SU1500645A1

SU1500645A1 - 3'-фтор-з'-дезоксирибонуклеозиды, проявляющие цитостатическую активность

Info

Publication number: SU1500645A1
Application number: SU874345438A
Authority: SU
Inventors: Nikolaj E Pupejko; Tamara I Prikota; Grigorij G Sivets; Evgenij I Kvasyuk; Igor A Mikhajlopulo; Viktor P Reshchikov; Nina M Fertukova
Original assignee: Inst Bioorg Chimii
Priority date: 1987-12-18
Filing date: 1987-12-18
Publication date: 1989-08-15

Description

Изобретение касается нуклеозидов, в частности 3'-φτορ-3^ζ-дезоксирибонуклеозидов общей формулы,

ЭН

где В - а7 аденин-9-ил, б) гуанин-9-ил, в) цитозин-1-ил, проявляющих цитостатическую активность, что может быть использовано в медицине.

Цель - создание новых более активных соединений указанного класса. Синтез ведут реакцией 1-0-ацетил-2,5-ди-0-бенэоил-З-фтор-З-дезокси-Д-рибофуранозы с триметилсилильным производным соответствующей аминокислоты в среде дихлорэтана в присутствии 5пС1^ или триметилсилилтрифторметансульфоната с последующей обработкой полученного соединения раствором метилата натрия или аммиака в метаноле. Выход полупродукта, брутто-формула; выход целевого продукта, т.пл. ⁰ С; брутто-формула: а) 82; С_?)Н_г4К₅0₆Г ; 74,6; 211-212; ϋ,_οΗ_ηΝ₅Ο₃Γ , б) 62,2; С^Н^ N,0? Р ', 70,4; 289-291 (с разл.); Ο₁₀Η_4{,Ν₅Ο₉Γ, в) 75,1; С Ε_μΝ_}Ο₄Ρ; 81,2; 221-223; СдН^Ы^Р. Новые соединения в сравнимой концентрации проявляют цитостатическое действие быстрее, чем циклоцитидин (через 3 и 24 ч), а эффективность их действия в 22, в 11 и в 20 раз выше, чем У циклоцитидина. 1 табл.

СП

о

и

СП

Изобретение относится к З'-фтор-3' -дезоксирибонуклеозидам общей формулы

где В - а) аденин-9-ил

б) гуанин-9-ил

в) цитозин-1-ил,

проявляющим цитостатическую активность .

"^θτφ^Β '

г он

Цель изобретения - новые фторсодержащие рибонуклеозиды с большей цитостатической активностью, чем

³ 1500645

у структурного аналога - циклоцитидина.

П р и м^- е р 1. 9-(3-Фтор-3-дезокси-^-Д-рибофуранозил) аденин (1а).

Смесь 1,7 г (4,22 ммоль) 1-0-ацетил- 2,5-ди-0-бензоил-3-фтор-3-дезокси-Д-рибофуранозы (II), 1,6 г (4,17 ммоль) бис-триметилсилильного производного б-Ы-бензоиладенина и ю 0,97 мл (2,16 г, 8,31 ммоль) четыреххлористого олова в 26 мл дихлорэтана перемешивают при 20^0 18 ч. Реакционную смесь разбавляют хлороформом до 70 мл и выливают в 40 мп насыщен- 15 ного раствора бикарбоната натрия.

Водный слой отделяют и промывают хлороформом (2x30 мл). Хлороформные растворы объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают. Оста- 20 ток хроматографируют на силикагеле Ъ 100/400 (300 см^). Колонку элюируют смесью растворителей хлороформ метанол с постепенным увеличением содержанием метанола от 2 до 12 об.%, 25 Фракции, содержащие нуклеозидный продукт, собирают и упаривают досуха. Получают 1,99-г (82%) 6-№-бензоил-9-(2,5-ди-0-бензоил-3-фтор-3-дезокси-^-Д-рибофуранозил)адени- 30 на III в виде сиропа.

