JP2016519108A - インターロイキン−１０を疾病及び疾患の治療に用いる方法 - Google Patents

インターロイキン−１０を疾病及び疾患の治療に用いる方法 Download PDF

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Abstract

ＩＬ-１０に感応する疾患若しくは異常症を有する被験体を治療する方法が、それに関係した投与及びドーズ投薬計画の方法を含んで、提供される。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年４月１８日に出願米国仮出願第６１／８１３，５６３号の優先権を主張し、この出願の全体が、参照事項として本願に併合される。
本発明は、多種多様な疾病及び疾患の治療又は予防に、ＩＬ-１０及び関連した薬剤を用いる方法に関する。
サイトカインインターロイキン-１０（ＩＬ-１０）は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）に及ぼす作用を通じて複数の免疫反応を調整する多面的サイトカインである。ＩＬ-１０は、活性化単球及び活性化マクロファージ中のＩＬ-１α、ＩＬ-１β、ＩＬ−６、ＩＬ-８、ＴＮＦ-α、ＧＭ-ＣＳＦ及びＧ-ＣＳＦの発現を抑制することによって、免疫反応を抑制することができ、また、ＮＫ細胞によるＩＦＮ-γ生成も抑制する。ＩＬ-１０がマクロファージ中に主に発現されるものの、発現は、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、マスト細胞及び単球の中にも検出されていた。免疫反応を抑制することに加えて、ＩＬ-１０は、ＩＬ−２処理胸腺細胞及びＩＬ−４処理胸腺細胞の増殖を刺激することを含む免疫刺激特性を示すことにより、Ｂ細胞の生存度を高める、ＭＨＣクラスＩＩ組織の発現を刺激する。
ヒトＩＬ-１０は、２つのモノマーサブユニット間の非共有結合的相互作用の破壊に際して生物学的に不活性になるホモダイマーである。機能性ダイマーがＩＦＮ-γに対してある種の類似点を示すことを、ＩＬ-１０の公表された結晶構造から得られるデータが示している（Ｚｄａｎｏｖ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄ）３：５９１−６０１）。
その多面発現性活性の結果として、ＩＬ-１０は、炎症状態、免疫関連疾患、線維性疾患及び癌を含む疾病、疾患及び状態の幅広い範囲に関連づけられてきた。これら多数の疾病、疾患及び状態に対するＩＬ-１０による臨床及び前臨床の評価が、その治療可能性を強固なものにしてきた。更に、ＰＥＧ化ＩＬ-１０は、特定の治療設定において、非ＰＥＧ化ＩＬ-１０よりも有効であることが示されてきた。
ＩＬ-１０関連の疾病、疾患及び状態の流行及び重大度を考慮すれば、有効性、患者寛容性等を最適化する新規なドーズレジュメ及びパラメータは、ＩＬ-１０及びＰＥＧ化ＩＬ-１０並びにそれらに関連する薬剤の治療有用性を進めることに著しく価値あるものである。
本開示は、様々な疾病、疾患及び状態、及び／又はこれらの症状を治療し及び／又は予防するために、ＩＬ-１０、改変（例えば、ＰＥＧ化）ＩＬ-１０、及びここに記載される関連した薬剤、並びにこれらの組成物を用いる方法を想定する。より詳しくは、本開示は、被験体の中に様々な疾病、疾患及び状態の治療及び／又は予防における有効性を達成し及び保持する一方で、これらに関係した副作用を最小にする、最適化されたドーズパラメータに関する。以下に詳細に記載するように、このドーズパラメータの最適化は、例えば、投与のルート及びその他の因子を考慮しつつ、吸収、分布、代謝及び排出（「ＡＤＭＥ」）に関連した薬物動態及び薬力学的パラメータの評価に関与する。ＡＤＭＥ及び他のパラメータに関連した用語は、関連のある科学分野においてそれらが通常受け取られた意味を有することが、ここにそれ以外の場合が示されない限り、意図されると理解されよう。一例として、用語「血清半減期」又は「ｔ１／２」は、除去半減期（すなわち、薬剤の血清中濃度がその初期又は最大値の半分に達した時間）のことをいう。
ここに記載される方法に従い、その疾病、疾患又は状態、及び／又は症状は、癌若しくは癌関連の疾患等の増殖性疾患又は硬変症、ＮＡＳＨ及びＮＡＦＬＤ等の線維性疾患であり得る。特定の癌に限定されるわけではないが、癌とは、結腸癌、黒色腫及び鱗状細胞癌腫に関連した腫瘍を含む固形腫瘍でもよく、又は血液疾患でもよい。
別の実施形態では、疾病、疾患又は状態は、ウィルス性疾患であり、これは、ヒト免疫不全ウィルス、Ｂ型肝炎若しくはＣ型肝炎ウィルス又はサイトメガロウィルスを含むが、これらに限定されない。さらなる実施態様では、疾病、疾患又は状態は免疫又は炎症性疾患であり、それは急性でもよく又は慢性でもよい。免疫及び炎症性疾患の例としては、炎症性大腸疾患、乾癬、慢性関節リウマチ、多発性硬化症及びアルツハイマー病が含まれる。
特定の実施形態では、疾病、疾患又は状態は、アテローム性動脈硬化を含む心血管疾患である。心血管疾患を有する被験体は、コレステロールが上昇し得る。
さらなる実施態様では、疾病、疾患又は状態は、血栓症又は血栓性状態である。
後述するように、ヒトＩＬ-１０は、ホモダイマーであり、各モノマーは１７８のアミノ酸を含み、それらの最初の１８はシグナルペプチドを含む。本開示の特定の実施形態では、シグナルペプチドが欠如した成熟ヒトＩＬ-１０ポリペプチド（例えば米国特許第６,２１７,８５７号を参照）、又は成熟ヒトＰＥＧ-ＩＬ-１０を含む。さらに特定の実施形態では、ＩＬ-１０薬剤は、成熟ヒトＩＬ-１０の変異体である。変異体が示す活性は、成熟ヒトＩＬ-１０の活性に比べて、低く、これに匹敵する、又は高くてもよく、特定の実施形態では、この活性は成熟ヒトＩＬ-１０の活性に匹敵し又はこれよりも高い。
本開示の特定の実施形態は、１つ以上の特性（例えば薬物動態パラメータ、有効性等）を高めるための、ＩＬ-１０の改変を想定する。特定の実施形態では、
たとえば、ＩＬ-１０はＰＥＧ化（グリコシル化）、アルブミン（例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ））接合及びＨＥＳ化によって改変される。さらなる実施態様では、ＩＬ-１０の改変は、免疫原性に対する治療に関連した有害な効果を生じさせず、そして、なおさらなる実施形態では、改変ＩＬ-１０は、未改変のＩＬ-１０より免疫原性が低い。用語「ＩＬ-１０」、「ＩＬ-１０ポリペプチド」、「薬剤」等は、広く解釈されるように意図され、例えば、同族体、変異体（突然変異蛋白質を含む）及びそれらのフラグメントを含む、ヒト及び非ヒトＩＬ-１０関連ポリペプチドを含み、ならびに、たとえば、リーダー配列を有しているＩＬ-１０ポリペプチド（例えば、シグナルペプチド）及び前述の改変バージョンを含む。さらに特定の実施形態では、用語「ＩＬ-１０」、「ＩＬ-１０ポリペプチド、薬剤は、作動薬である。特定の実施形態は、ＰＥＧ化ＩＬ-１０に関するものであり、これは「ＰＥＧ-ＩＬ-１０」とも呼ばれる。また、本開示は、前述のものをコードする核酸分子を想定する。
本開示の特定の実施形態は、被験体における疾病、疾患又は状態を治療又は予防する方法に関し、治療有効量のＩＬ-１０薬剤を被験体に投与することを含み、その量は、少なくとも０．１ｎｇ/ｍｌの平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成するに十分である。治療又は予防する方法は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介されてもよい。
他の実施形態は、被験体（例えば、ヒト）における疾病、疾患又は状態を治療又は予防する方法に関するものであり、
治療有効量のＩＬ-１０薬剤を被験体に投与することを含み、
その量は、ある期間にわたって平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を保持するのに十分であり、
平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度は、少なくとも０．１ｎｇ/ｍｌであり、
平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度は、当該期間の少なくとも９０％の間保持される。本開示の特定の実施形態では、平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度は、少なくとも０．２ｎｇ/ｍｌ、少なくとも０．３ｎｇ/ｍｌ、少なくとも０．４ｎｇ/ｍｌ、少なくとも０．５ｎｇ/ｍｌ、少なくとも０．６ｎｇ/ｍｌ、少なくとも０．７ｎｇ/ｍｌ、少なくとも０．８ｎｇ/ｍｌ、少なくとも０．９ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．２ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．２５ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．３ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．４ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．５ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．６ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．７ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．８ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．８５ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．９ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．９５ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．９７ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．９８ｎｇ/ｍｌ、少なくとも１．９９ｎｇ/ｍｌ、少なくとも２．０ｎｇ/ｍｌ、又は２ｎｇ/ｍｌを超える。
さらなる実施態様では、期間は、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも４８時間、少なくとも７２時間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヵ月、少なくとも６週間、少なくとも２ヵ月、少なくとも３ヵ月、又は３ヵ月を超える。
本開示の特定の実施形態では、平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度は、当該期間の少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は期間の１００％の間保持される。
所望の定常状態血清トラフ濃度（例えば、０．１ｎｇ/ｍｌ又は２ｎｇ/ｍｌ）を保持するに十分なドーズ計画により、所望の定常状態血清トラフ濃度より高い初期血清トラフ濃度が得られてもよいことが想定される。哺乳類の被験体中のＩＬ-１０の薬力学的及び薬物動態特性のため、初期トラフ濃度（例えば、１回以上の初回負荷量の投与の後一連の維持ドーズを行うことで達成される）は、ドーズパラメータ（量及び頻度）が一定に保たれる場合でも、徐々にかつ持続的に、ある期間にわたって低減する。その期間の後、この段階的かつ継続的な減少は終わり、定常状態血清トラフ濃度は保持される。
一例として、マウス（例えば、Ｃ５７ＢＬ/６マウス）へのＩＬ-１０薬剤（例えば、ミルｍＩＬ-１０）の〜０．１ｍｇ/ｋｇ/日の非経口投与（例えば、Ｓｃ及びＩＶ）が、たとえば２．０ｎｇ/ｍｌの定常状態血清トラフ濃度を保持するために必要である。しかしながら、その定常状態血清トラフ濃度は、０．１ｍｇ/ｋｇ/日のドーズの開始後（及びあらゆる初回負荷量後）の約３０日まで達成されないだろう。
それよりも、初期血清トラフ濃度が達成された後（例えば、２．５ｎｇ/ｍｌ）、その濃度は、たとえば約３０日の期間の間に、徐々にかつ持続的に低減し、その時の後、所望の定常状態血清トラフ濃度（例えば、２．０ｎｇ/ｍｌ）が保持される。当業者は、たとえばＡＤＭＥ及び患者特異的パラメータを用いて所望の定常状態トラフ濃度を保持するために必要なドーズを決定することができる。
本開示は、ＩＬ-１０薬剤が改変ＩＬ-１０薬剤を形成するための少なくとも１つの改変を含んでもよく、この改変がＩＬ-１０薬剤のアミノ酸配列を変更しない、方法を想定する。ある実施形態では、改変ＩＬ-１０薬剤は、ＰＥＧ-ＩＬ-１０薬剤である。ＰＥＧ-ＩＬ-１０薬剤は、ＩＬ-１０の少なくとも１つのサブユニットの少なくとも１つのアミノ酸残基に共有結合する少なくとも１つのＰＥＧ分子を含んでいてもよく、又は、別の実施形態では、モノＰＥＧ化及びジＰＥＧ化ＩＬ-１０の混合物を含んでいてもよい。
ＰＥＧ-ＩＬ-１０薬剤のＰＥＧ成分は、約５ｋＤａを超える、約１０ｋＤａを超える、約１５ｋＤａを超える、約２０ｋＤａを超える、約３０ｋＤａを超える、約４０ｋＤａを超える、又は約５０ｋＤａを超える分子量を有していてもよい。ある実施形態では、この分子量は、約５ｋＤａから約１０ｋＤａまで、約５ｋＤａから約１５ｋＤａまで、約５ｋＤａから約２０ｋＤａまで、約１０ｋＤａから約１５ｋＤａまで、約１０ｋＤａから約２０ｋＤａまで、約１０ｋＤａから約２５ｋＤａまで又は約１０ｋＤａから約３０ｋＤａまで、である。
ある実施形態では、改変ＩＬ-１０薬剤は、少なくとも１つのＦｃ融合体分子、少なくとも１つの血清アルブミン（例えば、ＨＳＡ又はＢＳＡ）、ＨＳＡ融合体分子又はアルブミン抱合体を含む。付加的な実施形態では、改変ＩＬ-１０薬剤はグリコシル化され、ＨＥＳ化され、又はドメインに結合する少なくとも１つのアルブミンを含む。ある改変ＩＬ-１０薬剤は、複数の種類の改変を含んでもよい。特定の実施形態では、改変は部位特異的である。ある実施形態は、リンカーを含む。改変ＩＬ-１０薬剤は、この後詳細に論述される。
また、本開示は、ここにおける教示と連携した遺伝子治療の使用を想定する。遺伝子治療の使用及び方法のために、被験体の細胞は、ＩＬ-１０関連のポリペプチドを、ここに記載されるようにインヴィヴォで、コードする核酸で変換されてもよい。代替的には、細胞は、導入遺伝子又はポリヌクレオチドでインビトロに変換された後、被験体の組織に移植されて、治療が達成されてもよい。さらに、始原細胞分離株又は株化細胞が、ＩＬ-１０関連のポリペプチドをコードする導入遺伝子又はポリヌクレオチドで変換されてもよく、その後、任意に被験体の組織に移植されてもよい。
本開示は、ＩＬ-１０薬剤が、１日に少なくとも２回、１日に少なくとも１回、４８時間に少なくとも１回、７２時間に少なくとも１回、１週間に１回少なくともで、２週間に少なくとも１回、毎月少なくとも一回、２ヵ月に少なくとも１回、又は３ヵ月に少なくとも１回、被験体に投与される方法を想定する。ある実施形態では、少なくとも１つの付加的な予防薬又は治療薬剤と共にＩＬ-１０薬剤を投与することを含み、その例は後述する。
ＩＬ-１０薬剤は、あらゆる有効なルートにより投与されてもよい。ある実施形態では、それは、皮下注射を含む非経口注入によって投与される。
本開示の特定の実施形態は、ある量（例えば治療有効量）のＩＬ-１０薬剤を含む医薬品組成物に関し、このＩＬ-１０薬剤は、１つ以上の薬理学的に許容される希釈液、キャリア又は賦形剤（例えば、等張注入液）とともに上記に記載されるそれらの薬剤を有する。医薬品組成物は、一般に、ヒト投与のために適切なものである。さらに、ある実施形態では、医薬品組成物は、少なくとも１つの付加的な予防又は治療薬剤を含む。
本開示の特定の実施形態は、上記の医薬品組成物の１つ及び任意に１つ以上の付加的な成分を含む無菌容器を想定する。一例であり、限定するものではないが、無菌容器は、注射器でもよい。なおさらなる実施態様では、無菌容器は、キットの１つの部品であり、このキットは、たとえば、少なくとも一つに予防薬剤又は治療薬剤を有する第２の無菌容器を有してもよい。
図１は、ヒト及びマウスＩＬ-１０のアミノ酸配列を表す。 図２Ａは、ＩＬ-１０の濃度を上昇させた場合のＰＢＭＣ中のＭＣＰ-１（ｐｇ/ｍＬ）の濃度を表す。１ｎｇ/ｍｌ以上の濃度で、ＩＬ-１０はＭＣＰ-１の分泌を増加させた。 図２Ｂは、ＩＬ-１０の濃度を上昇した場合における、ＬＰＳにより刺激されるＰＢＭＣ中のＭＣＰ-１（ｐｇ/ｍＬ）の濃度を表す。ＩＬ-１０はＰＢＭＣのＬＰＳ媒介活性化の阻害剤である、及び、１ｎｇ/ｍｌ及び上記の濃度のＩＬ-１０の添加はＭＣＰ-１の分泌を顕著に抑制した。
本開示をさらに説明するに当たり、この開示は、ここに記載される特定の実施形態に限定されないことが理解されるべきであり、また、ここに使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的のみに用いられていること及び制限する意図はないことが、理解されるべきである。
数値の範囲が与えられる場合は、文脈上別段の明示が無い限りその下限の単位の１０分の１まで、その範囲の上限及び下限の間に介在するそれぞれの値及びその明示された範囲内のあらゆる他の明示された値又は介在する値が、本発明内に包含されると理解される。これらのより狭い範囲の上限値および下限値は、より狭い範囲に独立して含まれてもよく、これらも本発明の範囲内に包含され、明示された範囲内で境界値を除外すると特定された場合にはそれに従う。明示された範囲が境界値の一方または両方を含む場合、含まれる境界値のいずれかまたは両方を除外する範囲も本発明に含まれる。別段に定義しない限り、本文中の全ての技術的な及び科学的な用語は、本発明が属する分野の当業者により一般に理解されると同じ意味を有する。
本願明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、前後関係が明らかに影響しない限り、複数指示物を含むものであることに注意されるべきである。請求項は、あらゆる任意の要素を除外するように立案されてもよいことにさらに注意されたい。このように、本文は、請求項の要素の記述に関連した「もっぱら」、「のみ」等といった排他的用語の使用のための、又はしての機能を果たす「否定的な」限定の使用のための、先行詞としての機能を果たすことが意図される。
ここに論述される出版物は、もっぱら、本出願の出願日前の技術開示のために与えられるものである。さらに、与えられる出版日は、実際の出版日付と異なっている場合もあり、それは独立して確かめられることが必要な場合もある。
概要
本開示は、ここに記載される薬剤及びその組成物を使用して、様々な疾病、疾患及び状態やその症状を治療すること及び／又は予防することを想定する。本開示の特定の態様では、この治療又は予防は、特定のドーズパラメータを利用することによってもたらされる。ある実施形態では、薬剤は、たとえば、炎症性及び免疫関連した疾患、線維性疾患、癌及び癌関連の疾患、又は心血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化）の治療のために最適化される血清トラフ濃度が達成されるように投与される。
本開示のある実施形態では、ＩＬ-１０薬剤（例えばＩＬ-１０ポリペプチド）によって治療可能な疾患若しくは異常症を有する、又は有するリスクがある被験体は、約０．１ｎｇ/ｍｌより高い血清トラフ濃度を達成するに十分な量でＩＬ-１０薬剤が投与され、特定の実施形態では、血清トラフ濃度は、約１ｎｇ/ｍｌより高く、別の実施形態では血清トラフ濃度は、約２ｎｇ/ｍｌより高い。
本開示のポリペプチド及び核酸分子に関連した「ヒト」へのあらゆる言及は、ポリペプチド又は核酸が得られた方法又は出所に関連していると限定する意味ではなく、天然のヒトポリペプチド又は核酸分子のシーケンスに対応し得るシーケンスに関連するのみの意味であることに留意する必要がある。ヒトポリペプチド及びそれらをコードする核酸分子に加えて、本開示は、他の種からのＩＬ-１０関連のポリペプチド及び対応する核酸分子を想定する。
定義
特に明記しない限り、以下の用語は、以下に掲げる意味を有すると意図される。他の用語は、明細書内の他の場所で定義される。
用語「患者」又は「被験体」は、ヒト又は人間以外の動物（例えば、哺乳類）のことをいうために、互換可能に用いられる。
用語「投与」、「投与する」等は、それらがたとえば被験体、細胞、組織、器官又は体液に適用される場合は、たとえば、ＩＬ-１０又はＰＥＧ-ＩＬ-１０、核酸（例えば、天然のヒトＩＬ-１０をコードする核酸）、前述のものを含む医薬品組成物、又は被験体、細胞、組織、器官又は体液への診断用薬の接触のことをいう。細胞との関連では、投与は、細胞への試薬の接触（例えば、インビトロに、又は、生体外で）ならびに流体が細胞と接触している場合での流体への試薬の接触を含む。
用語「治療する」「治療すること」、「治療」等は、被験体を苦しめる疾病、疾患又は状態の根本原因の少なくとも一つ、又は被験体を苦しめる疾病、疾患、又は状態に関連した症状の少なくとも一つを、一時的に又は永久に、排除し、低減し、抑制し、緩和し、又は改善するために、疾病、疾患又は状態又はその症状が診断され、観察され等の後に開始される処置（ＩＬ-１０又はＩＬ-１０を含む医薬品組成物を投与する等）の過程のことをいう。したがって、治療は、活性疾病を抑制する（例えば、疾病、疾患若しくは状態又はそれらに関連した臨床症状の発現若しくは更なる発現を抑える）ことを含む。この用語は、ＩＬ-１０又はＰＥＧ-ＩＬ-１０が、たとえば液相又はコロイダル相中でＩＬ-１０レセプタに接触する状況等、他の状況に対して用いられてもよい。
用語「治療が必要な」とは、ここで用いられる例では、被験体が必要とする又は治療が有益になるために医師又は他の介護者によりなされる判断のことをいう。この判断は、医師又は介護者の専門知識の領域の様々な因子に基づいてなされる。
用語「予防する」「予防すること」「予防」等は、疾病、疾患、状態等（たとえば臨床症状が無いことで決定される）を発症する被験体のリスクを一時的に又は永久に予防し、抑制し、抑止し又は低減する方法で、又は、一般に特定の疾病、疾患又は状態にかかりやすい傾向がある被験体との関連でその始まりを遅らせる方法で、（例えば、疾病、疾患、状態又はその症状の発症の前に）開始される処置（ＩＬ-１０又はＩＬ-１０を含む医薬品組成物を投与すること等）の過程のことをいう。特定の場合、これらの語は、疾病、疾患又は状態の進行を減速すること、又はそれらの有害な又はその他望ましくない状態への進行を抑制することも指す。
用語「予防が必要な」は、ここで用いられる例では、被験体が必要とする又は予防治療が有益になるために医師又は他の介護者によりなされる判断のことをいう。この判断は、医師又は介護者の専門知識の領域の様々な因子に基づいてなされる。
「治療有効量」というフレーズは、薬剤を、単独又は医薬品組成物の一部として、かつ、単一ドーズ又は一連のドーズの一部として、被験体に投与される際の疾病、疾患、又は状態のあらゆる症状、特徴又は特性に対する全ての検出可能なポジティブな効果を発揮できる量で、被験体に投与することをいう。治療有効量は、関連性のある生理作用を計測することによって確認することができ、被験体の状態のドーズレジュメ及び診断解析等に関連して調整することができる。一例として、投与後に生成される炎症性サイトカインの量の測定により、治療有効量が用いられたか否かが示され得る。
「変化をもたらす十分な量で」とのフレーズは、特定の治療の投与前（例えばベースラインレベル）と投与後とで測定される指標のレベルの間に、検出可能な差があることを意味する。指標は、あらゆる客観的なパラメータ（例えばＩＬ-１０の血清中濃度）又は主観的なパラメータ（例えば、被験体の幸福感）を有する。
用語「小分子」は、分子量が約１０ｋＤａ未満、約２ｋＤａ未満又は約１ｋＤａ未満の化合物という。小分子の非限定的な例としては、無機分子、有機分子、無機成分を含む有機分子、放射性原子を含む分子、及び合成分子が挙げられる。治療的に、小分子は大分子に比べて、細胞への透過性が高く、分解の作用を受けにくく、免疫応答を誘発する可能性が低い。
用語「リガンド」は、たとえば、レセプタの作動薬又は拮抗剤として作用し得るペプチド、ポリペプチド、膜関連又は膜結合分子、若しくはその複合体のことをいう。「リガンド」は、天然及び合成リガンド、例えば、サイトカイン、サイトカイン変異体、類似体、突然変異蛋白質等、及び抗体に由来した結合組成物を包含する。また、「リガンド」は、サイトカインのペプチド擬晶及び抗体のペプチド擬晶等の小分子を包含する。また、この用語は、作動薬でもなく拮抗剤でもないが、例えばシグナリング又は粘着性等の生物学的性質に顕著に影響することなくレセプタに結合し得る薬剤を包含する。更に、この用語は、例えば化学的方法又は組換えの方法により膜結合リガンドの可溶性バージョンに変化した膜結合リガンドを含む。リガンド又はレセプタは、その全体が細胞内に含まれてもよく、すなわち、細胞質ゾル、核又は他の細胞内コンパートメント内に存在してもよい。リガンド及びレセプタの複合体は、「リガンド-受容体複合体」と呼ばれる。
用語「阻害剤」及び「拮抗剤」は、たとえばリガンド、レセプタ、共同因子、遺伝子、細胞、組織又は器官等の活性化に対する抑制分子を、「活性化剤」及び「作動薬」はその活性化に対する活性化分子を、それぞれいう。阻害剤は、例えば、遺伝子、タンパク質、リガンド、レセプタ又は細胞に対し、低減し、ブロックし、防止し、活性化を遅らせ、不活性化し、鈍感にし、又は下方制御する分子である。活性化剤は、例えば、遺伝子、タンパク質、リガンド、レセプタ又は細胞に対して、増加させ、活性化し、容易にし、活性化を高め、感度を高め、又は上方制御する分子である。阻害剤は、構成物質の活性を低減し、ブロックし又は、不活化する分子として定義されてもよい。「作動薬」は、ターゲットと相互作用して、ターゲットの活性化の増加を引き起こし又は促進する分子である。「拮抗剤」は、作動薬の作用に対抗する分子である。拮抗剤は、作動薬の活性を防止し、低減し、抑制し又は中和し、また、拮抗剤は、特定された作動薬が無い場合においても、例えばターゲットレセプタ等のターゲットの構成要素の活性を予防し、抑制し又は低減することができる。
用語「変調する」、「変調」等は、ＩＬ-１０薬剤（又はこれらをコードする核酸分子）の機能又は活性を直接又は間接に増加又は低減する分子（例えば、活性化剤又は阻害剤）の能力、又は、分子の能力を高めてＩＬ-１０薬剤のそれに匹敵する効果を生み出す分子の能力のことをいう。用語「変調剤」は、上記に記載された活性をもたらし得る分子のことを広くいうものと意味される。一例として、例えば遺伝子、レセプタ、リガンド又は細胞の変調剤は、遺伝子、レセプタ、リガンド又は細胞の活性を改質する分子であり、その調節性の特性において、活性は活性化され、抑制され、又は変更されてもよい。変調剤は、単独で作用してもよく、又は、共同因子、例えば、タンパク質、金属イオン又は小分子等を用いてもよい。用語「変調剤」は、ＩＬ-１０に同じ作用機構を通して作用する薬剤（すなわち、それと類似の方法でＩＬ-１０として同じシグナリング経路を調節する薬剤）、及び、ＩＬ-１０のそれに匹敵する（又は超過する）生物反応を引き起こすことが可能な薬剤を含む。
変調剤の例としては、小分子化合物及び他の生物有機化学分子が挙げられる。小分子化合物の多数のライブラリ（例えば、組合せライブラリ）が、商業的に入手可能であり、変調剤を特定するための出発点としてしての機能を果たし得る。当業者は、１つ以上のアッセイ（例えば、生化学又は細胞ベースのアッセイ）を開発することができ、そこでは、この化合物ライブラリをスクリーニングして、所望の特性を有する１つ以上の化合物を特定することができ、その後、熟練した薬化学者は、たとえば類似体及びその誘導体を合成及び評価することによって、この１つ以上の化合物を最適化することができる。合成及び／又は分子モデリングの研究を、活性化剤の確認において利用することができる。
分子の「活性」は、リガンド又はレセプタへの分子の結合；触媒活性；遺伝子形質発現又は細胞シグナリング、分化又は成熟を刺激する能力;抗原性活性;他の分子の活性の変調等、を説明又は参照してもよい。用語は、細胞間相互作用（例えば、接着）の調節又は保持における活性、又は、細胞の構造体（例えば、細胞膜）の保持における活性を参照してもよい。「活性」は、比活性度を意味し得るものであり、例えば、［触媒活性］/［ｍｇタンパク質］、又は［免疫学的活性］/［ｍｇタンパク質］、生体コンパートメント中の濃度、等である。用語「増殖活性」は、例えば正常細胞分裂、ならびに癌、腫瘍、異形成、細胞形質転換、転移及び脈管形成を促進する、それらに必要な、又はそれらに具体的に関係する活性を包含する。
ここで用いられる例では、「匹敵する」、「匹敵する活性」、「〜に匹敵する活性）、「匹敵する効果」、「〜に匹敵する効果」等は、量的に及び／又は質的に考察することができる相対語である。この用語の意味は、それらが用いられる文脈にしばしば依存的である。一例として、ともにレセプタを活性化する２つの薬剤は、定性的な観点からは、匹敵する効果を有すると考察することができるが、当技術分野で受け入れられているアッセイ（例えば、投与反応アッセイ）又は当技術分野で受け入れられている動物モデルにより決定される活性について、１つの薬剤が、他の薬剤の活性の２０％のみしか達成することができない場合は、定量的な観点から匹敵する効果が欠如していると、２つの薬剤は考察されることができる。１つの結果を他の結果（例えば、参照規格に対する結果の１つ）と比較する場合、「匹敵する」とは、１つの結果が、３５％未満だけ、３０％未満だけ、２５％未満だけ、２０％未満だけ、２％未満だけ、３％未満だけ、４％未満だけ、５％未満だけ、７％未満だけ、１０％未満だけ、１５％未満だけ、又は１％未満だけ、参照規格から逸脱することを、しばしば意味する。特定の実施形態では、１つの結果が、１５％未満だけ、１０％未満だけ、又は５％未満だけ、参照規格から逸脱するなら、これは参照規格に匹敵する。一例であり、限定するものではないが、活性又は効果は、有効性、安定度、溶解性又は免疫原性を参照してもよい。
