CN1139932A - N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 - Google Patents
N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1139932A CN1139932A CN95191454A CN95191454A CN1139932A CN 1139932 A CN1139932 A CN 1139932A CN 95191454 A CN95191454 A CN 95191454A CN 95191454 A CN95191454 A CN 95191454A CN 1139932 A CN1139932 A CN 1139932A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- csf
- pegization
- rabbit
- protein
- goods
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
- C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Virology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本文提供了涉及给蛋白质附着水溶性多聚物的方法及组合物。提供了用于N端修饰蛋白质或其类似物的新方法及新得的组合物,包括新N端化学修饰的G-CSF组合物和相关制备方法。提供了化学修饰的共有干扰素。
Description
发明领域
本发明总的来说是涉及蛋白质修饰领域,而且,更具体地说是涉及对蛋白质及其类似物附着水溶性多聚物的领域(本文所用的术语“蛋白质”与“多肽”或“肽”这些术语,如未作其它说明均指同一意思)。本发明还涉及用于N端修饰蛋白质或其类似物的新方法和所得的组合物。另一方面,本发明涉及新N端化学修饰的G-CsF组合物和有关制备方法。本发明还涉及化学修饰的共有的干扰素。
发明背景
目前,治疗用蛋白质之所以能以适当的形式及充足的数量获得主要是由于重组DNA技术的进展。重组蛋白质的可用性导致蛋白质配方及化学修饰方面的进展。这种化学修饰的目的之一就是蛋白质保护。化学附着可有效地阻止蛋白水解酶与蛋白质骨架本身的接触,从而阻止了蛋白质的降解。其它的优势包括在特定环境条件下,增加治疗蛋白质的稳定性及循环时间并且减小其免疫原性。描述蛋白质修饰及融合蛋白质的综述性文章是:Francis Focus on Growth Factors,3:4-10(1992年5月)(由Mediscript,Morntview Court,Friern BarnetLand,London N20,OLD,UK出版)。
聚乙二醇(“PEG”)就是一种这类化学修饰部分,它用来制备治疗用蛋白质产品(动词“PEG化”(pegylate)意指附着至少一个PEG分子)。例如Adagan即为腺苷脱氨酶的PEG修饰形式,已被获准用于治疗严重复合型免疫缺陷疾病;PEG化的起氧歧化酶已进入治疗头部损伤的临床试用阶段;PEG化的α-干扰素已在治疗肝炎的I期临床试验中进行了测试;另据报导PEG化的葡萄糖脑苷脂酶和PEG化的血红蛋白也已进入临床前试验阶段。附着聚乙二醇对蛋白水解的保护作用已见报道(Sada,等J.Fermentation Bioengineering 71:137-139,1991),附着特定的聚乙二醇部分的方法参见美国专利No.4,179,337,Davis et al.,“无免疫原性多肽”,于1979年12月18日公布。以及美国专利No.4,002,531,Royer,“聚乙二醇对酶的修饰及其生产的产品”,1977年1月11日公布。如果想对此领域有更全面的了解,可参见Abuchowski等“Enzymes as Drugs”(J.S.Holcerbergand J.Roberts,eds.pp.367-383页(1981))。
已使用的其它水溶性多聚物如乙二醇、丙二醇共聚物,羧甲基纤维素,葡聚糖,聚乙烯醇,聚乙烯吡咯烷酮,聚-1,3-二氧戊环(poly-1,3-dioxolane),聚-1,3,6-三噁烷,乙烯马来酸酐共聚物,多聚氨基酸(或者是单一聚体或者是随机共聚体)。
对于聚乙二醇分子来说,可通过多种方法将其加到蛋白质上。总的来说,聚乙二醇分子是通过一个在蛋白质分子上发现的反应基团而联到蛋白质分子上的。氨基,如赖氨酸残基上的或N-末端上的氨基通常用于这类附着。例如,Royer(美国专利号4,002,531,见上述)认为可利用还原性烷基化反应将聚乙二醇分子附着到酶上。Wright于1993年4月28日公开的EP0539167,“Peg Imidates and ProteinDerivates Thereof”中认为带有自由氨基的肽及有机复合物可被PEG的直接衍生物或有关的水溶性有机多聚体所修饰。Shaw在1990年2月27日公开的美国专利号4,904,584中涉及修饰蛋白质中用于通过反应性氨基基团附着聚乙二醇分子的赖氨酸残基的数目。
“G-CSF”,粒细胞集落刺激因子即为一种经过化学修饰的具体治疗用蛋白质。G-CSF诱导嗜中性粒细胞的快速增殖并释放到血液中,从而在抗感染中提供治疗效应。
欧洲专利公开EP0401384于1990年12月12日公开的题为“化学修饰的粒细胞集落刺激因子”中描述了用于制备附着有聚乙二醇分子的G-CSF的材料和方法。
1992年3月4日公开的题为“连续性释放包含一个多肽分子共价结合上一水溶性多聚体的药用组合物”的EP0473268中报道了修饰的G-CSF及其类似物,描述了各种G-CSF及其共价结合上一水溶性颗粒多聚体如聚乙二醇所产生的衍生物的使用。
于1989年10月4日公开的EP0335423报道了一种修饰的具有人类粒细胞集落刺激因子活性的多肽。
另一个例子是PGE化的IL-6,在题为“修饰的hIL-6”(参见共同未决的U.S.S.N.07/632,070)的EP0442724中公开了将聚乙二醇分子附着到IL-6分子上。
于1985年9月11日公开的EP0154316报道了一淋巴细胞活素(Lymphokine)与一聚乙二醇的醛发生反应。
许多给蛋白质分子附着多聚物的方法涉及使用某一部分作为联接基团。然而这些部分往往具有抗原性。可进行一种不涉及联接基团的tresylchloride法,但由于tresyl chloride的使用会产生毒副产品,故很难用该方法生产治疗用产品。参见Francis等:蛋白质药物的稳定性:体内的降解途径及蛋白质稳定化的策略(Eds.Ahern.,T.and Manning,M.C.)(plenum,New York,1991)。同时还可参见Delgado等.,“通过Tresyl chloride激活偶联PEG到蛋白质在免疫亲合细胞制备中的应用”。Fisher等eds.,水相系统分离在细胞生物学及生物技术中的应用,Plenum Press,N.Y.N.Y.,1989 pp.211-213。
Chamow等(Bioconjugate Chem.5:133-140(1994))报道了CD4免疫吸附素(immanoadhesin)通过与单甲氧基多聚乙二醇醛发生还原性烷化作用进行修饰。作者报道50%的CD4-Ig在PEG化反应程度可控的条件下进行MePEG修饰。出处同上,见137页。作者还报道了在体外,修饰的CD4-Ig结合(对蛋白gp120)的能力与其MePEG化的程度呈负相关。出处同上,同样也可参见Rose et al.,Bioconjugate Chemistry 2:154-159(1991),文中报道了连接基团卡巴肼(carbohydrazide)选择性地附着到蛋白质底物(胰岛素)的C-末端羧基上。
然而,在整个领域内或涉及特定蛋白质的领域内还没有一种方法能够让水溶性多聚物选择性地附着到蛋白质如G-CSF的N-末端上。更有甚者,目前存在的方法在任何反应基团上提供非选择性附着反应,无论这些基团是在蛋白质内(例如,赖氨酸侧链基团),还是在N-末端上。这将会导致产物的不均一。例如,PEG化的G-CSF分子,有些分子中含有数目不同于其它分子的聚乙二醇部分。比如一个含5个赖氨酸残基的分子在上述反应中可能会形成一种不均一混合物,一些分子含有6个聚乙二醇分子,一些分子中具有5个,一些分子中具有4个,一些分子中具有3个,一些分子中具有2个,以及具有1个甚至一个聚乙二醇分子也没有。并且在带有一些聚乙二醇的分子中,聚乙二醇分子在不同的分子中可能不会附着于相同的位置。
以上这些都是开发治疗用PEG化蛋白质产品不中利因素。开发这类药物时,产品生物活性的可预见性显得分外重要。例如,在超氧化物歧化酶非选择性地与聚乙二醇分子结合的情况下,一部分修饰的酶完全丧失活性(P.McGoff et al.Chem.Pharm.Bull.36:3079-3091(1988))。如果这些治疗性蛋白质在组合物中各批量间有区别,人们将无法对其生物活性进行预测。不同位点结合的聚乙二醇分子稳定性不同,这一情况可能导致这些分子从蛋白质中解离出来。当然,如果这些分子是随机附着而因此随机解离,那么治疗用蛋白质的药物动力学就不可能准确预测。从消费者的角度考虑,不同批量的循环时间不尽相同,因此剂量上也可能是不准确的。从生产者角度考虑,获准进入市场的治疗用蛋白质的保存将增添麻烦。此外,上述方法没有一个提供无连接部分(蛋白质和多聚体之间)的选择性N-末端化学修饰。如果合用连接部分,由于可能的抗原性,可能产生不利影响。
因此,仍需要能选择性N端化学修饰蛋白质及其类似物,包括G-CSF及共有干扰素(以下就以这两种化学修饰的蛋白质为例加以说明)的方法本发明从诸多方面阐述了这一需要。
本发明概述
本发明涉及N-端化学修饰的蛋白质的基本上均一的制品及其所用的方法。出乎意料的是N-末端化学修饰的G-CSF显示出在该分子的另一位点上含一个化学修饰的其它G-CSF各类所未发现的在稳定性方面的优势。更出人意料的是在用于制备N-末端化学修饰的G-CSF的本方法中,发现使用还原性烷基化反应能够提供选择性地修饰N-末端的条件,并且该方法可广泛地应用于其它蛋白质(或其类似物)以及G-CSF。令人惊奇的是,利用还原性烷基化反应,其终产物-以胺键与水溶性多聚体结合的蛋白质,要比具有酰胺键(amide link age)的相同多聚物/蛋白质连接物稳定得多。另外一个这样修饰的蛋白质(如下就以此为实施例加以描述)是共有干扰素(consensus interferon)。因此,正如上面所要详述的,本发明具有涉及化学修饰蛋白质(或其类似物)以及特定蛋白质的特殊修饰的诸多方面的内容。
一方面,本发明涉及N-末端化学修饰的G-CSF(或其类似物)的基本上均一的制品及有关方法。在下面实施例中说明了N-末端单个PEG化的mono-PEG的G-CSF要较其它类型的单个PEG化的G-CSF更稳定。另外,由于G-CSF分子的N-末端在反应过程中较易与聚乙二醇分子接近,N-末端PEG化比例较高,因此该方法操作起来比较具有优势。
本发明还涉及一种还原性烷基化反应类型。该反应可选择性地激活蛋白质或其类似物N-末端残基的氨基基团,从而使水溶性多聚体部分选择性附着到N端。这样提供了多聚体/蛋白质结合分子的基本上均一的制品以及(如果应用聚乙二醇的话)具有聚乙二醇部分直接偶联到蛋白质部分上的PEG化蛋白质分子的制品。下面描述了用于G-CSF及共有干扰素的这一方法,这些内容提供了本发明的其它方面。
附图简述
图1A为一PEG化的G-CSF离子交换色谱峰的色谱图复制品。
图1B各种类型单PEG化G-CSF的SDS-PAGE图。
图2:线A为重组人类甲二磺酰G-CSF标准样的SEC-HPLC图;线B为SCM-PEG-GCSF反应混合物;线C为N-末端PEG化的G-CSF;线D为35赖氨酸单个PEG化的G-CSF;线E为赖氨酸41单个PEG化的G-CSF。
图3A、3B及3C为经内蛋白酶(endoproteinase)SV8肽酶切后的HPLC图,3A为N-末端PEG化的G-CSF;3B为35赖氨酸单个PEG化的G-CSF;3C为赖氨酸41单个PEG化的G-CSF。
图4是一条形图,图示在体外,单个PEG化的G-CSF种类与未PEG化的标准样生物活性的比较。
图5A及5B显示了在体内单个PEG化的G-CSF衍生物生物活性的分析结果,图5A显示仓鼠经皮下注射N-末端PEG化的G-CSF,35赖氨酸单个PEG化的G-CSF或赖氨酸41单个PEG化的G-CSF后白血球计数的平均值,图5B显示经单次皮下注射上述各种单个PEG化的G-CSF衍生物后曲线下的最终平均白血球数面积。
图6A、6B及6C为研究N-末端PEG化的G-CSF或35赖氨酸单个PEG化的G-CSF的稳定性所得的SEC-HPLC图。图6A为在pH6.0,4℃条件下研究N-末端单个PEG化的G-CSF稳定性的SEC-HPLC图,图6B为相同条件下35赖氨酸单个PEG化的G-CSF图。图6C显示在pH6.0及4℃下进一步对35赖氨酸单个PEG化的G-CSF稳定性研究结果。时间(“T”)表示天。
图7显示了rh-G-CSF与甲氧聚乙二醇醛(MW6kDa)发生还原性烷基化反应的过程中反应混合物的筛析(size exclusion)HPLC分析结果。
图8显示了用MPEG(也在MW=6kDa)N-羟基琥珀酰酯的反应混合物筛析(size exclusion)HPLC分析图。
图9为单次皮下注射剂量的单N-末端MPEG-GCSF接合物(由rh-G-CSF不同分子量的MPEG醛经过还原性烷化反应制得,其中MPEG的分子量为6kDa、12kDa以及20kDa)后总的白血球反应情况。
详细描述
本发明涉及N-末端化学修饰蛋白质的基本上均一的制品及其所用的方法。
一方面,本发明涉及N-末化学修饰的G-CSF的组合物及其所用的方法。
本方法(用于N-末端修饰G-CSF以及还原性烷基化反应法)提供了单聚体/蛋白质连接物的基本上均一的混合物。本文所用的“基本上均一的”意指观察到的每个聚合物/蛋白质连接物分子中均只含一个聚合物部分。制品中也许会包含未反应(即缺乏聚合物部分)的蛋白质。在下面的一个实施例中,通过肽图谱(peptide mapping)及N-末端测序证实,制备出的制品中至少含90%的单聚体/蛋白质连接物,未反应蛋白质含量最多不超过10%。优选的是,N-末端单个PEG化物质含量至少应达到制品的95%(正如在下面实施例中所述),最优选的是,N-末端单个PEG化物质占制品的99%或更高。这种单聚体/蛋白质连接物具有生物活性。本文提供的“基本上均一”的N-末端PEG化的G-CSF制品意指这些制品的均一性足以能够显示出均一制品所具有的优越性,例如,易于在临床应用中预测不同批量的药物动力学。
人们可以选择制备聚合物/蛋白质连接物分子混合物,本文提供的优势在于,人们可以选择单聚体/蛋白质连接物在混合物中的比例。这样,如果需要的话,人们便可以制备出带有不同数目附着的聚合物分子(比如2个、3个、4个等等)的各种蛋白质混合物,并与利用本发明方法制备出的单聚体/蛋白质连接物结合,便可得到预定单聚体/蛋白质连接物比例的混合物。
下面提供使用G-CSF的实施例,如上所述,G-CSF是用于治疗造血障碍的治疗用蛋白质。一般来说,在本发明实施中有用的G-CSF可以是从哺乳动物有机体中分离的,或者作为选择是化学合成方法的产品,或者是通过原核生物或真核生物宿主表达外源性DNA序列而得到的产品,其中这些DNA可从基因组或cDNA克隆或通过DNA合成得到。合适的原核生物宿主包括各种细菌(如,E.coli);合适的真核生物宿主包括酵母(如S.cerevisiae)及哺乳动物细胞(如:中国仓鼠卵巢细胞,猴细胞)。依据所用的宿主的不同,G-CSF表达产物可能会被哺乳动物或其它真核细胞中的碳水化合物所糖基化,或非糖基化。G-CSF表达产物中也可以包括一个起始的甲硫氨酸残基(在第-1位)。虽然优选重组G-CSF(特别是来自E.coli),本发明预测了使用任意或全部其它生物中G-CSF的这类形式的最大商业实用性。
已有报道一些G-CSF类似物具有生物学功能,这些分子也可以是化学修饰的,例如,添加上一个或多个聚乙二醇分子。G-CSF类似物在美国专利No.4,810,643中已有报道。具报道有生物活性的其它G-CSF类似物的例子有AU-A-76380/91,EP0459630,EP0272703,EP0473268以及EP0335423中所描述的那些,虽然文中没提供报道公开的每种类似物的活性。还可参见AU-A-10948/92,PCTUS94/00913以及EP0243153。
一般来说,本发明中有用的G-CSF及其类似物可以通过进行本文提供的化学修饰程序以选择性地修饰N-末端α-氨基,试验所得产品的所需生物学特征,例如本文提供的生物活性试验来确定。当然,如果需要对非人类哺乳动物进行这类治疗,可以使用重组非人类的G-CSF,如重组鼠、牛及犬等的G-CSF产品。例如,参见PCT WO 9105798及PCT WO 8910932。
因此,本发明的另一个方面包括N-末端化学修饰的G-CSF类似物的组合物。如上所述,G-CSF类似物可包括具有氨基酸添加、缺失和/或替代(与下面实施例1中所述的G-CSF氨基酸序列相比较而言)的产物。那些当N-末端被PEG化时预期发挥功能以选择性刺激中性粒细胞的产生的G-CSF类似物是为结合到G-CSF受体上并非必要的N-末端的类似物,见Hill et al.,PNAS-USA 90:5167-5171(1993);也可参见PCT US 94/00913。
使用的聚合物分子可选自水溶性多聚体。(对于本文描述的还原性烷基化方法,多聚体应具有单个反应醛基)。选择性聚合物分子应是水溶性的,使其要结合的蛋白质分子在水环境中不会发生沉淀现象,例如生理环境中。从还原性烷基化反应角度考虑,选择的聚合物分子应具有一个反应醛基,这样就可以根据本发明方法对聚合程度进行控制。多聚体可以是分枝或不分枝的。对于终产物制品的治疗用途,优选的聚合分子应是药用上可接受的。本领域的技术人员应能够根据该聚合物/蛋白质连接物是否在治疗上使用来选择所需的聚合物,如果是在治疗上使用,则应考虑其剂量,循环时间,对蛋白水解的抵抗力以及其它一些因素。对于G-CSF来说,可用本文中提供的测试手段加以探知,本领域的技术人员还应针对其它治疗性蛋白质选择合适的测试手段。水溶性多聚体可选自如:上面所列出的(背景部分)各种分子以及葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯烷酮),聚乙二醇,聚丙二醇,聚氧化丙烯/氧化乙烯(prolypropylene oxide/ethylene oxide)共聚物,聚氧乙烯化多元醇和聚乙烯醇。
出于下面所述的最优化考虑,聚合物的分子量可以是任意大小,并且可以是带有分枝或不分枝的。对于聚乙二醇来说,最优选的分子量是约为2kDa到大约100kDa之间(术语“大约”意指聚乙二醇制品中,一些分子大于所述分子量,另一些分子小于所述分子量)。下面的实施例1及实施例2涉及PEG6000,其选择便于纯化及提供一个合适的模式系统。其它大小的使用取决于所需的治疗方案(情况例如所需的缓释持续时间,效力如果在生物活性方面有效的话,处理的方便性,抗原性大小或缺乏以及其它一些PEG对治疗性蛋白质及其类似物的已知效应。
本发明的一个具体方面就是N-末端单个PEG化的G-CSF分子,它由一个聚乙二醇部分和一个G-CSF部分组成。对于该组合物,人们可从多种聚乙二醇分子(以分子量及有无分枝等),反应混合物中聚乙二醇分子对G-CSF蛋白质分子的比例,所进行的PEG化反应的类型,获得选择性N-末端PEG化的G-CSF的方法及所要使用的G-CSF的类型等方面进行选择。此外,本组合物及方法还包括药用组合物的配方,药剂的治疗和生产方法。
聚乙二醇分子对蛋白质分子的比例与它们在反应混合物中的浓度一样,可以改变。一般来说,最佳比例(是指反应效率而言,即反应混合物中没有多余未反应的蛋白质及聚合物分子)将根据所选聚乙二醇分子量进行测定。此外,正如本方法的一个实施例中涉及的非特异性PEG化反应和随后的N-末端单个PEG化产物的纯化,比例取决于可参加反应的可得到的反应基团数(典型的是∝或з氨基)。本文的一个实施例中涉及的蛋白质:PEG分子的反应比例相当低以获得基本上为单个PEG化的产品(每个蛋白质分子对1.5个PEG分子)。
