EA018039B1 - Ядерный фактор перепрограммирования - Google Patents

Ядерный фактор перепрограммирования Download PDF

Info

Publication number
EA018039B1
EA018039B1 EA201000858A EA201000858A EA018039B1 EA 018039 B1 EA018039 B1 EA 018039B1 EA 201000858 A EA201000858 A EA 201000858A EA 201000858 A EA201000858 A EA 201000858A EA 018039 B1 EA018039 B1 EA 018039B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
cells
gene
genes
cell
factor
Prior art date
Application number
EA201000858A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201000858A1 (ru
Inventor
Синиа Яманака
Original Assignee
Киото Юниверсити
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=38162968&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA018039(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Киото Юниверсити filed Critical Киото Юниверсити
Publication of EA201000858A1 publication Critical patent/EA201000858A1/ru
Publication of EA018039B1 publication Critical patent/EA018039B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/60—Transcription factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/60—Transcription factors
    • C12N2501/602—Sox-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/60—Transcription factors
    • C12N2501/603—Oct-3/4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/60—Transcription factors
    • C12N2501/604—Klf-4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/60—Transcription factors
    • C12N2501/605—Nanog
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/60—Transcription factors
    • C12N2501/606—Transcription factors c-Myc
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/027—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a retrovirus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к ядерному фактору перепрограммирования, обладающему способностью перепрограммирования дифференцированной соматической клетки для получения индуцированной плюрипотентной стволовой клетки. Ядерный фактор перепрограммирования для соматической клетки, содержащий каждый из следующих трех типов генов: гена семейства Oct, гена семейства Klf и гена семейства Myc, используется в качестве средства для индукции перепрограммирования дифференцированной клетки для удобного и высоковоспроизводимого получения индуцированной плюрипотентной стволовой клетки, обладающей плюрипотентностью и способностью к росту, такими же, как у ES-клеток, без использования эмбриона или ES-клетки.

