EA031986B1 - Способ и комбинация для лечения солидной раковой опухоли и набор, содержащий комбинацию - Google Patents

Способ и комбинация для лечения солидной раковой опухоли и набор, содержащий комбинацию Download PDF

Info

Publication number
EA031986B1
EA031986B1 EA201401096A EA201401096A EA031986B1 EA 031986 B1 EA031986 B1 EA 031986B1 EA 201401096 A EA201401096 A EA 201401096A EA 201401096 A EA201401096 A EA 201401096A EA 031986 B1 EA031986 B1 EA 031986B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
tumor
hyaluronan
taxane
enzyme
seq
Prior art date
Application number
EA201401096A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201401096A1 (ru
Inventor
Дэниел С. Маневал
Эйч. Майкл Шепард
Картис Б. Томпсон
Original Assignee
Галозим, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Галозим, Инк. filed Critical Галозим, Инк.
Publication of EA201401096A1 publication Critical patent/EA201401096A1/ru
Publication of EA031986B1 publication Critical patent/EA031986B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A61K31/37—Coumarins, e.g. psoralen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
    • C12N9/0026—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5)
    • C12N9/0028—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5) with NAD or NADP as acceptor (1.5.1)
    • C12N9/003—Dihydrofolate reductase [DHFR] (1.5.1.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2474—Hyaluronoglucosaminidase (3.2.1.35), i.e. hyaluronidase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y105/00—Oxidoreductases acting on the CH-NH group of donors (1.5)
    • C12Y105/01—Oxidoreductases acting on the CH-NH group of donors (1.5) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.5.1)
    • C12Y105/01003—Dihydrofolate reductase (1.5.1.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01035—Hyaluronoglucosaminidase (3.2.1.35), i.e. hyaluronidase

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Заявлен способ лечения солидной раковой опухоли, включающий введение композиции, содержащей разрушающий гиалуронан фермент, который может быть конъюгирован с полимером, и введение композиции, содержащей лекарственную форму направленного на опухоль таксана. Способ может дополнительно включать введение композиции, содержащей химиотерапевтический агент, такой как нуклеозидный аналог.