为了获得N-末端PEG化的G-CSF,也有多种如上所述的或者在下面实施例2中所述的还原性烷基化反应的PEG化反应方法可供选择。有关聚乙二醇部分与蛋白质部分之间无连接基团的聚合方法在Franciset al在:蛋白质药品的稳定性:体内降解途径及使蛋白质稳定的策略(Eds.Ahern.,T.and Manning,M.C.Plenum,New York,1991)中已有过描述。另外,Delgado et al.,“通过TresylChloride激活方法偶联PEG到蛋白质在免疫亲合细胞制品中的应用”及Fisher et al.,eds.,水相系统分离在细胞生物学及生物技术中的应用,Plenum Press,N.Y.N.Y.,1989 pp.211-213中涉及利用tresyl chloride,从而使聚乙二醇部分和蛋白质部分间没有连接基团存在。该方法由于会产生毒副产品,故很难用于生产治疗周产品。本发明的一个实例中涉及使用羧甲基甲氧聚乙二醇的N-羟基琥珀酰脂。正如下面将会更为详细地讲座的另一实施例涉及使用还原性烷基化反应方法。
获取N-末端PEG化的G-CSF制品的方法(即,如有必要,把该部分从其它单个PEG化的部分中分离出来)可以经过从PEG化的G-CSF分子群体中纯化N-末端PEG化的产物。例如,在下面的实施例中,PEG化的G-CSF首先通过离子交换色谱分离以获得具有电荷特征的单个PEG化物质(可能存在含有相同的表观电荷的其它多个PEG化的物质),然后使用分子筛层析(size exclusion chromatography)分离单个PEG化的产品。通过这种方法,将N-末端单个PEG化的G-CSF从其它类型的单个PEG化的物质及其它多个PEG化的物质中分离出来。其它方法已见报道。例如,PCT WO 90/04606,(1990年5月3日公开)中报道了一种分离PEG-蛋白质加合物混合物的方法,其中包括用含PEG的水性两相系统PEG/分离(partitioning)蛋白质加合物。
在另一方面,本发明还提供了选择性获得N-末端化学修饰蛋白质(或其类似物)的方法。下述为一种利用还原性烷基化反应进行蛋白质修饰的方法,它利用可获得的一价氨基(primaryamino group)(赖氨酸对N末端)的不同类型的特异性反应来进行特定蛋白质的修饰。在适当的反应条件下,成功地用带有聚合物的羰基将蛋白质的N-末端进行了选择性的修饰。在能够利用赖氨酸残基上ε-氨基和蛋白质N-末端α-氨基的pKa差异的pH下进行该反应。通过这种选择性修饰,控制水溶性聚合物附着到蛋白质上:聚合物的连接主要发生在蛋白质的N-末端,而其它反应基团(如赖氨酸残基上的侧链氨基)则没有明显的修饰发生。
更为重要而且令人惊奇的是,本发明提供了一种制备单聚体/蛋白质连接物分子的基本上均一的制品的方法,不需使用其它化学修饰化学方法所需的进一步纯化。此外,具有胺键的产物出乎意料地比以酰胺键形成的产物更稳定。这一点将会在下面的详细研究中得到证明。更具体地说,如果使用聚乙二醇,本发明还提供了没有可能的抗原性连接基团,并具有直接偶联到蛋白质部分的聚乙二醇部分而无毒副产品的N-末端PEG化的蛋白质。
因此,本发明的一方面内容是制备聚合物/蛋白质连接物的方法,包括:(a)在还原性烷基化反应条件下,将含多于一个氨基的蛋白质分子与水溶性聚合物分子反应,反应液的pH应适于选择激活所说蛋白质分子氨基末端的α-氨基,所以所述水溶性聚合物附着于所述α-氨基基团,以及;(b)获取反应产物。可从任选从未反应的分子中分离反应产物,但对于治疗用产品来说,这是优选的。
本发明的另一方面内容是这种还原性烷基化反应,它能够将聚合物分子选择性地附着到任意在N-末端具有α-氨基的蛋白质上,并提供了一种单聚体/蛋白质连接物的基本上均一的制品。这里所用的术语“单聚体/蛋白质连接物”意指由一个聚合物部分附着到一个蛋白质部分上组成的组合物(也包括本文所述的使用蛋白质类似物的那些连接物)。单聚体/蛋白质连接物具有位于N-末端而不是侧链氨基上(如赖氨酸侧链的氨基)的一个聚合物部分。制品优选含大于80%的单聚体/蛋白质连接物,更优选大于95%的单聚体/蛋白质连接物。
对于基本均一的单聚体/蛋白质连接物分子群体,其反应条件应是让水溶性聚合物分子选择性地附着到所需蛋白质的N-末端上。这种反应条件一般造成赖氨酸氨基与N-末端α-氨基的pKa差异(pK是指氨基质子化和非质子化各占50%时的pH)。一般来说,对于不同的蛋白质,可使用不同的pH以使N-末端α-氨基得到最佳修饰。
pH往往也会影响所用的聚合物分子与蛋白质分子的比例。一般来说,如果反应液pH低于pK,聚合物分子比例应大大超过蛋白质分子为宜(即:N-末端的α-氨基反应性越少,达到最佳条件所需的聚合物越多)。如果pH高于pK,则聚合物:蛋白质分子的比例不必要太大(即得到的反应基团越多,所需的聚合物分子越少)。
另一个需要考虑的重要条件是聚合物的分子量。一般来说,聚合物的分子量越大,结合到蛋白质上的聚合物分子数越少。同样,在优化这些参数时,聚合物分子是否有分枝也应加以考虑。总之,聚合物分子量越高(或分枝越多),聚合物:蛋白质的比例亦应越高。
对于这个还原性烷基化反应,其还原剂在水溶液应该比较稳定,最好仅能还原在还原性烷化反应初始阶段所形成的西佛碱(Schiffbase)。优选的还原剂可选自硼氢化钠,氰基硼氢钠,硼酸二甲胺,硼酸三甲胺以及硼酸吡啶。在下面实施例中使用的是氰基硼氢钠。
水溶性聚合物分子可以是上面描述的类型,其分子中应具备单个反应醛基使其偶联到蛋白质分子上。对于聚乙二醇,使用用于与G-CSF偶联及PEG12000用于和共有干扰素偶联在下面描述。值得一提的是对于G-CSF,本方法中,PEG12000,20000及25000均被成功地使用过。聚乙二醇丙醛(见美国专利No.5,252,714)由于其在水中有较好的稳定性而具有一定优势。
如上所述,本方法广泛适用于具有N-末端α-氨基的任何蛋白质及其类似物。例如,由细菌表达外源性DNA而获得的蛋白质产品,由于细菌表达的结果,其N-末端的甲硫氨酸(methionyl)残基上带有一个α-氨基。如上所述,包括肽在内,均是一些肽类似物及其它的修饰蛋白质。蛋白质类似物,如上所述的G-CSF类似物及非天然存在的共有干扰素均适用于此方法。
因此,对于该N-末端化学修饰的G-CSF,本文所述的任意G-CSF或其类似物均合用(例如,出处同上的文章所描述的那些)。下面实施例中所用的是细菌中产生的重组G-CSF,具有174个氨基酸残基及一额外的甲硫氨基酸残基。如本文所述,化学修饰可使用本文描述的任何水溶性聚合物分子进行,下面的实施例中使用的是聚乙二醇。
共有干扰素是本实施例中所用的另一种蛋白质。下面要描述的是用本发明中的还原性烷化的反应进行蛋白质N-末端的单个PEG化修饰,从而制备出化学修饰的共有干扰素。因此,本发明的另一方面涉及这些制品。正如本文所用的,共有人淋巴细胞干扰素在此称为“共有干扰素”,或“IFN-con”,意即为一个非天然多肽,它主要包括所有天然人白细胞干扰素亚型序列共有的那些氨基酸残基,而且它还包括在所有亚型无共同氨基酸的一个或多个位置上,主要发生于该位置一个氨基酸,并且在任何情况下,不包括在至少一个天然存在的亚型中不出现于该位置的任意氨基酸残基。IFN-con包括三个氨基酸序列,分别命名为IFN-con1、IFN-con2及IFN-con3,它在共同拥有的美国专利4,695,623及4,897,471中公开,本文引用其全文以供参考。(美国专利Nos.4,897,471及4,695,623中使用“α”命名,而本文未用)。编码IFN-con的DNA序列可按上述专利或其它标准方法进行合成。IFN-con多肽最好是通过转化或转染合成的DNA序列到细菌宿主中,尤其是E.coli表达产生。即IFNcon是重组IFN-con。以本领域的技术人员已知的方法和在Klein et al.,J.Chromatog.454:205-215(1988)中描述的用于IFN-con1的方法可纯化优选在E.coli中生产出的IFN-con。纯化的IFN-con可能包括其异构体的混合物,如纯化的IFN-con1中可能包含有甲硫酰IFN-con1,去甲硫氨酰IFN-con1及N-末端封闭的去甲硫氨酰IFN-con1(Keinet al.,Arc.Biochem.Biophy s.276:531-537(1990))。作为选择,IFN-con可包括特异性分离的异构体,可用本领域技术人员已知的诸如等电点聚焦的技术来彼此分离IFN-con的异构形式。
因此,本发明的另一方面内容是化学修饰的共有干扰素,其中所说的共有干扰素是选自IFN-con1,IFN-con2,及IFN-con3。化学修饰时用本文所述的水溶性聚合物例如PEG,以及用于N-末端选择性化学修饰的还原性烷基化方法。本文的实施例3中描述了IFN-con1的化学修饰,包含将IFN-con1分子在N-末端与聚乙二醇分子(PEG12000)相结合。
另一方面,本发明方法生产出的PEG化蛋白质是聚乙二醇部分直接与蛋白质部分相连接,没有联接基团存在,也不产生任何毒副产品。实施例中包括G-CSF及本文所述的共有干扰素。对于PEG化G-CSF蛋白质分子的群体,其中聚乙二醇部分是直接偶联到G-CSF蛋白质部分上(但并不一定是N-末端PEG化的G-CSF分子的群体),还原性烷基化反应可以在酸性或非酸性环境中进行。
本发明还有一方面是关于上述有关药用组合物。这种药用组合物可适于注射,或者是口服,作用于肺、鼻腔以及其它形式的施用。一般来说,包含于本发明中的药用组合物包含有效量的本发明的单聚体/蛋白质连接物产物以及药用上可接受的稀释剂,保存剂,增溶剂,乳化剂,佐剂及/或载体。这类组合物中包括各种缓冲液组份(如:Tris-HCl,醋酸盐,磷酸盐),pH及离子强度的稀释剂;添加剂诸如去污剂及增溶剂(如:Tween 80,多聚山梨醇酯80),抗氧化剂(如抗坏血酸,偏亚硫酸氢钠),保存剂(如:水杨乙汞,苯甲醇)以及填充物质(如:乳糖,甘露醇);将这些物质掺入聚合物分子如聚乳酸(polylacticacid),聚乙二醇酸等做成的颗粒状制品中或掺入脂质体中。这些组合物可能会影响本发明的N-末端化学修饰的蛋白质的物理状态稳定性,在体内的释放速度及体内清除速度。例如参见Remington’s《药物学》第18版。(1990,Mack出版公司.,Easton,PA18042)pp.1435-1712。本文引用以供参考。
本发明再有一个方面是涉及药品的治疗和生产方法。施用本发明生产的聚合物/G-CSF连接物(或具有天然G-CSF的促血细胞生成活性的类似物)来缓和或调理的症状的典型特征在于,造血或免疫功能的减退,而且更具体地说是中性粒细胞数的减少。这些症状也许是因为治疗其它疾病过程中(例如化疗或放疗)引起的。这也可能是由于患感染性疾病,比如细菌、病毒、真菌或其它一些感染疾病。例如,由于细菌感染所致败血症。或者,这种症状由遗传或环境因素造成的,如严重慢性嗜中性粒细胞减少症或白血病。年龄因素也很重要,在老年病学中,病人的嗜中性白细胞数目会减少或嗜中性白细胞活动性降低。一些这类症状见Filgrastim(r-met HuG-CSF)in clinical Practice,Morstyn,G.及T.M.Dexter编.,Marcel Dedder Inc.,N.Y.(1993),pp.351。其它一些研究不多的可经过施用本发明的聚合体/G-CSF连接物来缓和和调节的症状还有血液中脂类(或胆固醇)的减少,一些心血管症状,因为G-CSF可诱导产生纤维蛋白溶酶原激活因子。截止目前,G-CSF(或类似物)在这些情况中的激活模式还不十分清楚。水溶性聚合物分子(如聚乙二醇)的添加,可给施用的病人带来好处,因为生物活性的延缓滞留可允许每个疗程的G-CSF注射次数更少。
一般来说,施用本发明生产的聚合物/共有干扰素可缓解和调理的症状是那些可应用干扰素的症状,包括细胞增殖紊乱,病毒感染及自体免疫紊乱,如综合性血管硬化症。参考McManus Balmer,DICP,“药物治疗年鉴”24:761-767(1990)(具有生物活性的修饰因子在癌症治疗中的应用:回顾。第一部分,干扰素)。用共有干扰素治疗细胞增殖紊乱的方法及其组合物可参见1992年4月30日公开的PCT WO92/06707,本文引用以供参考。例如,肝炎(A、B、C、D、E型)可用本发明生产的PEG化共有干扰素分子来治疗。在下面的实施例中证明在体外,化学修饰的共有干扰素活性为非化学修饰的共有干扰素的20%。
上述的各种分子,由于进行了进一步的研究,因而获得了有关不同病人中不同的症状的治疗时所用的合适剂量水平的资料。普通技术人员在考虑治疗方案,病人年龄及健康状况后,可确定合适的剂量。一般来说,对于注射或灌注剂量应在每千克体重0.01μg至100μg之间(只计算蛋白质部分的重量,没有计算化学修饰部分的重量)。
下面的实施例将说明以上提及各方面。在实施例1中,通过N-末端PEG化的G-CSF与35赖氨酸或41赖氨酸(为met+174氨基酸G-CSF变体)单个PEG化的G-CSF相比较来证实前者的优点。实施例2中描述了在N-末端PEG化G-CSF过程中的还原性烷基化反应。本方法能够制备N-末端PEG化G-CSF的基本均一的制品。实施例3中讨论了在共有干扰素N-末端PEG化中的还原性烷基化反应。
实施例1
A.重组人类met-G-CSF制备
重组人类met-G-CSF(本文有时称为“rh-G-CSF”或“r-met-hu-G-CSF”)按照Souza专利,美国专利No.,4,810,643(本文引用以供参考)的。方法合用的rhG-CSF是来自E.coli的重组表达产物其氨基酸序列(由DNA序列编码)所示如下(SEQ.ID.NO.1和2):ATG ACT CCA TTA GGT CCT GCT TCT TCT CTG CCG CAA AGC TTT CTGM T P L G P A S S L P Q S F LCTG AAA TGT CTG GAA CAG GTT CGT AAA ATC CAG GGT GAC GGT GCTL K C L E Q V R K I Q G D G AGCA CTG CAA GAA AAA CTG TGC GCT ACT TAC AAA CTG TGC CAT CCGA L Q E K L C A T Y K L C H PGAA GAG CTG GTA CTG CTG GGT CAT TCT CTT GGG ATC CCG TGG GCTE E L V L L G H S L G I P W ACCG CTG TCT TCT TGT CCA TCT CAA GCT CTT CAG CTG GCT GGT TGTP L S S C P S Q A L Q L A G CCTG TCT CAA CTG CAT TCT GGT CTG TTC CTG TAT CAG GGT CTT CTGL S Q L H S G L F L Y Q G L LCAA GCT CTG GAA GGT ATC TCT CCG GAA CTG GGT CCG ACT CTG GACQ A L E G I S P E L G P T L DACT CTG CAG CTA GAT GTA GCT GAC TTT GCT ACT ACT ATT TGG CAAT L Q L D V A D F A T T I W QCAG ATG GAA GAG CTC GGT ATG GCA CCA GCT CTG CAA CCG ACT CAAQ M E E L G M A P A L Q P T QGGT GCT ATG CCG GCA TTC GCT TCT GCA TTC CAG CGT CGT GCA GGAG A M P A F A S A F Q R R A GGGT GTA CTG GTT GCT TCT CAT CTG CAA TCT TTC CTG GAA GTA TCTG V L V A S H L Q S F L E V STAC CGT GTT CTG CGT CAT CTG GCT CAG CCG TAA TAGY R V L R H L A Q P * *
(这也是用于对照动物的非PEG化的组合物)。作为选择,也可选用市场上的Neupogen进行下面的PEG化反应(本文引用其包装说明书以供参考)。
B.PEG化的G-CSF的制备
100mM pH8.0的N-二羟乙基甘氨酸,内含10mg/ml的上述rh-G-CSF的溶液,加入到平均分子量为6000道尔顿的固态SCM-MPEG中(羧甲氧聚乙二醇N-羟琥珀酰酯)(Union Carbide)。这里的SCM-MPEG要比rh-G-CSF多1.5摩尔。轻轻搅动1小时后,混合物以无菌水稀释至2mg/ml,pH以稀盐酸调至4.0。反应在室温下进行。此时反应混合物主要由三种形式的单个PEG化rh-G-CSF,一些双PEG化的rh-G-CSF和未修饰的rh-G-CSG及反应副产品(N-羟琥珀酰亚胺)组成。
C.N-末端PEG化rh-G-CSF的制备
三种形式的单个PEG化的rh-G-CSF可用离子交换色谱加以分离。反应混合物上样于(1mg蛋白质每毫升树脂)Pharmacza SSepharose FF柱(Pharmacia XK50/30库,柱床体积440ml),以缓冲液A(20mM的醋酸钠,pH4.0)加以平衡。然后以3倍于柱床体积的缓冲液A清洗。蛋白质样品用15倍于柱床体积的缓冲液B(20mM醋酸钠,pH4.0,1MNaCl),其浓度梯度从0~23%进行线形梯度洗脱。洗脱后柱床以等体积100%的缓冲液B加以清洗再以3体积的缓冲液A重新平衡。整个过程的流速应维持在8ml/min。洗脱液在280nm处加以监测,以5ml每管分部收集。按照图1A合并含各单PEG化rh-G-CSF种类的馏分。将这些合并物用带YM10 76mm膜350mL Amicon搅拌室(stirred cell)浓缩。
将来自离子交换色谱的合并液进行分子筛层析,以使双PEG化的蛋白质产物从单PEG化的蛋白质得以分离。大多数情况下,2-5ml溶液中含5-10mg样品的混合物上柱,柱为120ml Pharmacia Superdex75HR 16/60,以20mM的pH4.0的醋酸钠将柱平衡。以1,5ml/min流速洗脱100分钟。以2ml每管分部收集。洗脱液中蛋白质含量在280nm处加在监测。合并不同峰的馏分并进行下一步的分析。下表中比较每个峰处产量的相对比例。
表1
相对产量和修饰位点修饰位点 参考图1A 相对产量
N-末端 峰1A 3
Lys-35 峰2A 2
Lys-41 峰3A 1
在这种反应条件下,17及24位的赖氨酸可能不会发生明显的PEG化反应。
D.特征描述
为了鉴定每个样品的特征,从五个方面加以分析:(1)SDS-Page(图1B),(2)分子筛层析HPLC(“SEC HPLC”)(图2),(3)肽(酶切)分离图谱分析(图3A、3B及3C),(4)在体外对G-CSF生物活性的测试(图4)及(5)在体内(仓鼠体内)对其生物活性的测试(图5A及5B)。
对于每个样品组合物,结果显示,对于N-末端单个PEG化G-CSF来说,样品中被PEG化的比例已超过95%,余下的也许是未PEG化的物质(尽管样品中余下的低于试验检测极限)。至于三种形式单个PEG化产物(N-末端、赖氨酸41和赖氨酸35)的各自百分含量,结果显示,N-末端及赖氨酸41PEG化产物已超过单个PEG化总产物的97%,PEG化的赖氨酸35产率较低,可能是由于其在被测试条件中不稳定造成的。
表2
N-末端PEG化G-CSF组合物的百分比
非还性SDS PAGE SEC HPLD N-末端测序*单个PEG化的G-CSF 97.44 99.43 96.6未修饰的G-CSF 2.56 0.57 3.4
*下面讨论的N-末端测序在此不能认为是定量试验,因为在进行N-末端测序时,可能会造成聚乙二醇分子从蛋白质分子N-末端脱落下来。
表3
三种形式的单个PEG化产物百分比
N-末端PEG- Lys35PEG- Lys41PEG-
GSCF GSCF料 GSCF
(RI/UV=.96)* (RI/UV=.72) (RI/UV=1.12)非还原性 97.44 77.41 100.00SDS-PAGESEC HPLC 99.43 93.38 99.96
* RI/UV为折射光与紫外光吸收比例的指数,其主要用来估计每个蛋白质分子中含有聚乙二醇的分子数。应用聚乙二醇分子的折射和反映蛋白质分子的紫外光吸收的指数,从SEC HPLC数据计算。
**料这种形式G-CSF在测试条件下不稳定。
方法
1.SDS-PAGE.SDS-PAGE使用的是ISS Daiichi PureChemicals,Co.,Tokyo,Japan生产的非还原性4~20%的微胶,并以考马斯亮蓝染色。凝胶以分子动态显像密度计(molecularDynamics Densitometer with Image Quant)加以扫描。结果:如图1B所示。1号泳道(左手一边为一标准分子量蛋白(Novex Mork 12分子量标准品)。2道为3μg rh-G-CSF标准;3道为上样10μgSCM-PEG-GCSF反应混合物电泳结果;4道内加的是10μg N-末端单个PEG化的G-CSF;5道内为10μg从N-末端met数起,第35位赖氨酸残基单个PEG化的G-CSF;6道为10μg从N端甲硫氨酸起第41位赖氨酸单个PEG化的G-CSF。从图可以看出,3道中含有N-末端单个PEG化产物,并显示出单条带。