УФ-спектр, нм (1§6); 232

(4,56); 280 (4,30).

Найдено, %: С 63,90) Н 4,00',

N 11,90’, Г 3,21. . 35

С₃, Н₂₄. Ν,Ο,Ρ.

Вычислено,%: С 64,02; Н 4,15;

N 12,04; Р 3,26.

Растворяют 1,1 г (1,89 ммоль) трибензоата III в 20 мл 0,3 М раствора метилата натрия в метаноле, выдерживают при 20° С 10 ч, нейтрализуют 0,34 мл уксусной кислоты и упаривают досуха. Остаток хроматографируют на ионообменной смоле Дауэкс ^5 1-8 (ОН®-форма) (300 см³). Колонку элюируют сначала водой, затем смесью метанол-вода 4:1. Фракции, содержащие нуклеозидный продукт, собирают, упаривают досуха и кристаллизуют из 30 спирта. Получают 0,38 г (74,6%) соединения 1а, т.пл.211-212°С.

УФ-спектр, , нм (1§8) :

260 (4,16).

Спектр ПМР (ДМСО-Д₆), £ , м.д.: 35

8,37 и 8,15 (с, 1Н, Н-2, Н-8); 7,40

(с, 2Н, Ш_г); 5,96 (§, 1Н, Н-1' Д_Гг,=

=7,8 Гц); 5,92 ·(§, 1Н, 2'-0Н,

4

=6,0 Гц); 5,78 (_ёё, 1Н,5'-ОН); 5,10 (88, ΙΗ, Н-3'); 4,95(м, 1Н, Н-2');

4,31 (м, ΙΗ, Н-4'); 3,68 (м, 2Н,

й-5' , 5") .

Найдено, %: С 44,66,' Н 4,52’_;

N 25,80) Г 7,08.

^с1о ^ни^н5°э^г-269,23

Вычислено,%: С 44,61*, Н 4,49)

N 26,01; Р 7,05.

Пример 2. 9-(3-Фтор-3-дезокси-β-ϋ-рибофуранозил)гуанин (Iδ).

Смесь 1,74 г (4,32 ммоль) соединения II и триметилсилильного произв'одного 2,9-ди-Д-ацетилгуанина, полученного кипячением 1,2 г (5,10 ммоль) 2,9-ди-Н-ацетилгуанина в 30 мл гексаметилдисилазана, кипятят 1,5 ч в 50 мл дихлорэтана в присутствии 0,91 мл (1,11 г, 5,0 ммоль) триметилсилилтрифторметансульфоната. Раствор упаривают, остаток растворяют в 150 мл хлороформа и экстрагируют насыщенным раствором бикарбоната натрия (2-50 мл) и водой (2-50 мл). Хлороформный раствор сушат безводным сульфатом натрия, упаривают и хроматографируют на силикагеле Ь 40/100 (200 см³). Колонку элюируют смесью растворителей хлороформ-метанол с постепенным увеличением содержания метанола от 2 до 6 об,%. Фракции^ содержащие нуклеозидный продукт, собирают и упаривают. Получают 1,44 г (62,2%) 2-Р!-ацетил-9-(2,5-ди-0-бензоил-З-фтор-З-дезоксицр-О-рибофуранозил)гуанина IV в виде аморфного порошка, т.пл. 135-138°С.

УФ-спектр, нм (1§Б): 234

(4,53)ί 259 (4,32); 280 (4,22).

Найдено, %: С 58,40; Н 3,97;

N 12,87; Р 3,28.

0₂₆Η_ζ2Ν₅0_τΡ - 535,49.

Вычислено, %: С 58,31’, Н 4,14)

N 13,07; Р 3,54.

