PL202758B1 - Koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja zawierająca te koniugaty, środek farmaceutyczny, zastosowanie tych koniugatów i tych kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny - Google Patents

Koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja zawierająca te koniugaty, środek farmaceutyczny, zastosowanie tych koniugatów i tych kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny

Info

Publication number
PL202758B1
PL202758B1 PL341187A PL34118700A PL202758B1 PL 202758 B1 PL202758 B1 PL 202758B1 PL 341187 A PL341187 A PL 341187A PL 34118700 A PL34118700 A PL 34118700A PL 202758 B1 PL202758 B1 PL 202758B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
conjugate
erythropoietin
conjugates
glycoprotein
epo
Prior art date
Application number
PL341187A
Other languages
English (en)
Other versions
PL341187A1 (en
Inventor
Pascal Sebastian Bailon
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27495518&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL202758(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of PL341187A1 publication Critical patent/PL341187A1/xx
Publication of PL202758B1 publication Critical patent/PL202758B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
    • C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
    • C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/505—Erythropoietin [EPO]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja koniugatów erytropoetyny, środek farmaceutyczny, zastosowanie koniugatów erytropoetyny i ich kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny.
Erytropoeza jest procesem wytwarzania erytrocytów, który równoważy proces niszczenia komórek. Erytropoeza jest kontrolowanym mechanizmem fizjologicznym zapewniającym powstawanie erytrocytów w ilości wystarczającej do odpowiedniego natlenienia tkanek. Naturalnie występująca ludzka erytropoetyna (hEPO) jest wytwarzana w nerkach i jest humoralnym czynnikiem osoczowym stymulującym wytwarzanie erytrocytów (Carnot, P i Deflandre, C (1906) C.R. Acad. Sci. 143: 432; Erslev, AJ (1953 Blood 8: 349; Reissmann, KR (1950) Blood 5: 372; Jacobson, LO, Goldwasser, E, Freid, W i Plzak, LF (1957) Nature 179: 6331-4). Naturalnie występująca EPO stymuluje podziały i różnicowanie zaangażowanych prekursorów erytroidalnych w szpiku kostnym i wywiera działanie biologiczne przez wiązanie się z receptorami na prekursorach erytroidalnych (Krantz, BS (1991) Blood 77: 419).
Erytropoetynę wytwarza się drogą biosyntezy z użyciem technik rekombinacji DNA (Egrie, JC, Strickland, TW, Lane, J i inni (1986) Immunobiol. 72: 213-224) i jest ona produktem sklonowanego ludzkiego genu EPO wstawionego do komórek tkanki jajnika chomika chińskiego (komórkach CHO), ulegającego w nich ekspresji. Podstawową budowę przeważającej, w pełni przetworzonej postaci hEPO przedstawia SEQ ID NO:1. Występują w niej dwa mostki disulfidowe, pomiędzy Cys7-Cys161 i Cys29-Cys33. Masa cząsteczkowa łańcucha polipeptydowego EPO bez grup cukrowych wynosi 18236 Da. W nienaruszonej czą steczce EPO okoł o 40% masy czą steczkowej stanowią grupy wę glowodanowe, które glikozylują białko w miejscach glikozylacji białka (Sasaki, H, Bothner, B, Dell, A i Fukuda, M (1987) J. Biol. Chem. 262: 12059).
Ze względu na to, że ludzka erytropoetyna jest niezbędna do tworzenia erytrocytów, hormon ten znajduje zastosowanie w leczeniu zaburzeń charakteryzujących się niskim lub zaburzonym wytwarzaniem erytrocytów. Klinicznie EPO stosuje się w leczeniu niedokrwistości u pacjentów z przewlekłą niewydolnością nerek (CRF) (Eschbach, JW, Egri, JC, Downing, MR i inni (1987) NEJM 316: 73-78; Eschbach, JW, Abdulhadi, MH, Browne, JK i inni (1989) Ann. Intern. Med. 111: 992; Egrie, JC, Eschbach, JW, McGuire, T, Adamson, JW (1988) Kidney Intl. 33: 262; Lim, VS, Degowin, RL, Zavala, D i inni (1989) Ann. Intern. Med. 110: 108-114) oraz u pacjentów z AIDS i u pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię (Danna, RP, Rudnick, SA, Abels, RI w: red. MB Garnick, Erythropoietin in Clinical Applications - An International Perspective. New York, NY: Marcel Dekker; 1990: str. 301-324). Jednakże biodostępność dostępnych w handlu terapeutycznych leków białkowych, takich jak EPO, jest ograniczona z uwagi na ich krótki okres półtrwania w osoczu oraz podatność na rozkład przez proteazy. Wady te nie pozwalają na osiągnięcie maksymalnej siły działania przy klinicznym stosowaniu tych leków.
Nieoczekiwanie okazało się, iż owych wad można uniknąć dzięki nowym koniugatom erytropoetyny według wynalazku, które zawierają glikoproteinę erytropoetynę mającą co najmniej jedną wolną grupę aminową i wykazującą in vivo działanie biologiczne powodujące zwiększenie produkcji retikulocytów i erytrocytów przez komórki szpiku kostnego, gdzie erytropoetyna jest ludzką erytropoetyną; przy czym ta glikoproteina jest kowalencyjnie połączona z „n” grupami poli(glikolu etylenowego) o wzorze -CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR, przy czym grupa -CO każ dej grupy poli(glikolu etylenowego) tworzy wiązanie amidowe z jedną z tych grup aminowych; R oznacza C1-C6-alkil; x oznacza 2 lub 3; m oznacza 450-900; a n oznacza 1-3; z tym, że n i m są tak dobrane, aby różnica masy cząsteczkowej koniugatu i masy cząsteczkowej glikoproteiny erytropoetyny wynosiła od 20 kilodaltonów do 100 kilodaltonów.
Korzystnie koniugat ma wzór P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n, w którym x, m, n i R mają znaczenie podane powyżej, a P oznacza resztę glikoproteiny bez n grup(-y) aminowych(-ej) tworzących(-ej) wiązania(-e) amidowe z grupami(-ą) poli(glikolu etylenowego).
Korzystnie R oznacza metyl, m oznacza od 650 do 750 lub n oznacza 1.
Korzystniej R oznacza metyl; m oznacza od 650 do 750; a n oznacza 1.
Korzystną postacią wynalazku jest koniugat o wzorze [CH3O(CH2CH2O)mCH2CH2CH2CO-NH]n-P, w którym m oznacza 650 do 750, n oznacza 1, a P ma znaczenie podane wyż ej.
Korzystny jest taki koniugat zawierający glikoproteinę ludzką erytropoetynę eksprymowaną przez aktywację endogennego genu, w szczególności zawierający glikoproteinę o sekwencji SEQ ID NO:1.
PL 202 758 B1
W korzystnej postaci koniugatu R oznacza metyl; x oznacza 3; m oznacza 650-750; a n oznacza 1; z tym, że n i m są tak dobrane, aby różnica średniej masy cząsteczkowej koniugatu i średniej masy cząsteczkowej glikoproteiny erytropoetyny wynosiła około 30 kilodaltonów.
Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja zawierająca koniugaty określone powyżej, gdzie zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi co najmniej 90%, jeszcze korzystniej co najmniej 92%, a najkorzystniej co najmniej 96%.
Także korzystnie zawartość koniugatów, w których n oznacza 1, wynosi 90-96%.
Przedmiotem wynalazku jest także środek farmaceutyczny zawierający farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę i substancję czynną, cechujący się tym, że jako tę substancję czynną zawiera koniugat lub kompozycję określone powyżej.
Wynalazek dotyczy także koniugatów określonych powyżej do leczenia chorób związanych z anemią u pacjentów z przewlekłą niewydolnoś cią nerek (CRF), AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię, jak również zastosowania koniugatu lub kompozycji okreś lonych powyżej do wytwarzania środków do leczenia lub profilaktyki chorób związanych z anemią u pacjentów z przewlekłą niewydolnoś cią nerek (CRF), AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię.
Przedmiotem wynalazku jest też sposób wytwarzania związków koniugatów określonych powyżej, charakteryzujący się tym, że związek o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R, m i x mają znaczenie podane powyżej, poddaje się kondensacji z glikoproteiną erytropoetyną.
W porównaniu z niemodyfikowaną EPO (to jest EPO bez do łączonego PEG) oraz ze znanymi koniugatami PEG-EPO, koniugaty według wynalazku wykazują wydłużone okresy półtrwania w krążeniu oraz okresy występowania w osoczu, obniżony klirens oraz podwyższoną aktywność kliniczną in vivo. Koniugaty według wynalazku mają te same zastosowania co EPO. W szczególności koniugaty według wynalazku znajdują zastosowanie w leczeniu pacjentów przez stymulację podziałów komórkowych oraz różnicowania zaangażowanych prekursorów erytroidalnych w szpiku kostnym, tak samo jak w przypadku stosowania EPO w leczeniu pacjentów.
Ze względu na te ulepszone właściwości koniugaty według wynalazku można podawać jeden raz w tygodniu, podczas gdy niemodyfikowaną EPO podaje się trzy razy w tygodniu. Oczekuje się, że zmniejszona częstotliwość podawania spowoduje lepszą akceptację przez pacjentów, co doprowadzi do lepszych wyników leczenia, a także polepszy jakość życia pacjentów. Stwierdzono, że w porównaniu ze znanymi koniugatami EPO z poli(glikolem etylenowym), koniugaty mające masę cząsteczkową i strukturę linkera koniugatów wedł ug wynalazku odznaczają się polepszonym profilem skutecznoś ci, trwałością, wartościami AUC, okresem półtrwania w układzie krążenia oraz obniżonymi kosztami.
Koniugaty według wynalazku można podawać pacjentom w leczniczo skutecznej ilości tak samo jak podawana jest EPO. Leczniczo skuteczną ilością jest ilość koniugatu wymagana dla uzyskania in vivo działania biologicznego powodującego wzmożenie wytwarzania retykulocytów i erytrocytów przez komórki szpiku kostnego. Dokładna ilość koniugatu zależy od takich czynników związanych z pacjentem, jak dokładny typ leczonego stanu i stan leczonego pacjenta, a także od innych składników środka. Przykładowo można podawać 0,01-10 μq koniugatu na kilogram masy ciała, a korzystnie 0,1-1 μg na kilogram masy ciała, np. raz w tygodniu.
Środki farmaceutyczne zawierające koniugat można formułować tak, by zawierały ten koniugat w ilości wystarczającej dla zapewnienia skuteczności przy podawaniu różnymi drogami człowiekowi cierpiącemu na zaburzenia związane z krwią, charakteryzujące się niskim lub zaburzonym wytwarzaniem erytrocytów. Średnia leczniczo skuteczna ilość koniugatu może się zmieniać i powinna być ona dobierana i przepisywana w oparciu o zalecenia doświadczonego lekarza.
Produkty glikoproteiny erytropoetyny wytworzone zgodnie z wynalazkiem można formułować w postaci odpowiednich do iniekcji środków farmaceutycznych z dopuszczalnym farmaceutycznie nośnikiem lub zaróbką, ogólnie znanymi sposobami. Przykładowo odpowiednie środki opisano w WO97/09996, WO97/40850, WO98/58660 i WO99/07401. Wśród korzystnych farmaceutycznie dopuszczalnych nośników do formułowania środków według wynalazku można wymienić albuminę ludzkiej surowicy, białka ludzkiego osocza itd. Środki według wynalazku można formułować w 10 mM buforze, fosforanie sodu/potasu o pH 7 zawierającym środek tonizujący, np. 132 mM chlorek sodu. Ponadto środek farmaceutyczny może zawierać środek konserwujący. Środek farmaceutyczny może zawierać różne ilości erytropoetyny, np. 10-1000 μg/ml, np. 50 μg lub 400 μg.
Określenie „erytropoetyna” lub „EPO” oznacza glikoproteinę o sekwencji aminokwasowej przedstawionej jako SEQ ID NO:1 lub SEQ ID NO:2 lub o sekwencji aminokwasowej zasadniczo do nich
PL 202 758 B1 homologicznej, której właściwości biologiczne odnoszą się do stymulacji wytwarzania erytrocytów i różnicowania zaangażowanych prekursorów erytroidalnych w szpiku kostnym. Określenia te obejmują zarówno naturalną, jak i rekombinowaną ludzką erytropoetynę.
Koniugaty erytropoetyny według wynalazku można przedstawić ogólnym wzorem P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n, w którym x, m, n i R mają wyżej podane znaczenie. W tym wzorze P oznacza opisaną tu resztę glikoproteiny erytropoetyny (to jest bez grupy aminowej lub grup aminowych, które tworzą wiązanie amidowe z karbonylem w powyższym wzorze), wykazującej in vivo działanie biologiczne powodujące wzmożenie produkcji retykulocytów i erytrocytów przez komórki szpiku kostnego.
Korzystnie R oznacza metyl. Korzystnie m oznacza od około 650 do około 750, a n oznacza 1.
Najkorzystniej R oznacza metyl, m oznacza od 650 do około 750, a n oznacza 1, to jest koniugat według wynalazku ma wzór [CH3O(CH2CH2O)mCH2CH2CH2CO-NH]n-P, w którym m oznacza 650 do 750, n oznacza 1, a P ma wyżej podane znaczenie. Korzystnie m oznacza średnio 680.
Glikoproteina w koniugatach według wynalazku jest ludzką erytropoetyną. Ludzka erytropoetyna i zdefiniowane powyżej analogiczne białka mogą być eksprymowane przez endogenną aktywację genów. Korzystnie ludzkimi glikoproteinami, erytropoetynami są związki o SEQ ID NO: 1 i SEQ ID NO:2, a najkorzystniej o SEQ ID NO:1.
Użyte tu określenie „C1-C6-alkil” oznacza liniową lub rozgałęzioną grupę alkilową o 1-6 atomach węgla. Przykłady C1-C6-alkili obejmują metyl, etyl i izopropyl. Według wynalazku R oznacza jakikolwiek C1-C6-alkil. Korzystne są koniugaty, w których R oznacza metyl.
Symbol „m” oznacza liczbę reszt tlenku etylenu (OCH2CH2) w grupie poli(tlenku etylenu). Pojedyncza podjednostka PEG tlenku etylenu ma masę cząsteczkową około 44 daltonów. Zatem masa cząsteczkowa koniugatu (bez masy cząsteczkowej EPO) zależy od liczby „m”. W koniugatach według wynalazku „m” oznacza od około 450 do około 900 (co odpowiada masie cząsteczkowej od około 20 kDa do około 40 kDa), a korzystnie od około 650 do około 750 (co odpowiada masie cząsteczkowej około 30 kDa). Liczbę m dobiera się tak, żeby powstały koniugat według wynalazku miał aktywność fizjologiczną porównywalną z niemodyfikowaną EPO, która to aktywność może być taka sama, wyższa lub stanowić część odpowiadającej jej aktywności niemodyfikowanej EPO. Masa cząsteczkowa „około” konkretnej liczby oznacza, że jest ona sensownie bliska tej liczbie przy oznaczaniu standardowymi technikami analitycznymi. Liczba „m” jest dobrana tak, żeby masa cząsteczkowa każdej grupy poli(glikolu etylenowego) dołączonej kowalencyjnie do glikoproteiny erytropoetyny wynosiła od około 20 kDa do około 40 kDa, a korzystnie wynosiła około 30 kDa.
W koniugatach według wynalazku liczba „n” jest liczbą grup glikolu polietylenowego zwią zanych kowalencyjnie z wolnymi grupami aminowymi (włącznie z ε-aminowymi grupami lizyny i/lub N-terminalną grupą aminową) białka erytropoetyny poprzez wiązanie (wiązania) amidowe. Koniugat według wynalazku może zawierać jedną, dwie lub trzy grupy PEG na cząsteczkę EPO. Liczba „n” jest liczbą całkowitą od 1 do 3, przy czym korzystnie „n” oznacza 1 lub 2, a najkorzystniej „n” oznacza 1.
Związek o wzorze P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n można wytwarzać ze znanego materiału polimerycznego o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R i m mają wyżej podane znaczenie, przez kondensację związku o wzorze przedstawionym na rysunku z glikoproteiną erytropoetyną. Związki o wzorze przedstawionym na rysunku, w których x oznacza 3, stanowią estry sukcynimidylowe kwasu a-niższo-alkoksy-poli(oksyetyleno)masłowego (niższo-alkoksy-PEG-SBA). Związki o wzorze przedstawionym na rysunku, w których x oznacza 2, stanowią estry sukcynimidylowe kwasu α-niższo-alkoksy-poli(oksyetyleno)propionowego (niższo-alkoksy-PEG-SPA). Można zastosować dowolny znany sposób prowadzenia reakcji zaktywowanego estru z aminą w celu utworzenia amidu. W reakcji opisanej powyżej przykładowe ugrupowanie estru sukcynymidylowego stanowi grupę odszczepiającą się z wytworzeniem amidu. Zastosowanie estrów sukcynymidylowych, takich jak związki o wzorze przedstawionym na rysunku, do wytworzenia koniugatów z białkami, ujawniono w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5672662.
Ludzka EPO zawiera 9 wolnych grup aminowych, N-końcową grupę aminową oraz grupy ε-aminowe w ośmiu resztach lizyny. Gdy środek PEG-ilujący połączono ze związkiem SBA o wzorze przedstawionym na rysunku, stwierdzono, że przy pH 7,5, stosunku białko : PEG 1 : 3 oraz w temperaturze reakcji 20-25°C, powstała mieszanina mono-, di- oraz śladowych ilości tri-PEG-ilowanych białek. Gdy środek PEG-ilujący był związkiem SPA o wzorze przedstawionym na rysunku, w podobnych warunkach, z wyjątkiem tego, że stosunek białko : PEG wynosił 1 : 2, głównym produktem było białko mono-PEG-ilowane. PEG-ilowaną EPO można podawać jako mieszaninę lub w postaci różnych białek PEG-ilowanych rozdzielonych drogą chromatografii kationowymiennej. Przy manipulacji warunkami
PL 202 758 B1 reakcji (np. stosunkiem reagentów, pH, temperaturą, stężeniem białka, czasem reakcji itd.) można osiągnąć różne względne ilości poszczególnych PEG-ilowanych białek.
Ludzka erytropoetyna (EPO) stanowi ludzką glikoproteinę stymulującą tworzenie erytrocytów. Jej wytwarzanie i zastosowania terapeutyczne opisano szczegółowo w opisach patentowych Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5547933 i 5621080, EP-B 0148605, Huang, S.L, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1984) 2708-2712, EP-B 0205564, EP-B 0209539 i EP-B 0411678 a także w Lai, P.H. i inni, J. Biol. Chem. 261 (1986) 3116-3121, Sasaki, H. i inni, J. Biol. Chem. 262 (1987) 12059-12076. Erytropoetynę do zastosowań terapeutycznych można wytworzyć metodami rekombinacji (EP-B 0148605, EP-B 0209539 i Egrie, J.C., Strickland, T.W., Lane, J. i inni (1986) Immunobiol. 72: 213-224).
Sposoby ekspresji i wytwarzania erytropoetyny w pożywce wolnej od surowicy opisano np. w WO 96/35718 i w europejskim zgł oszeniu patentowym nr 513 738. Dodatkowo poza publikacjami wymienionymi powyżej wiadomo, że można przeprowadzić wolną od surowicy fermentację zrekombinowanych komórek CHO zawierających gen EPO. Sposoby takie opisano np. w EP-A 0513738, EP-A 0267678 oraz w ogólnej formie w Kawamoto, T. i inni Analytical Biochem. 130 (1983) 445-453, EP-A 0248656, Kowar, J. i Franek, F., Methods in Enzymology 421 (1986) 277-292, Bavister, B., Exp. Zoology 271 (1981) 45-51, EP-A 0481791, EP-A 0307247, EP-A 0343635, WO 88/00967.
W EP-A 0267678 do oczyszczania EPO wytworzonej w hodowlach wolnych od surowicy po dializie zastosowano chromatografię jonowymienną na S-Sepharose, preparatywną HPLC z odwróceniem faz na kolumnie C8 oraz chromatografię żelową. Etap chromatografii żelowej można zastąpić chromatografią jonowymienną na S-Sepharose z szybkim przepływem. Proponuje się także przeprowadzenie chromatografii z barwnikiem na kolumnie Blue Trisacryl przed chromatografią jonowymienną.
Proces oczyszczania zrekombinowanej EPO opisano w Nobuo, I. i inni J. Biochem. 107 (1990) 352-359. Zgodnie z tym sposobem EPO poddaje się jednak przed etapami oczyszczania działaniu roztworu Tween® 20, fluorku fenylometylosulfonylu, etylomaleimidu, pepstatyny A, siarczanu miedzi i kwasu oksamowego. W publikacjach, w tym w WO 96/35718, ujawniono procedurę wytwarzania erytropoetyny drogą procesu fermentacji w pożywce wolnej od surowicy (EPOsf).
Specyficzną aktywność EPO lub koniugatów EPO według wynalazku można oznaczyć w różnych znanych testach. Aktywność biologiczna oczyszczonych białek EPO według wynalazku jest taka, że podanie ich ludziom powoduje zwiększenie produkcji retykulocytów i erytrocytów w komórkach szpiku kostnego w porównaniu z pacjentami, którym ich nie podawano, lub pacjentami z grup kontrolnych. Aktywność biologiczną białek EPO lub ich fragmentów, uzyskanych i oczyszczonych według wynalazku, można przebadać metodami według Annable i innych Bull. Wld. Hlth. Org. (1972) 47: 99-112 i Pharm. Europa Spec. Issue Erythropoietin BRP Bio 1997(2). Inny sposób oznaczania aktywności białka EPO, test normocytemiczny na myszach, opisano w przykładzie 4.
Jak wyżej wspomniano, zakresem wynalazku objęte są także kompozycje zawierające wyżej opisane koniugaty. Związek zawierający co najmniej 90% koniugatów mono-PEG, tj. takich, w których n oznacza 1, moż na wytwarzać w sposób opisany w przykładzie 5. Zazwyczaj wymagane są koniugaty mono-PEG glikoproteiny erytropoetyny, ze względu na to, że mają one tendencję do wykazywania aktywności wyższej niż koniugaty di-PEG. Zawartość procentową koniugatów mono-PEG oraz stosunek koniugatów mono- do di-PEG można regulować zbierając razem szersze frakcje wokół piku elucji, aby zmniejszyć procent mono-PEG, lub węższe frakcje, aby zwiększyć procent mono-PEG w środku. Około 90% koniugatów mono-PEG zapewnia dobrą równowagę wydajności i aktywności. Czasami mogą być wymagane kompozycje, w których np. co najmniej 92% lub co najmniej 96% koniugatów stanowi mono-PEG (n oznacza 1). Zgodnie z jedną z postaci wynalazku zawartość procentowa koniugatów, których n oznacza 1, wynosi od 90% do 96%.
Koniugaty i kompozycje według wynalazku znajdują szczególne zastosowanie do wytwarzania leków do leczenia lub profilaktyki chorób związanych z niedokrwistością u pacjentów z przewlekłą niewydolnością nerek (CRF), z AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię.
Środki według wynalazku znajdują zastosowanie w sposobie leczenia profilaktycznego i/lub terapeutycznego zaburzeń obejmujących niedokrwistość w przewlekłej niewydolności nerek (CRF), AIDS oraz pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię, obejmującym etap podawania pacjentowi wyżej opisanego środka.
PL 202 758 B1
Wynalazek ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d 1. Fermentacja i oczyszczanie ludzkiej EPO
a) Wytwarzanie i fermentacja materiału inokulacyjnego
Z gazowej fazy zbiornika do przechowywania z ciekł ym azotem pobrano jedną próbkę Working
Cell Bank, pochodzącego z linii komórkowej CHO produkującej EPO (można zastosować ATCC CRL8695, ujawnioną w EP 411678 (Genetics Institute)). Komórki przeniesiono do szklanych butelek do wirowania i hodowano w pożywce buforowanej wodorowęglanem w inkubatorze w atmosferze wilgotnego CO2. Standardowa pożywka, wolna od surowicy, stosowana do wytwarzania i fermentacji materiału inokulacyjnego, ujawniona w europejskim zgłoszeniu patentowym 513738, Koch z 12 czerwca 1992 r. lub WO 96/35718, Burg z 14 listopada 1996 r., zawiera np. jako pożywkę DMEM/F12 (np. JRH Biosciences/Hazleton Biologies, Denver, US, zamówienie nr. 57-736) i dodatkowo wodorowęglan sodu, L+glutaminę, D+glukozę, zrekombinowaną insulinę, selenin sodu, diaminobutan, hydrokortyzon, siarczan żelaza(II), asparaginę, kwas asparaginowy, serynę i stabilizator komórek ssaczych, taki jak np. polialkohol winylowy, metyloceluloza, polidekstran, glikol polietylenowy, Pluronic F68, środek zwiększający objętość osocza poligelinę (HEMACCEL®) lub poliwinylopirolidon (WO 96/35718).
Pod mikroskopem sprawdzono czy hodowle nie zawierają organizmów zanieczyszczających je oraz wyznaczono gęstości komórek. Testy te przeprowadzano po każdym etapie podziału.
Po okresie początkowego wzrostu hodowlę komórek rozcieńczono świeżą pożywką do początkowej gęstości komórek i poddano jeszcze jednemu cyklowi wzrostu. Procedurę powtarzano do momentu otrzymania objętości około 2 l hodowli na każde szklane naczynie do wirowania. Po około 12 powtórzeniach uzyskano od 1 do 5 litrów hodowli, którą następnie użyto jako materiału inokulacyjnego do 10 l fermentatora inokulacyjnego.
Po 3-5 dniach, hodowle z 10 l fermentatora można zastosować jako materiał inokulacyjny do 100 l fermentatora inokulacyjnego.
Po 3-5 dniach hodowli, hodowle ze 100 l fermentatora można zastosować jako materiał inokulacyjny do 1000 l fermentatora produkcyjnego.
b) Zbieranie hodowli i rozdzielanie komórek
Zastosowano proces periodycznego powtórnego uzupełniania, t.j. kiedy hodowla osiągała wymaganą gęstość, zbierano około 80% hodowli. Pozostałą część hodowli uzupełniano świeżą pożywką i hodowano do czasu nastę pnego zbioru. Jeden etap produkcyjny sk ł adał się z maksymalnie 10 następujących po sobie zbiorów: 9 częściowych zbiorów i 1 całkowitego zbioru pod koniec fermentacji. Zbieranie wykonywano co 3-4 dni.
Określoną objętość zbioru przenoszono do ochłodzonego naczynia. Komórki usuwano przez wirowanie lub filtrację i odrzucano. Supernatant otrzymany po wirowaniu, zawierający EPO, kolejno filtrowano i zbierano w drugim ochłodzonym naczyniu. Każdy ze zbiorów podczas oczyszczania poddawano obróbce osobno.
Typowy sposób oczyszczania białka EPO ujawniono w WO 96/35718, Burg z 14 listopada 1996 r. Proces oczyszczania objaśniono poniżej.
a) Chromatografia na Blue Sepharose
Blue Sepharose (Pharmacia) składa się z ziaren Sepharose, które mają na powierzchni kowalencyjnie związany barwnik błękit Cibacron. Ze względu na to, że EPO wiąże się z Blue Sepharose mocniej niż większość niebiałkowych zanieczyszczeń, niektórych białkowych zanieczyszczeń i PVA, EPO można w tym etapie wzbogacić. Wymywanie z kolumny Blue Sepharose przeprowadza się zwiększając stężenie soli, a także pH.
Kolumnę wypełniono 80-100 l Blue Sepharose, zregenerowanej NaOH i zrównoważono buforem do równoważenia (chlorek sodu/wapnia i octan sodu). Naniesiono zakwaszony i przefiltrowany supernatant fermentacyjny. Po zakończeniu nakładania kolumnę przemyto najpierw buforem podobnym do buforu równoważącego, zawierającym wyższe stężenie chlorku sodu, a następnie buforem Tris. Produkt wymyto buforem Tris i zebrano w jedną frakcję zgodnie z wzorcowym profilem wymywania.
b) Chromatografia na Butyl Toyopearl
Butyl Toyopearl 650 C (Toso Haas) jest złożem polistyrenowym z dołączonymi kowalencyjnie alifatycznymi grupami butylowymi. EPO wiąże się z żelem mocniej niż większość zanieczyszczeń i PVA, tak że należy ją wymywać buforem zawierającym izopropanol.
Kolumnę zapakowano 30-40 l złoża Butyl Toyopearl 650 C, zregenerowanego NaOH, przemyto buforem Tris i równoważono buforem Tris zawierającym izopropanol.
PL 202 758 B1
Eluat z Blue Sepharose doprawiono izopropanolem do jego stężenia w buforze do równoważenia kolumny i nałożono na kolumnę. Następnie kolumnę przemyto buforem do równoważenia z wzrastającym stężeniem izopropanolu. Produkt wymyto buforem do wymywania (bufor Tris z dużą zawartością izopropanolu) i zebrano w jedną frakcję zgodnie z wzorcowym profilem wymywania .
c) Chromatografia na hydroksyapatycie Ultrogel
Hydroksyapatyt Ultrogel (Biosepra) składa się z hydroksyapatytu włączonego w złoże agarozowe w celu polepszenia właściwości mechanicznych. EPO ma niskie powinowactwo do hydroksyapatytu, zatem może być wymyta niższymi stężeniami fosforanu niż inne zanieczyszczenia białkowe.
Kolumnę wypełniono 30-40 l hydroksyapatytu Ultrogel i zregenerowano buforem fosforan potasu/chlorek wapnia i NaOH, a następnie buforem Tris. Następnie kolumnę równoważono buforem Tris zawierającym niskie stężenie izopropanolu i chlorku sodu.
Eluat z chromatografii Butyl Toyopearl zawierający EPO nałożono na kolumnę. Następnie kolumnę przemyto buforem do równoważenia i buforem Tris z izopropanolem i chlorkiem sodu. Produkt wymyto buforem Tris zawierającym fosforan potasu i zebrano w jedną frakcję, zgodnie z wzorcowym profilem wymywania.
d) HPLC z odwróceniem faz na Vydac C4
Złoże RP-HPLC Vydac C4 (Vydac) składa się z cząstek żelu krzemionkowego, których powierzchnie mają dołączone łańcuchy alkilowe C4. Rozdział EPO od białkowych zanieczyszczeń jest oparty na różnicach siły oddziaływań hydrofobowych. Białko wymywa się z gradientem acetonitrylu w rozcień czonym kwasie trifluorooctowym.
Preparatywną HPLC przeprowadzano stosując nierdzewną stalową kolumnę (wypełnioną 2,8 do 3,2 litra żelu krzemionkowego Vydac C4). Eluat z hydroksyapatytu Ultrogel zakwaszono dodając kwasu trifluorooctowego i naniesiono na kolumnę Vydac C4. Do przemycia i wymywania zastosowano gradient acetonitrylu w rozcieńczonym kwasie trifluorooctowym. Frakcje zbierano i od razu zobojętniano buforem fosforanowym. Zebrano frakcje EPO pozostające w zakresach IPC.
e) Chromatografia na DEAE Sepharose
Złoże DEAE Sepharose (Pharmacia) zawiera grupy dietyloaminoetylowe (DEAE) kowalencyjnie związane z powierzchnią ziaren Sepharose. W wiązaniu EPO z grupami DEAE biorą udział oddziaływania jonowe. Acetonitryl i kwas trifluorooctowy przechodzą przez kolumnę bez zatrzymywania. Po wymyciu tych substancji usuwa się śladowe zanieczyszczenia przemywając kolumnę buforem octanowym o niskim pH. Kolumnę przemywa się obojętnym buforem fosforanowym, a EPO wymywa się buforem o zwiększonej sile jonowej.
Kolumnę zapakowano DEAE Sepharose do szybkiego przepływu. Objętość kolumny ustawiono tak, żeby umożliwić załadowanie EPO w zakresie 3-10 mg EPO/ml żelu. Kolumnę przemyto wodą i równoważ ono buforem (fosforan sodu/potasu). Nał o ż ono połączone frakcje eluatu z HPLC i kolumnę przemyto buforem do równoważenia. Następnie kolumnę przemyto buforem do przemywania (bufor z octanu sodu), a następnie przemyto buforem do równoważenia. Następnie EPO wymyto z kolumny buforem do wymywania (chlorek sodu, fosforan sodu/potasu) i zebrano w jedną frakcję zgodnie z wzorcowym profilem wymywania.
Eluat z kolumny DEAE Sepharose doprowadzono do określonego przewodnictwa. Otrzymany lek wyjałowiono przez filtrację do butelek Teflon i przechowywano w -70°C.
P r z y k ł a d 2. PEG-ilacja EPO z użyciem mPEG-SBA
EPO oczyszczona według procedury z pożywką wolną od surowicy z przykładu 1 (EPOsf) była homogenna przy ocenie metodami analitycznymi oraz miała typowy wzór izoform składający się z 8 izoform. Miała ona właściwą aktywność biologiczną 190000 IU/mg, wyznaczoną w mysim teście normocytemicznym. Zastosowanym odczynnikiem PEG-ilującym był metoksy-PEG-SBA, związek o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R oznacza metyl, x oznacza 3 i m oznacza od 650 do 750 (średnio około 680, co odpowiada średniej masie cząsteczkowej około 30 kDa).
Reakcja PEG-ilacji
Do 100 mg EPOsf (9,71 ml przechowywanej EPOsf o stężeniu 10,3 mg/ml, 5,48 μmola) dodano 10 ml 0,1 M buforu z fosforanu potasu, pH 7,5 zawierającego 506 mg 30 kDa metoksy-PEG-SBA (16,5 μmol) (uzyskanego z Shearwater Polymers, Inc., Huntsville, Alabama) i mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej (20-23°C). Końcowe stężenie białka wynosiło 5 mg/ml, a stosunek białko:PEG wynosił 1 : 3. Po 2 godzinach reakcję zatrzymano doprowadzając pH lodowatym kwasem octowym do 4,5 i przechowywano w -20°C do czasu oczyszczania.
PL 202 758 B1
Oczyszczanie
1. Mieszanina koniugatów: Około 28 ml SP-SEPHAROSE FF (sulfopropylowy kationit) zapakowano do szklanej kolumny AMICON (2,2 x 7,5 cm) i równoważono 20 mM buforem octanowym pH 4,5 przy przepływie 150 ml/godz. Sześć ml mieszaniny reakcyjnej zawierającej 30 mg białka rozcieńczono 5-krotnie buforem do równoważenia i nałożono na kolumnę. Nie zaabsorbowany materiał wymyto buforem, a zaabsorbowany koniugat PEG wymyto z kolumny 0,175 M NaCl w buforze do równoważenia. Niezmodyfikowaną EPOsf nadal pozostającą na kolumnie wymyto 750 mM NaCl. Kolumnę ponownie równoważono wyjściowym buforem. Próbki analizowano metodą SDS-PAGE i określono ich stopień PEG-ilacji. Stwierdzono, że eluat z 0,175 M NaCl zawierał mono-, di- oraz śladowe ilości tri-PEG-ilowanych białek, podczas gdy eluat 750 mM NaCl zawierał niemodyfikowaną EPOsf.
2. Di-PEG i Mono-PEG-EPOsf: Oczyszczoną mieszaninę koniugatów wymytą z kolumny w poprzednim etapie rozcieńczono 4-krotnie buforem i ponownie naniesiono na kolumnę, którą przemyto w sposób opisany. Di-PEG-EPOsf i mono-PEG-EPOsf oddzielnie wymyto z kolumny odpowiednio 0,1 M NaCl i 0,175 M NaCl. Kolumnę przemyto także 750 mM NaCl, aby wymyć jakiekolwiek pozostałe niezmodyfikowane EPOsf.
Alternatywnie, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 5 razy buforem octowym i naniesiono na kolumnę SP-Sepharose (~0,5 mg białka/ml żelu). Kolumnę przemyto i zaabsorbowane mono-PEG-EPOsf, di-PEG-EPOsf oraz niezmodyfikowaną EPOsf wymyto w sposób opisany w poprzedniej części.
Wyniki
PEG-EPOsf zsyntetyzowano chemicznie drogą sprzęgania z liniową cząsteczką PEG o średniej masie cząsteczkowej 30 kDa. PEG-EPOsf otrzymano z reakcji pomiędzy pierwszorzędowymi grupami aminowymi EPOsf i estrem sukcynymidylowym kwasu PEG-masłowego o 30 kDa, w wyniku której powstaje wiązanie amidowe.
Wyniki zestawiono w tabeli 1. Oczyszczona mieszanina koniugatów zawierała mono- i di-PEG-EPOsf oraz wolną niezmodyfikowaną EPOsf, co oznaczono przy pomocy analizy SDS-PAGE. Mieszanina koniugatów zawierała 23,4 mg lub 78% materiału wyjściowego. Rozdział mono- i di-PEG-EPOsf przy pomocy chromatografii kationowymiennej wskazał, że stosunek mono- do di-PEG w mieszaninie koniugatów wynosił prawie 1 : 1. Po zakończeniu reakcji, stosunek poszczególnych składników Mono: Di : niezmodyfikowanej wynosił 40 : 38 : 20 (%). Ogólna wydajność była prawie ilościowa.
T a b e l a 1.
Zestawienie wyników PEG-ilacji EPOsf
Próbka Białko (mg) Wydajność (%)
Mieszanina reakcyjna 30 100
Mono- 12,0 40
Di- 11,4 38
Niezmodyfikowana 6,0 20
Mieszanina koniugatów 23,4 78
P r z y k ł a d 3. PEG-ilacja EPO z użyciem mPEG-SPA
Inną porcję EPOsf zastosowanej w przykładzie 2 poddano reakcji z 30 kDa metoksy-PEG-SPA (Shearwater Polymers, Inc., Huntsville, Alabama). Reakcję prowadzono przy stosunku białko : odczynnik 1 : 2, a techniki oczyszczania były takie jak w przykładzie 2. Wytworzono głównie mono-PEG-ilowane białka.
P r z y k ł a d 4. Aktywność in vivo PEG-ilowanej EPO oznaczona w mysim teście normocytemicznym
Mysi biologiczny test normocytemiczny jest znany (Pharm. Europa Spec. Issue Erythropoietin BRP Bio 1997(2)) i sposób opisany w monografii dotyczącej erytropoetyny, Ph. Eur. BRP. Próbki rozcieńczono z użyciem BSA-PBS. Normalnym zdrowym myszom, w wieku 7-15 tygodni, podano podskórnie 0,2 ml frakcji EPO zawierającej nie-PEG-ilowaną EPO lub tri-, di- albo mono-PEG-ilowaną EPO z przykładu 2 lub 3. Przez okres 6 dni, pobierano krew przez nakłucie żyły ogonowej i rozcieńczano tak, aby 1 μl krwi był obecny w 1 ml roztworu wybarwiającego z 0,15 umol oranżu akrydynowego. Czas wybarwiania wynosił 3 do 10 minut. Retykulocyty policzono mikrofluorometrycznie w cytometrze przepływowym analizując histogram czerwonej fluorescencji. Ilości retykulocytów podano w postaci
PL 202 758 B1 liczb bezwzględnych (na 30000 analizowanych komórek krwi). W danych prezentowanych każda grupa składała się z 5 myszy na dzień, i od każdej myszy pobierano krew tylko raz.
W odrębnych doświadczeniach myszom podano pojedynczą dawkę niezmodyfikowanej EPO (25 ng EPO), mieszaniny PEG(SBA)-EPO z przykładu 2 (10 ng koniugatu), mono- i di-PEG-ilowanych EPO z przykładu 2 (10 ng koniugatu), PEG(SPA)-EPO z przykładu 3 (10 ng koniugatu) i roztworu buforu. Wyniki zestawiono w tabeli 2. Można zaobserwować lepszą aktywność i przedłużony okres półtrwania PEG-ilowanych białek EPO, na co wskazują znacznie zwiększone ilości retykulocytów oraz przesunięcie maksimum zliczenia retykulocytów przy tej samej dawce na mysz (10 ng), w porównaniu z dawką 25 ng niemodyfikowanej EPO.
T a b e l a 2
EPO (niemodyfikowana) 30 kDa SPA PEG Mono 30K SBA Di 30K SBA Mieszanka koniugacyjna PEG-EPO SBA Bufor kontrolny
72h 1000 1393 1411 994 1328 857
96h 500 1406 1501 926 1338 697
120h około 200 1100 1182 791 944 701
144h około 0 535 607 665 660 708
P r z y k ł a d 5. Wytwarzanie głównie mono-PEG-EPO
Reakcja PEG-ilacji
Do 100 mg (5,48 μmol) EPOsf, w 100 mM buforze, fosforanie potasu, pH 7,5, wytworzonej według przykładu 1, dodano 329 mg (10,96 gmol) 30 kDa odczynnika PEG-SBA rozpuszczonego w 3 ml 1 mM HCl. Dodano wystarczającą ilość 100 mM buforu fosforanowo potasowego, pH 7,5, aby doprowadzić objętość mieszaniny reakcyjnej do 20 ml. Końcowe stężenie białka wynosiło 5 mg/ml i stosunek białko : środek PEG wynosił 1 : 2. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze otoczenia (20-22°C). Po 2 godzinach reakcję zatrzymano doprowadzając pH lodowatym kwasem octowym do 4,5 i przechowywano w -20°C do czasu oczyszczania.
Oczyszczanie
Mieszaninę reakcyjną z poprzedniego etapu rozcieńczono 1 : 5 10 mM octanem sodu, pH 4,5 i naniesiono na 300 ml SP-Sepharose FF (sulfopropylowy kationit) zapakowanej w kolumnie 4,2 x 19 cm. Kolumnę wcześniej równoważono tym samym buforem. Materiał wymywany z kolumny monitorowano przy 280 nm przy pomocy monitora Gilson UV i rejestrowano przy pomocy rejestratora Kipp and Zonen. Kolumnę przemyto 300 ml lub 1 objętością złoża buforu do równoważenia, aby usunąć nadmiar reagentów, produkty uboczne reakcji i oligomeryczne PEG-EPO. Następnie kolumnę przemyto 2 objętościami złoża 100 mM NaCl, aby usunąć di-PEG-EPO. Następnie mono-PEG-EPO wymyto 200 mM NaCl. Podczas wymywania mono-PEG-EPO odrzucono pierwsze 50 ml piku białka i zebrano mono-PEG-EPO w postaci 150 ml frakcji. Niezmodyfikowaną EPOsf pozostałą na kolumnie wymyto 750 mM NaCl. Wszystkie bufory do wymywania sporządzono w buforze do równoważenia. Wszystkie wymyte próbki zanalizowano metodą SDS-PAGE i wysokosprawnej chromatografii z wykluczeniem wymiarów (SEC). Mono-PEG-EPO zebraną w postaci 150 ml frakcji, w której nie wykryto niemodyfikowanej EPOsf, zagęszczono do ~ 4,5-7,5 mg/ml i poddano diafiltracji do buforu do przechowywania, 10 mM fosforan potasu, 100 mM NaCl, pH 7,5. Zagęszczanie/diafiltrację przeprowadzono przy pomocy układu Millipore Labscale™ TFF dostosowanego do wykluczających 50 kDa błon Millipore Pellicon XL Biomax 50 w temperaturze otoczenia. Zagęszczone mono-PEG-EPO wyjałowiono przez filtrację i zamrożono w -20°C.
Około 75% EPOsf było PEG-ilowanych. Po oczyszczaniu, całkowita wydajność wynosiła ~ 30% mono-PEG-EPO z niewykrywalną niemodyfikowaną EPOsf i około 25% di-PEG-EPO. Oligomery i niePEG-ilowane EPOsf stanowiły resztę białek. Mono-PEG-EPO uzyskana z 150 ml frakcji zawierała około 90% mono-PEG-EPO i około 10% di-PEG-EPO.
PL 202 758 B1
Wykaz sekwencji (1) Informacja ogólna (i) Zgłaszający (A) Nazwa: F.Hoffmann-La Roche AG (B) Ulica: 124 Grenzacherstrasse (C) Miasto: 3azylea (E) Kraj: Szwaj caria (F) Kod pocztowy: CH-4070
(G) Telefon: (61) 688 11 11
(H) Telefax: (61) 688 13 95
(I) Telex: 962 292 h Ir ch
(ii) Tytuł wynalazku: Koniugaty erytropoetyny (iii) Liczba sekwencji: 3
(iv) Postać do odczytu komputerowego:
(A) (B) (C) (D) Typ nośnika: dyskietka Komputer: kompatybilny z IBM PC System operacyjny: Word Program: Patentln Relkease 2.0
<170> Patentln Ver. . 2.0
<210> <211> <212> <213> 165 PRT Homo sapiens
<400>
Ala 1 Pro Pro Arg Leu Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr 15 Leu
Leu Glu Ala Lvs 20 C-lu Ala Glu Asn I j.e Thr Thr Gly Cys Ala 30 Glu His
Cys Ser Leu 35 Asn Glu Asn Ile Thr 40 Vai Pro Asp Thr Lys 4 5 Vai Asn Phe
Tyr Ala oO Trp tys Arg Mer Glu Vai 55 Gly Gin Gin Aj. a 60 Val Glu Vai Trp
Gin 65 Gly Leu A.la Leu Leu 70 Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gin A_a Leu 80
Leu Vai Asn Ser Ser 85 Gin Pro Tro Glu Pro Leu 90 Gin Leu His Vai 55 Asp
Lys Ala Val Ser 100 Gly Leu Arg Ser Leu 105 Thr Thr Leu Leu Arg 110 Ala Leu
Gly Ala Gin 115 Lys Glu Aj- a Ile Ser 120 Pro Pro Asp Ala Ala 125 Ser A-i. a Ala
Pro Leu 130 Arg Thr Ile Thr Ala Asp 135 Thr Phe Arg Lys 14 0 Leu Phe Arg Val
Tyr 145 Ser Asn Phe Leu Arg 150 Gly Lys Leu Lys Leu ” 155 Tyr Thr Gly Glu A-a 160
PL 202 758 B1
Cys Arg Thr Gly Asp 165 <210> 2 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2
Ala 1 Pro Pro Arg Leu 5 Ile Cys Asp Ser Arg 10 Val Leu Glu Arg Tyr 15 Leu
Leu Glu Ala Lys 20 Glu Ala Glu Asn Ile 25 Thr Thr Gly Cys Ala 30 Glu His
Cys Ser Leu 35 Asn Glu Asn Ile Thr 40 Val Pro Asp Thr Lys 45 Val Asn Phe
Tyr Ala 50 Trp Lys Arg Met Glu 55 Val Gly Gin Gin Ala 60 Val Glu Val Trp
Gin 65 Gly Leu Ala Leu Leu 70 Ser Glu Ala Val Leu 75 Arg Gly Gin Ala Leu 80
Leu Val Asn Ser Ser 85 Gin Pro Trp Glu Pro 90 Leu Gin Leu His Val 95 Asp
Lys Ala Val Ser 100 Gly Leu Arg Ser Leu 105 Thr Thr Leu Leu Arg 110 Ala Leu
Gly Ala Gin 115 Lys Glu Ala Ile Ser 120 Pro Pro Asp Ala Ala 125 Ser Ala Ala
Pro Leu 130 Arg Thr Ile Thr Ala 135 Asp Thr Phe Arg Lys 140 Leu Phe Arg Val
Tyr 145 Ser Asn Phe Leu Arg 150 Gly Lys Leu Lys Leu 155 Tyr Thr Gly Glu Ala 160
Cys Arg Thr Gly Asp Arg

Claims (18)

1. Koniugat zawierają cy glikoproteinę erytropoetynę maj ą c ą co najmniej jedną wolną grupę aminową i wykazującą in vivo działanie biologiczne powodujące zwiększenie produkcji retikulocytów i erytrocytów przez komórki szpiku kostnego, gdzie erytropoetyna jest ludzką erytropoetyną; przy czym ta glikoproteina jest kowalencyjnie połączona z „n” grupami poli(glikolu etylenowego) o wzorze -CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR, przy czym grupa -CO każdej grupy poli(glikolu etylenowego) tworzy wiązanie amidowe z jedną z tych grup aminowych; R oznacza C1-C6-alkil; x oznacza 2 lub 3; m oznacza 450-900; a n oznacza 1-3; z tym, że n i m są tak dobrane, aby różnica masy cząsteczkowej koniugatu i masy cząsteczkowej glikoproteiny erytropoetyny wynosiła od 20 kilodaltonów do 100 kilodaltonów.
2. Koniugat wedł ug zastrz. 1 o wzorze P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n, w którym x, m, n i R mają znaczenie podane w zastrz. 1, a P oznacza resztę glikoproteiny bez n grup(-y) aminowych(-ej) tworzących(-ej) wiązania(-e) amidowe z grupami(-ą) poli(glikolu etylenowego).
3. Koniugat według zastrz. 1 albo 2, w którym R oznacza metyl.
4. Koniugat według zastrz 1-3, w którym m oznacza 650-750.
5. Koniugat według zastrz. 1-4, w którym n oznacza 1.
6. Koniugat według zastrz. 1-5, w którym R oznacza metyl; m oznacza 650-750; a n oznacza 1.
7. Koniugat według zastrz. 1-6 o wzorze [CH3O(CH2CH2O)mCH2CH2CH2CO-NH]n-P, w którym m oznacza 650-750, n oznacza 1, a P ma znaczenie podane w zastrz. 2.
8. Koniugat wedł ug zastrz. 1-7 zawierają cy glikoproteinę ludzką erytropoetynę eksprymowaną przez aktywację endogennego genu.
9. Koniugat według zastrz. 1-8, zawierają cy glikoproteinę o sekwencji SEQ ID NO:1.
10. Koniugat według zastrz. 1, w którym R oznacza metyl; x oznacza 3; m oznacza 650 - 750;
a n oznacza 1; z tym, że n i m s ą tak dobrane, aby róż nica ś redniej masy cząsteczkowej koniugatu i ś redniej masy cząsteczkowej glikoproteiny erytropoetyny wynosiła około 30 kilodaltonów.
11. Kompozycja zawierająca koniugaty określone w zastrz. 1-10, znamienna tym, że zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi co najmniej 90%.
12. Kompozycja według zastrz. 11, znamienna tym, że zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi co najmniej 92%.
13. Kompozycja według zastrz. 12, znamienna tym, że zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi co najmniej 96%.
14. Kompozycja według zastrz. 11, znamienna tym, że zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi 90-96%.
15. Środek farmaceutyczny zawierający farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę i substancję czynną, znamienny tym, że jako tę substancję czynną zawiera koniugat lub kompozycję określone w zastrz. 1-14.
16. Koniugaty określone w zastrz. 1-10 do leczenia chorób związanych z anemią u pacjentów z przewlekłą niewydolnoś cią nerek (CRF), AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodz ą cych chemioterapię.
17. Zastosowanie koniugatu lub kompozycji określonych w zastrz. 1-14 do wytwarzania środków do leczenia lub profilaktyki chorób związanych z anemią u pacjentów z przewlekłą niewydolnością nerek (CRF), AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię.
18. Sposób wytwarzania związków koniugatów określonych w zastrz. 1-10, znamienny tym, że związek o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R, m i x mają znaczenie podane w zastrz. 1-6, poddaje się kondensacji z glikoproteiną erytropoetyną.
PL341187A 1999-07-02 2000-07-03 Koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja zawierająca te koniugaty, środek farmaceutyczny, zastosowanie tych koniugatów i tych kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny PL202758B1 (pl)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14225499P 1999-07-02 1999-07-02
US15022599P 1999-08-23 1999-08-23
US15154899P 1999-08-31 1999-08-31
US16615199P 1999-11-17 1999-11-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL341187A1 PL341187A1 (en) 2001-01-15
PL202758B1 true PL202758B1 (pl) 2009-07-31

Family

ID=27495518

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL341187A PL202758B1 (pl) 1999-07-02 2000-07-03 Koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja zawierająca te koniugaty, środek farmaceutyczny, zastosowanie tych koniugatów i tych kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny

Country Status (52)

Country Link
US (2) US6583272B1 (pl)
EP (2) EP1839676A3 (pl)
JP (2) JP3727009B2 (pl)
KR (1) KR100593143B1 (pl)
CN (2) CN1283664C (pl)
AR (2) AR024625A1 (pl)
AT (1) ATE370748T1 (pl)
AU (1) AU736067B2 (pl)
BG (1) BG65449B1 (pl)
BR (2) BR0002276A (pl)
CA (1) CA2310536C (pl)
CO (1) CO5190661A1 (pl)
CY (2) CY1107719T1 (pl)
CZ (1) CZ299516B6 (pl)
DE (3) DE122007000064I2 (pl)
DK (1) DK1064951T3 (pl)
DO (1) DOP2000000030A (pl)
EA (1) EA003777B1 (pl)
ES (2) ES2289985T3 (pl)
FR (2) FR2795734B1 (pl)
GB (2) GB2353281B (pl)
GC (1) GC0000197A (pl)
GE (1) GEP20022804B (pl)
GT (1) GT200000109A (pl)
HK (2) HK1068354A1 (pl)
HR (1) HRP20000436B1 (pl)
HU (1) HU226233B1 (pl)
ID (1) ID26447A (pl)
IL (1) IL137056A0 (pl)
IS (1) IS2492B (pl)
IT (1) IT1318606B1 (pl)
LU (1) LU91363I2 (pl)
MA (1) MA26746A1 (pl)
MX (1) MXPA00006547A (pl)
MY (1) MY128500A (pl)
NL (1) NL300289I9 (pl)
NO (2) NO327043B1 (pl)
NZ (1) NZ505454A (pl)
OA (1) OA11442A (pl)
PA (1) PA8497801A1 (pl)
PE (1) PE20010297A1 (pl)
PL (1) PL202758B1 (pl)
PT (1) PT1064951E (pl)
RS (1) RS49928B (pl)
SG (1) SG92717A1 (pl)
SI (1) SI1064951T1 (pl)
SK (1) SK286301B6 (pl)
SV (1) SV2002000120A (pl)
TN (1) TNSN00147A1 (pl)
TR (1) TR200001956A2 (pl)
TW (1) TWI235667B (pl)
UY (1) UY26228A1 (pl)

Families Citing this family (225)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU763719B2 (en) 1997-12-08 2003-07-31 Merck Patent Gmbh Heterodimeric fusion proteins useful for targeted immune therapy and general immune stimulation
US20030105294A1 (en) * 1998-02-25 2003-06-05 Stephen Gillies Enhancing the circulating half life of antibody-based fusion proteins
CA2328076C (en) * 1998-04-15 2009-10-06 Lexigen Pharmaceuticals Corporation Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by co-administration with angiogenesis inhibitor
US7304150B1 (en) * 1998-10-23 2007-12-04 Amgen Inc. Methods and compositions for the prevention and treatment of anemia
US7345019B1 (en) * 1999-04-13 2008-03-18 The Kenneth S. Warren Institute, Inc. Modulation of excitable tissue function by peripherally administered erythropoietin
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
SK782002A3 (en) 1999-07-21 2003-08-05 Lexigen Pharm Corp FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
US7067110B1 (en) 1999-07-21 2006-06-27 Emd Lexigen Research Center Corp. Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
CA2380331C (en) * 1999-08-09 2012-11-20 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Multiple cytokine-antibody complexes
US20050202538A1 (en) * 1999-11-12 2005-09-15 Merck Patent Gmbh Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics
CA2399832C (en) * 2000-02-11 2011-09-20 Stephen D. Gillies Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
US6586398B1 (en) * 2000-04-07 2003-07-01 Amgen, Inc. Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods
PT1311285E (pt) † 2000-05-15 2005-06-30 Hoffmann La Roche Composicao farmaceutica liquida contendo um derivado de eritropoietina
AU2001271729B2 (en) * 2000-06-29 2007-01-04 Merck Patent Gmbh Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by combined treatment with immunocytokine uptake enhancing agents
ATE421535T1 (de) * 2000-10-16 2009-02-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Peg-modifiziertes erythropoietin
BR0116381A (pt) * 2000-12-20 2004-02-25 Hoffmann La Roche Conjugado, composição farmacêutica que compreende o mesmo e sua utilização, processo para o tratamento profilático e/ou terapêutico de distúrbios, processo para a preparação de um conjugado, compostos e glicoproteìnas de eritropoetina
WO2002049673A2 (en) * 2000-12-20 2002-06-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugates of erythropoietin (pep) with polyethylene glycol (peg)
US20030072737A1 (en) * 2000-12-29 2003-04-17 Michael Brines Tissue protective cytokines for the protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues and organs
US7767643B2 (en) 2000-12-29 2010-08-03 The Kenneth S. Warren Institute, Inc. Protection, restoration, and enhancement of erythropoietin-responsive cells, tissues and organs
EP1234583A1 (en) * 2001-02-23 2002-08-28 F. Hoffmann-La Roche Ag PEG-conjugates of HGF-NK4
KR20090010127A (ko) * 2001-03-07 2009-01-28 메르크 파텐트 게엠베하 하이브리드 이소타입 항체 부분구조를 포함하는 단백질을 위한 발현 기술
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
WO2002079415A2 (en) * 2001-03-30 2002-10-10 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Reducing the immunogenicity of fusion proteins
DE60239454D1 (de) * 2001-05-03 2011-04-28 Merck Patent Gmbh Rekombinanter, tumorspezifischer antikörper und dessen verwendung
US6818613B2 (en) 2001-11-07 2004-11-16 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Aqueous sustained-release formulations of proteins
KR100467751B1 (ko) 2001-12-03 2005-01-24 씨제이 주식회사 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질
PT1454138E (pt) * 2001-12-04 2012-03-28 Merck Patent Gmbh Imunocitoquinas com seletividade modulada
CN102526044A (zh) * 2001-12-06 2012-07-04 法布罗根股份有限公司 提高内源性红细胞生成素(epo)的方法
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
US7129267B2 (en) 2002-03-11 2006-10-31 Janssen Pharmaceutica N.V. Methods for SHP1 mediated neuroprotection
KR20060019501A (ko) * 2002-07-01 2006-03-03 더 케네쓰 에스. 워렌 인스티튜트 인코포레이티드 응답 세포, 조직 및 기관을 보호, 회복 및 향상시키기위한 재조합 조직 보호 사이토카인 및 이를 코딩하는 핵산
AU2003258518B2 (en) 2002-07-24 2007-01-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Polyalkylene glycol acid additives
US7459435B2 (en) * 2002-08-29 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
DE60332358D1 (de) * 2002-09-09 2010-06-10 Hanall Pharmaceutical Co Ltd Protease-resistente modifizierte interferon alpha polypeptide
US20050176627A1 (en) * 2002-09-09 2005-08-11 Anthony Cerami Long acting erythropoietins that maintain tissue protective activity of endogenous erythropoietin
CA2496317C (en) 2002-09-11 2014-02-18 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Method of producing hydroxyalkyl starch derivatives
US7459436B2 (en) * 2002-11-22 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
US7388079B2 (en) * 2002-11-27 2008-06-17 The Regents Of The University Of California Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor
RU2366664C2 (ru) * 2002-12-17 2009-09-10 Мерк Патент Гмбх Гуманизированное антитело (н14.18) на основании антитела 14.18 мыши, связывающееся с gd2, и его слияние с il-2
US7553930B2 (en) 2003-01-06 2009-06-30 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7610156B2 (en) 2003-03-31 2009-10-27 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
CA2520875A1 (en) 2003-03-31 2004-10-21 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
US7642340B2 (en) 2003-03-31 2010-01-05 Xencor, Inc. PEGylated TNF-α variant proteins
US7279174B2 (en) * 2003-05-08 2007-10-09 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stent coatings comprising hydrophilic additives
WO2004101611A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-25 Affymax, Inc. Peptides that bind to the erythropoietin receptor
EP1626983B8 (en) * 2003-05-12 2010-12-22 Affymax, Inc. Novel poly (ethylene glycol) modified erythropoietin agonists and uses thereof
EP1628686A2 (en) * 2003-05-12 2006-03-01 Affymax, Inc. Spacer moiety for poly (ethylene glycol)-modified peptides
SI1629007T1 (sl) * 2003-05-12 2009-10-31 Affymax Inc Novi peptidi, ki se veĹľejo na eritropoetinski receptor
KR20060032140A (ko) * 2003-05-30 2006-04-14 센토코 인코포레이티드 트랜스글루타미나아제를 이용한 신규 에리트로포이에틴접합체의 형성
WO2005011587A2 (en) * 2003-07-30 2005-02-10 New Century Pharmaceuticls Chalaropsis lysozyme protein and its method of use in anti-bacterial applications
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
EA010650B1 (ru) * 2003-09-29 2008-10-30 Уоррен Фармасьютикалз, Инк. Защищающие ткань цитокины для лечения и профилактики сепсиса и образования спаек
EP1675871A2 (en) 2003-10-10 2006-07-05 Xencor Inc. Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders
CN1901934B (zh) * 2003-12-19 2013-09-11 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 促红细胞生成素在治疗慢性炎症性肠病中铁分布紊乱中的用途
EP1548031A1 (en) * 2003-12-22 2005-06-29 Dubai Genetics FZ-LLC Nature-identical erythropoietin
BRPI0417916A (pt) * 2003-12-31 2007-04-10 Merck Patent Gmbh proteìna de fusão de fc-eritropoietina com farmacocinética melhorada
US7608663B2 (en) * 2004-01-21 2009-10-27 Nektar Therapeutics Method of preparing propionic acid-terminated polymers
ZA200606216B (en) * 2004-02-02 2007-11-28 Ambrx Inc Modified human interferon polypeptides and their uses
EP2336192A1 (en) 2004-03-11 2011-06-22 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination
US7588745B2 (en) * 2004-04-13 2009-09-15 Si Options, Llc Silicon-containing products
US7253650B2 (en) 2004-05-25 2007-08-07 International Business Machines Corporation Increase productivity at wafer test using probe retest data analysis
CA2587382A1 (en) * 2004-11-11 2006-06-08 Affymax, Inc. Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor
WO2006062685A2 (en) * 2004-11-11 2006-06-15 Affymax, Inc. Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor
MX2007008982A (es) 2005-01-25 2007-12-06 Cell Therapeutics Inc Conjugados de proteinas biologicamente activas que tienen una vida media modificada in vivo.
EP1848461A2 (en) * 2005-02-16 2007-10-31 Nektar Therapeutics Al, Corporation Conjugates of an epo moiety and a polymer
US7919461B2 (en) 2005-06-03 2011-04-05 Affymax, Inc. Erythropoietin receptor peptide formulations and uses
US7550433B2 (en) 2005-06-03 2009-06-23 Affymax, Inc. Erythropoietin receptor peptide formulations and uses
US8324159B2 (en) * 2005-06-03 2012-12-04 Affymax, Inc. Erythropoietin receptor peptide formulations and uses
US20070072795A1 (en) * 2005-09-28 2007-03-29 Anton Haselbeck Treatment of neurodegenerative disorders
US20080096252A1 (en) * 2005-10-04 2008-04-24 Zamost Bruce L Production and purification of il-29
US8741260B2 (en) * 2005-10-07 2014-06-03 Armagen Technologies, Inc. Fusion proteins for delivery of GDNF to the CNS
US8053569B2 (en) * 2005-10-07 2011-11-08 Armagen Technologies, Inc. Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins
US8124095B2 (en) * 2005-10-07 2012-02-28 Armagen Technologies, Inc. Fusion proteins for delivery of erythropoietin to the CNS
US20080171696A1 (en) * 2005-10-21 2008-07-17 Avigenics, Inc. Pharmacodynamically enhanced therapeutic proteins
JP2009514814A (ja) * 2005-10-21 2009-04-09 シナジェバ・バイオファーマ・コーポレイション グリコール化およびグリコシル化された家禽類由来の治療用たんぱく質
US20130172274A1 (en) 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
DK1988910T3 (en) * 2006-02-28 2018-01-22 Kodiak Sciences Inc ACRYLOYLOXYETHYLPHOSPHORYLCHOLINE-CONTAINING POLYMER CONJUGATES AND PREPARATION thereof
WO2007108505A1 (ja) 2006-03-22 2007-09-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha エリスロポエチン溶液製剤
JP5723528B2 (ja) * 2006-08-04 2015-05-27 プロロング ファーマシューティカルズ エルエルシー 修飾されたエリスロポエチン
AU2007285763B2 (en) 2006-08-18 2011-12-15 Armagen Technologies, Inc. Agents for blood-brain barrier delivery
EP2120998B1 (en) 2006-11-28 2013-08-07 HanAll Biopharma Co., Ltd. Modified erythropoietin polypeptides and uses thereof for treatment
PE20130588A1 (es) * 2007-02-02 2013-05-21 Amgen Inc Hepcidina, antagonistas de la hepcidina y metodos de uso
US20090011040A1 (en) * 2007-05-02 2009-01-08 Naash Muna I Use of compacted nucleic acid nanoparticles in non-viral treatments of ocular diseases
CL2008002054A1 (es) * 2007-07-17 2009-05-29 Hoffmann La Roche Metodo para la regeneracion de una columna de cromatografia de intercambio cationico despues de la elusion de eritropoyetina monopeguilada y metodo para obtener una eritropoyetina monopeguilada, incorporando el metodo de regeneracion de la columna de intercambio cationico.
CL2008002053A1 (es) * 2007-07-17 2009-05-22 Hoffmann La Roche Metodo para la purificacion de una eritropoyetina monopeguilada (epompeg) que consiste en proporcionar una solucion que contiene eritropoyetina mono, poli y no peguilada y hacerla pasar por dos pasos de cromatografia de intercambio cationico y metodo para producir epo mpeg que incluye metodo de purificacion.
US8974791B2 (en) * 2007-07-27 2015-03-10 Armagen Technologies, Inc. Methods and compositions for increasing α-L-iduronidase activity in the CNS
US8383114B2 (en) * 2007-09-27 2013-02-26 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations
EP3381445B1 (en) 2007-11-15 2023-10-25 Amgen Inc. Aqueous formulation of antibody stablised by antioxidants for parenteral administration
US8101706B2 (en) 2008-01-11 2012-01-24 Serina Therapeutics, Inc. Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same
US8110651B2 (en) 2008-01-11 2012-02-07 Serina Therapeutics, Inc. Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same
US9175078B2 (en) 2008-01-25 2015-11-03 Amgen Inc. Ferroportin antibodies and methods of use
CN103694337B (zh) 2008-02-08 2016-03-02 Ambrx公司 经修饰瘦素多肽和其用途
TWI395593B (zh) 2008-03-06 2013-05-11 Halozyme Inc 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制
CN103381267A (zh) 2008-04-14 2013-11-06 哈洛齐梅公司 修饰的透明质酸酶及其在治疗透明质酸相关疾病和病症中的应用
ES2487846T3 (es) 2008-05-01 2014-08-25 Amgen, Inc. Anticuerpos anti-hepcindina y métodos de uso
EP2307038A4 (en) 2008-06-27 2013-03-27 Univ Duke THERAPEUTIC AGENTS COMPRISING ELASTINE-LIKE PEPTIDES
CA2737026C (en) 2008-09-26 2019-12-24 Ambrx, Inc. Modified animal erythropoietin polypeptides and their uses
WO2010056981A2 (en) 2008-11-13 2010-05-20 Massachusetts General Hospital Methods and compositions for regulating iron homeostasis by modulation bmp-6
ES2724588T3 (es) 2008-12-09 2019-09-12 Halozyme Inc Polipéptidos de PH20 soluble extendida y usos de los mismos
JP5873003B2 (ja) 2009-03-18 2016-03-01 アーメイゲン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドＡｒｍａｇｅｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ． ＩｇＧデコイ受容体融合タンパク質の血液脳関門送達のための組成物および方法
US9289699B2 (en) 2009-07-30 2016-03-22 Hoffmann-La Roche Inc. Moveable chromatography column separator
WO2011024025A1 (en) * 2009-08-28 2011-03-03 Avesthagen Limited An erythropoietin analogue and a method thereof
ES2578478T3 (es) 2009-09-17 2016-07-27 Baxalta Incorporated Coformulación estable de hialuronidasa e inmunoglobulina, y métodos de uso de la misma
MX2012003558A (es) * 2009-09-23 2012-07-03 Biogenerix Ag Procedimiento para la purificacion de eritropoyetina humana recombinante (epo), epo asi purificada y composiciones farmaceuticas que la comprenden.
HUE044865T2 (hu) 2009-10-09 2019-11-28 Armagen Inc Eljárások és készítmények a központi idegrendszerben iduronát-2-szulfatáz-aktivitás növelésére
WO2011050333A1 (en) 2009-10-23 2011-04-28 Amgen Inc. Vial adapter and system
US8765432B2 (en) 2009-12-18 2014-07-01 Oligasis, Llc Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
WO2011134979A2 (en) * 2010-04-27 2011-11-03 Scil Technology Gmbh Stable mia/cd-rap formulation
ES2545411T5 (es) 2010-06-07 2024-04-05 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármaco
CA2806058C (en) 2010-07-20 2016-09-13 Halozyme, Inc. Adverse side-effects associated with administration of anti-hyaluronan agents and methods for ameliorating or preventing the side-effects
PL2616101T3 (pl) 2010-09-14 2015-01-30 Hoffmann La Roche Sposób oczyszczania pegylowanej erytropoetyny
KR101951965B1 (ko) 2011-02-02 2019-02-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 크로마토그래피 칼럼 지지체
JP2014510045A (ja) 2011-02-08 2014-04-24 ハロザイム インコーポレイテッド ヒアルロナン分解酵素の組成物および脂質製剤ならびに良性前立腺肥大症の治療のためのその使用
MX341790B (es) 2011-03-31 2016-09-02 Amgen Inc Adaptador de viales y sistema.
AU2012245231B2 (en) 2011-04-20 2016-10-13 Amgen Inc. Autoinjector apparatus
US20130011378A1 (en) 2011-06-17 2013-01-10 Tzung-Horng Yang Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
CN103930142B (zh) 2011-10-14 2016-12-14 安姆根有限公司 注射器和装配方法
CA2853358A1 (en) 2011-10-24 2013-05-02 Halozyme, Inc. Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof
EP4338797A3 (en) 2011-12-02 2024-06-12 Armagen, Inc. Methods and compositions for increasing arylsulfatase a activity in the cns
DK2797622T3 (en) 2011-12-30 2017-01-16 Halozyme Inc PH20 polypeptide variants, formulations and uses thereof
RS57449B1 (sr) 2012-04-04 2018-09-28 Halozyme Inc Kombinovana terapija sa hijaluronidazom i taksanom koji ciljno deluje na tumor
CN102816227A (zh) * 2012-08-30 2012-12-12 深圳赛保尔生物药业有限公司 回收促红细胞生成素的方法
WO2014062856A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Halozyme, Inc. Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods
SI3081249T1 (sl) 2012-11-21 2021-03-31 Amgen Inc. Naprava za dajanje zdravila
CA2904725C (en) 2013-03-15 2022-04-12 Amgen Inc. Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system
JP6768501B2 (ja) 2013-03-15 2020-10-14 アムゲン・インコーポレーテッド 薬物カセット、自動注入機、および自動注入機システム
DK2968503T3 (en) 2013-03-15 2018-12-03 Intrinsic Lifesciences Llc ANTI-HEPCIDIN ANTIBODIES AND APPLICATIONS THEREOF
WO2014149357A1 (en) 2013-03-22 2014-09-25 Amgen Inc. Injector and method of assembly
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
SI3041513T1 (sl) 2013-09-08 2020-11-30 Kodiak Sciences Inc. Zwitterionski polimerni konjugati faktorja VIII
EP3060281B1 (en) 2013-10-24 2019-01-30 Amgen Inc. Drug delivery system with temperature-sensitive control
PL3060275T3 (pl) 2013-10-24 2019-12-31 Amgen Inc. Wstrzykiwacz i sposób montażu
WO2015119906A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
AU2015256082C1 (en) 2014-05-07 2020-09-10 Amgen Inc. Autoinjector with shock reducing elements
CN112237662B (zh) 2014-06-03 2022-10-21 安姆根有限公司 药物递送系统和使用方法
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
PL3186281T3 (pl) 2014-08-28 2019-10-31 Halozyme Inc Terapia skojarzona enzymem rozkładającym hialuronian i inhibitorem punktu kontrolnego odpowiedzi immunologicznej
NZ730186A (en) 2014-09-22 2020-04-24 Intrinsic Lifesciences Llc Humanized anti-hepcidin antibodies and uses thereof
AU2015332557B2 (en) 2014-10-14 2020-05-14 Amgen Inc. Drug injection device with visual and audio indicators
NZ730563A (en) 2014-10-14 2019-05-31 Halozyme Inc Compositions of adenosine deaminase-2 (ada2), variants thereof and methods of using same
JP6849590B2 (ja) 2014-10-17 2021-03-24 コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッドＫｏｄｉａｋ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ． ブチリルコリンエステラーゼ両性イオン性ポリマーコンジュゲート
JP6716566B2 (ja) 2014-12-19 2020-07-01 アムジエン・インコーポレーテツド 近接センサ付き薬物送達装置
ES2785311T3 (es) 2014-12-19 2020-10-06 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármacos con botón móvil o campo de interfaz de usuario
US10538589B2 (en) 2015-01-14 2020-01-21 Armagen Inc. Methods and compositions for increasing N-acetylglucosaminidase (NAGLU) activity in the CNS using a fusion antibody comprising an anti-human insulin receptor antibody and NAGLU
CA2976935C (en) 2015-02-17 2020-03-10 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
ES2905870T3 (es) 2015-02-27 2022-04-12 Amgen Inc Dispositivo de suministro de fármacos que tiene un mecanismo de protección de aguja con un umbral de resistencia ajustable al movimiento de la protección de aguja
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
WO2017100501A1 (en) 2015-12-09 2017-06-15 Amgen Inc. Auto-injector with signaling cap
CN108712911A (zh) 2015-12-30 2018-10-26 科达制药股份有限公司 抗体及其缀合物
WO2017120178A1 (en) 2016-01-06 2017-07-13 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
EP3429663B1 (en) 2016-03-15 2020-07-15 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
CN105820232B (zh) * 2016-04-08 2019-05-17 昂德生物药业有限公司 单修饰聚乙二醇重组人促红素的制备方法及其制品和应用
WO2017189089A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
WO2017192287A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
MX2018013616A (es) 2016-05-13 2019-02-21 Amgen Inc Montaje de cubierta protectora de vial.
US11238150B2 (en) 2016-05-16 2022-02-01 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
WO2017209899A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
WO2018004842A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
KR102470282B1 (ko) 2016-07-15 2022-11-24 에프. 호프만-라 로슈 아게 Ｐｅｇ화 에리트로포이에틴을 정제하기 위한 방법
US20190328965A1 (en) 2016-08-17 2019-10-31 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
EP3532127A1 (en) 2016-10-25 2019-09-04 Amgen Inc. On-body injector
AU2018210301A1 (en) 2017-01-17 2019-08-01 Amgen Inc. Injection devices and related methods of use and assembly
WO2018151890A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Amgen Inc. Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly
MX2019009755A (es) 2017-02-17 2019-10-07 Amgen Inc Mecanismo de insercion para dispositivo de suministro de farmacos.
EP3592403A1 (en) 2017-03-06 2020-01-15 Amgen Inc. Drug delivery device with activation prevention feature
IL268478B2 (en) 2017-03-07 2023-10-01 Amgen Inc Inserting a needle using super pressure
IL268386B2 (en) 2017-03-09 2023-11-01 Amgen Inc Insertion mechanism for a drug delivery device
CN110446499A (zh) 2017-03-20 2019-11-12 豪夫迈·罗氏有限公司 一种体外糖基工程化红细胞生成刺激蛋白的方法
EP4241807A3 (en) 2017-03-28 2023-10-11 Amgen Inc. Plunger rod and syringe assembly system and method
AU2018282077B2 (en) 2017-06-08 2023-11-23 Amgen Inc. Torque driven drug delivery device
AU2018280054B2 (en) 2017-06-08 2023-07-13 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
PE20200697A1 (es) 2017-06-22 2020-06-16 Catalyst Biosciences Inc Polipeptidos de serina proteasa 1 de tipo membrana modificada (mtsp-1) y metodos de uso
US11541183B2 (en) 2017-06-22 2023-01-03 Amgen Inc. Device activation impact/shock reduction
JP7475860B2 (ja) 2017-06-23 2024-04-30 アムジエン・インコーポレーテツド スイッチアセンブリにより起動されるキャップを含む電子薬物送達デバイス
ES2972207T3 (es) 2017-07-14 2024-06-11 Amgen Inc Sistema de inserción-retracción de agujas con sistema de resorte de torsión doble
MA49626A (fr) 2017-07-21 2020-05-27 Amgen Inc Élément d'étanchéité perméable aux gaz pour récipient à médicament et procédés d'assemblage
EP3658206A1 (en) 2017-07-25 2020-06-03 Amgen Inc. Drug delivery device with container access system and related method of assembly
EP4085942A1 (en) 2017-07-25 2022-11-09 Amgen Inc. Drug delivery device with gear module and related method of assembly
EP3664863A2 (en) 2017-08-09 2020-06-17 Amgen Inc. Hydraulic-pneumatic pressurized chamber drug delivery system
EP3668567A1 (en) 2017-08-18 2020-06-24 Amgen Inc. Wearable injector with sterile adhesive patch
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
WO2019070472A1 (en) 2017-10-04 2019-04-11 Amgen Inc. FLOW ADAPTER FOR MEDICATION DELIVERY DEVICE
IL272636B1 (en) 2017-10-06 2024-06-01 Amgen Inc Drug delivery device with combination assembly and related assembly method
WO2019074579A1 (en) 2017-10-09 2019-04-18 Amgen Inc. DRUG DELIVERY DEVICE COMPRISING A DRIVE ASSEMBLY AND ASSEMBLY METHOD THEREOF
EP3703778A1 (en) 2017-11-03 2020-09-09 Amgen Inc. System and approaches for sterilizing a drug delivery device
WO2019089178A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Amgen Inc. Drug delivery device with placement and flow sensing
WO2019090303A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Amgen Inc. Fill-finish assemblies and related methods
SG11202002966QA (en) 2017-11-10 2020-05-28 Amgen Inc Plungers for drug delivery devices
SG11202002772VA (en) 2017-11-16 2020-04-29 Amgen Inc Autoinjector with stall and end point detection
IL273638B1 (en) 2017-11-16 2024-06-01 Amgen Inc Door lock mechanism for drug delivery device
EP3731872B1 (en) 2017-12-29 2021-11-24 F. Hoffmann-La Roche AG Process for providing pegylated protein composition
JP7137625B2 (ja) 2017-12-29 2022-09-14 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｐｅｇ化タンパク質組成物を提供するための方法
JP7227633B2 (ja) 2017-12-29 2023-02-22 エフ． ホフマン－ラ ロシュ エージー． Ｐｅｇ化タンパク質組成物を提供するための方法
US20190351031A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Halozyme, Inc. Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
MX2021000749A (es) 2018-07-24 2021-03-29 Amgen Inc Dispositivos de suministro para administrar farmacos.
US12042645B2 (en) 2018-07-24 2024-07-23 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
WO2020023336A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
WO2020023220A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation
WO2020028009A1 (en) 2018-07-31 2020-02-06 Amgen Inc. Fluid path assembly for a drug delivery device
EP3613486B1 (de) * 2018-08-24 2020-10-07 UGA Biopharma GmbH Verfahren und anlage zur reinigung von epo und/oder einem epo-derivat
US20210346601A1 (en) 2018-09-24 2021-11-11 Amgen Inc. Interventional dosing systems and methods
CA3110371A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 Amgen Inc. Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device
EP3860685A1 (en) 2018-10-02 2021-08-11 Amgen Inc. Injection systems for drug delivery with internal force transmission
EP3860686A1 (en) 2018-10-05 2021-08-11 Amgen Inc. Drug delivery device having dose indicator
CA3109988A1 (en) 2018-10-15 2020-04-23 Amgen Inc. Platform assembly process for drug delivery device
MA53912A (fr) 2018-10-15 2022-01-19 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament comprenant un mécanisme d'amortissement
US11213620B2 (en) 2018-11-01 2022-01-04 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
CA3113076A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
US11613744B2 (en) 2018-12-28 2023-03-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use
MX2021012557A (es) 2019-04-24 2021-11-12 Amgen Inc Conjuntos y metodos de verificacion de esterilizacion de jeringuillas.
MX2022002149A (es) 2019-08-23 2022-03-17 Amgen Inc Dispositivo de suministro de farmacos con componentes de acoplamiento de capuchon de aguja configurable y metodos relacionados.
JP2022553640A (ja) 2019-10-10 2022-12-26 コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッド 眼障害を処置する方法
WO2022063082A1 (zh) 2020-09-22 2022-03-31 美国杰科实验室有限公司 一种糖基化修饰的促红细胞生成素及其应用
WO2022159414A1 (en) 2021-01-22 2022-07-28 University Of Rochester Erythropoietin for gastroinfestinal dysfunction
WO2022239704A1 (ja) 2021-05-10 2022-11-17 株式会社カイオム・バイオサイエンス 抗体組成物の精製方法
US20240208680A1 (en) 2021-05-21 2024-06-27 Amgen Inc. Method of optimizing a filling recipe for a drug container
WO2023209074A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods of restoring erythropoiesis in patients suffering from a sf3b1 mutant myelodysplastic syndrome by correcting coasy mis-splicing
WO2024094457A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for producing glycoprotein compositions
CN116492448A (zh) * 2023-04-12 2023-07-28 深圳赛保尔生物药业有限公司 负载peg-epo及间充质干细胞的组合物、药物及其制备方法

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
KR850004274A (ko) * 1983-12-13 1985-07-11 원본미기재 에리트로포이에틴의 제조방법
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
JPS6197229A (ja) 1984-10-18 1986-05-15 Chugai Pharmaceut Co Ltd 安定なエリトロポエチン製剤
US4917888A (en) 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US5641663A (en) * 1985-11-06 1997-06-24 Cangene Corporation Expression system for the secretion of bioactive human granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and other heterologous proteins from steptomyces
US4902502A (en) 1989-01-23 1990-02-20 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5166322A (en) 1989-04-21 1992-11-24 Genetics Institute Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof
US5674534A (en) * 1992-06-11 1997-10-07 Alkermes, Inc. Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin
NZ250375A (en) 1992-12-09 1995-07-26 Ortho Pharma Corp Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives
US5681811A (en) 1993-05-10 1997-10-28 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5359030A (en) * 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
ZA946122B (en) * 1993-08-17 1995-03-20 Amgen Inc Erythropoietin analogs
US5643575A (en) * 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5919455A (en) * 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5932462A (en) * 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
EP0741187A2 (en) 1995-05-05 1996-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Recombinant obese (Ob) proteins
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
US6025324A (en) * 1996-05-15 2000-02-15 Hoffmann-La Roche Inc. Pegylated obese (ob) protein compositions
TW517067B (en) * 1996-05-31 2003-01-11 Hoffmann La Roche Interferon conjugates
DE69726571T2 (de) * 1997-09-01 2004-11-04 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Rekombinantes humanes Erythropoietin mit vorteilhaftem Glykosylierungsmuster
JP2002531089A (ja) 1998-11-30 2002-09-24 イーライ・リリー・アンド・カンパニー 赤血球産生性化合物
PE20010288A1 (es) * 1999-07-02 2001-03-07 Hoffmann La Roche Derivados de eritropoyetina
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
WO2001068141A2 (en) 2000-03-17 2001-09-20 Maxygen Aps Dispersions of polypeptide conjugates
US6586398B1 (en) 2000-04-07 2003-07-01 Amgen, Inc. Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods
PT1311285E (pt) * 2000-05-15 2005-06-30 Hoffmann La Roche Composicao farmaceutica liquida contendo um derivado de eritropoietina

Also Published As

Publication number Publication date
YU40700A (sh) 2003-12-31
LU91363I9 (pl) 2018-12-31
CZ299516B6 (cs) 2008-08-20
DE60036053D1 (de) 2007-10-04
CZ20002386A3 (cs) 2002-04-17
GEP20022804B (en) 2002-09-25
FR07C0051I1 (pl) 2007-12-14
ITMI20001479A1 (it) 2001-12-30
SV2002000120A (es) 2002-01-31
GB2393960A (en) 2004-04-14
DOP2000000030A (es) 2002-07-15
ES2191511A1 (es) 2003-09-01
EP1064951B1 (en) 2007-08-22
HUP0002553A2 (en) 2001-03-28
IS5554A (is) 2001-01-02
TNSN00147A1 (fr) 2005-11-10
NL300289I1 (nl) 2007-11-01
JP2004155787A (ja) 2004-06-03
GB0016205D0 (en) 2000-08-23
EP1064951A3 (en) 2002-03-20
CY1107719T1 (el) 2010-07-28
DE60036053T2 (de) 2008-01-03
ITMI20001479A0 (it) 2000-06-30
HU226233B1 (en) 2008-07-28
NZ505454A (en) 2001-12-21
SG92717A1 (en) 2002-11-19
EA200000607A1 (ru) 2001-02-26
PA8497801A1 (es) 2001-12-14
EP1064951A2 (en) 2001-01-03
HUP0002553A3 (en) 2005-11-28
GB0400086D0 (en) 2004-02-04
IS2492B (is) 2009-02-15
DE122007000064I2 (de) 2010-03-25
EP1839676A3 (en) 2008-09-03
BG104570A (en) 2001-09-28
TWI235667B (en) 2005-07-11
IL137056A0 (en) 2001-06-14
GT200000109A (es) 2001-12-21
JP3727009B2 (ja) 2005-12-14
TR200001956A2 (tr) 2001-01-22
US6583272B1 (en) 2003-06-24
ES2289985T3 (es) 2008-02-16
SK286301B6 (en) 2008-07-07
NO20003372L (no) 2001-01-03
EA003777B1 (ru) 2003-08-28
CN1184233C (zh) 2005-01-12
FR2795734B1 (fr) 2005-09-30
ATE370748T1 (de) 2007-09-15
US20030120045A1 (en) 2003-06-26
MY128500A (en) 2007-02-28
BRPI0002276B8 (pt) 2021-05-25
NL300289I2 (nl) 2010-02-01
NO327043B1 (no) 2009-04-06
HK1033328A1 (en) 2001-08-24
BG65449B1 (bg) 2008-08-29
HRP20000436B1 (en) 2008-01-31
DE10031839A1 (de) 2001-02-01
JP2001064300A (ja) 2001-03-13
BR0002276A (pt) 2001-12-11
OA11442A (fr) 2004-04-28
GB2393960C (en) 2012-08-29
BRPI0002276B1 (pt) 2019-05-14
FR07C0051I2 (fr) 2008-05-09
NL300289I9 (nl) 2019-08-21
SK9872000A3 (en) 2002-06-04
ES2191511B1 (es) 2005-01-01
DE122007000064I1 (de) 2008-01-03
GB2353281B (en) 2004-06-09
LU91363I2 (fr) 2007-11-12
HK1068354A1 (en) 2005-04-29
CA2310536C (en) 2007-09-11
CN1283664C (zh) 2006-11-08
FR2795734A1 (fr) 2001-01-05
EP1839676A2 (en) 2007-10-03
RS49928B (sr) 2008-09-29
AU736067B2 (en) 2001-07-26
CA2310536A1 (en) 2001-01-02
AR055650A2 (es) 2007-08-29
NO2009010I2 (no) 2014-06-02
PE20010297A1 (es) 2001-03-07
KR20010049676A (ko) 2001-06-15
GB2393960B (en) 2004-08-04
GC0000197A (en) 2006-03-29
CO5190661A1 (es) 2002-08-29
CN1280137A (zh) 2001-01-17
NO20003372D0 (no) 2000-06-28
MA26746A1 (fr) 2004-12-20
MXPA00006547A (es) 2004-10-28
HU0002553D0 (en) 2000-08-28
PL341187A1 (en) 2001-01-15
UY26228A1 (es) 2000-10-31
GB2353281A (en) 2001-02-21
NO2009010I1 (no) 2009-05-25
CY2007021I1 (el) 2009-11-04
IT1318606B1 (it) 2003-08-27
CY2007021I2 (el) 2009-11-04
KR100593143B1 (ko) 2006-06-26
CN1515590A (zh) 2004-07-28
SI1064951T1 (sl) 2007-12-31
DK1064951T3 (da) 2007-10-08
AU4274400A (en) 2001-01-04
AR024625A1 (es) 2002-10-16
ID26447A (id) 2001-01-04
PT1064951E (pt) 2007-09-10
HRP20000436A2 (en) 2001-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL202758B1 (pl) Koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja zawierająca te koniugaty, środek farmaceutyczny, zastosowanie tych koniugatów i tych kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny
EP1196443B1 (en) Erythropoietin conjugates with polyethylenglycol
EP1432802B1 (en) Pegylated and diglycosylated erythropoietin
AU2002233230B2 (en) Erythropoietin conjugates
PL219131B1 (pl) Ciekła kompozycja farmaceutyczna, sposób jej wytwarzania oraz jej zastosowanie
RU2232163C2 (ru) Конъюгаты эритропоэтина и полиэтиленгликоля, фармацевтические композиции (варианты), способ профилактического и/или терапевтического лечения нарушений и способ получения коньюгата или композиции

Legal Events

Date Code Title Description
VDSO Invalidation of derivated patent or utility model

Ref document number: 383975

Country of ref document: PL