Description

Настоящее изобретение относится к ядерному фактору перепрограммирования, обладающему способностью перепрограммирования дифференцированной соматической клетки для получения индуцированной плюрипотентной стволовой клетки.
Предшествующий уровень техники
Эмбриональные стволовые клетки (Е8-клетки) представляют собой стволовые клетки, полученные из ранних эмбрионов человека или мыши, обладающие тем характерным свойством, что их можно культивировать в течение длительного периода, поддерживая плюрипотентную способность к дифференцировке во все виды клеток, существующие в живых организмах. Считается, что эмбриональные стволовые клетки человека можно использовать в качестве ресурса для способов трансплантационной клеточной терапии различных заболеваний, таких как болезнь Паркинсона, юношеский диабет и лейкоз, пользуясь преимуществами вышеупомянутых свойств. Однако при трансплантации Е8-клеток существует проблема отторжения таким же образом, что и при трансплантации органов. Более того, с этической точки зрения существует много особых мнений против использования Е8-клеток, которые получают, разрушая эмбрионы человека. Если можно индуцировать дедифференцировку собственных дифференцированных соматических клеток пациента для получения клеток, обладающих плюрипотентностью и способностью к росту, такой же, как у Е8-клеток (в данном описании эти клетки обозначены как индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ίΡδ-клетки), хотя иногда их называют клетками, подобными эмбриональным стволовым клеткам, или Е8-подобными клетками), полагают, что такие клетки можно использовать как идеальные плюрипотентные клетки, свободные от отторжения или этических проблем.
В качестве способа перепрограммирования соматического ядра опубликован, например, способ получения эмбриональной стволовой клетки из клонированного эмбриона, полученного путем трансплантации ядра соматической клетки в яйцеклетку (^.8. Н^апд е1 а1., 8с1епсе, 303, рр. 1669-74, 2004; \7.8. Н\\апд е1 а1., 8с1епсе, 308, рр.1777-83, 2005: однако было доказано, что эти статьи являлись фальсификациями, и позднее они были отозваны). Однако этот способ получения клонированного эмбриона только с целью получения Е8-клеток обладает гораздо более серьезными этическими проблемами по сравнению с обычными Е8-клетками с использованием избыточных эмбрионов, полученных при терапии для оплодотворения. Опубликован также способ перепрограммирования ядра соматической клетки посредством слияния соматической клетки и Е8-клетки (М. Таба е1 а1., Сигг. ΒίοΙ., 11, рр.1553-1558, 2001; С.А. Со\\ап е1 а1., 8с1епсе, 309, рр.1369-73, 2005). Однако данный способ приводит к использованию Е8-клеток человека, что не дает возможности решения этических трудностей. Кроме того, опубликован способ перепрограммирования ядра клетки посредством реакции экстракта линии клеток, полученных из опухоли зародышевых клеток, развившейся у человека, с дифференцированной клеткой (С.К. Тагапдег е1 а1., Мо1. Βίο1. Се11, 16, рр.5719-35, 2005). Однако оставалось совершенно неизвестным, какой компонент в экстракте индуцирует перепрограммирование по этому способу, и таким образом, этот способ связан с проблемами технической надежности и безопасности.
Предложен способ скрининга ядерного фактора перепрограммирования, обладающего действием перепрограммирования дифференцированных соматических клеток для получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (Международная публикация \7О 2005/80598). Этот способ включает в себя стадии контактирования соматических клеток, содержащих ген, в которых маркерный ген расположен так, чтобы его экспрессия находилась под контролем области контроля экспрессии генов ЕСАТ (ассоциированных с Е8-клетками транскриптов) (т.е. класса генов, специфически экспрессирующихся в Е8-клетках), с каждым тестируемым веществом; проверки присутствия или отсутствия появления клетки, экспрессирующей маркерный ген; и выбора тестируемого соединения, индуцирующего появление указанной клетки, в качестве кандидата на роль ядерного фактора перепрограммирования соматических клеток. Способ перепрограммирования соматической клетки описан в примере 6 и т.п. вышеуказанной публикации. Однако в этой публикации не смогли опубликовать действительную идентификацию ядерного фактора перепрограммирования.
Патентный документ 1: Международная публикация \7О 2005/80598
Описание изобретения
Целью настоящего изобретения является предоставление ядерного фактора перепрограммирования. Более конкретно, целью настоящего изобретения является предоставление средств для индукции перепрограммирования дифференцированной клетки без использования яйцеклеток, эмбрионов или Е8клеток для удобного и высоковоспроизводимого получения индуцированной плюрипотентной стволовой клетки, обладающей плюрипотентностью и способностью к росту, такими же, как у Е8-клеток.
Авторы настоящего изобретения проводили различные исследования для достижения вышеупомянутой цели и пытались идентифицировать ядерный фактор перепрограммирования с использованием способа скрининга ядерного фактора перепрограммирования, описанного в Международной публикации \7О 2005/80598. В результате обнаружили 24 вида генов-кандидатов на роль генов, относящихся к перепрограммированию ядра, и среди них обнаружили три вида генов, необходимых для перепрограммирования ядра. Настоящее изобретение сделано на основе вышеупомянутых обнаружений.
- 1 018039
Таким образом, настоящее изобретение относится к ядерному фактору перепрограммирования для соматической клетки, который содержит каждый из следующих трех типов генов: гена семейства Ос1. гена семейства К1£ и гена семейства Мус. Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения здесь представлен вышеупомянутый фактор, содержащий гена каждого из трех следующих типов генов: Ос!3/4, К1£4 и с-Мус.
Согласно другому предпочтительному варианту осуществления представлен вышеупомянутый фактор, дополнительно содержащий ген семейства 8ох, и в качестве более предпочтительного варианта осуществления представлен вышеупомянутый фактор, содержащий ген 8ох2.
Согласно другому предпочтительному варианту осуществления представлен вышеупомянутый фактор, содержащий цитокин вместе с геном семейства Мус, или, альтернативно, вместо гена семейства Мус. В качестве более предпочтительного варианта осуществления представлен вышеупомянутый фактор, где цитокин представляет собой основной фактор роста фибробластов (ЬРСР) и/или фактор стволовых клеток (8СР).
Согласно особенно предпочтительным вариантам осуществления представлены ядерный фактор перепрограммирования для соматической клетки, содержащий ген ТЕНТ в дополнение к каждому из: гена семейства Ос1, гена семейства К1£, гена семейства Мус и гена семейства 8ох; и вышеупомянутый фактор, содержащий ген или один или нескольких типов генов, выбранных из группы, состоящей из следующих генов: для большого Т-антигена 8У40, НРУ16 Е6, НРУ16 Е7 и ВтЛ, в дополнение к продукту каждого из: гена семейства Ос!, гена семейства К1£, гена семейства Мус, гена семейства 8ох и гена ТЕНТ.
В дополнение к этим факторам представлен вышеупомянутый фактор, дополнительно содержащий один или нескольких типов генов, выбранных из группы, состоящей из следующих: ЕЬх15, Ыапод, ЕКак, ЕСАТ15-2, Тс11 и β-катенин.
Согласно другому предпочтительному варианту осуществления вышеупомянутого изобретения представлен также вышеупомянутый фактор, содержащий один или нескольких типов генов, выбранных из группы, состоящей из следующего: ЕСАТ1, Е§д1, Ппт!3Ь, ЕСАТ8, Сб!3, 8ох15, ЕСАТ15-1, ЕФ117, 8а114, Кех1, ИТЕ1, 8!е11а, 8!а!3 и СгЬ2.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения индуцированной плюрипотентной стволовой клетки посредством перепрограммирования ядра соматической клетки, который включает в себя стадию контактирования вышеупомянутого ядерного фактора перепрограммирования с соматической клеткой.
Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения представлен вышеупомянутый способ, который включает в себя стадию добавления вышеупомянутого ядерного фактора перепрограммирования к культуре соматической клетки; вышеупомянутый способ, который включает в себя стадию введения гена, кодирующего вышеупомянутый ядерный фактор перепрограммирования, в соматическую клетку; вышеупомянутый способ, который включает в себя стадию введения указанного гена в соматическую клетку с использованием рекомбинантного вектора, содержащего по меньшей мере один тип гена, кодирующего вышеупомянутый ядерный фактор перепрограммирования; и вышеупомянутый способ, где в качестве соматической клетки используют соматическую клетку, выделенную у пациента.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к индуцированной плюрипотентной стволовой клетке, полученной посредством вышеупомянутого способа. Настоящее изобретение также относится к соматической клетке, полученной посредством индукции дифференцировки вышеупомянутой индуцированной плюрипотентной стволовой клетки.
Настоящее изобретение также относится к способу улучшения способности к дифференцировке и/или росту клетки, который включает в себя стадию контактирования вышеупомянутого ядерного фактора перепрограммирования с клеткой и, кроме того, относится к клетке, которую можно получить посредством вышеупомянутого способа, и к соматической клетке, полученной посредством индукции дифференцировки клетки, полученной посредством вышеупомянутого способа.
Посредством использования ядерного фактора перепрограммирования, представленного по настоящему изобретению, перепрограммирование ядра дифференцированной клетки можно удобно и с высокой воспроизводимостью индуцировать без использования эмбрионов или Е8-клеток, и можно получить индуцированную плюрипотентную стволовую клетку в форме недифференцированной клетки, обладающей способностью к дифференцировке, плюрипотентностью и способностью к росту, такими же, как у Е8-клеток. Например, индуцированную плюрипотентную стволовую клетку, обладающую высокой способностью к росту и плюрипотентностью при дифференцировке, можно получить из собственной соматической клетки пациента с использованием ядерного фактора перепрограммирования по настоящему изобретению. Клетки, которые можно получить посредством дифференцировки указанной клетки (например, клетки сердечной мышцы, инсулинпродуцирующие клетки, нервные клетки и т.п.), являются необычайно полезными, поскольку их можно использовать для видов терапии трансплантацией стволовых клеток для множества заболеваний, таких как сердечная недостаточность, инсулинозависимый сахарный диабет, болезнь Паркинсона и повреждение спинного мозга; таким образом, можно избегать этических проблем, касающихся использования эмбриона человека, и отторжения после трансплантации. Кроме того, различные клетки, которые можно получить посредством дифференцировки индуци
- 2 018039 рованной плюрипотентной стволовой клетки (например, клетки сердечной мышцы, клетки печени и т.п.), являются очень полезными в качестве систем для оценки эффективности или токсичности соединений, лекарственных средств, ядов и т.п.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 показан способ скрининга факторов перепрограммирования с использованием эмбриональных фибробластов (МЕЕ) мыши с нокином вдео в гене ЕЬх15.
На фиг. 2 - фотографии, изображающие морфологию ίΡδ-клеток, полученных посредством введения 24 генов, показанных в табл. 4. Морфология дифференцированных клеток (МЕЕ) и нормальных эмбриональных стволовых клеток (Е8) также показана в качестве контроля.
На фиг. 3 - профили экспрессии маркерных генов в ίΡδ-клетках. Показаны результаты К.Т-РСК. с использованием тотальной РНК, выделенной из ίΡδ-клеток, Е8-клеток и МЕЕ-клеток в качестве матриц.
На фиг. 4 - статус метилирования ДНК в ίΡδ-клетках. Геномную ДНК, выделенную из ίΡδ-клеток, Е8-клеток и МЕЕ-клеток, обрабатывали бисульфитом. ДНК-мишени амплифицировали Ρί'Έ и затем вставляли в плазмиду. Для каждого из генов выделяли и секвенировали десять клонов плазмиды. Метилированные СрС показаны сплошными кругами, а неметилированные СрС незакрашенными кругами.
На фиг. 5 - число колоний устойчивых к 0418 клеток, полученных посредством трансдукции группы из 24 генов и групп из 23 генов, где каждый отдельный ген убирали из группы из 24 генов. На нижних частях графика показано число колоний, полученное через одну неделю после отбора с 0418, а на верхних частях графика показано число клонов, полученных за три недели. Когда каждый из заключенных в рамку генов (идентификационный номер для каждого гена является таким же, как указано в табл. 1) удаляли, колоний не получали совсем, или через 3 недели наблюдали только небольшое число колоний.
На фиг. 6 показано число колоний устойчивых к 0418 клеток, полученных посредством трансдукции группы из 10 генов и групп из 9 генов, где каждый отдельный ген убирали из группы из 10 генов. Когда убирали каждый из генов № 14, 15 или 20, колоний не получали. Когда удаляли ген № 22, получали немного устойчивых к 0418 колоний. Однако клетки обладали дифференцированной морфологией, явно отличной от морфологии ίΡδ-клеток.
На фиг. 7 - число появившихся устойчивых к 0418 колоний (перепрограммированных колоний) для группы из 10 генов, группы из 4 генов, групп из 3 генов или групп из 2 генов. Показаны типичные морфология и размеры колоний.
На фиг. 8 показаны фотографии, изображающие результаты окрашивания гематоксилином-эозином (Н и Е) опухолей, сформировавшихся после подкожной трансплантации ίΡδ-клеток, полученных из МЕЕ, мышам пибе. Наблюдали дифференцировку во многие ткани системы трех зародышевых листков.
На фиг. 9 показаны фотографии эмбрионов, полученных посредством трансплантации ίΡδ-клеток, полученных из фибробластов кожи взрослых, в бластоцисты мыши и трансплантации клеток в матки псевдобеременных мышей. Можно наблюдать, что в верхнем левом эмбрионе клетки, полученные из ίΡδ-клеток (испускающие зеленую флуоресценцию), распределены системно. На нижних фотографиях можно наблюдать, что почти все клетки сердца, печени и спинного мозга эмбриона являются 0ЕΡположительными и происходят из ίΡδ-клеток.
На фиг. 10 показаны фотографии, изображающие результаты ΡΤ-Ρί.Έ. подтверждающие экспрессию маркерных генов Е8-клетки. На фотографиях 8ох2 минус обозначает ίΡδ-клетки, полученные посредством трансдукции 3 генов в МЕЕ, 4ЕСАТ обозначает ίΡδ-клетки, полученные посредством трансдукции 4 генов в МЕЕ, 10ЕСАТ обозначает ίΡδ-клетки, полученные посредством трансдукции 10 генов в МЕЕ, фибробласт кожи с 10ЕСАТ обозначает ίΡδ-клетки, полученные посредством трансдукции 10 генов в фибробласты кожи, Е8 обозначает Е8-клетки мыши и МЕЕ обозначает клетки МЕЕ без трансдукции гена. Числовые значения под символами обозначают номера клонов.
На фиг. 11 показано действие ЬЕ0Е на получение ίΡδ-клеток из МЕЕ. Четыре фактора (верхний ряд) или три фактора за исключением с-Мус (нижний ряд) с помощью ретровирусов трансдуцировали в МЕЕ, полученные у мышей ЕЬх15вдео/вдео, и культивировали на обычных клетках-фидерах (клетки 8ТО) (слева) и клетках 8ТО с введенным экспрессирующим ЬЕ0Е вектором (справа). Отбор с 0418 проводили в течение 2 недель, клетки окрашивали кристаллическим синим и фотографировали. Числовые значения обозначают число колоний.
На фиг. 12 показаны объяснения экспериментов с использованием мышей Nаηод-ЕΟЕΡ-IΚЕδ-Ρи^о. А: Выделяли искусственную хромосому Е. сой (ВАС), содержащую ген Иапод мыши в середине, и кассету ЕΟЕΡ-IΚЕ8-Ρи^о вставляли выше кодирующей области Иапод посредством рекомбинации. В: Получали трансгенных мышей с модифицированной ВАС. Наблюдали экспрессию 0ЕΡ, ограниченную внутренними массами клеток бластоцист и гонад.
На фиг. 13 показаны объяснения экспериментов с использованием мышей Nаηод-ЕΟЕΡ-IΚЕδ-Ρи^о. Из эмбрионов мышей Nаηод-ЕΟЕΡ-IΒЕδ-Ρи^о (13,5 суток после оплодотворения) извлекали головы, внутренние органы и гонады для получения МЕЕ. По результатам анализа на сортере клеток почти не присутствовало ΟЕΡ-положительных клеток в МЕЕ, полученных у мышей Nаηод-ЕΟЕΡ-IΚЕ8-Ρи^о
- 3 018039 (Ыапод), а также в МЕЕ, полученных у мыши ЕЬх15вдео/вдео (ЕЬх15) или в МЕЕ, полученных у мыши дикого типа (дикий).
На фиг. 14 показаны фотографии ίΡδ-клеток, полученных у МЕЕ мыши Хапод-Е6ЕР-1КЕ8-Риго (слева) и у МЕЕ мыши ЕЬх15вдео/вдео (справа). Клетки отбирали с пуромицином и 6418, соответственно.
На фиг. 15 показаны результаты роста 1Р8-клеток. 100000 клеток каждых из Е8-клеток, ίΡδ-клеток, полученных у МЕЕ мыши Ыапод-Е6ЕР-1КЕ8-Риго (Ыапод 1Р8, слева), и ίΡδ-клеток, полученных у МЕЕ мыши ЕЬх15|1део/1део (ЕЬх 1Р8), высевали на 24-луночные планшеты и пассировали каждые 3 суток. Показаны результаты подсчета клеток. Числовые значения представляют среднее время удвоения.
На фиг. 16 показаны профили экспрессии генов в 1Р8-клетках. Экспрессию маркерных генов в МЕЕ, Е8-клетках, 1Р8-клетках, полученных у МЕЕ мыши Ыапод-Е6ЕР-1КЕ8-Риго (Ыапод 1Р8, слева), и 1Р8клетках, полученных у МЕЕ мыши ЕЬх15вдео/вдео (ЕЬх 1Р8), анализировали посредством КТ-РСК. Числовые значения внизу указывают число пассажей.
На фиг. 17 показано формирование тератомы из Ыапод 1Р8-клеток. 1000000 клеток каждых из Е8клеток или Ыапод 1Р8-клеток подкожно инъецировали в спину мышей ннйс. и показан внешний вид опухолей, сформированных через 3 недели (слева), и изображения тканей (справа, окрашенные Н и Е).
На фиг. 18 показано получение химерных мышей с помощью Ыапод 1Р8-клеток. Химерные мыши рождались после трансплантации Ыапод 1Р8-клеток (клон №МЕ4ЕК-24, пассированный 6 раз) в бластоцисты. Из 90 трансплантированных эмбрионов родилось четыре химерных мыши.
На фиг. 19 показан перенос зародышевой линии из №под 1Р8-клеток. Анализом РСК геномной ДНК мышей, рожденных благодаря скрещиванию химерных мышей, показанных на фиг. 18, и мышей С57ВЬ/6, выявили присутствие трансгенов Ос13/4 и К1£4 у всех мышей, таким образом подтверждая перенос зародышевой линии.
На фиг. 20 показана индукция дифференцировки в нервные клетки из 1Р8-клеток. Показаны нервные клетки (сверху, βΙΙΙ-тубулин-положительные), олигодендроциты (слева, О4-положительные) и астроциты (справа, 6ЕАР-положительные), дифференцированные ш νίΐϊΌ из 1Р8-клеток, полученных из фибробластов кожи.
На фиг. 21 показано объяснение получения 1Р8-клеток без использования отбора с лекарственным средством. МЕЕ высевали до от 10000 до 100000 клеток на 10-см чашку и 4 фактора трансдуцировали с помощью ретровирусов. В контроле (пустой, слева) не появилось колоний, в то время как на чашках с трансдукцией 4 факторов получили выпуклые колонии, сходные с колониями 1Р8-клеток (в центре), а также плоские колонии трансформантов. При пассировании клеток получили клетки, сходные с 1Р8клетками (справа).
На фиг. 22 показаны профили экспрессии генов в клетках, полученных без использования отбора с лекарственным средством. РНК выделяли из полученных клеток, показанных на фиг. 21, и экспрессию маркерных генов Е8-клетки анализировали посредством КТ-РСК.
На фиг. 23 показаны клетки, подобные 1Р8-клеткам, полученные из фибробластов человека. Показаны колонии, полученные посредством трансдукции с помощью ретровирусов гомологичных генов человека для 4 факторов в фибробласты, полученные из эмбрионов человека (слева), и клетки после двух пассажей (справа).
На фиг. 24 показано получение 1Р8-клеток из фибробластов кожи взрослого человека. Факторы, упомянутые в левой колонке, трансдуцировали с помощью ретровирусов в фибробласты кожи взрослого человека, инфицированные рецептором для ретровирусов мыши с помощью лентивируса. На фотографиях показаны фазово-контрастные изображения (объектх 10) на сутки 8 после вирусной инфекции.
Наилучший способ осуществления изобретения
Ядерный фактор перепрограммирования по настоящему изобретению характеризуется тем, что содержит продукт гена для каждого из следующих трех типов генов: гена семейства Ос1, гена семейства К1£ и гена семейства Мус; и согласно предпочтительному варианту осуществления он характеризуется тем, что содержит продукт гена семейства 8ох в дополнение к вышеупомянутым трем типам генов.
В качестве средства для подтверждения ядерного фактора перепрограммирования по настоящему изобретению можно использовать, например, способ скрининга ядерных факторов перепрограммирования, описанный в Международной публикации \УО 2005/80598. Полное содержание вышеупомянутой публикации включено в содержание данного описания посредством ссылки. С помощью ссылки на вышеупомянутую публикацию специалисты в данной области могут проводить скрининг ядерных факторов перепрограммирования для подтверждения присутствия и действия фактора перепрограммирования по настоящему изобретению.
Например, в качестве экспериментальной системы, позволяющей наблюдать феномен перепрограммирования, можно использовать мышь, у которой проведен нокин вдео (гена, слитого из гена β галактозидазы и гена устойчивости к неомицину) в локусе ЕЬх15. Подробности описаны в примерах данного описания. Ген ЕЬх15 мыши представляет собой ген, специфически экспрессирующийся в плюрипотентных при дифференцировке клетках, таких как Е8-клетки и ранние эмбрионы. В гомомутантной мыши, у которой проведен нокин вдео в гене ЕЬх15 мыши, так что она является дефектной по функции
- 4 018039
РЬх15; аномальных фенотипов, включая относящиеся к плюрипотентности при дифференцировке или размножении, как правило, не наблюдают. У этой мыши экспрессия вдео находится под контролем энхансера и промотора гена РЬх15, и дифференцированные соматические клетки, в которых не экспрессируется вдео, обладают чувствительностью к 0418. В отличие от этого, гомомутантные Е8-клетки с нокином вдео обладают устойчивостью к 0418 в очень высокой концентрации (равной или превышающей 12 мг/мл). Посредством использования этого феномена можно сконструировать экспериментальную систему для визуализации перепрограммирования соматических клеток.
Посредством применения вышеупомянутой экспериментальной системы фибробласты (РЬх15вдео/вдео МЕР) можно сначала выделить из эмбриона гомомутантной мыши с нокином вдео (13,5 суток после оплодотворения. МЕР не экспрессируют ген РЬх15 и, соответственно, также не экспрессируют вдео, что приводит к чувствительности к 0418. Однако, когда МЕР сливают со свободными от генетических манипуляций Е8-клетками (также обладающими чувствительностью к 0418), вдео экспрессируется, и клетки становятся устойчивыми к 0418 в результате перепрограммирования ядер МЕР. Таким образом, посредством использования этой экспериментальной системы феномен перепрограммирования можно визуализировать как устойчивость к 0418.
Ядерные факторы перепрограммирования можно отбирать с использованием вышеупомянутой экспериментальной системы. В качестве кандидатов на роль генов, относящихся к ядерным факторам перепрограммирования, можно отобрать множество генов, которые обладают специфической экспрессией в Е8-клетках, или для которых предполагают важную роль в поддержании плюрипотентности при дифференцировке Е8-клеток, и можно подтвердить, может ли каждый из генов-кандидатов индуцировать перепрограммирование ядра самостоятельно или в подходящем их сочетании. Например, подтвердили, что сочетание всех выбранных первичных генов-кандидатов способно индуцировать перепрограммирование дифференцированных клеток в состояние, близкое к состоянию Е8-клеток. Затем получали сочетания посредством удаления каждого отдельного гена из вышеупомянутого сочетания и подтверждали то же самое действие сочетаний, чтобы выбрать каждый из вторичных генов-кандидатов, отсутствие которых вызывает снижение способности к индукции перепрограммирования или потерю способности к индукции перепрограммирования. Посредством повтора таких же стадий для вторичных генов-кандидатов, выбранных, как описано выше, можно выбрать необходимые сочетания генов для перепрограммирования ядра и можно подтвердить, что сочетание продуктов каждого из трех типов генов, гена семейства Ос1, гена семейства К1Г и гена семейства Мус, действует как ядерный фактор перепрограммирования. Кроме того, можно подтвердить, что сочетание продукта гена семейства 8ох в дополнение к продуктам вышеупомянутых трех типов генов обладает необычайно превосходными характеристиками в качестве ядерного фактора перепрограммирования. Конкретные примеры способа отбора ядерных факторов перепрограммирования показаны в примерах данного описания. Таким образом, с помощью ссылки на приведенные выше общие объяснения и конкретные объяснения в примерах, специалисты в данной области легко могут подтвердить, что сочетание указанных трех типов генов индуцирует перепрограммирование соматических клеток и что сочетание продуктов указанных трех типов генов является необходимым для перепрограммирования ядра.
Ядерный фактор перепрограммирования, представленный по настоящему изобретению, содержит по меньшей мере сочетание продуктов гена семейства Ос1, гена семейства К1Г и гена семейства Мус, например, сочетание продуктов трех типов генов Ос13/4, К1Г 4 и с-Мус. Примеры гена семейства Ос! включают в себя, например, Ос!3/4, Ос!1А, Ос!б и т.п. Ос!3/4 представляет собой фактор транскрипции, принадлежащий к семейству РОИ, и опубликовано, что он является маркером недифференцированных клеток (К. Окато!о е! а1., Се11, б0, рр. 461-72, 1990).
Опубликовано, что Ос!3/4 также участвует в поддержании плюрипотентности (1. №с1то1к е! а1., Се11, 95, рр. 379-91, 1998). Примеры гена семейства К1Г включают в себя К1Г1, К1Г2, К1Г4, К1Г5 и т.п. К1Г 4 (Кгирре1-подобный фактор-4) опубликован в качестве фактора репрессии опухолей (А.М. 0йа1еЬ е! а1., Се11 Кек., 15, рр.92-б, 2005). Примеры гена семейства Мус включают в себя с-Мус, Ν-Мус, Ь-Мус и т.п. сМус представляет собой фактор контроля транскрипции, вовлеченный в дифференцировку и пролиферацию клеток (8. АйЫкагу, М. ЕНегк, Να!. Неу. Мо1. Се11 Вю1., 6, рр. 635-45, 2005), и опубликовано также, что он вовлечен в поддержание плюрипотентности (Р. СагКспдЫ е! а1., Оеуе1ортеп1. 132, рр.885-96, 2005). Регистрационные номера в ΝΟΒΙ для генов из семейств, отличных от Ос!3/4, К1Г4 и с-Мус, следующие:
- 5 018039
Таблица 1
Мышь Человек
К1Е1 Кгирре1-подобный фактор 1 (эритроид) ΝΜ_010635 N14^0 0 6563
К1Е2 Кгирре1-подобный фактор 2 (легкое) ΝΜ_008452 ΝΜ_018270
К1Е5 Кгирре1-подобный фактор 5 НМ_009769 ΝΜ_001730
с-Мус онкоген миелоцитоматоза КМ 010849 ΝΜ 002467
Ν-Мус онкоген, родственный онкогену νМус вируса миелоцитоматоза, полученный из нейробластомы (птичий) ΝΜ_008709 ΝΜ005378
Ь-Мус гомолог 1 онкогена вируса миелоцитоматоза ν-Мус, полученный из карциномы легкого (птичий) ΝΜ_008506 ΝΜ_005376
ΟσίΙΑ домен РОИ, класс 2, фактор транскрипции 1 ΝΜ_198934 ΝΜ_002697
оспе домен ΡΟϋ, класс 3, фактор транскрипции 1 ΝΜ_011141 ΝΜ_002699
Все эти гены являются широко распространенными у млекопитающих, включая человека, и для использования продуктов вышеупомянутых генов по настоящему изобретению можно использовать гены, полученные у любых млекопитающих (гены, полученные у таких млекопитающих, как мышь, крыса, бык, овца, лошадь, обезьяна и т.п.). Помимо продуктов генов дикого типа можно использовать также продукты мутантных генов, содержащие замену, вставку и/или делецию нескольких (например, 1-10, предпочтительно 1-6, более предпочтительно 1-4, еще более предпочтительно 1-3 и наиболее предпочтительно 1 или 2) аминокислот и обладающие сходной функцией с продуктами генов дикого типа. Например, в качестве продукта гена с-Мус можно использовать продукт стабильного типа (Т58А), также как продукт дикого типа. Приведенное выше объяснение можно сходным образом применять к продуктам других генов.
Ядерный фактор перепрограммирования по настоящему изобретению может содержать продукт гена, отличный от вышеупомянутых трех типов продуктов генов. Пример такого продукта гена включает в себя продукт гена семейства 8ох. Примеры гена семейства 8ох включают в себя, например, 8ох1, 8ох3, 8ох7, 8ох15, 8ох17 и 8ох18, и предпочтительный пример включает в себя 8ох2. Ядерный фактор перепрограммирования, содержащий, по меньшей мере, сочетание продуктов четырех типов генов, гена семейства Ос( (например, Ос13/4). гена семейства Κΐί (например, К114), гена семейства Мус (например, сМус) и гена семейства 8ох (например, 8ох2), представляет собой предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения с точки зрения эффективности перепрограммирования, и в частности, сочетание с продуктом гена семейства 8ох иногда является предпочтительным для получения плюрипотентности. 8ох2, экспрессирующийся в процессе раннего развития, представляет собой ген, кодирующий фактор транскрипции (А.А. АуШои с1 а1., Сспс5 Осу., 17, рр.126-40, 2003). Регистрационные номера в ΝΟΒΙ для генов семейства 8ох, отличных от 8ох2, следующие.
Таблица 2
Мышь Человек
30X1 Содержащий 5ΚΥ-6οκο ген 1 ΝΜ 009233 ΝΜ 005986
30X3 Содержащий 3ΚΥ-βοκο ген 3 ЫМ 009237 ΝΜ 005634
30X7 Содержащий 5ΚΥ-6οκο ген 7 ΝΜ_011446 ΝΜ 031439
3οχ15 Содержащий ΞΚΥ-бокс ген 15 ΝΜ_009235 ΝΜ_006942
30X17 Содержащий ΒΚΥ-бокс ген 17 ΝΜ_011441 ΝΜ_022454
30X18 Содержащий ΒΚΥ-бокс ген 18 ΝΜ—009236 ΝΜ 018419
Кроме того, продукт гена семейства Мус можно заменять на цитокин. В качестве цитокина предпочтительными являются, например, 8СР, ЬРСР или т.п. Однако данные примеры цитокинов не являются ограничивающими.
В качестве более предпочтительного варианта осуществления пример включает в себя фактор, индуцирующий иммортализацию клеток, в дополнение к вышеупомянутым трем типам продуктов генов, предпочтительно к четырем типам продуктов генов. Например, пример включает в себя сочетание фактора, содержащего продукт гена ТЕНТ, с фактором, содержащим продукт или продукты одного или нескольких типов генов, выбранных из группы, состоящей из следующих генов: для большого Т-антигена 8У40, НРУ16 Е6, НРУ16 Е7 и ВшН. ТЕНТ является необходимым для поддержания структуры теломеры на конце хромосомы во время репликации ДНК, и ген экспрессируется в стволовых клетках или клетках
- 6 018039 опухоли человека, в то время как он не экспрессируется во многих соматических клетках (I. Нопка\\а. е! а1., Ргос. Νη11. Асаб. 8ск И8А, 102, рр.18437-442, 2005). Опубликовано, что большой Т-антиген 8У40, НРУ16 Е6, НРУ16 Е7 или ВшИ индуцируют иммортализацию соматических клеток человека в сочетании с большим Т-антигеном (8. Лк1шоу е! а1., 8!ет Се11к, 23, рр.1423-1433, 2005; Р. 8а1шоп е! а1., Мо1. Ткет., 2, рр. 404-414, 2000). Указанные факторы являются особенно полезными, в частности, когда 1Р8клетки являются индуцированными из клеток человека. Регистрационные номера в Νί'ΒΙ для генов ТЕНТ и Вш11 следующие.
Таблица 3
Мышь Человек
ТЕК.Т обратная транскриптаза теломеразы ΝΜ 009354 ΝΜ_198253
ВтИ область вставки 1 Мо-МЬУ для Влимфомы ΝΜ_007552 ΝΜ_005180
Более того, продукт или продукты одного или нескольких типов генов, выбранных из группы, состоящей из следующих:
БЬх15, №под, ЕВак, ЕСАТ15-2, Те11 и β-катенина, можно объединять. Пример особенно предпочтительного варианта осуществления с точки зрения эффективности перепрограммирования, включает в себя ядерный фактор перепрограммирования, содержащий всего десять типов продуктов генов, где продукты генов БЬх15, Nаπод, ЕВак, ЕСАТ15-2, Те11 и β-катенина объединяют с вышеупомянутыми четырьмя типами продуктов генов. БЬх15 (Υ. Токнхаюа е! а1., Мо1. Се11 Вю1., 23, рр. 2699-708, 2003), Nаπод (К. Мйкш е! а1., Се11, 113, рр. 631-42, 2003), ЕВак (К. Такакаккц К. Мйкш, 8. Υатаηака, №!лте, 423, рр. 541-5, 2003) и ЕСАТ15-2 (А. Войуш е! а1., Оеуе1ортеп!, 130, рр. 1673-80, 2003) представляют собой гены, специфически экспрессирующиеся в Е8-клетках. Те11 вовлечен в активацию Ак! (А. Вог1у|п е! а1., Оеуе1ортеп!, 130, рр. 1673-80, 2003), и β-катенин представляет собой важный фактор, приводящий в действие путь передачи сигнала \Уп1 и опубликовано также, что он вовлечен в поддержание плюрипотентности (Ν. 8а!о е! а1, N81. Меб., 10, рр. 55-63, 2004).
Кроме того, ядерный фактор перепрограммирования по настоящему изобретению может содержать, например, продукт или продукты одного или нескольких типов генов, выбранных из группы, состоящей из следующих: ЕСАТ1, Екд1, Ппт!3Ь, ЕСАТ8, ОбО, 8ох15, ЕСАТ15-1, Е!к117, 8а114, Вех1, ИТБ1, 8!е11а, 8!а!3 и ОтЬ2. ЕСАТ1, Екд1, ЕСАТ8, Об13 и ЕСАТ15-1 представляют собой гены, специфически экспрессирующиеся в Е8-клетках (К. Мйкш е! а1., Се11, 113, рр. 631-42, 2003). Ппт!3Ь представляет собой фактор, связанный с метилирующим ДНК ферментом, и 8ох15 представляет собой класс генов, экспрессирующихся в процессе раннего развития и кодирующих факторы транскрипции (М. Магиуата е! а1., 1. Вю1. Скет., 280, рр.24371-9, 2005). Е!к117 кодирует подобный тяжелому полипептиду ферритина 17 (А. соШотю!, Т. Вооп, С. Эе 8те!, 1п!. 1. Сапсег, 105, рр.371-6, 2003), 8а114 кодирует белок с Ζη-пальцами, в большом количестве экспрессирующийся в эмбриональных стволовых клетках (1. Кок1каке е! а1., Су!одепе!. Оепоте Век., 98, рр.274-7, 2002), и Вех1 кодирует фактор транскрипции, расположенный ниже Ос!3/4 (Е. Веп-8киккап, ЕВ. Ткотркоп, Ьб. бибак, Υ. Ветдтап, Мо1. Се11 Вю1., 18, рр.1866-78, 1998). ИТЕ1 представляет собой кофактор транскрипции, расположенный ниже Ос!3/4, и опубликовано, что супрессия пролиферации Е8-клеток индуцирована, когда данный фактор супрессирован (А. Окиба е! а1., ЕМВО 1., 17, рр.2019-32, 1998). 8!а!3 представляет собой сигнальный фактор для пролиферации и дифференцировки клеток. Активация 8!а!3 запускает действие ЫЕ, и таким образом, фактор играет важную роль в поддержании плюрипотентности (Н. ΝΑν-Γ Т. Вигбоп, I. СкатЬегк, А. 8ткк, Оепек Оеу., 12, рр.2048-60, 1998). ОгЬ2 кодирует белок, являющийся промежуточным звеном между различными рецепторами факторов роста, существующими на мембранах клетки, и каскадом Вак/МАРК (А.М. Скепд е! а1., Се11, 95, рр.793-803, 1998).
Однако продукты генов, которые можно включать в ядерный фактор перепрограммирования по настоящему изобретению, не являются ограниченными продуктами генов, конкретно указанных выше. Ядерный фактор перепрограммирования по настоящему изобретению может содержать один или несколько факторов, относящихся к дифференцировке, развитию, пролиферации или т.п., и факторов, обладающих другими видами физиологической активности, а также другие продукты генов, которые могут функционировать как ядерный фактор перепрограммирования. Понятно, что такие варианты осуществления попадают в объем настоящего изобретения. Посредством использования соматических клеток, в которых экспрессируются только один или два гена из трех типов генов Ос!3/4, К1Е4 и с-Мус, можно идентифицировать продукты других генов, которые могут функционировать как ядерный фактор перепрограммирования, например, посредством скрининга продукта гена, который может индуцировать перепрограммирование ядер указанных клеток. В соответствии с настоящим изобретением вышеупомянутый способ скрининга также представлен как новый способ скрининга ядерного фактора перепрограм мирования.
Продукты генов, содержащиеся в ядерном факторе перепрограммирования по настоящему изобретению, могут представлять собой, например, белок, собственно полученный с помощью вышеупомяну
- 7 018039 того гена, или, альтернативно, в форме продукта слитного гена для указанного белка с другим белком, пептидом или т.п. Например, можно использовать также слитый белок с зеленым флуоресцентным белком (СЕР) или продукт слитого гена с таким пептидом, как гистидиновая метка. Кроме того, посредством получения и использования слитого белка с пептидом ТАТ, полученным из вируса Ηΐν, можно способствовать внутриклеточному поглощению ядерного фактора перепрограммирования через мембраны клеток, таким образом, обеспечивая возможность индукции перепрограммирования посредством только добавления слитого белка в среду, таким образом, исключая сложные операции, такие как трансдукция гена. Поскольку способы получения продуктов таких слитых генов хорошо известны специалистам в данной области, специалисты в данной области легко могут сконструировать и получить продукт соответствующего слитого гена в зависимости от цели.
Посредством использования ядерного фактора перепрограммирования по настоящему изобретению, ядро соматической клетки можно перепрограммировать для получения индуцированной плюрипотентной стволовой клетки. В данном описании термин индуцированные плюрипотентные стволовые клетки обозначает клетки, обладающие свойствами, сходными со свойствами Е8-клеток, и более конкретно термин относится к недифференцированным клеткам, обладающим плюрипотентностью и способностью к росту. Однако термин не следует истолковывать узко в каком-либо смысле, и следует истолковывать его в самом широком смысле. Способ получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с использованием ядерного фактора перепрограммирования описан в Международной публикации \УО 2005/80598 (в публикации используют термин Е8-подобные клетки), и конкретно описаны также способы для выделения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Таким образом, с помощью ссылки на вышеупомянутую публикацию специалисты в данной области могут легко получить индуцированные плюрипотентные стволовые клетки с использованием ядерного фактора перепрограммирования по настоящему изобретению.
Способ получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток из соматических клеток с использованием ядерного фактора перепрограммирования по настоящему изобретению не является ограниченным конкретно. Можно применять любой способ до тех пор, пока ядерный фактор перепрограммирования может контактировать с соматическими клетками в условиях, при которых возможна пролиферация соматических клеток и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Например, продукт гена, содержащийся в ядерном факторе перепрограммирования по настоящему изобретению, можно добавлять в среду. Альтернативно, с использованием вектора, содержащего ген, с которого можно экспрессировать ядерный фактор перепрограммирования по настоящему изобретению, можно применять способы трансдукции указанного гена в соматическую клетку. При использовании такого вектора два или более типов генов можно вводить в вектор, и продукты каждого из генов можно одновременно экспрессировать в соматической клетке. Когда один или несколько из продуктов генов, содержащихся в ядерном факторе перепрограммирования по настоящему изобретению, уже экспрессируются в соматической клетке, подлежащей перепрограммированию, продукты указанных генов можно исключить из ядерного фактора перепрограммирования по настоящему изобретению. Понятно, что такой вариант осуществления попадает в объем настоящего изобретения.
При получении индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с использованием ядерного фактора перепрограммирования по настоящему изобретению типы соматических клеток, подлежащих перепрограммированию, не являются ограниченными конкретно, и можно использовать любые виды соматических клеток. Например, можно использовать зрелые соматические клетки, а также соматические клетки эмбрионального периода. Когда индуцированные плюрипотентные стволовые клетки используют для терапевтического лечения заболеваний, желательно использовать соматические клетки, выделенные у пациентов. Например, можно использовать соматические клетки, вовлеченные в заболевания, соматические клетки, участвующие в терапевтическом лечении заболеваний, и т.п. Способ для отбора индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, которые присутствуют в среде согласно способу по настоящему изобретению, не является ограниченным конкретно, и соответственно, можно использовать хорошо известные способы, например, ген устойчивости к лекарственному средству или т.п. можно использовать в качестве маркерного гена для выделения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с использованием устойчивости к лекарственному средству в качестве показателя. Различные среды, которые могут поддерживать недифференцированное состояние и плюрипотентность Е8-клеток, и различные среды, которые не могут поддерживать такие свойства, известны в данной области, и индуцированные плюрипотентные стволовые клетки можно эффективно выделить с использованием сочетания подходящей среды. Специалисты в данной области легко могут подтвердить способность к дифференцировке и пролиферации выделенных индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с использованием способов подтверждения, широко применяемых для Е8-клеток.
Применения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, полученных способом по настоящему изобретению, не являются ограниченными конкретно. Клетки можно использовать для любых экспериментов и исследований, проводимых с Е8-клетками, видов терапевтического лечения с использованием Е8-клеток и т.п. Например, желаемые дифференцированные клетки (например, нервные клетки,
- 8 018039 клетки сердечной мышцы, гемоциты и т.п.) можно получить посредством обработки индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, полученных способом по настоящему изобретению, ретиноевой кислотой, факторами роста, такими как ЕСР, глюкокортикоид или т.п., и терапию стволовыми клетками, основанную на аутотрансплантации клеток, можно выполнять посредством возвращения пациенту дифференцированных клеток, полученных, как описано выше. Однако применения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток по настоящему изобретению не являются ограниченными вышеупомянутыми конкретными вариантами осуществления.
Примеры
Настоящее изобретение будет более конкретно объяснено на примерах. Однако объем настоящего изобретения не является ограниченным следующими примерами.
Пример 1. Отбор фактора перепрограммирования.
Чтобы идентифицировать факторы перепрограммирования, требуется экспериментальная система для простого наблюдения феномена перепрограммирования. В качестве экспериментальной системы использовали мышь с нокином вдео (слитого гена из гена β-галактозидазы и гена устойчивости к неомицину) в локусе РЬх15. Ген РЬх15 мыши представляет собой ген, специфически экспрессирующийся при дифференцировке плюрипотентных клеток, таких как Е8-клетки, и в ранних эмбрионах. Однако у гомомутантной мыши, с нокином вдео в гене РЬх15 мыши таким, что удалена функция РЬх15, не наблюдали аномальных фенотипов, включая фенотипы, относящиеся к плюрипотентности при дифференцировке или развитии. У этой мыши контроль экспрессии вдео осуществляют посредством энхансера и промотора гена РЬх15. Конкретно, вдео не экспрессируется в дифференцированных соматических клетках, и они являются чувствительными к С418. В отличие от этого, гомомутантные Е8-клетки с нокином вдео обладают устойчивостью к С418 в необычайно высокой концентрации (равной или превышающей 12 мг/мл). Посредством использования вышеуказанного феномена сконструировали экспериментальную систему для визуализации перепрограммирования соматических клеток.
В вышеупомянутой экспериментальной системе фибробласты (РЬх15вдео/вдео МЕР) сначала выделяли из эмбриона гомоутантной мыши с нокином вдео (13,5 суток после оплодотворения). Поскольку МЕР не экспрессируют ген РЬх15, клетки также не экспрессируют вдео и таким образом обладают чувствительностью к С418. В то же время, когда МЕР слиты с Е8-клетками, не подвергавшимися манипуляции с генами (также обладающими чувствительностью к С418), ядра МЕР являются перепрограммированными, и в результате вдео экспрессируется и придает устойчивость к С418. Феномен перепрограммирования можно таким образом визуализировать как устойчивость к С418 посредством использования этой экспериментальной системы (Международная публикация νΟ 2005/80598). Поиски факторов перепрограммирования проводили с использованием вышеупомянутой экспериментальной системы (фиг. 1), и всего 24 типа генов выбрали в качестве кандидатов на роль факторов перепрограммирования, включая гены, для которых показали специфическую экспрессию в Е8-клетках, и гены, для которых предполагают важную роль в поддержании плюрипотентности при дифференцировке Е8-клеток. Эти гены показаны в табл. 4 и 5 ниже. В случае в-катенина (№ 21) и с-Мус (№ 22) использовали мутанты активного типа (катенин: 833Υ, с-Мус: Т58А).
- 9 018039
Таблица 4
Номер Наименова ние гена Описание гена
1 ЕСАТ1 Ассоциированный с ЕЗ-клетками транскрипт 1 (ЕСАТ1)
2 ЕСАТ2 Ассоциированный с плюрипотентностью при развитии 5 (ΌΡΡΑ5), специфический для ЕЗклетки ген 1 (Е331)
3 ЕСАТЗ Р-бокс-белок 15 (ЕЬх15),
4 ЕСАТ4 Фактор транскрипции с гомеобоксом Цапод
5 ЕСАТ5 Экспрессирующийся в ЕЗ-клетке Еаз (ЕЕаз),
6 ЕСАТ7 ДНК (цитозин-5-)-метилтрансфераза 3-подобный (ЦппЛ31) , вариант 1
7 ЕСАТ8 Ассоциированный с ЕЗ-клетками транскрипт 8 (ЕСАТ8)
3 ЕСАТ9 Фактор роста и дифференцировки 3 (СД£3),
9 ЕСАТ10 Содержащий ЗЕУ-бокс ген 15 (Зох15),
10 ЕСАТ15-1 Ассоциированный с плюрипотентностью при развитии 4 фрра4), вариант 1
11 ЕСАТ15-2 Ассоциированный с плюрипотентностью при развитии 2 (Брра2)
12 ЕВЫ17 Подобный тяжелому полипептиду ферритина 17 (ГЫ1117)
13 За114 8а1-подобный 4 (ВгозорЫ1а) (За114), вариант транскрипта а
14 ОсЬЗ/4 домен РОИ, класс 5, фактор транскрипции 1 . (Рои5£1)
15 Зох2 Содержащий 3ΕΥ-6οκσ ген 2 (Зох2)
16 Кех1 Белок с цинковыми пальцами 42 (Ζ£ρ42)
17 ОН1 Фактор транскрипции недифференцированной эмбриональной клетки 1 (Ш:£1)
18 Тс11 Контрольная точка Т-клеточной лимфомы 1 (Тс11)
19 ЗСе11а Ассоциированный с плюрипотентностью при развитии 3 (ОрраЗ)
20 К1£4 Ктирре1-подобный фактор 4 (кишечник) (К1Е4)
21 β-катенин Катенин (кадгерин-ассоциированный белок), бета 1, 88 кДа (СХппЫ)
22 с-Мус Онкоген миелоцитоматоза (Мус)
23 ЗОаЬЗ Передатчик сигнала и активатор транскрипции 3 (ЗОаЬЗ), вариант транскрипта 1
24 <ЗгЬ2 Связанный с рецептором фактора роста белок 2 (<ЗгЬ2)
- 10 018039
Таблица 5
Регистрационный номер в №СВ1
Но мер Наимено вание гена Характерное свойство Мышь Человек
1 ЕСАТ1 Ген, специфически экспрессирующийся в Е5клетке АВ211060 АВ211062
2 ЕСАТ2 Ген, специфически экспрессирующийся в ЕЗклетке НМ_02Б274 ΝΜ_0010252 90
3 ЕСАТЗ Ген, специфически экспрессирующийся в ЕЗклетке ΝΜ_015798 ΝΜ_152676
4 ЕСАТ4 Фактор транскрипции, обладающий гомеодоменом, необходимый фактор для поддержания плюрипотентности при дифференцировке ΆΒ093574 ΝΜ_024865
5 ЕСАТ5 Белок семейства Раз, фактор, стимулирующий рост ЕЗ-клетки ΝΜ_181548 Ж_181532
б ЕСАТ7 Фактор, связанный с ферментом метилирования ДНК, необходимый для импринтинга ΝΜ_019448 ΝΜ_013369
7 ЕСАТЗ Ген, специфически экспрессирующийся в ЕЗклетке, обладающий доменом ТиЗог ΆΒ211061 ΑΒ211063
8 ЕСАТ9 Ген, специфически экспрессирующийся в Е5клетке, принадлежащий семейству ΤΟΓβ ΝΜ-008108 ΝΜ_020634
9 ЕСАТ10 Ген, специфически экспрессирующийся в ЕЗклетке, фактор транскрипции семейства 3ΗΥ ΝΜ_009235 ΝΜ_006942
10 ЕСАТ15- 1 Ген, специфически экспрессирующийся в ЕЗклетке ΝΜ_028610 ΝΜ_018189
11 ЕСАТ15- 2 Ген, специфически экспрессирующийся в ЕЗклетке ΝΜ_028615 ΝΜ_138815
12 ЕДЫ 17 Ген, специфически экспрессирующийся в Е5клетке, подобный тяжелой цепи ферритина ΝΜ_031261 ΝΜ_031894
13 За114 Ген, специфически экспрессирующийся в Е8клетке, белок с Ζη-пальцами ΝΜ_175303 ΝΜ_020436
14 ОсЬЗ/4 Фактор транскрипции семейства рои, необходимый для поддержания плюрипотентности ΝΜ_013633 ΝΜ-002701
15 5ох2 Фактор транскрипции семейства 5Κ.Υ, необходимый для поддержания плюрипотентности ΝΜ_011443 ΝΜ_003106
16 Кех1 Ген, специфически экспрессирующийся в Е5клетке, белок с Ζη-пальцами ΝΜ_009556 ΝΜ_174900
17 иъ£1 Фактор регуляции транскрипции с высоким уровнем экспрессии в ЕЗклетке, стимулирующий рост ΕΞ ΝΜ_009482 ΝΜ_003577
- 11 018039
18 ТС11 Активирующий онкоген АКТ, в большом количестве экспрессирующийся в ЕЗклетке ЫМ_009337 ΝΜ_021966
19 ЗЪе11а Ген, специфически экспрессирующийся в ЕЗклетке ΝΜ_139218 ΝΜ_1$9286
20 К1£4 В большом количестве экспрессирующийся в ЕЗклетке, опубликовано действие как в качестве антионкогена, так и в качестве онкогена ММ_010637 ΝΜ_004235
21 β- катенин Фактор транскрипции, активирующийся по сигналу ИпС, опубликовано вовлечение в поддержание плюрипотентности ММ_007614 ΝΜ_001904
22 с-Мус Фактор контроля транскрипции, опубликован как участвующий в пролиферации и дифференцировке клетки, и как онкоген, вовлеченный в поддержание плюрипотентности ΝΜ_010849 ΝΜ_002467
23 зеаьз Фактор транскрипции, активирующийся по сигналу ЫР, считается необходимым для поддержания плюрипотентности ЕЗ-клеток мьтпги ΝΜ_213659 ΝΜ_139276
24 СгЬ2 Адапторный белок, являющийся промежуточным звеном между рецепторами факторов роста и каскадом Наз/МАРК ΝΜ_008163 ΝΜ_002086
кДНК указанных генов вставляли в ретровирусный вектор рМХ-дет способом Са1е\гау. Сначала каждым из 24 генов инфицировали РЬх15вдео/вдео МЕР, и затем проводили отбор с С418 в условиях культивирования Е8-клеток. Однако не получили устойчивых к С418 колоний. Затем ретровирусными векторами для всех 24 генов одновременно инфицировали РЬх15вдео/вдео МЕР. Когда проводили отбор с С418 в условиях культивирования Е8-клеток, получили множество колоний, устойчивых к лекарственному средству. Эти колонии выделяли, и продолжали культивирование. Обнаружили, что культивирование этих клеток можно проводить в течение длительного периода времени и что эти клетки обладают морфологией, сходной с морфологией Е8-клеток (фиг. 2). На фигуре ίΡδ-клетки представляют собой индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (называемые также подобные Е8-клетки, Е8подобные клетки или Е8Ь-клетки), Е8 представляют собой эмбриональные стволовые клетки, и МЕР представляют собой дифференцированные клетки (эмбриональные фибробласты).
Когда профили экспрессии маркерных генов исследовали посредством РТ-РСВ обнаружили экспрессию таких маркеров дедифференцировки, как Ыаиод и Ос13/4 (фиг. 3). Обнаружили, что экспрессия Ыаиод являлось близкой к экспрессии в Е8-клетках, в то время как экспрессия Ос13/4 была ниже, чем в Е8-клетках. Когда исследовали статус метилирования ДНК способом бисульфитного секвенирования, обнаружили, что ген Ыаиод и ген РЬх15 являются высокометилированными в МЕР, в то время как они являются деметилированными в ίΡδ-клетках (фиг. 4).
Приблизительно 50% гена 1СР2, гена импринтинга, являлось метилированным как в клетках МЕР, так и в ίΡδ-клетках. Поскольку известно, что память импринтинга удалена и ген 1СР2 почти полностью деметилирован в примордиальных зародышевых клетках через 13,5 суток после оплодотворения, из которых выделены РЬх15вдео/вдео МЕР, заключили, что ίΡδ-клетки не происходят из примордиальных зародышевых клеток, оставшихся в виде примеси в РЬх15вдео/вдео МЕР. Вышеуказанные результаты показали, что перепрограммирование дифференцированных клеток (МЕР) до состояния, близкого к состоянию Е8клеток, можно индуцировать с помощью сочетания 24 типов факторов.
Затем проводили исследования того, все ли из 24 типов генов являются необходимыми для перепрограммирования. 23 генами, с удалением каждого отдельного гена, трансфицировали РЬх15вдео/вдео МЕР. В результате для 10 генов обнаружили ингибирование формирования колоний при удалении каждого из них (фиг. 5, номера генов соответствуют номерам генов, показанных в табл. 4, и гены представляют собой следующие 10 типов генов: № 3, № 4, № 5, № 11, № 14, № 15, № 18, № 20, № 21 и № 22). Ко
- 12 018039 гда этими десятью генами одновременно трансфицировали ЕЬх15|1део/1део МЕЕ, устойчивые к 0418 колонии получали со значительно большей эффективностью по сравнению с одновременной трансфекцией 24 генами.
Кроме того, 9 генами, с удалением каждого отдельного гена из 10 генов, трансфицировали ЕЬх15вдео/вдео МЕЕ. В результате обнаружили, что колонии устойчивых к 0418 ίΡδ-клеток не формировались, когда удаляли каждый из 4 типов генов (№ 14, № 15, № 20 или № 22) (фиг. 6). Таким образом, предположили, что эти четыре типа генов среди десяти генов играют особенно важные роли в индукции перепрограммирования.
Пример 2. Индукция перепрограммирования с помощью сочетания 4 типов генов.
Исследовали, можно ли достичь индукции перепрограммирования соматических клеток с помощью четырех типов генов, для которых предполагали особенную важность среди 10 генов. С использованием сочетания вышеупомянутых 10 типов генов, сочетания вышеупомянутых 4 типов генов, сочетаний только 3 типов генов среди 4 типов генов и сочетаний только 2 типов генов среди 4 типов генов, эти наборы генов трансдуцировали с помощью ретровирусов в МЕЕ-клетки, как в соматические клетки, в которых проведен нокин гена вдео в гене ЕЬх15. В результате при трансдукции 4 типов генов получили 160 устойчивых к 0418 колоний. Хотя этот результат является почти таким же, как результат, полученный посредством трансдукции с 10 типами генов (179 колоний), колонии, полученные посредством трансдукции 4 генов, были меньше, чем колонии после трансдукции 10 генами. При пассировании этих колоний число колоний, обладающих морфологией ίΡδ-клеток, составляло 9 клонов среди 12 клонов в случае трансдукции 10 генами, в то время как присутствовала тенденция к некоторому понижению - 7 клонов среди 12 клонов в случае трансдукции 4 генами. В случае 4 генов почти такое же число ίΡδ-клеток получили как для клеток, полученных у мыши, так и для клеток, полученных у человека.
При трансдукции 3 генов, выбранных из вышеупомянутых 4 генов, получили 36 плоских колоний с одним из сочетаний (№ 14, № 15 и № 20). Однако при их пассировании ίΡδ-клеток не наблюдали. С другим сочетанием (№ 14, № 20 и № 22) получили 54 небольшие колонии. При пассировании 6 относительно крупных колоний из этих колоний, клетки, подобные Е8-клеткам, получили для всех этих 6 клонов. Однако, по-видимому, адгезия этих клеток между собой и к культуральной чашке была слабее, чем адгезия Е8-клеток. Скорость пролиферации клеток также являлась более медленной, чем скорость, наблюдаемая в случае трансдукции 4 генами. Кроме того, по одной колонии сформировалось с каждым из двух других видов сочетаний 3 генов из 4 генов. Однако пролиферации клеток не наблюдали при пассировании клеток. С любым из сочетаний 2 генов, выбранных из 4 генов (6 сочетаний), не сформировалось устойчивых к 0418 колоний. Вышеуказанные результаты показаны на фиг. 7.
Кроме того, результаты наблюдения профилей экспрессии маркерных генов Е8-клетки посредством КТ-РСК показаны на фиг. 10. Подробности способа следующие. Из ίΡδ-клеток, полученных посредством трансдукции 3 генов (Ос!3/4, К1Г4 и с-Мус: представлены как 8ох2 минус), 4 генов (8ох2 добавляли к трем генам: представлены как 4ЕСАТ) и 10 генов (№ 3, № 4, № 5, № 11, № 18 и № 21 в табл. 4 добавляли к четырем генам: представлены как 10ЕСАТ) в ЕЬх15вдео/вдео МЕЕ, ίΡδ-клеток, полученных посредством трансдукции 10 генов в фибробласты, полученные из кончика хвоста взрослой мыши, у которой проведен нокин вдео в гене ЕЬх15 (представлены как фибробласты кожи с 10ЕСАТ), Е8-клеток мыши и МЕЕ-клеток без трансдукции генов выделяли тотальную РНК и обрабатывали ДНКазой I для удаления загрязнения геномной ДНК. Первые цепи кДНК получали реакцией обратной транскрипции, и профили экспрессии маркерных генов Е8-клетки исследовали посредством ΡΟΚ В случае Ос!3/4, Иапод и ЕКак, ΡΟΗ проводили с использованием праймеров, которые амплифицируют только продукт транскрипции эндогенного гена, не с трансдуцированного ретровируса. Последовательности праймеров показаны в табл. 6.
- 13 018039
Таблица 6
ЕСАТ1 ЕСАТ1-ЙТ-3 ТОТ ССС ССС СТС ААА ССС САС СТС АСА Т
ЕСАТ1-ЕТ-А5 АТС ССС ССС САТ АСС АСС АСС СТС ААС Т
Езд1 РН34-Ц38 САА СТС ТСС ТТС СТТ ССС АСС АТС
рН34-Ь394 АСТ ССА ТАС АСТ ССС СТА ОС
Напод 6047-51 САС СТС ТТТ САС ССТ АСС ТС
6047-А31 ССС ТТС АТС АТС СТА САС ТС
ЕНаз 45328-Б118 АСТ ССС ССТ САТ САС АСТ ССТ АСТ
ЕКаэ-А3304 САС ТСС СТТ СТА СТС ССС ТАС СТС
са£з Сй£3-и253 СТТ ССА АСС ТОТ ССС ТСС сст стт
<ЗОГЗ Ы6914 АСС САС ССА ТСС АСА САС ССС АСС АС
Рд£4 Гд£4-КТ-3 ССТ ССТ САС САТ СТТ ССС АСТ СС
Ед£4-ΕΤ-ΑΞ ССТ ТСТ ТСС ТСС ССС ССТ ТСТ ТА
Сгхрро Сг1р£о-3 АТС САС ССА АСТ СТС ААС АТС АТС ТТС ССА
Сг1р£о-А3 СТТ ТСА ССТ ССТ ССТ ССА ТСА ССТ САС САТ
Ζ£ρ296 Ζ£ρ296-367 ССА ТТА ССС ССС АТС АТС ССТ ТТС
Ζ£ρ296-Α3350 САС ТСС ТСА СТС САС ССС ССТ ТСС
ϋβχΐ Оах1-5Ю96 ТСС ТСС ССТ ССА ССС САТ САА САС
ЦЭХ1-А31305 ССС САС ТСТ ТСА СТТ САС ССС АТС
ОсЪЗ/4 0с£3/4-39 ТСТ ТТС САС САС ССС ССС ССС ТС
0с£3/4-А32Ю ТСС ССС ССС АСА ТСС ССА САТ СС
НАТТ НАТ1 Ц283 АТТ СТТ ССТ ТСТ САА ССС ССС ААА СТС САС
ΝΑΤ1 Ь4 76 АОТ ТОТ ТТО СТО СОО АСТ тот САТ стс отс
Результаты, показанные на данной фигуре, показывают, что посредством трансдукции 3 генов эффективно индуцирована экспрессия каждого из ЕКаз и РдГ4. однако экспрессия каждого из Ое13/4 и №1под, факторов, необходимых для поддержания плюрипотентности, не являлась индуцированной или являлась очень слабой даже при индукции. Однако при трансдукции 4 генов присутствовал один клон (№ 7), в котором Ое13/4 и Ναηο§ являлись относительно сильно индуцированными среди изучаемых 4 клонов. Кроме того, при трансдукции 10 генов сильную индукцию каждого из Ое13/4 и Ναηο§ наблюдали в 3 клонах среди исследуемых 5 клонов.
Эти результаты показывают, что сочетание по меньшей мере 3 генов (№ 14, № 20 и № 22) является необходимым для перепрограммирования, и в случае группы из 4 генов и группы из 10 генов, включая 3 типа генов, эффективность перепрограммирования увеличивалась пропорционально увеличению числа генов.
Пример 3. Анализ плюрипотентности перепрограммированных клеток.
Чтобы оценить плюрипотентность при дифференцировке полученных ίΡδ-клеток, ίΡδ-клетки, полученные с помощью 24 факторов, 10 факторов и 4 факторов, подкожно трансплантировали мышам пибе. В результате опухоли, обладающие размером, сходным с опухолями, наблюдаемыми в случае Е8-клеток, сформировались у всех животных. Г истологически опухоли состояли из множества типов клеток, и наблюдали хрящевые ткани, нервные ткани, мышечные ткани, жировые ткани и ткани, подобные тканям кишечника (фиг. 8), что подтверждает плюрипотентность ίΡδ-клеток. В отличие от этого, хотя опухоли формировались, когда клетки, полученные с помощью 3 факторов трансплантировали мышам пибе, гистологически они являлись сформированными только из недифференцированных клеток. Таким образом, обнаружили, что ген семейства 8ох является необходимым для индукции плюрипотентности при дифференцировке.
- 14 018039
Пример 4. Перепрограммирование фибробластов, полученных из хвостов взрослых мышей.
фактора, идентифицированные в эмбриональных фибробластах мыши (МЕЕ), трансдуцировали в фибробласты, полученные из хвостов взрослых мышей с нокином вдео ЕЬх15, с системной экспрессией зеленого флуоресцентного белка (СЕР). Затем клетки культивировали на фидерных клетках в тех же самых условиях, что и условия культивирования Е8-клеток, и проводили отбор по С418. Через приблизительно две недели после начала отбора с лекарственным средством получили множество колоний 1Р8клеток. Когда эти клетки подкожно трансплантировали мышам пибе, формировались тератомы, состоящие из множества тканей из всех трех зародышевых листков. Кроме того, когда 1Р8-клетки, полученные из фибробластов кожи взрослых, трансплантировали в бластоцисты, и затем трансплантировали в матки псевдобеременных мышей, получили эмбрионы, в которых СЕР-положительные клетки являлись системно распределенными через 13,5 суток после оплодотворения (фиг. 9), что показывает, что 1Р8-клетки обладают плюрипотентностью и способны вносить вклад в эмбриогенез мыши. Эти результаты показывают, что идентифицированный класс факторов обладает способностью индуцировать перепрограммирование не только соматических клеток в эмбриональном периоде, но также соматических клеток зрелой мыши. На практике является чрезвычайно важным, что перепрограммирование можно индуцировать в клетках, полученных из кожи взрослых.
Пример 5.
Исследовали действие цитокинов на получение 1Р8-клеток. Экспрессирующий вектор (ретровирусный вектор рМХ) для основного фактора роста фибробластов (ЬЕСЕ) или фактора стволовых клеток (8СЕ) трансдуцировали в фидерные клетки (клетки 8ТО) для получения клеток, постоянно экспрессирующих цитокины. МЕЕ, полученные у мыши ЕЬх15вдео/вдео (500000 клеток/100-мм чашку) культивировали на этих клетках 8ТО, трансдуцировали 4 факторами и затем подвергали отбору с С418. В результате число сформированных колоний увеличивалось в 20 раз или выше на клетках 8ТО, продуцирующих ЬЕСЕ (фиг. 11) или 8СЕ (данные не представлены), по сравнению с культивированием на нормальных клетках 8ТО. Кроме того, хотя при трансдукции 3 факторов, отличных от с-Мус, не сформировалось колоний 1Р8-клеток на нормальных клетках 8ТО, формирование колоний наблюдали на клетках 8ТО, продуцирующих ЬЕСЕ (фиг. 11) или 8СЕ (данные не представлены). Эти результаты показывают, что стимуляция цитокином увеличивает эффективность получения 1Р8-клеток из МЕЕ и перепрограммирования ядер можно достигать с использованием цитокина вместо с-Мус.
Пример 6.
Существуют семейства всех генов Ос13/4. К1Г4, с-Мус и 8ох2 (табл. 1 и 2). Соответственно, проводили исследования, можно ли получить 1Р8-клетки с генами из семейств вместо этих 4 генов. В табл. 7 показаны объединенные экспериментальные результаты для двух параллелей. По отношению к семейству 8ох, для 8ох1 получили почти такое же число сформированных устойчивых к С418 колоний и эффективность получения 1Р8-клеток, как и полученные с 8ох2. Что касается 8ох3, число сформировавшихся устойчивых к С418 колоний составляло приблизительно 1/10 от числа колоний с 8ох2, однако эффективность получения 1Р8-клеток из отобранных колоний фактически была выше, чем эффективность с 8ох2. Что касается 8ох15, как число сформировавшихся устойчивых к С418 колоний, так и эффективность получения 1Р8-клеток были ниже, чем с 8ох2. Что касается 8ох17, число сформировавшихся устойчивых к С418 колоний являлось почти таким же, как с 8ох2, однако эффективность получения 1Р8-клеток являлась низкой. Что касается семейства К1Г, для К1Г2 получили меньшее число устойчивых к С418 колоний, чем с К1Г4, однако для них получили почти такую же эффективность получения 1Р8-клеток. Что касается семейства Мус, обнаружили, что с-Мус дикого типа являлся почти таким же, как мутант Т58А, как по числу сформировавшихся устойчивых к С418 колоний, так и по эффективности получения 1Р8-клеток. Кроме того, каждый из Ν-Мус и Ь-Мус (каждый дикого типа) являлся почти таким же, как с-Мус, как по числу сформировавшихся устойчивых к С418 колоний, так и по эффективности получения 1Р8-клеток.
- 15 018039
Таблица 7
Трансдуцироваяный ген Число сформировавшихся колоний Число отобранных колоний Число полученных штаммов 1Р5-клеток Эффективность получения1Р8клеток(%)
4 фактора (сМусТБЗА) 35 12 5 42
Зох1 84 12 7 58
5 охЗ 8 8 7 92
Зох15 11 11 1 8
30X17 78 12 2 17
К1£2 11 10 5 50
с-МусИТ 53 11 8 72
Ν-МусИТ 40 12 7 58
Ц-МусИТ 50 12 11 92
3 фактора <-Зох2) 6 6 2 17
Пример 7.
Проводили исследования, можно ли получить 1Р8-клетки с репортером, отличным от РЬх15-вдео. Выделяли искусственную бактериальную хромосому (ВАС) ЕксйепсЫа сой, содержащую ген №1под в середине, и затем проводили нокин гена 0РР и гена устойчивости к пуромицину Е. сой посредством рекомбинации (фиг. 12А). Затем вышеуказанную модифицированную ВАС вводили в Е8-клетки, чтобы подтвердить, что клетки становятся 0РР-положительными специфическим для недифференцированного состояния образом (данные не представлены). Затем эти Е8-клетки трансплантировали в бластоцисты мыши для получения трансгенных мышей через химерных мышей. У этих мышей наблюдали специфические 0РР-положительные клетки во внутренних клеточных массах бластоцист или гонад эмбрионов через 13,5 суток после оплодотворения (фиг. 12В). Гонады удаляли из эмбрионов через 13,5 суток после оплодотворения (гибрид мышей ЭВА, 129 и С57ВЙ/6) и выделяли МЕР. Подтверждали, что МЕР являются 0РР-отрицательными (фиг. 13) посредством проточной цитометрии. Эти МЕР трансдуцировали с помощью ретровирусов с 4 факторами и подвергали отбору с пуромицином, и в результате получили большое число устойчивых колоний. Только приблизительно 10-20% колоний являлись 0РРположительными. При пассировании 0РР-положительных колоний для них получали морфологию (фиг. 14) и пролиферацию (фиг. 15), такие же, как и для Е8-клеток. Исследование характера экспрессии генов показало, что характер экспрессии был ближе к характеру экспрессии в Е8-клетках по сравнению с 1Р8клетками, выделенными из РЬх15вдео/вдео МЕР посредством отбора с 0418 (фиг. 16). При трансплантации этих клеток мышам иийе, индуцировали формирование тератомы, таким образом, подтверждали, что клетки являются 1Р8-клетками (фиг. 17). Кроме того, получали рождение химерных мышей посредством трансплантации 1Р8-клеток, полученных посредством отбора по №1под-0ЕР, в бластоцисты мышей С57ВЙ/6 (фиг. 18). При скрещивании этих химерных мышей наблюдали перенос зародышевой линии (фиг. 19). В этих 1Р8-клетках, полученных посредством отбора с №иод-0РР, более близких к Е8клеткам, экспрессия 4 факторов из ретровирусов являлась почти полностью молчащей, что позволяет предполагать, что самовоспроизведение поддерживают эндогенные Ос!3/4 и 8ох2.
Пример 8.
1Р8-клетки из 10-см конфлюэнтного слоя обрабатывали трипсином и суспендировали в среде для Е8-клеток (клетки 8ТО удаляли посредством адгезии на покрытых желатином чашках в течение 10-20 мин после суспендирования). 2х106 клеток культивировали в течение четырех суток в покрытых НЕМА (2-гидроксиэтилметакрилатом) культуральных чашках для Е. сой в суспензионной культуре для формирования эмбриоидных телец (ЕВ) (сутки 1-4). На 4-е сутки формирования ЕВ (сутки 4), все ЕВ переносили в 10-см культуральную чашку и культивировали в среде для Е8-клеток в течение 24 ч, чтобы обеспечить адгезию. Через 24 ч (сутки 5) среду меняли на среду, содержащую 1Т8/фибронектин. Культивирование проводили в течение 7 суток (среду меняли каждые 2 суток) и отбирали положительные по нестину клетки (клетки из других семейств погибали до определенной степени в условиях культивирования в бессывороточной среде) (сутки 5-12). Затем индуцировали А2В5-положительные клетки. Через 7 суток (сутки 12) клетки разделяли посредством обработки трипсином и удаляли оставшиеся ЕВ. 1 х 105 клеток высевали на покрытый поли-Ь-орнитином/фибронектином 24-луночный планшет и культивировали в течение 4 суток в среде, содержащей №/ЬР0Р (среду меняли каждые 2 суток) (сутки 12-16). Через 4 суток (сутки 16) среду меняли на среду, содержащую №/ЬР0Р/Е0Р, и продолжали культивирование в течение 4 суток (среду меняли каждые 2 суток) (сутки 16-20). Через 4 суток (сутки 20) среду меняли на среду, содержащую №/ЬР0Р/РП0Р, и продолжали культивирование в течение 4 суток (среду меняли каждые 2 суток) (сутки 20-24). В течение этого периода (сутки 12-24), когда клетки избыточно размножались и достигали конфлюэнтности, их пассировали соответствующее число раз и высевали по 1-2х105
- 16 018039 клеток (число клеток менялось в зависимости от интервалов времени пассирования). Через 4 суток (сутки 24) среду меняли на среду Ν2/Τ3 и продолжали культивирование в течение 7 суток (сутки 24-31) с заменой среды каждые 2 суток. На сутки 31 клетки фиксировали и подвергали иммуноокрашиванию. В результате наблюдали дифференцировку ίΡδ-клеток в положительные по βΙΙΙ-тубулину нервные клетки, 04-положительные олигодендроциты и ΟΕΑΡ-положительные астроциты (фиг. 20).
Пример 9.
Для получения ίΡδ-клеток из произвольно выбранных соматических клеток мыши, отличных от клеток, полученных у мыши с нокином ЕЬх15-вдео, разработали способ получения без использования отбора с лекарственным средством. Эмбриональные фибробласты мыши (МЕЕ) культивировали в 10-см чашке (на фидерных клетках δΤ0) в меньших количествах, чем используемые выше (10000, 50000 или 100000 клеток), и контрольную ДНК или 4 фактора трансдуцировали с помощью ретровирусов. Когда культивирование проводили в течение 2 недель в среде для Е8-клеток (без отбора с 0418), не наблюдали формирования колоний на чашке с трансдукцией контрольной ДНК, в то время как на чашке с трансдукцией 4 факторов сформировалось множество компактных колоний, а также плоских колоний, которые считали трансформированными (фиг. 21). Когда из этих колоний отбирали 24 колонии и продолжали культивирование, наблюдали морфологию, подобную морфологии Е8-клеток. Профили экспрессии их генов исследовали посредством КТ-РСК, и в результате экспрессию Е§д1, маркера Е8-клеток, наблюдали в 7 клонах. Индукцию многих маркеров Е8-клеток, таких как №тод. ЕКак, ΟΌΕ3, 0с13/4 и 8ох2, наблюдали в клоне 4, и таким образом, считали, что клетки являются ίΡδ-клетками (фиг. 22). Вышеуказанные результаты показали, что отбор с лекарственным средством с использованием нокина ЕЬх15-вдео или т.п. не является обязательным для получения ίΡδ-клетки, и ίΡδ-клетки можно получать из соматических клеток, полученных из выбранной случайным образом мыши. Это также позволяет предполагать возможность того, что посредством вышеупомянутого способа ίΡδ-клетки можно получать из соматических клеток мыши, являющейся модельной для заболевания.
Пример 10.
В качестве клеток, из которых индуцировали ίΡδ-клетки, исследовали гепатоциты и клетки слизистой оболочки желудка, являющиеся клетками, отличными от фибробластов. Гепатоциты выделяли из печени мышей ЕЬх15|1део/1део посредством перфузии. В эти гепатоциты с помощью ретровирусов вводили 4 фактора и затем подвергали их отбору с 0418 для получения множества колоний ίΡδ-клеток. В качестве результата анализа характера экспрессии генов с использованием микрочипов ДНК обнаружили, что ίΡδ-клетки, полученные из печени, являются более сходными с Еδ-клетками, чем ίΡδ-клетки, полученные из фибробластов кожи или эмбриональных фибробластов. ίΡδ-клетки получили также из клеток слизистой оболочки желудка таким же способом, как из гепатоцитов.
Пример 11.
ΡΌ98059 представляет собой ингибитор ΜΑΡ-киназы, супрессирующий пролиферацию различных дифференцированных клеток. Однако известно, что он стимулирует поддержание недифференцированного статуса и пролиферации Еδ-клеток. Таким образом, изучали действия ΡΌ98059 на получение ίΡδклеток. В МЕЕ, полученные у мыши, обладающей селективными маркерами Nаηод-Е^ΕΡ-IКЕδ-Ρи^о, с помощью ретровирусов вводили 4 фактора и подвергали отбору с пуромицином. Без добавления ΡΌ98059 процент ΟΕΡ-положительных колоний составлял 8% из полученных колоний ίΡδ-клеток. Однако в группе, в которой ΡΌ98059 (конечная концентрация: 25 мкМ) постоянно добавляли со следующих суток после ретровирусной трансфекции, 45% из полученных колоний являлись ΟΕΡ-положительными. Результаты интерпретировали, как обусловленные тем, что ΡΌ98059 стимулирует пролиферацию ΟΕΡположительных ίΡδ-клеток, которые являются более близкими к Еδ-клеткам, в то время как ΡΌ98059 супрессирует пролиферацию ΟΕΡ-отрицательных ίΡδ-клеток или дифференцированных клеток. По этим результатам показали, что ΡΌ98059 можно использовать для получения ίΡδ-клеток, более близких к Еδклеткам, или получения ίΡδ-клеток без использования отбора с лекарственным средством.
Пример 12.
Плазмиду, содержащую ген красного флуоресцентного белка ниже промотора гена 0с13/4 мыши и ген устойчивости к гигромицину ниже промотора ΡΟΚ, вводили посредством нуклеофекции в эмбриональные фибробласты кожи человека (ΗΌΕ), в которых посредством лентивирусной трансдукции экспрессировали растворимый носитель семейства 7 (81с7а1, регистрационный номер в ΝΟΒΙ ΝΜ_007513) в качестве рецептора экотропного вируса мыши. Проводили отбор с гигромицином для получения штаммов со стабильной экспрессией. 800000 клеток высевали на клетках δΤ0, обработанных митомицином, и на следующие сутки 0с13/4, δоx2, Κ1Ε4 и с-Мус (каждый получен у человека) с помощью ретровирусов трансдуцировали в клетки. Отбирали 24 колонии из полученных через 3 недели (фиг. 23, слева), переносили в 24-луночный планшет, на котором рассеяны клетки δΤ0, и затем культивировали. Через 2 недели один из выращиваемых клонов высевали в 6-луночном планшете, на котором высеяны клетки δΤ0, и культивировали. В результате получили клетки, морфологически сходные с Еδ-клетками (фиг. 23, справа), что позволяет предполагать, что клетки представляли собой ίΡδ-клетки. В качестве среды в каждом случае использовали среду для Еδ-клеток мыши.
- 17 018039
Пример 13.
Фибробласты кожи взрослого человека (взрослые ΗΌΓ) трансдуцировали 81с7а1 (рецептор для ретровирусов мыши) с использованием лентивируса и полученные клетки высевали на 800000 фидерных клеток (обработанные митомицином клетки 8ТО). Гены трансдуцировали с помощью ретровирусов в виде следующих сочетаний.
1. Ос13/4, 8ох2, К114, с-Мус, ТЕКТ и большой Т антиген §ν40
2. Ос13/4, 8ох2, К114, С-Мус, ТЕКТ, ΗΡνΐ6 Е6
3. Ос13/4, 8ох2, К114, С-Мус, ТЕКТ, ΗΡνΐ6 Е7
4. Ос13/4, 8ох2, К1£4, С-Мус, ТЕКТ, ΗΡνΐ6 Е6, ΗΡνΐ6 Е7
5. Ос13/4, 8ох2, К1£4, с-Мус, ТЕКТ, ВтИ (Ос13/4, 8ох2, К114, с-Мус и ТЕКТ получены у человека, а ВшИ получен у мыши).
Культивирование продолжали в условиях культивирования для Е8-клеток мыши без отбора с лекарственным средством. В результате колонии, которые сочли колониями ίΡΞ-клеток, появились на 8-е сутки после вирусной трансфекции на чашке, на которую факторы вводили согласно сочетанию 1 (фиг. 24). Колонии ίΡΞ-подобных-клеток появлялись также с другими сочетаниями (2-5), хотя они являлись не такими заметными по сравнению с сочетанием 1. При трансдукции только 4 факторами не появлялось колоний.
Промышленная применимость
С использованием ядерного фактора перепрограммирования, предоставленного по настоящему изобретению, можно удобно с высокой воспроизводимостью индуцировать перепрограммирование ядер дифференцированных клеток без использования эмбрионов или Е8-клеток и можно получать индуцированные плюрипотентные стволовые клетки в виде недифференцированных клеток, обладающих способностью к дифференцировке, плюрипотентностью и способностью к росту, сходными с Е8-клетками.

Claims (16)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Ядерный фактор перепрограммирования для соматической клетки, содержащий каждый из следующих трех типов генов: гена семейства Ос1, гена семейства К11 и гена семейства Мус.
  2. 2. Фактор по п.1, содержащий каждый из трех следующих типов генов: Ос13/4, К114 и с-Мус.
  3. 3. Фактор по п.1 или 2, дополнительно содержащий ген семейства 8ох.
  4. 4. Фактор по п.3, содержащий следующий ген 8ох2.
  5. 5. Фактор по любому из пп.1-4, содержащий цитокин вместе с геном семейства Мус или вместо гена семейства Мус.
  6. 6. Фактор по п.5, где цитокин представляет собой ЬЕ6Е и/или 8СЕ.
  7. 7. Фактор по любому из пп.1-6, дополнительно содержащий ген ТЕКТ.
  8. 8. Фактор по любому из пп.1-7, дополнительно содержащий один или несколько типов генов, выбранных из группы, состоящей из следующих генов: гена большого Т-антигена 8У40. гена ΗΡν16 Е6, гена ΗΡν16 Е7и гена ВтИ.
  9. 9. Фактор по любому из пп.1-8, дополнительно содержащий один или несколько типов генов, выбранных из группы, состоящей из генов ЕЬх15, Иаиод, ЕКау ЕСАТ15-2, Тс11 и β-катенина.
  10. 10. Фактор по любому из пп.1-9, дополнительно содержащий один или несколько типов генов, выбранных из группы, состоящей из генов ЕСАТ1, Езд1, Опт13Б. ЕСАТ8, 6613, 8ох15, ЕСАТ15-1, Е1Ы17, 8а114, Кех1, ИТЕ1, §1е11а, 81а13 и 6гЬ2.
  11. 11. Способ получения индуцированной плюрипотентной стволовой клетки посредством перепрограммирования ядра соматической клетки, включающий в себя стадию приведения в контакт ядерного фактора перепрограммирования по любому из пп.1-10 с соматической клеткой.
  12. 12. Способ по п.11, где соматическая клетка является клеткой человека.
  13. 13. Индуцированная плюрипотентная стволовая клетка, полученная способом по п.11 или 12.
  14. 14. Соматическая клетка, полученная посредством индукции дифференцировки индуцированной плюрипотентной стволовой клетки по п.13.
  15. 15. Способ улучшения способности к дифференцировке и/или способности роста клетки, который включает в себя стадию приведения в контакт ядерного фактора перепрограммирования по любому из пп.1-10 с клеткой.
  16. 16. Способ по п.15, где клетка является клеткой человека.
EA201000858A 2005-12-13 2006-12-06 Ядерный фактор перепрограммирования EA018039B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005359537 2005-12-13

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201000858A1 EA201000858A1 (ru) 2011-02-28
EA018039B1 true EA018039B1 (ru) 2013-05-30

Family

ID=38162968

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201000858A EA018039B1 (ru) 2005-12-13 2006-12-06 Ядерный фактор перепрограммирования
EA200870046A EA014166B1 (ru) 2005-12-13 2006-12-06 Ядерный фактор перепрограммирования

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200870046A EA014166B1 (ru) 2005-12-13 2006-12-06 Ядерный фактор перепрограммирования

Country Status (18)

Country Link
US (1) US8048999B2 (ru)
EP (6) EP3418297B1 (ru)
JP (8) JP5098028B2 (ru)
KR (1) KR101420740B1 (ru)
CN (4) CN101864392B (ru)
AU (1) AU2006325975B2 (ru)
BR (1) BRPI0619794B8 (ru)
CA (1) CA2632142C (ru)
DK (1) DK1970446T3 (ru)
EA (2) EA018039B1 (ru)
ES (1) ES2367525T3 (ru)
HK (2) HK1125131A1 (ru)
IL (1) IL191903A (ru)
MX (2) MX352337B (ru)
NZ (1) NZ569530A (ru)
PT (1) PT1970446E (ru)
WO (1) WO2007069666A1 (ru)
ZA (1) ZA200804673B (ru)

Families Citing this family (582)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITRM20030376A1 (it) 2003-07-31 2005-02-01 Univ Roma Procedimento per l'isolamento e l'espansione di cellule staminali cardiache da biopsia.
US7682828B2 (en) 2003-11-26 2010-03-23 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods for reprogramming somatic cells
DK1740945T3 (en) 2004-04-07 2019-01-21 Ncardia Ag KKE-INVASIVE, IN-VITRO FUNCTIONAL TISSUE TEST SYSTEMS
EP1745144B1 (en) 2004-05-11 2010-12-01 Axiogenesis Ag Assay for drug discovery based on in vitro differentiated cells
US11660317B2 (en) 2004-11-08 2023-05-30 The Johns Hopkins University Compositions comprising cardiosphere-derived cells for use in cell therapy
US20100167404A1 (en) * 2005-08-03 2010-07-01 Advanced Cell Technology, Inc. Methods of Reprogramming Animal Somatic Cells
US9012219B2 (en) * 2005-08-23 2015-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells
US8048999B2 (en) 2005-12-13 2011-11-01 Kyoto University Nuclear reprogramming factor
US20090227032A1 (en) * 2005-12-13 2009-09-10 Kyoto University Nuclear reprogramming factor and induced pluripotent stem cells
US10647960B2 (en) * 2005-12-13 2020-05-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Transcriptome transfer produces cellular phenotype conversion
US8129187B2 (en) 2005-12-13 2012-03-06 Kyoto University Somatic cell reprogramming by retroviral vectors encoding Oct3/4. Klf4, c-Myc and Sox2
ES2698600T3 (es) 2005-12-13 2019-02-05 Univ Pennsylvania Métodos para transfectar ácidos nucleicos en células vivas
US8278104B2 (en) 2005-12-13 2012-10-02 Kyoto University Induced pluripotent stem cells produced with Oct3/4, Klf4 and Sox2
US9157066B2 (en) 2005-12-13 2015-10-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Transcriptome transfer produces cellular phenotype conversion
WO2007102787A1 (en) 2006-03-06 2007-09-13 Agency For Science, Technology & Research Human embryonic stem cell methods and podxl expression
JPWO2008102602A1 (ja) * 2007-02-22 2010-05-27 国立大学法人 東京大学 Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎを利用した臓器再生法
CN101743306A (zh) * 2007-03-23 2010-06-16 威斯康星校友研究基金会 体细胞重编程
JP2010523117A (ja) * 2007-04-07 2010-07-15 ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ 体細胞の再プログラミング
AU2016216711B2 (en) * 2007-04-07 2018-01-25 Whitehead Institute For Biomedical Research Reprogramming of somatic cells
ES2612538T3 (es) * 2007-05-29 2017-05-17 Christopher B. Reid Métodos para producción y usos de poblaciones de células multipotentes, poblaciones de células pluripotentes, poblaciones de células diferenciadas, y poblaciones de células resistentes a VIH
US9213999B2 (en) 2007-06-15 2015-12-15 Kyoto University Providing iPSCs to a customer
JP2008307007A (ja) * 2007-06-15 2008-12-25 Bayer Schering Pharma Ag 出生後のヒト組織由来未分化幹細胞から誘導したヒト多能性幹細胞
US9080145B2 (en) 2007-07-01 2015-07-14 Lifescan Corporation Single pluripotent stem cell culture
RU2473685C2 (ru) 2007-07-31 2013-01-27 Лайфскен, Инк. Дифференцировка человеческих эмбриональных стволовых клеток
WO2009032456A2 (en) * 2007-08-01 2009-03-12 Primegen Biotech Llc Non-viral delivery of transcription factors that reprogram human somatic cells into a stem cell-like state
RU2492232C2 (ru) 2007-08-31 2013-09-10 Уайтхэд Инститьют Фор Байомедикал Рисерч СТИМУЛЯЦИЯ ПУТИ Wnt ПРИ ПЕРЕПРОГРАММИРОВАНИИ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК
CA2660123C (en) * 2007-10-31 2017-05-09 Kyoto University Nuclear reprogramming method
ATE523585T1 (de) 2007-11-27 2011-09-15 Lifescan Inc Differenzierung menschlicher embryonaler stammzellen
WO2009073523A2 (en) * 2007-11-29 2009-06-11 Children's Hospital Of Orange County De-differentiation of human cells
US9683232B2 (en) * 2007-12-10 2017-06-20 Kyoto University Efficient method for nuclear reprogramming
WO2009075119A1 (ja) 2007-12-10 2009-06-18 Kyoto University 効率的な核初期化方法
JP5626619B2 (ja) * 2008-12-08 2014-11-19 国立大学法人京都大学 効率的な核初期化方法
WO2009076529A1 (en) 2007-12-11 2009-06-18 Research Development Foundation Small molecules for neuronal differentiation of embryonic stem cells
EP2072618A1 (en) * 2007-12-14 2009-06-24 Johannes Gutenberg-Universität Mainz Use of RNA for reprogramming somatic cells
KR101481164B1 (ko) 2008-01-30 2015-01-09 주식회사 미래셀바이오 체세포 유래 다능성 줄기세포의 제조 방법
WO2009096049A1 (ja) * 2008-02-01 2009-08-06 Kyoto University 人工多能性幹細胞由来分化細胞
KR20190057164A (ko) 2008-02-21 2019-05-27 얀센 바이오테크 인코포레이티드 세포 부착, 배양 및 탈리를 위한 방법, 표면 개질 플레이트 및 조성물
US20110067125A1 (en) * 2008-02-22 2011-03-17 The University Of Tokyo Method for producing founder animal for reproducing animal having lethal phenotype caused by gene modification
JP2009215191A (ja) 2008-03-07 2009-09-24 Keio Gijuku 神経損傷治療剤及び神経損傷治療方法
EP2100954A1 (en) * 2008-03-10 2009-09-16 Assistance Publique - Hopitaux de Paris Method for generating primate cardiac progenitor cells for clinical use from primate embryonic stem cells, and their applications
WO2009117439A2 (en) * 2008-03-17 2009-09-24 The Scripps Research Institute Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells
AU2015201026B2 (en) * 2008-03-17 2017-03-16 The Scripps Research Institute Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells
WO2009114949A1 (en) * 2008-03-20 2009-09-24 UNIVERSITé LAVAL Methods for deprogramming somatic cells and uses thereof
US8765465B2 (en) 2008-03-26 2014-07-01 Kyoto University Efficient production and use of highly cardiogenic progenitors and cardiomyocytes from embryonic and induced pluripotent stem cells
JPWO2009119105A1 (ja) * 2008-03-28 2011-07-21 国立大学法人 東京大学 ＧＰＩｂα＋ＧＰＶ＋ＧＰＶＩ＋血小板のインビトロ調製法
WO2009123349A1 (ja) 2008-03-31 2009-10-08 オリエンタル酵母工業株式会社 多能性幹細胞を増殖させる方法
CN101981181B (zh) * 2008-04-01 2013-05-29 国立大学法人东京大学 由iPS细胞制备血小板的方法
WO2009146098A2 (en) * 2008-04-02 2009-12-03 President And Fellows Of Harvard College Stem cells and uses thereof
US20100021437A1 (en) * 2008-04-07 2010-01-28 The McLean Hospital Corporation Whitehead Institute for Biomedical Research Neural stem cells derived from induced pluripotent stem cells
JP2011516082A (ja) * 2008-04-07 2011-05-26 ニューポテンシャル，インコーポレイテッド 小分子修飾因子の使用を通して多能性遺伝子を誘発することによる細胞の再プログラミング
US8623648B2 (en) * 2008-04-24 2014-01-07 Janssen Biotech, Inc. Treatment of pluripotent cells
KR101481165B1 (ko) * 2008-04-25 2015-01-09 주식회사 미래셀바이오 인간 체세포 유래 다능성 줄기세포의 제조 방법
CN101855350B (zh) 2008-05-02 2014-12-31 国立大学法人京都大学 核重编程序方法
JP2011522520A (ja) * 2008-05-06 2011-08-04 エージェンシー フォー サイエンス，テクノロジー アンド リサーチ 細胞の脱分化を行う方法
CA2723820A1 (en) * 2008-05-09 2009-11-12 Vistagen Therapeutics, Inc. Pancreatic endocrine progenitor cells derived from pluripotent stem cells
WO2009142717A2 (en) * 2008-05-19 2009-11-26 President And Fellows Of Harvard College Methods and products for dedifferentiation of cells
EP2128245A1 (en) 2008-05-27 2009-12-02 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Generation of induced pluripotent stem (iPS) cells
JP2011160661A (ja) * 2008-06-02 2011-08-25 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd 血球細胞の初期化法
CA2954948A1 (en) * 2008-06-04 2009-12-10 Cellular Dynamics International, Inc. Methods for the production of ips cells using non-viral approach
CA3060170A1 (en) * 2008-06-13 2009-12-17 Whitehead Institute For Biomedical Research Programming and reprogramming of cells
AU2015202237B2 (en) * 2008-06-13 2017-09-28 Whitehead Institute For Biomedical Research Programming and reprogramming of cells
US8669048B2 (en) * 2008-06-24 2014-03-11 Parkinson's Institute Pluripotent cell lines and methods of use thereof
WO2009157610A1 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Pusan National University Industry-University Cooperation Foundation Selenium dedifferentiated cell, preparation method and usage thereof
JP2011525794A (ja) * 2008-06-26 2011-09-29 国立大学法人大阪大学 ｉＰＳ細胞の製造方法および製造キット
KR101606943B1 (ko) 2008-06-27 2016-03-28 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 유도된 다능성 줄기 세포의 효율적인 확립 방법
JP5734183B2 (ja) 2008-06-30 2015-06-17 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 多能性幹細胞の分化
EP2322611B1 (en) 2008-07-16 2016-06-01 IP Pharma Co., Ltd. Method for production of reprogrammed cell using chromosomally unintegrated virus vector
CA2697621C (en) 2008-07-30 2017-01-17 Kyoto University Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells
AU2008360135A1 (en) * 2008-07-31 2010-02-04 Gifu University Efficient method for establishing induced pluripotent stem cells
EP2321406B1 (en) * 2008-08-05 2014-12-10 Keio University Method for selecting secondary neurosphere derived from induced pluripotent stem cell
WO2010017562A2 (en) 2008-08-08 2010-02-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Induced pluripotent stem cells
CN107988261A (zh) 2008-08-12 2018-05-04 细胞动力国际有限公司 产生ips细胞的方法
CA2734859A1 (en) * 2008-08-21 2010-02-25 Richter Gedeon Nyrt. Methods for treating cns disorders
GB2475656B (en) * 2008-08-22 2013-04-24 Univ Tokyo Organ regeneration method utilizing ips cell and blastocyst complementation
US20110231944A1 (en) 2008-09-04 2011-09-22 Riken B cell-derived ips cells and application thereof
SG193847A1 (en) * 2008-09-04 2013-10-30 Abt Holding Co Use of stem cells to prevent neuronal dieback
US8945922B2 (en) 2008-09-08 2015-02-03 Riken Generating a mature NKT cell from a reprogrammed somatic cell with a T-cell antigen receptor α-chain region rearranged to uniform Va-Ja in a NKT-cell specific way
EP2344646A2 (en) * 2008-09-12 2011-07-20 Scarab Genomics, LLC Clean genome bactofection
CN101492676B (zh) * 2008-09-16 2011-02-16 中国科学院广州生物医药与健康研究院 用脑膜细胞生成诱导的多能性干细胞的方法及其用途
SG160248A1 (en) * 2008-09-18 2010-04-29 Agency Science Tech & Res Use of novel monoclonal antibodies targeting human embryonic stem cells to characterize and kill induced pluripotent stem cells
US8703413B2 (en) 2008-09-22 2014-04-22 Children's Medical Center Corporation Detection of human somatic cell reprogramming
WO2010047133A1 (ja) * 2008-10-24 2010-04-29 株式会社クラレ 細胞保存方法、及び細胞輸送方法
EP2342333A4 (en) * 2008-10-30 2013-05-08 Univ Kyoto METHOD FOR THE PRODUCTION OF INDUCED PLURIPOTENTAL STEM CELLS
CN102272291B (zh) 2008-10-31 2018-01-16 詹森生物科技公司 人胚胎干细胞向胰腺内分泌谱系的分化
RU2528861C2 (ru) 2008-10-31 2014-09-20 Сентокор Орто Байотек Инк. Дифференцирование человеческих эмбриональных стволовых клеток в линию панкреатических эндокринных клеток
JP5608645B2 (ja) 2008-11-05 2014-10-15 学校法人慶應義塾 神経幹細胞製造方法
RU2547925C2 (ru) 2008-11-20 2015-04-10 Сентокор Орто Байотек Инк. Способы и композиции для закрепления и культивирования клеток на плоских носителях
BRPI0920956A2 (pt) 2008-11-20 2015-08-18 Centocor Ortho Biotech Inc Cultura de células-tronco pluripotentes em microveículos
EP2192174B1 (en) * 2008-11-21 2015-11-11 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Reprogramming cells toward a pluripotent state
US20100150889A1 (en) 2008-12-17 2010-06-17 The Uab Research Foundation Polycistronic Vector For Human Induced Pluripotent Stem Cell Production
WO2010077955A1 (en) 2008-12-17 2010-07-08 The Scripps Research Institute Generation and maintenance of stem cells
WO2010071210A1 (ja) 2008-12-18 2010-06-24 財団法人新産業創造研究機構 軟骨細胞様細胞、及びその製造方法
US10328103B2 (en) 2009-01-03 2019-06-25 Ray C. Wasielewski Medical treatment composition comprising mammalian dental pulp stem cells
US8470308B2 (en) * 2009-01-03 2013-06-25 Ray C. Wasielewski Enhanced medical implant comprising disrupted tooth pulp and tooth particles
CA2756283A1 (en) 2009-02-03 2010-08-12 Keio University Culture method of embryoid bodies and/or neural stem cells derived from human differentiated cell-derived pluripotent stem cells
US20100209404A1 (en) * 2009-02-10 2010-08-19 University Of Dayton Enhanced method for producing stem-like cells from somatic cells
SG173876A1 (en) * 2009-02-27 2011-09-29 Univ Kyoto Novel nuclear reprogramming substance
EP3293257B1 (en) * 2009-03-20 2021-08-11 Mesoblast, Inc. Production of reprogrammed pluripotent cells
JP5637354B2 (ja) * 2009-03-30 2014-12-10 独立行政法人産業技術総合研究所 精製転写因子の調製法と細胞導入技術
WO2010119819A1 (ja) 2009-04-17 2010-10-21 国立大学法人東北大学 ヒト肺組織幹細胞の調製方法及びヒト肺胞上皮細胞への分化誘導方法
CN101613717B (zh) * 2009-04-17 2012-01-11 中国科学院广州生物医药与健康研究院 用猪成纤维细胞生成诱导的多能性干细胞的方法
CN101580816B (zh) * 2009-04-23 2012-02-29 中国科学院广州生物医药与健康研究院 诱导多能性干细胞快速高效产生的新型无血清培养基以及使用其的方法
JP2010268789A (ja) 2009-04-24 2010-12-02 Kumamoto Univ 細胞医薬の製造方法
EP2253700A1 (en) 2009-05-13 2010-11-24 Helmholtz-Zentrum für Infektionsforschung GmbH A method for producing test systems from donors suffering from adverse effects of medicaments and /or medical treatments, and uses of said systems
US8957037B2 (en) 2009-05-18 2015-02-17 Curna, Inc. Treatment of reprogramming factor related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a reprogramming factor
WO2010137348A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Keio University Method for selecting clone of induced pluripotent stem cells
WO2010137746A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Kyoto University Method for producing induced pluripotent stem cells and method for culturing the same
US9365866B2 (en) 2009-06-03 2016-06-14 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Vectors for generating pluripotent stem cells and methods of producing pluripotent stem cells using the same
US20110002897A1 (en) * 2009-06-11 2011-01-06 Burnham Institute For Medical Research Directed differentiation of stem cells
US9399758B2 (en) 2009-07-15 2016-07-26 Mari Dezawa SSEA3(+) pluripotent stem cell that can be isolated from body tissue
US9550975B2 (en) 2009-07-15 2017-01-24 Mari Dezawa SSEA-3 pluripotent stem cell isolated from body tissue
WO2011011300A2 (en) 2009-07-20 2011-01-27 Centocor Ortho Biotech Inc. Differentiation of human embryonic stem cells
CN102471744B (zh) * 2009-07-21 2015-06-10 国立大学法人京都大学 图像处理装置、培养观察装置及图像处理方法
JP5751548B2 (ja) 2009-08-07 2015-07-22 国立大学法人京都大学 イヌｉＰＳ細胞及びその製造方法
JP5376478B2 (ja) * 2009-08-07 2013-12-25 国立大学法人京都大学 効率的な人工多能性幹細胞の樹立方法
CN101993495B (zh) * 2009-08-12 2013-07-24 上海近岸科技有限公司 一种蛋白质混合物及其制备方法
JP5761816B2 (ja) 2009-08-12 2015-08-12 国立大学法人京都大学 多能性幹細胞から神経前駆細胞への分化誘導法
JP5709015B2 (ja) 2009-08-19 2015-04-30 国立大学法人大阪大学 角膜移植用シート
SG178536A1 (en) 2009-08-22 2012-03-29 Univ Leland Stanford Junior Imaging and evaluating embryos, oocytes, and stem cells
US20110052549A1 (en) * 2009-08-27 2011-03-03 The Regents Of The University Of California Cell culture device to differentiate stem cells in a specific orientation
US8748179B2 (en) 2009-08-31 2014-06-10 Osaka University Method for efficient production of induced pluripotent stem cells utilizing cells derived from oral mucosa
CA2772619C (en) * 2009-09-04 2019-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for enhancing genome stability and telomere elongation in embryonic stem cells
GB0915523D0 (en) * 2009-09-07 2009-10-07 Genome Res Ltd Cells and methods for obtaining them
EP2475767B1 (en) 2009-09-08 2017-04-19 Kyoto University Method for producing mast cells from pluripotent stem cells
US20120263689A1 (en) * 2009-09-10 2012-10-18 The Salk Institute For Biological Studies Adipose-derived induced pluripotent stem cells
AU2014240253B2 (en) * 2009-09-15 2017-08-03 The University Of Tokyo Novel Method for Producing Differentiated Cells
KR101834687B1 (ko) 2009-09-15 2018-03-05 고쿠리츠다이가쿠호우진 도쿄다이가쿠 분화 세포의 신규 제조법
EP2480657B1 (en) 2009-09-24 2018-01-17 Kyoto University Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells
EP2483395B1 (en) * 2009-09-30 2016-12-07 Agency For Science, Technology And Research A nuclear receptor and mutant thereof and the use of the same in the reprogramming of cells
ES2638464T3 (es) 2009-10-16 2017-10-20 The Scripps Research Institute Inducción de células pluripotentes
JP2013507974A (ja) * 2009-10-29 2013-03-07 マックマスター ユニバーシティー 線維芽細胞からの誘導多能性幹細胞および前駆細胞の作製法
GB0919773D0 (en) 2009-11-12 2009-12-30 Univ Nottingham Induced pluripotent stem cell
CA3174901A1 (en) 2009-11-12 2011-05-19 Technion Research & Development Foundation Ltd. Culture media, cell cultures and methods of culturing pluripotent stem cells in an undifferentiated state
WO2011058064A1 (en) 2009-11-13 2011-05-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Reprogrammation of eukaryotic cells with engineered microvesicles
WO2011062559A1 (en) 2009-11-19 2011-05-26 Agency For Science, Technology And Research Methods of enhancing pluripotentcy
WO2011071118A1 (ja) 2009-12-09 2011-06-16 国立大学法人京都大学 ニトロビンを含む多能性幹細胞の心筋細胞への分化促進剤
EP2512514B1 (en) 2009-12-14 2014-11-05 Kyoto University Screening method for identifying compounds for treating amyotrophic lateral sclerosis
RU2701335C2 (ru) 2009-12-23 2019-09-25 Янссен Байотек, Инк. Способ получения популяции панкреатических эндокринных клеток, соэкспрессирующих nkx6.1 и инсулин, и способ лечения диабета
JP2011135864A (ja) * 2009-12-30 2011-07-14 Korea Univ Research & Business Foundation Ｏｃｔ４及びＢｍｉ１、またはその上位調節子を用いて体細胞から胚幹細胞類似細胞への逆分化を誘導する組成物及びこれを用いた胚幹細胞類似細胞の製造方法
EP2522725B1 (en) 2010-01-06 2016-10-05 National University Corporation Tottori University Mouse artificial chromosome vector
JP5827220B2 (ja) 2010-01-22 2015-12-02 国立大学法人京都大学 人工多能性幹細胞の樹立効率改善方法
KR101646308B1 (ko) 2010-02-03 2016-08-05 데츠야 이시카와 유도간 간세포 및 그 제조 방법, 그리고 그 세포의 응용
KR101857302B1 (ko) 2010-02-16 2018-05-11 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 유도된 다능성 줄기 세포의 효율적 확립 방법
WO2011102444A1 (ja) 2010-02-18 2011-08-25 国立大学法人大阪大学 誘導多能性幹細胞の製造方法
CA2791476C (en) 2010-03-01 2020-06-30 Janssen Biotech, Inc. Methods for purifying cells derived from pluripotent stem cells
EP2926821B1 (en) 2010-03-05 2019-12-25 Tissue Genesis, LLC Compositions to support tissue integration and inosculation of transplanted tissue and transplanted engineered penile tissue with adipose stromal cells
EP2545163A4 (en) * 2010-03-10 2013-11-06 Univ Kyoto METHOD FOR SELECTION OF INDUCED PLURIPOTENTAL STEM CELLS
CN102959076B (zh) 2010-03-31 2015-09-16 斯克里普斯研究所 重编程细胞
EP2559757B1 (en) 2010-04-16 2017-12-06 Keio University Method for producing induced pluripotent stem cells
US8815592B2 (en) 2010-04-21 2014-08-26 Research Development Foundation Methods and compositions related to dopaminergic neuronal cells
US9845457B2 (en) 2010-04-30 2017-12-19 Cedars-Sinai Medical Center Maintenance of genomic stability in cultured stem cells
US9249392B2 (en) 2010-04-30 2016-02-02 Cedars-Sinai Medical Center Methods and compositions for maintaining genomic stability in cultured stem cells
CN102242146B (zh) * 2010-05-10 2015-11-25 高丽大学校产学协力团 组合物和用其产生诱导全能干细胞的方法
RU2663339C1 (ru) 2010-05-12 2018-08-03 Янссен Байотек, Инк. Дифференцирование эмбриональных стволовых клеток человека
CA2804119A1 (en) 2010-05-25 2011-12-01 National Cancer Center Induced malignant stem cells or pre-induction cancer stem cells capable of self-replication outside of an organism, production method for same, and practical application for same
WO2011159726A2 (en) 2010-06-14 2011-12-22 The Scripps Research Institute Reprogramming of cells to a new fate
WO2011158960A1 (en) 2010-06-15 2011-12-22 Kyoto University Method for selecting human induced pluripotent stem cells
AU2011268056B2 (en) * 2010-06-18 2014-04-24 Cellular Dynamics International, Inc. Cardiomyocyte medium with dialyzed serum
US9476041B2 (en) 2010-07-12 2016-10-25 National University Corporation Tottori University Method for producing novel hipsc by means of siRNA introduction
EP2596096B1 (en) 2010-07-21 2018-01-31 Kyoto University Method for inducing differentiation of human pluripotent stem cell into intermediate mesoderm cell
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
WO2012020687A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Kyoto University Method of inducing differentiation from pluripotent stem cells to germ cells
EP2609425A1 (en) 2010-08-23 2013-07-03 President and Fellows of Harvard College Optogenetic probes for measuring membrane potential
WO2012026491A1 (ja) 2010-08-26 2012-03-01 国立大学法人京都大学 多能性幹細胞の心筋分化促進剤
US9499790B2 (en) 2010-08-26 2016-11-22 Kyoto University Method for promoting differentiation of pluripotent stem cells into cardiac muscle cells
JP5908838B2 (ja) 2010-08-30 2016-04-26 株式会社Ｉｄファーマ 多能性幹細胞を誘導するための組成物およびその使用
CN103221536B (zh) 2010-08-31 2016-08-31 詹森生物科技公司 人胚胎干细胞的分化
PL2611910T3 (pl) 2010-08-31 2018-06-29 Janssen Biotech, Inc Różnicowanie ludzkich embrionalnych komórek macierzystych
EP2611907B1 (en) 2010-08-31 2016-05-04 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of pluripotent stem cells
US9856210B2 (en) 2010-09-02 2018-01-02 Kyoto University Pharmaceutical composition for prevention and treatment of amyotrophic lateral sclerosis
WO2012036299A1 (en) 2010-09-14 2012-03-22 Kyoto University Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells
CN103459611B (zh) 2010-09-17 2016-11-02 哈佛大学校长及研究员协会 对多能干细胞的效用和安全性进行表征的功能基因组学研究
HRP20220796T1 (hr) 2010-10-01 2022-10-14 ModernaTX, Inc. Ribonukleinske kiseline koje sadrže n1-metil-pseudouracil i njihove uporabe
JP5921558B2 (ja) * 2010-10-14 2016-05-24 ユニバーシティ オブ セントラル フロリダ リサーチ ファウンデーション，インコーポレイテッド 心臓人工多能性幹細胞ならびに心筋の修復および再生に使用する方法
EP2630232A4 (en) 2010-10-22 2014-04-02 Biotime Inc METHOD FOR MODIFYING TRANSCRIPTIONAL REGULATORY NETWORKS IN STEM CELLS
WO2012057052A1 (ja) * 2010-10-25 2012-05-03 公立大学法人横浜市立大学 幹細胞の安定的維持、複製を制御するためのペプチジルプロリルイソメラーゼＰｉｎ１の利用
CA2821562A1 (en) 2010-11-02 2012-05-10 National University Corporation Kumamoto University Method of producing intestinal cells
JP5888753B2 (ja) * 2010-11-04 2016-03-22 国立大学法人京都大学 効率的な人工多能性幹細胞の樹立方法
EP2635707B1 (en) 2010-11-05 2019-03-27 Kyoto University Method of examining polycystic kidney disease and method of screening for therapeutic agent of the disease
WO2012063817A1 (ja) * 2010-11-09 2012-05-18 独立行政法人産業技術総合研究所 末梢血単球由来多能性幹細胞作製方法
EP2640829A4 (en) 2010-11-17 2014-06-11 Univ Kyoto CARDIOMYOCYTE AND / OR CARDIOVORA CELL PROLIFERATING AGENTS AND METHOD FOR PROLIFERATING CARDIOMYOCYTES AND / OR CARDIOVORA CELLS
EP2647384B1 (en) 2010-12-02 2018-05-23 Riken IMMUNOTHERAPY USING ALLO-NKT CELLS, CELLS FOR IMMUNOTHERAPY IN WHICH alpha CHAIN OF T-CELL RECEPTOR (TCR) GENE HAS BEEN REARRANGED TO UNIFORM V alpha-J alpha , AND BANKING OF NKT CELLS DERIVED FROM SAID CELLS
EP2647699B1 (en) * 2010-12-03 2020-04-01 Kyoto University Efficient method for establishing induced pluripotent stem cells
US9404082B2 (en) 2010-12-03 2016-08-02 Kyoto University Method for production of eosinophil from pluripotent stem cell
JP5888852B2 (ja) * 2010-12-08 2016-03-22 学校法人近畿大学 免疫不全動物を用いた細胞の製法
KR102703637B1 (ko) 2010-12-22 2024-09-05 페이트 세러퓨틱스, 인코포레이티드 단세포 분류 및 iPSC의 증강된 재프로그래밍을 위한 세포 배양 플랫폼
JP2014506453A (ja) 2011-01-19 2014-03-17 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 生得的多能性体細胞
WO2012098260A1 (en) 2011-01-21 2012-07-26 Axiogenesis Ag A non-viral system for the generation of induced pluripotent stem (ips) cells
WO2012112458A2 (en) * 2011-02-14 2012-08-23 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for increasing reprogramming efficiency
US9499789B2 (en) 2011-02-23 2016-11-22 Kyoto University Method for producing dendritic cells from pluripotent stem cells
JP2014507664A (ja) 2011-02-23 2014-03-27 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー ヒト胚における異数性の検出方法
GB201103600D0 (en) 2011-03-01 2011-04-13 Isis Innovation Dendritic cells
ES2855577T3 (es) 2011-03-30 2021-09-23 Transine Therapeutics Ltd Molécula de ácido nucleico funcional y uso de la misma
JP6025067B2 (ja) 2011-03-31 2016-11-16 ｉＨｅａｒｔ Ｊａｐａｎ株式会社 新規心筋細胞マーカー
EP2692860A4 (en) 2011-03-31 2015-05-20 Riken ANAPLASTIC STATE REGULATOR AND CORRESPONDING APPLICATIONS
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
EP3415616B1 (en) 2011-04-08 2024-05-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for rejuvenating cells
WO2012137970A1 (ja) 2011-04-08 2012-10-11 国立大学法人大阪大学 改変ラミニンおよびその利用
WO2012141181A1 (ja) * 2011-04-11 2012-10-18 国立大学法人京都大学 核初期化物質
WO2012144582A1 (ja) 2011-04-20 2012-10-26 国立大学法人大阪大学 角膜上皮分化指向性iPS細胞
WO2012158561A1 (en) 2011-05-13 2012-11-22 The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Use of zscan4 and zscan4-dependent genes for direct reprogramming of somatic cells
WO2012168434A1 (en) 2011-06-08 2012-12-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Partial reprogramming of somatic cells to induced tissue stem (its) cells
GB201110331D0 (en) 2011-06-16 2011-08-03 Isis Innovation Method of cryopreserving pluripotent stem cells
WO2013010045A1 (en) 2011-07-12 2013-01-17 Biotime Inc. Novel methods and formulations for orthopedic cell therapy
US9856457B2 (en) 2011-07-22 2018-01-02 Centre National De La Recherche Scientifique Use of cellular extracts for obtaining pluripotent stem cells
US20130029416A1 (en) 2011-07-22 2013-01-31 Tayaramma Thatava Differentiating induced pluripotent stem cells into glucose-responsive, insulin-secreting progeny
AU2012288249B2 (en) 2011-07-25 2017-06-22 Kyoto University Method for screening induced pluripotent stem cells
WO2013031826A1 (ja) * 2011-08-29 2013-03-07 国立大学法人京都大学 核初期化物質
US9145547B2 (en) 2011-08-30 2015-09-29 Riken Nuclear reprogrammed cells generated by introduction of a histone H2aa or TH2A gene, a histone H2ba or TH2B gene, or a phosphorylation-mimic of histone chaperon Npm2 gene, an Oct family gene and a klf family gene into a mammalian somatic cell
US9523674B2 (en) 2011-09-12 2016-12-20 National University Corporation Kumamoto University Method of screening for substances capable of promoting induction of induced pluripotent stem cells
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2762560A4 (en) * 2011-09-29 2015-05-20 Univ Tokyo PROCESS FOR INDUCING OREXINE NEURONES
US9480695B2 (en) 2011-09-29 2016-11-01 The University Of Tokyo Methods for inducing orexin neurons and agent for treating narcolepsy or eating disorder
EP3492109B1 (en) 2011-10-03 2020-03-04 ModernaTX, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
JP6162604B2 (ja) 2011-10-21 2017-07-12 国立大学法人京都大学 層流による多能性維持単一分散細胞培養法
GB2496375A (en) 2011-10-28 2013-05-15 Kymab Ltd A non-human assay vertebrate comprising human antibody loci and human epitope knock-in, and uses thereof
US8945876B2 (en) 2011-11-23 2015-02-03 University Of Hawaii Auto-processing domains for polypeptide expression
US20140329317A1 (en) 2011-11-25 2014-11-06 Kyoto University Method for culturing pluripotent stem cell
CA2853645A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 National Cancer Center Induced malignant stem cells
GB201122047D0 (en) 2011-12-21 2012-02-01 Kymab Ltd Transgenic animals
US8497124B2 (en) 2011-12-05 2013-07-30 Factor Bioscience Inc. Methods and products for reprogramming cells to a less differentiated state
EP2788033B1 (en) 2011-12-05 2017-05-31 Factor Bioscience Inc. Methods and products for transfecting cells
RS63244B1 (sr) 2011-12-16 2022-06-30 Modernatx Inc Kompozicije modifikovane mrna
JP6143268B2 (ja) 2011-12-19 2017-06-07 国立大学法人京都大学 ヒト多能性幹細胞から中間中胚葉細胞への分化誘導方法
EP2794857A4 (en) 2011-12-22 2015-07-08 Janssen Biotech Inc DIFFERENTIATION OF HUMAN EMBRYONIC STEM CELLS IN SINGLE INSULIN POSITIVE CELLS
JP5935224B2 (ja) 2011-12-27 2016-06-15 国立大学法人大阪大学 ｉＰＳ細胞の腫瘍化を抑制することが可能な分化誘導方法
EP2804944A1 (en) 2012-01-15 2014-11-26 Yeda Research and Development Co. Ltd. Induction of dedifferentiation of mesenchymal stromal cells
WO2013111875A1 (ja) 2012-01-27 2013-08-01 国立大学法人京都大学 多能性幹細胞の心筋分化誘導法
CA2866590A1 (en) 2012-03-07 2013-09-12 Janssen Biotech, Inc. Defined media for expansion and maintenance of pluripotent stem cells
US9764063B2 (en) 2012-03-15 2017-09-19 Iheart Japan Corporation Method for producing mixed cell population of cardiomyocytes and vascular cells from induced pluripotent stem cell
EP2828381A1 (en) 2012-03-21 2015-01-28 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Induced neural stem cells
EP2829605B1 (en) 2012-03-21 2019-05-08 Kyoto University Method for screening therapeutic and/or prophylactic agents for alzheimer's disease
WO2013151664A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 modeRNA Therapeutics Modified polynucleotides for the production of proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9303079B2 (en) 2012-04-02 2016-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9334475B2 (en) 2012-04-06 2016-05-10 Kyoto University Method for inducing erythropoietin-producing cell
WO2013158890A1 (en) * 2012-04-19 2013-10-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Generation of induced pluripotent stem cells by modulation of δnp63 or dcgr8
AU2013264708B2 (en) 2012-05-23 2019-03-07 Kyoto University Highly efficient method for establishing artificial pluripotent stem cell
DK2800811T3 (en) 2012-05-25 2017-07-17 Univ Vienna METHODS AND COMPOSITIONS FOR RNA DIRECTIVE TARGET DNA MODIFICATION AND FOR RNA DIRECTIVE MODULATION OF TRANSCRIPTION
US20140017717A1 (en) 2012-05-31 2014-01-16 Auxogyn, Inc. In vitro embryo blastocyst prediction methods
WO2013184527A1 (en) 2012-06-05 2013-12-12 Capricor, Inc. Optimized methods for generation of cardiac stem cells from cardiac tissue and their use in cardiac therapy
EP3450542B1 (en) 2012-06-08 2021-09-01 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells
US10040821B2 (en) 2012-07-11 2018-08-07 Tissuetech, Inc. Compositions containing HC-HA/PTX3 complexes and methods of use thereof
WO2014014119A1 (en) 2012-07-17 2014-01-23 Kyoto University Novel cardiomyocyte marker
WO2014022423A2 (en) 2012-07-31 2014-02-06 Hantash Basil M Hla g-modified cells and methods
CA2881394C (en) 2012-08-13 2024-05-14 Cedars-Sinai Medical Center Exosomes and micro-ribonucleic acids for tissue regeneration
WO2014027474A1 (ja) 2012-08-17 2014-02-20 株式会社Ｃｌｉｏ 心筋梗塞の修復再生を誘導する多能性幹細胞
EP2907870A4 (en) 2012-10-09 2016-04-06 Hayashi Nakanobu REPROGRAMMING PEPTIDE AND USE THEREOF
JP2014082956A (ja) 2012-10-19 2014-05-12 Somar Corp 細胞培養基材、およびそれを用いた細胞培養方法並びに多能性幹細胞の分化誘導方法
SG11201503167XA (en) * 2012-10-23 2015-05-28 Univ Kyoto Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells
JP6275646B2 (ja) 2012-10-30 2018-02-07 第一三共株式会社 Ｍａｉｔ様細胞およびその作製方法
RU2019143431A (ru) 2012-11-01 2020-04-28 Фэктор Байосайенс Инк. Способы и продукты для экспрессии белков в клетках
PL2922554T3 (pl) 2012-11-26 2022-06-20 Modernatx, Inc. Na zmodyfikowany na końcach
GB201222693D0 (en) * 2012-12-17 2013-01-30 Babraham Inst Novel method
CN104884632B (zh) 2012-12-27 2018-01-02 索尼公司 细胞分析系统及细胞分析方法
EP2940127B1 (en) 2012-12-28 2018-07-25 Kyoto University Method for producing induced pluripotent stem cells, cardiomyocytes or precursor cells thereof
CA2896658C (en) 2012-12-31 2021-06-22 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells using hb9 regulators
WO2014106141A1 (en) 2012-12-31 2014-07-03 Janssen Biotech, Inc. Suspension and clustering of human pluripotent cells for differentiation into pancreatic endocrine cells
RU2658488C2 (ru) 2012-12-31 2018-06-21 Янссен Байотек, Инк. Способ получения клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для панкреатических эндокринных клеток
US10370644B2 (en) 2012-12-31 2019-08-06 Janssen Biotech, Inc. Method for making human pluripotent suspension cultures and cells derived therefrom
EP2947157B1 (en) 2013-01-16 2017-09-13 Universal Bio Research Co., Ltd. Method for identifying cells
WO2014121200A1 (en) 2013-02-01 2014-08-07 Auxogyn, Inc. Abnormal syngamy phenotypes observed with time lapse imaging for early identification of embryos with lower developmental potential
US20150368713A1 (en) 2013-02-01 2015-12-24 THE UNITED STATES OF AMERICAN, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Serv METHOD FOR GENERATING RETINAL PIGMENT EPITHELIUM (RPE) CELLS FROM INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS (IPSCs)
US10450546B2 (en) 2013-02-06 2019-10-22 University Of Rochester Induced pluripotent cell-derived oligodendrocyte progenitor cells for the treatment of myelin disorders
WO2014123242A1 (ja) 2013-02-08 2014-08-14 国立大学法人京都大学 巨核球及び血小板の製造方法
JP6494903B2 (ja) 2013-02-14 2019-04-03 ソニー株式会社 分析システム、分析プログラム及び分析方法
SG11201506845XA (en) 2013-03-01 2015-09-29 Clio Inc Pharmaceutical composition including migratory factor for guiding pluripotent stem cells to damage
US9738861B2 (en) 2013-03-06 2017-08-22 Kyoto University Culture system for pluripotent stem cells and method for subculturing pluripotent stem cells
WO2014136519A1 (ja) 2013-03-08 2014-09-12 国立大学法人京都大学 Ｅｇｆ受容体阻害剤を含む多能性幹細胞の心筋分化促進剤
WO2014153230A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 The Regents Of The University Of California In vitro production of medial ganglionic eminence precursor cells
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
JP6473077B2 (ja) 2013-03-21 2019-02-20 国立大学法人京都大学 神経分化誘導用の多能性幹細胞
EP2980207B1 (en) 2013-03-25 2018-12-05 Foundation for Biomedical Research and Innovation at Kobe Cell sorting method
GB201306589D0 (en) 2013-04-11 2013-05-29 Abeterno Ltd Live cell imaging
CA2909230C (en) 2013-04-12 2021-06-15 Kyoto University Method for inducing alveolar epithelial progenitor cells
WO2014185358A1 (ja) 2013-05-14 2014-11-20 国立大学法人京都大学 効率的な心筋細胞の誘導方法
US10159766B2 (en) 2013-05-31 2018-12-25 Iheart Japan Corporation Layered cell sheet incorporating hydrogel
EP3008229B1 (en) 2013-06-10 2020-05-27 President and Fellows of Harvard College Early developmental genomic assay for characterizing pluripotent stem cell utility and safety
US11225642B2 (en) 2013-06-11 2022-01-18 Kyoto University Method for producing renal progenitor cells
WO2014200030A1 (ja) 2013-06-12 2014-12-18 国立大学法人京都大学 人工多能性幹細胞の選別方法および血球への分化誘導方法
US9796962B2 (en) 2013-08-07 2017-10-24 Kyoto University Method for generating pancreatic hormone-producing cells
WO2015025959A1 (ja) 2013-08-23 2015-02-26 独立行政法人理化学研究所 蛍光特性を示すポリペプチド、およびその利用
US9890360B2 (en) 2013-08-28 2018-02-13 Gifu University Method for producing induced pluripotent stem cells
CN105492598B (zh) 2013-08-29 2019-12-03 三浦典正 与细胞的抗衰老相关的生物分子群
WO2015034012A1 (ja) 2013-09-05 2015-03-12 国立大学法人京都大学 新規ドーパミン産生神経前駆細胞の誘導方法
JP2016536337A (ja) 2013-09-05 2016-11-24 テンポ バイオサイエンス インコーポレイテッドＴｅｍｐｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ． バイオセンサーを有するヒト細胞モデル
CN105849256A (zh) 2013-09-12 2016-08-10 株式会社钟化 诱导多能干细胞的分化诱导方法及筛选方法
JP6333830B2 (ja) 2013-09-13 2018-05-30 国立大学法人京都大学 多能性幹細胞の心筋分化を促進する化合物
CN105916980A (zh) 2013-09-24 2016-08-31 株式会社爱迪药业 用于改进诱导多能干细胞的效率的方法
EP3052106A4 (en) 2013-09-30 2017-07-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
SG11201602503TA (en) 2013-10-03 2016-04-28 Moderna Therapeutics Inc Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
EP3064577B1 (en) 2013-11-01 2020-09-09 Kyoto University Novel chondrocyte induction method
WO2015066488A2 (en) 2013-11-01 2015-05-07 New England Biolabs, Inc. Method for producing induced pluripotent stem cells
WO2015069736A1 (en) 2013-11-08 2015-05-14 The Mclean Hospital Corporation METHODS FOR EFFICIENT GENERATION OF GABAergic INTERNEURONS FROM PLURIPOTENT STEM CELLS
US10163203B2 (en) 2013-11-08 2018-12-25 Sony Corporation Cell analysis system, cell analysis program and cell analysis method
CN104630136B (zh) * 2013-11-15 2019-10-01 中国科学院广州生物医药与健康研究院 一种制备诱导多能性干细胞的方法以及该方法中所使用的组合物及其应用
US9932607B2 (en) 2013-11-15 2018-04-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Site-specific integration of transgenes into human cells
EP3375877A1 (en) 2013-11-18 2018-09-19 Crispr Therapeutics AG Crispr-cas system materials and methods
JP6536871B2 (ja) 2013-12-02 2019-07-03 国立大学法人京都大学 Ｆｇｆｒ３病の予防および治療剤ならびにそのスクリーニング方法
KR102070967B1 (ko) * 2013-12-10 2020-01-29 한국한의학연구원 사군자탕을 유효성분으로 포함하는, 세포의 유도만능줄기세포로의 리프로그래밍 촉진용 조성물 및 이를 이용한 유도만능줄기세포의 제조방법
JP2017504311A (ja) 2013-12-11 2017-02-09 ファイザー・リミテッドＰｆｉｚｅｒ Ｌｉｍｉｔｅｄ 網膜色素上皮細胞を生成する方法
WO2015089277A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for modifying a single stranded target nucleic acid
US10100284B2 (en) 2013-12-25 2018-10-16 Toagosei Co. Ltd. Method for inducing differentiation of pluripotent stem cells into endodermal cells
EP2896688A1 (en) 2014-01-20 2015-07-22 Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) A method of producing beta pancreatic cells from progenitor cells through the use of hydrogen peroxide
MX2016009771A (es) 2014-01-31 2016-11-14 Factor Bioscience Inc Metodos y productos para la produccion y administracion de acido nucleico.
EP3114214B1 (en) 2014-03-04 2023-11-01 Fate Therapeutics, Inc. Improved reprogramming methods and cell culture platforms
US11066649B2 (en) 2014-03-19 2021-07-20 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Method for inducing human cholangiocyte differentiation
JP6612736B2 (ja) 2014-03-20 2019-11-27 国立大学法人京都大学 心筋細胞の選別方法
ES2837840T3 (es) 2014-03-20 2021-07-01 Ares Trading Sa Medida cuantitativa de la cinética de desarrollo de la morfología de mórula y blastocisto humanos
WO2015151307A1 (ja) * 2014-03-31 2015-10-08 味の素株式会社 幹細胞用培地
KR102162138B1 (ko) 2014-05-16 2020-10-06 얀센 바이오테크 인코포레이티드 췌장 내분비 세포에서 mafa 발현을 향상시키기 위한 소분자의 용도
WO2015178431A1 (ja) 2014-05-21 2015-11-26 国立大学法人京都大学 膵芽細胞の製造方法および膵芽細胞を含む膵疾患治療剤
WO2015182765A1 (ja) 2014-05-30 2015-12-03 国立大学法人京都大学 低分子化合物を用いた多能性幹細胞の心筋分化誘導法
US9518103B2 (en) 2014-06-18 2016-12-13 President And Fellows Of Harvard College Optogenetic probes for measuring membrane potential
JP6629725B2 (ja) 2014-06-23 2020-01-15 東亞合成株式会社 新規合成ペプチドおよびその利用
JP7012432B2 (ja) 2014-07-14 2022-01-28 中外製薬株式会社 タンパク質のエピトープを同定するための方法
EP3188763B1 (en) 2014-09-02 2020-05-13 The Regents of The University of California Methods and compositions for rna-directed target dna modification
JP6452107B2 (ja) 2014-09-05 2019-01-16 国立大学法人 東京大学 糖尿病性皮膚潰瘍治療のための多能性幹細胞
AU2015327812B2 (en) 2014-10-03 2021-04-15 Cedars-Sinai Medical Center Cardiosphere-derived cells and exosomes secreted by such cells in the treatment of muscular dystrophy
JP6598185B2 (ja) 2014-11-07 2019-10-30 国立大学法人京都大学 軟骨過形成疾患の予防および治療剤ならびにそのスクリーニング方法
AU2015353853B2 (en) 2014-11-25 2020-10-15 President And Fellows Of Harvard College Methods for generation of podocytes from pluripotent stem cells and cells produced by the same
KR102526616B1 (ko) 2014-12-17 2023-04-27 푼다시온 파라 라 인베스티가시온 메디카 아플리카다 윌슨병 및 기타 병태의 치료에 사용되기 위한 핵산 구조물 및 유전자 치료용 벡터
WO2016097218A1 (en) 2014-12-17 2016-06-23 Fundación Para La Investigación Mèdica Aplicada Nucleic acid constructs and gene therapy vectors for use in the treatment of wilson's disease and other conditions
WO2016104717A1 (ja) 2014-12-26 2016-06-30 国立大学法人京都大学 肝細胞誘導方法
US10077463B2 (en) 2015-01-15 2018-09-18 President And Fellows Of Harvard College Optical selection of cells
WO2016114405A1 (ja) 2015-01-16 2016-07-21 国立研究開発法人産業技術総合研究所 ステルス性を有するｒｎａを使った遺伝子発現系および当該ｒｎａを含む遺伝子導入・発現ベクター
EP3543339A1 (en) 2015-02-13 2019-09-25 Factor Bioscience Inc. Nucleic acid products and methods of administration thereof
US10561687B2 (en) 2015-02-17 2020-02-18 University Health Network Methods for making and using sinoatrial node-like pacemaker cardiomyocytes and ventricular-like cardiomyocytes
RS58070B2 (sr) 2015-02-20 2022-10-31 Inst Nat Sante Rech Med Upotreba laminina za diferencijaciju pluripotentnih ćelija u ćelije hepatocitne linije
EP3266864A4 (en) 2015-03-06 2018-08-29 Kyoto University Method for inducing differentiation of alveolar epithelial cells
US10738280B2 (en) 2015-03-18 2020-08-11 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Method for producing naïve pluripotent stem cells
WO2016165788A1 (en) 2015-04-14 2016-10-20 Uab Ferentis Collagen mimetic peptide
CA2982568A1 (en) * 2015-04-14 2016-10-20 Kyoto University Method for producing stem cell clone suitable for inducing differentiation into somatic cells
EP3081638A1 (en) 2015-04-16 2016-10-19 Kyoto University Method for producing pseudo-islets
JP6935654B2 (ja) 2015-04-28 2021-09-15 東亞合成株式会社 合成ペプチドを用いた心筋細胞の生産方法
US9724432B2 (en) 2015-04-30 2017-08-08 University Of Rochester Non-human mammal model of human degenerative disorder, uses thereof, and method of treating human degenerative disorder
FR3037338B1 (fr) 2015-06-12 2020-02-28 Philippe Nirde Procede de greffe de cellule cardiaque sur la membrane choriallantoide d'œuf feconde
JP6746945B2 (ja) 2015-06-30 2020-08-26 ソニー株式会社 情報処理装置、情報処理システム及び情報処理方法
WO2017002300A1 (en) 2015-06-30 2017-01-05 Sony Corporation Information processing apparatus, information processing system, and information processing method
EP3333256B1 (en) * 2015-07-10 2023-10-25 Heartseed Inc. Method for producing high-quality ips cells
WO2017014165A1 (ja) 2015-07-17 2017-01-26 国立大学法人京都大学 血管内皮細胞の誘導方法
CN108138130A (zh) 2015-08-31 2018-06-08 爱平世股份有限公司 多能干细胞制造系统和生产诱导多能干细胞的方法
HUE057135T2 (hu) 2015-09-01 2022-04-28 Ncardia B V In vitro módszer egy humán pluripotens õssejtpopuláció kardiomiocita sejtpopulációvá történõ differenciálására
KR20180042437A (ko) 2015-09-08 2018-04-25 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 임상 등급 망막 색소 상피 세포의 재현성 있는 분화 방법
LT3347457T (lt) 2015-09-08 2022-02-10 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Tinklainės pigmento epitelio ląstelių, kilusių iš kamieninių ląstelių, valymas macs metodu
WO2017043666A1 (ja) 2015-09-11 2017-03-16 アステラス製薬株式会社 腎前駆細胞を製造する方法
JP2018532402A (ja) 2015-09-24 2018-11-08 クリスパー セラピューティクス アーゲー Ｒｎａプログラム可能エンドヌクレアーゼの新規のファミリーならびにゲノム編集および他の適用におけるそれらの使用
JP6691756B2 (ja) 2015-09-29 2020-05-13 東亞合成株式会社 合成ペプチドを用いた神経幹細胞の生産方法
EP3356520B1 (en) 2015-10-02 2022-03-23 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Lentiviral protein delivery system for rna-guided genome editing
KR20180055901A (ko) 2015-10-05 2018-05-25 오리그3엔, 인코포레이티드 간 기능장애의 확인 및 개선에 기반한 파킨슨병의 진단 및 치료
KR20180055918A (ko) 2015-10-16 2018-05-25 페이트 세러퓨틱스, 인코포레이티드 기저 상태 다능성의 유도 및 유지를 위한 플랫폼
DK3365435T3 (da) 2015-10-20 2021-04-06 Fujifilm Cellular Dynamics Inc Produktion af hæmatopoietiske prækursorceller med multi-afstamning med genetisk programmering
JP2016011317A (ja) * 2015-10-21 2016-01-21 加治佐　功 ゲノム編集用クリスパーキャス９による老化遺伝子切り取り若返り経口不老不死薬７
AU2016355191B2 (en) 2015-11-18 2023-06-29 Orbis Health Solutions Llc T7 alpha viral vector system
US11253551B2 (en) 2016-01-11 2022-02-22 Cedars-Sinai Medical Center Cardiosphere-derived cells and exosomes secreted by such cells in the treatment of heart failure with preserved ejection fraction
GB201601503D0 (en) 2016-01-27 2016-03-09 Isis Innovation Dendritic cells
US20190249172A1 (en) 2016-02-18 2019-08-15 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for gene editing in stem cells
WO2017159862A1 (ja) 2016-03-18 2017-09-21 国立大学法人京都大学 多能性幹細胞由来心筋細胞の凝集体の凍結方法
WO2017164746A1 (en) 2016-03-25 2017-09-28 Pluriomics B.V. In vivo method for differentiating human pluripotent stem cells into atrial cardiomyocytes
MA45479A (fr) 2016-04-14 2019-02-20 Janssen Biotech Inc Différenciation de cellules souches pluripotentes en cellules de l'endoderme de l'intestin moyen
HUE056387T2 (hu) 2016-04-15 2022-02-28 Univ Kyoto Eljárás antigénspecifikus CD8-pozitív T-sejtek indukálására
KR102312123B1 (ko) 2016-04-22 2021-10-13 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 도파민 생산 신경전구세포의 제조방법
KR20200127039A (ko) 2016-05-16 2020-11-09 고쿠리츠 다이가쿠 호우징 도우카이 고쿠리츠 다이가쿠 기코우 다능성 간세포에 의한 주산기 뇌장애의 개선 및 치료
US11351200B2 (en) 2016-06-03 2022-06-07 Cedars-Sinai Medical Center CDC-derived exosomes for treatment of ventricular tachyarrythmias
US20190330603A1 (en) 2016-06-17 2019-10-31 Genesis Technologies Limited Crispr-cas system, materials and methods
JP7099967B2 (ja) 2016-07-01 2022-07-12 リサーチ ディベロップメント ファウンデーション 幹細胞由来移植片からの増殖性細胞の排除
CA3030340A1 (en) 2016-08-01 2018-02-08 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Human induced pluripotent stem cells for high efficiency genetic engineering
EP3494979A4 (en) 2016-08-03 2020-03-04 Life Science Institute, Inc. REDUCTION AND TREATMENT OF ISCHEMIC REPERFUSION-INDUCED LUNG LESIONS USING PLURIPOTENTIC STEM CELLS
EP3494978A4 (en) 2016-08-03 2020-03-11 National University Corporation Nagoya University IMPROVEMENT AND TREATMENT OF CHRONIC PULMONARY DISEASES USING PLURIPOTENT STEM CELLS
US10373109B2 (en) 2016-08-04 2019-08-06 Fanuc Corporation System and method for iPS cell bank using media
US11259520B2 (en) 2016-08-04 2022-03-01 Fanuc Corporation Stem cell manufacturing system, stem cell information management system, cell transport apparatus, and stem cell frozen storage apparatus
US10354218B2 (en) 2016-08-04 2019-07-16 Fanuc Corporation System and method for iPS cell bank using internet technology
CN116115629A (zh) 2016-08-17 2023-05-16 菲克特生物科学股份有限公司 核酸产品及其施用方法
US11473057B2 (en) 2016-09-02 2022-10-18 Takara Bio Inc. Method for obtaining microglia from pluripotent stem cells
WO2018057542A1 (en) 2016-09-20 2018-03-29 Cedars-Sinai Medical Center Cardiosphere-derived cells and their extracellular vesicles to retard or reverse aging and age-related disorders
AU2017340634B2 (en) 2016-10-05 2022-06-02 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Generating mature lineages from induced pluripotent stem cells with MECP2 disruption
WO2018069927A1 (en) 2016-10-10 2018-04-19 The National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. Non-cytotoxic modified cells and use thereof
JP6868250B2 (ja) 2016-10-31 2021-05-12 国立大学法人鳥取大学 ヒト抗体産生非ヒト動物及びそれを用いたヒト抗体作製法
US11458225B2 (en) 2016-11-09 2022-10-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services 3D vascularized human ocular tissue for cell therapy and drug discovery
CN110114470A (zh) 2016-12-27 2019-08-09 住友化学株式会社 诱导的多能性干细胞的评价方法及选择方法、以及诱导的多能性干细胞的制备方法
WO2018135646A1 (ja) 2017-01-20 2018-07-26 国立大学法人京都大学 ＣＤ８α＋β＋細胞傷害性Ｔ細胞の製造方法
WO2018139548A1 (ja) 2017-01-26 2018-08-02 国立大学法人大阪大学 幹細胞の中胚葉系細胞への分化誘導用培地および中胚葉系細胞の製造方法
EP3587560A4 (en) 2017-01-27 2020-12-16 Kaneka Corporation ENDODERMAL CELL MASS, AND PROCESS FOR PRODUCING ANY CELL MASS AMONG THREE PRIMARY EMBRYONIC SHEET CELL MASSES FROM PLURIPOTENT CELLS
EP3578650A4 (en) 2017-02-06 2021-03-24 National Cancer Center Japan NEW T-LYMPHOCYTE RECEPTOR
WO2018152120A1 (en) 2017-02-14 2018-08-23 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Methods of engineering human induced pluripotent stem cells to produce liver tissue
US10828330B2 (en) 2017-02-22 2020-11-10 IO Bioscience, Inc. Nucleic acid constructs comprising gene editing multi-sites and uses thereof
CA3054119A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 I Peace, Inc. Cell treatment device, suspension culture vessel, and stem cell induction method
CA3054272C (en) 2017-02-27 2023-01-24 I Peace, Inc. Cell processing system and cell processing apparatus
JP6480093B2 (ja) 2017-02-27 2019-03-06 剛士 田邊 体細胞製造システム
EP3591040A4 (en) 2017-03-03 2020-11-11 Kyoto University METHOD FOR PRODUCING PANCREATIC ANALYZER CELLS
JP7171055B2 (ja) 2017-03-14 2022-11-15 国立大学法人京都大学 多能性幹細胞からヘルパーｔ細胞を製造する方法
CA3058306A1 (en) 2017-03-28 2018-10-04 Ajinomoto Co., Inc. Additive for undifferentiation maintaining medium
KR102668891B1 (ko) 2017-04-18 2024-05-29 후지필름 셀룰러 다이내믹스, 인코포레이티드 항원-특이적 면역 이펙터 세포
JP7336769B2 (ja) 2017-04-19 2023-09-01 シーダーズ―シナイ メディカル センター 骨格筋ジストロフィーを治療する方法及び組成物
US20200197442A1 (en) * 2017-04-26 2020-06-25 Nsage Corp. Pharmaceutical composition for prevention or treatment of alzheimer's disease, comprising stem cell secreting srage
WO2018203499A1 (ja) 2017-05-02 2018-11-08 剛士 田邊 医薬品組成物及び化粧品組成物
US11690876B2 (en) 2017-05-10 2023-07-04 University Of Rochester Methods of treating neuropsychiatric disorders
WO2018216743A1 (ja) 2017-05-25 2018-11-29 国立大学法人京都大学 中間中胚葉細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法、および多能性幹細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法
EP3406712A1 (en) 2017-05-26 2018-11-28 Fundación Centro Nacional De Investigaciones Oncológicas Carlos III Method for expanding stemness and differentiation potential of pluripotent cells
US20200208093A1 (en) 2017-06-14 2020-07-02 Takeda Pharmaceutical Company Limited Cell-sealing device
KR102422175B1 (ko) 2017-06-19 2022-07-18 고에키 자이단 호징 고베 이료 산교 도시 스이신 기코 만능 줄기 세포의 분화능의 예측 방법 및 이를 위한 시약
JP6758631B2 (ja) 2017-06-19 2020-09-23 国立大学法人大阪大学 角膜内皮細胞マーカー及びその利用
WO2018235878A1 (ja) 2017-06-20 2018-12-27 国立大学法人名古屋大学 多能性幹細胞による胎児発育不全に伴う脳障害の改善及び治療
US10660523B2 (en) 2017-07-07 2020-05-26 Hideo Ando Light-source unit, measurement apparatus, near-infrared microscopic apparatus, optical detection method, imaging method, calculation method, functional bio-related substance, state management method, and manufacturing method
EP3699267A4 (en) 2017-10-17 2021-10-27 Kyoto University METHOD OF MANUFACTURING AN ARTIFICIAL NEUROMUSCULAR END PLATE FROM PLURIPOTENT STEM CELLS
CN111225676A (zh) 2017-10-17 2020-06-02 国立大学法人广岛大学 诱导骨软骨修复的多能性干细胞
US20200332315A1 (en) 2017-11-02 2020-10-22 National University Corporation Tottori University Method for high production of protein using mammalian artificial chromosome vector
EP3707155A2 (en) 2017-11-09 2020-09-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Crispr/cas systems for treatment of dmd
BR112020009275A2 (pt) 2017-11-15 2020-10-27 Semma Therapeutics, Inc. composições de fabricação de célula de ilhota e métodos de uso
WO2019107485A1 (ja) 2017-11-30 2019-06-06 国立大学法人京都大学 細胞の培養方法
MA50942A (fr) 2017-12-01 2020-10-07 Encoded Therapeutics Inc Protéines de liaison à l'adn modifiées
AU2018386301A1 (en) 2017-12-14 2020-06-18 Bayer Healthcare Llc Novel RNA-programmable endonuclease systems and their use in genome editing and other applications
WO2019126068A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Cedars-Sinai Medical Center Engineered extracellular vesicles for enhanced tissue delivery
CN111868224A (zh) 2017-12-22 2020-10-30 国立大学法人京都大学 细胞培养装置，培养液抽吸器及细胞培养方法
JP6775224B2 (ja) 2018-03-16 2020-10-28 国立大学法人鳥取大学 マウス人工染色体ベクター及びその使用
CA3092497A1 (en) 2018-03-19 2019-09-26 Crispr Therapeutics Ag Novel rna-programmable endonuclease systems and uses thereof
JPWO2019182157A1 (ja) 2018-03-19 2021-03-18 国立大学法人京都大学 ハイドロゲルカプセル
EP3768827A1 (en) 2018-03-22 2021-01-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for reprogramming somatic cells
WO2019189545A1 (ja) 2018-03-30 2019-10-03 国立大学法人京都大学 細胞の製造方法
SG11202009314XA (en) 2018-03-30 2020-10-29 Univ Kyoto Heterocyclic compound
WO2019189758A1 (ja) 2018-03-30 2019-10-03 味の素株式会社 ポリリジン類縁体を含む、細胞増殖促進用組成物
US12018281B2 (en) 2018-03-30 2024-06-25 Kyoto University Cardiomyocyte maturation promoter
US11268070B2 (en) 2018-04-16 2022-03-08 Cellular Engineering Technologies, Inc. Methods for creating integration-free, virus-free, exogenous oncogene-free IPS cells and compositions for use in such methods
CA3097428A1 (en) 2018-04-20 2019-10-24 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Method for differentiation of ocular cells and use thereof
BR112020021802A2 (pt) 2018-04-23 2021-02-23 Kyoto University métodos para produzir uma população de células produtoras de insulina ou uma população de células beta pancreáticas e para diminuir o número ou inibir a proliferação de células positivas para ki67, e, população de células progenitoras pancreáticas ou células em um estágio posterior de diferenciação
EP3786286A4 (en) 2018-04-27 2022-01-26 Kaneka Corporation METHOD FOR PRODUCTION OF PANCREATIC BETA CELLS
US20210254006A1 (en) 2018-06-06 2021-08-19 Ideaya Biosciences, Inc. Methods of culturing and/or expanding stem cells and/or lineage committed progenitor cells using lactam compounds
KR20210056324A (ko) 2018-06-18 2021-05-18 유니버시티 오브 로체스터 정신분열증 및 다른 신경정신장애를 치료하는 방법
CN112654366A (zh) 2018-06-21 2021-04-13 罗切斯特大学 治疗或抑制亨廷顿病发作的方法
EP3822342A4 (en) 2018-07-13 2022-08-03 Kyoto University PROCESS FOR PRODUCTION OF GAMMA DELTA T LYMPHOCYTES
US20210299331A1 (en) 2018-07-19 2021-09-30 Kyoto University Pluripotent stem cell-derived plate-shaped cartilage and method for producing the same
WO2020022261A1 (ja) 2018-07-23 2020-01-30 国立大学法人京都大学 新規腎前駆細胞マーカーおよびそれを利用した腎前駆細胞の濃縮方法
WO2020027316A1 (ja) 2018-08-03 2020-02-06 国立大学法人京都大学 細胞製造法
EP3833365A4 (en) 2018-08-10 2022-05-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated ISLE DIFFERENTIATION DERIVED FROM STEM CELLS
JP7382603B2 (ja) 2018-08-10 2023-11-17 国立大学法人京都大学 Ｃｄ３陽性細胞の製造方法
JP7436990B2 (ja) 2018-08-10 2024-02-22 国立大学法人京都大学 カチオン性脂質を用いた心筋細胞へのトランスフェクション方法
WO2020036184A1 (ja) 2018-08-14 2020-02-20 国立研究開発法人国立国際医療研究センター 褐色脂肪細胞上清、その調製法、及び、使用
US20210198635A1 (en) 2018-08-20 2021-07-01 I Peace, Inc. Cell culture or induction method
JP7280574B2 (ja) 2018-08-20 2023-05-24 アイ ピース，インコーポレイテッド 細胞培養器
EA202190582A1 (ru) 2018-08-22 2021-05-27 Киото Юниверсити Способ получения энтеральных нейральных клеток-предшественников
CN112771166A (zh) 2018-08-31 2021-05-07 诺伊尔免疫生物科技株式会社 表达car的t细胞和car表达载体
BR112021004815A2 (pt) 2018-09-19 2021-06-01 Takeda Pharmaceutical Company Limited células produtoras de insulina, medicamento, e, métodos para produzir células produtoras de insulina, para gerar células do tipo ilhota pancreática, para tratar diabetes mellitus, para melhorar e/ou manter o controle dos níveis de glicose em jejum e pós-prandial em um paciente e para reduzir o risco de hipoglicemia em um paciente com diabetes mellitus
EP3800250A4 (en) 2018-10-10 2022-03-30 National University Corporation Tottori University PROCEDURE FOR GENERATING ANIMAL CELLS WITH DNA OF INTEREST USING MICRONUCLEAR CELL FUSION METHOD
JP7079946B2 (ja) 2018-10-10 2022-06-03 国立大学法人鳥取大学 外来染色体を含むヒト人工多能性幹細胞の製造方法
JP2022508724A (ja) 2018-10-12 2022-01-19 ヴィヴェ テラピューティクス 進行性家族性肝内胆汁鬱滞タイプ３（ｐｆｉｃ３）の治療のためのコドン最適化導入遺伝子
JP7553918B2 (ja) 2018-10-15 2024-09-19 公立大学法人横浜市立大学 栄養組成物
EP3875578A4 (en) 2018-10-31 2022-08-10 Kyoto University METHOD FOR GENERATING PLURIPOTENT STEM CELLS WITH RELEASED DIFFERENTIATION RESISTANCE TO MESENDODERM
US12036245B2 (en) 2018-11-07 2024-07-16 I Peace, Inc. Pharmaceutical composition and cosmetic composition
SG11202104634UA (en) 2018-11-07 2021-06-29 Vivet Therapeutics Codon-optimized abcb11 transgene for the treatment of progressive familial intrahepatic cholestasis type 2 (pfic2)
TW202039854A (zh) 2018-11-16 2020-11-01 美商編碼製藥公司 治療威爾遜氏病的組合物和方法
US20220016318A1 (en) 2018-11-19 2022-01-20 The United State Of America, As Represented By The Secretary, Deparment Of Health And Human Services Biodegradable tissue replacement implant and its use
US20220031749A1 (en) 2018-11-28 2022-02-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Multiplex genome editing of immune cells to enhance functionality and resistance to suppressive environment
CN113195710A (zh) 2018-12-06 2021-07-30 麒麟控股株式会社 T细胞或nk细胞的制造方法、t细胞或nk细胞的培养用培养基、t细胞或nk细胞的培养方法、维持未分化t细胞的未分化状态的方法和t细胞或nk细胞的增殖促进剂
CA3122289A1 (en) 2018-12-11 2020-06-18 University Of Rochester Methods of treating schizophrenia and other neuropsychiatric disorders
US20220056413A1 (en) 2018-12-21 2022-02-24 Kyoto University Lubricin-localized cartilage-like tissue, method for producing same and composition comprising same for treating articular cartilage damage
EP3903884A4 (en) 2018-12-26 2023-01-25 Kirin Holdings Kabushiki Kaisha MODIFIED TCR AND MANUFACTURING PROCESS THEREOF
WO2020138256A1 (ja) 2018-12-27 2020-07-02 国立大学法人京都大学 Ｔ細胞受容体の改変体
EP3919124A4 (en) 2019-02-01 2022-11-23 Kyoto University CELL DETECTION METHOD
US20230057355A1 (en) 2019-02-13 2023-02-23 University Of Rochester Gene networks that mediate remyelination of the human brain
WO2020175592A1 (ja) 2019-02-26 2020-09-03 国立大学法人東北大学 ｉＰＳ細胞を用いた骨芽細胞塊の作製法
JP7531170B2 (ja) 2019-03-05 2024-08-09 ファナック株式会社 細胞製造システム
CA3130789A1 (en) 2019-03-07 2020-09-10 The Regents Of The University Of California Crispr-cas effector polypeptides and methods of use thereof
WO2020209959A1 (en) 2019-03-08 2020-10-15 Crispr Therapeutics Ag Nucleobase-editing fusion protein systems, compositions, and uses thereof
WO2020186059A2 (en) 2019-03-12 2020-09-17 Crispr Therapeutics Ag Novel high fidelity rna-programmable endonuclease systems and uses thereof
US20220252575A1 (en) 2019-03-29 2022-08-11 Public University Corporation Yokohama City University Screening method and toxicity evaluation method
WO2020203538A1 (ja) 2019-03-29 2020-10-08 株式会社カネカ 多能性幹細胞を含む細胞集団及びその製造方法
EP3954436A4 (en) 2019-04-10 2023-01-11 Orizuru Therapeutics, Inc. PROCESS FOR MANUFACTURING A BIO-TISSUE-LIKE STRUCTURE
WO2020213725A1 (ja) 2019-04-17 2020-10-22 学校法人慶應義塾 誘導多能性幹細胞の製造方法及びキット
US20210047649A1 (en) 2019-05-08 2021-02-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Crispr/cas all-in-two vector systems for treatment of dmd
JPWO2020230832A1 (ru) 2019-05-15 2020-11-19
WO2020235319A1 (ja) 2019-05-20 2020-11-26 味の素株式会社 軟骨又は骨の前駆細胞の拡大培養方法
US20220306981A1 (en) 2019-06-10 2022-09-29 I Peace, Inc. Erythrocyte removal device, mononuclear cell collector, cell culture device, cell culture system, cell culture method, and method for collecting mononuclear cells
US20220306993A1 (en) 2019-06-10 2022-09-29 I Peace, Inc. Erythrocyte removal device, mononuclear cell collector, cell culture device, cell culture system, cell culture method, and mononuclear cell collection method
JP7541700B2 (ja) 2019-06-11 2024-08-29 国立大学法人京都大学 腎間質細胞の製造方法
WO2020264072A1 (en) 2019-06-25 2020-12-30 Semma Therapeutics, Inc. Enhanced differentiation of beta cells
CN113811597B (zh) 2019-06-28 2024-06-18 爱平世股份有限公司 细胞培养装置的应用
WO2020262351A1 (ja) 2019-06-28 2020-12-30 アイ ピース， インコーポレイテッド 細胞塊分割器、細胞塊分割器の製造方法、及び細胞塊の分割方法
EP4001425A4 (en) 2019-07-19 2023-04-19 Tokyo Electron Limited METHODS OF EVALUATION OF THE STATUS OF CELL DIFFERENTIATION
US10501404B1 (en) 2019-07-30 2019-12-10 Factor Bioscience Inc. Cationic lipids and transfection methods
WO2021030424A1 (en) 2019-08-13 2021-02-18 Semma Therapeutics, Inc. Pancreatic differentiation
CA3151819A1 (en) 2019-08-20 2021-02-25 Orizuru Therapeutics, Inc. Method for enriching cardiac myocytes
CN114341340A (zh) 2019-08-29 2022-04-12 发那科株式会社 细胞制造装置及其系统
WO2021038997A1 (ja) 2019-08-29 2021-03-04 ファナック株式会社 細胞製造装置
CN114341341A (zh) 2019-08-29 2022-04-12 发那科株式会社 细胞制造装置及其制造方法
JPWO2021066076A1 (ru) 2019-10-01 2021-04-08
TW202130805A (zh) 2019-10-21 2021-08-16 日商武田藥品工業股份有限公司 增生抑制劑
JPWO2021085639A1 (ru) 2019-10-31 2021-05-06
US20220411752A1 (en) 2019-11-01 2022-12-29 Kyoto University Method for producing t cells
US20220403307A1 (en) 2019-11-06 2022-12-22 I Peace, Inc. Cell culture device
EP4060023A4 (en) 2019-11-12 2023-12-13 Juntendo Educational Foundation METHOD FOR DIRECT TRANSDIFFERENTIATION OF A SOMATIC CELL
IL293189A (en) 2019-11-25 2022-07-01 Univ Kyoto A primary cell bank of t cells
WO2021117886A1 (ja) 2019-12-12 2021-06-17 国立大学法人千葉大学 巨核球および血小板を含む凍結乾燥製剤
FR3105260A1 (fr) 2019-12-20 2021-06-25 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Modèle organoïde cardiaque vascularisé apres incorporation de cardiomyocytes dérivés de cellules souches pluripotentes induites humaines
MX2022010521A (es) 2020-02-28 2022-09-19 Takeda Pharmaceuticals Co Metodo para producir linfocitos citoliticos naturales a partir de celulas madre pluripotentes.
JP2023516484A (ja) 2020-03-11 2023-04-19 ビット バイオ リミテッド 肝細胞作製方法
BR112022018101A2 (pt) 2020-03-13 2022-11-22 Goliver Therapeutics Células hepáticas tipo tronco para tratamento e/ou prevenção de distúrbios hepáticos fulminantes
JP7418759B2 (ja) 2020-03-18 2024-01-22 ファナック株式会社 顕微鏡観察システム
TW202200783A (zh) 2020-03-19 2022-01-01 國立大學法人京都大學 心肌細胞的精製方法
US20230212519A1 (en) 2020-03-19 2023-07-06 Orizuru Therapeutics, Inc. Method for purifying cardiomyocytes
EP4130239A4 (en) 2020-03-24 2024-05-15 Kaneka Corporation METHODS FOR INDUCING DIFFERENTIATION IN PANCREAS ALPHA CELLS
CN115516084A (zh) 2020-03-31 2022-12-23 国立大学法人京都大学 T细胞祖细胞的制造方法
AU2021250052A1 (en) 2020-03-31 2022-11-03 Sky Pharma Co.,Ltd. Method for screening for, method for producing, and method for designing drug active ingredients
CA3185067A1 (en) 2020-05-26 2021-12-02 Kouichi Tamura Hypoimmunogenic cells
CN115803426A (zh) 2020-05-28 2023-03-14 千纸鹤治疗公司 均一尺寸的细胞聚集体的大量制造方法
MX2022015002A (es) 2020-05-29 2023-03-03 Fujifilm Cellular Dynamics Inc Bicapa del epitelio pigmentario de la retina y fotorreceptores y uso de los mismos.
IL298085A (en) 2020-05-29 2023-01-01 Fujifilm Cellular Dynamics Inc Retinal pigment epithelium and bicellular photoreceptor aggregates and methods of using them
WO2021250058A2 (en) 2020-06-12 2021-12-16 Bayer Aktiengesellschaft CRISPR-Cas12a DIRECTED RANDOM MUTAGENESIS AGENTS AND METHODS
EP4170020A1 (en) 2020-06-17 2023-04-26 Kyoto University Chimeric antigen receptor-expressing immunocompetent cells
JP7429294B2 (ja) 2020-07-13 2024-02-07 国立大学法人京都大学 骨格筋前駆細胞及びその精製方法、筋原性疾患を治療するための組成物、並びに骨格筋前駆細胞を含む細胞群の製造方法
US20230323289A1 (en) 2020-07-20 2023-10-12 Aichi Medical University Composition for Pluripotent Cell Undifferentiated State Maintenance Culture, Medium for Pluripotent Cell Undifferentiated State Maintenance Culture, Method for Pluripotent Cell Undifferentiated State Maintenance Culture, and Method for Producing Pluripotent Cells
US20230265456A1 (en) 2020-08-10 2023-08-24 Fundacion Para La Investigacion Medica Aplicada Gene therapy vector expressing cyp27a1 for the treatment of cerebrotendinous xanthomatosis
WO2022039279A1 (ja) 2020-08-18 2022-02-24 国立大学法人京都大学 ヒト始原生殖細胞／ヒト始原生殖細胞様細胞の維持増幅方法
CN116018402A (zh) 2020-09-04 2023-04-25 心脏康复株式会社 iPS细胞的品质改善剂、iPS细胞的制备方法、iPS细胞、及iPS细胞制备用组合物
CA3200563A1 (en) 2020-09-29 2022-04-07 Genethon Enhancing utrophin expression in cell by inducing mutations within utrophin regulatory elements and therapeutic use thereof
EP4243839A1 (en) 2020-11-13 2023-09-20 Catamaran Bio, Inc. Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof
EP4249587A1 (en) 2020-11-20 2023-09-27 Orizuru Therapeutics, Inc. Maturation agent
WO2022115611A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Catamaran Bio, Inc. Cellular therapeutics engineered with signal modulators and methods of use thereof
AU2021399929A1 (en) 2020-12-16 2023-07-06 Universitat Pompeu Fabra Therapeutic lama2 payload for treatment of congenital muscular dystrophy
JP2022099262A (ja) 2020-12-22 2022-07-04 アイ ピース，インコーポレイテッド 細胞の培養器及び細胞の培養方法
WO2022138101A1 (ja) 2020-12-23 2022-06-30 三井化学株式会社 培養部材およびその用途
EP4267197A1 (en) 2020-12-23 2023-11-01 Vivet Therapeutics Minimal bile acid inducible promoters for gene therapy
JPWO2022138964A1 (ru) 2020-12-25 2022-06-30
WO2022163466A1 (ja) * 2021-01-26 2022-08-04 アイ ピース， インコーポレイテッド オリゴデンドロサイトの作製方法
TW202246489A (zh) 2021-02-09 2022-12-01 日商千紙鶴治療公司 成熟化劑
EP4306633A1 (en) 2021-03-09 2024-01-17 National University Corporation Tokyo Medical and Dental University Cell cluster production method
EP4310176A1 (en) 2021-03-17 2024-01-24 Astellas Pharma Inc. Pericyte having basic fibroblast growth factor (bfgf) gene introduced therein
WO2022194930A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Technische Universität Dresden Human macrophages resistant to tumor-induced repolarization
EP4060026A1 (en) 2021-03-19 2022-09-21 Technische Universität Dresden Ex-vivo proliferation of human phagocytic cells
EP4134086A1 (en) 2021-08-12 2023-02-15 Technische Universität Dresden Human macrophages resistant to tumor-induced repolarization
WO2022207889A1 (en) 2021-04-01 2022-10-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Liver organoid manufacturing methods, liver organoids obtained with the same, and uses thereof
JPWO2022215718A1 (ru) 2021-04-08 2022-10-13
WO2022230919A1 (ja) 2021-04-28 2022-11-03 国立大学法人 東京医科歯科大学 細胞の製造方法
JPWO2022230977A1 (ru) 2021-04-30 2022-11-03
WO2022236187A1 (en) 2021-05-07 2022-11-10 Children's Hospital Los Angeles Methods for making stem cell-derived enteric neural crest cells and their use in enteric neuropathy treatment
WO2022251443A1 (en) 2021-05-26 2022-12-01 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Methods to prevent rapid silencing of genes in pluripotent stem cells
JP2024520424A (ja) 2021-05-28 2024-05-24 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 黄斑、中心および末梢網膜色素上皮細胞を生成する方法
WO2022251477A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Biodegradable tissue scaffold with secondary matrix to host weakly adherent cells
WO2022258511A1 (en) 2021-06-07 2022-12-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for generating highly functional hepatocytes by differentiating hepatoblasts
JPWO2022259721A1 (ru) 2021-06-10 2022-12-15
EP4352214A1 (en) 2021-06-11 2024-04-17 Bayer AG Type v rna programmable endonuclease systems
EP4101928A1 (en) 2021-06-11 2022-12-14 Bayer AG Type v rna programmable endonuclease systems
AR126145A1 (es) 2021-06-15 2023-09-13 Takeda Pharmaceuticals Co Método para producir linfocitos citolíticos naturales a partir de células madre pluripotentes
WO2023277195A1 (ja) 2021-06-29 2023-01-05 国立大学法人佐賀大学 ｉＰＳ細胞由来軟骨細胞構造体の製造方法
WO2023286832A1 (ja) 2021-07-15 2023-01-19 アステラス製薬株式会社 血管内皮増殖因子（ｖｅｇｆ）高発現ペリサイト様細胞の製造方法
US20240335480A1 (en) 2021-07-15 2024-10-10 Astellas Pharma Inc. Vascular endothelial growth factor (vegf)-highly expressing pericyte-like cell
EP4374914A1 (en) 2021-07-21 2024-05-29 Kyoto University Method for producing retinal tissue
US20240318142A1 (en) 2021-08-11 2024-09-26 Kyoto University Method for producing renal interstitial progenitor cells, erythropoietin-producing cells, and method for producing renin-producing cells
EP4144841A1 (en) 2021-09-07 2023-03-08 Bayer AG Novel small rna programmable endonuclease systems with impoved pam specificity and uses thereof
US20230078230A1 (en) 2021-09-13 2023-03-16 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Methods for the production of committed cardiac progenitor cells
CN118056007A (zh) 2021-09-27 2024-05-17 国立大学法人京都大学 用于生产t细胞的方法
WO2023053220A1 (ja) 2021-09-28 2023-04-06 公益財団法人京都大学ｉＰＳ細胞研究財団 多能性幹細胞の製造方法
CA3235105A1 (en) 2021-10-20 2023-04-27 Steven A. Goldman Humanized chimeras for the prospective assessment of glial cell addition or replacement therapy
EP4419119A1 (en) 2021-10-20 2024-08-28 University of Rochester Isolated glial progenitor cells for use in the competition treatment of age-related white matter loss
US20230226116A1 (en) 2021-10-20 2023-07-20 University Of Rochester Method for rejuvenating glial progenitor cells and rejuvenated glial progenitor cells per se
CA3234231A1 (en) 2021-10-21 2023-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hypoimmune cells
IL311636A (en) 2021-11-01 2024-05-01 Vertex Pharma Differentiation of stem cell-derived pancreatic islets
US20230270818A1 (en) 2021-11-02 2023-08-31 University Of Rochester Tcf7l2 mediated remyelination in the brain
EP4431605A1 (en) 2021-11-11 2024-09-18 Healios K.K. Gene-modified pluripotent stem cell, immunocompetent cell derived therefrom, method for producing said cells, and use thereof
WO2023085433A1 (ja) 2021-11-15 2023-05-19 国立大学法人鳥取大学 ヒト細胞内でヒト人工染色体ベクターを作製する方法
KR20240099271A (ko) 2021-11-16 2024-06-28 각코 호진 도쿄 약카 다이가쿠 프로모터 활성화 서열, 그 프로모터 활성화 서열을 포함하는 발현 벡터, 및 그 발현 벡터를 포함하는 포유 동물 세포
JPWO2023090361A1 (ru) 2021-11-16 2023-05-25
WO2023118068A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Bayer Aktiengesellschaft Novel small type v rna programmable endonuclease systems
WO2023150557A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 University Of Rochester Methods of generating a population of neurons from human glial progenitor cells and genetic constructs for carrying out such methods
JPWO2023149555A1 (ru) 2022-02-04 2023-08-10
JPWO2023153464A1 (ru) 2022-02-09 2023-08-17
WO2023157727A1 (ja) 2022-02-15 2023-08-24 国立大学法人神戸大学 ヒト多能性幹細胞由来ライディッヒ様細胞の作製方法及びヒト多能性幹細胞由来ライディッヒ様細胞集団
JP7315184B2 (ja) 2022-02-16 2023-07-26 株式会社コーセー 多能性幹細胞から表皮角化細胞への分化誘導方法
WO2023167986A1 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Lineage Cell Therapeutics, Inc. Methods and compositions for treating hearing loss
WO2023172514A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Catamaran Bio, Inc. Engineered immune cell therapeutics targeted to her2 and methods of use thereof
WO2023171808A1 (ja) 2022-03-11 2023-09-14 慶應義塾 脊髄損傷治療剤
WO2023211857A1 (en) 2022-04-25 2023-11-02 Lineage Cell Therapeutics, Inc. Methods and compositions for treating vision loss
WO2023215455A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 University Of Rochester Dual macroglial-microglial approach towards therapeutic cell replacement in neurodegenerative and neuropsychiatric disease
WO2023237587A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Bayer Aktiengesellschaft Novel small type v rna programmable endonuclease systems
WO2023247532A1 (en) 2022-06-21 2023-12-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale A method for producing a bioengineered mammal induced pluripotent stem cell-derived cardiac organoid
US20240003871A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Ipsc-derived astrocytes and methods of use thereof
EP4338745A1 (en) 2022-09-14 2024-03-20 Technische Universität Dresden Allogeneic human macrophages for cell therapy
WO2024073776A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Methods for the production of cardiac fibroblasts
WO2024129743A2 (en) 2022-12-13 2024-06-20 Bluerock Therapeutics Lp Engineered type v rna programmable endonucleases and their uses
WO2024163747A2 (en) 2023-02-02 2024-08-08 University Of Rochester Competitive replacement of glial cells
WO2024167814A1 (en) 2023-02-06 2024-08-15 Bluerock Therapeutics Lp Degron fusion proteins and methods of production and use thereof
WO2024192329A1 (en) 2023-03-16 2024-09-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for producing stable human chondroctyes and their use for promoting cartillage growth and repair

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002097090A1 (en) * 2001-05-31 2002-12-05 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. Genes with es cell-specific expression
JP2004161682A (ja) * 2002-11-13 2004-06-10 Univ Kinki 体細胞核初期化因子
WO2005080598A1 (ja) * 2004-02-19 2005-09-01 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 体細胞核初期化物質のスクリーニング方法

Family Cites Families (154)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US70292A (en) * 1867-10-29 Petess
US4650761A (en) * 1981-11-27 1987-03-17 Eli Lilly And Company Method for stabilizing and selecting recombinant DNA containing host cell
US4650764A (en) 1983-04-12 1987-03-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Helper cell
US4861719A (en) * 1986-04-25 1989-08-29 Fred Hutchinson Cancer Research Center DNA constructs for retrovirus packaging cell lines
US4937190A (en) * 1987-10-15 1990-06-26 Wisconsin Alumni Research Foundation Translation enhancer
US5192553A (en) * 1987-11-12 1993-03-09 Biocyte Corporation Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood and methods of therapeutic use
US6140111A (en) * 1987-12-11 2000-10-31 Whitehead Institute For Biomedical Research Retroviral gene therapy vectors and therapeutic methods based thereon
US5591624A (en) * 1988-03-21 1997-01-07 Chiron Viagene, Inc. Retroviral packaging cell lines
US7070994B2 (en) * 1988-03-21 2006-07-04 Oxford Biomedica (Uk) Ltd. Packaging cells
JP2886547B2 (ja) 1988-07-26 1999-04-26 協和醗酵工業株式会社 ノイラミニダーゼの製造法
CA1339354C (en) * 1988-09-01 1997-08-26 The Whitehead Institute For Biomedical Research Recombinant retroviruses with amphotropic and ecotropic host ranges
US5266491A (en) * 1989-03-14 1993-11-30 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. DNA fragment and expression plasmid containing the DNA fragment
JP3051411B2 (ja) * 1989-03-14 2000-06-12 持田製薬株式会社 新規ｄｎａならびにそれを含有する発現プラスミド
JP2897295B2 (ja) * 1989-12-14 1999-05-31 味の素株式会社 レトロウィルス高生産用ｄｎａ構築物及びレトロウィルス高生産用細胞株
US5652122A (en) * 1989-12-21 1997-07-29 Frankel; Alan Nucleic acids encoding and methods of making tat-derived transport polypeptides
US5817491A (en) * 1990-09-21 1998-10-06 The Regents Of The University Of California VSV G pseusdotyped retroviral vectors
US5288514A (en) * 1992-09-14 1994-02-22 The Regents Of The University Of California Solid phase and combinatorial synthesis of benzodiazepine compounds on a solid support
US5834256A (en) * 1993-06-11 1998-11-10 Cell Genesys, Inc. Method for production of high titer virus and high efficiency retroviral mediated transduction of mammalian cells
FR2707091B1 (fr) 1993-06-30 1997-04-04 Cohen Haguenauer Odile Vecteur rétroviral pour le transfert et l'expression de gènes dans des cellules eucaryotes.
US5534423A (en) 1993-10-08 1996-07-09 Regents Of The University Of Michigan Methods of increasing rates of infection by directing motion of vectors
US5519134A (en) * 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US6013517A (en) * 1994-05-09 2000-01-11 Chiron Corporation Crossless retroviral vectors
US5525735A (en) * 1994-06-22 1996-06-11 Affymax Technologies Nv Methods for synthesizing diverse collections of pyrrolidine compounds
US5549974A (en) * 1994-06-23 1996-08-27 Affymax Technologies Nv Methods for the solid phase synthesis of thiazolidinones, metathiazanones, and derivatives thereof
PT787200E (pt) * 1994-10-28 2005-08-31 Univ Pennsylvania Adenovirus melhorado e metodos para a sua utilizacao
US5843780A (en) * 1995-01-20 1998-12-01 Wisconsin Alumni Research Foundation Primate embryonic stem cells
US5637456A (en) * 1995-02-17 1997-06-10 The University Of Texas, Board Of Regents Rapid test for determining the amount of functionally inactive gene in a gene therapy vector preparation
US5707618A (en) * 1995-03-24 1998-01-13 Genzyme Corporation Adenovirus vectors for gene therapy
US5830725A (en) * 1995-04-28 1998-11-03 The Board Of Trustees For The Leland Stanford Junior University Rapid, stable high-titre production of recombing retrovirus
US5744320A (en) * 1995-06-07 1998-04-28 Promega Corporation Quenching reagents and assays for enzyme-mediated luminescence
JPH11510386A (ja) 1995-07-28 1999-09-14 マリー キュリー キャンサー ケア 輸送蛋白質およびそれらの使用
DK0866796T3 (da) * 1995-09-22 2001-03-05 Amersham Pharm Biotech Uk Ltd Forbedringer ved eller i forbindelse med mutagenese af nukleinsyrer
US5910434A (en) * 1995-12-15 1999-06-08 Systemix, Inc. Method for obtaining retroviral packaging cell lines producing high transducing efficiency retroviral supernatant
FR2751345B1 (fr) * 1996-07-16 1998-09-18 Univ Paris Curie Lignees d'encapsidation hautement productrices
US6255071B1 (en) * 1996-09-20 2001-07-03 Cold Spring Harbor Laboratory Mammalian viral vectors and their uses
US6025192A (en) * 1996-09-20 2000-02-15 Cold Spring Harbor Laboratory Modified retroviral vectors
US6017735A (en) * 1997-01-23 2000-01-25 Marie Curie Cancer Care Materials and methods for intracellular transport and their uses
US6416959B1 (en) * 1997-02-27 2002-07-09 Kenneth Giuliano System for cell-based screening
WO1999010536A1 (en) * 1997-08-22 1999-03-04 Yale University A process to study changes in gene expression in granulocytic cells
JPH11115328A (ja) * 1997-10-16 1999-04-27 Dainippon Printing Co Ltd 熱転写受像シート及びその製造方法
US6835567B1 (en) * 1998-04-14 2004-12-28 Signal Pharmaceuticals, Inc. PNS cell lines and methods of use therefor
US20020174013A1 (en) 1998-04-17 2002-11-21 Viztec Inc., A Florida Corporation Chip card advertising method and system
WO1999061643A1 (en) * 1998-05-27 1999-12-02 University Of Florida Method of preparing recombinant adeno-associated virus compositions by using an iodixananol gradient
KR20000006334A (ko) * 1998-06-26 2000-01-25 이선경 바이러스코딩염기서열이전혀없는고효율레트로바이러스벡터
US6485959B1 (en) 1998-10-07 2002-11-26 Cedars Sinai Medical Center Cell preconditioning and cryopresevation medium
AU6339399A (en) 1998-10-16 2000-05-08 Novartis Ag Promotion of self-renewal and improved gene transduction of hematopoietic stem cells by histone deacetylase inhibitors
US6667176B1 (en) 2000-01-11 2003-12-23 Geron Corporation cDNA libraries reflecting gene expression during growth and differentiation of human pluripotent stem cells
CA2349415A1 (en) * 1998-11-09 2000-05-18 Monash University Embryonic stem cells
US6376246B1 (en) * 1999-02-05 2002-04-23 Maxygen, Inc. Oligonucleotide mediated nucleic acid recombination
US6153432A (en) * 1999-01-29 2000-11-28 Zen-Bio, Inc Methods for the differentiation of human preadipocytes into adipocytes
US6312949B1 (en) 1999-03-26 2001-11-06 The Salk Institute For Biological Studies Regulation of tyrosine hydroxylase expression
US6773920B1 (en) * 1999-03-31 2004-08-10 Invitrogen Corporation Delivery of functional protein sequences by translocating polypeptides
EP1186655B1 (en) * 1999-06-01 2008-04-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Packaging cell
US7015037B1 (en) * 1999-08-05 2006-03-21 Regents Of The University Of Minnesota Multiponent adult stem cells and methods for isolation
AU7473500A (en) * 1999-09-01 2001-03-26 University Of Pittsburgh Identification of peptides that facilitate uptake and cytoplasmic and/or nucleartransport of proteins, dna and viruses
WO2001021767A2 (en) 1999-09-24 2001-03-29 Morphogen Pharmaceuticals, Inc. Pluripotent embryonic-like stem cells, compositions, methods and uses thereof
US20030161817A1 (en) * 2001-03-28 2003-08-28 Young Henry E. Pluripotent embryonic-like stem cells, compositions, methods and uses thereof
US6280718B1 (en) 1999-11-08 2001-08-28 Wisconsin Alumni Reasearch Foundation Hematopoietic differentiation of human pluripotent embryonic stem cells
US7544509B2 (en) * 2000-01-24 2009-06-09 Mcgill University Method for preparing stem cell preparations
US6395546B1 (en) 2000-02-01 2002-05-28 Neurogeneration, Inc. Generation of dopaminergic neurons from human nervous system stem cells
US7439064B2 (en) * 2000-03-09 2008-10-21 Wicell Research Institute, Inc. Cultivation of human embryonic stem cells in the absence of feeder cells or without conditioned medium
US6458589B1 (en) 2000-04-27 2002-10-01 Geron Corporation Hepatocyte lineage cells derived from pluripotent stem cells
EP1287116A2 (en) 2000-05-17 2003-03-05 Geron Corporation Neural progenitor cell populations
WO2001096532A2 (en) * 2000-06-15 2001-12-20 Tanja Dominko Method of generating pluripotent mammalian cells by fusion of a cytoplast fragment with a karyoplast
DE10031179A1 (de) 2000-06-27 2002-01-31 Amaxa Gmbh Verfahren zur Einbringung von Nukleinsäuren und anderen biologisch aktiven Molekülen in den Kern höherer eukaryontischer Zellen mit Hilfe elektrischen Stroms
AU2001280767A1 (en) * 2000-07-31 2002-02-13 Active Motif Peptide-mediated delivery of molecules into cells
JP2002065261A (ja) 2000-08-30 2002-03-05 Mitsubishi Kasei Institute Of Life Sciences 生殖細胞の取得方法
ATE324321T1 (de) * 2000-08-31 2006-05-15 Edwin Lundgren Steuervorrichtung für einen lenkdrachen an einem boot
CA2430653A1 (en) 2000-11-27 2002-08-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University In Jerusalem Transfection of human embryonic stem cells
US20080268054A1 (en) 2000-12-04 2008-10-30 Eugene Bell Dermal derived human stem cells and compositions and methods thereof
EP1373474A2 (en) 2001-01-02 2004-01-02 Stemron, Inc. A method for producing a population of homozygous stem cells having a pre-selected immunophenotype and/or genotype
CA2434281A1 (en) * 2001-01-31 2002-08-08 Interface Biotech A/S An improved in vitro method of culturing mammalian cells for autologous cell implantation/transplantation methods
JP2003009854A (ja) 2001-04-09 2003-01-14 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd エンブリオイドボディ形成方法及びその用途
DE10119901A1 (de) 2001-04-23 2002-10-24 Amaxa Gmbh Schaltungsanordnung zur Einbringung von Nukleinsäuren und anderen biologisch aktiven Molekülen in den Kern höherer eukaryontischer Zellen mit Hilfe elektrischen Stroms
CN1302115C (zh) 2001-04-23 2007-02-28 埃麦克萨有限公司 电穿孔用缓冲溶液及上述溶液的使用方法
US20030044976A1 (en) 2001-08-27 2003-03-06 Advanced Cell Technology De-differentiation and re-differentiation of somatic cells and production of cells for cell therapies
JPWO2003027281A1 (ja) * 2001-09-20 2005-01-06 協和醗酵工業株式会社 骨格筋間質由来多分化能幹細胞
JP2004248505A (ja) 2001-09-21 2004-09-09 Norio Nakatsuji 移植抗原の一部または全てを欠除したｅｓ細胞由来の未分化な体細胞融合細胞およびその製造
AU2002330465B2 (en) 2001-09-21 2006-07-27 Kyoto University Screening method for a reprogramming agent, reprogramming agent screened by the method, method for using the reprogramming agent, method for differentiating an undifferentiated fusion cell, and production method of cells, tissues and organs.
US7588937B2 (en) * 2001-10-03 2009-09-15 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of in vitro differentiation of neural stem cells, motor neurons and dopamine neurons from primate embryonic stem cells
DE10162080A1 (de) * 2001-12-10 2003-06-26 Albrecht Mueller Verfahren zur Herstellung von Stammzellen mit erhöhtem Entwicklungspotential
CA2470707C (en) * 2001-12-21 2014-07-08 Mount Sinai Hospital Cellular compositions and methods of making and using them
NZ534428A (en) * 2002-01-31 2006-12-22 Asahi Techno Glass Corp A cryopreservation method for primate embryonic stem cells using a cryopreservation medium comprising a cryoprotectant at a concentration of from 12% (w/v) to 50% (w/v)
CA2476553A1 (en) * 2002-02-13 2003-08-21 Anthrogenesis Corporation Embryonic-like stem cells derived from post-partum mammalian placenta and uses and methods of treatment using said cells
ES2198216B1 (es) * 2002-07-02 2005-04-16 Juan Carlos Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A.(67%). Medio de cultivo de celulas madre-progenitoras autologas humanas y sus aplicaciones.
US7422736B2 (en) 2002-07-26 2008-09-09 Food Industry Research And Development Institute Somatic pluripotent cells
US20040048297A1 (en) * 2002-07-30 2004-03-11 Gene Logic, Inc. Nucleic acid detection assay control genes
AU2003901099A0 (en) 2003-03-11 2003-03-27 Es Cell International Pte Ltd. Methods of inducing differentiation of stem cells
KR100975254B1 (ko) * 2003-03-25 2010-08-11 도쿠리쓰교세이호징 가가쿠 기주쓰 신코 기코 줄기 세포의 분화 유도 및 분화능의 제어
CN1536076A (zh) * 2003-04-09 2004-10-13 中国人民解放军军事医学科学院野战输 成年人骨髓间充质干细胞体外扩增和定向诱导分化为心肌样细胞的方法
US9567591B2 (en) 2003-05-15 2017-02-14 Mello Biotechnology, Inc. Generation of human embryonic stem-like cells using intronic RNA
JPWO2004101775A1 (ja) * 2003-05-16 2006-07-13 協和醗酵工業株式会社 新規な成体組織由来の幹細胞およびその用途
US20050019801A1 (en) * 2003-06-04 2005-01-27 Curis, Inc. Stem cell-based methods for identifying and characterizing agents
FR2859219B1 (fr) * 2003-09-02 2005-10-14 Alain Privat Procede de production de neurones a partir de cellules d'une lignee cellulaire
JP2005095027A (ja) 2003-09-22 2005-04-14 Reprocell Inc 細胞の未分化状態マーカープロモーターおよびその利用
AU2004280066A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Genomically modified cell
ES2398239T3 (es) 2003-11-10 2013-03-14 The Scripps Research Institute Composiciones y procedimientos para inducir la desdiferenciación celular
US7682828B2 (en) 2003-11-26 2010-03-23 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods for reprogramming somatic cells
CA2549158A1 (en) 2003-12-01 2005-06-16 Technion Research And Development Foundation Ltd. Methods of generating stem cells and embryonic bodies carrying disease-causing mutations and methods of using same for studying genetic disorders
US20050233446A1 (en) * 2003-12-31 2005-10-20 Parsons Xuejun H Defined media for stem cell culture
WO2005090557A1 (ja) 2004-03-23 2005-09-29 Daiichi Asubio Pharma Co., Ltd. 多能性幹細胞の増殖方法
CA2561690A1 (en) * 2004-03-30 2005-10-27 Kyoto University Process for producing multipotential stem cell originating in testoid cell
US8012747B2 (en) * 2004-06-01 2011-09-06 San Diego State University Foundation Expression system
US20070202592A1 (en) * 2004-07-08 2007-08-30 Yasuo Kitagawa Pluripotent Cells Distributed Ubiquitously In Animal Tissue, Which Proliferate Selectively In Lower-Serum Culture
WO2006084229A2 (en) 2004-07-15 2006-08-10 Primegen Biotech, Llc Use of nuclear material to therapeutically reprogram differentiated cells
WO2006017476A2 (en) * 2004-08-02 2006-02-16 The Research Foundation Of State University Of New York Amino functionalized ormosil nanoparticles as delivery vehicles
JPWO2006035741A1 (ja) 2004-09-29 2008-05-15 伸弥 山中 Ｅｓ細胞特異的発現遺伝子及びその利用
US20060095319A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-04 Cardwell Carlzo B Marketing and compensation method
US20060182724A1 (en) 2005-02-15 2006-08-17 Riordan Neil H Method for expansion of stem cells
US20080085555A1 (en) * 2005-02-28 2008-04-10 Takayuki Asahara Method For In Vitro Amplification Of Adult Stem Cells
US20070033061A1 (en) * 2005-04-05 2007-02-08 Achaogen, Inc. Business methods for commercializing antimicrobial and cytotoxic compounds
WO2007026255A2 (en) 2005-06-22 2007-03-08 Universitetet I Oslo Dedifferentiated cells and methods of making and using dedifferentiated cells
CA2617611A1 (en) * 2005-08-01 2007-02-08 Nupotential, Llc Production of reprogrammed cells with restored potential
WO2007054720A1 (en) 2005-11-11 2007-05-18 The University Court Of University Of Edinburgh Reprogramming and genetic modification of cells
US8048999B2 (en) 2005-12-13 2011-11-01 Kyoto University Nuclear reprogramming factor
US20090227032A1 (en) * 2005-12-13 2009-09-10 Kyoto University Nuclear reprogramming factor and induced pluripotent stem cells
US8129187B2 (en) * 2005-12-13 2012-03-06 Kyoto University Somatic cell reprogramming by retroviral vectors encoding Oct3/4. Klf4, c-Myc and Sox2
US8278104B2 (en) * 2005-12-13 2012-10-02 Kyoto University Induced pluripotent stem cells produced with Oct3/4, Klf4 and Sox2
CN101389761A (zh) 2006-02-27 2009-03-18 银怎株式会社 使用bmi-1使星形胶质细胞去分化成为神经干细胞
US20090252711A1 (en) 2006-05-11 2009-10-08 Andrew Craig Boquest Stem Cells And Methods Of Making And Using Stem Cells
WO2008030610A2 (en) 2006-09-08 2008-03-13 Michigan State University Human transcriptome corresponding to human oocytes and use of said genes or the corresponding polypeptides to trans-differentiate somatic cells
JP2008099662A (ja) 2006-09-22 2008-05-01 Institute Of Physical & Chemical Research 幹細胞の培養方法
US20080132803A1 (en) * 2006-11-30 2008-06-05 Hyman Friedlander Method and system for doing business by mining the placental-chord complex
JP5419279B2 (ja) 2007-01-17 2014-02-19 ウィスコンシン アラムニ リサーチ ファンデーション 改良された幹細胞の培養
WO2008105630A1 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Procell Therapeutics Inc. Combined use of cell permeable nanog and oct4 for increasing self-renewal and suppressing differentiation of stem cells
WO2008105566A1 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Korea Stem Cell Bank System for providing stem cell services using internet and method thereof
CN101743306A (zh) 2007-03-23 2010-06-16 威斯康星校友研究基金会 体细胞重编程
JP2010523117A (ja) 2007-04-07 2010-07-15 ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ 体細胞の再プログラミング
ES2612538T3 (es) 2007-05-29 2017-05-17 Christopher B. Reid Métodos para producción y usos de poblaciones de células multipotentes, poblaciones de células pluripotentes, poblaciones de células diferenciadas, y poblaciones de células resistentes a VIH
JP2010528622A (ja) 2007-05-30 2010-08-26 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 体細胞から多能性細胞を生成する方法
JP2008307007A (ja) 2007-06-15 2008-12-25 Bayer Schering Pharma Ag 出生後のヒト組織由来未分化幹細胞から誘導したヒト多能性幹細胞
US9213999B2 (en) 2007-06-15 2015-12-15 Kyoto University Providing iPSCs to a customer
WO2009032456A2 (en) 2007-08-01 2009-03-12 Primegen Biotech Llc Non-viral delivery of transcription factors that reprogram human somatic cells into a stem cell-like state
US20090191160A1 (en) 2007-08-10 2009-07-30 University Of Dayton Methods of producing pluripotent stem-like cells
RU2492232C2 (ru) 2007-08-31 2013-09-10 Уайтхэд Инститьют Фор Байомедикал Рисерч СТИМУЛЯЦИЯ ПУТИ Wnt ПРИ ПЕРЕПРОГРАММИРОВАНИИ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК
CA2660123C (en) 2007-10-31 2017-05-09 Kyoto University Nuclear reprogramming method
US20110151447A1 (en) 2007-11-06 2011-06-23 Children's Medical Center Corporation Method to produce induced pluripotent stem (ips) cells from non-embryonic human cells
WO2009067563A1 (en) 2007-11-19 2009-05-28 The Regents Of The University Of California Generation of pluripotent cells from fibroblasts
WO2009075119A1 (ja) * 2007-12-10 2009-06-18 Kyoto University 効率的な核初期化方法
US9683232B2 (en) * 2007-12-10 2017-06-20 Kyoto University Efficient method for nuclear reprogramming
US20090191171A1 (en) * 2008-01-18 2009-07-30 Yupo Ma Reprogramming of Differentiated Progenitor or Somatic Cells Using Homologous Recombination
KR101481164B1 (ko) 2008-01-30 2015-01-09 주식회사 미래셀바이오 체세포 유래 다능성 줄기세포의 제조 방법
US20110014164A1 (en) 2008-02-15 2011-01-20 President And Fellows Of Harvard College Efficient induction of pluripotent stem cells using small molecule compounds
JP2011516042A (ja) 2008-03-17 2011-05-26 へルムホルツ・ツェントルム・ミュンヘン−ドイチェス・フォルシュングスツェントルム・ヒューア・ゲズントハイト・ウント・ウムヴェルト（ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング） 部位特異的組み換えを用いて無ベクター誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞を作製するベクターおよびその方法
WO2009117439A2 (en) * 2008-03-17 2009-09-24 The Scripps Research Institute Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells
CN101250502A (zh) 2008-04-01 2008-08-27 中国科学院上海生命科学研究院 一种诱导的多潜能干细胞的制备方法
CN101550406B (zh) * 2008-04-03 2016-02-10 北京大学 制备多潜能干细胞的方法,试剂盒及用途
US20100021437A1 (en) * 2008-04-07 2010-01-28 The McLean Hospital Corporation Whitehead Institute for Biomedical Research Neural stem cells derived from induced pluripotent stem cells
CN101855350B (zh) 2008-05-02 2014-12-31 国立大学法人京都大学 核重编程序方法
EP2128245A1 (en) 2008-05-27 2009-12-02 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Generation of induced pluripotent stem (iPS) cells
CA2954948A1 (en) * 2008-06-04 2009-12-10 Cellular Dynamics International, Inc. Methods for the production of ips cells using non-viral approach
AU2008360135A1 (en) 2008-07-31 2010-02-04 Gifu University Efficient method for establishing induced pluripotent stem cells
US20100062534A1 (en) * 2008-09-09 2010-03-11 The General Hospital Corporation Inducible lentiviral vectors for reprogramming somatic cells
DK3450545T5 (da) * 2008-10-24 2024-09-09 Wisconsin Alumni Res Found Pluripotente stamceller opnået ved ikke-viral omprogrammering

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002097090A1 (en) * 2001-05-31 2002-12-05 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. Genes with es cell-specific expression
JP2004161682A (ja) * 2002-11-13 2004-06-10 Univ Kinki 体細胞核初期化因子
WO2005080598A1 (ja) * 2004-02-19 2005-09-01 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 体細胞核初期化物質のスクリーニング方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Shin'ya YAMANAKA et al., "Mouse Sen'i Gasaibo Kara Yudo Tanosei Kansaibo о Tsukuru Tanpakushitsu Kakusan Koso", 01 December, 2006 (01.12.06), vol. 51, No.15, pages 2346 to 2351 *
TAKAHASHI, K. et al., Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors, Cell, 2006, vol. 126, No. 4, p. 663-76 *
TOKUZAWA,Y. et al., Fbx15 is a novel target of Oct3/4 but is dispensable for embryonic stem cell self-renewal and mouse development, Mol. Cell Biol, 2003, vol. 23, No. 8, p. 2699-708 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103773804A (zh) 2014-05-07
EP1970446A4 (en) 2009-04-08
CA2632142C (en) 2013-08-06
CN101356270B (zh) 2014-02-12
BRPI0619794B1 (pt) 2020-09-15
CN101356270A (zh) 2009-01-28
EP2208786B1 (en) 2018-08-01
CN103113463A (zh) 2013-05-22
CN101864392B (zh) 2016-03-23
HK1125967A1 (en) 2009-08-21
EA014166B1 (ru) 2010-10-29
US8048999B2 (en) 2011-11-01
EP2206724A1 (en) 2010-07-14
MX2008007654A (es) 2008-09-26
EP3418297A1 (en) 2018-12-26
EP2208786A1 (en) 2010-07-21
CN101864392A (zh) 2010-10-20
PT1970446E (pt) 2011-09-01
EP4223769A2 (en) 2023-08-09
EP1970446B1 (en) 2011-08-03
JP4411363B2 (ja) 2010-02-10
IL191903A0 (en) 2008-12-29
BRPI0619794B8 (pt) 2022-06-14
EA200870046A1 (ru) 2009-12-30
AU2006325975B2 (en) 2011-12-08
JP2008283972A (ja) 2008-11-27
JPWO2007069666A1 (ja) 2009-05-21
AU2006325975A1 (en) 2007-06-21
JP4411362B2 (ja) 2010-02-10
JP5943324B2 (ja) 2016-07-05
JP5098028B2 (ja) 2012-12-12
EP2206778B1 (en) 2018-08-01
KR20080095852A (ko) 2008-10-29
JP4183742B1 (ja) 2008-11-19
KR101420740B1 (ko) 2014-07-17
JP5248371B2 (ja) 2013-07-31
ES2367525T3 (es) 2011-11-04
EP4223769A3 (en) 2023-11-01
JP2009165478A (ja) 2009-07-30
JP5603282B2 (ja) 2014-10-08
IL191903A (en) 2011-11-30
JP2009165479A (ja) 2009-07-30
JP2011188860A (ja) 2011-09-29
EP1970446A1 (en) 2008-09-17
DK1970446T3 (da) 2011-10-24
ZA200804673B (en) 2009-11-25
HK1125131A1 (en) 2009-07-31
CN103113463B (zh) 2015-02-18
EP2206778A1 (en) 2010-07-14
JP2009165481A (ja) 2009-07-30
EP3418297B1 (en) 2023-04-05
NZ569530A (en) 2011-07-29
JP2014000083A (ja) 2014-01-09
MX352337B (es) 2017-11-21
WO2007069666A1 (ja) 2007-06-21
JP5467223B2 (ja) 2014-04-09
BRPI0619794A2 (pt) 2011-10-18
CA2632142A1 (en) 2007-06-21
JP2009165480A (ja) 2009-07-30
EA201000858A1 (ru) 2011-02-28
US20090068742A1 (en) 2009-03-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA018039B1 (ru) Ядерный фактор перепрограммирования
JP7078673B2 (ja) 条件的に不死化された長期幹細胞ならびにそのような細胞を作製する方法および使用する方法。
JP6934501B2 (ja) 体細胞の再プログラミング
WO2009096049A1 (ja) 人工多能性幹細胞由来分化細胞
US20220143102A1 (en) Methods for enhancing lifespan and/or treating cellular proliferative disorders by transplantation
KR102117894B1 (ko) 교차분화세포의 만능성 상태 경유 확인방법

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KG MD TJ TM