Растворяют 1,2 г (2,24 ммоль) соединения IV в 50 мл насыщенного при 0°С раствора аммиака в метаноле, выдерживают при 20°С 7 дней и упаривают. Остаток растирают с 50 мл спирта,· спирт декантируют, а образовавшийся порошок кристаллизуют из воды. Получают 0,45 г (70,4%) соединения II, т.пл. 289-291°С (с разложением).

УФ-спектр, нм (1§£) : 253

(4,14); 269 плечо (4,00).

1500645

5,88 (с, 1Н, Н-1',

х' =

Спектр ПМР (ДМСО-сЦ), 5" , м.д.:

7,91 (с, 1Н, Н-8); 6,54 (с, 2Н, ГОЦ), 5^ζ-0Η)·, 5,75 (_ё, 1Н,

8,4 Гц); 5,42 (с, 1Н, 2'-ОН); 5,04 (§§, 1Н,’Н-3'); 4,75 (м, 1Н, Н-2'); 4,20 (м, 1Н, Н-4'). 3,59 (_ё, 2Н, Н-У , 5" ).

Найдено,%: С 42,30',': н 4,17;

N 24,25; Р 6,55'.

Ο_4ΟΗ_αΝ₅Ο+Γ - 285,23.

Вычислено, %: С‘42,10; Н 4,24;

N 24,55, Г 6,66.

Пример 3. 1-(З-Фтор-З-дезокси-^-П-рибофуранозил)цитозин (1в)

Смесь 1,1 г (2,73 ммоль) соединения II и триметилсилильного' производного цитозина, полученного кипячением 0,3 г (2,70 ммоль) цитозина в смеси 1 мл триметилхлорсилана и 5 мл гексаметилдисилаза, кипятят Г ч в 25 мл дихлорэтана в присутствии 0,5 мл (0,61 г, 2,7 ммоль) триметил силилтрифторметансульфоната. Раствор упаривают, остаток растворяют в 100 мл хлороформа и экстрагируют насыщенным раствором бикарбоната натрия (2-30 мл) и водой (2* к 20 мл). Хлороформный раствор сушат безводным сульфатом натрия, упаривают и хроматографируют на силикагеле Ь 40/100 (150 см^г). Колонку элюируют смесью растворителей хлороформ метанол с постепенным увеличением содержания метанола от 2 до 10 об.%. Фракции, содержащие нуклеозидный продукт, собирают, упаривают, остаток кристаллизуют из спирта. Получают 0,92 г (75,1%) .1-(2,5-ди-0-бензоил-З-фтор-З-дезокси-^-П-рибофуранозил) цитозина V, т.пл. 203-205°С.

УФ-спектр, 3^?« нм (1§£)

231

е₂₅н_гоп₃о,г

(4,69); 269 (4,13),

Найдено, %: С 60,80; Н 4,40;

N 9,30,Г 4,10.

- 453,42

С 60,92; И 4,44',

Вычислено,%:

N 9,26;Г 4,18.

Растворяют 0,41 г (0,9 ммоль) соединения V в 30 мл насыщенного при 0°С раствора аммиака в' метаноле, выдерживают при 20°С 2 дня и упаривают. Остаток растирают с 30 мл эфира, эфир декантируют, а образовавшийся .порошок кристаллизуют из спирта. Получают 0,18 г (81,2%) соединения С1в), т.пл. 221-223°С.

10

УФ-спектр, 71^*° нм (1_ё£): 270

(3,92).

Спектр ПМР (ДМСО - 8_έ), £ , м.д.: 7,73 (§, 1Н, Н-6, 7,2 Гц)?

7,24 (с, 1Н, ΝΗ)’, 7,18 (с, 1Н, ΝΗ);

5.92 (_δ, ΙΗ, Н-1' , 3 г,г' = 7,8 Гц);

4.92 (ёё, 1Н, Н-3' , ,3,/ _гг= 4,8 Гц;

= 54,6 Гц); 4,25 (м, 1Н,Н-2'); 4,13(м, 1Н, Н-4'),' 3,44 (м,

Н-5', 5" ).

