JP7280574B2 - 細胞培養器 - Google Patents
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Description
D=2(s/π)1/2 (1)
ここで、Dは直径、Sは面積を表す。
図17及び図18に示すように、半透膜110(旭化成株式会社又はSPECTRUM)を、培養側プレート21及び培地側プレート22で挟み、さらに、半透膜110、培養側プレート21及び培地側プレート22を、培養槽30及び培地保持槽40で挟み込んだ。
実施例1と同様にゲル培地を作製した。ゲル培地にシングルセルにされたiPS細胞を添加した。15mLファルコンチューブ(Falcon)にiPS細胞を含むゲル培地を入れた。その後、ファルコンチューブのキャップを固く締めた。
実施例1と同様に細胞含有培地を調製した。また、図2に示した細胞培養器と同様の細胞培養器を用意した。培養槽30内の空気層が完全になくなるまで、培養槽30内に細胞含有培地を注入した。その後、培養槽30の供給口及び排出口を遮蔽した。また、培地保持槽40、培地流路200、及び培地タンク60をゲル培地で充填した。その後、培地タンク60の導入口及び排出口を遮蔽した。これにより、培養槽30及び培地保持槽40内部を密閉し、培養槽30及び培地保持槽40の内部と外部とで、ガス交換が完全に生じないようにした。
増殖因子を培地(StemSpan H3000、登録商標、STEMCELL Technologies Inc.)に添加し、さらに培地に脱アシル化ゲランガムを添加して、ゲル培地を用意した。
Claims (34)
- 培養成分が透過可能な培養成分透過部材と、
前記培養成分透過部材の一方の面を覆う、細胞含有培地を保持し、細胞を培養するための培養槽と、
前記培養成分透過部材の他方の面を覆う、培地を保持するための培地保持槽と、
前記培地保持槽に接続された培地流路と、
を備える細胞培養器であって、
前記培養槽に細胞を供給するための培養槽供給口と、細胞を排出するための培養槽排出口と、が設けられており、
前記培地流路が、密閉可能な培地流路であって、
前記培地流路内に流体を供給するための流路供給口と、前記培地流路内の流体を排出するための流路排出口と、が、前記培地流路に設けられており、
前記流路供給口及び前記流路排出口が密閉可能であり、
前記培地流路に設けられた、前記流体を移動させるための流体機械と、
前記培地流路及び前記流体機械が配置される培地流路用外気遮断部材と、
を備え、
前記培地流路及び前記流体機械のポンプヘッドが、前記培地流路用外気遮断部材内に配置され、
前記流体機械の前記ポンプヘッドに接続される駆動部が、前記培地流路用外気遮断部材外に配置される、
細胞培養器。 - 前記流路供給口に流体を供給するための供給器が着脱可能である、請求項1に記載の細胞培養器。
- 前記供給器が供給用ニードルレスコネクターを介して前記流路供給口に接続される、請求項2に記載の細胞培養器。
- 前記流路排出口に流体を排出するための排出器が着脱可能である、請求項1から3のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記排出器が排出用ニードルレスコネクターを介して前記流路排出口に接続される、請求項4に記載の細胞培養器。
- 前記流路供給口に流体を供給するための供給器が着脱可能であり、
前記流路排出口に流体を排出するための排出器が着脱可能であり、
前記供給器から前記培地流路内に流体を供給すると、前記培地流路内の流体が前記排出器内に移動する、
請求項1に記載の細胞培養器。 - 前記流路供給口に流体を供給するための供給器が着脱可能であり、
前記流路排出口に流体を排出するための排出器が着脱可能であり、
前記流体機械が駆動されると、前記供給器から前記培地流路に流体を供給され、前記培地流路内の流体が前記排出器内に移動する、
請求項1に記載の細胞培養器。 - 前記供給器から前記培地流路内に培地を供給すると、前記培地流路内の空気が前記排出器内に移動する、請求項6又は7に記載の細胞培養器。
- 前記供給器から前記培地流路内に培地を供給すると、前記培地流路内の培地が前記排出器内に移動する、請求項6又は7に記載の細胞培養器。
