JP3489991B2 - ３’−デオキシリボヌクレオチド誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な3’-デオキ
シリボヌクレオチド誘導体に関する。さらに詳しくは、
本発明は、ＲＮＡポリメラーゼを用いた塩基配列決定法
におけるターミネーターとして有用な、3’-デオキシリ
ボヌクレオチド誘導体に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＤＮＡの塩基配列分析は、分子生物学に
於いて基幹的な技術の一つである。ＤＮＡ塩基配列決定
法としては、現在、マキサム−ギルバート法（化学分解
法）〔Methods Enzymology, 65, 499-560 （1980）〕及
びサンガー法（ジデオキシ連鎖停止法）〔Proc. Natl.
Acad. Sci., USA, 74, 5463-5467（1977）〕の２つの基
本的な方法が知られている。なかでも、ジデオキシ連鎖
停止法は、化学分解法よりも簡単で短時間に配列が決定
できることから、ＤＮＡ塩基配列決定法の主流となって
いる。

【０００３】ジデオキシ連鎖停止法の基本原理は、以下
の如きものである。まず塩基配列を決めようとするＤＮ
Ａ断片を含む一本鎖ＤＮＡを調製し、これを複製過程の
鋳型とする。次いで、これに該ＤＮＡ断片の挿入部位の
近傍に結合するプライマーを結合させ、クレノウフラグ
メントと呼ばれる酵素で該一本鎖ＤＮＡに相補的なＤＮ
Ａを合成する。この合成は、４種の天然の２’−デオキ
シリボヌクレオチド及び連鎖停止剤（ターミネーター）
としてラジオアイソトープや蛍光色素等で標識した４種
の各塩基に対応する標識化２’，３’−ジデオキシヌク
レオチドの存在下で行われる。即ち、２’，３’−ジデ
オキシヌクレオチドは、２’−デオキシリボヌクレオチ
ドの３’位のＯＨ基がＨ基に置換されたもので、２’−
デオキシリボヌクレオチドと同様にクレノウフラグメン
トの基質になるが、２’，３’−ジデオキシヌクレオチ
ドが結合した場合は、そこでＤＮＡの連鎖伸長が停止す
る。この結果、共通の５’末端をもつが鎖長の異なる様
々なＤＮＡ鎖が合成される。即ち、アデニン（Ａ），グ
アニン（Ｇ），シトシン（Ｃ），チミン（Ｔ）夫々の塩
基について、２’，３’−ジデオキシヌクレオチド体を
併用して前記操作を行った後、これを電気泳動にかける
と、塩基配列の順番をＤＮＡの断片の長さで解読できる
のである。

【０００４】しかしながら、最近の、所謂ゲノム・プロ
ジェクトと言われる、ヒトや動植物の全ＤＮＡ塩基配列
の決定や全遺伝子の解析が進められている現状にあって
は、上記のジデオキシ連鎖停止法に於ける、操作手順の
煩雑さ（鋳型一本鎖ＤＮＡ調製等）や、処理時間の高速
化が難しい等の問題点が指摘されている。

【０００５】ポリメラーゼ連鎖反応(PCR) 法は優れた方
法であり、年々その利用範囲が広がっている［Randall
K. Saiki et al. Science, 239:487-491(1988)]。PCR
法では、１分子のDNA フラグメントを増幅することも可
能である。PCR 法で増幅した生成物をクローニングする
ことなくシークエンスする方法（ダイレクト・シークエ
ンス法）も有用な方法である［Corinne Wong et al. Na
ture, 330:384-386 (1988)] 。この方法はライブラリー
作製やそのスクリーニングが不要であり、多くのサンプ
ルの配列情報を同時に得られる迅速な方法である。

【０００６】しかるに、上記ダイレクト・シークエンス
法には２つの大きな問題点がある。一つは、取り込めな
かったプライマー及び２’デオキシリボヌクレオシド
５’トリホスフェート(2'dNTPs) が反応系中に残存し、
これらがシークエンス反応を妨げることである。従っ
て、従来法では、これら残存するプライマーと2'dNTPs
は、シークエンスの前にPCR 生成物から除去する必要が
あった。PCR 生成物の精製方法には種々の方法があり、
例えば、電気泳動による精製法、エタノール沈殿法、ゲ
ル濾過法、HPLC精製法がある［例えば、Dorit et al. C
urrent Protocols inMolecular Biology, Vol. 11, Joh
n Wiley and Sons, New York, 15.2.1-15.2.11 (1991)
参照」。しかし、何れの方法も煩雑である。

【０００７】２つ目の問題は、PCR生成物の迅速な再生
（renaturation) である。ＰＣＲ生成物が２本鎖ＤＮＡ
に再生してしまうと、１本鎖のテンプレート（鋳型）で
はなくなり、プライマーと１本鎖テンプレートとの間の
アニーリングを妨げる。再生を最小限にするための方法
として、例えば変性後の急冷、１つのプライマーのビオ
チレーション（biotilation)とストレプトアビジン被覆
物へのPCR 生成物の吸着、エクソヌクレアーゼの使用、
アシンメトリックPCR 等が報告されている。例えば、Ba
rbara Bachmann et al., Nucleic Acid Res., 18:1309
(1990) に開示されている。しかし、これらの方法の殆
どは、長い時間を必要とし、非常に面倒である。

【０００８】これら問題点を解決する手段の一つとし
て、ＲＮＡポリメラーゼの特性を利用した連鎖伸長反応
によるＤＮＡ塩基配列決定法が考えられている。このよ
うなＲＮＡポリメラーゼを用いる塩基配列決定法のう
ち、連鎖停止法については、４種の天然リボヌクレオチ
ド及びターミネーターとしてラジオアイソトープである
³²P 等の放射性同位元素を標識物として用いた４種の各
塩基に対応する標識化3’-デオキシヌクレオチドを用い
る方法が知られている〔Biochemistry, 24, 5716-5723
（1985）〕。しかしながら、この標識ターミネーター
は、標識物として放射性同位元素を用いているので、人
体に対する安全性や廃棄物処理等を考慮すると、使い勝
手のよいものではない。そこで、放射性同位元素に代え
て蛍光により標識されたターミネーターを利用すること
が考えられる。

【０００９】前述したジデオキシ連鎖停止法に用いられ
る標識化ターミネーターに関しては、例えば、サンガー
等の報告〔J. Mol. Biol., 143, 161-178 （1980）〕,
スミス等の報告〔Nucleic Acids Res., 13, 2399-2412
（1985）〕、プローバー等の報告〔Scince, 238, 336-3
41（1987）〕、コンネル等の報告〔BioTechniques, 5,3
42-348 （1987）〕、リー等の報告〔Nucleic Acids Re
s., 20, 2471-2483 （1992）〕、特公表平5-502371号公
報、特公平7-121239号公報等、種々の報告がなされてい
る。しかるに、何れの報告もＤＮＡポリメラーゼを用い
た方法であるため、ターミネーターとしては、２’，
３’−ジデオキシリボヌクレオチドが使用され、蛍光標
識された3’-デオキシリボヌクレオチドについては何ら
言及していない。

【００１０】また、特公平8-5908号公報には、標識化
２’，３’−ジデオキシリボヌクレオチド、標識化２’
−デオキシリボヌクレオチド、標識化3’-デオキシリボ
ヌクレオチド及び標識化リボヌクレオチドが各種記載さ
れている。しかるに、標識化3’-デオキシリボヌクレオ
チドについては、一般式に含まれる化合物の１つとして
特許請求の範囲に記載されているにも係わらず、実施例
の記載はなく、化合物として合成されたことは実証され
ておらず、未完成の状態である。さらに、この公報で
は、これらヌクレオチド誘導体を実際にＤＮＡ塩基配列
決定に使用した例は記載されていない。ところが、ＤＮ
Ａ合成時におけるＤＮＡポリメラーゼによる２’−デオ
キシリボヌクレオチドの取り込みには、ヌクレオチドが
有する塩基の種類によりバラツキがあることが知られて
いる。標識化ヌクレオチド誘導体についても、同様の傾
向があるとともに、標識物質の種類によってもＤＮＡポ
リメラーゼによる取り込みにバラツキがでることが予想
される。それにも係わらず上記特公平8-5908号公報に
は、開示された誘導体のＤＮＡポリメラーゼによる取り
込みについては全く評価していない。さらに、標識化
3’-デオキシリボヌクレオチドについては、物質自体が
合成されていないので、評価しようもない。

【００１１】上記事情は、ＤＮＡポリメラーゼを用いた
ＤＮＡ塩基配列決定法の場合であるが、ＲＮＡポリメラ
ーゼを用いたＤＮＡ塩基配列決定法については、どのよ
うな傾向があるのかは知られていない。即ち、リボヌク
レオチドの塩基の種類の違いによる取り込み効率の違い
や、標識化した3’-デオキシリボヌクレオチドの取り込
み効率の違いと、ＤＮＡ塩基配列決定法に対する影響に
ついては、殆ど知られていない。ＤＮＡ塩基配列決定の
如き高度な技術が要求される分野に於いて、蛍光標識化
合物や蛍光標識化3’-デオキシリボヌクレオチドは、使
用するＲＮＡポリメラーゼの活性を妨げてはならないと
いう厳しい制約を有するジデオキシ連鎖停止法に用いら
れる。そのため、ＤＮＡポリメラーゼとＲＮＡポリメラ
ーゼとの構造相関等に基づいて、上記の如き公知の標識
化ターミネーターから、ＲＮＡポリメラーゼを用いる連
鎖停止法に有用な蛍光標識化ターミネーターを推測する
ことは極めて困難である。

【００１２】このような状況の中、本発明者らは、ＲＮ
Ａポリメラーゼを利用した核酸の塩基配列決定法に於い
てターミネーターとして有用な各種の蛍光標識化3’-デ
オキシリボヌクレオチド誘導体を開発し、先に特許出願
した（特願平8-227904号）。その後、これらの蛍光標識
化3’-デオキシリボヌクレオチド誘導体を実際にＲＮＡ
ポリメラーゼを利用した核酸の塩基配列決定法に適用し
た結果、鋳型ＤＮＡの塩基配列を決定できた。しかしな
がら、理由は定かではないが、これらの蛍光標識化3’-
デオキシリボヌクレオチド誘導体は、実用的なレベルで
ＤＮＡの塩基配列決定法に使用するには、ＲＮＡポリメ
ラーゼによる取り込み率が十分でなかった。そこで、Ｒ
ＮＡポリメラーゼを利用したＤＮＡの塩基配列決定法を
実用化するという観点から、ＲＮＡポリメラーゼによる
取り込み率の改善された蛍光標識化3’-デオキシリボヌ
クレオチド誘導体の提供が望まれていた。

【００１３】

【発明が解決しようとする課題】そこで本発明の目的
は、ＲＮＡポリメラーゼを用いたＤＮＡの塩基配列決定
法におけるターミネーターとして有用な、ＲＮＡポリメ
ラーゼによる取り込み率の改善された3’-デオキシリボ
ヌクレオチド誘導体を提供することにある。

【００１４】

【課題を解決するための手段】本発明は、下記一般式
〔Ｉ〕で示される3’-デオキシリボヌクレオチド誘導体
の発明である。

【００１５】

【化６】 Ｑ−Ｖ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ−Ｒ 〔Ｉ〕 〔式中、Ｑは3’-デオキシリボヌクレオチド残基を表
し、ｎは４以上の整数を表し、Ｖは−Ｃ≡Ｃ−又は−Ｃ
Ｈ＝ＣＨ−を表し、Ｒは蛍光性を有する基を表す。〕

【００１６】即ち、本発明者等は、前記目的を達成すべ
く鋭意研究を重ねた。その結果、上記一般式〔Ｉ〕で示
される蛍光標識化3’-デオキシリボヌクレオチド誘導
体、即ち、−（ＣＨ₂ ）_n −で示されるメチレン鎖のｎ
の数が４以上であり、かつＲで示される蛍光性を有する
基を含んでなる蛍光標識化3’-デオキシリボヌクレオチ
ド誘導体は、人体、環境等への安全性が高く且つ高感度
に検出可能であり、ＲＮＡポリメラーゼの基質になり
得、これをＲＮＡポリメラーゼを用いるＤＮＡの塩基配
列決定法に於いてターミネーターとして用いた場合に、
ＲＮＡポリメラーゼによる取り込み率が高いことを見い
出し、本発明を完成するに至った。

【００１７】

【発明の実施の形態】本発明の一般式〔Ｉ〕で示される
3’-デオキシリボヌクレオチド誘導体は、(a)3’-デオ
キシリボヌクレオチド残基：Ｑ、 (b)リンカー：一般式〔VI〕

【００１８】

【化７】−Ｖ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＮＨ− 〔VI〕

【００１９】〔式中、Ｖ及びｎは前記に同じ。〕及び
(c)蛍光性を有する基の３つの構成部分に分けることが
できる。

【００２０】Ｑで示される3’-デオキシリボヌクレオチ
ド残基としては、下記一般式〔II〕及び〔III 〕で示さ
れるプリンヌクレオチド残基、下記一般式〔IV〕及び
〔Ｖ〕で示されるピリミジンヌクレオチドの3’-デオキ
シリボヌクレオチド残基が挙げられる。

【００２１】

【化８】

【００２２】

【化９】

【００２３】

【化１０】

【００２４】

【化１１】

【００２５】尚、上記一般式〔II〕〜〔Ｖ〕に於いて、
Ｒ₃ は−ＰＯ₃Ｈ₂：−Ｐ₂Ｏ₆Ｈ₃ ：−Ｐ₃Ｏ₉Ｈ₄ 又はそ
の塩を表し、当該塩の具体例としては、例えばナトリウ
ム塩，カリウム塩，リチウム塩等のアルカリ金属塩、例
えばバリウム塩等のアルカリ土類金属塩、例えばアンモ
ニウム塩，トリエチルアンモニウム塩，ピリジン塩等の
有機アミン塩等が好ましく挙げられる。

【００２６】上記一般式〔VI〕で示されるリンカーは、
Ｑで示される3’-デオキシリボヌクレオチド残基と蛍光
性を有する基とを結合するためのリンカーであり、二重
結合又は三重結合の一方の末端が、ｎが４以上のメチレ
ン鎖を介してアミノ基に結合しているアルキニルアミノ
基である。即ち、該リンカーの二重結合又は三重結合の
他方の末端が、前述した如き3’-デオキシリボヌクレオ
チド残基Ｑのうち、ピリミジンについてはその５位に、
また、７−デアザプリンについてはその７位に夫々結合
し、更に、リンカーのアミノ基は、蛍光色素基上のカル
ボキシル基と結合することにより、3’-デオキシリボヌ
クレオチド残基と、蛍光色素基とを有する化合物を形成
する。一般式〔VI〕で表されるリンカーに於いて、ｎが
４以上のメチレン鎖としては、例えばｎが４〜15のメチ
レン鎖が挙げられ、具体的には、テトラメチレン基、ペ
ンタメチレン基、ヘキサメチレン基、ヘプタメチレン
基、オクタメチレン基、ノナメチレン基、デカメチレン
基等が挙げられる。このようなリンカーとしては、上記
一般式〔VI〕に於いて、ＲＮＡポリメラーゼによる取り
込み率の改善という観点から、ｎは４以上の整数である
が、好ましくはｎは４〜10の整数であり、より好ましく
は、ｎは４〜８の整数を表し、さらに好ましくはｎは４
または６である。

【００２７】Ｒで表される蛍光性を有する基は、蛍光性
を有する基が直接アミノ基に結合していても、間にリン
カーを介してアミノ基に結合していてもよい。蛍光性を
有する基としては、特に限定はなく、蛍光強度や蛍光の
波長、ＲＮＡポリメラーゼによる取り込みの容易さ等を
考慮して適宜選択できる。但し、蛍光性を有する基は、
アルゴンレーザーのような適切な供給源からのエネルギ
ー吸収による刺激に引き続いて、検知可能な発光放射を
生じる蛍光色素基であることが好ましい。

【００２８】蛍光性を有する基Ｒとしては、例えば、下
記一般式〔VII 〕で示される基を挙げることができる。
一般式〔VII 〕で示される蛍光性を有する基は、特に、
アルゴンレーザーのような適切な供給源からのエネルギ
ー吸収による刺激に引き続いて、検知可能な発光放射を
生じる蛍光色素基である。

【００２９】

【化１２】

【００３０】〔式中、Ｗはカルボキシル基を表し、Ｘは
−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ’−（但し、Ｒ’は、水素原
子、低級アルキル基、アラルキル基又はアリール基を表
す）又は−ＣＨ₂−を表し、環Ａ及び環Ｂは何れか一方
が

【００３１】

【化１３】 であり、他方が

【００３２】

【化１４】 であり（但し、Ｚは、Ｏ又は＝Ｎ⁺Ｒ₁Ｒ₂を表し、Ｙ
は、ＯＨ又は−ＮＲ₁Ｒ₂ を表し、（但し、Ｒ₁及びＲ₂
は、夫々独立して水素原子又は低級アルキル基を表す
か、または、Ｒ₁ 及びＲ₂ が共にトリメチレン基を表す
（但し、該２つのトリメチレン基の各他端は、該２つの
トリメチレン基を有する窒素原子が結合している環上
の、該窒素原子と結合している炭素原子の両隣の炭素原
子の何れか一方とそれぞれ結合している）））、環Ｃ

【００３３】

【化１５】 に於ける波線------は、環Ａ及び環Ｂの構造に対応した
位置の結合手を意味し、上記環Ａ、Ｂ及びＣ並びにＷを
有するべンゼン環は、更に置換基を有していてもよ
い。〕

【００３４】一般式〔VII 〕に於いて、Ｘとして表され
る−ＮＲ’−に於けるＲ’で示される低級アルキル基と
しては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れにても良く、
例えば炭素数１〜６のアルキル基が挙げられ、具体的に
はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル
基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、ペン
チル基、イソペンチル基、tert−ペンチル基、１−メチ
ルペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、シク
ロプロピル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等
が挙げられる。Ｒ’で示されるアラルキル基としては、
例えば炭素数７〜20のアラルキル基が挙げられ、具体的
にはベンジル基、フェネチル基、フェニルプロピル基、
メチルベンジル基、メチルフェネチル基、エチルベンジ
ル基、ナフチルメチル基、ナフチルエチル基等が挙げら
れ、また、アリール基としては、例えばフェニル基、ト
リル基、キシリル基、ナフチル基等が挙げられる。

【００３５】一般式〔VII 〕に於いて、Ｚとして表され
る＝Ｎ⁺Ｒ₁Ｒ₂又はＹとして表される−ＮＲ₁Ｒ₂に於け
るＲ₁ 及びＲ₂ で示される低級アルキル基としては、直
鎖状、分枝状或いは環状の何れにても良く、例えば炭素
数１〜６のアルキル基が挙げられ、具体的にはメチル
基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−
ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、ペンチル基、
イソペンチル基、tert−ペンチル基、１−メチルペンチ
ル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、シクロプロピ
ル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げら
れる。

【００３６】上記一般式〔VII 〕に於いて、Ｗで示され
るカルボキシル基が下記一般式〔VIII〕に示す如き位置
に結合している場合、

【００３７】

【化１６】

【００３８】本発明の3’-デオキシリボヌクレオチド誘
導体に於ける蛍光色素基の部分は、下記式の何れの状態
をも取り得る。

【００３９】

【式１】

【００４０】また、該カルボキシル基は、例えばナトリ
ウム塩，カリウム塩，リチウム塩等のアルカリ金属塩、
例えばバリウム塩等のアルカリ土類金属塩、例えばアン
モニウム塩，トリエチルアンモニウム塩，ピリジン塩等
の有機アミン塩等の塩を形成していてもよい。