Description

Родственные заявки
Заявка претендует на приоритет предварительной заявки США номер 61/686,429, поданной 4 апреля 2012, озаглавленной Комбинированная терапия конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом и терапевтическим агентом и предварительной заявки США номер 61/714719, поданной 16 октября 2012, озаглавленной Комбинированная терапия антигиалуроновым агентом и терапевтическим агентом.
Эта заявка также родственна патентной заявке США № 13/815804, поданной в тот же день с этой заявкой, озаглавленной Комбинационная терапия антигиалуроновым агентом и терапевтическим агентом, которая претендует на приоритет предварительной заявки США номер 61/686429 и предварительной заявки США номер 61/714719.
Эта заявка родственна патентной заявке США номер 12/386222, озаглавленной Модифицированные гиалуронидазы и их применения в лечении ассоциированных с гиалуронаном заболеваний и состояний, поданной 14 апреля 2009, которая опубликована как US 20100003238 и претендует на приоритет предварительных заявок США номер 61/124278, 61/130357 и 61/195624. Эта заявка также родственна международной заявке РСТ номер PCT/US 2009/002352, поданной 14 апреля 2009, которая опубликована как WO 2009/128917 и претендует на приоритет предварительных заявок США номер 61/124278, 61/130357 и 61/195624.
Эта заявка родственна патентной заявке США номер 13/135817, озаглавленной Неблагоприятные побочные эффекты, ассоциированные с введением антигиалуроновых агентов и способы облегчения или предотвращения побочных эффектов, поданной 15 июля 2011, которая опубликована как US 20120020951 и претендует на приоритет предварительных заявок США номер 61/399993 и 61/455260. Эта заявка также родственна международной заявке РСТ номер PCT/US 2011/044281, поданной 15 июля 2011, которая опубликована как WO 2012/012300 и также претендует на приоритет предварительных заявок США номер 61/399993 и 61/455260.
Предмет каждой из вышеуказанных заявок включен в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Включение посредством ссылки перечня последовательностей, предоставленного в электронном виде.
Электронная версия перечня последовательностей подана с этой заявкой, его содержание включено в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Электронный файл создан 15 марта 2013, имеет размер 891 килобайт и называется 3108SEQPC1.txt.
Область техники
В настоящем документе предусмотрена комбинированная терапия, включающая антигиалуроновый агент, такой как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, и направленный на опухоль таксан, и, необязательно, дополнительный химиотерапевтический агент, такой как нуклеозидный аналог. Комбинированная терапия может быть использована в способах лечения рака, в частности солидных раковых опухолей.
Предшествующий уровень техники
Антигиалуроновые (антигиалуронановые) агенты, такие как разрушающие гиалуронан ферменты, например РН20, применяют в способах лечения ассоциированных с гиалуронаном заболеваний или состояний, в том числе раков и, в частности, ассоциированных с гиалуронаном раков или опухолей. Гиалуронан (гиалуронановая кислота; НА) представляет собой гликозаминогликан, который находится, в основном, в соединительных тканях, коже, хрящах и в синовиальной жидкости млекопитающих. В соединительной ткани, гидратирующая вода, ассоциированная с гиалуронаном, создает гидратированный матрикс между тканями. НА обнаруживается во внеклеточном матрике многих клеток, особенно в мягких соединительных тканях. Некоторые заболевания ассоциированы с экспрессией и/или продукцией гиалуронана, в том числе солидные раковые опухоли. Антигиалуроновые агенты представляют собой агенты, которые модулируют синтез или разрушение НА, тем самым изменяя уровень НА в ткани и клетках. В частности, гиалуронидазы представляют собой ферменты, разрушающие гиалуронан. За счет того, что гиалуронидазы катализируют разрушение НА, их можно применять для лечения заболеваний или расстройств, ассоциированных с накоплением НА или других гликозаминогликанов, в том числе рака и опухолей. Для лечения рака, в частности солидных опухолей, существует необходимость в улучшенных или альтернативных терапевтических лечениях.
Сущность изобретения
Разработан способ лечения солидной раковой опухоли, включающий введение композиции, содержащей разрушающий гиалуронан фермент, где разрушающий гиалуронан фермент конъюгирован с полимером и опухоль имеет повышенную клеточную и/или стромальную экспрессию гиалуронана по сравнению с нераковой тканью того же типа ткани или по сравнению с не метастазирующей опухолью того же типа опухоли, и введение композиции, содержащей лекарственную форму направленного на опухоль таксана, где направленный на опухоль таксан соединен напрямую или не напрямую с пептидным или белковым компонентом для направленнного действия на опухоль; где компонент связывает молекулу на поверхности опухоли, а молекула представляет собой опухолеспецифический маркер или рецептор, и
- 1 031986 направленный на опухоль таксан проявляет увеличенную специфичность к опухоли по сравнению с таксаном, который не связан с указанным компонентом.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения способ дополнительно включает введение композиции, содержащей химиотерапевтический агент, являющийся нуклеозидным аналогом.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения опухолеспецифический маркер или рецептор представляет собой сахар, липид, гликозаминогликан или белок.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения солидная раковая опухоль выбрана из опухоли поджелудочной железы, яичников, легких, прямой кишки, простаты, матки, головы и шеи и опухоли груди. Согласно отдельным вариантам выполнения изобретения солидная раковая опухоль представляет собой опухоль поджелудочной железы.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения разрушающий гиалуронан фермент представляет собой гиалуронидазу. Согласно некоторым частным вариантам выполнения изобретения гиалуронидаза представляет собой РН20 или ее укороченную форму, у которой отсутствует С-концевой участок присоединения гликозилфосфатидилинозитола (GPI) или часть участка присоединения GPI, за счет чего РН20 не ассоциируется с мембраной при экспрессии из клетки.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения гиалуронидаза представляет собой овечью или бычью РН20 или укороченную с С-конца человеческую РН20.
Согласно некоторым конкретным вариантам выполнения изобретения укороченная РН20 включает последовательность аминокислот 36-464 SEQ ID NO: 1 или последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности аминокислот 36-464 SEQ ID NO: 1 и сохраняет гиалуронидазную активность.
Согласно другим вариантам выполнения изобретения РН20 включает последовательность аминокислот SEQ ID NOS: 4-9, 47, 48, 150-170 или 183-189 или последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности SEQ ID NOS: 4-9, 47, 48, 150-170 или 183-189 и сохраняет гиалуронидазную активность.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения полимер представляет собой полиалкиленгликоль, декстран, пуллулан или целлюлозу. Согласно некоторым частным вариантам выполнения изобретения полиалкиленгликоль выбран из полиэтиленгликолей (PEG) или метоксиполиэтиленгликолей (mPEG).
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения разрушающий гиалуронан фермент вводят в диапазоне доз между 0,01 и 15 мкг/кг; или разрушающий гиалуронан фермент вводят в диапазоне доз между 10 и 10000 единиц/кг (массы тела субъекта).
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения направленный на опухоль таксан представляет собой паклитаксел или доцетаксел.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения компонентом для направленного действия на опухоль является альбумин.
Согласно некоторым конкретным вариантам выполнения изобретения направленный на опухоль таксан представляет собой связанный с альбумином паклитаксел или связанный с альбумином доцетаксел.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения направленный на опухоль таксан вводят в диапазоне доз между 1 и 1000 мг/м2 (площади поверхности тела субъекта).
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения нуклеозидный аналог представляет собой субстрат для нуклеозид дезаминазы. Согласно некоторым частным вариантам выполнения изобретения нуклеозид дезаминаза представляет собой аденозин дезаминазу или цитидин дезаминазу. Согласно другим вариантам выполнения изобретения нуклеозидный аналог выбран из флударабина, цитарабина, гемцитабина, децитабина и азацитидина.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения нуклеозидный аналог вводят в диапазоне доз между 100 и 2500 мг/м2.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения композицию (композиции) вводят внутривенно или подкожно.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения разрушающий гиалуронан фермент вводят до введения направленного на опухоль таксана, например, примерно за 5, 15, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 30 ч, 36, 40 или 48 ч до введения направленного на опухоль таксана.
Согласно другим вариантам выполнения изобретения разрушающий гиалуронан фермент и направленный на опухоль таксан вводят одновременно.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения разрушающий гиалуронан фермент и/или направленный на опухоль таксан вводят до нуклеозидного аналога, одновременно с нуклеозидным аналогом, или после нуклеозидного аналога, или периодически.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения разрушающий гиалуронан фермент вводят примерно за 5, 15, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8 ч ведения нуклеозидного аналога; а направленный на опухоль таксан вводят примерно за 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, 22, 24 ч до введения нуклеозидного аналога.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения способ дополнительно включает введение
- 2 031986 кортикостероида.
Изобретение также предусматривает способ лечения солидной раковой опухоли, включающий введение композиции, содержащей разрушающий гиалуронан фермент; введение композиции, содержащей лекарственную форму направленного на опухоль таксана, где направленный на опухоль таксан вводят одновременно с разрушающим гиалуронан ферментом; и введение кортикостероида до введения разрушающего гиалуронан фермента, одновременно с введением разрушающего гиалуронан фермента, периодически с введением разрушающего гиалуронан фермента или после введения разрушающего гиалуронан фермента.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения способ также включает введение нуклеозидного аналога после введения разрушающего гиалуронан фермента и направленного на опухоль таксана.
Согласно некоторым частным вариантам выполнения изобретения кортикостероид представляет собой глюкокортикоид, и глюкокортикоид выбран из кортизона, дексаметазона, гидрокортизона, метилпреднизолона, преднизолона и преднизона.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения разрушающий гиалуронан фермент и направленный на опухоль таксан вводят два раза в неделю или один раз в неделю в течение заранее определенного количества недель, а нуклеозидный аналог вводят один раз в неделю в течение заранее определенного количества недель.
Согласно другим вариантам выполнения изобретения разрушающий гиалуронан фермент вводят два раза в неделю, а направленный на опухоль таксан вводят один раз в неделю.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения субъект является человеком.
Изобретение также предусматривает комбинацию для лечения солидной раковой опухоли, включающую композицию, содержащую разрушающий гиалуронан фермент, который конъюгирован с полимером, и композицию, содержащую направленный на опухоль таксан, который соединен напрямую или не напрямую с белковым или пептидным компонентом для направленного действия на опухоль, где компонент связывает молекулу на поверхности опухоли, причем молекулой является опухолеспецифический маркер или рецептор, и направленный на опухоль таксан проявляет увеличенную специфичность к опухоли по сравнению с таксаном, который не связан с указанным компонентом. Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения разрушающий гиалуронан фермент представляет собой гиалуронидазу.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения комбинация дополнительно включает композицию, содержащую химиотерапевтический агент, который представляет собой нуклеозидный аналог.
Изобретение также предусматривает комбинацию для лечения солидной раковой опухоли, в которой разрушающий гиалуронан фермент представляет собой гиалуронидазу, причем согласно некоторым вариантам выполнения изобретения гиалуронидаза представляет собой РН20 или ее укороченную форму, у которой отсутствует С-концевой участок присоединения гликозилфосфатидилинозитола (GPI) или часть участка присоединения GPI, за счет чего РН20 не ассоциируется с мембраной при экспрессии в клетке. Согласно некоторым вариантам выполнения комбинации гиалуронидаза представляет собой овечью или бычью РН20 или укороченную с С-конца человеческую РН20. Согласно некоторым вариантам выполнения комбинации направленный на опухоль таксан представляет собой паклитаксел или доцетаксел. Согласно некоторым вариантам выполнения комбинации компонентом для направленного действия на опухоль является альбумин. Согласно некоторым вариантам выполнения комбинации направленный на опухоль таксан представляет собой связанный с альбумином паклитаксел или связанный с альбумином доцетаксел. Согласно некоторым вариантам выполнения комбинации нуклеозидный аналог представляет собой субстрат для нуклеозид дезаминазы. Согласно некоторым частным вариантам выполнения комбинации нуклеозид дезаминаза представляет собой аденозин дезаминазу или цитидин дезаминазу. Согласно другим вариантам выполнения комбинации нуклеозидный аналог выбран из флударабина, цитарабина, гемцитабина, децитабина и азацитидина.
Изобретение также предусматривает комбинацию для лечения солидной раковой опухоли, дополнительно включающую композицию, содержащую кортикостероид.
Изобретение также предусматривает комбинацию, в которой полимер представляет собой полиалкиленгликоль, декстран, пуллулан или целлюлозу.
Изобретение также предусматривает комбинацию, где полиалкиленгликоль выбран из полиэтиленгликолей (PEG) или метоксиполиэтиленгликолей (mPEG).
Изобретение также предусматривает набор, включающий инструкции по применению, содержащий комбинацию для лечения солидной опухоли, включающую композицию, содержащую разрушающий гиалуронан фермент, где разрушающий гиалуронан фермент конъюгирован с полимером; и композицию, содержащую направленный на опухоль таксан, который соединен напрямую или не напрямую с пептидным или белковым компонентом для направленного действия на опухоль, где компонент связывает молекулу на поверхности опухоли, а молекула представляет собой опухолеспецифический маркер или рецептор, такой как сахар, липид, гликозаминогликан или белок, направленный на опухоль таксан проявляет увеличенную специфичность к опухоли по сравнению с таксаном, который не связан с указанным
- 3 031986 компонентом.
Согласно некоторым вариантам выполнения изобретения набор дополнительно содержит химиотерапевтический агент, являющийся нуклеозидным аналогом.
Изобретение также предусматривает применение описанных выше комбинаций и композиций для лечения солидной раковой опухоли.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 показан эффект PEGPH20 (Р) и/или nab-паклитаксела (NAB, N) на рост опухоли в мышиной ксенотрансплантатной модели опухоли ВхРС-3 PDA.
На фиг. 2 показан эффект введения различных доз гемцитабина (GEM) на рост опухоли в мышиной ксенотрансплантатной модели опухоли ВхРС-3 PDA.
На фиг. 3 показан эффект PEGPH20 (Р), гемцитабина (GEM, G) и/или nab-паклитаксела (NAB, N) на рост опухоли в мышиной ксенотрансплантатной модели опухоли ВхРС-3 PDA.
На фиг. 4 приведено среднее время выживания мышей, которые получали PEGPH20 (Р), гемцитабин (GEM, G) и/или nab-паклитаксел (NAB, N), в мышиной ксенотрансплантатной модели опухоли ВхРС-3 PDA.
На фиг. 5 приведены уровни маркеров СА19-9 (фиг. 5А) и СЕА (фиг. 5В) в сыворотке крови мышей, которые получали PEGPH20 (Р), гемцитабин (GEM, G) и/или nab-паклитаксел (NAB, N), в мышиной ксенотрансплантатной модели опухоли ВхРС-3 PDA.
На фиг. 6 показано ингибирование роста опухоли PEGPH20 и паклитакселом, конъюгированным с альбумином (Ab-рас), в ксенотрансплантатной модели. На фиг. 6А показано ингибирование роста опухоли у мышей, которые получали носитель, паклитаксел, конъюгированный с альбумином (Ab-рас), PEGPH20 или Ab-рас и PEGPH20, в модели опухоли MDA-MB-468/HAS3. На фиг. 6В показано ингибирование роста опухоли у мышей, которые получали носитель, 1 мг/кг паклитаксела, конъюгированного с альбумином (Ab-рас), 3 мг/кг Ab-рас, 1 мг/кг Ab-рас и PEGPH20 или 10 мг/кг Ab-рас, в модели опухоли MDA-MB-468/HAS3.
Подробное описание
Содержание.
A. Определения.
B. Комбинированная терапия антигиалуроновым агентом.
1. Солидные опухоли и направленная на опухоль терапия.
a) . Направленный на опухоль таксан.
b) . Антигиалуроновый агент.
2. Комбинированная терапия антигиалуроновым агентом и направленным на опухоль таксаном.
C. Агенты для комбинированной терапии.
1. Антигиалуроновые агенты.
a) . Агенты, которые ингибируют синтез гиалуронана.
b) . Разрушающие гиалуронан ферменты и конъюгированные с полимером разрушающие гиалуронан ферменты.
i) . Гиалуронидазы.
(a) гиалуронидазы РН20 млекопитающих;
(b) бактериальные гиалуронидазы;
(c) гиалуронидазы из пиявок, других паразитов и ракообразных.
ii) . Другие разрушающие гиалуронан ферменты.
iii) . Растворимые разрушающие гиалуронан ферменты.
(a) растворимая человеческая РН20;
(b) rHuPH20.
iv) . Гликозилирование разрушающих гиалуронан ферментов.
v) . Модифицированные (конъюгированные с полимером) разрушающие гиалуронан ферменты.
Пегилированные растворимые разрушающие гиалуронан ферменты.
2. Таксаны и их лекарственные формы.
a) . Таксаны.
b) . Направленные на опухоль или строму таксаны.
Связанный с альбумином таксан.
3. Дополнительный химиотерапевтический агент (например, нуклеозидный аналог).
Примеры нуклеозидных аналогов.
i) . Гемцитабин.
ii) . Цитарабин.
iii) . Децитабин.
iv) . Азацитидин.
D. Способы получения нуклеиновых кислот и кодируемых полипептидов разрушающих гиалуронан ферментов.
1. Векторы и клетки.
- 4 031986
2. Экспрессия.
a) . Прокариотические клетки.
b) . Клетки дрожжей.
c) . Клетки насекомых.
d) . Клетки млекопитающих.
e) . Растения.
3. Способы очистки.
4. Пегилирование полипептидов разрушающих гиалуронан ферментов.
E. Фармацевтические композиции и лекарственные формы.
1. Лекарственные формы.
a) . Инъекционные формы, растворы и эмульсии.
b) . Лиофилизированные порошки.
c) . Местное введение.
d) . Композиции для других способов введения.
2. Количества лекарственных форм.
3. Упаковка и изделия.
F. Способы оценки активности, биодоступности и фармакокинетики.
1. Анализы in vitro.
a) . Гиалуронидазная активность разрушающего гиалуронан фермента.
b) . Активность таксана.
c) . Противораковая активность.
2. Модели на животных in vivo.
3. Фармакокинетика и переносимость.
G. Способы и применения комбинированной терапии.
1. Рак.
Выбор субъектов для лечения.
2. Дозы и введение.
3. Режим дозирования: частота и цикл введения.
4. Дополнительная комбинированная терапия.
a) . Кортикостероиды.
b) . Противораковые агенты и другие виды лечения.
H. Примеры.
А. Определения.
Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в области, к которой относится изобретение(изобретения). Все патенты, патентные заявки, опубликованные заявки и публикации, последовательности GENBANK, веб-сайты и другие опубликованные материалы, которые упоминаются в данном описании, если не указано иное, включены в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. В том случае, если для терминов, используемых в настоящем документе, существует множество определений, предпочтительны определения, указанные в этом разделе. Когда дается ссылка на URL или другой такой идентификатор или адрес, следует понимать, что такие идентификаторы могут измениться, и конкретная информация в интернете может появляться и исчезать, но эквивалентная информация может быть легко найдена путем поиска в интернете. Подобная ссылка указывает на доступность и публичное распространение такой информации.
В настоящем документе комбинированная терапия относится к лечению, в котором субъект получает два или больше терапевтических агента, например по меньшей мере два или по меньшей мере три терапевтических агента для лечения одного заболевания. Для целей настоящего документа комбинированная терапия включает терапию конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом и направленным на опухоль таксаном и, необязательно, дополнительно противораковым агентом или химиотерапевтическим агентом, таким как нуклеозидный аналог.
В настоящем документе таксан относится к семейству антимитотических агентов или агентов, ингибирующих микротрубочки, которые ингибируют рост клеток, останавливая митоз и деление клеток, препятствуя полимеризации микротрубочек. Таксаны включают образующиеся в природе дитерпены, образующиеся в растениях из рода Taxus (тис). Таксаны также включают таксаны, которые получены синтетическим путем и обладают антимитотической активностью или активностью ингибирования микротрубочек. Как правило, таксаны имеют общую структуру ядра, содержащую четыре кольца (шестичленные кольца А и С, восьмичленное кольцо В и четырехчленное кольцо D). Примером таксана является паклитаксел, таксан или его производное или аналог.
В настоящем документе антимитотическая активность относится к ингибированию, снижению или предотвращению митоза. Вследствие такой активности рост клеток ингибируется, снижается или предотвращается. Например, агент обладает антимитотической активностью, если рост клеток ингибируется по меньшей мере, или примерно по меньшей мере, или на 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% или больше по
- 5 031986 сравнению с ростом клеток в отсутствие агента.
В настоящем документе активность ингибирования микротрубочек относится к активности любого агента, который ингибирует образование микротрубочек, например уменьшая, снижая или предотвращая полимеризацию микротрубочек. Таким образом, активность ингибирования микротрубочек может относиться к любой активности, которая стабилизирует микротрубочки, являющиеся в естественных условиях нестабильными и подвергающимися динамичным процессам деполимеризации (укорачивания) и полимеризации (удлинения). Например, активность ингибирования микротрубочек осуществляется агентами, такими как таксаны, которые взаимодействуют с концами микротрубочек, тем самым блокируя или предотвращая их разборку или сборку. Анализы для оценки полимеризации микротрубочек известны в данной области техники, и примеры анализов описаны в настоящем документе. Агент обладает активностью ингибирования микротрубочек, если агент ингибирует полимеризацию микротрубочек по меньшей мере, или примерно по меньшей мере, или на 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% или больше по сравнению с полимеризацией в отсутствие агента.
В настоящем документе направленный на опухоль таксан относится к таксану, который напрямую или не напрямую соединен с фрагментом, и который имеет увеличенную специфичность по отношению к одной или нескольким молекулам на поверхности опухоли по сравнению с таксаном, который не соединен с фрагментом для направленного действия на опухоль. Например, фрагмент может представлять собой макромолекулу, пептид, белок, антитело (например, моноклональное антитело) или липид, которые взаимодействуют или связываются (например, специфично связываются) с молекулой, присутствующей на поверхности опухоли, такой как сахар, липид, гликозаминогликан или белок, присутствующие на поверхности опухоли. Обычно молекула, которая присутствует на поверхности опухоли, присутствует на уровне или в количестве, которые являются аномальными или отличающимися по сравнению с неопухолевыми тканями или нормальными тканями или клетками.
Использованная в настоящем документе фраза достаточна для достижения внутриопухолевой доставки означает, что таксан имеет увеличенную или большую направленность на опухолевую клетку, чем на неопухолевую клетку, и, таким образом, имеет увеличенную или большую внутриклеточную локализацию в опухолевых клетках. Анализы для оценки внутриопухолевой доставки могут включать анализы in vitro или in vivo, такие как анализы связывания или анализы субклеточной локализации, в которых сравнивают уровень или количество связанного или внутриклеточного лекарства, такого как таксан, между нормальными клетками и опухолевыми клетками. Такие анализы включают, но ограничиваются ими, иммуноанализы, в том числе радиоиммуноанализы или ELISA (например, ELISA лизатов и ELISA с детекцией в инфракрасной области; см. также Svojanovsky et al. (1999) Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 20:549-555); биоанализ на основе тубулина (см., например, Suye et al. (1997) Anal. Chem., 69:3633-3635); гистохимию или иммуногистохимию (Hong et al. (2007) Mol. Cancer. Ther., 6: 3239); HPLC; флуоресцентные анализы, в том числе проточную цитометрию и другие способы (см., например, Sheikh et al. (2001) Biosensors & Bioelectronics, 16:647-652), и другие аналогичные анализы, известные специалистам в данной области техники. Доступны антитела к таксану для применения в таких способах (см., например, Grothaus et al. (1995) J. Nat. Prod., 58:1003-14; Leu et al. (1993) Cancer Res., 53:1388-1391; Abcam, номер по каталогу ab26953). Также можно применять биосенсорную технологию (см., например, Braunhut et al. (2005) Assay and Drug Dev. Tech., 3: 77-88). Анализы также могут включать непрямые анализы, в которых оценивают активность таксана на клеточный аппарат, в том числе эффекты на апоптоз опухолевых клеток и рост опухоли, в том числе размер или объем опухоли.
В настоящем документе антигиалуроновый агент относится к любому агенту, который модулирует синтез или деградацию гиалуронана (НА), изменяя, таким образом, уровни гиалуронана в ткани или клетке. Для целей настоящего документа антигиалуроновые агенты снижают уровни гиалуронана в ткани или клетке по сравнению с ситуацией в отсутствие агента. Такие агенты включают соединения, которые модулируют экспрессию генетического материала, кодирующего НА синтазу (HAS) и другие ферменты или рецепторы, вовлеченные в метаболизм гиалуронана, или соединения, которые модулируют белки, синтезирующие или разрушающие гиалуронан, в том числе модулируют функцию или активность HAS. Агенты включают низкомолекулярные соединения, нуклеиновые кислоты, пептиды, белки или другие соединения. Например, антигиалуроновые агенты включают антисмысловые и смысловые молекулы, антитела, ферменты, низкомолекулярные ингибиторы и аналоги субстратов HAS, но не ограничиваются ими.
В настоящем документе конъюгат относится к полипептиду, связанному напрямую или не напрямую с одним или несколькими другими полипептидами или химическими фрагментами. Такие конъюгаты включают белки слияния, конъюгаты, которые получены путем химической конъюгации, или конъюгаты, которые получены любыми другими способами. Например, конъюгат относится к разрушающему гиалуронан ферменту, такому как гиалуронидаза или растворимый полипептид РН20, связанному напрямую или не напрямую с одним или несколькими другими полипептидами или химическими фрагментами, где по меньшей мере один растворимый полипептид РН20 связан, напрямую или не напрямую, с другим полипептидом или химическим фрагментом, при условии, что конъюгат сохраняет гиалуронидазную активность.
- 6 031986
В настоящем документе конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент относится к разрушающему гиалуронан ферменту, связанному напрямую или не напрямую с полимером. Связь может представлять собой любой тип связи, включая, но не ограничиваясь этим, ионные и ковалентные связи, а также любые другие достаточно стабильные виды взаимодействия. Упоминание конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента означает, что конъюгат проявляет гиалуронидазную активность. Как правило, конъюгаты с полимером проявляют по меньшей мере 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% или большую гиалуронидазную активность по сравнению с разрушающим гиалуронан ферментом, который не конъюгирован с полимером.
В настоящем документе разрушающий гиалуронан фермент относится к ферменту, который катализирует расщепление полимера гиалуронана (также называемого гиалуроновой кислотой или НА) на фрагменты с меньшей молекулярной массой. Примерами разрушающих гиалуронан ферментов являются гиалуронидазы и некоторые хондроитиназы и лиазы, которые обладают способностью к деполимеризации гиалуронана. Примеры хондроитиназ, которые являются разрушающими гиалуронан ферментами, включают, но не ограничиваются ими, хондроитин-АВС-лиазы (также известные как хондроитиназы ABC), хондроитин-АС-лиазы (также известные как хондроитинсульфат лиазы или хондроитинсульфат элиминазы) и хондроитин-С-лиазы. Хондроитин-АВС-лиазы включают два фермента, хондроитинсульфат-АВС-эндолиазу (ЕС 4.2.2.20) и хондроитин-сульфат-АВС-экзолиазу (ЕС 4.2.2.21). Примеры хондроитин-сульфат-АВС-эндолиаз и хондроитин-сульфат-АВС-экзолиаз включают, но не ограничиваются ими, ферменты из Proteus vulgaris и Flavobacterium heparinum (хондроитин-сульфат-АВС-эндолиаза Proteus vulgaris приведена в SEQ ID NO: 98; Sato et al. (1994) Appl. Microbiol. Biotechnol. 41(1):39-46). Примеры хондроитиназ-АС из бактерий включают, но не ограничиваются ими, фермент из Flavobactenum heparinum, приведенный в SEQ ID NO: 99, из Victivallis vadensis, приведенный в SEQ ID NO: 100, и из Arthrobacter aurescens (Tkalec et al. (2000) Applied and Environmental Microbiology 66(1):29-35; Ernst et al. (1995) Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology 30(5):387-444). Примеры хондроитиназ-С из бактерий включают, но не ограничиваются ими, ферменты из Streptococcus и Flavobacterium (Hibi et al. (1989) FEMS-Microbiol-Lett. 48(2):121-4; Michelacci et al. (1976) J. Biol. Chem. 251:1154-8; Tsuda et al. (1999) Eur. J. Biochem. 262:127-133).
В настоящем документе гиалуронидаза относится к классу ферментов, разрушающих гиалуронан. Гиалуронидазы включают бактериальные гиалуронидазы (ЕС 4.2.2.1 или ЕС 4.2.99.1), гиалуронидазы пиявок, других паразитов и ракообразных (ЕС 3.2.1.36) и гиалуронидазы млекопитающих (ЕС 3.2.1.35). Гиалуронидазы включают любую из гиалуронидаз не человеческого происхождения, включая, но не ограничиваясь ими, гиалуронидазы мыши, собаки, кошки, зайца, птиц, быка, овцы, свиньи, лошади, рыб, лягушек, бактериальные гиалуронидазы, и любые гиалуронидазы из пиявок, других паразитов и ракообразных. Примеры не человеческих гиалуронидаз включают гиалуронидазы коровы (SEQ ID NO: 10, 11, 64 и ВН55 (патенты США №№ 5747027 и 5827721), складчатокрылой осы (SEQ ID NO: 12 и 13), медоносной пчелы (SEQ ID NO: 14), белоголового шершня (SEQ ID NO: 15), бумажной осы (SEQ ID NO: 16), мыши (SEQ ID NO:17-19, 32), свиньи (SEQ ID NO:20-21), крысы (SEQ ID NO: 22-24, 31), кролика (SEQ ID NO: 25), овцы (SEQ ID NO: 26, 27, 63 и 65), шимпанзе (SEQ ID NO: 101), макаки-резус (SEQ ID NO:102), орангутанга (SEQ ID NO: 28), яванского макака (SEQ ID NO: 29), морской свинки (SEQ ID NO: 30), Arthrobacter sp. (штамм FB24) (SEQ ID NO: 67), Bdellovibrio bacteriovorus (SEQ ID NO: 68), Propionibacterium acnes (SEQ ID NO: 69), Streptococcus agalactiae (SEQ ID NO: 70); 18RS21 (SEQ ID NO: 71); серотипа Ia (SEQ ID NO: 72); серотипа III (SEQ ID NO: 73), Staphylococcus aureus (штамм COL) (SEQ ID NO: 74); штамма MRSA252 (SEQ ID NO: 75 и 76); штамма MSSA476 (SEQ ID NO: 77); штамма NCTC 8325 (SEQ ID NO: 78); штамма бычий (bovine) RF122 (SEQ ID NO: 79 и 80); штамма USA300 (SEQ ID NO: 81), Streptococcus pneumoniae (SEQ ID NO: 82); штамма ATCC BAA-255/R6 (SEQ ID NO: 83); серотипа 2, штамма D39/NCTC 7466 (SEQ ID NO: 84), Streptococcus pyogenes (серотип M1) (SEQ ID NO: 85); серотипа М2, штамма MGAS10270 (SEQ ID NO: 86); серотипа М4, штамма MGAS10750 (SEQ ID NO: 87); серотипа М6 (SEQ ID NO: 88); серотипа М12, штамма MGAS2096 (SEQ ID NO: 89 и 90); серотипа М12, штамма MGAS9429 (SEQ ID NO: 91); серотипа М28 (SEQ ID NO: 92); Streptococcus suis (SEQ ID NO: 93-95); Vibrio fischeri (штамм ATCC 700601/ES114 (SEQ ID NO: 96)), и фермент гиалуронидазу Streptomyces hyaluronolyticus, который является специфичным для гиалуроновой кислоты и не расщепляет хондроитин или хондроитинсульфат (Ohya, Т. and Kaneko, Y. (1970) Biochim. Biophys. Acta 198:607). Гиалуронидазы также включают гиалуронидазы человеческого происхождения. Примеры человеческих гиалуронидаз включают HYAL1 (SEQ ID NO: 36), HYAL2 (SEQ ID NO: 37), HYAL3 (SEQ ID NO: 38), HYAL4 (SEQ ID NO: 39) и РН20 (SEQ ID NO: 1). Также гиалуронидазы включают растворимые гиалуронидазы, включая овечью и бычью РН20, растворимую человеческую РН20 и растворимую rHuPH20. Примерами коммерчески доступных бычьих или овечьих растворимых гиалуронидаз являются Vitrase® (овечья гиалуронидаза), Amphadase® (бычья гиалуронидаза) и Hydase™ (бычья гиалуронидаза).
В настоящем документе очищенная бычья тестикулярная гиалуронидаза относится к бычьей гиалуронидазе, очищенной из бычьих тестикулярных экстрактов (см. патенты США №№ 2488564, 2488565, 2806815, 2808362, 2676139, 2795529, 5747027 и 5827721). Примеры коммерчески доступных очищенных
- 7 031986 бычьих тестикулярных гиалуронидаз включают Amphadase® и Hydase™, и бычьи гиалуронидазы, включающие гиалуронидазы, доступные из Sigma Aldrich, Abnova, EMD Chemicals, GenWay Biotech, Inc.,
Raybiotech, Inc., и Calzyme, но не ограничиваются ими. Также включены рекомбинантно полученные бычьи гиалуронидазы, такие как, например, гиалуронидазы, которые получены экспрессией молекулы нуклеиновой кислоты, приведенной в любой из SEQ ID NOS: 190-192.
В настояще документе очищенная овечья тестикулярная гиалуронидаза относится к овечьей гиалуронидазе, очищенной из овечьих тестикулярных экстрактов (см. патенты США №№ 2488564, 2488565 и 2806815 и публикацию международной заявки РСТ № WO 2005/118799). Примеры коммерчески доступных очищенных овечьих тестикулярных экстрактов включают Vitrase® и овечьи гиалуронидазы, включая гилуронидазы, которые доступны из Sigma Aldrich, Cell Sciences, EMD Chemicals, GenWay Biotech, Inc., Mybiosource.com и Raybiotech, Inc, но не ограничиваются ими. Также включены рекомбинантно полученные овечьи гиалуронидазы, такие как гиалуронидазы, которые получены экспрессией молекулы нуклеиновой кислоты, приведенной в любой из SEQ ID NOS: 66 и 193-194, но не ограничиваясь ими.
В настоящем документе РН20 относится к типу гиалуронидаз, которые находятся в сперме и являются активными в нейтральной среде. РН20 находится на поверхности сперматозоидов и в происходящей из лизосомы акросоме, где она связана с внутренней мембраной акросомы. РН20 включает в себя РН20 любого происхождения, включая, но не ограничиваясь ими, РН20 человека, шимпанзе, яванского макака, макака-резус, мыши, коровы, овцы, морской свинки, кролика и крысы. Примеры белков РН20 включают, но не ограничиваются ими, полипептиды РН20 человека (SEQ ID NO: 1), шимпанзе (SEQ ID NO: 101), макака-резус (SEQ ID NO: 102), яванского макака (SEQ ID NO: 29), коровы (SEQ ID NO: 11 и 64), мыши (SEQ ID NO: 32), крысы (SEQ ID NO: 31), кролика (SEQ NO ID NO: 25), овцы (SEQ ID NO: 27, 63 и 65) и морской свинки (SEQ ID NO: 30).
Ссылка на разрушающий гиалуронан фермент включает полипептиды-предшественники разрушающих гиалуронан ферментов и зрелые полипептиды разрушающих гиалуронан ферментов (такие как полипептиды, в которых была удалена сигнальная последовательность), укороченные формы, которые обладают активностью, и включает аллельные варианты и видовые варианты, варианты, кодируемые вариантами сплайсинга, и другие варианты, в том числе полипептиды, которые имеют по меньшей мере 40, 45, 50, 55, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99% или большую идентичность последовательности с полипептидами-предшественниками, приведенными в SEQ ID NO: 1, 10-48, 63-65, 67-102, или их зрелыми формами. Например, указание разрушающего гиалуронан фермента также включает варианты полипептида-предшественника человеческой РН20, приведенные в SEQ ID NOS: 50-51. Разрушающие гиалуронан ферменты также включают разрушающие гиалуронан ферменты, которые содержат химические или посттрансляционные модификации, и разрушающие гиалуронан ферменты, которые не содержат химических или посттрансляционных модификаций. Такие модификации включают, но не ограничиваются ими, пегилирование, альбуминирование, гликозилирование, фарнезилирование, карбоксилирование, фосфорилирование, гидроксилирование и другие модификации полипептида, известные в данной области. Укороченная гиалуронидаза РН20 представляет собой ее укороченную с С-конца форму, в частности форму, которая является укороченной и активной в нейтральной среде, когда является Nгликозилированной.
В настоящем документе растворимая РН20 относится к любой форме РН20, которая является растворимой при физиологических условиях. Растворимую РН20 можно отличить, например, по распределению в водной фазе раствора Тритон X-114, нагретого до 37°C (Bordier et al., (1981) J. Biol. Chem., 256:1604-7). Заякоренные в мембране РН20, такие как РН20 с GPI якорем, будут распределяться в богатой детергентами фазе, но после обработки фосфолипазой С будут распределяться в бедной детергентами или водной фазе. К числу растворимых РН20 относятся заякоренные в мембране РН20, в которых одна или несколько областей, ассоциированных с заякориванием гиалуронидазы в мембране, были удалены или изменены, и при этом растворимая форма гиалуронидазы сохранила активность. Растворимые РН20 включают рекомбинантные растворимые РН20 и растворимые РН20, которые содержатся в природных источниках или очищены из них, например растворимые РН20, которые содержатся или очищены из экстрактов из семенников овец или коров. Примером таких растворимых РН20 является растворимая человеческая РН20.
В настоящем документе растворимая человеческая РН20 или sHuPH20 включает полипептиды РН20, лишенные всего сайта связывания гликозилфосфатидилинозитола (GPI) на С-конце или его части, так что при экспрессии полипептиды растворимы при физиологических условиях. Растворимость можно оценить любым подходящим способом, который демонстрирует растворимость при физиологических условиях. Примером такого способа является анализ с Triton® Х-114, который оценивает распределение в водной фазе и который описан выше и в разделе Примеры. Кроме того, при получении в клетках СНО, таких как клетки CHO-S, растворимая человеческая РН20 экспрессируется и секретируется в культуральную среду. Однако растворимые полипептиды человеческой РН20 не ограничиваются полипептидами, получаемыми в клетках СНО, но могут быть получены в любых клетках и любым способом, вклю- 8 031986 чая рекомбинантную экспрессию и пептидный синтез. Указание на секрецию клетками СНО является дефинициональным. Таким образом, полипептид представляет собой полипептид растворимой РН20, если он может быть экспрессирован и секретирован клетками СНО и является растворимым, т.е. распределяется в водную фазу при экстракции с Triton® Х-114, независимо от того, был ли он получен данным способом. Полипептиды-предшественники полипептидов sHuPH20 могут включать сигнальную последовательность, такую как гетерологичная или не гетерологичная (т.е. нативная) сигнальная последовательность. Примерами предшественников являются полипептиды, которые имеют сигнальную последовательность, такую как нативная сигнальная последовательность из 35 аминокислот в позициях 1-35 (см., например, аминокислоты 1-25 в SEQ ID NO: 1).
В настоящем документе удлиненная растворимая РН20 или esPH20 включает растворимые полипептиды РН20, которые содержат остатки до сигнальной последовательности присоединения GPIякоря и один или несколько смежных остатков из сигнальной последовательности присоединения GPIякоря, таким образом, что esPH20 является растворимым при физиологических условиях. Растворимость при физиологических условиях можно определить любым способом, известным специалистам в данной области техники. Например, это можно оценить с помощью анализа с Triton® Х-114, описанного выше и в примерах. Кроме того, как обсуждалось выше, растворимая РН20 при получении в клетках СНО, например в клетках CHO-S, представляет собой полипептид, который экспрессируется и секретируется в клеточную культуральную среду. Растворимые полипептиды РН20 человека, тем не менее, не сводятся к полипептидам, которые продуцируются в клетках СНО, но могут продуцироваться любой клеткой или могут быть получены любым способом, в том числе рекомбинантной экспрессией или полипептидным синтезом. Указание на секрецию клетками СНО является дефинициональным. Таким образом, если полипептид может быть экспрессирован и секретирован клетками СНО и является растворимым, т.е. оказывается в водной фазе при экстракции Triton® Х-114, он является растворимым полипептидом РН20, в не зависимости от того, был ли он получен данным способом. Растворимый полипептид esPH20 человека в дополнение к остаткам 36-490 включает одну или несколько смежных аминокислот после положения аминокислотного остатка 491 из SEQ ID NO: 1 включительно, таким образом, что полученный полипептид является растворимым.
Примеры растворимых полипептидов esPH20 человека включают полипептиды, которые имеют аминокислотные остатки, соответствующие аминокислотам 36-491, 36-492, 36-493, 36-494, 36-495, 36496 и 36-497 в SEQ ID NO: 1. Примерами таких полипептидов являются полипептиды с последовательностью аминокислот, приведенной в любой из SEQ ID NOS: 151-154 и 185-187. Также предусмотрены аллельные варианты и другие варианты, например любые варианты, которые обладают 40, 45, 50, 55, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или большей идентичностью последовательности с соответствующими полипептидами из SEQ ID NOS: 151-154 и 185-187, которые сохраняют активность в нейтральной среде и являются растворимыми. Указание на идентичность последовательностей относится к вариантам с аминокислотными заменами.
В настоящем документе указание на esPH20 включает полипептиды-предшественники esPH20 и зрелые полипептиды esPH20 (например, те полипептиды, в которых была удалена сигнальная последовательность), их укороченные формы, которые обладают ферментативной активностью (сохраняющие по меньшей мере 1, 10, 20, 30, 40, 50% или больше от ферментативной активности полноразмерной формы) и являются растворимыми, и включает аллельные варианты и видовые варианты, варианты, кодируемые вариантами сплайсинга, и другие варианты, в том числе полипептиды, которые обладают по меньшей мере 40, 45, 50, 55, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или большей идентичностью последовательности с полипептидами-предшественниками, приведенными в SEQ ID NOS: 1 и 3, или их зрелыми формами.
В настоящем документе ссылка на esPH20 также включает полипептиды, которые содержат химические или посттрансляционные модификации, и полипептиды, которые не содержат химические или посттрансляционные модификации. Такие модификации включают, но не ограничиваются ими, пегилирование, альбуминирование, гликозилирование, фарнезилирование, карбоксилирование, гидроксилирование, фосфорилирование и другие модификации полипептидов, известные в данной области техники.
В настоящем документе растворимая рекомбинантная человеческая РН20 (rHuPH20) относится к композиции, содержащей растворимую форму человеческой РН20, которая рекомбинантно экспрессирована и секретирована в клетках яичника китайского хомячка (СНО). Растворимая rHuPH20 закодирована нуклеиновой кислотой, которая включает сигнальную последовательность и приведена в SEQ ID NO: 49. Нуклеиновая кислота, кодирующая растворимую rHuPH20, экспрессируется в клетках СНО, которые секретируют зрелый полипептид. При получении в культуральной среде существует гетерогенность последовательности С-конца, так что продукт включает смесь полипептидов, которые могут включать в себя любую одну или более из последовательностей SEQ ID NO: 4-9 в различной представленности.
Аналогично для других форм РН20, таких как esPH20, рекомбинантно экспрессированные полипептиды и их композиции могут включать множество видов полипептидов с гетерогенностью последовательности С-конца. Например, композиции рекомбинантно экспрессированного esPH20, полученного
- 9 031986 путем экспрессии полипептида SEQ ID NO: 151, который кодирует esPH20 с аминокислотами 36-497, могут включать формы с меньшим числом аминокислот, например 36-496 или 36-495.
В настоящем документе N-связанный фрагмент относится к аминокислотному остатку аспарагина (N) полипептида, который может быть гликозилирован в результате посттрансляционной модификации полипептида. Примеры N-связанных фрагментов РН20 человека включают аминокислоты N82, N166, N235, N254, N368 и N393 из РН20 человека, приведенного в SEQ ID NO: 1.
В настоящем документе N-гликозилированный полипептид относится к полипептиду РН20 или его укороченной форме, содержащему олигосахаридную связь по меньшей мере у трех N-связанных аминокислотных остатков, например N-связанных фрагментов, соответствующих аминокислотным остаткам N235, N368 и N393 из SEQ ID NO: 1. N-гликозилированный полипептид может включать полипептид, в котором три, четыре, пять или все N-связанные фрагменты связаны с олигосахаридом. Nсвязанные олигосахариды могут включать олигоманнозу, комплексный, гибридный или сулфатированный олигосахарид, или другие олигосахариды и моносахариды.
В настоящем документе частично N-гликозилированный полипептид относится к полипептиду, который содержит, по меньшей мере, N-ацетилглюкозаминовый гликан, связанный по меньшей мере с тремя N-связанными фрагментами. Частично гликозилированный полипептид может включать различные формы гликанов, в том числе моносахариды, олигосахариды и разветвленные сахариды, включая формы, полученные в результате обработки полипептида EndoH, EndoF1, EndoF2 и/или EndoF3.
В настоящем документе дегликозилированный полипептид РН20 относится к полипептиду РН20, в котором гликозилированы не все сайты гликозилирования. Дегликозилирование можно осуществить, например, путем удаления гликозилирования, путем предотвращения гликозилирования или путем модификации полипептида для элиминации сайта гликозилирования. Определенные сайты гликозилирования не требуются для проявления активности, тогда как другие сайты гликозилирования требуются для проявления активности.
Использованный в настоящем документе термин полимер относится к любому высокомолекулярному природному или синтетическому фрагменту, который состоит из повторяющихся звеньев. Полимеры включают, но не ограничиваются ими, полиэтиленгликолевые фрагменты, декстран, целлюлозу и сиаловую кислоту. Эти и другие примеры полимеров описаны в настоящем документе, и множество полимеров известны в данной области техники. Для целей настоящего документа полимер может быть конъюгирован, т.е. стабильно соединен напрямую или не напрямую через линкер с полипептидом. Такие полимерные конъюгаты, как правило, увеличивают период полувыведения в сыворотке и включают, но не ограничиваются ими, сиаловые фрагменты, фрагменты PEG, декстран и сахара, а также другие фрагменты, примером конъюгирования с полимером является гликозилирование. Например, гиалуронидазы, такие как растворимая РН20 или rHuPH20, могут быть конъюгированы с полимером.
В настоящем документе пегилированный относится к ковалентному или другому стабильному присоединению полимерных молекул, таких как полиэтиленгликоль (фрагмент пегилирования, PEG), к разрушающим гиалуронан фрагментам, таким как гиалуронидазы, как правило, для увеличения периода полувыведения разрушающего гиалуронан фрагмента.
В настоящем документе противораковый агент или химиотерапевтический агент относится к агенту, который способен убивать клетки, которые быстро делятся, такие как раковые клетки. Специалисту в данной области техники известны противораковые агенты, в том числе химиотерапевтические агенты. Примеры агентов описаны в настоящем документе.
В настоящем документе нуклеозидный аналог относится к агенту, который заменяет или имитирует один из строительных блоков нуклеиновых кислот, такой как пуриновый или пиримидиновый нуклеозид, в процессе репликации ДНК. Процесс может остановить рост опухоли, поскольку дополнительные нуклеозиды далее не могут быть присоединены. Примером нуклеозидного аналога является гемцитабин, который представляет собой аналог дезоксицитидина и при метаболической активации образует трифосфат, который имитирует или заменяет нуклеозид цитидин, включаясь в ДНК и конкурентно ингибируя синтез ДНК.
В настоящем документе нуклеозид дезаминаза относится к ферменту, который осуществляет дезаминирование нуклеозида. Например, цитидин дезаминаза (CDA) дезаминирует цитидин и дезоксицитидин до уридина и дезоксиуридина соответственно. Аденозин дезаминаза (ADA) дезаминирует аденозин, превращая его в соответствующий нуклеозид инозин путем замещения аминогруппы на гидроксильную группу.
В настоящем документе субстрат нуклеозид дезаминазы представляет собой молекулу, которая может быть дезаминирована до неактивного метаболита и, таким образом, инактивирована, в присутствии нуклеозид дезаминазы. Анализы для оценки дезаминирования известны специалистам в данной области техники, и включают, но не ограничиваются ими, высокоэффективную жидкостную хроматографию (HPLC) или масс-спектрометрию для метаболитов и дезаминированных метаболитов, анализы дезаминирования, такие как анализ дезаминирования на основе UDG с использованием избытка урацил-ДНКгликозилазы (см., например, Morgan et al. (2004) J. Biol. Chem., 279:52353-52360), или анализы, в которых оценивают цитотоксичность в клетках, экспрессирующих нуклеозид дезаминазу.
- 10 031986
Использованная в настоящем документе фраза достаточна для уменьшения уровня или активности белка нуклеозид дезаминазы относится к количеству таксана, которое требуется для того, чтобы ингибировать активность нуклеозид дезаминазы. Например, ингибирование можно оценить, анализируя дезаминирующую активность дезаминазы (например, цитидин дезаминазы), используя анализы дезаминирования, как описано выше. Ингибирование также можно оценить, анализируя внутриклеточные уровни белка дезаминазы. Анализы для оценки субклеточных белков хорошо известны специалисту в данной области техники и включают, например, клеточный ELISA, проточную цитометрию или способы обнаружения белков, такие как вестерн-блоттинг. Обычно такие анализы можно осуществить в клеточных лизатах или пермеабилизированных клетках. Например, вестерн-блоттинг цитидин дезаминазы можно осуществить путем солюбилизации тотальных клеточных лизатов, разделения белков и иммуноблоттинга дезаминазы с использованием антитела против ЦДА (например, от Abcam, номер по каталогу ab82346) с последующей инкубацией со вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой хрена и последующим обнаружением. Обычно количество достаточно для уменьшения уровня или активности белка нуклеозид дезаминазы, если уровень или активность белка уменьшается по меньшей мере, или по меньшей мере примерно на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% или больше.
В настоящем документе пролекарство представляет собой соединение, которое обладает фармакологической активностью после биотрансформации. Например, нуклеозидные аналоги, такие как гемцитабин, представляют собой пролекарства, поскольку их активность является результатом внутриклеточного превращения в два активных метаболита, гемцитабин дифосфат и гемцитабин трифосфат под действием дезоксицитидин киназы. Трифосфат (дифтордезоксицитидин трифосфат) конкурирует с эндогенными дезоксинуклеозид трифосфатами за включение в ДНК.
В настоящем документе производное относится к форме лекарства, которая подверглась изменению или модификации по сравнению с лекарством или агентом сравнения, но все еще сохраняет активность (например, проявляет повышенную или пониженную активность) по сравнению с лекарством или агентом сравнения. Как правило, производное соединения означает, что боковая цепь соединения была модифицирована или изменена.
В настоящем документе аналог лекарства или агента представляет собой лекарство или агент, родственный лекарству сравнения, но его химическая и биологическая активность может отличаться от активности лекарства сравнения. Как правило, аналоги обладают аналогичной активностью по сравнению с лекарством или агентом сравнения, но активность может быть повышенной или пониженной или иным образом улучшенной. Как правило, аналог соединения или лекарства означает, что основное ядро его структуры модифицировано или изменено по сравнению с лекарством сравнения.
В настоящем документе активность относится к функциональной активности или активностям полипептида или функциональной активности или активностям его части, связанным с активностью полноразмерного (целого) белка. Например, активные фрагменты полипептида могут проявлять активность полноразмерного белка. Функциональная активность включает, но не ограничивается биологической активностью, каталитической и ферментативной активностью, антигенностью (способностью связывать или конкурировать с полипептидом за связывание с антителами против полипептида), иммуногенностью, способностью образовывать мультимеры и способностью специфически связывать рецепторы или лиганды полипептида.
В настоящем документе гиалуронидазная активность относится к способности ферментативно катализировать расщепление гиалуроновой кислоты. В тесте фармакопеи США (USP) XXII издания в анализе на гиалуронидазу гиалуронидазную активность определяют косвенно, измеряя оставшееся количество высокомолекулярной гиалуроновой кислоты или гиалуронана (НА) в качестве субстрата после проведения ферментативной реакции с НА в течение 30 мин при 37°C (USP-NF XXII XVII (1990) 644-645, Конвенция о Фармакопее США, Роквилл, штат Мэриленд). Для определения относительной активности любой гиалуронидазы в единицах активности в анализе может быть использован стандартный раствор сравнения. Анализы in vitro для определения гиалуронидазной активности гиалуронидаз, например РН20, в том числе растворимой РН20 и esPH20, известны в уровне техники и описаны в настоящем документе. Примеры анализов включают микротурбидиметрический анализ, при котором расщепление гиалуроновой кислоты гиалуронидазой измеряют косвенно по нерастворимому осадку, образующемуся при связывании нерасщепленной гиалуроновой кислоты с сывороточным альбумином, и анализ с биотинилированной гиалурононовой кислотой, в котором расщепление гиалуроновой кислоты измеряют косвенно, определяя количество оставшейся биотинилированной гиалуроновой кислоты, нековалентно связанной с лунками микротитрационного планшета, с помощью конъюгата стрептавидин-пероксидаза хрена и хромогенного субстрата. Для построения стандартной кривой для определения активности исследуемой гиалуронидазы в единицах активности могут быть использованы стандартные образцы.
В настоящем документе удельная активность относится к единицам активности на 1 мг белка. Миллиграммы гиалуронидазы определяют по абсорции раствора при 280 нм, принимая коэффициент молярной экстинкции равным около 1,7 в единицах М-1 см-1.
В настоящем документе активность в нейтральной среде относится к способности полипептида РН20 ферментативно катализировать расщепление гиалуроновой кислоты при нейтральном рН (напри
- 11 031986 мер, при рН равном или равном примерно 7,0).
В настоящем документе сигнальная последовательность присоединения GPI-якоря представляет собой С-концевую последовательность аминокислот, которая направляет присоединение предварительно образованного GPI-якоря к полипептиду в просвете ЭР. Сигнальные последовательности присоединения GPI-якоря присутствуют в полипептидах-предшественниках GPI-заякоренных полипептидов, таких как GPI-заякоренные полипептиды РН20. С-концевая сигнальная последовательность присоединения GPIякоря, как правило, содержит преимущественно гидрофобную область из 8-20 аминокислот, с предшествующей гидрофильной спейсерной областью из 8-12 аминокислот, непосредственно после ω-сайта, или сайта присоединения GPI-якоря. Сигнальные последовательности присоединения GPI-якоря можно идентифицировать, используя способы, хорошо известные в данной области техники. Они включают способы и алгоритмы in silico (см, например, Udenfriend et al. (1995) Methods Enzymol. 250:571-582, Eisenhaber et al., (1999) J. Biol. Chem. 292: 741-758, Fankhauser et al., (2005) Bioinformatics 21:1846-1852, Omaetxebarria et al., (2007) Proteomics 7:1951-1960, Pierleoni et al., (2008) BMC Bioinformatics 9:392), в том числе способы и алгоритмы, которые легко доступны на биоинформатических веб-сайтах, таких как сайт ExPASy Proteomics tools (например, сайт expasy.ch/tools/), но не ограничиваются ими.
В настоящем документе нуклеиновые кислоты включают ДНК, РНК и их аналоги, в том числе пептидные нуклеиновые кислоты (ПНК) и их смеси. Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двухцепочечными. При упоминании зондов или праймеров, необязательно меченых, например, обнаруживаемой меткой, например флуоресцентной или радиоактивной меткой, предусмотрены одноцепочечные молекулы. Длина таких молекул, как правило, достаточна для того, чтобы их мишень при гибридизации или библиотеки или исследования библиотеки с помощью праймеров была статистически уникальна или была представлена низким числом копий (обычно менее 5, как правило, менее 3). Обычно зонд или праймер содержит последовательность по меньшей мере из 14, 16 или 30 расположенных подряд нуклеотидов, комплементарную или идентичную последовательности представляющего интерес гена. Зонды и праймеры могут включать 10, 20, 30, 50, 100 или более нуклеотидов в длину.
В настоящем документе пептид относится к полипептиду, длина которого больше или равна 2 аминокислотам и меньше или равна 40 аминокислотам.
В настоящем документе аминокислоты, встречающиеся в различных приведенных в настоящем документе последовательностях аминокислот, определяются в соответствии с их известными, трехбуквенными или однобуквенными обозначениями (табл. 1). Нуклеотиды, встречающиеся в различных фрагментах нуклеиновых кислот, обозначены стандартными однобуквенными обозначениями, рутинно употребляемыми в уровне техники.
В настоящем документе термин аминокислота относится к органическому соединению, содержащему аминогруппу и карбоксильную группу. Полипептид содержит две или более аминокислот. В настоящем изобретении аминокислоты включают двадцать природных аминокислот, неприродные аминокислоты и аналоги аминокислот (например, аминокислоты с боковой цепью у α-атома углерода).
В настоящем документе термин аминокислотный остаток относится к аминокислоте, образующейся при химическом расщеплении (гидролизе) полипептида по пептидным связям. Аминокислотные остатки по настоящему документу находятся в L изомерной форме. Остатки в D изомерной форме, обозначенные таким образом, могут быть заменены на любой остаток L-аминокислоты, если при этом полипептид сохраняет желаемое свойство. NH2 относится к свободной аминогруппе, присутствующей на аминоконце полипептида. СООН относится к свободной карбоксильной группе, присутствующей на карбоксильном конце полипептида. Аббревиатуры для обозначения аминокислотных остатков, соответствующие стандартной номенклатуре полипептидов, описанной в J. Biol. Chem, 243. 3557-3559 (1968) и принятой 37 C.F.R. §§ 1.821-1.822, приведены в табл. 1.
- 12 031986
Таблица соответствия
Таблица 1
аминокислота тирозин глицин__ фенилаланин .....
метионин аланин серин.......
изолейцин лейцин валин треонин пролин лизин гистидин глутамин глутаминовая кислота Gln и/или Glu________ триптофан__________ аргинин аспарагиновая кислота аспарагин__
Asn и/или Asp цистеин неизвестная или другая
Все последовательности аминокислотных остатков представлены в настоящем документе в виде формул при ориентации слева направо в обычном направлении от аминоконца к карбоксильному концу. Термин ”аминокислотный остаток включает аминокислоты, перечисленные в таблице соответствия (табл. 1), и модифицированные и необычные аминокислоты, такие как аминокислоты, указанные в §§
1.821-1.822 37 C.F.R., которые включены в настоящий документ посредством ссылки. Кроме того, следует отметить, что тире в начале или в конце последовательности аминокислотных остатков обозначает пептидную связь с последовательностью из одного или более аминокислотных остатков, связь с аминоконцевой группой, такой как NH2, или карбоксильной концевой группой, такой как СООН.
В настоящем документе термин природные а-аминокислоты относится к остаткам 20 ааминокислот, встречающихся в природе, которые включаются в белок у человека посредством специфического распознавания кодона мРНК молекулой тРНК, несущей остаток аминокислоты. Не встречаю щиеся в природе аминокислоты включают, например, аминокислоты или аналоги аминокислот, отличающиеся от 20 природных аминокислот, и включают D-изостереомеры аминокислот, но не ограничиваются ими. Примеры неприродных аминокислот описаны в настоящем документе и известны специалистам в данной области.
В настоящем документе ДНК-конструкция представляет собой одноцепочечную или двухцепочечную, линейную или кольцевую молекулу ДНК, которая содержит фрагменты ДНК, комбинированные и соединенные в таком порядке, который не встречается в природе. ДНК-конструкции существуют как результат человеческой манипуляции и включают клоны и другие копии искусственных молекул.
В настоящем документе фрагмент ДНК представляет собой часть более крупной молекулы ДНК с определенными атрибутами. Например, фрагмент ДНК, кодирующий указанный полипептид, представляет собой часть большей молекулы ДНК, такой как плазмида или фрагмент плазмиды, который при чтении от 5' к 3' кодирует последовательность аминокислот указанного полипептида.
В настоящем документе термин полинуклеотид означает одноцепочечный или двухцепочечный полимер дезоксирибонуклеотидов или рибонуклеотидных оснований, читаемый от 5' к 3' концу. Полинуклеотиды включают РНК и ДНК и могут быть выделены из природных источников, синтезированы in vitro или получены комбинацией природных и синтетических молекул. Длину полинуклеотидных молекул в настоящем документе приводят в нуклеотидах (сокращенно нт) или парах оснований (сокращенно по). Определение длины в нуклеотидах применяют для одноцепочечных и двухцепочечных молекул, где позволяет контекст. Когда термин применяют к двухцепочечной молекуле, он употребляется для обозначения общей длины и эквивалентен термину пара оснований. Специалисту в данной области тех ники очевидно, что две цепи двухцепочечного полинуклеотида могут незначительно отличаться по длине и что концы их могут быть расположены уступом, поэтому не все нуклеотиды в двухцепочечной молекуле полинуклеотида могут образовывать пары. Такие непарные концы, как правило, не превышают в длину 20 нуклеотидов.
В настоящем документе сходство между двумя белками или нуклеиновыми кислотами относится
- 13 031986 к подобию аминокислотных последовательностей белков или нуклеотидных последовательностей нуклеиновых кислот. Сходство может быть определено по степени идентичности и/или гомологии последовательностей остатков и самих содержащихся в них остатков. Методы оценки степени сходства белков или нуклеиновых кислот хорошо известны специалистам в данной области. Например, в одном методе оценки сходства последовательностей две аминокислотные или нуклеотидные последовательности выравнивают таким образом, чтобы достичь максимального уровня идентичности между последовательностями. Идентичность относится к степени, в которой аминокислотные или нуклеотидные последовательности инвариантны. При выравнивании аминокислотных последовательностей и, в некоторой степени, нуклеотидных последовательностей также возможно учитывать консервативные различия и/или частые замены аминокислот (или нуклеотидов). Различия являются консервативными при сохранении физико-химических свойств участвующих остатков. Выравнивание может быть глобальным (выравнивание сравниваемых последовательностей по всей длине последовательностей, включая все остатки) или локальным (выравнивание частей последовательностей, которые включают только наиболее сходный район или районы).
Идентичность имеет признанное в данной области значение и может быть рассчитана с применением опубликованных методов. (См., например, Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., изд. Oxford University Press, Нью-Йорк, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., изд. Academic Press, Нью-Йорк, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, часть I, Griffin, A.M. и Griffin, H.G., изд. Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; и Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., изд. М Stockton Press, New York, 1991). Хотя существует множество методов определения идентичности между двумя полинуклеотидами или полипептидами, термин идентичность хорошо известен квалифицированному специалисту (Carrillo, H., Lipman, D., SIAM J. Applied Math 48:1073 (1988)).
В настоящем документе термин гомологичный (по отношению к последовательностям нуклеиновых кислот и/или аминокислот) означает гомологию последовательностей, большую или равную приблизительно 25%, как правило, гомологию последовательностей, большую или равную 25, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90 или 95%; точный процент может быть указан, если это необходимо. В настоящем документе термины гомология и идентичность часто являются взаимозаменяемыми, если отдельно не указано иное. Как правило, для определения процента гомологии или идентичности последовательности выравнивают для достижения наибольшего совпадения остатков (см., например, Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., изд. Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., изд. Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, часть I, Griffin, A.M. и Griffin, H.G., изд. Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; и Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. и Devereux, J., изд. М Stockton Press, New York, 1991; Carillo и др. (1988) SIAM J. Applied Math 48:1073). Для определения гомологии последовательностей количество консервативных аминокислот определяют с помощью стандартных алгоритмов программ выравнивания, при этом могут быть использованы установленные по умолчанию штрафы за разрыв, предусмотренные поставщиком программного обеспечения. По существу, гомологичные молекулы нуклеиновых кислот гибридизуются, как правило, при умеренно жестких условиях или при высоко жестких условиях по всей длине интересующих нуклеиновых кислот. Также предусмотрены молекулы нуклеиновых кислот, которые включают вырожденные кодоны вместо кодонов в гибридизующихся молекулах нуклеиновых кислот.
Идентичность или гомология нуклеотидных последовательностей или аминокислотных последовательностей любых двух молекул по меньшей мере на 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% может быть определена с помощью известных компьютерных алгоритмов, таких как программа FASTA, с использованием, например, параметров по умолчанию, как указано Pearson и др. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (другие программы включают пакет программ GCG (Devereux, J. и др., Nucleic Acids Research 12(I):387 (1984)), программы BLASTP, BLASTN, FASTA (Atschul, S.F. и др., J. Mol. Biol. 215:403 (1990)); Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop, изд. Academic Press, San Diego, 1994 и Carillo и др. (1988) SIAM J. Applied Math 48:1073). Например, для определения идентичности может быть использована функция BLAST базы данных Национального центра биотехнологической информации. Другие коммерчески или публично доступные программы включают программу MegAlign от DNAStar (Мэдисон, Висконсин) и программу Gap, разработанную компьютерной группой генетики Университета Висконсин (UWG) (Мэдисон, Висконсин). Процент гомологии или идентичности белков и/или молекул нуклеиновых кислот можно определить, например, путем сравнения их последовательностей с применением компьютерной программы GAP (см., например, Needleman и др. (1970) J. Mol. Biol. 48:443, с изменениями от Smith и Waterman ((1981) Adv. Appl. Math. 2:482). Программа GAP определяет сходство как отношение количества выровненных символов (например, нуклеотидов или аминокислот), которые являются сходными, к общему числу символов в более короткой из двух последовательностей. Параметры по умолчанию для программы GAP могут включать: (1) унарную матрицу сравнения (содержащую значение 1 для идентичных символов и 0 для не идентичных) и взвешенную матрицу сравнения Gribskov и др., (1986) Nucl. Acids Res. 14:6745, как описано Schwartz и Dayhoff в атласе белковых последователь- 14 031986 ностей и структур Atlas Of Protein Sequence And Structure, National Biomedical Research Foundation, с. 353358 (1979), (2) штраф в размере 3,0 для каждого разрыва и дополнительный штраф 0,10 для каждого символа в каждом разрыве; и (3) отсутствие штрафа для разрывов на концах.
Таким образом, в настоящем документе термины идентичность или гомология относятся к сравнению эталонного и исследуемого полипептида или полинуклеотида. В настоящем документе термин по меньшей мере на 90% идентичны относится к проценту идентичности от 90 до 99,99 по отношению к эталонной последовательности нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности полипептида. Принимая для иллюстративных целей длину сравниваемого и эталонного полипептидов в 100 аминокислот, идентичность на уровне 90% и более свидетельствует о том, что не более 10% аминокислот (т.е. 10 из 100 аминокислот) в исследуемом полипептиде отличается от эталонного полипептида. Подобное сравнение можно провести между исследуемым и эталонным полинуклеотидами. Такие различия могут быть представлены в виде точечных мутаций, случайным образом распределенных по всей длине полипептидной цепи, или они могут быть сосредоточены в одном или нескольких районах цепи различной длины вплоть до максимально допустимой, например, 10/100 отличающихся аминокислот (приблизительно 90% идентичности). Отличия определяются как замены, вставки или делеции нуклеотидов или аминокислот. При уровне гомологии или идентичности выше приблизительно 85-90% результат не должен зависеть от выбранной программы и параметров штрафов за разрыв; такие высокие уровни идентичности могут быть легко оценены, часто с помощью ручного выравнивания без помощи программного обеспечения.
В настоящем документе выравнивание последовательностей относится к использованию гомологии (сходства и/или идентичности) для выравнивания соответствующих позиций в нуклеотидной или аминокислотной последовательности. Как правило, две или более последовательностей, которые связаны 50% и большей идентичностью, выравниваются. Набор выровненных последовательностей относится к 2 или большему количеству последовательностей, которые выровнены в соответствующих позициях, и может включать последовательности, полученные на основе РНК, такие как EST и другие кДНК, выровненные с последовательностью геномной ДНК.
В настоящем документе праймер относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые в соответствующих условиях (например, в присутствии четырех различных нуклеозидтрифосфатов и полимеризующего агента, такого как ДНК-полимераза, РНК-полимераза или обратная транскриптаза) в соответствующем буфере и при подходящей температуре могут выступать в качестве точки начала направляемого матрицей синтеза ДНК. Следует иметь в виду, что определенные молекулы нуклеиновых кислот могут служить в качестве зонда и в качестве праймера. Праймеры, однако, имеют на конце 3' гидроксильную группу для удлинения. Праймеры могут быть использованы для осуществления разнообразных методов, включая, например, полимеразную цепную реакцию (ПЦР), ПЦР с обратной транскрипцией ЩЦ-ПЦР, ПЦР на РНК, ЛЦР, мультиплексную ПЦР, супрессионную ПЦР, ПЦР с захватом, ПЦР с экспрессией, 3' и 5' RACE (быстрая амплификация концов кДНК), ПЦР in situ, ПЦР с лигированием и другие протоколы амплификации.
В настоящем документе пара праймеров относится к набору праймеров, включающему 5' (прямой) праймер, который гибридизуется с комплементарным участком 5'-конца амплифицируемой последовательности (например, с помощью ПЦР), и 3' (обратный) праймер, который гибридизуется с комплементарным участком 3'-конца амплифицируемой последовательности.
В настоящем документе термин специфически гибридизуется относится к отжигу молекулы нуклеиновой кислоты (например, олигонуклеотида) с целевой молекулой нуклеиновой кислоты через комплементарное спаривание оснований. Специалистам в данной области известны параметры in vitro и in vivo, которые влияют на специфическую гибридизацию, такие как длина и состав конкретной молекулы. Особенно важные для гибридизации in vitro параметры дополнительно включают температуру отжига и отмывания, состав буфера и концентрацию соли. Примеры условий отмывания для удаления неспецифически связанных молекул нуклеиновых кислот включают 0,1xSSPE, 0,1% SDS и 65°C при высокой жесткости и 0,2xSSPE, 0,1% SDS и 50°C при умеренной жесткости. Эквивалентные условия известны в уровне техники. Специалист в данной области для достижения специфической гибридизации молекул нуклеиновой кислоты с целевыми молекулами нуклеиновой кислоты может легко изменить условия для конкретной задачи. При упоминании двух молекул нуклеиновых кислот комплементарность означает, что две нуклеотидные последовательности способны гибридизоваться, как правило, при наличии 25, 15 или 5% не совпадающих нуклеотидов. При необходимости может быть точно указан процент комплементарности. Как правило, две молекулы выбирают таким образом, что они гибридизуются при высоко жестких условиях.
В настоящем документе термин по существу, идентичный по отношению к продукту означает достаточно близкий продукт, в котором интересующее свойство является в значительной степени неизменным, поэтому, по существу, идентичный продукт может быть использован вместо исходного продукта.
В настоящем документе термины по существу, идентичные или сходные варьируются в зависимости от контекста, как это понимает специалист в данной области техники.
- 15 031986
В настоящем документе аллельный вариант или аллельные различия относятся к любой из двух или более альтернативных форм гена, занимающих один хромосомный локус. Аллельные различия естественно возникают в результате мутаций и могут привести к фенотипическому полиморфизму в популяциях. Генные мутации могут быть молчащими (без изменений в закодированном полипептиде) или могут приводить к полипептидам с измененной аминокислотной последовательностью. Термин аллельный вариант также используется здесь для обозначения белка, кодируемого аллельными вариантами гена. Обычно эталонная форма гена кодирует полипептид дикого типа и/или преобладающую форму полипептида в популяции или у одного эталонного представителя вида. Как правило, аллельные варианты, которые включают варианты между видами и внутри видов, обладают по меньшей мере 80, 90% или большей идентичностью аминокислотной последовательности с формой дикого типа и/или преобладающей формой у того же вида, причем степень идентичности зависит от гена и от того, является ли сравнение межвидовым или внутривидовым. Как правило, внутривидовые аллельные варианты обладают по меньшей мере приблизительно 80, 85, 90, 95% или большей идентичностью с формой дикого типа и/или преобладающей формой, в том числе 96, 97, 98, 99% или большей идентичностью с формой дикого типа и/или преобладающей формой полипептида. Упоминание аллельного варианта в настоящем документе обычно относится к различиям в белках между представителями одного и того же вида.
Используемый здесь термин аллель является взаимозаменяемым с термином аллельный вариант и относится к альтернативным формам генов или их частей. Аллели занимают одинаковый локус или позицию в гомологичных хромосомах. Когда субъект имеет два одинаковых аллеля гена, субъект называется гомозиготным субъектом по этому гену или аллелю. Когда субъект имеет два различных аллеля гена, субъект называется гетерозиготным по гену. Аллели конкретного гена могут отличаться друг от друга одним нуклеотидом или несколькими нуклеотидами и могут включать изменения, такие как замены, делеции и вставки нуклеотидов. Аллель гена также может быть формой гена, содержащей мутацию.
В настоящем документе видовые варианты относятся к вариантам полипептидов, встречающихся в различных видах, в том числе в различных видах млекопитающих, таких как мышь и человек. Например, для РН20 примерами предусмотренных здесь видовых вариантов являются РН20 приматов, например человека, шимпанзе, макака и яванского макака, но не ограничиваясь ими. Обычно идентичность последовательностей видовых вариантов составляет 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или больше. Соответствующие остатки между видовыми вариантами можно определить путем сравнения и выравнивания последовательностей для максимизации числа совпадающих нуклеотидов или остатков, например, таким образом, что идентичность последовательностей равна 95% или больше, равна 96% или больше, равна 97% или больше, равна 98% или больше или равна 99% или больше. Искомому положению далее присваивается номер в соответствии с исходной молекулой нуклеиновой кислоты. Выравнивание можно осуществить вручную или на глаз, особенно, если идентичность последовательностей выше 80%.
В настоящем документе человеческий белок представляет собой белок, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, такой как ДНК, присутствующей в геноме человека, включая все его аллельные варианты и консервативные варианты. Вариант или модификация белка представляет собой человеческий белок, если модификация основана на последовательности человеческого белка дикого типа или известной последовательности человеческого белка.
В настоящем документе вариант сплайсинга относится к варианту, полученному в результате дифференциального процессинга первичного транскрипта геномной ДНК, который приводит к образованию более чем одного типа мРНК.
В настоящем документе модификация относится к модификации последовательности аминокислот полипептида или последовательности нуклеотидов в молекуле нуклеиновой кислоты и включает делеции, вставки и замены аминокислот и нуклеотидов соответственно. Примерами модификаций являются аминокислотные замены. Полипептид с замещенными аминокислотами может иметь 65, 70, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или большую идентичность последовательности с полипептидом, не содержащим аминокислотные замены. Аминокислотные замены могут быть консервативными или не консервативными. Обычно любая модификация полипептида сохраняет активность полипептида. Способы модификации полипептида являются обычными для специалистов в данной области техники и включают, например, способы с использованием методик рекомбинантных ДНК.
В настоящем документе подходящие консервативные аминокислотные замены хорошо известны специалистам в данной области техники, и они могут быть осуществлены обычно без изменения биологической активности полученной молекулы. Специалистам в данной области техники известно, что обычно единичные аминокислотные замены в не существенных областях полипептида значительно не изменяют его биологическую активность (см., например, Watson et al. Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, The Benjamin/Cummings Pub. со., с. 224). Такие замены можно осуществить в соответствии с примерами замен, которые приведены в табл. 2 ниже.
- 16 031986
Первоначальный остаток Примеры консервативных замен
Ala (А) Gly; Ser
Arg(R) Lys
Asn (Ν) Gln; His
Cys (С) Ser
Gln(Q) Asn
Glu (E) Asp
Gly(G) Ala; Pro
His (H) Asn; Gln
lie (I) Leu; Val
Leu (L) Ile; Val
Lys (K) Arg; Gln; Glu
Met (M) Leu; Tyr; lie
Phe (F) Met; Leu; Tyr
Ser(S) Thr
Thr (T) Ser
Trp (W) Tyr
Tyr(Y) Trp; Phe
Val (V) Ile; Leu
Таблица 2
Другие замены также допустимы и могут быть определены опытным путем или в соответствии с известными консервативными заменами.
В настоящем документе термин промотор означает часть последовательности ДНК, содержащей ген, которая отвечает за связывание РНК полимеразы и инициацию транскрипции. Последовательности промоторов обычно, но не всегда, находятся в 5'-некодирующей области.
В настоящем документе выделенный или очищенный полипептид, или белок, или его биологически активная часть, по существу, не содержит клеточного материала или других загрязняющих белков из клеток или тканей, из которых происходит белок, или является, по существу, свободным от химических веществ-предшественников и других химических веществ при его химическом синтезе. Препараты могут быть определены как, по существу, чистые, если они являются свободными от легко обнаруживаемых примесей, определяемых с помощью стандартных способов анализа, таких как тонкослойная хроматография (ТСХ), гель-электрофорез и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), используемых специалистами в области техники для оценки чистоты, или препараты могут быть определены как достаточно чистые, если дальнейшая очистка не приводит к обнаруживаемому изменению физических и химических свойств вещества, таких как энзиматическая и биологическая активность. Способы очистки соединений для получения, по существу, химически чистых соединений известны специалистам в данной области. По существу, химически чистые соединения, однако, могут представлять собой смесь стереоизомеров. В таких случаях дополнительная очистка может увеличить удельную активность соединения.
Таким образом, упоминание, по существу, очищенного полипептида, например, по существу, очищенного растворимого РН20, относится к препаратам белка, которые, по существу, не содержат клеточного материала, и включают препараты белков, в которых белок отделен от компонентов клеток, из которых он был выделен, или в которых получен рекомбинантно. В одном варианте термин по существу, не содержащий клеточного материала относится к препаратам белков-ферментов, содержащим менее чем приблизительно 30% (по сухому весу) белков, не являющихся ферментом (также называемых в настоящем документе загрязняющими белками), как правило, содержащим менее 20% белков, не являющихся ферментом, 10% белков, не являющихся ферментом, или менее чем приблизительно 5% белков, не являющихся ферментом. Если белок-фермент получен рекомбинантно, препарат должен, по существу, не содержать культуральной среды, т.е. содержание культуральной среды составляет менее приблизительно 20, 10 или 5% от объема препарата белка-фермента.
Используемый здесь термин по существу, не содержит химических веществ-предшественников и других химических веществ относится к препарату фермента, в котором белок отделен от химических веществ-предшественников и других химических веществ, которые использовали в синтезе белка. Этот термин включает препараты фермента, содержащие менее 30% (на сухой вес), 20, 10, 5% или менее химических веществ-предшественников или химических веществ и компонентов, не являющихся ферментом.
В настоящем документе термин синтетический, употребляемый, например, по отношению к синтетическим молекулам нуклеиновой кислоты, синтетическим генам или синтетическим пептидам, относится к молекуле нуклеиновой кислоты или полипептиду, которые получают с помощью рекомбинантных методов и/или методов химического синтеза.
В настоящем документе получение рекомбинантными методами или с помощью методов рекомбинантной ДНК означает использование известных методов молекулярной биологии для экспрессии бел
- 17 031986 ков, кодируемых клонированной ДНК.
В настоящем документе вектор (или плазмида) относится к дискретному элементу, который используется для введения гетерологичных нуклеиновых кислот в клетки для их экспрессии или репликации. Векторы обычно остаются в эписомном состоянии, но могут быть разработаны векторы для интеграции гена или его части в хромосому генома. Также предусмотрены векторы, которые представляют собой искусственные хромосомы, такие как искусственные хромосомы дрожжей и искусственные хромосомы млекопитающих. Процедуры выбора и использования таких векторов хорошо известны специалистам в данной области.
В настоящем документе вектор экспрессии включает векторы, способные экспрессировать ДНК, функционально связанную с регуляторными последовательностями, такими как промоторные районы, которые способны вызывать экспрессию таких фрагментов ДНК. Дополнительные последовательности могут включать промоторные и терминаторные последовательности и, при необходимости, могут включать одну или несколько точек начала репликации, один или более маркеров для отбора, энхансер, сигнал полиаденилирования. Векторы экспрессии обычно получают из плазмидной или вирусной ДНК, или вектор может содержать элементы того и другого. Таким образом, вектор экспрессии относится к рекомбинантным конструкциям ДНК или РНК, например плазмидам, бактериофагам, рекомбинантным вирусам или другим векторам, которые после введения в соответствующую клетку-хозяина приводят к экспрессии клонированной ДНК. Соответствующие векторы экспрессии хорошо известны специалистам в данной области и включают векторы, которые реплицируются в эукариотических клетках и/или прокариотических клетках, векторы, которые остаются в эписомном состоянии, или векторы, которые интегрируются в геном клетки-хозяина.
В настоящем документе вектор также включает вирусный вектор или вирусные векторы. Вирусные векторы представляют собой сконструированные вирусы, функционально связанные с экзогенным геном для передачи (как носитель или челнок) экзогенного гена в клетки.
В настоящем документе термины функционально или функционально связанный по отношению к сегментам ДНК означают, что сегменты расположены так, что они функционируют в соответствии с их назначением, например транскрипция инициируется после промотора и до начала любой транскрибируемой последовательности. Промотор, как правило, представляет собой домен, с которым для инициации транскрипции связывается транскрипционный комплекс, который затем проходит через кодирующий сегмент до терминатора.
В настоящем документе термин оценка относится к качественному и количественному определению абсолютного значения активности белка, такого как фермент, или его домена, присутствующих в образце, а также к получению индекса, коэффициента, процента, визуального показателя или другого показателя уровня активности. Оценка может быть прямой или косвенной. Например, химические вещества, определяемые в процессе исследования, не обязательно должны представлять собой непосредственно продукт ферментативного расщепления, но могут представлять собой, например, его производные или некоторые дополнительные вещества. Например, обнаружение продукта расщепления может быть проведено с помощью обнаруживаемого фрагмента, такого как флуоресцентный фрагмент.
Используемый в настоящем документе термин биологическая активность относится к активности соединения in vivo или к физиологической реакции, которая проявляется при введении соединения, композиции или другой смеси in vivo. Биологическая активность, таким образом, охватывает терапевтический эффект и фармацевтическую активность таких соединений, композиций и смесей. Биологическую активность можно наблюдать в системах in vitro, предназначенных для исследования или использования такой активности. Таким образом, для целей настоящего изобретения биологическая активность фермента гиалуронидазы представляет собой разрушение гиалуроновой кислоты.
Используемый в настоящем документе термин эквивалент в отношении двух последовательностей нуклеиновых кислот означает, что две интересующие последовательности кодируют одну последовательность аминокислот или эквивалентные белки. Термин эквивалент в отношении двух белков или пептидов означает, что два белка или пептида обладают, по существу, одинаковой аминокислотной последовательностью и включают только такие аминокислотные замены, которые, по существу, не изменяют активность или функции белка или пептида. Термин эквивалент в отношении свойства не обязательно означает, что свойство присутствует в той же степени (например, два пептида могут проявлять одну ферментативную активность при разной скорости катализа), но при этом активность, как правило, остается, по существу, одинаковой.
В настоящем документе термины модулирует и модуляция или изменяет относятся к изменению активности молекулы, такой как белок. Примеры активности включают, но не ограничиваются биологической активностью, такой как передача сигнала. Модуляция может включать повышение активности (т.е. усиление активности или агонистическую активность), снижение активности (т.е. ослабление активности или ингибирование) или любые другие изменения активности (такие как изменения периодичности, частоты, длительности, кинетики или другого параметра). Термин модуляция зависит от контекста, как правило, модуляция относится к изменению параметра одного объекта по сравнению с другим указанным объектом, например белком дикого типа, белком в основном состоянии или белком,
- 18 031986 экспрессируемым в указанном типе клеток или при определенном состоянии.
В настоящем документе лекарственная форма для непосредственного введения относится к композиции, которую вводят без разбавления.
В настоящем документе лекарственная форма для однократного введения относится к лекарственной форме для применения только один раз. Как правило, лекарственная форма для однократного введения представляет собой лекарственную форму для непосредственного введения.
В настоящем документе лекарственная форма для многократного введения относится к лекарственной форме для применения для повторных введений.
В настоящем документе композиция относится к любой смеси. Композиция может представлять собой раствор, суспензию, жидкость, порошок, пасту, может быть водной или неводной или представлять собой комбинацию указанных типов.
В настоящем документе комбинация относится к любой связи двух или более элементов. Комбинация может представлять собой два или более отдельных элемента, таких как две композиции или две совокупности, может представлять собой их смесь, например смесь двух или более элементов, или любые их вариации. Элементы комбинации, как правило, функционально связаны или сходны.
Используемый здесь термин заболевание или нарушение относится к патологическим состояниям организма, которые возникли в результате факторов или состояний, включающих, но не ограничивающихся инфекцией, приобретенными состояниями, генетическими состояниями, и которые характеризуются идентифицируемыми симптомами. Заболевания и нарушения, представляющие интерес в контексте настоящего документа, включают заболевания и нарушения, ассоциированные с гиалуронаном.
В настоящем документе внутривенное введение относится к доставке терапевтического агента непосредственно в вену.
В настоящем документе термины ассоциированный с гиалуронаном рак или богатый гиалуронаном рак включают рак, при котором уровень гиалуронана повышен по причине заболевания или состояния, при котором уровень гиалуронана повышен как следствие заболевания или состояния или при котором повышенный уровень гиалуронана наблюдается при заболевании или состоянии по иной причине. Ассоциированные с гиалуронаном рак или опухоли ассоциированы с повышенным уровнем гиалуронана в ткани или клетке, повышенным интерстициальным давлением жидкости, пониженным сосудистым объемом и/или повышенным содержанием воды в ткани. Такие раки включают, например, опухоли, в том числе солидные опухоли, такие как рак на поздней стадии, метастатический рак, недифференцированный рак, рак яичников, карциному in situ (ISC), плоскоклеточную карциному (SCC), рак простаты, рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легких, рак груди, рак прямой кишки и другие типы рака.
В настоящем документе повышенный уровень гиалуронана относится к количеству гиалуронана в конкретной ткани, биологической жидкости или клетке, зависящему от заболевания или состояния, наблюдаемому как следствие заболевания или состояния, или наблюдаемому при заболевании по иной причине. Например, как следствие наличия богатой гиалуронаном опухоли уровень гиалуронана (НА) может быть повышен в биологических жидкостях, таких как кровь, моча, слюна и сыворотка, и/или может быть повышен в пораженной опухолью ткани или клетке. Уровень можно сравнивать со стандартом или другим подходящим контролем, таким как образец сравнения из субъекта, у которого нет ассоциированного с НА заболевания.
В настоящем документе лечение субъекта с заболеванием или состоянием означает, что симптомы субъекта частично или полностью снимаются или остаются неизменными в ходе лечения. Таким образом, лечение охватывает профилактику, терапию и/или излечение. Профилактика относится к предотвращению возможного заболевания и/или предотвращению ухудшения симптомов или прогрессирования заболевания.
В настоящем документе фармацевтически эффективный агент включает любой терапевтический агент или биологически активный агент, включая, но не ограничиваясь, например, химиотерапевтическими агентами, анестетиками, вазоконстрикторами, диспергирующими агентами, обычными терапевтическими препаратами, включая низкомолекулярные препараты и терапевтические белки.
В настоящем документе лечение представляет собой любой способ уменьшения или иного благотворного изменения симптомов состояния, нарушения, заболевания или другого показания.
В настоящем документе терапевтический эффект представляет собой эффект лечения субъекта, который заключается в изменении, как правило, улучшении или смягчении симптомов заболевания или состояния, или заключается в излечении заболевания или состояния. Терапевтически эффективное количество относится к количеству композиции, молекулы или соединения, которое приводит к терапевтическому эффекту после введения субъекту.
Используемый здесь термин субъект относится к животному, в том числе млекопитающему, такому как человек.
В настоящем документе термин пациент относится к субъекту человеку, проявляющему симптомы заболевания или нарушения.
В настоящем документе примерно такой же по отношению к количеству означает, что специалист
- 19 031986 в данной области техники будет рассматривать два значения как одинаковые или отличающиеся в пределах допустимой ошибки. Например, как правило, для фармацевтических композиций количества, отличающиеся в пределах по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или 10%, рассматриваются как примерно одинаковые.
Такое количество может варьировать в зависимости от переносимости изменений в конкретной композиции субъктами.
В настоящем документе режим дозирования относится к количеству агента, например, композиции, содержащей антигиалуроновый агент, например, растворимую гиалуронидазу или другой агент, и частоте введения. Режим дозирования зависит от заболевания или состояния, подвергающегося лечению, и поэтому может варьировать.
В настоящем документе частота введения относится к промежутку времени между последовательными введениями лекарственного средства. Например, частота может представлять собой дни, недели и месяцы. Например, частота введения может составлять более чем раз в неделю, например два раза в неделю, три раза в неделю, четыре раза в неделю, пять раз в неделю, шесть раз в неделю или ежедневно. Частота также может представлять собой одну, две, три или четыре недели. Конкретная частота является функцией конкретного заболевания или состояния, подвергающегося лечению. Обычно частота введения составляет более чем один раз в неделю, обычно составляет два раза в неделю.
В настоящем документе цикл введения относится к повторяющейся схеме режима дозирования фермента и/или второго агента, которая повторяется при последовательных введениях. Например, примером цикла введения является 28-дневный цикл с введением два раза в неделю на протяжении трех недель и с последующим прерыванием дозирования на одну неделю.
В настоящем документе в отношении дозирования из расчета мг/кг субъекта предполагается, что среднестатистический субъект, являющийся человеком, имеет вес примерно 70-75 кг, например 70 кг, и площадь поверхности тела (BSA) 1,73.
В настоящем документе облегчение симптомов заболевания или нарушения посредством лечения, например введением фармацевтической композиции или другого лекарственного средства, относится к любому уменьшению симптомов или побочных эффектов состояния, которое является постоянным или временным, устойчивым или кратковременным, такому как, например, уменьшение побочных эффектов, связанных с введением или происходящих при введении антигиалуронового агента, такого как пегилированная гиалуронидаза.
В настоящем документе профилактика или предотвращение относится к способам уменьшения риска развития заболевания или состояния.
В настоящем документе терапевтически эффективное количество или терапевтически эффективная доза представляет собой количество агента, соединения, материала или композиции, содержащей соединение, которое является, по меньшей мере, достаточным для проявления терапевтического эффекта. Указанное количество необходимо для предотвращения, лечения, смягчения, устранения или частичного устранения симптомов заболевания или нарушения.
В настоящем документе единичная дозированная форма относится к физически дискретным единицам, пригодным для человека и животных, содержащимся в индивидуальной упаковке, как известно в уровне техники.
В настоящем документе единичная дозированная лекарственная форма относится к лекарственной форме в виде одной дозы.
В настоящем документе лекарственная форма для непосредственного введения означает, что лекарственная форма не требует дальнейшего разбавления для введения.
В настоящем документе изделие представляет собой продукт, который изготавливается и продается. В настоящем документе термин охватывает антигиалуроновые агенты, например разрушающий гиалуронан фермент, такой как гиалуронидаза, и композиции второго агента, содержащиеся в упаковках. Например, второй агент представляет собой кортикостероид, направленный на опухоль таксан или химиотерапевтический агент.
В настоящем документе жидкая композиция относится к любой композиции, которая может течь. Таким образом, жидкие композиции включают композиции в полутвердой форме, пасты, растворы, водные смеси, гели, лосьоны, кремы и другие подобные композиции.
В настоящем документе комбинация, такая как комбинация предусмотренных в настоящем документе композиций, относится к любой связи элементов комбинации.
В настоящем документе набор относится к комбинации компонентов, например к комбинации композиций, предусмотренных в настоящем документе, и еще одного объекта, предназначенного, например, для таких целей как восстановление, активация, а также, например, инструментов/устройств для введения, доставки, диагностики и оценки биологической активности или свойств. Наборы необязательно включают инструкции по применению.
В настоящем документе клеточный экстракт или лизат относится к препарату или фракции, образованной из лизированных или разрушенных клеток.
В настоящем документе животное включает любое животное, включая, но не ограничиваясь приматами, например человеком, гориллой и низшими приматами, грызунами, такими как мыши и крысы,
- 20 031986 птицами, такими как куры, жвачными животными, например козами, коровами, оленями, овцами, свиньями, и другими животными. Термин животные, не являющиеся человеком, исключает человека из круга предусмотренных животных. Предусмотренные в настоящем документе гиалуронидазы представляют собой ферменты из любого источника, включая животных, растения, прокариотические организмы и грибы. Большая часть гиалуронидаз представляет собой ферменты животного происхождения, в том числе ферменты млекопитающих. Как правило, гиалуронидазы представляют собой гиалуронидазы человеческого происхождения.
В настоящем документе лечение рака включает введение лекарств и других агентов для лечения рака и также протоколы лечения, например хирургические операции и облучение. Лечение рака включает введение противораковых агентов.
В настоящем документе противораковый агент относится к агентам или соединениям, используемым в лечении рака. Они включают любые агенты, используемые самостоятельно или в комбинации с другими соединениями, которые могут ослаблять, уменьшать, облегчать, предупреждать или фиксировать или поддерживать в состоянии ремиссии клинические симптомы или диагностические маркеры, ассоциированные с опухолями и раками, и которые могут использоваться в предусмотренных здесь комбинациях и композициях. Примеры противораковых агентов включают разрушающие гиалуронан ферменты, например, предусмотренные здесь пегилированные разрушающие гиалуронан ферменты, используемые самостоятельно или в комбинации с другими противораковыми агентами, такими как химиотерапевтические агенты, полипептиды, антитела, пептиды, низкомолекулярные соединения или генотерапевтические векторы, вирусы или ДНК, но не ограничиваются ими.
В настоящем документе контроль относится к образцу, который, по существу, идентичен исследуемому образцу, за исключением того, что он не обладает в какой-то мере исследуемым параметром, или, если речь идет об образце плазмы, контроль может быть взят у нормального добровольца, не затронутого интересующим состоянием. Контроль также может представлять собой внутренний контроль.
В настоящем документе упоминание понятий в единственном числе также включает множественное число, если контекст с очевидностью не указывает на иное. Таким образом, например, упоминание молекулы, включающей или содержащей внеклеточный домен, относится к молекулам с одним или несколькими внеклеточными доменами.
В настоящем документе диапазоны и количества могут быть обозначены как конкретные значения с добавлением термина примерно. Термин примерно также включает в себя точное значение. Следовательно, примерно 5 оснований означает примерно 5 оснований, а также 5 оснований.
В настоящем документе термины по желанию или необязательно означают, что описанные явления или обстоятельства могут иметь место или могут не иметь места, и что описание включает случаи, когда указанное явление или обстоятельство происходит, и случаи, когда это не так. Например, необязательно замещенная группа означает, что группа не является замещенной или является замещенной.
В настоящем документе аббревиатуры для любых защитных групп, аминокислот и других соединений, если не указано иное, употребляются в соответствии с их обычным использованием и являются признанными аббревиатурами или употребляются в соответствии с Комиссией по биохимической номенклатуре IUPAC-IUB (см. (1972) Biochem. 11: 1726).
В. Комбинированная терапия антигиалуроновым агентом.
В настоящем документе предусмотрена комбинированная терапия антигиалуроновым агентом, таким как разрушающий гиалуронан фермент, и направленным на опухоль таксаном, таким как связанный с альбумином таксан паклитаксел, для применения в лечении различных типов рака. Например, в настоящем документе предусмотрена комбинированная терапия конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом, например гилуронидазой, такой как PEGPH20, и направленным на опухоль таксаном, таким как связанный с альбумином паклитаксел, для применения в лечении рака. В частности, комбинированная терапия, предусмотренная в настоящем документе, используется в лечении любых типов рака, которые характеризуются солидными опухолями, являющимися непроницаемыми изза стромального слоя. Примеры таких типов рака включают солидные раковые опухоли, такие как, например, рак поджелудочной железы, рак груди, рак простаты, рак желудка, рак прямой кишки, рак яичников, рак головы и шеи и другие типы рака. Комбинированная терапия может дополнительно включать цитотоксическое химиотерапевтическое лекарство, например любое цитотоксическое химиотерапевтическое лекарство, чья активность повышена (например, из-за увеличенной доставки и/или увеличенного периода полувыведения) за счет одного или обоих агентов, выбранных из антигиалуронового агента, например конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента, и/или направленного на опухоль таксана. Например, дополнительный химиотерапевтический агент может представлять собой нуклеозидный аналог, такой как гемцитабин или его производное, который обладает непосредственной противоопухолевой активностью.
1. Солидные опухоли и направленная на опухоль терапия.
Солидные опухоли состоят из раковых клеток и стромальных клеток (например, фибробластов и воспалительных клеток), которые окружены внеклеточным матриксом и сосудистой сетью. Стромальные клетки, компоненты внеклеточного матрикса и/или сосудистой системы обычно являются ненормальны
- 21 031986 ми по сравнению с теми стромальными клетками, компонентами внеклеточного матрикса и/или сосудистой системы, которые присутствуют в нормальных тканях. Например, многие солидные опухоли имеют повышенное количество фибробластов по сравнению с нормальными тканями. Также сосудистая система в солидных опухолях может иметь разветвленную или извитую структуру по сравнению с нормальной сосудистой системой и имеет структурные нарушения, характеризующиеся расширенными сосудами, уменьшением эндотелиальной выстилки и/или сжатием сосудов. Наконец, опухолевые и стромальные клетки продуцируют и организуют сложную сеть компонентов внеклеточного матрикса, таких как коллагены, протеогликаны, гликозаминогликаны (например, гиалуронан) и другие молекулы, которые образуют плотную массу и могут вносить вклад в высокое интерстициальное давление опухоли. Высокое интерстициальное давление жидкости выше внутрисосудистого давления в концевых артериолах и капиллярах может привести к нарушению перфузии жидкостей и растворов в интерстиций. Таким образом, высокое интерстициальное давление может помешать поглощению терапевтических агентов опухолевыми тканями, а также может влиять на свойства роста опухолевых клеток, поддерживая пролиферацию опухолевых клеток.
Чтобы терапия была эффективной, лекарства должны эффективно покидать кровеносные сосуды опухоли и проникать в опухолевые ткани для достижения раковых клеток. Высокое интерстициальное давление жидкости, а также плотный состав и организация внеклеточного матрикса и ассоциированных клеток влияет на проникновение лекарства. В результате стромальный барьер часто мешает проникновению противоопухолевых лекарств в опухоли, что делает многие традиционные виды лечения рака неэффективными.
Например, рак поджелудочной железы является одним из самых непроницаемых из всех солидных раковых опухолей. В результате, рак поджелудочной железы, в том числе протоковая аденокарцинома поджелудочной железы, характеризуется устойчивостью к традиционным химиотерапевтическим агентам, так что 5-летняя выживаемость составляет меньше 5%. Стандартная терапия для рака поджелудочной железы представляет собой терапию гемцитабином. Гемцитабин имеет ограниченные эффекты на увеличение выживаемости пациентов, например только у примерно четверти пациентов, подвергаемых лечению монотерапией гемцитабином, наблюдается клинический эффект со средним временем выживания немного больше 5 месяцев, что только на один месяц превышает среднее время выживания в случае лечения химиотерапевтическим агентом 5-фторурацилом (5-FU) (Burris et al. (1997) J. Clin. Oncol., 15:2403-2413). В случае адъювантной терапии, где лечение также сопровождается хирургическим лечением поджелудочной железы или другой нехимиотерапевтической адъювантной терапией, гемцитабин повышает выживаемость на два месяца по сравнению с пациентами, которые подвергались только хирургическому лечению (Neuhaus et al. (2008) J. Clin. Oncol. 26: May 20 suppl; abst.).
В последнее время были разработаны различные виды терапии, которые включают терапевтический агент, который может проникать внутрь стромального слоя и ассоциированной сосудистой системы. Терапевтические агенты, которые могут истощать строму, перфорировать или иным образом проникать внутрь стромы, рассматриваются как перспективные терапевтические агенты для многих видов рака, характеризующихся непроницаемым стромальным слоем. Такие агенты включают, например, конъюгированные с альбумином таксаны (Von Hoff et al. (2011) J. Clin. Oncol., 29:4548-54; Frese et al. (2012) Cancer Discovery, 2:260-269), ингибитор hedgehog (Olive et al. (2009) Science, 324:1457-61) и конъюгированную с полимером гиалуронидазу (Provenzano et al. (2012) Cancer Cell, 21:418-429). Каждый из этих типов лечения также ассоциирован с увеличенной доставкой направленных не на строму химиотерапевтических агентов, которая приводит к усилению противоопухолевых эффектов и удвоению времени выживания по сравнению с монотерапией химиотерапевтическим агентом (например, гемцитабином).
а). Направленный на опухоль таксан.
Таксаны, такие как паклитаксел (например, Taxol®) и доцетаксел (например, Taxotere®), являются мощными химиотерапевтическими агентами для применения в лечении различных типов опухолей. Таксаны действуют как ингибиторы митоза, связываясь с высокой аффинностью с микротрубочками, тем самым препятствуя делению клеток. В результате, таксаны предотвращают рост и метастазирование опухолевых клеток и могут привести к гибели клеток. Терапевтическое применение таксанов было ограничено из-за проблем с растворимостью и связанной с ними токсичностью, длительной системной доступностью и недоступностью для стромы опухоли.
Чтобы преодолеть проблемы, связанные с терапевтическим применением таксанов, была разработана лекарственная форма направленных на рецептор gp60 наночистиц, состоящих из связанных с альбумином частиц таксанов. Такие формы включают, например, наночастицы связанного с альбумином (nab)-паклитаксела (ABI-007, например, Abraxane®) и наночастицы связанного с альбумином доцетаксела (ABI-008). Gp60 является рецептором альбумина на эндотелии сосудов. Опосредованный рецептором альбумина gp60 захват вызывает ассоциацию с внутриклеточным кавеолином-1, что приводит к инвагинации клеточной мембраны с образованием трансцитозных везикул (называемых кавеолами), содержащих связанный компонент плазмы из внеклеточного пространства, и далее трансцитозу и депонированию содержимого кавеол вне сосудов. Кроме того, альбумин также связывается со SPARC (секретируе
- 22 031986 мый кислый белок, обогащённый цистеином), который представляет собой гликопротеин внеклеточного матрикса, сверхэкспрессированный и ассоциированный с неблагоприятным прогнозом при различных раках. В результате стромальный барьер для доставки лекарства преодолевается и достигается более высокая внутриопухолевая концентрация лекарства. С применением nab-паклитаксела могут быть достигнуты более высокие внутриопухолевые концентрации и повышенная биодоступность по сравнению с традиционным паклитакселом в растворе (Foote (2007) Biotechnology Annual Review, 13:345).
Поскольку направленные на опухоль таксаны, такие как конъюгированные с альбумином таксаны, способны проникать в строму и истощать или разрушать ее, эти агенты можно использовать в комбинации с другими направленными не на строму химиотерапевтическими агентами, чтобы увеличить доставку других агентов в опухоль. Механизм увеличения доставки связан с разрушением стромальной архитектуры и индукцией реактивного ангиогенеза, что приводит к увеличению перфузии и доставки химиотерапевтического агента (см., например, Frese et al. (2012) Cancer Discovery, 2:260-269). Например, исследования показали, что nab-паклитаксел, конъюгированный с альбумином таксан, в комбинации с гемцитабином увеличивает почти в 2,8 раз количество гемцитабина в опухоли по сравнению с лечением только гемцитабином (Von Hoff et al. (2011) J. Clin. Oncol., 29:4548-4554). Результаты также показали, что комбинированная терапия удваивает время выживания пациентов с раком поджелудочной железы (Von Hoff et al. (2011)).
Механизм увеличения внутриопухолевого количества гемцитабина при комбинации с терапией nabпаклитакселом в последнее время связывали с независимым механизмом, относящимся к ингибированию цитидин дезаминазы (Cda) в группах, подвергающихся лечению nab-паклитакселом (Frese et al. (2012) Cancer Discovery 2:260-269). Cda повсеместно экспрессируется в клетках и может инактивировать гемцитабин путем его дезаминирования до метаболита дифтордезоксиуридина (dFdU). Лечение nabпаклитакселом приводило к увеличению уровня активных форм кислорода (АФК), которые вызывали деградацию Cda без какой-либо модуляции уровней мРНК. Таким образом, совместное лечение с nabпаклитакселом приводит к снижению дезаминирования гемцитабина и, тем самым, стабилизирует гемцитабин, что приводит к повышению внутриопухолевых уровней гемцитабина.
b). Антигиалуроновый агент.
Антигиалуроновые агенты снижают уровень гиалуроновой кислоты (НА; также называемой в настоящем документе гиалуронаном), препятствуя ее синтезу или увеличивая ее разрушение. Например, разрушающие гиалуронан ферменты, такие как ферменты гиалуронидазы, представляют собой ферменты, которые воздействуют на гиалуронан и разрушают его. Гиалуронан является основным компонентом внеклеточного матрикса солидных опухолей. НА представляет собой высокомолекулярный линейный гликозаминогликан, который содержит повторяющиеся дисахаридные единицы, β-1,3 Н-ацетил-Эглюкозамина, соединенного β-1,4 связью с D-глюкуроновой кислотой. НА встречается в природе в организме и секретируется на чрезвычайно высоком уровне в некоторых раковых клетках, в том числе в клетках рака поджелудочной железы. Локальные нарушения метаболизма НА наблюдались во многих солидных злокачественных опухолях, при этом повышенные уровни НА часто коррелируют с неблагоприятным прогнозом в опухолях, таких как карцинома молочной железы, карцинома желудка, колоректальная карцинома, карцинома яичников, карцинома простаты и карцинома легких.
НА участвует в увеличении поглощения воды и повышении интерстициального давления жидкости (IFP) в пораженных тканях, таких как опухоли, что приводит к сжатию сосудистой системы опухоли. Например, в участке воспаления или в очаге опухоли происходит быстрое накопление гиалуронана, других компонентов матрикса и воды. В связи с таким быстрым накоплением пораженный участок не может прийти к равновесию с его окружением и поэтому имеет более высокое интерстициальное давление жидкости по сравнению с нормальными тканями. Как обсуждалось выше, IFP большинства солидных опухолей и других пораженных тканей связано с повышенным накоплением НА, выступающим как барьер для эффективной доставки лекарств (Heldin et al. (2004) Nat Rev Cancer 4(10):806-813). Накопление НА также снижает контактное ингибирование между опухолевыми клетками (см., например, Itano et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:3609-3614).
Антигиалуроновые агенты, которые ингибируют синтез НА или разрушают гиалуронан, такие как разрушающие гиалуронан ферменты, например гиалуронидазы (например, РН20), могут снижать уровень гиалуронана, так что ткань уменьшается в объеме, кровеносные сосуды расширяются, и через участок ткани может протекать больше крови. Это приводит к уменьшению интерстициального давления жидкости в участке ткани и связанному с этим увеличению сосудистой перфузии. Например, было показано, что гиалуронидаза удаляет НА из опухоли, что приводит к снижению объема опухоли, снижению внутриопухолевого интерстициального давления, замедлению пролиферации опухолевых клеток и повышению эффективности совместного введения химиотерапевтических лекарств и биологических агентов за счет увеличения проницаемости опухоли (см., например, опубликованную заявку США № 20100003238 и международную опубликованную заявку РСТ № WO 2009/128917).
Применение гиалуронидазы, такой как фермент РН20, для системного лечения характеризуется проблемами, связанными с коротким периодом полувыведения фермента. Например, немодифицирован
- 23 031986 ная гиалуронидаза, как правило, имеет короткий период полувыведения для ферментативной активности в крови, составляющий минуты, обычно меньше 5 мин. Это означает, что такие ферменты обычно не подходят для применения для внутривенного введения и для других типов введения, при которых продолжительность их действия является короткой. Это обусловлено тем, что после разрушения субстрат НА замещается с полупериодом восстановления приблизительно 5 ч. В противоположность этому способы, которые увеличивают доставку и/или продлевают ассоциацию гиалуронидазы с гиалуронаном, ассоциированным с клеткой (например, ассоциированный с опухолью околоклеточный гиалуронан), делают возможным лечение опухолей, богатых НА. Такие способы могут включать, например, конъюгацию фермента с полимером, применение агликозилированного фермента или фермента, модифицированного для снижения гликозилирования, непрерывную инфузию фермента и/или локализованную доставку фермента, но не ограничиваются ими. Например, модификация гиалуронидазы полимером, например, с помощью пегилирования, увеличивает период полувыведения фермента приблизительно до 48-72 ч и делает возможным системное лечение опухолей, богатых НА (см., например, опубликованную заявку США № 20100003238 и международную опубликованную заявку РСТ № WO 2009/128917). Увеличенный период полувыведения по сравнению с немодифицированной гиалуронидазой обеспечивает непрерывное удаление НА, и, тем самым, снижает или уменьшает степень регенерации НА в пораженной ткани, такой как опухоль. Таким образом, поддержание уровня фермента в плазме за счет конъюгации с полимером обеспечивает удаление НА, такого как НА опухоли, и также препятствует ресинтезу НА.
Кроме того, конъюгированные с полимером разрушающие гиалуронан ферменты, такие как конъюгированная с полимером гиалуронидаза или РН20, например PEGPH20, могут истощать строму, окружающую раковые клетки, разрушая НА. Такие агенты могут быть использованы в виде монотерапии для лечения опухолей или в комбинированной терапии для увеличения доставки направленных не на строму химиотерапевтических агентов, таких как гемцитабин. Результаты клинических исследований пациентов с раком поджелудочной железы также показывают, что лечение PEGPH20 в комбинации с гемцитабином приводит практически к удвоению общей выживаемости по сравнению с лечением только гемцитабином (Provenzano et al. (2012) Cancer Cell, 21:418-429).
2. Комбинированная терапия антигиалуроновым агентом и направленным на опухоль таксаном.
В настоящем документе установлено, что комбинированная терапия, включающая по меньшей мере два разных направленных на строму или направленных на опухоль терапевтических агента, имеет намного большую эффективность, чем в случае одного направленного на строму агента. Например, в настоящем документе установлено, что комбинированная терапия направленными на опухоль таксанами и антигиалуроновыми агентами, в частности антигиалуроновым агентом, способным достигать околоклеточного НА в опухоли и воздействовать на него в течение времени, достаточного для снижения уровня НА, имеет повышенную эффективность по сравнению с лечением только одним агентом. Например, комбинированная терапия направленным на опухоль таксаном и конъюгированной с полимером гиалуронидазой приводит к повышению эффективности более чем на 25% по сравнению с лечением только одним агентом. В дополнительной комбинации с направленным не на строму химиотерапевтическим лекарством гемцитабином средняя выживаемость для взятого в качестве примера рака увеличилась на 79% в модели рака поджелудочной железы на мышах по сравнению с лечением только гемцитабином и увеличилась более чем на 30% по сравнению с существующими видами терапии, включающими только один направленный на строму агент. Это увеличение эффективности может сопровождаться значительным улучшением выживаемости пациентов с раком поджелудочной железы и другими раками, характеризующимися непроницаемой стромой, по сравнению с существующими подходами к лечению.
Таким образом, в настоящем документе предусмотрены способы применения комбинированной терапии, включающей антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент или конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент (например, гиалуронидаза или РН20), и направленный на опухоль таксан, такой как связанный с альбумином таксан, для лечения солидных стромапьных раковых опухолей. Например, комбинированная терапия может быть использована для лечения рака поджелудочной железы, рака груди, рака простаты, рака желудка, рака прямой кишки, колоректального рака, рака легких, рака яичников и других видов рака. Композиции, содержащие антигиалуроновый агент, такой как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент (например, гиалуронидаза или РН20), и направленный на опухоль таксан (например, связанный с альбумином таксан) могут быть предусмотрены отдельно в виде комбинации или предусмотрены в виде одной композиции. Если агенты предусмотрены и вводятся отдельно, они могут быть введены одновременно или почти одновременно, последовательно или прерывисто в любом порядке. Например, антигиалуроновый агент, например, конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент (например, гиалуронидаза или РН20) и направленный на опухоль таксан (например, связанный с альбумином таксан) могут быть введены отдельно, при этом их вводят почти одновременно или вводят с разницей в дни или часы. Место инъекции может быть тем же самым или другим. Если место инъекции второго агента отличается от места введения первого агента, оно может находиться рядом с местом инъекции первого вводимого агента.
Комбинация направленных на опухоль агентов может быть использована вместе для лечения солидных стромальных раковых опухолей, или она может быть использована в дополнительной комбина
- 24 031986 ции с другими химиотерапевтическими агентами или видами лечения. В конкретных примерах комбинация антигиалуронового агента, такого как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент (например, гиалуронидаза или РН20), и направленного на опухоль таксана (например, связанный с альбумином таксан) используется в дополнительной комбинации с химиотерапевтическим агентом. Другой агент может представлять собой направленный на строму или направленный не на строму агент. Как правило, другой агент представляет собой направленный не на строму цитотоксический агент, который обладает прямой противоопухолевой активностью.
Например, дополнительный химиотерапевтический агент может представлять собой цитотоксический агент, такой как платина (цисплатин или карбоплатин), паклитаксел, гемцитабин, доцетаксел, винорелбин, иринотекан и пеметрексед. Как правило, дополнительный химиотерапевтический агент представляет собой нуклеозидный аналог, такой как гемцитабин. Дополнительное лечение или агент могут быть применены или введены отдельно или вместе с антигиалуроновым агентом, таким как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент (например, гиалуронидаза), и/или с комбинированной терапией направленным на опухоль таксаном (например, связанным с альбумином таксаном). Дополнительный агент в комбинации можно вводить отдельно, или он может быть предусмотрен в одной композиции. Если дополнительный агент предусмотрен и вводится отдельно, он может быть введен одновременно или почти одновременно, последовательно или прерывисто в любом порядке с комбинированной терапией антигиалуроновым агентом и/или связанным с альбумином таксаном. Как правило, чтобы осуществить увеличенную доставку дополнительного агента, дополнительный агент водят после введения комбинированной терапии антигиалуроновым агентом и/или связанным с альбумином таксаном. Из-за увеличенной доставки и периода полувыведения дополнительного химиотерапевтического агента доза дополнительного агента для введения и/или частота введения может быть уменьшена по сравнению с существующими режимами дозирования. В результате предусмотренная в настоящем документе комбинированная терапия может приводить к снижению побочных эффектов от совместного введения дополнительных терапевтических агентов (например, нуклеозидного аналога, такого как гемцитабин) по сравнению с их введением по отдельности или по сравнению с их введением либо только с антигиалуроновым агентом, например разрушающим гиалуронан ферментом, либо только с направленным на опухоль таксаном.
В следующих разделах описаны примеры антигиалуроновых агентов, в том числе конъюгированных с полимером разрушающих гиалуронан ферментов, направленных на опухоль таксанов, а также другие примеры химиотерапевтических агентов, не имеющие ограничительного характера, для применения в комбинированной терапии, предусмотренной в настоящем документе. Также описаны примеры режимов дозирования и способов лечения стромальных солидных раковых опухолей.
С. Агенты для комбинированной терапии.
В настоящем документе предусмотрена комбинированная (комбинационная) терапия антигиалуроновыми агентами, такими как разрушающими гиалуронан ферментами, и направленным на опухоль таксаном, таким как связанный с альбумином паклитаксел, для применения в лечении рака. В частности, в настоящем документе предусмотрена комбинированная терапия конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом, например гиалуронидазой, такой как PEGPH20, и направленным на опухоль таксаном, таким как связанный с альбумином паклитаксел, для применения в лечении рака. В частности, предусмотренная в настоящем документе комбинированная терапия используется в лечении любых видов рака, характеризующихся солидными опухолями, являющимися непроницаемыми из-за НА во внеклеточном матриксе. Примеры таких типов рака включают солидные раковые опухоли, включающие, без ограничения, рак поджелудочной железы, рак груди, рак простаты, рак желудка, рак прямой кишки, рак яичников, рак головы и шеи и другие типы рака. Комбинированная терапия может дополнительно включать цитотоксическое химиотерапевтическое лекарство, например, любое цитотоксическое химиотерапевтическое лекарство, активность которого увеличивается (например, из-за увеличенной доставки и/или увеличенного периода полувыведения) за счет одного или обоих агентов, выбранных из антигиалуроновых агентов, в том числе конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента, и/или направленного на опухоль таксана. Например, дополнительный химиотерапевтический агент может представлять собой нуклеозидный аналог, такой как гемцитабин или его производное, который обладает прямой противоопухолевой активностью.
1. Антигиалуроновые агенты.
Комбинированная терапия, в том числе комбинации, способы и их применение, предусмотренные в настоящем документе, включают антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, например конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент. Антигиалуроновый агент представляет собой такой агент, который может быть введен таким образом, что он достигает своей мишени и, в частности, достигает опухолевой клетки, имеющей повышенный уровень околоклеточного НА. Например, антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, можно вводить путем непрерывной инфузии или инъецировать локально, он может быть модифицирован полимером, или модифицирован таким образом, что он является агликозилированным или имеет уменьшенное гликозлирование. В одном из примеров предусмотренные композиции и комбинации содержат разрушающий гиа- 25 031986 луронан фермент, в частности гиалуронидазу, такую как растворимая гиалуронидаза (например), РН20 или укороченная РН20), который был модифицирован путем конъюгации с одной или несколькими полимерными молекулами (полимерами), как правило, для увеличения периода полувыведения разрушающего гиалуронан фермента, например, для обеспечения продолжительных/устойчивых эффектов лечения у субъекта.
Гиалуронан является компонентом внеклеточного матрикса и основным компонентом интерстициального барьера. Катализируя гидролиз гиалуронана, разрушающие гиалуронан ферменты снижают вязкость гиалуронана, тем самым увеличивая проницаемость ткани и увеличивая скорость абсорбции жидкостей, вводимых парентерально. В связи с этим, антигиалуроновые агенты, в том числе разрушающие гиалуронан ферменты, такие как гиалуронидазы, были использованы, например, в качестве усиливающих распространение или диспергирующих агентов в сочетании с другими агентами, лекарствами и белками для повышения их распространения и доставки.
Антигиалуроновые агенты снижают уровень гиалуроновой кислоты (НА; также называемой в настоящем документе гиалуронаном), препятствуя ее синтезу или увеличивая ее разрушение. Например, разрушающие гиалуронан ферменты, такие как гиалуронидазы, воздействуют на гиалуроновую кислоту (НА) и разрушают ее. Лечение агентами, которые разрушают гиалуронан или ингибируют его синтез, такими как разрушающие гиалуронан ферменты, снижает уровень гиалуронана, так что ткань уменьшается в объеме, кровеносные сосуды расширяются, и через участок ткани может протекать больше крови. Примерами таких антигиалуроновых агентов являются агенты, которые ингибируют синтез гиалуронана или разрушают гиалуронан.
а). Агенты, которые ингибируют синтез гиалуронана.
Антигиалуроновые агенты включают агенты, которые ингибируют синтез гиалуронана, такие как агенты, которые ингибируют, снижают или подавляют экспрессию НА-синтазы, ингибиторы синтеза НА и ингибиторы тирозинкиназ.
НА может синтезироваться тремя ферментами, идентифицированными как НА-синтазы, которые являются продуктами трёх родственных генов млекопитающих, обозначаемых has-1, has-2 и has-3. Различные типы клеток экспрессируют различные ферменты HAS, и экспрессия мРНК HAS коррелирует с биосинтезом НА. Известно, что сайленсинг генов HAS в опухолевых клетках ингибирует рост опухоли и метастазирование. Антигиалуроновый агент включает любой агент, который ингибирует, снижает или подавляет экспрессию или уровень НА-синтазы. Такие агенты известны специалистам в данной области или могут быть идентифицированы.
Например, подавление HAS может быть достигнуто путем доставки олигонуклеотидов, которые специфически гибридизуются или иным образом взаимодействуют с одной или несколькими молекулами нуклеиновых кислот, кодирующих HAS. Например, антигиалуроновые агенты, которые ингибируют синтез гиалуронана, включают антисмысловые или смысловые молекулы к гену has. Такое антисмысловое или смысловое ингибирование, как правило, основано на гибридизации олигонуклеотидных цепей или сегментов за счет образования водородных связей, таким образом, что по меньшей мере одна цепь или сегмент расщепляется, деградирует или иным образом теряет функциональность. В других примерах могут быть использованы посттранскрипционный сайленсинг генов (PTGS), РНКи, рибозимы и ДНКзимы. Создание таких конструкций, основанных на последовательностях HAS1 (представлена в SEQ ID NO: 195), HAS2 (представлена в SEQ ID NO: 196) или HAS3 (представлена в SEQ ID NO: 197 или 198), находится в пределах компетенции специалиста в данной области. В уровне техники известно, что последовательность антисмысловой или смысловой молекулы не обязательно должна быть комплементарна на 100% по отношению к её нуклеиновой кислоте-мишени, чтобы такая молекула могла гибридизоваться специфически. Кроме того, олигонуклеотид может гибридизоваться с одним или несколькими сегментами, и при этом промежуточные или смежные сегменты могут не участвовать в гибридизации (например, структура петли или структура шпильки). Как правило, антисмысловые или смысловые молекулы имеют по меньшей мере 70% комплементарность последовательности с целевой областью в нуклеиновой кислоте-мишени, например от 75 до 100% комплементарности, например 75, 80, 85, 90, 95 или 100%. Примеры смысловых и антисмысловых молекул известны в уровне техники (см., например, Chao et al. (2005) J. Biol. Chem., 280:27513-27522; Simpson et al. (2002) J. Biol. Chem., 277:10050-10057; Simpson et al. (2002) Am. J Path., 161:849; Nishida et al. (1999) J. Biol. Chem., 274:21893-21899; Edward et al. (2010) British J Dermatology, 162:1224-1232; Udabage et al. (2005) Cancer Res., 65:6139; и опубликованная патентная заявка США № US 20070286856).
Другим примером антигиалуронового агента, который представляет собой ингибитор синтеза НА, является 4-метилумбеллиферон (4-MU; 7-гидрокси-4-метилкумарин) или его производные. 4-MU действует путем уменьшения пула предшественника UDP-GlcUA, который необходим для синтеза НА. Например, в клетках млекопитающих НА синтезируется под действием HAS с использованием предшественников UDP-глюкуроновой кислоты (UGA) и UDP-N-ацетил-D-глюкозамина. 4-MU препятствует процессу образования UGA, тем самым истощая внутриклеточный пул UGA и приводя к ингибированию синтеза НА. 4-MU, как известно, обладает противоопухолевой активностью (см., например, Lokeshwar et al. (2010) Cancer Res., 70:2613-23; Nakazawa et al. (2006) Cancer Chemother. Pharmacol, 57:165-170; Moro- 26 031986 hashi et al. (2006) Biochem. Biophys. Res. Comm., 345-1454-1459). Пероральное введение 4-MU в количестве 600 мг/кг/сут снижает метастазирование на 64% в модели меланомы В16 (Yoshihara et al. (2005)
FEBS Lett., 579:2722-6). Структура 4-MU представлена ниже. Кроме того, производные 4-MU, в частности 6,7-дигидрокси-4-метилкумарин и 5,7-дигидрокси-4-метилкумарин, обладают противораковой активностью (см., например, Morohashi et al. (2006) Biochem. Biophys. Res. Comm., 345-1454-1459).
4-Метилумбеллиферон (4-MU; C10H8O3)
CH3
Другие примеры антигиалуроновых агентов представляют собой ингибиторы тирозинкиназы, такие как лефлуномид (Arava), генистеин или эрбстатин. Лефлуномид также является ингибитором синтеза пиримидина. Лефлуномид является известным препаратом для лечения ревматоидного артрита (RA), а также эффективен при лечении отторжения как аллотрансплантатов, так и ксенотрансплантатов. НА, как известно, прямо или косвенно способствует развитию RA (см., например, Stuhlmeier (2005) J. Immunol., 174:7376-7382). Ингибиторы тирозинкиназы подавляют экспрессию генов HAS1 (Stuhlmeier 2005).
b). Разрушающие гиалуронан ферменты и конъюгированные с полимером разрушающие гиалуронан ферменты.
Антигиалуроновые агенты включают разрушающие гиалуронан ферменты. Разрушающие гиалуронан ферменты, такие как гиалуронидазы, представляют собой семейство ферментов, которые разрушают гиалуронан, являющийся важным компонентом внеклеточного матрикса и основным компонентом интерстициального барьера. Разрушающие гиалуронан ферменты разрушают гиалуронан, расщепляя полимеры гиалуронана, состоящие из повторяющихся дисахаридных единиц D-глюкуроновой кислоты (GlcA) и Х-ацетил-О-глюкозамина (GlcNAc), соединенных друг с другом чередующимися β-1^4 и β-1^3 гликозидными связями. Цепи гиалуронана могут достигать в длину примерно 25000 дисахаридных повторов или больше, и полимеры гиалуронана могут достигать размера примерно от 5000 до 20000000 Да in vivo. Катализируя гидролиз гиалуронана, основного компонента интерстициального барьера, разрушающие гиалуронан ферменты снижают вязкость гиалуронана, тем самым увеличивая проницаемость ткани.
Соответственно, разрушающие гиалуронан ферменты для комбинаций, применений и способов, предусмотренных в настоящем документе, включают любой фермент, способный катализировать расщепление дисахаридной цепи или полимера гиалуронана. В некоторых примерах разрушающий гиалуронан фермент расщепляет β-1^4 гликозидную связь в цепи или полимере гиалуронана. В других примерах разрушающий гиалуронан фермент катализирует расщепление β-1^3 гликозидной связи в цепи или полимере гиалуронана.
Разрушающие гиалуронан ферменты включают гиалуронидазы, а также другие ферменты, такие как хондроитиназы и лиазы, которые могут расщеплять гиалуронан. Более того, разрушающие гиалуронан ферменты также включают их растворимые формы, которые могут экспрессироваться или секретироваться из клеток. Как описано ниже, разрушающие гиалуронан ферменты существуют в связанной с мембраной форме или растворимой форме, которая секретируется из клеток. Для целей настоящего документа, растворимые разрушающие гиалуронан ферменты предусмотрены для применения в комбинациях, способах и применениях в настоящем документе. Таким образом, если разрушающие гиалуронан ферменты включают гликозилфосфатидилинозитольный (GPI) якорь и/или иным образом заякорены в мембране или являются нерастворимыми, такие разрушающие гиалуронан ферменты могут быть предусмотрены в растворимой форме путем укорочения или удаления GPI якоря, чтобы получить секретируемый или растворимый фермент. Таким образом, разрушающие гиалуронан ферменты включают укороченные варианты, например варианты, укороченные с целью удаления всего или части GPI якоря. Примерами таких растворимых гиалуронидаз являются растворимые гиалуронидазы РН20, такие как любые растворимые гиалуронидазы РН20, приведенные в патенте США № 7767429; опубликованной заявке США № US 20040268425 или US 20100143457.
Предусмотренные в настоящем документе разрушающие гиалуронан ферменты также включают варианты любого разрушающего гиалуронан фермента, такого как любая гиалуронидаза или растворимая гиалуронидаза, например РН20, которые известны специалисту в данной области техники или описаны в настоящем документе. Например, разрушающие гиалуронан ферменты могут иметь одно или несколько изменений в их первичной последовательности, таких как аминокислотные замены, добавления и/или делеции. Вариант разрушающего гиалуронан фермента обычно имеет по меньшей мере или примерно 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или большую идентичность последовательности по сравнению с разрушающим гиалуронан ферментом, не имеющим изменений. Любое изменение может быть включено в разрушающий гиалуронан фермент для целей настоящего документа, при условии, что фермент сохраняет гиалуронидазную активность, такую как по меньшей мере или примерно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95% или больше от активности разрушающего гиалуро- 27 031986 нан фермента, не имеющего изменений (как измерено с помощью анализов in vitro и/или in vivo, хорошо известных в данной области техники и описанных в настоящем документе). Например, примерами разрушающих гиалуронан ферментов, в том числе тех разрушающих гиалуронан ферментов, которые могут быть конъюгированы с полимером, являются любые разрушающие гиалуронан ферменты, приведенные в любой из SEQ ID NOS: 2, 4-9, 47, 48, 150-170, 183-189 и 199-210, или любые разрушающие гиалуронан ферменты, которые имеют по меньшей мере или примерно 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или большую идентичность последовательности с любой из SEQ ID NOS: 2, 4-9, 47, 48, 150-170, 183-189 и 199-210.
Различные формы разрушающих гиалуронан ферментов, в том числе гиалуронидаз, были получены и одобрены для терапевтического применения для различных субъектов, в том числе для человека. Например, препараты гиалуронидазы, полученные из животных, включают Vitrase® (ISTA Pharmaceuticals), очищенную овечью тестикулярную гиалуронидазу, Amphadase® (Amphastar Pharmaceuticals), бычью тестикулярную гиалуронидазу и Hydase™ (Prima Pharm Inc.), бычью тестикулярную гиалуронидазу. Hylenex® (Halozyme Therapeutics) представляет собой человеческую рекомбинантную гиалуронидазу, полученную путем генной инженерии в клетках яичника китайского хомячка (СНО), содержащих нуклеиновую кислоту, кодирующую растворимые формы РН20, называемые rHuPH20 (см., например, опубликованную заявку США № US 20040268425; патент США № 7767429). Понятно, что любой препарат гиалуронидазы может быть использован в предусмотренных в настоящем документе комбинациях, способах и применениях, см., например, патенты США №№ 2488564, 2488565, 2676139, 2795529, 2806815, 2808362, 5747027 и 5827721 и международную опубликованную заявку РСТ № WO 2005/118799; опубликованную заявку США № US 20040268425; патент США № 7767429; или любые препараты гиалуронидазы, предусмотренные в настоящем документе.
Не имеющее ограничительного характера описание примеров разрушающих гиалуронан ферментов, таких как ферменты гиалуронидазы или растворимые ферменты гиалуронидазы, например РН20, для применения в предусмотренных в настоящем документе комбинациях и способах описаны ниже. Обычно такие разрушающие гиалуронан ферменты включают разрушающие гиалуронан ферменты, которые конъюгированы с полимером.
i). Гиалуронидазы.
Гиалуронидазы входят в большое семейство разрушающих гиалуронан ферментов. Есть три основных класса гиалуронидаз: гиалуронидазы млекопитающих, бактериальные гиалуронидазы и гиалуронидазы пиявок, других паразитов и ракообразных. Эти ферменты могут быть использованы в совместных композициях, представленных здесь. Известны другие гиалуронидазы, такие как гиалуронидаза складчатокрылой осы (SEQ ID NO: 12 и 13), медоносной пчелы (SEQ ID NO: 14), белоголового шершня (SEQ ID NO: 15) и бумажной осы (SEQ ID NO: 16). Любые из этих ферментов могут быть использованы в композициях, комбинациях и способах, предусмотренных в настоящем документе.
а). Гиалуронидазы млекопитающих.
Гиалуронидазы млекопитающих (ЕС 3.2.1.35) являются эндо-З-И-ацетилгексозаминидазами, которые гидролизуют β-1^4 гликозидные связи гиалуронана с образованием олигосахаридов различной длины, таких как тетрасахариды и гексасахариды. Эти ферменты имеют как гидролитическую, так и трансгликозидазную активность и могут разрушать гиалуронан и хондроитинсульфаты (CS), обычно C4S и C6-S. Гиалуронидазы этого типа включают, но не ограничиваются ими, гиалуронидазы коров (бычья гиалуронидаза) (SEQ ID NO: 10, 11, 64, 203 и 204, а также молекулы нуклеиновых кислот, приведенные в SEQ ID NOS:190-192), овец (Ovis aries) (SEQ ID NO: 26, 27, 63 и 65, a также молекулы нуклеиновых кислот, приведенные в SEQ ID NOS: 66 и 193-194), мыши (SEQ ID NO: 17-19, 32, 205), свиньи (SEQ ID NO: 20-21), крысы (SEQ ID NO: 22-24, 31, 206), кролика (SEQ ID NO: 25, 207), орангутана (SEQ ID NO: 28), яванского макака (SEQ ID NO: 29, 202), морской свинки (SEQ ID NO: 30, 208), шимпанзе (SEQ ID NO: 101, 199, 200), макака-резус (SEQ ID NO: 102, 201), лисы (SEQ ID NO: 209 и 210) и гиалуронидазы человека (SEQ ID NOS: 1-2, 36-39). Упомянутые выше гиалуронидазы включают гиалуронидазы РН20. Кроме того, гиалуронидаза ВН55 также относится к этому типу и описана в патентах США 5747027 и 5827721. В качестве примера гиалуронидазы в композициях, комбинациях и способах в настоящем документе предусмотрены растворимые гиалуронидазы.
Гиалуронидазы млекопитающих могут быть далее подразделены на гиалуронидазы, которые являются активными в нейтральных условиях, которые преимущественно представляют собой гиалуронидазы из экстрактов яичек, и гиалуронидазы, которые являются активными в кислых условиях, которые преимущественно присутствуют в таких органах, как печень. Примеры активных в нейтральной среде гиалуронидаз включают РН20, включая, но не ограничиваясь этим, РН20, полученную из различных видов, такую как овечью (SEQ ID NO: 27, 63 и 65), бычью (SEQ ID NO: 11 и 64) и человеческую (SEQ ID NO: 1) РН20. Человеческая РН20 (также известная как SPAM1 или поверхностный белок сперматозоидов РН20), как правило, прикреплена к мембране через гликозилфосфатидилинозитольный якорь (GPI). В естественных условиях это необходимо для взаимодействия сперматозоида и яйцеклетки и проникновения сперматозоидов через слой клеток кумулюса посредством расщепления гиалуроновой кислоты.
- 28 031986
Кроме человеческой РН20 (также называемой SPAM1), в геноме человека было идентифицировано пять гиалуронидаза-подобных генов, HYAL1, HYAL2, HYAL3, HYAL4 и HYALP1. HYALP1 является псевдогеном, а для HYAL3 (полипептид-предшественник представлен в SEQ ID NO: 38) не была показана ферментативная активность к любым известным субстратам. HYAL4 (полипептид-предшественник представлен в SEQ ID NO: 39) является хондроитиназой и проявляет низкую активность по отношению к гиалуроновой кислоте. HYAL1 (полипептид-предшественник представлен в SEQ ID NO: 36) является типичным активным в кислой среде ферментом, и РН20 (полипептид-предшественник представлен в SEQ ID NO: 1) является типичным активным в нейтральной среде ферментом. Активные в кислой среде гиалуронидазы, такие как HYAL1 и HYAL2 (полипептид-предшественник представлен в SEQ ID NO:37) обычно не имеют каталитической активности при нейтральном рН (т.е. рН 7). Например, HYAL1 имеет низкую каталитическую активность in vitro при рН выше 4,5 (Frost et al. (1997) Anal. Biochem. 251:263269). HYAL2 является активным в кислой среде ферментом с очень низкой удельной активностью in vitro. Гиалуронидаза-подобные ферменты также могут быть разделены на ферменты, которые обычно прикреплены к плазматической мембране через гликозилфосфатидилинозитольный якорь (GPI), например, человеческие HYAL2 и РН20 (Danilkovitch-Miagkova, et al. (2003) Proc Natl Acad Sci USA 100(8):4580-5), и ферменты, которые, как правило, растворимы, такие как человеческая HYAL1 (Frost et al. (1997) Biochem Biophys Res Commun. 236(1):10-5).
PH20.
PH20, как и другие гиалуронидазы млекопитающих, является эндо-З-Л-ацетилгексозаминидазой, которая гидролизует гиалуроновую кислоту по β 1 —>4 гликозидной связи на олигосахариды различной длины, такие как тетрасахариды и гексасахариды. Этот фермент обладает гидролитической и трансгликозидазной активностями и может расщеплять гиалуроновую кислоту и хондроитинсульфаты, такие как C4-S и C6-S. РН20 в естественных условиях участвует в адгезии сперматозоида и яйцеклетки и обеспечивает проникновение сперматозоидов через слой клеток кумулюса за счёт расщепления гиалуроновой кислоты. РН20 расположена на поверхности сперматозоидов и в акросоме (производной лизосомы), где она связана с внутренней акросомной мембраной. РН20 плазматической мембраны имеют гиалуронидазную активность только при нейтральном рН, в то время как РН20 внутренней акросомной мембраны обладает активностью и в нейтральной, и в кислой среде. В дополнение к активности гиалуронидазы РН20 также, по-видимому, является рецептором для НА-индуцированного клеточного сигналлинга и рецептором для зоны пеллюцида, окружающей яйцеклетку.
Примеры белков РН20, включая белки-предшественники и зрелые формы, включают, но не ограничиваются ими, человеческую РН20 (полипептид-предшественник представлен в SEQ ID NO: 1, зрелый полипептид представлен в SEQ ID NO: 2), РН20 шимпанзе (SEQ ID NO: 101, 199, 200), PH20 макакарезус (SEQ ID NO: 102, 201), бычью РН20 (SEQ ID NO: 11 и 64, 203, 204), PH20 кролика (SEQ ID NO: 25, 207), овечью РН20 (SEQ ID NO: 27, 63 и 65), PH20 яванского макака (SEQ ID NO: 29, 202), PH20 морской свинки (SEQ ID NO: 30, 208), PH20 крысы (SEQ ID NO: 31, 206), PH20 мыши (SEQ ID NO: 32, 205) и лисы (SEQ ID NO: 209 и 210).
Бычья РН20 является 553-аминокислотным полипептидом-предшественником (SEQ ID NO: 11). Выравнивание бычьего и человеческого белка РН20 показывает только небольшую степень гомологии, с множеством разрывов, присутствующих от аминокислоты 470 до соответствующего карбоксиконцевого остатка из-за отсутствия GPI якоря в бычьем полипептиде (см., например, Frost GI (2007) Expert Opin. Drug. Deliv. 4: 427-440). На самом деле, наличие GPI якоря не предсказывают для РН20 многих других видов, кроме человека. Таким образом, полипептиды РН20, полученные из овец и быков, естественно существуют как растворимые формы. Хотя бычья РН20 существует в виде очень слабо прикрепленного к плазматической мембране белка, она не закреплена с помощью чувствительного к фосфолипазе якоря (Lalancette et al. (2001) Biol Reprod. 65(2):628-36). Эта уникальная особенность бычьей гиалуронидазы позволила использовать растворимую бычью гиалуронидазу яичек в виде экстракта для клинического применения (Wydase®, Hyalase®).
мРНК-транскрипт человеческой РН20 обычно транслируется в 509-аминокислотный полипептидпредшественник (SEQ ID NO: 1), содержащий сигнальную последовательность из 35 аминокислот на Nконце (позиции аминокислотных остатков 1-35), и 19-аминокислотную сигнальную последовательность присоединения гликозилфосфатидилинозитольного якоря (GPI) на С-конце (позиции аминокислотных остатков 491-509). Зрелая РН20, таким образом, является полипептидом из 474 аминокислот; представленным в SEQ ID NO: 2. После транспорта полипептида-предшественника в ЭР и удаления сигнального пептида С-концевой сигнальный заякоривающий пептид GPI расщепляется для облегчения ковалентного прикрепления GPI-якоря к вновь образованной С-концевой аминокислоте в положении аминокислоты, соответствующий положению 490 полипептида-предшественника, приведенного в SEQ ID NO: 1. Таким образом, образуется 474-аминокислотный GPI-заякоренный зрелый полипептид с аминокислотной последовательностью, приведенной в SEQ ID NO: 2.
Человеческая РН20 проявляет гиалуронидазную активность в нейтральной и кислой среде. В одном аспекте РН20 является типичной активной в нейтральной среде гиалуронидазой, которая закреплена на
- 29 031986 плазматической мембране через GPI. В другом аспекте РН20 экспрессируется на внутренней мембране акросомы, где она проявляет активность как в нейтральной, так и в кислой среде. Похоже, что РН20 содержит два каталитических центра на отдельных участках полипептида: участки пептид 1 и пептид 3 (Cherr et al., (2001) Matrix Biology 20:515-525). Участок пептида 1 PH20, который соответствует положениям аминокислот 107-137 зрелого полипептида, приведенного в SEQ ID NO: 2, и позиции 142-172 полипептида-предшественника, приведенного в SEQ ID NO: 1, являются необходимыми для активности фермента при нейтральном рН. Аминокислоты в положениях 111 и 113 (соответствующие положениям в зрелом полипептиде РН20, представленном в SEQ ID NO: 2) в пределах этого участка должны быть важными для активности, так как мутагенез заменой аминокислотного остатка приводит к образованию полипептида РН20 с 3% гиалуронидазной активностью или недетектируемой гиалуронидазной активностью соответственно, по сравнению с полипептидом РН20 дикого типа (Arming et al., (1997) Eur. J. Biochem. 247:810-814).
Участок пептида 3, который соответствует положениям аминокислот 242-262 зрелого полипептида, приведенного в SEQ ID NO: 2, и положениям 277-297 полипептида-предшественника, приведенного в SEQ ID NO: 1, по-видимому, важен для активности фермента при кислых значениях рН. В пределах этого участка аминокислоты в положениях 249 и 252 зрелого полипептида РН20, по-видимому, важны для активности, так как мутагенез одного из двух аминокислотных остатков приводит к образованию полипептида, по существу, лишенного активности (Arming et al., (1997) Eur. J. Biochem. 247:810-814).
В дополнение к каталитическим центрам, РН20 также содержит гиалуронансвязывающий сайт. Экспериментальные данные показывают, что этот участок расположен в участке пептида 2, что соответствует положениям аминокислот 205-235 полипептида-предшественника, приведенного в SEQ ID NO: 1, и положениям 170-200 зрелого полипептида, приведенного в SEQ ID NO: 2. Этот участок высоко консервативен среди гиалуронидаз и похож на гепаринсвязывающий мотив. Мутация остатка аргинина в положении 176 (соответствующем зрелому полипептиду РН20, приведенному в SEQ ID NO: 2) на глицин приводит к полипептиду с активностью гиалуронидазы лишь около 1 % от активности полипептида дикого типа (Arming et al., (1997) Eur. J. Biochem. 247:810-814).
Существует семь потенциальных сайтов гликозилирования, включая сайты N- и Огликозилирования, в человеческой РН20 в позициях N82, N166, N235, N254, N368, N393 и S490 полипептида, приведенного в SEQ ID NO: 1. Поскольку аминокислоты с 36 по 464 из SEQ ID NO: 1, повидимому, содержат активный минимальный домен человеческой гиалуронидазы РН20, сайт Nгликозилирования S490 не требуется для активности гиалуронидазы. В человеческой РН20 есть шесть дисульфидных мостиков. Две дисульфидные связи между остатками цистеина С60 и С351 и между остатками цистеина С224 и С238 полипептида показаны в SEQ ID NO: 1 (соответствуют остаткам С25 и С316, С189 и С203 зрелого полипептида, приведенного в SEQ ID NO: 2 соответственно). Еще четыре дисульфидные связи образуются между остатками цистеина С376 и С387; между остатками цистеина С381 и С435; между остатками цистеина С437 и С443 и между остатками цистеина С458 и С464 полипептида, представленного в SEQ ID NO: 1 (соответствуют остаткам С341 и С352; С346 и С400; С402 и С408; С423 и С429 зрелого полипептида, приведенного в SEQ ID NO: 2 соответственно).
b). Бактериальные гиалуронидазы.
Бактериальные гиалуронидазы (ЕС 4.2.2.1 или ЕС 4.2.99.1) расщепляют гиалуронан и, в различной степени, хондроитинсульфаты и дерматансульфаты. Гиалуронанлиазы, выделенные из бактерий, отличаются по своей активности от гиалуронидаз (от гиалуронидаз из других источников, например гиалуронглюкозаминидаз, ЕС 3.2.1.35). Это эндо-З-Ы-ацетилгексозаминидазы, которые катализируют реакции элиминирования, а не гидролиз З1^4-гликозидной связи, между N-ацетил-β-D-глюкозамином и остатками D-глюкуроновой кислоты в гиалуронане с получением 3-(4-дезокси-З-О-глюк-4-енуролозил)-Иацетил-Э-глюкозамин тетра- и гексасахаридов и дисахаридных конечных продуктов. В результате реакции образуются олигосахариды с ненасыщенными остатками аскорбиновой кислоты на их невосстанавливающих концах.
Примеры гиалуронидаз бактерий для применениях в композициях, комбинациях и способах, представленных в настоящем документе, включают, но не ограничиваются ими, разрушающие гиалуронан ферменты из микроорганизмов, в том числе штаммов Arthrobacter, Bdellovibrio, Clostridium, Micrococcus, Streptococcus, Peptococcus, Propionibacterium, Bacteroides и Streptomyces. Конкретные примеры таких ферментов включают, но не ограничиваются ими, ферменты Arthrobacter sp. (штамм FB24) (SEQ ID NO: 67), Bdellovibrio bacteriovorus (SEQ ID NO: 68), Propionibacterium acnes (SEQ ID NO: 69), Streptococcus agalactiae ((SEQ ID NO: 70); 18RS21 (SEQ ID NO: 71); серотип Ia (SEQ ID NO: 72); и серотип III (SEQ ID NO: 73)), Staphylococcus aureus (strain COL (SEQ ID NO: 74); штамм MRSA252 (SEQ ID NOS: 75 и 76); штамм MSSA476 (SEQ ID NO: 77); штамм NCTC 8325 (SEQ ID NO: 78); штамм bovine RF122 (SEQ ID NOS: 79 и 80); и штамм USA300 (SEQ ID NO: 81)), Streptococcus pneumoniae ((SEQ ID NO: 82); штамм АТСС ВАА-255/Р,6 (SEQ ID NO: 83); и серотип 2, штамм D39/NCTC 7466 (SEQ ID NO: 84)), Streptococcus pyogenes (серотип M1 (SEQ ID NO: 85); серотип М2, штамм MGAS10270 (SEQ ID NO: 86); серотип М4, штамм MGAS10750 (SEQ ID NO: 87); серотип M6 (SEQ ID NO: 88); серотип М12, штамм MGAS2096
- 30 031986 (SEQ ID NOS: 89 и 90); серотип M12, штамм MGAS9429 (SEQ ID NO: 91); и серотип М28 (SEQ ID NO:
92)); Streptococcus suis (SEQ ID NOS: 93-95); Vibrio fischeri (штамм АТСС 700601/ES114 (SEQ ID NO:
96)) и гиалуронидазу Streptomyces hyaluronolyticus, которая специфична к гиалуроновой кислоте и не расщепляет хондроитин или хондроитинсульфат (Ohya, Т. and Kaneko, Y. (1970) Biochim. Biophys. Acta
198:607).
с). Гиалуронидазы пиявок, других паразитов и ракообразных.
Гиалуронидазы пиявок, других паразитов и ракообразных (ЕС 3.2.1.36) являются эндо-βглюкуронидазами, которые дают тетра- и гексасахариды в качестве конечных продуктов. Эти ферменты катализируют гидролиз 1^3-связей между ф-Э-глюкуронатом и №ацетил-Э-глюкозамином в гиалуронате. Примеры гиалуронидаз пиявок включают, но не ограничиваются ими, гиалуронидазы Hirudinidae (например, Hirudo medicinalis), Erpobdellidae (например, Nephelopsis obscura и Erpobdella punctata), Glossiphoniidae (например, Desserobdella picta, Helobdella stagnalis, Glossiphonia complanata, Placobdella ornata и Theromyzon sp.) и Haemopidae (Haemopis marmorata) (Hovingh et al. (1999) Comp Biochem Physiol В Biochem Mol Biol. 124(3):319-26). Примером гиалуронидазы бактерий, имеющей тот же механизм действия, что и гиалуронидаза пиявок, является фермент из цианобактерии Synechococcus sp. (штамм RCC307, SEQ ID NO:97).
ii) . Другие разрушающие гиалуронан ферменты.
В дополнение к семейству гиалуронидаз в предусмотренных здесь композициях, комбинациях и способах могут быть использованы другие разрушающие гиалуронан ферменты. Например, могут быть использованы ферменты, обладающие способностью расщеплять гиалуроновую кислоту, такие как отдельные хондроитиназы и лиазы. Примеры хондроитиназ, которые могут расщеплять гиалуроновую кислоту, включают, но не ограничиваются ими, хондроитин АВС-лиазы (также известные как хондроитиназы ABC), хондроитин АС-лиазы (также известные как хондроитинсульфат лиазы или хондроитинсульфат элиминазы) и хондроитин С-лиазы. Способы получения и очистки таких ферментов для применения в предусмотренных здесь композициях, комбинациях и способах известны в данной области (например, патент США № 6054569; Yamagata, et al. (1968) J. Biol. Chem. 243(7): 1523-1535; Yang et al. (1985) J. Biol. Chem. 160(30):1849-1857).
Хондроитин АВС-лиазы включают два фермента, хондроитинсульфат АВС-эндолиазу (ЕС 4.2.2.20) и хондроитинсульфат АВС-экзолиазу (ЕС 4.2.2.21) (Hamai et al. (1997) J Biol Chem. 272(14):9123-30), которые разрушают разнообразные гликозаминогликаны типа хондроитинсульфата и дерматансульфата. Хондроитинсульфат, хондроитинсульфат протеогликан и дерматансульфат являются предпочтительными субстратами для хондроитинсульфат АВС-эндолиазы, но фермент также может оказывать действие и на гиалуроновую кислоту с более низкой скоростью. Хондроитинсульфат АВС-эндолиаза разрушает различные гликозаминогликаны типа хондроитинсульфата и дерматансульфата, образуя смеси А4ненасыщенных олигосахаридов различных размеров, которые в конечном счете разрушаются до А4ненасыщенных тетра- и дисахаридов. Хондроитинсульфат АВС-экзолиаза имеет такую же субстратную специфичность, но удаляет дисахаридные остатки с невосстанавливающих концов полимерных хондроитинсульфатов и их олигосахаридных фрагментов, производимых хондроитин сульфат АВС-эндолиазой (Hamai, A. et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:9123-9130). Примеры хондроитинсульфат АВС-эндолиаз и хондроитинсульфат ABC-экзолиаз включают, но не ограничиваются ими, ферменты из Proteus vulgaris и Flavobacterium heparinum (хондроитинсульфат АВС-эндолиаза Proteus vulgaris представлена в SEQ ID NO: 98 (Sato et al. (1994) Appl. Microbiol. Biotechnol. 41(1):39-46).
Хондроитин АС-лиаза (ЕС 4.2.2.5) активна в отношении хондроитинсульфатов А и С, хондроитина и гиалуроновой кислоты, но неактивна в отношении дерматансульфата (хондроитинсульфат В). Примеры ферментов хондроитиназ АС бактерий включают, но не ограничиваются ими, ферменты Flavobacterium heparinum и Victivallis vadensis, представленные в SEQ ID NO: 99 и 100 соответственно, и Arthrobacter aurescens (Tkalec et al. (2000) Applied and Environmental Microbiology 66(1):29-35; Ernst et al. (1995) Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology 30(5):387-444).
Хондроитиназа С расщепляет хондроитин сульфат С с образованием тетрасахарида и ненасыщенного 6-сульфатированного дисахарида (дельта Di-6S). Она также расщепляет гиалуроновую кислоту с образованием ненасыщенного несульфатированного дисахарида (дельта Di-OS). Примеры ферментов хондроитиназ С бактерий включают, но не ограничиваются ими, ферменты из Streptococcus и Flavobactenum (Hibi et al. (1989) FEMS-Microbiol-Lett. 48(2): 121-4; Michelacci et al. (1976) J. Biol. Chem. 251:1154-8; Tsuda et al. (1999) Eur. J. Biochem. 262:127-133).
iii) . Растворимые разрушающие гиалуронан ферменты.
Для использования в композициях, комбинациях и способах согласно настоящему документу предусмотрены растворимые разрушающие гиалуронан ферменты, включая растворимые гиалуронидазы. Растворимые разрушающие гиалуронан ферменты включают любые разрушающие гиалуронан ферменты, которые при экспрессии (например, в клетках СНО) секретируются и существуют в растворимой форме. Такие ферменты включают, но не ограничиваются ими, растворимые гиалуронидазы, включая не человеческие растворимые гиалуронидазы, включая не человеческие растворимые гиалуронидазы жи- 31 031986 вотного происхождения, растворимые гиалуронидазы бактерий и гиалуронидазы человека, Hyall, бычью РН20 или овечью РН20, а также их аллельные варианты и другие варианты. Например, растворимые разрушающие гиалуронан ферменты включают любые разрушающие гиалуронан ферменты, которые были модифицированы, чтобы быть растворимыми. Например, разрушающие гиалуронан ферменты, которые содержат GPI якорь, могут быть сделаны растворимыми путем укорочения или удаления всего GPI якоря или его части. В одном примере человеческая гиалуронидаза РН20, которая обычно заякорена в мембране с помощью GPI, может быть сделана растворимой путем укорочения и удаления всего или части GPIякоря на С-конце.
Растворимые разрушающие гиалуронан ферменты также включают активные в нейтральной среде и активные в кислой среде гиалуронидазы. В зависимости от таких факторов как, например, желаемый уровень активности фермента после введения и/или место введения для применения могут быть выбраны активные в нейтральной среде и активные в кислой среде гиалуронидазы. В конкретном варианте разрушающий гиалуронан фермент для применения в композициях, комбинациях и способах согласно настоящему документу представляет собой растворимую активную в нейтральной среде гиалуронидазу.
Примеры растворимой гиалуронидазы включают РН20 из любых видов, такие как любая из представленных в SEQ ID NO: 1, 2, 11, 25, 27, 29-32, 63-65, 101-102 и 199-210. Такие растворимые формы включают их укороченные формы, в которых отсутствует весь С-концевой GPI-якорь или его часть, при условии, что гиалуронидаза растворима (секретируется при экспрессии) и сохраняет гиалуронидазную активность. Такие формы, как правило, представляют собой зрелые формы, у которых при экспрессии из клетки отсутствует сигнальный пептид. Также растворимые гиалуронидазы включают растворимые формы вариантов любых РН20 из любых видов, приведенных в SEQ ID NO: 1, 2, 11, 25, 27, 29-32, 63-65, 101-102 и 199-210, или их укороченные формы, которые проявляют гиалуронидазную активность. Варианты включают полипептиды, имеющие 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или большую степень идентичности с любой из последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 11, 25, 27, 29-32, 63-65, 101-102 и 199-210, их зрелые (например, у которых отсутствует сигнальная последовательность) или укороченные формы. Варианты аминокислот включают консервативные и не консервативные мутации. Понятно, что остатки, которые важны или необходимы для активности гиалуронидазы, такие как любой из остатков, описанных выше или известных специалисту в данной области, как правило, инвариантны и не могут быть изменены. К ним относятся, например, остатки активного центра. Так, например, аминокислотные остатки 111, 113 и 176 (что соответствует остаткам в зрелом полипептиде РН20, представленном в SEQ ID NO: 2) человеческого полипептида РН20 или его растворимой формы, как правило, инвариантны и не заменяются. Другие остатки, которые обеспечивают гликозилирование и образование дисульфидных связей, необходимых для правильного фолдинга, также могут быть инвариантными.
В некоторых случаях, растворимый разрушающий гиалуронан фермент в норме является заякоренным через GPI (как, например, человеческий РН20) и становится растворимым при укорочении с Сконца. Такое укорочение может удалить всю сигнальную последовательность для заякоривания через GPI или может удалить только часть сигнальной последовательности для заякоривания через GPI. Полученный полипептид, однако, является растворимым. В случаях, когда растворимый разрушающий гиалуронан фермент сохраняет часть сигнальной последовательности для заякоривания через GPI, могут быть сохранены 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или более аминокислотных остатков в сигнальной последовательности присоединения GPI-якоря, при условии, что полипептид является растворимым. Полипептиды, содержащие одну или несколько аминокислот из якоря GPI, называются удлинёнными растворимыми разрушающими гиалуронан ферментами. Используя способы, хорошо известные в данной области, специалист в данной области может определить, является ли полипептид GPI-заякоренным. Такие способы включают, но не ограничиваются таковыми, применение известных алгоритмов для предсказания наличия и расположения сигнальной последовательности присоединения GPI-якоря и ω-сайта, а также выполнение анализа растворимости до и после расщепления фосфатидилинозитола специфической фосфолипазой С (PI-PLC) или D (PI-PLD).
Удлинённые растворимые разрушающие гиалуронан ферменты могут быть получены путем укорочения с С-конца любого исходного GPI-заякоренного разрушающего гиалуронан фермента таким образом, чтобы полученный полипептид являлся растворимым и содержал один или несколько аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения GPI-якоря (см., например, опубликованную патентную заявку США № US 20100143457). Примеры удлинённых растворимых разрушающих гиалуронан ферментов, укороченных с С-конца, но с сохранившейся частью сигнальной последовательности присоединения якоря GPI, включают, но не ограничиваются таковыми, удлинённые растворимые полипептиды РН20 (esPH20) приматов, такие как, например, полипептиды esPH20 человека и шимпанзе. Например, полипептиды esPH20 могут быть получены путём укорочения с С-конца любого из зрелых полипептидов или полипептидов-предшественников, предусмотренных в SEQ ID NO: 1, 2, 50, 51 или 101, или других вариантов полипептидов, в том числе их активного фрагмента, в результате чего полипептид становится растворимым и сохраняет один или более аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения GPI-якоря. Варианты включают полипептиды, имеющие 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95% или большую идентичность последовательности с любой из последовательностей
- 32 031986
SEQ ID NO: 1, 2, 50, 51 или 101, которые сохраняют гиалуронидазную активность. Полипептиды esPH20, предусмотренные в настоящем документе, могут быть укорочены с С-конца на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более аминокислот по сравнению с полипептидом дикого типа, таким как полипептид с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 1, 2, 50, 51 или 101, при условии, что полученный полипептид esPH20 становится растворимым и сохраняет один или более аминокислотных остатков из сигнальной последовательности присоединения GPI-якоря.
Как правило, для применения в композициях, комбинациях и способах, предусмотренных в данном описании, используется растворимый человеческий разрушающий гиалуронан фермент, такой как растворимый человеческий РН20. Несмотря на то, что могут быть использованы разрушающие гиалуронан ферменты, такие как РН20, других животных, такие препараты являются потенциально иммуногенными, так как они содержат белки животных. Например, значительная часть пациентов демонстрирует первичную сенсибилизацию вторично по отношению к потребляемым продуктам питания, и так как они содержат белки животных, то все пациенты имеют риск последующей сенсибилизации. Таким образом, препараты не человеческого происхождения не могут быть пригодными для длительного применения. Если предпочтительным вариантом являются препараты не человеческого происхождения, то предполагается, что могут быть получены полипептиды с пониженной иммуногенностью. Такие модификации находятся в пределах уровня знаний специалиста в данной области и могут включать в себя, например, удаление и/или замену одного или более антигенных эпитопов в молекуле.
Разрушающие гиалуронан ферменты, в том числе гиалуронидазы (например, РН20), используемые в способах согласно настоящему описанию, могут быть получены рекомбинантно или путём очистки или частичной очистки из природных источников, таких как, например, экстракты семенников. Способы получения рекомбинантных белков, в том числе рекомбинантных разрушающих гиалуронан ферментов, приведены в данном описании и хорошо известны в данной области.
(а) Растворимая РН20 человека.
Примером растворимой гиалуронидазы является растворимая РН20 человека. Были получены растворимые формы рекомбинантной человеческой РН20, и они могут быть использованы в композициях, комбинациях и способах, описанных в данном документе. Получение таких растворимых форм РН20 описано в опубликованных патентных заявках США №№ US 20040268425; US 20050260186, US 20060104968, US 20100143457 и международной заявке РСТ №WO 2009111066. Например, растворимые полипептиды РН20 включают укороченные с С-конца варианты полипептидов, которые включают последовательность аминокислот из SEQ ID NO: 1 или 2, или имеют по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 95, 97, 98% идентичности последовательности с последовательностью аминокислот, представленной в SEQ ID NO: 1 или 2, сохраняют активность гиалуронидазы и являются растворимыми. Указанные полипептиды включают растворимые полипептиды РН20, в которых полностью или частично отсутствует сигнальная последовательность присоединения GPI-якоря.
Также предусмотрены удлинённые растворимые полипептиды РН20 (esPH20), которые содержат по меньшей мере одну аминокислоту из якоря GPI. Таким образом, вместо ковалентного присоединения якоря GPI к С-концу белка в ЭР и заякоривания на внеклеточной стороне плазматической мембраны, такие полипептиды секретируются и являются растворимыми. Укороченные с С-конца полипептиды РН20 могут быть укорочены с С-конца на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 или более аминокислот по сравнению с полноразмерным полипептидом дикого типа, например полноразмерным полипептидом дикого типа с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:1 или 2, или аллельными или видовыми вариантами, или другими вариантами полипептида.
Примеры растворимых форм включают, но не ограничиваются ими, укороченные с С-конца полипептиды человеческой РН20, представленной в SEQ ID NO: 1, имеющие на С-конце аминокислотный остаток 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499 или 500 в последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO: 1, или полипептиды, которые имеют по меньшей мере 85% идентичность последовательности по сравнению с ними. Растворимые формы человеческой РН20, как правило, включают формы, которые содержат, по меньшей мере, аминокислоты 36-464 из SEQ ID NO: 1. Например, при экспрессии в клетках млекопитающих в ходе процессинга отщепляется N-концевая сигнальная последовательность из 35 аминокислот, и зрелая форма белка секретируется. Таким образом, зрелые растворимые полипептиды содержат аминокислоты с 36 до 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482 и 483 из SEQ ID NO: 1. В табл. 3 приведены не ограничивающие примеры укороченных с С-конца полипептидов РН20, включая растворимые укороченные с С-конца полипептиды РН20. В табл. 3 ниже указаны длина (количество аминокислот) предшественников и зрелых полипептидов и идентификатор (SEQ ID NO) последовательности, с которым приведены примеры аминокислотных последовательностей-предшественников и зрелых полипептидов укороченных с С-конца белков РН20. Для сравнения в таблицу также включен полипептид РН20 дикого типа. В частности, примеры растворимых гиалуронидаз включают растворимые полипептиды РН20 человека, которые имеют 442, 443, 444, 445, 446 или 447 аминокислот в длину, такие как полипептиды, приведенные в любой из SEQ ID NO: 4-9, или их аллельные, видовые или другие варианты.
- 33 031986
Таблица 3
Примеры укороченных с С-конца полипептидов РН20
Полипептид Предшественник (аминокислоты) Предшественник SEQ П) NO Зрелый полипептид (амино-кислоты) Зрелый полипептид SEQ Ш NO
Дикий тип 509 1 474 2
SPAM1-SILF 500 139 465 183
SPAM-VSIL 499 106 464 150
SPAM1-IVSI 498 140 463 184
SPAM1-FIVS 497 107 462 151
SPAM1-MFIV 496 141 461 185
SPAM1-TMFI 495 108 460 152
SPAM1-ATMF 494 142 459 186
SPAM1-SATM 493 109 458 153
SPAM1-LSAT 492 143 457 187
SPAM1-TLSA 491 110 456 154
SPAM1-STLS 490 112 455 156
SPAM1-PSTL 489 111 454 155
SPAM1-SPST 488 144 453 188
SPAM1-ASPS 487 113 452 157
SPAM1-NASP 486 145 451 189
SPAM1-YNAS 485 114 450 158
SPAM1-FYNA 484 115 449 159
SPAM1-IFYN 483 46 448 48
SPAM1-QIFY 482 3 447 4
SPAM1-PQIF 481 45 446 5
QDAM1 UDCiT 2“klVl 1 ” /1ОП τον 44 445 А
SPAM1-EEPQ 479 43 444 7
SPAM1-TEEP 478 42 443 8
SPAM1-ETEE 477 41 442 9
SPAMI-METE 476 116 441 160
SPAM1-PMET 475 117 440 161
SPAM1-PPME 474 118 439 162
SPAM1-KPPM 473 119 438 163
SPAM1-LKPP 472 120 437 164
SPAM1-FLKP 471 121 436 165
SPAM1-AFLK 470 122 435 166
SPAM1-DAFL 469 123 434 167
SPAM1-IDAF 468 124 433 168
SPAM 1-CID A 467 40 432 47
SPAM1-VCID 466 125 431 169
SPAM1-GVCI 465 126 430 170
Например, растворимые формы РН20 включают, например, полипептиды, которые имеют последовательность аминокислот, приведенную в любой из SEQ ID NO: 4-9, 47, 48, 150-170 и 183-189, или последовательность аминокислот, которая обладает по меньшей мере 85, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% идентичности последовательности с любой из последовательностей SEQ ID NO: 4-9, 47, 48, 150-170 и 183-189 и сохраняет гиалуронидазную активность.
Обычно растворимые формы РН20 получают с использованием систем экспрессии белка, которые обеспечивают правильное N-гликозилирование, которое обеспечивает сохранение активности полипептида, так как гликозилирование важно для каталитической активности и стабильности гиалуронидаз. Такие клетки включают, например, клетки яичника китайского хомячка (СНО) (например, клетки DG44 СНО).
(b) rHuPH20.
Были получены растворимые формы рекомбинантной человеческой РН20, и они могут быть использованы в композициях, комбинациях и способах, описанных в данном документе. Получение таких растворимых форм рекомбинантной человеческой РН20 описано, например, в опубликованных патентных заявках США №№ US 20040268425; US 20050260186, US 20060104968, US 20100143457 и международной заявке РСТ № WO 2009111066. Примеры таких полипептидов представляют собой полипептиды, которые могут быть получены из молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислоты 1-482 (приведены в SEQ ID NO: 3). Пример такой нуклеиновой кислоты представлен в SEQ ID NO: 49. В ходе посттрансляционных модификаций удаляется 35 аминокислот сигнальной последовательности, в резуль
- 34 031986 тате чего остаётся 447-аминокислотная растворимая рекомбинантная человеческая РН20 (SEQ ID NO: 4). Так как белок получают в культуральной среде, присутствует гетерогенность последовательности Сконца, так что продукт, обозначенный rHuPH20, включает смесь молекул, которые могут включать в себя любую (любые) из молекул SEQ ID NO: 4-9 в различном количестве. Как правило, rHuPH20 получают в клетках, таких как СНО (например, клетки СНО DG44), которые обеспечивают правильное Nгликозилирование для сохранения активности.
iv). Гликозилирование разрушающих гиалуронан ферментов.
Гликозилирование, в том числе N- и О-гликозилирование, некоторых разрушающих гиалуронан ферментов, в том числе гиалуронидаз, может быть важно для их каталитической активности и стабильности. В то время как изменение типа гликана, модифицирующего гликопротеин, может иметь серьёзные последствия для антигенности белка, структурного фолдинга, растворимости и стабильности, большинство ферментов не требуют гликозилирования для оптимальной активности. Для некоторых гиалуронидаз удаление N-гликозилирования может привести к почти полной потере активности гиалуронидазы. Таким образом, для таких гиалуронидаз присутствие N-связанных гликанов является критическим для образования активного фермента.
N-связанные олигосахариды делятся на несколько основных типов (олигоманнозы, сложные, гибридные, сульфатированные), каждый из которых имеет (Man)3-GlcNAc-GlcNAc-остов, связывающийся через амидный азот Asn-остатков, которые входят в -Asn-Xaa-Thr/Ser-последовательности (где Хаа не является Pro). Гликозилирование по -Asn-Xaa-Cys-сайту было показано для белка С системы коагуляции. В некоторых случаях разрушающий гиалуронан фермент, такой как гиалуронидаза, может содержать как N-, так и О-гликозидные связи. Например, РН20 имеет О-связанные олигосахариды, а также N-связанные олигосахариды. Есть шесть потенциальных сайтов N-гликозилирования в позициях N82, N166, N235, N254, N368, N393 человеческого РН20, приведённого в SEQ ID NO: 1. Аминокислотные остатки N82, N166 и N254 заняты гликанами сложного типа, тогда как аминокислотные остатки N368 и N393 заняты гликанами высокоманнозного типа. Аминокислотный остаток N235 занят примерно на 80% высокоманнозными гликанами и на 20% гликанами сложного типа. Как отмечалось выше, О-гликозилирование по S490 не требуется для активности гиалуронидазы.
В некоторых примерах, разрушающие гиалуронан ферменты, используемые в композициях, комбинациях и способах согласно настоящему документу, гликозилированы по одному или всем сайтам гликозилирования. Например, для человеческой РН20 или ее растворимой формы гликозилированы 2, 3, 4, 5 или 6 из сайтов N-гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368, N393 из SEQ ID NO: 1. В некоторых примерах разрушающие гиалуронан ферменты гликозилированы по одному или нескольким нативным сайтам гликозилирования. В других примерах разрушающие гиалуронан ферменты модифицированы для получения одного или более не нативных сайтов гликозилирования, чтобы обеспечить гликозилирование полипептида в одном или более дополнительных сайтах. В таких примерах присоединение дополнительных фрагментов сахаров может улучшить фармакокинетические свойства молекулы, например увеличить время полувыведения и/или увеличить активность.
В других примерах разрушающие гиалуронан ферменты, используемые в композициях, комбинациях и способах согласно настоящему документу, являются частично дегликозилированными (или частично N-гликозилированными полипептидами). Например, частично дегликозилированные растворимые полипептиды РН20, которые полностью или частично сохраняют гиалуронидазную активность полностью гликозилированной гиалуронидазы, могут быть использованы в композициях, комбинациях и способах согласно настоящему документу. Примеры частично дегликозилированных гиалуронидаз включают растворимые формы частично дегликозилированных полипептидов РН20 из любых видов, таких как любые полипептиды, приведенные в любой из SEQ ID NOS: 1, 2, 11, 25, 27, 29-32, 63, 65, 101-102 и 199210, или их аллельные варианты, видовые варианты или другие варианты. Такие варианты известны специалистам в данной области техники и включают полипептиды, обладающие 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95% или большей идентичностью последовательности с любой из последовательностей SEQ ID NOS: 1, 2, 11, 25, 27, 29-32, 63, 65, 101-102 и 199-210, или их укороченные формы. Частично дегликозилированные гиалуронидазы, предусмотренные в настоящем документе, также включают гибридные, слитые или химерные частично дегликозилированные гиалуронидазы, а также конъюгаты частично дегликозилированных гиалуронидаз.