2.分子筛层析-高压液相色谱
SEC-HPLC使用的是Biosep SEC 3000柱,在水相HPLC系统中进行的,并使用100mM磷酸钠,在pH 6.9条件下,以1ml/min流速洗脱20min。监测280nm处的信号。结果:如图2所示,线“C”,因为只含N-末端单个PEG化的rh-G-CSF,故只有一个峰,线“D”(赖氨酸35单个PEG化产物)和“E”(赖氨酸41单个PEG化产物)情况相同。这也显示单个PEG化G-CSF在不同收集管中是基本上纯的。
3.肽酶切分离图谱。使用下述方法,对三种样品(称为“Mono-PEG-1”、“Mono-PEG-2”及Mono-PEG-3“)加以分析。(a)还原性烷基化反应。500μg的单个PEG化G-CSF等分样品进行快速真空干燥,将其在含6M盐酸胍及1mM EDTA的0.3M Tris-HCl中配制成1mg/950μl浓度,缓冲液pH8.4。样品中加碘乙酸进行S-羧甲基化,并在37℃孵育反应20分钟。样品然后用Sephadex G-25快速旋转蛋白分离柱(Quick Spin Protein Columns)进行脱盐处理,后更换缓冲液。经脱盐和更换缓冲液后,样品浓度用增加的缓冲液将其稀释至0.5mg/ml。(b)蛋白质内切酶SV8消化。样品以SV8(酶与底物比为1∶25)在25℃消化处理26小时。(c)HPLC肽酶切分离图谱。消化后的蛋白质装入Vydac C4柱(4.6×250mm,颗粒直径5μ,孔径300),以0.1%TFA中乙腈的线性梯度进行洗脱,经HPLC作肽图。肽段人工收集后置快速真空干燥器(Speed Vac)中将其干燥后以备测序之用。结果:与对照标准样相比,(i)(图3A)为“Mono-PEG-1”(即N-末端单个PEG化产物),57.3分钟时峰值减小而在77.5分钟时出现一新峰;(ii)(图3B)为“Mono-PEG-2”,(赖氨酸35PEG化产物),在30.3分钟时峰的高度有所下降并在66.3分钟时出现一新的洗脱峰;(iii)(图3C)为“Mono-PEG-3”(赖氨酸41 PEG化产物),30.3分钟时的峰消失,而在66.4分钟时出现一新的洗脱峰。这些肽段在分离图谱中都显示出显著的差异。从图还可以看出由于微小的消化差异在86.1分钟肽的两侧出现一些小的不完全裂解物。(d)N-末端测序分析。上面图谱中每个“新”肽段都要经过N-末端序列分析来鉴定。干燥后的肽段溶于0.1%TFA,在ABI蛋白质测序仪中进行测序。对于“Mono-PEG-1”(N-末端PEG化产物),60%的“新”峰产物(77.5分钟时)进行了10个循环的测序。起始得率5%,这意味着N-末端的甲硫氨酸残基被聚乙二醇分子。封闭。必须注意到,象这种起始肽应该引起0起始得率,这里的小于5%值可能是由于在测序分析过程中造成聚乙二醇分子从N-末端甲硫氨酸上脱落下来所致。N-末端肽段序列测定结果为:M-T-P-L-G-P-A-S-S。对于“Mono-PEG-2”(赖氨酸35PEG化产物),收集了66.3分钟处峰值总体积的80%,并对其进行9轮循环测序。赖氨酸35的回收率相当低,意味着PEG化发生在35位赖氨酸上。而41位的赖氨酸回收率与其它氨基酸残基一样,说明该残基未发生修饰。肽在30.3分钟处的峰高比相应标准参照图要低,肽在30.3分钟处的峰面积只为相应肽的57.5%,对其序列测定结果为K-L-C-A-T-Y-K-L。对于“Mono-PEG-3”(赖氨酸41PEG化产物),对于在66.4分钟洗脱的肽收集了峰总体积80%的样品,并对其进行9个循环的测序,检测的序列为K-L-C-A-T-Y-K-L,其中含35和41赖氨酸残基。35位赖氨酸的回收率与其它残基回收率一致,41位的赖氨酸的回收率相当低,意味着PEG化在该处发生。结果:“Mono-PEG-1”为N-末端单个PEG化产物;“Mono-PEG-2”为35赖氨酸部分PEG化产物;“Mono-PEG-3”为41赖氨酸PEG化产物。通过比较对照标准样(非PEG化G-CSF)和单个PEG化的G-CSF 1、2和3的图谱,可以看出“Mono-PEG-2”(Lys35)和“Mono-PEG-3”(Lys41)二者图谱N-末端肽峰高都略微有所下降。这说明赖氨酸35和赖氨酸41的产物中均混杂有少量的N-末端PEG产物,或者N-末端的甲硫氨酸有少部分被PEG化。
4.体外活性。该物质有活性。图4显示的为体外分析结果。从图可以看出,N-末端单个PEG化产物具有未修饰的rhG-CSF活性的68%。方法:G-CSF体外生物测定是合用鼠32D细胞G-CSF依赖性克隆的促有丝分裂试验。细胞以含5%FBS和20ng/ml rhG-CSF的Iscoves培养基进行培养。在加样品之前,细胞用不含rhG-CSF的生长培养基冲洗2次。以48至0.5ng/ml浓度范围(相当于4800~50IU/ml)作12个点的rhG-CSF标准曲线。在标准曲线尝试范围内每份样品制备估计落在标准曲线线型部分内(1000到3000IU/ml)的4种稀释液,并以一式三份。由于这些样品显然在体外活性较低,PEG化rhG-CSF样品一般稀释不到4~10倍。每份40μl体积的样品或标准样稀释液加到含10,000细胞/孔的96孔微滴度板的合适小孔中。在5.5%CO2,37℃培养48小时后,每孔加入0.5μmCi甲基-3H-胸腺嘧啶。18小时后,收获平板细胞并计数,作出剂量反应曲线(logrhG-CSF浓度对CPM-背景)并对落在标准曲线线型部分范围内的点进行线性回归分析。用所得的线性方程及稀释系数校正来测定未知试验样品的浓度。结果:如图4所示。从图4可以看出,三种单个PEG化形式中,N-末端单个PEG化G-CSF在体外显示最高生物活性。
5.体内活性。体内测定也证实了N-末端PEG化的G-CSF的活性。体内测定是给金黄地鼠皮下一次注射0.1mg/kg体重剂量的样品而进行的。每组4只动物在每个时间点经尾部抽血。收集的血样当天进行全血细胞计数,并计算出白细胞平均数目。从图5 A及5B可以看出,在皮下单次注射0.1mg/kg体重剂量样品1天后出现作用高峰。两种单个PEG化产物(N-末端及赖氨酸35)显示出延长的反应,而对赖氨酸41PEG化的蛋白质的反应在体内并没显示出比未修饰的rhG-CSF活性增强(从图5B可看出,其实活性还更差一些)。这些结果表明在蛋白质分子上附着聚乙二醇分子能显著改变蛋白质的治疗效果并且PEG化蛋白质的益处还取决于修饰位点。(单次皮下注射后曲线下的WBC净平均面积(根据CRC标准数学表,26th Ed.(Beyer,W.H.,Ed.)CRC PressInc.,Boca Raton,FL 1981.p.125来计算)与Lys-35及N-末端单个PEG化产物一致)。
E.稳定性研究
另外,对上面制备的N-末端及3 5赖氨酸单个PEG化G-CSF稳定性进行了研究。(41赖氨酸PEG化产物未被研究是因为已证实其没有超出未修饰的G-CSF的额外活性)。研究表明N-末端PEG化的G-CSF在贮存时出人意料地要比单个PEG化的G-CSF的其它形式赖氨酸35单个PEG化产物更稳定。稳定性是以SEC-HPLC监测到产物裂解来测定的。方法:N-末端PEG化G-CSF及赖氨酸35单个PEG化G-CSF研究在4℃2个pH条件下完成的,即pH4.0和pH6.0,每个周期16天。将pH升至6.0是为了使稳定性研究得以更快地进行。pH6.0时,上述所得的N-末端单个PEG化G-CSF和赖氨酸35单个PEG化G-CSF置于含20mM磷酸钠、5mM醋酸钠、2.5%甘露醇、0.005%Tween-80,pH为6.0的缓冲液中至蛋白质终浓度为0.25mg/ml。每毫升等份液贮于3ml无菌注射瓶中。每个注射瓶于4℃及29℃各保存16天。由SEC-HPLC绘图来分析其稳定性。如果后来的测量结果与最初测量结果(时间=0)保持一致(由肉眼观察确定),则样品在那段时间内被认为是稳定的。结果:如图6A-6C所示。(a)4℃pH6.0条件下比较。图6A显示pH6.0,4℃条件下N-末端单个PEG化G-CSF经过一定时间段后的SEC-HPLC图;图6B所示为赖氨酸35单个PEG化G-CSF在pH6.0,4℃条件下经过一定时间段后的SEC-HPLC图。有一种解释认为赖氨酸35PEG化产物的裂解物中,有的分子量正好与未修饰的G-CSF相近。(b)pH4.0,4℃条件下期限延长。pH4.0,4℃条件下提供了的控制条件是一个相当稳定的条件,在该条件下N-末端PEG化G-CSF不降解。对于赖氨酸35PEG化产物,仍发生产物的降解,但其速率要缓慢得多。(c)pH4.0,4℃条件下的稳定性比较。图6C显示在这些条件下,延长时间期限时,G-CSSF的单个PEG化产物的SEC-HPLC图。从图可以看出,在pH6.0,4℃条件下,PEG化的赖氨酸35在16天或35天时的去PEG水平增加不高于6天时所见水平(见图6B)。这意味着去PEG化水平(不稳定性)有6天后,该条件下一直保持未变。
实施例2
本实施例陈述了一种利用还原性烷基化反应来制备单个PEG化G-CSF的基本上均一的群体的方法,和该群体的特征鉴定。在此使用了上面实施例所述的重组G-CSF。可以看出,此方法不仅在制备N-末端化学修饰的蛋白质方面具有优越性,而且本还原性烷基化反应过程中的胺键产生实质上更稳定的产物,正如在贮存时聚集程度的较大差异所显示的。
A.在N-末端α-氨基残基上附着的单甲氧聚乙二醇-GCSF连接物的制备。
制备rhG-CSF反应溶液(1ml,浓度为5mg/ml,如上面实施例中所述),内含100mM磷酸钠,pH5.0,还含有2 0mM NaCNBH3,将其充分搅拌冷冻(4℃)后,加入摩尔数超出5倍的甲氧聚乙二醇醛(MPEG)(平均分子量为6kDa)。反应混合物在相同温度下持续搅拌。
反应过程中蛋白质的修饰程度用SEC-HPLC来对其监测,SEC-HPLC使用的是Bio-Sil SEC 250-5柱(BIO-RAD),在pH6.8条件下,用0.05M NaH2PO4,0.05M Na2HPO4,0.15M NaCl,0.01MNaN3,缓冲液以1ml/min流速进行洗脱。
10小时后SEC HPLC分析结果显示,已有92%的蛋白质转变成mono-MPEG-GCSF衍生物。这从图7可以看出,其中记录了蛋白质浓度(以在A280处的吸光率测得),显示了在8.72分钟时出现的单个PEG化G-CSF产物的洗脱峰,在9.78分钟出现的未发生反应的G-CSF的较小洗脱峰。
作为比较图8显示了用MPEG的N-羟琥珀酰脂所得的峰。其分子量也为6kDa。从图可以看出,在反应混合物中有:tri-MPEG-GCSF连接物(峰肩均在7.25分钟),di-MPEG-GCSF连接物(峰值在7.62min),mono-MPEG-GCSF连接物(峰值在9.87min)。
在10小时时间点,92%的蛋白质已被转化成单个PEG化产品,其反应混合物的pH以100mM HCl调至pH4.0,并用1mM HCl将反应混合物稀释5倍。
mono-MPEG-GCSF衍生物用离子交换色谱法合用以20mM的醋酸钠缓冲液pH为4.0平衡的HiLoad 16/10 S Sepharose HP柱(Pharmacia)进行纯化。反应混合物以1ml/min流速装柱,未反应的MPEG以3倍于柱体积的相同缓冲液进行洗脱。然后进行400分钟的线性梯度洗脱,20mM醋酸钠浓度从0%~45%,pH4.0,内含1M NaCl,在4℃洗脱蛋白质-聚合物连接物。
将含mono-MPEG-GCSF衍生物的收集管合并,浓缩和过滤灭菌。
用不同平均分子量(12、20和25kDa)的MPEG醛修饰rh-G-CSF而得到的各种形式mono-MPEG-GCSF连接物以相似方法制备。
B.单个PEG化G-CSF的分析
1.分子量
利用SDS-PAGE,凝胶过滤,基质辅助激光解析质谱分析(matrix assisted laser desorption),以及平衡离心法测定单个PEG化连接物的分子量。结果如下表4所示。
表4
N-束端烷基化Mono-MPEG-GCSF连接物分子量连接物 估计的 凝胶过滤 质谱测 超离心测
分子量 测分子量 分子量 分子量MPEG-(6kDa)- 24800 53024 24737 25548G-CSFMPEG-(12kDa)- 30800 124343 30703 29711GCSFMPEG-(20kDa)- 38800 221876 38577 38196GCSFMPEG-(25 kDa)- 43800 333266 N/D N/DGCSF
制备的N-末端mono-MPEG-GCSF连接物结构以N-末端蛋白质序列分析和肽酶切图谱法加以证实。N-末端用硫氨酰残基的溴化氰裂解导致聚乙二醇分子的除去。
2.生物活性
PEG化MPEG-GCSF连接物的体外生物活性经过测定刺激鼠骨髓细胞对3H胸腺嘧啶的吸收来测定。
体内生物活性经过将MPEG-GCSF连接物或rhG-CSF(100mg/克体重剂量)皮下注射仓鼠后测量其总白细胞数目来测定。与未修饰的G-CSF相比,PEG化G-CSF生物活性的计算是以WB/时间曲线下面积减去载体对照曲线下面积而得到的。MPEG-GCSF衍生物的相对活性的表示是以其与未修饰的G-CSF相比的百分活性加以描述的。
如图9所示,显示了对用不同分子量(6kDa、12kDa及20kDa)的MPEG醛经还原性烷基反应而制得的mono-N-末端MPEG-GCSF连接物的总白细胞数目反应。从图可以看出,所有单个PEG化产物均诱导反应。除了12kDa的PEG在第二天白细胞数目较20kDa PEG产物作用后白细胞数目稍大外,所用的聚乙二醇分子量越大,获得的白细胞数目会越多。
3.稳定性研究
比较了用两种不同的化学方法(这里指胺及酰胺的还原性烷基化反应)制备的N-末端PEG化G-CSF的聚合程度。出乎意料的是,发现以胺键形成的N-末端PEG化G-CSF要比以酰胺键(实施例1中所述的NHS法)形成的N-末端PEG化G-CSF稳定得多。
方法:两种形式的N-末端PEG化G-CSF产物置于pH4.0的10mMNaOac中,其中含5%的山梨醇,蛋白质分子终浓度为每ml溶液中含1mg蛋白质。G-CSF都用PEG6000PEG化。酰胺键连接物制备按实施例1,胺键连接物制备按实施例2进行。每种形式的6等份样品在45℃保存8周。8周后,以分子筛层析及离子交换色谱测定聚集程度。
结果:结果表明本发明的还原性烷基化反应产物要比乙酰化产物优越得多,因为,令人吃惊的是,在升高的温度条件下产物经8周后,前者的聚集程度要比后者的要小得多。下表为两种形式产物经分子筛层析(SEC)或离子交换色谱(IE)分析后各自未发生聚集的百分数:
表5
样本45℃下8周 %主峰SEC/IE
胺键产物 82%/84%
酰胺键产物 37%/65%*
*该值相对较高是因为离子交换色谱不能够进行聚集程度的彻底分析。
实施例3
该实施例描述化学修饰的共有干扰素。更具体地说,该实施例描述了一种制备单个PEG化IFN-con1的基本上均一的群体的方法,及该群体的特征鉴定。
应该注意到,虽然本实施例中用的是IFN-con1,但上述的任一共有干扰素均可被化学修饰。尽管本实施例中使用了聚乙二醇进行修饰,但象这种化学修饰可用上述任一水溶性聚合物进行。对于PEG化作用,虽然本实施例中使用的是PEG12000,但其它任何形式的水溶性PEG均可使用(此处使用PEG12000是为了和易于处理和方便)。同样,这里也有很多种化学修饰方法(诸如乙酰化反应),但对于选择性N-末端化学修饰(如N-末端PEG化反应)来说,最好还是用该实施例中所述的还原性化反应。
A.共有干扰素的制备
干扰素IFN-αcon1(在这里指IFN-con1(可参见美国专利No.4,695,623图2中的描述(引用其全文以供参考)它胜于制备单个PEG化共有干扰素。IFN-con1是在细菌中表达外源性DNA而产生的,其N-末端具有一个甲硫氨酰残基。
B.共有干扰素的PEG化
IFN-con1溶液(3.45mg/ml,含35.25%的N-末端封闭形式)溶于磷酸钠浓度为100mM,pH4.0内含20mM NaCNBH3的溶液中,4℃冷却后充分混匀,加入超出8倍摩尔量的甲氧聚乙二醇醛(MPEG)(平均分子量为12kDa)。
在反应过程中蛋白质的修饰程度用反相HPLC来监测,HPLC以多聚(苯乙烯/二乙烯基苯)进行装柱,如PLRP-S(PL SeperationSciences Polymer Labaratories)。
10小时后,反相HPLC分析结果表明,80%的N-末端具有未封闭的α氨基的蛋白质转变成MPEG-IFN-con1衍生物。
在10小时时间点,反应混合物用水稀释5倍,mono-MPEG-IFN-con1衍生物的纯化用离子交换层析来完成,其所用的柱为Hiload16/10 S Sepharose HP柱(Pharmacia),以20mM的醋酸钠缓冲液pH 4.0加以平衡。反应混合物以1ml/min的流速装入柱内,未反应的MPEG醛以3倍于柱体积的相同缓冲液加以洗脱。然后在4℃条件下进行蛋白质-聚合物连接物分子的洗脱,以0%~75%的20mM醋酸钠缓冲液进行线性洗脱420分钟。缓冲液pH为4.0,含有1M NaCl。
合并含mono-MPEG-IFN-con1衍生物的馏分,经浓缩后再过滤灭菌。
C.单个PEG化共有干扰素的分析
1.均一性
纯化的mono-MPEG-IFN-con1连接物均一性通过SDS-PAGE加以检测,SDS-PAGE用的是10-20%或4-20%的预制梯度胶(Integrated Separation System)。凝胶显示主要带在分子量为35kDa处。
各种形式mono-MPEG-IFN-con1的有效半径(流体动力学半径)测定用的是Superose 6HR 10/30(Pharmacia)凝胶过滤柱。在280nm处经紫外吸收测定蛋白质。BIO—RAD凝胶过滤标准品作为球状蛋白质分子量标记。
纯化的N-末端mono—MPEG—IFN—con1连接物结构采用N-末端蛋白质测序及肽酶切图谱来加以证实。
在这里必须注意该IFN—con1制品中含有一些N-末端封闭物质,它们未发生PEG化。然而,PEG化的物质匀为N-末端单个PEG化。因而,在这种情况下,可考虑能用其它方法将末端封闭和未封闭的产物分开,如用离子交换层析或分子筛分析法。
2.生物活性
mono-MPEG-IFN con1连接物体外生物活性是经过测定其抗病毒活性来测定的。mono-MPEG-IFN con1连接物的体外生物活性经过测定其在人(Hela)细胞中的抗病毒生物活性来确定。
发现mono-MPEG(12kDa)-IFN-conl连接物体外生物活性(U/mg蛋白质为未修饰IFN-con1活性的20%。正如前面所述的PEG化G-CSF,体外分析虽然对了解生物活性有一定作用,但由于特征性缓慢释放,常测得的化学修饰蛋白质活性很低。体内生物活性要比体外高。
D.N-末端封闭分子去除后化学修饰的共有干扰素。
前面所述的IFN—con1经预先去除其中的N-末端封闭分子部分之后,也进行本发明的还原性烷基化反应。在上面所述的还原性烷基化反应。在上面所述的还原性烷基化方法中使用了PEG12000和PEG20000两种分子。
该分子的表观分子量如下
连接物 凝胶过滤测得的 SDS—PAG测得
表观分子量 的表观分子量monoMPEG(12kDa) 104.0kDa 35.6kDa
IFN-con1monoMPEG(20kDa) 175.1kDa 55.4kDa
IFN-con1
IFN-con1 20kDa PEG连接物的FPLC离子交换色谱分析结果中出现3个峰:
MonoMPEG-IFN-con1:占总面积的66%(洗脱至265.93ml)。
蛋白质聚集物(aggregate)及寡聚MPEG-IFN-con1连接物:占总面积的24%(洗脱至238.42ml)以及
未反应的IFN-con1:占10%的总面积(洗脱至328.77ml)。
该条件尚未进一步优化,可用色谱或其它方法进一步分离单个PEG化的物质。
尽管用优选的实施例描述了本发明,但应明白对于本领域的技术人员而言可进行变动和修改。因此,在所附的权利要求书中试图覆盖所有落在所要求的本发明范围内的等价变化。
序列表(1)一般信息:(i)申请人:AMGEN INC(ii)发明题目:N-末端化学修饰的蛋白质组合物及方法。(iii)序列个数:2(iv)联系地址:
(A)地址:Amgen Inc.
(B)街道:1840 Dehavilland Drive
(C)城市:Thousand Daks
(D)州:California
(E)国家:USA
(F)邮政区号:91320(v)计算机可读形式:
(A)贮存介质:软磁盘
(B)计算机:IBM PC兼容机
(C)操作系统:PC-DOS/MS-DOS
(D)软件:PatentIn Release #1.0,#1.25.版(vi)当前的申请资料:
(A)申请号码:
(B)申请日:
(C)分类:(viii)代理人/代理信息:
(A)姓名:Pessin,Karol M.