【００４１】上記一般式〔VII 〕に於いて、環Ａ又は環
Ｂに於ける置換基Ｚが＝Ｎ⁺Ｒ₁Ｒ₂であり、Ｙが−ＮＲ₁
Ｒ₂である場合で、Ｒ₁ 及びＲ₂ が共にトリメチレン基
を表し、該２つのトリメチレン基の各他端が、該２つの
トリメチレン基を有する窒素原子が結合している環上
の、該窒素原子と結合している炭素原子の両隣の炭素原
子の何れか一方とそれぞれ結合している場合としては、
例えば下記式で示すものが挙げられる。

【００４２】

【化１７】

【００４３】上記一般式〔VII 〕に於いて、環Ｃ

【００４４】

【化１８】

【００４５】に於ける波線------は、環Ａ及び環Ｂの構
造に対応した位置の結合手を意味するものであるが、こ
れを具体的に示すと、例えば以下の如くになる。即ち、
環Ａが

【００４６】

【化１９】

【００４７】である場合は、環Ｃに於ける結合手の位置
は以下に示す如きであり、

【００４８】

【化２０】

【００４９】また、環Ｂが

【００５０】

【化２１】

【００５１】である場合は、環Ｃに於ける結合手の位置
は以下に示す如きである。

【００５２】

【化２２】

【００５３】更に、Ｘが−ＮＨ−である場合、環Ａ（又
は環Ｂ）と環Ｃとは、下記に示す何れの状態をも取り得
る。

【００５４】

【化２３】

【００５５】上記一般式〔VII 〕に於ける環Ａ、Ｂ及び
Ｃ並びにＷを有するべンゼン環は、は、更に置換基を有
していてもよいが、このような置換基としては、アルキ
ル基、アルコキシ基、ハロゲン原子等が挙げられる。ア
ルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れに
ても良く、また、二重結合を有していても良く、例えば
炭素数１〜20のアルキル基が挙げられ、好ましくは、炭
素数１〜６の低級アルキル基が挙げられる。具体的には
メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル
基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、ペン
チル基、イソペンチル基、tert−ペンチル基、１−メチ
ルペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、シク
ロプロピル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等
が好ましく挙げられる。アルコキシ基としては、低級ア
ルコキシ基、例えば炭素数１〜６のアルコキシ基が好ま
しく、具体的にはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポ
キシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、アミルオ
キシ基、イソアミルオキシ基、tert−アミルオキシ基、
１−メチルペンチルオキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、
イソヘキシオキシ基等が挙げられる。また、ハロゲン原
子としては、フッ素、塩素、臭素、沃素等が挙げられ
る。

【００５６】上記一般式〔VII 〕で示される蛍光色素基
としては、より具体的には、例えば５（または６）カル
ボキシテトラメチルローダミン（以下、ＴＭＲと略記す
る。）、５（または６）カルボキシローダミンＸ（以
下、ＸＲと略記する。）、５（または６）カルボキシロ
ーダミン６Ｇ（以下、Ｒ６Ｇと略記する。）、５（また
は６）カルボキシローダミン１１０（以下、Ｒ１１０と
略記する。）、５（または６）カルボキシフルオレッセ
イン、５（または６）カルボキシ−２’，７’−ジクロ
ロフルオレッセイン、５（または６）カルボキシ−
２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレッセイ
ン、５（または６）カルボキシ４，７−ジクロロ−
２’，７’−ジメトキシフルオレッセイン、５（または
６）カルボキシ−４，７，４’，５’−テトラクロロ−
２’，７’−ジメトキシフルオレッセイン、５（または
６）カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−
ジメトキシフルオレッセイン、５（または６）カルボキ
シ−４，Ａ７−ジクロロ−１’，２’，７’，８’−ジ
ベンゾフルオレッセイン、５（または６）カルボキシ−
４，７−ジクロロ−１’，２’，７’，８’−ジベンゾ
フルオレッセイン等の蛍光色素から誘導されたものが好
ましく挙げられる。

【００５７】一般式〔Ｉ〕で示される本発明の3’-デオ
キシリボヌクレオチド誘導体は、例えば以下の如き合成
スキームに従えば容易に合成することができる。尚、下
記合成スキーム中、Ｒ₄ は上記した如き蛍光色素基を表
わす。また、下記合成スキームに於いて使用される略称
の正式名は下記の通りである。

【００５８】ＣＡＮ：硝酸二アンモニウムセリウム（I
V）、 ＡｃＯＨ：酢酸、 ＮＰＥＴＦＡ：５−トリフルオロアセタミド−１−ペン
チン ＮＨＥＴＦＡ：６−トリフルオロアセタミド−１−ヘキ
シン ＮＯＴＦＡ：８−トリフルオロアセタミド−１−オクチ
ン Ｅｔ₃ Ｎ：トリエチルアミン、 （Ｐｈ₃ Ｐ）₄ Ｐｄ：テトラキス（トリフェニルホスフ
ィン）パラジウム（０）、 ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、 ＮＨＴｆａ：トリフルオロアセタミド、 （ＥｔＯ）₃ ＰＯ：リン酸トリエチル、 Ｔｒｉｓ（ＴＢＡ）ＰＰ：トリス（トリ−ｎ−ブチルア
ンモニウム）ピロホスフェート、 ＴＥＡＢ：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液、 ＴＢＤＭＳＣｌ：tert−ブチルジメチルシリルクロリ
ド、 ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、 ＴＣＤＩ：１，１’−チオカルボニルジイミダゾール、 ｎ−Ｂｕ₃ ＳｎＨ：水素化−トリ−ｎ−ブチルすず、 ＡＩＢＮ：２，２’−アゾビス（イソブチロニトリ
ル）、 ｐｙｒ．：ピリジン、 ｎ−Ｂｕ₄ ＮＦ：テトラブチルアンモニウムフルオライ
ド、 Ａｃ₂ Ｏ：無水酢酸、 ＭｅＯＨ：メタノール、 ＮＩＳ：Ｎ−ヨードコハク酸イミド、 ＳＴＣ：４−チオクレゾール、 ＨＭＰＡ：ヘキサメチルホスホルアミド、 ＭＣＰＢＡ：ｍ−クロロ過安息香酸、 Ｒ⁴ −ＯＳｕ：蛍光色素基のコハク酸イミジルエステル
体。

【００５９】（１）蛍光標識3’-デオキシウリジン
５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ
が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝４の化合物）の合成。

【００６０】

【式２】

【００６１】（２）蛍光標識3’-デオキシシチジン
５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ
が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝４の化合物）の合成。

【００６２】

【式３】

【００６３】（３）蛍光標識3’-デオキシシチジン
５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ
が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝６の化合物）の合成。

【００６４】

【式４】

【００６５】（４）蛍光標識７−デアザ−3’-デオキシ
アデノシン ５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に
於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝４の化合物）
の合成。

【００６６】

【式５】

【００６７】（５）蛍光標識７−デアザ−3’-デオキシ
アデノシン ５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に
於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝６の化合物）
の合成。

【００６８】

【式６】

【００６９】（６）蛍光標識７−デアザ−3’-デオキシ
グアノシン ５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に
於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝４の化合物）
の合成。

【００７０】

【式７】

【００７１】（７）蛍光標識3’-デオキシウリジン
５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いてＶが−
ＣＨ＝ＣＨ−であって、ｎ＝４の化合物）の合成。

【００７２】

【式８】

【００７３】（８）蛍光標識3’-デオキシウリジン
５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いてＶが−
ＣＨ＝ＣＨ−であって、ｎ＝４の化合物）の合成。

【００７４】

【式９】

【００７５】（９）蛍光標識７−デアザ−3’-デオキシ
シチジン ５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於
いてＶが−ＣＨ＝ＣＨ−であって、ｎ＝４の化合物）の
合成。

【００７６】

【式１０】

【００７７】（１０）蛍光標識７−デアザ−3’-デオキ
シアデノシン ５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕
に於いてＶが−ＣＨ＝ＣＨ−であって、ｎ＝４の化合
物）の合成。

【００７８】

【式１１】

【００７９】（１１）蛍光標識７−デアザ−3’-デオキ
シグアノシン ５’−トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕
に於いてＶが−ＣＨ＝ＣＨ−であって、ｎ＝４の化合
物）の合成。

【００８０】

【式１２】

【００８１】本発明の3’-デオキシリボヌクレオチド誘
導体は、ＲＮＡポリメラーゼを用いる連鎖停止法による
ＤＮＡ塩基配列決定法に於けるＲＮＡ伸長反応停止剤と
して非常に有効であるので、これらを用いることにより
ＤＮＡ塩基配列を簡便且つ短時間に決定することができ
る。即ち、塩基配列を決定すべき鋳型ＤＮＡを各ＲＮＡ
ポリメラーゼのプロモーターの下流に繋ぎ、アデニン
（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、ウラシル
（Ｕ）の４種類のリボヌクレオチドと該リボヌクレオチ
ドに対応する本発明の異なる蛍光色素で修飾された４種
の3’-デオキシリボヌクレオチド誘導体の存在下で各塩
基の部位でＲＮＡポリメラーゼの伸長停止反応を行い、
それらの産物を混合して１つのレーンで電気泳動した
後、レーザーの励起による蛍光波長を分光することによ
りＤＮＡ塩基配列を逐次決定することができる。上記の
如きＲＮＡポリメラーゼを用いる連鎖停止法に於いて使
用されるＲＮＡポリメラーゼとしては特に限定されない
が、伸長反応のプロセッシビティの高いプロモーター依
存型ファージ由来のＲＮＡポリメラーゼが好ましく挙げ
られる。これらＲＮＡポリメラーゼの具体例としては、
Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３ＲＮＡポリメラーゼ、Ｓ
Ｐ６ＲＮＡポリメラーゼ等が挙げられる。

【００８２】以下に、実施例及び参考例並びに実験例を
挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれら
により何等限定されるものではない。

【００８３】

【実施例】

参考例１ 3’-デオキシ-5−ヨードシチジン（前述の合成スキーム
中の化合物６に相当。以下、化合物６と略記する。尚、
以下の化合物についても同様に合成スキーム中の化合物
を夫々示す。）の合成 3’-デオキシシチジン（化合物５：3.0g,13.2mmol)を1,
4-ジオキサン（300ml ）とエタノール（30ml）の混合溶
液に懸濁させ、10℃まで冷却させた後、トリフルオロ酢
酸銀（7.0g,31.7mmol)及びヨウ素（8.04g,31.7mmol)を
添加し、室温で２時間撹拌した。反応終了後、沈澱物を
セライトを通して濾別し、1,4-ジオキサンで洗浄し、ろ
液と洗液を合わせて濃縮して、3’-デオキシ-5−ヨード
シチジン（化合物６）を3.84g 得た（収率82.4% ）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.64-1.70 (m, 1H, 3'
-Ha), 1.88-1.99 (m, 1H, 3'-Hb), 3.60-3.89 (m, 2H,
5'-Ha,b), 4.20-4.21 (m, 1H, 4'-H), 4.37-4.39(m, 1
H, 2'-H), 5.59 (s, 1H, 1'-H), 7.58 (brs, 1H, NH ２
a), 8.41 (brs,1H,NH２b), 8.79 (brs, 1H, 6-H)

【００８４】参考例２ 5-トリフルオロアセタミド-1−ペンチンの合成 水素化ナトリウム（60％油性；5.99g,0.15mol ）のＤＭ
Ｆ（340ml ）溶液にトリフルオロアセタミド（19.2g,0.
17mol ）を氷冷下、10回にわけて添加した。次いでヨウ
化ナトリウム（20.4g,0.136mol）を加え、その後5-クロ
ロ-1−ペンチン（13.97g,0.136mol ）のジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）（50ml）溶液を加て、室温で4.5 時
間、次いで60℃で21時間撹拌反応させた。反応液を冷却
後、リン酸二水素カリウム（59.2g ）水溶液（500ml ）
を加え、この溶液をエーテル（500ml）で抽出した。エ
ーテル層を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後減圧
下に濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（溶出液；ヘキサン- 酢酸エチル混合溶媒）
で精製して、5-トリフルオロアセタミド-1- ペンチン1
7.6g を得た（収率67% ）。 1H-NMR (270MHz,CDCl ３) δppm:1.83(m, 2H, −CH₂ CH
₂ CH₂-), 2.04(t, 1H, J=2.7Hz, H-CC-), 2.31(dt, 2H,
J=2.7, 6.6Hz, -CCCH₂- ), 3.52(q, 2H, J=6.7Hz, CH
₂N), 6.88(brs, 1H, NHTfa)

【００８５】参考例３ 3’-デオキシ-5- （5"- トリフルオロアセタミド-1"-ペ
ンチニル）シチジンの合成 3’-デオキシ-5- ヨードシチジン（化合物６：777mg,2.
20mmol)のDMF （11ml）溶液に窒素気流下、参考例２で
得た5-トリフルオロアセタミド-1- ペンチン（1.18g,6.
60mmol)、よう化銅（Ｉ）（83.8mg,0.44mmol)、テトラ
キス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（25
4mg,0.22mmol)及びトリエチルアミン（0.613ml,4.4mmo
l)を加え室温で30分間反応させた。反応液を塩化メチレ
ン- メタノール混液（20ml）で希釈しイオン交換樹脂AG
1X8 （バイオラド社製；HCO₃ ^- 型;2.02g ）を加え30分
間撹拌した。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；クロロホルム
- メタノール混合溶液）で精製し、メタノール- エーテ
ル混合液より結晶化して、新規物質3’-デオキシ-5-
（5"- トリフルオロアセタミド-1"-ペンチニル）シチジ
ン409mg を得た（収率46.0% ）。 融点 191-193 ℃ 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm: 1.63-1.78 (m, 3H,
3'-Ha and CH₂ CH₂ CH₂N),1.86-1.96 (m, 1H, 3'-Hb),
2.39-2.44(m, 2H, CH₂ CH₂CH₂N), 3.27-3.31(m, 2H, CH₂
N), 3.51-3.82 (m, 2H, 5'-Ha,b), 4.12-4.31 (m, 2H,
2'-H and 4'-H), 5.15 (t, 1H, J = 5.1Hz, 5'-OH), 5.
51 (d, 1H, J = 4.1Hz, 2'-OH), 5.62(s, 1H, 1'-H),
6.69 (brs, 1H, 4-NHa), 7.64 (brs, 1H, 4-NHb), 8.30
(s, 1H, 6-H), 9.50 (brs, 1H, NHTfa)

【００８６】参考例４ トリス（トリ- ｎ- ブチルアンモニウム）ピロホスフェ
ートの合成 ピロリン酸テトラナトリウム十水和物（2.23g ）を水
（50ml）に溶解し、イオン交換樹脂ダウエックス50WX8
（ダウエックス社製；H⁺ 型、45ml）のカラムに通し
た。カラムは更に水で溶出し、溶出液のpHがほぼ中性に
なるまで集めた。トリ−ｎ−ブチルアミン（3.55ml）を
溶出液に加え良く撹拌した。混合液を減圧濃縮し残渣は
エタノール、ピリジン、ＤＭＦで更に共沸濃縮乾固し
た。得られた残渣を乾燥ＤＭＦに溶解し10mlにメスアッ
プして0.5M濃度のトリス（トリ−ｎ−ブチルアンモニウ
ム）ピロホスフェートを得た。

【００８７】参考例５ 5-（5"-アミノ-1"-ペンチニル）-3’-デオキシシチジン
-5'-トリホスフェートの合成 3’-デオキシ-5-（5"-トリフルオロアセタミド-1"-ペン
チニル）シチジン（121mg,0.3mmol)をリン酸トリエチル
（1.21ml）に溶解し、−20℃まで冷却した後オキシ塩化
リン（25μl ）を添加し−20℃で撹拌した。30分経過
後、オキシ塩化リン（22μl ）を追加し、さらに５時間
撹拌した。この反応液を、−20℃に冷却した参考例４で
得たトリス（トリ-n-ブチルアンモニウム）ピロホスフ
ェートを0.5M含むDMF 溶液（3.6ml ）に添加し、室温で
２時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン-水混
液（5ml ）を添加、一夜静置後、25％アンモニア水（20
ml）を加え４時間静置した。反応液をエーテルにて洗浄
後、濃縮乾固して得た残渣をＤＥＡＥ- トヨパールイオ
ン交換カラムクロマトグラフィー（東ソー社製：1.7 ×
30cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液
(pH7.5)0M →0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製し
て、新規物質5-（5"-アミノ-1"-ペンチニル）-3’-デオ
キシシチジン-5'-トリホスフェート105mg を得た（収率
36.6% ）。

【００８８】参考例６ ＸＲ−標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート
（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、
ｎ＝３の化合物）の合成 5-（5"−アミノ-1"-ペンチニル）-3’-デオキシシチジ
ン-5'-トリホスフェート（8μmol）を溶解したＤＭＦ
（300μl）-水（300μl）混合液に、トリエチルアミン
（10μl）と5-カルボキシ-Ｘ-ローダミンコハク酸イミ
ドエステル（モレキュラープローブ社製）（26.9μmol
）を加え室温で一夜撹拌した。反応液に水（30ml）を
加え希釈した後、ＤＥＡＥ- トヨパールイオン交換カラ
ムクロマトグラフィー（1.7×15cm；溶出液：炭酸水素
トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.5)0.1M →0.7M直線
濃度勾配（全量2L) ）で精製して、下記式で示されるＸ
Ｒ-標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート
〔一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、
ｎ＝３の化合物。以下、ＸＲ−３’ｄＣＴＰ（ｎ３）と
略記する。〕6.28μmol を得た（収率78.5% ）。

【００８９】

【化２４】

【００９０】また、得られたＸＲ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ
３）を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム〔ベック
マン（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測
定した結果（測定波長：700nm 〜200nm 、対照：蒸留
水）を図１に示す。

【００９１】参考例７ 6-トリフルオロアセタミド-1- ヘキシンの合成 １）5-ヘキシニル-p- トルエンスルフォネートの合成 氷冷した塩化p-トルエンスルフォニル（20.11g,105.5mm
ol)のピリジン（30ml）溶液に5-ヘキシン-1-オール（東
京化成（株）製；10ml,91.7mmol)を滴下し、その後室温
で20時間撹拌した。反応液に水（15ml）を加え攪拌した
後水（500ml ）に投入した。この溶液をエーテル（300m
l ）で抽出し、エーテル層を冷1N- 塩酸、飽和炭酸水素
ナトリウム水溶液および水で洗浄し、硫酸マグネシウム
で乾燥後減圧下に濃縮して、5-ヘキシニル-p-トルエン
スルフォネート7.33g を得た（収率32% ）。 ２）6-ヨード-1−ヘキシンの合成 5-ヘキシニル-p-トルエンスルフォネート（7.33g,33.3m
mol)、よう化ナトリウム（4.99g,33.3mmol)およびアセ
トン（37ml）の混合液を１時間還流反応させた。冷却
後、沈殿物を濾別し濾液を濃縮した。得られた残渣をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；ヘキサ
ン）で精製し、6-ヨード-1-ヘキシン3.31g を得た（収
率54.8% ）。 ３）6-トリフルオロアセタミド-1- ヘキシンの合成 水素化ナトリウム（60％油性；2.55g,63.6mol ）のＤＭ
Ｆ（50ml）溶液にトリフルオロアセタミド（8.99g,79.6
mmol)を氷冷下、約10部分にわけて添加した。次いで6-
ヨード-1- ヘキシン（3.31g,15.9mmol)のＤＭＦ（15m
l）溶液を加えた。反応液を室温で４時間撹拌した。反
応液に飽和塩化アンモニウム水（100ml ）およびエーテ
ル（100ml ）を加え抽出した。エーテル層を硫酸マグネ
シウムで乾燥後減圧下に濃縮し、得られた残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；ヘキサン-酢
酸エチル混合溶媒）で精製して、6-トリフルオロアセタ
ミド-1-ヘキシン2.0gを得た（収率65.4% ）。 融点 41.0-42.5 ℃ 1H-NMR (270MHz,CDCl_３) δppm:1.53-1.80(m, 4H, -CH₂
(CH ₂)₂ -), 1.98(t, 1H,J=2.7Hz, H-CC-), 2.26(dt, 2
H, J=2.5, 6.7Hz, CC-CH₂-), 3.41(q, 2H,J=6.8Hz, CH₂
-N ), 6.48(brs, 1H, NHTfa)