Гликозидазы или гликозид гидролазы представляют собой ферменты, которые катализируют гидролиз гликозидной связи, чтобы образовать два меньших углевода. Основные виды N-гликанов позвоночных включают высокоманнозные гликаны, гибридные гликаны и сложные гликаны. Есть несколько гликозидаз, которые приводят только к частичному дегликозилированию белка; они включают: EndoF1, которая расщепляет высокоманнозные и гибридные гликаны; EndoF2, которая расщепляет биантеннальные гликаны сложного типа; EndoF3, которая расщепляет биантеннальные и более разветвленные сложные гликаны, и EndoH, которая расщепляет высокоманнозные и гибридные гликаны. Например, обработка разрушающего гиалуронан фермента, такого как растворимая РН20, одной или всеми указанными выше гликозидазами приводит к частичному дегликозилированию и, как следствие, сохранению гиалуронидазной активности.
- 35 031986
Таким образом, частично дегликозилированные разрушающие гиалуронан ферменты, такие как частично дегликозилированные растворимые гиалуронидазы, могут быть получены путем гидролиза одной или несколькими гликозидазами, как правило, гликозидазами, который не удаляют все N-гликаны, но только частично дегликозилируют белок. Например, обработка РН20 (например, рекомбинантной РН20, обозначаемой rHuPH20) одной или всеми указанными выше гликозидазами (например, EndoFl, EndoF2 и/или EndoF3) приводит к частичному дегликозилированию. Эти частично дегликозилированные полипептиды РН20 могут проявлять гиалуронидазную ферментативную активность, которая сопоставима с полностью гликозилированными полипептидами. В отличие от этого обработка РН20 гликозидазой PNGазой F, которая расщепляет все N-гликаны, приводит к полному дегликозилированию всех Nгликанов и тем самым делает РН20 ферментативно неактивной. Таким образом, хотя все сайты Nгликозилирования (такие как, например, по аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 человеческой РН20, приведенной в SEQ ID NO: 1) могут быть гликозилированы, обработка одной или несколькими гликозидазами может сделать степень гликозилирования пониженной по сравнению с гиалуронидазой, которая не подвергалась обработке одной или несколькими гликозидазами.
Частично дегликозилированные разрушающие гиалуронан ферменты, в том числе частично дегликозилированные растворимые полипептиды РН20, могут иметь 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80% от уровня гликозилирования полностью гликозилированного полипептида. В одном примере 1, 2, 3, 4, 5 или 6 сайтов N-гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 в SEQ ID NO: 1, частично дегликозилированы таким образом, что они больше не содержат высокоманнозных или сложных гликанов, но содержат, по меньшей мере, фрагмент N-ацетилглюкозамина. В некоторых примерах 1, 2 или 3 сайта N-гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166 и N254 в SEQ ID NO:1, являются дегликозилированными, то есть они не содержат углеводный фрагмент. В других примерах 3, 4, 5 или 6 сайтов N-гликозилирования, соответствующих аминокислотам N82, N166, N235, N254, N368 и N393 в SEQ ID NO:1, гликозилированы. Гликозилированные аминокислотные остатки минимально содержат фрагмент N-ацетилглюкозамина. Как правило, частично дегликозилированные разрушающие гиалуронан ферменты, в том числе частично дегликозилированные растворимые полипептиды РН20, проявляют гиалуронидазную активность, которая составляет 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 200%, 300%, 400%, 500%, 1000% или более от активности гиалуронидазы, проявляемой полностью гликозилированным полипептидом.
v. Модифицированные (конъюгированные с полимером) разрушающие гиалуронан ферменты
Ковалентное или другое стабильное присоединение (конъгирование) полимерных молекул, таких как фрагменты полиэтиленгликоля (пегилирование, PEG), к ферменту, разрушающему гиалуроновую кислоту, такому как гиалуронидаза, может придать полезные свойства полученной композиции разрушающий гиалуронан фермент-полимер. Такие свойства включают улучшенную биосовместимость, увеличенное время полужизни (и ферментативную активность) белка в крови, клетках и/или других тканях в субъекте, эффективное экранирование белка от протеаз и гидролиза, улучшение биораспределения, фармакокинетики и/или фармакодинамики и повышение растворимости в воде.
Примеры полимеров, которые могут быть конъюгированы с разрушающим гиалуронан ферментом, таким как гиалуронидаза, включают природные и синтетические гомополимеры, такие как полиолы (например, поли-ОН), полиамины (т.е. поли-ИН2) и поликарбоновые кислоты (т.е. поли-СООН), а также гетерополимеры, т.е. полимеры, содержащие одну или более различных соединяемых групп, например гидроксильную группу и аминогруппу. Примеры подходящих полимерных молекул включают полимерные молекулы, выбранные из таких веществ как полиалкиленоксиды (РАО), такие как полиалкиленгликоли (PAG), включая полиэтиленгликоли (PEG), метоксиполиэтиленгликоли (mPEG) и полипропиленгликоли, PEG-глицидиловые эфиры (Epox-PEG), PEG-оксикарбонилимидазол (CDI-PEG), разветвленные полиэтиленгликоли (PEG), поливиниловый спирт (PVA), поли(этиленимин) (PEI), линейные полиамидоамины, полиакриламид (PAAm), полидиметилакриламид (PDAAm), поликарбоксилаты, поливинилпирролидон, полиЮ,Е-аминокислоты, ангидрид полиэтилен-комалеиновой кислоты, ангидрид полистирол-комалеиновой кислоты, декстраны, в том числе карбоксиметилдекстраны, хитозан, декстрин, гепарин, гомологичный альбумин, целлюлоза, в том числе метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксиэтилцеллюлоза и гидроксипропилцеллюлоза, гидролизаты хитозана, крахмалы, такие как гидроксиэтил-крахмал и гидроксипропил-крахмал, гликоген, агарозы и их производные, гуаровая камедь, пуллулан, инулин, ксантановая камедь, каррагинан, пектин, гидролизаты альгиновой кислоты и биополимеры.
Как правило, полимеры представляют собой полиалкиленоксиды (РАО), такие как полиэтиленоксиды, такие как PEG, как правило, mPEG, который имеет меньшее количество реакционноспособных групп, способных к перекрестному сшиванию, по сравнению с полисахаридами, такими как декстран и пуллулан. Как правило, полимеры представляют собой нетоксичные полимерные молекулы, такие как (метокси)полиэтиленгликоль (mPEG), который может быть ковалентно конъюгирован с ферментом, разрушающим гиалуроновую кислоту (например, для присоединения к группам на поверхности белка) с применением относительно простых химических реакций.
Известно, что пегилирование лекарственных средств повышает их устойчивость к протеолизу, по
- 36 031986 вышает время полужизни в плазме и снижает антигенность и иммуногенность. Примеры методик пегилирования известны в уровне техники (смотрите, например, Lu and Felix, Int. J. Peptide Protein Res., 43:127-138, 1994; Lu and Felix, Peptide Res., 6.140-6, 1993; Felix et al., Int. J. Peptide Res., 46:253-64, 1995; Benhar et al., J. Biol. Chem., 269: 13398-404, 1994; Brumeanu et al., J Immunol., 154:3088-95, 1995; смотрите, also, Caliceti et al. (2003) Adv. Drug Deliv. Rev. 55(10):1261-77 and Molineux (2003) Pharmacotherapy 23 (8 Pt 2):3S-8S). Пегилирование также можно использовать для доставки молекул нуклеиновых кислот in vivo. Например, пегилирование аденовируса может повысить его стабильность и усилить перенос генов (см., например, Cheng et al. (2003) Pharm. Res. 20(9): 1444-51).
Подходящие полимерные молекулы для присоединения к ферменту, разрушающему гиалуроновую кислоту, включая гиалуронидазы, включают, но не ограничиваются ими, полиэтиленгликоль (PEG) и производные PEG, такие как метоксиполиэтиленгликоли (mPEG), PEG-глицидиловые эфиры (EpoxPEG), PEG-оксикарбонилимидазол (CDI-PEG), разветвленные PEG и полиэтиленоксид (РЕО) (см., например, Roberts et al., Advanced Drug Delivery Review 2002, 54: 459-476; Harris and Zalipsky, S. (eds.) Poly(ethylene glycol), Chemistry and Biological Applications ACS Symposium Series 680, 1997; Mehvar et al., J. Pharm. Pharmaceut. Sci., 3(1):125-136, 2000; Harris, Nature Reviews 2(3):214-221 (2003); и Tsubery, J. Biol. Chem. 279(37):38118-24, 2004). Полимерная молекула может иметь молекулярную массу, как правило, в диапазоне примерно от 3 до примерно 60 кДа. В некоторых вариантах осуществления полимерная молекула, которая конъюгирована с белком, таким как гиалуронидаза, например РН20, имеет молекулярную массу между или примерно между 5 и 60 кДа, такую как по меньшей мере или примерно по меньшей мере или 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 или более 60 кДа.
Пегилированные растворимые разрушающие гиалуронан ферменты.
Разрушающий гиалуронан фермент, используемый в комбинациях и способах в настоящем документе, может представлять собой пегилированный разрушающий гиалуронан фермент, такой как пегилированный растворимый разрушающий гиалуронан фермент. В одном из примеров он представляет собой пегилированную растворимую гиалуронидазу, например пегилированную РН20. Различные способы модификации полипептидов путем ковалентного присоединения (конъюгации) PEG или производного PEG (т.е. пегилирование) известны в данной области техники (см., например, US 2006/0104968; US 5672662; US 6737505 и US 2004/0235734). Методы пегилирования включают применение специализированных линкеров и химических реакций для связывания (см., например, Roberts et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 54:459-476, 2002), присоединение нескольких фрагментов PEG к единственному участку конъюгации (например, используя разветвленные PEG; см., например, Guiotto et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:177-180, 2002), сайт-специфическое пегилирование и/или монопегилирование (см., например, Chapman et al., Nature Biotech. 17:780-783, 1999), и сайт-направленное ферментативное пегилирование (см., например, Sato, Adv. Drug Deliv. Rev., 54:487-504, 2002), но не ограничиваются ими. С помощью способов и методов, описанных в данной области техники, можно получить белки, имеющие 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше 10 PEG или производных PEG, присоединенных к одной молекуле белка (см., например, US 2006/0104968).
Многочисленные реагенты для пегилирования были описаны в данной области. Такие реагенты включают, но не ограничиваются ими, активированный N-гидроксисукцинимидилом (NHS) PEG, сукцинимидил mPEG, mPEG2-N-гидроксисукцинимид, mPEG сукцинимидил α-метилбутаноат, mPEG сукцинимидилпропионат, mPEG сукцинимидилбутаноат, сукцинимидиловый эфир mPEG карбоксиметил 3гидроксибутановой кислоты, гомобифункциональный PEG-сукцинимидилпропионат, гомобифункциональный PEG-пропиональдегид, гомобифункциональный PEG-бутиральдегид, PEG-малеимид, PEGгидразид, паранитрофенилкарбонат PEG, mPEG-бензотриазолкарбонат, пропиональдегид PEG, mPEG бутиральдегид, разветвленный mPEG2 бутиральдегид, mPEG ацетил, mPEG пиперидон, mPEG метилкетон, mPEG малеимид без линкера, mPEG-винилсульфон, mPEG-тиол, MPEG-ортопиридилтиоэфир, MPEG-ортопиридил дисульфид, Fmoc-PEG-NHS, Boc-PEG-NHS, винилсульфон PEG-NHS, акрилат PEGNHS, флуоресцеин PEG-NHS и биотин PEG-NHS (см., например, Monfardini et al., Bioconjugate Chem. 6:62-69, 1995; Veronese et al., J. Bioactive Compatible Polymers 12:197-207, 1997; US 5672662; US 5932462;
US 6495659; US 6737505; US 4002531; US 4179337; US 5122614; US 5324844; US 5446090; US 5612460;
US 5643575; US 5766581; US 5795569; US 5808096; US 5900461; US 5919455; US 5985263; US 5990237;
US 6113906; US 6214966; US 6258351; US 6340742; US 6413507; US 6420339; US 6437025; US 6448369;
US 6461802; US 6828401; US 6858736; US 2001/0021763; US 2001/0044526; US 2001/0046481; US 2002/0052430; US 2002/0072573; US 2002/0156047; US 2003/0114647; US 2003/0143596; US 2003/0158333; US 2003/0220447; US 2004/0013637; US 2004/0235734; US 2005/0114037; US 2005/0171328; US 2005/0209416; EP 01064951; EP 0822199; WO 01076640; WO 0002017; WO 0249673; WO 0500360; WO 9428024 и WO 0187925).
2. Таксаны и их лекарственные формы.
Комбинированная терапия, в том числе композиции, комбинации и способы и их применения, предусмотренные в настоящем документе, включают таксан. Таксаны обычно плохо растворимы в воде, что ограничивает их терапевтическое применение. В предусмотренных в настоящем документе композициях и комбинациях таксаны предусмотрены в виде лекарственных форм, которые являются водораствори- 37 031986 мыми. В конкретных примерах, предусмотренных в настоящем документе, таксаны предусмотрены в виде лекарственных форм, которые направленно действуют на строму и/или проникают в строму или клетки опухоли. Примером такой лекарственной формы таксана является связанный с альбумином таксан.
а). Таксаны.
Таксаны представляют собой дитерпены, которые получают из растений рода Taxus (тис). Таксаны представляют собой антимитотические агенты, которые связываются с тубулином и стабилизируют полимеризацию микротрубочек, тем самым нарушая нормальное равновесие в процессе сборки и разборки микротрубочек и замедляя функционирование микротрубочек. Поскольку таксаны способствуют образованию микротрубочек, они предотвращают деполимеризацию тубулина, образующего микротрубочки митотического веретена. Микротрубочки необходимы для деления клеток, и клетки, подвергнутые воздействию таксанов, останавливаются в премитотической G2 фазе и не делятся. Эти лекарства, таким образом, нарушают процесс деления клеток, поскольку клетки, подвергнутые воздействию этих лекарств, находятся в митозе. Это в конечном итоге может привести к гибели клеток из-за неудачного митоза.
Таксаны также образуют активные формы кислорода (АФК), в том числе приводят к накоплению О2 и Н2О2 в обработанных клетках. Накопление АФК связано с прямой цитотоксической активностью таксанов, в том числе паклитаксела, а также с эффектами на соседние клетки (см., например, Alexandre et al. (2007) Cancer Res., 67:3512).
Таксаны для применения в композициях, комбинациях и способах, предусмотренных в настоящем документе, включают любое дитерпеновое соединение, которое ингибирует деполимеризацию тубулина. В частности, такие таксаны также включают любые таксаны, которые приводят к накоплению АФК в обработанных клетках. Таксаны включают такие таксаны, которые представляют собой очищенные формы образующихся в природе дитерпенов или такие таксаны, которые синтезированы искусственно. Таксаны включают такие таксаны, которые не являются кристаллическими и/или являются аморфными. Таксаны также включают безводные формы таксана.
Паклитаксел (таксол) представляет собой встречающийся в природе дитерпеноид. Он имеет химическое название 53,20-эпокси-1,2а,4,73,103,13а-гексагидрокситакс-11-ен-9-он 4,10-диацетат 2-бензоат. Таксол обнаружен в коре ствола тиса коротколистного или тихоокеанского, Taxus brevifolia, а также в Tbaccata и Tcuspidata. Он был впервые выделен из коры дерева тиса тихоокеанского, Taxus brevifolia (Wani et al. (1971) J. Am. Chem. Soc., 93:2325). Структура ядра паклитаксела содержит четыре кольца (шестичленные кольца А и С, восьмичленное кольцо В и четырехчленное кольцо D). Структура паклитаксела приведена ниже, показана нумерация в соответствии с общепринятой системой нумерации для этого класса лекарств.
Паклитаксел может быть получен полусинтетическими способами из химических веществпредшественников, называемых баккатины, которые получены из хвои и веток дерева тиса европейского или гималайского. Например, паклитаксел может быть получен из баккатина путем присоединения защитных групп к гидроксильным группам баккатина, которые должны стать гидроксильными группами паклитаксела, превращения предшественника баккатина в паклитаксел и последующего удаления защитных групп с гидроксильных групп для получения паклитаксела. Кроме того, паклитаксел недавно был синтезирован из простых предшественников (см., например, международные заявки РСТ №№ WO 93/10076, WO 93/16059; патенты США №№ 5200534; 5015744; 4960790; Nicolaou (1993) Nature 364: 464466; Nicolaou, KO. et al. (1994) Nature, 367:630-634; и Holton et al. (1994) J. Am. Chem. Soc, 116:15971600).
Доцетаксел (таксотер) представляет собой другой пример таксана для применения в комбинациях и композициях, предусмотренных в настоящем документе. Доцетаксел имеет химическое название 1,73,103-тригидрокси-9-оксо-53,20-эпокситакс-11-ен-2а,4,13а-триил 4-ацетат 2-бензоат 13-{(2R,3S)-3[(трет-бутоксикарбонил)амино]-2-гидрокси-3-фенилпропаноат и имеет структуру, приведенную ниже, где нумерация показана в соответствии с общепринятой системой нумерации для этого класса лекарств.
- 38 031986
Доцетаксел представляет собой полусинтетический таксан второго поколения, полученный из соединения, обнаруженного в тисе европейском Taxus baccata. Доцетаксел представляет собой этерифицированный продукт 10-деацетил баккатина III, экстрагированного из дерева тиса европейского. Он отличается от паклитаксела в двух позициях в своей химической структуре: у него отсутствует ацетатная эфирная группа и присутствует трет-бутилкарбаматная эфирная группа на фенилпропионатной боковой цепи вместо бензиламида в паклитакселе. Доцетаксел, аналог паклитаксела, получают полусинтетическим путем из 10-деацетил баккатина III, нецитотоксического предшественника, экстрагированного из хвои Taxus baccata и этерифицированного химически синтезированной боковой цепью (Cortes and Pazdur, 1995, J. Clin. Oncol. 13(10):2643-55).
Таксаны для применения в композициях, комбинациях и способах, предусмотренных в настоящем документе, включают аналоги, производные и пролекарства паклитаксела или доцетаксела. Такие производные таксана включают производные, которые имеют улучшенную растворимость в воде по сравнению с паклитакселом или доцетакселом. Например, производные, аналоги и пролекарства таксана включают производные, в которых позиции в кольце модифицированы или дериватизированы, и, в частности, в которых позиции 2'- и 7- или 10-дериватизированы подходящими группами (см., например, Fu et al. (2009) Current Medicinal Chemistry, 16:1-13).
Например, производные, аналоги и пролекарства таксана включают, но не ограничиваются ими, водорастворимые таксолы, имеющие различные замещенные ацильные группы в 2'-О-позиции (см., например, патент США № 4942184); водорастворимые таксолы, в которых 2'- и/или 7'-гидроксильные группы дериватизированы выбранной аминокислотой или соединением-миметиком аминокислоты (см., например, патент США № 4960790); сульфированный 2'-акрилоил, сульфированный 2'-О-ацилтаксол и замещенный 2'-бензоил и 2',7-дибензоилтаксол (см., например, патенты США №№ 5352805 и 5411984); 2'и/или 7-О-эфирные и 2'- и/или 7-О-карбонатные производные таксола (см., например, патент США № 5817840); производные таксана, полученные путем конъюгации с полимерами, такими как полиэтиленгликоль, полиф-глутаминовая кислота), по.чи(1 .-аспарагиновая кислота) (см., например, патент США № 5977163); пролекарства таксана, имеющие фосфонооксигруппу в позиии С-7, С-10 и/или 2'-боковой цепи таксана (см., например, WO 9414787); соли 2'-сукцинилпаклитаксела и 2'-глутарилпаклитаксела (Deutch et al. (1989) J. Med. Chem., 32:788-792); 2'- и 7-аминокислотные производные паклитаксела и их соли (Matthew et al. (1992) J. Med. Chem., 35:145-151); сульфонатные производные (Zhao et al. (1991) J. Nat. Prod., 54:1607-1611); 7-фосфатные аналоги паклитаксела (Vyas et al. (1993) Bioorg. Med. Chem., Lett., 3:1357-1360); 2'- и 7-полиэтиленгликолевые эфиры паклитаксела (Greenwald et al. (1995) J. Org. Chem., 60:331-336; Greenwald et al. (1996) J. Med. Chem., 39:424-431); 2'- и 7-фосфоноксифенилпропионат паклитаксел (Ueda et al. (1993) Bioorg. Med. Chem. Lett., 3:1761-1766); 2'- и 7-метилпиридиний ацетатные аналоги паклитаксела (Nicolaou et al. (1994) Angew Chemie, 106:1672-1675); Paloma et al. (1994) Chem. Biol., 1:107-112); пролекарство паклитаксела с яблочной кислотой в 2'-позиции (Damen et al. (2000) Bioorg. Med. Chem. Lett., 8:427-432); сульфонатные соли таксанов и, в частности, таксола (патент США № 5059699); производные, в которых для повышения растворимости таксана в липидах присоединена ацильная цепь (см., например, патент США № 6482850); тригидратные формы доцетаксела, которые обладают большей стабильностью, чем безводный продукт (см., например, патенты США №№ 6022985 и 6838569); С-10 производные таксана, в том числе, те, которые содержат карбаматный фрагмент в позиции С-10 (патент США № 8138361); гидрофобные производные таксана (опубликованная заявка США № US 20090263483); и содержащие гидразидную группу карбоксилатные производные таксанов (см., например, патент США № 8133888).
b). Направленные на опухоль или на строму таксаны.
Соединения таксана, предусмотренные в композициях и комбинациях в настоящем документе, обычно предусмотрены для направленного действия на опухоль или строму, окружающую опухоль. Таксан в композициях и комбинациях, предусмотренных в настоящем документе, также предусмотрен в виде растворимых или нанодисперсных лекарственных форм, которые обладают улучшенной растворимостью.
Природный или полусинтетический паклитаксел (таксол) характеризуется такими недостатками как низкая растворимость в воде и неспецифичность действия или локализации. Например, таксаны, в том числе паклитаксел и доцетаксел, очень плохо растворимы в воде (меньше чем 10 мкг/мл) и, в результате,
- 39 031986 не могут быть практически получены в виде лекарственной формы с водной средой для внутривенного введения. Для преодоления проблем с растворимостью в воде современные лекарственные формы паклитаксела составлены для внутривенного введения пациентам с раком в виде лекарственной формы раствора в полиоксиэтилированном касторовом масле (полиоксил 35 или Cremophor®) в качестве основного растворителя/сурфактанта с высокими концентрациями этанола, использованного в качестве сорастворителя. Как и паклитаксел, доцетаксел очень плохо растворяется в воде. В настоящее время растворителем/сурфактантом, используемым для растворения доцетаксела, является полисорбат 80 (Tween 80) (Bissery et al. 1991 Cancer Res. 51(18):4845-52; Tomiak et al. 1994). Этанол, кремофор и/или Tween в существующих лекарственных формах ассоциированы с возникновением аллергических реакций, которые могут включать сильную кожную сыпь, крапивницу, покраснение, диспноэ, тахикардию и другое.
Кроме того, за счет увеличения специфичности к раковой ткани молекулы таксана обладают меньшей токсичностью за счет снижения системных эффектов или воздействия. Как правило, направленный на опухоль таксан представляет собой таксан, его производное, аналог или пролекарство, конъюгированные или соединенные напрямую или не напрямую через линкер с фрагментом для узнавания опухоли. Фрагмент для узнавания опухоли может представлять собой моноклональное антитело, белок, пептид, липид или макромолекулярный комплекс, который узнает опухолеспецифический маркер или фрагмент, дифференциально экспрессированный на раковых клетках по сравнению с нормальными клетками. Раковые клетки сверхэкспрессируют многие опухолеспецифические маркеры или рецепторы, которые могут быть мишенью для доставки таксана.
Направленный на опухоль таксан может быть предусмотрен в виде лекарственных форм мицелл, наночастиц, микросфер, липосом или гидрогеля. Такие лекарственные формы могут быть использованы, чтобы инкапсулировать активные ингредиенты, такие как таксаны, которые могут обладать низкой растворимостью в водной среде. Такие лекарственные формы хорошо известны специалисту в данной области техники. В некоторых примерах носитель для доставки покрыт фрагментом для направленного действия на опухоль или конъюгирован с фрагментом для направленного действия на опухоль, где фрагмент для направленного действия на опухоль представляет собой, например, макромолекулярный комплекс, моноклональное антитело, белок, пептид или липид. Таким образом, в некоторых примерах система доставки лекарств инкапсулирует таксаны и сама по себе несет лиганды для направленного действия или другое полимерное покрытие на поверхности для осуществления направленного действия на опухоль.
Примеры направленных на опухоль таксанов и их лекарственных форм включают фрагмент для направленного действия на опухоль, который представляет собой макромолекулу, такую как поли-Lглутамат (PGA-TXL, Xyotax; Li et al. (1998) Cancer Res., 58:2404-2409); моноклональное антитело, специфичное к опухолевому маркеру, такому как рецепторы р140 TrkA или р75 (Guillemard and Saragovi (2001) Cancer Res., 61:694), или антитело против рецептора эпидермального фактора роста (т.е. антиEGFR моноклональное антитело, такое как цетуксимаб; Safavy et al. (2003) Bioconjug., 14:302-10; Ojima et al. (2002) J. Med. Chem., 45:5620-3), анти-HER2 (герцептин, транстузумаб, Cirstoiu-Hapca et al. (2010) J. Control Release, 144:324-31); полиненасыщенную жирную кислоту, такую как докозагексаеновая кислота (DHA; Bradley et al. (2001) Clin. Cancer Research, 7:3229-38), линоленовая кислота или линолевая кислота (Kuznetsova et al. (2006) Bioorg. Med. Chem. Lett., 15:974-7); пептид, такой как 7-аминокислотный синтетический пептид, называемый BBN[7-13], который связывается с рецепторами бомбезин/гастринвысвобождающего пептида на поверхности клетки (BBN/GRP) (Safavy et al. (1999) J. Med. Chem., 42:4919-4924), направленный на LRP-1 19-аминокислотный пептид angiopep-2 (Wen et al. (2011) Molecular Cancer Therapeutics, 10 (11 Suppl):Abstract B49), октапептид, который расщепляется матриксной металлопротеиназой 2 (ММР2; Yamada et al. (2010) Cancer Biology and Therapy, 9:192-203), и пептид RGD (смотрите, например, Zhao et al. (2009) J. Drug Target, 17:10-8); белки, которые направленно действуют на опухолеспецифические рецепторы, такие как рецепторы витаминов, в том числе биотина, витамина Н или В-7, фолата или фолиевой кислоты, витамина В12 или рибофлавина (смотрите, например, Chen et al. (2010) Biconjug. Chem., 21:979-987, Li et al. (2011) International Journal of Nanomedicine, 6:1167-1184); гиалуроновую кислоту (HA) (Auzenne et al. (2007) Neoplasia, 9:479-486); трансферрин (Sahoo et al. (2004) Int. J. Cancer, 112:335-40); и альбумин.
Связанный с альбумином таксан.
Примером растворимого комплекса полимер-лекарство является конъюгированный с альбумином таксан. Альбумин представляет собой природный носитель эндогенных гидрофобных молекул, таких как витамины или гормоны. В дополнение к тому, что альбумин действует в качестве носителя, альбумин также облегчает эндотелиальный трансцитоз компонентов плазмы, связанных с белком, путем связывания с gp60 на поверхности эндотелиальных клеток, что обуславливает опосредованный кавеолами трансцитоз. Альбумин также способен связываться с секретируемым кислым белком, обогащённым цистеином (SPARC, также известный как остеонектин), присутствующим на многих опухолевых клетках. Таким образом, альбумин способствует накоплению в опухолевой клетке связанных с альбумином лекарств.
Альбумин включает человеческий сывороточный альбумин (HSA), а также не человеческий альбу- 40 031986 мин, такой как бычий сывороточный альбумин (BSA). HSA представляет собой хорошорастворимый глобулярный белок с Mr 65K и содержит 585 аминокислот (SEQ ID NO: 211). HSA является наиболее распространенным белком в плазме и обеспечивает 70-80% коллоидного осмотического давления плазмы человека. Аминокислотная последовательность HSA содержит всего 17 дисульфидных мостиков, одну свободную тиольную группу (Cys 34) и единственный триптофан (Trp 214).
Человеческий сывороточный альбумин (HSA) имеет несколько гидрофобных участков связывания (всего восемь участков для жирных кислот, эндогенного лиганда HSA), и было показано, что альбумин связывается с разнообразными фармацевтическими агентами, особенно с нейтрально и отрицательно заряженными гидрофобными соединениями (Goodman et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th ed., McGraw-Hill New York (1996)). Два высокоаффинных участка связывания предположительно находятся в субдоменах IIA и IIIA HSA, которые представляют собой сильно удлиненные гидрофобные карманы с заряженными остатками лизина и аргинина около поверхности, функционирующими в качестве точек присоединения для полярных лигандов (см., например, Fehske et al., Biochem. Pharmcol, 30, 687-92 (1981), Vorum, Dan. Med. Bull., 46, 379-99 (1999), Kragh-Hansen, Dan. Med. Bull., 37:57-84 (1990), Curry et al., Nat. Struct. Biol., 5, 827-35 (1998), Sugio et al., Protein. Eng., 12, 439-46 (1999), He et al., Nature, 358, 209-15 (1992) и Carter et al., Adv. Protein. Chem., 45, 153-203 (1994)). Было показано, что паклитаксел и доцетаксел связываются с HSA (см., например, Paal et al., Eur. J. Biochem., 268(7), 2187-91 (2001), Purcell et al., Biochim. Biophys. Acta, 1478(1), 61-8 (2000), Altmayer et al., Arzneimittelforschung, 45, 1053-6 (1995), Garrido et al., Rev. Esp. Anestestiol Reanim., 41, 308-12 (1994); и Urien et al., Invyvest. New Drugs, 14(2), 147-51 (1996)).
Весовое соотношение альбумина и таксана в композиции составляет примерно или меньше чем 20:1 или меньше, например, 19:1, 18:1, 17:1, 16:1, 15:1, 14:1, 13:1, 12:1, 11:1, 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1 или меньше, и обычно составляет по меньшей мере, или составляет примерно по меньшей мере, или составляет 9:1. Полученный продукт может быть получен без растворителя и/или сурфактанта. Таксан покрыт альбумином. Наночастицы таксана/альбумина обычно имеют средний диаметр не больше чем 200 нм, обычно от 100 до 200 нм, например средний диаметр составляет 130 нм.
Например, связанные с альбумином таксаны включают связанный с альбумином (nab-)паклитаксел (например, Abraxane, American Bioscience, Inc. (Santa Monica, CA); также описан в патентах США №№ 5439686 и 6749868) или связанный с альбумином доцетаксел (например, описанный в опубликованных патентных заявках США №№ 20080161382, 20070117744 и 20070082838). Человеческий альбумин функционирует в качестве поверхностно-активного полимера, обеспечивающего стабилизацию заряда и пространственную стабилизацию наночастиц паклитаксела с целью предотвращения агрегации. Стабилизация достигается за счет того, что альбумин адсорбируется на поверхности наночастиц паклитаксела, создавая, таким образом, слой, который функционирует в качестве поверхностно-активного полимера, предотвращающего агрегацию частиц паклитаксела. Взаимодействие между паклитакселом и человеческим альбумином слабое, и оба вещества свободно диссоциируют после восстановления. Таким образом, при восстановлении и инъецировании в кровоток концентрация паклитаксела быстро снижается и, как считается, частицы альбумина диссоциируют на отдельные молекулы альбумина и далее циркулируют с еще прикрепленным паклитакселом. В частности, связанный с альбумином паклитаксел (например, nabпаклитаксел или абраксан) может быть использован в качестве коллоидной суспензии, полученной из лиофилизированного препарата паклитаксела и человеческого сывороточного альбумина, разведенного в солевом растворе (0,9% NaCl). Полученный комплекс лекарство-частица стабилизирован при среднем размере частиц 130 нм. Наночастицы, содержащие другие таксаны, такие как любые таксаны, описанные в настоящем документе выше, также могут быть получены и использованы и могут иметь те же характеристики, как описано выше.
3. Дополнительный химиотерапевтический агент (например, нуклеозидный аналог).
Необязательно, дополнительный химиотерапевтический агент, активность которого улучшена или увеличена путем совместного введения с одним или обоими агентами, выбранными из конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента и/или лекарственной формы таксана, может быть включен в комбинированную терапию, предусмотренную в настоящем документе. Например, в комбинированную терапию, предусмотренную в настоящем документе, могут быть включены один или несколько нуклеозидных аналогов, в частности антиметаболитов. После проникновения в клетку нуклеозидные аналоги последовательно фосфорилируются до нуклеозид 5'-монофосфатов, дифосфатов и трифосфатов. Например, обычно нуклеозидные аналоги превращаются в активное соединение путем фосфорилирования нуклеозида до соответствующего трифосфата (например, дифосфаткиназой), который далее может конкурировать с физиологическим нуклеозидом (например, dCTP) в качестве субстрата для включения в ДНК. Таким образом, нуклеозидные аналоги имитируют физиологические нуклеозиды. После включения аналог становится неэффективным субстратом, тем самым останавливая репликацию и/или вызывая обрыв цепи. См., Sampath et al. (2003), Oncogene, 22:9063-9074 для обзора нуклеозидных аналогов. Поскольку нуклеозидные аналоги требуют превращения в активную форму, они обычно представляют собой пролекарства, которые должны быть фосфорилированы с образованием активной формы.
Нуклеозидные аналоги для применения в композициях и комбинациях в настоящем документе
- 41 031986 включают пуриновые и пиримидиновые нуклеозидные аналоги, а также их производные и пролекарства. Пиримидиновые нуклеозидные аналоги включают фторпиримидин 5-фторурацил (5-FU; фторурацил), 5фтор-2'-дезоксицитидин (FCdR), арабинозилцитозин (ара-С; также называемый арабинозид цитозина или цитарабин), гемцитабин (2'-дезокси-2',2'-дифторцитидин), троксацитабин (β-Ε-диоксолан цитидин, ВСН4556), децитабин (5-аза-2'-дезоксицитидин), азацитидин (4-амино-1-Р-Э-рибофуранозил-1,3,5-триазин2(1Н)-он), псевдоизоцитидин (psi ICR), 5-аза-2'-дезокси-2',2'-дифторцитидин; 5-аза-2'-дезокси-2'фторцитидин; 1-3-О-рибофуранозил-2(Ш)-пиримидинон (зебуларин); 2',3'-дидезокси-5-фтор-3'тиацитидин (эмтрива); 2'-циклоцитидин (анцитабин); 1-3-Э-арабинофуранозил-5-азацитозин (фазарабин или ара-АС); 6-азацитидин (6-аза-CR); 5,6-дигидро-5-азацитидин (dH-аза-CR); М-пентилоксикарбонил5'-дезокси-5-фторцитидин (капецитабин); М-октадецил-цитарабин и цитарабин элаидиновую кислоту, и их производные и пролекарства, но не ограничиваются ими. Пуриновые нуклеозидные аналоги включают, например, флударабин, кладрибин, клофарабин, неларабин, фородезин, пентостатин и тезацитабин и их производные и пролекарства.
Другие пролекарства нуклеозидных аналогов известны в уровне техники или могут быть получены дополнительно. Например, другие пролекарства включают пролекарства, которые модиицированы с целью изменения свойств поглощения клетками и/или устойчивости к деактивации дезаминазой (обсуждается ниже). Например, такие пролекарства могут обеспечивать улучшенную абсорбцию при пероральном введении и/или увеличенное или специфичное действие на ткань (Li et al. (2008) Journal Pharm. Science, 97:1109-1134).
Противоопухолевая активность некоторых нуклеозидных аналогов была ограничена из-за низкого уровня достигаемой цитотоксичности. Это происходит в значительной степени из-за инактивации ферментами, которая может происходить во многих тканях. Например, метаболическая инактивация некоторых нуклеозидных аналогов может быть вызвана дезаминированием. Дезаминирование может катализироваться нуклеотид-специфичными дезаминазами, такими как аденозин дезаминаза или цитидин дезаминаза (cdA). Таким образом, некоторые противораковые лекарства метаболизируются ферментами, встречающимися в организме, такими как аденозин дезаминаза (ADA, EC 3.5.4.4) и цитидин дезаминаза (CDA, также называемая цитозиннуклеозиддезаминазой, цитидинаминогидролазой или ЕС 3.5.4.5). Эти ферменты функционируют в организме человека и в других организмах, дезаминируя природные аминопуриновые и аминопиримидиновые нуклеозиды соответственно. Эти ферменты также превращают активные противораковые лекарства на основе нуклеозидов в неактивные метаболиты. Например, CDA является компонентом пути реутилизации пиримидина. Она превращает цитидин и дезоксицитидин в уридин и дезоксиуридин, соответственно, путем гидролитического дезаминирования (Cacciamani et al. (1991) Arch. Biochem. Biophys. 290:285-292; Wentworth and Wolfenden (1978) Methods Enzymol. 57:401-407; Wisdom and Orsi (1967) Biochem. J. 104:7P). Она также дезаминирует ряд синтетических цитозиновых аналогов, являющихся применяемыми в клинике лекарствами, таких как ара-С и другие, как обсуждается ниже (Eliopoulos et al. (1998) Cancer Chemother. Pharmacol. 42:373-378; Kees et al. (1989) Cancer Res. 49:30153019; Antiviral Chem. Chemother. (1990) 1:255-262). Например, период полужизни гемцитабина в плазме составляет приблизительно 10 мин из-за быстрого дезаминирования эндогенным ферментом дезоксицитидин дезаминазой до соответствующего производного урацила (dFdU) (P.G. Johnston et al., Cancer Chromatography and Biological Response Modifiers, Annual 16, 1996, Chap. 1, ed. Pinedo H.M. et al.).
Например, лекарство арабинозиладенин (флударабин, ара-А), являющееся пуриновым нуклеозидом, дезаминируется ADA; полученное соединение, в котором исходная аминогруппа замещена на гидроксил, является неактивным в качестве противоопухолевого агента по сравнению с исходным соединением. Аналогично, лекарство арабинозилцитозин (также называемый цитарабин Ара-С (или АраС); 4-амино-1фЮ-арабинофуранозил)-2(1Н)-пиримидинон; цитозин арабинозид или 1-фЮ-арабинофуранозил)цитозин) метаболически разрушаются CDA до неактивного арабинозилурацила. Гемцитабин, децитабин, азацитидин и другие лекарства инактивируются аналогичным образом. Дезаминирование нуклеозидных аналогов, таких как цитозиновые нуклеозиды и их аналоги (например, цитарабин и гемцитабин), предотвращает накопление их токсичных внутриклеточных трифосфатных производных, которые действуют как активные метаболиты.
Превращение соединений цитозина в производные уридина обычно сопровождается потерей терапевтической активности или возникновением побочных эффектов. Также было показано, что рак, который приобретает устойчивость к лекарствам, относящимся к классу цитозиновых аналогов, часто сверхэкспрессирует CDA (Leuk. Res. 1990, 14, 751-754). Лейкемические клетки и солидные опухоли, экспрессирующие высокий уровень CDA, могут проявлять устойчивость к цитозиновым антиметаболитам и, тем самым, ограничивают противоопухолевую активность таких терапевтических агентов (Biochem. Pharmacol. 1993, 45:1857-1861). Устойчивость к нуклеозидным аналогам может требовать увеличения дозы, непрерывной инфузии или повторных введений. Эти эффекты могут привести к тяжелым неблагоприятным эффектам, в частности, связанным с миелосупрессией и иммуносупресией.
Активные формы кислорода (АФК) связаны с инактивацией ферментов, в том числе нуклеозид дезаминаз. Известно, что таксаны индуцируют внутриопухолевые АФК и, таким образом, инактивируют
- 42 031986 активность нуклеозид дезаминаз (см., например, Frese et al. (2012) Cancer Discovery, 2:260-269).
Таким образом, для целей настоящего документа примерами нуклеозидных аналогов для применения в комбинациях и композициях, предусмотренных в настоящем документе, являются нуклеозидные аналоги, которые представляют собой субстраты дезаминазы, и которые, таким образом, подвержены инактивации под действием этого фермента. Например, дезаминаза может представлять собой цитидин дезаминазу или аденозин дезаминазу. Внутриопухолевый уровень и активность таких аналогов могут быть значительно увеличены при комбинированной терапии с конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом и лекарственной формой таксана. Примеры таких нуклеозидных аналогов включают, но не ограничиваются ими, флударабин, цитарабин, гемцитабин, децитабин и азацитидин или их производные. В конкретных примерах, нуклеозидный аналог представляет собой такой нуклеозидный аналог, который можно использовать для лечения солидных опухолей, таких как рак мочевого пузыря, рак груди, рак легких, рак яичников, рак поджелудочной железы и другие виды рака.
Любые нуклеозидные аналоги, предусмотренные в настоящем документе, могут быть составлены в виде лекарственных форм в виде липосом, микрочастиц, наночастиц или конъюгатов с полимером. Например, могут быть получены лекарственные формы с контролируемой доставкой и/или увеличенными периодами полувыведения вводимых лекарств. Например, известны примеры липосомальных лекарственных форм (см., например, патенты США №№ 5736155 и 8022279).
Примеры нуклеозидных аналогов
i). Гемцитабин.
Гемцитабин (2',2'-дифтордезоксицитидин, dFdC) представляет собой дифторированный аналог дезоксицитидина и, таким образом, представляет собой нуклеозидный аналог или антиметаболит. После его проникновения в клетки в результате внутриклеточного фосфорилирования нуклеозид монофосфат и дифосфат киназами образуются 5'-дифосфатные (dFdCDP) и 5'-трифосфатные (dFdCTP) производные соответственно. Гемцитабин трифосфат действует как ложное основание, конкурируя с dCTP за включение в ДНК. После включения в ДНК до того, как прекратится удлинение цепи ДНК, в ДНК может быть включен только еще один нуклеотид. ДНК-полимераза эпсилон далее не способна удалить нуклеотид гемцитабин и осуществить репарацию растущих цепей ДНК (маскированный обрыв цепи (masked chain termination).
Гемцитабин продается на рынке под названием Gemzar®, представляет собой лекарственную форму в виде лиофилизированного порошка. Gemzar®, гемцитабин для инъекций, USP, содержит гемцитабин HCl, который представляет собой 2'-дезокси-2',2'-дифторцитидин моногидрохлорид (β-изомер). Gemzar® поставляется в виде лекарственных форм для внутривенного введения, содержащих либо 200 мг, либо 1 г гемцитабина HCl (на свободное основание), составленного с маннитолом (200 мг или 1 г соответственно) и ацетатом натрия (12,5 мг или 62,5 мг соответственно) в виде стерильного лиофилизированного порошка. рН лекарственной формы может быть скорректирован добавлением хлористоводородной кислоты и/или гидроксида натрия. Gemzar®, процесс его получения и способы его применения описаны в патентах США №№ 5464826 и 4808614. Gemzar® в настоящее время одобрен для лечения рака поджелудочной железы, рака груди и немелкоклеточного рака легких (NSCLC) и в настоящее время испытывается для рака яичников. Кроме того, Gemzar® может быть использован в лечении HCV, а также в качестве модулятора иммунной функции (см. патент США № 6555518). Gemzar® можно вводить путем внутривенной инфузии в дозе приблизительно от 1000 до 1250 мг/м2 в течение 30 мин, один раз в неделю в течение периода до 7 недель с последующим перерывом в лечении в течение недели.
Известны синтетические производные гемцитабина, в том числе несколько пролекарств (см., например, Ishitsuka et al., международную опубликованную заявку № WO 03/043631; Alexander et al. (2003)
J. Med. Chem., 46: 4205-4208; патент США № 6303569; Guo et al. (2001) Cancer Chemother. Pharmacol., 48:169-176; международную опубликованную заявку № WO 01/21135; Di Stefano et al. (1999) Biochem. Pharmacol, 57: 793-799; Guo et al. (1999) J. Org. Chem., 64: 8319-8322; международную опубликованную заявку № WO 99/33483; международную опубликованную заявку № WO 98/32762; международную опубликованную заявку № WO 98/00173; патенты США №№ 5606048; 5594124; европейскую патентную заявку № ЕР 712860; патенты США №№ 5521294; 5426183; 5401838; европейский патент № ЕР 0376518; европейскую патентную заявку № ЕР 577303; европейскую патентную заявку № ЕР 576230; Chou et al. (1992) Synthesis, 565-570; Richardson et al. (1992) Nucleic Acid Res., 20: 1763-1768; Baker et al. (1991) J. Med. Chem., 34: 1879-1884; международную опубликованную заявку № WO 91/15498; европейскую патентную заявку № ЕР 329348; европейскую патентную заявку № ЕР 272891).
Примеры улучшенных пролекарств включают гемцитабина элаидат (также называемый 2'-дезокси2',2'-дифторцитидин-5'-иловый эфир 9(Е)-октадеценовой кислоты; 2'-дезокси-2',2'-дифтор-5'-О-[9(Е)октадеценоил]цитидин; СР-4126; или регистрационный номер CAS 210829-30-4); меглюминовую соль эфира азелаиновой кислоты и гемцитабина (также называемую меглюминовая соль 1-[5-О-(9карбоксинонаноил)^^-арабинофуранозил]цитозина); другие соли эфира азелаиновой кислоты и гемцитабина; и 1 -[4-(2-пропилпентанамидо)-2-оксо-1Н-пиримидин-1 -ил]-2-дезокси-2,2-дифтор^^-рибофуранозу (также называемую LY-2334737), но не ограничиваются ими. Например, СР-4126 представляет со- 43 031986 бой липофильное производное гемцитабина, эфир ненасыщенной кислоты и гемцитабина. Благодаря своей липофильности, он демонстрирует увеличенное поглощение клетками и накопление в клетках, что приводит к увеличению превращения в активные метаболиты.
По сравнению с другими нуклеозидными аналогами гемцитабин и его производные или пролекарства обладают большей противоопухолевой активностью, в особенности в отношении солидных опухолей. Была показана противоопухолевая активность гемцитабина в отношении рака поджелудочной железы, мелкоклеточного и немелкоклеточного рака легких и рака мочевого пузыря.
Будучи относительно гидрофильным соединением гемцитабин имеет ограниченную способность проникать через плазматические мембраны путем пассивной диффузии. Таким образом, требуется увеличение дозы или инфузия. Введение гемцитабина было связано с некоторыми побочными эффектами. Вводимые дозы или более длительное время инфузии для поддержания цитотоксического уровня могут быть связаны с миелотоксичностью и другими неблагоприятными эффектами, такими как повышение уровня фермента трансаминазы печени, тошнота и рвота, а также кожная сыпь.
ii) . Цитарабин.
Цитарабин представляет собой нуклеозидный аналог, который был впервые выделен из губки Cryptotethya crypta. Цитарабин фосфорилируется до ара-СТР, который может конкурировать с dCTP. Ара-СТР также может быть включен в ДНК и препятствовать полимеризации цепи и репарации ДНК. Цитарабин может быть инактивирован цитидин дезаминазой.
Цитарабин, главным образом, использовался для гематологических раков. Были разработаны синтетические производные цитарабина и было показано, что они эффективны против солидных опухолей. Они включают, например, гемцитабин (см. выше). Например, известны эфирные производные цитарабина. Примером такого производного является СР-4055, который представляет собой эфир 5'-элаидиновой кислоты и цитарабина (см., например, Breistol et al. (1999) Cancer Res., 59:2944).
Из-за проблем с поддержанием достаточного уровня цитотоксических эффектов вводимые дозы или увеличенное время инфузии могут вызвать побочные эффекты, такие как миелосупрессия и другие специфические повреждения тканей.
iii) . Децитабин.
Децитабин (5-аза-2'-дезоксицитидин, 5-аза-CdR) представляет собой пиримидиновый нуклеозидный аналог цитидина. Децитабин был впервые получен циклизацией перацилгликозил изоцианатов (Pliml and Sorm (1964) Collect. Czech. Chem. Commun. 29:2576-2577). Можно различить две изомерные формы децитабина. β-аномер является активной формой. Децитабин является активным ингредиентом в коммерчески доступном продукте DACOGEN™, в форме стерильного лиофилизированного порошка для инъекций.
Внутри клетки децитабин сначала превращается в свою активную форму, фосфорилированный 5аза-дезоксицитидин, с помощью дезоксицитидин киназы, которая главным образом синтезируется в S фазе клеточного цикла. Аффинность децитабина к каталитическому участку дезоксицитидин киназы аналогична аффинности природного субстрата, дезоксицитидина (Momparler et al. (1985) Pharmacol Ther 30:287-299). После превращения в свою форму трифосфата дезоксицитидин киназой децитабин включается в репликацию ДНК со скоростью, аналогичной скорости для природного субстрата, dCTP (Bouchard and Momparler (1983) Mol. Pharmacol. 24:109-114).
Одной из функций децитабина является его способность специфически и эффективно ингибировать метилирование ДНК. Метилирование цитозина с образованием 5-метилцитозина происходит на уровне ДНК. Включение децитабина в цепь ДНК приводит к эффекту гипометилирования. Каждый класс дифференцированных клеток имеет свои собственные паттерны метилирования. После хромосомной дупликации, чтобы сохранить эти паттерны метилирования, 5-метилцитозин на родительской цепи служит для направленного метилирования комплементарной дочерней цепи ДНК. Замена углерода в позиции 5 цитозина на азот нарушает этот нормальный процесс метилирования ДНК. Замена 5-метицитозина на децитабин в специфичном участке метилирования приводит к необратимой инактивации ДНКметилтрансферазы, предположительно, из-за образования ковалентной связи между ферментом и децитабином (Juttermann et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:11797-11801). Специфично ингибируя ДНК-метилтрансферазу, фермент, необходимый для метилирования, можно предотвратить неправильное метилирование генов-супрессоров опухоли.
Способы получения децитабина, и, в частности, его β-аномера, известны в данной области техники (см., например, патенты США №; 3350388; 3817980; 4209613; опубликованную заявку США № US 20120046457; международную опубликованную заявку № WO 2008/101448; Winkley et al. (1970) J. Org. Chem., 35:491-495; Piskala et al. (1978) Nucleic Acids Research, 1:s109-s114; Ben-Hattar et al. (1986) J. Org. Chem., 51:3211-3213). Децитабин может быть составлен в виде лекарственной формы стандартными способами, известными в данной области техники. Лекарственные формы могут представлять собой жидкие или лиофилизированные лекарственные формы. Например, децитабин обычно поставляется в виде стерильного лиофилизированного порошка для инъекций вместе с буферной солью, такой как дигидрофосфат калия, и модификатором рН, таким как гидроксид натрия. Например, децитабин поставляется Super- 44 031986
Gen, Inc. в виде лиофилизированного порошка, упакованного в 20 мл стеклянные флаконы, содержащие 50 мг децитабина, одноосновный дигидрофосфат калия и гидроксид натрия. При восстановлении 10 мл стерильной воды для инъекций каждый мл содержит 5 мг децитабина, 6,8 мг KH2PO4 и приблизительно 1,1 мг NaOH. рН полученного раствора составляет 6,5-7,5. Восстановленный раствор может быть далее разбавлен до концентрации 1,0 или 0,1 мг/мл в холодном растворе для инфузии, т.е. 0,9% хлоридом натрия; или 5% декстрозой; или 5% глюкозой; или раствором Рингера с лактатом. Невскрытые флаконы, как правило, хранят в холодильнике (2-8°C; 36-46°F) в упаковке производителя. Также известны жидкие лекарственные формы (см., например, патент США № 6982253).
Децитабин имеет короткий период полувыведения in vivo по причине дезаминирования децитабина до 5-аза-2'-дезоксиуридина, которое катализируется цитидин дезаминазой (Chabot et al. (1983) Biochemical Pharmacology 22:1327-1328). Рассчитанная Km децитабина для очищенного фермента из печени человека составляла 250 мкМ, а Km для природного субстрата, дезоксицитидина, составляла 12 мкМ. Скорость дезаминирования дезоксицитидина цитидин дезаминозой была примерно в 6 раз выше, чем скорость дезаминирования децитабина при равных концентрациях. В связи с коротким периодом полувыведения децитабин чаще всего вводят пациентам путем инъекций, например путем болюсной внутривенной инъекции, непрерывной внутривенной инфузии или внутривенной инфузии.
Продолжительность внутривенной инфузии может быть ограничена распадом децитабина в водных растворах. Существуют более стабильные в водных растворах производные децитабина (см., например, патент США № 7250416).
iv). Азацитидин.
5-Азацитидин (обозначение Национального центра по химиотерапии рака NSC-102816; регистрационный номер CAS 320-67-2), также известный как азацитидин, AZA, или 4-амино-1-Р-Эрибофуранозил-1,3,5-триазин-2(1Н)-он, представляет собой аналог децитабина (см., например, Hanna et al. (1998) Collect. Czech. Chem. Commun., 63:222-230). В настоящее время известен на рынке как лекарственный препарат VIDAZA®. Азацитидин представляет собой нуклеозидный аналог, а именно аналог цитидина. Он является антагонистом природных нуклеозидов. Например, единственное структурное различие между азацитозином и цитозином заключается в наличии атома азота в 5 положении цитозинового кольца в азацитозине по сравнению с атомом углерода в этой позиции в цитозине.
Способы получения азацитидина и, в частности, способы, которые позволяют избежать использования воды, известны в данной области техники (патенты США №№ 3350388; 8058424; Winkley and Robins (1970) J. Org. Chem., 35:491; Piskala and Sorm (1978) Nucl. Acid. Chem., 1:435; и Vorbrueggen et al. (1981) Chemische Berichte, 114:1234-1255).
Азацитидин является субстратом для цитидин дезаминазы (см., например, Voytek et al. (1977) Cancer Res., 37:1956-61). Для проявления цитотоксических эффектов in vivo требуются высокие концентрации или непрерывная инфузия лекарства. Побочные эффекты среди прочих включают снижение количества белых и красных клеток крови и тромбоцитов, тошноту, рвоту, усталость, диарею и другие.
D. Способы получения нуклеиновых кислот и кодируемых полипептидов разрушающих гиалуронан ферментов.
Полипептиды разрушающего гиалуронан фермента, такого как растворимая гиалуронидаза, раскрытые в данном документе, могут быть получены хорошо известными в данной области способами очистки белков и экспрессии рекомбинантного белка. Когда полипептиды получают рекомбинантными способами, может быть использован любой способ идентификации нуклеиновых кислот, которые кодируют желаемые гены, известный специалистам в данной области техники. Любой метод, доступный в данной области, может быть использован для получения полноразмерной (т.е. охватывающей всю кодирующую область) кДНК или клона геномной ДНК, кодирующих гиалуронидазу, например, из клетки или ткани. Модифицированные растворимые гиалуронидазы или их варианты могут быть сконструированы из полипептида дикого типа, например, путем сайт-направленного мутагенеза.
Полипептиды могут быть клонированы или выделены с применением любых доступных способов, известных в данной области для клонирования и выделения молекул нуклеиновых кислот. Такие способы включают ПЦР-амплификацию нуклеиновых кислот и скрининг библиотек, в том числе скрининг нуклеиновых кислот методом гибридизации, скрининг на основе антител и активности.
Для выделения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей нужный полипептид, могут быть использованы методы амплификации нуклеиновых кислот, включая, например, методы полимеразной цепной реакции (ПЦР). Материал, содержащий нуклеиновую кислоту, может быть использован в качестве исходного материала, из которого может быть выделена желаемая нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид. Например, препараты ДНК и мРНК, клеточные экстракты, экстракты тканей, образцы жидкости (например, кровь, сыворотка, слюна) и образцы от здоровых и/или больных субъектов могут быть использованы в способах амплификации. Библиотеки нуклеиновых кислот также могут быть использованы в качестве источника исходного материала. Для амплификации интересующего полипептида могут быть разработаны праймеры. Например, праймеры могут быть сконструированы на основе экспрессируемых последовательностей, с которых синтезируется нужный полипептид. Праймеры могут быть раз- 45 031986 работаны на основе аминокислотной последовательности полипептида. Молекулы нуклеиновых кислот, полученные путем амплификации, могут быть секвенированы и проверены на наличие закодированного интересующего полипептида.
К молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, могут быть присоединены дополнительные нуклеотидные последовательности, в том числе линкерные последовательности, содержащие сайты рестрикции, с целью клонирования синтетического гена в вектор, например экспрессионный вектор или вектор, предназначенный для амплификации кодирующих белки последовательностей ДНК. Кроме того, дополнительные нуклеотидные последовательности, определяющие функциональные элементы ДНК, могут быть функционально связаны с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид. Примеры таких последовательностей включают, но не ограничиваются ими, промоторные последовательности, предназначенные для обеспечения внутриклеточной экспрессии белка, и секреторные последовательности, например гетерологичные сигнальные последовательности, предназначенные для обеспечения секреции белка. Такие последовательности известны специалистам в данной области. Дополнительные нуклеотидные последовательности, такие как последовательности азотистых оснований, определяющих связывающиеся с белками районы, также могут быть связаны с молекулами нуклеиновых кислот, кодирующими фермент. Такие области включают, но не ограничиваются ими, последовательности оснований, которые обеспечивают или кодируют белки, которые облегчают поглощение фермента конкретными целевыми клетками или иным образом изменяют фармакокинетику продукта синтетического гена. Например, ферменты могут быть связаны с PEG фрагментами.
Кроме того, могут быть добавлены метки или другие фрагменты, например, для возможности обнаружения или аффинной очистки полипептида. Например, дополнительные последовательности нуклеотидных остатков, такие как последовательности оснований, обеспечивающие эпитопную метку или другой детектируемый маркер, также могут быть связаны с молекулами нуклеиновых кислот, кодирующими фермент. Примеры таких последовательностей включают последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие His-tag (например, 6xHis, НННННН; SEQ ID NO: 54) или Flag-Tag (DYKDDDDK; SEQ ID NO: 55).
Идентифицированные и выделенные нуклеиновые кислоты затем могут быть вставлены в соответствующий вектор для клонирования. Может быть использовано большое количество систем векторов и хозяев, известных в данной области. Возможные векторы включают, но не ограничиваются ими, плазмиды или модифицированные вирусы, но векторная система должна быть совместима с используемой клеткой-хозяином. Такие векторы включают, но не ограничиваются ими, бактериофаги, такие как производные бактериофага лямбда, или плазмиды, такие как производные плазмиды pCMV4, pBR322 или pUC, или вектор Bluescript (Stratagene, La Jolla, CA). Другие экспрессионные векторы включают вектор экспрессии HZ24, являющийся примером в данном документе. Вставка в вектор для клонирования может быть осуществлена, например, путем лигирования фрагмента ДНК в вектор для клонирования, который имеет комплементарные липкие концы. Вставка может быть осуществлена с применением ТОРОвекторов для клонирования (Invitrogen, Carlsbad, CA). Если комплементарные сайты рестрикции, используемые для фрагмента ДНК, не присутствуют в векторе для клонирования, то концы молекул ДНК могут быть ферментативно модифицированы. Кроме того, любой интересующий сайт мож:ет быть получен путем лигирования нуклеотидных последовательностей (линкеров) на концах ДНК; и эти лигированные линкеры могут содержать определенные химически синтезированные олигонуклеотиды, кодирующие последовательности, распознаваемые эндонуклеазой рестрикции. В другом способе расщепленный эндонуклеазой вектор и ген белка могут быть изменены с помощью гомополимерных хвостовых последовательностей. Рекомбинантные молекулы могут быть введены в клетки-хозяева, например, посредством трансформации, трансфекции, инфекции, электропорации и сонопорации, так что в клетки доставляется множество копий последовательности гена.
В конкретных вариантах осуществления трансформация клеток-хозяев рекомбинантными молекулами ДНК, которые включают выделенный ген белка, кДНК или синтезированную последовательность ДНК, позволяет получать множество копий гена. Таким образом, ген может быть получен в больших количествах в растущих трансформантах, выделен в виде рекомбинантных молекул ДНК из трансформантов и, при необходимости, извлечён из выделенной рекомбинантной ДНК.
1. Векторы и клетки.
Для рекомбинантной экспрессии одного или более желаемых белков, таких как любой разрушающий гиалуронан белок, описанный в настоящем документе, нуклеиновая кислота, содержащая всю нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, или ее часть, может быть вставлена в соответствующий экспрессионный вектор, т.е. вектор, который содержит необходимые элементы для транскрипции и трансляции встроенной кодирующей белок последовательности. Необходимые сигналы транскрипции и трансляции также могут содержаться в нативном промоторе гена фермента и/или его фланкирующих участках.
Также предусмотрены векторы, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую фермент. Также предусмотрены клетки, содержащие векторы. Клетки включают эукариотические и прокариотические клетки, а векторы включают в себя любые подходящие векторы для применения в этих клетках.
- 46 031986
Предусмотрены прокариотические и эукариотические клетки, в том числе эндотелиальные клетки, содержащие векторы. Такие клетки включают бактериальные клетки, дрожжевые клетки, клетки грибов, архей, растительные клетки, клетки насекомых и клетки животных. Такие клетки используют для получения белка путем выращивания вышеописанных клеток в условиях, при которых кодируемый белок экспрессируется в клетке, и последующего выделения из этих клеток экспрессированного белка. Например, для целей данного изобретения фермент может быть секретирован в среду.
Предусмотрены векторы, которые содержат последовательность нуклеотидов, которая кодирует полипептид разрушающего гиалуронан фермента, в некоторых примерах, полипептид растворимой гиалуронидазы, соединенный с нативной или гетерологичной сигнальной последовательностью, а также множеством ее копий. Векторы могут быть выбраны для экспрессии белка фермента в клетке или экспрессии фермента в виде секретируемого белка.
Для экспрессии последовательности, кодирующей белок, могут быть использованы разнообразные системы вектор-хозяин. Они включают, но не ограничиваются ими, системы клеток млекопитающих, инфицированных вирусом (например, вирусом коровьей оспы, аденовирусом и другими вирусами); системы клеток насекомых, инфицированных вирусом (например, бакуловирусом); микроорганизмы, такие как дрожжи, содержащие дрожжевые векторы, или бактерии, трансформированные ДНК бактериофага, плазмидной ДНК или космидной ДНК. Элементы экспрессионных векторов различаются по своей силе и специфичности. В зависимости от используемой системы вектор-хозяин может быть использован любой из множества подходящих элементов транскрипции и трансляции.
Для конструирования экспрессионных векторов, содержащих химерный ген с соответствующими сигналами контроля транскрипции/трансляции и последовательностями, кодирующими белок, могут быть использованы любые известные специалистам в данной области способы вставки фрагментов ДНК в вектор. Эти способы могут включать способы получения рекомбинантной ДНК in vitro и синтетические подходы, и рекомбинацию in vivo (генетическая рекомбинация). Экспрессию последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих белок или домены, производные, фрагменты или их гомологи, можно регулировать с помощью второй последовательности нуклеиновой кислоты, так что гены или их фрагменты экспрессируются в хозяине, трансформированном рекомбинантной молекулой (молекулами) ДНК. Например, экспрессией белков можно управлять с помощью любого промотора/энхансера, известного в данной области. В конкретном варианте промотор не является нативным для гена интересующего белка. Промоторы, которые можно использовать, включают, но не ограничиваются ими, ранний промотор SV40 (Bernoist and Chambon, Nature 290:304-310 (1981)), промотор, содержащейся в З'-длинном концевом повторе вируса саркомы Рауса (Yamamoto et al. Cell. 22:787-797 (1980)), промотор тимидин-киназы вируса герпеса (Wagner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1441-1445 (1981)), регуляторные последовательности гена металлотионеина (Brinster et al., Nature 296:39-42 (1982)); прокариотические экспрессионные векторы содержат промотор β-лактамазы (Jay et al., (1981) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:5543) или tac-промотор (DeBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:21-25 (1983)); см. также Useful Proteins from Recombinant Bacteria: in Scientific American 242:79-94 (1980); экспрессионные векторы растений содержат промотор нопалин-синтетазы (Herrera-Estrella et al., Nature 303:209-213 (1984)) или промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты (Gardner et al., Nucleic Acids Res. 9:2871 (1981)) и промотор фотосинтетического фермента рибулозобисфосфаткарбоксилазы (Herrera-Estrella et al., Nature 310:115-120 (1984)); промоторные элементы из дрожжей и других грибов включают промотор Gal4, промотор алкогольдегидрогеназы, промотор фосфоглицераткиназы, промотор щелочной фосфатазы, в трансгенных животных были использованы следующие участки контроля транскрипции животных, которые проявляют тканевую специфичность: регуляторный участок гена эластазы I, который активен в ацинарных клетках поджелудочной железы (Swift et al., Cell 38:639-646 (1984); Ornitz et al., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409 (1986); MacDonald, Hepatology 7:425-515 (1987)); регуляторный участок гена инсулина, который активен в β-клетках поджелудочной железы (Hanahan et al., Nature 315:115-122 (1985)), регуляторный участок гена иммуноглобулина, который активен в лимфоидных клетках (Grosschedl et al., Cell 38:647-658 (1984); Adams et al., Nature 318:533-538 (1985); Alexander et al., Mol. Cell. Biol. 7:1436-1444 (1987)), регуляторный участок вируса опухоли молочной железы мыши, который активен в яичке, молочной железе, лимфоидных и тучных клетках (Leder et al., Cell. 45:485-495 (1986)), регуляторный участок гена альбумина, который активен в печени (Pinkert et al., Genes and Devel. 1:268-276 (1987)), регуляторный участок гена αфетопротеина, который активен в печени (Krumlauf et al., Mol. Cell. Biol. 5:1639-1648 (1985); Hammer et al., Science 235:53-58 1987)), регуляторный участок гена α-1 антитрипсина, который активен в печени (Kelsey et al., Genes and Devel. 1:161-171 (1987)), регуляторный участок гена β-глобина, который активен в миелоидных клетках (Magram et al., Nature 315:338-340 (1985); Kollias et al., Cell. 46:89-94 (1986)), регуляторный участок гена основного белка миелина, который активен в олигодендроцитах мозга (Readhead et al., Cell. 48:703-712 (1987)), регуляторный участок гена лёгких цепей миозина 2, который активен в скелетных мышцах (Shani, Nature 314:283-286 (1985)) и регуляторный участок гена рилизинг-фактора гонадотропного гормона, который активен в гонадотропных клетках гипоталамуса (Mason et al., Science 234:1372-1378 (1986)).
- 47 031986
В конкретном варианте осуществления используется вектор, который содержит промотор, функционально связанный с нуклеиновыми кислотами, кодирующими интересующий белок или его домен, фрагмент, производное или гомолог, одну или несколько точек начала репликации и, необязательно, один или несколько маркеров для селекции (например, ген устойчивости к антибиотику). Примеры плазмидных векторов для трансформации клеток E.coli включают, например, векторы экспрессии pQE (доступные в Qiagen, Valencia, CA, см. также опубликованную литературу Qiagen по описанию системы). Векторы pQE имеют промотор фага Т5 (узнаваемый РНК-полимеразой Е. coli) и удвоенный модуль репрессии lac-оператора, что обеспечивает жестко регулируемую экспрессию рекомбинантных белков в E.coli на высоком уровне, также векторы включают синтетический сайт связывания рибосомы (RBS II) для эффективной трансляции, последовательность, кодирующую 6xHis-метку, терминаторы транскрипции t0 и Т1, ориджин репликации ColE1 и ген β-лактамазы для устойчивости к ампициллину. Векторы pQE позволяют размещать 6xHis-метку на N- или С-конце рекомбинантного белка. Такие плазмиды включают pQE 32, pQE 30 и pQE 31, которые имеют сайты множественного клонирования для всех трех рамок считывания и обеспечивают экспрессию 6xHis-меченных с N-конца белков. Другие примеры плазмидных векторов для трансформации клеток E.coli включают, например, векторы экспрессии рЕТ (см. патент США 4952496; доступны от Novagen, Madison, WI; см. также опубликованную литературу Novagen с описанием системы). Такие плазмиды включают рЕТ 11а, которая содержит промотор ТТкю. терминатор Т7, индуцируемый lac-оператор E.coli и ген lac-репрессора; рЕТ 12а-с, которая содержит промотор Т7, терминатор Т7 и секреторный сигнал OmpT E.coli; и рЕТ 15b и pET19b (Novagen, Madison, WI), которые содержат лидерную последовательность His-Tag™ для применения при очистке на специфичной к His колонке и сайт расщепления тромбином, который обеспечивает расщепление после очистки на колонке, ТТ-кю промоторный участок и Т7 терминатор.
Примером вектора для экспрессии в клетках млекопитающих является вектор экспрессии HZ24. Вектор экспрессии HZ24 был получен из векторной конструкции pCI (Promega). Он содержит участки ДНК, кодирующие ген β-лактамазы для устойчивости к антибиотику (AmpR), короткий Е1-ориджин репликации, немедленный-ранний энхансер/промотор цитомегаловируса (CMV) и поздний сигнал полиаденилирования SV40 (SV40). Вектор экспрессии также имеет внутренний сайт посадки рибосомы (IRES) вируса ECMV (Clontech) и ген дигидрофолатредуктазы (DHFR) мыши.
2. Экспрессия.
Полипептиды разрушающего гиалуронан фермента, в том числе полипептиды растворимой гиалуронидазы, могут быть получены любым способом, известным специалистам в данной области, включая способы in vivo и in vitro. Интересующие белки могут быть экспрессированы в любом организме, подходящем для получения требуемого количества и формы белков, например необходимых для введения и лечения. Экспрессионные организмы включают прокариотические и эукариотические организмы, такие как E.coli, дрожжи, растения, клетки насекомых, клетки млекопитающих, в том числе клеточные линии человека, и трансгенных животных. Экспрессионные организмы могут отличаться по уровню получения белков, а также типам посттрансляционных модификаций, которые присутствуют на экспрессированных белках. Выбор экспрессионного организма может быть сделан на основе этих и других факторов, таких как соображения нормативного регулирования и безопасности, себестоимости и необходимости и методов очистки.
Специалистам в данной области доступны и известны различные экспрессионные векторы, которые могут быть использованы для экспрессии белков. Выбор экспрессионного вектора будет зависеть от выбора хозяина системы экспрессии. В целом, экспрессионные векторы могут включать транскрипционные промоторы и, необязательно, энхансеры, сигналы трансляции, сигналы терминации транскрипции и трансляции. Экспрессионные векторы, используемые для стабильной трансформации, обычно имеют маркер для селекции, который обеспечивает селекцию и поддержание трансформированных клеток. В некоторых случаях, для амплификации числа копий вектора могут быть использованы ориджины репликации.
Полипептиды разрушающих гиалуронан ферментов, такие как полипептиды растворимой гиалуронидазы, могут также быть использованы или экспрессированы в виде слитых белков. Например, слитый фермент может быть получен для добавления ферменту дополнительной функции. Примеры слитых белков-ферментов включают, но не ограничиваются ими, белки, слитые с сигнальными последовательностями, например сигналами для локализации, например, his6-меткой или myc-меткой, или белки, слитые с последовательностями для очистки, например, с GST, а также белки, слитые последовательностью для направления секреции белка и/или ассоциации с мембраной.
а). Прокариотические клетки.
Прокариоты, особенно Е. coli, обеспечивают систему для получения больших количеств белка. Трансформация Е. coli является простым и быстрым способом, хорошо известным специалистам в данной области. Экспрессионные векторы для Е. coli могут содержать индуцируемые промоторы, такие промоторы являются удобными для индуцирования высоких уровней экспрессии белка и для экспрессии белков, которые проявляют некоторую токсичность для клеток-хозяев. Примеры индуцируемых промо- 48 031986 торов включают lac-промотор, trp-промотор, гибридный tac-промотор, промоторы Т7 и SP6 РНКполимераз и регулируемый температурой λΡΕ-промотор.
Белки, такие как любой указанный здесь белок, могут быть экспрессированы в цитоплазме Е. coli. Цитоплазма является восстановительной средой, и для некоторых молекул это может стать причиной образования нерастворимых телец включения. Восстанавливающие агенты, такие как дитиотреитол и βмеркаптоэтанол, и денатурирующие агенты, такие как гуанидин-HCl и мочевина, могут быть использованы для восстановления растворимости белков. Альтернативный подход состоит в экспрессии белков в периплазматическом пространстве бактерий, которое является окислительной средой и содержит шаперонинподобные белки и дисульфидизомеразы, что может привести к образованию растворимого белка. Как правило, чтобы направить экспрессию белка в периплазму, с белком сливают лидерную последовательность. Лидерная последовательность затем удаляется сигнальными пептидазами внутри периплазмы. Примеры периплазматических лидерных последовательностей включают лидерную последовательность гена пектат-лиазы pelB и лидерную последовательность, полученную из гена щелочной фосфатазы. В некоторых случаях периплазматическая экспрессия приводит к утечке экспрессированного белка в культуральную среду. Секреция белков обеспечивает быструю и простую очистку от культурального супернатанта. Белки, которые не секретируются, могут быть получены из периплазмы после осмотического лизиса. Подобно цитоплазматической экспрессии в некоторых случаях белки могут стать нерастворимыми, и денатурирующие и восстанавливающие агенты могут быть использованы, чтобы способствовать растворению и ренатурации. Температура индукции и роста также может влиять на уровни экспрессии и растворимость, как правило, используется интервал температур между 25 и 37°C. Как правило, бактерии производят агликозилированные белки. Таким образом, если белки требуют гликозилирования для выполнения своей функции, гликозилирование может быть осуществлено in vitro после очистки из клетокхозяев.
b) . Клетки дрожжей.
Дрожжи, такие как Saccharomyces cerevisae, Schizosaccharomyces pombe, Yarrowia lipolytica, Kluyveromyces lactis и Pichia pastoris, являются хорошо известными экспрессионными организмами, которые могут быть использованы для получения белков, таких как любой из описанных здесь белков. Дрожжи можно трансформировать эписомными реплицирующимися векторами или путем стабильной интеграции в хромосомы методом гомологичной рекомбинации. Как правило, для регулирования экспрессии генов используют индуцируемые промоторы. Примеры таких промоторов включают GAL1, GAL7 и GAL5 и промоторы металлотионеина, такие как CUP1, АОХ1, или другие промоторы Pichia или других дрожжей. Экспрессионные векторы часто включают маркер для селекции, такой как LEU2, TRP1, HIS3 и URA3 для отбора и поддержания трансформированной ДНК. Белки, экспрессируемые в дрожжах, часто являются растворимыми. Совместная экспрессия с шаперонинами, такими как Bip, и протеиндисульфидизомеразой может улучшить уровни экспрессии и растворимость. Кроме того, белки, экспрессированные в дрожжах, могут быть направленно секретированы с помощью слияния с сигнальным секреторным пептидом, таким как секреторный сигнал дрожжевого фактора спаривания альфа Saccharomyces cerevisae, и слияния с поверхностными белками клетки дрожжей, такими как рецептор адгезии спаривания Aga2p или глюкоамилаза Arxula adeninivorans. Чтобы затем удалить слитые последовательности от экспрессированных полипептидов, когда они выходят из секреторного пути, может быть добавлен сайт расщепления протеазой, например протеазой Kex-2. Дрожжи также способны к гликозилированию по мотивам Asn-X-Ser/Thr.
c) . Клетки насекомых.
Клетки насекомых, в частности система бакуловирусной экспрессии, полезны для экспрессии полипептидов, таких как полипептиды гиалуронидазы. Клетки насекомых экспрессируют высокие уровни белка и способны к большинству посттрансляционных модификаций, используемых высшими эукариотами. Бакуловирусы имеют ограниченный круг хозяев, что повышает безопасность и снижает нормативные требования к эукариотической экспрессии. Типичные векторы экспрессии используют промотор для экспрессии высокого уровня белка, такой как промотор полиэдрина бакуловируса. Обычно используемые бакуловирусные системы включают бакуловирусы, такие как вирус ядерного полиэдроза Autographa californica (AcNPV) и вирус ядерного полиэдроза Bombyx mori (BmNPV), и клеточные линии насекомых, такие как Sf9, полученные из Spodoptera frugiperda, Pseudaletia unipuncta (A7S) и Danaus plexippus (DpN1). Для высокого уровня экспрессии нуклеотидная последовательность экспрессируемой молекулы должна быть вставлена непосредственно после инициаторного кодона полиэдрина вируса. Сигналы секреции млекопитающих точно процессируются в клетках насекомых и могут быть использованы для секреции экспрессированного белка в культуральную среду. Кроме того, клеточные линии Pseudaletia unipuncta (A7S) и Danaus plexippus (DpN1) продуцируют белки с гликозилированием, аналогичным таковому в клеточных системах млекопитающих.
В качестве альтернативной системы экспрессии в клетках насекомых используются стабильно трансформированные клетки. Для экспрессии могут быть использованы клеточные линии, такие как Schneider 2 (S2), Kc (Drosophila melanogaster) и С7 (Aedes albopictus). Промотор металлотионеина дрозо- 49 031986 филы может быть использован, чтобы обеспечивать высокие уровни экспрессии при индукции тяжелыми металлами кадмием или медью. Векторы экспрессии обычно поддерживают с помощью маркеров для селекции, таких как неомицин и гигромицин.
d) . Клетки млекопитающих.
Для экспрессии белков, включая полипептиды разрушающего гиалуронан фермента, такие как полипептиды растворимой гиалуронидазы, могут быть использованы системы экспрессии млекопитающих. Экспрессионные конструкции могут быть доставлены в клетки млекопитающих путём вирусной инфекции, такой как аденовирусная инфекция, или путем прямого переноса ДНК, например, с помощью липосом, фосфата кальция, DEAE-декстрана и физических способов, таких как электропорация и микроинъекция. Экспрессионные векторы для клеток млекопитающих, как правило, включают в себя сайт кэпирования мРНК, ТАТА-бокс, последовательность инициации трансляции (консенсусная последовательность Козака) и сигналы полиаденилирования. Чтобы обеспечить бицистронную экспрессию другого гена, например маркера для селекции, также могут быть добавлены IRES элементы. Такие векторы часто включают промоторы-энхансеры транскрипции для высокого уровня экспрессии, например промоторэнхансер SV40, промотор цитомегаловируса человека (CMV) и длинный концевой повтор вируса саркомы Рауса (RSV). Эти промоторы-энхансеры активны во многих типах клеток. Тканеспецифичные и клеточно-специфичные промоторные и энхансерные участки также могут быть использованы для экспрессии. Примеры участков промотора/энхансера включают, но не ограничиваются ими, последовательности из генов, таких как гены эластазы I, инсулина, иммуноглобулина, вируса опухоли молочной железы мыши, альбумина, а-фетопротеина, а-1-антитрипсина, β-глобина, основного белка миелина, легкой цепи миозина 2 и гена рилизинг-фактора гонадотропного гормона. Для отбора и поддержания клеток с экспрессионной конструкцией могут быть использованы маркеры для селекции. Примеры маркерных генов для селекции включают, но не ограничиваются ими, гены гигромицин-В-фосфотрансферазы, аденозиндезаминазы, ксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазы, аминогликозидфосфотрансферазы, дигидрофолатредуктазы (DHFR) и тимидинкиназы. Например, экспрессия может быть осуществлена в присутствии метотрексата для селекции только тех клеток, которые экспрессируют ген DHFR. Слияние с сигнальными молекулами клеточной поверхности, такими как TCR-ζ и FceRI-γ, может направить экспрессию белков в активном состоянии на поверхности клетки.
Для экспрессии в клетках млекопитающих, подходят различные клеточные линии, в том числе клеточные линии мыши, крысы, человека, обезьяны, курицы и хомяка. Типичные клеточные линии включают, но не ограничиваются таковыми, СНО, HeLa, Balb/3Т3, МТ2, мышиные NSO (не секретирующие) и другие линии клеток, миеломные, гибридомные и гетерогибридомные клеточные линии, лимфоциты, фибробласты, клетки Sp2/0, COS, NIH3T3, HEK293, 293S, 2В8 и HKB. Доступны также клеточные линии, адаптированные к бессывороточной среде, что облегчает очистку секретируемых белков из клеточной культуральной среды. Примеры включают клетки CHO-S (Invitrogen, Carlsbad, CA, Cat#11619-012) и бессывороточную клеточную линию EBNA-1 (Pham et al., (2003) Biotechnol. Bioeng. 84:332-42). Также доступны клеточные линии, которые способны расти в специальных средах, оптимизированных для максимальной экспрессии. Например, клетки DG44 СНО приспособлены расти в суспензионной культуре в химически охарактеризованной среде без животных компонентов.
e) . Растения.
Трансгенные растительные клетки и растения могут быть использованы для экспрессии белков, таких как любой из описанных здесь белков. Экспрессионные конструкции, как правило, вводят в растения с применением прямого переноса ДНК, например, бомбардировкой микрочастицами и PEGопосредованной передачей в протопласты, и агробактериальной трансформацией. Экспрессионные векторы могут включать промотор и энхансер, элементы терминации транскрипции и элементы контроля трансляции. Экспрессионные векторы и способы трансформации, как правило, различаются для двудольных растений-хозяев, таких как Arabidopsis и табак, и для однодольных растений-хозяев, таких как кукуруза и рис. Примеры промоторов растений, используемых для экспрессии, включают промотор вируса мозаики цветной капусты, промотор нопалин-синтазы, промотор рибулозобисфосфаткарбоксилазы и промоторы убиквитина и UBQ3. Маркеры селекции, такие как гены гигромицина, фосфоманнозоизомеразы и неомицинфосфотрансферазы, часто используют для облегчения селекции и поддержания трансформированных клеток. Трансформированные растительные клетки можно поддерживать в культуре клеток, в виде агрегатов (каллусная ткань), и регенерировать в целые растения. Трансгенные растительные клетки могут также включать водоросли, разработанные для получения полипептида гиалуронидазы. Поскольку растения имеют типы гликозилирования, отличающиеся от таковых в клетках млекопитающих, это может повлиять на выбор получения белка в этих организмах.
3. Способы очистки.
Способ очистки полипептидов, включая полипептиды разрушающего гиалуронан фермента (например, полипептида растворимой гиалуронидазы), или других белков из клеток-хозяев будет зависеть от выбранных клеток-хозяев и систем экспрессии. В случае секретируемых молекул, белки, как правило, очищают от культуральной среды после удаления клеток. При внутриклеточной экспрессии клетки могут
- 50 031986 быть лизированы, а белки очищены из экстракта. Когда для экспрессии используют трансгенные организмы, такие как трансгенные растения и животные, то в качестве исходного материала, чтобы подготовить лизированный экстракт клеток, могут быть использованы ткани или органы. Кроме того, получение белка в трансгенных животных может включать получение полипептидов в молоке или яйцах, которые могут быть собраны и, если необходимо, белки могут быть извлечены и дополнительно очищены с применением стандартных методов, известных в данной области.
Белки, такие как полипептиды растворимой гиалуронидазы, могут быть очищены с применением стандартных методов очистки белков, известных в данной области, включая, но не ограничиваясь, SDSPAGE, фракционирование по размеру и гель-хроматографию, осаждение сульфатом аммония и ионообменную хроматографию, такую как анионообменную хроматографию. Для повышения эффективности очистки и чистоты препаратов также могут быть использованы аффинные способы очистки. Например, в аффинной очистке могут быть использованы антитела, рецепторы и другие молекулы, которые связывают фермент гиалуронидазу. Экспрессионные конструкции также могут быть сконструированы таким образом, чтобы добавить к белку аффинную метку, такую как myc-эпитоп, слияние с GST или His6, после чего белки могут быть аффинно очищены с помощью антител к myc, глутатионовой смолы и Niсмолы соответственно. Чистота может быть оценена любым способом, известным в данной области, в том числе гель-электрофорезом, методами ВЭЖХ (HPLC), окрашиванием и спектрофотометрическими методами. Композиции очищенного rHuPH20, как представлено в данном описании, как правило, имеют удельную активность по меньшей мере от 70000 до 100000 ед/мг, например около 120000 ед/мг. Удельная активность может варьировать в зависимости от модификации, например, с помощью полимера.
4. Пегилирование полипептидов разрушающиего гиалуронан фермента.
Полиэтиленгликоль (PEG) широко используется в биоматериалах, биотехнологии и медицине в первую очередь потому, что PEG является биосовместимым, нетоксичным, водорастворимым полимером, который, как правило, является неиммуногенным (Zhao and Harris, ACS Symposium Series 680: 45872, 1997). В области доставки лекарственных средств PEG-производные широко используются при ковалентном присоединении PEG (т.е. ПЭГилировании (пегилировании)) к белкам с целью снижения иммуногенности, протеолиза и клиренса в почках и для повышения растворимости (Zalipsky, Adv. Drag Del. Rev. 16:157-82, 1995). Таким же способом PEG присоединяют к низкомолекулярным, относительно гидрофобным препаратам для повышения растворимости, снижения токсичности и изменения биораспределения. Как правило, пегилированные препараты вводят инъекцией в виде растворов.
Близкими применениями являются синтез поперечно-сшитых деградируемых сетей PEG или получение композиций для использования в доставке лекарственных средств, так как большое количество тех же химических соединений и приемов, используемых для создания деградируемых, растворимых носителей лекарственных средств, также может быть использовано для создания деградируемых гелей (Sawhney et al., Macromolecules 26: 581-87, 1993). Кроме того, известно, что межмолекулярные комплексы могут быть образованы путем смешивания растворов двух комплементарных полимеров. Такие комплексы, как правило, стабилизируются электростатическими взаимодействиями (полианион-поликатион) и/или водородными связями (поликислота-полиоснование) между вовлечёнными полимерами и/или гидрофобными взаимодействиями между полимерами и водным окружением (Krupers et al., Eur. Polym J. 32:785-790, 19966). Например, смешивание растворов полиакриловой кислоты (РААс) и полиэтиленоксида (РЕО) при надлежащих условиях приводит к образованию комплексов, основанных, главным образом, на водородных связях. Диссоциация этих комплексов в физиологических условиях была использована для доставки немодифицированных лекарственных средств (т.е. не пегилированных). Кроме того, комплексы комплементарных полимеров формируются из гомополимеров и сополимеров.
Многочисленные реагенты для пегилирования были описаны в данной области. Такие реагенты включают, но не ограничиваются ими, активированный N-гидроксисукцинимидилом (NHS) PEG, сукцинимидил mPEG, mPEG2-N-гидроксисукцинимид, mPEG-сукцинимидил α-метилбутаноат, mPEGсукцинимидилпропионат, mPEG-сукцинимидилбутаноат, сукцинимидиловый эфир mPEG карбоксиметил 3-гидроксибутановой кислоты, гомобифункциональный PEG-сукцинимидилпропионат, гомобифункциональный PEG-пропиональдегид, гомобифункциональный PEG-бутиральдегид, PEG-малеимид, PEGгидразид, паранитрофенил-карбонат PEG, mPEG-бензотриазол карбонат, пропиональдегид PEG, mPEGбутиральдегид, разветвленный mPEG2-бутиральдегид, mPEG-ацетил, mPEG-пиперидон, mPEGметилкетон, mPEG-малеимид без линкера, mPEG-винилсульфон, mPEG-тиол, MPEGортопиридилтиоэфир, MPEG-ортопиридил дисульфид, Fmoc-PEG-NHS, Boc-PEG-NHS, винилсульфон PEG-NHS, акрилат PEG-NHS, флуоресцеин PEG-NHS и биотин PEG-NHS (см., например, Monfardini et al., Bioconjugate Chem. 6:62-69, 1995; Veronese et al., J. Bioactive Compatible Polymers 12:197-207, 1997; US 5672662; US 5932462; US 6495659; US 6737505; US 4002531; US 4179337; US 5122614; US 5324844; US 5446090; US 5612460; US 5643575; US 5766581; US 5795569; US 5808096; US 5900461; US 5919455; US 5985263; US 5990 237; US 6113906; US 6214966; US 6258351; US 6340742; US 6413507; US 6420339; US 6437025; US 6448369; US 6461802; US 6828401; US 6858736; US 2001/0021763; US 2001/0044526; US 2001/0046481; US 2002/0052430; US 2002/0072573; US 2002/0156047; US 2003/0114647; US 2003/0143596; US 2003/0158333; US 2003/0220447; US 2004/0013637; US 2004/0235734; WO 0500360; US 2005/0114037;
- 51 031986
US 2005/0171328; US 2005/0209416; EP 1064951; EP 0822199; WO 01076640; WO 0002017; WO 0249673;
WO 9428024; и WO 0187925).
В одном примере полиэтиленгликоль имеет молекулярную массу в диапазоне от примерно 3 до примерно 50 кДа и обычно от примерно 5 до примерно 30 кДа. Ковалентное присоединение PEG к препарату (известное как ПЭГилирование (пегилирование)) может быть осуществлено известными методами химического синтеза. Например, пегилирование белка может быть осуществлено путем взаимодействия NHS-активированного PEG с белком при соответствующих условиях реакции.
Несмотря на то, что было описано множество реакций для присоединения PEG, наиболее широко применяемые из них обладают направленностью, проходят при мягких условиях и не требуют трудоемкой последующей обработки для удаления токсичных катализаторов или побочных продуктов. Например, монометокси PEG (mPEG) имеет только одну реакционноспособную концевую гидроксильную группу, и, таким образом, его применение ограничивает некоторую гетерогенность получаемой смеси продукта PEG-белка. Активация гидроксильной группы на конце полимера, противоположном концевой метоксигруппе, обычно необходима для достижения эффективного пегилирования белка, чтобы сделать производные PEG более восприимчивыми к нуклеофильной атаке. Атакующим нуклеофилом обычно является эпсилон-аминогруппа остатка лизина, но и другие амины также могут вступать в реакцию (например, N-концевая альфа-аминогруппа или амины в цикле гистидина), если локальные условия являются для этого благоприятными. Более направленное присоединение возможно в белках, содержащих один лизин или цистеин. Последний остаток может быть мишенью PEG-малеимида для тиол-специфической модификации. Кроме того, PEG-гидразид может быть подвергнут взаимодействию с окисленным периодатом разрушающим гиалуронан ферментом с последующим восстановлением в присутствии NaCNBH3. Для более специфичного пегилирования пегилированный СМР-углевод может быть подвергнут взаимодействию с разрушающим гиалуронан ферментом в присутствии соответствующих гликозил-трансфераз. Одним из подходов является подход пегилирования, где с полипептидом соединяется множество полимерных молекул. При использовании этого подхода иммунной системе сложнее распознать эпитопы на поверхности полипептида, отвечающие за образование антител, за счёт чего снижается иммунный ответ. Для полипептидов, введенных непосредственно в кровеносную систему человека для получения специфического физиологического эффекта (т.е. фармацевтических препаратов), типичным потенциальным иммунным ответом является ответ IgG и/или IgM, в то время как для полипептидов, которые вдыхают через дыхательную систему (т.е. продуктов промышленности) потенциальной реакцией может быть ответ IgE (т.е. аллергическая реакция). Одна из теорий, объясняющих снижение иммунного ответа, состоит в том, что полимерная молекула (молекулы) экранируют эпитоп (эпитопы) на поверхности полипептида, отвечающие за иммунный ответ, приводящий к образованию антител. Другая теория или, по меньшей мере, фактор, оказывающий частичное влияние, состоит в том, что чем тяжелее конъюгат, тем более снижается иммунный ответ.
Как правило, чтобы получить пегилированные разрушающие гиалуронан ферменты, предусмотренные в настоящем описании, в том числе пегилированные гиалуронидазы, фрагменты PEG конъюгируют путём ковалентного присоединения с полипептидами. Способы пегилирования включают, но не ограничиваются таковыми, использование специализированных линкеров и сшивающих химических соединений (см., например, Roberts, Adv. Drug Deliv. Rev. 54:459-476, 2002), присоединение множества фрагментов PEG к единственному сайту конъюгации (например, при использовании разветвлённых PEG; см., например, Guiotto et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:177-180, 2002), сайт-специфическое пегилирование и/или монопегилирование (см., например, Chapman et al., Nature Biotech. 17:780-783, 1999) и сайтнаправленное ферментативное пегилирование (см., например, Sato, Adv. Drug Deliv. Rev., 54:487-504, 2002). Способы и подходы, описанные в данной области, позволяют получать белки, имеющие 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более 10 PEG или производных PEG, присоединенных к одной молекуле белка (см., например, US 2006/0104968).
В качестве примера метода получения пегилированных разрушающих гиалуронан ферментов, таких как пегилированные гиалуронидазы, для конъюгирования PEG-фрагментов с rHuPH20 могут быть применены PEG-альдегиды, сукцинимиды и карбонаты, обычно сукцинимидил PEG. Например, rHuPH20 был конъюгирован с примерами сукцинимидил моноPEG (mPEG) реагентов, в том числе mPEGсукцинимидилпропионатами (mPEG-SPA), mPEG-сукцинимидилбутаноатами (mPEG-SBA) и с mPEG2-Nгидроксилсукцинимидом (для присоединения разветвленного PEG). Эти пегилированные сукцинимидиловые эфиры содержат между группой PEG и активированным кросс-сшивающим агентом углеродные цепи различной длины, и содержат единственную или разветвленную группу PEG. Эти различия могут быть использованы, например, для обеспечения различной кинетики реакций и потенциального ограничения сайтов, доступных для присоединения PEG к rHuPH20 в процессе конъюгации.
Сукцинимидил PEG (см. выше), содержащий линейные или разветвленные PEG, может быть конъюгирован с rHuPH20. PEG может использоваться для получения rHuPH20, воспроизводимо содержащих молекулы, имеющие, в среднем, примерно от трёх до шести или от трех до шести молекул PEG на гиалуронидазу. Такие композиции пегилированной rHuPH20 можно легко очистить с получением композиций, имеющих удельную активность гиалуронидазы приблизительно 25000 или 30000 ед/мг белка и практиче- 52 031986 ски не содержащих не пегилированной rHuPH20 (менее 5% не пегилированного фермента).
При использовании различных реагентов PEG могут быть получены примеры вариантов разрушающих гиалуронан ферментов, в частности растворимых рекомбинантных человеческих гиалуронидаз (например, rHuPH20), например, с помощью mPEG-SBA (30 кДа), mPEG-SMB (30 кДа) и разветвленных вариантов на основе mPEG2-NHS (40 кДа) и mPEG2-NHS (60 кДа). Пегилированные варианты rHuPH20 были получены с использованием реагентов NHS, а также карбонатов и альдегидов при применении каждого из следующих реагентов: разветвлённого mPEG2-NHS-40K, разветвлённого mPEG-NHS-10K, разветвлённого mPEG-NHS-20K, разветвлённого mPEG2-NHS -60K; mPEG-SBA-5K, mPEG-SBA-20K, mPEG-SBA-30K; mPEG-SMB-20K, mPEG-SMB-30K; mPEG-бутиральдегида; mPEG-SPA-20K, mPEGSPA-30K и PEG-NHS-5K-биотина. Пегилированные гиалуронидазы также могут быть получены с применением реагентов PEG, доступных от Dowpharma, подразделение Dow Chemical Corporation; включая гиалуронидазы, пегилированные PEG-паранитрофенилкарбонатом Dowpharma (30 кДа) и PEGпропиональдегидом (30 кДа).
В одном примере пегилирование включает конъюгацию mPEG-SBA, например mPEG-SBA-30K (имеющего молекулярную массу около 30 кДа), или других сукцинимидиловых эфиров производных PEG бутановой кислоты с растворимой гиалуронидазой. Сукцинимидиловые эфиры производных PEG бутановой кислоты, такие как mPEG-SBA-30K, легко соединяются с аминогруппами белков. Например, ковалентное конъюгирование m-PEG-SBA-30K и rHuPH20 (приблизительно 60 кДа) приводит к образованию стабильных амидных связей между rHuPH20 и mPEG, как показано на схеме 1, приведенной ниже.
Схема 1
О
о
Н3СО —^-СНзСН^О ^-СН2СН2С Н2С —Ν —— rtlu Pl-120 η пегилированная rHuPH20
Как правило, mPEG-SBA-30K или другие PEG добавляют к разрушающему гиалуронан ферменту, в некоторых случаях к гиалуронидазе, при молярном соотношении PEG: полипептид 10:1 в соответствующем буфере, например в 130 мМ NaCl/10 мМ HEPES, рН 6,8 или в 70 мМ фосфатном буфере, рН 7, с последующей стерилизацией, например, путём стерильной фильтрации, и проводят конъюгацию, например, при перемешивании в течение ночи при 4°C в холодной комнате. В одном примере конъюгированный с PEG разрушающий гиалуронан фермент концентрируют и заменяют буфер.
Другие способы соединения сукцинимидиловых эфиров производных PEG бутановой кислоты, таких как mPEG-SBA-30K, известны в данной области (см., например, патент US 5672662; патент US 6737505 и US 2004/0235734). Например, полипептид, такой как разрушающий гиалуронан фермент (например, гиалуронидаза), может быть соединен с активированным NHS производным PEG путём реакции в боратном буфере (0,1М, рН 8,0) в течение 1 ч при 4°C. Полученный пегилированный белок может быть очищен путем ультрафильтрации. Кроме того, пегилирование бычьей щелочной фосфатазы может быть достигнуто путем перемешивания фосфатазы с mPEG-SBA в буфере, содержащем 0,2М фосфата натрия и 0,5М NaCl (рН 7,5) при 4°C в течение 30 мин. Непрореагировавший PEG может быть удалён путем ультрафильтрации. Другим способом является реакция полипептида с mPEG-SBA в деионизированной воде, в которую добавляют триэтиламин для повышения рН до 7,2-9. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение нескольких часов для завершения пегилирования.
Способы пегилирования разрушающих гиалуронан полипептидов, в том числе, например, гиалуронидаз животного происхождения и бактериальных разрушающих гиалуронан ферментов, известны специалистам в данной области техники. См., например, европейский патент ЕР 0400472, в котором описывается пегилирование гиалуронидазы из бычьих яичек и хондроитин ABC лиазы. Кроме того, опубликованная заявка США 20060104968 описывает пегилирование человеческой гиалуронидазы, полученной из человеческой РН20. Например, пегилированный разрушающий гиалуронан фермент обычно содержит по меньшей мере три группы PEG на молекулу. Например, разрушающий гиалуронан фермент может иметь молярное соотношение PEG: белок в диапазоне от 5:1 до 9:1, например 7:1.
Е. Фармацевтические композиции и лекарственные формы.
В настоящем документе предусмотрены композиции или комбинации антигиалуронового агента и
- 53 031986 лекарственной формы направленного на опухоль таксана. Например, в настоящем документе предусмотрены композиции или комбинации конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента и лекарственной формы направленного на опухоль таксана. Лекарственная форма таксана может быть составлена в виде совместной лекарственной формы с композицией, содержащей антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, или может вводиться совместно с композицией, содержащей антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент. Например, такие комбинации и композиции могут быть использованы для лечения рака, в том числе солидных опухолей, как описано в настоящем документе. В некоторых примерах антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, может быть предусмотрен в виде комбинации отдельных композиций, которые вводятся отдельно. В других примерах, антигиалуроновый агент, например, разрушающий гиалуронан фермент, и таксан предусмотрены в одной композиции и могут вводиться вместе. Композиции или комбинации композиций могут быть составлены для парентеральной доставки (т.е. для системной доставки). Например, композиции или комбинации композиций составлены для подкожной доставки или для внутривенной доставки.
Также в настоящем документе предусмотрены комбинации и композиции, содержащие третий агент, который представляет собой дополнительный химиотерапевтический агент для лечения рака, такой как нуклеозидный аналог или другой антиметаболит (например, гемцитабин или его производное или другой нуклеозидный аналог). Примеры таких агентов описаны выше и в других местах в настоящем документе. Дополнительный химиотерапевтический агент, например нуклеозидный аналог, может быть составлен в виде одной лекарственной формы с композициями, содержащими антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, и/или композициями, содержащими направленный на опухоль таксан, или может вводиться совместно с композициями, содержащими антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, и/или композициями, содержащими направленный на опухоль таксан. Например, дополнительный химиотерапевтический агент, например нуклеозидный аналог, может быть предусмотрен в виде отдельной композиции от комбинаций или композиций антигиалуронового агента, например разрушающего гиалуронан фермента, и таксана. В других примерах, нуклеозидный аналог составлен в виде одной лекарственной формы с одним или обоими агентами, выбранными из антигиалуронового агента, например разрушающего гиалуронан фермента, и таксана. Например, нуклеозидный аналог составлен в виде одной лекарственной формы с антигиалуроновым агентом, таким как разрушающий гиалуронан фермент, и направленный на опухоль таксан предусмотрен в виде отдельной композиции. В другом примере нуклеозидный аналог составлен в виде одной лекарственной формы с направленным на опухоль таксаном, и антигиалуроновый агент, например разрушающий гиалуронан фермент, предусмотрен в виде отдельной композиции. В другом примере нуклеозидный аналог, антигиалуроновый агент и направленный на опухоль таксан составлены вместе в одной композиции. Композиции или комбинации композиций могут быть составлены для парентеральной доставки (т.е. для системной доставки). Например, композиции или комбинации композиций составлены для подкожной доставки или для внутривенной доставки.
Композиции могут быть составлены в виде лекарственной формы для однократного введения или для многократного введения. Агенты могут быть составлены в виде лекарственной формы для непосредственного введения. Композиции могут быть предусмотрены в виде жидкой или лиофилизированной лекарственной формы.
Соединения могут быть составлены в виде подходящих фармацевтических лекарственных форм, таких как растворы, суспензии, таблетки, диспергируемые таблетки, пилюли, капсулы, порошки, лекарственные формы с замедленным высвобождением или эликсиры для перорального введения, а также трансдермальные пластыри и ингаляторы сухого порошка. Как правило, соединения составлены в виде фармацевтических композиций с использованием методов и методики, хорошо известных в данной области техники (см., например, Ansel Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, Fourth Edition, 1985, 126). Обычно тип лекарственной формы зависит от способа введения. Композиции могут быть составлены в виде одной лекарственной формы или предусмотрены в виде отдельных композиций.
Обычно композиции составлены в виде лиофилизированной или жидкой формы. Если композиции предусмотрены в лиофилизированной форме, они могут быть восстановлены непосредственно перед применением с помощью соответствующего буфера, например стерильного солевого раствора. Композиции могут быть предусмотрены совместно или отдельно. Для целей настоящего документа такие композиции, как правило, предусмотрены отдельно. Антигиалуроновый агент, например разрушающий гиалуронан фермент, такой как растворимая гиалуронидаза, направленный на опухоль таксан и/или дополнительный химиотерапевтический агент, могут быть упакованы в виде отдельных композиций для введения вместе, последовательно или прерывисто. Комбинации могут быть упакованы в виде набора.
Композиции могут быть составлены в виде лекарственной формы для введения любым способом, известным специалистам в данной области техники, в том числе для внутримышечной, внутривенной, внутрикожной, внутриочаговой, внутрибрюшинной инъекции, подкожного, внутриопухолевого, эпидурального, назального, перорального, вагинального, ректального, местного, локального, ушного, ингаляционного, буккального (например, сублингвального) и трансдермального введения или любого другого
- 54 031986 способа введения. Другие способы введения также предусмотрены. Введение может быть локальным, местным или системным в зависимости от места лечения. Локальное введение в область, нуждающуюся в лечении, может быть достигнуто, например, путем локальной инфузии во время хирургического лечения, местного применения, например, в сочетании с раневой повязкой после хирургической операции, путем инъекции, с помощью катетера, с помощью суппозитория или с помощью имплантата, но не ограничиваясь этим. Композиции также могут быть введены с другими биологически активными агентами, либо последовательно, либо прерывисто, либо в одной композиции. Введение также может включать системы с контролируемым высвобождением, в том числе лекарственные формы с контролируемым высвобождением и устройства для контролируемого высвобождения, такие как помпа.
Любой подходящий способ в любом конкретном случае зависит от множества факторов, таких как природа заболевания, прогрессирование заболевания, тяжесть заболевания и конкретная используемая композиция. Для целей настоящего документа, желательно, чтобы антигиалуроновый агент, как правило, разрушающий гиалуронан фермент, такой как растворимая гиалуронидаза, направленный на опухоль таксан и/или дополнительный химиотерапевтический агент, вводились таким образом, чтобы в плазме они присутствовали в фармацевтически доступном количестве или на фармацевтически доступном уровне. Например, композиции вводят системно, например, посредством внутривенного введения. Подкожные способы введения также могут быть использованы, несмотря на то, что может потребоваться увеличение времени абсорбции для обеспечения эквивалентной биодоступности по сравнению с внутривенными способами. Агенты, такие как разрушающий гиалуронан фермент, направленный на опухоль таксан и/или дополнительный химиотерапевтический агент (например, нуклеозидный аналог), могут быть введены разными способами введения. Фармацевтические композиции могут быть составлены в виде дозированных лекарственных форм, подходящих для каждого способа введения.
Способы введения могут быть использованы для уменьшения негативного воздействия на разрушающие гиалуронан ферменты, например растворимые гиалуронидазы, и другие молекулы, такого как протеолитическая деградация и иммунологическая реакция через антигенные и иммуногенные ответы. Примеры таких способов включают локальное введение в участок лечения или непрерывную инфузию антигиалуронового агента.
1. Лекарственные формы.
Фармацевтически приемлемые композиции получают с учетом указаний регулирующих ведомств или других ведомств в соответствии с общепризнанной фармакопеей для применения на животных и на людях. Композиции могут иметь форму растворов, суспензий, эмульсий, таблеток, пилюль, капсул, порошков и лекарственных форм с замедленным высвобождением. Композиция может быть составлена в виде суппозитория с обычными связывающими агентами и носителями, такими как триглицериды. Пероральная лекарственная форма может включать стандартные носители, такие как фармацевтически чистые маннит, лактозу, крахмал, стеарат магния, сахарин натрия, целлюлозу, карбонат магния и другие такие агенты. Лекарственная форма должна соответствовать способу введения.
Фармацевтические композиции могут включать носители, такие как разбавитель, адъювант, эксципиент или среда, с которыми вводят фермент или активатор. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences автора B.W. Martin. Такие композиции будут содержать терапевтически эффективное количество соединения, обычно в очищенной форме, вместе с подходящим количеством носителя, таким, чтобы обеспечить форму для надлежащего введения пациенту. Такие фармацевтические носители могут представлять собой стерильные жидкости, такие как вода и масла, в том числе минеральные масла, масла, имеющие животное или растительное происхождение, или синтетические масла, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло и кунжутное масло. Вода является типичным носителем, когда фармацевтическую композицию вводят внутривенно. Солевые растворы и водные расвторы декстрозы и глицерола также могут использоваться в качестве жидких носителей, в частности, для инъецируемых растворов. Композиции также могут содержать вместе с активным ингредиентом разбавитель, такой как лактоза, сахароза, дикальция фосфат или карбоксиметилцеллюлоза; смазывающий агент, такой как стеарат магния, стеарат кальция и тальк; и связывающий агент, такой как крахмал, природные камеди, такие как аравийская камедь, желатин, глюкоза, меласса, поливинилпирролидон, целлюлоза и ее производные, повидон, кросповидон и другие такие связывающие агенты, известные специалистам в данной области техники. Подходящие фармацевтические эксципиенты включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рисовую муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерол, пропилен, гликол, воду и этанол. Если необходимо, композиция также может содержать незначительные количества смачивающих или эмульгирующих агентов, или рН буферных агентов, например, ацетата, цитрата натрия, производных циклодекстрина, сорбитанмонолаурата, монолаурат сорбитана, триэтаноламин ацетата натрия, триэтаноламин олеата и других таких агентов.
В одном из примеров фармацевтический препарат может быть в жидкой форме, например, в виде растворов, сиропов или суспензий. Такие жидкие препараты могут быть получены обычными способами с фармацевтически приемлемыми добавками, такими как суспендирующие агенты (например, сироп сорбита, производные целлюлозы или гидрогенизированные пищевые жиры); эмульгирующие агенты (на- 55 031986 пример, лецитин или аравийская камедь); неводные носители (например, миндальное масло, жирные сложные эфиры или фракционированные растительные масла); и консерванты (например, метил- или пропил-п-гидроксибензоаты или сорбиновая кислота). В другом примере, фармацевтические препараты могут быть представлены в лиофилизированной форме для восстановления водой или другой подходящей средой перед применением.
Фармацевтически и терапевтически активные соединения и их производные, как правило, составлены и вводятся в виде лекарственных форм для однократного введения или в виде лекарственных форм для многократного введения. Каждая однократная доза содержит заранее определенное количество терапевтически активного соединения, достаточное для получения желательного терапевтического эффекта, вместе с требуемым фармацевтическим носителем, средой или разбавителем. Лекарственные формы для однократного введения включают, но не ограничиваются ими, таблетки, капсулы, пиллюли, порошки, гранулы, стерильные растворы или суспензии для парентерального введения и растворы или суспензии для перорального введения, эмульсии масло-вода, содержащие подходящие количества соединений или их фармацевтически приемлемых производных. Лекарственные формы для однократного введения могут быть предусмотрены в ампулах и шприцах или в индивидуально упакованных таблетках или капсулах. Лекарственные формы для однократного введения могут быть введены частями, или может быть введено несколько лекарственных форм. Лекарственная форма для многократного введения представляет собой множество идентичных лекарственных форм для однократного введения, упакованных в один контейнер для введения отдельными лекарственными формами для однократного введения. Примеры лекарственных форм для многократного введения включают флаконы, банки таблеток или капсул или банки, содержащие пинты или галлоны содержимого. Таким образом, лекарственная форма для многократного введения представляет собой множество однократных доз, не разделенных в упаковке. Обычно, могут быть получены дозированные лекарственные формы или композиции, содержащие активный ингредиент в диапазоне от 0,005 до 100%, где остальное их содержимое представлено нетоксичным наполнителем.
Фармацевтическая композиция может быть составлена в виде дозированных лекарственных форм, подходящих для каждого способа введения.
а). Инъекционные формы, растворы и эмульсии.
В настоящем документе предусмотрено парентеральное введение, обычно осуществляемое инъекцией, такой как подкожная, внутримышечная, внутриопухолевая, внутривенная или внутрикожная инъекция. Инъекционные формы могут быть получены обычными способами в виде жидких растворов или суспензий, твердых форм, подходящих для растворения или суспендирования в жидкости перед инъекцией, либо в виде эмульсий. Подходящими эксципиентами являются, например, вода, солевой раствор, декстроза, глицерол или этанол. Кроме того, если необходимо, фармацевтические композиции для введения также могут содержать активатор в форме растворителя, такой как рН буферные агенты, соли ионов металлов или другие такие буферы. Фармацевтические композиции также могут содержать другие незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, рН буферные агенты, стабилизаторы, усилители растворимости и другие такие агенты, такие как, например, ацетат натрия, сорбитан монолаурат, триэтаноламин олеат и циклодекстрин. Также в настоящем документе предусмотрена имплантация систем с медленным высвобождением или с замедленным высвобождением, позволяющих поддерживать постоянный уровень дозы (см., например, патент США № 3710795). Процент активного соединения, содержащегося в такой парентеральной композиции, сильно зависит от его конкретной природы, а также от активности соединения и потребностей субъекта.
Например, стандартная стабилизированная лекарственная форма конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента, такого как конъюгированная с полимером растворимая гиалуронидаза, как предусмотрено в настоящем документе, составлена с одним или несколькими веществами, выбранными из ЭДТА, NaCl, CaCl2, гистидина, лактозы, альбумина, Pluronic® F68, TWEEN® и/или других детергентов или других аналогичных агентов. Например, предусмотренные в настоящем документе композиции могут включать один или несколько рН буферов (таких как, например, гистидиновый, фосфатный или другие буферы) или кислых буферов (таких как ацетатный, цитратный, пируватный, Gly-HCl, сукцинатный, лактатный, малеатный или другие буферы), модификатор тоничности (такой как, например, аминокислота, полиспирт, NaCl, трегалоза, другие соли и/или сахара), стабилизатор, хелатирующий агент, такой как этилендиаминтетрауксусная кислота, этилендиаминтетраацетат или ЭДТА кальция, поглотитель кислорода, такой как метионин, аскорбиновая кислота/аскорбат, лимонная кислота/цитрат, или альбумин и/или консервант, такой как консервант, содержащий ароматическое кольцо (например, фенол или крезол). Примеры стабилизаторов, которые используются в композициях, содержащих разрушающий гиалуронан фермент, включают детергенты, такие как полисорбаты, и белки, такие как человеческий сывороточный альбумин. Примеры концентраций сывороточного альбумина, которые используются в композициях в настоящем документе, включают от 0,1 до 1 мг/мл сывороточного альбумина, например по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или примерно, или 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 или 1 мг/мл сывороточного альбумина, но могут быть больше или меньше. Также в композициях могут присутствовать полисорбаты в концентрациях, например, составляющих или составляющих при- 56 031986 мерно между 0,001 и 0,1%, например по меньшей мере примерно, или по меньшей мере, или примерно, или 0,001, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,006, 0,007, 0,008, 0,009, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09 или 0,1%. Также может присутствовать хелатирующий металлы агент, такой как ЭДТА кальция (CaEDTA), например, в концентрации между примерно 0,02 и 20 мМ, такой как по меньшей мере примерно, или по меньшей мере, или примерно, или 0,02, 0,04, 0,06, 0,08, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 5, 10, 15, 20 мМ или более. рН и осмолярность композиции могут быть скорректированы специалистом в данной области техники для оптимизации условий для необходимой активности и стабильности композиции. В некоторых примерах предусмотрены композиции, имеющие осмолярность между 100 и 500 мОсм/кг, например по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или примерно, или 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 420, 440, 460, 500 или больше, и рН между или примерно между 6 и 8, например между 6 и 7,4, например, рН, равный или равный примерно 6, 6,2, 6,4, 6,6, 6,8, 7, 7,2, 7,4, 7,6, 7,8 или 8.
Обычно в лекарственных формах, содержащих разрушающий гиалуронан фермент, в настоящем документе предусмотрен NaCl, например, в количестве, которое составляет или составляет примерно от 100 до 150 мМ или больше. Например, в примере лекарственной формы она может содержать или может содержать примерно 10 мМ гистидина и/или может содержать или содержать примерно 130 мМ NaCl. Другие лекарственные формы могут содержать дополнительно или альтернативно лактозу, например 13 мг/мл или примерно 13 мг/мл лактозы. Дополнительно в лекарственной форме может присутствовать антибактериальный или противогрибковый агент, включая тиомерсал, но не ограничиваясь им. Лекарственные формы могут также содержать альбумин, Pluronic® F68, TWEEN® и/или другой детергент. Предусмотренные лекарственные формы имеют рН, который составляет или составляет примерно от 6,0 до 7,4, например 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3 или 7,4, обычно имеют рН, который составлят или составляет примерно рН 6,5. Концентрированные лекарственные формы модифицированной растворимой гиалуронидазы для применения в настоящем документе обычно разводят в солевом растворе или другом солевом буферном растворе перед введением для создания соответствующей концентрации соли.
Инъекции предназначены для локального и системного введения. Для целей настоящего документа локальное введение желательно для непосредственного введения в пораженный интерстиций, ассоциированный с накопленным или избыточным гиалуронаном. Препараты для парентерального введения включают стерильные готовые растворы для инъекции, стерильные сухие растворимые продукты, такие как лиофилизированные порошки, готовые для объединения с растворителем непосредственно перед применением, в том числе подкожные таблетки, стерильные суспензии, готовые для инъекций, стерильные сухие нерастворимые продукты, готовые для объединения с носителем непосредственно перед применением, и стерильные эмульсии. Растворы могут быть водными либо неводными. При внутривенном введении подходящие наполнители включают физиологический солевой или фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) и растворы, содержащие загустители и солюбилизирующие агенты, такие как глюкоза, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль и их смеси.
Фармацевтически приемлемые носители, используемые в парентеральных композициях, включают водные носители, неводные носители, противомикробные агенты, изотонические агенты, буферы, антиоксиданты, местные анестетики, суспендирующие и диспергирующие агенты, эмульгирующие агенты, секвестрирующие или хелатирующие агенты и другие фармацевтически приемлемые вещества. Примеры водных носителей включают хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, изотонический раствор декстрозы для инъекций, стерильную воду для инъекций, декстрозу и лактатный раствор Рингера для инъекций. Неводные парентеральные носители включают жирные масла растительного происхождения, хлопковое масло, кукурузное масло, кунжутное масло и арахисовое масло. К парентеральным композициям, упакованным в многодозовые контейнеры, могут быть добавлены противомикробные средства в бактериостатических или фунгистатических концентрациях, которые включают фенолы или крезолы, производные ртути, бензиловый спирт, хлорбутанол, метиловый и пропиловый сложные эфиры п-гидроксибензойной кислоты, тимеросал, хлорид бензалкония и хлорид бензетония. Изотонические агенты включают хлорид натрия и декстрозу. Буферы включают фосфат и цитрат. Антиоксиданты включают бисульфат натрия. Местные анестетики включают гидрохлорид прокаина. Суспендирующие и диспергирующие агенты включают натрий карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и поливинилпирролидон. Эмульгаторы включают полисорбат 80 (Tween 80). Секвестрирующие или хелатирующие агенты для ионов металлов включают ЭДТА. Фармацевтические носители также включают этиловый спирт, полиэтиленгликоль и пропиленгликоль для водорастворимых носителей и гидроксид натрия, соляную кислоту, лимонную кислоту или молочную кислоту для регулирования рН.
При внутривенном введении подходящие носители включают физиологический солевой или фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), и растворы, содержащие загустители и солюбилизирующие агенты, такие как глюкоза, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль и их смеси.
Концентрация фармацевтически активного соединения может быть скорректирована таким образом, чтобы инъекция обеспечивала эффективное количество для получения желаемого фармакологического эффекта. Точная доза зависит от возраста, веса и состояния пациента или животного, как это из- 57 031986 вестно в данной области техники. Препараты для однократного парентерального введния упакованы в ампулу, флакон или шприц с иглой. Объем жидкого раствора или восстановленного препарата порошка, содержащего фармацевтически активное соединение, зависит от заболевания, подлежащего лечению, и конкретного изделия, выбранного для упаковки. Все препараты для парентерального введния должны быть стерильными, как это известно и применяется на практике в данной области техники.
b) . Лиофилизированные порошки.
В настоящем документе предусмотрены лиофилизированные порошки, которые могут быть восстановлены для введения в виде растворов, эмульсий и других смесей. Они также могут быть восстановлены и составлены в виде твердых лекарственных форм или гелей. Лиофилизированные порошки также могут быть получены из любого из описанных выше растворов.
Стерильный лиофилизированный порошок получают путем растворения соединения антигиалуронового агента, который представляет собой разрушающий гиалуронан фермент, такой как растворимая гиалуронидаза, и/или второго агента в буферном растворе. Буферный раствор может содержать эксципиент, который улучшает стабильность, или другой фармакологический компонент порошка или восстановленного раствора, полученного из порошка. Стерильная фильтрация раствора с последующей лиофилизацией при стандартных условиях, известных специалистам в данной области техники, обеспечивает получение желаемой лекарственной формы. Кратко, лиофилизированный порошок получают путем растворения эксципиента, такого как декстроза, сорбит, фруктоза, кукурузный сироп, ксилит, глицерин, глюкоза, сахароза или другой подходящий агент в подходящем буфере, таком как цитрат, фосфат натрия или калия или другой такой буфер, известный специалистам в данной области техники. Далее выбранный фермент добавляют к полученной смеси и перемешивают до полного его растворения. Полученную смесь фильтруют в стерильных условиях или обрабатывают, чтобы удалить частицы и обеспечить стерильность, и распределяют во флаконы для лиофилизации. Каждый флакон будет содержать однократную дозу (1 мг - 1 г, обычно 1-100 мг, например 1-5 мг) или множество доз соединения. Лиофилизированный порошок можно хранить в соответствующих условиях, таких как примерно от 4°C до комнатной температуры.
Восстановление такого лиофилизированного порошка буферным раствором обеспечивает лекарственную форму для применения при парентеральном введении.
Точное количество зависит от показаний, подлежащих лечению, и выбранного соединения. Такое количество может быть определено опытным путем.
c) . Местное введение.
Местные смеси получают, как описано для местного и системного введения. Полученная смесь может представлять собой раствор, суспензию, эмульсии или тому подобное и может быть составлена в виде кремов, гелей, мазей, эмульсий, растворов, эликсиров, лосьонов, суспензий, настоек, паст, пены, аэрозолей, растворов для орошения, спреев, суппозиториев, бандажей, кожных пластырей или любых других лекарственных форм, подходящих для местного введения.
Соединения или их фармацевтически приемлемые производные могут быть составлены в виде лекарственных форм аэрозолей для местного введения, например, путем ингаляции (см., например, патенты США №№ 4044126, 4414209 и 4364923, в которых описаны аэрозоли для доставки стероида, используемые для лечения воспалительных заболеваний, в частности астмы). Эти лекарственные формы для введения в дыхательные пути могут быть в форме аэрозоля или раствора для распылителя или в виде мелкодисперсного порошка для инсуффляции, отдельно или в комбинации с инертным наполнителем, таким как лактоза. В таком случае частицы лекарственной формы будут, как правило, иметь диаметр меньше чем 50 мкм, предпочтительно меньше чем 10 мкм.
Соединения могут быть составлены в виде лекарственных форм для локального или местного введения, такого как, местное применение на кожу и слизистые оболочки, такие как глаза, в форме гелей, кремов и лосьонов, а также для введения в глаза или для интрацистернального или интраспинального введения. Местное введение предполагается для трансдермальной доставки и также для введения в глаза и слизистые оболочки или в случае ингаляционной терапии. Также могут быть введены назальные растворы активного соединения как такового или в комбинации с другими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.
Предусмотрены лекарственные формы, подходящие для трансдермального введения. Они могут быть предусмотрены в любой подходящей форме, например в виде отдельных пластырей, приспособленных, чтобы оставаться в тесном контакте с эпидермисом реципиента в течение длительного периода времени. Такие пластыри содержат активное соединение, необязательно в буферном водном растворе, с концентрацией, например, от 0,1 до 0,2М для активного соединения. Лекарственные формы, подходящие для трансдермального введения, также могут быть доставлены путем ионофореза (см., например, Pharmaceutical Research 3(6), 318 (1986)), и, как правило, имеют форму необязательно буферного водного раствора активного соединения.
d) . Композиции для других способов введения.
В зависимости от состояния, подлежащего лечению, также в настоящем документе предусмотрены другие способы введения, такие как местное введение, трансдермальные пластыри, пероральное и рек- 58 031986 тальное введение. Например, фармацевтические дозированные лекарственные формы для ректального введения представляют собой ректальные суппозитории, капсулы и таблетки для системного эффекта. Ректальные суппозитории включают твердые тела для введения в прямую кишку, которые плавятся или размягчаются при температуре тела, высвобождая один или несколько фармакологически или терапевтически активных ингредиентов. Фармацевтически приемлемые вещества, используемые в ректальных суппозиториях, представляют собой основы или носители и агенты для повышения температуры плавления. Примеры основ включают какао-масло (масло из какао-бобов), глицерин-желатин, карбовакс (полиоксиэтиленгликоль) и соответствующие смеси моно-, ди- и триглицеридов жирных кислот. Могут быть использованы комбинации различных основ. Агенты для повышения температуры плавления суппозиториев включают спермацет и воск. Ректальные суппозитории могут быть получены либо путем прессования, либо путем формования. Типичный вес ректального суппозитория составляет примерно от 2 до 3 г. Таблетки и капсулы для ректального введения изготавливают с использованием того же самого фармацевтически приемлемого вещества и теми же способами, что и лекарственные формы для перорального введения.
Лекарственные формы, подходящие для ректального введения, могут быть предусмотрены в виде суппозиториев с однократной дозой. Они могут быть получены путем смешивания активного соединения с одним или несколькими обычными твердыми носителями, например с какао-маслом, и путем последующего придания формы полученной смеси.
Для перорального введения фармацевтические композиции могут принимать форму, например, таблеток или капсул, полученных обычными способами с фармацевтически приемлемыми эксципиентами, такими как связывающие агенты (например, предварительно желатинизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или гидрофосфат кальция); смазывающие агенты (например, стеарат магния, тальк или диоксид кремния); разрыхлители (например, картофельный крахмал или натрия крахмала гликолят); или смачивающие агенты (например, лаурилсульфат натрия). Таблетки могут быть покрыты оболочкой с использованием способов, хорошо известных в данной области техники.
Лекарственные формы, подходящие для буккального (сублингвального) введения, включают, например, пастилки для рассасывания, содержащие активное соединение в ароматизированной основе, обычно в сахарозе и аравийской камеди или трагаканте; и пастилки, содержащие соединение в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и аравийская камедь.
Фармацевтические композиции также могут быть введены с помощью лекарственных форм с контролируемым высвобождением и/или устройств для контролируемой доставки (см., например, патенты США №№ 3536809; 3598123; 3630200; 3845770; 3847770; 3916899; 4008719; 4687660; 4769027; 5059595; 5073543;5120548;5354556;5591767;5639476;5674533 и 5733566).
Для введения выбранных композиций известны и могут быть использованы различные системы доставки, такие как, например, инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, а также рекомбинантные клетки, способные экспрессировать соединение, опосредуемый рецептором эндоцитоз и доставка молекул нуклеиновой кислоты, кодирующей растворимую гиалуронидазу, или другие агенты, такие как системы доставки ретровирусов.
Таким образом, в некоторых вариантах воплощения при введении композиций в настоящем документе также могут быть использованы липосомы и/или наночастицы. Липосомы образованы из фосфолипидов, которые диспергированы в водной среде и спонтанно образуют многослойные концентрические двухслойные везикулы (также называемые многослойные везикулы (MLV)). MLV обычно имеют диаметр от 25 нм до 4 мкм. Обработка ультразвуком MLV приводит к образованию мелких однослойных везикул (SUV) с диаметром в диапазоне от 200 до 500 А, содержащих водный раствор в ядре.
При диспергировании в воде в зависимости от молярного соотношения липида к воде фосфолипиды могут образовывать множество структур, отличных от липосом. При низких значения этого соотношения образуются липосомы. Физические характеристики липосом зависят от рН, ионной силы и присутствия двухвалентных катионов. Липосомы могут демонстрировать низкую проницаемость для ионных и полярных веществ, но при повышенных температурах происходит фазовый переход, который заметно изменяет их проницаемость. Фазовый переход связан с изменением от плотно упакованной, упорядоченной структуры, известной как состояние геля, к свободно упакованной, менее упорядоченной структуре, известной как жидкое состояние. Это происходит при характерной температуре фазового перехода и приводит к увеличению проницаемости для ионов, сахаров и лекарств.
Липосомы взаимодействуют с клетками посредством различных механизмов: эндоцитоз фагоцитирующими клетками ретикулоэндотелиальной системы, такими как макрофаги и нейтрофилы; адсорбция на поверхности клетки за счет неспецифических слабых гидрофобных или электростатических сил или за счет специфических взаимодействий с компонентами поверхности клетки; слияние с плазматической мембраной клетки путем вставки липидного бислоя липосомы в плазматическую мембрану с одновременным высвобождением липосомального содержимого в цитоплазму; и транспортировка липосомальных липидов в клеточные или субклеточные мембраны или наоборот без какой-либо ассоциации содержимого липосом. Изменение липосомной композиции может изменить действующий механизм, хотя
- 59 031986 одновременно может быть задействовано более одного механизма. Нанокапсулы обычно могут стабильно и воспроизводимо включать соединения. Чтобы избежать побочных эффектов из-за внутриклеточной полимерной перегрузки, такие ультрадисперсные частицы (размером около 0,1 мкм) должны быть разработаны с использованием полимеров, способных разлагаться in vivo. Биоразлагаемые полиалкилцианоакрилатные наночастицы, которые удовлетворяют этим требованиям, рассматриваются для применения в настоящем документе, и такие частицы могут быть легко получены.
2. Количества лекарственной формы.
Композиции могут быть составлены в виде лекарственной формы для однократного введения или для многократного введения. Агенты могут быть составлены в виде лекарственной формы для непосредственного введения.
В композициях или комбинациях композиций, предусмотренных в настоящем документе, в которых антигиалуроновый агент представляет собой разрушающий гиалуронан фермент, такой как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент составлен в виде лекарственной формы для непосредственного введения в количестве между или примерно между 0,5 мкг и 50 мг, например между или примерно между 100 мкг и 1 мг, 1 и 20 мг, 100 мкг и 5 мг, 0,5 и 1450 мкг, 1 и 1000 мкг, 5 и 1250 мкг, 10 и 750 мкг, 50 и 500 мкг, 0,5 и 500 мкг или 500 и 1450 мкг. Например, конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент составлен в виде лекарственной формы для непосредственного введения в количестве между или примерно между 15 ед. или 150 ед. и 60000 ед. на дозу, 300 и 30000 ед., 500 и 25000 ед., 500 и 10000 ед., 150 и 15000 ед., 150 и 5000 ед., 500 и 1000 ед., 5000 и 45000 ед., 10000 и 50000 ед. или 20000 и 60000 ед., например по меньшей мере, или примерно по меньшей мере, или примерно, или 15, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1250, 1500, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000, 20000, 30000, 40000 или 50000 ед. на дозу. Конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент может быть предусмотрен в виде концентрированного раствора с концентрацией, составляющей или составляющей примерно от 50 до 15000 ед./мл, например от 10 до 500 ед./мл, от 1000 до 15000 ед./мл, от 100 до 5000 ед./мл, от 500 до 5000 ед./мл или от 100 до 400 ед./мл, например по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или примерно, или 50, 100, 150, 200, 400, 500, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000, 11000, 12000 или 12800 ед./мл. Объем композиции может составлять от 0,5 до 1000 мл, например от 0,5 до 100 мл, от 0,5 до 10 мл, от 1 до 500 мл, от 1 до 10 мл, например по меньшей мере, или примерно по меньшей мере, или примерно, или 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50 мл или больше. Композиция обычно составлена таким образом, что конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент не вводят в объемах более чем примерно 50 мл и, как правило, вводят в объеме 5-30 мл, обычно в объеме, который не превышает примерно 10 мл. Для больших объемов время инфузии может быть скорректировано для облегчения доставки большего объема. Например, время инфузии может составлять по меньшей мере 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50 мин, 1 ч или больше.
В композициях или комбинациях композиций, предусмотренных в настоящем документе, направленный на опухоль таксан, такой как связанный с альбумином таксан, например связанный с альбумином паклитаксел, составлен в виде лекарственной формы для непосредственного введения таксана в количестве между или примерно между 10 и 1000 мг, например между или примерно между 20 и 500 мг, 10 и 250 мг, 75 и 400 мг, 100 и 200 мг, 150 и 400 мг, 200 и 800 мг, 50 и 200 мг или 50 и 150 мг. Композиция может быть предусмотрена в лиофилизированной форме для дальнейшего восстановления или в виде жидкой лекарственной формы. Например, восстановление жидкой лекарственной формы можно осуществить водой или 0,9% хлоридом натрия или другим физиологическим раствором. При восстановлении или в случае, если композиция предусмотрена в жидкой лекарственной форме, композиция, содержащая таксан в виде лекарственной формы направленного на опухоль таксана, может быть предусмотрена в качестве концентрированного раствора с концентрацией между или примерно между 0,01 и 100 мг/мл, например между или примерно между 1 и 50 мг/мл, 2,5 и 25 мг/мл, 5 и 15 мг/мл или 10 и 100 мг/мл, например по меньшей мере или примерно по меньшей мере 5 мг/мл. Объем композиции может составлять от 0,5 до 1000 мл, например от 0,5 до 100 мл, от 0,5 до 10 мл, от 1 до 500 мл, от 1 до 10 мл, например по меньшей мере, или примерно по меньшей мере, или примерно, или 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 200 мл или больше. Всё содержимое флакона может быть набрано для введения, или оно может быть разделено на множество доз для многократного введения. Для больших объемов время инфузии может быть скорректировано для облегчения доставки большего объема. Например, время инфузии может составлять по меньшей мере 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50 мин, 1 ч или больше. Понятно, что лекарственные формы таксана могут содержать другие компоненты, в том числе наполнители, полимеры, липиды и другие эксципиенты. Дозы, предусмотренные выше, приведены для компонента таксана, который является активным ингредиентом.
Например, Abraxane®, связанный с альбумином паклитаксел, составлен в виде лекарственной формы паклитаксела, не содержащей растворитель, в которой паклитаксел находится в комплексе только с альбумином, образуя стабильные частицы, имеющие размер примерно 130 нм. Каждый 50 мл флакон с Abraxane® содержит 100 мг паклитаксела и приблизительно 900 мг человеческого альбумина в виде сте- 60 031986 рильного лиофилизата. Предусмотрено, что каждый флакон должен быть восстановлен 20 мл 0,9% хлорида натрия для инъекций, USP, для получения суспензии, содержащей 5 мг/мл паклитаксела. Восстановленную суспензию абраксана вводят путем инфузии в рекомендованной дозе 260 мг/м2 внутривенно в течение 30 мин.
В композициях или комбинациях композиций, предусмотренных в настоящем документе, нуклеозидный аналог, такой как гемцитабин или его производное, составлен в виде лекарственной формы для непосредственного введения в количестве между или примерно между 100 и 5000 мг, например между или примерно между 500 и 5000 мг, 500 и 2500 мг, 1000 и 2500 мг, 2000 и 5000 мг или 1500 и 2500 мг, обычно по меньшей мере, или примерно по меньшей мере, или примерно 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг. Композиция может быть предусмотрена в лиофилизированной форме для дальнейшего восстановления или в виде жидкой лекарственной формы. Например, восстановление жидкой лекарственной формы можно осуществить водой, или 0,9% хлоридом натрия, или другим физиологическим раствором. При восстановлении, или если композиция предусмотрена в жидкой лекарственной форме, композиция может быть предусмотрена в виде концентрированного раствора, содержащего нуклеозидный аналог в концентрации между или примерно между 1 и 500 мг/мл, например между или примерно между 5 и 100 мг/мл, 10 и 50 мг/мл, 25 и 200 мг/мл или 20 и 100 мг/мл, например по меньшей мере или примерно по меньшей мере 5, 10, 20, 30 или 40 мг/мл, и обычно не больше чем 40 мг/мл, чтобы минимизировать неполное растворение. Объем композиции может составлять от 0,5 до 1000 мл, например от 0,5 до 100 мл, от 0,5 до 10 мл, от 1 до 500 мл, от 1 до 10 мл, например по меньшей мере, или примерно по меньшей мере, или примерно, или 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 200 мл или больше. Всё содержимое флакона может быть набрано для введения, или оно может быть разделено на множество доз для многократного введения. Для больших объемов время инфузии может быть скорректировано для облегчения доставки большего объема. Например, время инфузии может составлять по меньшей мере 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50 мин, 1 ч или больше. После отбора некоторого количества лекарства для введения лекарственная форма может быть дополнительно разбавлена, если это необходимо, например, водой, солевым (например, 0,9%) или другим физиологическим раствором. Понятно, что лекарственные формы нуклеозидного аналога (например, гемцитабина или его производного) могут содержать другие компоненты, в том числе наполнители, полимеры, липиды и другие эксципиенты. Дозы, предусмотренные выше, приведены для компонента нуклеозидного аналога, который является активным ингредиентом.
Например, Gemzar®, гемцитабин для инъекций, предусмотрен в виде лиофилизированной лекарственной формы, содержащей 200 или 1000 мг активного агента во флаконе. Предусмотрено, что каждый флакон должен быть восстановлен 5 или 25 мл, соответственно, 0,9% хлорида натрия для инъекций, USP, для получения суспензии, содержащей 40 мг/мл гемцитабина (принимая во внимание объем лиофилизированного порошка, концентрация после восстановления может быть равна или равна примерно 38 мг/мл). Перед введением соответствующее количество лекарства может быть дополнительно разбавлено 0,9% хлоридом натрия или другим физиологическим раствором.
3. Упаковка и изделия.
Также предусмотрены изделия, содержащие упаковочный материал, любую фармацевтическую композицию или комбинацию, предусмотренную в настоящем документе, и этикетку, которая указывает на то, что композиции и комбинации следует использовать для лечения рака, такого как стромальные раковые опухоли или солидные раковые опухоли. Примерами изделий являются контейнеры, в том числе однокамерные и двухкамерные контейнеры. Контейнеры включают, но не ограничиваются ими, пробирки, бутылки и шприцы. Контейнеры также могут включать иглу для подкожного введения.
В одном из примеров изделие содержит фармацевтическую композицию, содержащую антигиалуроновый агент, такой как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, и направленный на опухоль таксан, и не содержит дополнительного агента или объекта для лечения. В другом примере изделие содержит фармацевтические композиции, содержащие антигиалуроновый агент, например конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, направленный на опухоль таксан и дополнительный химиотерапевтический агент (например, нуклеозидный аналог). В этом примере для упаковки в виде изделий агенты могут быть предусмотрены вместе или отдельно.
Предусмотренные в настоящем документе изделия содержат упаковочный материал. Упаковочные материалы для применения в упаковке фармацевтических продуктов хорошо известны специалистам в данной области техники. См., например, патенты США №№ 5323907, 5052558 и 5033252, каждый из которых включен в настоящий документ во всей их полноте. Примеры фармацевтических упаковочных материалов включают, но не ограничиваются ими, блистерные упаковки, бутылки, пробирки, ингаляторы, помпы, инфузионные мешки, флаконы, контейнеры, шприцы, бутылки и любой упаковочный материал, подходящий для выбранной лекарственной формы и предполагаемого способа введния и лечения.
Выбор упаковки зависит от агентов и от того, могут ли такие композиции быть упакованы вместе или по отдельности. В общем, упаковка не реагирует с композициями, содержащимися в ней. В других примерах некоторые из компонентов могут быть упакованы в виде смеси. В других примерах все компоненты упакованы отдельно. Таким образом, например, компоненты могут быть упакованы в виде от- 61 031986 дельных композиций, которые при смешивании непосредственно перед введением могут быть непосредственно введены вместе. Альтернативно, компоненты могут быть упакованы в виде отдельных композиций для введения по отдельности.
Компоненты могут быть упакованы в контейнер. Компоненты упакованы по отдельности в одной и том же контейнере. Обычно примеры таких контейнеров включают контейнеры, которые имеют закрытое, определенное пространство, содержащее конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, и отдельное закрытое, определенное пространство, содержащее другие компоненты или компонент, таким образом, что последовательные области разделены легко удаляемой мембраной, которая после удаления позволяет компонентам смешиваться, или которая позволяет ввести компоненты поотдельности. Предполагается любой контейнер или другое изделие, при условии, что агенты отделены от других компонентов перед введением. Для подходящих вариантов воплощения см., например, контейнеры, описанные в патентах США №№ 3539794 и 5171081.
Выбранные композиции, в том числе изделия с ними могут быть предусмотрены в виде наборов. Наборы могут включать фармацевтическую композицию, описанную в настоящем документе, и элемент для введения, предусмотренный в виде изделия. Набор, необязательно, может включать инструкции по применению, включающие дозы, режим дозирования и инструкции для способа введения. Наборы также могут включать фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, и элемент для диагностики.
F. Способы оценки активности, биодоступности и фармакокинетики.
Можно оценить свойства и активности агентов, содержащихся в композициях, предусмотренных в настоящем документе. Свойства и активности могут быть связаны с биологической активностью и/или канцерогенной активностью. Анализы можно осуществить in vitro или in vivo. Такие анализы включают, но не ограничиваются ими, измерение количества гиалуронана в ткани или биоптатах опухоли или растворимого гиалуронана в плазме, измерения катаболитов гиалуронана в крови или моче, измерения гиалуронидазной активности в плазме или измерения интерстициального давления жидкости, сосудистого объема или содержания воды в опухолях. Анализы можно использовать для оценки эффектов агентов, в том числе эффектов дозы и способа введения.
1. Анализы in vitro.
а). Гиалуронидазная активность разрушающего гиалуронан фермента.
Активность разрушающего гиалуронан фермента можно оценить, используя методы, хорошо известные в данной области. Например, анализ USP XXII для гиалуронидазы косвенно определяет активность путем измерения количества не разрушенного субстрата гиалуронана или гиалуроновой кислоты (НА), оставшегося после добавления фермента к НА через 30 мин при 37°C (USP XXII-NF XVII (1990) 644-645 United States Pharmacopeia Convention, Inc, Rockville, MD). Раствор эталонного стандарта гиалуронидазы (USP) или стандарта гиалуронидазы Национального Формуляра (NF) может быть использован в анализе для определения активности (в единицах) любой гиалуронидазы. В одном примере активность измеряют с использованием микротурбидиметрического анализа. Данный метод основан на образовании нерастворимого осадка при связывании гиалуроновой кислоты с сывороточным альбумином. В одном примере активность измеряют с использованием микротурбидиметрического анализа. Данный метод основан на образовании нерастворимого осадка при связывании гиалуроновой кислоты с сывороточным альбумином. Активность измеряют путем инкубации гиалуронидазы с гиалуронатом натрия (гиалуроновой кислотой) в течение заданного периода времени (например, 10 мин) с последующим осаждением не разрушенного гиалуронана натрия при добавлении подкисленного сывороточного альбумина. Мутность полученного образца измеряют при 640 нм после дополнительного периода инкубации. Уменьшение мутности в результате действия гиалуронидазы на субстрат гиалуронат натрия является мерой ферментативной активности гиалуронидазы. В другом примере активность гиалуронидазы измеряют с помощью микротитровального теста, в котором после инкубации с гиалуронидазой определяется остаточное количество биотинилированной гиалуроновой кислоты (см., например, Frost and Stern (1997) Anal. Biochem. 251:263-269, опубликованная заявка США № 20050260186). Свободные карбоксильные группы в остатках глюкуроновой кислоты гиалуроновой кислоты биотинилируют, и биотинилированная гиалуроновая кислота как субстрат ковалентно связывается с планшетом для микротитрования. После инкубации с гиалуронидазой остаточное количество субстрата биотинилированной гиалуроновой кислоты детектируют с помощью авидин-пероксидазной реакции и сравнивают со значением, полученным в реакции со стандартами гиалуронидазы известной активности. Другие анализы для определения активности гиалуронидазы также известны в данной области и могут быть использованы в методах согласно данному документу (см., например, Delpech et al., (1995) Anal. Biochem. 229:35-41; Takahashi et al., (2003) Anal. Biochem. 322:257-263).
Также можно оценить способность разрушающего гиалуронан фермента, такого как модифицированная растворимая гиалуронидаза (например, пегилированная rHuPH20), действовать как усиливающий распространение или усиливающий диффузию агент. Например, краситель трипановый синий может быть инъецирован, например, подкожно или внутрикожно, с разрушающим гиалуронан ферментом или без него в латеральную кожу с каждого бока лишенной волосяного покрова мыши. Далее, чтобы опреде- 62 031986 лить способность разрушающего гиалуронан фермента действовать в качестве усиливающего распространение агента, область распространения красителя измеряют, например, с помощью микроштангенциркуля (см., например, опубликованную заявку США № 20060104968). Влияние совместного введения разрушающего гиалуронан фермента, такого как гиалуронидаза, с другим агентом, таким как химиотерапевтический агент, на фармакокинетические и фармакодинамические свойства этого агента также можно оценить in vivo с использованием модели на животных и/или на людях, например, в ходе клинических исследований, как обсуждалось выше и продемонстрировано в примере 1 ниже. Функциональную активность разрушающего гиалуронан фермента, который не является гиалуронидазой, можно сравнить с активностью гиалуронидазы с использованием любых из этих анализов. Такое измерение может быть проведено, чтобы определить функционально эквивалентное количество разрушающего гиалуронан фермента. Например, способность разрушающего гиалуронан фермента действовать в качестве усиливающего распространение или диспергирующего агента можно оценить, инъецируя его (например, подкожно или внутрикожно) в латеральную кожу мыши с трипановым синим, и затем можно определить количество разрушающего гиалуронан фермента, требуемое для достижения такого же уровня диффузии, как в случае, например, 100 единиц стандарта сравнения гиалуронидазы. Таким образом, требуемое количество разрушающего гиалуронан фермента является функционально эквивалентным 100 единицам гиалуронидазы. Чтобы оценить активность препарата модифицированного разрушающего гиалуронан фермента, также можно измерить гидравлическую проводимость (K), например, в опухоли, до и после обработки модифицированным разрушающим гиалуронан ферментом, таким как модифицированная гиалуронидаза.
Способность модифицированного разрушающего гиалуронан фермента, такого как модифицированная гиалуронидаза, в том числе пегилированная гиалуронидаза, влиять на один или несколько маркеров, ассоциированных с ассоциированными с гиалуронаном заболеваниями и состояниями, описанными выше, или на любые другие ассоциированные маркеры или фенотипы, можно оценить с использованием любого одного или нескольких анализов, описанных выше. Например, способность модифицированного разрушающего гиалуронан фермента, такого как модифицированная гиалуронидаза, снижать уровни или содержание гиалуронана, способность образовывать ореол и его размеры, способность снижать интерстициальное давление жидкости, содержание воды и/или сосудистый объем, можно оценить с использованием любого одного или нескольких описанных выше анализов in vitro, ex vivo и/или in vivo. В одном из примеров модифицированная гиалуронидаза может быть введена субъекту, имеющему опухоль, или она может быть применена в соответствующей модели на животных, и ее влияние на уровни гиалуронана, образование или размер ореола, интерстициальное давление жидкости, содержание воды и/или сосудистый объем можно оценить и сравнить с субъектами или моделями на животных, которым не была введена модифицированная гиалуронидаза. В некоторых примерах модифицированная гиалуронидаза может быть введена с другим агентом, таким как химиотерапевтический агент.
Другие различные анализы для оценки гиалуронидазной активности, в том числе анализы ее воздействия на синтез или разрушение НА, известны специалисту в данной области техники и включают любые описанные в настоящем документе или известные в данной области техники анализы, например анализы in vitro, в которых измеряют разрушение гиалуронана (см., например, Frost and Stern (1997) Anal. Biochem. 251:263-269), окрашивание ткани или других образцов на НА, например, с использованием связывающего НА белка или другого анти-НА реагента (см., например, Nishida et al. (1999) J. Biol. Chem., 274:21893-21899), анализ с исключением частиц (Nishida et al. 1999; Morohashi et al. (2006) Biochem Biophys. Res. Comm., 345:1454-1459); измерение или оценку экспрессии мРНК HAS для гена has (Nishida et al. 1999).
b). Активность таксана.
Для тестирования соединений с целью идентификации тех соединений, которые обладают необходимой биологической активностью для ингибирования ассоциации тубулина, доступны стандартные физиологические, фармакологические и биохимические методики. Могут быть использованы анализы in vitro и in vivo для оценки биологической активности, такой как цитотоксичность и полимеризация тубулина (см., например, Hidaka et al. (2012) Biosci. Biotechnol. Biochem., 76:349-352).
Например, предусмотренные в настоящем документе соединения таксана могут быть протестированы в анализе стабилизации микротрубочек (Barron et al., (2003) Anal. Biochem., 315:49-56). Сборку тубулина или ее ингибирование можно контролировать с помощью анализа полимеризации тубулина в формате измерения поглощения или флуоресценции. Например, можно использовать анализ полимеризации тубулина, основанный на измерении оптической плотности, поскольку концентрация полимера микротрубочек пропорциональна количеству света, рассеянного микротрубочками. Примером такого анализа является анализ полимеризации тубулина HTS (номер по каталогу BK004P или BK006P; Cytoskeleton, Denver, CO). Также может быть использован анализ на основе флуоресценции, в котором после полимеризации происходит усиление флуоресценции за счет включения флуоресцентного репортера в микротрубочки (номер по каталогу BK01W, Cytoskeleton, Denver). В таких анализах тубулин можно инкубировать с соединением таксаном, таким как паклитаксел, винбластин или доцетаксел, и можно измерить полимеризацию с течением времени. Например, в анализе флуоресценции полимеризацию можно
- 63 031986 измерить, отслеживая изменения флуоресценции при возбуждении при 360 нм и эмиссии при 420 нм. Сборку тубулина также можно контролировать с помощью рассеяния света, которое приблизительно соответствует кажущемуся поглощению при 350 нм. Для предотвращения агрегации в анализе обычно используют бычий сывороточный альбумин (BSA). Чтобы увеличить отношение сигнал/шум, из числа используемых при анализе веществ может быть исключен глицерин, который является усилителем полимеризации тубулина. В качестве контроля может быть использован винбластин, лекарство, дестабилизирующее микротрубочки, которое стабилизирует тубулин и не вызывает деполимеризацию.
с). Противораковая активность.
Противораковуюактивность соединений и агентов, описанных в настоящем документе, в том числе разрушающего гиалуронан фермента, направленного на опухоль таксана и/или других химиотерапевтических агентов (например, нуклеозидного аналога) и их лекарственных форм можно исследовать in vitro, например, с помощью инкубации культуры раковых клеток с производным и последующей оценки ингибирования роста клеток в культуре. Подходящие клетки для такого тестирования включают клетки мышиной лейкемии Р388, клетки меланомы В16 и клетки рака легких Льюис, а также человеческие клетки рака молочной железы MCF7, рака яичников OVCAR-3, клетки рака легких А549, МХ-1 (клетки опухоли молочной железы человека), НТ29 (клеточная линия рака прямой кишки), HepG2 (клеточные линии рака печени) и НСТ116 (клеточные линии рака прямой кишки).
2. Модели на животных in vivo.
Модели на животных могут быть использованы для оценки влияния предусмотренных в настоящем документе композиций или комбинаций на уровни или содержание гиалуронана, интерстициальное давление жидкости, содержание воды, сосудистый объем и на размер, объем или рост опухоли. Кроме того, модели на животных могут быть использованы для оценки фармакокинетики или переносимости композиций или комбинаций.
Модели на животных могут включать модели на мышах, крысах, кроликах, собаках, морских свинках и приматах, кроме человека, таких как, яванские макаки или макаки-резус, но не ограничиваются ими. Модели на животных включают генетические модели, а также ксенотрансплантатные модели. Например, ксенотрансплантатные модели включают такие модели, в которых перед тестированием агентов получают опухоли в подходящих подопытных животных, например в лишенных волосяного покрова мышах. В некоторых примерах иммунодефицитным мышам, таким как лишенные волосяного покрова мыши или мыши SCID, трансплантируют опухолевую клеточную линию, например опухолевую клеточную линию ассоциированного с гиалуронаном рака, чтобы получить модель этого рака на животных. Примеры клеточных линий, в том числе клеточных линий, которые образуют ассоциированный с гиалуронаном рак, включают, без ограничения, клетки карциномы простаты PC3, клетки аденокарциномы поджелудочной железы ВхРС-3, клетки карциномы молочной железы MDA-MB-231, клетки опухоли молочной железы MCF-7, клетки опухоли молочной железы ВТ474, клетки опухоли простаты Tramp C2 и клетки рака простаты Mat-LyLu, а также другие клеточные линии, описанные в настоящем документе, которые являются ассоциированными с гиалуронаном, например содержат повышенные уровни гиалуронана. Примеры моделей рака поджелудочной железы на животных включают получение опухолей у животных с помощью клеток аденокарциномы поджелудочной железы ВхРС-3 (см., например, Von Hoff et al. (2011) J. Clin. Oncol., 29:4548-54).
Также могут быть использованы генетические модели, в которых животных делают дефицитными по одному или нескольким генам, что приводит к образованию или формированию опухоли. Такие генно-инженерные модели на мышах (GEMM) могут воспроизводить молекулярные и клинические особенности заболевания. Например, пример генетической модели рака поджелудочной железы включает специфичную для поджелудочной железы экспрессию эндогенных мутантов аллелей Kras и Trp33, что приводит к получению мутантной мыши, имеющей дефицитный фенотип (которую называют мышь KPC; LSL-KrasGl2D, LSL-Trp53R172H, Pdx-1-Cre). У мышей KPC развиваются первичные опухоли поджелудочной железы, которые имеют сходные признаки с заболеванием человека, в том числе устойчивость к нуклеозидному аналогу гемцитабину (см, например, Frese et al. (2012) Cancer Discovery, 2:260-269).
Предусмотренные в настоящем документе композиции или комбинации могут быть введены мышам, чтобы оценить их влияние на заболевание. Например, можно оценить или измерить уровни гиалуронана. В другом примере можно оценить влияние на рост опухоли или ингибирование опухолевых клеток. Например, можно определить значения ED50, т.е. количество агента (агентов), необходимое для достижения 50% ингибирования роста опухоли у животного. Также можно определить выживаемость.
3. Фармакокинетика и переносимость.
Чтобы оценить эффекты предусмотренных в настоящем документе комбинаций и композиций, исследования фармакокинетики и переносимости можно осуществить с использованием моделей на животных или в ходе клинических исследований на пациентах. Модели на животных включают модели на мышах, крысах, кроликах, собаках, морских свинках и приматах, кроме человека, таких как яванские макаки или макаки-резус, но не ограничиваются ими. В некоторых случаях исследования фармакокинетики и переносимости осуществляют с использованием здоровых животных. В других примерах исследования осуществляют с использованием моделей заболеваний на животных, для которых предусмотре- 64 031986 на терапия предусмотренной в настоящем документе комбинацией или композицией, таких как модели рака на животных.
Фармакокинетические свойства предусмотренных в настоящем документе комбинаций или композиций можно оценить, измеряя после введения такие параметры как максимальная (пиковая) концентрация химиотерапевтического агента (Cmax), время достижения пиковой концентрации (т.е. когда достигается максимум концентрации химиотерапевтического агента; Tmax), минимальная концентрация химиотерапевтического агента (т.е. минимум концентрации между дозами химиотерапевтическего агента; Cmm), период полувыведения (T1/2) и площадь под кривой (т.е. площадь под кривой, образованной путем построения графика зависимости концентрации от времени; AUC). В случаях, когда химиотерапевтический агент вводят подкожно, определяют абсолютную биодоступность агента, сравнивая площадь под кривой для химиотерапевтическего агента после подкожной доставки (АиСпк) с AUC для химиотерапевтическего агента после внутривенной доставки (AUCb/b). Абсолютную биодоступность (F) можно рассчитать, используя формулу F = ([AUC]h/k х доза,,.,,) / ([AUC]b/b х дозав/в). Концентрацию химиотерапевтического агента в плазме после подкожного введения можно измерить, используя любой известный в данной области техники способ для оценки концентраций химиотерапевтических агентов в образцах крови.
Чтобы оценить эффект от увеличения или уменьшения концентраций совместно вводимого агента (например, нуклеозидного аналога), в фармакокинетических исследованиях могут быть исследованы диапазон доз и разная частота дозирования. Фармакокинетические свойства подкожного вводимого химиотерапевтического агента, такие как биодоступность, также можно оценить при совместном введении с конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом и/или направленным на опухоль таксаном или без них. Например, собакам, таким как гончие, с использованием одного или нескольких способов введения может быть введен химиотерапевтический агент (например, нуклеозидный аналог, такой как гемцитабин) в комбинации с конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом и/или направленным на опухоль таксаном или без них. Такие исследования можно осуществить, чтобы оценить эффект совместного введения антигиалуронового агента, такого как гиалуронидаза, на фармакокинетические свойства химиотерапевтического агента, такие как его биодоступность.
Исследования для оценки безопасности и переносимости также известны в данной области техники и могут быть использованы в настоящем документе. После введения комбинаций и композиций по настоящем документу можно контролировать развитие любых неблагоприятных реакций. Неблагоприятные реакции могут включать реакции в месте инъекции, такие как эдема или отек, головная боль, лихорадка, усталость, озноб, покраснение, головокружение, крапивница, свистящее дыхание или стеснение в груди, тошнота, рвота, дрожь, боли в спине, боли в груди, мышечные спазмы, судороги или конвульсии, изменения кровяного давления, анафилактические реакции или тяжелые реакции гиперчувствительности, но не ограничиваются ими. Как правило, чтобы оценить эффект от увеличения или уменьшения концентраций химиотерапевтическего агента и/или антигиалуронового агента, такого как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, и/или направленного на опухоль таксана в дозе, в исследованиях безопасности и переносимости используют диапазон доз и разные частоты ведения.
G. Способы и применения комбинированной терапии.
Комбинации и композиции, предусмотренные в настоящем документе, могут быть использованы в способах терапии для лечения рака и, в частности, для лечения солидных раковых опухолей. В этих способах субъекту, имеющему солидную опухоль, проводят комбинированную терапию антигиалуроновым агентом, таким как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент (например, гиалуронидаза, такая как РН20, например PEGPH20), и лекарственной формой таксана (например, лекарственной формой связанного с альбумином таксана). В некоторых примерах также может быть введен дополнительный агент, который представляет собой нуклеозидный аналог и, в частности, нуклеозидный аналог, который используют для лечения солидных опухолей и/или который чувствителен к ингибированию дезаминированием (например, гемцитабин или его производное). Как было обнаружено в настоящем документе, количество нуклеозидного аналога внутри опухоли, и, таким образом, его цитотоксический эффект, при комбинированном режиме с конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом и лекарственной формой таксана намного превышает эффект, который наблюдается в том случае, когда нуклеозидный аналог вводят только с одним из агентов (т.е. конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом или лекарственной формой таксана). Например, эффект может быть синергическим. Степень или уровень внутриопухолевой активности нуклеозидного аналога, наблюдаемые при использовании предусмотренной в настоящем документе комбинированной терапии, достигают показателей, которые до сих пор не были достигнуты при использовании существующей терапии, включая увеличенную эффективность и выживаемость, превосходящие существующие режимы лечения.
i. Рак.
Комбинированная терапия антигиалуроновым агентом, например, конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом, лекарственной формой таксана и/или нуклеозидным аналогом может быть использована для лечения раковых клеток, неоплазий, опухолей и метастазов. Предусмотренная в настоящем документе комбинированная терапия обладает противоопухолевой активностью и
- 65 031986 приводит к замедлению или снижению роста опухоли, уменьшению объема опухоли и в некоторых случаях к элиминации или усчезновению опухоли. Комбинированная терапия приводит к увеличению выживаемости субъектов по сравнению с субъектами, подвергаемыми лечению теми же самыми агентами в режиме монотерапии или комбинированной терапии двумя агентами. Для рака, такого как рак поджелудочной железы, который трудно поддается лечению, комбинированная терапия обеспечивает значительные преимущества по сравнению с существующими способами лечения.
Например, комбинированная терапия может быть использована для лечения солидной опухоли, такой как солидная опухоль легких и бронхов, молочной железы, ободочной и прямой кишки, почек, желудка, пищевода, печени и внутрипеченочных желчных протоков, мочевого пузыря, головного мозга и других частей нервной системы, головы и шеи, полости рта и глотки, шейки матки, тела матки, щитовидной железы, яичников, семенников, простаты, злокачественной меланомы, холангиокарциномы, тимомы, немеланомного рака кожи, а также гематологических опухолей и/или злокачественных заболеваний, таких как лейкемия и лимфома в детском возрасте, множественная миелома, болезнь Ходжкина, лимфома лимфоцитарного и кожного происхождения, острый и хронический лейкоз, такой как острая лимфобластная, острая миелоцитарная или хроническая миелоцитарная лейкемия, неоплазия плазматических клеток, лимфоидная неоплазия и рак, ассоциированный со СПИДом. Как правило, комбинированная терапия используется для лечения солидных опухолей, например стромальных солидных раковых опухолей. Примеры опухолей включают, например, опухоли поджелудочной железы, опухоли яичников, опухоли легких, опухоли прямой кишки, опухоли простаты, опухоли шейки матки и опухоли молочной железы.
В частности, рак может представлять собой богатый гиалуронаном рак, который подходит для направленного действия на него антигиалуроновым агентом, таким как разрушающий гиалуронан фермент. Было идентифицировано несколько богатых гиалуронаном типов рака. Богатые гиалуронаном раки включают, но не ограничиваются ими, рак простаты, груди, прямой кишки, яичников, желудка, головы и шеи и другие опухоли и раки. В некоторых случаях уровни гиалуронана коррелируют с неблагоприятным прогнозом, например сниженной выживаемостью и/или безрецидивной выживаемостью, метастазированием, ангиогенезом, инвазией раковых клеток в другие ткани/области и другими показателями неблагоприятного прогноза. Такие корреляции наблюдались, например, в случае богатых гиалуронаном раков, в том числе рака яичников, SCC, ISC, рака простаты, рака легких, в том числе немелкоклеточного рака легких (NSCLC), рака груди, рака прямой кишки и рака поджелудочной железы (см., например, Anttila et al., (2000) Cancer Research, 60:150-155; Karvinen et al., (2003) British Journal of Dermatology, 148:8694; Lipponen et al., (2001) Eur. Journal of Cancer, 849-856; Pirinen et al., (2001) Int. J. Cancer: 95: 12-17; Auvinen et al., (2000) American Journal of Pathology, 156(2):529-536; Ropponen et al., (1998) Cancer Research, 58: 342-347). Таким образом, богатые гиалуронаном раки можно лечить путем введения антигиалуронового агента, такого как гиалуронидаза, для лечения одного или нескольких симптомов рака.
В примерах лечения богатых гиалуронаном раков антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, может действовать как терапевтический агент сам по себе и/или он может усиливать активность другого совместно вводимого агента или комбинированной терапии. Например, разрушающие гиалуронан ферменты, такие как гиалуронидаза, демонстрируют прямые антиканцерогенные эффекты при инъецировании в опухоли. Гиалуронидаза предотвращает рост опухолей, трансплантированных мышам (De Maeyer et al., (1992) Int. J. Cancer 51:657-660), и ингибирует образование опухоли при воздействии канцерогенов (Pawlowski et al. (1979) Int. J. Cancer 23:105-109). Гиалуронидаза является эффективной в качестве единственного терапевтического агента при лечения рака головного мозга (глиомы) (см. международную опубликованную заявку номер WO 198802261).
Антигиалуроновые агенты, такие как разрушающие гиалуронан ферменты, в том числе гиалуронидазы, также могут быть использованы для увеличения доставки химиотерапевтических агентов в опухоли. Разрушающий гиалуронан фермент может быть введен или применен в комбинации, например, одновременно с одним или несколькими другими химиотерапевтическими агентами или другими противораковыми агентами или видами лечения (например, лечение лекарственной формой таксана и/или лечения нуклеозидным аналогом) или до них. В некоторых случаях ферменты могут повышать чувствительность опухолей, являющихся устойчивыми к обычной химиотерапии. Например, разрушающие гиалуронан ферменты, в том числе гиалуронидазы, такие как rHuPH20, могут быть введены пациенту в количестве, эффективном для увеличения диффузии вокруг участка опухоли (например, для облегчения циркуляции и/или повышения концентрации химиотерапевтических агентов в участке опухоли и вокруг него), ингибирования подвижности опухолевой клетки, например, за счет разрушения гиалуроновой кислоты, и/или для снижения порога апоптоза опухолевой клетки. Это может привести опухолевую клетку (опухолевые клетки) опухоли в состояние аноикоза, что делает опухолевые клетки более чувствительны к действию химиотерапевтических агентов. Введение разрушающего гиалуронан фермента, такого как гиалуронидаза, может вызывать ответ у ранее устойчивых к химиотерапии опухолей поджелудочной железы, желудка, прямой кишки, яичников и молочной железы (Baumgartner et al. (1988) Reg. Cancer Treat. 1:55-58; Zanker et al. (1986) Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 27:390). Разрушающий гиалуронан фермент, такой как гиалуронидаза, как правило, усиливает проникновение химиотерапевтического агента или других проти
- 66 031986 вораковых агентов в солидные опухоли, тем самым приводя к лечению заболевание.
Выбор субъектов для лечения.
Способы включают стадии выбора для лечения субъектов, которые имеют ассоциированную с гиалуронаном опухоль или рак. Такие способы включают способы обнаружения маркеров ассоциированного с гиалуронаном заболевания, которые включают любые имеющиеся у субъекта с ассоциированным с гиалуронаном заболеванием показатели, указывающие на то, что субъект, вероятно, будет отвечать на лечение антигиалуроновым агентом, таким как разрушающий гиалуронан фермент, и/или указывающие на то, что образец от субъекта, такой как ткань, клетка или жидкость, содержит повышенную экспрессию гиалуронана. Примеры анализов для обнаружения маркеров описаны ниже и включают анализы для измерения уровня НА и/или относительных уровней НА в образце от субъекта, анализы для оценки эффектов разрушающих гиалуронан ферментов на образец от субъекта и анализы для измерения показателей, которые обычно ассоциированы с некоторыми ассоциированными с гиалуронаном заболеваниями/состояниями, таких как низкая экспрессия или активность гиалуронидазы, высокое интерстициальное давление жидкости, большой сосудистый объем и высокое содержание воды. В общем, может быть использован любой известный анализ для обнаружения белков или нуклеиновых кислот в образцах от субъектов или для оценки эффекта от лечения на клетки/ткани in vitro.
Субъекты, выбранные для лечения в способах, предусмотренных в настоящем документе, включают субъекты, имеющие повышенные, аномальные уровни гиалуронана или накопление гиалуронана, по сравнению с субъектами, не имеющими заболевания или состояния, или по сравнению с нормальными тканями или образцами, которые не имеют повышенной, аномальной экспрессии НА или накопления НА. Любой образец или ткань от субъекта можно протестировать и сравнить с нормальным образцом или тканью. Уровни гиалуронана могут быть измерены в любом источнике, таком как ткань (например, полученная биопсией), опухоль, клетки или кровь, сыворотка, моча или другие биологические жидкости. Например, как описано в настоящем документе, профили накопления НА в солидных опухолях обычно классифицируют на околоклеточное или стромальное накопление НА. Наиболее заметно повышенные уровни НА в плазме были обнаружены у больных с опухолью Вильма, мезотелиомой и метастазами в печень. Таким образом, в зависимости от заболевания или состояния уровни гиалуронана могут быть измерены в различных образцах. Выбор образца находится в пределах компетентности специалиста в данной области техники.
Анализ, используемый для измерения уровня субстрата гиалуронидазы, зависит от заболевания или состояния и может быть выбран в зависимости от конкретного заболевания или состояния. Специалисту в данной области техники известны способы обнаружения гиалуронана, которые включают иммуногистохимические способы или способы ELISA, но не ограничиваются ими.
В одном из примеров стадию обнаружения маркеров осуществляют до лечения субъекта, например, чтобы определить, имеет ли субъект ассоциированное с гиалуронаном состояние или заболевание, которое будет поддаваться лечению разрушающим гиалуронан ферментом. В этом примере, если маркер обнаруживают (например, если обнаруживают, что клетка, ткань или жидкость от пациента содержат повышенную экспрессию гиалуронана или являются восприимчивыми к разрушающему гиалуронан ферменту), то осуществлют стадию лечения, в которой вводят субъекту разрушающий гиалуронан фермент. В одном из примеров, если маркер не обнаруживают (например, если обнаруживают, что клетка, ткань или жидкость от пациента содержат нормальную или не повышенную экспрессию гиалуронана или не являются восприимчивыми к разрушающему гиалуронан ферменту), то может быть выбран другой вариант лечения.
В другом примере стадию обнаружения маркеров осуществляют после лечения субъекта или во время курса лечения субъекта (например, лечения антигиалуроновым агентом, таким как разрушающий гиалуронан фермент (например, растворимая модифицированная гиалуронидаза) (с совместно вводимым агентом или без него)), например, чтобы определить, оказывает ли лечение антигиалуроновым агентом эффект на лечение заболевания или состояния. В одном из таких примеров, если маркер не обнаруживают, или маркер обнаруживают в количестве или на относительном уровне, которые снижены по сравнению с количеством/уровнем до лечения или по сравнению с другим образцом, то лечение продолжают, проводят еще один этап лечения или начинают другое лечение, такое как комбинированная терапия. В другом таком примере, если маркер обнаруживают на том же уровне, что и до лечения, или на том же уровне, что и в другом образце, то может быть выбран другой вариант лечения.
Анализы для обнаружения маркеров ассоциированных с гиалуронаном заболеваний и состояний включают анализы для измерения количества (например, относительного количества) гиалуронана и/или экспрессии гиалуронидазы в ткани, клетке и/или биологической жидкости субъекта, например в опухоли. Указанные анализы включают анализы, с помощью которых можно обнаружить экспрессию НА, экспрессию гиалуронан синтазы 1 (HAS1), экспрессию гиалуронан синтазы 2 (HAS2), экспрессию гиалуронан синтазы 3 (HAS3), наличие ореола (области околоклеточного матрикса, обогащенной протеогликанами, в том числе гиалуронаном) и наличие разрушающих гиалуронан ферментов, таких как гиалуронидазы, например, в образцах от субъекта.
Анализы для обнаружения уровней белка и нуклеиновой кислоты хорошо известны в данной облас- 67 031986 ти техники и могут быть использованы в способах измерения уровня гиалуронана, экспрессии гиалуронан синтазы или другого белка и/или нуклеиновой кислоты, предусмотренных в настоящем документе. Такие анализы включают ELISA, SDS-PAGE, вестерн-блоттинг, ПЦР, ОТ-ПЦР, иммуногистохимию, гистологию и проточную цитометрию, но не ограничиваются ими. Например, образец от субъекта, такой как образец ткани (например, образец биопсии опухоли от пациента или из модели на животных, образец стромы), образец жидкости (например, кровь, моча, плазма, слюна или другой образец), клетки или образец клеток, или экстракт или другой образец могут быть окрашены антителами против НА или связывающими НА белками, например, с использованием гистологического окрашивания, такого как иммуногистохимия (IHC) фиксированных или замороженных срезов тканей для определения наличия и количества гиалуронана в ткани или образце, или с использованием иммунофлуоресцентного окрашивания клеток, анализов иммунопреципитации и проточной цитометрии. В другом примере образец, например образец биопсии, можно проанализировать с помощью ОТ-ПЦР, чтобы оценить уровень мРНК НА.
Известные способы обнаружения экспрессии гиалуронана при раке включают анализ, подобный ELISA, описанный в Lokeshwar et al., (1997) Cancer Res. 57: 773-777, предназначенный для измерения уровней НА в моче или в экстрактах ткани мочевого пузыря у субъектов, имеющих рак мочевого пузыря, но не ограничиваются им. Для анализа мочу или экстракты наносят на микролуночные планшеты (также наносят НА пуповины, используемый в качестве стандарта), далее инкубируют (например, 16 ч при комнатной температуре) с меченым (например, биотинилированным) связывающим НА белком, таким как белки, которые описаны в настоящем документе, далее планшет промывают и затем количественно оценивают связывание связывающего НА белка с лунками, используя субстрат для агента для обнаружения, связывающегося за счет взаимодействия авидин-биотин. Такие способы хорошо известны в данной области техники. В одном из примеров моча от субъекта с НА-ассоциированным раком мочевого пузыря содержит повышенные в 2-9 раз уровни НА по сравнению с мочой/экстрактами от нормальных пациентов (здоровые субъекты или субъекты с другим урогенитальным заболеванием или состоянием); таким образом, маркер будет обнаружен, если уровни НА в моче были повышены по сравнению с нормальными субъектами, например повышены в 2-9 раз или примерно в 2-9 раз, например повышены в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 раз или примерно в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 по сравнению с нормальным субъектом.
