WO2004063221A1

WO2004063221A1 - メタスチン誘導体およびその用途

Info

Publication number: WO2004063221A1
Application number: PCT/JP2003/016978
Authority: WO
Inventors: Chieko Kitada; Taiji Asami; Naoki Nishizawa; Tetsuya Ohtaki; Naoki Tarui; Hirokazu Matsumoto; Jiro Noguchi; Hisanori Matsui
Original assignee: Takeda Pharmaceutical Company Limited
Priority date: 2002-12-26
Filing date: 2003-12-26
Publication date: 2004-07-29
Also published as: US20120015868A1; KR20050090420A; US8361968B2; CN1761680A; US20090318365A1; CA2511858A1; EP1577323A4; AU2003292696A1; EP1577323A1; US20060241051A1; EP1577323B1

Description

明細書

誘導体およびその用途

技術分野

本発明は、誘導体およびその用途に関する背景技術

ヒト由来メタスチン（K i S S— lペプチドとも呼ばれる）（WO O 0 / 2 4 8 9 0号）およびマウス · ラット由来メタスチン（WO 0 1 Z 7 5 1 0 4号 2 ) が知られている。メタスチンを含有する徐放製剤も知られている（WO O 2 / 8 5 3 9 9号）。

メタスチンは、癌転移抑制活性を有しており、癌（例えば、肺癌、胃癌、肝癌、膝癌、大腸癌、直腸瘙、結腸癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮類癌、乳癌、腎癌、膀胱癌、脳腫瘍等）の予防，治療に有効であること、膝臓機能調節作用を有しており、膝臓疾患（例えば、急性または慢性膝炎、膝癌等）の予防 ·治療にも有効であること、胎盤機能調節作用を有しており、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩異常の予防 ·治療に有効であることが報告されている（WO 0 0 Z 2 4 8 9 0号； WO 0 1 / 7 5 1 0 4号 2 ； W〇 0 2 Z 8 5 3 9 9号）。発明の開示

本発明は、優れた癌転移抑制活性、癌増殖抑制活性等を有する安定なメタスチン誘導体を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、メタスチンの構成アミノ酸を特定の修飾基で修飾することにより、予想外にも天然型メタスチンよりも血中安定性などが向上し、かつ優れた癌転移抑制活性や癌増殖抑制活性を示すことを見出した。さらに、本発明者らは、メタスチンおよびメタスチン誘導体が、予想外にも従来知られていた作用とは全く異なる血糖上昇作用、塍グルカゴン分泌促進作用、尿生成促進作用を有することを見出した。本発明者らは、これらの知見に基づいて、さらに検討し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、

〔 1〕式

〔式中、 2¹、 Z ³、 Z ⁵および Z ⁷はそれぞれ水素原子または Cェ— ₃ァルキル基を、 z ²、 z⁴、 z ⁶および z ⁸はそれぞれ水素原子、 oまたは

Sを、

R ¹は（ 1 ) 水素原子または（ 2 ) 置換されていてもよい力ルバモイル基、置換されていてもよいヒドロキシル基および置換されていてもよい芳香族環基から成る群から選ばれる基で置換されていてもよい Cェ— 8ァルキル基を、

R ²は（ 1 ) 水素原子または（ 2 ) 環状または鎖状の Cェ—ェ。アルキル基または（ 3 ) 環状アルキル基と鎖状アルキル基からなる（ェ—ェ。アルキル基を、

R ³は（ 1 ) 置換されていてもよい塩基性基を有し、さらに他の置換基を有していてもよい Cぃ₈アルキル基、

( 2 ) 置換されていてもよい塩基性基を有し、さらに他の置換基を有していてもよいァラルキル基、

( 3 ) 置換されていてもよい塩基性基を有している炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基を有し、さらに他の置換基を有していてもよい — ₄アルキル基、または

(4) 置換されていてもよい塩基性基を有している炭素数 7以下の非芳香性複素環基を有し、さらに他の置換基を有していてもよい C — ₄'アルキル基を、

R ⁴は ( 1 ) 置換されていてもよい C ₆__{1 2}芳香族炭化水素基、

( 2 ) 置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基、

( 3 ) 置換されていてもよい C ₈— ₁₄芳香族縮合環基、

(4) 置換されていてもよい、 3ないし 1 1個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基、

( 5 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基、および

( 6 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい C i— ₄アルキル基を、

Xは式 —NHCH (Q ¹ ) YQ ² C (= Z ⁹) 一

(式中、 Q ¹は（ 1 ) 置換されていてもよい C ₆_ _{1 2}芳香族炭化水素基

( 2 ) 置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる

5ないし 1 4員芳香族複素環基、

( 3 ) 置換されていてもよい C ₈__{1 4}芳香族縮合環基、

( 6 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい C i— ₄アルキル基を、 Q ²は（ 1 ) 力ルバモイル基およびヒドロキシル基から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい Cェ— 4アルキル基で置換されていてもよい CH₂、 ( 2 ) 力ルバモイル基およびヒドロキシル基から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい C — ₄アルキル基で置換されていてもよい NHまたは（ 3 ) Oを、

Yは C i— eアルキル基で置換されていてもよい、式— C ONH―、一 C S NH—、一 CH₂NH—、一 NHCO -、 — CH₂0—、 — CH₂ S - または一 C H₂ CH₂—で表わされる基を、

Z ⁹は水素原子、 Oまたは Sを示す）で表わされる基を、

Pは（ 1 ) 水素原子、

( 2) 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1〜4 8番目のアミノ酸配列の C末端側から任意の連続したまたは不連続に結合したアミノ酸残基、

( 3) 式 J ¹— J ²_ C (J ³) (Q ³) Y¹ C (J ⁴) (Q⁴) Y² C ( J ⁵) (Q⁵) Y³ C ( J " (Q⁶) C (=Z ¹⁰) -

(式中、 J ¹は（ a) 水素原子または（b ) 置換基を有していてもよい環基を含む置換基で置換されていてもよい、（ i ) (： — _{1 5}ァシル基、

(ii) アルキル基、（iii) C ₆— ₁₄ァリール基、（iv) 力ルバモイル基、（V) カルボキシル基、（vi) スルフィノ基、（vii) アミジノ基、または（viii) ダリオキシロイル基を、

J ²は（ 1 ) C i— ₆アルキル基で置換されていてもよい NH、（ 2 ) C i— ₆アルキル基で置換されていてもよい C H₂、（ 3 ) Oまたは（4) Sを、

J ³〜 J ⁶はそれぞれ水素原子または Cェ— 3アルキル基を、

Q³〜Q⁶はそれぞれ、

( 1 ) 置換されていてもよい C ₂芳香族炭化水素基、

( 2 ) 置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子

、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基、 ( 3 ) 置換されていてもよい C ₈— ₁₄芳香族縮合環基、

( 5 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基

( 6 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、

( 7 ) 置換されていてもよいアミノ基、

( 8 ) 置換されていてもよいグァニジノ基、

( 9 ) 置換されていてもよいヒドロキシル基、

( 1 0 ) 置換されていてもよい力ルポキシル基、

( 1 1 ) 置換されていてもよい力ルバモイル基、および

( 1 2 ) 置換されていてもよいスルフヒドリル基

から成る群から選ばれる置換基を有していてもよい c i— ₄アルキル基又は水素原子を示し、

J ³と Q ³、 J ⁴と Q⁴、 J ⁵と Q ⁵、 J ⁶と Q ⁶が結合することで、あるいは J ²と Q ³、 Y ¹と Q⁴、 Y²と Q ⁵、 Y ³と Q ⁶が結合することで環を形成してもよい、

丫ュ〜丫³はそれぞれ一 CON (J ^{1 3})—、 — C S N (J ^{1 3})—、 - C ( J ¹ ⁴) N (J ^{1 3})—または一 N (J ^{1 3}) C O— （ J ^{1 3}および J ¹⁴はそれぞれ水素原子または C アルキル基を示す）で示される基を示し、

Z ^{1 G}は水素原子、 Oまたは Sを示す）で表わされる基、

(4) 式 "一 J ² - C (J ⁷) (Q ⁷) Y² C ( J ⁸) (Q⁸) Y³ C ( J ⁹

) (Q⁹) C (= Z ¹⁰) - (式中、 J ¹および J ²はそれぞれ前記と同意義を、

J ⁷~ J ⁹は J ³と同意義を、

Q⁷〜Q⁹は Q³と同意義を、

Y ²および Y ³は前記と同意義を、

Z ¹。は前記と同意義を示し、 J ⁷と Q ⁷、 J ⁸と Q ⁸、 J ⁹と Q⁹が結合することで、あるいは J ²と Q ⁷、 Y²と Q⁸、 Y³と Q ⁹が結合することで環を形成してもよい。）で表わされる基、

( 5 ) 式 J ¹— "一 C ( J ¹⁰) ( Q ¹⁰ ) Y ³ C ( J ^{1 1} ) (Q ¹ M C (= Z ¹⁰) 一

(式中、 J ¹および J ²は前記と同意義を、

J ^{1 0}および J ^{1 1}は J ³と同意義を、

Q ¹。および Q ^{1 1}は Q ³と同意義を、

Y³は前記と同意義を、

Z ¹ Dは前記と同意義を示し、

J ¹⁰と Q ^{1 Q}、 J ^{1 1}と Q ^{1 1}が結合することで、あるいは J ²と Q ^{1 ()}、 Y ³と Q^{1 1}が結合することで環を形成してもよい。）で表わされる基、

( 6 ) 式 J ¹一 "一 C ( J ¹²) (Q ¹²) C (= Z ¹⁰) - (式中、 J ¹および J ²は前記と同意義を、

J ¹²は J ³と同意義を、

Q ¹²は Q ³と同意義を、

Z ^{1 Q}は前記と同意義を示し、

J ^{1 2}と Q ^{1 2}が結合することで、あるいは J ²と Q ^{1 2}が結合することで環を形成してもよい。）で表わされる基、または

( 7 ) 式 J ¹一（ J ¹は前記と同意義を示す）で表わされる基を示す。〕で表わされるメタスチン誘導体（ I ) (ただし、配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1〜 5 4番目、第 2〜 5 4番目、第 3〜 54 番目、第 4〜 5 4番目、第 5 ~ 5 4番目、第 6〜 54番目、第 7〜 5 4 番目、第 8〜 5 4番目、第 9 ~ 5 4番目、第 1 0〜 5 4番目、第 1 1〜 5 4番目、第 1 2〜 5 4番目、第 1 3〜 5 4番目、第 1 4〜 5 4番目、第 1 5〜 54番目、第 1 6〜 54番目、第 1 7〜 54番目、第 1 8〜 5 4番目、第 1 9〜 5 4番目、第 2 0〜 5 4番目、第 2 1〜 5 4番目、第 2 2〜 5 4番目、第 2 3〜 5 4番目、第 2 4〜 5 4番目、第 2 5〜 54 番目、第 2 6〜 5 4番目、第 2 7〜 5 4番目、第 2 8〜 5 4番目、第 2 9〜 5 4番目、第 3 0〜 54番目、第 3 1〜 5 4番目、第 3 2〜 5 4番目、第 3 3〜 5 4番目、第 3 4：〜 5 4番目、第 3 5〜 5 4番目、第 3 6 〜 54番目、.第 3 7〜 5 4番目、第 3 8〜 5 4番目、第 3 9〜 5 4番目、第 40〜 5 4番目、第 4 1〜 54番目、第 4 2〜 5 4番目、第 4 3〜 54番目、第 44〜 5 4番目、第 4 5〜 5 4番目、第 4 6〜 5 4番目、第 4 7〜 5 4番目、第 4 8〜 54番目または第 4 9〜 5 4番目のァミノ酸配列からなるペプチドを除く）またはその塩、

〔 2〕 ( i ) D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ ( 化合物番号 141) 、

( ii) D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -Trp-NH₂ (化合物番号 174) 、

( iii ) 3- (3-Indolyl) ropionyl-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe-NH₂ (化合物番号 260) 、

( iv) 3-P enyl ro ionyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ ( 化合物番号 269) 、

( v ) 2- (indoI-3-yl) et ylcarbamoyl-Asn-Ser-P e-AzaGIy-Leu- Arg(Me)-Phe-NH₂ (化合物番号 279) 、

( vi ) D-Tyr-Asn-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ ( 化合物番号 286) 、 .

( vii ) D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe Ψ (CSNH) Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

(化合物番号 296) 、

( viii ) Tyr Ψ (CH₂NH) Asn-D-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe-NH₂ (化合物番号 300) 、

( ix ) D-Tyr-D-Asn-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ (化合物番号 303) 、

( x ) D-Tyr-D-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ (化合物番号 305) 、

(xi) D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe (4F) - NH₂ ( 化合物番号 318) 、 (xii) D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe Ψ (NHCO) Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ (化合物番号 319) 、

( xii i ) 3-Pyridylpropionyl-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe- 匪 ₂ (化合物番号 322) 、

( χίν ) 4-Imidazoleacetyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Ptie - NH₂ (化合物番号 323) 、

( v ) D-Tyr-D-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Trp-NH₂ (化合物番号 385) 、または

(xvi) D-Tyr-D-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Trp-NH₂ (化合物番号 386) である請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩、

〔3〕上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩のプロドラッグ、〔4〕上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグを含有してなる医薬、

〔 5〕癌転移抑制剤または癌増殖抑制剤である上記〔4〕記載の医薬、

〔6〕癌の予防 ·治療剤である上記〔4〕記載の医薬、

〔 7〕膝臓機能調節剤である上記〔4〕記載の医薬、

〔 8〕急性もしくは慢性膝炎または膝癌の予防 · 治療剤である上記〔4 〕記載の医薬、

〔 9〕胎盤機能調節剤である上記〔4〕記載の医薬、

〔 1 0〕絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防 ·治療剤である上記〔4〕記載の医薬、

〔 1 1〕性腺機能改善剤である上記〔4〕記載の医薬、

〔 1 2〕ホルモン依存性癌（例えば、前立腺癌、乳癌）、不妊症、子宮内膜症または子宮筋腫の予防 ·治療剤である上記〔4〕記載の医薬、〔 1 3) 排卵誘発または促進剤である上記〔4〕記載の医薬、

〔 1 4〕性腺刺激ホルモン分泌促進剤または性ホルモン分泌促進剤である上記〔4〕記載の医薬、〔 1 5〕アルツハイマー病または軽度認知障害の予防 ·治療剤である上記〔4〕記載の医薬、

〔 1 6〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする癌転移抑制または癌増殖抑制方法、

〔 1 7〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする癌の予防 ·治療方法、

〔 1 8〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする膝臓機能調節方法、

〔 1 9〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする急性もしくは慢性膝炎または塍癌の予防 · 治療方法、

〔2 0〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする胎盤機能調節方法、

〔2 1〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防 ·治療方法、

〔2 2〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする性腺機能改善方法、

〔2 3〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とするホルモン依存性癌（例えば、前立腺癌、乳癌）、不妊症、子宮内膜症または子宮筋腫の予防 · 治療方法、

〔2 4〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徵とする排卵誘発または促進方法、

〔2 5〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする性腺刺激ホルモン分泌促進方法または性ホルモン分泌促進方法、〔2 6〕哺乳動物に対して、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徵とするアルツハイマー病または軽度認知障害の予防 · 治療方法、〔2 7〕癌転移抑制剤または癌増殖抑制剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔2 8〕癌の予防 · 治療剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔2 9〕滕臓機能調節剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔3 0〕急性もしくは慢性膝炎または膝癌の予防 ·治療剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔3 1〕胎盤機能調節剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔 3 2〕絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防 ·治療剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔3 3〕性腺機能改善剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔 3 4〕ホルモン依存性癌（例えば、前立腺癌、乳癌）、不妊症、子宮内膜症または子宮筋腫の予防 ·治療剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔 3 5〕排卵誘発または促進剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔 3 6〕性腺刺激ホルモン分泌促進剤または性ホルモン分泌促進剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔 3 7〕アルツハイマー病または軽度認知障害の予防 · 治療剤を製造するための上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用、

〔3 8〕メタスチン受容体ァゴニストを含有してなる膝グルカゴン分泌促進剤、

〔 3 9〕メタスチン受容体ァゴニス卜を含有してなる尿生成促進剤、

〔4 0〕メタスチン受容体ァゴニストを含有してなる肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、ィンスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 · 治療剤、

〔4 1〕メタスチン受容体ァゴニストが請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグである上記〔3 8〕〜〔4 0〕記載の剤、

〔4 2〕哺乳動物に対して、メタスチン受容体ァゴニストの有効量を投与することを特徴とする塍グルカゴン分泌促進方法、

〔4 3〕哺乳動物に対して、メタスチン受容体ァゴニストの有効量を投与することを特徴とする尿生成促進方法、

〔4 4〕哺乳動物に対して、メタスチン受容体ァゴニストの有効量を投与することを特徴とする肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 · 治療方法、

〔4 5〕腌グルカゴン分泌促進剤を製造するためのメタスチン受容体ァゴニス卜の使用、

〔4 6〕尿生成促進剤を製造するためのメタスチン受容体ァゴニストの使用、および

〔4 7〕肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療剤を製造するためのメタスチン受容体ァゴニス卜の使用を提供する。

さらに、本発明は、

〔 1〕メタスチンまたはその塩を含有してなる血糖上昇剤、

〔 2〕メタスチンまたはその塩を含有してなる膝グルカゴン分泌促進剤〔 3〕メタスチンまたはその塩を含有してなる尿生成促進剤、

〔4〕メタスチンまたはその塩を含有してなる肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、ィンスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、.血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療剤、

〔 5〕メタスチンをコードする D N Aを含有する D N Aを含有してなる血糖上昇剤、

〔 6〕メタスチンをコードする D N Aを含有する D N Aを含有してなる塍グルカゴン分泌促進剤、 '

〔7〕メタスチンをコードする D N Aを含有する D N Aを含有してなる尿生成促進剤、

〔 8〕メタスチンをコードする D N Aを含有する D N Aを含有してなる肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 · 治療剤、

〔 9〕メタスチンをコ一ドする D N Aを含有する D N Aを含有してなる肥満、高脂血症、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギ一、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患、脂肪毒性、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、頻尿、夜尿症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の診断剤、

〔 1 0〕メタスチンまたはその塩に対する抗体を含有してなる血糖低下剤、

〔 1 1〕メタスチンまたはその塩に対する抗体を含有してなる膝グルカゴン分泌抑制剤、

〔 1 2〕メタスチンまたはその塩に対する抗体を含有してなる尿生成抑制剤、

〔 1 3〕メタスチンまたはその塩に対する抗体を含有してなる糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤、

〔 1 4〕メタスチンまたはその塩に対する抗体を含有してなる肥満、高脂血症、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患、脂肪毒性、糖尿病、耐糖能障害、ケト一シス、アシドーシス、頻尿、夜尿症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の診断剤、

〔 1 5〕メタスチンをコードする D N Aを含有する D N Aに対するアンチセンス D N Aを含有してなる血糖低下剤、〔 1 6〕メタスチンをコードする DN Aを含有する DN Aに対するアンチセンス D N Aを含有してなる膝グルカゴン分泌抑制剤、

〔 1 7〕メタスチンをコードする DNAを含有する DNAに対するアンチセンス DN Aを含有してなる尿生成抑制剤、

〔 1 8〕メタスチンをコードする DNAを含有する DNAに対するアンチセンス DNAを含有してなる糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、ァシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 · 治療剤、

〔 1 9〕メタスチンが、

( 1 ) 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の N末端から第 4 7〜 5 4番目のアミノ酸配列を含有し、 8乃至 5 4個のアミノ酸残基からなるぺプチド、

( 2 ) 配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列の N末端から第 1 3 4〜 1 4 1番目のアミノ酸配列を含有し、 8乃至 5 4個のアミノ酸残基からなるぺプチド、

( 3 ) 配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列の N末端から第 1 3 8〜 1 4 5番目のアミノ酸配列を含有し、 8乃至 5 4個のアミノ酸残基からなるペプチド、または

(4) 配列番号： 7で表わされるアミノ酸配列の N末端から第 1 1 2〜 1 1 9番目のアミノ酸配列を含有し、 8乃至 5 4個のアミノ酸残基からなるペプチドである上記 C 1 ) ~ 〔 1 8〕記載の剤、

〔2 0〕メタスチン受容体またはその塩を含有してなる血糖上昇剤、 [2 1〕メタスチン受容体またはその塩を含有してなる隧グルカゴン分泌促進剤、

〔 2 2〕メタスチン受容体またはその塩を含有してなる尿生成促進剤、〔2 3〕メタスチン受容体またはその塩を含有してなる肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療剤、

〔2 4〕メタスチン受容体をコ一ドする DN Aを含有する DN Aを含有してなる血糖上昇剤、

〔2 5〕メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DN Aを含有してなる塍グルカゴン分泌促進剤、

〔 2 6〕メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNAを含有してなる尿生成促進剤、

〔2 7〕メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNAを含有してなる肥満、髙脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 · 治療剤、

〔 2 8〕メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNAを含有してなる肥満、高脂血症、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患、脂肪毒性、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、ァシドーシス、頻尿、夜尿症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の診断剤、

〔2 9〕メタスチン受容体またはその塩に対する抗体を含有してなる血糖低下剤、

〔 3 0〕メタスチン受容体またはその塩に対する抗体を含有してなる膝グルカゴン分泌抑制剤、

〔3 1〕メタスチン受容体またはその塩に対する抗体を含有してなる尿生成抑制剤、

〔 3 2〕メタスチン受容体またはその塩に対する抗体を含有してなる糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 · 治療剤、

〔3 3〕メタスチン受容体またはその塩に対する抗体を含有してなる肥満、高脂血症、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患、脂肪毒性、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、頻尿、夜尿症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の診断剤、

〔3 4〕メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNAに対するアンチセンス DN Aを含有してなる血糖低下剤、

〔3 5〕メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNAに対するアンチセンス D NA-を含有してなる膝グルカゴン分泌抑制剤、

〔3 6〕メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNAに対するアンチセンス DN Aを含有してなる尿生成抑制剤、

〔3 7〕メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNAに対するアンチセンス DNAを含有してなる糖尿病、耐糖能障害、ケト一シス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤、

〔3 8〕メタスチン受容体が配列番号： 9、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質である上記〔 1〕〜〔2 2〕記載の剤、

〔3 9) メタスチンまたはその塩および（または）メタスチン受容体、その部分べプチドまたはその塩を用いることを特徴とする血糖調節薬、膊グルカゴン調節薬または尿生成調節薬のスクリ一ニング方法、

〔4 0〕メタスチンまたはその塩および（または）メタスチン受容体、その部分べプチドまたはその塩を含有することを特徴とする血糖調節薬、滕グルカゴン調節薬または尿生成調節薬のスクリーニング用キット、〔4 1〕メタスチンをコードする D N Aを含有する D N Aおよび（または）メタスチン受容体またはその部分べプチドをコードする D N Aを含有する D N Aを用いることを特徴とする血糖調節薬、塍グルカゴン調節薬または尿生成調節薬のスクリーニング方法、

〔4 2〕メタスチンをコードする D N Aを含有する D N Aおよび（または）メタスチン受容体またはその部分べプチドをコードする D N Aを含有する D N Aを含有することを特徴とする血糖調節薬、塍グルカゴン調節薬または尿生成調節薬のスクリーニング用キット、

〔4 3〕メタスチン受容体に対するアンタゴニストを含有してなる血糖低下剤、

〔4 4〕メタスチン受容体に対するアン夕ゴニストを含有してなる膝グルカゴン分泌抑制剤、

[ 4 5〕メタスチン受容体に対するアン夕ゴニス卜を含有してなる尿生成抑制剤、

〔4 6〕メタスチン受容体に対するアンタゴニストを含有してなる糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 · 治療剤、

〔4 7〕メタスチンの発現を促進する物質を含有してなる血糖上昇剤、〔4 8〕メタスチンの発現を促進する物質を含有してなる膝グルカゴン分泌促進剤、

〔4 9〕メタスチンの発現を促進する物質を含有してなる尿生成促進剤〔 5 0〕メタスチンの発現を促進する物質を含有してなる肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療剤、〔 5 1〕メタスチンの発現を抑制する物質を含有してなる血糖低下剤、〔 5 2〕メタスチンの発現を抑制する物質を含有してなる塍グルカゴン分泌抑制剤、

〔5 3〕メタスチンの発現を抑制する物質を含有してなる尿生成抑制剤、

〔5 4〕メタスチンの発現を抑制する物質を含有してなる糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 · 治療剤、

〔 5 5〕メタスチン受容体の発現を促進する物質を含有してなる血糖上昇剤、

〔 5 6〕メタスチン受容体の発現を促進する物質を含有してなる隧グルカゴン分泌促進剤、

〔 5 7〕メタスチン受容体の発現を促進する物質を含有してなる尿生成促進剤、

〔 5 8〕メタスチン受容体の発現を促進する物質を含有してなる肥満、髙脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 · 治療剤、

〔 5 9〕メタスチン受容体の発現を抑制する物質を含有してなる血糖低下剤、

〔 6 0〕メタスチン受容体の発現を抑制する物質を含有してなる塍グルカゴン分泌抑制剤、

〔6 1〕メタスチン受容体の発現を抑制する物質を含有してなる尿生成抑制剤、

〔6 2〕メタスチン受容体の発現を抑制する物質を含有してなる糖尿病、耐糖能障害、ケ卜一シス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤、

〔 6 3〕哺乳動物に対して、

( 1 ) メタスチンまたはその塩、

( 2 ) メタスチンをコードする DNAを含有する DNA、

( 3 ) メタスチン受容体またはその塩、

(4) メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNA、

( 5 ) メタスチンの発現を促進する物質、または

(6 ) メタスチン受容体の発現を促進する物質の有効量を投与することを特徴とする血糖上昇方法、

〔6 4〕哺乳動物に対して、

( 1 ) メタスチンまたはその塩、

( 2 ) メタスチンをコードする DNAを含有する DNA、

( 3) メタスチン受容体またはその塩、

( 4 ) メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNA、

( 5 ) メタスチンの発現を促進する物質、または

( 6 ) メタスチン受容体の発現を促進する物質の有効量を投与することを特徴とする膝グルカゴン分泌促進方法、

〔6 5〕哺乳動物に対して、 .

( 1 ) メタスチンまたはその塩、

( 2 ) メタスチンをコードする DNAを含有する DNA、

( 3 ) メタスチン受容体またはその塩、

( 4 ) 'メタスチン受容体をコ一ドする DNAを含有する DNA、

( 5 ) メタスチンの発現を促進する物質、または

(6 ) メタスチン受容体の発現を促進する物質の有効量を投与することを特徴とする肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ —マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療方法、〔6 6〕哺乳動物に対して、

( 1 ) メタスチンまたはその塩に対する抗体、

(2 ) メタスチンをコ一ドする DN Aを含有する DN Aに対するアンチセンス DNA、

(3 ) メタスチン受容体またはその塩に対する抗体、

(4 ) メタスチン受容体をコードする DN Aを含有する DN Aに対するアンチセンス DNA、

( 5 ) メタスチン受容体に対するアン夕ゴニスト、

(6 ) メタスチンの発現を抑制する物質、または

( 7 ) メタスチン受容体の発現を抑制する物質の有効量を投与することを特徴とする血糖低下方法、

[6 7 ] 哺乳動物に対して、

( 1 ) メタスチンまたはその塩に対する抗体、

( 2 ) メタスチンをコードする DNAを含有する DNAに対するアンチセンス D N A、

( 3 ) メタスチン受容体またはその塩に対する抗体、

( 4 ) メタスチン受容体をコードする D N Aを含有する D N Aに対するアンチセンス D N A、

( 5 ) メタスチン受容体に対するアン夕ゴニスト、

( 6 ) メタスチンの発現を抑制する物質、または

( 7 ) メタスチン受容体の発現を抑制する物質の有効量を投与することを特徴とする膝グルカゴン分泌抑制方法、

〔 6 8〕哺乳動物に対して、

( 1 ) メタスチンまたはその塩に対する抗体、

( 2 ) メタスチンをコ一ドする D N Aを含有する D N Aに対するァンチセンス DNA、

( 3 ) メタスチン受容体またはその塩に対する抗体、

(4) メタスチン受容体をコードする DN Aを含有する DN Aに対するアンチセンス D NA、

( 5 ) メタスチン受容体に対するアン夕ゴニスト、

( 6 ) メタスチンの発現を抑制する物質、または

( 7 ) メタスチン受容体の発現を抑制する物質の有効量を投与することを特徴とする糖尿病、耐糖能障害、ケ卜ーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障の予防 · 治療方法、

〔 6 9〕血糖上昇剤を製造するための

( 1 ) メタスチンまたはその塩、

( 2 ) メタスチンをコードする D NAを含有する D N A、

( 3 ) メタスチン受容体またはその塩、

(4) メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNA、

( 5 ) メタスチンの発現を促進する物質、または

( 6 ) メタスチン受容体の発現を促進する物質の使用、

〔 7 0〕滕グルカゴン分泌促進剤を製造するための

( 1 ) メタスチンまたはその塩、

( 2 ) メタスチンをコードする D N Aを含有する D N A、

( 3 ) メタスチン受容体またはその塩、

(4) メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNA、

( 5 ) メタスチンの発現を促進する物質、または

(6 ) メタスチン受容体の発現を促進する物質の使用、

〔 7 1〕肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、' 脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療剤を製造するための

( 1 ) メタスチンまたはその塩、

( 2 ) メタスチンをコードする DNAを含有する DNA、 3 ) メタスチン受容体またはその塩、

4) メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNA、

5 ) メタスチンの発現を促進する物質、または

6 ) メタスチン受容体の発現を促進する物質の使用、

7 2〕血糖低下剤を製造するための

1 ) メタスチンまたはその塩に対する抗体、

2 ) メタスチンをコ一ドする DN Aを含有する DN Aに対するアンチセンス D NA、

3 ) メタスチン受容体またはその塩に対する抗体、

(4) メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNAに対するアンチセンス D N A、

5 ) メタスチン受容体に対するアンタゴニスト、

6 ) メタスチンの発現を抑制する物質、または

7 ) メタスチン受容体の発現を抑制する物質の使用、

〔 7 3〕塍グルカゴン分泌抑制剤を製造するための

1 ) メタスチンまたはその塩に対する抗体、

2 ) メタスチンをコードする DN Aを含有する DN Aに対するアンチセンス D NA、

3 ) メタスチン受容体またはその塩に対する抗体、

(4) メタスチン受容体をコードする DNAを含有する DNAに対するアンチセンス DNA、

5 ) メタスチン受容体に対するアンタゴニスト、

6 ) メタスチンの発現を抑制する物質、または

7 ) メタスチン受容体の発現を抑制する物質の使用、

〔 7 4〕糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障の予防 ·治療剤を製造するための

( 1 ) メタスチンまたはその塩に対する抗体、 (2 ) メタスチンをコ一ドする DN Aを含有する DN Aに対するアンチセンス D N A、

(3 ) メタスチン受容体またはその塩に対する抗体、

(4) メタスチン受容体をコードする D N Aを含有する D N Aに対するアンチセンス DNA、

( 5) メタスチン受容体に対するアンタゴニスト、

(6 ) メタスチンの発現を抑制する物質、または

(7 ) メタスチン受容体の発現を抑制する物質の使用、

[7 5〕 ( a) メタスチンおよび（または）（b) メタスチン受容体（以下、部分ペプチドも含む）を用いることを特徴とする血糖調節薬、膝グルカゴン調節薬または尿生成調節薬のスクリ一ニング方法、

〔7 6〕 ( a ) メタスチンをコードする DNAを含有する DNAおよび

(または）（b) メタスチン受容体をコードする D NAを用いることを特徴とする血糖調節薬、膝グルカゴン調節薬または尿生成調節薬のスクリーエング方法、

〔7 7〕標識したメタスチンをメタスチン受容体に接触させた場合と、標識したメタスチンおよび試験化合物をメタスチン受容体に接触させた場合における、標識したメタスチンのメタスチン受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリ一二ング方法、

〔7 8〕標識したメタスチンをメタスチン受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合と、標識したメタスチンおよび試験化合物をメタスチン受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、標識したメタスチンの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質の.スクリ一二ング方法、

〔7 9〕標識したメタスチンを、メタスチン受容体をコードする DNA を含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメ夕スチン受容体に接触させた場合と、標識したメタスチンおよび試験化合物をメタスチン受容体をコ一ドする D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメタスチン受容体に接触させた場合における、標識したメタスチンの該メタスチン受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリーニング方法、

〔8 0〕メタスチン受容体を活性化する化合物（例えば、メタスチン、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグ）をメタスチン受容体を含有する細胞（例、 C H〇細胞、ヒト大腸癌由来細胞株 S W 6 2 0細胞）に接触させた場合と、メタスチン受容体を活性化する化合物および試験化合物をメタスチン受容体を含有する細胞に接触させた場合における、メタスチン受容体を介した細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリ一二ング方法、

〔 8 1〕メタスチン受容体を活性化する化合物（例えば、メタスチン、上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグ）をメタスチン受容体をコ一ドする D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメタスチン受容体に接触させた場合と、メタスチン受容体を活性化する化合物および試験化合物をメタスチン受容体をコードする D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメタスチン受容体に接触させた場合における、メタスチン受容体を介する細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリーニング方法、

〔 8 2〕試験化合物をメタスチン受容体を含有する細胞に接触させた場合における、メ夕スチン受容体を介した細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするメタスチン受容体ァゴニス卜のスクリ一二ング方法

〔8 3〕試験化合物をメタスチン受容体をコードする D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメタスチン受容体に接触させた場合における、メタスチン受容体を介する細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするメタスチン受容体ァゴニストのスクリ一二ング方法、

〔 8 4〕細胞刺激活性が細胞内 C a ^{2 +}遊離の促進活性、細胞増殖阻害活性、遊走阻害活性、腫瘍増殖抑制活性、血糖上昇活性または膝グルカゴン分泌促進活性である上記〔8 0〕〜〔8 3〕記載のスクリーニング方法、

〔8 5〕（ a) 上記〔 1〕記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグおよび（または）（b) メタスチン受容体を用いることを特徴とするメタスチン受容体ァゴニストまたはメタスチン受容体アンタゴニス卜のスクリ一二ング方法を提供する。

上記式中、 Z Z ³、 Z ⁵および Z ⁷はそれぞれ水素原子または Cェ—

₃アルキル基を、 z²、 z⁴、 z ⁶および z ⁸はそれぞれ水素原子、 oまたは Sを示す。

3アルキル基としては、メチル基、ェチル基、プロピル基、イソプロピル基が用いられる。

Zェ〜 Z ⁸の組み合わせとしては、 Z ¹および Z ³が水素原子で、 Z ⁵ および Z ⁷がそれぞれ水素原子または Cェ— 3アルキル基で、 z ²、 z⁴、 Z ⁶および Z ⁸がそれぞれ〇または Sを示す場合も好ましい。

Z i〜Z ⁸のより好ましい組み合わせとしては、

( a) Z ¹が水素原子、 Z ³が水素原子、 Z ⁵が水素原子、 Z ⁷が水素原子であり、 no、 z⁴が〇、 ∑ ⁶が〇、 z ⁸が〇である場合、

(b) Z ¹が水素原子、 Z ³が水素原子、 Z ⁵が水素原子、 Z ⁷が水素原子であり、 ∑ ²が0、 ∑ ⁴が0、 Z ⁶が〇、 Z ⁸が Sである場合、

( c ) Z ¹および Z ³が水素原子であり、 Z ⁵が水素原子で、 Z ⁷がメチル基であり、 ∑ ²が〇で、 ∑ ⁴が0で、 ∑ ⁶が0で、 Z ⁸が 0である場合などが挙げられる。なかでも、（ a) と（b) の場合が好ましい。

R ¹は（ 1 ) 水素原子または（ 2 ) 置換されていてもよい力ルバモイル基、置換されていてもよいヒドロキシル基および置換されていてもよい芳香族環基から成る群から選ばれる基で置換されていてもよい Cェ— 8 アルキル基を示し、なかでも（ 1 ) 水素原子または（ 2 ) 置換されていてもよい力ルバモイル基、置換されていてもよいヒドロキシル基および置換されていてもよい芳香族環基から成る群から選ばれる基で置換されている Cェ— 8アルキル基が好ましい。

r C i — ₈アルキル基」としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、イソプチル、 sec-ブチル、 t e r t-ブチル、ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチルなどの鎖状 C i — sアルキル基ゃシクロプロピル、シクロプチル、シクロペンチル、シクロへキシルなどの環状 C ₃— ₈アルキル基などが用いられる。なかでもメチル、ェチルなどの Cェ— 3アルキル基が好ましい。

「置換されていてもよい力ルバモイル基」としては、例えば、力ルバモイル、モノー C _ ₆アルキル力ルバモイル基 (例、メチルカルバモイル、ェチルカルバモイル等）、ジー C — eアルキル力ルバモイル基（例、ジメチルカルバモイル、ジェチルカルバモイル、ェチルメチルカルパモイル等）、モノーまたはジー C ₆ _ ₄ァリ一ルカルバモイル基（例、フエ二ルカルバモイル、 1 一ナフチルカルバモイル、 2—ナフチルカルバモイル等）、炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノ一またはジ一 5ないし 7員複素環カルパモイル基（例、 2 —ピリジルカルバモイル、 3 —ピリジルカルバモイル、 4 一ピリジルカルバモイル、 2 —チェ二ルカルバモイル、 3—チェ二ルカルバモイル等）などが用いられる。

「置換されていてもよいヒドロキシル基」としては、例えば、ヒドロキシ基、置換されていてもよい C i— 6アルコキシ基、置換されていてもよい C ₆ — _{1 4}ァリールォキシ基、置換されていてもよい C ₇— i ₆ァラルキルォキシ基などが用いられる。「置換されていてもよい C — ₆アルコキシ基」、「置換されていてもよい C ₆ — _{1 4}ァリールォキシ基」および「置換されていてもよい C ₇ — _{1 6}ァラルキルォキシ基」としては、後述する置換基 A群の「置換されていてもよい C — ₆アルコキシ基」、「置換されていてもよい C ₆— _{1 4}ァリールォキシ基」および「釁換されていてもよい C ₇—ェ ₆ァラルキルォキシ基」と同様のものが用いられる。

「置換されていてもよい芳香族環基」の「芳香族環基」としては、例えば、芳香族炭化水素基、芳香族複素環基、芳香族縮合環基、芳香族縮合複素環基などが用いられる。

「芳香族炭化水素基」としては、例えば、フエニル、 2—ビフエニリル、 3—ビフエ二リル、 4ービフエ二リル、シクロォクタテトラェニルなどの C ₆ _ i ₄ァリール基が用いられる。

「芳香族複素環基」としては、例えば、炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 4員、好ましくは 5ないし 1 0員、より好ましくは 5または 6員の芳香族複素環基が用いられる。具体的には、例えば、チェニル（例、 2 —チェニル、 3 —チェニル）、フリル（例、 2—フリル、 3 —フリル）、ピリジル（例、 2 —ピリジル、 3 —ピリジル、 4 一ピリジル）、チアゾリル（例、 2 —チアゾリル、 4 一チアゾリル、 5— チアゾリル）、ォキサゾリル（例、 2—ォキサゾリル、 4 一ォキサゾリル）、ピラジニル、ピリミジニル（例、 2 —ピリミジニル、 4 一ピリミジニル）、ピロリル（例、 1 —ピロリル、 2 —ピロリル、 3 —ピロリル ) 、イミダゾリル（例、 1 一イミダゾリル、 2 —イミダゾリル、 4 —ィミダゾリル）、ピラゾリル（例、 1 一ピラゾリル、 3 —ピラゾリル、 4 一ピラゾリル）、ピリダジニル（例、 3—ピリダジニル、 4 一ピリダジニル）、イソチアゾリル（例、 3—イソチアゾリル）、イソォキサゾリル（例、 3—イソォキサゾリル）などが用いられる。

「芳香族縮合環基」としては、ナフチル（例、 1 一ナフチル、 2—ナフチル）、アンスリル（例、 2 —アンスリル、 9 一アンスリル）などの C ₈— _{1 4}芳香族縮合環基が用いられる。

「芳香族縮合複素環基」としては、例えば、 3ないし 1 1個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 4員（好ましくは 5ないし 1 0員）の 2環または 3環式の芳香族複素環基、または炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 4員（好ましくは 5ないし 1 0員）の 7ないし 1 0員芳香族複素架橋環から任意の 1個の水素原子を除いてできる 1価の基が用いられる。具体的には、例えば、キノリル（例、 2 一キノリル、 3—キノリル、 4—キノリル、 5—キノリル、 8—キノリル）、イソキノリル（例、 1一イソキノリル、 3—イソキノリル、 4一イソキノリル、 5—イソキノリル）、インドリル（例、 1一インドリル、 2—インドリル、 3—インドリル）、 2—ベンゾチアゾリル、ベンゾ [b ] チェニル、（例、 2—べンゾ [b] チェニル、 3—べンゾ [b] チェニル）、ベンゾ [b] フラニル（例、 2—べンゾ [b] フラニル、 3—べンゾ [b] フラニル）などが用いられる。

「芳香族環基」の「置換基」としては、後述する置換基 A群から選ばれる置換基が用いられる。

R ¹としては、例えば、水素原子、力ルバモイルメチル、 2—力ルバモイルェチル、ヒドロキシメチル、 1—ヒドロキシェチル、ベンジル、 4ーヒドロキシベンジル、 2—ピリジルメチル、 3—ピリジルメチル、 4一ピリジルメチル、 2—チェニルメチル、 3—チェニルメチル、 1 一ナフチルメチル、 2—ナフチルメチル、 3—インドールメチル、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、イソブチル、 sec-ブチル、 tert -プチル、シクロへキシルメチルなどが用いられ、なかでもヒド口キシメチル、 1ーヒドロキシェチル、ベンジル、 4—ヒドロキシベンジル、 3—インドールメチル、メチル、イソブチルなどが好ましく、特にヒドロキシメチル、 1ーヒドロキシェチルなどが好ましい。

R ²は（ 1 ) 水素原子、（ 2 ) 環状または鎖状の。アルキル基または（ 3 ) 環状アルキル基と鎖状アルキル基からなる。アルキル基を示す。

環状の C 。アルキル基としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシルなどの C ₃-₈シクロアルキル基などが用いられる。

鎖状の（ェ—ェ。アルキル基としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 sec-プチル、 tert-ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチル、ノナニル、デカニルなどが用いられる。

環状アルキル基と鎖状アルキル基からなる Cェ— 。アルキル基としては、例えば、シクロペンチルメチル、シクロへキシルメチルなどの C ₃

— ₇シクロアルキル一 Cェ— 3アルキル基などが用いられる。

R ²としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 sec-ブチル、 tert -ブチル、シクロへキシルメチルなどが用いられ、なかでもメチル、ェチル、イソプロピル、イソブチル、 sec-プチル、 tert-プチルなどが好ましく、特にイソプロピル、ィソプチルなどが好ましい。

R ³は（ 1 ) 置換されていてもよい塩基性基を有し、さらに他の置換基を有していてもよい C i— sアルキル基、

( 2 ) 置換されていてもよい塩基性基を有し、さらに他の置換基を有し

( 3 ) 置換されていてもよい塩基性基を有している炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基を有し、さらに他の置換基を有していてもよい C , _₄アルキル基、または

(4) 置換されていてもよい塩基性基を有している炭素数 7以下の非芳香性複素環基を有し、さらに他の置換基を有していてもよい C アルキル基を示す。

「置換されていてもよい塩基性基」としては、例えば、（ 1 ) 1または 2個の C i— ₆アルキル、 — ₆ァシル（例、メチル、エヂル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ァセチル、プロピオニルなど）などを有していてもよいグァニジノ基、（ 2 ) 1ないし 3個の C アルキル、 C i— ₆ァシル（例、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、ァセチル、プロピオニルなど）などを有していてもよいアミノ基、（ 3 P T/JP2003/016978

30

) 1または, 2個の C — ₆アルキル、 — 6ァシル（例、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、ァセチル、プロピオニルなど）などを有していてもよいグァニジノ基で置換されていてもよい C _ ₆アルキル力ルポ二ルーアミノ基（例、ァセトアミド）、（4 ) 1ないし 3個の C i— ₆アルキル、 ^— ₆ァシル（例、メチル、ェチル、プロピル、ィソプロピル、ブチル、ァセチル、プロピオニルなど）などを有していてもよいアミノ基で置換されていてもよい C アルキルカルボ二ルーァミノ基（例、ァセトアミド）などが用いられる。なかでも、グァニジノ、 N —メチルダァニジノ、 N , N —ジメチルダァニジノ、 N , N ' ージメチルダァニジノ、 N—ェチルダァニジノ、 N—ァセチルグァ二ジノ、ァミノ、 N —メチルァミノ、 N， N—ジメチルァミノ、アミノアセ夕ミド、グァニジノアセタミド、アミジノなどが好ましい。

「置換されていてもよい塩基性基」以外の他の「他の置換基」としては、後述する置換基 A群から選ばれる置換基が用いられる。

「（ — 8アルキル基」としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル

、イソプロピル、プチル、イソブチル、 s e c-プチル、 t e r t -ブチル、ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチルなどが用いられる。

「ァラルキル基」としては、例えば、ベンジル、フエネチル、ジフエニルメチル、 1 一ナフチルメチル、 2—ナフチルメチル、 2 , 2—ジフェニルェチル、 3—フエニルプロピル、 4 一フエニルプチル、 5 —フエ二ルペンチル、 2—ビフエ二リルメチル、 3—ビフエ二リルメチル、 4 ービフエニリルメチルなどの C 7—ェ ₆ァラルキル基などが用いられる。

「炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基」としては、例えば、シク口プロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシルなどの C ₃— ₇シクロアルキル基などが用いられる。

「炭素数 7以下の非芳香性複素環基」としては、例えば、 1ないし 7 個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 0員非芳香性複素環基などが用いられる。具体的には、例えばピロリジニル（例、 1一ピロリジニル、 2—ピロリジニル、 3—ピロリジニル）、ォキサゾリジニル（例、 2—ォキサゾリジニル）、イミダゾリニル（例、 1—イミダゾリニル、 2—イミダゾリニル、 4一イミダゾリニル）、ピペリジニル (例、 1ーピペリジニル、 2—ピベリジニル、 3—ピペリジニル、 4一ピベリジニル）、ピペラジニル（例、 1ーピペラジエル、 2—ピペラジニル）、モルホリノ、チオモルホリノなどが用いられる。

「(^ — ₄アルキル基」としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 sec-ブチル、 tert -プチルなどが用いられる。

R ³としては、例えば、（ 1 ) 3—グァニジノプロピル、 3— (N— メチルダァニジノ）プロピル、 3一 (N, N—ジメチルダァニジノ）プ口ピル、 3— (N, N ' ージメチルダァニジノ）プロピル、 3— （N— ェチルダァニジノ）プロピル、 3 _ (N—プロピルグァニジノ）プロピル、 3 - (N—ァセチルダァニジノ）プロピル、 4ーグァニジノプチル、 4 - (N—メチルダァニジノ）プチル、 2—グァニジノエチル、 2 _ (N—メチルダァニジノ）ェチル、 4一アミノブチル、 4一 (N—メチルァミノ）プチル、 4一 (N, N—ジメチルァミノ）プチル、 3—アミノプロピル、 2—アミノエチル、アミノメチル、アミノアセタミドメチル、グァニジノアセタミドメチル、 2— （グァ二ジノカルポニル）ェチル、（ 2 ) 4—グァニジノベンジル、 4ーァミノベンジル、（ 3 ) 4 - グァニジノシクロへキシルメチル、 4一アミノシク口へキシルメチル、

(4) 1一アミジノピペリジン一 4ーィルメチルなどが用いられ、なかでも 3—グァニジノプロピル、 3— （N—メチルダァニジノ）プロピル、 3— (N, N—ジメチルグァ二ジノ）プロピル、 3— (N, N ' —ジメチルダァニジノ）プロピル、 3— (N—ェチルダァニジノ）プロピル、 3— （N—プロピルグァニジノ）プロピル、 3— （N—ァセチルダァ二ジノ）プロピル、 4—グァニジノブチル、 4一（N—メチルダァニジプチル、 2—グァニジノエチル、 2— （N—メチルダァニジノ）ェチル、 4一アミノブチル、 4— (N〜メチルァミノ）プチル、 4一（N , N—ジメチルァミノ）プチル、 3—ァミノプロピル、 2—アミノエチル、 4ーァミノベンジル、アミノアセタミドメチル、グァニジノアセタミドメチルなどが好ましく、特に、 3—グァニジノプロピル、 3— （N ーメチルダァニジノ）プロピル、 3— （N, N—ジメチルダァニジノ）プロピル、 3—. （N, N ' ージメチルダァニジノ）プロピル、 3— （N ーェチルダァニジノ）プロピル、 3— (N—ァセチルダァニジノ）プロピル、 4ーグァニジノブチル、 4一（N—メチルダァニジノ）プチル、 2—グァニジノエチル、 4ーァミノプチルなどが好ましい。

R⁴は（ 1 ) 置換されていてもよい C ₆— ₁₂芳香族炭化水素基、

( 3 ) 置換されていてもよい C ₈— ₁₄芳香族縮合環基、

(6 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、から成る群から選ばれる S換基で置換されていてもよい C ₂ _₄アルキル基を示し、なかでも

( 1 ) 置換されていてもよい C₆— ₁₂芳香族炭化水素基、

(2 ) 置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる

5ないし 1 4員芳香族複素環基、

( 3 ) 置換されていてもよい C₈— ₁₄芳香族縮合環基、

(4 ) 置換されていてもよい、 3ないし 1 1個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基、

( 6 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、から成る群から選ばれる置換基で置換されている C _ ₄アルキル基が好ましい。

「。ェ— ₄アルキル基」としては、例えば、メチル、エヂル、プロピル、イソプロピル、プチル、イソブチル、 s ec-ブチル、 t e r t-ブチルなどが用いられる。

「C ₆— _{1 2}芳香族炭化水素基」としては、例えば、フエニル、シクロォクタテトラェニルなどの単環式の C 6—ュ ₂芳香族炭化水素基などが用いられる。

「 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基」としては、例えば、 1ないし 7個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 4員、好ましくは 5ないし 1 0員、より好ましくは 5または 6員の単環式の芳香族複素環基が用いられる。具体的には、例えばチェニル（例、 2—チェニル、 3—チェニル）、フリル（例、 2 —フリル、 3 —フリル）、ピリジル（例、 2 —ピリジル、 3 —ピリジル、 4 一ピリジル）、チアゾリル（例、 2 —チアゾリル、 4 一チアゾリル、 5 —チアゾリル）、ォキサゾリル（例、 2—才キサゾリル、 4ーォキサゾリル）、ピラジニル、ピリミジニル（例、 2—ピリミジニル、 4 一ピリミジニル）、ピロリル（例、 1 一ピロリル、 2 —ピロリル、 3 —ピ口リル）、イミダゾリゾレ（例、 1—イミダゾリル、 2—イミダゾリル、 4 一イミダゾリル）、ピラゾリル（例、 1 一ピラゾリル、 3—ビラゾリル、 4—ピラゾリル）、ピリダジニル（例、 3—ピリダジニル、 4—ピリダジニル）、イソチアゾリル（例、 3—イソチアゾリル）、イソォキサゾリル（例、 3—イソォキサゾリル）などが用いられる。「C ₈— _{1 4}芳香族縮合環基」としては、例えば、ナフチル（例、 1 一ナフチル、 2 一ナフチル) 、アンスリル (例、 2 —アンスリル、 9 - 7 ンスリル）などが用いられる。

「 3ないし 1 1個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基」としては、例えば、 3ないし 1 1個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 4員（好ましくは 5ないし 1 0員）の 2 環または 3環式の芳香族複素環基、または炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 4員（好ましくは 5ないし 1 0員）の 7ないし 1 0員芳香族複素架橋環から任意の 1個の水素原子を除いてできる 1価の基が用いられる。具体的には、例えばキノリル（例、 2 —キノリル、 3 一キノリル、 4 一キノリル、 5—キノリル、 8—キノリル）、イソキノリル（例、 1 一イソキノリル、 3 —イソキノリル、 4 一イソキノリル、 5 —イソキノリル）、インドリル（例、 1 一インドリル、 2 —インドリル、 3 —インドリル）、 2—ベンゾチアゾリル、ベンゾ [ b ] チェニル、（例、 2—べンゾ [ b ] チェニル、 3—ベンゾ [ b ] チェニル）、ベンゾ [ b ] フラニル（例、 2—べンゾ [ b ] フラエル、 3—べンゾ [ b ] フラニル）などが用いられる。

「炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基」としては、例えば、シク口プロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシルなどの C ₃ _ ₇シク口アルキル基などが用いられる。

「炭素数 7以下の非芳香性複素環基」としては、ピロリジニル（例、 1 一ピロリジエル、 2 —ピロリジニル、 3 —ピロリジニル）、ォキサゾリジニル（例、 2—ォキサゾリジニル）、イミダゾリニル（例、 1ーィミダゾリニル、 2 —イミダゾリニル、 4 一イミダゾリニル）、ピベリジニル（例、 1 ーピペリジニル、 2—ピベリジニル、 3—ピベリジニル、 4ーピベリジニル）、ピペラジニル（例、 1ーピペラジニル、 2 —ピぺラジニル）、モルホリノ、チオモルホリノなどの 1ないし 7個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 0員の非芳香性複素環基などが用いられる。

これら「C ₆__{1 2}芳香族炭化水素基」、「 1ないし 7個の炭素原子と窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基」、「C ₈— ₁₄芳香族縮合環基」、「3ないし 1 1個の炭素原子と窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基」、 · 「炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基」および「炭素数 7以下の非芳香性複素環基」の置換基としては、例えば、ォキソ、ハロゲン原子（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等）、 C i— gアルキレンジォキシ（例、メチレンジォキシ、エチレンジォキシ等）、ニトロ、シァノ、置換されていてもよい C — 6アルキル、置換されていてもよい C ₂— ₆アルケニル、置換されていてもよい C ₂_₆アルキニル、置換されていてもよい C ₃— ₈シクロアルキル、置換されていてもよい C ₆ _ 丄 ₄ ァリール、置換されていてもよい C ₇— ₆ァラルキル、置換されていてもよい Cェ _ ₆アルコキシ、ヒドロキシ、置換されていてもよい C ₆— ェ ₄ ァリ一ルォキシ、置換されていてもよい（ ₇__{1 6}ァラルキルォキシ、メルカプト、置換されていてもよい Cェ— eアルキルチオ、置換されていてもよい C ₆— _{1 4}ァリールチオ、置換されていてもよい C ₇__{1 6}7ラルキルチオ、置換されていてもよいアミノ [ァミノ、置換されていてもよいモノ又はジー Cェ— eアルキルーァミノ（例、メチルァミノ、ジメチルァミノ、ェチルァミノ、ジェチルァミノ、プロピルァミノ、イソプロピルァミノ等）、置換されていてもよいモノ又はジー C ₂— ₆アルケニルーァミノ（例、ビニルァミノ、プロべニルァミノ、イソプロべニルァミノ）、置換されていてもよい C₂— ₆アルキニル—アミノ（例、 2—ブチン一 1ーィルーアミノ、 4一ペンチン一 1一ィル一ァミノ、 5—へキシン一 1一ィル一ァミノ）、置換されていてもよいモノ又はジ一 C ₃— ₈シクロ 6978

36 アルキルーァミノ（例、シクロプロピルァミノ、シクロへキシルァミノ ) 、置換されていてもよい C ₆ — ₄ァリールーァミノ（例、フエニルァミノ、ジフエ二ルァミノ、ナフチルァミノ）、置換されていてもよい C i— 6アルコキシーアミノ（例、メトキシァミノ、エトキシァミノ、プロポキシァミノ、イソプロボキシァミノ）、ホルミルァミノ、置換されていてもよい C i— eアルキル一力ルポニルァミノ（例、ァセチルァミノ、プロピオニルァミノ、ビバロイルァミノ等）、置換されていてもよい C ₃— ₈シクロアルキル一力ルポニルァミノ（例、シクロプロピル力ルポ二ルァミノ、シクロペンチルカルポニルァミノ、シクロへキシルカルポ二ルァミノ等）、置換されていてもよい C ₆— _{1 4}ァリール—カルボニルァミノ（例、ベンゾィルァミノ、ナフトイルァミノ等）、置換されていてもよい Cェ—eアルコキシ一力ルポニルァミノ（例、メトキシカルポニルァミノ、エトキシカルボニルァミノ、プロポキシカルボニルァミノ、ブトキシカルポニルァミノ等）、置換されていてもよい C i— eアルキルスルホニルァミノ（例、メチルスルホニルァミノ、ェチルスルホニルアミノ等）、置換されていてもよい C ₆— _{1 4} 7リールスルホニルァミノ（例、フエニルスルホニルァミノ、 2—ナフチルスルホニルァミノ、 1 ーナフチルスルホニルァミノ等） ] 、ホルミル、力ルポキシ、置換されていてもよい C i— eアルキル一カルボニル（例、ァセチル、プロピオニル、ビバロイル等）、置換されていてもよい C ₃ _ ₈シクロアルキル—カルボニル（例、シクロプロピル力ルポニル、シクロペンチルカルポニル、シクロへキシルカルポエル、 1 一メチル—シク口へキシルー力ルポニル等 ) 、置換されていてもよい C ₆ _ ₄ァリール—カルポニル（例、ベンゾィル、 1 一ナフトイル、 2—ナフトイル等）、置換されていてもよい C ₇ _ ₆ァラルキル—カルポニル（例、フエ二ルァセチル、 3 —フエニルプロピオニル等）、置換されていてもよい、炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及ぴ酸素原子から選ばれる 1 または 2種、 1ないし 4個のへテ口原子を含む 5ないし 7員複素環カルボニル（例、ニコチノィル、イソニコチノィル、テノィル、フロイル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノ力ルポニル、ピぺラジン一 1ーィルカルポニル、ピロリジン一 1 〜ィルカルポニル等）、エステル化されていてもよいカルポキシル、置換されていてもよい力ルバモイル基、置換されていてもよい C i— ₆アルキルスルホニル（例、メチルスルホニル、ェチルスルホニル等）、置換されていてもよい C i— eアルキルスルフィニル（例、メチルスルフィ二ル、ェチルスルフィニル等）、置換されていてもよい（： ₆—_{1 4}ァリールスルホニル（例、フエニルスルホニル、 1 一ナフチルスルホニル、 2 _ ナフチルスルホニル等）、置換されていてもよい C ₆— _{1 4}ァリールスルフィエル（例、フエニルスルフィニル、 1 一ナフチルスルフィニル、 2 一ナフチルスルフィニル等）、置換されていてもよい C — ₆アルキル一カルポニルォキシ（例、ァセトキシ、プロピオニルォキシ等）、置換されていてもよい〇₆—_{1 4}ァリール一力ルポニルォキシ（例、ベンゾィルォキシ、ナフチルカルポニルォキシ等）、置換されていてもよい Cェ—e アルコキシ—カルポニルォキシ（例、メトキシカルボニルォキシ、エトキシカルボニルォキシ、プロポキシ力ルポニルォキシ、ブトキシカルポニルォキシ等）、置換されていてもよいモノー C — 6アルキルカルバモィルォキシ (例、メチルカルバモイルォキシ、ェチルカルバモイルォキシ等）、置換されていてもよいジー C アルキル力ルバモイルォキシ、置換されていてもよいモノ一またはジ— C ₆ _ _{1 4}ァリール力ルバモイルォキシ（例、フエ二ルカルバモイルォキシ、ナフチルカルバモイルォキシ等）、置換されていてもよい複素環基、スルホ、スルファモイル、スルフイナモイル、スルフエナモィル、またはこれらの置換基が 2個以上（例、 2〜 3個）結合した基などから選ばれる置換基（置換基 A群）が用いられる。置換基の数は特に限定されないが、置換可能な位置に 1 ないし 5個、好ましくは 1ないし 3個有していてもよく、置換基数が 2 個以上の場合、各置換基は同一または異なっていてもよい。

置換基 A群の「エステル化されていてもよいカルボキシル基」としては、例えば置換されていてもよい C，— ₆アルコキシ一力ルポニル（例、メトキシカルポニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、 t e r t-ブトキシカルボニル等）、置換されていてもよい（： ₆—_{1 4}ァリールォキシ一力ルポニル（例、フエノキシカルボ二ル等）、置換されていてもよい C ₇—ェ ₆ァラルキルォキシ一力ルポニル（例、ベンジルォキシカルポニル、フエネチルォキシカルポニル等）などが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい — 6アルキル」の — ₆ァルキル」としては、例えばメチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、イソプチル、 sec-ブチル、 t e r t -ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシルなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい C ₂ _ ₆アルケニル」の「C ₂— ₆ アルケニル」としては、例えばビニル、プロぺニル、イソプロぺニル、 2—ブテン一 1 一ィル、 4 一ペンテン— 1 一ィル、 5—へキセン一 1 一ィルなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい C ₂ _ ₆アルキニル」の「C ₂— ₆ アルキニル」としては、例えば 2—ブチン一 1 一ィル、 4 一ペンチン一 1 —ィル、 5 —へキシン一 1ーィルなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい C ₃— ₈シクロアルキル」の「C ₃— ₈シクロアルキル」としては、例えばシクロプロピル、シクロプチル、シクロペンチル、シクロへキシルなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい（： ₆—_{1 4}ァリール」の「C ₆— ₄ァリール」としては、例えばフエニル、 1 一ナフチル、 2—ナフチル、 2—ビフエ二リル、 3—ビフエ二リル、 4ービフエ二リル、 2 —アンスリルなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい C ₆ァラルキル」の「C ₇— _{1 6}ァラルキル J としては、ベンジル、フエネチル、ジフエニルメチル、 1—ナフチルメチル、 2—ナフチルメチル、 2 , 2—ジフエ二ルェチル、 3—フエニルプロピル、 4 一フエニルブチル、 5—フエニルペンチル、 2 —ビフエ二リルメチル、 3—ビスェニリルメチル、 4 —ビフエ二リルメチル）などが用いられる。置換基 A群の「置換されていてもよい C ₆アルコキシ」の「（ — 6 アルコキシ」としては、例えばメトキシ、エトキシ、プロボキシ、イソプロボキシ、ブトキシ、イソブトキシ、 sec-ブトキシ、ペンチルォキシ、へキシルォキシなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい C _{6 14}ァリールォキシ」の「 C ₆ ュ ₄ァリールォキシ」としては、例えば、フエニルォキシ、 1 —ナフチルォキシ、 2—ナフチルォキシなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい C _{7 1 6}ァラルキルォキシ」の Γ C ₇„！ ₆ァラルキルォキシ」としては、例えば、ベンジルォキシ、フエネチルォキシなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい C ₆アルキルチオ」の「（：丄 —₆アルキルチオ」としては、例えばメチルチオ、ェチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、 sec-ブチルチオ、 tert-ブチルチオなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい C _{6 4}ァリールチオ」 φ 「C ₆— ₁₄ァリ一ルチオ」としては、例えばフエ二ルチオ、 1 ナフチルチォ、 2—ナフチルチオなどが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい C ₇-_{1 S} 7ラルキルチオ」の「 C ₇ ェ ₆ァラルキルチオ」としては、例えばべンジルチオ、フエネチルチォなどが用いられる。

これら「Cェ — ₆アルコキシ一力ルポニル」、「（ — 6アルキル基」、「C _{2 6}アルケニル」、「C _{2 6}アルキニル」、「（^— 6アルコキシ」、「（：アルキルチオ」、、 C アルキル—ァミノ、 C ₂_₆アルケ二ルーアミノ、 C ₆アルキニルーァミノ、 C i ₆アルコキシーアミノ、「C — ₆アルキル一力ルポニル」、「C — ₆アルキルスルホニル」、「Cェ — ₆アルキルスルフィニル」、「 C — ₆アルキル一力ルポニルアミノ」、「C i ₆アルコキシ一力ルポニルァミノ」、 rC ₆アルキルスルホニルァミノ」、 rC i ₆アルキル一力ルポニルォキシ」、 — ₆ アルコキシ一力ルポ二ルォキシ」、「モノー C — ルォキシ」、「ジー — 6アルキル力ルバモイルォキシ」の置換基としては、例えばハロゲン原子（例、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ョゥ素原子）、力ルポキシ、ヒドロキシ、ァミノ、モノーまたはジー

—₆アルキルァミノ、モノーまたはジー c ₆— ₁₄ァリールァミノ、 c ₃— _s シクロアルキル、 C i— eアルコキシ、 C — 6アルコキシ一力ルポニル、 C！一 ₆アルキルチォ、 C！ _ ₆アルキルスルフィニル、 C i _₆アルキルスモイル、チォカルパモイル、モノ— Cェ— 6アルキル力ルバモイル（例、メチルカルバモイル、ェチルカルバモイル等）、ジー C i— eアルキル力ルバモイル（例、ジメチルカルバモイル、ジェチルカルバモイル、ェチルメチルカルバモイル等）、モノーまたはジー C ₆_₁₄ァリール力ルバモイル（例、フエ二ルカルバモイル、 1 一ナフチルカルバモイル、 2 _ ナフチルカルバモイル等）、炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノ—またはジ一 5ないし 7員複素環力ルバモイル（例、 2—ピリジルカルバモイル、 3—ピリジルカルバモイル、 4一ピリジルカルバモイル、 2—チェ二ルカルバモイル、 3—チェ二ルカルバモイル等）などから選ばれる 1ないし 5個の置換基が用いられる。

置換基 A群の「C ₄ァリールォキシ一力ルポニル」、「C ₇_ _{1 6} ァラルキルォキシ一力ルポニル」、「C ₃— ₈シクロアルキル」、「C ₆ ― ₁₄ァリール」、「C ₇― ₁₆ァラルキル」、「C ₆― ₁₄ァリールォキシ J 、「C ₇— ₁₆ァラルキルォキシ」、「C ₆— ₁₄ァリ一ルチオ」、「C ₇—ェ ₆ァラルキルチオ」、 C ₃― ₈シクロアルキルーァミノ、 C ₆— _{1 4}ァリ一ル一ァミノ、「C ₃— ₈シクロアルキル一力ルポ二ル」、「C ₆— ₁₄ァリ一ルー力ルポ二ル」、「C ₇— _{1 6}ァラルキル一力ルポ二ル」、「炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 7員複素環力ルポニル」、「 C ₆ - ₄ァリールスルホニル」、「C ₆― i ₄ァリールスルフィニル」、「C ₃— ₈シクロアルキル一カルボニルァミノ」、「C ₆_₁₄ァリール一力ルポニルァミノ」、「C ₆— ₄ァリールスルホニルァミノ」、「C ₆一ュ ₄ァリール一力ルポニルォキシ」、「モノーまたはジ— C ₆ _ i ₄ァリールカルバモイルォキシ」の置換基としては、例えばハロゲン原子、ヒド口キシ、力ルポキシ、ニトロ、シァノ、上記した置換されていてもよい C^ — ₆アルキル、上記した置換されていてもよい C ₂ _ ₆アルケニル、上記した置換されていてもよい C ₂ — ₆アルキニル、上記した置換されていてもよい C ₃ — ₈シクロアルキル、上記した置換されていてもよい C！ _ ₆ アルコキシ、上記した置換されていてもよい Cェ— 6アルキルチオ、上記した置換されていてもよい C _ ₆アルキルスルフィニル、上記した置換されていてもよい Cェ_ ₆アルキルスルホニル、上記したエステル化されていてもよいカルボキシル、力ルバモイル、チォカルバモイル、モノー

C ^— ₆アルキル力ルバモイル、ジー Cェ— ₆アルキル力ルバモイル、モノ —またはジー c ₆— i ₄ァリ一ルカルバモイル、炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノ一またはジー 5ないし 7員複素環力ルバモイルなどから選ばれる 1ないし 5個の置換基が用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい複素環基」としては、例えば、ハロゲン原子、ヒドロキシ、力ルポキシ、ニトロ、シァノ、上記した置換されていてもよい C i— ₆アルキル、上記した置換されていてもよい C ₂— ₆アルケニル、上記した置換されていてもよい C ₂ _ ₆アルキニル、上記した置換されていてもよい C ₃ _ ₈シクロアルキル、上記した置換されていてもよい C ₆ _ ₄ァリ一ル、上記した置換されていてもよい C — ₆ アルコキシ、上記した置換されていてもよい C i _ ₆アルキルチオ、上記した置換されていてもよい C ₆— i ₄ァリ一ルチオ、上記した置換されていてもよい C ₇ —ェ ₆ァラルキルチオ、上記した置換されていてもよい C 丄— 6アルキルスルフィニル、上記した置換されていてもよい C ₆ — _{1 4}ァリ一ルスルフィエル、上記した置換されていてもよい Cェ— ₆アルキルスルホニル、上記した置換されていてもよい C ₆ _ _{1 4}ァリ一ルスルホニル、上記したエステル化されていてもよいカルポキシル、力ルバモイル、チォカルバモイル、モノー C ₁— ₆アルキル力ルバモイル、ジー低級アルキル力ルバモイル、モノ一またはジー C ₆— ₄ァリールカルパモイル、炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1 または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノ一またはジー 5ないし 7員複素環力ルバモイルなどで置換されていてもよい、炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 4員（単環、 2環または 3環式）複素環基、好ましくは（i ) 5ないし 1 4員（好ましくは 5ないし 1 0員）芳香族複素環基、（i i ) 5ないし 1 0員非芳香族複素環基または（i i i ) 7ないし 1 0員複素架橋環から任意の 1個の水素原子を除いてできる 1 価の基などが用いられ、なかでも 5員芳香族複素環基が好ましく用いられる。具体的には、例えばチェニル（例、 2 —チェニル、 3 —チェニル ) 、フリル（例、 2—フリル、 3 —フリル）、ピリジル（例、 2 —ピリジル、 3—ピリジル、 4 一ピリジル）、チアゾリル（例、 2—チアゾリル、 4 一チアゾリル、 5 —チアゾリル) 、ォキサゾリル（例、 2—ォキサゾリル、 4一才キサゾリル）、キノリル（例、 2 —キノリル、 3—キノリル、 4—キノリル、 5—キノリル、 8—キノリル）、イソキノリル (例、 1 一イソキノリル、 3—イソキノリル、 4 一イソキノリル、 5— イソキノリル）、ピラジニル、ピリミジニル（例、 2—ピリミジニル、 4 一ピリミジニル）、ピロリル（例、 1 一ピロリル、 2 —ピロリル、 3 一ピロリル）、イミダゾリル（例、 1—イミダゾリル、 2—イミダゾリル、 4 一イミダゾリル）、ピラゾリル（例、 1 一ピラゾリル、 3—ピラゾリル、 4 一ピラゾリル）、ピリダジニル（例、 3—ピリダジニル、 4 —ピリダジニル）、イソチアゾリル（例、 3—イソチアゾリル）、イソォキサゾリル（例、 3 —イソォキサゾリル）、インドリル（例、 1ーィンドリル、 2—インドリル、 3—インドリル）、 2—ベンゾチアゾリル、ベンゾ [ b ] チェニル、（例、 2—ベンゾ [ b ] チェニル、 3 —ベンゾ [ b ] チェニル）、ベンゾ [ b ] フラニル（例、、 2—べンゾ [ b ] フラニル、 3—べンゾ [ b ] フラニル）などの芳香族複素環基、例えばピロリジニル（例、 1 一ピロリジニル、 2—ピロリジニル、 3 —ピロリジニル）、ォキサゾリジニル（例、 2—ォキサゾリジニル）、イミダゾリニル（例、 1 一イミダゾリニル、 2—イミダゾリニル、 4 一イミダゾリニル）、ピペリジニル（例、 1ーピペリジニル、 2—ピペリジニル、 3—ピベリジニル、 4ーピベリジニル）、ピペラジニル（例、 1—ピぺラジニル、 2—ピペラジニル）、モルホリノ、チオモルホリノなどの非芳香族複素環基などが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよい力ルバモイル基」としては、上記した置換されていてもよい C i— ₆アルキル、置換されていてもよい C ₂— ₆アルケニル、置換されていてもよい C ₂— ₆アルキニル、置換されていてもよい C ₃ — ₈シクロアルキル、置換されていてもょレ、 C ₆ _ i ₄ァリール、置換されていてもよい複素環基などで置換されていてもよいカルバモイル基が用いられ、具体的には、例えば力ルバモイル、チォカルバモイル、モノー C ₁ _ ₆アルキル力ルバモイル（例、メチルカルバモイル、ェチルカルバモイル等）、ジー C ト ₆アルキル力ルバモイル (例、ジメチルカルバモイル、ジェチルカルバモイル、ェチルメチルカルバモイル等）、 — 6アルキル ( C ₆アルコキシ) 力ルバモイル（例、メチル（メトキシ）力ルバモイル、ェチル（メトキシ）力ルバモイル）、モノーまたはジー C ₆ _ _{1 4}ァリール力ルバモイル（例、フエ二ルカルバモィル、 1 一ナフチルカルバモイル、 2—ナフチルカルバモイル等）、炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2 種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノ—またはジ— 5ないし 7員複素環力ルバモイル（例、 2 —ピリジルカルバモイル、 3 —ピリジルカルバモイル、 4 _ピリジルカルバモイル、 2 —チェ二ルカルバモイル、 3 一チェ二ルカルバモイル等）、 5ないし 7員の環状力ルバモイル（例、 1 一ピロリジニルカルポニル、 1ーピペリジニルカルポニル、へキサメチレンイミノカルポニル）などが用いられる。

置換基 A群の「置換されていてもよいァミノ」としては、上記した置換されていてもよい C i— ₆アルキル、上記した置換されていてもよい C ₂— ₆アルケニル、上記した置換されていてもよい C ₂_₆アルキニル、上記した置換されていてもよい C ₃— ₈シクロアルキル、上記した置換されていてもよい C 6— i ₄ァリ一ル、上記した置換されていてもよい C ₁ _ ₆ アルコキシ、ホルミル、上記した置換されていてもよい Cェ—eアルキル一力ルポニル、上記した置換されていてもよい C ₃— ₈シクロアルキル— カルボニル、上記した置換されていてもよい C ₆_₁₄ァリール一力ルポニル、上記した置換されていてもよい C i— eアルコキシ一力ルポニル、上記した置換されていてもよい C -eアルキルスルホニル、置換されていてもよい C ₆—ェ ₄ァリールスルホニル）などから選ばれる 1 または 2 個の基で置換されていてもよいアミノが用いられる。

より好ましくは、「C ₆__{1 2}芳香族炭化水素基」、「 1ないし 7個の炭素原子と窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基」、「C _S_₁₄芳香族縮合環基」、「 3ないし 1 1個の炭素原子と窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基」、「炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基 J および「炭素数 7以下の非芳香性複素環基」の置換基としては、ハロゲン原子、ヒドロキシ、 C^— ₆アルコキシ、ハロゲン化されていてもよい — ₆アルキル、ハロゲン化されていてもよい C i_₆アルコキシ、ァミノ、ニトロ、シァノなどが好ましい。

R⁴としては、例えば、

( 1 ) ベンジル、 2—フルォロベンジル、 3—フルォロベンジル、 4一フルォロベンジル、 4一クロ口ベンジル、 3 , 4—ジフルォ口べンジル、 3， 4ージクロ口ベンジル、ペンタフルォロベンジル、 4ーヒドロキシベンジル、 4ーメトキシベンジル、 3— トリフルォロメチルベンジル、 4ーァミノベンジル、 4—ニトロベンジル、 4—シァノベンジル、フエネチルなどの「置換されていてもよい C ₆—ェ ₂芳香族炭化水素基を有している Cェ― ₄アルキル基」、

( 2 ) 2—ピリジルメチル、 3—ピリジルメチル、 4一ピリジルメチル、 2 —チェニルメチル、 3 —チェニルメチル、 4 一チアゾリルメチルなどの「置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基を有している C t— ₄アルキル基」、 ( 3 ) 1—ナフチルメチル、 2 _ナフチルメチル、インデン— 2—ィルメチルなどの「置換されていてもよい C 8—ェ ₄芳香族縮合環基を有している C ぃ ₄アルキル基」、

( 4 ) 3—インド一ルメチル、 1 一ホルミルインドールー 3—ィルメチル、 3'—べンゾ [ b ] チェニルメチル、 2 —キノリルメチルなどの「置換されていてもよい、 3ないし 1 1個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基を有する Cェ— 4アルキル基」、

( 5 ) シクロへキシルメチル、シクロペンチルメチル、インダン— 2— ィルメチルなどの「置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基を有する C i— ₄アルキル基」、

( 6 ) 4ーピベリジニルメチル、テトラヒドロフルフリル、テトラヒド口フラン一 2 —ィル、テトラヒドロピラン一 3 —ィル、インドリン一 3 一ィルなどの「置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基を有する C ェ— ₄アルキル基」などが用いられ、なかでもベンジル、 2— フルォロベンジル、 3 —フルォロベンジル、 4 一フルォロベンジル、 4 ーヒドロキシベンジル、 4ーァミノベンジル、 4一二トロベンジル、 4 一クロ口ベンジル、 4ーメトキシベンジル、 4—シァノベンジル、 3— トリフルォロメチルベンジル、 3 , 4—ジクロ口ベンジル、 3 ， 4ージフルォロベンジル、ペンタフルォロベンジル、 3—ピリジルメチル、 4 一ピリジルメチル、 3—インド一ルメチル、 1—ホルミルインド一ル— 3 —ィルメチル、 3—べンゾ [ b ] チェニルメチル、 2—キノリルメチル、 1 一ナフチルメチル、 2—ナフチルメチル、シクロへキシルメチル、フエネチルなどが好ましく、特にベンジル、 2—フルォロベンジル、 3—フルォロベンジル、 4—フルォロベンジル、 4—ヒドロキシベンジル、 4ーァミノベンジル、 4一二トロベンジル、 4一クロ口ベンジル、 4—メトキシベンジル、 4—シァノベンジル、 3—トリフルォロメチルベンジル、 3 , 4—ジクロ口ベンジル、 3 , 4—ジフルォロベンジル、ペンタフルォロベンジル、 3—ピリジルメチル、 4一ピリジルメチル、 3—インド一ルメチル、 3—べンゾ [b] チェニルメチル、 1—ナフチルメチル、 2—ナフチルメチル、シクロへキシルメチルなどが好ましい

Xは式

一 NHCH (Q ¹) Y Q ² C (= Z ⁹) 一

(式中、各記号は前記と同意義を示す）で表わされる基を示す。

Q ¹は（ 1 ) 置換されていてもよい C ₆_₁₂芳香族炭化水素基、 ( 2 ) 置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基、

( 3 ) 置換されていてもよい C ₈_₁₄芳香族縮合環基、

( 6 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい Cェ— ₄アルキル基を示し、 R ⁴と同様のものが用いられる。

Q ¹としては、

( 1 ) ベンジル、 2—フルォロベンジル、 3—フルォロベンジル、 4— フルォロベンジル、 4一クロ口ベンジル、 3， 4—ジフルォ口べンジル、 3 , 4—ジクロ口ベンジル、ペン夕フルォロベンジル、 4—ヒドロキシベンジル、 4ーメトキシベンジル、 4一トリフルォロメチルベンジル、 4ーァミノベンジル、 4一二トロベンジル、 4一シァノベンジル、フエネチルなどの「置換されていてもよい C ₆— ₂芳香族炭化水素基を有している Cト₄アルキル基」、

( 2 ) 2 —ピリジルメチル、 3 —ピリジルメチル、 4 一ピリジルメチル、 2 —チェニルメチル、 3 —チェニルメチル、 4 一チアゾリルメチルなどの「置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基を有している Cェ— 4アルキル基」、

( 3 ) 1 一ナフチルメチル、 2 —ナフチルメチル、インデン— 2 —ィルメチルなどの「置換されていてもよい C ₈ _ _{1 4}芳香族縮合環基を有している c i— ₄アルキル基」、

( 4 ) 3 —インドールメチル、 1 —ホルミルインドールー 3—ィルメチル、 3—べンゾ [ b ] チェニルメチル、 2—キノリルメチルなどの「置換されていてもよい、 3ないし 1 1個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基を有する — 4アルキル基」、

( 5 ) シクロへキシルメチル、シクロペンチルメチル、インダン一 2— ィルメチルなどの「置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基を有する C i— 4アルキル基」、

( 6 ) 4—ピベリジニルメチル、テトラヒドロフルフリル、テトラヒド口フラン一 2 —ィル、テトラヒドロピラン一 3 —ィル、インドリン一 3 ーィルなどの「置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基を有する Cェ— ₄アルキル基」などが用いられ、なかでもシクロへキシルメチル、ベンジル、 4 一フルォロベンジル、 4ーヒドロキシベンジル、ペンタフルォロベンジル、 2 —ピリジルメチル、 4 一ピリジルメチル、 1 一ナフチルメチル、 2—ナフチルメチルなどが好ましく、特にべンジル、 4 一フルォロベンジル、シクロへキシルメチルなどが好ましい。

Q ²は（ 1 ) 力ルバモイル基およびヒドロキシ基から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい C - 4アルキル基で置換されていてもよい C H ₂、（ 2 ) 力ルバモイル基およびヒドロキシ基から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい Cェ— 4アルキル基で置換されていてもよい NHまたは（ 3 ) 0を示す。

「（：ェ— ₄アルキル基」としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、イソプチル、 sec-ブチル、 tert-ブチルなどが用いられる。

Q ²としては、 CH₂、 CH (C H₃) 、 C H (C H₂ OH) 、 NHなどが好ましい。

Yは C — ₆アルキル基で置換されていてもよい、式一 CONH—、 - C S NH—、 — CH₂NH—、 —NHC O—、一 CH₂0—、一 CH₂ S 一または一 CH₂ CH₂—で表わされる基を示す。

rC i— eアルキル基」としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、イソブチル、 sec-ブチル、 tert-ブチル、ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシルなどが用いられる。

Yとしては、式一 CONH—、一 C S NH—、一 NHC O—、一 CH ₂NH—で表される基が好ましい。

Z ⁹は水素原子、 Oまたは Sを示し、なかでも 0、 Sが好ましい。 Pは（ 1 ) 水素原子、

(2 ) 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列（ヒトメタスチンの 5 4 アミノ酸残基）の第 1〜 4 8番目のアミノ酸配列の C末端側から任意の連続したまたは不連続に結合したアミノ酸残基、

( 3 ) 式 J ¹ 一 J ²— C (J ³) (Q ³) Y ¹ C ( J ⁴) (Q⁴) Y² C ( J ⁵) (Q^s) Y³ C ( J " (Q ⁶) C (= Z ¹⁰) 一

(式中、各記号は前記と同意義を示す）で表わされる基、

( 4 ) 式一 J ¹ 一 J ² - C (") (Q ⁷) Y² C (J ⁸) (Q⁸) Y ³ C ( J " (Q⁹) C (= Z ¹⁰) -

(式中、各記号は前記と同意義を示す）で表わされる基、

( 5 ) 式 J ¹ 一 J ² - C U ¹ " (Q ¹⁰) Y³ C ( J ^{x l}) (Q ^{1 1}) C (= Z ^{1 0}) ―

(式中、各記号は前記と同意義を示す）で表わされる基、 ( 6 ) 式 J ¹— J ² C ( J ¹²) (Q ¹²) C (= Z ¹ °) -

(式中、各記号は前記と同意義を示す）で表わされる基、または

( 7 ) 式 J ¹— ( J ¹は前記と同意義を示す）で表わされる基を示す。「配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1〜 4 8番目のァミノ酸配列の C末端側から任意の連続したまたは不連続に結合したアミノ酸残基」としては、具体的には、

( I ) Asn -

( 2 ) Trp Asn -、

( 3 ) Asn Trp Asn -、

( 4 ) Tyr Asn Trp Asn -、

( 5 ) Asn Tyr Asn Trp Asn-、

( 6 ) Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 7 ) Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 8 ) Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 9 ) Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(10) Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn_、 .

( II) Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn, Trp Asn -、

(12) Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(13) Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、 (14) Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 15) Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn-、

( 16) Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 17) Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 18) Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 19) Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 20) Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(21) Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 22) lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(23) Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 24) Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 25) Ser Arg Gin He Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 26) His Ser Arg Gin He Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 27) Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 28) Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys ASP Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 29 ) Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala

Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(30) Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly

Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn - (31) Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 32) Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(33) Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(34) Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 35) Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin He Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 36) Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 37) Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp

Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 38) Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin He Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

( 39 ) Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin He Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(40) Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin He Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(41) Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin He Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(42) Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(43) Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(44) Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(45) Leu Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala

Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(46) Ser Leu Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn - 、

(47) Thr Ser Leu Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn -、

(48) Gly Thr Ser Leu Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gin Gin Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gin lie Pro Ala Pro Gin Gly Ala Val Leu Val Gin Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn - などが用いられる。

J ¹は、（ a) 水素原子または（b ) 置換基を有していてもよい環基を含む置換基で置換されていてもよい、（ i ) ( ェ— _{1 5}ァシル基、（ii ) アルキル基、（iii) C _{6 14}ァリール基、（iv) 力ルバモイル基、（V) カルボキシル基、（vi) スルフィノ基、（vii) アミジノ基、または（viii) ダリオキシロイル基を示す。「環基」としては、例えば、「置換されていてもよい芳香族炭化水素基」、「置換されていてもよい芳香族複素環基」、「置換されていてもよい芳香族縮合環基」、 '「置換されていてもよい芳香族縮合複素環基」、「置換されていてもよい非芳香性環状炭化水素基」、「置換されていてもよい非芳香性複素環基」などが用いられ、「芳香族炭化水素基」、

「芳香族複素環基」、「芳香族縮合環基」、「芳香族縮合複素環基」としては、前記と同様のものが用いられる。

「非芳香性環状炭化水素基」としては、シクロプロピル、シクロプチル、シクロペンチル、シクロへキシルなどの C ₃— ₈シクロアルキル基などが用いられる。

「非芳香性複素環基」としては、ピロリジニル（例、 1 一ピロリジニル、 2 —ピロリジニル、 3 —ピロリジニル）、ォキサゾリジニル（例、 2—ォキサゾリジニル）、イミダゾリニル（例、 1 _イミダゾリニル、 2 —イミダゾリニル、 4 一イミダゾリニル）、ピペリジニル（例、 1 一ピベリジニル、 2—ピペリジニル、 3—ピベリジニル、 4ーピペリジニル）、ピペラジニル（例、 1ーピペラジニル、 2—ピペラジニル）、モルホリノ、チオモルホリノなどの 1ないし 7個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のヘテロ原子を含む 5ないし 1 0員の非芳香性複素環基などが用いられる

「環基」が有していてもよい置換基としては、前記した置換基 A群の置換基と同様のものが用いられる。

「（：ェ— _{1 5}ァシル基」としては、例えば、ホルミル、（：ェ— _{1 4}アルキルーカルポニル（例、ァセチル、プロピオニル、ピバロィル等などの C i— ₆アルキル—カルボニル）などが用いられる。

r C i— _{1 5}アルキル基」としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、イソブチル、 sec-ブチル、 t er t -プチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチル、ノナニル、デカニルなどが用いられる。「C ₆— ₁₄ァリール基」としては、例えば、フエニル、 1 一ナフチル、 2—ナフチル、ビフエニルなどが用いられる。

( 1 ) 環基を含む置換基で置換されていてもよい C — ₅ァシル基としては、（i) ホルミル、（ i i) C ₁₄アルキル一力ルポニル（例、ァセチル、プロピオニル、ピパロィル等などの Cェ— 6アルキル一力ルポ二ル）、（iii) C ₃— ₈シクロアルキル—カルポニル（例、シクロプロピルカルポニル、シクロペンチルカルボニル、シクロへキシルカルポニル、 1ーメチルシクロへキシルカルポニル等）、（iv) C ₃— ₈シクロアルキル一 C i _₆アルキル一力ルポニル（例えば、シクロプロピルァセチル、シクロペンチルァセチル、シクロへキシルァセチル等）（V) C ₆— ₁₄ ァリール一力ルポニル（例、ベンゾィル、 1一ナフトイル、 2—ナフトィル等）、 C ₆_₁₄ァラルキル一力ルポニル（例、フエ二ルァセチル、 3—フエニルプロピオニル等）、（vi) 炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1 または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 7員の単環式複素環カルボニル（例、ニコチノィル、イソニコチノィル、テノィル、フロイル、モルホリノ力ルポニル、チォモルホリノ力ルポニル、ピぺラジン一 1ーィルカルポニル、ピロリジン一 1 ーィルカルポニル等）、（vii) 炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 7員の単環式複素環一 C i— eアルキルカルポニル（例、 3—ピリジルァセチル、 4一ピリジルァセチル、 2—チェニルァセチル、 2—フリルァセチル、モルホリノァセチル、チオモルホリノアセチル、ピぺリジン— 2—ァセチル、ピロリジン一 2—ィルァセチル等）、（ viii) 3ないし 1 1個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 4員（好ましくは 5ないし 1 0員）の 2環または 3環式の芳香族複素環カルポニル（例えば、 2 _インド一ルカルポニル、 3—インドールカルボニル、 2—キノリルカルボニル、 1—イソキノリルカルボニル、 2—べンゾ [b] チェ二ルカルポニル、 2—べンゾ [b] フラニルカルポニル等）、（ix) 3ないし 1 1個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 1 4員（好ましくは 5ないし 1 0員）の 2環または 3環式の芳香族複素環一 Cェ— 6アルキルカルボニル（例えば、 2—インドールァセチル、 3 —インドールァセチル、 2—キノリルァセチル、 1ーィソキノリルァセチル、 2—べンゾ [ b ] チェ二ルァセチル、 2—べンゾ [ b ] フラニルァセチル等）などが用いられ、なかでもァセチル、 2— インドールカルポニル、 3—インドールカルポニル、 3—インドールァセチル、 3 —インドールプロピオニル、 2 —インドリンカルポニル、 3 —フエニルプロピオニル、ジフエ二ルァセチル、 2 —ピリジン力ルポ二ル、， 3 —ピリジン力ルポニル、， 4 一ピリジン力ルポニル、 1 一ピリジニオアセチル、 2 —ピリジンァセチル、， 3 —ピリジンァセチル、， 4 一ピリジンァセチル、 3— ( 1 一ピリジニォ) プロピオニル、 3— ( ピリジン一 2 —ィル）プロピオニル、 3— (ピリジン一 3 _ィル）プロピオニル、 3 — （ピリジン一 4 一ィル）プロピオニル、 4 一イミダゾ一ルァセチル、シクロへキサン力ルポニル、 1ーピペリジンァセチル、 1 —メチルー 1ーピベリジ二オアセチル、 4ーピペリジン力ルポニル、 2 一ピリミジンカルボニル、 4 一ピリミジン力ルポニル、 5—ピリミジンカルボニル、 2 —ピリミジンァセチル、 4 —ピリミジンァセチル、 5— ピリミジンァセチル、 3— （ピリミジン一 2—ィル）プロピオニル、 3 一（ピリミジン一 4—ィル）プロピオニル、 3— （ピリミジン一 5—ィル）プロピオニル、ブ夕ノィル、へキサノィル、ォクタノィル、 D —グルクロニル、アミノー（ 4ーヒドロキシフエニル）ァセチル）などが好ましく用いられる。

( 2 ) 環基を含む置換基で置換されていてもよい C ー ₅アルキル基としては、例えば、（ i ) モノーまたはジー C i _ ₅アルキル（例、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソプチル、 s ec-ブチル、 t e r t-ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチル、ノナニル、デカニル）、（i i ) モノーまたはジ一 C₃— ₈シクロアルキル（例、シクロプロピル、シクロペンチル等）、 (iii) モノ—またはジー C ₃— ₈シクロアルキル一 C ₇アルキル（例えば、シクロプロピルメチル、シクロペンチルメチル、シクロへキシルェチル等）、（iv) モノーまたはジー C₇— _{1 5}ァラルキル（例、ベンジル、フエネチル等）、（V) 炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノ一またはジ— 5ないし 7員の単環式複素環一 C — 6アルキル基（例、 3 一ピリジルメチル、 4一ピリジルメチル、 2一チェニルメチル、フルフリル等）、（vi) 3ないし 1 1個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノ一またはジ一 5ないし 14員（好ましくは 5ないし 1 0員）の 2環または 3環式の芳香族複素環— C i— eアルキル基（例えば、 2—ィンドールメチル、 3—インドールメチル、 3— （インドール— 3—ィル ) プロピル、 2—キノリルメチル、 1一イソキノリルメチル、 2—ベンゾ [b] チェニルメチル、 2—ベンゾ [b] フラニルメチル等）などが用いられ、なかでもメチル、ェチル、ベンジル、 3— （インドール— 3 一ィル）プロピルなどが好ましく用いられる。

(3) 環基を含む置換基で置換されていてもよいじ ₆—₁₄ァリール基としては、例えば、（ i ) C ₆— ₁₄炭素環基（例、シクロアルキル、フエニル、 1一ナフチル、 2—ナフチル等）、（ii) 炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のヘテロ原子を含む 5ないし 7員の単環式複素環基（例、 3—ピリジル、 2—チェニル等）、（iii) 3ないし 1 1個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含む 5ないし 14員（好ましくは 5ないし 1 0員）の 2環または 3環式の芳香族複素環基（例えば、 2—インドリル、 3—インドリル、 2—キノリル、 1一イソキノリル、 2—べンゾ [b] チェニル、 2 一べンゾ [b] フラニル等）などで置換されていてもよい C₆— ₁₄ァリ —ル基（例、フエニル、ナフチル、ビフエニル）などが用いられる。 (4) 環基を含む置換基で置換されていてもよい力ルバモイル基としては、（i) 力ルバモイル、（ii) モノーまたはジ— C卜ュ ₅アルキルカルバモイル基（例、メチルカルバモイル、ェチルカルバモイル、（iii) モノーまたはジ一 C ₃_₈シクロアルキル一力ルバモイル（例、シクロプ口ピル力ルバモイル、シクロペンチルカルバモイル、シクロへキシルカルバモイル等）、（iv) モノーまたはジ一 C ₃_₈シクロアルキル一 C丄 _₆アルキル一力ルバモイル (例えば、シク口プロピルメチルカルバモイル、シクロペンチルメチルカルバモイル、 2—シクロへキシルェチルカルバモイル等）（V) モノーまたはジー C ₆— ₄ァリール一力ルバモイル (例、フエ二ルカルバモイル等）、モノーまたはジ一（： ₆_₁₄ァラルキルーカルパモイル（例、ベンジルカルバモイル、フエネチルカルバモイル等）、（vi) 炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または' 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノ一またはジ一 5ないし 7員の単環式複素環力ルバモイル（例、 3—ピリジン力ルバモイル、 2—チォフェン力ルバモイル、ピぺリジン一 3—ィルカルバモィル等）、（vii) 炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノ一またはジー 5ないし 7員の単環式複素環一 C i— eアルキル力ルバモル（例、 3—ピリジルメチルカルバモイル、 2— (ピリジン一 2—ィル）ェチル力ルバモイル、 2 — (ピペリジン一 1一ィル）ェチルカルバモイル等）、 (viii) 3ないし 1 1個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1 または 2種、 1ないし 4個のへテロ原子を含むモノーまたはジー 5ないし 1 4員（好ましくは 5ないし 1 0員）の 2環または 3環式の芳香族複素環力ルバモイル（例、 4一インドールカルバモィル、 5—インドールカルバモイル、 3 —キノリル力ルバモイル、 5 — キノリル力ルバモイル等）、（ix) 3ないし 1 1個の炭素原子以外に窒素原子、硫黄原子及び酸素原子から選ばれる 1または 2種、 1ないし 4 個のへテロ原子を含むモノ一またはジー 5ないし 1 4員（好ましくは 5 ないし 1 0員）の 2環または 3環式の芳香族複素環一 C i— eアルキル力ルポニル（例、ベンズイミダゾ一ルー 2—ィルメチルカルバモイル、 2 一（インドールー 3—ィル）ェチルカルバモイル等）、（X) 5ないし 7員の環状力ルバモイル（例、 1一ピロリジニルカルポニル、 1—ピぺリジニルカルポニル、へキサメチレンィミノカルボニル等）（xi) C —_{1 5}ァシルカルバモイル（ここで言う C i— ₅ァシルは「環基を含む置換基で置換されていてもよい C i— i ₅ァシル基」の rC i— _{1 5}ァシル基」と同意義を示す）、（xii) C i— ₅アルキルアミノカルバモイル（ここで言う C i ₅アルキルは「環基を含む置換基で置換されていてもよい 0^_ _{1 5}アルキル基」の rC i— _{1 5}アルキル基」と同意義を示す）（ xiii) C ₆ リールアミノカルバモイル（ここで言う C _{6 4}ァリ —ルは「環基を含む置換基で置換されていてもよい C ₆— ₁₄ァリール基」の「C₆_₁₄ァリール基」と同意義を示す）などが用いられ、なかでも 2— （インドールー 3—ィル）ェチルカルバモイルなどが好ましく用いられる。

( 5 ) 環基を含む置換基で置換されていてもよい力ルポキシル基としては、（i) C ₅アルキルォキシカルポニル（ここで言う C ₅アルキルは「環基を含む置換基で置換されていてもよい C ₁₅アルキル基」の rc^— j sアルキル基」と同意義を示す。例、 tert-ブチルォキシ力ルポニル、ベンジルォキシカルボニル、 9一フルォレニルメトキシカルポニル）、（ii) C ₆— ₁₄ァリールォキシカルポニル（ここで言う C ₆— ₁₄ァリ一ルは「環基を含む置換基で置換されていてもよい C ₆— ₄ァリール基」の「C₆_₁₄ァリ一ル基」と同意義を示す。例、フエノキシ力ルポニル）、などが用いられる。

( 6 ) 環基を含む置換基で置換されていてもよいスルフィノ基としては (i) C i _ i ₅アルキルスルホニル（ここで言う C — i ₅アルキルは「環基を含む置換基で置換されていてもよい C i— i ₅アルキル基」の「C i— _{1 5}アルキル基」と同意義を示す。例、ベンジルスルホニル）、（ii ) C₆— ₁₄ァリールスルホニル（ここで言う C ₆— ₄ァリールは「環基を含む置換基で置換されていてもよい C₆_ ァリ一ル基」の「C₆— ₄ァリ一ル基」と同意義を示す。例、トシル）などが用いられる。

( 7 ) 環を含む置換基基で置換されていてもよいアミジノ基としては、

( i) アミジノ、（Π) C丄— ₅アルキルアミジノ（ここで言うアルキルは「環基を含む置換基で置換されていてもよい C i— i ₅アルキル基」の rC — i sアルキル基」と同意義を示す。例、 N—メチルアミジノ）、（iii) C _x__{x 5}ァシルアミジノ (ここで言う（： _{1 5}ァシルは

「環基を含む置換基で置換されていてもよい C i—ェ ₅ァシル基」の「C i— _{1 5}ァシル基」と同意義を示す。例、 N—ァセチルアミジノ）などが用いられる。.

( 8 ) 環基を含む置換基で置換されていてもよいダリオキシロイル基としては、（i) Cェ— i ₅アルキルォキザリル（ここで言う C i— ₅アルキルは「環基を含む置換基で置換されていてもよい C - ₅アルキル基」の rc t— _{1 5}アルキル基」と同意義を示す。例、ェチルォキザリル）、

( i i) C ₆— _{1 4}ァリールォキザリル（ここで言う C ₆— ₄ァリールは「環基を含む置換基で置換されていてもよい C ₆— ₁₄7リール基」の「C

₆— ₁₄ァリール基」と同意義を示す。例、、フエ二ルォキザリル）などが用いられる。

上記した中でも、 J ¹としては、水素原子、ァセチル、 3—インドールカルポニル、 3 — (インドールー 3—ィル）プロピオニル、 3—フエニルプロピオニル、ジフエ二ルァセチル、 3— （ピリジン一 3—ィル）プロピオニル、 4一イミダゾールァセチル、シクロへキサンカルポニル、 1 —ピぺリジンァセチル、 1—メチルー 1ーピペリジニオアセチル、 4ーピペリジン力ルポニル、へキサノィル、アミノー（4ーヒドロキシフエエル）ァセチル、 D—ダルクロニル、 2— （インドールー 3—ィル ) ェチルカルバモイル、 tert-ブチルォキシ力ルポニル、 9 一フルォレニルメトキシカルポニル、アミジノなどが好ましく用いられ、なかでも水素原子、ァセチル、 3—インドールカルポニル、 3— （インドールー 3—ィル）プロピオニル、 3—フエニルプロピオニル、 3 — (ピリジン一 3—ィル）プロピオニル、 4一イミダゾールァセチル、シクロへキサンカルボニル、へキサノィル、アミノー（4—ヒドロキシフエニル）ァセチル、 2— （インドールー 3—ィル）ェチルカルバモイル、 9—フルォレニルメトキシカルボニル、アミジノなどが好ましい。

J ²は（ 1) C卜 ₆アルキル基で置換されていてもよい NH （2) C ₆アルキル基で置換されていてもよい CH₂ （3) 0または（4 ) Sを示す。

rCi— eアルキル基」としては、メチル、ェチル、プロピル、イソプ口ピル、ブチル、イソブチル、 sec-ブチル、 tert -プチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシルなどが用いられる。

J ²としては、 NHが好ましい。

J ³ J ¹²はそれぞれ水素原子または — 3アルキル基を示す。

rCi— sアルキル基」としては、メチル、ェチル、プロピル、イソプ口ピルが用いられる。

J ³としては、水素原子が好ましい。

J ⁴としては、水素原子が好ましい。

J ⁵としては、水素原子が好ましい。

J ⁶としては、水素原子が好ましい。

J ⁷としては、水素原子が好ましい。

J ⁸としては、水素原子が好ましい。

J ⁹としては、水素原子が好ましい。

J ^{1 Q}としては、水素原子が好ましい。

J ^{1 1}としては、水素原子が好ましい。

J ^{1 2}としては、水素原子が好ましい。

Q ³ Q ¹²はそれぞれ、

(1) 置換されていてもよい C₆— ₁₂芳香族炭化水素基、

(2) 置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 14員芳香族複素環基、

(3) 置換されていてもよい C₈— ₁₄芳香族縮合環基、 (4) 置換されていてもよい、 3ないし 1 1個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基、

( 5 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基、 ( 6) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、

( 7 ) 置換されていてもよいアミノ基、

( 8 ) 置換されていてもよいグァニジノ基、

( 9) 置換されていてもよいヒドロキシル基、

( 1 0) 置換されていてもよいカルボキシル基、

( 1 1 ) 置換されていてもよい力ルバモイル基、および

( 1 2 ) 置換されていてもよいスルフヒドリル基

から成る群から選ばれる置換基を有していてもよい C ₄アルキル基を示す。

特に、 Q ³〜Q ⁶としては、

( 1 ) 置換されていてもよい C_{6 12}芳香族炭化水素基、

(2 ) 置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基、

( 3 ) 置換されていてもよい C ₈_₁₄芳香族縮合環基、

( 5) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基、

( 6) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、

(7) 置換されていてもよいアミノ基、

( 8) 置換されていてもよいグァニジノ基、

( 9) 置換されていてもよいヒドロキシル基、

( 1 0 ) 置換されていてもよいカルボキシル基、

( 1 1 ) 置換されていてもよい力ルバモイル基、および ( 1 2 ) 置換されていてもよいスルフヒドリル基

から成る群から選ばれる置換基を有する Cェ— 4アルキル基が好ましい。

「置換されていてもよい c ₆— _{1 2}芳香族炭化水素基」、「置換されていてもよい 1ないし 7個の炭素原子と窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基」、「置換されていてもよい C ₈— _{1 4}芳香族縮合環基」、「置換されていてもよい 3ないし 1 1個の炭素原子と窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基」、「置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基」および「置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基」としては、前記と同様のものが用いられる。

( 1 ) 置換されていてもよい C _s — i ₂芳香族炭化水素基を有している C _ ₄アルキル基としては、例えばベンジル、 4ーヒドロキシベンジル、 2 —クロ口ベンジル、 3—クロ口ベンジル、 4 一クロ口ベンジル、 4— ァミノべンジルなどが用いられる。

( 2 ) 置換されていてもよい 1ないし 7個の炭素原子と窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基を有している Cェ_ ₄アルキル基としては、例えば、 2 —ピリジルメチル、 3 —ピリジルメチル、 4 一ピリジルメチル、 4 —イミダゾ一ルメチルなどが用いられる。

( 3 ) 置換されていてもよい C _s— _{1 4}芳香族縮合環基を有している C _ ₄アルキル基としては、例えば、 1 一ナフチルメチル、 2—ナフチルメチルなどが用いられる。

( 4 ) 置換されていてもよい 3ないし 1 1個の炭素原子と窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5 ないし 1 4員芳香族縮合複素環基を有している — 4アルキル基としては、例えば、 3 —インドールメチル、 1 一ホルミルインドールー 3—ィルメチル、 2—キノリルメチルなどが用いられる。

( 5 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基を有している c ₁— ₄アルキル基としては、例えば、シクロへキシルメチルなどが用いられる。

( 6 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基を有している C — ₄アルキル基としては、例えば、ピぺリジン— 1ーィルメチルなどが用いられる。

( 7) 置換されていてもよいアミノ基を有している Cェ— ₄アルキル基としては、例えば、 2—アミノエチル、 3—ァミノプロピル、 4ーァミノプチル、 4—ァセタミドブチルなどが用いられる。

( 8) 置換されていてもよいグァニジノ基を有している C アルキル基としては、例えば、 3—グァニジノプロピル、 3— (N— 卜シル) グァニジノプロピルなどが用いられる。

( 9) 置換されていてもよいヒドロキシル基を有している C — ₄アルキル基としては、例えば、ヒドロキシメチル、 1ーヒドロキシェチル、ベンジルォキシメチルなどが用いられる。

( 1 0 ) 置換されていてもよい力ルポキシル基を有している C i— ₄アルキル基としては、例えば、カルポキシルメチル、 2一カルボキシルエヂル、ベンジルォキシカルボニルメチルなどが用いられる。

( 1 1 ) 置換されていてもよい力ルバモイル基を有している C i— ₄アルキル基としては、例えば、力ルバモイルメチル、 2—力ルバモイルェチル、キサンチルカルバモイルなどが用いられる。

( 1 2) 置換されてもよぃスルフヒドリル基を有している C — ₄アルキル基としては、例えば、スルフヒドリルメチル、 2— （メチルスルフヒドリル）ェチルなどが用いられる。

( 1 3 ) 無置換の Cェ— 4アルキル基としては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソプチル、 sec -プチル、 tert- プチルなどが用いられる。

Q³としては、 4ーヒドロキシベンジル、 3—ピリジルメチル、 4一ピリジルメチル、メチル、イソプチル、ヒドロキシメチル、カルボキシメチル、 4一アミノブチルなどが好ましく用いられ、特に、 4ーヒドロキシベンジル、 3—ピリジルメチル、 4 一ピリジルメチルなどが好ましく用いられる。

Q ⁴としては、力ルバモイルメチル、 2—力ルバモイルェチル、 4 一ヒドロキシベンジル、 4—イミダゾールメチル、イソプチル、ヒドロキシメチル、 1ーヒドロキシェチル、力ルポキシメチル、 4 一アミノブチルなどが好ましく用いられ、特に、力ルバモイルメチル、 2—力ルバモィルェチル、 4ーヒドロキシベンジルなどが好ましく用いられる。

Q ⁵としては、ベンジル、 2 —クロ口ベンジル、 3 —クロ口べンジル、 4 一クロ口ベンジル、 4ーァミノベンジル、 2 —ピリジルメチル、 3 一ピリジルメチル、 4 一ピリジルメチル、 1 一ナフチルメチル、 2—ナフチルメチル、 3 —インドールメチル、 1 一ホルミルインドールー 3— ィルメチル、 2—キノリルメチル、シクロへキシルメチル、ヒドロキシメチル、 1ーヒドロキシェチル、メチル、イソプロピル、イソプチル、 s ec-プチル、力ルポキシメチル、 4 一アミノブチルなどが好ましく用いられ、特に、ベンジル、 2—クロ口ベンジル、 3 —クロ口ベンジル、 4 一クロ口ベンジル、 4ーァミノベンジル、 2 —ピリジルメチル、 3—ピリジルメチル、 4一ピリジルメチル、 1 一ナフチルメチル、 2 —ナフチルメチル、 3 —インドールメチル、 2 —キノリルメチル、シクロへキシルメチル、 1ーヒドロキシェチル、イソプロピル、イソブチル、 s ec -ブチルなどが好ましく用いられる。

Q ⁶としては、メチル、ヒドロキシメチル、 1 ーヒドロキシェチル、力ルバモイルメチル、 2—力ルバモイルェチルなどが好ましく用いられ、特に、力ルバモイルメチルなどが好ましく用いられる。

Q ⁷としては、 4ーヒドロキシベンジル、力ルバモイルメチル、 3— ピリジルメチルなどが好ましく用いられ、特に、 4ーヒドロキシベンジルなどが好ましく用いられる。

Q ⁸としては、ベンジル、 4 一ピリジルメチル、 2 —ナフチルメチル、 3—インドールメチル、ヒドロキシメチル、シクロへキシルメチル、 s ec -プチル、 1ーヒドロキシェチルなどが好ましく用いられ、特に、 4 一ピリジルメチル、 3—インドールメチル、 sec-ブチルなどが好ましく用いられる。

. Q⁹としては、力ルバモイルメチルなどが好ましく用いられる。

Q ^{1 Q}としては、 4ーヒドロキシベンジル、 3—インドールメチル、メチル、 1ーヒドロキシェチル、 3—グァニジノプロピルなどが好ましく用いられ、特に、 3—インド一ルメチルなどが好ましく用いられる。

Q ^{1 1}としては、力ルバモイルメチルなどが好ましく用いられる。

Q ^{1 2}としては、力ルバモイルメチルなどが好ましく用いられる。

丫ェ〜丫³はそれぞれ式一 C ON (J ^{1 3})—、 — C S N (J ^{1 3})—、一 C (J ^{1 4}) N (J ^{1 3})—または一 N (J ^{1 3}) C O— （ J ^{1 3}および J ¹⁴はそれぞれ水素原子または C アルキル基を示す）で示される基を示す。

J ^{1 3}および J ¹⁴で示される Cェ— ₃アルキル基としては、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピルが用いられる。

J ^{1 3}としては、水素原子が好ましい。

J ¹⁴としては、水素原子が好ましい。

Y¹としては、式一 C ONH—、または一 C H₂NH—で示される基などが好ましい。

Y²としては、式一 C ONH—、または— C H₂NH_で示される基などが好ましい。

Y³としては、式一 C ONH—で示される基などが好ましい。

J ³と Q³、 J ⁴と Q⁴、 J ⁵と Q ⁵、 J ⁶と Q⁶、 J ⁷と Q ⁷、 J ⁸と Q⁸ · 、 J ⁹と Q ⁹、 J ^{1 0}と Q ^{1 0}、 J ^{1 1}と Q ^{1 1} J ^{1 2}と Q ¹²が結合することで環を形成してもよい。この場合、 C ( J ³) (Q ³) 、 C ( J ⁴) (Q " 、 C ( J ⁵) (^{Q 5}) 、 C ( J ⁶) (Q ⁶) 、 C ( J ⁷) (Q ⁷) 、 C ( J ⁸) (Q ⁸) 、 C ( ") (Q " 、 C ( J ¹ °) (Q ¹ °) 、 C ( J ¹ (Q ^{1 1}) または C ( J ^{1 2}) (Q ^{1 2}) で、例えば、シクロペン夕ン、シクロへキサン、ピぺリジンなどを形成する。

J ²と Q³、 Y¹と Q⁴、 Y²と Q⁵、 Y³と Q⁶、 J ²と Q ⁷、 Y²と Q⁸ 、 Y³と Q⁹、 J ²と Q ^{1 ()}、 Y³と Q^{1 1} J ²と Q ¹²が結合することで環を形成してもよい。

J ²と Q ³、 J ²と Q ⁷、 J ²と Q ^{1 ()}、 J ²と Q ^{1 2}が結合して環を形成する場合、 J ²— C ( J ³) (Q ³) 、 J ² - C ( J ⁷) (Q ⁷) 、 J ²— C ( J ¹ °) (Q ¹ °) 、 J ² - C ( J ^{1 2}) (Q ^{1 2}) で、例えば、ピロリジン、ピぺリジン、チアゾリジンを形成する。

Y ¹と Q⁴、 Y²と Q ⁵、 Y ³と Q ⁶、 Y²と Q ⁸、 Y³と Q ⁹、 Y³と Q ¹ ¹が結合して環を形成する場合、 Y ¹ C ( J ⁴) (Q⁴) 、 Y² C ( J ⁵) (Q ⁵) 、 Y³ C ( J ⁶) (Q " 、 Y² C ( J ⁸) (Q ⁸) 、 Y³ C ( J ⁹ ) (Q⁹) 、 Y³ C ( J ^{1 1}) (Q ^{1 1}) で、例えば、ピロリジン一 2 _力ルポニル、ピぺリジン— 2—力ルポニル、チアゾリジン一 4一力ルポ二ルを形成する。

式 J ¹— J ² - C (J ³) (Q ³) Y ¹ C (J ⁴) (Q⁴) Y² C ( J ⁵) (Q ⁵) Y³ C ( J ⁶) (Q ⁶) C (= Z ¹ °) 一で表わされる基としては、例えば、

Tyr Asn Trp Asn -、

Tyr Asn Trp D- Asn -、

Tyr Asn D-Trp Asn -、

Tyr D-Asn Trp Asn -、 '

D-Tyr Asn Trp Asn-,

Tyr Lys Trp Asn -、

Tyr Asp Trp Asn-,

Tyr Tyr Trp Asn -、

Tyr Leu Trp Asn -、

Tyr Asn Ala Asn -、

Tyr Asn Leu Asn -、

Tyr Asn Ser Asn -、

Tyr Asn Asp Asn-、

Tyr Asn Lys Asn-、

Ala Asn Trp Asn-、 Leu Asn Trp Asn -、

Ser Asn Trp Asn -、

Asp Asn Trp Asn -、

Lys Asn Trp Asn -、

Tyr Asn Trp (For) Asn -、 D~Tyr Asn D-Trp Asn -、 D-Tyr Asn Ala Asn -、 D-Tyr Asn Ser Asn -、 D-Tyr Asn Cha Asn -、 D-Tyr Asn Thr Asn -、 D-Tyr Asn lie Asn -、 D-Tyr Gin Trp Asn-, D-Tyr Thr Trp Asn -、 D-Tyr Asn Val Asn -、 D-Tyr D-Asn Trp Asn -、 D-Tyr D-Asn D-Trp Asn -、 D-Tyr Asn Phe Asn -、 D-Tyr Asn Nal (1) Asn -、 D-Tyr Asn Nal (2) Asn -、 D-Tyr Asn Phe (2C1) Asn -， D-Tyr Asn Phe (3C1) Asn-, D-Tyr Asn Phe (4C1) Asn -， D-Tyr Asn Phe (4匪 ₂) Asn - D-Tyr Asn Pya (3) Asn -、 D-Tyr D-Asn Phe Asn -、 D-Tyr D-Asn Cha Asn -、 D-Tyr D-Asn Thr Asn -、 D-Tyr Asn Pya (2) Asn -、 D-Tyr Asn Pya (4) Asn -、 D-Tyr D-Ser Trp Asn -、

D-Tyr D-His Trp Asn-、

D-Pya (3) D-Asn Cha Asn -、

D-Pya (3) D-Tyr Cha Asn -、

ΤΥΓΨ (CH₂NH) Asn Trp Asn -、

D-Tyr Asn^ (CH₂NH) Trp Asn -、

Tyr^ (CH₂丽） ASH D-Trp Asn -、

D-Tyr Asn Ala (2- Qui) Asn -、

D-Tyr Asn D-Pya (4) Asn -、

D-Tyr D-Asn Pya (4) Asn -、

Tyr D-Asn Cha Asn -、

D-Tyr D-Asn Thr Asn -、

D-Tyr D-Asn Pya (4) Asn-などが好ましい。

式 J ¹一 J ² - C (J ⁷) (Q ⁷) Y ² C ( ") (Q ⁸) Y ³ C ( J ⁹) ( Q ⁹) C (= Z ¹ °) 一で表わされる基としては、例えば、

Fmoc Asn Trp Asn -、

D-Asn Trp Asn_、

D-Tyr Trp Asn—、

D-Tyr D-Trp Asn -、

D-Tyr Ser Asn -、

D-Tyr Thr Asn -、

D-Tyr He Asn -、

D-Tyr Phe Asn-、

D-Tyr Nal (2) Asn -、

D-Pya (3) Phe Asn-、

D-Pya (3) Trp Asn -、

D-Tyr D-Pya (4) Asn -、

D-Asn Cha Asn - などが好ましい。式 "— "一 C ( J ¹ °) (Q ¹⁰) Y³C ( J ¹ M (Q ^{1 1}) C (=

Z ¹⁰) 一で表わされる基としては、例えば、

Fffloc Trp Asn -、

Boc Tyr Asn -、

Tyr Asn -、

D-Trp Asn-,

Ac Trp Asn-、

Amidino Trp Asn -、

Ac Ala Asn -、

Ac Arg Asn-,

Ac Thr Asn-などが好ましい。

式 J ¹一 J ² _ C ( J ^{1 2}) (Q ¹²) C (= Z ^{1 Q}) —で表わされる基としては、

Fffloc Asn -、

3- (Indol-3-yl) propionyl Asn -、

3-Indolecarbonyl Asn -、

3 - Indoleacetyl Asn-、

4- (Indol-3-yl) butyryl Asn -、

Dipiienylacetyl Asn-、

Hexanoyl Asn -、

Cyclohexanecabonyl Asn -、

2- (Indol-3-yl) ethylcabamoyl Asn -、

3- Pyr idylpropionyl Asn -、

4- Iffiidzoleacetyl Asn -、

Piper idinecarbonyl Asn -、

1-Piperidineacetyl Asn -、

1-Me thyl-l- iperidinioacetyl Asn -、

1-Pyridinioacetyl Asn -、

D-Glucronyl Asn-などが好ましい。式 J ^{1 _}で表わされる基としては、例えば、水素原子などが好ましい。

本発明のメタスチン誘導体（ I ) としては、前記した各記号の基を任意に組み合わせた全ての化合物が好ましく用いられるが、なかでも以下の化合物番号で示す化合物（表 1〜 1 1 ) が好適である。

MS 10 ： Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Plie-NH₂

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 化合物番号 17： [Pya (4) 101MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Pya (4) -NH₂

化合物番号 18： [Tyr (Me) 10]MS10 .

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg-Tyr (Me) - NH₂

化合物番号 19： [Phe (2F) 101MS10

Tyr - Asn- Trp - Asn-Ser-Phe- Gly- Leu - Arg-Phe (2F) -NH₂

化合物番号 23： [Tyr5]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Tyr-Phe-Gly-Leu-Arg-P e-NH₂

化合物番号 24： [Leu5]MS10

Tyr- Asn- Trp- Asn- Leu- Phe- Gly- Leu- Arg- Phe- NH₂

化合物番号 30： Acetyl- MS10

Acetyl-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 31： Fmoc-MSlO

Fmoc-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 38： [D-Ser5]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-D-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 39： [D-Asn4]MS10

Tyr-Asn-Trp-D-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg-P e-NH₂

化合物番号 40： [D-Trp3]MS10

Tyr-Asn-D-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 41 ： [D-Asn2]MS10

Tyr-D-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Plie-ΝΗ 化合物番号 42： [D-Tyrl]MS10

D~Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-P e-NH₂ 化合物番号 44： [Lys9] MS 10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Lys-P e-NH2 化合物番号 45： [Ala8]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Ala-Arg-P e-NH₂ 化合物番号 50： [Ala7]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Ala-Leu-Arg-P e-NH₂ 化合物番号 51： [NMePhelO]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-NMeP e-NH₂ 化合物番号 53： des (1-3) -Fmoc-MSlO

Fmoc-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 54： des (1-2) -Fmoc-MSlO

Fmoc-Trp-Asn-Ser-Plie-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂ 化合物番号 55： des (1) -Fmoc-MSlO

Fnioc-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Plie-NH₂ 化合物番号 56： [Lys2]MS10

Tyr-Lys-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂ 化合物番号 57： [Asp2]MS10

Tyr-Asp-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂ 化合物番号 58： [Tyr2]MS10

Tyr-Tyr-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-P e-NH₂ 化合物番号 59： [Leu2]MS10

Tyr-Leu-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-P e-NH₂ 化合物番号 60： [Pya(3) 101MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Pya (3) -NH₂ 化合物番号 61 ： [Phe (4F) 10]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg-Phe (4F) -腿 ₂ 化合物番号 67： [Ala3]MS10

化合物番号 83 : [Arg(asy Me₂) 9]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (asyMe₂) -Phe-NH₂ 化合物番号 87： des (4-5) -Boc-MSlO

Boc-Tyr-Asn-Trp-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 88： des (4-5) -MS10

Tyr-Asn-Trp-P e-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 90 : [9Ψ10, CH₂NH]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg^ (CH₂NH) Phe - NH₂ 化合物番号 91 : [8Ψ9, CH₂NH] MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-GIy-LeuV (CH₂NH) Arg-P e-NH₂ 化合物番号 97： [Har9]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Har-Phe-NH₂

化合物番号 98 : [Lys (Me₂) 9]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Lys (Me₂) -Phe-NH₂ 化合物番号 101： [Ser7]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Ser-Leu-Arg-P e-NH₂

化合物番号 105： [Nle8]MS10

Tyr- Asn- Trp- Asn- Ser-Phe- Gly- Nle- Arg-Plie-丽 ₂

化合物番号 107： [Val8]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Val-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 109： [TyrlOlMSlO

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Tyr-NH₂

化合物番号 110： [Nal (2) 10]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Nal (2) -NH₂ 化合物番号 111 ： [Phe (F5) 101MS10

Tyr - Asn- Trp-Asn-Ser - Phe - Gly - Leu- Arg- Phe (F5) - NH₂ 化合物番号 112： [ChalOlMSlO

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Cha-NH₂

化合物番号 114： des (1-3) -3- (3-Indolyl) propionyl-MSlO ^z腿 - 3 匪一 (9H) SJV-n3l-Aio-8qd-j9s-nsv-(iJi-usv-iAx

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¾N-3¾d-SJV-n91-Aio-3ii₍j-J9S-nsv-lAuoiaoj(i (!Alopui-g) -g f/X3d U 90請 OAV 化合物番号 141 : [D-Tyrl, Arg (Me) 9] MS10

D - Tyr- Asn- Trp- Asn- Ser- Phe- Gly- Leu- Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 142： [D-Tyrl, D-Trp3, Arg (Me) 9]MS10

D- Tyr- Asn- D- Trp- Asn-Ser- Phe- Gly- Leu- Arg (Me) - Phe- NH₂ 化合物番号 143 : [D-Trp3, Arg(Me) 9]MS10

Tyr- Asn- D- Trp- Asn- Ser- Phe- Gly- Leu- Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 144： des (l-3) -FfflOc- [Arg (Me) 9]MS10

Fffloc-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) - Phe -皿 ₂

化合物番号 145： des (l-2)-Fmoc-[Arg(Me) 91MS10

Fmoc-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) - Phe - NH₂

化合物番号 146： [10Ψ, CSNH, D-Tyrl]MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe^ (CSNH)題 ₂ 化合物番号 150： [Tyr6]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 151 ： [Nal (1) 6]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Nal (1) -Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂ 化合物番号 152： [Nal (2) 6]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Nal (2) -Gly-Leu-Arg-P e-NH₂ 化合物番号 153： [Phe (F5) 6]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe (F₅) -Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂ 化合物番号 154： [P e (4F) 6]MS10

Tyr- Asn- Trp- Asn- Ser- Phe (4F) -Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂ 化合物番号 156： [C a6]MS10

Tyr- Asn- Trp- Asn- Ser- Cha- Gly- Leu- Arg- Phe-丽₂

化合物番号 163 : [6Ψ7, CH₂NH] MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe^ (CH₂龍） Gly - Leu- Arg - Phe- NH₂ 化合物番号 165 : [Dap (Gly) 9J-MS10

Tyr- Asn- Trp- Asn- Ser-Phe- Gly- Leu- Dap (Gly) -P e-NH₂ 化合物番号 166 : [6Ψ7, CSNH1MS10 Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe Ψ (CSNH) Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂ 化合物番号 169： [D-Tyrl, Ala3, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Ala-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 170： [D-Tyrl, Ser3, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Ser-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 171 ： [D-Tyrl, C a3, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Cha-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 172： [D-Tyrl, Cha6, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Cha-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 173 : [D-Tyrl, Ala7, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Ala-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 174： [D-Tyrl, Arg (Me) 9, TrplO]MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -Trp-NH₂ 化合物番号 176： [AzaGly7]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 181： [D-Tyrl, Cha3, 6, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Cha-Asn-Ser-C a-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 182： [D-Tyrl, Cha3, 6, Arg (Me) 9, TrplO]MS10

D-Tyr-Asn-C a-Asn-Ser-Cha-Gly-Leu-Arg (Me) - Trp_NH₂ 化合物番号 183 : [Phe(4NH₂) 9]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Phe (4NH₂) -P e-NH₂ 化合物番号 184： [P e (4-Guanidino) 9]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Phe (4-Guanidino) - Phe - NH₂ 化合物番号 185 : [Dap (GnGly) 9]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Dap (GnGly) -Phe-NH₂ 化合物番号 186 : [Trp(For) 10]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Trp (For) -NH₂ 化合物番号 187： [Abu8]MS10

Tyr- Asn- Trp- Asn- Ser-Phe- Gly-Abu- Arg- Phe- NH₂ 化合物番号 189 : [Ala (3-Bzt) 10]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg-Ala (3-Bzt) -NH₂ 化合物番号 190： [D-Tyrl, Cha3, AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Cha-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ . 化合物番号 191 : [D-Tyrl, Ser3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MS10

D-Tyr- Asn- Ser- Asn- Ser- Phe- AzaGly- Leu- Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 192： [D-Tyrl, Arg(Et) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Et) -Phe-NH₂

化合物番号 193： [D-Tyrl, Arg (n-Pr) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (n-Pr) -Phe-NH₂ 化合物番号 194： [D-Tyrl, Arg (Ac) 9] MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (Ac) -Phe-NH₂

化合物番号 197 : [Phe (3F) 10JMS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-P e (3F) -匪 ₂

化合物番号 198 : [Phe (3, 4F₂) 10JMS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-P e (3, 4F₂) -NH₂ 化合物番号 199 : [Phe (3, 4C1₂) 10]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe (3, 4C1₂) -匪 ₂ 化合物番号 200 : [Phe (3CF₃) 10]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe (3CF₃) - NH₂

化合物番号 201 : [Ala (2-Qui) 101MS10

Tyr- Asn- Trp-Asn- Ser- Phe- Gly- Leu-Arg-Ala (2- Qui) -NH₂ 化合物番号 203： [D-Tyrl, Cha6, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Cha-Gly-Leu-Arg (Me) - Phe-腿 ₂ 化合物番号 204 : [D-Tyrl, Ala7, Arg (Me) 9JMS10

D - Tyr-Asn- Trp- Asn- Ser- Phe- Ala- Leu- Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 205： [D-Tyrl, Thr3, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-T r-Asn-Ser-Piie-Gly-Leu-Arg (Me) - Phe - NH₂

化合物番号 206： [D-Tyrl, Ile3， Arg (Me) 9] MS10 D-Tyr-Asn-Ile-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe- NH₂ 化合物番号 207 : [D-Tyrl, Ser4, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Trp-Ser-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) - Phe-丽₂ 化合物番号 208： [D-Tyrl, Thr4, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Trp-Thr-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) - Phe-丽₂ 化合物番号 209： [D-Tyrl, Gln4, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Trp-Gln-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 210： [D-Tyrl, Ala4, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Trp-Ala-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 211 : [D-Tyrl, Thr5, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Thr-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 212： [D-Tyrl, Ala5, Arg (Me) 9] MS 10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ala-P e-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 213： [D-Tyrl, Val8, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Val-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 214： [D-Tyrl, Gln2, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Gln-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 215： [D-Tyrl, Thr2, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Thr-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 216： des (l)-[D-Asn2, Arg(Me) 9] MSIO

D-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (Me) - Phe- NH₂ 化合物番号 217： des (1)-[D-Tyr2, Arg(Me) 9]MS10

D-Tyr-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 218： [N((CH₂)₃Gn)] Gly9]MS10

Tyr- Asn- Trp-Asn- Ser-Phe- Gly- Leu- N ( (CH₂) ₃Gn) Gly-Plie-NH₂ 化合物番号 220： [Arg (Et) 9] MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Et) -Phe-NH₂ 化合物番号 221： [D-Tyrl, T r3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-T r-Asn-Ser-Plie-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe-腿 ₂ 化合物番号 222： des (1) - [D - Tyr2, AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10 D~Tyr-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 223： des (1-2) - [D-Trp3, Arg (Me) 9] MSIO

D~Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 224： des (1) -[D-Tyr2, D-Trp3, Arg (Me) 9] MSIO D - Tyr- D- Trp- Asn-Ser- Phe_Gly- Leu- Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 225： des (1) - [D-Asn2, D-Trp3, Arg (Me) 9] MSIO D-Asn-D-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 226： des (1)一 [D-Tyr2, Ser3, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Ser-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 227： des (1) - [D-Tyr2， T r3, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Thr-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 228： des (1)- [D- Tyr2， Ile3， Arg (Me) 9] MS10 D - Tyr- lie- Asn- Ser- Phe- Gly- Leu- Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 229 : [D-Tyrl, Val3, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Val-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 230： [D-Tyrl, D-Asn2, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-D-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 231： [D-Tyrl, D-Asn2, D - Trp3， Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-D-Asn-D-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 232： [D-Tyrl, AzaGly7， Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Plie-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 233： [D-Tyrl, Ile3, AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10 D-Tyr-Asn-Ile-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 234： [D-Tyrl, Val3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Val-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 235： [D-Tyrl, Ala3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Ala-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 236： [D-Tyrl, D-Trp3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-D-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 237： [D-Tyrl, D - Asn2， AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-D-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 238： [D-Tyrl, D-Asn2, D-Trp3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-D-Asn-D-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 239： des (1) - [D-Tyr2, Ser3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Ser-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 240： des (1) - [D-Tyr2, Ile3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO · D-Tyr-Ile-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg(Me) -Phe-NH₂

化合物番号 41： des (1) - [D-Tyr2, Thr3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Thr-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 242： des (1)一 [D - Tyr2， D-Trp3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-D-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 244： [D-Tyrl, Phe3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Phe-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe - NH₂

化合物番号 245： [D-Tyrl, Nal (1) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Nal (1) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 246： [D-Tyrl, Nal (2) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Nal (2) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 247： [D-Tyrl, Phe (2C1) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Phe (2C1) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 248： [D-Tyrl, Phe (3C1) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Phe (3C1) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe-丽 ₂ 化合物番号 249： [D-Tyrl, Phe (4C1) 3, AzaGlyi, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Phe (4C1) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 250： [D-Tyrl, Phe (確) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Phe (4丽 ₂) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 251： [D-Tyrl, Pya (3) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Pya (3) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 252： [D-Tyrl, D-A 3, AzaGly7, Arg(Me) 91MS10 D-Tyr-Asn-D-Ala-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 253： [D-Tyrl, Pro3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MS10

D-Tyr-Asn-Pro-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 254： des (1) - [D-Tyr2, Phe3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MS10

D-Tyr-P e-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH_Z

化合物番号 255： des (1)一 [D-Tyr2, Nal (2) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MS10 D-Tyr-Nal (2) -Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂

化合物番号 256： des (1)- [D-Pya (3) 2, Phe3, AzaGly7, Arg (Me) 91MS10 D-Pya (3) -P e-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 257： [D-Tyrl, D-Asn2, P e3, AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10

D-Tyr-D-Asn-Phe-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 258： [D-Pya (3) 1, AzaGly7, Arg (Me) 9] MS10

D-Pya (3) -Asn-Trp-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 259 : [D-Alal,AzaGly7, Arg(Me)9]MS10

D-Ala-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 260： des (1-3) -3- (3-Indolyl) propionyl- [AzaGly7, Arg (Me) 9JMS10

3 - (3-Indolyl) pro ionyl-Asn-Ser-P e-AzaGIy-Leu-Arg (Me) - Phe - NH₂ 化合物番号 261 : [7Ψ8, CH₂NH]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly^ (CH₂NH) Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 265： des (1-3) -Indole-3-carbonyl- [AzaGly7, Arg(Me) 91MS10 Indole-3-carbonyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 266： des (1-3) -Indole-3-acetyl- [AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10 Indol-3-acetyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 267： des (1-3) -4- (3-Indolyl) butyryl- [AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10

4 - (3-Indolyl) butyryl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 268： des (1-3) -Diphenylacetyl- [AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10 Diphenylacetyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 269： des (1-3) -3-Phenylpropionyl- [AzaGly7, Arg (Me) 91MS10 3~Phenyl ro ionyl-Asn-Ser-Plie-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 270： [D-Tyrl, Phe3, Ser-Phe5, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Phe-Asn-Ser-Phe-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 271： des (l-2)-[AzaGly7, Arg(Me) 9] MSIO

Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 272： des (1-2) -Acetyl- [AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

Acetyl- Trp-Asn-Ser- Plie-AzaGly- Leu- Arg (Me) -P e-NH₂

化合物番号 273： des (1-2) -Amidino- [AzaGlyi, Arg (Me) 9] MSIO

Amidino-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 274： des (1-2) -Acetyl- [Ala3, AzaGly7, Arg (Me) 9JMS10 Acetyl-Ala-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 275： des (1-2) -Acetyl- [Arg3, AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10 Acetyl-Arg-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 276： des (1-2) -Acetyl- [Tlir3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO Acetyl-Thr-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂

化合物番号 277： des (1-3) -n-Hexanoyl- [AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10 n-Hexanoyl-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂

化合物番号 278： des (1-3) -Cyc lohexanecarbonyl- [AzaGly7,

Arg (Me) 9] MSIO

Cyc lohexanecar ony 1-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 279： des (1-3) -2- (Indol-3-yl) et ylcarbamoyl- [AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

2- (indol-3-yl) et ylcarbamoyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe- NH₂

化合物番号 281： [D-Tyrl, Pya (2) 6, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Pya (2) -Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 282： [D-Tyrl, Pya (4) 6, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Pya (4) -Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂

化合物番号 283 ： [D-Tyrl, D-Asn2, Cha3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-D-Asn-Cha-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe- NH₂ 化合物番号 284 ： [D-Tyrl, D - Asn2, Thr3, AzaGlyi, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-D-Asn-Thr-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe- NH₂ 化合物番号 285 ： [D-Tyrl, Pya (2) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Pya (2) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Ar.g (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 286 ： [D-Tyrl, Pya (4) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 287 ： [D-Tyrl, D-Ser2, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

D - Tyr- D_Ser- Trp-Asn- Ser- Phe- AzaGly- Leu- Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 288 ： [D-Tyrl, D-His2, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-D-His-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 289 ： des (1) - [D-Pya (3) 2, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Pya (3) -Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂

化合物番号 290 ： [D-Pya (3) 1, D-Asn2, Cha3, AzaGIyi, Arg (Me) 9] MSIO D-Pya (3) -D-Asn-C a-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 291 ： [D-Pya (3) 1, D-Tyr2, Cha3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Pya (3) -D-Tyr-Cha-Asn-Ser-Phe-AzaGIy-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 293 : [4Ψ5, CH₂NH]MS10

Tyr- Asn- Trp- Asn^ (CH₂NH) Ser-Plie-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

化合物番号 294 : [ΙΨ2, CH₂NH]MS10

Tyr^ (CH₂NH) Asn- ΤΓΡ- Asn- Ser-Phe- Gly- Leu- Arg- Phe-匪 ₂

化合物番号 295 : [2Ψ3, CH₂NH]MS10

Tyr- Asn (CH₂NH) Trp-Asn- Ser- Phe- Gly- Leu- Arg- Phe- NH₂

化合物番号 296 : [6Ψ7, CSNH, D-Tyrl, Arg (Me) 9] MSIO '

D - Tyr- Asn- Trp- Asn- Ser- ΡΙιεΨ (CSNH) Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 297 ： [D-Tyrl, Thr5, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Thr-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 298： [D-Tyrl, D-Asn2, T r5, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr-D-Asn-Trp-Asn-Thr-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 299： [1Ψ2, CH₂NH, AzaGly7, Arg (Me) 9] -MSIO

ΤγΐΨ (CH₂NH) Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 300： [1Ψ 2, CH₂NH, D-Trp3, AzaGly7, Arg (Me) 9] -MSIO

ΊγνΨ (CH₂NH) Asn-D-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 301 ： [D-Tyrl, Ala (2-Qui) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr- Asn- Ala (2- Qui) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe- NH₂ 化合物番号 302： [D-Tyrl, D-Pya (4) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-D-Pya (4) -Asn- Ser - Phe - AzaGly- Leu- Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 303： [D-Tyrl, D-Asn2, Pya (4) 3， AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10 D-Tyr-D-Asn-Pya (4) -Asn- Ser- Phe- AzaGly- Leu- Arg (Me) -Phe- NH₂ 化合物番号 304： [D-Asn2, Pya (4) 3, AzaGlyi, Arg (Me) 9] MSIO

Tyr-D-Asn-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe- NH₂ 化合物番号 305： des (1) - [D-Tyr2, D-Pya (4) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Tyr- D- Pya (4) -Asn- Ser- Phe- AzaGly- Leu- Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 306： [D-Pya (4) 1， D-Asn2, Cha3, AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D~Pya (4) -D-Asn-Cha-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 307： [7Ψ 8, CH₂NH, D-Tyrl, Arg (Me) 9] MSIO

D- Tyr- Asn- Trp-Asn- Ser- Phe- Gly^ (CH₂匪） Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 308： [6 7, CH₂NH, D-Tyrl, Arg (Me) 9] MSIO

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e^ (CH₂匪） Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 310： [Nar9]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Nar-P e-NH₂

化合物番号 311 : [Nar (Me) 9] MS10

Tyr- Asn- Trp- Asn-Ser- Phe- Gly- Leu- Nar (Me) -P e-NH₂

化合物番号 312： [Har (Me) 9] MSIO

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Har (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 313： [Dab9]MS10 Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Dab-Phe-NH₂

化合物番号 314： [0rn9]MS10

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-Gly-Leu-Orn-Phe-NH₂

化合物番号 315： des (1)-[D-Asn2, C a3, AzaGly7, Arg (Me) 9]MS10 , D-Asn-Cha-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 316： [D-Tyrl, D-

Asn2, Thr3, AzaGly7, Arg (Me) 9, Phe (4F) 10] MS10

D-Tyr-D-Asn-Thr-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe (4F) -NH₂ 化合物番号 317： [D-Tyrl, D - Asn2, Pya (4) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9, Pile (4F) 10] MS10

D-Tyr-D-Asn-Pya (4) -Asn-Ser-Ptie- AzaGly- Leu- Arg (Me) -Phe (4F) - NH₂ 化合物番号 318： [D-Tyrl, AzaGly7, Arg (Me) 9, Phe (4F) 101MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe (4F) - NH₂ 化合物番号 319： [6^7JHCO, D-Tyrl, Arg(Me) 9]MS10

D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-PheV (NHCO) Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ 化合物番号 322： des (1-3) -3-Pyr idylpropionyl-

[AzaGly7, Arg(Me)9] MS10

3-Pyridylpro ionyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe -匪 ₂ 化合物番号 323： des (1-3) -4-Imidazoleacetyl- [AzaGly7, Arg (Me) 9] MS 10 4-Imidazoleacetyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 324： des (1-3) -4-Piperidinecarbonyl- [AzaGly7, Arg(Me)9]MS10

Piper id inecarbonyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe - NH₂ 化合物番号 325： des (1-3) -1-Piperidineacetyl- [AzaGly7, Arg(Me)9]MS10

Piper id ineace tyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe -皿 ₂

化合物番号 26： des (1-3) -1-Met ylpiperidinio-l-acetyl- [AzaGlyi, Arg(Me) 9]

MS10 Methyl iperidino-l-acetyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ 化合物番号 327： des (1-3) -1-Pyr idinioaceiyl- [AzaGlyi, Arg (Me) 9] MSIO

1- Pyr id inoacetyl-Asn-Ser-P e-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 328： des (1-3) -D-Glucronyl- [AzaGly7, Arg (Me) 9] MSIO D-Glucronyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 375： 2-Aminoethyl-Gly- [D-Tyrl, Arg (Me) 9] MSIO

2- Aniinoethyl-Gly-D-Tyr-Asii-Trp-Asn-Ser-Plie-Gly-Leu-Arg (Me) -P e- NH₂

化合物番号 385： des (1) - [D-Tyr2, D-

Pya (4) 3, AzaGly7, Arg (Me) 9， TrplO] MSIO

D-Tyr-D-Pya (4) -Asn-Ser-Plie- AzaGly- Leu- Arg (Me) -Trp-NH₂

化合物番号 386： des (1-3) -3-Pyr idylpro ionyl-

[AzaGly7,Arg(Me) 9, TrplO]MS10

3-Pyr idylpropionyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Trp-NH₂ 化合物番号 387： Dap- [D-Tyrl, Arg (Me) 9] MSIO

Dap-D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂

化合物番号 397： Methyl t hi ocarbamoyl-Sar- [D-Tyrl, Arg (Me) 9]MS10

Methyl t iocarbamoyl-Sar-D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu- Arg (Me) - Phe - NH₂

化合物番号 400： (S) -1- (Quinolin- 8- yl- carbamoyl) - 4- thiapentylcarbamoyl- [D-Tyrl, Arg (Me) 9] MSIO

(S) -1- (Quinol in-8-yl -carbamoyl) -4-thi pentylcarbamoyl-D-Tyr-Asn- Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂

ただし、本発明のメタスチン誘導体（ I ) は、配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1〜 5 4番目（化合物番号 1 ) 、第 2〜 5 4番目、第 3〜 5 4番目、第 4〜 5 4番目、第 5〜 5 4番目、第 6〜 5 4番目、第 7〜 5 4番目、第 8〜 5 4番目、第 9〜 5 4番目、第 1 0〜 5 4番目、第 1 1〜 54番目、第 1 2〜 54番目、第 1 3〜 5 4番目、第 1 4 ~ 5 4番目、第 1 5〜 5 4番目、第 1 6〜 5 4番目、第 1 7〜 5 4番目、第 1 8〜 5 4番目、第 1 9〜 54番目、第 2 0〜 54番目、第 2 1〜 5 4番目、第 2 2〜 5 4番目、第 2 3〜 5 4番目、第 2 4〜 54番目、第 2 5〜 5 4番目、第 2 6〜 5 4番目、第 2 7〜 5 4番目、第 2 8〜 5 4番目、第 2 9〜 5 4番目、第 3 0〜 5 4番目、第 3 1〜 5 4番目、第 3 2〜 5 4番目、第 3 3〜 54番目、第 3 4〜 54番目、第 3 5〜 5 4 番目、第 3 6〜 5 4番目、第 3 7〜 5 4番目、第 3 8〜 5 4番目、第 3 9〜 54番目、第 40〜 5 4番目（化合物番号 2 ) 、第 4 1〜 5 4番目、第 42〜 5 4番目（化合物番号 32) 、第 4 3 ~ 5 4番目、第 44〜 5 4番目、第 4 5〜 54番目（化合物番号 3 ) 、第 4 6〜 5 4番目（化合物番号 4) 、第 4 7〜 5 4番目、第 4 8〜 5 4番目または第 4 9〜 5 4 番目のアミノ酸配列からなるペプチド（天然型のヒ卜 · メタスチンまたはその部分ペプチド）を含まない。図面の簡単な説明

図 1は、 I10T7T175発現 CH0細胞を用いた化合物 3 2 2、化合物 3 0 5 、化合物 3 0 3、化合物 2 8 6、化合物 2 3 2、化合物 1 4 1の遊走阻害活性評価を示す。横軸の F B S—は F B S無添加の場合、 F B S +は F B S添加の場合、 3 2 2は化合物 3 2 2添加の場合、 3 0 5は化合物 3 0 5添加の場合、 3 0 3は化合物 3 0 3添加の場合、 2 8 6は化合物 2 8 6添加の場合、 2 3 2は化合物 2 3 2添加の場合、 1 4 1は化合物 1 4 1添加の場合、（ 1— 5 4) はメタスチン（ 1— 5 4) 添加の場合、（4 5— 5 4) はメタスチン 4 5— 5 4添加の場合を示す。縦軸は、 F B S添加の場合の遊走活性を 1 0 0 %とした場合の相対活性を示す。図 2は、ヒト結腸癌由来細胞株 SW620担癌マウスを用いた化合物 322および Metastin (1-54) の腫瘍増殖抑制活性評価を示す。値は（平均値）土 (標準誤差）を示す。 ◊は V e h i c 1 e (蒸留水）を、〇は化合物 3 2 2 ( 0. 1 m ) を、譬は化合物 3 2 2 ( 1 mM) を、讕は Met as Un ( Metastin 1-54) を添加した時の結果を示す。横軸は投与後の日数を示す。横軸上のバーは投与期間を示す。縦軸は腫瘍体積（mm³) を示す図 3は、ヒト結腸癌由来細胞株 SW620担癌マウスを用いた化合物 305および Metastin (1-54) の腫瘍増殖抑制活性評価を示す。値は（平均値）士 (標準誤差）を示す。 ◊は V e h i c 1 e (蒸留水）を、〇は化合物 3 0 5 (0. ImM) を、 ·は化合物 30 5 ( 1 mM) を、騸は Metastin ( Metastin 1-5.4) を添加した時の結果を示す。横軸は投与後の日数を示す。横軸上のパーは投与期間を示す。縦軸は腫瘍体積（mm³) を示す図 4は、メタスチンを無麻酔下のラットに静脈投与した際の血中ダルコース濃度の変動を調べた結果を示す。図中、（一。一）は生理食塩水投与群、（一▲一）はメタスチン 1 7nmol/kg投与群、（― ·—）はメタスチン 8 0 nmol/kg投与群および（—令一）はメタスチン 1 7 0 nmol/kg投与群の血中グルコース濃度を表す。値は平均値士標準偏差（ me a n±S E) ( n = 5 ) を示す。 *は生理食塩水投与群に比べて、 P値が 0. 0 5以下であることを示す。は生理食塩水投与群に比べて、 P値が 0. 0 1以下であることを示す。

図 5は、メタスチンを無麻酔下のラットに静脈投与した際の血中ダルカゴン濃度の変動を調べた結果を示す。図中、（一。一）は生理食塩水投与群、（一 ·—）はメタスチン 8 0 nmol/kg投与群の血中グルカゴン濃度を表す。値は平均値士標準偏差（me a n士 S E) (n = 6〜 9) を示す。 *は生理食塩水投与群に比べて、 P値が 0. 0 5以下であることを示す。 * *は生理食塩水投与群に比べて、 P値が 0. 0 1以下であることを示す。

図 6は、メタスチンを無麻酔下のラットに静脈投与した際の血中インスリン濃度の変動を調べた結果を示す。図中、（—o—）は生理食塩水投与群、（一 ·一）はメタスチン 8 0 nmol/kg投与群の血中インスリン濃度を表す。値は平均値士標準偏差（me a n ±S E) (n = 6〜9) を示す。図 Ίは、メタスチンを無麻酔下のラッ卜に静脈投与した際の血中コルチコステロン濃度の変動を調べた結果を示す。図中、（一。一）は生理食塩水投与群、（一 ·一）はメタスチン 8 0 nniol/kg投与群の血中コルチコステロン濃度を表す。値は平均値土標準偏差（m e a n士 S E) ( n = 4〜 5 ) を示す。

図 8は、メタスチンを無麻酔下のラットに静脈投与した際の血中甲状腺ホルモン（T3)濃度の変動を調べた結果を示す。図中、（—o—）は生理食塩水投与群、（一 ·一）はメタスチン 8 0 nmol/kg投与群の血中甲状腺ホルモン（T3)濃度を表す。値は平均値土標準偏差（m e a n ± S E ) ( n = 4 ~ 5 ) を示す。

図 9は、メタスチンを無麻酔下のラットに静脈投与した際の血中ダルコース濃度の変動を調べた結果を示す。図中、. （一。一）は生理食塩水投与群、（一 ·一）はメタスチン 8 0 nmol/kg投与群の血中グルコース濃度を表す。値は平均値士標準偏差（m e a n ± S E) (n = 6〜 9 ) を示す。 *は生理食塩水投与群に比べて、 P値が 0. 0 5以下であることを示す。

図 1 0は、メタスチン誘導体を無麻酔下のラットに静脈投与した際の血中グルコース濃度の変動を調べた結果を示す。図中、（一。一）は生理食塩水投与群、（一 ·一）は KiSSl- 305 8 0 nmol/kg投与群、（一 A 一）は KiSSl- 322 8 0 nmol/kg投与群の血中グルコース濃度を表す。値は平均値士標準偏差（m e a n ±S E) (n = 5 ) を示す。 *は生理食塩水投与群に比べて、 P値が 0. 0 5以下であることを示す。 * *は生理食塩水投与群に比べて、 P値が 0. 0 1以下であることを示す。図 1 1は、メタスチンを無麻酔下のラッ卜に静脈投与した際の血中グルカゴン濃度の変動を調べた結果を示す。図中、（一o—）は生理食塩水投与群、（一 ·一）は KiSSl-305 (化合物 3 0 5 ) 8 0 nmol/kg投与群、（一▲一）は KiSS卜 322 (化合物 3 2 2 ) 8 0 nmol/kg投与群の血中グルカゴン濃度を表す。値は平均値土標準偏差（m e a n ± S E ) (n = 5 ) を示す。 *は生理食塩水投与群に比べて、 P値が 0. 0 5 以下であることを示す。

図 1 2は、ラッ卜の血漿中に含まれるエストラジオールの濃度を表す図である。図中、縦軸はエストラジオールの濃度を、横軸は薬剤投与群のグループをそれぞれ示す。

図 1 3は、ラッ卜の血漿中に含まれるプロゲステロンの濃度を表す図である。図中、縦軸はエストラジオールの濃度を、横軸は薬剤投与群のグループをそれぞれ示す。

図 1 4は、メタスチン投与による未成熟ラット血中 FSH濃度の変動を表す図である。

図 1 5は、メタスチン投与による未成熟ラット血中 LH濃度の変動を表す図である。

図 1 6は、メタスチン投与による未成熟ラット血中プロゲステロン濃度の変動を表す図である。

図 1 7は、メタスチン投与によるラット血中 FSH濃度の変動を表す図である。

図 1 8は、メタスチン投与によるラット血中 LH濃度の変動を表す図である。

図 1 9は、メタスチン投与によるラット血中テストステロン濃度の変動を表す図である。

図 2 0は、試験例 1 3で測定した各投与群におけるラット 1個体当たりの排卵数を示す図である。図中♦は、ラット個体ごとの値を示し、は各群における平均値を示す。

図 2 1は、試験例 1 3で測定した各投与群における血中エストラジオール濃度を示す図である。図中▲は、ラット個体ごとの値を示し、は各群における平均値を示す。

図 2 2は、試験例 1 3で測定した各投与群における血中プロゲステロン濃度を示す図である。図中▲は、ラット個体ごとの値を示し、一は各群における平均値を示す。配列表フリ一テキス卜

配列番号 1 5 C末端がアミド化している

配列番号 1 6 C末端がアミド化している

配列番号 1 7 C末端がアミド化している

配列番号 1 8 C末端がアミド化している発明を実施するための最良の形態

本発明のメタスチン誘導体（ I ) は、自体公知のペプチドの合成法に従って製造することができる。ペプチドの合成法としては、例えば固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。すなわち、本発明のぺプチドを構成し得る部分べプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的のぺプチドを製造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離法としてはたとえば、以下の（ 1 ) 〜（ 5 ) に記載された方法が挙げられる

( 1 ) M. Bodanszky および M. A. 0ndetti、ペプチドシンセシス (Peptide Synthesis), Interscience Publishers, New York (1966年)

( 2 ) Schroederおよび Luebke、ザペプチド（The Pept ide)， Academic Press, New York (1965年)

( 3 ) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、丸善（株）（ 1975年）

( 4) 矢島治明および榊原俊平、生化学実験講座 1、タンパク質の化学 IV、 205、 (1977年）

( 5 ) 矢島治明監修、続医薬品の開発第 14巻ペプチド合成広川書店また、反応後は通常の精製法、たとえば、溶媒抽出 ·蒸留 · カラムク口マトグラフィ一 · 液体クロマトグラフィー ·再結晶などを組み合わせて本発明のぺプチドを精製単離することができる。上記方法で得られるぺプチドが遊離体である場合は公知の方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法によって遊離体に変換することができる。保護されたアミノ酸またはべプチドの縮合に関しては、ぺプチド合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができるが、特に、トリスフォスフォニゥム塩類、テトラメチルゥロニゥム塩類、カルポジイミド類等がよい。トリスフォスフォニゥム塩類としてはべンゾトリアゾールー 1 一ィルォキシトリス（ピロリジノ）フォスフォニゥムへキサフルォロフォスフェイト（PyB0P)、プロモトリス（ピロリジノ）フォスフォニゥムへキサフルォロフォスフェイト（PyB roP)、 7-ァザべンゾトリァゾ一ル- 1 _ィルォキシトリス（ピロリジノ）フォスフォニゥムへキサフルォ口フォスフェイト（PyAOP)、テトラメチルゥ口ニゥム塩類としては 2_ ( 1H -べンゾトリァゾル - 1-ィル） - 1， 1， 3, 3へキサフルオロフォスフェイト (HBTU)、 2- (7-ァザべンゾトリァゾル -卜ィル） - 1， 1, 3, 3へキサフルォロフォスフェイト（HATU)、 2 -（1H -べンゾトリァゾル -卜ィル） - 1, 1, 3, 3-テトラメチルゥロニゥムテトラフルォロボレイト（TBTU)、 2- (5-ノルポルネン- 2, 3-ジカルポキシィミド）- 1, 1， 3, 3-テトラメチルゥロニゥムテトラフルォロボレイト（TNTU)、 0- (Ν-スクシミジル） - 1, 1, 3， 3-テトラメチルゥロニゥムテトラフルォロポレイト（TSTU)、カルポジイミド類としては DCC、 N, N' -ジイソプロピルカルポジイミド（D IPCDI)、 N-ェチル -N' - (3 -ジメチルアミノプロピル）カルポジィミド塩酸塩（EDC I · HC 1)などが挙げられる。これらによる縮合にはラセミ化抑制剤（例えば、 HONB, HOB t, HOAt, HOOB tなど）の添加が好ましい。縮合に用いられる溶媒としては、ぺプチド縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。たとえば無水または含水の N , N—ジメチルホルムアミド、 N , N—ジメチルァセトアミド、 N—メチルピロリドンなどの酸アミド類、塩化メチレン、クロ口ホルムなどのハロゲン化炭化水素類、トリフルォロエタノール、フエノールなどのアルコール類、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジンなどの三級アミン類、ジォキサン、テトラヒドロフランなどのエーテル類、ァセトニトリル、プロピオ二トリルなどの二トリル類、酢酸メチル、酢酸ェチルなどのェステル類あるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はぺプチド結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通常約一 2 0 °C〜 5 0での範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常 1. 5から 6倍過剰で用いられる。固相合成の場合にはニンヒドリン反応を用いたテス卜の結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行うことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはァセチルイミダゾールなどを用いて未反応アミノ酸をァシル化して、後の反応に影響を及ぼさないようにすることができる。

原料アミノ酸のァミノ基の保護基としては、たとえば、 Z、 Bo tert-ペンチルォキシカルボニル、イソポルニルォキシカルポニル、 4 ーメトキシベンジルォキシカルポエル、 C卜 Z、 Br- Z、ァダマンチルォキシカルボニル、トリフルォロアセチル、フタロイル、ホルミル、 2—二トロフエニルスルフエニル、ジフエニルホスフイノチオイル、 Fmocなどが挙げられる。力ルポキシル基の保護基としては、たとえば Rとして上記した C i— ₆アルキル基、 C ₃_₈シクロアルキル基、 C ₇_ _{1 4}7ラルキル基の他、ァリル、 2ーァダマンチル、 4一二卜口ベンジル、 4ーメ卜キシベンジル、 4一クロ口ベンジル、フエナシル基およびべンジルォキシカルポニルヒドラジド、 tert-ブトキシカルポニルヒドラジド、トリチルヒドラジドなどが挙げられる。

セリンおよびスレオニンの水酸基は、たとえばエステル化またはエーテル化によって保護することができる。このエステル化に適する基としては例えばァセチル基などの低級（C ₂— ₄) アルカノィル基、ベンゾィル基などのァロイル基などの有機酸から誘導される基などが挙げられる。また、エーテル化に適する基としては、たとえばベンジル基、テトラヒドロビラニル基、 tert-ブチル基、トリチル基（Trt) などである。チロシンのフエノール性水酸基の保護基としては、たとえばなし 2， 6-ジクロルベンジル、 2 —二トロベンジル、 .Br- Z、 tert-ブチルなどが挙げられる。ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、 Tos、 4 -メ卜キシ - 2, 3， 6-トリメチルベンゼンスルホニル（Mt r)、 DNP、 Bom、 Bum, Boc、 Tr t 、 Fmocなどが挙げられる。

アルギニンのグァニジノ基の保護基としては Tos， Z, 4-メトキシ- 2， 3, 6-トリメチルベンゼンスルフォニル（Mt r) , p -メトキシベンゼンスフレフォニル（MBS)， 2, 2, 5, 7, 8 -ペンタメチルク口マン- 6 -スルフォニル (Pmc) , メシチレン- 2-スルフォニル（Mt s)、 2, 2, 4， 6, 7 -ペンタメチルジヒドロべンゾフラン- 5-スルホニル（Pbi)、 Boc、 Z、 N0₂などが挙げられる。

リジンの側鎖アミノ基の保護基としては Z, C 1-Z, トリフルォロアセチル、 Boc、 Fmoc、 Trt , Mt r, 4, 4-ジメチル- 2, 6-ジォキソサイクロへキシリデンエイル（Dde) などが挙げられる。

トリブトファンのインドリル保護基としてはフオルミル（For)、 Z, Boc、 Mt s、 Mt rなどが挙げられる。

ァスパラギン、グルタミンの保護基としては Tr t, キサンチル（Xan)、 4， 4 ' -ジメトキシベンズヒドリル（Mbh)、 2, 4, 6-トリメトキシベンジル (Tmob)などが挙げられる。

原料の力ルポキシル基の活性化されたものとしては、たとえば対応する酸無水物、アジド、活性エステル [アルコール（たとえば、ペンタクロロフエノ一ル、 2, 4, 5—トリクロ口フエノール、 2, 4—ジニトロフエノ一ル、シァノメチルアルコール、パラニトロフエノール、 H0NB、 N-ヒドロキシスクシミド、 1 ーヒドロキシベンゾトリアゾ一ル（HOB t ) 、 1 一ヒドロキシ- 7-ァザべンゾトリアゾール（HOAt ) とのエステル] などが挙げられる。原料のァミノ基の活性化されたものとしては、たとえば対応する亜リン酸アミドが挙げられる。

保護基の除去（脱離）方法としては、たとえば Pd黒あるいは Pd炭素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルォロメタンスルホン酸、トリフルォロ酢酸、臭化トリメシルシラン（TMSBr) 、トリメチルシリルトリフルォロメタンスルホネー卜、テ卜ラフルォロホウ酸、卜リス（トリフルォロ）ホウ素、三臭化ホウ素あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルェチルァミン、トリェチルァミン、ピぺリジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモニア中ナ卜リゥムによる還元なども挙げられる。上記酸処理による脱離反応は一般に一 2 0 ° ( 〜 4 0 °C の温度で行われるが、酸処理においてはァニソ一ル、フエノール、チォァニソール、メタクレゾ一ル、パラクレゾールのようなカチオン捕捉剤や、ジメチルスルフイド、 1 , 4 -ブタンジチオール、 1, 2-エタンジチォール等の添加が有効である。また、ヒスチジンのイミダゾ一ル保護基として用いられる 2， 4-ジニトロフエニル基はチォフエノール処理により除去され、トリブトファンのインドール保護基として用いられるホルミル基は上記の 1, 2-エタンジチオール、 1， 4-ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナトリウム、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっても除去される。

原料の反応に関与すべきでない官能基の保護および保護基、ならびにその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化などは公知の保護基あるいは公知の手段から.適宜選択しうる。

ペプチドのアミド体を得る方法としては、アミド体合成用樹脂を用いて固相合成するかまたは力ルポキシル末端アミノ酸のひ一力ルポキシル基をアミド化した後、アミノ基側にペプチド鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ぺプチド鎖の N末端の Q! —ァミノ基の保護基のみを除いたぺプチドと C末端の力ルポキシル基の保護基のみを除いたぺプチド（またはアミノ酸）とを製造し、この両ペプチドを上記したような混合溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と同様である。縮合により得られた保護ペプチドを精製した後、上記方法によりすベての保護基を除去し、所望の粗ポリペプチドを得ることができる。この粗ペプチドは既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望のぺプチドのアミド体を得ることができる。

本発明のメタスチン誘導体（ I ) が、コンフィギユレーショナルァイソマー（配置異性体）、ジァステレオマー、コンフォーマー等として存在する場合には、所望により、前記の分離、精製手段によりそれぞれを単離することができる。また、本発明の化合物がラセミ体である場合には、通常の光学分割手段により S体及び R体に分離することができる本発明のメタスチン誘導体（ I ) に立体異性体が存在する場合には、この異性体が単独の場合及びそれらの混合物の場合も本発明に含まれるまた、本発明のメタスチン誘導体（ I ) は、水和物または非水和物であってもよい。

本発明のメタスチン誘導体（ I ) は同位元素（例、 ³H、 ¹⁴ C、 ^{3 5} S ) 等で標識されていてもよい。

本明細書におけるべプチドはべプチド標記の慣例に従って左端が N末端（ァミノ末端）、右端が C末端（力ルポキシル末端）である。ぺプチドの C末端は、アミド（— C ONH₂) 、力ルポキシル基（一 C OOH ) 、カルボキシレート（_ C O〇—）、アルキルアミド（— C ONHR ) またはエステル（一 C OOR) であってもよいが、特にアミド（一 C ONH₂) が好ましい。エステルまたはアルキルアミドの Rとしては、例えばメチル、ェチル、 n—プロピル、イソプロピルもしくは n—ブチルなどの C _ ₆アルキル基、シクロペンチル、シクロへキシルなどの C ₃_₈シクロアルキル基、フエニル、 Q!—ナフチルなどの C ₆— _{1 2}ァリ一ル基、ベンジル、フエネチル、ベンズヒドリルなどのフエニル— C アルキル、もしくは a—ナフチルメチルなどのひ一ナフチルー C ァルキルなどの C ₇_ i ₄ァラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるビバロイルォキシメチル基などがあげられる。

本発明のメタスチン誘導体（ I ) の塩としては、例えば金属塩、アンモニゥム塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩等が挙げられる。金属塩の好適な例としては、例えばナトリウム塩、カリゥム塩等のアル力リ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩等のアル力リ土類金属塩；アルミニウム塩等が挙げられる。有機塩基との塩の好適な例としては、例えばトリメチルァミン、卜リエチルァミン、ピリジン、ピコリン、 2， 6—ルチジン、エタノールァミン、ジエタノールァミン、トリエタノールァミン、シクロへキシルァミン、ジシクロへキシルァミン、 N , N '—ジベンジルエチレンジアミン等との塩が挙げられる。無機酸との塩の好適な例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等との塩が挙げられる。有機酸との塩の好適な例としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルォロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シユウ酸、酒石酸、マレイン酸、クェン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、 P -トルエンスルホン酸等との塩が挙げられる。塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアルギニン、リジン、オル二チン等との塩が挙げられ、酸性アミノ酸との塩の好適な例としては-、例えばァスパラギン酸、グルタミン酸等との塩が挙げられる。

このうち、薬学的に許容し得る塩が好ましい。例えば、化合物内に酸性官能基を有する場合にはアルカリ金属塩（例、ナトリウム塩、力リウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩等）等の無機塩、アンモニゥム塩等が、また、化合物内に塩基性官能基を有する場合には、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等無機酸との塩、または酢酸、フタル酸、フマル酸、シユウ酸、酒石酸、. マレイン酸、クェン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、 p —トルエンスルホン酸等の有機酸との塩が好ましい。

本発明のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩（以下、本発明のメタスチン誘導体（ I ) と略記する）のプロドラッグは、生体内における生理条件下で酵素や胃酸等による反応により本発明のメタスチン誘導体（ I ) に変換するメタスチン誘導体、すなわち酵素的に酸化、還元、加水分解等を起こして本発明のメタスチン誘導体に変化するメタスチン誘導体、胃酸等により加水分解等を起こして本発明のメタスチン誘導体（ I ) に変化するメタスチン誘導体をいう。本発明のメタスチン誘導体（ I ) のプロドラッグとしては、本発明のメタスチン誘導体（ I ) のァミノ基がァシル化、アルキル化、リン酸化されたメタスチン誘導体（例えば、本発明のメタスチン誘導体（ I ) のァミノ基がエイコサノィル化、ァラニル化、ペンチルァミノカルポニル化、（ 5—メチルー 2—ォキソ _ 1 , 3—ジォキソレン一 4—ィル）メトキシカルポニル化、テトラヒドロフラニル化、ピロリジルメチル化、ビバロイルォキシメチル化、 tert—ブチル化されたメタスチン誘導体等 ) ；本発明のメタスチン誘導体（ I ) の水酸基がァシル化、アルキル化、リン酸化、ホウ酸化されたメタスチン誘導体（例えば、本発明のメタスチン誘導体（I ) の水酸基がァセチル化、パルミトイル化、プロパノィル化、ビバロイル化、スクシ二ル化、フマリル化、ァラニル化、ジメチルアミノメチルカルポエル化されたメタスチン誘導体等）；本発明のメタスチン誘導体（ I ) のカルポキシ基がエステル化、アミド化されたメタスチン誘導体（例えば、本発明のメタスチン誘導体（ I ) の力ルポキシ基がェチルエステル化、フエニルエステル化、力ルポキシメチルェステル化、ジメチルアミノメチルエステル化、ビバロイルォキシメチルエステル化、エトキシカルポニルォキシェチルエステル化、フタリジルエステル化、（ 5—メチルー 2—ォキソ一 1 , 3—ジォキソレン一 4 _ ィル）メチルエステル化、シクロへキシルォキシカルポニルェチルエステル化、メチルアミド化されたメタスチン誘導体等）；等が挙げられる。これらのメタスチン誘導体は自体公知の方法によって本発明のメタスチン誘導体（ I ) から製造することができる。

また、本発明のメタスチン誘導体（ I ) のプロドラッグは、広川書店 1 9 90年刊「医薬品の開発」第 7巻分子設計 1 6 3頁から 1 9 8頁に記載されているような生理的条件で本発明のメタスチン誘導体（ I ) に変化するものであってもよい。

本発明のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩のプロドラッグ（以下、本発明の化合物と略記する場合がある）は癌転移抑制活性または癌増殖抑制活性を有するため、癌転移抑制剤または癌増殖抑制剤として、あらゆる癌（例えば、肺癌、胃癌、肝癌、膝癌、大腸癌、直腸癌、結腸癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、乳癌等）の予防 ·治療剤などの医薬として有用である。

さらに、本発明の化合物は膝臓機能調節作用を有するため、滕臓機能調節剤として、種々の膝臓疾患（例えば、急性または慢性塍炎、滕癌等 ) の治療 ·予防剤として有用である。

また、本発明の化合物は胎盤機能調節作用を有するため、胎盤機能調節剤として、例えば、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防または治療剤などの医薬として有用である。

さらに、本発明の化合物は血糖上昇作用、隧グルカゴン分泌促進作用、尿生成促進作用を有しているので、血糖上昇剤、滕グルカゴン分泌促進剤、尿生成促進剤として、例えば、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防または治療剤などの医薬として有用である。

さらに、本発明の化合物は、性腺刺激ホルモン（例、 FSH、 LHなど）分泌促進作用、性ホルモン〔例、アンドロゲン（例、テストステロン、アンドロステンジオンなど）、エストロゲン（例、ェストラジオ一ル、エストロンなど）、プロゲステロンなど〕分泌促進作用、性腺機能改善作用、排卵誘発または促進作用、性成熟作用などを有しているので、例えば、性腺機能改善剤、排卵誘発または促進剤、性腺刺激ホルモン分泌促進剤または性ホルモン分泌促進剤、ホルモン依存性癌〔例、前立腺癌、乳癌など〕、不妊症〔例、月経不順、月経困難症、無月経症、体重減少性無月経症、続発性無月経症、無排卵症、卵巣機能低下症、性腺機能低下症、精子形成障害、性機能低下症（例、インポテンスなど）、性器萎縮症、精巣萎縮症、精巣機能障害、無精子症、低アンドロゲン血症など〕、子宮内膜症、子宮筋腫などの予防 · 治療剤として使用することができる。

さらに、本発明のメタスチン誘導体またはその塩あるいはそのプロドラッグは、アルツハイマー病、軽度認知障害などの予防 · 治療剤などとして有用である。

さらに、本発明の化合物は、天然型メタスチン、例えばメタスチン 5 4 ( 1 - 5 ) ゃメタスチン 1 0 (4 5— 5 4) に比べて、優れた血中安定性を有している。

本発明の化合物を含有してなる医薬は、毒性が低く、医薬製剤の製造法で一般的に用いられている自体公知の手段に従って、本発明の化合物をそのままあるいは薬理学的に許容される担体と混合して、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤、（ソフトカプセルを含む）、液剤、注射剤、坐剤、徐放剤等の医薬製剤として、経口的または非経口的（例、局所、直腸、静脈投与等）に安全に投与することができる。

本発明の化合物の本発明製剤中の含有量は、製剤全体の約 0. 0 1ないし約 1 0 0重量％である。

本発明の化合物の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に、癌患者（体重 6 0 k gとして）に対して、一日につき約 0. 1〜 1 0 0 m g、好ましくは約 1. 0〜 5 0 mg、より好ましくは約 1. 0〜 2 0 mgである。非経口的に投与する場合は、その 1回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常、癌患者（体重 6 0 k gとして）に対して、一日につき約 0. 0 1〜 3 0 mg 程度、好ましくは約 0. l〜 2 0 mg程度、より好ましくは約 0. 1〜 1 O mg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。本発明の医薬の製造に用いられてもよい薬理学的に許容される担体と' しては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が挙げられ、例えば固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤及び崩壊剤、あるいは液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤及び無痛化剤等が挙げられる。更に必要に応じ、通常の防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、吸着剤、湿潤剤等の添加物を適宜、適量用いることもできる。

賦形剤としては、例えば乳糖、白糖、 D —マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロース、軽質無水ケィ酸等が挙げられる。滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸力ルシゥム、タルク、コロイドシリカ等が挙げられる。

結合剤としては、例えば結晶セルロース、白糖、 D —マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、デンプン、ショ糖、ゼラチン、メチルセルロース、カルポキシメチルセルロースナトリウム等が挙げられる。

崩壊剤としては、例えばデンプン、カルポキシメチルセルロース、力ルポキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、 Lーヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。

溶剤としては、例えば注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリ一ブ油等が挙げられる溶解補助剤としては、例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコール、 D —マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスァミノメタン、コレステロール、トリエタノールァミン、炭酸ナトリウム、クェン酸ナトリウム等が挙げられる。

懸濁化剤としては、例えばステアリルトリエタノールァミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニゥム、塩化べンゼトニゥム、モノステアリン酸グリセリン、等の界面活性剤；例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルポキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシェチルセル Π—ス、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子等が挙げられる。

等張化剤としては、例えばブドウ糖、 D —ソルビト一ル、塩化ナトリウム、グリセリン、 D —マンニトール等が挙げられる。

緩衝剤としては、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クェン酸塩等の緩衝液等が挙げられる。

無痛化剤としては、例えばべンジルアルコール等が挙げられる。

防腐剤としては、例えばパラヒドロキシ安息香酸エステル類、クロ口ブ夕ノール、ベンジルアルコール、フエネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。

抗酸化剤としては、例えば亜硫酸塩、ァスコルビン酸、 α — トコフエロール等が挙げられる。

さらに、本発明の化合物は、本発明の化合物以外の薬物と併用して使用することができる。

本発明の化合物と併用し得る薬物（以下、併用薬物と略記する場合がある）としては、例えば、癌治療のための化学療法剤、ホルモン療法剤、免疫療法剤等の薬剤（以下、併用薬剤と略記する）と組み合わせて用いることができる。

該「化学療法剤」としては、例えばアルキル化剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来抗癌剤などが挙げられる。