【００９２】参考例８ 3’-デオキシ-5−（6"−トリフルオロアセタミド-1"-ヘ
キシニル）シチジン（化合物７）の合成 3’-デオキシ-5−ヨードシチジン（化合物６：800mg,2.
27mmol)のDMF （11.4ml）溶液に窒素気流下、参考例７
で得た6-トリフルオロアセタミド-1- ヘキシン（1.31g,
6.80mmol)、よう化銅（Ｉ）（86.3mg,0.453mmol)、テト
ラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
（262mg,0.227mmol)及びトリエチルアミン（0.632ml,4.
53mmol)を加え室温で30分間反応させた。反応液を塩化
メチレン- メタノール混液（20ml）で希釈しイオン交換
樹脂AG1X8 （HCO₃ ^- 型; 2.02g ）を加え30分間撹拌し
た。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィ（溶出液；クロロホルム- メタノ
ール混合溶液）で精製し、メタノール- エーテル混合液
より結晶化して、新規物質3’-デオキシ-5- （6"- トリ
フルオロアセタミド-1"-ヘキシニル）シチジン（化合物
７）399mg を得た（収率42.1% ）。 融点 195-197 ℃ 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.52-1.69 (m, 5H, 3'
-Ha and CH₂ CH₂CH₂ CH₂N), 1.86-1.96(m, 1H, 3'-Hb),
2.39-2.50 (m, 2H, CCH₂-), 3.18-3.28(m, 2H,CH ₂N),
3.50-3.83(m, 2H, 5'-Ha,b), 4.11-4.33 (m, 2H, 2'-H
and 4'-H), 5.14 (t, 1H, J = 4.9Hz, 5'-OH), 5.50
(d, 1H, J = 4.0Hz, 2'-OH), 5.62 (s, 1H, 1'-H), 6.6
5 (brs, 1H, 4-NHa), 7.59 (brs, 1H, 4-NHb), 8.29
(s, 1H, 6-H), 9.41 (brs, 1H, NHTfa)

【００９３】参考例９ 5-（6"−アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオキシシチジ
ン-5'-トリホスフェート（化合物８）の合成 3’-デオキシ-5−（6"−トリフルオロアセタミド-1"-ヘ
キシニル）シチジン（化合物７：125.5mg,0.3mmol)をリ
ン酸トリエチル（1.26ml）に溶解し、−20℃まで冷却し
た後オキシ塩化リン（25.11 μl ）を添加し−20℃で撹
拌した。30分経過後、オキシ塩化リン（22.32 μl ）を
追加し、さらに５時間撹拌した。この反応液を、−20℃
に冷却したトリス（トリ-n- ブチルアンモニウム）ピロ
ホスフェートを0.5M含むDMF 溶液（3.6ml ）に添加し、
室温で２時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン
- 水混液（4ml ）を添加、一夜静置後、25％アンモニア
水（20ml）を加え４時間静置した。反応液をエーテルに
て洗浄後、濃縮乾固して得た残渣をＤＥＡＥ- トヨパー
ルイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.7 ×30cm；
溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.
5)0M →0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製して、新
規物質5-（6"-アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオキシシ
チジン-5'-トリホスフェート（化合物８）200mg を得た
（収率69.0% ）。

【００９４】実施例１ ＸＲ−標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート
（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、
ｎ＝４の化合物）の合成 5-（6"- アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオキシシチジ
ン-5'-トリホスフェート（化合物８：10μmol ）を溶解
したＤＭＦ（300μl）−水（300μl）混合液に、トリエ
チルアミン（10μl）、5-カルボキシ−Ｘ−ローダミン
コハク酸イミドエステル（モレキュラープローブ社製）
（15μmol ）を加え室温で一夜撹拌した。反応液に水
（30ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ- トヨパールイオ
ン交換カラムクロマトグラフィー（1.7 ×15cm；溶出
液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.5)0.1
M →0.7M直線濃度勾配（全量2L)）で精製して、下記式
で示されるリンカー部のメチレン鎖のｎの数が４個であ
るＸＲ−標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェー
ト〔一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であっ
て、ｎ＝４の化合物。以下、ＸＲ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ
４）と略記する。〕8.02μmolを得た（収率80.2%）。

【００９５】

【化２５】

【００９６】また、得られたＸＲ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ
４）を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム〔ベック
マン（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測
定した結果（測定波長：700nm 〜200nm 、対照：蒸留
水）を図２に示す。

【００９７】参考例１０ 8-トリフルオロアセタミド-1- オクチンの合成 １）7-オクチン-1−オールの合成 リチウムアセチリドエチレンジアミン錯体（アルドリッ
チ社製；11.3g,122.5mmol)とジメチルスルホキシド（50
ml）の懸濁液を５〜10℃に冷却し、1-ブロモ-6-テトラ
ヒドロピラニルオキシヘキサン（シグマ社製；25g,94.3
mmol)を２時間かけて滴下した。その後室温で２時間撹
拌した。反応液に水（10ml）を加え10分間撹拌した後水
（150ml ）に投入しエーテル（300ml ）で抽出した。エ
ーテル層を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後減圧
下に濃縮し、油状物として8-（テトラヒドロピラニルオ
キシ）-1- オクチン18.1g を得た（収率91.2% ）。8-
（テトラヒドロピラニルオキシ）-1- オクチン（18g,8
5.6mmol)とクロロホルム（40ml）とメタノール（140ml
）の混合液にダウエックス50WX8 （H⁺ 型、18g ）を添
加し環流下に１時間加熱した。樹脂を濾別後、濾液を濃
縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（溶出液；ヘキサン- 酢酸エチル混合液）で精製
し、7-オクチン-1- オール9.6gを得た（収率88.6% ）。 ２）7-オクチニル-p- トルエンスルフォネートの合成 氷冷した塩化p-トルエンスルフォニル（17.4g,91.3mmo
l)のピリジン（30ml）溶液に7-オクチン-1- オール（9.
6g,76.1mmol)を滴下し、その後５〜10℃で20時間撹拌し
た。反応液に水（15ml）を加え攪拌後反応液を水（500m
l ）に投入しエーテル（500ml ）で抽出した。エーテル
層を冷1N- 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および
水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後減圧下に濃縮し
て、7-オクチニル-p- トルエンスルフォネート18.3g を
得た（収率85.7% ）。 ３）8-ヨード-1−オクチンの合成 7-オクチニル-p−トルエンスルフォネート（18.3g,65.2
mmol)、よう化ナトリウム（9.77g,65.2mmol)およびアセ
トン（91ml）の混合液を４時間環流反応した。冷却後、
沈殿物を濾別し濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；ヘキサン）で
精製し、8-ヨード-1- オクチン14.5g を得た（収率94.2
% ）。 ４）8-トリフルオロアセタミド-1- オクチンの合成 水素化ナトリウム（60％油性；9.82g,245mmol)のＤＭＦ
（200ml ）溶液にトリフルオロアセタミド（34.7g,307m
mol)を氷冷下、10回にわけて添加した。次いで8-ヨード
-1- オクチン（14.5g,61.4mmol)のＤＭＦ（60ml）溶液
を加え、室温で２時間撹拌させた。反応液に飽和塩化ア
ンモニウム水溶液（400ml ）およびエーテル（400ml ）
を加え抽出した。エーテル層を硫酸マグネシウムで乾燥
後減圧下に濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（溶出液；ヘキサン−酢酸エチル混合
溶媒）で精製し、ヘキサンより結晶化して8-トリフルオ
ロアセタミド-1- オクチン10.8g を得た（収率79.3%
）。 融点 29.5-30.0 ℃ 1H-NMR (270MHz,CDCl_３) δppm:1.36-1.63(m, 8H, -CH₂
(CH₂)₄ -), 1.94(t, 1H,J=2.7Hz, H-CC-), 2.20(dt, 2H,
J=2.5, 6.7Hz, CC-CH₂-), 3.37(q, 2H, J=6.8Hz, CH₂-
N ), 6.28(brs, 1H, NHTfa)

【００９８】参考例１１ 3’-デオキシ-5−（8"−トリフルオロアセタミド-1"-オ
クチニル）シチジン（化合物９）の合成 3’-デオキシ-5−ヨードシチジン（化合物６：450mg,1.
27mmol)のDMF （6.4ml）溶液に窒素気流下、参考例１０
で得た8-トリフルオロアセタミド-1- オクチン（846mg,
3.82mmol)、よう化銅（Ｉ）（48.5mg,0.25mmol)、テト
ラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
（147mg,0.127mmol)及びトリエチルアミン（0.355ml,2.
55mmol)を加え室温で30分間反応させた。反応液を塩化
メチレン−メタノール混液（12ml）で希釈しイオン交換
樹脂AG1X8 （HCO₃ ^- 型;1.17g）を加え30分間撹拌した。
濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム- メタノー
ル混合溶液）で精製し、メタノール−エーテル混合液よ
り結晶化して、新規物質3’-デオキシ-5−（8"- トリフ
ルオロアセタミド-1"-オクチニル）シチジン（化合物
９）219mg を得た（収率38.5% ）。 融点 165-167 ℃ 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.27-1.54 (m, 8H, -
(CH₂)₄ -), 1.63-1.69(m,1H, 3'-Ha), 1.86-1.97 (m, 1
H, 3'-Hb), 2.37(t, 2H, J=7.0Hz, CCCH₂), 3.14-3.21
(m, 2H, CH₂N), 3.49-3.56 (m, 1H, 5'-Ha), 3.75-3.81
(m, 1H, 5'-Hb), 4.08-4.31 (m, 2H, 2'-H and 4'-H),
5.13 (t, 1H, J = 5.0Hz, 5'-OH), 5.49(d,1H, J = 4.
1Hz, 2'-OH), 5.62 (d, 1H, J=1.4Hz, 1'-H), 6.62 (br
s, 1H, 4-NHa), 7.58 (brs, 1H, 4-NHb), 8.28 (s, 1H,
6-H), 9.41 (brs, 1H, NHTfa)

【００９９】参考例１２ 5-（8"−アミノ-1"-オクチニル）-3’-デオキシシチジ
ン-5'-トリホスフェート（化合物１０）の合成。 3’-デオキシ-5- （8"- トリフルオロアセタミド-1"-オ
クチニル）シチジン（化合物９：134mg,0.3mmol)をリン
酸トリエチル（1.34ml）に溶解し、−20℃まで冷却した
後オキシ塩化リン（25.11 μl ）を添加し−20℃で撹拌
した。30分経過後、オキシ塩化リン（22.32 μl ）を追
加し、さらに3.5 時間撹拌した。この反応液を、−20℃
に冷却したトリス（トリ-n- ブチルアンモニウム）ピロ
ホスフェートを0.5M含むDMF 溶液（3.6ml ）に添加し、
室温で２時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン
- 水混液（5ml ）を添加、一夜静置後、25％アンモニア
水（20ml）を加え４時間静置した。反応液をエーテルに
て洗浄後、濃縮乾固して得た残渣をＤＥＡＥ- トヨパー
ルイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.7 ×30cm；
溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.
5)0M →0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製して、新
規物質5-（8"- アミノ-1"-オクチニル）-3’-デオキシ
シチジン-5'-トリホスフェート（化合物１０）262mg を
得た（収率50.0%）。

【０１００】実施例２ ＸＲ−標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート
（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、
ｎ＝６の化合物）の合成 5-（8"−アミノ-1"-オクチニル）-3’-デオキシシチジ
ン-5'-トリホスフェート（化合物１０：8 μmol ）を溶
解したＤＭＦ（300μl）-水（300μl）混合液にトリエ
チルアミン（10μl）と5-カルボキシ-Ｘ-ローダミンコ
ハク酸イミドエステル（モレキュラープローブ社製）
（12μmol ）を加え室温で一夜撹拌した。反応液に水
（30ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ- トヨパールイオ
ン交換カラムクロマトグラフィー（1.7×15cm；溶出
液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.5)0.1
M →0.7M直線濃度勾配（全量2L) ）で精製して、下記式
で示されるＸＲ- 標識-3’-デオキシシチジン-5'-トリ
ホスフェート〔一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ
−であって、ｎ＝６の化合物。以下、ＸＲ- ３’ｄＣＴ
Ｐ（ｎ６）と略記する。〕5.34μmol を得た（収率66.7
% ）。

【０１０１】

【化２６】

【０１０２】また、得られたＸＲ−３’ｄＣＴＰ（ｎ
６）を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム〔ベック
マン（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測
定した結果（測定波長：700nm 〜200nm 、対照：蒸留
水）を図３に示す。

【０１０３】参考例１３ 6-クロロ-9−｛2',5'-ビス（O-tert- ブチルジメチルシ
リル）-3'-O-［（イミダゾール-1"-イル）チオカルボニ
ル］-β-D-リボフラノシル｝-7-デアザプリン（化合物
１３）の合成 6-クロロ-9-（β-D-リボフラノシル）-7-デアザプリン
（化合物１１：3.58g,12.5mmol)をTHF（160ml）に溶解
後、ピリジン（5.1ml,62.7mmol)、硝酸銀（4.68g,27.6m
mol)及びtert−ブチルジメチルシリルクロライド（4.16
g,27.6mmol)を添加し、室温で一晩撹拌した。反応終了
後、沈澱物をセライトを通して濾別し、濾液を濃縮、ク
ロロホルムに溶解後、0.2N塩酸及び飽和食塩水にて洗浄
した。クロロホルム層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥
後、クロロホルムを留去し、新規物質6-クロロ-9−［2,
5-ビス（O-tert−ブチルジメチルシリル）−β-D- リボ
フラノシル］-7−デアザプリン（化合物１２）6.42g を
定量的に得た。このものを更に精製することなくDMF
（120ml ）に溶解後、1, 1'-チオカルボニルジイミダゾ
ール（13.36g,75.0mmol)を添加し、室温で一晩撹拌し
た。反応終了後、酢酸エチル及び水を加えたのち、有機
層を飽和食塩水にて洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸
マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；酢酸エチル
-n-ヘキサン混合溶媒）で精製して、新規物質6-クロロ-
9- ｛2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシリル）-3'-
O-［（イミダゾール-1-イル）チオカルボニル］-β-D-
リボフラノシル｝-7-デアザプリン（化合物１３）4.03g
を得た（収率51.5% ）。

【０１０４】参考例１４ 6-クロロ-9−［2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシ
リル）-3’-デオキシ−β-D−リボフラノシル］-7−デ
アザプリン（化合物１４）の合成 6-クロロ-9- ｛2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシ
リル）-3'-O-［（イミダゾール-1- イル）チオカルボニ
ル］-β-D-リボフラノシル｝-7- デアザプリン（化合物
１３：4.0g,6.41mmol)をトルエン（200ml ）に溶解後、
2,2'- アゾビス（イソブチロニトリル）（0.21g,1.3mmo
l)及び水素化−トリ−ｎ−ブチルすず（3.45ml,13mmol)
を添加し、窒素気流下、80℃で30分間撹拌した。反応終
了後、トルエンを留去し、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィ（溶出液；酢酸エチル-n-ヘキサン混合溶媒）で
精製して、新規物質6-クロロ-9- ［2',5'-ビス（O-tert
-ブチルジメチルシリル）-3’-デオキシ-β-D-リボフラ
ノシル］-7- デアザプリン（化合物１４）2.60g を得た
（収率81.5% ）。

【０１０５】参考例１５ 6-クロロ-9-（3’-デオキシ-β-D-リボフラノシル）-7-
デアザプリン（化合物１５）の合成 6-クロロ-9-［2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシリ
ル）-3’-デオキシ-β-D-リボフラノシル］-7-デアザプ
リン（化合物１４：2.6g,5.2mmol)をTHF（30ml）に溶解
し、1Mテトラブチルアンモニウム フルオライド（12.5
ml,12.5mmol)を添加し、室温で一晩撹拌した。反応終了
後、反応液を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィ（溶出液；クロロホルム- メタノール混合溶媒）
で精製して、新規物質6-クロロ-9- （3’-デオキシ-β-
D-リボフラノシル）-7-デアザプリン（化合物１５）1.4
7g を定量的に得た。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm: 1.93, 2.23 (m, 2H,
3'-Ha,b), 3.55, 3.71(2dd, 2H, J = 4.1, 11.9; 3.2,
11.6 Hz, 5'-Ha,b), 4.36 (m, 1H, 2'-H), 4.45(m, 1H,
4'-H), 5.02 (brs, 1H, 5'-OH), 5.66 (brs, 1H, 2'-O
H), 6.19 (d,1H,J = 2.4Hz, 1'-H), 6.70 (d, 1H, J =
3.8Hz, 7-H), 8.02 (d, 1H, J = 4.1Hz,8-H), 8.66 (s,
1H, 2-H)

【０１０６】参考例１６ 6-クロロ-9- （3’-デオキシ-2',5'-ジ-O-アセチル-β-
D-リボフラノシル）-7-デアザプリン（化合物１６）の
合成 6-クロロ-9-（3’-デオキシ-β-D-リボフラノシル）-7-
デアザプリン（化合物１５：1.47g,5.45mmol)をピリジ
ン（15ml）に溶解後、無水酢酸（5ml）を添加し、室温
で一晩撹拌した。反応終了後、０℃に冷却しメタノール
（5ml）を加え減圧濃縮し、クロロホルムに溶解後0.5N
塩酸及び飽和食塩水にて洗浄した。クロロホルム層を無
水硫酸マグネシウムにて乾燥後、クロロホルムを留去し
て新規物質6-クロロ-9-（3’-デオキシ-2',5'-ジ-O-ア
セチル-β-D-リボフラノシル）-7-デアザプリン（化合
物１６）2.00g を定量的に得た。

【０１０７】参考例１７ 6-クロロ-7-ヨード-9-（3’-デオキシ-2',5'-ジ-O-アセ
チル-β-D-リボフラノシル）-7-デアザプリン（化合物
１７）の合成 6-クロロ-9-（3’-デオキシ-2',5'-ジ-O-アセチル-β-D
-リボフラノシル）-7-デアザプリン（化合物１６：1.44
g,4.07mmol)をアセトニトリル（67ml）に溶解後、硝酸
二アンモニウムセリウム（IV）（0.62g,2.44mmol)及び
ヨウ素（1.12g,2.03mmol)を添加し、80℃で30分間撹拌
した。反応終了後、アセトニトリルを減圧濃縮し酢酸エ
チルに溶解後、5 ％亜硫酸水素ナトリウム溶液、飽和炭
酸水素ナトリウム溶液及び飽和食塩水で洗浄した。酢酸
エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチル
を留去し、塩化メチレン-エーテルで結晶化させ、新規
物質6-クロロ-7-ヨード-9-（3’-デオキシ-2',5'-ジ-O-
アセチル-β-D-リボフラノシル）-7-デアザプリン（化
合物１７）1.46gを得た（収率75.0% ）。 融点：149-150 ℃ 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm: 2.14, 2.17 (2s, 6H,
2Ac), 2.23-2.49 (m,2H, 3'-Ha,b), 4.25- 4.48 (m, 2
H, 5'-Ha,b), 4.58-4.68 (m, 1H, 4'-H), 5.52-5.54
(m, 1H, 2'-H), 6.33 (d, 1H, J = 1.4Hz, 1'-H), 7.64
(s, 1H, 8-H), 8.63 (s, 1H, 2-H)

