CN114349858B - 抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用 - Google Patents
抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及抗人白介素‑10高亲和力兔单克隆抗体及其应用。本发明中用单个B细胞筛选和培养技术成功开发了高亲和力的抗人白介素‑10兔单克隆抗体A和B，并证明了这两个抗体可以识别人白介素‑10蛋白表面的不同抗原决定簇，可以用于开发双抗夹心法酶联免疫检测试剂盒；利用该抗体对开发的双抗夹心法酶联免疫检测试剂盒，具有特异性高、抗干扰能力强、检测灵敏度高和稳定性好等优点。该方法学的建立，提供了一种能够在血清、细胞培养基样品中稳定检测极微量水平人白介素‑10蛋白的试剂盒。
Description
技术领域
本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用。
背景技术
人白介素-10蛋白(简称“人白介素-10”，或IL-10)是一种由多种细胞产生的多功能细胞因子，在炎症反应和免疫调节中具有多种作用。IL-10抑制炎症反应和细胞免疫反应，加强与适应性免疫和清除功能相关的耐受性，抑制由单核细胞和巨噬细胞产生的促炎因子。IL-10具有双向调节作用，不仅影响免疫系统，而且可以通过调节生长因子、细胞因子影响许多病理生理过程，包括血管生成、肿瘤形成和感染，慢性炎性肠病、类风湿性关节炎，银屑病、HCV感染、HIV感染等，IL-10都发挥着重要作用。在正常人的血清中，IL-10蛋白水平较低，参考范围为(38.6±10.6)ng/ml。因此开发一种高灵敏度的IL-10蛋白检测方法学，具有非常重要的意义。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。
本发明提供了一对结合人人白介素-10蛋白的高亲和力兔单克隆抗体A和B，该抗体能够和重组表达的人人白介素-10结合，也能与细胞分泌的人人白介素-10，也能和人血清中的人白介素-10蛋白结合。抗体A和重组表达人人白介素-10结合的亲和常数为9.62X10-11M，抗体B和重组表达人人白介素-10结合的亲和常数为9.68X10-12M。
本发明是这样实现的，抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体，所述兔单克隆抗体为兔单克隆抗体A或兔单克隆抗体B；
所述兔单克隆抗体A的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQID NO:5，SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；
所述兔单克隆抗体B的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQID NO:15，SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20。
本发明提供的抗体，轻链恒定区为κ链，重链恒定区为IgG1型。
进一步地，所述兔单克隆抗体A轻链可变区序列为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B轻链可变区序列为SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
进一步地，所述兔单克隆抗体A重链可变区序列为SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B重链可变区序列为SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。
进一步地，所述兔单克隆抗体A轻链序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B轻链序列为SEQ ID NO:11所示氨基酸。
进一步地，所述兔单克隆抗体A重链氨基酸序列为SEQ ID NO:2；所述兔单克隆抗体B重链序列为SEQ ID NO:12所示氨基酸。
本发明还提供了如上述的抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体在建立非诊断目的的人白介素-10的酶联免疫检测方法中的应用。
进一步地，所述酶联免疫检测方法为双抗夹心法酶联免疫检测方法。
进一步地，所述双抗夹心法酶联免疫检测方法中，捕获抗体为兔单克隆抗体A，检测抗体为经生物素标记的兔单克隆抗体B。
本发明还提供了如上述的抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体在制备用于检测人白介素-10的试剂或试剂盒中的应用。
进一步地，所述人白介素-10包括重组表达的人白介素-10，或细胞分泌的人IL-10蛋白，或人血清中的IL-10蛋白。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本专利通过成功开发了一对高亲和力的抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体，进一步开发了一种高灵敏度和特异性针对IL-10蛋白的双抗夹心法酶联免疫检测方法，在临床诊断和科研应用上具有重要的意义。
本发明中所获得抗人人白介素-10蛋白的兔单克隆抗体A和B的亲和力，其中兔抗人人白介素-10蛋白单克隆抗体B的亲和力达到了10-12M，为首个亲和力达到pM(10-12)级别的抗人人白介素-10蛋白单克隆抗体。
本发明中所制备的抗人人白介素-10蛋白的兔单克隆抗体A和B，通过蛋白相互作用非标技术验证证明其结合于人人白介素-10表面的不同抗原决定簇，可以用于建立针对人人白介素-10蛋白的双抗夹心酶联免疫检测方法。
本发明所提供的基于所述的抗人人白介素-10蛋白兔单克隆抗体所建立的人人白介素-10双抗夹心酶联免疫检测方法，捕获抗体为本发明中的人人白介素-10兔单克隆抗体A，检测抗体为经生物素标记的本发明中的人人白介素-10兔单克隆抗体B，标准样品为体外重组表达的人人白介素-10蛋白，检测灵敏度为125pg/ml(125ng/L)，所建立的方法可以用于人人白介素-10蛋白的高灵敏度检测。
本发明所提供的基于所述的抗人人白介素-10蛋白兔单克隆抗体所建立的人人白介素-10双抗夹心酶联免疫检测方法具有高特异性，和与人人白介素-10相似的其他人白介素系列蛋白，和鼠及大鼠来源的人白介素-10蛋白也没有交叉反应。
附图说明
图1是人IL-10兔单克隆抗体A和B的亲和力测定结果；
图2是人IL-10兔单克隆抗体A和B的抗原决定簇测定结果；
图3是基于人IL10兔单克隆抗体A和B建立的酶联免疫检测方法的标准曲线；
图4是双抗夹心法酶联免疫检测方法的灵敏度测定结果；
图5是基于人IL-10兔单克隆抗体A和B建立的酶联免疫检测方法的特异性实验(抗干扰实验)；
图6是人人白介素-10兔单克隆抗体A和B的热稳定性测定。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明，各实施例及试验例中所用的设备和试剂如无特殊说明，均可从商业途径得到。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
根据本申请包含的信息，对于本领域技术人员来说可以轻而易举地对本发明的精确描述进行各种改变，而不会偏离所附权利要求的精神和范围。应该理解，本发明的范围不局限于所限定的过程、性质或组分，因为这些实施方案以及其他的描述仅仅是为了示意性说明本发明的特定方面。实际上，本领域或相关领域的技术人员明显能够对本发明实施方式作出的各种改变都涵盖在所附权利要求的范围内。
为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本申请中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。因此，除非特别说明，否则在说明书和所附权利要求书中所列出的数字参数都是近似值，其可能会根据试图获得的理想性质的不同而加以改变。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。本发明中，“约”指给定值或范围的10％以内，优选为5％以内。
本发明下述各实施例中未特别限定温度时，则均为常温条件。常温是指四季中自然室温条件，不进行额外的冷却或加热处理，一般常温控制在10～30℃，最好是15～25℃。
本发明中涉及的基因、蛋白或其片段可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、植物)中产生。
本发明披露了抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用。本发明用来制备人人白介素-10兔单克隆抗体的免疫原是利用哺乳表达系统在体外重组表达的、经验证具有生物活性的人人白介素-10全长蛋白；制备方法为基于单个B淋巴细胞筛选和培养的单克隆抗体开发技术。利用Biacore仪器测定了所获得抗人人白介素-10蛋白的兔单克隆抗体A和B的亲和力，其中兔抗人人白介素-10蛋白单克隆抗体B的亲和力达到了10-12M，为首个亲和力达到pM(10-12)级别的抗人人白介素-10蛋白单克隆抗体。
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1人IL-10兔单克隆抗体的制备
1、人IL-10兔单克隆抗体的制备
1)动物免疫：为了获得识别人IL-10蛋白的兔单克隆抗体，该发明以自主生产的重组人IL-10蛋白为免疫原，免疫新西兰大白兔；每只大白兔免疫200ug，首次免疫将免疫原与等量的完全弗式佐剂混合制成乳化剂，腹部及背部皮下多点注射，间隔3周取100ug免疫原与等量的不完全弗式佐剂混合制成乳化剂，腹部及背部皮下多点注射，加强免疫两次，三次免疫后用ELISA方法测定血清效价，取血清效价高的兔子，用200ug免疫原就皮下多点注射加强免疫一次，三天后取脾脏。
2)脾脏细胞分离。
3)B淋巴细胞分选：参见专利201910125091.4《从脾脏细胞中高效分离单个抗原特异性B淋巴细胞的方法》
4)编码兔单克隆抗体基因的克隆
培养后的B细胞上清用抗原包被的ELISA来鉴定阳性克隆。阳性克隆的细胞收集裂解后提取RNA并反转录成cDNA。采用PCR方法，天然配对的兔单克隆抗体轻重链可变区基因(VH和VL)从对应阳性克隆的cDNA中被扩增出来，并经测序确定序列。
5)单克隆抗体的生产和纯化
为了获得多株识别人IL-10蛋白的兔单克隆抗体，该发明将兔单克隆抗体重链、轻链基因分别装载在表达载体上，将质粒转染293F细胞；转染72-96小时获得培养上清中含有重组的识别人IL-10蛋白的兔单克隆抗体。使用protein A亲和凝胶树脂从转染后的培养基上清中纯化出重组的识别人IL-10蛋白的兔单克隆抗体，抗体鉴定后分装，于-20℃低温保存备用。
本发明中涉及兔单克隆抗体A和B。其中：
抗体A的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO:1；重链氨基酸序列为SEQ ID NO:2；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:3；重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4；轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9和SEQ IDNO:10。
抗体B的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO:11重链氨基酸序列为SEQ ID NO:12；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:13；重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14；轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:16和SEQ IDNO:17；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20。
实施例2抗体的筛选和鉴定
1)利用GE公司的Biacore 3000生物分子相互作用分析仪对本发明提供的抗人IL-10兔单克隆抗体A和B的亲和力进行精确测定(见图1)；其中使用所选定A抗体和B抗体的浓度分别为67nM，并将其固定在CM5芯片上；然后针对A抗体，用100nM、50nM、33.33nM、11.11nM和3nM五个浓度的重组人IL-10蛋白去结合，获得亲和力曲线；针对B抗体，用20nM、12.3nM、4.1nM、1.37nM和0.46nM五个浓度的重组人IL-10蛋白去结合，获得亲和力曲线；最终通过曲线拟合和计算，获得人IL-10兔单克隆抗体A的亲和力为9.62X10-11M；人IL-10兔单克隆抗体B的亲和力为9.68X10-12M。
2)抗原识别表位的鉴定：使用Probe Life公司的Gator生物分子相互作用分析仪来对本发明中所获得的兔抗人IL-10单克隆抗体A和B，在人IL-10蛋白上面所结合的抗原识别表位进行鉴定；其中使用到的材料为His-tag重组人IL-10蛋白，使用浓度为100nM，使用所获得兔抗人IL-10单克隆抗体A和B的浓度分别为20nM和6.66nM。通过分析两种抗体之间的配对数据可知，在兔抗人IL-10单克隆抗体A和重组人IL-10蛋白结合后，兔抗人IL-10单克隆抗体B仍旧能够结合重组人IL-10蛋白，证明兔抗人单克隆抗体A和B结合在IL-10蛋白表面不同的部位，且相互不干扰。
实施例3基于抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B建立双抗夹心法酶联免疫检测方法
双抗夹心法酶联免疫检测方法的具体步骤：(1)使用碳酸盐缓冲液(pH9.4,0.05M)将捕获抗体，抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A进行包被，4度孵育过夜；洗涤液洗板；(2)用含有5％牛血清白蛋白、0.05％Tween-20的磷酸盐缓冲液(pH7.2,0.05M)进行封闭；(3)将标准样品(重组人IL-10蛋白)、待测样品用含1％牛血清白蛋白、0.05％Tween-20的磷酸盐缓冲液稀释后，加入到酶标板中，常温条件孵育1小时，然后用洗涤液洗板；(4)将用含1％牛血清白蛋白、0.05％Tween-20的磷酸盐缓冲液稀释的经生物素标记的抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体B加入到板中，常温条件孵育1小时，然后用洗涤液洗板；(5)加入用含1％牛血清白蛋白、0.05％Tween-20的磷酸盐缓冲液稀释的亲和素标记的辣根过氧化物酶(HRP)，常温条件孵育1小时，然后用洗涤液洗板；(6)加入TMB显色液，常温显色10分钟，加草酸终止显色，然后分别与450nm和630nm下测定吸光值，OD450减去OD630为校正后的吸光值。
实施例4抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B性能检测
双抗夹心法酶联免疫检测方法的条件摸索：通过正交试验方法，综合考虑背景及重组蛋白的光吸收值，选择抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A的包被浓度为4ug/ml，生物标记的抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A的检测浓度为2ug/ml。
双抗夹心法酶联免疫检测方法的灵敏度：加入的样品为重组人IL-10蛋白，样品用含1％牛血清白蛋白、0.05％Tween-20的磷酸盐缓冲液稀释，浓度分别为1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.25pg/ml,15.625pg/ml,7.8125pg/ml,3.9062pg/ml,1.9531pg/ml,0.9765pg/ml,0.4882pg/ml,0.2441pg/ml,0.1220pg/ml,0.0610pg/ml,0pg/ml，加样量为25ul/孔。以人IL-10蛋白浓度的对数值(Log10)为横坐标，吸光值的校正值(OD450-OD630)为纵坐标作图(见图4)。以吸光值平均值大于三倍空白对照吸光值平均值的最低人IL-10蛋白浓度为双抗夹心法酶联免疫检测方法的灵敏度。实验结果显示所建立的基于抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B建立双抗夹心法酶联免疫检测方法的检测灵敏度达到125pg/ml。
对抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B特异性的检测：本专利中，大鼠和小鼠IL-10与人IL-10蛋白被用于对抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B特异性的检测，采用的方法为双抗夹心法酶联免疫检测方法，所有标准品蛋白的浓度均为1ug/ml。结果显示基于抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B的双抗夹心法酶联免疫检测方法对于其他种属的IL-10均无任何交叉反应(见图5)，证明抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B对于人IL-10蛋白具有高度的特异性。
对抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B热稳定性的测试：本专利中，抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B被放置于37℃保温箱中，并于第3、6、10和20天分别取样，然后通过双抗夹心法酶联免疫检测方法来对人IL-10标准品蛋白进行检测，根据所比较经37℃处理不同时间的抗体样品和未经37℃处理的抗体样品，所建立的标准曲线，来比较抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B热稳定性；结果显示(见图6)本发明中的两株兔抗IL-10单克隆抗体在37℃下处理20天后，对检测灵敏度和线性范围的影响小于5％，证明抗人IL-10蛋白兔单克隆抗体A和B热稳定性强。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 优睿赛思（武汉）生物科技有限公司
<120> 抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体及其应用
<160> 20
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser
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Ile Phe Pro Pro Ser Ala Asp Leu Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile
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<210> 10
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Ala Lys Thr Pro Val Ile Asp Glu Pro Leu Phe Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 11
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser
20 25 30
Val Glu Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser
35 40 45
Gln Ser Ile Ser Asn Glu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
50 55 60
Arg Pro Glu Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Asp Leu Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser
100 105 110
Ala Tyr Tyr Ser Ser Ser Val Asp Ile Tyr Asn Thr Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Glu Val Val Val Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile
130 135 140
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145 150 155 160
Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val
165 170 175
Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln
180 185 190
Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr
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210 215 220
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225 230 235
<210> 12
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro
20 25 30
Gly Ala Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
35 40 45
Gly Ser Tyr Gly Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Ala Cys Ile Val Thr Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
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85 90 95
Val Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr
100 105 110
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165 170 175
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180 185 190
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260 265 270
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val
325 330 335
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340 345 350
Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg
355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
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435 440 445
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450 455 460
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<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
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1 5 10 15
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20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Glu Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Tyr Tyr Ser Ser Ser
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100 105 110
<210> 14
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Gly Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
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50 55 60
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Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
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Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 15
<211> 6
<212> PRT
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<400> 16
Gly Ala Ser
1
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Gln Ser Ala Phe Tyr Ser Asn Ser Val Asp Ile Tyr Asn Ser
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<210> 18
<211> 9
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Gly Phe Ser Phe Ser Gly Ser Tyr Gly
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Ile Val Thr Ser Ser Gly Thr Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
Ala Lys Glu Leu Leu Gly Tyr Phe Thr Ala Asn Leu
1 5 10
Claims (10)
1.抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体为兔单克隆抗体A或兔单克隆抗体B；
所述兔单克隆抗体A的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ IDNO:5，SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；
所述兔单克隆抗体B的轻链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ IDNO:15，SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17；重链互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20。
2.根据权利要求1所述的抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于：所述兔单克隆抗体A轻链可变区序列为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B轻链可变区序列为SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于：所述兔单克隆抗体A重链可变区序列为SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B重链可变区序列为SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于：所述兔单克隆抗体A轻链序列为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述兔单克隆抗体B轻链序列为SEQ ID NO:11所示氨基酸。
5.根据权利要求1所述的抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于：所述兔单克隆抗体A重链氨基酸序列为SEQ ID NO:2；所述兔单克隆抗体B重链序列为SEQ ID NO:12所示氨基酸。
6.如权利要求1-5任一所述的抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体在建立非诊断目的的人白介素-10的酶联免疫检测方法中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述酶联免疫检测方法为双抗夹心法酶联免疫检测方法。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述双抗夹心法酶联免疫检测方法中，捕获抗体为兔单克隆抗体A，检测抗体为经生物素标记的兔单克隆抗体B。
9.如权利要求1-5任一所述的抗人白介素-10高亲和力兔单克隆抗体在制备用于检测人白介素-10的试剂或试剂盒中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述人白介素-10包括重组表达的人白介素-10，或细胞分泌的人IL-10蛋白，或人血清中的IL-10蛋白。
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