用語「応答」、たとえば、細胞、組織、器官、又は有機体の「応答」は、生化学又は生理学的挙動における変化を包含し、例えば、その変化が活性化、刺激又は治療と相関している場合、又は遺伝的プログラミング等の内部機構と相関している場合の、生体コンパートメント中の濃度、密度、接着又はマイグレーション、遺伝子形質発現の速度、又は分化の状態が挙げられる。特定の文脈では、用語「活性化」、「刺激」等は、内部機構によって、ならびに外部又は環境因子によって、調整される細胞活性化のことをいい、一方、用語「阻害」、「ダウンレギュレーション」等は、逆の効果のことをいう。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、ここに互換可能に用いられ、あらゆる長さのアミノ酸のポリマー形態のことをいい、それは遺伝子的に符号化した及び非遺伝子的に符号化したアミノ酸、化学的又は生化学的に改変又は誘導体化されたアミノ酸及び改変ポリペプチド骨格を有するポリペプチドが含まれる。この用語は、融合タンパクを含み、この非限定的な例としては、異種のアミノ酸シーケンスによる融合タンパク；異種の及び相同的リーダー配列による融合タンパク；Ｎ末端基メチオニン残基が存在又は不存在の融合タンパク；免疫学的にタグ付加したタンパク質による融合タンパク等が挙げられる。
参照が、１文字又は３文字表記に従ってアミノ酸になされることが、この開示参照を通して理解されよう。読者の便宜のために、１文字又は３文字表記のアミノ酸コードが、下記に与えられる。
Ｇ グリシン Ｇｌｙ Ｐ プロリン Ｐｒｏ
Ａ アラニン Ａｌａ Ｖ バリン Ｖａｌ
Ｌ ロイシン Ｌｅｕ I イソロイシン Ｉｌｅ
Ｍ メチオニン Ｍｅｔ Ｃ システイン Ｃｙｓ
Ｆ フェニルアラニン Ｐｈｅ Ｙ チロシン Ｔｙｒ
Ｗ トリプトファン Ｔｒｐ Ｈ ヒスチジン Ｈｉｓ
Ｋ リジン Ｌｙｓ Ｒ アルギニン Ａｒｇ
Ｑ グルタミン Ｇｌｎ Ｎ アスパラギン Ａｓｎ
Ｅ グルタミン酸 Ｇｌｕ Ｄ アスパラギン酸 Ａｓｐ
Ｓ セリン Ｓｅｒ Ｔ スレオニン Ｔｈｒ
ここで用いられる例では、用語「変異体」は、天然の変異体及び非天然の変異体を包含する。天然に存在する変異体は、同族体（アミノ酸又はヌクレオチド配列が異なるポリペプチド及び核酸、それぞれ同じ種の１つの個体から他の種まで）及び対立遺伝子の変異体（それぞれ同じ種の１つの個体から他の種までアミノ酸又はヌクレオチド配列が異なるポリペプチド及び核酸）を含む。非天然に存在する変異体は、それぞれ、シーケンスの変化が人工的に導入される（例えば、突然変異蛋白質）アミノ酸又はヌクレオチド配列の変化を含むポリペプチド及び核酸を含み、たとえばヒトの治療介入（「人の手」）により研究室レベルで変化が発生する。したがって、「突然変異蛋白質」は、組換えタンパク質に変異することを広く呼び、部位特異的又はランダムな突然変異生成を有するクローンが生成された遺伝子から又は完全に合成された遺伝子から、由来することがしばしばであることが、単一又は複数のアミノ酸置換が通常裁置される。
用語「ＤＮＡ」、「核酸」、「核酸分子」、「ポリヌクレオチド」等は、ここに互換可能に用いられ、あらゆる長さのヌクレオチドのポリマー形態であって、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチドのいずれか、又はその類似体のことをいう。ポリヌクレオチドの非限定的な例としては、直鎖及び円形の核酸、メッセンジャーＲＮＡ（メッセンジャーｍＲＮＡ）、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組換えポリヌクレオチド、ベクター、調査、プライマー等が挙げられる。
ポリペプチドの構造との関連でここに用いられる例では、「Ｎ末端」及（又は「アミノ末端」）及び「Ｃ末端」（又は「カルボキシル末端」）はポリペプチドの末端のアミノ及びカルボキシル末端のことを、それぞれいい、用語「Ｎ末端の」及び「Ｃ末端の」とは、Ｎ末端及びＣ末端に向かうポリペプチドのアミノ酸配列中の相対位置のことをそれぞれいい、それぞれ、Ｎ末端及びＣ末端で残留物を含むことができる。「Ｎ末端の直近」又は「Ｃ末端の直近」とは、第１及び第２のアミノ酸残基が共有結合して連続したアミノ酸配列を与える場合において、第２のアミノ酸残基に対する第１のアミノ酸残基の位置のことをいう。
アミノ酸シーケンス又はポリヌクレオチドシーケンスとの関連で、「由来する」（例えば、アミノ酸配列はＩＬ-１０ポリペプチドから「由来する」）とは、ポリペプチド又は核酸が、参照ポリペプチドのそれをベースとしたシーケンス又は核酸（例えば、天然に存在するＩＬ-１０ポリペプチド又はＩＬ-１０コード核酸）を有することを示すことを意味し、タンパク質又は核酸が製造される出所又は方法を限定することを意味しない。一例として、「由来する」という用語は、参照アミノ酸又はＤＮＡの塩基配列の同族体又は変異体を含む。
ポリペプチドとの関連で、用語「分離された」は、天然に存在するならば、それが自然に発生してもよい環境と異なる環境にある着目のポリペプチドのことをいう。「分離された」とは、着目のポリペプチドに対して実質的に濃縮された、及び／又は着目のポリペプチドが部分的又は実質的に精製されたサンプル中のポリペプチドを含むことを意味する。ポリペプチドが天然に存在しない場合は、「分離された」とは、ポリペプチドが、それが合成又は組換え手段で製造された環境から分離されたことを示す。
「濃縮される」とは、サンプルが非自然に（例えば、科学者によって）処理されることにより、着目のポリペプチドが、ａ）生体サンプル等（例えば、ポリペプチドが自然に発生するサンプル、又は投与の後存在するサンプル）の開始サンプル中のポリペプチドの濃度よりも高い濃度（例えば、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも８倍高い、少なくとも６４倍高い、又はそれ以上）で、又はｂ）ポリペプチドが製造された（例えば、細菌細胞の場合のように）環境より高い濃度で
で存在するようになることを意味する。
「実質的に純粋な」とは、成分（例えばポリペプチド）が、組成物の全含量の約５０％よりも高いことを指し、典型的には全ポリペプチド含量の約６０％よりも高いことを指す。より典型的には、「実質的に純粋な」とは、全組成物の少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又はそれ以上が、着目の成分である組成物のことをいう。あるケースでは、ポリペプチドは、組成物の全含量の約９０％よりも高く、又は約９５％よりも高くなる。
用語「特異的に結合する」又は「選択的に結合する」とは、リガンド/レセプタ、抗体/抗原、又はその他の結合対に用いられる場合は、タンパク質及びその他の生物学的製剤の異種個体群中にタンパク質が存在することを決定する結合反応を指す。したがって、指定された状況下では、特定のリガンドは、特定のレセプタに結合し、サンプル中に存在する他のタンパク質には大量に結合しない。抗体、又は想定された方法での抗体の抗原結合部位から誘導される結合組成物は、あらゆるその他の抗体又はそれから誘導される結合組成物による親和性よりも少なくとも２倍大きい、少なくとも１０倍より大きい、少なくとも２０倍より大きい、又は少なくとも１００倍大きい親和性で、その抗原若しくは変異体又はその突然変異蛋白質と結合する。特定の実施形態では、抗体は、Ｓｃａｔｃｈａｒｄａｎａｌｙｓｉｓ（Ｍｕｎｓｅｎ，ｅｔａｌ．１９８０Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０−２３９）での定義に従って約１０９リットル/ｍｏｌより大きい親和性を有する。
ＩＬ-１０及びＰＥＧ-ＩＬ-１０
抗炎症サイトカインＩＬ-１０は、別名ヒトサイトカイン合成阻止因子（ＣＳＩＦ）としても知られており、タイプ（クラス）−２サイトカイン、すなわちＩＬ-１９、ＩＬ-２０、ＩＬ-２２、ＩＬ-２４（Ｍｄａ-７）及びＩＬ-２６、インターフェロン（ＩＦＮ-α、-β、-γ、-δ、-ε、-κ、-Ω、及び-τ）並びにインターフェロン状分子（リミチン、ＩＬ-２８Ａ、ＩＬ-２８Ｂ及びＩＬ-２９）を含む一組のサイトカインとして分類される。
ＩＬ-１０は、免疫制御及び炎症において多面発現性効果を有するサイトカインである。それは、肥満細胞によって生成され、アレルギー反応の部位でこれらの細胞が有する刺激的な効果を打ち消す。ＩＦＮ-γ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＴＮＦα及びＧＭ-ＣＳＦ等の炎症誘発性サイトカインの合成を抑制することができる一方で、ＩＬ-１０は、特定のＴ細胞及び肥満細胞に対して刺激を与え、また、Ｂ細胞の成熟、増殖及び抗体産生を刺激する。ＩＬ-１０はＮＦ-κＢ活性を抑止することができ、ＪＡＫ-ＳＴＡＴシグナリング経路の調節に関与する。また、ＣＤ８+Ｔ細胞の細胞傷害性活性及びＢ細胞の抗体産生を誘発し、マクロファージ活性及び腫瘍促進炎症を抑制する。ＣＤ８+Ｔ細胞の調節は、ドーズ依存性であり、高用量では、より強力な細胞傷害性反応を誘発する。
ヒトＩＬ-１０は、分子量が３７ｋＤａのホモダイマーであり、各１８．５ｋＤａのモノマーは、１７８のアミノ酸を含み、そのうちの最初の１８は、シグナルペプチド及び２つの分子内ジスルフィド結合を形成する２対のシステイン残基を含む。ＩＬ-１０ダイマーは、２つのモノマーサブユニットの間の非共有結合的相互作用の破壊に際して、生物学的に不活性になる。
本開示は、８０％のホモロジーを示すヒトＩＬ-１０及びネズミＩＬ-１０及びその使用を想定する。さらに、本開示の範囲は、ＩＬ-１０相同分子種及びその改変形態を含み、これらは他の哺乳類の種からのものであり、ラット（受託ＮＰ_０３６９８６．２;ＧＩ １４８７４７３８２）;ウシ（受託ＮＰ_７７６５１３．１;ＧＩ ４１３８６７７２）;ヒツジ（受託ＮＰ_００１００９３２７．１;ＧＩ ５７１６４３４７）;イヌ（受託ＡＢＹ８６６１９．１;ＧＩ １６６２４４５９８）;及びウサギ（受託ＡＡＣ２３８３９．１;ＧＩ ３２４２８９６）を含む。
上記のように、用語「ＩＬ-１０」、「ＩＬ-１０ポリペプチド」、「ＩＬ-１０薬剤」等は、広く解釈され、例えば、同族体、変異体（突然変異蛋白質を含む）及びそのフラグメントを含むヒト及び非ヒトＩＬ-１０関連ポリペプチドならびに例えばリーダー配列（例えばシグナルペプチド）を有するＩＬ-１０ポリペプチド、及び前述の改変バージョンを含むと意図される。さらに特定の実施形態では、ＩＬ-１０、ＩＬ-１０ポリペプチド及びＩＬ-１０薬剤は、作動薬である。
ＩＬ-１０レセプタ、タイプＩＩサイトカイン受容体は、アルファ及びベータサブユニットから成り、これはそれぞれ、Ｒ１及びＲ２とも呼ばれる。受容体活性化は、アルファ及びベータの両方への結合が必要である。ＩＬ-１０ポリペプチドの１つのホモダイマーが、アルファと結合し、同じＩＬ-１０ポリペプチドの他のホモダイマーが、ベータと結合する。
組換えヒトＩＬ-１０の有用性は、たとえば血流中の腎クリアランス、タンパク質分解及びモノマー化によりその血清半減期が比較的短期であることによって、しばしば制限される。その結果、その二量体構造を阻害してその活性に悪影響を与えることなくＩＬ-１０の薬物動態プロファイルを向上させるために、様々なアプローチが研究された。ＩＬ-１０のＰＥＧ化により、特定の薬物動態パラメータ（例えば、血清半減期）の改善及び／又は活性の強化が得られる。例えば、本開示の特定の実施形態では、ＰＥＧ-ＩＬ-１０を用いた増殖疾患（例えば癌）の治療を最適化する方法が関与する。
前記のように、本開示はまた、ここにおける教示と連携した遺伝子治療の使用を想定する。遺伝子治療は、新規遺伝子を導入し、先に存在する遺伝子の付加的なコピーを導入し既存の遺伝子の機能を弱め、又は既存の非機能性遺伝子を修復する目的で、通常ベクター中にパッケージ化される遺伝形質を、被験体中の内因性の細胞に供給することによって達成される。一旦細胞の内側に入れば、核酸は、細胞内機構によって発現され、その結果、着目のタンパク質が生成される。本発明の文脈において、遺伝子治療は、治療として利用され、ここに記載される疾病、疾患又は状態の治療又は予防で使用するために、ＩＬ-１０薬剤をコードする核酸を供給する。
上記のように、遺伝子治療の使用及び方法のために、被験体の細胞は、ＩＬ-１０関連のポリペプチドを、ここに記載されるようにインヴィヴォで、コードする核酸で変換されてもよい。代替的には、細胞は、導入遺伝子又はポリヌクレオチドでインビトロに変換された後、被験体の組織に移植されて、治療が達成されてもよい。さらに、始原細胞分離株又は株化細胞が、ＩＬ-１０関連のポリペプチドをコードする導入遺伝子又はポリヌクレオチドで変換されてもよく、その後、任意に被験体の組織に移植されてもよい。
ここで用いられる例では、用語「ＰＥＧ化ＩＬ-１０」及びＰＥＧ-ＩＬ-１０は、結合が安定となるよう一般にリンカーを介してＩＬ-１０タンパク質の少なくとも１つのアミノ酸残基に共有結合で結合される、１つ以上のポリエチレングリコール分子を有するＩＬ-１０分子のことをいう。用語「モノＰＥＧ化ＩＬ-１０」及び「モノ-ＰＥＧ-ＩＬ-１０」とは、１つのポリエチレングリコール分子は、一般にリンカーを介して、ＩＬ-１０ダイマーの１つのサブユニット上の単一アミノ酸残基に共有結合することを示す。特定の実施形態では、本開示の中に用いられるＰＥＧ-ＩＬ-１０は、モノ-ＰＥＧ-ＩＬ-１０であり、これは、１〜９個のＰＥＧ分子が、ＩＬ-１０ダイマーの１つのサブユニットのＮ末端において、アミノ酸残基のアルファアミノ基にリンカーを介して共有結合する。１つのＩＬ-１０サブユニット上でモノＰＥＧ化を行うことにより、一般に、サブユニットシャフリングが生じるため、非ＰＥＧ化、モノＰＥＧ化及びジＰＥＧ化ＩＬ-１０の非均一な混合物が生成する。更に、完了に向けて進行するためにＰＥＧ化反応を可能にすれば、非特異的及びマルチＰＥＧ化ＩＬ-１０が生成し、これはその生理活性を低減する。したがって、本開示の特定の実施形態では、ここに記載される（例えば実験のセクション）方法によって生成されるモノＰＥＧ化及びジＰＥＧ化ＩＬ-１０の混合物の投与を含む。
特定の実施形態では、ＰＥＧ部分の平均分子量は、約５ｋＤａと約５０ｋＤａとの間にある。ＩＬ-１０へのＰＥＧ結合の方法又は部位は重要ではないが、特定の実施形態では、ＰＥＧ化はＩＬ-１０薬剤の活性を改質せず、又は最小限変更するだけである。特定の実施形態では、半減期の増加は、生物学的活性度のあらゆる減少より大きい。ＰＥＧ-ＩＬ-１０の生体活性は典型的には、細菌抗原（米国特許第７,０５２,６８６号に記載されるように、リポポリサッカライド（ＬＰＳ））、そしてＰＥＧ-ＩＬ-１０で処理される）を用いて検証される被験体の血清中の、炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦ-α又はＩＦＮ-γ）のレベルを評価することによって計測される。
ＩＬ-１０変異体は、様々な目的を念頭に置いて調製することができ、これは、血清半減期を上昇すること、ＩＬ-１０に対する免疫反応を低減すること、精製又は製造を容易にすること、その単一遺伝子性サブユニットへのＩＬ-１０の変換を低減すること、治療有効性を向上させること、及び治療使用の間の副作用の重大度又は発生を少なくすることが含まれる。アミノ酸配列変異体は、通常、自然界では見出されない予め定められた変異体であるが、例えばグリコシル化変異体等、翻訳後の変異体でもよい。ＩＬ-１０活性の適切なレベルを保持するという条件で、ＩＬ-１０のあらゆる変異体を用いることができる。腫瘍の文脈では、適切なＩＬ-１０活性としては、例えば、腫瘍部位へのＣＤ８＋Ｔ細胞浸入、ＩＦＮ-γ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ-１０等の炎症性サイトカイン及びこれらの浸潤状の細胞からのＲＡＮＫ−Ｌの発現、生体サンプル中のＩＦＮ-γのレベルの増加が挙げられる。
フレーズ「保存アミノ酸置換」は、タンパク質中のアミノ酸を、酸性度、塩基性、電荷、極性、又は側鎖のサイズが同程度のアミノ酸で置換することによってタンパク質の活性を保つ置換のことをいう。伝統的なアミノ酸置換は、以下のグループのアミノ酸残基の置換を一般に伴う：１）Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｖ、Ｆ;２）Ｒ、Ｋ;３）Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｗ、Ｒ;４）Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｓ;５）Ｑ、Ｎ;及び６）Ｄ、Ｅ。置換、挿入又は欠失に対する誘導は、異なる変異体タンパク質又は異なる種からのタンパク質のアミノ酸配列のアライメントに基づいてもよい。したがって、あらゆる天然に存在するＩＬ-１０ポリペプチドに加えて、本開示は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０、通常は２０以下、１０以下又は、５以下のアミノ酸置換を想定し、置換は、通常伝統的なアミノ酸置換である。
また、本開示は、成熟ＩＬ-１０から誘導される連続したアミノ酸残基を含んだ成熟ＩＬ-１０の活性フラグメント（例えば、部分列）を想定する。ペプチド又はポリペプチド部分列の連続したアミノ酸残基の長さは、そこから部分列が由来する特定の天然に存在するアミノ酸配列に応じて変化する。一般に、ペプチド及びポリペプチドは、約２０のアミノ酸から約４０のアミノ酸まで、約４０のアミノ酸から約６０のアミノ酸まで、約６０のアミノ酸から約８０のアミノ酸まで、約８０のアミノ酸から約１００のアミノ酸まで、約１００のアミノ酸から約１２０のアミノ酸まで、約１２０のアミノ酸から約１４０のアミノ酸まで、約１４０のアミノ酸から約１５０のアミノ酸まで、約１５０のアミノ酸から約１５５のアミノ酸まで、約１５５のアミノ酸から完全長のペプチド又はポリペプチドまで、であってもよい。
さらに、ＩＬ-１０ポリペプチドは、連続したアミノ酸の定義された長さ（例えば「比較ウィンドウ」）にわたって、参照配列と比較して定義された配列同一性を有することができる。比較のためのシーケンスのアライメントの方法は、当該技術分野で周知である。比較のためのシーケンスの最適なアライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）のローカルホモロジーアルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）のホモロジーアライメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４（１９８８）の類似性方法の検索により、これらのアルゴリズムのコンピュータ処理による実行(ＧＡＰ，ＢＥＳＴＦＩＴ，ＦＡＳＴＡ，ａｎｄＴＦＡＳＴＡ ｉｎ ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）により、又はマニュアルのアライメント及び外観検査（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．１９９５ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を参照）により、実行可能である。
一例として、適切なＩＬ-１０ポリペプチドは、約２０のアミノ酸から約４０のアミノ酸まで、約４０のアミノ酸から約６０のアミノ酸まで、約６０のアミノ酸から約８０のアミノ酸まで、約８０のアミノ酸から約１００のアミノ酸まで、約１００のアミノ酸から約１２０のアミノ酸まで、約１２０のアミノ酸から約１４０のアミノ酸まで、約１４０のアミノ酸から約１５０のアミノ酸まで、約１５０のアミノ酸から約１５５のアミノ酸まで、約１５５のアミノ酸から完全長のペプチド又はポリペプチドまでの連続したストレッチに対するアミノ酸配列同一性の、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％を有するアミノ酸配列を含むことができる。
さらに下記に議論されるように、ＩＬ-１０ポリペプチドは、天然出所から分離されてもよく（例えば、その天然に存在する環境以外の環境）また、組み換えにより製造されてもよく（例えば、バクテリア、イースト、ピキア属、昆虫細胞等の遺伝子的改変宿主細胞中等）、ここで、遺伝子的改変宿主細胞は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んだ核酸で改変される。ＩＬ-１０ポリペプチドは、合成により（例えば無細胞化学合成により）生成されてもよい。
ＩＬ-１０薬剤をコードする核酸分子が、本開示によって想定され、これは、それらの天然に存在する及び非天然に存在するアイソフォーム、対立遺伝子の変異体及びスプライスバリアントを含む。また、本開示は、核酸一次構造を包含し、これは、天然に存在するＤＮＡの塩基配列からの１つ以上の塩基中で変異するが、なお、遺伝コードの縮重のためにＩＬ-１０ポリペプチドに対応するアミノ酸配列に翻訳される。
ＩＬ-１０血清中濃度
ここに記載される方法におけるＩＬ-１０の血液プラズマレベルは、いくつかの方法に特徴付けることができ、それは以下を含む：（１）ある特定のレベルを上回る、又は、レベルの範囲にある平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度;（２）ある時間中に、ある特定のレベルを上回る平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度;（３）ある特定のレベルを上回る若しくは下回る、又は、レベルの範囲にある定常状態ＩＬ-１０血清中濃度レベル;又は(４)ある特定のレベルを上回る若しくは下回る、又は、レベルの範囲にある濃度プロファイルのＣｍａｘ。ここに記載されるように、平均血清トラフＩＬ-１０濃度は、特定の標識における有効性に対して特に受入れがあることが見出された。
本開示のある実施形態では、生成することができる血漿レベルの濃度プロファイルは、以下を含む：約０．１ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．１５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．２ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．２５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．３ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．３５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．４ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．４５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．５５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．６ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．６５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．７ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．７５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．８ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．８５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．９ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．９５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．０ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．１ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．２ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．３ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．４ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．６ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．７ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．８ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．９ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．０ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．１ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．２ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．３ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．４ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．７５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、又は約３．０ｎｇ/ｍｌよりも大きい平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度。
癌関連の疾病、疾患又は状態の治療又は予防に向けられる特定の実施形態では、約０．５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．５５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．６ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．６５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．７ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．７５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．８ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．８５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．９ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約０．９５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．０ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．１ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．２ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．３ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．４ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．６ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．７ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．８ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約１．９ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．０ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．１ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．２ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．３ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．４ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、約２．７５ｎｇ/ｍｌよりも大きい、又は約３．０ｎｇ/ｍｌよりも大きい平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成することにより、治療は最適化される。
本開示の特定の実施形態は、約０．１ｎｇ/ｍｌから約１．０ｎｇ/ｍｌまで、約０．１ｎｇ/ｍｌから約０．９ｎｇ/ｍｌまで、約０．１ｎｇ/ｍｌから約０．８ｎｇ/ｍｌまで、約０．１ｎｇ/ｍｌから約０．７ｎｇ/ｍｌまで、約０．１ｎｇ/ｍｌから約０．６ｎｇ/ｍｌまで、約０．１ｎｇ/ｍｌから約０．５ｎｇ/ｍｌまで、約０．２ｎｇ/ｍｌから約１．０ｎｇ/ｍｌまで、約０．２ｎｇ/ｍｌから約０．９ｎｇ/ｍｌまで、約０．２ｎｇ/ｍｌから約０．８ｎｇ/ｍｌまで、約０．２ｎｇ/ｍｌから約０．７ｎｇ/ｍｌまで、約０．２ｎｇ/ｍｌから約０．６ｎｇ/ｍｌまで、約０．２ｎｇ/ｍｌから約０．５ｎｇ/ｍｌまで、約０．３ｎｇ/ｍｌから約１．０ｎｇ/ｍｌまで、約０．３ｎｇ/ｍｌから約０．９ｎｇ/ｍｌまで、約０．３ｎｇ/ｍｌから約０．８ｎｇ/ｍｌまで、約０．３ｎｇ/ｍｌから約０．７ｎｇ/ｍｌまで、約０．３ｎｇ/ｍｌから約０．６ｎｇ/ｍｌまで、約０．３ｎｇ/ｍｌから約０．５ｎｇ/ｍｌまで、約０．３ｎｇ/ｍｌから約０．４ｎｇ/ｍｌまで、約０．４ｎｇ/ｍｌから約１．０ｎｇ/ｍｌまで、約０．４ｎｇ/ｍｌから約０．９ｎｇ/ｍｌまで、約０．４ｎｇ/ｍｌから約０．８ｎｇ/ｍｌまで、約０．４ｎｇ/ｍｌから約０．７ｎｇ/ｍｌまで、約０．４ｎｇ/ｍｌから約０．６ｎｇ/ｍｌまで、約０．４ｎｇ/ｍｌから約０．５ｎｇ/ｍｌまで、約０．５ｎｇ/ｍｌから約１．０ｎｇ/ｍｌまで、約０．５ｎｇ/ｍｌから約０．９ｎｇ/ｍｌまで、約０．５ｎｇ/ｍｌから約０．８ｎｇ/ｍｌまで、約０．５ｎｇ/ｍｌから約０．７ｎｇ/ｍｌまで、約０．５ｎｇ/ｍｌから約０．６ｎｇ/ｍｌまで、約０．７ｎｇ/ｍｌから約２．３ｎｇ/ｍｌまで、約０．８ｎｇ/ｍｌから約２．２ｎｇ/ｍｌまで、約０．９ｎｇ/ｍｌから約２．１ｎｇ/ｍｌまで、約１．０ｎｇ/ｍｌから約２．１ｎｇ/ｍｌまで、約１．０ｎｇ/ｍｌから約２．０ｎｇ/ｍｌまで、約１．０ｎｇ/ｍｌから約１．９ｎｇ/ｍｌまで、約１．０ｎｇ/ｍｌから約１．８ｎｇ/ｍｌまで、約１．０ｎｇ/ｍｌから約１．７ｎｇ/ｍｌまで、約１．０ｎｇ/ｍｌから約１．６ｎｇ/ｍｌまで、約１．０ｎｇ/ｍｌから約１．５ｎｇ/ｍｌまで、約１．９ｎｇ/ｍｌから約２．５ｎｇ/ｍｌよりも大きい値まで、約１．９ｎｇ/ｍｌから約２．５ｎｇ/ｍｌまで、約１．９ｎｇ/ｍｌから約２．４ｎｇ/ｍｌまで、約１．９ｎｇ/ｍｌから約２．３ｎｇ/ｍｌまで、約１．９ｎｇ/ｍｌから約２．２ｎｇ/ｍｌまで、又は約１．９ｎｇ/ｍｌから約２．１ｎｇ/ｍｌまでの範囲の、平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を含む。
抗炎症疾病、疾患又は状態の治療又は予防に向けられる特定の実施形態では、治療は、０．１ｎｇ/ｍｌ〜１．０ｎｇ/ｍｌの、０．１ｎｇ/ｍｌ〜０．９ｎｇ/ｍｌの、０．１ｎｇ/ｍｌ〜０．８ｎｇ/ｍｌの、０．１ｎｇ/ｍｌ〜０．７ｎｇ/ｍｌの、０．１ｎｇ/ｍｌ〜０．６ｎｇ/ｍｌの、０．１ｎｇ/ｍｌ〜０．５ｎｇ/ｍｌの、０．２ｎｇ/ｍｌ〜１．０ｎｇ/ｍｌの、０．２ｎｇ/ｍｌ〜０．９ｎｇ/ｍｌの、０．２ｎｇ/ｍｌ〜０．８ｎｇ/ｍｌの、０．２ｎｇ/ｍｌ〜０．７ｎｇ/ｍｌの、０．２ｎｇ/ｍｌ〜０．６ｎｇ/ｍｌの、０．２ｎｇ/ｍｌ〜０．５ｎｇ/ｍｌの、０．３ｎｇ/ｍｌ〜１．０ｎｇ/ｍｌの、０．３ｎｇ/ｍｌ〜０．９ｎｇ/ｍｌの、０．３ｎｇ/ｍｌ〜０．８ｎｇ/ｍｌの、０．３ｎｇ/ｍｌ〜０．７ｎｇ/ｍｌの、０．３ｎｇ/ｍｌ〜０．６ｎｇ/ｍｌの、０．３ｎｇ/ｍｌ〜０．５ｎｇ/ｍｌの、０．３ｎｇ/ｍｌ〜０．４ｎｇ/ｍｌの、０．４ｎｇ/ｍｌ〜１．０ｎｇ/ｍｌの、０．４ｎｇ/ｍｌ〜０．９ｎｇ/ｍｌの、０．４ｎｇ/ｍｌ〜０．８ｎｇ/ｍｌの、０．４ｎｇ/ｍｌ〜０．７ｎｇ/ｍｌの、０．４ｎｇ/ｍｌ〜０．６ｎｇ/ｍｌの、０．４ｎｇ/ｍｌ〜０．５ｎｇ/ｍｌの、０．５ｎｇ/ｍｌ〜１．０ｎｇ/ｍｌの、０．５ｎｇ/ｍｌ〜０．９ｎｇ/ｍｌの、０．５ｎｇ/ｍｌ〜０．８ｎｇ/ｍｌの、０．５ｎｇ/ｍｌ〜０．７ｎｇ/ｍｌの、又は０．５ｎｇ/ｍｌ〜０．６ｎｇ/ｍｌの、平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成することにより最適化される。
実験のセクションでは、ＰＤＶ６扁平上皮癌及びＣＴ-２６結腸癌腫におけるｍＩＬ-１０及びＰＥＧ-ｍＩＬ-１０の治療有効性の評価を説明し、そこでは、ｍＩＬ-１０及びＭＰＥＧ-ＩＬ-１０ドーズパラメータ（投与の量及び頻度）は、１〜２ｎｇ/ｍｌの平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成するに十分である。実験のセクションに記載されるように、ＰＥＧ-ＩＬ-１０治療は、完全寛解をもたらした一方で、ＩＬ-１０治療は、抗腫瘍機能を実証したものの、完全寛解には至らなかった。
また、Ｃ型肝炎におけるＩＬ-１０治療の効果を評価することができる。Ｃ型肝炎ウィルスによる感染の作用を受けやすい機能性免疫系によるマウスモデル（Ｄｏｒｎｅｒ， Ｍ． （０９ Ｊｕｎｅ ２０１１） Ｎａｔｕｒｅ４７４：２０８−２１１を参照）を、ｍＩＬ-１０及びＰＥＧ-ｍＩＬ-１０の薬物動態及び薬力学的効果を評価するために利用することができる。ここに記載された教示及び当業者の知識ベースを使用して、約０．１ｎｇ/ｍｌ、約０．５ｎｇ/ｍｌ、約１．０ｎｇ/ｍｌ、約１．５ｎｇ/ｍｌ及び約２ｎｇ/ｍｌの平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成するために投与されるｍＩＬ-１０及びＰＥＧ-ｍＩＬ-１０の効果を、評価することができる。
大部分の患者集団における治療ドーズにおいて優勢であるわけではないが、ＩＬ-１０の高用量の投与は、限られた数の被験体において、副作用（例えば頭痛、貧血及び肝臓に対する影響）を引き起こした。幸いにも、０．１〜２ｎｇ/ｍｌの平均ＩＬ-１０血清中濃度が治療持続時間で保持される場合は、この副作用は優勢でない。それにもかかわらず、本開示のもう一つの実施形態では、ＩＬ-１０治療を受けている被験体を監視して、副作用を予測する、即ち潜在的にそれを回避するための方法が与えられる。
この方法は、以下を含む：(１)ＩＬ-１０の被験体のピークの濃度を計測すること;(２)ＩＬ-１０の被験体のトラフ濃度を計測すること;(３)ピークのトラフの変動を計算すること;及び（４）計算されたピークのトラフ変動を使用して、被験体の中に潜在的な副作用を予測すること。ピークのトラフ変動が小さくなれば、被験体がＩＬ-１０関連の副作用を経験する可能性が低くなることを示す。特定の実施形態では、特定のピークのトラフ変動が、特定のドーズパラメータを用いて特定の疾病、疾患及び状態の治療のために決定され、それらの変動は、参照規格として用いられる。
上記に記載されるＩＬ-１０ドーズ関連のパラメータに加えて、分布の体積の考慮も関係する。大部分の薬剤に対して、血漿薬物濃度は、多指数関数的な形態で減少する。静脈内投与の直後、薬剤は、初期スペース（血漿量として最小限に画定する）全体に迅速に分配され、その後、脈管外スペース（例えば特定の組織）への低速の受動拡散型分配がなされる。静脈ＩＬ-１０投与は、そのような２-コンパートメント反応速度論モデルに関連する（Ｒａｃｈｍａｗａｔｉ，Ｈ．ｅｔａｌ．（２００４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２１（１１）：２０７２−７８を参照）。皮下組換えｈＩＬ-１０の薬動学も、検討された（Ｒａｄｗａｎｓｋｉ，Ｅ．ｅｔａｌ．（１９９８）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１５（１２）：１８９５−１９０１）。更に、特異的細胞型に対してサイトカインをターゲットにする試みにおいて、ＩＬ-１０改変が導入された（Ｒａｃｈｍａｗａｔｉ，Ｈ．（Ｍａｙ２００７）Ｄｒｕｇ Ｍｅｔ．Ｄｉｓｔ．３５（５）：８１４−２１を参照）。
更に後述されるように、マウスに観察されるＩＬ-１０及びＰＥＧ-ＩＬ-１０抗腫瘍有効性は、ＣＤ８＋Ｔ細胞中の細胞傷害性酵素の誘起から生じ、その結果、腫瘍細胞の死滅がもたらされる。
非限定的にアポトーシス誘発薬剤を含む多くの抗癌化合物が、サイクルで投与される。頻繁に、単一ドーズ又は最大耐量（ＭＴＤ）に接近するドーズ系列が投与され、単一投与又は最大耐量（ＭＴＤ）に接近する高用量のドーズ系列を行った後に続いてドーズの休止（「ドラッグホリデイ」）がなされ、患者の通常の生理学上の回復が可能になる。一例として、このドーズストラテジーは、抗ＶＥＧＦ（アバスチン）等の細胞傷害性化学療法剤抗体療法及びプロロイキン（ＩＬ−２）等の半減期の短い生物学的試薬に適用される。
マウスでの研究を行って、ＩＬ-１０治療の薬物動態パラメータを理解すること及びヒトの腫瘍治療計画を最適化することに役に立つデータを得た。実験のセクションに記載されるように、１週間に同じ量の薬剤を、１ドーズ又は複数のドーズのいずれかの投与により受けたマウスは、全部の曝露が同程度になるものの、毎日のドーズを受けたマウスは、腫瘍サイズが最も大きく低下した（表１５）。更に、約１ｎｇ/ｍｌよりも高い血清トラフ濃度を維持する治療計画（例えば、１．１〜２．１ｎｇ/ｍｌ）では、腫瘍サイズ及び重量が、最も大きく低下した（表１６）。
本開示は、約０．１ｎｇ/ｍｌによりも高い血清トラフ濃度の維持で生じるあらゆるドーズの投与を想定する（例えば、０．１〜２ｎｇ/ｍｌ、０．１〜１ｎｇ/ｍｌ、０．５〜１．５ｎｇ/ｍｌ又は１．１〜２．１ｎｇ/ｍｌ）。例えば、被験体がヒトである場合、非ＰＥＧ化ｈＩＬ-１０は、１５μｇ/ｋｇ/日よりも高い、１８μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２０μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２１μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２２μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２３μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２４μｇ/ｋｇ/日よりも高い、又は２５μｇ/ｋｇ/日よりも高いドーズで投与されてもよい。被験体がヒトである場合、比較的小さなＰＥＧ（例えば、５ｋＤａのモノジＰＥＧ-ｈＩＬ１０）を含むＰＥＧ-ｈＩＬ-１０は、２．０μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２．３μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２．５μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２．６μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２．７μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２．８μｇ/ｋｇ/日よりも高い、２．９μｇ/ｋｇ/日よりも高い、３．０μｇ/ｋｇ/日よりも高い、３．１μｇ/ｋｇ/日よりも高い、３．２μｇ/ｋｇ/日よりも高い、３．３μｇ/ｋｇ/日よりも高い、３．４μｇ/ｋｇ/日よりも高い又は３．５μｇ/ｋｇ/日よりも高いドーズで投与されてもよい。
ＩＬ-１０機能におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の役割
ＣＤ８（分化抗原群８）は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のためのコレセプタとしての機能を果たす膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ８コレセプタは主に細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の表面上で発現するが、それは他の細胞型（ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）を含む）上でも見出される。ＴＣＲのように、ＣＤ８は主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合するが、クラスＩＭＨＣタンパク質に特異的である。
ＣＤ８機能は、ＣＤ８鎖の対を含むダイマーの形成を必要とする。ＣＤ８には２つのアイソフォーム、アルファ及びベータがあり、ＣＤ８の最も共通の形態は、ＣＤ８α及びＣＤ８β鎖、免疫グロブリン超分子群の両方の部分、を含んでいる。ＣＤ８αは、クラスＩＭＨＣ分子と相互作用し、この相互作用は、細胞障害性Ｔ細胞のＴ細胞受容体とターゲット細胞とを、抗原特異的活性化の間に、密接に結合される状態に保つ。ＣＤ８表面タンパク質を有する細胞傷害性Ｔ細胞を、「ＣＤ８＋Ｔ細胞」と呼ぶ。ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＴＬ及びＮＫ細胞）は、特異的な、感染ターゲット細胞の抗原（一般に、細胞内病原菌による感染から生じる細胞表面ペプチド又はタンパク質）を認識し、それらの抗原が被験体の通常の抗原プロファイル（「免疫学的自己」）と異なるならば、ＣＤ８＋Ｔ細胞は活性化され、ターゲット細胞のアポトーシスを誘発する。
抗原プロファイルが異なるいくつかのシナリオが、存在する。例えば、病原体（例えばウィルス）が細胞に侵入すれば、細胞は「非自己」細胞表面抗原を生成し、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、感染細胞を根絶する試みにおいて、免疫応答を開始する。細胞のタンパク質の一部が、核酸やアミノ酸レベルで突然変異により改変されるという他のシナリオも、生じる。癌細胞は、多くの突然変異を一般にもたらし、ＣＤ８＋Ｔ細胞により『異なっている』と認識される。ヒト癌中のＣＤ８＋Ｔ細胞の存在は、より長い生残性と相関する。
前記のシナリオの両方ともに、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＩＦＮγ、パーフォリン及びグランザイムＢを生成する。ＩＦＮγは、ターゲット細胞の上でさらに抗原の「提示」を上方制御するために重要であり、それはクラスＩＭＨＣタンパク質上で発生する。パーフォリン及びグランザイムＢは、ターゲット細胞（例えばウィルス及び癌）の死滅を媒介する。
パーフォリンは、ＣＴＬ及びＮＫの顆粒中に見出される細胞溶解性タンパク質であり、脱顆粒においてそれ自体をターゲット細胞の形質膜に挿入する。パーフォリンは、補体成分９（Ｃ９）と構造上及び機能上で類似点を有し、そしてＣ９と同様に、パーフォリンは、膜貫通小管を生成し、様々なターゲット細胞を非特異的に溶解することができる。パーフォリンは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞媒介細胞崩壊のための重要なエフェクター分子である。
上記のように、グランザイムＢは、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞により発現されるセリンプロテアーゼである。ＣＴＬ及びＮＫ細胞は、特異的な感染したターゲット細胞個体群を認識して、細胞のアポトーシスを誘発し、これは、通常は細胞内病原菌による感染から生じるペプチド又はタンパク質である『非自己』抗原を、その表面に支持する。グランザイムＢは、細胞性免疫応答においてＣＴＬによるターゲット細胞アポトーシスの迅速誘起のために重要である。
ＩＬ-１０は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化において、多様な役割を演ずる。例えば、ＩＬ-１０は、エフェクター分子（ＩＦＮγ、パーフォリン及びグランザイムＢ）を、メモリＣＤ８＋Ｔ細胞、すなわちその前の感染又はワクチン投与中に発生した細胞、に誘発する。このメモリＣＤ８＋Ｔ細胞は、ウィルスに対する被験体の長期保護を与える原因となる細胞である。ＩＬ-１０が存在しないときは、メモリＣＤ８＋Ｔ細胞の生成及び増幅が発生し得る（Ｖｉｃａｒｉ，Ａ．ａｎｄＴｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，Ｇ．（２００４）Ｉｍｍｕｎｏ．Ｒｅｖ．２０２：２２３−２３６）が、ＩＬ-１０がこの細胞を直接活性化するという事実は、固有の及び代替的な治療アプローチを与える。慢性ウィルス感染がＣＤ８＋Ｔ細胞に関連がある（Ｖｉｒｇｉｎ， Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２００９） Ｃｅｌｌ １３８， ｐ． ３０）ものの、非ＰＥＧ化ＩＬ-１０又はＰＥＧ化ＩＬ-１０による被験体（例えば、マウス）の治療は記載されていない。
上記を考慮し、本開示の実施形態は、ＣＤ８＋Ｔ細胞と、癌及びウィルス感染の両方との間の関係に基づく。したがって、癌関連の疾病、疾患及び状態を治療及び／又は防止する特定の方法、たとえば平均ＩＬ-１０血清中濃度を、例えば、≧０．５ｎｇ/ｍｌ、≧１ｎｇ/ｍｌ、又は≧２ｎｇ/ｍｌに保持する等が、ウィルスに関連した疾病、疾患及び状態の治療においても適用されるべきである。
他のサイトカインとは対照的に、ＩＬ-１０は、有力な免疫刺激及び免疫抑制因子とみなすことができる。慢性炎症におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の役割は、これまで完全には説明されていない。しかしながら、癌及びウィルス関連疾患においては、少なくとも部分的にＣＤ８＋Ｔ細胞を通してＩＦＮγの関係が媒介されるため、また、炎症関連の疾患のコントロールに関係するＩＬ-１０−Ｔ細胞経路には（炎症性サイトカインのダウンレギュレーションを通して）、ＩＦＮγも関与しているため、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、炎症においてキーとなる役割を演じることができる。したがって、ＩＬ-１０は、消炎剤の現在の集合において、重要な治療であることが判明され得る。
ＩＬ-１０の生成の方法
本開示のポリペプチドは、非組換え（例えば化学合成）及び組換えの方法を含むあらゆる適切な方法により生成することができる。
Ａ．化学合成
ポリペプチドを化学的に合成する場合、合成は、液相又は固相を介して進行してもよい。固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、非天然アミノ酸の取込み及び／又はペプチド/タンパク質骨格鎖の改変を可能にする。９-フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）及びｔ-ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）等のＳＰＰＳの様々な形態が、本開示のポリペプチドの合成に利用可能である。化学合成の詳細は、当該技術分野で知られている（例えば、ＧａｎｅｓａｎＡ．（２００６）ＭｉｎｉＲｅｖ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６：３−１０；及び ＣａｍａｒｅｒｏＪ．Ａ．ｅｔａｌ．，（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｅｐｔ Ｌｅｔｔ．１２：７２３−８）。
固相ペプチド合成は、この後記載されるように実行されてもよい。アルファ官能基（Ｎα）及びあらゆる反応性側鎖は、酸に不安定な又は塩基不安定な官能基で保護されている。保護基は、アミド結合を結合するための状況下で安定であるが、生成したペプチド鎖を損なうことなく、容易に開裂が可能である。α-アミノ官能基のために適切な保護基の非限定的な例としては、以下が挙げられる：Ｂｏｃ、ベンジルオキシカルボニル(Ｚ)、Ｏ-クロルベンジルオキシカルボニル、二フェニルイソプロピルオキシカルボニル、第三級アミロキシカルボニル（Ａｍｏｃ）、α（α）-ジメチル-３,５-ジメトキシ-ベンジルオキシカルボニル、ｏニトロスルフェニル、２-シアノ-ｔ-ブトキシカルボニル、Ｆｍｏｃ、１−（４、４-ジメチル-２、６-ジオキソシクロヘキス-１-イリデン）エチル（Ｄｄｅ）等。
適切な側鎖保護基の非限定的な例としては：アセチル、アリル（Ａｌｌ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシカルボニル(Ｚ)、ｔ-ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、ｏ-ブロモベンジルオキシカルボニル、ｔ-ブチル（ｔＢｕ）、ｔ-ブチルジメチルシリル、２-クロロベンジル、２-クロロベンジルオキシカルボニル、２、６-ジクロロベンジル、シクロヘキシル、シクロペンチル、１−（４，４-ジメチル-２，６-ジオキソシクロヘキス-１-イリデン）エチル（Ｄｄｅ）、イソプロピル、４-メトキシ-２、３-６トリメチルベンジルスルホニル（Ｍｔｒ）、２,３,５,７,８-ペンタメチルクロマン-６-スルホニル（Ｐｍｃ）、ピバロイル、テトラヒドロピラン-２-イル、トシル（Ｔｏｓ）、２,４,６-トリメトキシベンジル、トリメチルシリル及びトリチル（Ｔｒｔ）が挙げられる。
固相合成において、Ｃ末端アミノ酸は、適切な支持物質に結合する。適切な支持物質は、段階的な縮合及び合成プロセスの開裂反応に対し、試薬及び反応条件が不活性であり、かつ、反応中に用いられている培地を溶解しないものである。市販の入手可能な支持物質の例としては、反応基及び／又はポリエチレングリコールで改変されたスチレン/ジビニルベンゼンコポリマー；クロロメチル化スチレン/ジビニルベンゼンコポリマー;ヒドロキシメチル化又はアミノメチル化されたスチレン/ジビニルベンゼンコポリマー;等、が挙げられる。ペプチド酸の製造が望まれる場合は、ポリスチレン（１％）-ジビニルベンゼン又は４-ベンジルオキシベンジルアルコールで誘導されたＴｅｎｔａＧｅｌ（登録商標）（Ｗａｎｇ−ａｎｃｈｏｒ）又は２クロロトリチルクロライドを用いることができる。ペプチドアミドの場合、ポリスチレン（１％）ジビニルベンゼン又は、５-（４'-アミノメチル）-３',５'-ジメトキシフェノキシで誘導体化したＴｅｎｔａＧｅｌ（登録商標）、吉草酸（ＰＡＬ−ａｎｃｈｏｒ）又はｐ-（２，４−-ジメトキシフェニル-アミノメチル）フェノキシ基（Ｒｉｎｋ ａｍｉｄｅ ａｎｃｈｏｒ）を用いることができる。
ポリマー担持体へのリンケージは、Ｃ末端Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸を支持物質と反応させることによって達成することができ、この反応は、室温又は高温で（例えば４０℃〜６０℃の間で）、例えば２〜７２時間の反応時間で、エタノール、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ-メチルピロリドン又は同様の溶媒中へ活性化試薬を添加することにより行われる。
Ｎα保護アミノ酸（例えばＦｍｏｃアミノ酸）のＰＡＬ、Ｗａｎｇ又はＲｉｎｋアンカーへのカップリングは、例えば、Ｎ，Ｎ’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’-ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）又はその他のカルボジイミド、２−（１Ｈ-ベンゾトリアゾル-１-イル）-１,１,３,３テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＢＴＵ）又はその他のウロニウム塩、Ｏ-アシル尿素、ベンゾトリアゾル-１-イル-トリス-ピロリジノ-ホスホニウムヘキサフルオロホスフェイト（ＰｙＢＯＰ）又はその他のホスホニウム塩、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド、その他のＮ-ヒドロキシイミド又はオキシム等のカップリング試薬を用い、１-ヒドロキシベンゾトリアゾール又は１-ヒドロキシ-７-アザベンゾトリアゾールの存在下又は不存在下で、例えばＨＯＢｔの添加によるＴＢＴＵを用いて、例えばジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、トリエチルアミン又はＮ-メチルモルホリン等の塩基、例えばジイソプロピルエチルアミンの添加の存在下または不存在下で、２〜７２時間の反応時間で、遂行される（例えば、３時間、アミノ酸及びカップリング試薬が１，５〜３倍過剰、例えば２倍過剰で、約１０℃〜５０℃の温度、例えば、２５℃で、ジメチルホルムアミド、Ｎ-メチルピロリドン又はジクロロメタン等の溶媒中、例えばジメチルホルムアミド中）。
カップリング試薬に代えて、活性エステル（例えばペンタフルオロフェニル、ｐ-ニトロフェニル等）、Ｎα-Ｆｍｏｃ-アミノ酸のシンメトリックな無水物、その酸塩化物又は酸フッ化物を、上記に記載される状況下で用いることも可能である。
Ｎα保護アミノ酸（例えば、Ｆｍｏｃアミノ酸）は、ＤＩＥＡを添加し１０〜１２０分、例えば２０分の反応時間で、ジクロロメタン中、２-クロロトリチル樹脂に結合することができるが、この溶媒及びこの塩基の使用に限定されない。
次に続く保護アミノ酸のカップリングを、ペプチド合成の従来法に従い、典型的に自動ペプチドシンセサイザで、遂行することができる。ジメチルホルムアミド中例えばピペリジン（１０％〜５０％）による処理、ＤＭＦ中５０％のピペリジンで５〜２０分、例えば、２分を２回、及び、ＤＭＦ中２０％のピペリジンで１５分を１回により、固相上の結合アミノ酸のＮα-Ｆｍｏｃ保護基を開裂した後、３〜１０倍の過剰、例えば１０倍の過剰の次の保護アミノ酸が、ジクロロメタン、ＤＭＦ、又はこれら２つの混合物等の不活性、非含水、極性溶媒中、約１０℃〜５０℃の温度、例えば２５℃で、その前のアミノ酸に結合する。ＰＡＬ、Ｗａｎｇ又はＲｉｎｋアンカーに第１のＮα-Ｆｍｏｃアミノ酸を結合させるための前述の試薬は、カップリング試薬として適切である。保護アミノ酸の活動エステル、又は、塩化物又はフッ化物又はそのシンメトリックな無水物を、選択肢として用いることもできる。
固相合成の終わりに、ペプチドが支持物質から開裂され、同時に側鎖保護基が開裂される。開裂は、トリフルオロ酢酸又はその他の強酸性媒体を用い、ジメチルスルフィド、エチルメチルスルフィド、チオアニソール、チオクレゾール、ｍ-クレゾール、アニソールエタンジチオール、フェノール又は水等、例えば、１５％Ｖ/Ｖジメチルスルフィド/エタンジチオール/ｍ-クレゾール１:１:１の、スカベンジャーを５％Ｖ/Ｖ〜２０％Ｖ/Ｖで添加し、０．５〜３時間以内例えば２時間以内で、遂行可能である。完全保護側鎖を有するペプチドは、氷酢酸/トリフルオロエタノール/ジクロロメタン２:２:６を用いて２-クロロトリチルアンカーを開裂することによって得られる。保護ペプチドは、シリカゲル上のクロマトグラフィにより、精製することが可能である。ペプチドがＷａｎｇアンカーを介して固相に結合され、かつ、Ｃ末端アルキルアミド化でペプチドを得ることが意図される場合は、開裂は、アルキルアミン又はフルオロアルキルアミンでアミノ分解によって遂行可能である。アミノ分解は、約-１０℃〜５０℃（例えば約２５℃）の温度、約１２〜２４時間（例えば約１８時間）の反応時間で、遂行される。さらに、ペプチドは、再エステル化、例えば、メタノールを用いて、担持体から開裂させることが可能である。
ペプチドを析出させ、よって、エーテル中に残存するスカベンジャー及び開裂された保護基を分離するために、得られた酸性溶液を、３〜２０倍の量の低温のエーテル又はｎ-ヘキサン、例えば１０倍過剰のジエチルエーテルと、混合してもよい。氷酢酸から数回ペプチドを再沈殿させることにより、更に精製を遂行することができる。得られた沈殿物は、水又は第三級ブタノール又はこれら２つの溶媒の混合物、例えば第三級ブタノール/水１:１の混合物中に取り込み、そして、冷凍乾燥させることができる。
得られたペプチドは、例えば、酢酸塩形態中における弱塩基性樹脂上でのイオン交換;非誘導体化ポリスチレン/ジビニルベンゼンコポリマー（例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＸＡＤ）上での疎水吸着クロマトグラフィ;シリカゲル上の吸着クロマトグラフィ;例えばカルボキシメチルセルロース上でのイオン交換クロマトグラフィ;例えばセファデックス（登録商標）Ｇ−２５上での分配クロマトグラフィ;向流分配クロマトグラフィ;又は高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、例えばオクチル又はオクタデシルシリルシリカ（ＯＤＳ）相の逆相ＨＰＬＣ等を含む、様々なクロマトグラフィの方法で精製することができる。
Ｂ．組み換え型生成
ヒト及びマウスＩＬ-１０の製造を記載する方法は、例えば、米国特許第５,２３１,０１２号に見出すことができ、これは、ＩＬ-１０活性を有するタンパク質を生成するための方法を教示し、これは組み換え及びその他の合成技術を含む。ＩＬ-１０は、ウィルス由来であってもよく、Ｅｐｓｔｅｉｎバールウィルス（ＢＣＲＦ１タンパク質）からのウィルスＩＬ-１０のクローニング及び発現は、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．， （１９９０） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４８：１２３０に開示されるＩＬ-１０は、ここに記載された標準技術等、当該技術分野で知られている標準技術を用いた多数で得ることができる。組換えヒトＩＬ-１０は、例えば、米国ニュージャージ州ロッキーヒルのペプロテック社からも商業的に入手可能である。
ポリペプチドが組み換え型技術を用いて生成される場合は、ポリペプチドは、あらゆる適切な構築体及びあらゆる適切な宿主細胞を用いて、細胞内タンパク質として又は分泌されたタンパク質として生成されてもよく、この宿主細胞は、それぞれ細菌性細胞（例えば大腸菌）等の原核生物の又はイースト宿主細胞等の真核生物の細胞であってもよい。宿主細胞として用いることができる真核生物の細胞のその他の例には、昆虫細胞、哺乳動物細胞や植物細胞が含まれる。哺乳類の宿主細胞が用いられる場合、それらは、ヒト細胞（例えば、ＨｅＬａ、２９３、Ｈ９及びＪｕｒｋａｔ細胞）;マウス細胞（例えば、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｌ細胞及びＣ１２７細胞）;霊長類細胞（例えば、Ｃｏｓ １、Ｃｏｓ ７及びＣＶ１）;及びハムスター細胞（例えば、Ｃｈｉｎｅｓｅハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）を含んでもよい。
ポリペプチドの発現のために適切な様々な宿主ベクトル系が、当該技術分野で知られる標準手続きに従って用いられてもよい。Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，１９８９ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ、及び Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．１９９５ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄｓ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓを参照。宿主細胞への遺伝形質の導入のための方法としては、例えば、形質転換、エレクトロポレーション、接合、カルシウムリン酸塩法等が挙げられる。移動のための方法は、導入されたポリペプチド-コード化核酸の安定性発現を与えるように選択することができる。ポリペプチドエンコード核酸は、遺伝可能なエピソームの要素（例えば、プラスミド）として与えられることができ、又はゲノム的に統合されることができる。着目のポリペプチドの生成に用いられる様々な適切なベクターが、商業的に入手可能である。
ベクターは、宿主細胞宿主細胞中の染色体外維持を与えることができ、又は宿主細胞ゲノムへの統合化を与えることができる。発現ベクターは、転写及び翻訳制御配列を与え、また、コード領域が、転写開始領域並び転写及び翻訳終端領域の転写調節下で操作可能に結合される場合に、誘導可能な又は構成要素の発現を与えてもよい。一般に、転写及び翻訳制御配列の非限定的な例としては、プロモータ配列、リボゾーム結合部位、転写開始及び停止シーケンス、翻訳開始及び停止シーケンス及びエンハンサー又は活性化剤シーケンスを含み得る。プロモータは構成要素でありえる又は誘導可能であってもよく、強力な構成要素のプロモータ（例えば、Ｔ７）であってもよい。
発現構築体は、プロモータ配列の近くに位置する好都合な制限部位を一般に有することにより、着目のタンパク質をコードする核酸一次構造の挿入を実現する。発現ホスト中に効力を発生する選択可能なマーカーが存在して、ベクターを含む細胞の選択を容易にしてもよい。更に、発現構築体は、付加的な要素を含んでもよい。例えば、発現ベクターは、１、２の複製系を有してもよく、したがって、有機体中に保持されること、例えば、哺乳類の又は昆虫細胞中に発現のために、そして原核生物のホスト中にクローニング及び増幅のために保持されることが可能になる。さらに、発現構築体は、変換された宿主細胞の選択を可能にするために、選択可能なマーカー遺伝子を有してもよい。選択可能な遺伝子は当該技術分野で周知であり、宿主細胞を用いて変異することになる。
タンパク質の分離及び精製は、当該技術分野で知られている方法に従って達成可能である。例えば、タンパク質は、構成的におよび／または誘起によりタンパク質を発現する遺伝子的改変細胞の溶菌液から、又は免疫親和性精製による合成反応混合物から、分離可能であり、この免疫親和性精製は、抗タンパク質抗体にサンプルを接触させることと、洗浄して非特異的に結合した材料を取り除くことと、特異的に結合したタンパク質を溶出させることとが、一般に関与する。分離されたタンパク質は、タンパク質精製の中に通常に用いられる、透析及びその他の方法によってさらに精製することができる。一実施形態では、タンパク質は、金属キレートクロマトグラフィ方法を用いて分離されてもよい。タンパク質は、分離を容易にするために、改変されてもよい。
ポリペプチドは、実質的に純粋な又は分離された形態（例えば、その他のポリペプチドを含まない）で調製されてもよい。ポリペプチドは、存在し得るその他の成分（例えば、その他のポリペプチド又はその他の宿主細胞成分）と比べてポリペプチドが濃縮された組成物中に存在することができる。例えば、ポリペプチドがその他の発現タンパク質を実質的に含まない、例えば、約９０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満、又は約１％未満で存在する組成物中に、精製ポリペプチドが与えられてもよい
ＩＬ-１０ポリペプチドは、組み換え型技術を用いて、当該技術分野で知られる異なるＩＬ-１０関連の核酸を処理し、ＩＬ-１０ポリペプチドをコードすることができる構築体を与えることにより、発生させてもよい。特定のアミノ酸配列が与えられれば、当業者は、例えば分子生物学のバックグラウンド及び経験に鑑みて、このアミノ酸配列をコードする様々な異なる核酸分子を認識することが理解されよう。
アミド結合置換
ある場合では、ＩＬ-１０は、ペプチド結合以外の１つ以上のリンケージを含み、例えば、少なくとも２つの隣接したアミノ酸が、アミド結合以外のリンケージを介して結合される。望ましくないタンパク質分解又はその他の分解の手段を低減する又は排除するため、及び／又は血清安定性を増加させるため、及び／又は立体配位の柔軟性を制限する又は増加させるため、ＩＬ-１０の骨格鎖中の１つ以上のアミド結合を置換することができる。
他の例では、ＩＬ-１０中の１つ以上のアミドリンケージ（-ＣＯ-ＮＨ-）が、アミドリンケージの等量式であるリンケージで置換されてもよく、これは例えば、-ＣＨ２ＮＨ-、-ＣＨ２Ｓ-、-ＣＨ２ＣＨ２-、-ＣＨ=ＣＨ（シス及びトランス）、-ＣＯＣＨ２-、-ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２-又は-ＣＨ２ＳＯ-等が挙げられる。例えば、ＩＬ-１０中の１つ以上のアミドリンケージを、減等量式擬似ペプチド結合で置換することもできる。Ｃｏｕｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．４１：１８１−１８４を参照されたい。この置換及びこれらをもたらす方法は、当業者に知られている。
アミノ酸置換
１つ以上のアミノ酸置換を、ＩＬ-１０ポリペプチド中に行うことができる。以下は、非限定的な例である：
ａ）アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、ノルロイシン、(Ｓ)-２-アミノ酪酸、(Ｓ)-シクロヘキシルアラニン又は分枝、環状及び直鎖のアルキル、アルケニル又はアルキニル置換を含むＣ１-Ｃ１０炭素からなる脂肪族側鎖によって置換されるその他の単純なαアミノ酸を含むアルキル置換疎水性アミノ酸の置換;
ｂ）フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、スルホチロシン、ビフェニルアラニン、１-ナフチルアラニン、２-ナフチルアラニン、２-ベンゾチエニルアラニン、３-ベンゾチエニルアラニン、ヒスチジン、上記に列挙した芳香族アミノ酸のアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アザ、ハロゲン化（フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨウ化）又はアルコキシ（Ｃ１から〜Ｃ４）の置換形態を含む芳香族置換疎水性アミノ酸の置換、このうち、前記置換形態の例示的な例は以下の通りである：２−３−又は４-アミノフェニルアラニン、２-クロロフェニル、３-クロロフェニル又は４-クロロフェニルアラニン、２−３−又は４-メチルフェニルアラニン、２−３−又は４-メトキシフェニルアラニン、５-アミノ、−５-クロロ、５-メチル、又は、５メトキシトリプトファン、２’−３'−または、４'−アミノ―２’−３'−または、４'-クロロ−２、３又は４-ビフェニルアラニン２’−３'−または、４'-メチル−２−３−又は４-ビフェニルアラニン及び２-ピリジル又は３-ピリジルアラニン;
ｃ）アルギニン、リジン、ヒスチジン、オルニチン、２、３-ジアミノプロピオン酸、アルキル、アルケニル又はその前のアミノ酸のアリール置換（Ｃ１-Ｃ１０分枝、直鎖又は、環状）誘導体、を含むホモアルギニンを含む、塩基性側鎖を含むアミノ酸の置換であって、置換基は、ヘテロ原子（例えばアルファ窒素又は遠位窒素又は窒素類）上にあるか、又は例えばプロＲ位置等のアルファ炭素上にあるか否かで決まる。例示的な例としてしての機能を果たす化合物であって、Ｎ-イプシロン-イソプロピル-リジン、３−（４-テトラヒドロピリジル）-グリシン、３−（４-テトラヒドロピリジル）-アラニン、Ｎ,Ｎ-ガンマ，ガンマ’-ジエチル-ホモアルギニンを含む。また、これに含まれるものには、アルファ-メチル-アルギニン、アルファ-メチル-２，３-ジアミノプロピオン酸、アルファ-メチルヒスチジン、アルキル基がアルファ炭素のプロ−Ｒ位置を占めるアルファ-メチルオルニチンも挙げられる。また、アルキル、芳香族、複素環式芳香族（複素環式芳香族基が単独で又は組合せで１つ以上の窒素、酸素又は硫黄原子を有する）、カルボン酸又は酸塩化物（活性エステル、活性アザリド及び関連した誘導体）及びリジン、オルニチン又は２、３-ジアミノプロピオン酸等多くの周知の活性化誘導体のいずれか、から形成されるアミドが、これらに含まれる。
ｄ）アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモグルタミン酸、チロシン、アルキル、アリール、アリールアルキル、並びに２、４−-ジアミノプロピオン酸、オルニチン又はリジンのヘテロアリールスルホンアミド及びテトラゾール置換アルキルアミノ酸を含む酸性アミノ酸の置換。
ｅ）アスパラギン、グルタミン、及びアスパラギン又はグルタミンのアルキル又は芳香族置換誘導体を含む側鎖アミド残留物の置換。及び
ｆ）セリン、スレオニン、ホモセリン、２、３-ジアミノプロピオン酸、及びセリン又はスレオニンのアルキル又は芳香族置換誘導体を含むヒドロキシル含有アミノ酸の置換。
ある場合、ＩＬ-１０は、１つ以上の天然に存在する非遺伝子的にコードされたＬアミノ酸、合成Ｌアミノ酸又はアミノ酸のＤ-エナンチオマーを含む。例えば、ＩＬ-１０はＤ-アミノ酸のみを含むことができる。例えば、ＩＬ-１０ポリペプチドは、以下の残留物の１つ以上を含むことができる：ヒドロキシプロリン、β-アラニン、ｏ-アミノ安息香酸、ｍ-アミノ安息香酸、ｐ-アミノ安息香酸、ｍ-アミノメチル安息香酸、２、３-ジアミノプロピオン酸、α-アミノイソ酪酸、Ｎ-メチルグリシン（サルコシン）、オルニチン、シトルリン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎメチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン３-ベンゾチエニルアラニン、４-クロロフェニルアラニン、２-フルオロフェニルアラニン、３-フルオロフェニルアラニン、４-フルオロフェニルアラニン、ペニシラミン、１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-カルボン酸、β-２-チエニルアラニン、メチオニンスルホキシド、ホモアルギニン、Ｎ-アセチルリジン、２、４−-ジアミノ酪酸、ロー-アミノフェニルアラニン、Ｎ-メチルバリン、ホモシステイン、ホモセリン、ε-アミノヘキサン酸、ω-アミノヘキサン酸、ω-アミノヘプタン酸、ω-アミノオクタン酸、ω-アミノデカン酸、ω-アミノテトラデカン酸、シクロヘキシルアラニン、α、γ-ジアミノ酪酸、α、β-ジアミノプロピオン酸、δ-アミノ吉草酸及び２、３-ジアミノ酪酸。
付加的な改変
システイン残基又はシステイン類似体を、ＩＬ-１０ポリペプチドに導入して、ジスルフィド結合を介して他のペプチドにリンケージを与えること、又は、ＩＬ-１０ポリペプチドの環化を与えることが、可能である。システイン又はシステイン類似体を導入する方法は、当該技術分野で知られている;例えば、米国特許第８,０６７,５３２号を参照されたい。
ＩＬ-１０ポリペプチドは、環化が可能である。１つ以上のシステイン又はシステイン類似体をＩＬ-１０ポリペプチドに導入することができ、導入されたシステイン又はシステイン類似体は、２番目に導入されたシステイン又はシステイン類似体とジスルフィド結合を形成することができる。環化のその他の手段としては、オキシムリンカー又はランチオニンリンカーの導入が挙げられる。例えば、米国特許第８,０４４,１７５号を参照されたい。環化結合を形成することができるアミノ酸（または、非アミノ酸部分）のあらゆる組合せを、利用及び／又は導入することができる。環化結合は、架橋の導入を可能にする官能基を有するアミノ酸のあらゆる組合せ（又はアミノ酸及び−（ＣＨ２）ｎ-ＣＯ-又は−（ＣＨ２）ｎ-Ｃ６Ｈ４-ＣＯ-）を用いて生成可能である。その例としては、ジスルフィド、−（ＣＨ２）ｎ−カルバ架橋、チオアセタール、チオエーテル架橋（シスタチオニン又はランチオニン）等のジスルフィド擬晶、及びエステル及びエーテルを含む架橋が挙げられる。これらの例では、ｎはあらゆる整数であってもよいが、しばしば１０未満である。
その他の改変は、例えば、Ｎ-アルキル（または、アリール）置換（ψ［ＣＯＮＲ］）又はラクタム及びその他の環状構造を造るために架橋する骨格鎖を含む。その他の誘導体は、Ｃ末端ヒドロキシメチル誘導体、ｏ改変誘導体（例えば、Ｃ末端ヒドロキシメチルベンジルエーテル）、アルキルアミド及びヒドラジド等の置換アミドを含むＮ末端改変誘導体を含む。
ある場合、ＩＬ-１０ポリペプチド中の１つ以上のＬ-アミノ酸が、１つ以上のＤ-アミノ酸で置換される。
ある場合、ＩＬ-１０ポリペプチドは、レトロインベルソ類似体である（Ｓｅｌａ ａｎｄ Ｚｉｓｍａｎ（１９９７）ＦＡＳＥＢＪ．１１：４４９を参照）。レトロインベルソペプチド類似体は、アミノ酸配列の方向が逆であり（レトロ）、かつ、その中の１つ以上のアミノ酸のキラリティー（Ｄ-又はＬ-）が逆である（インベルソ）、直鎖ポリペプチドの異性体であり、例えばＬアミノ酸よりもむしろＤ-アミノ酸を使用する。［Ｊａｍｅｓｏｎ ｅｔａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ３６８：７４４；及び Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ３６８：６９２を参照］。
ＩＬ-１０ポリペプチドは、「タンパク質形質導入ドメイン」（ＰＴＤ）を含むことができ、これはポリペプチド、ポリヌクレオチド、炭水化物、又は脂質二重層、ミセル、細胞膜、オルガネラ膜又は小胞膜を横断することを容易にする有機又は無機分子を参照する。ＰＴＤは他の分子と結合されて、分子が膜を横断すること、例えば、細胞外スペースから細胞内スペースへ行くこと、又は細胞質ゾルがオルガネラの中へ行くことを容易にする。ある実施形態では、ＰＴＤは、ＩＬ-１０ポリペプチドのアミノ末端に共有結合され、別の実施形態では、ＰＴＤは、ＩＬ-１０ポリペプチドのカルボキシル末端に共有結合される。典型的なタンパク質形質導入ドメインの非限定的な例としては、最低のウンデカペプチドタンパク質形質導入ドメイン（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲを含むＨＩＶ-１ＴＡＴの残留物４７-５７に対応する;ＳＥＱＩＤＮＯ：//）；細胞内への導入を導くに十分多数のアルギニン残基を含むポリアルギニンシーケンス（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１０〜５０個のアルギニン）;ＶＰ２２ドメイン（Ｚｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅ Ｔｈｅｒ．９（６）：４８９−９６）；ショウジョウバエアンテナペディアタンパク質形質導入ドメイン（Ｎｏｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ５２（７）：１７３２−１７３７）；短縮したヒトカルシトニンペプチド（Ｔｒｅｈｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ２１：１２４８−１２５６）；ポリリジン（Ｗｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９７：１３００３−１３００８）；ＲＲＱＲＲＴＳＫＬＭＫＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：/）;Ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎ ＧＷＴＬＮＳＡＧＹＬＬＧＫＩＮＬＫＡＬＡＡＬＡＫＫＩＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：/）;ＫＡＬＡＷＥＡＫＬＡＫＡＬＡＫＡＬＡＫＨＬＡＫＡＬＡＫＡＬＫＣＥＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：/）;及びＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：/）。典型的なＰＴＤの非限定的な例としては、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：/）、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：/）;３個のアルギニン残基〜５０個のアルギニン残基のアルギニンホモポリマー;典型的なＰＴＤドメインアミノ酸配列、その非限定的な例としては以下のいずれか：ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：//）;ＲＫＫＲＲＱＲＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：//）;ＹＡＲＡＡＡＲＱＡＲＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：//）;ＴＨＲＬＰＲＲＲＲＲＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：//）;及びＧＧＲＲＡＲＲＲＲＲＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：//）。
ＩＬ-１０ポリペプチドのＣ末端のアミノ酸のカルボキシル基ＣＯＲ３は、遊離型（Ｒ３=ＯＨ）の形態、又は、例えばナトリウム、カリウム又はカルシウム塩等の生理的に認容されたアルカリ性又はアルカリ土類塩の形態で、存在することができる。また、カルボキシル基は、例えばメタノール、分枝又は非分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキルアルコール、例えばエチルアルコール又は第三級ブタノール等の、第一級、第二級又は第三級アルコールと、エステル化が可能である。また、カルボキシル基は、アンモニア、分枝又は非分枝Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミン又は例えばメチルアミン又はジメチルアミン等のＣ１-Ｃ６ジ-アルキルアミン等の第一級又は第二級アミンと、アミド化が可能である。
ＩＬ-１０ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸ＮＲ１Ｒ２のアミノ基は、遊離型（Ｒ１=Ｈ及びＲ２=Ｈ）の形態で、又は例えば塩化物又は酢酸塩等の生理的に認容された塩の形態で、存在することができる。また、アミノ基は、Ｒ１=Ｈ及びＲ２=アセチル、トリフルオロアセチル又はアダマンチルとなるよう、酸でアセチル化が可能である。アミノ基は、上記されるアミノ保護基等（例えば、Ｆｍｏｃ、ベンジルオキシカルボニル(Ｚ)、Ｂｏｃ及びＡｌｌｏｃ）、ペプチド化学において従来から用いられているアミノ保護基による保護の形態で存在することができる。アミノ基は、Ｎ-アルキル化が可能であり、その際、Ｒ１及び／又はＲ２は、=Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ２〜Ｃ８アルケニル又はＣ７〜Ｃ９アラルキルである。アルキル残留物は直鎖、分枝又は環状（例えばそれぞれ、エチル、イソプロピル及びシクロヘキシル）であってもよい。
ＩＬ-１０機能の強化及び／又は模倣のための特定の改変
ここに開示される治療方法（例えばＩＬ-１０）の１つ以上の物性及び／又はそれらが投与される方法を向上させることは、しばしば有益であり、そして、ときには不可避である。物性の改善は、例えば、免疫原性を調節すること；水溶性、生体有用性、血清半減期及び／又は治療半減期を上昇する方法;及び／又は生物学的活性度を調節することを含む。特定の改変は、例えば、検出アッセイ（例えばエピトープタグ）に用いられる抗体の増加、及び、タンパク質精製の容易性を与えることに対して、有用になり得る。この改善は一般に、治療方法の生理活性に不利に影響を与えることなく及び／又はその免疫原性を上昇させることなく、与えられなければならない。
ＩＬ-１０のＰＥＧ化は、本開示によって想定される１つの特別な改変であり、その他の改変の非限定的な例としては、グリコシル化（Ｎ−及びＯ−リンク）;ポリシアリル化;血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ｃｙｎｏ血清アルブミン又はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））を含むアルブミン融合体分子;例えば複合脂肪酸鎖と結合したアルブミン（アシル化）;及びＦｃ-融合体タンパク質が挙げられる。
ＰＥＧ化：タンパク質治療学の臨床効果は、プラズマ半減期が短期である点及びプロテアーゼ分解への敏感性の点により、しばしば制限される。この困難性は、ポリペプチドシーケンスを、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール又はポリオキシアルキレン等の様々な非タンパクポリマーのいずれかに接合又は結合させることを含む、様々な改変で克服することができることが、様々な治療タンパク質（例えばフィルグラスチム）の研究において示された。これは、例えばＰＥＧ等のタンパク質及び非タンパクポリマーに共有結合される結鎖部分によって、しばしばもたらされる。このＰＥＧ複合生体分子は、より良好な物理及び熱安定性、酵素的分解への敏感性に対する保護、高い溶解性、長い生体内の循環半減期及び低いクリアランス、低い免疫原性及び抗原性、並びに、低い毒性、を含む、臨床的に有用な特性を有することが示された。
ＰＥＧ化の薬物動態パラメータに対する有益な効果に加えて、ＰＥＧ化自体は、活性を強化することもできる。例えば、ＰＥＧ-ＩＬ-１０は、特定の癌に対して非ＰＥＧ化ＩＬ-１０より有効であることが示された（例えば、欧州特許ＥＰ２０６６３６Ａ２を参照）。
ポリペプチドシーケンスへの接合に適切なＰＥＧは一般に、室温で水に可溶であり、そして、一般式Ｒ（Ｏ-ＣＨ２-ＣＨ２）ｎＯ−Ｒを有し、式中、Ｒは水素又はアルキル又はアルカノール基等の保護基であり、ｎは１〜１０００の整数である。Ｒが保護基である場合は、１〜８個の炭素を一般に有する。ポリペプチドシーケンスに接合されるＰＥＧは、直鎖又は分枝であってもよい。分枝のＰＥＧ誘導体、「スターＰＥＧ」及び多数枝のＰＥＧが、本開示に想定される。本開示の中に用いられるＰＥＧの分子量は、いかなる特別な範囲にも限定されず、その例はここのあらゆる場所に記載される;一例として、特定の実施形態では、５ｋＤａ〜２０ｋＤａの分子量を有し、他の実施形態では４ｋＤａ〜１０ｋＤａの分子量を有する。
また、本開示では、接合体の組成物を想定し、ここで、ＰＥＧは、異なるｎ値を有し、したがって、様々な異なるＰＥＧが、特定の比で存在する。例えば、ある組成物は、接合体の混合物を含み、ｎ=１、２、３及び４である。ある組成物では、接合体のパーセンテージでｎ=１は１８-２５％であり、接合体のパーセンテージで、ｎ=２が５０-６６％であり、接合体のパーセンテージで、ｎ=３が１２-１６％であり、接合体のパーセンテージで、ｎ=４が多くとも５％である。この組成物は当該技術分野で知られる反応条件及び精製法により、生成可能である。典型的な反応条件は、明細書全体に記載される。カチオン交換クロマトグラフィを用いて接合体を分離することができ、例えば所望の数のＰＥＧが結合された接合を含む画分が、その後特定され、未改変のタンパク質シーケンス及び他の数のＰＥＧが結合した接合体を含まないように精製される。
ＰＥＧ化は、ポリペプチドのＮ末端のアルファアミノ基、リジン残基の側鎖上のイプシロンアミノ基、及びヒスチジン残基の側鎖上のイミダゾール基で最も頻繁に生成する。組み換え型ポリペプチドの大部分が単一アルファ及び多数のイプシロンアミノ及びイミダゾール基を有するため、多数の位置異性体が、リンカー化学に応じて生成可能である。当該技術分野で知られる総合的なＰＥＧ化ストラテジーが、ここに適用可能である。ＰＥＧは、ポリペプチドシーケンスの１つ以上の遊離アミノ又はカルボキシル基と、ポリエチレングリコールとの間の結合を媒介する末端反応基（「スペーサ」）を介して、本開示のポリペプチドに結合されてもよい。遊離アミノ基に結合できるスペーサを有するＰＥＧは、Ｎ-ヒドロキシサクシニルイミドでポリエチレングリコールのコハク酸性エステルを活性化することにより調製可能なＮ-ヒドロキシサクシニルイミドポリエチレングリコールを含んでいる。遊離アミノ基に結合できる他の活性化ポリエチレングリコールとしては、２、４−ビス（Ｏ-メトキシポリエチレングリコール）-６-クロロ−ｓ−トリアジンが挙げられ、これはポリエチレングリコールモノメチルエーテルを塩化シアヌルと反応させることにより調製されてもよい。遊離カルボキシル基に結合される活性化ポリエチレングリコールは、ポリオキシエチレンジアミンを含む。
スペーサを有しているＰＥＧへの、本開示のポリペプチドシーケンスの１つ以上の接合は、様々な従来法によって遂行されてもよい。例えば、接合反応は、ｐＨ５〜１０の液中、４℃〜室温の温度で、３０分〜２０時間、４:１〜３０:１の試薬対タンパク質のモル比を利用して、遂行可能である。反応条件を選択することにより、所望の置換度を支配的に達成するように反応を管理することができる。一般に、低温、低ｐＨ（例えば、ｐＨ=５）及び短い反応時間が、結合されるＰＥＧの数を低減する傾向があり、他方、高温、中性〜高ｐＨ（例えば、ｐＨ７以上）及び長い反応時間は、結合されるＰＥＧの数を増加させる傾向がある。反応を終了するために、当該技術分野で知られている様々な手段を用いることができる。ある実施形態では、反応混合物を酸性化し、例えば-２０℃で冷凍することにより、反応は終了する。例えば、様々な分子のＰＥＧ化は、米国特許第５,２５２,７１４号;第５,６４３,５７５号;第５,９１９,４５５号;第５,９３２,４６２号;及び第５，９８５，２６３号で議論される。ＰＥＧ-ＩＬ-１０は、例えば、米国特許第７,０５２,６８６号に記載される。ここでの使用のために想定される特異的反応条件は、実験のセクションに記載される。
また、本開示は、ＰＥＧ擬晶の使用を想定する。ＰＥＧ（例えば、拡張血清半減期）の特質を保持しつつも、いくつかの付加的な有利な特性を与える組み換え型ＰＥＧ擬晶が、開発されてきた。一例として、ＰＥＧに類似の伸張した形態を形成することが可能な単純なポリペプチド鎖（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ及びＴｈｒを含む）が、すでに着目のペプチド又はタンパク質薬剤（例えば、Ａｍｕｎｉｘ'ＸＴＥＮ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；米国カリフォルニア州マウンテンビュー）に融合されて、組み換えにより生成することができる。これにより、製造プロセス中での付加的な接合ステップの必要性が無くなる。更に、確立された分子生物学技術により、ポリペプチド鎖の側鎖組成物の制御が可能となり、免疫原性及び製造特性の最適化ができるようになる。
グリコシル化：本開示の目的で、「グリコシル化」とは、広く、グリカンをタンパク質、脂質又はその他の有機分子に結合する酵素法のことをいう。本開示と連携した「グリコシル化」という用語の使用は、（その下にあるグリコシル化部位を取り除くことにより、又は、化学的及び／又は酵素的手段でグリコシル化を欠失させることにより）１つ以上の炭化水素部分を加えること又は欠失させること、及び／又は、天然のシーケンスの中に存在し得る又は存在しなくてもよい１つ以上のグリコシル化部位を加えることを、意味するものと一般に意図される。さらに、このフレーズは、未改変タンパク質のグリコシル化の質的な変化を含み、これには、存在する様々な炭化水素部分の性質及び比率の変化が関与する。
グリコシル化は、ＩＬ-１０等のポリペプチドの物性（例えば、溶解性）に劇的に影響を及ぼし得るものであり、かつ、タンパク質安定性、分泌及び細胞小器官局在化においても、重要となり得る。グリコシル化ポリペプチドは拡張安定性を示し得るとともに、１つ以上の薬物動態特性（例えば半減期）を向上し得る。さらに、溶解性の改善により、例えば、非グリコシル化ポリペプチドを含んでいる配合に比べて薬剤管理のために適切な配合の生成を可能にすることができる。
適切なグリコシル化は、生物学的活性度のために必須となり得る。実際、真核生物からの遺伝子は、タンパク質をグリコシル化するための細胞プロセスを持たないバクテリア（例えば大腸菌）中に発現される場合は、グリコシル化の欠如により殆どまたは全く活性が回復しないタンパク質を生成する。
グリコシル化部位の添加は、アミノ酸配列を変更することによって達成することができる。例えば、ポリペプチドへの交替は、１つ以上のセリン又はスレオニン残留物（Ｏにリンクされたグリコシル化部位のために）又はアスパラギン残基（Ｎ−リンクグリコシル化部位のために）を、添加することにより、又は、これらで置換することにより、なされてもよい。Ｎ−リンク及びＯ−リンクオリゴ糖の構造及び各タイプに見出される糖残留物は、異なってもよい。両方に」共通して見出される１種類の糖は、Ｎ-アセチルノイラミン酸（以下シアリン酸と称する）である。シアリン酸は通常、Ｎ−リンク及びＯ−リンクのオリゴ糖の末端残留物であり、その負電荷によって、糖タンパク質に酸性特性を与え得る。本開示の特別な実施形態はＮ-グリコシル化変異体の生成及び使用を含む。
本開示のポリペプチドシーケンスは、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンを発生させるよう、特に、ポリペプチドをコードする核酸を、あらかじめ選択された塩基で突然変異させることにより、核酸レベルでの変化を通して、任意に変更されてもよい。ポリペプチド上の炭化水素部分の数を増やすための他の手段としては、ポリペプチドへのグリコシドの化学又は酵素のカップリングによる手段が挙げられる。炭水化物の除去は、化学的に又は酵素的に達成されてもよく、又はグリコシル化されるアミノ酸残基をコードするコドンの置換により達成されてもよい。化学的な脱グリコシル技術は知られており、ポリペプチド上の炭化水素部分の酵素の開裂は、様々なエンド-及びエクソ-グリコシダーゼを用いて達成することができる。
ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）−欠損Ｃｈｉｎｅｓｅハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、組み換え型糖タンパク質の生成のために一般的に用いられる宿主細胞である。これらの細胞は、酵素ベータ-ガラクトシドアルファ-２，６-シアリルトランスフェラーゼを発現せず、したがって、アルファ２，６リンケージ中のシアリン酸を、これらの細胞中に生成される糖タンパク質のＮ−リンクオリゴ糖に加えない。
ポリシアリル化：また、本開示では、ポリペプチドの安定性及び生体内の薬動学を向上させるために、ポリシアリル化を使用して、ポリペプチドの、自然に発生する生物分解可能なα-（２−＞８）-リンクポリシアル酸（「ＰＳＡ」）への接合を、想定する。ＰＳＡは、親水性の高い生物分解可能な非毒性天然ポリマーであり、血液中の高い見かけ分子量を与え、それはその血清半減期を長くする。さらに、ペプチド及びタンパク質治療学の範囲のポリシアリル化により、著しく低いタンパク質分解、生体内の活性の保持、及び免疫原性及び抗原性の低下がもたらされた（例えば、Ｇ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ３００（１−２）：１２５−３０を参照）。その他の接合体（例えば、ＰＥＧ）による改変と同様に、部位特異的ポリシアリル化の様々な技術は、利用可能である（例えば、Ｔ．Ｌｉｎｄｈｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）ＰＮＡＳ１０８（１８）７３９７−７４０２を参照）。
アルブミン融合体：接合のための付加的な適切な成分及び分子は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、カニクイザル血清アルブミン及びウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等のアルブミンを含む。
成熟ＨＳＡ、すなわち、〜２０日の血清半減期を有する５８５個のアミノ酸ポリペプチド（〜６７ｋＤａ）は、主に、コロイダル浸透圧性血圧、血液ｐＨ、及び多数の内因性及び外因性リガンドの輸送及び分配の維持に貢献する。タンパク質は、３つの構造的に相同的なドメイン（ドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩ）を有し、ほぼ全体がアルファ-ヘリカル構造にあり、１７個のジスルフィド架橋によって高い安定性を有する。アルブミンの３つの一次的薬剤結合領域は、サブドメインＩＢ、ＩＩＡ及びＩＩＩＡ内の３つのドメインで各々進行中である。
アルブミン合成が肝臓内で行われて、短命な一次的生成物であるプレプロアルブミンを生成する。したがって、ＨＳＡの全長は、１８個のアミノ酸のシグナルペプチドを有し（ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ;ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：//）、次いで、６個のアミノ酸のプロドメインが続き（ＲＧＶＦＲＲ;ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：//）;これら２４個のアミノ酸残基ペプチドは、プレプロドメインとも呼ばれる。ＨＳＡは、プレプロドメインとして内因性シグナルペプチドを用いて、発現及び分泌することが可能である。代替的には、ＨＳＡは、成熟構築体に融合されるＩｇＫシグナルペプチドを用いて、発現及び分泌することが可能である。プレプロアルブミンはそのアミノ末端において、小胞体ルーメン内で迅速に共同翻訳的に開裂され、安定な６０９個のアミノ酸前駆物質ポリペプチド、プロアルブミンを生成する。その後プロアルブミンは、ゴルジ装置へと引き継がれ、そこでは、フューリン依存的アミノ末端開裂により、５８５個のアミノ酸成熟アルブミンに変換される。
アルブミンの一次的アミノ酸配列、構造及び機能は、アルブミン合成及び分泌のプロセスであるため、全種に亘って、高度に保存される。例えば、ＨＳＡに相当するアルブミン血清タンパク質は、カニクイザル、ウシ、イヌ、ウサギ及びラットに見出される。非ヒト種では、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）は、ＨＳＡと最も構造的に類似である（例えば、Ｋｏｓａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｖ２００７Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．９６（１１）：３１１７−２４を参照）。本開示は、例えば薬剤発現プロセスにおける上記に記載のそれら非限定的に含む非ヒト種からのアルブミンの使用を想定する。
本開示に従い、アルブミンは、カルボキシル末端で、アミノ末端で、カルボキシル及びアミノ末端で、及び内部的に、薬剤分子（例えばここに記載されるポリペプチド）に接合されてもよい（例えば、米国特許第５，８７６，９６９号及び米国特許第７，０５６，７０１号を参照）。
本開示によって想定されるＨＳＡ-薬剤分子接合体においては、アルブミンの様々な形式、例えばアルブミン分泌プレシーケンス及びその変異体、フラグメント及びその変異体、及びＨＳＡ変異体等が、用いられてもよい。これらの形態は、１つ以上の所望のアルブミン活性を一般に有する。付加的な実施形態では、本開示は、アルブミン、アルブミンフラグメント及びアルブミン変異体、その他に直接または間接的に融合されるポリペプチド薬剤分子を含む融合タンパクが関与し、ここで、融合タンパクは、融合されない薬剤分子より高いプラズマ安定性を有し、及び／又は、融合タンパクは、融合されない薬剤分子の治療活性を保持する。ある実施形態では、間接的な融合体は、リンカー、例えばペプチドリンカー又はその改変バージョン、によってもたらされる。
細胞内開裂は、例えば、フューリン又はカスパーゼによる酵素の力で遂行されてもよい。細胞は、これらの内因性酵素の低い濃度を発現し、これは細胞内の一部の融合体分子を開裂することができ;したがって、ポリペプチドの一部は、ＨＳＡに接合されることなく細胞から分泌され、他方で、ポリペプチドの他の一部は、ＨＳＡを含む融合体分子の形態で分泌される。本開示の実施形態は、様々なフューリン融合体構築体の使用を想定する。例えば、シーケンスＲＧＲＲ、ＲＫＲＫＫＲ、ＲＫＫＲ又はＲＲＲＫＫＲを含む構築体がデザインされてもよい。
また、本開示は、細胞外開裂（すなわち、生体外での開裂）を想定し、ここでは融合体分子が細胞から分泌され、精製され、その後開裂される。切除により、成熟ＩＬ-１０からＨＳＡ-リンカー複合体全体を分離してもよく、又はＨＳＡ-リンカー複合体全体よりも小さな部分でもよいことが理解される。
上記のように、ＨＳＡ又はそのフラグメントの核酸コーディングが１つ以上のポリペプチドシーケンスの核酸コーディングに結合されるよう、本開示の１つ以上のポリペプチドへのアルブミンの融合を、例えば、遺伝子操作によって達成することができる。その後、融合ポリペプチドを発現するよう、例えば適切なプラスミドの形態で融合されたヌクレオチド配列を用いて、適切なホストを形質転換又はトランスフェクトすることができる。例えば、発現は、原核生物又は真核生物の細胞からインビトロに、又は例えばトランスジェニック生物からインヴィヴォに、もたらされてもよい。本開示のある実施形態では、融合タンパクの発現は、哺乳動物細胞株、たとえば、ＣＨＯ細胞株で、実行される。形質転換は、ここに広く用いられ、細胞膜を通した直接の取り込み、外因性遺伝形質（外因性核酸）の取込み及び発現から生じる細胞の遺伝子の交替のことをいう。形質転換はバクテリアのある種の中に自然に発生するが、それはその他の細胞内で人工の手段でもたらされてもよい。
さらに、アルブミン自体を改変して、その循環半減期を延長することもできる。ＩＬ-１０への改変アルブミンの融合は、上記の遺伝子操作技術によって又は化学接合によって達成されることができ;得られた融合分子は、未改変アルブミンとの融合体のそれを上回る半減期を有する（国際特許公報ＷＯ２０１１／０５１４８９号を参照）。
代替的なアルブミン結合ストラテジー：いくつかのアルブミン-結合ストラテジーが、直接の融合に代わるものとして開発され、これには、複合脂肪酸鎖（アシル化）を通したアルブミン結合が含まれる。血清アルブミンが脂肪酸のための輸送タンパク質であるので、アルブミン-結合活性を有するこれらの天然リガンドは、小タンパク質療法の半減期拡張に用いられてきた。例えば、インスリンデテミル（ＬＥＶＥＭＩＲ）は、糖尿病のための承認された製品であり、ミリスチル鎖を含み、これは遺伝子的に改変インシュリンに接合されて、長時間作用型インシュリン類似体を生成する。
また、本開示は、アルブミン結合ドメイン（ＡＢＤ）ポリペプチドシーケンス及びここに記載されるポリペプチドの１つ以上のシーケンスを備える融合タンパクを想定する。文献に記載されたあらゆるＡＢＤポリペプチドシーケンスを、融合タンパクの成分とすることができる。融合タンパクの成分は、ここに記載されるそれらのリンカー等のリンカーを通して任意に共有結合を形成し得る。本開示の実施形態の一部では、融合タンパクは、Ｎ末端部分としてのＡＢＤポリペプチドシーケンス、及び、Ｃ末端部分としてのここに記載されるポリペプチドを含む。
また、本開示は、アルブミン結合ポリペプチドのフラグメントを含む融合タンパクを想定し、そのフラグメントが、アルブミン結合;又はアルブミン結合ポリペプチドの多量体又は少なくとも２つのアルブミン結合ポリペプチドを含むそれらのフラグメント又はモノマー単位としてそれらのフラグメントを実質的に保持する。ＡＢＤ及び関連した技術に関する総合的な議論については、国際特許公報ＷＯ２０１２／０５０９２３号、国際特許公報ＷＯ２０１２／０５０９３０号、国際特許公報ＷＯ２０１２／００４３８４号及び国際特許公報ＷＯ２００９／０１６０４３号を参照されたい。
その他の分子による接合：接合のための付加的な適切な成分及び分子は、例えば、サイログロブリン;破傷風トキソイド;ジフテリアトキソイド;ポリ（Ｄ-リジン：Ｄ-グルタミン酸）等のポリアミノ酸;ロタウィルスのＶＰ６ポリペプチド;インフルエンザウィルス血球凝集素、インフルエンザウィルス核タンパク;キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）;及びＢ型肝炎ウィルスコアタンパク質及び表面抗原;又は前述のもののあらゆる組合せを含む。
したがって、本開示は、ポリペプチドシーケンスのＮ−及び／又はＣ−末端における１つ以上の付加的な成分又は分子の接合を想定し、これは例えば、他のポリペプチド（例えば、被験体ポリペプチドとは異種のアミノ酸配列を有するポリペプチド）等又はキャリア分子が挙げられる。したがって、典型的なポリペプチドシーケンスは、他の成分又は分子による接合体として与えられ得る。
接合改変は、それは、付加的な又は相補的な機能を有する活性又は第２の分子に由来した活性を保持するポリペプチドシーケンス中でなされてもよい。例えば、ポリペプチドシーケンスが、分子に接合されて、例えば、溶解性、保存性、インヴィヴォ又はシェルフ半減期又は安定性、免疫原性の低下、遅延又は制御生体内リリース、等を容易にすることができる。その他の機能又は活性は、接合のないポリペプチドシーケンスに対する毒性を低減する接合を含み、接合は、接合のないポリペプチドシーケンス又は薬剤より効率的に、一種の細胞又は器官をターゲットにして、さらに、ここに記載するような疾病、疾患又は状態（例えば癌）に関連した原因又は影響に対して更に対抗する。
ＩＬ-１０ポリペプチドは、タンパク質等の大型のゆっくり代謝される巨大分子;セファロース、アガロース、セルロース又はセルロースビーズ等の多糖類;ポリグルタミン酸又はポリリジン等のポリマーアミノ酸;アミノ酸コポリマー;不活化ウィルス粒子;ジフテリア、破傷風、コレラ又はロイコトキシン分子からの類毒物等の不活化細菌毒素;不活化バクテリア;及び樹状細胞に接合されてもよい。この接合形態は、所望の場合、本開示のポリペプチドに対して抗体を生成するために用いることができる。
接合のための付加的な候補成分及び分子は、分離又は精製のために適切なそれらを含む。特別な非限定的な例としては、ビオチン（ビオチン-アビジン特異的結合対）、抗体、レセプタ、リガンド、レクチンを含む結合分子、又はプラスチック又はポリスチレンビーズ、プレート又はビーズ、磁気ビーズ、テスト小片及び膜を含む固体担体を含む分子等が挙げられる。
カチオン交換クロマトグラフィ等の精製法を用いて、電荷差によって接合体を分離することができ、そしてそれは効率的に接合体を、それらの様々な分子量に分離する。例えば、カチオン交換カラムを充填した後、〜２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ〜４で洗浄することができ、その後、ｐＨ約３〜５．５、例えば、ｐＨ〜４．５でバッファされた線形（０Ｍ〜０．５Ｍ）ＮａＣｌ勾配で溶出させることができる。カチオン交換クロマトグラフィによって得られる画分の含量は、従来の方法、例えば、質量分析、ＳＤＳ-ＰＡＧＥ、又は分子量によって分子実体を分離するその他の既知の方法等を用いて、分子量によって特定されてもよい。
Ｆｃ-融合分子：特定の実施形態では、
本開示のポリペプチドシーケンスのアミノ−末端又はカルボキシル−末端を、イムノグロブリンＦｃ領域（例えばヒトＦｃ）に融合して、融合接合体（又は融合分子）を形成することができる。Ｆｃ融合接合体は、バイオ医薬品の全身半減期を増加させることが示され、したがって、生物薬剤製品は、より頻度の低い投与を要求し得る。
Ｆｃは、血管を覆う内皮細胞中で、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合し、結合に際し、Ｆｃ融合分子は分解から保護され、循環に再リリースされて、分子がより長く循環内に保たれるようにする。このＦｃ結合は、内因性ＩｇＧがその長いプラズマ半減期を保持するためのメカニズムであると考えられている。さらに最近のＦｃ-融合技術では、バイオ医薬品の単一コピーを抗体のＦｃ領域に結合し、伝統的なＦｃ-融合接合体と比較して、バイオ医薬品の薬物動態及び薬力学的特性を最適化する。ここに開示されるポリペプチドの用途に適切なその他のＦｃ関連の技術の例は、国際特許公開ＷＯ２０１３／１１３００８号に記載される。
その他の改変：本開示は、１つ以上の特性を向上させるための、ＩＬ-１０の、現在知られている又は将来開発される、その他の改変の使用を想定する。循環半減期を延長する、安定性を上昇する、クリアランスを低減する、又は、本開示のポリペプチドの免疫原性又はアレルゲン性を変更する、１つのこの方法は、ＨＥＳ化によるポリペプチドシーケンスの改変が関与しており、これはポリペプチドシーケンスの特性を改変するために、その他の分子に結合されるヒドロキシエチル澱粉誘導体を利用する。例えば、ＨＥＳ化の様々な特徴は、米国特許出願公開第２００７／０１３４１９７号及び第２００６／０２５８６０７号に記載される。
また、本開示は、融合タグとしてＳＵＭＯ（ＬｉｆｅＳｅｎｓｏｒｓ社;米国ペンシルバニア州マルヴァーン）を含む融合分子を想定する。ここに記載されるポリペプチドのＳＵＭＯとの融合は、発現の強化、溶解性の改善、及び／又は精製法の開発の援助を含む、いくつかの有益な効果をもたらし得る。ＳＵＭＯプロテアーゼは、ＳＵＭＯの第三級構造を認識して、ＳＵＭＯのＣ−末端で、融合タンパクを開裂し、したがって、所望のＮ−末端アミノ酸を有する、ここに記載されるポリペプチドをリリースする。
リンカー：リンカー及びそれらの使用を、上記に記載してきた。本開示のポリペプチドシーケンスを改変するために用いられる前記の成分及び分子のいずれかは、リンカーを介して任意に接合されてもよい。適切なリンカーは、一般に、改変ポリペプチドシーケンスとリンク成分及び分子との間で運動ができる十分な長さを有する、「フレキシブルなリンカー」を含む。リンカー分子は、一般に約６〜５０の原子の長さである。また、リンカー分子は、例えば、アリールアセチレン、２〜１０のモノマー単位を含んだエチレングリコールオリゴマー、ジアミン、二酸、アミノ酸又はこれらの組合せであってもよい。適切なリンカーは容易に選択されることができ、あらゆる適切な長さ、例えば１個のアミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１０〜２０個、２０〜３０個、３０〜５０個又は５０個以上のアミノ酸であってもよい。
例示的なフレキシブルなリンカーは、グリシンポリマー(Ｇ)ｎ、グリシン-セリンポリマー、（たとえば、（ＧＳ）ｎ、ＧＳＧＧＳｎ、ＧＧＧＳｎ、（ＧｍＳｏ）ｎ、（ＧｍＳｏＧｍ）ｎ、（ＧｍＳｏＧｍＳｏＧｍ）ｎ、（ＧＳＧＧＳｍ）ｎ、（ＧＳＧＳｍＧ）ｎ及び（ＧＧＧＳｍ）ｎ等、及びこれらの組合せ、ここで、ｍ、ｎ及びｏは、少なくとも１つの整数から各々独立して選択され、グリシン-アラニンポリマー、アラニン-セリンポリマー及びその他のフレキシブルなリンカーを含んでいる。グリシン及びグリシン-セリンポリマーは、比較的構造化されておらず、したがって、成分同士の間の中性のつなぎ鎖としてしての機能を果たしてもよい。例示的なフレクシブルリンカーの非限定的な例としては、ＧＧＳＧ、ＧＧＳＧＧ、ＧＳＧＳＧ、ＧＳＧＧＧ、ＧＧＧＳＧ及びＧＳＳＳＧが挙げられる。
治療及び予防用途
本開示は、幅広い範囲の疾病、疾患及び／又は状態、及び／又はその症状に対する治療又は予防における、ここに記載されるＩＬ-１０ポリペプチド（例えばＰＥＧ-ＩＬ-１０）の使用を想定する。実際、本開示の教示は、上記のＩＬ-１０平均血清トラフ濃度パラメータを達成する又は保持することが有益となり得るあらゆる疾病、疾患又は状態に適用することになっている。特別な用途がこの後詳細に記載されるが、本開示がこれに限定されないことを理解すべきである。さらに、特別な疾病、疾患及び状態の総合的なカテゴリーをこの後説明するが、疾病、疾患及び状態のいくらかは、複数のカテゴリーに属し得る（例えば、癌及び線維性に関連した疾患）とともに、他のもので、開示されたカテゴリーの何れにも属さない場合もあり得る。
線維性疾患及び癌。本開示に従い、ＩＬ-１０（例えば、ＰＥＧ-ＩＬ-１０）を用いて、癌を含む増殖の状態又は疾患を治療又は予防することができ、これらには、例えば、子宮、頸部、胸、前立腺、精巣、消化管路（例えば、食道、口こういん頭、胃、小腸又は大腸、結腸又は直腸）、腎臓、腎細胞、膀胱、骨、骨髄、皮膚、頭部又は頸部、皮膚、肝臓、胆嚢、心臓、肺、膵臓、唾液腺、副腎、甲状腺、脳（例えば神経膠腫）、神経節、中枢神経系（ＣＮＳ）及び周辺神経系（ＰＮＳ）の癌、並びに、細網内皮系及び免疫系（例えば、鬱憤又は胸腺）の癌が含まれる。また、本開示は、その他の癌関連の疾病、疾患又は状態を治療又は予防する方法を提供し、これらには、例えば、免疫原性腫瘍、非免疫原性腫瘍、休眠中の腫瘍、ウィルス誘発性癌（例えば、上皮細胞癌、内皮細胞癌、扁平上皮癌及び乳頭しゅウィルス）、腺癌、リンパ腫、癌腫、黒色腫、白血病、ミエローマ、肉腫、テラトカルシノーマ、化学誘起癌、転移及び腫瘍起因性血管形成が含まれる。本開示は、例えば調節性のＴ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞の活性を調節することによる、腫瘍細胞又は癌細胞抗原に対する耐性の低減を想定する（例えば、Ｒａｍｉｒｅｚ−Ｍｏｎｔａｇｕｔ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２２：３１８０−３１８７；及びＳａｗａｙａ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：１５０１−１５０９を参照）。特定の実施形態では、腫瘍又は癌は、結腸癌、卵巣癌、乳癌、黒色腫、肺癌、グリア芽細胞腫又は白血病である。癌関連の疾病、疾患及び状態という用語の使用は、直接または間接的に癌と関連する状況に、並びに、例えば、異形成等の腫瘍起因性血管形成及び前癌状態を含むように、広く参照することを意味する。
ある実施形態では、
本開示は、ＩＬ-１０ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ-ＩＬ-１０）及び少なくとも１つの付加的な治療又は診断薬剤を用いて、増殖状態、癌、腫瘍又は前癌状態を治療する方法を提供するものであり、それらの例は、本開示の他の部分に記載される。
また、本開示は、線維症、疾患及び状態を治療又は予防する方法を提供する。ここで用いられる例では、「線維症、疾患及び状態」というフレーズ、及び類似の用語（例えば、「線維性疾患」）及びフレーズは、線維性組織又は瘢痕組織の形成に生じうるあらゆる状況（例えば１つ以上の組織における線維症）を含むように、広く解釈されるべきである。一例として、瘢痕組織を引き起こし得る外傷（例えば、傷）は、皮膚、目、肺、腎臓、肝臓、中枢神経系及び心血管系における傷を含む。また、このフレーズは、脳卒中及び、たとえば外傷又は手術の結果としての、組織接着から生じた瘢痕組織形成を包含する。
ここで用いられる例では、用語「線維症」は、器官又は組織の通常の構成要素ではなく、修復又は反応性プロセスとしての繊維組織の形成のことをいう。線維症は、あらゆる特定の組織中における通常の沈着を上回る繊維芽細胞蓄積及びコラーゲン沈着によって特徴付けられる。
線維性疾患の非限定的な例としては、創傷治癒から生じる線維症、全身及び局所強皮症、アテローム性動脈硬化、再狭窄、肺炎症及び線維症、特発性肺線維症、間質性肺疾患、肝硬変、慢性Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎感染の結果としての線維症、腎臓疾患（例えば糸球体腎炎）、瘢痕組織から生じた心疾患、ケロイド及び過形成性瘢痕、並びに、眼病（例えば黄斑部改変及び網膜及び硝子体網膜症）が挙げられる。線維症は更に、化学療法剤薬剤誘発性線維症、放射線障害性線維症及び外傷及び燃焼を含む。
線維性疾患は、しばしば、肝臓に関連し、この疾患と、肝細胞中の肝臓コレステロール及びトリグリセリドの不適当な蓄積の間に結びつきがしばしばある。この蓄積は、肝臓線維症及び硬変症につながる炎症誘発性反応という結果として現れる。線維性成分を有する肝障害は、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む。
心血管疾患。
また、本開示は、ここに記載されるＩＬ-１０ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ-ＩＬ-１０）を使用して、特定の心血管−及び／又は関連した代謝関連疾病、疾患及び状態、ならびにこれらに関係した疾患を治療及び／又は予防することを想定する。
ここで用いられる例では、用語「心血管疾患」は、「心疾患」等は、心血管系に影響を及ぼすあらゆる疾病、原発性心臓疾病、脳及び腎臓の血管疾患及び末梢動脈疾患のことをいう。心血管疾患とは、冠動脈性心疾患（すなわち虚血性心疾患又は冠動脈疾患）、アテローム性動脈硬化、心筋症、高血圧、高血圧性心疾患、肺性心、心臓リズム障害、心内膜炎、脳血管障害及び末梢動脈疾患を含む疾病の一群である。心血管疾患は、世界中で死亡の主な原因であり、通常は老年の大人に影響を及ぼすものの、心血管疾患（特にアテローム性動脈硬化）の前例は、人生の初期に開始する。
本開示の特定の実施形態は、アテローム性動脈硬化、すなわちコレステロール及びトリグリセリド等の脂肪質の蓄積の結果としてプラークを形成するために慢性動脈壁が厚くなる状況を、治療及び／又は予防するための、ＩＬ-１０ポリペプチドの使用に関する。アテローム性動脈硬化には、動脈の壁中の慢性炎症反応がしばしば関与し、この慢性炎症反応の大部分はマクロファージの蓄積に起因し、機能性高密度リポタンパク質によるマクロファージからの脂肪及びコレステロールの十分な除去なしに、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）によって促進される。慢性的に膨張するアテローム血栓性障害は、内腔の完全な閉鎖を引き起こし得るものであり、これは、内腔狭窄が深刻なために下流組織への血液供給が不十分となり貧血が生じる場合にのみ現れる。
ＩＬ-１０ポリペプチドは、コレステロールに関連する疾患の治療及び／又は予防において、特に有利となり得るものであり、これらの疾患は、例えば、心血管疾患（例えばアテローム性動脈硬化）、脳血管障害（例えば脳卒中）、及び末梢血管疾患に関係し得る。非限定的な一例としては、ＩＬ-１０ポリペプチドは、被験体の血液コレステロールレベルを下げるために用いられてもよい。被験体が高コレステロール血症を有するか否かを決定する場合においては、通常のコレステロールレベルと異常コレステロールレベルとの間には厳格な境界はなく、数値の解釈は、その他の健康状況及び危険因子に関連して作成される必要がある。それにもかかわらず、以下のガイドラインは、アメリカ合衆国内で一般に用いられる：総コレステロール＜２００ｍｇ/ｄＬが望ましく、２００-２３９ｍｇ/ｄＬは、高いコレステロールの境界線上であり、≧＝２４０ｍｇ/ｄＬは高コレステロールである。総コレステロールのレベルが高くなれば、心血管疾患のリスクも増加し、ＬＤＬ又は非ＨＤＬコレステロールのレベルの両方により、将来の冠動脈性心疾患が予測される。高コレステロール血症を評価する場合に、全てのリポタンパク亜分画（ＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ及びＨＤＬ）を計測することが、しばしば有用である。特定の治療目標は、ＨＤＬを保持又は上昇させつつ、ＬＤＬを低減することである。
血栓症及び血栓性状態。
血栓症は、血管中の血栓（血液の塊り）の形成であり、循環系を通した血液の流れを妨害するものであり、以下（ウィルヒョウの３要素）の１つ以上における異常症に起因し得る：凝固性亢進又は血液凝固の増大、内皮細胞外傷、又は血流妨害（うっ血、乱流）。
血栓症は一般に、静脈型又は動脈型に分類され、これらそれぞれは、いくつかのサブタイプによって示すことができる。静脈血栓は、深在静脈血栓症（ＤＶＴ）、門脈血栓症、腎静脈血栓症、頸静脈血栓症、バッド-キアリ症候群、パジェットシュレッター病、及び脳静脈洞血栓症を含む。動脈血栓は、脳卒中及び心筋梗塞を含む。
その他の疾病、疾患及び状状態は、本開示によって想定され、これらには、心房性血栓症、及び、真性多血症（別名紅斑、一次的多血球血症及び真正赤血球増加症）、すなわち骨髄があまりに多くのＲＢＣ、ＷＢＣ、及び／又は血小板を生成する骨髄増殖性の血液疾患、が含まれる。
免疫及び炎症状態。ここで用いられる例では、「免疫疾病」、「免疫状態」、「免疫疾患」、「炎症性疾病」、「炎症性状態」、「炎症性疾患」等の用語は、あらゆる免疫関連又は炎症性関連の状況（例えば、病理学的炎症及び自己免疫性疾患）を広く包含するように意味する。このような状態は、その他の疾病、疾患及び状態としばしば密接不可分に結び付けられる。一例として、「免疫状態」とは、癌、腫瘍及び腫瘍起因性血管形成等の増殖の状態のことをいい得るものであり、これには、感染症（急性及び慢性）、腫瘍、及び免疫系による撲滅に抵抗する癌が含まれる。
例えば炎症性サイトカインに起因し得る免疫及び炎症性関連の疾病、疾患及び状態の非限定的なリストには、関節炎、腎不全、狼瘡、喘息、乾癬、大腸炎、膵臓炎、アレルギー、線維症、外科合併症（例えば炎症性サイトカインが治癒を妨げる場合）、貧血及び線維筋痛が含まれる。慢性炎症にかかわり得るその他の疾病及び疾患には、アルツハイマー病、うっ血心不全、脳卒中、大動脈弁狭窄、動脈硬化、骨粗鬆症、パーキンソン病、感染症、炎症性腸疾患（例えばクローン病及び潰瘍性大腸炎）、アレルギー性接触性皮膚炎及びその他の湿疹、全身性硬化症、移植及び多発性硬化症が含まれる。
前記の疾病、疾患及び状態のうち、ＩＬ-１０（例えば、ＰＥＧ-ＩＬ-１０）が特に有効となり得る（例えば、現在の治療法の制限による）ものが、この後更に詳細に記載される。
本開示のＩＬ-１０ポリペプチドは、特に炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に有効となり得る。ＩＢＤは、クローン病（ＣＤ）及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を含み、これら両方ともに、特発性慢性疾病であり、これは消化管路のあらゆる部分に影響を及ぼし得るとともに多くの薬害反応に関連し、そして、長いＵＣを有する患者は、結腸癌を発症するリスクが高くなる。現在のＩＢＤ治療は、炎症性症状をコントロールすることを目的とし、特定の薬剤（例えば、コルチコステロイド、アミノサリチラート及び標準免疫抑制剤（例えばサイクロスポリン、アザチオプリン及びメトトレキセート））の成功は限定的にとどまる一方で、長期の治療は、肝損傷（例えば、線維症又は硬変症）及び骨髄抑制を引き起こし得るとともに、患者はしばしばこの治療に対して難治性に陥る。
乾癬は、一般的な免疫介在性慢性皮膚疾病の一群であり、米国内では４５０万人以上が罹患し、そのうち１５０万人は、疾病の中等度から重度の形態を有すると考えられている。更に、乾癬を有する患者の１０％以上は、乾癬性関節炎を発症し、これは関節の周囲の骨及び結合組織に損傷を与える。乾癬の根底にある生理学的知識が向上した結果、例えば、疾病の炎症性性質の原因となるＴリンパ球及びサイトカインの活性をターゲットにする薬剤の導入が得られた。この薬剤は、ＥＮＢＲＥＬ（エタネルセプト）、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（インフリキシマブ）及びＨＵＭＩＲＡ（アダリムマブ）を含むＴＮＦ-α阻害剤（慢性関節リウマチ（Ｒａ）の治療にも用いられる）、及び、ＡＭＥＶＩＶＥ（アレファセプト）及びＲＡＰＴＩＶＡ（エファリズマブ）等のＴ細胞阻害剤を含む。これらの薬剤のいくつかが、特定の患者集団の中にある程度有効であるが、全ての患者を効果的に治療することは、全く示されなかった。
慢性関節リウマチ（Ｒａ）は、関節の膜ライニング（関節滑膜）における慢性炎症によって一般に特徴づけられ、米国の人口の約１％又は米国内の２１０万人に影響を及ぼす。ＴＮＦ-α及びＩＬ−１を含むサイトカインの炎症性プロセスにおける役割の更なる理解により、新しい種類の疾患修飾性抗リウマチ剤（ＤＭＡＲＤ）の開発及び導入が可能になった。この薬剤（一部Ｒａのための治療方法と重なる）は、ＥＮＢＲＥＬ（エタネルセプト）、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（インフリキシマブ）、ＨＵＭＩＲＡ（アダリムマブ）及びＫＩＮＥＲＥＴ（アナキンラ）を含む。これらの薬剤のいくつかは、症状を楽にし、構造損傷の進行を抑制し、特定の患者集団の中に身体的な機能を向上させるのであるが、改良された有効性、相補的作用機構、及び深刻な副作用の少ない／小さい代替的な薬剤に対する必要性が、なお存在する。
多発性硬化症（ＭＳ）は、脳及び脊髄中に複数の領域の炎症及びミエリンの瘢痕を有する深刻な消耗性自己免疫性疾患であり、これに罹患している被験体は、特にここに記載されるＩＬ-１０ポリペプチドによって援助されてもよく、それは、現行の治療が症状を軽減するだけであり又は障害の進行を遅らせるだけのものであるためだからである。
同様に、ＩＬ-１０ポリペプチドは、患者の思考、記憶及び言語プロセスを深刻に弱める脳障害であるアルツハイマー病（ＡＤ）、及び、例えば異常運動、固縮及び震動により特徴づけられるＣＮＳの進行性疾患であるパーキンソン病（ＰＤ）等、神経改変疾患で苦しめられている被験体に対して、特に有利となり得る。これらの疾患は進行性かつ消耗性であり、利用できる治療薬は存在しない。
ウィルス疾病。ウィルス疾病におけるＩＬ-１０の役割に対する興味が高まってきた。ＩＬ-１０は、レセプタ結合活性に応じて、刺激性及び抑制性効果を生み出すと考えられてきた。
例えば、抗ウィルス免疫及びワクチンの有効性を増大するため、ＩＬ-１０機能を抑制する効果が考慮されてきた（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｅ．，（２０１１）Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５０：３９−６５を参照）。更に、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）機能におけるＩＬ-１０の役割が、検討されてきた。また、ヒト免疫不全ウィルス１型（ＨＩＶ-１）複製の阻害に加えて、ＩＬ-１０は、エフェクター免疫メカニズムの失活によるウィルスの存続を促進し得る（Ｎａｉｃｋｅｒ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２００（３）：４４８−４５２）。他の研究では、慢性Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）感染中のＴ細胞排除を管理することができるＢ細胞のＩＬ-１０生成サブセットが特定された。
前記の研究では、ＩＬ-１０阻害が有益となり得ることを示すが、ＣＤ８＋Ｔ細胞成分を含む特定のウィルス感染が、ＩＬ-１０の投与を通した治療及び／又は予防のための候補となり得る。これは、ＩＬ-１０が調節性のＴ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞の変調により、特定の癌に演ずるポジティブな役割によって、支持される。
本開示は、ＩＬ-１０による治療が有益となり得るあらゆるウィルス性疾病、疾患又は状態の治療及び／又は予防における、ＩＬ-１０ポリペプチドの使用を想定する。想定されるウィルス性疾病、疾患及び状態の例としては、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ、ヘルペスウィルス及びサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）が含まれる。
医薬品組成物
本開示のＩＬ-１０ポリペプチドは、被験体への投与に適切な組成物の形態であってもよい。一般に、この組成物は、ＩＬ-１０及び１つ以上の薬理学的に許容される又は生理的に許容可能な希釈液、キャリア又は賦形剤を含む「医薬品組成物」である。特定の実施形態では、ＩＬ-１０ポリペプチドは、治療的に許容可能な量で存在する。これら医薬品組成物は、本開示の方法で用いられてもよく;したがって、例えば、医薬品組成物は、ここに記載した治療及び予防の方法及び使用の実施ために、被験体に、生体外で、又は、生体内で投与することができる。
本開示の医薬品組成物は、投与の意図された方法又はルートと互換性を持つように調製することができ;投与の例示的なルートが、ここに記載される。さらに、本開示によって想定される疾病、疾患及び状態を治療又は予防するため、医薬品組成物を、ここに記載されるその他の治療的に活性な薬剤又は化合物と組み合わせて用いてもよい。
薬品組成物は、本開示によって想定される治療有効量のＩＬ-１０ポリペプチド並びに１つ以上の薬学的及び生理的に許容可能な配合薬剤を、典型的に含んでいる。適切な薬理学的に許容可能又は生理的に許容可能な希釈液、キャリア又は賦形剤の非限定的な例としては、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸及び重硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、ベンジルアルコール、メチルパラベン、エチル又はｎ-プロピル、ｐ-ヒドロキシベンゾアート）、乳化剤、懸濁剤、分散剤、溶媒、フィラー、充填剤、洗剤、バッファ、ビヒクル、希釈液、及び／又はアジュバントが挙げられる。例えば、適切なビヒクルは、生理的食塩水又はクエン酸塩緩衝食塩水でもよく、これには、経静脈投与のための医薬品組成物に共通したその他の材料が追加され得る。血清アルブミンを混合した中性バッファ食塩水又は食塩水は、さらに例示的なビヒクルである。当業者は、ここに想定される医薬品組成物及び用量形態で使用可能な様々なバッファを、容易に認識する。典型的なバッファの非限定的な例としては、薬理学的に許容される弱酸、弱塩基又はそれらの混合物が挙げられる。一例として、バッファ成分は、リン酸、酒石酸、乳酸、琥珀酸、クエン酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸及びその塩等の水溶性材料であってもよい。許容可能なバッファ剤としては、例えば、Ｔｒｉｓバッファ、Ｎ−（２-ヒドロキシエチル）ピペラジン-Ｎ'−（２-エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ-モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ-モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ-モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、及びＮ-トリス［ヒドロキシメチル］メチル-３-アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）が挙げられる。
医薬品組成物が調製された後、これを、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体又は乾燥又は凍結乾燥粉体として、無菌のバイアル中で保存してもよい。この配合は、すぐに利用可能な形態、使用の前に還元が必要な凍結乾燥の形態、使用の前に希釈が必要な液体の形態、又はその他の許容可能な形態のいずれかで、保存されてもよい。ある実施形態では、医薬品組成物は、１回限りの容器（例えば、１回限りのバイアル、アンプル、注射器又は、例えばＥｐｉＰｅｎ（商標）と類似の自動注入装置）で提供され、複数回使用の容器（例えば、複数回使用のバイアル）は、別の実施形態で提供される。体内埋植（例えば埋込ポンプ）及びカテーテル系、より低速の注入ポンプ及び装置を含む、あらゆるドラッグデリバリー装置が、ＩＬ-１０を供給するために用いられてもよく、これら全てが当業者に周知である。また、一般に皮下又は筋内に投与するデポ型注入を利用して、ここに開示したポリペプチドを、定義された期間、リリースしてもよい。デポ型注入は、通常、固体又は油ベースであり、一般に、ここに記載される配合成分の少なくとも一つを含む。当業者は、可能な配合及びデポ型注入の使用に精通している。
医薬品組成物は、無菌の注射可能な水の形態でもよく又は油性の懸濁液でもよい。
この懸濁液は、既知の従来技術に従って、ここに説明した適切な分散又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて調製されてもよい。無菌の注射可能な製剤は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈液又は溶媒中の、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液としての、無菌の注射可能な溶液又は懸濁液でもよい。使用できる許容可能な希釈液、溶媒及び分散媒体は、水、リンガー液、生理食塩液、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、米国ニュージャージ州パーサイパニー）又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、及び適切なそれらの混合物を含む。さらに、無菌、固定油は、溶媒又は懸濁媒体として従来から用いられる。この目的のため、あらゆる刺激の少ない固定油を用いることができ、合成モノ又はジグリセリドを含む。更に、オレイン酸等の脂肪酸を、注射可能薬物の製剤へ使用することが見出されている。吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウム又はゼラチン）を含むことにより、特定の注射可能な配合の長期にわたる吸収を達成することができる。
活性成分を含む医薬品組成物は、例えば、錠剤、カプセル、トローチ、トローチ剤、水性の又は油っぽい懸濁液、分散性粉体又は顆粒、エマルジョン、ハード又はソフトカプセル又はシロップ、溶液、ミクロビーズ又はエリクシル等としての、経口使用に適切な形態であってもよい、経口使用が意図される医薬品組成物は、医薬品組成物の製造のために従来技術で知られるあらゆる方法に従い、調製可能であり、この組成物は、薬学的に上品かつ口に合う製剤を提供するために、例えば甘味剤、香料、着色剤及び保存料等の１つ以上の薬剤を有してもよい。錠剤、カプセル等は、錠剤の製造のために適切な非毒性の薬理学的に許容される賦形剤を含む混和物中に、活性成分を有している。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、第三リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウム等の希釈剤;コーンスターチ又はアルギン酸等の造粒剤及び崩壊剤;例えばデンプン、ゼラチン又はアラビアゴム等の結合剤、及び例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルク等の潤滑剤であってもよい。
経口薬投与に適切な錠剤、カプセル等は、既知の技術によってコーティング又は非コーティングを与えて、消化管路中の分解及び吸収を遅らせ、それにより、維持された作用を提供する。例えば、モノステアリン酸グリセリン又はグリセリルジステアリン酸等の遅延材料を用いてもよい。それらは、当該技術分野で知られている技術で、コーティングして、徐放を行う浸透治療錠剤を形成してもよい。付加的な薬剤としては、投与された組成物のデリバリーを制御するための、生物分解可能又は生体適合性の粒子又はポリマー物質が挙げられ、これは、ポリエステル類、ポリアミン酸、ヒドロゲル、ポリビニルピロリドン、ポリ無水物、ポリグリコール酸、エチレン-酢酸ビニル、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、硫酸プロタミン、又はラクチド/グリコリドコポリマー、ポリ乳酸/グリコリドコポリマー、又は酢酸ビニルエチレンコポリマーが挙げられる。例えば、経口薬剤は、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン-マイクロカプセル又はポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルをそれぞれ用いたコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されるマイクロカプセル中、又はコロイドドラッグデリバリーシステム中に取り込むことができる。コロイド分散系は、巨大分子複合体、ナノ-カプセル、マイクロスフェア、ミクロビーズ、及び油-水乳濁液、ミセル、混合ミセル及びリポソームを含む脂質ベース系を含む。上記の配合の製剤のための方法は、当業者には明らかである。
経口使用のための配合は、ハードゼラチンカプセルとして与えられてもよく、ここで、活性成分は、例えば炭酸カルシウム、第三リン酸カルシウム、カオリン又は微結晶性セルロース等の不活性固体の希釈剤と混合され、又は、ソフトゼラチンカプセルとして与えられてもよく、ここで、活性成分は、水又は油媒体、たとえば落花生油、流動パラフィン又はオリーブ油等、とで混合される。
水性懸濁液は、その生産のために適切な賦形剤を含む混和物中に、活性材料を含有する。この賦形剤は、例えばカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカント及びアラビアゴム等の懸濁薬剤;例えば、天然に存在するホスファチド（例えば、レシチン）、又はアルキレンオキシドの脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアラート）、又はエチレンオキシドの長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール用）、又はエチレンオキシドの脂肪酸及びヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレイン酸塩）、又はエチレンオキシドの脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレイン酸塩）等の分散又は湿潤剤、であってもよい。水性懸濁液は、１つ以上の防腐剤を有してもよい。
油性懸濁液は、例えば落花生油、オリーブ油、胡麻油若しくはやし油等の植物油中、又は流動パラフィン等の鉱油中に、活性成分を懸濁することによって調製してもよい。油性懸濁液は、増粘剤、たとえば密蝋、固形パラフィン又はセチルアルコール等、を有してもよい。口に合う経口製剤を提供するために、上記に記載等の甘味料及び香料を加えてもよい。
水付加による水性懸濁液の製剤に適切な、分散性粉体及び顆粒は、分散剤又は湿潤剤、懸濁化剤及び１つ以上の防腐剤を含む混和物中に、活性成分を提供する。適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤が、ここに例示される。
本開示の医薬品組成物は、水中油型乳剤の形態であってもよい。油性相は、たとえばオリーブ油又は落花生油等の植物油、若しくは、たとえば流動パラフィン等の鉱油、又はこれらの混合物であってもよい。適切な乳化剤は、たとえば、アラビアゴム又はトラガカント等の天然に存在するゴム;たとえば、脂肪酸から誘導される大豆、レシチン及びエステル又は部分エステル等の天然に存在するホスファチド;たとえばソルビタンモノオレイン酸塩等のヘキシトール無水物;及びたとえばポリオキシエチレンソルビタンモノオレイン酸塩等、部分エステルのエチレンオキシドとの縮合生成物、が含まれる。
配合は、急速な分解から、又は本体からの除去から、組成物を保護するためのキャリアを含んでいてもよく、例えば、インプラント、リポソーム、ヒドロゲル、プロドラッグ及びマイクロカプセル化デリバリー系を含む制御放出配合挙げられる。例えば、モノステアリン酸グリセリン又はグリセリルステアラート等の遅延材料が、単独で、又はワックスと組み合わせて、用いられてもよい。
本開示は、直腸投与のための坐薬の形態での、ＩＬ-１０ポリペプチドの投与を想定する。坐薬は、薬剤を適切な非刺激性賦形剤と混合することにより調製できるが、この賦形剤は、常温で固形であるが直腸温では液体になり、したがって、直腸内で溶融して、薬剤を放出する。この材料は、カカオ脂及びポリエチレングリコールを含むが、これに限定されるものではない。
本開示によって想定されるＩＬ-１０ポリペプチドは、現在知られている又は将来開発されるあらゆるその他の適切な医薬品組成物（例えば、鼻吸入又は口吸入使用のためのスプレー）の形態であってもよい。
配合中のポリペプチド又はそのフラグメントの濃度は、広く変化し得る（例えば、約０．１重量％未満から、通常約２重量％又は少なくとも約２重量％、２０重量％〜５０重量％又はそれ以上まで）とともに、通常、主として液量、粘度及び被験体ベースの因子に基づき、例えば選択される投与の特定の方法に従って選択される。
投与のルート
本開示は、あらゆる適切な方法でのＩＬ-１０及びその組成物の投与を想定する。投与の適切なルートとしては、経静脈（例えば、筋肉内、静脈、皮下（例えば、注入又はインプラント）、腹腔内、嚢内、関節内、腹腔内、大脳内（実質内）及び側脳室内）、経口、経鼻、経膣、舌下、眼内、直腸、局所（例えば経皮）、舌下腺及び吸入が挙げられる。デポ型注入では、一般に皮下又は筋内に投与され、これを利用して、定義された期間中、ここに開示されるＩＬ-１０ポリペプチドを放出する。
本開示の特定の実施形態は、非経口投与を想定し、そして、さらに特定の実施形態では、非経口投与は皮下である。
併用療法
本開示は、１つ以上の活性治療薬（例えばサイトカイン）又はその他の予防若しくは治療方法（例えば、放射線）と組み合わせた、ＩＬ-１０（例えばＰＥＧ-ＩＬ-１０）の使用を想定する。この併用療法では、様々な活性薬剤は、異なる作用機構をしばしば有する。この併用療法は、１つ以上の薬剤のドーズの低減を可能にして、１つ以上の薬剤に関連した副作用を低減又は排除することにより、特に有利になり得るとともに、さらに、この併用療法は、根底にある疾病、疾患又は状態に対する相乗的治療又は予防効果を有し得る。
ここで用いられる例では、「組合せ」は、別々に投与することができる、例えば別々の投与のために別々に調製する（例えばキットで提供されるように）、治療法、及び、単一配合で一緒に投与することができる（すなわち「同時配合」）、治療法を含むという意味である。
特定の実施形態では、ＩＬ-１０ポリペプチドは順次投与又は適用され、例えば、１つの薬剤は、１つ以上のその他の薬剤の前に投与される。別の実施形態では、ＩＬ-１０ポリペプチドは、同時に投与され、例えば、２以上の薬剤が、同じ時間に又はおよそ同じ時間に、投与され；２つ以上の薬剤が、２つ以上の別々の配合で存在してもよく、又は組み合わされて１つの配合（すなわち同時配合）にされてもよい。２以上の薬剤が順次又は同時に投与されるか否かを問わず、これらは本開示の目的で組合せにより投与されると考えられる。
本開示のＩＬ-１０ポリペプチドは、その状況下で適切なあらゆる方法で、１つ以上のその他の（活性）薬剤と組み合わせて用いられてもよい。一実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤及び本開示の少なくとも１つのＩＬ-１０ポリペプチドによる治療が、ある期間にわたって保持される。別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療は、（例えば、被験体は安定である時）低減又は中止される一方で、本開示のＩＬ-１０ポリペプチドによる治療は、一定ドーズの投薬計画に保持される。さらに別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療は、（例えば、被験体は安定である時）低減又は中止される一方で、本開示のＩＬ-１０ポリペプチドによる治療は、低減される（例えば、低ドーズ、低頻度のドーズ又は短期の治療計画）。さらに別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療は、（例えば、被験体は安定である時）低減又は中止され、かつ、本開示のＩＬ-１０ポリペプチドによる治療が増大される（例えば、高用量、高頻度のドーズ又は長い治療計画）。さらに別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療が保持され、かつ、本開示のＩＬ-１０ポリペプチドによる治療が、低減又は中止される（例えば、低ドーズ、低頻度ドーズ又は短期の治療計画）。さらに別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤による治療及び本開示のＩＬ-１０ポリペプチドによる治療が、低減又は中止される（例えば、低ドーズ、低頻度ドーズ又は短期の治療計画）。
線維性疾患及び癌。本開示は、増殖の状態、癌、腫瘍又は前癌疾病、疾患又は状態を、ＩＬ-１０ポリペプチド（例えばＰＥＧ-ＩＬ-１０）及び少なくとも１つの付加的な治療又は診断薬剤を用いて、治療及び／又は予防する方法を提供する。
化学療法剤の非限定的な例としては、チオテパ及びシクロホスホアミド等のアルキル化剤;ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホナート;アジリジン（例えばベンゾドーパ、カルボコン、メツアドーパ及びウレドーパ）;アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホアミド、トリエチレンチオ蛍光体アミド及びトリメチロールメラミンを含むエチレンイミン及びメチルメラミン;クロランブシル等のナイトロジェンマスタード、クロランブシルクロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミン酸化物、メルファラン、ノベムビチン、フェンテルミン、プレドニマスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード;カルマスティン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン等のニトロソ尿素;アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の抗生物質;メトトレキセート及び５‐フルオロウラシル（５-ＦＵ）等の抗代謝剤;デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸類似物;フルダラビン、６‐メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体;例えばアンシタビン、アザシチジン、６-アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン、５-ＦＵ等のピリミジン類似体;カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン;アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎;フォリン酸等の葉酸補液;アセグラトン;アルドホスファミドグリコシド;アミノレブリン酸;アムサクリン;ベストラブシル;ビサントレン;エダトラキサート;デフォファミン;デメコルチン;ジアジクオン;エフロルニチン;エリプチニウム酢酸塩;エトグルシド;硝酸ガリウム;ヒドロキシ尿素;レンチナン;ロニダミン;ミトグアゾン;ミトキサントロン;モピダモール;ニトラクリン;ペントスタチン;フェナメト;ピラルビシン;ポドフィリン酸;２-エチルヒドラジド;プロカルバジン;ラゾキサン;シゾフィラン;スピロゲルマニウム;テヌアゾン酸;トリアジクオン;２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン;ウレタン;ビンデシン;ダカルバジン;マンノムスチン;ミトブロニトール;ミトラクトール;ピポブロマン;ガシトシン;アラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）;シクロホスファミド;チオテパ;タキソイド、例えば、パクリタキセル及びドセタキセル;クロランブシル;ゲムシタビン;６‐チオグアニン;メルカプトプリン;メトトレキセート;シスプラチン及びカルボプラチン等のプラチナ及びプラチナ配位化合物;ビンブラスチン;エトポシド（ＶＰ-１６）;イホスファミド;マイトマイシンＣ;ミトキサントロン;ビンクリスチン;ビノレルビン;ナベルビン;ノバントロン;テニポシド;ダウノマイシン;アミノプテリン;ゼローダ;イバンドロネート;ＣＰＴ１１;トポイソメラーゼ阻害剤;ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）;レチノイン酸;エスペラミシン;カペシタビン;及び上記のいずれかの薬理学的に許容される塩、酸又は誘導体が挙げられる。
また、化学療法剤は、抗卵胞ホルモン等の、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は抑制するように作用する抗ホルモン剤を含み、この抗卵胞ホルモンは、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、４(５)-イミダゾール阻害アロマターゼ、４-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、オナプリストン及びトレミフェン;並びに、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン等の抗アンドロゲン，及び上記いずれかの薬理学的に許容される塩、酸、又は誘導体が含まれる。特定の実施形態では、併用療法は、ホルモン又は関連するホルモン剤の投与を含む。
ＩＬ-１０ポリペプチドと組み合わせて用いることができる付加的な治療方法としては、ＩＬ-１２、ＩＮＦα等のサイトカイン又はサイトカイン拮抗剤、又は抗表皮成長因子レセプタ、放射線治療、他のＴ抗原に対するモノクローナル抗体、モノクローナル抗体と毒物との複合体、Ｔ細胞アジュバント、骨髄移植又は抗原提示細胞（例えば樹状細胞療法）等が挙げられる。また、ワクチン（例えば、可溶性タンパク質として、又は、タンパク質をコードしている核酸として）が、ここにも提供される。
心血管疾患。本開示は、特定の心血管関連及び／又は代謝関連疾病、疾患及び状態、ならびにそれに関係した疾患を、ＩＬ-１０ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ-ＩＬ-１０）及び少なくとも１つの付加的な治療又は診断剤で、治療及び／又は予防する方法を提供する。
高コレステロール血症（したがってしばしばアテローム性動脈硬化）の治療のための併用療法に有用な治療薬の例としては、コレステロールの酵素的合成を阻害するスタチン（例えば、ＣＲＥＳＴＯＲ、ＬＥＳＣＯＬ、ＬＩＰＩＴＯＲ、ＭＥＶＡＣＯＲ、ＰＲＡＶＡＣＯＬ及びＺＯＣＯＲ）;コレステロールを分離してその吸収を予防する胆汁酸樹脂（例えば、ＣＯＬＥＳＴＩＤ、ＬＯ−ＣＨＯＬＥＳＴ、ＰＲＥＶＡＬＩＴＥ、ＱＵＥＳＴＲＡＮ及びＷＥＬＣＨＯＬ）;コレステロール吸収を抑止するエゼチミブ（ＺＥＴＩＡ）;トリグリセリドを低減してＨＤＬを穏当に増大させ得るフィブリン酸（例えば、ＴＲＩＣＯＲ）；ＬＤＬコレステロール及びトリグリセリドを穏当に低下させるナイアシン（例えば、ＮＩＡＣＯＲ）；及び／又は前述の組合せ（例えば、ＶＹＴＯＲＩＮ（シンバスタチンと共にエゼチミブ）が挙げられる。ここに記載されたＩＬ-１０ポリペプチドと組み合わせた使用のための候補となり得る代替的なコレステロール治療は、様々な補助成分及びハーブ（例えば、ニンニク、ポリコサノール及びグッグル）を含む。本開示は、上記のいずれかの薬理学的に許容される塩、酸又は誘導体を包含する。
免疫及び炎症状態。本開示は、免疫関連及び／又は炎症性関連の疾病、疾患及び状態、ならびにそれに関係した疾患を、ＩＬ-１０ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ-ＩＬ-１０）及び少なくとも１つの付加的な治療又は診断剤で、治療及び／又は予防する方法を提供する。
併用治療に有用な治療薬の非限定的な例としては、以下が挙げられる：アスピリン、イブプロフェン及びその他のプロピオン酸誘導体等の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ブクロキシ酸、カルプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルプロフェン、フルルビプロフェン、インドプロフェン、ケトプロフェン、ミロプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、スプロフェン、チアプロフェン酸及びチオキサプロフェン）、酢酸誘導体（インドメタシン、アセメタシン、アルクロフェナック、クリダナク、ジクロフェナク、フェンクロフェナック、フェンクロジ酸、フェンチアザク、フロフェナク、イブフェナック、イソキセパク、オキシピナク、スリンダク、チオピナク、トルメチン、ジドメタシン及びゾメピラク）、フェナム酸誘導体（フルフェナム酸、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ニフルム酸及びトルフェナム酸）、ビフェニルカルボン酸誘導体（ジフルニサル及びフルフェニサール）、オキシカム（イソキシカム、ピロキシカム、スドキシカム及びテノキシカム）、サリチラート（アセチルサリチル酸、スルファサラジン）及びピラゾロン（アパゾン、ベンズピペリノン、フェプラゾン、モフェブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン）。その他の組合せは、シクロオキシゲナーゼ-２（ＣＯＸ-２）阻害剤を含む。
組合せのためのその他の活性剤は、プレドニソロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、デキサメタゾン又はヒドロコルチゾン等のステロイドを含む。現在のＩＬ-１０ポリペプチドと組み合わせて患者を治療する場合に必要なステロイドドーズを漸減させることにより、ステロイドの１つ以上の医薬品副作用を低減又は排除できるため、このような組合せは、特に有利となり得る。
例えば慢性関節リウマチの治療のために組合せる活性剤の更なる例としては、サイトカイン抑制抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）;その他のヒトサイトカイン又は成長因子に対する抗体又は拮抗剤、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ-１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ-８、ＩＬ−１５、ＩＬ-１６、ＩＬ-１８、ＥＭＡＰ-ＩＩ、ＧＭ-ＣＳＦ、ＦＧＦ又はＰＤＧＦを含む。
活性剤の特定の組合せは、自己免疫及び引き続く炎症カスケードにおいて異なる時点で干渉し得るとともに、キメラ、ヒト化又はヒトＴＮＦ抗体のようなＴＮＦ拮抗剤、ＲＥＭＩＣＡＤＥ、抗ＴＮＦ抗体フラグメント（例えばＣＤＰ８７０）、及び可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦレセプタ、その誘導体、ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ。）又はｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ）、可溶性ＩＬ-１３レセプタ（ｓＩＬ-１３）を含み、また、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤;同様にＩＬ−１阻害剤（例えば、インターロイキン-１変換酵素阻害剤）が有効となり得る。その他の組合せは、インターロイキン１１、抗Ｐ７及びｐ-セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）を含む。ここに記載されるＩＬ-１０ポリペプチドと組み合わせて有用な剤のその他の例は、インターフェロン-β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ）;インターフェロン-β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ）;コパキソン;高圧酸素;静脈免疫グロブリン;クラドリビン;及びその他のヒトサイトカイン又は成長因子（例えば、ＣＤ４０リガンド及びＣＤ８０に対する抗体）に対する抗体又は拮抗剤、を含む。
本開示は、上記のいずれかの薬理学的に許容される塩、酸又は誘導体を包含する。
ウィルス疾病。本開示は、ウィルス性疾病、疾患及び状態、ならびにそれに関係した疾患を、ＩＬ-１０ポリペプチド（例えば、ＰＥＧ-ＩＬ-１０）及び少なくとも１つの付加的な治療又は診断剤（例えば、１つ以上のその他の抗ウィルス性剤及び／又は１つ以上のその他の非ウィルス剤）で、治療及び／又は予防する方法を提供する。
この併用療法は、様々なウィルスライフサイクルステージをターゲットにし、かつ、異なる作用機構を有する、抗ウィルス性剤を含み、この非限定的な例としては、以下：ウィルスの脱殻の阻害剤（例えば、アマンタジン及びリマンタジン）;逆転写酵素阻害剤（例えば、アシクロビル、ジドブジン及びラミブジン）;インテグラーゼをターゲットにする薬剤;ウィルスＤＮＡに転写因子の結合を抑止する薬剤;翻訳（例えば、ホミビルセン）に影響を与える薬剤（例えば、アンチセンス分子）;翻訳/リボザイム機能を調節する薬剤;プロテアーゼインヒビター;ウィルス集合調節剤（例えば、リファンピシン）;及びウィルス粒子の放出を阻止する薬剤（例えば、ザナミビル及びオセルタミビル）、が挙げられる。特定のウィルス感染（例えば、ＨＩＶ）の治療や予防は、抗ウィルス因子の群（「カクテル」）をしばしば伴う。
ＩＬ-１０ポリペプチドと組み合わせて使用することが想定されるその他の抗ウィルス因子の非限定的な例としては、以下：アバカビル、アデフォビル、アマンタジン、アンプレナビル、アムプリゲン、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、ボセプレビル、シドホビル、コンビビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフュービルタイド、エンテカビル、ファムシクロビル、ホスアンプレナビル、フォスカーネット、フォスフォネット、ガンシクロビル、イバシタビン、イムノビル、イドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、様々なインターフェロン（例えば、ペグインターフェロンα-２ａ）、ロピナビル、ロビリド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサビル、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、ラルテグラビル、リバビリン、リトナビル、ピラミジン、サキナビル、スタブジン、テラプレビル、テノホビル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロック、ビダラビン、ビラミジン及びザルシタビンが挙げられる。
本開示は、上記のいずれかの薬理学的に許容される塩、酸又は誘導体を包含する。
ドーズ 本開示のＩＬ-１０ポリペプチドは、例えば、投与の目標（例えば、望まれる消散の程度）;年齢、重量、性別及び健康及び被験体の物理的状態、投与されている配合;投与のルート;及び疾病、疾患、状態又はその症状の性質、によって決まる量で、被験体に投与されてもよい。ドーズ投薬計画は、投与される薬剤の存在、性質及びこれに関連したあらゆる副作用の範囲を考慮し得る。有効な用量量及び用量投薬計画は、たとえば、安全性及びドーズ漸増の試み、インヴィヴォでの研究（例えば動物モデル）、及び当業者に知られているその他の方法から、容易に決定することができる。
本開示は、特定の血清トラフ濃度を達成するため及び／又は特定の平均血清トラフ濃度を保持するための、ＩＬ-１０の投与を想定する。ＩＬ-１０に特異的な方法論が、本明細書の他の部分及びこの下記のセクションに記載される。
一般に、用量が、被験体に不可逆的に有毒となり得る量未満で、かつ被験体に対する測定可能な効果を生じるために必要な量（例えば、最大耐量「ＭＴＤ」）以上であるように、ドーズパラメータは決定づける。この量は、投与のルート及びその他の因子を考慮し、例えば、ＡＤＭＥに関連した薬物動態及び薬力学的パラメータにより決定される。
有効ドーズ（ＥＤ）とは、それを摂取する被験体のある割合が、治療反応又は所望の効果を生ずる薬剤のドーズ又は量である。薬剤の「中央値有効ドーズ量」又はＥＤ５０は、それが投与される人口の５０％が治療反応又は所望の効果を生ずる薬剤のドーズ又は量である。ＥＤ５０は薬剤の効果の合理的な予測の基準として一般的に用いられるが、これは必ずしも、臨床医が、全ての関連性のある因子を考慮して、適切であると考えるだろうドーズではない。したがって、ある状況では、有効量は、計算されたＥＤ５０よりも大きく、他の状況では、有効量は、計算されたＥＤ５０より小さく、なお他の状況では、有効量は、計算されたＥＤ５０と同じである。
さらに、本開示のＩＬ-１０ポリペプチドの有効ドーズ量は、被験体に１つ以上のドーズで投与されるときに、健康な被験体に対して所望の結果を生成する量であってもよい。例えば、特定の疾患を経験している被験体に対する有効ドーズ量は、その疾患の診断パラメータ、基準、マーカー等を、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は９０％より高く、改良するものであってもよく、ここで、１００％は、正常被験者によって示される診断パラメータ、基準、マーカー等として定義される。
ここに記載される疾病、疾患又は状態を治療するために必要なＰＥＧ-ＩＬ-１０の量は、接合タンパク質のＩＬ-１０活性に基づき、これは当該技術分野で知られているＩＬ-１０活性アッセイによって決定することができる。一例として、腫瘍の場面において、適切なＩＬ-１０活性は、例えば、腫瘍部位へのＣＤ８+Ｔ細胞浸透物、これらの浸潤状の細胞からの、ＩＦＮ-γ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ-１０及びＲＡＮＫ−Ｌ等の炎症サイトカインの発現、及び生体サンプルの中にＩＦＮ-γのレベルの増加を含む。
ＩＬ-１０薬剤の治療有効量は、体重/日で約０．０１〜約１００μｇタンパク質/ｋｇ、体重/日で約０．１〜２０μｇタンパク質/ｋｇ、体重/日で約０．５〜１０μｇタンパク質/ｋｇ、又は体重/日で約１〜４μｇタンパク質/ｋｇ、の範囲とすることができる。ある実施形態では、ＩＬ-１０薬剤を連続注入によって投与し、体重/日で約５０〜８００μｇタンパク質/ｋｇを供給する
（例えば、ＩＬ-１０薬剤を体重/日で約１〜１６μｇタンパク質/ｋｇ）。例えば、注入速度は、副作用及び血球数の評価に基づいて変えてもよい。
経口薬剤の投与では、組成物は、１．０〜１０００ミリグラムの活性成分を含有する錠剤、カプセル等の形態で提供されることができ、活性成分が特に、１．０、３．０、５．０、１０．０、１５．０、２０．０、２５．０、５０．０、７５．０、１００．０、１５０．０、２００．０、２５０．０、３００．０、４００．０、５００．０、６００．０、７５０．０、８００．０、９００．０、及び、１０００．０ミリグラムであってもよい。
ＩＬ-１０ポリペプチドのための特定のドーズ投薬計画（例えばドーズ頻度）は、本開示の他の部分に記載される。
特定の実施形態では、開示されたＩＬ-１０ポリペプチドの用量は、「単位剤形」で含まれる。「単位剤形」というフレーズは、物理的に個別の単位のことをいい、各単位は、単独で、又は、１つ以上の付加的な薬剤と組み合わせて、所望の効果を生じるに十分な、本開示のＩＬ-１０ポリペプチドの予め定められた量を含んでいる。単位剤形のパラメータは、達成される特定の薬剤及び効果に依存することが、理解されよう。
キット
また、本開示は、ＩＬ-１０及びその医薬品組成物を含むキットを想定する。キットは一般に、下記のように様々な要素を収容する物理的構造の形態であり、例えば、上記の方法の実行に利用されてもよい（例えば、コレステロールホメオスタシスを回復させる必要のある被験体へのＩＬ-１０ポリペプチドの投与）。
キットは、ここに開示されるＩＬ-１０ポリペプチドの１つ以上を含むことができる（例えば、無菌容器で提供）、これは、被験体への投与に適切な医薬品組成物の形態であってもよい。ＩＬ-１０ポリペプチドは、使用の準備ができている形態で、又は、例えば投与前に還元又は希釈が必要な形態で、提供することができる。ＩＬ-１０ポリペプチドがユーザーによって還元する必要がある形態の場合は、キットは、バッファ、薬理学的に許容される賦形剤等を、パッケージ化で、又は、ＩＬ-１０ポリペプチドとは別々に、含んでもよい。併用療法が想定される場合は、キットは別々にいくつかの薬剤を有してもよく、又は、これらがキットにすでに組み込まれてもよい。キットの各要素は、個体容器で封入されてもよく、そして、様々な容器の全てが単一のパッケージ中にあってもよい。本開示のキットは、内部に収容される要素を適切に保持する（例えば、冷凍又は凍結）ために必要な状態となるように設計されてもよい。
キットは、その中の要素を特定するための情報及びそれらの使用のための指示書（例えば、ドーズパラメータ、活性成分の臨床薬理学、作用機構、薬動学及び薬力学、副作用、禁忌等を含むこと）を含むラベル又は包装挿入物を有してもよい。ラベル又は挿入物は、ロット番号及び有効期限等の製造者情報を含むことができる。ラベル又は包装挿入物は、例えば、要素を収容する物理的構造内に統合し、物理的構造内に別々に含まれるようにしてもよく、又はキットの要素（例えばアンプル、チューブ又はバイアル）に添付されるようにしてもよい。
ラベル又は挿入物は、さらにコンピュータ読取り可能な媒体を、含むことができ、又は媒体に取り込まれることができ、この媒体は、ディスク（例えば、ハードディスク、カード、記憶ディスク）、ＣＤ-ＲＯＭ又はＤＶＤ-ＲＯＭ/ＲＡＭ等の光ディスク、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープ、又はＲＡＭ及びＲＯＭ等の電気保存媒体、又は、これらの磁気/光学保存媒体等のハイブリッド型、フラッシュメディア又はメモリタイプカードであってもよい。ある実施形態では、実際の指示書はキットの中に存在しないが、例えばインターネットを介して、リモートソースから指示書を得るための手段が提供される。
以下の例は、どのように本発明を製作し使用するかの、完全な開示及び説明を当業者に提供するように、提示され、本発明者が、自身の発明と考えるものの範囲を限定することは意図されず、下記の実験は、実行されたものであり、かつ、実行できる実験の全てであると示すことは意図されない。現在形で記載される例示的な説明は、必ずしも実行されるというわけではなく、むしろこれらの説明は、ここに記載されるデータ等を生成するために実行することが可能であると、理解されるべきである。用いられる数値（例えば量、温度等）に関して正確さを確実にする取り組みがなされたが、ある実験誤差及び偏差が考慮されるべきである。
特に明記しない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏（℃）であり、圧力は大気圧又は大気圧近傍である。標準的な略称が使用され、これは以下を含む：ｂｐ=塩基対;ｋｂ=キロベース;ｐｌ=ピコリットル;ｓ又はｓｅｃ=秒;ｍｉｎ=分;ｈ又はｈｒ=時間;ａａ=アミノ酸;ｋｂ=キロベース;ｎｔ=ヌクレオチド;ｎｇ=ナノグラム;μｇ=マイクログラム;ｍｇ=ミリグラム;ｇ=グラム;ｋｇ=キログラム;ｄｌ又はｄＬ＝デシリットル;μｌ又はμＬ=マイクロリットル;ｍｌ又はｍＬ=ミリリットル;ｌ又はＬ=リットル;μＭ=ミクロモル;ｍＭ=ミリモル;Ｍ=モル;ｋＤａ=キロダルトン;ｉ.ｍ.=筋肉内（筋肉内で）;ｉ.ｐ.=腹腔内（腹腔内で）;ｉ.ｖ.又はＩＶ=静脈（静脈で）;ｓ.ｃ.又はＳＣ=皮下（皮下で）;ＱＤ=毎日;ＢＩＤ=１日２回;ＱＷ=毎週;ＱＭ=毎月;ＨＰＬＣ=高速液クロマトグラフィ;ＢＷ=体重;Ｕ=単位;ｎｓ=統計的に有意でない;ＰＢＳ=リン酸塩緩衝食塩水;ＰＣＲ=ＰＣＲ法;ＮＨＳ=Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド;ＤＭＥＭ=ダルベッコ改変イーグル培地;ＧＣ=ゲノムコピー;ＥＤＴＡ=エチレンジアミン四酢酸。
材料及び方法 以下の総合的な材料及び方法が、下記の実施例に用いられてもよい。
分子生物学の標準分析法が、記載される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；及びＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１−４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，を参照のこと。これらにおいては、細菌細胞のクローニング及びＤＮＡ突然変異発生（Ｖｏｌ．１）、哺乳動物細胞及びイーストのクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質及びタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、及びバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）が記載される）。
科学文献は、免疫沈降、クロマトグラフィ、泳動、遠心及び結晶化、ならびに化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパクの生成及びタンパク質のグリコシル化を含む、タンパク質精製のための方法を記載する（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌｓ．１−２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹを参照）。
ポリクローナル及びモノクローナル抗体の生成、精製及び開裂が記載され（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）；リガンド/レセプタ相互作用のキャラクテリゼーションのための標準技術が利用可能であり（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，ＮＹを参照）；フローサイトメトリー（蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）を含む）のための方法が利用可能であり（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照）；そして、核酸プライマー及びプローブ（ポリペプチド）及び抗体を含む、たとえば診断試薬としての使用のため、核酸を変成するために適切な蛍光性試薬が、利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ．；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）。
免疫系の組織学の標準分析法が記載される（例えば、Ｌｏｕｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照）。
免疫細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８+Ｔ細胞）の除去は、抗体媒介除去によって行われてもよい。例えば、２５０μｇのＣＤ４特異的抗体又はＣＤ８特異的抗体を、毎週注入し、ＦＡＣＳ及びＩＨＣ分析法を用いて細胞除去を確かめることができる。
例えば、抗原性フラグメント、リーダー配列、タンパク質畳み込み、機能ドメイン、グリコシル化部位及びシーケンス調整等を決定するためのソフトウェアパッケージ及びデータベースが、利用可能である（例えば、ＧＣＧウィスコンシンパッケージ（米国カリフォルニア州サンディエゴのＡｃｃｅｌｒｙｓ社）;及びＤｅＣｙｐｈｅｒ（商標）（米国ニュージャージ州クリスタルベイのＴｉｍｅＬｏｇｉｃ社を参照）。
免疫適格Ｂａｌｂ/Ｃ又はＢ細胞欠損Ｂａｌｂ/Ｃマウスが、米国メーン州バーハーバーのＴｈｅＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ．より得られ、標準的な手法に従って用いられた（例えば、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ(２００１）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，６９（１１）：７０６７−７３、及びＣｏｍｐｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｏｍｐ．Ｍｅｄ．５４（６）：６８１−８９を参照）。本開示によって想定される実験研究のために適切である他のマウス株は、当業者に知られており、そして、ＴｈｅＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ．から一般に利用可能である。
特に明記しない限り、皮膚のＰＤＶ６扁平上皮癌が、ここに記載される実験に用いられた（例えば、Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ４４２：４６１−４６５を参照）。Ｅｐ２乳がん、ＣＴ２６結腸癌腫、及び４Ｔ１乳癌モデル等の他の腫瘍学関連モデル及び細胞株が、使用可能であり（Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ４４２：４６１−４６５を参照）、これは当業者に知られている。また、腫瘍学非関連モデル及び細胞株（例えば炎症のモデル）を用いてもよく、これは当業者にも知られている。
血清ＩＬ-１０濃度レベル及び曝露レベルは、当該技術分野で用いられる標準分析法によって決定されてもよい。例えば、血清曝露レベルアッセイは、マウステール小片から全血（〜５０μｌ/マウス）を普通のキャピラリチューブに収集し、遠心により血清及び血球を分離し、標準ＥＬＩＳＡキット及び技術によってＩＬ-１０曝露レベルを決定することにより、実行することができる。ＩＬ-１０血清中濃度を決定する更なる手段が、この後に記載される。
ＰＥＧ化ＩＬ-１０の生成
本開示は、当業者に知られているあらゆる手段でのＰＥＧ化ＩＬ-１０の合成を想定する。モノ-ＰＥＧ-ＩＬ-１０及びモノ−/ジ−ＰＥＧ-ＩＬ-１０の混合物を生成するための代替的な合成スキームを数種類、下記に説明するが、これらは例示目的のみである。モノ-ＰＥＧ-ＩＬ-１０とモノ−/ジ−ＰＥＧ-ＩＬ-１０の混合物とは、多くの同等な特性を有する一方で、選択的にＰＥＧ化したモノ−及びジ−ＰＥＧ-ＩＬ-１０の混合物は、最終的なＰＥＧ化生成物の収率を改良する（例えば、米国特許第７,０５２,６８６号及び米国特許第出願公開公報第２０１１／０２５０１６３号を参照）。
ＰＥＧの生成及び使用において本開示の実施に適切な自身の技術（及び他のドラッグデリバリー技術）を活用することに加えて、当業者は、ＰＥＧ関連の技術（及び他のドラッグデリバリー技術）の多くの商業的供給元にも通じている。一例として、ＮＯＦ Ａｍｅｒｉｃａ社（米国カリフォルニア州アーヴィン）は、単官能直鎖ＰＥＧ、二官能性ＰＥＧ、多枝ＰＥＳ、分枝ＰＥＧ、ヘテロ官能性ＰＥＧ、分岐ＰＥＧ及びリリース可能ＰＥＧを供給し;Ｐａｒｃｈｅｍ社（米国ニューヨーク州ニューロシェル）は、ＰＥＧ生成物及び他の専門原料の世界的な販売者である。
例示的なＰＥＧ-ＩＬ-１０合成スキームＮｏ.１．ＩＬ-１０を、ｐＨ７．０、１００ｍＭ ＮａＣｌで、１０ｍＭリン酸ナトリウムに対して透析してもよい。次いで、透析されたＩＬ-１０を、透析バッファを用いて、３．２倍に希釈して４ｍｇ/ｍｌの濃度としてもよい。リンカーを添加する前に、Ｓｃ-ＰＥＧ-１２Ｋ（Ｄｅｌｍａｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌａｂｓ；米国イリノイ州メイウッド）、１００ｍＭホウ砂を１体積、ｐＨ９．１で、９体積に希釈したＩＬ-１０に加えて、ＩＬ-１０溶液のｐＨを８．６まで上げることができる。Ｓｃ-ＰＥＧ-１２Ｋのリンカーは、透析バッファ中に溶解することができ、適切な体積のリンカー溶液（ＩＬ-１０がリンカー/モルで１．８〜３．６モル）を、希釈ＩＬ-１０溶液に加えて、ＰＥＧ化反応を開始することができる。反応速度を制御するため、反応を５℃で遂行することができる。ＰＥＧ化反応の間、反応溶液をマイルドに攪拌することができる。サイズ排除ＨＰＬＣ（Ｓｅ-ＨＰＬＣ）で測定したモノ-ＰＥＧ-ＩＬ-１０の収率が４０％に近い場合は、１Ｍのグリシン溶液を加えて３０ｍＭの最終濃度とすることにより、反応が停止される。ＨＣｌ溶液を用いて、反応溶液のｐＨを７．０にゆっくりと調整し、その後、０．２ミクロンのフィルタを用いて反応溶液を濾過し、-８０℃で保存する。
例示的なＰＥＧ-ＩＬ-１０合成スキームＮｏ.２。リンカーとしてメトキシ-ＰＥＧ-アルデヒド（ＰＡＬＤ-ＰＥＧ）を用いて、モノ-ＰＥＧ-ＩＬ-１０が調製される（ＩｎｈａｌｅＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＳｙｓｔｅｍｓ、米国アトランタ州ハンツヴィル：また、ＮＯＦ Ａｍｅｒｉｃａ社（米国カリフォルニア州アーヴィンからも入手可能）。ＰＡＬＤ-ＰＥＧは、５ｋＤａ、１２ｋＤａ又は２０ｋＤａの分子量を有し得る。反応バッファのｐＨが６．３〜７．５である以外は上記と同様に、ＩＬ-１０を透析し、希釈する。活性化ＰＡＬＤ-ＰＥＧリンカーを、１:１のモル比で反応バッファに加える。水性シアノボロヒドリドを反応混合物に加えて、０．５〜０．７５ｍＭの最終濃度とする。マイルドに撹拌しながら、反応を１５〜２０時間室温（１８-２５の℃）で遂行する。１Ｍのグリシンで、反応をクエンチする。収率を、Ｓｅ-ＨＰＬＣにより分析する。ゲル濾過クロマトグラフィにより、未反応のＩＬ-１０、ＰＥＧリンカー及びジ-ＰＥＧ-ＩＬ-１０から、モノ-ＰＥＧ-ＩＬ-１０を分離し、ＲＰ-ＨＰＬＣ及びバイオアッセイ（例えば、ＩＬ-１０感応細胞又は細胞株の刺激）によってキャラクテリゼーションがなされる。
例示的なＰＥＧ-ＩＬ-１０合成スキームＮｏ.３
ＩＬ-１０（例えば齧歯動物又は霊長類）を、５０ｍＭリン酸ナトリウム、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ範囲５〜７．４で透析する。１:１〜１:７のモル比の５ＫＰＥＧ-プロピルアルデヒドを、０．７５〜３０ｍＭナトリウムシアノボロハイドライドの存在下、１〜１２ｍｇ/ｍｌの濃度でＩＬ-１０と反応させる。代替的には、反応を、ピコリンボランを用いて類似の方法で活性化することができる。反応物を、５〜３０℃で３〜２４時間培養する。
ＰＥＧ化反応物のｐＨを、６．３に調整し、７．５ｍｇ/ｍｌのｈＩＬ-１０を、ＰＥＧと反応させて、ＩＬ-１０対ＰＥＧリンカーの比を１：３．５とする。シアノボロヒドリドの最終濃度は、〜２５ｍｍであり、反応は１５℃で１２〜１５時間遂行される。モノ−及びジ−ＰＥＧＩＬ-１０は、反応物中最も多い生成物であり、終了時にはそれぞれ、濃度は〜４５〜５０％である。グリシン又はリジン等のアミノ酸、又は代替的にはＴｒｉｓバッファ、を用いて、反奄・クエンチしてもよい。ゲル濾過、アニオンカチオン交換クロマトグラフィ、及びサイズ排除ＨＰＬＣ（Ｓｅ-ＨＰＬＣ）等の複数の精製法を用いて、所望のＰＥＧ化ＩＬ-１０分子を分離することができる。
例示的なＰＥＧ-ＩＬ-１０合成スキームＮｏ.４。ＩＬ-１０を、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ ７．０、１００ｍＭ ＮａＣｌで透析する。次いで、透析されたＩＬ-１０を、透析バッファを用いて、３．２倍に希釈して、約０．５〜１２ｍｇ/ｍｌの濃度とする。リンカーを添加する前に、Ｓｃ-ＰＥＧ-１２Ｋ（ＤｅｌｍａｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＬａｂｓ；米国イリノイ州メイウッド）、１００ｍＭホウ砂を１体積、ｐＨ９．１で、９体積に希釈したＩＬ-１０に加えて、ＩＬ-１０溶液のｐＨを８．６まで上げる。Ｓｃ-ＰＥＧ-１２Ｋのリンカーを、透析バッファ中に溶解し、適切な体積のリンカー溶液（ＩＬ-１０がモル当たりリンカーで１．８〜３．６モル）を、希釈ＩＬ-１０溶液に加えて、ＰＥＧ化反応を開始する。反応速度を制御するため、反応を５℃で遂行することができ、反応溶液をマイルドに攪拌する。サイズ排除ＨＰＬＣ（Ｓｅ-ＨＰＬＣ）で測定したモノ-ＰＥＧ-ＩＬ-１０の収率が４０％に近い場合は、１Ｍのグリシン溶液を加えて３０ｍＭの最終濃度とすることにより、反応が停止される。ＨＣｌ溶液を用いて、反応溶液のｐＨを７．０にゆっくりと調整し、その後、反応溶液を０．２ミクロンフィルタで濾過し、-８０℃で保存する。
下記、上記、及びその説明を含む表１５に記載した材料は、本質的には米国特許公開公報第２０１１／００９１１４１９号（米国特許公開公報第２０１１／００９１１４１９号の共同発明者が、本出願の発明者でもある）及びその教示より抽出され、広く適用でき、多数の異なる場面で利用及び／又は改変される。同様に、関連分野及び／又は技術領域の他の刊行物の教示（例えば、米国特許出願番号第６,３８７,３６４号及び第７，０５２，６８４号並びに国際出願公開公報ＷＯ２００６／０７５１３８号を参照）は、当業者の総合的な知識とあいまって、更なる実験研究の基礎を形成することができる。
腫瘍モデル及び腫瘍分析
当技術分野で認められたあらゆる腫瘍モデル、アッセイ等を用いて、様々な腫瘍に関するＩＬ-１０及びＰＥＧ-ＩＬ-１０の効果を評価することができる。この後記載される腫瘍モデル及び腫瘍分析は、利用可能なものの代表であり、それらを用いて、表１-１５に記載されたデータを生成し、評価する。
同系マウス腫瘍細胞を、腫瘍接種当たり、細胞１０４個、１０５個又は、１０６個で、皮下に又は皮内に注入する。Ｅｐ２乳がん、ＣＴ２６結腸癌腫、皮膚のＰＤＶ６扁平上皮癌及び４Ｔ１乳癌モデルを、用いることができる（Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ４４２：４６１−４６５を参照）。免疫適格Ｂａｌｂ/Ｃ又はＢ細胞欠損Ｂａｌｂ/Ｃマウスを、用いることができる。ＰＥＧ-ｍＩＬ-１０を、免疫適格マウスに投与することができる一方で、ＰＥＧ-ｈＩＬ-１０治療をＢ細胞欠損マウスに用いることができる。治療が開始される前に、腫瘍を、１００〜２５０ｍｍ３のサイズに到達するようにする。ＩＬ-１０、ＰＥＧ-ｍＩＬ-１０、ＰＥＧ-ｈＩＬ-１０又はバッファコントロールを、腫瘍移植点から遠く離れた部位で、皮下に投与する。典型的には、電子ノギスを用いて、癌成長を週２回モニターする。
腫瘍組織及びリンパ器官を、様々な終末点で採取し、多数の炎症マーカーに対するメッセンジャーｍＲＮＡ発現を計測し、複数の炎症細胞マーカーに対する免疫組織化学を実行する。組織を、液体窒素中で急速冷凍し、-８０℃で保存する。典型的には、電子ノギスを用いて、一次癌の成長を週２回モニターする。以下の式を用いて癌体積を計算することができ：（幅２×長さ/２）、式中、長さは、より長い方の寸法である。治療が開始される前に、腫瘍を、９０〜２５０ｍｍ３のサイズに到達するようにする。
ＩＬ-１０及び／又はＰＥＧ-ＩＬ-１０の投与
上記の腫瘍モデル及び癌分析法を利用して、以下に記載するデータを生成した。しかしながら、上記のように、これらと同じモデル及び方法論を、他の実験の設定に用いてもよい。
マウスＩＬ-１０（ｍＩＬ-１０）又はＰＥＧ-ｍＩＬ-１０を、免疫適格マウスに投与、他方で、ＰＥＧ-ｈＩＬ-１０処理がＢ細胞欠損マウスに用いられた。マウスＩＬ-１０、ＰＥＧ-ｍＩＬ-１０、ＰＥＧ-ｈＩＬ-１０、又はビヒクルコントロールは、腫瘍播種から遠く離れた部位に、皮下投与された。これらの研究に用いられたＰＥＧ-ｍＩＬ-１０は、Ｓｃ-ＰＥＧ-１２Ｋのリンカーで調製された。ｍＩＬ-１０及びＰＥＧ-ｍＩＬ-１０の生体活性を、内因性ｍＩＬ-１０レセプタ（Ｒ１及びＲ２）を発現するＭＣ/９、マウス肥満細胞株を利用した短期増殖バイオアッセイを適用して評価した。ＭＣ/９細胞は、ｍＩＬ-４及びｍＩＬ-１０の相互刺激に応じて増殖する（ＭＣ/９細胞は、ｍＩＬ-４又はｍＩＬ-１０のみでは増殖しない）。アラマーブルー、代謝活性の検出に基づく成長指標染料、を用いた比色手段で、増殖を計測した。組換え型又はＰＥＧ-ｍＩＬ-１０の生体活性は、ＥＣ５０値、又は最大刺激の半分がドーズ応答曲線（表１）で観察されるときのタンパク質の濃度により評価された。
Figure 2016519108
表１に示されるように、ＭＣ/９バイオアッセイに基づき、実験に用いられるＰＥＧ-ｍＩＬ-１０の比活性度は、ｍＩＬ-１０の活性より、約７倍低かった。
また、Ｅｐ２乳癌腫瘍を内包するマウスに、ＰＥＧ-ｍＩＬ-１０を、隔日に投与してもよい。治療は、癌サイズの縮小及び癌除去の誘発に有効であった。
Figure 2016519108
また、ＰＥＧ-ｍＩＬ-１０による治療も、ＰＤＶ６、ＣＴ-２６、及び４Ｔ１同系免疫コンピテントマウス腫瘍モデルの癌サイズ低減に、有効であった（表３、４及び表５参照）。
Figure 2016519108
用量漸増法の検討
用量漸増法の研究では、予想されるピーク及びトラフ服用レベルに対応した時間に、各グループの代表的なマウスから尾静脈ブリードを収集した。電気化学ルミネセンスの検出とパターニングされたアレイとの組合せであるマルチアレイ技術に基づいた、メソスケールディスカバリープラットフォームを用いて、採取された血清を、ｍＩＬ-１０濃度についてアッセイした。両側不対スチューデントｔ検定を用いて、血清ｍＩＬ-１０濃度でグループ分けされたｍＩＬ-１０−処理又はＰＥＧ-ｍＩＬ-１０−処理マウスの平均癌体積を、それらに対応するビヒクルコントロールグループの平均癌体積と比較した。２つのグループに不等な相違（ｔ検定からのｐ<０．０５）があった時に、ウェルチの補正を用いた。
４Ｔ１乳癌罹患マウスのＰＥＧ-ｍＩＬ-１０及びｍＩＬ-１０の用量漸増法では、一次的腫瘍のコントロール及び肺転移は、ｍＩＬ-１０及びＰＥＧ-ｍＩＬ-１０の両方共に、用量漸増法が可能であることが示された。表６に記載したように、あらゆる所与のドーズで、ＰＥＧ-ｍＩＬ-１０は、ｍＩＬ-１０より有効である。毎日２回の治療は、移植後１７日目に開始され，その時、平均癌体積は８４〜９０ｍｍ３であった。治療グループは、グループ当たり１４匹のマウスから成り、コントロールグループは、各グループで８匹のマウスを有していた。それぞれ、Ｔｒｉｓ及びＨｅｐｅｓバッファはｍＩＬ-１０及びＰＥＧ ｍＩＬ-１０に対するコントロールであった。
Figure 2016519108
ＰＤＶ６扁平上皮癌内包マウス中でのＰＥＧ-ｍＩＬ-１０及びｍＩＬ-１０の用量漸増法では、一次腫瘍のコントロールは、ｍＩＬ-１０及びＰＥＧ-ｍＩＬ-１０の両方で用量漸増可能であるが、あらゆる所与のドーズで、ＰＥＧ-ｍＩＬ-１０は、ｍＩＬ-１０より有効である。
（表７）。高用量ＰＥＧ-ｍＩＬ-１０治療は、１００％に近い癌後退がもたらされ、引き続き、再投薬試験への耐性が示された
（表８）。毎日２回の治療は、移植後２３日目に開始され、その際、平均癌体積は１０７〜１０９ｍｍ３であり、全てのｍＩＬ１０治療グループ及び０．０１ｍｇ/ｋｇのＰＥＧｍＩＬ-１０治療グループに対し、５５日目連続して行われた。１００％の癌後退が認められたとき、０．１ｍｇ/ｋｇのＰＥＧ-ｍＩＬ-１０治療は４８日目に停止され、他方、残りのグループは５１日目まで治療が続けられた。治療グループは、グループ当たり１０匹のマウスから成り、各ビヒクルコントロールは６匹のマウスを含んでいた。Ｔｒｉｓバッファ及びＨｅｐｅｓバッファはそれぞれ、ｍＩＬ-１０及びＰＥＧ ｍＩＬ-１０のためのビヒクルコントロールであった。一次移植の８５日後及び最後のＰＥＧ-ｍＩＬ１０治療の４週間後に、再移植がなされた。１０匹のマウスが、グループ当たり居た。
Figure 2016519108
肺転移の研究
４Ｔ１乳癌モデルにおける肺転移は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｓｅｃｔｉｏｎ２０．２．４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９９９）に記載されるように、肺切除の後肉眼的に（表９）、又は培養の後肺転移のコロニーを計数することによって（表１０）定量化された。簡潔にいうと、４Ｔ１癌関係マウスから採取される肺をミンチ化し、コラゲナーゼ/エラスターゼカクテルで消化市、その後、６‐チオグアニンを含む媒体中で、限界希釈アッセイで培養した。４Ｔ１細胞のみが、６-チオグアニン耐性を示し、培養の１０〜１４日後にコロニー数を計数することによって、定量化が可能である。毎日２回の治療は、移植の後１７日目に開始され、その際、平均癌体積は、８４〜９０ｍｍ３であった。それぞれ、Ｔｒｉｓ及びＨｅｐｅｓバッファはｍＩＬ-１０及びＰＥＧ ｍＩＬ-１０に対するコントロールであった。肺当たり培養された転移のコロニーの数として、肺転移は計測された。
Figure 2016519108
Figure 2016519108
定量的ＲＴ-ＰＣＲで計測されたように、４Ｔ１乳癌内包マウスへのＰＥＧ-ｍＩＬ-１０又はＩＬ-１０の投与により、転移の速度が低減し、免疫刺激性サイトカインのＣＤ８+Ｔ細胞浸入及び発現が増加する（表１１及び１２）。ＣＤ８表面マーカー用免疫組織化学品によって染色されたいくつかの腫瘍の代表的な部分から、浸入したＣＤ８+Ｔ細胞の数が計数され、抗ＣＤ３及び抗ＴＣＲαβ抗体による染色により確かめられた。
Figure 2016519108
ＰＥＧ-ｍＩＬ-１０は、炎症サイトカイン誘起において、ＩＬ-１０よりも有効である。ホモジナイズされた癌サンプルからの全ＲＮＡが抽出され、前述の通り逆転写された（例えば、Ｈｏｍｅｙ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：３４６５−３４７０を参照）。相補ＤＮＡは、蛍光発生５'-ヌクレアーゼＰＣＲアッセイによって、サイトカインの発現のために、定量的に分析された（例えば、Ｈｏｌｌａｎｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８：７２７６−７２８０を参照）。特異的ＰＣＲ生成物は、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を利用して、４０サイクル間連続的に計測された。数値を、ユビキチンに対して正規化した。データを対数変換し、これを、クラスカルワリス統計分析（中央値方法）で処理した。発現レベル（対数変換値）は、癌サンプル中に発現された炎症サイトカインの量に対応するため、発現レベル（対数変換）がより高いほど、癌サンプル中に発現された炎症サイトカインの量はより多くなった。
Figure 2016519108
免疫細胞の除去
ＣＤ４＋及びＣＤ８+Ｔ細胞は、抗体媒介排除によって除去された。２５０μｇのＣＤ４特異抗体又はＣＤ８特異抗体が、この目的のために毎週注入された。細胞除去は、ＦＡＣＳ及びＩＨＣ分析法を用いて確認された。
ＣＤ４抗体によるＢ細胞欠損ＢＡＬＢ/ｃマウス中のＣＤ４＋Ｔ細胞の除去（Ｃ.１２９-Ｉｇｈ-６ｔｍ１Ｃｇｎ）は、腫瘍上のＰＥＧ-ｈＩＬ-１０機能を阻害した（表１３）。
Figure 2016519108
ＣＤ８+Ｔ細胞の除去は、同系癌の成長におけるＰＥＧ ｍＩＬ-１０の効果を完全に阻害する（表１４）。
Figure 2016519108
ＩＬ-１０ドーズ頻度及び血清トラフ濃度
ＩＬ-１０治療の薬物動態パラメータの理解を強化するため、及び、ヒト被験体中の組み換え型ヒトＩＬ-１０（ｒｈＩＬ-１０）に対する癌治療計画を最適化するために有用なマウスのデータを生成するため、マウス研究はデザインされた及び実行された。
マウスには、ＰＤＶ６腫瘍細胞が接種され、この腫瘍を２．５週間成長させて、１００ｍｍ３に到達した。その後、腫瘍保持マウスのグループ（ｎ=１０/グループ）は、同一の毎週のドーズ（０．７ｍｇ/ｋｇ/週間）で、５ｋＤａのモノ−ジＰＥＧｍＩＬ-１０を投与して治療され、これは、ａ）週に一度１つのボーラス皮下注射、又はｂ）週を通していくつかに分けたドーズでの皮下注射、毎週２度（０．３５ｍｇ/ｋｇ）、一日おき（〜０．２５ｍｇ/ｋｇ、毎週の全ドーズ=０．７ｍｇ/ｋｇとなるよう）、及び毎日（０．１ｍｇ/ｋｇ/日）を含む。全てのマウスが１週間に薬剤の同じ量を受けたため、類似した全体の曝露（濃度曲線下面積、ＡＵＣ）が観察された。ピークの曝露は、１週間に１回ドーズされた動物が最も高く、一方、最小薬剤曝露（トラフ）が最も高かったのは、より小量の毎日のドーズを受けたマウスであった。驚くべきことに、表１５に示されるように、毎日ドーズされる動物は、最も高い抗腫瘍有効性を示し、血清トラフ曝露は、抗腫瘍機能にとって重要であった一方、抗腫瘍機能上のピーク曝露の影響は、決定的でなかったことが、示された。
Figure 2016519108
必要な血清トラフ濃度は、２つの腫瘍モデル：Ｃ５７ＢＬ/６マウス中のＰＤＶ６腫瘍及びＢａｌｂ/Ｃマウス中のＣＴ２６結腸癌細胞、に対して、でさらに調査された。標準的な方法を利用し、マウスを１００ｍｍ３まで成長させた後、治療を開始し、５ｋＤａのモノ−ジ−ＰＥＧｍＩＬ-１０を４週間投与した。その後、異なる治療スケジュールを受けている腫瘍保持マウスに対して、ＩＬ-１０の血清トラフ濃度を計測した。ＩＬ-１０血清トラフ濃度は、その後、得られた癌サイズに相関していた。表１６に示されるように、ＩＬ-１０血清トラフが１ｎｇ/ｍｌ以上のマウスは、常に小さな腫瘍を有し、それらの腫瘍に拒絶反応を示した。
Figure 2016519108
ヒト細胞の中に重要なトラフ濃度を確認するため、ｈＩＬ-１０が、高い濃度で、ヒト末しょう血単球細胞（ＰＢＭＣ）の培養物に加えられた。ＰＢＭＣ培養物は非処理のままにされ、又はリポポリサッカライド（ＬＰＳ）で刺激された。ＩＬ-１０が、ＰＢＭＣのＬＰＳ媒介活性化を阻害するということは、知られている。活性を、ケモカインＭＣＰ-１の分泌として計測した。ＬＰＳ及びＩＬ-１０は共に、ＭＣＰ-１の分泌を誘発するものの、ケモカインの誘発においては、互いの活性を阻害し合う。１ｎｇ/ｍＬ以上の濃度で、ＩＬ-１０は、ＬＰＳの不存在下で、ＭＣＰ-１の分泌を上昇させた（図２Ａ）。対照的に、ＰＢＭＣがＬＰＳで刺激された場合、１ｎｇ/ｍｌの濃度でのＩＬ-１０の添加が、ＭＣＰ-１（図２Ｂ）の分泌を顕著に阻害した。これにより、それぞれの生体プロセスの誘起及び阻害の両方に対するＩＬ-１０の生体活性が確認された。
ヒト被験体におけるサイトカイン及びコレステロールに対するＩＬ-１０の効果
ヒト被験体中の血清ＩＬ-１０濃度の決定。ヒトのボランティアに、所望の量のｒｈＩＬ-１０を皮下又は静注で投与し、投与後所望の時間に、全血液サンプルをヘパリン抗凝血物質含有血管に採血した。標準サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）キットを用いて、血清ｒｈＩＬ-１０又はＰＥＧ-ｒｈＩＬ-１０濃度を決定した。典型的には、ＥＬＩＳＡアッセイは、０．１〜１０ｎｇ/ｍｌの濃度範囲で、選択的、直鎖及び再生可能であると見出され、その定量下限（ＬＯＯ）は、０．１ｎｇ/ｍＬであった。また、血清サンプルは、ｈＩＬ-１０に結合する抗体の存在に対して、ＥＬＩＳＡによっても分析された。さらに、マウス肥満細胞株ＭＣ９を含んでいる有効なバイオアッセイを用いて、選択された血清サンプルは分析され;この細胞株は、ＩＬ-１０に反応して増殖する。バイオアッセイを用いて、ＧＭＰ生成ｒＨｕＩＬ-１０及びＰＥＧ-ｒＨｕＩＬ-１０の生理活性を決定するとともに、患者血清中のＩＬ-１０の生体活性を決定する。典型的には、ＩＬ-１０濃度及び活性のＥＬＩＳＡ及びバイオアッセイの測定は、対応する値を現した。
ヒト被験体中のＴＮＦα及びＩＬ-１β濃度の決定
ＩＬ-１０は、慢性炎症疾病に罹患している患者において抗炎症機能を有し、ＴＮＦα及びＩＬ-１βは、この疾病中に放出される重要な炎症サイトカインを示す。ＴＮＦα及びＩＬ-１βの濃度は、ヒト被験体から得られる血液サンプル中で決定された。典型的には、ｒｈＩＬ-１０の皮下又は静注投与の直前（０時間）、及び、投与後０．５、２、３、４、６、８、１２、１６、２４、４８、７２及び９６時間で、３ｍｌの静脈血を無菌的に採血した。ＬＰＳ及び抗凝血物質の存在下で、サンプルに対して、全血サイトカインリリースアッセイを行い、ＴＮＦα及びＩＬ-１β濃度のを、ＥＬＩＳＡアッセイで計測した。ＬＰＳは、血球からのＴＮＦα及びＩＬ-１βのリリースを刺激した。
個体がｒＨｕＩＬ-１０により静注でドーズされた後、０．５〜１２時間後に収集されたサンプルにおいて、ＴＮＦα及びＩＬ-１βのリリースは、阻害された。ｒＨｕＩＬ-１０により皮下にドーズされた個体から収集されたサンプルにおいて、ＴＮＦα及びＩＬ-１βのリリースは、０．５時間から２４時間まで阻害された。それらのヒト被験体中のｒＨｕＩＬ-１０の血清中濃度は、ＥＬＩＳＡによって決定された。ＴＮＦα及びＩＬ-１βの阻害は、ｒＨｕＩＬ-１０の血清中濃度と相関した。ｒＨｕＩＬ-１０の血清中濃度は、ドーズの後増大し、４８時間上がったままだった。しかしながら、ｒＨｕＩＬ-１０の濃度が０．２ｎｇ/ｍｌ以上である限りにおいてのみＴＮＦα及びＩＬ-１βのリリースが阻害され、濃度が０．１ｎｇ/ｍｌより低かった場合は、ＴＮＦα及びＩＬ-１βのリリースは阻害されなかった。ｒＨｕＩＬ-１０の静注ドーズ後１２時間後、そして、皮下ドーズ後２４時間後、血清中濃度は０．２ｎｇ/ｍｌよりも低く落ち、ＴＮＦα及びＩＬ-１βのリリースが観測された。慢性炎症疾病に罹患している患者において、０．２ｎｇ/ｍｌ以上のＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成すること、又は抗炎症機能を観測することが、必要であることが、これらのデータから示される。
ヒト癌患者におけるＰＥＧ-ＩＬ-１０によるＩＮＦγ及びコレステロール変調の決定ＩＬ-１０は、ＣＤ８+Ｔ細胞中にＩＦＮγを誘発し、そして、このＩＦＮγ誘発は、マウスにおいては、ＩＬ-１０媒介癌除去のために必須である。コントロールマウス（データは示さない）において、癌の消散を誘発する濃度のＰＥＧ-ｒｍＩＬ-１０で処理されれば、ＩＦＮγ欠損マウスは、それらの腫瘍に対して拒絶反応を示さない。したがって、ＩＦＮγは、ＰＥＧ-ｒｈＩＬ-１０で治療される患者の血清中で計測された。
適切な投与技術に関する教育の後、癌患者は、ＰＥＧ-ｒｈＩＬ-１０を毎日皮下に、様々なドーズで自己注入した。血清ＩＬ-１０濃度は、前述のとおり、サンドイッチＥＬＩＳＡを用いて決定された。ＩＦＮγは、第１のドーズの前、又はドーズの２８日後に、採取された血清サンプル中、Ｌｕｍｉｎｅｘビーズアッセイ（Ｌｕｍｉｎｅｘ社;米国テキサス州オースティン）を用いて計測された。
表１７に示されるように、１μｇ/ｋｇのＰＥＧ-ＩＬ-１０を受けている患者の血清トラフレベルは、ＩＬ-１０で〜０．４と〜１．１ｎｇ/ｍＬの間であり、２．５μｇ/ｋｇのＰＥＧ-ＩＬ-１０ドーズを受けている患者の血清トラフレベルは、ＩＬ-１０で〜０．４と〜２．６ｎｇ/ｍＬの間である。
Ｊａｋ-Ｓｔａｔ経路を主に通るＩＦＮγシグナルＪａｋ-Ｓｔａｔシグナリングは、順次レセプタ漸加及びキナーゼのヤヌスファミリーのメンバー（Ｊａｋｓ：Ｊａｋｓ１−３及びＴｙｋ２）及びＳｔａｔ（Ｓｔａｔ５ａ及びＳｔａｔ５ｂを含むＳｔａｔ１−６）の活性化が関与し、特異的反応要素を介してターゲット遺伝子の転写を支配する。このシグナリングメカニズムが、サイトカイン受容体超ファミリーの多くのメンバーの特徴であるため、ＩＦＮγ誘発Ｊａｋ-Ｓｔａｔシグナリングは、クラスＩＩサイトカイン受容体シグナル形質導入のための現在のパラダイムである。表１７に示されるように、１ｎｇ/ｍｌ以上の血清トラフレベルを有する患者では、血清中にＩＦＮγの誘発が示された一方、１ｎｇ/ｍｌより低い血清トラフレベルを有する患者では、ＩＦＮγの誘発は示されなかった。表１７を参照し、ＩＦＮγ誘発は、１よりも大きい値として画定される。
Figure 2016519108
１ｎｇ/ｍｌ以上のＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成すること、又は、癌/腫瘍の設定において治療効果を観測することが、必要であることを、これらのデータは示している。重要なことは、血清トラフ濃度は、ＩＦＮγ誘発のための決定的な因子であり、ドーズレベルでない。
ＰＥＧ-ｒｈＩＬ-１０の投与への前又は１週間毎日の皮下ドーズの後（１μｇ/ｋｇ;２．５μｇ/ｋｇ;又は５μｇ/ｋｇ;ｎ=３-４患者/ドーズ）、癌患者から採血される血清サンプル中のコレステロールを計測した。表１８を参照し、１μｇ/ｋｇを受けている患者は、０．４ｎｇ/ｍｌの一日平均血清コレステロール濃度を達成し、コレステロールが７．８％低下し、２．５μｇ/ｋｇを受けている患者は、１ｎｇ/ｍｌの一日平均血清コレステロール濃度を達成し、コレステロールが１９％低下し、５μｇ/ｋｇを受けている患者は、２ｎｇ/ｍｌの平均血清トラフコレステロール濃度を達成し、コレステロールが３８％低下した。したがって、ドーズ投薬計画の各々により、血清コレステロールにおいて、治療的に関連性のある低下を実現し、これは、約０．２ｎｇ/ｍｌ〜０．４ｎｇ/ｍｌの平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が有効であったことを示している。
Figure 2016519108
本発明の特定の実施形態がここに記載され、本発明を遂行するために発明者に知られているベストモードを含む。前述を読むに当たり、開示された実施形態の記載、変更は、当該技術分野に従事する個人には明らかであると思われ、また、それらの当業者はこの変更を適切であるとして用いてもよいことが予測される。従って、本発明は、具体的にここに記載されるように実行されることが意図され、また、本発明は、全ての改変及び準拠法によって容認されて本文書に添付される請求項に記載される構成要件等価物を含むことが意図される。更に、ここに別段示されない限り、又は別段文脈により明確に否定されない限り、その全ての可能な変形における上記の要素のあらゆる組合せは、本発明によって包含されるものである。
この明細書中に示した全ての刊行物、特許出願、登録番号、及び他の引用文献は、参照事項としてここに包含され、それは、当該刊行物又は特許出願のそれぞれが参照事項として包含されることが、具体的かつ個別的に示されている如くである。

Claims (75)

  1. 被験体における疾病、疾患又は状態を治療又は予防する方法であって、
    治療有効量のＩＬ-１０薬剤を前記被験体に投与することを含み、
    当該量は、少なくとも０．１ｎｇ/ｍｌの平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成するに十分である、方法。
  2. 被験体における疾病、疾患又は状態を治療又は予防する方法であって、
    治療有効量のＩＬ-１０薬剤を被験体に投与することを含み、
    当該量は、ある期間にわたって平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を保持するのに十分であり、
    平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度は、少なくとも０．１ｎｇ/ｍｌであり、及び
    平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度は、前記期間の少なくとも９０％の間保持される、方法。
  3. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも１．５ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
  4. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも１．８５ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
  5. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも２．０ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
  6. 前記期間が、少なくとも１２時間である、請求項２〜５又は６９〜７５のいずれかに記載の方法。
  7. 前記期間が、少なくとも２４時間である、請求項６に記載の方法。
  8. 前記期間が、少なくとも４８時間である、請求項７に記載の方法。
  9. 前記期間が、少なくとも７２時間である、請求項８に記載の方法。
  10. 前記期間が、少なくとも１週間である、請求項９に記載の方法。
  11. 前記期間が、少なくとも２週間である、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記期間が、少なくとも１ヵ月である、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、前記期間の少なくとも９５％の間保持される、請求項２〜１２又は６９〜７５のいずれかに記載の方法。
  14. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、前記期間の少なくとも９８％の間保持される、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、前記期間の１００％の間保持される、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記ＩＬ-１０薬剤が、成熟ヒトＩＬ-１０である、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
  17. 前記ＩＬ-１０薬剤が、成熟ヒトＩＬ-１０の変異体であり、
    前記変異体は、成熟ヒトＩＬ-１０の活性に匹敵する活性を示す、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
  18. 前記疾病、疾患又は状態が、増殖性疾患である、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
  19. 前記増殖性疾患が、癌である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記癌が、固形腫瘍又は血液疾患である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記疾病、疾患又は状態が、免疫又は炎症疾患である、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
  22. 前記免疫又は炎症疾患が、炎症腸疾患、乾癬、慢性関節リウマチ、多発性硬化症及びアルツハイマー病から成る群より選択される、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記疾病、疾患又は状態が、血栓症又は血栓性状態である、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
  24. 前記疾病、疾患又は状態が、線維性疾患である、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
  25. 前記疾病、疾患又は状態が、ウィルス疾患である、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
  26. 前記ウィルス疾患が、ヒト免疫不全ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス及びサイトメガロウィルスから成る群より選択される、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記疾病、疾患又は状態が、心血管疾患である、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
  28. 前記心血管疾患が、アテローム性動脈硬化である、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記被験体が、高いコレステロール値を有する、請求項２７又は２８に記載の方法。
  30. 前記ＩＬ-１０薬剤が、改変ＩＬ-１０薬剤を形成するための少なくとも１つの改変を含み、
    前記改変は、ＩＬ-１０薬剤のアミノ酸配列を変更しない、請求項１〜２９のいずれかに記載の方法。
  31. 前記改変ＩＬ-１０薬剤が、ＰＥＧ-ＩＬ-１０薬剤である、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記ＰＥＧ-ＩＬ-１０薬剤が、ＩＬ-１０の少なくとも１つのサブユニットの少なくとも１つのアミノ酸残基に共有結合する少なくとも１つのＰＥＧ分子を含む、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記ＰＥＧ-ＩＬ-１０薬剤が、モノＰＥＧ化及びジＰＥＧ化ＩＬ-１０の混合物を含む、請求項３１又は３２に記載の方法。
  34. 前記ＰＥＧ-ＩＬ-１０薬剤のＰＥＧ成分が、約５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの分子量を有する、請求項３１〜３３のいずれかに記載の方法。
  35. 前記ＰＥＧ-ＩＬ-１０薬剤のＰＥＧ成分が、約２０ｋＤａよりも大きい分子量を有する、請求項３１〜３３のいずれかに記載の方法。
  36. 前記ＰＥＧ-ＩＬ-１０薬剤のＰＥＧ成分が、少なくとも約３０ｋＤの分子量を有する、請求項３１〜３３のいずれかに記載の方法。
  37. 前記改変ＩＬ-１０薬剤が、Ｆｃ融合分子である、請求項３０に記載の方法。
  38. 前記改変ＩＬ-１０薬剤が、血清アルブミンを含む、請求項３０に記載の方法。
  39. 前記第１の血清アルブミンが、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記改変ＩＬ-１０薬剤が、ＨＳＡ融合分子又はアルブミン抱合体である、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記改変ＩＬ-１０薬剤が、グリコシル化されている、請求項３０に記載の方法。
  42. 前記改変ＩＬ-１０薬剤が、ＨＥＳ化されている、請求項３０に記載の方法。
  43. 前記改変ＩＬ-１０薬剤が、アルブミン結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む、請求項３０に記載の方法。
  44. 前記改変が、部位特異的である、請求項３０〜４３のいずれかに記載の方法。
  45. 前記改変が、リンカーを含む、請求項３０〜３６、３８及び３９のいずれかに記載の方法。
  46. 前記ＩＬ-１０薬剤が、少なくとも１日２回被験体に投与される、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法。
  47. 前記ＩＬ-１０薬剤が、少なくとも１日１回被験体に投与される、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法。
  48. 前記ＩＬ-１０薬剤が、少なくとも被験体に７２時間毎に投与される、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法。
  49. 前記ＩＬ-１０薬剤が、少なくとも１週間に１回被験体に投与される、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法。
  50. 前記ＩＬ-１０薬剤が、少なくとも被験体に２週間毎に投与される、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法。
  51. 前記ＩＬ-１０薬剤が、毎月少なくとも１回被験体に投与される、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法。
  52. 少なくとも１つの付加的な予防又は治療薬剤を投与することを更に含む、請求項１〜５１のいずれかに記載の方法。
  53. 前記被験体が、ヒトである、請求項１〜５２のいずれかに記載の方法。
  54. 前記投与が、非経口注入によってなされる、請求項１〜５３のいずれかに記載の方法。
  55. 前記非経口注入が、皮下のものである、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記治療又は予防することが、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される、請求項１〜５５のいずれかに記載の方法。
  57. 請求項１-５６のいずれかに記載の量のＩＬ-１０薬剤と、薬理学的に許容される希釈剤、キャリア又は賦形剤と、を含む、医薬品組成物。
  58. 前記賦形剤が、等張注入溶液である、請求項５７に記載の医薬品組成物。
  59. 前記組成物が、ヒトへの投与のために適している、請求項５７に記載の医薬品組成物。
  60. 少なくとも１つの付加的な予防又は治療薬剤を更に含む、請求項５７〜５９のいずれかに記載の医薬品組成物。
  61. 請求項５７-６０のいずれかに記載の医薬品組成物を含む、無菌容器。
  62. 前記無菌容器が、注射器である、請求項６１に記載の無菌容器。
  63. 請求項６１又は請求項６２の前記無菌容器を含む、キット。
  64. 少なくとも１つの付加的な予防又は治療薬剤を含む第２の無菌容器を更に含む、請求項６３に記載のキット。
  65. 前記量が、少なくとも０．５ｎｇ/ｍｌの平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成するために十分である、請求項１に記載の方法。
  66. 前記量が、少なくとも１．０ｎｇ/ｍｌの平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成するために十分である、請求項１に記載の方法。
  67. 前記量が、少なくとも１．５ｎｇ/ｍｌの平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成するために十分である、請求項１に記載の方法。
  68. 前記量が、少なくとも２．０ｎｇ/ｍｌ.の平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度を達成するのに十分である、請求項１に記載の方法。
  69. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも０．２ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
  70. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも０．４ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
  71. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも０．６ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
  72. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも０．８ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
  73. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも１．０ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
  74. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも１．２５ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
  75. 前記平均ＩＬ-１０血清トラフ濃度が、少なくとも１．７５ｎｇ/ｍｌである、請求項２に記載の方法。
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