CZ299516B6 - Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem - Google Patents
Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem Download PDFInfo
- Publication number
- CZ299516B6 CZ299516B6 CZ20002386A CZ20002386A CZ299516B6 CZ 299516 B6 CZ299516 B6 CZ 299516B6 CZ 20002386 A CZ20002386 A CZ 20002386A CZ 20002386 A CZ20002386 A CZ 20002386A CZ 299516 B6 CZ299516 B6 CZ 299516B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- thr
- conjugate
- asn
- sequence
- glycoprotein
- Prior art date
Links
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 title claims abstract description 95
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 title claims abstract description 95
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 7
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 101000920686 Homo sapiens Erythropoietin Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 34
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims abstract description 29
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 29
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 23
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 13
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 7
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims abstract description 4
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 92
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims description 73
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 7
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 claims description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 4
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 claims description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 claims 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 claims 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 15
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 abstract description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 abstract description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 abstract 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 48
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 46
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 29
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 20
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 20
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 19
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 11
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 11
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 6
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 6
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 5
- -1 lysine amino acid Chemical class 0.000 description 5
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 5
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- KSZCCRIGNVSHFH-UWVGGRQHSA-N Leu-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O KSZCCRIGNVSHFH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 4
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 4
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 3
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Asn Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XVAPVJNJGLWGCS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N Asn-Phe Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- SNYCNNPOFYBCEK-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNYCNNPOFYBCEK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- NAAAPCLFJPURAM-HJGDQZAQSA-N Asp-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O NAAAPCLFJPURAM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- GXHDGYOXPNQCKM-XVSYOHENSA-N Asp-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O GXHDGYOXPNQCKM-XVSYOHENSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- GRNOCLDFUNCIDW-ACZMJKKPSA-N Cys-Ala-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N GRNOCLDFUNCIDW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- BYALSSDCQYHKMY-XGEHTFHBSA-N Cys-Arg-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CS)N)O BYALSSDCQYHKMY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N Cys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- AFODTOLGSZQDSL-PEFMBERDSA-N Glu-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N AFODTOLGSZQDSL-PEFMBERDSA-N 0.000 description 2
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CNMOKANDJMLAIF-CIQUZCHMSA-N Ile-Thr-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNMOKANDJMLAIF-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- STAVRDQLZOTNKJ-RHYQMDGZSA-N Leu-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O STAVRDQLZOTNKJ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N Leu-Ser-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- BGGTYDNTOYRTTR-MEYUZBJRSA-N Leu-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O BGGTYDNTOYRTTR-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 2
- CKSXSQUVEYCDIW-AVGNSLFASA-N Lys-Arg-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N CKSXSQUVEYCDIW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- RBEATVHTWHTHTJ-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O RBEATVHTWHTHTJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 2
- 101100205189 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-5 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 241001415846 Procellariidae Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N Ser-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 2
- GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N Ser-Ser-Ser-Ser Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(O)=O JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N Thr-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 2
- PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 2
- FBVGQXJIXFZKSQ-GMVOTWDCSA-N Tyr-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N FBVGQXJIXFZKSQ-GMVOTWDCSA-N 0.000 description 2
- SOAUMCDLIUGXJJ-SRVKXCTJSA-N Tyr-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SOAUMCDLIUGXJJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 2
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 2
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N oxamic acid Chemical compound NC(=O)C(O)=O SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- DYMYLBQTHCJHOQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) butanoate Chemical class CCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O DYMYLBQTHCJHOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) propanoate Chemical class CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N (2s)-1-[2-[[(2s)-pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H]1NCCC1 BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- QUKZJBQJUYHRON-UHFFFAOYSA-N 3-ethylpyrrole-2,5-dione Chemical compound CCC1=CC(=O)NC1=O QUKZJBQJUYHRON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YYOVLDPHIJAOSY-DCAQKATOSA-N Arg-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N YYOVLDPHIJAOSY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N Arg-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N Arg-Tyr Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccc(O)cc1)C(=O)O UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- ZBYLEBZCVKLPCY-FXQIFTODSA-N Asp-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O ZBYLEBZCVKLPCY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 101150002621 EPO gene Proteins 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N Gly-Asp-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 108010065426 Hemaccel Proteins 0.000 description 1
- 101100333654 Homo sapiens EPO gene Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JUWJEAPUNARGCF-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JUWJEAPUNARGCF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ORWTWZXGDBYVCP-BJDJZHNGSA-N Leu-Ile-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C ORWTWZXGDBYVCP-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N Lys-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- VCYJKOLZYPYGJV-AVGNSLFASA-N Pro-Arg-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VCYJKOLZYPYGJV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- VZKBJNBZMZHKRC-XUXIUFHCSA-N Pro-Ile-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VZKBJNBZMZHKRC-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N Pro-Ser-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N Pro-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N Ser-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N Ser-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N Thr-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- BBPCSGKKPJUYRB-UVOCVTCTSA-N Thr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BBPCSGKKPJUYRB-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- GHWVXCQZPNWFRO-UHFFFAOYSA-N butane-2,3-diamine Chemical compound CC(N)C(C)N GHWVXCQZPNWFRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 108010057760 hepatic sialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- OAHKWDDSKCRNFE-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl chloride Chemical compound ClS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 OAHKWDDSKCRNFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008288 physiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108010038196 saccharide-binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
Abstract
Konjugát, který obsahuje erythropoetinový glykoprotein s alespon jednou volnou aminoskupinou, jehožbiologická aktivita in vivo spocívá v indukci bunek kostní drene ke zvýšení produkce retikulocytu acervených krvinek, zvolený ze souboru sestávajícího z lidského erythropoetinu a jeho analogu vykazujících aktivitu erythropoetinu, pricemž tento glykoprotein je kovalente vázán k "n" poly(ethylenglykol)ovým skupinám obecného vzorce -CO-(CH.sub.2.n.).sub.x.n.-(OCH.sub.2.n.CH.sub.2.n.).sub.m.n.-OR, kde -CO každé poly(ethylenglykol)ové skupiny tvorí amidovou vazbu s jednou z výše uvedených aminoskupin; R je alkyl s 1 až 6 C atomy; x je 2 nebo 3; m je 450 až 900; n je 1 až 3; a n a m jsou zvoleny tak, že molekulová hmotnost konjugátu snížená o molekulovou hmotnost erythropoetinového glykoproteinuje 20 kDa až 100 kDa. Zpusob výroby tohoto konjugátu kondenzací slouceniny vzorce II s erythropoetinovým glykoproteinem a jeho použití pro lécení anémie u pacientu s chronickým selháním ledvin nebo AIDS a pacientu s rakovinou, kterí prodelávají chemoterapii. Farmaceutická kompozice s obsahem tohotokonjugátu.
Description
Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, způsob jeho výroby a použití a farmaceutická kompozice s jeho obsahem
Oblast techniky
Vynález se týká konjugátu erythropoetinového glykoproteinu způsobu jeho výroby a použití a farmaceutické kompozice s jeho obsahem.
Dosavadní stav techniky
Erythropoéza je produkce červených krvinek, která kompenzuje jejich úbytek vyvolaný destrukcí. Erythropoéza je řízeným fysiologickým mechanismem, který zpřístupňuje dostatečný počet krvinek pro správné okysličování tkání. Přirozený lidský erythropoetin (hEPO) vzniká v ledvinách a je humorálním plazmatickým faktorem, který stimuluje tvorbu červených krvinek (Camot, P. a Deflandre, C, 1906, C. R. Acad. Sci. 143: 432; Erslev, A. J., 1953 Blood 8: 349; Reissmann,
K. R., 1950, Blood 5: 372; Jacobson, L. O., Goldwasser, E., Freid, W. a Plzak L. F., 1957, Nátuře 179: 6331 až 6334). Přirozený EPO stimuluje dělení a diferenciaci determinovaných erythroid20 nich progenitorů v kostní dřeni a uplatňuje svou biologickou aktivitu vazbou k receptorům na erythroidních prekurzorech (Krantz, B. S., 1991, Blood 77, 419).
Erythropoetin je vyráběn biosynteticky za použití technologie rekombinantní DNA (Egrie J. C., Strickland T. W., Lané, J. et al., 1986, Immunobiol. 72, 213 až 224) a je produktem klonovaného genu lidského EPO inzertovaného do buněk tkáně vaječníků čínského křečka (buněk CHO), v nichž je exprimován. Primární struktura převládající, plně upravené formy hEPO je uvedena v SEQ ID NO: 1. V této struktuře jsou dva disulfidové můstky mezi Cys7-Cys161 a Cys29-Cys33. Molekulová hmotnost polypeptidového řetězce EPO bez cukerných zbytků je 18 236 Da. V intaktní molekule EPO asi 40 % molekulové hmotnosti připadá na sacharidové skupiny, které glykosylují protein na glykosylačních místech proteinu (Sasaki, H., Bothner, B., Dell, A., a Fukuda, M., 1987, J. Biol. Chem. 262, 12059).
Jelikož je lidský erythropoetin nezbytný při tvorbě červených krvinek, je tento hormon užitečný při léčení krevních poruch charakterizovaných nízkou nebo defektní tvorbou červených krvinek.
Klinicky se EPO používá při léčení anémie u pacientů s chronickým selháním ledvin (CRF) (Eschbach, J. W., Egri, J. C., Downing, M. R. et al., 1987, NEJM 316, 73 až 78; Eschbach, J. W., Abdulhadi, Μ. H., Browne, J. K. et al., 1989, Ann. Intern. Med., 111, 992; Egrie, J. C. Eschbach, J. W., McGuire, T., Adamson, J. W., 1988, Kidney Intl. 3, 262; Lim, V. S.; Degowin, R. L., Zavala, D. et al., 1989, Ann. Intern. Med. 110, 108 až 144), u pacientů trpících AIDS a pacientů trpících rakovinou, kteří prodělávají chemoterapii (Danna, R. P., Rudnick, S. A., Abels, R. I., MB, ed. Gamick, Erythropoietin in Clinical Applications - An International Perspective, New York, NY, Marcel Dekker; 1990, str. 301 až 324). Biodostupnost u proteinových léčiv dostupných na trhu, jako je EPO, je však omezena jejich krátkým poločasem v plazmě a náchylností k degradaci proteasami. Tyto nedostatky brání dosažení maximální klinické účinnosti.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je konjugát, který obsahuje erythropoetinový glykoprotein s alespoň jednou volnou aminoskupinou, jehož biologická aktivita in vivo spočívá v indukci buněk kostní dřevně ke zvýšení produkce retikulocytů a červených krvinek, zvolený ze souboru sestávajícího z lidského erythropoetinu a jeho analogů vykazujících aktivitu erythropoetinu, zvolených z
i) analogů, v nichž je sekvence lidského erythropoetinu modifikována přidáním 1 až 6 glyko55 sylačních míst nebo přeřazením alespoň jednoho glykosylaěního místa,
-1 CZ 299516 B6 ii) analogů, v nichž je sekvence lidského erythropoetinu změněna modifikací zvolenou ze souboru sestávajícího z
Asn30Thr32;
AsnSlThr53,
Asn57Thr59;
Asn69;
Asn69Thr7i;
Ser68Asn69Thr7];
Val^Asn^Thr90;
Ser87Asn88Thr9C;
$erS7Asn88Giy89Thr90;
Ser87Asn88Thr90Thr92;
Ser87Asn88TV°Ala162;
Asn69Thr71Ser87Asn88Thr90;
Asn30Thr32Val87Asn88Thr90;
Asn89Ile90Thr91;
Ser87Asn89Ile90Thr91;
Asn136Thr138;
AsnI3SThr140;
Thr125; a Pro124Thr125 a
iii) analogů, v nichž je sekvence lidského erythropoetinu na svém karboxylovém konci doplněna o druhou sekvenci, přičemž tato druhá sekvence obsahuje alespoň jedno glykosylační místo;
přičemž tento glykoprotein je kovalentně vázán k „n“ poly(ethylenglykol)ovým skupinám obecného vzorce
-CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR, kde
-CO každé poly(ethylenglykol)ové skupiny tvoří amidovou vazbu sjednou zvýše uvedených aminoskupin;
R představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku; x představuje 2 nebo 3; m představuje 450 až 900;
-2CZ 299516 B6 n představuje 1 až 3; a n a m jsou zvoleny tak, že molekulová hmotnost konjugátu snížená o molekulovou hmotnost erythropoetinového glykoproteinu je 20 až 100 kDa.
Předmětem vynálezu jsou dále kompozice, které obsahují konjugáty popsané výše, přičemž podíl konjugátů, kde n představuje číslo 1, v kompozici je alespoň 90 %.
Konjugáty podle vynálezu je možno používat stejně jako nemodifikovaný EPO. Konkrétně je io konjugát podle vynálezu, stejně jako EPO, užitečný při léčení pacientů stimulací dělení a diferenciaci determinovaných erythroidních progenitorů v kostní dřeni. Tyto konjugáty však vykazují prodloužený poločas cirkulace a prodlouženou dobu setrvání v plazmě, sníženou clearanci a zvýšenou klinickou aktivitu in vivo. Vzhledem k těmto zlepšeným vlastnostem je konjugáty podle vynálezu možno podávat jednu týdně, namísto podávání třikrát týdně u nemodifikovaného
EPO. Předpokládá se, že následkem snížené četnosti podávání bude zvýšení kompliance u pacientů, které dále povede ke zlepšeným výsledkům léčení a zvýšené kvalitě života pacientů. Bylo zjištěno, že ve srovnání s obvyklými konjugáty EPO vázaného k polyethylenglykolu, konjugáty s molekulovou hmotností a linkerovou strukturou konjugátů podle tohoto vynálezu vykazují zlepšenou účinnost, stabilitu, AUC, zlepšený poločas cirkulace a profil nákladů realizovaného zboží.
Konjugáty podle tohoto vynálezu je možno podávat v terapeuticky účinných dávkách pacientům stejným způsobem, jakým je podáván EPO. Terapeuticky účinné množství je takové množství konjugátu, které je nezbytné pro dosažení biologické aktivity in vivo, jež vede buňky kostní dřeně ke zvýšení produkce retikulocytů a červených krvinek. Přesné množství je záležitostí přednostní volby, v závislosti na takových faktorech, jako jsou přesný typ léčeného stavu, stav léčeného pacienta a také ostatní složky kompozice. Je například možno tento konjugát podávat v dávkách 0,01 až 10 pg/kg tělesné hmotnosti, přednostně 0,1 až 1 pg/kg tělesné hmotnosti, například jednou týdně.
Je možno připravovat farmaceutické kompozice obsahující konjugát podle vynálezu v účinné koncentraci, které se budou podávat různými způsoby humánním pacientům, kteří mají v anamnéze krevní poruchy charakterizované nízkou nebo defektní tvorbou červených krvinek. Průměrné terapeuticky účinné množství konjugátu může kolísat a v konkrétním případě by mělo být založeno na doporučení a předpisu od kvalifikovaného ošetřujícího lékaře.
Produkty na bázi erythropoetinového glykoproteinu podle tohoto vynálezu je možno připravovat ve formě farmaceutických kompozic vhodných pro injekční podávání za použití farmaceuticky vhodných nosičů nebo vehikulí známých v tomto oboru. Vhodné kompozice jsou například popsány ve WO97/09996, W097/40850, WO98/58660 a W099/07401. Jako farmaceuticky vhodné nosiče, kterých se přednostně používá při formulaci produktů podle vynálezu, je možno uvést humánní sérový albumin, humánní plazmové proteiny atd. Sloučeniny podle vynálezu je možno připravovat v 1 OmM pufru na bázi fosforečnanu sodného/draselného o pH 7, který obsahuje činidlo upravující tonicitu, například 132mM chlorid sodný. Farmaceutické kompozice mohou popřípadě obsahovat konzervační látky. Farmaceutická kompozice může obsahovat různá množství erythropoetinu, například 10 až 1000 pg/ml, například 50 pg nebo 400 pg.
Pod pojmem „erythropoetin“ nebo „EPO“ se rozumí glykoprotein s aminokyselinovou sekvencí uvedenou v SEQ ID NO:1 nebo SEQ ID NO: 2 nebo aminokyselinovou sekvencí, která je s nimi v podstatě homologní, jehož biologické vlastnosti spočívají ve stimulaci produkce červených krvinek a stimulaci dělení a diferenciace determinovaných erythroidních progenitorů v kostní dřeni. Do rozsahu těchto pojmů, jak se jich používá v tomto textu, spadají takové proteiny modifikované záměrně, jako jsou proteiny modifikované místně cílenou mutagenezí, nebo náhodně modifikované mutacemi. Do rozsahu těchto pojmů také spadají analoga s 1 až 6 přídavnými glykosylačními místy, analoga s alespoň jednou přídavnou aminokyselinou na karboxylovém
-3CZ 299516 B6 konci glykoproteinů, v nichž přídavná aminokyselina obsahuje alespoň jedno glykosylační místo, a analoga s aminokyselinovou sekvencí, která zahrnuje přeřazení alespoň jednoho místa pro glykosylaci. Pod těmito pojmy se rozumí jak přirozený, tak i rekombinantní lidský erythropoetin.
Erythropoetinové konjugáty podle vynálezu lze znázornit obecným vzorcem I
P-[NHCCKCH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n (I), kde x, m, n a R mají výše uvedený význam, a P představuje zbytek erythropoetinového glyko10 proteinu popsaný v tomto textu (tj. bez aminoskupiny nebo aminoskupin, které tvoří amidovou vazbu s karbonylem znázorněným v obecném vzorci I) vykazující biologickou aktivitu, která spočívá v tom, že vede buňky kostní dřeně ke zvýšení produkce retikulocytů a červených krvinek.
V přednostním provedení tohoto vynálezu R představuje methylskupinu. Hodnota m je přednostně asi 650 až 750 a n je přednostně 1.
V nej výhodnějším provedení tohoto vynálezu R představuje methylskupinu, m představuje asi 650 až asi 750 a n představuje číslo 1, tzn., že konjugát definovaný výše odpovídá obecnému vzorci [CH3O(CH2CH2O)mCH2CH2CH2CO-NH]n-P kde m představuje 650 až 750, n představuje 1 a P má výše uvedený význam. V přednostním provedení je m průměrně asi 680.
Glykoproteinem konjugátů definovaných výše je přednostně lidský erythropoetin. Lidský erythropoetin a analogické proteiny definované výše mohou být exprimovány aktivací endogenního genu. Přednostní lidské erythropoetinové glykoproteiny mají sekvenci odpovídající SEQ ID
NO: 1 a SEQ ID NO: 2, zvláště pak SEQ ID NO: 1.
P může být zvolen ze souboru sestávajícího ze zbytků lidského erythropoetinu a jeho analog s 1 až 6 přídavnými glykosylačními místy. Jak je podrobněji popsáno dále, příprava a čištění EPO jsou v tomto oboru dobře známy. Pod pojmem „EPO“ se rozumí přirozený nebo rekom35 binantní protein, přednostně lidský, jak byl získán z jakéhokoliv obvyklého zdroje, jako jsou tkáně, syntéza proteinu, buněčná kultura s přirozenými nebo rekombinantními buňkami. Do rozsahu tohoto pojmu spadá jakýkoliv protein, který vykazuje aktivitu EPO, jako jsou muteiny nebo jinak modifikované proteiny. Rekombinantní EPO je možno připravovat expresí v buněčných liniích CHO, BHK nebo HeLa, postupem s rekombinantní DNA nebo aktivací endogenního genu.
Exprese proteinů, včetně EPO aktivací endogenního genu jev tomto oboru dobře známa aje popsána na příklad v patentech US 5 733 761, US 5 641 670 a US 5 773 746 a mezinárodních patentových přihláškách WO 93/09222, WO 94/12650, WO 95/31560, WO 90/11354, WO 91/06667 a WO 91/09955, které jsou citovány náhradou za přenesení celého jejich obsahu do tohoto textu. Přednostními druhy EPO při výrobě erythropoetinových glykoproteinových produktů jsou druhy lidského EPO. Jako druhu EPO se větší přednost dává lidskému EPO s aminokyselinovou sekvencí znázorněnou v SEQ ID NO: 1 nebo SEQ ID NO: 2, výhodněji aminokyselinovou sekvencí znázorněnou v SEQ IDNO: 1.
V jednom provedení P může představovat zbytek glykoproteinového analogu s 1 až 6 přídavnými glykosylačními místy. Ke glykosylaci proteinu jedním zbytkem oligosacharidu nebo více zbytky oligosacharidu dochází na specifických místech hlavního řetězce polypeptidu, a významně ovlivňuje fyzikální vlastnosti proteinu, jako je stabilita, sekrece, subcelulámí lokalizace a biologická aktivita proteinu. Obvykle se vyskytují dva typy glykosylace. O-vázané oligosacharidy jsou navázány ke zbytkům šeřinu nebo threoninu a N-vázané oligosacharidy jsou navázány ke zbytků asparaginu. Jeden typ oligosacharidu, který může být jak N-vázaný, tak O-vázaný, představuje
-4CZ 299516 B6
N-acetylneuraminová kyselina (sialová kyselina), což je třída aminocukrů obsahujících 9 nebo více atomů uhlíku. Sialová kyselina je obvykle terminálním zbytkem N-vázaných i O-vázaných oligosacharidů a jelikož nese negativní náboj, propůjčuje oligosacharidu kyselé vlastnosti. Lidský erythropoetin se 165 aminokyselinami obsahuje tři N-vázané oligosacharidové řetězce a jeden
O-vázaný oligosacharidový řetězec, které tvoří asi 40 % celkové molekulové hmotnosti glykoproteinu. N-vázaná glykosylace se vyskytuje na asparaginových zbytcích v polohách 24, 38 a 83 a O-vázaná glykosylace se vyskytuje na serinovém zbytku v poloze 126. Oligosacharidové řetězce jsou modifikovány terminálními zbytky sialové kyseliny. Enzymatické odstranění všech zbytků sialové kyseliny z glykosylovaného erythropoetinu vede ke ztrátě aktivity in vivo, nikoliv ío však in vitro, jelikož sialylace erythropoetinu brání jeho vazbě, a následné clearanci, hepatickým vazebným proteinem.
Glykoproteiny podle tohoto vynálezu zahrnují analoga lidského erythropoetinu s aminokyselinovou sekvencí lidského erythropoetinu, v níž je provedena jedna změna nebo větší počet změn, což vede ke zvýšení počtu míst pro navázání sialové kyseliny. Tato glykoproteinová analoga je možno připravovat místně cílenou mutagenezí zahrnující přidání, deleci nebo náhradu aminokyselinových zbytků, kterou se zvyšují nebo pozměňují místa, která jsou dostupná pro glykosylaci. Glykoproteinová analoga, v nichž je úroveň sialové kyseliny vyšší, než je její úroveň v lidském erythropoetinu se obvykle připravují přidáním glykosylačních míst, která nenarušují sekun20 dámí nebo terciární konformaci, která je nutná pro biologickou aktivitu. Do glykoproteinů podle vynálezu také spadají analoga se zvýšenou úrovní navázání sacharidů v glykosylačním místě, která obvykle obsahují substituci jedné nebo více aminokyselin v těsné blízkosti N-vázaného nebo O-vázaného místa. Glykoproteiny podle tohoto vynálezu také zahrnují analoga obsahující jednu nebo více aminokyselin, které prodlužují karboxylový konec erythropoetinu a poskytují alespoň jedno přídavné sacharidové místo. Do glykoproteinů podle tohoto vynálezu také spadají analoga s aminokyselinovou sekvencí, která obsahuje přeřazení alespoň jednoho glykosylačního místa. Takové přeřazení glykosylačního místa zahrnuje deleci jednoho nebo většího počtu glykosylačních míst v lidském erythropoetinu a přidání jednoho nebo většího počtu nepřirozených glykosylačních míst. Zvýšením počtu sacharidových řetězců na erythropoetinu, a tedy počtu sialových kyselin na molekulu erythropoetinu, se může dosáhnout výhodných vlastností, jako je zvýšená rozpustnost, větší resistence vůči proteolýze, snížená imunogenicita, prodloužený poločas v séru a zvýšená biologická aktivita. Erythropoetinová analoga s přídavnými glykosylačními místy jsou podrobněji popsána v evropské patentové přihlášce 640 619 (Elliot), zveřejněná 1. března 1995.
V přednostním provedení glykoproteiny podle tohoto vynálezu zahrnují aminokyselinovou sekvenci, která obsahuje alespoň jedno přídavné glykosylační místo. Jako neomezující příklady takových glykoproteinů je možno uvést erythropoetin, který zahrnuje sekvenci lidského erythropoetinu, jež je změněna modifikací zvolenou ze souboru sestávajícího z
-5CZ 299516 B6
Asn3OThr32;
Asn51Thr53,
Asn57Thr59;
Asn69;
Asn69Thr71;
Ser68Asn69Thr71;
Val87Asn88Thr90;
Ser87Asn88Thr90;
Ser87Asn88Gly89Thr90;
Ser87Asn88Thr90Thr92;
Ser87Asn88Thr90Ala162;
Asn69Thr71Ser87Asn88Thr90;
Asn30Thr32Val87Asn88Thr90;
Asn89Ile90Thr91;
Ser87Asn89IIe90Thr91;
Asn136Thr138;
Asn138Thr140;
Thr125; a.
Pro124Thr125.
Záznam, kterého se zde používá pro popis modifikací aminokyselinové sekvence vyjadřuje, že v poloze v odpovídajícím nemodifikovaném proteinu (například hEPO o SEQ ID NO: 1 nebo SEQ ID NO: 2) vyjádřené horním indexem byla provedena změna na aminokyselinu uvedenou bezprostředně před tímto horním indexem.
Glykoproteinem také může být analog s alespoň jednou přídavnou aminokyselinou na svém karboxylovém konci, přičemž tato přídavná aminokyselina obsahuje alespoň jedno glykosylační místo, tzn., že konjugát definovaný výše se také vztahuje na sloučeniny, kde glykoprotein má ío sekvenci, která zahrnuje sekvenci lidského erythropoetinu, a druhou sekvenci na karboxylovém konci sekvence lidského erythropoetinu, přičemž tato druhá sekvence obsahuje alespoň jedno glykosylační místo. Přídavná aminokyselina může obsahovat peptidový fragment odvozený od karboxylového konce lidského choriového gonadotropinu. V přednostním provedení je glykoproteinem analog zvolený ze souboru sestávajícího ze (a) lidského erythropoetinu s amino15 kyselinovou sekvencí Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gin (SEQ ID NO: 3), připojenou ke karboxylovému konci; (b) analog definovaný v odstavci (a), který dále obsahuje Ser87 Asn88 Thr90 EPO; a (c) analog definovaný v odstavci (a), který dále obsahuje Asn30 Thr32 Val87 Asn88 Thr90 EPO.
Glykoproteinem také může být analog s aminokyselinovou sekvencí, která zahrnuje přeřazení alespoň jedno glykosylačního místa. Přeřazení může představovat deleci jakéhokoliv N-vázaného cukerného místa v lidském erythropoetinu a přidání N-vázaného sacharidového místa v poloze 88 aminokyselinové sekvence lidského erythropoetinu. V přednostním provedení je glykoproteinem analog zvolený ze souboru sestávajícího z Gin20 * * * 24 25 Ser87 Asn88 Thr90 EPO; Gin38
Ser87 Asn88 Thr90 EPO; a Gin83 Ser87 Asn88 Thr90 EPO.
-6CZ 299516 B6
Pod pojmem „nižší alkyl“ se v tomto textu rozumí přímá nebo rozvětvená alkylskupina s 1 až 6 atomy uhlíku. Jako příklady nižších alkylskupin je možno uvést methyl-, ethyl- a isopropylskupinu. Podle tohoto vynálezu R představuje jakýkoliv nižší alkyl. Přednost se dává konjugátům, kde R představuje methylskupinu.
Symbol „m“ představuje počet ethylenoxidových zbytků (OCH2CH2) v poly(ethylenoxid)ové skupině. Jednoduchá ethylenoxidová PEG podjednotka má molekulovou hmotnost asi 44 Da. Molekulová hmotnost konjugátu (nezahrnující molekulovou hmotnost EPO) tedy závisí na hodnotě „m“. V konjugátech podle tohoto vynálezu „m“ představuje asi 450 až asi 900 (což odpoio vídá molekulové hmotnosti asi 20 kDa až asi 40 kDa), přednostně od asi 650 do asi 750 (což odpovídá molekulové hmotnosti asi 30 kDa). Hodnota m je zvolena tak, aby výsledný konjugát podle tohoto vynálezu vykazoval fyziologickou aktivitu srovnatelnou s nemodifikovaným EPO, přičemž tato aktivita může být stejná jako odpovídající aktivita nemodifikovaného EPO, nebo vyšší či může představovat její zlomek. Molekulová hmotnost, jejíž určitá hodnota je uvozena slovem „asi“ znamená, že jde o hodnotu vykazující rozumný rozptyl od hodnoty stanovené obvyklými analytickými postupy. Hodnota „m“ je zvolena tak, aby molekulová hmotnost každé poly(ethylenglykol)ové skupiny kovalentně vázané k erythropoetinovému glykoproteinů byla od asi 20 kDa do asi 40 kDa, a přednostně asi 30 kDa.
V konjugátech podle tohoto vynálezu symbol „n“ představuje počet polyethylenglykolových skupin kovalentně vázaných k volným aminoskupinám (včetně epsílon-aminoskupin aminokyseliny lysinu a/nebo aminoskupiny na aminovém konci) erythropoetinového proteinu prostřednictvím amidové vazby či amidových vazeb. V konjugátu podle vynálezu mohou na jednu molekulu EPO připadat 1, 2 nebo 3 PEG skupiny. Symbol „n“ představuje celé číslo v rozmezí 1 až 3, před25 nostně číslo 1 nebo 2, výhodněji číslo 1.
Sloučeniny obecného vzorce I je možno připravovat ze známé polymemí sloučeniny obecného vzorce II
kde Ram mají výše uvedený význam, tak, že se sloučenina obecného vzorce II kondenzuje s erythropoetinovým glykoproteinem. Sloučeninami obecného vzorce II, kde X představuje číslo 3, jsou alfa-nižší alkoxy, máselná kyselina sukcinimidylestery poly(ethylenglykolu) (nižší alkoxy-PEG-SBA). Sloučeniny obecného vzorce II, kde x představuje číslo 2 jsou alfa-nižší alkoxy, propionová kyselina sukcinimidylestery poly(ethylenglykolu) (nižší-alkoxy-PEG-SPA).
Reakci aktivovaného esteru s aminem za vzniku amidu je možno provádět jakýmkoliv obvyklým způsobem. Při výše popsané reakci je uvedený sukcinimidylester odstupující skupinou vyvolávající tvorbu amidu. Použití sukcinimidylesterů jako sloučenin obecného vzorce II při výrobě konjugátů s proteiny je popsáno v patentu US 5 672 662, uděleném 30. září 1997 (Harris et al.).
Lidský EPO obsahuje volných 9 aminoskupin: aminoskupinu aminového konce a epsilon-aminoskupiny 8 zbytků lysinu. Bylo zjištěno, že když se pegylační činidlo nechá reagovat s SBA sloučeninou obecného vzorce II při pH 7,5, v poměru protein : PEG 1 : 3 a při teplotě od 20 do 25 °C, vznikne směs obsahující mono- a dipegylované sloučeniny a stopová množství tripegylovaných sloučenin. Když je pegylačním činidlem SPA sloučenina obecného vzorce II, poměr protein : PEG je 1:2a ostatní podmínky zůstávají stejné, získají se převážně monopegylované sloučeniny. Pegylovaný EPO je možno podávat ve formě směsi nebo ve formě různě pegylovaných sloučenin rozdělených katexovou chromatografií. Se změnami reakčních podmínek (jako je
-7CZ 299516 B6 například poměr reagentů, pH, teplota, koncentrace proteinu, reakční doba atd.) se relativní množství různě pegylovaných sloučenin mohou měnit.
Lidský erythropoetin (EPO) je lidský glykoprotein, který stimuluje tvorbu erythrocytů. Jeho výroba a terapeutické aplikace jsou podrobně popsány například v patentech US 5 547 933 a US 5 621 080, EP-B 0 148 605, Huang, S. L., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 1984, 2708 až 2712, EP-B 0 205 564, EP-B 0 209 539 a EP-B 0 411 678 a také v Lai, P. H. et al., J. Biol. Chem. 261, 1986, 3116 až 3121 a Sasaki, H. et al., J. Biol. Chem. 262, 1987, 12059 až 12076. Erythropoetin pro použití při léční je možno vyrábět rekombinantními postupy (EP-B 0 148 605, ío EP-B 0 209 539 a Egrie, J. C., Strickland, T. W., Lané, J. et al., 1986, Immunobiol. 72, 213 až
224).
Způsoby exprese a výroby erythropoetinu v médiu bez séra jsou popsány například v přihlášce WO 96/35718 (Burg), zveřejněné 14. listopadu 1996 a v evropské patentové publikaci č. 513 738 (Koch), zveřejněné 12. června 1992. Kromě těchto způsobů popsaných v uvedených publikacích je známo, že je možno provést bezsérovou fermentaci rekombinantních buněk CHO, které obsahují EPO gen. Takové způsoby jsou popsány například v EP-A 0 513 738, EP A 0 267 678 a v obecné formě v Kawamoto, T. et al., Analytical Biochem 130 (1983) 445 až 453, EP-A 0 248 656, Kowar, J. a Franěk, F., Methods in Enzymology 421 (1986) 277 až 292,
Bavister, B., Expcology 271 (1981), 45 až 51, EP-A 0 481 791, EP-A 0 307 247, EP-A 0 343 635 a WO 88/00967.
V EP-A 0 267 678 jsou popsány ionexová chromatografie na S-Sepharose, vysokotlaká kapalinová chromatografie s reversními fázemi na sloupci Cg a gelová filtrační chromatografie pro čištění EPO získaného v kultuře bez séra po dialýze. V této souvislosti lze stupeň gelové filtrační chromatografie nahradit ionexovou chromatografií na S-Sepharose Fast Flow. Před ionexovou chromatografií je také možno provést chromatografií na sloupci s barvivém Blue Trisacryl.
Způsob čištění rekombinantního EPO je popsán v Nobuo, I. et al., J. Biochem. 107, 1990, 352 až
359. Při tomto postupu se však před provedením purifikačního stupně EPO zpracovává roztokem
Tween®20, fenylmethylsulfonylchloridu, ethylmaleinimidu, pepstatinu A, síranu měďnatého a kyseliny oxamové. Publikace, včetně WO 96/35718 (Burg), zveřejněné 14. listopadu 1996, popisují způsob výroby erythropoetinu fermentaci bez séra (EPOsf).
Specifickou aktivitu EPO nebo EPO konjugátů podle tohoto vynálezu je možno stanovit za použití různých zkoušek známých v tomto oboru. Biologická aktivita purifikovaných EPO proteinů podle tohoto vynálezu je taková, že injekční podání EPO proteinu humánnímu pacientovi vede u buněk kostní dřeně k produkci retikulocytů a červených krvinek, která je oproti kontrolním skupinám subjektů zvýšena. Biologickou aktivitu EPO proteinů nebo jejich fragmentů, které byly získány a purifikovány podle tohoto vynálezu, je možno zkoušet postupy popsanými v Annable et al., Bull. Wld. Hlth. Org., 1972, 47, 99 až 112 a Pharm. Europa Spec. Issue Erythropoetin BRP Bio, 1977, 2. Jiná biologická zkouška stanovení aktivity EPO proteinu, zkouška na normocytních myších, je popsána v příkladu 4.
Předmětem vynálezu jsou také kompozice, které obsahují výše popsané konjugáty. Kompozici obsahující alespoň 90 % mono-PEG konjugátů, tj. v nichž n představuje číslo 1, je možno připravit způsobem popsaným v příkladu 5. Běžně jsou žádoucí mono-PEG konjugáty erythropoetinových glykoproteinů, jelikož obvykle mají vyšší aktivitu než di-PEG konjugáty. Procentní podíl mono-PEG konjugátu, jakož i poměr mono- a di-PEG produktů lze regulovat: za účelem snížení procentního podílu mono-PEG produktu se shromažďuje širší rozmezí frakcí okolo elučního píku, nebo za účelem zvýšení procentního podílu mono-PEG produktu se shromažďuje užší rozmezí frakcí okolo elučního píku. U kompozic s 90% podílem mono-PEG konjugátů je dobře vyvážen poměr výtěžek/aktivita. Někdy však mohou být potřebné kompozice s konjugáty, z nichž alespoň 92 nebo alespoň 96 % tvoří mono-PEG konjugáty (tj. kde n představuje číslo 1).
V provedení podle tohoto vynálezu činí podíl konjugátů, kde n představuje číslo 1, 90 až 96 %.
-8CZ 299516 B6
Předmětem vynálezu jsou dále odpovídající farmaceutické kompozice, jejichž podstata spočívá v tom, že obsahují konjugát nebo kompozici, které jsou definovány výše, a farmaceuticky vhodný excipient.
Konjugáty a kompozice podle tohoto vynálezu jsou zvláště užitečné při výrobě léčivých přípravků pro léčení nebo prevenci chorob, které souvisejí s anémií u pacientů s chronickým selháním ledvin (CRF), AIDS a u pacientů, kteří prodělávají chemoterapii při léčení rakoviny.
Předmětem vynálezu je také použití konjugátu nebo směsi konjugátů podle vynálezu pro výrobu léčiv pro léčení nebo profylaxi chorob, které souvisejí s anémií u pacientů s chronickým selháním ledvin nebo AIDS a pro léčení pacientů trpících rakovinou, kteří prodělávají chemoterapii.
Dále je předmětem vynálezu způsob výroby sloučenin definovaných výše, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje kondenzaci sloučeniny obecného vzorce II
O
ROIC^C^OJ^íCH^COOhT^ (II) f kde R, m a x mají výše uvedený význam; s erythropoetinovým glykoproteinem.
Předmětem vynálezu jsou dále sloučeniny definované výše pro léčení chorob, které souvisejí s anémií u pacientů s chronickým selháním ledvin (CRF) nebo AIDS a u pacientů, kteří prodělávají chemoterapii při léčení rakoviny.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Fermentace a purifikace lidského EPO
a) Příprava inokula a fermentace
Jedna lahvička Working Cell Bank obsahující buňky, které pocházejí z CHO buněčné linie produkující EPO (je možno použít ATCC CRL8695, popsané v EP 411 678, Genetics Institute) se vyjme z plynné fáze tanku pro ukládání v kapalném dusíku. Buňky se umístí do skleněných rotačních nádob a kultivují v médiu pufrovaném hydrogenuhličitanem v inkubátoru se zvlhčenou atmosférou CO2. Obvyklá bezsérová média používaná pro přípravu inokula a fermentaci jsou popsána v evropské patentové přihlášce 513 738 (Koch), zveřejněné 12. června 1992, nebo WO 96/35718 (Burg), zveřejněné 14. listopadu 1996. Tato média například obsahují DMEM/F12 (např. JRH Biosciences/Hazleton Biologics, Denver, US, pořadové číslo 57-736) a navíc hydrogenuhličitan sodný, L-(+)-glutamin, D-(+)-glukózu, rekombinantní inzulín, selenit sodný, diaminobutan, hydrokortizon, síran železnatý, asparagin, asparagovou kyselinu, serin a stabilizátor pro savčí buňky, jako je například polyvinylalkohol, methylcelulosa, polydextran, poly-9CZ 299516 B6 ethylenglykol, Pluronic F68, plazmový expandér polygelin (HEMACCEL®) nebo polyvinylpyrrolidon (WO 96/35718).
Kultury se podrobí mikroskopické kontrole ohledně nepřítomnosti kontaminujících mikro5 organismů a stanoví se buněčná denzita. Tyto zkoušky se provádějí při každém stupni dělení.
Po počátečním období růstu se buněčná kultura zředí čerstvým médiem na výchozí buněčnou denzitu a nechá projít dalším růstovým cyklem. Tento postup se opakuje, dokud se nezíská kultura v objemu asi 2 litrů na skleněnou rotační nádobu. Po asi 12 zdvojeních je dostupných 1 až ío 5 litrů této kultury, kterou je možno použít jako inokula pro 1 Olitrový inokulační fermentor.
Po 3 až 5 dnech je kultury z lOlitrového fermentoru možno použít jako inokula pro lOOlitrový inokulační fermentor.
Po dalších 3 až 5 dnech kultivace je kultury ze lOOlitrového fermentoru možno použít jako inokula pro lOOOlitrový produkční fermentor. b) Sklizeň a separace buněk
Po dosažení požadované buněčné denzity se sklidí asi 80 % kultury. Zbytek kultury se doplní čerstvým kultivačním médiem a kultivuje do následující sklizně. Jeden produkční cyklus sestává maximálně z 10 následných sklizní: 9 částečných sklizní a 1 úplné sklizně na závěr fermentace. Sklizeň se provádí každé 3 až 4 dny.
Stanovený objem sklizených buněk se přemístí do chlazené nádoby. Buňky se odstraní centrifugací nebo filtrací a zahodí. Supematant z centrifugačního stupně obsahující EPO se přefiltruje přes filtr zapojený v sérii a shromáždí do druhé chlazené nádoby. Každá sklizeň se podrobí separačnímu postupu odděleně.
Typický postup purifikace EPO proteinu je popsán vWO96/35718 (Burg), zveřejněné
14. listopadu 1996. Popis tohoto purifikačního postupu následuje.
a) Chromatografie na Blue Sepharose
Blue Sepharose (Pharmacia) je tvořena perlami Sepharose, kjejichž povrchu je kovalentně navázána modř Cibacron. Jelikož vazba EPO k Blue Sepharose je silnější než vazba většiny nebílkovinných kontaminantů, některých nečistot bílkovinné povahy a PVA, je v tomto stupni možno získat produkt obohacený EPO. Eluce sloupce Blue Sepharose se provádí za zvyšující se koncentrace soli a hodnoty pH.
Sloupec se naplní 80 až 100 litry Blue Sepharose, regeneruje hydroxidem sodným a ekvilibruje ekvilibračním pufrem (chlorid sodný/vápenatý a octan sodný). Do sloupce se uvede kyselý a přefiltrovaný supematant z fermentoru. Poté se sloupec promyje nejprve pufrem podobným ekvilibračnímu pufru, který obsahuje vyšší koncentraci chloridu sodného a následně pufrem
Tris-báze. Produkt se eluuje pufrem Tris-báze a shromáždí v jediné frakci v souladu se vzorovým elučním profilem.
b) Chromatografie na Butyl Toyopearl
Butyl Toyopearl 650 C (Toso Haas) tvoří matrice na bázi polystyrenu, k níž jsou kovalentně vázány alifatické butylové zbytky. Jelikož vazba EPO k tomuto gelu je silnější než vazba většiny nečistot a PVA, musí se eluovat pufrem obsahujícím isopropylalkohol.
Sloupec se naplní 30 až 40 litry Butyl Toyopearl 650 C, regeneruje hydroxidem sodným, promyje pufrem Tris-báze a ekvilibruje pufrem Tris-báze obsahujícím isopropylalkohol.
-10CZ 299516 B6
Eluát ze sloupce Blue Sepharose se nastaví na koncentrací isopropylalkoholu v pufru použitém pro ekvilibraci sloupce a uvede do sloupce. Sloupec se promyje ekvilibračním pufrem se zvýšenou koncentrací isopropylalkoholu. Produkt se eluuje elučním pufrem (pufr Tris-báze s vysokým obsahem isopropylalkoholu) a shromáždí v jediné frakci v souladu se vzorovým elučním profilem.
c) Chromatografie na Hydroxyapatite Ultrogel
Hydroxyapatite Ultrogel (Biosepra) je tvořen hydroxyapatitem, který je z důvodu zlepšení mechanických vlastností začleněn do agarosové matrice. EPO má nízkou afinitu khydroxyapatitu, a lze ho tedy eluovat při nižší koncentraci fosforečnanu než proteinové nečistoty.
Sloupec se naplní 30 až 40 litry Hydroxyapatite Ultrogel a regeneruje pufrem na bázi fosforečnan draselného/chloridu vápenatého a NaOH a následně pufrem Tris-báze. Poté se sloupec ekvilibruje pufrem Tris-báze obsahujícím malé množství isopropylalkoholu a chloridu sodného.
Eluát z chromatografie na sloupci Butyl Toyopearl obsahující EPO se uvede do sloupce. Sloupec se poté promyje ekvilibračním pufrem a pufrem Tris-báze bez isopropylalkoholu a chloridu sodného. Produkt se eluuje pufrem Tris-báze obsahujícím fosforečnan draselný v nízké koncentraci a shromáždí v jediné frakci v souladu se vzorovým elučním profilem.
d) Vysokotlaká kapalinová chromatografie s obrácenými fázemi (RP-HPLC) na sloupci Vydac C4
Látka pro RP-HPLC Vydac C4 (Vydac) je tvořena silikagelovými částicemi, jejichž povrch nese alkylové řetězce se 4 atomy uhlíku. Oddělování EPO od nečistot protoeinové povahy je založeno na odlišnostech v síle hydrofobních interakcí. Eluce se provádí gradientem acetonitrilu ve zředěné trifluoroctové kyselině.
Preparativní HPLC se provádí za použití kolony z nerezové oceli (naplněné 2,8 až 3,2 litru silikagelu Vydac C4). Eluát získaný chromatografií na Hydroxyapatite Ultrogel se okyselí přidáním trifluoroctové kyseliny a uvede do sloupce Vydac C4. Pro propláchnutí a eluci se použije gradientu acetonitrilu ve zředěné trifluoroctové kyselině. Frakce se shromáždí a ihned zneutralizují fosforečnanovým pufrem. Shromažďují se frakce EPO, které jsou v rozmezí IPC.
e) Chromatografie na DEAE Sepharose
Látka DEAE Sepharose (Pharmacia) je tvořena perlami Sepharose, kjejichž povrchu jsou kovalentně navázány diethylaminoethylskupiny (DEAE). Vazba EPO ke skupinám DEAE je zprostředkována iontovými interakcemi. Sloupcem se bez zadržování nechá procházet acetonitril a trifluoroctová kyselina. Poté, co se tyto látky vymyjí, se sloupec promyje acetátovým pufrem o nízkém pH, čímž se odstraní stopové nečistoty, načež se sloupec promyje neutrálním fosforečnanovým pufrem a EPO se eluuje pufrem se zvýšenou iontovou silou.
Sloupec se naplní látkou DEAE Sepharose Fast Flow. Objem sloupce se nastaví tak, aby se zajistilo, že na 3 až lOmg dávku EPO bude připadat 1 ml gelu. Sloupec se promyje vodou a ekvilibračním pufrem (fosforečnan sodný/draselný). Shromážděné frakce HPLC eluátu se uvedou do sloupce a sloupec se promyje ekvilibračním pufrem. Poté se sloupec promyje promývacím puf50 rem (pufr na bázi octanu sodného) a dále ekvilibračním pufrem. Následně se ze sloupce elučním pufrem (chlorid sodný, fosforečnan sodný/draselný) eluuje EPO, který se shromáždí v jediné frakci v souladu se vzorovým elučním profilem.
Eluát ze sloupce DEAE Sepharose se nastaví na specifikovanou vodivost. Výsledné léčivo se přefiltruje za sterilních podmínek do teflonových nádob a skladuje při -70 °C.
-11 CZ 299516 B6
Příklad 2
Pegylace EPO pomocí mPEG-SBA
EPO purifikovaný způsobem bez séra popsaným v příkladu 1 (EPOsf) je podle analýz homogenní a vykazuje typický profil tvořený 8 isoformami. Jeho specifická biologická aktivita stanovená na normocytních myších je 190 000 IU/mg. Jako pegylačního činidla se použije methoxy-PEGSBA, což je sloučenina obecného vzorce II, kde R představuje methylskupinu; x představuje číslo 3; a m představuje číslo 650 až 750 (průměrné asi 680, což odpovídá průměrné molekulové ío hmotnosti asi 30 kDa).
Pegylační reakce
Ke 100 mg EPOsf (9,71 ml zásobního roztoku EPOsf o koncentraci 10,3 mg/ml, 5,48 pmol) se přidá 10 ml 0,lM pufru obsahujícího fosforečnan draselný (pH 7,5) s obsahem 506 mg 30kDa methoxy-PEG-SBA (16,5 pmol) (od firmy Shearwater Polymers, lne., Huntsville, Alabama, USA). Vzniklá směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti (20 až 23 °C). Konečná koncentrace proteinu je 5 mg/ml a poměr protein : PEG činidlo je 1 : 3. Po 2 hodinách se reakce zastaví nastavením pH na hodnotu 4,5 za použití ledové kyseliny octové. Produkt se uchovává při -20 °C až do purifikace.
Purifikace
1. Konjugovaná směs
Asi 28 ml SP-Sepharose FF (sulfo-propylová katexová pryskyřice) se naplní do skleněné kolony Amicon (2,2 x 7,5 cm) a ekvilibruje 20mM acetátovým pufrem (pH 4,5) při rychlosti průtoku 150ml/h. 6 ml reakční směsi obsahující 30 mg proteinu se pětinásobně zředí ekvilibračním pufrem a uvede do sloupce. Neadsorbované látky se odplaví pufrem a adsorbovaná PEG konjugá30 tová směs se ze sloupce eluuje 0,175M chloridem sodným v ekvilibračním pufru. Nemodifikovaný EPOsf, který ještě zůstal ve sloupci, se eluuje 750mM chloridem sodným. Sloupec se reekvilibruje výchozím pufrem. Vzorky se analyzují postupem SDS-PAGE a stanoví se stupeň jejich pegylace. Zjistilo se, že eluát získaný za použití 0,175M chloridu sodného obsahuje monopegylované a dipegylované produkty a stopová množství tripegylovaných produktů, zatímco eluát získaný za použití 750mM chloridu sodného obsahuje nemodifikovaný EPOsf.
2. Di-PEG a mono-PEG-EPOsf
Purifikovaná konjugátová směs eluovaná ze sloupce v předchozím stupni se čtyřnásobně zředí pufrem a znovu uvede do sloupce a promyje popsaným způsobem. Ze sloupce se odděleně eluuje 0,lM chloridem sodným di-PEG-EPOsf a 0,175M chloridem sodným mono-PEG-EPOsf. Eluce se také provádí pomocí 750mM roztoku chloridu sodného, čímž se eluuje všechen zbytkový nemodifikovaný EPOsf.
Alternativně se reakční směs pětinásobně zředí acetátovým pufrem a uvede do sloupce SP-Sepharose (asi 0,5mg proteinu/ml gelu). Sloupec se promyje a naadsorbovaný mono-PEGEPOsf, di-PEG-EPOsf a nemodifikovaný EPOsf se eluují postupem popsaným v předchozím textu.
Výsledky
PEG-EPOsf se syntetizuje chemicky konjugací lineární molekuly PEG s průměrnou molekulovou hmotností 30kDa. PEG-EPOsf vzniká reakcí mezi primárními aminoskupinami EPOsf a sukcinimidylesterovým derivátem 30kDa PEG-máselné kyseliny, která vede k amidové vazbě.
- 12CZ 299516 B6
Výsledky jsou souhrnně uvedeny v tabulce 1. Purifikovaná konjugovaná směs podle analýzy SDS-PAGE obsahuje mono- a di-PEG-EPOsf a neobsahuje nemodifikovaný EPOsf. Výtěžek konjugátové směsi činí 23,4 mg či 78 %, vztaženo na výchozí látku. Katexová chromatografická separace mono- a di-PEG-EPOsf ukázala, že poměr mono- a di-PEG-EPOsf v konjugátové směsi je téměř 1 : 1. Po dokončení reakce je poměr jednotlivých složek mono-PEG ; di-PEG ; nemidikovaný EPOsf 40 : 38 : 20 (%). Celkový výtěžek je téměř kvantitativní.
Tabulka 1
Souhrn výsledků pegylace EPOsf
| Vzorek | Protein (mg) | Výtěžek |
| Rxn směs | 30 | 100 |
| Mono | 12,0 | 40 |
| Di | 11,4 | 38 |
| Nemodifikovaný | 6,0 | 20 |
| Konjug. směs | 23,4 | 78 |
Příklad 3
Pegylace EPO za použití mPEG-SPA
Alikvot EPOsf, odlišný od alikvotu použitého při postupu podle příkladu 2, se nechá reagovat s 30kDa methoxy-PEG-SPA (Shearwater Polymers, lne., Huntsville, Alabama, USA). Reakce se provádí při poměru protein:činidlo 1:2a čištění se provádí způsobem popsaným v příkladu 2. Získá se převážně mono-pegylovaný produkt.
Příklad 4
Aktivita pegylovaného EPO in vivo stanovená zkouškou na normocytních myších
Biostanovení na normocytních myších je v tomto oboru známé (Pharm. Europa Spec. Issue Erythropoietin BRP Bio 1997(2)) a postup je popsán v monografii o erythropoetinu Ph. Eur.
BRP. Vzorky se zředí BSA-PBS. Normálním zdravým myším o stáří 7 až 15 týdnů se subkutánně podá 0,2 ml EPO frakce obsahující nepegylovaný EPO nebo tri-, di- nebo mono-pegylovaný EPO získaný podle příkladu 2 nebo 3. Během 6 dní se napíchnutím ocasní žíly odebírá krev. Odebraná krev se ředí tak, že v 1 ml 0,15μΜ akridinového oranžového barvicího roztoku je 1 μΐ krve. Doba barvení je 3 až 10 minut. Retikulocyty se spočítají mikrofluorometricky v průtoko35 vém cytometru analýzou červeného fluorescenčního histogramu. Počty retikulocytů se uvádějí v absolutních číslech (na 30 000 analyzovaných krvinek). Každou skupinu tvoří 5 myší za den a krev se odebírá jednou denně.
Myším se při odděleně prováděných zkouškách podá jediná dávka nemodifikovaného EPO (25 ng EPO), směs PEG(SBA)-EPO získaná podle příkladu 2 (10 ng konjugátu), monoa di-pegylovaný EPOsf získaný podle příkladu 2 (10 ng konjugátu), PEG(SPA)-EPO získaný podle příkladu 3 (10 ng konjugátu) a pufrovací roztok. Výsledky jsou znázorněny v tabulce 2. Výsledky ukazují vyšší aktivitu a prodloužený poločas pegylovaných EPO produktů, což je dolo-13CZ 299516 B6 ženo významným zvýšením počtu retikulocytů a posunem maximálního počtu retikulocytů za použití stejné dávky na myš (10 ng) ve srovnání s 25ng dávkou nemodifikovaného EPO.
Tabulka 2
| EPO nemodifikovaný | 30kDa SPA PEG | Mono 30K SBA | Di 30K SBA | PEG-EPO SBA kon- jugátová směs | Kontrola pufr | ||
| 72 | h | 1000 | 1393 | 1411 | 994 | 1328 | 857 |
| 96 | h | 500 | 1406 | 1501 | 926 | 1338 | 697 |
| 120 | h | asi 200 | 1100 | 1182 | 791 | 944 | 701 |
| 144 | h | asi 0 | 535 | 607 | 665 | 660 | 708 |
Příklad 5 ío Příprava převážně mono-PEG-EPO Pegylační reakce
Použije se 100 mg (5,48 pmol) EPOsf ve lOOmM pufru obsahujícím fosforečnan draselný (pH 7,5) připraveného způsobem popsaným v příkladu 1. Přidá se 329 mg (10,96 μιηοΐ) 30kDa PEG-SBA činidla rozpuštěného ve 3 ml lmM kyseliny chlorovodíkové. K reakční směsi se přidá lOOmM pufrovací roztok fosforečnanu draselného (pH 7,5) v množství dostatečném pro doplnění objemu směsi do 20 ml. Konečná koncentrace proteinu je 5 mg/ml a poměr protein : PEG činidlo je 1 : 2. Reakční směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti (20 až 22 °C). Po 2 hodinách se reakce zastaví nastavením pH na hodnotu 4,5 za použití ledové kyseliny octové. Produkt se až do purifikace uchovává ve zmrazeném stavu při -20 °C.
Purifikace
Reakční směs získaná v předchozím stupni se zředí v poměru 1:51 OmM octanem sodným (pH 4,5) a uvede do sloupce 4,2 x 19 cm naplněného 300 ml SP-Sepharose FF (sulfopropyl katexová pryskyřice). Sloupec se předběžně ekvilibruje stejným pufrem. Výtok ze sloupce se monitoruje při 280 nm za použití UV monitoru Gilson a hodnoty se zaznamenávají za použití zařízení Kipp and Zonen. Sloupec se promyje ekvilibračním pufrem (300 ml nebo jeden objem lože), aby se odstranil nadbytek reakčních činidel, vedlejší produkty a oligomemí PEG-EPO; a poté dvěma objemy lože lOOmM chloridu sodného, aby se odstranil di-PEG-EPO. Poté se 200mM chloridem sodným eluuje mono-PEG-EPO. Při eluci mono-PEG-EPO se prvních 50 ml proteinového píku zahodí a mono-PEG-EPO se shromáždí jako 150ml frakce. Nemodifikovaný EPOsf, kteiý zůstal na sloupci, se eluuje 750mM chloridem sodným. Všechna eluční činidla byla připravena v ekvilibračním pufru. Všechny eluované vzorky se analyzují SDS-PAGE a vysoce výkonnou chromatografií SEC. Mono-PEG-EPO pool získaný ze 150ml frakce, který neobsahuje žádný nemodifikovaný EPOsf, se poté zkoncentruje na koncentraci asi 4,5 až 7,5 mg/ml a diafiltruje do zásobního pufru, lOmM fosforečnanu draselného, lOOmM chloridu sodného (pH 7,5). Zkoncentrování/diafiltrace se provádí za použití systému Milipore Labscale® TFF s mem40 bránou Millipore Pellicon XL Biomax 50 s vylučovacím limitem 50 kDa při teplotě místnosti.
- 14CZ 299516 B6
Koncentrovaný mono-PEG-EPO se přefiltruje za sterilních podmínek a uchovává zmrazený při -20 °C.
Přibližně 75 % EPOsf je pegylováno. Po přečištění byl celkový výtěžek mono-PEG-EPO bez 5 detekovatelného nemodifikovaného EPOsf asi 30 % a di-PEG-EPO asi 25 %. Oligomeiy a nepegylovaný EPOsf se považují za zbývající protein. Mono-PEG-EPO pool získaný ze 150ml frakce obsahuje asi 90 % mono-PEG-EPO a asi 10 % di-PEG-EPO.
ío SEZNAM SEKVENCÍ (1) OBECNÉ INFORMACE:
(i) PŘIHLAŠOVATEL:
(A) JMÉNO: F. Hoffmann-La Roche AG (B) ULICE: 124 Grenzacherstrasse (C) MĚSTO: Basilej (E) ZEMĚ: Švýcarsko (F) PSČ: CH-4070 (G) TELEFON: (61) 688 11 11 (H) TELEFAX: (61) 688 13 95 (I) TELEX: 962 292 hlr ch (ii) NÁZEV VYNÁLEZU: Erythropoetinový konjugát (iii) POČET SEKVENCÍ: 3 (iv) STROJNĚ ČITELNÁ FORMA:
(A) TYP MÉDIA: Disketa (B) POČÍTAČ: IBM PC kompatibilní (C) OPERAČNÍ SYSTÉM: WORD (D) SOFTWARE: Patentin Release 2.0 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 165 <212> PRT <213> Homo sapiens
- 15CZ 299516 B6
| <400> 1 | |||||||||||||||
| Ala 1 | Pro | Pro | Arg | Leu Ile Cys Asp Ser Arg | Val | Leu Glu | Arg Tyr Leu 15 | ||||||||
| 5 | 10 | ||||||||||||||
| Leu | Glu | Ala | Lys | Glu | Ala | Glu | Asn | Ile | Thr | Thr | Gly | Cys | Ala | Glu | His |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Cys | Ser | Leu | Asn | Glu | Asn | Ile | Thr | Val | Pro | Asp | Thr | Lys | Val | Asn | Phe |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Tyr | Ala | Trp | Lys | Arg | Met | Glu | Val | Gly | Gin | Gin | Ala | Val | Glu | Val | Trp |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gin | Gly | Leu | Ala | Leu | Leu | Ser | Glu | Ala | Val | Leu | Arg | Gly | Gin | Ala | Leu |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Leu | Val | Asn | Ser | Ser | Gin | Pro | Trp | Glu | Pro | Leu | Gin | Leu | His | Val | Asp |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Lys | Ala | Val | Ser | Gly | Leu | Arg | Ser | Leu | Thr | Thr | Leu | Leu | Arg | Ala | Leu |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Gly | Ala | Gin | Lys | Glu | Ala | Ile | Ser | Pro | Pro | Asp | Ala | Ala | Ser | Ala | Ala |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Pro | Leu | Arg | Thr | Ile | Thr | Ala | Asp | Thr | Phe | Arg | Lys | Leu | Phe | Arg | Val |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Tyr | Ser | Asn | Phe | Leu | Arg | Gly | Lys | Leu | Lys | Leu | Tyr | Thr | Gly | Glu | Ala |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Cys Arg Thr Gly Asp | |||||||||||||||
| 165 | |||||||||||||||
| <210> 2 <211> 166 <212> PRT | |||||||||||||||
| <213> Homo sapiens |
- 16CZ 299516 B6
| <400> 2 Ala Pro 1 | Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr | Leu | |||||||||||||
| 5 | 10 | 15 | |||||||||||||
| Leu | Glu | Ala | Lys | Glu | Ala | Glu | Asn | Ile | Thr | Thr | Gly | Cys | Ala | Glu | His |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Cys | Ser | Leu | Asn | Glu | Asn | Ile | Thr | Val | Pro | Asp | Thr | Lys | Val | Asn | Phe |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Tyr | Ala | Trp | Lys | Arg | Met | Glu | Val | Gly | Gin | Gin | Ala | Val | Glu | Val | Trp |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gin | Gly | Leu | Ala | Leu | Leu | Ser | Glu | Ala | Val | Leu | Arg | Gly | Gin | Ala | Leu |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Leu | Val | Asn | Ser | Ser | Gin | Pro | Trp | Glu | Pro | Leu | Gin | Leu | His | Val | Asp |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Lys | Ala | val | Ser | Gly | Leu | Arg | Ser | Leu | Thr | Thr | Leu | Leu | Arg | Ala | Leu |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Gly | Ala | Gin | Lys | Glu | Ala | Ile | Ser | Pro | Ero | Asp | Ala | Ala | Ser | Ala | Ala |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Pro | Leu | Arg | Thr | Ile | Thr | Ala | Asp | Thr | Phe | Arg | Lys | Leu | Phe | Arg | Val |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Tyr | Ser | Asn | Phe | Leu | Arg | Gly | Lys | Leu | Lys | Leu | Tyr | Thr | Gly | Glu | Ala |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Cys | Arg | Thr | Gly | Asp | Arg |
165 <210> 3 <211> 28 <212>PRT <213> Homo sapiens <400> 3
| Ser | Ser | Ser | Ser | Lys Ala | Pro | Pro | Pro | Ser | Leu | Pro Ser Pro Ser Arq |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||
| Leu | Pro | Gly | Pro | Ser Asp | Thr | Pro | Ile | Leu | Pro | Gin |
| 20 | 25 |
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (24)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Konjugát, který obsahuje erythropoetinový glykoprotein s alespoň jednou volnou 15 aminoskupinou, jehož biologická aktivita in vivo spočívá v indukci buněk kostní dřeně ke zvýšení produkce retikulocytů a červených krvinek, zvolený ze souboru sestávajícího z lidského erythropoetinu a jeho analogů vykazujících aktivitu erythropoetinu, zvolených zi) analogů, v nichž je sekvence lidského erythropoetinu modifikována přidáním 1 až 20 6 glykosylačních míst nebo přeřazením alespoň jednoho glykosylačního místa,- 17CZ 299516 B6 ii) analogů, v nichž je sekvence lidského erythropoetinu změněna modifikací zvolenou ze souboru sestávajícího zAsn30Thr32;Asn5IThr53,Asn57Thr59;Asn69;Asn69Thr71;Ser68Asn69Thr71;Val87Asn88Thr90;Ser87Asn88Thr90;Ser87Asn88Gly89Thr90;Ser87Asn88Thr90Thr92;Ser87Asn88Thr90Ala162;Asn69Thr71Ser87Asn88Thr90;Asn30Thr32Val87Asn88Thr90;Asn89ile90Thr91;Ser87Asn89Ile90Thr91;Asnl36Thr138;Asn138Thr140; Thr125; aPro124Thr125 aiii) analogů, v nichž je sekvence lidského erythropoetinu na svém karboxylovém konci doplněna o druhou sekvenci, přičemž tato druhá sekvence obsahuje alespoň jedno glykosylační místo;přičemž tento glykoprotein je kovalentně vázán k „n“ poly(ethylenglykol)ovým skupinám obec10 ného vzorce-CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR, kde-CO každé poly(ethylenglykol)ové skupiny tvoří amidovou vazbu sjednou zvýše uvedených aminoskupin;R představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;x představuje
- 2 nebo 3; m představuje 450 až 900;25 n představuje 1 až 3; a-18CZ 299516 B6 n a m jsou zvoleny tak, že molekulová hmotnost konjugátu snížená o molekulovou hmotnost erythropoetinového glykoproteinu je 20 až 100 kDa.5 2. Konjugát podle nároku 1 obecného vzorce IP-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n (I), kde x, m, n a R mají význam uvedený v nároku 1, a P představuje zbytek glykoproteinu bez ίο n aminoskupiny nebo aminoskupin, které tvoří amidovou vazbu se skupinou nebo skupinami poly(ethylenglykol)u.
- 3. Konjugát podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde R představuje methylskupinu.15
- 4. Konjugát podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde m představuje 650 až 750.
- 5. Konjugát podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde n představuje 1.
- 6. Konjugát podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde R představuje methylskupinu; 20 m představuje 650 až 750; a n představuje 1.
- 7. Konjugát podle kteréhokoliv z předchozích nároků obecného vzorce [CH3O(CH2CH2O)mCH2CH2CH2CO-NH]n-P kde m představuje 650 až 750, n představuje 1 a P má význam uvedený v nároku 2.
- 8. Konjugát podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde glykoproteinem je lidský erythropoetin.
- 9. Konjugát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, kde lidský erythropoetinový glykoprotein je exprimován aktivací endogenního genu.
- 10. Konjugát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, kde glykoprotein má sekvenci SEQ ID NO: 1. 35
- 11. Konjugát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, kde glykoprotein má sekvenci lidského erythropoetinu modifikovanou přidáním 1 až 6 glykosylačních míst.
- 12. Konjugát podle nároku 1, kde v analogu ze skupiny iii) druhá sekvence zahrnuje sekvenci 40 odvozenou od sekvence karboxylového konce lidského choriového gonadotropinu.
- 13. Konjugát podle nároku 1, kde analog ze skupiny iii) má sekvenci zvolenou ze souboru sestávajícího ze45 (a) sekvence lidského erythropoetinu a sekvenci SEQ ID NO: 3 na karboxylovém konci sekvence lidského erythropoetinu;(b) sekvence definované v odstavci (a), která je modifikována prostřednictvím Ser87 Asn88 Thr90; a (c) sekvence definované v odstavci (a), která je modifikována prostřednictvím Asn30 Thr32 Val Asn88 Thr90.
- 14. Konjugát podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, kde glykoprotein má sekvenci lidského 55 erythropoetinu modifikovanou přeřazením alespoň jednoho glykosylačního místa.- 19CZ 299516 B6
- 15. Konjugát podle nároku 14, kde přeřazení zahrnuje deleci jakýchkoliv N-glykosylačních míst v lidském erythropoetinu a přidání N-glykosylačního místa v poloze 88 sekvence lidského erythropoetinu.5
- 16. Konjugát podle nároku 15, kde glykoprotein má sekvenci lidského erythropoetinu pozměněnou modifikací zvolenou ze souboru sestávajícího zGin24 Ser87 Asn88 Thr90;Gin38 Ser87 Asn88 Thr90; a Gin83 Ser87 Asn88 Thr90.
- 17. Směs konjugátů, vyznačující se tím, že sestává z jednotlivých konjugátů podle 10 kteréhokoliv z nároků 1 až 16.
- 18. Směs konjugátů podle nároku 17, vyznačující se tím, že v ní podíl konjugátů, v nichž n představuje číslo 1, dosahuje alespoň 90 %.15
- 19. Směs konjugátů podle nároku 17 nebo 18, vyznačující se tím, že v ní podíl konjugátů, v nichž n představuje číslo 1, dosahuje alespoň 92 %.
- 20. Směs konjugátů podle nároku 19, v y z n a č u j í c í se t í m , že v ní podíl konjugátů, v nichž n představuje číslo 1, dosahuje alespoň 96 %.
- 21. Směs konjugátů podle nároku 17 nebo 18, vyznačující se tím, že v ní podíl konjugátů, v nichž n představuje číslo 1, leží v rozmezí od 90 do 96 %.
- 22. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje konjugát nebo směs 25 konjugátů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 a farmaceuticky vhodný excipient.
- 23. Použití konjugátu nebo směsi konjugátů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 pro výrobu léčiv pro léčení nebo profylaxi chorob, které souvisejí s anémií u pacientů s chronickým selháním ledvin nebo AIDS a pro léčení pacientů trpících rakovinou, kteří prodělávají chemoterapii.
- 24. Konjugát nebo směs konjugátů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 pro použití pro profylaktické nebo kurativního léčení poruch zahrnujících anémií u pacientů s chronickým selháním ledvin nebo AIDS a pacientů trpících rakovinou, kteří prodělávají chemoterapii.35 25. Způsob výroby konjugátů nebo směsí konjugátů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21, vyznačující se tím, že zahrnuje kondenzaci sloučeniny obecného vzorce II kde R, m a x mají význam uvedený ve kterémkoliv z nároků 1 až 6, s erythropoetinovým glykoproteinem.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14225499P | 1999-07-02 | 1999-07-02 | |
| US15022599P | 1999-08-23 | 1999-08-23 | |
| US15154899P | 1999-08-31 | 1999-08-31 | |
| US16615199P | 1999-11-17 | 1999-11-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20002386A3 CZ20002386A3 (cs) | 2002-04-17 |
| CZ299516B6 true CZ299516B6 (cs) | 2008-08-20 |
Family
ID=27495518
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20002386A CZ299516B6 (cs) | 1999-07-02 | 2000-06-23 | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
Country Status (52)
Families Citing this family (224)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69824039T2 (de) | 1997-12-08 | 2005-08-18 | Lexigen Pharmaceuticals Corp., Lexington | Heterodimäre fusionsproteine zur verwendung für gezielte immuntherapie und allgemeine immunerregung |
| US20030105294A1 (en) * | 1998-02-25 | 2003-06-05 | Stephen Gillies | Enhancing the circulating half life of antibody-based fusion proteins |
| PL343462A1 (en) * | 1998-04-15 | 2001-08-13 | Lexigen Pharm Corp | Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by co-administration with angiogenesis inhibitor |
| US7304150B1 (en) * | 1998-10-23 | 2007-12-04 | Amgen Inc. | Methods and compositions for the prevention and treatment of anemia |
| US7345019B1 (en) * | 1999-04-13 | 2008-03-18 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Modulation of excitable tissue function by peripherally administered erythropoietin |
| CZ299516B6 (cs) * | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
| SK782002A3 (en) | 1999-07-21 | 2003-08-05 | Lexigen Pharm Corp | FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| US7067110B1 (en) | 1999-07-21 | 2006-06-27 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| BR0013231A (pt) * | 1999-08-09 | 2002-07-23 | Lexigen Pharm Corp | Complexos citocina-anticorpo múltiplos |
| US20050202538A1 (en) * | 1999-11-12 | 2005-09-15 | Merck Patent Gmbh | Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics |
| ES2269366T3 (es) * | 2000-02-11 | 2007-04-01 | Merck Patent Gmbh | Mejoramiento de la vida media en circulacion de proteinas de fusion basadas en anticuerpos. |
| US6586398B1 (en) * | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
| WO2001087329A1 (en) * | 2000-05-15 | 2001-11-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate |
| DE60129695T2 (de) * | 2000-06-29 | 2008-06-05 | Merck Patent Gmbh | Steigerung von durch antikörper-zytokin-fusionsproteine mediierten immunantworten durch eine kombinierte behandlung mit mitteln zur erhöhung der immunzytokinaufnahme |
| AU2001290312A1 (en) * | 2000-10-16 | 2002-04-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Peg-modified erythropoietin |
| ATE505204T1 (de) * | 2000-12-20 | 2011-04-15 | Hoffmann La Roche | Konjugate von erythropoietin (epo) mit polyethylenglykol (peg) |
| CN100528235C (zh) * | 2000-12-20 | 2009-08-19 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 红细胞生成素共轭物 |
| US20030072737A1 (en) * | 2000-12-29 | 2003-04-17 | Michael Brines | Tissue protective cytokines for the protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues and organs |
| US7767643B2 (en) | 2000-12-29 | 2010-08-03 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Protection, restoration, and enhancement of erythropoietin-responsive cells, tissues and organs |
| EP1234583A1 (en) * | 2001-02-23 | 2002-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | PEG-conjugates of HGF-NK4 |
| BR0207854A (pt) * | 2001-03-07 | 2004-08-24 | Merck Patent Gmbh | Tecnologia de expressão para proteìnas contendo uma porção de anticorpo de isotipo hìbrido |
| DE10112825A1 (de) | 2001-03-16 | 2002-10-02 | Fresenius Kabi De Gmbh | HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung |
| US6992174B2 (en) * | 2001-03-30 | 2006-01-31 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Reducing the immunogenicity of fusion proteins |
| DE60239454D1 (de) * | 2001-05-03 | 2011-04-28 | Merck Patent Gmbh | Rekombinanter, tumorspezifischer antikörper und dessen verwendung |
| US6818613B2 (en) | 2001-11-07 | 2004-11-16 | Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. | Aqueous sustained-release formulations of proteins |
| KR100467751B1 (ko) | 2001-12-03 | 2005-01-24 | 씨제이 주식회사 | 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질 |
| ES2381025T3 (es) | 2001-12-04 | 2012-05-22 | Merck Patent Gmbh | Inmunocitocinas con selectividad modulada |
| EP2324834B1 (en) * | 2001-12-06 | 2019-05-08 | Fibrogen, Inc. | Methods of Increasing Endogenous Erythropoietin (EPO) |
| DE10209822A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid |
| DE10209821A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid |
| AU2003218045A1 (en) | 2002-03-11 | 2003-09-29 | Ortho Mcneil Pharmaceutical, Inc | Methods for shp1 mediated neuroprotection |
| CA2491567A1 (en) * | 2002-07-01 | 2004-01-08 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Recombinant tissue protective cytokines and encoding nucleic acids thereof for protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues, and organs |
| CA2492775C (en) | 2002-07-24 | 2011-06-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Polyalkylene glycol acid additives |
| US7459435B2 (en) * | 2002-08-29 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| CA2498319A1 (en) * | 2002-09-09 | 2004-03-18 | Nautilus Biotech | Rational evolution of cytokines for higher stability, the cytokines and encoding nucleic acid molecules |
| US20050176627A1 (en) * | 2002-09-09 | 2005-08-11 | Anthony Cerami | Long acting erythropoietins that maintain tissue protective activity of endogenous erythropoietin |
| BR0314107A (pt) | 2002-09-11 | 2005-07-19 | Fresenius Kabi De Gmbh | Método de produção de derivados de hidroxialquil amido |
| US7459436B2 (en) * | 2002-11-22 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| US7388079B2 (en) * | 2002-11-27 | 2008-06-17 | The Regents Of The University Of California | Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor |
| JP4494977B2 (ja) * | 2002-12-17 | 2010-06-30 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Ｇｄ２に結合するマウス１４．１８抗体のヒト化抗体（ｈ１４．１８）およびそのｉｌ−２融合タンパク質 |
| US7553930B2 (en) | 2003-01-06 | 2009-06-30 | Xencor, Inc. | BAFF variants and methods thereof |
| US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
| AU2004227937B2 (en) | 2003-03-31 | 2007-09-20 | Xencor, Inc | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7642340B2 (en) | 2003-03-31 | 2010-01-05 | Xencor, Inc. | PEGylated TNF-α variant proteins |
| US7610156B2 (en) | 2003-03-31 | 2009-10-27 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7279174B2 (en) * | 2003-05-08 | 2007-10-09 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent coatings comprising hydrophilic additives |
| BRPI0411160A (pt) * | 2003-05-12 | 2006-07-11 | Affymax Inc | novos compostos modificados com poli(glicol etilênico) e usos dos mesmos |
| EP1628686A2 (en) * | 2003-05-12 | 2006-03-01 | Affymax, Inc. | Spacer moiety for poly (ethylene glycol)-modified peptides |
| ATE428727T1 (de) * | 2003-05-12 | 2009-05-15 | Affymax Inc | Neue, an den erythropoietinrezeptor bindende peptide |
| MXPA05012313A (es) * | 2003-05-12 | 2006-04-18 | Affymax Inc | Peptidos que se unen al receptor de eritropoyetina. |
| KR20060032140A (ko) * | 2003-05-30 | 2006-04-14 | 센토코 인코포레이티드 | 트랜스글루타미나아제를 이용한 신규 에리트로포이에틴접합체의 형성 |
| US7662607B2 (en) * | 2003-07-30 | 2010-02-16 | New Century Pharmaceuticals, Inc. | Chalaropsis lysozyme protein and its method of use in anti-bacterial applications |
| WO2005014655A2 (en) | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein |
| EA010650B1 (ru) * | 2003-09-29 | 2008-10-30 | Уоррен Фармасьютикалз, Инк. | Защищающие ткань цитокины для лечения и профилактики сепсиса и образования спаек |
| EP1675871A2 (en) | 2003-10-10 | 2006-07-05 | Xencor Inc. | Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders |
| EP1696947B1 (en) * | 2003-12-19 | 2014-02-26 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Use of erythropoietin in the treatment of disturbances of iron distribution in chronic inflammatory intestinal diseases |
| EP1548031A1 (en) * | 2003-12-22 | 2005-06-29 | Dubai Genetics FZ-LLC | Nature-identical erythropoietin |
| PT1699821E (pt) * | 2003-12-31 | 2012-08-23 | Merck Patent Gmbh | Proteína de fusão fc-eritropoietina com farmacocinética melhorada |
| JP5015608B2 (ja) * | 2004-01-21 | 2012-08-29 | ネクター セラピューティクス | プロピオン酸末端ポリマーの調製方法 |
| ZA200606216B (en) * | 2004-02-02 | 2007-11-28 | Ambrx Inc | Modified human interferon polypeptides and their uses |
| WO2005092928A1 (en) | 2004-03-11 | 2005-10-06 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination |
| US7588745B2 (en) * | 2004-04-13 | 2009-09-15 | Si Options, Llc | Silicon-containing products |
| US7253650B2 (en) | 2004-05-25 | 2007-08-07 | International Business Machines Corporation | Increase productivity at wafer test using probe retest data analysis |
| WO2006062685A2 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-15 | Affymax, Inc. | Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor |
| JP2008519858A (ja) * | 2004-11-11 | 2008-06-12 | アフィーマックス・インコーポレイテッド | エリスロポエチンレセプターに結合する新規ペプチド |
| CA2595695A1 (en) | 2005-01-25 | 2006-08-03 | Cell Therapeutics, Inc. | Biologically active protein conjugates comprising (nn[s/t]) peptide repeats and having increased plasma half-life |
| WO2006089228A2 (en) * | 2005-02-16 | 2006-08-24 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Conjugates of an epo moiety and a polymer |
| US7550433B2 (en) * | 2005-06-03 | 2009-06-23 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US8324159B2 (en) * | 2005-06-03 | 2012-12-04 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US7919461B2 (en) | 2005-06-03 | 2011-04-05 | Affymax, Inc. | Erythropoietin receptor peptide formulations and uses |
| US20070072795A1 (en) * | 2005-09-28 | 2007-03-29 | Anton Haselbeck | Treatment of neurodegenerative disorders |
| PL1931704T3 (pl) * | 2005-10-04 | 2011-06-30 | Zymogenetics L L C | Wytwarzanie i oczyszczanie IL-29 |
| US8124095B2 (en) * | 2005-10-07 | 2012-02-28 | Armagen Technologies, Inc. | Fusion proteins for delivery of erythropoietin to the CNS |
| US8741260B2 (en) * | 2005-10-07 | 2014-06-03 | Armagen Technologies, Inc. | Fusion proteins for delivery of GDNF to the CNS |
| US8053569B2 (en) * | 2005-10-07 | 2011-11-08 | Armagen Technologies, Inc. | Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins |
| US20070092486A1 (en) * | 2005-10-21 | 2007-04-26 | Avigenics, Inc. | Glycolated and glycosylated poultry derived therapeutic proteins |
| US20080171696A1 (en) * | 2005-10-21 | 2008-07-17 | Avigenics, Inc. | Pharmacodynamically enhanced therapeutic proteins |
| US8841255B2 (en) | 2005-12-20 | 2014-09-23 | Duke University | Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides |
| US20130172274A1 (en) | 2005-12-20 | 2013-07-04 | Duke University | Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties |
| JP5528710B2 (ja) * | 2006-02-28 | 2014-06-25 | オリガシス コーポレイション | アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン含有ポリマー抱合体及びその製法 |
| WO2007108505A1 (ja) | 2006-03-22 | 2007-09-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | エリスロポエチン溶液製剤 |
| CA2659990C (en) * | 2006-08-04 | 2016-03-22 | Prolong Pharmaceuticals, Inc. | Polyethylene glycol erythropoietin conjugates |
| US8497246B2 (en) * | 2006-08-18 | 2013-07-30 | Armagen Technologies, Inc. | Methods for diagnosing and treating CNS disorders by trans-blood-brain barrier delivery of protein compositions |
| JP2010510794A (ja) * | 2006-11-28 | 2010-04-08 | ハナル ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 修飾型エリスロポエチンポリペプチド及びこの治療用用途 |
| TW201206954A (en) * | 2007-02-02 | 2012-02-16 | Amgen Inc | Hepcidin, hepcidin antagonists and methods of use |
| US20090011040A1 (en) * | 2007-05-02 | 2009-01-08 | Naash Muna I | Use of compacted nucleic acid nanoparticles in non-viral treatments of ocular diseases |
| AR067537A1 (es) * | 2007-07-17 | 2009-10-14 | Hoffmann La Roche | Purificacion de polipeptidos pegilados |
| AR067536A1 (es) * | 2007-07-17 | 2009-10-14 | Hoffmann La Roche | Metodo para obtener una eritropoyetina mono-pegilada en una forma sustancialmente homogenea |
| US8974791B2 (en) | 2007-07-27 | 2015-03-10 | Armagen Technologies, Inc. | Methods and compositions for increasing α-L-iduronidase activity in the CNS |
| EP2205280B1 (en) | 2007-09-27 | 2019-09-04 | Amgen Inc. | Pharmaceutical formulations |
| WO2009064838A1 (en) | 2007-11-15 | 2009-05-22 | Amgen, Inc. | Aqueous formulation of erythropoiesis stimulating protein stablised by antioxidants for parenteral administration |
| WO2009089542A2 (en) | 2008-01-11 | 2009-07-16 | Serina Therapeutics, Inc. | Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same |
| US8101706B2 (en) | 2008-01-11 | 2012-01-24 | Serina Therapeutics, Inc. | Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same |
| AU2009206306B2 (en) | 2008-01-25 | 2013-06-06 | Amgen Inc. | Ferroportin antibodies and methods of use |
| SG188143A1 (en) | 2008-02-08 | 2013-03-28 | Ambrx Inc | Modified leptin polypeptides and their uses |
| TWI395593B (zh) | 2008-03-06 | 2013-05-11 | Halozyme Inc | 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制 |
| SG187427A1 (en) | 2008-04-14 | 2013-02-28 | Halozyme Inc | Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions |
| EP2816059A1 (en) | 2008-05-01 | 2014-12-24 | Amgen, Inc | Anti-hepcidin antibodies and methods of use |
| CA2953975C (en) | 2008-06-27 | 2019-11-26 | Duke University | Therapeutic agents comprising elastin-like peptides |
| CN102232085A (zh) | 2008-09-26 | 2011-11-02 | Ambrx公司 | 修饰的动物促红细胞生成素多肽和其用途 |
| EP3693014A1 (en) | 2008-11-13 | 2020-08-12 | The General Hospital Corporation | Methods and compositions for regulating iron homeostasis by modulation bmp-6 |
| KR101546563B1 (ko) | 2008-12-09 | 2015-08-28 | 할로자임, 아이엔씨 | 연장된 가용성 ｐｈ20 폴리펩티드 및 그의 용도 |
| WO2010108048A2 (en) | 2009-03-18 | 2010-09-23 | Armagen Technologies, Inc. | Compositions and methods for blood-brain barrier delivery of igg-decoy receptor fusion proteins |
| JP5813638B2 (ja) | 2009-07-30 | 2015-11-17 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 可動クロマトグラフィーカラムセパレータ |
| WO2011024025A1 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | Avesthagen Limited | An erythropoietin analogue and a method thereof |
| IN2012DN03219A (cs) | 2009-09-17 | 2015-10-23 | Baxter Healthcare Sa | |
| CA2775012A1 (en) * | 2009-09-23 | 2011-03-31 | Biogenerix Ag | Process for the purification of recombinant human erythropoietin (epo), epo thus purified and pharmaceutical compositions comprising same |
| SI2485761T1 (sl) | 2009-10-09 | 2019-05-31 | Armagen, Inc. | Postopki in sestavki za povečanje aktivnosti iduronat-2-sulfataze v CŽS |
| US9662271B2 (en) | 2009-10-23 | 2017-05-30 | Amgen Inc. | Vial adapter and system |
| US8765432B2 (en) | 2009-12-18 | 2014-07-01 | Oligasis, Llc | Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates |
| SG10201908916UA (en) * | 2010-04-27 | 2019-11-28 | Scil Tech Gmbh | Stable MIA/CD-RAP formulations |
| EA032537B1 (ru) | 2010-06-07 | 2019-06-28 | Эмджен Инк. | Способ работы устройства для доставки лекарственного средства |
| EP2595624B1 (en) | 2010-07-20 | 2018-01-31 | Halozyme, Inc. | Methods of treatment or prevention of the adverse side-effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent |
| EP2616101B1 (en) | 2010-09-14 | 2014-07-09 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Method for purifying pegylated erythropoietin |
| EP2671074A1 (en) | 2011-02-02 | 2013-12-11 | F. Hoffmann-La Roche AG | Chromatography column support |
| EP2672958A1 (en) | 2011-02-08 | 2013-12-18 | Halozyme, Inc. | Composition and lipid formulation of a hyaluronan-degrading enzyme and the use thereof for treatment of benign prostatic hyperplasia |
| WO2012135315A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Amgen Inc. | Vial adapter and system |
| LT2699293T (lt) | 2011-04-20 | 2019-04-25 | Amgen Inc. | Automatinio purškimo prietaisas |
| US9993529B2 (en) | 2011-06-17 | 2018-06-12 | Halozyme, Inc. | Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme |
| EP3335747B1 (en) | 2011-10-14 | 2021-04-07 | Amgen Inc. | Injector and method of assembly |
| SG11201401797TA (en) | 2011-10-24 | 2014-09-26 | Halozyme Inc | Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof |
| JP6266529B2 (ja) | 2011-12-02 | 2018-01-24 | アーマジェン・インコーポレイテッドＡｒｍａｇｅｎ， Ｉｎｃ． | Ｃｎｓにおけるアリールスルファターゼａ活性を増加するための方法および組成物 |
| PT3130347T (pt) | 2011-12-30 | 2019-12-10 | Halozyme Inc | Variantes de polipéptidos de ph20, suas formulações e utilizações |
| PT2833905T (pt) | 2012-04-04 | 2018-08-06 | Halozyme Inc | Terapia de combinação com hialuronidase e um taxano dirigido a tumor |
| CN102816227A (zh) * | 2012-08-30 | 2012-12-12 | 深圳赛保尔生物药业有限公司 | 回收促红细胞生成素的方法 |
| WO2014062856A1 (en) | 2012-10-16 | 2014-04-24 | Halozyme, Inc. | Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods |
| ES2780395T3 (es) | 2012-11-21 | 2020-08-25 | Amgen Inc | Dispositivo de administración de fármacos |
| MX359794B (es) | 2013-03-15 | 2018-10-10 | Intrinsic Lifesciences Llc | Anticuerpos anti-hepcidina y usos de los mismos. |
| JP6336564B2 (ja) | 2013-03-15 | 2018-06-06 | アムゲン・インコーポレーテッド | 薬物カセット、自動注入器、および自動注入器システム |
| US10492990B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-12-03 | Amgen Inc. | Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system |
| CN113559363B (zh) | 2013-03-22 | 2023-10-31 | 美国安进公司 | 注射器及装配方法 |
| TW201534726A (zh) | 2013-07-03 | 2015-09-16 | Halozyme Inc | 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途 |
| EP3760639A1 (en) | 2013-09-08 | 2021-01-06 | Kodiak Sciences Inc. | Zwitterionic polymer conjugates |
| JP7051293B2 (ja) | 2013-10-24 | 2022-04-11 | アムジエン・インコーポレーテツド | 温度感知制御を伴う薬剤送達システム |
| US11097055B2 (en) | 2013-10-24 | 2021-08-24 | Amgen Inc. | Injector and method of assembly |
| WO2015119906A1 (en) | 2014-02-05 | 2015-08-13 | Amgen Inc. | Drug delivery system with electromagnetic field generator |
| SG11201609219QA (en) | 2014-05-07 | 2016-12-29 | Amgen Inc | Autoinjector with shock reducing elements |
| KR102506249B1 (ko) | 2014-06-03 | 2023-03-03 | 암겐 인코포레이티드 | 약물 전달 시스템 및 사용 방법 |
| US9840553B2 (en) | 2014-06-28 | 2017-12-12 | Kodiak Sciences Inc. | Dual PDGF/VEGF antagonists |
| EP3186281B1 (en) | 2014-08-28 | 2019-04-10 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor |
| WO2016049036A1 (en) | 2014-09-22 | 2016-03-31 | Intrinsic Lifesciences Llc | Humanized anti-hepcidin antibodies and uses thereof |
| NZ730563A (en) | 2014-10-14 | 2019-05-31 | Halozyme Inc | Compositions of adenosine deaminase-2 (ada2), variants thereof and methods of using same |
| CA2957960C (en) | 2014-10-14 | 2023-08-22 | Amgen, Inc. | Drug injection device with visual and audible indicators |
| KR20210013299A (ko) | 2014-10-17 | 2021-02-03 | 코디악 사이언시스 인코포레이티드 | 부티릴콜린에스테라제 양성이온성 중합체 컨쥬게이트 |
| EP3233159B1 (en) | 2014-12-19 | 2020-03-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device with live button or user interface field |
| JP6716566B2 (ja) | 2014-12-19 | 2020-07-01 | アムジエン・インコーポレーテツド | 近接センサ付き薬物送達装置 |
| US10538589B2 (en) | 2015-01-14 | 2020-01-21 | Armagen Inc. | Methods and compositions for increasing N-acetylglucosaminidase (NAGLU) activity in the CNS using a fusion antibody comprising an anti-human insulin receptor antibody and NAGLU |
| ES2748750T3 (es) | 2015-02-17 | 2020-03-17 | Amgen Inc | Dispositivo de administración de fármacos con sujeción asistida por vacío y/o realimentación |
| ES2905870T3 (es) | 2015-02-27 | 2022-04-12 | Amgen Inc | Dispositivo de suministro de fármacos que tiene un mecanismo de protección de aguja con un umbral de resistencia ajustable al movimiento de la protección de aguja |
| WO2017039786A1 (en) | 2015-09-02 | 2017-03-09 | Amgen Inc. | Syringe assembly adapter for a syringe |
| US11351308B2 (en) | 2015-12-09 | 2022-06-07 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling cap |
| RU2744860C2 (ru) | 2015-12-30 | 2021-03-16 | Кодиак Сайенсиз Инк. | Антитела и их конъюгаты |
| US11154661B2 (en) | 2016-01-06 | 2021-10-26 | Amgen Inc. | Auto-injector with signaling electronics |
| EP3721922B1 (en) | 2016-03-15 | 2022-05-04 | Amgen Inc. | Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices |
| CN105820232B (zh) * | 2016-04-08 | 2019-05-17 | 昂德生物药业有限公司 | 单修饰聚乙二醇重组人促红素的制备方法及其制品和应用 |
| WO2017189089A1 (en) | 2016-04-29 | 2017-11-02 | Amgen Inc. | Drug delivery device with messaging label |
| WO2017192287A1 (en) | 2016-05-02 | 2017-11-09 | Amgen Inc. | Syringe adapter and guide for filling an on-body injector |
| AU2017263558B2 (en) | 2016-05-13 | 2022-12-22 | Amgen Inc. | Vial sleeve assembly |
| US11238150B2 (en) | 2016-05-16 | 2022-02-01 | Amgen Inc. | Data encryption in medical devices with limited computational capability |
| US11541176B2 (en) | 2016-06-03 | 2023-01-03 | Amgen Inc. | Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices |
| WO2018004842A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events |
| CN109415427A (zh) | 2016-07-15 | 2019-03-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于纯化聚乙二醇化的促红细胞生成素的方法 |
| US20190328965A1 (en) | 2016-08-17 | 2019-10-31 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement detection |
| US20200261643A1 (en) | 2016-10-25 | 2020-08-20 | Amgen Inc. | On-body injector |
| AU2018210301A1 (en) | 2017-01-17 | 2019-08-01 | Amgen Inc. | Injection devices and related methods of use and assembly |
| JP7064501B2 (ja) | 2017-02-17 | 2022-05-10 | アムジエン・インコーポレーテツド | 無菌流体流路を備える薬物送達デバイスおよび関連する組立方法 |
| AU2018221351B2 (en) | 2017-02-17 | 2023-02-23 | Amgen Inc. | Insertion mechanism for drug delivery device |
| CA3050927A1 (en) | 2017-03-06 | 2018-09-13 | Brian Stonecipher | Drug delivery device with activation prevention feature |
| IL268478B2 (en) | 2017-03-07 | 2023-10-01 | Amgen Inc | Inserting a needle using super pressure |
| JP2020509837A (ja) | 2017-03-09 | 2020-04-02 | アムジエン・インコーポレーテツド | 薬剤送達装置のための挿入機構 |
| CN110446499A (zh) | 2017-03-20 | 2019-11-12 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 一种体外糖基工程化红细胞生成刺激蛋白的方法 |
| CN110446512B (zh) | 2017-03-28 | 2022-03-18 | 美国安进公司 | 柱塞杆和注射器组件系统以及方法 |
| EP3634546A1 (en) | 2017-06-08 | 2020-04-15 | Amgen Inc. | Torque driven drug delivery device |
| US11590294B2 (en) | 2017-06-08 | 2023-02-28 | Amgen Inc. | Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly |
| CN111107870A (zh) | 2017-06-22 | 2020-05-05 | 催化剂生物科学公司 | 经修饰的膜型丝氨酸蛋白酶1（mtsp-1）多肽及其使用方法 |
| MX2019015472A (es) | 2017-06-22 | 2020-02-19 | Amgen Inc | Reduccion del impacto/choque de la activacion del mecanismo. |
| WO2018237225A1 (en) | 2017-06-23 | 2018-12-27 | Amgen Inc. | ELECTRONIC DRUG DELIVERY DEVICE COMPRISING A CAP ACTIVATED BY A SWITCH ASSEMBLY |
| EP3651832B1 (en) | 2017-07-14 | 2023-12-13 | Amgen Inc. | Needle insertion-retraction system having dual torsion spring system |
| MA49626A (fr) | 2017-07-21 | 2020-05-27 | Amgen Inc | Élément d'étanchéité perméable aux gaz pour récipient à médicament et procédés d'assemblage |
| WO2019022951A1 (en) | 2017-07-25 | 2019-01-31 | Amgen Inc. | DRUG DELIVERY DEVICE WITH GEAR MODULE AND ASSEMBLY METHOD THEREOF |
| WO2019022950A1 (en) | 2017-07-25 | 2019-01-31 | Amgen Inc. | DRUG DELIVERY DEVICE WITH CONTAINER ACCESS SYSTEM AND ASSEMBLY METHOD THEREOF |
| EP3664863A2 (en) | 2017-08-09 | 2020-06-17 | Amgen Inc. | Hydraulic-pneumatic pressurized chamber drug delivery system |
| MA49897A (fr) | 2017-08-18 | 2020-06-24 | Amgen Inc | Injecteur sur-corps avec patch adhésif stérile |
| US11103636B2 (en) | 2017-08-22 | 2021-08-31 | Amgen Inc. | Needle insertion mechanism for drug delivery device |
| WO2019070472A1 (en) | 2017-10-04 | 2019-04-11 | Amgen Inc. | FLOW ADAPTER FOR MEDICATION DELIVERY DEVICE |
| CN111132711B (zh) | 2017-10-06 | 2022-07-01 | 安进公司 | 带有联锁组件的药物递送装置及相关组装方法 |
| EP3694578A1 (en) | 2017-10-09 | 2020-08-19 | Amgen Inc. | Drug delivery device with drive assembly and related method of assembly |
| WO2019090079A1 (en) | 2017-11-03 | 2019-05-09 | Amgen Inc. | System and approaches for sterilizing a drug delivery device |
| WO2019089178A1 (en) | 2017-11-06 | 2019-05-09 | Amgen Inc. | Drug delivery device with placement and flow sensing |
| WO2019090303A1 (en) | 2017-11-06 | 2019-05-09 | Amgen Inc. | Fill-finish assemblies and related methods |
| CA3079665A1 (en) | 2017-11-10 | 2019-05-16 | Amgen Inc. | Plungers for drug delivery devices |
| WO2019099324A1 (en) | 2017-11-16 | 2019-05-23 | Amgen Inc. | Door latch mechanism for drug delivery device |
| MX2020005066A (es) | 2017-11-16 | 2020-08-20 | Amgen Inc | Autoinyector con deteccion de detencion y punto final. |
| JP7137625B2 (ja) | 2017-12-29 | 2022-09-14 | エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー | Ｐｅｇ化タンパク質組成物を提供するための方法 |
| WO2019129877A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for providing pegylated protein composition |
| KR102497097B1 (ko) | 2017-12-29 | 2023-02-06 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 페길화 단백질 조성물의 제공 방법 |
| US20190351031A1 (en) | 2018-05-16 | 2019-11-21 | Halozyme, Inc. | Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20 |
| US10835685B2 (en) | 2018-05-30 | 2020-11-17 | Amgen Inc. | Thermal spring release mechanism for a drug delivery device |
| US11083840B2 (en) | 2018-06-01 | 2021-08-10 | Amgen Inc. | Modular fluid path assemblies for drug delivery devices |
| CA3103682A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Delivery devices for administering drugs |
| WO2020023220A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation |
| US20210228815A1 (en) | 2018-07-24 | 2021-07-29 | Amgen Inc. | Hybrid drug delivery devices with grip portion |
| EP3826701A1 (en) | 2018-07-24 | 2021-06-02 | Amgen Inc. | Delivery devices for administering drugs |
| EP3829692A1 (en) | 2018-07-31 | 2021-06-09 | Amgen Inc. | Fluid path assembly for a drug delivery device |
| EP3613486B1 (de) * | 2018-08-24 | 2020-10-07 | UGA Biopharma GmbH | Verfahren und anlage zur reinigung von epo und/oder einem epo-derivat |
| MA53724A (fr) | 2018-09-24 | 2021-12-29 | Amgen Inc | Systèmes et procédés de dosage interventionnel |
| AU2019350660A1 (en) | 2018-09-28 | 2021-03-18 | Amgen Inc. | Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device |
| AR116679A1 (es) | 2018-10-02 | 2021-06-02 | Amgen Inc | Sistemas de inyección para la administración de fármacos con transmisión de fuerza interna |
| EP3860686A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-08-11 | Amgen Inc. | Drug delivery device having dose indicator |
| SG11202103800RA (en) | 2018-10-15 | 2021-05-28 | Amgen Inc | Drug delivery device having damping mechanism |
| CA3109988A1 (en) | 2018-10-15 | 2020-04-23 | Amgen Inc. | Platform assembly process for drug delivery device |
| MA54057A (fr) | 2018-11-01 | 2022-02-09 | Amgen Inc | Dispositifs d'administration de médicament à rétraction partielle d'élément d'administration de médicament |
| EP3873566A1 (en) | 2018-11-01 | 2021-09-08 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction |
| WO2020092056A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Amgen Inc. | Drug delivery devices with partial needle retraction |
| US11613744B2 (en) | 2018-12-28 | 2023-03-28 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use |
| US20220160972A1 (en) | 2019-04-24 | 2022-05-26 | Amgen Inc. | Syringe sterilization verification assemblies and methods |
| CA3148261A1 (en) | 2019-08-23 | 2021-03-04 | Amgen Inc. | Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods |
| CA3157509A1 (en) | 2019-10-10 | 2021-04-15 | Kodiak Sciences Inc. | Methods of treating an eye disorder |
| US20230331798A1 (en) | 2020-09-22 | 2023-10-19 | Jecho Laboratories, Inc. | Glycosylation-modified erythopoietin and use thereof |
| WO2022159414A1 (en) | 2021-01-22 | 2022-07-28 | University Of Rochester | Erythropoietin for gastroinfestinal dysfunction |
| IL308169A (en) | 2021-05-10 | 2024-01-01 | Chiome Bioscience Inc | Purification method of an antibody compound |
| WO2022246055A1 (en) | 2021-05-21 | 2022-11-24 | Amgen Inc. | Method of optimizing a filling recipe for a drug container |
| WO2023209074A1 (en) | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods of restoring erythropoiesis in patients suffering from a sf3b1 mutant myelodysplastic syndrome by correcting coasy mis-splicing |
| CN116492448A (zh) * | 2023-04-12 | 2023-07-28 | 深圳赛保尔生物药业有限公司 | 负载peg-epo及间充质干细胞的组合物、药物及其制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0640619A1 (en) * | 1993-08-17 | 1995-03-01 | Amgen Inc. | Erythropoietin analogs with additional glycosylation sites |
| WO1999011781A1 (en) * | 1997-09-01 | 1999-03-11 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Recombinant human erythropoietin with advantageous glycosylation profile |
| WO2001002017A2 (en) * | 1999-07-02 | 2001-01-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Erythropoietin conjugates with polyethylenglycol |
| WO2001087329A1 (en) * | 2000-05-15 | 2001-11-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| KR850004274A (ko) * | 1983-12-13 | 1985-07-11 | 원본미기재 | 에리트로포이에틴의 제조방법 |
| EP0154316B1 (en) | 1984-03-06 | 1989-09-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified lymphokine and production thereof |
| JPS6197229A (ja) | 1984-10-18 | 1986-05-15 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 安定なエリトロポエチン製剤 |
| US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US5641663A (en) * | 1985-11-06 | 1997-06-24 | Cangene Corporation | Expression system for the secretion of bioactive human granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and other heterologous proteins from steptomyces |
| US4902502A (en) | 1989-01-23 | 1990-02-20 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
| US5166322A (en) | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
| US5674534A (en) * | 1992-06-11 | 1997-10-07 | Alkermes, Inc. | Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin |
| NZ250375A (en) | 1992-12-09 | 1995-07-26 | Ortho Pharma Corp | Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives |
| US5681811A (en) | 1993-05-10 | 1997-10-28 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| US5359030A (en) * | 1993-05-10 | 1994-10-25 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| US5919455A (en) * | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5643575A (en) * | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5932462A (en) * | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| EP0741187A2 (en) * | 1995-05-05 | 1996-11-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Recombinant obese (Ob) proteins |
| US5672662A (en) | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| US6025324A (en) * | 1996-05-15 | 2000-02-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Pegylated obese (ob) protein compositions |
| TW517067B (en) * | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
| EP1135493A2 (en) | 1998-11-30 | 2001-09-26 | Eli Lilly And Company | Erythropoietic compounds |
| CZ299516B6 (cs) * | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
| WO2001068141A2 (en) | 2000-03-17 | 2001-09-20 | Maxygen Aps | Dispersions of polypeptide conjugates |
| US6586398B1 (en) | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
-
2000
- 2000-06-23 CZ CZ20002386A patent/CZ299516B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-06-27 SK SK987-2000A patent/SK286301B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-06-27 US US09/604,938 patent/US6583272B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 DE DE60036053T patent/DE60036053T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 HR HR20000436A patent/HRP20000436B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 TR TR2000/01956A patent/TR200001956A2/xx unknown
- 2000-06-28 AU AU42744/00A patent/AU736067B2/en active Active
- 2000-06-28 DK DK00113115T patent/DK1064951T3/da active
- 2000-06-28 DO DO2000000030A patent/DOP2000000030A/es unknown
- 2000-06-28 CA CA002310536A patent/CA2310536C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 DE DE122007000064C patent/DE122007000064I2/de active Active
- 2000-06-28 EP EP00113115A patent/EP1064951B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 IL IL13705600A patent/IL137056A0/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 2000-06-28 PT PT00113115T patent/PT1064951E/pt unknown
- 2000-06-28 SI SI200030963T patent/SI1064951T1/sl unknown
- 2000-06-28 NO NO20003372A patent/NO327043B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 AT AT00113115T patent/ATE370748T1/de active
- 2000-06-28 ES ES00113115T patent/ES2289985T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 PE PE2000000654A patent/PE20010297A1/es not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 RS YUP-407/00A patent/RS49928B/sr unknown
- 2000-06-28 NZ NZ505454A patent/NZ505454A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 ID IDP20000533D patent/ID26447A/id unknown
- 2000-06-28 EP EP07010693A patent/EP1839676A3/en not_active Withdrawn
- 2000-06-29 SG SG200003658A patent/SG92717A1/en unknown
- 2000-06-29 GT GT200000109A patent/GT200000109A/es unknown
- 2000-06-29 CO CO00048963A patent/CO5190661A1/es active IP Right Grant
- 2000-06-29 PA PA20008497801A patent/PA8497801A1/es unknown
- 2000-06-29 CN CNB001078895A patent/CN1184233C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-29 AR ARP000103318A patent/AR024625A1/es active IP Right Grant
- 2000-06-29 CN CNB2004100036029A patent/CN1283664C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-29 MY MYPI20002954A patent/MY128500A/en unknown
- 2000-06-29 GE GEAP20005430A patent/GEP20022804B/en unknown
- 2000-06-30 KR KR1020000036976A patent/KR100593143B1/ko active IP Right Grant
- 2000-06-30 IS IS5554A patent/IS2492B/is unknown
- 2000-06-30 GB GB0016205A patent/GB2353281B/en not_active Withdrawn - After Issue
- 2000-06-30 MA MA26014A patent/MA26746A1/fr unknown
- 2000-06-30 DE DE10031839A patent/DE10031839A1/de not_active Ceased
- 2000-06-30 IT IT2000MI001479A patent/IT1318606B1/it active
- 2000-06-30 SV SV2000000120A patent/SV2002000120A/es active IP Right Grant
- 2000-06-30 TN TNTNSN00147A patent/TNSN00147A1/fr unknown
- 2000-06-30 BG BG104570A patent/BG65449B1/bg unknown
- 2000-06-30 ES ES200001625A patent/ES2191511B1/es not_active Expired - Fee Related
- 2000-06-30 MX MXPA00006547A patent/MXPA00006547A/es active IP Right Grant
- 2000-06-30 GB GB0400086A patent/GB2393960C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-30 HU HU0002553A patent/HU226233B1/hu active Protection Beyond IP Right Term
- 2000-06-30 TW TW089112948A patent/TWI235667B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-06-30 UY UY26228A patent/UY26228A1/es not_active IP Right Cessation
- 2000-06-30 OA OA1200000197A patent/OA11442A/fr unknown
- 2000-07-02 GC GCP2000749 patent/GC0000197A/en active
- 2000-07-03 EA EA200000607A patent/EA003777B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-07-03 JP JP2000201525A patent/JP3727009B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-03 FR FR0008609A patent/FR2795734B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-03 PL PL341187A patent/PL202758B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-07-03 BR BRPI0002276A patent/BRPI0002276B8/pt unknown
- 2000-07-03 BR BR0002276-4A patent/BR0002276A/pt not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-06-12 HK HK01104020A patent/HK1033328A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-06-12 HK HK05100477A patent/HK1068354A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-11-14 US US10/293,551 patent/US20030120045A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-12-17 JP JP2003419520A patent/JP2004155787A/ja active Pending
-
2006
- 2006-09-25 AR ARP060104175A patent/AR055650A2/es unknown
-
2007
- 2007-08-23 CY CY20071101097T patent/CY1107719T1/el unknown
- 2007-09-05 NL NL300289C patent/NL300289I9/nl unknown
- 2007-09-06 CY CY200700021C patent/CY2007021I2/el unknown
- 2007-09-12 LU LU91363C patent/LU91363I2/fr unknown
- 2007-10-19 FR FR07C0051C patent/FR07C0051I2/fr active Active
-
2009
- 2009-05-05 NO NO2009010C patent/NO2009010I2/no unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0640619A1 (en) * | 1993-08-17 | 1995-03-01 | Amgen Inc. | Erythropoietin analogs with additional glycosylation sites |
| WO1999011781A1 (en) * | 1997-09-01 | 1999-03-11 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Recombinant human erythropoietin with advantageous glycosylation profile |
| WO2001002017A2 (en) * | 1999-07-02 | 2001-01-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Erythropoietin conjugates with polyethylenglycol |
| WO2001087329A1 (en) * | 2000-05-15 | 2001-11-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3727009B2 (ja) | エリスロポエチン誘導体 | |
| JP4190184B2 (ja) | ポリエチレングリコールを有するエリスロポエチン接合体 | |
| EP1432802B1 (en) | Pegylated and diglycosylated erythropoietin | |
| JP3967594B2 (ja) | 新しい薬剤組成物 | |
| RU2232163C2 (ru) | Конъюгаты эритропоэтина и полиэтиленгликоля, фармацевтические композиции (варианты), способ профилактического и/или терапевтического лечения нарушений и способ получения коньюгата или композиции |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20220725 |