В другом примере экспрессию и продукцию гиалуронана в опухолевых клетках in vitro можно оценить с использованием любых из способов, описанных выше. Аналогично, продукцию гиалуронан синтазы (например, HAS1, HAS2 или HAS3) и/или ее экспрессию клетками in vitro, ex vivo или in vivo также можно оценить, например, с помощью ELISA, SDS-PAGE, вестерн-блоттинга, ПЦР, ОТ-ПЦР, иммуногистохимии, гистологии или проточной цитометрии.
В другом примере определяют уровень гиалуронидазной активности в образце от субъекта, например в крови или в плазме, например, с помощью турбидиметрического анализа.
В другом примере из организма пациента выделяют клетку или другую ткань, например опухолевую клетку, и используют ее в исследовании, чтобы определить, является ли клетка или ткань восприимчивой к лечению разрушающим гиалуронан ферментом in vitro, например, с использованием анализа клоногенности или другого анализа для измерения роста, пролиферации и/или выживаемости клеток или тканей, таких как опухолевые клетки, в ответ на лечение. Например, раковые клетки от субъекта могут быть высеяны на поверхность, такую как внеклеточный матрикс или смесь белков, такая как смесь, продаваемая под торговым названием Matrigel® (BD Biosciences). В этом примере ассоциированный с гиалуронаном маркер представляет собой чувствительность клетки или ткани к применению разрушающего гиалуронан фермента. В этом примере в том случае, если любое свойство, такое как пролиферация, рост или выживаемость клеток, ингибируется или блокируется в результате добавления разрушающего гиалуронан фермента, то делают заключение, что субъект может поддаваться лечению композициями, содержащими разрушающий гиалуронан фермент.
В дополнение к анапизам для определения уровней экспрессии гиалуронана для выбора субъектов для лечения и/или для оценки эффективности и/или продолжительности лечения могут быть использованы другие анализы. Интерстициальное давление жидкости (IFP) можно измерить, используя соответствующий зонд или инструмент. Например, для измерения IFP в раковых тканях или других исследуемых тканях можно использовать катетер с электронным преобразователем на конце. Катетер проходит через внутреннее отверстие хирургической иглы, которая затем вставляется в центр опухоли. Иглу вынимают, а катетер удерживается в нужном положении. Далее может быть измерено IFP (в мм Hg) с использованием соответствующего устройства сбора данных (Ozerdem et al. (2005) Microvasc. Res. 70:116-120). Другие способы измерения IFP включают способ с использованием фитиля в игле (wick-in-needle) (Fadnes et al. (1977) Microvasc. Res. 14:27-36).
Сосудистый объем можно измерить, например, с помощью ультразвуковой визуализации. В этом способе используют гиперэхогенные микропузырьки, чтобы обеспечить сильные отражения ультразвуковой волны, которые можно детектировать. Микропузырьки при инъекции, например внутривенной инъекции, субъекту или животному в модели на животных проходят через сосудистое пространство благодаря своему размеру. Анализы для оценки содержания воды в ткани, например содержания воды в опухолевой ткани, также известны в данной области техники. Например, отобранные образцы из опухо- 68 031986 ли могут быть промокнуты, взвешены и заморожены, а затем лиофилизированы. Вес воды далее рассчитывается как соотношение веса мокрой ткани к весу сухой (т.е. лиофилизированной) ткани.
Способность опухолевой клетки формировать околоклеточный матрикс (ореол) можно оценить in vitro, используя анализ исключения частиц. Маленькие частицы (фиксированные в формалине красные кровяные тельца) могут быть добавлены к культурам опухолевых клеток, культивируемых при низкой плотности, в присутствии, например, аггрекана, который представляет собой большой агрегирующий протеогликан хондроитинсульфат. После оседания частиц культуры можно рассмотреть под 400х увеличением, чтобы определить, были ли сформированы опухолевыми клетками ореолы. Они могут быть видны как области вокруг клеток, из которых исключены частицы.
Для любых способов обнаружения маркер (например, экспрессия НА, чувствительность к разрушающему гиалуронан ферменту, экспрессия НА-синтазы или гиалуронидазная активность), как правило, сравнивают с контрольным образцом, так что обнаружение маркера, как правило, включает определение того, повышается или снижается считываемый показатель по сравнению с контрольным образцом.
Например, контрольный образец может представлять собой другую ткань, клетку или биологическую жидкость, такую как нормальная ткань, клетка или биологическая жидкость, например ткань, клетка или биологическая жидкость, аналогичная тестируемому образцу, но выделенная из другого субъекта, такого как субъект, являющийся нормальным (т.е. не имеющий заболевания или состояния или не имеющий заболевания или состояния того типа, который имеет субъект, подвергающийся лечению), например субъект, не имеющий ассоциированного с гиалуронаном заболевания или состояния, или аналогичную ткань из другого субъекта, имеющего аналогичное заболевание или состояние, но чье заболевание не является тяжелым и/или не является ассоциированным с гиалуронаном, или характеризуется относительно низкой экпрессией гиалуронана и поэтому является ассоциированным с гиалуронаном в меньшей степени. Например, когда тестируемая клетка, ткань или жидкость получены от субъекта, имеющего рак, их можно сравнить с тканью, клеткой или жидкостью от субъекта, имеющего менее тяжелый рак, такой как рак на ранней стадии, дифференцированный или другой тип рака. В другом примере, контрольный образец представляет собой жидкость, ткань, экстракт (например, клеточный или ядерный экстракт), препарат нуклеиновой кислоты или пептида, клеточную линию, образец биопсии, стандарт или другой образец с известным количеством или относительным количеством НА, такой как образец, например, опухолевой клеточной линии, про которую известно, что она экспрессирует относительно низкие уровни НА, такой как, например, опухолевые клеточные линии, описанные в настоящем документе, экспрессирующие низкие уровни НА, например, клеточная линия НСТ 116, клеточная линия НТ29, клеточная линия NCI H460, клеточная линия DU145, клеточная линия Capan-1, и образец опухоли из моделей опухолей, полученные с использованием таких клеточных линий.
Понятно, что конкретное изменение уровня НА, например увеличение или уменьшение уровня НА, зависит от используемого анализа. Например, в ELISA, кратное увеличение или уменьшение поглощения при определенной длине волны или количества белка (например, как определено с использованием стандартной кривой) могут быть выражены относительно контроля. В анализе ПЦР, таком как ОТ-ПЦР, уровни можно сравнить с контрольными уровнями экспрессии (например, выразить в виде кратного изменения) с использованием способов, известных в данной области техники, таких как использование стандартов.
Например, когда тестируется количество гиалуронана в образце от субъекта, обнаружение маркера может показать, что количество НА в образце (например, раковой клетки, ткани или жидкости) от субъекта повышено по сравнению с контрольным образцом, таким как контрольный образец, описанный в предыдущем параграфе. В одном из примеров рак считают богатым гиалуронаном раком, если количество НА в ткани, клетке или жидкости повышено или повышено примерно в 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20 раз или больше по сравнению с контрольным образцом, который может представлять собой, без ограничения, например, жидкость, ткань, экстракт (например, клеточный или ядерный экстракт), препарат нуклеиновой кислоты или пептида, клеточную линию, образец биопсии, стандарт или другой образец с известным количеством или относительным количеством НА, такой как образец, например, опухолевой клеточной линии, про которую известно, что она экспрессирует относительно низкие уровни НА, например опухолевые клеточные линии, описанные в настоящем документе, экспрессирующие низкие уровни НА, например клеточная линия НСТ 116, клеточная линия НТ29, клеточная линия NCI Н460, клеточная линия DU145, клеточная линия Capan-1, и опухоли из моделей опухолей, полученных с использованием таких клеточных линий.
Кроме того, в таких способах уровень гиалуронана, ассоциированного с клеткой, можно оценить как низкий, средний или высокий. Например, экспрессия НА считается высокой или средней, если 30, 35, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90% или больше от области опухоли демонстрирует устойчивый сигнал НА. Как правило, в настоящем документе предусмотрено лечение субъектов, имеющих уровень НА, по меньшей мере, от среднего до высокого.
2. Дозы и введение.
Предусмотренная в настоящем документе комбинированная терапия, включающая антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, и направленный на опухоль таксан, и необяза- 69 031986 тельно в дополнительной комбинации с нуклеозидным аналогом, вводится в количестве, достаточном для оказания терапевтически полезного эффекта. Как правило, активные агенты вводят в количестве, которое не вызывает неблагоприятные побочные эффекты у пациента, подвергающегося лечению, или которое минимизирует или снижает наблюдаемые побочные эффекты по сравнению с дозами и количествами, необходимыми для лечения только одним из вышеуказанных агентов. Например, как описано в настоящем документе, авторами было обнаружено, что комбинированная терапия конъюгированным с полимером разрушающим гиалуронан ферментом и направленным на опухоль таксаном приводит к увеличению внутриопухолевой доставки и увеличению внутриопухолевого периода полувыведения совместно вводимого нуклеозидного аналога, например гемцитабина. Таким образом, количество нуклеозидного аналога (например, гемцитабина), которое может быть введено в предусмотренной в настоящем документе комбинированной терапии, снижено по сравнению с количествами нуклеозидного аналога, вводимыми в используемых до этого способах, известных в данной области техники (например, монотерапия гемцитабином или двойная терапия в сочетании с одним другим агентом), но при этом достигается, по существу, такая же или улучшенная терапевтическая эффективность. Вследствие того, что вводимая доза уменьшена, побочные эффекты, связанные с введением нуклеозидного аналога (например, гемцитабина), такие как иммуносупрессия или миелосупрессия, снижаются, минимизируются или не возникают.
Определение точного количества активных агентов, в том числе антигиалуронового агента, например, конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента, направленного на опухоль таксана и, необязательно, нуклеозидного аналога, которое следует ввести субъекту, находится в пределах компетентности специалиста в данной области техники. Например, такие агенты и применения для лечения заболеваний и состояний, таких как рак и солидные опухоли, хорошо известны в данной области техники. Таким образом, дозы таких агентов в композиции или комбинированной терапии могут быть выбраны на основе стандартного режима дозирования для такого агента при данном способе введения.
Понятно, что точная доза и продолжительность лечения зависят от ткани или опухоли, подвергаемой лечению, и могут быть определены опытным путем с использованием известных протоколов тестирования или путем экстраполяции из данных тестирования in vivo или in vitro, и/или могут быть определены из известных режимов дозирования конкретного агента. Следует отметить, что концентрации и значения доз также могут варьировать в зависимости от возраста индивидуума, подвергаемого лечению, веса индивидуума, способа введения и/или степени или тяжести заболевания и других факторов, рассмотрение которых находится в пределах компетентности квалифицированного медицинского специалиста. Обычно режим дозирования выбирают для ограничения токсичности. Следует отметить, что лечащий врач будет знать, как и когда завершить, прервать или скорректировать терапию, чтобы снизить дозировку из-за токсичности или нарушений функции костного мозга, печени или почек или других тканей. И наоборот, лечащий врач также будет знать, как и когда скорректировать лечение до более высоких уровней, если клинический ответ не является адекватным (исключая токсические побочные эффекты). Следует также понимать, что для любого конкретного субъекта определенные режимы дозирования должны корректироваться с течением времени в соответствии с индивидуальной потребностью и профессиональной оценкой лица, назначающего лечение или наблюдающего за введением лекарственных форм, и что диапазоны концентраций, приведенные в настоящем документе, являются только примерами и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
Например, конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, такой как гиалуронидаза, например РН20 (например, PEGPH20), вводят в терапевтически эффективном количестве, чтобы разрушать или расщеплять гиалуронан, ассоциированный с опухолью. Количество разрушающего гиалуронан фермента, такого как растворимая гиалуронидаза, которое должно быть введено для лечения заболевания или состояния, например рака или солидной опухоли, такой как НА-богатая опухоль, можно определить стандартными клиническими методами. Кроме того, чтобы помочь определить оптимальный диапазон доз, могут быть использованы анализы in vitro и модели на животных. Точная доза, которую можно определить опытным путем, может зависеть от конкретного фермента, способа введения, типа заболевания, подвергаемого лечению, и тяжести заболевания. Диапазон доз составляет или составляет примерно, например, от 50 до 50000000 ед. конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента, или функционально эквивалентное количество другого конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента. Понятно, что в настоящем документе единица активности нормирована к стандартной активности, например активность измеряют в микротурбидиметрическом анализе, оценивающем гиалуронидазную активность.
Таким образом, например, разрушающий гиалуронан фермент, такой как гиалуронидаза, например конъюгированная с полимером РН20, например конъюгированная с PEGPH20, может быть введен в количестве, составляющем или составляющем примерно от 10 до 50000000 ед., от 10 до 40000000 ед., от 10 до 36000000 ед., от 10 до 12000000 ед., от 10 до 1200000 ед., от 10 до 1000000 ед., от 10 до 500000 ед., от 100 до 100000 ед., от 500 до 50000 ед., от 1000 до 10000 ед., от 5000 до 7500 ед., от 5000 до 50000 ед. или от 1000 до 10000 ед. Обычно конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент вводят субъекту в количестве, составляющем между или примерно между 0,01 мкг/кг и 25 мг/кг, например меж
- 70 031986 ду или примерно между 00005 мг/кг (0,5 мкг/кг) и 25 мг/кг, 0,5 мкг /кг и 10 мг/кг, 0,02 мг/кг и 1,5 мг/кг, 0,01 мкг/кг и 15 мкг/кг, 0,05 мкг/кг и 10 мкг/кг, 0,75 мкг/кг и 7,5 мкг/кг или 1,0 мкг/кг и 3,0 мкг/кг. Конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент может быть введен среднему взрослому человеку, имеющему вес, как правило, примерно от 70 до 75 кг, например, в дозе, составляющей по меньшей мере или примерно по меньшей мере 00005 мг/кг (субъекта), 00006, 00007, 00008, 00009, 0,001, 0,0016, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,006, 0,007, 0,008, 0,009, 0,01, 0,016, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,15, 0,2, 0,25, 0,30, 0,35, 0,40, 0,45, 0,5, 0,55, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 мг/кг или больше.
Конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, такой как пегилированная гиалуронидаза (например, PEGPH20), предусмотренный в настоящем документе, может быть введен в количестве между или примерно между 1 и 800000 ед./кг, например между или примерно между 10 и 800000 ед./кг, 10 и 750000 ед./кг, 10 и 700000 ед./кг, 10 и 650000 ед./кг, 10 и 600000 ед./кг, 10 и 550000 ед./кг, 10 и 500000 ед./кг, 10 и 450000 ед./кг, 10 и 400000 ед./кг, 10 и 350000 ед./кг, 10 и 320000 ед./кг, 10 и 300000 ед./кг, 10 и 280000 ед./кг, 10 и 260000 ед./кг, 10 и 240000 ед./кг, 10 и 220000 ед./кг, 10 и 200000 ед./кг, 10 и 180000 ед./кг, 10 и 160000 ед./кг, 10 и 140000 ед./кг, 10 и 120000 ед./кг, 10 и 100000 ед./кг, 10 и 80000 ед./кг, 10 и 70000 ед./кг, 10 и 60000 ед./кг, 10 и 50000 ед./кг, 10 и 40000 ед./кг, 10 и 30000 ед./кг, 10 и 20000 ед./кг, 10 и 15000 ед./кг, 10 и 12800 ед./кг, 10 и 10000 ед./кг, 10 и 9000 ед./кг, 10 и 8000 ед./кг, 10 и 7000 ед./кг, 10 и 6000 ед./кг, 10 и 5000 ед./кг, 10 и 4000 ед./кг, 10 и 3000 ед./кг, 10 и 2000 ед./кг, 10 и 1000 ед./кг, 10 и 900 ед./кг, 10 и 800 ед./кг, 10 и 700 ед./кг, 10 и 500 ед./кг, 10 и 400 ед./кг, 10 и 300 ед./кг, 10 и 200 ед./кг, 10 и 100 ед./кг, 16 и 600000 ед./кг, 16 и 500000 ед./кг, 16 и 400000 ед./кг, 16 и 350000 ед./кг, 16 и 320000 ед./кг, 16 и 160000 ед./кг, 16 и 80000 ед./кг, 16 и 40000 ед./кг, 16 и 20000 ед./кг, 16 и 16000 ед./кг, 16 и 12,800 ед./кг, 16 и 10000 ед./кг, 16 и 5000 ед./кг, 16 и 4000 ед./кг, 16 и 3000 ед./кг, 16 и 2000 ед./кг, 16 и 1000 ед./кг, 16 и 900 ед./кг, 16 и 800 ед./кг, 16 и 700 ед./кг, 16 и 500 ед./кг, 16 и 400 ед./кг, 16 и 300 ед./кг, 16 и 200 ед./кг, 16 и 100 ед./кг, 160 и 12,800 ед./кг, 160 и 8000 ед./кг, 160 и 6000 ед./кг, 160 и 4000 ед./кг, 160 и 2000 ед./кг, 160 и 1000 ед./кг, 160 и 500 ед./кг, 500 и 5000 ед./кг, 1000 и 100000 ед./кг или 1000 и 10000 ед./кг массы субъекта. В некоторых примерах разрушающий гиалуронан фермент, такой как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, такой как пегилированная гиалуронидаза (например, PEGPH20), может быть введен в количестве, составляющем или составляющем примерно от 1 до 1000 ед./кг, от 1 до 500 ед./кг или от 10 до 50 ед./кг.
Обычно, когда удельная активность пегилированной гиалуронидазы составляет или составляет примерно от 10000 до 80000 ед./мг, например от 20000 до 60000 ед./мг или от 18000 до 45000 ед./мг, субъекту вводят или вводят примерно 1 ед./кг (ед./кг массы субъекта), 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 16, 32, 64, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000, 12800, 20000, 32000, 40000, 50000, 60000, 70000, 80000, 90000, 100000, 120000, 140000, 160000, 180000, 200000, 220000, 240000, 260000, 280000, 300000, 320000, 350000, 400000, 450000, 500000, 550000, 600000, 650000, 700000, 750000, 800000 ед./кг или больше. Например, вводят 60000; 70000; 80000; 90000; 100000; 200000; 300000; 400000; 500000; 600000; 700000; 800000; 900000; 1000000; 1500000; 2000000; 2500000; 3000000; 3500000; 4000000 ед. или больше.
В примерах в настоящем документе направленный на опухоль таксан, такой как связанный с альбумином таксан (например, связанный с альбумином паклитаксел), вводят в терапевтически эффективном количестве, достаточном для достижения внутриопухолевой доставки. В некоторых примерах направленный на опухоль таксан, такой как связанный с альбумином таксан (например, связанный с альбумином паклитаксел) вводят в терапевтически эффективном количестве для снижения внутриопухолевых уровней дезаминирующих белков (например, цитидин дезаминазы) по сравнению с отсутствием лечения, например, для снижения или уменьшения уровней дезаминирующих белков по меньшей мере или примерно по меньшей мере на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% или больше. В конкретных примерах направленный на опухоль таксан, такой как связанный с альбумином таксан (например, связанный с альбумином паклитаксел), вводят в терапевтически эффективном количестве для увеличения внутриопухолевого уровня совместно вводимого нуклеозидного аналога (например, гемцитабина или его производного) по сравнению с отсутствием лечения. Например, внутриопухолевый уровень гемцитабина увеличивается по меньшей мере или примерно по меньшей мере на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% или больше. Количество направленного на опухоль таксана, такого как связанный с альбумином таксан (например, связанный с альбумином паклитаксел), которое должно быть введено для лечения заболевания или состояния, например рака или солидной опухоли, такой как НА-богатая опухоль, может быть определено стандартными клиническими методами. Кроме того, чтобы помочь определить оптимальные диапазоны доз, могут быть использованы анализы in vitro и модели на животных. Точная доза, которую можно определить опытным путем, может зависеть от конкретного таксана, конкретной лекарственной формы (например, лекарственная форма в виде наночастицы или липосомы), способа введения, типа заболевания, подвергаемого лечению, и тяжести заболевания.
Как правило, направленный на опухоль таксан, такой как связанный с альбумином таксан (например, связанный с альбумином паклитаксел) вводят субъекту из расчета на площадь поверхности тела
- 71 031986 (ПИТ; м2) субъекта в количестве между или примерно между 1 и 1000 мг/м2, например, между или примерно между 10 и 500 мг/м2, 50 и 400 мг/м2, 25 и 300 мг/м2, и обычно в количестве по меньшей мере или примерно по меньшей мере, или примерно, или 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90,100, 150, 200, 250, 300 мг/м2. В некоторых случаях субъекту могут быть введены более низкие дозы направленного на опухоль таксана, такого как связанный с альбумином таксан (например, связанный с альбумином паклитаксел), по сравнению с существующими лекарственными формами или режимами дозирования. Например, направленный на опухоль таксан, такой как связанный с альбумином таксан (например, связанный с альбумином паклитаксел), вводят субъекту в количестве, которое составляет по меньшей мере или примерно по меньшей мере 50 или 100 мг/м2, но которое меньше чем 260, 200 или 150 мг/м2. В других примерах доза, которая вводится за одно введение, является такой же, как существующие дозы и режимы дозирования, но схема дозирования снижена таким образом, что вводится более низкое количество нуклеозидного аналога за цикл введения. В других случаях субъектам могут быть введены более высокие дозы направленного на опухоль таксана, такого как связанный с альбумином таксан (например, связанный с альбумином паклитаксел), по сравнению с существующими лекарственными формами или режимами дозирования. Например, направленный на опухоль таксан, такой как связанный с альбумином таксан (например, связанный с альбумином паклитаксел) вводят субъекту в количестве, которое составляет по меньшей мере или примерно по меньшей мере 300 мг/м2, например между или примерно между 300 и 1000 мг/м2. Преобразование или определение соответствующих доз в мг/кг с учетом роста и веса субъекта находится в пределах компетентности специалиста в данной области техники. Например, Ш1Т определяют по формуле (рост (см) х вес (кг)/3600)1/2. 1П1Т среднего взрослого человека составляет 1,73 м2.
В примерах в настоящем документе комбинированная терапия, необязательно, включает дополнительное введение нуклеозидного аналога (например, гемцитабина или его производного или другого аналога). Гемцитабин вводят в терапевтически эффективном количестве, достаточном для достижения внутриопухолевой доставки. В конкретных примерах нуклеозидный аналог (например, гемцитабин или его производное или другой аналог) вводят совместно с комбинированной терапией, предусмотренной в настоящем документе, в количестве, достаточном для достижения внутриопухолевого уровня, который увеличен по меньшей мере в 1,5, 2, 3, 4, 5, 10 раз или больше по сравнению с внутриопухолевым уровнем, достигаемым, когда нуклеозидный аналог вводится отдельно. Количество нуклеозидного аналога (например, гемцитабина, его производного или другого аналога, описанных в настоящем документе), которое должно быть введено для лечения заболевания или состояния, например рака или солидной опухоли, такой как НА-богатая опухоль, может быть определено стандартными клиническими методами. Кроме того, чтобы помочь определить оптимальные диапазоны доз, могут быть использованы анализы in vitro и модели на животных. Точная доза, которую можно определить опытным путем, может зависеть от конкретного нуклеозидного аналога, конкретной лекарственной формы, способа введения, типа заболевания, подвергаемого лечению, и тяжести заболевания.
Как правило, нуклеозидный аналог (например, гемцитабин или его производное или другой аналог) вводят субъекту из расчета на площадь поверхности тела (ПИТ; м2) субъекта в количестве между или примерно между 100 и 2500 мг/м2, например между или примерно между 500 и 2000 мг/м2, 750 и 1500 мг/м2, 1000 и 1500 мг/м2 или 500 и 1500 мг/м2 и обычно вводят в количестве по меньшей мере, или примерно по меньшей мере, или примерно, или 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1250, 1500, 1750, 2000 мг/м2 или больше. В некоторых случаях субъектам могут быть введены более низкие дозы нуклеозидного аналога (например, гемцитабина или его производного или другого таксана) по сравнению с существующими лекарственными формами или режимами дозирования. Например, нуклеозидный аналог (например, гемцитабин или его производное или другой таксан) вводят субъекту в количестве, составляющем по меньшей мере или примерно по меньшей мере 200 или 500 мг/м2, но меньше чем 1000 или 1250 мг/м2. В других случаях доза, которая вводится за одно введение, является такой же, как существующие дозы и режимы дозирования, но схема дозирования снижена таким образом, что вводится более низкое количество нуклеозидного аналога за цикл введения. Определение соответствующей дозы в мг/кг находится в пределах компетентности специалиста в данной области техники.
Предусмотренные в настоящем документе агенты могут быть введены внутривенно, подкожно, внутримышечно, внутрикожно, перорально или другими способами введения. Конкретный способ может различаться для различных вводимых агентов или может быть одинаковым. Например, один, или несколько, или все агенты могут вводиться подкожно. В конкретных примерах в настоящем документе предполагается, что конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент может быть введен подкожно. В таких примерах конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент вводят в режиме дозирования, который предусматривает 1-8 ч, например 1-2 ч абсорбции для достижения биодоступности фермента в кровотоке, чтобы получить аналогичную опухолевую активность, как и в случае мгновенного внутривенного режима дозирования. В примерах в настоящем документе направленный на опухоль таксан и/или нуклеозидный аналог также могут быть введены подкожно. Конкретная лекарственная форма или совместная лекарственная форма одного или нескольких агентов для подкожного введения предусмотрена такой, чтобы достичь достаточной биодоступности агента и минимизировать реакции в месте инъекции.
- 72 031986
В другом примере один, или несколько, или все агенты могут быть введены внутривенно. В таком примере один, или несколько, или все агенты могут быть введены струйно или путем инфузии. Время струйного введения или инфузии может составлять от 1 до 60 мин и обычно составляет примерно от 10 до 40 мин и не больше 60 мин. Агенты могут быть введены путем одновременной инфузии или путем последовательной инфузии. В одном из примеров два агента или все три вводимых агента в комбинированной терапии в настоящем документе предусмотрены для одновременной введения путем инфузии. В таком примере вводимые агенты предусмотрены в одной композиции для инфузии вместе в одном инфузионном мешке. В другом случае вводимые агенты предусмотрены в отдельных композициях, но их объединяют в один инфузионный мешок в виде одного инфузата непосредственно перед инфузией. В другом примере вводимые агенты одновременно или почти одновременно вводят путем инфузии или подкожной инфузии, и они находятся в отдельных инфузионных мешках для отдельных инфузий.
3. Режим дозирования: частота и цикл введения.
Антигиалуроновый агент, такой как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, может быть введен до направленного на опухоль таксана, одновременно или почти одновременно с направленным на опухоль таксаном, после направленного на опухоль таксана или прерывисто с направленным на опухоль таксаном. Например, антигиалуроновый агент, например конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, и направленный на опухоль таксан могут быть введены вместе или отдельно. Если агенты вводятся отдельно, они могут быть введены сразу друг за другом, например введены в течение от 30 с до 15 мин друг за другом, например меньше чем в течение 15, 14, 12, 10, 5, 2, 1 мин или 30 с друг за другом. В других случаях антигиалуроновый агент, такой как конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, и направленный на опухоль таксан вводят последовательно и/или прерывисто. В таких примерах антигиалуроновый агент, например разрушающий гиалуронан фермент, может быть введен первым, или направленный на опухоль таксан может быть введен первым. Обычно антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, вводят до направленного на опухоль таксана. Например, антигиалуроновый агент или разрушающий гиалуронан фермент вводят по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или примерно, или за 5, 15, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 30, 36, 40 или 48 ч до введения направленного на опухоль таксана.
В примерах комбинированной терапии в настоящем документе нуклеозидный аналог может быть введен до антигиалуронового агента (например, разрушающего гиалуронан фермента) и/или направленного на опухоль таксана, одновременно или почти одновременно с антигиалуроновым агентом (например, разрушающим гиалуронан ферментом) и/или направленным на опухоль таксаном, после антигиалуронового агента (например, разрушающего гиалуронан фермента) и/или направленного на опухоль таксана или прерывисто с антигиалуроновым агентом (например, разрушающим гиалуронан ферментом) и/или направленным на опухоль таксаном. Нуклеозидный аналог может быть введен вместе или отдельно с одним или обоими агентами, выбранными из антигиалуронового агента (например, разрушающего гиалуронан фермента) и/или направленного на опухоль таксана. Если нуклеозидный аналог вводится отдельно, он может быть введен непосредственно до или непосредственно после введения антигиалуронового агента, такого как разрушающий гиалуронан фермент, и/или направленного на опухоль таксана, например введен в течение от 30 с до 15 мин от антигиалуронового агента (например, разрушающего гиалуронан фермента) и/или направленного на опухоль таксана, например меньше чем в течение 15, 14, 12, 10, 5, 2, 1 мин или 30 с от антигиалуронового агента (например, разрушающего гиалуронан фермента) и/или направленного на опухоль таксана. Обычно нуклеозидный аналог вводят после антигиалуронового агента, такого как разрушающий гиалуронан фермент. В некоторых случаях нуклеозидный аналог вводят после антигиалуронового агента, такого как разрушающий гиалуронан фермент, и направленного на опухоль таксана. Например, нуклеозидный аналог вводят по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или примерно, или через 5, 15, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 30, 36, 40 или 48 ч после введения антигиалуронового агента (например, разрушающего гиалуронан фермента) и/или направленного на опухоль таксана.
В одном из примеров в настоящем документе антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, вводят отдельно от других агентов и вводят непосредственно до или сразу после направленного на опухоль таксана. Например, разрушающий гиалуронан фермент вводят меньше чем с интервалом 15, 14, 12, 10, 5, 2, 1 мин или 30 с до или после направленнего на опухоль таксана. В таких примерах нуклеозидный аналог вводят после антигиалуронового агента (например, разрушающего гиалуронан фермента) и направленного на опухоль таксана. Например, нуклеозидный аналог вводят по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или примерно, или через 5, 15, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 30, 36, 40 или 48 ч после введения разрушающего гиалуронан фермента и/или направленного на опухоль таксана.
В другом примере антигиалуроновый агент, такой как разрушающий гиалуронан фермент, вводят до направленного на опухоль таксана, который вводят до нуклеозидного аналога. Например, антигиалуроновый агент (например, разрушающий гиалуронан фермент) вводят по меньшей мере, или по меньшей мере примерно, или примерно, или за 5, 15, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 30, 36, 40 или 48 ч до введения направленного на опухоль таксана. В таком примере нуклеозидный аналог вводят по мень- 73 031986 шей мере, или по меньшей мере примерно, или примерно, или через 5, 15, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16,
18, 20, 22, 24, 30, 36, 40 или 48 ч после введения направленного на опухоль таксана.
Частота и график введения, а также количества доз могут периодически изменяться в течение цикла введения для поддержания постоянного и/или длительного эффекта активных агентов в течение необходимого периода времени. Комбинации или композиции могут вводиться каждый час, каждый день, каждую неделю, каждый месяц, каждый год или один раз. Продолжительность цикла введения можно определить опытным путем, и она зависит от заболевания, подлежащего лечению, тяжести заболевания, конкретного пациента и других соображений, находящихся в пределах компетентности лечащего врача. Продолжительность лечения предусмотренной в настоящем документе комбинированной терапией может составлять одну неделю, две недели, один месяц, несколько месяцев, один год, несколько лет или больше. Дозы могут быть разделены на множество циклов введения на протяжении курса лечения. Например, модифицированный фермент гиалуронидаза может вводиться два раза в неделю в течение года или дольше. Если симптомы заболевания сохраняются в отсутствии прекращения лечения, лечение может быть продолжено в течение дополнительного периода времени. В течение курса лечения можно отслеживать признаки заболевания и/или токсичность или побочные эффекты, связанные с лечением.
Кроме того, цикл введения может быть скорректирован таким образом, чтобы включать периоды прекращения лечения, чтобы обеспечить период восстановления от воздействия агентов. Длительность периода прекращения лечения может составлять заранее определенное время или может быть определена опытным путем в зависимости от того, как пациент отвечает на лечение или в зависимости от наблюдаемых побочных эффектов. Например, лечение может быть прервано на одну неделю, две недели, один месяц или несколько месяцев. Обычно период прекращения лечения встроен в цикл режима дозирования для пациента.
Например, примером режима дозирования является цикл лечения или цикл введения из 28 дней. Агент, такой как антигиалуроновый агент, например конъюгированный с полимером разрушающий гиалуронан фермент, направленный на опухоль таксан и/или нуклеозидный аналог, можно вводить один раз в неделю или два раза в неделю. Например, агент можно вводить в течение первых 3 недель один раз в неделю или два раза в неделю с последующей одной неделей без дозирования. Таким образом, например, пациенту может вводиться доза агента два раза в неделю в 1, 4, 8, 11, 15 и 18 день (или в 0, 3, 6, 9, 12 и 15 день) с последующей одной неделей прекращения лечения в течение 28-дневного цикла. В другом примере пациенту может вводиться доза агента один раз в неделю в 1, 8 и 16 дни с последующей одной неделей прекращения лечения в течение 28-дневного цикла. В другом примере агент может вводиться в течение всех 28 дней один раз в неделю или два раза в неделю. Таким образом, например, пациенту может вводиться доза агента два раза в неделю в 1, 4, 8, 11, 15, 18, 21 и 24 день (или в 0, 4, 7, 11, 14, 18, 21 или 25 день) в течение всех 28 дней цикла. В других примерах пациенту может вводиться доза агента один раза в неделю в 1, 8, 16 или 24 день в течение всех 28 дней цикла. Понятно, что данное выше описание приведено только в качестве примера, и что могут применяться вариации приведенного выше описания. Более того, аналогичные циклы введения могут применяться для всех вводимых агентов, или для каждого вводимого агента может использоваться его собственный режим дозирования в предусмотренной в настоящем документе комбинированной терапии.
Определение точного цикла введения и схемы дозирования находится в пределах компетентности специалиста в данной области техники. Как отмечалось выше, цикл введения может длиться любой желаемый период времени. Таким образом, 28-дневный цикл введения можно повторять в течение любого периода времени. Выбор цикла введения и режима дозирования, которые отвечают потребностям пациента, в зависимости от индивидуальных факторов, специфичных для пациента и заболевания, подлежащего лечению, находится в пределах уровня компетентности лечащего врача.
Обычно график введения нуклеозидного аналога, например гемцитабина или его производного, как правило, зависят от цикла введения антигиалуронового агента, например конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента, и/или направленного на опухоль таксана. Например, нуклеозидный аналог может быть введен после первого введения антигиалуронового агента, такого как разрушающий гиалуронан фермент, и/или направленного на опухоль таксана в цикле введения, и/или после любого одного или нескольких последовательных введений в цикле. В других примерах нуклеозидный аналог вводят после каждого последовательного введения антигиалуронового агента (например, разрушающего гиалуронан фермента) и/или направленного на опухоль таксана в цикле, после каждого второго последовательного введения разрушающего гиалуронан фермента и/или направленного на опухоль таксана в цикле или вводят один раз в неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели или один раз в месяц в процессе цикла введения антигиалуронового агента, например разрушающего гиалуронан фермента, и/или направленного на опухоль таксана. В некоторых примерах нуклеозидный аналог вводят только один раз за цикл введения антигиалуронового агента, например разрушающего гиалуронан фермента, и/или направленного на опухоль таксана. В дополнительном примере нуклеозидный аналог вводят прерывисто между циклами введения. Например, нуклеозидный аналог не вводят в процессе первого цикла введения, но вводят в процессе второго цикла, далее пропуская третий цикл введения, и вводят снова в процессе четвертого цикла и т.д., или используют любые варианты перечисленных графиков
- 74 031986 введения.
В конкретных примерах комбинированной терапии в настоящем документе способы включают введение антигиалуронового агента и направленного на опухоль таксана одновременно или почти одновременно, например совместно. Антигиалуроновый агент и направленный на опухоль таксан могут быть введены с частотой введения два раза в неделю или один раз в неделю в течение заранее определенного числа недель. В частности, антигиалуроновый агент вводят два раза в неделю, и направленный на опухоль таксан вводят один раз в неделю. Необязательно, в комбинированной терапии также может быть введен нуклеозидный аналог. Например, нуклеозидный аналог вводят один раз в неделю в течение заранее определенного числа недель, и, как правило, нуклеозидный аналог вводят через одну неделю после введения антигиалуронового агента и направленного на опухоль таксана. Способ также может включать введение кортикостероида до введения антигиалуронового агента, одновременно с введением антигиалуронового агента, прерывисто с введением антигиалуронового агента или после введения антигиалуронового агента. Цикл введения может длиться в течение любого периода времени, и определение его длительности находится в пределах уровня компетентности лечащего или практикующего врача. Как правило, заранее определенное число недель составляет 3 недели или 4 недели, но может быть больше. Цикл введения можно повторять множество раз в зависимости от статуса заболевания и ответа субъекта.
4. Дополнительная комбинированная терапия.
Предусмотренная в настоящем документе комбинированная терапия может быть использована сама по себе или в дополнительной комбинации с другим терапевтическим агентом или лечением. Предусмотренные в настоящем документе комбинации или композиции могут быть дополнительно составлены в лекарственную форму или введены или применены вместе с другими терапевтическими или фармакологическими агентами или видами лечения, такими как процедуры, а также до них, прерывисто или после них. Например, такие агенты включают, но не ограничиваются ими, другие биологически активные агенты, противораковые агенты, низкомолекулярные соединения, диспергирующие агенты, анестетики, вазоконстрикторы и хирургическое лечение и их комбинации. Такие агенты также могут включать один или несколько агентов для облегчения, снижения или предотвращения побочных эффектов. В некоторых случаях, комбинированная терапия может быть использована в комбинации с одним или несколькими видами лечения рака, которые удаляют первичную опухоль или которые подавляют иммунную систему субъекта до лечения. Например, могут быть использованы дополнительная химиотерапия или лучевая терапия в дополнение к предусмотренной в настоящем документе комбинированной терапии. Такая дополнительная терапия может ослаблять иммунную систему субъектов. В других примерах хирургическое удаление и/или терапия, направленная на ослабление иммунной системы, могут не требоваться. Примеры других способов, которые могут быть комбинированы с комбинированной терапией, предусмотренной в настоящем документе, включают введение соединения, которое снижает скорость пролиферации опухоли или неопластических клеток без ослабления иммунной системы (например, путем введения соединений-супрессоров опухоли или путем введения соединений, специфичных к опухолевым клеткам), или введение соединения, ингибирующего ангиогенез.
Препарат второго агента или агентов или второй вид или виды лечения могут быть введены или применены один раз или могут быть разделены на несколько меньших доз, подлежащих введению через промежутки времени. Выбранные препараты агентов/виды лечения могут быть введены в одной или нескольких дозах в течение курса лечения, например в течение нескольких часов, дней, недель или месяцев. В некоторых случаях используется непрерывное введение. Понятно, что точная доза и курс введения зависят от показания и переносимости пациента. Обычно режим дозирования второго агента/видов лечения в настоящем документе известен специалисту в данной области техники.
а). Кортикостероиды.
Предусмотренная в настоящем документе комбинированная терапия может быть использована сама по себе или в дополнительной комбинации с одним или несколькими кортикостероидами. Кортикостероид вводят в количестве, которое является терапевтически эффективным для облегчения или снижения одного или нескольких неблагоприятных эффектов введения конъюгированных с полимером разрушающих гиалуронан ферментов или другого агента, в частности неблагоприятных эффектов на скелетномышечную систему. Терапевтически эффективное количество представляет собой дозу, достаточную для облегчения, предотвращения, устранения или снижения одного или нескольких симптомов или неблагоприятных эффектов. Показатели улучшений или успешного предварительного лечения включают определение невозможности установления оценки по шкале СТСАЕ или изменения в степени или тяжести по шкале СТСАЕ.
Кортикостероиды представляют собой класс стероидных гормонов, которые образуются в коре надпочечников. Кортикостероиды участвуют во множестве физиологических реакций, таких как реакция на стресс, иммунный ответ и регуляция воспаления, метаболизм углеводов, катаболизм белков, уровень электролитов в крови и поведение. Они включают глюкокортикоиды, которые представляют собой противовоспалительные агенты с большим количеством других функций, и минералокортикоиды, которые контролируют солевой и водный баланс, прежде всего, воздействуя на почки.
Глюкокортикоиды представляют собой класс стероидных гормонов, например кортикостероиды,
- 75 031986 которые связываются с глюкокортикоидным рецептором. Глюкокортикоиды вызывают свои эффекты путем связывания с глюкокортикоидным рецептором. Среди других активностей, активированный глюкокортикоидный комплекс, в свою очередь, повышает экспрессию противовоспалительных белков в ядре и репрессирует экспрессию провоспалительных белков в цитозоле, предотвращая транслокацию других факторов транскрипции из цитозоля в ядро.
Обычно любой кортикостероид, например глюкокортикоид, может быть использован в способах или комбинациях, предусмотренных в настоящем документе. Глюкокортикоиды включают синтетические и несинтетические глюкокортикоиды. Примеры глюкокортикоидов включают, но не ограничиваются ими, алклометазон, алгестон, беклометазон (например, беклометазон дипропионат), бетаметазон (например, бетаметазона 17-валерат, бетаметазона натрия ацетат, бетаметазона натрия фосфат, бетаметазона валерат), будезонид, клобетазол (например, клобетазола пропионат), клобетазон, клокортолон (например, клокортолон пивалат), клопреднол, кортикостерон, кортизон и гидрокортизон (например, гидрокортизона ацетат), кортивазол, дефлазакорт, дезонид, дезоксиметазон, дексаметазон (например, дексаметазон 21фосфат, дексаметазона ацетат, дексаметазона натрия фосфат), дифторазон (например, дифторазона диацетат), дифлукортолон, дифлупреднат, эноксолон, флуазакорт, флуклоронид, флудрокортизон (например, флудрокортизона ацетат), флуметазон (например, флуметазона пивалат), флунизолид, флуоцинолон (например, флуоцинолона ацетонид), флуоцинонид, флуокортин, флуокортолон, флуорометолон (например, флуорометолона ацетат), флуперолон (например, флуперолона ацетат), флупредниден, флупреднизолон, флурандренолид, флутиказон (например, флутиказона пропионат), формокортал, галцинонид, галобетазол, галометазон, галопредон, гидрокортамат, гидрокортизон (например, гидрокортизона 21бутират, гидрокортизона ацепонат, гидрокортизона ацетат, гидрокортизона бутепрат, гидрокортизона бутират, гидрокортизона ципионат, гидрокортизона гемисукцинат, гидрокортизона пробутат, гидрокортизона натрия фосфат, гидрокортизона натрия сукцинат, гидрокортизона валерат), лотепреднол этабонат, мазипредон, медризон, мепреднизон, метилпреднизолон (метилпреднизолона ацепонат, метилпреднизолона ацетат, метилпреднизолона гемисукцинат, метилпреднизолона натрия сукцинат), мометазон (например, мометазона фуроат), параметазон (например, параметазона ацетат), предникарбат, преднизолон (например, преднизолона 25-диэтиламиноацетат, преднизолона натрия фосфат, преднизолона 21гемисукцинат, преднизолона ацетат; преднизолона фарнезилат, преднизолона гемисукцинат, преднизолон -21 (бета-Э-глюкуронид), преднизолона метасульфобензоат, преднизолона стеаглат, преднизолона тебутат, преднизолона тетрагидрофталат), преднизон, преднивал, преднилиден, римексолон, тиксокортол, триамцинолон (например, триамцинолона ацетонид, триамцинолона бенетонид, триамцинолона гексацетонид, триамцинолона ацетонида 21-пальмитат, триамцинолона диацетат).
Эти глюкокортикоиды и их соли подробно обсуждаются, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (16th ed. 1980).
В некоторых примерах глюкокортикоид выбран из кортизона, дексаметазона, гидрокортизона, метилпреднизолона, преднизолона и преднизона. В конкретном примере глюкокортикоид представляет собой дексаметазон.
Кортикостероид предусмотрен в терапевтически эффективной дозе. Терапевтически эффективная концентрация может быть определена опытным путем с помощью тестирования в известных системах in vitro или in vivo (например, модели на животных). Например, количество выбранного кортикостероида, которое должно быть введено для облегчения неблагоприятных эффектов, можно определить стандартными клиническими методами. Кроме того, чтобы помочь определить оптимальные диапазоны доз, могут быть использованы модели на животных. Точная доза, которую можно определить опытным путем, может зависеть от конкретного терапевтического препарата, режима и схемы дозирования, способа введения и тяжести заболевания.
Концентрация выбранного терапевтического агента в композиции зависит от абсорбции, инактивации и скорости экскреции, физико-химических характеристик, схемы дозирования и вводимого количества, а также от других факторов, известных специалистам в данной области техники. Например, понятно, что точная доза и продолжительность лечения зависят от заболевания или состояния, ткани, подлежащей лечению, пациента или субъекта и антигиалуронового агента, в том числе количества и режима дозирования. Доза кортикостероида также может варьировать в зависимости от возраста и состояния здоровья пациента, дозирования конъюгированного с полимером разрушающего гиалуронан фермента (например, дозирования пегилированного разрушающего гиалуронан фермента), активности кортикостероида и способа введения. Например, следует отметить, что концентрации и величины доз будут варьировать в зависимости от терапевтической дозы и режима дозирования разрушающего гиалуронан фермента. Дополнительно, чтобы достичь желаемых результатов, кортикостероид можно вводить ежедневно, еженедельно или ежемесячно или в течение более длительных периодов времени. Конкретный объем дозы может варьировать и зависит от режима дозирования, частоты введения и желательной скорости введения. Следует отметить, что концентрации и величины доз также могут варьировать в зависимости от возраста индивидуума, подвергающегося лечению.
Точную дозу и продолжительность лечения можно определить опытным путем с использованием известных протоколов тестирования или путем экстраполяции из данных тестирования in vivo или in
- 76 031986 vitro. Следует также понимать, что для каждого конкретного субъекта определенные режимы дозирования должны корректироваться с течением времени в соответствии с индивидуальной потребностью и профессиональной оценкой лица, назначающего введение или наблюдающего за введением лекарственных форм, и что диапазоны концентраций, приведенные в настоящем документе, являются только примерами и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Обычно, режимы дозирования выбирают для ограничения токсичности, и в настоящем документе режимы дозирования выбирают для облегчения неблагоприятных побочных эффектов. Следует отметить, что лечащий врач будет знать, как и когда завершить, прервать или скорректировать терапию, чтобы снизить дозировку из-за токсичности или нарушений функции костного мозга, печени или почек или других тканей. И наоборот, лечащий врач также будет знать, как и когда скорректировать лечение до более высоких уровней, если клинический ответ не является адекватным (исключая токсические побочные эффекты). Введение терапевтического агента не должно превышать максимальных уровней доз, установленных Управлением США по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов или опубликованных в Настольном справочнике врача.
Обычно вводимая доза кортикостероида зависит от конкретного кортикостероида, поскольку существуют различия в активности между разными кортикостероидами (см. табл. 4 ниже). Кортикостероид или глюкокортикоид, например дексаметазон, можно вводить перорально (таблетки, жидкости или жидкие концентраты) (п/о), внутривенно (в/в) или внутримышечно. Кортикостероид, как правило, вводят в виде болюса, но его также можно вводить в течение периода времени, пока доза является эффективной для облегчения одного или нескольких побочных эффектов, связанных с введением антигиалуронового агента, например пегилированной гиалуронидазы.
Таблица 4
Введение глкокортикоида
Глюкокортикоид (способ введения) Эквивалентная активность (мг)
Гидрокортизон (в/в или п/о) 20
Преднизон 5
Преднизолон (в/в или п/о) 5
Метилпреднизолона натрия сукцинат (в/в) 4
Дексаметазон (в/в или п/о) 0,5-0,75
Кортикостероид можно вводить в любом количестве, которое является эффективным для облегчения одного или нескольких побочных эффектов, связанных с введением разрушающего гиалуронан фермента. Таким образом, кортикостероид, например глюкокортикоид, можно вводить, например, в количестве между или примерно 0,1 и 100 мг на дозу, между или примерно 0,1 и 80 мг, 0,1 и 60 мг, 0,1 и 40 мг, 0,1 и 30 мг, 0,1 и 20 мг, 0,1 и 15 мг, 0,1 и 10 мг, 0,1 и 5 мг, 0,2 и 40 мг, 0,2 и 30 мг, 0,2 и 20 мг, 0,2 и 15 мг, 0,2 и 10 мг, 0,2 и 5 мг, 0,4 и 40 мг, 0,4 и 30 мг, 0,4 и 20 мг, 0,4 и 15 мг, 0,4 и 10 мг, 0,4 и 5 мг, 0,4 и 4 мг, 1 и 20 мг, 1 и 15 мг или 1 и 10 мг на взрослого субъекта человека весом 70 кг. Как правило, кортикостероид, такой как глюкокортикоид, вводят в количестве между или примерно 0,4 и 20 мг, например в количестве, равном или равном примерно 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,75, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 мг на дозу на среднего взрослого субъекта человека.
Кортикостероид может быть введен, например, в дозе, составляющей или составляющей примерно 0,001 мг/кг (субъекта), 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,006, 0,007, 0,008, 0,009, 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,15, 0,2, 0,25, 0,30, 0,35, 0,40, 0,45, 0,50, 0,55, 0,60, 0,65, 0,70, 0,75, 0,80, 0,85, 0,90, 0,95, 1, 1,05, 1,1, 1,15, 1,20, 1,25, 1,3, 1,35 или 1,4 мг/кг из расчета на среднего взрослого субъекта человека, как правило, имеющего вес примерно от 70 до 75 кг.
Вводимая доза может варьировать в таких пределах, пока введение кортикостероида облегчает один или несколько неблагоприятных побочных эффектов, связанных с введением разрушающего гиалуронан фермента. В одном из примеров в цикле лечения дозирование глюкокортикоида, например дексаметазона, проводят в последовательно более низких дозах. Таким образом, в таких режимах лечения доза кортикостероида уменьшается. Например, дексаметазон вводят до введения разрушающего гиалуронан фермента в начальной дозе 4 мг и после каждого последовательного введения разрушающего гиалуронан фермента дозу дексаметазона уменьшают, так что доза составляет 3 мг для следующего введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы, далее 2 мг на введение антигиалуронового агента, например пегилированной гиалуронидазы, и далее 1 мг на введение антигиалуронового агента, например пегилированной гиалуронидазы. Предусмотрена любая доза, пока доза кортикостероида является эффективной для облегчения одного или нескольких побочных эффектов, связанных с введением разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы.
Время введения может варьировать, пока введение кортикостероида облегчает один или несколько неблагоприятных побочных эффектов, связанных с введением разрушающего гиалуронан фермента, такого как пегилированная гиалуронидаза. Кортикостероид можно вводить последовательно, прерывисто, одновременно или в той же самой композиции, что и разрушающий гиалуронан фермент, например пегилированный разрушающий гиалуронан фермент. Например, кортикостероид можно вводить до введе
- 77 031986 ния разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы, в процессе введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы, одновременно с введением разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы, или после введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы. В другом примере кортикостероид и разрушающий гиалуронан фермент, например пегилированную гиалуронидазу, вводят прерывисто. Обычно кортикостероид вводят до введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы. Например, кортикостероид, например глюкокортикоид, такой как дексаметазон, можно вводить примерно или точно за 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 45 мин, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36 ч или больше до введения антигиалуронового агента, например пегилированного разрушающего гиалуронан фермента.
В некоторых примерах кортикостероид вводят в то же время, когда вводят разрушающий гиалуронан фермент, например пегилированный разрушающий гиалуронан фермент. В этом примере кортикостероид можно вводить вместе с разрушающим гиалуронан ферментом, например пегилированной гиалуронидазы, или отдельно от него. Как правило, кортикостероид вводят отдельно от разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированного разрушающего гиалуронан фермента. В других примерах кортикостероид вводят точно или примерно через 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 45 мин, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36 ч или больше после введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированного разрушающего гиалуронан фермента.
В одном из примеров кортикостероид вводят до введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы. Например, кортикостероид, например глюкокортикоид, например дексаметазон, вводят за 1 ч до введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы. В другом примере кортикостероид вводят за 5 мин до введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированного разрушающего гиалуронан фермента. В другом примере кортикостероид вводят как до, так и после введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы. В другом примере кортикостероид, такой как дексаметазон, вводят за 15 мин непосредственно перед введением разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированного разрушающего гиалуронан фермента, и через 8 ч после введения антигиалуронового агента, например пегилированного разрушающего гиалуронан фермента. В другом примере кортикостероид, такой как дексаметазон, вводят за 1 ч до введения разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированного разрушающего гиалуронан фермента, и через 8-12 ч после введения антигиалуронового агента, например пегилированного разрушающего гиалуронан фермента.
Предполагается любой режим дозирования, пока время дозирования кортикостероида облегчает один или несколько побочных эффектов, связанных с введением разрушающего гиалуронан фермента, например пегилированной гиалуронидазы. Кроме того, доза и режим дозирования кортикостероида являются такими, что они не влияют на терапевтический эффект или не снижают терапевтический эффект разрушающего гиалуронан фермента или другого агента в предусмотренных в настоящем документе композициях и комбинациях, в том числе при лечении рака или солидных опухолей.
b). Противораковые агенты и другие виды лечения.
Комбинированная терапия, предусмотренная в настоящем документе, может быть использована отдельно сама по себе или в дополнительной комбинации с другими противораковыми агентами. Противораковый агент (противораковые агенты) или вид лечения (виды лечения) могут представлять собой хирургическое лечение, лучевую терапию, лекарства, химиотерапевтические агенты, полипептиды, антитела, пептиды, низкомолекулярные вещества или векторы, вирусы или ДНК для генной терапии.
Примеры противораковых агентов, которые могут быть введены после применения комбинированной терапии, одновременно с применением комбинированной терапии или до применения комбинированной терапии в настоящем документе, включают, но не ограничиваются ими, ацивицин; авицин; акларубицин; акодазол; акронин; адозелезин; алдеслейкин; алемтузумаб; алитретиноин (9-цис-ретиноевая кислота); аллопуринол; альтретамин; альвоцидиб; амбазон; амбомицин; аметантрон; амифостин; аминоглутетимид; амсакрин; анастрозол; анаксирон; анцитабин; антрамицин; апазиквон; аргимесна; триоксид мышьяка; аспарагиназа; асперлин; атримустин; азацитидин; азетепа; азотомицин; баноксантрон; батабулин; батимастат; живую вакцину БЦЖ; бенаксибин; бендамустин; бензодеп (Benzodep); бексаротен; бевацизумаб; бикалутамид; биэтасерпин; бирикодар; бисантрен; биснафида димезилат; бизелезин; блеомицин; бортезомиб; бреквинар; бропиримином; будотитан; бусульфан; кактиномицин; калустерон; канертиниб; капецитабин; карацемид; карбетимир; карбоплатин; карбоквон; кармофур; кармустин с полифепрозаном; кармустин; карубицин; карзелезин; цедефингол; целекоксиб; цемадотин (Cemadotin); хлорамбуцил; циотеронел; циролемицин; цисплатин; кладрибин; кланфенур; клофарабин; криснатол; циклофосфамид; цитарабин липосомальный; цитарабин; дакарбазин; дактиномицин; дарбэпоэтин альфа; даунорубицин липосомальный; даунорубицин/дауномицин; даунорубицин; децитабин; денилейкин дифтитокс; декснигулдипин; дексонаплатин; дексразоксан; дезагуанин; диазиквон; диброспидий; диеногест; диналин; дисермолид; доцетаксел; дофеквидар (Dofequidar); доксифлуридин; доксорубицин липосомальный; доксорубицин HCL; доксорубицин HCL липосомальный для инъекций; доксорубицин; дролоксифен; дромастанолон пропионат; дуазомицин; экомустин; эдатрексат; эдотекарин; эфлорнитин; элакридар
- 78 031986 (Elacridar); элинафид; раствор Elliott's В; элсамитруцин; эмитефур; энлоплатин; энпромат; энзастаурин; эпипропидин; эпирубицин; эпоэтин альфа; эпталопрост; эрбулозол; эсорубицин; эстрамустин; этанидазол; этоглуцид; этопозида фосфат; этопозид VP-16; этопозид; этоприн; экземестан; эксисулинд; фадрозол; фазарабин; фенретинид; филграстим; флоксуридин; флударабин; фторурацил; 5-фторурацил; флюоксиместерон; фторцитабин; фосквидон; фостриецин; фостриецин; фотретамин; фулвестрант; галарубицин; галоцитабин; гемцитабин; гемтузумаб/озогамицин; герохинол; гиматекан; гимерацил; глоксазон; глуфосфамид; гозерелина ацетат; гидроксимочевина; ибритумомаб/тиуксетан; идарубицин; ифосфамид; илмофозин; иломастат; иматиниб мезилат; имексон; импросульфан; индисулам; инпроквон; интерферон а-2а; интерферон a-2b; интерферон а; интерферон β; интерферон γ; интерфероны; интерлейкин-2 и другие интерлейкины (в том числе рекомбинантные интерлейкины); интоплицин; йобенгуан [131-I]; ипроплатин; иринотекан; ирсогладин; иксабепилон; кетотрексат; L-аланозин; ланреотид; лапатиниб; ледоксантрон; летрозол; лейковорин; лейпролид; лейпрорелин (лейпролид); левамизол; лексакальцитол; лиарозол; лобаплатин; лометрексол; ломустин/СИИНУ; ломустин; лонафарниб; лозоксантрон; луртотекан; мафосфамид; манносульфан; маримастат; масопрокол; мехлорэтамин; мехлорэтамин/хлорметин; мегестрола ацетат; мегестрол; меленгестрол; мелфалан; мелфалан L-PAM; меногарил, мепитиостан; меркаптопурин;
6-меркаптопурин; месну; метезинд; метотрексат; метоксален; метомидат; метоприн; метуредепа; мибоплатин; мипроксифен; мизонидазол; митиндомид; митокарцин; митокромин; митофлаксон; митогиллин; митогуазон; митомалцин; митомицин С; митомицины; митонафид; митоквидон; митоспер; митотан; митоксантрон; митозоломид; мивобулин; мизорибин; мофаротен; мопидамол; мубритиниб; микофеноловая кислота; нандролон фенилпропионат; недаплатин; неларабин; неморубицин; нитракрин; нокодазол; нофетумомаб; ногаламицин; нолатрексед; нортопиксантрон; октреотид; опрелвекин; ормаплатин; ортатаксел; отерацил; оксалиплатин; оксисуран; оксофенарсин; паклитаксел; памидронат; патупилон; пегадемас; пэгаспаргаза; пэгфилграстим; пелдезин; пелиомицин; пелитрексол; пеметрексед; пентамустин; пентостатин; пепломицин; перфосфамид; перифозин; пикоплатин; пинафид; пипоброман; пипосульфан; пирфенидон; пироксантрон; пиксантрон; плевитрексед; пликамицин митрамицин; пликамицин; пломестан; пломестан; порфимер натрия; порфимер; порфиромицин; преднимустин; прокарбазин; пропамидин; проспидий; пумитепа; пуромицин; пиразофурин; хинакрин; ранимустин; расбуриказу; рибоприн; ритросульфан; ритуксимаб; роглетимид; роквинимекс; руфокромомицин; сабарубицин; сафингол; сарграмостим; сатраплатин; себриплатин; семустин; симтразен; сизофиран; собузоксан; сорафениб; спарфозат; спарфозовую кислоту (Sparfosic acid); спарзомицин; спирогерманий; спиромустин; спироплатин; скваламин; стрептонигрин; стрептоварицин; стрептозоцин; суфосфамид; сулофенур; сунитиниба малат; 6тиогуанин (6-TG); тацединалин; тальк; тализомицин; таллимустин; тамоксифен; тариквидар; тауромустин; текогалан; тегафур; телоксантрон; темопорфин; темозоломид; тенипозид/VM-26; тенипозид; тероксирон; тестолактон; тиамиприн; тиогуанин; тиотепу; тиамиприн; тиазофурин; тиломизол; тилорон; тимкодар; тиазолидин-4-карбоновая кислота (Timonacic); тирапазамин; топиксантрон; топотекан; торемифен; тозитумомаб; трабектедин (эктинэсайдин 743); трастузумаб; трестолон; третиноин/ATRA; трицирибин; трилостан; триметрексат; триплатина тетранитрат; трипторелин; трофосфамид; тубулозол; убенимекс; урамустин; уредепу; валрубицин; валсподар; вапреотид; вертепорфин; винбластин; винкристин; виндезин; винепидин; винфлунин; винформид; винглицинат; винлейцинол; винлейросин; винорелбин; винросидин; винтриптол; винзолидин; ворозол; ксантомицин А (гуамециклин); зениплатин; зиласкорб [2-Н]; зиностатин; золедронат; зорубицин и зосуквидар, например, алдеслейкин (например, PROLEUKIN®); алемтузумаб (например, САМРАТН®); алитретиноин (например, PANRETIN®); аллопуринол (например, ZYLOPRJM®); альтретамин (например, HEXALEN®); амифостин (например, ETHYOL®); анастрозол (например, ARIMIDEX®); триоксид мышьяка (например, TRISENOX®); аспарагиназа (например, ELSPAR®); живая вакцина BCG (например, TICE® BCG); бексаротен (например, TARGRETIN®); бевацизумаб (AVASTIN®); блеомицин (например, BLENOXANE®); бусульфан для внутривенного введения (например, BUSULFEX®); бусульфан для перорального применения (например, MYLERAN™); калустерон (например, METHOSARB®); капецитабин (например, XELODA®); карбоплатин (например, PARAPLATIN®); кармустин (например, BCNU®, BiCNU®); кармустин с полифепрозаном (например, GLIADEL® Wafer); целекоксиб (например, CELEBREX®); хлорамбуцил (например, LEUKERAN®); цисплатин (например, PLATINOL®); кладрибин (например, LEUSTATIN®, 2-CdA®); циклофосфамид (например, CYTOXAN®, NEOSAR®); цитарабин (например, CYTOSAR-U®); цитарабин липосомальный (например, DepoCyt®); дакарбазин (например, DTIC-Domev): дактиномицин (например, COSMEGEN®); дарбэпоэтин альфа (например, ARANESP®); даунорубицин липосомальный (например, DANUOXOME®); даунорубицин/дауномицин (например, CERUBIDINE®); денилейкин дифтитокс (например, ONTAK®); дексразоксан (например, ZINECARD®); доцетаксел (например, TAXOTERE®); доксорубицин (например, ADRIAMYCIN®, RUBEX®); доксорубицин липосомальный, в том числе, доксорубицин HCL липосомальный для инъекций (например. DOXIL®); дромастанолон пропионат (например, DROMOSTANOLONE® и MASTERONE® для инъекций); раствор Elliott's В (например, Elliott's В Solution®); эпирубицин (например, ELLENCE®); эпоэтин альфа (например, EPOGEN®); эст
- 79 031986 рамустин (например, EMCYT®); этопозида фосфат (например, ETOPOPHOS®); этопозид VP-16 (например, VEPESID®); экземестан (например, AROMASIN®); филграстим (например, NEUPOGEN®); флоксуридин (например, FUDR®); флударабин (например, FLUDARA®); фторурацил, в том числе, 5-FU (например, ADRUCIL®); фулвестрант (например, FASLODEX®); гемцитабины (например, GEMZAR®); гемтузумаб/ озогамицин (например, MYLOTARG®); гозерелина ацетат (например, ZOLADEX®); гидроксимочевина (например, HYDREA®); ибритумомаб/тиуксетан (например, ZEVALIN®); идарубицин (например, IDAMYCIN®); ифосфамид (например, IFEX®); иматиниб мезилат (например, GLEEVEC®); интерферон альфа-2а (например, ROFERON-A®); интерферон альфа-Зб (например, INTRON А®); иринотекан (например, CAMPTOSAR®); летрозол (например, FEMARA®); лейковорин (например, WELLCOVORIN®, LEUCOVORIN®); левамизол (например, ERGAMISOL®); ломустин/CCNUs (например, CeeNU®); мехлорэтамин/хлорметин (например, MUSTARGEN®); мегестрола ацетат (например, MEGACE®); мелфалан/L-PAM (например, ALKERAN®); меркаптопурин, в том числе, 6-меркаптопурин (6-МР; например, PURINETHOL®); месна (например, MESNEX®); метотрексат; метоксален (например, UVADEX®); митомицин С (например, MUTAMYCIN®, MITOZYTREX®); митотан (например, LYSODREN®); митоксантрон (например, NOVANTRONE®); нандролон фенилпропионат (например, DURABOLIN-50®); нофетумомаб (например, VERLUMA®); опрелвекин (например, NEUMEGA®); оксалиплатин (например, ELOXATIN®); паклитаксел (например, PAXENE®, TAXOL®); памидронат (например, AREDIA®); пегадемас (например, ADAGEN®); пэгаспаргаза (например, ONCASPAR®); пэгфилграстим (например, NEULASTA®); пентостатин (например, NIPENT®); пипоброман (например, VERCYTE®); пликамицин/митрамицин (например, MITHRACIN®); порфимер натрия (например, PHOTOFRIN®); прокарбазин (например, MATULANE®); хинакрин (например, ATABRINE®); расбуриказа (например, ELITEK®); ритуксимаб (например, RITUXAN®); сарграмостим (например, PROKINE®); стрептозоцин (например, ZANOSAR®); сунитиниба малат (например, SUTENT®); тальк (например, SCLEROSOL®); тамоксифен (например, NOLVADEX®); темозоломид (например, TEMODAR®); тени^зад/У^-Зб (например, VUMON®); тестолактон (например, TESLAC®); тиогуанин, в том числе 6тиогуанин (6-TG); тиотепу (например, THIOPLEX®); топотекан (например, HYCAMTIN®); торемифен (например, FARESTON®); тозитумомаб (например, BEXXAR®); трастузумаб (например, HERCEPTIN®); третиноин/ATRA (например, VESANOID®); урамустин; валрубицин (например, VALSTAR®); винбластин (например, VELBAN®); винкристин (например, ONCOVIN®); винорелбин (например, NAVELBINE®); и золедронат (например, ZOMETA®).
Н. Примеры.
Следующие примеры включены только для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения объема изобретения.
Пример 1. Противоопухолевый эффект комбинированного лечения PEGPH20 и Nab-паклитакселом на модели ксенотрансплантата опухоли поджелудочной железы человека.
Противоопухолевый эффект PEGPH20 в сочетании с наночастицами альбумин-связанного (nab)паклитаксела оценивали в модели ксенотрансплантата рака поджелудочной железы человека.
Опухолевые клетки линии BXPC3 рака поджелудочной железы (American Tissue Culture Collection (ATCC) CRL-1687) культивировали до приблизительно 80% площади покрытия, обрабатывали трипсином, собирали, промывали один раз в HBSS (солевой сбалансированный раствор Хэнкса, Mediatech Inc.). Перед введением клетки промывали дважды стерильным HBSS, подсчитывали с использованием автоматизированного устройства для подсчёта Nexcelom Cellometer (Nexcelom Bioscience; Lawrence, MA), которое определяет концентрацию клеток и их жизнеспособность по окрашиванию трипановым синим, и разбавляли HBSS до концентрации 1х108 клеток/мл на льду перед введением в животных. Самцам лишенных волосяного покрова мышей (бестимусные мыши NCr nu/nu, Taconic Laboratories, Inc.) в возрасте около 6 недель вводили внутримышечно (IM) по 0,05 мл клеточной суспензии, перитибиально, в левую заднюю ногу (рядом с надкостницей большой берцовой кости). Опухоли у животных оценивали два раза в неделю и позволяли им расти до среднего объема опухоли примерно 350-400 мм3. Фактические объемы опухоли определяли с помощью ультразвукового устройства VisualSonics Vevo 770 с высоким разрешением (VisulaSonics Inc.; Торонто, Онтарио, Канада).
Животных с опухолями распределяли в 8 групп для лечения по 8 животных в каждой группе и вводили внутривенно 1) носитель (буфер API; 2) PEGPH20 (4,5 мг/кг); 3) nab-паклитаксел (3 мг/кг; низкая доза); 4) nab-паклитаксел (10 мг/кг, умеренная доза); 5) nab-паклитаксел (30 мг/кг; высокая доза); 6) PEGPH20 (4,5 мг/кг) + nab-паклитаксел (3 мг/кг); 7) PEGPH20 (4,5 мг/кг) + nab-паклитаксел (10 мг/кг) или 8) PEGPH20 (4,5 мг/кг) + nab-паклитаксел (30 мг/кг). PEGPH20 и nab-паклитаксел вводили отдельно. PEGPH20 вводили сразу после nab-паклитаксела. Доза и частота введений представляли собой введения каждые 3 дня, в общей сложности шесть инъекций, начиная от дня 0, при объеме дозы 0,1 мл/25 г мышь или 4,0 мл/кг (т.е. дни 0, 3, 6, 9, 12, 15).
Объемы опухолей у всех мышей измеряли по изображениям, получаемым с использованием ультразвуковой системы VisualSonics, 2 раза в неделю. Объем опухоли рассчитывали с использованием ком- 80 031986 пьютерной программы для визуализации в SD-режиме (VisualSonics® Vevo 770®, v 3.0.0). Ингибирование роста опухоли в процентах (% TGI) рассчитывали по еле дующему уравнению:
В приведенном выше уравнении Tn является средним объемом опухоли в группе лечения в соответствующий день N в указанной временной точке после обработки; Т0 является средним объемом опухоли в группе лечения в день 0 до лечения; Cn является средним объемом опухоли в контрольной группе в соответствующий день N в указанной временной точке после обработки носителем; и С0 является средним объемом опухоли в контрольной группе в день 0 до обработки.
Результаты представлены на фиг. 1. Результаты показывают, что nab-паклитаксел при высоких и средних дозах ингибирует рост опухоли, и его эффект был усилен в присутствии PEGPH20. Например, в последний момент времени, когда был измерен объем опухоли, умеренная и высокая дозы nabпаклитаксела (10 мг/кг и 30 мг/кг) ингибировали рост опухоли на 62% (р<0,01) и 74% (р<0,01), соответственно, по сравнению с контролем-носителем. В присутствии PEGPH20 ингибирование роста опухоли в группе лечения с дозой 10 мг/кг nab-паклитаксела было увеличено до 72% (р<0,01), а в группе лечения с дозой 30 мг/кг nab-паклитаксела было увеличено до 91% (р<0,01). Это показывает опосредованное PEGPH20 увеличение эффективности на 19% для умеренной дозы nab-паклитаксела и на 26% для высокой дозы nab-паклитаксела. Существенного ингибирования роста опухоли не наблюдалось в группах, получавших 4,5 мг/мг PEGPH20, или в группах, получавших низкую дозу 3 мг/кг nab-паклитаксела в присутствии или в отсутствие PEGPH20.
Пример 2. Противоопухолевый эффект комбинированной терапии PEGPH20, Nab-паклитакселом и гемцитабином на модели ксенотрансплантата опухоли поджелудочной железы человека.
А. Ингибирование роста опухоли.
Модель ксенотрансплантата рака поджелудочной железы человека, описанная в примере 1, была использована для оценки противоопухолевого эффекта комбинированной терапии PEGPH20 и nabпаклитакселом в сочетании с дополнительной обработкой гемцитабином. Перед выполнением исследования путь введения и уровень дозы для гемцитабина были обосновано выбраны. Для этого мышей с опухолями обрабатывали различными дозами гемцитабина (60 мг/кг, 120 мг/кг, 180 мг/кг и 240 мг/кг) один раз в неделю в течение 21 дня (день 0, 7, 14 и 21) и контролировали объем опухоли, как описано выше. Результаты представлены на фиг. 2. Результаты показывают, что гемцитабин ингибирует рост опухоли при всех испытанных дозах по сравнению с введением только носителя. Субоптимальная доза 180 мг/кг была выбрана для использования в последующих исследованиях комбинированной химиотерапии с PEGPH20. Субоптимальные дозы гемцитабина и nab-паклитаксела были выбраны для оценки потенциальных преимуществ от объединения трех противораковых агентов: PEGPH20, гемцитабина и nabпаклитаксела.
Мышей с опухолями распределяли в 8 групп лечения по 12 животных в каждой группе и вводили 1) носитель (буфер API); 2) PEGPH20 (4,5 мг/кг); 3) nab-паклитаксел (10 мг/кг); 4) гемцитабин (180 мг/кг); 5) PEGPH20 (4,5 мг/кг) + nab-паклитаксел (10 мг/кг); 6) PEGPH20 (4,5 мг/кг) + гемцитабин (180 мг/кг); 7) nab-паклитаксел (10 мг/кг) + гемцитабин (180 мг/кг) или 8) PEGPH20 (4,5 мг/кг) + nab-паклитаксел (10 мг/кг) + гемцитабин (180 мг/кг). PEGPH20 и nab-паклитаксел вводили внутривенно, и доза и частота обработок составили два раза в неделю (2х/неделю) в течение четырех недель цикла дозирования. Гемцитабин вводили внутрибрюшинно через 24 ч после PEGPH20 и/или nab-паклитаксела каждые 7 дней в течение трех недель цикла дозирования. В зависимости от тестируемой группы режим дозирования для введения агентов в течение четырех недель цикла приведен в табл. 5.
- 81 031986
Таблица 5
Режим дозирования
Режим Обработка
День 0 носитель или PEGPH20 ± nab-паклитаксел (каждый внутривенно)
День 1 (24 часа после введения в День 0) гемцитабин (внутрибрюшинно)
День 4 носитель или PEGPH20 ± nab-паклитаксел (каждый внутривенно)
День 7 носитель или PEGPH20 ± nab-паклитаксел (каждый внутривенно)
День 8 (24 часа после введения в День 7) гемцитабин (внутрибрюшинно)
День 11 носитель или PEGPH20 ± nab-паклитаксел (каждый внутривенно)
День 14 носитель или PEGPH20 ± nab-паклитаксел (каждый внутривенно)
День 15 (24 часа после введения в День 14) гемцитабин (внутрибрюшинно)
День 18 носитель или PEGPH20 ± nab-паклитаксел (каждый внутривенно)
День 21 носитель или PEGPH20 ± nab-паклитаксел (каждый внутривенно)
День 25 носитель или PEGPH20 ± nab-паклитаксел (каждый внутривенно)
Объем опухоли и ингибирование роста опухоли определяли, как описано в примере 1. Результаты показаны на фиг. 3. Эти результаты показывают, что гемцитабин сам по себе, PEGPH20 сам по себе и РЕОРН20+гемцитабин проявили некоторую противоопухолевую активность, но противоопухолевый эффект был значительно выше при терапии, включающей nab-паклитаксел, с наибольшим проявленным противоопухолевым эффектом у животных, обработанных PEGPH20, nab-паклитакселом и гемцитабином. Табл. 6 представляет результаты ингибирования роста в процентах относительно введения носителя, результаты определены из измерений объема опухоли в день 26. Результаты показывают, что обработка животных PEGPH20 в дополнение к обработке nab-паклитакселом и гемцитабином приводит к 81%-му ингибированию роста опухоли по сравнению с носителем, в то время как лечение nabпаклитакселом и гемцитабином без PEGPH20 приводят только к 66% ингибирования роста опухоли. Таким образом, результаты показывают, что добавление PEGPH20 к комбинированной терапии nabпаклитакселом и гемцитабином привело к увеличению эффективности на 23%.
Таблица 6
Противоопухолевый эффект PEGPH20 в комбинации с гемцитабином и/или nab-паклитакселом
Обработка Ингибирование роста опухоли (% от носителя-контроля) р-значение (относительно носителя-контроля)
Гемцитабин 25 0,0110
PEGPH20 + гемцитабин 38 <0,0001
PEGPH20 39 <0,0028
Nab-паклитаксел 63 <0,0001
Nab-паклитаксел + гемцитабин 66 <0,0001
PEGPH20 + паЬ-паклитаксел 71 <0,0001
PEGPH20 + nab-паклитаксел + гемцитабин 81 <0,0001
В. Среднее время выживания.
После первых четырёх недель цикла дозирования, как указано в части А, цикл дозирования повторяли дважды, после чего следовало время для оценки конечной точки выживаемости. Коротко, в каждом цикле дозирования животных обрабатывали носителем или PEGPH20 (4,5 мг/мл) вместе с nabпаклитакселом (10 мг/кг) или без него внутривенно дважды в неделю в течение четырех недель. В каждом цикле группам, получающим гемцитабин, вводили гемцитабин (180 мг/кг) через 24 ч после PEGPH20 и/или nab-паклитаксела каждые семь дней в течение трех недель в ходе цикла дозирования. Конечная точка время выживаемости, косвенный показатель выживания животных, была определена как (а) время до достижения опухолью объема более чем 2000 мм3, (б) время до более чем 20% потери веса тела или (с) время до умерщвления или смерти животных.
Результаты приведены на фиг. 4 и в табл. 7. Результаты показывают, что конечная точка среднее время выживаемости для животных, обработанных только гемцитабином, составило 38 дней, для животных, обработанных nab-паклитакселом и гемцитабином, составило 52 дня, и для животных, обработанных PEGPH20, nab-паклитакселом и гемцитабином, составило 68 дней. Таким образом, результаты показывают, что при добавлении PEGPH20 к терапии nab-паклитакселом и гемцитабином увеличилась средняя продолжительность выживания по сравнению с любой другой обработкой, и эффективность была
- 82 031986 увеличена на 31% по сравнению с обработкой nab-паклитакселом и гемцитабином без PEGPH20 и повышена на 79% по сравнению с обработкой только гемцитабином.
Таблица 7
Среднее время выживания
Обработка Среднее время выживания (дней)
Гемцитабин 38
Nab-паклитаксел + гемцитабин 52
PEGPH20 + nab-паклитаксел + гемцитабин 68ч
* Относительно носителя (р <0,0001)
I Относительная nab-паклитаксела + гемцитабина (р = 0,0008)
С. Измерение биомаркеров опухоли.
Для измерения терапевтического ответа были протестированы биомаркеры углеводный антиген 199 (СА19-9) и карциноэмбриональный антиген (СЕА), ассоциированные с раком поджелудочной железы. Животных обрабатывали, как описано в части А. Сыворотки собирали от дополнительных животных (n<3) из каждой группы в дни 0, 6, 13 и 20 первого цикла дозирования. Человеческий СА19-9 измеряли с помощью набора СА 19-9 ELISA (№ по каталогу СА199Т, Calbiotech, Spring Valley, СА) и опухолевый антиген СЕА измеряли с помощью набора СЕА ELISA (№ по каталогу СЕ062Т, Calbiotech, Spring Valley, CA).
Результаты приведены на фиг. 5. Результаты показывают, что обработка PEGPH20 привела к снижению уровня измеренных маркеров во всех группах лечения. Например, на 20-й день был детектирован одинаковый уровень маркера СА19-9 во всех группах, получавших PEGPH20, который составил примерно 40-60 Ед/мл. В отличие от этого уровень маркера СА19-9 у животных, обработанных nabпаклитакселом или nab-паклитакселом+гемцитабином, был приблизительно вдвое выше, чем у животных, получавших также PEGPH20, и составил примерно 110 Ед/мл. Животные, обработанные только гемцитабином, имели уровни СА19-9, которые были примерно равны таковым только для носителяконтроля. Таким образом, результаты показывают, что у животных, обработанных PEGPH20 + nabпаклитакселом, был уменьшен уровень СА19-9 по сравнению с животными, обработанными только nabпаклитакселом; у животных, обработанных PEGPH20 + гемцитабином, снизился уровень СА19-9 по сравнению с животными, обработанными только гемцитабином; и у животных, обработанных PEGPH20 + nab-паклитакселом + гемцитабином, уровень СА19-9 снизился по сравнению с животными, обработанными только nab-паклитакселом + гемцитабином. У животных, обработанных PEGPH20 + nabпаклитакселом + гемцитабином, уровень СА19-9 был снижен на 49% по сравнению с животными, обработанными nab-паклитакселом + гемцитабином в отсутствие PEGPH20.
Аналогичные результаты были получены при измерении маркёра СЕА. Для этого маркера результаты показывают, что у животных, получавших только nab-паклитаксел, уровни СЕА, по существу, остались неизмененными на 20-й день в сравнении с контролем-носителем, в этих группах СЕА был измерен на уровне приблизительно от 20 до 25 нг/мл. У животных, получавших гемцитабин или nab-паклитаксел + гемцитабин, было обнаружено некоторое снижение измеренного маркера СЕА на 20-й день до приблизительно 15 нг/мл. В присутствии PEGPH20 уровень маркера был значительно снижен по сравнению с группами лечения без PEGPH20. Например, у животных, обработанных только PEGPH20, измеренный уровень СЕА на 20-й день составил примерно 7-8 нг/мл. У животных, получавших PEGPH20 + гемцитабин, PEGPH20 + nab-паклитаксел или PEGPH20 + nab-паклитаксел + гемцитабин, уровни СЕА на 20-й день были слишком малы, чтобы количественно определить их с помощью ELISA.
Пример 3. Экспрессирующая rHuPH20 линия клеток.
А. Получение первичной линии клеток, экспрессирующей растворимую rHuPH20.
Плазмиду HZ24 (представленную в SEQ ID NO:52) использовали для трансфекции клеток яичника китайского хомячка (линия клеток СНО). Плазмидный вектор HZ24 для экспрессии растворимой rHuPH20 содержит каркас вектора pCI (Promega), ДНК, кодирующую аминокислоты 1-482 человеческой гиалуронидазы РН20 (SEQ ID NO: 49), внутренний сайт посадки рибосомы (IRES) из вируса ECMV (Clontech) и ген дигидрофолатредуктазы мыши (DHFR). Каркас вектора pCI также включает в себя ДНК, кодирующую ген β-лактамазы, обеспечивающей устойчивость к антибиотику (AmpR), ориджин репликации fl, немедленно-ранний энхансер/промотор цитомегаловируса (CMV), химерный интрон и поздний сигнал полиаденилирования SV40. ДНК-конструкция, кодирующая растворимую rHuPH20, содержит сайт NheI и консенсусную последовательность Козака, затем последовательность, кодирующую метионин в аминокислотной позиции 1 природной 35-аминокислотной сигнальной последовательности человеческой РН20, а после последовательности ДНК, кодирующей тирозин, соответствующий аминокислоте в позиции 482 человеческой гиалуронидазы РН20, представленной в SEQ ID NO: 1, также включает стопкодон, а после него - сайт рестрикции BamHI. Таким образом, с конструкции PCI-PH20-IRES-DHFRSV40pa (HZ24) под действием промотора CMV синтезируется единственная мРНК, кодирующая аминокислоты 1-482 человеческой РН20 (представленной в SEQ ID NO: 3) и аминокислоты 1-186 мышиной дигидрофолатредуктазы (представленной в SEQ ID NO: 53), разделенные внутренним сайтом посадки:
- 83 031986 рибосомы (IRES).
Нетрансфицированные клетки DG44 СНО, растущие в модифицированной CD-CHO среде GIBCO для DHFR(-) клеток, содержащей 4 мМ глутамина и 18 мл/л Pluronic F68/L (Gibco), высевали по 0,5х106 клеток/мл в перемешиваемую на шейкере колбу для подготовки к трансфекции. Клетки выращивали при 37°C в атмосфере 5% CO2 в увлажненном инкубаторе при встряхивании 120 об/мин. Экспоненциально растущие нетрансфицированные клетки DG44 СНО проверяли на жизнеспособность перед трансфекцией.
Шестьдесят миллионов жизнеспособных клеток из культуры не трансфицированных клеток DG44 СНО осаждали и ресуспендировали до плотности 2х107 клеток в 0,7 мл 2-кратного трансфекционного буфера (2xHeBS: 40 мМ HEPES, рН 7,0, 274 мМ NaCl, 10 мМ KCl, 1,4 мМ Na2HPO4, 12 мМ декстрозы). К каждой аликвоте ресуспендированных клеток было добавлено 0,09 мл (250 мкг) линеаризованной плазмиды HZ24 (рестрикция в течение ночи ферментом Cla I (New England Biolabs)), и суспензии клеток/ДНК были перенесены в кюветы для электропорации, 0,4 см ВТХ (Gentronics), при комнатной температуре. Отрицательный контроль электропорации представлял собой суспензию клеток без плазмидной ДНК, которую электропорировали разрядом конденсатора с параметрами 330 В и 960 мкФ или 350 В и 960 мкФ.
После электропорации клетки переносили из кюветы в 5 мл модифицированной среды CD-CHO для DHFR(-) клеток, содержащей 4 мМ глутамина и 18 мл/л Pluronic F68/L (Gibco), и культивировали в 6луночном планшете без антибиотика для селекции в течение 2 дней при 37°C в 5% атмосфере CO2 в увлажненном инкубаторе.
Через два дня после электропорации 0,5 мл культуральной среды удаляли из каждой лунки и проверяли ее на наличие активности гиалуронидазы с применением микротурбидиметрического метода, описанного в примере 6. Клетки, экспрессирующие наибольшие уровни гиалуронидазы, были собраны из лунки для культивирования, подсчитаны и разбавлены до 1х104-2х104 жизнеспособных клеток на 1 мл. Аликвоту 0,1 мл клеточной суспензии переносили в каждую из лунок пяти 96-луночных круглодонных планшетов для культивирования клеток. В каждую лунку с клетками было добавлено 100 мкл среды CDCHO (GIBCO), содержащей 4 мМ GlutaMAX™-1 (GIBCO™, Invitrogen Corporation) и не содержащей гипоксантина и тимидина (конечный объем 0,2 мл).
Идентифицировали десять клонов из 5 планшетов, культивированных без метотрексата. Шесть клонов HZ24 выращивали в культуре из одной клетки и переносили в перемешиваемые встряхиванием колбы в виде суспензий. Клоны 3D3, ЗЕ5, 2G8, 2D9, 1Е11 и 4D10 высевали в 96-луночные круглодонные планшеты для культивирования клеток методом бесконечного разбавления, при котором клетки разводили в лунках планшета 1:2 сверху вниз и 1:3 слева направо, начиная с 5000 клеток в верхней левой лунке. Разбавленные клоны выращивали вместе с 500 нетрансфицированными клетками DG44 СНО на лунку, чтобы обеспечить наличие необходимых ростовых факторов для начальных дней в культуре. Для субклонирования было подготовлено десять планшетов, причём 5 планшетов содержали 50 нМ метотрексата и 5 планшетов были без метотрексата.
Клон 3D3 произвёл 24 видимых субклона (13 на планшете без метотрексата и 11 на планшете с 50 нМ метотрексата). Значительная активность гиалуронидазы была определена в супернатантах 8 из 24 субклонов (>50 ед./мл), и эти восемь субклонов выращивали в культуральных матрасах Т-25. Клоны, выделенные после обработки метотрексатом, выращивали в присутствии 50 нМ метотрексата. Клон 3D35M растили в присутствии 500 нМ метотрексата, что привело к образованию клонов, продуцирующих более 1000 ед./мл гиалуронидазы в перемешиваемых встряхиванием колбах (клон 3D35M, или Gen1 3D35M). Из клеток 3D35M затем был получен эталонный банк клеток (МСВ).
В. Получение линии клеток второго поколения, экспрессирующих растворимую rHuPH20.
Клеточная линия Gen1 3D35M, описанная в примере 3A, была адаптирована к более высоким уровням метотрексата, что привело к образованию клонов 2 поколения (Gen2). Клетки 3D35M высевали из культуры, культивируемой в присутствии метотрексата, в среду CD-CHO, содержащую 4 мМ GlutaMAX1™ и 1,0 мкМ метотрексата. Клетки были адаптированы к более высокому уровню метотрексата путем выращивания их в течение 9 пассажей (46 дней) при 37°C, 7% CO2 в увлажненном инкубаторе. Из выращенной популяции клеток были получены клоны путем предельного разведения культуры в 96луночных планшетах, содержащих среду с 2,0 мкМ метотрексата. Примерно через 4 недели клоны идентифицировали, и клон 3E10В был выбран для выращивания. Клетки 3E10В выращивали в среде CDCHO, содержащей 4 мМ GlutaMAX-1™ и 2,0 мкМ метотрексата в течение 20 пассажей. Из клеточной линии 3E10В был создан и заморожен эталонный банк клеток (МСВ), который можно использовать для последующих исследований.
Размножение клеточной линии продолжали, культивируя клетки 3E10В в среде CD-CHO, содержащей 4 мМ GlutaMAX-1™ и 4,0 мкМ метотрексата. После 12-го пассажа клетки были заморожены в пробирках как банк клеток для исследований (RCB). Одну пробирку из RCB оттаивали и культивировали в среде, содержащей 8,0 мкМ метотрексата. Через 5 дней концентрация метотрексата в среде была увеличена до 16,0 мкМ, а затем до 20,0 мкМ через 18 дней. Клетки после восьмого пассажа в среде, содержа- 84 031986 щей 20,0 мкМ метотрексата, были клонированы методом предельного разведения культуры в 96луночных планшетах со средой CD-CHO, содержащей 4 мМ GlutaMAX-1™ и 20,0 мкМ метотрексата.
Клоны были идентифицированы 5-6 недель спустя, и клон 2В2 был выбран для выращивания в среде, содержащей 20,0 мкМ метотрексата. После 11-го пассажа клетки 2В2 были заморожены в пробирках как банк клеток для исследований (RCB).
Полученные клетки 2В2 являются дефицитными по дигидрофолатредуктазе (dhfr-) клетками DG44 СНО, которые экспрессируют растворимый рекомбинантный человеческий белок РН20 (rHuPH20). Растворимая РН20 присутствует в клетках 2В2 в количестве примерно 206 копий/клетка. Саузерн-блот анализ геномной ДНК клеток 2В2, обработанной эндонуклеазами рестрикции Spe I, Xba I и BamH I/Hind III, с применением rHuPH20-специфической пробы показал следующий профиль рестрикции: одна крупная гибридизованная полоса ~7,7 тысяч пар оснований и четыре меньших гибридизованных полосы (~13,9, ~6,6, ~5,7 и ~4,6 тысячи пар оснований) при обработке Spe I; одна крупная гибридизованная полоса ~5,0 тысяч пар оснований и две меньших гибридизованных полосы (~13,9 и ~6,5 тысячи пар оснований) при обработке Xba I; и единственная гибридизованная полоса ~1,4 тысячи пар оснований, наблюдаемая при обработке ДНК 2В2 эндонуклеазами рестрикции BamH I/Hind III. Анализ последовательности транскрипта мРНК показал, что полученные кДНК (SEQ ID NO:56) были идентичны исходной последовательности (SEQ ID NO: 49) кроме одной пары оснований в положении 1131, которая оказалась тимидином (Т) вместо ожидаемого цитозина (С). Это мутация, которая не влияет на аминокислотную последовательность.
Пример 4. Получение и очистка rHuPH20.
А. Получение растворимой rHuPH20 Gen2 в 300 л биореакторе для культивирования клеток.
Пробирку клеток HZ24-2В2 (Пример 3В) оттаивали и клетки выращивали, начиная с перемешиваемых встряхиванием колб до вращающейся колбы объёмом 36 л в среде CD-CHO (Invitrogen, Carlsbad, СА) с добавлением 20 мкМ метотрексата и GlutaMAX-1™ (Invitrogen). Коротко, пробирку клеток оттаивали на водяной бане при 37°C, добавляли среду и клетки центрифугировали. Клетки ресуспендировали в 125 мл вращающейся колбе с 20 мл свежей среды и помещали на 37°C при 7% СО2 в инкубатор. Клетки выращивали в 40 мл среды в 125 мл вращающейся колбе. Когда плотность клеток достигла более чем 1,5х106 клеток/мл, культуру поместили в 125 мл вращающуюся колбу с 100 мл культуральной среды. Колбу инкубировали при 37°C, 7% CO2. Когда плотность клеток достигла более чем 1,5х106 клеток/мл, культуру перенесли в 250 мл вращающуюся колбу с 200 мл культуральной среды; колбу инкубировали при 37°C, 7% CO2. Когда плотность клеток достигла более чем 1,5х106 клеток/мл, культуру перенесли в 1 л вращающуюся колбу с 800 мл культуральной среды и инкубировали при 37°C, 7% CO2. Когда плотность клеток достигла более чем 1,5х106 клеток/мл, культуру перенесли в 6 л вращающуюся колбу с 5000 мл культуральной среды, клетки инкубировали при 37°C, 7% CO2. Когда плотность клеток достигла более чем 1,5х106 клеток/мл, культуру перенесли в 36 л вращающуюся колбу с 32 л культуральной среды и инкубировали при 37°C, 7% СО2.
400 л реактор стерилизовали и добавляли 230 мл среды CD-CHO. Перед применением реактор был проверен на загрязнения. Примерно 30 л суспензии клеток переносили из вращающихся 36 л колб в 400 л биореактор (Braun) при плотности посевного материала 4,0х105 жизнеспособных клеток на 1 мл, общий объем 260 л. Были заданы параметры: температура 37°C; скорость мешалки 40-55 об/мин; давление в резервуаре 3 пси; циркуляция воздуха 0,5-1,5 л/мин; поток воздуха 3 л/мин. Реактор ежедневно проверяли на количество клеток, рН, состав среды, получение и накопление белка. Кроме того, во время работы реактора добавляли питательные вещества. Через 120 ч (5 дней) было добавлено 10,4 л питательной среды № 1 (4xCD-CHO + 33 г/л глюкозы +160 мл/л Glutamax-1™ + 83 мл/л Yeastolate + 33 мг/л рекомбинантного человеческого инсулина). Через 168 ч (7 дней) было добавлено 10,8 л питательной среды № 2 (2xCD-CHO + 33 г/л глюкозы + 80 мл/л Glutamax-1™ + 167 мл/л Yeastolate + 0,92г/л бутирата натрия), а температура культуры была изменена до 36,5°C. Через 216 ч (9 дней) было добавлено 10,8 л питательной среды № 3 (1xCD-CHO + 50 г/л глюкозы + 50 мл/л Glutamax-1™ + 250 мл/л + Yeastolate 1,80 г/л бутирата натрия), а температура культуры была изменена до 36°C. Через 264 ч (11 дней) было добавлено 10,8 л питательной среды № 4 (1xCD-CHO + 33 г/л глюкоза + 33 мл/л Glutamax-1™ + 250 мл/л Yeastolate + 0,92 г/л бутирата натрия), а температура культуры была изменена до 35,5°C. Добавление питательной среды приводило к резкому повышению продукции растворимой rHuPH20 на заключительных этапах получения. Реактор использовали в течение 14 или 15 дней или до тех пор, пока жизнеспособность клеток не падала ниже 40%. Процесс привел к конечной производительности 17000 ед./мл с максимальной плотностью 12 млн клеток/мл. В период продукции белка культуру анализировали на наличие микоплазмы, биологического загрязнения, эндотоксинов и вирусов in vitro и in vivo; образцы были отобраны для трансмиссионной электронной микроскопии (ТЕМ) и определения активности фермента.
Культуру прокачивали перистальтическим насосом параллельно через четыре модуля системы фильтрации Millistak (Millipore), каждый из которых содержит слой диатомовой земли фракции 4-8 мкм и слой диатомовой земли фракции 1,4-1,1 мкм, после которых расположена целлюлозная мембрана, затем через единственный модуль второй системы фильтрации Millistak (Millipore), содержащей слой диа- 85 031986 томовой земли фракции 0,4-0,11 мкм и слой диатомовой земли фракции <0,1 мкм, после которых расположена целлюлозная мембрана, а затем через последний 0,22 мкм фильтр в стерильный одноразовый гибкий мешок емкостью 350 л. В собранную культуральную жидкость добавляли ЭДТА до 10 мМ и Трис до 10 мМ, рН 7,5. Культуральная жидкость была сконцентрирована в 10 раз с помощью устройства тангенциальной проточной фильтрации (TFF), использующего четыре полиэфирсульфоновых (PES) фильтра Sartoslice TFF (Sartorius) с пределом исключения молекулярной массы (MWCO) 30 кДа, затем буфер 10х заменяли на 10 мМ Трис, 20 мМ Na2SO4, рН 7,5 и жидкость пропускали через фильтр на 0,22 мкм в 50 л стерильный мешок для хранения.
Концентрированную диафильтрованную жидкость подвергли обработке для инактивации вирусов. Перед инактивацией вирусов был приготовлен раствор, содержащий 10% Тритон Х-100 и 3% три-(нбутил)фосфата (TNBP). Концентрированную диафильтрованную жидкость обрабатывали 1% Тритон Х100, 0,3% TNBP в течение 1 ч в 36 л стеклянном реакционном сосуде непосредственно перед очисткой на колонке Q.
В. Очистка растворимой rHuPH20 Gen2.
Была подготовлена ионообменная колонка с Q-сефарозой (Pharmacia) (9 л смолы, Н=29 см, D=20 см). Образцы после промывания колонки были отобраны для определения рН, электропроводности и содержания эндотоксина (LAL-анализ). Колонку уравновешивали 5 об. колонки 10 мМ Трис, 20 мМ Na2SO4, рН 7,5. После инактивации вирусов жидкость концентрировали, подвергали диафильтрации (пример 4А) и загружали на колонку Q при скорости потока 100 см/ч. Колонку промывали 5 об. колонки 10 мМ Трис, 20 мМ Na2SO4, рН 7,5 и 10 мМ Hepes, 50 мМ NaCl, рН 7,0. Белок элюировали 10 мМ Hepes, 400 мМ NaCl, рН 7,0 через конечный фильтр 0,22 мкм в стерильный мешок. Образец элюата проверяли на биологическое загрязнение, концентрацию белка и активность гиалуронидазы. В начале и в конце ионообменной хроматографии была определена абсорбция A280.
Затем проводили гидрофобную хроматографию на фенил-сефарозе (Pharmacia). Была подготовлена колонка (19-21 л смолы, Н=29 см, D=30 см) с фенил-сефарозой (PS). Образцы после промывания колонки собирали для определения рН, электропроводности и эндотоксина (LAL-анализ). Колонку уравновешивали 5 об. колонки 5 мМ фосфата калия, 0,5 М сульфата аммония, 0,1 мМ CaCl2, рН 7,0. К элюату белка с колонки с Q-сефарозой были добавлены концентрированные растворы 2М сульфата аммония, 1М фосфата калия и 1М CaCl2 для получения конечных концентраций 5 мМ, 0,5М и 0,1 мМ соответственно. Белок наносили на колонку с PS при скорости потока 100 см/ч и собирали жидкость на выходе. Колонку промывали раствором, содержащим 5 мМ фосфата калия, 0,5М сульфата аммония и 0,1 мМ CaCl2, рН 7,0 при скорости 100 см/ч и промывочный раствор также собирали. Вместе с жидкостью от промывания колонки всю прошедшую через колонку жидкость пропускали через конечный 0,22 мкм фильтр и собирали в стерильный мешок. Образцы из прошедшей через колонку жидкости отбирали для определения биологического загрязнения, концентрации белка и активности фермента.
Готовили колонку с аминофенилборонатом (ProMedics). Образцы после промывания колонки собирали и определяли рН, электропроводность и наличие эндотоксина (LAL-анализ). Колонку уравновешивали 5 об. колонки раствора, содержащего 5 мМ фосфата калия, 0,5М сульфата аммония. Жидкость, прошедшую через PS и содержащую очищенный белок, наносили на колонку с аминофенилборонатном при скорости потока 100 см/ч. Колонку промывали раствором, содержащим 5 мМ фосфата калия, 0,5М сульфат аммония, рН 7,0. Колонку промывали раствором, содержащим 20 мМ бицина, 0,5М сульфата аммония, рН 9,0. Колонку промывали раствором, содержащим 20 мМ бицина, 100 мМ хлорида натрия, рН 9,0. Белок элюировали 50 мМ Hepes, 100 мМ NaCl, рН 6,9 и пропускали через стерильный фильтр в стерильный мешок. Образцы элюата были проанализированы на биологическое загрязнение, концентрацию белка и активность фермента.
Была подготовлена колонка с гидроксиапатитом (НАР) (BioRad). Промывочную жидкость собирали и определяли рН, электропроводность и наличие эндотоксина (LAL-анализ). Колонку уравновешивали раствором, содержащим 5 мМ фосфата калия, 100 мМ NaCl, 0,1 мМ CaCl2, рН 7,0. В жидкость, полученную после хроматографии на колонке с аминофенилборонатом и содержащую очищенный белок, добавляли фосфат калия и CaCl2 до конечных концентраций 5 мМ и 0,1 мМ, соответственно, и наносили на колонку с НАР при скорости потока 100 см/ч. Колонку промывали раствором, содержащим 5 мМ фосфата калия, рН 7, 100 мМ NaCl, 0,1 мМ CaCl2. Затем колонку промывали раствором, содержащим 10 мМ фосфат калия, рН 7, 100 мМ NaCl, 0,1 мМ CaCl2. Белок элюировали 70 мМ фосфата калия, рН 7,0 и элюат пропускали через 0,22 мкм стерильный фильтр в стерильный мешок. Образец элюата анализировали на биологическое загрязнение, концентрацию белка и активность фермента.
Затем очищенный на НАР белок пропускали через фильтр для удаления вирусных частиц. Сначала был подготовлен стерильный фильтр Viosart (Sartorius) промыванием 2 л раствора 70 мМ фосфата калия, рН 7,0. Перед применением из фильтрованного буфера отбирали образцы для определения рН и проводимости. Очищенный на НАР белок пропускали с помощью перистальтического насоса через фильтр с размером пор 20 нМ для удаления вируса. Фильтрованный белок в 70 мМ фосфата калия, рН 7,0, пропускали через конечный 0,22 мкм фильтр в стерильный мешок. В образце, подвергнутом фильтрации для удаления вирусов, определяли концентрацию белка, активность фермента, исследовали содержание оли- 86 031986 госахаридов, моносахаридов и сиаловой кислоты. Образец также тестировали на наличие примесей.
Пример 5. Получение пегилированной rHuPH20.
В этом примере rHuPH20 была пегилирована в реакции фермента с линейным N-гидроксисукцинимидиловым эфиром метоксиполи(этиленгликоль)бутановой кислоты (mPEG-SBA-30K).
А. Получение mPEG-SBA-30K.
Чтобы получить PEGPH20, rHuPH20 (имеет молекулярную массу около 60 кДа) ковалентно конъюгировали с линейным N-гидроксисукцинимидиловым эфиром метоксиполи(этиленгликоль)бутановой кислоты (mPEG-SBA-30K), имеющим приблизительную молекулярную массу 30 кДа. Структура mPEGSBA приведена ниже, где n~68E
О
Способы, используемые для получения mPEG-SBA-30K, который использовался для пегилирования rHuPH20, описаны, например, в патенте США № 5672662. В целом, mPEG-SBA-30K получают в соответствии со следующей процедурой.
Раствор этилового эфира малоновой кислоты (2 экв.), растворенного в диоксане, добавляют по каплям к гидриду натрия (2 экв.) и толуолу в атмосфере азота. mPEG метансульфонат (1 экв., 30 кДа, Shearwater) растворяют в толуоле и добавляют к вышеуказанной смеси. Полученную смесь нагревают с обратным холодильником в течение приблизительно 18 ч. Реакционную смесь концентрируют до половины её первоначального объема, экстрагируют 10% водным раствором NaCl, экстрагируют 1% водным раствором соляной кислоты и водные экстракты объединяют. Собранные водные слои экстрагируют дихлорметаном (3 раза) и органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и выпаривают досуха. Полученный остаток растворяют в 1н. растворе гидроксида натрия, содержащем хлорид натрия, и смесь перемешивают в течение 1 ч. рН смеси доводят до примерно 3 путём добавления 6н. соляной кислоты. Смесь экстрагируют дихлорметаном (2 раза).
Органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют, концентрируют и выливают в холодный диэтиловый эфир. Осадок собирают фильтрованием и сушат в вакууме. Полученное соединение растворяют в диоксане и нагревают с обратным холодильником в течение 8 ч, затем концентрируют досуха. Полученный остаток растворяют в воде и экстрагируют дихлорметаном (2 раза), сушат над сульфатом магния и раствор концентрируют на роторном испарителе, затем выливают в холодный диэтиловый эфир. Осадок собирают фильтрованием и сушат в вакууме. Полученное соединение (1 экв.) растворяют в дихлорметане и добавляют N-гидроксисукцинимид (2,1 экв.). Раствор охлаждают до 0° С и добавляют по каплям раствор дициклогексилкарбодиимида (2,1 экв.) в дихлорметане. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение приблизительно 18 ч. Реакционную смесь фильтруют, концентрируют и осаждают диэтиловым эфиром. Осадок собирают путем фильтрации и сушат в вакууме с получением порошка mPEG-SBA-30K, который затем замораживают при < -15°C.
В. Конъюгирование mPEG-SBA-30K и rHuPH20.
Для получения PEGPH20 mPEG-SBA-30K соединяют с аминогруппой rHuPH20 путём ковалентной конъюгации, что приводит к образованию стабильных амидных связей между rHuPH20 и mPEG, как показано ниже, где n ~681.
о / \ Ни
Н3СО-+СН2СН2О +-СН2СН2СН2С —N — гНиРНЗО п
пегилированная rHuPH20
Перед конъюгацией образец очищенного белка rHuPH20, полученный в примере 4В, концентрируют до концентрации 10 мг/мл с использованием 10 кДа полиэфирсульфоновой (PES) кассеты для фильтрации с тангенциальным потоком (TFF) (Sartorius) с площадью фильтрации 0,2 м, и заменяют буфер на 70 мМ калий-фосфатный буфер, рН 7,2. Концентрированный белок затем хранят при 2-8°C до использования.
- 87 031986
Для конъюгации rHuPH20 mPEG-SBA-30K (Nektar) размораживают при комнатной температуре в темноте в течение не более 2 ч. В зависимости от размера партии стерильную 3-дюймовую мешалку помещают в колбу Эрленмейера объёмом 1 или 3 л и добавляют белок rHuPH20 с заменённым буфером. 5 г порошка сухого mPEG-SBA-30K на 1 г rHuPH20 (молярное отношение mPEG-SBA-30K:rHuPH20 составляет 10:1) добавляют в колбу с вакуумной крышкой и смесь перемешивают в течение 10 мин или до завершения растворения mPEG-SBA-30K. Скорость перемешивания устанавливают таким образом, чтобы перемешивание происходило без образования пены.
Затем раствор фильтруют под вытяжным шкафом класса 100 путём перекачивания раствора перистальтическим насосом через 0,22 мкм полистироловую и ацетатцеллюлозную фильтровальную капсулу (Corning 50 mL Tubetop filter) в новую колбу Эрленмейера объёмом 1 или 3 л, содержащую стерильную 3-дюймовую мешалку. Объем реакционной смеси PEGPH20 определяют по массе (плотность 1 г/мл), а 0,22 мкм фильтр, используемый для фильтрации, исследуют после использования на целостность.
Смесь затем помещают на магнитную мешалку при 2-8°C и перемешивают в течение 20±1 ч в темноте. Скорость перемешивания снова устанавливают так, что перемешивание происходит без образования пены. Всю колбу Эрленмейера заворачивают в пленку, чтобы защитить раствор от света. После перемешивания реакционную смесь гасят добавлением 1М раствора глицина до конечной концентрации 25 мМ. Для проверки рН и проводимости из колбы отбирают пробы. Для последующей очистки на Q сефарозе значение рН и проводимости затем доводят путем добавления к раствору 5 мМ основания Трис (5,65 об./об.) и 5 мМ Трис, 10 мМ NaCl, рН 8,0 (13,35 об./об.).
Ионообменную колонку с QFF сефарозой (GE Healthcare) (высота = 21,5-24,0 см, диаметр = 20 см) подготавливали путем уравновешивания 5 об. колонки (36 л) 5 мМ Трис, 10 мМ NaCl, рН 8,0. Конъюгированный продукт наносили на колонку QFF при скорости потока 95 см/ч. Затем колонку промывали 11 л уравновешивающего буфера (5 мМ Трис, 10 мМ NaCl, рН 8,0) при скорости потока 95 см/ч с последующим промыванием 25 л уравновешивающего буфера при скорости потока 268 см/ч. Затем белковый продукт элюировали 5 мМ Трис, 130 мМ NaCl, рН 8,0 при скорости потока 268 см/ч. Полученный очищенный PEGPH20 концентрировали до 3,5 мг/мл с использованием 30 кДа полиэфирсульфоновой (PES) кассеты для фильтрации с тангенциальным потоком (TFF) (Sartorius) с площадью фильтрации 0,2 м2 и заменяли буфер на 10 мМ гистидин, 130 мМ NaCl, рН 6,5. В полученном материале определяли ферментативную активность, как описано в примере 6 ниже. Пегилированным rHuPH20 в концентрации 3,5 мг/мл (конечная ферментативная активность 140000 ед./мл) в объеме 3 мл заполняли стеклянные пробирки объёмом 5 мл с силиконизированными пробками из бромбутилового каучука и алюминиевыми колпачками и замораживали (заморозка в течение ночи в морозильной камере при -20°C, а затем более длительное хранение в морозильной камере при -80°C). Пегилированный rHuHP20 содержит приблизительно 4,5 моль PEG на 1 моль rHuPH20.
Пример 6. Определение гиалуронидазной активности растворимой rHuPH20.
Гиалуронидазную активность растворимой rHuPH20 в таких образцах как культуры клеток, плазма, фракции после очистки и очищенные растворы определяли методом турбидиметрического анализа, который основан на образовании нерастворимого осадка при связывании гиалуроновой кислоты с сывороточным альбумином, или анализом с биотинилированной гиалуроновой кислотой в качестве субстрата, в котором количество ферментативно активной rHuPH20 или PEGPH20 измеряется при расщеплении субстрата биотинилированной гиалуроновой кислоты (b-НА), который является нековалентно связанным с пластиковым микротитрационным планшетом.
А. Микротурбидиметрический анализ.
В этом анализе активность гиалуронидазы rHuPH20 была измерена путем инкубации растворимой rHuPH20 с гиалуронатом натрия (солью гиалуроновой кислоты) в течение заданного периода времени (10 мин) с последующим осаждением нерасщеплённого гиалуроната натрия при добавлении подкисленного сывороточного альбумина. Мутность полученного образца измеряли при 640 нм после 30-минутной инкубации. Уменьшение мутности в результате ферментативной активности по отношению к гиалуронату натрия было мерой активности растворимой гиалуронидазы rHuPH20. Метод применяли с использованием калибровочной кривой, полученной путём разведений эталонного стандарта растворимой rHuPH20; измерения активности пробы были сделаны относительно этой калибровочной кривой.
Разведения образца были подготовлены в растворе для разведения ферментов. Раствор для разведения фермента получали растворением 33,0±0,05 мг гидролизованного желатина в 25,0 мл 50 мМ реакционного буфера PIPES (140 мМ NaCl, 50 мМ PIPES, pH 5,5), 25,0 мл стерильной воды для инъекций (SWFI; Braun, номер продукта R5000-1), 0,2 мл 25% раствора человеческого сывороточного альбумина (US Biologicals) и встряхивания смеси в течение 30 с. Раствор готовили в течение 2 ч до применения и хранили на льду до применения. Образцы разбавляли примерно до 1-2 ед./мл. Как правило, однократное максимальное разбавление не превышало 1:100, и начальный объём образца для первого разбавления был не менее 20 мкл. Минимальные объемы проб, необходимые для выполнения анализа, составляли образцы в процессе анализа, фракции FPLC - 80 мкл; культуральные супернатанты - 1 мл; концентрированный материал - 80 мкл; очищенный или конечный материал - 80 мкл. Разведения были сделаны в трех
- 88 031986 повторах в 96-луночном планшете с низким связыванием белка, и по 30 мкл каждого разбавления было перенесено в черные планшеты Optilux с прозрачным дном (BD Biosciences).
Для получения стандартной кривой растворы известной растворимой rHuPH20 с концентрацией 2,5 ед./мл готовили с применением раствора для разведения образцов и добавляли в планшет Optilux в трех повторах. Разведения составляли 0 ед./мл, 0,25 ед./мл, 0,5 ед./мл, 1,0 ед./мл, 1,5 ед./мл, 2,0 ед./мл и 2,5 ед./мл. Лунки без реагента, которые содержали по 60 мкл раствора для разведения фермента, использовали в качестве отрицательного контроля. Затем планшет закрывали и нагревали на нагревательном блоке в течение 5 мин при 37°C. Крышку снимали и встряхивали планшет в течение 10 с. После встряхивания планшет вновь помещали на нагревательный блок и в устройство MULTIDROP 384 Liquid Handling Device добавляли теплый 0,25 мг/мл раствор гиалуроната натрия (приготовлен растворением 100 мг гиалуроната натрия (LifeCore Biomedical) в 20,0 мл SWFI, полученную смесь осторожно перемешивали вращением и/или покачиванием при 2-8°C в течение 2-4 ч или до полного растворения). Реакционный планшет помещали в MULTIDROP 384 и инициировали реакцию нажатием пусковой клавиши, что приводило к добавлению 30 мкл гиалуроната натрия в каждую лунку. Планшет затем удаляли из MULTIDROP 384 и встряхивали в течение 10 с с открытой крышкой, а затем закрывали и переносили на нагревательный блок. Планшет инкубировали при 37°C в течение 10 мин.
Сиситему MULTIDROP 384 подготавливали для прекращения реакции, помещая в неё рабочий раствор сыворотки и меняя установленный объём до 240 мкл (25 мл исходного раствора сыворотки [1 об. лошадиной сыворотки (Sigma) разводили 9 об. 500 мМ ацетатного буферного раствора и доводили рН до 3,1 соляной кислотой] растворяли в 75 мл 500 мМ ацетатного буферного раствора). Планшет снимали с нагревательного блока и помещали в MULTIDROP 384 и добавляли по 240 мкл рабочего раствора сыворотки в каждую лунку. Планшет снимали и встряхивали в течение 10 с. Еще через 15 мин измеряли мутность образцов при 640 нм; активность гиалуронидазы (в ед./мл) каждого образца была определена путем сравнений со стандартной кривой.
Удельная активность (ед./мг) рассчитывали путем деления активности гиалуронидазы (ед./мл) на концентрацию белка (мг/мл).
В. Анализ с биотинилированным гиалуронаном.
Анализ с биотинилированным гиалуронаном определяет количество ферментативно активной rHuPH20 или PEGPH20 в биологических образцах путём расщепления субстрата, высокомолекулярной (~1,2 МДа) биотинилированной гиалуроновой кислоты (b-НА), нековалентно связанного с пластиковым многолуночным микротитрационным планшетом. rHuPH20 или PEGPH20 в стандартах и образцах инкубируют в планшете, покрытом b-НА, при 37°C. После серии промывок оставшийся нерасщепленный/связанный b-НА обрабатывают конъюгатом стрептавидина и пероксидазы хрена (SA-HRP). Реакция между иммобилизованным SA-HRP и хромогенным субстратом, 3,3',5,5'-тетраметилбензидином (ТМВ), приводит к синему окрашиванию раствора. После прекращения реакции добавлением кислоты образуется растворимый желтый продукт реакции, определяемый путем регистрации оптической плотности при 450 нм с использованием спектрофотометра для микротитрационных планшетов. Уменьшение оптической плотности при 450 нм в результате ферментативной активности, действующей на субстрат, биотинилированную гиалуроновую кислоту (b-НА), является мерой активности растворимой гиалуронидазы rHuPH20. Способ осуществляется с использованием калибровочной кривой, полученной с помощью разведений эталонного стандарта растворимой rHuPH20 или PEGPH20, и измерения активности образца выполняют относительно этой калибровочной кривой.
Растворы образца и калибратора были приготовлены в растворителе для анализа. Растворитель для анализа получают путём добавления 1% об./об. объединенной плазмы (от соответствующего вида организма) к 0,1% (вес./об.) BSA в HEPES, рН 7,4. Его получают ежедневно и хранят при температуре 2-8°C. В зависимости от вида организма, а также ожидаемого уровня гиалуронидазы, чтобы получить по меньшей мере одно разбавление, которое попадет в пределы калибровочной кривой, готовят одно или несколько разведений. Чтобы определить разведение (разведения) тестируемых образцов, используют известную информацию о дозе введённой гиалуронидазы, пути введения, ориентировочном объеме плазмы тестируемого вида и моменте времени для оценки уровней активности гиалуронидазы. Каждое разведение образца перемешивали путём кратких встряхиваний на вортексе, и наконечники пипетки заменяли после каждого разведения. В целом, разведения начинали с начального разбавления в 50 или 100 раз с последующими дополнительными серийными разведениями. Калибровочную кривую для rHuPH20 или PEGPH20 (в зависимости от применяемого лечения) получали на семи точках в диапазоне концентраций от 0,004 до 3,0 ед./мл для rHuPH20 и от 0,037 до 27 ед/мл для PEGPH20. По 100 мкл каждого разведения тестируемого образца и образца для каждой точки калибровочной кривой было внесено в три лунки 96луночного микротитрационного планшета (Immulon 4НВХ, Thermo), который был предварительно покрыт 100 мкл на лунку b-НА с концентрацией 0,1 мг/мл с последующей блокировкой 250 мкл 1,0% (вес./об.) бычьего сывороточного альбумина в PBS. Планшет (планшеты) покрывали клейкой плёнкой и инкубировали при 37°C в течение примерно 90 мин. По окончании инкубации клейкую плёнку удаляли с планшета, жидкость образцов отбирали и планшет промывали 5 раз 300 мкл на лунку промывочного буфера (10 мМ фосфатного буфера, 2,7 мМ хлорида калия, 137 мМ хлорида натрия, рН 7,4, 0,05% (об./об.)
- 89 031986
Tween 20, PBST) с использованием автоматического устройства для промывки (BioTek ELx405 Select CW, Program '4HBX1'). В каждую лунку добавляли 100 мкл рабочего раствора конъюгата стрептавидинаHRP [конъюгат стрептавидин-HRP (1:5000 об./об.) в 20 мМ Трис-HCl, 137 мМ хлорида натрия, 0,025% (об./об.) Tween 20, 0,1% (вес./об.) бычьего сывороточного альбумина]. Планшет закрывали и инкубировали при комнатной температуре в течение приблизительно 60 мин без встряхивания в защищенном от света месте. По окончании инкубации клейкую плёнку удаляли с планшета, образцы отбирали и планшеты промывали 5 раз 300 мкл на лунку промывочного буфера, как описано выше. В каждую лунку добавляли раствор ТМВ (при комнатной температуре) и планшет инкубировали в защищенном от света месте в течение примерно 5 мин при комнатной температуре. Затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл раствора для остановки реакции для ТМВ (KPL, Catalog # 50-85-06). Оптическую плотность в каждой лунке при 450 нм определяли с использованием спектрофотометра для микротитрационных планшетов. Калибровочную кривую для каждого планшета моделировали с помощью аппроксимации 4-параметрической логистической кривой. Активность гиалуронидазы каждого неизвестного образца рассчитывали путем интерполяции по калибровочной кривой с поправкой на коэффициент разбавления образца и представляли в ед./мл.
Пример 7. Влияние лечения PEGPH20 на модель опухоли с высоким уровнем перитуморального гиалуронана (НА).
Для оценки влияния PEGPH20 на высокие уровни перитуморального НА была получена линия опухолевых клеток BXPC3-HAS3 для создания мышиной модели ксенотрансплантата опухоли HAhigh. Клетки BXPC3 (номер по каталогу АТСС CRL-1687) культивировали в стандартных условиях культивирования с использованием полной среды RPMI. Для экспрессии транскрипта кДНК человеческой гиалуронансинтазы 3 (представлен в SEQ ID NO: 212) была создана лентивирусная система. Полученный лентивирусный вектор для экспрессии кДНК hHAS3 был назван PLV-EF1a-hHAS3-IRES-HYG, вектор приведен в SEQ ID NO: 213. Стабильная клеточная линия BX-PC3-HAS3 была получена путем вирусной инфекции PLV-EF1a-hHAS3-IRES-HYG с последующей селекцией на гигромицине. Во всех опытах были использованы клетки, зараженные для сверхэкспрессии hHAS3.
Чтобы подтвердить уровни НА, интенсивность цвета в срезе опухоли измеряли с помощью программы Aperio spectrum. Опухоль оценивали как HAHigh при сильном окрашивании на НА более 25% среза опухоли; оценивали как HAModerate при сильном окрашивании на НА между 10 и 25% среза опухоли; оценивали как HALow при сильном окрашивании на НА менее 10% среза опухоли.
Для получения опухолей с высоким давлением мышам NCr (nu/nu) в возрасте от 5 до 6 недель и с весом тела 20-25 г вводили клетки BxPC-3-HAS3 (5x106/50 мкл) рядом с надкостницей правой большой берцовой кости. Длину (L) и ширину (W) массы солидной опухоли измеряли штангенциркулем и объем опухоли (TV) рассчитывали как (LxW2)/2. Когда объем опухолей достиг примерно от 1500 до 2000 мм3, мышей разделили на две группы для лечения: (1) BXPC3 HAhigh, контроль-носитель или (2) BXPC3 HAhigh, PEGPH20.
Животным вводили носитель (10 мМ гистидина, рН 6,5, 130 мМ NaCl) или PEGPH20 (4,5 мг/кг) в точке 0 ч и снова в точке 42 ч. При первой обработке PEGPH20 или контролем-носителем (за 48 ч до умерщвления, т.е. при t=0 ч), животным также внутрибрюшинно вводили 240 мг/кг гемцитабина и внутривенно вводили 10 мг/кг паклитаксела (Abraxane®). За два часа до умерщвления (46 ч) животным внутрибрюшинно вводили HYPOXYPROBE™ (пимонизадол гидрохлорид; Chemicon International, Temecula, CA) в количестве 60 мг/кг, а также 0,5 мл BrdU. За пять минут до умерщвления (48 ч) животным внутривенно вводили 75 мкл 0,6 мг/мл раствора флуоресцентного карбоцианинового красителя, растворённого в 75% DMSO, 1,1'-диоктадецил-3,3,3',3'-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат (DiI).
Животных умерщвляли через 48 ч. Целые опухоли собирали, ткани охлаждали до -20°C на алюминиевых блоках, покрытых средой для заливки ОСТ (Sakura Finetek, Torrance, CA), и хранили при -80°C до получения срезов. Опухолевые криосрезы разрезали на срезы толщиной 10 мкм и обрабатывали для иммуногистохимии или микроскопии. Было оценено влияние на перфузию сосудов и гипоксию опухоли.
А. Перфузия сосудов.
Неокрашенные, свежие криосрезы были отсканированы с помощью системы для флуоресцентной микроскопии (система конфокальной визуализации BD CARV II Confocal Imager, Sparks, MD; камера Quentem 512sc (Photometries, Tucson, AZ); система моторизованного перемещения по осям X-Y MIV2000, и система MetaMorph System, Sunnyvale, CA). Для определения перфузии опухоли целые срезы опухоли были отсканированы при десятикратном увеличении по сигналу флуоресцентного карбоцианина (DiI) (возбуждение 562 нм/эмиссия 624 нм). Изображения были проанализированы с помощью Image-Pro Analyzer 7.0 (Media Cybermetrics, Bethesda, MD). Были определены площадь всей опухоли и площадь положительного окрашивания. Перфузию сосудов в каждой опухоли рассчитывали как процент (сигнал) положительного окрашивания от всего среза опухоли.
Результаты приведены в табл. 8. Результаты показывают, что обработка PEG-PH20 опосредует перфузию красителя в опухолях BXPC3-HAS3 со значительным увеличением перфузии кровеносных сосудов в опухолях от мышей, обработанных PEGPH20, по сравнению с контрольными обработанными опу- 90 031986 холями. Как показано в табл. 8, животные, обработанные PEGPH20, показали увеличение перфузии сосудов со средней площадью 7,24 ± 1,78, что является повышением на 116,9% в сравнении с контрольными животными.
Таблица 8
РЕОРН20-опосредованное увеличение перфузии сосудов в опухолях HAhlgh
Средний % площади васкуляризации по отношению ко всей площади среза опухоли Р % повышения
контроль(п=7) 3,42 ± 0,53 - -
PEGPH20 (п=6) 7,24 ± 178 <0,0001 116,9
В. Гипоксия..
Срезы опухолей обработанных животных сравнивали по наличию районов гипоксии путём визуализации пимонидазола гидрохлорида (HYPOXYPROBE™). В частности, после умерщвления криосрезы, которые были заблокированы козьей сывороткой от неспецифического окрашивания, были исследованы в течение 1 ч при комнатной температуре с разведением антитела против пимонидазола 1:50 (Hypoxyprobe™-1 Mab-1, мышиный IgG1; Chemicon International, Temecula, СА), чтобы обнаружить аддукты пимонидазола, или с разведением 1:100 антитела против CD31 (крысиное антитело, BD Pharmingen, San Diego, CA), чтобы обнаружить эндотелиальные клетки. После промывки для удаления основного реагента в качестве вторичного реагента использовали FITC-меченое козье вторичное антитело против антител мыши (для визуализации Hypoxyprobe™-1 Mab-1, разведение 1:100; Vector Labs Burlingame, CA, USA) или меченое техасским красным козье антитело против антител крысы (для визуализации CD31 эндотелиальных клеток, разведение 1:100; Vector Labs Burlingame, CA USA), окрашивание проводили в течение 30 мин при комнатной температуре. Срезы были исследованы с помощью системы визуализации ImagePro Analyzer 7.0 (Media Cybermetrics, Bethesda, MD). Для визуализации CD31 длина волны возбуждения составила 562 нм, и длина волны эмиссии составила 624 нм. Для визуализации пимонидазола гидрохлорида (HYPOXYPROBE™) длина волны возбуждения составила 490 нм, и длина волны эмиссии составила 520 нм.
Результаты представлены в табл. 9. Результаты показывают, что PEGPH20, который опосредует удаление НА, приводит к снижению гипоксии в опухоли BXPC3-HAS3. Контрольные животные имели средний процент площади областей с гипоксией 3,98±2,70% от всей площади среза опухоли. Животные, обработанные PEGPH20, имели уменьшенную площадь гипоксии в опухоли со средним значением 0,86± 1,07, что на 78% ниже по сравнению с контрольными животными.
Таблица 9
РЕСРН20-опосредованное снижение площади гипоксии в опухолях HAhigh
% площади гипоксии от всей площади среза опухоли Р % снижение
контроль (п=7) 3,98 ± 2,70 - -
PEGPH20 (п=6) 0,86 ±1,07 0,035 78
Пример 8. Влияние комбинированного лечения PEGPH20 и nab-паклитакселом на модель опухоли молочной железы, негативную по трем маркерам, с высоким уровнем перитуморального гиалуронана (НА).
Была получена клеточная линия MDA-MB-468 рака молочной железы, негативного по трем маркерам, (TNBC), сверхэкспрессирующая кДНК транскрипта hHAS3A (SEQ ID NO: 212), и, тем самым, была создана модель HAhigh TNBC. Для получения стабильной экспрессирующей hHAS3 клеточной линии MDA-MB-468/HAS3 клетки MDA-MB-468 (номер по каталогу АТСС НТВ-132) культивировали в стандартных условиях культивирования с использованием полной среды RPMI и заражали содержащим кДНК hHAS3 экспрессионным лентивирусным вектором PLV-EF1a-hHAS3-IRES-Hyg (SEQ ID NO: 213), описанным выше, с последующей селекцией на гигромицине.
Клетки MDA-MB-468/HAS3, суспендированные в среде RPMI, вводили лишенным волосяного покрова мышам. Объем опухоли измеряли, как описано выше. На 17-й день, когда опухоли достигали объема примерно 300 мм3, животных распределяли на 6 групп лечения, которым внутривенно вводили 1) носитель; 2) 1 мг/кг nab-паклитаксела; 3) 3 мг/кг nab-паклитаксела; 4) 10 мг/кг nab-паклитаксела; 5) 4,5 мг/кг PEGPH20; или 6) 1 мг/кг nab-паклитаксела и 4,5 мг/кг PEGPH20. Объем опухоли измеряли каждые 3 или 4 дня в течение 45 дней.
Результаты приведены на фиг. 6. Животные в группе лечения 1, получавшие только носитель, имели прогрессирующий рост опухоли на протяжении всего исследования. В последний день исследования (62 день) средний размер опухоли увеличился в объеме чуть более чем в два раза. Опухоли животных в группах лечения 2 и 3, получавших nab-паклитаксел по 1 или 3 мг/кг, сначала показали уменьшение раз- 91 031986 меров опухоли (примерно 30%) в дни 17-27 после имплантации клеток (0-10 дней после лечения), но затем возобновили опухолевый рост с более низкой скоростью по сравнению с контрольными животными, получавшими носитель. В последний день исследования средний объем опухоли был чуть меньше удвоенного исходного объема.
Характер роста опухоли, наблюдаемый у обработанных PEGPH20 животных (группа 5), был таким же, как в группах 2 и 3, но средний размер опухоли для группы 5 был немного меньше, чем у групп 2 и 3 в последний день. Средний размер опухоли у животных в группе 4, которые получали 10 мг/кг nabпаклитаксела, имел ту же тенденцию, что и в группах 2, 3 и 5, в течение первых 10 дней после начала лечения (дни исследования 17-27), но затем имел меньший объем в течение последующих 11 дней, а затем постепенно дополнительно уменьшался в течение оставшегося времени исследования на 30%, и средний объем опухоли достиг в конце исследования одной трети среднего объема исходной опухоли.
Комбинация 1 мг/кг nab-паклитаксела и PEGPH20 (группа 6) привела к существенному уменьшению среднего объема опухоли. Эти результаты показывают, что при обработке комбинацией nabпаклитаксела и PEGPH20 существует синергетический эффект, что приводит к значительному повышению эффективности ингибирования роста опухоли по сравнению с отдельными процедурами с той же дозой. Комбинированная терапия привела к аналогичному уменьшению объема опухоли, наблюдаемому у животных, получавших в 10 раз больше nab-паклитаксела в виде единственной терапии (10 мг/кг nabпаклитаксела (группа 5)), которая также привела к окончательному среднему объему опухоли, равному примерно одной трети от среднего объема исходной опухоли.
Поскольку модификации изобретения будут очевидны, специалистам в данной области, предполагается, что это изобретение ограничено только объемом прилагаемой формулы изобретения.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> ГАЛОЗИМ, Инк.
Маневал, Дэниел C.
Шепард, Эйч. Майкл
Томпсон, Картис Б.
<120> КОМБИНАЦИОННАЯ ТЕРАПИЯ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ АНТИГИАЛУРОНАНОВЫЙ АГЕНТ И ТАКСАН, НАПРАВЛЕННЫЙ НА РАКОВУЮ МИШЕНЬ <130> 033320.03108.WO01/3108PC <140> Не подписано <141> данным документом <150> US 61/686,429 <151> 2012-04-04 <150> US 61/714,719 <151> 2012-10-16 <160> 213 <170> FastSEQ для Windows версии 4.0 <210> 1 <211> 509 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> предшественник человеческой PH20 <400> 1
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
- 92 031986
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val
485 490 495
Ser Ile Leu Phe Leu Ile Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu
500 505
<210> 2 <211> 474 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens
- 93 031986 <220>
<223> Зрелая PH20 <400> 2
Leu Asn 1 Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val Ser Ile Leu
450 455 460
- 94 031986
Phe Leu Ile Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu
465
470 <210> 3 <211> 482 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> предшественник PH20 1-482 <400> 3
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
- 95 031986
Asn Pro Asp Asn Phe 405 Ala Ile Gln Leu Glu 410 Lys Gly Gly Lys Phe 415 Thr
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr
<210> 4 <211> 447 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-482 <400> 4
Leu Asn
Ala Trp
Leu Asp
Thr Gly
Pro Tyr
Gln Lys
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr
Phe Arg
Asn Ala
Met Ser
Gln Gly
Ile Asp
Ile Ser
Tyr Met
100 Trp Arg 115
Asn Arg
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180 Lys Lys 195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln 275
Gly Glu
Leu Ser
Ala Pro
Pro Ser
Leu Phe
Val Thr
Ser Ile
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230 Asn Arg 245 Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
Pro Val
Glu Phe
Ser Phe
Ile Phe
Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu
135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200
Ser Trp
215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu
295
Arg Ser
Ile Pro
Cys Leu
Ile Gly
Tyr Val
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Asn Val
Gly Lys
Ser Pro
Asp Arg
Val Asn 75
Lys Ala
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro 235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300 Ser Cys
Pro Phe
Phe Asp
Arg Ile
Leu Gly
Gly Gly
Lys Lys
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu 285
Ile Val
Leu Leu
Leu Trp
Glu Pro
Asn Ala
Tyr Tyr
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
- 96 031986
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr
435 440 445
<210> 5 <211> 446 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-481 <400> 5
Leu Asn
Ala Trp
Leu Asp
Thr Gly
Pro Tyr
Gln Lys
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Phe Arg
Asn Ala
Met Ser
Gln Gly
Ile Asp
Ile Ser
Tyr Met
100
Trp Arg
115
Asn Arg
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180
Lys Lys
195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
Ala Pro
Pro Ser
Leu Phe
Val Thr
Ser Ile
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230 Asn Arg 245 Ser Pro
Val Leu
Pro Val
Glu Phe
Ser Phe
Ile Phe
Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu
135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200
Ser Trp
215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
Ile Pro
Cys Leu
Ile Gly
Tyr Val
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Asn Val
Gly Lys
Ser Pro
Asp Arg
Val Asn 75
Lys Ala
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Pro Phe
Phe Asp
Arg Ile
Leu Gly
Gly Gly
Lys Lys
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
Leu Trp
Glu Pro
Asn Ala
Tyr Tyr
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
- 97 031986
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe
435 440 445
<210> 6 <211> 445 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-480 <400> 6
Leu Asn
Ala Trp
Leu Asp
Thr Gly
Pro Tyr
Gln Lys
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Phe Arg
Asn Ala
Met Ser
Gln Gly
Ile Asp
Ile Ser
Tyr Met
100
Trp Arg
115
Asn Arg
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180
Lys Lys
195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Pro
Pro Ser
Leu Phe
Val Thr
Ser Ile
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230 Asn Arg
Pro Val
Glu Phe
Ser Phe
Ile Phe
Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu
135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200
Ser Trp
215
Asn Thr
Val Arg
Ile Pro
Cys Leu
Ile Gly
Tyr Val
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
Asn Val
Gly Lys
Ser Pro
Asp Arg
Val Asn 75
Lys Ala
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Pro Phe
Phe Asp
Arg Ile
Leu Gly
Gly Gly
Lys Lys
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Leu Trp
Glu Pro
Asn Ala
Tyr Tyr
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160
Leu Arg
175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
- 98 031986
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
435 440 445
<210> 7 <211> 444 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-479 <400> 7
Leu Asn
Ala Trp
Leu Asp
Thr Gly
Pro Tyr
Gln Lys
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
Phe Arg
Asn Ala
Met Ser
Gln Gly
Ile Asp
Ile Ser
Tyr Met
100
Trp Arg
115
Asn Arg
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180
Lys Lys
195
Asn Asp
Ala Pro
Pro Ser
Leu Phe
Val Thr
Ser Ile
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Pro Val
Glu Phe
Ser Phe
Ile Phe
Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu
135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200
Ser Trp
Ile Pro
Cys Leu
Ile Gly
Tyr Val
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe
185
Gly Ser
Leu Trp
Asn Val
Gly Lys
Ser Pro
Asp Arg
Val Asn
Lys Ala
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
Pro Phe
Phe Asp
Arg Ile
Leu Gly
Gly Gly
Lys Lys
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Leu Trp
Glu Pro
Asn Ala
Tyr Tyr
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160
Leu Arg
175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
- 99 031986
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr
305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360 Glu Lys 375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp
425
Glu Glu
220
Ser Pro 235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala <210> 8 <211> 443 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-478 <400> 8
Leu Asn
Ala Trp
Leu Asp
Thr Gly
Pro Tyr
Gln Lys
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
Phe Arg
Asn Ala
Met Ser
Gln Gly
Ile Asp
Ile Ser
Tyr Met
100
Trp Arg
115
Asn Arg
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
Ala Pro
Pro Ser
Leu Phe
Val Thr
Ser Ile
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Val
Glu Phe
Ser Phe
Ile Phe
Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu
135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Ile Pro
Cys Leu
Ile Gly
Tyr Val
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe
Asn Val
Gly Lys
Ser Pro
Asp Arg
Val Asn
Lys Ala
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Pro Phe
Phe Asp
Arg Ile
Leu Gly
Gly Gly
Lys Lys
Val Ile
110
Pro Lys
125
Asn Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
Leu Trp
Glu Pro
Asn Ala
Tyr Tyr
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160
Leu Arg
175
Asn His
- 100 031986
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr
305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
180 Lys Lys 195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420 Lys Pro 435
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu 405
Asp Val
Pro Met
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe 265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410 Ala Asp 425
Glu Glu
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Pro
190 Asn Val 205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala <210> 9 <211> 442 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-477 <400> 9
Leu Asn
Ala Trp
Leu Asp
Thr Gly
Pro Tyr
Gln Lys
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
Phe Arg
Asn Ala
Met Ser
Gln Gly
Ile Asp
Ile Ser
Tyr Met
100
Trp Arg
115
Asn Arg
Thr Glu
Ala Pro
Pro Ser
Leu Phe
Val Thr
Ser Ile
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
Pro Val
Glu Phe
Ser Phe
Ile Phe
Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu
135
Glu Lys
Ile Pro
Cys Leu
Ile Gly
Tyr Val
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Asn Val
Gly Lys
Ser Pro
Asp Arg
Val Asn
Lys Ala
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
Pro Phe
Phe Asp
Arg Ile
Leu Gly
Gly Gly
Lys Lys
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Leu Trp
Glu Pro
Asn Ala
Tyr Tyr
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
- 101 031986
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro 225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr 305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro 385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Asp Phe
His Leu
180
Lys Lys
195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ile Lys
170
Leu Phe
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp
425
Glu Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile Gln Glu Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu
335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp
415
Asp Ala <210> 10 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Bos taurus <220>
<223> гиалуронидаза <400> 10
Met 1 Arg Pro Phe Ser 5 Leu Glu Val Ser Leu 10 His Leu Pro Trp Ala 15 Met
Ala Ala His Leu Leu Pro Val Cys Thr Leu Phe Leu Asn Leu Leu Ser
20 25 30
Met Thr Gln Gly Ser Arg Asp Pro Val Val Pro Asn Gln Pro Phe Thr
35 40 45
Thr Ile Trp Asn Ala Asn Thr Glu Trp Cys Met Lys Lys His Gly Val
50 55 60
Asp Val Asp Ile Ser Ile Phe Asp Val Val Thr Asn Pro Gly Gln Thr
65 70 75 80
Phe Arg Gly Pro Asn Met Thr Ile Phe Tyr Ser Ser Gln Leu Gly Thr
85 90 95
Tyr Pro Tyr Tyr Thr Ser Ala Gly Glu Pro Val Phe Gly Gly Leu Pro
100 105 110
Gln Asn Ala Ser Leu Asn Ala His Leu Ala Arg Thr Phe Gln Asp Ile
- 102 031986
Leu Ala
130 Trp Glu 145
Ile Tyr
Trp Leu
Ala Ala
Arg Pro
210 Tyr Asp 225
Cys Ala
Leu Tyr
Thr Gln
Ala Gly
290
Phe Tyr
305
Ser Leu
Val Ser
Glu Tyr
Gly Ala
370 Ala Arg 385
Ser Phe
Gly Ala
Cys Arg
Met Trp
450
115
Ala Met
Ala Trp
Arg Gln
Ala Pro
180
Glu Glu 195
Gln Gly
Phe Lys
Gln Asn
Pro Ser
260
Met Phe 275
Ala Gly
Asp Met
Gly Glu
Trp Leu
340 Val Asp 355
Arg Leu
Arg Pro
Ser Ile
Leu Ser
420 Cys Tyr 435
Pro Glu
Arg Pro
150
Arg Ser
165
Arg Val
Trp Met
Leu Trp
Ser Pro
230
Asp Gln
245
Ile Tyr
Val Gln
Asp Pro
Thr Asn
310
Ser Ala
325
Ser Thr
Thr Thr
Cys Ser
Ser Tyr
390
Lys Pro
405
Leu Glu
Arg Gly
120 Pro Arg 135
Arg Trp
Arg Ala
Glu Ala
Ala Gly
200
Gly Phe
215
Asn Tyr
Leu Gly
Leu Pro
His Arg
280
Lys Leu
295
His Phe
Ala Gln
Ser Thr
Leu Gly
360
Gln Val 375
Pro Lys
Thr Pro
Asp Arg
Trp Arg
440
Phe Ser
Ala Phe
Leu Val
170
Ala Ala 185
Thr Leu
Tyr Asn
Thr Gly
Trp Leu
250
Ala Ala 265
Val Ala
Pro Val
Leu Pro
Gly Ala
330
Lys Glu
345
Pro Ser
Leu Cys
Ala Arg
Gly Gly
410 Leu Arg 425
Gly Thr
Gly Leu
140
Asn Trp
155
Gln Lys
Gln Asp
Lys Leu
Phe Pro
220
Arg Cys
235
Trp Gly
Leu Glu
Glu Ala
Leu Pro
300
Ala Glu
315
Ala Gly
Ser Cys
Ile Leu
Ser Gly
380
Leu Ile
395
Gly Pro
Met Ala
Arg Cys
125
Ala Val
Asp Thr
Gln His
Gln Phe
190 Gly Gln 205 Glu Cys
Pro Leu
Gln Ser
Gly Thr
270
Phe Arg
285
Tyr Met
Glu Leu
Val Val
Gln Ala
350
Asn Val
365
His Gly
Leu Asn
Leu Thr
Val Glu
430
Glu Gln
445
Ile Asp
Lys Asp
160 Pro Asp 175 Glu Gly
Ala Leu
Tyr Asn
Asn Ile
240 Arg Ala 255
Lys Lys
Val Ala
Gln Leu
Glu His
320 Leu Trp 335
Ile Lys
Thr Ser
Arg Cys
Ser Thr
400
Leu Gln
415
Phe Glu
Trp Gly <210> 11 <211> 553 <212> БЕЛОК <213> Bos taurus <220>
<223> Предшественник коровьей PH20 <400> 11
Met Arg Met Leu Arg Arg His His Ile Ser Phe Arg Ser Phe Ala Gly
1 5 10 15
Ser Ser Gly Thr Pro Gln Ala Val Phe Thr Phe Leu Leu Leu Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Ala Leu Asp Phe Arg Ala Pro Pro Leu Ile Ser Asn Thr Ser
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Val Glu Arg Cys Val Asn Arg Arg
50 55 60
Phe Gln Leu Pro Pro Asp Leu Arg Leu Phe Ser Val Lys Gly Ser Pro
- 103 031986
Gln
Leu
Gly
Lys
Val
145
Pro
Asn
Phe
Lys
Cys
225
Asp
Ser
Thr
Arg
Tyr
305
Gly
Gly
Cys
Ile
Asn
385
His
Tyr
Asp
Val
Ile
465
Ser
Thr
Cys
Ala
Gln
545
70 75 80
Lys Ser Ala Thr Gly Gln Phe Ile Thr Leu Phe Tyr Ala Asp Arg
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro His Ile Asp Glu Lys Thr Gly Lys Thr Val Phe
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Leu Gly Asn Leu Lys Ser His Met Glu Lys Ala
115 120 125
Asn Asp Ile Ala Tyr Tyr Ile Pro Asn Asp Ser Val Gly Leu Ala
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Asn Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys
150 155 160
Lys Asp Val Tyr Arg Asp Glu Ser Val Glu Leu Val Leu Gln Lys
165 170 175
Pro Gln Leu Ser Phe Pro Glu Ala Ser Lys Ile Ala Lys Val Asp
180 185 190
Glu Thr Ala Gly Lys Ser Phe Met Gln Glu Thr Leu Lys Leu Gly
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp
210 215 220
Tyr Asn His Asn His Asn Gln Pro Thr Tyr Asn Gly Asn Cys Pro
230 235 240
Val Glu Lys Arg Arg Asn Asp Asp Leu Glu Trp Leu Trp Lys Glu
245 250 255
Thr Ala Leu Phe Pro Ser Val Tyr Leu Asn Ile Arg Leu Lys Ser
260 265 270
Gln Asn Ala Ala Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Gln Glu Ala Ile
275 280 285
Leu Ser Lys Ile Ala Ser Val Glu Ser Pro Leu Pro Val Phe Val
290 295 300
Ala Arg Pro Val Phe Thr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Leu Ser Gln
310 315 320
Asp Leu Val Asn Ser Val Gly Glu Ile Val Ser Leu Gly Ala Ser
325 330 335
Ile Ile Met Trp Gly Ser Leu Asn Leu Ser Leu Ser Met Gln Ser
340 345 350
Met Asn Leu Gly Thr Tyr Leu Asn Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile
355 360 365
Asn Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys His
370 375 380
Glu Gly Val Cys Thr Arg Lys His Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu
390 395 400
Leu Asn Pro Met Asn Phe Ala Ile Gln Thr Gly Glu Gly Gly Lys
405 410 415
Thr Val Pro Gly Thr Val Thr Leu Glu Asp Leu Gln Lys Phe Ser
420 425 430
Thr Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ala Asn Ile His Cys Lys Lys Arg
435 440 445
Asp Ile Lys Asn Val His Ser Val Asn Val Cys Met Ala Glu Asp
450 455 460
Cys Ile Asp Ser Pro Val Lys Leu Gln Pro Ser Asp His Ser Ser
470 475 480
Gln Glu Ala Ser Thr Thr Thr Phe Ser Ser Ile Ser Pro Ser Thr
485 490 495
Thr Ala Thr Val Ser Pro Cys Thr Pro Glu Lys His Ser Pro Glu
500 505 510
Leu Lys Val Arg Cys Ser Glu Val Ile Pro Asn Val Thr Gln Lys
515 520 525
Cys Gln Ser Val Lys Leu Lys Asn Ile Ser Tyr Gln Ser Pro Ile
530 535 540
Asn Ile Lys Asn Gln Thr Thr Tyr
550
- 104 031986 <210> 12 <211> 331 <212> БЕЛОК <213> Vespula vulgaris <220>
<223> гиалуронидаза A <400> 12
Ser Glu Arg Pro Lys Arg Val Phe Asn Ile Tyr Trp Asn Val Pro Thr
1 5 10 15
Phe Met Cys His Gln Tyr Asp Leu Tyr Phe Asp Glu Val Thr Asn Phe
20 25 30
Asn Ile Lys Arg Asn Ser Lys Asp Asp Phe Gln Gly Asp Lys Ile Ala
35 40 45
Ile Phe Tyr Asp Pro Gly Glu Phe Pro Ala Leu Leu Ser Leu Lys Asp
50 55 60
Gly Lys Tyr Lys Lys Arg Asn Gly Gly Val Pro Gln Glu Gly Asn Ile
65 70 75 80
Thr Ile His Leu Gln Lys Phe Ile Glu Asn Leu Asp Lys Ile Tyr Pro
85 90 95
Asn Arg Asn Phe Ser Gly Ile Gly Val Ile Asp Phe Glu Arg Trp Arg
100 105 110
Pro Ile Phe Arg Gln Asn Trp Gly Asn Met Lys Ile His Lys Asn Phe
115 120 125
Ser Ile Asp Leu Val Arg Asn Glu His Pro Thr Trp Asn Lys Lys Met
130 135 140
Ile Glu Leu Glu Ala Ser Lys Arg Phe Glu Lys Tyr Ala Arg Phe Phe
145 150 155 160
Met Glu Glu Thr Leu Lys Leu Ala Lys Lys Thr Arg Lys Gln Ala Asp
165 170 175
Trp Gly Tyr Tyr Gly Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn Met Ser Pro Asn Asn
180 185 190
Leu Val Pro Glu Cys Asp Val Thr Ala Met His Glu Asn Asp Lys Met
195 200 205
Ser Trp Leu Phe Asn Asn Gln Asn Val Leu Leu Pro Ser Val Tyr Val
210 215 220
Arg Gln Glu Leu Thr Pro Asp Gln Arg Ile Gly Leu Val Gln Gly Arg
225 230 235 240
Val Lys Glu Ala Val Arg Ile Ser Asn Asn Leu Lys His Ser Pro Lys
245 250 255
Val Leu Ser Tyr Trp Trp Tyr Val Tyr Gln Asp Glu Thr Asn Thr Phe
260 265 270
Leu Thr Glu Thr Asp Val Lys Lys Thr Phe Gln Glu Ile Val Ile Asn
275 280 285
Gly Gly Asp Gly Ile Ile Ile Trp Gly Ser Ser Ser Asp Val Asn Ser
290 295 300
Leu Ser Lys Cys Lys Arg Leu Gln Asp Tyr Leu Leu Thr Val Leu Gly
305 310 315 320
Pro Ile Ala Ile Asn Val Thr Glu Ala Val Asn
325 330
<210> 13 <211> 340 <212> БЕЛОК <213> Vespula vulgaris <220>
<223> гиалуронидаза B <400> 13
Asp Arg Thr Ile Trp Pro Lys Lys Gly Phe Ser
Ile Tyr Trp Asn Ile
- 105 031986
Pro Thr
Gln Phe
Ile Ser
Lys Asn
Asn Leu
Tyr Pro
Trp Arg
Asp Ile
130
Ser Met
145
Ile Phe
Thr Glu
Asp Lys
Lys Met
210
Tyr Leu
225
Glu Arg
Pro Lys
Ile Phe
Thr Asn
290
Thr Asp
305
Leu Gly
Pro Leu
His Phe
Asn Ile
Leu Phe
Gly Thr
Thr Ile
Lys Lys
100
Pro Ile
115
Ser Ile
Ile Glu
Met Glu
Trp Gly
180
Pro Ser
195
Ser Trp
Lys Asn
Leu Lys
Val Leu
260
Leu Thr 275
Gly Ala
Arg Lys
Pro Ile
Asn Phe
340
Cys His
Lys Tyr
Tyr Asp
Tyr Glu
His Leu
Ile Ala
Phe Arg
Asp Leu
Lys Glu
150 Lys Thr 165
Tyr His
Phe Asp
Leu Phe
Val Leu
230
Glu Ala 245
Pro Tyr
Glu Ala
Asp Gly
Arg Cys
310
Ala Phe
325
Asn Phe
Asn Ser
Pro Gly
Ile Arg
Glu Gln
Gly Gly
Arg Asn
120 Val Arg 135
Ala Ser
Leu Lys
Gly Tyr
Cys Asp
200
Asn Asn
215
Lys Pro
Ile Arg
Trp Trp
Asp Val
280
Ile Ile
295
Glu Lys
Lys Val
Gly Val 25
Met Asn
Asn Phe
Asn Glu
Phe Thr
Ile Gly
105
Val Asp
Lys Glu
Asn Arg
Leu Ala
170
Pro His
185
Ala Leu
Gln Asn
Asp Glu
Ile Ser
250 Tyr Thr 265
Lys Asn
Ile Trp
Leu Lys
Thr Lys
330
Tyr Phe
Asn Phe
Pro Ser
Gly Val
Lys Glu
Val Ile
Asn Leu
His Pro
140
Phe Glu
155
Lys Glu
Cys Leu
Ser Met
Val Leu
220
Lys Ile
235
Lys Asn
Tyr Gln
Thr Phe
Gly Val
300
Glu Tyr
315
Ala Val
Lys Glu
Arg Gly
Met Val
Pro Gln
Leu Asp
His Phe
110 Lys Ile 125
Lys Trp
Thr Ser
Ile Arg
Ser Gly
190
Ser Glu
205
Leu Pro
His Leu
Phe Lys
Asp Lys
270
Lys Glu
285
Ser Tyr
Leu Met
Lys Glu
Leu Lys
Glu Thr
Leu Leu
Lys Gly
Glu Ile
His Asn
Asn Lys
Asp Lys
Ala Lys
160 Lys Lys 175
Ser Thr
Asn Asp
Ser Ile
Val Gln
240
His Leu
255
Glu Ser
Ile Leu
Glu Leu
Lys Ile
320
Asn Thr
335 <210> 14 <211> 382 <212> БЕЛОК <213> Apis mellifera <220>
<223> гиалуронидаза <400> 14
Met 1 Ser Arg Pro Leu 5 Val Ile Thr Glu Gly 10 Met Met Ile Gly Val 15 Leu
Leu Met Leu Ala Pro Ile Asn Ala Leu Leu Leu Gly Phe Val Gln Ser
20 25 30
Thr Pro Asp Asn Asn Lys Thr Val Arg Glu Phe Asn Val Tyr Trp Asn
35 40 45
Val Pro Thr Phe Met Cys His Lys Tyr Gly Leu Arg Phe Glu Glu Val
50 55 60
Ser Glu Lys Tyr Gly Ile Leu Gln Asn Trp Met Asp Lys Phe Arg Gly
- 106 031986
Glu Glu
Lys Asp
Leu Gly
Asn Gln
130
Glu Ser
145
Tyr Lys
Asp Asp
Gly Gln
Pro Ala
210
Thr Pro
225
Asn Asp
Ser Val
Val Gly
Thr Ser
290
Arg Arg
305
Lys Ile
Asp Asp
Asn Asn
Ala Asn
370
Ile Ala
Pro Asn
100
Asn Leu
115
Ile Pro
Trp Arg
Lys Leu
Gln Arg
180
Leu Phe
195
Ala Asn
Asn Gln
Lys Met
Tyr Leu
260
Gly Arg 275
Arg Lys
Asp Thr
Thr Asp
Ile Asn
340
Glu Leu
355
Asp Arg
Ile Leu 85 Gly Asn
Thr Lys
Asp Lys
Pro Ile
150
Ser Val
165
Val Glu
Met Glu
Trp Gly
Pro Ser
230 Ser Trp 245
Arg Trp
Val Lys
Lys Val
Asp Leu
310 Leu Gly 325 Thr Lys
Gly Pro
Leu Thr
Tyr Asp
Val Val
His Leu
120
Ser Phe
135
Phe Arg
Glu Val
Gln Glu
Glu Thr
200
Tyr Tyr
215
Ala Gln
Leu Phe
Asn Leu
Glu Ala
280
Leu Pro
295
Ser Arg
Ala Asp
Ala Lys
Ala Val
360 Val Asp 375
Pro Gly
Ala Arg
105
Gln Val
Pro Gly
Gln Asn
Val Arg
170 Ala Lys 185
Leu Lys
Ala Tyr
Cys Glu
Glu Ser
250
Thr Ser 265
Leu Arg
Tyr Tyr
Ala Asp
Gly Phe
330
Cys Leu
345
Lys Arg
Val Ser
Met Phe
Asn Gly
Phe Arg
Val Gly
140 Trp Ala 155 Arg Glu
Arg Arg
Ala Ala
Pro Tyr
220
Ala Thr 235
Glu Asp
Gly Glu
Ile Ala
Trp Tyr
300
Leu Glu 315
Ile Ile
Gln Phe
Ile Ala
Val Asp
380
Pro Ala
Gly Val
110 Asp His 125
Val Ile
Ser Leu
His Pro
Phe Glu
190
Lys Arg 205
Cys Tyr
Thr Met
Val Leu
Arg Val
270 Arg Gln 285
Lys Tyr
Ala Thr
Trp Gly
Arg Glu
350
Leu Asn
365
Gln Val
Leu Leu
Pro Gln
Leu Ile
Asp Phe
Gln Pro
160 Phe Trp 175
Lys Tyr
Met Arg
Asn Leu
Gln Glu
240
Leu Pro 255
Gly Leu
Met Thr
Gln Asp
Leu Arg
320
Ser Ser
335
Tyr Leu
Asn Asn <210> 15 <211> 331 <212> БЕЛОК <213> Dolichovespula maculata <220>
<223> гиалуронидаза <400> 15
Ser Glu Arg Pro Lys Arg Val Phe Asn Ile Tyr Trp Asn Val Pro Thr
1 5 10 15
Phe Met Cys His Gln Tyr Gly Leu Tyr Phe Asp Glu Val Thr Asn Phe
20 25 30
Asn Ile Lys His Asn Ser Lys Asp Asp Phe Gln Gly Asp Lys Ile Ser
35 40 45
Ile Phe Tyr Asp Pro Gly Glu Phe Pro Ala Leu Leu Pro Leu Lys Glu
50 55 60
Gly Asn Tyr Lys Ile Arg Asn Gly Gly Val Pro Gln Glu Gly Asn Ile
65 70 75 80
Thr Ile His Leu Gln Arg Phe Ile Glu Asn Leu Asp Lys Thr Tyr Pro
85 90 95
Asn Arg Asn Phe Asn Gly Ile Gly Val Ile Asp Phe Glu Arg Trp Arg
- 107 031986
Pro Ile
Ser Ile
130
Ile Glu
145
Met Glu
Trp Gly
Leu Val
Ser Trp
210 Arg His 225
Val Lys
Val Leu
Leu Thr
Gly Gly
290
Leu Ser
305
Pro Ile
100 Phe Arg 115
Asp Leu
Leu Glu
Glu Thr
Tyr Tyr
180
Pro Asp 195
Leu Phe
Glu Leu
Glu Ala
Ser Tyr
260
Glu Thr 275
Asp Gly
Lys Cys
Thr Val
Gln Asn
Val Arg
Ala Ser
150
Leu Lys
165
Gly Tyr
Cys Asp
Asn Asn
Thr Pro
230
Val Arg 245
Trp Trp
Asp Val
Ile Ile
Lys Arg
310
Asn Val
325
Trp Gly
120
Asn Glu
135
Lys Arg
Leu Ala
Pro Tyr
Ala Thr
200
Gln Asn
215
Asp Gln
Ile Ser
Tyr Val
Lys Lys
280
Ile Trp
295
Leu Arg
Thr Glu
105
Asn Met
His Pro
Phe Glu
Lys Lys
170 Cys Phe 185
Ala Met
Val Leu
Arg Val
Asn Asn
250 Tyr Gln 265
Thr Phe
Gly Ser
Glu Tyr
Thr Val
330
Met Ile
Phe Trp
140
Lys Tyr
155
Thr Arg
Asn Met
Leu Glu
Leu Pro
220
Gly Leu
235
Leu Lys
Asp Asp
Gln Glu
Ser Ser
300
Leu Leu
315
Asn
110 His Lys 125
Asp Lys
Ala Arg
Lys Gln
Ser Pro
190 Asn Asp 205
Ser Val
Val Gln
His Ser
Thr Asn
270
Ile Ala 285
Asp Val
Thr Val
Lys Phe
Lys Met
Leu Phe
160 Ala Asp 175
Asn Asn
Lys Met
Tyr Ile
Gly Arg
240 Pro Lys 255
Thr Phe
Ile Asn
Asn Ser
Leu Gly
320 <210> 16 <211> 367 <212> БЕЛОК <213> Polistes annularis <220>
<223> гиалуронидаза <400> 16
Tyr Val Ser Leu Ser Pro Asp Ser Val Phe Asn Ile Ile Thr Asp Asp
1 5 10 15
Ile Ser His Gln Ile Leu Ser Arg Ser Asn Cys Glu Arg Ser Lys Arg
20 25 30
Pro Lys Arg Val Phe Ser Ile Tyr Trp Asn Val Pro Thr Phe Met Cys
35 40 45
His Gln Tyr Gly Met Asn Phe Asp Glu Val Thr Asp Phe Asn Ile Lys
50 55 60
His Asn Ser Lys Asp Asn Phe Arg Gly Glu Thr Ile Ser Ile Tyr Tyr
65 70 75 80
Asp Pro Gly Lys Phe Pro Ala Leu Met Pro Leu Lys Asn Gly Asn Tyr
85 90 95
Glu Glu Arg Asn Gly Gly Val Pro Gln Arg Gly Asn Ile Thr Ile His
100 105 110
Leu Gln Gln Phe Asn Glu Asp Leu Asp Lys Met Thr Pro Asp Lys Asn
115 120 125
Phe Gly Gly Ile Gly Val Ile Asp Phe Glu Arg Trp Lys Pro Ile Phe
130 135 140
Arg Gln Asn Trp Gly Asn Thr Glu Ile His Lys Lys Tyr Ser Ile Glu
145 150 155 160
Leu Val Arg Lys Glu His Pro Lys Trp Ser Glu Ser Met Ile Glu Ala
165 170 175
Glu Ala Thr Lys Lys Phe Glu Lys Tyr Ala Arg Tyr Phe Met Glu Glu
- 108 031986
Thr Leu
Tyr Gly
210 Asp Cys 225
Tyr Asn
Gln Lys
Ala Val
Tyr Trp
290
Thr Asp 305
Gly Ile
Cys Lys
Val Asn
180 Lys Leu 195
Phe Pro
Asp Ala
Asn Gln
Pro Glu
260 Arg Ile 275
Trp Tyr
Val Glu
Ile Ile
Arg Leu
340
Val Thr
355
Ala Lys
Tyr Cys
Lys Ala
230
Glu Ile 245
Glu Arg
Ser Asn
Val Tyr
Lys Thr
310
Trp Gly 325
Arg Glu
Glu Thr
Lys Thr
200
Tyr Asn
215
Thr Ile
Leu Phe
Val Tyr
Asn Leu
280
Gln Asp
295
Phe Gln
Ser Ser
Tyr Leu
Val Asn
360
185
Arg Lys
Val Thr
Glu Asn
Pro Ser
250
Leu Val
265
Glu His
Lys Met
Glu Ile
Ser Asp
330
Leu Asn
345
Gly Arg
Arg Ala
Pro Asn
220
Asp Arg
235
Val Tyr
Gln Gly
Ser Pro
Asp Ile
300
Val Thr
315
Val Asn
Thr Leu
Ser Ser
190 Lys Trp 205
Asn Pro
Leu Ser
Val Arg
Arg Ile
270
Ser Val
285
Tyr Leu
Asn Gly
Ser Leu
Gly Pro
350
Leu Asn
365
Gly Tyr
Gly Pro
Trp Met
240
His Glu
255
Lys Glu
Leu Ala
Ser Glu
Gly Asp
320
Ser Lys
335
Phe Ala
Phe <210> 17 <211> 462 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <220>
<223> гиалуронидаза <400> 17
Met Leu Gly Leu Thr Gln His Ala Gln Lys Val Trp Arg Met Lys Pro
1 5 10 15
Phe Ser Pro Glu Val Ser Pro Gly Ser Ser Pro Ala Thr Ala Gly His
20 25 30
Leu Leu Arg Ile Ser Thr Leu Phe Leu Thr Leu Leu Glu Leu Ala Gln
35 40 45
Val Cys Arg Gly Ser Val Val Ser Asn Arg Pro Phe Ile Thr Val Trp
50 55 60
Asn Gly Asp Thr His Trp Cys Leu Thr Glu Tyr Gly Val Asp Val Asp
65 70 75 80
Val Ser Val Phe Asp Val Val Ala Asn Lys Glu Gln Ser Phe Gln Gly
85 90 95
Ser Asn Met Thr Ile Phe Tyr Arg Glu Glu Leu Gly Thr Tyr Pro Tyr
100 105 110
Tyr Thr Pro Thr Gly Glu Pro Val Phe Gly Gly Leu Pro Gln Asn Ala
115 120 125
Ser Leu Val Thr His Leu Ala His Thr Phe Gln Asp Ile Lys Ala Ala
130 135 140
Met Pro Glu Pro Asp Phe Ser Gly Leu Ala Val Ile Asp Trp Glu Ala
145 150 155 160
Trp Arg Pro Arg Trp Ala Phe Asn Trp Asp Ser Lys Asp Ile Tyr Arg
165 170 175
Gln Arg Ser Met Glu Leu Val Gln Ala Glu His Pro Asp Trp Pro Glu
180 185 190
Thr Leu Val Glu Ala Ala Ala Lys Asn Gln Phe Gln Glu Ala Ala Glu
195 200 205
Ala Trp Met Ala Gly Thr Leu Gln Leu Gly Gln Val Leu Arg Pro Arg
210 215 220
Gly Leu Trp Gly Tyr Tyr Gly Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Asn Asp Phe
- 109 031986
225
Leu Ser
Asn Asp
Ser Ile
Tyr Val
290
Arg Asp
305
Met Thr
Glu Ser
Asp Lys
Asp Ser
370
Leu Cys
385
Pro Ser
Ile Glu
Ser Leu
Tyr Arg
450
Leu Asn
Gln Leu
260
Tyr Leu
275
Arg His
Pro His
Asp Tyr
Ala Ala
340
Thr Ser
355
Thr Leu
Ser Glu
Tyr Pro
Leu Thr
420
Lys Asp
435
Gly Trp
230 Tyr Thr 245
Gly Trp
Pro Ala
Arg Val
Val Pro
310
Leu Leu 325
Gln Gly
Thr Lys
Gly Pro
Ala Leu
390
Glu Ala 405
His Asp
Arg Ala
Arg Gly
Gly Gln
Leu Trp
Ala Leu
280
Gln Glu
295
Val Met
Pro Leu
Val Ala
Glu Ser
360
Phe Ile
375
Cys Ser
Leu Leu
Gly Arg
Gln Met
440
Lys Trp
455
Cys Pro
250
Asn Gln 265
Met Gly
Ala Leu
Pro Tyr
Glu Glu
330 Gly Ala 345
Cys Gln
Val Asn
Gly His
Thr Leu
410
Pro Pro
425
Ala Met
Cys Asp
235
Val Phe
Ser Tyr
Thr Gly
Arg Val
300
Val Gln
315
Leu Glu
Val Leu
Ala Ile
Val Thr
380
Gly Arg 395
Asn Pro
Ser Leu
Lys Phe
Lys Arg
460
Val Arg
Ala Leu
270 Lys Ser 285
Ala Ile
Ile Phe
His Ser
Trp Leu
350
Lys Ala
365
Ser Ala
Cys Val
Ala Ser
Lys Gly
430 Arg Cys 445
Gly Met
240 Asp Gln 255
Tyr Pro
Gln Met
Val Ser
Tyr Glu
320
Leu Gly
335
Ser Ser
Tyr Met
Ala Leu
Arg His
400
Phe Ser
415
Thr Leu
Arg Cys <210> 18 <211> 473 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <220>
<223> Гиалуронидаза 2 <400> 18
Met 1 Arg Ala Gly Leu 5 Gly Pro Ile Ile Thr 10 Leu Ala Leu Val Leu 15 Glu
Val Ala Trp Ala Gly Glu Leu Lys Pro Thr Ala Pro Pro Ile Phe Thr
20 25 30
Gly Arg Pro Phe Val Val Ala Trp Asn Val Pro Thr Gln Glu Cys Ala
35 40 45
Pro Arg His Lys Val Pro Leu Asp Leu Arg Ala Phe Asp Val Lys Ala
50 55 60
Thr Pro Asn Glu Gly Phe Phe Asn Gln Asn Ile Thr Thr Phe Tyr Tyr
65 70 75 80
Asp Arg Leu Gly Leu Tyr Pro Arg Phe Asp Ala Ala Gly Thr Ser Val
85 90 95
His Gly Gly Val Pro Gln Asn Gly Ser Leu Cys Ala His Leu Pro Met
100 105 110
Leu Lys Glu Ser Val Glu Arg Tyr Ile Gln Thr Gln Glu Pro Gly Gly
115 120 125
Leu Ala Val Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Val Trp Val Arg Asn
130 135 140
Trp Gln Glu Lys Asp Val Tyr Arg Gln Ser Ser Arg Gln Leu Val Ala
145 150 155 160
Ser Arg His Pro Asp Trp Pro Ser Asp Arg Val Met Lys Gln Ala Gln
165 170 175
Tyr Glu Phe Glu Phe Ala Ala Arg Gln Phe Met Leu Asn Thr Leu Arg
- 110 031986
Tyr Val
Pro Asp
210 Gly Arg 225
Leu Trp
Thr Leu
Arg Glu
Pro Val
290
Leu Ser 305
Gly Ser
Met Glu
Pro Tyr
Gln Cys
370
Thr Phe 385
Thr Pro
Asp Leu
Trp Gly
Ala Ser
450
Val Ala
465
180 Lys Ala 195
Cys Tyr
Cys Pro
Ala Glu
Ala Ser
260
Ala Leu
275
Tyr Val
Gln Val
Ala Gly
Thr Cys
340
Ile Val
355
His Gly
Leu His
Ser Glu
Asn Tyr
420
Gly Glu
435
Arg Ala
Val Ala
Val Arg
Asn His
Asp Val
230
Ser Thr
245
Ser Val
Arg Val
Phe Thr
Asp Leu
310
Val Ile 325
Gln Tyr
Asn Val
His Gly
Leu Asn
390
Pro Gln
405
Leu Gln
Gln Cys
Trp Ala
Leu Thr
470
Pro Gln
200
Asp Tyr 215
Glu Val
Ala Leu
His Ser
Ala His
280
Arg Pro
295
Ile Ser
Phe Trp
Leu Lys
Ser Trp
360
Arg Cys 375
Ala Ser
Leu Arg
Lys His
Gln Arg
440 Gly Ser 455
Trp Thr
185
His Leu
Val Gln
Ala Arg
Phe Pro
250 Arg Asn 265
Thr His
Thr Tyr
Thr Ile
Gly Asp
330
Asn Tyr 345
Ala Thr
Val Arg
Ser Phe
Pro Glu
410 Phe Arg 425
Asn Tyr
His Leu
Leu
Trp Gly
Asn Trp
220 Asn Asp 235
Ser Val
Phe Val
His Ala
Thr Arg
300
Gly Glu
315
Ser Glu
Leu Thr
Gln Tyr
Arg Asn
380
Arg Leu 395
Gly Gln
Cys Gln
Lys Gly
Thr Ser
460
190 Phe Tyr 205
Glu Ser
Gln Leu
Tyr Leu
Ser Phe
270
Asn His 285
Gly Leu
Ser Ala
Asp Ala
Gln Leu
350
Cys Ser
365
Pro Ser
Val Pro
Leu Ser
Cys Tyr
430
Ala Ala
445
Leu Leu
Leu Phe
Tyr Thr
Ala Trp
240 Asp Glu 255
Arg Val
Ala Leu
Thr Gly
Ala Leu
320
Ser Ser
335
Leu Val
Trp Thr
Ala Asn
Gly His
400
Glu Ala 415
Leu Gly
Gly Asn
Gly Leu <210> 19 <211> 412 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <220>
<223> гиалуронидаза 3 <400> 19
Met 1 Ile Met His Leu 5 Gly Leu Met Met Val 10 Val Gly Leu Thr Leu 15 Cys
Leu Met His Gly Gln Ala Leu Leu Gln Val Pro Glu His Pro Phe Ser
20 25 30
Val Val Trp Asn Val Pro Ser Ala Arg Cys Lys Ala His Phe Gly Val
35 40 45
His Leu Pro Leu Asp Ala Leu Gly Ile Val Ala Asn His Gly Gln His
50 55 60
Phe His Gly Gln Asn Ile Ser Ile Phe Tyr Lys Asn Gln Phe Gly Leu
65 70 75 80
Tyr Pro Tyr Phe Gly Pro Arg Gly Thr Ala His Asn Gly Gly Ile Pro
85 90 95
Gln Ala Val Ser Leu Asp His His Leu Ala Arg Ala Ala His Gln Ile
100 105 110
Leu His Ser Leu Gly Ser Ser Phe Ala Gly Leu Ala Val Leu Asp Trp
- 111 031986
Glu Glu
130 Val Tyr 145 Leu Asp
Ala Ala
Arg Pro
Gly Trp
210
Ile Thr
225
Ala Leu
Arg Gln
Leu Leu
Thr His
290
Thr Ile
305
Gly Asp
Asp Tyr
Ala Asp
Ala Arg
370
Asp Asp
385
Gly Trp
115
Trp Tyr
Leu Ala
Pro Gln
Arg Ala
180 Ser Gly 195
His Lys
Thr Gln
Phe Pro
Ala Phe
260
Glu His 275
Arg Ser
Gly Val
Leu Ser
Leu Val
340
Met Ala
355
Lys Asp
Ser Leu
Ala Gly
Pro Leu
Ala Ser
150
Glu Gln
165
Leu Met
Leu Trp
Met Ala
Asn Thr
230
Ser Ile 245
Val Arg
Ser His
Ser Gly
Ser Ala
310
Phe Ser
325
Gly Thr
Cys Ser
Pro Gly
Gly Ala
390
Pro Thr
405
120 Trp Ala 135 Trp Val
Leu His
Glu Tyr
Gly Phe
200
Ser Asn 215
Gln Leu
Tyr Leu
His Arg
Pro Leu
280
Arg Phe 295
Ala Leu
Ser Ser
Leu Gly
His Gln
360
Gln Met
375
Trp Asn
Cys Leu
Gly Asn
Trp Thr
Lys Ala
170
Thr Leu 185
Tyr Arg
Tyr Thr
Arg Trp
Pro Pro
250
Leu Glu 265
Pro Val
Leu Ser
Gly Thr
Glu Glu
330 Pro Tyr 345
Arg Cys
Glu Ala
Ser Phe
Glu Pro
410
Trp Gly
140
Gln Gln
155
His Thr
Gln Leu
Tyr Pro
Gly His
220
Leu Trp 235
Arg Leu
Glu Ala
Leu Ala
Leu Asp
300 Ala Gly 315
Lys Cys
Val Ile
His Gly
Phe Leu
380 Arg Cys 395
Lys Pro
125
Pro His
Met Phe
Ser Phe
Gly Arg
190 Ala Cys 205
Cys His
Ala Ala
Pro Leu
Phe Arg
270 Tyr Ser 285
Asp Leu
Val Val
Trp Arg
Asn Val
350
His Gly
365
His Leu
His Cys
Arg Gln
Pro Gly
160
Glu Gln
175
Thr Leu
Gly Asn
Ala Ala
Ser Ser
240 Ala Tyr 255
Val Ala
Arg Leu
Met Gln
Leu Trp
320
Leu His 335
Thr Lys
Arg Cys
Gln Pro
Tyr Ser
400 <210> 20 <211> 435 <212> БЕЛОК <213> Sus scrofa <220>
<223> гиалуронидаза <400> 20
Met 1 Ala Ala His Leu 5 Leu Pro Ile Cys Thr 10 Leu Phe Leu Asn Leu 15 Leu
Ser Val Ala Gln Gly Ser Arg Asp Pro Val Val Leu Asn Arg Pro Phe
20 25 30
Thr Thr Ile Trp Asn Ala Asn Thr Gln Trp Cys Leu Lys Arg His Gly
35 40 45
Val Asp Val Asp Val Ser Val Phe Glu Val Val Val Asn Pro Gly Gln
50 55 60
Thr Phe Arg Gly Pro Asn Met Thr Ile Phe Tyr Ser Ser Gln Leu Gly
65 70 75 80
Thr Tyr Pro Tyr Tyr Thr Ser Ala Gly Glu Pro Val Phe Gly Gly Leu
85 90 95
Pro Gln Asn Ala Ser Leu Asp Val His Leu Asn Arg Thr Phe Lys Asp
100 105 110
Ile Leu Ala Ala Met Pro Glu Ser Asn Phe Ser Gly Leu Ala Val Ile
- 112 031986
115
Asp Trp Glu Ala Trp
130
Asp Ile Tyr Arg Gln
145
Asp Trp Pro Ala Pro
165
Glu Ala Ala Gln Thr
180
Leu Arg Pro His Gly
195
Asn Tyr Asp Phe Gln
210
Val Ser Ala Gln Asn
225
Ala Leu Tyr Pro Ser
245
Lys Thr Gln Leu Tyr
260
Ala Ala Ala Ala Gly
275
Ile Phe His Asp Met
290
His Ser Leu Gly Glu
305
Trp Val Ser Trp Glu
325
Lys Glu Tyr Val Asp
340
Ser Gly Ala Leu Leu
355
Cys Val Arg Arg Pro
370
Ser Ser Phe Ser Ile
385
Gln Gly Ala Leu Ser
405
Gln Cys Arg Cys Tyr
420
Gly Thr Arg
435
120
Arg Pro Arg Trp Ala
135
Arg Ser Arg Ala Leu
150
Trp Val Glu Ala Ala
170
Trp Met Ala Gly Thr
185
Leu Trp Gly Phe Tyr
200
Ser Ser Asn Tyr Thr
215
Asp Gln Leu Gly Trp
230
Ile Tyr Leu Pro Ser
250
Val Gln His Arg Val
265
Asp Pro Asn Leu Pro
280
Thr Asn Arg Leu Leu
295
Ser Ala Ala Gln Gly
310
Asn Thr Arg Thr Lys
330
Thr Thr Leu Gly Pro
345
Cys Ser Gln Ala Val
360
Ser His Thr Glu Ala
375
Lys Pro Thr Pro Gly
390
Leu Lys Asp Arg Val
410
Pro Gly Trp Arg Gly
425
125
Phe Asn Trp Asp Ala
140
Val Gln Lys Gln His
155
Ala Gln Asp Gln Phe
175 Leu Lys Leu Gly Gln
190
Gly Phe Pro Asp Cys
205
Gly Gln Cys Pro Pro
220
Leu Trp Gly Gln Ser
235
Ala Leu Glu Gly Thr
255 Asn Glu Ala Phe Arg
270
Val Leu Pro Tyr Ala
285
Ser Arg Glu Glu Leu
300
Ala Ala Gly Val Val
315
Glu Ser Cys Gln Ser
335 Phe Ile Leu Asn Val
350
Cys Ser Gly His Gly
365
Leu Pro Ile Leu Asn
380
Gly Gly Pro Leu Thr
395
Gln Met Ala Glu Glu
415 Thr Trp Cys Glu Gln
430
Lys
Pro
160
Gln
Thr
Tyr
Gly
Arg
240
Asn
Val
Gln
Glu
Leu
320
Ile
Thr
Arg
Pro
Leu
400
Phe
Gln <210> 21 <211> 419 <212> БЕЛОК <213> Sus scrofa <220>
<223> гиалуронидаза 3 <400> 21
Met 1 Thr Met Gln Leu Gly 5 Leu Ala Leu Val 10 Leu Gly Val Ala Met 15
Leu Gly Cys Gly Gln Pro Leu Leu Arg Ala Pro Glu Arg Pro Phe
20 25 30
Val Leu Trp Asn Val Pro Ser Ala Arg Cys Lys Ala Arg Phe Gly
35 40 45
His Leu Pro Leu Glu Ala Leu Gly Ile Thr Ala Asn His Gly Gln
50 55 60
Phe His Gly Gln Asn Ile Thr Ile Phe Tyr Lys Ser Gln Leu Gly
65 70 75
Tyr Pro Tyr Phe Gly Pro Arg Gly Thr Ala His Asn Gly Gly Ile
Cys
Cys
Val
Arg
Leu
Pro
- 113 031986
Gln Ala
His Arg
Glu Glu
130
Tyr Gln
145
Asp Pro
Ala Arg
Pro His
Trp His
210
Leu Ala 225
Leu Phe
Gln Ala
Val Gly
His Arg
290
Ile Gly
305
Asp Leu
Tyr Leu
Ala Met
Trp Gln
370
Gly Ser 385
Trp Ala
Glu Ala
Val Ser
100
Ser Leu
115
Trp Cys
Ala Ala
Gln Glu
Ala Leu
180 Gly Leu 195
Gly Thr
Arg Asn
Pro Ser
Phe Val
260
His Pro
275
Asn Ser
Val Ser
Ser Phe
Val Gly
340 Ala Cys 355
Asp Pro
Pro Gly
Gly Pro
Thr
Leu Asp
Arg Pro
Pro Leu
Ser Cys
150
Gln Leu 165
Met Glu
Trp Gly
Ala Ser
Thr Gln
230 Ile Tyr 245
Arg Tyr
His Pro
Gly Arg
Ala Ala
310
Ser Ser 325
Thr Leu
Ser His
Gly Gln
Ala Trp
390 Thr Cys 405
His His
Gly Phe
120 Trp Ala 135 Ala Trp
Cys Lys
Asp Thr
Phe Tyr
200 Asn Tyr 215
Leu Tyr
Leu Pro
Arg Leu
Leu Pro
280
Phe Leu 295
Leu Gly
Ser Glu
Gly Pro
Gln Arg
360 Leu Lys 375
Glu Ser
Gln Glu
Leu Ala 105
Thr Gly
Gly Asn
Ala Gln
Ala Arg
170 Leu Arg 185
His Tyr
Thr Gly
Trp Leu
Pro Gly
250
Glu Glu 265
Val Leu
Ser Gln
Ala Ser
Glu Glu
330 Tyr Val 345
Cys His
Val Phe
Phe Ser
Pro Arg
410
Arg Ala
Leu Ala
Trp Gly
140 Arg Val 155
Ala Gly
Leu Gly
Pro Ala
His Cys
220
Trp Ala
235
Leu Pro
Ala Phe
Ala Tyr
Asp Glu
300 Gly Val 315
Cys Trp
Ile Asn
Gly His
Leu His
380
Cys Arg
395
Pro Glu
Ala Tyr
110
Val Leu 125
Arg Arg
Tyr Pro
Phe Glu
Arg Met
190
Cys Gly
205
His Ala
Ala Ser
Pro Ala
Arg Val
270
Ala Arg
285
Leu Val
Val Leu
His Leu
Val Thr
350
Gly Arg
365
Leu His
Cys Tyr
Leu Gly
Gln Ile
Asp Trp
Gln Ala
Asn Leu
160
Glu Ala
175
Leu Arg
Asn Gly
Ala Ala
Ser Ala
240
Tyr His
255
Ala Leu
Leu Thr
Gln Thr
Trp Gly
320 Arg Gly 335
Arg Ala
Cys Ala
Pro Gly
Trp Gly
400
Pro Glu
415 <210> 22 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <220>
<223> гиалуронидаза 1 <400> 22
Met 1 Lys Pro Phe Ser 5 Pro Glu Val Ser Pro 10 Asp Pro Cys Pro Ala 15 Thr
Ala Ala His Leu Leu Arg Thr Tyr Thr Leu Phe Leu Thr Leu Leu Glu
20 25 30
Leu Ala Gln Gly Cys Arg Gly Ser Met Val Ser Asn Arg Pro Phe Ile
35 40 45
Thr Val Trp Asn Ala Asp Thr His Trp Cys Leu Lys Asp His Gly Val
50 55 60
Asp Val Asp Val Ser Val Phe Asp Val Val Ala Asn Lys Glu Gln Asn
- 114 031986
Phe Gln
Tyr Pro
Gln Asn
Lys Ala
130 Trp Glu 145
Ile Tyr
Trp Pro
Ala Ala
Arg Pro
210 Tyr Asp 225
His Asp
Leu Tyr
Ser Gln
Leu Val
290
Phe Tyr
305
Ser Leu
Ile Ser
Ala Tyr
Ala Ala
370 Val Arg 385
Ser Phe
Gly Thr
Cys Arg
Met
Gly Pro
Tyr Tyr
100
Ala Ser
115
Ala Met
Ala Trp
Gln Gln
Glu Thr
180
Glu Ala
195
Arg Gly
Phe Leu
Gln Asn
Pro Ser
260
Met Tyr
275
Ser Arg
Glu Lys
Gly Glu
Ser Glu
340
Met Asp
355
Leu Leu
His Pro
Ser Ile
Leu Ser
420
Cys Tyr
435
Asn Met
Thr Pro
Leu Val
Pro Glu
Arg Pro
150
Arg Ser
165
Leu Val
Trp Met
Leu Trp
Ser Pro
230 Asp Gln 245 Ile Tyr
Val Arg
Asp Pro
Thr Asp
310
Ser Ala 325
Lys Thr
Ser Thr
Cys Ser
Ser Tyr
390
Glu Pro
405
Leu Lys
Arg Gly
Thr Ile
Thr Gly
Thr His
120 Pro Asp 135
Arg Trp
Met Glu
Glu Ala
Ala Gly
200
Gly Tyr
215
Asn Tyr
Leu Gly
Leu Pro
Tyr Arg
280
His Val
295
Tyr Leu
Ala Gln
Ser Thr
Leu Gly
360
Glu Ala 375
Pro Glu
Thr His
Asp Arg
Trp Ser
440
Phe Tyr
Glu Pro 105
Leu Ala
Phe Ser
Ala Phe
Leu Val
170
Glu Ala 185
Thr Leu
Tyr Gly
Thr Gly
Trp Leu
250
Ala Ala 265
Val Gln
Pro Ile
Leu Pro
Gly Ala
330
Lys Glu
345
Pro Phe
Leu Cys
Ala Leu
Asp Gly
410
Ala Gln
425
Gly Glu
Arg Glu
Val Phe
His Ala
Gly Leu
140
Asn Trp 155
Arg Ala
Gln Gly
Gln Leu
Phe Pro
220 Gln Cys 235
Trp Asn
Leu Met
Glu Ala
Met Pro
300
Leu Glu 315
Ala Gly
Ser Cys
Ile Leu
Ser Gly
380
Leu Thr 395
Arg Pro
Met Ala
Trp Cys
Glu Leu
Gly Gly
110
Phe Gln
125
Ala Val
Asp Ser
Glu His
Gln Phe
190 Gly Gln 205
Asp Cys
Ser Leu
Gln Ser
Gly Thr
270
Phe Arg
285
Tyr Val
Glu Leu
Ala Val
Gln Ala
350
Asn Val
365
Arg Gly
Leu Ser
Leu Ser
Met Lys
430
Lys Lys
445
Gly Thr 95
Leu Pro
Asp Ile
Ile Asp
Lys Asp
160 Pro Asp 175
Gln Glu
Val Leu
Tyr Asn
Ser Ile
240
Tyr Ala 255
Gly Lys
Leu Ala
Gln Ile
Glu His
320 Leu Trp 335
Ile Lys
Thr Ser
Arg Cys
Pro Ala
400 Leu Lys 415
Phe Lys
Gln Asp <210> 23 <211> 473 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <220>
<223> гиалуронидаза 2 <400> 23
Met Arg Ala Gly Leu Gly Pro Ile Ile
5
Val Ala Trp Ala Ser Glu Leu Lys Pro
Thr Leu Ala Leu Val Leu Glu
15
Thr Ala Pro Pro Ile Phe Thr
- 115 031986
Gly Arg
Pro Arg
Thr Pro
Asp Arg
His Gly
Leu Lys
Leu Ala
130 Trp Gln 145
Ser Arg
Tyr Glu
Tyr Val
Pro Asp
210 Gly Arg 225
Leu Trp
Thr Leu
Gln Glu
Pro Val
290
Leu Asn 305
Gly Ser
Met Glu
Pro Tyr
Gln Cys
370
Thr Phe 385
Thr Pro
Asp Leu
Trp Gly
Ala Ser
450
Val Ala
465
Pro Phe
His Lys
Asn Glu
Leu Gly
Gly Val
100
Glu Ala
115
Val Ile
Glu Lys
His Pro
Phe Glu
180 Lys Ala 195
Cys Tyr
Cys Pro
Ala Glu
Ala Ser
260
Ala Leu 275
Tyr Val
Gln Met
Ala Gly
Asn Cys
340
Ile Val
355
His Gly
Leu His
Ser Glu
Ser Tyr
420
Gly Glu 435
Arg Ala
Met Thr
Val Val
Val Pro
Gly Phe
Leu Tyr
Pro Gln
Val Glu
Asp Trp
Asp Val
150 Asp Trp 165
Phe Ala
Val Arg
Asn His
Asp Val
230
Asn Thr
245
Ser Lys
Arg Val
Phe Thr
Asp Leu
310
Val Ile
325
Gln Asn
Asn Val
His Gly
Leu Ser
390
Pro Gln
405
Leu Gln
Gln Cys
Trp Ala
Leu Thr
470
Ala Trp
Leu Asp
Phe Asn
Pro Arg
Asn Gly
Arg Tyr
120
Glu Glu
135
Tyr Arg
Pro Ser
Ala Arg
Pro Gln
200
Asp Tyr 215
Glu Val
Ala Leu
His Ser
Ala His
280
Arg Pro 295
Ile Ser
Phe Trp
Leu Lys
Ser Trp
360 Arg Cys 375
Pro Ser
Leu Arg
Met His
Gln Trp
440
Gly Ala
455
Trp Thr
Asn Val
Leu Arg
Gln Asn
Phe Asp
Ser Leu
105
Ile Gln
Trp Arg
Gln Ser
Asp Arg
170
Gln Phe 185
His Leu
Val Gln
Ala Gln
Phe Pro
250 Arg Asn 265
Thr His
Thr Tyr
Thr Ile
Gly Asp
330
Lys Tyr 345
Ala Thr
Val Arg
Ser Phe
Pro Glu
410 Phe Arg 425
Asn His
His Leu
Leu
Pro Thr
Ala Phe
Ile Thr 75
Ala Ala
Cys Ala
Thr Gln
Pro Val
140 Ser Arg 155
Ile Val
Met Leu
Trp Gly
Asn Trp
220 Asn Asp 235
Ser Val
Phe Val
His Ala
Thr Arg
300
Gly Glu
315
Ser Val
Leu Thr
Gln Tyr
Arg Asn
380
Arg Leu 395
Gly Glu
Cys His
Lys Arg
Ala Ser
460
Gln Glu 45
Asp Val
Thr Phe
Gly Met
His Leu
110
Glu Pro
125
Trp Val
Gln Leu
Lys Gln
Asn Thr
190 Phe Tyr 205
Asp Ser
Gln Leu
Tyr Leu
Ser Phe
270
Asn His
285
Arg Leu
Ser Ala
Tyr Ala
Gln Thr
350
Cys Ser 365
Pro Ser
Val Pro
Leu Ser
Cys Tyr
430
Ala Ala
445
Leu Leu
Cys Ala
Glu Ala
Tyr Tyr
Ser Val
Pro Met
Ala Gly
Arg Asn
Val Ala
160
Ala Gln
175
Leu Arg
Leu Phe
Tyr Thr
Ala Trp
240
Asp Lys
255
Arg Val
Ala Leu
Thr Glu
Ala Leu
320
Ser Ser
335
Leu Val
Trp Thr
Ala Ser
Gly Arg
400
Glu Asp
415
Leu Gly
Gly Asp
Gly Leu <210> 24 <211> 412 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus
- 116 031986 <220>
<223> гиалуронидаза 3 <400> 24
Met 1 Ile Thr Gln Leu 5 Gly Leu Thr Leu Val 10 Val Gly Leu Thr Leu 15 Cys
Leu Val His Val Gln Ala Leu Leu Gln Val Pro Glu Phe Pro Phe Ser
20 25 30
Val Leu Trp Asn Val Pro Ser Ala Arg Cys Lys Thr Arg Phe Gly Val
35 40 45
His Leu Pro Leu Asp Ala Leu Gly Ile Ile Ala Asn His Gly Gln Arg
50 55 60
Phe His Gly Gln Asn Ile Thr Ile Phe Tyr Lys Asn Gln Phe Gly Leu
65 70 75 80
Tyr Pro Tyr Phe Gly Pro Arg Gly Thr Ala His Asn Gly Gly Ile Pro
85 90 95
Gln Ala Val Ser Leu Asp His His Leu Ala Gln Ala Ala His Gln Ile
100 105 110
Leu His Asn Leu Gly Ser Ser Phe Ala Gly Leu Ala Val Leu Asp Trp
115 120 125
Glu Glu Trp Tyr Pro Leu Trp Ala Gly Asn Trp Gly Thr His Arg Gln
130 135 140
Val Tyr Gln Ala Ala Ser Trp Ala Trp Ala Gln Gln Met Phe Pro Asp
145 150 155 160
Leu Asn Pro Gln Glu Gln Leu His Lys Ala Gln Thr Gly Phe Glu Gln
165 170 175
Ala Ala Arg Ala Leu Met Glu His Thr Leu Arg Leu Gly Gln Met Leu
180 185 190
Arg Pro His Gly Leu Trp Gly Phe Tyr Arg Tyr Pro Val Cys Gly Asn
195 200 205
Gly Trp His Asn Met Ala Ser Asn Tyr Thr Gly His Cys His Pro Ala
210 215 220
Ile Ile Thr Arg Asn Thr Gln Leu Arg Trp Leu Trp Ala Ala Ser Ser
225 230 235 240
Ala Leu Phe Pro Ser Ile Tyr Leu Pro Pro Arg Leu Pro Pro Ala Tyr
245 250 255
His Gln Thr Phe Val Arg His Arg Leu Glu Glu Ala Phe Arg Val Ala
260 265 270
Leu Thr Gly His Ala His Pro Leu Pro Val Leu Ala Tyr Val Arg Leu
275 280 285
Thr His Arg Ser Ser Gly Arg Phe Leu Ser Leu Asp Asp Leu Met Gln
290 295 300
Thr Ile Gly Val Ser Ala Ala Leu Gly Ala Ala Gly Val Val Leu Trp
305 310 315 320
Gly Asp Leu Ser Val Ser Ser Ser Glu Glu Glu Cys Trp Arg Leu His
325 330 335
Asp Tyr Leu Val Gly Thr Leu Gly Pro Tyr Val Ile Asn Val Thr Lys
340 345 350
Ala Ala Thr Ala Cys Ser His Gln Arg Cys His Gly His Gly Arg Cys
355 360 365
Ser Trp Lys Asp Pro Gly Gln Met Glu Ala Phe Leu His Leu Gln Pro
370 375 380
Asp Asp Asn Leu Gly Ala Trp Lys Ser Phe Arg Cys Arg Cys Tyr Leu
385 390 395 400
Gly Trp Ser Gly Pro Thr Cys Leu Glu Pro Lys Pro
405 410
<210> 25 <211> 545 <212> БЕЛОК <213> Oryctolagus cuniculus
- 117 031986 <220>
<223> Предшественник кроличьей PH20 <400> 25
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Gly Ser Ala Val Glu
1 5 10 15
Leu Ser Gly Val Phe Gln Ile Val Phe Ile Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Ala Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Thr Glu Phe Cys Leu Gly Lys Ser
50 55 60
Gly Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Leu Phe Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Lys Asn Lys Thr Gly Gln Gly Ile Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Pro His Thr Gly Ala Ile Val His Gly
100 105 110
Arg Ile Pro Gln Leu Gly Pro Leu Gln Gln His Leu Thr Lys Leu Arg
115 120 125
Gln Glu Ile Leu Tyr Tyr Met Pro Lys Asp Asn Val Gly Leu Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Leu Pro Thr Trp Leu Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Ile Tyr Arg Ile Lys Ser Ile Glu Leu Val Lys Ser Gln His
165 170 175
Pro Gln Tyr Asn His Ser Tyr Ala Thr Glu Lys Ala Lys Arg Asp Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Met Glu Glu Thr Leu Lys Leu Gly Arg
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Asp Lys Pro Asn Leu Tyr Lys Gly Ser Cys Phe
225 230 235 240
Asp Ile Glu Lys Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Lys Glu
245 250 255
Ser Thr Ala Leu Phe Pro Ser Val Tyr Leu Thr Ser Arg Ala Arg Ser
260 265 270
Ala Thr Ala Leu Ser Lys Leu Tyr Val Val Arg Asn Arg Val His Glu
275 280 285
Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile Pro Asp Asp Lys Ser Pro Leu Pro Asn
290 295 300
Phe Val Tyr Thr Arg Leu Val Phe Thr Asp Gln Ile Phe Gln Phe Leu
305 310 315 320
Ser His His Asp Leu Val Tyr Thr Ile Gly Glu Ile Val Ala Leu Gly
325 330 335
Ala Ser Gly Ile Val Val Trp Gly Ser Gln Ser Leu Ala Arg Ser Met
340 345 350
Lys Ser Cys Leu His Leu Asp Asn Tyr Met Lys Thr Ile Leu Asn Pro
355 360 365
Tyr Leu Ile Asn Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Asn Gln Val Leu
370 375 380
Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys Thr Arg Lys Asn Trp Asn Pro Asn Asp
385 390 395 400
Tyr Leu His Leu Asn Pro Gly Asn Phe Ala Ile Gln Leu Gly Ser Asn
405 410 415
Gly Thr Tyr Lys Val Asp Gly Lys Pro Thr Leu Thr Asp Leu Glu Gln
420 425 430
Phe Ser Lys Asn Phe Gln Cys Ser Cys Tyr Thr Asn Leu Asn Cys Lys
435 440 445
Glu Arg Thr Asp Met Asn Asn Val Arg Thr Val Asn Val Cys Ala Val
450 455 460
- 118 031986
Glu Asn Val Cys Ile Asp Thr Asn Val Gly Pro Gln Ala Val Thr Tyr
465 470 475 480
Ala Pro Lys Glu Lys Lys Asp Val Ala His Ile Leu Ser Asn Thr Thr
485 490 495
Ser Ile Asn Ser Ser Thr Thr Met Ser Leu Pro Phe Pro Arg Lys His
500 505 510
Val Ser Gly Cys Leu Leu Val Leu Cys Met Tyr Ser Gln Tyr Leu Asn
515 520 525
Ile Cys Tyr Arg Leu Val Ala Ile Gly Ile Gln His Gly Tyr Tyr Leu
530 535 540
Lys
545 <210> 26 <211> 476 <212> БЕЛОК <213> Ovis aries <220>
<223> гиалуронидаза 2 <400> 26
Met 1 Trp Thr Gly Leu 5 Gly Pro Ala Val Thr 10 Leu Ala Leu Val Leu 15 Val
Val Ala Trp Ala Thr Glu Leu Lys Pro Thr Ala Pro Pro Ile Phe Thr
20 25 30
Gly Arg Pro Phe Val Val Ala Trp Asp Val Pro Thr Gln Asp Cys Gly
35 40 45
Pro Arg His Lys Met Pro Leu Asp Pro Lys Asp Met Lys Ala Phe Asp
50 55 60
Val Gln Ala Ser Pro Asn Glu Gly Phe Val Asn Gln Asn Ile Thr Ile
65 70 75 80
Phe Tyr Arg Asp Arg Leu Gly Met Tyr Pro His Phe Asn Ser Val Gly
85 90 95
Arg Ser Val His Gly Gly Val Pro Gln Asn Gly Ser Leu Trp Val His
100 105 110
Leu Glu Met Leu Lys Gly His Val Glu His Tyr Ile Arg Thr Gln Glu
115 120 125
Pro Ala Gly Leu Ala Val Ile Asp Trp Glu Asp Trp Arg Pro Val Trp
130 135 140
Val Arg Asn Trp Gln Asp Lys Asp Val Tyr Arg Arg Leu Ser Arg Gln
145 150 155 160
Leu Val Ala Ser His His Pro Asp Trp Pro Pro Glu Arg Ile Val Lys
165 170 175
Glu Ala Gln Tyr Glu Phe Glu Phe Ala Ala Arg Gln Phe Met Leu Glu
180 185 190
Thr Leu Arg Phe Val Lys Ala Phe Arg Pro Arg His Leu Trp Gly Phe
195 200 205
Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His Asp Tyr Val Gln Asn Trp Glu
210 215 220
Thr Tyr Thr Gly Arg Cys Pro Asp Val Glu Val Ser Arg Asn Asp Gln
225 230 235 240
Leu Ser Trp Leu Trp Ala Glu Ser Thr Ala Leu Phe Pro Ser Val Tyr
245 250 255
Leu Glu Glu Thr Leu Ala Ser Ser Thr His Gly Arg Asn Phe Val Ser
260 265 270
Phe Arg Val Gln Glu Ala Leu Arg Val Ala Asp Val His His Ala Asn
275 280 285
His Ala Leu Pro Val Tyr Val Phe Thr Arg Pro Thr Tyr Ser Arg Gly
290 295 300
Leu Thr Gly Leu Ser Glu Met Asp Leu Ile Ser Thr Ile Gly Glu Ser
305 310 315 320
- 119 031986
Ala Ala
Thr Thr
Ser Leu
Ser Trp
370
Asn Ala
385
Pro Ser
Ser Trp
Tyr Leu
Ala Gly
450
Leu Ala
465
Leu Gly
Ser Asn
340
Val Pro 355
Ala Gln
His Thr
His Ala
Ala Asp
420 Gly Trp 435 Gly Ala
Val Ala
Ala Ala
325
Glu Thr
Tyr Val
Cys His
Phe Leu
390
Pro Asp
405
Arg Asn
Gly Gly
Ser Gly
Val Leu
470
Gly Val
Cys Arg
Val Asn
360
Gly His
375
His Leu
Glu Pro
His Leu
Glu Gln
440
Ala Trp
455
Ala Phe
Ile Leu
330
Arg Leu
345
Val Ser
Gly Arg
Ser Ala
Arg Leu
410
Gln Thr
425
Cys Gln
Ala Gly
Thr Trp
Trp Gly
Lys Asp
Trp Ala
Cys Val
380
Ser Ser
395
Arg Pro
His Phe
Trp Asp
Ser His
460
Thr Ser
475
Asp Ala
Tyr Leu
350
Ala Gln
365
Arg Arg
Phe Arg
Glu Gly
Arg Cys
430
Arg Arg
445
Leu Thr
Gly Phe
335
Thr Arg
Tyr Cys
Asp Pro
Leu Val
400
Glu Leu
415
Gln Cys
Arg Ala
Gly Leu <210> 27 <211> 114 <212> БЕЛОК <213> Ovis aries <220>
<223> PH20 частичная последовательность <400> 27
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Leu Ser Lys Ile
1 5 10 15
Ala Ser Val Glu Ser Pro Leu Pro Val Phe Val Tyr His Arg Pro Val
20 25 30
Phe Thr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Leu Ser Gln Gly Asp Leu Val Asn
35 40 45
Ser Val Gly Glu Ile Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Ile Met Trp
50 55 60
Gly Ser Leu Asn Leu Ser Leu Thr Met Gln Ser Cys Met Asn Leu Gly
65 70 75 80
Asn Tyr Leu Asn Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
85 90 95
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
100 105 110
Ile Arg
<210> 28 <211> 414 <212> БЕЛОК <213> Pongo pygmaeus <220>
<223> гиалуронидаза 3 <400> 28
Met Thr Thr Arg Leu Gly Pro Ala Leu Val Leu Gly Val Ala Leu Cys
1 5 10 15
Leu Gly Cys Gly Gln Pro Leu Pro Gln Val Pro Glu Arg Pro Phe Ser
20 25 30
Val Leu Trp Asn Val Pro Ser Ala His Cys Lys Ser Arg Phe Gly Val
- 120 031986
His Leu
Phe His
Tyr Pro
Gln Ala
His His
Glu Glu
130
Tyr Gln
145
Asp Pro
Ala Arg
Pro His
Trp His
210
Leu Ala 225
Leu Phe
Gln Ala
Val Gly
Ser Gly
290
Ser Ala 305
Leu Ser
Asp Thr
Cys Ser
Pro Gly
370
Gly Asp
385
Pro Thr
Pro Leu
Gly Gln
Tyr Phe
Leu Pro
100
Ser Leu
115
Trp Cys
Ala Ala
Gln Glu
Ala Leu
180 Gly Leu 195
Ser Met
Arg Asn
Pro Ser
Phe Val
260
His Leu 275
Arg Phe
Ala Leu
Ser Ser
Leu Gly
340
His Gln
355
Gln Met
Trp Lys
Cys Gln
Asn Ala
Asn Met
Gly Pro
Leu Asp
Arg Pro
Pro Leu
Ser Trp
150
Gln Leu 165
Met Glu
Trp Gly
Ala Ser
Thr Gln
230 Ile Tyr 245 Arg His
Pro Val
Leu Ser
Gly Ala
310
Glu Glu 325
Pro Tyr
Arg Cys
Glu Ala
Ser Phe
390
Glu Pro
405
Leu Gly 55
Thr Ile
Lys Gly
Arg His
Gly Phe
120 Trp Ala 135 Ala Trp
Tyr Lys
Asp Thr
Phe Tyr
200 Asn Tyr 215
Leu His
Leu Pro
Arg Leu
Leu Ala
280 Gln Asp 295
Ala Gly
Glu Cys
Gly Ile
His Gly
360
Phe Leu
375
Ser Cys
Arg Leu
Ile Ile
Phe Tyr
Thr Ala
Leu Ala
105
Ala Gly
Gly Asn
Ala Gln
Ala Tyr
170
Leu Arg
185
His Tyr
Thr Gly
Trp Leu
Pro Arg
250
Glu Glu
265
Tyr Val
Asp Leu
Val Val
Trp His
330
Asn Val
345
His Gly
His Leu
His Cys
Gly Pro
410
Ala Asn
Lys Asn 75
His Asn
Leu Ala
Pro Ala
Trp Gly
140
Gln Val
155
Thr Gly
Val Ala
Pro Ala
Arg Cys
220
Trp Ala
235
Leu Pro
Ala Phe
Arg Leu
Val Gln
300
Leu Trp
315
Leu His
Thr Arg
Arg Cys
Trp Pro
380
Tyr Trp
395
Lys Glu
Arg Gly
Gln Leu
Gly Gly
Ala Tyr
110
Val Leu 125
Arg Arg
Phe Pro
Phe Glu
Gln Ala
190
Cys Gly
205
His Ala
Ala Ser
Pro Ala
Arg Val
270
Thr His
285
Thr Ile
Gly Asp
Asp Tyr
Ala Ala
350 Ala Arg 365 Asp Gly
Gly Trp
Ala Val
Gln His
Gly Leu
Ile Pro
Gln Ile
Asp Trp
Arg Ala
Asp Leu
160
Gln Ala
175
Leu Arg
Asn Gly
Ala Thr
Ser Ala
240
His His
255
Ala Leu
Arg Arg
Gly Val
Leu Ser
320
Leu Val
335
Met Ala
Arg Asp
Ser Leu
Ala Gly
400 <210> 29 <211> 510 <212> БЕЛОК <213> Macaca fascicularis <220>
<223> Предшественник PH20 Cynomolgus monkey <400> 29
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Ile Ile Pro Asn Val Pro
- 121 031986
Phe Leu
Asn Glu
Ile Asn
Gly Tyr
Gly Ile
Gln Asp
130 Ile Asp 145
Lys Asp
Val Gln
Glu Lys
Ser Leu
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Val Ala
Ser Lys
290 Arg Leu 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val His
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
Ile Phe
Val Asn
Trp Ala
Pro Leu
Val Thr
Tyr Pro
100
Pro Gln
115
Ile Leu
Trp Glu
Val Tyr
Leu Ser
180
Ala Gly
195
Arg Pro
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu 275
Ile Pro
Val Phe
Ser Thr
Trp Gly
340 Asp Thr 355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420 Cys Ser 435 Asp Thr
Ala Ser
Tyr Asn
Ile Leu
500
Trp Asn
Asp Met
Gly Gln
Tyr Ile
Lys Val
Phe Tyr
Glu Trp
150 Lys Asn 165
Leu Pro
Lys Asp
Asn His
Tyr Arg
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Leu Gly
325
Ser Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Asp
405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Thr Ser
485
Phe Leu
Ala Pro
Ser Leu
Gly Val
Asp Leu
Ser Leu
120
Met Pro
135
Arg Pro
Arg Ser
Gln Ala
Phe Met
200 Leu Trp 215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Asn 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asp Trp
Ile Arg
Val Glu
Thr Asn
440
Val Asp
455
Pro Pro
Ser Ser
Ile Ile
Ser Glu
Phe Thr
Thr Ile
Thr Thr
105
Gln Asp
Val Asp
Thr Trp
Ile Glu
170 Thr Asp 185
Leu Glu
Gly Tyr
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Thr Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410 Asp Leu 425
Leu Ser
Val Cys
Val Glu
Thr Val
490
Ser Ser
505
Phe Cys
Leu Met
Phe Tyr
Gly Val
His Leu
Asn Leu
140 Ala Arg 155
Leu Val
Lys Ala
Thr Ile
Tyr Leu
220 Asn Gly 235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu 315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380
Ser Asp 395
Lys Gly
Glu Glu
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu 475
Ser Thr
Val Ala
Leu Gly
Gly Ser
Val Asp
Thr Val
110 Asp Lys 125
Gly Met
Asn Trp
Gln Gln
Lys Gln
190
Lys Leu 205
Phe Pro
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Val
Ser Arg
Ala Ser
Lys Ser
350 Tyr Ile 365 Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445 Asp Gly
Gly Ser
Thr Met
Ser Leu
510
Lys Phe
Pro Arg
Arg Leu 95
His Gly
Ser Lys
Ala Val
Lys Pro
160
Gln Asn
175
Glu Phe
Gly Arg
Asp Cys
Phe Asp
240
Glu Ser 255
Val Val
Arg Val
Tyr Ala
Glu Glu
320 Gly Ile 335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr 415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Pro Pro
