JPH08500362A

JPH08500362A - Ｉｌ−４および／またはｉｌ−１０ならびにそれらに対する抗体の新規な用途

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Publication number: JPH08500362A
Application number: JP6506437A
Authority: JP
Inventors: コフマン，ロバート; デ・ヴリエス，ジャン・イー; デ・ワール，マレフィット・レーネ; パウリー，フィオーナ; レニック，ドナ
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme Corp
Priority date: 1992-08-20
Filing date: 1993-08-18
Publication date: 1996-01-16
Anticipated expiration: 2019-02-09
Also published as: RU95108330A; PL307566A1; DE69316921D1; HU9500467D0; MY111402A; WO1994004180A2; CZ283488B6; WO1994004180A3; KR950702841A; SK21195A3; TW243415B; RU2120802C1; FI950697A0; HU220103B; HUT70976A; DK0671933T3; EP0801951A2; CA2142861A1; JP3494647B2; ATE162947T1

Abstract

(57)【要約】多くの疾患の治療のための、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１０、またはＩＬ−４に対する抗体およびＩＬ−１０に対する抗体の使用のための組成物および方法が提供される。１つの態様においては、腫瘍性リンパ球によるＩＬ−２の産生を阻害するため、またはＩＬ−２依存性腫瘍細胞増殖を阻害するためにＩＬ−１０が使用される。他の態様においては、炎症性腸疾患を治療するためにＩＬ−１０が使用される。また別の態様においては、ＩＦＮ−γのレベルを増加させるために、ＩＬ−４に対する抗体およびＩＬ−１０に対する抗体が使用される。さらにまた別の態様においては、Ｔ細胞によるサイトカイン産生のＩＬ−１０介在性阻害を増強するために、ＩＬ−４およびＩＬ−１０の組み合わせが使用される。さらにまた別の態様においては、遅延型過敏反応を阻害するために、ＩＬ−１０が単独でまたはＩＬ−４との組み合わせにおいて使用される。本発明はさらに、生理学的に受容可能な担体および、ＩＬ−４とＩＬ−１０との組み合わせもしくはＩＬ−４に対する抗体とＩＬ−１０に対する抗体との組み合わせを含む医薬組成物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】ＩＬ−４および／またはＩＬ−１０ならびにそれらに対する抗体の新規な用途本発明は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）一依存性腫瘍細胞増殖、遅延型過敏（ＤＨＴ）反応、および炎症性腸疾患の治療；ならびにＴ細胞によるサイトカイン産生の阻害の増強、またはガンマインターフェロン（ＩＦＮ−γ）産生の増大のための組成物および方法に関するものである。これらの組成物および方法は、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、もしくはそれらの組み合わせ、またはＩＬ−４およびＩＬ−１０のアンタゴニスト、たとえば中和抗体を使用する。発明の背景白血病は造血細胞の悪性トランスフォーメーションにより生じる一群の不均質な新生物であり、リンパ球または骨髄細胞タイプに由来する可能性がある。トランスフォームした細胞は主として骨髄およびリンパ組織で増殖し、そこでそれらは正常な造血および免疫を阻害する。それらは血液中へ遊出し、他の組織に浸潤し、しばしば異なる細胞タイプの異常な分布をもたらす可能性もある。白血病の例には、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリー・セル白血病、および成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）が含まれる。白血病は一般に、臨床経過の性質に応じて急性または慢性に識別される。リンパ腫は、白血病と異なり主としてリンパ組織内に滞在する腫瘍性の細胞トランスフォーメーションである。リンパ腫は一般にホジキン病および非ホジキン性リンパ腫に分けられる。ホジキン病の場合、大部分の細胞はＴ細胞表現型を伴う小型リンパ球である。非ホジキン性リンパ腫の全症例のうち９０％以上はＢ細胞由来である。これらの疾病の大部分の治療が全く成功しておらず、先行技術方法は主として化学療法および放射線療法に集中している。しかしこれまでこれらの療法は一般に長期的な緩解または治癒の効果を示していない。従ってこれらの疾病、特にその腫瘍性細胞増殖がＩＬ−２に依存している疾病の安全かつ信頼性のある治療法が求められている。ＩＦＮ−γは、宿主を多様な感染性物質および疾病に対して防御するのに寄与するマクロファージの有効な活性化剤として関与している。感染に対する防御におけるＩＦＮ−γの重要な役割のため、ＩＦＮ−γの産生を増加させうる組成物および方法が求められている。免疫系は多数の自然および誘導免疫反応を行い、その２つの幅広いカテゴリーは体液性免疫反応および細胞性免疫反応と呼ばれている。体液性免疫は、抗体産生、およびプラズマ細胞を含めたＢ細胞による作用を幅広く表す。細胞性免疫はＴ細胞、単球、マクロファージおよび組織球を含めた細胞により仲介される。Ｔ細胞は、種々の機能またはマーカーに従ってさらに分類しうる。たとえばＴ細胞は、Ｔヘルパー細胞またはＴサプレッサー細胞として分類しうる。さらにＴ細胞は、活性化して細胞毒性となるか、または他の、より特殊な機能を行うことができる。正常な場合は、Ｔ細胞とＢ細胞は互いの活性をある程度制御しうる相互作用を示す。たとえばパウル(Paul)(編者)Fundamentals of Immunology(第２版)ラバン・プレス、ニューヨーク（１９８９）を参照されたい。種々の抗原に対して、一般に互いに排他的様式で細胞性反応または体液性反応のいずれかが優位となる。ある重症の疾病、たとえば癩病、リーシュマニア症、およびあるタイプの自己免疫は、一方のクラスの反応が他方より不適性に優位となったことに起因すると思われる。モスマン(Mossmann)ら，Immunol.Today 8:22 3(1987)；モスマン(Mossmann)ら，Ann.Rev.Immunol.7:145(1989);パリッシュ(Pa rish)，Transplant.Rev 13:35(1972);およびリュー(Liew)，Immunol．Today 10: 40(1989)。免疫系を制御するメカニズムの１つは、サイトカインと呼ばれる蛋白質の産生を伴う。リンホカインはＴ細胞およびあるＢ細胞により産生されるサイトカインであり、モノカインは単球により産生されるサイトカインである。サイトカイン（グリコシル化される場合がある）は多数の免疫反応を仲介する。ＩＬ−４は抗体産生Ｂ細胞の産生を刺激しうるサイトカインであり、これはキラーＴ細胞または細胞毒性Ｔ細胞の増殖をも促進する。ＩＬ−４はＴヘルパー細胞タイプ１（Ｔｈ１）の活性をも阻害しうる。一方、ＩＬ−４はそれ以上のＢ細胞の産生、またはそれ以上のＢ細胞による抗体産生を阻害する。従ってＩＬ−４は内部制御メカニズムの一部である。ＩＬ−１０は多数の作用または効果を仲介しうるサイトカインである。ＩＬ− １０はマウスおよびヒト双方の細胞から単離されており、種々のクラスまたはサブセットのＴヘルパー（Ｔｈ）細胞の免疫反応の調節に関与する。Ｔｈ細胞は、それらのサイトカイン産生プロフィールにより区別される異なるサブセットに分類することができる。一般に抗原またはマイトジェン性レクチンによる活性化に伴い、Ｔｈ１Ｔ細胞クローンはインターロイキン−２（ＩＬ−２）およびＩＦＮ−γを産生し、これに対しＴｈ２細胞クローンはＩＬ−Ｉ０、ＩＬ−４およびインターロイキン− ５（ＩＬ−５）を分泌する。両クラスのＴｈ細胞クローンとも、サイトカイン、たとえば腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、および顆粒球マクロファージコロニ−刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を産生する。第３カテゴリーのＴｈ細胞（Ｔｈ０）は、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＴＮＦ−α、ＩＬ−３、およびＧＭ−ＣＳＦを同時に産生する。Ｔｈ１およびＴｈ２細胞の異なるサイトカイン産生パターンは、それらのヘルパー機能を反映している。Ｔｈ１細胞は主として遅延型過敏反応に関与し、これに対しＴｈ２細胞は抗体産生に付随する。抗体反応（Ｔｈ２経路）および遅延型過敏反応（Ｔｈ１経路）は、しばしば互いに排他的であり、Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞は交差制御効果をもつと考えられる。Ｔｈ１細胞により産生されたＩＦＮ− γはＴｈ２細胞の増殖を阻害し、Ｔｈ２細胞により産生されたＩＬ−１０はＴｈ１細胞クローンによるサイトカイン合成、特にＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の産生を阻害する。遅延型過敏症（ＤＨＴ）は一般にＴ細胞および単球および／またはマクロファージによる水腫（浮腫）および組織の細胞浸潤を特色とする細胞仲介免疫反応である。遅延型過敏反応および体液性免疫反応には、いくつかの組のサイトカインが別個に付随する。シェール(Cher)ら，J.Immunol.138:3688(1987);およびモスマン(Mossmann)ら(1987および1989、前掲）。これらのクラスの反応に付随する疾病は、付随するサイトカインの組の不適性な産生により起こる可能性がある。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、胃腸管の一部の慢性的な非特異的炎症を特色とする一群の胃腸障害を表す。ヒトにおける最も顕著なＩＢＤの例である潰瘍性結腸炎およびクローン病は多数の症状および合併症を伴い、これには子供の成長遅延、直腸脱、大便中の血液（たとえばメレナおよび／または血便排泄）、るいそう、鉄欠乏症、ならびに貧血、たとえば鉄欠乏性貧血および慢性疾患または慢性炎症の貧血が含まれる。ＩＢＤの病因は不明である。ワインガールデンおよびスミス(Wyngaarden,Smit h)（編者）(Cecil's Textbook of Medicine(W.B.サウンダーズ・コーポレーション、1985)、ベルコウ(Berkow)（編者）The Merck Manual of Diagnosis and Therapy（メルク・シャープ・アンド・デーメ・リサーチ・ラボラトリーズ、１９８２）、ならびに Harrison's Principles of Internal Medicine, 第１２版，マグローヒル・インコーポーテッド（１９９１）を参照されたい。潰瘍性結腸炎は、主として結腸粘膜に発現する慢性的、非特異的、炎症性の潰瘍性疾患である。それはしばしば、出血性下痢、腹部痙攣、大便中の血液および粘液、倦怠感、発熱、貧血、食欲不振、体重減少、白血球増加症、低アルブミン血症、ならびに赤血球沈降速度上昇（ＥＳＲ）を特色とする。合併症には、出血、中毒性結腸炎、中毒性巨大結腸、時に直腸膣瘻、および結腸癌の発生の危険度の増大が含まれる可能性がある。潰瘍性結腸炎は結腸から離れた部位の合併症、たとえば関節炎、強直性脊椎炎、仙腸骨炎、後部ブドウ膜炎、結節性紅斑、壊疽性膿皮症、および上強膜炎をも伴う。治療法は疾病の程度および持続期間に応じてかなり異なる。たとえば脱水症および電解質不均衡を防止するための液体療法が、重症の発作に際してしばしば指示される。さらに、特別な食事療法が時には有用である。投薬には、各種のコルチコステロイド、スルファサラジンおよびその幾つかの誘導体、ならびに恐らく免疫抑制薬が含まれる．クローン病は潰瘍性結腸炎と共通の多数の特色を伴う。クローン病は、かなり広範性である潰瘍性結腸炎の病変と異なり、病変が隣接する正常な結腸と明確に境界を定める傾向があるという点で区別しうる。さらにクローン病は、主として回腸（回腸炎）および回腸と結腸（回結腸炎）を冒す。場合により結腸のみが罹患し（肉芽種性結腸炎）、時には小腸全体が影響を受ける（空回腸炎）。稀な場合には、胃、十二指腸または食道が影響される。病変には、臨床例のほぼ半数においてサルコイド型上皮様肉芽種が含まれる。クローン病の病変は経壁性であり、深部潰瘍、水腫（浮腫）および線維症を含み、これらは閉塞および瘻形成ならびに膿腫形成をもたらす可能性がある。これは通常ははるかに浅い病変を生じる潰瘍性結腸炎と対照的である。ただし場合により線維症、閉塞、瘻形成および膿腫形成の合併症は、潰瘍性結腸炎においても見られる。現在の治療法は両方の疾病において類似しており、ステロイド、スルファサラジンおよびその誘導体、ならびに免疫抑制薬、たとえばサイクロスポリンＡ、メルカプトプリンおよびアザチオプリンの使用を含む。これらはすべて強い不都合な副作用を生じる可能性がある。遅延型過敏症および炎症性腸疾患が医学的に重要であるため、これらの状態を治療するための改良された組成物および方法が要望されている。発明の概要本発明は、前記の状態を治療するための組成物および方法を提供することにより、上記の要望を満たすものである。より詳細には本発明は、ＩＬ−２依存性腫瘍細胞増殖に苦しむ哺乳動物に有効量のＩＬ−１０を投与することを含む、ＩＬ−２依存性腫瘍細胞増殖の阻害方法を提供する。本発明はさらに、患者のＩＮＦ−γ産生を増大させるのに有効な量の、ＩＬ− ４およびＩＬ−１０に対する抗体を患者に共投与することを含む、患者のＩＮＦ −γレベルを高める方法を提供する。本発明はさらにまた、炎症性腸疾患に苦しむ哺乳動物に有効量のＩＬ−１０を投与することを含む、哺乳動物における炎症性腸疾患を治療する方法を提供する。本発明はさらにまた、哺乳動物に有効量のＩＬ−４およびＩＬ−１０を同時投与することを含む、哺乳動物におけるＴ細胞によるサイトカイン産生の阻害を増強する方法を提供する。これにより治療される哺乳動物は、好ましくはヒトである。本発明はさらにまた、有効量のＩＬ−１０を投与することを含む、哺乳動物における遅延型過敏反応を阻害する方法を提供する。好ましい態様においては、有効量のＩＬ−４がＩＬ−１０と共投与される。好ましくは以上の方法においてヒトＩＬ−４およびＩＬ−１０がヒトの治療のために用いられる。発明の説明本明細書に引用したすべての参考文献の全体を参考としてここに採用する。記載する核酸配列はすべて、左から右へ読まれる普通の５′−３′の取り決めに従う。配列中のヌクレオチド塩基については標準的な１文字略号を使用する（３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２）。サイトカインおよび抗体の供給源本明細書において用いる“インターロイキン−４”または“ＩＬ−４”は、( ａ)国際特許出願公開ＷＯ８７／０２９９０号明細書の図１Ｃに示された成熟ヒトＩＬ−４の配列と実質的に等しいアミノ酸配列をもち、かつ(ｂ)天然ＩＬ− ４に一般的な生物学的活性をもつ蛋白質を意味する。実質的に等しいアミノ酸配列とは、前記の特許出願公開明細書に示された配列と比較して他のＩＬ−４の配列が等しいか、または生物学的活性を実質的に損なわない１または２以上のアミノ酸の変更（欠失、付加、置換）により異なることを意味する。ＩＬ−４は種々の業者、たとえばジェンザイム・コーポレーション、マサチュセッツ州ケンブリッジから市販されているか、または天然源もしくは組換えＤＮＡ法を用いて既知の方法により製造することができる［シーハン(Sheehan)ら，J .Immunol.142:884(1989)およびスターンズ(Starnes)，J.Immunol.145:4185(1990 )］。