(B)参考/摘要号:A-286(2)SEQ ID NO:1信息:
(i)序列特征:
(A)长度:531碱基对
(B)类型:核酸
(C)链型:单链
(D)拓扑学特征:线形(ii)分子类型:cDNA(xi)序列描述:SEQ ID NO:1:ATGACTCCAT TAGGTCCTGC TTCTTCTCTG CCGCAAAGCT TTCTGCTGAA ATGTCTGGAA 60CAGGTTCGTA AAATCCAGGG TGACGGTGCT GCACTGCAAG AAAAACTGTG CGCTACTTAC 120AAACTGTGCC ATCCGGAAGA GCTGGTACTG CTGGGTCATT CTCTTGGGAT CCCGTGGGCT 180CCGCTGTCTT CTTGTCCATC TCAAGCTCTT CAGCTGGCTG GTTGTCTGTC TCAACTGCAT 240TCTGGTCTGT TCCTGTATCA GGGTCTTCTG CAAGCTCTGG AAGGTATCTC TCCGGAACTG 300GGTCCGACTC TGGACACTCT GCAGCTAGAT GTAGCTGACT TTGCTACTAC TATTTGGCAA 360CAGATGGAAG AGCTCGGTAT GGCACCAGCT CTGCAACCGA CTCAAGGTGC TATGCCGGCA 420TTCGCTTCTG CATTCCAGCG TCGTGCAGGA GGTGTACTGG TTGCTTCTCA TCTGCAATCT 480TTCCTGGAAG TATCTTACCG TGTTCTGCGT GATCTGGCTC AGCCGTAATA G 531(2)SEQ ID NO:2信息:(i)序列特征:
(A)长度:175氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)链型:单链
(D)拓扑学特征:线形(ii)分子类型:蛋白质(xi)序列描述:SEQ ID NO:2:Met Thr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gln Ser Phe Leu Leu1 5 10 15Lys Cys Leu Glu Gln Val Arg Lys Ile Gln Gly Asp Gly Ala Ala Leu
20 25 30Gln Glu Lys Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu
35 40 45Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly Ile Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser
50 55 60Cys Pro Ser Gln Ala Leu Gln Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gln Leu His65 70 75 80Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gln Gly Leu Leu Gln Ala Leu Glu Gly Ile
85 90 95Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gln Leu Asp Val Ala
100 105 110Asp Phe Ala Thr Thr Ile Trp Gln Gln Met Glu Glu Leu Gly Met Ala
115 120 125Pro Ala Leu Gln Pro Thr Gln Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala
130 135 140Phe Gln Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gln Ser145 150 155 160Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gln Pro
165 170 175
Claims (38)
1.N-末端化学修饰的G-CSF或其类似物的基本上均一制品,任选存在于药用上可接受的稀释剂、载体或佐剂中。
2.权利要求1的制品,其中所说的G-CSF用选自葡聚糖、多聚(n-乙烯吡咯烷酮)、聚乙二醇、丙二醇(propropylene glycol)均聚体、聚氧化丙烯/氧化乙烯(prolypropylene oxide/ethyleneoxide)共聚体、聚氧乙烯多元醇(polyoxyethylated polyols)及聚乙烯醇的化学物质进行化学修饰。
3.权利要求2的制品,其中所说的G-CSF或其类似物用聚乙二醇进行化学修饰。
4.权利要求3的制品,其中所说的聚乙二醇具有在大约2kDa到100kDa之间的分子量。
5.权利要求4的制品,其中所说的聚乙二醇具有约在6kDa与25kDa之间的分子量。
6.权利要求1的制品,其中所说的制品由至少90%N-末端单个PEG化的G-CSF或其类似物及至多10%的未发生PEG化的G-CSF或其类似物组成。
7.权利要求6的制品,其中所说的制品由至少95%N-末端单个PEG化的G-CSF或其类似物及至多5%的未发生PEG化的G-CSF或其类似物组成。
8.权利要求1的制品,其中所说的G-CSF具有在SEQ ID NO.1中鉴定的序列。
9.N-末端单个PEG化的G-CSF的基本上均一的制品,任选存在于药用上可接受的稀释剂、载体或者佐剂中,其中:(a)所说的G-CSF具有在SEQ ID NO.1中鉴定的氨基酸序列;(b)所说的G-CSF用分子量为大约12kDa的聚乙二醇部分单个PEG化。
10.一种药用组合物包括:(a)单个PEG化的G-CSF的基本上均一的制品,所说的单个PEG化的G-CSF由具有分子量约12kDa的聚乙二醇部分通过胺键仅在其N-末端连接到G-CSF部分上组成;(b)不到5%的非PEG化G-CSF分子及(c)药用上可接受的稀释剂、佐剂或载体。
11.治疗造血紊乱疾病的方法,包括施用治疗上有效量的权利要求1-10中任意一项的制品。
12.一种将水溶性聚合物分子附着到蛋白质或其类似物上的方法,其中所说的水溶性聚合物具有单个反应醛基,所说的方法包括:
(a)在还原性烷基化条件下,在足够酸性以选择性激活所说蛋白质部分氨基末端α-氨基基团,以便使水溶性聚合物选择性地附着到所说α-氨基上的pH值下将蛋白质部分与水溶性聚合物部分反应;和
(b)获得反应混合物和
(c)任选从未发生反应的部分中分离反应产物。
13.权利要求12的方法,其中所说的聚合物是药用上可接受的。
14.权利要求12的方法,其中所说的水溶性聚合物选自:葡聚糖、多聚(n-乙烯吡咯烷酮)、聚乙二醇、丙二醇均聚体、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯多元醇及聚乙烯醇。
15.权利要求14的方法,其中所说的多聚体是聚乙二醇。
16.权利要求12的方法,其中所说的还原性烷基化反应涉及使用选自硼氢化钠、氰基硼氢钠,硼酸二甲胺、硼酸三甲胺及硼酸吡啶的还原剂。
17.一种将聚乙二醇分子附着到G-CSF分子上的方法,其中所说的聚乙二醇分子含有单个反应醛基,所说的方法包括:
(a)在还原性烷基化反应条件下,足够酸性以选择性地激活所说G-CSF氨基末端α-氨基基团的pH值下,使所说的G-CSF与所说的聚乙二醇分子反应;和
(b)获得PEG化的G-CSF和
(c)任选从非PEG化G-CSF中分离出PEG化G-CSF。
18.权利要求17的方法,其中所说的聚乙二醇分子量为大约6kDa到大约25kDa。
19.以权利要求17的方法生产的PEG化G-CSF产品。
20.化学修饰的共有干扰素,由共有干扰素蛋白质部分连接到至少一个水溶性聚合物部分上组成。
21.权利要求20的化学修饰的共有干扰素,其中所说的共有干扰素部分选自IFN-con1、IFN-con2及IFN-con3。
22.权利要求21的化学修饰的共有干扰素,其中所说的水溶性聚合物是药用上可接受的。
23.权利要求20的化学修饰的共有干扰素,其中所说的水溶性聚合物选自:葡聚糖、多聚(n-乙烯吡咯烷酮)、聚乙二醇、丙二醇均聚体、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚体、聚氧乙烯多元醇及聚乙烯醇。
24.根据权利要求23的化学修饰的共有干扰素,其中所说的水溶性聚合物部分是聚乙二醇。
25.根据权利要求20的化学修饰的共有干扰素,其中所说的水溶性聚合物部分不用另外的连接基团直接连接到所说的共有干扰素部分上。
26.一种化学修饰的共有干扰素由IFN-con1连接到至少一个聚乙二醇部分上组成。
27.PEG化的共有干扰素。
28.一种向共有干扰素上附着水溶性聚合物的方法,其中所说的水溶性聚合物具有单个反应醛基,所说的方法包括:
(a)在还原性烷基化条件下,在足够酸性以选择性激活所说的共有干扰素部分氨基末端α-氨基基团的pH值下,使共有干扰素部分与水溶性多聚体部分反应;
(b)获得反应产物和
(c)可任选地从未发生反应的部分中分离反应产物。
29.权利要求28的方法,其中所说的聚合物是药用上可接受的。
30.权利要求28的方法,其中所说的水溶性聚合物选自:葡聚糖、多聚(n-乙烯吡咯烷酮)、聚乙二醇、丙二醇均聚体、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚体、聚氧乙烯多元醇及聚乙烯醇。
31.权利要求30的方法,其中所说的聚合物为聚乙二醇。
32.权利要求28的方法,其中所说的还原性烷基化反应涉及使用选自硼氢化钠、氰基硼氢钠、硼酸二甲胺、硼酸三甲胺及硼酸吡啶的还原剂。
33.一种向共有干扰素分子上附着聚乙二醇分子的方法,其中所说的聚乙二醇分子具有单个反应醛基,所说的方法包括:
(a)在还原性烷基化条件下,在足够酸性以选择性激活所说的共有干扰素末端α-氨基基团的pH值下,使所说的共有干扰素与所说的聚乙二醇分子反应;
(b)获得PEG化的共有干扰素和
(c)可任选地从未发生PEG化的共有干扰素中分离出PEG化的共有干扰素。
34.权利要求33的方法,其中所说的聚乙二醇分子具有大约2kDa到大约100kDa的分子量。
35.以权利要求33的方法所生产的PEG化共有干扰素产品。
36.单个PEG化的共有干扰素的基本均一的制品。
37.权利要求36的制品,包括大约90%单个PEG化的共有干扰素及大约10%的末PEG化的共有干扰素。
38.一种药用组合物,包括(a)单个PEG化的共有干扰素的基本上均一的制品,所说的单个PEG化的共有干扰素由一个聚乙二醇部分连接到共有干扰素部分上组成,该连接通过胺键并仅在其N末端;(b)少于5%的未PEG化的共有干扰素分子;和(c)一种药用上可接受的稀释剂、佐剂或载体。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/321,510 US5824784A (en) | 1994-10-12 | 1994-10-12 | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
US08/321,510 | 1994-10-12 |
Related Child Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2008101276757A Division CN101381409B (zh) | 1994-10-12 | 1995-02-08 | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 |
CNB001309749A Division CN1229388C (zh) | 1994-10-12 | 1995-02-08 | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1139932A true CN1139932A (zh) | 1997-01-08 |
CN1071760C CN1071760C (zh) | 2001-09-26 |
Family
ID=23250903
Family Applications (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2008101276757A Expired - Lifetime CN101381409B (zh) | 1994-10-12 | 1995-02-08 | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 |
CN95191454A Expired - Lifetime CN1071760C (zh) | 1994-10-12 | 1995-02-08 | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 |
CNB001309749A Expired - Lifetime CN1229388C (zh) | 1994-10-12 | 1995-02-08 | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 |
CNA2005101137680A Pending CN1896103A (zh) | 1994-10-12 | 1995-02-08 | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2008101276757A Expired - Lifetime CN101381409B (zh) | 1994-10-12 | 1995-02-08 | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB001309749A Expired - Lifetime CN1229388C (zh) | 1994-10-12 | 1995-02-08 | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 |
CNA2005101137680A Pending CN1896103A (zh) | 1994-10-12 | 1995-02-08 | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (7) | US5824784A (zh) |
EP (5) | EP2392594A1 (zh) |
JP (8) | JP3177251B2 (zh) |
KR (2) | KR100248111B1 (zh) |
CN (4) | CN101381409B (zh) |
AT (2) | ATE179991T1 (zh) |
CA (3) | CA2472085A1 (zh) |
DE (3) | DE10299044I1 (zh) |
DK (1) | DK0733067T3 (zh) |
ES (2) | ES2131811T3 (zh) |
GR (1) | GR3030526T3 (zh) |
HK (2) | HK1008787A1 (zh) |
IL (3) | IL112585A (zh) |
LU (1) | LU91006I2 (zh) |
MX (1) | MX9602259A (zh) |
NL (1) | NL300106I2 (zh) |
NZ (1) | NZ281469A (zh) |
PT (1) | PT822199E (zh) |
WO (1) | WO1996011953A1 (zh) |
ZA (1) | ZA951008B (zh) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1321134C (zh) * | 2000-11-23 | 2007-06-13 | 赵剑 | 一种生物活性蛋白质的非均一制品及其制备方法 |
CN102234310A (zh) * | 2010-04-30 | 2011-11-09 | 杭州九源基因工程有限公司 | 一种聚乙二醇修饰蛋白的分离纯化方法 |
WO2012055205A1 (zh) * | 2010-10-25 | 2012-05-03 | 重庆富进生物医药有限公司 | 聚乙二醇化的重组集成干扰素变异体偶联物及其制备方法和应用 |
CN102485742A (zh) * | 2010-12-02 | 2012-06-06 | 山东新时代药业有限公司 | 一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子的制备及分离纯化方法 |
CN103908660A (zh) * | 2013-01-05 | 2014-07-09 | 石药集团百克(山东)生物制药有限公司 | 一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF药物组合物及其制备方法 |
CN104491843A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-04-08 | 石药集团百克(山东)生物制药有限公司 | 一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF活性药物组合物 |
Families Citing this family (543)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE135370T1 (de) * | 1988-12-22 | 1996-03-15 | Kirin Amgen Inc | Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor |
US20020177688A1 (en) * | 1988-12-22 | 2002-11-28 | Kirin-Amgen, Inc., | Chemically-modified G-CSF |
US5581476A (en) * | 1993-01-28 | 1996-12-03 | Amgen Inc. | Computer-based methods and articles of manufacture for preparing G-CSF analogs |
US5951974A (en) * | 1993-11-10 | 1999-09-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates |
AU1916295A (en) * | 1994-02-08 | 1995-08-29 | Amgen, Inc. | Oral delivery of chemically modified proteins |
US6001968A (en) | 1994-08-17 | 1999-12-14 | The Rockefeller University | OB polypeptides, modified forms and compositions |
US6429290B1 (en) | 1994-08-17 | 2002-08-06 | The Rockefeller University | OB polypeptides, modified forms and derivatives |
US20030053982A1 (en) * | 1994-09-26 | 2003-03-20 | Kinstler Olaf B. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
US5824784A (en) | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
WO1996041813A2 (en) * | 1994-11-09 | 1996-12-27 | Offord Robin E | Functionalized polymers for site-specific attachment |
US5795587A (en) | 1995-01-23 | 1998-08-18 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
US6008202A (en) * | 1995-01-23 | 1999-12-28 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
CA2236591C (en) | 1995-11-02 | 2012-01-03 | Schering Corporation | Continuous low-dose cytokine infusion therapy |
US5908621A (en) | 1995-11-02 | 1999-06-01 | Schering Corporation | Polyethylene glycol modified interferon therapy |
TW517067B (en) * | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
EP2002846B1 (en) | 1996-12-06 | 2017-01-25 | Amgen Inc. | Combination therapy using an IL-1 inhibitor for treating IL-1 mediated diseases |
AU5773798A (en) * | 1997-01-29 | 1998-08-18 | Polymasc Pharmaceuticals Plc | Pegylation process |
US6583267B2 (en) | 1997-06-06 | 2003-06-24 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Chemically modified polypeptides |
US20080076706A1 (en) | 1997-07-14 | 2008-03-27 | Bolder Biotechnology, Inc. | Derivatives of Growth Hormone and Related Proteins, and Methods of Use Thereof |
US6753165B1 (en) * | 1999-01-14 | 2004-06-22 | Bolder Biotechnology, Inc. | Methods for making proteins containing free cysteine residues |
EP1012184B1 (en) * | 1997-07-14 | 2007-10-10 | Bolder Biotechnology, Inc. | Derivatives of growth hormone and related proteins |
US6017876A (en) * | 1997-08-15 | 2000-01-25 | Amgen Inc. | Chemical modification of granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) bioactivity |
US5985263A (en) * | 1997-12-19 | 1999-11-16 | Enzon, Inc. | Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates |
US5981709A (en) * | 1997-12-19 | 1999-11-09 | Enzon, Inc. | α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same |
JP4574007B2 (ja) * | 1998-04-28 | 2010-11-04 | メルク・セローノ・ソシエテ・アノニム | ポリオール−ifn−ベータ複体 |
CZ300540B6 (cs) * | 1998-05-15 | 2009-06-10 | Schering Corporation | Farmaceutický prostredek obsahující ribavirin v kombinaci s interferonem alfa pro lécbu pacientu s chronickou infekcí hepatitidy C genotypu 1 |
NL1009601C2 (nl) * | 1998-07-09 | 2000-01-11 | Univ Utrecht | Verbinding welke de binding van een eiwit aan mestcellen kan remmen, toepassing van de verbinding voor de bereiding van een geneesmiddel, een farmaceutisch preparaat, een werkwijze voor het diagnostiseren van een ziekte en een selectiewerkwijze. |
WO2000004041A2 (en) * | 1998-07-16 | 2000-01-27 | Hyseq, Inc. | Methods and molecules relating to cd39-like polypeptides |
CA2338665C (en) * | 1998-08-06 | 2011-01-18 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Peg-urate oxidase conjugates and use thereof |
US6783965B1 (en) | 2000-02-10 | 2004-08-31 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
US6420339B1 (en) | 1998-10-14 | 2002-07-16 | Amgen Inc. | Site-directed dual pegylation of proteins for improved bioactivity and biocompatibility |
BR9915548A (pt) * | 1998-10-16 | 2001-08-14 | Biogen Inc | Proteìnas de fusão de interferon-beta e usos |
DE69930015T2 (de) | 1998-10-16 | 2006-10-12 | Biogen Idec Ma Inc., Cambridge | Polymerkonjugate von interferon-beta-1a und deren verwendungen |
US6660843B1 (en) | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
TWI257394B (en) | 1998-10-23 | 2006-07-01 | Kirin Amgen Inc | Thrombopoietic compounds |
US7488590B2 (en) | 1998-10-23 | 2009-02-10 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
CA2352538A1 (en) * | 1998-11-30 | 2000-06-08 | Eli Lilly And Company | Erythropoietic compounds |
US8288126B2 (en) | 1999-01-14 | 2012-10-16 | Bolder Biotechnology, Inc. | Methods for making proteins containing free cysteine residues |
BR122013003013B8 (pt) | 1999-01-14 | 2021-07-06 | Bolder Biotechnology Inc | proteína isolada monopeguilada do hormônio do crescimento e método para sua obtenção |
ATE246202T1 (de) * | 1999-01-29 | 2003-08-15 | Hoffmann La Roche | Gcsf konjugate |
EP1369429A1 (en) * | 1999-01-29 | 2003-12-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | GCSF conjugates |
WO2000051626A1 (fr) * | 1999-03-01 | 2000-09-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Preparations de g-csf modifiees chimiquement |
US6485718B1 (en) | 1999-04-13 | 2002-11-26 | Pharmacia Corporation | Site specific ligation of proteins to synthetic particles |
US6924264B1 (en) | 1999-04-30 | 2005-08-02 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Modified exendins and exendin agonists |
US7160924B2 (en) * | 2002-07-19 | 2007-01-09 | The General Hospital Corporation | Protein conjugates with a water-soluble biocompatible, biodegradable polymer |
US8106098B2 (en) * | 1999-08-09 | 2012-01-31 | The General Hospital Corporation | Protein conjugates with a water-soluble biocompatible, biodegradable polymer |
US7459540B1 (en) | 1999-09-07 | 2008-12-02 | Amgen Inc. | Fibroblast growth factor-like polypeptides |
US7074878B1 (en) | 1999-12-10 | 2006-07-11 | Harris J Milton | Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom |
US6348558B1 (en) | 1999-12-10 | 2002-02-19 | Shearwater Corporation | Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom |
ES2327606T3 (es) | 2000-01-10 | 2009-11-02 | Maxygen Holdings Ltd | Conjugados de g-csf. |
US6646110B2 (en) * | 2000-01-10 | 2003-11-11 | Maxygen Holdings Ltd. | G-CSF polypeptides and conjugates |
US6831158B2 (en) * | 2000-01-10 | 2004-12-14 | Maxygen Holdings Ltd. | G-CSF conjugates |
US6555660B2 (en) * | 2000-01-10 | 2003-04-29 | Maxygen Holdings Ltd. | G-CSF conjugates |
US7049761B2 (en) * | 2000-02-11 | 2006-05-23 | Altair Engineering, Inc. | Light tube and power supply circuit |
DE60138364D1 (de) | 2000-02-11 | 2009-05-28 | Bayer Healthcare Llc | Gerinnungsfaktor vii oder viia konjugate |
DE60103940T2 (de) | 2000-02-29 | 2005-07-28 | Pfizer Products Inc., Groton | Stabilisierter Granulozyten-Kolonie-stimulierender Faktor |
US20020064820A1 (en) * | 2000-03-13 | 2002-05-30 | Jean-Michel Dayer | Apo-A-I regulation of T-cell signaling |
WO2001076639A2 (en) * | 2000-04-06 | 2001-10-18 | Pharmacia Corporation | Chemically-modified myelopoietin conjugates |
US6586398B1 (en) * | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
WO2001079469A2 (en) * | 2000-04-14 | 2001-10-25 | University Of South Carolina Research Foundation | Cloning of corynebacteriaceae histidine ammonia lyase and therapeutic uses |
WO2001081376A2 (en) | 2000-04-21 | 2001-11-01 | Amgen Inc. | Apo-ai/aii peptide derivatives |
US6677136B2 (en) | 2000-05-03 | 2004-01-13 | Amgen Inc. | Glucagon antagonists |
US20030211094A1 (en) * | 2001-06-26 | 2003-11-13 | Nelsestuen Gary L. | High molecular weight derivatives of vitamin k-dependent polypeptides |
AU2001273387A1 (en) * | 2000-07-12 | 2002-01-21 | Gryphon Therapeutics, Inc. | Polymer-modified bioactive synthetic chemokines, and methods for their manufacture and use |
CN1454097A (zh) * | 2000-09-08 | 2003-11-05 | 格莱风治疗公司 | 聚合物修饰的合成的蛋白质类 |
US7118737B2 (en) * | 2000-09-08 | 2006-10-10 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Polymer-modified synthetic proteins |
ES2367891T3 (es) * | 2000-09-29 | 2011-11-10 | Schering Corporation | Interleucina-10 pegilada. |
JP5170931B2 (ja) * | 2000-10-16 | 2013-03-27 | 中外製薬株式会社 | Peg修飾エリスロポエチン |
US6706289B2 (en) * | 2000-10-31 | 2004-03-16 | Pr Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules |
EP1334127A1 (en) * | 2000-11-02 | 2003-08-13 | Maxygen Aps | Single-chain multimeric polypeptides |
JP2004515533A (ja) * | 2000-12-14 | 2004-05-27 | アミリン・ファーマシューティカルズ,インコーポレイテッド | 代謝障害を治療するためのペプチドyyおよびペプチドyyアゴニスト |
TW593427B (en) * | 2000-12-18 | 2004-06-21 | Nektar Therapeutics Al Corp | Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives |
US7053150B2 (en) * | 2000-12-18 | 2006-05-30 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Segmented polymers and their conjugates |
MXPA03005406A (es) * | 2000-12-20 | 2003-09-25 | Hoffmann La Roche | Conjugados de eritropoyetina. |
US7442370B2 (en) | 2001-02-01 | 2008-10-28 | Biogen Idec Ma Inc. | Polymer conjugates of mutated neublastin |
DE60227367D1 (de) * | 2001-02-06 | 2008-08-14 | Merck Patent Gmbh | Modifizierter granulozyten stimulierender factor (g-csf) mit verringerter immunogenität |
EP1234583A1 (en) * | 2001-02-23 | 2002-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | PEG-conjugates of HGF-NK4 |
ATE432288T1 (de) | 2001-02-27 | 2009-06-15 | Maxygen Aps | Neue interferon-beta-ähnliche moleküle |
US7276580B2 (en) | 2001-03-12 | 2007-10-02 | Biogen Idec Ma Inc. | Neurotrophic factors |
US7247618B2 (en) * | 2001-04-30 | 2007-07-24 | Tripathi Rajavashisth | Methods for inhibiting macrophage colony stimulating factor and c-FMS-dependent cell signaling |
CA2445947A1 (en) * | 2001-04-30 | 2002-11-07 | Targeted Genetics Corporation | Lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
RS51708B (sr) | 2001-05-11 | 2011-10-31 | Amgen Inc. | Peptidi i njima srodni molekuli koji se vezuju za tall-1 |
US7229810B2 (en) * | 2001-06-28 | 2007-06-12 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates of proteinases |
MXPA04000231A (es) * | 2001-07-11 | 2004-05-04 | Maxygen Holdings Ltd | Conjugados del factor de estimulacion de colonias de granulocitos. |
US20040077835A1 (en) * | 2001-07-12 | 2004-04-22 | Robin Offord | Chemokine receptor modulators, production and use |
IL160965A0 (en) * | 2001-10-05 | 2004-08-31 | Intermune Inc | Method of treating hepatitis virus infection with a multiphasic interferon delivery profile |
US7084257B2 (en) | 2001-10-05 | 2006-08-01 | Amgen Inc. | Fully human antibody Fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity |
US6908963B2 (en) * | 2001-10-09 | 2005-06-21 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith |
US7173003B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-06 | Neose Technologies, Inc. | Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF |
WO2004099231A2 (en) | 2003-04-09 | 2004-11-18 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
US7157277B2 (en) | 2001-11-28 | 2007-01-02 | Neose Technologies, Inc. | Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII |
US7214660B2 (en) * | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
US7138370B2 (en) | 2001-10-11 | 2006-11-21 | Amgen Inc. | Specific binding agents of human angiopoietin-2 |
EP2236161A1 (en) | 2001-10-18 | 2010-10-06 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of opioid antagonists |
AU2002366023B2 (en) * | 2001-11-19 | 2007-10-25 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Drug mobilizing pluripotent stem cells from tissue into peripheral blood |
US20030171285A1 (en) * | 2001-11-20 | 2003-09-11 | Finn Rory F. | Chemically-modified human growth hormone conjugates |
AU2002356990A1 (en) * | 2001-11-20 | 2003-06-10 | Pharmacia Corporation | Chemically-modified human growth hormone conjugates |
KR100480432B1 (ko) * | 2001-12-04 | 2005-04-06 | 선바이오(주) | G-csf와 폴리에틸렌글리콜 유도체의 배합체 |
EP1461067A1 (en) * | 2001-12-07 | 2004-09-29 | Intermune, Inc. | Compositions and method for treating hepatitis virus infection |
DE60323936D1 (de) * | 2002-01-14 | 2008-11-20 | Gen Hospital Corp | Bioabbaubare polyketale, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung |
WO2003061577A2 (en) * | 2002-01-18 | 2003-07-31 | Biogen Idec Ma Inc. | Polyalkylene glycol with moiety for conjugating biologically active compound |
DE10209821A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid |
US20030191056A1 (en) | 2002-04-04 | 2003-10-09 | Kenneth Walker | Use of transthyretin peptide/protein fusions to increase the serum half-life of pharmacologically active peptides/proteins |
US20030199464A1 (en) * | 2002-04-23 | 2003-10-23 | Silviu Itescu | Regeneration of endogenous myocardial tissue by induction of neovascularization |
DE60335639D1 (de) * | 2002-06-14 | 2011-02-17 | Amylin Pharmaceuticals Inc | Prävention und/oder behandlung von colitis ulcerosa mit pyy oder pyyä3-36ü |
US20040002451A1 (en) * | 2002-06-20 | 2004-01-01 | Bruce Kerwin | Compositions of pegylated soluble tumor necrosis factor receptors and methods of preparing |
EP1534269B1 (en) * | 2002-07-19 | 2013-10-30 | The General Hospital Corporation | Oxime conjugates and methods for their formation and use |
JP2006508056A (ja) | 2002-08-28 | 2006-03-09 | イミュネックス・コーポレーション | 心臓血管疾患を治療するための組成物および方法 |
JP4764630B2 (ja) | 2002-09-09 | 2011-09-07 | ネクター セラピューティックス | 水溶性ポリマーアルカナール |
US8129330B2 (en) | 2002-09-30 | 2012-03-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
JP2004196770A (ja) * | 2002-10-24 | 2004-07-15 | Effector Cell Institute Inc | 樹状細胞前駆体の血中レベル上昇剤 |
US20050075279A1 (en) * | 2002-10-25 | 2005-04-07 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
US7314613B2 (en) | 2002-11-18 | 2008-01-01 | Maxygen, Inc. | Interferon-alpha polypeptides and conjugates |
TWI281864B (en) * | 2002-11-20 | 2007-06-01 | Pharmacia Corp | N-terminally monopegylated human growth hormone conjugates and process for their preparation |
WO2004063221A1 (ja) | 2002-12-26 | 2004-07-29 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | メタスチン誘導体およびその用途 |
RS20050501A (en) | 2002-12-26 | 2007-08-03 | Mountain View Pharmaceuticals Inc., | Polymer conjugates of cytokines,chemokines,growth factors, polypeptide hormones and antagonists thereof with preserved receptor-binding activity |
RS20050502A (en) * | 2002-12-26 | 2007-08-03 | Mountain View Pharmaceuticals Inc., | Polymer conjugates of interferon- beta with enhanced biological potency |
WO2004061094A1 (en) | 2002-12-30 | 2004-07-22 | Gryphon Therapeutics, Inc. | Water-soluble thioester and selenoester compounds and methods for making and using the same |
US7803362B2 (en) * | 2003-01-24 | 2010-09-28 | Synageva Biopharma Corp. | Glycosylated interferon alpha |
CN1997666A (zh) * | 2003-02-26 | 2007-07-11 | 印特缪恩股份有限公司 | 聚乙二醇修饰的干扰素组合物及其使用方法 |
WO2004078127A2 (en) * | 2003-02-28 | 2004-09-16 | Intermune, Inc. | Continuous delivery methods for treating hepatitis virus infection |
US7871607B2 (en) | 2003-03-05 | 2011-01-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases |
JP4464395B2 (ja) | 2003-03-05 | 2010-05-19 | ヘイローザイム インコーポレイテッド | 可溶性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質(sHASEGP)、その調製プロセス、使用およびそれを含む薬学的組成物 |
US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
BRPI0408358A (pt) | 2003-03-14 | 2006-03-21 | Neose Technologies Inc | polìmeros hidrossolúveis ramificados e seus conjugados |
JP2006521372A (ja) * | 2003-03-28 | 2006-09-21 | バイオポリメド インコーポレーテッド | 生物学的活性物質と生体適合性高分子の1:1接合体、この製造方法とこれを含む薬学組成物 |
US20060134736A1 (en) * | 2003-03-28 | 2006-06-22 | Jacobs John W | Human growth hormone conjugated with biocompatible polymer |
EP1610825A2 (en) | 2003-03-31 | 2006-01-04 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
US7610156B2 (en) | 2003-03-31 | 2009-10-27 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
US7642340B2 (en) | 2003-03-31 | 2010-01-05 | Xencor, Inc. | PEGylated TNF-α variant proteins |
US8791070B2 (en) | 2003-04-09 | 2014-07-29 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated factor IX |
EP1613272B1 (en) * | 2003-04-11 | 2013-12-18 | Antriabio, Inc. | Method for preparation of site-specific protein conjugates |
DE602004025799D1 (de) | 2003-04-15 | 2010-04-15 | Glaxosmithkline Llc | Humane il-18 substitutionsmutanten und deren konjugate |
EP1897552B1 (en) | 2003-04-18 | 2009-06-17 | Biogen Idec MA Inc. | Polymer-conjugated glycosylated neublastin |
EP2390262A1 (en) | 2003-05-16 | 2011-11-30 | Intermune, Inc. | Synthetic chemokine receptor ligands and methods of use thereof |
CA2533702C (en) | 2003-07-22 | 2012-05-22 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Method for preparing functionalized polymers from polymer alcohols |
WO2005012484A2 (en) | 2003-07-25 | 2005-02-10 | Neose Technologies, Inc. | Antibody-toxin conjugates |
US7267960B2 (en) | 2003-07-25 | 2007-09-11 | Amgen Inc. | Antagonists and agonists of LDCAM and methods of use |
WO2005014655A2 (en) | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein |
CN100519581C (zh) | 2003-08-25 | 2009-07-29 | 东丽株式会社 | 干扰素-β复合物 |
GB0320638D0 (en) | 2003-09-03 | 2003-10-01 | Novartis Ag | Organic compounds |
KR101200729B1 (ko) | 2003-09-17 | 2012-11-13 | 넥타르 테라퓨틱스 | 다분지형 고분자 전구약물 |
US7642235B2 (en) * | 2003-09-22 | 2010-01-05 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
US7230068B2 (en) | 2003-10-09 | 2007-06-12 | Ambrx, Inc. | Polymer derivatives |
EP2263684A1 (en) | 2003-10-10 | 2010-12-22 | Novo Nordisk A/S | IL-21 derivatives |
AU2004279895A1 (en) | 2003-10-10 | 2005-04-21 | Xencor, Inc | Protein based TNF-alpha variants for the treatment of TNF-alpha related disorders |
EP2407470A3 (en) | 2003-10-14 | 2015-06-10 | F. Hoffmann-La Roche Ltd. | Macrocyclic carboxylic acids and acylsulfonamides as inhibitors of HCV replication |
EP2633866A3 (en) | 2003-10-17 | 2013-12-18 | Novo Nordisk A/S | Combination therapy |
US7407973B2 (en) * | 2003-10-24 | 2008-08-05 | Intermune, Inc. | Use of pirfenidone in therapeutic regimens |
US7220407B2 (en) * | 2003-10-27 | 2007-05-22 | Amgen Inc. | G-CSF therapy as an adjunct to reperfusion therapy in the treatment of acute myocardial infarction |
US8637650B2 (en) | 2003-11-05 | 2014-01-28 | Genovoxx Gmbh | Macromolecular nucleotide compounds and methods for using the same |
US20080305992A1 (en) | 2003-11-24 | 2008-12-11 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
US8633157B2 (en) | 2003-11-24 | 2014-01-21 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin |
US20060040856A1 (en) | 2003-12-03 | 2006-02-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated factor IX |
WO2005053730A1 (ja) * | 2003-12-05 | 2005-06-16 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 末期心不全治療剤 |
WO2005067963A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-28 | Intermune, Inc. | Use of polyethylene glycol-modified interferon-alpha in therapeutic dosing regimens |
GB0500020D0 (en) | 2005-01-04 | 2005-02-09 | Novartis Ag | Organic compounds |
CA2552892C (en) | 2004-01-08 | 2014-08-05 | Neose Technologies, Inc. | O-linked glycosylation of peptides |
EP1730167B1 (en) * | 2004-01-21 | 2011-01-12 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus |
AU2005319099B2 (en) | 2004-02-02 | 2010-09-16 | Ambrx, Inc. | Modified human growth hormone |
GB2429207A (en) | 2004-02-02 | 2007-02-21 | Ambrx Inc | Modified human interferon polypeptides and their uses |
EP2335715A3 (en) | 2004-02-11 | 2013-12-18 | Amylin Pharmaceuticals, LLC | Pancreatic polypeptide family motifs and polypeptides comprising the same |
NZ548978A (en) | 2004-02-11 | 2009-10-30 | Amylin Pharmaceuticals Inc | Hybrid polypeptides with selectable properties |
US8076288B2 (en) | 2004-02-11 | 2011-12-13 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides having glucose lowering activity |
WO2005084303A2 (en) * | 2004-03-01 | 2005-09-15 | Enzon Pharmaceuticals, Inc. | Interferon-beta polymer conjugates |
AU2005229001A1 (en) * | 2004-03-23 | 2005-10-13 | Amgen Inc. | Chemically modified protein compositions and methods |
WO2005115477A2 (en) | 2004-04-13 | 2005-12-08 | Quintessence Biosciences, Inc. | Non-natural ribonuclease conjugates as cytotoxic agents |
EP1586334A1 (en) * | 2004-04-15 | 2005-10-19 | TRASTEC scpa | G-CSF conjugates with peg |
MXPA06013412A (es) | 2004-05-19 | 2007-01-23 | Maxygen Inc | Polipeptidos de interferon-alfa y conjugados. |
WO2005123113A2 (en) * | 2004-06-14 | 2005-12-29 | Intermune, Inc. | Interferon compositions and methods of use thereof |
KR101699142B1 (ko) | 2004-06-18 | 2017-01-23 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 신규 항원-결합 폴리펩티드 및 이의 용도 |
NZ552029A (en) | 2004-06-25 | 2009-01-31 | Takeda Pharmaceutical | Metastin derivatives and use thereof |
EP1771197A2 (en) * | 2004-06-30 | 2007-04-11 | Egen Corporation | Pegylated interferon alpha-1b |
WO2006010057A2 (en) * | 2004-07-08 | 2006-01-26 | Amgen Inc. | Therapeutic peptides |
WO2006010143A2 (en) | 2004-07-13 | 2006-01-26 | Neose Technologies, Inc. | Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 [glp-1] |
EP1771573A4 (en) | 2004-07-21 | 2009-02-18 | Ambrx Inc | BIOSYNTHETIC POLYPEPTIDES OBTAINED FROM NON-NATURALLY CITED AMINO ACIDS |
US7597884B2 (en) | 2004-08-09 | 2009-10-06 | Alios Biopharma, Inc. | Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use |
MX2007002029A (es) | 2004-08-19 | 2007-03-28 | Biogen Idec Inc | Variantes de neublastina. |
AU2005277227B2 (en) | 2004-08-19 | 2011-10-06 | Biogen Ma Inc. | Refolding transforming growth factor beta family proteins |
US8268967B2 (en) | 2004-09-10 | 2012-09-18 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated interferon α |
EP2301963A1 (en) | 2004-09-23 | 2011-03-30 | Vasgene Therapeutics, Inc. | Polypeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth |
EP1814573B1 (en) | 2004-10-29 | 2016-03-09 | ratiopharm GmbH | Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (fgf) |
WO2006055260A2 (en) * | 2004-11-05 | 2006-05-26 | Northwestern University | Use of scf and g-csf in the treatment of cerebral ischemia and neurological disorders |
NZ555533A (en) | 2004-12-13 | 2010-03-26 | Amylin Pharmaceuticals Inc | Pancreatic polypeptide family motifs, polypeptides and methods comprising the same |
EP1836298B1 (en) * | 2004-12-22 | 2012-01-18 | Ambrx, Inc. | COMPOSITIONS OF AMINOACYL-tRNA SYNTHETASE AND USES THEREOF |
US7816320B2 (en) * | 2004-12-22 | 2010-10-19 | Ambrx, Inc. | Formulations of human growth hormone comprising a non-naturally encoded amino acid at position 35 |
US8080391B2 (en) | 2004-12-22 | 2011-12-20 | Ambrx, Inc. | Process of producing non-naturally encoded amino acid containing high conjugated to a water soluble polymer |
DK1828224T3 (en) | 2004-12-22 | 2016-07-18 | Ambrx Inc | Compositions containing, methods including, AND USES OF NON-NATURAL AMINO ACIDS AND POLYPEPTIDES |
EP1674113A1 (en) | 2004-12-22 | 2006-06-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Conjugates of insulin-like growth factor-1 (IGF-1) and poly(ethylene glycol) |
ES2449195T3 (es) | 2005-01-10 | 2014-03-18 | Ratiopharm Gmbh | Factor estimulante de colonias de granulocitos glicopegilado |
JP5735194B2 (ja) | 2005-01-25 | 2015-06-17 | セル セラピューティクス インコーポレーテッド | 改善された生体内半減期を有する生物学的に活性なタンパク質 |
CN101119743B (zh) * | 2005-01-31 | 2012-09-26 | 株式会社Eci | 免疫增强剂 |
US7402730B1 (en) | 2005-02-03 | 2008-07-22 | Lexicon Pharmaceuticals, Inc. | Knockout animals manifesting hyperlipidemia |
US20090286723A1 (en) * | 2005-02-11 | 2009-11-19 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid Polypeptides with Selectable Properties |
EP2390264A1 (en) * | 2005-02-11 | 2011-11-30 | Amylin Pharmaceuticals Inc. | GIP analog and hybrid polypeptides with selectable propperties |
US8263545B2 (en) * | 2005-02-11 | 2012-09-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
WO2006094530A1 (en) * | 2005-03-11 | 2006-09-14 | Siegfried Ltd. | Di-polymer protein conjugates and processes for their preparation |
WO2007010552A2 (en) * | 2005-03-17 | 2007-01-25 | Serum Institute Of India Limited | N- terminal peg conjugate of erythropoietin |
ES2330671T3 (es) | 2005-03-31 | 2009-12-14 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Amilina y agonistas de amilina para el tratamiento de enfermedades y trastornos psiquiatricos. |
CA2602654A1 (en) | 2005-04-05 | 2006-10-12 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P Angeletti Spa | Method for shielding functional sites or epitopes on proteins |
EP1871795A4 (en) | 2005-04-08 | 2010-03-31 | Biogenerix Ag | COMPOSITIONS AND METHOD FOR PRODUCING GLYCOSYLATION MUTANTS OF A PROTEASE-RESISTANT HUMAN GROWTH HORMONE |
ES2856881T3 (es) | 2005-04-11 | 2021-09-28 | Horizon Pharma Rheumatology Llc | Formas variantes de urato oxidasa y su uso |
US7833979B2 (en) | 2005-04-22 | 2010-11-16 | Amgen Inc. | Toxin peptide therapeutic agents |
CA2607651A1 (en) | 2005-05-18 | 2007-04-19 | Maxygen, Inc. | Evolved interferon-alpha polypeptides |
US20080255026A1 (en) | 2005-05-25 | 2008-10-16 | Glycopegylated Factor 1X | Glycopegylated Factor Ix |
CA2607844C (en) | 2005-06-01 | 2012-07-10 | Maxygen Holdings Ltd. | Pegylated g-csf polypeptides and methods of producing same |
TW200722521A (en) * | 2005-06-01 | 2007-06-16 | Alza Corp | Novel bioconjugation reactions for acylating polyethylene glycol reagents |
WO2007009208A1 (en) * | 2005-06-02 | 2007-01-25 | Cangene Corporation | Poly(ethylene glocol) modified human gm-csf with increased biological activity |
ATE529442T1 (de) * | 2005-06-03 | 2011-11-15 | Ambrx Inc | Verbesserte humane interferon-moleküle und ihre verwendungen |
KR100694994B1 (ko) * | 2005-06-13 | 2007-03-14 | 씨제이 주식회사 | 사람 과립구 콜로니 형성인자 동종체 |
CA2611836A1 (en) * | 2005-06-13 | 2006-12-21 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Transmucosal delivery of peptide derivatives |
JP2008546708A (ja) | 2005-06-17 | 2008-12-25 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | Hcvにおけるサングリフェリンの使用 |
ES2553160T3 (es) | 2005-06-17 | 2015-12-04 | Novo Nordisk Health Care Ag | Reducción y derivatización selectivas de proteínas Factor VII transformadas por ingeniería que comprenden al menos una cisteína no nativa |
CA2612901A1 (en) * | 2005-06-20 | 2007-01-04 | Pepgen Corporation | Low-toxicity, long-circulating chimeras of human interferon- alpha analogs and interferon tau |
US7695710B2 (en) * | 2005-06-20 | 2010-04-13 | Pepgen Corporation | Antitumor and antiviral combination therapies using low-toxicity, long-circulating human interferon-alpha analogs |
WO2007011802A1 (en) | 2005-07-18 | 2007-01-25 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Method for preparing branched functionalized polymers using branched polyol cores |
KR100735784B1 (ko) * | 2005-07-20 | 2007-07-06 | 재단법인 목암생명공학연구소 | 인간 과립구콜로니자극인자 변이체 및 이의 화학적 접합물 |
BRPI0613962A2 (pt) | 2005-07-25 | 2009-03-24 | Intermune Inc | inibidores macrocìclicos inovadores de replicação de vìrus da hepatite c |
WO2007015591A1 (en) * | 2005-08-02 | 2007-02-08 | Cheil Industries Inc. | Epoxy resin composition for packaging semiconductor device |
JP2009503111A (ja) * | 2005-08-04 | 2009-01-29 | ネクター セラピューティックス エイエル,コーポレイション | G−csf部分および重合体の複合体 |
BRPI0614649A2 (pt) | 2005-08-11 | 2011-04-12 | Amylin Pharmaceuticals Inc | polipeptìdeos hìbridos com propriedades selecionáveis |
US8008453B2 (en) | 2005-08-12 | 2011-08-30 | Amgen Inc. | Modified Fc molecules |
AU2005335491B2 (en) | 2005-08-18 | 2010-11-25 | Ambrx, Inc. | Compositions of tRNA and uses thereof |
HUE045165T2 (hu) | 2005-08-19 | 2019-12-30 | Amylin Pharmaceuticals Llc | Exendin diabetes kezelésére és testtömeg csökkentésére |
US20070105755A1 (en) | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Neose Technologies, Inc. | One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides |
GEP20104956B (en) | 2005-10-11 | 2010-04-12 | Array Biopharma Inc | Compounds for inhibiting hepatitis c viral replication and use thereof |
US20090304754A1 (en) * | 2005-10-12 | 2009-12-10 | Srebrenka Robic | Pegylated glutenase polypeptides |
AU2006344395B2 (en) | 2005-10-13 | 2013-05-02 | Human Genome Sciences, Inc. | Methods and compositions for use in treatment of patients with autoantibody positive diseases |
AU2006304856A1 (en) * | 2005-10-21 | 2007-04-26 | Synageva Biopharma Corp. | Glycolated and glycosylated poultry derived therapeutic proteins |
US20080171696A1 (en) * | 2005-10-21 | 2008-07-17 | Avigenics, Inc. | Pharmacodynamically enhanced therapeutic proteins |
US8168592B2 (en) | 2005-10-21 | 2012-05-01 | Amgen Inc. | CGRP peptide antagonists and conjugates |
US20090048440A1 (en) | 2005-11-03 | 2009-02-19 | Neose Technologies, Inc. | Nucleotide Sugar Purification Using Membranes |
DE602006020480D1 (de) * | 2005-11-08 | 2011-04-14 | Ambrx Inc | Beschleuniger für die modifikation nichtnatürlicher aminosäuren und nichtnatürlicher aminosäurepolypeptide |
PE20070684A1 (es) | 2005-11-14 | 2007-08-06 | Amgen Inc | MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP |
PT2339014E (pt) * | 2005-11-16 | 2015-10-13 | Ambrx Inc | Métodos e composições compreendendo aminoácidos não-naturais |
EP1968635B1 (en) * | 2005-12-14 | 2014-09-17 | Ambrx, Inc. | Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides |
US8404643B2 (en) | 2005-12-22 | 2013-03-26 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Metastin derivatives and use thereof |
JP5738516B2 (ja) | 2005-12-30 | 2015-06-24 | ゼンサン (シャンハイ) サイエンス アンド テクノロジー リミテッド | 心機能改善のためのニューレグリンの徐放 |
AU2007205545B9 (en) | 2006-01-12 | 2012-10-18 | Hokusan Co. Ltd. | Oral composition containing interferon-alpha |
CN100475270C (zh) * | 2006-01-20 | 2009-04-08 | 清华大学 | 一种治疗肿瘤的药物及其应用 |
AR059193A1 (es) | 2006-01-31 | 2008-03-12 | Bayer Schering Pharma Ag | Modulacion de la actividad de mdl-1 para el tratamiento de enfermedades inflamatorias |
KR101513732B1 (ko) | 2006-02-21 | 2015-04-21 | 넥타르 테라퓨틱스 | 분할된 분해가능한 폴리머 및 이로부터 제조된 컨주게이트 |