480
Phe Ile
495 <210> 30 <211> 529
- 122 031986 <212> БЕЛОК <213> Cavia porcellus <220>
<223> Предшественник PH20 морской свинки <400> 30
Met 1 Gly Ala Phe Thr 5 Phe Lys His Ser Phe 10 Phe Gly Ser Phe Val 15 Glu
Cys Ser Gly Val Leu Gln Thr Val Phe Ile Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Ala Asp Lys Arg Ala Pro Pro Leu Ile Pro Asn Val Pro Leu
35 40 45
Leu Trp Val Trp Asn Ala Pro Thr Glu Phe Cys Ile Gly Gly Thr Asn
50 55 60
Gln Pro Leu Asp Met Ser Phe Phe Ser Ile Val Gly Thr Pro Arg Lys
65 70 75 80
Asn Ile Thr Gly Gln Ser Ile Thr Leu Tyr Tyr Val Asp Arg Leu Gly
85 90 95
Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Pro His Thr Gly Ala Ile Val His Gly Gly
100 105 110
Leu Pro Gln Leu Met Asn Leu Gln Gln His Leu Arg Lys Ser Arg Gln
115 120 125
Asp Ile Leu Phe Tyr Met Pro Thr Asp Ser Val Gly Leu Ala Val Ile
130 135 140
Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Thr Arg Asn Trp Arg Pro Lys
145 150 155 160
Asp Ile Tyr Arg Asn Lys Ser Ile Glu Leu Val Lys Ser Gln His Pro
165 170 175
Gln Tyr Asn His Ser Tyr Ala Val Ala Val Ala Lys Arg Asp Phe Glu
180 185 190
Arg Thr Gly Lys Ala Phe Met Leu Glu Thr Leu Lys Leu Gly Lys Ser
195 200 205
Leu Arg Pro Ser Ser Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr
210 215 220
Asn Thr His Phe Thr Lys Pro Asn Tyr Asp Gly His Cys Pro Pro Ile
225 230 235 240
Glu Leu Gln Arg Asn Asn Asp Leu Gln Trp Leu Trp Asn Asp Ser Thr
245 250 255
Ala Leu Tyr Pro Ser Val Tyr Leu Thr Ser Arg Val Arg Ser Ser Gln
260 265 270
Asn Gly Ala Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val His Glu Ser Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Leu Met Asp Asp Lys Asn Pro Leu Pro Ile Tyr Val Tyr Ile
290 295 300
Arg Leu Val Phe Thr Asp Gln Thr Thr Thr Phe Leu Glu Leu Asp Asp
305 310 315 320
Leu Val His Ser Val Gly Glu Ile Val Pro Leu Gly Val Ser Gly Ile
325 330 335
Ile Ile Trp Gly Ser Leu Ser Leu Thr Arg Ser Leu Val Ser Cys Ile
340 345 350
Gly Leu Glu Asn Tyr Met Lys Gly Thr Leu Leu Pro Tyr Leu Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Gly Gln Val Leu Cys Lys Asn Gln
370 375 380
Gly Ile Cys Thr Arg Lys Asp Trp Asn Thr Asn Thr Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Ala Thr Asn Phe Asp Ile Glu Leu Gln Gln Asn Gly Lys Phe Val
405 410 415
Val His Gly Lys Pro Ser Leu Glu Asp Leu Gln Glu Phe Ser Lys Asn
420 425 430
Phe His Cys Ser Cys Tyr Thr Asn Val Ala Cys Lys Asp Arg Leu Asp
435 440 445
- 123 031986
Val His 450 Asn Val Arg Ser Val 455 Asn Val Cys Thr Ala 460 Asn Asn Ile
Ile Asp Ala Val Leu Asn Phe Pro Ser Leu Asp Asp Asp Asp Glu
465 470 475
Pro Ile Thr Asp Asp Thr Ser Gln Asn Gln Asp Ser Ile Ser Asp
485 490 495
Thr Ser Ser Ala Pro Pro Ser Ser His Ile Leu Pro Lys Asp Leu
500 505 510
Trp Cys Leu Phe Leu Leu Ser Ile Phe Ser Gln His Trp Lys Tyr
515 520 525
Leu
Cys
Pro
480
Ile
Ser
Leu <210> 31 <211> 512 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <220>
<223> Предшественник крысиной PH20 <400> 31
Met Gly Glu Leu Gln Phe Lys Trp Leu Phe Trp Arg Ser Phe Ala
1 5 10 15
Ser Gly Gly Thr Phe Gln Thr Val Leu Ile Phe Leu Phe Ile Pro
20 25 30
Ser Leu Thr Val Asp Tyr Arg Ala Thr Pro Val Leu Ser Asp Thr
35 40 45
Phe Val Trp Val Trp Asn Val Pro Thr Glu Ala Cys Val Glu Asn
50 55 60
Thr Glu Pro Ile Asp Leu Ser Phe Phe Ser Leu Ile Gly Ser Pro
65 70 75
Lys Thr Ala Ile Gly Gln Pro Val Thr Leu Phe Tyr Val Asp Arg
85 90 95
Gly Asn Tyr Pro His Ile Asp Ala Gln Gln Thr Glu His His Gly
100 105 110
Ile Pro Gln Lys Gly Asp Leu Thr Thr His Leu Val Lys Ala Lys
115 120 125
Asp Val Glu Arg Tyr Ile Pro Thr Asp Lys Leu Gly Leu Ala Ile
130 135 140
Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Met Arg Asn Trp Thr Pro
145 150 155
Asp Ile Tyr Arg Asn Lys Ser Ile Glu Leu Val Gln Ala Ala Asp
165 170 175
Ala Ile Asn Ile Thr Glu Ala Thr Val Arg Ala Lys Ala Gln Phe
180 185 190
Gly Ala Ala Lys Glu Phe Met Glu Gly Thr Leu Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Ile Arg Pro Lys His Leu Trp Gly Phe Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Asn Asn Lys Phe Gln Val Asp Asn Tyr Asp Gly Gln Cys Pro Asp
225 230 235
Glu Lys Lys Arg Asn Asp Asp Leu Asp Trp Leu Trp Lys Glu Ser
245 250 255
Gly Leu Tyr Pro Ser Val Tyr Leu Lys Lys Asp Leu Lys Ser Ser
260 265 270
Lys Ala Thr Leu Tyr Val Arg Tyr Arg Val Leu Glu Ser Ile Arg
275 280 285
Ser Lys Val Ser Asp Glu Ser Asn Pro Val Pro Ile Phe Val Tyr
290 295 300
Arg Leu Val Phe Thr Asp His Val Ser Glu Tyr Leu Leu Glu Asp
305 310 315
Glu
Tyr
Thr
Val
Arg
Leu
Gly
Glu
Ile
Lys
160
Pro
Glu
His
Tyr
Val
240
Thr
Arg
Val
Ile
Asp
320
- 124 031986
Leu Val Asn Thr Ile 325 Gly Glu Ile Val Ala 330 Gln Gly Thr Ser Gly 335 Ile
Ile Ile Trp Asp Ala Met Ser Leu Ala Gln Arg Ser Ala Gly Cys Pro
340 345 350
Ile Leu Arg Gln Tyr Met Lys Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile Val Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Thr Leu Cys Lys Glu Lys
370 375 380
Gly Met Cys Ser Arg Lys Thr Glu Ser Ser Asp Ala Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asp Pro Ser Ser Phe Ser Ile Asn Val Thr Glu Ala Gly Lys Tyr Glu
405 410 415
Val Leu Gly Lys Pro Glu Val Lys Asp Leu Glu Tyr Phe Ser Glu His
420 425 430
Phe Lys Cys Ser Cys Phe Ser Lys Met Thr Cys Glu Glu Thr Ser Asp
435 440 445
Met Arg Ser Ile Gln Asp Val Asn Val Cys Met Gly Asp Asn Val Cys
450 455 460
Ile Lys Ala Thr Leu Gly Pro Asn Ser Ala Phe His Leu Leu Pro Gly
465 470 475 480
Lys Gly Leu Leu Leu Met Thr Thr Leu Ala His Ile Leu His His Leu
485 490 495
Pro His Asp Ile Phe Val Phe Pro Trp Lys Met Leu Val Ser Thr Pro
500 505 510
<210> 32 <211> 512 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <220>
<223> Предшественник мышиной PH20 <400> 32
Met Gly
Ser Gly
Ser Leu
Phe Leu
Asn Asp
Lys Thr
Gly Leu
Ile Pro
Asp Ile
130
Asp Trp
145
Asp Asn
Gly Leu
Glu Ala
Leu Arg
210
Glu Leu
Gly Thr
Thr Val 35
Trp Ile
Pro Ile
Ala Thr
Tyr Pro
100 Gln Arg 115
Glu His
Glu Glu
Tyr Arg
Ser Ile
180 Gly Arg 195
Pro Asn
Arg Phe
Phe Gln
Asp Tyr
Trp Asn
Asp Leu
Gly Gln
His Ile
Gly Asp
Tyr Ile
Trp Arg
150
Asn Lys
165
Thr Glu
Lys Phe
Gln Leu
Lys His
Thr Val
Arg Ala
Val Pro
Ser Phe
Pro Val
Asp Ala
Tyr Gln
120
Pro Asp
135
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
Met Glu
200
Trp Gly
215
Leu Phe
Leu Ile 25
Ala Pro
Thr Glu
Phe Ser
Thr Leu
Asn Gln
105
Ala His
Asp Lys
Trp Leu
Glu Leu
170 Gln Lys 185
Gly Thr
Tyr Tyr
Trp Gly
Phe Leu
Ile Leu
Arg Cys
Leu Ile
Phe Tyr
Ala Glu
Leu Arg
Leu Gly
140
Arg Asn
155
Val Gln
Ala Ile
Leu His
Leu Phe
220
Ser Phe
Leu Ile
Ser Asn
Val Gly
Gly Ser
Val Asp
His Tyr
110 Lys Ala 125
Leu Ala
Trp Lys
Ser Thr
Gln Gln
190 Leu Gly 205
Pro Asp
Val Glu
Pro Cys
Thr Thr
Asn Val
Pro Arg
Arg Leu
Gly Gly
Lys Thr
Ile Ile
Pro Lys
160
Asn Pro
175
Phe Glu
Lys Phe
Cys Tyr
- 125 031986
Asn Asn Lys Phe Gln Asp Pro Lys Tyr Asp Gly Gln Cys Pro Ala Val
225 230 235 240
Glu Lys Lys Arg Asn Asp Asn Leu Lys Trp Leu Trp Lys Ala Ser Thr
245 250 255
Gly Leu Tyr Pro Ser Val Tyr Leu Lys Lys Asp Leu Lys Ser Asn Arg
260 265 270
Gln Ala Thr Leu Tyr Val Arg Tyr Arg Val Val Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Val Gly Asn Ala Ser Asp Pro Val Pro Ile Phe Val Tyr Ile
290 295 300
Arg Leu Val Phe Thr Asp Arg Thr Ser Glu Tyr Leu Leu Glu Asp Asp
305 310 315 320
Leu Val Asn Thr Ile Gly Glu Ile Val Ala Leu Gly Thr Ser Gly Ile
325 330 335
Ile Ile Trp Asp Ala Met Ser Leu Ala Gln Arg Ala Ala Gly Cys Pro
340 345 350
Ile Leu His Lys Tyr Met Gln Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile Val Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Thr Leu Cys Asn Glu Lys
370 375 380
Gly Met Cys Ser Arg Arg Lys Glu Ser Ser Asp Val Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Ser His Phe Asp Ile Met Leu Thr Glu Thr Gly Lys Tyr Glu
405 410 415
Val Leu Gly Asn Pro Arg Val Gly Asp Leu Glu Tyr Phe Ser Glu His
420 425 430
Phe Lys Cys Ser Cys Phe Ser Arg Met Thr Cys Lys Glu Thr Ser Asp
435 440 445
Val Lys Asn Val Gln Asp Val Asn Val Cys Val Gly Asp Asn Val Cys
450 455 460
Ile Lys Ala Lys Val Glu Pro Asn Pro Ala Phe Tyr Leu Leu Pro Gly
465 470 475 480
Lys Ser Leu Leu Phe Met Thr Thr Leu Gly His Val Leu Tyr His Leu
485 490 495
Pro Gln Asp Ile Phe Val Phe Pro Arg Lys Thr Leu Val Ser Thr Pro
500 505 510
<210> 33 <211> 807 <212> БЕЛОК <213> Staphylococcus aureus <220>
<223> гиалуронидаза <400> 33
Met Thr Tyr Arg Ile Lys Lys Trp Gln Lys Leu Ser Thr Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Met Ala Gly Val Ile Thr Leu Asn Gly Gly Glu Phe Arg Ser Val
20 25 30
Asp Lys His Gln Ile Ala Val Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Pro Asp
35 40 45
Tyr Glu Lys Leu Arg Asn Thr Trp Leu Asp Val Asn Tyr Gly Tyr Asp
50 55 60
Lys Tyr Asp Glu Asn Asn Pro Asp Met Lys Lys Lys Phe Asp Ala Thr
65 70 75 80
Glu Lys Glu Ala Thr Asn Leu Leu Lys Glu Met Lys Thr Glu Ser Gly
85 90 95
Arg Lys Tyr Leu Trp Ser Gly Ala Glu Thr Leu Glu Thr Asn Ser Ser
100 105 110
His Met Thr Arg Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ala Glu Ala Met
115 120 125
- 126 031986
Arg Asn 130 Pro Lys Thr Thr Leu 135 Asn Thr Asp Glu Asn 140 Lys Lys Lys Val
Lys Asp Ala Leu Glu Trp Leu His Lys Asn Ala Tyr Gly Lys Glu Pro
145 150 155 160
Asp Lys Lys Val Lys Glu Leu Ser Glu Asn Phe Thr Lys Thr Thr Gly
165 170 175
Lys Asn Thr Asn Leu Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr Pro Lys
180 185 190
Ser Leu Thr Asn Thr Leu Ile Leu Leu Asn Asp Gln Phe Ser Asn Glu
195 200 205
Glu Lys Lys Lys Phe Thr Ala Pro Ile Lys Thr Phe Ala Pro Asp Ser
210 215 220
Asp Lys Ile Leu Ser Ser Val Gly Lys Ala Glu Leu Ala Lys Gly Gly
225 230 235 240
Asn Leu Val Asp Ile Ser Lys Val Lys Leu Leu Glu Cys Ile Ile Glu
245 250 255
Glu Asp Lys Asp Met Met Lys Lys Ser Ile Asp Ser Phe Asn Lys Val
260 265 270
Phe Thr Tyr Val Gln Asp Ser Ala Thr Gly Lys Glu Arg Asn Gly Phe
275 280 285
Tyr Lys Asp Gly Ser Tyr Ile Asp His Gln Asp Val Pro Tyr Thr Gly
290 295 300
Ala Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Gly Ile Ser Gln Met Met Pro Met
305 310 315 320
Ile Lys Glu Thr Pro Phe Asn Asp Lys Thr Gln Asn Asp Thr Thr Leu
325 330 335
Lys Ser Trp Ile Asp Asp Gly Phe Met Pro Leu Ile Tyr Lys Gly Glu
340 345 350
Met Met Asp Leu Ser Arg Gly Arg Ala Ile Ser Arg Glu Asn Glu Thr
355 360 365
Ser His Ser Ala Ser Ala Thr Val Met Lys Ser Leu Leu Arg Leu Ser
370 375 380
Asp Ala Met Asp Asp Ser Thr Lys Ala Lys Tyr Lys Lys Ile Val Lys
385 390 395 400
Ser Ser Val Glu Ser Asp Ser Ser Tyr Lys Gln Asn Asp Tyr Leu Asn
405 410 415
Ser Tyr Ser Asp Ile Asp Lys Met Lys Ser Leu Met Thr Asp Asn Ser
420 425 430
Ile Ser Lys Asn Gly Leu Thr Gln Gln Leu Lys Ile Tyr Asn Asp Met
435 440 445
Asp Arg Val Thr Tyr His Asn Lys Asp Leu Asp Phe Ala Phe Gly Leu
450 455 460
Ser Met Thr Ser Lys Asn Val Ala Arg Tyr Glu Ser Ile Asn Gly Glu
465 470 475 480
Asn Leu Lys Gly Trp His Thr Gly Ala Gly Met Ser Tyr Leu Tyr Asn
485 490 495
Ser Asp Val Lys His Tyr His Asp Asn Phe Trp Val Thr Ala Asp Met
500 505 510
Lys Arg Leu Ser Gly Thr Thr Thr Leu Asp Asn Glu Ile Leu Lys Asp
515 520 525
Thr Asp Asp Lys Lys Ser Ser Lys Thr Phe Val Gly Gly Thr Lys Val
530 535 540
Asp Asp Gln His Ala Ser Ile Gly Met Asp Phe Glu Asn Gln Asp Lys
545 550 555 560
Thr Leu Thr Ala Lys Lys Ser Tyr Phe Ile Leu Asn Asp Lys Ile Val
565 570 575
Phe Leu Gly Thr Gly Ile Lys Ser Thr Asp Ser Ser Lys Asn Pro Val
580 585 590
Thr Thr Ile Glu Asn Arg Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Leu Tyr Thr Asp
595 600 605
Asp Lys Gln Thr Thr Asn Ser Asp Asn Gln Glu Asn Asn Ser Val Phe
610 615 620
Leu Glu Ser Thr Asp Thr Lys Lys Asn Ile Gly Tyr His Phe Leu Asn
- 127 031986
625
Lys Pro
Glu Ile
Glu Val
Leu Tyr
690
Val Thr
705
Glu Ser
Asp Ile
Leu Lys
Glu Ser
770
Gly Tyr
785
Val His
Lys Ile
Asn Lys
660
Thr Gln
675
Pro Gly
Val Val
Val Trp
Asn Asn
740 Lys Lys 755
Thr Asn
Ser Ile
Phe Glu
630
Thr Val
645
Ser Gln
Lys His
Leu Ser
Lys Gln
710
Ala Gly
725
Thr Lys
Asp Asp
Ser Ala
Thr Asn
790
Leu Thr
805
Lys Lys
Lys Asp
Ser Asn
680
Lys Asp
695
Glu Asp
Val Asn
Val Glu
Asn Thr
760
Ser Asp
775
Lys Asn
Lys
Glu Ser
650
Thr Gln
665
Ser Asp
Val Phe
Asp Phe
Tyr Ser
730 Val Lys 745 Tyr Glu
Ile Glu
Thr Ser
635
His Thr
Lys Thr
Asn Lys
Lys Thr
700
His Val
715
Asn Ser
Ala Lys
Cys Ser
Ser Lys
780
Thr Ser
795
Gly Lys
Asp Glu
670
Tyr Gly
685
Lys Lys
Val Lys
Thr Gln
Gly Met
750
Phe Tyr
765
Ile Ser
Asn Glu
640 Trp Lys 655
Tyr Tyr
Tyr Val
Asp Glu
Asp Asn
720
Thr Phe 735
Phe Ile
Asn Pro
Met Thr
Ser Gly
800 <210> 34 <211> 371 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pyogenes bacteriophage H4489A <220>
<223> гиалуронидаза <400> 34
Met Thr Glu Asn Ile Pro Leu Arg Val Gln Phe Lys Arg Met Ser Ala
1 5 10 15
Asp Glu Trp Ala Arg Ser Asp Val Ile Leu Leu Glu Gly Glu Ile Gly
20 25 30
Phe Glu Thr Asp Thr Gly Phe Ala Lys Phe Gly Asp Gly Gln Asn Thr
35 40 45
Phe Ser Lys Leu Lys Tyr Leu Thr Gly Pro Lys Gly Pro Lys Gly Asp
50 55 60
Thr Gly Leu Gln Gly Lys Thr Gly Gly Thr Gly Pro Arg Gly Pro Ala
65 70 75 80
Gly Lys Pro Gly Thr Thr Asp Tyr Asp Gln Leu Gln Asn Lys Pro Asp
85 90 95
Leu Gly Ala Phe Ala Gln Lys Glu Glu Thr Asn Ser Lys Ile Thr Lys
100 105 110
Leu Glu Ser Ser Lys Ala Asp Lys Ser Ala Val Tyr Ser Lys Ala Glu
115 120 125
Ser Lys Ile Glu Leu Asp Lys Lys Leu Ser Leu Thr Gly Gly Ile Val
130 135 140
Thr Gly Gln Leu Gln Phe Lys Pro Asn Lys Ser Gly Ile Lys Pro Ser
145 150 155 160
Ser Ser Val Gly Gly Ala Ile Asn Ile Asp Met Ser Lys Ser Glu Gly
165 170 175
Ala Ala Met Val Met Tyr Thr Asn Lys Asp Thr Thr Asp Gly Pro Leu
180 185 190
Met Ile Leu Arg Ser Asp Lys Asp Thr Phe Asp Gln Ser Ala Gln Phe
195 200 205
Val Asp Tyr Ser Gly Lys Thr Asn Ala Val Asn Ile Val Met Arg Gln
210 215 220
Pro Ser Ala Pro Asn Phe Ser Ser Ala Leu Asn Ile Thr Ser Ala Asn
- 128 031986
225 230 235 240
Glu Gly Gly Ser Ala Met Gln Ile Arg Gly Val Glu Lys Ala Leu Gly
245 250 255
Thr Leu Lys Ile Thr His Glu Asn Pro Asn Val Glu Ala Lys Tyr Asp
260 265 270
Glu Asn Ala Ala Ala Leu Ser Ile Asp Ile Val Lys Lys Gln Lys Gly
275 280 285
Gly Lys Gly Thr Ala Ala Gln Gly Ile Tyr Ile Asn Ser Thr Ser Gly
290 295 300
Thr Ala Gly Lys Met Leu Arg Ile Arg Asn Lys Asn Glu Asp Lys Phe
305 310 315 320
Tyr Val Gly Pro Asp Gly Gly Phe His Ser Gly Ala Asn Ser Thr Val
325 330 335
Ala Gly Asn Leu Thr Val Lys Asp Pro Thr Ser Gly Lys His Ala Ala
340 345 350
Thr Lys Asp Tyr Val Asp Glu Lys Ile Ala Glu Leu Lys Lys Leu Ile
355 360 365
Leu Lys Lys
370
<210> 35 <211> 1628 <212> БЕЛОК <213> Clostridium perfringens <220>
<223> гиалуронидаза <400> 35
Met Asn Lys Asn
Met Thr Ile Ser
Gly Ile Thr Glu
Ser Tyr Ser Gly
Tyr Asp Asp Gly
Leu Glu Ala Ser
Gly Lys Thr Asn
100
Asp Asn Tyr Phe
115
Glu Lys Met Asp
130
Val Ile Gly Glu
145
Lys His Val Phe
Arg Ala Asp Asp
180
Tyr Tyr Gly Asn
195
Phe Gly Gly Asp
210
Asp Pro Tyr His
225
Leu Ser Glu Ile
Arg Tyr Val Tyr
Ile Arg Lys Ile
Val Leu Pro Ser
Asn Phe Tyr Glu
Gly Glu Phe Gln
Ile Asp Thr Tyr
Asn Leu Glu Ala
Phe Leu Val Gly
Asn Lys Asn Ile
120
Ala Asn Ile Val
135
Asp Thr Asp Ser
150
Asn Gln Leu Glu
165
Tyr Ala Glu Val
Pro Trp Ser Asn
200
Tyr Lys Leu Asn
215
Asn Ser Lys Trp
230
Lys Lys Leu Ala
245
Ala Leu His Pro
Ile Thr Ser Thr
Asn Leu Val Val
Ile Tyr Pro Lys
Ile Ser Asp Glu
Thr Lys Lys Arg
Thr Val Ser Asn
Ile Asn Glu Ser
105
Pro His Asp Glu
Ser Val Lys Asp
140
Ala Phe Tyr Gly
155
Glu Gly Asn Lys
170
Ala His Arg Gly
185
Glu Asp Arg Ala
Gln Tyr Val Phe
220
Arg Asp Leu Tyr
235
Gln Val Gly Asn
250
Phe Met Asn Asn
Val Leu Ala Ala
Phe Ala Thr Asp
Pro Gln Glu Ile
Ile Asn Ile Val
Val Asp Glu Val
Glu Ile Val Pro
Gly Gly Val Val
110
Ser Phe Phe Asp
125
Gly Val Ile Gly
Val Thr Thr Leu
160
Ile Gln Ser Phe
175
Phe Ile Glu Gly
190
Glu Leu Met Lys
205
Ala Pro Lys Asp
Pro Glu Glu Lys
240
Glu Thr Lys Asn
255
Pro Val Arg Phe
- 129 031986
Asp Thr
Phe Thr
290 Asp Asp 305
Leu Thr
Asp Leu
Gly Ser
Ser Ile
370
Phe Ala 385
Arg Ala
Gln His
Asp Pro
Glu Ala
450
Ile Trp
465
Lys Tyr
Leu Arg
Val Arg
Phe Lys
530
Glu Leu
545
Lys Asn
Leu Asn
Ser Ala
Tyr Ser
610
His Tyr
625
Val Pro
Ser Ile
Gln Asp
Ser Thr
690 Tyr Val 705
Phe Leu
Lys Ile
Gly Val
260
Glu Glu 275
Gln Leu
Ala Ser
Asp Leu
Lys Thr
340
Ser Ala
355
Val Met
Asn Asn
Pro Phe
Leu Ile
420 Ser Lys 435
Asn Lys
Asp Asn
Met Asp
Glu Ile
500
Pro Leu
515
Gln Lys
Ile Ala
Asn Pro
Cys Trp
580
Ile Ala
595
Glu Ala
Val Asp
Phe Ile
Val Asp
660
Ala Pro
675
Glu Leu
Gly Val
Met Gly
Gln Tyr
740 Glu Tyr 755
Asn Tyr
Leu Glu
Ala Pro
310
Thr Arg 325
Asp Leu
Gln Leu
Thr Gly
Phe Met
390 Phe Trp 405 Met Gly
Ile Asp
Ser Ala
Lys Glu
470
His Gly
485
Ser Lys
Gln Glu
Tyr Asp
Glu Phe
550 Gly Asn 565
Glu Asp
Ile Glu
Gln Gly
His Thr
630 Lys Ser 645
Pro Asn
Thr Gly
Val Tyr
Lys Tyr
710
Ala Asn
725
Thr Val
Thr Met
Gln Asn
280
Asn Asp 295
Ala Gln
Trp Leu
Met Phe
Lys Glu
360
Gly Arg
375
Asn Asn
Ile Asn
Gly Asn
Gly Ile
440
Leu Phe 455
Glu Ala
Thr Ala
His Met
Ser Val
520
Ser Gly
535
Thr Asn
Glu Arg
Thr Met
Glu Gly
600
Ala Phe
615
Glu Tyr
Met Gly
Arg Ile
Asn Pro
680
Lys Asn 695
Ser Asn
Ser Asn
Asp Gly
Pro Gly
760
265
Asp Leu
Val Arg
Gly Ala
Glu Glu
330
Cys Pro
345
Leu Asn
Ile Trp
Ile Ser
Trp Pro
410 Asp Thr 425
Val Leu
Ala Ile
Asp Glu
Glu Glu
490
Ile Asn 505
Glu Leu
Ala Ser
Leu Gln
Thr Arg
570 Asp Ala 585
Asp Asp
Glu Lys
Ala Glu
Gln Asn
650
Ile Ala 665
Asp Asn
Pro Asn
Pro Ile
Pro Asn
730 Arg Glu 745
Ala Ile
Gly Val
Gln Phe
300
Ser Met
315
Gln Gln
Ser Asp
Lys Ala
Gly Glu
380
Thr Glu
395
Cys Ser
Phe Leu
Asn Pro
Ala Asp
460
Asn Trp
475
Thr Asn
Gln Asn
Ala Pro
Ile Lys
540 Lys Ala 555 Asp Gln
Ala Ile
Glu Ala
Ser Lys
620
Val Gly
635
Leu Ser
Thr Tyr
Ile Phe
Arg Ile
700
Thr Leu 715
Asp Thr
Trp Ile
Lys Val
270 Ile Lys 285
Ala Ile
Tyr Val
Ser Thr
Tyr Tyr
350
Glu Asp 365
Val Asp
Gly His
Asp Asn
His Pro
430
Met Gln
445
Tyr Ala
Asn Asp
Ser Ser
Met Asp
510 Lys Leu 525
Glu Asp
Ala Asp
Ile Ile
Gly Tyr
590
Ala Trp 605
Thr Tyr
Val Gln
Val Val
Ile Ser
670 Asp Asn 685
Asp Val
Asn Asn
Met Gln
Asp Leu
750
Glu Asn
765
Ala Lys
Leu Ala
Lys Leu
320
Tyr Pro 335
Gly Asn
Asn Val
Glu Asn
Pro Gly
400 Ser Lys 415
Gly Val
Gln Ala
Trp Asn
Ser Phe
480
Leu Ala 495
Gly Arg
Glu Ala
Ala Leu
Tyr Tyr
560 Tyr Trp 575
Leu Lys
Ala Asn
Gly Phe
His Ile
640 Ile Gly 655
Asn Arg
Asn Ala
Gly Thr
Val Glu
720
Lys Ala 735
Glu Glu
Leu Asp
- 130 031986
Leu Lys 770 Val Arg Gly Val Arg 775 Leu Ile Ala Thr Glu 780 Ala Arg Glu Asn
Thr Trp Leu Gly Val Arg Asp Ile Asn Val Asn Lys Lys Glu Asp Ser
785 790 795 800
Asn Ser Gly Val Glu Phe Asn Pro Ser Leu Ile Arg Ser Glu Ser Trp
805 810 815
Gln Val Tyr Glu Gly Asn Glu Ala Asn Leu Leu Asp Gly Asp Asp Asn
820 825 830
Thr Gly Val Trp Tyr Lys Thr Leu Asn Gly Asp Thr Ser Leu Ala Gly
835 840 845
Glu Phe Ile Gly Leu Asp Leu Gly Lys Glu Ile Lys Leu Asp Gly Ile
850 855 860
Arg Phe Val Ile Gly Lys Asn Gly Gly Gly Ser Ser Asp Lys Trp Asn
865 870 875 880
Lys Phe Lys Leu Glu Tyr Ser Leu Asp Asn Glu Ser Trp Thr Thr Ile
885 890 895
Lys Glu Tyr Asp Lys Thr Gly Ala Pro Ala Gly Lys Asp Val Ile Glu
900 905 910
Glu Ser Phe Glu Thr Pro Ile Ser Ala Lys Tyr Ile Arg Leu Thr Asn
915 920 925
Met Glu Asn Ile Asn Lys Trp Leu Thr Phe Ser Glu Phe Ala Ile Ile
930 935 940
Ser Asp Glu Leu Glu Asn Ala Gly Asn Lys Glu Asn Val Tyr Thr Asn
945 950 955 960
Thr Glu Leu Asp Leu Leu Ser Leu Ala Lys Glu Asp Val Thr Lys Leu
965 970 975
Ile Pro Thr Asp Asp Ile Ser Leu Asn His Gly Glu Tyr Ile Gly Val
980 985 990
Lys Leu Asn Arg Ile Lys Asp Leu Ser Asn Ile Asn Leu Glu Ile Ser
995 1000 1005
Asn Asp Thr Gly Leu Lys Leu Gln Ser Ser Met Asn Gly Val Glu Trp
1010 1015 1020
Thr Glu Ile Thr Asp Lys Asn Thr Leu Glu Asp Gly Arg Tyr Val Arg
1025 1030 1035 1040
Leu Ile Asn Thr Ser Asn Glu Ala Val Asn Phe Asn Leu Thr Lys Phe
1045 1050 1055
Glu Val Asn Ser Asn Glu Val Tyr Glu Pro Ser Leu Val Asp Ala Tyr
1060 1065 1070
Val Gly Asp Asp Gly Ala Lys Lys Ala Val Asp Gly Asp Leu Lys Thr
1075 1080 1085
Arg Val Lys Phe Leu Gly Ala Pro Ser Thr Gly Asp Thr Ile Val Tyr
1090 1095 1100
Asp Leu Gly Gln Glu Ile Leu Val Asp Asn Leu Lys Tyr Val Val Leu
1105 1110 1115 1120
Asp Thr Glu Val Asp His Val Arg Asp Gly Lys Ile Gln Leu Ser Leu
1125 1130 1135
Asp Gly Glu Thr Trp Thr Asp Ala Ile Thr Ile Gly Asp Gly Val Glu
1140 1145 1150
Asn Gly Val Asp Asp Met Phe Ser Thr Pro Leu Lys Asn Gly Tyr Lys
1155 1160 1165
His Gly Asn Gln Ser Gly Gly Ile Val Pro Ile Asp Ser Ala Tyr Val
1170 1175 1180
Glu Gly Asp Asn Leu Asn Gln Lys Ala Arg Tyr Val Arg Ile Leu Phe
1185 1190 1195 1200
Thr Ala Pro Tyr Arg His Arg Trp Thr Val Ile Asn Glu Leu Met Ile
1205 1210 1215
Asn Asn Gly Glu Tyr Ile Ser Thr Val Asn Asp Pro Thr Tyr Ile Ser
1220 1225 1230
Asn Pro Ile Glu Glu Arg Gly Phe Ala Pro Ser Asn Leu Arg Asp Gly
1235 1240 1245
Asn Leu Thr Thr Ser Tyr Lys Pro Asn Thr Asn Asn Gly Glu Ile Ser
1250 1255 1260
Glu Gly Ser Ile Thr Tyr Arg Leu Ser Glu Lys Thr Asp Val Arg Lys
- 131 031986
1265 1270
Val Thr Ile Val Gln Ser Gly Ser 1285
Ala Arg Val Gly Asp Gly Ser Glu 1300
Leu Gly Thr Leu Ser Asn Ser Leu
13151320
Asn Asn Ile Tyr Glu Ile Lys Ile 13301335
Ile Tyr Glu Ile Ile Thr Leu Asn 13451350
Asp Ser Leu Lys Ala Lys Tyr Asp 1365
Glu Tyr Thr Leu Ser Ser Phe Glu 1380
Ala Lys Ser Ile Leu Asp Asp Ser
13951400
Lys Ala Leu Glu Lys Leu Asn Lys 14101415
Ala Thr Asp Phe Glu Asp Phe Asn 14251430
Leu Val Glu Glu Glu Tyr Thr Ala 1445
Val Leu Glu Ala Ala Asn Glu Ala 1460
Gln Asp Gln Ile Asn Gln Ile Val
14751480
Ala Leu Val Lys Glu Thr Pro Glu 14901495
Leu Ile Asn Gln Gly Lys Ser Leu
15051510
Asn Val Gly Glu Tyr His Lys Gly 1525
Ile Asn Lys Ala Glu Glu Val Phe 1540
Glu Ile Asn Leu Ala Lys Glu Ser
15551560
Asn Ser Leu Leu Ile Glu Glu Ser 15701575
Lys Ile Asp Ile Gly Asp Leu Ala 15851590
Thr Thr Asn Thr Ser Leu Asp Leu 1605
Tyr Glu Ile Ser Phe Ile Asn His 1620
12751280
Ser Ile Ser Asn Ala Lys Val Met
12901295
Asn Val Thr Asp Gln Trp Val Gln 13051310
Asn Glu Phe Ile Asn Arg Asp Tyr
1325
Glu Trp Thr Asp Val Ala Pro Asn
1340
Gln Glu Phe Glu Phe Pro Val Asn 13551360
Glu Leu Ile Asn Leu Ser Gly Asp
13701375
Thr Leu Lys Glu Ala Leu Asn Glu 13851390
Asn Ser Ser Gln Lys Lys Ile Asp
1405
Ala Glu Glu Arg Leu Asp Leu Arg 1420
Lys Val Leu Thr Leu Gly Asn Ser 14351440
Glu Ser Trp Ala Leu Phe Ser Glu
14501455
Asn Lys Asn Lys Ala Asp Tyr Thr 14651470
Ile Asp Leu Asp Ala Ser Ile Lys
1485
Val Asp Lys Thr Asn Leu Gly Glu
1500
Leu Asp Glu Ser Val Glu Gly Phe 15151520
Ala Lys Asp Gly Leu Thr Val Glu
15301535
Asn Lys Glu Asp Ala Thr Glu Glu 15451550
Leu Glu Gly Ala Ile Ala Arg Phe
1565
Thr Gly Asp Phe Asn Gly Asn Gly 1580
Met Val Ser Lys Asn Ile Gly Ser 1595 1600
Asn Lys Asp Gly Ser Ile Asp Glu
1610 1615
Arg Ile Leu Asn
1625 <210> 36 <211> 435 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> Гиалуронидаза-1 [Предшественник] <400> 36
Met 1 Ala Ala His Leu 5 Leu Pro Ile Cys Ala 10 Leu Phe Leu Thr Leu 15 Leu
Asp Met Ala Gln Gly Phe Arg Gly Pro Leu Leu Pro Asn Arg Pro Phe
20 25 30
Thr Thr Val Trp Asn Ala Asn Thr Gln Trp Cys Leu Glu Arg His Gly
35 40 45
Val Asp Val Asp Val Ser Val Phe Asp Val Val Ala Asn Pro Gly Gln
- 132 031986
Thr Phe
Thr Tyr
Pro Gln
Ile Leu
Asp Trp
130 Asp Ile 145
Asp Trp
Gly Ala
Leu Arg
Asn Tyr
210
Ile Arg
225
Ala Leu
Lys Ser
Ala Val
Ile Phe
290
His Ser 305
Trp Val
Lys Glu
Ser Gly
Cys Val
370
Ala Ser 385
Arg Gly
Lys Cys
Ser Met
Arg Gly
Pro Tyr
Asn Ala
100
Ala Ala
115
Glu Ala
Tyr Arg
Pro Ala
Ala Arg
180
Pro Arg
195
Asp Phe
Ala Gln
Tyr Pro
Gln Met
260
Ala Ala
275
Tyr Asp
Leu Gly
Ser Trp
Tyr Met
340
Ala Leu
355
Arg Arg
Phe Ser
Ala Leu
Arg Cys
420
Trp
435
Pro Asp
Tyr Thr
Ser Leu
Ile Pro
Trp Arg
Gln Arg
150
Pro Gln
165
Ala Trp
Gly Leu
Leu Ser
Asn Asp
230
Ser Ile 245
Tyr Val
Gly Asp
Thr Thr
Glu Ser
310
Glu Asn 325
Asp Thr
Leu Cys
Thr Ser
Ile Gln
390
Ser Leu
405
Tyr Pro
Met Thr
Pro Thr
Ile Ala
Ala Pro
120
Pro Arg
135
Ser Arg
Val Glu
Met Ala
Trp Gly
200
Pro Asn
215
Gln Leu
Tyr Met
Gln His
Pro Asn
280
Asn His
295
Ala Ala
Thr Arg
Thr Leu
Ser Gln
360
His Pro
375
Leu Thr
Glu Asp
Gly Trp
Ile Phe
Gly Glu
His Leu
105
Asp Phe
Trp Ala
Ala Leu
Ala Val
170
Gly Thr 185
Phe Tyr
Tyr Thr
Gly Trp
Pro Ala
250 Arg Val 265
Leu Pro
Phe Leu
Gln Gly
Thr Lys
330
Gly Pro
345
Ala Leu
Lys Ala
Pro Gly
Gln Ala
410
Gln Ala
425
Tyr Ser
Pro Val
Ala Arg
Ser Gly
Phe Asn
140
Val Gln
155
Ala Gln
Leu Gln
Gly Phe
Gly Gln
220
Leu Trp
235
Val Leu
Ala Glu
Val Leu
Pro Leu
300
Ala Ala
315
Glu Ser
Phe Ile
Cys Ser
Leu Leu
380
Gly Gly
395
Gln Met
Pro Trp
Ser Gln
Phe Gly
Thr Phe
110
Leu Ala
125
Trp Asp
Ala Gln
Asp Gln
Leu Gly
190 Pro Asp 205
Cys Pro
Gly Gln
Glu Gly
Ala Phe
270 Pro Tyr 285 Asp Glu
Gly Val
Cys Gln
Leu Asn
350
Gly His
365
Leu Leu
Pro Leu
Ala Val
Cys Glu
430
Leu Gly
Gly Leu
Gln Asp
Val Ile
Thr Lys
His Pro
160
Phe Gln
175
Arg Ala
Cys Tyr
Ser Gly
Ser Arg
240
Thr Gly
255
Arg Val
Val Gln
Leu Glu
Val Leu
320
Ala Ile 335
Val Thr
Gly Arg
Asn Pro
Ser Leu
400
Glu Phe
415
Arg Lys <210>
<211>
<212>
<213>
473
БЕЛОК
Homo sapiens <220>
<223>
Гиалуронидаза-2 [Предшественник] <400>
Met Arg Ala Gly Pro Gly Pro Thr Val Thr 1 5 10
Val Ala Trp Ala Met Glu Leu Lys Pro Thr
Leu
Ala
Ala
Pro
Leu
Pro
Val
Ile
Leu
Phe
Thr
Ala
- 133 031986
Gly Arg
Pro Arg
Ser Pro
Asp Arg
His Gly
Leu Gln
Leu Ala
130
Trp Gln
145
Ser Arg
Tyr Glu
Tyr Val
Pro Asp
210 Gly Arg 225
Leu Trp
Thr Leu
Gln Glu
Pro Val
290
Leu Ser 305
Gly Ala
Thr Glu
Pro Tyr
Gln Cys
370
Thr Phe 385
Ala Pro
Asp Ile
Trp Ser
Ala Ser
450
Ala Ala
465
Pro Phe
Leu Lys
Asn Glu
Leu Gly
Gly Val
100 Lys Arg 115
Val Ile
Asp Lys
His Pro
Phe Glu
180 Lys Ala 195
Cys Tyr
Cys Pro
Ala Glu
Ala Ser
260
Ala Leu 275
Tyr Val
Glu Met
Ala Gly
Thr Cys
340
Val Val
355
His Gly
Leu His
Gly Glu
Asp His
420
Gly Glu 435
Glu Ala
Leu Ala
Val Val
Val Pro
Gly Phe
Leu Tyr
Pro Gln
Val Glu
Asp Trp
Asp Val
150
Asp Trp
165
Phe Ala
Val Arg
Asn His
Asp Val
230
Ser Thr
245
Ser Arg
Arg Val
Phe Thr
Asp Leu
310
Val Ile
325
Gln Tyr
Asn Val
His Gly
Leu Ser
390
Pro Gln
405
Leu Gln
Gln Cys
Trp Ala
Phe Thr
470
Ala Trp
Leu Asp 55
Val Asn
Pro Arg
Asn Val
His Tyr
120 Glu Asp 135
Tyr Arg
Pro Pro
Ala Gln
Pro Arg
200
Asp Tyr 215
Glu Val
Ala Leu
His Gly
Ala Arg
280
Arg Pro 295
Ile Ser
Leu Trp
Leu Lys
Ser Trp
360 Arg Cys 375
Thr Asn
Leu Arg
Thr His
Gln Trp
440 Gly Ser 455
Trp Thr
Asp Val
Leu Asn
Gln Asn
Phe Asp
Ser Leu
105
Ile Arg
Trp Arg
Arg Leu
Asp Arg
170
Gln Phe
185
His Leu
Val Gln
Ala Arg
Phe Pro
250
Arg Asn
265
Thr His
Thr Tyr
Thr Ile
Gly Asp
330
Asp Tyr
345
Ala Thr
Val Arg
Ser Phe
Pro Val
410
Phe Arg
425
Asp His
His Leu
Leu
Pro Thr
Ala Phe
Ile Thr 75
Ser Ala
Trp Ala
Thr Gln
Pro Val
140 Ser Arg 155
Ile Val
Met Leu
Trp Gly
Asn Trp
220 Asn Asp 235
Ser Val
Phe Val
His Ala
Ser Arg
300 Gly Glu 315 Ala Gly
Leu Thr
Gln Tyr
Arg Asn
380
Arg Leu 395
Gly Glu
Cys Gln
Arg Gln
Thr Ser
460
Gln Asp 45
Asp Val
Ile Phe
Gly Arg
His Arg
110
Glu Ser
125
Trp Val
Gln Leu
Lys Gln
Glu Thr
190
Phe Tyr
205
Glu Ser
Gln Leu
Tyr Leu
Ser Phe
270
Asn His
285
Arg Leu
Ser Ala
Tyr Thr
Arg Leu
350
Cys Ser
365
Pro Ser
Val Pro
Leu Ser
Cys Tyr
430
Ala Ala
445
Leu Leu
Cys Gly
Gln Ala
Tyr Arg
Ser Val
Lys Met
Ala Gly
Arg Asn
Val Ala
160
Ala Gln
175
Leu Arg
Leu Phe
Tyr Thr
Ala Trp
240 Asp Glu 255
Arg Val
Ala Leu
Thr Gly
Ala Leu
320
Thr Ser
335
Leu Val
Arg Ala
Ala Ser
Gly His
400
Trp Ala
415
Leu Gly
Gly Gly
Ala Leu <210> 38 <211> 417 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens
- 134 031986 <220>
<223> Гиалуронидаза-3 [Предшественник] <400> 38
Met 1 Thr Thr Gln Leu 5 Gly Pro Ala Leu Val 10 Leu Gly Val Ala Leu 15 Cys
Leu Gly Cys Gly Gln Pro Leu Pro Gln Val Pro Glu Arg Pro Phe Ser
20 25 30
Val Leu Trp Asn Val Pro Ser Ala His Cys Glu Ala Arg Phe Gly Val
35 40 45
His Leu Pro Leu Asn Ala Leu Gly Ile Ile Ala Asn Arg Gly Gln His
50 55 60
Phe His Gly Gln Asn Met Thr Ile Phe Tyr Lys Asn Gln Leu Gly Leu
65 70 75 80
Tyr Pro Tyr Phe Gly Pro Arg Gly Thr Ala His Asn Gly Gly Ile Pro
85 90 95
Gln Ala Leu Pro Leu Asp Arg His Leu Ala Leu Ala Ala Tyr Gln Ile
100 105 110
His His Ser Leu Arg Pro Gly Phe Ala Gly Pro Ala Val Leu Asp Trp
115 120 125
Glu Glu Trp Cys Pro Leu Trp Ala Gly Asn Trp Gly Arg Arg Arg Ala
130 135 140
Tyr Gln Ala Ala Ser Trp Ala Trp Ala Gln Gln Val Phe Pro Asp Leu
145 150 155 160
Asp Pro Gln Glu Gln Leu Tyr Lys Ala Tyr Thr Gly Phe Glu Gln Ala
165 170 175
Ala Arg Ala Leu Met Glu Asp Thr Leu Arg Val Ala Gln Ala Leu Arg
180 185 190
Pro His Gly Leu Trp Gly Phe Tyr His Tyr Pro Ala Cys Gly Asn Gly
195 200 205
Trp His Ser Met Ala Ser Asn Tyr Thr Gly Arg Cys His Ala Ala Thr
210 215 220
Leu Ala Arg Asn Thr Gln Leu His Trp Leu Trp Ala Ala Ser Ser Ala
225 230 235 240
Leu Phe Pro Ser Ile Tyr Leu Pro Pro Arg Leu Pro Pro Ala His His
245 250 255
Gln Ala Phe Val Arg His Arg Leu Glu Glu Ala Phe Arg Val Ala Leu
260 265 270
Val Gly His Arg His Pro Leu Pro Val Leu Ala Tyr Val Arg Leu Thr
275 280 285
His Arg Arg Ser Gly Arg Phe Leu Ser Gln Asp Asp Leu Val Gln Ser
290 295 300
Ile Gly Val Ser Ala Ala Leu Gly Ala Ala Gly Val Val Leu Trp Gly
305 310 315 320
Asp Leu Ser Leu Ser Ser Ser Glu Glu Glu Cys Trp His Leu His Asp
325 330 335
Tyr Leu Val Asp Thr Leu Gly Pro Tyr Val Ile Asn Val Thr Arg Ala
340 345 350
Ala Met Ala Cys Ser His Gln Arg Cys His Gly His Gly Arg Cys Ala
355 360 365
Arg Arg Asp Pro Gly Gln Met Glu Ala Phe Leu His Leu Trp Pro Asp
370 375 380
Gly Ser Leu Gly Asp Trp Lys Ser Phe Ser Cys His Cys Tyr Trp Gly
385 390 395 400
Trp Ala Gly Pro Thr Cys Gln Glu Pro Arg Pro Gly Pro Lys Glu Ala
405 410 415
Val
<210> 39 <211> 481
- 135 031986 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> Гиалуронидаза-4 <400> 39
Met 1 Lys Val Leu Ser 5 Glu Gly Gln Leu Lys 10 Leu Cys Val Val Gln 15 Pro
Val His Leu Thr Ser Trp Leu Leu Ile Phe Phe Ile Leu Lys Ser Ile
20 25 30
Ser Cys Leu Lys Pro Ala Arg Leu Pro Ile Tyr Gln Arg Lys Pro Phe
35 40 45
Ile Ala Ala Trp Asn Ala Pro Thr Asp Gln Cys Leu Ile Lys Tyr Asn
50 55 60
Leu Arg Leu Asn Leu Lys Met Phe Pro Val Ile Gly Ser Pro Leu Ala
65 70 75 80
Lys Ala Arg Gly Gln Asn Val Thr Ile Phe Tyr Val Asn Arg Leu Gly
85 90 95
Tyr Tyr Pro Trp Tyr Thr Ser Gln Gly Val Pro Ile Asn Gly Gly Leu
100 105 110
Pro Gln Asn Ile Ser Leu Gln Val His Leu Glu Lys Ala Asp Gln Asp
115 120 125
Ile Asn Tyr Tyr Ile Pro Ala Glu Asp Phe Ser Gly Leu Ala Val Ile
130 135 140
Asp Trp Glu Tyr Trp Arg Pro Gln Trp Ala Arg Asn Trp Asn Ser Lys
145 150 155 160
Asp Val Tyr Arg Gln Lys Ser Arg Lys Leu Ile Ser Asp Met Gly Lys
165 170 175
Asn Val Ser Ala Thr Asp Ile Glu Tyr Leu Ala Lys Val Thr Phe Glu
180 185 190
Glu Ser Ala Lys Ala Phe Met Lys Glu Thr Ile Lys Leu Gly Ile Lys
195 200 205
Ser Arg Pro Lys Gly Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Tyr Pro Asp Cys His
210 215 220
Asn Tyr Asn Val Tyr Ala Pro Asn Tyr Ser Gly Ser Cys Pro Glu Asp
225 230 235 240
Glu Val Leu Arg Asn Asn Glu Leu Ser Trp Leu Trp Asn Ser Ser Ala
245 250 255
Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Gly Val Trp Lys Ser Leu Gly Asp Ser Glu
260 265 270
Asn Ile Leu Arg Phe Ser Lys Phe Arg Val His Glu Ser Met Arg Ile
275 280 285
Ser Thr Met Thr Ser His Asp Tyr Ala Leu Pro Val Phe Val Tyr Thr
290 295 300
Arg Leu Gly Tyr Arg Asp Glu Pro Leu Phe Phe Leu Ser Lys Gln Asp
305 310 315 320
Leu Val Ser Thr Ile Gly Glu Ser Ala Ala Leu Gly Ala Ala Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Asp Met Asn Leu Thr Ala Ser Lys Ala Asn Cys Thr
340 345 350
Lys Val Lys Gln Phe Val Ser Ser Asp Leu Gly Ser Tyr Ile Ala Asn
355 360 365
Val Thr Arg Ala Ala Glu Val Cys Ser Leu His Leu Cys Arg Asn Asn
370 375 380
Gly Arg Cys Ile Arg Lys Met Trp Asn Ala Pro Ser Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Ala Ser Tyr His Ile Glu Ala Ser Glu Asp Gly Glu Phe Thr
405 410 415
Val Lys Gly Lys Ala Ser Asp Thr Asp Leu Ala Val Met Ala Asp Thr
420 425 430
Phe Ser Cys His Cys Tyr Gln Gly Tyr Glu Gly Ala Asp Cys Arg Glu
435 440 445
- 136 031986
Ile Lys 450 Thr Ala Asp Gly Cys 455 Ser Gly Val Ser Pro 460 Ser Pro Gly Ser
Leu Met Thr Leu Cys Leu Leu Leu Leu Ala Ser Tyr Arg Ser Ile Gln
465 470 475 480
Leu <210> 40 <211> 467 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-467 <400> 40
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
- 137 031986
Val Thr Leu 370 Ala Ala Lys Met 375 Cys Ser Gln Val Leu 380 Cys Gln Glu Gln
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala
465
<210> 41 <211> 477 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-477 <400> 41
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
- 138 031986
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu
465 470 475
<210> 42 <211> 478 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-478 <400> 42
Met Gly Val Leu 1
Ser Ser Gly Val
Cys Leu Thr Leu
Phe Leu Trp Ala
Asp Glu Pro Leu
Ile Asn Ala Thr
Gly Tyr Tyr Pro
100
Gly Ile Pro Gln
115
Lys Asp Ile Thr
130
Ile Asp Trp Glu
145
Lys Asp Val Tyr
Val Gln Leu Ser
180
Glu Lys Ala Gly
195
Leu Leu Arg Pro
210
Lys Phe Lys His
Ser Gln Ile Val
Asn Phe Arg Ala
Trp Asn Ala Pro
Asp Met Ser Leu
Gly Gln Gly Val
Tyr Ile Asp Ser
Lys Ile Ser Leu
120
Phe Tyr Met Pro
135
Glu Trp Arg Pro
150
Lys Asn Arg Ser
165
Leu Thr Glu Ala
Lys Asp Phe Leu
200
Asn His Leu Trp
215
Ile Phe Phe Arg
Phe Thr Phe Leu
Pro Pro Val Ile
Ser Glu Phe Cys
Phe Ser Phe Ile
Thr Ile Phe Tyr
Ile Thr Gly Val
105
Gln Asp His Leu
Val Asp Asn Leu
140
Thr Trp Ala Arg
155
Ile Glu Leu Val
170
Thr Glu Lys Ala
185
Val Glu Thr Ile
Gly Tyr Tyr Leu
220
Ser Phe Val Lys
Leu Ile Pro Cys
Pro Asn Val Pro
Leu Gly Lys Phe
Gly Ser Pro Arg
Val Asp Arg Leu
Thr Val Asn Gly
110
Asp Lys Ala Lys
125
Gly Met Ala Val
Asn Trp Lys Pro
160
Gln Gln Gln Asn
175
Lys Gln Glu Phe
190
Lys Leu Gly Lys
205
Phe Pro Asp Cys
- 139 031986
Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala 405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440 Val Asp 455
Pro Pro
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Asn Gly
235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu
315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380
Ser Asp
395
Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350
Tyr Ile 365
Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445 Asp Gly
Glu Pro
Phe Asn
240
Glu Ser 255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320 Gly Ile 335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr 415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
<210> 43
<211> 479
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220> <223> PH20 предшественник 1-479
<400> 43
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
- 140 031986
145 150
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser
165
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala
180
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu
195200
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp
210215
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro
225230
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp
245
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr
260
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn
275280
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser
290295
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val
305310
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr
325
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile
340
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr
355360
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys
370375
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp
385390
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln
405
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu
420
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr
435440
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp
450455
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro
465470
155160
Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
170175
Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
185190
Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
205
Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
220
Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
235240
Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
250255
Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
265270
Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
285
Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
300
Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
315320
Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
330335
Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
345350
Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
365
Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
380
Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
395400
Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
410415
Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
425430
Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
445
Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
460
Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln
475 <210> 44 <211> 480 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-480 <400> 44
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala
3540
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro
5055
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu
6570
Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1015
Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
2530
Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro 45
Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe 60
Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
80
- 141 031986
Ile Asn
Gly Tyr
Gly Ile
Lys Asp
130
Ile Asp
145
Lys Asp
Val Gln
Glu Lys
Leu Leu
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
Ala Thr
Tyr Pro
100
Pro Gln
115
Ile Thr
Trp Glu
Val Tyr
Leu Ser
180
Ala Gly
195
Arg Pro
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Gly Gln
Tyr Ile
Lys Ile
Phe Tyr
Glu Trp
150 Lys Asn 165
Leu Thr
Lys Asp
Asn His
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala
405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Gly Val
Asp Ser
Ser Leu
120
Met Pro
135
Arg Pro
Arg Ser
Glu Ala
Phe Leu
200 Leu Trp 215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440
Val Asp
455
Pro Pro
Thr Ile
Ile Thr
105
Gln Asp
Val Asp
Thr Trp
Ile Glu
170
Thr Glu
185
Val Glu
Gly Tyr
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Phe Tyr
Gly Val
His Leu
Asn Leu
140 Ala Arg 155
Leu Val
Lys Ala
Thr Ile
Tyr Leu
220 Asn Gly 235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu 315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380
Ser Asp 395
Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Val Asp
Thr Val
110 Asp Lys 125
Gly Met
Asn Trp
Gln Gln
Lys Gln
190
Lys Leu 205
Phe Pro
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350 Tyr Ile 365 Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445 Asp Gly
Glu Pro
Arg Leu
Asn Gly
Ala Lys
Ala Val
Lys Pro
160
Gln Asn
175
Glu Phe
Gly Lys
Asp Cys
Phe Asn
240
Glu Ser
255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320
Gly Ile
335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr
415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Gln Ile
480
<210> 45
<211> 481
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220> <223> PH20 предшественник 1-481
<400> 45
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His
Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
- 142 031986
Ser Ser
Cys Leu
Phe Leu
Asp Glu 65 Ile Asn
Gly Tyr
Gly Ile
Lys Asp
130 Ile Asp 145
Lys Asp
Val Gln
Glu Lys
Leu Leu
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290 Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450 Ile Asp 465 Phe
Gly Val
Thr Leu
Trp Ala
Pro Leu
Ala Thr
Tyr Pro
100
Pro Gln
115
Ile Thr
Trp Glu
Val Tyr
Leu Ser
180
Ala Gly
195
Arg Pro
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Ser Gln
Asn Phe
Trp Asn
Asp Met
Gly Gln
Tyr Ile
Lys Ile
Phe Tyr
Glu Trp
150 Lys Asn 165
Leu Thr
Lys Asp
Asn His
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala 405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Ile Val
Arg Ala
Ala Pro
Ser Leu
Gly Val
Asp Ser
Ser Leu
120
Met Pro
135
Arg Pro
Arg Ser
Glu Ala
Phe Leu
200 Leu Trp 215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440 Val Asp 455
Pro Pro
Phe Thr
Pro Pro
Ser Glu
Phe Ser
Thr Ile
Ile Thr
105
Gln Asp
Val Asp
Thr Trp
Ile Glu
170
Thr Glu
185
Val Glu
Gly Tyr
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Phe Leu
Val Ile
Phe Cys
Phe Ile 75
Phe Tyr
Gly Val
His Leu
Asn Leu
140 Ala Arg 155
Leu Val
Lys Ala
Thr Ile
Tyr Leu
220 Asn Gly 235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu 315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380 Ser Asp 395 Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Leu Ile
Pro Asn
Leu Gly
Gly Ser
Val Asp
Thr Val
110 Asp Lys 125
Gly Met
Asn Trp
Gln Gln
Lys Gln
190 Lys Leu 205
Phe Pro
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350 Tyr Ile 365 Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445 Asp Gly
Glu Pro
Pro Cys
Val Pro
Lys Phe
Pro Arg
Arg Leu
Asn Gly
Ala Lys
Ala Val
Lys Pro
160
Gln Asn
175
Glu Phe
Gly Lys
Asp Cys
Phe Asn
240
Glu Ser
255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320 Gly Ile 335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr
415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Gln Ile
480
- 143 031986 <210> 46 <211> 483 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-483 <400> 46
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
- 144 031986
420 425
Phe Tyr Cys 435 Ser Cys Tyr Ser Thr 440 Leu Ser
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys
450 455
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu
465 470
Phe Tyr Asn
430
Cys Lys Glu 445 Lys Ala Asp
Ile Ala 460 Asp Gly Val Cys
Thr 475 Glu Glu Pro Gln Ile 480
<210> 47
<211> 432
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> зрелая PH20
36-467 <400> 47
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
- 145 031986
Ala Ala Lys Met 340 Cys Ser Gln Val Leu Cys 345 Gln Glu Gln Gly 350 Val Cys
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
<210> 48
<211> 448
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Зрелая PH20 36-483
<400> 48
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
- 146 031986
305 310
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr
325 330
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys
340 345
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr
355 360
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly
370 375
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe
385 390
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu
405 410
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp
420 425
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu
435 440
315
Ile Ile Asn Val Thr 335
Gln Glu Gln Gly 350 Val
Leu His Leu 365 Asn Pro
Lys Phe 380 Thr Val Arg
Ser 395 Glu Lys Phe Tyr
Lys Ala Asp Val Lys 415
Gly Val Cys Ile 430 Asp
Pro Gln Ile 445 Phe Tyr
320
Leu
Cys
Asp
Gly
Cys
400
Asp
Ala
Asn <210> 49 <211> 1446 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<223> ДНК, кодирующая растворимую rHuPH20 предшественник <400> 49 atgggagtgc taaaattcaa gcacatcttt tcccagatag ttttcacctt ccttctgatt cctcctgtta ttccaaatgt gcctttcctc cttggaaaat ttgatgagcc actagatatg ataaacgcca ccgggcaagg tgttacaata tacatagatt caatcacagg agtaactgtg caagaccatc tggacaaagc taagaaagac ggaatggctg ttattgactg ggaagaatgg aaagatgttt acaagaatag gtctattgaa ctcacagagg ccactgagaa agcaaaacaa gtagagacta taaaattggg aaaattactt tttccggatt gttacaacca tcactataag gtagaaataa aaagaaatga tgatctcagc ccatccattt atttgaacac tcagcagtct cgagttcggg aagccatcag agtttccaaa tttgcatata cccgcatagt ttttactgat cttgtgtata catttggcga aactgttgct accctcagta taatgcgaag tatgaaatct atactgaatc cttacataat caacgtcaca tgccaggagc aaggagtgtg tataaggaaa aacccagata attttgctat tcaacttgag ccgacacttg aagacctgga gcaattttct ttgagttgta aggagaaagc tgatgtaaaa gatggtgtct gtatagatgc ttttctaaaa ttctac ttcagaagct ttgttaaatc aagtggagta 60 ccatgttgct tgactctgaa tttcagagca 120 tgggcctgga atgccccaag tgaattttgt 180 agcctcttct ctttcatagg aagcccccga 240 ttttatgttg atagacttgg ctactatcct 300 aatggaggaa tcccccagaa gatttcctta 360 attacatttt atatgccagt agacaatttg 420 agacccactt gggcaagaaa ctggaaacct 480 ttggttcagc aacaaaatgt acaacttagt 540 gaatttgaaa aggcagggaa ggatttcctg 600 cggccaaatc acttgtgggg ttattatctt 660 aaacccggtt acaatggaag ttgcttcaat 720 tggttgtgga atgaaagcac tgctctttac 780 cctgtagctg ctacactcta tgtgcgcaat 840 atacctgatg caaaaagtcc acttccggtt 900 caagttttga aattcctttc tcaagatgaa 960 ctgggtgctt ctggaattgt aatatgggga 1020 tgcttgctcc tagacaatta catggagact 1080 ctagcagcca aaatgtgtag ccaagtgctt 1140 aactggaatt caagtgacta tcttcacctc 1200 aaaggtggaa agttcacagt acgtggaaaa 1260 gaaaaatttt attgcagctg ttatagcacc 1320 gacactgatg ctgttgatgt gtgtattgct 1380 cctcccatgg agacagaaga acctcaaatt 1440 1446
<210> 50
<211> 509
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> PH20 вариант P48A
- 147 031986 <400> 50
Met Gly Val Leu 1
Ser Ser Gly Val
Cys Leu Thr Leu
Phe Leu Trp Ala
Asp Glu Pro Leu
Ile Asn Ala Thr
Gly Tyr Tyr Pro
100
Gly Ile Pro Gln
115
Lys Asp Ile Thr
130
Ile Asp Trp Glu
145
Lys Asp Val Tyr
Val Gln Leu Ser
180
Glu Lys Ala Gly
195
Leu Leu Arg Pro
210
Tyr Asn His His
225
Val Glu Ile Lys
Thr Ala Leu Tyr
260
Ala Ala Thr Leu
275
Ser Lys Ile Pro
290
Arg Ile Val Phe
305
Leu Val Tyr Thr
Val Ile Trp Gly
340
Leu Leu Asp Asn
355
Val Thr Leu Ala
370
Gly Val Cys Ile
385
Asn Pro Asp Asn
Val Arg Gly Lys
420
Phe Tyr Cys Ser
435
Val Lys Asp Thr
450
Ile Asp Ala Phe
465
Phe Tyr Asn Ala
Lys Phe Lys His
Ser Gln Ile Val
Asn Phe Arg Ala
Trp Asn Ala Pro
Asp Met Ser Leu
Gly Gln Gly Val
Tyr Ile Asp Ser
Lys Ile Ser Leu
120
Phe Tyr Met Pro
135
Glu Trp Arg Pro
150
Lys Asn Arg Ser
165
Leu Thr Glu Ala
Lys Asp Phe Leu
200
Asn His Leu Trp
215
Tyr Lys Lys Pro
230
Arg Asn Asp Asp
245
Pro Ser Ile Tyr
Tyr Val Arg Asn
280
Asp Ala Lys Ser
295
Thr Asp Gln Val
310
Phe Gly Glu Thr
325
Thr Leu Ser Ile
Tyr Met Glu Thr
360
Ala Lys Met Cys
375
Arg Lys Asn Trp
390
Phe Ala Ile Gln
405
Pro Thr Leu Glu
Cys Tyr Ser Thr
440
Asp Ala Val Asp
455
Leu Lys Pro Pro
470
Ser Pro Ser Thr
485
Ile Phe Phe Arg
Phe Thr Phe Leu
Pro Pro Val Ile
Ser Glu Phe Cys
Phe Ser Phe Ile
Thr Ile Phe Tyr
Ile Thr Gly Val
105
Gln Asp His Leu
Val Asp Asn Leu
140
Thr Trp Ala Arg
155
Ile Glu Leu Val
170
Thr Glu Lys Ala
185
Val Glu Thr Ile
Gly Tyr Tyr Leu
220
Gly Tyr Asn Gly
235
Leu Ser Trp Leu
250
Leu Asn Thr Gln
265
Arg Val Arg Glu
Pro Leu Pro Val
300
Leu Lys Phe Leu
315
Val Ala Leu Gly
330
Met Arg Ser Met
345
Ile Leu Asn Pro
Ser Gln Val Leu
380
Asn Ser Ser Asp
395
Leu Glu Lys Gly
410
Asp Leu Glu Gln
425
Leu Ser Cys Lys
Val Cys Ile Ala
460
Met Glu Thr Glu
475
Leu Ser Ala Thr
490
Ser Phe Val Lys
Leu Ile Pro Cys
Pro Asn Val Ala
Leu Gly Lys Phe
Gly Ser Pro Arg
Val Asp Arg Leu
Thr Val Asn Gly
110
Asp Lys Ala Lys
125
Gly Met Ala Val
Asn Trp Lys Pro
160 Gln Gln Gln Asn
175
Lys Gln Glu Phe
190
Lys Leu Gly Lys
205
Phe Pro Asp Cys
Ser Cys Phe Asn
240
Trp Asn Glu Ser
255
Gln Ser Pro Val
270
Ala Ile Arg Val
285
Phe Ala Tyr Thr
Ser Gln Asp Glu
320
Ala Ser Gly Ile
335
Lys Ser Cys Leu
350
Tyr Ile Ile Asn
365
Cys Gln Glu Gln
Tyr Leu His Leu
400
Gly Lys Phe Thr
415
Phe Ser Glu Lys
430
Glu Lys Ala Asp
445
Asp Gly Val Cys
Glu Pro Gln Ile
480
Met Phe Ile Val
495
- 148 031986
Ser Ile Leu Phe Leu Ile Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu
500 505 <210> 51 <211> 509 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> предшественник PH20 вариант L499W <400> 51
Met Gly Val Leu 1
Ser Ser Gly Val
Cys Leu Thr Leu
Phe Leu Trp Ala
Asp Glu Pro Leu
Ile Asn Ala Thr
Gly Tyr Tyr Pro
100
Gly Ile Pro Gln
115
Lys Asp Ile Thr
130
Ile Asp Trp Glu
145
Lys Asp Val Tyr
Val Gln Leu Ser
180
Glu Lys Ala Gly
195
Leu Leu Arg Pro
210
Tyr Asn His His
225
Val Glu Ile Lys
Thr Ala Leu Tyr
260
Ala Ala Thr Leu
275
Ser Lys Ile Pro
290
Arg Ile Val Phe
305
Leu Val Tyr Thr
Val Ile Trp Gly
340
Leu Leu Asp Asn
355
Val Thr Leu Ala
370
Gly Val Cys Ile
Lys Phe Lys His
Ser Gln Ile Val
Asn Phe Arg Ala
Trp Asn Ala Pro
Asp Met Ser Leu
Gly Gln Gly Val
Tyr Ile Asp Ser
Lys Ile Ser Leu
120
Phe Tyr Met Pro
135
Glu Trp Arg Pro
150
Lys Asn Arg Ser
165
Leu Thr Glu Ala
Lys Asp Phe Leu
200
Asn His Leu Trp
215
Tyr Lys Lys Pro
230
Arg Asn Asp Asp
245
Pro Ser Ile Tyr
Tyr Val Arg Asn
280
Asp Ala Lys Ser
295
Thr Asp Gln Val
310
Phe Gly Glu Thr
325
Thr Leu Ser Ile
Tyr Met Glu Thr
360
Ala Lys Met Cys
375
Arg Lys Asn Trp
Ile Phe Phe Arg
Phe Thr Phe Leu
Pro Pro Val Ile
Ser Glu Phe Cys
Phe Ser Phe Ile
Thr Ile Phe Tyr
Ile Thr Gly Val
105
Gln Asp His Leu
Val Asp Asn Leu
140
Thr Trp Ala Arg
155
Ile Glu Leu Val
170
Thr Glu Lys Ala
185
Val Glu Thr Ile
Gly Tyr Tyr Leu
220
Gly Tyr Asn Gly
235
Leu Ser Trp Leu
250
Leu Asn Thr Gln
265
Arg Val Arg Glu
Pro Leu Pro Val
300
Leu Lys Phe Leu
315
Val Ala Leu Gly
330
Met Arg Ser Met
345
Ile Leu Asn Pro
Ser Gln Val Leu
380
Asn Ser Ser Asp
Ser Phe Val Lys
Leu Ile Pro Cys
Pro Asn Val Pro
Leu Gly Lys Phe
Gly Ser Pro Arg
Val Asp Arg Leu
Thr Val Asn Gly
110
Asp Lys Ala Lys
125
Gly Met Ala Val
Asn Trp Lys Pro
160 Gln Gln Gln Asn
175
Lys Gln Glu Phe
190
Lys Leu Gly Lys
205
Phe Pro Asp Cys
Ser Cys Phe Asn
240
Trp Asn Glu Ser
255
Gln Ser Pro Val
270
Ala Ile Arg Val
285
Phe Ala Tyr Thr
Ser Gln Asp Glu
320
Ala Ser Gly Ile
335
Lys Ser Cys Leu
350
Tyr Ile Ile Asn
365
Cys Gln Glu Gln
Tyr Leu His Leu
- 149 031986
385 390 395
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly
405 410
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe
420 425
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu
465 470 475
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met
485 490
Ser Ile Trp Phe Leu Ile Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu
500 505
400
Lys Phe Thr
415
Ser Glu Lys
430
Lys Ala Asp
Gly Val Cys
Pro Gln Ile
480
Phe Ile Val
495
<210> 52 <211> 6630 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> HZ24 вектор <400> 52 tcaatattgg ccattagcca tattattcat ttggccattg catacgttgt atctatatca aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gtcattagtt catagcccat atatggagtt gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc agtaacgcca atagggactt tccattgacg ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg caatgggagt ttgttttggc accaaaatca cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tcgtttagtg aaccgtcaga tcactagaag tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt actgggcttg tcgagacaga gaagactctt tgacatccac tttgcctttc tctccacagg aggctagagt acttaatacg actcactata catctttttc agaagctttg ttaaatcaag tctgattcca tgttgcttga ctctgaattt tttcctctgg gcctggaatg ccccaagtga agatatgagc ctcttctctt tcataggaag tacaatattt tatgttgata gacttggcta aactgtgaat ggaggaatcc cccagaagat gaaagacatt acattttata tgccagtaga agaatggaga cccacttggg caagaaactg tattgaattg gttcagcaac aaaatgtaca aaaacaagaa tttgaaaagg cagggaagga attacttcgg ccaaatcact tgtggggtta ctataagaaa cccggttaca atggaagttg tctcagctgg ttgtggaatg aaagcactgc gcagtctcct gtagctgcta cactctatgt ttccaaaata cctgatgcaa aaagtccact tactgatcaa gttttgaaat tcctttctca tgttgctctg ggtgcttctg gaattgtaat gaaatcttgc ttgctcctag acaattacat cgtcacacta gcagccaaaa tgtgtagcca tggttatata gcataaatca atattggcta 60 taatatgtac atttatattg gctcatgtcc 120 gactagttat taatagtaat caattacggg 180 ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc 240 attgacgtca ataatgacgt atgttcccat 300 tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc 360 gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga 420 gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg 480 taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac 540 gggatttcca agtctccacc ccattgacgt 600 acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc 660 tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc 720 ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat 780 agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc 840 tacaagacag gtttaaggag accaatagaa 900 gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac 960 tgtccactcc cagttcaatt acagctctta 1020 ggctagcatg ggagtgctaa aattcaagca 1080 tggagtatcc cagatagttt tcaccttcct 1140 cagagcacct cctgttattc caaatgtgcc 1200 attttgtctt ggaaaatttg atgagccact 1260 cccccgaata aacgccaccg ggcaaggtgt 1320 ctatccttac atagattcaa tcacaggagt 1380 ttccttacaa gaccatctgg acaaagctaa 1440 caatttggga atggctgtta ttgactggga 1500 gaaacctaaa gatgtttaca agaataggtc 1560 acttagtctc acagaggcca ctgagaaagc 1620 tttcctggta gagactataa aattgggaaa 1680 ttatcttttt ccggattgtt acaaccatca 1740 cttcaatgta gaaataaaaa gaaatgatga 1800 tctttaccca tccatttatt tgaacactca 1860 gcgcaatcga gttcgggaag ccatcagagt 1920 tccggttttt gcatataccc gcatagtttt 1980 agatgaactt gtgtatacat ttggcgaaac 2040 atggggaacc ctcagtataa tgcgaagtat 2100 ggagactata ctgaatcctt acataatcaa 2160 agtgctttgc caggagcaag gagtgtgtat 2220
- 150 031986 aaggaaaaac tggaattcaa gtgactatct acttgagaaa ggtggaaagt tcacagtacg attttctgaa aaattttatt gcagctgtta tgtaaaagac actgatgctg ttgatgtgtg tctaaaacct cccatggaga cagaagaacc cgcccctctc cctccccccc ccctaacgtt tgtgcgtttg tctatatgtt attttccacc cggaaacctg gccctgtctt cttgacgagc ggaatgcaag gtctgttgaa tgtcgtgaag caaacaacgt ctgtagcgac cctttgcagg ctctgcggcc aaaagccacg tgtataagat cacgttgtga gttggatagt tgtggaaaga aaggggctga aggatgccca gaaggtaccc tgcacatgct ttacatgtgt ttagtcgagg ggggacgtgg ttttcctttg aaaaacacga ctgccatcat ggttcgacca ttgaactgca gcaagaacgg agacctaccc tggcctccgc tgaccacaac ctcttcagtg gaaggtaaac ggttctccat tcctgagaag aatcgacctt gagaactcaa agaaccacca cgaggagctc taagacttat tgaacaaccg gaattggcaa gcagttctgt ttaccaggaa gccatgaatc ggatcatgca ggaatttgaa agtgacacgt aacttctccc agaataccca ggcgtcctct ataagtttga agtctacgag aagaaagact gcggccgctt cgagcagaca tgataagata aatgcagtga aaaaaatgct ttatttgtga cattataagc tgcaataaac aagttaacaa tcagggggag atgtgggagg ttttttaaag cgataaggat ccgggctggc gtaatagcga gttgcgcagc ctgaatggcg aatggacgcg gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc gggctccctt tagggttccg atttagtgct tagggtgatg gttcacgtag tgggccatcg ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc atctcggtct attcttttga tttataaggg aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg tcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc ctctcagtac aatctgctct gatgccgcat ccgctgacgc gccctgacgg gcttgtctgc ccgtctccgg gagctgcatg tgtcagaggt gaaagggcct cgtgatacgc ctatttttat agacgtcagg tggcactttt cggggaaatg aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg attctcagaa tgacttggtt gagtactcac tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc atatacttta gattgattta aaacttcatt tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt tcacctcaac ccagataatt ttgctattca 2280 tggaaaaccg acacttgaag acctggagca 2340 tagcaccttg agttgtaagg agaaagctga 2400 tattgctgat ggtgtctgta tagatgcttt 2460 tcaaattttc tactgaggat ccatagctaa 2520 actggccgaa gccgcttgga ataaggccgg 2580 atattgccgt cttttggcaa tgtgagggcc 2640 attcctaggg gtctttcccc tctcgccaaa 2700 gaagcagttc ctctggaagc ttcttgaaga 2760 cagcggaacc ccccacctgg cgacaggtgc 2820 acacctgcaa aggcggcaca accccagtgc 2880 gtcaaatggc tctcctcaag cgtattcaac 2940 cattgtatgg gatctgatct ggggcctcgg 3000 ttaaaaaaac gtctaggccc cccgaaccac 3060 tgataagctt gccacaaccc acagcggccg 3120 tcgtcgccgt gtcccaaaat atggggattg 3180 tcaggaacga gttcaagtac ttccaaagaa 3240 agaatctggt gattatgggt aggaaaacct 3300 taaaggacag aattaatata gttctcagta 3360 attttcttgc caaaagtttg gatgatgcct 3420 gtaaagtaga catggtttgg atagtcggag 3480 aaccaggcca cctcagactc tttgtgacaa 3540 ttttcccaga aattgatttg gggaaatata 3600 ctgaggtcca ggaggaaaaa ggcatcaagt 3660 aaacgcgtgg tacctctaga gtcgacccgg 3720 cattgatgag tttggacaaa ccacaactag 3780 aatttgtgat gctattgctt tatttgtaac 3840 caacaattgc attcatttta tgtttcaggt 3900 caagtaaaac ctctacaaat gtggtaaaat 3960 agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 4020 ccctgtagcg gcgcattaag cgcggcgggt 4080 cttgccagcg ccctagcgcc cgctcctttc 4140 gccggctttc cccgtcaagc tctaaatcgg 4200 ttacggcacc tcgaccccaa aaaacttgat 4260 ccctgataga cggtttttcg ccctttgacg 4320 ttgttccaaa ctggaacaac actcaaccct 4380 attttgccga tttcggccta ttggttaaaa 4440 aattttaaca aaatattaac gcttacaatt 4500 tgtgcggtat ttcacaccgc atatggtgca 4560 agttaagcca gccccgacac ccgccaacac 4620 tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga 4680 tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgagac 4740 aggttaatgt catgataata atggtttctt 4800 tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct 4860 gacaataacc ctgataaatg cttcaataat 4920 atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg 4980 cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg 5040 tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc 5100 caatgatgag cacttttaaa gttctgctat 5160 ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact 5220 cagtcacaga aaagcatctt acggatggca 5280 taaccatgag tgataacact gcggccaact 5340 agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg 5400 cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg 5460 caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg 5520 taatagactg gatggaggcg gataaagttg 5580 ctggctggtt tattgctgat aaatctggag 5640 cagcactggg gccagatggt aagccctccc 5700 aggcaactat ggatgaacga aatagacaga 5760 attggtaact gtcagaccaa gtttactcat 5820 tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc 5880 aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag 5940 gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct 6000
- 151 031986 gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac6060 caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgttcttc6120 tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg6180 ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt6240 tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt6300 gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc6360 tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca6420 gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata6480 gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg6540 ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct6600 ggccttttgc tcacatggct cgacagatct6630 <210> 53 <211> 186 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <220>
<223> дигидрофолат редуктаза <400> 53
Val 1 Arg Pro Leu Asn 5 Cys Ile Val Ala Val 10 Ser Gln Asn Met Gly 15 Ile
Gly Lys Asn Gly Asp Leu Pro Trp Pro Pro Leu Arg Asn Glu Phe Lys
20 25 30
Tyr Phe Gln Arg Met Thr Thr Thr Ser Ser Val Glu Gly Lys Gln Asn
35 40 45
Leu Val Ile Met Gly Arg Lys Thr Trp Phe Ser Ile Pro Glu Lys Asn
50 55 60
Arg Pro Leu Lys Asp Arg Ile Asn Ile Val Leu Ser Arg Glu Leu Lys
65 70 75 80
Glu Pro Pro Arg Gly Ala His Phe Leu Ala Lys Ser Leu Asp Asp Ala
85 90 95
Leu Arg Leu Ile Glu Gln Pro Glu Leu Ala Ser Lys Val Asp Met Val
100 105 110
Trp Ile Val Gly Gly Ser Ser Val Tyr Gln Glu Ala Met Asn Gln Pro
115 120 125
Gly His Leu Arg Leu Phe Val Thr Arg Ile Met Gln Glu Phe Glu Ser
130 135 140
Asp Thr Phe Phe Pro Glu Ile Asp Leu Gly Lys Tyr Lys Leu Leu Pro
145 150 155 160
Glu Tyr Pro Gly Val Leu Ser Glu Val Gln Glu Glu Lys Gly Ile Lys
165 170 175
Tyr Lys Phe Glu Val Tyr Glu Lys Lys Asp
180 185
<210> 54 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> His tag <400> 54
His His His His His His <210> 55 <211> 8
- 152 031986 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Flag tag <400> 55
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
5 <210> 56 <211> 1449 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<223> Последовательность мРНК Gen2 <400> 56 atgggagtgc taaaattcaa gcacatcttt tcccagatag ttttcacctt ccttctgatt cctcctgtta ttccaaatgt gcctttcctc cttggaaaat ttgatgagcc actagatatg ataaacgcca ccgggcaagg tgttacaata tacatagatt caatcacagg agtaactgtg caagaccatc tggacaaagc taagaaagac ggaatggctg ttattgactg ggaagaatgg aaagatgttt acaagaatag gtctattgaa ctcacagagg ccactgagaa agcaaaacaa gtagagacta taaaattggg aaaattactt tttccggatt gttacaacca tcactataag gtagaaataa aaagaaatga tgatctcagc ccatccattt atttgaacac tcagcagtct cgagttcggg aagccatcag agtttccaaa tttgcatata cccgcatagt ttttactgat cttgtgtata catttggcga aactgttgct accctcagta taatgcgaag tatgaaatct atactgaatc cttacataat caacgtcaca tgccaggagc aaggagtgtg tataaggaaa aacccagata attttgctat tcaacttgag ccgacacttg aagacctgga gcaattttct ttgagttgta aggagaaagc tgatgtaaaa gatggtgtct gtatagatgc ttttctaaaa ttctactga ttcagaagct ttgttaaatc aagtggagta 60 ccatgttgct tgactctgaa tttcagagca 120 tgggcctgga atgccccaag tgaattttgt 180 agcctcttct ctttcatagg aagcccccga 240 ttttatgttg atagacttgg ctactatcct 300 aatggaggaa tcccccagaa gatttcctta 360 attacatttt atatgccagt agacaatttg 420 agacccactt gggcaagaaa ctggaaacct 480 ttggttcagc aacaaaatgt acaacttagt 540 gaatttgaaa aggcagggaa ggatttcctg 600 cggccaaatc acttgtgggg ttattatctt 660 aaacccggtt acaatggaag ttgcttcaat 720 tggttgtgga atgaaagcac tgctctttac 780 cctgtagctg ctacactcta tgtgcgcaat 840 atacctgatg caaaaagtcc acttccggtt 900 caagttttga aattcctttc tcaagatgaa 960 ctgggtgctt ctggaattgt aatatgggga 1020 tgcttgctcc tagacaatta catggagact 1080 ctagcagcca aaatgtgtag tcaagtgctt 1140 aactggaatt caagtgacta tcttcacctc 1200 aaaggtggaa agttcacagt acgtggaaaa 1260 gaaaaatttt attgcagctg ttatagcacc 1320 gacactgatg ctgttgatgt gtgtattgct 1380 cctcccatgg agacagaaga acctcaaatt 1440 1449 <210> 57 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> C-концевой пептид, отщепленный от растворимой rHuPH20 aa 431-447 <400> 57
Asp Ala Phe Lys Leu Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe
5 10 15
Tyr
- 153 031986 <210> 58 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> C-концевой пептид, отщепленный от растворимой rHuPH20 aa
431-446 <400>
Asp Ala Phe Lys Leu Pro
Pro Met Glu Thr
Glu Glu Pro
Gln Ile
Phe <210> 59 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> C-концевой пептид, отщепленный от растворимой rHuPH20 aa
431-445 <400> 59
Asp Ala Phe Lys Leu Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
5 10 15 <210> 60 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> C-концевой пептид, отщепленный от растворимой rHuPH20 aa
431-444 <400> 60
Asp Ala Phe Lys Leu Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln
5 10 <210> 61 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> C-концевой пептид, отщепленный от растворимой rHuPH20 aa
431-443 <400> 61
Asp Ala Phe Lys Leu Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro
5 10 <210> 62 <211> 12 <212> БЕЛОК
- 154 031986 <213> Homo sapiens <220>
<223> C-концевой пептид, отщепленный от растворимой rHuPH20 aa
431-442 <400> 62
Asp Ala Phe Lys Leu Pro
5
Pro Met Glu Thr Glu Glu <210> 63 <211> 520 <212> БЕЛОК <213> Ovis aries <220>
<223> PH20 <400> 63
Leu 1 Asp Phe Pro Ala 5 Pro Pro Leu Ile Ser 10 Asn Thr Ser Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ala Glu Arg Cys Val Lys Ile Phe Lys Leu Pro
20 25 30
Pro Asp Leu Arg Leu Phe Ser Val Lys Gly Ser Pro Gln Lys Ser Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Phe Ile Thr Leu Phe Tyr Ala Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro His Ile Asp Glu Lys Thr Gly Asn Thr Val Tyr Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Leu Gly Asn Leu Lys Asn His Leu Glu Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Ala Tyr Tyr Ile Pro Asn Asp Ser Val Gly Leu Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Asn Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Arg Asp Glu Ser Val Glu Leu Val Leu Gln Lys Asn Pro Gln Leu
130 135 140
Ser Phe Pro Glu Ala Ser Lys Ile Ala Lys Val Asp Phe Glu Thr Ala
145 150 155 160
Gly Lys Ser Phe Met Gln Glu Thr Leu Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
Asn Tyr Asn Gln Pro Thr Tyr Asn Gly Asn Cys Ser Asp Leu Glu Lys
195 200 205
Arg Arg Asn Asp Asp Leu Asp Trp Leu Trp Lys Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Phe Pro Ser Val Tyr Leu Asn Ile Lys Leu Lys Ser Thr Pro Lys Ala
225 230 235 240
Ala Phe Tyr Val Arg Asn Arg Val Gln Glu Ala Ile Arg Leu Ser Lys
245 250 255
Ile Ala Ser Val Glu Ser Pro Leu Pro Val Phe Val Tyr His Arg Pro
260 265 270
Val Phe Thr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Leu Ser Gln Gly Asp Leu Val
275 280 285
Asn Ser Val Gly Glu Ile Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Ile Met
290 295 300
Trp Gly Ser Leu Asn Leu Ser Leu Thr Met Gln Ser Cys Met Asn Leu
305 310 315 320
Gly Asn Tyr Asn Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
- 155 031986
Ala Ala
Thr Arg
Met Asn
370
Gly Lys
385
Cys Ser
Asn Val
Gly Pro
Ala Ser
450
Thr Val 465
Lys Val
Gln Gly
Gln Asn
Lys Met
340
Lys Gln
355
Phe Ala
Val Thr
Cys Tyr
His Ser
420
Val Lys
435
Thr Thr
Val Ser
Arg Cys
Val Lys
500 Ile Lys 515
Cys Ser
Trp Asn
Ile Gln
Leu Glu
390
Ala Asn
405
Val Asn
Leu Gln
Thr Val
Pro Cys
470
Leu Glu
485
Trp Lys
Asn Gln
Gln Val
Ser Ser
360 Thr Gly 375
Asp Leu
Ile Asn
Val Cys
Pro Ser
440
Ser Ser 455
Thr Pro
Ala Ile
Asn Thr
Thr Thr
520
Leu Cys
345
Asp Tyr
Lys Gly
Gln Thr
Cys Lys
410
Met Ala
425
Asp His
Ile Ser
Glu Lys
Ala Asn
490
Ser Ser
505
His Asp
Leu His
Gly Lys
380
Phe Ser
395
Lys Arg
Glu Asp
Ser Ser
Pro Ser
460
Gln Ser
475
Val Thr
Gln Ser
Glu Gly
350
Leu Asn
365
Tyr Thr
Asp Lys
Val Asp
Ile Cys
430
Ser Gln
445
Thr Thr
Pro Glu
Gln Thr
Gln Ser
510
Val Cys
Pro Ile
Val Pro
Phe Tyr
400
Ile Lys
415
Ile Glu
Asn Glu
Ala Thr
Cys Leu
480 Gly Cys 495
Ser Ile <210> 64 <211> 474 <212> БЕЛОК <213> Bos taurus <220>
<223> предшественник коровьей PH20 <400> 64
Met Gly Met Phe Arg Arg His His Ile Ser Phe Arg Ser Phe Ala Gly
1 5 10 15
Ser Ser Gly Thr Pro Gln Ala Val Phe Thr Phe Leu Leu Leu Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Ala Leu Asp Phe Arg Ala Pro Pro Leu Ile Ser Asn Thr Ser
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Val Glu Arg Cys Val Asn Arg Arg
50 55 60
Phe Gln Leu Pro Pro Asp Leu Arg Leu Phe Ser Val Lys Gly Ser Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ser Ala Thr Gly Gln Phe Ile Thr Leu Phe Tyr Ala Asp Arg
85 90 95
Leu Gly Tyr Tyr Pro His Ile Asp Glu Lys Thr Gly Lys Thr Val Phe
100 105 110
Gly Gly Ile Pro Gln Leu Gly Asn Leu Lys Ser His Leu Glu Lys Ala
115 120 125
Lys Asn Asp Ile Ala Tyr Tyr Ile Pro Asn Asp Ser Val Gly Leu Ala
130 135 140
Val Ile Asp Trp Glu Asn Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys
145 150 155 160
Pro Lys Asp Val Tyr Arg Asp Glu Ser Val Glu Leu Val Leu Gln Lys
165 170 175
Asn Pro Gln Leu Ser Phe Pro Glu Ala Ser Lys Ile Ala Lys Val Asp
180 185 190
Phe Glu Thr Ala Gly Lys Ser Phe Met Gln Glu Thr Leu Lys Leu Gly
195 200 205
Lys Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp
210 215 220
- 156 031986
Cys Tyr Asn His Asn His Asn Gln Pro Thr Tyr Asn Gly Asn Cys Pro
225 230 235 240
Asp Val Glu Lys Arg Arg Asn Asp Asp Leu Glu Trp Leu Trp Lys Glu
245 250 255
Ser Thr Ala Leu Phe Pro Ser Val Tyr Leu Asn Ile Arg Leu Lys Ser
260 265 270
Thr Gln Asn Ala Ala Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Gln Glu Ala Ile
275 280 285
Arg Leu Ser Lys Ile Ala Ser Val Glu Ser Pro Leu Pro Val Phe Val
290 295 300
Tyr Ala Arg Pro Val Phe Thr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Leu Ser Gln
305 310 315 320
Gly Asp Leu Val Asn Ser Val Gly Glu Ile Val Ser Leu Gly Ala Ser
325 330 335
Gly Ile Ile Met Trp Gly Ser Leu Asn Leu Ser Leu Ser Val Gln Ser
340 345 350
Cys Met Asn Leu Gly Thr Tyr Leu Asn Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile
355 360 365
Ile Asn Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys His
370 375 380
Asp Gly Gly Val Cys Thr Arg Lys His Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu
385 390 395 400
His Leu Asn Pro Met Asn Phe Ala Ile Gln Thr Gly Glu Gly Gly Lys
405 410 415
Tyr Thr Val Pro Gly Thr Leu Thr Leu Glu Asp Leu Gln Lys Phe Ser
420 425 430
Asp Thr Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Asn Leu Ser Cys Lys Lys Arg
435 440 445
Val Asp Ile Lys Asn Val His Ser Val Asp Val Cys Met Ala Glu Asp
450 455 460
Val Cys Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro
465 470
<210> 65 <211> 517 <212> БЕЛОК <213> Ovis aries <220>
<223> PH20 <400> 65
Asp Phe Arg Ala
Trp Asn Ala Pro
Asp Leu Arg Leu
Gly Gln Phe Ile
His Ile Asp Glu
Leu Gly Asn Leu
Tyr Tyr Ile Pro
100
Asn Trp Arg Pro
115
Arg Asp Glu Ser
130
Phe Pro Glu Ala
145
Pro Pro Leu Ile
Ala Glu Arg Cys
Phe Ser Val Lys
Thr Leu Phe Tyr
Lys Thr Gly Asn
Lys Asn His Leu
Asn Asp Ser Val
Thr Trp Ala Arg
120
Val Glu Leu Val
135
Ser Lys Ile Ala
150
Ser Asn Thr Ser
Ile Lys Ile Phe
Gly Ser Pro Gln
Ala Asp Arg Leu
Thr Val Tyr Gly
Glu Lys Ala Lys
Gly Leu Ala Val
105
Asn Trp Lys Pro
Leu Gln Lys Asn
140
Lys Val Asp Phe
155
Phe Leu Trp Ala
Lys Leu Pro Pro
Lys Ser Ala Thr
Gly Tyr Tyr Pro
Gly Ile Pro Gln
Lys Asp Ile Ala
Ile Asp Trp Glu
110
Lys Asp Val Tyr
125
Pro Gln Leu Ser
Glu Thr Ala Gly
160
- 157 031986
Lys Ser Phe Met Gln 165 Glu Thr Leu Lys Leu 170 Gly Lys Leu Leu Arg 175 Pro
Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His Asn
180 185 190
Tyr Asn Gln Pro Thr Tyr Asn Gly Asn Cys Ser Asp Leu Glu Lys Arg
195 200 205
Arg Asn Asp Asp Leu Asp Trp Leu Trp Lys Glu Ser Thr Ala Leu Phe
210 215 220
Pro Ser Val Tyr Leu Asn Ile Lys Leu Lys Ser Thr Pro Lys Ala Ala
225 230 235 240
Phe Tyr Val Arg Asn Arg Val Gln Glu Ala Ile Arg Leu Ser Lys Ile
245 250 255
Ala Ser Val Glu Ser Pro Leu Pro Val Phe Val Tyr His Arg Pro Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Leu Ser Gln Gly Asp Leu Val Asn
275 280 285
Ser Val Gly Glu Ile Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Ile Met Trp
290 295 300
Gly Ser Leu Asn Leu Ser Leu Thr Met Gln Ser Cys Met Asn Leu Gly
305 310 315 320
Asn Tyr Leu Asn Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys His Asp Glu Gly Val Cys
340 345 350
Thr Arg Lys Gln Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Met
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Thr Gly Lys Gly Gly Lys Tyr Thr Val Pro Gly
370 375 380
Lys Val Thr Leu Glu Asp Leu Gln Thr Phe Ser Asp Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ala Asn Ile Asn Cys Lys Lys Arg Val Asp Ile Lys Asn
405 410 415
Val His Ser Val Asn Val Cys Met Ala Glu Asp Ile Cys Ile Glu Gly
420 425 430
Pro Val Lys Leu Gln Pro Ser Asp His Ser Ser Ser Gln Asn Glu Ala
435 440 445
Ser Thr Thr Thr Val Ser Ser Ile Ser Pro Ser Thr Thr Ala Thr Thr
450 455 460
Val Ser Pro Cys Thr Pro Glu Lys Gln Ser Pro Glu Cys Leu Lys Val
465 470 475 480
Arg Cys Leu Glu Ala Ile Ala Asn Val Thr Gln Thr Gly Cys Gln Gly
485 490 495
Val Lys Trp Lys Asn Thr Ser Ser Gln Ser Ser Ile Gln Asn Ile Lys
500 505 510
Asn Gln Thr Thr Tyr
515
<210>
<211>
<212>
<213>
1620
ДНК
Ovis aries <220>
<223>
кодирующая PH20 овец <400> 66 ttttccgtgt tggttggctc cctctgggcc tggaatgccc tctgagactc ttctctgtaa attattttat gctgatagac tgtatatgga ggaattcccc agacattgcc tattacatac tggacttcag agcaccccct cagctgaacg ttgtattaaa aaggaagccc ccaaaaaagt ttggctacta tcctcatata agttgggaaa cttaaaaaat caaatgacag cgtgggcttg ctcatttcaa acacttcttt 60 atctttaaac tacctccaga 120 gctacgggac aatttattac 180 gatgaaaaaa caggcaacac 240 catttggaaa aagccaaaaa 300 gcggtcattg actgggaaaa 360
- 158 031986 ctggaggcct acctgggcaa gaaactggaa tgagttggtt ctgcaaaaaa atccacaact agtggatttt gagacagcag gaaagagttt acttcggcca aatcacttat ggggttatta taaccagcct acttacaatg gaaattgctc cgactggttg tggaaggaaa gcactgccct aaaatctact ccaaaagctg ccttctatgt gtctaaaata gcgagtgttg aaagtccact tactgatggg tcttcaacat acctttctca cgttgctcta ggtgcctctg ggattataat gcaatcttgc atgaacctag gcaattactt cgtcacccta gcagccaaaa tgtgcagcca aaggaaacaa tggaattcaa gcgactatct aactgggaaa ggtggaaaat acacagtacc gttttctgat aaattttatt gcagttgtta tataaaaaat gttcatagtg ttaatgtatg tgtgaagtta caacccagtg atcattcctc cagcagtatc tcaccctcta ctacagccac gtcccctgag tgcctcaaag tcaggtgttt gtgtcaaggt gttaaatgga agaacacttc tcaaacaacc tattaaaata taaattcagt acctaaagat gtttacaggg atgagtctgt 420 cagtttccca gaggcttcca agattgcaaa 480 catgcaagag actttaaaac tgggaaaatt 540 tctttttcct gattgttaca atcataatta 600 tgatttagaa aaaaggagaa atgatgatct 660 tttcccttct gtttatttga atatcaagtt 720 tcgtaatcgt gtccaggaag ccattcggtt 780 tcccgttttt gtatatcacc gtccagtttt 840 gggtgacctt gtgaattcgg ttggtgagat 900 gtggggcagt ctcaatctaa gcctaactat 960 gaacactaca ctgaatcctt acataatcaa 1020 agtgctttgc cacgatgaag gagtgtgtac 1080 tcacctgaac ccaatgaatt ttgctattca 1140 tgggaaagtc acacttgaag acctgcaaac 1200 tgccaacatc aactgtaaga agagagttga 1260 tatggcagaa gacatttgta tagagggccc 1320 tagccagaat gaggcatcta ctaccaccgt 1380 cacagtatct ccatgtactc ctgagaaaca 1440 ggaagccatc gccaacgtca cccaaacggg 1500 cagtcagtca agtattcaaa atattaaaaa 1560 gcttataaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1620 <210> 67 <211> 793 <212> БЕЛОК <213> Arthrobacter sp.
<220>
<223> гиалуронан лиаза (штамм FB24) <400> 67
Met Thr Arg Glu Phe Ser Arg Arg Thr Ala Leu Lys Gly Ala Ala Leu
1 5 10 15
Ser Gly Leu Leu Leu Ala Met Val His Gly Pro Ala His Ala Ala Ala
20 25 30
Thr Ala Asn Ala Thr Leu Thr Pro Ala Asp Phe Ala Gly Leu Arg Gln
35 40 45
Arg Trp Val Asp Gln Ile Thr Gly Arg Lys Val Leu Val Ala Gly Asp
50 55 60
Asn Asp Phe Val Thr Ala Leu Ala Ala Leu Asp Lys Lys Ala Arg Thr
65 70 75 80
Ala Ile Asp Leu Leu Glu Arg Ser Ala Gly Arg Leu Thr Val Phe Ser
85 90 95
Asp Leu Ser Leu Ala Lys Asp Thr Asp Leu Val Thr Thr His Thr Arg
100 105 110
Leu Ala Thr Met Ala Thr Ala Trp Ala Thr Pro Gly Ser Glu His Phe
115 120 125
Ala Asp Ala Gly Leu Leu Ala Ala Ile Arg Ala Gly Leu Ala Asp Ala
130 135 140
Asn Ser Leu Cys Tyr Asn Ala Ser Lys Glu Glu Gln Gly Asn Trp Trp
145 150 155 160
Ser Trp Glu Ile Gly Thr Pro Lys Ala Leu Ala Asp Thr Met Val Leu
165 170 175
Leu His Ala Glu Leu Thr Ala Ala Glu Arg Ala Ala Tyr Cys Ala Ala
180 185 190
Ile Asp His Phe Val Pro Asp Pro Trp Gln Gln Phe Pro Pro Lys Arg
195 200 205
Gly Lys Ile Thr Ser Val Gly Ala Asn Arg Val Asp Leu Cys Gln Ala
210 215 220
Val Thr Ile Arg Ser Leu Val Asp Glu Asp Ala Glu Lys Leu Thr His
225 230 235 240
Ala Val Ala Gly Leu Ser Glu Val Trp Gln Tyr Val Ser Ala Gly Asn
- 159 031986
245
Gly Phe Phe Thr Asp
260
Thr Gly Ser Tyr Gly
275
Ala Leu Leu Gly Gly
290
Ile Leu Phe Lys Thr
305
Gly Ala Met Ala Asp
325
Asn Thr Gly Phe Asp
340
Leu Ala Arg Ala Val
355
Cys Leu Ala Trp Ile
370
Ala Gly Val Gly Arg
385
Leu Thr Glu Thr Asp
405
Asp Arg Thr Met His
420
Ala Ser Ser Arg Ile
435
Arg Gly Tyr His Thr
450
Leu Gly Gln Tyr Asp
465
Leu Pro Gly Ile Thr
485
Gly Glu Trp Gly Ala
500
Ala Tyr Gly Asp Val
515
Gly Thr Gly Leu Thr
530
Ile Val Cys Leu Gly
545
Glu Thr Val Val Asp
565
Gly Thr Ala Ala Gly
580
Leu Thr Val Asp Arg
595
Val Leu Asp Ala Ala
610
Ser Trp Ser Glu Val
625
Asn Tyr Ala Thr Leu
645
Ser Tyr Ala Tyr Leu
660
Ser Leu Ser Gly Gln
675
Ala Gln Ala Val Lys
690
Trp Arg Pro Gly Thr
705
Val Val Val Lys Glu
725
Pro Thr Gln Asn Ala
740
250
Gly Ser Phe Ile Gln
265
Val Val Leu Leu Thr
280
Thr Gly Ala Glu Val
295
Val Glu Gly Ser Phe
310
Ser Val Arg Gly Arg
330
Leu Gly Ala Ser Thr
345
Asp Pro Val Thr Ala
360
Asn Gln Asn Arg Lys
375
Thr Ala Leu Val Lys
390
Leu Pro Gly Gly His
410
His Ser Gln Gly Trp
425
Ala Trp Tyr Glu Cys
440
Gly Ser Gly Met Thr
455
Asp Ala Phe Trp Ala
470
Val Asp Thr Ser Ser
490
Ala Thr Pro Ala Asn
505
Ala Ala Val Gly Gln
520
Ala Arg Lys Ser Trp
535
Ala Asp Ile Arg Thr
550
His Arg Asn Leu His
570
Thr Val Ala Ala Thr
585
Trp Val His Leu Glu
600
Pro Leu Gln Val Leu
615
Asn Val Lys Gly Ser
630
Tyr Phe Asp His Gly
650
Val Ala Pro Gly Ala
665
Ser Phe His Thr Val
680
Phe Lys Lys Glu Lys
695
Val Gly Asp Leu Ala
710
Val Gly Asp Arg Leu
730
Ser Thr Leu Thr Leu
745
255
His Ser Thr Thr Pro 270
Gly Leu Ser Lys Leu
285
Ser Asp Pro Ser Arg
300
Ala Pro Phe Met Val
315
Ser Ile Ser Arg Glu
335
Ile Glu Ser Ile Leu 350
Arg Arg Trp Arg Ser
365
Ala Pro Ile Leu Ala
380
Glu Leu Leu Ala Met
395
Tyr Leu Phe Pro Ala
415
Thr Leu Ser Thr Ala 430
Gly Asn Gly Glu Asn
445
Tyr Val Tyr Asp Gly
460
Thr Ala Asn His Cys
475
Leu Pro Asp Lys Val
495
Glu Trp Thr Gly Ser 510
His Leu Ile Gly Pro
525
Phe Val Ser Lys Asp
540
Gly Ser Gly Ser Arg
555
Ala Gly Phe Asn Ala
575
Pro Gly His Pro Glu 590
Gly Phe Gly Gly Tyr
605
Arg Glu Gln Arg Glu
620
Ala Ala Arg Gln Thr
635
His Glu Pro Glu Ala
655
Ser Ala Ser Met Thr 670
Leu Arg Asn Asp Glu
685
Thr Thr Ala Ala Thr
700
Leu Ser Gly Pro Ala
715
Ser Ile Ala Val Ser
735
Arg Leu Lys Thr Lys
750
Tyr
Phe
Asp
Ala
320
Ser
Leu
Leu
Asp
Gly
400
Met
Met
Asn
Asp
Arg
480
Glu
Thr
Gly
Val
Ile
560
Met
Val
Val
Gly
Arg
640
Ala
Ser
Val
Phe
Cys
720
Asp
Arg
- 160 031986
Phe Phe
Asp Gly
770
Thr Lys
785
Arg Ile
755
Phe Thr
Gln Ile
Ile Glu
Val Leu
Glu Leu
790
Gly Gln
760
Glu Val
775
Ser Ala
Gly Ala
Asp Ile
Glu
Ser Leu
Ala Asn
780
Ser His
765
His Ala
Gly Ala
Gly Arg <210> 68 <211> 557 <212> БЕЛОК <213> Bdellovibrio bacteriovorus <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 68
Met 1 Thr Lys Phe Phe 5 Phe Leu Leu Thr Leu 10 Ile Ser Ala Thr Ala 15 Phe
Ala Gln Ser Glu Pro Asp Trp Thr Ala Gly Val Pro Val Pro Pro Gly
20 25 30
Gly Arg Ser Asn Ile Tyr Ser Trp Asn Asp Phe Asp Phe Gln Ala Thr
35 40 45
Leu Asn Lys Gly Lys Ile His Ala Gln Val Tyr Pro Val Thr Val Thr
50 55 60
Gly Met Leu Pro Pro Tyr Glu Pro Val Arg Arg Leu Ile Glu Glu Lys
65 70 75 80
Asn Ser Asn Pro Leu Arg Lys Trp Ile Gln Ser Leu Met Lys Gly Leu
85 90 95
Ser Gly Phe Arg Ser Phe Glu Asp Val Leu Lys Asn Leu Gly Leu His
100 105 110
Lys Tyr Pro Leu Glu Asn Glu Arg Gly Val Tyr Ala Val Pro Tyr Pro
115 120 125
Asn Glu Ile Arg Pro Asp Thr Leu Met Gly Phe Gly Leu Ile Glu Arg
130 135 140
Asn Gly Ala Glu Gly Phe Thr Phe Ser Cys Ala Ala Cys His Ser Ser
145 150 155 160
Asn Leu Phe Gly Lys Thr Val Leu Gly Met Thr Asn Arg Phe Pro Arg
165 170 175
Ala Asn Glu Phe Phe Ile Lys Ala Lys Lys Val Met Pro Leu Met Asp
180 185 190
Pro His Ile Phe Gln Ala Tyr Thr Arg Ala Thr Asp Ala Glu Thr Ala
195 200 205
Leu Leu Val Glu Ser Lys Glu Arg Leu Lys Ser Val Ala Leu Lys Gln
210 215 220
Pro Ile Ala Leu Gly Leu Asp Thr Ser Leu Ala Gln Val Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Asn Arg Arg Ala Lys Asp Gly Tyr Ala Asn Tyr Ser Asp Lys Ala
245 250 255
Ala Arg Ser Pro Arg Ala Asp Ala Tyr Leu Asp Asn Lys Pro Ala Asp
260 265 270
Ser Lys Pro Ala Val Trp Trp Asn Val Lys Tyr Lys Asn Arg Trp Leu
275 280 285
Ser Asp Gly Ser Val Leu Ser Gly Asn Pro Ile Phe Thr Asn Leu Ile
290 295 300
Trp Asn Glu Ile Gly Arg Gly Ala Asp Leu His Glu Leu Glu Gln Trp
305 310 315 320
Leu Ala Asp Asn Asp His Ile Ile Lys Glu Leu Thr Thr Ala Val Phe
325 330 335
Ala Ser Glu Ala Pro His Ile Thr Asp Phe Tyr Pro Ala Glu Lys Ile
340 345 350
Asp Leu Gly Arg Ala Lys Ala Gly Glu Gln Ile Phe Lys Asn Thr Cys
355 360 365
- 161 031986
Ala Lys
370
Leu Val
385
Lys Glu
Gln Gly
Lys Asn
Leu Val
450
Pro Asn
465
Tyr Tyr
Cys Gly
Arg Glu
His Asp
530
Glu Asp
545
Cys His
Leu Ser
Lys Thr
Met Lys
420 Gly Ile 435
Gly Ile
Leu Cys
Ser Gly
Gly Tyr
500
His Leu
515
Glu Gly
Lys Tyr
Gly His
Ala Ala
390
Pro Val
405
Ser Leu
Val Ile
Trp Ala
Val Leu
470
Glu Ala
485
Pro Ile
Tyr Asp
Ile Phe
Asn Leu
550
Tyr Glu 375
Glu Arg
Val Asn
Glu Gln
Lys Ala
440 Arg Trp 455
Leu Thr
Leu Asn
Gly Asp
Thr Arg
520 Ile Lys 535
Ile Gln
Lys Ala
Leu Lys
Val Gly
410
Leu Asn 425
Gln Glu
Pro Tyr
Pro Ala
Lys Asp
490
Lys Thr 505
Asn Pro
Asp Gly
Phe Leu
Trp Asn
380
Thr Val
395
Thr Asp
Asp Leu
Gly Tyr
Met His
460
Lys Lys
475
Thr Asp
Pro Lys
Gly Met
Lys Glu
540
Gln Thr
555
Leu Pro
Glu Val
Pro Phe
Glu Ile
430
Val Pro
445
Asn Asn
Arg Pro
Tyr Asp
Ala Trp
510
Gly Asn
525
Ile Leu
Leu
Gln Ala
Arg Tyr
400
Arg Arg
415
Ser Lys
Pro Pro
Ser Ile
Ser Ile
480
Phe Ser
495
Lys Thr
Met Gly
Ser Ala <210> 69 <211> 813 <212> БЕЛОК <213> Propionibacterium acnes <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 69
Met 1 Phe Gly Thr Pro 5 Ser Arg Arg Thr Phe 10 Leu Thr Ala Ser Ala 15 Leu
Ser Ala Met Ala Leu Ala Ala Ser Pro Thr Val Thr Asp Ala Ile Ala
20 25 30
Ala Pro Gly Pro Asp Ser Trp Ser Ala Leu Cys Glu Arg Trp Ile Asp
35 40 45
Ile Ile Thr Gly Arg Arg Ala Ala Arg Thr Ser Asp Pro Arg Ala Arg
50 55 60
Ala Ile Ile Ala Lys Thr Asp Arg Lys Val Ala Glu Ile Leu Thr Asp
65 70 75 80
Leu Val Ser Gly Ser Ser Arg Gln Thr Val Leu Ile Ser Ala Asp Leu
85 90 95
Arg Lys Glu Gln Ser Pro Phe Ile Thr Lys Thr Ala Arg Ala Ile Glu
100 105 110
Ser Met Ala Cys Ala Trp Ala Thr Pro Gly Ser Ser Tyr His Lys Asp
115 120 125
Pro Glu Ile Leu Ser Ala Cys Ile Glu Gly Leu Arg Asp Phe Cys Arg
130 135 140
Leu Arg Tyr Asn Pro Ser Gln Asp Glu Tyr Gly Asn Trp Trp Asp Trp
145 150 155 160
Glu Asp Gly Ala Ser Arg Ala Val Ala Asp Val Met Cys Ile Leu His
165 170 175
Asp Val Leu Pro Pro Glu Val Met Ser Ala Ala Ala Ala Gly Ile Asp
180 185 190
His Phe Ile Pro Asp Pro Trp Phe Gln Gln Pro Ala Ser Val Lys Pro
195 200 205
Thr Ala Asn Pro Val Gln Pro Val Val Ser Thr Gly Ala Asn Arg Met
210 215 220
- 162 031986
Asp Leu
225
Lys Arg
Thr Thr
Ser His
Leu Ala
290
Glu Ser
305
Pro Val
Ile Ser
Arg Ala
Gln Trp
370
His Leu 385
Ala Ala
Ala Ser
Val Ser
Glu Asn
450
Leu Pro
465
Asp Tyr
Arg Ala
Ser Gly
Thr Ser
530 Lys Asp 545 Arg Ala
Lys Leu
Asn Pro
Thr Asp
610 Ile Asp 625 Glu Arg
Ala Trp
Ala Thr
Thr Val
690
Thr Val
705
Val Ala
Thr Arg
Leu Arg
Glu Gly
260
Ile Pro
275
Met Leu
Ala Arg
Met Tyr
Arg Ile
340
Met Leu
355
Arg Gly
Ser Glu
Lys Ala
Met Asp
420
Asn Cys
435
Glu Trp
Gly Asp
Ser Ala
Val Gly
500
Gly Leu
515
Gln Asp
Ala Met
Ile Thr
Leu Val
580
Arg Trp
595
Thr Asp
Val Asn
Ala Tyr
Ala Leu
660
Arg Pro
675
Gln Ala
Val Thr
Val Asn
Ala Val
230
His Ala
245
Asp Gly
Tyr Thr
Phe Pro
Lys Ala
310 Asn Gly 325
Asn Glu
Met Met
Ile Val
Pro Ser
390 Arg Pro 405
Arg Leu
Ser Asp
Ala Ser
Met Gly
470
Pro Thr 485
Ala Ser
Ala Ser
Ser Ala
Val Glu
550
Val Val
565
Asp Gly
Ala His
Leu Ser
Pro Ser
630
Ala Ser
645
Leu Pro
Gly Val
Val Arg
Thr Leu
710 Arg Pro
Met Cys
Val Asp
Phe Arg
Gly Gly
280
Leu Val
295
Phe His
Gln Ile
Ser Ala
Ala Asp
360
His Gly
375
Thr Leu
Val Pro
Val His
Arg Ile
440
Arg Thr 455
Gln Tyr
Gly Thr
Trp Ala
Gly Ser
520 Leu Lys 535
Leu Thr
Glu His
Asn Arg
Leu Asp
600
Ala Asp
615
Arg Lys
Leu His
Thr Ala
Glu Pro
680
Ser Ala
695
Ala Phe
Ala Leu
Arg Ser
Gly Leu
250 Ala Asp 265 Tyr Gly
Ser Gly
Asp Gln
Leu Asp
330
Ala Met
345
Ala Leu
Trp Met
Val Asp
Glu Ser
410 Arg Thr 425
Ala Trp
Ser Gln
Glu Asp
Thr Val
490 Ala Lys 505
Trp Ser
Ala Arg
Thr Asp
Arg Lys
570
Val Ser 585
Gly Val
Val Ala
Val Lys
Val Thr
650 Ser Arg 665
Phe Thr
Gly Ala
Trp Lys
Val Gln
Ile Ala
235
Pro Asp
Gly Gly
Asp Val
Met Arg
300
Val Glu
315
Asp Val
His Gly
Pro Thr
Ala Arg
380
Ile Ser 395
Ser Thr
Ala Asp
Tyr Glu
Gly Met
460
Gly Tyr 475
Asp Ser
Thr Pro
Ala Ala
Arg Leu
540
Val Thr 555
Val Ala
Ser Ala
Gly Gly
Thr Arg
620
Gly Ala 635
His His
Ser His
Val Leu
Leu Leu
700
Pro Ala
715
Thr Arg
Thr Gly
Ala Trp
Phe Ile
270
Leu Phe 285
Phe Asp
Arg Gly
Arg Gly
Ile Ser
350
His Arg
365
Asn Thr
Leu Phe
Pro Ser
Trp Leu
430 Tyr Gly 445
Arg Tyr
Trp Ala
Thr Pro
Thr Asn
510
Ala Ser 525
Trp Val
Thr Asp
Ser Ser
Thr Ser
590 Tyr Val 605
Lys Gly
Asp Glu
Asp Arg
Thr Met
670 Arg Asn 685
Thr Lys
Thr Cys
Glu Ser
Asp Glu
240 Arg Val 255
Gln His
Ser Gly
Ile Val
Phe Ile
320 Arg Ser 335
Ile Ala
Ala Glu
Phe Asp
Asp Ala
400
Tyr Phe
415
Ile Thr
Asn Gly
Leu Leu
Thr Val
480
Leu Lys 495
Glu Trp
His Ile
Gly Leu
Ala Ser
560
Ser Thr 575
Phe Gln
Phe Ala
Thr Trp
Val Ile
640
Pro Val
655
Ala Leu
Asp Ala
Asp Pro
Gly Gly
720 Ala Asn
- 163 031986
725 730 735
Gln Met Glu Val Val Ile Val Glu Pro Thr Gln Lys Arg Gly Ser Leu
740 745 750
Thr Val Thr Ile Glu Gly Ser Trp Lys Val Lys Thr Ala Asp Ser His
755 760 765
Val Asp Val Ser Cys Glu Asn Ala Ala Gly Thr Leu His Val Asp Thr
770 775 780
Ala Gly Leu Gly Gly Gln Ser Val Arg Val Thr Leu Ala Arg Gln Val
785 790 795 800
Thr Gln Thr Pro Ser Gly Gly Gly Arg His Asp Arg Ala
805 810
<210> 70 <211> 1072 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus agalactiae <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 70
Met Glu Ile Lys Lys Lys Tyr Arg Ile Met Leu Tyr Ser Ala Leu Ile
1 5 10 15
Leu Gly Thr Ile Leu Val Asn Asn Ser Tyr Gln Ala Lys Ala Glu Glu
20 25 30
Leu Thr Lys Thr Thr Ser Thr Ser Gln Ile Arg Asp Thr Gln Thr Asn
35 40 45
Asn Ile Glu Val Leu Gln Thr Glu Ser Thr Thr Val Lys Glu Thr Ser
50 55 60
Thr Thr Thr Thr Gln Gln Asp Leu Ser Asn Pro Thr Ala Ser Thr Ala
65 70 75 80
Thr Ala Thr Ala Thr His Ser Thr Met Lys Gln Val Val Asp Asn Gln
85 90 95
Thr Gln Asn Lys Glu Leu Val Lys Asn Gly Asp Phe Asn Gln Thr Asn
100 105 110
Pro Val Ser Gly Ser Trp Ser His Thr Ser Ala Arg Glu Trp Ser Ala
115 120 125
Trp Ile Asp Lys Glu Asn Thr Ala Asp Lys Ser Pro Ile Ile Gln Arg
130 135 140
Thr Glu Gln Gly Gln Val Ser Leu Ser Ser Asp Lys Gly Phe Arg Gly
145 150 155 160
Ala Val Thr Gln Lys Val Asn Ile Asp Pro Thr Lys Lys Tyr Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asp Ile Glu Thr Ser Asn Lys Ala Gly Gln Ala Phe Leu Arg
180 185 190
Ile Met Glu Lys Lys Asp Asn Asn Thr Arg Leu Trp Leu Ser Glu Met
195 200 205
Thr Ser Gly Thr Thr Asn Lys His Thr Leu Thr Lys Ile Tyr Asn Pro
210 215 220
Lys Leu Asn Val Ser Glu Val Thr Leu Glu Leu Tyr Tyr Glu Lys Gly
225 230 235 240
Thr Gly Ser Ala Thr Phe Asp Asn Ile Ser Met Lys Ala Lys Gly Pro
245 250 255
Lys Asp Ser Glu His Pro Gln Pro Val Thr Thr Gln Ile Glu Glu Ser
260 265 270
Val Asn Thr Ala Leu Asn Lys Asn Tyr Val Phe Asn Lys Ala Asp Tyr
275 280 285
Gln Tyr Thr Leu Thr Asn Pro Ser Leu Gly Lys Ile Val Gly Gly Ile
290 295 300
Leu Tyr Pro Asn Ala Thr Gly Ser Thr Thr Val Lys Ile Ser Asp Lys
305 310 315 320
Ser Gly Lys Ile Ile Lys Glu Val Pro Leu Ser Val Thr Ala Ser Thr
- 164 031986
325
Glu Asp Lys Phe Thr
340
Gly Asn His Val Tyr
355
Gln Lys Leu Asp Glu
370
Asp Ser Asn His Thr
385
Ser Ala Gln Leu Thr
405
Gln Ile Thr Asn Pro
420
Arg Thr Val Lys Glu
435
Val Asn Lys Asp Ile
450
Gly Val Pro Arg Ser
465
Phe Thr Asp Ala Glu
485
Val Pro Asp Ala Gly
500
Ala Leu Gly Gly Asn
515
Gly Leu Leu Arg Lys
530
Leu Lys Asn Leu Phe
545
Asp Gly Ser Tyr Ile
565
Gly Asn Val Leu Ile
580
Glu Thr Asp Tyr Lys
595
Trp Ile Asn Gln Ser
610
Asp Met Ser Arg Gly
625
Ala Ala Ala Val Glu
645
Ser Asn Glu Glu Arg
660
Ile Thr Ser Asn Lys
675
Ser Asp Ile Ala Asn
690
Thr Lys Pro Leu Lys
705
Leu Ala Tyr Tyr Asn
725
His Ser Lys Arg Thr
740
Arg Gly Trp Tyr Thr
755
Gln Ser His Tyr Ser
770
Met Ala Gly Thr Thr
785
Glu Phe Met Ser Lys
805
Val Thr Gly Thr Ser
820
330
Lys Leu Leu Asp Lys
345
Asp Thr Asn Asp Ser
360
Thr Asn Ala Lys Asn
375
Phe Leu Trp Lys Asp
390
Ala Thr Tyr Arg Arg
410
His Ser Thr Ile Tyr
425
Ser Leu Ala Trp Leu
440
Glu Gly Ser Ala Asn
455
Ile Thr Ala Thr Leu
470
Ile Lys Thr Tyr Thr
490
Tyr Phe Arg Lys Thr
505
Leu Val Asp Met Gly
520
Asp Asn Thr Ile Ile
535
Thr Thr Ala Thr Lys
550
Asp His Thr Asn Val
570
Asp Gly Leu Thr Gln
585
Ile Ser Asn Gln Glu
600
Phe Leu Pro Leu Ile
615
Arg Ser Ile Ser Arg
630
Val Leu Arg Gly Phe
650
Asn Leu Asp Leu Lys
665
Phe Tyr Asn Val Phe
680
Met Asn Lys Met Leu
695
Ser Asn Leu Ser Thr
710
Ala Glu Lys Asp Phe
730
Leu Asn Tyr Glu Gly
745
Gly Asp Gly Met Phe
760
Asn His Phe Trp Pro
775
Glu Lys Asp Ala Lys
790
His Ser Lys Asp Ala
810
Asp Phe Val Gly Ser
825
335 Trp Asn Asp Val Thr
350
Asn Met Gln Lys Ile
365
Ile Lys Thr Ile Lys
380
Leu Asp Asn Leu Asn
395
Leu Glu Asp Leu Ala
415
Lys Asn Glu Lys Ala
430
His Gln Asn Phe Tyr
445
Trp Trp Asp Phe Glu
460
Ala Leu Met Asn Asn
475
Asp Pro Ile Glu His
495
Leu Asp Asn Pro Phe
510
Arg Val Lys Ile Ile
525
Glu Lys Thr Ser His
540
Ala Glu Gly Phe Tyr
555
Ala Tyr Thr Gly Ala
575
Leu Leu Pro Ile Ile
590
Leu Asp Met Val Tyr
605
Val Lys Gly Glu Leu
620
Glu Ala Ala Ser Ser
635
Leu Arg Leu Ala Asn
655
Ser Thr Ile Lys Thr
670
Asn Asn Leu Lys Ser
685
Asn Asp Ser Thr Val
700
Phe Asn Ser Met Asp
715
Gly Phe Ala Leu Ser
735
Met Asn Asp Glu Asn
750
Tyr Leu Tyr Asn Ser
765
Thr Val Asn Pro Tyr
780
Arg Glu Asp Thr Thr
795
Lys Glu Lys Thr Gly
815
Val Lys Leu Asn Asp
830
Ile
Asn
Leu
Asn
400
Lys
Ile
Asn
Ile
Tyr
480
Phe
Lys
Glu
Ser
Ala
560
Tyr
Gln
Lys
Met
His
640
Met
Ile
Tyr
Ala
Arg
720
Leu
Thr
Asp
Lys
Lys
800
Gln
His
- 165 031986
Phe Ala Leu 835 Ala Ala Met Asp Phe 840 Thr Asn Trp Asp Arg 845 Thr Leu Thr
Ala Gln Lys Gly Trp Val Ile Leu Asn Asp Lys Ile Val Phe Leu Gly
850 855 860
Ser Asn Ile Lys Asn Thr Asn Gly Ile Gly Asn Val Ser Thr Thr Ile
865 870 875 880
Asp Gln Arg Lys Asp Asp Ser Lys Thr Pro Tyr Thr Thr Tyr Val Asn
885 890 895
Gly Lys Thr Ile Asp Leu Lys Gln Ala Ser Ser Gln Gln Phe Thr Asp
900 905 910
Thr Lys Ser Val Phe Leu Glu Ser Lys Glu Pro Gly Arg Asn Ile Gly
915 920 925
Tyr Ile Phe Phe Lys Asn Ser Thr Ile Asp Ile Glu Arg Lys Glu Gln
930 935 940
Thr Gly Thr Trp Asn Ser Ile Asn Arg Thr Ser Lys Asn Thr Ser Ile
945 950 955 960
Val Ser Asn Pro Phe Ile Thr Ile Ser Gln Lys His Asp Asn Lys Gly
965 970 975
Asp Ser Tyr Gly Tyr Met Met Val Pro Asn Ile Asp Arg Thr Ser Phe
980 985 990
Asp Lys Leu Ala Asn Ser Lys Glu Val Glu Leu Leu Glu Asn Ser Ser
995 1000 1005
Lys Gln Gln Val Ile Tyr Asp Lys Asn Ser Gln Thr Trp Ala Val Ile
1010 1015 1020
Lys His Asp Asn Gln Glu Ser Leu Ile Asn Asn Gln Phe Lys Met Asn
1025 1030 1035 1040
Lys Ala Gly Leu Tyr Leu Val Gln Lys Val Gly Asn Asp Tyr Gln Asn
1045 1050 1055
Val Tyr Tyr Gln Pro Gln Thr Met Thr Lys Thr Asp Gln Leu Ala Ile
1060 1065 1070
<210> 71 <211> 1072 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus agalactiae 18RS21 <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 71
Met Glu Ile Lys Lys Lys His Arg Ile Met Leu Tyr Ser Ala Leu Ile
1 5 10 15
Leu Gly Thr Ile Leu Val Asn Asn Ser Tyr Gln Ala Lys Ala Glu Glu
20 25 30
Leu Thr Lys Thr Thr Ser Thr Ser Gln Ile Arg Asp Thr Gln Thr Asn
35 40 45
Asn Ile Glu Val Leu Gln Thr Glu Ser Thr Thr Val Lys Glu Thr Ser
50 55 60
Thr Thr Thr Thr Gln Gln Asp Leu Ser Asn Pro Thr Ala Ser Thr Ala
65 70 75 80
Thr Ala Thr Ala Thr His Ser Thr Met Lys Gln Val Val Asp Asn Gln
85 90 95
Thr Gln Asn Lys Glu Leu Val Lys Asn Gly Asp Phe Asn Gln Thr Asn
100 105 110
Pro Val Ser Gly Ser Trp Ser His Thr Ser Ala Arg Glu Trp Ser Ala
115 120 125
Trp Ile Asp Lys Glu Asn Thr Ala Asp Lys Ser Pro Ile Ile Gln Arg
130 135 140
Thr Glu Gln Gly Gln Val Ser Leu Ser Ser Asp Lys Gly Phe Arg Gly
145 150 155 160
Ala Val Thr Gln Lys Val Asn Ile Asp Pro Thr Lys Lys Tyr Glu Val
165 170 175
- 166 031986
Lys Phe
Ile Met
Thr Ser
210
Lys Leu 225
Thr Gly
Lys Asp
Val Asn
Gln Tyr
290
Leu Tyr 305
Ser Gly
Glu Asp
Gly Asn
Gln Lys
370
Asp Ser 385
Ser Ala
Gln Ile
Arg Thr
Val Asn
450 Gly Val 465
Phe Thr
Val Pro
Ala Leu
Gly Leu
530
Leu Lys
545
Asp Gly
Gly Asn
Glu Thr
Trp Ile
610
Asp Met
625
Ala Ala
Ser Asn
Ile Thr
Asp Ile
180 Glu Lys 195
Gly Thr
Asn Val
Ser Ala
Ser Glu
260
Thr Ala
275
Thr Leu
Pro Asn
Lys Ile
Lys Phe
340
His Val
355
Leu Asp
Asn His
Gln Leu
Thr Asn
420 Val Lys 435
Lys Asp
Pro Arg
Asp Ala
Asp Ala
500
Gly Gly
515
Leu Arg
Asn Leu
Ser Tyr
Val Leu
580 Asp Tyr 595
Asn Gln
Ser Arg
Ala Val
Glu Glu
660
Ser Asn
Glu Thr
Lys Asp
Thr Asn
Ser Glu
230
Thr Phe 245
His Pro
Leu Asn
Thr Asn
Ala Thr
310 Ile Lys 325 Thr Lys
Tyr Asp
Glu Thr
Thr Phe
390
Thr Ala 405
Pro His
Glu Ser
Ile Glu
Ser Ile
470
Glu Ile 485
Gly Tyr
Asn Leu
Lys Asp
Phe Thr
550 Ile Asp 565
Ile Asp
Lys Ile
Ser Phe
Gly Arg
630
Glu Val
645
Arg Asn
Lys Phe
Ser Asn
Asn Asn
200
Lys His
215
Val Thr
Asp Asn
Gln Pro
Lys Asn
280
Pro Ser 295
Gly Ser
Glu Val
Leu Leu
Thr Asn
360
Asn Ala 375
Leu Trp
Thr Tyr
Ser Thr
Leu Ala
440
Gly Ser
455
Thr Ala
Lys Thr
Phe Arg
Val Asp
520
Asn Thr 535
Thr Ala
His Thr
Gly Leu
Ser Asn
600
Leu Pro
615
Ser Ile
Leu Arg
Leu Asp
Tyr Asn
Lys Ala 185
Thr Arg
Thr Leu
Leu Glu
Ile Ser
250
Val Thr 265
Tyr Val
Leu Gly
Thr Thr
Pro Leu
330 Asp Lys 345
Asp Ser
Lys Asn
Lys Asp
Arg Arg
410
Ile Tyr
425
Trp Leu
Ala Asn
Thr Leu
Tyr Thr
490 Lys Thr 505 Met Gly
Ile Ile
Thr Lys
Asn Val
570
Thr Gln
585
Gln Glu
Leu Ile
Ser Arg
Gly Phe
650
Leu Ile
665
Val Phe
Gly Gln
Leu Trp
Thr Lys
220
Leu Tyr 235
Met Lys
Thr Gln
Phe Asn
Lys Ile
300 Val Lys 315
Ser Val
Trp Asn
Asn Met
Ile Lys
380 Leu Asp 395
Leu Glu
Lys Asn
His Gln
Trp Trp
460
Ala Leu 475
Asp Pro
Leu Asp
Arg Val
Glu Lys
540
Ala Glu 555
Ala Tyr
Leu Leu
Leu Asp
Val Lys
620
Glu Ala 635
Leu Arg
Ser Thr
Asn Asn
Ala Phe
190
Leu Ser 205
Ile Tyr
Tyr Glu
Ala Lys
Ile Glu
270
Lys Ala 285
Val Gly
Ile Ser
Thr Ala
Asp Val
350
Gln Lys
365
Thr Ile
Asn Leu
Asp Leu
Glu Lys
430
Asn Phe
445
Asp Phe
Met Asn
Ile Glu
Asn Pro
510 Lys Ile 525
Thr Ser
Gly Phe
Thr Gly
Pro Ile
590
Met Val
605
Gly Glu
Ala Ser
Leu Ala
Ile Lys
670 Leu Lys
Leu Arg
Glu Met
Asn Pro
Lys Gly
240
Gly Pro
255
Glu Ser
Asp Tyr
Gly Ile
Asp Lys
320
Ser Thr
335
Thr Ile
Ile Asn
Lys Leu
Asn Asn
400
Ala Lys
415
Ala Ile
Tyr Asn
Glu Ile
Asn Tyr
480
His Phe
495
Phe Lys
Ile Glu
His Ser
Tyr Ala
560
Ala Tyr
575
Ile Gln
Tyr Lys
Leu Met
Ser His
640
Asn Met
655
Thr Ile
Ser Tyr
- 167 031986
675 680 685
Ser Asp Ile Ala Asn Met Asn Lys Met Leu Asn Asp Ser Thr Val Ala
690 695 700
Thr Lys Pro Leu Lys Ser Asn Leu Ser Thr Phe Asn Ser Met Asp Arg
705 710 715 720
Leu Ala Tyr Tyr Asn Ala Glu Lys Asp Phe Gly Phe Ala Leu Ser Leu
725 730 735
His Ser Lys Arg Thr Leu Asn Tyr Glu Gly Met Asn Asp Glu Asn Thr
740 745 750
Arg Gly Trp Tyr Thr Gly Asp Gly Met Phe Tyr Leu Tyr Asn Ser Asp
755 760 765
Gln Ser His Tyr Ser Asn His Phe Trp Pro Thr Val Asn Pro Tyr Lys
770 775 780
Met Ala Gly Thr Thr Glu Lys Asp Ala Lys Arg Glu Asp Thr Thr Lys
785 790 795 800
Glu Phe Met Ser Lys His Ser Lys Asp Ala Lys Glu Lys Thr Gly Gln
805 810 815
Val Thr Gly Thr Ser Asp Phe Val Gly Ser Val Lys Leu Asn Asp His
820 825 830
Phe Ala Leu Ala Ala Met Asp Phe Thr Asn Trp Asp Arg Thr Leu Thr
835 840 845
Ala Gln Lys Gly Trp Val Ile Leu Asn Asp Lys Ile Val Phe Leu Gly
850 855 860
Ser Asn Ile Lys Asn Thr Asn Gly Ile Gly Asn Val Ser Thr Thr Ile
865 870 875 880
Asp Gln Arg Lys Asp Asp Ser Lys Thr Pro Tyr Thr Thr Tyr Val Asn
885 890 895
Gly Lys Thr Ile Asp Leu Lys Gln Ala Ser Ser Gln Gln Phe Thr Asp
900 905 910
Thr Lys Ser Val Phe Leu Glu Ser Lys Glu Pro Gly Arg Asn Ile Gly
915 920 925
Tyr Ile Phe Phe Lys Asn Ser Thr Ile Asp Ile Glu Arg Lys Glu Gln
930 935 940
Thr Gly Thr Trp Asn Ser Ile Asn Arg Thr Ser Lys Asn Thr Ser Ile
945 950 955 960
Val Ser Asn Pro Phe Ile Thr Ile Ser Gln Lys His Asp Asn Lys Gly
965 970 975
Asp Ser Tyr Gly Tyr Met Met Val Pro Asn Ile Asp Arg Thr Ser Phe
980 985 990
Asp Lys Leu Ala Asn Ser Lys Glu Val Glu Leu Leu Glu Asn Ser Ser
995 1000 1005
Lys Gln Gln Val Ile Tyr Asp Lys Asn Ser Gln Thr Trp Ala Val Ile
1010 1015 1020
Lys His Asp Asn Gln Glu Ser Leu Ile Asn Asn Gln Phe Lys Met Asn
1025 1030 1035 1040
Lys Ala Gly Leu Tyr Leu Val Gln Lys Val Gly Asn Asp Tyr Gln Asn
1045 1050 1055
Val Tyr Tyr Gln Pro Gln Thr Met Thr Lys Thr Asp Gln Leu Ala Ile
1060 1065 1070
<210> 72 <211> 1081 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus agalactiae серотип Ia <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 72
Met Glu Ile Lys Lys Lys His Arg Ile Met Leu Tyr Ser Ala Leu Ile
5 10 15
Leu Gly Thr Ile Leu Val Asn Asn Ser Tyr Gln Ala Lys Ala Glu Glu
- 168 031986
Phe Thr
Asn Val
Thr Thr
Thr Ala
Thr Gln
Ile Asp
Ala Lys
130
Ser Pro
145
Asp Lys
Thr Lys
Gly Gln
Leu Trp
210
Thr Lys
225
Leu Tyr
Met Lys
Thr Gln
Phe Asn
290
Lys Ile
305
Val Lys
Ser Val
Trp Asn
Asn Met
370
Ile Lys
385
Leu Lys
Leu Glu
Lys Asn
His Gln
450 Trp Trp 465
Ala Leu
Asp Pro
Leu Val
Lys Thr 35 Glu Val
Thr Thr
Thr Ala
Asn Lys
100 Lys Lys 115
Asp Trp
Ile Ile
Gly Phe
Lys Tyr
180
Ala Phe
195
Leu Ser
Ile Tyr
Tyr Glu
Ala Lys
260
Ile Glu
275
Lys Ala
Val Gly
Ile Ser
Thr Ala
340 Asp Val 355
Gln Lys
Asp Ile
Gly Leu
Asp Leu
420
Glu Lys
435
Asn Phe
Asp Phe
Met Asn
Ile Glu
500
Asn Pro
515
Thr Ser
Pro Gln
Gln Gln
Thr His
Glu Leu
Ile Asp
Asn Thr
Gln Arg
150
Arg Gly
165
Glu Val
Leu Arg
Glu Met
Asn Pro
230
Lys Gly 245
Gly Pro
Glu Ser
Asp Tyr
Gly Ile
310
Asp Lys 325
Ser Thr
Thr Ile
Leu Asn
Lys Leu
390
Asn Asn 405
Ala Lys
Ala Ile
Tyr Asn
Glu Ile
470 Asn Tyr 485
His Phe
Phe Lys
Thr Ser
Thr Glu
Asp Leu
Ser Thr
Val Lys
Lys Lys
120 Tyr Ile 135
Thr Glu
Ala Val
Lys Phe
Ile Met
200
Thr Ser 215
Lys Leu
Thr Gly
Lys Asp
Val Asn
280 Gln Tyr 295
Leu Tyr
Ser Gly
Glu Asp
Gly Asn
360 Gln Lys 375
Asp Ser
Ser Ala
Gln Ile
Arg Thr
440
Val Asn
455
Gly Val
Phe Thr
Val Pro
Ala Leu
520
Gln Ile
Ser Thr
Ser Asn
Met Lys
Asn Gly
105
Ser Gln
Asp Gln
Gln Gly
Thr Gln
170 Asp Ile 185
Lys Lys
Gly Thr
Asn Val
Ser Val
250
Ser Glu 265
Thr Ala
Thr Leu
Pro Ser
Lys Ile
330
Asn Phe
345
His Val
Leu Asp
Asn Arg
Gln Leu
410
Thr Asn
425
Val Lys
Lys Asp
Pro Arg
Asp Ala
490 Asp Ala 505 Gly Gly
Arg Asp
Thr Val
Ser Thr
Gln Val
Asp Phe
Trp Thr
Thr Lys
140
Gln Val
155
Lys Val
Glu Thr
Lys Asp
Thr Asn
220
Ser Glu
235
Thr Phe
His Pro
Leu Asn
Thr Asn
300
Ala Thr
315
Ile Lys
Thr Lys
Tyr Asp
Glu Thr
380
Thr Phe
395
Thr Ala
Pro His
Glu Ser
Ile Glu
460
Ser Ile
475
Glu Ile
Gly Tyr
Asn Leu
Thr Gln 45
Lys Gly
Ala Ser
Val Asp
Lys Glu
110
Asn Leu
125
Ser Val
Ser Leu
Asn Ile
Ser Asn
190
Lys Asn
205
Lys His
Val Thr
Asp Asn
Gln Pro
270
Lys Asn
285
Pro Ser
Gly Ser
Glu Val
Leu Leu
350
Thr Asn
365
Asn Ala
Leu Trp
Thr Tyr
Ser Thr
430
Leu Ala
445
Gly Ser
Thr Ala
Lys Thr
Phe Arg
510 Val Asp 525
Thr Asn
Thr Ser
Thr Ala
Asn Gln
Lys Ile
Tyr Gly
Asn Lys
Ser Ser
160 Asp Pro 175
Lys Val
Thr Arg
Thr Leu
Leu Glu
240
Ile Ser 255
Val Thr
Tyr Val
Leu Gly
Thr Thr
320
Pro Leu
335
Asp Lys
Asp Ser
Lys Asn
Glu Asp
400
Arg Arg 415
Ile Tyr
Trp Leu
Ala Asn
Thr Leu
480
Tyr Thr 495
Lys Thr
Met Gly
- 169 031986
Arg Val Lys Ile Ile Glu Gly 535 Leu Leu Arg Lys Asp Asn 540 Thr Ile Ile
530
Lys Lys Thr Ser His Ser Leu Lys Asn Leu Phe Thr Thr Ala Thr Lys
545 550 555 560
Ala Glu Gly Phe Tyr Ala Asp Gly Ser Tyr Ile Asp His Thr Asn Val
565 570 575
Ala Tyr Thr Gly Ala Tyr Gly Asn Val Leu Ile Asp Gly Leu Thr Gln
580 585 590
Leu Leu Pro Ile Ile Gln Glu Thr Asp Tyr Lys Ile Ser Asn Gln Glu
595 600 605
Leu Asp Met Val Tyr Lys Trp Ile Asn Gln Ser Phe Leu Pro Leu Ile
610 615 620
Val Lys Gly Glu Leu Met Asp Met Ser Arg Gly Arg Ser Ile Ser Arg
625 630 635 640
Glu Ala Ala Ser Ser His Ala Ala Ala Val Glu Val Leu Arg Gly Phe
645 650 655
Leu Arg Leu Ala Asn Met Ser Asn Glu Glu Arg Asn Leu Asp Leu Lys
660 665 670
Ser Thr Ile Lys Thr Ile Ile Thr Ser Asn Lys Phe Tyr Asn Val Phe
675 680 685
Asn Asn Leu Lys Ser Tyr Ser Asp Ile Ala Asn Met Asn Lys Leu Leu
690 695 700
Asn Asp Ser Thr Val Ala Thr Lys Pro Leu Lys Ser Asn Leu Ser Thr
705 710 715 720
Phe Asn Ser Met Asp Arg Leu Ala Tyr Tyr Asn Ala Glu Lys Asp Phe
725 730 735
Gly Phe Ala Leu Ser Leu His Ser Lys Arg Thr Leu Asn Tyr Glu Gly
740 745 750
Met Asn Asp Glu Asn Thr Arg Gly Trp Tyr Thr Gly Asp Gly Met Phe
755 760 765
Tyr Leu Tyr Asn Ser Asp Gln Ser His Tyr Ser Asn His Phe Trp Pro
770 775 780
Thr Val Asn Pro Tyr Lys Met Ala Gly Thr Thr Glu Lys Asp Thr Gly
785 790 795 800
Arg Glu Asp Thr Ile Lys Lys Leu Met Asn Arg Tyr Asp Lys Thr Asn
805 810 815
Lys Asn Ser Lys Val Met Thr Gly Gln Val Thr Gly Thr Ser Asp Phe
820 825 830
Val Gly Ser Val Lys Leu Asn Asp His Phe Ala Leu Ala Ala Met Asp
835 840 845
Phe Thr Asn Trp Asp Arg Thr Leu Thr Ala Gln Lys Gly Trp Val Ile
850 855 860
Leu Asn Asp Lys Ile Val Phe Leu Gly Ser Asn Ile Lys Asn Thr Asn
865 870 875 880
Gly Val Gly Asn Val Ser Thr Thr Ile Asp Gln Arg Lys Asp Asp Ser
885 890 895
Lys Thr Pro Tyr Thr Thr Tyr Val Asn Gly Lys Thr Val Asp Leu Lys
900 905 910
Gln Ala Ser Ser Gln Gln Phe Thr Asp Thr Lys Ser Val Phe Leu Glu
915 920 925
Ser Lys Glu Pro Gly Arg Asn Ile Gly Tyr Ile Phe Phe Lys Asn Ser
930 935 940
Thr Ile Asp Ile Glu Arg Lys Glu Gln Thr Gly Thr Trp Asn Ser Ile
945 950 955 960
Asn Arg Thr Ser Lys Asn Thr Ser Ile Val Ser Asn Pro Phe Ile Thr
965 970 975
Ile Ser Gln Lys His Asp Asn Lys Gly Asp Ser Tyr Gly Tyr Met Met
980 985 990
Val Pro Asn Ile Asp Arg Thr Ser Phe Asp Lys Leu Ala Asn Ser Lys
995 1000 1005
Glu Val Glu Leu Leu Glu Asn Ser Ser Lys Gln Gln Val Ile Tyr Asp
1010 1015 1020
Lys Asn Ser Gln Thr Trp Ala Val Ile Lys His Asp Asn Gln Glu Ser
- 170 031986
1040
Leu Tyr Leu Val
1055
Gln Pro Gln Thr
1070
1025 1030 1035
Leu Ile Asn Asn Gln Phe Lys Met Asn Lys Ala Gly
1045 1050
Gln Lys Val Gly Asn Asp Tyr Gln Asn Val Tyr Tyr
1060 1065
Met Thr Lys Thr Asp Gln Leu Ala Ile
1075 1080
<210> 73 <211> 984 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus agalactiae серотип III <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 73
Met 1 Lys Gln Val Val 5 Asp Asn Gln Thr Gln 10 Asn Lys Glu Leu Val 15 Lys
Asn Gly Asp Phe Asn Gln Thr Asn Pro Val Ser Gly Ser Trp Ser His
20 25 30
Thr Ser Ala Arg Glu Trp Ser Ala Trp Ile Asp Lys Glu Asn Thr Ala
35 40 45
Asp Lys Ser Pro Ile Ile Gln Arg Thr Glu Gln Gly Gln Val Ser Leu
50 55 60
Ser Ser Asp Lys Gly Phe Arg Gly Ala Val Thr Gln Lys Val Asn Ile
65 70 75 80
Asp Pro Thr Lys Lys Tyr Glu Val Lys Phe Asp Ile Glu Thr Ser Asn
85 90 95
Lys Ala Gly Gln Ala Phe Leu Arg Ile Met Glu Lys Lys Asp Asn Asn
100 105 110
Thr Arg Leu Trp Leu Ser Glu Met Thr Ser Gly Thr Thr Asn Lys His
115 120 125
Thr Leu Thr Lys Ile Tyr Asn Pro Lys Leu Asn Val Ser Glu Val Thr
130 135 140
Leu Glu Leu Tyr Tyr Glu Lys Gly Thr Gly Ser Ala Thr Phe Asp Asn
145 150 155 160
Ile Ser Met Lys Ala Lys Gly Pro Lys Asp Ser Glu His Pro Gln Pro
165 170 175
Val Thr Thr Gln Ile Glu Glu Ser Val Asn Thr Ala Leu Asn Lys Asn
180 185 190
Tyr Val Phe Asn Lys Ala Asp Tyr Gln Tyr Thr Leu Thr Asn Pro Ser
195 200 205
Leu Gly Lys Ile Val Gly Gly Ile Leu Tyr Pro Asn Ala Thr Gly Ser
210 215 220
Thr Thr Val Lys Ile Ser Asp Lys Ser Gly Lys Ile Ile Lys Glu Val
225 230 235 240
Pro Leu Ser Val Thr Ala Ser Thr Glu Asp Lys Phe Thr Lys Leu Leu
245 250 255
Asp Lys Trp Asn Asp Val Thr Ile Gly Asn His Val Tyr Asp Thr Asn
260 265 270
Asp Ser Asn Met Gln Lys Ile Asn Gln Lys Leu Asp Glu Thr Asn Ala
275 280 285
Lys Asn Ile Lys Thr Ile Lys Leu Asp Ser Asn His Thr Phe Leu Trp
290 295 300
Lys Asp Leu Asp Asn Leu Asn Asn Ser Ala Gln Leu Thr Ala Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Arg Leu Glu Asp Leu Ala Lys Gln Ile Thr Asn Pro His Ser Thr
325 330 335
Ile Tyr Lys Asn Glu Lys Ala Ile Arg Thr Val Lys Glu Ser Leu Ala
340 345 350
Trp Leu His Gln Asn Phe Tyr Asn Val Asn Lys Asp Ile Glu Gly Ser
- 171 031986
Ala
Thr
385
Tyr
Lys
Met
Ile
Thr
465
Asn
Thr
Gln
Leu
Ser
545
Gly
Leu
Val
Met
Ser
625
Asp
Glu
Met
Trp
Ala
705
Asp
Gly
Thr
Asn
Ile
785
Thr
Ala
Lys
Ile
355
Asn Trp Trp
370
Leu Ala Leu
Thr Asp Pro
Thr Leu Asp
420
Gly Arg Val
435
Ile Glu Lys
450
Lys Ala Glu
Val Ala Tyr
Gln Leu Leu
500
Glu Leu Asp
515
Ile Val Lys
530
Arg Glu Ala
Phe Leu Arg
Lys Ser Thr
580
Phe Asn Asn
595
Leu Asn Asp
610
Thr Phe Asn
Phe Gly Phe
Gly Met Asn
660
Phe Tyr Leu
675
Pro Thr Val
690
Lys Arg Glu Ala Lys Glu Ser Val Lys
740
Asn Trp Asp
755
Asp Lys Ile
770
Gly Asn Val
Pro Tyr Thr
Ser Ser Gln
820
Glu Pro Gly
835
Asp Ile Glu
850
Asp Phe Glu
375
Met Asn Asn
390
Ile Glu His
405
Asn Pro Phe
Lys Ile Ile
Thr Ser His
455
Gly Phe Tyr
470
Thr Gly Ala
485
Pro Ile Ile
Met Val Tyr
Gly Glu Leu
535
Ala Ser Ser
550
Leu Ala Asn
565
Ile Lys Thr
Leu Lys Ser
Ser Thr Val
615
Ser Met Asp
630
Ala Leu Ser
645
Asp Glu Asn
Tyr Asn Ser
Asn Pro Tyr
695
Asp Thr Thr
710
Lys Thr Gly
725
Leu Asn Asp
Arg Thr Leu
Val Phe Leu
775
Ser Thr Thr
790
Thr Tyr Val
805
Gln Phe Thr
Arg Asn Ile
Arg Lys Glu
855
360
Ile Gly Val
Tyr Phe Thr
Phe Val Pro
410
Lys Ala Leu
425
Glu Gly Leu
440
Ser Leu Lys
Ala Asp Gly
Tyr Gly Asn
490
Gln Glu Thr
505
Lys Trp Ile
520
Met Asp Met
His Ala Ala
Met Ser Asn
570
Ile Ile Thr
585
Tyr Ser Asp
600
Ala Thr Lys
Arg Leu Ala
Leu His Ser
650
Thr Arg Asp
665
Asp Gln Ser
680
Lys Met Ala
Lys Glu Phe
Gln Val Thr
730
His Phe Ala
745
Thr Ala Gln
760
Gly Ser Asn
Ile Asp Gln
Asn Gly Lys
810
Asp Thr Lys
825
Gly Tyr Ile
840
Gln Thr Gly
365
Pro Arg Ser
380
Asp Ala Glu
395
Asp Ala Gly
Gly Gly Asn
Leu Arg Lys
445
Asn Leu Phe
460
Ser Tyr Ile
475
Val Leu Ile
Asp Tyr Lys
Asn Gln Ser
525
Ser Arg Gly
540
Ala Val Glu
555
Glu Glu Arg
Ser Asn Lys
Ile Ala Asn
605
Pro Leu Lys
620
Tyr Tyr Asn
635
Lys Arg Thr
Trp Tyr Thr
His Tyr Ser
685
Gly Thr Thr
700
Met Ser Lys
715
Gly Thr Ser
Leu Ala Ala
Lys Gly Trp
765
Ile Lys Asn
780
Arg Lys Asp
795
Thr Ile Asp
Ser Val Phe
Phe Phe Lys
845
Thr Trp Asn
860
Ile Thr Ala
Ile Lys Thr
400
Tyr Phe Arg
415
Leu Val Asp
430
Asp Asn Thr
Thr Thr Ala
Asp His Thr
480
Asp Gly Leu
495
Ile Ser Asn
510
Phe Leu Pro
Arg Ser Ile
Val Leu Arg
560
Asn Leu Asp
575
Phe Tyr Asn
590
Met Asn Lys Ser Asn Leu Ala Glu Lys
640
Leu Asn Tyr
655
Gly Asp Gly
670
Asn His Phe
Glu Lys Asp
His Ser Lys
720
Asp Phe Val
735
Met Asp Phe
750
Val Ile Leu
Thr Asn Gly
Asp Ser Lys
800
Leu Lys Gln
815
Leu Glu Ser
830
Asn Ser Thr Ser Ile Asn
- 172 031986
Arg 865 Thr Ser Lys Asn Thr 870 Ser Ile Val Ser Asn 875 Pro Phe Ile Thr Ile 880
Ser Gln Lys His Asp Asn Lys Gly Asp Ser Tyr Gly Tyr Met Met Val
885 890 895
Pro Asn Ile Asp Arg Thr Ser Phe Asp Lys Leu Ala Asn Ser Lys Glu
900 905 910
Val Glu Leu Leu Glu Asn Ser Ser Lys Gln Gln Val Ile Tyr Asp Lys
915 920 925
Asn Ser Gln Thr Trp Ala Val Ile Lys His Asp Asn Gln Glu Ser Leu
930 935 940
Ile Asn Asn Gln Phe Lys Met Asn Lys Ala Gly Leu Tyr Leu Val Gln
945 950 955 960
Lys Val Gly Asn Asp Tyr Gln Asn Val Tyr Tyr Gln Pro Gln Thr Met
965 970 975
Thr Lys Thr Asp Gln Leu Ala Ile
980
<210> 74 <211> 807 <212> БЕЛОК <213> Staphylococcus aureus (штамм COL) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 74
Met Thr Tyr Arg Ile Lys Lys Trp Gln Lys Leu Ser Thr Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Met Ala Gly Val Ile Thr Leu Asn Gly Gly Glu Phe Arg Ser Val
20 25 30
Asp Lys His Gln Ile Ala Val Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Pro Asp
35 40 45
Tyr Glu Lys Leu Arg Asn Thr Trp Leu Asp Val Asn Tyr Gly Tyr Asp
50 55 60
Lys Tyr Asp Glu Asn Asn Pro Asp Met Lys Lys Lys Phe Asp Ala Thr
65 70 75 80
Glu Lys Glu Ala Thr Asn Leu Leu Lys Glu Met Lys Thr Glu Ser Gly
85 90 95
Arg Lys Tyr Leu Trp Ser Gly Ala Glu Thr Leu Glu Thr Asn Ser Ser
100 105 110
His Met Thr Arg Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ala Glu Ala Met
115 120 125
Arg Asn Pro Lys Thr Thr Leu Asn Thr Asp Glu Asn Lys Lys Lys Val
130 135 140
Lys Asp Ala Leu Glu Trp Leu His Lys Asn Ala Tyr Gly Lys Glu Pro
145 150 155 160
Asp Lys Lys Val Lys Glu Leu Ser Glu Asn Phe Thr Lys Thr Thr Gly
165 170 175
Lys Asn Thr Asn Leu Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr Pro Lys
180 185 190
Ser Leu Thr Asn Thr Leu Ile Leu Leu Asn Asp Gln Phe Ser Asn Glu
195 200 205
Glu Lys Lys Lys Phe Thr Ala Pro Ile Lys Thr Phe Ala Pro Asp Ser
210 215 220
Asp Lys Ile Leu Ser Ser Val Gly Lys Ala Glu Leu Ala Lys Gly Gly
225 230 235 240
Asn Leu Val Asp Ile Ser Lys Val Lys Leu Leu Glu Cys Ile Ile Glu
245 250 255
Glu Asp Lys Asp Met Met Lys Lys Ser Ile Asp Ser Phe Asn Lys Val
260 265 270
Phe Thr Tyr Val Gln Asp Ser Ala Thr Gly Lys Glu Arg Asn Gly Phe
275 280 285
- 173 031986
Tyr Lys 290 Asp Gly Ser Tyr Ile 295 Asp His Gln Asp Val 300 Pro Tyr Thr Gly
Ala Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Gly Ile Ser Gln Met Met Pro Met
305 310 315 320
Ile Lys Glu Thr Pro Phe Asn Asp Lys Thr Gln Asn Asp Thr Thr Leu
325 330 335
Lys Ser Trp Ile Asp Asp Gly Phe Met Pro Leu Ile Tyr Lys Gly Glu
340 345 350
Met Met Asp Leu Ser Arg Gly Arg Ala Ile Ser Arg Glu Asn Glu Thr
355 360 365
Ser His Ser Ala Ser Ala Thr Val Met Lys Ser Leu Leu Arg Leu Ser
370 375 380
Asp Ala Met Asp Asp Ser Thr Lys Ala Lys Tyr Lys Lys Ile Val Lys
385 390 395 400
Ser Ser Val Glu Ser Asp Ser Ser Tyr Lys Gln Asn Asp Tyr Leu Asn
405 410 415
Ser Tyr Ser Asp Ile Asp Lys Met Lys Ser Leu Met Thr Asp Asn Ser
420 425 430
Ile Ser Lys Asn Gly Leu Thr Gln Gln Leu Lys Ile Tyr Asn Asp Met
435 440 445
Asp Arg Val Thr Tyr His Asn Lys Asp Leu Asp Phe Ala Phe Gly Leu
450 455 460
Ser Met Thr Ser Lys Asn Val Ala Arg Tyr Glu Ser Ile Asn Gly Glu
465 470 475 480
Asn Leu Lys Gly Trp His Thr Gly Ala Gly Met Ser Tyr Leu Tyr Asn
485 490 495
Ser Asp Val Lys His Tyr His Asp Asn Phe Trp Val Thr Ala Asp Met
500 505 510
Lys Arg Leu Ser Gly Thr Thr Thr Leu Asp Asn Glu Ile Leu Lys Asp
515 520 525
Thr Asp Asp Lys Lys Ser Ser Lys Thr Phe Val Gly Gly Thr Lys Val
530 535 540
Asp Asp Gln His Ala Ser Ile Gly Met Asp Phe Glu Asn Gln Asp Lys
545 550 555 560
Thr Leu Thr Ala Lys Lys Ser Tyr Phe Ile Leu Asn Asp Lys Ile Val
565 570 575
Phe Leu Gly Thr Gly Ile Lys Ser Thr Asp Ser Ser Lys Asn Pro Val
580 585 590
Thr Thr Ile Glu Asn Arg Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Leu Tyr Thr Asp
595 600 605
Asp Lys Gln Thr Thr Asn Ser Asp Asn Gln Glu Asn Asn Ser Val Phe
610 615 620
Leu Glu Ser Thr Asp Thr Lys Lys Asn Ile Gly Tyr His Phe Leu Asn
625 630 635 640
Lys Pro Lys Ile Thr Val Lys Lys Glu Ser His Thr Gly Lys Trp Lys
645 650 655
Glu Ile Asn Lys Ser Gln Lys Asp Thr Gln Lys Thr Asp Glu Tyr Tyr
660 665 670
Glu Val Thr Gln Lys His Ser Asn Ser Asp Asn Lys Tyr Gly Tyr Val
675 680 685
Leu Tyr Pro Gly Leu Ser Lys Asp Val Phe Lys Thr Lys Lys Asp Glu
690 695 700
Val Thr Val Val Lys Gln Glu Asp Asp Phe His Val Val Lys Asp Asn
705 710 715 720
Glu Ser Val Trp Ala Gly Val Asn Tyr Ser Asn Ser Thr Gln Thr Phe
725 730 735
Asp Ile Asn Asn Thr Lys Val Glu Val Lys Ala Lys Gly Met Phe Ile
740 745 750
Leu Lys Lys Lys Asp Asp Asn Thr Tyr Glu Cys Ser Phe Tyr Asn Pro
755 760 765
Glu Ser Thr Asn Ser Ala Ser Asp Ile Glu Ser Lys Ile Ser Met Thr
770 775 780
Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Lys Asn Thr Ser Thr Ser Asn Glu Ser Gly
- 174 031986
785 790
Val His Phe Glu Leu Thr Lys
805
795
800 <210> 75 <211> 420 <212> БЕЛОК <213> Staphylococcus aureus (штамм MRSA252) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 75
Met Thr Tyr Arg Met Lys Lys Trp Gln Lys Leu Ser Thr Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Met Ala Gly Val Ile Thr Leu Asn Gly Gly Glu Phe Arg Ser Ile
20 25 30
Asp Lys His Gln Ile Ala Val Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Thr Asp
35 40 45
Tyr Glu Lys Leu Arg Asn Ile Trp Leu Asp Val Asn Tyr Gly Tyr Asp
50 55 60
Lys Tyr Asp Glu Asn Asn Pro Asp Met Lys Lys Lys Phe Glu Ala Thr
65 70 75 80
Glu Asn Glu Ala Glu Lys Leu Leu Lys Glu Met Lys Thr Glu Ser Asp
85 90 95
Arg Lys Tyr Leu Trp Glu Ser Ser Lys Asp Leu Asp Thr Lys Ser Ala
100 105 110
Asp Met Thr Arg Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ser Glu Ala Met
115 120 125
Lys His Lys Asn Thr Lys Leu Lys Thr Asp Glu Asn Lys Thr Lys Val
130 135 140
Lys Asp Ala Leu Glu Trp Leu His Lys Asn Ala Tyr Gly Lys Glu Pro
145 150 155 160
Asp Lys Lys Val Ala Asp Leu Thr Ser Asn Phe Lys Asn Lys Thr Ser
165 170 175
Arg Asn Thr Asn Leu Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr Pro Arg
180 185 190
Ala Leu Thr Asn Thr Leu Ile Leu Leu Gln Glu Asp Phe Thr Asp Glu
195 200 205
Glu Lys Lys Lys Tyr Thr Ala Pro Ile Lys Thr Phe Ala Pro Asp Ser
210 215 220
Asp Lys Ile Leu Ser Ser Val Gly Lys Ser Glu Pro Ala Lys Gly Gly
225 230 235 240
Asn Leu Val Asp Ile Ser Lys Val Lys Leu Leu Glu Ser Ile Ile Glu
245 250 255
Glu Asp Lys Asp Met Met Lys Lys Ser Ile Asp Ser Phe Asn Thr Val
260 265 270
Phe Thr Tyr Ala Gln Asn Ser Ala Thr Gly Lys Glu Arg Asn Gly Phe
275 280 285
Tyr Lys Asp Gly Ser Tyr Ile Asp His Gln Asp Val Pro Tyr Thr Gly
290 295 300
Ala Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Gly Ile Ser Gln Met Met Pro Met
305 310 315 320
Ile Lys Glu Thr Pro Phe Asn Asp Ser Asn Gln Asn Asp Thr Thr Leu
325 330 335
Lys Ser Trp Ile Asp Asp Gly Phe Met Pro Leu Ile Tyr Lys Gly Glu
340 345 350
Met Met Asp Leu Ser Arg Gly Arg Ala Ile Ser Arg Glu Asn Glu Thr
355 360 365
Ser His Ser Ala Ser Ala Thr Val Met Lys Ser Leu Leu Arg Leu Ser
370 375 380
Asp Thr Met Asp Lys Ser Thr Lys Ala Lys Tyr Lys Lys Ile Val Lys
- 175 031986
385
Thr Ser Val Glu
390
Ser Asp
405
Ser
395
Ser Tyr Lys Gln
410
Thr
Asp
Tyr
Leu
415
400
Ser
Ser Tyr Ser Asp
420 <210> 76 <211> 806 <212> БЕЛОК <213> Staphylococcus aureus (штамм MRSA252) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 76
Met Thr Asn Lys Met Lys Lys Trp Gln Lys Leu Ser Thr Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Met Thr Gly Val Ile Ala Leu Asn Asn Gly Glu Phe Arg Asn Val
20 25 30
Asp Lys His Gln Ile Ala Val Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Pro Asp
35 40 45
Tyr Glu Lys Leu Lys Lys Thr Trp Leu Asp Val Asn Tyr Gly Tyr Asp
50 55 60
Gln Tyr Asp Glu Asn Asn Gln Asp Met Lys Lys Lys Phe Asp Ala Lys
65 70 75 80
Glu Lys Glu Ala Lys Lys Leu Leu Asp Asp Met Lys Thr Asp Thr Asn
85 90 95
Arg Thr Tyr Leu Trp Ser Gly Ala Glu Asn Leu Glu Thr Asn Ser Ser
100 105 110
His Met Thr Lys Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ala Glu Ser Met
115 120 125
Gln His Lys Asn Thr Val Leu Lys Thr Val Glu Asn Lys Leu Lys Ile
130 135 140
Lys Glu Ala Leu Asp Trp Met His Lys Asn Val Tyr Gly Lys Asn Pro
145 150 155 160
Ser Gln Lys Val Glu Asp Leu Thr Lys Asn Arg Lys Gly Gln Thr Thr
165 170 175
Pro Lys Asn Asn Ser Leu Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr Pro
180 185 190
Arg Ala Leu Thr Asn Thr Leu Leu Leu Met Asp Asp Met Leu Thr Lys
195 200 205
Asp Glu Met Lys Asn Tyr Ser Lys Pro Ile Ser Thr Tyr Ala Pro Ser
210 215 220
Ser Asp Lys Ile Leu Ser Ser Val Gly Glu Ser Glu Asp Ala Lys Gly
225 230 235 240
Gly Asn Leu Val Asp Ile Ser Lys Val Lys Leu Leu Glu Ser Val Ile
245 250 255
Glu Glu Asp Val Asp Met Leu Lys Lys Ser Ile Asp Ser Phe Asn Lys
260 265 270
Val Phe Thr Tyr Val Gln Asp Ser Ala Thr Gly Lys Gly Arg Asn Gly
275 280 285
Phe Tyr Lys Asp Gly Ser Tyr Ile Asp His Gln Asp Val Pro Tyr Thr
290 295 300
Gly Ala Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Gly Ile Ser Gln Met Met Pro
305 310 315 320
Met Ile Lys Glu Ser Pro Phe Lys Thr Thr Gln Asp Asn Ala Thr Leu
325 330 335
Ser Asn Trp Ile Asp Glu Gly Phe Met Pro Leu Ile Tyr Lys Gly Glu
340 345 350
Met Met Asp Leu Ser Arg Gly Arg Ala Ile Ser Arg Glu Asn Glu Thr
355 360 365
Ser His Thr Ala Ser Ala Thr Val Met Lys Ser Leu Leu Arg Leu Asn
- 176 031986
370 375 380
Asp Thr Met Asp Asp Ser Thr Lys Thr Arg Tyr Lys Gln Ile Val Lys
385 390 395 400
Thr Ser Val Asn Ser Asp Ser Ser Tyr Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Asn
405 410 415
Ser Tyr Ser Asp Ile Ala Lys Met Lys Lys Leu Met Asn Asp Ser Thr
420 425 430
Ile Ser Lys Asn Asp Leu Thr Gln Gln Leu Lys Ile Tyr Asn Asp Met
435 440 445
Asp Arg Val Thr Tyr His Asn Lys Asp Leu Asp Phe Ala Phe Gly Leu
450 455 460
Ser Met Thr Ser Lys Asn Ile Ala Arg Tyr Glu Asn Ile Asn Gly Glu
465 470 475 480
Asn Leu Lys Gly Trp His Thr Gly Ala Gly Met Ser Tyr Leu Tyr Asn
485 490 495
Ser Asp Val Lys His Tyr Arg Asp Asn Phe Trp Ala Thr Ala Asp Met
500 505 510
Thr Cys Leu Pro Gly Thr Thr Thr Leu Asn Asp Met Pro Ser Thr Asn
515 520 525
Thr Lys Asn Asp Lys Ser Phe Val Gly Gly Thr Lys Leu Asn Asn Lys
530 535 540
Tyr Ala Ser Ile Gly Met Asp Phe Glu Asn Gln Asp Lys Thr Leu Thr
545 550 555 560
Ala Lys Lys Ser Tyr Phe Ile Leu Asn Asp Lys Ile Val Phe Leu Gly
565 570 575
Thr Gly Ile Lys Ser Thr Asp Ser Ser Lys Asn Pro Val Thr Ser Val
580 585 590
Glu Asn Arg Lys Ala Asn Gly Tyr Lys Leu Phe Lys Asp Asp Ile Glu
595 600 605
Ile Thr Thr Ser Asp Val Asn Ala Gln Glu Thr His Ser Val Phe Leu
610 615 620
Glu Ser Asn Asp Thr Lys Lys Asn Ile Gly Tyr His Phe Leu Asp Lys
625 630 635 640
Pro Lys Ile Thr Val Lys Lys Glu Ser His Thr Gly Lys Trp Ser Glu
645 650 655
Ile Asn Lys Ser Gln Lys Lys Asp Asp Lys Lys Asp Glu Tyr Tyr Glu
660 665 670
Val Thr Gln Thr His Asn Thr Ser Asp Ser Lys Tyr Ala Tyr Val Leu
675 680 685
Tyr Pro Gly Leu Ser Lys Ser Asp Phe Lys Ser Lys Asn Asn Asn Val
690 695 700
Ser Ile Val Lys Gln Asp Glu Asp Phe His Val Ile Lys Asp Asn Asp
705 710 715 720
Gly Val Phe Ala Gly Val Asn Tyr Ser Asp Asn Thr Lys Ser Phe Asp
725 730 735
Ile Asn Gly Ile Thr Val Glu Leu Lys Glu Lys Gly Met Phe Val Ile
740 745 750
Lys Lys Lys Asp Asp Lys Ala Tyr Lys Cys Ser Phe Tyr Asn Pro Glu
755 760 765
Thr Thr Asn Thr Ala Ser Asn Ile Glu Ser Lys Ile Phe Ile Lys Gly
770 775 780
Tyr Thr Ile Thr Asn Lys Ser Val Ile Asn Ser Asn Asp Ala Gly Val
785 790 795 800
Asn Phe Glu Leu Thr Lys
805
<210> 77 <211> 815 <212> БЕЛОК <213> Staphylococcus aureus (штамм MSSA476) <220>
- 177 031986 <223> гиалуронан лиаза <400> 77
Met Thr Tyr Arg Ile Lys Lys Trp Gln Lys Leu Ser Thr Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Met Ala Gly Val Ile Thr Leu Asn Gly Gly Glu Phe Arg Ser Ile
20 25 30
Asp Lys Tyr Gln Ile Ala Val Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Pro Asp
35 40 45
Tyr Glu Lys Leu Arg Asn Thr Trp Leu Asp Val Asn Tyr Gly Tyr Asp
50 55 60
Lys Tyr Asp Glu Lys Asn Asp Ala Met Lys Lys Lys Phe Glu Ala Thr
65 70 75 80
Glu Asn Glu Ala Lys Lys Leu Leu Ser Glu Met Lys Thr Glu Ser Asp
85 90 95
Arg Lys Tyr Leu Trp Glu Asn Ser Lys Asp Leu Asp Thr Lys Ser Ala
100 105 110
Asp Met Thr Arg Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ala Glu Ala Met
115 120 125
Lys His Lys Asp Thr Lys Leu Lys Ile Asp Glu Asn Lys Lys Lys Val
130 135 140
Lys Asp Ala Leu Glu Trp Leu His Lys Asn Ala Tyr Gly Lys Glu Pro
145 150 155 160
Asp Lys Lys Val Ala Asp Leu Thr Ser Asn Phe Lys Asn Lys Thr Ser
165 170 175
Arg Asn Thr Asn Leu Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr Pro Arg
180 185 190
Ala Leu Thr Asn Thr Leu Ile Leu Leu Asn Asp Gln Phe Ser Asn Asp
195 200 205
Glu Lys Lys Lys Tyr Thr Ala Pro Ile Lys Thr Phe Ala Pro Glu Ser
210 215 220
Asp Lys Ile Leu Ser Ser Val Gly Gln Pro Glu Gln Ala Lys Gly Gly
225 230 235 240
Asn Leu Val Asp Ile Ala Lys Val Lys Leu Leu Glu Ser Ile Ile Glu
245 250 255
Glu Asp Lys Asp Ile Thr Lys Asn Ser Ile Asp Ala Phe Asn Lys Val
260 265 270
Phe Thr Tyr Val Gln Ser Asn Ala Thr Gly Lys Glu Arg Asn Gly Phe
275 280 285
Tyr Lys Asp Gly Ser Tyr Ile Asp His Gln Asp Val Pro Tyr Thr Gly
290 295 300
Ala Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Gly Ile Ser Gln Met Met Pro Met
305 310 315 320
Ile Lys Glu Thr Pro Phe Asn Asp Lys Thr Gln Asn Asp Thr Thr Leu
325 330 335
Lys Ser Trp Ile Asp Asp Gly Phe Met Pro Leu Ile Tyr Lys Gly Glu
340 345 350
Met Met Asp Leu Ser Arg Gly Arg Ala Ile Ser Arg Glu Asn Glu Thr
355 360 365
Ser His Thr Ala Ser Ala Thr Val Met Lys Ser Leu Leu Arg Leu Ser
370 375 380
Asp Ala Met Asp Asp Ser Thr Lys Ala Lys Tyr Lys Gln Ile Val Lys
385 390 395 400
Thr Ser Val Lys Ser Asp Ser Ser Tyr Gly Gln Asn Asp Thr Leu Ser
405 410 415
Ser Tyr Ser Asp Ile Ser Lys Met Lys Ser Leu Met Glu Asp Ser Thr
420 425 430
Ile Ser Thr Asn Gly Leu Thr Gln Gln Leu Lys Ile Tyr Asn Asp Met
435 440 445
Asp Arg Val Thr Tyr His Asn Lys Asp Leu Asp Phe Ala Phe Gly Leu
450 455 460
Ser Met Thr Ser Lys Asn Val Ala Arg Tyr Glu Ser Ile Asn Gly Glu
465 470 475 480
- 178 031986
Asn Leu Lys Gly Trp 485 His Thr Gly Ala Gly 490 Met Ser Tyr Leu Tyr 495 Asn
Ser Asp Val Lys His Tyr Arg Asp Asn Phe Trp Ala Thr Ala Asp Met
500 505 510
Lys Arg Leu Ala Gly Thr Thr Thr Leu Glu Asn Glu Glu Pro Lys Gly
515 520 525
Thr Asp Val Lys Lys Ser Ser Lys Thr Phe Val Gly Gly Thr Lys Phe
530 535 540
Asp Asp Gln His Ala Ser Ile Gly Met Asp Phe Glu Asn Gln Asp Lys
545 550 555 560
Thr Leu Thr Ala Lys Lys Ser Tyr Phe Ile Leu Asn Asp Lys Ile Val
565 570 575
Phe Leu Gly Thr Gly Ile Lys Ser Thr Asp Ser Ser Lys Asn Pro Val
580 585 590
Thr Thr Ile Glu Asn Arg Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Leu Tyr Thr Asp
595 600 605
Asp Lys Gln Thr Thr Ala Ser Asp Asn Gln Gly Thr Asn Ser Val Phe
610 615 620
Leu Glu Ser Thr Asn Lys Pro Lys Asn Asn Ile Gly Tyr His Phe Leu
625 630 635 640
Asn Glu Ser Lys Ile Thr Val Lys Lys Glu Ser His Thr Gly Lys Trp
645 650 655
Ser Asp Ile Asn Lys Ser Gln Lys Gln Asp Ser Lys Thr Asn Gln Tyr
660 665 670
Tyr Glu Val Thr Gln Lys His Ser Asn Thr Asp Ser Lys Tyr Ala Tyr
675 680 685
Val Leu Tyr Pro Gly Leu Ser Lys Asp Asp Phe Asn Thr Lys Lys Asp
690 695 700
Lys Val Thr Val Val Lys Gln Asp Asp Asp Phe His Val Val Lys Asp
705 710 715 720
Asn Glu Ser Val Trp Ala Gly Val Asn Tyr Ser Asp Ser Thr Gln Thr
725 730 735
Phe Ile Ile Asn Asn Thr Lys Val Glu Val Lys Ala Lys Gly Met Phe
740 745 750
Ile Leu Lys Lys Lys Asp Asp Lys Thr Tyr Glu Cys Ser Phe Tyr Asn
755 760 765
Pro Glu Ser Thr Asn Thr Ala Ser Asp Ile Glu Ser Lys Ile Ser Met
770 775 780
Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Lys Asn Thr Ser Thr Ser Asn Glu Ser
785 790 795 800
Gly Val Arg Phe Glu Leu Gln Gln Thr Leu Asn Lys Asp Asp Asn
805 810 815
<210> 78 <211> 807 <212> БЕЛОК <213> Staphylococcus aureus (штамм NCTC 8325) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 78
Met Thr Tyr Arg Ile Lys Lys Trp Gln Lys Leu Ser Thr Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Met Ala Gly Val Ile Thr Leu Asn Gly Gly Glu Phe Arg Ser Val
20 25 30
Asp Lys His Gln Ile Ala Val Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Pro Asp
35 40 45
Tyr Glu Lys Leu Arg Asn Thr Trp Leu Asp Val Asn Tyr Gly Tyr Asp
50 55 60
Lys Tyr Asp Glu Asn Asn Pro Asp Met Lys Lys Lys Phe Asp Ala Thr
65 70 75 80
- 179 031986
Glu Lys
Arg Lys
His Met
Arg Asn
130 Lys Asp 145
Asp Lys
Lys Asn
Ser Leu
Glu Lys
210
Asp Lys 225
Asn Leu
Glu Asp
Phe Thr
Tyr Lys
290 Ala Tyr 305 Ile Lys
Lys Ser
Met Met
Ser His
370
Asp Ala 385
Ser Ser
Ser Tyr
Ile Ser
Asp Arg
450
Ser Met 465
Asn Leu
Ser Asp
Lys Arg
Thr Asp
530 Asp Asp 545
Thr Leu
Phe Leu
Glu Ala
Tyr Leu
100 Thr Arg 115
Pro Lys
Ala Leu
Lys Val
Thr Asn
180
Thr Asn
195
Lys Lys
Ile Leu
Val Asp
Lys Asp
260 Tyr Val 275 Asp Gly
Gly Val
Glu Thr
Trp Ile
340
Asp Leu
355
Ser Ala
Met Asp
Val Glu
Ser Asp
420
Lys Asn
435
Val Thr
Thr Ser
Lys Gly
Val Lys
500
Leu Ser 515
Asp Lys
Gln His
Thr Ala
Gly Thr
Thr Asn 85
Trp Ser
Thr Tyr
Thr Thr
Glu Trp
150 Lys Glu 165
Leu Asn
Thr Leu
Phe Thr
Ser Ser
230
Ile Ser 245
Met Met
Gln Asp
Ser Tyr
Val Leu
310
Pro Phe 325
Asp Asp
Ser Arg
Ser Ala
Asp Ser
390 Ser Asp 405
Ile Asp
Gly Leu
Tyr His
Lys Asn
470
Trp His
485
His Tyr
Gly Thr
Lys Ser
Ala Ser
550 Lys Lys 565
Gly Ile
Leu Leu
Gly Ala
Arg Asn
120
Leu Asn
135
Leu His
Leu Ser
Trp Trp
Ile Leu
200
Ala Pro
215
Val Gly
Lys Val
Lys Lys
Ser Ala
280
Ile Asp
295
Leu Glu
Asn Asp
Gly Phe
Gly Arg
360
Thr Val
375
Thr Lys
Ser Ser
Lys Met
Thr Gln
440 Asn Lys 455
Val Ala
Thr Gly
His Asp
Thr Thr
520
Ser Lys
535
Ile Gly
Ser Tyr
Lys Ser
Lys Glu
Glu Thr
105
Ile Glu
Thr Asp
Lys Asn
Glu Asn
170
Asp Tyr
185
Leu Asn
Ile Lys
Lys Ala
Lys Leu
250
Ser Ile
265
Thr Gly
His Gln
Gly Ile
Lys Thr
330
Met Pro
345
Ala Ile
Met Lys
Ala Lys
Tyr Lys
410
Lys Ser
425
Gln Leu
Asp Leu
Arg Tyr
Ala Gly
490
Asn Phe
505
Leu Asp
Thr Phe
Met Asp
Phe Ile
570 Thr Asp
Met Lys
Leu Glu
Lys Ile
Glu Asn
140 Ala Tyr 155
Phe Thr
Glu Ile
Asp Gln
Thr Phe
220
Glu Leu 235
Leu Glu
Asp Ser
Lys Glu
Asp Val
300
Ser Gln 315
Gln Asn
Leu Ile
Ser Arg
Ser Leu
380
Tyr Lys 395
Gln Asn
Leu Met
Lys Ile
Asp Phe
460
Glu Ser 475
Met Ser
Trp Val
Asn Glu
Val Gly
540
Phe Glu 555
Leu Asn
Ser Ser
Thr Glu
Thr Asn
110
Ala Glu
125
Lys Lys
Gly Lys
Lys Thr
Gly Thr
190
Phe Ser 205
Ala Pro
Ala Lys
Cys Ile
Phe Asn
270 Arg Asn 285
Pro Tyr
Met Met
Asp Thr
Tyr Lys
350
Glu Asn
365
Leu Arg
Lys Ile
Asp Tyr
Thr Asp
430
Tyr Asn
445
Ala Phe
Ile Asn
Tyr Leu
Thr Ala
510
Ile Leu
525
Gly Thr
Asn Gln
Asp Lys
Lys Asn
Ser Gly
Ser Ser
Ala Met
Lys Val
Glu Pro
160 Thr Gly 175
Pro Lys
Asn Glu
Asp Ser
Gly Gly
240
Ile Glu
255
Lys Val
Gly Phe
Thr Gly
Pro Met
320
Thr Leu
335
Gly Glu
Glu Thr
Leu Ser
Val Lys
400
Leu Asn
415
Asn Ser
Asp Met
Gly Leu
Gly Glu
480 Tyr Asn 495 Asp Met
Lys Asp
Lys Val
Asp Lys
560
Ile Val
575
Pro Val
- 180 031986
580 585 590
Thr Thr Ile Glu Asn Arg Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Leu Tyr Thr Asp
595 600 605
Asp Lys Gln Thr Thr Asn Ser Asp Asn Gln Glu Asn Asn Ser Val Phe
610 615 620
Leu Glu Ser Thr Asp Thr Lys Lys Asn Ile Gly Tyr His Phe Leu Asn
625 630 635 640
Lys Pro Lys Ile Thr Val Lys Lys Glu Ser His Thr Gly Lys Trp Lys
645 650 655
Glu Ile Asn Lys Ser Gln Lys Asp Thr Gln Lys Thr Asp Glu Tyr Tyr
660 665 670
Glu Val Thr Gln Lys His Ser Asn Ser Asp Asn Lys Tyr Gly Tyr Val
675 680 685
Leu Tyr Pro Gly Leu Ser Lys Asp Val Phe Lys Thr Lys Lys Asp Glu
690 695 700
Val Thr Val Val Lys Gln Glu Asp Asp Phe His Val Val Lys Asp Asn
705 710 715 720
Glu Ser Val Trp Ala Gly Val Asn Tyr Ser Asn Ser Thr Gln Thr Phe
725 730 735
Asp Ile Asn Asn Thr Lys Val Glu Val Lys Ala Lys Gly Met Phe Ile
740 745 750
Leu Lys Lys Lys Asp Asp Asn Thr Tyr Glu Cys Ser Phe Tyr Asn Pro
755 760 765
Glu Ser Thr Asn Ser Ala Ser Asp Ile Glu Ser Lys Ile Ser Met Thr
770 775 780
Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Lys Asn Thr Ser Thr Ser Asn Glu Ser Gly
785 790 795 800
Val His Phe Glu Leu Thr Lys
805 <210> 79 <211> 809 <212> БЕЛОК <213> Staphylococcus aureus (штамм бычий RF122) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 79
Met Thr Tyr Arg Met Lys Lys Trp Gln Lys Leu Ser Thr Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Met Ala Gly Gly Ile Thr Phe Asn Asp Ser Glu Phe Arg Ser Val
20 25 30
Asp Lys His Gln Ile Ala Val Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Pro Asn
35 40 45
Tyr Glu Lys Leu Lys Asn Thr Trp Leu Asp Val Asn Tyr Gly Tyr Asp
50 55 60
Lys Tyr Asp Glu Ser Asn Pro Asp Met Lys Lys Lys Phe Glu Ala Thr
65 70 75 80
Glu Lys Glu Ala Arg Lys Leu Leu Ser Glu Met Lys Thr Glu Ser Asp
85 90 95
Arg Lys Tyr Leu Trp Glu Asn Ser Lys Asp Leu Asp Thr Lys Ser Ala
100 105 110
Asp Met Thr Arg Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ala Glu Ala Met
115 120 125
Lys His Pro Lys Thr Thr Leu Lys Asn Asp Glu Asn Lys Lys Lys Val
130 135 140
Lys Asp Ala Leu Glu Trp Leu His Lys Asn Ala Tyr Gly Lys Glu Pro
145 150 155 160
Gly Lys Lys Val Ala Asp Leu Lys Thr Asn Phe Ser Lys Ser Ala Pro
165 170 175
Gln Lys Asn Thr Asn Leu Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr Pro
- 181 031986
Arg Ala
Glu Glu
210 Ser Asp 225 Gly Asn
Glu Glu
Val Phe
Phe Tyr
290
Gly Ala 305
Met Ile
Leu Thr
Glu Met
Thr Ser
370 Ser Asp 385
Lys Asn
Ser Ser
Thr Ile
Met Asp
450
Leu Ser 465
Glu Asn
Asn Ser
Met Lys
Gly Thr
530 Phe Asp 545
Lys Thr
Val Phe
Val Thr
Asp Asp
610
Phe Leu
625
Leu Asn
Trp Ser
Tyr Tyr
180
Leu Thr 195
Lys Lys
Glu Ile
Leu Val
Asp Lys
260
Thr Tyr 275
Lys Asp
Tyr Gly
Lys Glu
Ser Trp
340 Met Asp 355
His Ser
Ala Met
Ser Val
Tyr Ser
420
Ser Thr 435
Arg Val
Met Thr
Leu Lys
Asp Val
500
Arg Leu 515
Asp Val
Asp Gln
Leu Thr
Leu Gly
580
Thr Ile 595
Lys Gln
Glu Ser
Lys Ser
Asp Ile
660
Glu Val
675
Asn Thr
Lys Tyr
Leu Ser
230 Asp Ile 245
Asp Met
Val Gln
Gly Ser
Val Val
310
Thr Pro 325
Ile Asp
Leu Ser
Ala Ser
Asp Glu
390 Lys Ser 405 Asp Ile
Asn Gly
Thr Tyr
Ser Lys
470
Gly Trp 485
Arg His
Ala Asp
Lys Lys
His Ala
550 Ala Lys 565
Thr Gly
Glu Asn
Thr Thr
Thr Asn
630 Lys Ile 645
Asn Lys
Thr Gln
Leu Ile
200
Thr Ala
215
Ser Val
Ser Lys
Met Lys
Asp Ser
280
Tyr Ile
295
Leu Leu
Phe Asn
Asp Gly
Arg Gly
360
Ala Thr 375
Ser Thr
Asp Ser
Asp Lys
Leu Thr
440
His Asn
455
Asn Val
His Thr
Tyr Arg
Thr Thr
520
Ser Ser
535
Ser Ile
Lys Ser
Ile Lys
Arg Lys
600
Asn Ser
615
Ser Thr
Thr Val
Ser Gln
Lys His
680
185
Leu Leu
Pro Ile
Gly Lys
Val Lys
250
Asn Ser
265
Ala Thr
Asp His
Glu Gly
Asp Lys
330
Phe Met
345
Arg Ala
Val Met
Lys Ala
Ser Tyr
410
Met Lys
425
Gln Gln
Lys Asp
Ala Arg
Gly Ala
490
Asp Asn
505
Thr Leu
Lys Thr
Gly Met
Tyr Phe
570
Thr Thr 585
Ala His
Asn Asn
Gln Asn
Lys Lys
650
Lys Asp
665
Ser Asn
Lys Glu
Lys Thr
220
Ala Glu
235
Leu Leu
Ile Asp
Asp Lys
Lys Asp
300
Ile Ser
315
Thr Gln
Pro Leu
Ile Ser
Lys Ser
380 Lys Tyr 395
Gly Gln
Ser Leu
Leu Lys
Leu Asp
460
Tyr Glu 475
Gly Met
Phe Trp
Glu Asn
Phe Val
540 Asp Phe 555
Ile Leu
Asp Ser
Gly Tyr
Gln Glu
620
Asn Ile 635
Glu Ser
Thr Gln
Thr Asp
190 Asp Phe 205
Phe Ala
Pro Ala
Glu Ser
Ser Phe
270
Glu Arg
285
Val Pro
Gln Met
Asn Asn
Ile Tyr
350
Arg Glu
365
Leu Leu
Lys Gln
Asn Asp
Met Thr
430
Ile Tyr
445
Phe Ala
Asn Ile
Ser Tyr
Ala Thr
510
Glu Glu 525
Gly Gly
Glu Asn
Asn Asp
Ser Lys
590
Thr Leu
605
Thr Asn
Gly Tyr
His Thr
Lys Thr
670 Asp Lys 685
Thr Asp
Pro Lys
Lys Gly
240
Ile Ile
255
Asn Lys
Asn Gly
Tyr Thr
Met Pro
320
Thr Thr
335
Lys Gly
Asn Glu
Arg Leu
Ile Val
400
Thr Leu
415
Asp Ser
Asn Ala
Phe Gly
Asn Gly
480
Leu Tyr
495
Ala Asp
Pro Lys
Thr Lys
Gln Asp
560 Lys Ile 575
Asn Pro
Tyr Thr
Ser Val
His Phe
640 Gly Lys 655
Asp Glu
Tyr Ala
- 182 031986
Tyr Val 690 Leu Tyr Pro Gly Ile 695 Thr Lys Asp Asn Phe 700 Lys Ser Lys Ala
Ser Gln Val Thr Val Val Lys Gln Asp Asp Asp Phe His Val Val Lys
705 710 715 720
Asp Asn Glu Ser Val Trp Ala Gly Val Asn Tyr Ser Asp Ser Thr Gln
725 730 735
Thr Phe Asp Ile Asn Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Ala Lys Gly Met
740 745 750
Phe Ile Leu Lys Lys Lys Asp Asp Asn Thr Tyr Glu Cys Ser Phe Tyr
755 760 765
Asn Pro Glu Ser Thr Asn Ser Ala Ser Asp Ile Glu Ser Lys Ile Ser
770 775 780
Met Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Lys Asn Thr Ser Asn Thr Asn Glu
785 790 795 800
Ser Gly Val Arg Phe Glu Leu Thr Lys
805 <210> 80 <211> 807 <212> БЕЛОК <213> Staphylococcus aureus (штамм бычий RF122) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 80
Met Thr Tyr Lys Met Lys Lys Trp Gln Lys Leu Ser Thr Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Met Ala Gly Val Ile Thr Leu Asn Asn Gly Glu Phe Arg Asn Val
20 25 30
Asp Lys His Gln Ile Ala Val Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Pro Asp
35 40 45
Tyr Glu Lys Leu Lys Lys Thr Trp Leu Asp Val Asn Tyr Gly Asn Asp
50 55 60
Gln Tyr Asp Glu Asn Asn Gln Asp Met Lys Lys Lys Phe Asp Ala Lys
65 70 75 80
Glu Asn Glu Ala Lys Lys Leu Leu Glu Asp Met Lys Thr Asp Thr Asn
85 90 95
Arg Thr Tyr Leu Trp Ser Gly Ala Glu Asn Leu Glu Thr Asn Ser Ser
100 105 110
His Met Thr Lys Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ala Glu Ala Met
115 120 125
Arg His Lys Asn Thr Ser Leu Lys Thr Asp Glu Asn Lys Leu Lys Ile
130 135 140
Lys Asp Ala Ile Lys Trp Leu His His Asn Val Tyr Gly Lys Asp Pro
145 150 155 160
Asp Lys Lys Val Ala Asp Leu Thr Thr Asn Arg Lys Glu Lys Asp Ser
165 170 175
Ser Lys Lys Asn Asn Ser Leu Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr
180 185 190
Pro Arg Ala Leu Thr Asn Thr Leu Leu Leu Met Asp Asn Met Leu Thr
195 200 205
Lys Asp Glu Met Lys Asn Tyr Ser Lys Pro Ile Ser Ile Tyr Ser Pro
210 215 220
Ser Ser Tyr Lys Ile Leu Ser Ser Val Gly Glu Ser Glu Asp Ala Lys
225 230 235 240
Gly Gly Asn Leu Val Asp Ile Ala Lys Val Lys Phe Leu Glu Ser Val
245 250 255
Ile Glu Glu Asp Val Asp Met Met Lys Lys Ser Ile Asp Ser Phe Asn
260 265 270
Lys Val Phe Thr Tyr Val Gln Asp Ser Ala Thr Gly Lys Ala Arg Asn
275 280 285
- 183 031986
Gly Phe 290 Tyr Lys Asp Gly Ser 295 Tyr Ile Asp His Gln 300 Asp Val Pro Tyr
Thr Gly Ala Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Gly Ile Ser Gln Met Met
305 310 315 320
Pro Met Ile Lys Glu Ser Pro Phe Lys His Thr Gln Asp Lys Ala Thr
325 330 335
Leu Ser Asn Trp Ile Asp Glu Gly Phe Met Pro Leu Ile Tyr Lys Gly
340 345 350
Glu Met Met Asp Leu Ser Arg Gly Arg Ala Ile Ser Arg Glu Asn Glu
355 360 365
Thr Ser His Thr Ala Ser Ala Thr Val Met Lys Ser Leu Leu Arg Leu
370 375 380
Ser Asp Thr Met Asp Glu Ser Thr Lys Thr Lys Tyr Lys Gln Ile Val
385 390 395 400
Lys Thr Ser Val Lys Ser Asp Ser Ser Tyr Asp Ser Asn Asp Thr Leu
405 410 415
Asn Ser Tyr Ser Asp Ile Asp Lys Met Lys Lys Leu Met Asn Asp Ser
420 425 430
Thr Ile Ser Lys Asn Asp Leu Thr Gln Gln Leu Lys Ile Tyr Asn Asp
435 440 445
Met Asp Arg Val Thr Tyr His Asn Lys Glu Leu Asp Phe Ala Phe Gly
450 455 460
Leu Ser Met Thr Ser Lys Asn Ile Ala Arg Tyr Glu Asn Ile Asn Gly
465 470 475 480
Glu Asn Leu Lys Gly Trp His Thr Gly Ala Gly Met Ser Tyr Leu Tyr
485 490 495
Asn Ser Asp Val Lys His Tyr Arg Asp Asn Phe Trp Ala Thr Ala Asp
500 505 510
Met Thr Arg Leu Pro Gly Thr Thr Thr Leu Asn Asp Met Pro Ser Thr
515 520 525
Asn Thr Lys Asn Asp Lys Ser Phe Val Gly Gly Thr Lys Leu Asn Asn
530 535 540
Lys Tyr Ala Ser Ile Gly Met Asp Phe Glu Asn Gln Asp Lys Thr Leu
545 550 555 560
Thr Ala Lys Lys Ser Tyr Phe Ile Leu Asn Asp Lys Ile Val Phe Ile
565 570 575
Gly Thr Gly Ile Lys Ser Thr Asp Ser Ser Lys Asn Pro Val Thr Ser
580 585 590
Val Glu Asn Arg Lys Ala Asn Gly Tyr Lys Leu Phe Lys Gly Asp Ile
595 600 605
Glu Ile Thr Thr Ser Asp Val Asn Ala Gln Glu Thr His Ser Val Phe
610 615 620
Leu Glu Ser Asn Asp Thr Lys Lys Asn Ile Gly Tyr His Phe Leu Asp
625 630 635 640
Lys Pro Lys Ile Thr Val Lys Lys Glu Ser His Thr Gly Lys Trp Ser
645 650 655
Glu Ile Asn Lys Ser Gln Lys Thr Asp Asp Lys Lys Asp Glu Tyr Tyr
660 665 670
Glu Val Thr Gln Thr His Asn Thr Ser Asp Ser Lys Tyr Ala Tyr Val
675 680 685
Leu Tyr Pro Gly Leu Ser Lys Ser Asp Phe Lys Ser Lys Asn Asn Asn
690 695 700
Val Ser Ile Val Lys Gln Asp Glu Asp Phe His Val Ile Lys Asp Asn
705 710 715 720
Asp Gly Val Phe Ala Gly Val Asn Tyr Ser Asp Ser Thr Lys Ser Phe
725 730 735
Asp Ile Asn Gly Thr Ile Val Glu Leu Lys Glu Lys Gly Met Phe Val
740 745 750
Ile Lys Lys Lys Asp Asp Asn Thr Tyr Glu Cys Ser Phe Tyr Asn Pro
755 760 765
Thr Ser Thr Asn Ser Thr Ser Asn Lys Glu Ser Lys Ile Ser Val Thr
770 775 780
Gly Tyr Thr Ile Thr Asn Gln Ser Val Ser Asn Phe Lys Glu Ser Asp
- 184 031986
785 790
Ile His Phe Glu Leu Thr Lys
805
795
800 <210> 81 <211> 807 <212> БЕЛОК <213> Staphylococcus aureus (штамм USA300) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 81
Met Thr Tyr Arg Ile Lys Lys Trp Gln Lys Leu Ser Thr Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Met Ala Gly Val Ile Thr Leu Asn Gly Gly Glu Phe Arg Ser Val
20 25 30
Asp Lys His Gln Ile Ala Val Ala Asp Thr Asn Val Gln Thr Pro Asp
35 40 45
Tyr Glu Lys Leu Arg Asn Thr Trp Leu Asp Val Asn Tyr Gly Tyr Asp
50 55 60
Lys Tyr Asp Glu Asn Asn Pro Asp Met Lys Lys Lys Phe Asp Ala Thr
65 70 75 80
Glu Lys Glu Ala Thr Asn Leu Leu Lys Glu Met Lys Thr Glu Ser Gly
85 90 95
Arg Lys Tyr Leu Trp Ser Gly Ala Glu Thr Leu Glu Thr Asn Ser Ser
100 105 110
His Met Thr Arg Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ala Glu Ala Met
115 120 125
Arg Asn Pro Lys Thr Thr Leu Asn Thr Asp Glu Asn Lys Lys Lys Val
130 135 140
Lys Asp Ala Leu Glu Trp Leu His Lys Asn Ala Tyr Gly Lys Glu Pro
145 150 155 160
Asp Lys Lys Val Lys Glu Leu Ser Glu Asn Phe Thr Lys Thr Thr Gly
165 170 175
Lys Asn Thr Asn Leu Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr Pro Lys
180 185 190
Ser Leu Thr Asn Thr Leu Ile Leu Leu Asn Asp Gln Phe Ser Asn Glu
195 200 205
Glu Lys Lys Lys Phe Thr Ala Pro Ile Lys Thr Phe Ala Pro Asp Ser
210 215 220
Asp Lys Ile Leu Ser Ser Val Gly Lys Ala Glu Leu Ala Lys Gly Gly
225 230 235 240
Asn Leu Val Asp Ile Ser Lys Val Lys Leu Leu Glu Cys Ile Ile Glu
245 250 255
Glu Asp Lys Asp Met Met Lys Lys Ser Ile Asp Ser Phe Asn Lys Val
260 265 270
Phe Thr Tyr Val Gln Asp Ser Ala Thr Gly Lys Glu Arg Asn Gly Phe
275 280 285
Tyr Lys Asp Gly Ser Tyr Ile Asp His Gln Asp Val Pro Tyr Thr Gly
290 295 300
Ala Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Gly Ile Ser Gln Met Met Pro Met
305 310 315 320
Ile Lys Glu Thr Pro Phe Asn Asp Lys Thr Gln Asn Asp Thr Thr Leu
325 330 335
Lys Ser Trp Ile Asp Asp Gly Phe Met Pro Leu Ile Tyr Lys Gly Glu
340 345 350
Met Met Asp Leu Ser Arg Gly Arg Ala Ile Ser Arg Glu Asn Glu Thr
355 360 365
Ser His Ser Ala Ser Ala Thr Val Met Lys Ser Leu Leu Arg Leu Ser
370 375 380
Asp Ala Met Asp Asp Ser Thr Lys Ala Lys Tyr Lys Lys Ile Val Lys
- 185 031986
385
Ser Ser Val Glu Ser
405
Ser Tyr Ser Asp Ile
420
Ile Ser Lys Asn Gly
435
Asp Arg Val Thr Tyr
450
Ser Met Thr Ser Lys
465
Asn Leu Lys Gly Trp
485
Ser Asp Val Lys His
500
Lys Arg Leu Ser Gly
515
Thr Asp Asp Lys Lys
530
Asp Asp Gln His Ala
545
Thr Leu Thr Ala Lys
565
Phe Leu Gly Thr Gly
580
Thr Thr Ile Glu Asn
595
Asp Lys Gln Thr Thr
610
Leu Glu Ser Thr Asp
625
Lys Pro Lys Ile Thr
645
Glu Ile Asn Lys Ser
660
Glu Val Thr Gln Lys
675
Leu Tyr Pro Gly Leu
690
Val Thr Val Val Lys
705
Glu Ser Val Trp Ala
725
Asp Ile Asn Asn Thr
740
Leu Lys Lys Lys Asp
755
Glu Ser Thr Asn Ser
770
Gly Tyr Ser Ile Thr
785
Val His Phe Glu Leu
805
390
Asp Ser Ser Tyr Lys
410
Asp Lys Met Lys Ser
425
Leu Thr Gln Gln Leu
440
His Asn Lys Asp Leu
455
Asn Val Ala Arg Tyr
470
His Thr Gly Ala Gly
490
Tyr His Asp Asn Phe
505
Thr Thr Thr Leu Asp
520
Ser Ser Lys Thr Phe
535
Ser Ile Gly Met Asp
550
Lys Ser Tyr Phe Ile
570
Ile Lys Ser Thr Asp
585
Arg Lys Ala Asn Gly
600
Asn Ser Asp Asn Gln
615
Thr Lys Lys Asn Ile
630
Val Lys Lys Glu Ser
650
Gln Lys Asp Thr Gln
665
His Ser Asn Ser Asp
680
Ser Lys Asp Val Phe
695
Gln Glu Asp Asp Phe
710
Gly Val Asn Tyr Ser
730
Lys Val Glu Val Lys
745
Asp Asn Thr Tyr Glu
760
Ala Ser Asp Ile Glu
775
Asn Lys Asn Thr Ser
790
Thr Lys
395
Gln Asn Asp Tyr Leu
415 Leu Met Thr Asp Asn 430
Lys Ile Tyr Asn Asp
445
Asp Phe Ala Phe Gly
460
Glu Ser Ile Asn Gly
475
Met Ser Tyr Leu Tyr
495 Trp Val Thr Ala Asp 510
Asn Glu Ile Leu Lys
525
Val Gly Gly Thr Lys
540
Phe Glu Asn Gln Asp
555
Leu Asn Asp Lys Ile
575
Ser Ser Lys Asn Pro
590
Tyr Thr Leu Tyr Thr
605
Glu Asn Asn Ser Val
620
Gly Tyr His Phe Leu
635
His Thr Gly Lys Trp
655 Lys Thr Asp Glu Tyr
670
Asn Lys Tyr Gly Tyr
685
Lys Thr Lys Lys Asp
700
His Val Val Lys Asp
715
Asn Ser Thr Gln Thr
735 Ala Lys Gly Met Phe 750
Cys Ser Phe Tyr Asn
765
Ser Lys Ile Ser Met
780
Thr Ser Asn Glu Ser
795
400
Asn
Ser
Met
Leu
Glu
480
Asn
Met
Asp
Val
Lys
560
Val
Val
Asp
Phe
Asn
640
Lys
Tyr
Val
Glu
Asn
720
Phe
Ile
Pro
Thr
Gly
800 <210> 82 <211> 1066 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pneumoniae <220>
<223> гиалуронан лиаза
- 186 031986 <400> 82
Met 1 Gln Thr Lys Thr 5 Lys Lys Leu Ile Val 10 Ser Leu Ser Ser Leu 15 Val
Leu Ser Gly Phe Leu Leu Asn His Tyr Met Thr Ile Gly Ala Glu Glu
20 25 30
Thr Thr Thr Asn Thr Ile Gln Gln Ser Gln Lys Glu Val Gln Tyr Gln
35 40 45
Gln Arg Asp Thr Lys Asn Leu Val Glu Asn Gly Asp Phe Gly Gln Thr
50 55 60
Glu Asp Gly Ser Ser Pro Trp Thr Gly Ser Lys Ala Gln Gly Trp Ser
65 70 75 80
Ala Trp Val Asp Gln Lys Asn Ser Ala Asp Ala Ser Thr Arg Val Ile
85 90 95
Glu Ala Lys Asp Gly Ala Ile Thr Ile Ser Ser His Glu Lys Leu Arg
100 105 110
Ala Ala Leu His Arg Met Val Pro Ile Glu Ala Lys Lys Lys Tyr Lys
115 120 125
Leu Arg Phe Lys Ile Lys Thr Asp Asn Lys Ile Gly Ile Ala Lys Val
130 135 140
Arg Ile Ile Glu Glu Ser Gly Lys Asp Lys Arg Leu Trp Asn Ser Ala
145 150 155 160
Thr Thr Ser Gly Thr Lys Asp Trp Gln Thr Ile Glu Ala Asp Tyr Ser
165 170 175
Pro Thr Leu Asp Val Asp Lys Ile Lys Leu Glu Leu Phe Tyr Glu Thr
180 185 190
Gly Thr Gly Thr Val Ser Phe Lys Asp Ile Glu Leu Val Glu Val Ala
195 200 205
Asp Gln Leu Ser Glu Asp Ser Gln Thr Asp Lys Gln Leu Glu Glu Lys
210 215 220
Ile Asp Leu Pro Ile Gly Lys Lys His Val Phe Ser Leu Ala Asp Tyr
225 230 235 240
Thr Tyr Lys Val Glu Asn Pro Asp Val Ala Ser Val Lys Asn Gly Ile
245 250 255
Leu Glu Pro Leu Lys Glu Gly Thr Thr Asn Val Ile Val Ser Lys Asp
260 265 270
Gly Lys Glu Val Lys Lys Ile Pro Leu Lys Ile Leu Ala Ser Val Lys
275 280 285
Asp Ala Tyr Thr Asp Arg Leu Asp Asp Trp Asn Gly Ile Ile Ala Gly
290 295 300
Asn Gln Tyr Tyr Asp Ser Lys Asn Glu Gln Met Ala Lys Leu Asn Gln
305 310 315 320
Glu Leu Glu Gly Lys Val Ala Asp Ser Leu Ser Ser Ile Ser Ser Gln
325 330 335
Ala Asp Arg Thr Tyr Leu Trp Glu Lys Phe Ser Asn Tyr Lys Thr Ser
340 345 350
Ala Asn Leu Thr Ala Thr Tyr Arg Lys Leu Glu Glu Met Ala Lys Gln
355 360 365
Val Thr Asn Pro Ser Ser Arg Tyr Tyr Gln Asp Glu Thr Val Val Arg
370 375 380
Thr Val Arg Asp Ser Met Glu Trp Met His Lys His Val Tyr Asn Ser
385 390 395 400
Glu Lys Ser Ile Val Gly Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr Pro
405 410 415
Arg Ala Ile Asn Asn Thr Leu Ser Leu Met Lys Glu Tyr Phe Ser Asp
420 425 430
Glu Glu Ile Lys Lys Tyr Thr Asp Val Ile Glu Lys Phe Val Pro Asp
435 440 445
Pro Glu His Phe Arg Lys Thr Thr Asp Asn Pro Phe Lys Ala Leu Gly
450 455 460
Gly Asn Leu Val Asp Met Gly Arg Val Lys Val Ile Ala Gly Leu Leu
465 470 475 480
Arg Lys Asp Asp Gln Glu Ile Ser Ser Thr Ile Arg Ser Ile Glu Gln
485 490 495
- 187 031986
Val Phe
Tyr Ile
Leu Ile
530
Asn Pro
545
Lys Ser
Arg Gly
Val Glu
Glu Thr
610 Asp Ser 625
Ser Leu
Arg Pro
Tyr Asn
Arg Thr
690
Tyr Thr 705
Tyr Ser
Thr Thr
Leu Pro
Thr Ala
770
Lys Ser
785
Ile Gln
Lys Leu
Ala Ser
Phe Leu
850 Lys Lys 865
Lys Asp
Leu Thr
Met Leu
Glu Leu
930 Tyr Asp 945
Val Ser
Thr Ile
Glu Thr
Lys Leu
500 Asp His 515
Asp Gly
Ile Asp
Phe Ala
Arg Ser
580
Val Leu 595
Lys Gln
Tyr Tyr
Met Gln
Ser Tyr
660
Ala Glu 675
Leu Asn
Ser Asp
Asp Gly
Glu Thr
740
Ser Ala 755
Thr Met
Trp Phe
Asn Thr
Glu Ser
820
Leu Thr 835
Glu Ser
Ser Ser
Ile Asn
Ile Ser
900
Ile Pro
915
Glu Ser
Ala Lys
Thr Ile
Arg Lys
980
Gln Glu
Val Asp
Thr Asn
Leu Ser
Lys Asp
550
Pro Leu
565
Ile Ser
Arg Gly
Cys Leu
Asp Val
630
Ser Leu
645
Leu Ser
Lys Gly
Tyr Glu
Gly Met
710
Tyr Trp
725
Asp Ala
Phe Val
Asp Phe
Met Leu
790
Ser Thr
805
Gly Asn
Glu Gln
Phe Asp
Ile Ser
870
Glu Gly
885
Gln Ala
Asn Val
Ser Leu
Gln Gly
950
Ser Asn
965
Glu Gly
Ser Ala
Gln Gly
Val Ala
520
Gln Leu
535
Lys Met
Leu Val
Arg Ala
Ile His
600
Gln Ser
615
Phe Lys
Leu Ser
Ala Phe
Phe Gly
680
His Met
695
Phe Tyr
Pro Thr
Lys Arg
Gly Thr
760
Thr Asn
775
Lys Asp
Asp Thr
Pro Tyr
Glu Lys
840
Ser Lys
855
Met Ser
Gln Ser
His Lys
Asp Arg
920
Ile Glu
935
Val Trp
Gln Phe
Asp Glu
Pro Asp
Glu Gly 505
Tyr Thr
Leu Pro
Gln Thr
Asn Gly
570
Asn Ser 585
Arg Ile
Leu Val
Asn Leu
Asp Ala
650 Asn Lys 665 Phe Gly
Asn Lys
Leu Tyr
Val Asn
730 Ala Asp 745
Ser Lys
Trp Asn
Lys Ile
Ala Ala
810 Lys Val 825
Asp Tyr
Lys Asn
Lys Ala
Asp Lys
890
Gln Asn 905
Ala Thr
Asn Asn
Gly Ile
Gln Val
970
Tyr Lys
985
Gln Glu
Phe Tyr
Gly Ala
Val Ile
540
Met Tyr 555
Glu Leu
Glu Gly
Ala Asp
Lys Thr
620
Lys Thr 635
Gly Val
Met Asp
Leu Ser
Glu Asn
700 Asn Gly 715
Pro Tyr
Ser Asp
Leu Asp
Gln Thr
780
Ala Phe 795
Thr Thr
Tyr Val
Pro Glu
Ile Gly
860
Leu Gln
875
Glu Val
Arg Asp
Phe Asn
Glu Thr
940
Val Lys
955
Leu Lys
Ile Ala
Val Phe
Gln Asp
510
Tyr Gly
525
Gln Lys
His Trp
Met Asp
His Val
590
Met Ser
605
Ile Val
Tyr Lys
Ala Ser
Lys Thr
670
Leu Phe
685
Lys Arg
Asp Leu
Lys Met
Thr Gly
750
Asp Ala
765
Leu Thr
Leu Gly
Ile Asp
Asn Asp
830
Thr Gln
845
Tyr Phe
Lys Gly
Glu Asn
Ser Tyr
910
Gln Met
925
Leu Gln
Tyr Asp
Arg Gly
Tyr Tyr
990 Lys Lys
Gly Ser
Asn Val
Thr Lys
Ile Asp
560
Met Ser 575
Ala Ala
Glu Gly
Gln Ser
Asp Ile
640
Val Pro 655
Ala Met
Ser Ser
Gly Trp
Ser His
720
Pro Gly
735
Lys Val
Asn Ala
Ala His
Ser Asn
800
Gln Arg
815
Lys Glu
Ser Val
Phe Phe
Ala Trp
880
Glu Phe
895
Gly Tyr
Ile Lys
Ser Val
Asp Ser
960
Val Tyr
975
Asn Pro
Leu Glu
- 188 031986
995 1000 1005
Gln Ala Ala Gln Pro Gln Val Gln Asn Ser Lys Glu Lys Glu Lys Ser
1010 1015 1020
Glu Glu Glu Lys Asn His Ser Asp Gln Lys Asn Leu Pro Gln Thr Gly
1025 1030 1035 1040
Glu Gly Gln Ser Ile Leu Ala Ser Leu Gly Phe Leu Leu Leu Gly Ala
1045 1050 1055
Phe Tyr Leu Phe Arg Arg Gly Lys Asn Asn
1060 1065
<210> 83 <211> 1078 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pneumoniae (штамм ATCC BAA-255/R6) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 83
Met Ile Leu Gln Tyr Val Tyr Trp Ser Val Tyr Met Gln Thr Lys Thr
1 5 10 15
Lys Lys Leu Ile Val Ser Leu Ser Ser Leu Val Leu Ser Gly Phe Leu
20 25 30
Leu Asn His Tyr Met Thr Val Gly Ala Glu Glu Thr Thr Thr Asn Thr
35 40 45
Ile Gln Gln Ser Gln Lys Glu Val Gln Tyr Gln Gln Arg Asp Thr Lys
50 55 60
Asn Leu Val Glu Asn Gly Asp Phe Gly Gln Thr Glu Asp Gly Ser Ser
65 70 75 80
Pro Trp Thr Gly Ser Lys Ala Gln Gly Trp Ser Ala Trp Val Asp Gln
85 90 95
Lys Asn Ser Ser Ala Asp Ala Ser Thr Arg Val Ile Glu Ala Lys Asp
100 105 110
Gly Ala Ile Thr Ile Ser Ser Pro Glu Lys Leu Arg Ala Ala Val His
115 120 125
Arg Met Val Pro Ile Glu Ala Lys Lys Lys Tyr Lys Leu Arg Phe Lys
130 135 140
Ile Lys Thr Asp Asn Lys Val Gly Ile Ala Lys Val Arg Ile Ile Glu
145 150 155 160
Glu Ser Gly Lys Asp Lys Arg Leu Trp Asn Ser Ala Thr Thr Ser Gly
165 170 175
Thr Lys Asp Trp Gln Thr Ile Glu Ala Asp Tyr Ser Pro Thr Leu Asp
180 185 190
Val Asp Lys Ile Lys Leu Glu Leu Phe Tyr Glu Thr Gly Thr Gly Thr
195 200 205
Val Ser Phe Lys Asp Ile Glu Leu Val Glu Val Ala Asp Gln Pro Ser
210 215 220
Glu Asp Ser Gln Thr Asp Lys Gln Leu Glu Glu Lys Ile Asp Leu Pro
225 230 235 240
Ile Gly Lys Lys His Val Phe Ser Leu Ala Asp Tyr Thr Tyr Lys Val
245 250 255
Glu Asn Pro Asp Val Ala Ser Val Lys Asn Gly Ile Leu Glu Pro Leu
260 265 270
Lys Glu Gly Thr Thr Asn Val Ile Val Ser Lys Asp Gly Lys Glu Val
275 280 285
Lys Lys Ile Pro Leu Lys Ile Leu Ala Ser Val Lys Asp Thr Tyr Thr
290 295 300
Asp Arg Leu Asp Asp Trp Asn Gly Ile Ile Ala Gly Asn Gln Tyr Tyr
305 310 315 320
Asp Ser Lys Asn Glu Gln Met Ala Lys Leu Asn Gln Glu Leu Glu Gly
325 330 335
Lys Val Ala Asp Ser Leu Ser Ser Ile Ser Ser Gln Ala Asp Arg Ile
- 189 031986
Tyr Leu
Ala Thr
370
Ser Ser
385
Ser Met
Val Gly
Asn Thr
Lys Tyr
450 Arg Lys 465
Asp Met
Gln Glu
Val Asp
Thr Asn
530
Leu Ser
545
Lys Asp
Pro Leu
Ile Ser
Arg Gly
610
Arg Leu 625
Asp Val
Ser Leu
Leu Ser
Lys Gly
690
Tyr Glu 705
Gly Met
Tyr Trp
Asp Ala
Phe Val
770
Asp Phe
785
Met Leu
Ser Thr
Ser Asn
340 Trp Glu 355
Tyr Arg
Arg Tyr
Glu Trp
Asn Trp
420
Leu Ser 435
Thr Asp
Thr Thr
Gly Arg
Ile Ser
500
Gln Gly
515
Val Ala
Gln Leu
Lys Met
Leu Val
580 Arg Ala 595
Ile His
Gln Ser
Phe Lys
Leu Ser
660
Ala Phe
675
Phe Gly
His Met
Phe Tyr
Pro Thr
740
Lys Arg 755
Gly Thr
Thr Asn
Lys Asp
Asp Thr
820 Pro Tyr 835
Lys Phe
Lys Leu
Tyr Gln
390
Met His
405
Trp Asp
Leu Met
Val Ile
Asp Asn
470
Val Lys
485
Ser Thr
Glu Gly
Tyr Thr
Leu Pro
550
Gln Thr
565
Asn Gly
Asn Ser
Arg Ile
Leu Val
630
Asn Leu
645
Asp Ala
Asn Lys
Phe Gly
Asn Lys
710
Leu Tyr
725
Val Asn
Ala Asp
Ser Lys
Trp Asn
790 Lys Ile 805 Ala Ala
Lys Val
Ser Asn
360
Glu Glu 375
Asp Glu
Lys His
Tyr Glu
Lys Glu
440 Glu Lys 455
Pro Phe
Val Ile
Ile Arg
Phe Tyr
520
Gly Ala 535
Val Ile
Met Tyr
Glu Leu
Glu Gly
600 Ala Asp 615
Lys Thr
Lys Thr
Gly Val
Met Asp
680
Leu Ser 695
Glu Asn
Asn Gly
Pro Tyr
Ser Asp
760
Leu Asp 775
Gln Thr
Ala Phe
Thr Thr
Tyr Val
840
345
Tyr Lys
Met Ala
Thr Val
Val Tyr
410 Ile Gly 425 Tyr Phe
Phe Val
Lys Ala
Ala Gly
490
Ser Ile 505
Gln Asp
Tyr Gly
Gln Lys
His Trp
570 Met Asp 585
His Val
Met Ser
Ile Val
Tyr Lys
650
Ala Ser 665
Lys Thr
Leu Phe
Lys Arg
Asp Leu
730
Lys Met 745
Thr Gly
Asp Ala
Leu Thr
Leu Gly
810 Ile Asp 825
Asn Asp
Thr Ser
Lys Gln
380
Val Arg 395
Asn Ser
Thr Pro
Ser Asp
Pro Asp
460
Leu Gly 475
Leu Leu
Glu Gln
Gly Ser
Asn Val
540
Thr Lys
555
Ile Asp
Met Ser
Ala Ala
Glu Gly
620
Gln Ser 635
Asp Ile
Val Pro
Ala Met
Ser Ser
700
Gly Trp
715
Ser His
Pro Gly
Lys Val
Asn Ala
780
Ala His
795
Ser Asn
Gln Arg
Lys Glu
350
Ala Asn 365
Val Thr
Thr Val
Glu Lys
Arg Ala
430
Glu Glu 445
Pro Glu
Gly Asn
Arg Lys
Val Phe
510
Tyr Ile
525
Leu Ile
Asn Pro
Lys Ser
Arg Gly
590
Val Glu
605
Glu Thr
Asp Ser
Ser Leu
Arg Thr
670
Tyr Asn
685
Arg Thr
Tyr Thr
Tyr Ser
Thr Thr
750
Leu Pro
765
Thr Ala
Lys Ser
Ile Gln
Lys Leu
830
Ala Ser
845
Leu Thr
Asn Pro
Arg Asp
400
Ser Ile
415
Ile Asn
Ile Lys
His Phe
Leu Val
480 Asp Asp 495
Lys Leu
Asp His
Asp Gly
Ile Asp
560
Phe Ala
575
Arg Ser
Val Leu
Lys Gln
Tyr Tyr
640
Met Gln
655
Ser Tyr
Ala Glu
Leu Asn
Ser Asp
720
Asp Gly
735
Glu Thr
Ser Ala
Thr Met
Trp Phe
800
Asn Thr 815
Glu Ser
Leu Thr
- 190 031986
Thr Gln Ser Val Phe Leu Glu Ser
860
Tyr Phe Phe Phe Lys Lys Ser Ser
875880
Lys Gly Ala Trp Lys Asp Ile Asn
890895
Glu Asn Glu Phe Leu Thr Ile Ser
905910
Ser Tyr Gly Tyr Met Leu Ile Pro
925
Gln Met Ile Lys Glu Leu Glu Ser
940
Leu Gln Ser Val Tyr Asp Ala Lys
955960
Tyr Asp Asp Ser Val Ser Thr Ile
970975
Arg Gly Val Tyr Thr Ile Arg Lys
985990
Tyr Tyr Asn Pro Glu Thr Gln Glu
1005
Lys Lys Leu Glu Gln Ala Ala Gln 1020
Lys Glu Lys Ser Glu Glu Glu Lys
10351040
Pro Gln Thr Gly Glu Gly Gln Ser
10501055
Leu Leu Gly Ala Phe Tyr Leu Phe
10651070
Glu Gln Glu Lys Asp Tyr Pro Glu
850 855
Ser Asp Ser Lys Lys Asn Ile Gly
865 870
Ile Ser Met Ser Lys Ala Leu Gln 885
Glu Gly Gln Ser Asp Lys Glu Val 900
Gln Ala His Lys Gln Asn Gly Asp 915920
Asn Val Asp Arg Ala Thr Phe Asn 930935
Ser Leu Ile Glu Asn Asn Glu Thr
945950
Gln Gly Val Trp Gly Ile Val Lys 965
Ser Asn Gln Phe Gln Val Leu Lys 980
Glu Gly Asp Glu Tyr Lys Ile Ala 9951000
Ser Ala Pro Asp Gln Glu Val Phe 10101015
Pro Gln Val Gln Asn Ser Lys Glu 10251030
Asn His Ser Asp Gln Lys Asn Leu 1045
Ile Leu Ala Ser Leu Gly Phe Leu 1060
Arg Arg Gly Lys Asn Asn
1075
1075 <210> 84 <211> 1067 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pneumoniae серотип 2 (штамм D39/N) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 84
Met Gln Thr Lys Thr Lys Lys Leu Ile Val Ser Leu Ser Ser Leu Val
1 5 10 15
Leu Ser Gly Phe Leu Leu Asn His Tyr Met Thr Val Gly Ala Glu Glu
20 25 30
Thr Thr Thr Asn Thr Ile Gln Gln Ser Gln Lys Glu Val Gln Tyr Gln
35 40 45
Gln Arg Asp Thr Lys Asn Leu Val Glu Asn Gly Asp Phe Gly Gln Thr
50 55 60
Glu Asp Gly Ser Ser Pro Trp Thr Gly Ser Lys Ala Gln Gly Trp Ser
65 70 75 80
Ala Trp Val Asp Gln Lys Asn Ser Ser Ala Asp Ala Ser Thr Arg Val
85 90 95
Ile Glu Ala Lys Asp Gly Ala Ile Thr Ile Ser Ser Pro Glu Lys Leu
100 105 110
Arg Ala Ala Val His Arg Met Val Pro Ile Glu Ala Lys Lys Lys Tyr
115 120 125
Lys Leu Arg Phe Lys Ile Lys Thr Asp Asn Lys Val Gly Ile Ala Lys
130 135 140
Val Arg Ile Ile Glu Glu Ser Gly Lys Asp Lys Arg Leu Trp Asn Ser
145 150 155 160
Ala Thr Thr Ser Gly Thr Lys Asp Trp Gln Thr Ile Glu Ala Asp Tyr
165 170 175
- 191 031986
Ser Pro Thr Leu 180 Asp Val Asp Lys Ile 185 Lys Leu Glu Leu Phe 190 Tyr Glu
Thr Gly Thr Gly Thr Val Ser Phe Lys Asp Ile Glu Leu Val Glu Val
195 200 205
Ala Asp Gln Pro Ser Glu Asp Ser Gln Thr Asp Lys Gln Leu Glu Glu
210 215 220
Lys Ile Asp Leu Pro Ile Gly Lys Lys His Val Phe Ser Leu Ala Asp
225 230 235 240
Tyr Thr Tyr Lys Val Glu Asn Pro Asp Val Ala Ser Val Lys Asn Gly
245 250 255
Ile Leu Glu Pro Leu Lys Glu Gly Thr Thr Asn Val Ile Val Ser Lys
260 265 270
Asp Gly Lys Glu Val Lys Lys Ile Pro Leu Lys Ile Leu Ala Ser Val
275 280 285
Lys Asp Thr Tyr Thr Asp Arg Leu Asp Asp Trp Asn Gly Ile Ile Ala
290 295 300
Gly Asn Gln Tyr Tyr Asp Ser Lys Asn Glu Gln Met Ala Lys Leu Asn
305 310 315 320
Gln Glu Leu Glu Gly Lys Val Ala Asp Ser Leu Ser Ser Ile Ser Ser
325 330 335
Gln Ala Asp Arg Ile Tyr Leu Trp Glu Lys Phe Ser Asn Tyr Lys Thr
340 345 350
Ser Ala Asn Leu Thr Ala Thr Tyr Arg Lys Leu Glu Glu Met Ala Lys
355 360 365
Gln Val Thr Asn Pro Ser Ser Arg Tyr Tyr Gln Asp Glu Thr Val Val
370 375 380
Arg Thr Val Arg Asp Ser Met Glu Trp Met His Lys His Val Tyr Asn
385 390 395 400
Ser Glu Lys Ser Ile Val Gly Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr
405 410 415
Pro Arg Ala Ile Asn Asn Thr Leu Ser Leu Met Lys Glu Tyr Phe Ser
420 425 430
Asp Glu Glu Ile Lys Lys Tyr Thr Asp Val Ile Glu Lys Phe Val Pro
435 440 445
Asp Pro Glu His Phe Arg Lys Thr Thr Asp Asn Pro Phe Lys Ala Leu
450 455 460
Gly Gly Asn Leu Val Asp Met Gly Arg Val Lys Val Ile Ala Gly Leu
465 470 475 480
Leu Arg Lys Asp Asp Gln Glu Ile Ser Ser Thr Ile Arg Ser Ile Glu
485 490 495
Gln Val Phe Lys Leu Val Asp Gln Gly Glu Gly Phe Tyr Gln Asp Gly
500 505 510
Ser Tyr Ile Asp His Thr Asn Val Ala Tyr Thr Gly Ala Tyr Gly Asn
515 520 525
Val Leu Ile Asp Gly Leu Ser Gln Leu Leu Pro Val Ile Gln Lys Thr
530 535 540
Lys Asn Pro Ile Asp Lys Asp Lys Met Gln Thr Met Tyr His Trp Ile
545 550 555 560
Asp Lys Ser Phe Ala Pro Leu Leu Val Asn Gly Glu Leu Met Asp Met
565 570 575
Ser Arg Gly Arg Ser Ile Ser Arg Ala Asn Ser Glu Gly His Val Ala
580 585 590
Ala Val Glu Val Leu Arg Gly Ile His Arg Ile Ala Asp Met Ser Glu
595 600 605
Gly Glu Thr Lys Gln Arg Leu Gln Ser Leu Val Lys Thr Ile Val Gln
610 615 620
Ser Asp Ser Tyr Tyr Asp Val Phe Lys Asn Leu Lys Thr Tyr Lys Asp
625 630 635 640
Ile Ser Leu Met Gln Ser Leu Leu Ser Asp Ala Gly Val Ala Ser Val
645 650 655
Pro Arg Thr Ser Tyr Leu Ser Ala Phe Asn Lys Met Asp Lys Thr Ala
660 665 670
Met Tyr Asn Ala Glu Lys Gly Phe Gly Phe Gly Leu Ser Leu Phe Ser
- 192 031986
675 680 685
Ser Arg Thr Leu Asn Tyr Glu 695 His Met Asn Lys Glu 700 Asn Lys Arg Gly
690
Trp Tyr Thr Ser Asp Gly Met Phe Tyr Leu Tyr Asn Gly Asp Leu Ser
705 710 715 720
His Tyr Ser Asp Gly Tyr Trp Pro Thr Val Asn Pro Tyr Lys Met Pro
725 730 735
Gly Thr Thr Glu Thr Asp Ala Lys Arg Ala Asp Ser Asp Thr Gly Lys
740 745 750
Val Leu Pro Ser Ala Phe Val Gly Thr Ser Lys Leu Asp Asp Ala Asn
755 760 765
Ala Thr Ala Thr Met Asp Phe Thr Asn Trp Asn Gln Thr Leu Thr Ala
770 775 780
His Lys Ser Trp Phe Met Leu Lys Asp Lys Ile Ala Phe Leu Gly Ser
785 790 795 800
Asn Ile Gln Asn Thr Ser Thr Asp Thr Ala Ala Thr Thr Ile Asp Gln
805 810 815
Arg Lys Leu Glu Ser Ser Asn Pro Tyr Lys Val Tyr Val Asn Asp Lys
820 825 830
Glu Ala Ser Leu Thr Glu Gln Glu Lys Asp Tyr Pro Glu Thr Gln Ser
835 840 845
Val Phe Leu Glu Ser Ser Asp Ser Lys Lys Asn Ile Gly Tyr Phe Phe
850 855 860
Phe Lys Lys Ser Ser Ile Ser Met Ser Lys Ala Leu Gln Lys Gly Ala
865 870 875 880
Trp Lys Asp Ile Asn Glu Gly Gln Ser Asp Lys Glu Val Glu Asn Glu
885 890 895
Phe Leu Thr Ile Ser Gln Ala His Lys Gln Asn Gly Asp Ser Tyr Gly
900 905 910
Tyr Met Leu Ile Pro Asn Val Asp Arg Ala Thr Phe Asn Gln Met Ile
915 920 925
Lys Glu Leu Glu Ser Ser Leu Ile Glu Asn Asn Glu Thr Leu Gln Ser
930 935 940
Val Tyr Asp Ala Lys Gln Gly Val Trp Gly Ile Val Lys Tyr Asp Asp
945 950 955 960
Ser Val Ser Thr Ile Ser Asn Gln Phe Gln Val Leu Lys Arg Gly Val
965 970 975
Tyr Thr Ile Arg Lys Glu Gly Asp Glu Tyr Lys Ile Ala Tyr Tyr Asn
980 985 990
Pro Glu Thr Gln Glu Ser Ala Pro Asp Gln Glu Val Phe Lys Lys Leu
995 1000 1005
Glu Gln Ala Ala Gln Pro Gln Val Gln Asn Ser Lys Glu Lys Glu Lys
1010 1015 1020
Ser Glu Glu Glu Lys Asn His Ser Asp Gln Lys Asn Leu Pro Gln Thr
1025 1030 1035 1040
Gly Glu Gly Gln Ser Ile Leu Ala Ser Leu Gly Phe Leu Leu Leu Gly
1045 1050 1055
Ala Phe Tyr Leu Phe Arg Arg Gly Lys Asn Asn
1060 1065 <210> 85 <211> 805 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pyogenes серотип M1 <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 85
Met Asn Thr Tyr Phe Cys Thr His His Lys Gln Leu Leu Leu Tyr Ser
5 10 15
Asn Leu Phe Leu Ser Phe Ala Met Met Gly Gln Gly Thr Ala Ile Tyr
- 193 031986
Ala Asp
Thr Gln
Gln Gln
Ile Ala
Phe His
Gln Gly
Asp Tyr
130
Lys Ile
145
Ser Lys
His Ala
Asn Lys
Asn Asn
210 Leu Lys 225
Phe Arg
Asn Leu
Lys Asp
Phe Thr
290
Ile Asp
305
Ile Ala
Gln Leu
Lys Met
Ile Val
370 Arg Phe 385
Ile Leu
Lys Thr
Val Tyr
Leu Leu
450
Ala Ser 465
Asp Phe
Glu Ala
Met Phe
Thr Leu
Thr Leu
Lys Asp
Gly Asn
Asn Lys
100
Pro Asp
115
Ser Ala
Ala Lys
Ala Ile
Tyr Asn
180
Glu Asn
195
Thr Leu
Tyr Thr
Val Arg
Ile Asp
260
Asp Leu
275
Leu Val
His Val
Tyr Thr
Ile Pro
340
Ala Thr
355
Arg Gly
Asn Ala
Arg Ile
Arg Ile
420
Asp Asn
435
Ser Asp
Phe Asn
Ala Phe
Met Asn
500
Tyr Leu
515
Thr Ser
Thr Thr
Tyr Tyr
Asp Ala
Ala Glu
His Glu
Ser Ala
Gln Ile
150
Ala Ile
165
Leu Asp
Trp Trp
Ser Leu
Ala Pro
230
Ala Ala 245
Met Gly
Glu Ile
Asp Glu
Val Thr
310 Gly Ala 325
Ile Ile
Ile Tyr
Glu Met
Gln Ser
390 Ala Asp 405
Lys Thr
Leu Lys
Thr Ser
Ser Met
470
Gly Leu 485
Asn Glu
Tyr Asn
Asn Ser
Thr Asp
Thr Glu
Tyr Asp
Lys Asp
Asn Arg
120
Asn Ile 135
Thr Asn
Val Lys
Arg Glu
Val Tyr
200
Met Tyr 215
Ile Glu
Asn Phe
Arg Val
Ser Asp
280
Gly Asn 295
Asn Ala
Tyr Gly
Gln Lys
His Trp
360 Met Asp 375
His Val
Met Ser
Leu Val
Thr Tyr
440
Val Pro
455
Asp Lys
Ser Met
Asn Leu
Asn Asp
520
Glu Pro
Ser Glu
Leu Leu
Lys Thr
Ala Gln
105
Thr Tyr
Thr Lys
Pro Glu
Asp Gly
170
Asn His
185
Glu Ile
Pro Tyr
Lys Phe
Ser Pro
250
Lys Leu
265
Thr Ile
Gly Phe
Gln Ser
Asn Val
330
Thr Lys
345
Ile Asn
Met Thr
Ala Gly
Glu Glu
410
Thr Gln
425
His Asp
Val Gln
Leu Ala
Phe Ser
490
His Gly
505
Leu Gly
Asn Asn
Lys Lys
Asp Gln
Asn Pro
Asn Ile
Leu Trp
Thr Tyr
140 Ser Cys 155 Met Ala
Gln Thr
Gly Thr
Phe Thr
220
Val Pro
235
Phe Glu
Ile Ser
Lys Ala
Tyr Gln
300
Pro Leu
315
Leu Ile
Ser Pro
His Ser
Arg Gly
380
Ile Glu
395
Pro His
Gly Asn
Ile Lys
Lys Leu
460 Leu Tyr 475 Asn Arg
Trp Phe
His Tyr
Thr Tyr 45 Val Val
Trp Asn
Asp Met
Ile Lys
110
Glu His
125
Arg Asn
Tyr Tyr
Phe Met
Thr Gly
190
Pro Arg
205
Gln Glu
Asp Pro
Ala Asn
Gly Ile
270
Ile Glu
285
Asp Gly
Tyr Lys
Asp Gly
Ile Lys
350
Phe Phe
365
Arg Ser
Ala Leu
Arg Leu
Ala Phe
430
Leu Met
445
Asp Ser
Asn Asn
Thr Gln
Thr Ser
510
Ser Glu
525
Phe Gln
Gln Pro
Ser Ile
Val Thr
Ser Tyr
Ala Lys
Ile Glu
Gln Asp
160
Tyr Glu 175
Lys Glu
Ala Ile
Glu Ile
Thr Arg
240
Ser Gly
255
Leu Arg
Lys Val
Ser Leu
Lys Gly
320
Leu Ser 335
Ala Asp
Pro Ile
Ile Ser
Arg Ala
400
Ala Leu
415
Tyr Asn
Lys Glu
Tyr Val
Lys His
480 Asn Tyr 495
Asp Gly
Asn Tyr
- 194 031986
Trp Ala Thr Val Asn Pro Tyr Arg 535 Leu Pro Gly Thr 540 Thr Glu Thr Glu
530
Gln Lys Pro Leu Glu Gly Thr Pro Glu Asn Ile Lys Thr Asn Tyr Gln
545 550 555 560
Gln Val Gly Met Thr Gly Leu Ser Asp Asp Ala Phe Val Ala Ser Lys
565 570 575
Lys Leu Asn Asn Thr Ser Ala Leu Ala Ala Met Thr Phe Thr Asn Trp
580 585 590
Asn Lys Ser Leu Thr Leu Asn Lys Gly Trp Phe Ile Leu Gly Asn Lys
595 600 605
Ile Ile Phe Val Gly Ser Asn Ile Lys Asn Gln Ser Ser His Lys Ala
610 615 620
Tyr Thr Thr Ile Glu Gln Arg Lys Glu Asn Gln Lys Tyr Pro Tyr Cys
625 630 635 640
Ser Tyr Val Asn Asn Gln Pro Val Asp Leu Asn Asn Gln Leu Val Asp
645 650 655
Phe Thr Asn Thr Lys Ser Ile Phe Leu Glu Ser Asp Asp Pro Ala Gln
660 665 670
Asn Ile Gly Tyr Tyr Phe Phe Lys Pro Thr Thr Leu Ser Ile Ser Lys
675 680 685
Ala Leu Gln Thr Gly Lys Trp Gln Asn Ile Lys Ala Asp Asp Lys Ser
690 695 700
Pro Glu Ala Ile Lys Glu Val Ser Asn Thr Phe Ile Thr Ile Met Gln
705 710 715 720
Asn His Thr Gln Asp Gly Asp Arg Tyr Ala Tyr Met Met Leu Pro Asn
725 730 735
Met Thr Arg Gln Glu Phe Glu Thr Tyr Ile Ser Lys Leu Asp Ile Asp
740 745 750
Leu Leu Glu Asn Asn Asp Lys Leu Ala Ala Val Tyr Asp His Asp Ser
755 760 765
Gln Gln Met His Val Ile His Tyr Gly Lys Lys Ala Thr Met Phe Ser
770 775 780
Asn His Asn Leu Ser His Gln Gly Phe Tyr Ser Phe Pro His Pro Val
785 790 795 800
Arg Gln Asn Gln Gln
805
<210> 86 <211> 780 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pyogenes серотип M2 (штамм MGAS10) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 86
Met 1 Val Tyr Phe Tyr 5 Leu Val Asn Gln Ser 10 Thr Phe Ile Ile Ser 15 Phe
Leu Tyr Trp Arg Asn Val Ser Val Asn Thr Tyr Phe Cys Thr His His
20 25 30
Lys Gln Leu Leu Leu Tyr Ser Asn Leu Phe Leu Ser Phe Ala Met Ile
35 40 45
Gly Gln Gly Thr Ala Ile Tyr Ala Asp Thr Leu Thr Ser Asn Ser Glu
50 55 60
Pro Asn Asn Thr Tyr Phe Gln Thr Gln Thr Leu Thr Thr Thr Asp Ser
65 70 75 80
Glu Lys Lys Val Val Gln Pro Gln Gln Lys Asp Tyr Tyr Thr Glu Leu
85 90 95
Leu Asp Gln Trp Asn Ser Ile Ile Ala Gly Asn Asp Ala Tyr Asp Lys
100 105 110
Thr Asn Pro Asp Met Val Thr Phe His Asn Lys Ala Glu Lys Asp Ala
115 120 125
- 195 031986
Gln Asn 130 Ile Ile Lys Ser Tyr Gln 135 Gly Pro Asp His 140 Glu Asn Arg Thr
Tyr Leu Trp Glu His Ala Lys Asp Tyr Ser Ala Ser Thr Asn Ile Thr
145 150 155 160
Lys Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ala Lys Gln Ile Thr Asn Pro
165 170 175
Glu Ser Cys Tyr Tyr Gln Asp Ser Lys Ala Ile Ala Ile Val Lys Asp
180 185 190
Gly Met Ala Phe Met Tyr Glu His Ala Tyr Asn Leu Asn Arg Glu Asn
195 200 205
His Gln Thr Thr Gly Lys Glu Asn Lys Glu Asn Trp Trp Val Tyr Glu
210 215 220
Ile Gly Thr Pro Arg Ala Ile Asn Asn Thr Leu Ser Leu Met Tyr Pro
225 230 235 240
Tyr Phe Thr Gln Glu Glu Ile Leu Lys Tyr Thr Ala Pro Ile Glu Lys
245 250 255
Phe Val Pro Asp Pro Thr Arg Phe Arg Val Arg Ala Ala Asn Phe Ser
260 265 270
Pro Phe Glu Ala Asn Ser Gly Asn Leu Ile Asp Met Gly Arg Val Lys
275 280 285
Leu Ile Ser Gly Ile Leu Arg Lys Asp Asp Leu Glu Ile Ser Asp Thr
290 295 300
Ile Lys Ala Ile Glu Lys Val Phe Thr Leu Val Asp Glu Gly Asn Gly
305 310 315 320
Phe Tyr Gln Asp Gly Ser Leu Ile Asp His Val Val Thr Asn Thr Gln
325 330 335
Ser Pro Leu Tyr Lys Lys Gly Ile Ala Tyr Thr Gly Ala Tyr Gly Asn
340 345 350
Val Leu Ile Asp Gly Leu Ser Gln Leu Ile Pro Ile Ile Gln Lys Thr
355 360 365
Lys Ser Pro Ile Glu Ala Asp Lys Met Ala Thr Ile Tyr His Trp Ile
370 375 380
Asn His Ser Phe Phe Pro Ile Ile Val Arg Gly Glu Met Met Asp Met
385 390 395 400
Thr Arg Gly Arg Ser Ile Ser Arg Phe Asn Ala Gln Ser His Val Ala
405 410 415
Gly Ile Glu Ala Leu Arg Ala Ile Leu Arg Ile Ala Asp Met Ser Glu
420 425 430
Glu Pro His Arg Leu Glu Leu Lys Thr Arg Ile Lys Thr Leu Val Thr
435 440 445
Gln Gly Asn Ala Phe Tyr Asn Val Tyr Asp Asn Leu Lys Thr Tyr His
450 455 460
Asp Ile Lys Leu Met Lys Glu Leu Leu Ser Asp Thr Ser Val Pro Val
465 470 475 480
Gln Lys Leu Asp Ser Tyr Val Ala Ser Phe Asn Ser Met Asp Lys Leu
485 490 495
Ala Leu Tyr Asn Asn Lys His Asp Phe Ala Phe Gly Leu Ser Met Phe
500 505 510
Ser Asn Arg Thr Gln Asn Tyr Glu Ala Met Asn Asn Glu Asn Leu His
515 520 525
Gly Trp Phe Thr Ser Asp Gly Met Phe Tyr Leu Tyr Asn Asn Asp Leu
530 535 540
Gly His Tyr Ser Glu Asn Tyr Trp Ala Thr Val Asn Pro Tyr Arg Leu
545 550 555 560
Pro Gly Thr Thr Glu Thr Glu Gln Lys Pro Leu Glu Gly Thr Pro Glu
565 570 575
Asn Ile Lys Thr Asn Tyr Gln Gln Val Gly Met Thr Ser Leu Ser Asp
580 585 590
Asp Ala Phe Val Ala Ser Lys Lys Leu Asn Asn Thr Ser Ala Leu Ala
595 600 605
Ala Met Thr Phe Thr Asn Trp Asn Lys Ser Leu Thr Leu Asn Lys Gly
610 615 620
Trp Phe Ile Leu Gly Asn Lys Ile Ile Phe Val Gly Ser Asn Ile Lys
- 196 031986
625 630 635 640
Asn Gln Ser Ser His Lys Ala Tyr Thr Thr Ile Glu Gln Arg Lys Glu
645 650 655
Asn Gln Lys His Pro Tyr Cys Ser Tyr Val Asn Asn Gln Pro Val Asp
660 665 670
Leu Asn Asn Gln Leu Val Asp Phe Thr Asn Thr Lys Ser Ile Phe Leu
675 680 685
Glu Ser Asp Asp Pro Ala Gln Asn Ile Gly Tyr Tyr Phe Phe Lys Pro
690 695 700
Arg Thr Leu Ser Ile Ser Lys Ala Leu Gln Thr Gly Lys Trp Gln Asn
705 710 715 720
Ile Lys Ala Asp Asp Lys Ser Pro Glu Ala Ile Lys Glu Val Ser Asn
725 730 735
Thr Phe Ile Thr Ile Met Gln Asn His Thr Gln Glu Gly Asp Arg Tyr
740 745 750
Ala Tyr Met Met Leu Pro Asn Met Thr Arg Gln Glu Phe Glu Thr Tyr
755 760 765
Ile Ser Lys Leu Asp Ile Asp Leu Leu Glu Asn Asn
770 775 780
<210> 87 <211> 868 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pyogenes серотип M4 (штамм MGAS10) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 87
Met Asn Thr Tyr Phe Cys Thr His His Lys Gln Leu Leu Leu Tyr Ser
1 5 10 15
Asn Leu Phe Leu Ser Phe Ala Met Met Gly Gln Gly Thr Ala Ile Tyr
20 25 30
Ala Asp Thr Leu Thr Ser Asn Ser Lys Pro Asn Asn Thr Tyr Phe Gln
35 40 45
Thr Gln Thr Leu Thr Thr Thr Asp Ser Glu Lys Lys Val Val Gln Pro
50 55 60
Gln Gln Lys Asp Tyr Tyr Thr Glu Leu Leu Asp Gln Trp Asn Ser Ile
65 70 75 80
Ile Ala Gly Asn Asp Ala Tyr Asp Lys Thr Asn Pro Asp Met Val Thr
85 90 95
Phe His Asn Lys Ala Glu Lys Asp Ala Gln Asn Ile Ile Lys Ser Tyr
100 105 110
Gln Glu Pro Asp His Glu Asn Arg Thr Tyr Leu Trp Glu His Ala Lys
115 120 125
Asp Tyr Ser Ala Ser Ala Asn Ile Thr Lys Thr Tyr Arg Asn Ile Glu
130 135 140
Lys Ile Ala Lys Gln Ile Thr Asn Pro Glu Ser Cys Tyr Tyr Gln Asp
145 150 155 160
Ser Lys Ala Ile Ala Ile Val Lys Asp Gly Met Ala Phe Met Tyr Glu
165 170 175
His Ala Tyr Asn Leu Asp Arg Glu Asn His Gln Thr Thr Gly Lys Glu
180 185 190
Asn Lys Glu Asn Trp Trp Asp Tyr Glu Ile Gly Thr Pro Arg Ala Ile
195 200 205
Asn Asn Thr Leu Ser Leu Met Tyr Pro Tyr Phe Thr Gln Glu Glu Ile
210 215 220
Leu Lys Tyr Thr Ala Pro Ile Glu Lys Phe Val Pro Asp Pro Thr Arg
225 230 235 240
Phe Arg Val Arg Ala Ala Asn Phe Pro Pro Phe Glu Ala Asn Ser Gly
245 250 255
Asn Leu Ile Asp Met Gly Arg Val Lys Leu Ile Ser Gly Ile Leu Arg
- 197 031986
Lys Asp
Phe Thr
290
Ile Asp
305
Ile Ala
Gln Leu
Lys Met
Ile Val
370 Arg Phe 385
Ile Leu
Lys Thr
Val Tyr
Leu Leu
450
Ala Ser 465
Asp Phe
Glu Ala
Met Phe
Trp Ala
530
Gln Lys
545
Gln Val
Lys Leu
Asn Lys
Ile Ile
610
Tyr Thr
625
Ser Tyr
Phe Thr
Asn Ile
Ala Leu
690
Pro Glu 705
Asn His
Met Thr
Leu Leu
260 Asp Leu 275
Leu Val
His Val
Tyr Thr
Ile Pro
340
Ala Thr
355
Arg Gly
Asn Ala
Arg Ile
Arg Ile
420 Asp Asn 435
Ser Asp
Phe Asn
Ala Phe
Met Asn
500
Tyr Leu
515
Thr Val
Pro Leu
Gly Met
Asn Asn
580
Ser Leu 595
Phe Val
Thr Ile
Val Asn
Asn Thr
660
Gly Tyr 675
Gln Thr
Ala Ile
Thr Gln
Arg Gln
740
Glu Asn
755
Glu Ile
Asp Glu
Val Thr
310 Gly Ala 325
Ile Ile
Ile Tyr
Glu Met
Gln Ser
390 Ala Asp 405
Lys Thr
Leu Lys
Thr Ser
Ser Met
470
Gly Leu 485
Asn Glu
Tyr Asn
Asn Pro
Glu Gly
550
Thr Ser 565
Thr Ser
Thr Leu
Gly Ser
Glu Gln
630
Asn Gln 645
Lys Ser
Tyr Phe
Gly Lys
Lys Glu
710
Asp Gly
725
Glu Phe
Asn Asp
Ser Asp
280
Gly Asn 295
Asn Ala
Tyr Gly
Gln Lys
His Trp
360 Met Asp 375
His Val
Met Ser
Leu Val
Thr Tyr
440
Val Pro
455
Asp Lys
Ser Met
Asn Leu
Asn Asp
520
Tyr Arg 535
Thr Pro
Leu Ser
Ala Leu
Asn Lys
600
Asn Ile
615
Arg Lys
Pro Val
Ile Phe
Phe Lys
680
Trp Gln
695
Val Ser
Asp Arg
Glu Thr
Lys Leu
760
265
Thr Ile
Gly Phe
Gln Ser
Asn Val
330 Thr Lys 345
Ile Asn
Met Thr
Ala Gly
Glu Glu
410
Thr Gln 425
His Asp
Val Gln
Leu Ala
Phe Ser
490
His Gly 505
Leu Gly
Leu Pro
Glu Asn
Asp Asp
570
Ala Ala 585
Gly Trp
Lys Asn
Glu Asn
Asp Leu
650
Leu Glu 665
Pro Thr
Asn Ile
Asn Thr
Tyr Ala
730 Tyr Ile 745
Ala Ala
Lys Ala
Tyr Gln
300
Pro Leu
315
Leu Ile
Ser Pro
His Ser
Arg Gly
380
Ile Glu
395
Pro His
Gly Asn
Ile Lys
Lys Leu
460 Leu Tyr 475
Asn Arg
Trp Phe
His Tyr
Gly Thr
540 Ile Lys 555
Ala Phe
Met Thr
Phe Ile
Gln Ser
620
Gln Lys
635
Asn Asn
Ser Asp
Thr Leu
Lys Ala
700
Phe Ile
715
Tyr Met
Ser Lys
Val Tyr
270
Ile Glu 285
Asp Gly
Tyr Lys
Asp Gly
Ile Glu
350
Phe Phe
365
Arg Ser
Ala Leu
Arg Leu
Val Phe
430
Leu Met
445
Asp Ser
Asn Asn
Thr Gln
Thr Ser
510
Ser Glu
525
Thr Glu
Thr Asn
Val Ala
Phe Thr
590
Leu Gly
605
Ser His
His Pro
Gln Leu
Asp Pro
670
Ser Ile
685
Asp Asp
Thr Ile
Met Leu
Leu Asp
750 Asp His 765
Lys Val
Ser Leu
Lys Gly
320
Leu Ser
335
Ala Asp
Pro Ile
Ile Ser
Arg Ala
400
Ala Leu
415
Tyr Asn
Lys Glu
Tyr Val
Lys His
480
Asn Tyr
495
Asp Gly
Asn Tyr
Thr Glu
Tyr Gln
560 Ser Lys 575
Asn Trp
Asn Lys
Lys Ala
Tyr Cys
640
Val Asp
655
Ala Gln
Ser Lys
Lys Ser
Met Gln
720
Pro Asn
735
Ile Asp
Asp Ser
- 198 031986
Gln Gln 770 Met His Val Ile His 775 Tyr Glu Lys Lys Ala 780 Thr Thr Phe Ser
Asn His Asn Leu Ser His Gln Gly Phe Tyr Ser Phe Pro His Pro Val
785 790 795 800
Lys Gln Asn Gln Gln Gln Lys Leu Ala His Gln Gly Ile Ala Ala Lys
805 810 815
Asn Asn Ala Leu Asn Ser His Lys Ile Pro His Lys Arg Gln Arg Arg
820 825 830
Leu Pro Arg Thr Gly Tyr Gln Ser Ser Ser Leu Glu Phe Leu Gly Gly
835 840 845
Ala Leu Val Ala Ser Phe Asn His Ile Thr Lys Pro Phe Arg Lys Lys
850 855 860
Asp Leu Arg Ile
865
<210> 88 <211> 828 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pyogenes серотип M6 <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 88
Met 1 Val Tyr Phe Tyr 5 Leu Val Asp Gln Phe 10 Thr Phe Ile Ile Ser 15 Phe
Leu Tyr Trp Arg Asn Leu Ser Val Asn Thr Tyr Phe Cys Thr His His
20 25 30
Lys Gln Leu Leu Leu Tyr Ser Asn Leu Phe Leu Ser Phe Ala Met Met
35 40 45
Gly Gln Gly Thr Ala Ile Tyr Ala Asp Thr Leu Thr Ser Asn Ser Glu
50 55 60
Pro Asn Asn Thr Tyr Phe Gln Thr Gln Thr Leu Thr Thr Thr Asp Ser
65 70 75 80
Glu Lys Lys Val Val Gln Pro Gln Gln Lys Asp Tyr Tyr Thr Glu Leu
85 90 95
Leu Asp Gln Trp Asn Ser Ile Ile Ala Gly Asn Asp Ala Tyr Asp Lys
100 105 110
Thr Asn Pro Asp Met Val Thr Phe His Asn Lys Ala Glu Lys Asp Ala
115 120 125
Gln Asn Ile Ile Lys Ser Tyr Gln Gly Pro Asp His Glu Asn Arg Thr
130 135 140
Tyr Leu Trp Glu His Ala Lys Asp Tyr Ser Ala Ser Thr Asn Ile Thr
145 150 155 160
Lys Thr Tyr Arg Asn Ile Glu Lys Ile Ala Lys Gln Ile Thr Asn Pro
165 170 175
Glu Ser Cys Tyr Tyr Gln Asp Ser Lys Ala Ile Ala Ile Val Lys Asp
180 185 190
Gly Met Ala Phe Met Tyr Glu His Ala Tyr Asn Leu Asp Arg Glu Asn
195 200 205
His Gln Thr Thr Gly Lys Glu Asn Lys Glu Asn Trp Trp Val Tyr Glu
210 215 220
Ile Gly Thr Pro Arg Ala Ile Asn Asn Thr Leu Ser Leu Met Tyr Pro
225 230 235 240
Tyr Phe Thr Gln Glu Glu Ile Leu Lys Tyr Thr Ala Pro Ile Glu Lys
245 250 255
Phe Val Pro Asp Pro Thr Arg Phe Arg Val Arg Ala Ala Asn Phe Ser
260 265 270
Pro Phe Glu Ala Asn Ser Gly Asn Leu Ile Asp Met Gly Arg Val Lys
275 280 285
Leu Ile Ser Gly Ile Leu Arg Lys Asp Asp Leu Glu Ile Ser Asp Thr
290 295 300
- 199 031986
Ile Lys
305
Phe Tyr
Ser Pro
Val Leu
Lys Ser
370
Asn His 385
Thr Arg
Gly Ile
Glu Pro
Gln Gly
450
Asp Ile 465
Gln Lys
Ala Leu
Ser Asn
Gly Trp
530 Gly His 545
Pro Gly
Asn Ile
Asp Ala
Ala Met
610
Trp Phe
625
Asn Gln
Asn Gln
Leu Asn
Glu Ser
690
Thr Thr 705
Ile Lys
Thr Phe
Ala Tyr
Ile Ser
770
Ala Val
785
Lys Lys
Ala Ile
Gln Asp
Leu Tyr
340
Ile Asp
355
Pro Ile
Ser Phe
Gly Arg
Glu Ala
420
His Arg
435
Asn Ala
Lys Leu
Leu Asp
Tyr Asn
500
Arg Thr
515
Phe Thr
Tyr Ser
Thr Thr
Lys Thr
580
Phe Val
595
Thr Phe
Ile Leu
Ser Ser
Lys His
660
Asn Gln
675
Asp Asp
Leu Ser
Ala Asp
Ile Thr
740
Met Met
755
Lys Leu
Tyr Asp
Ala Thr
Glu Lys
310 Gly Ser 325
Lys Lys
Gly Leu
Glu Ala
Phe Pro
390
Ser Ile
405
Leu Arg
Leu Ala
Phe Tyr
Met Lys
470 Ser Tyr 485
Asn Lys
Gln Asn
Ser Asp
Glu Asn
550
Glu Thr
565
Asp Tyr
Ala Ser
Thr Asn
Gly Asn
630
His Lys
645
Pro Tyr
Leu Val
Pro Ala
Ile Ser
710 Asp Lys 725
Ile Met
Leu Pro
Asp Ile
His Asp
790 Met Phe
Val Phe
Leu Ile
Gly Ile
Ser Gln
360 Asp Lys 375
Ile Ile
Ser Arg
Ala Ile
Leu Lys
440
Asn Val
455
Glu Leu
Val Ala
His Asp
Tyr Glu
520
Gly Met
535
Tyr Trp
Glu Gln
Gln Gln
Lys Lys
600
Trp Asn
615
Lys Ile
Ala Tyr
Cys Ser
Asp Phe
680
Gln Asn 695
Lys Ala
Ser Pro
Gln Asn
Asn Met
760
Asp Leu 775
Ser Gln
Ser Asn
Thr Leu
Asp His
330 Ala Tyr 345
Leu Ile
Met Ala
Val Arg
Phe Asn
410 Leu Arg 425 Thr Arg
Tyr Asp
Leu Ser
Ser Phe
490
Phe Ala 505
Ala Met
Phe Tyr
Ala Thr
Lys Pro
570
Val Gly
585
Leu Asn
Lys Ser
Ile Phe
Thr Thr
650 Tyr Val 665
Thr Asn
Ile Gly
Leu Gln
Glu Ala
730
His Thr 745
Thr Arg
Leu Glu
Gln Met
His Asn
Val Asp
315
Val Val
Thr Gly
Pro Ile
Thr Ile
380
Gly Glu 395
Ala Gln
Ile Ala
Ile Lys
Asn Leu
460
Asp Thr 475
Asn Ser
Phe Gly
Asn Asn
Leu Tyr
540
Val Asn
555
Leu Glu
Met Thr
Asn Thr
Leu Thr
620
Val Gly
635
Ile Glu
Asn Asn
Thr Lys
Tyr Tyr
700
Thr Gly
715
Ile Lys
Gln Asp
Gln Glu
Asn Asn
780
His Val
795
Leu Ser
Glu Gly
Thr Asn
Ala Tyr
350
Ile Gln
365
Tyr His
Met Met
Ser His
Asp Met
430
Thr Leu
445
Lys Thr
Phe Val
Met Asp
Leu Ser
510
Glu Asn
525
Asn Asn
Pro Tyr
Gly Thr
Ser Leu
590
Ser Ala
605
Leu Asn
Ser Asn
Gln Arg
Gln Pro
670
Ser Ile
685
Phe Phe
Lys Trp
Glu Val
Gly Asp
750
Phe Glu
765
Asp Lys
Ile His
His Gln
Asn Gly
320
Ala Gln
335
Gly Asn
Lys Thr
Trp Ile
Asp Met
400
Val Ala
415
Ser Glu
Val Thr
Tyr His
Pro Val
480
Lys Leu 495
Met Phe
Leu His
Asp Leu
Arg Leu
560
Pro Glu
575
Ser Asp
Leu Ala
Lys Gly
Ile Lys
640
Lys Glu 655
Val Asp
Phe Leu
Lys Pro
Gln Asn
720
Ser Asn 735
Arg Tyr
Thr Tyr
Leu Ala
Tyr Glu
800 Gly Phe
- 200 031986
805 810 815
Tyr Ser Phe Pro His Pro Val Lys Gln Asn Gln Gln
820 825 <210> 89 <211> 556 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pyogenes серотип M12 (штамм MGAS2) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 89
Met Val Tyr Phe Tyr Leu Val Asn Gln Ser Thr Phe Ile Ile Ser Phe
1 5 10 15
Leu Tyr Trp Arg Asn Leu Ser Val Asn Thr Tyr Phe Cys Thr His His
20 25 30
Lys Gln Leu Leu Leu Tyr Ser Asn Leu Phe Leu Ser Phe Ala Met Met
35 40 45
Gly Gln Gly Thr Ala Ile Tyr Ala Asp Thr Leu Thr Ser Asn Ser Glu
50 55 60
Pro Asn Asn Thr Tyr Phe Gln Thr Gln Thr Leu Thr Thr Thr Asp Ser
65 70 75 80
Glu Lys Lys Val Val Gln Pro Gln Gln Lys Asp Tyr Tyr Thr Glu Leu
85 90 95
Leu Asp Gln Trp Asn Ser Ile Ile Ala Gly Asn Asp Ala Tyr Asp Lys
100 105 110
Thr Asn Pro Asp Met Val Thr Phe His Asn Lys Ala Glu Lys Asp Ala
115 120 125
Gln Asn Ile Ile Lys Ser Tyr Gln Gly Pro Asp His Glu Asn Arg Thr
130 135 140
Tyr Leu Gly Asn Met Gln Arg Ile Ile Pro Leu Leu Leu Ile Ser Arg
145 150 155 160
Lys Leu Thr Ala Ile Leu Lys Lys Ile Ser Lys Met Lys Ser Leu Met
165 170 175
Glu Asp Ser Thr Ile Ser Thr Asn Gly Leu Thr Gln Gln Leu Lys Ile
180 185 190
Tyr Asn Asp Met Asp Arg Val Thr Tyr His Asn Lys Gly Leu Asp Phe
195 200 205
Ala Phe Gly Leu Ser Met Thr Ser Lys Asn Val Ala Arg Tyr Glu Ser
210 215 220
Ile Asn Gly Glu Asn Leu Lys Gly Trp His Thr Gly Ala Gly Met Ser
225 230 235 240
Tyr Leu Tyr Asn Ser Asp Val Lys His Tyr Arg Asp Asn Phe Trp Ala
245 250 255
Thr Ala Asp Met Lys Arg Leu Ala Gly Thr Thr Thr Leu Asp Asn Glu
260 265 270
Glu Pro Lys Ser Thr Asp Val Lys Lys Ser Ser Lys Thr Phe Val Gly
275 280 285
Gly Thr Lys Phe Asp Asp Gln His Ala Ser Ile Gly Met Asp Phe Glu
290 295 300
Asn Gln Asp Lys Thr Leu Thr Ala Lys Lys Ser Tyr Phe Ile Leu Asn
305 310 315 320
Asp Lys Ile Val Phe Leu Gly Thr Gly Ile Lys Ser Thr Asp Ser Ser
325 330 335
Lys Asn Pro Val Thr Thr Ile Glu Asn Arg Lys Ala Asn Asp Tyr Lys
340 345 350
Leu Tyr Lys Asp Asp Thr Gln Thr Thr Asn Ser Asp Asn Gln Glu Thr
355 360 365
Asn Ser Leu Phe Leu Glu Ser Thr Asn Ser Thr Gln Asn Asn Ile Gly
370 375 380
Tyr His Phe Leu Asn Glu Ser Lys Ile Thr Val Lys Lys Glu Ser His
- 201 031986
385 390 395
Thr Gly Lys Trp Ser Asp Ile Asn Lys Ser Gln Lys Asp Ile Gln
405 410 415
Thr Asp Glu Tyr Tyr Glu Val Thr Gln Lys His Ser Asn Thr Asp
420 425 430
Lys Tyr Ala Tyr Val Leu Tyr Pro Gly Leu Ser Lys Asp Val Phe
435 440 445
Ser Lys Ala Ser Lys Val Thr Val Val Lys Gln Glu Asp Asp Phe
450 455 460
Val Val Lys Asp Asn Glu Ser Val Trp Ala Gly Ile Asn Tyr Ser
465 470 475
Ser Ala Lys Thr Phe Glu Ile Asn Asn Thr Lys Val Glu Val Lys
485 490 495
Lys Gly Met Phe Ile Leu Thr Lys Lys Asp Asp Asn Thr Tyr Glu
500 505 510
Ser Phe Tyr Asn Pro Glu Ser Thr Asn Ser Val Ser Asp Ile Glu
515 520 525
Lys Ile Ser Met Thr Gly Tyr Ser Ile Ile Asn Lys Asn Thr Ser
530 535 540
Ser Asn Glu Ser Gly Val Arg Phe Glu Leu Thr Lys
545 550 555
400
Lys
Ser
Lys
His
Asp
480
Ala
Cys
Ser
Thr <210> 90 <211> 635 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pyogenes серотип M12 (штамм MGAS2) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 90
Met 1 Ala Phe Met Tyr 5 Glu His Ala Tyr Asn Leu 10 Asn Arg Glu Asn 15
Gln Thr Thr Gly Lys Glu Asn Lys Glu Asn Trp Trp Val Tyr Glu
20 25 30
Gly Thr Pro Arg Ala Ile Asn Asn Thr Leu Ser Leu Met Tyr Pro
35 40 45
Phe Thr Gln Glu Glu Ile Leu Lys Tyr Thr Ala Pro Ile Glu Lys
50 55 60
Val Pro Asp Pro Thr Arg Phe Arg Val Arg Ala Ala Asn Phe Ser
65 70 75
Phe Glu Ala Ser Ser Gly Asn Leu Ile Asp Met Gly Arg Val Lys
85 90 95
Ile Ser Gly Ile Leu Arg Lys Asp Asp Leu Glu Ile Ser Asp Thr
100 105 110
Lys Ala Ile Glu Lys Val Phe Thr Leu Val Asp Glu Gly Asn Gly
115 120 125
Tyr Gln Asp Gly Ser Leu Ile Asp His Val Val Thr Asn Ala Gln
130 135 140
Pro Leu Tyr Lys Lys Gly Ile Ala Tyr Thr Gly Ala Tyr Gly Asn
145 150 155
Leu Ile Asp Gly Leu Ser Gln Leu Ile Pro Ile Ile Gln Lys Thr
165 170 175
Ser Pro Ile Glu Ala Asp Lys Met Ala Thr Ile Tyr His Trp Ile
180 185 190
His Ser Phe Phe Pro Ile Ile Val Arg Gly Glu Met Met Asp Met
195 200 205
Arg Gly Arg Ser Ile Ser Arg Phe Asn Ala Gln Ser His Val Ala
210 215 220
Ile Glu Ala Leu Arg Ala Ile Leu Arg Ile Ala Asp Met Ser Glu
225 230 235
Pro His Arg Leu Ala Leu Lys Thr Arg Ile Lys Thr Leu Val Thr
His
Ile
Tyr
Phe
Pro
Leu
Ile
Phe
Ser
Val
160
Lys
Asn
Thr
Gly
Glu
240
Gln
- 202 031986
245 250 255
Gly Asn Ala Phe Tyr Asn Val Tyr Asp Asn Leu Lys Thr Tyr His Asp
260 265 270
Ile Lys Leu Met Lys Glu Leu Leu Ser Asp Thr Ser Val Pro Val Gln
275 280 285
Lys Leu Asp Ser Tyr Val Ala Ser Phe Asn Ser Met Asp Lys Leu Ala
290 295 300
Leu Tyr Asn Asn Lys His Asp Phe Ala Phe Gly Leu Ser Met Phe Ser
305 310 315 320
Asn Arg Thr Gln Asn Tyr Glu Ala Met Asn Asn Glu Asn Leu His Gly
325 330 335
Trp Phe Thr Ser Asp Gly Met Phe Tyr Leu Tyr Asn Asn Asp Leu Gly
340 345 350
His Tyr Ser Glu Asn Tyr Trp Ala Thr Val Asn Pro Tyr Arg Leu Pro
355 360 365
Gly Thr Thr Glu Thr Glu Gln Lys Pro Leu Glu Gly Thr Pro Glu Asn
370 375 380
Ile Lys Thr Asn Tyr Gln Gln Val Gly Met Thr Ser Leu Ser Asp Asp
385 390 395 400
Ala Phe Val Ala Ser Lys Lys Leu Asn Asn Thr Ser Ala Leu Ala Ala
405 410 415
Met Thr Phe Thr Asn Trp Asn Lys Ser Leu Thr Leu Asn Lys Gly Trp
420 425 430
Phe Ile Leu Gly Asn Lys Ile Ile Phe Val Gly Ser Asn Ile Lys Asn
435 440 445
Gln Ser Ser His Lys Ala Tyr Thr Thr Ile Glu Gln Arg Lys Glu Asn
450 455 460
Gln Lys His Pro Tyr Cys Ser Tyr Val Asn Asn Gln Pro Val Asp Leu
465 470 475 480
Asn Asn Gln Leu Val Asp Phe Thr Asn Thr Lys Ser Ile Phe Leu Glu
485 490 495
Ser Asp Asp Pro Ala Gln Asn Ile Gly Tyr Tyr Phe Phe Lys Pro Thr
500 505 510
Thr Leu Ser Ile Ser Lys Ala Leu Gln Thr Gly Lys Trp Gln Asn Ile
515 520 525
Lys Ala Asp Asp Lys Ser Pro Glu Ala Ile Lys Glu Val Ser Asn Thr
530 535 540
Phe Ile Thr Ile Met Gln Asn His Thr Gln Asp Gly Asp Arg Tyr Ala
545 550 555 560
Tyr Met Met Leu Pro Asn Met Thr Arg Gln Glu Phe Glu Thr Tyr Ile
565 570 575
Ser Lys Leu Asp Ile Asp Leu Leu Glu Asn Asn Asp Lys Leu Ala Ala
580 585 590
Val Tyr Asp His Asp Ser Gln Gln Met His Val Ile His Tyr Glu Lys
595 600 605
Lys Ala Thr Met Phe Ser Asn His Asn Leu Ser His Gln Gly Phe Tyr
610 615 620
Ser Phe Pro His Pro Val Lys Gln Asn Gln Gln
625 630 635
<210> 91 <211> 828 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pyogenes серотип M12 (штамм MGAS9) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 91
Met Val Tyr Phe Tyr Leu Val Asn Gln Ser Thr Phe Ile Ile Ser Phe
5 10 15
Leu Tyr Trp Arg Asn Leu Ser Val Asn Thr Tyr Phe Cys Thr His His
- 203 031986
Lys Gln
Gly Gln
Pro Asn
Glu Lys
Leu Asp
Thr Asn
Gln Asn
130 Tyr Leu 145
Lys Thr
Glu Ser
Gly Met
His Gln
210
Ile Gly
225
Tyr Phe
Phe Val
Pro Phe
Leu Ile
290
Ile Lys 305
Phe Tyr
Ser Pro
Val Leu
Lys Ser
370
Asn His 385
Thr Arg
Gly Ile
Glu Pro
Gln Gly
450
Asp Ile 465
Gln Lys
Ala Leu
Ser Asn
Leu Leu
Gly Thr
Asn Thr
Lys Val
Gln Trp
100 Pro Asp 115
Ile Ile
Trp Glu
Tyr Arg
Cys Tyr
180
Ala Phe
195
Thr Thr
Thr Pro
Thr Gln
Pro Asp
260
Glu Ala 275
Ser Gly
Ala Ile
Gln Asp
Leu Tyr
340
Ile Asp
355
Pro Ile
Ser Phe
Gly Arg
Glu Ala
420
His Arg
435
Asn Ala
Lys Leu
Leu Asp
Tyr Asn
500 Arg Thr 515
Leu Tyr
Ala Ile
Tyr Phe
Val Gln
Asn Ser
Met Val
Lys Ser
His Ala
150
Asn Ile
165
Tyr Gln
Met Tyr
Gly Lys
Arg Ala
230
Glu Glu
245
Pro Thr
Ser Ser
Ile Leu
Glu Lys
310 Gly Ser 325
Lys Lys
Gly Leu
Glu Ala
Phe Pro
390
Ser Ile
405
Leu Arg
Leu Ala
Phe Tyr
Met Lys
470 Ser Tyr 485 Asn Lys
Gln Asn
Ser Asn
Tyr Ala
Gln Thr
Pro Gln
Ile Ile
Thr Phe
120
Tyr Gln
135
Lys Asp
Glu Lys
Asp Ser
Glu His
200
Glu Asn
215
Ile Asn
Ile Leu
Arg Phe
Gly Asn
280
Arg Lys 295
Val Phe
Leu Ile
Gly Ile
Ser Gln
360 Asp Lys 375
Ile Ile
Ser Arg
Ala Ile
Leu Lys
440
Asn Val
455
Glu Leu
Val Ala
His Asp
Tyr Glu
520
Leu Phe
Asp Thr
Gln Thr
Gln Lys
Ala Gly
105
His Asn
Gly Pro
Tyr Ser
Ile Ala
170 Lys Ala 185 Ala Tyr
Lys Glu
Asn Thr
Lys Tyr
250
Arg Val
265
Leu Ile
Asp Asp
Thr Leu
Asp His
330
Ala Tyr
345
Leu Ile
Met Ala
Val Arg
Phe Asn
410
Leu Arg 425
Thr Arg
Tyr Asp
Leu Ser
Ser Phe
490
Phe Ala
505
Ala Met
Leu Ser
Leu Thr
Leu Thr 75
Asp Tyr
Asn Asp
Lys Ala
Asp His
140
Ala Ser
155
Lys Gln
Ile Ala
Asn Leu
Asn Trp
220
Leu Ser
235
Thr Ala
Arg Ala
Asp Met
Leu Glu
300 Val Asp 315
Val Val
Thr Gly
Pro Ile
Thr Ile
380 Gly Glu 395
Ala Gln
Ile Ala
Ile Lys
Asn Leu
460 Asp Thr 475
Asn Ser
Phe Gly
Asn Asn
Phe Ala
Ser Asn
Thr Thr
Tyr Thr
Ala Tyr
110
Glu Lys
125
Glu Asn
Thr Asn
Ile Thr
Ile Val
190 Asn Arg 205
Trp Val
Leu Met
Pro Ile
Ala Asn
270
Gly Arg 285
Ile Ser
Glu Gly
Thr Asn
Ala Tyr
350
Ile Gln
365
Tyr His
Met Met
Ser His
Asp Met
430
Thr Leu 445
Lys Thr
Ser Val
Met Asp
Leu Ser
510
Glu Asn
525
Met Met
Ser Glu
Asp Ser
Glu Leu 95
Val Lys
Asp Ala
Arg Thr
Ile Thr
160
Asn Pro
175
Lys Asp
Glu Asn
Tyr Glu
Tyr Pro
240
Glu Lys
255
Phe Ser
Val Lys
Asp Thr
Asn Gly
320
Ala Gln
335
Gly Asn
Lys Thr
Trp Ile
Asp Met
400
Val Ala
415
Ser Glu
Val Thr
Tyr His
Pro Val
480
Lys Leu
495
Met Phe
Leu His
- 204 031986
Gly Trp 530 Phe Thr Ser Asp Gly Met 535 Phe Tyr Leu Tyr 540 Asn Asn Asp Leu
Gly His Tyr Ser Glu Asn Tyr Trp Ala Thr Val Asn Pro Tyr Arg Leu
545 550 555 560
Pro Gly Thr Thr Glu Thr Glu Gln Lys Pro Leu Glu Gly Thr Pro Glu
565 570 575
Asn Ile Lys Thr Asn Tyr Gln Gln Val Gly Met Thr Ser Leu Ser Asp
580 585 590
Asp Ala Phe Val Ala Ser Lys Lys Leu Asn Asn Thr Ser Ala Leu Ala
595 600 605
Ala Met Thr Phe Thr Asn Trp Asn Lys Ser Leu Thr Leu Asn Lys Gly
610 615 620
Trp Phe Ile Leu Gly Asn Lys Ile Ile Phe Val Gly Ser Asn Ile Lys
625 630 635 640
Asn Gln Ser Ser His Lys Ala Tyr Thr Thr Ile Glu Gln Arg Lys Glu
645 650 655
Asn Gln Lys His Pro Tyr Cys Ser Tyr Val Asn Asn Gln Pro Val Asp
660 665 670
Leu Asn Asn Gln Leu Val Asp Phe Thr Asn Thr Lys Ser Ile Phe Leu
675 680 685
Glu Ser Asp Asp Pro Ala Gln Asn Ile Gly Tyr Tyr Phe Phe Lys Pro
690 695 700
Thr Thr Leu Ser Ile Ser Lys Ala Leu Gln Thr Gly Lys Trp Gln Asn
705 710 715 720
Ile Lys Ala Asp Asp Lys Ser Pro Glu Ala Ile Lys Glu Val Ser Asn
725 730 735
Thr Phe Ile Thr Ile Met Gln Asn His Thr Gln Asp Gly Asp Arg Tyr
740 745 750
Ala Tyr Met Met Leu Pro Asn Met Thr Arg Gln Glu Phe Glu Thr Tyr
755 760 765
Ile Ser Lys Leu Asp Ile Asp Leu Leu Glu Asn Asn Asp Lys Leu Ala
770 775 780
Ala Val Tyr Asp His Asp Ser Gln Gln Met His Val Ile His Tyr Glu
785 790 795 800
Lys Lys Ala Thr Met Phe Ser Asn His Asn Leu Ser His Gln Gly Phe
805 810 815
Tyr Ser Phe Pro His Pro Val Lys Gln Asn Gln Gln
820 825
<210> 92 <211> 828 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus pyogenes серотип M28 <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 92
Met Val Tyr Phe Tyr Leu Val Asn Gln Phe Thr Phe Ile Ile Ser Phe
1 5 10 15
Leu Tyr Arg Arg Asn Leu Ser Val Asn Thr Tyr Phe Cys Thr His His
20 25 30
Lys Gln Leu Leu Leu Tyr Ser Asn Leu Phe Leu Ser Phe Ala Met Met
35 40 45
Gly Gln Gly Thr Ala Ile Tyr Ala Asp Thr Leu Thr Ser Asn Ser Glu
50 55 60
Pro Asn Asn Thr Tyr Phe Gln Thr Gln Met Leu Thr Thr Thr Asp Ser
65 70 75 80
Glu Lys Lys Val Val Gln Pro Gln Gln Lys Asp Tyr Tyr Thr Glu Leu
85 90 95
Leu Asp Gln Trp Asn Ser Ile Ile Ala Gly Asn Asp Ala Tyr Asp Lys
100 105 110
- 205 031986
Thr Asn
Gln Asn
130
Tyr Leu 145
Lys Thr
Glu Ser
Gly Met
His Gln
210
Ile Gly
225
Tyr Phe
Phe Val
Pro Phe
Leu Ile
290
Ile Lys
305
Phe Tyr
Ser Pro
Val Leu
Lys Ser
370
Asn His 385
Thr Arg
Gly Ile
Glu Pro
Gln Gly
450
Asp Ile 465
Gln Lys
Ala Leu
Ser Asn
Gly Trp
530
Gly His
545
Pro Gly
Asn Ile
Asp Ala
Ala Met
Pro Asp
115
Ile Ile
Trp Glu
Tyr Arg
Cys Tyr
180
Ala Phe
195
Thr Thr
Thr Pro
Thr Gln
Pro Asp
260
Glu Ala 275
Ser Gly
Ala Ile
Gln Asp
Leu Tyr
340
Ile Asp
355
Ser Ile
Ser Phe
Gly Arg