Найдено, %:

N 17,01; Г 7,57

2Н,

С 43,97; Н 4,88-,

15

20

25

30

35

45

С_д Η_ηΝ,Ο₄Ρ.

Вычислено,%: С 44,08,' Н 4,93,*

N 17,13,' Р 7,74.

Исследование биологической активности 9-(3-фтор-3-дезокси-$-0-рибофуранозил)аденина (1а), 9-(3-фтор-3-дезокси-^-О-рибофуранозил)гуанина (16) и 1-(З-фтор-З-дезокси-^-О-рибофуранозил)цитозина (1в) изучали в системе ίη νίίτο при инкубировании суспендированной культуры асцитической лейкозной опухоли штамма лимфолейкоза.Ь-1210. В каждом опыте использовали по 2 мл взвеси, содержащей 1-1,1-10⁶ лейкозных клеток. Препараты применяли в концентрациях ΙΟ'² и 10* ⁴ моль/л в виде раствора в 0,9%-ном растворе хлорида натрия.

В контрольных опытах вместо растворов препарата в . пробирки добавляли раствор хлорида натрия. После инкубирования в течение 3 и 24 ч в каждом, опыте подсчитывали общее количество клеток в 1 мл взвеси, содержание жизнеспособных клеток и отношение его к содержанию жизнеспособных клеток в контрольной серии. Цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики.

Производное аденозина (1а) проявляло четко выраженный эффект уже через 3 ч инкубации, содержание жизнеспособных клеток по отношению к .контролю (контроль принимался за 100%) доставляло 64,7+6,8 и 81,3+4,2%· при концентрации препарата 10^г1М и 1 СГ^М соответственно (см.таблицу).Спустя 24 ч инкубации эффект подавления лейкозных клеток Ь—1 21 0 наблюдался при действии всех 3-фторсодержащих нукле55 озидов данные представлены в таблице) .

В сравнении с этим известный противолейкозный препарат - циклоцитин

40

50

7

1500645

8

VI начинал проявлять цитостатический эффект только после 24 ч инкубации, а содержание погибших лейкозные клеток составляло лишь 3,9% по отношению к контролю.

Таким образом, соединения 1а-в в сравнимой концентрации проявляют цитостатическое действие быстрее,чем эталонный циклоцитидин (через 3 и 24 ч), а эффективность их действия в 22, в II и в 20 раз выше; чем у циклоцитидина.

Claims

Формула изобретения 3'-Фтор-3 *-дезоксирибонуклеозиды

общей формулы с · г эн где В - а) аденин-9-ил б) гуанин-9-ил в) цитозин-1-ил,

проявляющие цитостатическую активность.

Влияние, ίη νίϊΓο 3'-фтор-3'-дезокси-Д-ϋрибофураноэцдов аденина (1а), гуанина (16), цитозина (1в) и противолейкозного препара циклоцитидина (VI) на клетки Ь-1210

Препарат % жизнеспособных клеток по отношению и контролю после % погибших клеток по отношению к контролю через 24 ч инкубации Эффективность действия через 24 ч инкубации* № Концентрация, моль/л 3 ч инкубации 24 ч инкубации 1а 1*10'² 64,7+6,8 13,6±3,8 86,4 22,1 1 · 10"⁴ 81,3+4,2 41,0±8,0 59,0 15,1 16 1 ·10'² 95,512,3 55,5+4,6 44,5 П,4 Ι-ΙΟ"⁴ 95,5+1,0 68,2+12,9 31,8 8,1 1в 1·10“^г 93,0+0,7 20,7±5,1 79,3 20,3 1· 10~⁴ 89,5±4,4 11,3+0,5 68,7 22,7 VI 0,8-10-⁵¹ - 96,1±1,0 3,9; - зб ίο-⁴· - 96,111,2 3,9 —.

* Эффективность определена как отношение % погибших клеток под действием Р-производных соединений к % погибших клеток под действием циклоцитидина .