TWI501774B (zh) | 2006-02-27 | 2015-10-01 | Biogen Idec Inc | 神經性病症之治療 |
EP2010569A4 (en) | 2006-03-20 | 2009-09-09 | Xoma Technology Ltd | FOR GASTRIN SPECIFIC HUMAN ANTIBODIES, MATERIALS AND METHODS |
WO2007115150A2 (en) * | 2006-03-31 | 2007-10-11 | Centocor, Inc. | Binding partners with immunoglobulin domains modified to have extended half-life |
CA2643680A1 (en) | 2006-04-11 | 2007-11-22 | Novartis Ag | Hcv/hiv inhibitors and their uses |
JO3324B1 (ar) | 2006-04-21 | 2019-03-13 | Amgen Inc | مركبات علاجية مجففة بالتبريد تتعلق بالعصارة الهضمية |
US8299024B2 (en) * | 2006-05-12 | 2012-10-30 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | Methods to restore glycemic control |
RU2008150314A (ru) | 2006-05-19 | 2010-06-27 | Гликофи, Инк. (Us) | Композиции эритропоэтина |
EP2029738A2 (en) | 2006-05-24 | 2009-03-04 | Novo Nordisk Health Care AG | Factor ix analogues having prolonged in vivo half life |
US7981425B2 (en) | 2006-06-19 | 2011-07-19 | Amgen Inc. | Thrombopoietic compounds |
JP2009541333A (ja) | 2006-06-23 | 2009-11-26 | クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド | 修飾リボヌクレアーゼ |
EP2452683A3 (en) | 2006-06-26 | 2012-08-22 | Amgen Inc. | Methods for treating atherosclerosis |
EP2049151A4 (en) * | 2006-07-17 | 2010-03-24 | Quintessence Biosciences Inc | METHOD AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF CANCER |
CN101516388B (zh) * | 2006-07-21 | 2012-10-31 | 诺和诺德公司 | 通过o-联糖基化序列的肽的糖基化 |
US8299015B2 (en) * | 2006-07-25 | 2012-10-30 | Lipoxen Technologies Limited | Derivatisation of granulocyte colony-stimulating factor |
GB0615067D0 (en) * | 2006-07-28 | 2006-09-06 | Ttp Communications Ltd | Reconfigurable signal processing scheme |
EP2054074B8 (en) | 2006-08-04 | 2014-11-12 | Prolong Pharmaceuticals, LLC | Modified erythropoietin |
ITMI20061624A1 (it) * | 2006-08-11 | 2008-02-12 | Bioker Srl | Mono-coniugati sito-specifici di g-csf |
US8497240B2 (en) | 2006-08-17 | 2013-07-30 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | DPP-IV resistant GIP hybrid polypeptides with selectable properties |
CL2007002502A1 (es) | 2006-08-31 | 2008-05-30 | Hoffmann La Roche | Variantes del factor de crecimiento similar a insulina-1 humano (igf-1) pegilados en lisina; metodo de produccion; proteina de fusion que la comprende; y su uso para tratar la enfermedad de alzheimer. |
AU2007291501B2 (en) * | 2006-08-31 | 2012-07-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the production of insulin-like growth factor-I |
WO2008030614A2 (en) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Ambrx, Inc. | Suppressor trna transcription in vertebrate cells |
DK2615108T3 (en) * | 2006-09-08 | 2017-01-30 | Ambrx Inc | Modified human plasma polypeptide or fc scaffolds and their applications |
WO2008030613A2 (en) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Ambrx, Inc. | Hybrid suppressor trna for vertebrate cells |
US7985783B2 (en) | 2006-09-21 | 2011-07-26 | The Regents Of The University Of California | Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification |
BRPI0719446A2 (pt) | 2006-09-28 | 2013-12-10 | Schering Corp | Uso de il-10 peguilada para tratar câncer |
WO2008057683A2 (en) | 2006-10-03 | 2008-05-15 | Novo Nordisk A/S | Methods for the purification of polypeptide conjugates |
DK2068907T3 (en) * | 2006-10-04 | 2018-01-15 | Novo Nordisk As | GLYCEROL BOND PEGYLED SUGAR AND GLYCOPE Peptides |
US20090252703A1 (en) * | 2006-10-19 | 2009-10-08 | Gegg Jr Colin V | Use of alcohol co-solvents to improve pegylation reaction yields |
CA2667678A1 (en) | 2006-10-25 | 2008-07-24 | Amgen Inc. | Toxin peptide therapeutic agents |
JO3048B1 (ar) | 2006-10-25 | 2016-09-05 | Takeda Pharmaceuticals Co | مشتقات متاستين واستخدامها |
KR101079993B1 (ko) * | 2006-11-17 | 2011-11-04 | 동아제약주식회사 | 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체 |
EP2727936B1 (en) | 2006-11-22 | 2016-09-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including IGF-IR |
ZA200904022B (en) | 2006-12-08 | 2010-08-25 | Lexicon Pharmaceuticals Inc | Monoclonal antibodies against ANGPTL3 |
WO2008097497A2 (en) | 2007-02-02 | 2008-08-14 | Adnexus, A Bristol-Myers Squibb R & D Company | Vegf pathway blockade |
CN101245109B (zh) * | 2007-02-12 | 2011-12-14 | 杭州九源基因工程有限公司 | 一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体及其制备方法 |
KR20140012199A (ko) | 2007-03-30 | 2014-01-29 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 변형된 fgf-21 폴리펩티드 및 그 용도 |
KR20100016160A (ko) | 2007-04-03 | 2010-02-12 | 바이오제너릭스 에이지 | 글리코페길화 g―csf를 이용하는 치료 방법 |
JP2008266219A (ja) * | 2007-04-20 | 2008-11-06 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | リジン及びシステイン残基を含まないタンパク質 |
CA2685686A1 (en) | 2007-05-01 | 2008-11-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Neublastin polypeptides for use increasing vascularization in a tissue |
CN103965347B (zh) | 2007-05-02 | 2017-07-18 | Ambrx公司 | 经修饰干扰素β多肽和其用途 |
EP2162540A2 (en) | 2007-05-22 | 2010-03-17 | Amgen Inc. | Compositions and methods for producing bioactive fusion proteins |
JP2010531135A (ja) * | 2007-06-04 | 2010-09-24 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | N−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼを使用したo結合型グリコシル化 |
WO2008154639A2 (en) | 2007-06-12 | 2008-12-18 | Neose Technologies, Inc. | Improved process for the production of nucleotide sugars |
US20110159523A1 (en) * | 2007-06-27 | 2011-06-30 | Cedars-Sinai Medical Center | N-terminal specific chemical labeling for proteomics applications |
EA201070187A1 (ru) | 2007-07-26 | 2010-08-30 | Эмджен Инк. | Модифицированные ферменты лецитин-холестерин ацилтрансферазы |
CN101352573B (zh) * | 2007-07-27 | 2011-02-09 | 杭州九源基因工程有限公司 | 聚乙二醇单修饰的重组人集落细胞刺激因子赖氨酸缺陷体 |
EP2581441A1 (en) | 2007-08-09 | 2013-04-17 | Genzyme Corporation | Method of treating autoimmune disease with mesenchymal stem cells |
CL2008002399A1 (es) * | 2007-08-16 | 2009-01-02 | Pharmaessentia Corp | Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c. |
PT2197919E (pt) | 2007-08-27 | 2014-07-17 | Ratiopharm Gmbh | Formulação líquida de conjugado de g-csf |
US8207112B2 (en) | 2007-08-29 | 2012-06-26 | Biogenerix Ag | Liquid formulation of G-CSF conjugate |
US8758761B2 (en) * | 2007-09-30 | 2014-06-24 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Combination therapies for treating type 1 diabetes |
US8697062B2 (en) * | 2007-10-08 | 2014-04-15 | Quintessence Biosciences, Inc. | Compositions and methods for ribonuclease-based therapeutics |
WO2009055014A2 (en) * | 2007-10-23 | 2009-04-30 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom |
AU2008326324B9 (en) | 2007-11-20 | 2012-11-15 | Ambrx, Inc. | Modified insulin polypeptides and their uses |
WO2009073977A1 (en) * | 2007-12-13 | 2009-06-18 | Biovectra Inc. | Polypeptides modified by protein trans-splicing technology |
WO2009086356A2 (en) | 2007-12-27 | 2009-07-09 | Baxter International Inc. | Method and compositions for specifically detecting physiologically acceptable polymer molecules |
CN102037004A (zh) * | 2008-01-08 | 2011-04-27 | 生物种属学股份公司 | 使用寡糖基转移酶的多肽的糖缀合 |
US20100316702A1 (en) * | 2008-01-08 | 2010-12-16 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for regulating erythropoeitin expression and ameliorating anemia and stimulating erythropoiesis |
US20090183503A1 (en) * | 2008-01-18 | 2009-07-23 | Alberto Verdesi | Exhaust apparatus |
LT2245145T (lt) | 2008-01-18 | 2017-04-10 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Aktyvių gausiai fosforilintų žmogaus lizosominės sulfatazės fermentų gamyba ir jų panaudojimas |
EP3103880A1 (en) | 2008-02-08 | 2016-12-14 | Ambrx, Inc. | Modified leptin polypeptides and their uses |
EP2248832B1 (en) | 2008-02-18 | 2014-09-03 | Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. | A g-csf conjugate modified by water-soluble polymer |
ES2476690T3 (es) | 2008-02-27 | 2014-07-15 | Novo Nordisk A/S | Moléculas conjugadas del Factor VIII |
TWI395593B (zh) | 2008-03-06 | 2013-05-11 | Halozyme Inc | 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制 |
BRPI0822530B1 (pt) * | 2008-04-03 | 2022-03-22 | Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd | Método de preparação de um hormônio de crescimento humano glicolado por polietileno (modificado por peg), hormônio do crescimento humano modificado por peg de menor peso molecular aparente e seu uso, preparação de hormônio do crescimento humano modificado por peg de menor peso molecular aparente e seu método de preparação e composição |
BRPI0911266A2 (pt) * | 2008-04-03 | 2015-09-29 | Hoffmann La Roche | ensaio de fator de crescimento similar à insulina peguilado |
EP2285402A2 (en) | 2008-04-14 | 2011-02-23 | Halozyme, Inc. | Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions |
TWI394580B (zh) | 2008-04-28 | 2013-05-01 | Halozyme Inc | 超快起作用胰島素組成物 |
EP2303313B1 (en) | 2008-05-21 | 2015-10-28 | Amylin Pharmaceuticals, LLC | Exendins to lower cholestrol and triglycerides |
PE20091931A1 (es) | 2008-05-22 | 2009-12-31 | Bristol Myers Squibb Co | Proteinas de dominio de armazon basadas en fibronectina multivalentes |
JOP20190083A1 (ar) | 2008-06-04 | 2017-06-16 | Amgen Inc | بولي ببتيدات اندماجية طافرة لـfgf21 واستخداماتها |
GB0811743D0 (en) | 2008-06-26 | 2008-07-30 | Hemosol Biopharma Inc | Composition |
EP2671891A3 (en) | 2008-06-27 | 2014-03-05 | Amgen Inc. | Ang-2 inhibition to treat multiple sclerosis |
UA118536C2 (uk) * | 2008-07-23 | 2019-02-11 | Амбркс, Інк. | Модифікований поліпептид бичачого гранулоцитарного колонієстимулювального фактора та його застосування |
SI2314609T1 (sl) * | 2008-07-30 | 2017-05-31 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Derivat metastina in njegova uporaba |
TWI421093B (zh) * | 2008-07-31 | 2014-01-01 | Pharmaessentia Corp | 胜肽-聚合物綴合物 |
MX2011001583A (es) | 2008-08-11 | 2011-04-04 | Nektar Therapeutics | Conjugados de alcanoato polimericos de multiples brazos. |
EP2331139B1 (en) | 2008-09-11 | 2019-04-17 | Nektar Therapeutics | Polymeric alpha-hydroxy aldehyde and ketone reagents and conjugation method |
MX348657B (es) | 2008-09-26 | 2017-06-21 | Ambrx Inc | Microorganismos y vacunas dependientes de replicacion de aminoacidos no naturales. |
EP3216800A1 (en) | 2008-09-26 | 2017-09-13 | Ambrx, Inc. | Modified animal erythropoietin polypeptides and their uses |
EP2334695B1 (en) | 2008-10-01 | 2015-12-23 | Quintessence Biosciences, Inc. | Therapeutic ribonucleases |
EP2358749B1 (en) | 2008-10-10 | 2018-07-18 | Amgen, Inc | Fgf21 mutants and uses thereof |
WO2010045321A2 (en) | 2008-10-15 | 2010-04-22 | Baxter International Inc. | Pegylation of recombinant blood coagulation factors in the presence of bound antibodies |
PT2349342T (pt) | 2008-10-17 | 2018-10-26 | Baxalta Inc | Factores sanguíneos modificados que compreendem um baixo grau de polímero solúvel na água |
BRPI0919827B8 (pt) | 2008-10-20 | 2021-05-25 | Usv Ltd | processos para aumentar o rendimento de uma reação de peguilação de r-methug-csf processo para a produção em escala grama de peg- r-methug-csf |
US9274122B2 (en) * | 2008-10-21 | 2016-03-01 | Baxalta Incorporated | Methods for determining active ingredients in pro-drug PEG protein conjugates with releasable PEG reagents (in vitro de-pegylation) |
CA2742064A1 (en) * | 2008-10-31 | 2010-05-06 | Amgen Inc. | Materials and methods relating to stem cell mobilization by multi-pegylated granulocyte colony stimulating factor |
IT1392655B1 (it) | 2008-11-20 | 2012-03-16 | Bio Ker S R L | Site-specific monoconjugated insulinotropic glp-1 peptides. |
TWI496582B (zh) | 2008-11-24 | 2015-08-21 | 必治妥美雅史谷比公司 | 雙重專一性之egfr/igfir結合分子 |
DK3037529T3 (da) | 2008-12-09 | 2019-05-20 | Halozyme Inc | Udvidede opløselige ph20-polypeptider og anvendelse deraf |
PL2356467T3 (pl) | 2008-12-11 | 2013-12-31 | Baxalta Inc | Wykrywanie fizjologicznie dopuszczalnych cząsteczek polimeru z zastosowaniem spektroskopii w bliskiej podczerwieni |
EP3348281B1 (en) | 2008-12-17 | 2023-07-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Mono- and di-peg il-10 production; and uses |
US8512690B2 (en) | 2009-04-10 | 2013-08-20 | Novartis Ag | Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors |
US20110182850A1 (en) | 2009-04-10 | 2011-07-28 | Trixi Brandl | Organic compounds and their uses |
AU2010246038A1 (en) | 2009-05-05 | 2011-12-01 | Amgen Inc. | FGF21 mutants and uses thereof |
DK3248610T3 (da) | 2009-05-05 | 2024-01-15 | Amgen Inc | Fgf21-mutanter og anvendelser deraf |
ES2904360T3 (es) | 2009-05-20 | 2022-04-04 | Biomarin Pharm Inc | Variantes de péptido natriurético de tipo C |
EP2443145A1 (en) | 2009-06-17 | 2012-04-25 | Amgen, Inc | Chimeric fgf19 polypeptides and uses thereof |
WO2010148413A2 (en) | 2009-06-19 | 2010-12-23 | Medimmune, Llc | Protease variants |
AU2010265964B2 (en) | 2009-06-25 | 2014-09-18 | Horizon Therapeutics Usa, Inc. | Methods and kits for predicting infusion reaction risk and antibody-mediated loss of response by monitoring serum uric acid during PEGylated uricase therapy |
WO2011014882A1 (en) | 2009-07-31 | 2011-02-03 | Medtronic, Inc. | CONTINUOUS SUBCUTANEOUS ADMINISTRATION OF INTERFERON-α TO HEPATITIS C INFECTED PATIENTS |
JP5734985B2 (ja) | 2009-09-17 | 2015-06-17 | バクスター・ヘルスケヤー・ソシエテ・アノニムBaxter Healthcare SA | ヒアルロニダーゼおよび免疫グロブリンの安定な共製剤およびそれらの使用方法 |
US8926976B2 (en) | 2009-09-25 | 2015-01-06 | Xoma Technology Ltd. | Modulators |
US9885711B2 (en) | 2009-09-25 | 2018-02-06 | Xoma Technology Ltd. | Screening methods |
EP2480578A4 (en) * | 2009-09-25 | 2013-04-17 | Vybion Inc | MODIFICATION OF POLYPEPTIDE |
US9315860B2 (en) | 2009-10-26 | 2016-04-19 | Genovoxx Gmbh | Conjugates of nucleotides and method for the application thereof |
NZ598465A (en) | 2009-10-30 | 2013-10-25 | Boehringer Ingelheim Int | Dosage regimens for hcv combination therapy comprising bi201335, interferon alpha and ribavirin |
JP2013509422A (ja) | 2009-10-30 | 2013-03-14 | シーエヌエス セラピューティクス,インク. | 改良されたニュールツリン分子 |
MX2012005912A (es) | 2009-11-23 | 2012-10-05 | Amylin Pharmaceuticals Inc | Conjugado de polipeptido. |
JP6184695B2 (ja) | 2009-12-04 | 2017-08-23 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 多重特異性抗体、抗体アナログ、組成物、及び方法 |
UA109888C2 (uk) | 2009-12-07 | 2015-10-26 | ІЗОЛЬОВАНЕ АНТИТІЛО АБО ЙОГО ФРАГМЕНТ, ЩО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З β-КЛОТО, РЕЦЕПТОРАМИ FGF І ЇХНІМИ КОМПЛЕКСАМИ | |
CN102753573A (zh) | 2009-12-21 | 2012-10-24 | Ambrx公司 | 经过修饰的牛促生长素多肽和其用途 |
NZ600363A (en) | 2009-12-21 | 2014-07-25 | Ambrx Inc | Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses |
US20110152188A1 (en) * | 2009-12-23 | 2011-06-23 | Hanns-Christian Mahler | Pharmaceutical compositions of igf/i proteins |
EP2536753B1 (en) | 2010-02-16 | 2017-12-20 | Novo Nordisk A/S | Factor viii molecules with reduced vwf binding |
NZ602255A (en) * | 2010-03-04 | 2014-04-30 | Pfenex Inc | Method for producing soluble recombinant interferon protein without denaturing |
PL2552949T3 (pl) | 2010-04-01 | 2017-01-31 | Pfenex Inc. | Sposoby wytwarzania G-CSF w komórce gospodarza Pseudomonas |
EP2558497A2 (en) | 2010-04-15 | 2013-02-20 | Amgen Inc. | Human fgf receptor and beta-klotho binding proteins |
US8980253B2 (en) | 2010-04-26 | 2015-03-17 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-tRNA synthetase |
CN103096911B (zh) | 2010-04-27 | 2018-05-29 | Atyr 医药公司 | 与异亮氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现 |
AU2011248489B2 (en) | 2010-04-28 | 2016-10-06 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl tRNA synthetases |
EP2563383B1 (en) | 2010-04-29 | 2017-03-01 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of valyl trna synthetases |
WO2011150279A2 (en) | 2010-05-27 | 2011-12-01 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glutaminyl-trna synthetases |
CN103097523B (zh) | 2010-04-29 | 2016-09-28 | Atyr医药公司 | 与天冬酰胺酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现 |
US9034321B2 (en) | 2010-05-03 | 2015-05-19 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-tRNA synthetases |
EP2566496B1 (en) | 2010-05-03 | 2018-02-28 | aTyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of methionyl-trna synthetases |
CA2797277C (en) | 2010-05-03 | 2021-02-23 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases |
CA2798139C (en) | 2010-05-04 | 2019-09-24 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-trna synthetase complex |
EP2569331A1 (en) | 2010-05-10 | 2013-03-20 | Perseid Therapeutics LLC | Polypeptide inhibitors of vla4 |
CN103200953B (zh) | 2010-05-14 | 2017-02-15 | Atyr 医药公司 | 与苯丙氨酰‑β‑tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现 |
CN103096914B (zh) | 2010-05-17 | 2015-08-12 | Atyr医药公司 | 与亮氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现 |
MX2012013375A (es) | 2010-05-17 | 2013-04-11 | Cebix Inc | Peptido c pegilado. |
CN103180339B (zh) | 2010-05-26 | 2016-04-27 | 百时美施贵宝公司 | 具有改善的稳定性的基于纤连蛋白的支架蛋白质 |
AU2011261486B2 (en) | 2010-06-01 | 2017-02-23 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of lysyl-tRNA synthetases |
WO2011159930A2 (en) | 2010-06-16 | 2011-12-22 | Medtronic, Inc. | Damping systems for stabilizing medications in drug delivery devices |
IN2012MN02896A (zh) | 2010-06-24 | 2015-06-12 | Panmed Ltd | |
EP2593125B1 (en) | 2010-07-12 | 2017-11-01 | aTyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glycyl-trna synthetases |
WO2012007324A2 (en) | 2010-07-15 | 2012-01-19 | Novo Nordisk A/S | Stabilized factor viii variants |
US9878046B2 (en) | 2010-07-20 | 2018-01-30 | Halozyme, Inc. | Adverse side-effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent and methods for ameliorating or preventing the side-effects |
AR082319A1 (es) | 2010-07-22 | 2012-11-28 | Biomarin Pharm Inc | Produccion de una n-acetilgalactosamina-6-sulfatasa humana activa altamente fosforilada y sus usos |
CA2807552A1 (en) | 2010-08-06 | 2012-02-09 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
RU2446173C1 (ru) * | 2010-08-13 | 2012-03-27 | Зао "Биокад" | Новый функционально активный, высокоочищенный стабильный конъюгат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (г-ксф) с полиэтиленгликолем с пролонгированным биологическим действием, пригодный для медицинского применения, и иммунобиологическое средство на его основе |
US9567386B2 (en) | 2010-08-17 | 2017-02-14 | Ambrx, Inc. | Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides |
BR112013003522B1 (pt) | 2010-08-17 | 2021-05-25 | Ambrx, Inc. | polipeptídeos relaxina modificados compreendendo um aminoácido não codificado naturalmente, seu método de preparação e seu uso, bem como ácido nucleico e célula hospedeira |
CN103108650A (zh) | 2010-08-25 | 2013-05-15 | Atyr医药公司 | 与酪氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现 |
CN103209992A (zh) | 2010-09-15 | 2013-07-17 | 诺沃—诺迪斯克有限公司 | 具有减少的细胞摄取的因子viii变体 |