あるいは既知のＩＬ−４ヌクレオチド配列に基づくオリゴヌクレオチドプローブ混合物を用いて、標準法により調製されたゲノムまたはｃＤＮＡライブラリー中の、ＩＬ−４をコードするＤＮＡを同定することができる。こうして同定されたＤＮＡはライブラリーから制限エンドヌクレアーゼ開裂により切り取るか、または適宜なプライマーおよびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法を用いて製造し［サイキ(Saiki),Science 239:487(1988)］、配列決定し、そして真核発現系において、または（必要に応じて標準法によりイントロン欠失後に）原核発現系もしくは真核発現系において発現させることができる。もちろんオリゴヌクレオチドプローブまたはＰＣＲを用いる代わりに標準的な発現クローニング法を適用して、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることができる。こうして製造されたＩＬ−４は既知の方法、たとえば免疫化学的方法またはバイオアッセイ法を用いて検出することができる。用いられるＩＬ−４は、好ましくはヒト組換えＩＬ−４である。グリコシル化ＩＬ−４（たとえば真核発現系において産生された組換えＩＬ−４）および非グリコシル化蛋白質（たとえば化学的に合成されたもの、または細菌性発現系において産生したもの）が用いられる。本明細書において用いる“インターロイキン−１０”または“ＩＬ−１０”は、（ａ）実質的に国際特許出願公開ＷＯ９１／００３４９号明細書に示された成熟（たとえば分泌リーダー配列を欠如する）ＩＬ−１０のアミノ酸配列をもち、かつ（ｂ）天然ＩＬ−１０に一般的な生物学的活性をもつ蛋白質を意味する。グリコシル化ＩＬ−１０（たとえば真核細胞、たとえばＣＨＯ細胞において産生されたもの）および非グリコシル化ＩＬ−１０（たとえば標準法により化学的に合成されたもの、または大腸菌において産生されたもの）を使用しうる。ＩＬ −１０の生物学的活性を備えた突然変異蛋白質および他の類似体も包含され、これにはＢＣＲＦ１（エプスタイン・バールウイルスＩＬ−１０；単にウイルスＩＬ−１０とも呼ばれる）蛋白質が含まれる。国際特許出願公開ＷＯ９１／００３４９号明細書にはＩＬ−１０活性の測定に適した多数のインビトロアッセイ法が記載されている。この出願明細書にはＩＬ−１０の多数の好ましい修飾法が記載されている。本発明に用いるのに適したＩＬ−１０は、多数の供給源から得られる。たとえばそれはこの蛋白質を分泌しうる活性Ｔ細胞の培養液から単離しうる。さらにＩＬ−１０またはその活性フラグメントは、当技術分野で知られている標準法により化学的に合成することができる。たとえばメリフィールド（Merrifield），Sc ience 233:341-47(1986)およびアサートン（Atherton）ら，Solid Phase Peptid e Synthesis,A Practical Approach,1989, Ｉ．Ｒ．Ｌ．プレス、オックスフォード、を参照されたい。組換えヒトＩＬ−１０も市販品であり、たとえばペプト・テク・インコーポレーテッド（ニュージャージー州ロッキー・ヒル）から購入される。あるいは組換えＩＬ−１０は前記にＩＬ−４に関して記載したものに従って、既知のヒトＩＬ−１０またはウイルスＩＬ−１０配列情報を利用して製造することができる。組換えヒトＩＬ−１０の製法はたとえば国際特許出願公開ＷＯ９１／００３４９号明細書に記載されている。ヒトＩＬ−１０をコードする配列を含むクローンは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）、マリーランド州ロックビルに１９８９年１２月２０日に寄託され、受託番号６８１９１および６８１９２と認定された。エプスタイン・バールウイルスからのウイルスＩＬ−１０（ＢＣＲＦＩ蛋白質）のクローニングおよび発現についてはムーア（Moor）ら［Science 248:1230(1990)］に示されている。好ましくはヒトＩＬ−１０がヒトの治療に用いられるが、ウイルスＩＬ−１０、または他のいずれかの哺乳動物種からのＩＬ−１０を代わりに用いることもできる。極めて好ましくは、用いられるＩＬ−１０は組換えヒトＩＬ−１０である。ＩＬ−４およびＩＬ−１０は、いかなる供給源からのものであっても、標準法により精製することができ、これには酸析もしくは塩析、イオン交換クロマトグラフィー、金属キレートクロマトグラフィー、ゲル濾過、高速蛋白質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、調製用ディスクゲルもしくはカーテン電気泳動、等電点電気泳動、低温有機溶剤分画、向流分配、およびイムノアフィニティークロマトグラフィーが含まれるが、これらに限定されない。ＩＬ−４およびＩＬ−１０に対して標準法により抗体を産生することができる。本明細書において用いる“抗体”という語は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体（ＭｃＡｂ）の双方を意味する。それは免疫グロブリン全体およびその抗原結合フラグメントをも包含する。ポリクローナル抗体は宿主動物、たとえばウサギ、ラット、ヤギ、ヒツジ、マウスなどをＩＬ−４またはＩＬ−１０で免疫することにより産生しうる。好ましくは抗体力価を高めるために、初期注射後に１回または２回以上の追加免疫注射を行う。次いで動物から採血し、血清を調製し、標準法、たとえばＥＬＩＳＡ法によりポリペプチドを抗原として用いてスクリーニングする。免疫グロブリン画分は標準法により調製しうる。好ましくはＩＬ−４またはＩＬ−１０の免疫原性は、多数の既知アジュバントの１つと組み合わせることにより、および／または免疫前に標準法で架橋することによってより大型の形態に変換することによって高められる。こうして免疫された動物から調製された血清は、そのまま使用しうる。あるいは標準法により、たとえばプラズマフォレシス、またはＩｇＧ特異性吸着剤、たとえば固定化プロテインＡを用いる吸着クロマトグラフィーにより、血清からＩｇＧ画分を分離することができる。本発明において使用するための好ましいモノクローナル抗体は、たとえばコーラー（Kohler）ら［Nature 256:495(1975);Eur.J.Immunol.6:511(1976)］に記載される標準法により調製しうる。要約すると、動物を前記に従って免疫して、抗体分泌性の体細胞を形成する。次いで免疫された動物から骨髄腫細胞に融合させるためにこれらの細胞を分離する。抗体を産生する能力をもつ体細胞、特にＢ細胞が骨髄腫細胞系との融合に適している。これらの体細胞は感作動物のリンパ節、脾臓および末梢血から得られる。ラット脾臓細胞がしばしば用いられる。それは一部は、これらの細胞が比較的高い割合でマウス骨髄腫細胞系と安定な融合体を形成するからである。しかしその代わりにヒト、マウス、ウサギ、ヒツジ、ヤギその他の細胞を用いることもできる。リンパ腫から、ハイブリドーマ産生融合法に用いるための特殊な骨髄腫細胞系が開発された［コーラーおよびミルスタイン(Kohler,Milstein), Eur.J.Immunol .6:511(1976)；シュルマン（Shulman）ら，Nature 276:269(1978)；フォーク（V oIk）ら，J.Virol.42:220(1982)］。抗体産生脾臓細胞またはリンパ節細胞と骨髄腫細胞とのハイブリッドを形成する方法は、通常は体細胞と骨髄腫細胞をそれぞれ１０：１の比率で（ただしこの比率は約２０：１−約１：１に変化させうる）、細胞膜の融合を促進する物質（１または２以上）（化学物質、ウイルスまたは電気）の存在下に混合することを含む。融合法はコーラーおよびミルスタイン（Ko hler,Milstein），前掲；ゲフター（Gefter）ら, ［Somatic Cell Genet.3:231( 1977)］，およびフォーク（Volk）ら［J.Virol.42:220(1982)］に記載されている。これらの研究者らが用いた融合促進剤は、センダイウイルスおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であった。融合法では、生存できるハイブリッドが非常に低頻度でしか得られない（例えば、体細胞源として脾臓を用いた場合、およそ１×１０⁵個の脾臓細胞に対してただ１個のハイブリッドが得られるにすぎない）ため、融合したハイブリッドを残りの融合していない細胞、特に融合していない骨髄腫細胞から選択することが必須である。目的の抗体産生ハイブリドーマを、他の融合細胞ハイブリッドから検出する方法も必要である。一般に、融合細胞ハイブリッドの選択は、ハイブリドーマの増殖は支持するが、融合していない骨髄腫細胞（通常は無期限に分裂し続ける）の増殖は阻害する培地で細胞を培養することによって行なわれる。融合に用いられる体細胞は試験管内の培養では長期の生存を維持できないことから、問題となることはない。例えば、ヒポキサンチンフォスフォリボシルトランスフェラーゼのない骨髄腫細胞（ＨＰＲＴ−陰性）が利用できる。これらの細胞に対する選択は、ヒポキサンチン／アミノプテリン／チミジン（ＨＡＴ）培地、すなわち融合細胞ハイブリッドは脾臓細胞のＨＰＲＴ−陽性の遺伝子型のために生き残る培地中で行なわれる。遺伝子型が要求にかなうハイブリッドの増殖を支持する培地中で選択できる様々な遺伝的欠損（薬物感受性等）を有する骨髄腫細胞の利用も可能である。融合細胞ハイブリッドを選択的に培養するためには数週間を必要とする。この期間の初期に、後にクローニング及び増殖をさせることができるように、必要な抗体を産生するハイブリッドを同定することが必要である。一般に、得られたハイブリッドの約１０％が目的の抗体を産生するが、約１％から約３０％までの範囲であることは珍しくない。抗体産生ハイブリッドの検出は、文献に記載された酵素結合イムノアッセイやラジオイムノアッセイを含む数種の標準的な検定法のいずれによっても行なうことができる［例えばkennet et al.（編集者）,Monoclonal Antibodies and Hybr idomas:A New Dimension in Biological Analyses,pp.376-384,Plenum Press,Ne w York(1980)］。必要な融合細胞ハイブリッドを選択し、個々の抗体産生細胞系にクローン化した後は、それぞれの細胞系は２種の標準的な方法のいずれかで増殖させることができる。ハイブリドーマ細胞の懸濁液を組織適合性の一致した動物に注射することができる。注射された動物には、融合細胞ハイブリッドによって産生される特異的なモノクローナル抗体を分泌する腫瘍が現れる。血清や腹水のような動物の体液を採取してモノクローナル抗体を後濃度に得ることができる。あるいは、個々の細胞系を実験室の培養試験管内で増殖させることができる。１種の特異的なモノクローナル抗体を高濃度に含有する培養液をデカンテーション、濾過、または遠心分離によって集め、続いて精製することができる。一旦必要なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを得ると、１つの種の結合領域をもう１つの種の抗体の非結合領域と結合させた種間（interspecifi c）モノクローナル抗体を作る技術を用いることができる［Liu et al.,Proc. Na tl. Acad. Sci. USA 84:3439(1987)］。例えば、齧歯動物のモノクローナル抗体のＣＤＲ（相補性決定領域）をヒト抗体のフレームワーク領域に移植し、それによって齧歯動物の抗体を“ヒト化”することができる［Riechmann et al., Natu re 332:323(1988)］。更には、ヒトの定常領域の有無によらず、ＣＤＲをヒト抗体の可変領域に移植することができる。このような方法論は、例えば、ヒトのインターロイキンー２受容体のｐ５５（Ｔａｃ）サブユニットに対するマウスのモノクローナル抗体をヒト化するのに用いられた［Queen et al., Proc. Natl. Ac ad. Sci. USA 86:10029(1989)］。あるいはまた、ＩＬ-４またはＩＬ-１０を用い、Banchereauらの方法でヒトのモノクローナル抗体を調製することができる［Science 251:70(1991)］。本発明はまた、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）₂、Ｆｖフラグメント等のような抗体結合フラグメントを包含する。抗体のフラグメントの利用及び産生はよく知られている。例えば、Ｆａｂフラグメント［Tijssen,Practice and Theory of EnzymeI mmunoassays (Elsevier,Amsterdam,1985)］、Ｆｖフラグメント［Hochman et aI ., Biochemistry 12:1130(1973); Sharon et al., Biochemistry 15:1591(1976) ; Ehrlich et al., 米国特許No.4,355,023］及び抗体半分子（Auditore-Hargrea ves, 米国特許No.4,470,925）である。好ましくは、本発明に用いられる抗体及び抗体フラグメントは、それらが調製されたＩＬ-４またはＩＬ-１０に特異的に結合してその生物学的活性を中和する。ＩＬ-２依存性腫瘍細胞増殖阻害下記の実施例に示すように、ヒト及びウイルスのＩＬ-１０はヒトＴ細胞に対して直接の効果を有する。ＦｃγＲII（ＣＤ３２）をトランスフェクトされたＬ細胞を抗ＣＤ３モノクローナル抗体あるいは抗ＣＤ２モノクローナル抗体のマイトジェニックペアと組み合わせて用いた場合、ヒトTh0-、Thl-、Th2-様細胞の増殖反応はすべてＩＬ-１０によって阻害されることが見いだされた。更に、ヒトＴ細胞クローンの抗原特異的な増殖反応は、適切なクラスIIのＭＨＣ分子をトランスフェクトされたマウスＬ細胞をＡＰＣとして用いた場合、ＩＬ-１０によって阻害された。トランスフェクトされたクラスIIＭＨＣ遺伝子の本質的な発現はＳＶ４０プロモーターの支配下にあるため、ＩＬ-１０はこの系でのクラスIIＭＨＣの発現に影響しない。ＩＬ-１０の阻害効果は、主にｍＲＮＡレベルでのＩＬ-２産生の阻害を介したＴ細胞クローンへのＩＬ-１０の直接の効果による。ＩＬ-１０はＩＦＮ-γ、ＩＬ-４、ＩＬ-５及びＧＭ-ＣＳＦの産生に影響しなかった為、阻害効果はＩＬ-２に特異的であった。ＩＬ-１０とＩＬ-１０受容体との相互作用は、見かけ上ＩＬ-２合成を特異的に阻害する情報伝達経路の引き金を引く。本発明の組成物の有効性を証明するために他の検定法を用いることもできる。例えば、ヌードマウスの異種移植モデルを用いることができる。このモデルは、広範囲の化学療法剤をテストするために用いられてきた［Haward et al., Cance r Res. 51:3274(1991)及びMcLemore et al.,Cancer Res. 47:5132(1987)参照］。このような細胞増殖は、Ｂ細胞ＣＬＬ等の白血病と関連しているかも知れない。本発明の方法で治療される哺乳動物として好ましいのは、ＩＬ-２-依存性の腫瘍細胞の増殖に苦しむヒトの患者である。ＩＬ-２-依存性の腫瘍細胞の増殖を阻害する為の本発明の方法は、腫瘍細胞の増殖に苦しむ哺乳動物、好ましくはヒトに、治療に有効な投与量のＩＬ-１０を投与することを含む。治療に有効な投与量の生物学的に活性のある第２の薬剤もまた投与される。ＩＬ-１０及び生理学的に許容し得る担体を含有する薬学的組成物は、典型的には静脈内に投与される。ＩＬ-１０はまたリポソームに包埋することもできる。本明細書で用いる“ＩＬ-２依存性の腫瘍細胞の増殖”の語は、増殖がコントロールされず、進行性であり、継続的な増殖をＩＬ-２に依存するような、あらゆる新規な、または異常な組織の増殖として定義される。増殖は良性または悪性のいずれでも良い。