = inwz, T = n 315 ;x=nh2.y = f 310 ;X = OH,Y«H 311 ; X = OH. Y - CHa 314 ;X = xV CrlT - i—OH F 0 Vl + Ν-ΛΥ X \ fjf ° n4 y 316 ;X=OH,Y = H 318 :X=0H,Y = CH3 317 ; X = OH, Y = H 319 ; X = OH, Y = CHj ./"320 X Yl( ^322; X = vl
5H
324 ; X = NH2, Y = F I”
^0H °Υ\
"y-T
^323 ;X=NHZ.Y = H 325 ; X = NH2,Y= F
Reagentes: (i) uracilo sililado, TMSOTf, DCE (ii) timina sililada, TMSOTf, DCE (iii) N4-Bz-citosina sililada, TMSOTf, CH3CN (iv) 5-F-citosina, TMSOTf, CH3CN (v) TBAF, CH3CN (vi) NH3/MeOH 56
Esquema 9
309
Reagentes: (i) 6-CI-purina sililada, TMSOTf, DCE (ii) 6-CI-2-F-purina sililada, TMSOTf, DCE (iii) TBAF, CH3CN (iv) NH3/DME (v) NH3/MeOH, 90 °C (vi) HSCH2CH2OH, NaOMe, refluxo. 57
Tabela 2
58 continuação N° . Η-1' H-3' H- 4' H-5' outros Hz, OH), 1,76 (s, 3H, ch3- 5) 1 9b 6,78 (ps 1, 6, 01 (s) 5, 05 (1, J 3,51 (m) 11,5 (6, NH), 7,37 (s, J = 3,44 Hz) = 4 Hz) H-6) , 4, 94 (1, J = 6 Hz, OH) , 1,81 (s, 3H, CH3-6) 2 0b 7,01 (s) 5,71 (s) 4, 89 (s) 3, 88 (m) 821 (d, J = 8 Hz, H-6) , 7,71 (m, H-5, Ph-H) 2 lb 7,16 (ps 1, 5, 14 (S) 5, 13 (ps 3,79 (m) 7, 92 (0, J = 7,2 Hz, H- J = 3,6, 4,4 t, J 6) , 7,57 (m, H-5, Ph-H) Hz) 3, 2, 4,8 Hz) 22b 6, 85 (s) 5, 94 (d, J 4, 76 (s) 3,56 (s) 7,86 (d, J = 7,2 Hz, H- = 12 Hz) 6) , 7,36, 7,32 (2s, nh2 ) 5,77 (d, J = 7,2 Hz, H-5), 5,07 (1, J = 52 Hz, OH) 23b 6, 86 (ps t J 5, 94 (d, J 4, 94 (m) 3,49 (m) 7,47 (d, J = 7,6 Hz, H- = 4 ,4, 4,8 = 1, 6 Hz) ) 6) , 7,35, 7,32 (2s, Hz) nh2 ) 5,80 (d, J = 7,2 Hz, H-5) aCDCl3, bDMSO · d6 59
Tabela 3 N° . Η-1' H-3' H-4' H-5' outros 24a 25d 2 6a 7.04 (s), 6,93 (t, J = 4.4 Hz) 5,85 (s), 5,78 (s) 5,18 (ps t, J = 4, 4,4 Hz), 5,02 (s) 3,85 (m) 8,79, 8,78 (26, H-8) , 8,60, 8,21 (2s, H-2), 1,94 (s, 5-CH3), 0,92 , 0,91 ( 8s,dBu) , 0,111, 0,105, 0,097, 0,095 (4s, 4 CH3) 27d 6,88 (s) 5,77 (s) 5,02 (s) 3,88 (m) 8,60 (s, H-8) , 0, 91 (s, dBu), 0,112, 0,105 (2s, 2 x CH3) 2 8d 6,81 (m) 5, 84(s) 5,19 (m) 3,81 (m) 8,17 (s, H-8), 0,92 (s, fcBu), 0,103, 0,089 (2s, 2 CH3) 2 9d 30d 1,00 (m) 5, 86(s) 5,28 (m) 3,87 (m) 8,78 (s, H-8), 8,22 (s, H-2) 314 6,81 (m) 5,73 (d, J = 1,6 Hz) 4,96 (d, J = 2,8 Hz) 3,85 (m) 8,19 (s, H-8) , 0, 91 (s, dBu) , 0, 09, 0, 084 (2s, 2 x CH3) 32d 6,78 (m) 5,75 (s) 4,95 (m) 3,81 (m) 8,14 (s, H-8), 5,11 (s, NH2) , 0,89 (s, dBu) , 0, 076 (s, CH3) 33d 6,76 (m) 5,80 (s) 5,18 (ps I, J 4,4, 4,8 Hz) 3,78 (m) 7,84 (s, H-8), 0,91 (s, dBu) , 0, 093, 0, 08 (2s, 2 x CH3) 34d 8,73 (ps I, J = 4,4, 4,8 Hz) 5,80 (s) 5,09 (m) 3,78 (m) 7,84 (s, H-8), 5,12 (s, NH2) , 0,91 (s, dBu) , 0, 096, 0, 082 (s, CH3) 60 continuação N° . Η-1' H-3' H-4' H-5' outros 35d 6,90 (s) 6,08 (s) 4,91 (s) 3,63 (s) 8,40 (s, H-8), 8,17 (s, H-2) , 7,40 (s, NH2), 5,22 (t, J = 5,6 Hz, OH) 36" 6,89 (I, J = 4 Hz) ) 6,06 (s) 5,14 (ps I, J 36) ) 3,57 (m) 8,31 (s, H-8), 8,17 (s, H-2), 7,36 (s, NH2) , 4, 97 (t, J = 6 Hz, OH) 37b 6, 94 (m) 6,15 (t, J = 16) 4,98 (s) 3,67 (s) 2,57 (br s, H), 8,43 (s, H-8), 8,17 (s, H-2), 5,17 (s, OH) 38b 38b 0,68/(ps I, J = 3,6, 4,4 Hz) 6,06 (s) 5,13 (t, J = 3,6) 3,58 (m) 8,26 (s, 118), 8,00 (s, -2) aCDCl3, bDMSO · d6
Tabela 4
61 continuação N° . Η-1' H-3' H-4' H-5' outros 44° 6,62 (m) 0,01 (d, J = 1,6 Hz) 5,08 (m) 3,56 (m) 7,82 (s, H-8), 6,57 (s, NH2) , 4, 95 (1, J = 5,6 Hz, OH) ^DMSO-d6
Tabela 5 N° . Ηί 0 C (solv)" [a] d, deg fórmula anal • 10 xarope Ci5H23FN204Si C, H, N 11 xarope Ci6H25FN204Sí C, H, N 12 144-146 (A) -20,47 (c 0,36, C22H28FN304Sí C, H, N CHC13) 13 139-141 (A) +157,68 (c 0,31, C22H28FN304Sí C, H, N CHCI3) 14 xarope C, H, N 15 xarope C, H, N 16 161-162 (C) -13,412 (c 0,20, C9H9FN2O40,3H20 C, H, N MeOH) 17 136-137 (E) =138,55 (c 0,14, C9H9FN2O40,2H20 C, H, N MeOH) 18 149-151 (D) -30,44 (c 0,20, Ci6H15FN205 C, H, N MeOH) 19 116-118 (E) -132,42 (c 0,25, c16h13fn2o5 C, H, N MeOH) 20 200-202 - dec (C) -54,89 (c 0,39, Ci6H14FN304 C, H, N CHCI3) 21 170-172 (C) +136,38 (c 0,45, Ci6Hi4FN304 0,3H2O C, H, N CHCI3) 22 198-200 dec (B) -21,31 (c 0,25, C9Hi0FN3O34H2O C, H, N MeOH) 23 120-121 (E) +159,15 (c 0,21, c9h10fn3o3 C, H, N MeOH) 62 continuação N° . Ηί 0 C (solv)" [a] d, deg fórmula anal 24 xarope c, H, N 25 xarope C, H, N 26 xarope C16H22FCIN3O2SÍ C, H, N 27 espuma O c\] o o o 00 cr> + Ci6H2iF2ClN402Si C, H, N chci3) 28 xarope +139,67 (c 0,18, Ci6H2iClN402Si C, H, N CHC13) 29 C, H, N 30 espuma C, H, N 31 180-182 (A) +13,33 (c 0,54, Ci6H23F2N502Si C, H, N CHCI3) 0,2acetona 32 129-130 (A) +90,22 (c 0,23, C16H23FC1N502Sí C, H, N CHCI3) 33 184-186 (A) +116,53 (c 0,13, Ci6H23F2N502Sí C, H, N CHCI3) 0,3acetona 34 128-130 (A) +89,87 (c 0,15, Ci6H23FC1N502Sí C, H, N CHCI3) 35 188-189 (C) +54,91 (c 0,17, Ci0H10FN5O20,2H20 C, H, N MeOH) 36 169-171 (C) +160,62 (c 0,19, CioHi0FN502 0,3MeOH C, H, N MeOH) 37 128-130 (E) -50,21 (c 0,20, CioH9FN4030,2H20 C, H, N MeOH) 38 > 200 dec (C) +169,60 (c 0,20, Ci0H9FN4O30,3H20 C, H, N MeOH) 39 185-188 dec (B) -56,15 (c 0,16, C, H, N MeOH) 40 180 dec (B) +178,22 (c 0,10, C, H, N MeOH) 41 155-156 dec (B) +10,64 (c 0,17, C, H, N MeOH) 42 150-152 (B) +142,49 (c 0,17, C, H, N MeOH) 63 continuação N° . Ηί 0 O (solv)" [a] D f deg fórmula anal. 43 > 200 dec (B) +24, 42 (c 0,10, C, Η, N DMF) 44 > 210 dec (B) +58, 68 (c O \—1 o C, Η, N DMF) aSolventes: A; EtOAc-hexanos, B; CH :2Cl2-MeOH, C; CHCl3-MeOH, D; THF ciclo-hexano, E; liofilizado