TWI480288B (zh) | 2010-09-23 | 2015-04-11 | Lilly Co Eli | 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物 |
PT2621519T (pt) | 2010-09-28 | 2017-10-04 | Aegerion Pharmaceuticals Inc | Polipéptido de fusão de leptina-abd com duração de ação melhorada |
KR20140035305A (ko) | 2010-10-05 | 2014-03-21 | 노파르티스 아게 | C형 간염 바이러스 감염의 새로운 치료법 |
US9011833B2 (en) | 2010-10-08 | 2015-04-21 | Novartis Ag | Vitamin E formulations of sulfamide NS3 inhibitors |
CN103933577B (zh) * | 2010-10-25 | 2014-12-10 | 北京凯因科技股份有限公司 | 重组集成干扰素变异体聚乙二醇偶联物的制备和应用 |
US9023791B2 (en) | 2010-11-19 | 2015-05-05 | Novartis Ag | Fibroblast growth factor 21 mutations |
RU2013123793A (ru) | 2010-11-24 | 2014-12-27 | Лексикон Фармасьютикалз, Инк. | Антитела, связывающиеся с notum пектинацетилэстеразой |
RU2013129824A (ru) | 2010-11-30 | 2015-01-10 | Новартис Аг | Новое лечение инфекции вируса гепатита с |
US20140371258A1 (en) | 2010-12-17 | 2014-12-18 | Nektar Therapeutics | Water-Soluble Polymer Conjugates of Topotecan |
WO2012088282A1 (en) | 2010-12-21 | 2012-06-28 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polymeric prodrug conjugates of pemetrexed-based compounds |
WO2012088422A1 (en) | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polymeric prodrug conjugates of taxane-based compounds |
WO2012088445A1 (en) | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polymeric prodrug conjugates of cabazitaxel-based compounds |
WO2012109387A1 (en) | 2011-02-08 | 2012-08-16 | Halozyme, Inc. | Composition and lipid formulation of a hyaluronan-degrading enzyme and the use thereof for treatment of benign prostatic hyperplasia |
US9340590B2 (en) | 2011-03-16 | 2016-05-17 | Amgen Inc. | Potent and selective inhibitors of NaV1.3 and NaV1.7 |
AU2012236889A1 (en) * | 2011-03-25 | 2013-05-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Pegylated human HDL particle and process for production thereof |
BR112013025021A2 (pt) | 2011-03-31 | 2017-03-01 | Novartis Ag | alisporivir para tratar infecções por vírus de hepatite c. |
PT2694087E (pt) | 2011-04-01 | 2015-04-09 | Novartis Ag | Tratamento para infecção com vírus de hepatite b sozinho ou em combinação com vírus de hepatite delta e doenças do fígado associadas |
BR112013025934A2 (pt) | 2011-04-13 | 2016-09-06 | Debiopharm Int Sa | tratamento de infecção pelo vírus da hepatite c com alisporivir |
US20140187488A1 (en) | 2011-05-17 | 2014-07-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for maintaining pegylation of polypeptides |
BR112013030958B1 (pt) | 2011-06-03 | 2022-02-08 | Xoma Technology Ltd | Anticorpo que se liga ao fator de transformação de crescimento beta, composição farmacêutica, usos dos mesmos, molécula de ácido nucleico, vetor de expressão, e método para produção de um anticorpo |
CN103889443A (zh) | 2011-06-17 | 2014-06-25 | 哈洛齐梅公司 | 使用透明质酸降解酶的持续皮下胰岛素输注法 |
US9993529B2 (en) | 2011-06-17 | 2018-06-12 | Halozyme, Inc. | Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme |
WO2013003593A1 (en) | 2011-06-28 | 2013-01-03 | Alternative Innovative Technologies Llc | Methods of use of hsp70 for increased performance or hsp70 related disorders |
BR112014000055A2 (pt) | 2011-07-01 | 2017-06-13 | Bayer Ip Gmbh | polipeptídeos de fusão de relaxina e usos dos mesmos |
PL2717917T3 (pl) | 2011-07-05 | 2016-12-30 | Koniugaty p97 - przeciwciało | |
DK2729160T3 (da) | 2011-07-08 | 2019-07-01 | Aegerion Pharmaceuticals Inc | Manipulerede polypeptider, der har forbedret virkningstid og reduceret immunogenicitet |
CN102952067A (zh) * | 2011-08-30 | 2013-03-06 | 苏州欣诺科生物科技有限公司 | 用于蛋白质n端聚乙二醇修饰的吡哆醛衍生物、制备方法及其应用 |
AU2012301769B2 (en) | 2011-08-31 | 2016-05-19 | Amgen Inc. | FGF21 for use in treating type 1 diabetes |
US20130071394A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | John K. Troyer | Compositions and combinations of organophosphorus bioscavengers and hyaluronan-degrading enzymes, and methods of use |
JO3476B1 (ar) | 2011-09-26 | 2020-07-05 | Novartis Ag | بروتينات مندمجة لعلاج الاضطرابات الايضية |
TW201315742A (zh) | 2011-09-26 | 2013-04-16 | Novartis Ag | 治療代謝病症之雙功能蛋白質 |
US20140228281A1 (en) | 2011-09-27 | 2014-08-14 | Novartis Ag | Alisporivr for treatment of hepatitis c virus infection |
US9937241B2 (en) | 2011-10-14 | 2018-04-10 | Alternative Innovative Technologies Llc | Degradation resistant HSP70 formulations and uses thereof |
AU2012328880B2 (en) | 2011-10-24 | 2017-02-23 | Halozyme, Inc. | Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof |
EP2771300B1 (en) | 2011-10-25 | 2017-12-20 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US10350139B2 (en) | 2011-10-25 | 2019-07-16 | Corning Incorporated | Pharmaceutical glass packaging assuring pharmaceutical sterility |
JP2015504038A (ja) | 2011-10-31 | 2015-02-05 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーBristol−Myers Squibb Company | 低減した免疫原性を有するフィブロネクチン結合ドメイン |
CN104220086A (zh) | 2011-11-17 | 2014-12-17 | 塞比克斯股份公司 | Peg化的c-肽 |
WO2013101509A2 (en) | 2011-12-15 | 2013-07-04 | Alternative Innovative Technologies Llc | Hsp70 fusion protein conjugates and uses thereof |
IL298330A (en) | 2011-12-30 | 2023-01-01 | Halozyme Inc | Ph20 polypeptide variants, formulations and uses thereof |
DK2809350T3 (en) | 2012-01-30 | 2019-01-28 | Arecor Ltd | STABILIZED Aqueous Antibody Preparations |
KR20140123571A (ko) | 2012-02-16 | 2014-10-22 | 에이티와이알 파마, 인코포레이티드 | 자가면역 및 염증성 질환의 치료를 위한 히스티딜trna 신테타제 |
SG11201405276PA (en) | 2012-02-27 | 2014-10-30 | Amunix Operating Inc | Xten conjugate compositions and methods of making same |
US20150030564A1 (en) | 2012-02-29 | 2015-01-29 | Toray Industries, Inc. | Inhibitory agent for body cavity fluid accumulation |
WO2013134138A1 (en) | 2012-03-03 | 2013-09-12 | Immungene, Inc. | Engineered antibody-interferon mutant fusion molecules |
JP2015509980A (ja) | 2012-03-14 | 2015-04-02 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Hcv−hiv同時感染患者集団のhcv感染症を治療するための併用療法 |
JP2015512900A (ja) | 2012-03-28 | 2015-04-30 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 特別な患者の遺伝子亜型分集団のhcv感染症を治療するための併用療法 |
CN104411332B (zh) | 2012-03-30 | 2018-11-23 | 索伦托治疗有限公司 | 与vegfr2结合的全人抗体 |
EA031986B1 (ru) | 2012-04-04 | 2019-03-29 | Галозим, Инк. | Способ и комбинация для лечения солидной раковой опухоли и набор, содержащий комбинацию |
KR20220084444A (ko) | 2012-05-31 | 2022-06-21 | 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 | Pd-l1에 결합하는 항원 결합 단백질 |
EP3505534A1 (en) | 2012-06-08 | 2019-07-03 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising sitespecific nonnatural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
EP2864358B1 (en) | 2012-06-22 | 2019-08-07 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind ccr2 |
ES2611788T3 (es) | 2012-06-26 | 2017-05-10 | Sutro Biopharma, Inc. | Proteínas de Fc modificadas que comprenden residuos de aminoácidos no naturales específicos del sitio, conjugados de las mismas, métodos para su preparación y métodos para su uso |
JP6433424B2 (ja) | 2012-07-31 | 2018-12-05 | バイオアシス テクノロジーズ インコーポレイテッド | 脱リン酸化されたリソソーム蓄積症タンパク質およびその使用方法 |
BR112015004022B1 (pt) | 2012-08-31 | 2023-04-25 | Sutro Biopharma, Inc | Aminoácidos modificados compreendendo um grupo azido |
US9278124B2 (en) | 2012-10-16 | 2016-03-08 | Halozyme, Inc. | Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods |
EP2916835A4 (en) | 2012-11-12 | 2016-07-27 | Redwood Bioscience Inc | COMPOUNDS AND METHOD FOR PRODUCING A CONJUGATE |
CA2890906A1 (en) | 2012-11-16 | 2014-05-22 | The Regents Of The University Of California | Pictet-spengler ligation for protein chemical modification |
US9310374B2 (en) | 2012-11-16 | 2016-04-12 | Redwood Bioscience, Inc. | Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate |
US20140205566A1 (en) | 2012-11-30 | 2014-07-24 | Novartis Ag | Cyclic nucleuoside derivatives and uses thereof |
US9383357B2 (en) | 2012-12-07 | 2016-07-05 | Northwestern University | Biomarker for replicative senescence |
WO2014099984A1 (en) | 2012-12-20 | 2014-06-26 | Amgen Inc. | Apj receptor agonists and uses thereof |
US20150361159A1 (en) | 2013-02-01 | 2015-12-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold proteins |
CN103113466B (zh) * | 2013-03-01 | 2015-06-03 | 中国科学院过程工程研究所 | 聚乙二醇修饰的重组人干扰素β-1b及制备方法 |
WO2014165277A2 (en) | 2013-03-12 | 2014-10-09 | Amgen Inc. | POTENT AND SELECTIVE INHIBITORS OF Nav1.7 |
BR112015022416A2 (pt) | 2013-03-13 | 2017-10-24 | Bioasis Technologies Inc | fragmentos de p97 e seus usos |
RU2535002C2 (ru) * | 2013-04-04 | 2014-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук | Средство коррекции отдаленных последствий нарушений сперматогенеза, вызванных цитостатическим воздействием |
JP2016519108A (ja) | 2013-04-18 | 2016-06-30 | アルモ・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド | インターロイキン−10を疾病及び疾患の治療に用いる方法 |
US9839579B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-12-12 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9707154B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-07-18 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9713572B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-07-25 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9849066B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-12-26 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9717648B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-08-01 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9707155B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-07-18 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9707153B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-07-18 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9603775B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-03-28 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9700485B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-07-11 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9700486B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-07-11 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
US9717649B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-08-01 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
WO2014204816A2 (en) | 2013-06-17 | 2014-12-24 | Armo Biosciences, Inc. | Method for assessing protein identity and stability |
TW201534726A (zh) | 2013-07-03 | 2015-09-16 | Halozyme Inc | 熱穩定ph20玻尿酸酶變異體及其用途 |
US9764039B2 (en) | 2013-07-10 | 2017-09-19 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
WO2015031673A2 (en) | 2013-08-28 | 2015-03-05 | Bioasis Technologies Inc. | Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof |
US10010588B2 (en) | 2013-08-30 | 2018-07-03 | Armo Biosciences, Inc. | Methods of using pegylated interleukin-10 for treating hyperlipidemia |
WO2015049630A1 (en) | 2013-10-02 | 2015-04-09 | Novartis Ag | Insulin-like growth factor mimetics for use in therapy |
WO2015054658A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Sutro Biopharma, Inc. | Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use |
US20160235810A1 (en) | 2013-10-18 | 2016-08-18 | Novartis Ag | Methods of treating diabetes and related disorders |
KR20160079114A (ko) | 2013-11-11 | 2016-07-05 | 아르모 바이오사이언시스 인코포레이티드 | 질환 및 장애를 치료하기 위한 인터류킨-10을 사용하는 방법 |
EP3068891A1 (en) | 2013-11-13 | 2016-09-21 | Aequus Biopharma Inc. | Engineered glycoproteins and uses thereof |
WO2015081282A1 (en) | 2013-11-27 | 2015-06-04 | Redwood Bioscience, Inc. | Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate |
UY35874A (es) | 2013-12-12 | 2015-07-31 | Novartis Ag | Un proceso para la preparación de una composición de proteínas pegiladas |
WO2015130963A2 (en) | 2014-02-27 | 2015-09-03 | Xenetic Biosciences, Inc. | Compositions and methods for administering insulin or insulin-like protein to the brain |
WO2015187295A2 (en) | 2014-06-02 | 2015-12-10 | Armo Biosciences, Inc. | Methods of lowering serum cholesterol |
CA2951391C (en) | 2014-06-10 | 2021-11-02 | Amgen Inc. | Apelin polypeptides |
EP4223317A3 (en) | 2014-06-12 | 2023-09-27 | RA Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of complement activity |
CN107148282A (zh) | 2014-08-22 | 2017-09-08 | 索伦托治疗有限公司 | 结合cxcr3的抗原结合蛋白 |
HUE043847T2 (hu) | 2014-08-28 | 2019-09-30 | Halozyme Inc | Hialuronán-lebontó enzimmel és egy immun checkpoint inhibitorral végzett kombinációs terápia |
EA201700181A1 (ru) | 2014-10-14 | 2017-09-29 | Галозим, Инк. | Композиции аденозиндеаминазы-2 (ада-2), их варианты и способы использования |
JP2017536098A (ja) | 2014-10-14 | 2017-12-07 | アルモ・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド | インターロイキン−15組成物及びその使用 |
WO2016064817A1 (en) | 2014-10-22 | 2016-04-28 | Armo Biosciences, Inc. | Methods of using interleukin-10 for treating diseases and disorders |
KR20240024362A (ko) | 2014-10-24 | 2024-02-23 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 변형된 fgf-21 폴리펩티드 및 그의 용도 |
EA037151B1 (ru) | 2014-11-06 | 2021-02-11 | Фармаэссентия Корпорейшн | Способ лечения с использованием пегилированного интерферона |
US10046058B2 (en) | 2014-12-02 | 2018-08-14 | Rezolute, Inc. | Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates |
EP3988110A1 (en) | 2015-01-28 | 2022-04-27 | RA Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of complement activity |
US10618970B2 (en) | 2015-02-03 | 2020-04-14 | Armo Biosciences, Inc. | Method of treating cancer with IL-10 and antibodies that induce ADCC |
US10335492B2 (en) * | 2015-03-03 | 2019-07-02 | Nansha Biologics (Hong Kong) Limited | Increasing serum half-life of human IL-11 variants by N-terminal branched PEGylation |
EP3265491A1 (en) | 2015-03-03 | 2018-01-10 | Xoma (Us) Llc | Treatment of post-prandial hyperinsulinemia and hypoglycemia after bariatric surgery |
US10167334B2 (en) | 2015-04-03 | 2019-01-01 | Xoma Technology Ltd. | Treatment of cancer using anti-TGF-BETA and PD-1 antibodies |
JP6525171B2 (ja) | 2015-04-13 | 2019-06-05 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | 環状化サイトカイン及びその製法 |
KR20170141692A (ko) | 2015-05-01 | 2017-12-26 | 알리스타 파마슈티컬즈, 인크. | 안구 장애를 치료하기 위한 아디포넥틴 펩티드모방체 |
AU2016268403A1 (en) | 2015-05-28 | 2017-12-07 | Armo Biosciences, Inc. | Pegylated interleukin-10 for use in treating cancer |
AU2016304588A1 (en) | 2015-08-06 | 2018-02-15 | Xoma (Us) Llc | Antibody fragments against the insulin receptor and uses thereof to treat hypoglycemia |
JP7053453B2 (ja) | 2015-08-25 | 2022-04-12 | アルモ・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド | 疾患及び障害を治療するためのインターロイキン10の使用方法 |
CN108026182B (zh) | 2015-09-18 | 2022-04-26 | 国立大学法人宫崎大学 | 长效肾上腺髓质素衍生物 |
EP3355908A1 (en) | 2015-10-01 | 2018-08-08 | Amgen Inc. | Treatment of bile acid disorders |
US10935276B2 (en) | 2015-10-20 | 2021-03-02 | Steven Michalski | Air mixing device |
US11202819B2 (en) | 2015-12-08 | 2021-12-21 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Use of C-type natriuretic peptide variants to treat osteoarthritis |
MX2018007352A (es) | 2015-12-16 | 2019-05-16 | Ra Pharmaceuticals Inc | Moduladores de la actividad del complemento. |
US10118963B2 (en) | 2016-01-29 | 2018-11-06 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind PD-L1 |
JP7148493B2 (ja) | 2016-08-01 | 2022-10-05 | ゾーマ (ユーエス) リミテッド ライアビリティ カンパニー | 副甲状腺ホルモン受容体1(pth1r)抗体およびその使用 |
AU2017335771A1 (en) | 2016-09-28 | 2019-02-28 | Musc Foundation For Research Development | Antibodies that bind interleukin-2 and uses thereof |
BR112019011053A2 (pt) | 2016-12-07 | 2019-10-15 | Ra Pharmaceuticals Inc | moduladores da atividade do complemento |
US11129906B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-09-28 | David Gordon Bermudes | Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria |
CN110637027A (zh) | 2017-02-08 | 2019-12-31 | 百时美施贵宝公司 | 包含药代动力学增强子的修饰的松弛素多肽及其用途 |
US10781435B2 (en) | 2017-06-22 | 2020-09-22 | Catalyst Biosciences, Inc. | Modified membrane type serine protease 1 (MTSP-1) polypeptides and methods of use |
KR102020995B1 (ko) | 2017-10-30 | 2019-09-16 | 한국코러스 주식회사 | 콜로니자극인자와 폴리올이 접합된 접합물을 고수율로 제조하는 방법 |
US11492493B2 (en) | 2017-12-26 | 2022-11-08 | Becton, Dickinson And Company | Deep ultraviolet-excitable water-solvated polymeric dyes |
JP2021509805A (ja) | 2017-12-27 | 2021-04-08 | カウンシル オブ サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ | 顆粒球コロニー刺激因子活性を示すポリペプチド |
EP3765484A4 (en) * | 2018-03-14 | 2021-12-22 | Ba, Yong | PEGYLATED ANTIFREEZE PROTEINS AND PROCESSES FOR PREPARATION AND USE |
EP3775052B1 (en) | 2018-03-30 | 2024-06-05 | Becton, Dickinson and Company | Water-soluble polymeric dyes having pendant chromophores |
MA52347A (fr) | 2018-04-24 | 2021-03-03 | Amgen Inc | Procédé de fabrication de compositions pharmaceutiques injectables |
WO2019222435A1 (en) | 2018-05-16 | 2019-11-21 | Halozyme, Inc. | Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20 |
KR102167755B1 (ko) | 2018-05-23 | 2020-10-19 | 주식회사 큐어바이오 | 단편화된 grs 폴리펩타이드, 이의 변이체 및 이들의 용도 |
CA3107332A1 (en) | 2018-07-22 | 2020-01-30 | Bioasis Technologies Inc. | Treatment of lymphatic metastases |
US20220056093A1 (en) | 2018-09-11 | 2022-02-24 | Ambrx, Inc. | Interleukin-2 polypeptide conjugates and their uses |
EP3867265A1 (en) | 2018-10-19 | 2021-08-25 | Ambrx, Inc. | Interleukin-10 polypeptide conjugates, dimers thereof, and their uses |
US11613744B2 (en) | 2018-12-28 | 2023-03-28 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use |
EP3902913A1 (en) | 2018-12-28 | 2021-11-03 | Catalyst Biosciences, Inc. | Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use |
BR112021015832A2 (pt) | 2019-02-12 | 2022-01-18 | Ambrx Inc | Composições que contêm conjugados de anticorpo-agonista de tlr, métodos e usos dos mesmos |
US10882954B2 (en) | 2019-04-11 | 2021-01-05 | Sunbio Inc. | Tertiary alkoxy polyethylene glycol and derivatives thereof |
KR20210153092A (ko) | 2019-04-15 | 2021-12-16 | 퀴셀 세라퓨틱스 엘엘씨 | 암 치료에 사용하기 위한, 마스킹된 유형 i 인터페론(ifna 및 ifnb) 및 종양 항원에 대한 항체를 포함하는 융합 단백질 조성물 |
WO2020213015A1 (en) * | 2019-04-15 | 2020-10-22 | Nof Corporation | Conjugate of bio-related substance and block polymer, and block polymer derivative for obtaining said conjugate |
KR20220151202A (ko) | 2020-03-11 | 2022-11-14 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 인터류킨-2 폴리펩타이드 접합체 및 그의 사용 방법 |
EP4121448A2 (en) | 2020-03-20 | 2023-01-25 | Amgen Inc. | Determination of free n-terminus of pegfilgrastim using an acid protease |
US20210355468A1 (en) | 2020-05-18 | 2021-11-18 | Bioasis Technologies, Inc. | Compositions and methods for treating lewy body dementia |
US20210393787A1 (en) | 2020-06-17 | 2021-12-23 | Bioasis Technologies, Inc. | Compositions and methods for treating frontotemporal dementia |
JP2023538071A (ja) | 2020-08-20 | 2023-09-06 | アンブルックス,インコーポレイテッド | 抗体-tlrアゴニストコンジュゲート、その方法及び使用 |