悪性の増殖は、典型的には腫瘍細胞の退形成（脱分化）の度合がより大きいことで特徴づけられる。ＩＬ-２依存性の腫瘍細胞は典型的にはリンパ性または骨髄性の細胞系から得られる。ＩＬ-２はＴ細胞によって産生され、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びＢ細胞を含むさまざまな細胞に対して多くの活性を有する。ＩＬ-２はＴ細胞成長因子として作用し、またＩＬ-２の存在下で剌激するとＴ細胞によるサイトカインの産生を高めることが示された。ＩＬ-２はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化してＭＨＣ非特異的な方法で標的細胞を殺す。更に、ＩＬ-２は関係した細胞の拡大に関与し、それによってそれらの細胞による抗体産生を高める。ＩＬ-２のこれらの活性に基づけば、ＩＬ-１０によるＩＬ-２産生の阻害は、いくつかの疾患において重要である。例えば、自己免疫甲状腺炎のような自己免疫病、インシュリン依存性の糖尿病、リウマチ様関節炎、全身性紅斑性狼瘡及び多発性硬化症のような、Ｔ細胞の増殖が望ましくない状況で、ＩＬ-２によって促進されるＴ細胞の増殖を抑える手段として使うことができる。更に、ＩＬ-１０が、ＩＬ-２によって促進されるＴ細胞の拡大を抑制できるということは、急性対宿主移植片疾患の治療や、炎症性腸疾患、類肉腫及び肺性線維症等の慢性炎症疾患の治療において、潜在的な臨床的有用性を持つことを示している。更に、ＩＬ-４やＩＬ-５の強力な産生細胞であるアレルゲン特異的Ｔ細胞のＩＬ-２によって促進される増殖を阻害することにより、ＩＬ-１０は喘息やアトピー性皮膚炎等のアレルギー性疾患の治療にも使用できる。本発明の医薬組成物により治療される腫瘍増殖を伴う疾患には、Ｂ細胞ＣＬＬやＡＴＬのようなＩＬ-２依存性として知られる白血病がある。本発明の医薬組成物は種々のドラッグデリバリーシステムでの使用に適している。ドラッグデリバリーの現在の方法についての短い総説は、Langer,Science 249:1527(1990)を参照のこと。投与可能な化合物を調製する方法はこの分野での熟練者には知られているか、または明らかであろう。より詳細には、例えばRemington's Pharmace utical Science,17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA(1985)に記載されている。本発明で使用されるＩＬ-１０は、例えば生理食塩水、生理的リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、リンゲル液、デキストロース／生理食塩水、ハンクス液、及びグルコース等の薬理学的に許容される媒体中に、処方に従って調製する。この組成物は、緩衝剤、浸透圧調整剤、湿潤剤、界面活性剤等のように、適当な生理的条件の薬理学的に許容される補助物質を含んでもよい。添加物として、殺菌剤、安定化剤等の、活性のある内容物をさらに含んでいてもよい。患者への投与量は、何を投与するか、予防または治療を目的とするのか、宿主の状態、投与方法等によって変化する。薬理学的組成物は、典型的には経皮または静脈内、皮下、もしくは筋肉内等の非経口投与を意図している。経口投与できる形態も望ましいが、胃の環境を通り抜ける為に組成物を修飾して供与される。組成物は予防または治療に使用できる。好ましくは、医薬組成物は静脈内に投与される。したがって、本発明は好ましくは水系の担体であるが、許容される担体に溶解または懸濁したＩＬ-１０を含む組成物を提供する。これらの組成物は、従来の滅菌方法または濾過滅菌により滅菌される。こうして得られる水溶液は、そのまま、または凍結乾燥して使用できるように包装される。凍結乾燥品の場合、投与前に滅菌水系担体と混合する。ＩＬ-１０を、標準的な化学療法剤等の、生物活性を有する第２の化合物と共に投与してもよい。そのような化合物として、ビンクリスチン、ダウノルビシン、Ｌ-アスパラギナーゼ、ミトキサントロン及びアムサクリンがあるが、これに限るものではない。治療に使用する場合、ＩＬ-２依存性の腫瘍細胞の増殖を阻害するのに十分な量の医薬組成物を投与する。望ましい効果を生むための適当な量を“治療上の有効量”と呼ぶ。ＩＬ-１０の治療上の有効量は、例えば、治療が行なわれた特定の用法、投与の方法、患者の健康状態や担当医の判断によって変化する。例えば、持続注入の用量は、典型的には７０ｋｇの患者１日あたり約５００ｎｇから約８００μｇの範囲、好ましくは約１０μｇから約３００μｇの範囲内である。典型的な用量は、７００ｎｇ／ｋｇ／日から１６μｇ／ｋｇ／日である。薬理学的な処方におけるＩＬ−１０の濃度は広範で、例えば約１０μｇから約５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約１００μｇから２ｍｇ／ｍｌである。濃度は、投与方法に合うように、主に液量、粘度等により決められる。このようにして、静脈内注入用の典型的な医薬組成物は、２．５ｍｇのＩＬ−１０と２５０ｍｌのデキストロース／生理食塩水を含むように定められる。固形の組成物においては、例えば薬理学的なグレードのマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム等を含む通常の無毒の固形担体を使用してもよい。経口投与のためには、前述したこれらの担体等の通常よく使う賦形剤に、一般に１０ー９５％の、好ましくは２５ー７５％の活性成分、つまり本発明のＩＬ−１０ポリペプチドを加えて薬理学的に許容される無毒の組成物を作る。エアロゾルでの投与には、ＩＬ−１０は界面活性剤や抛射薬と共に細かく分離した形で供与されるのが好ましい。ＩＬ−１０の典型的な百分率は、重量比で０．０１％から２０％、好ましくは１％−１０％である。界面活性剤は言うまでもなく無毒でなければならず、抛射薬に溶けるものが好ましい。そのような化合物の代表例として、カプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレステリン酸及びオレイン酸のような６から２２個の炭素原子を含有する脂肪酸と、例えばエチレングリコール、グリセロール、エリスリトール、アルビトール、マンニトール、ソルビトール、及びソルビトールから得られるヘキシトール無水物のような脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物とのエステルあるいは部分エステル、及びこれらのエステルのポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレン誘導体がある。天然または混合物のグリセリド等のエステル混合物も使用できる。界面活性剤は、組成物の重量の０．１％−２０％、好ましくは０．２５％−５％を占める。組成物の残りの部分は通常は抛射薬である。液化した抛射薬は、大気中では典型的には気体であり、高圧により濃縮する。適当な液化抛射薬として、ブタン、プロパンのような炭素原子５個までの低級アルカン、そして好ましくはフッ素置換またはフッ素塩素置換されたアルカンがある。上記の化合物の混合物も使用できる。エアロゾルを発生するには、適当なバルブを取り付けた容器に、細かく分離したペプチド及び界面活性剤を含む適当な抛射薬を入れる。従って、内容物はバルブの動きによって放出されるまで高圧の状態に維持される。血清中での半減期を延長するために、カプセルに入れたり、リポソームのルーメン側に導入したり、コロイドとして調製したり、その他、ペプチドの残存期間を延長するような通常の技術を使うこともできる。例えば具体例として、ＩＬ− １０をリポソーム内に包埋することができる。リポソームの調製方法は、例えば Szoka et al.,Ann.Rev.Biophys.Bioeng．9:467(1980)，米国特許No.4,235,871,N o.4,501,728,及びNo.4,837,028に記載されているように、いろいろな方法が使用できる。調製後、望ましい範囲の大きさにする為、またリポソームの大きさの分布を比較的狭くする為に、リポソームを大きさによって分別する。リポソームを大きさで分別するには、いくつかの方法が使用でき、そのうちの１つは米国特許No.4,7 37,323に記載されている。最も効率良い包埋方法でも、大きさをそろえた初期のリポソーム懸濁液には５０％またはそれ以上の自由形（包埋されていない）薬剤が存在する。リポソーム懸濁液から包埋されていない物質を除く為にいくつかの方法が使用できる。１つの方法では、懸濁液中のリポソームを高速の遠心分離により沈澱し、上清中に自由形の化合物と非常に小さなリポソームを残す。別の方法では、懸濁液を限外濾過により濃縮し、次に濃縮したリポソームを置換媒体に再懸濁する。あるいは、大きなリポソーム粒子を溶質分子から分けるためにゲル濾過を使用することもできる。上記の処理をした後、リポソーム懸濁液を静脈内投与の使用に望ましい濃度に合わせる。これには、例えば遠心分離や限外濾過によりリポソームが濃縮された場合には、適当な容量の注射用媒体に再懸濁し、薬剤除去の過程で懸濁液の総体積が増えた場合には懸濁液を濃縮してもよい。次に懸濁液を上記のように濾過により滅菌する。本発明のペプチドを含有するリポソームは、上記のように非経口的に投与する。ＩＦＮ−γ産生の増強本発明の方法は、患者の免疫系がＩＬ−４やＩＬ−１０の産生によりＩＦＮ− γの産生を阻害するような感染性の病気に苦しむ患者において特に有用である。代表的な疾患として、内臓レーシュマニア症、癩腫性癩、カビ感染症が挙げられる。代表的なカビ感染にはカンジダ、パラコクシジオミコーゼ、ブラストミセスやクリプトスピロイデウム群のカビ属がある。多くの感染性細菌は、ＩＦＮ−γの量が低いことにより、直接または間接的に利益を得ている。これらの感染はしばしば慢性であり、感染性のものに対するTh 2とThl反応の不均衡により特徴づけられる。この不均衡の結果、Th2細胞からＩＬ−４、ＩＬ−１０が産生されるため、Th1細胞からのＩＦＮ−γの産生が阻害される。本発明に用いられる抗体は、好ましくは患者個人に由来するものである。同種の細胞に由来する非自己の抗体も有用である。別の動物種に由来する抗体も利用可能であるが、不利な免疫反応（ＨＡＭＡ（抗マウス- ヒト抗体））が起こるのを制御する方法が必要となるかも知れない。例えば、ヒト化したラット抗体は、種々の抗原結合性フラグメントと同じように、ヒト患者の免疫反応を最小にすることができる。この抗体は、ＩＬ−４やＩＬ−１０の天然の受容体への結合親和性と同程度もしくはそれ以上の親和性を示す結合定数をもつことが好ましい。これらのサイトカインの、対応する受容体への結合と比べ、１／１００より強い結合定数をもつ抗体が好ましい。結合の比較は、標準的な平衡法を用いて調べられる。その基本的な技術は、Chpt 25 of Vol.1:Immunochemistry，Ed.D.M.Wei r,4th Ed.1986,Blackwell Scientific Publ.25.1-25.30に記載されている。あるいは、標準的なインビトロでの生物試験で、一定量のＩＬ−４またはＩＬ−１０を中和するのに必要な抗体のモル過剰量を決める試験法を使うこともできる。そのような試験法の例がMosmann et al.,J.Immunol.Methods 116:151(1989)（ＩＬ −４）及びFiorentino et al.,J.Exp.Med.170:2081(1989)に見られる。ある一定量のＩＬ−４やＩＬ−１０を中和するこれらの抗体の合理的な範囲は１０倍から１０００倍の過剰量である。本明細書において用いる“共投与される”という語は、抗−ＩＬ−４抗体と抗 −ＩＬ−１０抗体が患者の体内に一緒に存在するように、十分に短い間隔で一緒に投与されるという意味である。投与の特定の順序は重要ではなく、抗体は予め混合して同時に投与しても、また別々に投与しても良い。投与の方法は、典型的には非経口、好ましくは静脈内投与である。標準的な静脈内投与方法を使って抗体を患者に投与しても良い。抗体は、まず、生理的リン酸緩衝液のような、滅菌した生物学的に適合した媒体に懸濁する。レシチン、グルコース、デキストロース、抗生物質のような、薬理学的に許容される添加物を抗体と共に含んでもよい。共投与される抗体の量は、１つの抗体につき、体重１ｋｇあたり１−１０ｍｇの範囲である。それぞれの抗体について、血清中の濃度が１−１５０μｇ／ｍｌ、好ましくは１０−１００μｇ／ｍｌとなる量の抗体を投与することが望ましい。抗体の半減期は、典型的には２−７日であり、どちらかの抗体濃度が望ましいレベル以下に低下した場合には繰り返し投与することが適当である。血清試料中の抗体レベルは伝統的なイムノアッセイ、好ましくはＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定できる。本発明の具体例を説明するために、ＩＬ−４及びＩＬ−１０に対するモノクローナル抗体を使用するが、他のアンタゴニストも同様に使用できる。例えば、ＩＬ−４またはＩＬ−１０の受容体に特異的に結合して、サイトカインの結合を阻害する抗体を使用することができる。同様に膜貫通ドメインを欠失した可溶型のＩＬ−４、ＩＬ−１０受容体を使用することができる。最後に、ＩＬ−４及びＩＬ−１０の変異型アンタゴニストであって、対応する受容体には強く結合するが、生物学的活性を本質的に欠いたものも使用できる。そのようなＩＬ−４変異型アンタゴニストの１つであって、野生型のヒトＩＬ−４の１２４位のチロシン残基がアスパラギン酸残基に置換されたものがKruseらによって記載されている［E MBO J.11:3237(1992)］。これらのアンタゴニストは、好ましくは滅菌した水系の混合物を使って静脈内に共投与する。この混合物は、滅菌緩衝液、生理食塩水、抗生物質等の、薬理学的に許容されるどのような賦形剤を含んでいても良い。治療は、典型的には、患者の臨床反応からみて、感染が抑制されたときに終了する。従来の抗生物質による治療を本発明と共に使用することもできる。炎症性腸疾患 “炎症性腸疾患”または略して“ＩＢＤ”の語は、本明細書では潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む病気に対して使われる。ＩＢＤの治療にＩＬ−１０を投与する場合、静脈内投与のような非経口投与が好ましい。最も好ましくは、投与方法は静脈内投与であり、治療を受ける哺乳動物はヒトである。ＩＬ−１０投与量は、一般には体重１ｋｇあたり約１μｇから約１００ｍｇの範囲である。しばしばこの範囲は体重１ｋｇあたり約１０μｇから約１０００μ ｇである。最も好ましくは、体重１ｋｇあたり約５０μｇから約１００μｇの量が投与される。ＩＬ−１０は単独で投与しても良いし、１つまたはそれ以上の治療剤と一緒に共投与しても良い。そのような、腸組織の散発性の炎症を制御するのに有用な化合物の例として、コルチコステロイド、サルファサラジン、サルファサラジンの誘導体、シクロスポリンＡのような免疫抑制剤、メルカプトプリン、アザチオプリン、及びその他のサイトカインがある。共投与は、一般に、複数（２つまたはそれ以上）の薬剤が特定の期間中、患者（受容者）の体内に存在することを意味する。典型的には、第２の薬剤が第１の薬剤の半減期以内に投与されれば、この２つの化合物は共投与されたとみなされる。本発明は更に、哺乳動物から採ったサンプルのＩＬ−１０を測定することにより、至適以下の量のＩＬ−１０により特徴づけられる、ある哺乳動物の炎症状態の進展しやすい素質を予見する方法をも供与する。至適以下の量とは、検出できない量を含む。検出できる量であれば、既知の正常なＩＬ−１０レベルと比較できる。あるいは、商品化されて入手可能な診断キットを使って、ＩＬ−１、ＩＬ −６、ＴＮＦ及びＩＦＮ−γのような炎症性メディエーターを測定することもできる。これらのメディエーターのうち１つでも過剰に産生されていれば、不十分な量のＩＬ−１０しかないことを示している可能性がある。サンプル源としては血液が好ましい。この方法により、ＩＢＤや貧血、関節炎、皮膚炎あるいはＩＢＤと関連する他の症状のような多くの炎症性状態の傾向を予見することができる。