Glu Ala
420
His Arg
435
Asn Ala
Lys Leu
Leu Asp
Tyr Asn
500
Arg Thr
515
Phe Thr
Tyr Ser
Thr Thr
Lys Thr
580
Phe Val
595
Thr Phe
Met Val
Lys Ser
His Ala
150
Asn Ile
165
Tyr Gln
Met Tyr
Gly Lys
Arg Ala
230
Glu Glu
245
Pro Thr
Asn Ser
Ile Leu
Glu Lys
310 Gly Ser 325
Lys Lys
Gly Leu
Glu Ala
Phe Pro
390
Ser Ile
405
Leu Arg
Leu Ala
Phe Tyr
Met Lys
470 Ser Tyr 485 Asn Lys
Gln Asn
Ser Asp
Glu Asn
550
Glu Thr
565
Asn Tyr
Ala Ser
Thr Asn
Thr Phe
120
Tyr Gln
135
Lys Asp
Glu Lys
Asp Ser
Glu His
200
Glu Asn
215
Ile Asn
Ile Leu
Arg Phe
Gly Asn
280 Arg Lys 295
Val Phe
Leu Ile
Gly Ile
Ser Gln
360 Asp Lys 375
Ile Ile
Ser Arg
Ala Ile
Leu Lys
440
Asn Val
455
Glu Leu
Val Ala
His Asp
Tyr Glu
520
Gly Met
535
Tyr Trp
Glu Gln
Gln Gln
Lys Lys
600 Trp Asn
His Asn
Gly Pro
Tyr Ser
Ile Ala
170 Lys Ala 185 Ala Tyr
Lys Glu
Asn Thr
Lys Tyr
250
Arg Val
265
Leu Ile
Asp Asp
Thr Leu
Asp His
330
Ala Tyr
345
Leu Ile
Met Ala
Val Arg
Phe Asn
410 Leu Arg 425
Thr Arg
Tyr Asp
Leu Ser
Ser Phe
490
Phe Ala 505
Ala Met
Phe Tyr
Ala Thr
Lys Pro
570
Val Gly
585
Leu Asn
Lys Ser
Lys Ala
Asp His
140
Ala Ser
155
Lys Gln
Ile Ala
Asn Leu
Asn Trp
220
Leu Ser
235
Thr Ala
Arg Ala
Asp Met
Leu Glu
300 Val Asp 315
Val Val
Thr Gly
Pro Ile
Thr Ile
380 Gly Glu 395
Ala Gln
Ile Ala
Ile Lys
Asn Leu
460 Asp Thr 475
Asn Ser
Phe Gly
Asn Asn
Leu Tyr
540
Val Asn
555
Leu Glu
Met Thr
Asn Thr
Leu Thr
Glu Lys
125
Glu Asn
Ala Asn
Ile Thr
Ile Val
190
Asp Arg 205
Trp Val
Leu Met
Pro Ile
Ala Asn
270
Gly Arg 285
Ile Ser
Glu Gly
Thr Asn
Ala Tyr
350
Ile Gln
365
Tyr His
Met Met
Ser His
Asp Met
430
Thr Leu
445
Lys Thr
Ser Val
Met Asp
Leu Ser
510
Glu Asn 525
Asn Asn
Pro Tyr
Gly Thr
Ser Leu
590
Ser Ala
605
Leu Asn
Asp Ala
Arg Thr
Ile Thr
160
Asn Pro
175
Lys Asp
Glu Asn
Tyr Glu
Tyr Pro
240
Glu Lys
255
Phe Ser
Val Lys
Asp Thr
Asn Gly
320
Ala Gln
335
Gly Asn
Lys Thr
Trp Ile
Asp Met
400
Val Ala
415
Ser Glu
Val Thr
Tyr His
Pro Val
480
Lys Leu
495
Met Phe
Leu His
Asp Leu
Arg Leu
560
Pro Glu
575
Ser Asp
Leu Ala
Lys Gly
- 206 031986
610 Trp Phe 625
Asn Gln
Asn Gln
Leu Asn
Glu Ser
690
Thr Thr 705
Ile Lys
Thr Phe
Ala Tyr
Ile Ser
770
Ala Val
785
Lys Lys
Tyr Ser
Ile Leu
Ser Ser
Lys His
660
Asn Gln
675
Asp Asp
Leu Ser
Ala Asp
Ile Thr
740
Met Met
755
Lys Leu
Tyr Asp
Ala Thr
Phe Pro
820
Gly Asn
630
His Lys
645
Pro Tyr
Leu Val
Ser Ala
Ile Ser
710 Asp Lys 725
Ile Met
Leu Pro
Asp Ile
His Asp
790
Met Phe
805
His Pro
615
Lys Ile
Ala Tyr
His Ala
Asp Phe
680
Gln Asn
695
Lys Ala
Ser Pro
Gln Asn
Asn Met
760
Asp Leu
775
Ser Gln
Ser Asn
Val Lys
Ile Phe
Thr Thr
650
Tyr Val
665
Thr Asn
Ile Gly
Leu Gln
Glu Ala
730
His Thr 745
Thr Arg
Leu Glu
Gln Met
His Asn
810
Gln Asn
825
620 Val Gly 635
Ile Glu
Asn Asn
Thr Lys
Tyr Tyr
700
Thr Gly
715
Ile Lys
Gln Asp
Gln Glu
Asn Asn
780
His Val
795
Leu Ser
Gln Gln
Ser Asn
Gln Arg
Gln Pro
670
Ser Ile
685
Phe Phe
Lys Trp
Glu Val
Gly Asp
750
Phe Glu
765
Asp Lys
Ile His
His Gln
Ile Lys
640 Lys Glu 655 Val Asp
Phe Leu
Lys Pro
Gln Asn
720
Ser Asn 735
Arg Tyr
Thr Tyr
Leu Ala
Tyr Glu
800 Gly Phe 815 <210> 93 <211> 522 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus suis <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 93
Met Gly Phe Phe Ile Ser Gln Ser Lys Gln His Tyr Gly Ile Arg Lys
1 5 10 15
Tyr Lys Val Gly Val Cys Ser Ala Leu Ile Ala Leu Ser Ile Leu Gly
20 25 30
Thr Arg Val Ala Ala Asn Gln Leu Pro Ser Thr Glu Thr Ala Ser Pro
35 40 45
Gln Ser Ser Gln Leu Val Glu Thr Thr Pro Glu Thr Thr Glu Ala Val
50 55 60
Asn Leu Thr Thr Glu Ala Val Met Thr Ser Glu Val Ser Ser Glu Val
65 70 75 80
Ser Pro Val Thr Ser Thr Glu Thr Gln Pro Ser Ser Thr Ala Ala Glu
85 90 95
Thr Leu Ala Ser Pro Gln Ala Val Gln Ala Thr Lys Glu Glu Glu Lys
100 105 110
Asn Leu Val Ala Asn Gly Glu Phe Ala Ser Thr Thr Ala Ala Ser Gly
115 120 125
Asn Trp Ala Asp Pro Ala Ala Thr Asn Trp Glu Thr Trp Ile Pro Ala
130 135 140
Asn Val Lys Lys Glu Asn Gly Gln Val Arg Ile Asp Glu Gly Arg Leu
145 150 155 160
His Ile Ser Ser Thr Ala Ser Tyr Arg Val Ala Val His Gln Thr Val
165 170 175
Asp Val Asp Pro Asn Lys Arg Tyr Leu Phe Ser Tyr Asn Val Glu Thr
180 185 190
Lys Asp Leu Lys Gly Ser Gly Val Arg Val Arg Leu Arg Ser Leu Thr
- 207 031986
Ala Glu
210
Lys Asn 225
Pro Glu
Gly Gln
Thr Pro
Gly Gln
290
Asp Leu 305
Asn Met
Asp Lys
Gln Ala
Leu Ala
370
Leu Gly
385
Glu Pro
Lys Ser
Gln Val
Ile Asp
450
Asn Glu 465
Thr Pro
Ser Gln
Pro Asp
195
Gly Lys
Gly Ser
Thr Arg
Ala Trp
260
Glu Thr 275
Ile Ser
Thr Tyr
Ile Arg
Asp Thr
340
Thr Val
355
Asn Lys
Arg Leu
Thr Asn
Ser His
420
Val Glu
435
Leu Val
Asn Lys
Arg Ala
Glu Glu
500
Pro Thr
515
Asp Leu
Gln Ala
230
Lys Leu
245
Leu Asp
Pro Glu
Leu Ala
Arg Ile
310
Pro Leu
325
Lys Leu
Phe Asp
Arg Tyr
Asp Ala
390
Gln Gly
405
Leu Thr
Asn Pro
Arg Lys
Ser Ile
470
Val Val
485
Ile Leu
Thr Ile
200
Ser Pro
215
Glu His
Lys Val
Asn Ile
Pro Ser
280
Ser Asn
295
Ala Asp
Ala Ala
Ser Ser
Thr Leu
360
Gln Ser
375
Gly Val
Lys Thr
Thr Val
Asp Ser
440
Gly Met
455
Asp Gly
Asn Thr
Thr Tyr
Ser Val
520
Gln Glu
Ile Glu
Glu Leu
250
Ser Leu
265
Leu Glu
Lys Val
Ala Ala
Gly Lys
330
Phe Glu
345
Arg Asn
Asn Asp
Ala Ser
Ile Phe
410
Tyr Arg
425
Ala Tyr
Asn Trp
Asn Trp
Leu Ile
490
Thr Lys
505
Lys His
Phe Ala
220
Gln Ile
235
Phe Phe
Val Glu
Leu Val
Tyr Leu
300
Val Ala
315
Thr Gln
Leu Thr
Asn Trp
Thr Gln
380
Ser Leu
395
Asn Asp
Arg Leu
Tyr His
Leu Tyr
460
Trp Asp
475
Tyr Met
Pro Ile
205
Tyr Thr
Leu Thr
Glu Asn
Tyr Val
270
Gln Pro
285
Pro Val
Ile Val
Val Asp
Val Thr
350
Glu Asp
365
Met Lys
Lys Lys
Ile Asp
Glu Gln
430
Asp Arg
445
Thr Asn
Tyr Glu
His Pro
Ser Lys
510
Pro Tyr
Val Ser
240
Ser Val 255
Glu Lys
Glu Thr
Arg Pro
Glu Lys
320
Val Tyr
335
Glu His
Ile Ser
Ala Phe
Trp Val
400
Phe Ser
415
Met Ala
Ser Leu
Val Tyr
Ile Gly
480
Tyr Phe
495
Phe Val <210> 94 <211> 1164 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus suis <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 94
Met Gly Phe Phe Ile Ser Gln Ser Lys Gln His Tyr Gly Ile Arg Lys
1 5 10 15
Tyr Lys Val Gly Val Cys Ser Ala Leu Ile Ala Leu Ser Ile Leu Gly
20 25 30
Thr Arg Val Ala Ala Asn Gln Leu Pro Ser Thr Glu Thr Ala Ser Pro
35 40 45
Gln Ser Ser Gln Leu Val Glu Thr Thr Pro Glu Thr Thr Glu Ala Val
50 55 60
Met Thr Ser Glu Val Ser Ser Glu Val Ser Pro Val Thr Ser Thr Glu
65 70 75 80
Thr Gln Pro Ser Ser Thr Thr Ala Glu Thr Leu Ala Ser Pro Gln Ala
- 208 031986
Val Gln
Ile Ser
Asn Trp
130
Val Arg 145
Arg Val
Leu Phe
Arg Val
Gln Glu
210
Ile Glu 225
Glu Leu
Ser Leu
Pro Glu
Lys Val
290
Ala Ala 305
Gly Lys
Phe Glu
Arg Asn
Asn Asp
370
Ala Ser 385
Ile Phe
Tyr Arg
Ala Tyr
Asn Trp
450 Asn Trp 465
Leu Ile
Thr Lys
Thr Leu
Ser Lys
530 Val Arg 545
Lys Gly
Val Ala
Ala Thr
100
Thr Thr
115
Glu Thr
Ile Asp
Ala Val
Ser Tyr
180 Arg Leu 195
Phe Ala
Gln Ile
Phe Phe
Val Glu
260
Leu Val
275
Tyr Leu
Val Ala
Thr Gln
Leu Ile
340 Asn Trp 355
Ala Gln
Ser Leu
Asn Asp
Arg Leu
420
Tyr His
435
Leu Tyr
Trp Asp
Tyr Met
Pro Ile
500
Thr Asn
515
Val Ala
Ala Gly
Glu Gly
Tyr Thr
580
Lys Glu
Ala Pro
Trp Ile
Glu Gly
150
His Gln
165
Asp Val
Arg Ser
Tyr Thr
Leu Thr
230
Glu Asn 245
Tyr Val
Gln Pro
Pro Val
Thr Val
310 Val Asp 325
Val Thr
Glu Asp
Met Lys
Glu Lys
390 Ile Asp 405
Glu Gln
Asp Arg
Ala Asn
Tyr Glu
470
His Pro
485
Ser Lys
Pro Val
Ile Leu
Ala Gln
550 Phe Tyr 565 Gly Ala
Glu Lys
Ser Gly
120
Pro Ala
135
Arg Leu
Thr Val
Glu Thr
Leu Thr
200
Pro Tyr
215
Val Ser
Ser Val
Glu Lys
Glu Thr
280
Arg Pro
295
Glu Lys
Val Tyr
Glu His
Ile Ser
360
Ala Phe
375
Trp Val
Phe Ser
Met Ala
Ser Leu
440 Val Tyr 455
Ile Gly
Tyr Phe
Phe Val
Pro Ala
520 Glu Gly 535
Gly Leu
Arg Asp
Tyr Gly
Asn Leu 105
Asn Trp
Asn Val
His Ile
Asp Val
170 Lys Asp 185
Ala Glu
Lys Asn
Pro Glu
Gly Gln
250
Thr Pro 265
Gly Gln
Asp Leu
Asn Met
Asp Lys
330
Gln Ala
345
Leu Ala
Leu Gly
Glu Pro
Lys Ser
410
Gln Val 425
Ile Asp
Asn Glu
Thr Ser
Ser Gln
490 Pro Asp 505 Val Gly
Ala Leu
Thr Thr
Gly Ser
570
Asn Val
585
Val Ala
Lys Glu
Lys Lys
140
Ser Ser 155
Asp Pro
Leu Lys
Gly Lys
Gly Ser
220
Thr Arg 235
Ala Trp
Glu Thr
Ile Ser
Thr Tyr
300
Ile Arg
315
Asp Thr
Thr Val
Asn Lys
Arg Leu
380
Thr Glu 395
Ser His
Val Glu
Leu Val
Asn Lys
460
Arg Ala 475
Glu Glu
Pro Thr
Gly Asn
Arg Glu
540
Ile Met
555
Phe Ile
Leu Ile
Asn Gly
110
Leu Ala
125
Glu Asn
Thr Ala
Asn Lys
Gly Ser
190
Asp Leu
205
Gln Ala
Lys Leu
Leu Asp
Pro Glu
270
Leu Ala
285
Arg Ile
Pro Leu
Lys Leu
Phe Asp
350
Arg Tyr
365
Asp Ala
Gln Ser
Leu Thr
Asn Pro
430
Arg Lys
445
Ser Ile
Val Val
Ile Leu
Thr Ile
510
Gln Thr
525
Asp Ala
Lys Phe
Asp His
Glu Gly
590
Glu Phe
Ala Thr
Gly Gln
Ser Tyr
160
Arg Tyr
175
Gly Val
Ser Pro
Glu His
Lys Val
240
Asn Ile
255
Gln Ser
Ser Asn
Ala Asp
Ala Ala
320
Ser Ser
335
Thr Leu
Gln Ser
Gly Val
Lys Thr
400
Thr Val
415
Asp Ser
Gly Met
Asp Gly
Asn Thr
480
Thr Tyr
495
Arg Lys
Asp Leu
Asp Arg
Val Asp
560
Thr Asn
575
Phe Ser
- 209 031986
Gln Leu Leu 595 Pro Val Ile Gln Pro 600 Thr Glu Phe Ala Leu 605 Lys Glu Glu
Gln Thr 610 Asn Ile Leu Tyr Glu 615 Trp Ile Glu Lys Ala 620 Phe Met Pro Ile
Leu 625 Val Arg Gly Glu Leu 630 Met Asp Met Thr Arg 635 Gly Arg Ser Ile Ser 640
Arg Ala Thr Gly Glu 645 Ser His Val Gln Ala 650 Met Glu Ile Leu Arg 655 Ser
Leu Val Arg Ile 660 Ala Glu Ser Ala Gln 665 Pro Glu Gln Lys Thr 670 Lys Leu
Leu Ser Phe 675 Val Lys Ala Gln Leu 680 Thr Ser Asp Thr Phe 685 Tyr Asp Ser
Tyr Arg 690 Ser Leu Lys Ser Tyr 695 Lys Asp Ile Asp Leu 700 Val Asn Lys Leu
Leu 705 Ala Asp Asn Gln Ile 710 Pro Ala Glu Val Asp 715 Lys Asp Tyr Ile Ala 720
Ala Phe Asn Asn Met 725 Asp Lys Phe Val Tyr 730 Arg Ser Ala Gln Glu 735 Gly
Phe Thr Phe Ala 740 Leu Ser Met Tyr Ser 745 Ser Arg Thr Gln Asn 750 Tyr Glu
Asp Met Asn 755 Asn Glu Asn Arg Lys 760 Gly Trp Tyr Thr Ala 765 Asp Gly Met
Val Tyr 770 Leu Tyr Asn Asp Asp 775 Leu Ser His Tyr Ser 780 Asn His Tyr Trp
Ala 785 Thr Val Asp Pro Tyr 790 Arg Leu Pro Gly Thr 795 Thr Thr Thr Lys Asp 800
Lys Arg Glu Asp Gly 805 Ser Gly Glu Val Thr 810 Leu Ala Ser Asp Phe 815 Val
Gly Ala Ser Gln 820 Leu Gly Asn Arg Leu 825 Ala Thr Ile Ala Met 830 Asp Phe
Asn Asn Trp 835 Asn Asn Ser Leu Thr 840 Ala Arg Lys Ala Trp 845 Ile Val Leu
Gly Asn 850 Lys Ile Val Phe Leu 855 Gly Thr Asp Ile Gln 860 His Gln Ser Ala
Gln 865 Gly Ala Glu Thr Thr 870 Ile Glu Asn Arg Lys 875 Leu Leu Thr Gly Glu 880
Lys Tyr Ser Tyr Tyr 885 Ile Asn Gly Gln Pro 890 Val Asp Leu Ser Lys 895 Glu
Val Val Thr Asp 900 Lys Thr Gln Ser Phe 905 Tyr Met Thr Asn Gly 910 Lys Asp
Asn Gln Ser 915 Ile Gly Tyr Val Phe 920 Leu Asn Gln Leu Pro 925 Thr His Ala
Lys Leu 930 Asp Gln Arg Thr Gly 935 Lys Trp Ser Asp Ile 940 Asn Tyr Asn Gln
Ser 945 Lys Glu Glu Val Ser 950 Asn Ser Phe Val Ser 955 Leu Trp His Glu His 960
Ala Gln Thr Ser Ser 965 Asn Tyr Ala Tyr Val 970 Leu Val Pro Asn Gln 975 Ser
Met Glu Lys Val 980 Asn Gln Ala Ala Ala 985 Ser Val Lys Leu Leu 990 His Gln
Asp Arg Asp 995 Leu Gln Val Val Tyr 1000 Asp ) Gln Glu Gln Asn Val 1005 Trp Gly
Val Val Lys 1010 Tyr Thr Asp Thr Ala 1015 Tyr Lys Leu Thr Asp 1020 Asp Ile Thr
Leu Thr 1025 Asp Ala Gly Leu Tyr 1030 Thr Ile Gln Lys Val 1035 Glu Gly Gly Tyr 1040
Arg Ile Ala Phe Tyr Asn 1045 Pro Ser Thr Arg Thr 1050 Val Lys Asn Gly Ile 1055
Glu Leu Thr Lys Ala 1060 Gly Ser Ser Leu Thr 1065 Val Glu Met Glu Pro 1070 Thr
Ala Ala Tyr Pro 1075 Ser Thr Val Trp 1080 Lys ) Val Thr Met Pro Glu 1085 Gly Ser
Asp Lys Gln Thr Gly Ser Val Glu Lys Thr Glu Lys Glu Glu Lys Gln
- 210 031986
1090
1095
1100
Leu Lys Glu Asn Gln Pro Ser Ser Glu Val Lys Gln Val Val His His
1105 1110 1115 1120
Ala Ala Glu Lys Thr Lys Pro Ser Lys Pro Arg Leu Pro Gln Thr Gly
1125 1130 1135
Glu Glu Ala Ser Leu Gly Leu Gly Phe Leu Gly Leu Leu Thr Leu Gly
1140 1145 1150
Ala Val Val Asp Phe Lys Cys Arg Arg Ser His Ser
1155 1160
<210> 95 <211> 1164 <212> БЕЛОК <213> Streptococcus suis <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 95
Met Gly Phe Phe Ile Ser Gln Ser Lys Gln His Tyr Gly Ile Arg Lys
1 5 10 15
Tyr Lys Val Gly Val Cys Ser Ala Leu Ile Ala Leu Ser Ile Leu Gly
20 25 30
Thr Arg Val Ala Ala Asn Gln Leu Pro Ser Thr Glu Thr Ala Ser Pro
35 40 45
Gln Ser Ser Gln Leu Val Glu Thr Thr Pro Glu Thr Thr Glu Ala Val
50 55 60
Met Thr Ser Glu Val Ser Ser Glu Val Ser Pro Val Thr Ser Thr Glu
65 70 75 80
Thr Gln Pro Ser Ser Thr Thr Ala Glu Thr Leu Ala Ser Pro Gln Ala
85 90 95
Val Gln Ala Thr Lys Glu Glu Lys Asn Leu Val Ala Asn Gly Glu Phe
100 105 110
Ile Ser Thr Thr Ala Pro Ser Gly Asn Trp Lys Glu Leu Ala Ala Thr
115 120 125
Asn Trp Glu Thr Trp Ile Pro Ala Asn Val Lys Lys Glu Asn Gly Gln
130 135 140
Val Arg Ile Asp Glu Gly Arg Leu His Ile Ser Ser Thr Ala Ser Tyr
145 150 155 160
Arg Val Ala Val His Gln Thr Val Asp Val Asp Pro Asn Lys Arg Tyr
165 170 175
Leu Phe Ser Tyr Asp Val Glu Thr Lys Asp Leu Lys Gly Ser Gly Val
180 185 190
Arg Val Arg Leu Arg Ser Leu Thr Ala Glu Gly Lys Asp Leu Ser Pro
195 200 205
Gln Glu Phe Ala Tyr Thr Pro Tyr Lys Asn Gly Ser Gln Ala Glu His
210 215 220
Ile Glu Gln Ile Leu Thr Val Ser Pro Glu Thr Arg Lys Leu Lys Val
225 230 235 240
Glu Leu Phe Phe Glu Asn Ser Val Gly Gln Ala Trp Leu Asp Asn Ile
245 250 255
Ser Leu Val Glu Tyr Val Glu Lys Thr Pro Glu Thr Pro Glu Gln Ser
260 265 270
Pro Glu Leu Val Gln Pro Glu Thr Gly Gln Ile Ser Leu Ala Ser Asn
275 280 285
Lys Val Tyr Leu Pro Val Arg Pro Asp Leu Thr Tyr Arg Ile Ala Asp
290 295 300
Ala Ala Val Ala Thr Val Glu Lys Asn Met Ile Arg Pro Leu Ala Ala
305 310 315 320
Gly Lys Thr Gln Val Asp Val Tyr Asp Lys Asp Thr Lys Leu Ser Ser
325 330 335
Phe Glu Leu Ile Val Thr Glu His Gln Ala Thr Val Phe Asp Thr Leu
- 211 031986
Arg Asn
Asn Asp
370
Ala Ser
385
Ile Phe
Tyr Arg
Ala Tyr
Asn Trp
450 Asn Trp 465
Leu Ile
Thr Lys
Thr Leu
Ser Lys
530 Val Arg 545 Lys Gly
Val Ala
Gln Leu
Gln Thr
610
Leu Val
625
Arg Ala
Leu Val
Leu Ser
Tyr Arg
690
Leu Ala 705
Ala Phe
Phe Thr
Asp Met
Val Tyr
770
Ala Thr
785
Lys Arg
Gly Ala
Asn Asn
340 Asn Trp 355
Ala Gln
Ser Leu
Asn Asp
Arg Leu
420
Tyr His
435
Leu Tyr
Trp Asp
Tyr Met
Pro Ile
500
Thr Asn
515
Val Ala
Ala Gly
Glu Gly
Tyr Thr
580
Leu Pro 595
Asn Ile
Arg Gly
Thr Gly
Arg Ile
660
Phe Val
675
Ser Leu
Asp Asn
Asn Asn
Phe Ala
740
Asn Asn
755
Leu Tyr
Val Asp
Glu Asp
Ser Gln
820 Trp Asn 835
Glu Asp
Met Lys
Glu Lys
390
Ile Asp
405
Glu Gln
Asp Arg
Thr Asn
Tyr Glu
470
His Pro
485
Ser Lys
Pro Val
Ile Leu
Ala Gln
550 Phe Tyr 565 Gly Ala
Val Ile
Leu Tyr
Glu Leu
630
Glu Ser 645
Ala Glu
Lys Ala
Lys Ser
Gln Ile
710 Met Asp 725
Leu Ser
Glu Asn
Asn Asp
Pro Tyr
790
Gly Ser 805
Leu Gly
Asn Ser
Ile Ser
360
Ala Phe
375
Trp Val
Phe Ser
Met Ala
Ser Leu
440 Val Tyr 455
Ile Gly
Tyr Phe
Phe Val
Pro Ala
520 Glu Gly 535 Gly Leu
Arg Asp
Tyr Gly
Gln Pro
600
Glu Trp
615
Met Asp
His Val
Ser Ala
Gln Leu
680
Tyr Lys
695
Pro Ala
Lys Phe
Met Tyr
Arg Lys
760
Asp Leu
775
Arg Leu
Gly Glu
Asn Arg
Leu Thr
840
345
Leu Ala
Leu Gly
Glu Pro
Lys Ser
410
Gln Val
425
Ile Asp
Asn Glu
Thr Pro
Ser Gln
490
Pro Asp
505
Val Gly
Ala Leu
Thr Thr
Gly Ser
570
Asn Val
585
Thr Glu
Ile Glu
Met Thr
Gln Ala
650
Gln Pro
665
Thr Ser
Asp Ile
Glu Val
Val Tyr
730
Ser Ser 745
Gly Trp
Ser His
Pro Gly
Val Thr
810
Leu Ala
825
Ala Arg
Asn Lys
Arg Leu
380
Thr Glu
395
Ser His
Val Glu
Leu Val
Asn Lys
460 Arg Ala 475
Glu Glu
Pro Thr
Gly Asn
Arg Glu
540
Ile Met
555
Phe Ile
Leu Ile
Phe Ala
Lys Ala
620 Arg Gly 635
Met Glu
Glu Gln
Asp Thr
Asp Leu
700 Asp Lys 715
Arg Ser
Arg Thr
Tyr Thr
Tyr Ser
780
Thr Thr 795
Leu Ala
Thr Ile
Lys Ala
350 Arg Tyr 365
Asp Ala
Gln Ser
Leu Thr
Asn Pro
430 Arg Lys 445
Ser Ile
Val Val
Ile Leu
Thr Ile
510
Gln Thr 525
Asp Ala
Lys Phe
Asp His
Glu Gly
590
Leu Lys
605
Phe Met
Arg Ser
Ile Leu
Lys Thr
670
Phe Tyr
685
Val Asn
Asp Tyr
Ala Gln
Gln Asn
750
Ala Asp 765
Asn His
Thr Thr
Ser Asp
Ala Met
830 Trp Ile 845
Gln Ser
Gly Val
Lys Thr
400
Thr Val
415
Asp Ser
Gly Met
Asp Gly
Asn Thr
480
Thr Tyr
495
Arg Lys
Asp Leu
Asp Arg
Val Asp
560
Thr Asn
575
Phe Ser
Glu Glu
Pro Ile
Ile Ser
640 Arg Ser 655 Lys Leu
Asp Ser
Lys Leu
Ile Ala
720
Glu Gly
735
Tyr Glu
Gly Met
Tyr Trp
Lys Asp
800
Phe Val 815
Asp Phe
Val Leu
- 212 031986
Gly Asn Lys 850 Ile Val Phe Leu 855 Gly Thr Asp Ile Gln 860 His Gln Ser Ala
Gln Gly Ala Glu Thr Thr Ile Glu Asn Arg Lys Leu Leu Thr Gly Glu
865 870 875 880
Lys Tyr Ser Tyr Tyr Ile Asn Gly Gln Pro Val Asp Leu Ser Lys Glu
885 890 895
Val Val Thr Asp Lys Thr Gln Ser Phe Tyr Met Thr Asn Gly Lys Asp
900 905 910
Asn Gln Ser Ile Gly Tyr Val Phe Leu Asn Gln Leu Pro Thr His Ala
915 920 925
Lys Leu Asp Gln Arg Thr Gly Lys Trp Ser Asp Ile Asn Tyr Asn Gln
930 935 940
Ser Lys Glu Glu Val Ser Asn Ser Phe Val Ser Leu Trp His Glu His
945 950 955 960
Ala Gln Thr Ser Ser Asn Tyr Ala Tyr Val Leu Val Pro Asn Gln Ser
965 970 975
Met Glu Lys Val Asn Gln Ala Ala Ala Ser Val Lys Leu Leu His Gln
980 985 990
Asp Arg Asp Leu Gln Val Val Tyr Asp Gln Glu Gln Asn Val Trp Gly
995 1000 1005
Val Val Lys Tyr Thr Asp Thr Ala Tyr Lys Leu Thr Asp Asp Ile Thr
1010 1015 1020
Leu Thr Asp Ala Gly Leu Tyr Thr Ile Gln Lys Val Glu Gly Gly Tyr
1025 1030 1035 1040
Arg Ile Ala Phe Tyr Asn Pro Ser Thr Arg Thr Val Lys Asn Gly Ile
1045 1050 1055
Glu Leu Thr Lys Ala Gly Ser Ser Leu Thr Val Glu Met Glu Pro Thr
1060 1065 1070
Ala Ala Tyr Pro Ser Thr Val Trp Lys Val Thr Met Pro Glu Gly Ser
1075 1080 1085
Asp Lys Gln Thr Gly Ser Val Glu Lys Thr Glu Lys Glu Glu Lys Gln
1090 1095 1100
Leu Lys Glu Asn Gln Pro Ser Ser Glu Val Lys Gln Val Val His His
1105 1110 1115 1120
Ala Ala Glu Lys Thr Lys Pro Ser Lys Pro Arg Leu Pro Gln Thr Gly
1125 1130 1135
Glu Glu Ala Ser Leu Gly Leu Gly Phe Leu Gly Leu Leu Thr Leu Gly
1140 1145 1150
Ala Val Val Asp Phe Lys Cys Arg Arg Ser His Ser
1155 1160
<210> 96 <211> 802 <212> БЕЛОК <213> Vibrio fischeri (штамм ATCC 700601 / ES114) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 96
Met Tyr Met Ile
Leu Phe Leu Phe
Pro Gln Tyr Leu
Glu Asn Tyr Leu
Asn Met Val Thr
Met Thr Pro Gln
Lys Lys His Arg
Thr Gly Asn Ala
Pro Ser Asp Phe
Gly Asp Pro Ala
Ser Thr Asn Ser
Pro Asn Ala Ser
Leu Asn Thr Ile
Tyr Ala Ala Lys
Glu Gln Val Arg
Ile Thr Phe Asp
Ser Ala Gln Lys
Gly Ile Trp Asp
Ala Leu Ser Met
Asn Thr Gln Thr
Glu Asn Trp Ala
Gln Thr Leu Lys
His Trp Asp Ser
Asp Leu Pro Leu
- 213 031986
Ile Asp
Arg Leu
Glu Asn
130
Ile Asn
145
Trp Gln
Leu Leu
His Leu
Val Ser
210
Thr Gly
225
Met Leu
Pro Ala
Gly Ser
Asn Val
290
Ser Pro
305
Ile Asn
Met Val
Val Gly
Asp Ser
370
Thr Asp
385
Thr Tyr
Lys Asp
Val His
Arg Ile
450
Phe Thr
465
Tyr Thr
Thr Val
Gly Asn
Asn Tyr
530
Ser Ala
545
Gly Ser
Glu Asn
Glu Gln
Lys Asp
100
Phe Thr
115
Asn Gln
Gln Asn
Trp Glu
Phe Asp
180
Asn Ala
195
Pro Gly
Gly Asn
Glu Asn
Val Ile
260
Phe Leu
275
Leu Leu
Trp Ser
Gln Ser
Asn Gly
340
Leu Asn
355
Asp Lys
Asp Thr
Gln Ala
Pro Leu
420
Arg Arg
435
Gly Asn
Gly Asp
Gly Tyr
Asp Ser
500
Val Asn
515
Gly Ile
Tyr Lys
Asn Ile
Arg Lys
580
Ala Ala
Thr Thr
Met Ala
Leu Met
Phe Tyr
150
Leu Ala 165
Asp Ile
Thr Arg
Ala Ala
Arg Thr
230
Asn Ser 245
Glu Tyr
Gln His
Gly Gly
Met Asp
310
Tyr Glu
325
Arg Ser
Ile Val
Asn Lys
Tyr Gln
390
Ala Gln 405
Ile Gly
Thr Asp
Tyr Glu
Gly Met
470 Trp Pro 485
Gln Ile
Thr Asn
Ala Gly
Ser Trp
550 Lys Asp 565
Arg Leu
Leu Pro
Leu Gly
Lys Ala
120
Leu Asn
135
Phe Val
Ile Pro
Lys Asp
Tyr Phe
200
Glu Ser 215
Asp Asn
Glu Glu
Val Ser
Ser Asp
280
Leu Gly
295
Asn Gln
Pro Leu
Ile Ser
Asn Ser
360
Gln Leu 375
Asn Phe
His Ile
Asn Phe
Trp Ala
440
Cys Met
455
Ile Tyr
Thr Val
Met Ala
Met Gln
520
Met Gln
535
Phe Met
Gln Ser
Ala Glu
Tyr Gln
Pro Asn
105
Tyr Arg
Asp Ile
Asn Gln
Lys Asp
170 Asn Tyr 185
Thr Pro
Thr Asn
Ala Gln
Ile Ser
250
Glu Gly
265
Ile Ala
Ile Gln
Thr Ile
Leu Tyr
330
Arg Ser 345
Met Leu
Ser Ser
Phe Asp
Val Asn
410 Ser Tyr 425
Phe Ala
Asn Gly
Leu Tyr
Asn Ala
490
Asp Cys 505
Trp Val
Phe Tyr
Phe Asp
Asn Ala
570
Thr Lys
585
Gly Ala
Ile Arg
Leu Arg
Met Thr
140
Leu Glu
155
Ile His
Gln Thr
Asp Pro
Pro Asn
220
Val Val
235
Gln Ala
Asp Gly
Tyr Asn
Met Asn
300
Ser Asn
315
Lys Gly
Ala Glu
Phe Tyr
Leu Ile
380
Lys Ile
395
Asp Pro
Pro Ser
Leu Ala
Glu Asn
460
Asn Asp
475
Ser Arg
Ser Gly
Gly Ser
Asn Trp
540
Asn Glu
555
Asn Asn
Leu Phe
Pro Ala
Asn Ser
110 Asp Gly 125
Ala Met
Tyr Gly
Asn Ile
Ile Ile
190
Thr His
205
Tyr Arg
Leu Ile
Ile Ala
Tyr Tyr
270
Gly Thr
285
Ala Val
Val Tyr
Ala Met
Gln Asn
350
Thr Asn
365
Lys Thr
Tyr Tyr
Thr Val
Met Asp
430
Met His
445
Leu Lys
Gln Leu
Met Pro
Glu Arg
510
Thr Ser
525
Ser Asp
Val Val
Ile Thr
Ile Asp
590 Thr Phe
Tyr Gln
Asn Leu
Asn Tyr
Asn Trp
160
Leu Val
175
Thr Asn
Leu Gly
Glu Ser
Arg Gly
240
Ala Leu 255
Thr Asp
Tyr Gly
Ala Gly
Asn Ile
320
Met Asp
335
His Asp
Gly Pro
Gln Ile
Val Ser
400
Ser Leu
415
Arg Ile
Ser Tyr
Gly Trp
Asp His
480
Gly Thr
495
Val Gly
Leu Asn
Thr Leu
Met Leu
560
Thr Ile
575
Gly Thr
Ser Ile
- 214 031986
595 600 605
Arg Asn Lys Thr Leu Ala Asn Ser Asp Leu Ser Tyr Val Met
610 615 620
Pro Lys Thr Ile Ser Ile Ser Gln Asn Asp Val Asp Gly Asn
625 630 635
Asp Ile Gly Asn Ser Lys Gly Asp Val Ser Asp Ser Tyr Leu
645 650
Thr Leu Thr Gln Val Asp Gln Ala Asp Tyr Gln Tyr Ala Leu
660 665 670
Asn Gln Asn Asn Asp Thr Val Gln Asn Tyr Ala Gln His Pro
675 680 685
Thr Val Leu Arg Gln Asp Glu Gln Ala His Ala Val Gln Glu
690 695 700
Leu Asn Ile Ile Ala Ala Asn Asn Trp Lys Asn Asn Pro Val
705 710 715
Thr Asp Thr Ile Thr Leu Asn Ser Met Met Gly Phe Met Ile
725 730
Glu Ser Ser Asn Thr Phe Thr Val Ala Val Ser Glu Pro Ile
740 745 750
Ile Asp Ser Val Asn Phe Thr Phe Asp Lys Gln Gly Ile Val
755 760 765
Glu Asp Ile Glu Asn Arg Val Val Leu Asn Gly Thr Thr Leu
770 775 780
Asn Thr Ser Gly Leu Gln Gly Gln Ser Tyr Ser Phe Gln Val
785 790 795
Gln Asp
Leu Thr
Trp Ser
640
Gln Ala
655
Leu Pro
Asp Val
Asn Thr
Asn Ile
720
Lys Glu
735
Gln Thr
Ile Lys
Thr Ile
Thr Ile
800 <210> 97 <211> 517 <212> БЕЛОК <213> Synechococcus sp. (штамм RCC307) <220>
<223> гиалуронан лиаза <400> 97
Met Gly Ala Pro Ala Ile Pro Lys Val Pro Arg Ser Pro Ser Lys Ser
1 5 10 15
Glu His Thr Thr Arg Pro Asn Ser Gly Glu Ser Glu Val Val Arg Gln
20 25 30
Ala Glu Glu Leu Phe Glu Gln Thr Leu Val Asn Val Arg Gly Gln Leu
35 40 45
Ala Gly Ala Val Ala Ala Leu Glu Ser Ser Val His Asp Ser Glu Leu
50 55 60
Asn Tyr Gly Glu Ile Phe Leu Arg Asp Asn Val Pro Val Met Val Tyr
65 70 75 80
Leu Leu Leu Arg Gly Arg Phe Glu Ile Val Arg His Phe Leu Asp Leu
85 90 95
Cys Leu Glu Leu Gln Ser Arg Ser Tyr Arg Thr Arg Gly Val Phe Pro
100 105 110
Thr Ser Phe Val Glu Glu Asp Asp Lys Ile Leu Ala Asp Tyr Gly Gln
115 120 125
Arg Ser Ile Gly Arg Ile Thr Ser Val Asp Ala Ser Leu Trp Trp Pro
130 135 140
Val Leu Cys Trp Met Tyr Val Arg Ala Ser Gly Asp Thr Ser Tyr Gly
145 150 155 160
Thr Ser Pro Lys Val Gln Arg Ala Val Gln Leu Leu Leu Asp Leu Val
165 170 175
Leu Gln Pro Ser Phe Tyr Glu Pro Pro Val Leu Phe Val Pro Asp Cys
180 185 190
Ala Phe Met Ile Asp Arg Pro Met Asp Val Trp Gly Ala Pro Leu Glu
- 215 031986
Val Glu
210
Ser Leu
225
Leu Glu
Asn His
Pro Thr
Gln Pro
290
Gly Gly
305
Phe Tyr
Gly Pro
His Leu
Gln Asp
370
Trp Ser
385
Ala Ala
Leu Leu
Gln Leu
Pro Thr
450
Thr Ile
465
Gln Asp
Ser Phe
Phe Leu
195
Val Leu
Val Glu
Leu Thr
Tyr Trp
260
Glu Gln
275
Glu Val
Tyr Leu
Ser Leu
Gln Gln
340
Met Ala
355
Glu Trp
Tyr His
Ala Val
Leu Gly
420
Asn Gln
435
Gly Thr
Val Gly
Val Lys
Gln Asp
500
Lys Asn
515
Leu Phe
Gly Gly
230
Arg Thr 245
Val Thr
Tyr Gly
Ile Pro
Ile Gly
310 Gly Asn 325
Leu Ala
Glu Met
Ile Thr
Asn Gly
390
Leu Met 405
Gln Thr
Leu Pro
Trp Val
Phe Leu
470
Leu Leu 485
Gln His
Tyr
200 Gly Cys 215
Gly His
Trp Met
Ser Lys
Asp Tyr
280
His Trp
295
Asn Met
Ala Leu
Leu Phe
Pro Met
360
Asn Thr
375
Gly His
His Gln
Arg Thr
Arg Gln
440
Gly Gln
455
Leu Leu
Asp Leu
Glu Lys
Leu Lys
Gly Gly
Arg Asp
250
Thr Met
265
Gln Ser
Leu Gln
Arg Thr
Gly Ser
330
Arg Leu
345
Arg Ile
Gly Met
Trp Pro
Arg Leu
410
Met Leu
425
Gln Trp
Gln Ala
His His
Asp Asp
490
Ser Ser
505
Ser Cys
220
Pro Leu
235
Leu Arg
Gln Val
Arg Asn
Glu Trp
300
Gly Arg
315
Leu Phe
Val Ile
Cys His
Asp Pro
380
Ser Leu 395
Tyr Pro
Glu Glu
Ala Glu
Arg Ile
460
Leu Met 475
Val Gly
Thr Asp
205
Cys Gln
Ile Gln
Val Tyr
Leu Arg
270
Glu Phe
285
Leu Asp
Pro Asp
Gly Leu
His Asn
350
Pro Pro
365
Lys Asn
Leu Trp
Asn Asp
Cys Tyr
430 Tyr Phe 445
Asn Gln
Arg Lys
Pro Leu
Glu Arg
510
Leu Met
Gln Arg
240
Leu Leu
255
Arg Arg
Asn Val
Asp Arg
Phe Arg
320
Leu Thr
335
Arg Gln
Met Asp
Trp Pro
Pro Met
400
Asp Leu
415
Trp Gln
Asp Gly
Thr Trp
Ala Pro
480
Arg Leu
495
Lys Ser <210> 98 <211> 1021 <212> БЕЛОК <213> Proteus vulgaris <220>
<223> хондроитин-сульфат-ABC эндолиаза <400> 98
Met 1 Pro Ile Phe Arg 5 Phe Thr Ala Leu Ala 10 Met Thr Leu Gly Leu 15 Leu
Ser Ala Pro Tyr Asn Ala Met Ala Ala Thr Ser Asn Pro Ala Phe Asp
20 25 30
Pro Lys Asn Leu Met Gln Ser Glu Ile Tyr His Phe Ala Gln Asn Asn
35 40 45
Pro Leu Ala Asp Phe Ser Ser Asp Lys Asn Ser Ile Leu Thr Leu Ser
50 55 60
Asp Lys Arg Ser Ile Met Gly Asn Gln Ser Leu Leu Trp Lys Trp Lys
65 70 75 80
Gly Gly Ser Ser Phe Thr Leu His Lys Lys Leu Ile Val Pro Thr Asp
- 216 031986
Lys Glu
Phe Trp
Phe Gly
130 Val Lys 145
Asn Asp
Ser Asp
Asp Ser
Tyr Ile
210
Ser Asp
225
His Asn
Ile Asp
Lys Glu
Asp Phe
290
Gly Arg 305
Asn Leu
Gly Asn
Glu Lys
Met Thr
370
Val Thr 385
Thr Leu
Val Tyr
Asp Met
Leu Ser
450
Lys Arg 465
Leu Thr
Thr Ala
Phe Lys
Ser Val
530 Ala Trp 545
His Pro
Trp Leu
Ala Ser
100
Leu Tyr 115
Glu Lys
Leu Asp
Leu Glu
Gly Thr
180 Ile Arg 195
Asp Arg
Tyr Gln
Val Lys
Leu Ile
260
Thr Asn 275
Asp Ala
His Leu
Asn Ser
Tyr Thr
340 Asp Pro 355
Lys His
Thr His
Leu Met
Asp Ser
420
Lys Val
435
Arg Gln
Ile Asn
Gln Val
Trp Arg
500
Asn Ala 515
Gly Glu
Ile Tyr
Phe Asn
Ala Met
580
Lys Ala
Asn Glu
Leu Ile
Phe Thr
150 Asn Arg 165
Gln Asp
Phe Lys
Ile Met
Val Lys
230
Pro Gln 245
Arg Gln
Leu Ala
Leu Asn
Ile Thr
310 Gln Asp 325
Thr Leu
Thr Gln
Leu Leu
His Trp
390
Ser Asp
405
Leu Leu
Ser Ala
His Leu
Leu Val
470
Pro Pro
485
His Glu
Ser Gln
Ser Gly
Ser Asn
550
Ser Pro
565
Ser Ala
Trp Gly
Lys Pro
120
Ser Thr 135
Gly Trp
Glu Met
Ser Ile
Ala Pro
200
Phe Ser
215
Thr Arg
Leu Pro
Arg Leu
Leu Glu
280
Ile His
295
Asp Lys
Lys Gln
Met Phe
Lys Ala
360
Asp Gln
375
Gly Tyr
Ala Leu
Trp Tyr
Asp Ser
440
Ala Leu
455
Asn Thr
Gly Gly
Gly Asn
Leu Ile
520 Trp Asn 535
Pro Glu
Ser Leu
Lys Ser
Arg Ser 105
Ile Asp
Ser Glu
Arg Ala
Thr Leu
170
Gly Arg 185
Ser Asn
Val Asp
Leu Ser
Val Thr
250
Ile Asn
265
Glu Asn
Thr Leu
Gln Ile
Leu Phe
330
Asn Ile
345
Gln Leu
Gly Phe
Ser Ser
Lys Glu
410 Ser Arg 425
Ser Asp
Leu Leu
Phe Ser
Lys Asp
490 Tyr Pro 505
Tyr Leu
Asn Leu
Val Gly
Lys Ser
570
Ser Pro
585
Ser Thr
Gly Tyr
Ala Gln
140
Val Gly
155
Asn Ala
Ser Leu
Val Ser
Asp Ala
220
Glu Pro
235
Pro Glu
Glu Phe
Ile Ser
Ala Asn
300
Ile Ile
315
Asp Asn
Ser Arg
Lys Gln
Val Lys
380
Arg Trp
395
Ala Asn
Glu Phe
Leu Asp
Leu Glu
460
His Tyr
475
Gly Leu
Gly Tyr
Leu Arg
Lys Lys
540
Leu Pro
555
Val Ala
Asp Lys
Pro Val
110
Leu Thr 125
Ala Gly
Val Ser
Thr Asn
Gly Ala
190
Gln Gly
205
Arg Tyr
Glu Ile
Asn Leu
Val Gly
270
Lys Leu 285
Gly Gly
Tyr Gln
Tyr Val
Ala Tyr
350
Met Tyr 365
Gly Ser
Trp Tyr
Leu Gln
Lys Ser
430
Tyr Phe
445
Pro Asp
Ile Thr
Arg Pro
Ser Phe
510
Asp Thr 525
Ala Met
Leu Ala
Gln Gly
Thr Leu
590
Phe Ser
Ile Asp
Phe Lys
Leu Asn
160
Thr Ser 175
Lys Val
Glu Ile
Gln Trp
Gln Phe
240
Ala Ala 255
Gly Glu
Lys Ser
Thr Gln
Pro Glu
320
Ile Leu 335
Val Leu
Leu Leu
Ala Leu
Ile Ser
400
Thr Gln
415
Ser Phe
Asn Thr
Asp Gln
Gly Ala
480 Asp Gly 495
Pro Ala
Pro Phe
Val Ser
Gly Arg
560
Tyr Tyr
575
Ala Ser
- 217 031986
Ile Tyr Leu Ala 595 Ile Ser Asp Lys 600 Thr Gln Asn Glu Ser 605 Thr Ala
Phe Gly Glu Thr Ile Thr Pro Ala Ser Leu Pro Gln Gly Phe Tyr
610 615 620
Phe Asn Gly Gly Ala Phe Gly Ile His Arg Trp Gln Asp Lys Met
625 630 635
Thr Leu Lys Ala Tyr Asn Thr Asn Val Trp Ser Ser Glu Ile Tyr
645 650 655
Lys Asp Asn Arg Tyr Gly Arg Tyr Gln Ser His Gly Val Ala Gln
660 665 670
Val Ser Asn Gly Ser Gln Leu Ser Gln Gly Tyr Gln Gln Glu Gly
675 680 685
Asp Trp Asn Arg Met Glu Gly Ala Thr Thr Ile His Leu Pro Leu
690 695 700
Asp Leu Asp Ser Pro Lys Pro His Thr Leu Met Gln Arg Gly Glu
705 710 715
Gly Phe Ser Gly Thr Ser Ser Leu Glu Gly Gln Tyr Gly Met Met
725 730 735
Phe Asn Leu Ile Tyr Pro Ala Asn Leu Glu Arg Phe Asp Pro Asn
740 745 750
Thr Ala Lys Lys Ser Val Leu Ala Ala Asp Asn His Leu Ile Phe
755 760 765
Gly Ser Asn Ile Asn Ser Ser Asp Lys Asn Lys Asn Val Glu Thr
770 775 780
Leu Phe Gln His Ala Ile Thr Pro Thr Leu Asn Thr Leu Trp Ile
785 790 795
Gly Gln Lys Ile Glu Asn Met Pro Tyr Gln Thr Thr Leu Gln Gln
805 810 815
Asp Trp Leu Ile Asp Ser Asn Gly Asn Gly Tyr Leu Ile Thr Gln
820 825 830
Glu Lys Val Asn Val Ser Arg Gln His Gln Val Ser Ala Glu Asn
835 840 845
Asn Arg Gln Pro Thr Glu Gly Asn Phe Ser Ser Ala Trp Ile Asp
850 855 860
Ser Thr Arg Pro Lys Asp Ala Ser Tyr Glu Tyr Met Val Phe Leu
865 870 875
Ala Thr Pro Glu Lys Met Gly Glu Met Ala Gln Lys Phe Arg Glu
885 890 895
Asn Gly Leu Tyr Gln Val Leu Arg Lys Asp Lys Asp Val His Ile
900 905 910
Leu Asp Lys Leu Ser Asn Val Thr Gly Tyr Ala Phe Tyr Gln Pro
915 920 925
Ser Ile Glu Asp Lys Trp Ile Lys Lys Val Asn Lys Pro Ala Ile
930 935 940
Met Thr His Arg Gln Lys Asp Thr Leu Ile Val Ser Ala Val Thr
945 950 955
Asp Leu Asn Met Thr Arg Gln Lys Ala Ala Thr Pro Val Thr Ile
965 970 975
Val Thr Ile Asn Gly Lys Trp Gln Ser Ala Asp Lys Asn Ser Glu
980 985 990
Lys Tyr Gln Val Ser Gly Asp Asn Thr Glu Leu Thr Phe Thr Ser
995 1000 1005
Phe Gly Ile Pro Gln Glu Ile Lys Leu Ser Pro Leu Pro
1010 1015 1020
Ile
Ala
Val
640
Asn
Ile
Trp
Lys
Arg
720
Ala
Phe
Ile
Thr
Asn
800
Gly
Ala
Lys
His
Asp
880
Asn
Ile
Ala
Val
Pro
960
Asn
Val
Tyr
<210> 99
<211> 684
<212> БЕЛОК
<213> Pedobacter heparinus
<220>
<223> хондроитин AC лиаза
- 218 031986 <400> 99
Pro Ala Leu Leu
Lys Arg Val Met
Val Ala Glu Lys
Asp Val Pro Tyr
His Leu Leu Gln
Ser His Tyr Tyr
Phe Lys Tyr Trp
100 Asn Glu Ile Ala
115
Arg Tyr Gly Lys
130
Glu Arg Met Lys
145
Thr Asp Ile Ala
Glu Ala Leu Leu
180
Phe Val His Tyr
195
His Gly Pro Gln
210
Gly Val Leu Lys
225
Ser Thr Glu Lys
Leu Lys Ala Ile
260
Gly Val Ser Arg
275
Leu Leu Val Ala
290
Asp Ala Ile Ala
305
Glu Pro Tyr His
Arg Pro Ala Tyr
340
Arg Ser Glu Ser
355
Asp Gly Ala Thr
370
Met Pro Val Trp
385
Tyr Leu Thr Asp
Asn Asp Phe Ala
420
Tyr Ala Leu Asp
435
Phe Asp Lys Glu
450
Pro Glu Asn Ile
465
Val Ile Ser Thr
Ile Ala Gln Gln
Leu Asp Leu Lys
Asn Leu Asn Thr
Lys Asp Asp Ala
Leu Glu Thr Ile
Gly Asp Asp Lys
Tyr Asp Ser Asp
Thr Pro Gln Ala
120
Lys Pro Leu Asp
135
Arg Gly Glu Pro
150
Leu His Tyr Phe
165
Ser Phe Ala Val
Glu Glu Gly Leu
200
Leu Gln Ile Ser
215
Leu Ala Asn Tyr
230
Leu Ala Ile Phe
245
Arg Gly Ser Tyr
Pro Asp Ile Leu
280
Lys Met Ile Asp
295
Arg Thr Asp Ser
310
His Gln Phe Trp
325
Ser Phe Asn Val
Gly Asn Lys Glu
360
Asn Ile Gln Leu
375
Glu Trp Asp Lys
390
Arg Pro Leu Thr
405
Gly Gly Val Ser
Tyr Asp Ser Leu
440
Ile Val Cys Leu
455
Thr Thr Thr Leu
470
Ala Gly Lys Thr
Thr Gly Thr Ala
Lys Pro Leu Arg
Leu Gln Pro Asp
Met Thr Asn Trp
Ile Gln Ala Tyr
Val Phe Asp Gln
Pro Lys Ser Arg
105
Leu Gly Glu Met
Glu Ala Leu Val
140
Glu Lys Lys Thr
155
Tyr Arg Ala Leu
170
Lys Glu Leu Phe
185
Gln Tyr Asp Tyr
Ser Tyr Gly Ala
220
Val Arg Asp Thr
235
Ser Lys Tyr Tyr
250
Met Asp Phe Asn
265
Asn Lys Lys Ala
Leu Lys His Thr
300
Thr Val Ala Ala
315
Asn Gly Asp Tyr
330
Arg Met Val Ser
345
Asn Leu Leu Gly
Arg Gly Pro Glu
380
Ile Pro Gly Ile
395
Lys Leu Trp Gly
410
Asp Gly Val Tyr
425
Gln Ala Lys Lys
Gly Ala Gly Ile
460
Asn Gln Ser Trp
475
Gly Arg Gly Lys
Glu Leu Ile Met
Asn Met Asp Lys
Gly Ser Trp Lys
Leu Pro Asn Asn
Ile Glu Lys Asp
Ile Ser Lys Ala
Asn Trp Trp His
110
Leu Ile Leu Met
125
His Lys Leu Thr
Gly Ala Asn Lys
160
Leu Thr Ser Asp
175
Tyr Pro Val Gln
190
Ser Tyr Leu Gln
205
Val Phe Ile Thr
Pro Tyr Ala Leu
240
Arg Asp Ser Tyr
255
Val Glu Gly Arg
270
Glu Lys Lys Arg
285
Glu Glu Trp Ala
Gly Tyr Lys Ile
320
Val Gln His Leu
335
Lys Arg Thr Arg
350
Arg Tyr Leu Ser
365
Tyr Tyr Asn Ile
Thr Ser Arg Asp
400
Glu Gln Gly Ser
415
Gly Ala Ser Ala
430
Ala Trp Phe Phe
445
Asn Ser Asn Ala
Leu Asn Gly Pro
480
Ile Thr Thr Phe
- 219 031986
485 490 495
Lys Ala Gln Gly Gln Phe Trp Leu Leu His Asp Ala Ile Gly Tyr Tyr
500 505 510
Phe Pro Glu Gly Ala Asn Leu Ser Leu Ser Thr Gln Ser Gln Lys Gly
515 520 525
Asn Trp Phe His Ile Asn Asn Ser His Ser Lys Asp Glu Val Ser Gly
530 535 540
Asp Val Phe Lys Leu Trp Ile Asn His Gly Ala Arg Pro Glu Asn Ala
545 550 555 560
Gln Tyr Ala Tyr Ile Val Leu Pro Gly Ile Asn Lys Pro Glu Glu Ile
565 570 575
Lys Lys Tyr Asn Gly Thr Ala Pro Lys Val Leu Ala Asn Thr Asn Gln
580 585 590
Leu Gln Ala Val Tyr His Gln Gln Leu Asp Met Val Gln Ala Ile Phe
595 600 605
Tyr Thr Ala Gly Lys Leu Ser Val Ala Gly Ile Glu Ile Glu Thr Asp
610 615 620
Lys Pro Cys Ala Val Leu Ile Lys His Ile Asn Gly Lys Gln Val Ile
625 630 635 640
Trp Ala Ala Asp Pro Leu Gln Lys Glu Lys Thr Ala Val Leu Ser Ile
645 650 655
Arg Asp Leu Lys Thr Gly Lys Thr Asn Arg Val Lys Ile Asp Phe Pro
660 665 670
Gln Gln Glu Phe Ala Gly Ala Thr Val Glu Leu Lys
675 680
<210> 100 <211> 844 <212> БЕЛОК <213> Victivallis vadensis ATCC BAA-548 <220>
<223> хондроитин AC лиаза <400> 100
Met His Arg Lys Ile Val Phe Pro Leu Phe Val Leu Leu Phe Thr Ala
1 5 10 15
Phe Ala Ala Phe Ala Ala Ser Gln Pro Gln Trp Lys Trp Arg Gln Ser
20 25 30
Lys Tyr Cys Arg Ile Thr Glu His Ala Gly Lys Lys Leu Leu Thr Val
35 40 45
Ala Ile Pro Ala Asp Ala Pro Glu Ile Ser Arg Arg Asn Thr Ala Asp
50 55 60
Thr Pro Val Gly Leu Thr Cys Phe Glu Gly Gln Pro Ile Glu Phe Ser
65 70 75 80
Ile Arg Leu Arg Asn Ser Gly Ile Ser Arg Pro Asp Asn Leu His Asn
85 90 95
Gly Ile Lys Phe Gln Leu Tyr Phe Arg Asp Gly Asn Gly Thr Glu Arg
100 105 110
Trp Thr Gln Ala Glu Ile Pro His Glu Pro Phe Pro Trp Arg Arg Phe
115 120 125
Arg Phe Ser Glu Arg Ile Pro Ala Asp Ala Thr Ser Gly Thr Leu Arg
130 135 140
Leu Gly Leu Gln Gly Ser Ser Gly Asn Val Glu Phe Asp Leu Asp Ser
145 150 155 160
Leu Gln Ile Arg Pro Leu Asp Pro Glu Leu Ser Pro Val Pro Pro Thr
165 170 175
Pro Glu Gln Ile Arg Glu Cys Glu Leu Ile Glu Ser Arg Leu Arg Ala
180 185 190
Gly Leu Pro Ala Gln Gln Pro Pro Pro Gly Pro Glu Val Lys Lys Leu
195 200 205
Leu Glu Arg Gln Asn Gly Asp Gly Thr Phe Arg Asp Leu Asp Tyr Ser
- 220 031986
210
Ala Arg Asn Arg Ser
225
Phe Glu Leu Ala Leu
245
Asp Pro Ala Ala Gly
260
Glu Arg Gln Pro Gln
275
Pro Lys Ile Leu Gly
290
Asp Gly Pro Arg Arg
305
Phe Leu Ser Arg Tyr
325
Ile Phe Cys Arg Ala
340
Ala Ala Ala Val Leu
355
Lys Thr Ala Trp Ser
370
Gln His Gly Pro Gln
385
Ala Asn Ile Ala Tyr
405
Leu Ser Pro Glu Gln
420
Phe Gln Trp Val Leu
435
Arg Gln Leu Gly Arg
450
Asn Ala Phe Ala Gln
465
Tyr Asp Ala Ala Leu
485
Gly Asn Arg His Phe
500
Thr Trp Tyr Ala Ser
515
Glu Asp Asp Thr Asn
530
Gly Ala Cys Leu Val
545
Ala Cys Trp Asp Trp
565
Pro Val Tyr Thr Gly
580
Gly Gly Asp Leu Pro
595
Gly Glu Thr Gly Phe
610
Ala Val Tyr Thr Gln
625
Phe Phe Asp Arg Asp
645
Thr Ser Pro Tyr Glu
660
Gly Glu Ile Gln Gln
675
Tyr Arg Gly Glu Asn
690
Trp Arg Tyr Val Glu
705
215
Ile Trp Pro Ala Ala
230
Ala Arg Ala Thr Pro
250
Glu Ala Val Arg Lys
265
Asn Gly Asn Trp Trp
280
Asn Ile Leu Leu Leu
295
Arg Ala Ala Leu Asn
310
Thr Gly Asn Asn Arg
330
Leu Leu Glu Arg Asn
345
Ser Glu Glu Ile Arg
360
Phe Gly Gly Ile Arg
375
Ile Gln Phe Gly Asn
390
Trp Ser Asn Ile Leu
410
Trp Arg Ile Met Arg
425
Trp Arg Gly Arg Met
440
Asn Ala Ala Glu Thr
455
Leu Arg Asn Ala Asp
470
Arg Arg Asn Arg Asp
490
Trp Asn Ser Asp Tyr
505
Val Arg Met Asn Ser
520
Trp Asp Asn Ala Leu
535
Met Arg Ser Gly Arg
550
Thr Arg Leu Pro Gly
570
Glu Asp Ala Arg Arg
585
Arg Trp Thr His Ser
600
Val Gly Gly Val Thr
615
Asp Leu Asp Gly Val
630
Ala Ile Tyr Cys Leu
650
Val Ala Thr Thr Val
665
Gly Asp Gly Trp Phe
680
Leu Lys Leu Thr Ala
695
Gly Gly Leu Thr Arg
710
220
Arg His Leu Lys Arg
235
Gly His Ala Leu Tyr
255 Ala Val Ala Trp Trp
270
Trp Asn Asp Met Tyr
285
Ser Pro Glu Leu Phe
300
Val Cys Arg Gln Ala
315
Val Phe Ile Ala Ala
335
Leu Pro Val Met Asp
350
Phe Ala Pro Ala Glu
365
Ala Asp Gly Cys Tyr
380
Tyr Gly Gly Glu Phe
395
Lys Glu Thr His Trp
415
His Leu Thr Phe Asn
430
Asp Leu Leu Ala Cys
445
Lys Gly Glu Arg Thr
460
Pro Gly Asp Arg Ala
475
Gly Glu Asn Thr Leu
495 Met Val His Arg Arg
510
Val Arg Val Arg Pro
525
Gly Arg Tyr Phe Ser
540
Glu Tyr Glu Asn Ile
555
Thr Thr Leu Pro Lys
575 Phe Gly Leu Lys Ile
590
Arg Asn Trp Arg Gln
605
Asp Gly Glu Arg Gly
620
Arg Ala Arg Lys Ala
635
Gly Ser Gly Ile Thr
655
Asn Ser Cys Leu Arg
670
Arg His Asp Gly Ile
685
Gly Pro Arg Thr Gly
700
Pro Val Pro Glu Thr
715
Thr
240
Arg
Ala
Val
Pro
Cys
320
Asn
Arg
His
His
Leu
400
Glu
Gly
Gly
Leu
Pro
480
Thr
Pro
Ile
Asp
Thr
560
Thr
Gly
Leu
Ala
Trp
640
Ser
Asn
Gly
Asp
Lys
720
- 221 031986
Glu Leu
Ser Tyr
Gly Thr
Val Glu
770
Arg Leu
785
Lys Gly
Thr Leu
Glu Phe
Phe Thr
Ile Tyr
740
Pro Pro
755
Phe Ala
Asp Asp
Thr Val
Lys Leu
820
Ala Gly
835
Leu Thr
725
Thr Ile
Gly Arg
Asp Gly
Phe Glu
790
His Ala
805
Asn Gly
Gln Ser
Val Glu
Leu Pro
Val Leu
760
Val Arg
775
Thr Asp
Ala Asp
Val Ser
Val Lys
840
His Gly
730
Gly Ala 745
Arg Asn
Ala Ala
Thr Pro
Pro Thr
810
Arg Lys
825
Ile Val
Val Lys
Thr Pro
Thr Pro
Ile Phe
780 Gly Val 795 Gly Arg
Val Pro
Leu Lys
Pro Arg
Glu Glu
750 Glu Cys 765 Tyr Glu
Phe Leu
His Ser
Leu Pro
830
Asn Ala
735
Thr Ala
Gln Ala
Pro Gly
Ile Gly
800
Ser Phe
815
Ala Gly <210> 101 <211> 510 <212> БЕЛОК <213> Pan troglodytes <220>
<223> PH20 шимпанзе <400> 101
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Val Thr Gly Gln Asp Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Gln Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
- 222 031986
Ser Lys 290 Ile Pro Asp Ala Lys 295 Ser Pro Leu Pro Val 300 Phe Val Tyr Thr
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Ser Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Asp
485 490 495
Leu Cys Asp Leu Tyr Leu Val Pro Thr Ser Tyr Leu Ile Leu
500 505 510
<210> 102 <211> 512 <212> БЕЛОК <213> Macaca mulatta <220>
<223> Предшественник PH20 макак-резус <400> 102
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Ile Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asn Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Thr Leu Met Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ile Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Leu Thr Thr Gly Val Thr Val His Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Val Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ser Lys
115 120 125
Gln Asp Ile Leu Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Pro Gln Ala Thr Asp Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
- 223 031986
Glu Lys Ala 195 Gly Lys Asp Phe Met 200 Leu Glu Thr Ile Lys 205 Leu Gly Arg
Ser Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Arg Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asp
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Val Val
260 265 270
Val Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Asn Pro Leu Pro Val Phe Val Tyr Ala
290 295 300
Arg Leu Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Arg Glu Glu
305 310 315 320
Leu Val Ser Thr Leu Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Ser Leu Ser Ile Thr Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Thr Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asp Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Asp Ile Arg Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val His Gly Lys Pro Thr Val Glu Asp Leu Glu Glu Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Thr Asn Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Ser Leu Lys Pro Pro Val Glu Thr Glu Gly Ser Pro Pro
465 470 475 480
Ile Phe Tyr Asn Thr Ser Ser Ser Thr Val Ser Thr Thr Met Phe Ile
485 490 495
Trp Arg Leu Glu Val Trp Asp Gln Gly Ile Ser Arg Ile Gly Phe Phe
500 505 510
<210> 103 <211> 505 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-505 <400> 103
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
- 224 031986
Gly Tyr
Gly Ile
Lys Asp
130
Ile Asp
145
Lys Asp
Val Gln
Glu Lys
Leu Leu
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
Phe Tyr
Ser Ile
Tyr Pro
100
Pro Gln
115
Ile Thr
Trp Glu
Val Tyr
Leu Ser
180
Ala Gly
195
Arg Pro
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Asn Ala
Leu Phe
500
Tyr Ile
Lys Ile
Phe Tyr
Glu Trp
150 Lys Asn 165
Leu Thr
Lys Asp
Asn His
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala
405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Ser Pro
485
Leu Ile
Asp Ser
Ser Leu
120
Met Pro
135
Arg Pro
Arg Ser
Glu Ala
Phe Leu
200 Leu Trp 215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440 Val Asp 455
Pro Pro
Ser Thr
Ile Ser
Ile Thr
105
Gln Asp
Val Asp
Thr Trp
Ile Glu
170
Thr Glu
185
Val Glu
Gly Tyr
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Leu Ser
490
Ser
505
Gly Val
His Leu
Asn Leu
140 Ala Arg 155
Leu Val
Lys Ala
Thr Ile
Tyr Leu
220 Asn Gly 235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu 315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380 Ser Asp 395 Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Ala Thr
Thr Val
110 Asp Lys 125
Gly Met
Asn Trp
Gln Gln
Lys Gln
190 Lys Leu 205
Phe Pro
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350
Tyr Ile 365
Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445
Asp Gly
Glu Pro
Met Phe
Asn Gly
Ala Lys
Ala Val
Lys Pro
160
Gln Asn
175
Glu Phe
Gly Lys
Asp Cys
Phe Asn
240
Glu Ser
255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320
Gly Ile
335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr
415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Gln Ile
480
Ile Val
495
<210> 104
<211> 503
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> PH20 предшественник 1-503
<400> 104
- 225 031986
Met Gly
Ser Ser
Cys Leu
Phe Leu
Asp Glu
Ile Asn
Gly Tyr
Gly Ile
Lys Asp
130
Ile Asp
145
Lys Asp
Val Gln
Glu Lys
Leu Leu
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
Phe Tyr
Ser Ile
Val Leu
Gly Val
Thr Leu
Trp Ala
Pro Leu
Ala Thr
Tyr Pro
100
Pro Gln
115
Ile Thr
Trp Glu
Val Tyr
Leu Ser
180
Ala Gly
195
Arg Pro
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Asn Ala
Leu Phe
Lys Phe
Ser Gln
Asn Phe
Trp Asn
Asp Met
Gly Gln
Tyr Ile
Lys Ile
Phe Tyr
Glu Trp
150 Lys Asn 165
Leu Thr
Lys Asp
Asn His
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala
405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Ser Pro
485
Leu Ile
Lys His
Ile Val
Arg Ala
Ala Pro
Ser Leu
Gly Val
Asp Ser
Ser Leu
120
Met Pro
135
Arg Pro
Arg Ser
Glu Ala
Phe Leu
200 Leu Trp 215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440
Val Asp
455
Pro Pro
Ser Thr
Ile
Ile Phe
Phe Thr
Pro Pro
Ser Glu
Phe Ser
Thr Ile
Ile Thr
105
Gln Asp
Val Asp
Thr Trp
Ile Glu
170
Thr Glu
185
Val Glu
Gly Tyr
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Leu Ser
490
Phe Arg
Phe Leu
Val Ile
Phe Cys
Phe Ile
Phe Tyr
Gly Val
His Leu
Asn Leu
140 Ala Arg 155
Leu Val
Lys Ala
Thr Ile
Tyr Leu
220 Asn Gly 235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu 315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380
Ser Asp 395
Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Ala Thr
Ser Phe
Leu Ile
Pro Asn
Leu Gly
Gly Ser
Val Asp
Thr Val
110 Asp Lys 125
Gly Met
Asn Trp
Gln Gln
Lys Gln
190
Lys Leu 205
Phe Pro
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350 Tyr Ile 365 Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445 Asp Gly
Glu Pro
Met Phe
Val Lys
Pro Cys
Val Pro
Lys Phe
Pro Arg
Arg Leu
Asn Gly
Ala Lys
Ala Val
Lys Pro
160
Gln Asn
175
Glu Phe
Gly Lys
Asp Cys
Phe Asn
240
Glu Ser
255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320
Gly Ile
335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr
415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Gln Ile
480
Ile Val
495
- 226 031986
500 <210> 105 <211> 501 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-501 <400> 105
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
- 227 031986
405 410
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe
420 425
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu
465 470 475
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met
485 490
Ser Ile Leu Phe Leu
500
415
Ser Glu Lys
430
Lys Ala Asp
Gly Val Cys
Pro Gln Ile
480
Phe Ile Val
495
<210> 106 <211> 499 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-499 <400> 106
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
- 228 031986
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val
485 490 495
Ser Ile Leu
<210> 107 <211> 497 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-497 <400> 107
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
- 229 031986
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
Phe Tyr
Ser
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Asn Ala
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala 405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Ser Pro
485
215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440 Val Asp 455
Pro Pro
Ser Thr
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Leu Ser
490
220 Asn Gly 235 Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu
315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380
Ser Asp
395
Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Ala Thr
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350
Tyr Ile 365
Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445
Asp Gly
Glu Pro
Met Phe
Phe Asn
240
Glu Ser 255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320 Gly Ile 335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr 415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Gln Ile
480
Ile Val
495 <210> 108 <211> 495 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-495 <400> 108
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
- 230 031986
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile
485 490 495
<210> 109 <211> 493 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-493 <400> 109
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
- 231 031986
Phe Leu
Asp Glu 65 Ile Asn
Gly Tyr
Gly Ile
Lys Asp
130
Ile Asp
145
Lys Asp
Val Gln
Glu Lys
Leu Leu
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
Phe Tyr
Trp Ala
Pro Leu
Ala Thr
Tyr Pro
100
Pro Gln
115
Ile Thr
Trp Glu
Val Tyr
Leu Ser
180
Ala Gly
195
Arg Pro
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Asn Ala
Trp Asn
Asp Met
Gly Gln
Tyr Ile
Lys Ile
Phe Tyr
Glu Trp
150 Lys Asn 165
Leu Thr
Lys Asp
Asn His
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala
405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Ser Pro
485
Ala Pro
Ser Leu
Gly Val
Asp Ser
Ser Leu
120
Met Pro
135
Arg Pro
Arg Ser
Glu Ala
Phe Leu
200 Leu Trp 215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440
Val Asp
455
Pro Pro
Ser Thr
Ser Glu
Phe Ser
Thr Ile
Ile Thr
105
Gln Asp
Val Asp
Thr Trp
Ile Glu
170
Thr Glu
185
Val Glu
Gly Tyr
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Leu Ser
490
Phe Cys
Phe Ile
Phe Tyr
Gly Val
His Leu
Asn Leu
140 Ala Arg 155
Leu Val
Lys Ala
Thr Ile
Tyr Leu
220 Asn Gly 235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu 315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380
Ser Asp 395
Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Ala Thr
Leu Gly
Gly Ser
Val Asp
Thr Val
110 Asp Lys 125
Gly Met
Asn Trp
Gln Gln
Lys Gln
190
Lys Leu 205
Phe Pro
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350 Tyr Ile 365 Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445 Asp Gly
Glu Pro
Met
Lys Phe
Pro Arg
Arg Leu
Asn Gly
Ala Lys
Ala Val
Lys Pro
160
Gln Asn
175
Glu Phe
Gly Lys
Asp Cys
Phe Asn
240
Glu Ser
255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320
Gly Ile
335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr
415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Gln Ile
480 <210> 110 <211> 491 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens
- 232 031986 <220>
<223> PH20 предшественник 1-489 <400> 110
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
- 233 031986
Ile Asp Ala 465 Phe Leu Lys 470 Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu 475 Pro Gln Ile 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala
485 490
<210> 111 <211> 489 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-489 <400> 111
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
- 234 031986
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu
485
<210> 112 <211> 490 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-490 <400> 112
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
- 235 031986
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser
485 490
<210> 113 <211> 487 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-487 <400> 113
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
- 236 031986
Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
Phe Tyr
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Asn Ala
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala 405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Ser Pro
485
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440 Val Asp 455
Pro Pro
Ser
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Asn Gly
235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu
315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380
Ser Asp
395
Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350
Tyr Ile 365
Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445 Asp Gly
Glu Pro
Phe Asn
240
Glu Ser 255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320 Gly Ile 335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr 415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Gln Ile
480 <210> 114 <211> 485 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-485 <400> 114
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
- 237 031986
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser
485
<210> 115 <211> 484 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-484 <400> 115
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
- 238 031986
Asp 65 Glu Pro Leu Asp Met 70 Ser Leu Phe Ser Phe 75 Ile Gly Ser Pro
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys
145 150 155
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe
225 230 235
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp
305 310 315
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His
385 390 395
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln
465 470 475
Phe Tyr Asn Ala
Arg
Leu
Gly
Lys
Val
Pro
160
Asn
Phe
Lys
Cys
Asn
240
Ser
Val
Val
Thr
Glu
320
Ile
Leu
Asn
Gln
Leu
400
Thr
Lys
Asp
Cys
Ile
480
<210> 116
<211> 476
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> PH20 предшественник 1-476
- 239 031986 <400> 116
Met Gly Val Leu 1
Ser Ser Gly Val
Cys Leu Thr Leu
Phe Leu Trp Ala
Asp Glu Pro Leu
Ile Asn Ala Thr
Gly Tyr Tyr Pro
100
Gly Ile Pro Gln
115
Lys Asp Ile Thr
130
Ile Asp Trp Glu
145
Lys Asp Val Tyr
Val Gln Leu Ser
180
Glu Lys Ala Gly
195
Leu Leu Arg Pro
210
Tyr Asn His His
225
Val Glu Ile Lys
Thr Ala Leu Tyr
260
Ala Ala Thr Leu
275
Ser Lys Ile Pro
290
Arg Ile Val Phe
305
Leu Val Tyr Thr
Val Ile Trp Gly
340
Leu Leu Asp Asn
355
Val Thr Leu Ala
370
Gly Val Cys Ile
385
Asn Pro Asp Asn
Val Arg Gly Lys
420
Phe Tyr Cys Ser
435
Val Lys Asp Thr
450
Ile Asp Ala Phe
465
Lys Phe Lys His
Ser Gln Ile Val
Asn Phe Arg Ala
Trp Asn Ala Pro
Asp Met Ser Leu
Gly Gln Gly Val
Tyr Ile Asp Ser
Lys Ile Ser Leu
120
Phe Tyr Met Pro
135
Glu Trp Arg Pro
150
Lys Asn Arg Ser
165
Leu Thr Glu Ala
Lys Asp Phe Leu
200
Asn His Leu Trp
215
Tyr Lys Lys Pro
230
Arg Asn Asp Asp
245
Pro Ser Ile Tyr
Tyr Val Arg Asn
280
Asp Ala Lys Ser
295
Thr Asp Gln Val
310
Phe Gly Glu Thr
325
Thr Leu Ser Ile
Tyr Met Glu Thr
360
Ala Lys Met Cys
375
Arg Lys Asn Trp
390
Phe Ala Ile Gln
405
Pro Thr Leu Glu
Cys Tyr Ser Thr
440
Asp Ala Val Asp
455
Leu Lys Pro Pro
470
Ile Phe Phe Arg
Phe Thr Phe Leu
Pro Pro Val Ile
Ser Glu Phe Cys
Phe Ser Phe Ile
Thr Ile Phe Tyr
Ile Thr Gly Val
105
Gln Asp His Leu
Val Asp Asn Leu
140
Thr Trp Ala Arg
155
Ile Glu Leu Val
170
Thr Glu Lys Ala
185
Val Glu Thr Ile
Gly Tyr Tyr Leu
220
Gly Tyr Asn Gly
235
Leu Ser Trp Leu
250
Leu Asn Thr Gln
265
Arg Val Arg Glu
Pro Leu Pro Val
300
Leu Lys Phe Leu
315
Val Ala Leu Gly
330
Met Arg Ser Met
345
Ile Leu Asn Pro
Ser Gln Val Leu
380
Asn Ser Ser Asp
395
Leu Glu Lys Gly
410
Asp Leu Glu Gln
425
Leu Ser Cys Lys
Val Cys Ile Ala
460
Met Glu Thr Glu
475
Ser Phe Val Lys
Leu Ile Pro Cys
Pro Asn Val Pro
Leu Gly Lys Phe
Gly Ser Pro Arg
Val Asp Arg Leu
Thr Val Asn Gly
110
Asp Lys Ala Lys
125
Gly Met Ala Val
Asn Trp Lys Pro
160 Gln Gln Gln Asn
175
Lys Gln Glu Phe
190
Lys Leu Gly Lys
205
Phe Pro Asp Cys
Ser Cys Phe Asn
240
Trp Asn Glu Ser
255
Gln Ser Pro Val
270
Ala Ile Arg Val
285
Phe Ala Tyr Thr
Ser Gln Asp Glu
320
Ala Ser Gly Ile
335
Lys Ser Cys Leu
350
Tyr Ile Ile Asn
365
Cys Gln Glu Gln
Tyr Leu His Leu
400
Gly Lys Phe Thr
415
Phe Ser Glu Lys
430
Glu Lys Ala Asp
445
Asp Gly Val Cys
- 240 031986 <210> 117 <211> 475 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-475 <400> 117
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
- 241 031986
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr
465 470 475
<210> 118 <211> 474 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-474 <400> 118
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
- 242 031986
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu
465 470
<210> 119 <211> 473 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-473 <400> 119
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
- 243 031986
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met
465 470
<210> 120 <211> 472 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-472 <400> 120
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
- 244 031986
225 230 235
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp
305 310 315
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His
385 390 395
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro
465 470
240
Ser
Val
Val
Thr
Glu
320
Ile
Leu Asn Gln
Leu
400
Thr
Lys
Asp
Cys <210> 121 <211> 471 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-471 <400> 121
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro
65 70 75
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys
145 150 155
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln
Lys
Cys
Pro
Phe
Arg
Leu
Gly
Lys
Val
Pro
160
Asn
- 245 031986
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro
465 470
<210> 122 <211> 470 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-470 <400> 122
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
- 246 031986
Gly Ile
Lys Asp
130
Ile Asp
145
Lys Asp
Val Gln
Glu Lys
Leu Leu
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
100
Pro Gln
115
Ile Thr
Trp Glu
Val Tyr
Leu Ser
180
Ala Gly
195
Arg Pro
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Lys Ile
Phe Tyr
Glu Trp
150 Lys Asn 165
Leu Thr
Lys Asp
Asn His
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala
405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Ser Leu
120
Met Pro
135
Arg Pro
Arg Ser
Glu Ala
Phe Leu
200
Leu Trp
215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280
Lys Ser
295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360
Met Cys
375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440
Val Asp
455
105
Gln Asp
Val Asp
Thr Trp
Ile Glu
170
Thr Glu
185
Val Glu
Gly Tyr
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
His Leu
Asn Leu
140 Ala Arg 155
Leu Val
Lys Ala
Thr Ile
Tyr Leu
220 Asn Gly 235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu 315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380 Ser Asp 395 Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
110 Asp Lys 125
Gly Met
Asn Trp
Gln Gln
Lys Gln
190 Lys Leu 205
Phe Pro
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350
Tyr Ile 365
Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445 Asp Gly
Ala Lys
Ala Val
Lys Pro
160
Gln Asn
175
Glu Phe
Gly Lys
Asp Cys
Phe Asn
240
Glu Ser
255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320
Gly Ile
335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr
415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys <210> 123 <211> 469 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-469 <400> 123
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
- 247 031986
Phe Leu Trp Ala Trp
Asp Glu Pro Leu Asp
Ile Asn Ala Thr Gly
Gly Tyr Tyr Pro Tyr
100
Gly Ile Pro Gln Lys
115
Lys Asp Ile Thr Phe
130
Ile Asp Trp Glu Glu
145
Lys Asp Val Tyr Lys
165
Val Gln Leu Ser Leu
180
Glu Lys Ala Gly Lys
195
Leu Leu Arg Pro Asn
210
Tyr Asn His His Tyr
225
Val Glu Ile Lys Arg
245
Thr Ala Leu Tyr Pro
260
Ala Ala Thr Leu Tyr
275
Ser Lys Ile Pro Asp
290
Arg Ile Val Phe Thr
305
Leu Val Tyr Thr Phe
325
Val Ile Trp Gly Thr
340
Leu Leu Asp Asn Tyr
355
Val Thr Leu Ala Ala
370
Gly Val Cys Ile Arg
385
Asn Pro Asp Asn Phe
405
Val Arg Gly Lys Pro
420
Phe Tyr Cys Ser Cys
435
Val Lys Asp Thr Asp
450
Ile Asp Ala Phe Leu
465
Asn Ala Pro Ser Glu
Met Ser Leu Phe Ser
Gln Gly Val Thr Ile
Ile Asp Ser Ile Thr
105
Ile Ser Leu Gln Asp
120
Tyr Met Pro Val Asp
135
Trp Arg Pro Thr Trp
150
Asn Arg Ser Ile Glu
170
Thr Glu Ala Thr Glu
185
Asp Phe Leu Val Glu
200
His Leu Trp Gly Tyr
215
Lys Lys Pro Gly Tyr
230
Asn Asp Asp Leu Ser
250
Ser Ile Tyr Leu Asn
265
Val Arg Asn Arg Val
280
Ala Lys Ser Pro Leu
295
Asp Gln Val Leu Lys
310
Gly Glu Thr Val Ala
330
Leu Ser Ile Met Arg
345
Met Glu Thr Ile Leu
360
Lys Met Cys Ser Gln
375
Lys Asn Trp Asn Ser
390
Ala Ile Gln Leu Glu
410
Thr Leu Glu Asp Leu
425
Tyr Ser Thr Leu Ser
440
Ala Val Asp Val Cys
455
Phe Cys Leu Gly Lys
Phe Ile Gly Ser Pro
Phe Tyr Val Asp Arg
Gly Val Thr Val Asn
110
His Leu Asp Lys Ala
125
Asn Leu Gly Met Ala
140
Ala Arg Asn Trp Lys
155
Leu Val Gln Gln Gln
175
Lys Ala Lys Gln Glu
190
Thr Ile Lys Leu Gly
205
Tyr Leu Phe Pro Asp
220
Asn Gly Ser Cys Phe
235
Trp Leu Trp Asn Glu
255
Thr Gln Gln Ser Pro
270
Arg Glu Ala Ile Arg
285
Pro Val Phe Ala Tyr
300
Phe Leu Ser Gln Asp
315
Leu Gly Ala Ser Gly
335
Ser Met Lys Ser Cys
350
Asn Pro Tyr Ile Ile
365
Val Leu Cys Gln Glu
380
Ser Asp Tyr Leu His
395
Lys Gly Gly Lys Phe
415
Glu Gln Phe Ser Glu
430
Cys Lys Glu Lys Ala
445
Ile Ala Asp Gly Val
460
Phe
Arg
Leu
Gly
Lys
Val
Pro
160
Asn
Phe
Lys
Cys
Asn
240
Ser
Val
Val
Thr
Glu
320
Ile
Leu Asn Gln
Leu
400
Thr
Lys
Asp
Cys <210> 124 <211> 468 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
- 248 031986 <223> PH20 предшественник 1-468 <400> 124
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe
465
- 249 031986 <210> 125 <211> 466 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-466 <400> 125
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
- 250 031986
Val Arg Gly Lys 420 Pro Thr Leu Glu Asp 425 Leu Glu Gln Phe Ser 430 Glu Lys
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp
465 <210> 126 <211> 465 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-465 <400> 126
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
- 251 031986
Leu Leu Asp 355 Asn Tyr Met Glu Thr 360 Ile Leu Asn Pro Tyr 365 Ile Ile Asn
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile
465
<210> 127 <211> 464 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-464 <400> 127
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
- 252 031986
Ser Lys 290 Ile Pro Asp Ala Lys 295 Ser Pro Leu Pro Val 300 Phe Ala Tyr Thr
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
<210> 128 <211> 462 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-462 <400> 128
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
- 253 031986
Val Glu Ile Lys Arg 245 Asn Asp Asp Leu Ser 250 Trp Leu Trp Asn Glu 255 Ser
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly
450 455 460
<210> 129 <211> 460 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-460 <400> 129
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
- 254 031986
Glu Lys Ala 195 Gly Lys Asp Phe Leu 200 Val Glu Thr Ile Lys 205 Leu Gly Lys
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala
450 455 460
<210> 130 <211> 458 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-458 <400> 130
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
- 255 031986
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys
450 455
<210> 131 <211> 456 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-456 <400> 131
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
- 256 031986
Gly Tyr Tyr Pro 100 Tyr Ile Asp Ser Ile 105 Thr Gly Val Thr Val 110 Asn Gly
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp
450 455
<210> 132 <211> 454 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-454 <400> 132
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
- 257 031986
Phe Leu 50 Trp Ala Trp Asn Ala 55 Pro Ser Glu Phe Cys 60 Leu Gly Lys Phe
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala
450
<210> 133
<211> 452
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> PH20 предшественник 1-452
<400> 133
- 258 031986
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr
450
<210> 134 <211> 450 <212> БЕЛОК
- 259 031986 <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-450 <400> 134
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys
- 260 031986
450 <210> 135 <211> 508 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-508 <400> 135
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
- 261 031986
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val
485 490 495
Ser Ile Leu Phe Leu Ile Ile Ser Ser Val Ala Ser
500 505
<210> 136 <211> 506 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-506 <400> 136
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
- 262 031986
305 310 315
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala
325 330
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys
340 345
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr
385 390 395
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly
405 410
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe
420 425
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu
465 470 475
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met
485 490
Ser Ile Leu Phe Leu Ile Ile Ser Ser Val
500 505
320
Ser Gly Ile
335
Ser Cys Leu
350
Ile Ile Asn
Gln Glu Gln
Leu His Leu
400
Lys Phe Thr
415
Ser Glu Lys
430
Lys Ala Asp
Gly Val Cys
Pro Gln Ile
480
Phe Ile Val
495
<210> 137 <211> 504 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-504 <400> 137
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
- 263 031986
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp 465
Phe Tyr
Ser Ile
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Asn Ala
Leu Phe
500
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala 405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Ser Pro
485
Leu Ile
215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440 Val Asp 455
Pro Pro
Ser Thr
Ile Ser
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Leu Ser
490
220 Asn Gly 235 Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu
315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380
Ser Asp
395
Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Ala Thr
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350
Tyr Ile 365
Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445
Asp Gly
Glu Pro
Met Phe
Phe Asn
240
Glu Ser 255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320 Gly Ile 335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr 415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Gln Ile
480
Ile Val
495 <210> 138 <211> 502 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-502 <400> 138
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
- 264 031986
115 120
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val
130 135
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr
145 150
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile
165
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr
180 185
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val
195 200
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly
210 215
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly
225 230
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu
245
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu
260 265
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg
275 280
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro
290 295
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu
305 310
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val
325
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met
340 345
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile
355 360
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser
370 375
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn
385 390
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu
405
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp
420 425
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu
435 440
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val
450 455
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met
465 470
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu
485
Ser Ile Leu Phe Leu Ile
500
125
Asn Leu Gly Met Ala Val
140
Ala Arg Asn Trp Lys Pro
155 160
Leu Val Gln Gln Gln Asn
175
Lys Ala Lys Gln Glu Phe
190
Thr Ile Lys Leu Gly Lys
205
Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
220
Asn Gly Ser Cys Phe Asn
235 240
Trp Leu Trp Asn Glu Ser
255
Thr Gln Gln Ser Pro Val
270
Arg Glu Ala Ile Arg Val
285
Pro Val Phe Ala Tyr Thr
300
Phe Leu Ser Gln Asp Glu
315 320
Leu Gly Ala Ser Gly Ile
335
Ser Met Lys Ser Cys Leu
350
Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
365
Val Leu Cys Gln Glu Gln
380
Ser Asp Tyr Leu His Leu
395 400
Lys Gly Gly Lys Phe Thr
415
Glu Gln Phe Ser Glu Lys
430
Cys Lys Glu Lys Ala Asp
445
Ile Ala Asp Gly Val Cys
460
Thr Glu Glu Pro Gln Ile
475 480
Ala Thr Met Phe Ile Val
495 <210> 139 <211> 500 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-500 <400> 139
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile
1 5
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe
Phe Arg Ser Phe Val Lys 15
Phe Leu Leu Ile Pro Cys
- 265 031986
Cys Leu
Phe Leu
Asp Glu
Ile Asn
Gly Tyr
Gly Ile
Lys Asp
130
Ile Asp
145
Lys Asp
Val Gln
Glu Lys
Leu Leu
210 Tyr Asn 225
Val Glu
Thr Ala
Ala Ala
Ser Lys
290
Arg Ile 305
Leu Val
Val Ile
Leu Leu
Val Thr
370 Gly Val 385
Asn Pro
Val Arg
Phe Tyr
Val Lys
450
Ile Asp
465
Phe Tyr
Ser Ile
Thr Leu
Trp Ala
Pro Leu
Ala Thr
Tyr Pro
100
Pro Gln
115
Ile Thr
Trp Glu
Val Tyr
Leu Ser
180
Ala Gly
195
Arg Pro
His His
Ile Lys
Leu Tyr
260
Thr Leu
275
Ile Pro
Val Phe
Tyr Thr
Trp Gly
340
Asp Asn
355
Leu Ala
Cys Ile
Asp Asn
Gly Lys
420
Cys Ser
435
Asp Thr
Ala Phe
Asn Ala
Leu Phe
500
Asn Phe
Trp Asn
Asp Met
Gly Gln
Tyr Ile
Lys Ile
Phe Tyr
Glu Trp
150 Lys Asn 165
Leu Thr
Lys Asp
Asn His
Tyr Lys
230 Arg Asn 245
Pro Ser
Tyr Val
Asp Ala
Thr Asp
310
Phe Gly
325
Thr Leu
Tyr Met
Ala Lys
Arg Lys
390
Phe Ala
405
Pro Thr
Cys Tyr
Asp Ala
Leu Lys
470
Ser Pro
485
Arg Ala
Ala Pro
Ser Leu
Gly Val
Asp Ser
Ser Leu
120
Met Pro
135
Arg Pro
Arg Ser
Glu Ala
Phe Leu
200 Leu Trp 215
Lys Pro
Asp Asp
Ile Tyr
Arg Asn
280 Lys Ser 295
Gln Val
Glu Thr
Ser Ile
Glu Thr
360 Met Cys 375
Asn Trp
Ile Gln
Leu Glu
Ser Thr
440 Val Asp 455
Pro Pro
Ser Thr
Pro Pro
Ser Glu
Phe Ser
Thr Ile
Ile Thr
105
Gln Asp
Val Asp
Thr Trp
Ile Glu
170
Thr Glu
185
Val Glu
Gly Tyr
Gly Tyr
Leu Ser
250
Leu Asn
265
Arg Val
Pro Leu
Leu Lys
Val Ala
330
Met Arg
345
Ile Leu
Ser Gln
Asn Ser
Leu Glu
410
Asp Leu
425
Leu Ser
Val Cys
Met Glu
Leu Ser
490
Val Ile
Phe Cys
Phe Ile
Phe Tyr
Gly Val
His Leu
Asn Leu
140 Ala Arg 155
Leu Val
Lys Ala
Thr Ile
Tyr Leu
220 Asn Gly 235
Trp Leu
Thr Gln
Arg Glu
Pro Val
300
Phe Leu
315
Leu Gly
Ser Met
Asn Pro
Val Leu
380 Ser Asp 395 Lys Gly
Glu Gln
Cys Lys
Ile Ala
460
Thr Glu
475
Ala Thr
Pro Asn
Leu Gly
Gly Ser
Val Asp
Thr Val
110 Asp Lys 125
Gly Met
Asn Trp
Gln Gln
Lys Gln
190 Lys Leu 205
Phe Pro
Ser Cys
Trp Asn
Gln Ser
270
Ala Ile
285
Phe Ala
Ser Gln
Ala Ser
Lys Ser
350
Tyr Ile 365
Cys Gln
Tyr Leu
Gly Lys
Phe Ser
430 Glu Lys 445 Asp Gly
Glu Pro
Met Phe
Val Pro
Lys Phe
Pro Arg
Arg Leu
Asn Gly
Ala Lys
Ala Val
Lys Pro
160
Gln Asn
175
Glu Phe
Gly Lys
Asp Cys
Phe Asn
240
Glu Ser
255
Pro Val
Arg Val
Tyr Thr
Asp Glu
320 Gly Ile 335
Cys Leu
Ile Asn
Glu Gln
His Leu
400
Phe Thr
415
Glu Lys
Ala Asp
Val Cys
Gln Ile
480
Ile Val
495
- 266 031986 <210> 140 <211> 498 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-498 <400> 140
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
- 267 031986
Phe Tyr Cys 435 Ser Cys Tyr Ser Thr 440 Leu Ser Cys Lys Glu 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu
465 470 475
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met
485 490
Ser Ile
Lys Ala Asp
Gly Val Cys
Pro Gln Ile 480
Phe Ile 495 Val
<210> 141 <211> 496 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-496 <400> 141
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
- 268 031986
Val Ile Trp Gly 340 Thr Leu Ser Ile Met 345 Arg Ser Met Lys Ser 350 Cys Leu
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val
485 490 495
<210> 142 <211> 494 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-494 <400> 142
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
- 269 031986
Thr Ala Leu Tyr 260 Pro Ser Ile Tyr Leu Asn 265 Thr Gln Gln Ser 270 Pro Val
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe
485 490
<210> 143 <211> 492 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-492 <400> 143
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
- 270 031986
Val Gln Leu Ser 180 Leu Thr Glu Ala Thr 185 Glu Lys Ala Lys Gln 190 Glu Phe
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr
485 490
<210> 144 <211> 488 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-488 <400> 144
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
- 271 031986
Gly Tyr Tyr Pro 100 Tyr Ile Asp Ser Ile 105 Thr Gly Val Thr Val 110 Asn
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys
145 150 155
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe
225 230 235
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp
305 310 315
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His
385 390 395
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln
465 470 475
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr
485
Gly
Lys
Val
Pro
160
Asn
Phe
Lys
Cys
Asn
240
Ser
Val
Val
Thr
Glu
320
Ile
Leu Asn Gln Leu
400
Thr
Lys
Asp
Cys
Ile
480 <210> 145 <211> 486 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 предшественник 1-486 <400> 145
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val
5 10 15
Lys
- 272 031986
Ser Ser Gly Val 20 Ser Gln Ile Val Phe 25 Thr Phe Leu Leu Ile 30 Pro Cys
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Ala Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
Leu Leu Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys
210 215 220
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro
485
<210> 146
- 273 031986 <211> 472 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> зрелая PH20 36-507 <400> 146
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
- 274 031986
Ser Ile Leu
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val
450 455 460
Phe Leu Ile Ile Ser Ser Val Ala
465 470
<210> 147 <211> 470 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> зрелая PH20 36-505 <400> 147
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
- 275 031986
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val Ser Ile Leu
450 455 460
Phe Leu Ile Ile Ser Ser
465 470
<210> 148 <211> 468 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> зрелая PH20 36-503 <400> 148
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
- 276 031986
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val Ser Ile Leu
450 455 460
Phe Leu Ile Ile
465
<210> 149 <211> 466 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> зрелая PH20 36-501 <400> 149
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro Asn 10 Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
- 277 031986
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe 290
Gly 305 Thr
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe 370
Lys 385 Pro
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser 450
Phe 465 Leu
Ala Lys
260 Asp Gln 275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
250
Val Phe 265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp 425
Glu Glu
Thr Met
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile Gln Glu Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Phe Ile
460
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Val Ser
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu
335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp
415
Asp Ala
Tyr Asn
Ile Leu <210> 150 <211> 464 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> зрелая PH20 36-499 <400> 150
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
- 278 031986
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr
305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
180 Lys Lys 195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu 405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe 265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410 Ala Asp 425
Glu Glu
Thr Met
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Phe Ile
460
190 Asn Val 205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Val Ser
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala
Tyr Asn
Ile Leu <210> 151 <211> 462 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-497 <400> 151
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
- 279 031986
130
Ser Leu 145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro 225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr 305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro 385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180
Lys Lys
195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360 Glu Lys 375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe 185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp 425
Glu Glu
Thr Met
140
Gln Glu 155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Phe Ile
460
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Val Ser
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala
Tyr Asn <210> 152 <211> 460 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-495 <400> 152
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
- 280 031986
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290 Gly Thr 305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
Tyr Met
100 Trp Arg 115
Asn Arg
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180 Lys Lys 195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260 Asp Gln 275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu 135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
Leu Gly 105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe 185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp 425
Glu Glu
Thr Met
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro 235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Phe Ile
460
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp 415
Asp Ala
Tyr Asn <210> 153 <211> 458 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-493 <400> 153
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
- 281 031986
Thr Gly
Pro Tyr 65
Gln Lys
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro 225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr 305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro 385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
Gln Gly
Ile Asp
Ile Ser
Tyr Met
100
Trp Arg
115
Asn Arg
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180
Lys Lys
195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Val Thr
Ser Ile
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
Ile Phe 55 Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu 135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
Tyr Val
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe 185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp 425
Glu Glu
Thr Met
Asp Arg
Val Asn 75
Lys Ala
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Leu Gly
Gly Gly
Lys Lys
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Tyr Tyr
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala
Tyr Asn <210> 154 <211> 456 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-491
- 282 031986 <400> 154
Leu Asn 1 Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala
450 455
<210> 155 <211> 454
- 283 031986 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-489 <400> 155
Leu Asn Phe Arg 1
Ala Trp Asn Ala
Leu Asp Met Ser
Thr Gly Gln Gly
Pro Tyr Ile Asp
Gln Lys Ile Ser
Thr Phe Tyr Met
100
Glu Glu Trp Arg
115
Tyr Lys Asn Arg
130
Ser Leu Thr Glu
145
Gly Lys Asp Phe
Pro Asn His Leu
180
His Tyr Lys Lys
195
Lys Arg Asn Asp
210
Tyr Pro Ser Ile
225
Leu Tyr Val Arg
Pro Asp Ala Lys
260
Phe Thr Asp Gln
275
Thr Phe Gly Glu
290
Gly Thr Leu Ser
305
Asn Tyr Met Glu
Ala Ala Lys Met
340
Ile Arg Lys Asn
355
Asn Phe Ala Ile
370
Lys Pro Thr Leu
385
Ser Cys Tyr Ser
Thr Asp Ala Val
420
Phe Leu Lys Pro
435
Ala Pro Pro Val
Pro Ser Glu Phe
Leu Phe Ser Phe
Val Thr Ile Phe
Ser Ile Thr Gly
Leu Gln Asp His
Pro Val Asp Asn
Pro Thr Trp Ala
120
Ser Ile Glu Leu
135
Ala Thr Glu Lys
150
Leu Val Glu Thr
165
Trp Gly Tyr Tyr
Pro Gly Tyr Asn
200
Asp Leu Ser Trp
215
Tyr Leu Asn Thr
230
Asn Arg Val Arg
245
Ser Pro Leu Pro
Val Leu Lys Phe
280
Thr Val Ala Leu
295
Ile Met Arg Ser
310
Thr Ile Leu Asn
325
Cys Ser Gln Val
Trp Asn Ser Ser
360
Gln Leu Glu Lys
375
Glu Asp Leu Glu
390
Thr Leu Ser Cys
405
Asp Val Cys Ile
Pro Met Glu Thr
440
Ile Pro Asn Val
Cys Leu Gly Lys
Ile Gly Ser Pro
Tyr Val Asp Arg
Val Thr Val Asn
Leu Asp Lys Ala
Leu Gly Met Ala
105
Arg Asn Trp Lys
Val Gln Gln Gln
140
Ala Lys Gln Glu
155
Ile Lys Leu Gly
170
Leu Phe Pro Asp
185
Gly Ser Cys Phe
Leu Trp Asn Glu
220
Gln Gln Ser Pro
235
Glu Ala Ile Arg
250
Val Phe Ala Tyr
265
Leu Ser Gln Asp
Gly Ala Ser Gly
300
Met Lys Ser Cys
315
Pro Tyr Ile Ile
330
Leu Cys Gln Glu
345
Asp Tyr Leu His
Gly Gly Lys Phe
380
Gln Phe Ser Glu
395
Lys Glu Lys Ala
410
Ala Asp Gly Val
425
Glu Glu Pro Gln
Pro Phe Leu Trp
Phe Asp Glu Pro
Arg Ile Asn Ala
Leu Gly Tyr Tyr
Gly Gly Ile Pro
Lys Lys Asp Ile
Val Ile Asp Trp
110
Pro Lys Asp Val
125
Asn Val Gln Leu
Phe Glu Lys Ala
160
Lys Leu Leu Arg
175
Cys Tyr Asn His
190
Asn Val Glu Ile
205
Ser Thr Ala Leu
Val Ala Ala Thr
240
Val Ser Lys Ile
255
Thr Arg Ile Val
270
Glu Leu Val Tyr
285
Ile Val Ile Trp
Leu Leu Leu Asp
320
Asn Val Thr Leu
335
Gln Gly Val Cys
350
Leu Asn Pro Asp
365
Thr Val Arg Gly
Lys Phe Tyr Cys
400
Asp Val Lys Asp
415
Cys Ile Asp Ala
430
Ile Phe Tyr Asn
445
- 284 031986
Ala Ser Pro Ser Thr Leu
450 <210> 156 <211> 455 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-490 <400> 156
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
- 285 031986
Ser Cys Tyr Ser Thr 405 Leu Ser Cys Lys Glu 410 Lys Ala Asp Val Lys 415 Asp
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser
450 455
<210> 157 <211> 452 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-487 <400> 157
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
- 286 031986
Ile Arg Lys 355 Asn Trp Asn Ser Ser 360 Asp Tyr Leu His Leu 365 Asn Pro Asp
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser
450
<210> 158 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-485 <400> 158
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
- 287 031986
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser
450
<210> 159 <211> 449 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-484 <400> 159
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
- 288 031986
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr
305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala
Ala Lys
260 Asp Gln 275 Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360 Glu Lys 375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp
425
Glu Glu
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile Gln Glu Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu
335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp
415
Asp Ala
Tyr Asn <210> 160 <211> 441 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-476 <400> 160
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
- 289 031986
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr
305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln 275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420 Lys Pro 435
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Ser Trp
215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345 Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410 Ala Asp 425 Glu
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile Gln Glu Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp
415
Asp Ala <210> 161 <211> 440 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-475 <400> 161
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
- 290 031986
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro 225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr 305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro 385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
His Leu
180
Lys Lys
195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360 Glu Lys 375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Leu Phe
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410 Ala Asp 425
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Cys Tyr
190 Asn Val 205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala <210> 162 <211> 439 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-474 <400> 162
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
- 291 031986
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro 225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr 305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro 385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180
Lys Lys
195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410 Ala Asp 425
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala <210> 163 <211> 438 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-473 <400> 163
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
- 292 031986
Glu Glu Trp Arg 115 Pro Thr Trp Ala 120 Arg Asn Trp Lys Pro 125 Lys Asp Val
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met
435
<210> 164 <211> 437 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-472 <400> 164
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro Asn 10 Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
- 293 031986
Gln Lys Ile Ser Leu 85 Gln Asp His Leu Asp 90 Lys Ala Lys Lys Asp 95 Ile
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro
435
<210> 165 <211> 436 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-471 <400> 165
Leu Asn 1 Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
- 294 031986
Thr Gly Gln Gly Val
Pro Tyr Ile Asp Ser
Gln Lys Ile Ser Leu
Thr Phe Tyr Met Pro
100
Glu Glu Trp Arg Pro
115
Tyr Lys Asn Arg Ser
130
Ser Leu Thr Glu Ala
145
Gly Lys Asp Phe Leu
165
Pro Asn His Leu Trp
180
His Tyr Lys Lys Pro
195
Lys Arg Asn Asp Asp
210
Tyr Pro Ser Ile Tyr
225
Leu Tyr Val Arg Asn
245
Pro Asp Ala Lys Ser
260
Phe Thr Asp Gln Val
275
Thr Phe Gly Glu Thr
290
Gly Thr Leu Ser Ile
305
Asn Tyr Met Glu Thr
325
Ala Ala Lys Met Cys
340
Ile Arg Lys Asn Trp
355
Asn Phe Ala Ile Gln
370
Lys Pro Thr Leu Glu
385
Ser Cys Tyr Ser Thr
405
Thr Asp Ala Val Asp
420
Phe Leu Lys Pro
435
Thr Ile 55 Phe Tyr Val Asp Arg 60 Leu Gly Tyr Tyr
Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
70 75 80
Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
90 95
Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
105 110
Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
120 125
Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
135 140
Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
150 155 160
Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
170 175
Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
185 190
Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
200 205
Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
215 220
Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
230 235 240
Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
250 255
Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
265 270
Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
280 285
Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
295 300
Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
310 315 320
Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
330 335
Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
345 350
Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
360 365
Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
375 380
Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
390 395 400
Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
410 415
Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
425 430
<210> 166 <211> 435 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-470 <400> 166
Leu Asn Phe Arg Ala
5
Pro Pro Val
Ile Pro Asn Val Pro Phe Leu Trp
- 295 031986
Ala Trp Asn Ala 20 Pro Ser Glu Phe Cys 25 Leu Gly Lys Phe Asp 30 Glu Pro
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys
435
<210> 167 <211> 434 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <223> PH20 36-469 <220>
- 296 031986 <400> 167
Leu Asn Phe Arg 1
Ala Trp Asn Ala
Leu Asp Met Ser
Thr Gly Gln Gly
Pro Tyr Ile Asp
Gln Lys Ile Ser
Thr Phe Tyr Met
100
Glu Glu Trp Arg
115
Tyr Lys Asn Arg
130
Ser Leu Thr Glu
145
Gly Lys Asp Phe
Pro Asn His Leu
180
His Tyr Lys Lys
195
Lys Arg Asn Asp
210
Tyr Pro Ser Ile
225
Leu Tyr Val Arg
Pro Asp Ala Lys
260
Phe Thr Asp Gln
275
Thr Phe Gly Glu
290
Gly Thr Leu Ser
305
Asn Tyr Met Glu
Ala Ala Lys Met
340
Ile Arg Lys Asn
355
Asn Phe Ala Ile
370
Lys Pro Thr Leu
385
Ser Cys Tyr Ser
Thr Asp Ala Val
420
Phe Leu
Ala Pro Pro Val
Pro Ser Glu Phe
Leu Phe Ser Phe
Val Thr Ile Phe
Ser Ile Thr Gly
Leu Gln Asp His
Pro Val Asp Asn
Pro Thr Trp Ala
120
Ser Ile Glu Leu
135
Ala Thr Glu Lys
150
Leu Val Glu Thr
165
Trp Gly Tyr Tyr
Pro Gly Tyr Asn
200
Asp Leu Ser Trp
215
Tyr Leu Asn Thr
230
Asn Arg Val Arg
245
Ser Pro Leu Pro
Val Leu Lys Phe
280
Thr Val Ala Leu
295
Ile Met Arg Ser
310
Thr Ile Leu Asn
325
Cys Ser Gln Val
Trp Asn Ser Ser
360
Gln Leu Glu Lys
375
Glu Asp Leu Glu
390
Thr Leu Ser Cys
405
Asp Val Cys Ile
Ile Pro Asn Val
Cys Leu Gly Lys
Ile Gly Ser Pro
Tyr Val Asp Arg
Val Thr Val Asn
Leu Asp Lys Ala
Leu Gly Met Ala
105
Arg Asn Trp Lys
Val Gln Gln Gln
140
Ala Lys Gln Glu
155
Ile Lys Leu Gly
170
Leu Phe Pro Asp
185
Gly Ser Cys Phe
Leu Trp Asn Glu
220
Gln Gln Ser Pro
235
Glu Ala Ile Arg
250
Val Phe Ala Tyr
265
Leu Ser Gln Asp
Gly Ala Ser Gly
300
Met Lys Ser Cys
315
Pro Tyr Ile Ile
330
Leu Cys Gln Glu
345
Asp Tyr Leu His
Gly Gly Lys Phe
380
Gln Phe Ser Glu
395
Lys Glu Lys Ala
410
Ala Asp Gly Val
425
Pro Phe Leu Trp
Phe Asp Glu Pro
Arg Ile Asn Ala
Leu Gly Tyr Tyr
Gly Gly Ile Pro
Lys Lys Asp Ile
Val Ile Asp Trp
110
Pro Lys Asp Val
125
Asn Val Gln Leu
Phe Glu Lys Ala
160
Lys Leu Leu Arg
175
Cys Tyr Asn His
190
Asn Val Glu Ile
205
Ser Thr Ala Leu
Val Ala Ala Thr
240
Val Ser Lys Ile
255
Thr Arg Ile Val
270
Glu Leu Val Tyr
285
Ile Val Ile Trp
Leu Leu Leu Asp
320
Asn Val Thr Leu
335
Gln Gly Val Cys
350
Leu Asn Pro Asp
365
Thr Val Arg Gly
Lys Phe Tyr Cys
400
Asp Val Lys Asp
415
Cys Ile Asp Ala
430 <210> 168 <211> 433 <212> БЕЛОК
- 297 031986 <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-468 <400> 168
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe
- 298 031986 <210> 169 <211> 431 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-466 <400> 169
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp
- 299 031986
420
425
430 <210> 170 <211> 430 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-465 <400> 170
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
- 300 031986
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile
420 425 430 <210> 171 <211> 429 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-464 <400> 171
Leu Asn 1 Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
- 301 031986
385 390
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu
405
Thr Asp Ala Val Asp Val
420
395
Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
410
Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
425
Val
400
Lys Asp
415 <210> 172 <211> 427 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-462 <400> 172
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
- 302 031986
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
375 380
Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
395
Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
410
Cys Ile Ala Asp Gly
425
Phe
Val
Tyr Cys
400
Lys Asp
415 <210> 173 <211> 425 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-460 <400> 173
Leu Asn 1 Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
- 303 031986
355
Asn Phe Ala Ile Gln
370
Lys Pro Thr Leu Glu
385
Ser Cys Tyr Ser Thr
405
Thr Asp Ala Val Asp
420
360365
Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
375380
Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
390 395400
Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
410415
Val Cys Ile Ala
425 <210> 174 <211> 423 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-458 <400> 174
Leu Asn Phe Arg Ala 1 5
Ala Trp Asn Ala Pro
Leu Asp Met Ser Leu
Thr Gly Gln Gly Val
Pro Tyr Ile Asp Ser
Gln Lys Ile Ser Leu
Thr Phe Tyr Met Pro
100
Glu Glu Trp Arg Pro
115
Tyr Lys Asn Arg Ser
130
Ser Leu Thr Glu Ala
145
Gly Lys Asp Phe Leu
165
Pro Asn His Leu Trp
180
His Tyr Lys Lys Pro
195
Lys Arg Asn Asp Asp
210
Tyr Pro Ser Ile Tyr
225
Leu Tyr Val Arg Asn
245
Pro Asp Ala Lys Ser
260
Phe Thr Asp Gln Val
275
Thr Phe Gly Glu Thr
290
Gly Thr Leu Ser Ile
305
Asn Tyr Met Glu Thr
325
Ala Ala Lys Met Cys
Pro Pro Val Ile Pro 10
Ser Glu Phe Cys Leu
Phe Ser Phe Ile Gly
Thr Ile Phe Tyr Val
Ile Thr Gly Val Thr
Gln Asp His Leu Asp
Val Asp Asn Leu Gly
105
Thr Trp Ala Arg Asn
120
Ile Glu Leu Val Gln
135
Thr Glu Lys Ala Lys
150
Val Glu Thr Ile Lys
170
Gly Tyr Tyr Leu Phe
185
Gly Tyr Asn Gly Ser
200
Leu Ser Trp Leu Trp
215
Leu Asn Thr Gln Gln
230
Arg Val Arg Glu Ala
250
Pro Leu Pro Val Phe
265
Leu Lys Phe Leu Ser
280
Val Ala Leu Gly Ala
295
Met Arg Ser Met Lys
310
Ile Leu Asn Pro Tyr
330
Ser Gln Val Leu Cys
Asn Val Pro Phe Leu Trp 15
Gly Lys Phe Asp Glu Pro
Ser Pro Arg Ile Asn Ala
Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr 60
Val Asn Gly Gly Ile Pro
80
Lys Ala Lys Lys Asp Ile 95
Met Ala Val Ile Asp Trp 110
Trp Lys Pro Lys Asp Val
125
Gln Gln Asn Val Gln Leu
140
Gln Glu Phe Glu Lys Ala
155 160
Leu Gly Lys Leu Leu Arg
175
Pro Asp Cys Tyr Asn His
190
Cys Phe Asn Val Glu Ile
205
Asn Glu Ser Thr Ala Leu
220
Ser Pro Val Ala Ala Thr
235 240
Ile Arg Val Ser Lys Ile
255
Ala Tyr Thr Arg Ile Val
270
Gln Asp Glu Leu Val Tyr
285
Ser Gly Ile Val Ile Trp
300
Ser Cys Leu Leu Leu Asp
315 320
Ile Ile Asn Val Thr Leu
335
Gln Glu Gln Gly Val Cys
- 304 031986
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Ser Ser
360 Glu Lys 375
Leu Glu
Ser Cys
Cys
345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp
415 <210> 175 <211> 421 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-456 <400> 175
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
- 305 031986
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp
Gln Val
Ser Ser
360 Glu Lys 375
Leu Glu
Ser Cys
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp
415 <210> 176 <211> 419 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-454 <400> 176
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
- 306 031986
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala
<210> 177 <211> 417 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-452 <400> 177
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
- 307 031986
290
Gly Thr Leu Ser Ile
305
Asn Tyr Met Glu Thr
325
Ala Ala Lys Met Cys
340
Ile Arg Lys Asn Trp
355
Asn Phe Ala Ile Gln
370
Lys Pro Thr Leu Glu
385
Ser Cys Tyr Ser Thr
405
Thr
295300
Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
310 315320
Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
330335
Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
345350
Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
360365
Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
375380
Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
390 395400
Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
410415 <210> 178 <211> 415 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-450 <400> 178
Leu Asn Phe Arg Ala 1 5
Ala Trp Asn Ala Pro
Leu Asp Met Ser Leu
Thr Gly Gln Gly Val
Pro Tyr Ile Asp Ser
Gln Lys Ile Ser Leu
Thr Phe Tyr Met Pro
100
Glu Glu Trp Arg Pro
115
Tyr Lys Asn Arg Ser
130
Ser Leu Thr Glu Ala
145
Gly Lys Asp Phe Leu
165
Pro Asn His Leu Trp
180
His Tyr Lys Lys Pro
195
Lys Arg Asn Asp Asp
210
Tyr Pro Ser Ile Tyr
225
Leu Tyr Val Arg Asn
245
Pro Asp Ala Lys Ser
260
Phe Thr Asp Gln Val
Pro Pro Val Ile Pro Asn 10
Ser Glu Phe Cys Leu Gly
Phe Ser Phe Ile Gly Ser
Thr Ile Phe Tyr Val Asp
Ile Thr Gly Val Thr Val
75
Gln Asp His Leu Asp Lys
Val Asp Asn Leu Gly Met
105
Thr Trp Ala Arg Asn Trp
120
Ile Glu Leu Val Gln Gln 135
Thr Glu Lys Ala Lys Gln
150 155
Val Glu Thr Ile Lys Leu
170
Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro
185
Gly Tyr Asn Gly Ser Cys
200
Leu Ser Trp Leu Trp Asn
215
Leu Asn Thr Gln Gln Ser
230 235
Arg Val Arg Glu Ala Ile
250
Pro Leu Pro Val Phe Ala
265
Leu Lys Phe Leu Ser Gln
Val Pro Phe Leu Trp
Lys Phe Asp Glu Pro
Pro Arg Ile Asn Ala
Arg Leu Gly Tyr Tyr
Asn Gly Gly Ile Pro
Ala Lys Lys Asp Ile
Ala Val Ile Asp Trp
110
Lys Pro Lys Asp Val
125
Gln Asn Val Gln Leu
140
Glu Phe Glu Lys Ala
160
Gly Lys Leu Leu Arg
175
Asp Cys Tyr Asn His
190
Phe Asn Val Glu Ile
205
Glu Ser Thr Ala Leu
220
Pro Val Ala Ala Thr
240
Arg Val Ser Lys Ile
255
Tyr Thr Arg Ile Val
270
Asp Glu Leu Val Tyr
- 308 031986
Thr Phe
290
Gly Thr
305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330
Leu Cys
345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile Gln Glu Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu
335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys
415 <210> 179 <211> 473 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-508 <400> 179
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
- 309 031986
Thr Phe
290
Gly Thr
305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
Phe Leu
465
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Ile Ile
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
Ser Ser
470
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
Val Ala
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp 425
Glu Glu
Thr Met
Ser
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile Gln Glu Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Phe Ile
460
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Val Ser
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu
335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp
415
Asp Ala
Tyr Asn
Ile Leu <210> 180 <211> 471 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-506 <400> 180
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
- 310 031986
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr
305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
Phe Leu
465
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Ile Ile
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
Ser Ser
470
215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360 Glu Lys 375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
Val
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp 425
Glu Glu
Thr Met
220
Ser Pro 235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Phe Ile
460
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Val Ser
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala
Tyr Asn
Ile Leu <210> 181 <211> 469 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-504 <400> 181
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro Asn 10 Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
- 311 031986
145
Gly Lys Asp Phe Leu
165 Pro Asn His Leu Trp
180
His Tyr Lys Lys Pro
195
Lys Arg Asn Asp Asp
210
Tyr Pro Ser Ile Tyr
225
Leu Tyr Val Arg Asn
245
Pro Asp Ala Lys Ser
260
Phe Thr Asp Gln Val
275
Thr Phe Gly Glu Thr
290
Gly Thr Leu Ser Ile
305
Asn Tyr Met Glu Thr
325 Ala Ala Lys Met Cys
340
Ile Arg Lys Asn Trp
355
Asn Phe Ala Ile Gln
370
Lys Pro Thr Leu Glu
385
Ser Cys Tyr Ser Thr
405
Thr Asp Ala Val Asp
420
Phe Leu Lys Pro Pro
435
Ala Ser Pro Ser Thr
450
Phe Leu Ile Ile Ser
465
150 155
Val Glu Thr Ile Lys Leu
170
Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro
185
Gly Tyr Asn Gly Ser Cys
200
Leu Ser Trp Leu Trp Asn
215
Leu Asn Thr Gln Gln Ser
230 235
Arg Val Arg Glu Ala Ile
250
Pro Leu Pro Val Phe Ala
265
Leu Lys Phe Leu Ser Gln
280
Val Ala Leu Gly Ala Ser
295
Met Arg Ser Met Lys Ser
310 315
Ile Leu Asn Pro Tyr Ile
330
Ser Gln Val Leu Cys Gln
345
Asn Ser Ser Asp Tyr Leu
360
Leu Glu Lys Gly Gly Lys
375
Asp Leu Glu Gln Phe Ser
390 395
Leu Ser Cys Lys Glu Lys
410
Val Cys Ile Ala Asp Gly
425
Met Glu Thr Glu Glu Pro
440
Leu Ser Ala Thr Met Phe
455
160
Gly Lys Leu Leu Arg
175
Asp Cys Tyr Asn His
190
Phe Asn Val Glu Ile
205
Glu Ser Thr Ala Leu
220
Pro Val Ala Ala Thr
240
Arg Val Ser Lys Ile
255
Tyr Thr Arg Ile Val
270
Asp Glu Leu Val Tyr
285
Gly Ile Val Ile Trp
300
Cys Leu Leu Leu Asp
320
Ile Asn Val Thr Leu
335
Glu Gln Gly Val Cys
350
His Leu Asn Pro Asp
365
Phe Thr Val Arg Gly
380
Glu Lys Phe Tyr Cys
400
Ala Asp Val Lys Asp
415
Val Cys Ile Asp Ala
430
Gln Ile Phe Tyr Asn
445
Ile Val Ser Ile Leu
460 <210> 182 <211> 467 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-502 <400> 182
Leu Asn Phe Arg Ala 1 5
Ala Trp Asn Ala Pro
Leu Asp Met Ser Leu
Thr Gly Gln Gly Val
Pro Tyr Ile Asp Ser
Gln Lys Ile Ser Leu
Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro Phe Leu Trp 1015
Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro 2530
Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala 4045
Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr 5560
Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro 70 7580
Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
- 312 031986
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290 Gly Thr 305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
Phe Leu
465
Tyr Met
100 Trp Arg 115
Asn Arg
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180 Lys Lys 195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260 Asp Gln 275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Ile
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu 135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
Leu Gly 105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe 185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp 425
Glu Glu
Thr Met
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro 235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Phe Ile
460
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Val Ser
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp 415
Asp Ala
Tyr Asn
Ile Leu <210> 183 <211> 465 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-500 <400> 183
Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile
5
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys
Pro Asn Val
Leu Gly Lys
Pro Phe Leu Trp
Phe Asp Glu Pro
- 313 031986
Leu Asp
Thr Gly
Pro Tyr 65
Gln Lys
Thr Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Phe
290 Gly Thr 305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
Met Ser
Gln Gly
Ile Asp
Ile Ser
Tyr Met
100
Trp Arg
115
Asn Arg
Thr Glu
Asp Phe
His Leu
180
Lys Lys
195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Leu Phe
Val Thr
Ser Ile
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Leu Val
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Ser Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu 405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
Ser Phe
Ile Phe
Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu 135
Glu Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
Ile Gly
Tyr Val
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp
425
Glu Glu
Thr Met
Ser Pro
Asp Arg
Val Asn 75
Lys Ala
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Pro
235
Ile Arg
Ala Tyr
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Phe Ile
460
Arg Ile 45 Leu Gly
Gly Gly
Lys Lys
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Lys Leu
Cys Tyr
190
Asn Val
205
Ser Thr
Val Ala
Val Ser
Thr Arg
270
Glu Leu 285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Val Ser
Asn Ala
Tyr Tyr
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Ile Val
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala
Tyr Asn
Ile Leu
Phe
465 <210> 184 <211> 463 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens
- 314 031986 <220>
<223> PH20 36-498 <400> 184
Leu Asn 1 Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val Ser Ile
450 455 460
- 315 031986 <210> 185 <211> 461 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-496 <400> 185
Leu Asn Phe Arg 1
Ala Trp Asn Ala
Leu Asp Met Ser
Thr Gly Gln Gly
Pro Tyr Ile Asp
Gln Lys Ile Ser
Thr Phe Tyr Met
100
Glu Glu Trp Arg
115
Tyr Lys Asn Arg
130
Ser Leu Thr Glu
145
Gly Lys Asp Phe
Pro Asn His Leu
180
His Tyr Lys Lys
195
Lys Arg Asn Asp
210
Tyr Pro Ser Ile
225
Leu Tyr Val Arg
Pro Asp Ala Lys
260
Phe Thr Asp Gln
275
Thr Phe Gly Glu
290
Gly Thr Leu Ser
305
Asn Tyr Met Glu
Ala Ala Lys Met
340
Ile Arg Lys Asn
355
Asn Phe Ala Ile
370
Lys Pro Thr Leu
385
Ser Cys Tyr Ser
Ala Pro Pro Val
Pro Ser Glu Phe
Leu Phe Ser Phe
Val Thr Ile Phe
Ser Ile Thr Gly
Leu Gln Asp His
Pro Val Asp Asn
Pro Thr Trp Ala
120
Ser Ile Glu Leu
135
Ala Thr Glu Lys
150
Leu Val Glu Thr
165
Trp Gly Tyr Tyr
Pro Gly Tyr Asn
200
Asp Leu Ser Trp
215
Tyr Leu Asn Thr
230
Asn Arg Val Arg
245
Ser Pro Leu Pro
Val Leu Lys Phe
280
Thr Val Ala Leu
295
Ile Met Arg Ser
310
Thr Ile Leu Asn
325
Cys Ser Gln Val
Trp Asn Ser Ser
360
Gln Leu Glu Lys
375
Glu Asp Leu Glu
390
Thr Leu Ser Cys
405
Ile Pro Asn Val
Cys Leu Gly Lys
Ile Gly Ser Pro
Tyr Val Asp Arg
Val Thr Val Asn
Leu Asp Lys Ala
Leu Gly Met Ala
105
Arg Asn Trp Lys
Val Gln Gln Gln
140
Ala Lys Gln Glu
155
Ile Lys Leu Gly
170
Leu Phe Pro Asp
185
Gly Ser Cys Phe
Leu Trp Asn Glu
220
Gln Gln Ser Pro
235
Glu Ala Ile Arg
250
Val Phe Ala Tyr
265
Leu Ser Gln Asp
Gly Ala Ser Gly
300
Met Lys Ser Cys
315
Pro Tyr Ile Ile
330
Leu Cys Gln Glu
345
Asp Tyr Leu His
Gly Gly Lys Phe
380
Gln Phe Ser Glu
395
Lys Glu Lys Ala
410
Pro Phe Leu Trp
Phe Asp Glu Pro
Arg Ile Asn Ala
Leu Gly Tyr Tyr
Gly Gly Ile Pro
Lys Lys Asp Ile
Val Ile Asp Trp
110
Pro Lys Asp Val
125
Asn Val Gln Leu
Phe Glu Lys Ala
160
Lys Leu Leu Arg
175
Cys Tyr Asn His
190
Asn Val Glu Ile
205
Ser Thr Ala Leu
Val Ala Ala Thr
240
Val Ser Lys Ile
255
Thr Arg Ile Val
270
Glu Leu Val Tyr
285
Ile Val Ile Trp
Leu Leu Leu Asp
320
Asn Val Thr Leu
335
Gln Gly Val Cys
350
Leu Asn Pro Asp
365
Thr Val Arg Gly
Lys Phe Tyr Cys
400
Asp Val Lys Asp
415
- 316 031986
Thr Asp Ala Val 420 Asp Val Cys Ile Ala Asp 425 Gly Val Cys Ile 430 Asp Ala
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val
450 455 460
<210> 186 <211> 459 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-494 <400> 186
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
- 317 031986
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Thr Leu
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Ser Ala
455
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410 Ala Asp 425
Glu Glu
Thr Met
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Phe
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp
415
Asp Ala
Tyr Asn <210> 187 <211> 457 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-492 <400> 187
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro Asn 10 Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
- 318 031986
Asn Tyr Met Glu Thr 325 Ile Leu Asn Pro Tyr 330 Ile Ile Asn Val Thr 335 Leu
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr
450 455
<210> 188 <211> 453 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-488 <400> 188
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
- 319 031986
Phe Thr
Thr Phe
290
Gly Thr
305
Asn Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Phe Leu
Ala Ser
450
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340
Lys Asn
355
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ser
Ala Val
420
Lys Pro
435
Pro Ser
Val Leu
Thr Val
Ile Met
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
Glu Asp
390
Thr Leu
405
Asp Val
Pro Met
Thr
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Gln Phe
Lys Glu
410
Ala Asp
425
Glu Glu
Gln Asp
Ser Gly
300
Ser Cys
315
Ile Ile Gln Glu Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu
395
Lys Ala
Gly Val
Pro Gln
Glu Leu
285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Ile Phe
445
Val Tyr
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu
335
Val Cys
Pro Asp
Arg Gly
Tyr Cys
400
Lys Asp
415
Asp Ala
Tyr Asn <210> 189 <211> 451 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <220>
<223> PH20 36-486 <400> 189
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Val
115 120 125
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
- 320 031986
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Arg Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Ala Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Pro Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro
450
<210> 190 <211> 2105 <212> ДНК <213> Bos taurus <220>
<223> PH20 ДНК <400> 190 ggtttatctc tgttcttggt gaggagacag ggtaaatgtg ctcagctctt tatggagtag aacttgcaaa acattcctaa atacgaagga ttcattttta tccatcaaag tggcttcatt tacaccaaag cgtgtaggag aaaaaagtgc atgctgaggc gccaccatat ctcctttcgg gcagtgttca ccttccttct gcttccgtgt cttatttcaa acacttcttt cctctgggcc agaagatttc aactacctcc agatctgaga agtgctaccg gacaatttat tacattattt atagatgaaa aaacaggcaa aaccgtattc agtcatatgg agaaagcaaa aaatgacatt ttggcggtca ttgactggga aaactggagg gatgtttaca gggatgagtc agttgagttg ccagaggctt ccaagattgc aaaagtggat gagactttaa aactgggaaa attacttcgg cctgattgtt acaatcataa tcataaccaa gaaaaaagga gaaatgatga tctcgagtgg tctgtttatt tgaatatcag gttaaaatct cgtgtccagg aagccattcg gttgtctaaa tttgtatatg cccgtccagt ttttactgat cttgtgaatt cggttggtga gatcgtttct acagaattga ctgctgtgct catccgcgag 60 tggagacggg cagagatgac aagatgaagc 120 agaagaatat ttaaatgtaa atcatcatta 180 ctgtgttcat atcttgcatc aaatattagg 240 ctttcacagt catcgctctt tgtgatgaga 300 agctttgctg ggtctagcgg aacaccccag 360 tgtttggctc tggacttcag agcaccccct 420 tggaatgccc cagttgaacg ttgtgttaac 480 ctcttctctg taaaaggaag cccccagaaa 540 tatgctgata gacttggcta ctatcctcat 600 ggaggaattc cccagttggg aaacttaaaa 660 gcctattaca taccaaatga cagcgtgggc 720 cctacctggg caagaaactg gaaacctaaa 780 gttctgcaaa aaaatccgca actcagtttc 840 tttgagacag caggaaagag tttcatgcaa 900 ccaaatcact tatggggtta ttatcttttt 960 cctacttaca atggaaattg ccctgatgta 1020 ttgtggaagg aaagcactgc ccttttccct 1080 actcaaaatg ctgccttgta tgttcgtaat 1140 atagcgagtg tcgaaagtcc acttccggtt 1200 gggtcttcaa catatctttc tcagggtgac 1260 ctaggtgcct ctgggattat aatgtggggc 1320
- 321 031986 agtctcaatc taagcttatc tatgcaatct acactgaatc cttacataat caacgtcacc tgccacaatg aaggagtgtg tacaaggaaa aacccaatga attttgctat tcaaactggg gtcacacttg aagacttgca aaagttttct atccactgta agaagagagt tgatataaaa gaagacattt gtatagacag ccctgtgaag gaggcatcta ctaccacctt cagcagtatc ccatgtactc ctgagaaaca ctcccctgag cccaacgtca cccaaaaggc gtgtcaaagt cctattcaaa atattaaaaa tcaaacaacc aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa tgcatgaacc taggcactta cttgaacact 1380 ctagccgcca aaatgtgcag ccaagtgctt 1440 cactggaatt caagcgacta tcttcacctg 1500 gaaggtggaa aatacacagt acctgggaca 1560 gatacatttt attgcagttg ttatgccaac 1620 aatgttcata gtgttaacgt gtgtatggca 1680 ttacaaccca gtgatcattc ctccagccag 1740 tcaccctcca ctacaactgc cacagtatct 1800 tgcctcaaag tcaggtgttc ggaagtcatc 1860 gttaaattga agaacatttc ctatcagtca 1920 tattaaaatt aaattcagta aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2040 aaaaaaaaaa aaaaaaaaag aaaaaaaaaa 2100 2105 <210> 191 <211> 1971 <212> ДНК <213> Bos taurus <220>
<223> Hyal1 ДНК <400> 191 ttggtgcgcc tggtgccaga cttaaggaac gccctggggt caggaagttt ggagaatgag gccctgggct atggcagccc acttgcttcc catgacccaa ggctcccggg accctgtggt tgccaacacc gagtggtgta tgaagaaaca tgtggtgacc aacccggggc agaccttccg ccagctgggt acctaccctt actatacatc ccagaatgcc agcctgaatg cccacctggc gcctgagcct cgcttctcag ggctggcagt ggccttcaac tgggacacca aggacattta gcagcaccca gactggctag ctcctcgggt ggctgcagag gagtggatgg caggcaccct cctctggggc ttctataatt tccctgagtg tacaggccgg tgtccactaa acatctgtgc ccagagccgt gccctctacc ccagcatcta gacacagatg ttcgtgcagc accgtgtggc ggaccccaag ctgccggtgc tgccctacat tctgcccgcg gaggagctgg agcacagcct agtggtgctc tgggtgagct ggctgagcac ggagtatgtg gacacgacgc tgggaccctc gtgcagtcag gtcctatgct ccggccatgg ggcccgcctc atcctcaact ccaccagttt cctgacccta caaggtgccc tctcgctcga atgtcgctgc taccgtgggt ggagggggac ggcatgggca cgcactgagt acctgatgca agtccaggca gtcacaggag tcatggttac gcatacacca gtgtgcacac ctgcttacag agcagtgggg catatgctga ttggcatggg ctggctaggg ctttcccaag tccaggcagt aggagtcatg tcaggcatcc tgccgacaga tcagtcttca aacagaagca gtcacaagca tggttaagac acggagcttc cactgcaggg taagcggtgc ggttaaacaa ataacaaata agaatcttgc tgatgcctgc acaggccctc 60 gcctttcagc cttgaggttt ccctacacct 120 tgtctgcacc ctgttcctga acttgctcag 180 ccccaaccag cccttcacta ccatctggaa 240 cggcgtggac gtagacatca gtatctttga 300 cggccctaac atgaccattt tctacagctc 360 tgctggggag cctgtgtttg gtggcctgcc 420 ccgcacattc caggacatcc tggctgccat 480 cattgactgg gaggcatggc gcccgcgctg 540 ccggcagcgc tcacgggcat tggtacagaa 600 ggaggccgca gctcaggacc agttcgaggg 660 caagctggga caagcactgc gccctcaggg 720 ctacaactat gactttaaaa gtcccaacta 780 ccagaatgac cagctcgggt ggctgtgggg 840 cctgcctgca gcactggagg gcacgaagaa 900 tgaggcattc cgtgtggcag cgggtgcggg 960 gcagctcttc tacgacatga ctaaccactt 1020 gggggagagt gcagcccagg gtgcagcggg 1080 aagcaccaag gaatcatgcc aggccatcaa 1140 catcctgaat gtgaccagcg gggctcgtct 1200 ccgttgtgcc cggcgcccca gttaccccaa 1260 ttccatcaag cctacacctg gtggtgggcc 1320 ggatcggttg cggatggcag tggagttcga 1380 acggtgtgag cagtggggca tgtggtgatt 1440 agctgggcct ggctaggtag ggctttccca 1500 agtcagaagt ccactcagcc agtgtcatga 1560 accaagatag ctgcataagg acacggtgtg 1620 cacacactga gtacctgatg caatctgggc 1680 cacaggagtc atggttaggc atccagtcac 1740 gtcaaaaata cttcctctgg agacactgag 1800 ctgacattcg ggacttccct ggccatccag 1860 ggcacgggca gagactaaga tcacgaatgc 1920 aataaactga cattcactgg g 1971 <210> 192 <211> 1912 <212> ДНК
- 322 031986 <213> Bos taurus <220>
<223> Hyal2 ДНК <400> 192 caagtcgccg gcgggctgcc caaagggcag taccccggga aggagggagg ccgccgacct gagctggtgc ctggcaggtg acactgactt ggccccgccg tcacactggc cctggtgttg acagcaccac ccatcttcac gggccggccc gactgtggcc cgcgccacaa gatgccattg caggcttcac ctaacgaggg ttttgtaaat ctgggcatgt atccacactt caattcggtg aatggcagcc tctgggtaca cctggagatg acacaggagc ctgcagggct ggcagtcatc cgcaactggc aggacaagga tgtgtaccgc caccctgatt ggccaccaga gcgcgtagcc gcacggcagt tcatgctgga gacattgcga tggggcttct acctcttccc tgactgttac tatacaggcc gctgccctga tgttgaggtc gccgagagca cggccctctt cccctctgtc cacggccgca actttgtcag ctttcgtgtc catgccaacc atgcactccc cgtctacgtc acagggctta gcgagatgga tctcatctcc gctggcgtca tcctctgggg tgacgcaggg ctcaaggatt atctgactcg gtcattggta cagtactgca gctgggccca gtgccatggc gctcacacct tcctgcacct cagtgccagc gatgagccgc ggctgcgacc agagggggaa atgcactttc gctgccagtg ctacttaggc aggcgggcag ctgggggtgc cagtggggcc gcagtggcag tcctggcctt cacctagact cagctggcct ctgccacaag gggtctgtca accagagtct ggaggggcag agccctctgg caccccctgt tctaaggggg aggggcagtc gaggaagagg ggcacagctg ggccggggag gtttattatt attattttgg ggtctctttt gagctggcgc gaatagcttg gctagagact 60 actgggccga cggactccca cacagttcct 120 cctgcagccc ccagcatgtg gacaggcctg 180 gtggtggcat gggccacgga gctgaagccc 240 tttgtggtcg catgggatgt gcccacacag 300 gacccaaagg acatgaaggc ctttgatgtt 360 cagaacatca ccatcttcta ccgtgaccgg 420 gggaggtcag tacatggtgg tgtgccacag 480 ctgaagggac acgtggaaca ctacattcgt 540 gactgggagg actggcggcc agtgtgggtg 600 cgattatcac gccatttggt agccattcgc 660 aaggaggcgc agtatgagtt tgagttcgct 720 tttgtcaagg cgtttcggcc tcggcaccta 780 aaccatgatt atgtgcagaa ctgggagacc 840 tcccgaaatg accagctggc ctggctctgg 900 tacttggaag agacactggc ttcctccact 960 caggaggctc ttcgcgtggc tgacgtccac 1020 ttcacgaggc ccacctatag ccgtggactc 1080 accattggtg agagtgctgc cctgggtgca 1140 tttaccacca gcaacgagac ctgccgacgc 1200 ccctatgtcg tcaatgtgtc ctgggctgcc 1260 catgggcgct gtgtgcgccg ggaccccaac 1320 agcttccgtc tagtgcctag ccacgcacct 1380 ctcagttggg ccgaccgcaa ccacctacag 1440 tggggcggtg agcaatgcca gtgggaccgc 1500 tgggctgggt cccacctcac tggcctgctg 1560 ttgtaagggt ctctcaccca gctgccacgc 1620 ggcatgtagg agcctgcaag gggtggacaa 1680 gatgcctggt aggatgtcct taccagctcc 1740 ccctggaagg ccccgtctct ccctgccaga 1800 gacctgaccc tactcccctg cccctggata 1860 gtaaattaaa tataaaacaa ct 1912 <210> 193 <211> 1537 <212> ДНК <213> Ovis aries <220>
<223> Hyal2 ДНК <400> 193 gcaaatgaca ctgacttcct cactggccct ggtgttggtg tcttcacggg ccggcccttt gccacaagat gccattggac acgagggttt tgtaaatcag cacacttcaa ctcggtgggg gggtacacct ggagatgctg cagggctggc agtcatcgac acaaggatgt gtaccgccga caccagagcg catagtcaag tgctggagac actgcgattt tcttccctga ctgttacaac gccctgatgt tgaggtctcc ccctcttccc ctctgtctac gcagccccca gcatgtggac gtggcatggg ccacagagct gtggttgcat gggatgtgcc ccaaaggaca tgaaggcctt aacatcacca tcttctaccg aggtcagtcc atggtggtgt aagggacacg tggaacacta tgggaggact ggcggccagt ttatcacgcc agttggtggc gaggcgcagt atgagtttga gtcaaggcgt ttcggcctcg catgattatg tgcaaaactg cgaaatgacc agctgtcctg ctggaagaga cgctggcttc aggcctgggc cccgccgtca 60 gaagcccaca gcaccaccca 120 cacacaggac tgtggcccac 180 tgatgtgcag gcctcaccta 240 tgaccggctg ggcatgtatc 300 gccacagaat ggcagcctct 360 cattcgtaca caggagcctg 420 gtgggtgcgc aactggcagg 480 cagtcaccac cccgattggc 540 gttcgctgca cggcagttca 600 gcacctatgg ggcttctacc 660 ggagacctat acaggccgct 720 gctctgggcc gagagcacag 780 ctccactcac ggccgcaact 840
- 323 031986 ttgtcagctt tcgtgtccag gaggctcttc cactcccagt ctacgtcttc acgaggccca agatggatct catctccacc attggtgaga tctggggtga cgcagggttt accaccagca tgactcggtc actggtaccc tatgtcgtca gggcccagtg ccatggccat gggcgctgtg tgcacctcag tgccagcagc ttccgtctag tgcgaccaga gggggagctc agttgggccg gccagtgcta cttaggctgg ggcggtgagc ggggtgccag tggggcctgg gctgggtccc tggccttcac ctggacttcg taagggtctc acaaggggtc tgccaggcat gtagcagccc gcgtggctga cgtccaccat gccaaccatg 900 cctacagccg tggactcaca gggcttagcg 960 gtgctgccct gggtgcagcc ggcgtcatcc 1020 acgagacctg ccgacgcctc aaggattatc 1080 atgtgtcctg ggctgcccag tactgcagct 1140 tgcgccggga ccccaacgct cacaccttcc 1200 tgcctagcca cgcacctgat gagccgcggc 1260 accgcaacca cctacagacg cactttcgct 1320 agtgccagtg ggaccgcagg cgggcagctg 1380 acctcactgg cctgctggca gtggcagtcc 1440 acccagctgc caggccagct ggcctctgcc 1500 acaaggg 1537 <210> 194 <211> 1967 <212> ДНК <213> Ovis aries <220>
<223> ДНК гиалуронидазы <400> 194 actcctgttt atctctgttc ttggtgagga accaggttac agatgaagca acttgcaaaa taaacgtaaa tcatcattat tcatttttat tcttgcatca aatattaggt aaaccaaagt atcgctcttt gtgaagagaa tgctaaggcg ggccagtgga acaccccagg cggcgctcgc ggacttcaga gcaccccctc ttatttcaaa agctgaacgt tgtgttaaaa tctttaaact aggaagcccc caaaaaagtg ctacgggaca tggctactat cctcatatag atgaaaaaac gttgggaaac ttaaaaaatc atttggaaaa aaatgacagc gtgggcttgg cggtcattga aaactggaaa cctaaagatg tttacaggga tccacaactc agtttcccag aggcttccaa aaagagtttc atgcaagaga ctttaaaact gggttattat ctttttcctg attgttacaa aaattgctct gatttagaaa aaaggagaaa cactgccctt ttcccttctg tttatttgaa cttctatgtt cgtaatcgtg tccaggaagc aagtccactt ccggtttttg tatatcaccg cctttctcag ggtgaccttg tgaattcggt gattataatg tggggcagtc tcaatctaag caattacttg aacactacac tgaatcctta gtgcagccaa gtgctttgcc acgatgaagg cgactatctt cacctgaacc caatgaattt cacagtacct gggaaagtca cacttgaaga cagttgttat gccaacatca actgtaagaa taatgtatgt atggcagaag acatttgtat tcattcctct agccagaatg aggcatctac tacagccacc acagtatctc catgtactcc caggtgtttg gaagccatcg ccaacgtcac gaacacttcc agtcagtcaa gtattcaaaa aaattcagtg cttattaaga aaaaaaaaaa gacagacaga attgactgct gtgctcatcc 60 cattcctaaa tacgaaggaa gaagagtatt 120 ccatcaaagt agcttcattc tgtgttccta 180 gtgtaggaga aaaaagtgct tttcatagtc 240 ccgccatatc tcctttagga gctttgttgg 300 cttccttctg cttccatgtt ggttggctct 360 cacttctttc ctctgggcct ggaatgcccc 420 acctccagat ctgagactct tctctgtaaa 480 atttattaca ttattttatg ctgatagact 540 aggcaacacc gtatatggag gaattcccca 600 agccaaaaaa gacattgcct attatatacc 660 ctgggaaaac tggaggccta cctgggcaag 720 tgagtctgtt gagttggttc tgcaaaaaaa 780 gattgcaaaa gtggattttg agacagcagg 840 gggaaaatta cttcggccaa atcacttatg 900 tcataattat aaccagccta cttacaatgg 960 tgatgatctc gactggttgt ggaaggaaag 1020 tatcaagtta aaatctactc caaaagctgc 1080 cattcggttg tctaaaatag cgagtgttga 1140 tccagttttt actgatgggt cttcaacata 1200 tggtgagatc gttgctctag gtgcctctgg 1260 cctaactatg caatcttgca tgaacctagg 1320 cataatcaac gtcaccctag cagccaaaat 1380 agtgtgtaca aggaaacaat ggaattcaag 1440 tgctattcaa actgggaaag gtggaaaata 1500 cctgcaaacg ttttctgata aattttattg 1560 gagagttgat ataaaaaatg ttcatagtgt 1620 agagggccct gtgaagttac aacccagtga 1680 taccaccgtc agcagtatct caccctctac 1740 tgagaaacag tcccctgagt gcctcaaagt 1800 ccaaacgggg tgtcaaggtg ttaaatggaa 1860 tattaaaaat caaacaacct attaaaatat 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaa 1967 <210> 195 <211> 2116 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
- 324 031986 <223> HAS1 <400> 195 cggagagaag ccactcctgc ccctgctcat atcgctacgg cgcagagcct tggatgcagc cgtacctgcg gcgtcctcat gcgaggtctt cctgggaacc aggatcctgg cgcagcgctg cggtggacta agctcgtgcg tccttaaccc tcaatgtgga taggcctata tcctgggtac tgggttatgc tcctgcggtg acaacgcgct gcctgttccc gggcgctgct cggcctggct tgtgtggcct gcacctcggg gggcgctgct ggagcggccc tgggctactg ggcggaccgg gtcttcaggg tctctgggcc ctggactata gtgggatctg atttctactg aaaaaaaaaa <210> 196 <211> 3275 <212> ДНК <213> Homo <220> <223> HAS2 <400> 196 gaagtcaaga agacttgaaa tgagtcttcc ctgttatcgg aagaaaaaag tgcaacggaa acatttaaga cggtcgtctc accctccggg gcattgtgag tctcctcctt ttactatttc cctgtttgcc gaacaaaaca agagagcccg gccagaccca ctgcgatgag agcctgccgc tgctccggcc tggcccggag cctgggcctc atgacctggg cctacgccgc cctcctggcc ttcggcctct acggggcctt cttcgcgtac ctggagcacc ggcgggtggc caccgcgcgc agtgtggcgc tgaccatctc ccagtgcctg gcgtccgccc gcgccctgct ggtggtggat ggcaaccgcg ccgaggacct cgctgacgag gaccccgcca cgtacgtgtg cgcggcggcg ggcgcggtgg gcgccggagc gcggctggca gtggaggcgc tggtgaggac gggcggcaag cgcgaggtca tgtacacagc cgtgcaggtc tgtgactcgg acacaaggtt ggtactggac gaggaccccc gggtaggggc tctggactcc tgggtcagct tcctaagcag gcgggcttgt cagagctact tccactgtgt taggaataac ctcttgcagc agtttcttga ccactgtact tttggggatg accggcacct taccaagtac acctccaggt cccgctgcta gctgagccag cagacacgct ggtccaagtc ctggtggcac cggcaccatg cgtggatgac cttcttcgtg gcggccactg tgctgcgtct gtgggtgctg ctgtgcgtgc agggcgtggc gcggggctgc ctgcgcatgg tgcttctgtc cctgcctgcc aagttcctgg cgctagtcac ccggcggaag ctggccgcta actacgtccc gctgcttggg ggcctggtcc gcagcgtagc ttcccgcgca gccgaggcct accacttggc ggtggccatg ttgacgctgt actgggtggg gggctaccgc gtccaggtgt gagtccagcc gaggccagag gagagctgct gggccccgag tcagtttccc tcctctgcaa aacgaggggg ttgggactgg gacttctggg tctccaggga aggagtggag ggaaagggtc ctgctttctc tgtgatcagg atgtaataaa gaattttatt aaaaaa sapiens cgtctggaaa gaattaccca gtcctggctt cagccccagc caaagacttt tctcccaatt acaggctttt tttttttttt tttttttttt gggcagaaag actgaagccc aaaaaaaaaa aaaagttaat ttatttttaa agcataattt acataaagag aatattagtg aaattatttt ctcccctatc ctttttaaat gttgttttta aaattcatct gatctcttat tacctcaatt accacacaga caggctgagg acgactttat aggtttctat gtatcctgag aataattgga ggaatcacag ctgcttatat tgttggctac tcttttggac tgtatggtgc ctttttggca tttttggagc accgaaaaat gaaaaaatcc gttgcccttt gcatcgctgc ctatcaagaa acagcaggac gcgcccaagc 60 ggtgctgacc atcgccttcg 120 cggggtgccg ctggcctccg 180 cctttcagcg cacctggtgg 240 ggcggcggcg cgggggccgc 300 cgcctaccag gaggaccccg 360 gtacccgcgc gcgcggctgc 420 ctacatggtc gacatgttcc 480 ggacggcaac taccaccagc 540 ctatcgggag gtggaggcgg 600 tcgcaggtgc gtgtgcgtgg 660 cttcaaggcg ctcggagatt 720 ggaccccatg gcactgctgg 780 tgttggtggg gacgtgcgga 840 cctgcgatac tgggtagcct 900 atcctgcatc agcggtcctc 960 ggcctggtac aaccagaagt 1020 caccaaccgc atgctcagca 1080 ctcagagacg ccctcgtcct 1140 gtacttccgt gagtggctgt 1200 ctacgaggcg gtggtctccg 1260 gttctacgcg ggccgccctt 1320 actggccaag gcggccttcg 1380 gctctacgcg cccctctaca 1440 catgaaccag agtggctggg 1500 tctgctgccc ctggcgctct 1560 acacgaggcc agggccgact 1620 cgcgggggcc ggcgcctacg 1680 cgtgcggagg ctttgccggc 1740 acgcggatgc cgcctcaagg 1800 ccacgaactt gctgggtggt 1860 tcagcccaag attcttcagt 1920 gggtatttat tggtcagggt 1980 ctcgttctta tttaatctcc 2040 tattttcaaa aaaaaaaaaa 2100 2116 cgagcagccc attgaaccag 60 ctgcgcttcc tgggttctgc 120 taagacgaaa aagagatttt 180 aaaaaaaaaa aagaaaagaa 240 ttttaagaat tagactgaag 300 ttaaagtggg gaagaatcaa 360 aatttcttat tttttttggc 420 ttggaaactg cccgccaccg 480 gaccaagagc tgaacaagat 540 accacactct ttggagtctc 600 cagtttatcc aaacggataa 660 tcacacctca tcatccaaag 720 ctagaaaccc ccataaagtt 780 gatccagact acttaaggaa 840
- 325 031986 atgtttgcaa tctgtgaaaa tgggaactca gaagatgacc caaatcagcc acttatatct tgagtcacat aaagaaagct ctgcatcatg caaaaatggg gggacgaagt gtggattatg atctgtggag atggtaaaag tgtccagatt ttaaacaagt gatggctttt aatatagaaa tggacctctg ggaatgtaca tcaagaattt atgggcaacc gctgagcctg ggctatgcaa tatagaatat ctcagatggc atggctgtac aatgcaatgt tatcactgga ttctttcctt taaaatttgg aacattctcc atcttttgcc agctgcctta gttatacatg tcgagtttac tgggtggggc acatcaggaa atcagtttgg tttacaatcc aaggccattt tcagaatcca ctattgggtc atgcttttga gaagggacaa caatatgaca gtcacacaca acaccttagt caccaaagga gacatatcac tttcattctg ccaaagtaaa tttctatgaa aatgggatga tgaaagtgtt ttgccctata aaaggatttt ggaaactcaa gttttgatag atgataattt gaaatgccaa aggaagtttt gtgtttttaa attttgtatg tttctgccaa aataaacctg atacttaaaa aatcctgccc aataaaatgt ttctctctct tatttaaact ttcaatattt cctatcacac tttggaagta gaaaatcaag gccaaaggta agtctttgaa agaaaacagt ataatctttg gagattctgg ttatctgtat aattttggac <210> 197 <211> 4220 <212> ДНК <213> Homo sapiens <220>
<223> транскрипт HAS3 <400> 197 gagtgcgttc gcggctgctt ggcgccagcg cccaggttgc ggcaggcagg ggggtcccgc ctgcgtgtgg tgggcaccag tatgtgacgg gctaccagtt ggcgccatcc tgggcctgca cgcatgcgac gtgccggcca ctgtgcattg ccgcatacca cagcgcatct ccttccctga gacgcctaca tgctggacat tttgtgtggc gcagcaactt gagggcatgg accgtgtgcg ggctaaccta tttacatgat ggaagaacaa cgcaacacgt gtggaaaaag tacaggtttg ttttagaaga acgattcctg gggcctgtca gaaactcctt aatgtagctt caaaatacac taaaccagca ggtttcacaa tctttctcat tcttcttgtt gaggaaatat ttcccgccaa ggaaaaccat tcctgggtgg aacagacagt cgctgtatgt tggtgcttga tcctctaggg tgctgctggg acaatacatc attctttgtt tacctcacta ggaaaagttc ttttttttta aaaggccgtt ccaatcttaa ttcttccttt aaaatgtgaa ctacctttta taactttttg aaaatacaca gtgcaatttt aggcatccag cagtgttttc acatacaatg вариант 1 tgacctggtg tgggctggcc cgcgcccctt cctgtttgcc catccacacg cctgctcatt ggccctgaag ggaggaccct cctcaaggtg cttccacgag ccatgaggca ggatgtggtg ccctgggatt ggacatcttc cttccacgaa aacgcaattg agaagtcatg tgattcagac agatcccatg gatctcattc gtcttatttt gttgcatgag tggtgatgac agctcgatct gacccgttgg acatcacttg tgccacagta aactgtccag cgtcatggtc gatgtttgca tgttgttaat tgtgattttc tctaattgtt agttctcatc tgtatgatct gctgtacagt acttgaacaa aacaagaaga tatgcacttt gccatgcttt tttcaaccta ggaaggattt ggctgtgctg agacaaattt tttaaaataa gcttggttga aaattgaata tttttatttc ctttcgtgtg ttcattaaga cactggacaa ccagaacaag cagtt ggcgccgcct ttggcgcccc cagcatatgc ctggcagtgc gaaaagcact cagagccttt ctgccctccc gactacttgc gtcatggtgg gtgctgggcg ggcgagggtg cgggccagca aaagttgtca agtgaagtca aagggtcccg gtcttgtcca tacacagcct actatgcttg gttggaggtg ctcagcagtg gggtgtgttc tttgtggaag aggcatctca aagtgcctta agcaagtcct tggatgacct atccagctct ctagtaggtc ttcatgtctc attgcaacaa ttcataggac accatttata ggaacgttgc aataagtgtg tccatgtttt attgtggcat agacatttat aactcagatt ttccttactg atgtgggtta tacaacctaa tctttttaac tattttgata tgcatattct aataagttct ctgatgttca gtttatttct ttttagaaaa tacctaaaaa tttaaaaaaa aacatgggta tcaagtggaa ccggcactgc cttcccctac cggtgcagct tgggtggcat acctgtcctt ttgccttcct cgcggcgggg gcaagtgcct tggatggcaa gcaccgagca agacggaggc ccttctcgtg tggtcataga tgggcagaga gtgagacaga acaaaagtat tcagagcact acccagcctc ttgggggaga taagatattg agtgcattag attggtacaa cgaaccgggt ctgaaacacc acttccgaga acgaagcgat tctaccgggg tcataaaatc tctactcagt taaacaaagc tcattccagt aggagtctaa tctatgcatg gcaggcggaa gacgtttgca cagataatgc atgggtttat taacctgtta tgcatccgcc tcatggaaga cttatggact tttaccaaat taattgtact ctattttact taaaaaattt tgatagaaag gtgaaagaag ggccaatata aaaaatcgtt agggaatgat tcaaagatga agtggagaaa
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1500
1560
1620
1680
1740
1800
1860
1920
1980
2040
2100
2160
2220
2280
2340
2400
2460
2520
2580
2640
2700
2760
2820
2880
2940
3000
3060
3120
3180
3240
3275 accgaggcgg ccagagcgca gacgacagcc cctggcagcc cggcctgtac ggagcaccgg ctcggtggca gcgctcggcc ccgccaggag ggccggcttc cagcctgcag catcatgcag
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
- 326 031986 aagtggggag gcaagcgcga ggtcatgtac gactacatcc aggtgtgcga ctctgacact cttcgagtcc tggaggagga tccccaagta aacaagtacg actcatggat ttccttcctg gtggagcggg cctgccagtc ctactttggc atgtaccgca acagcctcct ccagcagttc ggcagcaagt gcagcttcgg ggatgaccgg taccgaacta agtataccgc gcgctccaag cggtggctca accagcaaac ccgctggagc tctctgtggt tccataagca ccacctctgg ttccccttct tcctcattgc cacggttata attctcctct tcctgctgac ggtgcagctg ttccttcggg gcaatgcaga gatgatcttc agccttctgc cggccaagat ctttgccatt tctggccgaa aaaccattgt ggtgaacttc gcagttctcc tgggagggct ggcctacaca gagctagcct tccttgtctc tggggctata atgctatatc tggccatcat cgcccggcga gcttttgctg aggtgtgaca tggcccccaa agggaagggg aatggaagag aaaagacagg gtctcttaat ggtccaaagg acaaatctaa gacagctctg tttagaggag gcaacactga gtgttttcag actgcctgtc tgcttgcatc ccagagggca ctcagaagtt gtgctaaacc ataggtacct gagtgacggc aacctgcgga ccagaggtgg caggagaatt tctactgagc accccacccc taagtagtca tcaatgcaat gcctgatctt tgggcatcag aaaacagggt actccacatc aacattccag ggatgagcca ttaaaagtgc acattaaaaa ggaaagtttg taaaggaggc cataagctac acagaggcct tctagatggg ttcttagctt gtctgtgatc aacatgttca gaaaagaagt gaagtcttgg ctcaaattca gctctgatct gaggctaaga acattttttg aggtatcact gcagtcacct tcaaggtggc aattggggcg gagccccggc tgttctcagc acatatggga actatgagga gctgcttgga cggattcctt ggcagccggg ttgacaatca tctccaatgg aaagcttttc aatggttatc tttgagacca tccattctcc caagttgtga cagtcactgc atttgcctgc actggttcct acatcctaag gttcttgctt gctgttttcc ctctgctgct tttggggaat tccaggctgt tctcagcgtt ttgagtttaa aagggttgct tgcttgccct ccaaatgtcc aaccagcact aaggtggaca gcagacaaga tacaaagacg caaggtgtgc tctgagccac ctcccacgaa ctcaagggtt ttccaggtgt gagtttctgg taagactgct ggttgacatc aggcatttgc taaggcagct gatccaggca tttgagcatt agaatggagg aaatccggtc ggcttgtttt tcttcagcat ttacttgaag gtcctaccat cagctctgcc ttgcactgtg caggtacagg tagtgggctc acaacgtttg acatttttca gcagcaaaac caaactgggt aagagccttt atacaattgg acgcattttg tttgtattgt ttctacaata atttgtaaac ttttaatttt caggtcaagt tttttatact atatgccggt tatctcgaaa acggccttca aggccctcgg cgattcggtg 780 gtgctggatc cagcctgcac catcgagatg 840 gggggagtcg ggggagatgt ccagatcctc 900 agcagcgtgc ggtactggat ggccttcaac 960 tgtgtgcagt gtattagtgg gcccttgggc 1020 ctggaggact ggtaccatca gaagttccta 1080 cacctcacca accgagtcct gagccttggc 1140 tgcctcacag agacccccac taagtacctc 1200 aagtcttact tccgggagtg gctctacaac 1260 atgacctacg agtcagtggt cacgggtttc 1320 cagcttttct accggggccg catctggaac 1380 gtgggcatta tcaaggccac ctacgcctgc 1440 atgtccctct actccctcct ctatatgtcc 1500 gctaccatca acaaatctgg ctggggcacc 1560 attggcctca ttcctgtgtc catctgggtg 1620 gcttattgcc aggacctgtt cagtgagaca 1680 ctgtatggct gctactgggt ggccctcctc 1740 tgtgggaaga agccggagca gtacagcttg 1800 gcagagcggg taaagtgcaa tgggtaaggg 1860 gtgggaggga ggagggagtg ctgtgtttta 1920 aatgcaaaga acggtgatgt agtatggcct 1980 tcccccagat gcagggctgc aggggattct 2040 tgcacatagg cagtagcctc ctcctgggct 2100 aagttaagtc ccattcagtg gcaacttgtg 2160 aggaggttct cccagcccat ctgaacacaa 2220 gagctgggcc ggttagtgta tgtcaccccc 2280 aagattgcgc ctgagataca aggcccagaa 2340 ccaggaatgg tgctttatgt gagatacccc 2400 aaccagcagg gagttagcac tgaactgctt 2460 ccaggaggaa caaagagatt gtggtggtgc 2520 tgggtgttcc acctggaaac tgctcagacg 2580 tctgctgggg agataaaaag attaagcccc 2640 gtattttaac ctgtatactc ttgaattcct 2700 cacactcccc acttcacttt cttcaaagcc 2760 cttctaccct catcatcata ggtaaggttt 2820 tcttatagaa gcttcagcag gaggcaagcg 2880 gcctctgatc aaattggcta caatcttgga 2940 ttagcatgtg tgactttcag gctactgttc 3000 agtgttccca aagtgaactc tcaaatccaa 3060 tcagtggctt ctccagggaa ttcttacagc 3120 ttctttccag aaaccaaact aggagatgaa 3180 tctctctcat gcctcctgag gctgtttttg 3240 gaggggaagc cattttccag tgacttgcaa 3300 aacctgggat cctgactaag cctttgactt 3360 tttctcagag gggccagcta acccgtgcag 3420 gggcaagcct ctagtgtacc aagtgcttcc 3480 agatgggcaa accctggtgc tttccttcat 3540 agctaacagt tgccacatca cacagacctc 3600 agacccaacc catgaaggct ggaaggcagc 3660 atcgttctgc tggccaagaa gttaaactat 3720 agccaagtgc agagttcaga cttcgctaag 3780 attaatgtag gatgacaggc tctcctggct 3840 gtcgtcaact ttcctcaaat caaaaacagg 3900 acctcgactg gtttttctaa gttattttgt 3960 cttcagcttt atccccgttt cttgcaaggg 4020 gtttttcctc attgagaatt caaatcctct 4080 atatttattt ttacctgctt tttttttttt 4140 gcacttattt gtcaaaataa agattctcac 4200 4220 <210> 198 <211> 1229 <212> ДНК
- 327 031986 <213> Homo sapiens <220>
<223> транскрипт HAS3 вариант 2 <400> 198 ggaggggcat ggagccgccg cgggcctgct atgccggtgc agctgacgac agccctgcgt gtgctgggtg gcatcctggc agcctatgtg cactacctgt ccttcggcct gtacggcgcc ctttttgcct tcctggagca ccggcgcatg tccccgcggc ggggctcggt ggcactgtgc ttgcgcaagt gcctgcgctc ggcccagcgc gtggtggatg gcaaccgcca ggaggacgcc ggcggcaccg agcaggccgg cttctttgtg ggtgagacgg aggccagcct gcaggagggc agcaccttct cgtgcatcat gcagaagtgg ttcaaggccc tcggcgattc ggtggactac gatccagcct gcaccatcga gatgcttcga gtcgggggag atgtccagcc cccagggaaa gctgcccagg tcagagctac ggaagcatgg cagtgagctg attctccaat ggtgagcagg aatgtatccc tgaggaaaag tccacaagaa cagaaagctg tgggacgaaa gcacagcagg agggcaggat tattcccacc tgccacagtt tcaagaaaaa cgcaaaggaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa gagctccgga gcgcggcagc cggcggcacg 60 gtggtgggca ccagcctgtt tgccctggca 120 acgggctacc agttcatcca cacggaaaag 180 atcctgggcc tgcacctgct cattcagagc 240 cgacgtgccg gccaggccct gaagctgccc 300 attgccgcat accaggagga ccctgactac 360 atctccttcc ctgacctcaa ggtggtcatg 420 tacatgctgg acatcttcca cgaggtgctg 480 tggcgcagca acttccatga ggcaggcgag 540 atggaccgtg tgcgggatgt ggtgcgggcc 600 ggaggcaagc gcgaggtcat gtacacggcc 660 atccaggtgt gcgactctga cactgtgctg 720 gtcctggagg aggatcccca agtaggggga 780 ggtatggcag tagaggatga ccaggtccaa 840 tccgttcacc aacgccacgt ttctagagag 900 ggactacatg tgaactggga cctgcaggcc 960 caattcaaga aactagtaag aaacaatggg 1020 cttctgggag gctggagatc ctttctctca 1080 cacatgccac aaataacatc tcaccttcag 1140 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1200 1229 <210> 199 <211> 509 <212> БЕЛОК <213> Pan troglodyte <220>
<223> Предшественник chimpanzee PH20 XP_527873 <400> 199
Met Gly Val Leu Lys Phe Lys His Ile Phe Phe Arg Ser Phe Val Lys
1 5 10 15
Ser Ser Gly Val Ser Gln Ile Val Phe Thr Phe Leu Leu Ile Pro Cys
20 25 30
Cys Leu Thr Leu Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro
35 40 45
Phe Leu Trp Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe
50 55 60
Asp Glu Pro Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg
65 70 75 80
Ile Asn Val Thr Gly Gln Asp Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu
85 90 95
Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly
100 105 110
Gly Ile Pro Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys
115 120 125
Lys Asp Ile Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val
130 135 140
Ile Asp Trp Glu Glu Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Val Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn
165 170 175
Val Gln Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe
180 185 190
Glu Lys Ala Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys
195 200 205
- 328 031986
Leu Leu 210 Arg Pro Asn His Leu 215 Trp Gly Tyr Tyr Leu 220 Phe Pro Asp Cys
Tyr Asn His His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn
225 230 235 240
Val Glu Ile Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser
245 250 255
Thr Ala Leu Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val
260 265 270
Ala Ala Thr Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Gln Glu Ala Ile Arg Val
275 280 285
Ser Lys Ile Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Val Tyr Thr
290 295 300
Arg Ile Val Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu
305 310 315 320
Leu Val Tyr Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile
325 330 335
Val Ile Trp Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu
340 345 350
Leu Leu Asp Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn
355 360 365
Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln
370 375 380
Gly Val Cys Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu
385 390 395 400
Asn Pro Asp Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr
405 410 415
Val Arg Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys
420 425 430
Phe Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp
435 440 445
Val Lys Asp Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys
450 455 460
Ile Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Ser Gln Ile
465 470 475 480
Phe Tyr Asn Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val
485 490 495
Ser Ile Leu Phe Leu Ile Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu
500 505
<210> 200 <211> 474 <212> БЕЛОК <213> Pan troglodyte <220>
<223> зрелая PH20 шимпанзе XP_527873 <400> 200
Leu 1 Asn Phe Arg Ala 5 Pro Pro Val Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asp Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Phe Ile Gly Ser Pro Arg Ile Asn Val
35 40 45
Thr Gly Gln Asp Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Ser Ile Thr Gly Val Thr Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Lys Ile Ser Leu Gln Asp His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Tyr Met Pro Val Asp Asn Leu Gly Met Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
- 329 031986
Glu Glu Trp 115 Arg Pro Thr Trp Ala 120 Arg Asn Trp Lys Pro 125 Lys Asp Val
Tyr Lys Asn Arg Ser Ile Glu Leu Val Gln Gln Gln Asn Val Gln Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Glu Ala Thr Glu Lys Ala Lys Gln Glu Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Leu Val Glu Thr Ile Lys Leu Gly Lys Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Lys Lys Pro Gly Tyr Asn Gly Ser Cys Phe Asn Val Glu Ile
195 200 205
Lys Arg Asn Asp Asp Leu Ser Trp Leu Trp Asn Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Ile Tyr Leu Asn Thr Gln Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Gln Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Ile
245 250 255
Pro Asp Ala Lys Ser Pro Leu Pro Val Phe Val Tyr Thr Arg Ile Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Val Leu Lys Phe Leu Ser Gln Asp Glu Leu Val Tyr
275 280 285
Thr Phe Gly Glu Thr Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly Ile Val Ile Trp
290 295 300
Gly Thr Leu Ser Ile Met Arg Ser Met Lys Ser Cys Leu Leu Leu Asp
305 310 315 320
Asn Tyr Met Glu Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Glu Gln Gly Val Cys
340 345 350
Ile Arg Lys Asn Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro Asp
355 360 365
Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Lys Gly Gly Lys Phe Thr Val Arg Gly
370 375 380
Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Glu Gln Phe Ser Glu Lys Phe Tyr Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Ser Thr Leu Ser Cys Lys Glu Lys Ala Asp Val Lys Asp
405 410 415
Thr Asp Ala Val Asp Val Cys Ile Ala Asp Gly Val Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Phe Leu Lys Pro Pro Met Glu Thr Glu Glu Ser Gln Ile Phe Tyr Asn
435 440 445
Ala Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Thr Met Phe Ile Val Ser Ile Leu
450 455 460
Phe Leu Ile Ile Ser Ser Val Ala Ser Leu
465 470
<210> 201 <211> 477 <212> БЕЛОК <213> Macaca mulatta <220>
<223> зрелая PH20 макак-резус EHH17639 <400> 201
Leu Asn 1 Phe Arg Ala 5 Pro Pro Ile Ile Pro 10 Asn Val Pro Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Ser Glu Phe Cys Leu Gly Lys Phe Asn Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Thr Leu Met Gly Ser Pro Arg Ile Asn Ile
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
- 330 031986
Pro Tyr 65
Gln Lys
Leu Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro
225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Leu
290
Gly Ser
305
Thr Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro
385
Ser Cys
Thr Asp
Ser Leu
Asn Thr
450
Glu Val
465
Ile Asp
Val Ser
Tyr Met
100 Trp Arg 115
Asn Arg
Pro Gln
Asp Phe
His Leu
180 Arg Lys 195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln 275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340 Lys Asp 355 Asp Ile
Thr Val
Tyr Thr
Ala Val
420
Lys Pro
435
Ser Ser
Trp Asp
Leu Thr
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Met Leu
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Asn Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Thr
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Arg Leu
Glu Asp
390
Asn Leu
405
Asp Val
Pro Val
Ser Thr
Gln Gly
470
Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu 135
Asp Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360 Glu Lys 375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Val Ser
455
Ile Ser
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe 185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Glu Phe
Lys Glu
410
Ala Asp 425
Glu Gly
Thr Thr
Arg Ile
Val His 75
Lys Ser
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Val
235
Ile Arg
Val Tyr
Arg Glu
Ser Gly
300 Ser Cys 315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Ser Pro
Met Phe
460 Gly Phe 475
Gly Gly
Lys Gln
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Arg Ser
Cys Tyr
190 Asp Val 205
Ser Thr
Val Val
Val Ser
Ala Arg
270
Glu Leu 285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Pro Ile
445
Ile Trp
Phe
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Leu Val
Val Ser
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
His Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala
Phe Tyr
Arg Leu <210> 202 <211> 475 <212> БЕЛОК <213> Macaca fascicularis <220>
<223> зрелая PH20 Cynomolgus monkey P38568.1 <400> 202
- 331 031986
Leu Asn
Ala Trp
Leu Asp
Thr Gly
Pro Tyr
Gln Lys
Leu Phe
Glu Glu
Tyr Lys
130
Ser Leu
145
Gly Lys
Pro Asn
His Tyr
Lys Arg
210
Tyr Pro 225
Leu Tyr
Pro Asp
Phe Thr
Thr Leu
290
Gly Ser 305
Thr Tyr
Ala Ala
Ile Arg
Asn Phe
370
Lys Pro 385
Ser Cys
Thr Asp
Ser Leu
Asn Thr
450
Leu Phe
465
Phe Arg
Asn Ala
Met Ser 35
Gln Gly
Ile Asp
Val Ser
Tyr Met
100 Trp Arg 115 Asn Arg
Pro Gln
Asp Phe
His Leu
180 Arg Lys 195
Asn Asp
Ser Ile
Val Arg
Ala Lys
260
Asp Gln
275
Gly Glu
Leu Ser
Met Glu
Lys Met
340 Lys Asp 355 Asp Ile
Thr Val
Tyr Thr
Ala Val
420
Lys Pro
435
Ser Ser
Leu Ile
Ala Pro
Pro Ser
Leu Phe
Val Thr
Leu Thr
Leu Gln
Pro Val
Pro Thr
Ser Ile
Ala Thr
150
Met Leu
165
Trp Gly
Pro Gly
Asp Leu
Tyr Leu
230
Asn Arg
245
Asn Pro
Val Leu
Thr Val
Ile Thr
310
Thr Ile
325
Cys Ser
Trp Asn
Arg Leu
Glu Asp
390
Asn Leu 405
Asp Val
Pro Val
Ser Thr
Ile Ser
470
Pro Ile
Glu Phe
Thr Leu
Ile Phe
Thr Gly
Asp His
Asp Asn
Trp Ala
120
Glu Leu 135
Asp Lys
Glu Thr
Tyr Tyr
Tyr Asn
200 Ser Trp 215
Asn Thr
Val Arg
Leu Pro
Lys Phe
280
Ala Leu 295
Arg Ser
Leu Asn
Gln Val
Ser Ser
360
Glu Lys
375
Leu Glu
Ser Cys
Cys Ile
Glu Thr
440
Val Ser
455
Ser Val
Ile Pro
Cys Leu 25
Met Gly
Tyr Val
Val Thr
Leu Asp
Leu Gly
105
Arg Asn
Val Gln
Ala Lys
Ile Lys
170
Leu Phe
185
Gly Ser
Leu Trp
Gln Gln
Glu Ala
250
Val Phe
265
Leu Ser
Gly Ala
Met Lys
Pro Tyr
330 Leu Cys 345
Asp Tyr
Gly Gly
Glu Phe
Lys Glu
410 Ala Asp 425
Glu Gly
Thr Thr
Ala Ser
Asn Val
Gly Lys
Ser Pro
Asp Arg
Val His
Lys Ser
Met Ala
Trp Lys
Gln Gln
140
Gln Glu
155
Leu Gly
Pro Asp
Cys Phe
Asn Glu
220
Ser Val
235
Ile Arg
Val Tyr
Arg Glu
Ser Gly
300 Ser Cys 315
Ile Ile
Gln Glu
Leu His
Lys Phe
380
Ser Glu 395
Lys Ala
Gly Val
Ser Pro
Met Phe
460
Leu
475
Pro Phe
Phe Asn
Arg Ile 45 Leu Gly
Gly Gly
Lys Gln
Val Ile
110 Pro Lys 125
Asn Val
Phe Glu
Arg Ser
Cys Tyr
190 Asp Val 205
Ser Thr
Val Val
Val Ser
Ala Arg
270
Glu Leu 285
Ile Val
Leu Leu
Asn Val
Gln Gly
350
Leu Asn
365
Thr Val
Lys Phe
Asp Val
Cys Ile
430
Pro Ile
445
Ile Val
Leu Trp
Glu Pro
Asn Val
Tyr Tyr
Ile Pro
Asp Ile
Asp Trp
Asp Val
Gln Leu
Lys Ala
160 Leu Arg 175
Asn His
Glu Ile
Ala Leu
Ala Thr
240
Lys Ile
255
Leu Val
Val Ser
Ile Trp
Leu Asp
320
Thr Leu 335
Val Cys
Pro Asp
His Gly
Tyr Cys
400 Lys Asp 415
Asp Ala
Phe Tyr
Asn Ile <210> 203 <211> 518
- 332 031986 <212> БЕЛОК <213> Bos taurus <220>
<223> Зрелая коровья PH20 <400> 203
Leu 1 Asp Phe Arg Ala 5 Pro Pro Leu Ile Ser 10 Asn Thr Ser Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Val Glu Arg Cys Val Asn Arg Arg Phe Gln Leu
20 25 30
Pro Pro Asp Leu Arg Leu Phe Ser Val Lys Gly Ser Pro Gln Lys Ser
35 40 45
Ala Thr Gly Gln Phe Ile Thr Leu Phe Tyr Ala Asp Arg Leu Gly Tyr
50 55 60
Tyr Pro His Ile Asp Glu Lys Thr Gly Lys Thr Val Phe Gly Gly Ile
65 70 75 80
Pro Gln Leu Gly Asn Leu Lys Ser His Met Glu Lys Ala Lys Asn Asp
85 90 95
Ile Ala Tyr Tyr Ile Pro Asn Asp Ser Val Gly Leu Ala Val Ile Asp
100 105 110
Trp Glu Asn Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Val Tyr Arg Asp Glu Ser Val Glu Leu Val Leu Gln Lys Asn Pro Gln
130 135 140
Leu Ser Phe Pro Glu Ala Ser Lys Ile Ala Lys Val Asp Phe Glu Thr
145 150 155 160
Ala Gly Lys Ser Phe Met Gln Glu Thr Leu Lys Leu Gly Lys Leu Leu
165 170 175
Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn
180 185 190
His Asn His Asn Gln Pro Thr Tyr Asn Gly Asn Cys Pro Asp Val Glu
195 200 205
Lys Arg Arg Asn Asp Asp Leu Glu Trp Leu Trp Lys Glu Ser Thr Ala
210 215 220
Leu Phe Pro Ser Val Tyr Leu Asn Ile Arg Leu Lys Ser Thr Gln Asn
225 230 235 240
Ala Ala Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Gln Glu Ala Ile Arg Leu Ser
245 250 255
Lys Ile Ala Ser Val Glu Ser Pro Leu Pro Val Phe Val Tyr Ala Arg
260 265 270
Pro Val Phe Thr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Leu Ser Gln Gly Asp Leu
275 280 285
Val Asn Ser Val Gly Glu Ile Val Ser Leu Gly Ala Ser Gly Ile Ile
290 295 300
Met Trp Gly Ser Leu Asn Leu Ser Leu Ser Met Gln Ser Cys Met Asn
305 310 315 320
Leu Gly Thr Tyr Leu Asn Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val
325 330 335
Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys His Asn Glu Gly
340 345 350
Val Cys Thr Arg Lys His Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn
355 360 365
Pro Met Asn Phe Ala Ile Gln Thr Gly Glu Gly Gly Lys Tyr Thr Val
370 375 380
Pro Gly Thr Val Thr Leu Glu Asp Leu Gln Lys Phe Ser Asp Thr Phe
385 390 395 400
Tyr Cys Ser Cys Tyr Ala Asn Ile His Cys Lys Lys Arg Val Asp Ile
405 410 415
Lys Asn Val His Ser Val Asn Val Cys Met Ala Glu Asp Ile Cys Ile
420 425 430
Asp Ser Pro Val Lys Leu Gln Pro Ser Asp His Ser Ser Ser Gln Glu
435 440 445
- 333 031986
Ala Ser 450 Thr Thr Thr Phe Ser 455 Ser Ile Ser Pro Ser 460 Thr Thr Thr Ala
Thr Val Ser Pro Cys Thr Pro Glu Lys His Ser Pro Glu Cys Leu Lys
465 470 475 480
Val Arg Cys Ser Glu Val Ile Pro Asn Val Thr Gln Lys Ala Cys Gln
485 490 495
Ser Val Lys Leu Lys Asn Ile Ser Tyr Gln Ser Pro Ile Gln Asn Ile
500 505 510
Lys Asn Gln Thr Thr Tyr
515 <210> 204 <211> 439 <212> БЕЛОК <213> Bos taurus <220>
<223> зрелая коровья PH20 AAP55713 <400> 204
Leu 1 Asp Phe Arg Ala 5 Pro Pro Leu Ile Ser 10 Asn Thr Ser Phe Leu 15 Trp
Ala Trp Asn Ala Pro Val Glu Arg Cys Val Asn Arg Arg Phe Gln Leu
20 25 30
Pro Pro Asp Leu Arg Leu Phe Ser Val Lys Gly Ser Pro Gln Lys Ser
35 40 45
Ala Thr Gly Gln Phe Ile Thr Leu Phe Tyr Ala Asp Arg Leu Gly Tyr
50 55 60
Tyr Pro His Ile Asp Glu Lys Thr Gly Lys Thr Val Phe Gly Gly Ile
65 70 75 80
Pro Gln Leu Gly Asn Leu Lys Ser His Leu Glu Lys Ala Lys Asn Asp
85 90 95
Ile Ala Tyr Tyr Ile Pro Asn Asp Ser Val Gly Leu Ala Val Ile Asp
100 105 110
Trp Glu Asn Trp Arg Pro Thr Trp Ala Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Val Tyr Arg Asp Glu Ser Val Glu Leu Val Leu Gln Lys Asn Pro Gln
130 135 140
Leu Ser Phe Pro Glu Ala Ser Lys Ile Ala Lys Val Asp Phe Glu Thr
145 150 155 160
Ala Gly Lys Ser Phe Met Gln Glu Thr Leu Lys Leu Gly Lys Leu Leu
165 170 175
Arg Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn
180 185 190
His Asn His Asn Gln Pro Thr Tyr Asn Gly Asn Cys Pro Asp Val Glu
195 200 205
Lys Arg Arg Asn Asp Asp Leu Glu Trp Leu Trp Lys Glu Ser Thr Ala
210 215 220
Leu Phe Pro Ser Val Tyr Leu Asn Ile Arg Leu Lys Ser Thr Gln Asn
225 230 235 240
Ala Ala Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Gln Glu Ala Ile Arg Leu Ser
245 250 255
Lys Ile Ala Ser Val Glu Ser Pro Leu Pro Val Phe Val Tyr Ala Arg
260 265 270
Pro Val Phe Thr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Leu Ser Gln Gly Asp Leu
275 280 285
Val Asn Ser Val Gly Glu Ile Val Ser Leu Gly Ala Ser Gly Ile Ile
290 295 300
Met Trp Gly Ser Leu Asn Leu Ser Leu Ser Val Gln Ser Cys Met Asn
305 310 315 320
Leu Gly Thr Tyr Leu Asn Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val
325 330 335
Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys His Asp Gly Gly
- 334 031986
340 345 350
Val Cys Thr Arg Lys His Trp Asn Ser Ser Asp Tyr Leu His Leu Asn
355 360 365
Pro Met Asn Phe Ala Ile Gln Thr Gly Glu Gly Gly Lys Tyr Thr Val
370 375 380
Pro Gly Thr Leu Thr Leu Glu Asp Leu Gln Lys Phe Ser Asp Thr Phe
385 390 395 400
Tyr Cys Ser Cys Tyr Ser Asn Leu Ser Cys Lys Lys Arg Val Asp Ile
405 410 415
Lys Asn Val His Ser Val Asp Val Cys Met Ala Glu Asp Val Cys Ile
420 425 430
Asp Ala Phe Leu Lys Pro Pro
435 <210> 205 <211> 477 <212> БЕЛОК <213> Mus musculus <220>
<223> Зрелая мышиная PH20 NP_001073344.1 <400> 205
Val Asp Tyr Arg Ala Ala Pro Ile Leu Ser Asn Thr Thr Phe Leu Trp
1 5 10 15
Ile Trp Asn Val Pro Thr Glu Arg Cys Val Gly Asn Val Asn Asp Pro
20 25 30
Ile Asp Leu Ser Phe Phe Ser Leu Ile Gly Ser Pro Arg Lys Thr Ala
35 40 45
Thr Gly Gln Pro Val Thr Leu Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Leu Tyr
50 55 60
Pro His Ile Asp Ala Asn Gln Ala Glu His Tyr Gly Gly Ile Pro Gln
65 70 75 80
Arg Gly Asp Tyr Gln Ala His Leu Arg Lys Ala Lys Thr Asp Ile Glu
85 90 95
His Tyr Ile Pro Asp Asp Lys Leu Gly Leu Ala Ile Ile Asp Trp Glu
100 105 110
Glu Trp Arg Pro Thr Trp Leu Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Asn Tyr
115 120 125
Arg Asn Lys Ser Ile Glu Leu Val Gln Ser Thr Asn Pro Gly Leu Ser
130 135 140
Ile Thr Glu Ala Thr Gln Lys Ala Ile Gln Gln Phe Glu Glu Ala Gly
145 150 155 160
Arg Lys Phe Met Glu Gly Thr Leu His Leu Gly Lys Phe Leu Arg Pro
165 170 175
Asn Gln Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Asn Lys
180 185 190
Phe Gln Asp Pro Lys Tyr Asp Gly Gln Cys Pro Ala Val Glu Lys Lys
195 200 205
Arg Asn Asp Asn Leu Lys Trp Leu Trp Lys Ala Ser Thr Gly Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Val Tyr Leu Lys Lys Asp Leu Lys Ser Asn Arg Gln Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Tyr Arg Val Val Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys Val
245 250 255
Gly Asn Ala Ser Asp Pro Val Pro Ile Phe Val Tyr Ile Arg Leu Val
260 265 270
Phe Thr Asp Arg Thr Ser Glu Tyr Leu Leu Glu Asp Asp Leu Val Asn
275 280 285
Thr Ile Gly Glu Ile Val Ala Leu Gly Thr Ser Gly Ile Ile Ile Trp
290 295 300
Asp Ala Met Ser Leu Ala Gln Arg Ala Ala Gly Cys Pro Ile Leu His
305 310 315 320
- 335 031986
Lys Tyr Met Gln Thr 325 Thr Leu Asn Pro Tyr 330 Ile Val Asn Val Thr 335 Leu
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Thr Leu Cys Asn Glu Lys Gly Met Cys
340 345 350
Ser Arg Arg Lys Glu Ser Ser Asp Val Tyr Leu His Leu Asn Pro Ser
355 360 365
His Phe Asp Ile Met Leu Thr Glu Thr Gly Lys Tyr Glu Val Leu Gly
370 375 380
Asn Pro Arg Val Gly Asp Leu Glu Tyr Phe Ser Glu His Phe Lys Cys
385 390 395 400
Ser Cys Phe Ser Arg Met Thr Cys Lys Glu Thr Ser Asp Val Lys Asn
405 410 415
Val Gln Asp Val Asn Val Cys Val Gly Asp Asn Val Cys Ile Lys Ala
420 425 430
Lys Val Glu Pro Asn Pro Ala Phe Tyr Leu Leu Pro Gly Lys Ser Leu
435 440 445
Leu Phe Met Thr Thr Leu Gly His Val Leu Tyr His Leu Pro Gln Asp
450 455 460
Ile Phe Val Phe Pro Arg Lys Thr Leu Val Ser Thr Pro
465 470 475 <210> 206 <211> 477 <212> БЕЛОК <213> Rattus norvegicus <220>
<223> Зрелая крысиная PH20 NP_446419.1 <400> 206
Val Asp Tyr Arg Ala Thr Pro Val Leu Ser Asp Thr Thr Phe Val Trp
1 5 10 15
Val Trp Asn Val Pro Thr Glu Ala Cys Val Glu Asn Val Thr Glu Pro
20 25 30
Ile Asp Leu Ser Phe Phe Ser Leu Ile Gly Ser Pro Arg Lys Thr Ala
35 40 45
Ile Gly Gln Pro Val Thr Leu Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Asn Tyr
50 55 60
Pro His Ile Asp Ala Gln Gln Thr Glu His His Gly Gly Ile Pro Gln
65 70 75 80
Lys Gly Asp Leu Thr Thr His Leu Val Lys Ala Lys Glu Asp Val Glu
85 90 95
Arg Tyr Ile Pro Thr Asp Lys Leu Gly Leu Ala Ile Ile Asp Trp Glu
100 105 110
Glu Trp Arg Pro Thr Trp Met Arg Asn Trp Thr Pro Lys Asp Ile Tyr
115 120 125
Arg Asn Lys Ser Ile Glu Leu Val Gln Ala Ala Asp Pro Ala Ile Asn
130 135 140
Ile Thr Glu Ala Thr Val Arg Ala Lys Ala Gln Phe Glu Gly Ala Ala
145 150 155 160
Lys Glu Phe Met Glu Gly Thr Leu Lys Leu Gly Lys His Ile Arg Pro
165 170 175
Lys His Leu Trp Gly Phe Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Asn Lys
180 185 190
Phe Gln Val Asp Asn Tyr Asp Gly Gln Cys Pro Asp Val Glu Lys Lys
195 200 205
Arg Asn Asp Asp Leu Asp Trp Leu Trp Lys Glu Ser Thr Gly Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Val Tyr Leu Lys Lys Asp Leu Lys Ser Ser Arg Lys Ala Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Tyr Arg Val Leu Glu Ser Ile Arg Val Ser Lys Val
245 250 255
Ser Asp Glu Ser Asn Pro Val Pro Ile Phe Val Tyr Ile Arg Leu Val
- 336 031986
260 265 270
Phe Thr Asp His Val Ser Glu Tyr Leu Leu Glu Asp Asp Leu Val Asn
275 280 285
Thr Ile Gly Glu Ile Val Ala Gln Gly Thr Ser Gly Ile Ile Ile Trp
290 295 300
Asp Ala Met Ser Leu Ala Gln Arg Ser Ala Gly Cys Pro Ile Leu Arg
305 310 315 320
Gln Tyr Met Lys Thr Thr Leu Asn Pro Tyr Ile Val Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Thr Leu Cys Lys Glu Lys Gly Met Cys
340 345 350
Ser Arg Lys Thr Glu Ser Ser Asp Ala Tyr Leu His Leu Asp Pro Ser
355 360 365
Ser Phe Ser Ile Asn Val Thr Glu Ala Gly Lys Tyr Glu Val Leu Gly
370 375 380
Lys Pro Glu Val Lys Asp Leu Glu Tyr Phe Ser Glu His Phe Lys Cys
385 390 395 400
Ser Cys Phe Ser Lys Met Thr Cys Glu Glu Thr Ser Asp Met Arg Ser
405 410 415
Ile Gln Asp Val Asn Val Cys Met Gly Asp Asn Val Cys Ile Lys Ala
420 425 430
Thr Leu Gly Pro Asn Ser Ala Phe His Leu Leu Pro Gly Lys Gly Leu
435 440 445
Leu Leu Met Thr Thr Leu Ala His Ile Leu His His Leu Pro His Asp
450 455 460
Ile Phe Val Phe Pro Trp Lys Met Leu Val Ser Thr Pro
465 470 475 <210> 207 <211> 510 <212> БЕЛОК <213> Oryctolagus cuniculus <220>
<223> Зрелая кроличья PH20 NP_001076141. 1
<400> 207
Ala Asn Phe Arg Ala Pro Pro Val Ile Pro Asn Val Pro Phe Leu Trp
1 5 10 15
Ala Trp Asn Ala Pro Thr Glu Phe Cys Leu Gly Lys Ser Gly Glu Pro
20 25 30
Leu Asp Met Ser Leu Phe Ser Leu Phe Gly Ser Pro Arg Lys Asn Lys
35 40 45
Thr Gly Gln Gly Ile Thr Ile Phe Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro Tyr Ile Asp Pro His Thr Gly Ala Ile Val His Gly Arg Ile Pro
65 70 75 80
Gln Leu Gly Pro Leu Gln Gln His Leu Thr Lys Leu Arg Gln Glu Ile
85 90 95
Leu Tyr Tyr Met Pro Lys Asp Asn Val Gly Leu Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Glu Glu Trp Leu Pro Thr Trp Leu Arg Asn Trp Lys Pro Lys Asp Ile
115 120 125
Tyr Arg Ile Lys Ser Ile Glu Leu Val Lys Ser Gln His Pro Gln Tyr
130 135 140
Asn His Ser Tyr Ala Thr Glu Lys Ala Lys Arg Asp Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Gly Lys Asp Phe Met Glu Glu Thr Leu Lys Leu Gly Arg Leu Leu Arg
165 170 175
Pro Asn His Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn His
180 185 190
His Tyr Asp Lys Pro Asn Leu Tyr Lys Gly Ser Cys Phe Asp Ile Glu
195 200 205
- 337 031986
Lys Lys 210 Arg Asn Asp Asp Leu 215 Ser Trp Leu Trp Lys 220 Glu Ser Thr Ala
Leu Phe Pro Ser Val Tyr Leu Thr Ser Arg Ala Arg Ser Ala Thr Ala
225 230 235 240
Leu Ser Lys Leu Tyr Val Val Arg Asn Arg Val His Glu Ala Ile Arg
245 250 255
Val Ser Lys Ile Pro Asp Asp Lys Ser Pro Leu Pro Asn Phe Val Tyr
260 265 270
Thr Arg Leu Val Phe Thr Asp Gln Ile Phe Gln Phe Leu Ser His His
275 280 285
Asp Leu Val Tyr Thr Ile Gly Glu Ile Val Ala Leu Gly Ala Ser Gly
290 295 300
Ile Val Val Trp Gly Ser Gln Ser Leu Ala Arg Ser Met Lys Ser Cys
305 310 315 320
Leu His Leu Asp Asn Tyr Met Lys Thr Ile Leu Asn Pro Tyr Leu Ile
325 330 335
Asn Val Thr Leu Ala Ala Lys Met Cys Asn Gln Val Leu Cys Gln Glu
340 345 350
Gln Gly Val Cys Thr Arg Lys Asn Trp Asn Pro Asn Asp Tyr Leu His
355 360 365
Leu Asn Pro Gly Asn Phe Ala Ile Gln Leu Gly Ser Asn Gly Thr Tyr
370 375 380
Lys Val Asp Gly Lys Pro Thr Leu Thr Asp Leu Glu Gln Phe Ser Lys
385 390 395 400
Asn Phe Gln Cys Ser Cys Tyr Thr Asn Leu Asn Cys Lys Glu Arg Thr
405 410 415
Asp Met Asn Asn Val Arg Thr Val Asn Val Cys Ala Val Glu Asn Val
420 425 430
Cys Ile Asp Thr Asn Val Gly Pro Gln Ala Val Thr Tyr Ala Pro Lys
435 440 445
Glu Lys Lys Asp Val Ala His Ile Leu Ser Asn Thr Thr Ser Ile Asn
450 455 460
Ser Ser Thr Thr Met Ser Leu Pro Phe Pro Arg Lys His Val Ser Gly
465 470 475 480
Cys Leu Leu Val Leu Cys Met Tyr Ser Gln Tyr Leu Asn Ile Cys Tyr
485 490 495
Arg Leu Val Ala Ile Gly Ile Gln His Gly Tyr Tyr Leu Lys
500 505 510
<210> 208 <211> 494 <212> БЕЛОК <213> Cavia porcellus <220>
<223> зрелая PH20 морской свинки NP_001166492.1 <400> 208
Asp Lys Arg Ala Pro Pro Leu Ile Pro Asn Val Pro Leu Leu Trp Val
1 5 10 15
Trp Asn Ala Pro Thr Glu Phe Cys Ile Gly Gly Thr Asn Gln Pro Leu
20 25 30
Asp Met Ser Phe Phe Ser Ile Val Gly Thr Pro Arg Lys Asn Ile Thr
35 40 45
Gly Gln Ser Ile Thr Leu Tyr Tyr Val Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr Pro
50 55 60
Tyr Ile Asp Pro His Thr Gly Ala Ile Val His Gly Gly Leu Pro Gln
65 70 75 80
Leu Met Asn Leu Gln Gln His Leu Arg Lys Ser Arg Gln Asp Ile Leu
85 90 95
Phe Tyr Met Pro Thr Asp Ser Val Gly Leu Ala Val Ile Asp Trp Glu
100 105 110
Glu Trp Arg Pro Thr Trp Thr Arg Asn Trp Arg Pro Lys Asp Ile Tyr
- 338 031986
115 120 125
Arg Asn Lys Ser Ile Glu Leu Val Lys Ser Gln His Pro Gln Tyr Asn
130 135 140
His Ser Tyr Ala Val Ala Val Ala Lys Arg Asp Phe Glu Arg Thr Gly
145 150 155 160
Lys Ala Phe Met Leu Glu Thr Leu Lys Leu Gly Lys Ser Leu Arg Pro
165 170 175
Ser Ser Leu Trp Gly Tyr Tyr Leu Phe Pro Asp Cys Tyr Asn Thr His
180 185 190
Phe Thr Lys Pro Asn Tyr Asp Gly His Cys Pro Pro Ile Glu Leu Gln
195 200 205
Arg Asn Asn Asp Leu Gln Trp Leu Trp Asn Asp Ser Thr Ala Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Val Tyr Leu Thr Ser Arg Val Arg Ser Ser Gln Asn Gly Ala
225 230 235 240
Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val His Glu Ser Ile Arg Val Ser Lys Leu
245 250 255
Met Asp Asp Lys Asn Pro Leu Pro Ile Tyr Val Tyr Ile Arg Leu Val
260 265 270
Phe Thr Asp Gln Thr Thr Thr Phe Leu Glu Leu Asp Asp Leu Val His
275 280 285
Ser Val Gly Glu Ile Val Pro Leu Gly Val Ser Gly Ile Ile Ile Trp
290 295 300
Gly Ser Leu Ser Leu Thr Arg Ser Leu Val Ser Cys Ile Gly Leu Glu
305 310 315 320
Asn Tyr Met Lys Gly Thr Leu Leu Pro Tyr Leu Ile Asn Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Lys Met Cys Gly Gln Val Leu Cys Lys Asn Gln Gly Ile Cys
340 345 350
Thr Arg Lys Asp Trp Asn Thr Asn Thr Tyr Leu His Leu Asn Ala Thr
355 360 365
Asn Phe Asp Ile Glu Leu Gln Gln Asn Gly Lys Phe Val Val His Gly
370 375 380
Lys Pro Ser Leu Glu Asp Leu Gln Glu Phe Ser Lys Asn Phe His Cys
385 390 395 400
Ser Cys Tyr Thr Asn Val Ala Cys Lys Asp Arg Leu Asp Val His Asn
405 410 415
Val Arg Ser Val Asn Val Cys Thr Ala Asn Asn Ile Cys Ile Asp Ala
420 425 430
Val Leu Asn Phe Pro Ser Leu Asp Asp Asp Asp Glu Pro Pro Ile Thr
435 440 445
Asp Asp Thr Ser Gln Asn Gln Asp Ser Ile Ser Asp Ile Thr Ser Ser
450 455 460
Ala Pro Pro Ser Ser His Ile Leu Pro Lys Asp Leu Ser Trp Cys Leu
465 470 475 480
Phe Leu Leu Ser Ile Phe Ser Gln His Trp Lys Tyr Leu Leu
485 490 <210> 209 <211> 540 <212> БЕЛОК <213> Vulpes vulpes <220>
<223> Предшественник PH20 рыжей лисицы <400> 209
Met Gly Val Leu Arg Phe Gln Asn Ile Phe Phe Arg Ser Phe Leu Gly
1 5 10 15
Ser Ser Gly Thr Thr Gln Ala Val Phe Ile Phe Leu Leu Ile Pro Arg
20 25 30
Cys Leu Thr Gln Glu Phe Arg Ala Pro Pro Phe Ile Pro Asn Val Ser
35 40 45
- 339 031986
Phe Leu
Asn Val
Lys Thr
Gly Tyr
Gly Ile
Lys Asp
130 Ile Asp 145
Lys His
Ile His
Glu Lys
Phe Leu
210 Tyr Asn 225
Ile Glu
Thr Ala
Pro Phe
Val Ser
290 Ala Arg 305
Asp Leu
Ile Val
Thr Glu
Asn Val
370
Glu Gly
385
Leu Asn
Thr Val
Lys Phe
Asp Met
450
Cys Ile
465
Trp Lys
Pro Ala
Leu Lys
Gly Tyr
530
Trp Gly
Gln Leu
Val Val
Tyr Pro
100
Pro Gln
115
Ile Ser
Trp Asp
Ile Tyr
Leu Asn
180
Ala Ala 195
Arg Pro
Tyr Asn
Glu Arg
Leu Phe
260
Thr Ala
275
Lys Val
Pro Val
Val Asn
Met Trp
340 Leu Asp 355
Thr Leu
Val Cys
Pro Val
Gln Gly
420
Tyr Cys 435
Thr Asp
Asp Val
Gly Lys
Thr Gly
500
Ala Arg
515
Gln Ser
Trp Asn
Asp Leu
Gly Gln
His Ile
Leu Gly
His Tyr
Ser Trp
150 Lys Glu 165
Leu Thr
Arg Cys
Asn Tyr
Tyr Lys
230
Arg Asn 245
Pro Ser
Leu Tyr
Lys Asp
Phe Thr
310
Thr Ile 325
Gly Ser
Thr Tyr
Ala Ala
Ile Arg
390
Asn Phe 405
Lys Pro
Ala Cys
Ile His
Tyr Leu
470
Tyr Val
485
Pro Pro
Phe Ile
Ile Tyr
Ala Pro
Asn Leu
Gly Ile
Asn Lys
Ser Leu
120
Ile Glu 135
Arg Pro
Gln Ser
Glu Val
Phe Met
200
Leu Trp 215
Asn Pro
Asp Glu
Ile Tyr
Val Arg
280
Ile Lys 295
Asp Val
Gly Glu
Leu Asn
Ile Lys
360
Lys Met 375
Lys His
Ala Ile
Thr Leu
Tyr Ala
440
Thr Ile 455
Asn Leu
Thr Ser
Cys Val
Val Glu
520 Ile Lys 535
Thr Glu
Phe Ser
Ala Ile
Thr Thr
105
Lys Lys
Thr Asp
Asn Trp
Ile Asp
170
Thr Gln
185
Gln Glu
Gly Phe
Asn Tyr
Ile Asp
250 Leu Lys 265
Asn Arg
His Pro
Leu Leu
Ser Val
330
Leu Thr
345
Asn Lys
Cys Ser
Trp Asn
Gln Leu
410
Glu Asp
425
Asn Thr
Lys Val
Val Pro
Ser Asn
490
Pro Gly
505
Asp Asn
Asn Lys
Leu Cys
Leu Ile 75
Phe Tyr
Gly Lys
His Leu
Ser Met
140 Ala Arg 155
Leu Ala
Ile Ala
Thr Leu
Tyr Leu
220 Asn Gly 235
Trp Leu
Ser Lys
Val Leu
Leu Pro
300
Thr Tyr
315
Ser Leu
Glu Asn
Leu Asn
Gln Val
380
Ser Asn 395
Glu Arg
Leu Gln
His Cys
Cys Val
460
Ser Gly
475
Ile Phe
Arg Asp
Ser Lys
Lys Gln
540
Ala Lys
Gly Ser
Ala Asp
His Val
110 Asp Lys 125
Gly Leu
Asn Trp
Gln Gln
Gln Ala
190 Lys Leu 205
Tyr Pro
Ser Cys
Trp Lys
Leu Lys
270
Glu Ala 285
Ile Phe
Leu Thr
Gly Val
Val Gln
350 Pro Tyr 365 Leu Cys
Asp Tyr
Ser Gly
Gln Phe
430 Arg Glu 445
Gly Glu
His Leu
Ser Val
Leu Asn
510
Thr Thr
525
Arg Phe
Pro Leu
Arg Leu
Asn Gly
Ala Lys
Ala Val
Arg Pro
160
Gln His
175
Asp Phe
Gly Lys
Asp Cys
Tyr Asp
240
Glu Ser
255
Ser Ser
Ile Arg
Val Tyr
Glu Asp
320
Ser Gly
335
Ile Cys
Ile Ile
Gln Asp
Leu His
400
Arg Tyr
415
Ser Lys
Arg Val
Asp Val
Pro Val
480
Met Pro
495
Arg Cys
Gln Thr
- 340 031986 <210> 210 <211> 505 <212> БЕЛОК <213> Vulpes vulpes <220>
<223> Зрелая PH20 рыжей лисицы Q29152 <400> 210
Gln 1 Glu Phe Arg Ala 5 Pro Pro Phe Ile Pro 10 Asn Val Ser Phe Leu 15 Trp
Gly Trp Asn Ala Pro Thr Glu Leu Cys Ala Lys Arg Phe Asn Val Gln
20 25 30
Leu Asp Leu Asn Leu Phe Ser Leu Ile Gly Ser Pro Leu Lys Thr Val
35 40 45
Val Gly Gln Gly Ile Ala Ile Phe Tyr Ala Asp Arg Leu Gly Tyr Tyr
50 55 60
Pro His Ile Asn Lys Thr Thr Gly Lys His Val Asn Gly Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gln Leu Gly Ser Leu Lys Lys His Leu Asp Lys Ala Lys Lys Asp Ile
85 90 95
Ser His Tyr Ile Glu Thr Asp Ser Met Gly Leu Ala Val Ile Asp Trp
100 105 110
Asp Ser Trp Arg Pro Asn Trp Ala Arg Asn Trp Arg Pro Lys His Ile
115 120 125
Tyr Lys Glu Gln Ser Ile Asp Leu Ala Gln Gln Gln His Ile His Leu
130 135 140
Asn Leu Thr Glu Val Thr Gln Ile Ala Gln Ala Asp Phe Glu Lys Ala
145 150 155 160
Ala Arg Cys Phe Met Gln Glu Thr Leu Lys Leu Gly Lys Phe Leu Arg
165 170 175
Pro Asn Tyr Leu Trp Gly Phe Tyr Leu Tyr Pro Asp Cys Tyr Asn Tyr
180 185 190
Asn Tyr Lys Asn Pro Asn Tyr Asn Gly Ser Cys Tyr Asp Ile Glu Glu
195 200 205
Arg Arg Asn Asp Glu Ile Asp Trp Leu Trp Lys Glu Ser Thr Ala Leu
210 215 220
Phe Pro Ser Ile Tyr Leu Lys Ser Lys Leu Lys Ser Ser Pro Phe Thr
225 230 235 240
Ala Leu Tyr Val Arg Asn Arg Val Leu Glu Ala Ile Arg Val Ser Lys
245 250 255
Val Lys Asp Ile Lys His Pro Leu Pro Ile Phe Val Tyr Ala Arg Pro
260 265 270
Val Phe Thr Asp Val Leu Leu Thr Tyr Leu Thr Glu Asp Asp Leu Val
275 280 285
Asn Thr Ile Gly Glu Ser Val Ser Leu Gly Val Ser Gly Ile Val Met
290 295 300
Trp Gly Ser Leu Asn Leu Thr Glu Asn Val Gln Ile Cys Thr Glu Leu
305 310 315 320
Asp Thr Tyr Ile Lys Asn Lys Leu Asn Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr
325 330 335
Leu Ala Ala Lys Met Cys Ser Gln Val Leu Cys Gln Asp Glu Gly Val
340 345 350
Cys Ile Arg Lys His Trp Asn Ser Asn Asp Tyr Leu His Leu Asn Pro
355 360 365
Val Asn Phe Ala Ile Gln Leu Glu Arg Ser Gly Arg Tyr Thr Val Gln
370 375 380
Gly Lys Pro Thr Leu Glu Asp Leu Gln Gln Phe Ser Lys Lys Phe Tyr
385 390 395 400
Cys Ala Cys Tyr Ala Asn Thr His Cys Arg Glu Arg Val Asp Met Thr
405 410 415
Asp Ile His Thr Ile Lys Val Cys Val Gly Glu Asp Val Cys Ile Asp
- 341 031986
420 425430
Val Tyr Leu Asn Leu Val Pro Ser Gly His Leu Pro Val Trp Lys Gly
435 440445
Lys Tyr Val Thr Ser Ser Asn Ile Phe Ser Val Met Pro Pro Ala Thr
450 455460
Gly Pro Pro Cys Val Pro Gly Arg Asp Leu Asn Arg Cys Leu LysAla
465 470 475480
Arg Phe Ile Val Glu Asp Asn Ser Lys Thr Thr Gln Thr Gly TyrGln
485 490495
Ser Ile Tyr Ile Lys Asn Lys Lys Gln
500505 <210> 211 <211> 585 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> человеческий сывороточный <400> 211
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu
Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val
3540
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
5055
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
6570
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln
100
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val
115120
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys
130135
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
145150
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys
165
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu
180
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys
195200
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val
210215
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser
225230
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly
245
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile
260
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu
275280
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp
290295
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser
305310
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly
325 альбумин (aa 25-609)
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
15
Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
30
Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu 45
Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys 60
Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
7580
Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro 9095
His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
105110
Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His 125
Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg 140
Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
155160
Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala 170175
Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
185190
Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu 205
Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro 220
Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
235240
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp 250255
Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
265270
Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His 285
Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser 300
Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
315 320
Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
330 335
- 342 031986
Arg His
Tyr Glu
Cys Tyr
370
Gln Asn
385
Tyr Lys
Gln Val
Val Gly
Ala Glu
450
Glu Lys 465
Leu Val
Tyr Val
Ile Cys
Leu Val
530 Lys Ala 545 Ala Asp
Ala Ala
Pro Asp
340
Thr Thr
355
Ala Lys
Leu Ile
Phe Gln
Ser Thr
420
Ser Lys
435
Asp Tyr
Thr Pro
Asn Arg
Pro Lys
500
Thr Leu
515
Glu Leu
Val Met
Asp Lys
Ser Gln
580
Tyr Ser
Leu Glu
Val Phe
Lys Gln
390
Asn Ala
405
Pro Thr
Cys Cys
Leu Ser
Val Ser
470
Arg Pro
485
Glu Phe
Ser Glu
Val Lys
Asp Asp
550
Glu Thr
565
Ala Ala
Val Val
Lys Cys
360 Asp Glu 375
Asn Cys
Leu Leu
Leu Val
Lys His
440
Val Val
455
Asp Arg
Cys Phe
Asn Ala
Lys Glu
520
His Lys
535
Phe Ala
Cys Phe
Leu Gly
Leu Leu
345
Cys Ala
Phe Lys
Glu Leu
Val Arg
410
Glu Val
425
Pro Glu
Leu Asn
Val Thr
Ser Ala
490
Glu Thr
505
Arg Gln
Pro Lys
Ala Phe
Ala Glu
570
Leu
585
Leu Arg
Ala Ala
Pro Leu
380
Phe Glu
395
Tyr Thr
Ser Arg
Ala Lys
Gln Leu
460
Lys Cys
475
Leu Glu
Phe Thr
Ile Lys
Ala Thr
540
Val Glu
555
Glu Gly
Leu Ala
350 Asp Pro 365
Val Glu
Gln Leu
Lys Lys
Asn Leu
430 Arg Met 445
Cys Val
Cys Thr
Val Asp
Phe His
510 Lys Gln 525
Lys Glu
Lys Cys
Lys Lys
Lys Thr
His Glu
Glu Pro
Gly Glu
400
Val Pro
415
Gly Lys
Pro Cys
Leu His
Glu Ser
480
Glu Thr
495
Ala Asp
Thr Ala
Gln Leu
Cys Lys
560
Leu Val
575 <210>
<211>
<212>
<213>
212
1662
ДНК
Homo sapiens <220>
<223>
HAS3 вариант 1 кДНК <400> 212 atgccggtgc agctgacgac gtgctgggtg gcatcctggc cactacctgt ccttcggcct ctgtttgcct tcctggagca tccccgcggc ggggctcggt ttgcgcaagt gcctgcgctc gtggtggatg gcaaccgcca ggcggcaccg agcaggccgg ggtgagacgg aggccagcct agcaccttct cgtgcatcat ttcaaggccc tcggcgattc gatccagcct gcaccatcga gtcgggggag atgtccagat gtgcggtact ggatggcctt cagtgtatta gtgggccctt gactggtacc atcagaagtt accaaccgag tcctgagcct acagagaccc ccactaagta tacttccggg agtggctcta tacgagtcag tggtcacggg agccctgcgt gtggtgggca agcctatgtg acgggctacc gtacggcgcc atcctgggcc ccggcgcatg cgacgtgccg ggcactgtgc attgccgcat ggcccagcgc atctccttcc ggaggacgcc tacatgctgg cttctttgtg tggcgcagca gcaggagggc atggaccgtg gcagaagtgg ggaggcaagc ggtggactac atccaggtgt gatgcttcga gtcctggagg cctcaacaag tacgactcat caacgtggag cgggcctgcc gggcatgtac cgcaacagcc cctaggcagc aagtgcagct tggctaccga actaagtata cctccggtgg ctcaaccagc caactctctg tggttccata tttcttcccc ttcttcctca ccagcctgtt tgccctggca 60 agttcatcca cacggaaaag 120 tgcacctgct cattcagagc 180 gccaggccct gaagctgccc 240 accaggagga ccctgactac 300 ctgacctcaa ggtggtcatg 360 acatcttcca cgaggtgctg 420 acttccatga ggcaggcgag 480 tgcgggatgt ggtgcgggcc 540 gcgaggtcat gtacacggcc 600 gcgactctga cactgtgctg 660 aggatcccca agtaggggga 720 ggatttcctt cctgagcagc 780 agtcctactt tggctgtgtg 840 tcctccagca gttcctggag 900 tcggggatga ccggcacctc 960 ccgcgcgctc caagtgcctc 1020 aaacccgctg gagcaagtct 1080 agcaccacct ctggatgacc 1140 ttgccacggt tatacagctt 1200
- 343 031986 ttctaccggg gccgcatctg gaacattctc attatcaagg ccacctacgc ctgcttcctt ctctactccc tcctctatat gtccagcctt atcaacaaat ctggctgggg cacctctggc ctcattcctg tgtccatctg ggtggcagtt tgccaggacc tgttcagtga gacagagcta ggctgctact gggtggccct cctcatgcta aagaagccgg agcagtacag cttggctttt ctcttcctgc tgacggtgca gctggtgggc 1260 cggggcaatg cagagatgat cttcatgtcc 1320 ctgccggcca agatctttgc cattgctacc 1380 cgaaaaacca ttgtggtgaa cttcattggc 1440 ctcctgggag ggctggccta cacagcttat 1500 gccttccttg tctctggggc tatactgtat 1560 tatctggcca tcatcgcccg gcgatgtggg 1620 gctgaggtgt ag 1662 <210> 213 <211> 10836 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> pLV-EF1a-hHAS3-IRES-Hyg вектор <400> 213 aagcttaatg tagtcttatg caatactctt gcaacatgcc ttacaaggag agaaaaagca gtacgatcgt gccttattag gaaggcaaca tgaattgccg cattgcagag atattgtatt tctctggtta gaccagatct gagcctggga taagcctcaa taaagcttgc cttgagtgct ctctggtaac tagagatccc tcagaccctt cgcccgaaca gggacttgaa agcgaaaggg cggcttgctg aagcgcgcac ggcaagaggc attttgacta gcggaggcta gaaggagaga gggagaatta gatcgcgatg ggaaaaaatt aaattaaaac atatagtatg ggcaagcagg ctgttagaaa catcagaagg ctgtagacaa acaggatcag aagaacttag atcattatat caaaggatag agataaaaga caccaaggaa aaaagtaaga ccaccgcaca gcaagcggcc gagggacaat tggagaagtg aattatataa agtagcaccc accaaggcaa agagaagagt aggagctttg ttccttgggt tcttgggagc gacgctgacg gtacaggcca gacaattatt gctgagggct attgaggcgc aacagcatct gctccaggca agaatcctgg ctgtggaaag ttggggttgc tctggaaaac tcatttgcac taataaatct ctggaacaga tttggaatca taacaattac acaagcttaa tacactcctt gaatgaacaa gaattattgg aattagataa aacaaattgg ctgtggtata taaaattatt aagaatagtt tttgctgtac tttctatagt atcgtttcag acccacctcc caaccccgag agaaggtgga gagagagaca gagacagatc tcggttaact tttaaaagaa aaggggggat agacataata gcaacagaca tacaaactaa aattttatcg atgcctcccc gtcaccaccc taattcatac aaaaggactc gcccctgcct ccactaacgt agaacccaga gatcgctgcg atcactgagg tggagaagag catgcgtgag catcgcccac agtccccgag aagttggggg gaaggtggcg cggggtaaac tgggaaagtg agggtggggg agaaccgtat ataagtgcag ggtttgccgc cagaacacag gtaagtgccg cgggttatgg cccttgcgtg ccttgaatta cttgatcccg agcttcgggt tggaagtggg gccccttcgc ctcgtgcttg agttgaggcc atctggtggc accttcgcgc ctgtctcgct ttttgatgat atcctgcgac gctttttttc gtagtcttgc aacatggtaa cgatgagtta 60 ccgtgcatgc cgattggtgg aagtaaggtg 120 gacgggtctg acatggattg gacgaaccac 180 taagtgccta gctcgataca taaacgggtc 240 gctctctggc taactaggga acccactgct 300 tcaagtagtg tgtgcccgtc tgttgtgtga 360 ttagtcagtg tggaaaatct ctagcagtgg 420 aaaccagagg agctctctcg acgcaggact 480 gaggggcggc gactggtgag tacgccaaaa 540 gatgggtgcg agagcgtcag tattaagcgg 600 cggttaaggc cagggggaaa gaaaaaatat 660 gagctagaac gattcgcagt taatcctggc 720 atactgggac agctacaacc atcccttcag 780 aatacagtag caaccctcta ttgtgtgcat 840 gctttagaca agatagagga agagcaaaac 900 gctgatcttc agacctggag gaggagatat 960 atataaagta gtaaaaattg aaccattagg 1020 ggtgcagaga gaaaaaagag cagtgggaat 1080 agcaggaagc actatgggcg cagcgtcaat 1140 gtctggtata gtgcagcagc agaacaattt 1200 gttgcaactc acagtctggg gcatcaagca 1260 atacctaaag gatcaacagc tcctggggat 1320 cactgctgtg ccttggaatg ctagttggag 1380 cacgacctgg atggagtggg acagagaaat 1440 aattgaagaa tcgcaaaacc agcaagaaaa 1500 atgggcaagt ttgtggaatt ggtttaacat 1560 cataatgata gtaggaggct tggtaggttt 1620 gaatagagtt aggcagggat attcaccatt 1680 gggacccgac aggcccgaag gaatagaaga 1740 cattcgatta gtgaacggat ctcgacggta 1800 tggggggtac agtgcagggg aaagaatagt 1860 agaattacaa aaacaaatta caaaattcaa 1920 cccccaaccc gccccgaccg gagctgagag 1980 tggggaatcc cagggaccgt cgttaaactc 2040 ttcccgcccc ctcacccgcc cgctctcgtc 2100 gctccggtgc ccgtcagtgg gcagagcgca 2160 gaggggtcgg caattgaacc ggtgcctaga 2220 atgtcgtgta ctggctccgc ctttttcccg 2280 tagtcgccgt gaacgttctt tttcgcaacg 2340 tgtgtggttc ccgcgggcct ggcctcttta 2400 cttccacgcc cctggctgca gtacgtgatt 2460 tgggagagtt cgaggccttg cgcttaagga 2520 tggcctgggc gctggggccg ccgcgtgcga 2580 gctttcgata agtctctagc catttaaaat 2640 tggcaagata gtcttgtaaa tgcgggccaa 2700
- 344 031986 gatctgcaca ctggtatttc ggtttttggg cagcgcacat gttcggcgag gcggggcctg tagtctcaag ctggccggcc tgctctggtg ccctgggcgg caaggctggc ccggtcggca cccggccctg ctgcagggag ctcaaaatgg gagtcaccca cacaaaggaa aagggccttt acggagtacc gggcgccgtc caggcacctc tctttaggtt ggggggaggg gttttatgcg actgaagtta ggccagcttg gcacttgatg tttggatctt ggttcattct caagcctcag caggtgtcgt gaaaactacc cctctagacc gccctgcgtg tggtgggcac cagcctgttt gcctatgtga cgggctacca gttcatccac tacggcgcca tcctgggcct gcacctgctc cggcgcatgc gacgtgccgg ccaggccctg gcactgtgca ttgccgcata ccaggaggac gcccagcgca tctccttccc tgacctcaag gaggacgcct acatgctgga catcttccac ttctttgtgt ggcgcagcaa cttccatgag caggagggca tggaccgtgt gcgggatgtg cagaagtggg gaggcaagcg cgaggtcatg gtggactaca tccaggtgtg cgactctgac atgcttcgag tcctggagga ggatccccaa ctcaacaagt acgactcatg gatttccttc aacgtggagc gggcctgcca gtcctacttt ggcatgtacc gcaacagcct cctccagcag ctaggcagca agtgcagctt cggggatgac ggctaccgaa ctaagtatac cgcgcgctcc ctccggtggc tcaaccagca aacccgctgg aactctctgt ggttccataa gcaccacctc ttcttcccct tcttcctcat tgccacggtt aacattctcc tcttcctgct gacggtgcag tgcttccttc ggggcaatgc agagatgatc tccagccttc tgccggccaa gatctttgcc acctctggcc gaaaaaccat tgtggtgaac gtggcagttc tcctgggagg gctggcctac acagagctag ccttccttgt ctctggggct ctcatgctat atctggccat catcgcccgg ttggcttttg ctgaggtgta gacgcgtctc cccctctccc tccccccccc ctaacgttac tgcgtttgtc tatatgttat tttccaccat gaaacctggc cctgtcttct tgacgagcat aatgcaaggt ctgttgaatg tcgtgaagga aacaacgtct gtagcgaccc tttgcaggca ctgcggccaa aagccacgtg tataagatac cgttgtgagt tggatagttg tggaaagagt ggggctgaag gatgcccaga aggtacccca cacatgcttt acatgtgttt agtcgaggtt ggacgtggtt ttcctttgaa aaacacgatg cgccaccatg aaaaagcctg aactcaccgc gttcgacagc gtctccgacc tgatgcagct cttcgatgta ggagggcgtg gatatgtcct caaagatcgt tatgtttatc ggcactttgc tgacattggg gaattcagcg agagcctgac cacgttgcaa gacctgcctg aaaccgaact catggatgcg atcgctgcgg ccgatcttag gcaaggaatc ggtcaataca ctacatggcg tgtgtatcac tggcaaactg tgatggacga cgatgagctg atgctttggg ccgaggactg tttcggctcc aacaatgtcc tgacggacaa cgaggcgatg ttcggggatt cccaatacga gttggcttgt atggagcagc agacgcgcta atcgccgcgg ctccgggcgt atatgctccg gccgcgggcg gcgacggggc ccgtgcgtcc 2760 cgagcgcggc caccgagaat cggacggggg 2820 cctggcctcg cgccgccgtg tatcgccccg 2880 ccagttgcgt gagcggaaag atggccgctt 2940 aggacgcggc gctcgggaga gcgggcgggt 3000 ccgtcctcag ccgtcgcttc atgtgactcc 3060 gattagttct cgagcttttg gagtacgtcg 3120 atggagtttc cccacactga gtgggtggag 3180 taattctcct tggaatttgc cctttttgag 3240 acagtggttc aaagtttttt tcttccattt 3300 cgggccacca tgccggtgca gctgacgaca 3360 gccctggcag tgctgggtgg catcctggca 3420 acggaaaagc actacctgtc cttcggcctg 3480 attcagagcc tgtttgcctt cctggagcac 3540 aagctgccct ccccgcggcg gggctcggtg 3600 cctgactact tgcgcaagtg cctgcgctcg 3660 gtggtcatgg tggtggatgg caaccgccag 3720 gaggtgctgg gcggcaccga gcaggccggc 3780 gcaggcgagg gtgagacgga ggccagcctg 3840 gtgcgggcca gcaccttctc gtgcatcatg 3900 tacacggcct tcaaggccct cggcgattcg 3960 actgtgctgg atccagcctg caccatcgag 4020 gtagggggag tcgggggaga tgtccagatc 4080 ctgagcagcg tgcggtactg gatggccttc 4140 ggctgtgtgc agtgtattag tgggcccttg 4200 ttcctggagg actggtacca tcagaagttc 4260 cggcacctca ccaaccgagt cctgagcctt 4320 aagtgcctca cagagacccc cactaagtac 4380 agcaagtctt acttccggga gtggctctac 4440 tggatgacct acgagtcagt ggtcacgggt 4500 atacagcttt tctaccgggg ccgcatctgg 4560 ctggtgggca ttatcaaggc cacctacgcc 4620 ttcatgtccc tctactccct cctctatatg 4680 attgctacca tcaacaaatc tggctggggc 4740 ttcattggcc tcattcctgt gtccatctgg 4800 acagcttatt gccaggacct gttcagtgag 4860 atactgtatg gctgctactg ggtggccctc 4920 cgatgtggga agaagccgga gcagtacagc 4980 cggcctaggg ataacagggt aatccgctag 5040 tggccgaagc cgcttggaat aaggccggtg 5100 attgccgtct tttggcaatg tgagggcccg 5160 tcctaggggt ctttcccctc tcgccaaagg 5220 agcagttcct ctggaagctt cttgaagaca 5280 gcggaacccc ccacctggcg acaggtgcct 5340 acctgcaaag gcggcacaac cccagtgcca 5400 caaatggctc tcctcaagcg tattcaacaa 5460 ttgtatggga tctgatctgg ggcctcggta 5520 aaaaaaacgt ctaggccccc cgaaccacgg 5580 ataatatggc cacactagag atccaccggt 5640 gacgtctgtc gagaagtttc tgatcgaaaa 5700 ctcggagggc gaagaatctc gtgctttcag 5760 gcgggtaaat agctgcgccg atggtttcta 5820 atcggccgcg ctcccgattc cggaagtgct 5880 ctattgcatc tcccgccgtg cacagggtgt 5940 gcccgctgtt ctgcagccgg tcgcggaggc 6000 ccagacgagc gggttcggcc cattcggacc 6060 tgatttcata tgcgcgattg ctgatcccca 6120 caccgtcagt gcgtccgtcg cgcaggctct 6180 ccccgaagtc cggcacctcg tgcacgcgga 6240 tggccgcata acagcggtca ttgactggag 6300 ggtcgccaac atcttcttct ggaggccgtg 6360 cttcgagcgg aggcatccgg agcttgcagg 6420 cattggtctt gaccaactct atcagagctt 6480
- 345 031986 ggttgacggc atccggagcc cgatggctgt ggcaaaggaa ttgactggta cctttgtatc tggttgctgt actgtgtttg tccgggactt gcccgctgct aagctgacgt tccttctgct ccggctctgc tgggccgcct cagctgtaga cccaacgaag gagcctggga cttgagtgct tcagaccctt ttcagtattt cagcttataa tttcactgca tctagctatc ttctccgccc ctctgagcta tcgccctata tgggaaaacc tggcgtaata ggcgaatggg agcgtgaccg tttctcgcca ttccgattta cgtagtgggc tttaatagtg tttgatttat caaaaattta ggggaaatgt cgctcatgag gtattcaaca ttgctcaccc tgggttacat aacgttttcc ttgacgccgg agtactcacc gtgctgccat gaccgaagga gttgggaacc tagcaatggc ggcaacaatt cccttccggc gtatcattgc cggggagtca tgattaagca aacttcattt aaatccctta gatcttcttg cgctaccagc ctggcttcag accacttcaa tggctgctgc cggataaggc gaacgaccta ccgaagggag aatttcgatg gggactgtcg gtagaagtac taggcggccg ttcttaacta atgctattgc ctctttatga ctgacgcaac tcgctttccc ggacaggggc cctttccatg acgtcccttc ggcctcttcc ccccgcctgg tcttagccac acaagatctg gctctctggc tcaagtagtg ttagtcagtg ataacttgca tggttacaaa ttctagttgt ccgcccctaa catggctgac ttccagaagt gtgagtcgta ctggcgttac gcgaagaggc acgcgccctg ctacacttgc cgttcgccgg gtgctttacg catcgccctg gactcttgtt aagggatttt acgcgaattt gcgcggaacc acaataaccc tttccgtgtc agaaacgctg cgaactggat aatgatgagc gcaagagcaa agtcacagaa aaccatgagt gctaaccgct ggagctgaat aacaacgttg aatagactgg tggctggttt agcactgggg ggcaactatg ttggtaactg ttaatttaaa acgtgagttt agatcctttt ggtggtttgt cagagcgcag gaactctgta cagtggcgat gcagcggtcg caccgaactg aaaggcggac atgcagcttg ggcgtacaca tcgccgatag cgtcgacaat tgttgctcct ttcccgtatg ggagttgtgg ccccactggt cctccctatt tcggctgttg gctgctcgcc ggccctcaat gcgtcttcgc aattcgagct tttttaaaag ctttttgctt taactaggga tgtgcccgtc tggaaaatct aagaaatgaa taaagcaata ggtttgtcca ctccgcccat taattttttt agtgaggagg ttacgcgcgc ccaacttaat ccgcaccgat tagcggcgca cagcgcccta ctttccccgt gcacctcgac atagacggtt ccaaactgga gccgatttcg taacaaaata cctatttgtt tgataaatgc gcccttattc gtgaaagtaa ctcaacagcg acttttaaag ctcggtcgcc aagcatctta gataacactg tttttgcaca gaagccatac cgcaaactat atggaggcgg attgctgata ccagatggta gatgaacgaa tcagaccaag aggatctagg tcgttccact tttctgcgcg ttgccggatc ataccaaata gcaccgccta aagtcgtgtc ggctgaacgg agatacctac aggtatccgg ggcgcagggt aatcgcccgc tggaaaccga caacctctgg tttacgctat gctttcattt cccgttgtca tggggcattg gccacggcgg ggcactgaca tgtgttgcca ccagcggacc cttcgccctc cggtaccttt aaaagggggg gtactgggtc acccactgct tgttgtgtga ctagcagtag tatcagagag gcatcacaaa aactcatcaa cccgccccta tatttatgca cttttttgga tcactggccg cgccttgcag cgcccttccc ttaagcgcgg gcgcccgctc caagctctaa cccaaaaaac tttcgccctt acaacactca gcctattggt ttaacgctta tatttttcta ttcaataata ccttttttgc aagatgctga gtaagatcct ttctgctatg gcatacacta cggatggcat cggccaactt acatggggga caaacgacga taactggcga ataaagttgc aatctggagc agccctcccg atagacagat tttactcata tgaagatcct gagcgtcaga taatctgctg aagagctacc ctgttcttct catacctcgc ttaccgggtt ggggttcgtg agcgtgagct taagcggcag cgatgcgacg agaagcgcgg cgccccagca attacaaaat gtggatacgc tctcctcctt ggcaacgtgg ccaccacctg aactcatcgc attccgtggt cctggattct ttccttcccg agacgagtcg aagaccaatg actggaaggg tctctggtta taagcctcaa ctctggtaac tagttcatgt tgagaggaac tttcacaaat tgtatcttat actccgccca gaggccgagg ggcctaggga tcgttttaca cacatccccc aacagttgcg cgggtgtggt ctttcgcttt atcgggggct ttgattaggg tgacgttgga accctatctc taaaaaatga caatttaggt aatacattca ttgaaaaagg ggcattttgc agatcagttg tgagagtttt tggcgcggta ttctcagaat gacagtaaga acttctgaca tcatgtaact gcgtgacacc actacttact aggaccactt cggtgagcgt tatcgtagtt cgctgagata tatactttag ttttgataat ccccgtagaa cttgcaaaca aactcttttt agtgtagccg tctgctaatc ggactcaaga cacacagccc atgagaaagc ggtcggaaca caatcgtccg ccgtctggac ctcgtccgag ttgtgaaaga tgctttaatg gtataaatcc cgtggtgtgc tcagctcctt cgcctgcctt gttgtcgggg gcgcgggacg cggcctgctg gatctccctt acttacaagg ctaattcact gaccagatct taaagcttgc tagagatccc catcttatta ttgtttattg aaagcatttt catgtctggc gttccgccca ccgcctcggc cgtacccaat acgtcgtgac tttcgccagc cagcctgaat ggttacgcgc cttcccttcc ccctttaggg tgatggttca gtccacgttc ggtctattct gctgatttaa ggcacttttc aatatgtatc aagagtatga cttcctgttt ggtgcacgag cgccccgaag ttatcccgta gacttggttg gaattatgca acgatcggag cgccttgatc acgatgcctg ctagcttccc ctgcgctcgg gggtctcgcg atctacacga ggtgcctcac attgatttaa ctcatgacca aagatcaaag aaaaaaccac ccgaaggtaa tagttaggcc ctgttaccag cgatagttac agcttggagc gccacgcttc ggagagcgca
6540 6600 6660 6720 6780 6840 6900 6960 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 8280 8340 8400 8460 8520 8580 8640 8700 8760 8820 8880 8940 9000 9060 9120 9180 9240 9300 9360 9420 9480 9540 9600 9660 9720 9780 9840 9900 9960 10020 10080 10140 10200 10260
- 346 031986 cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc 10320 tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg 10380 ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct 10440 ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata 10500 ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc 10560 gcccaatacg caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggcacg 10620 acaggtttcc cgactggaaa gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgtg agttagctca 10680 ctcattaggc accccaggct ttacacttta tgcttccggc tcgtatgttg tgtggaattg 10740 tgagcggata acaatttcac acaggaaaca gctatgacca tgattacgcc aagcgcgcaa 10800 ttaaccctca ctaaagggaa caaaagctgg agctgc 10836