【０１０８】参考例１８ 7-ヨード-3’-デオキシ-7- デアザアデノシン（化合物
１８）の合成 6-クロロ-7- ヨード-9- （3’-デオキシ-2',5'- ジ-O-
アセチル- β-D- リボフラノシル）-7- デアザプリン
（化合物１７：1.63g,3.40mmol)とアンモニア- メタノ
ール（70ml）を110 ℃で20時間反応させた。反応終了
後、反応液を減圧濃縮し、メタノールで結晶化させ、新
規物質7-ヨード-3’-デオキシ-7- デアザアデノシン
（化合物１８）1.00g を得た（収率78.8% ）。 融点：223-225 ℃（分解）

【０１０９】参考例１９ 7-デアザ-7- （6"- トリフルオロアセタミド-1"-ヘキシ
ニル）-3’-デオキシアデノシン（化合物１９）の合成 7-ヨード-3’-デオキシ-7- デアザアデノシン（化合物
１８：220mg,0.585mmol)のDMF （3ml ）溶液に窒素気流
下、参考例７で得た6-トリフルオロアセタミド-1- ヘキ
シン（339mg,1.75mmol)、よう化銅（Ｉ）（22.3mg,0.11
7mmol)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジ
ウム（０）（67.5mg,0.058mmol)及びトリエチルアミン
（0.163ml,1.17mmol)を加え室温で30分間反応させた。
反応液を塩化メチレン- メタノール混液（6ml ）で希釈
しイオン交換樹脂AG1X8 （HCO₃ ^- 型; 0.55g ）を加え30
分間撹拌した。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；クロロホル
ム- メタノール混合溶液）で精製して、新規物質7-デア
ザ-7- （6"- トリフルオロアセタミド-1"-ヘキシニル）
-3’-デオキシアデノシン（化合物１９）210mg を得た
（収率81.6% ）。1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.55
-1.63(m, 4H, -(CH₂)₂-), 1.83-1.92 (m, 1H, 3'-Ha),
2.13-2.24 (m, 1H, 3'-Hb), 2.47-2.52(m, 2H, CCCH
₂-), 3.16-3.24(m,2H, CH₂N), 3.46-3.54 (m, 1H, 5'-H
a), 3.62-3.68 (m, 1H, 5'-Hb), 4.23-4.38(m, 2H, 2'-
H and 4'-H), 5.03 (t, 1H, J = 5.5Hz, 5'-OH), 5.56
(d,1H, J =4.3Hz, 2'-OH), 6.01 (d, 1H, J = 2.2Hz,
1'-H), 6.60 (brs, 2H, 6-NH₂),7.65 (s, 1H, 8-H), 8.
11 (s, 1H, 2-H), 9.44 (brs, 1H, NHTfa)

【０１１０】参考例２０ 7-デアザ-7- （6"- アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオ
キシアデノシン-5'-トリホスフェート（化合物２０）の
合成 7-デアザ-7- （6"- トリフルオロアセタミド-1"-ヘキシ
ニル）-3’-デオキシアデノシン（化合物１９：181mg,
0.41mmol)をリン酸トリエチル（1.81ml）に溶解し、−2
0℃まで冷却した後オキシ塩化リン（34.32 μl)を添加
し−20℃で撹拌した。30分経過後、オキシ塩化リン（3
0.5μl)を追加し、さらに４時間撹拌した。この反応液
を、−20℃に冷却したトリス（トリ-n- ブチルアンモニ
ウム）ピロホスフェートを0.5M含むDMF 溶液（4.9ml ）
に添加し、室温で３時間撹拌した。反応終了後、トリエ
チルアミン- 水混液（5ml ）を添加、一夜静置後、25％
アンモニア水（20ml）を加え４時間静置した。反応液を
エーテルにて洗浄後、濃縮乾固して得た残渣をＤＥＡＥ
- トヨパールイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.
2 ×30cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩
衝液(pH7.5)0M →0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製
して、新規物質7-デアザ-7- （6"- アミノ-1"-ヘキシニ
ル）-3’-デオキシアデノシン-5'-トリホスフェート
（化合物２０）283mgを得た（収率69.6% ）。

【０１１１】実施例３ Ｒ６Ｇ標識7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-トリ
ホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ
−であって、ｎ＝４の化合物）の合成 7-デアザ-7- （6"- アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオ
キシアデノシン-5'-トリホスフェート（化合物２０：8
μmol ）を溶解したＤＭＦ（0.6ml ）- 水（0.3ml ）の
混合液に、トリエチルアミン（10μl ）と5-カルボキシ
ローダミン６Ｇコハク酸イミドエステル（モレキュラー
プローブ社製）（16μmol ）のDMF （1.3ml ）溶液を加
え室温で一夜撹拌した。反応液に水（30ml）を加え希釈
した後、ＤＥＡＥ- トヨパールイオン交換カラムクロマ
トグラフィー（1.2 ×30cm；溶出液：炭酸水素トリエチ
ルアンモニウム緩衝液(pH7.5)0.1M →0.6M直線濃度勾配
( 全量2L) ）で精製して、下記式で示されるＲ６Ｇ標識
7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-トリホスフェー
ト〔一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であっ
て、ｎ＝４の化合物。以下、Ｒ６Ｇ- ３’ｄＡＴＰ（ｎ
４）と略記する。〕5.33μmol を得た（収率66.7% ）。

【０１１２】

【化２７】

【０１１３】〔式中、Ｅｔはエチル基を、また、Ｍｅは
メチル基を夫々示す。〕 また、得られたＲ６Ｇ−３’ｄＡＴＰ（ｎ４）を、ＤＵ
６４０紫外可視分光解析システム〔ベックマン（株）
製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測定した結果
（測定波長：700nm 〜200nm 、対照：蒸留水）を図４に
示す。

【０１１４】参考例２１ 7-デアザ-7−（8"−トリフルオロアセタミド-1"-オクチ
ニル）-3’-デオキシアデノシン（化合物２１）の合成 7-ヨード-3’-デオキシ-7- デアザアデノシン（化合物
１８：220mg,0.585mmol)のDMF （3ml ）溶液に窒素気流
下、参考例１０で得た8-トリフルオロアセタミド-1−オ
クチン（388mg,1.75mmol)、よう化銅（Ｉ）（22.3mg,0.
117mmol)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラ
ジウム（０）（67.5mg,0.058mmol)及びトリエチルアミ
ン（0.163ml,1.17mmol)を加え室温で30分間反応させ
た。反応液を塩化メチレン- メタノール混液（6ml ）で
希釈しイオン交換樹脂AG1X8 （HCO₃ ^-型; 0.55g ）を加
え30分間撹拌した。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣
をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；クロロ
ホルム- メタノール混合溶液）で精製して、新規物質7-
デアザ-7−（8"- トリフルオロアセタミド-1"-オクチニ
ル）-3’-デオキシアデノシン（化合物２１）216mg を
得た（収率78.7% ）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.29-1.58(m, 8H, -(C
H₂)₄-), 1.83-1.91 (m,1H, 3'-Ha), 2.14-2.24 (m,1H,
3'-Hb), 2.44-2.51(m, 2H, CCCH₂), 3.15-3.22(m, 2H,
CH₂N), 3.46-3.54 (m, 1H, 5'-Ha), 3.62-3.70 (m, 1H,
5'-Hb), 4.26-4.36 (m, 2H, 2'-H and 4'-H), 5.04
(t, 1H, J = 5.4Hz, 5'-OH), 5.56 (d, 1H,J = 4.6Hz,
2'-OH), 6.01 (d, 1H, J = 2.4Hz, 1'-H), 6.60 (brs,
2H, 6-NH₂)，７．６５ （ｓ， １Ｈ， ８−Ｈ），
８．１１ （ｓ， １Ｈ， ２−Ｈ）， ９．３８
（ｂｒｓ， １Ｈ， ＮＨＴｆａ）

【０１１５】参考例２２ 7-デアザ-7- （8"- アミノ-1"-オクチニル）-3’-デオ
キシアデノシン-5'-トリホスフェート（化合物２２）の
合成 7-デアザ-7- （8"- トリフルオロアセタミド-1"-オクチ
ニル）-3’-デオキシアデノシン（化合物２１：189mg,
0.403mmol)をリン酸トリエチル（1.89ml）に溶解し、−
20℃まで冷却した後オキシ塩化リン（33.7μl)を添加し
−20℃で撹拌した。30分経過後、オキシ塩化リン（30.0
μl)を追加し、さらに４時間撹拌した。この反応液を、
−20℃に冷却した0.5M- トリス（トリ-n- ブチルアンモ
ニウム）ピロホスフェートのDMF 溶液（4.8ml ）に添加
し、室温で３時間撹拌した。反応終了後、トリエチルア
ミン- 水混液（15ml）を添加、一夜静置後、25％アンモ
ニア水（20ml）を加え４時間静置した。反応液をエーテ
ルにて洗浄後、濃縮乾固して得た残渣をＤＥＡＥ- トヨ
パールイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.2 ×30
cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(p
H7.5)0M →0.6M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製して、
新規物質7-デアザ-7- （8"- アミノ-1"-オクチニル）-
3’-デオキシアデノシン-5'-トリホスフェート（化合物
２２）143mg を得た（収率35% ）。

【０１１６】実施例４ Ｒ６Ｇ標識7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-トリ
ホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ
−であって、ｎ＝６の化合物）の合成 7-デアザ-7- （8"- アミノ-1"-オクチニル）-3’-デオ
キシアデノシン-5'-トリホスフェート（化合物２２：8
μmol ）を溶解したＤＭＦ（0.6ml ）- 水（0.3ml ）の
混合液に、トリエチルアミン（10μl ）と5-カルボキシ
ローダミン６Ｇコハク酸イミドエステル（モレキュラー
プローブ社製）（16μmol ）のDMF （1.3ml ）溶液を加
え室温で一夜撹拌した。反応液に水（30ml）を加え希釈
した後、ＤＥＡＥ- トヨパールイオン交換カラムクロマ
トグラフィー（1.2 ×30cm；溶出液：炭酸水素トリエチ
ルアンモニウム緩衝液(pH7.5)0.1M →0.6M直線濃度勾配
( 全量2L) ）で精製して、下記式で示されるＲ６Ｇ標識
7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-トリホスフェー
ト〔一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であっ
て、ｎ＝６の化合物。以下、Ｒ６Ｇ- ３’ｄＡＴＰ（ｎ
６）と略記する。〕4.3μmol を得た（収率53.8% ）。

【０１１７】

【化２８】

【０１１８】〔式中、Ｅｔはエチル基を、また、Ｍｅは
メチル基を夫々示す。〕 また、得られたＲ６Ｇ- ３’ｄＡＴＰ（ｎ６）を、ＤＵ
６４０紫外可視分光解析システム〔ベックマン（株）
製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測定した結果
（測定波長：700nm 〜200nm 、対照：蒸留水）を図５に
示す。

【０１１９】参考例２３ 3’-デオキシ-5- ヨードウリジン（化合物２）の合成 3’-デオキシウリジン（化合物１：2.08g,9.11mmol)を
酢酸（75ml）に溶解後、硝酸二アンモニウムセリウム
（IV）（2.50g,4.56mmol)及びヨウ素（1.39g,2.73mmol)
を添加し、80℃で30分間撹拌した。反応終了後、酢酸を
減圧濃縮し次いでエタノール- トルエン混液（1:2v/v;3
0ml ）で３回、水- エタノール混液（1:2v/v;30ml ）で
３回共沸濃縮し油状物を得た。得られた残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィ（溶出液；塩化メチレン- メ
タノール混合溶媒）で精製して、3’-デオキシ-5- ヨー
ドウリジン（化合物２）1.78g を得た（収率55.08%）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.89-1.92(m, 1H, 3'-
Ha),2.17-2.26 (m, 1H,3'-Hb), 3.51-3.56 (m, 1H, 5'-
Ha), 3.74-3.79 (m, 1H, 5'-Hb), 4.22-4.30(m,2H, 2'-
H and 4'-H), 5.59 (s, 1H, 1'-H), 8.31 (s, 1H, 6-
H), 11.72(s, 1H,NH)

【０１２０】参考例２４ 3’-デオキシ-5- （6"- トリフルオロアセタミド-1"-ヘ
キシニル）ウリジン（化合物３）の合成 3’-デオキシ-5- ヨードウリジン（化合物２：805mg,2.
27mmol)のDMF （12ml）溶液に窒素気流下、参考例７で
得た6-トリフルオロアセタミド-1- ヘキシン（1.31g,6.
80mmol)、よう化銅（Ｉ）（86.3mg,0.453mmol)、テトラ
キス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（26
2mg,0.227mmol)及びトリエチルアミン（0.63ml,4.53mmo
l)を加え室温で４時間反応させた。反応液を減圧濃縮し
て得た残渣を塩化メチレン- メタノール混液（20ml）に
溶解しイオン交換樹脂AG1X8 （バイオラド社製, HCO₃ ^-
型; 2g）を加え30分間撹拌した。濾別後、濾液を濃縮し
得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶
出液；塩化メチレン- メタノール混合溶液）で精製し
て、新規物質3’-デオキシ-5- （6"- トリフルオロアセ
タミド-1"-ヘキシニル）ウリジン（化合物３）419mg を
得た（収率45.5% ）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6) δppm:1.49-1.64(m, 4H, -
(CH₂)₂-), 1.92-1.97 (m,1H, 3'-Ha), 2.17-2.28 (m, 1
H, 3'-Hb), 2.39(t, 2H, J=6.9Hz, -CCCH₂), 3.21(q, 2
H, J=6.3Hz, CH₂N), 3.49-3.54 (m, 1H, 5'-Ha), 3.72-
3.75(m, 1H,5'-Hb), 4.24-4.35 (m, 2H, 2'-H and 4'
H), 5.20(t, 1H, J=4.9Hz, 5'-OH), 5.52(d,1H, J=3.8H
z, 2'-OH), 5.75 (s, 1H, J = 2.2Hz, 1'-H), 8.23 (s,
1H, 6-H),9.42 (brs, 1H, NHTfa), 11.57 (s, 1H, 3-N
H)

【０１２１】参考例２５ 5-（6"- アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオキシウリジ
ン-5'-トリホスフェート（化合物４）の合成 3’-デオキシ-5- （6"- トリフルオロアセタミド-1"-ヘ
キシニル）ウリジン（化合物３：122.5mg,0.3mmol)をリ
ン酸トリエチル（1.23ml）に溶解し、−20℃まで冷却し
た後オキシ塩化リン（25μl ）を添加し−20℃で撹拌し
た。30分経過後、オキシ塩化リン（22μl ）を追加し、
さらに５時間撹拌した。この反応液を、−20℃に冷却し
たトリス（トリ-n- ブチルアンモニウム）ピロホスフェ
ートを0.5M含むDMF 溶液（3.6ml ）に添加し、室温で４
時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン- 水混液
（5ml ）を添加、一夜静置後、25％アンモニア水（20m
l）を加え４時間静置した。反応液をエーテルにて洗浄
後、濃縮乾固して得た残渣をＤＥＡＥ- トヨパールイオ
ン交換カラムクロマトグラフィー（東ソー社製；1.2 ×
30cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液
(pH7.5)0M →0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製し
て、新規物質5-（6"- アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デ
オキシウリジン-5'-トリホスフェート（化合物４）172m
g を得た（収率60.0%）。

【０１２２】実施例５ ＴＭＲ- 標識3’-デオキシウリジン-5'-トリホスフェー
ト（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であっ
て、ｎ＝４の化合物）。の合成。 5-（6"- アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオキシウリジ
ン-5'-トリホスフェート（化合物４：8 μmol ）を溶解
したＤＭＦ（300 μl ）- 水（300 μl ）混合液にトリ
エチルアミン（10μl ）と5-カルボキシテトラメチルロ
ーダミンコハク酸イミドエステル（モレキュラープロー
ブ社製）（13μmol ）を加え室温で一夜撹拌した。反応
液に水（30ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ- トヨパー
ルイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.7 ×30cm；
溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.
5)0.05M→0.7M直線濃度勾配( 全量2L) ）で精製して、
下記式で示されるＴＭＲ- 標識3’-デオキシウリジン-
5'-トリホスフェート〔一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が
−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝４の化合物。以下、ＴＭＲ-
３’ｄＵＴＰ（ｎ４）と略記する。〕5.9 μmol を得た
（収率73.8% ）。

【０１２３】

【化２９】

【０１２４】〔式中、Ｍｅはメチル基を示す。〕 また、得られたＴＭＲ- ３’ｄＵＴＰ（ｎ４）を、ＤＵ
６４０紫外可視分光解析システム〔ベックマン（株）
製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測定した結果
（測定波長：700nm 〜200nm 、対照：蒸留水）を図６に
示す。

【０１２５】参考例２６ 6-メトキシ-2- メチルチオ-9- ｛2',5'-ビス（O-tert-
ブチルジメチルシリル）-3'-O-［（イミダゾール-1- イ
ル）チオカルボニル］- β-D- リボフラノシル｝-7- デ
アザプリン（化合物２５）の合成 6-メトキシ-2- メチルチオ-9- （β-D- リボフラノシ
ル）-7- デアザプリン（化合物２３：12.86g,39.28mmo
l)をTHF （580ml ）に溶解後、ピリジン（16.8ml,208mm
ol)、硝酸銀（15.55g,91.5mmol)及びtert- ブチルジメ
チルシリルクロライド（13.80g,91.5mmol)を添加し、室
温で一晩撹拌した。反応終了後、沈澱物をセライトを通
して濾別し、濾液を濃縮、クロロホルムに溶解後、0.2N
塩酸及び飽和食塩水にて洗浄した。クロロホルム層を無
水硫酸マグネシウムにて乾燥後、クロロホルムを留去
し、粗6-メトキシ-2- メチルチオ-9- ［2',5'-ビス（O-
tert- ブチルジメチルシリル）- β-D- リボフラノシ
ル］-7- デアザプリン（化合物２４）24.0g を得た。得
られた化合物２４（24.0g ）をDMF （400ml ）に溶解
後、1, 1'-チオカルボニルジイミダゾール（35.0g,196.
5mmol)を添加し、室温で一晩撹拌した。反応終了後、酢
酸エチル及び水を加えたのち、有機層を飽和食塩水にて
洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥
後、減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィ（溶出液；酢酸エチル- クロロホルム混合
溶媒）で精製して、新規物質6-メトキシ-2- メチルチオ
-9- ｛2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシリル）-3'
-O-［（イミダゾール-1- イル）チオカルボニル］-β-D
-リボフラノシル｝-7-デアザプリン（化合物２５）20.4
5gを得た（収率78.2% ）。