Anteriormente, a síntese de D-nucleósidos 2', 3'-insaturados foi conseguida através da reacção de eliminação partindo de um análogo de nucleósido prontamente disponível, que envolveu uma modificação no comprimento dos nucleósidos individuais. Vários grupos divulgaram D-2'-fluoro-2',3'-insaturados nucleósidos de pirimidina pela eliminação de análogos de 2'-fluorados nucleósidos adequados (Martin, J. A., et al., J. Med. Chem. 1990, 33, 2137-2145; Stezycki, R. Z., et al., J. Med. Chem. 1990, 33, 2150-2157). No entanto, esta estratégia para a síntese de L-Fd4N, é acompanhada por dificuldades adicionais na preparação de L-nucleósidos como o material de partida. Existem alguns exemplos da síntese de nucleósidos de purina 2',3'-insaturados por condensação directa devido à labilidade da unidade de açúcar 2,3-insaturada, sob as condições de acoplamento na presença de ácido de Lewis, excepto um caso do análogo de pirimidina utilizando um intermediário tiofenilo (Abdel-Medied, A. W.-S., et al., Synthesis 1991, 313-317/ Sujino, K., et al., Tetrahedron Lett. 1996, 37, 6133-6136). Contrariamente à unidade de açúcar 2,3-insaturada, previa-se que o açúcar 2-fluoro-2,3-insaturado, que tem uma estabilidade acrescida da ligação de glicosilo durante a condensação com um heterociclo, se tornasse mais adequado para a reacção de acoplamento directo. Assim, foi seleccionado o 64 (R) -2-fluorobutenólido 506, como um percursor para o intermediário chave 508, o qual foi preparado a partir da acetonida de L-gliceraldeido 501.
Começando com a acetonida de L-gliceraldeido, foi obtida uma mistura de (E) -502/ (Z) -2 (9:1 por RMN de 1H) através da
reacção de Horner-Emmons, na presença de α-fluorofosfonoacetato de trietilo e bis(trimetilsilil)amida de sódio em THF (Thenappan, A., et al., J. Org. Chem., 1990, 55, 4639-4642; Morikawa, T. , et al ., Chem. Pharm . Buli. 1992, 40, 3189-3193; Patrick, T. B., et al., J. Org. Chem. 1994, 59, 1210-1212) .
Devido a dificuldades na separação dos isómeros (E)-502/(Z)-502, as misturas foram utilizadas na seguinte reacção de ciclização, sob condições ácidas, para dar a lactona 503 desejada e o diol 504 não ciclizado. A mistura resultante foi convertida na lactona sililada 506, foi submetida a redução com DIBAL-H em CH2CI2 a 78 °C para dar o lactol 507. O lactol 507 foi tratado com anidrido acético para proporcionar o intermediário chave 508, o qual foi condensado com 6-cloropurina sililada, sob condições de Vorburggen, para dar misturas anoméricas 509. O tratamento de 509 com TBAF em THF deu os nucleósidos livres 510 e 511, prontamente separados por cromatografia em coluna de silica gel. Os análogos de adenina 512 e 513 foram obtidos por tratamento dos compostos 510 e 511 com mercaptoetanol e NaOMe numa bomba de aço a 90 °C, respectivamente. O tratamento dos compostos 510 e 511 com mercaptoetanol e NaOMe deu os análogos de inosina 514 e 515, respectivamente. A atribuição estereoquimica destes compostos foi com base na espectroscopia NOESY (pico cruzado entre H-l' e H-4' no isómero B 512). 65
Esquema 10. Síntese de L-2'-Fluoro-d4Adenina e -Hipoxantina por Condensação Directa •o 1 0
OH F ho^AsíAco^4 iii
AcO
OR v (65%)
n /-OR
OR F vi
p' ' C02Et6 5 (70,2% a partir de 1)R = TBDMS (63*)Cl
9 viii
12; X = NHj 05 %) 14; X = OH (80%)
13;X = NH2(78%) 15; X = OH 05%)
Reagentes: (i) (Et0),P(0)CHFC02Et [(CH3)3Si]2NNa, THF, -78 °C (ii) HCI/EtOH (iii) TBDMSCI, imidazole, CH,CI2 (iv) DIBAL-H a 1 M em CH2CI,, CH,CI2, -78 °C (v) Ac,0, pir., CH,CI2 (vi) 6-CI-purina sililada, TMSOTf, DCE (vii) TBAF, CH3CN (viii) NH3/MeOH, 90 °C (ix) HS(CH9)2OH, NaOMe/MeOH, refluxo 66
Tabela 7. Concentração Efectiva (EC50) e Inibidora (IC50) Média de L-2'-Fluoro-d4Adenina e Hipoxantina contra HIV-1 em PBM
Composto N° . EC50 (μΜ) (Células ΡΒΜ) EC90 (μΜ) (Células ΡΒΜ) Citotoxicidade Células PMC Células Vero Células CEM IC50 (μΜ) IC50 (μΜ) IC50 (μΜ) 512 1,5 15, 1 > 100 > 100 > 100 513 47,6 332 > 100 > 100 > 100 514 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 515 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 316 (β) > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 317 (α) > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 318 (β) > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 319 (α) > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 322 (β) 0,51 4,3 > 100 > 100 > 100 323 (α) > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 335 (β) 1,5 15, 1 > 100 > 100 > 100 336 (α) 47,6 332 > 100 > 100 > 100 337 (β) > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 338 (α) > 100 > 100 > 100 > 100 ΑΖΤ 0,004 0,04 > 100 29, 0 14,3
Secção experimental.