Claims (52)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ лечения солидной раковой опухоли, включающий введение композиции, содержащей разрушающий гиалуронан фермент, где разрушающий гиалуронан фермент конъюгирован с полимером, и опухоль имеет повышенную клеточную и/или стромальную экспрессию гиалуронана по сравнению с нераковой тканью того же типа ткани или по сравнению с не метастазирующей опухолью того же типа опухоли, и введение композиции, содержащей лекарственную форму направленного на опухоль таксана, где направленный на опухоль таксан соединен напрямую или не напрямую с пептидным или белковым компонентом для направленнного действия на опухоль;
    компонент связывает молекулу на поверхности опухоли, где молекула представляет собой опухолеспецифический маркер или рецептор, и направленный на опухоль таксан проявляет увеличенную специфичность к опухоли по сравнению с таксаном, который не связан с указанным компонентом.
  2. 2. Способ по п.1, дополнительно включающий введение композиции, содержащей химиотерапевтический агент, являющийся нуклеозидным аналогом.
  3. 3. Способ по п.1 или 2, где опухолеспецифический маркер или рецептор представляет собой сахар, липид, гликозаминогликан или белок.
  4. 4. Способ по любому из пп.1-3, где солидная раковая опухоль выбрана из опухоли поджелудочной железы, яичников, легких, прямой кишки, простаты, матки, головы и шеи и опухоли груди.
  5. 5. Способ по любому из пп.1-4, где солидная раковая опухоль представляет собой опухоль поджелудочной железы.
  6. 6. Способ по любому из пп.1-5, где разрушающий гиалуронан фермент представляет собой гиалуронидазу.
  7. 7. Способ по п.6, где гиалуронидаза представляет собой РН20 или ее укороченную форму, у которой отсутствует С-концевой участок присоединения гликозилфосфатидилинозитола (GPI) или часть участка присоединения GPI, за счет чего РН20 не ассоциируется с мембраной при экспрессии из клетки.
  8. 8. Способ по п.6 или 7, где гиалуронидаза представляет собой овечью или бычью РН20 или укороченную с С-конца человеческую РН20.
  9. 9. Способ по любому из пп.1-8, где укороченная РН20 включает последовательность аминокислот 36-464 SEQ ID NO: 1 или последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности аминокислот 36-464 SEQ ID NO: 1 и сохраняет гиалуронидазную активность.
  10. 10. Способ по п.9, где РН20 включает последовательность аминокислот SEQ ID NOS: 4-9, 47, 48, 150-170 или 183-189 или последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности SEQ ID NOS: 4-9, 47, 48, 150-170 или 183-189 и сохраняет гиалуронидазную активность.
  11. 11. Способ по любому из пп.1-10, где полимер представляет собой полиалкиленгликоль, декстран, пуллулан или целлюлозу.
  12. 12. Способ по п.11, где полиалкиленгликоль выбран из полиэтиленгликолей (PEG) или метоксиполиэтиленгликолей (mPEG).
  13. 13. Способ по любому из пп.1-12, где разрушающий гиалуронан фермент вводят в диапазоне доз между 0,01 и 15 мкг/кг или разрушающий гиалуронан фермент вводят в диапазоне доз между 10 и 10000 ед./кг (массы тела субъекта).
  14. 14. Способ по любому из пп.1-13, где направленный на опухоль таксан представляет собой паклитаксел или доцетаксел.
  15. 15. Способ по любому из пп.1-14, где компонентом для направленного действия на опухоль является альбумин.
  16. 16. Способ по п.15, где направленный на опухоль таксан представляет собой связанный с альбумином паклитаксел или связанный с альбумином доцетаксел.
  17. 17. Способ по любому из пп.1-16, где направленный на опухоль таксан вводят в диапазоне доз между 1 и 1000 мг/м2 (площадь поверхности тела субъекта).
    - 347 031986
  18. 18. Способ по любому из пп.2-17, где нуклеозидный аналог представляет собой субстрат для нуклеозид дезаминазы.
  19. 19. Способ по п.18, где нуклеозид дезаминаза представляет собой аденозин дезаминазу или цитидин дезаминазу.
  20. 20. Способ по любому из пп.2-19, где нуклеозидный аналог выбран из флударабина, цитарабина, гемцитабина, децитабина и азацитидина.
  21. 21. Способ по любому из пп.2-20, где нуклеозидный аналог вводят в диапазоне доз между 100 и 2500 мг/м2.
  22. 22. Способ по любому из пп.1-21, где композицию(композиции) вводят внутривенно или подкожно.
  23. 23. Способ по любому из пп.1-22, где разрушающий гиалуронан фермент вводят до введения направленного на опухоль таксана.
  24. 24. Способ по п.23, где разрушающий гиалуронан фермент вводят по меньшей мере примерно за 5, 15, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 30, 36, 40 или 48 ч до введения направленного на опухоль таксана.
  25. 25. Способ по любому из пп.1-22, где разрушающий гиалуронан фермент и направленный на опухоль таксан вводят одновременно.
  26. 26. Способ по любому из пп.2-25, где разрушающий гиалуронан фермент и/или направленный на опухоль таксан вводят до нуклеозидного аналога, одновременно с нуклеозидным аналогом или после нуклеозидного аналога или периодически.
  27. 27. Способ по любому из пп.2-26, где разрушающий гиалуронан фермент вводят по меньшей мере примерно за 5, 15, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 30, 36, 40 или 48 ч до введения нуклеозидного аналога и направленный на опухоль таксан вводят по меньшей мере примерно за 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, 22, 24 ч до введения нуклеозидного аналога.
  28. 28. Способ по любому из пп.1-27, дополнительно включающий введение кортикостероида.
  29. 29. Способ по любому из пп.1-28, включающий введение композиции, содержащей разрушающий гиалуронан фермент;
    введение композиции, содержащей лекарственную форму направленного на опухоль таксана, где направленный на опухоль таксан вводят одновременно с разрушающим гиалуронан ферментом; и введение кортикостероида до введения разрушающего гиалуронан фермента, одновременно с введением разрушающего гиалуронан фермента, периодически с введением разрушающего гиалуронан фермента или после введения разрушающего гиалуронан фермента.
  30. 30. Способ по п.29, далее включающий введение нуклеозидного аналога после введения разрушающего гиалуронан фермента и направленного на опухоль таксана.
  31. 31. Способ по любому из пп.28-30, где кортикостероид представляет собой глюкокортикоид.
  32. 32. Способ по п.31, где глюкокортикоид выбран из кортизона, дексаметазона, гидрокортизона, метилпреднизолона, преднизолона и преднизона.
  33. 33. Способ по любому из пп.1-32, где разрушающий гиалуронан фермент и направленный на опухоль таксан вводят два раза в неделю или один раз в неделю в течение заранее определенного количества недель; нуклеозидный аналог вводят один раз в неделю в течение заранее определенного количества недель.
  34. 34. Способ по п.33, где разрушающий гиалуронан фермент вводят два раза в неделю и направленный на опухоль таксан вводят один раз в неделю.
  35. 35. Способ по любому из пп.1-34, где субъект является человеком.
  36. 36. Комбинация для лечения солидной раковой опухоли, включающая композицию, содержащую разрушающий гиалуронан фермент, где разрушающий гиалуронан фермент конъюгирован с полимером; и композицию, содержащую направленный на опухоль таксан, который соединен напрямую или не напрямую с белковым или пептидным компонентом для направленного действия на опухоль;
    компонент связывает молекулу на поверхности опухоли, где молекулой является опухолеспецифический маркер или рецептор, и направленный на опухоль таксан проявляет увеличенную специфичность к опухоли по сравнению с таксаном, который не связан с указанным компонентом.
  37. 37. Комбинация по п.36, дополнительно включающая композицию, содержащую химиотерапевтический агент, который представляет собой нуклеозидный аналог.
  38. 38. Комбинация по п.36 или 37, где разрушающий гиалуронан фермент представляет собой гиалуронидазу.
  39. 39. Комбинация по п.38, где гиалуронидаза представляет собой РН20 или ее укороченную форму, у которой отсутствует С-концевой участок присоединения гликозилфосфатидилинозитола (GPI) или часть участка присоединения GPI, за счет чего РН20 не ассоциируется с мембраной при экспрессии в клетке.
  40. 40. Комбинация по п.39, где гиалуронидаза представляет собой овечью или бычью РН20 или укороченную с С-конца человеческую РН20.
    - 348 031986
  41. 41. Комбинация по любому из пп.36-40, где направленный на опухоль таксан представляет собой паклитаксел или доцетаксел.
  42. 42. Комбинация по любому из пп.36-41, где компонентом для направленного действия на опухоль является альбумин.
  43. 43. Комбинация по п.42, где направленный на опухоль таксан представляет собой связанный с альбумином паклитаксел или связанный с альбумином доцетаксел.
  44. 44. Комбинация по любому из пп.37-43, где нуклеозидный аналог представляет собой субстрат для нуклеозид дезаминазы.
  45. 45. Комбинация по п.44, где нуклеозид дезаминаза представляет собой аденозин дезаминазу или цитидин дезаминазу.
  46. 46. Комбинация по любому из пп.37-45, где нуклеозидный аналог выбран из флударабина, цитарабина, гемцитабина, децитабина и азацитидина.
  47. 47. Комбинация по любому из пп.36-46, дополнительно включающая композицию, содержащую кортикостероид.
  48. 48. Комбинация по любому из пп.36-47, где полимер представляет собой полиалкиленгликоль, декстран, пуллулан или целлюлозу.
  49. 49. Комбинация по п.48, где полиалкиленгликоль выбран из полиэтиленгликолей (PEG) или метоксиполиэтиленгликолей (mPEG).
  50. 50. Набор, включающий инструкции по применению, содержащий комбинацию для лечения солидной опухоли, включающую композицию, содержащую разрушающий гиалуронан фермент, где разрушающий гиалуронан фермент конъюгирован с полимером; и композицию, содержащую направленный на опухоль таксан, который соединен напрямую или не напрямую с пептидным или белковым компонентом для направленного действия на опухоль, где компонент связывает молекулу на поверхности опухоли, и молекула представляет собой опухолеспецифический маркер или рецептор, такой как сахар, липид, гликозаминогликан или белок; и направленный на опухоль таксан проявляет увеличенную специфичность к опухоли по сравнению с таксаном, который не связан с указанным компонентом.
  51. 51. Набор по п.50, дополнительно содержащий химиотерапевтический агент, являющийся нуклеозидным аналогом.
  52. 52. Применение комбинации по любому из пп.36-49 для лечения солидной раковой опухоли.
EA201401096A 2012-04-04 2013-03-15 Способ и комбинация для лечения солидной раковой опухоли и набор, содержащий комбинацию EA031986B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261686429P 2012-04-04 2012-04-04
US201261714719P 2012-10-16 2012-10-16
PCT/US2013/032684 WO2013151774A1 (en) 2012-04-04 2013-03-15 Combination therapy with an anti - hyaluronan agent and a tumor - targeted taxane