US11602598B1 (en) * | 2020-08-27 | 2023-03-14 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Prefilled syringe with pegfilgrastim having optimized dose and methods related thereto |
CN112710826A (zh) * | 2020-11-17 | 2021-04-27 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 一种提高试剂稳定性的包被和封闭方法 |
US11952461B2 (en) | 2021-03-22 | 2024-04-09 | Sunbio, Inc. | Siloxy polyethylene glycol and derivatives thereof |
CA3213805A1 (en) | 2021-04-03 | 2022-10-06 | Feng Tian | Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof |
CN113214328B (zh) * | 2021-05-08 | 2022-06-28 | 宁波经济技术开发区弘翔生化科技有限公司 | 一种双水相体系以及基于双水相体系的单糖分离方法 |
EP4155349A1 (en) | 2021-09-24 | 2023-03-29 | Becton, Dickinson and Company | Water-soluble yellow green absorbing dyes |
WO2024007016A2 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Beckman Coulter, Inc. | Novel fluorescent dyes and polymers from dihydrophenanthrene derivatives |
WO2024044327A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Beckman Coulter, Inc. | Dhnt monomers and polymer dyes with modified photophysical properties |
Family Cites Families (96)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US1609546A (en) | 1925-11-19 | 1926-12-07 | Petroleum Rectifying Co | Process of separating water from emulsions |
DE2047413C3 (de) | 1970-09-26 | 1980-05-29 | F. Hoffmann-La Roche & Co Ag, Basel (Schweiz) | Verfahren zur Herstellung von Peptiden in homogener Phase |
US4002714A (en) * | 1972-08-14 | 1977-01-11 | Fumio Usui | Method for producing a tapered pipe of reinforced synthetic resin |
US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
US4002531A (en) * | 1976-01-22 | 1977-01-11 | Pierce Chemical Company | Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby |
DE2930542A1 (de) | 1979-07-27 | 1981-02-12 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate und verfahren zu ihrer herstellung |
JPS57192435A (en) | 1981-05-20 | 1982-11-26 | Toyobo Co Ltd | Modified polypeptide |
DE3139483C2 (de) | 1981-10-03 | 1985-06-13 | Dr.-Ing. Rudolf Hell Gmbh, 2300 Kiel | Verfahren und Schaltungsanordnung zur Kontraststeigerung |
US6936694B1 (en) * | 1982-05-06 | 2005-08-30 | Intermune, Inc. | Manufacture and expression of large structural genes |
US4609546A (en) | 1982-06-24 | 1986-09-02 | Japan Chemical Research Co., Ltd. | Long-acting composition |
JPS58225025A (ja) * | 1982-06-24 | 1983-12-27 | Nippon Chem Res Kk | 効力持続性組成物 |
WO1985003934A1 (en) | 1984-03-06 | 1985-09-12 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified protein and process for its preparation |
EP0154316B1 (en) * | 1984-03-06 | 1989-09-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified lymphokine and production thereof |
JPS61227526A (ja) | 1984-07-25 | 1986-10-09 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 新規なコロニー刺激因子 |
JPS6142558A (ja) | 1984-08-06 | 1986-03-01 | Matsushita Electric Works Ltd | アミノ樹脂成形材料 |
JPS62129298A (ja) | 1985-12-02 | 1987-06-11 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 新規ポリペプチド |
WO1986004605A1 (en) | 1985-02-08 | 1986-08-14 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Human granulocyte colony stimulating factor |
US5532341A (en) | 1985-03-28 | 1996-07-02 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Human pluripotent hematopoietic colony stimulating factor |
WO1987000056A1 (en) | 1985-06-26 | 1987-01-15 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
US4766106A (en) * | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
ES8800982A1 (es) | 1985-07-05 | 1987-12-01 | Takeda Chemical Industries Ltd | Un metodo para producir la enzima superoxido-dismutasa modificada con derivados de polietilenglicol y triazina. |
US4810643A (en) * | 1985-08-23 | 1989-03-07 | Kirin- Amgen Inc. | Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor |
JPS63500636A (ja) | 1985-08-23 | 1988-03-10 | 麒麟麦酒株式会社 | 多分化能性顆粒球コロニー刺激因子をコードするdna |
JPH0657152B2 (ja) | 1985-09-17 | 1994-08-03 | 中外製薬株式会社 | Csf遺伝子類 |
JP2514950B2 (ja) | 1986-03-10 | 1996-07-10 | エフ・ホフマン―ラ ロシユ アーゲー | 化学修飾蛋白質,その製造法および中間体 |
DK203187A (da) * | 1986-04-22 | 1987-10-23 | Immunex Corp | Human g-csf proteinekspression |
US6673347B1 (en) | 1986-04-30 | 2004-01-06 | Gryphon Therapeutics | Polypeptide and protein derivatives and process for their preparation |
CA1283046C (en) | 1986-05-29 | 1991-04-16 | Nandini Katre | Tumor necrosis factor formulation |
JPS63126900A (ja) | 1986-06-26 | 1988-05-30 | Takeda Chem Ind Ltd | 化学修飾蛋白質 |
US4791192A (en) | 1986-06-26 | 1988-12-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified protein with polyethyleneglycol |
JPS63152393A (ja) | 1986-07-03 | 1988-06-24 | Takeda Chem Ind Ltd | グリコシル誘導体 |
GR871067B (en) | 1986-07-18 | 1987-11-19 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Process for producing stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony stimulating factor |
WO1988001297A1 (en) | 1986-08-11 | 1988-02-25 | Cetus Corporation | Expression of g-csf and muteins thereof |
JPS6360938A (ja) | 1986-09-02 | 1988-03-17 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 修飾組織型プラスミノ−ゲン活性化因子およびその製造方法 |
US4894226A (en) | 1986-11-14 | 1990-01-16 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polyproline conjugation |
US5214132A (en) | 1986-12-23 | 1993-05-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Polypeptide derivatives of human granulocyte colony stimulating factor |
US5194592A (en) | 1986-12-23 | 1993-03-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Monoclonal antibodies to novel polypeptide derivatives of human granulocyte colony stimulating factor |
US5362853A (en) | 1986-12-23 | 1994-11-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Polypeptide derivatives of human granulocyte colony stimulating factor |
DK174044B1 (da) * | 1986-12-23 | 2002-05-06 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Polypeptid afledt fra human granulocytkolonistimulerende faktor, og fremgangsmåde til fremstilling deraf, DNA kodende for nævnte polypeptid, rekombinant plasmid indeholdende nævnte DNA, og mikroorganismer indeholdende nævnte rekombinante plasmid....... |
JPH086063B2 (ja) | 1987-07-22 | 1996-01-24 | 日本ペイント株式会社 | 親水性表面処理剤及び処理方法 |
US4904584A (en) * | 1987-12-23 | 1990-02-27 | Genetics Institute, Inc. | Site-specific homogeneous modification of polypeptides |
US4847325A (en) | 1988-01-20 | 1989-07-11 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
CA1340810C (en) * | 1988-03-31 | 1999-11-02 | Motoo Yamasaki | Polypeptide derivatives of human granulocyte colony stimulating factor |
JP2958019B2 (ja) | 1988-05-06 | 1999-10-06 | 住友製薬株式会社 | ポリエチレングリコール誘導体、修飾ペプチドおよびその製造方法 |
JP2796388B2 (ja) * | 1988-05-13 | 1998-09-10 | アムジエン・インコーポレーテツド | G−csfの精製方法 |
US5218092A (en) | 1988-09-29 | 1993-06-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Modified granulocyte-colony stimulating factor polypeptide with added carbohydrate chains |
US5349052A (en) * | 1988-10-20 | 1994-09-20 | Royal Free Hospital School Of Medicine | Process for fractionating polyethylene glycol (PEG)-protein adducts and an adduct for PEG and granulocyte-macrophage colony stimulating factor |
GB8824591D0 (en) * | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Fractionation process |
AU4660789A (en) | 1988-11-23 | 1990-06-12 | Genentech Inc. | Polypeptide derivatives |
US6166183A (en) | 1992-11-30 | 2000-12-26 | Kirin-Amgen, Inc. | Chemically-modified G-CSF |
ATE135370T1 (de) * | 1988-12-22 | 1996-03-15 | Kirin Amgen Inc | Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor |
JPH04503607A (ja) | 1989-02-24 | 1992-07-02 | イムノセラピューティックス・インコーポレイテッド | 固定化サイトカイン類 |
US5324844A (en) | 1989-04-19 | 1994-06-28 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
US5166322A (en) | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
KR920701252A (ko) * | 1989-10-10 | 1992-08-11 | 스티븐 엠. 오드레 | 과립구 군체 자극인자 및 그를 이용하여 개 및 고양이과 동물의 전염병을 치료하거나 예방하는 방법 |
JP2978187B2 (ja) | 1989-11-02 | 1999-11-15 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | 修飾スーパーオキサイドディスムターゼの製造法 |
JPH04218000A (ja) * | 1990-02-13 | 1992-08-07 | Kirin Amgen Inc | 修飾ポリペプチド |
DE4009661C1 (zh) | 1990-03-26 | 1991-03-07 | Aisa Automation Industrielle S.A., Vouvry, Ch | |
GB9107846D0 (en) | 1990-04-30 | 1991-05-29 | Ici Plc | Polypeptides |
DE4014750A1 (de) * | 1990-05-08 | 1991-11-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Muteine des granulozyten-stimulierenden faktors (g-csf) |
US5126324A (en) | 1990-06-07 | 1992-06-30 | Genentech, Inc. | Method of enhancing growth in patients using combination therapy |
IE912365A1 (en) * | 1990-07-23 | 1992-01-29 | Zeneca Ltd | Continuous release pharmaceutical compositions |
ES2128348T3 (es) * | 1990-10-17 | 1999-05-16 | Amgen Inc | Obtencion de composiciones para el tratamiento de alteraciones de la proliferacion celular. |
US5372808A (en) * | 1990-10-17 | 1994-12-13 | Amgen Inc. | Methods and compositions for the treatment of diseases with consensus interferon while reducing side effect |
US5252714A (en) * | 1990-11-28 | 1993-10-12 | The University Of Alabama In Huntsville | Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde |
US5124297A (en) | 1990-12-07 | 1992-06-23 | Amoco Corporation | Olefin polymerization and copolymerization catalyst |
CH682636A5 (de) * | 1990-12-21 | 1993-10-29 | Bucher Guyer Ag Masch | Verfahren zum selektiven Entfernen von Zucker aus Getränken. |
ATE190629T1 (de) | 1991-01-18 | 2000-04-15 | Amgen Inc | Methoden zur behandlung von durch den tumor nekrose faktor ausgelösten krankheiten |
DE4105480A1 (de) | 1991-02-21 | 1992-08-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verbesserte aktivierung von rekombinanten proteinen |
WO1992016221A1 (en) | 1991-03-15 | 1992-10-01 | Synergen, Inc. | Pegylation of polypeptides |
US5595732A (en) | 1991-03-25 | 1997-01-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polyethylene-protein conjugates |
WO1993000109A1 (en) | 1991-06-28 | 1993-01-07 | Genentech, Inc. | Method of stimulating immune response using growth hormone |
US5281698A (en) | 1991-07-23 | 1994-01-25 | Cetus Oncology Corporation | Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation |
US5197592A (en) * | 1991-08-05 | 1993-03-30 | Fmc Corporation | Wire frame idler roll support |
NZ244778A (en) * | 1991-10-21 | 1994-03-25 | Ortho Pharma Corp | Peg imidates and protein derivatives thereof |
US5589365A (en) * | 1991-11-29 | 1996-12-31 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Process for producing glycosylated indolopyrrolocarbazole derivatives by culturing certain microorganisms |
JP3235855B2 (ja) | 1991-12-19 | 2001-12-04 | 住友製薬株式会社 | 細胞接着活性ペプチド及びその高分子修飾体 |
JP3387519B2 (ja) * | 1992-03-04 | 2003-03-17 | 株式会社日立製作所 | 情報記録再生方式及びデイスク状記録媒体 |
FR2692736B1 (fr) | 1992-06-23 | 1996-12-20 | Thomson Csf | Filtre radioelectrique de forte et moyenne puissance. |
US5382657A (en) * | 1992-08-26 | 1995-01-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Peg-interferon conjugates |
EP0679095A1 (en) | 1992-11-25 | 1995-11-02 | Amgen Boulder Inc. | Modified insulin-like growth factors |
US5581476A (en) | 1993-01-28 | 1996-12-03 | Amgen Inc. | Computer-based methods and articles of manufacture for preparing G-CSF analogs |
WO1995000162A1 (en) * | 1993-06-21 | 1995-01-05 | Enzon, Inc. | Site specific synthesis of conjugated peptides |
US5589356A (en) | 1993-06-21 | 1996-12-31 | Vanderbilt University | Litigation of sidechain unprotected peptides via a masked glycoaldehyde ester and O,N-acyl rearrangement |
US5481571A (en) | 1993-11-12 | 1996-01-02 | Pacific Communication Sciences, Inc. | Method and apparatus for switching between radio frequency circuits |
SK166695A3 (en) * | 1994-03-31 | 1997-02-05 | Amgen Inc | Mgdf polypeptide for stimulating growth and megakaryocyte differentiation |
US5795569A (en) * | 1994-03-31 | 1998-08-18 | Amgen Inc. | Mono-pegylated proteins that stimulate megakaryocyte growth and differentiation |
US5646113A (en) | 1994-04-07 | 1997-07-08 | Genentech, Inc. | Treatment of partial growth hormone insensitivity syndrome |
US5661122A (en) | 1994-04-15 | 1997-08-26 | Genentech, Inc. | Treatment of congestive heart failure |
US5935924A (en) | 1994-04-15 | 1999-08-10 | Genentech, Inc. | Treatment of congestive heart failure |
EP0756494A1 (en) | 1994-05-24 | 1997-02-05 | Amgen Boulder Inc. | Modified insulin-like growth factors |
US5824784A (en) * | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
US5770577A (en) * | 1994-11-14 | 1998-06-23 | Amgen Inc. | BDNF and NT-3 polypeptides selectively linked to polyethylene glycol |
JP3708151B2 (ja) | 1994-12-15 | 2005-10-19 | 協和醗酵工業株式会社 | Peg化したヒト顆粒球コロニー刺激因子の定量法 |
US5672662A (en) | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
KR101441331B1 (ko) | 2013-07-19 | 2014-09-17 | 주식회사 슈프리마 | 광학식 지문 인식 장치 |
-
1994
- 1994-10-12 US US08/321,510 patent/US5824784A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-02-08 ES ES95910233T patent/ES2131811T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 JP JP51319196A patent/JP3177251B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 EP EP10183858A patent/EP2392594A1/en not_active Withdrawn
- 1995-02-08 EP EP95910233A patent/EP0733067B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 AT AT95910233T patent/ATE179991T1/de active
- 1995-02-08 EP EP10180124A patent/EP2399930A1/en not_active Withdrawn
- 1995-02-08 ES ES97117514T patent/ES2224197T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 EP EP04015640A patent/EP1564219A1/en not_active Withdrawn
- 1995-02-08 DE DE2002199044 patent/DE10299044I1/de active Pending
- 1995-02-08 CN CN2008101276757A patent/CN101381409B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 MX MX9602259A patent/MX9602259A/es active IP Right Grant
- 1995-02-08 WO PCT/US1995/001729 patent/WO1996011953A1/en active IP Right Grant
- 1995-02-08 CA CA002472085A patent/CA2472085A1/en not_active Abandoned
- 1995-02-08 CA CA002178752A patent/CA2178752C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 AT AT97117514T patent/ATE277078T1/de active
- 1995-02-08 EP EP97117514A patent/EP0822199B1/en not_active Revoked
- 1995-02-08 DE DE69533556T patent/DE69533556T2/de not_active Revoked
- 1995-02-08 ZA ZA951008A patent/ZA951008B/xx unknown
- 1995-02-08 CA CA2307142A patent/CA2307142C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 IL IL11258595A patent/IL112585A/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-02-08 NZ NZ281469A patent/NZ281469A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-02-08 CN CN95191454A patent/CN1071760C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 CN CNB001309749A patent/CN1229388C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 DK DK95910233T patent/DK0733067T3/da active
- 1995-02-08 PT PT97117514T patent/PT822199E/pt unknown
- 1995-02-08 CN CNA2005101137680A patent/CN1896103A/zh active Pending
- 1995-02-08 DE DE69509628T patent/DE69509628T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-02-08 KR KR1019960703099A patent/KR100248111B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-02-08 IL IL134754A patent/IL134754A/en not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-07-22 JP JP19257696A patent/JP3177449B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-06-20 US US08/879,760 patent/US5985265A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-07-31 HK HK98109570A patent/HK1008787A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-07-31 HK HK98109573A patent/HK1008826A1/xx not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-03-19 JP JP11076959A patent/JPH11310600A/ja active Pending
- 1999-06-16 GR GR990401601T patent/GR3030526T3/el unknown
- 1999-10-23 KR KR1019997009836A patent/KR100261030B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-02-27 IL IL13475400A patent/IL134754A0/xx unknown
-
2001
- 2001-03-26 US US09/817,725 patent/US7090835B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-10-01 JP JP2002288746A patent/JP2003155299A/ja not_active Withdrawn
- 2002-11-04 NL NL300106C patent/NL300106I2/nl unknown
-
2003
- 2003-01-29 LU LU91006C patent/LU91006I2/fr unknown
- 2003-04-10 JP JP2003106520A patent/JP2003327600A/ja active Pending
-
2005
- 2005-09-30 JP JP2005286188A patent/JP2006077021A/ja not_active Withdrawn
- 2005-09-30 JP JP2005286189A patent/JP2006045243A/ja not_active Withdrawn
-
2006
- 2006-04-26 US US11/411,321 patent/US7662933B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-12-16 US US12/639,398 patent/US8258262B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-06-14 JP JP2010134726A patent/JP5350330B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2012
- 2012-08-02 US US13/565,447 patent/US20120296072A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-03-19 US US13/847,290 patent/US20130189219A1/en not_active Abandoned
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1321134C (zh) * | 2000-11-23 | 2007-06-13 | 赵剑 | 一种生物活性蛋白质的非均一制品及其制备方法 |
CN102234310A (zh) * | 2010-04-30 | 2011-11-09 | 杭州九源基因工程有限公司 | 一种聚乙二醇修饰蛋白的分离纯化方法 |
CN102234310B (zh) * | 2010-04-30 | 2017-02-08 | 杭州九源基因工程有限公司 | 一种聚乙二醇修饰蛋白的分离纯化方法 |
WO2012055205A1 (zh) * | 2010-10-25 | 2012-05-03 | 重庆富进生物医药有限公司 | 聚乙二醇化的重组集成干扰素变异体偶联物及其制备方法和应用 |
CN102485742A (zh) * | 2010-12-02 | 2012-06-06 | 山东新时代药业有限公司 | 一种聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子的制备及分离纯化方法 |
CN103908660A (zh) * | 2013-01-05 | 2014-07-09 | 石药集团百克(山东)生物制药有限公司 | 一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF药物组合物及其制备方法 |
CN103908660B (zh) * | 2013-01-05 | 2015-02-04 | 石药集团百克(山东)生物制药有限公司 | 一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF药物组合物及其制备方法 |
CN104491843A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-04-08 | 石药集团百克(山东)生物制药有限公司 | 一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF活性药物组合物 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1071760C (zh) | N-端化学修饰的蛋白质组合物及方法 | |
US7232562B2 (en) | E38N interferon gamma polypeptide variants | |
CN1294596A (zh) | 修饰蛋白的免疫原性 | |
CN1321745A (zh) | 巨噬细胞炎性蛋白-3,-4和-1γ | |
CN1150756A (zh) | 稳定的蛋白质:磷脂组合物和方法 | |
CN1177302A (zh) | 作为抗肿瘤剂的淋巴毒素-α/β复合体和抗淋巴毒素-β受体抗体 | |
CN1150458A (zh) | 用于刺激造血的通式为gm-csf-l-epo或epo-l-gm-csf的杂合分子 | |
CN1142940C (zh) | 含有mpl配体的药物组合物 | |
JP2011507913A (ja) | Y型ポリエチレングリコール修飾したg−csfならびにその製造方法および使用 | |
US7230081B1 (en) | Interferon gamma conjugates | |
CN1735428A (zh) | 伴侣蛋白10的免疫抑制作用 | |
CN1859925A (zh) | 具有保留的受体结合活性的细胞因子、趋化因子、生长因子、多肽激素及其拮抗剂的聚合物缀合物 | |
CN1192751A (zh) | 单核细胞趋化蛋白-4 | |
RU2268749C2 (ru) | КОНЪЮГАТЫ γ-ИНТЕРФЕРОНА | |
CN88102023A (zh) | 猪生长激素类似物 | |
AU782635B2 (en) | Interferon gamma conjugates | |
AU741659B2 (en) | N-terminally chemically modified protein compositions and methods | |
AU2004202431A1 (en) | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C17 | Cessation of patent right | ||
CX01 | Expiry of patent term |
Expiration termination date: 20150208 Granted publication date: 20010926 |