Os pontos de fusão foram determinados num dispositivo laboratorial Mel-temp II e não estão corrigidos. Os espectros de ressonância magnética nuclear foram registados em espectrómetros Bruker 250 e AMX400 400 MHz com tetrametilsilano como padrão interno; desvios quimicos (δ) são apresentados em partes por 67 milhão (ppm) e os sinais são descritos como s (singleto), d (dupleto), t (tripleto), q (quarteto), br s (singleto largo), dd (duplo dupleto) e m (multipleto) . Os espectros de UV foram obtidos num espectrofotómetro beckman DU 650. As rotações ópticas foram determinadas num Jasco DIP-370 Digital
Polarimeter. Os espectros de massa foram determinados em espectrómetros de MS de sector de focagem dupla (EBE) Micromass Inc. Autospec High Resolution. Os espectros de infravermelho foram registados num espectrómetro Nicolet 510 FT-IR. As análises elementares foram realizadas pelo Atlantic Microlab, Inc., Norcross, GA. Todas as reacções foram seguidas utilizando cromatografia em camada fina, em placas de silica gel GF 200 mm, Analtech. O 1,2-dicloroetano, diclorometano e acetonitrilo secos foram obtidos por destilação com Catb, antes da utilização. O THF seco foi obtido por destilação com Na e benzofenona quando a solução se tornou púrpura.
Acetonida de L-(S)-gliceraldeido (302). Foi arrefecida uma solução de L-gulonic-Y-lactona (175 g, 0,98 mol) em DMF (1 L) a 0 °C e foi adicionado, gota a gota com agitação, ácido p-toluenossulfónico (1,1 g, 5,65 mmol). Foi adicionado 2-metoxipropeno (87,7 g, 0,92 mol), gota a gota, através de um funil de adição, a 0 °C, à solução resultante. A mistura reaccional foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada por mais 24 h. Após o término da reacção, foi adicionado carbonato de sódio (124 g) e a suspensão resultante foi vigorosamente agitada durante 3 horas. Foi então filtrada por um filtro de vidro e o filtrado é evaporado sob vácuo. Ao residuo amarelo, é adicionado tolueno (170 mL) após o que ocorreu cristalização. O sólido foi filtrado por sucção, lavado com hexanos/etanol (9:1; 1 L) e seco para dar sólido amarelado 301 (99, 1 g, 65%) . 68
Foi adicionado, gota a gota a 0 °C, metaperiodato de sódio (123 g, 0,58 mol), durante 30 min mantendo o pH a 5,5 (adjustado por adição de NaOH a 2 N), a uma suspensão agitada de 5,6-O-isopropilideno-L-gulono-l,4-lactona (70,0 g, 0,32 mol) em água (27 0 mL) . A suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, depois, saturada com cloreto de sódio e filtrada. O pH do filtrado foi ajustado a 6,5-7,0 e extraído com diclorometano (5 vezes 200 mL) e acetato de etilo (5 vezes 300 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas com sulfato de magnésio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida (< 20 °C.). Em seguida, o resíduo resultante foi destilado para dar 302 (23,2 g, 69%) como um óleo incolor; p.e. 49-51 °C/16 Torr. [a]D25 -66,4 (c 6,3, benzeno). (E)/(Z)-Etil-3-[(R)-2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il]-2-fluoroacrilato (E-303 e Z-303). Foi arrefecida, a -78 °C, uma solução de 2-fluorofosfonoacetato de trietilo (39,2 g, 162 mmol) em THF (70 mL) e foi adicionada, gota a gota, uma solução de bis(trimetilsilil)amida de sódio (solução a 1,0 M em THF, 162 mL, 162 mmol) . A mistura foi mantida, durante 30 min, a -78 °C, depois, foi adicionada uma solução de 303 (19, 14 g, 147 mmol) em THF (70 mL) . Depois de se agitar durante lha -78 °C, a mistura reaccional foi tratada com NH4C1 aquoso e extraída com éter. A fase etérea foi lavada com NaCl saturado, seca sobre MgS04, filtrada e evaporada. O resíduo foi submetido a cromatograf ia em sílica gel para dar Z-303 e Z-303 (9:1 por RMN de 1H) como um óleo amarelado límpido (34,6 g, 97,9%). RMN de XH (CDC13) δ 1,34, 1,36 (2t, J = 8 Hz, -CH2CH3) , 1,40, 1,45 (2s, —CH3) , 3,69 (m, H3-5) , 4,28 (m, Hb-5, -CH2CH3) , 5,02 (m, H-4), 5,40 (m, H-4) , 6,02 (dd, J = 8,20 Hz, H-3) , 6,18 (dd, J = 8,32 Hz, H-3). 69 (R) - (+)-4-[(terc-Butildimetilsililoxi)metil]-2-fluoro-2-buten-4-ólido (307). Uma solução de £-303 e Z-303 (19,62 g, 89, 89 mmol) em 110 mL de EtOH anidro foi tratada com 30 mL de HC1 conc. e agitada à temperatura ambiente durante 2 hr. O solvente foi removido in vacuo e o residuo foi co-evaporado com Tolueno (3*300 mL) para dar a lactona 304 e o éster não ciclico 305. O xarope amarelado resultante foi utilizado na reacção seguinte sem mais purificação. Foi adicionado cloreto de t-butildimetilsililo (27,1 g, 180 mmol) a uma mistura de 304, 305 e imidazole (12,3 g, 180 mmol) em CH2C12 (250 mL) e a mistura reaccional foi agitada durante 4 h à temperatura ambiente. A mistura resultante foi lavada com água, seca (MgS04) , filtrada e concentrada à secura. O residuo foi isolado por cromatografia em coluna de silica gel utilizando EtOAc a 4%-hexanos como eluente para dar 307 (28, 0 g, 70,2% a partir do composto 302) como um sólido branco cristalino, p.f. 48-50 °C; [a]28D +105,3 (c 1,60, CHC13) ; RMN de (CDC13) δ 0,07, 0,08 (2s, 2 x CH3) , 0,88 (s, ^u) , 3,88 (m, 2H, H-5) , 5,01 (m, 1H, H-4), 6,73 (ps t, 1H, J = 4 Hz); Anal. Calcd para C10H19FO3SÍ: C, 53, 63; H, 7,77. Encontrada: C, 53,70; H, 7,75. l-Acetil-4-[(terc-butildimetilsililoxi)metil]-2-fluoro-2-buten-4-ólido (309). A lactona 307 (20,58 g, 83,54 mmol) foi dissolvida em 200 mL de CH2C12 sob atmosfera de azoto, depois, a mistura foi arrefecida a -78 °C e foi adicionada uma solução de DIBAL-H a 1,0 M em CH2CI2 (125 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 2 horas a -78 °C. A mistura fria foi tratada com ácido nitrico diluido, lavada com água e seca (Na2SC>4) . A evaporação do solvente deu anómeros de 308 como um óleo amarelo pálido (16,6 g, rendimento em bruto de 80%), o qual foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. 70
Foi adicionado, a 0 °C, Ac20 (25 mL, 0,27 mol) a uma solução de 308 e piridina (22 mL, 0,27 mol) em CH2C12 (200 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas. A mistura reaccional foi lavada com HC1 diluído, solução de NaHC03 saturado e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica combinada foi seca, filtrada e concentrada à secura. 0 resíduo foi submetido a cromatografia em coluna (EtOAc a 6,5%/hexanos) para dar 309 (12,6 g, 65%) como um óleo incolor.