医薬組成物もまた提供される。潰瘍性大腸炎やクローン病のようなＩＢＤを患う哺乳動物に投与するための組成物は、その哺乳動物において少なくとも１つのＩＢＤの症状や所見を改善する効果のある量のＩＬ−１０と、上記のような薬理学的に許容される担体を含む。一般に、“症状”という語は、疾病または患者の状態の主観的な事実全てを意味する。これは患者に知覚される事実を含む。ＩＢＤの症状の例として、下痢、腹痛、発熱、メレナ、血便、体重減少がある。一般に“所見”という語は、通常診察している医者に知覚される疾病または患者の状態の客観的事実、あるいは実験室での検査や、超音波検査やラジオグラフィー試験等の他の試験により、それ自体明らかとなる特徴といった客観的事実全てを意味する。ＩＢＤの所見のいくつかの例として、腹部腫脹、舌炎、アフタ性潰瘍、肛門裂創、肛門周囲瘻、貧血、吸収不良や鉄欠乏がある。時折、所見と症状は重なり合う。例えば、患者が血便を訴え（症状）、研究室での試験で便の検体が血液陽性であること（所見）等である。本発明のこの態様の医薬組成物は、好ましくは非経口投与に適した形のものである。好ましくは、効果的な量を１単位の量とし、アンプルに入れて提供される。あるいは、効果的な量の数倍の量を含むバイアルや、その他の形態で提供される。薬理学的に許容される添加物の例として、水溶性賦形薬、緩衝液、希釈液、殺菌剤及び防腐剤がある。ＩＬ−１０活性を決定する為に、サイトカイン自体の生物学的アッセイを用いることもできる。ヒトリンホカインの生物学的アッセイはAggarwal,Methods inE nzymology 116:441(1985)及びMatthews,et al.,(Clemens,et al.,eds.)，Cytoki nes and Interferons;A Partical Approach:pp.221-225(IRI Press,Washington, D.C.1987)に開示されている。ヒトＩＬ−２及びＧＭ−ＣＳＦは、これらの因子依存的な細胞系ＣＴＬＬ−２及びＫＧ−１でそれぞれアッセイでき、この細胞はＡＴＣＣからＴＩＢ２１４及びＣＣＬ２４６の番号で手に入れることができる。ヒトＩＬ−３は、例えばMetclaf，“The Hemopoietic Colony Stimulating Fac tors” （Elsvier,Amsterdam,1984）に記載されたように、軟寒天培地における広範囲の造血細胞コロニー形成に対する刺激能でアッセイできる。ＩＦＮ−γは、例えば Meager in Clemens,et al.(eds.)at pp.129-147のように抗-ウイルスアッセイで定量できる。これらのサイトカインをモニターすることによって、有効量のＩＬ−１０をいつ投与すべきかについて、有効な情報を得ることができる。ＥＬＩＳＡのような免疫化学的アッセイも利用できる。ＩＬ−１０は水、生理食塩水または緩衝液のような水性担体中で様々な添加剤及び／または希釈剤と共にまたはなしに投与することができる。あるいは、亜鉛懸濁液のような懸濁液をＩＬ−１０を含有させて調製することができる。このような懸濁液は皮下（ＳＱ）または筋肉内（ＩＭ）注射に利用できる。ＩＬ−１０と添加剤の比率は、これらが共に有効量で存在する限り広い範囲で変えることができる。１回の用量としては、ＩＬ−１０の量は約１マイクログラム（μｇ）から約１００ミリグラム（ｍｇ）までで用いることができる。１日の総投与量は、典型的には体重１ｋｇあたり約１μｇから約１００ｍｇの範囲である。好ましくは、投与量は体重１ｋｇあたり約１０μｇから約１０００ μｇの範囲で選択される。より好ましくは、投与量は体重１ｋｇあたり約５０μ ｇから約１００μｇの範囲で選択される。投与は、必要な治療効果をあげるようなスケジュールで行なわれ、短期間またはより長期間の定期的な投与でも、あるいは炎症が散発的である場合には不定期な投与でも良い。組成物は、経口的に投与しても注射によっても良い。経口投与の処方では、消化管に存在する蛋白分解酵素からポリペプチドを保護する化合物が含まれる。注射は通常筋肉内、皮下、皮内または静脈内である。あるいはまた、適当な状況においては関節内注射または他の経路を使うことができる。更に、ＩＬ−１０を含有する組成物を患者に埋め込むかまたはドラッグデリバリーシステムを用いて注射しても良い。例えばUrquhart,et al.,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.24:199(198 4);Lewis,ed.“Controlled Release of Pesticides and Pharmaceuticals”(P lenum Press，New York,1981)；米国特許Ｎo.3,773,919及びNo.3,270,960を参照。ペプチドは非経口的に投与するのが好ましく、１回の投与量を注射可能な形で投与するのが好ましい。注射可能な形の例としては、溶液、懸濁液及びエマルジョンがある。より好ましいのは、ＩＬ−１０の有効量を静脈内に投与するものである。 “有効量”の語は、本明細書においては、自己免疫の状態または望ましくないもしくは適当でない炎症性もしくは免疫系の応答の症状あるいは所見を改善するのに十分な量を意味するものと定義する。典型的な哺乳動物の宿主としては、マウス、ラット、ネコ、イヌ、及びヒトを含む霊長動物がある。特定の患者に対する有効量は治療すべき状態；患者の総体的な健康状態；投与の方法、経路及び投与量、及び副作用の重さのような因子に依存して変化する。適当な投与量の決定は、この分野で知られるパラメーターを用いて臨床医が行なう。一般に、投与は最適投与量よりやや少ない量から始め、その後、要求される、または最適の効果が達成されるまで少しずつ増加させる。The Merck Manual §269 “Pharmacokinetics and Drug Administration”参照。ＴＮＦα、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１、及びＩＬ−６のレベルは有効な投与量が到達された時の重要な指標となり得る。好ましくは、治療される哺乳動物由来のＩＬ−１０を用いる。典型的には、ＩＬ−１０は生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及びこの分野で知られる他の水性担体と共に注射される。適当な非水性担体も使用することができ、こうした例としては不揮発油及びエチルオレエートが挙げられる。好ましい担体は５％デキストロース含有生理食塩水である。等張性及び化学的安定性を高めるために、担体中に緩衝剤、防腐剤あるいは他の物質のような添加物を含むことがしばしば望まれる。１日の総投与量は、１回の注射または持続注入として与えられる。あるいはまた、静脈内ボーラス（bolus）投与または筋肉内注射のような他の経路による投与の為に、数回のより小さい投与量に分けても良い。好ましくは、ＩＬ−１０は静脈内ボーラスとして投与される。ＩＬ−１０は単独でも、また他の治療剤と組み合わせて投与しても良い。炎症性腸疾患に適用するこうした薬剤の例として、コルチコステロイド、サルファサラジン、サルファサラジンの誘導体、及びシクロスポリンＡ、メルカプトプリン、アザチオプリンのような細胞毒性を有する薬剤がある。典型的には、複数の薬剤の投与は、別個に注入するか、続けて注射して行なう。適当な条件下では、複数の薬剤、例えば、ＩＬ−１０と他のサイトカイン、ステロイド、または他の治療剤を混合して同時に注入あるいは注射する。ＩＢＤ症状は散発的であり、従って効果的な治療は適切な時期に少量を投与することで達成し得ることに留意すべきである。あるいは、少量を持続的に投与することによって、患者である標的動物が長期間症状のない健康状態を得ることができる。共投与は、同時でも連続的でも良い。一般に、“共投与”とは、（複数の）サイトカインが特定の期間中共に患者（受容者）の体内に存在することを意味する。典型的には、第２のサイトカインが、投与されるべき第１のサイトカインの半減期以内に投与されれば、２つのサイトカインは共投与されたことになる。共投与は非経口的であることが好ましく、更に好ましくは静脈内投与である。有効量は、哺乳動物の体重１ｋｇあたり約１５μｇから約１５００μｇの範囲から選択される。遅延型過敏症反応の阻害本発明のこの態様は、有効量のＩＬ−１０を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における遅延型過敏症の反応をインビボで阻害する方法を提供する。哺乳動物にはＩＬ−１０と共に有効量のＩＬ−４を投与することができ、また哺乳動物は典型的にはヒトである。ＩＬ−４とＩＬ−１０の共投与は同時でも連続的でも良い。通常投与は非経口的であり、好ましくは静脈内投与である。更に、哺乳動物の体内の炎症部位への細胞の移動を阻害する方法が本発明によって提供される。細胞の移動とは、リンパ球、単球、及びマクロファージを含む哺乳動物の細胞性免疫応答を炎症部位へ動員または誘引することである。また、哺乳動物組織の腫脹を阻害する方法が提供される。上記の方法は、ＩＬ−４及び／またはＩＬ−１０の、静脈内投与のような非経口的、または局所的炎症部位付近への投与を含むことができる。ＩＬ−４またはＩＬ−１０の有効量は、通常哺乳動物の体重１ｋｇあたり約１５μｇから約１５００μｇの範囲から選択される。本発明は更に、それぞれの有効量のＩＬ−４及びＩＬ−１０を哺乳動物に共投与することを含む、哺乳動物における遅延型過敏症の反応をインビボで制限する方法を提供する。ここで共投与は非経口的であり、有効量は、哺乳動物の体重１ｋｇあたり約１５μｇから約１５００μｇの範囲から選択される。有効量は約１００μｇから約１０００μｇの範囲から選択することができる。更に、本発明は哺乳動物におけるＴ細胞によるサイトカイン産生の、ＩＬ−１０による阻害を増強するキットを含む。キットはＩＬ−４とＩＬ−１０の混合物の１回の投与量を含有するアンプルを含む。アンプルの代わりに他の容器を使用することもできる。この例としては、バイアル、プラスティックバッグ、ガラス製の試験管等がある。好ましくは、ＩＬ−４とＩＬ−１０の混合物を非経口投与に適した形にする。１回の投与量は典型的には哺乳動物の体重１ｋｇあたりＩＬ −４またはＩＬ−１０それぞれ約１５μｇから約１５００μｇの範囲から選択される。本発明の基礎となる概念は、Ｔ細胞活性に対するＩＬ−４とＩＬ−１０の協調的な効果である。本発明により、この協調はＴ細胞に特異的に関連して確認されたことが初めて示された。これまでのデータから、マクロファージまたは単球に対する効果及びマクロファージのエフェクターとしての役割が示されてきた。Ｔ細胞活性に対するＩＬ−４とＩＬ−１０の追加的な効果は驚くべきものであり、特に細胞性免疫に関する他の治療に利用できる。ＩＬ−４とＩＬ−１０の組み合わせによってＴ細胞のサイトカイン産生のＩＬ−１０介在性の阻害が増強される為、本発明は、サイトカイン産生に関連するＴ細胞の応答をコントロールすることが必要とされる場合に有用である。こうした例としては、遅延型過敏症、細胞性炎症及びＴ細胞の増殖と活性化に対する効果がある。例えば、自己免疫疾患である糖尿病メリタス（mellitus）１型は、リンパ球、マクロファージ及び形質細胞による島細胞浸潤によって特徴づけられる。Ｔ細胞からのサイトカイン産生の抑制によって、糖尿病の症状及び島細胞の破壊を改善できる。更に、本発明は、臓器移植及び移植片に対する細胞性免疫応答を治療するのに有用な役割を果たすことができる。移植腎拒絶反応は、細胞性免疫が関与することが知られている。移植された腎臓の領域において、サイトカインは細胞の活性化、増殖、凝集、線維化、増殖の阻害及び細胞毒性を引き起こす。同様に、本発明は、ＧＶＨＤの治療に有用な役割を果たすことができる。更に、リンパ増殖症である類肉腫症はＤＴＨの減少及びＴ細胞またはへルパー細胞の活性化、引き続いて肉芽腫の形成という事実と関連している。実施例本発明は、次の非限定的な実施例によって説明することができる。別に示さない限り、下記の固体混合物中の固体、液体中の液体、及び液体中の固体に対して与えられた百分率は、それぞれwt/wt、 vol/vol,.wt/volである。ＩＬ−２依存性細胞増殖の阻害実施例１・・ＩＬ−１０は、ＣＤ３２をトランスフェクトしたマウスＬ細胞で架橋された抗−ＣＤ３モノクローナル抗体による活性化に続くヒトTh0、Th1、Th2 “様”クローンの増殖を阻害する。細胞及び細胞系使用したＴ細胞系はＣＤ２⁺、ＣＤ３⁺、ＣＤ４⁺、及びＣＤ８^-であった。クロ−ンＨＹ−０６、８２７及び８３７は前に記載された［Yssel,et al.,Eur.J.I mmunol.16:1187(1986)及びHaanen,et al.,J.Exp.Med.174:583(1991)］。Ｔ細胞クローン８２７はＨＬＡ−ＤＲ３によって破傷風毒素（ＴＴ）を認識し、Ｔ細胞クローンＨＹ−０６はMycobacterium Iepraeの６５ｋＤ熱ショックタンパク質のぺプチド２−１２を認識する。Ｔ細胞クローン８３７の抗原特異性は知られていない。Ｔ細胞クローンＳＰ−Ｂ２１及びＳＰ−Ａ３は、胎児胸線及び胎児肝臓の移植によってうまく再構成された重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）の患者から得た(Ron carolo,et al.,J.Exp.Med.168:2139(1988))。Ｔ細胞クローンＮＰ１２、ＮＰ１４及びＮＰ４４はアトピー性の患者のＰＢＭＣから樹立されたものであり、ハウスダスト中のダニの主要なアレルゲンであるDerpＩ分子のｐ８９−１１７ペプチドに応答して特異的に増殖する（Yssel,et al.,J.Immunol.148:738(1992)）。Ｔ細胞クローンＣＲ２５３、ＣＲ３７８、ＣＲ３８０、ＡＰ７４、及びＡＰ７５は、慢性ライム関節炎の患者のＰＢＭＣから単離されたものであり、Borrelia bur gdorferiの６０ｋＤ熱ショックタンパク質ホモログ（ＨＳＰ６０）に対して反応性がある［Shanafelt,et al.,J.Immunol.146:3985(1991)］。これらのＴ細胞クローンを、そのリンホカイン産生のプロフィールに基づいてＴヘルパーサブセットに割り当てた（表１）。Ｔ細胞クローン（２×１０⁵cells /ml）は、前に記載されたように、２４ウェルのリンブロ（Linbro）プレート（F low,Mc Lean,VA）を用い、１ｍｌあたり１０⁶個の放射線照射（４０００ｒａｄ）された同種異系の末梢血白血球（ＰＢＬ）、１ｍｌあたり１０⁵個の放射線照射（５０００ｒａｄ）されたエプスタイン・バールウイルス感染Ｂ細胞系（ＥＢＶ−ＬＣＬ）ＪＹ、及び０．１ｍｇ／ｍｌの精製ＰＨＡ（Wellcome Diagnostics ,Beckenham,Kent,UK）を含有する支持細胞混合液中で２週間刺激した［Spits,et al.,J.Immunol.128:95(1982)］。刺激後３から４日後に、培養液を分け、２０Ｕ／ｍｌのｒＩＬ−２を含有する培地中で更に培養した。全てのクローン化Ｔ細胞系及びＥＢＶ−ＬＣＬは、１％のヒトＡＢ⁺血清を添加したYssel培地（Yssel, et al.,J.Immunol.Methods 72:219(1984)）で培養した。ＣＤ３２（ＦｃγＲII）（１６．２ＣＧ７）をトランスフェクトされたマウスＬ細胞はPeltz,J.Immunol.141:1891(1988)（参考としてここに引用する）に記載された方法で調製した。簡単にいえば、ヒト単球細胞系Ｕ９３７の突然変異体から単離されたＦｃγＲIIのｃＤＮＡクローン１６．２を用いた（Stuart etal.,J .Exp.Med.166:1668(1987)参照）。標準的な部位特異的突然変異誘発法を用いて、細胞質ドメインの最初のアミノ酸（アルギニン）の次の２個のリジンのコドンを終止コドンに変える突然変異を起こすことによって、細胞質領域を欠損した突然変異体を作成した。マウスＬ細胞の一過性のトランスフェクションは標準的な方法で行った。