- 前記供給器から前記培地流路内に流体を供給する際に、外気が前記培地流路内に進入しない、請求項2、3、6及び7のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路が密閉された状態で、前記培地流路内に外気が進入しない、請求項1から10のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路が密閉された状態で、前記培地流路内に、前記培地流路外の細胞、微生物、ウイルス、及び塵が進入しない、請求項1から11のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路が密閉された状態で、前記培地流路内の物質が、前記培地流路外に流出しない、請求項1から12のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路が密閉された状態で、前記培地流路の内外で気体の交換が生じない、請求項1から13のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路が密閉された状態で、前記培地流路内に、二酸化炭素ガス、窒素ガス、及び酸素ガスの少なくともいずれかが供給されない、請求項1から14のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路内の培地のpHが所定の範囲内に保たれる、請求項1から15のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路が、ガス非透過性物質に埋め込まれている、請求項1から16のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路の少なくとも一部が、ガス非透過性物質からなる部材中に設けられた孔である、請求項1から17のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記流体機械が流体機械用外気遮断部材で外気から遮断されている、請求項1から18のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記ポンプヘッドと前記駆動部が着脱可能である、請求項1から19のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記駆動部が駆動部保持部材に保持され、
前記培地流路用外気遮断部材と前記駆動部保持部材が着脱可能である、請求項1から20のいずれか1項に記載の細胞培養器。 - 前記駆動部保持部材が前記培地流路用外気遮断部材から外された際に、前記培地流路用外気遮断部材の内外で気体の交換が生じない、請求項21に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路と前記培地保持槽内を培地が循環可能である、請求項1から22のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 前記培地流路が、前記培地保持槽と接続されることにより、前記培地流路の内部が密閉される、請求項1から23のいずれか1項に記載の細胞培養器。
- 請求項1から24のいずれか1項に記載の細胞培養器と、
前記培養槽内の培地及び細胞の少なくとも一方を撮影する撮影装置と、
備える、培養装置。 - 前記撮影装置が、テレセントリックレンズを介して前記細胞を撮影する、請求項25に記載の培養装置。
- 前記撮影装置で得られた画像にハイパスフィルタを適用する画像処理部をさらに備える、請求項25又は26に記載の培養装置。
- 前記画像処理部が、前記ハイパスフィルタを適用した画像に分水嶺アルゴリズムを適用して、前記画像中の細胞又は細胞塊を抽出する、請求項27に記載の培養装置。
- 前記画像処理部が、前記画像に分水嶺アルゴリズムを適用する前に、前記画像にDistance Transform法を適用する、請求項28に記載の培養装置。
- 前記画像処理部が、前記抽出した細胞又は細胞魂の大きさを算出する、請求項28又は29に記載の培養装置。
- 前記画像処理部が、前記抽出した細胞又は細胞魂の数を算出する、請求項28から30のいずれか1項に記載の培養装置。
- 培地の濁度と、培地の細胞又は細胞魂の密度と、の関係を記憶する関係記憶装置をさらに備え、
前記撮影装置で得られた画像に基づき、前記培養槽内の前記培地の濁度の値を算出し、前記算出された濁度の値と、前記関係と、に基づき、撮影された細胞又は細胞魂の密度の値を算出する画像処理部をさらに備える、請求項25又は26に記載の培養装置。 - 前記画像処理部が、前記抽出した細胞又は細胞塊の数、及び前記培養槽全体の容積に対する前記撮影装置が撮影した領域の容積の割合から、前記培養槽における細胞又は細胞塊の密度の値を算出する、請求項28から31のいずれか1項に記載の培養装置。
- 培地の色と、培地のpHと、の関係を記憶する関係記憶装置をさらに備え、
前記撮影装置で得られた画像における前記培養槽内の前記培地の色の値を算出し、前記算出された色の値と、前記関係と、に基づき、撮影された前記培地のpHの値を算出する画像処理部をさらに備える、請求項25又は26に記載の培養装置。
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