Processo geral para a condensação de acetato 309 com bases de pirimidina.
Foi refluxada, durante 3 horas sob azoto, uma mistura de uracilo (420 mg, 3,75 mmol), hexametildissilazano (15 mL) e sulfato de amónio (20 mg). A solução límpida obtida foi concentrada à secura in vácuo. Foram adicionados, a 0 °C, à solução de açúcar 309 (728 mg, 2,50 mmol)), TMSOTf (0,7 mL, 3,14 mmol) e a base sililada em DCE seco (20 mL) . A mistura reaccional foi agitada durante 2 horas sob azoto, vertida numa solução arrefecida sat. de NaHCCç (30 mL) e agitada durante 15 min. A mistura resultante foi lavada, seca (Na2S04), filtrada e concentrada in vacuo. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (MeOH a 3%/CHCl3) para dar 310 (0,960 g, 2,73 mmol, 73%) como uma mistura anomérica inseparável, a qual foi utilizada no passo seguinte sem separação. 1-[5-0-(terc-Butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-L-glicero-pent-2-enofuranosil]uracilo (310). UV (CHC13) Xmax 257,5 nm.; Anal. (C15H23FN2O4S1) C, Η, N. 71 1-[5-0-(terc-Butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-L-glicero-pent-2-enofuranosil]timina (311).
Foram submetidos a reacção, durante 2 h, timina sililada (242 mg, 1,92 mmol) , 307 (500 mg, 1,72 mmol) e TMSOTf (0,5 mL, 2,25 mmol) para dar uma mistura de 311, a qual foi purificada por cromatografia em coluna de silica gel (MeOH a 3%/CHCl3) como uma mistura anomérica inseparável (0,392 g, 1,10 mmol, 64%). UV (CHC13) Xmax 262,0 nm. Anal. (C16H25FN2O4SÍ) C, Η, N. Z^-Benzoil-l-[5-0-(terc-butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-(a,b)-L-glicero-pent-2-enofuranosil]citosina (312 e 313).
Foram submetidos a reacção, durante 2 h, N6-benzoilcitosina sililada (790 mg, 3,67 mmol), 307 (470 mg, 1,62 mmol) e TMSOTf (0,5 mL, 2,25 mmol) para dar misturas de 312 e 313, as quais foram purificadas por cromatografia em coluna de silica gel (EtOAc a 30%/hexano) para proporcionar o anómero β 312 (0,34 g, 0,76 mmol, 47,1%) como um sólido branco e o anómero α 313 (0,23 g, 0,52 mmol, 31,8%) com um sólido branco. 312: UV (CHC13) Xmax 260,5 nm; Anal. (C22H28FN3O4S1) C, Η, N.; 513: UV (CHC13)
Xmax 260,5 nm. ; Anal. (C22H28FN3O4S1) C, Η, N. 5-Fluoro-l-[5-0-(terc-butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-(a,b-L-glicero-pent-2-enofuranosil]citosina (314 e 315).
Foram submetidos a reacção, durante 2 h, 5-fluoro-citosina sililada (300 mg, 2,32 mmol), 309 (360 mg, 1,24 mmol) e TMSOTf (0,4 mL, 1,86 mmol) para dar uma mistura de 314 e 315, a qual foi purificada por cromatografia em coluna de silica gel (MeOH a 3%/CH2Cl2) para proporcionar o anómero β 314 como um sólido branco (168 mg, 37,8%) e um anómero 315 (121 mg, 27,1%) como um 72 sólido branco. 314: UV (MeOH) Àmax 2 81,5 nm; 315: UV (MeOH) Àmax 281,5 nm. 1-(2,3-Didesoxi-2-fluoro-(α,β)-L-glicero-pent-2-eno-furanosil)uracilo (316 e 317).
Foi adicionado fluoreto de tetra-n-butilamónio (0,6 mL, 0,6 mmol) a uma mistura de 310 (177 mg, 0,52 mmol) em THF (15 mL) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min. O solvente foi removido e o residuo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH a 2%/CHCÍ3) para dar o anómero β 316 (52,8 mg, 0,23 mmol, 44,5%) e o anómero a 317 (35,1 mg, 0,15 mmol, 29,6%). 316: UV (H20) Xmax 2 61,0 nm (pH 7); Anal. (C9H9FN204 * 0,3H20) C, Η, N. 317: UV (H20) Àmax 2 61,0 nm (pH 7); Anal. (C9H9FN2O4· 0,2H20) C, Η, N. 1-(2,3-Didesoxi-2-fluoro-(α,β)-L-glicero-pent-2-eno-furanosil)timina (318 e 319).
Foi adicionado, a 0 °C, fluoreto de tetra-n-butilamónio (0,8 mL, 0,8 mmol) a uma mistura de 311 (240 mg, 0,67 mmol) em THF (10 mL) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente, à t.a., durante 15 min. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (THF a 40%/ciclo-hexano) para dar o anómero β 318 (66,5 mg, 0,28 mmol, 41%) e o anómero α 319 (52,8 mg, 0,23 mmol, 26%). 318: UV (H20) Àmax 265,5 nm (pH 7); Anal. (Ci0HuFN2O4 · 0,4H20) C, Η, N. 319: UV (H20) Xmax 2 66, 0 nm (pH 7); Anal. (C9H9FN204 · 0,3H20) C, H, N. 73 í^-Benzoil-l-(2,3-didesoxi-2-fluoro-p-L-glicero-pent-2-enofuranosil)citosina (320).