試薬組換えＩＬ−１０はE.coliで発現させ、de Malefytらの方法（J.Exp.Med.174: 915(1991)及びWO/91/00349）に従って精製した。増殖アッセイクローン化Ｔ細胞は支持細胞で剌激後１０から１２日で用いた。この段階でＴ細胞クローンは小さく、“静止”状態にある。Ｔ細胞クローン（２×１０⁴ cel ls/well）をＣＤ３２をトランスフェクトされたＬ細胞（２×１０⁴ cells/well ）と共に抗−ＣＤ３モノクローナル抗体（ＳＰＶ−Ｔ３ｂ）（１μｇ／ｍｌ）（ Spits,e tal.,Hybridoma 2:423(1983)）の存在下、２００μｌの平底プレート（Falcon,B ecton Dickinson,Lincoln Park,NJ）でインキュベートした。Ｌ細胞は、Ｔ細胞を添加する前にＩＬ−１０（１００Ｕ／ｍｌ）の存在下、あるいは非存在下でモノクローナル抗体（１μｇ／ｍｌ）と１時間プレインキュベートし、その後７２時間培養した。Ｌ細胞は使用前にマイトマイシンＣ（５０ｍｇ／ｍｌ）（Sigma Chemical Co.St.Louis,MO）で３７℃、４５分間処理し、続いて４回洗浄した。細胞は３７℃及び５％ＣＯ₂中で７２時間インキュベートし、［³Ｈ］ＴｄＲで４時間パルス標識し、Ysselらの方法（Eur.J.Immunol.16:1187(1986)）で回収した。結果は［³Ｈ］ＴｄＲの取り込みのｃｐｍで表し、３重で行なった培養の平均値を示す。ＩＬ−１０のＴ細胞クローンの増殖に対する効果は、Ｔ細胞のリンホカイン産生パターンによって変化しなかった。Ｔ細胞クローン８３７、ＳＰ−Ｂ２１、及び８２７は活性化によりＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＦＮ−γを産生し、したがってこれらはヒトTh0クローンに相当すると考えられる。ＨＹ−０６、ＣＲ２５３、ＣＲ３７８、ＣＲ３８０、ＡＰ７４、及びＡＰ７５は高レベルのＩＦＮ−γを産生し、ＩＬ−４及びＩＬ−５は検出不能あるいは低レベルである。これらのクローンはヒトTh1様クローンに相当すると考えられる。一方ＮＰ１２及びＮＰ４４は、特異的抗原による活性化に従って、高レベルのＩＬ−４及びＩＬ−５を産生し、ＩＦＮ−γは検出不能あるいは低レベルであることから、ヒトTh2様クローンに相当する。Ｔ細胞クローンＳＰ−Ａ３は活性化によってＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＦＮ−γ、及びＧＭ−ＣＳＦを産生するが、ＩＬ−４は産生しなかった。表１に示すように、ＩＬ−１０は活性化されたＴ細胞クローン８３７、ＳＰ− Ｂ２１、ＳＰ−Ａ３、８２７、ＨＹ−０６、ＣＲ２５３、ＣＲ３７８、ＣＲ３８０、ＡＰ７４、ＡＰ７５、ＮＰ１２及びＮＰ４４の増殖を阻害した。このように、ＩＬ−１０は全てのＴヘルパーサブセットに属するＴ細胞クローンの増殖を阻害することができた。概して、ＩＬ−１０は本発明の実験条件においてＴ細胞クローンの増殖を２０−５０％阻害した。この阻害は用量依存的であり、また抗− ＩＬ−１０モノクローナル中和抗体１９Ｆ１で抑えられることから特異的であった。表１ＣＤ３２（ＦｃγＲII）をトランスフェクトされたＬ細胞上で架橋された抗−ＣＤ３モノクローナル抗体による活性化に続くヒトＴｈｏ、Ｔｈ１及びＴｈ２クローンの増殖応答に対するＩＬ−１０の効果齧蓄歯動物のＩＬ−１０は種特異的であり、これらのヒトＴ細胞クローンの増殖に効果がなかった。このことから、ＩＬ−１０はＴ細胞クローンに直接作用しているのであり、抗−ＣＤ３モノクローナル抗体を架橋するのに用いられるＣＤ３２をトランスフェクトされたマウスＬ細胞を介しているのではないことが示唆される。これらの結果から、ＩＬ−１０は、ＣＤ３２をトランスフェクトされたＬ細胞上で架橋された抗-ＣＤ３モノクローナル抗体により形成された、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介した活性化に続くヒトTh0、Th1及びTh2クローンの増殖を直接阻害することが示された。実施例２・・ＩＬ−１０はＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−３、あるいはＢ７によって出される剌激性のシグナルに依存することなくＣＤ４⁺Ｔ細胞クローンの増殖を阻害する。ヒトＴ細胞クローンの活性化はＴ細胞のアクセサリー分子と、抗原提示細胞（ＡＰＣ）のこれらに相補的な構造との相互作用によって調節することができる。ＬＦＡ−１とＩＣＡＭ１、ＣＤ２とＬＦＡ３、ＣＤ２８とＢ７あるいはＣＴＬＡ−４とＢ７との相互作用により、Ｔ細胞の増殖及びエフェクター機能を高める刺激性のシグナルが出されることが示されている。ＩＬ−１０がこれらのアクセサリー分子の剌激性の作用に影響することによりＴ細胞の増殖を阻害しているのかどうかを決定するために、ＣＤ３２と共にＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−３、またはＢ７を発現するＬ細胞を作成した。ｐＣＤ−ＳＲα−ＬＦＡ−３ＨＹＧ、ｐＣＤＭ８−ＩＣＡＭ−１ＨＹＧ及びｐＢＪ−Ｂ７ＨＹＧの作成ＬＦＡ−３のｃＤＮＡは、ＬＦＡ−３特異的プライマーを用いたＰＣＲ増幅によってRaji細胞のｃＤＮＡライブラリーから得た。Raji細胞のｃＤＮＡライブラリーは前に記載されたようにｐＣＤ−ＳＲａベクターで作成した。（Matsui et al.,Science154:1788(1991)）。膜貫通型のＬＦＡ−３のクローニングの為に次のプラィマーを用いた。センス：5’−GGCTGCAGCGACGAGCCATGGTTGCTGGGAGCGACGCG−3’（NT1-30）及びアンチセンス：5’−TTCATCTTCTGGTACCAATCAATTGGAGTTGGTTC−3’（NT 780-745 ）増幅生産物をサブクローニングするのに便利なように、ＬＦＡ−３センスプライマーはＰｓｔ-１部位を持ち、ＬＦＡ-３アンチセンスプライマーはKpn-１部位を持つように設計した。増幅は、以下の条件で行なった：Raji細胞ライブラリーのHind-III切断プラスミドＤＮＡ１μｇを、それぞれのプライマー２５nmole、 d GＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ及びｄＴＴＰ（Pharmacia,Uppsala,Sweden）をそれぞれ１２５ｍＭ、５０ｍＭＫＣｌ、１０ｍＭTris−HCl、ｐＨ８．３、１．５ｍＭＭｇＣｌ₂、１mg/mlゼラチン、及び５ユニットのTaqポリメラーゼ（IBI,N ewHaven,CT）を含有する５０μｌの反応液中で増幅させた。混合液は、Perkin-Elmer/Cetus DNA Thermal cyclerで２０サイクル（変性３０秒９４℃、アニーリング３０秒５５℃、伸長６０秒７２℃）インキュベートした。反応液の１部５μｌを取り出し、同じ条件で２回目の増幅を行なった。反応液をクロロホルムで抽出処理し、１％のアガロースゲルにのせた。７８５ｂｐと予想される増幅生成物を分離後ゲルから切り取り、Geneclean kit(Bio 10 1,La Jolla,CA)を用いてシリカに吸着させることによって単離し、Ｐｓｔ−１及びＫｐｎ−１で切断し、Bluescript II ＫＳ（＋）にサブクローン化した（St ratagene,La Jolla,CA）。ＬＦＡ−３を含有するいくつかのクローンを標準法で単離し、４個のクローンについてシーケナーゼＤＮＡ sequencing kit （USB,Cleveland,OH)を用いたジデオキシ終止法によって塩基配列を決定した。４個のクローンは全て発表された配列に１００％同じであった。これらのクローンの１つのＰｓｔ−１−Ｋｐｎ −１フラグメントを単離し、ｐＣＤ−ＳＲａ２９６発現ベクターにサブクローニングした（Matsui et al.,supra）。ｐＣＤＭ８−ＩＣＡＭ−１［Blanchard et al.,J.Immunol.,138:2417(1987)］はBrian Seed博士に頂いた（Massachusetts General Hospital,Boston,MA）。ハイグロマイシン−Ｂ耐性をコードするアミノシクリトールホスホトランスフェラーゼ遺伝子をＳＶ−４０プロモーター及びポリアデニル化シグナルの支配下におき、標準的な方法でｐＣＤ−ＳＲα−ＬＦＡ−３及びｐＣＤＭ８−ＩＣＡＭ−１のＳｆｉ−Ｉ部位に挿入し、それぞれｐＣＤ−ＳＲα−ＬＦＡ−３ＨＹＧ及びｐＣＤＭ８−ＩＣＡＭ−１ＨＹＧを生成した。ｐＢ７−Ｂ７ＨＹＧはＳＲαプロモーターの支配下のヒトＢ７を含有しており（Makgoba et al.,Nature 331:86(198 8））、L．Lanier博士に頂いた（DNAX Research Insutitute）。ＨＬＡ−ＤＲ３またはＣＤ３２を発現するＬ細胞を、リポフェクチン（BRL,Ga ithersburg,MD）によって、メーカーの手法に従ってｐＣＤ−ＳＲα−ＬＦＡ− ３−ＨＹＧ、ｐＣＤＭ８−ＩＣＡＭ−１−ＨＹＧまたはｐＢＪ−Ｂ７−ＨＹＧでトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後に細胞を分け、２００μｇ／mlのハイグロマイシン−Ｂ（Lilly,Indianapolis,IN）を含有する培地を添加し、培地は３日間毎に交換した。１２日後、個々のハイグロマイシン−Ｂ耐性コロニーが見られるようになった。これらの細胞を集め、間接免疫蛍光法でＬＦＡ−３、ＩＣＡＭ−１またはＢ７の発現を染色し、FACS−Star Plusで２回連続してポジティブソーティングを行ない、精製した。共トランスフェクトされた細胞系は、２００μｇ／mlのハイグロマイシン−Ｂ及び１０％ＦＣＳを添加したＲＰＭＩ−１６４０中で維持した。ＦＡＣＳ分析の為に、細胞をＶ−底ミクロタイタープレート（Flow Laborator ies,McLean,VA）で精製モノクローナル抗体（１０μｇ／ml）と共に３０分間４ ℃でインキュベートした。０．０２ｍＭのアジ化ナトリウム及び１％ＢＳＡ（Si gma， St.Louis,MO）を含有するＰＢＳで２回洗浄後、細胞をヤギ抗−マウス抗体（TAG O,Inc.,Burlingame,CA）のＦＩＴＣ標識Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの１／４０希釈液と共に３０分間４℃でインキュベートした。更に３回洗浄した後、標識細胞サンプルをFACScan(Becton Dickinson,Sunnyvale,CA）でフローミクロフルオリメトリー（ＦＭＦ）によって分析した。Krenskyらによって記載された抗−ＬＦＡ−３モノクローナル抗体ＴＳ２／９を用いた（J.Immunol.132:2180(1984) ）。Azumaらによって記載された抗−ＩＣＡＭ-１モノクローナル抗体ＬＢ２及び抗−Ｂ７モノクローナル抗体Ｌ３０７を用いた（J.Exp.Med.175:353(1992)）。Ｔ細胞クローンは、ＩＬ−１０の存在下または非存在下で、ＣＤ３２と、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−３またはＢ７を共に発現しているＬ細胞に架橋された抗−ＣＤ３または抗−ＣＤ２モノクローナル抗体によって活性化した。Ｔ細胞クローンＳＰ−Ｂ２１及びＮＰ１２の増殖は、ＩＣＡＭ−１及びＬＦＡ−３を共に発現しているＣＤ３２導入Ｌ細胞によって提示された抗−ＣＤ３モノクローナル抗体でクローンを剌激した場合に促進されることが見いだされた。ＬＦＡ−３の共発現はＩＣＡＭ−１あるいはＢ７と比較してＴ細胞クローンの増殖促進に対してより有効であり、増殖が一貫して２から４倍に増加した。ＩＣＡＭ−１の共発現によっては、中位の増殖促進が観察された。Ｂ７は概してＴ細胞クローンの増殖に影響しなかった。ＩＬ−１０は、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−３及びＢ７の存在下においても、ＣＤ３２をトランスフェクトしたＬ細胞に架橋された抗−ＣＤ３モノクローナル抗体による活性化に伴うＴ細胞クローンの増殖応答を阻害した。しかしながら、ＬＦＡ−３を発現するＬＣＤ３２細胞によって活性化したＴ細胞クローンの増殖のＩＬ−１０による阻害の程度はより低かった。Ｔ細胞クローンの増殖はまた、Ｔ細胞クローンＳＰ−Ｂ２１及びＮＰ−１２については、ＬＣＤ３２細胞に架橋した抗−ＣＤ２モノクローナル抗体のマイトジェニックな組み合せによっても誘発された。Ｔ細胞クローン（２×１０⁴cells /well ）を、前記したように、２００μｌの丸底プレート（Linbro,Flow Labora tories,Mc.Lean,VA）中で抗−ＣＤ２モノクローナル抗体Ｘ１１−１（０．５mg/ ml)及びＤ６６（０．５mg/mlで剌激した。これらの抗体の作成はBrottier,J.Im munol.135:1624(1985)に記載されている。ＩＣＡＭ−１またはＬＦＡ−３を共発現した場合、Ｔ細胞の増殖は影響されなかった。しかしながら、ＣＤ３２とＢ７を共発現するＬ細胞を用いた場合、中位の増殖促進が観察された。ＣＤ３２と、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−３またはＢ７を共発現しているＬ細胞を用いた場合、抗−ＣＤ２によって誘発されるＴ細胞クローンの増殖はまた、ＩＬ−１０の存在下で３０−５０％阻害された。ＩＬ−１０はＴ細胞クローンによるＬＦＡ−１、ＣＤ２、またはＣＤ２８の発現には影響しなかった。まとめていえば、これらの結果より、ＩＬ−１０のＴ細胞増殖に対する直接の阻害効果は、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−３、またはＢ７によって出される刺激性のシグナルの変化によるものではないことが示された。実施例３・・ＩＬ−２はＩＬ−１０によるＴ細胞増殖の阻害を抑制することができるが、ＩＬ−４はできない。ＩＬ−１０によって誘発されるＴ細胞増殖の阻害をＩＬ−２あるいはＩＬ−４の添加によって抑制できるかどうかを決定するために、ＩＬ−２またはＩＬ−４の存在下で、ＣＤ３２と、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−３またはＢ７を発現しているＬ細胞上に架橋された抗−ＣＤ３または抗−ＣＤ２モノクローナル抗体によってＴ細胞クローンを活性化した。ＩＬ−２は２０Ｕ／ｍｌ、ＩＬ−４は２００Ｕ／ｍｌで添加した。精製ヒトｒ−ＩＬ−４（比活性２×１０⁷Ｕ／ｍｇ）はScherin g-Plough Research(Bloomfield,NJ)より得た。低濃度のＩＬ−２の添加によって、Ｔ細胞クローンＳＰ−Ｂ２１及びＮＰ−１２の増殖に対するＩＬ−１０の阻害効果を完全に抑制することが見いだされた。しかしながら、ＩＬ−４は２００Ｕ／ｍｌの濃度まで添加しても、Ｔ細胞増殖に対するＩＬ−１０の阻害効果を抑制することができなかった。ＩＬ−１０の存在下でＴ細胞クローンを７２時間まで培養しても、ＩＬ−２受容体のα鎖またはβ 鎖の発現のダウンレギュレーションには至らなかった。更に、ＩＬ−１０の存在下でＴ細胞クローンをＰＨＡで活性化しても、ＩＬ−２受容体のα鎖及びβ鎖の発現の誘導には効果がなかった。Herve,et al.,Blood 75:1017(1990)に記載された抗−ＩＬ−２Ｒαモノクローナル抗体ＢＢ１０を用いた。Takeshita,J. Exp. Med．169:1323(1989)に記載された抗−ＩＬ−２Ｒβモノクローナル抗体Ｔｕ２７も用いた。まとめていえば、これらの結果より、Ｔ細胞増殖のＩＬ−１０による阻害はＩＬ−２によって抑制し得るがＩＬ−４によっては抑制されず、これはＩＬ− ２産生の阻害に起因するであろうことが示された。実施例４・・ＩＬ−１０はヒトＴ細胞クローンによるＩＬ−２産生を阻害するが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＦＮ−γ及びＧＭ−ＣＳＦの産生は阻害しない。