【０１２６】参考例２７ 6-メトキシ-2-メチルチオ-9-［2',5'-ビス（O-tert-ブ
チルジメチルシリル）-3’-デオキシ- β-D-リボフラノ
シル］-7-デアザプリン（化合物２６）の合成 6-メトキシ-2-メチルチオ-9-｛2',5'-ビス（O-tert-ブ
チルジメチルシリル）-3'-O-［（イミダゾール-1-イ
ル）チオカルボニル］-β-D-リボフラノシル｝-7-デア
ザプリン（化合物２５：20.45g,30.7mmol)をトルエン
（1L）に溶解後、2,2'-アゾビス（イソブチロニトリ
ル）（1.01g,6.1mmol)及び水素化-n-トリブチルすず（1
6.5ml,61.4mmol)を添加し、窒素気流下、80℃で30分間
撹拌した。反応終了後、トルエンを留去し、シリカゲル
カラムクロマトグラフィ（溶出液；酢酸エチル-n-ヘキ
サン混合溶媒）で精製して、新規物質6-メトキシ-2-メ
チルチオ-9-［2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシリ
ル）-3’-デオキシ-β-D-リボフラノシル］-7-デアザプ
リン（化合物２６）14.57gを得た（収率87.9%）。

【０１２７】参考例２８ 7-ヨード-6-メトキシ-2-メチルチオ-9-［2',5'-ビス（O
-tert-ブチルジメチルシリル）-3’-デオキシ-β-D-リ
ボフラノシル］-7-デアザプリン（化合物２７）の合成 6-メトキシ-2-メチルチオ-9-［2',5'-ビス（O-tert-ブ
チルジメチルシリル）-3’-デオキシ- β-D-リボフラノ
シル］-7-デアザプリン（化合物２６：15.57g,28.84mmo
l)をDMF に溶解し、N-ヨードこはく酸イミド（7.79g,3
4.61mmol)を加え、窒素気流下遮光し、室温で５時間撹
拌した。反応終了後、反応液を０℃に冷却し酢酸エチル
および水を加えたのち有機層を５％チオ硫酸ナトリウム
溶液、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、飽和食塩水で洗浄
した。酢酸エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、
酢酸エチルを留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィ（溶出液；クロロホルム-n-ヘキサン混合溶媒）で精
製して、新規物質7-ヨード-6-メトキシ-2-メチルチオ-9
-［2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシリル）-3’-
デオキシ-β-D-リボフラノシル］-7-デアザプリン（化
合物２７）19.06gを得た（収率99.3%）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm: -0.10, -0.06, 0.12,
0.13 (4s, 12H, 4MeSi), 0.80, 0.93 (2s, 18H, 2t-B
u), 1.90-2.10 (m, 1H, 3'-Ha), 2.18-2.28 (m,1H, 3'-
Hb), 2.54 (s, 3H, SMe), 3.72 (dd, 1H, J = 2.7, 11.
6Hz, 5'-Ha), 3.94(dd, 1H, J = 2.2, 11.6Hz, 5'-Hb),
4.03 (s, 3H, OMe), 4.32-4.48 (m, 2H,2'-H, 4'-H),
6.07 (d, 1H, J = 3.0Hz, 1'-H), 7.59 (s, 1H, 8-H)

【０１２８】参考例２９ 7-ヨード-2-メチルチオ-9-［2',5'-ビス（O-tert-ブチ
ルジメチルシリル）-3’-デオキシ-β-D-リボフラノシ
ル］-7-デアザプリン-6-オン（化合物２８）の合成 4-チオクレゾール（3.36g,27.0mmol)をメタノールに溶
解後、ナトリウムメトキシド（1.61g,29.7mmol)を添加
し、５分間撹拌後メタノールを留去した。これに、トル
エン（150ml ）に溶解した7-ヨード-6-メトキシ-2-メチ
ルチオ-9- ［2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシリ
ル）-3’-デオキシ-β-D-リボフラノシル］-7-デアザプ
リン（化合物２７：4.00g,6mmol)及びヘキサメチルホス
ホルアミド（10ml,57.1mmol)を添加し、窒素気流下、4.
5 時間還流した。反応終了後、酢酸エチルと水を加え、
有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥後減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィ（溶出液；塩化メチレン−メ
タノール混合溶媒）で精製して、新規物質7-ヨード-2-
メチルチオ-9- ［2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチル
シリル）-3’-デオキシ-β-D-リボフラノシル］-7-デア
ザプリン-6-オン（化合物２８）2.35g を得た（収率59.
9% ）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm: 0.06, 0.08, 0.20,
0.24 (4s, 12H, 4MeSi),0.92, 1.03 (2s, 18H, 2t-Bu),
2.07-2.13 (m, 1H, 3'-Ha), 2.34-2.38 (m, 1H,3'-H
b), 2.63 (s, 3H, SMe), 3.81-4.05 (m, 2H, 5'-Ha,b),
4.46-4.57 (m, 2H,2'-H, 4'-H), 6.12 (d, 1H, J = 3.
0Hz, 1'-H), 7.47 (s, 1H, 8-H), 12.44 (s,1H, 1-H)

【０１２９】参考例３０ 7-ヨード-2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシリル）
-3’-デオキシ-7-デアザグアノシン（化合物２９）の合
成 7-ヨード-2-メチルチオ-9-［2',5'-ビス（O-tert-ブチ
ルジメチルシリル）-3’-デオキシ-β-D-リボフラノシ
ル］-7-デアザプリン-6-オン（化合物２８：2.30g,3.53
mmol)を塩化メチレン（90ml）に溶解し、０℃に冷却
後、m-クロロ過安息香酸（0.96g,3.88mmol)を添加し０
℃で15分間撹拌、さらに室温で１時間撹拌した。反応終
了後、反応液を飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び飽和食
塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後塩化メチ
レンを留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィ（溶出液；クロロホルム-メタノール混合
溶媒）で精製しスルホキシド体2.02g （収率83.9%）を
得た。これを1,4-ジオキサン（20ml）に溶解し、−78℃
に冷却後、液体アンモニア（60ml）を加え、110 ℃で６
時間加熱した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、得ら
れた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出
液；塩化メチレン- メタノール混合溶媒）で精製して、
新規物質7-ヨード-2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチル
シリル）-3’-デオキシ-7-デアザグアノシン（化合物２
９）1.60g を得た（収率73.1% ）。

【０１３０】参考例３１ 3’-デオキシ-7-ヨード-7-デアザグアノシン（化合物３
０）の合成。 7-ヨード-2',5'-ビス（O-tert-ブチルジメチルシリル）
-3’-デオキシ-7-デアザグアノシン（化合物２９：1.6
g,2.58mmol)をTHF（50ml）に溶解し、1M-テトラブチル
アンモニウムフルオライド（6.2ml,6.17mmol)を添加
し、室温で一晩撹拌した。反応終了後、反応液を減圧濃
縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；ク
ロロホルム−メタノール混合溶媒）で精製後、メタノー
ルで結晶化させ、新規物質3’-デオキシ-7-ヨード-7-デ
アザグアノシン（化合物３０）0.80g を得た（収率79.1
% ）。 融点：176-178 ℃（分解） 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm: 1.81-1.89 (m, 1H,
3'-Ha), 2.10-2.20 (m,1H, 3'-Hb), 3.43-3.64 (m, 2H,
5'-Ha,b), 4.18-4.29 (m, 2H, 2'-H, 4'-H), 4.91 (t,
1H, J = 5.5Hz, 5'-OH), 5.46 (d, 1H, J = 4.3Hz, 2'
-OH), 5.80 (d,1H,J = 2.4Hz, 1'-H), 6.30 (brs, 2H,
2-NH2), 7.10 (s, 1H, 8-H), 10.45 (brs,1H, 1-H)

【０１３１】参考例３２ 3’-デオキシ-7-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキ
シニル）-7-デアザグアノシン（化合物３１）の合成 3’-デオキシ-7-ヨード-7-デアザグアノシン（化合物３
０：765mg,2.0mmol)のDMF （10ml）溶液に窒素気流下、
参考例７で得た6-トリフルオロアセタミド-1-ヘキシン
（1.16g,6.0mmol)、よう化銅（Ｉ）（76.4mg,0.40mmo
l)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム
（０）（226mg,0.20mmol)及びトリエチルアミン（0.56m
l,4.0mmol)を加え室温で１時間反応させた。反応液を塩
化メチレン-メタノール混液（20ml）で希釈しイオン交
換樹脂AG1X8 （HCO₃ ^- 型; 2.0g）を加え30分間撹拌し
た。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィ（溶出液；クロロホルム- メタノ
ール混合溶液）で精製して、新規物質3’-デオキシ-7-
（6"- トリフルオロアセタミド-1"-ヘキシニル）-7- デ
アザグアノシン（化合物３１）616mg を得た（収率69.5
% ）。 mp 185-187 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.47-1.68(m, 4H, -(C
H₂)₂-),1.80-1.88 (m, 1H, 3'-Ha), 2.09-2.19 (m, 1H,
3'-Hb), 2.38(t, 2H, J=6.9Hz, CCCH₂), 3.25(q, 2H,
J=6.8Hz, CH₂N), 3.42-3.62 (m, 2H, 5'-Ha,b), 4.17-
4.30 (m, 2H, 2'-H, 4'-H), 4.90 (t, 1H, J = 5.5Hz,
5'-OH), 5.45 (d, 1H, J = 4.3Hz, 2'-OH),5.80 (d, 1
H, J = 2.7Hz, 1'-H), 6.28 (brs, 2H, 2-NH₂), 7.11
(s, 1H, 8-H), 9.42 (brs, 1H, NHTfa), 10.39 (s, 1H,
1-H)

【０１３２】参考例３３ 7-デアザ-7- （6"- アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオ
キシグアノシン-5'-トリホスフェート（化合物３２）の
合成 3’-デオキシ-7- （6"- トリフルオロアセタミド-1"-ヘ
キシニル）-7- デアザグアノシン（化合物３１：133mg,
0.3mmol)をリン酸トリエチル（1.33ml）に溶解し、−20
℃まで冷却した後オキシ塩化リン（25μl)を添加し−20
℃で撹拌した。30分経過後、オキシ塩化リン（22μl)を
追加し、さらに一晩撹拌した。この反応液を、−20℃に
冷却したトリス（トリ-n- ブチルアンモニウム）ピロホ
スフェートを0.5M含むDMF 溶液（3.6ml ）に添加し、室
温で３時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン-
水混液(4ml) を添加、反応液をエーテルにて洗浄後、Ｄ
ＥＡＥ- トヨパールイオン交換カラムクロマトグラフィ
ー（1.7 ×30cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニ
ウム緩衝液(pH7.5)0M →0.6M直線濃度勾配( 全量2L)）
で精製した。これに25％アンモニア水（20ml）を加え１
時間静置し、減圧濃縮後、得られた残渣を再度ＤＥＡＥ
- トヨパールイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.
7 ×30cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩
衝液(pH7.5)0M→0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製
して、新規物質7-デアザ-7- （6"- アミノ-1"-ヘキシニ
ル）-3’-デオキシグアノシン-5'-トリホスフェート
（化合物３２）108mg を得た（収率36.4% ）。

【０１３３】実施例６ Ｒ１１０標識7-デアザ-3’-デオキシグアノシン-5'-ト
リホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡
Ｃ−であって、ｎ＝４の化合物）の合成 7-デアザ-7- （6"- アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオ
キシグアノシン-5'-トリホスフェート（化合物３２：8
μmol ）と5-カルボキシローダミン 110-ビス-トリフ
ルオロアセテート コハク酸イミドエステル（モレキュ
ラープローブ社製）（15μmol ）をDMF （500 μl ）-
水（250 μl ）に溶解し、トリエチルアミン（0.16ml）
及びピリジン（0.29ml）を加え、一夜撹拌した。反応液
に水（30ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ- トヨパール
イオン交換カラムクロマトグラフィー（1.7 ×30cm；溶
出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5
）0.1M→0.8M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製して、
下記式で示されるＲ１１０標識7-デアザ-3’-デオキシ
グアノシン-5'-トリホスフェート〔一般式〔Ｉ〕に於い
て、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝４の化合物。以
下、Ｒ１１０-３’ｄＧＴＰ（ｎ４）と略記する。〕3.3
8μmol を得た（収率42.3% ）。

【０１３４】

【化３０】

【０１３５】また、得られたＲ１１０-３’ｄＧＴＰ
（ｎ４）を、ＤＵ６４０紫外可視分 光解析システム
〔ベックマン（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペク
トルを測定した結果（測定波長：700nm 〜200nm 、対
照：蒸留水）を図７に示す。

【０１３６】参考例３４ Ｎ- プロパルギルトリフルオロアセタミドの合成 ０℃に冷却したトリフルオロ酢酸メチル（東京化成製；
69.2g,0.54mol ）にプロパルギルアミン（アルドリッチ
社製；25g,0.45mol ）を滴下した。０℃で２時間反応
後、減圧蒸留（23mmHg; 沸点77℃）により精製して、Ｎ
- プロパルギルトリフルオロアセタミド43.8g （86.0%
）を得た。

【０１３７】参考例３５ 3’-デオキシ-5- （3"- トリフルオロアセタミド-1"-プ
ロピニル）ウリジンの合成 3’-デオキシ-5- ヨードウリジン（化合物２：1.56g,4.
4mmol)のDMF （22ml）溶液に窒素気流下、参考例３４で
得たＮ- プロパルギルトリフルオロアセタミド（1.54m
l,13.2mmol)、よう化銅（Ｉ）（168mg,0.88mmol)、テト
ラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
（508mg,0.44mmol)及びトリエチルアミン（1.23ml,8.8m
mol)を加え室温で４時間反応させた。反応液を減圧濃縮
して得た残渣を塩化メチレン- メタノール混液（40ml）
に溶解しイオン交換樹脂AG1X8 （バイオラド社製, HCO₃
^- 型; 4g）を加え３０分間撹拌した。濾別後、濾液を濃
縮し得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
（溶出液；塩化メチレン- メタノール混合溶液）で精製
して、3’-デオキシ-5- （3"- トリフルオロアセタミド
-1"-プロピニル）ウリジン918mg を得た（55.3% ）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.89-1.92 (m, 1H, 3'
-Ha), 2.17-2.26 (m,1H,3'-Hb), 3.53, 3.76 (2dd,2H,
J = 3.1, 11.9; 2.7, 12.1Hz, 5'-Ha,b), 4.22-4.30
(m, 4H, 2'-H, 4'-H, -CH₂-), 5.20 (brs, 1H, 5'-OH),
5.52 (d, 1H,J =4.0Hz, 2'-OH), 5.75 (d, 1H, J = 1.
9Hz, 1'-H), 8.34 (s, 1H, 6-H),10.06 (t, 1H,J=5.4H
z, NHTfa), 11.67 (s, 1H, NH)

【０１３８】参考例３６ 5-（3"- アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオキシウリジ
ン-5'-トリホスフェートの合成。 3’-デオキシ-5- （3"- トリフルオロアセタミド-1"-プ
ロピニル）ウリジン（42mg,0.11mmol)をリン酸トリエチ
ル（1.13ml）に溶解し、-20 ℃まで冷却した後オキシ塩
化リン（25μl ）を添加し-20 ℃で撹拌した。30分経過
後、オキシ塩化リン（22μl ）を追加し、さらに5 時間
撹拌した。この反応液を、-20 ℃に冷却した参考例４で
得たトリス（トリ-n- ブチルアンモニウム）ピロホスフ
ェートを0.5M含むDMF 溶液（3.6ml ）に添加し、室温で
２時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン- 水混
液（4ml ）を添加、一夜静置後、25% アンモニア水（20
ml）を加え4 時間静置した。反応液をエーテルにて洗浄
後、濃縮乾固して得た残渣をＤＥＡＥ- トヨパールイオ
ン交換カラムクロマトグラフィー（東ソー社製；1.2×3
0cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液
(pH7.5)0M →0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製し
て、5-（3"- アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオキシウ
リジン-5'-トリホスフェート115mg を得た（収率41.3%
）。

【０１３９】参考例３７ ＴＭＲ- 標識3’-デオキシウリジン-5'-トリホスフェー
ト（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であっ
て、ｎ＝１の化合物）の合成 5-（3"- アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオキシウリジ
ン-5'-トリホスフェート（10.5μmol ）の1M- 炭酸水素
トリエチルアンモニウム緩衝液（pH9.05;1.2ml）に5-カ
ルボキシテトラメチルローダミンコハク酸イミドエステ
ル（モレキュラープローブ社製）（15mg）のDMF 溶液
（0.9ml ）を加え室温で一夜撹拌した。反応液に水（30
ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ- トヨパールイオン交
換カラムクロマトグラフィー（1.2 ×30cm；溶出液：炭
酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.5)0.05M→0.
7M直線濃度勾配( 全量2L) ）で精製して、ＴＭＲ- 標識
3’-デオキシウリジン-5'-トリホスフェート〔一般式
〔Ｉ〕に於けるｎ＝１の化合物。以下、ＴＭＲ- ３’ｄ
ＵＴＰ（ｎ１）と略記する。〕7.38μmol を得た（収率
70.2% ）。

【０１４０】参考例３８ 3’-デオキシ-5- （3"- トリフルオロアセタミド-1"-プ
ロピニル）シチジンの合成 3’-デオキシ-5- ヨードシチジン（化合物６：1.0g,2.8
3mmol)のDMF （14ml）溶液に窒素気流下、参考例２で得
たＮ- プロパルギルトリフルオロアセタミド（0.99ml,
8.50mmol)、よう化銅（Ｉ）（108mg,0.566mmol)、テト
ラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
（327mg,0.283mmol)及びトリエチルアミン（0.8ml,5.66
mmol)を加え室温で30分反応させた。反応液を塩化メチ
レン- メタノール混液（25ml）で希釈しイオン交換樹脂
AG1X8 （HCO₃ ^- 型; 2.6g）を加え３０分間撹拌した。濾
別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィ（溶出液；塩化メチレン- メタノール混
合溶液）で精製して、3’-デオキシ-5- （3"- トリフル
オロアセタミド-1"-プロピニル）シチジン879mg を得た
（収率82.5% ）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.64-1.71 (m, 1H, 3'
-Ha), 1.86-1.96 (m, 1H, 3'-Hb), 3.52-3.57 (m, 1H,
5'-Ha), 3.79-3.83 (m, 1H, 5'-Hb), 4.14-4.28(m, 4H,
2'-H, 4'-H, -CH₂-), 5.18 (t, 1H, J = 5.0Hz, 5'-O
H), 5.53 (d, 1H,J = 3.8Hz, 2'-OH), 5.63 (s, 1H, 1'
-H), 6.76 (brs, 1H, NH₂a), 7.74 (brs,1H, NH₂b), 8.
38 (s, 1H, 6-H), 9.93 (brs, 1H, NHTfa)

【０１４１】参考例３９ 5-（3"-アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオキシシチジン
-5'-トリホスフェートの合成 3’-デオキシ-5-（3"-トリフルオロアセタミド-1"-プロ
ピニル）シチジン（113mg,0.3mmol)をリン酸トリエチル
（1.13ml）に溶解し、-20 ℃まで冷却した後オキシ塩化
リン（25μl ）を添加し-20 ℃で撹拌した。30分経過
後、オキシ塩化リン（22μl ）を追加し、さらに5 時間
撹拌した。この反応液を、-20 ℃に冷却した参考例４で
得たトリス（トリ-n- ブチルアンモニウム）ピロホスフ
ェートを0.5M含むDMF 溶液（3.6ml ）に添加し、室温で
２時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン- 水混
液（4ml ）を添加、一夜静置後、25% アンモニア水（20
ml）を加え4 時間静置した。反応液をエーテルにて洗浄
後、濃縮乾固して得た残渣をＤＥＡＥ- トヨパールイオ
ン交換カラムクロマトグラフィー（1.2 ×30cm；溶出
液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.5)0M
→0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製して、5-（3"-
アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオキシシチジン-5'-ト
リホスフェート115mg を得た（収率41.3% ）。