Foi adicionado fluoreto de tetra-n-butilamónio (1 M em THF) (1 mL, 1 mmol) a uma solução do anómero β 312 (280 mg, 0,63 mmol) em THF (10 mL) e a reacção foi mantida sob agitação, à temperatura ambiente, durante 1 h. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por coluna flash em sílica gel utilizando MeOH a 2,5%/CHCl3 para dar 320 (218 mg, 0,66 mmol, 75%) como um sólido branco. UV (MeOH) Xmax 2 60,5 nm. Anal. (C16H14FN3O4) C, Η, N. ^-Benzoil-l- (2,3-didesoxi-2-fluoro-<x-L-glicero-pent-2-enofuranosil)citosina (321).
Foi adicionado fluoreto de tetra-n-butilamónio (1 M em THF) (1 mL, 1 mmol) a uma solução do anómero α 313 (280 mg, 0,63 mmol) em THF (10 mL) e a reacção foi mantida sob agitação, à temperatura ambiente, durante 1 h. A mistura reaccional foi concentrada sob a pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel utilizando MeOH a 2,5%/CHCl3 para dar 321 (145,8 mg, 0,44 mmol, 69%) como um sólido branco. UV (MeOH) Àmax 2 60,5 nm. Anal. (C16H14FN3O4 · 0,3H20) C, Η, N. 74 1-(2,3-didesoxi-2-fluoro-p-L-glicero-pent-2-enofuranosil)citosina (322).
Uma solução do anómero β (67,60 mg, 0,204 mmol) em
MeOH (5 mL) foi tratada com NH3/MeOH (10 mL de solução saturada) e a mistura reaccional foi mantida sob agitação, à temperatura ambiente, até se observar o desaparecimento do material de partida (10 h). A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por TLC preparativa utilizando MeOH a 12%/CH2C12 como um eluente. O material obtido a partir da placa deu 322 (43 mg, 93,1%) como um sólido, por trituração com hexanos e éter dietilico. UV (H20) Xmax 266, 5 nm (pH 7); Anal. (C9H10FN3O3 · 0,4H20) C, H, N. 1- (2,3-didesoxi-2-fluoro-<x-L-glicero-pent-2-enofuranosil)citosina (323).
Uma solução do anómero α (65,90 mg, 0,199 mmol) em MeOH (5 mL) foi tratada com NH3/MeOH (10 mL de solução saturada) e a mistura reaccional foi mantida sob agitação, à temperatura ambiente, até se observar o desaparecimento do material de partida (16 h). A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por TLC preparativa utilizando MeOH a 12%/CH2C12 como um eluente. O material obtido da placa deu 322 (42,5 mg, 94,5%) como um sólido, por trituração com hexanos e éter dietilico. UV (H20) Àmax 27 6, 0 nm (pH 2), 2 67,0 nm (pH 7); Anal. (CgHioFNsOs) C, Η, N. 75 5-Fluoro-l-(2,3-didesoxi-2-fluoro-p-L-glicero-pent-2-enofuranosil)citosina (324).
Foi adicionado fluoreto de tetra-n-butilamónio (1 M em THF) a uma solução do anómero β 314 em acetonitrilo e a reacção foi mantida sob agitação, à temperatura ambiente, durante 1 h. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por coluna flash em silica gel utilizando MeOH a 12%/CHCl3 para dar 324. 5-Fluoro-l-(2,3-didesoxi-2-fluoro-a-L-glicero-pent-2-enofuranosil)citosina (325).
Foi adicionado fluoreto de tetra-n-butilamónio (1 M em THF) a uma solução do anómero β 315 em acetonitrilo e a reacção foi mantida sob agitação, à temperatura ambiente, durante 1 h. A mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida e o residuo foi purificado por coluna flash em silica gel utilizando MeOH a 12%/CHCl3 para dar 325.
Processo geral para a condensação de acetato 309 com bases de purina.
Foi refluxada, durante 4 h sob azoto, uma mistura de 6-cloropurina (1,20 g, 7,75 mmol), hexametildissilazano (25 mL) e sulfato de amónio (quantidade catalítica). A solução límpida obtida foi concentrada in vacuo e o resíduo foi dissolvido em DCE seco (10 mL) e submetido a reacção, à temperatura ambiente, com uma solução de 307 (1,50 g, 5,17 mmol) em DCE (40 mL) e triflato de trimetilsililo (1,5 mL, 7,75 mmol). Após agitação da mistura durante 1 h, à temperatura ambiente, sob azoto, a 76 solução reaccional foi então vertida numa solução saturada de NaHCCç (20 mL) arrefecida em gelo e agitada durante 15 min. A camada orgânica foi lavada com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre MgS04. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o residuo foi separado por cromatografia em coluna de silica gel utilizando EtOAc a 12,5%/hexanos para dar mistura anomérica 326 (1,25 g, 62,9%) como um xarope. 6-Cloro-9-[5-0-(terc-butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-L-glicero-pent-2-enofuranosil]purina (326) 326: UV (MeOH) Xmax 265, 0 nm; Anal. (CieíMlFN^Si) C, Η, N. 6-Cloro-2-fluoro-9-[5-0-(terc-butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-(α,β)-L-glicero-pent-2-enofuranosil]purina (327 e 328). A mistura de 2-fluoro-6-cloropurina sililada [preparada a partir de 1,170 g (6,78 mmol) de 2-fluoro-6-cloropurina e DCE seco (40 mL) foi agitada, durante 16 h, à temperatura ambiente. Após tratamento da reacção semelhante ao de 326, a purificação por cromatografia em coluna de silica gel (EtOAc a 12%/hexanos) deu o anómero β 327 (685 mg, 1,70 mmol, 30,0%) como uma espuma branca e o anómero α 328 (502 mg, 1,25 mmol, 22,1%) como um xarope amarelado. 327: UV (MeOH) Xmax 268,5 nm. Anal. (C16H21F2CIN4O2SÍ) C, H, N., 328: UV (MeOH) Xmax 269, 0 mn. Anal. (C16H21F2CIN4O2SÍ) C, Η, N. 77 6-Cloro-9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-(α,β)-L-glicero-pent-2-enofuranosil)purina (329 e 330). Uma solução de 326 (1,2 g, 3,12
mmol) em CH3CN seco (20 mL) foi tratada com TBAF (solução a 1 M em THF) (3,2 mL, 3,2 mmol) e agitada durante 1 h. Após evaporação do solvente, o material seco foi purificado por cromatografia em coluna (MeOH a 3%/CHCl3) para obter o anómero β 329 (296 mg, 35%) como um sólido branco e o anómero α 330 (380 mg, 45%) como uma espuma. 329: UV (MeOH) Xmax 2 65,0 nm. ; 330: UV (MeOH) Xmax 2 65,0 nm, (332) . 6-Amino-2-fluoro-9-[5-0-(terc-butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-p-L-glicero-pent-2-enofuranosil]purina (331) e 6-Cloro-2-amino-9-[-5-0-(terc-butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-p-L-glicero-pent-2-enofuranosil]purina (332)
Fez-se borbulhar, à temperatura ambiente, durante a noite, amónia seca numa solução agitada de 327 (420 mg, 1,04 mmol) em DME seco (35 mL) . Os sais foram removidos por filtração e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna de silica gel (EtOAc a 25%/hexanos) para dar dois compostos, 331 (114 mg, 0,30 mmol) como um sólido branco e 332 (164 mg, 0,41 mmol) como um sólido branco. 331: UV (MeOH) Xmax 268,5 nm. Anal. (C16H23F2N5O2SÍ · 0,2Acetona) C, Η, N, 332: UV (MeOH) Xmax 307,5 nm. Anal. (C16H23FN5O2CISÍ) C, Η, N, Cl. 78 6-Amino-2-fluoro-9-[5-0-(terc-butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-a-L-glicero-pent-2-enofuranosil]purina (333) e 6-Cloro-2-amino-9-[-5-0-(terc-butildimetilsilil)-2,3-didesoxi-2-fluoro-a-L-glicero-pent-2-enofuranosil]purina (334).
Fez-se borbulhar, à temperatura ambiente, durante a noite, amónia seca numa solução agitada de 333 (420 mg, 1,04 mmol) em DME seco (35 mL) . Os sais foram removidos por filtração e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. 0 residuo foi purificado por cromatografia em coluna de silica gel (EtOAc a 25%/hexanos) para dar dois compostos, 332 (150 mg, 0,38 mmol) como um sólido branco e 333 (69,3 mg, 0,18 mmol) como um sólido branco. 333: UV (MeOH) Xmax 269, 0 nm. Anal. (C16H23F2N5O2SÍ · 0,3Acetona) C, Η, N, 334: UV (MeOH) Xmax 309, 5 nm. Anal. (C16H23FCIN5O2SÍ) C, Η, N. 9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-p-L-glicero-pent-2-enofuranosil)adenina (335). Foi aquecida, a 90 °C, numa bomba de aço, durante 24 h, uma solução de 329 (100 mg, 0,369 mmol) e NH3 saturado/MeOH (50 mL) . Após arrefecimento à temperatura ambiente, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o xarope residual foi purificado por cromatografia em coluna utilizando MeOH a 6%/CHCl3 como um eluente para dar 335 (70 mg, 75%) como um sólido branco. 335: UV (H20) Àmax 258 nm (ε 18800) (pH 2), 258,5 nm (ε 18800) (pH 7), 258,5 nm (ε 19100) (pH 11).
Anal. (C10H10FN5O2 · 0,2H2O) , C, Η, N. 79 9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-<x-L-glicero-pent-2-enofuranosil)adenina (336). Foi aquecida a 90 °C, numa bomba de aço, durante 24 h, uma solução de 330 (99 mg, 0,366 mmol) e NH3 saturado/MeOH (50 mL). Após arrefecimento à temperatura ambiente, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o xarope residual foi purificado por cromatografia em coluna utilizando MeOH a 6%/CHCl3 como um eluente para dar 336 (72 mg, 78%) como um sólido branco. 336: UV (H20) Xmax 258 nm (ε 21100) (pH 2), 259 nm (ε 21500) (pH 7), 259 nm (ε 22600) (pH 11). Anal. (CioH10FN502 · 0,3MeOH) C, Η, N. 9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-p-L-glicero-pent-2-enofuranosil)hipoxantina (337). Foi refluxada, durante 4 h sob azoto, uma mistura de 329 (100 mg, 0,369 mmol), NaOMe (solução a 0,5 M em MeOH) (2,94 mL, 1,46 mmol) e HSCH2CH2OH (0,1 mL, 1,46 mmol) em MeOH (20 mL). A mistura reaccional foi arrefecida, neutralizada com AcOH glacial e evaporada, à secura, sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (MeOH a 10%/CHCl3) para dar 337 (74 mg, 80%) como um sólido branco. 37: UV (H20) Xmax 247 nm (ε 12400) (pH 2), 247, 5 nm (ε 13000) (pH 7), 253 nm (ε 13100) (pH 11). Anal. (C10H9FN4O3 · 0,2H20) C, Η, N. 9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-a-L-glicero-pent-2-enofuranosil)hipoxantina (338). Foi refluxada, durante 4 h sob azoto, uma mistura de 330 (100 mg, 0,369), NaOMe (solução a 0,5 M em MeOH) (2,94 mL, 1,46 mmol) e HSCH2CH2OH (0,1 mL, 1,46 mmol) em MeOH (20 mL) . A mistura reaccional foi arrefecida, neutralizada com AcOH glacial e evaporada, à secura, sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica 80 gel (MeOH a 10%/CHCl3) para dar 338 (70 mg, 80%) como um sólido branco. 338: UV (H20) Xmax 247,5 nm (ε 12700) (pH 2) , 247,5 nm (ε 13700) (pH 7) , 252,5 nm (ε 13100) (pH 11) . Anal. (C10H9FN4O3 · 0,3H20) C, H, N. 2-Fluoro-6-amino-9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-|5-L-glicero-pent-2-enofuranosil)purina (339). Uma solução de 31 (101 mg, 0,26 mmol) em acetonitrilo seco (15 mL) foi tratada com TBAF (solução a 1 M em THF) (0,35 mL, 0,35 mmol) e agitada durante 30 min. Após evaporação do solvente, o material seco foi purificado por cromatografia em coluna (CH2CI2 a 9%/MeOH) para obter 339 (64,7 mg, 0,24 mmol, 92,3%) como um sólido branco cristalino. UV (H2O) Xmax 269, 0 nm (pH 7) . 2-Fluoro-6-amino-9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-a-L-glicero-pent-2-enofuranosil)purina (340). Uma solução de 333 (73,4 mg,
0,19 mmol) em acetonitrilo seco (10 mL) foi tratada com TBAF (solução a 1 M em THF) (0,25 mL, 0,25 mmol) e agitada durante 30 min. Após evaporação do solvente, o material seco foi purificado por cromatografia em coluna (CH2CI2 a 9%/MeOH) para obter 340 (46,2 mg, 0,17 mmol, 90,3%) como um sólido branco cristalino. UV (H20) Xmax 2 69, 0 nm (pH 7) . 2-Amino-6-cloro-9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-p-L-glicero-pent-2-enofuranosil)purina (341). Uma solução de 332 (143,5 mg,
0,40 mmol) em acetonitrilo seco (15 mL) foi tratada com TBAF (solução a 1 M em THF) (0,6 mL, 0,60 mmol) e agitada durante 30 min. Após evaporação do solvente, o material seco foi purificado por cromatograf ia em coluna (CH2CI2 a 5%/MeOH) para obter 341 (109 mg, 0,382 mmol, 95,5%) como um sólido branco cristalino. UV (H20) Xmax 308,5 nm (pH 7). 81 2-Amino-6-cloro-9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-o-L-glicero-pent-2-enofuranosil)purina (342). Uma solução de 334 (145 mg,
0,36 mmol) em acetonitrilo seco (10 mL) foi tratada com TBAF (solução a 1 M em THF) (0,5 mL, 0,50 mmol) e agitada durante 30 min. Após evaporação do solvente, o material seco foi purificado por cromatografia em coluna (9% 0¾ CI2 /MeOH) para obter 342 (99, 9 mg, 0,35 mmol, 96,4%) como um sólido branco cristalino. UV (H2O) Xmax 309, 0 nm (pH 7). 9-(2,3-didesoxi-2-fluoro-p-L-glicero-pent-2-enofuranosil)guanina (343). Uma mistura de 341 (63,6 mg, 0,223 mmol), 2-mercaptoetanol (0,06 mL, 0,89 mmol) e NaOMe a 1 N (0,89 mL, 0,89 mmol) em MeOH (10 mL) foi refluxada, durante 5 h,
sob azoto. A mistura foi arrefecida, neutralizada com AcOH glacial e concentrada à secura, sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (CH2CI2 a 12%/MeOH) para obter 343 (30,1 mg, 0,113 mmol, 50,7%) como um sólido branco. UV (H20) Xmax 253, 5 nm (pH 7). 9- (2,3-didesoxi-2-fluoro-<x-L-glicero-pent-2-enofuranosil)guanina (344). Uma mistura de 342 (59,3 mg, 0,208 mmol), 2-mercaptoetanol (0,07 mL, 1,04 mmol) e NaOMe a 1 N (1,04 mL, 1,04 mmol) em MeOH (10 mL) foi refluxada, durante 5 h sob azoto. A mistura foi arrefecida, neutralizada com AcOH glacial e concentrada, à secura, sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (CH2CI2 a 12,5%/MeOH) para obter 344 (28,0 mg, 0,105 mmol, 50,5%) como um sólido branco. UV (H20) Xmax 253, 0 nm (pH 7) . 82
IV. Actividade Anti-Hepatite C
Os compostos podem exibir actividade anti-hepatite C pela inibição de polimerase HCV, pela inibição de outras enzimas necessárias no ciclo de replicação ou por outros métodos conhecidos. Têm sido publicados uma série de ensaios para avaliar estas actividades. 0 documento WO 97/12033, apresentado em 27 de Setembro de 1996, pela Emory University, com C. Hagedorn e A. Reinoldus como inventores, divulga um ensaio de polimerase HCV que pode ser utilizado para avaliar a actividade dos compostos aqui descritos. Triangle Pharmaceuticals, Inc., Durham, Carolina do Norte tem a licença exclusiva deste pedido e invenção. Outros ensaios de polimerase HCV têm sido descritos por Bartholomeusz, et al., Hepatitis C vírus (HCV) RNA polymerase assay using cloned HCV non-structural proteins; Antiviral Therapy 1996: 1 (Supp 4) 18-24. V. Composições Farmacêuticas
Os seres humanos que padecem de qualquer um dos distúrbios aqui descritos podem ser tratados pela administração, ao doente, de uma quantidade eficaz do composto activo ou de um seu derivado ou sal farmaceuticamente aceitável, na presença de um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. Os materiais activos podem ser administrados por qualquer via adequada, por exemplo, por via oral, parentérica, intravenosa, intradérmica, subcutânea ou tópica, na forma líquida ou sólida. Uma dosagem preferida do composto para todas os estdos acima mencionados estará na gama desde cerca de 1 a 50 mg/kg, de um modo 83 preferido, de 1 a 20 mg/kg de peso corporal por dia, de um modo mais geral, de 0,1 até cerca de 100 mg por quilograma de peso corporal do receptor, por dia. A gama de dosagem eficaz dos derivados farmaceuticamente aceitáveis pode ser determinada com base no peso do nucleósido parental a ser administrado. Se o derivado tem actividade por si só, a dosagem eficaz pode ser estimada como acima, utilizando o peso do derivado, ou por outros meios conhecidos pelos peritos na técnica. O composto é convenientemente administrado em forma de dosagem unitária adequada, incluindo, mas sem estar limitado a, uma contendo de 7 a 3000 mg, de um modo preferido, de 70 a 1400 mg de ingrediente activo por forma de dosagem unitária. A dosagem oral de 50-1000 mg é frequentemente adequada.
Idealmente, o ingrediente activo deve ser administrado para conseguir picos de concentrações de plasma do composto activo desde cerca de 0,2 a 70 pM, de um modo preferido, de cerca de 1,0 a 10 μΜ. Isto pode ser conseguido, por exemplo, por injecção intravenosa de uma solução com 0,1 a 5% do ingrediente activo, opcionalmente em soro fisiológico ou administrada como um bólus do ingrediente activo. A concentração do composto activo na composição do fármaco irá depender das velocidades de absorção, inactivação e excreção do fármaco, bem como de outros factores conhecidos pelos peritos na técnica. Deve notar-se que os valores de dosagem também irão variar com a gravidade do estado a ser tratado. Entender-se-á também que, para qualquer indivíduo em particular, os regimes de dosagem devem ser ajustados ao longo do tempo, de acordo com a necessidade individual e a opinião profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das composições e, 84 assim, as gamas de concentração aqui apresentadas são apenas exemplificativas e não pretendem limitar o âmbito ou a acção da composição reivindicada. 0 ingrediente activo pode ser administrado de uma só vez ou pode ser dividida numa série de dosagens mais pequenas a serem administradas em vários intervalos de tempo.
Um modo de administração preferido do composto activo é por via oral. As composições orais irão incluir, de um modo geral, um diluente inerte ou um veiculo comestível. Podem ser incluídos em cápsulas de gelatina ou comprimidos em comprimidos. Para o propósito da administração terapêutica oral, o composto activo pode ser incorporado com excipientes e utilizado na forma de comprimidos, trociscos ou cápsulas. Agentes ligantes e/ou materiais adjuvantes farmaceuticamente compatíveis podem ser incluídos como parte da composição.
Os comprimidos, pílulas, cápsulas, trociscos e semelhantes podem conter qualquer um dos seguintes ingredientes ou compostos de uma natureza semelhante: um aglutinante, tal como celulose microcristalina, goma tragacanto ou gelatina; um excipiente, tal como amido ou lactose, um agente de desintegração, tal como ácido algínico, Primogel, ou amido de milho; um lubrificante, tal como estearato de magnésio ou Sterotes; um glidante, tal como dióxido de sílica coloidal; um agente adoçante, tal como sacarose ou sacarina; ou um agente aromatizante, tais como hortelã-pimenta, salicilato de metilo ou aroma de laranja. Quando a forma de dosagem unitária é uma cápsula, pode conter, além do material do tipo acima, um veículo líquido, tal como um óleo gordo. Além disso, as formas de dosagem unitárias podem conter vários outros materiais que modificam a forma física da 85 unidade de dosagem, por exemplo, revestimentos de açúcar, goma-laca ou outros agentes entéricos. 0 composto pode ser administrado como um componente de um elixir, suspensão, xarope, pastilha, pastilha elástica ou semelhantes. Um xarope pode conter, além dos compostos activos, sacarose como um agente adoçante e determinados conservantes, pigmentos e corantes e aromatizantes. 0 composto ou um derivado farmaceuticamente aceitável ou seus sais também pode ser misturado com outros materiais activos que não comprometem a acção desejada, ou com materiais que sejam um suplemento à acção desejada, tais como antibióticos, antifúngicos, anti-inflamatórios ou outros antivirais, incluindo outros compostos nucleósidos. As soluções ou suspensões utilizadas para aplicação parentérica, intradérmica, subcutânea ou tópica podem incluir os seguintes componentes: um diluente estéril, tal como água para injecção, solução de soro fisiológico, óleos fixados, polietilenoglicóis, glicerina, propilenoglicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos, tal como álcool benzilico ou metilparabenos; antioxidantes, tal como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes, tal como ácido etilenodiaminatetraacético; tampões, tais como acetatos, citratos ou fosfatos e agentes para o ajuste da tonicidade, tal como cloreto de sódio ou dextrose. A preparação parentérica pode ser incluida em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de dosagem múltipla feitos de vidro ou plástico.
Se administrado por via intravenosa, os veiculos preferidos são soro fisiológico ou tampão fosfato salino (PBS). 86
Numa forma de realização preferida, os compostos activos são preparados com veículos que irão proteger o composto contra a eliminação rápida do corpo, tal como uma formulação de libertação controlada, incluindo implantes e sistemas de libertação microencapsulados. Podem ser utilizados polímeros biodegradáveis, biocompatíveis, tais como etilenovinilacetato, polianidridos, ácido poliglicólico, colagénio, poliortoésteres e ácido poliláctico. Os métodos para a preparação das referidas formulações serão evidentes para os peritos na técnica. Os materiais podem ser comercialmente obtidos da Alza Corporation.
As suspensões lipossomais (incluindo lipossomas cujo alvo são células infectadas com anticorpos monoclonais a antigénios virais) também são preferidas como veículos farmaceuticamente aceitáveis. Estas podem ser preparadas de acordo com métodos conhecidos pelos peritos na técnica, por exemplo, como descrito na Patente U.S. N°. 4522811.
Por exemplo, as formulações lipossomais podem ser preparadas por dissolução de lípido(s) adequado(s) (tais como estearoilfosfatidiletanolamina, estearoilfosfatidilcolina, aracadoilfosfatidilcolina e colesterol) num solvente inorgânico que é, depois, evaporado, permanecendo uma película fina de lípido seco na superfície do recipiente. Uma solução aquosa do composto activo ou seus derivados monofosfato, difosfato e/ou trifosfato é então introduzida no recipiente. 0 recipiente é então agitado à mão para libertar material lipídico das paredes do recipiente e para dispersar agregados lipídicos formando assim a suspensão lipossomal.
Lisboa, 13 de Dezembro de 2006 87

Claims (23)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um 2'-fluoronucleósido no fabrico de um medicamento para o tratamento de infecção por hepatite C em humanos, em que o 2'-fluoronucleósido é um composto de fórmula: Qase
    em que Base é uma base de purina ou pirimidina; R1 é OH, H, OR3, N3, CN, halogéneo, CF3, alquilo inferior, amino, alquilamino inferior, dialquilamino inferior ou alcoxilo, em que o referido alquilo inferior é um Ci a C4 saturado, linear, ramificado ou, se adequado, um grupo alquilo cíclico; R2 é H, monofosfato, difosfato, trifosfato, um pró-fármaco fosfato estabilizado, acilo, fosfato, um lipido ou um aminoácido; e R3 é acilo, alquilo, fosfato ou outro grupo abandonante farmaceuticamente aceitável que, quando administrado in vivo, é capaz de ser clivado ao composto parental, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, 1 opcionalmente, em combinação com um veiculo farmaceuticamente aceitável.
  2. 2. Utilização da reivindicação 1, em que R e H, monofosfato, difosfato, trifosfato ou acilo.
  3. 3. Utilização da reivindicação 1, em que R1 é OH, OR3, alquilo inferior ou halogéneo, em que o referido alquilo inferior é um Ci a C4 saturado, linear, ramificado ou, se adequado, um grupo alquilo cíclico.
  4. 4. Utilização da reivindicação 1, em que R e acrlo.
  5. 5. Utilização da reivindicação 1, em que R e H, monofosfato, difosfato, trifosfato ou acilo; R1 é OH, alquilo inferior ou halogéneo, em que o referido alquilo inferior é um Ci a C4 saturado, linear, ramificado ou, se adequado, um grupo alquilo cíclico; e R3 é acilo.
  6. 6. Utilização da reivindicação 1, em que a Base é uma base de purina.
  7. 7. Utilização da reivindicação 6, em que a base de purina é seleccionada do grupo que consiste em guanina, adenina, hipoxantina, 2,β-diaminopurina e 6-cloropurina.
  8. 8. Utilização da reivindicação 1, em que a Base é uma base de pirimidina.
  9. 9. Utilização da reivindicação 1, em que R1 e R2 são hidrogénio. 2
  10. 10. Utilização da reivindicação
  11. 11. Utilização da reivindicação
  12. 12. Utilização da reivindicação
  13. 13. Utilização da reivindicação
  14. 14. Utilização da reivindicação
  15. 15. Utilização da reivindicação
  16. 16. Utilização da reivindicação
  17. 17. Utilização da reivindicação fosfato estabilizado.
  18. 18. Utilização da reivindicação 1, em que R1 é OH ou OR3. 1, em que R1 é OH. 1, em que R1 é H. 1, em que R1 é halogéneo. 1, em que R1 é CF3. 1, em que R1 é alquilo inferior. 1, em que R2 é H. 1, em que R2 é um pró-fármaco 1, em que R2 é acilo.
  19. 19. Utilização da reivindicação 1, em que a base de purina é seleccionada de adenina, N6-alquilpurinas, N6-acilpurinas (em que acilo é C(O)(alquilo, arilo, alquilarilo ou arilalquilo), N6-benzilpurina, N6-halopurina, N6-vinilpurina, N6-acetilenopurina, N6-acilpurina, N6-hidroxialquilpurina, N6-tioalquilpurina, N2-alquilpurinas, N2-alquil-6-tiopurinas, guanina, hipoxantina, 2,6-diaminopurina, 2-cloro-2-aminopurina, inosina ou 6-cloropurina.
  20. 20. Utilização da reivindicação 1, em que a Base é uma base de pirimidina seleccionada de timina, citosina, 5-fluorocitosina, 5-metilcitosina, 6-azapirimidina, 3 incluindo 6-azacitosina, 2- e/ou 4-mercaptopirimidina, uracilo, 5-halouracilo, incluindo 5-fluorouracilo, C5-alquilpirimidinas, C5-halopirimidinas, C5-acetilenopirimidina, C5-hidroxialquilpurina, C5-benzilpirimidinas, C5-vinilpirimidina, C5-acilpirimidina, C5-amidopirimidina, C5-cianopirimidina, C5-nitropirimidina, C5-aminopirimidina, 5-azacitidinilo, imidazolopiridinilo, pirazolopirimidinilo. 5-azauracililo, triazolopiridinilo, pirrolopirimidinilo ou
  21. 21 . Utilização da reivindicação 1, em que o medicamento é adequado para administração oral.
  22. 22 . Utilização da reivindicação 1, em que 0 medicamento é adequado para administração parentérica.
  23. 23. Utilização da reivindicação 1, em que o medicamento é adequado para administração intravenosa. Lisboa, 13 de Dezembro de 2006 4 grupo fenilo está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, como descrito na definição de arilo acima, um lípido, um aminoácido, péptido ou colesterol; e R3 é acilo, alquilo, fosfato ou outro grupo abandonante farmaceuticamente aceitável que, quando administrado in vivo, é capaz de ser clivado ao composto parental, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
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