Ｔ細胞クローンの増殖に対するＩＬ−１０の直接的な阻害効果がＩＬ−２産生の阻害によるものであるかどうかを決定するために、ＩＬ−１０の存在または非存在下、Ｔ細胞クローン８３７、ＳＰ−Ｂ２１、８２７、ＨＹ−０６、ＣＲ２５３、ＮＰ１２、及びＮＰ４４を、ＣＤ３２と、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−３またはＢ７をトランスフェクトされたＬ細胞上に架橋された抗−ＣＤ３モノクローナル抗体によって２４時間活性化し、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＦＮ−γ及びＧＭ−ＣＳＦの産生をサイトカイン−特異的ＥＬＩＳＡによって測定した。これらのＥＬＩＳＡの感受性は：ＩＬ−２、１０pg/ml；ＩＬ−４、５０pg/ml；ＩＬ−５、５０pg/ml；ＩＦＮ−γ、３００pg/ml；及びＧＭ−ＣＳＦＮ５０pg/m lであった。前記した様に、支持細胞で剌激後１０−１２日にＴ細胞クローンをリンホカイン産生の定量の為に集めた。細胞を５％ＣＯ₂の湿潤条件下で３７℃で２４時間インキュベートし、培養上清を集め、２５０×ｇで遠心し、分割して試験まで− ２０℃に保存した。Ｔ細胞クローンの活性化により、そのTh細胞サブセットのサイトカイン産生プロフィールに従って、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＧＭ− ＣＳＦＮ及びＩＦＮ−γが産生された。一般に、サイトカイン産生の最高量は、Ｔ細胞クローンをＣＤ３２とＬＦＡ−３あるいはＢ７を発現したＬ細胞によって活性化した時に測定された。実際、ＩＬ−２の産生は、ＬＣＤ３２−ＬＦＡ− ３及びＬＣＤ３２−Ｂ７トランスフェクタント上の抗−ＣＤ３モノクローナル抗体で活性化されたＴ細胞クローンの上清に多く検出された。ＩＬ−１０はＴ細胞クローンによるＩＬ−２の産生を強く阻害した。ＩＬ−４の産生はＩＬ−１０によって影響されず、一方、ＩＬ−５、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＩＦＮ−γの産生はＩＬ−１０によってわずかに阻害されたに過ぎなかった。このように、ＩＬ−１０は活性化ヒトＴ細胞クローンによるＩＬ−２の産生を特異的に阻害した。実施例５・・ＩＬ−１０は、ポリクローナルな活性化後のヒトＴ細胞クローンによるＩＬ−２産生を阻害する。ＩＬ−１０がヒトＴ細胞クローンに直接作用してリンホカイン産生を阻害することができるかどうかを更に決定する為に、Ｔ細胞クローン８２７、ＳＰ−Ｂ２１及びＮＰ４４を、アクセサリー細胞の非存在下、テトラデカノイルホルボールアセテート（ＴＰＡ）（Calbiochem）、抗−ＣＤ３モノクローナル抗体、及びＴＰＡＮＰＨＡ及びＴＰＡ、あるいは抗−ＣＤ２モノクローナル抗体のマイトジェニックな組み合せによって活性化した。Ｔ細胞クローンは１×１０⁶cells/m lの濃度、ＰＨＡ（１００ng/ml）、抗−ＣＤ３モノクローナル抗体ＳＰＶ−Ｔ３ｂ（１μｇ／ml）及びＴＰＡ（１ng/ml）で剌激した。表２に示すように、Ｔ細胞クローン８２７、ＳＰ−Ｂ２１及びＮＰ４４のポリクローナルな活性化により、そのリンホカイン産生プロフィールに従って高レベルのリンホカイン産生が起きた。ＩＬ−１０は、調べた全ての活性化の方法でこれらのクローンによるＩＬ−２の産生を強く阻害したが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＦＮ−γ、及びＧＭ−ＣＳＦの産生は影響を受けなかった。ＩＬ−１０は、抗 −ＣＤ３モノクローナル抗体＋ＴＰＡ及びＣａ⁺⁺イオノフォア＋ＴＰＡによる活性化に伴なうこれらのＴ細胞クローンによるＩＬ−２の産生を阻害することができたことから、阻害のメカニズムはＴ細胞受容体／ＣＤ３情報伝達経路には関与せず、タンパク質キナーゼＣ活性化の下流に作用することが示された。実施例６・・ＩＬ−１０は、ヒトＴ細胞クローンによるＩＬ−２生成をｍＲＮＡレベルで阻害する。ＩＬ−１０がどのレベルでＩＬ−２の産生を阻害するかを決定する為に、ＩＬ −１０の存在または非存在下、抗−ＣＤ３モノクローナル抗体及びＴＰＡによる活性化後のＴ細胞クローンＮＰ−１２、ＨＹ−０６、８２７、ＳＰ−Ａ３、８３７、及びＳＰ−Ｂ２１において、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＦＮ− γのｍＲＮＡの発現をノーザンブロットによって分析した。全ＲＮＡはChirgwin らの方法（Biochem.18:5294(1979)）で単離した。ノーザン分析はde Waal Malef yt,J.Immunol.142:3634(1989)に記載されたように行なった。次のプローブをノーザン分析に用いた：Yokota,et al.In Lymphokines 13(198 7)に記載されたｐＣＤ−ｈＩＬ−２の２８５ｂｐのＰｓｔ−Ｉ−Ｘｂａ−Ｉフラグメント（ｎｔ１−２８５）；Yokota,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83:589 4(1986)に記載されたｐＣＤ−ｈＩＬ−４の３１８ｂｐのＮｈｅ−Ｉ−ＥｃｏＲＩのフラグメント（ｎｔ１０６−４２４）；Yokota,supraのｐＣＤ−ｈＩＦＮ− γの１１００ｂｐのＰｓｔ−Ｉ−Ｈｉｎｃ−IIフラグメント（ｎｔ５−１１０６）；及びde Waal Malefyt,et al.,J.Immunol.145:2297(1990)に記載されたｐＡＬの１２００ｂｐのＰｓｔ−Ｉフラグメント。ＩＬ−１０はこれらのクローンで発現されるＩＬ−２ｍＲＮＡのレベルを強く阻害したが、Th0−及びTh2−様クローンによるＩＬ−４及びＩＬ−５の発現、あるいはTh0−及びTh1−様クローンによるＩＦＮ−γの発現には影響しなかった。これらの結果から、ＩＬ−１０はヒトＴ細胞クローンによるＩＬ−２の産生をｍＲＮＡレベルで特異的に阻害することが示された。実施例７・・ＩＬ−１０は、末梢血細胞から単離されたヒトＴ細胞によるＩＬ− ２産生を阻害する。ＩＬ−１０が静止状態のＴ細胞の増殖及びＩＬ−２産生を阻害できるかどうかを決定した。Ｔ細胞を末梢血から単離し、ＣＤ３２導入Ｌ細胞上で、あるいはＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−３またはＢ７が共発現したＣＤ３２細胞上で架橋された抗 −ＣＤ３または抗−ＣＤ２モノクローナル抗体で活性化した。総ＰＢＭＮＣは、 Boyum，A.,Scan.J.Clin.Lab.Invest.21(Suppl 97):77(1968)に記載されたフィコールハイパーク（FicollーHypaque,Sigma Diagnostics，St.Louis,MO）密度勾配上で遠心分離することにより健康なドナーのバフィーコ一卜から単離した。Ｔ細胞は、プラスティックへの吸着、ナイロンウールカラム通過、磁石を利用した涸渇によるネガティブ選択に従ってＰＢＭＮＣから精製した。簡単にいえば、１００×１０⁶個のＰＢＭＮＣを１００ｍｍの組織培養皿（Becton Dickinson, Lincoln Park,NJ）中で、１％のヒトＡＢ型の血清を添加したYssel's培地で３７ ℃で３０分間培養した。非吸着細胞を取り、ナイロンウール（Robbins Scientif ic，Sunnyvale,CA）カラムを通した［Julius,et al.Eur.J.Immunol.3:645(1973) ］。続いて細胞を飽和濃度の抗−ＣＤ１４（LeuM3）、ＣＤ１６（Leu lla）、ＣＤ１９（Leu12）、及びＣＤ５６（Leu19）モノクローナル抗体で４℃で３０分間インキュベートし、洗浄し、ヒツジ−抗−マウスＩｇＧでコートしたマグネティックビーズ（Dynabeads M450,Dyal A.S.,Oslo,Norway）と、ビーズ対細胞の比率が４０：１になるようにしてインキュベートした。混合液を４℃で３０分間ゆっくり振とうしながらインキュベートし、ロゼット形成細胞をメーカーの説明に従って磁気粒子収集機で除去した。Ｔ細胞集団は９７−９９％がＣＤ２⁺、ＣＤ３⁺であった。抗−ＣＤ１４（LeuM3）、ＣＤ１６（L eu lla）、ＣＤ１９（Leu12）、及びＣＤ５６（Leu19）モノクローナル抗体、及び適当なアイソタイプの対照モノクローナル抗体はBecton Dickinson,Mountain View,CAから購入した。ＰＢＭＮＣＴ細胞（２×１０⁵cells/well）は、前記したようにＬＦｃγＲI I細胞のトランスフェクタントに架橋した抗−ＣＤ３または抗−ＣＤ２モノクローナル抗体で剌激した。３７℃でのインキュベーション２４時間後に培養上清を採取した。静止Ｔ細胞の活性化はＣＤ３２Ｌ細胞上にＢ７抗原が存在することに完全に依存することが見いだされた。ＣＤ３２Ｌ細胞に架橋された抗−ＣＤ３または抗−ＣＤ２モノクローナル抗体は共にＴ細胞の増殖及びリンホカイン産生の誘導に無効であった。更に、これらの細胞にＩＣＡＭ−１またはＬＦＡ−３をトランスフェクションしても無効であった。しかしながら、Ｂ７をトランスフェクトしたＣＤ３２Ｌ細胞上に架橋された抗−ＣＤ２または抗−ＣＤ３モノクローナル抗体は、Ｔ細胞の強い増殖と、高レベルのＩＬ−２、ＩＦＮ−γ及びＧＭ−ＣＳＦの産生を引き起こした。ＩＬ−１０はこれらの条件では静止Ｔ細胞の増殖を有意に阻害しなかった。一方、ＩＬ−１０はＩＬ−２の産生を阻害したが、これらの細胞によるＩＦＮ−γ及びＧＭ−ＣＳＦの産生を阻害しなかった。しかしながら、ＩＬ−１０の存在下で産生したＩＬ−２のレベルはポイントテストの時点（３日目）で最大の増殖を引き起こすのになお十分であった。これらの結果を総合すると、アクセサリー細胞上でのＢ７との相互作用によるＴ細胞でのＣＤ２８またはＣＴＬＡ−４の会合（engagement）が、静止Ｔ細胞による増殖とリンホカイン産生の誘導に絶対的に必要であること、及びＩＬ−１０がこれらの条件下においてもなおＩＬ−２産生を阻害することができることが示された。実施例８ ‥ＩＬ−１０は、ヒトＨＬＡ分子をトランスフェクトしたマウスＬ細胞を抗原提示細胞として用いた場合、抗原特異的なＴ細胞増殖を阻害する。ＨＬＡ−ＤＲ３あるいはＨＬＡ−ＤＲ３とＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ３またはＢ７をトランスフェクトしたマウスのＬ細胞を上記したように抗原提示細胞として用いた場合の、破傷風毒素（ＴＴ）特異的Ｔ細胞クローン８２７及びM.Leprae６５ kD hsp pt［２−１２］特異的Ｔ細胞クローンＨＹ−０６の抗原特異的増殖に対するＩＬ−１０の効果を調べた。Ｌ細胞トランスフェクタントによるＨＬＡ−ＤＲ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ３及びＢ７の発現のＦＡＣＳプロフィールより、ＩＬ −１０はこれらの細胞でのクラスII ＭＨＣの本質的な発現に効果がないことが示された。破傷風毒素はB.Bizzini博士（Institute Pasteur,Paris,France）より提供されたものであり、最終濃度１μｇ/mlで用いた。Hsp pt［２−１２］はペプチドの固相合成法で作成し、分析用逆相ＨＰＬＣ及びアミノ酸分析を用いてチェックした。ペプチドは最終濃度０．５μｇ/mlで用いた。Ｔ細胞クローン８２７及びＨＹ−０６の刺激、増殖アッセイ及びサイトカインの測定は前記したように行なった。ＨＬＡ−ＤＲ３をトランスフェクトしたＬ細胞を抗原提示細胞（ＡＰＣ）として用いた場合、ＩＬ−１０がＨＹ−０６と８２７の抗原特異的な増殖を用量依存的に阻害することが見いだされた。１０U/mlで添加したＩＬ−１０は阻害活性を有し、１００U/ml及び５００U/mlでは３０−５０％までの増殖阻害がみられた。この結果は、ＡＰＣとしてＨＬＡ−ＤＲ及びＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ３またはＢ７をトランスフェクトしたＬ細胞を用いた場合にも認められた。Ｔ細胞クローン８２７及びＨＹ−０６の増殖反応は、ＬＦＡ３を共トランスフェクトしたＬ細胞を用いた場合に増大し、ＩＬ−１０の阻害効果は低くなった。８２７及びＨＹ− ０６の増殖応答のＩＬ−１０による阻害は、抗−ＩＬ−１０モノクローナル中和抗体１９Ｆ１によって完全に抑制され、阻害が特異的であることを示した。これらの結果より、ＨＬＡ−ＤＲ導入マウスＬ細胞をＡＰＣとして用いた場合、ＩＬ −１０が８２７及びＨＹ−０６の抗原特異的な増殖応答を阻害することが示された。ＩＬ−１０による抗原特異的な増殖の阻害はＴ細胞レベルであることが見いだされた。これを決定する為に、ヒトまたはマウスのＩＬ−１０の存在下で、Ｔ細胞クローン８２７及びＨＹ−０６をＴＴ及びpt［２−１２］で活性化し、ＩＬ− １０が抗原提示Ｌ細胞に作用しているのか、あるいは直接Ｔ細胞クローンに作用しているのかを調べた。既に述べたように、ヒトＩＬ−１０はヒト及びマウスの細胞に作用するが、マウスのＩＬ−１０はマウスの細胞にのみ作用する。ＨＬＡ−ＤＲのみをトランスフェクト、またはＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ３またはＢ７と共に共トランスフェクトしたＬ細胞をＡＰＣとして用いた場合、マウスのＩＬ−１０は８２７及びＨＹ−０６の抗原特異的な増殖を阻害することができないことが見いだされた。これらの結果より、ＩＬ−１０はヒトＴ細胞クローンの増殖に対して直接的な効果を有することが示された。Ｔ細胞クローン８２７及びＨＹ−０６を、ＩＬ−１０及びＩＬ−２の存在下または非存在下、ＨＬＡ−ＤＲのみ、またはＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ３またはＢ７と組み合わせて発現しているＬ細胞及びＴＴまたはpt［２−１２］で活性化し、外からのＩＬ−２の添加によってＩＬ−１０の阻害効果を抑制できるかどうかを調べた。低濃度のＩＬ−２によってＩＬ−１０（７）Ｔ細胞クローン８２７及びＨＹ−０６の抗原特異的増殖に対する阻害効果が抑制された。ＩＬ−１０の存在下または非存在下、ＨＬＡ−ＤＲのみ、またはＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ３またはＢ７と組み合わせて発現しているＬ細胞及びpt［２−１２］でＴ細胞クローンＨＹ−０６を活性化し、２４時間後に採取した培養上清中のＩＬ −２及びＩＦＮ−γの産生を決定した。ＩＬ−１０は抗原特異的な活性化後のＴ細胞クローンＨＹ−０６によるＩＬ−２の産生を阻害したが、ＩＦＮ−γの産生は阻害しなかった。まとめていえば、これらの結果より、ＩＬ−１０はＩＬ−２の生成の特異的な阻害によって抗原特異的なＴ細胞の増殖を阻害することが示された。炎症性腸疾患ＩＢＤ（炎症性腸疾患）のマウスのモデルが確立されている。このモデルは、ＩＢＤの病因及びメカニズムの解明に役立つ。更に、様々な治療薬のための実験的フォーラムを提供する。このモデルを確立するために、ＩＬ−１０遺伝子を除去するか、無効にするか、あるいは実験動物で発現できないようにする。この動物は“ノックアウトされた”ＩＬ−１０遺伝子を有する、または“ノックアウト ”（ＫＯ）動物であると呼ばれる。ＫＯはこの分野で知られた数種の手段のいずれによっても行なうことができる。例えば、ＩＬ−１０遺伝子が不活化された形質転換動物を作ることができる。 Goodnow,C.，“Transgenic Animals,”1502-1504,Encyclopedia of Immunology ，Roitt(ed.),Academic Press,San Diego(1992)参照。簡単にいえば、授精した卵母細胞の前核に精製ＤＮＡを顕微注射する。その後、卵母細胞を養母の輸卵管に外科的に移植する。あるいは、ホモ接合の突然変異動物を単離するために、標準的な遺伝的飼育法を用いることができる。更に、マウスの生殖細胞の特定の遺伝子を不活化する方法がある。この場合、突然変異体の遺伝子（transgene）が相同的組み換えによって野生型の遺伝子の代わりに導入される。受精幹（ＥＳ）細胞は“マウスの未分化胚芽細胞から単離してインビトロで培養し、その後別の未分化胚芽細胞に再移植して、移植されたマウスの体細胞及び生殖細胞の組織を別々にコロニー形成することができる”。 Goodnow at 1503。培養中のＥＳ細胞にＤＮＡを導入して未分化胚芽細胞を養母に外科的に移植する。互いに対になったヘテロ接合の突然変異体の子孫が生まれ、ついには２個の突然変異を有する対立遺伝子を持った子孫、例えばホモ接合の突然変異体が作られる。これらの子孫は目的となる遺伝子において機能的な対立遺伝子を持たないことになり、特定の遺伝子を取り除く為の“遺伝的切開”ができるようになる。生まれた子孫の分析により、ＫＯマウスにおける標的遺伝子の、結果として生じる表現型を生む為の役割を洞察することができる。特定の遺伝子の欠損を有する実験動物を作る更に別の方法としては、McMahon, et al.,“The Midbrain-Hindbrain Phenotype of Wnt-1^-/Wnt-1^- Mice Results from Stepwise Depletion of engrailed-Expressing Cells by 9.5 Days Postco itum,"Cell 69:581(1992)及びTravis,“Scoring a Technical Knockout in Mice ,"Science 256:1392(1992)を参照せよ。更に適用できる技術としては突然変異誘発及びアンチセンスの技術がある。Goodnow,C.(1992,supra)参照。実施例９ ‥マウスの炎症性腸疾患モデルＩＬ−１０遺伝子を欠いたマウスを飼育した。一般的な技術の記載及び特定の遺伝子を欠損したマウスの作成方法については、以下を参照すること。Kuhn et al.Science 254:707(1991);Capecchi,Science 244:1288(1989);Robertson(ed.) Teratocarcinomas and embryonic stem cells： A Practical Approach,I.R.L.P ress,Oxford(1987)；及びZijestra,et al.Nature 336:348(1989)。ＩＬ−１０遺伝子を欠いたマウスは、以下ＩＬ−１０Ｔマウス、あるいはノックアウト（ＫＯ）マウスと呼ぶ。第１群４匹のマウスを骨髄のアッセイの為に犠牲にした。骨髄の１部を、骨髄性及び赤血球の前駆細胞の生成能を決定する為に解析し（表３参照）、また幹細胞の生成を評価する為に分析した（表４参照）。骨髄の残りは、正常な血液産生を支持する微小環境細胞の能力を評価する為の長期骨髄培養に用いた。胸腺及び脾臓は正常な数のＴ細胞及び正常な数のＢ細胞を有していた。前駆細胞及び幹細胞の短期のアッセイ法は下記の表に記載した。対照マウス及びノックアウトマウスの細胞は別々に保存した。ＩＬ−１０Ｔマウスは骨髄球、赤血球及び幹細胞の産生においては明らかな欠陥は示さなかった。同時に、長期の培養により、ＩＬ−１０Ｔマウス由来の培養を含む全ての培養中で支持的な間質の層が形成された。これらの培養は、２つの段階で生じた：まず、細胞を、継続的な血液産生を支持する為に必要な間質層の複合体を形成するように培養中に入れた。次に、間質細胞と関わる実際の前駆体となる細胞を提供する為に、培養を、同じ型のドナーから得た別の骨髄細胞と共に再度まいた。この第２段階は、第２群及び第３群のマウスが利用可能になった時に行なった。第２群及び第３群これらの動物から得た骨髄細胞は、長期骨髄培養実験を完了する為に必要であった。この目的にこれらの骨髄を用いた上、他の実験を行なった（表５−９参照）。ＩＬ−１０Ｔ動物は貧血であるが、骨髄の前駆体は正常なレベルを有しているように思われた。従って、これらの貧血を評価し、臓器を組織学的に観察した。ＲＢＣ形態学全ての対照動物は正常な外観の赤血球（ＲＢＣ’ｓ）を有していた。ＩＬ−１０Ｔマウスでは様々な形態を示した。ＩＬ−１０Ｔ＃１は小赤血球を有していた：＃２及び＃３は小赤血球の他、いくつかの大赤血球、色素形成過多の細胞及び時に有核赤血球（ＮＲＢＣ’ｓ）を有していた。赤血球スメアをニューメチレンブルーで染色し、リボソームの染色を示した細胞を調べた。非常に若い赤血球（網状赤血球）において染色が陽性となり、これは造血器官からの未熟な細胞の放出を意味している。これは網状赤血球数として示される。ＩＬ−１０Ｔマウスの臓器組織学心臓、肺、腎臓、及び胸腺の切片を観察したところ正常な外観を呈した。肝臓は時折単球及び好中性顆粒球が集中している他は正常に見えた。脾臓は著しく異常であった。濾胞が存在したが、赤色髄領域は造血細胞に満ちており、ほとんどはＮＲＢＣ’ｓ及び芽球型（未熟な細胞）であった。成熟ＲＢＣ’ｓはほとんどまたは全くなく、マクロファージにおける鉄の貯蔵はなかった。以下のデータはコロニー形成アッセイの結果である。アッセイは骨髄細胞と同様に脾臓細胞で行なった。ＩＬ−３＋ＩＬ−６の代わりにＩＬ−３＋ｃ−kitリガンドをコロニー形成細胞を剌激する為に用いた。最初のアッセイ（上段）で得られたＢＦＵ−ｅの数を次のアッセイで得られたＢＦＵ−ｅの数と比較することによって証明されるように、ＩＬ−３＋ｃ−kitリガンドの組み合せは赤血球前駆体を刺激するのにより効果的である。糞便試験ＩＬ−１０Ｔマウスの糞便試験は寄生虫感染を示す卵の存在を明らかにはしなかった。上部または下部腸管に住む成熟寄生虫を示す証拠は得られなかった。動物は僅かにから顕著な貧血の間まで様々であった。貧血は赤血球を製造できないということでは説明できない。ＩＬ−１０Ｔマウスは貧血を補償しようとする徴候を示した。最初に、彼らはその脾臓中でＲＢＣ前駆体を正常の数より多く産生した。マウスにおいては、通常脾臓がＲＢＣ欠損を補償しようとするであろう。マウス脾臓は正常のマウスより二倍大きく、ＲＢＣを発生しようと過剰活性であった。何匹かのマウスはうまく補償した。それらはその血液中に正常に近い数のＲＢＣを持っており、また網状赤血球数が比較的正常であったので多くの非成熟細胞は血流中に放出されていなかった。しかしながら、その他のマウスはうまくいかなかったので早熟のまま細胞を血流中に押し出し、そのために網状赤血球数が非常に高かった（すなわち、１７％）。それらはまた、いくつかの循環する有核のＲＢＣも持っていた。これらのマウスはまた、正常より高い血小板数を持ち、ならびにその脾臓中の巨核球の数が上昇していた。この事はそれらが出血したことの徴候である。血液の損失は鉄貯蔵の涸渇による慢性貧血の理由を説明するであろう（この鉄涸渇は脾臓および骨髄の両方で明らかであった）。剖検により内部出血がないのは明らかであった。しかしながら、ＩＬ−１０Ｔマウスのほとんどはその糞便に血液が存在し、また、直腸脱を示した。マウスは詳細に検討され、蟯虫、条虫類またはその他の寄生虫感染は陰性であることが観察された。糞便中の陽性出血および貧血の重症度の間に直接の関連があった。貧血および出血の問題に加えて、ＩＬ−１０Ｔマウスは血液中にリンパ球より多くの好中球性顆粒球を持っていた。これはマウスの正常時と反対である。末梢血分化を参照されたい（表６）。この観察結果はまた脾臓コロニー形成アッセイで観察された骨髄球様前駆体の非常な増加（表９）と一致している。したがって、これらのマウスは“慢性炎症の貧血”症候群を罹患している。剖検において、ＩＬ−１０Ｔマウスおよび同腹子対照からの組織断片が比べられた。対照からのすべての検体は正常に見えた。ＩＬ−１０Ｔマウスでは胸腺および脊髄組織は正常に見えた。脾臓では赤芽球および骨髄芽球に巨核球を加えたものが僅かから顕著に増加していた。ＲＢＣプールは小さいかまたは本質的に存在していなかった。プルシアンブルー染色は鉄貯蔵の涸渇を示し、骨髄外造血が増加した証拠があった。鉄貯蔵の涸渇は血液損失と一致しており、異常な赤血球生成を生じる。全体の実験では、脾臓は正常の１．５から３倍の大きさであった。腸間膜リンパ節は正常に比べて非常に大きく、ほとんど正常の脾臓の大きさであった。ＢおよびＴ− 細胞小胞は同様に拡大されており、この様子は炎症応答と一致している。小腸はよく形成された粘膜および粘膜下組織を示した。いくつかの切片では多形核白血球（ＰＭＮ）および単核細胞がわずかに増加していた。大腸および直腸では結腸の下部を含む所から広がった直腸の著しい炎症を示した。著しい量の浮腫および湿潤細胞が明らかであった。ＰＭＮが主たる細胞型であったが、好酸球、リンパ球、形質細胞および上皮様細胞（上皮に似ている細胞）も存在した。粘膜、陰窩および粘膜下組織に炎症があった。しばしば炎症が筋層（特に、内部括約筋領域）に観察された。多くの領域において、上皮は失われていたかまたは存在しなかった。多発性病変はＲＢＣおよびＰＭＮと凝集した繊維性物質を示した。いくつかの血管はＲＢＣでうっ血していた。上皮細胞の凝集は肉芽腫の初期形成（しかし完全に形成された肉芽腫ではない）が明らかであることを示唆している。慢性的炎症を起こすことが可能な寄生虫、卵または細胞内細菌は見あたらなかった。多発性病変および出血は便潜血試験の陽性結果と一致している。全体像は二次的貧血およびるいそうを持つＩＢＤと一致している。実施例１０外因性ＩＬ−１０処置に応答するＩＬ−１０ＫＯマウスＩＬ−１０遺伝子を欠く４匹のマウス（ＩＬ−１０ＫＯ）および３匹の正常対照マウスが試験された。対照マウスは正常の身体的外見を持っていた。対照マウスの３匹すべてが陰性潜血便試料を示し、正常に見える直腸を持っていた。ＩＬ−１０ＫＯマウスの何匹かは対照より有意に小さく、不健康な徴候を示していた。それらは正常対照と比較してしわくちゃの毛を持ち、元気が悪かった。４匹のＩＬ−１０ＫＯマウスの１匹は背が曲がっており、異常な足どりで歩いていた。ＩＬ−１０ＫＯマウスの４匹すべてが腫張した直腸および紅班性直腸組織または明確な直腸脱を持っていた。実験ＫＯマウスの２匹は二つの別々の場合に明確に陽性である潜血便試料を示し、一方、第三のマウスはある場合には陰性であったが二回目はあいまいであった。４匹すべてのＫＯマウスで直腸スメアが実施され、３匹が多量の好中球性顆粒球を含む化膿性滲出液を示した。動物の個々のスメア中に赤血球もまた存在し、それらは試料採取時の直腸の出血に由来する。ＩＬ−１０ＫＯマウスは時間によるるいそうを示したので、ＩＬ−１０ＫＯマウスおよび正常対照の体重を本試験の一部として記録した。ＩＬ−１０マウスの３匹に２週間毎日３５マイクログラムのＩＬ−１０が注射された。これら３匹のマウスは一貫して化膿性滲出液を示した（３匹の内２匹のみが出血の徴候も示し、３匹の内１匹は背が曲がっており歩行が異常であった）。１匹のＩＬ−１０ＫＯマウス（出血および化膿性滲出液が陰性）および正常対照には２週間毎日トロメタミン（ＴＲＩＳ）緩衝液が注射された。一般的健康度、身体的外観、直腸滲出液、潜血および体重がモニターされた。ＩＬ−１０注入２週後、３匹のＩＬ−１０ＫＯマウスすべてが元気を増し、毛がなめらかになり、姿勢および歩行が正常になった。３匹すべてに炎症の徴候がまだ存在しているが直腸の腫脹は減少を示した。３匹すべてで潜血の結果が陰性であり、直腸スメアでの赤血球は見られなかった。滲出液の量が減少した；しかしながら、好中球性顆粒球はまだ直腸スメアで観察された。１匹の動物のスメアではこの時点で好中球性顆粒球より上皮およびリンパ球細胞の方が多かった。１匹の動物は体重を約１６グラムに維持した。他の２匹はその体重が１６から１７．８グラムに、および１１．４から１４グラムに増加した。ＴＲＩＳ緩衝液を２週間受けたＩＬ−１０ＫＯマウスはいまだ陰性の潜血便試料を示した。そのマウスは多量の好中球性顆粒球を含む多くの滲出液があった。直腸はまだ腫張し、脱出しやすかった。この動物は背が曲がっており歩行が異常であった。また、るいそうの明らかな徴候を示し、体重が１６．６から１４グラムに減少した。ＴＲＩＳ緩衝液を注射された正常対照は直腸を含む正常の健康外観を維持していた。その潜血便試料はいまだ陰性であり、直腸滲出液は検出されなかった。体重は１７．１から１９グラムおよび１７．４から１８．７グラムへ増加した。数週間後でも、それらの動物の体重は増加し続けた。実施例１１炎症性腸疾患に起因する徴候または症状の改善ＩＢＤを罹患しているヒト患者は以下のごとく本発明に従ったＩＬ−１０で処置できる。そのような患者は典型的には下痢、腹痛、熱、メレナ、血便排泄および体重減少を含む症状、および腹部塊、舌炎、アフタ性潰瘍、肛門裂傷、肛門周囲フィステル、貧血、吸収不良および鉄欠乏を含む徴候を持っている。患者は最初１日当たり体重キログラム当たり５μｇのＩＬ−１０で処置される。患者の体重が７０ｋｇであれば、最初の開始用量は１日当たり３５０μｇのＩＬ−１０である。この用量は静脈内ボーラスとして投与される。患者の耐性および応答に依存して１日当たり約５０から１５０μｇ増量する。１日当たり約７００μｇの最適用量が（１日当たり、キログラム当たり１０μｇ）数日後に達成される。最初の処置の前、およびその後最終処置後の数日まで毎日、患者を臨床的におよび検査パラメーターでモニターする。検査パラメーターには血球数（特に全白血球細胞数およびその分化に注意を払って）が含まれている。特に興味が持たれるのは白血球の数が正常に維持されているか、または患者の処置前から有意に変化していないかどうかである。白血球分化に関しては、末梢血に未成熟形が現れていないか、および白血球細胞の分化型の正常比が一定であるかまたは変化しているかについて特別の注意が払われた。末梢血のリンパ球と単球の比に特別の注意が払われた。モニターできるその他のパラメーターには赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、化学的プロフィール、ＩＬ−６、ＴＮＦおよびＩＦＮ−γの血中濃度が含まれる。最後に、患者の便の血液および化膿性滲出液の規則的（毎日）評価で治療に対する患者の応答を示すことができる。治療により腸炎症の一つまたはそれ以上の症状または徴候の改善が得られた。遅延型過敏症反応の阻害実施例１２マウスにおける影響の減少ＢＡＬＢ／ｃマウスが抗ＣＤ４モノクローナル抗体（ＭｏＡｂ）で前処理され、４週間後森林型熱帯リーシュマニアに感染させた。ＢＡＬＢ／ｃはSimonsen L aboratories(Gilroy,California）から得られた商業的に入手可能なマウスの純系株である。使用されたマウスは８から１２の週令であった。森林型熱帯リーシュマニア（ＷＨＯＭ／−／１７３と称されるＷＨＯ株）は３０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（J.R.Scientific,Woodland,CAから入手可能）、２ｍＭＬ−グルタミンおよび各々１００Ｕ／mlのペニシリンおよびストレプトマイシンを含むＭ１９９（GIBCO,Grand island,NYから入手可能）中でプロマスティゴートとして培養された。プロマスティゴートは定常期培養物から採取し、リン酸緩衝化塩溶液（ＰＢＳ）で洗浄した。１．５ｘ１０⁷の生存可能なプロマスティゴートを左後足踵内に皮下に注射してマウスを感染させた。森林型熱帯リーシュマニア抗原は寄生虫を４サイクルの凍結融解、続いての遠心分離により調製した。抗原調製液は培養ウェルに２ｘ１０⁶生物体／ｍｌ相当で加えた。以下のモノクローナル抗体（ＭｃＡｂ）がインビボアッセイで使用された：抗マウスＩＬ−４ＭｃＡｂ中和抗体（ＡＴＣＣ番号ＨＢ１８８）、抗マウスＩＬ −１０ＭｃＡｂ中和抗体［Chatelain,et.al.,J.Immunol.148:1182(1992)により記載されている抗ＩＬ−４の方法により調製］、および抗マウスＣＤ４（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ２０７）。すべての抗体調製液は組織培養上清からイオン交換クロマトグラフィーおよびゲル濾過により精製し、リムラス凝集アッセイにより測定して３内毒素単位（ＥＵ）／ｍｇより少ない蛋白質が含まれていた。細胞精製において、以下の精製ＭｃＡｂが使用された：ビオチニル化ＲＭ−４ −５およびＲＭ−４−４、抗マウスＣＤ４およびＡＭＳ−３２．１、抗マウスＭａｃ−１（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ１２８）、ＲＡ３−６Ｂ２、および抗マウスＢ２２０［Coffman,Immunological Reviews 69:5(1982)］。組換え体マウスＩＬ−４およびＩＬ−１０は大腸菌で発現され前記のごとくアフィニティーで精製された。森林型熱帯リーシュマニア感染部位の膿を出す膝窩リンパ節（ＬＮ）を感染後４から６週間でＢＡＬＢ／ｃまたは抗ＣＤ４前処理ＢＡＬＢ／ｃマウスから除去し、０．２５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳ中で掻き裂いて単一細胞懸濁液とした。ＣＤ４＋Ｔ細胞の精製においては、全ての操作を４℃で行った。約４ｘ１０⁸ＬＮ細胞が各々１２μｇ／ｍｌの抗Ｂ２２０、抗Ｍａｃ−１、抗ＣＤ８および抗ークラスII Ｉ−Ａ^dを含む２ｍｌのＰＢＳ／ＢＳＡ溶液で３０分間標識された。ＭｃＡｂ標識細胞懸濁液はＰＢＳ／ＢＳＡ中で洗浄後、ヒツジ抗ラット被覆ダイナビーズ（Dynabeads,Robbins Scientific,Mountain View,C alf．から入手可能）と細胞１個当たり３ビーズの割合で回転培養機上３０分間インキュベートされた。陰性細胞は磁気的分離により得られた。ＣＤ４＋Ｔ細胞は得られた細胞懸濁液からさらに濃縮され、磁気活性化細胞ソーター（ＭＡＣＳ、Miltenyi Dusseldolf,Germany）を用いた陽性選択によると８５％ＣＧ４＋であった。簡単に記すと、細胞はＰＢＳ／ＢＳＡ中（約５０ｍｌ／１０⁸細胞）１２μｇ／ｍｌビオチニル化抗ＣＤ４で１５分間標識された。細胞をＰＢＳで洗い、ストレプトアビジンマイクロビーズ（Becton Dickinson,S unnyvale,Calf．）とともに約５０μｌ／１０⁸細胞でインキュベートした。１５分後、ストレプトアビジン−ＰＥ（Becton Dickinson）を最終濃度１／５０で加えた。さらに５分間インキュベーションした後、細胞懸濁液を洗浄し、使用説明書に従って磁気カラム（ＭＡＣＳ、Miltenyi Dusseldolf,Germany）を通過させた。磁気化カラムに保持された細胞はマグネットからカラムを除きＰＢＳ／ＢＳＡでよく洗浄することにより溶出した。得られた細胞集団は９６％ＣＤ４＋以上であった。Ｔ細胞除去脾臓細胞は、上記ＬＮ細胞についての記載と全く同じに、ヒツジ抗ラットDynabeadsを用いる陰性選択により抗ＣＤ４および抗ＣＤ８染色細胞が除去されている正常ドナーの脾臓から調製された。調製物は日常的にＦＡＣＳ分析により９９％ＣＤ４およびＣＤ８陰性であった。未分離リンパ節細胞または精製ＣＤ４＋Ｔ細胞は、９６穴丸底プレートの２５０μｌ容量に指定された量で、５％ＦＣＳ含有ｃＲＰＭＩ中で二重に培養するように準備され、精製ＣＤ４＋Ｔ細胞の場合は森林型熱帯リーシュマニア抗原の存在下または非存在下、５ｘ１０⁵細胞除去正常脾臓細胞とともに加えられた。ｃＲＰＭＩはＲＰＭＩ−１６４０（J.R.H.Biosciences,Lenexa,Kansasから入手可能）、１０％ＦＣＳ、２ｍＭＬ−グルタミン、０．０５ｍＭ２−ＭＥおよび各々１００Ｕ／ｍｌのペニシリンおよびストレプトマイシンを含んでいる完全培養培地を意味している。抗原提示細胞（ＡＰＣ）は森林型熱帯リーシュマニア抗原（２ｘ１０⁶生物体／ｍｌに相当）または培地単独で４時間パルスラベルされた。次にＴ細胞除去脾臓細胞は培養に先だって１０００ラドのγ−照射がなされた。ある場合には、組換え体ＩＬ−１０（ｒＩＬ−１０）（５０μｇ／ｍｌ）、組換え体ＩＬ−４（ｒＩＬ−４）（１００μｇ／ｍｌ）、および／またはこれらのサイトカインの中和ＭｃＡｂが培養ウェルに加えられた。サイトカイン合成検出のため、７２時間後に上清液を集めた。上清液中のサイトカイン濃度はＩＦＮ−γ（Chatelain et al.1992,上記文献を参照されたい）、ＩＬ−４（Chatelain et al.1992,上記文献）、ＩＬ−１０およびＩＬ−３について上述されるような２部位サンドイッチＥＬＩＳＡにより検出された。試料は精製組換え体または天然サイトカインの標準曲線と比較して定量した。抗ＣＤ４ＭｏＡｂによる前処理は最初に動物の利用可能なＴ細胞を抑えたが、最終的には森林型熱帯リーシュマニアによる寄生虫侵入に対する動物の抵抗性を増強させた。この現象は反直覚的でありその機構は不明瞭であるが、広く観察されている。ＤＴＨは寄生虫感染への動物の抵抗性と強く相関している。感染４週間後、リーシュマニア凍結融解抗原を動物の反対の側方の足蹠に注入した。次の４８時間にわたり、足蹠腫脹をメートルカリパスでモニターした。各々の動物は腹腔内に５回量のサイトカインを受けている。一つの群はＩＬ−４の５回量を受けており、別の群はＩＬ−１０の５回量を受けており、第三の群はＩＬ−４およびＩＬ−１０の組み合わせの５回量を受けている。５回量の各々は１２時間ごとに与えられ、最初の用量は抗原投与１２時間前である。表１１はリーシュマニア抗原注入２４時間後のマウス足蹠の大きさを示している。ＰＢＳのみを注入された対照動物の応答と、指示された用量のＩＬ−４、ＩＬ−１０または両方の組み合わせを受けた動物の応答が比較されている。サイトカインは抗原注入に先だった１２時間前から開始して、４８時間の間１２時間毎に腹腔内（ＩＰ）に投与された。各々の群は動物５匹であった。ＩＬ−４単独で処理したマウスはＰＢＳで処理したマウスと大体同程度であったことをデータは示している。ＩＬ−１０単独で処理したマウスの腫脹は対照より小さかった。ＩＬ−４およびＩＬ−１０の組み合わせで処理された動物は最も小さな腫脹応答であった（特に２０μｇの各々のサイトカイン処理群）。表１２は第二の独立した実験からのデータを示している。実験形式は上記のものと同じであるが、足蹠データはリーシュマニア抗原注入４８時間後に取られた。各々の群は動物５匹であった。ＩＬ−４およびＩＬ−１０の阻害効果はＩＬ− ４に対するモノクローナル抗体２ｍｇおよびＩＬ−１０に対するモノクローナル抗体５ｍｇの投与により阻止された。ＩＬ−４およびＩＬ−１０に対するモノクローナル抗体（陽性対照として使用された）はサイトカインの最初の投与１２時間前にＩＰで与えられた。５ｍｇのイソ型対照モノクローナル抗体（ＩＣＡ）は（陰性対照として加えられた）、阻害に何等の影響も与えなかった。ＩＣＡはCh atelain et al.1992（前に引用）により記載されているごとく調製された。ＩＬ−４およびＩＬ−１０に対する抗体が投与されるとＩＬ−４およびＩＬ− １０に対して拮抗し、サイトカインの有効性を減少させた。また、これらの抗体は組換え的に産生されたサイトカインのさらなる対照となった。データは、動物のＤＴＨ反応の減少において、ＩＬ−４およびＩＬ−１０の組み合わせが個々のサイトカイン単独よりも一層効果的であることを示している。ＩＬ−１０単独はＩＬ−４単独よりもより効果的であったが、組み合わせよりは効果がより小さかった。サイトカインの組み合わせを各々のサイトカインに対して産生されたモノクローナル抗体とともに投与すると、サイトカイン処理の有効性が打ち消された。表１３のデータは、抗原投与１２時間前に開始して、抗原投与後２４時間まで１２時間毎にサイトカインを投与して得られたものである。リーシュマニア抗原注入部位の膿を出すリンパ節（ＬＮ）の細胞は、サイトカインおよび抗原を受けた動物から抗原投与５日後に除去された。表１３の”処置”と付けた欄は動物がＬＮ細胞を取る処置を受けたことを意味している。リンパ節はインビトロにおいて森林型熱帯リーシュマニア凍結融解抗原により刺激された。７２時間後上清液のＩＮＦ−γ含量が試験された。示されているデータは３匹の別々の動物から得られたものである（ｎ＝３±標準誤差）。このデータはサイトカインで処理された動物は、ＰＢＳで処理された対照よりもＩＮＦ−γが少ないことを示している。さらに、ＩＬ−４およびＩＬ−１０の組み合わせで処理された動物は、単一のサイトカインを受けた実験動物のいかなる対照よりもかなりＩＮＦ−γが少なかったことを明らかにした。表１４のデータを得るために、４週間前に森林型熱帯リーシュマニアに感染させた抗ＣＤ４前処理マウスからＣＤ４＋Ｔ細胞が単離された（３．５ｘ１０⁵／ウェル）。細胞はインビトロで森林型熱帯リーシュマニア凍結融解抗原ならびにＡＰＣ源としてＴ細胞除去脾臓細胞（５ｘ１０⁵／ウェル）と一緒に刺激した。７２時間後ＥＬＩＳＡによりＩＮＦ−γ含量が決定された。”添加”と付けた欄はＴｈ１細胞が培養された培地に添加された物質を意味している。表１４のデータは、ＩＬ−４およびＩＬ−１０はいずれも単独で投与されると、ＰＢＳで処理された対照と比較してＴｈ１細胞により産生されるＩＮＦ−γの量を著しく減少させたことを示している。さらに、培地へのＩＬ−４およびＩＬ −１０の組み合わせの添加は、どちらのサイトカイン単独での添加よりも約５０％ＩＮＦ−γを減少させた。前記のデータは、ＩＬ−１０は対照と比較すると、ＤＴＨ応答、腫脹および一般的にはリンパ節からの、特異的にはＴｈ１細胞からのＩＮＦ−γ産生を堅実に減少させたことを示す。さらに、ＩＬ−４とＩＬ−１０との組み合わせは、同一の用量範囲において、ＩＬ−４単独またはＩＬ−１０単独のいずれよりも優れていた。２０μｇの各々のサイトカインの組み合わせ療法は、ＩＬ−４およびＩＬ −１０各々の２倍以上の用量（５０μｇ）の単一療法よりも優れた結果を示した。したがって、組み合わせ療法として与えられた各々２０μｇのＩＬ−４およびＩＬ−１０は、単一療法剤として与えられた５０μｇのどちらか一方のＩＬ−４またはＩＬ−１０よりも優れた利点を示した。実施例１３タイプＩ糖尿病を持つ患者の処置 National Diabetes Data GroupまたはWorld Health Organizationにより開発された範疇を用いて診断されたタイプＩ糖尿病（またはインシュリン依存性糖尿病）を持つ患者が治療のために選択された。患者は最初は１日当たり、体重キログラム当たり各々２０μｇのＩＬ−４およびＩＬ−１０で処置された。患者の体重が７０ｋｇであれば、初期開始用量は各々のサイトカインについて１４００μ ｇである。この用量は静脈内ボーラス注射として投与される。用量は患者の耐性および応答に応じて１日当たり約２５０から１０００μｇ増加させる。１日当たり約７０００μｇ（１日当たり、キログラム当たり１００μｇ）の最適用量は数日後に達成される。最初の処置に先だって、およびその後最後の処置数日後までの毎日、患者を臨床的および検査パラメーターでモニターする。検査パラメーターには、血液グルコースおよび血球数が含まれ、特に全白血球細胞数およびその分化に注意が払われる。血液グルコースモニタリングは糖尿病の処置においてよく知られている。さらに興味が持たれるのは、白血球の数が正常に維持されているか、または患者の処置前から有意に変化していないかどうかである。白血球分化に関しては、末梢血に未成熟形が現れていないか、および白血球細胞の分化型の正常比が一定であるかまたは変化しているかについて特別の注意が払われた。末梢血のリンパ球と単球の比に特別の注意が払われた。当業者には明らかになるごとく、本発明の多くの変更および変形を本発明の精神および範囲から離れることなくなすことができるであろう。ここに記載した特定の実施態様は例示の為のみに与えられており、本発明は付随する請求の範囲の項目によってのみ制限されるべきである。【配列表】配列番号：１配列の長さ：１６０アミノ酸配列の型：アミノ酸卜ポロジー：直線状配列の種類：蛋白質配列：配列番号：２配列の長さ：１４７アミノ酸配列の型：アミノ酸卜ポロジー：直線状配列の種類：蛋白質配列：配列番号：３配列の長さ：３８塩基配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列の種類：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ配列：配列番号：４配列の長さ：３５塩基配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列の種類：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ配列：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＣＪ 39/395 Ｄ 9284−4ＣＵ 9284−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 ＡＢＥＡＣＪ (31)優先権主張番号０７／９３３，４６２ (32)優先日 1992年８月21日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号０７／９３３，９５０ (32)優先日 1992年８月21日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＶＮ (72)発明者デ・ワール，マレフィット・レーネアメリカ合衆国カリフォルニア州94086, サニーヴェイル，ムエンダー・アベニュー 891 (72)発明者パウリー，フィオーナアメリカ合衆国カリフォルニア州94040, マウンテン・ヴュー，デル・メディオ・アベニュー 541，ナンバー 204 (72)発明者レニック，ドナアメリカ合衆国カリフォルニア州94022, ロス・アルトス，アーマンド・アベニュー 601

Claims

【特許請求の範囲】１．次の用途： (ａ)ＩＬ−２依存性腫瘍細胞増殖の阻害； (ｂ)ＩＦＮ−γレベルの増加； (ｃ)炎症性腸疾患の治療； (ｄ)サイトカイン産生の阻害の増強；および (ｅ)遅延型過敏反応の阻害よりなる群より選択される用途のための医薬組成物を製造する方法であって、薬学的に受容される担体と、用途(ａ)、(ｂ)、(ｃ)、(ｄ)および(ｅ)についてそれぞれ (ｉ)ＩＬ−１０； (ii)ＩＬ−４に対する抗体およびＩＬ−１０に対する抗体； (iii)ＩＬ−１０； (iv)ＩＬ−４およびＩＬ−１０；および (ｖ)ＩＬ−１０とを混合することを含む方法。２．さらに、ＩＬ−４と担体およびＩＬ−１０を混合することを含む、請求項１(ｅ)(ｖ)に記載の方法。３．ＩＬ−４またはＩＬ−１０がヒトＩＬ−４またはヒトＩＬ−１０である、請求項１または２に記載の方法。４．次の用途： (ａ)ＩＬ−２依存性腫瘍細胞増殖の阻害； (ｂ)ＩＦＮ−γレベルの増加； (ｃ)炎症性腸疾患の治療； (ｄ)サイトカイン産生の阻害の増強；および (ｅ)遅延型過敏反応の阻害よりなる群より選択される用途のための医薬組成物であって、薬学的に受容される担体と、用途(ａ)、(ｂ)、(ｃ)、(ｄ)および(ｅ)についてそれぞれ(ｉ)ＩＬ− １０； (ii)ＩＬ−４に対する抗体およびＩＬ−１０に対する抗体； (iii)ＩＬ−１０； (iv)ＩＬ−４およびＩＬ−１０；および (ｖ)ＩＬ−１０とを含む組成物。５．さらにＩＬ−４を含む、請求項ＩＬ−４(ｅ)(ｖ)に記載の医薬組成物。６．ＩＬ−４またはＩＬ−１０がヒトＩＬ−４またはヒトＩＬ−１０である、請求項４または５に記載の医薬組成物。７．それぞれ (ａ)ＩＬ−２依存性腫瘍細胞増殖の阻害； (ｂ)ＩＦＮ−γレベルの増加； (ｃ)炎症性腸疾患の治療； (ｄ)サイトカイン産生の阻害の増強；および (ｅ)遅延型過敏反応の阻害のための (ｉ)ＩＬ−１０； (ii)ＩＬ−４に対する抗体およびＩＬ−１０に対する抗体； (iii)ＩＬ−１０； (iv)ＩＬ−４およびＩＬ−１０；および (ｖ)ＩＬ−１０の使用。８．ＩＬ−４がＩＬ−１０と共投与される、請求項７(ｅ)(ｖ)に記載の使用。９．それぞれ (ａ)ＩＬ−２依存性腫瘍細胞増殖の阻害； (ｂ)ＩＦＮ−γレベルの増加； (ｃ)炎症性腸疾患の治療； (ｄ)サイトカイン産生の阻害の増強；および (ｅ)遅延型過敏反応の阻害のための治療薬を製造するための (ｉ)ＩＬ−１０； (ii)ＩＬ−４に対する抗体およびＩＬ−１０に対する抗体； (iii)ＩＬ−１０； (iv)ＩＬ−４およびＩＬ−１０；および (ｖ)ＩＬ−１０の使用。１０．治療薬がさらにＩＬ−４を含む、請求項９(ｅ)(ｖ)に記載の使用。１１．ＩＬ−４またはＩＬ−１０がヒトＩＬ−４またはヒトＩＬ−１０である、請求項７から１０のいずれかに記載の使用。