【０１４２】参考例４０ ＸＲ- 標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート
（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、
ｎ＝１の化合物）の合成 5-（3"- アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオキシシチジ
ン-5'-トリホスフェート（8 μmol ）を溶解した1M- 炭
酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH9.05;0.4ml
）に、5-カルボキシ- Ｘ- ローダミンコハク酸イミド
エステル（モレキュラープローブ社製）（15mg）のDMF
溶液（0.9ml ）を加え室温で一夜撹拌した。反応液に水
（30ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ- トヨパールイオ
ン交換カラムクロマトグラフィー（1.2 ×30cm；溶出
液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.5)0.1
M →0.7M直線濃度勾配（全量2L) ）で精製して、ＸＲ-
標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート〔一般
式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝１
の化合物。以下、ＸＲ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ１）と略記す
る。〕2.93μmol を得た（収率36.6% ）。

【０１４３】参考例４１ 7-デアザ-7-（3"-トリフルオロアセタミド-1"-プロピニ
ル）-3’-デオキシアデノシンの合成 7-ヨード-3’-デオキシ-7- デアザアデノシン（化合物
１８：0.5g,1.33mmol)のDMF （6.7ml ）溶液に窒素気流
下、参考例３４で得たＮ- プロパルギルトリフルオロア
セタミド（0.47ml,3.99mmol)、よう化銅（Ｉ）（51mg,
0.266mmol)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パ
ラジウム（０）（154mg,0.133mmol)及びトリエチルアミ
ン（0.37ml,2.66mmol)を加え室温で30分反応させた。反
応液を塩化メチレン- メタノール混液（12ml）で希釈し
イオン交換樹脂AG1X8 （HCO₃ ^- 型;1.22g ）を加え３０
分間撹拌した。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；塩化メチレ
ン- メタノール混合溶液）で精製して、7-デアザ-7-
（3"- トリフルオロアセタミド-1"-プロピニル）-3’-
デオキシアデノシン436mg を得た（収率82.3% ）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.83-1.91 (m, 1H, 3'
-Ha), 2.14-2.24 (m,1H,3'-Hb), 3.48-3.56 (m, 1H, 5'
-Ha), 3.66-3.73 (m, 1H, 5'-Hb), 4.30-4.35(m, 4H,
2'-H, 4'-H, -CH₂-), 5.08 (t, 1H, J = 5.5Hz, 5'-O
H), 5.59 (d, 1H, J= 3.8Hz, 2'-OH), 6.02 (d, 1H, J
= 2.2Hz, 1'-H), 6.80 (brs, 2H, NH₂),7.79 (s, 1H, 8
-H), 8.12 (s, 1H, 2-H), 10.08 (brs, 1H, NHTfa)

【０１４４】参考例４２ 7-デアザ-7-（3"-アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオキ
シアデノシン-5'-トリホスフェートの合成 7-デアザ-7-（3"-トリフルオロアセタミド-1"-プロピニ
ル）-3’-デオキシアデノシン（120mg,0.3mmol)をリン
酸トリエチル（1.2ml ）に溶解し、-20 ℃まで冷却した
後オキシ塩化リン（25μl)を添加し-20 ℃で撹拌した。
30分経過後、オキシ塩化リン（22μl)を追加し、さらに
4 時間撹拌した。この反応液を、-20 ℃に冷却した参考
例４で得たトリス（トリ-n- ブチルアンモニウム）ピロ
ホスフェートを0.5M含むDMF 溶液（3.6ml ）に添加し、
室温で3 時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン
- 水混液（4ml ）を添加、一夜静置後、25% アンモニア
水（20ml）を加え4 時間静置した。反応液をエーテルに
て洗浄後、濃縮乾固して得た残渣をＤＥＡＥ- トヨパー
ルイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.2 ×30cm；
溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.
5)0M →0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）で精製して、7-
デアザ-7- （3"- アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオキ
シアデノシン-5'-トリホスフェート114mg を得た（収率
39.9% ）。

【０１４５】参考例４３ Ｒ６Ｇ標識7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-トリ
ホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ
−であって、ｎ＝１の化合物）の合成 7-デアザ-7−（3"- アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオ
キシアデノシン-5'-トリホスフェート（8 μmol ）を溶
解した1M- 炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH
9.05;0.4ml）に、5-カルボキシローダミン 6G コハク酸
イミドエステル（モレキュラープローブ社製）（14.5m
g）のDMF 溶液（0.8ml ）を加え室温で一夜撹拌した。
反応液に水（30ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ- トヨ
パールイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.2 ×30
cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(p
H7.5)0.1M →0.6M直線濃度勾配( 全量2L) ）で精製し
て、Ｒ6Ｇ標識7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-ト
リホスフェート〔一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡
Ｃ−であって、ｎ＝１の化合物。以下、Ｒ６Ｇ−３’ｄ
ＡＴＰ（ｎ１）と略記する。〕2.54μmol を得た（収率
31.7% ）。

【０１４６】参考例４４ 3’-デオキシ-7-（3"-トリフルオロアセタミド-1"-プロ
ピニル）-7-デアザグアノシンの合成 3’-デオキシ-7-ヨード-7-デアザグアノシン（化合物３
０：0.65g,1.7mmol)のDMF （8.5ml ）溶液に窒素気流
下、参考例３４で得たＮ- プロパルギルトリフルオロア
セタミド（0.58ml,5.0mmol)、よう化銅（Ｉ）（63mg,0.
33mmol)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラ
ジウム（０）（192mg,0.17mmol)及びトリエチルアミン
（0.46ml,3.31mmol)を加え室温で1 時間反応させた。反
応液を塩化メチレン- メタノール混液（16ml）で希釈し
イオン交換樹脂AG1X8 （HCO₃ ^- 型; 1.6g）を加え30分間
撹拌した。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；クロロホルム-
メタノール混合溶液）で精製して、3’-デオキシ-7-
（3"- トリフルオロアセタミド-1"-プロピニル）-7-デ
アザグアノシン485mg を得た（収率70.5% ）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6)δppm:1.81-1.91 (m, 1H, 3'
-Ha), 2.10-2.21 (m, 1H, 3'-Hb), 3.42-3.68 (m, 2H,
5'-Ha,b), 4.22-4.30 (m, 4H, 2'-H, 4'-H, -CH₂-), 4.
94 (t, 1H, J = 5.5Hz, 5'-OH), 5.49 (d, 1H, J = 4.3
Hz, 2'-OH), 5.81(d, 1H, J = 2.4Hz, 1'-H), 6.32 (br
s, 2H, 2-NH₂), 7.27 (s, 1H, 8-H), 10.05 (brs, 1H,
NHTfa), 10.50 (brs, 1H, 1-H)

【０１４７】参考例４５ 7-デアザ-7-（3"-アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオキ
シグアノシン-5'-トリホスフェートの合成 3’-デオキシ-7-（3"- トリフルオロアセタミド-1"-プ
ロピニル）-7-デアザグアノシン（125mg,0.3mmol)をリ
ン酸トリエチル（1.25ml）に溶解し、-20 ℃まで冷却し
た後オキシ塩化リン（25μl)を添加し-20 ℃で撹拌し
た。30分経過後、オキシ塩化リン（22μl)を追加し、さ
らに一晩撹拌した。この反応液を、-20 ℃に冷却した参
考例４で得たトリス（トリ-n- ブチルアンモニウム）ピ
ロホスフェートを0.5M含むDMF 溶液（3.6ml ）に添加
し、室温で3 時間撹拌した。反応終了後、トリエチルア
ミン- 水混液(4ml) を添加、反応液をエーテルにて洗浄
後、ＤＥＡＥ- トヨパールイオン交換カラムクロマトグ
ラフィー（1.2 ×30cm；溶出液：炭酸水素トリエチルア
ンモニウム緩衝液(pH7.5)0M →0.6M直線濃度勾配( 全量
2L)）で精製した。これに25% アンモニア水（15ml）を
加え1 時間静置し、減圧濃縮後、得られた残渣を再度Ｄ
ＥＡＥ- トヨパールイオン交換カラムクロマトグラフィ
ー（1.2 ×30cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニ
ウム緩衝液(pH7.5)0M→0.3M直線濃度勾配( 全量1L) ）
で精製して、7-デアザ-7- （3"- アミノ-1"-プロピニ
ル）-3’-デオキシグアノシン-5'-トリホスフェート75m
gを得た（収率25.9% ）。

【０１４８】参考例４６ Ｒ１１０標識7-デアザ-3’-デオキシグアノシン-5'-ト
リホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡
Ｃ−であって、ｎ＝１の化合物）の合成 7-デアザ-7−（3"- アミノ-1"-プロピニル）-3’-デオ
キシグアノシン-5'-トリホスフェート（10.5μmol ）と
5-カルボキシローダミン 110-ビス- トリフルオロアセ
テート コハク酸イミドエステル（モレキュラープロー
ブ社製）（31.5mg）をDMF （0.49ml）- 水（0.23ml）に
溶解し、トリエチルアミン（0.16ml）及びピリジン（0.
29ml）を加え、一夜撹拌した。反応液に水（30ml）を加
え希釈した後、ＤＥＡＥ- トヨパールイオン交換カラム
クロマトグラフィー（1.2 ×30cm；溶出液：炭酸水素ト
リエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5 ）0.1M→0.8M直線
濃度勾配( 全量1L) ）で精製して、Ｒ１１０標識7-デア
ザ-3’-デオキシグアノシン-5'-トリホスフェート〔一
般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝
１の化合物。以下、Ｒ１１０- ３’ｄＧＴＰ（ｎ１）と
略記する。〕3.67μmol を得た（収率34.9% ）。

【０１４９】実施例７ Ｒ１１０標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェー
ト（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であっ
て、ｎ＝４の化合物）の合成。 5-（6"-アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオキシシチジン
-5'-トリホスフェート（化合物8：8μmol）を溶解した
ＤＭＦ（400μl）ー水（200μl）混合液にトリエチルア
ミン（20μl）と5-カルボキシローダミン 110-ビス-ト
リフルオロアセテート コハク酸イミドエステル（モレ
キュラープローブ社製）（21μmol）を加え室温で一夜
撹拌した。反応液に水（30ml）を加え希釈した後、ＤＥ
ＡＥ-トヨパールイオン交換カラムクロマトグラフィー
（1.7×15cm；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウ
ム緩衝液(pH7.5)0.1M→0.8M直線濃度勾配（全量1L)）で
精製して、下記式で示されるＲ１１０標識-3’-デオキ
シシチジン-5'-トリホスフェート〔一般式〔Ｉ〕に於い
て、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝４の化合物。以
下、Ｒ１１０- ３’ｄＣＴＰ（ｎ４）と略記する。〕5.
83μmolを得た（収率72.9%）。

【０１５０】

【化３１】

【０１５１】また、得られたＲ１１０- ３’ｄＣＴＰ
（ｎ４）を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム〔ベ
ックマン（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトル
を測定した結果（測定波長：700nm〜200nm、対称：蒸留
水）を図８に示す。

【０１５２】実施例８ Ｒ６Ｇ標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート
（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、
ｎ＝４の化合物）の合成。 5-（6"-アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオキシシチジン
-5'-トリホスフェート（化合物8：8μmol）を溶解した
ＤＭＦ（2.9ml）ー水（0.9ml）混合液にトリエチルアミ
ン（20μl）、6-カルボキシローダミン 6G コハク酸イ
ミドエステル（モレキュラープローブ社製）（16μmo
l）とを加え室温で一夜撹拌した。反応液に水（30ml）
を加え希釈した後、ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交換カ
ラムクロマトグラフィー（1.7×15cm；溶出液：炭酸水
素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.5)0.1M→0.7M直
線濃度勾配（全量1L)）で精製して、下記式で示される
Ｒ６Ｇ標識-3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェー
ト〔一般式〔Ｉ〕においてｎ＝４の化合物。以下、Ｒ６
Ｇ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ４）と略記する。〕5.83μmolを
得た（収率43.1%）。

【０１５３】

【化３２】

【０１５４】〔式中、Ｅｔはエチル基を、また、Ｍｅは
メチル基を夫々示す。〕 また、得られたＲ６Ｇ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ４）を、ＤＵ
６４０紫外可視分光解析システム〔ベックマン（株）
製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測定した結果
（測定波長：700nm〜200nm、対称：蒸留水）を図９に示
す。

【０１５５】実施例９ ＸＲ標識7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-トリホ
スフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−
であって、ｎ＝４の化合物）の合成。 7-デアザ-7-（6"-アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオキ
シアデノシン-5'-トリホスフェート（化合物20：8μmo
l）を溶解したＤＭＦ（400μl）-水（400μl）の混合液
に、トリエチルアミン（20μl）と6-カルボキシ-Ｘ-ロ
ーダミンコハク酸イミドエステル（モレキュラープロー
ブ社製）（22μmol）を加え室温で一夜撹拌した。反応
液に水（30ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ-トヨパー
ルイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.7×15cm；
溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液(pH7.
5)0.1M→0.6M直線濃度勾配(全量1L)）で精製して、下記
式で示されるXR標識7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-
5'-トリホスフェート〔一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が
−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝４の化合物。以下、ＸＲ-
３’ｄＡＴＰ（ｎ４）と略記する。〕4.39μmolを得た
（収率54.8%）。

【０１５６】

【化３３】

【０１５７】また、得られたＸＲ- ３’ｄＡＴＰ（ｎ
４）を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム〔ベック
マン（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測
定した結果（測定波長：700nm〜200nm、対称：蒸留水）
を図１０に示す。

【０１５８】実施例１０ ＸＲ標識7-デアザ-3’-デオキシグアノシン-5'-トリホ
スフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−
であって、ｎ＝４の化合物）の合成。 7-デアザ-7-（6"-アミノ-1"-ヘキシニル）-3’-デオキ
シグアノシン-5'-トリホスフェート（化合物３２：8μm
ol）と5-カルボキシ-Ｘ-ローダミンコハク酸イミドエス
テル（モレキュラープローブ社製）（19μmol）をDMF
（400μl）-水（200μl）に溶解し、トリエチルアミン
（20μl）を加え、一夜撹拌した。反応液に水（30ml）
を加え希釈した後、ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交換カ
ラムクロマトグラフィー（1.7×15cm；溶出液：炭酸水
素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0.1M→0.8M
直線濃度勾配(全量1L)）で精製して、下記式で示される
XR-標識-7-デアザ-3’-デオキシグアノシン-5'-トリホ
スフェート〔一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−
であって、ｎ＝４の化合物。以下、ＸＲ- ３’ｄＧＴＰ
（ｎ４）と略記する。〕2.68μmolを得た（収率33.5
%）。

【０１５９】

【化３４】

【０１６０】また、得られたＸＲ- ３’ｄＧＴＰ（ｎ
４）を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム〔ベック
マン（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測
定した結果（測定波長：700nm〜200nm、対称：蒸留水）
を図１１に示す。

【０１６１】実験例１ リンカー鎖長の異なる3’-デオキシターミネーターの取
り込み率の評価 この評価は、Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.86, pp.4076
-4080, June 1989に記載の方法に基づいて行った。 〔鋳型ＤＮＡ〕 ｐＢＳＫＳ（＋）／ｐｖｕII（ストラタジーン社製） 〔ターミネーター〕 ・ＸＲ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ４）（実施例１の化合物） ・ＸＲ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ６）（実施例２の化合物） ・ＸＲ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ１）（参考例４０の化合物） ・ＸＲ- ３’ｄＣＴＰ（ｎ３）（参考例６の化合物） ・Ｒ６Ｇ- ３’ｄＡＴＰ（ｎ４）（実施例３の化合物） ・Ｒ６Ｇ- ３’ｄＡＴＰ（ｎ６）（実施例４の化合物） ・Ｒ６Ｇ- ３’ｄＡＴＰ（ｎ１）（参考例４３の化合
物） ・ＴＭＲ- ３’ｄＵＴＰ（ｎ４）（実施例５の化合物） ・ＴＭＲ- ３’ｄＵＴＰ（ｎ１）（参考例３７の化合
物） ・Ｒ１１０- ３’ｄＧＴＰ（ｎ４）（実施例６の化合
物） ・Ｒ１１０- ３’ｄＧＴＰ（ｎ１）（参考例４６の化合
物）

【０１６２】〔操作方法〕鋳型ＤＮＡ１μg を、各ター
ミネーター，グアノシン-5'-トリホスフェート（ｒＧＴ
Ｐ），ウリジン-5'-トリホスフェート（ｒＵＴＰ），ア
デノシン-5'-トリホスフェート（ｒＡＴＰ），シチジン
-5'-トリホスフェート（ｒＣＴＰ），MgCl₂,スペルミジ
ン- （HCl)₃, ジチオスレイトール（DTT ），トリス／H
Cl （pH7.5）及びＴ７ＲＮＡポリメラーゼを終濃度が下
記条件となるように含むサンプルチューブに添加した
後、蒸留水により全体量を10μl とし、これを試料とし
た。〈条件〉 ・ターミネーター ＸＲ−３’ｄＣＴＰ ：１μM Ｒ６Ｇ−３’ｄＡＴＰ ：20μM ＴＭＲ- ３’ｄＵＴＰ ：10μM Ｒ１１０- ３’ｄＧＴＰ ：１μM ・ｒＧＴＰ ：500 μM ・ｒＵＴＰ ：500 μM ・ｒＡＴＰ ：250 μM ・ｒＣＴＰ ：250 μM ・MgCl₂ ：５〜10mM ・スペルミジン- （HCl)₃ ：２mM ・ＤＴＴ ：10mM ・トリス／HCl （pH7.5 ） ：40mM ・Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ ：25units ／10μl

【０１６３】試料を37℃で１時間加温した後、ゲル濾過
法により取り込まれなかったターミネーターを除去し、
遠心分離により沈澱を採取した。次いで、該沈殿物を３
μl ホルムアミドダイ（95％ホルムアミド含有10mMＥＤ
ＴＡ）に溶解した後、80℃で５分間加温した。これを冷
却した後、４％シークエンスゲルに1.5 μl アプライ
し、ＡＢＩ３７７蛍光自動シークエンサー（ＡＢＩ社
製）による泳動を５時間行った。シークエンサーのゲル
イメージ上での最終シグナル（ベース）を求めると共
に、最終ベース／ターミネーター濃度を算出し、取り込
み率を比較した。その結果を表１に示す。

【０１６４】

【表１】

【０１６５】〔結果〕表１から明らかな如く、ＸＲ-
３’ｄＣＴＰ及びＲ６Ｇ- ３’ｄＡＴＰについては、ｎ
の数が１のものよりも４及び６のものの方が取り込み率
が著しく向上することが判る。また、ＴＭＲ- ３’ｄＵ
ＴＰ及びＲ１１０- ３’ｄＧＴＰについても、最終ベー
スの値の比較から、ｎの数が１のものよりも４のものの
方が取り込み量が著しく向上することが判る。更にま
た、ＸＲ- ３’ｄＣＴＰに於いては、ｎの数が１のもの
と３のものとでは、取り込み率に違いがないことが判
る。以上のことから、蛍光標識３’ｄＮＴＰに於いて、
ｎの数を４以上とすることによりその取り込み量を著し
く向上させることが判る。言い換えれば、これらをＲＮ
Ａポリメラーゼを用いる連鎖停止法によるＤＮＡ塩基配
列決定法に於いてターミネーターとして用いればＤＮＡ
塩基配列を簡便且つ短時間に、高感度に決定し得ること
が判る。

【０１６６】参考例４７ 6-トリフルオロアセタミドー1ーヘキセンの合成。 １）5-ヘキセニルーp-トルエンスルフォネートの合成。 氷冷した塩化p-トルエンスルフォニル（54.78g,287mmo
l)のピリジン（100ml）溶液に5ーヘキセンー1ーオール〔東
京化成（株）製；20ml,239mmol〕を滴下し、その後5℃
で16時間撹拌した。反応液を氷水（500ml）に投入した
後、エーテル（500ml）で抽出し、エーテル層を冷1Nー塩
酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で
洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後減圧下に濃縮して、
5-ヘキセニルーp-トルエンスルフォネート44.37gを得た
（収率72.9%）。 ２）6ーヨード-1-ヘキセンの合成。 5-ヘキセニルーp-トルエンスルフォネート（44.3g,174mm
ol)、よう化ナトリウム（31.3g,209mmol)およびアセト
ン（250ml）の混合液を3時間環流反応させた。冷却後、
沈殿物を濾別し濾液を濃縮した。得られた残渣をエーテ
ル（500ml）に溶解後、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶
液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で
洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後減圧下に濃縮して、
6ーヨード-1-ヘキセン31.27gを得た（収率85.5%）。 ３）6-トリフルオロアセタミドー1ーヘキセンの合成。 水素化ナトリウム（60%油性；14.89g,372mmol)のＤＭＦ
（370ml）溶液にトリフルオロアセタミド（50.39g,446m
mol)を氷冷下、約10部分にわけて添加した。次いで6ーヨ
ード-1-ヘキセン（31.27g,149mmol)のＤＭＦ（130ml）
溶液を加え、室温で3時間撹拌した。反応液に飽和塩化
アンモニウム水（300ml）およびエーテル（300ml）を加
え抽出した。エーテル層を飽和食塩水（300ml）で二回
洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥して減圧下に濃縮し、
得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（溶出液；ヘキサンー酢酸エチル混合溶媒）で精製し
て、6-トリフルオロアセタミドー1ーヘキセン24.36gを得
た（収率83.8%）。 1H-NMR (270MHz,CDCl₃) δppm:1.39-1.69(m, 4H, -CH_２
(CH_２)_２ CH_２-), 2.04-2.14(m, 2H, H_２C=C-), 3.37(d
d, 2H, J=7.0, 13.8Hz, CH_２N), 4.96-5.06(m, 2H, =CH
CH_２ ), 5.71-5.86(m, 1H, H_２C=CH),6.45(brs, 1H, NH
Tfa)

【０１６７】参考例４８ 3’-デオキシ-5-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキ
セニル）ウリジン（化合物３３）の合成。 塩化パラジウム（1.77g,10mmol)と塩化リチウム（0.85
g,20mmol)のメタノール（100ml）溶液を一晩撹拌し、リ
チウムテトラクロロパラデートの0.1M溶液を調製した。
3’-デオキシウリジン（化合物１：1.14g,5mmol)と酢酸
水銀（II）（1.60g,5mmol)を水（50ml）に溶解し、60℃
で5時間撹拌した。反応液を減圧下に濃縮後、残渣を無
水メタノール（55ml）に懸濁させ、先に調製したリチウ
ムテトラクロロパラデートの0.1M溶液（55ml）と参考例
４７で得た6-トリフルオロアセタミド-1-ヘキセン（3.4
2g,17.5mmol)を加え16時間還流反応させた。反応液を硫
化水素ガスで飽和させた後、沈澱をセライトを通して濾
別し、濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィ（溶出液；ジクロロメタン-メタノ
ール混合溶液）及び、HPLC(カラム; Wakosil II 5C18
RS Prep 20.0×250mm, 溶出液；アセトニトリル-水混合
溶液）にて精製し、新規物質3’-デオキシ-5-（6"-トリ
フルオロアセタミド-1"-ヘキセニル）ウリジン（化合物
３３）454mgを得た（収率21.6%）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6) δppm:1.25-1.55(m, 4H, -
(CH_２)_２-), 1.68-1.80(m, 1H, 3'-Ha), 1.95-2.18 (m,
3H, 3'-Hb and =CHCH_２ ), 3.05-3.25(m, 2H,CH₂N), 3.
50-3.60 (m, 1H, 5'-Ha), 3.70-3.85(m, 1H, 5'-Hb),
4.15-4.36 (m,2H, 2'-H and 4'-H), 5.22(t, 1H, J =
5.1Hz, 5'-OH), 5.54(d, 1H, J = 4.3Hz, 2'-OH), 5.66
(d, 1H, J = 1.6Hz, 1'-H), 6.03(d, 1H, J = 15.7Hz,
-CH=CHCH _２-), 6.38(dt, 1H, J = 7.0, 16.2Hz, -CH=CH
CH_２-), 8.18 (s, 1H, 6-H), 9.39 (brs, 1H, NHTfa),
11.32 (s, 1H, 3-NH)

【０１６８】参考例４９ 3’-デオキシ-5-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキ
セニル）ウリジン（化合物３３）の合成。 3’-デオキシ-5-ヨードウリジン（化合物２：300mg,0.8
5mmol)のDMF（4.25ml）溶液に窒素気流下、参考例４７
で得た6-トリフルオロアセタミド-1-ヘキセン（496mg,
2.54mmol)、よう化銅（Ｉ）（32.3mg,0.17mmol)、テト
ラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（0）（9
7.9mg,0.085mmol)及びトリエチルアミン（0.24ml,1.69m
mol)を加え60℃で18時間反応させた。反応液を塩化メチ
レン-メタノール混液（9.3ml）で希釈し、イオン交換樹
脂AG1×8（バイオラド社製, HCO ₃ ^- 型; 0.68g）を加え3
0分間撹拌した。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；塩化メチ
レン-メタノール混合溶液）及び、HPLC(カラム; Wakosi
l II 5C18 RS Prep 20.0×250mm, 溶出液；アセトニト
リル-水混合溶液）にて精製し、新規物質3’-デオキシ-
5-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキセニル）ウリ
ジン（化合物３３）127mgを得た（収率35.5%）。 1H-NMR (270MHz, DMSO-d6) δppm:1.25-1.55(m, 4H, -
(CH_２)_２-), 1.68-1.80(m, 1H, 3'-Ha), 1.95-2.18 (m,
3H, 3'-Hb and =CHCH_２ ), 3.05-3.25(m, 2H,CH₂N), 3.
50-3.60 (m, 1H, 5'-Ha), 3.70-3.85(m, 1H, 5'-Hb),
4.15-4.36 (m,2H, 2'-H and 4'-H), 5.22(t, 1H, J =
5.1Hz, 5'-OH), 5.54(d, 1H, J = 4.3Hz, 2'-OH), 5.66
(d, 1H, J = 1.6Hz, 1'-H), 6.03(d, 1H, J = 15.7Hz,
-CH=CHCH _２-), 6.38(dt, 1H, J = 7.0, 16.2Hz, -CH=CH
CH_２-), 8.18 (s, 1H, 6-H), 9.39 (brs, 1H, NHTfa),
11.32 (s, 1H, 3-NH)

【０１６９】参考例５０ 5-（6"-アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシウリジン
-5'-トリホスフェート（化合物３４）の合成。 3’-デオキシ-5-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキ
セニル）ウリジン（化合物３３：126.4mg,0.3mmol)をり
ん酸トリエチル（1.26ml）に溶解し、−20℃まで冷却し
た後オキシ塩化リン（41.9μl）を添加し−20℃で撹拌
した。30分経過後、オキシ塩化リン（55.9μl）を追加
し、さらに23時間撹拌した。この反応液を、−20℃に冷
却したトリス（トリ-n-ブチルアンモニウム）ピロホス
フェートを0.5M含むDMF溶液（3.6ml）に添加し、室温で
3時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン-水混液
（15ml）を添加し、一夜静置した。反応液をエーテルに
て洗浄後、ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交換カラムクロ
マトグラフィー（1.7×40cm；溶出液：炭酸水素トリエ
チルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0M→0.3M直線濃度勾
配（全量1L））で精製した。これに17%アンモニア水（6
0ml）を加え5℃で17時間静置し、減圧濃縮後、得られた
残渣を再度ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交換カラムクロ
マトグラフィー（1.7×40cm；溶出液：炭酸水素トリエ
チルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0M→0.3M直線濃度勾
配（全量1L））で精製して新規物質5-（6"-アミノ-1"-
ヘキセニル）-3’-デオキシウリジン-5'-トリホスフェ
ート（化合物３４）65.3mgを得た（収率22.4%）。

【０１７０】実施例１１ ＴＭＲ標識3’-デオキウリジン-5'-トリホスフェート
（一般式〔Ｉ〕に於いてＶが-CH=CH-であって、ｎ＝４
の化合物）の合成。 5-（6"-アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシウリジン
-5'-トリホスフェート（化合物３４：14.8μmol）を溶
解したＤＭＦ（300μl）ー水（300μl）混合液に、トリ
エチルアミン（10μl）及び6-カルボキシテトラメチル
ローダミンコハク酸イミドエステル（モレキュラープロ
ーブ社製）（15.9μmol）を加え室温で一夜撹拌した。
反応液に水（30ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ-トヨ
パールイオン交換カラムクロマトグラフィー（1.7×15c
m；溶出液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（p
H7.5）0.05M→0.65M直線濃度勾配（全量1L））で精製し
て、下記式で示されるリンカー部が二重結合であって、
そのメチレン鎖のｎの数が４個であるＴＭＲ標識3’-デ
オキシウリジン-5'-トリホスフェート〔一般式〔Ｉ〕に
於いてＶが-CH=CH-であって、ｎ＝４の化合物。以下、
ＴＭＲ-Allyl-３’ｄＵＴＰ（ｎ４）と略記する。〕7.6
2μmolを得た（収率51.4%）。

【０１７１】

【化３５】

【０１７２】〔式中、Ｍｅはメチル基を示す。〕 また、得られたＴＭＲ-Allyl-３’ｄＵＴＰ（ｎ４）
を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム〔ベックマン
（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測定し
た結果（測定波長：700nm〜200nm、対称：蒸留水）を図
１２に示す。

【０１７３】実験例２ リンカー部のメチレン鎖が異なる3’-デオキシターミネ
ーターの検討 〔鋳型ＤＮＡ〕下記試料を用いてＰＣＲ法を行い（96℃
１分，55℃30秒，72℃１分：１回、96℃30秒，55℃30
秒，72℃１分：24回）、得られたＰＣＲ産物（ヒト甲状
腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）βサブユニットＤＮＡ増幅断
片）を鋳型ＤＮＡとした。尚、夫々の試料を所定量サン
プルチューブに添加した後、ＥＸＴａｑ緩衝液（宝酒造
（株））により全体量を10μlとしたものをＰＣＲ用試
料とした。 〈試料〉 ・ヒトＴＳＨβサブユニットＤＮＡ（accession No.S70586） を導入したBluescriptII（ストラタジーン社製） ：１pg ・フォワード・プラーマー （5'-ACGTTGTAAAACGACGGCCAGT-3'） ：0.1Ｍ ・リバース・プラーマー （5'-TAACAATTTCACAGGAAACA-3'） ：0.1Ｍ ・２’ｄＧＴＰ ：200μＭ ・２’ｄＴＴＰ ：200μＭ ・２’ｄＡＴＰ ：200μＭ ・２’ｄＣＴＰ ：200μＭ ・ＥＸＴａｑポリメラーゼ（宝酒造（株）製） ：0.5units 〔ターミネーター〕 ・ＴＭＲ３’ｄＵＴＰ（ｎ４）（実施例５の化合物） ・ＴＭＲ-Allyl-３’ｄＵＴＰ（ｎ４）（実施例１１の化合物） 〔操作方法〕鋳型ＤＮＡ 10ngを、各ターミネーター，
グアノシン-5'-トリホスフェート（ｒＧＴＰ），ウリジ
ン-5'-トリホスフェート（ｒＵＴＰ），アデノシン-5'-
トリホスフェート（ｒＡＴＰ），シチジン-5'-トリホス
フェート（ｒＣＴＰ），MgCl _２，スペルミジン-（ＨＣ
ｌ）_３，ジチオスレイトール（ＤＴＴ），トリス／ＨＣ
ｌ（pH7.5），酵母無機ピロホスファターゼ（ＰＰａｓ
ｅ）及びＴ７ ＲＮＡポリメラーゼを下記条件となるよ
うにサンプルチューブに添加した後、蒸留水により全体
量を10μlとし、これを試料とした。 〈条件〉 ・ターミネーター ：10μＭ ・ｒＧＴＰ ：500μＭ ・ｒＵＴＰ ：500μＭ ・ｒＡＴＰ ：250μＭ ・ｒＣＴＰ ：250μＭ ・MgCl_２ ：８ｍＭ ・スペルミジン-（ＨＣｌ）₃ ：２ｍＭ ・ＤＴＴ ：５ｍＭ ・トリス／ＨＣｌ（pH7.5） ：40ｍＭ ・酵母ＰＰａｓｅ ：10units ・Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ（ギブコＢＲＬ社製） ：25units

【０１７４】試料を37℃で30分間加温した後、セファデ
ックスＧ２５カラム（ファルマシア社製）を用いたゲル
濾過法により取り込まれなかったターミネーターを除去
し、遠心分離により沈澱を採取した。次いで、該沈殿物
を４μlホルムアミドダイ（10mM ＥＤＴＡ含有、95％ホ
ルムアミド）に溶解した後、90℃で２分間加温した。こ
れを冷却した後、４％シークエンスゲルに２μlアプラ
イし、ＡＢＩ３７７蛍光自動シークエンサー（ＡＢＩ社
製）による泳動を行った。ターミネーターとしてＴＭＲ
-３’ｄＵＴＰ（ｎ４）を用いて得られたシークエンサ
ーのゲルイメージをマトリックス変換した結果（ターミ
ネーション・パターン）を図１３Ａに、また、ターミネ
ーターとしてＴＭＲ-Allyl-３’ｄＵＴＰ（ｎ４）を用
いて得られたシークエンサーのゲルイメージを同様にマ
トリックス変換した結果（ターミネーション・パター
ン）を図１３Ｂに夫々示す。

【０１７５】〔結果〕図１３Ａ及びＢから明らかな如
く、ＴＭＲ-３’ｄＵＴＰ（ｎ４）とＴＭＲ-Allyl-３’
ｄＵＴＰ（ｎ４）とのターミネーション・パターンに違
いは認められず、ＴＮＲ-Allyl-３’ｄＵＴＰ（ｎ４）
は、ＴＭＲ-３’ｄＵＴＰ（ｎ４）と同様に効率よく取
り込まれることが判る。尚、ターミネーターの使用量を
10μＭから0.5μＭとした以外上記と同様に行った場合
も、上記と同様の結果であった。

【０１７６】参考例５１ 3’-デオキシ-5-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキ
セニル）シチジン（化合物３５）の合成。 3’-デオキシ-5-ヨードシチジン（化合物６：600mg,1.7
0mmol)のDMF（8.5ml）溶液に窒素気流下、参考例４７で
得た6-トリフルオロアセタミド-1-ヘキセン（995mg,5.1
mmol)、よう化銅（Ｉ）（64.7mg,0.34mmol)、テトラキ
ス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（0）（196m
g,0.17mmol)及びトリエチルアミン（0.47ml,3.40mmol)
を加え60℃で18時間反応させた。反応液を塩化メチレン
-メタノール混液（20ml）で希釈し、イオン交換樹脂AG1
×8（バイオラド社製, HCO₃ ^- 型;1.36g）を加え30分間
撹拌した。濾別後、濾液を濃縮し得られた残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；塩化メチレン-
メタノール混合溶液）及び、HPLC（カラム; Wakosil II
5C18 RS Prep 20.0×250mm, 溶出液；アセトニトリル-
水混合溶液）にて精製し、新規物質3’-デオキシ-5-
（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキセニル）シチジ
ン（化合物３５）187mgを得た（収率26.2%）。 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δppm:1.37-1.52(m, 4H, -
(CH_２)_２-), 1.64-1.68(m, 1H, 3'-Ha), 1.90-1.97 (m,
1H, 3'-Hb), 2.07-2.12 (m, 2H, =CHCH_２ ), 3.18(dd,
2H, J = 6.8, 12.8Hz, CH₂N), 3.53-3.56 (m, 1H, 5'-H
a), 3.80-3.82(m, 1H, 5'-Hb), 4.10-4.30 (m, 2H, 2'-
H and 4'-H), 5.15(t, 1H, J = 5.0Hz,５’−ＯＨ），
５．４８（ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．０Ｈｚ，
２’−ＯＨ）， ５．６５（ｓ， １Ｈ， １’−
Ｈ）， ５．８７（ｄｔ， １Ｈ， Ｊ＝ ６．８，
１５．６Ｈｚ， −ＣＨ＝CHCH_２-), 6.18(d, 1H, J =
15.6Hz, -CH=CHCH_２-), 6.91,7.10 (2 br s, 2H, 4-NH
_２), 8.26 (s, 1H, 6-H), 9.38 (brs, 1H, NHTfa)

【０１７７】参考例５２ 5-（6"-アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシシチジン
-5'-トリホスフェート（化合物３６）の合成。 3’-デオキシ-5-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキ
セニル）シチジン（化合物３５：126.1mg,0.3mmol)をリ
ン酸トリエチル（1.26ml）に溶解し、−20℃まで冷却し
た後、オキシ塩化リン（25.1μl）を添加し−20℃で撹
拌した。30分経過後、オキシ塩化リン（22.3μl）を追
加し、さらに4時間撹拌した。この反応液を、−20℃に
冷却したトリス（トリ-n-ブチルアンモニウム）ピロホ
スフェートを0.5M含むDMF溶液（3.6ml）に添加し、室温
で3時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン-水混
液（5ml）を添加し、一夜静置した。反応液をエーテル
にて洗浄後、ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交換カラムク
ロマトグラフィー（1.7×40cm；溶出液：炭酸水素トリ
エチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0M→0.3M直線濃度
勾配（全量1L））で精製した。これに17%アンモニア水
（60ml）を加え5℃で15時間静置し、減圧濃縮後、得ら
れた残渣を再度ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交換カラム
クロマトグラフィー（1.7×40cm；溶出液：炭酸水素ト
リエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0M→0.3M直線濃
度勾配（全量1L））で精製して新規物質5-（6"-アミノ-
1"-ヘキセニル）-3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフ
ェート（化合物３６）175mgを得た（収率60.2%）。

【０１７８】実施例１２ ＸＲ標識3’-デオキシチジン-5'-トリホスフェート（一
般式〔Ｉ〕に於いてＶが-CH=CH-であって、ｎ＝４の化
合物）の合成。 5-（6"-アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシシチジン
-5'-トリホスフェート（化合物３６：10μmol）を溶解
したＤＭＦ（300μl）ー水（300μl）混合液に、トリエ
チルアミン（10μl）、6-カルボキシ-Ｘ-ローダミンコ
ハク酸イミドエステル（モレキュラープローブ社製）
（25μmol）を加え室温で一夜撹拌した。反応液に水（3
0ml）を加えて希釈した後、ＤＥＡＥ-トヨパールイオン
交換カラムクロマトグラフィー（1.7×15cm；溶出液：
炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0.05M
→0.65M直線濃度勾配（全量1L））で精製して、下記式
で示されるリンカー部が二重結合であって、そのメチレ
ン鎖のｎの数が４個であるＸＲ標識3’-デオキシシチジ
ン-5'-トリホスフェート〔一般式〔Ｉ〕に於いてＶが-C
H=CH-であって、ｎ＝４の化合物。以下、ＸＲ-Allyl-
３’ｄＣＴＰ（ｎ４）と略記する。〕6.55μmolを得た
（収率65.5%）。

【０１７９】

【化３６】

【０１８０】また、得られたＸＲ-Allyl-ｄＣＴＰ（ｎ
４）を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム〔ベック
マン（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測
定した結果（測定波長：700nm〜200nm、対称：蒸留水）
を図１４に示す。

【０１８１】参考例５３ 7-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキセニル）-3’-
デオキシ-7-デアザアデノシン（化合物３７）の合成。 7-ヨード-3’-デオキシ-7-デアザアデノシン（化合物１
８：600g,1.60mmol)のDMF（8.0ml）溶液に窒素気流下、
参考例４７で得た6-トリフルオロアセタミド-1-ヘキセ
ン（912mg,4.80mmol)、よう化銅（Ｉ）（62mg,0.32mmo
l)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム
（0）（184mg,0.16mmol)及びトリエチルアミン（0.44m
l,3.2mmol)を加え60℃で18時間反応させた。反応液を塩
化メチレン-メタノール混液（16ml）で希釈し、イオン
交換樹脂AG1X8（バイオラド社製, HCO ₃ ^- 型; 1.50g）を
加え30分間撹拌した。濾別後、濾液を濃縮して得られた
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出液；塩
化メチレン-メタノール混合溶液）及び、HPLC（カラム;
Wakosil II 5C18 RS Prep 20.0×250mm, 溶出液；アセ
トニトリル-水混合溶液）にて精製し、新規物質7-（6"-
トリフルオロアセタミド-1"-ヘキセニル）-3’-デオキ
シ-7-デアザアデノシン（化合物３７）175mgを得た（収
率24.8%）。 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δppm:1.23-1.54(m, 4H, -
(CH_２)_２-), 1.87-1.90 (m, 1H, 3'-Ha), 2.19-2.20
(m, 3H, 3'-Hb and =CHCH_２ ), 3.20(dd, 2H, J= 6.6, 1
3.0Hz, CH_２N), 3.46-3.62 (m, 2H, 5'-Ha and 5'-Hb),
4.25-4.38 (m,2H, 2'-H and 4'-H), 5.01(t, 1H, J =
5.6Hz, 5'-OH), 5.50(d, 1H, J = 4.8Hz, 2'-OH), 5.95
(dt, 1H, J = 7.2, 15.2Hz, -CH=CHCH_２-), 6.01(d, 1
H, J = 2.4Hz, 1'-H), 6.62(br s, 2H, 6-NH２), 6.74
(d, 1H, J = 15.2Hz, -CH=CHCH_２-), 7.48 (s, 1H, 8-
H), 8.03 (s, 1H, 2-H), 9.40 (brs, 1H, NHTfa)

【０１８２】参考例５４ 7-（6"-アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシ-7-デア
ザアデノシン-5'-トリホスフェート（化合物３８）の合
成。 7-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキセニル）-3’-
デオキシ-7-デアザアデノシン（化合物３７：133mg,0.3
mmol)をリン酸トリエチル（1.26ml）に溶解し、−20℃
まで冷却した後、オキシ塩化リン（25.1μl）を添加し
−20℃で撹拌した。30分経過後、オキシ塩化リン（22.3
μl）を追加し、さらに6時間撹拌した。この反応液を、
−20℃に冷却したトリス（トリ-n-ブチルアンモニウ
ム）ピロホスフェートを0.5M含むDMF溶液（3.6ml）に添
加し、室温で3時間撹拌した。反応終了後、トリエチル
アミン-水混液（5ml）を添加し、一夜静置した。反応液
をエーテルにて洗浄後、ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交
換カラムクロマトグラフィー（1.7×40cm；溶出液：炭
酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0M→0.3
M直線濃度勾配（全量1L））で精製した。これに17%アン
モニア水（60ml）を加え5℃で15時間静置し、減圧濃縮
後、得られた残渣を再度ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交
換カラムクロマトグラフィー（1.7×40cm；溶出液：炭
酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0M→0.3
M直線濃度勾配（全量1L））で精製して新規物質7-（6"-
アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシ-7-デアザアデノ
シン-5'-トリホスフェート（化合物３８）126mgを得た
（収率42.2%）。

【０１８３】実施例１３ Ｒ６Ｇ標識3’-デオキシ-7-デアザアデノシン-5'-トリ
ホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いてＶが-CH=CH-であ
って、ｎ＝４の化合物）の合成。 7-（6"-アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシ-7-デア
ザアデノシン-5'-トリホスフェート（化合物３８：8μm
ol）を溶解したＤＭＦ（2ml）ー水（1ml）混合液に、ト
リエチルアミン（10μl）、5-カルボキシローダミン 6G
コハク酸イミドエステル（モレキュラープローブ社
製）（16μmol）を加え室温で一夜撹拌した。反応液に
水（30ml）を加え希釈した後、ＤＥＡＥ-トヨパールイ
オン交換カラムクロマトグラフィー（1.7×15cm；溶出
液：炭酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）
0.05M→0.65M直線濃度勾配（全量1L））で精製して、下
記式で示されるリンカー部が二重結合であって、そのメ
チレン鎖のｎの数が４個であるＲ６Ｇ標識3’-デオキシ
-7-デアザアデノシン-5'-トリホスフェート〔一般式
〔Ｉ〕に於いてＶが-CH=CH-であって、ｎ＝４の化合
物。以下、Ｒ６Ｇ-Allyl-３’ｄＡＴＰ（ｎ４）と略記
する。〕3.90μmolを得た（収率48.7%）。

【０１８４】

【化３７】

【０１８５】〔式中、Ｅｔはエチル基を、また、Ｍｅは
メチル基を夫々示す。〕 また、得られたＲ６Ｇ-Allyl-３’ｄＡＴＰ（ｎ４）
を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム〔ベックマン
（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペクトルを測定し
た結果（測定波長：700nm〜200nm、対称：蒸留水）を図
１５に示す。

【０１８６】参考例５５ 7-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキセニル）-3’-
デオキシ-7-デアザグアノシン（化合物３９）の合成。 7-ヨード-3’-デオキシ-7-デアザグアノシン（化合物３
０：1.31g,3.33mmol)のDMF（16.67ml）溶液に窒素気流
下、参考例４７で得た6-トリフルオロアセタミド-1-ヘ
キセン（1.90g,9.99mmol)、よう化銅（Ｉ）（130mg,0.6
6mmol)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジ
ウム（0）（385mg,0.33mmol)及びトリエチルアミン（0.
93ml,6.66mmol)を加え60℃で18時間反応させた。反応液
を塩化メチレン-メタノール混液（40ml）で希釈し、イ
オン交換樹脂AG1X8（バイオラド社製, HCO₃ ^- 型; 2.96
g）を加え30分間撹拌した。濾別後、濾液を濃縮して得
られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出
液；塩化メチレン-メタノール混合溶液）及び、HPLC(カ
ラム; Wakosil II 5C18 RS Prep 20.0×250mm, 溶出
液；アセトニトリル-水混合溶液）にて精製し、新規物
質3’-デオキシ-7-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘ
キセニル）-7-デアザグアノシン（化合物３９）439mgを
得た（収率28.7%）。 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δppm:1.35-1.53(m, 4H, -
(CH_２)_２-), 1.85-1.89(m, 1H, 3'-Ha), 2.09-2.15 (m,
3H, 3'-Hb and =CHCH_２ ), 3.19(dd, 2H, J =6.8,12.8H
z, CH_２N), 3.43-3.56 (m, 2H, 5'-Ha and 5'-Hb), 4.1
0-4.30 (m, 2H, 2'-H and 4'-H), 4.84(t, 1H, J = 5.6
Hz, 5'-OH), 5.42(d, 1H, J = 4.4Hz,2'-OH), 5.81(d,
1H, J = 2.8Hz, 1'-H), 6.21(br s, 2H, 2-NH_２), 6.37
(d, 1H, J = 15.6Hz, -CH=CHCH_２-), 6.57(dt, 1H, J =
7.1, 15.6Hz, -CH=CHCH_２-),6.93 (s, 1H, 8-H), 9.39
(brs, 1H, NHTfa), 10.29 (s, 1H, 1-H)

【０１８７】参考例５６ 7-（6"-アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシ-7-デア
ザグアノシン-5'-トリホスフェート（化合物４０）の合
成。 7-（6"-トリフルオロアセタミド-1"-ヘキセニル）-3’-
デオキシ-7-デアザグアノシン（化合物３９：138mg,0.3
mmol)をリン酸トリエチル（1.26ml）に溶解し、−20℃
まで冷却した後オキシ塩化リン（25.1μl）を添加し−2
0℃で撹拌した。30分経過後、オキシ塩化リン（22.3μ
l）を追加し、さらに8時間撹拌した。この反応液を、−
20℃に冷却したトリス（トリ-n-ブチルアンモニウム）
ピロホスフェートを0.5M含むDMF溶液（3.6ml）に添加
し、室温で3時間撹拌した。反応終了後、トリエチルア
ミン-水混液（5ml）を添加し、一夜静置した。反応液を
エーテルにて洗浄後、ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交換
カラムクロマトグラフィー（1.7×40cm；溶出液：炭酸
水素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0M→0.3M
直線濃度勾配（全量1L））で精製した。これに17%アン
モニア水（60ml）を加え5℃で16時間静置し、減圧濃縮
後、得られた残渣を再度ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交
換カラムクロマトグラフィー（1.7×40cm；溶出液：炭
酸水素トリエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0M→0.3
M直線濃度勾配（全量1L））で精製して新規物質7-（6"-
アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシ-7-デアザグアノ
シン-5'-トリホスフェート（化合物４０）122mgを得た
（収率40.4%）。

【０１８８】実施例１４ Ｒ１１０標識3’-デオキシ-7-デアザグアノシン-5'-ト
リホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いてＶが-CH=CH-で
あって、ｎ＝４の化合物）の合成。 7-（6"-アミノ-1"-ヘキセニル）-3’-デオキシ-7-デア
ザグアノシン-5'-トリホスフェート（化合物４０：10μ
mol）を溶解したＤＭＦ（500μl）ー水（375μl）混合液
に、トリエチルアミン（25μl）、5-カルボキシローダ
ミン 110-ビス-トリフルオロアセテート コハク酸イ
ミドエステル（モレキュラープローブ社製）（25μmo
l）を加え室温で一夜撹拌した。反応液に水（30ml）を
加え希釈した後、ＤＥＡＥ-トヨパールイオン交換カラ
ムクロマトグラフィー（1.7×15cm；溶出液：炭酸水素
トリエチルアンモニウム緩衝液（pH7.5）0.05M→0.65M
直線濃度勾配（全量1L））で精製して、下記式で示され
るリンカー部が二重結合であって、そのメチレン鎖のｎ
の数が４個であるＲ１１０標識3’-デオキシ-7-デアザ
グアノシン-5'-トリホスフェート〔一般式〔Ｉ〕に於い
てＶが-CH=CH-であって、ｎ＝４の化合物。以下、Ｒ１
１０-Allyl-３’ｄＡＴＰ（ｎ４）と略記する。〕5.1μ
molを得た（収率51.0%）。

【０１８９】

【化３８】

【０１９０】また、得られたＲ１１０-Allyl-３’ｄＡ
ＴＰ（ｎ４）を、ＤＵ６４０紫外可視分光解析システム
〔ベックマン（株）製〕を用いて、紫外可視吸収スペク
トルを測定した結果（測定波長：700nm〜200nm、対称：
蒸留水）を図１６に示す。

【０１９１】

【発明の効果】以上に述べた如く、本発明は、例えばＲ
ＮＡポリメラーゼ作用を利用する核酸の塩基配列決定法
に於いて安全且つ高感度に目的の塩基配列を決定するた
めに有用な蛍光標識化3’-デオキシリボヌクレオチド誘
導体を提供するものであり、本発明の蛍光標識化3’-デ
オキシリボヌクレオチド誘導体を用いてＲＮＡポリメラ
ーゼを用いる連鎖停止法を行えば、より高精度に且つよ
り高速に、目的とする塩基配列の解析を行い得、簡便且
つ短時間に核酸の塩基配列を決定し得る点に優れた効果
を奏するものであり、斯業に貢献するところ極めて大な
る発明である。

【図面の簡単な説明】

【図１】 参考例６で得られた、カルボキシローダミン
Ｘ標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート（一
般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝
３の化合物）の紫外可視吸収スペクトルを測定した結果
を示す。

【図２】 実施例１で得られた、カルボキシローダミン
Ｘ標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート（一
般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝
４の化合物）の紫外可視吸収スペクトルを測定した結果
を示す。

【図３】 実施例２で得られた、カルボキシローダミン
Ｘ標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート（一
般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、ｎ＝
６の化合物）の紫外可視吸収スペクトルを測定した結果
を示す。

【図４】 実施例３で得られた、カルボキシローダミン
６Ｇ標識7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-トリホ
スフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−
であって、ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクトル
を測定した結果を示す。

【図５】 実施例４で得られた、カルボキシローダミン
６Ｇ標識7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-トリホ
スフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−
であって、ｎ＝６の化合物）の紫外可視吸収スペクトル
を測定した結果を示す。

【図６】 実施例５で得られた、カルボキシテトラメチ
ルローダミン標識3’-デオキシウリジン-5'-トリホスフ
ェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であ
って、ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクトルを測
定した結果を示す。

【図７】 実施例６で得られた、カルボキシローダミン
１１０標識7-デアザ-3’-デオキシグアノシン-5'-トリ
ホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ
−であって、ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクト
ルを測定した結果を示す。

【図８】 実施例７で得られたカルボキシローダミン１
１０標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート
（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、
ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクトルを測定した
結果を示す。

【図９】 実施例８で得られた、カルボキシローダミン
６Ｇ標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート
（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−であって、
ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクトルを測定した
結果を示す。

【図１０】 実施例９で得られた、カルボキシローダミ
ンＸ標識7-デアザ-3’-デオキシアデノシン-5'-トリホ
スフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ−
であって、ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクトル
を測定した結果を示す。

【図１１】 実施例１０で得られた、カルボキシローダ
ミンＸ標識7-デアザ-3’-デオキシグアノシン-5'-トリ
ホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いて、Ｖ が−Ｃ≡Ｃ
−であって、ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクト
ルを測定した結果を示す。

【図１２】 実施例１１で得られた、カルボキシテトラ
メチルローダミン標識3’-デオキシウリジン-5'-トリホ
スフェート（一般式〔Ｉ〕に於いてＶが-CH=CH-であっ
て、ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクトルを測定
した結果を示す。

【図１３】 ターミネーターとしてＴＭＲ-３’ｄＵＴ
Ｐ（ｎ４）を用いて得られたターミネーション・パター
ン（Ａ）及びターミネーターとしてＴＭＲ-Allyl-３’
ｄＵＴＰ（ｎ４）を用いて得られたターミネーション・
パターン（Ｂ）を示す。

【図１４】 実施例１２で得られた、カルボキシローダ
ミンＸ標識3’-デオキシシチジン-5'-トリホスフェート
（一般式〔Ｉ〕に於いてＶが-CH=CH-であって、ｎ＝４
の化合物）の紫外可視吸収スペクトルを測定した結果を
示す。

【図１５】 実施例１３で得られた、カルボキシローダ
ミン６Ｇ標識3’-デオキシ-7-デアザアデノシン-5'-ト
リホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いてＶが-CH=CH-で
あって、ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクトルを
測定した結果を示す。

【図１６】 実施例１４で得られた、カルボキシローダ
ミン１１０標識3’-デオキシ-7-デアザアデノシン-5'-
トリホスフェート（一般式〔Ｉ〕に於いてＶが-CH=CH-
であって、ｎ＝４の化合物）の紫外可視吸収スペクトル
を測定した結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 林崎 良英 茨城県つくば市高野台３丁目１番１ 理 化学研究所ライフサイエンス筑波研究セ ンター内 (72)発明者 小澤 香織 兵庫県尼崎市高田町６番１号 和光純薬 工業株式会社大阪研究所内 (72)発明者 藤尾 一功 兵庫県尼崎市高田町６番１号 和光純薬 工業株式会社大阪研究所内 (72)発明者 田中 巧 兵庫県尼崎市高田町６番１号 和光純薬 工業株式会社大阪研究所内 (56)参考文献 特開 平４−320699（ＪＰ，Ａ) 特公 平８−5908（ＪＰ，Ｂ２) 国際公開96／014434（ＷＯ，Ａ１) Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，1997年 １ 月27日，Ｖｏｌ．53， Ｎｏ．４，ｐ. 1523−1544 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，1985年, Ｖｏｌ．24，ｐ．5716−5723 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07H 19/00 - 19/24 C07H 21/00 - 21/04 ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＣＡＯＬＤ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式〔Ｉ〕で示される3'-デオキシ
   リボヌクレオチド誘導体。 【化１】 〔式中、Ｑは3'-デオキシリボヌクレオチド残基を表
   し、ｎは４または６を表し、Ｖは−Ｃ≡Ｃ−又は−ＣＨ
   ＝ＣＨ−を表し、Ｒは下記一般式［ＶＩＩ］を表す。〕 【化２】 〔式中、Ｗはカルボキシル基を表し、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ
   −、−ＮＲ'−（但し、Ｒ'は、水素原子、低級アルキル
   基、アラルキル基又はアリール基を表す）又は−ＣＨ₂
   −を表し、環Ａ及び環Ｂは何れか一方が 【化３】 であり、他方が 【化４】 であり（但し、Ｚは、Ｏ又は＝Ｎ⁺ Ｒ₁ Ｒ₂ を表し、Ｙ
   は、ＯＨ又は−ＮＲ₁ Ｒ₂ を表し、（但し、Ｒ₁ 及びＲ
   ₂ は、夫々独立して水素原子又は低級アルキル基を表す
   か、または、Ｒ₁ 及びＲ₂ が共にトリメチレン基を表す
   （但し、該２つのトリメチレン基の各他端は、該２つの
   トリメチレン基を有する窒素原子が結合している環上
   の、該窒素原子と結合している炭素原子の両隣の炭素原
   子の何れか一方とそれぞれ結合している）））、環Ｃ 【化５】 に於ける波線------は、環Ａ及び環Ｂの構造に対応した
   位置の結合手を意味し、上記環Ａ、Ｂ及びＣ並びにＷを
   有するべンゼン環は、更に置換基を有していてもよ
   い。〕
2. 【請求項２】 Ｘが−Ｏ−である請求項１記載の3'-デオ
   キシリボヌクレオチド誘導体。
3. 【請求項３】 Ｚが＝Ｎ⁺Ｒ₁Ｒ₂であり、Ｙが−ＮＲ₁Ｒ₂
   である請求項１または２記載の3'−デオキシリボヌクレ
   オチド誘導体。
4. 【請求項４】 Ｒ₁ 及びＲ₂ は、夫々独立して水素原子
   又は炭素数１〜６の低級アルキル基を表すか、またはＲ
   ₁ 及びＲ₂ が共にトリメチレン基を表す請求項３に記載
   の3'-デオキシリボヌクレオチド誘導体。
5. 【請求項５】 環Ａ、Ｂ及びＣ並びにＷを有するべンゼ
   ン環の少なくとも１つの環が置換基として炭素数１〜６
   の低級アルキル基を有する請求項１〜４のいずれか１項
   に記載の3'-デオキシリボヌクレオチド誘導体。
6. 【請求項６】 Ｖが−ＣＨ＝ＣＨ−である請求項１〜５
   のいずれか１項に記載の3'-デオキシリボヌクレオチド
   誘導体。
7. 【請求項７】 ＲＮＡポリメラーゼを用いた塩基配列決
   定法におけるターミネーターとして用いられる請求項１
   〜６のいずれか１項に記載の3'-デオキシリボヌクレオ
   チド誘導体。