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201401096A1 EA201401096A1 (ru) 2015-09-30
EA031986B1 true EA031986B1 (ru) 2019-03-29

Family

ID=48050937

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201401096A EA031986B1 (ru) 2012-04-04 2013-03-15 Способ и комбинация для лечения солидной раковой опухоли и набор, содержащий комбинацию

Country Status (27)

Country Link
US (3) US9913822B2 (ru)
EP (1) EP2833905B1 (ru)
JP (4) JP6042527B2 (ru)
KR (2) KR101809858B1 (ru)
CN (2) CN104411324A (ru)
AU (1) AU2013243873B2 (ru)
BR (1) BR112014024848A2 (ru)
CA (3) CA3152081A1 (ru)
CY (1) CY1120523T1 (ru)
DK (1) DK2833905T3 (ru)
EA (1) EA031986B1 (ru)
ES (1) ES2673093T3 (ru)
HK (1) HK1203844A1 (ru)
HR (1) HRP20181187T1 (ru)
HU (1) HUE038744T2 (ru)
IL (2) IL234703B (ru)
LT (1) LT2833905T (ru)
MX (2) MX360092B (ru)
NZ (1) NZ700073A (ru)
PL (1) PL2833905T3 (ru)
PT (1) PT2833905T (ru)
RS (1) RS57449B1 (ru)
SG (1) SG11201406340QA (ru)
SI (1) SI2833905T1 (ru)
TR (1) TR201809231T4 (ru)
WO (1) WO2013151774A1 (ru)
ZA (1) ZA201406969B (ru)

Families Citing this family (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102775472A (zh) 2003-01-06 2012-11-14 安吉奥开米公司 作为穿过血脑屏障的载体的抑酶肽及类似物
NZ542873A (en) 2003-03-05 2008-07-31 Halozyme Inc Soluble, neutral-active hyaluronidase activity glycoprotein (sHASEGP) that is produced with high yield in a mammalian expression system by introducing nucleic acids that lack a narrow region encoding amino acids in the carboxy terminus of the human PH20 cDNA
WO2015081096A2 (en) * 2013-11-26 2015-06-04 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor-targeted nanoparticles for enhanced transcytosis mediated drug delivery
US9365634B2 (en) 2007-05-29 2016-06-14 Angiochem Inc. Aprotinin-like polypeptides for delivering agents conjugated thereto to tissues
EP2285402A2 (en) 2008-04-14 2011-02-23 Halozyme, Inc. Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions
TWI394580B (zh) 2008-04-28 2013-05-01 Halozyme Inc 超快起作用胰島素組成物
US8921314B2 (en) 2008-10-15 2014-12-30 Angiochem, Inc. Conjugates of GLP-1 agonists and uses thereof
US8828925B2 (en) 2008-10-15 2014-09-09 Angiochem Inc. Etoposide and doxorubicin conjugates for drug delivery
US9914754B2 (en) 2008-12-05 2018-03-13 Angiochem Inc. Conjugates of neurotensin or neurotensin analogs and uses thereof
CA2915783C (en) * 2008-12-09 2020-07-21 Halozyme, Inc. Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof
JP2012512185A (ja) 2008-12-17 2012-05-31 アンジオケム インコーポレーテッド 膜１型マトリックス金属タンパク質阻害剤およびその使用
ES2729261T3 (es) 2009-04-20 2019-10-31 Angiochem Inc Tratamiento del cáncer de ovario utilizando un agente anticancerígeno conjugado con un análogo de Angiopep-2
CN102596993A (zh) 2009-07-02 2012-07-18 安吉奥开米公司 多聚体肽结合物以及其应用
DK2477603T3 (en) 2009-09-17 2016-06-13 Baxalta Inc STABLE CO-DEVELOPMENT OF hyaluronidase and Immunoglobulin, AND METHODS OF USE THEREOF
DK2595624T3 (en) 2010-07-20 2018-03-26 Halozyme Inc Methods of treating or preventing adverse side effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent
JP6162707B2 (ja) 2011-10-24 2017-07-12 ハロザイム インコーポレイテッド 抗ヒアルロナン剤治療のためのコンパニオン診断およびその使用方法
DK2797622T3 (en) 2011-12-30 2017-01-16 Halozyme Inc PH20 polypeptide variants, formulations and uses thereof
AU2013243873B2 (en) 2012-04-04 2016-08-25 Halozyme, Inc. Combination therapy with an anti - hyaluronan agent and a tumor - targeted taxane
WO2014062856A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Halozyme, Inc. Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods
CN105579578A (zh) * 2013-08-12 2016-05-11 贝纳罗亚研究院·弗吉尼亚梅森 用于免疫调节的4-甲基伞形酮治疗
US9732154B2 (en) 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
US9603927B2 (en) 2014-02-28 2017-03-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-CD38 antibodies
PT3138555T (pt) 2014-04-30 2020-12-15 Fujifilm Corp Composição lipossómica e método de produção da mesma
US10117886B2 (en) 2014-05-30 2018-11-06 Hao Cheng Hyaluronidase and a low density second PEG layer on the surface of therapeutic-encapsulated nanoparticles to enhance nanoparticle diffusion and circulation
PT3186281T (pt) 2014-08-28 2019-07-10 Halozyme Inc Terapia de combinação com uma enzima de degradação de hialuronano e um inibidor de pontos de verificação imunológica
CN104237500B (zh) * 2014-09-30 2016-09-28 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 一种透明质酸固相包被方法
BR112017011749A2 (pt) 2014-12-04 2018-05-15 Janssen Biotech Inc anticorpos anti-cd38 para o tratamento de leucemia mieloide aguda
WO2016118538A1 (en) * 2015-01-19 2016-07-28 The Texas A&M University System Functionalized protein-based materials and their uses
KR102602754B1 (ko) 2015-05-20 2023-11-14 얀센 바이오테크 인코포레이티드 경쇄 아밀로이드증 및 다른 cd38-양성 혈액학적 악성종양을 치료하기 위한 항-cd38 항체
CA2989400A1 (en) 2015-06-15 2016-12-22 Angiochem Inc. Ang1005 for the treatment of leptomeningeal carcinomatosis
MY192978A (en) 2015-06-22 2022-09-20 Janssen Biotech Inc Combination therapies for heme malignancies with anti-cd38 antibodies and survivin inhibitors
US20170044265A1 (en) 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
RU2768178C2 (ru) * 2015-11-02 2022-03-23 Фуджифилм Корпорэйшн Средство для лечения опухоли и набор, содержащий липосомальную композицию гемцитабина
US10781261B2 (en) 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
RS63210B1 (sr) 2015-11-03 2022-06-30 Janssen Biotech Inc Potkožne formulacije anti-cd38 antitela i njihova upotreba
EP3187190A1 (en) * 2015-12-31 2017-07-05 Erytech Pharma Method of treating a mammal, including human, against cancer using methionine and asparagine depletion
US11446398B2 (en) 2016-04-11 2022-09-20 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
JPWO2017195792A1 (ja) * 2016-05-13 2019-03-14 国立大学法人 熊本大学 新規なｐｅｇ修飾酵素及びそれを用いた抗がん剤デリバリー
SG11201901815WA (en) * 2016-08-31 2019-04-29 Fujifilm Corp Anti-tumor agent, anti-tumor effect enhancer, and anti-tumor kit
WO2019089832A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating high risk multiple myeloma
WO2019126302A2 (en) * 2017-12-20 2019-06-27 Targagenix, Inc. Combination taxoid nanoemulsion with immunotherapy in cancer
US11497726B2 (en) * 2018-03-16 2022-11-15 Dfb Soria, Ll. Topical therapy for the treatment of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and cervical cancer using nanoparticles of taxanes
WO2019222435A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Halozyme, Inc. Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20
CN110960506A (zh) * 2018-09-28 2020-04-07 中山大学 用于治疗由线粒体功能失调引起的疾病的纳米制剂
CA3139852A1 (en) * 2019-05-13 2020-11-19 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Polymer-based implant for retinal therapy and methods of making and using the same
CN110302395B (zh) * 2019-07-18 2023-02-17 暨南大学 一种可促肿瘤凝血和酶/pH双重响应性释药的纳米粒子及其制备方法与应用
RU2706341C1 (ru) * 2019-07-24 2019-11-18 ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "РОССИЙСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАДИОЛОГИИ И ХИРУРГИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ ИМЕНИ АКАДЕМИКА А.М. ГРАНОВА" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ / ФГБУ "РНЦРХТ им. ак. А.М. Гранова" Минздрава России Способ лечения неоперабельной аденокарциномы головки поджелудочной железы
WO2022072383A1 (en) 2020-09-30 2022-04-07 Cercacor Laboratories, Inc. Insulin formulations and uses in infusion devices
CN112245580A (zh) * 2020-10-26 2021-01-22 深圳先进技术研究院 一种靶向载氧纳米酶制剂及其制备方法
CN116726186A (zh) * 2022-03-11 2023-09-12 四川省医学科学院·四川省人民医院 药物递送系统及其在制备抗黑色素瘤药物中的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6749868B1 (en) * 1993-02-22 2004-06-15 American Bioscience, Inc. Protein stabilized pharmacologically active agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
JP2006265117A (ja) * 2005-03-22 2006-10-05 Noribumi Sawamukai Ａｋｔシグナル経路の活性化阻害を目的として使用するレフルノミド
JP2006298892A (ja) * 2005-04-18 2006-11-02 Glyco Japan Co Ltd 抗癌剤
WO2009128917A2 (en) * 2008-04-14 2009-10-22 Halozyme, Inc. Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions
WO2011057034A2 (en) * 2009-11-05 2011-05-12 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Catenae: serosal cancer stem cells

Family Cites Families (157)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2488564A (en) 1947-06-03 1949-11-22 Orthe Pharmaecutlcal Corp Preparation of hyaluronidase
US2488565A (en) 1947-06-04 1949-11-22 Ortho Pharma Corp Preparation of hyaluronidase
US2676139A (en) 1950-09-01 1954-04-20 American Home Prod Hyaluronidase
US2808362A (en) 1952-05-02 1957-10-01 Armour & Co Preparation of hyaluronidase
US2795529A (en) 1954-06-17 1957-06-11 American Home Prod Stabilized hyaluronidase solution containing calcium chloride
US2806815A (en) 1955-04-12 1957-09-17 Ortho Pharma Corp Stabilized hyaluronidase
GB1050899A (ru) 1963-12-22
US3539794A (en) 1967-09-12 1970-11-10 American Cyanamid Co Self-contained chemiluminescent lighting device
US3536809A (en) 1969-02-17 1970-10-27 Alza Corp Medication method
US3598123A (en) 1969-04-01 1971-08-10 Alza Corp Bandage for administering drugs
US3630200A (en) 1969-06-09 1971-12-28 Alza Corp Ocular insert
DE2012888C3 (de) 1970-03-14 1981-04-02 Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen Verfahren zur Herstellung von 5-Azapyrimidinnucleosiden
US3710795A (en) 1970-09-29 1973-01-16 Alza Corp Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane
US3847770A (en) 1972-04-10 1974-11-12 Continental Can Co Photopolymerizable compositions prepared from beta hydroxy esters and polyitaconates
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
US3845770A (en) 1972-06-05 1974-11-05 Alza Corp Osmatic dispensing device for releasing beneficial agent
US3916899A (en) 1973-04-25 1975-11-04 Alza Corp Osmotic dispensing device with maximum and minimum sizes for the passageway
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4002531A (en) 1976-01-22 1977-01-11 Pierce Chemical Company Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby
US4008719A (en) 1976-02-02 1977-02-22 Alza Corporation Osmotic system having laminar arrangement for programming delivery of active agent
DE2757365A1 (de) 1977-12-20 1979-06-21 Schering Ag Neues verfahren zur herstellung von nucleosiden
US4526988A (en) 1983-03-10 1985-07-02 Eli Lilly And Company Difluoro antivirals and intermediate therefor
GB8322007D0 (en) 1983-08-16 1983-09-21 Wellcome Found Pharmaceutical delivery system
US4952496A (en) 1984-03-30 1990-08-28 Associated Universities, Inc. Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase
US5736155A (en) 1984-08-08 1998-04-07 The Liposome Company, Inc. Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
US4769027A (en) 1984-08-15 1988-09-06 Burroughs Wellcome Co. Delivery system
IE58110B1 (en) 1984-10-30 1993-07-14 Elan Corp Plc Controlled release powder and process for its preparation
DE3587500T2 (de) 1984-12-04 1993-12-16 Lilly Co Eli Tumorbehandlung bei Säugetieren.
JPH01500997A (ja) 1986-09-30 1989-04-06 ビオヘミー・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング ヒアルロニダーゼの使用
PT86377B (pt) 1986-12-24 1990-11-20 Lilly Co Eli Processo para a preparacao de conjugados de imunoglobulinas com um difluoronucleosideo acilado
US5033252A (en) 1987-12-23 1991-07-23 Entravision, Inc. Method of packaging and sterilizing a pharmaceutical product
US5052558A (en) 1987-12-23 1991-10-01 Entravision, Inc. Packaged pharmaceutical product
IL89258A0 (en) 1988-02-16 1989-09-10 Lilly Co Eli 2',3'-dideoxy-2',2'-difluoro-nucleosides
US4942184A (en) 1988-03-07 1990-07-17 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Water soluble, antineoplastic derivatives of taxol
US5073543A (en) 1988-07-21 1991-12-17 G. D. Searle & Co. Controlled release formulations of trophic factors in ganglioside-lipsome vehicle
CA2004695C (en) 1988-12-12 1999-08-10 Rosanne Bonjouklian Phospholipid nucleosides
US4960790A (en) 1989-03-09 1990-10-02 University Of Kansas Derivatives of taxol, pharmaceutical compositions thereof and methods for the preparation thereof
IT1229203B (it) 1989-03-22 1991-07-25 Bioresearch Spa Impiego di acido 5 metiltetraidrofolico, di acido 5 formiltetraidrofolico e dei loro sali farmaceuticamente accettabili per la preparazione di composizioni farmaceutiche in forma a rilascio controllato attive nella terapia dei disturbi mentali organici e composizioni farmaceutiche relative.
US5324844A (en) 1989-04-19 1994-06-28 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
EP0400472B1 (en) 1989-05-27 1996-04-03 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Process for preparing polyethylene glycol derivatives and modified protein.
US5120548A (en) 1989-11-07 1992-06-09 Merck & Co., Inc. Swelling modulated polymeric drug delivery device
US5015744A (en) 1989-11-14 1991-05-14 Florida State University Method for preparation of taxol using an oxazinone
WO1991015498A2 (en) 1990-04-04 1991-10-17 Nycomed Imaging As Nucleoside derivatives
US5733566A (en) 1990-05-15 1998-03-31 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii Controlled release of antiparasitic agents in animals
US5059699A (en) 1990-08-28 1991-10-22 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Water soluble derivatives of taxol
AU3140093A (en) 1991-11-22 1993-06-15 University Of Mississippi, The Synthesis and optical resolution of the taxol side chain and related compounds
US5580578A (en) 1992-01-27 1996-12-03 Euro-Celtique, S.A. Controlled release formulations coated with aqueous dispersions of acrylic polymers
FR2687150B1 (fr) 1992-02-07 1995-04-28 Rhone Poulenc Rorer Sa Procede de preparation de derives du taxane.
US5200534A (en) 1992-03-13 1993-04-06 University Of Florida Process for the preparation of taxol and 10-deacetyltaxol
US5171081A (en) 1992-05-29 1992-12-15 Pita Joe W Chemiluminescent reactive vessel
US5426183A (en) 1992-06-22 1995-06-20 Eli Lilly And Company Catalytic stereoselective glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides
US5594124A (en) 1992-06-22 1997-01-14 Eli Lilly And Company Stereoselective glycosylation process for preparing 2'-Deoxy-2',2'-difluoropyrimidine nucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoropyrimidine nucleosides and intermediates thereof
YU43193A (sh) 1992-06-22 1997-01-08 Eli Lilly And Company 2'-deoksi-2',2'-difluoro(4-supstituisani)pirimidinski nukleozidi antivirusnog i antikancerogenog dejstva i međuproizvodi
UA41261C2 (uk) 1992-06-22 2001-09-17 Елі Ліллі Енд Компані Спосіб одержання збагачених бета-аномером нуклеозидів
US5401838A (en) 1992-06-22 1995-03-28 Eli Lilly And Company Stereoselective fusion glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides
US5606048A (en) 1992-06-22 1997-02-25 Eli Lilly And Company Stereoselective glycosylation process for preparing 2'-Deoxy-2', 2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides
US5323907A (en) 1992-06-23 1994-06-28 Multi-Comp, Inc. Child resistant package assembly for dispensing pharmaceutical medications
WO1994005282A1 (en) 1992-09-04 1994-03-17 The Scripps Research Institute Water soluble taxol derivatives
US5411984A (en) 1992-10-16 1995-05-02 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Water soluble analogs and prodrugs of taxol
RU2125042C1 (ru) 1992-12-23 1999-01-20 Бристоль-Мейерз Сквибб Компани Таксаны с боковой цепью, промежуточные соединения, способы получения
US5591767A (en) 1993-01-25 1997-01-07 Pharmetrix Corporation Liquid reservoir transdermal patch for the administration of ketorolac
US5439686A (en) 1993-02-22 1995-08-08 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Methods for in vivo delivery of substantially water insoluble pharmacologically active agents and compositions useful therefor
AU7097094A (en) 1993-06-01 1994-12-20 Enzon, Inc. Carbohydrate-modified polymer conjugates with erythropoietic activity
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5446090A (en) 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
EP0675201A1 (en) 1994-03-31 1995-10-04 Amgen Inc. Compositions and methods for stimulating megakaryocyte growth and differentiation
US5795569A (en) 1994-03-31 1998-08-18 Amgen Inc. Mono-pegylated proteins that stimulate megakaryocyte growth and differentiation
IT1270594B (it) 1994-07-07 1997-05-07 Recordati Chem Pharm Composizione farmaceutica a rilascio controllato di moguisteina in sospensione liquida
FR2722191B1 (fr) 1994-07-08 1996-08-23 Rhone Poulenc Rorer Sa Procede de preparation du trihydrate du (2r,3s)-3-tertbutoxycarbonylamino-2-hydroxy-3-phenylpropionate de 4-acetoxy2alpha-benzoyloxy-5beta,20epoxy-1,7beta,10beta trihydroxy-9-oxo-tax-11-en-13alpha-yle
US6093563A (en) 1994-07-08 2000-07-25 Ibex Technologies R And D, Inc. Chondroitin lyase enzymes
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5521294A (en) 1995-01-18 1996-05-28 Eli Lilly And Company 2,2-difluoro-3-carbamoyl ribose sulfonate compounds and process for the preparation of beta nucleosides
US5747027A (en) 1995-04-07 1998-05-05 The Regents Of The University Of California BH55 hyaluronidase
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
US6107332A (en) 1995-09-12 2000-08-22 The Liposome Company, Inc. Hydrolysis-promoting hydrophobic taxane derivatives
AU735900B2 (en) 1996-03-12 2001-07-19 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel prodrugs
ES2208923T3 (es) 1996-07-03 2004-06-16 PHARMACIA &amp; UPJOHN COMPANY Distribucion blanco de medicamentos con la ayuda de derivados de sulfonamidas.
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
US6103525A (en) 1996-10-17 2000-08-15 The Regents Of The University Of California Hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies that bind to human plasma hyaluronidase
US6193963B1 (en) 1996-10-17 2001-02-27 The Regents Of The University Of California Method of treating tumor-bearing patients with human plasma hyaluronidase
US6258351B1 (en) 1996-11-06 2001-07-10 Shearwater Corporation Delivery of poly(ethylene glycol)-modified molecules from degradable hydrogels
SK283879B6 (sk) 1997-01-24 2004-04-06 Conpharma As Deriváty gemcitabínu, spôsob ich prípravy, ich použitie a farmaceutický prostriedok s ich obsahom
US5990237A (en) 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
SG113402A1 (en) 1997-06-27 2005-08-29 American Bioscience Inc Novel formulations of pharmacological agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
US6448369B1 (en) 1997-11-06 2002-09-10 Shearwater Corporation Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
US5985263A (en) 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5965119A (en) 1997-12-30 1999-10-12 Enzon, Inc. Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents
CA2323048C (en) 1998-03-12 2006-10-10 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
TW466112B (en) 1998-04-14 2001-12-01 Lilly Co Eli Novel use of 2'-deoxy-2',2'-difluorocytidine for immunosuppressive therapy and pharmaceutical composition comprising the same
AU5039399A (en) 1998-07-03 2000-01-24 Neles Field Controls Oy Method and arrangement for measuring fluid
US6420339B1 (en) 1998-10-14 2002-07-16 Amgen Inc. Site-directed dual pegylation of proteins for improved bioactivity and biocompatibility
WO2000033888A2 (en) 1998-12-11 2000-06-15 Coulter Pharmaceutical, Inc. Prodrug compounds and process for preparation thereof
CA2362937C (en) 1999-02-24 2011-03-22 The Uab Research Foundation Taxane derivatives for targeted therapy of cancer
JO2291B1 (en) 1999-07-02 2005-09-12 اف . هوفمان لاروش ايه جي Erythropoietin derivatives
CZ299516B6 (cs) 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6461802B1 (en) 1999-08-02 2002-10-08 Agfa-Gevaert Adhesive layer for polyester film
US6376470B1 (en) 1999-09-23 2002-04-23 Enzon, Inc. Polymer conjugates of ara-C and ara-C derivatives
ES2256082T3 (es) 1999-12-22 2006-07-16 Nektar Therapeutics Al, Corporation Derivados de polimeros hidrosolubles con impedimento esterico.
US6413507B1 (en) 1999-12-23 2002-07-02 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol)
AU2001238595A1 (en) 2000-02-22 2001-09-03 Shearwater Corporation N-maleimidyl polymer derivatives
US6586398B1 (en) 2000-04-07 2003-07-01 Amgen, Inc. Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods
ES2290142T3 (es) 2000-05-16 2008-02-16 Bolder Biotechnology, Inc. Metodos para replegamiento de proteinas que contiene residuos de cisteina libre.
EP1345628B1 (en) 2000-12-20 2011-04-13 F. Hoffmann-La Roche AG Conjugates of erythropoietin (epo) with polyethylene glycol (peg)
TWI246524B (en) 2001-01-19 2006-01-01 Shearwater Corp Multi-arm block copolymers as drug delivery vehicles
US6908963B2 (en) 2001-10-09 2005-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith
MXPA04004336A (es) 2001-11-07 2005-05-16 Nektar Therapeutics Al Corp Polimeros ramificados y sus conjugados.
IL161785A0 (en) 2001-11-23 2005-11-20 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for identification of tumor targeting enzymes
US6982253B2 (en) 2002-06-05 2006-01-03 Supergen, Inc. Liquid formulation of decitabine and use of the same
KR20040040782A (ko) 2002-11-08 2004-05-13 선바이오(주) 신규한 헥사-암 폴리에틸렌글리콜과 유도체 및 그의합성방법
ES2685436T3 (es) 2002-12-09 2018-10-09 Abraxis Bioscience, Llc Composiciones y procedimientos para administración de agentes farmacológicos
EP2218779A1 (en) 2002-12-16 2010-08-18 Halozyme, Inc. Human chondroitinase glycoprotein (chasegp), process for preparing the same, and pharmaceutical compositions comprising thereof
US6838569B2 (en) 2002-12-16 2005-01-04 Dabur India Limited Process for preparation of paclitaxel trihydrate and docetaxel trihydrate
US7199223B2 (en) 2003-02-26 2007-04-03 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer-factor VIII moiety conjugates
NZ542873A (en) 2003-03-05 2008-07-31 Halozyme Inc Soluble, neutral-active hyaluronidase activity glycoprotein (sHASEGP) that is produced with high yield in a mammalian expression system by introducing nucleic acids that lack a narrow region encoding amino acids in the carboxy terminus of the human PH20 cDNA
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20090123367A1 (en) 2003-03-05 2009-05-14 Delfmems Soluble Glycosaminoglycanases and Methods of Preparing and Using Soluble Glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7038038B2 (en) 2003-03-17 2006-05-02 Pharmion Corporation Synthesis of 5-azacytidine
US7610156B2 (en) 2003-03-31 2009-10-27 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
KR100512483B1 (ko) 2003-05-07 2005-09-05 선바이오(주) 신규한 폴리에틸렌글리콜-말레이미드 유도체의 합성방법
EA011351B1 (ru) 2003-05-23 2009-02-27 Нектар Терапеутикс Ал, Корпорейшн Полимерные реагенты, способы их получения, а также содержащие их конъюгаты и фармацевтические препараты
ES2437491T3 (es) 2003-10-10 2014-01-10 Alchemia Oncology Pty Limited Modulación de la síntesis y degradación de hialuronano en el tratamiento de enfermedad
WO2005118799A1 (en) 2004-04-15 2005-12-15 Ista Pharmaceuticals, Inc. Ovine hyaluronidase
CA2564542C (en) 2004-04-22 2012-11-27 Celator Pharmaceuticals, Inc. Combination formulations of anthracycline agents and cytidine analogs
AU2006249235B2 (en) 2004-05-14 2010-11-11 Abraxis Bioscience, Llc Sparc and methods of use thereof
US7112687B2 (en) 2004-07-15 2006-09-26 Indena, S.P.A. Methods for obtaining paclitaxel from taxus plants
DK3248600T3 (da) 2005-02-18 2020-07-06 Abraxis Bioscience Llc Kombinationer og måder til administration af terapeutiske stoffer og kombinationsterapi
US7250416B2 (en) 2005-03-11 2007-07-31 Supergen, Inc. Azacytosine analogs and derivatives
WO2007027941A2 (en) 2005-08-31 2007-03-08 Abraxis Bioscience, Llc. Compositions and methods for preparation of poorly water soluble drugs with increased stability
PL3311805T3 (pl) 2005-08-31 2020-07-27 Abraxis Bioscience, Llc Kompozycje zawierające słabo rozpuszczalne w wodzie środki farmaceutyczne i środki przeciwdrobnoustrojowe
US8138361B2 (en) 2005-12-28 2012-03-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania C-10 carbamates of taxanes
US20100112077A1 (en) 2006-11-06 2010-05-06 Abraxis Bioscience, Llc Nanoparticles of paclitaxel and albumin in combination with bevacizumab against cancer
CZ2007136A3 (cs) 2007-02-20 2008-08-27 Ústav organické chemie a biochemie AV CR, v.v.i. Zpusob výroby 1-(2-deoxy-alfa-D-erythro-pentofuranosyl)-5-azacytosinu
WO2008128169A1 (en) 2007-04-13 2008-10-23 Abraxis Bioscience, Inc. Sparc and methods of use thereof
MX2010009287A (es) 2008-02-21 2010-12-21 Sun Pharma Advanced Res Co Ltd Nuevos cojugados de taxano que contienen hidrazida.
TWI395593B (zh) 2008-03-06 2013-05-11 Halozyme Inc 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制
CA2717383C (en) 2008-03-06 2017-01-03 Halozyme, Inc. Large-scale production of soluble hyaluronidase
CA2721153C (en) 2008-04-10 2018-10-02 Abraxis Bioscience, Llc Compositions of hydrophobic taxane derivatives and uses thereof
TWI394580B (zh) 2008-04-28 2013-05-01 Halozyme Inc 超快起作用胰島素組成物
CN102143760B (zh) 2008-07-08 2015-06-17 Abbvie公司 前列腺素e2结合蛋白及其用途
CA2915783C (en) 2008-12-09 2020-07-21 Halozyme, Inc. Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof
AR076418A1 (es) 2009-04-27 2011-06-08 Reddys Lab Inc Dr Preparacion de decitabina
WO2010138918A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Pacira Pharmaceuticals, Inc. Hyaluronidase as an adjuvant for increasing the injection volume and dispersion of large diameter synthetic membrane vesicles containing a therapeutic agent
TWI502004B (zh) * 2009-11-09 2015-10-01 Dow Corning 群集官能性聚有機矽氧烷之製法及其使用方法
CN105147613A (zh) * 2010-03-29 2015-12-16 阿布拉科斯生物科学有限公司 增强药物递送和治疗剂有效性的方法
CN105477641B (zh) 2010-05-21 2021-03-23 Xl-蛋白有限责任公司 生物合成的脯氨酸/丙氨酸无规卷曲多肽及其用途
WO2011153010A1 (en) * 2010-06-04 2011-12-08 Abraxis Biosciences, Llc Methods of treatment of pancreatic cancer
DK2595624T3 (en) 2010-07-20 2018-03-26 Halozyme Inc Methods of treating or preventing adverse side effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent
EP2672958A1 (en) 2011-02-08 2013-12-18 Halozyme, Inc. Composition and lipid formulation of a hyaluronan-degrading enzyme and the use thereof for treatment of benign prostatic hyperplasia
JP6162707B2 (ja) 2011-10-24 2017-07-12 ハロザイム インコーポレイテッド 抗ヒアルロナン剤治療のためのコンパニオン診断およびその使用方法
DK2797622T3 (en) 2011-12-30 2017-01-16 Halozyme Inc PH20 polypeptide variants, formulations and uses thereof
AU2013243873B2 (en) * 2012-04-04 2016-08-25 Halozyme, Inc. Combination therapy with an anti - hyaluronan agent and a tumor - targeted taxane
WO2014062856A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Halozyme, Inc. Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6749868B1 (en) * 1993-02-22 2004-06-15 American Bioscience, Inc. Protein stabilized pharmacologically active agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
JP2006265117A (ja) * 2005-03-22 2006-10-05 Noribumi Sawamukai Ａｋｔシグナル経路の活性化阻害を目的として使用するレフルノミド
JP2006298892A (ja) * 2005-04-18 2006-11-02 Glyco Japan Co Ltd 抗癌剤
WO2009128917A2 (en) * 2008-04-14 2009-10-22 Halozyme, Inc. Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions
WO2011057034A2 (en) * 2009-11-05 2011-05-12 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Catenae: serosal cancer stem cells

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DESAI NEIL P; TRIEU VUONG; HWANG LARN YUAN; WU RUJIN; SOON-SHIONG PATRICK; GRADISHAR WILLIAM J: "Improved effectiveness of nanoparticle albumin-bound (nab) paclitaxel versus polysorbate-based docetaxel in multiple xenografts as a function of HER2 and SPARC status", ANTI-CANCER DRUGS, LIPPINCOTT WILLIAMS & WILKINS, US, vol. 19, no. 9, 1 October 2008 (2008-10-01), US, pages 899 - 909, XP009170271, ISSN: 0959-4973, DOI: 10.1097/CAD.0b013e32830f9046 *
FOSSA, S.D. JACOBSEN, A.B. GINMAN, C. JACOBSEN, I.N. OVERN, S. IVERSEN, J.R. URNES, T. DAHL, A.A. VEENSTRA, M. S: "Weekly Docetaxel and Prednisolone versus Prednisolone Alone in Androgen-Independent Prostate Cancer: A Randomized Phase II Study", EUROPEAN UROLOGY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 52, no. 6, 21 November 2007 (2007-11-21), AMSTERDAM, NL, pages 1691 - 1699, XP022356374, ISSN: 0302-2838, DOI: 10.1016/j.eururo.2007.01.104 *
MOROHASHI, H. ; KON, A. ; NAKAI, M. ; YAMAGUCHI, M. ; KAKIZAKI, I. ; YOSHIHARA, S. ; SASAKI, M. ; TAKAGAKI, K.: "Study of hyaluronan synthase inhibitor, 4-methylumbelliferone derivatives on human pancreatic cancer cell (KP1-NL)", BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 345, no. 4, 14 July 2006 (2006-07-14), AMSTERDAM, NL, pages 1454 - 1459, XP024925247, ISSN: 0006-291X, DOI: 10.1016/j.bbrc.2006.05.037 *
WPI / THOMSON Week 200676, 5 October 2006 Derwent World Patents Index; XP002698730, SAWAMUKAI N; TANAKA Y: "Leflunomide useful for activating inhibition of Akt signaling pathway, suppressing cell growth, inducing apoptosis in cancer cell, and as pharmaceutical for preventing and treating cancer e.g. breast cancer" *
WPI / THOMSON Week 200701, 2 November 2006 Derwent World Patents Index; XP002698729, ENDO M; SASAKI M; TAKAGAKI K; YOSHIHARA S: "Pharmaceutical composition useful for treating cancer e.g. brain tumor and stomach cancer, comprises combination of hyaluronic acid synthesis inhibiting factor and antitumor substance" *

Also Published As

Publication number Publication date
BR112014024848A2 (pt) 2017-07-11
PL2833905T3 (pl) 2019-01-31
HK1203844A1 (en) 2015-11-06
US20130302400A1 (en) 2013-11-14
CN104411324A (zh) 2015-03-11
JP6042527B2 (ja) 2016-12-14
LT2833905T (lt) 2018-07-10
IL234703A0 (en) 2014-11-30
KR101809858B1 (ko) 2017-12-15
JP2016188250A (ja) 2016-11-04
US9913822B2 (en) 2018-03-13
CA2986512C (en) 2022-05-17
IL259977A (en) 2018-12-02
CA2869460A1 (en) 2013-10-10
KR20160033249A (ko) 2016-03-25
JP2015514109A (ja) 2015-05-18
KR20150002752A (ko) 2015-01-07
JP2019199479A (ja) 2019-11-21
TR201809231T4 (tr) 2018-07-23
KR101626703B1 (ko) 2016-06-02
ES2673093T3 (es) 2018-06-19
DK2833905T3 (en) 2018-07-30
SG11201406340QA (en) 2014-11-27
US10137104B2 (en) 2018-11-27
WO2013151774A1 (en) 2013-10-10
US20190083449A1 (en) 2019-03-21
NZ700073A (en) 2016-08-26
HUE038744T2 (hu) 2018-11-28
CA3152081A1 (en) 2013-10-10
EA201401096A1 (ru) 2015-09-30
AU2013243873B2 (en) 2016-08-25
ZA201406969B (en) 2020-01-29
EP2833905B1 (en) 2018-05-02
RS57449B1 (sr) 2018-09-28
CA2986512A1 (en) 2013-10-10
MX360092B (es) 2018-10-19
AU2013243873A1 (en) 2014-10-09
PT2833905T (pt) 2018-08-06
HRP20181187T1 (hr) 2018-09-21
CY1120523T1 (el) 2019-07-10
EP2833905A1 (en) 2015-02-11
US20170290796A1 (en) 2017-10-12
JP6422920B2 (ja) 2018-11-14
IL234703B (en) 2019-12-31
IL259977B (en) 2019-09-26
MX2022013713A (es) 2022-12-13
JP2018138613A (ja) 2018-09-06
CA2869460C (en) 2018-05-15
CN108686203A (zh) 2018-10-23
SI2833905T1 (en) 2018-08-31
MX2014011965A (es) 2015-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101809858B1 (ko) 항-히알루로난 제제 및 종양-표적 탁산을 이용한 병용 치료
JP6262700B2 (ja) 修飾されたヒアルロニダーゼおよびヒアルロナン関連疾患および状態の治療における使用
DK2595624T3 (en) Methods of treating or preventing adverse side effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent
US20190351031A1 (en) Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM