JPS63152364A - アルキニルアミノヌクレオチド及びその製造方法 - Google Patents

アルキニルアミノヌクレオチド及びその製造方法

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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はアルキルアミノヌクレオチド、特にこれを用い
て螢光性ペースＤＮＡシーケンス化法の連鎖停止基質と
して螢光性標識付のヌクレオチドをこしらえることに関
連するものである。
ＤＮＡシーケンス化は近代分子生物学の基礎的な分析技
術の一つである。
シーケン化の為の信頼できる手法の開発が遺伝子的情報
の機構を理解するのに大巾に役立っておシ、これがまた
遺伝子物質の取扱い（即ち遺伝子工学〕を可能にしてい
る。
現在ＤＮＡシーケンス化には二つの一般的手法があるニ
一つはマクサム・ギルバートの化学デグラデーション（
Ａ、Ｍ、　Ｍａｙａｍ他によるＭｏｔｈ、　ｉｎ　Ｅｎ
ｚｙｍ。
−１９８０年刊の６５巻の４９９〜５５９頁〕でもう一
つは５ＡＮＧＥＨのジデオキシ連鎖停止法（エフ・サン
ガー他の米国学術会議−１９７７年刊の７４巻の５４６
３〜５４６７頁）である。
これら二つの手法の共通点は、−組のＤＮＡ断片を作シ
、これを電気泳動で分析することである。
但しこれらの断片作成の手法は異っている。
凧凡庸−Ｇ　Ｉ　ＬＢ　ＥＲＴ法では、ＤＮＡ断片はシ
ーケンス化されるべきＤＮＡ部の塩基特異的化学分割に
よって作られる。シーケンス化されるべきＤＮＡ片は先
ず５′−末端を　Ｐで標識付けされ、次に、４つの部分
に分けられる。各部分は一連の異なった化学的処理をう
け、塩基（または諸塩基〕に隣接した位置でＤＮＡを分
割するようになっている。この結果は、標識付けられた
全ての小片は当初のＤＮＡ部と同じ先端５′と、分裂の
位置で決る先端３′をもつことになる。この処理はグル
電気泳動による分離に好都合な長さのＤＮＡ片を作シ出
す状態の下で行われる。
８ＡＮＧＥＲ法の場合ＤＮＡ片の作成はシーケンス化さ
れるべきＤＮＡ部の部分的な酵素複製（即ち合成）によ
る。最も一般的な説明によれば、シーケンス化されるべ
きＤＮＡ部は標準的な方法でシーケンス化ベクターバク
テリオファージＭ１３のような大きな、環状で一本のよ
シ糸状のＤＮＡ片である６シーケンシングベクター”に
挿入される。これが複製工程用のテングレートになる。
この挿入のすぐ上の方にあるテングレートの部分を補足
するシーケンスをもったＤＮＡの短片が合成用のプライ
マーとして役立つべくテンプレートにアニールされる。
４つの天然のデオキシリカヌクレオシドトリホヌフェー
）　（ｄｄＮＴＰ）ターミネータ−に沿って４個のｄＮ
ＴＰを１塩基に１個の割合で含んでいる（３２Ｐの標識
付けされたｄＮＴＰが付加され標識された小片を供給す
る９゜１つのｄＮＴＰがポリメラーゼに組み込まれてい
る場合、鎖状は連結的に拡大することができる。対応す
るｄｄＮＴＰが選択される場合は、この鎖状は終了する
。ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰの比率は適当な長さのＤ
ＮＡ片を作るように調整される。このようにして、４つ
の反−１０＝ 応の混合物各々が先端３′とプライマーが決める先端５
′に同じジデスオキシヌクレオシドの残留分をもった小
片の配分を含むことになる。１ターミネータ−″′連鎖
ターミネーター”及び１連鎖終了基質”という用語は終
始一貫して互換的に１つの基質を意味しておフ、それは
テンプレートの指示した方法に従い核酸を複製する酵素
によってＤＮＡの先端３′マたはＲＮＡ鎖に組み込むこ
とが可能であるが、一旦、組み込まれたらその後は鎖の
増加を妨げるものである。
対照的に、自然のデスオキシヌクレオシド基質は６鎖増
殖基質”と考えることができる。
“ヌクレオシド”という用語はピリミジンあるいはプリ
ン（あるいはその誘導体）１分子と、１個のリボース糖
（あるいはその誘導体又は機能上の等何物）１分子とか
らなる複素環状塩基糖の単位体を意味するのに常に用い
られる。６ヌクレオチドという用語はヌクレオシドある
いはその附リン酸反応誘導体を常に意味する。
５ＡＮＧＥＲ法も凧工１ｍ−ＧＩＬＢＥＲＴ法も一般的
に言って物理的方法では直接法められない塩基のシーケ
ンス情報が決定可能な鎖状長さの情報へと変換されてい
る。この決定は電気泳動分離によって達成可能である。
変性条件（高温、尿素の存在等〕の下では、短いＤＮＡ
片はあたかも固いロッドのように移動する。
グル母材が電気泳動用に使われる場合は、このＤＮＡ片
は大きさ別に分けられる。シーケンス化に必要な単一塩
基分割は、数百個迄の塩基をもつＤＮＡ片の為に常に得
ることができる。全面的シーケンス化を確定するため、
ＭＡＹＡＭ−ＧＩＬＢＥＲＴ法あるいは５ＡＮＧＥＲ法
によシ作られた４セニツトの小片が４本の平行なレーン
で電気泳動をうける。この結果、グルの長さに沿って空
間的に分離される小片が生じる。
標識付された小片のパターンは典型的にはＸ線撮影で感
光フィルムに転写される（即ち、ある一定時間グルとフ
ィルムとをはさみこむことで露出が得られる）。現像さ
れたフィルムには、４本のレーンに配分された帯状の連
続体が見えるので、この帯状連続体をシーケンス化ハシ
ゴと呼ぶことが多い。このハシゴは目視でフィルムを走
査しく短く、より速く動く小片から始める〕そしてハシ
ゴ上の各ステップのために次の帯状体が現われているレ
ーンを確定することで読み取れる。
各レーンは与えられた塩基（又はＷＧＩＬＢＥＲＴ法の
場合は塩基の組合わせ〕と結びついているのでレーン割
当ての線状進行が直接、塩基のシーケンスに変えられる
。ＤＮＡシーケンス化の為のこの５ＡＮＧＥＲ及びＭＡ
ＸＡＭ−ＧＩＬＢＥＲＴ法は考え方としては高度かつ効
果的であるが、作業上は困難かつ時間のかかるものであ
る。これらの技術を分析すると、問題の多くが単一の放
射性同位元素リポータ−の利用から生じていることがわ
かる。〔リポータ−というのは物理的あるいは化学的特
性をもった化学的グループと定義づけることができるも
のでこの特性は適切な物理的あるいは化学的な検出シス
テム又は手続によって容易に測定または検出が可能なも
のである。〕検出の簡便性は色の変化、発光、螢光ある
いは放射能の如き特性によって得ら一１３＝ れるものであシ、あるいは又、在来型（例えば、旧式の
色彩計、分光光度計、螢光計あるいは放射性の〕検出手
続で発見できるグループを含む特定のリガンド・リガン
ド複合体を形成するべく、リガンド確認場所として作用
するリポータ−複合体は蛋白質リガンド、酵素基質、抗
体抗原、炭化水素、レクチン、蛋白賛助因子、蛋白質奏
効因子、核酸・核酸又は核酸リガンド複合体の形態をと
ることが可能である。（Ｐ、１５／１４行より）高度な
特定活動に３２Ｐのような短命の放射性同位元素を使用
することはメンテナンス上および健康安全上の双方の見
地から問題がある。３２Ｐの短かい半減期には予じめ数
日前に試薬の必要性を予期し、そしてこの試薬を迅速に
使用しなければならない。３２Ｆの標識の付いたＤＮＡ
シーケンス化小片が一旦作られたら、それらは自壊を起
こし易いので、直ちに電気泳動分析を受けなければなら
ない。大きな電気泳動グルは単一塩基分離を達成するの
に必要な大量の汚染緩衝物質になるので、汚染物処理問
題が生じる。グル内の標識付ＤＮＡ片を視覚化するのに
必要な放射能撮影はゆっくシしたプロセス（−夜越しの
露出が普通）をたどシ、しかも全体の作業にはかなシの
時間がかかる。その上結論として強力な放射性同位元素
使用に関連した健康上の危険が存在し得る。４つの塩基
の位置分析を行うため、只１つのリポータ−を使用して
も、プロセス全体において著しい複雑性を作業にもたら
している。
薬品／酵素の段階は別個の容器でと９行わればならず、
電気泳動分析も４本の平行レーンで行われはならない。
移動中に生じた熱による歪みは標識付けＤＮＡ片の像を
ゆがんだものにし、（即ち微笑効果）その結果、４つの
レーンの比較を困難なものにする。これらの歪みが原因
で単一のグル上で読みとれる塩基の数がしばしば限定さ
れる。
４つの平行レーン使用の必要性に伴ない放射能撮影に長
い時間がかかるので、視覚化の為にスナップ写真方式を
取らざるを得ない。多数の帯状体を同時に空間分割する
必要があるので、非常に大きなグルが使用されなければ
ならない。
これが更に問題をもたらす。即ち大きなグルは取扱い難
く、動きが鈍く、このため全体の処理に更に時間がかか
ることになる。最後に、そこには取扱説明書の解釈問題
がある。シーケンス化ノ・シボを塩基シーケンスに変換
するには、高度に熟練した科学者の全面的な注意を必要
とする時間集中的且つエラーが起こｐ易いプロセスなの
である。
この読みとシを自動化しようとした数多くの試みが行わ
れてきたし、いくつかの機械的な補助装置もあるにはあ
るが、シーケンスグルの解釈プロセスでも苦労があシか
つ時間のかかるものである。
こういう問題を取扱う為に、３２Ｐ放射線撮影を代替方
式すなわち、非放射性同位元素のリポータ−システムが
検討されてきた。かかる検出システムは、３２Ｐと同じ
位、感度を達成するのに極端に敏感でなければならない
だろう。即ち、シーケンス化グル上の各帯状体がＤＮＡ
の１０　　　乗のモル程度にあることである。このレベ
ルの感度に到達できる検出方法の１つは螢光である。Ｄ
ＮＡ片は１つないしはそれ以上の螢光標識をつけること
ができる（螢光染料）。
適当な光源をもった励磁が標識からの特徴ある放射とな
シ、こうして帯状体を識別することになる。
放射性同位元素標識の代わりに螢光標識を使用すると、
検出システムをこのような特定方法に合わせるのがより
簡単になる。例えば、いくつかの放射特性（即ち、スペ
クトル配分、寿命、偏光）に基く区別しやすい４つの異
なる螢光ラベルの使用で指定の塩基に結び付いたシーケ
ンス化片に指定の標識を独特のやや方で連結することが
できる。
この連結を行えば、この小片は単一のレーンで合体した
り、分割したりすることができるし、この塩基の割当は
選択された放射特性にもとづいて直接性われる。
これ迄は、螢光を基にしたＤＮＡシーケンス化システム
を開発しようとする２つの試みが記述された。
最初のシステムはカリフォルニア工科大学で開発され、
Ｋ、Ｍ、　ＳＭＩＴＨ氏によ５１９８４年西独特許出願
≠ＤＥ３４４６６３５Ａ１：Ｌ、Ｅ、ＨＯＯＤ氏其他に
より、１９８５年西独特許出願すＤＥ３５０１３０６Ａ
１；Ｌ、Ｍ、　ＳＭＩＴＨ氏其他により核酸研究（１９
８５年）１３巻２３９９〜２４１２頁及びり、Ｍ、　Ｓ
ＭＩＴＨ氏其他によシ（１９８６年）　ＮＡＴＵＲＥ誌
３２１巻６７４〜６７９頁で発表されてきた。
このシステムは考え方として前の個所で記述された問題
を取扱うが、実施の明細には、部分的にのみ成功したＳ
ＭＩＴＨ氏のアプローチが記載されている。
例えば、このシステムに使われている螢光標識付けＤＮ
Ａシーケンス化片の最大放射における大きい波長域が４
つのすべての染料を単一の白黒源で有効に励磁させるの
を困難なものにしている。
更に重要なことは、異なった純負荷をもつ染料から起こ
る電気泳動の著しい摂動変化のため、このシステムシー
ケンス化を遂行することが困難又は不可能になっている
。これらの困難性はＳＭＩＴＨ氏其他によって明白に指
運されている。
一般的に螢光標識シーケンス化断片をつくるのに使用さ
れる方法論には困難がつきまとう。
ＭＡＸＡＭ−ＧＩＬＢＥＲＴシーケンス化では、５′標
識オリゴヌクレオチドが制限分裂で作られる「粘着性の
先端をもつ」２本鎖のＤＮＡ片に酵素的に結合される。
これによってこの形態で作られる断片の配列を限定する
。５ＡＮＧＥＲのシーケンス化においては５′標識オリ
ゴヌクレオチドがプライマーとして使用される。４つの
特別なプライマーが必要となる。
１つの新しいベクター系を使用するには４つの新しい染
色標識プライマーを合成し純化する複雑なプロセスを経
なければならない。特別なプライマーを要する時は常に
同じである。標識プライマーの使用は他の面からも不利
を伴う。これら重合反応はやはジ別個の容器で進められ
ねばならない。
凧凡Ｗ−ＧＩＬＢＥＲＴ　（！：　５ＡＮＧＥＲのシー
ケンス化システムにおけると同様、標識プライマーから
誘導されるすべての断片は螢光標識されるだろう。
このように、結果としてのシーケンヌ化パターンは共通
の人為構造（即ち、偽又は影の帯状体山積〕の大部分を
抑さえ、鎖ターミネータ−の組込み以外のプロセスで酵
素鎖の拡大が中断される時にこれが起る。
第２のアプローチにおいては、Ｗ、　Ａｎｓｏｒｇｅ他
（Ｊ、　Ｂｉｏｅｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ、　ｖｏｌ、　１３．３１５−３２３（１９８
６年）は非放射性アイソトープによるＤＮＡシーケンス
化技術を明らかにしておシ、それによれば、単一の５′
−テトラメチルローダミン螢光標識が１７塩基オリゴヌ
クレオチド・プライマーの５′先端に原子共有状態で結
合されるのである。このプライマーは異なる長さの一連
の酵素で複製されるＤＮＡ断片を作シ出すのに標準ジデ
オキシヌクレオチド・シーケンス化化学構造を通じて、
酵素的に４つの容器中に拡張される。４つの容器それぞ
れが４つのグルレーンでの従来の電気泳動分離からの終
端塩基の割当を可能にする４つのＤＮＡ！基の１つに対
応するジデオキシヌクレオチドのターミネータ−を持っ
ている。この５′テトラメチルローダミンの螢光標識は
全グル幅を通過するアルゴン・イオンのレザー光線によ
って刺激される。このシステムは放射能リポータ−の代
わシに螢光リポータ−が使用できるという点に利点があ
るが、従来方法のシーケンス化に伴う不利な点全てに加
えて標識プライマーに作らねばならないという不便を抱
え込んでいる。
これまでのところ、螢光検出の利点とメーミネーター標
識の利点とを組合せたＤＮＡシーケンス化システムを作
った人はいない。もし適当な螢光標識鋲ターミネータ−
が見出されれば標識配列断片は標識鋲ターミネータ−が
酵素によシ−ケンス化断片中に組込まれる時に限り、生
成されることになろう。この場合、他の標識メソッドに
付随する多くの人為構造は除去される。もしＤＮＡシー
ケンス化に要する４つの鎖ターミネータ−のそれぞれが
仮にそれぞれ異なる区別できる螢光リポータ−に原子共
有的に結合しているとすれば、原則的に、単一のプライ
マー伴張反応を通じ４つのターミネータ−全てを組込む
こと、次いでそれの結果できるシーケンス化断片を単一
のグルレーン中で分析することが可能になるはずである
。このような螢光標識ターミネータ−が発見されるとす
れば、これら化合物は多分、他のタイプの核酸−酵素ラ
ベリングにとって役立つことだろう。特に、螢光標識タ
ーミネータ−の同類は他の非螢光リポータ−を用いるた
めに設計されうる。又それらはテンプレートで決められ
る形態（６９ｇ、逆転写酵素、ＲＮＡポリトラーゼ又は
ＤＮＡポリメラーゼ）において核酸と複製する酵素のた
めの鎖増殖基質として利用することもできる。リポータ
−をＤＮＡ中にシーケンス化に有利な形で導入すること
は核酸標識化の問題中最大の難関である。ＤＮＡシーケ
ンス化のために開発された化合物ないし戦略は又多くの
他のラベリング問題にも適用できそうである。
螢光を使うＤＮＡ配列のための鎖終結基質として役に立
つためには、その基質に螢光標準が含まれていなければ
ならないと共に、ＤＮＡシーケンス化に有益な酵素によ
って受容されるものでなければならない。このような基
質として適当と考えられるものは、自然に発生するヌク
レオチドの誘導体又は同族である。螢光標識とヌクレオ
チドとが同時に１つの複製酵素の活性部位中にフィツト
しないであろうと予想されるため、適切に設計された基
質には螢光標識をこの酵素の活性部位から引離して位置
付けるに十分な長さと適当な形状を持つ結合基によって
ヌクレオチドから分離された螢光標識が含まれなければ
ならない。結合基の種類は使われる標識と酵素とによっ
て変わる。しかし合成の便宜上、又標識ないし酵素条件
の変化に対する適応性という観点から、この結合基をヌ
クレオチドと螢光標識とに結合させたリンカ−から成る
ものと考えるのがもっとも好都合である。
ＤＮＡシーケンス化のための螢光標識銀ターミネータ−
をデザインするには、リンカ−はいくつかの条件を満足
しなければならない。
１）同じあるいは機能上向等のリンカ−をＤＮＡ中に見
出される４つの塩基すべてに結びつけることができなけ
ればならない。
２）リンカ−は標識ヌクレオチドがＤＮＡシーケンス化
に有用な酵素のための終結基質として実際に使われるの
を妨げてはならない。
３）リンカ−（それとオプション・スペーｔ　−および
標識）はそれが結合している塩基に対してとは独立の仕
方で結合（リンカ−がりしているオリゴヌクレオチドの
電気泳動を妨げなければならない。
４）塩基へのリンカ−の結合、またスペーサーもしくは
標識は単一の、よく明確化されたヌクレオチド基質を生
み出すため立体選別的または限局選別的で碌ければなら
ない。
５〕　最後に、できればリンカ−は標識との結合のため
１次または２次アミンを含んでいることが望ましい。
標識をヌクレオチドとオリゴヌクレオチド（下を参照〕
に結合させるのに５つの異るタイプのアミン・リンカ−
が発見されているにもかかわらず、その内いずれのリン
カ−もＤＮＡシーケンス化にとって有用な終結基質に使
われる上記の５つの条件をすべて満足するものではない
。
パーダストローム他（Ｊ、　ＡＭ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏ
ｃ、、　ｖｏｌ。
９９．１５８７（１９７６月はアルケン−アミノとアク
リレート側鎖を５−マーキュリオーウリジンのオレフィ
ンへのＰｄ（１１）触媒連結によジヌクレオチドに結合
させる方法を発見した。ルース（ＰＣＴ／ＵＳ８４／Ｑ
Ｑ２７９）は上記の側鎖をリンカ−として用いて、リポ
ータ−を触媒によらずに合成したオリゴヌクレオチドと
結合させた。ランガー他（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ。
Ａｃａｄ−８ｅｔ、、ＵＳＡ、ｖｏｌ、７８．６６３３
（１９８１））はリポータ−をヌクレオチドに結合させ
るのにアリラミノ・リンカ−を用いる方法を発見した。
これらリンカ−の不利な点は限局選択的に適当なマーキ
ュリアル・ヌクレオチド前駆体を作ることの困難さ、こ
れらヌクレオチド／オレフィン連結反応のいずれかによ
る生成物の混合物を分離することの難しさ、それとビニ
ルで置換されたヌクレオシドの潜在的不安定さにある。
クレグアン他（Ｗ０８６１０２９２９）はリンカ−をジ
チゾンのＮ４位置、またアデノソンのＮ６位置に結合す
る方法を発見している。この方法の不利な点は、ウリジ
ンとグアノシンにこれと同様なリンカ−を結合する部位
がないということである。
上記の５つの要請条件を満すかも知れない他のリンカ−
としては、一つはアルキニラジノ・リンカ−が考えられ
る。ここでは三重結合の一端がヌクレオシドに、また他
端が１次または２次アミンを含む基に結合している。化
学的安定を達成するにはアミンを直接、三重結合に結合
させるべきではない。アルキン基をヌクレオシドに結合
させるいくつかの方法が発見されている（以下を参照）
。
バー他（Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓａｃ、、　Ｐｅｒｋｉｎ
ｓ　Ｔｒａｎｓ、　１．１２６３−１２６７（１９７８
月は５−エチニルリジン、２′−デオキシ−５−エチニ
ルリジン、５−エチニルシトシン、５−エチニルシチジ
ン、２′−デオキシ−５−エチニルシトシン、５−エチ
ニルシチジン、２′−デオキシ−５−エチニルシチジン
および２′−デオキシリボヌクレオシドのα−アノーヌ
ーの合成を発見した。
２′−デオキシリボヌクレオシドは、機能化された２−
デオキシ糖と連結させ、アノメリック混合物を分離させ
、糖から保護基を除去するようなヘテロサイクルを作り
出すことによって調製された。
バーゲストローム（Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ
、　、　ｖｏｌ　、　１００＋８１０６（１９７８））
はアルケンをウラシル・ヌクレオシドの５−マーキュリ
誘導体または５−ヨード誘導体とを・母ラジウムを触媒
にして作った。この方法はアルケンを同じようにウラシ
ル・ヌクレオシド誘導体と反応させてみて失敗したと伝
えられる。
ヴインセント他（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｍ　Ｌｅｔｔｅ
ｒｓ、Ｖｏｌ、２２゜９４５−９４７（１９８１））は
、　−３′、５／−ビス（トリメチルシリル〕デオキシ
ウサジンとアルキニル亜鉛反応剤とを、パラジウムまた
はニッケル触媒〔ジクロロ−ビス（トリフェニルホスヒ
ン）−パラジウム（ｎ）、ｐクロロ−ビス（ベンゾニト
リル）ノ母ラジウム（ＩＩ）またはジクロロ（エチレン
−（ビス（ジフェニルホスヒンルニッケル（ＩＩ）　）
の介在する下で反応させることによって５−アルキニル
−２′−デオキシウリジンを合成することができた。
ロビンス他（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈ＊ｍ、、Ｖｏｌ、４８．
１８５４−１８６２（１９８３））は終結アルキン、Ｈ
Ｃ≡ＣＲ（Ｒ＝Ｈ。
アルキル、フェニール、トリアルキルシリル、ヒドロキ
シアルキルまたは保護されたヒドロキシアルキル〕ヲ、
ビス（トリフェニルホスヒン〕−パラジウム（ｎ）クロ
リドと温めたトリエチラシン中の銅（１）イオジドの介
在の下で、５−ヨード−１−メチルウラシルと５−ヨー
ドウラシル・ヌクレオシド（それらのｐ−）ルイルエヌ
テルと同様保護されている〕とに連結させる方法を発見
している。
３’−５’−ジー〇−アセチルー５−ヨード−２′−デ
オキシウリジンがヘクシン、４−（ｐ、−）ルイルオキ
シ〕ブチン、４−（テトラハイドロピラニルオキシ）ま
たは４−（トリチルオキシ）ブチンと反応した時の主な
生成物は得ようとしたアルキニルクリジンよシもむしろ
環化したフラノ［２，３−ｄ］ビリジジン−２のような
ものであった。
上の参考例ではいずれもアルキニルアミノ・リンカ−を
ヌクレオシドに結合させる方法は発見していない。パー
ゲストロームの方法論は失敗し、パー（Ｂａｒｒ）のそ
れは直接には適用できない。
ロビンス他およびヴインセント他の用いた触媒はアルキ
ンが一つのアミノ基を含む場合に幾多の望ましからざる
副反応を惹起こすものである（ｃ。
ｇ、環化またはアミンのアルキンへの分子間ヌクレオン
ィリック添加〕。結合反応が報告されているツバ唯、エ
レクトロン欠乏のウラシル基を含むヨードヌクレオシド
との間にのみである。Ｐｄを触媒とする結合反応が一般
に電子欠乏アリルヨウ化物ともっともよく反応するので
あるから、アルキン類を他の３つの塩基（いずれもウラ
シルより電子を多く含む〕の内、１つに連結しようとす
る試みは多分お先走っているのである。
ここにアルキニルアミノ・ヌクレオチドが必要とな勺、
またこれらを作る方法が必要になってくる。
本発明の化合物は次の構造をもつアルキニルアミノ−ヌ
クレオチドである。
Ｎｕｃ−ＣミＣ−Ｒ１−ＮＲ２Ｒ３（１）ここでＲ１は
１−２０原子をもつ置換された、またはされないジラジ
カル基である。Ｒ１は直線銀アルキレンＣ１−Ｃ２ｏで
あシえ、この鎖中に二重結合、三重結合、アリール基ま
たはＮ、０ないしＳのようなヘテロ原子をオプションと
して含むことかできる。これら異種原子はエーテル、チ
オエーテル、エステル、アミンまたはアミドなどの官能
基の部分をなし得る。
Ｒ１は直鎖アルキレン、Ｃ１−Ｃ１ｏであることが望ま
しい。よＱ望ましいＲ１は−ＣＨ２−である。Ｒ４上の
置換基にはＣ４−Ｃ６アルキル、アリール、エステル、
エーテル、アミン、アミドまたはクロロ基がある。
Ｒ２とＲ３はそれぞれ独立にＨ，Ｃ４−０４アルキル、
マタハアシル、アルコキシカルがニルもシくハスルホニ
ルのような保護基である。好ましくは、Ｒ２がＨ％Ｒ３
がＨまたはトリフルオロアセチルでめるのがよい。
Ｎｕｃ（ヌクレオチド〕はＲ４−Ｈｅ　ｔ　（複素環塩
基）である： ２はＨまたは■２で Ｒ４は糖または糖状基： である。
またここではＲ５はＨ、ＰＯ３Ｈ２，Ｐ２Ｏ６Ｈ３，Ｐ
３Ｏ，Ｈ４またはその塩であり、Ｒ，＝Ｒ８＝Ｈであれ
ば、Ｒ６＝Ｈ。
Ｏｎ　＃　Ｆ　＋　ＮｓまたはＮＲ２となる。あるいは
Ｒ，＝Ｈで、さらにＲ８＝ＯＨの時はＲ６＝ＨまたはＯ
Ｈであり、またはＲ，＝ＯＨでＲ８＝Ｈの時はＲ６＝Ｏ
Ｈとなる。本発明の標識アルキニルアミノ−ヌクレオチ
ドは構造ｌであジ、ここで８３はリポータ−（標Ｒ）で
ある。
塩基特異的にＤＮＡシーケンス化断片中にリポータ−を
結合させるのに用いられる戦略は、すべてのＤＮＡシー
ケンシング・システムのもつ臨界的特長である。本発明
によるアルキニルアミノ−ヌクレオチドの使用により、
リポータ−（標識）をアルキニルアミノヌクレオチド鎖
メーミネーターに結びつけることで、サンガーの方法論
を大幅に改善することができる。リポータ−は非常なバ
ラエティ−に富む簡単に入手、検出できるグループ（標
識〕から選ぶことができるのであるが、便宜上、螢光リ
ポータ−を使う方法を取ることにし、これは以下に説明
されている通シである。
このアプローチは多くの実用上の利点をもたらしてくれ
る。一番重要な点はターミネータ−の標識化によ多結合
リポータ−を堅固に塩基特異的終結イベントと結びつけ
ることができることである。
ただ誠実な（ｂｏｎａ　ｆｉｄａ）終結結果からもたら
されるＤＮＡ−次構造決定（シーケンシング）断片だけ
がリポータ−を担うことができる。これは従来のシーケ
ンシングにみられる多くの人工物を除去してくれる。さ
らにこのアプローチでは、いがなる特別のゾライマーも
介入してこないため、シーケンシング・ベクターの選択
に完全な柔軟性をもたせることができる。
リポータ−が４つの低分子量反応剤に運ばれるノテ、オ
ートメーションは容易になる。これら反応剤の内一つを
、−反応に対して選んで使うことができる。
操作上なんら本質的に不利な点はない。このアプローチ
に伴う問題はそのデザイン段階で遭遇するものである。
一般的にＤＮＡ　’ｉクシ−ンス化する除用いる酵素は
基質に対し高度に選択的であり、またシーケンシング酵
素にとって効果的な終結基質である原子価を共用して結
合するリポータ−によってヌクレジオドトリホスフェー
トを作ることができるはずだと軽々しく期待する理由は
どこにもない。リポータ−の基質への結合が基質の立体
的および電子的性質を大幅に変えてしまってこの基質を
酵素の受入れられないものにするか、あるいは受は入れ
られるとしてもＤＮＡ鎖に併合されることはないという
ことが考えられるかも知れない。
しかしながら、本発明のアルキルアミノ・リンカ−は小
サイズであること、またピリジジンヌクレオチドの５−
位置へこのリンカ−が結合されうろこと、さらにプリン
ヌクレオチドの７−位置に結合されうろこと、これらに
よって基質の吸収の度合、または信頼性をあまり阻害す
ることのない標識終結基質が入手できることがわかった
。
本発明のアルキルアミノヌクレオチドは、螢光標識アル
キルアミノヌクレオチド鎖ターミネータ−の解説を通じ
て明らかになるだろう、螢光を標識とするアルキルアミ
ノヌクレオチドの構造概要およびその合理性を説明する
には、標識構造を５つの構成部分に分解すると都合がよ
い。
（１）トリホスフェート部位、Ｒ５ （Ｉｉ）　ｒ糖」、Ｒ４ ０１１）へテロサイクリック塩基（Ｈｅｔ）弼リンカ−
（−ＣＥＥＣＲｌ−ＮＲ２−）Ｍ螢光標識、Ｒ３ （Ｉ）トリホスフェート断片（Ｒ５） トリホスフェート部位またはそれに近い類似物質（例え
ば、α−チオトリホスフェート９はいがなる酵素基質に
とっても恩恵的な機能性を発揮する。この機能は基質に
大きな結合エネルギーを与え、酵素−基質反応の現実の
場を提供する。
（１１）糖（Ｒ４） 「糖」部分は天然の酵素基質中にある２′−デオキシリ
ぎ７ラノーゼの構造断片に対応する。この分子部分は酵
素の認知に役立ち、トリホスフェート部分と複素環状塩
基との間の適切な空間関係を保持する上で大切である。
ＤＮＡシーケンシングにとって有用であるためには、「
糖」がりポ７ラノーゼである場合には３′−α−位置は
次に酵素によって使われることができるハイドロオキシ
ル基を持っていてはならない。ハイドロオキシル基が存
在しないこと、他の基によフ置換されること、あるいは
使用不可能の状態に変えてしまうこと、この３つの内、
１つが必要なのである。このような糖類は終結糖という
ことになるだろう。多くのモディファイされたフラノー
ゼ断片がこの要請に応えることが知られている。これに
は次のものが含まれる。
２、’、　３’−ジオキシ−Ｂ−Ｄ−りがフラノシル（
（、）。
Ｆ、Ｓａｎｇｅｒ　　ｅｔ　　ａｌ、、Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔ、Ａｃａｄ、Ｓｅｔ、ＵＳＡ。
Ｖｏｌ、７４．５４６３−５４６７（１９７７））。
３′−デオキシ−Ｂ−Ｄ−りがフラノシル［（ｃ）　。
Ｋｌｅｍｅｎｔ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｇｅｎｅ　Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。
ｖｏｌ、３．５９−６６（１９８６）〕。
〕３′−アミノー２′，３′−ジデオキシＢ−Ｄ−リボ
フラノシル（（ｄ）　、　Ｚ、Ｇ、　Ｃｈｉｄｇｅａｖ
ａｄｚｅ　ｅｔ　ａｌ、。
Ｎｕｃ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、、Ｖｏｌ、　１２．１６
７１−１６８６（１９８４））。
２′、３′−ジデオキシ−３′−フルオロ−Ｂ−Ｄ−リ
ボフラノシル（（ｅ）　、　Ｚ、Ｇ、　Ｃｈｉｄｇｅａ
ｖａｄｚｅ　ａｔ　ａｌ、。
ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、、　Ｖｏｌ、　１８３　、２７５
−２７８（１９８５）　：ｌ。
２′，３′−ジオアキシー２′，３′−ジデハイドロー
Ｂ−Ｄ−リボ７ラノシ／Ｉ／　（（ｆ）　Ａｔｋｉｎｇ
ｏｎ　＠ｔ　ａｌ、。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、、ｖｏｌ　、８．４８９７−４９０４
（１９６０））。
アシクロヌクレオシドトルホス７　ｘ　−）　（Ａｃｙ
ＮＴＰ’りの中でいわゆる糖は非環状基をなすが、〔ｅ
、訃、２−オキシエトキシメチル、　（Ｘ＞　）、この
物質はまたサンガーの方法論によるとＤＮＡシーケンシ
ングにおいて鎖ターミネータ−として使うこともできる
。
Ａｃ　ｙＮＴＰ’　ｍの終結基質としての使用は、従来
のサンガ一式シーケンシング（３２Ｐ　！Ｊ　ｙＪｆ−
ター）においてＡｅｙＮＴＰ’ａをもってｄｄＮＴＰ’
ｓに置換えることによってデモンストレートされた。た
だ、同様なりＮＡフラグメントの分布をえるのに、Ａｅ
ｙＮＴＰＯ濃度を高くする（約１０〆〕ことが必要であ
った。
ＡｃｙＮＴ’Ｐ’、ｇはＤＮＡポリメラーカー　（Ｋｌ
ｅｎｏｗ　７ラグメント〕ともＡＭＶリバース・トラン
スクリプターゼとも有効に反応する。Ａｃ　ｙＮＴＰ’
　ｓのアルキニルアミノ誘導体もそこでやはシ終結基質
として働くことを期待されるのである。
ＡｃｙＮＴＰ’ａにはｄｄＮＴＰ’ｓよりさらに容易に
合成できるという利点がある。ｄｄＮＴＰ’ｇの合成は
従来のシーケンシングでは大きな問題ではないが、構造
的に複雑な螢光標識銀ターミネータ−を作るとなるとガ
ラリと変って難しくなる。
２−オキシエトクシメチル基を糖として使うと反応剤合
成は大いに簡単になり、しかもパーフォーマンスは一定
の水準に維持される。
医学研究によってＤＮＡシーケンシングにとって役立つ
他の糖修正（Ｓｕｇａｒ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）
　　が見出されている。たとえば、３′−アシド−２′
，３′−ジデオキシチミジン、［ＡＺＴ　：ミッヤｅｔ
　ａｌ、、　Ｐｒｏａ。
Ｎａｔ、　Ａｅａｄ、　Ｓｅｔ、　ＵＳＡ、　ｖｏｌ、
　８２　、７０９６−７１００（１９８５））ト９〔２
′−ハイドロキシ−１−（ハイドロキシメチル）−エト
キシメチルコクアニン［ＤＨＰＧ　ニアストン他、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ
、　、　Ｖｏｌ、　１０８゜１７１６−１７２１（１９
８２））はトリホスフェートに転換することによって作
用し、ＤＮＡ復製の鎖終結をもたらすと想定される２つ
の抗ビールス剤である。
（１１Ｄ複素環状基（Ｗｅｔ） ヘテロサイクリック基は核酸中でクリティカル・リコグ
ニッションエレメントとして機能し、特別の空間方向で
水準結合アクセッターおよびドナーとして作用する。複
素環状基エレメントは正確なシーケンシングに必要なＨ
ｉＦｉ　ｆもち、合体にとって基本的重要性をもってい
る。
またこの構造部分はリンカ−結合部位でもある。
よいとされる複素環状基に含まれるのは：ウラシル（ｈ
）、シトシン（ｉ）、ワーデアガアデニン（ｊ）、７−
ゾアザクアニン（ｋ）、７−ゾアデビポクサチン０）、
である。天然でない７−デアザプリンは、塩基ポーショ
ンにネット・チャージを加えることなく、したがってグ
リコシディック結合を不安定化させながらリンカ−を結
合させるために使うことができる。さらに水素結合ドナ
ーおよびアクセプターとして機能的に同等な他の複素環
状基も使える。
例えば、８−アザ−７−デアザプリンと３，７−ジブア
ザアデニンは７−デアザプリンの代わりにまた６−アザ
ピリミジンはピリミジンの代わりに使用できる。（命名
を簡単化するため、複素環状基は全体を通して７−デア
ザプリンとして命名し、番号を振った。） Ｗリンカ− リンカ−は三重結合の１つの末端が１乃至２０原子の置
換、もしくは不置換ジラジカル基、Ｒ１を通じてアミン
に結合しているアルキニルアミノ基である。三重結合の
別の末端はピリミジンとして５−位置で、または７−デ
アザプリンとして７−位置（プリン数）で複素環基へ共
有結合している。
アルキニルアミノ基のアミン窒素は反応性官能性基（例
えばカルがニル）と螢光性標識上で結合する。リンカ−
はＤＮＡ重合体への結合、あるいはＤＮＡ重合体による
合体を著しく妨害してはならない。ジラジカル基は直鎖
アルキレン（Ｃ１乃至Ｃ２ｏ）であり、場合により鎖二
重結合の中に三重結合のアリル基、もしくはＮ、０．Ｓ
のような複素原子を有する。複素原子はエーテル、チオ
エーテル、エステル、アミン、アシドのような官能性基
の一部となりうる。ジラジカル基への置換は（Ｃ４乃至
Ｃ６）アルキル、アリル、エステル、エーテル、アミン
、アミド、またはクロロ基を含む。ジラジカル基は（Ｃ
１乃至Ｃ１゜）の直鎖アルキレンであることが好ましく
、ジラジカルが−ＣＨ２−であることが最も好ましい。
（Ｖ）螢光標識（Ｒ３〕 螢光標識は、アルゴンイオンレーデのような適切な供給
源からのエネルギー吸収による刺激に引き続いて、検知
可能で放射性の放射物を生じる。
添加を連続するときに遭遇するＤＮＡ基それぞれが独特
で区別可能な螢光レポータを有することが望ましい。
標識を付けられた鎖ターミネータに基づ（ＤＮＡ連続順
序において、螢光標識に使用できるレポータノ族は既知
の染料９−カルブキシエチル−６ハイドロキシ−３オキ
ンー３Ｈ−キサンチンから得られる。（Ｓ、　Ｂｉｇｇ
ｓ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、、　Ｖｏｌ、　
１２３゜このキサンチン族は一般構造１を有し、一般構
造去においてＲ２およびＲ４゜はＨ１低アルキル、低ア
ルコキシ、ハロおよびシアノを含む。
ＤＮＡ連続に適した染料の好ましいセット構造力ａ　）
　Ｒ９＝Ｒ１０＝Ｈ１ａｂｇ、　４８７ｎｍ、　ｅｍｉ
ｓ、　５０５　ｎｒｎ；　ｂ）Ｒ５＋＝Ｈ＋Ｒ１（、≡
ＣＨ６＊ａｂｇ、４９４ｎｍ、ｅｍｉｓ、５１２ｎｍ：
ｃ）　Ｒ２≡ＣＨ３＋　Ｒ１０＝Ｈ，ａｂｓ、　５０１
ｎｍ、　ａｍｉｇ、　５１９ｎｍ：およびｄ）　Ｒ，＝
Ｒ１ｏ≡ＣＨ５＋　ａｂｓ、　５０８　ｎｍ、　ｅｍｉ
ｓ、　５２６ｎｍである。Ｌ、Ｍ、　Ｓｍ１ｔｈ、　Ｌ
、Ｅ、　Ｈｏｏｄ　ａｔ　ａｌ、、　Ｌ、Ｍ、Ｓｍ１ｔ
ｈａｔ　ａｌ、、およびＷ、　Ａｎｓｏｒｇｅ　ａｔ　
ａｌ、によって示された計器はこれら染料のいずれか１
つで標識を付けられた連続断片をＤＮＡ連続に適した濃
度で検知することができる。しかしこれらの計器は上記
４つの染料のセットを識別することができない。染料を
識別し、ＤＮＡ連鎖を決定するためのこの情報を利用す
る手段は参照によって具体化された同時出願において明
らかにされている（ａｔｔｏｒｎｅｙｄｏｅｋａｔ　ｎ
ｏ、　１ｐ−５９７−Ａ）。
この出願は、密接に関連した区別可能なレポータからの
放射エネルギーの存在を検知する手段を有する連続ＤＮ
Ａのためのシステムを明らかにし、そのレポータは変形
されたサンが−ＤＮＡ鎖延長方法においてヌクレオチド
を区切っている鎖として働く化合物に共有結合している
。区別可能な螢光レポークの１つはサンが−ＤＮＡ連続
反応において代表となる４つのジデオキシヌクレオチド
基のそれぞれに結合しておシ、例えばアデニン、グアニ
ン、シトシン、チミンのジデオキシヌクレオチドである
。これらの標識レポータ鎖ターミネータ試薬は伝統的サ
ンが一方法において標識のない鎖ターミネータの代用に
され、対応するデオキシヌクレオチド、適切なプリマー
、テングレート、ポリメラーゼと反応において結合され
る。結果としての化合物は色４表長さのＤＮＡ断片を有
し、このＤＮＡ断片は４つのＤＮＡ基各々に対応する特
有の標識を持つ鎖ターミネータと共に３′の末端上で終
わる１つの基によってそれぞれ異なる。この新しい標識
付けの方法は、伝統的なサンが一方法のデオキシヌクレ
オチドの１つに含まれる通例の放射性標識を避けること
ができる。
これらレポータ標識の検知は２つの固定したフォトマル
チプライア管（ＲＭＴ　）で行なうことが可能でロシ、
このフォトマルチプライア管はＤＮＡ断片上で鎖ターミ
ネータに結合されたレーザ刺激レポータから間隔を取っ
た螢光放射物を受ける。これらの断片は空間およびまた
は時間において、ＰＭＴの感知領域に対して垂直な軸に
沿って移動するためにエレクトロンォレティカリイに分
離されうる。
螢光放射物は、はじめに伝導と反射の両性質を有し、１
つの性質（伝導〕を１つのＰＭＴに導き、別の性質（反
射）を別のＰＭＴに導くために設置されているジクロイ
ックフィルタを通過する。一連の螢光レポータが緊密に
間隔を取った放射物を有していても、所定の螢光レポー
タに特有の第３の信号を発生するために供給され得る各
ＰＭＴにおいて異なるデジタル信号が発生される。この
システムは、４８８　ｎｍのような信号レーデラインに
よって効果的に全て興奮し、通常の最大値が５乃至７だ
けそれぞれ異なシ緊密に間隔を取った放射物を有するレ
ポータを検知することができる。それ故重要なりＮＡス
トランドにおける連続的な基の位置は、ＤＮＡにおける
４つの基それぞれと一致する４つのレポータ標識を付け
た各鎖ターミネータとして特有の比率に基づいて成され
る。
これらのキサンチアン染料は反応性官能性基を４６一 含むので、上記の同時出願はこれらの染色をアルキニル
アミノリンカ−のアミン基へ結合するために使用できる
試薬のデザインおよび製造も明らかにしている。
Ｎ−ハイドロキシスクシンインドエステル２（Ｒ，およ
びＲｌＧが構造１として定義されている〕はこのような
試薬の好ましい例である。２の製造の間、サルコシン基
が基礎染料構造にサイド反応を最少限にするために加え
られる。上記の同時出願において、この任意のサルコシ
ン基はゞスペーサ”として述べられている。好ましい試
薬だけがここでは使用されるので、標識を付けたアルキ
ニルアミノ鎖ターミネータの螢光部分はサルコシンヌベ
ーサを含むと考えられる。Ｎ−ノ・イドロキシスクシン
イシド離脱基はリンカ−のアミノ基に取って代わられ、
螢光染料（部分構造１）は、濃縮アンモニウムハイドロ
キシドの処理によって遊離される。Ｎ−ハイドロキシス
クシンインドエーテルは上記に述べられたアルキニルア
ミノリンカ−において示されたもののような高ヌクレオ
フイリックアミノ基と選択的に反応するアシル化触媒で
ある。
対照標準実験は、２に類似したＮ−ハイドロキシスクシ
ンイシドエステルがリンカ−アミノ基よりも複素環基の
アミノ基とより緩慢に反応することを示している。複酸
環アミノ基との反応が僅かに起こった場合、アンドは染
料を遊離するアンモニウムハイドロキシド処理によって
加水分解されることが分った。それ故螢光染料のような
レポータをリンカ−のアミノ基に、そのヌクレオチドを
望ましくない形状に変化することなく結合するために、
２のようなエステルを使用することが可能である。
本発明の螢光標識を付けたアルキニルアミノヌクレオチ
ド鎖ターミネータは、ＡＭＶリバーストランスクリゾタ
スを伴うＤＮＡ連続においてのみならず、同時出願ＩＰ
−５９７−Ａにおいて明らかにされたアリルアミノリン
カ−を含む対応する基質においても働く。しかしながら
本発明の化合物は、アリルアミノリンカ−を含む対応す
る基質よりも合成され易い。これはアリルアミノリンカ
−がＤＮＡ連続に必要な種々の基土の予め選択された位
置に結合され易いためである。さらにアリルアミノリン
カ−は、高収量でヌクレオチドに結合され得る。
最後に、複素環リングと結合したアルキンを含むヌクレ
オチドは、アルケンを含む対応するヌクレオチドよりも
安定すると予測される。アルキニルアミノヌクレオチド
から得られる適切な螢光標識を付けた鎖ターミネータは
、構造３によって示されでおジ、この構造３におａて、
Ｎｕｃ、Ｒ１乃至Ｒ４およびＲ８乃至Ｒ８は上記に定義
されているようにＲ５＝ＨＯ９Ｐ３−３　　でろり、Ｒ
８がＨまたはＯＨのとき、Ｒ６はＯＨであってはならな
いと規定されている。
？ スキームｌ［、シ！Ｉ楯が２．３−ジデオキシリ？フラ
ノシル基である、本発明のアルキニルアミノヌクレオチ
ドの製造手段を示している。これらの手段は本発明の全
ての楯に適合する。ヌクレオテ＝４９− ドの糖を変形するだめの既知の手段と結び付けられた場
合、これらの手段は２．３−ジデオキシリホフラノシル
基が本発明の別の糖によシ、取って代わられるアルキニ
ルアミンヌクレオチドを製造すさまざまなルートが第１
のキイ中間体、イオドヌクレオシド（４）を製造するた
めに使用される。
ｄ数例において、対応するブロモヌクレオシドが５Ｆ イオドヌクレオシドの代わシに使用される。つ５−イオ
ド−２′，３′−シアオキシウリジンは２’、　３’−
ジデオキシウリゾンを処理することによって製造するこ
とができる。（Ｐｆｉｔｚｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、
　Ｏｒｇ。
Ｃｈｅｍ、、Ｖｏｌ、６０，５５４−５５７（１９８２
）：）５−イオド−２′，３′−ジデオキシクチジンは
２′，３′−ジデオキシシチジン（Ｒａｔｃｏ　Ｃｏ、
）を対応する５−マーキュリオヌクレオシド（Ｂｅｒｇ
ｇｓｔｒｏｍ　ｅｔ、ａｌ、。
Ｊ、　Ｃａｒｂｏｎｈｙｄｒａｔｅｓ、　Ｎｕｃｌｅｏ
ｓｉｄｅｓ　ａｎｄ　ＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓＶｏｌ、
４．２５７−２６９（１９７７））へ変化し、それから
イオジンを処理することによって製造することができる
。
７−デアザグアノシンおよび２′−デオキシ−７−ジア
ザグアノシンを製造する手段は知られているが、７−ジ
アザグアニンへのエレクトロンイリックアタックが７お
よび８の両位置で発生することが示されている［５ｅｅ
ｌａ　ａｔ　ａｌ、、　Ｃｈｅｍ、　Ｂｅｒ、、Ｖｏｌ
。
１１１．２９２５−２９３０（１９７８））。しかしな
がら所望の７−イオド−７−デアザプリンがＮ−イオド
スクシンイシドによる６−メトキシ−２−チオメチル−
７−デアザプリンの処理後、２−チオメチルおよび６−
メトキシ基による置換によってスキーム２および第３例
に示されているように得られることが見い出された。７
−ジアザゾリンリングシステムのレジオセレクチプなオ
ジネーション用のＮ−イオドヌクシンイシドの使用は前
例がない。
７−イオド−２−３１−ジデオキシ−７−デアザアデノ
シンはツペルシジンの脱酸素によって生成され、マーキ
ュレーション／イオジネ−シ１ンニ続けられる（スキー
ム３）。脱酸素反応は、スキーム３で示され例４で記述
されたような２′，３′−ジデオキシ−７−デアザアデ
ノシンの改良された合成を与えるため、Ｍｏｆｆａｔｔ
等（Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓａｃ、。
Ｖｏｌ、９５．４０１６−４０３０（１９７２）、ｌお
よびＲｏｂｉｎｓ等（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　１ｅｔ
ｔ、、　Ｖｏｌ、　２５．３６７−３４０（１９８４）
）によって明らかにされた手続から応用された。
皿　　　　　　　　　　狙 スキーム３ ７−イオド−７−デアザアデノシンは、Ｂｅｒｇｓｔｒ
ｏｍ等のＪ、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　ｓ　、　Ｎ
ｕｃ　１　ｓｏ　ｓ　ｉ　ｄｅ　＠ａｎｄ　Ｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｓ。
Ｖｏｌ、５，２８５−２９６（１９７８）およびＢｅｒ
ｇｓｔｒｏｍ等のＪ、Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、、Ｖｏｌ、
　４６．１４２４（１９８１）で報告されたように、ツ
ペルシジン（７−デアザアデノシン）のレジオ選択的ナ
マーキーｖ−シ＝ｓン／イオジネーションにより生成さ
れ得る。
７−イオド−２′，３′−ジデオキシ−７−デアザアデ
ノシンへの選択的なルートは高価な醗酵生成物ツペルシ
ジンを使用せずに出発材料として用いられ得る。これら
のルートはスキーム４および５に示され、例５および６
に記述されている。
これらのルートの１つにおいては、７−位置中にヨウ素
をレジオ選択的に取シ込むことについての問題はもう１
つの従来にないヨウ素化によって解決された。この場合
、ヨウ素セックロリドを伴う６−クロロ−７−デアザゾ
リン３２の処理は７−イオドレジオアイソマー（ｒｅｇ
ｉｏｉｓｏｍｅｒ）３３のみを供給した。
ｐｄ（ＩＩ）　／　Ｃｕ　（１）触媒を用いての保護５
−イオドワラシルヌクレオシドによる末端アルキンのカ
ップリングのための方法はＲｏｂｉｎｓ等〔Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ　、　Ｖｏｌ　−２２，４２１−
４２４（１９８１））によシ報告されたが、この方法は
アルキルニルアミン（例えば、グロノやギルアミン）と
非保護５−イオド−ビリミジンまたは７−イオド−プリ
ンヌクレオシド間の所望されるカップリングをもたらし
はしない。直接カップリングでアルキニルアミンを用い
ることの可能性は、螢光性標識の続いて起こる結合のた
めのアミン基を伴う混合物を直接供給するためには以上
に望ましい。同様に、非保護ヌクレオシドを用いる方法
は、保護／脱保護反応の別の不必要な系列を除去するこ
とによって所望された混合物への更に直接的なルートを
供給するため求められた。
以下に記述される状態下で、アルキニルアミンはＰｄ　
（０）　／　Ｃｕ　（１）触媒を用いての優れた生成の
中の種々のハロヌクレオシドに首尾良く結合される。
このカップリング反応はまた、アルキニルアミン窒素が
アセチルおよびトリフロロアセチルなどのアシル基、９
−フロレニルメチルオキシカルボニル基ｆｒ、トのアル
コキシカルボニル基、ｐ−トルエンスルホニル基などの
スルホニル基によって保護されるときは、うまくいった
。
意外に、アミノ基と三重結合の間の炭素原子は以下に記
述される手続では重大ではないことがわかった。すなわ
ち、 ３−アミノ−１−プロピ／（プロフイに’７　ミン）、
５−アミノ−１−、，２ンチン、Ｎ−（２−プロピニル
）トリフロロアセトアミド、Ｎ−（４−ペンチニル）ト
リフロロアセトアミド、およびＮ−（１１−ドデシニル
）トリフロロアセトアミドは全て首尾よくカップリング
反応に用いられた。
ｐａ　（０）　／　Ｃｕ　（１）触媒作用カップリング
反応の大きな成果は技術の観点では予期されないもので
ある。
例えば、Ｂｓｒｇｇｔｒａｍ等１：　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃ
ｂｅｍ、　Ｓｏｃ、　。
Ｖｏｌ、１００．８１０６（１９７８））は、アルキン
はＰｄ触媒を用いてワラシルヌクレオシドの５−水銀ま
たは５−イオド誘導体を結合できなかったと述べている
。また、Ｒｏｂ　ｉ　ｎ　ａ等［：　Ｊ、　Ｏｒｇ、　
Ｃｂｅｍ、　。
Ｖｏｌ、　４８．１８５４−１８６２（１９８３））は
、３’、５’−ジーＯ−アセチルー５−イオド−２′−
デオキシワリジンのｐａ　（ＩＯ／　ＣＬＩ　（１）触
媒作用反応はしばしば循環化された生成物を生成すると
いうことを明らかにした。以下に記述される過程が用い
られるとき、カップリングは容易に循環化する電位を有
する（５−アミノ−１−ペンチンのような）アルキニル
アミンとでさえも成功する。典型的に、本発明のアルキ
ニルアミノーヌクレオンドはフラスコ中にハロヌクレオ
シドとＣｕ（１）を入れ、空気を除くためＡｒによりフ
ラッシュ（ｆｌｕ＋＋ｂｉｎｇ）　　ｌ、、乾燥ジメチ
ルホルムアミドを加えることにより生成され、アルキニ
アミノ、トリエチルアミンおよびｐ　ｄ（０）の添加に
続けられる。反応混合物は、薄層クロマトグラフィ（Ｔ
ＬＣ）がノ・ロヌクレオシドの消失を示すまで数時間か
き混ぜられる。非保護アルキニルアミンが用いられる場
合、アルキニルアミノ−ヌクレオシドは、反応混合物を
凝集し、カップリング反応中に生成されるノ・イドコノ
１ライドを中和するため水酸化アンモニウムを含む溶出
溶媒を用いてシリカダル上でクロマトグラフ化すること
によって単離され得る。保護アルキニルアミンが用いら
れる場合、メタノール／塩化メチレンは反応混合物に添
加され、強塩基アニオン交換樹脂の重炭酸塩形態に続け
られる。このスラリはその場合約４５分間かき混ぜられ
、フィルターにかけられ、そしてこの樹脂は付加的な塩
化メタノール／メチレンによりすすがれ得る。結合され
たろ化液は凝集され、塩化メタノール−メチレン勾配（
ｇｒａｄｉｅｎｔ）を用いてシリカダル上のフジッシュ
ークロマトグラフィによシ敏速に精製され得る。
本発明のアルキニルアミノ−ヌクレオチドは５−イオド
ピリミジンまたは７−イオド−７−デアザグリンヌクレ
オシドから好ましく生成されるが、類似シたブロモヌク
レオシドもまた用いられ得る。
（Ｐｄ　（０）　／　（’ｕ　（１）触媒作用カップリ
ング反応はまた、適切なハロヌクレオチドが有効な場合
のみ、芳香環またはへテロ芳香環上の他のポジションで
アルキニルアミン基を尋くため用いられ得る。〕ｐａ　
（ｏ）　７　ｃｕ　（Ｉ）触媒作用カップリング反応に
適切なアルキニルアミンは末端アルキンであわ、そこで
は三重結合は１−２０原子のジラジカル基によりアミン
に結合されている。ジラジカル基は直鎖アルキレン（Ｃ
Ｉ−０２０’例えば−Ｃ３Ｈ６−）であることができ、
あるいは二重結合（例えば−ＣＨ＝　ＣＨＣＨ２）　、
三重結合（例えば−ＣミＣ−ＣＨ２−）またはアリル基
〔例えば（ノクラ）−Ｃ６Ｈ４−またはパラ−ＣＨ２−
Ｃ６Ｈ５−）を含み得る。ジラジカルはまたエーテル、
エステル、アミノ、すなわちアミド基の一部として鎖中
にＮ、０．またはＳのような複素原子を含み得る。ジラ
ジカル基土の適切な置換ＵＣ１−Ｃ６アルキル、アリル
、エステル、エーテル、アミン、アミドまたはクロロ基
を含む。好ましくはジラジカルは直鎖アルキレン（Ｃ１
−Ｃ４゜）である。さらに好ましくはジラジカルは−Ｃ
Ｈ２−である。アミン上の適切な置換は低アルキル（Ｃ
１−Ｃ４）およびトリフロロアセチル等の保護基である
。一般に、アルキニルアミンは第１、第２または第３ア
ミンであシ得る。しかしながら、リンカ−として用いら
れるため、アルキニルアミンが第１アミンであることは
好ましい。アルキニルアミンのアミンは、アミン保護が
次の段階で必要とされるので、通常は保護される。カッ
プリング生成物はまた。このアミンが保護された形態で
導かれるとき、さらに容易に精製される。トリフロロア
セチル保護基は、結合生成物が一致する５−トリホスフ
ェイトに置換される後に容易に移動されるので、選択さ
れる。一般的に５（イオドヌクレオシドに関して）アル
キニルアミンの１，５〜３．０倍過多はアルキニルアミ
ノへのイオドヌクレオシドの完全な直換を保障するため
用いられ得る。
カップリング反応のための適切な溶媒はイオドーまたは
ブロモヌクレオシドを融解する極性溶媒を含み、Ｐｄ（
０）　／　Ｃｕ　（１）触媒システムを分解することは
ない。Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アセ
トニトリル、ＴＨＦ、ジメチルスルホキサイド（ＤＭＳ
Ｏ）　、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）、お
よびアルコールは全て用いられ得る。す彦わち少量の水
を含む溶媒はまた容認される。この溶媒はＤＭＦである
ことが好ましい。ノ１０ヌクレオシドの濃度は０．０２
−１．０Ｍであることが好ましく、さらに好ましくは０
．２−０．５Ｍである。
適切なＰｄ触媒はＰ　ｄ　（０）コンプレックス、例え
ばテトラキス（トリアリルホスフィン）ｐｄ（０）であ
る。
好ましくは、Ｐｄ（０）触媒はテトラキス（トリへニル
ホスフィン）　ｐｄ（０）である。用いられたＰｄ触媒
の量は一般的に１−２５モル係（イオドヌクレオシドに
基づく）であり、好ましくは５−１５モルチである。更
に多量の触媒が非常に小さい規模で反応を導くために、
または結合のための反応時間を減少するために用いられ
る。
Ｃｕ（Ｉ）共触媒は好ましくはノ・ログン化銅または疑
似ハロゲン化物（シアン化銅のような）であり、最も好
ましくはＣｕｌである。
Ｐｄ（０）触媒に対するＣｕ（１）共触媒のモル比は１
．０よシ大きく２０より小さい。保護アルキニルアミン
が用いられる場合、Ｃｕ／Ｐｄの好ましいモル比は２で
ある。アルキニルアミンが非保護の場合、妨害されない
アルカリ性窒素原子は銅の触媒作用を減少する。この場
合、Ｃｕ　／　Ｐｄ　　比５は好ましい。
どちらの場合にも、Ｃｏ／Ｐｄ比１　　のときは室温で
は反応は観察されない。反応速度は一般にＣｕ／Ｐｄ比
が増加するように増加する。しかしながら、保護アルキ
ニルアミンおよび２以上のＣｏ／Ｐｄ比により、この増
加は、ＴＬＣによって示されるように増加した副生成物
に伴われる。
トリエチルアミンはこの反応でアシド−スキャベンジャ
として好ましく作用する。すなわち、他の強アルカリ性
アミンもまた用いられ得る。過多非保護アルキニルアミ
ンはまたアシド−スキャベンジャとして作用するが、好
ましくトリエチルアミンが加えられる。
保護アルキニルアミノヌクレオシドは燐オキシクロライ
ドによる処理によって対応する５−トリホスフェイトに
置換され、それからトリーｎ−プチルアンモニワムピロ
ホスフエイトに置換される［：Ｒｕｔｈ等、Ｍｏ１．　
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　４１５　（１９８１）　〕。
合成初期トリホスフェイトは、トリエチルアンモニウム
重炭酸塩のような揮発性バッファによる溶出によるイオ
ン交換クロマトグラフィによって精製され得る。所望さ
れたヌクレオシドトリホスフェイトは副生成物からうま
く分離されるが、リポフィル化は、この保護基がトリフ
ロロアセチル基であるとき、リンカ−窒素上の保護基の
いくらかの除去となる。脱保護は１４％水性アンモニア
による処理によって完成され、生成物は再びイオン交換
クロマトグラフィによって精製される。リンカ−及びそ
の保護基の本質はトリホスフェイトへのブロック置換と
は思われないので、この方式は種々様々なヌクレオシド
　モノ−、ジー、およびトリホスフェイトが保護または
非保護アルキニルアミノ　リンカ−により生成するため
用いられ得る。
本発明のアルキニルアミノ−ヌクレオチドの生成後、こ
の段階は本発明の所望されるレポーター標識アルキニル
アミノ−ヌクレオチドの生成のだめのセットである。
以下に示された４つの螢光的に標識化されたアルキニル
アミノ−ヌクレオチド　チェーン−ターミネータ（３４
−３７）の好ましいセットは本発明のアルキニルアミノ
−ヌクレオチドから得られる。この標識化された化合物
のセットは、アルキニルアミノ　ヌクレオシド　トリホ
スフェイト６を伴つカップリングＮ−ハイドロキシスシ
ニミドエステル２によって例１９に記述されたように生
成され、アンモニア脱保護に続けられる。
Ｈ３ＣＨ３ 旦 一邦 これら４つの螢光標識されたチェインターミネータ（ｃ
ｈａｉｎ　ｔｅｒｍｎａｔｏｒ）は、ザグルスキー（Ｚ
ａｇｕｒｓｋｙ）らの手法〔Ｇｅｎｅ　Ａｎａｌｙｇ　
ｉ　ｓ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ。
Ｖｏｌ。２．８９−９４（１９８５）：）に従ってハ■
逆転写酵素を用いてＤＮＡを配列する場合には、標準ジ
デオキシヌクレオチドやチェインターミネータ−の代わ
りに用いられる。生成した螢光標識された配列梯子（ｓ
ｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　１ａｄｄｅｒ）は、ｒルミ気泳動
中に移動するので螢光分子を検出するために設計された
機器によって分析することができ、その機器は、ロパー
トソン（Ｒｏｂｅｒｔｇｏｎ　）らによる継続中の出願
Ｓ、Ｎ、　　　　　（ＩＰ−６７８）に記述されている
機器が好ましい。２つのフィルターを使用するこの型の
システムはロパートソンらの出願に記述されており、そ
の内容は参考文献としてここに掲載されている。ロパー
トンンらが記述しているように、一対のモジュールが平
面の上下に置かれ、その平面内では電気泳動グル上の複
数のレーンをレポーターを励起させる光束が走査する。
各々のチャンネルはレポーターで標識されたＤＮＡ断片
を含んでいる。各々の検出モジュールは、広い入射領域
を有する光電子増倍管（ＰＭＴ　）およびＰＭＴとダル
中の螢光種との間に置かれた分離波長選択性フィルター
からなる。これらのフィルターは、二色性フィルター作
用を模倣した、補足し合う透過帯特性を有する干渉フィ
ルターである、このフィルターはＰＭＴが、別の意味で
は種の性質の関数として変化する信号を生じることを可
能にする。一方のフィルターは、低放出波長の大部分を
通過させ高放出波長を除去するのに対し、他方は正確に
逆の作用をする。透過フィルターは、軸からのズレの角
度が予め設定されたものよねも大きい角度からの光を除
去するために、干渉フィルターと共に用いることができ
る。波長フィルターは、４つの染料の放出領域において
大まかに補足する透過−波長特性を有し、その特性は種
の輻射エネルギースペクトルの中心付近に起こる遷移波
長を伴う。
断片の検出は、スミス（Ｓｍｉｔｈ）ら、フード（Ｈｏ
ｏｄ）らおよびアンソーブ（Ａｎａｏｒｇｅ　）らが記
述した方法によっても行なうことができる。しかしなが
ら、この４つの螢光染料の特別の組合わせによって得ら
れる情報を用いて１本のレーン中の４種の塩基を同時に
分析することは、上記継続中の特許出願に記述される信
号処理システムを用いることによってのみ行なうことが
可能である。
螢光検出法によって得られた結果と標準連続法によって
得られた結果とを比較するために、この４本の標識され
たチェインターミネータ−の組合わせは螢光体によって
標識された　Ｐレポーターを含む配列断片を生成させる
ためにも使用された。
（Ｐレポーターは、標識されたｄＮＴＰの添加またはキ
ナーゼを用いてプライマーの５′を標識することによる
プライマーの拡張の間に、酵素を用いて組込む。）生成
した二重にラベルされた配列梯子は、オートラジオグラ
フィによっても螢光グル読取り機によっても分析が可能
である。これらの螢光標識された配列梯子は、すべての
ノ々ンドがほぼ２塩基遅れて移動することを除いて、標
準ジデオキシヌクレオチド・チェインターミネータ−に
よって生成した梯子に非常に似ており、機能的にも＝７
３− 等価である。これらの配列梯子の種々のバンドの比強度
は、リンカ−および染料を添加することによりて修正さ
れるが、修正チェインターミネータ−がバンドの取り違
えを起こすことは明瞭ではない。適当な電気泳動の条件
下では、とれらのチェインターミネータ−のリンカ−お
よび染料はバンドを変則的に移動させることはしない。
すなわち、よシ速く移動するバンドは、より移動の遅い
バンドよりも塩基の含量が少ない。異なった染料による
隣会ったバンド間におかれた間隔は、互いに隣の染料に
よってわずかに変化する。最適の条件下で螢光性または
放射性検出のいずれかを用いた場合には、比バンド強度
および位置におけるこれらの小さな変化は、配列ＤＮＡ
へのとれらチェインターミネータ−の使用を妨げるもの
ではない。
ＤＮＡ配列のための標識された連鎖終結基質の調製に用
いるアルキニルアミノヌクレオチドの有益性は、上述し
た４種の化合物の組合わせのみの合成に限られることは
ない。糖、塩基および染料の他の組合わせは、アルキニ
ルアミノ・リンカ−の−７← 手法により組み上げられ、これらの化合物もまたＤＮＡ
の配列に有用である。螢光標識されたチェインターミネ
ータ−の調製におけるこれらの有用性に加えて、この発
明のアルキニルアミノヌクレオチドは、一般に、ヌクレ
オチドまたはオリゴヌクレオチドへのレポーターの多用
性を付与することに有益である。これらの分子の最も求
核性の強い部位はリンカ−に伴って導入されたアミノ基
であるために、活性カルボン酸（例えば、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドエステル）、インシアネート、インチ
オシアネート、活性ハロゲン化アリール（例えば、１−
フルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）、または適当な
反応性を有する他の求電子性官能基を含むレポーターは
、選択的にこの窒素原子に結合することができる。この
標識された付加物は、以下に述べるように他に適用し得
る。
ヌクレオチドのへテロサイクリック塩基のサブユニット
が遺伝暗号に使われているために、多くのヌクレオチド
の機能がしばしば糖サブユニットの性質によって決定さ
れる。同様に、アルキニルアミノヌクレオチドの有用性
は、どのようなタイプの糖サブユニットが存在するかに
特に依存する。
ヌクレオチドの必要危機能をアルキニルアミノ・リンカ
−および／″！たはレポーターが妨げるならば、この有
用性は減少する。この発明のアルキニルアミノ・リンカ
−を含むヌクレオチドは、以下のような異なった利点を
有する。アルキニルアミノ・リンカ−の小さな立体かさ
が、ヌクレオチドの震動を最少にする。：ヌクレオチド
が二重螺旋ＤＮＡに組込まれている場合に、リンカ−が
ピ＋Ｊ　ミジンヌクレオチドの５位および７−ジアザプ
リンヌクレオチドの７位に位置することは、結局リンカ
−およびレポーターを主たる溝に配置することになる（
これは、混成および他の手順に伴う妨害を最少にし、二
重螺旋形態が可能であることを要求する）。：そして、
レポーターが結合したアルキニルアミノヌクレオチドは
、顯逆転写酵素に対する優れた基質である。機能的に関
連のある酵素は類似の方法でそれらの基質と相互作用す
る傾向があるため、これらのヌクレオチドは型にはまっ
た直接的なヌクレオチドの重合を行なう他の有益な酵素
（他の逆転写酵素、ＤＮＡポリメラーゼ、およびＲＮＡ
ポリメラーゼのようなもの）に対する基質でもあるかも
しれない。この発明のアルキニルアミノ−ヌクレオチド
は、ラベルされた２′−デオキシオリゴヌクレオチドの
化学的（非酵素的）合成に対する魅力的な代替法を提供
する。ルーズ（Ｒｕ　ｔｈ　）は国際出願番号ＰＣＴ／
ＵＳ８４１００２７９で、規定された一本鎖オリゴヌク
レオチドの配列にしｙＪ？　−ター基を組込む方法を公
開している。この方法は、アミノ基によって保護された
リンカ−を有する、適切に保護され活性化されたヌクレ
オチド単量体の調製を含む。これらのヌクレオチド単量
体をオリゴヌクレオチドを化学的に合成することに用い
、続いてレポーターがリンカ−のアミン基に選択的に結
合する。アルキニルアミノ・リンカ−が小さいことと、
それらがピリミジンヌクレオチドの５位および７−ジア
ザプリンヌクレオチドの７位に位置することは、それら
を含むオリゴヌクレオチドの機能を改善するために期待
される。ルーズによって記述されたものの一つに類似し
た、適切な保護および活性化を受けた単量体（３８）は
、市販の５−ヨード−２′−デオキシウリジンに、触媒
Ｐｄ（ｏ）　／　Ｃｏ　（１）の存在下でアルキルアミ
ノ・リンカ−を結合させ、続いて５′−アルコールの選
択的なジメトキシトリチル化を行ない、最終的にクロロ
（ジインプロピルアミノ）メトキシホスフィンを伴う３
′−ホスホラミダイト（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔ
ｅ　）に変えることによシ調製することが可能である。
この単量体および他の類似のアルキニルアミノ含有単量
体は、有益なオリゴヌクレオチド合成であシ、ルーズに
よって記述された方法に従ったレポーターの結合である
ことが期待される。（リンカ−の窒素を保護するトチフ
ルオロアセチル基は、普通はオリゴヌクレオチドの化学
合成中の最終脱保護に用いられる塩基および／または求
核試薬によって除去される。）レポーターがオリゴヌク
レオチド合成で用いられる反応によって影響を受けなけ
れば、それはよシ早い段階でアルキニルアミノ・リンカ
−に結合させることができる。
ＯＲ 、Ｐ−ＯＣＨ３ Ｐｒ２Ｎ オリゴリボヌクレオチドの化学合成は現在のところ、２
′−デオキシオリゴヌクレオチドの合成のようには効率
が良くないか有用でないけれども、適当ナモノマー（（
３９）　−０−テトラヒドロピラ−ル（ＯＴＨＰ）〕は
調製が可能で、標識されたＲＮＡを作るために用いるこ
とができる。
その他の適用では、二本鎖核酸の酵素標識はアルキルア
ミノリンカ−を用いることによって促進できる。ランガ
ー（Ｌａｎｇｅｒ）らは、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ。
Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ　、ＵＳＡ、　７８　、６６３３（
１９８１）で、ビオチンリポータ−で二本鎖ＤＮＡを標
識するためのニックトランスレーション法を発表した。
アリルアミノリンカ−は、２′−デオキシウリジン三リ
ン酸とワリジン三リン酸の５−位置にビオチンを結合さ
せるために用いられている。その結果得られたビオチニ
ル化ヌクレオチドはＤＮＡ及びＲＮＡポリメラーゼの基
質である。あるいは、アルキニルアミノリンカ−はビオ
チンの結合に用いられるか、もしくは一般的に螢光染料
のような他のリポータ−の結合に用いることができ、ア
ルキニルアミノリンカ−を有するアデノシン三リン酸類
似物（４０）及び（４１）はアリルアミノリンカ−を有
するアデノシン類似物よりも容易に調製できた。（４０
）及び（４１）のヌクレオチド三リン酸類似物は、ラン
ガーらの酵素手法によって、ＤＮＡもしくはＲＮＡのニ
ックトランスレーション標識化のために用いることがで
きた。
ＨＯＲ ４０：Ｒ＝Ｈ ４１：ＲにＯＨ 次の例はこの発明を説明するものである。
全ての温度は摂氏である。（２５度は常温もしくは室温
のことである。）全ての部及び百分率は、容量で示す液
体混合物を除き、特に他の指示がない限シ重量％である
。次に示すような略語を用いる。
ＤＭＦ　ニジメチルホルムアミド ＤＭＳＯニジメチルスルホキシド ＮＨＴＦＡ　　：　　）リフルオロアセトアミド基ＴＥ
ＡＢ　　：　　）リエチルアンモニワムビカーがネート
Ｔｒｉｍ　　：　　）リス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタンＳＦ　ニスクシニルフルオレセイン ＮＭＲ：核磁気共鳴スペクトル ＩＲ：赤外スペクトル Ｕｖ：紫外スペクトルもしくは紫外線検出ＴＬＣ：　シ
リカゲルを用いた薄層クロマトグラフィーＨＰＬＣ：高
圧液体クロマトグラフィーＧＣ：ガスクロマトグラフィ
ー ｍｐ：融点 ｍｐｄ：分解を伴う融点 ｂｐ：沸点 ＮＭＲデータの記載において、化学シフトはｐｐｍであ
たえられ、カップリング定数（Ｊ）はＨｚで与えられる
。融点は全て訂正されていない。イオン交換樹脂は使用
前に適当な水溶液と有機溶剤で洗浄した。全ての化合物
の同定は、ここでは適切な分光法と分析法によって行っ
た。他に記述がなければ、シリカダルを用いたクロマト
グラフィーによる精製は、ステイルらが、Ｊ、　Ｏｒｇ
、　Ｃｈｅｍ、　、　４３　、２９２３−２９２６（１
９７８）に詳述するように行った。
実施例　１ ジデオキシシチジン５′−トリホスフェ−）　（４２）
の製造 （化合物４２は化学構造６０１例であり、とこでＨｅｔ
はシトシン（１）、Ｒ１は−ＣＩ−１２−である。又、
これはラベル付き連鎖停止剤３５に対する中間先駆物質
である。） （４３）の製造 プロパルギルアミン（２４，７９ｇ、０．４５０モル；
オルトリッチ、９９％）を１時間に亘り０°Ｃでメチル
トリフルオロアセテ−）（６９，１９ｇ。
０．５４０モル、１．２当量、オルトリッチ）に滴下し
た。これを０℃でさらに１時間攪拌したのち、１５　ｃ
ＩｒＬＶｉｇｒｅｏｘカラムを用いて蒸留し、無色液状
のトリフルオロアセトアミド４３６２．１２１１（９１
％）（沸点＋６８．５〜６９．５°Ｃ，１ｌｔｏｒｒ）
を得た。この物質はＮＭＲおよびＧＣで測定したところ
均質系であることが認められ、プロパルギルアミンを無
水トリフルオロ酢酸でアシル化して得られた分光学的に
同一の物質と互換的に使用することができた。
１Ｎ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）：　　６．８５（幅広ｓ、
ＩＨ，ＮＨＴＦＡ）、４．１７　（ｄ　ｄ　、　Ｊ＝５
．６及び２．５．２Ｈ，ＣＨ２）、２．３５　（ｔ　、
　Ｊ＝２．５　。
ＩＨ，ＣＩ（）。　　ＩＲに−ト：ｃｒｎ−’　）：　
３３００（Ｎ−ＩＨ）、３ｏ９５及び２９３５（Ｃ−Ｈ
）、２１３０（アセチレン）、１７２０（Ｃ＝Ｏ）、１
５５０（Ｎ−Ｈ）、１４３０．１３６５．１１６ｏ、１
０４０．９９８．９１８．８５７．８２９．７７２、及
び７２５゜Ｂ、　　５−ヨヮドー２’、　３’−ジデオ
キシシチジン（４４）の製造 ２′，３′−ジデオキシシチジン（２，１１，！７，１
０ミリモＡ／　、　Ｒａｙｌｏ　）および酢酸第２水銀
（３，３５，？。
１０．５ミリモル＋　Ｆｉｓｈｅｒ　）を５０ｍＪのメ
タノールに溶かした溶液を１９時間還流させた。得られ
た白色懸濁物をメタノール（５０ｍｌ）およびジクロロ
メタン（１００ｍＪ）で稀釈した。次にヨク素（３，０
５Ｊ９，１２ミリモル）を加え、懸濁物を２５℃で透明
な紫色溶液が生ずるまで攪拌した。
４時間後、ＡＧ３Ｘ４Ａ樹脂の遊離塩基型（２０ｍｌ。
３８ミリ当盆、Ｂｆｏ−Ｒａｄ；弱い塩基性ポリスチレ
ン樹脂）を加え、さらに硫化水素をこの反応物中に１５
分間に亘り泡立てさせつつ導入した。第２水銀の完全な
析出をＴＬＣで確認した。反応物をフィルタ部材を介し
て濾過し、さらにこのフィルタ部材を１：１のメタノー
ル−ジクロロメタンで洗った。Ｆ液をシリカダル（１０
，９）上で蒸発させ、この荷重されたシリカゲルを１５
０９のシリカダルカラムの頂部に載せた。次にジクロロ
メタン中に溶かした５％、１０％および２０チメタノー
ルを用いて溶出をおこなったところヨウ化物４４２．７
９．９（８３％）が無色結晶として得られた。
これを沸とう水から２回再結晶させ、真空乾燥（５０°
Ｃ）させたところ大きい純粋なプリズム状物（ｍｐ：ｄ
１７８°）が得られた。
’　Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ　６）　：　８．５０　
（ｓ　、Ｉ　Ｈ、Ｈ６）、７．７３（幅広、ｍ、ＩＨ，
−ＮＨ，、、ａ）、６．５３　（幅広８．ＩＨ，−ＮＨ
２ｂ）。
５．８６　（ｄ　ｄ　、　Ｊ＝６．５及び２．１、ＩＨ
，Ｈ１’）、５゜１９（ｔ、ＩＨ。
５’ＯＨ）、４．０４（ｍ、ＩＨ，Ｈ４’）、３．７５
（ｄｄｄ、Ｊ＝１２．１．５．２及び２．９　ｅ　Ｉ　
Ｈ、Ｈ５’　ａ　）、３．５３　（ｄ　ｔ　、　Ｊ＝１
２．１及び３．８．ＩＨ。
Ｈ５’ｂ）、及び２．３−１．７（ｍ、４Ｈ，Ｈ２’及
びＨ３′）。
計算値Ｃ，Ｈ１２Ｎ３０３１　：　Ｃ３２，０７４，Ｈ
３，５９％、Ｎ　　１２．４６％。実験値：　Ｃ３２，
０５％、Ｒ３，８０％。
Ｎ　　１２．４６係。
ロピニル）　−２′，３′−ジデオキシシチジン（４５
）の製造方法 ５０ｍ１３つロフラスコにヨヮドシチジン４４（７７０
■、２．ｏｏミリモル）およびヨウ化第１銅（７６，２
１Ｒ９，０１４００ミリモル、０．２０当量；オルトリ
ッチ、金ラベル）を導入した。このフラスコにアルゴン
で満たし、乾燥したジメチルポルムアミド（１０７／Ｌ
ｌ、オルトリッチ）を加え、ヨウ化第１銅で懸濁された
ヨウドシチジン溶液０．２　Ｍを得た。次に、Ｎ−プロ
パルギルトリフルオロア＊　ト７ミ）’（０，７０ｍｌ
！、　６．００　ミリ％　／Ｉ／　、　３．０当量）お
よびトリエチルアミン（０，５６ｙｄ　、　４．００ミ
リモル、２０当量９分子篩上に貯そうされた）をシリン
ジを介して加えた。テトラキス（トリフェニルホスフィ
ン）パラジワム（ｏ）　（ｉ　ｓ　ｉ■。
０．２０ミリモル、０．１０当量）ｆ、乾燥ボックス中
のビン中に入れ、これを反応混合物中に加えた。
その結果、ヨワ化第１銅は溶けて黄色溶液が得られ、こ
れは数時間後に暗色化した。この反応物をＴＬＣで出発
物質が完全に消費されたことが確認されるまで放置した
。４時間後、反応物を２０罰のメタノール／ジクロロメ
タン（１：１）２層ｍＪで稀釈し、ＡＧＩ　Ｘ８樹脂（
Ｂｉｏ−Ｒａｄ　、　２．０　ｇ　、　ｃａ　。
６当量；強い塩基性、アニオン交換ポリスチレン樹脂）
の重炭酸塩を加えた。約１５分間攪拌したのちにガスの
発生が止った。３０分後、反応混合物を濾過し、樹脂を
ジクロロメタン−メタノール（１：１）混液で洗った。
この涙液を一緒にし、これをロータリ蒸発器で急激に濃
縮させた。なお、ジメチルホルムアミドの除去は４５℃
、　２　　ｔｏｒｒで約１０分を要しておこなった。残
渣を直ちにジクロロメタン中に溶かした１０％、１５％
および２０係メタノール溶液を用い、シリカダル１００
ｙ上にてクロマトグラフィにより精製した。さらに留分
から溶媒を除去した結果、アルケニルアミンヌクレオシ
ド４５が青黄色結晶質気泡体の形で６５１■（９０％）
得られた。このものはＴＩ、ＣおよびＮＭＲで均質物か
らなることが確認された。類似する製剤から得られた製
品は元素分析により半水和物であることが確認された。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　　：　９．９６（幅
広　ｓ　、　Ｉ　Ｈ、ＮＨＴＦＡ　）、８．３２（ａ、
ＩＨ，Ｈ６）、７．７６（幅広　ｇ＋ＩＨ，ＮＨ２ａ）
、６．７８（幅広ｓ　、ＩＨ＋ＮＨ２ｂ）、５．８８　
（ｄ　ｄ　、　Ｊ＝６．５及び２．５、ＬＨ。
Ｈ１′）、５．１３（ｔ、Ｊ＝５．１．１Ｈ，５’０Ｉ
（）、４．２８　（ｄ　、　Ｊ＝５．０　。
２Ｈ，−ＣＨ２−）、４．０４　（ｍ　、　ＬＨ，Ｈ４
’　）、３．７３（ｄｄｄ。
Ｊ−１２，０、５，０及び３．１　、　ＩＨ、Ｈ５’ａ
　）、３．５３（ｄｔ、Ｊ＝１２．１及び４．０　、　
ＩＨ、Ｈ５’ｂ　）、２．３−１．７（ｍ、　４Ｈ，Ｈ
２’　ａｎｄ　Ｈ３’）。
１０Ｆ−Ｎ！ｖｎＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、ｓ）　：　−７４
，０（ｓ）　、ＵＶ（ＭｅＯＨ）　：最大点　２３８．
５（１７，１００）及び２９５．５（９，３００）。
計算値　Ｃ１４Ｈ１５Ｎ４０４Ｆ８１／２Ｈ２０：Ｃ４
５，５，Ｈ４，３７゜Ｎ１５．１７．　　実験値　：　
　Ｃ４５，５６、Ｈ４，５２、Ｎ　１５．２６゜Ｄ　　
）　ＩＪ　ス（）　ＩＪ　−Ｎ−プチルアンモニワム）
トリフオスフェートの製造 テトラナトリクム　ピロフォスフェート　ガカハイドレ
ート（４，４６ｇ、１０ｍモル〕を最小量の水〔約５０
　ｍｌ　）に溶解しＡＧ５０Ｗ　Ｘ８樹脂〔１００−２
００メツシュ＋４Ｘ１０ｃｍ床；強酸性、カチオン交換
、？リスチレン樹脂〕のカラムを通し水に注いだ。カラ
ムは水で溶出し溶出液を水冷却フラスコで溶出液の−が
ほぼ中性になるまで回収した。トリーンーブチルアミン
（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｇｏｌｄ　Ｌａｂｅｌ。
７、１　ｍｌ　ｇ　３０　ｍモル〕を溶出液に加え、２
層を全てのアミンが溶解するまで激しく攪拌した。生成
溶液をリポフィライズした。残留物は２回乾燥ピリジン
で１回乾燥ジメチルフォルムアミドで共蒸発した。残留
物を乾燥ジメチルフォルムアミド〔１０１ｎｌ〕に溶解
し生成する１、　０　Ｍ溶液をアルゴンの下Ｏ０で使用
するまで貯蔵した〔１力月の間〕。
Ｅ　保護アルキニルアミノ　ヌクレオシドの対応５′ト
リフオスフエートへの変換及びトリフルオルアセチル保
護基の除去の一般方法。５−（３一アミノー１−プロピ
ニル）　−２′，３′−ジデオキシシチジン５′−トリ
フオスフェート（４２）の製造アルキニルアミノヌクレ
オシド４ｓ（３６１ｍｙ。
１、　ＯＯｍ　モｋ　）　ヲ）リメチルフォスフェート
（２，０ｍｌ　、　Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｇｏｌｄ　Ｌａｂ
ｅｌ　：ｌに窒素下炉乾燥フラスコ内で攪拌しながら溶
解した。溶液は一１０’に冷却し、フォスフォラスオキ
シクロリド（０，０９３ｍＡ！、　１．００ｍモルＡｌ
ｄｒｉｃｈ　Ｇｏｌｄ　Ｌａｂｅｌ　：）をシリンジで
加えた。反応混合物を一１０’で３０分間攪拌後、第２
部分のフォスフォラスオキシクロリド（０，０９３ｍｌ
、　１．００　ｍモル〕を加え、溶液を攪拌しながら徐
々に２５°に暖めた。反応混合物の部分をＩＮ水性水酸
化物で急冷し、ＨＰＬＣで分析シた。対応ヌクレオシド
モノフォスフェートへの変換が最大〔この場合、フォス
フォラスオキシクロリドの第２添加後１００分〕のとき
、反応混合物ヲト！Ｊ　ス（ト！Ｊ−ｎ−ブナルアンモ
ニヮムビロフォスフエートの予め冷却した〔−１０°〕
溶液〔乾燥ジエチルフォルムアミド１．ＯＭＭｇＯ６、
ＯｍＪ　）に滴加した。溶液はアルゴンした攪拌しなが
ら徐々に２５°に暖めた。１００分後、反応溶液をトリ
エチルアミン（１，４ｍＡ’ｌの予め冷却した〔０°〕
水（２０ｍｌ：］溶液に徐々に加えた。溶液を１５分間
氷冷却しながら攪拌し、−夜釣２°に放置した。、２５
°、０．５）−ルの真空蒸発で揮発物を除き、残留物を
水（７５ｍＡ’：］に再溶解し、ＤＥＡＥ　−８ＥＰＨ
ＡＤＥＸイオン交換体（：　Ａ−２５−１２０、２６，
Ｘ６５α床〕のカラムに適用した。これは、１）ｐＨ７
，６゜１、　ＯＭ水性ＴＥＡＢ［：　３０　Ｑｍ／］。
２）　１．０　Ｍ水性重炭酸カリワム〔３００ｍ１〕、
及び３）ｐＨ７，６、０，１Ｍ水性ＴＥＡＢ　Ｃ３００
ｍ１）で平衡化したものである。
カラムは、０．１Ｍ（ＩＬ）から１．０Ｍ（ＩＭ：ｌの
ｐＨ７，６の水性ＴＥＡＢの線状勾配で溶出した。カラ
ムは１２分毎にフラクションを回収しながら１００ｄ／
時でドライブした。溶出は２７０　ｎｍ　（４０ＡＵＦ
Ｓ）の吸収を観測した。所望の物質が良く分離した、グ
ラジェント端に近いメージャー帯として溶出した。生成
物含有フラクションをプールし、濃縮し〔３０°以下〕
、絶対エタノールと２回共蒸発した。
残留物を水［２０，４ｄ）でとり、リポフィライズした
。
中間体生成物を水〔１２，５ｍｌ〕でとり、濃水酸化ア
ンモニワム（１２，５ｄ／）を加えた。３．５時間攪拌
後、溶液を２時間アスピレータ真空下２時間攪拌して過
剰のアンモニアガスを除き、リポフィライズした。残留
物をｐＨ７，６０，１Ｍ水性ＴＥＡＢＣ１０ｄ）でとシ
、上述したように調製したＤＥＡＥ−５ＥＰＨＡＤＥＸ
イオン交換樹脂（：Ａ−２５−１２０゜１．６Ｘ５５ｃ
ｒｒＬ床〕のカラムに適用した。カラムは、０．１Ｍ（
２８０ｍＡ’ｌから１．０Ｍ［２８０罰〕のＴＥＡＨの
線状勾配で６フラクシヨンを回収しながら溶出した。生
成物は単一メージャービークとして溶出した。純粋生成
物（＋３９−４５）を含むと考えられるフラクションを
プールし、濃縮し〔３０°以下〕、絶対エタノールで共
蒸発し〔２ｘ〕、水（９，ｓｍＪ）でとった。溶液はＵ
Ｖ吸収及びＨＰＬＣで試験した後、リポフィライズした
。生成物の稀溶液は、ｐＨ８，２５０ｍＭ水性Ｔｒｉｇ
バッファで２４０及び２９３．５　ｎｍに最大吸収を示
した。生成物の吸収係数を出発原料のもの（９，３００
）に等しいと考えると、生成物の収量は、２９３．５　
ｎｎ１７）吸収を基準にして、０．３２ｍモル〔３２％
〕テアった。
最終生成物のＨＰＬＣ（Ｚｏｒｂａｘ　ＳＡＸ　、　０
．２　Ｍ　　ｐＨ６，５水性燐酸カリワム、２７０　ｎ
ｍで観測〕は、本質的に単一ピークを示した。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２０　）　：　８．５７　（ｓ　、Ｉ
　Ｈｅ　Ｈ６）、６．０３（ｄｄ、Ｊ＝６．４及び１．
６．ＩＨ，Ｈｆ）、４．４２（ｍ、２Ｈ，Ｈ４′及びＨ
５’ａ）、４．１８（ｄｄｄ、Ｊ＝１２．　５．５及び
３．　　ＩＨ，Ｈ５’ｂ）、４．０３６（ｍ　、２Ｈ、
−ＣＨ２−）、２．５−１．９（ｍ、４Ｈ，Ｈ２’及び
Ｈ３′）、プラスカワンタイオン（トリエチルアンモニ
ウム）ｓ−久’Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２０）　：　−９，０２
（ｄ、　Ｊ＝２０．　ＩＰ）、−９，７４（ｄ　。
Ｊ＝２０．ＩＰ）、−２１，３７（ｔ　、Ｊ＝２０．Ｉ
Ｐ）。　ＵＶ（ｐＨ８，２ａｑ　　Ｔｒｉｓ）：　２４
０及び２９３．５　ｎｍで最大。
例　　２ ５−（３−アミノ−１−プロピニル）　−２’　−３’
−ジデオキシウリジン５′−トリフオスフェート（４６
）の製造 〔化合物便は、ｎｅｔがワラシル（ｈ）でＲ４が−ＣＨ
２−である構造月の例である。これは標識鋲ターミネー
タ３４の中間体前駆体である〕Ａ　５−イオン−２’　
−３’−ジデオキシウリジン３７の製造 ジデオキシウリジン（２，１２２，９，１０，０ｍモル
〕を３ＣＩＡ’の温メタノールに溶解し、２０°に冷却
後、メタノール（２０ＴＩＬｌ）中のヨワ素モノクロリ
ド（４，０６，！ｉ’、２５ｍモ／ｌ／　、　２．５　
ｅｑ　＊　Ｆｉｓｈｅｒ　〕を５分間に亘って加えた。
暗紫色反応混合物を５０゜浴で窒素下２０分間加熱した
後、直ちに氷水浴で冷却した。攪拌することなく１６５
分間放置した後、生成沈澱を回収し冷メタノールで洗浄
した［：２ｘｌＯｍＡ！：］、−夜真空乾燥すると２．
２３２．９〔６６％〕のアイオダイド４７がオフホワイ
ト微結晶で得られた。この物質を更に精製することなく
次の反応に用いたが、他の調製物はクロマトグラフ又は
沸騰メタノール〔３０ｒｆＬｌ／Ｉ〕からの再結晶で精
製して白針秋物を得た（　ｍｐ　ｄ　１６０１６４°〕
。
ＮＭＲは粗沈澱が均質であることを示したが、５′−ヒ
ドロキシルプロトンが痕跡不純物による触媒交換により
極めて広いことをも示した。クロマトグラフ又は再結晶
物質は、このプロトンが通常のよ−９← うに鋭いトリプレットであるスペクトルを与えた。
１Ｈ−ＮＭＲ［ＤＭＳＯ−ｄ６：］　　：　　１１．６
０（ブロードｇ、ＩＨ，Ｈ３）、８．５７（ｓ、ＩＨ，
６Ｈ）、５．９０（ｄｄ、Ｊ＝２．０及び６．６．ＬＨ
。
Ｈ１′）、５．２（ブロード　ｓ、ＩＨ，Ｈ３）、４．
ｏ６（ｍ、１ｎ、ａ４’）、３．７５及び３．５３（ｍ
、２Ｈ，Ｈ５’）、２．２６．２．０２及び１．８４（
ｍ、４Ｈ，Ｈ２’及びＨ３′）。
Ｂ　　５−（３−トリフルオロアセタミド−１−プロピ
ニル）　−２′，３′シワリジン（４８）の製造イオド
ウリジン４７を例１ｃの一般方法に従ってＮ−プロパギ
ルトリフルオロアセタミドにカップリングした。ジクロ
ロメタン勾配のＯ−５％メタノールでのクロマトグラフ
でＴＬＣでは均質だが乾燥しがたい物質を得た。クロマ
トグラフ生成物を数回クロロフォルムとの共蒸発及び真
空乾燥後、５３６．５１＆のアルキニルアミノヌクレオ
シド４８を白色フオームとして得た。この物質はＴＬＣ
で均質であり、ＮＭＲで少量〔３９モルチ；補正収量６
６％〕のクロロフォルム以外は純粋である。
’　Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、ｓ　］　：　１１．６
１（ｓ　、　Ｉ　Ｈ、Ｈ３）、１０．０７（ｄｉｓｔｏ
ｒｔｅｄ　ｔ　、ＩＨ，ＮＨＴＦＡ）、８．３５（ｓ、
ＩＨ，Ｈ６）、７、２６　（ｓ　、０．３９　Ｈ、ＣＨ
Ｃｔ３）、５．８９　（ｄ　ｄ　、　Ｊ＝６．６及び３
，２゜ＩＨ１Ｈ１′）、５．１５（ｔ、Ｊ＝５．２．Ｉ
Ｈ，５’ＯＨ）、４゜２２（ブロードｄ、２Ｈ，−ＣＨ
２Ｎ−）、４．０４（ａｐｐａｒｅｎｔ　ｈｅｐｔ　、
　Ｊ＝３．５１　＋ｌＨ，Ｈ４’）、３．７３及び３．
５３（ｍ、　２Ｈ，Ｈ５’）、２．２６．２．０３及び
１．８４（ｒｎ、４Ｈ，Ｈ２’及びＨ３′）。
ＴＬＣ（９５：　５ジクロロメタン−メタノール。
２エリュジョン、ＵＶ）：原料アイオダイド４７゜Ｒｆ
＝０．３７：生成物４８，０．２８；触媒、０．９５及
び０．８０プラススライドストリーキニス。
Ｃ５−（３−アミノ−１−プロピニル）　−２′，３′
−ジブオキシワリジン５′−トリフオスフエートアルキ
ニルアミノヌクレオシド４８（０，３０ｍモル〕を対応
するトリフオスフェートに変換し、そのトリフルオロア
セチル基を例ＩＥの一般方法で除いた。第２部分のフォ
スフォラスオキシクロリドの添加後、フォスフォリル化
を進行させた。全体で２１０分間であった。生成物の吸
収係数を原料のもの〔１３，０００）と等しいと考える
と、トリフオスフェートの収量は、２９１．５　ｎｍの
ＵＶ吸収に基づいて１８であった。
例　　３ ７−（３−アミノ−１−プロピニル）　−２′，３′ジ
デオキシグアノシン５′−トリフオスフェート（４９）
の製造 〔化合物４９は、Ｈｅｔが７−ジアザグアニン（ｋ）で
Ｒ１が−ＣＨ２−である構造６の例である。これは標識
鋲ターミネータ３７の中間体前駆体である〕八　６−メ
トキシ−２−メチルチオ−９−（３，５−ジ−ｏ−ｐ−
トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−りがフラノシル）
−７−デアザプリン（９）の製造 ６−メトキシ−２−メチルチオ−７−デアザプリン（８
＋　９．２　Ｅｌ　＊　Ｆ、５ｅｅｌａ　ｅｔ　ａｌ、
、　Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、。
Ｖｏｌ、１１１．２９２５（１９７８）の方法に従って
製造）を１５０１１Ｌｌの乾燥ピリジンに溶解してアゼ
オトロピック乾燥し、３０−３５°で蒸発乾燥した。　
この物質を室温で窒素下４５０１ｒＬｌの乾燥アセトニ
トリルに懸濁し、水素化ナトリウム〔６０チ油懸濁液の
２．ｘ６ＩＩ）を攪拌しながら添加した。４５分後、１
−クロロ−２−デオキシ−３，５−ジー０−ｐ−トルオ
イル−α−Ｄ−リボフラノース〔１８゜６１　＋　Ｍ、
Ｈｏｆｆｎｅｒ　ｌＣｈｅｍ　＊　Ｂｅｒ、＋　Ｖｏｗ
、　　９：Ｌ　２７７７（１９６０）の方法に従って製
造〕を３等部分で２０分間に亘って加えた。反応混合物
を室温で更に４５分間攪拌後、酢酸〔１ｍｌ〕及びジク
ロロメタン〔３００１ｎｌ〕を加えた。混合物をフィル
ターエイドのパッドを通して吸引濃過し、濃過液を蒸発
乾燥した。残留物をベンゼンに溶解し、この溶液を水〔
２ｘ〕及びブライン〔１ｘ〕で洗浄した。
有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥及び蒸発後、残留物を
メタノール（４００ｍ／）に溶解し、結晶化させて無色
結晶としてリボシル化した生成物９゜１９．２４ｇＣ７
３，８係〕を得た（　ｍｐ　１０６−１０７°〕。
’　Ｈ−ＮＭＲＣＣＤＣＬ３）　　：　　２．４２　（
ｓ　−３Ｈ、）ルオイルＣＨ３）、２．４４　（ｓ　、
Ｉ　Ｈ、ＣＨ３）、２．６４　（ｓ　、３Ｈ，５ＣＨｓ
　）、２．７０及び２．８９（ｍ　、２Ｈ，Ｈ２’）、
４．０８　（ｍ　、　ＩＨ、Ｈ３’）、４．５６（ｍ、
ＩＨ。
■３′）、４．６５（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’）、５．７４（
ｍ、ＩＨ，Ｈ４’）、６．４４（ｄ、Ｊ＝４．ＩＨ，Ｈ
７）、６．７７（ｄｄ、Ｊ＝８及び６１ＩＨ１Ｈｆ）、
７．０５（ｄ、Ｊ＝４．ＩＩ（、Ｈ８）、及び７．２５
及び７．９５（ｍ、８Ｈ。
トルオイルＨ）。
少量のジクロロメタンを含むメタノールからの上記物質
の試料の再結晶でｍｐが１０９−１１０゜の結晶を得た
。
Ｂ　６−メトキシ−２−メチルチオ−９−（２−デオキ
シ−β−Ｄ−リざフラノシル）−７−デアザプリン（１
０）の製造 エステル９〔１９Ｉ！〕及びＲＥＸＹＮ　２０１　！脂
〔３８Ｉ１強塩基性、アニオン交換、ポリスチレン樹脂
〕の６００ｄメタノール懸濁液を１．５時間窒素下で還
流した。熱懸濁液を吸引濃過して樹脂を除き濃過液を蒸
発乾燥した。固体残留物をエーテル、　　　（４５０ｍ
ｌ）に溶解し、１０分後、溶液をフィルタエイドのパッ
ドを通して少量の着色不純物を除、いた。溶液を、前の
反応で得た所望の生成物の結晶でシードし、−夜２５°
で放置した。結晶ジオール１０を濃過て回収し、母液を
濃縮して第２生産物を得た。各生産物をエーテルで完全
に洗浄し乾燥して全部で８．４３．９（７８，０係〕の
ジオール１０を無色結晶（ｍｐ　１２９−１３０’）と
して得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　　：　　２．２１及
び２．５５　（ｍ　、　２Ｈ、Ｈ２’）、２．５６　（
ｓ　、３　Ｈ、Ｓ　ＣＨ３）、３．５３（ｍ、２Ｈ，Ｈ
５’）、３．８２　（ｍ　。
ＩＨ，Ｈ３’）、４．０２　（ｓ　、３　Ｈ、ＯＣＨ−
、）、４．３６（ｍ、ＬＨ，Ｈ４’）、４．９０　（ｔ
　、　Ｊ＝５．５　、１Ｈ、５’ＯＨ）、５．３０（ｄ
、Ｊ＝５．５．ＩＨ。
３’ＯＨ）、６．４８（ｄ、Ｊ≧４．ＩＨ，Ｈ７）、６
．５５（ｄｄ、Ｊ＝８及び６、Ｉｎ、Ｈ１’）、７．４
８（ｄ、Ｊ≠４．ＬＨ，Ｈ８）。少量のメタノールを含
むジクロロメタンからの上記物質の試料の再結晶でｍｐ
が１３０−１３１°の結晶を得た。
Ｃ６−メタオキシ−２−メチルチオ−９−（５−Ｑ　−
）　ＩＪフェニルメチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リゴ
フラノジル）−７−デアザプリン（１１）の製造 ジオール１０（７，２，Ｆ）はドライピリジン中で溶解
させ溶液を３５°で乾燥するまで蒸発させることによっ
てアゼオトロビックに乾燥させた。残留物はドライピリ
ジン（１０ＱｍＪ）および塩化トリフェニルメチル（ｓ
、ｏ、ｐ）で溶解させ、トリエチルアミン（＋、ｏｄ）
、および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（３００１Ｑ
）を添加した。反応混合物を窒素下で３０分間６５°で
加熱した後、塩化トリフェニルメチル（１，Ｏ、Ｐ　）
　′ｆｒ：さらに添加して、１６．５時間加熱を続けた
。冷却した後、反応混合物を濃縮して、残留物はジクロ
ロメタンと水との間で分配した。水性層はジクロロメタ
ンで抽出され、−緒にした有機層は０．３Ｎヒドロクロ
リツク酸、水性ナトリワムピカーボネート、およびプリ
ンで洗浄した。ナトリウムサルフェートに対して乾燥さ
せ濃縮した後、ジクロロメタン中の０％、１％、１．５
％および２％のメタノール溶液を用い、シリカダル上の
クロマトグラフィによる粗生成物の純化は無色ガラスと
して１２．１．９（９４，５％）のモノトリチルエーテ
ル１１を与えた。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ６３）　：　２−５８　（ｓ　、
３　Ｈ、Ｓ　ＣＨ３）、２．４２および２．６２（ｍ、
２Ｈ，Ｈ２’）、３．３７　（ｍ　、　２Ｈ、Ｈ５’）
、４．０４（ｍ、ＩＨ１Ｈ３’）、４．０８　（ｓ　、
３　Ｈ、ＯＣＨ３）、４．６０（ｍ、ＩＨ。
Ｈ４′）、６．４０（ｄ、Ｊ＝４．ＬＨ，Ｈ７）、６．
６８　（見かけ　ｔ。
Ｊ＝７．ＩＨ，Ｈ１’）、７．００（ｄ、Ｊ＝４．ＩＨ
，Ｈ８）、７．２７および７．４３（ｍ、１５Ｈ，）リ
チルＨ）。　とのデータは前述のように調製された１１
の異なるパッチから得られた。
Ｄ、　　６−メタオキシ−２−メチルチオ−９−（５−
１０１，− −ｏ−Ｂフェニルメチルー２，３−ジデオキシ−β−Ｄ
−リボフラノシル）−７−デアザプリン（１２）の製造 ドライジクロロメタン（２２０ｍＡ’）中のトリチルエ
ーテル１１（１２，１，！ｉ’）、　　ジメチルアミノ
ピリジン（９，２１１）、およびフェニルクロロチオノ
ヵーボネー）（７，５ｍ、アルドリッヒ）の溶液ハ、窒
素下で２時間２５°　で攪拌された。ＴＬＣ分析によれ
ば、反応は不完全であシ、フェニルクロロチオノカーゲ
ネート（４，０ｍ）を添加し、反応混合物をさらに１時
間攪拌した。溶液はジクロロメタン（２ｓｏｉ）で稀釈
し、続いて０．５Ｎヒドロクロリツク酸（５００ｍＪ）
、０．５Ｎ水酸化ナトリワム（５００ｍ）、およびプリ
ンで洗浄した。有機層はナトリウムサルフェートに対し
て乾燥され、乾燥するまで蒸発させた。
生成粗チオノカーボネートはドライトルエン（３５０Ｔ
Ｌｌ）およびアゾインビスブチロニ）　ＩＪ　／Ｌ／（
３５０１９）で溶解され、水素化トリーｎ−ブチルチン
（１０ｙｄ）を添加した。生成溶液は１０分間１００−
１０５°で加熱した。冷却した後、溶液は少量のエーテ
ルで稀釈し、１０係の水性フッ化カリワム（３５０ＴＬ
ｌ）でシェイクした。２つの層はろ過動剤のパッドでろ
過して（ダークスラッグを取除くために）分離させた。
有機層は０．７５　Ｎ水酸化カリウムとブラインで洗浄
し、ナトリワムサルフェートに対して乾燥させ、濃縮さ
せた。
１：１のジクロロメタン−エーテル、次いでジクロロメ
タンでのシリカゲル上の生成油のクロマトグラフィは無
色の固体（ｍｐ　１２２−１２４°）として９．９３ｇ
（８４，５％）のジデオキシヌクレオシド１２を与えた
。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ４３）　：　２．１０．２．３３
、および２．４３　（ｍ　、　４Ｈ。
Ｈ２’およびＨ３′）、２−６０　（Ｓ　＃　３　Ｈ、
Ｓ　ＣＨ３）、３．３０（ｍ、２Ｈ。
Ｈ５′）、４．０８　（ｓ　、３　Ｈ、ＯＣＨ＝、　）
、４．２９（ｍ、ＩＨ，Ｈ４’）、６．３６（ｄ　、　
Ｊ＝３．７、ＩＨ１Ｈ７）、６．５３（ｄｄ、Ｊ＝７お
よび４．ＩＨ。
Ｈ１′）、７．０９（ｄ　、　ＩＨ，Ｊ＝３．７．Ｈ８
）、７．２５および７．４５（ｔｎ、１５Ｈ，トリチル
Ｈ）。
Ｅ、　　７−ヨートー６−メタオキシー２−メチルチオ
−９−（５−０−）リフェニルメチルー２，３−ジデオ
キシ−β−Ｄ−りがフラノシル）−７−デアザプリン（
１３）　： Ｎ−ヨードサクシンイミド（１０，０ｇ）がドライジメ
チルフォルムアミド（５５０１ｎｌ）中のデアザゾリン
１２（９，９，９）の溶液に添加された。窒素下のダー
ク中で１６時間攪拌した後、１０％のナトリウムピカー
ボネート（２，５−）を添加し、反応混合物は５０°で
パクオ中で１００−の容量に濃縮した。この溶液は水と
エーテルアセテートとの間で分配された。有機層は５係
の水性ナトリワムヒドロスルファイトとプリンで洗浄し
、ナトリワムサルフェートに対して乾燥させ、濃縮した
。シリカゲル上の微かに不純な生成物のジクロロメタン
でのクロマトグラフィは無色のガラス固体として１１．
６８．９（９５，６％）のヨーシト１３を与えた。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ／！、３）　：　２．０６．２．
２４、および２．４１　（ｍ　、　４Ｈ。
Ｈ２’およびＨ３′）、２．５８　（ｓ　、３　Ｈ、Ｓ
　ＣＨ３）、３．３０（ｍ、２Ｈ。
Ｈ５’）、４．１０　（ｓ　、３Ｈ、０ＣＲ３）、４．
２９（ｍ、ＩＨ，Ｈ４’）、６．４７（ｄｄ、Ｊ＝６お
よび４．ｏｒ、ｎｆ）、７．１９（ｓ、ＩＨ，Ｈ８）、
７．３０および７．４６（ｍ、１５Ｈ，）リチルＨ）。
　このデータは前述のように調製された１３の異なるパ
ッチから得られた。
Ｆ、　　７−イオド−２−メチルチオ−９−（５−０−
トリフェニルメチル−２，３−ジデオキシ−β−Ｄ−り
がフラノシル）−７−ゾアザプリンー４−オン（１４）
の製造 ナトリワムチオクレソレートはナトリワムメタオキサイ
ド（１当量）全メタノール中のチオクレゾールの溶液に
添加して次いで乾燥するまで蒸発させることによって調
製された。ドライトルエン（１ｓｏｍＪ）中のメチルエ
ーテルリ（４，０ｇ）、ナトリワムチオクレンレート（
４，０＃）、およびヘキサメチルフォスフオルアミド（
１０１ｎｌ）の混合物は窒素下で４．５時間還流させた
。冷却した後、混合物はエチルアセテートと水との間で
分配された。有機層は水とプリンで洗浄し、ナトリワム
サルフェートに対して乾燥させ、乾燥するまで蒸発させ
た。シリカゲル上の生成粗生成物のジクロロメタン中の
０％および２係メタノールでのクロマトグラフィは無色
のガラス固体として３．８０．！ｉ’（９７，０％　）
のデアザプリノン１４を与えた。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ２３）　：　２．０５．２．２７
、および２．４２（ｍ。
４Ｈ，Ｈ２’およびＨ３′）、２．６０　（Ｂ、３　Ｈ
−Ｓ　ＣＨ３）、３．３０　（ｍ　。
２Ｈ，Ｈ５’）、４．２８（ｍ、　ＩＨ，Ｈ４′）、６
．４０　（ｄ　ｄ　、　Ｊ−７および４、ＩＨ，Ｈｆ）
、７．０５　（ｔｒ　、Ｉ　Ｈ＊　Ｈ８）、７．３０お
よび７．４６（ｍ、１５Ｈ，）リチルＨ）、１０．００
　（ブロード　ｓ、ＩＨ。
Ｈｌ）。
Ｇ、　　７−イオド−５′−〇−トリフェニルメチル−
２’、　３’−ジデオキシ−７−デアザグアノシン（１
５）の製造 ；ｔタークロロペロキシペンツイック酸（１，２３ｇ１
８５％、アルドリッヒ）が窒素下で００でドライジクロ
ロメタン（１５０Ｔｎｌ）中のメチルチオエーテル１４
（３，６ｇ）の攪拌溶液に添加された。
１５分後、冷却浴は取除かれ、攪拌は４０分間２５°で
続けられた。この溶液は水性ナトリワムビカーがネート
とプリンで洗浄し、ナトリワムサルフェートに対して乾
燥させた。メタノール（２容量係）が添加され、生成溶
液はシリカゲルの短プラグを通過し、極性不純物を取除
いた。生成粗スルフォキサイド（３，０７Ｊｉ’）はジ
オキサン（４０ＴＬｌ）で溶解させガラス線ぎムに入れ
た。アンモニア（１０，０，１を添加し、混合物は１０
０°で２時間自動クレープ中で加熱した。生成溶液は乾
燥するまで蒸発させた。残留物はジクロロメタン（２０
７ｄ）中で溶解させ、ろ過動剤のノＪ？ットでろ過した
。メタノール（４０ｍ）を溶液に添加し、冷却して、Ｌ
５７ｆ；ｌの無色生成物が結晶化された。
母リカーを蒸発させジクロロメタン中の５俤のメタノー
ルでのシリカダル上の媒質圧力液体クロマトグラフィに
よって純化し無色結晶として３２８■の生成物をさらに
与えた。全収率のデアザグアノシン１５は１．９０ｇ（
５５，４チ）であった。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ（Ｊ３）　：　２．０５．２，２３
、および２．３５　（ｍ　、　４Ｈ。
Ｈ２’およびＨ３′）、３．２９（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’）
、４．２６（ｍ、　ＬＨ，Ｈ４’）、５．９０　（ブロ
ード　ｓ　＋　２Ｈ＋　ＮＨ２）、６．２４（ｄｄ、　
、Ｔ＝７および４ｔＩＨ−Ｈｆ）、６．９０（ｓ、ＩＨ
，Ｈ８）、７．３０および７．４６（ｍ、１５Ｈ，）リ
チル　Ｈ）、１０．９０　（ブロード　ｓ、ＩＨ。
Ｈｌ）。　メタノール−ジクロロメタンからのこの材料
のサンプルの再結晶化はｍｐ　２０１−２０３°の結晶
を与えた。
Ｈ，２’、　３’−ジデオキシ−７−イオド−７−デア
ザダアノジン（１６）の製造： ホルミック酸（１２ｍｌり中のトリチルエーテル１５（
１，７１りの溶液を１０分間室温で攪拌した。
生成黄色懸濁体は次いで３０°でバクオ中で乾燥するま
で急速に蒸発された。ジクロロメタン中の５１．７％、
および１０チのメタノールでのシリカダル上の残留物の
クロマトグラフィは９４０４の無色固体を与えた。少量
のジクロロメタンを含有するエーテルとのこの固体のト
リチュレーションは無色結晶として８３８ダ（８１，０
％）のヌクレオシド１６を与えた。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：　１．９５．２．
０９、および２．２６（ｍ。
４Ｈ，Ｈ２’およびＨ３′）、３．４８および３．５４
（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’）、３．９８（ｍ、ＩＨ，Ｈ４′）
、４．９０　（ブロード　ｔ　、　Ｊ＝５　、　ＩＨ。
５’ＯＨ）、６．０８（ｍ、　ＩＨ，Ｈ１’）、６．３
２　（ブロード　ｓ　、　２Ｈ。
ＮＨ，、、）、７．１２（ｓ、ＩＨ，Ｈ８）、１０．４
６　（ブロード　８゜ＩＨ，Ｈｌ）。
Ｔ、７−（３−トリフルオロアセトアミド−１−プロピ
ニル−２’、　３’−ジデオキシ−７−デアザグアノシ
ン（５０）の製造 ヨーシト１６（３７６■、１．　ＯＯｍｍｏｌ）は例Ｉ
Ｃに示された一般的方法によってＮ−プロパルジルトリ
フルオロアセトアミドに２，２５時間結合された。
生成物と開始材料は、ＴＣＬとは区別され、そのため反
応は逆位相ＨＰＬＣ（１０ｃｒＩＬＯＤＳ　、　１　ｒ
ｒｔｌ／分、１００チの水乃至１００係のメタノールの
５分間の勾配。
次いでｉｏｏ％のメタノール、２８０　ｎｍのＵＶ検出
：開始ヨーシト１６，５．４９分；生成物５０．５．７
５分；中間物、６．５８分）によって監視された。粗生
成物はジクロロメタン中ではあまシ溶解せず、そのため
クロマトグラフィコロンに付加される前にシリカゲル上
のジクロロメタン−メタノール溶液から濃縮された。ジ
クロロメタン中の２係、５チ、７％、および１０％のメ
タノールの溶離は、黄色固体として３００ダ（７８％）
のアルキニルアミノヌクレオシド５０を与えた。
１）ｒ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ）　：　１．９６．２．
０８、および２．２８（ｍ。
４Ｈ，Ｈ２’およびＨ３′）、３．４７および３．５５
（ｍ　、２Ｈ，Ｈ５’）、３．９９（ｍ　、　ＩＨ，Ｈ
４’）、４．２２　（ブロードｓ　＋　２　Ｈ＋　−Ｃ
Ｈ２−）。
４．９０（ｔ、Ｊ＝５．ＩＨ，５’、ＩＨ，５’ＯＨ）
、６．０９（ｄｄ、Ｊ＝６および４　、　：ｒＨ，Ｃ１
′）、６．３３　（ブロード　ｓ　ｒ　２Ｈ＋　ＮＨ２
）、７．３０（ｓ、ＩＨ，Ｈ８）、１０．０５　（ブロ
ード　ｓ、ＩＨ，ＮＨＴＦＡ）、１０．５０　（ブロー
ド　ａ、ＬＨ，Ｋｌ）。′Ｈ−デカップルド１３Ｃ−Ｎ
ＭＲ（ＤＭｓＯ−ｄ６）：　　１５５．５（ｇ、Ｊ＝３
６．５、トリフルオロアセチル　カルがニル）、１５７
．８，１５３．１および１４９．９（Ｃ２，Ｃ４および
Ｃ６）、１２２．６（Ｃ８）、１１５．９（ｑ　、Ｊ−
２８８、ＣＦ３　）、９９．４および９７．５（Ｃ７お
よびＣ５）、８４．２および７７．４（アセチレン性）
　、　８３．２およびｓ　１．ｏ　（ｃ　丁およびＣ４
′）、６２．９　（Ｃ５’）、２９．７　（プロバルジ
リック）、３１，８および２５．８（Ｃ２’およびＣ３
′）。この　Ｃ−ＮＭＲデータは前述のように調製され
た５０の異なるパッチから得られる。
Ｊ、７−（３−アミノ−１−プロピル）　−２′，３′
　−ジデオキシ−７−デアザグアノシン５′−トリフオ
スフェート（４９）の製造 アルキニルアミノヌクレオシド５０　（０，９０ｍｍｏ
ｌ　）は対応する５′−トリフオスフェートに変換され
、トリフルオロアセチル保護基が例ＩＥに示された一般
的方法に従って対で取除かれた。フオスフオラスオキシ
クロライドを第２に添加した後、反応体はさらに１６５
分間攪拌された。生成物に対する吸着具効果が開始材料
（１１，９００）の吸着具効果に等しいと仮定すると、
２７２．５ｍｎ　　の吸着に基づいて、５′−トリフオ
スフェート４９の収率ハエ８チであった。
実施例４ ７−（３−アミノ−１−７６０−ル）　−２′，３′−
ジェトキシ−７−デアザアデノシン５′−トリホスフェ
ート（５１）の調製　：（化合物５１はｎｅｔが７−ジ
アザアデニンＵ）で、Ｒ１が−ＣＨ２−である構造６の
例である。これは標識された鎖状ターミネータ３６の直
接の前駆体である。） ［：Ａ］、　　２’−アセトキシ−３′−ブロモ−５’
−（２−アセトキシインブチリル）アデノシン（１８）
の調製 ２−アセトキシイソブチリルブロマイド（１９，５ｍｌ
　、　１５０ｍｍｏｌ　、　５　ｅｑ　：　Ｊ、Ａｍ、
Ｃｈｅｍ、Ｓａｃ、、　　９５゜４０１６−４０３０（
１９７３）に記載されたラッセル等の方法に従って調製
した）を、ドライ−アセトニトリル（２５０ｍｌ　、　
Ａｌｄｒｉｅｈ　）　　中のツペルシジン懸濁液（１７
、７−デアザアデノシン、６．６６ｇ。
２５、０　ｍｍｏｌ　、　Ｓｉｇｍａ　）に１５分かけ
て添加した。
懸濁した固体は約５分以内に溶解した。溶素気流下に、
反応混合液を２５℃で２２時間攪拌した。
この反応混合液を、水４００ｄに硫酸水素二カリワム（
４３，５５ｇｓ３００ｍｍｏｌ、６ｅｑ）を溶解した水
溶液中に加えた。３０分間の攪拌後、溶液を酢酸エチル
（１×４００ＴＬｌおよび２　Ｘ　２００　ｒｎｌ　）
で抽出した。集めた有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥
し、エバフレートすることにより、白色の泡状物１４．
７３ｇ（１１８％）を得た。この物質は、ＴＬＣ（Ｕ　
Ｖ検出による）で９５係以上のやや広がった一つのスポ
ットであるが、ＮＭＲでは一つの主生成物と少なくとも
一つの副生成物の存在が示された。そのＮＭＲスペクト
ルは、主生成物がブロモアセテート１８であることと一
致していた。
主成分１８のＨ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ　６中）　：　
８．０Ｂ（ｇ、ＩＢ（。
Ｈ２）、７．３４（ｄ、Ｊ＝３．７．ＩＨ，Ｈ８）、７
．１２（ブロード８１２Ｈ，ＮＨ２）、６．７０（ｄ、
Ｊ＝３．７．ＩＨ，Ｈ７）、６．３２（ｄ、Ｊ＝ａ、ｓ
、ＩＨ，ａｒ）、５．６１（ｄｄ　、　Ｊ＝２．４　、
３．８　、　ＩＨ，Ｈ２’）、４，８９（ｄｄ、Ｊ＝２
．４，４．５．ＩＨ，Ｈ３’）、４．４３（ｍ、ＩＨ，
Ｈ４’）、４．３５（ｄ　ｄ　、Ｊ＝１２，４　、ＬＨ
＋Ｈ５’ａ　）、４．２９（ｄｄ、Ｊ＝１２．７．ＩＨ
。
Ｈ５’ｂ）、２．０８（ｓ、３Ｈ，０Ａｃ）、２．００
（ｓ、３Ｈ，０Ａｃ）、１．４９　（［１，６Ｈ，２Ｃ
Ｈｓ　）。
（Ｂ：）、　　２′，３′−ジデオキシ−２’、　３’
−デヒドロ−７−デアザアデノシン（１９）の調製 亜鉛粉末（２０、ｌｉ’　、　Ｍａｌｌｉｎｋｒｏｄｔ
　）を、ＩＮ塩酸（３Ｘ５０Ｗｄｌ）、水（２ｘ５０Ｔ
Ｌｌ）、２チの硫酸銅溶液（２Ｘ５０ｍｌ）、水（４Ｘ
５（ｌｔＡ’）、エタノール（３Ｘ５０ｍＪ）、および
エーテル（２×５０−）で速やかに洗浄（要した時間は
約１０分）することによシ、新鮮な亜鉛−銅カップルを
調製した。夫々の洗浄の間、空気中への亜鉛の露出を最
少限にするために、懸濁状態になるまで亜鉛粉末をフリ
ット磁器製の漏斗中で攪拌し、洗浄液を吸引した。この
亜鉛−銅カップルを３０分間減圧乾燥した。上記で得た
粗製のブロモアセテート（１４，６３Ｆ）をドライ−ジ
メチルホルムアミド（１５０ｍＡ！　、　Ａｌｄｒｉｅ
ｈ　）中に溶解し、ｏｐリーエパポレータ（４５°Ｃ、
２ｔｏｒｒ）で略２５ｍ１の溶媒を除去した。新鮮な亜
鉛−銅カップル（１４６３ｇ。
約９ｅｑ）を加え、得られた懸濁液を屋素雰囲気下に２
５℃で攪拌した。この反応は、亜鉛−銅カップルの質に
よって誘導時間および／または異なった速度を示す。従
って、ＴＬＣ（９０：　９　：　１のジクロロメタン−
メタノール−濃水酸化アンモニワム；出発物質のＲｆ＝
０．４５．生成物のＲｆ＝０．３９゜０．３６）により
出発物質が完全に消費されたことが示されるまで、反応
を続ける。この実施例のケースの場合、反応は１５分以
内に完了した。１００分後、炭酸水素ナトリワムの飽和
水溶液（７ｓｍＪ）を、１０分間かけて注意深く反応混
合液に添加した濾過器を用いて反応混合液を濾過し、濾
過器をメタノール（２Ｘ５０ｍＡ’）で洗浄した。合体
したＦ液を乾燥されるまでエノぐポレートし、残渣ヲ水
（１５０ｍ／）と酢酸エチル（１５０ｍ）の間で分配さ
せた。水層を酢酸エチル（２×１００ｍ）で抽出し、合
体した抽出有機溶媒を硫酸マグネシワム上で乾燥し、濃
縮した後、１時間かけて減圧乾燥した。
得られた暗いオレンジ色の半固体をメタノール（ｉ　ｏ
　Ｑｍ／）中に溶解し、次いで水（２５ｍＪ）およびＲ
ＥＸＹＮ　２０１樹脂（２９Ｆ　１４．３　ｍｅｇ／＃
　ｌ　５ｅｑ　ｌ水酸化物型）を添加した。この反応混
合液を、全部で２１０分間還流した。ＴＬＣ（８５：１
３：２　　のジクロロメタン−メタノール−濃水酸化ア
ンモニウム；中間体のＲｔ＝ｏ、４ｑ、最終生成物（１
９）のＲｔ＝０．２４＞によるモニターの結果、反応は
転化率７０％で急速に停止することが示されたため、１
６５分後に追加の樹脂（２９ｇ）’！ｉ添加した。
冷却することなく樹脂ｅ濾過によシ除去し、１：１のジ
クロロメタン−メタノール（２ｘ７５ｍ）で洗浄した。
ν液を集めて乾燥するまで蒸発させ、得られた紫色の固
体を沸騰しているインプロパツール（１５９ｍＡ）から
再結晶させることによシ、オフホワイト色の針状結晶（
ｍｐ　２０２２０３　）として３．７７１／のオレフィ
ン１９が得られた。母液を２５ｍ１に濃縮することによ
り、生成物（青紫色の針状結晶；　ｍｐ　２０２−２０
３　）の第二の収穫０．６３１１！が得られた。両者の
収穫物（全部で４．４０９Ｆ。
７６％）は均一であることがＴＬＣで示され、また痕跡
量のインプロパツールの存在を除いて純粋であることが
ＮＭＲで示された。
”Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６中）　：　８．０７（ｓ
、ｉＨ，）Ｉ２）、７．１５（ｄ、Ｊ＝３．７．ＩＨ，
Ｈ８）、７．１２（ブロードｓ　、　ＩＨ，Ｈｆ）、７
．０１（ブロードｓ　、　２Ｈ＋　ＮＨ２）、６．５７
（ｄ　、Ｊ＝３．６　、１）１゜Ｈ７）、６，６４と６
．０２　（ブロードｄ、Ｊ＝６．０．夫ｈ　ＩＨ。
Ｈ２’とＨ３′）、４．ｑｓｔｔ、Ｊ＝６．５，１ａ、
ｓ’ｏｎ）、４．７９　（ｍ　。
ＩＨ，Ｈ４’）、３．５２　（ｍ　、２　Ｈ＃　Ｈ５’
　）。
（Ｃ）、　　２′，３′−ジデオキシ−７−デアザアデ
ノシン（２０）の調製 ４５０ｒｆＬｌのパールトトル（Ｐａｒｒ　Ｂｏｔｔｌ
ｅ　）中に、オレフィン１９（３，８０１，エタノール
（７６ｍ／）。
炭素を担体とした１０％パラジワム（３８０，９゜Ａｌ
ｄｒｉｅｂ　）を収容し、４０　ｐｓｉの水素を導入し
た。
２５℃で４．６７時間振シ混ぜることによ、９１４．６
７ｐｓｉの水素が吸収され、水素の取込みが止まった。
ＴＬＣ（８５：　１３　：　２のジクロロメタン−メタ
ノール−濃水酸化アンモニワムで二回流出；出発物質１
９のＲｈ＝０．４５．生成物２０のＲｆ＝０．４８）に
よって、単一なＵＶ−活性の生成物に完全に転化したこ
とが示された。濾過器を用いて濾過することによシ触媒
を除去し、エタノールで洗浄した。
Ｆ液から溶媒を除去し、−晩減圧乾燥することにより、
白色の泡状体として３．９８．Ｐ（１０４％）のジデオ
キシヌクレオシド２０が得られた。ＮＭＲによって、８
重量％のエタノールが存在することを除いて均一である
ことが示された（合計収量９６％）。
この物質と同様のパッチは難結晶性で、無水溶媒とのア
ゼオトロビック乾燥で極端に吸湿性となった。従って、
この物質は減圧下で約１週間保存し、ＮＭＲが５重量％
のエタノール含有量を示したときに使用した。この生成
物について観察される結晶性の欠如および分光学的特徴
は、既にロビンス（Ｒｏｂｉｎｓ　）等によってＣａｎ
、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、、　ｖｏｗ、　５５　＋１２５９
（１９７７）に報告されたものと一致していた。
’Ｈ−Ｎ典（ＤＭＳＯ−ｄ６中）　：　８．０４（ｇ、
ＩＨ，Ｈ２）、７．３３（ｄ、Ｊ＝３．６．ＩＨ，Ｈ８
）、６．９７　（ブロードｓ　ｒ　２Ｈ＋ＮＨ２）、６
．５６（ｄ、Ｊ＝３．６．ＩＨ，Ｈ７）、６．３４（ｄ
ｄ、Ｊ＝５．２と６．４、ｘＨ，ａ１′）、４．９６（
ｔ、Ｊ＝５．６．ＩＨ，５’ＯＨ）、４．３３　（ｔ　
。
Ｊ＝５．１，０．４３Ｈ，エタノールＯＨ）、４．０４
（ｍ、ＬＨ，Ｈ４’）、３．４−３．６　（ｍ　、　２
．８６Ｈ、Ｈ５’とエタノールＣＨ２）、２．３３と２
．２１と２．０２（ｍ、４Ｈ，Ｈ２’とＨ３′）、１．
０６　（ｔ　、　Ｊ＝７．０　。
１．３Ｈ，エタノールＣＨ５）。
［：Ｄ）、　　７−ヨード−２’、　３’−ジデオキシ
−７−デアザアデノシン（２１）の調製 純度９５％のジデオキシヌクレオシド２０（２，９５Ｅ
ｌ　、　１１．９６ｍｍｏｌ　）溶液、無水酢酸ナトリ
クム（４，１３、！ｉ’　、　５０．３ｍｍｏｌ　、　
４ｅｑ）および酢酸水銀（３，８１ｇ＋　１１．９５ｍ
ｍｏｌ　、　１．０Ｏｅｑ　、Ｆｉｓｈｓｒ。
９９．９％）を水（１ｓｏｍＪ）中に加え１機械的に攪
拌した溶液を窒素雰囲気下に６５℃で２時間加熱した。
得られた水銀性の白色懸濁液を２５℃にまで冷却した後
、ヨードＣ４，９７１１、１８，９ｍｍｏｌ。
１．６ｅｑ）および酢酸エチル（１９０ｍ７）を添加し
た。１時間後、懸濁された水銀剤は消費され、透明な紫
色の溶液が残った。２時間後、硫化ナトリラム（６，３
５ｇ）を添加すると、紫色が消失した。
３０分間の攪拌稜、反応液中に硫化水素ガスを１５分の
間接やかにバブリングさせた。硫化水銀（黒色コロイド
）およびヨウ化物２１　（白色粉末）が反応液から沈澱
した。二つの主なＵＶ−活性スポットのうちの一つの消
失をモニターすることによシ、水銀（Ｉｔ）の完全な沈
澱を確認した。反応溶液は濾過器を用いて濾過され、二
層に分離された。沖過器は、生成物がもう抽出されない
ことがＴＬＣで示されるまで、沸騰している酢酸エチル
（ｑｘ１００＋＋＋ｌ）で洗浄された。夫々の酢酸エチ
ル抽出液を水層で洗浄した。合体した酢酸エチル層を硫
酸マグネシウム上で乾燥し、干上がるまで蒸発させた。
得られた粗製の固体は、空気中に露出されると赤色に変
化した。この物質を３：１のジクロロメタン−メタノー
ル（１００ｍＪ）に溶解し、遊離塩基型のＡＣ３Ｘ４Ａ
陰イオン交換樹脂（５，０ｇ　、　ＢｉｏＲａｄ　。
２、９　ｍｅｑ　／　ｆｉ乾燥状態）を添加した。この
赤色溶液中に硫化水素を１０分間バブリングしたところ
、赤色が脱色された。単時間加温することによシ僅かな
曇りを除去し、溶液をシリカゲルの２　ｃｒｒＬ７’ラ
グを通して速やかにＥ過した。シリカダルを３：１のジ
クロロメタン−メタノール（１００ｍＪ）ｋ追加して洗
浄した。シリカゲル（５０，Ｐ）をｒ液中に添加し、硫
化水素ガスを１ｏ分間バブリングした。ロータリーエバ
ポレータを用いてこの混合液から溶媒を除去し、またク
ロロホルム（２００ｒＬｌ）と共に蒸発させることによ
ってシリカダルを乾燥した。このシリカゲルを、窒素気
流で脱ガスされたシリカゲルカラム（５００ｍ）上に速
やかに載置した。窒素流下に、５％（６Ｌ）および１０
％（４Ｌ）の沸騰しているジクロロメタン中メタノール
溶液で溶出することにより、白色粉末状のヨウ化物２．
９２　ｇと、４５６ダ（７，５％）よシ少ない極性の７
，８−ショート−２’　、３’−ジデオキシ−７−デア
ザアデノシンを得た。主生成物を沸騰している酢酸エチ
ル（２００ｄ）から再結晶することにより、２．６２６
　ｇの白色針状結晶（ｍｐ１５８−１６０℃）が得られ
た。母液を１０−にまで濃縮することによシ、第二の収
穫物として明赤色針状結晶（ｍｐ　　１５６１５８°Ｃ
）が得られた。ＮＭＲおよびＴＬＣによれば両者の収穫
物共に均一であり、共にオレフィン１９からヨヮ化ヌク
レオシド２１への、オーバーオールで６４％の収率を示
した。
’　Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ　６中）　：　８．０９
（＠、ＩＨ，Ｈ２）、７．６７（ｇ、ＩＨ，Ｈ８）、４
．９５　（ｔ　、　Ｊ冨５．５　、　ＩＨ、５’ＯＨ）
、４．０４（見掛は上の７重線、　Ｊ＝３．５　、　Ｉ
Ｈ，Ｈ４’）、３．５９と３．４９（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’
）、２．３０と２．２８と２．２０（ｒｎ、４Ｈ，Ｈ２
’とＨ３′）。
（Ｅ：３．７−（３−）リフルオロアセタミド−１−プ
ロピニル）　−２′，３′−ジデオキシ−７−デアザア
デノシン（５２）の調製 ヨウ化物２１　（７２０，３＃、　２．ＯＯｍｍｏｌ　
）を、Ｎ−グロノ９ルギルトリフルオロアセトアミドと
９０分間結合し、続いて実施例ＩＣに示した標準的な処
理を行なった。ジクロロメタン中の７係メタノール溶液
でのクロマトグラフィーにより、オフホワイト色の粉末
として７０５．８■の結合生成物５２（９２％）が得ら
れ、ＮＭＲおよびＴＬＣによれば該生成物は均一であっ
た。沸騰している酢酸エチル（ｌＱｌｎｌ）から再結晶
させることにより、３７２■の白色微結晶（ｍｐ　１６
９−１７１°Ｃ）が得られた。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６中）：　１０．１（歪ん
だｔ、ＩＨ。
ＮＨＴＦＡ　）、８．１０（ｇ　、　ＩＨ，Ｈ２）、７
．７８（ａ、ＩＨ，Ｈ８）、６．０−７．５　（非常に
ブロードなｇ　ｌ　２　ＨＩ　Ｎ　Ｈ２）、６．３４（
ｄ　ｄ　、　Ｊ＝４．５と７．ｏ、１ａ、Ｈ１′）、４
．９８　（ｔ　、　Ｊ＝５　、　ＩＨ。
５’０Ｉ（）、４．３１（僅かにブロードなｓ　ｒ　２
　Ｈ、−ＣＨ２Ｎ　−）、４．１０（見掛は上の７重線
、　Ｊ＝３．５　、１）（、Ｈ４’）、３．６０と３．
４０（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’）、２．３７と２．１８と２．
００（ｍ１４ＨＩＨ２’とＨ３′） ＴＬＣ（９０：　９　：　１のジクロロメタン−メタノ
ール−濃水酸化アンモニウム：ＵＶ）：出発物質である
ヨウ化物（２１）　（７）　Ｒｆ　＝　０．３６　、生
成物（呼）のＲｆ＝０．２６゜ ＣＦ３．７−（３−アミノ−１−プロピニル）−２′，
３′−ジデオキシ−７−デアザアデノシ７５′−トリホ
スフェート（５１）の調製 アルキルアミノヌクレオンド５２　（１，ＯＯｍｍｏｌ
　）を対応する５′−トリホスフェートに転化し、トリ
フルオロアセチル基を除去し、続いて実施例ＩＥに示し
た一般的処理を行なった。オキシ塩化リンの第二アリコ
ート’を添加した後、溶液を１２０分間攪拌した。生成
物の吸収係数が出発物質のそれ（１２，７００）　に等
しいと仮定して、７２９．５ｎｍにおける吸収に基づく
トリホスフェート５１の収量は、４０％であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２０中）　：　７．９７（ｓ、ＩＨ，
Ｈ２）、７．８０（ｓ。
ＩＨ，Ｈ８）、６．３３（ｍ、ＩＨ，Ｈｆ）、４．４４
（ｍ、ＩＨ，Ｈ４’）、４．２７（ｍ　、　ＩＨ、Ｈ５
’ａ）、４．１４（ｍ　、　ＩＨ，Ｈ５’ｂ　）、４．
１１（ブロードｇ　＋　２　Ｈ、−ＯＨ２−）、２．６
−２．０（ｍ　、　４Ｈ、Ｈ２’とＨ３′）、これらに
加えて対イオン（トリエチルアンモニワム）のピーク。
３１Ｐ−ＮＭＲ（Ｄ２０）　：　−８，５９（ブロード
ｄ　、Ｊ＝２０゜ＩＰ）、２１．３８（ｍ、ＩＰ） ＵＶ（ｐＨ８，２のＴｒｉｓ溶液）：２３８ｎｍ　及び
２、７９．５　ｎｍに極大吸収。
実施例４ ７−ヨード−２’　、３’−ジェトキシ−７−デアザア
デノシン（２１）の調製：（化合物２１は実施例４で調
製し、使用した中間体である） ［：Ａ）、　　６−クロロ−２−メチルチオ−９−（２
−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシン）−７−デアザプ
リン（２３）の調製 メタノール（２１０ｍ１）及び濃水酸化アンモニワム（
２１０ｍｌ）を、ジクロロメタｙ（２１０ｍｌ）中の６
−クロロ−２−メチルチオ−９−（３，５−ジ−ｏ−ｐ
−トルイル−２−デオキシ−６−Ｄ−りがフラノシル）
−７−デアザプリン（２２、２６，８、！ｉ’　；　Ｊ
−Ａｍ、Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　ｖｏｗ、　１０６　
、６３７９（１９８４）に記載された方法に従って調製
した）に加えた。
得られた混合液を室温で５日間攪拌し、溶媒を完全にエ
バポレートさせた。残渣をエタノールとコエパポレート
させて乾燥した。粗生成物をジクロロメタン中に溶解し
、放置したところ、無色の結晶が沈澱した。沈澱物を集
め、エーテルで完全に洗浄することにより、１４．５Ｉ
Ｉ（７９，１％）のジオール２３（ｍｐ　ｄ　１９０−
１９２°Ｃ）が得られた。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：　２．２６と２．
５５　（ｍ　、　２Ｈ、Ｈ２’）。
２．５７　（ｓ　、３　Ｈ、Ｓ　Ｃ＝、　）、３．５４
（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’）、３．８４（ｍ。
ＩＨ，Ｈ３’）、　４．３７（ｍ、　ＩＨ，Ｈ４’）、
４．９５（ｍ、　ＩＨ，ＯＨ）、５．３４（ｍ　、　Ｉ
Ｈ，ＯＨ）　、　６．５７（ｍ、　ＩＨ，Ｈｆ）、６．
６３（ｍ。
ＩＨ，Ｈ７）、７．８０（ｍ、ＩＨ，Ｈ８）。
とのＮＭＲデータは、上記のようにして調製されたジオ
ール２３の異なったバッチから得られたものである。
（Ｂ）、　　６−クロロ−２−メチルチオ−９−（５−
Ｑ　−トＩＪ　フェニルメチル−２−デオキシ−β−Ｄ
−リボフラノシル）−７−デアザプリン（２４）の調製 ジオール２３（１４，５ｇ）′ｆ、、ドライ−ピリジン
と共にコエパヂレートした。塩化トリフェニルメチル（
１６，９）、４−（ジメチルアミノ）ビリジｙ（６００
１ｎｇ）及びトリメチルアミｙ（８，０ｍ）を、ドライ
−ピリジン（２００ｍ／）中のドライ−ジオール溶液に
加えた。反応混合液を６５℃において窒素雰囲気下に６
時間授拌した後、追加の塩化トリフェニルメチル（２，
０，Ｐ）及びトリメチルアミン（１，Ｏｍｒ）を添加し
、１７時間加熱を継続した。冷却後、メタノール（３ｍ
ｌ）　を添加し、反応混合液を干上がるまでエバポレー
トした。残渣をジクロロメタンと０．３Ｎ塩酸水溶液と
の間で分配させた。有機層を炭酸水素す）　ＩＪワム水
溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリヮム上で乾燥した
後、干上がるまでエバポレートさせた。得られた粗生成
物について、１％及び１．５％のメタノール（ジクロロ
メタン中）を用いてシリカダル上でクロマトグラフィー
を行なったところ、ガラス状の固体として２２．７ｇ（
８８，６％）のモノトリチルエーテル（ｍｏｎｏ　ｔｒ
ｉｔｙ］　ｅｔｅｒ）　２４が得られた。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ２３）　：　２．４８と２．６０
（ｔｎ、　２Ｈ，Ｈ２’）、２．５９　（ｓ　、３　Ｈ
、Ｓ　Ｃ３）、３．４０（ｍ、２）１．Ｔ（５’）、４
．０８　（ｒｎ　。
ＩＨ，Ｈ３’）、４．６１（ｍ、ＩＨ，Ｈ４’）、６．
４３（ｍ、　ＬＨ，Ｈ７）、６．６８（ｍ、’ｌ）（、
Ｈ１’）、７．２−７．５（ｒｎ、１６Ｈ，Ｉ・リチル
ＨとＨ８）。
とのＮＭＲデータは、上記のようにして調製された２４
の異なったパッチから得られたものである。
Ｃ，６−クロロ−２−メチルチオ−９−（５−０−トリ
フェニルメチル−２，３−ジデオキシ−β＋　Ｄ−ＩＪ
ボフラノシル）−７−デアザプリン（２５）の調製 ４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１６，５ｇ）および
フェニルクロロチオノカルボネートをトリチルエーテル
２４の無水ジクロロメタン溶液（３００１ｒＬｌ）に添
加した。室温で窒素の存在下で反応溶液を２．２５時間
攪拌した後、ジクロロメタン（２００ｄ）を加えた。溶
液を、０．５Ｎ塩酸（７ｏｏ＋＋＋ｌ）、０．５Ｎ水酸
化ナトリウム（７００Ｔｎｌりおよび食塩水で洗浄した
。有機層を過量の硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固
した。
得られた粗製チオカルボネートを無水トルエン（４５０
ｍｌりに溶解し、加熱して穏やかに還流させた。アゾイ
ソビスブチロニトリル（６００■）および水素化トリー
ｎ−ブチルチン（１７，７１ｎｌ）を添加した。溶素の
存在下で還流時に１５分間攪拌した後、さらに水素化ト
リーｎ−ブチルチン（２，０ｒＬｌ）を添加し、反応液
をさらに１５分間還流させた。冷却後、反応液をエーテ
ル（２０ＱｍＡりで希釈し、１０％フッ化カリウム水溶
液（５００ｍｆｆｌ）、０、７５　Ｎ水酸化カリウム（
５００ｍＡりおよび食塩水で洗浄した。過剰の硫酸ナト
リウムで乾燥させて濃縮した後、得られた粗生成物を２
：１ジクロロメタン−エーテルおよびジクロロメタンを
用いてシリカダル・クロマトグラフィーにかけることに
よ＃）１０．１４のジデオキシヌクレオチド２５を得た
。不純物の分画を集めて再度クロマトグラフィーにかけ
ることによシ、さらに３．７６１１の純生成物を得た。
これらを合せて、２５を無色の固体（ｍｐ、１４０−１
４２．５）として１３．９　、Ｆ　（６３，０％）得た
。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：　２．１１．２，３６
、および２．４６　（ｍ　。
４Ｈ，Ｈ２’およびＨ３′）、２．６０（８，３Ｈ９Ｓ
ＣＨ３）、３，３３（明瞭なｄ　、　Ｊ＝４，２Ｈ，Ｈ
５’）、４．３２（ｍ　、　ＩＨ，Ｈ４’）、６．３９
（ｄ　、Ｊ＝３．７．ＩＨ，Ｈ７）、６．５２（ｄ　ｄ
　、　Ｊ＝６．７および３．７　、　ＩＨ、ａｔ）、　
７．２５および７．４５（ｍ、１５Ｈ，）リチルＨ）、
７．３２（ｄ、　ＩＨ，Ｊ＝３．７．Ｈ８）。
このデータは、上述のように調製された２５の異なった
群から得られたものである。
Ｄ、　　６−クロロ−２−メチルチオ−９−（２′，３
′　−ジデオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−７−デ
アザプリン（２６）の調製 １：１メタノール−ジクロロメタン（１００ｍ／）にト
リチルエーテル２５（７，５８ｇ）を溶解したものにト
リフルオロ酢酸（１０ｍｌ）−１添加し、溶液を２５°
Ｃで窒素の存在下において１７時間攪拌した。反応溶液
はジクロロメタン（５００ｍｌ）と重炭酸ナトリウム水
溶液に分配し、水性層はジクロ・　　ロメタンを用いて
再抽出した。有機層を集めて過剰の硫酸ナトリウムで乾
燥し、蒸発乾固した。残留物ヲ、ジクロロメタン中に０
％および５％のメタノールを混合させた溶液を用いてシ
リカダル・カラムクロマトグラフィーにかけることによ
シ、ヌクレオチド２６を厚い無色のガラス状物質として
４．０７ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：　２．１６．２．２６
、および２．５０（ｍ。
４Ｈ，Ｈ２’およびＨ３′）、２−６３　（ｓ　、３　
Ｈ、Ｓ　ＣＨ３）、２．７６（広いｓ　、ＬＨ，ＯＨ）
、３．６７および３．９３（ｍ、２ａ、ａｓ’）、４．
２７（ｒｎ、　ＩＨ，Ｈ４’）、６．３８　（ｄ　ｄ　
、　Ｊ＝６．７および５．２Ｈｚ。
ＩＨ９Ｈ１′）、６．５１（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、ＬＨ
，Ｈ７）、７．２６（ｄ。
１）Ｌ　Ｊ＝３．７Ｈｚ　、Ｈ８）。　このデータは、
上述シタヨうに調製された２６の異なった群より得られ
た。
Ｅ、　　２′，３′−ジデオキシ−２−メチルチオ−７
−デアザアデノシン（２７）の調製 メタノール（５０ｍＪ）に塩化物２６　（１，８：ｌ　
）を溶解した溶液をガラスを内張シしたボンベに入れ、
アンモニアを滴下した。溶液をオートクレーブにおいて
１００°で１５時間加熱した。冷却後、反応溶液を蒸発
乾固した。得られた粗生成物を、ジクロロメタンに０１
，３％および５％のメタノールを混合した溶液を用いて
シリカゲルによって生成することにより、デアザアデノ
シン２７を無色の固体（ｍｐ、１８４１８５°）として
１．２７　＃　（８０，４％）得た。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：　２．旧、２．２
１および２．３９　（ｍ　。
４Ｈ，Ｈ２’およびＨ３′）、２．４５　（ｓ　、３　
Ｈ、Ｓ　ＣＨ３）、３，５０（ｍ　、　２Ｈ、Ｈ５’）
、４．０２（ｍ　、　ＩＨ，Ｈ４’）、４．８３　（ｔ
　、　Ｊ＝５．５　。
Ｉ）（，５’ＯＨ）、６．３２（ｄｄ　、　Ｊ＝７およ
び４．５、ＩＨ２Ｈ１′）、６．５０　（ｄ　、　Ｊ＝
３．７、ＩＨ，Ｈ７）、７．０７（広いｓ　、　２ＨＩ
ＮＨ２）、７．０２（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝３．７．Ｈ８）。
Ｆ、　　２′，３′−ジデオキシ−７−デアザアデノシ
ン（２０）の調製 ６００■の２７および過剰のラニーニッケル（アルトリ
ッヒ（Ａｌｄｒｉｃｈ）、水およびメタノールで洗浄済
み）の混合物を、窒素の存在下で、ＴＣＬが出発物質の
消失を示すまで（６時間）還流する。熱い溶液をろ過し
、ろ過助剤およびろ集したラニーニッケルをメタノール
で洗浄した。集めたろ液の溶縛を留去させることによシ
、２０を実施例４Ｃで調製した物質と同一の無色のガラ
ス状固体として４２４ｇ（８４，９係）得た−０ Ｇ、　　７−ヨード−２′，３′−ジデオキシ−７−デ
アザアデノシン（２１）の調製 ジデオキシ−７−デアザアデノシン２０を下記の実施例
４Ｄで刀えられる手法によりヨウ素化した。
実施例　６ ツーヨード−２’、　３’−ジデオキシ−７−デアザア
デノシン（２１）の第３の製造 （化合物２１は実施例４で製造し、用いた中間体である
。） Ａ、　　６−クロロ−９−（２−デオキシ−β−Ｄ−リ
ボフラノシル）−７−デアザプリン（２９）　　の製造 濃水酸化アンモニウム（１００ｍ７）のメタノール（１
７４ｄ）溶液を、６−クロロ−９−（３，５−ジー０−
ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−りがフラノシ
ル）−７−デアザプリン（２８，１０、Ｏｌｌ、Ｋａｚ
４ｍｉｅｒｃｚｕｋ他Ｊ、　Ａｍｅｒ　、　Ｃｈｅｍ、
　Ｓａｃ　。
１０６巻、６３７９（１９８４）に記載されている通り
に製造）のジクロロメタン（１００ｍＪ）ｉ液に加えた
。この混合物を２５℃で２４時間攪拌した後、濃水酸化
アンモニウム（５ｏｄ）をさらに加えた。全部で５日間
攪拌した後、反応混合物を蒸発乾固し、粗生成物をエタ
ノールとともに共蒸発に供した。残渣をジクロロメタン
中に溶解し、所望生成物を結晶化させた。ろ過および乾
燥によシ、４．９０Ｆ（９２％）のヌクレオシド２９を
無色結晶として得た（融点１５５．５〜１５８．５℃）
。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：　２．３０および
２．５５　（ｍ　、　２Ｈ、Ｈ２’）、３．５８（ｍ、
　２Ｈ，Ｈ５’）、３．８５　（ｍ　、　ＩＨ、Ｈ３’
）、４．４０（ｍ、ＩＨ＊Ｈ４′）、４．９７（ｍ、　
ＩＨ，ＯＨ）、５．３５（ｍ、　ＩＨ，Ｈ３’）、６．
６５（ｍ　、Ｉ　Ｈｐ　Ｈ１′）、６．７５（ｄ　、　
ＩＩ（、Ｉ（７）、８．００（ｍ、　ＩＨ，Ｈ８）、８
．６５（ａ　、　ＩＨ，Ｈ２）。このデータは上記した
通りに製造した２９の異なるパッチのものから得たもの
でおるＯ Ｂ、　　６−クロロ−９−（５−０−）ジフェニルメチ
ル−２−デオキシ−β−Ｄ−りぎフラノシル）−７−デ
アザプリン（３０）の製造 ヌクレオシド２９（２，５ｇ）を乾燥ピリジンとともに
共蒸発させることによシ乾燥した。残渣を乾燥ピリジン
（４９ｍＪ）中に溶解し、トリフェニルメチルクロリド
（２，５ｇ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１２
０■）およびトリエチルアミン（１，６ｄ）を加えた。
この反応混合物を６５℃で４時間窒素下に攪拌した。ト
リフェニルメチルクロリド（１，０ｇ）およびトリエチ
ルアミン（０，６づ）をさらに加え、反応を７５°Ｃで
１８時間おこなった。冷却後、メタノール（２ｄ）を加
え、その混合物を蒸発乾固させた。残渣をジクロロメタ
ンおよび０．５Ｎ塩酸の間に分配させた。有機層を炭酸
水素ナトリウム水溶液およびプラインで洗浄し、硫酸ナ
トリウム上で乾燥し、蒸発乾固させた。ジクロロメタン
中メタノールの０チ、１．５％および３％溶液を用いシ
リカダルクロマトグラフィーによｆｉ　２．２６１１の
トリチルエーテル３０をガラス様固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：　２．４６および２．
６５（ｍ、２Ｈ，Ｈ２’）、３．４０（ｍ、２Ｈ，Ｈ５
’）、４．１０（ｍ　、　ＩＨ，Ｈ３’）、４．６５（
ｍ、ＩＨ。
Ｈ４′）、６．５５（ｄ、ＩＨ，Ｈ７）、６．７２（ｒ
ｎ、ＩＨ，Ｈ１’）、７．２−７．５（ｍ、１６Ｈ，）
リチルＨおよびＨ８）、および８．６０（ｓ。
ＩＨ，Ｈ２）。
Ｃ，６−クロロ−９−（５−０−）リグニルメチル−２
−デオキシ−３−チオノカルがフェノキシ−β−Ｄ−り
がフラノシル）−７−デアザプリン（３０ａ）の製造 ４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１，３５ｇ）および
フェニルクロロチオカーボネート（１，２０ｄ）を、ト
リチルエーテル３０の乾燥ジクロロメタン（３ｏＴｒＬ
ｌ）溶液に加えた。この反応混合物を窒素下、２５℃で
２時間攪拌した後、ジクロロメタン（２ｏｎｅ）をさら
に加え、この溶液を０．５塩酸、０．５Ｎ水酸化ナトリ
ワムおよびプラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリワ
ム上で乾燥し、蒸発乾−１３← 固させた。残渣をジクロロメタン−エーテルでトリチュ
レートしたところ、１．５３１！（７６％）のチオカー
がネート３０ａを無色結晶として得た（融点１８６．５
−１８８．５°Ｃ） ’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：　２．８５および３．
００（ｍ、２Ｈ，Ｈ２’）、３．５５（ｍ、　２Ｈ，Ｈ
５’）、４．５０　（ｍ　、Ｉ　Ｈｅ　Ｈ４’　）、６
．００（ｍ、ＩＨ。
Ｈ３′）、６．６０　（ｄ　、　ＩＨ，Ｈ７）、６．８
５（ｍ、　ＩＨ，Ｈｆ）、７．１−７．５（ｍ、２０Ｈ
，）リチルおよびフェニルＨ）、７．５０（ｄ。
ＩＨ，Ｈ８）および８．６０（ｓ、ＩＨ，Ｈ２）。
Ｄ、　　６−クロロ−９−（５−０トリフェニルメチル
−２，３−ジデオキシ−β−Ｄ−１７ポフラノシル）−
７−ジアザグリｙ（３１）の製造チオカーざネート３０
ａ　（１，２１）、アゾインビスブチロニトリル（５０
１９）およびトリーｎ　−ブチルスズ水素化物（０，６
０１ｎｌ）の乾燥トルエン（５０ｄ）溶液を窒素下１１
０℃で１５分間熱した。冷却後、この反応混合物をエー
テル５０ｍ１で稀釈し、１０％フッ化カリワム水溶液（
５０ｍＪ）およびプラインで洗浄した。有機層を硫酸ナ
トリウム上で乾燥し、蒸発乾固させた。得られた粗生成
物を、ジクロロメタン中Ｏ％および１．５チメタノール
を用いたシリカゲルクロマトグラフィーによｐｏ、８４
ｇ（９２ｑｂ）のジデオキシヌクレオシド３１を無色固
体として得た（融点６０−６３．５°Ｃ）。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ／！、、）：　２．１１．２．３
６および２．５０（ｍ、４Ｈ。
Ｈ２’およびＨ３′）、３．３７（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’）
、　４．３５（ｍ、ＬＨ。
Ｈ４′）、６．５０（ｄ　、Ｊ＝３．７　、　ＩＨ，Ｈ
７）、６．５８（ｄｄ　、ＩＨ，Ｈ１′）、７．２５お
よび７．４５（ｍ＋１５Ｈ，トリチルＨ）　、　７．５
５（ｄ　。
ＩＨ、Ｊ＝３．７　、　Ｈ８）および８．６０（ｓ　、
　ＩＨ，Ｈ２）。
Ｅ、　　６−クロロ−９−（２，３−ジデオキシ−β−
Ｄ−リボフラノシル）−７−デアザプリン（３１ａ　）
の製造 トリフルオロ酢酸（１，５ｍＡ’）をトリチルエーテル
３１（７００ｒＲ９）の１＝１メタノール−ジクロロメ
タン（２０ｍＡ’）溶液に加えた。窒素下、２５°Ｃで
１７時間攪拌した後、炭酸水素す）　＋Ｊワム（１，５
ｇ）を加え、その混合物を３０分間攪拌した。この反応
混合物をろ過し、蒸発乾固させた。得られた粗生成物を
ジクロロメタン中メタノール０％および２壬溶液を用い
たシリカゲルクロマトグラフィーによシ３００■（８４
チ）のアルコ−／Ｉ／郷を無色ガラスとして得た。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：　２．２０．２．４０
および２．６５（ｍ、４Ｈ。
Ｈ２’およびＨ３′）、３．６５および４．００（ｍ、
２Ｈ，Ｈ５’）、　３．９５（幅広ｓ　＋　Ｉ　Ｈｌ　
ＯＨ）、４．３５　（ｍ　、　Ｉ　Ｈ、Ｈ４′）、６．
２８（ｄｄ。
ＩＨ，）（１’）、６．６２（ｄ、、ｒ＝＋、　ＩＨ，
Ｈ７）、　７．４ｏ（ｄ、ＩＨ。
Ｊ＝４　、　Ｈ８）および８．６５（ｓ　、　ＩＨ，Ｈ
２）。
Ｆ、　　６−クロロ−９−（５−アセトキシ−２，３−
ジデオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−７−デアザプ
リン（３２）の製造 無水酢酸（２，０ミＩ７モル）をアルコール３１ａ（２
８４■）の乾燥ピリジン（１０ｍＡり溶液に加えた。こ
の溶液を２５°Ｃで１．２５時間攪拌した後、メタノー
ル（１０ｍ／）を加えた。さらに３０分間攪拌後、この
反応混合物を蒸発乾固させた。残渣をジクロロメタンに
溶解し、その溶液をＩＮ塩酸（２ｘ）およびプライン（
１ｘ）で洗浄した。有゛　機層を硫酸ナトリウム上で乾
燥し、蒸発乾固させて２９５■（８９’ｌ）の粗アセチ
ートリを無色ガラスとして得た。
’　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ／−、）　：　２．０７　（ｓ
　、３　Ｈ、アセチル）、２．２０゜２．４５および２
．５５（ｍ、　４Ｈ，Ｈ２’およびＨ３′）、４．２５
および４．３５（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’）、４．４０（ｒｎ
、ＬＨ，Ｈ４′）、６．５５（ｄｄ。
ＩＨ，Ｈ１’）、６．６５（ｄ、ＩＨ，Ｈ７）、７．５
０（ｄ、ＩＨ，Ｈ８）および８．６０（ｇ、ＩＨ，Ｈ２
）。
Ｇ、　　６−クロロ−７−ヨード−９−（５−０−アセ
チル−２，３−ジデオキシ−β−］）　−ＩＪ　＆フラ
ノシル）−７−デアザプリン（３３）のＨ造−塩化ヨー
素（３４０＃）のジクロロメタン（約ＩＴ／Ｌｌ）溶液
をアセテート３２（２００■）溶液に加えた。２５℃で
３時間攪拌した後、反応混合物をジクロロメタンおよび
亜ニチオン酸ナトリウム水溶液の間に分配させた。有機
層を炭酸水素ナトリウムおよびプラインで洗浄し、硫酸
ナトリウム上で乾燥し、蒸発乾固させた。残渣をジクロ
ロメタン−エーテルでトリチュレートして無色結晶１３
５■（４７チ）を得た（融点１３２．５−１３４℃）。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ４３）　：　２．１０．２．４０
および２．５５　（ｍ　、４　ＨｍＨ２’およびＨ３′
）、２．１７　（ｓ　、　３Ｈ、Ｃ０Ｃ）（３）、４．
２７および４．３７（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’）、４．４０　
（ｍ　、Ｌ　Ｈ＊　Ｈ４）、６．５５（ｄｄ。
ＩＨ，Ｈｆ）、７．７２（ｓ　、ＩＨ，Ｈ８）および８
．６０（ｓ、ＩＨ。
Ｈ２）　　。
Ｈ，７−ヨード−２′，３′−ジデオキシ−７−デアザ
アデノシン（２１）の製造 ガラス内張りしたがンペ内で、アンモニア（４ｙ）をク
ロリド３３（１２５■）のメタノール（２０ｄ）溶液に
加えた。このゴンペをオートクレーブ中１００℃で３時
間熱した。冷却後、反応混合物を蒸発乾固させた。残渣
を熱酢酸エチルに溶解し、その熱溶液をろ過動剤のパッ
ドを通してろ過した。
ろ液を蒸発乾固した後、残渣をエーテルでトリチュレー
トしてやや不純な生成物２１（８５■）を無色結晶とし
て得た。この生成物を、ジクロロメタ７９５％メタノー
ル溶液を用いたシリカダルＴＬＣによりさらに精製した
ところ６７９（６３％）のアイオダイド２１を無色固体
として得た。この物質は実施例４Ｄで得たものと同一の
ものであった。
実施例　７ ツーヨード−２′，３′−ジデオキク−７−デアザイノ
シン（５３）の製造 （化合物５３はＨｅｔが７−ジアザヒポキサンチン（１
）である構造４の例である） 窒素下に、デアザアデノシン２１　（７２０，３ｍ９．
２、　ＯＯミＩＪモル）の氷酢酸（２，０ｄ）中懸濁液
に水（１８ｍ１）を滴下して透明溶液を調製した。アル
イン気流を通して固体硝酸ナトリウム（１，３８，９，
２０，０ミリモル、１０当量）を１０分間かけて小パッ
チづつ加えた。得られた曇った反応混合物をアルゴン下
に機械的に攪拌したところゴム状沈澱が徐々に生成した
。１８時間後、反応混合物をろ過し、沈殿を酢酸エチル
（：ｔｏｏｙ）および水（約１０−）で充分に洗浄した
。併せたろ液を分配させ、水相を酢酸エチル（２Ｘ５０
ｄ）で抽出した。併せた有機層を硫酸マグネシウム上で
乾燥し、蒸発乾固させた。ＴＬＣにより、沈殿と酢酸エ
チル抽出物の双方が生成物５３からなり、５チ未満の未
反応２１で汚染されていた。両ノＺツチの生成物を１：
１メタノール−ジクロロメタンに溶解し、それを併せ、
シリカゲル（７ｇ）上に蒸発させた。
シリカゲルをクロロホルム（５Ｑｍ７１りと共蒸発させ
、シリカダルカラム（５０ｇ）上に置いた。ジクロロメ
タン中８チメタノールで流出させたところ、５５８．３
■（７８％）のデアザイノシン５３を淡黄色固体として
得た。この物質を沸騰するインプロパツールから再結晶
させることによりそれぞれ白色針状晶小を得た。これら
針状晶は分解を伴ない２００°Ｇないし２１０℃間で変
化する融点を示した。クロマトグラフ精製し再結晶した
生成物は、ＴＬＣおよびＮＭＲにより、インゾロパノー
ル（５モル係）の存在を除き均質であった。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　＋　１２．０４　　
（幅広ｓ　、ＩＨ，Ｈｌ）。
７．９３（ｓ、ＩＨ，Ｈ２）、７．５６（ｓ　、　ＬＨ
，Ｈ８，）、６．２９（ｄｄ。
Ｊ　＝　４．０および６．ｓ、ＩＨ，Ｈ１′）、４．９
４（ｔ、Ｊ＝５．０．ＬＨ。
５’ＯＨ）、４０４（見掛は上の７重線、　、Ｔ＝３．
５　、　ＩＨ，ａ４′）、２．３６　、２．１８および
１．９９（ｍ、４Ｈ，Ｈ２’およびＨ３′）。
実施例　８ ５−（３−アミノ−１−プロピニル）−２′−デオキシ
シチジン５′−トリホスフェート（５４）の製造（化合
物りは、Ｒ１が−ＣＨ２−１Ｈｅｔがシトシン（１）、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７およびＲ８がＨ，Ｒ６がＯＲ、並びに
Ｒ５がＰ３０９Ｈ３−であるアルキニルアミノヌクレオ
チド（１）の例である） Ａ、　　５−ヨード−２′−デオキシシチジン（５５）
の製造 ２′−デオキシシチジン−水和物（１，２２６ｇ、５、
ＯＯミリモル、アルドリッチ）および酢酸第二水銀（１
，７５３Ｆ、　５．５ミリモル、１．１当量、フィッシ
ャー）のメタノール（３０ｍｌ）溶液を１４．５時間還
流させた。得られた白色懸濁液をメタノール（３０ｍＪ
）およびジクロロメタン（５０ｄ）で稀釈した後、ヨウ
素（１，５２２１６，００ミリモル、１，２当量）を加
えた。６０分間攪拌した後、得られた紫色溶液を脱色し
、未反応水銀物質（ｒｎｅｒｃｕｒｉａｌ　）がまだ白
色懸濁液として目で見えた。
１００分後と２４０分後に、ヨウ素（それぞれ０．３８
１　、Ｆ、　１．５ミリモル、０．３当量、および０．
１２２Ｆ、０．５０ミリモル、０．１当量）をさらに加
えた。全部で５時間後、反応混合物は透明で紫色であっ
た。フリーペース形態のＡＣ３ｘ　４Ａ樹脂（５，１７
１１，２，９ミリ当量／Ｊ）、３当量、パイオーラド）
を加えた後、硫化水素を５分間反応混合物に吹込んだ。
水銀（ＩＩ）が完全に沈殿したことがＴＬＣにより実証
された。この反応混合物をろ過助剤全通してろ過し、ろ
過動剤ｆ、１：１メタノール−ジクロロメタンで洗浄し
た。ろ液を併せ、これにシリカゲル（５Ｊｌｔ−加え、
この混合物を蒸発乾固させた。シリカゲルをクロロホル
ム（５０ｉｔ）と共蒸発させ゛、シリカゲルカラム（ｓ
ｏ、Ｆ）上に置いた。ジクロロメタン中メタノールの１
５係、２０％および３０％溶液で流出させたところ、１
．３７８．ｌｉ’（７８％）のヨードシチジン５５を白
色粉末として得た。沸騰するメタノール（３５ｒｎｌ）
から再結晶し、−夜真空乾燥したところ、白色針状晶０
．９５３．９を得た（融点１７９−１８０℃）。
母液を１０Ｔｎｌに濃縮したところ、淡黄色針状晶０．
１４０．９を得た（融点１７２−１７４°Ｃ）。痕跡量
のメタノールを除き、両方とも（全収率６２チ）　ＴＬ
ＣおよびＮＭＲによって均質であった。
’　）（−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ　ｂ　）　：　８−２
８　（ｓ　、Ｉ　Ｉ（、Ｈ６）、７．８および６．６（
幅広ｓ　、２Ｈ，ＮＨ）、６．０８（ｔ、Ｊ＝６．３．
ＩＨ，Ｈｆ）、５．２０（ｄ、Ｊ≠４　、　ＩＨ、３’
ＯＨ）、４．９０　（ｔ　、　Ｊ＝５　、　ＩＨ，５’
ＯＨ）。
４．２０（ｍ、ＩＨ，Ｈ４’）、３．７７（歪んだｑ　
、ＩＨ，Ｈ３’）、３．６０および３．５４（ｍ、ＩＪ
（、Ｈ５’）、２．１２および１．９８（ｍ、ＩＨ。
Ｈ２′）。ＴＬＣ（７５：　２０　：　５ジクロロメタ
ン−メタノール−濃水酸化アンモニワム：ＵＶ）：出発
物質、Ｒ４＝０．１５、生成物明、０．３３；水銀（■
）。
０．５４　。
Ｂ、５−（３−トリフルオロアセトアミド−１−プロピ
ニル）　−２’−デオキシシチジン（５６）　　の製造 実施例ＩＣの一般工程に従ってアイオダイド醤（３５３
，１■、１．ＯＯミリモル）を４時間Ｎ−プロパやルギ
ルトリフルオロアセトアミドにカップルさせた。ジクロ
ロメタン中メタノールの０〜２０チメタノール勾配によ
り粗生成物をクロマトグラフ精製し、−夜真空乾燥した
ところ、白色粉末３．８４ＩＩ（１０２係）を得た。こ
の物質はＴＬＣにより均質であったが、溶媒を強固に保
持していた。
この粉末を沸騰するインゾロ・ぐノール（１ｏｎ／）か
ら再結晶し、−２０℃に冷却したところ、２９９．６■
（７４％）のアルキルアミノヌクレオシド５６を白色針
状晶として得た（融点１６８−１７０８Ｃ）。ＮＭＲに
よって再結晶生成物は均質であり、結晶は生成物５６の
１分子当り０．５分子のイソプロパツールを含んでいる
ことが示された。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：　９．９６　（幅
広ｓ　、　ＩＨ，ＮＨＴＦＡ）、８．１５（ｓ、ＩＨ，
Ｈ６）、７．８３および６．８６（幅広＆　＋　２Ｈ＋
ＮＨ２）、６．１０　Ｃｔ　、　Ｊ±６．５．ＩＨ，Ｈ
ｆ）、５．２１（ｄ、Ｊ−４，５゜１）（，３’ＯＨ）
、ｓ、ｏ６（ｔ　、、ｙ＝ｓ、、１ｕ、Ｈ１′）、５．
２１（ｄ。
Ｊ　＝　４．５、ＩＨ，３’ＯＨ）、５．０６（ｔ　、
Ｊ＝５．ＩＨ，５’０Ｉ（）、４．３５（ｄ　、　Ｊ＝
４　、０．５Ｈ、インゾロパノールＯＨ）、４．２８　
（幅広ｇ　１２Ｈ，−ＣＨ２Ｎ−）、４．２０（見掛は
上の六重線、　Ｊ−３，５。
ＬＨ，Ｈ４′）、３．７９（ｍ、１．５Ｈ，Ｈ３’およ
びインゾロパノールＣＨｓ　）、３．５６　（ｍ　、２
Ｈ、Ｈ５’）、　２．１３および１．９７（ｍ、ＩＨ。
Ｈ２′）、および１．０４（ｄ　、Ｊ＝６，３Ｈ，イソ
プロパツールＣＨ）。ＴＬＣ（８５：　１３　：　２　
　ジクロロメタン−メタノール−濃水酸化アンモニワム
、２回流出；Ｕｖ）：出発アイオダイド５５　、　Ｒｆ
　＝０．３１　：生成物５６．０．２７゜ Ｃ，５−（３−アミノ−１−プロピニル）−２’−デオ
キシシチジン５′−トリホスフェート（５４）実施例Ｉ
　Ｅの一般手法に従い、アルキルアミノヌクレオシド５
６（０，２７５ミリモル）を対応する５′−トリホスフ
ェートに転化し、そのトリフルオロアセチル基を除去し
た。オキシ塩化リンをさらに加えた後、加リン酸反応を
３．５時間おこなった。
生成物の吸収係数が出発物質のそれ（８，７８０）と同
じであると仮定して、トリホスフェートの収率は、その
２９３　ｎｍにおけるＵｖ吸収に基づき、１７チであっ
た。
実施例　９ ５−（３−トリフルオロアセトアミド−１−プロピニル
）　−２’−デオキシワリジン（５７）の製造（化合物
５７は、Ｒ１が−ＣＨ２−１Ｒ２がＣ０ＣＦ３、Ｈｅｔ
がワラシル（ｂ）、Ｒ３、Ｒ５，Ｒ，およびＲ８がＨｌ
およびＲ６がＯＨであるアルキルアミノヌクレオチドＣ
Ｉ）の例である） 反応混合物を通常よりも２．５倍濃縮した以外は実施例
ＩＣの一般手法により、５−ヨード−２′−デオキシワ
リジン（７，０８Ｆ、２０．０ミリモル、アルドリッチ
）を４時間Ｎ−）リフルオロアセチルプロパルギルアミ
ンにカップルさせた。ジクロロメタ７９１０〜２０幅メ
タノールを用いてシリカダル（５００，！ｉ’）クロマ
トグラフ精製したところ、３．５０．？（４６％）（７
）フルー？ル７ミ／ヌクＬ／オシド５７を黄褐色固体と
して得た。ＮＭＲおよびＴＬＣにより、この物質は、真
空乾燥によって除去されなかったメタノール（約５０モ
ル係）の存在を除き、純度〉９５チであった。
’　Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ　６）　：　１１．６３
　（ｓ　、Ｉ　Ｈ＊　Ｈ３）、１０．０６（歪んだｔ　
、　ＩＨ、ＮＨＴＦＡ　）、８．１９（ｓ、ＩＨ，Ｈ６
）、６．１０（見掛は上のｔ　、１ｎ、Ｈｆ）、５．２
３　（ｄ　、　Ｊ＝４　、　ＩＨ、３’ＯＨ）、５．０
７（ｔ　、　Ｊ＝５　、　ＩＨ，５’ＯＨ）、４．２３
　（ｍ　、３　Ｈ、−ＣＨ２−およびＨ４′）、３．８
（見掛は上のｑ　、　Ｊ＝４．ＩＨ，Ｈ３’）、３．５
８（ｍ、２Ｈ，Ｈ５’）および２．１２（ｍ、　２Ｈ，
Ｈ２’）。
実施例　１０ ５−（５−１リフルオロアセトアミド−１−ペンチニル
）　−２′，３′−ジデオキシウリジン（５８）の製造 （化合物りは、Ｈｅｔがウラシル（ｂ）であり、Ｒ１が
−（ＣＨ２）５−である構造５の例である）Ａ、５−１
リフルオロアセドアミント−１−ペンチン（５９）の製
造 水素化ナトリウム（油中６０係懸濁液、アルファ）を、
インタンで完全かつ迅速に洗浄した後真空乾燥すること
によって油除去した。この油除去水素化ナトリウム（４
，４０！ｑ、０．１１０モル、１．１当量）を約２０部
分にわけて２５分間かけて、５−クロロ４ンチル（１０
，６ｍｌ、　０．１００モル、１．０当量）、トリフル
オロアセトアミド（１４，１３ｐ、Ｑ、１２５モル、１
．２５当量）およびヨワ素化ナトリワム（１４，９９１
１，０１００モル、１．０当量）の乾燥ジメチルホルム
アミド（２５０ｍ７）溶液に加えた。この反応混合物を
２５°Ｇで４．５時間および６０℃で２１時間攪拌した
。冷却後、反応混合物をリン酸二水素カリウム（４３，
５ｇ、０．２５０モル、２．０当量）の水（５００ｍＪ
）溶液に加えた。この溶液をペンタン（２Ｘ５００ｍｌ
）およびエーテル（３ｘ５００ｍＪ）で抽出した。有機
層を併せ、水（１ｘ１００ｍ）で洗浄し、硫酸マグネシ
ウム上で乾燥し、ロータリーエバポレーターで濃縮した
。２０ｃＩｒＬのｖｔｇｒｅｕｘカラムを通して２回分
別蒸留したところ８．０９，９（５４％）の５−トリフ
ルオロアセトアミド−１−ペンチン（５８）を無色流動
性液体として得た（沸点１３　Ｔｏｒｒで６８−６９℃
）。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：　６．７７　（幅広ｓ
　、　ＩＨ、ＮＨＴＦＡ　）、３．５３（Ｇ）、Ｊ＝６
．７および２．７　、２Ｈ、−ＣＨ２ＣＨＴＦＡ　）、
２．３１（ｔｄ、Ｊ＝６．７および２．７　、２Ｈ、Ｈ
ＣＣＣＨ２−）、２．０４（ｔ、Ｊ＝２．７．ＩＨ，Ｈ
ＣＣＣＨ２−）、および１．８３（５重線、Ｊ＝６．７
　、２Ｈ、−ＣＨ２Ｃ月、、ＣＨ２−）。
Ｂ、５−（５−トリフルオロアセトアミド−１−インチ
ニル）　−２′，３′−ジデオキシウリジン（５８）の
製造 実施例ＩＣの一般手法に従って、５−トリフルオロアセ
トアミド−１−ペンチン（５９）を４時間５−ヨード−
２′，３′−ジデオキシウリジン（４７、実施例２人に
記載した通りに製造）にカップルさせた。ジクロロメタ
ン中０〜５係メタノールを用いシリカダルクロマトグラ
フ精製したところ、６４７．７即のアルキニルアミノヌ
クレオシド５８を淡黄褐色泡状物として得た。この物質
はＴＬＣおよびＮＭＲにより、約１６モル係のジメチル
ホルムアミドの存在を除き、均質であった。ジメチルホ
ルムアミドの存在について補正した結果、所望生成物の
収率は８０係であった。
’　Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ　６　）　：　１１．５
２　（ｓ　、Ｉ　Ｈ、Ｈ３）、９．４７（歪んだｔ　、
　ｌＨ，ＮＨＴＦＡ）、５．９０（ｑ、ＩＨ，Ｈｆ）、
５．１２（ｔ　、　ＩＨ，５’ＯＨ）、４．０４（ｍ、
ＩＨ，Ｈ４’）、３．７１および３．５２（ｍ、２）Ｔ
、５’Ｈ）、３．３０（ｒｒ；、２Ｈ。
−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ旦、、ＮＨＴＦＡ）、２．４０（ｔ、
２Ｈ。
−Ｃ…２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＴＦＡ）、２．２３　、２．
０１および１．８５（ｍ　、　４Ｈ、Ｈ２’およびＨ３
′）、および１．７３　（５重線、２Ｈ１−ＣＨ２ＣＨ
２ＣＨ２ＮＨＴＦＡ）。
＝１５０− 実施例１１ ５−（１２−トリフルオロアセトアミド−１−ドデシニ
ル）　−２／、３／−ジデオキシウリジン（６０）の製
造 （化合物りは、Ｈｅｔがウラシル（ｈ）で、Ｒ１が−（
ＣＨ２）１０−である構造５の例である）Ａ、１１−ド
ブシン−１−オール（シ）の製造予備冷却された、リチ
ウムアセチリドエチレンジアミン錯体（２３，９４Ｉｌ
、０．２６０モル、１，３当量、アルドリッチ、９０％
）の乾燥ジメチルスルホキシド（ＩＱＯｍｌ）中懸濁液
に、１−ブロモ−１０−テトラヒドロピラニルオキシデ
カン（６４，２６１？、０．２００モル、ランカスター
、“９７＋チ”）を内部温度が５〜１０℃のままである
ように１４０分かけて滴下した。滴下が完了した後、冷
却浴を除去し、反応混合物を４．５時間攪拌した。この
反応混合物に水（２０７＋１Ｊ）を滴下した。１０分間
攪拌した後、反応混合物を水（３００ｍｌ）中に注いだ
。この溶液をペンタン（２ｘ３ｏｏｍＪ）およびエーテ
ル（２ｘ３ｏｏｄ）で順次抽出した。各有機層を別々に
水（約２０ｄ）で洗浄し、洗液を主水相と併せて再抽出
した。有機層を併せ、硫酸マグネシウム上で乾燥し、蒸
発乾固させたところ、粗製１２−（テトラヒドロピラニ
ルオキシ）−１−ドブシン５１．３８Ｆ（９６チ）を油
状物として得た。
強酸性イオン交換樹脂（ＡＧ−５０Ｗ−Ｘ８．５０ｇ１
５、１　ミ！Ｊ当量／ｇ１バイオ−ラド）を上記粗製生
成物（４９，９６，９）のクロロホルム（２６０ｍｌり
とメタノール（２６０ｍｌ）との混合物溶液に加え°た
。この懸濁液を還流下に４．５時間加熱した後、冷却し
た。この反応混合物をろ過し、ろ液を濃縮した。残渣を
ヘキサン中１０％、２０％および３０チ酢酸エチルを用
いてシリカダル（５００ｇ）クロマトグラフ生成したと
ころ、油状物３１ｇを得た。これはホスホモリブデン酸
による検出によシ〉９５チエスポツトであった。この物
質を２０鋸のＶｉｇｒｅｕｘカラムを通して蒸留したと
ころ、０、７８　ｇの先駆物の後に、１１−ドブシン−
１−オール（６１）　１７．９１　＆を粘稠無色油状物
として得た（　１．４　Ｔｏｒｒでの沸点１０４−１０
８℃）。
これは放置することによって白色固体に固化した。
この物質はＧＣによる９８チ１ビークであった。
蒸留前のクロマトグラフ精製した生成物の”）Ｉ−ＮＭ
Ｒ（ＣＤＣ４，）　；　３．６４　（ｔ　、２Ｉ（、−
Ｃ旦２０Ｈ）　。
３．３７および３．３３（ｍ、約０．２Ｈ，不純物）。
２、１７　（ｔｄ、　２Ｈ，ＨＣＣＣす２−）、１．９
２（ｔ、ＩＨ。
ＨＣＣＣＨ２−）および１．２−１．６　（ｍ、　１７
Ｈ，（ＣＨ２）ＢおよびＯＨ）。ＩＲ（溶融物の薄膜）
　：　３３９２　（０−Ｈ）　。
３３１１．２９３０および２８５４（Ｃ−Ｉ（）　、２
１６０　（アセチレン）、１４６６．１４３２，１３９
４．１４７１゜１３５２．１３２８．１３０３．１１０
３および１００１゜Ｂ、　１２−ヨード−１−ドブシン
（６２）の製造蒸留したアルコール６１（１５，５０ｇ
、８５ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（６６
，９０１１，２５５ミリモル、３．０当量）の乾燥トル
エン（４２５ｍｌ、モレキュラーシーブ上で保存したも
の）中懸濁液にヨウ素（４３，１６Ｆ、１７０ミリモル
、２．０当量）を加えた。この反応混合物を激しく攪拌
しながら２５分間還流下に熱したところ、油状沈殿を含
む黄色溶液が生成した。２５℃に冷却した後、飽和炭酸
水素ナイリウム水溶液（２００ｍｌ）およびヨウ素（２
３，７３ｇ、９３．５ミリモル、１．１当量）を加え、
この反応混合物を１時間激しく攪拌した。飽和亜硫酸す
）　ＩＪウム水溶液（４０１１Ｌｌ）を加えて紫色を消
失させた。この反応混合物を２層に分離させ、有機層を
プラインで洗浄した。
その有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮した。
残渣をジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶解し、エーテル
（２００ｍＡ’）を加えた。３０分間放置した後、得ら
れた沈殿（トリフェニルホスフィンオキシト）をろ過に
よって除去し、エーテル（ＩＱＯｍｌ）で洗浄した。さ
らに放置したところ、併せた母液および他の洗液から結
晶が得られ、これを前と同様に除去した。併せた母液と
エーテル洗液を濃縮し、暖かいトルエン（２００７ｄ）
に溶解した。
この溶液をシリカゲルカラム上に置き、トルエン（３リ
ツトル）で流出させたところ、１３．５５９（５５％）
のアイオダイドしを淡黄色流動性液体として得た。この
物質はＧＣによる９６％１ビ−りであった。
’１（−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：３．２０　（ｔ、　
２Ｈ，−ＣＨ２１）、　２．１７（ｔｄ、２Ｈ，ＨＣＣ
Ｃ旦、、−）、１．９４（ｔ、ＬＨ，ＨＣＣＣ■２−）
。
１．８２．１．５１および１．２０−１．４２（ｍ、　
１６Ｈ，（ＣＨ２）Ｂ）。
Ｃ，１２−１−リフルオロアセトアミド−１−ドブシン
（６３）の製造 水素化ナトリウム（油中６０％懸濁液、アルファ）をペ
ンタンで迅速かつ充分に洗浄し真空乾燥することによっ
て油除去した。この油除去した水素化ナトリウム（３，
８４Ｆ、１６０ミリモル、４当量）の乾燥ジメチルホル
ムアミド（９層ｍｌ、アルドリッチ）中懸濁液にトリフ
ルオロアセトアミド（２２，６１，Ｐ、２００ミリモル
、５当量）を約１０の部分にわけて５０分かけて加えた
。この添加の初期に、反応混合物が暖かくなることが見
い出されたとき、氷−水浴を加え、残シの添加を約１０
℃の内部温度でおこなった。氷−水浴を取シ除き、反応
混合物を、水素の発生が停止するまで攪拌した。さらに
１０分間攪拌した後、アイオダイド６３Ｃ１１，６９Ｅ
、４０．０ミリモル）の乾燥ジメチルホルムアミド（１
０ｍｌ）溶液を１０分間かけて滴下した。２０℃で４時
間攪拌した後、反応混合物を、飽和塩化アンモニウム水
溶液（２００ｍｌ　）、水（２００ｍｌ）およびペンタ
ン（２００ＴＩＬｌ）の攪拌した混合物に素早く注いだ
。反応容器を、水Ｃ５０ｍ１）、飽和塩化アンモニウム
（５０ｍＡ’）およびペンタン（２００ｒｆＬｌ）の混
合物ですすいだ。
溶液を併せ、放置して２層に分離させ、水相をペンタン
（２Ｘ２００ｍｌ）で抽出した。有機層を併せ、硫酸マ
グネシウム上で乾燥し、蒸発乾固させて１０．４２．９
（９４％）のトリフルオロアセトアミトリを油状物とし
て得た。これは放置によシワックス状固体に固化した。
この物質を沸騰するヘキサン（１００ＴｒＬｌ）から、
ゆっくりと−２０℃まで冷却し再結晶させることによっ
て１０．４２．Ｐ（９４％）のトリフルオロアセトアミ
トリを淡黄色針状晶として得た（融点４６−４７℃）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ４３）：６．２７　（幅広ｓ、　
ＩＨ，ＮＨＴＦＡ）　。
３．３４　（見掛は上のｑ、　２Ｈ，−Ｃ旦、、ＮＨＴ
ＦＡ　）　、　２．１８（ｔｄ、　２Ｈ，ＨＣＣＣ）！
２−）、　１．９５（ｔ、　ＩＨ，ＨＣＣＣＨ２−）　
。
１．２０１．６５（ｍ、１６Ｈ，（ＣＨ２）Ｂ）。
ＩＲ（溶融物の薄膜）　：　３３１２．３２９８．２９
３２゜および２８５７（Ｃ−ＨおよびＮ−Ｈ）、２１１
７（７セチｖン）、１７０６（Ｃ＝Ｏ）、１６７５，１
５６３，１４６０゜１４４８、１２０８．１１８２．１
１６６、７２２および６４３゜ Ｄ、　　５−（１２−トリフルオロアセトアミド−１−
ドデシニル）　−２１，３／−ジデオキシウリジン（す
）の製造 実施例ＩＣに記載した一般手法に従い、保護されたアル
キニルアミンリを２４時間５−ヨード−２７，３／−ジ
デオキシウリジン（Ｌへ６７６．２〜．２．００ミリモ
ル、実施例２人に記載した通シに製造）にカップルさせ
た。ジクロロメタン中〇〜５チメタノールで流出させる
シリカゲル（１００Ｉ）クロマトグラフ生成にょシ暗赤
色泡状物を得た。赤色不純物をメタノール中４０％水を
用い逆相カラム（１００，９，４０μｍシリカゲル上の
オクタデシルシラン、ペーカー）上におけるクロマトグ
ラフによシ除去した。適切な分画を併せ、濃縮し、無水
エタノールと２回共蒸発させて７３１〜のアルキニルア
ミノヌクレオシド６０を透明油状物として得た。この物
質は、残渣エタノール（２５モルチ、補正収率７３チ）
の存在を除きＴＬＣおよびＮＭＲによシ均質であった。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１１．４９　（幅広
ｓ、　ＬＨ，Ｈ３）。
９．３８　（歪んだｔ、ＬＨ，ＮＨＴＦＡ　）、　８．
１５（ｓ、　ＩＨ，Ｈ６）　。
５．９０（ｄｄ、　ＩＨ，Ｈ１’）、　５．１２　（歪
んだｔ、　ＩＨ，５’ｏＨ）。
４．３５　（ｔ、　０．２５Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２０Ｈ）、
　４．０３　（ｍ、　ＩＨ，Ｈ４’　）　。
３．７２および３．５２　（ｍ、　２Ｈ，Ｈ５’　）、
　３．４３　（ｍ、　０．５Ｈ。
ＣＨ３Ｃ旦、ＯＨ）、　３．１６（５重線、２Ｈ，−Ｃ
見、ＮＨＴＦＡ）　。
２．３４　（ｔ、　２）１．プロパルギルＨ）　、　２
．１６．２．０１および１．８６（ｍ、　４Ｈ，Ｈ２’
および［３’）、　１．６５−１．１５（ｍ、　１６Ｈ
。
（ＣＨ２）８）、および１．０６　（ｔ、　０．７５Ｈ
，ＣＨ３ＣＨ２０Ｈ）実施例１２ ５−（５−アミノ−１−ペンチニル）　＋　２７，３／
−ジデオキシウリジン（６４）の製造 （化合物６４は、Ｗｅｔがウラシル（ｈ）、Ｒ４が（Ｃ
Ｈ２）３、並びにＲ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７および
Ｒ８がＨであるアルキルアミノヌクレオチド（Ｉ）の例
である） Ａ、　　５−アミノ−１−ペンチン（６５）の製造５−
クロロペンチン（２０，５１，！ｉｒ、　０．２００モ
ル）およびヨウ素化ナトリウム（７，４６，９゜０．０
５０モル、０．２５当量）を収容するボンベ中にアンモ
ニア（３４０ＩＩ、２０モル）を蒸留させた。このボン
ベを封止し、オートクレーブ中１００℃で１２時間熱し
た。アンモニアを蒸発させ、残渣を水酸化ナトリウム（
４０＃、１．０モル、５当量、水（ＩＱＯｄ）およびエ
ーテル（１００ｍＪ）からなる２相混合物とともに攪拌
した。得られた混合物をろ過した後、２層に分離させた
。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、２０ｃｒｎの
Ｖｉｇｒｅｕｘカラムを通して蒸留した。４つの分画（
１２，４６ｇ１沸点９５−１２７℃、大気圧）はＧＣに
よシ有意量の生成物を含んでいることがわかった。これ
ら分画を併せ、スピニングバンドカラムｔｊＮｌして注
意深く蒸留して６．５４Ｍ（３９チ）の５−アミノ−１
−ペンチン（６５）を無色流動性液体として得た（沸点
１２５．５−１２６℃）。この物質はＧＣによる）９９
％１ピークであった。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：２．８１（ｔ、　Ｊ＝
７．５．２Ｈ。
−ＣＨ２ＮＨ２）、２．２７Ｃｔｄ、　Ｊ＝７．５およ
び２．５．２Ｈ。
ＨＣＣＣ旦２−　）、　１．９６　（ｔ、　Ｊ＝２．５
．　ＩＨ，ＨＣＣＣＨ２−）。
１．６６（多重線、　Ｊ＝７．５．２Ｈ，−ＣＨ２ＮＨ
２ＣＨ２−）および１．０７（幅広ｓ、　２Ｈ，ＮＨ）
。
Ｂ、保護されていないアルキルアミン類のヨードヌクレ
オシド類へのカップリングの一般手法。５−（５−アミ
ノ−１−ペンチン）　＋　２７．３／−ジデオキシウリ
ジン（６４）の製造 乾燥した３５ｍ１丸底フラスコに、５−ヨード−Ｚ／、
３／−ジデオキシウリジン（４７，６７６，２■、２、
　ＯＯミ！Ｊモル、実施例２人に記載した通９に製造）
を仕込み、アルゴンでフラッシングした。乾燥ジメチル
ホルムアミド（１０ｍｌ、アルドリッチ）、乾燥トリエ
チルアミン（０，５５ｍＪ、　４．０ミリモル、２．０
当量、シーブ上で貯蔵）、５−アミノ−１−ペンチｙ　
（０，５９ｍｌ、　６．０３ミリモ／ｌ／、３．０当量
）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）−パラ
ジウム（０）（２３１ｍ９．０．２００ミリモル、０．
１当ｉ、ドライがツクス内のガラスビン中ニ秤量）を加
えた。得られた懸濁液を４５分間攪拌したが、・母ラジ
ウム触媒は少なくとも部分的に未溶解のままであった。
ヨウ化第１銅（１９０，４ｍ６１．１．００ミリモル、
０．５当量、アルドリッチ・ゴールド・ラベル）を加え
た。１５分間攪拌した後、均質な育色溶液が生成し、約
１５０分径溶液は曇った。２００分後、ＴＬＣによシ、
出発のアイオダイド４７の全てが消費されたことが示さ
れた。４時間後、反応混合物を４５℃、２Ｔｏｒｒで約
１０分間ロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を
すぐにシリカゲルカラム（１００，９）上に吸収させ、
ジクロロメタン、メタノールおよび濃水酸化アンモニウ
ム（９０：９：１．８５：１３：２．７５：２０：５．
６５：３０：５および５０：４５：５の各々４００７ｄ
）の混合物で流出させた。
ＴＬＣによる主極性生成物を含む分画を併せ、エタノー
ルと２回共蒸発させ、−夜真空乾燥して３９５．９Ｊ９
（６７％）のアルキニルアミノヌクレオシド６４を黄色
固体として得た。この物質は、真空乾燥で除去されなか
ったエタノール（３３モル％）の存在を除きＴＬＣおよ
び聴によシ均質であった。エタノールの存在に対して補
正した６４の収率は６４チであった。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ　Ｏ−ｄ　６　）　：　８．３３
　（ｇ　＊　ＩＨ−Ｈ６）　、５．９０（ｄｄ、　Ｊ＝
６．６および３．０．　ＬＨ，Ｈｌ　’　）、　４．０
５　（ｍ、　ＩＨ。
Ｈ４’）、　３．７３（ｄｄ、　Ｊ＝１２．１および２
．８．ＩＨ，Ｈ５’ａ　）　。
３．５３（ｄｄ、　Ｊ＝１２．１および３．１．　ＩＨ
，Ｈ５’ｂ）、　２．８０　（幅広ｓ；　２Ｈ，−ＣＨ
，Ｈ２）、　２．４５　（ｔ、　Ｊ＝７．０．２Ｈ，プ
ロパルギルＨ）、　２．２８．２．０２、および１．８
６　（ｍ、　４Ｈ，Ｈ２’およびＨ３’）、および１．
７０（５重線ｓ　Ｊ＝７．０Ｈｚ、　２Ｈ。
−ＣＨ２Ｏ旦、、ＣＨ２−）。このＮＭＲデータは、上
記と同様の方法によって得た６４の別のパッチのものか
ら得た。両物質のｍ試料における交換可能な水素（Ｈ３
，５’ＯＨ、および−ＮＨ２）についての信号は、これ
を併せて、ベースラインからほとんど解析できガかった
単一の幅広（幅＞　２　ｐｐｍ　）信号とした。
実施例１３ ５−（３−アミノ−１−プロピニル）　＋　２′、３／
−ジデオキシウリジン（す）の製造 （化合物りは、Ｗｅｔがウラシル（ｈ）、Ｒ１がＣＨ２
、並びにＲ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８がＨ
であるアルキニルアミノヌクレオチド（１）の例である
） ５−アミノ−１−ペンチンの代シにグロノ４ルギルアミ
ンを用いた以外は実施例１２Ｂに記載した手法に従い、
５−ヨード−２′、３′−ジデオキシウリジン（４７，
２，００ミリモル）を３時間プロＡ’ルギルアミン（６
，００ミリモル、アルドリッチ）にカップルさせた。上
記したクロマトグラフィーに！す７９４．５■の不純ア
ルキニアミノヌクレオチドゼを黄色固体として得、これ
はＴＬＣによシ分析したところ、単一スポットを与えた
。聴および反応の物質収支により、この物質はエタノー
ルおよび恐らく無機不純物によシ汚染されていることが
示された。
’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：１１．７０　（幅
広ｓ、　ＩＨ，Ｈ３）。
８．４０　（ｓ、　ＩＨ，Ｈ６）、　８．２５　（幅広
ｇ、　２Ｈ，ＮＨ）、　５．８９（ｄｄ、Ｊ＝６．６お
よび３．０．　ＩＨ，Ｈ１’　）、　５．１３（ｔ、　
Ｊ＝５．０゜ＩＨ，５’ＯＨ）、４．０７（ｍ、　ＩＨ
，Ｈ４’）、３．９６　（ｓ、２Ｈ。
−ＣＨ，、ＮＩ（２）、　３．７１および３．５６　（
０１，２ＨｌＨ５’　）　、２．３０　。
２．０４および１．８５　（ｍ、　４Ｈ，Ｈ２’および
Ｈ３′）、並びにおよびエタノールおよび未知の不純物
の信号。
この聴データは、０．２当量のヨウ化第１銅を用いかつ
反応を完結までさせ々かった以外は上記と同様に製造し
た肘の別のパッチから取った。
実施例１４ １−（２−ヒドロキシエトキシメチル）−５−（３−ア
ミノ−１−プロピニル）シトシントリホスフェート（６
７）の製造 （化合物りは、Ｒ４が−ＣＨ２−１Ｒ２およびＲ３がＨ
，Ｈｅｔがシトシン（１）、Ｒ４が（ｇ）、およびＲ５
がＲ６０，ＨであるアルキニルアミノヌクレオチドＣＩ
）の例である） Ａ、１−（２−ヒドロキシエトキメチル）−５−ヨード
シトシン（鰹）の製造 １−（２−ヒドロキシエトキシメチル）シトシン（１，
８５ｇ、１０．０ミリモル）および酢酸第１銅（３，３
５ｇ、１０．５ミリモル）をメタノール（５０ｍＪ）お
よびジクロロメタン（１００１ｒＬｅ）中で還流させた
。ヨウ素（３，０５，９，１２，０ミリモル）を加え、
反応混合物を１時間攪拌した。フリーペース形態のＡＣ
３−Ｘ４樹脂（３８ミリ当量）を加え、この溶液に硫化
水素を１５分間吹込んだ。
ろ過により固形物を除去し、ろ液をシリカダル（１０ｇ
）上にストリップダウンさせた。このシリカゲルをシリ
カゲルカラム（４Ｘ　２５　ｔｙｎ　）上に載せ、ジク
ロロメタン中５％、１０チおよび２０チメタノールで流
出させた。蒸発および真空乾燥により、無色固体（１，
７３ｇ、５６％）を得た。
９５チエタノールから再結晶させて分析して純粋な物質
（融点１７２℃）を得た。
Ｃ，ＩＮ、０６Ｉとして計算値：Ｃ２７，０３％、Ｉ（
３，２４係、Ｎ１３．５１％、実測値：Ｃ２７，０８％
、Ｈ３，４１％、Ｎ１３．５１％。ＵＶ［メタノール）
　：極大２９２．５（５３００）。
’　Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ　Ｏ−ｄ　６）　：　３．４８
１　（ｍ、　４Ｈ）　Ｉ４．６５９（ｔ、　Ｊ＝５．　
ＩＨ）、　５．０７０（ｓ、　２Ｈ，６，６６５（幅広
ｓ、　ＩＨ）。
７．８６９（幅広ｓ、ＩＨ）、および８．１０７　（ｓ
　、　１ｆ（）Ｂ、１−（２−ヒドロキシエトキシメチ
ル）−５−（３−トリフルオロアセトアミド−１−プロ
ピニル）シトシン（６９）の調製 ヨウ化物６８（３１１■、１．ＯＯミリモル）を、実施
例ＩＣに詳述した一般的な方法に従ってＮ−プロパルギ
ルトリフルオロアセトアミドに結合させた。ジクロロメ
タン中５％、１ｏＩ％および２゜チメタノールを用いた
シリカダル（３Ｘ２０ｔｙｎ）上のフラッシュクロマト
グラフィーにより、アルキニルアミノヌクレオチド録を
淡黄色の泡状物（７７，４１ｎ９．２３％）として得た
。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ０−ｄ６）：３．４７２　（幅広
ｓ、４．２７６（ｄ。
Ｊ＝５．０．２Ｈ）、　４．６５３　（幅広ｔ、　Ｊ＝
＝４．５．　ＩＨ）、　５．０９１（ｓ、　２Ｈ）、　
６．９２５　（幅広ｓ、　ＬＨ）、　８．０３７（ｓ、
　ＬＨ）及び９．９６４（幅広、ＩＨ） Ｃ，１−（２−ヒドロキシエトキシメチル）−５−（３
−アミノ−１−プロピニル）シトシン（６７）の調製 アルキルアミノヌクレオチド６９（０，１ロアミリモル
）の糖部分の水酸基を、トリホスフェートに転化し、ト
リフルオロアセチル基を以下の実施例ＩＥで示す一般的
方法によシ除去した。第２のアリコートのオキシ塩化リ
ンを添加した後、リン酸化を７５分間行わせた。生成物
の吸収係数は出発物質（７７９０）の吸収係数に等しい
と仮定して、トリホスフェート６７の収量は２９１ｎｍ
におけるＵＶ吸収に基づき２１チであった。
実施例１５ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル２ａの製造〔ア
ルキニルアミノヌクレオチド［Ｒ，；ｌ’Ｒ１０がＨの
場合〕への５０５　ｎｍ螢光染料の付着の好ましい試薬
〕 Ａ、９−（カル？キシエチリデン）　−３，６−シヒド
ロキシー９Ｈ−キサンチン［５Ｆ−５０５］の製造レゾ
ルシノール［３３，０，９，０，３００モル〕及び無水
こはく酸［３０，０ＩＩ、０．３００モル〕を丸底フラ
スコに入れ窒素でＡ−ジした。メタンスルフォン酸［１
５０ｍＪ］を加え、溶液を窒素雰囲気下で２時間６５℃
で攪拌した。反応混合物を氷冷水〔１ｔ〕に急速攪拌し
ながら滴加し、同時に５０チ水性水酸化ナトリウムを添
加して−を２．５＋　７０．５に保った。粒状沈澱にみ
える生成物を漏過回収し、水［３ｘｌＯｍ１次いでアセ
トン〔３ｘ１ｏｏｍＪ）で濯いだ。生成物を空気乾燥し
、次いで１１０℃１８時間真空乾燥〔真空炉〕して暗赤
粉末［３７，７＃、８８％〕を得た。
分析試料を、生成物を２５ｄの熱０．３　Ｎ　ＨＣｔに
溶解して調製した。冷却して形成した沈澱を漏逸て除き
、捨てた。種水性水酸化ナトリウムを添加してｍｌ（を
１．２５にあげた。生成沈澱を漏過回収し、水で濯ぎ、
空気乾燥し、次いでＰ２Ｏ５上で１４０℃３６時間真空
乾燥した。
分析：計算［Ｃ（１６）Ｈ（１２）Ｏ（５））Ｃ６７，
６０，Ｈ４，２６゜実測：　Ｃ６７，３７，Ｈ４，３４
，０，５２チ水［Ｋ−Ｆ：ＩＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）
　：　（はとんどスピロラクトン型〕δ２．６９０　（
ｔ、　Ｊ＝８．６ｈｚ、　２Ｈ）　；３．０７０　（ｔ
、　Ｊ＝８．６ｈｚ　、　２Ｈ）、　６．５３０　（ｄ
　、　Ｊ＝１．８ｈｚ、　２Ｈ）　：６．６７６　（ｄ
ｄ　、　Ｊ＝８．７．１．８ｈｚ、　２Ｈ）、　７．４
３２　（ｄ、　Ｊ＝８．７．１、Ｂｈｚ、２Ｈ）。
７．４３２（ｄ　、Ｊ＝＝８．７ｈｚ、　２Ｈ）　、及
び９．９６４（ｓ、２Ｈ）。
Ｖｉｓ、　ａｂｓ、　（ｐ［（８，２；５０ｍＭ　ａｑ
　Ｔｒｉｓ／ＨＣ２：　ｍａｘ４８６　ｎｍ［７２，６
００１゜ Ｂ、９−（２−カルがキシエチル）　−３，６−ジアセ
ドキシー９−エトキシ−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ２Ｅｔ
ＳＦ−５０５：］の製造 ５Ｆ−５０５［２９，３，！７．１０３　ｍモル〕を水
冷却無水酢酸［５００ｍ１］に添加し次いでピリジン〔
１００ｄ〕を加えた。混合物を水中で２０分間攪拌し次
いで急速攪拌氷冷動水〔７１〕に２０分間に亙って加え
た。更に３０分間攪拌後、中間生成物を漏逸し、水〔４
１〕に再懸濁し更に３０分間攪拌した。固体を漏過回収
し、絶対エタノール〔１１〕に溶解し４５分間還流した
。溶液をロータリ蒸発器で濃縮し２００ｍ１に濃縮した
。これは結晶を生じた。生成物を濃過回収、空気乾燥９
次いで真空乾燥し、淡いオレンジ微結晶を得た［　２１
．９　、Ｐ　。
７　５１％］。
塩化メチレン／シクロヘキサンからの再結晶で無色微結
晶を得た。Ｍ、Ｐ、　１４２−１４３℃。
分析二計算［Ｃ（２２）Ｈ（２２）Ｏ（８）］Ｃ６，６
３，７６゜Ｈ５、３５、実測：　Ｃ６３，５８，Ｈ５，
３９、ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）　：δ１．０３５（ｔ
、Ｊ＝＝６．９ｈｚ、３Ｈ〕、１．６６７（ｍ、２Ｈ）
、２．２３２（ｍ、２Ｈ）、２．２９４（ｓ、６Ｈ）、
２．８８８（ｑ、Ｊ＝６．９ｈｚ、２Ｈ）。
７．０−７．１（ｍ、４Ｈ）　、及び７．５７５　（ｄ
　、　Ｊ＝９．１ｈｚ、　２Ｈ）。
Ｃ，９−（２−（Ｎ−スクシンイミジロキシカル？ニル
））−エチル）　−３，６−ジアセドキシー９−エトキ
シ−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ２ＥｔＳＦ−５０５−ＮＨ
８、：ｌの製造 Ａｃ２ＥｔＳＦ−５０５［１０，４＆　、　２５．１　
ｍモル〕を塩化メチレン［３００ｄ］及び１−（３−ジ
メチルアミノプロピル）−３−エチルカルがジイミドヒ
ドロクロリド（９，７０，！９，５０．６ｍモル〕と混
合し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド［４，３２ｇ、３
７．５ｍモル〕を加えた。混合物を１時間攪拌し水で［
５Ｘ５０ｍｌ：］で洗浄した。合せた水性層を塩化メチ
レン〔５０ＴＬｔ〕でパック抽出し、プールした有機層
を硫酸ナトリウム上で乾燥しストリップダウンした。エ
タノール〔７５ｍ１〕によるトリテユレーション、次い
で漏逸、空気乾燥で粗生成物が明黄色固体として（ｃ、
　１０１９　：Ｉ得られた。この物質を塩化メチレン〔
５０ＴＬｌ〕に溶解しシクロヘキサン〔５０ｄ）を加え
た。茶さじ一杯のチャーコールを加え、混合物を漏逸し
、生成物を追加の部分のシクロヘキサン〔１００ＴＩＬ
ｌ〕でおろした。漏逸て回収、空気乾燥、及び真空乾燥
で無色結晶［６，９４ｇ、５４％〕を得た。エタノール
からの第２結晶で分析試料を得た。Ｍ、Ｐ、　１６２−
３℃。
分析：計算［ｃ（２６）ａ（２５）Ｎ（１）ｏ（１０）
）Ｃ６ｔ、０５゜Ｈ４，９３，Ｎ２．７４゜実測：　Ｃ
６０，７８，Ｈ５，０１，Ｎ２．６５゜ＮＭＲ（ＤＭＳ
Ｏ−ｄ　６）　：δ１．０５６　（ｔ　、　Ｊ＝７．Ｏ
ｈｚ、　３Ｈ）　、　２．４−２．１（ｍ、４Ｈ）　、
　２．２９３（ｓ、　６Ｈ）、　２．７５７（ｓ　、４
Ｈ）　。
２．９２２（ｑ　、Ｊ　＝７．Ｏｈｚ、　２Ｈ）　、７
．０６９（ｍ、４Ｈ）　、及び７．６１７　（ｐ　ｄ　
、　Ｊ＝９．１ｈ　ｚ、　２Ｈ）。
Ｄ、９−（２−（Ｎ−メチル−Ｎ−（ベンジルオキシカ
ルボニルメチル）カルがキサミド）エルチ）−３，６−
ジアセドキシー９−エトキシ−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ
２ＥｔＳＦ−５０５−８ａｒ−ＯＢｎ　］の製造サルコ
シンベンジルエステル＊　［１，１３ｆｉ　。
６．３１ｍモ＃］の塩化メチンｙ［５０ｍＪ］溶液ｋＡ
ｃ２ＥｔＳＦ−５０５−ＮＨ８［２，５８，９、５，０
５ｍモル〕及び５％重炭酸ナトリウム水溶液〔３０１ｎ
ｌ〕を加えた。２層混合物を迅速に２０時間攪拌した。
層を分離し有機層を３Ｘ１５ｍｌの水で洗浄し、硫酸ナ
トリウム上で乾燥し、２５ＴＬｌの濃縮した溶液を１５
０ｄのシクロヘキサンで希釈し、チャーコール処理し、
窒素流下で７５罰の減少し生成物の沈澱を得た。上澄み
をデカントし残留物を塩化メチレンで共蒸発して無色フ
オーム［１，７０＃、５８チ〕を得た。
広範な真空乾燥で分析試料を得た。分析：計算［Ｃ（３
２）Ｈ（３３）Ｎ（１）Ｏ（９））Ｃ６６，７７、Ｈ５
，７８，Ｎ２．４３゜実測：　Ｃ６６，６６、Ｈ５，８
９，Ｎ２．２５゜ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）：〔アミド
結合ロータマの５：２混合物を示す〕δ〔メジャー及び
マイカ）１．０４０及び１．０１８（ｔ。
Ｊ＝６．７ｈｚ、　３Ｈ）　、　１．７８９及び１．６
７０　（ｍ　、　２Ｈ）　、２．２１１（ｍ、２Ｈ）　
、　２．２９０及び２．２７６　（ｓ　、６Ｈ）　、　
２．７１３及び２．６９５（ｓ、　３Ｈ）　、２．８９
３（ｑ　、Ｊ＝６．７ｈｚ、　２Ｈ）　、３．９６３（
ｓ　、　２Ｈ）、　５．０７５及び５．０３９　（ｓ　
、　２Ｈ）、　７．０４４　（ｍ　。
４Ｈ）　、　７．３２４　（ｍ　、　５Ｈ）及び７．５
７３及び７．５１６（ｐｄ、Ｊ＝９．２　ｈ　ｚ　、　
２Ｈ）。
＊サルコシンベンジルニステルル−）シレート塩〔アダ
ムスケミカル社〕は塩化メチレンに取シ、繰返し５％水
性重炭酸ナトリウムで洗浄し、次いで水で洗浄し、硫酸
ナトリウム上で乾燥しストリップダウンした。
Ｅ、９−（２−（Ｎ−メチル−Ｎ−（Ｎ’スクシンイミ
ジルオキシカルボニルメチル）カルボキサミド）エチル
）　−３，６−ジアセドキシー９−エトキシ−９Ｈ−エ
トキシ−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ２ＥｔＳＦ−５０５−
８ａｒ−ＮＨ８，構造２ａｌの製造Ａｃ２ＥｔＳＦ−５
０５−８ａｒ−ＯＢｎ　（：　１．５５　、！ｉ’　、
　２．６９ｍモル〕の絶対エタノール［６０ｍＡり溶液
に炭素Ｃ０，１５，９：］上の１０チパラジウムを加え
た。混合物を水素のバルーン圧力下で３０分間攪拌した
。
触媒を漏逸て除去し、エタノールをストリップするとシ
ロップ状の残留物を得た。
この残留物を塩化メチレン［８５ｍＪ］に溶解しＮ−ヒ
ドロキシスクシンイミド［０，４９５，ｌｉ’。
４、３０　ｍモル〕及び１−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（１
，１２ｇ　、　５．８４ｍモル〕を加えた〔４×２５ｍ
１〕。溶液を２５ｍＪの濃縮し、シクロヘキサンで１７
５１Ｌｌに希釈し、チャーコール処理し、窒素流下で容
量７５ｍ１！に減少した。固体生成物を漏逸、空気乾燥
、真空乾燥で回収して無色粉末［０，９７１？、６２％
］を得た。
塩化メチレンとの共蒸発、続いて４０℃での広範な真空
乾燥で痕跡のシクロヘキサンを除き分析試料を無定形固
体として得た。分析二計算〔Ｃ（２９）ｆ（（３０）Ｎ
（２）０（１１）　）Ｃ５９，７９，Ｈ５，１９，Ｎ４
．８１　。
実測：　Ｃ５９，３７，Ｈ４，６２，Ｎ４．６２．０．
９３チ水［Ｋ−Ｆ］。
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６Ｃ［アミド結合ロータマの４：
１混合物を示す〕δ〔メジャー及びマイカ）１．０３４
（ｔ、Ｊ＝６．９ｈｚ、　３Ｈ）、　１．８２７及び１
．９３５（ｍ、２Ｈ）。
２．２２３（ｍ、２Ｈ）、　２．２８９（ａ、　６Ｈ）
、　２．７５８（ｓ　、４Ｈ）　。
２．７７９及び２．８２４　（８１３Ｈ）　−２−８８
８（ｑ　、Ｊ　＝６．８　ｈ　ｚ　−２Ｈ）、４．３３
３及び４．４７３　（ｓ　、２Ｈ）　＊　７−０４３　
（ｍ　、４Ｈ）　。
及び７．５８７（ｐｅｒ　ｄ、Ｊ＝９．１ｈｚ、　２）
Ｉ）。
実施例１６ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル２ｂの製造〔ア
ルキニルアミノヌクレオチド〔Ｒ，７ｊ：Ｈ及びＲＩＱ
がＣＨ３の場合〕への５１２　ｎｍ螢光染料の付着の好
ましい試薬〕 Ａ・　４−メチルレゾルシノールの製造２．４−ジヒド
ロキシベンズアルデヒド［３３，９７ｍ９．０．２４６
モル〕〔トルエンから再結晶〕を分光グレードの２−７
°ロバノール〔３１〕に気体入口及びバブラー出口を備
えた丸底フラスコ中で混合した。炭素［１，３５ｍｇ：
］上の１０チパラジウム次いで燐酸Ｃ３ｍ１〕を加えて
混合物を窒素でスパージした。窒素流を水素流に切替え
混合物を迅速に水冷却しながら攪拌した。３時間後水素
のとシあげが終了し、触媒を漏逸て除いた。濃過液を２
００ｍ１のストリップダウンし２００ｍの酢酸エチルを
加えた。溶液を４Ｘ２００ｍの水で洗浄し、合せた水抽
出物を酢酸エチルでパック抽出した。
有機抽出物を水洗浄し、合せた有機層を硫酸ナトリウム
上で乾燥しストリップダウンして生成物を無色結晶固体
として得た［２９．９５７Ｖ、９８％］Ｍ、Ｐ、：１０
６℃［Ｌｉｔ、１０６−１０７℃［Ｊ、Ｃ，Ｂｅ１ｌ。
Ｗ、　Ｂｒｉｄｇｅ　＋　Ａ、　Ｒｏｂｅｒ１３ｏｎ、
　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、。
１５４２〜４５（１９３７）））。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−
ｄ、）：δ１．９６１（ｓ、Ｍｅ）、６．０７６（ｄｄ
、Ｈ−６，Ｊ［５，６］＝８ｈｚ、Ｊ［：　２゜６］＝
２ｈｚ）、６．２３１（ｄ、Ｈ−２）、６．７６０（ｄ
　、Ｈ−５）　。
８．８６７（ｓ、　ＯＨ）　、及び９．００８（ｓ、Ｏ
Ｈ）。
Ｂ、　　９−カルボキシエチリデン−３，６−シヒドロ
キシー２．７−ジメチル−９Ｈ−キサンチン［５Ｆ−５
１２〕の製造 ４−メチルレゾルシノール［２５，１１，０，２０８モ
ル〕及び無水こはく酸［２０，８Ｉ１．０．２０８モル
〕を丸底フラスコに入れ、窒素でフラスコｅノｆ−ジし
た。メタンスルフォン酸（１５０ｍＪ）を加え、溶液を
窒素下で６５℃に２時間加熱した。溶液を１１の急速攪
拌、氷冷動水に満願し、同時に５０チ水性水酸化ナトリ
ウムを添加して−を２．２５±０．２５に保った。生成
物を遠心分離で回収し、水〔３×〕及びアセトン〔２×
〕で洗浄した。固体を空気乾燥し、次いで１１０℃で真
空乾燥して煉瓦赤粉末［２４，１，１７４％〕を得た。
精製を、酢酸エチルを生成物のジメチルスルフォキサイ
ド溶液に徐々に拡散させて行なった。沈澱を漏逸して回
収し、空気乾燥し、次いで真空乾燥した。ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ６）　：　［：水及びジメチルフルフォキサイ
ドのそれぞれの１モルと共に純粋デルタ型を示す〕δ２
．１２４　（ｓ　、　６Ｈ）、　３．４２１　（ｄ　、
　Ｊ＝７．２ｈｚ、　２Ｈ）、　５．７６９　（ｔ　、
　Ｊ＝７．２ｈｚ、　ＩＨ）、　６．５１２（ｓ　、　
ＩＨ）。
６．５７３（ｓ、ＬＨ）、　７．２９５（ｓ、２Ｈ）、
９．６８１（ａ、ＩＨ）。
９．８２５（ｇ、ＩＨ）及び１２．３４６（ｂｅ、ＬＨ
）、　Ｖｉｓ、ａｂｓ。
（ｐＨ８，２ａｑ　Ｔｒｌｇ　）　：　ｍａｘ　４９３
．５　ｎｍ０Ｃ，９−カルがキシエチル−３，６−ジア
セドキシー２，７−ノメチルー９−エトキシ−９Ｈ−キ
サンテア　［Ａｃ２ＥｔＳＦ−５１２］の製造８Ｆ−５
１２の試料［２０，０１９，６４，０ｍモル〕を無水酢
酸〔３５０ｍ１〕に加え次いでピリジン［１３Ｑ＋ｎＡ
’）を加えた。これを１時間攪拌し漏逸して未反応染料
の痕跡を除いた。濃過液を３．５１の急速攪拌水に注い
だ。固体中間体を漏逸て回収し、２１の冷水に再懸濁し
、１５分間攪拌し、次いで再回収し、空気乾燥してスピ
ロラクトン中間体［２０，８，９］を得だ。これを絶対
エタノール［６００７ｄ］に溶解し４５分間還流した。
溶液を１７フー チャーコール処理し３００ｄに濃縮した。生成物を漏逸
て回収し、冷エタノール（）ｘ５ｏｍＪ：）で濯ぎ、空
気乾燥し、次いで真空乾燥して無色微結晶［１４，９，
９，５３％］を得た。Ｍ、Ｐ、１４３℃。
分析：計算ＥＣ（２４）Ｈ（２６）Ｏ（８））Ｃ６５，
１５、Ｈ５，９２゜実測：　Ｃ６５，３１，Ｈ５，９２
゜ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：　　δ１．０２７（ｔ
、Ｊ＝６．９ｈｚ、　３Ｈ）、１．６２８（ｍ、２Ｈ）
、２．１３６（ｓ　、　６Ｈ）　、　２．２０７　（ｍ
、　２Ｈ）、　２．３０３（ｓ　、　６Ｈ）、　２．８
８４（ｑ、６．９ｈｚ、　２Ｋ）、　６．９３９（ｓ　
、２Ｈ）　、及び７．４１７（ｓ。
２Ｈ）。
Ｄ、９−（２−（Ｎ−スクシンイミジロキシカルポニル
）−エチル）　−３，６−ジアセドキシー２，７−シメ
チルー９−エトキシ−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ２ＥｔＳ
Ｆ−５１２−ＮＨ８］の製造Ａｃ２ＥｔＳＦ−５１２［
９，４２１１、２１，３ｍモル〕の塩化メチレン［１７
５ｍＪ：］溶液にＮ−ヒドロキシスクシンイミド［：３
．６２．！７，３１．５ｍモル〕、直後に１−（３−ジ
メチルアミノゾロビル）−３−エチルカルボジイミドハ
イドロクロライド［８，０５、ｌｉ’、４２．０ｍモル
〕を加えた。溶液を室温で２時間攪拌した。混合物を水
［４Ｘ１００７ｄ：）で洗浄し水性洗浄を塩化メチレン
〔２×５０７１Ｌｌ〕でパック抽出した。合せた有機層
を硫酸ナトリウム上で乾燥し油にストリップダウンした
。絶対エタノールを加え、スフラッチングで結晶化を誘
起した。
生成物を濃過て回収し、空気乾燥し、次いで真空乾燥し
て淡オレンジ色の微結晶を得た［９．８０．９゜８５％
〕。
分析試料を、ＩＩ塩化メチレン［１０ｍＪ］に溶解しシ
クロヘキサン［４０ＴＬｌ、：ｌを加えて調製した。
チャーコール処理後冷却しスフラッチングで結晶化を誘
起して無色結晶固体を得た。Ｍ、Ｐ、１５９℃。
分析二計算［：Ｃ（２８）Ｈ（２９）Ｎ（１）Ｏ（１０
））Ｃ６２，３３゜Ｈ５，４２，Ｎ２．６０゜実測：　
Ｃ６２，０６、Ｈ５，７１、Ｎ２．３９　。
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）　：δ１．０５３（ｔ　、Ｊ
　＝６．９ｈｚ、　３Ｈ：］　。
２．１４９（ｓ　、６Ｈ）、　２．３０４（ｓ　、６Ｈ
）、　２．１−２．４（ｍ、４Ｈ）。
２．７４７　（ｓ　＝　４　Ｈ）　、２．９２０　（ｑ
　−Ｊ　＝６．９　ｈ　ｚ　＊　２　Ｈ）＊　６．９７
５（ｓ＊２ａ）＋及び７．４６４（ｓ、２Ｈ）。
Ｅ、９−（２−（Ｎ−メチル−Ｎ−（ペンジロキシ力ル
デニル）−カルボキサミド）−エチル）−３，６−ジア
セドキシー２，７−シメチルー９−エトキシ−９Ｈ−キ
サンチンＣＡｃ２ＥｔＳＦ−５１２−８ａｒ−ＯＢｎ　
］の製造 サルコシンベンジルエステル［０，７２，１ｉ’、４．
０２ｍモル〕の塩化メチレン〔２５ｍ１〕の溶液にＡｃ
２ＥｔＳＦ−５１２−ＮＨ８［１，７３ｇ　、　３．２
１　ｍモル〕及び５チ重炭酸ナトリウム水溶液［２０ｍ
Ａ’、：ｌを加えた。２相混合物を２０時間迅速攪拌し
た。層を分離し有機層ｆｚ　３　Ｘ　１５　ｍｌ水で洗
浄し硫酸す）ＩＪウム上で乾燥し、１０ｍ１！に濃縮し
た。浴液をシクロヘキサンで６０１ｎｌ！に希釈しチャ
ーコール処理し、窒素流下で２５ｍ１に減少して生成物
の沈澱を得た。
上澄み液をデカンテーションし無色固体に真空乾燥した
［１．４４，９．７４％〕。
塩化メチレン／シクロヘキサンからの再結晶、チャーコ
ール処理で分析試料を得た。
Ｍ、Ｐ、１５０−２℃。分析：計算［Ｃ（３４））（（
３７）Ｎ（１）Ｏ（９）、：１ｃ６７．６５　、Ｈ６，
１８、Ｎ２．３２゜実測：Ｃ６７，４２，）１６．０８
．Ｎ２．３３゜ＮＭａ（Ｄｕｓｏ−δ６）：　Ｃアミド
結合ロータマの５：２混合物を示す〕δ〔メージャー及
びマイカ）１．０４９及び１．００８　（ｔ　、　Ｊ　
＝６．８　ｈ　ｚ。
３Ｈ）、１．７４７及び１．６６　（ｍ、　２Ｈ）　、
　２．１４４及び２．１１５（ｓ、６Ｈ）、２．１８（
ｍ、２Ｈ）、２．３１４及び２．３０３　（ｓ　、　３
Ｈ）　。
２．６９４（ｓ、３Ｈ）、　２．９０７及び２．８８４
（ｑ、Ｊ＝６．８ｈｚ、２Ｈ）。
３．９６１（ｓ、２Ｈ）、　５．０７５及び５．０１６
　（ｓ　、　２Ｉ（）　、　６．９６０及び６．９１７
　（ｓ　、　２Ｈ）　、　７．４３０及び７．３９６（
ｓ、２Ｈ）、及び７．３０　（ｍ　、　５Ｋ）。
Ｆ、９−（２−（Ｎ−メチル−Ｎ−（Ｎ’−スクシンイ
ミジロキシ力ルゴニルメチル）−力ルポキサミド）−エ
チル）　−３，６−ジアセドキシー９−エトキシ−２，
４，５，７−テトラメチル−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ２
ＥｔＳＦ−５１２−８ａｒ−ＮＨ８，構造い〕の製造 Ａｃ２ＥｔＳＦ−５１２−８ａｒ−ＯＢｎ　［０，４５
１／　、　０．７４５モル〕の絶対エタノール〔２０ｍ
１〕懸濁液に炭素［０，０５９１上１０％／’Ｐラジウ
ムを添加した。混合物を水素の・ぐルーン圧力下で３０
分間攪拌した。
触媒を濃過て除去し、エタノールをストリップオフして
シロップ状残留物を得た。
この残留物を塩化メチレン〔２５ＴＬｌ〕に溶解し、Ｎ
−ヒドロキシスクシンイミド［０，１２９＃。
１、１２　ｍモル〕及び１−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）−３−エチル−カルボジイミドハイドロクロライ
ド［０，２９２ｇ、１．５２ｍモ＃］を加えた。混合物
を３０分間攪拌し、水で洗浄した〔３Ｘ１５ｍ〕。溶液
を硫酸す）ＩＪウム上で乾燥し１０ｍ１に濃縮しシクロ
ヘキサンで４０＋＋＋Ｊに希釈し、チャーコール処理し
、窒素流下で容量を２０１ｎｌに減少した。上澄み液を
デカンテーションし残留物を塩化メチレンから第２の沈
澱に付して無色粉末を得た［０．２７，９．５９％〕。
分析：計算〔Ｃ（３１）Ｈ（３４）Ｎ（２）Ｏ（１１）
）Ｃ６０，９８，Ｈ５，６１、Ｎ４．５９゜実測：　Ｃ
６０，２８、Ｈ５，７１、Ｎ４．４０　、１．０８水［
Ｋ−Ｆ：］。
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）　：　［アミド結合に近いロ
ータマの５：１混合物を示す〕δ〔メージャー及びマイ
カ）　１．０４３　（ｔ　、　Ｊ＝７．Ｏｈｚ、　３Ｈ
）、　１．７９３及び１．９３３（ｍ、２Ｈ）、　２．
１４５及び２．１３３（ｓ、６Ｈ）、　２．１９８（ｍ
、２Ｈ）。
２．３１４　（ｓ　＝　６Ｈ）、２．７４０　（ｓ　ｔ
　４Ｈ）、２．７７８及び２．８２１（ｓ　、　３Ｈ）
、　２．９００　（ｑ　、　Ｊ＝７．Ｏｈ　ｚ、　２Ｈ
）、　４．３３４及び４．４６９　（ａ　、　２Ｈ）、
　６．９６０及び６．９２５（ｓ、２Ｈ）、及び７．４
４１　（ｓ　、　２１（）。
実施例１７ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル２Ｃの製造〔ア
ルキニルアミノヌクレオチド〔Ｒ９がＣＨ３及びＲ１゜
がＨの場合〕への５１９　ｎｍ螢光染料の付着の好まし
い試薬〕 Ａ、９−（２−カルボキシエチリデン）　−３，６−ジ
ヒドロキシ−４，５−ジメチル−９Ｈ−キサンチン［５
Ｆ−５１９）の製造 ２−メチルレゾルシノール［３７，２Ｆ、０．３００モ
ル〕及び無水こはく酸〔３０゜Ｏｇ、０．３００モル〕
を丸底フラスコに入れ窒素でパージした。メタンスルフ
ォン酸〔１５０ｍ１〕を加え、浴液を窒累雰囲気下６５
℃で４時間攪拌した。反応混合物を迅速攪拌氷冷水〔１
１〕に満願し同時に５０％水性水酸化ナトリウムを添加
してＰＨを６．０±０．５に保った。遠心分離で微細に
分割された固体を回収し水で濯ぎ（４Ｘ２５０ｔ〕、毎
回再懸濁し、スピニングダウンし、上澄みを捨てた。粗
生成物を水〔１）〕に懸濁し充分な水性水酸化ナトリウ
ム［５Ｃ１：］を加え−を１０．２にあげた。溶液を漏
逸し漏液の−を濃ＨＣｔで１．２にした。生成物を遠心
分離で回収し、上記のように水［３ｘ３５０ｄ〕及びア
セトン［３×２５０ｍｌ：］で濯いだ。生成固体をトル
エンで共沸させ、漏逸て回収し、１１０℃で真空乾燥し
て煉瓦赤色の粉末を得た（２４．６．！７，５３係〕。
分析：計算〔Ｃ（１８）Ｔ（（１６）Ｏ（５）：］Ｃ６
９，２２，Ｈ５，１６゜実測：Ｃ６８，９５゜Ｉ（５，
３０、０，８０％水［Ｋ−Ｆ］。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ
６）　：〔はとんどがデルタ型〕δ２．１６４　、　（
ｓ　、　３Ｈ）　。
２．１７７（ｓ、３Ｈ）、３．３７６（ｄ、Ｊ＝７．１
ｈｚ、　ＩＨ）、５．７４９（ｔ、Ｊ＝＝７．２ｈｚ、
　ＬＨ）、６．６４２（ｄ、Ｊ＝８．８ｈｚ、　ＬＨ）
。
６−６７２　（ｄ　＊　Ｊ−８，８ｈ　ｚ　＊　Ｉ　Ｈ
）　−７，２１６（ｄ　、Ｊ　＝８．５　ｈ　ｚ　、Ｉ
　Ｈ）　。
７．２２７　（ｄ　、　Ｊ＝８．５ｈｚ、　ＬＨ）、　
９．６０２　（ｂ　ｓ　、　ＩＨ）、及び９．７５８（
ｂｓ、ＬＨ）、　Ｖｉｓ、　ａｂｓ、　（ｐＨ８，２：
　５０　ｍＭ　ａｑＴｒｉｓ／ＨＣ４）　ｍａｘ５００
ｎｍ　（６９，８００）Ｂ、９−（２−カルボキシエチ
ル）　−３，６−ジアセドキシー４．５−ジメチル−９
−エトキシ−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ２ＥｔＳＦ−５１
９］の製造５Ｆ−５１９ＣＩ　５．０　、ｌｉ’　、　
４８．０　ｍモル］を無水酢酸〔２５ｏｍｌ）に加え、
固体を粉末化した。〔高不溶性５Ｆ−５１９を分散する
ためソニフィケーションが有効である〕。懸濁液を水冷
却し、ピリジン［５ＱｍＩ！］を加え、混合物を２時間
攪拌した。溶液を漏遇し、ゆっくりだが一定の流れで迅
速攪拌氷冷動水〔４１〕に加えた。更に２０分間攪拌後
、中間体生成物を漏逸し、水〔３１〕に再懸濁し更に２
５分間固体を漏逸て回収し、空気乾燥した。
乾燥中間体を絶対エタノール〔６００ｍ１〕に溶解し１
時間還流した。溶液をロータリ蒸発器で２００ｍ１に濃
縮して結晶化を生じさせた。生成物を漏逸て回収し、空
気乾燥し、次いで真空乾燥して無色微結晶を得た［１２
．１３ｉ５７チ〕。
分析試料を塩化メチレン溶液からシクロヘキサン沈澱し
て得た。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）　：δ１．０３３（
ｔ　、　Ｊ＝６．９ｈｚ、　３Ｈ）、　１．６７４　（
ｍ、　２Ｈ）、　２．１８９　（ｓ　、　６Ｈ）。
２．１９（ｍ、２１（）、　２．３４８（ｓ、６Ｈ）、
　２．８７８（ｑ、Ｊ＝６．９ｈｚ。
２Ｈ）、　７．００６　（ｄ　、Ｊ　＝８．６ｈｚ、　
２Ｈ）、及び７．３９９（ｄ、Ｊ＝８．６ｈｚ、２Ｈ）
。
Ｃ，９−（２−（Ｎ−スクシンイミジロキシカルデニル
）−エチル−３，６−ジアセドキシー４，５−ジメチル
−９−エトキシ−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ２ＥｔＳＦ−
５１９−ＮＨ８］の製造Ａｃ２ＥｔＳＦ−５１９−ＮＨ
８Ｃ７，８０ｇ　、　１７．６　ｍモル〕を塩化メチレ
ン［１７５７ｄ〕と混合し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイ
ミド［２，７５，！ｉ’、　　２３．９ｍモル〕及び１
−（３−ジメチルアミンプロピル）−３−エチルカルデ
ジイミドハイドロクロライドＣ７，ＯＯ＃、３６．５ｍ
モル］を加えた。混合物全９ｎ分間攪拌し水で洗浄した
〔５×１００−〕。
合せた水性層を塩化メチレン（２ｘ５０ｍＪ）でパック
抽出し、プールした有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し
ストリップダウンした。エタノール〔１００Ｔｎｌ〕で
トリチーレートし漏逸、空気乾燥して明黄色固体として
生成物を得た［　７．４５．９　。
７８％〕。
シクロヘキサン／塩化メチレンからの２再結晶で分析試
料を得た。Ｍ、Ｐ、１６４−５℃。分析：計算〔Ｃ（２
８））Ｉ（２９）Ｎ（１）Ｏ（１０））Ｃ６２，３３，
Ｈ５，４２゜Ｎ２．６０゜実測：　Ｃ６２，１７、Ｈ５
，４７、Ｎ２．４８　。
ＮＭＲ−（ＤＭＳＯ−δ６）：　　δ１．０５１（ｔ、
Ｊ＝７．Ｏｈｚ、３Ｈ）。
２．４−２．１（ｍ、４Ｈ）、２．１９１（ｓ、６Ｈ）
、２．３３７（ｓ　、６Ｈ）。
２．７１５（ｓ　、４Ｈ）、　２．９１２（ｑ　、Ｊ＝
８．６ｈｚ、　２Ｈ）　、及び７．４２９（ｄ、Ｊ＝８
．６ｈｚ、２Ｈ）。
Ｄ、９−（２−（Ｎ−メチル−Ｎ−（ベンジロキシカル
ボニルメチル）カルボキサミド）エチル）−３，６−ジ
アセドキシー４，５−ジメチル−９−エトキシ−９Ｈ−
キサンチン（Ａｃ２ＢｔＳＦ−５１９−８ａｒ−ＯＢｎ
　）の製造 サルコシンベンジルエステル［０，５５７１１１３，１
１ｍモル〕の塩化メチレン［：１９ｍ１］溶液にＡｃ２
ＥｔＳＦ−５１９−ＮＨ８［１，３０Ｅｌ　、　２．４
１　ｍモル〕及び５％重炭酸ナトリウム水溶液〔１５ｍ
１〕を加えた。２相混合物を１８時間急速攪拌した。層
を分離し有機層を３ＸＩＱｍｌ水で洗浄し、硫酸ナトリ
ウム上で乾燥し１０ｍ１に濃縮した。溶液をシクロヘキ
サンで４０ＴＬｌに希釈し、チャコール処理し、窒素流
下で２０ｍ１に減少して粘着性固体として生成物の沈澱
を生じた。上澄みデカンテーションし、残留物を塩化メ
チレンと共沸し無色フオームを得た〔０．９７１１．６
７％〕。
広範な真空乾燥で分析試料を得た。分析二計算［Ｃ（３
４）Ｈ（３７）Ｎ（１）Ｏ（９））Ｃ６７，６５，Ｈ６
，１８，Ｎ２．３２゜実測：　Ｃ６７，４３，Ｈ６，３
７，Ｎ２．３２゜ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）〔アミド結
合ロータマの５：２混合物を示す〕：δ〔メージャ及び
マイカ〕１．’ｏ４４及び１．０２０（ｔ。
Ｊ　＝７．Ｏｈｚ、　３Ｈ）、　１．８２４及び１．７
１４（ｍ、２Ｈ）、　２．１７（ｍ、　２Ｈ）、　２．
１９５及び２．１６９　（ｓ　、　６Ｈ）、　２．３４
６及び２．３３７（ｓ、６Ｈ）、　２．７２０及び２．
６９１　（ｓ　、　３Ｈ）、　２．８８９（ｑ　、Ｊ＝
７．Ｑｌｌｚ、　２Ｈ）、　３．９５９及び３．９８８
　（ｓ　、　２Ｈ）　。
５．０７３及び５．０４８　（ｓ　、　２Ｈ）、　７．
０００及び６．９５４（ｄ、Ｊ＝８．６ｈ　ｚ、　２Ｈ
）　、及び７．４５’−７，２５（ｍ、７Ｈ）。
Ｅ、９−（２−（Ｎ−メチル−Ｎ−（Ｎ−スクシンイミ
ジロキシ力ルポニルメチル）カルボキサミド）エチル）
　−３，６−ジアセドキシー４，５−ジメチル−９−エ
トキシ−９Ｈ−キサンチン（Ａｃ２ＥｔＳＦ−５１９−
８ａｒ−ＮＨ８、構造上）の製造Ａｃ２ＥｔＳＦ−５１
９−８ａｒ−ＯＢｎ　［１，３５、！９　、２．２４　
ｍモル〕の絶対エタノール〔５０ｍ１〕溶液に炭素上１
０チパラジウム［０，１３！ｊ）を加えた。混合物を水
素バルーン圧力下２０時間攪拌した。触媒を濃過て除き
、エタノールをストリップオフしてシロップ状残留物を
得た。
残留物を塩化メチレン（：５０ｍＪ）に溶解しＮ−ヒド
ロキシスクシンイミド［０，３９Ｆ、３．３９ｍモル〕
及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル
−カルボジイミドハイドロクロライドＣ１，５７ＩＩ、
　８．１９ｍモル〕を加えた。混合物を７５分間攪拌し
た後、水で洗浄した［４Ｘ１５Ｍ〕。溶液を硫酸ナトリ
ウム上で乾燥し、２５ｄに濃縮し、シクロヘキサンで１
２５ｍＡ’に希釈し、チャコール処理し、容量を窒素流
下で５　Ｑ’ｍに減少した。上澄みをデカンテーション
し、残留油を塩化メチレン〔５ｒＩＬｌ〕でとシ急速攪
拌シクロヘキサン［７５’ｍＪ　）に満願し無色粉末［
０，５８７１４３％〕を得た。
分析試料を得るため生成物の一部を塩化メチレンにとシ
、モレキーラシーブ上で乾燥し、窒素流下で蒸発し、最
終的に乾燥ピストルで４８℃五酸化燐上２０時間乾燥し
た。分析：計算［Ｃ（３１）Ｈ（３４）Ｎ（２）Ｏ（１
１））Ｃ６０，９８，Ｈ５，６１，Ｎ４．５９゜実測Ｃ
６０，１５，Ｈ５，７１，Ｎ４．５１゜ＮＭＲ（ＤＭＳ
Ｏ−δ６）［アミド結合ロータマの４：１混合物を示す
〕：δ〔メージャ及びマイカ）　ＬＯ３９（ｔ　ｅ　Ｊ
＝６．９　ｈ　ｚ　、３Ｈ）　。
１．８４１及び１．９４５（ｍ、２Ｈ）、　２．１９（
ｍ、２Ｈ）、　２．１９４（ｓ。
６Ｈ）、　２．３４５　（ｓ　、　６Ｈ）、　２．７６
７及び２−７４４　（ｓ　ｅ　４　Ｈ）　１２．７７８
及び２．８２５（ｓ、３Ｈ）、　２．８８８（ｑ、Ｊ＝
６．９ｈｚ。
２Ｈ）　、　４．３２８及び４．４６１（ａ、２Ｈ）、
　７．０００（ｄ、Ｊ＝８．６ｈｚ、　２Ｈ）、及び７
．４１０（ｄ、Ｊ＝（８，６ｈｚ、　２Ｈ）。
実施例１８ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル２ｄの製造 〔Ｒ９及びＲ１０がＣＨ３であるアルキニルアミノ−ヌ
クレオチドに５２６　ｎｍ染料を付着するに好ましい試
薬〕 Ａ、　　２．４−ジヒドロキシ−３−メチルペンザルデ
ヒドの製造 燐オキシクロリド［８０ｍＡ’、０．８６モル〕ヲＮ−
メチルフォルムアニリド〔１０２ｍ７，０．８２モル〕
のエーテル［２５０ｍ］中攪拌混合物に加えた。混合物
を１時間室温で攪拌した抜水で冷却した。２−メチルレ
ゾルシノール（Ａｌｄｒｉｃｈ、　１００、！９，０．
８１モル〕を加え、混合物を一夜攪拌しながら放置して
室温に暖めた。沈澱中間体生成物を漏逸で回収し、エー
テルで濯いだ〔３×〕。中間体をアセトン〔２５０ｍ１
〕及び水［２５０７ｄ］の混合物に溶解して加水分解し
、３０分間攪拌した。
水〔２１〕を加え、混合物を沸騰させ、放置して冷却し
、結晶生成物を沈澱させた。これを２回目に〔４１〕か
ら再結晶して純粋生成物Ｃ７０ｇ。
５７％〕を得た。Ｍ、Ｐ、　１５０℃。（Ｌｉｔ、１５
２−３℃［Ｗ、　Ｂａｋｅｒ　ｅｔ　ａｌ　Ｊ、　Ｃｈ
ｅｍ、　５ｏｃ−２８３４−５、（１９４８）　：））
　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）　：δ１．９７３（ｓ、３
Ｈ）、　６．５５１（ｄ、Ｊ＝８．５ｈｚ、　ＩＨ）、
　７．４２８（ｄ、Ｊ　＝８．５ｈｚ、　ＩＨ）、　９
．７０３（ｓ、　ＬＨ）、　１０．７４５（ｓ、　ＩＫ
）及び１１．５９２（ｓ、　ＩＨ）。
Ｂ、　　２．４−ジメチルレゾルシノールの製造２．４
−ジヒドロキシ−３−メチルベンズアルデヒド［３０，
Ｏｇ、１９７ｍモル〕とイソデロノぐノール〔３１〕の
溶液の磁気攪拌機を備えた５１３首フラスコ内で氷冷し
た。燐酸〔４Ｔｎｌ〕及び炭素上１０チパラジウムを加
え９素で次いで水素でスパージした。とシあげが完了し
たと考えられた時［ｃ、１．５時間〕、溶液を再び窒素
でスパージし、次いでセライ）　［Ｃｅ１ｉｔｅ■］を
通して漏逸しだ。溶媒をス）　ＩＪツブオフし生成溶液
を水で洗浄した［４Ｘ１００７ｄ）。水洗を酢酸エチル
でパック抽出し、合せた有機層を硫酸ナトリウム上で乾
燥しストリップダウンした。昇華〔９５°、０．０５ト
ール〕で無色固体［１９，６Ｉｉ、７２チ〕を得た。
Ｍ、Ｐ、１０７−８℃（Ｌｉｔ、　１０８−９℃〔Ｗ。
Ｂａｋｅｒ　ｅｔ　ａｌ　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、
　２８３４−５　＋（１９４８）　）　）　ＮＭＲ（Ｄ
ＭＳＯ−δ６）　：δ１．９６９　（ｓ、　３Ｈ）。
２．０３７　（ｓ　、　３Ｈ）、　６．２２０　（ｄ　
、　Ｊ＝８．１ｈｚ、　ＩＨ）、　６．６３７（ｄ　、
　Ｊ＝８．１ｈｚ、　ＩＨ）、　７．９２９　（ｓ、　
ＩＨ）及び８．７８５（ｇ。
Ｉｎ）。
Ｃ，９’−（２−カルボキシエチリデン）　−３，６−
ジヒドロキシ−２，４，５，７−チトラメチルー９１（
−キサンチン（５Ｆ−５２６）の製造 ２．４−ジメチルレゾルシノール［２８，４，？。
０、２０５モル〕及び無水こはく酸（２０，０＃。
０、２００モル〕を丸底フラスコに入れ窒素でノ９−ジ
した。メタンスルフォン酸［２３６１ｒＬｌ’］を添加
し溶液を７０℃２０時間窒素雰囲気下で攪拌した。
反応混合物を水性水酸化ナトリウム［１５０ｍＪの水中
９５ｇ〕及び氷〔３）〕の急速攪拌混合物に満願した。
充分のメタンスルフォン酸を添加して最終−を４．７か
ら１．５にした。生成固体を遠心分離で回収し、懸濁で
洗浄しスピニングダウンし、水からデカンテーションし
た［５Ｘ１．２１’：ｌ。最終懸濁液を漏逸て回収し、
空気乾燥した後、１１０℃で６時間炉乾燥して煉瓦赤色
固体を得た［３０．６ｇ、４４％〕０ アルカリ性溶液からの第２沈澱、遠心分離及び水洗で分
析試料を得た。分析：計算〔Ｃ（１６）Ｈ（１２）Ｏ（
５）］Ｃ７０，５７，Ｈ５，９２゜実測：Ｃ７０，３９
゜Ｈ６，ＯＯ，０，１２チ水［Ｋ−Ｆ　］。ＮＭＲ（Ｄ
ＭＳＯ−δ６）　Ｃはとんどがスピロラクトン型〕：δ
２．１７２（ｓ、　１２Ｈ）。
２．５０８　（ｍ　ｚ　２　Ｈ）　、及び７．６０４　
（８、２Ｈ）。Ｖｉａ、　ａｂｓ。
（ｐＨ８，２：　５０　ｍＭ　ａｑ　Ｔｒｉｓ／ＨＣｔ
）　：　５０９ｎｍＩＱ３− （７１，３００）。
Ｄ、９−（２−カルブキシエチル）　−３，６−ジアセ
ドキシー９−エトキシ−２，４，５，７−チトラメチ＃
−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ２ＥｔＳＦ−５２６’：］の
製造５Ｆ−５２６［２５，２，ｌｉ’　、　７４ｍモル
〕を氷冷無水酢酸［４５Ｑｍ：］に加えた後ピリジン［
１００ｍ］を加え、混合物を水冷却しながら１５０分間
攪拌した。反応混合物を漏逸した後、急速攪拌氷冷水〔
７）〕のゆっくりした定常流に更に３０分間攪拌後、中
間体生成物を漏逸し水洗し、水〔４１〕中に再懸濁し、
更に３０分間攪拌した。固体を漏逸て回収し、空気乾燥
してスピロラクトン中間体を得た（２８．９Ｊ９：）。
この中間体の一部［１８，６ｇ〕を絶対エタノール〔１
１〕に溶解し９０分間還流した。溶液をロタリエパポレ
ータで３００ｍ１に濃縮し結晶を生じた。生成物を漏逸
て回収し、エタノールで濯ぎ、空気乾燥した後、真空乾
燥して無色微結晶を得た［１１．６．１用いた中間体の
量を基準にして５２％〕。
ｍ化メチレン／シクロヘキサンからの再結晶、チャコー
ル処理で無色微結晶を得た。Ｍ、Ｐ、１５４−１５５℃
、塩化メチレンからの２回の蒸発でシクロヘキサンの痕
跡を除き分析に供した。分析二計算（Ｃ（３０）Ｈ（３
３）Ｎ（１）Ｏ（１０））Ｃ６，４８，Ｉ（５，８６。
Ｎ　２．４７゜実測：　Ｃ６３，０８，Ｈ６，ＯＯ，Ｎ
２．３７゜ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：δ１．０５Ｂ
　（ｔ　、　Ｊ＝６．９ｈｚ、　３Ｈ）、　２．１３６
（ｓ＋　、６Ｈ）、　２．１５５（ｓ、　６Ｈ）、　２
．２２８　（ｍ、４Ｈ）、　２．３７１（ｓ、　６Ｈ）
、　２．７４８（ｓ、４Ｈ）、　２．９１８（ｑ、Ｊ＝
６．９ｈｚ、２Ｈ）及び７．３００　（ｓ、　２Ｈ）。
Ｆ、９−（２−（Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃペンジロキシ力ル
デニルメチル）カルがキサミド）エチル）−３，６−ジ
アセドキシー９−エトキシ−９Ｈ−キサンテｙ　［Ａｃ
２ＥｔＳＦ−５０５−８ａｒ−ＯＢｎ　）の製造サルコ
シンベンジルエステル［０，７２，９，４，０２ｍモル
〕の塩化メチレン［４Ｑ１ｎｌ］溶液にＡｃ２ＥｔＳＦ
−５２６−ＮＨ８［１，８２ｇ　、３．２１　ｍモル〕
及び５チ重炭酸ナトリウム水溶液［３０ｍ１：］を加え
た。２相混合物を急速に２０時間攪拌した。この層を分
離し、有機層を４Ｘ１５Ｔｎｌの水で洗浄し、硫酸ナト
リウム上で乾燥し、１５ＴＩＬｌ！に濃縮した。
溶液をシクロヘキサンで１００ｍＡ！に希釈し、チャコ
ール処理し、窒素流下で５０ｍ７に減少して生成物の沈
澱を得た。漏逸後空気乾燥して無色固体を得た［：０．
９６ｇ、４７チ〕。
塩化メチレンとの共沸後広範な真空乾燥で分析試料を得
た。分析：計算［Ｃ（３６）Ｈ（４１）Ｎ（１）０（９
）　）Ｃ６８，４５，Ｉ（６，５４，Ｎ２．２２゜実測
：　Ｃ６８，２９。
）Ｉ６．７０．　Ｎ２．０７゜ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６
）［アミド結合ロータマの５：２混合物を示す〕：δ［
メージャ及びマイナ］　１．０４９及び１．０２７　（
ｔ、　Ｊ＝６．８ｈｚ、　３Ｈ）　。
１．７８３及び１．７００（ｍ、２Ｈ）、　２．１２９
及び２．０９９　（ｓ　。
６Ｈ）、２．１５９及び２．１２９（ｓ、６Ｈ）、　２
．１４（ｍ、２Ｈ）　。
２．３７９及び２．３７１　（ｓ　、　６Ｈ）、　２．
６９９及び２．６９０　（８。
３Ｈ）、　２．８７３　（ｑ　、　Ｊ＝６．８ｈｚ、　
２Ｈ）、　３．９５８及び３．９７６（８，２Ｈ）、　
５．０７５及び５．０１９　（ａ　、　２Ｈ）　、　７
．２６６及び７．２３３　（ｓ　、　２Ｈ）及び７．２
５−７．４０（ｍ、５Ｈ）。
Ｇ、９−（２−（Ｎ−メチル−Ｎ　−（Ｎ’−スクシン
イミジロキシカルポニルメチル）カルボキサミド）エチ
ル）　−３，６−ジアセトキシー９−２．４．５．７−
テトラメチル−９Ｈ−キサンチン［Ａｃ２ＥｔＳＦ　−
５２６−８ａ　ｒ−ＮＨ８、構造２ａ〕の製造Ａｃ２Ｅ
ｔＳＦ−５２６−８ａｒ−ＯＢｎ　　［０，９６１１、
１，５２ｍモル〕の絶対エタノール［４０ｄ］溶液に炭
素上１０％ｉ４ラジウム［０，１０ＩＩ〕を添加した。
混合物を水素バルーン圧力下で３０分間攪拌した。触媒
を漏逸て除き、エタノールをストリップオンしてシロッ
プ状残留物を得た。
この残留物を塩化メチレン［４０ｒＬｌ：］に溶解し、
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド［０，２６，？、　２．
２６ｍモル〕及び１−（３−ジメチルアミンプロピル）
−３−エチル−カルがジイミドハイドロクロライド［：
０．５９＆、３．０８ｍモル〕を加えた。混合物を３０
分間攪拌した後、水洗した［４Ｘ１５７ｄ］。
溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥し、１５ｄに濃縮し、シ
クロヘキサンで１００Ｍに希釈し、チャコール処理し窒
素流下で容量を５０ｄに減少した。
生成物を漏逸て回収し、空気乾燥して無色微結晶を得た
［０．５７３！！、５９％〕。
塩化メチレンとの共沸後、４０℃での広範な真空乾燥で
シクロヘキサンを除き無定形固体として分析試料を得た
。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　：δ１．０４３（ｔ、Ｊ
＝６．７ｈｚ、３Ｈ）、１．８２（ｍ、２Ｈ）、２．１
３０（ｓ、６Ｈ）。
２、１５７　（ｓ　Ｉ６　Ｈ）　、２．１５　（ｍ　ｅ
　２　Ｈ）　、２．３７８　（ｓ　、６　Ｈ）　。
２．７４８（ｓ　、４Ｈ）、２．７７８（ｓ　、３Ｈ）
、２．８９１（ｑ　、Ｊ＝６．７ｈｚ、２Ｈ）１４，３
２７（Ｓ１２Ｈ）及び７．２７５　（Ｓ、　２Ｈ）。
実施例１９ アルキニルアミノヌクレオチドとＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミドとのカンプリングの一般方法螢光標識鎖ターミ
ネートアルキニルアミノヌクレオチド３４−３７の製造 アルキニルアミノヌクレオチドトリフォスフエイト４９
［１０ミクロモル、例３Ｊから〕を水［０，０５０ｍＡ
：］にとシ、ジメチルフォルムアミド（ｏ、ｔｏｏｄ）
で希釈した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル２
ａ［１２，３ｍＪ？、２１ミクロモル、２．１ｅｑ、例
１５Ｅから〕のジメチルフォルムアミド［０，１００モ
ル〕溶液を加え、混合物を５０°で４時間攪拌した。濃
水酸化アンモニウム（０，２ｓｄ］を加え、反応容器を
緊密に栓をし、５０°の加熱を２５分間継続した。生成
赤色溶液を水で１０威に希釈し、ＤＥＡＥ−セファデッ
クス［５ｅｐｈａｄｅｘ）Ａ−２５−１２０−［ｌＸ１
９ｃｒｎ床〕のカラムに適用した。これは１．　Ｑ　Ｍ
　ｐＨ７，６水性ＴＥＡＢ　［５ｏｍｌ　）、次いで０
．２　Ｍ　ｐＨ７，６水性ＴＥＡＢ〔５０ｍ１〕で平衡
にした。カラムは０．４Ｍ［１５０ｍ１　〕から００．
７ＭＣ１５０ｍＡ’）のＰＨ７，、６水性ＴＥＡＨの直
線勾配で溶出した。カラムは３分毎に１００ｒｎｌ　／
　ｈ回収フラクションで駆動した。溶出液は４９８　ｎ
ｍ　［４０ＡＵＦＳ　）で吸収度を観測した。２の少な
い副産物が先ず溶出した後、バセリン解離の強い生成物
帯が溶出した。純粋生成物と考えられるフラクションを
プールし、ストリップダウン〔Ｔ〈３００〕し、３回絶
対エタノールと共蒸発し、水［０，７４１ｄ］でとった
。溶液を可視吸収で〔−８，２５０ｍＭ水性Ｔｒｉｓバ
ッファー〕で評価しリポフィライズした。生成物の稀溶
液は４８７．５　ｎｍに最大吸収を示した。生成物の吸
収係数を遊離のもの［７２，６００：］に等しいと考え
ると、標識アルキニルアミノ−ヌクレオチド３７の収量
は４．２マイクロモル〔４２％〕であった。
上記方法で、Ｈａｔが７−ジアザグアニン［ｋ）である
螢光標識鎖ターミネータ３７を製造した。
螢光標識鎖ターミネータ３４　［Ｈｅｔがウラシル〔ｈ
〕である〕、３５〔シトシン〔ｌ〕〕、及び３６〔７−
ジアザアデノシン〔ｊ〕〕が、アルキニルアミノ−ヌク
レオチドトリ７オスフエイト４６゜４２及び５１と、Ｎ
−ヒドロキシスクシンイミド２ｄ、２ｃ、及び２ｂとを
、それぞれカップリングさせることによシ、同様の方法
に従って製造された。他の螢光標識ヌクレオチド）　Ｉ
Ｊフォスフエイトも同一の方法で製造された。
出願人代理人　　弁理士　鈴　江　武　彦手続補正書（
方式） 昭和６２年１２月２８日 １、事件の表示 特願昭６２−１６６２２４号 ２、発明の名称 アルキニルアミノ　ヌクレオチド ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド
・カンパニー ４、代理人 住所　東京都千代田区霞が関３丁目７番２号　ＵＢＥビ
ル〒１００　　電話０３（５０２）３１８１　　（大代
表）昭和６２年９月２２日 ６、補正の対象 明細書

Claims (12)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）次の構造を有するアルキニルアミノ　ヌクレオチ
    ド Ｎｕｃ−Ｃ≡Ｃ−Ｒ＿１−ＮＲ＿２Ｒ＿３ 式中、Ｒ＿１は、１−２０原子のジラジカル基であり、
    Ｒ＿２及びＲ＿３は、独立して、Ｈ、Ｃ＿１−Ｃ＿４ア
    ルキル又は保護基、及び Ｎｕｃは、次の構造を有するＲ＿４−Ｈｅｔである。 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式
    、表等があります▼ ここで、ＺはＨ又はＮＨ＿２であり、かつＲ＿４は次の
    ものである。 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼ 又は▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ＿５はＨ、ＰＯ＿３Ｈ＿２、Ｐ＿２Ｏ＿６Ｈ＿
    ３、Ｐ＿３Ｏ＿９Ｈ＿４又はその塩であり、 （ｉ）Ｒ＿７＝Ｒ＿８＝Ｈである場合、Ｒ＿６＝Ｈ、Ｏ
    Ｈ、Ｆ、Ｎ＿３又はＮＨ＿２、又は （ｉｉ）Ｒ＿７＝ＨかつＲ＿８＝ＯＨである場合、Ｒ＿
    ６＝Ｈ又はＯＨ、又は （ｉｉｉ）Ｒ＿７＝ＯＨかつＲ＿８＝Ｈである場合、Ｒ
    ＿６は又はＯＨである。
  2. （２）Ｒ＿１が直鎖Ｃ＿１−Ｃ＿１＿０アルキレン基で
    ある特許請求の範囲第１項記載のアルキニルアミノ　ヌ
    クレオチド。
  3. （３）Ｒ＿１が−ＣＨ＿２−基である特許請求の範囲第
    １項記載のアルキニルアミノ　ヌクレオチド。
  4. （４）Ｒ＿２がＨであり、Ｒ＿３がＨ又は保護基である
    特許請求の範囲第１項記載のアルキニルアミノ　ヌクレ
    オチド。
  5. （５）Ｒ＿４が鎖末端シュガーである特許請求の範囲第
    １項記載のアルキニルアミノ　ヌクレオチド。
  6. （６）次の構造を有する標識アルキニルアミノ　ヌクレ
    オチド Ｎｕｃ−Ｃ≡Ｃ−Ｒ＿１−ＮＲ＿２Ｒ＿３ 式中、Ｒ＿１は、１−２０原子のジラジカル基であり、
    Ｒ＿２は、Ｈ、Ｃ＿１−Ｃ＿４アルキル又は保護基、及
    びＮｕｃは、次の構造を有するＲ＿４−Ｈｅｔである。 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式
    、表等があります▼ ここで、ＺはＨ又はＮＨ＿２であり、かつＲ＿４は次の
    ものである。 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼ 又は▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ＿５はＨ、ＰＯ＿３Ｈ＿２、Ｐ＿２Ｏ＿６Ｈ＿
    ３、Ｐ＿３Ｏ＿９Ｈ＿４又はその塩であり、 （ｉ）Ｒ＿７＝Ｒ＿８＝Ｈである場合、Ｒ＿６＝Ｈ、Ｏ
    Ｈ、Ｆ、Ｎ＿３又はＮＨ＿２、又は （ｉｉ）Ｒ＿７＝ＨかつＲ＿８＝ＯＨである場合、Ｒ＿
    ６＝Ｈ又はＯＨ、又は （ｉｉｉ）Ｒ＿７＝ＯＨかつＲ＿８＝Ｈである場合、Ｒ
    ＿６は又はＯＨであり、かつＲ＿３はレポータ基である
    。
  7. （７）Ｒ＿３が螢光基である特許請求の範囲第６項記載
    の標識アルキニルアミノ　ヌクレオチド。
  8. （８）ヨウ素を７−位置にレジオ選択的に導入するため
    ２−チオアルコキシ−６−アルコキシ−７−デアザプリ
    ンをＮ−イオドサクシンイミドで処理する工程を包含す
    る２−チオアルコキシ−６−アルコキシ−７−イオド−
    ７−デアザプリンの製造方法。
  9. （９）次の工程を包含する７−（３−アミノ−１−プロ
    ピニル）−２′，３′−ジデオキシグアノシン５′−ト
    リフォスフェートの製造方法。 （Ａ）水素化ナトリウムの存在下で、６−メトキシ−２
    −メチルチオ−７−デアザプリンと１−クロロ−２−デ
    オキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リ
    ボフラノーズとを接触させる工程、 （Ｂ）塩基性条件下で工程（Ａ）のエステル生成物９を
    ジオール￥１０￥に加水分解する工程、 （Ｃ）ジオール￥１０￥の５−ＯＨ位置をトリチル基で
    保護する工程、 （Ｄ）中間体チオノカルボネートを水素化スズ還元剤で
    還元して３−ＯＨ基を除く工程、 （Ｅ）工程（Ｄ）で生成するジデオキシデアザプリン￥
    １２￥をＮ−イオドサクシンイミドで処理して７−イオ
    ド誘導体￥１３￥を生成する工程、 （Ｆ）化合物￥１３￥をヘキサメチルフォスフォルアミ
    ド中でナトリウム　チオクレゾレートと接触させて７−
    デアザプリン−６−オン￥１４￥を生成する工程、 （Ｇ）化合物１４をメタ−クロロパ−オキシ安息香酸及
    びアンモニアで順次処理して７−デアザグアノシン￥１
    ５￥を得る工程、 （Ｈ）Ｎ−プロパギルトリフルオロアセトアミドを脱保
    護７−イオド化合物￥１６￥とカップリングして７−（
    ３−トリフルオロアセトアミド−１−プロピニル）−２
    ′，３′−ジデオキシ−７−デアザグアノシンを得る工
    程、及び （Ｉ）工程（Ｈ）の生成物を５′トリフォスフェートに
    変換し次いで脱保護する工程。
  10. （１０）ヨウ素を７−位置にレジオ選択的に導入するた
    め一塩化ヨウ素で６−クロロ−７−デアザプリンを処理
    する工程を包含する６−クロロ−７−イオド−７−デア
    ザプリンの製造方法。
  11. （１１）複素環塩基内の炭素原子についたヨウ素原子を
    有するイオド−ヌクレオチドと末端アルキニルアミンと
    を、ビス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム　ジ
    クロライド／ヨウ化第一銅触媒を用いてカップリングさ
    せるにあたり、テトラキス（トリフェニルフォスフィン
    ）パラジウム（Ｏ）／ヨウ化第一銅触媒を用いることを
    包含する改良を含むアルキニルアミノヌクレオチドの改
    良製造方法。
  12. （１２）次の構造を有する７−イオド−ヌクレオチド。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、ＺはＨ又はＮＨ＿２であり、かつＲ＿４は次のも
    のである。 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
    表等があります▼ 又は▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ＿５はＨ、ＰＯ＿３Ｈ＿２、Ｐ＿２Ｏ＿６Ｈ＿
    ３、Ｐ＿３Ｏ＿９Ｈ＿４又はその塩であり、 （ｉ）Ｒ＿７＝Ｒ＿８＝Ｈである場合、Ｒ＿６＝Ｈ、Ｏ
    Ｈ、Ｆ、Ｎ＿３又はＮＨ＿２、又は （ｉｉ）Ｒ＿７＝ＨかつＲ＿８＝ＯＨである場合、Ｒ＿
    ６＝Ｈ又はＯＨ、又は （ｉｉｉ）Ｒ＿７＝ＯＨかつＲ＿８＝Ｈである場合、Ｒ
    ＿６は又はＯＨである。
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