「アルキル化剤」としては、例えば、ナイトロジェンマスタード、塩酸ナイトロジエンマスタードー Ν —ォキシド、クロラムプチル、シクロフォスフアミド、ィホスフアミド、チォテパ、カルボコン、トシル酸ィンプロスルファン、ブスルファン、塩酸二ムスチン、ミトプロニトール、メルファラン、ダカルバジン、ラニムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、トリエチレンメラミン、カルムスチン、口ムスチン、ストレプトゾシン、ピポブロマン、ェトグルシド、カルポプラチン、シスブラチン、ミポプラチン、ネダプラチン、ォキサリブラチン、アルトレ夕ミン、アンバムスチン、塩酸ジブロスピジゥム、フォテムスチン、プレドニムスチン、プミテパ、リポムスチン、テモゾ口ミド、トレォスルファン、トロフォスフアミド、ジノス夕チンスチマラマー、カルポコン、アドゼレシン、システムスチン、ビゼレシンなどが挙げられる。

「代謝拮抗剤」としては、例えば、メルカプトプリン、 6—メルカプトプリンリポシド、チオイノシン、メトトレキサ一ト、エノシ夕ビン、シ夕ラピン、シ夕ラビンォクフォスフアート、塩酸アンシタビン、 5 _ F U系薬剤（例、フルォロウラシル、テガフール、 U F T、ドキシフルリジン、カルモフール、ガロシ夕ビン、エミテフールなど）、アミノプテリン、ロイコポリンカルシウム、タブロイド、ブトシン、フオリネィトカルシウム、レポフオリネイトカルシウム、クラドリビン、エミテフール、フルダラビン、ゲムシ夕ビン、ヒドロキシカルバミド、ペントス夕チン、ピリトレキシム、イドキシゥリジン、ミトグァゾン、チアゾフリン、アンバムスチンなどが挙げられる。

「抗癌性抗生物質」としては、例えば、ァクチノマイシン D、ァクチノマイシン C、マイトマイシン C、クロモマイシン A 3、塩酸ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、硫酸べプロマイシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アクラルビシン、塩酸ピラルビシン、塩酸ェピルビシン、ネオカルチノス夕チン、ミスラマイシン、ザルコマイシン、カルチノフィリン、ミトタン、塩酸ゾルビシン、塩酸ミトキサントロン、塩酸イダルビシンなどが挙げられる。

「植物由来抗癌剤」としては、例えば、エトポシド、リン酸エトポシド、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンデシン、テニポシド、パクリタキセル、ドセタクセル、ビノレルビンなどが挙げられる。

該「ホルモン療法剤」としては、例えば、ホスフェストロール、ジェチルスチルベストロール、クロロトリアニセリン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノン、酢酸シプロテロン、ダナゾ一ル、ァリルエストレノール、ゲストリノン、メパルトリシン、ラロキシフェン、オルメロキフェン、レポルメロキシフェン、抗エストロゲン（例、クェン酸夕モキシフェン、クェン酸トレミフェンなど）、ピル製剤、メピチォスタン、テストロラクトン、アミノグルテチイミド、 L H— R Hァゴニスト（例、酢酸ゴセレリン、プセレリン、リュ一プロレリンなど）、ドロロキシフェン、ェピチォス夕ノール、スルホン酸ェチニルェストラジオ一ル、ァロマ夕一ゼ阻害薬（例、塩酸ファドロゾール、アナストロゾール、レトロゾール、ェキセメスタン、ポロゾ一ル、フオルメスタンなど）、抗アンドロゲン（例、フルタミド、ビカル夕ミド、ニル夕ミドなど）、 5 -レダク夕ーゼ阻害薬（例、フィナステリド、エブリステリドなど）、副腎皮質ホルモン系薬剤（例、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ベ夕メタゾン、トリアムシノロンなど ) 、アンドロゲン合成阻害薬（例、アビラテロンなど）、レチノイドおよびレチノイドの代謝を遅らせる薬剤（例、リアロゾールなど）などが挙げられ、なかでも L H— R Hァゴニスト（例、酢酸ゴセレリン、ブセレリン、リュ一プロレリンなど）が好ましい。

該「免疫療法剤（B R M ) 」としては、例えば、ピシバニール、クレスチン、シゾフィラン、レンチナン、ウベニメクス、インターフエ口ン、インターロイキン、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロ二一刺激因子、エリスロポイエチン、リンホトキシン、 B C Gワクチン、コリネパクテリゥムパルプム、レバミゾ一ル、ポリサッカライド K、プロコダゾ一ルなどが挙げられる。

本発明の化合物と併用薬物とを組み合わせることにより、

( 1 ) 本発明の化合物または併用薬物を単独で投与する場合に比べて、その投与量を軽減することができる、

( 2 ) 患者の症状（軽症、重症など）に応じて、本発明の化合物と併用する薬物を選択することができる、

( 3 ) 本発明の化合物と作用機序が異なる併用薬物を選択することにより、治療期間を長く設定することができる、

( 4 ) 本発明の化合物と作用機序が異なる併用薬物を遽択することにより、治療効果の持続を図ることができる、

( 5 ) 本発明の化合物と併用薬物とを併用することにより、相乗効果が得られる、などの優れた効果を得ることができる.。

以下、本発明の化合物（ I ) と併用薬物を併用して使用することを「本発明の併用剤」と称する。

本発明の併用剤の使用に際しては、本発明の化合物と併用薬物の投与時期は限定されず、本発明の化合物またはその医薬組成物と併用薬物またはその医薬組成物とを、投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。併用薬物の投与量は、臨床上用いられている投与量に準ずればよく、投与対象、投与ルート、疾患、組み合わせ等により適宜選択することができる。

本発明の併用剤の投与形態は、特に限定されず、投与時に、本発明の化合物と併用薬物とが組み合わされていればよい。このような投与形態としては、例えば、（ 1 ) 本発明の化合物と併用薬物とを同時に製剤化して得られる単一の製剤の投与、（2 ) 本発明のとを別々に製剤化して得られる 2種 2種の製剤の投与の製剤の同一投与経路での同時投与、（ 3 ) 本発明の化合物と併用薬物とを別々に製剤化して得られる 2種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、（4 ) 本発明の化合物と併用薬物とを別々に製剤化して得られる 2種の製剤の異なる投与経路での同時投与、（ 5 ) 本発明の化合物と併用薬物とを別々に製剤化して等られる 2種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えば、本発明の化合物；併用薬物の順序での投与、あるいは逆の順序での投与）などが挙げられる。

本発明の併用剤は、毒性が低く、例えば、本発明の化合物または（および）上記併用薬物を自体公知の方法に従って、薬理学的に許容される担体と混合して医薬組成物、例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤、（ソフトカプセルを含む）、液剤、注射剤、坐剤、徐放剤等として、経口的または非経口的（例、局所、直腸、静脈投与等）に安全に投与することができる。注射剤は、静脈内、筋肉内、皮下または臓器内投与あるいは直接病巣に投与することができる。本発明の併用剤の製造に用いられてもよい薬理学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質があげられ、例えば固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤及び崩壌剤、あるいは液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤及び無痛化剤等があげられる。更に必要に応じ、通常の防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、吸着剤、湿潤剤等の添加物を適宜、適量用いることもできる。

賦形剤としては、例えば乳糖、白糖、 D—マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロース、軽質無水ケィ酸等が挙げられる。滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸力ルシゥム、タルク、コロイドシリカ等が挙げられる。

結合剤としては、例えば結晶セルロース、白糖、 D —マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、デンプン、ショ糖、ゼラチン、メチルセルロース、カルポキシメチルセルロースナトリゥム等が挙げられる。

崩壊剤としては、例えばデンプン、カルポキシメチルセルロース、力ルポキシメチルセルロースカルシウム、カルポキシメチルスターチナトリウム、 Lーヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。

懸濁化剤としては、例えばステアリルトリエタノールァミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニゥム、塩化べンゼトニゥム、モノステアリン酸グリセリン、等の界面活性剤；例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルポキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシェチルセル口一ス、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子等が挙げられる。

等張化剤としては、例えばブドウ糖、 D —ソルビトール、塩化ナトリウム、グリセリン、 D —マンニトール等が挙げられる。

防腐剤としては、例えばパラォキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フエネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。

抗酸化剤としては、例えば亜硫酸塩、ァスコルビン酸、 α —トコフエロール等が挙げられる。

本発明の併用剤における本発明の化合物と併用薬物との配合比は、投与対象、投与ルート、疾患等により適宜選択することができる。

例えば、本発明の併用剤における本発明の化合物の含有量は、製剤の形態によって相違するが、通常製剤全体に対して約 0 . 0 1〜 1 0 .0重量％、好ましくは約 0 . 1〜 5 0重量％、さらに好ましくは約 0 . 5〜 2 0重量％程度である。

本発明の併用剤における併用薬物の含有量は、製剤の形態によって相違するが、通常製剤全体に対して約 0 . 0 1〜 1 0 0重量％、好ましくは約 0 . 1〜 5 0重量％、さらに好ましくは約 0 . 5〜 2 0重量％程度である。

本発明の併用剤における担体等の添加剤の含有量は、製剤の形態によつて相違するが、通常製剤全体に対して約 1〜 9 9 . 9 9重量％、好ましくは約 1 0〜 9 0重量％程度である。

また、本発明の化合物および併用薬物をそれぞれ別々に製剤化する場合も同様の含有量でよい。これらの製剤は、製剤工程において通常一般に用いられる自体公知の方法により製造することができる。

例えば、本発明の化合物または併用薬物は、分散剤（例、ツイ一ン（

Twe en) 8 0 (アトラスパウダー社製、米国）、 HC0 60 (日光ケミカルズ製）、ポリエチレングリコール、カルポキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセル tiース、デキストリンなど）、安定化剤（例、ァスコルビン酸、ピロ亜硫酸ナトリウム等）、界面活性剤（例、ポリソルベート 8 0、マクロゴール等）、可溶剤（例、グリセリン、エタノール等）、緩衝剤（例、リン酸及びそのアル力リ金属塩、クェン酸及びそのアルカリ金属塩等）、等張化剤（例、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、ソルビトール、ブドウ糖等 ) 、 p H調節剤（例、塩酸、水酸化ナトリウム等）、保存剤（例、パラォキシ安息香酸ェチル、安息香酸、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール等）、溶解剤（例、濃グリセリン、メダルミン等 ) 、溶解補助剤（例、プロピレングリコール、白糖等）、無痛化剤（例、 .ブドウ糖、ベンジルアルコール等）などと共に水性注射剤に、あるいはォリーブ油、ゴマ油、綿実油、コーン油などの植物油、プロピレングリコールなどの溶解補助剤に溶解、懸濁あるいは乳化して油性注射剤に成形し、注射剤とすることができる。

経口投与用製剤とするには、自体公知の方法に従い、本発明の化合物または併用薬物を例えば、賦形剤（例、乳糖、白糖、デンプンなど）、崩壊剤（例、デンプン、炭酸カルシウムなど）、結合剤（例、デンプン、アラビアゴム、カルポキシメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロースなど）または滑沢剤（例、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレング。リコール 6 0 0 0など）などを添加して圧縮成形し、次いで必要により、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性の目的のため自体公知の方法でコーティングすることにより経口投与製剤とすることができる。そのコーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ェチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、ツイーン 8 0、プル口ニック F 6 8、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセル口一スフタレート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシネート、ォィドラギット（ローム社製、ドイツ，メタアクリル酸 · アクリル酸共重合）および色素（例、ベンガラ，二酸化チタン等）などが用いられる。経口投与用製剤は速放性製剤、徐放性製剤のいずれであってもよい。例えば、坐剤とするには、自体公知の方法に従い、本発明の化合物または併用薬物を油性または水性の固状、半固状あるいは液状の坐剤とすることができる。上記組成物に用いる油性基剤としては、例えば、高級脂肪酸のグリセリド〔例、カカオ脂、ウイテプゾル類（ダイナマイトノ一ベル社製，ドイツ）など〕、中級脂肪酸〔例、ミグリオール類（ダイナマイトノーベル社製，ドイツ）など〕、あるいは植物油（例、ゴマ油、大豆油、綿実油など）などが挙げられる。また、水性基剤としては、例えばポリエチレングリコール類、プロピレングリコール、水性ゲル基剤としては、例えば天然ガム類、セルロース誘導体、ビニール重合体、ァクリル酸重合体などが挙げられる。

上記徐放性製剤としては、徐放性マイクロカプセル剤などが挙げられる。

徐放型マイクロカプセルとするには、自体公知の方法を採用できるが、例えば、下記〔 2〕に示す徐放性製剤に成型して投与するのが好ましい。

本発明の化合物は、固形製剤（例、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤 ) などの経口投与用製剤に成型するか、坐剤などの直腸投与用製剤に成型するのが好ましい。特に経口投与用製剤が好ましい。

併用薬物は、薬物の種類に応じて上記し剤形とすることができる。以下に、〔 1〕本発明の化合物または併用薬物の注射剤およびその調製、〔2〕本発明の化合物または併用薬物の徐放性製剤または速放性製剤およびその調製、〔3〕本発明の化合物または併用薬物の舌下錠、バッカルまたは口腔内速崩壊剤およびその調製について具体的に示す。

〔 1〕注射剤およびその調製

本発明の化合物または併用薬物を水に溶解してなる注射剤が好ましい

。該注射剤には安息香酸塩または Zおよぴサリチル酸塩を含有させてもよい。

該注射剤は、本発明の化合物または併用薬物と所望により安息香酸塩または Zおよびサリチル酸塩の双方を水に溶解することにより得られる上記安息香酸、サリチル酸の塩としては、例えばナトリウム，力リウムなどのアルカリ金属塩、カルシウム，マグネシウムなどのアルカリ土類金属塩、アンモニゥム塩、メダルミン塩、その他トロメタモールなどの有機酸塩などが挙げられる。

注射剤中の本発明の化合物または併用薬物の濃度は 0 . 5〜 5 0 w / V %、好ましくは 3〜 2 0 w Z v %程度である。また安息香酸塩または /およびサリチル酸塩の濃度は 0 . 5〜 5 0 w / v %、好ましくは 3〜 2 0 w / V %が好ましい。

また、本剤には一般に注射剤に使用される添加剤、例えば安定化剤（ァスコルビン酸、ピロ亜硫酸ナトリウム等）、界面活性剤（ポリソルべート 8 0、マクロゴール等）、可溶剤（グリセリン、エタノール等）、緩衝剤（リン酸及びそのアルカリ金属塩、クェン酸及びそのアルカリ金属塩等）、等張化剤（塩化ナトリウム、塩化カリウム等）、分散剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、デキストリン）、 p H調節剤（塩酸、水酸化ナトリウム等）、保存剤（パラォキシ安息香酸ェチル、安息香酸等）、溶解剤（濃グリセリン、メダルミン等）、溶解補助剤（プロピレンダリコール、白糖等）、無痛化剤（ブドウ糖、ベンジルアルコ一ル等）などを適宜配合することができる。これらの添加剤は一般に注射剤に通常用いられる割合で配合される。 '

注射剤は P H調節剤の添加により 2〜 1 2好ましくは 2 . 5〜 8 . 0に調整するのがよい。注射剤は本発明の化合物または併用薬物と所望により安息香酸塩または/およびサリチル酸塩の双方を、また必要により上記添加剤を水に溶解することにより得られる。これらの溶解はどのような順序で行つてもよく、従来の注射剤の製法と同様に適宜行うことができる。

注射用水溶液は加温するのがよく、また通常の注射剤と同様にたとえば濾過滅菌，高圧加熱滅菌などを行うことにより注射剤として供することができる。

注射用水溶液は、例えば 1 0 0 °C〜 1 2 1 °Cの条件で 5分〜 3 0分高圧加熱滅菌するのがよい。

さらに多回分割投与製剤として使用できるように、溶液の抗菌性を付与した製剤としてもよい。

〔 2〕徐放性製剤または速放性 M剤およびその調製

本発明の化合物または併用薬物を含んでなる核を所望により水不溶性物質ゃ膨潤性ポリマーなどの被膜剤で被覆してなる徐放性製剤が好ましレ^ 例えば、 1 日 1回投与型の経口投与用徐放性製剤が好ましい。

被膜剤に用いられる水不溶性物質としては、例えばェチルセルロース、ブチルセルロースなどのセルロースエーテル類、セルロースァセテ一ト、セル口一スプロピオネートなどのセルロースエステル類、ポリビニルアセテート、ポリビエルブチレ一トなどのポリビエルエステル類、ァクリル酸/メタクリル酸共重合体、メチルメ夕クリレー卜共重合体、ェトキシェチルメタクリレー卜/シンナモェチルメタクリレートノアミノアルキルメタクリレート共重合体、ポリアクリル酸、ポリメ夕クリル酸、メタクリル酸アルキルアミド共重合体、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリメタクリレート、ポリメタクリルアミド、アミノアルキルメタクリレート共重合体、ポリ（メタクリル酸アンヒドリド）、グリシジルメタクリレート共重合体、とりわけオイドラギット R S— 1 0 0 , R L - 1 0 0 , R S— 3 0 D， R L - 3 0 D , R L - P 0 , S - P 0 (ァクリル酸ェチル · メタァクリル酸メチル · メタァクリル酸塩化卜リメチル • アンモニゥムェチル共重合体）、オイドラギット N E— 3 0 D (メタァクリル酸メチル · ァクリル酸ェチル共重合体）などのオイドラギット類（ローム ' ファ一マ社）などのアクリル酸系ポリマー、硬化ヒマシ油 (例、ラブリーワックス（フロイン卜産業）など）などの硬化油、カルナパワックス、脂肪酸グリセリンエステル、パラフィンなどのワックス類、ポリグリセリン脂肪酸エステル等が挙げられる。

膨潤性ポリマーとしては、酸性の解離基を有し、 pH依存性の膨潤を示すポリマーが好ましく、胃内のような酸性領域では膨潤が少なく、小腸や大腸などの中性領域で膨潤が大きくなる酸性の解離基を有するポリマーが好ましい。

このような酸性の解離基を有し pH依存性の膨潤を示すポリマ一としては、例えば力一ポマー (Carbomer) 9 3 4 P、 9 4 0、 94 1、 9 7 4 P、 9 8 0、 1 3 42等、ポリカーボフィル（polycarbophil) 、力ルシゥムポリカボーフィル（carcium polycarbophil) (前記はいずれも B Fグッドリッチ社製）、ハイビスヮコー 1 0 3、 1 0 4、 1 0 5、 3 0 4 (いずれも和光純薬（株）製）などの架橋型ポリアクリル酸重合体が挙げられる。

徐放性製剤に用いられる被膜剤は親水性物質をさらに含んでいてもよい。

該親水性物質としては、例えばプルラン、デキストリン、アルギン酸アルカリ金属塩などの硫酸基を有していてもよい多糖類、ヒドロキシプ口ピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルポキシメチルセル口一スナトリウムなどのヒドロキシアルキル基またはカルボキシアルキル基を有する多糖類、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。

徐放性製剤の被膜剤における水不溶性物質の含有率は約 3 0〜約 9 0 % (w/w) 、好ましくは約 3 5〜約 8 0 % (w/w) 、さらに好ましくは約 40〜 7 5 % (w/w) 、膨潤性ポリマ一の含有率は約 3〜約 3 0 % (w/w ) 、好ましくは約 3〜約 1 5 % (w/w)である。被膜剤は親水性物質をさらに含んでいてもよく、その場合被膜剤における親水性物質の含有率は約 5 0 % (w/w)以下、好ましくは約 5〜約 4 0 % (w/w) 、さらに好ましくは約 5〜約 3 5 % (w/w) である。ここで上記％ (w/w) は被膜剤液から溶媒（例、水、メタノール、エタノール等の低級アルコール等）を除いた被膜剤組成物に対する重量％を示す。

徐放性製剤は、以下に例示するように薬物を含む核を調製し、次いで得られた核を、水不溶性物質ゃ膨潤性ポリマーなどを加熱溶解あるいは溶媒に溶解または分散させた被膜剤液で被覆することにより製造される I . 薬剤を含む核の調製。

被膜剤で被覆される薬物を含む核（以下、単に核と称することがある ) の形態は特に制限されないが、好ましくは顆粒あるいは細粒などの粒子状に形成される。

核が顆粒または細粒の場合、その平均粒子径は、好ましくは約 1 5 0 〜2， 0 0 0 ^m、さらに好ましくは約 50 0〜約 l, 400 mである核の調製は通常の製造方法で実施することができる。例えば、薬物に適当な賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定化剤等を混合し、湿式押し出し造粒法、流動層造粒法などにより調製する。

核の薬物含量は、約 0. 5〜約 9 5 % (w/w) 、好ましくは約 5. 0〜約 8 0 % (w/w) 、さらに好ましくは約 3 0〜約 7 0 % (w/w) である。核に含まれる賦形剤としては、例えば白糖、乳糖、マンニトール、グルコースなどの糖類、澱粉、結晶セルロース、リン酸カルシウム、コ一ンスターチなどが用いられる。中でも、結晶セルロース、コーンスターチが好ましい。

結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、プル口ニック F 6 8、アラビアゴム、ゼラチン、澱粉などが用いられる。崩壊剤としては、例えばカルポキシメチルセルロースカルシウム（ECG505)、クロスカルメロースナトリウム（Ac- D i- So l)、架橋型ポリビニルピ口リドン（クロスポビドン）、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（L- HPC) などが用いられる。中でも、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースが好ましい。滑沢剤、凝集防止剤としては例えばタルク、ステアリン酸マグネシゥムおよびその無機塩、また潤滑剤としてポリエチレングリコールなどが用いられる。安定化剤としては酒石酸、クェン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸などの酸が用いられる。

核は上記製造法以外にも、例えば核の中心となる不活性担体粒子上に水、低級アルコール（例；メタノール、エタノールなど）等の適当な溶媒に溶解した結合剤をスプレ一しながら、薬物あるいはこれと賦形剤、滑沢剤などとの混合物を少量づっ添加して行なう転動造粒法、パンコ一ティング法、流動層コ一ティング法や溶融造粒法によっても調製することができる。不活性担体粒子としては、例えば白糖、乳糖、澱粉、結晶セルロース、ワックス類で製造されたものが使用でき、その平均粒子径は約 1 0 0 x m〜約 1 , 5 0 0 であるものが好ましい。

核に含まれる薬物と被膜剤とを分離するために、防護剤で核の表面を被覆してもよい。防護剤としては、例えば前記親水性物質や、水不溶性物質等が用いられる。防護剤は、好ましくはポリエチレングリコールやヒドロキシアルキル基またはカルポキシアルキル基を有する多糖類、より好ましくはヒドロキシプロピルメチルセル口一ス、ヒドロキシプロピルセルロースが用いられる。該防護剤には安定化剤として酒石酸、クェン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸等の酸や、タルクなどの滑沢剤を含んでいてもよい。防護剤を用いる場合、その被覆量は核に対して約 1〜約 1 5 % (w/w) 、好ましくは約 1〜約 1 0 % (w/w) 、さらに好ましくは約 2〜約 8 % (w/w) である。

防護剤は通常のコーティング法により被覆することができ、具体的には、防護剤を例えば流動層コーティング法、パンコーティング法等により核にスプレーコーティングすることで被覆することができる。 I I. 核の被膜剤による被覆

前記 Iで得られた核を、前記水不溶性物質及び pH依存性の膨潤性ポリマー、および親水性物質を加熱溶解あるいは溶媒に溶解または分散させた被膜剤液により被覆することにより徐放性製剤が製造される。

核の被膜剤液による被覆方法として、例えば噴霧コーティングする方法などが挙げられる。

被膜剤液中の水不溶性物質、膨潤性ポリマーまたは親水性物質の組成比は、被膜中の各成分の含有率がそれぞれ前記含有率となるように適宜選ばれる。

被膜剤の被覆量は、核（防護剤の被覆量を含まない）に対して約 1〜約 9 0 % (w/w) 、好ましくは約 5〜約 5 0 % (w/w) 、さらに好ましくは約 5〜 3 5 % (w/w) である。

被膜剤液の溶媒としては水または有機溶媒を単独であるいは両者の混液を用いることができる。混液を用いる際の水と有機溶媒との混合比（水/有機溶媒：重量比）は、 1〜 1 0 0 %の範囲で変化させることができ、好ましくは 1〜約 3 0 %である。該有機溶媒としては、水不溶性物質を溶解するものであれば特に限定されないが、例えばメチルアルコール、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、 n-ブチルアルコール等の低級アルコール、アセトンなどの低級アルカノン、ァセトニトリル、クロ口ホルム、メチレンクロライドなどが用いられる。このうち低級アルコールが好ましく、エチルアルコール、イソプロピルアルコールが特に好ましい。水及び水と有機溶媒との混液が被膜剤の溶媒として好ましく用いられる。この時、必要であれば被膜剤液中に被膜剤液安定化のために酒石酸、クェン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸などの酸を加えてもよい。

噴霧コーティングにより被覆する場合の操作は通常のコーティング法により実施することができ、具体的には、被膜剤液を例えば流動層コーティング法、パンコ一ティング法等により核にスプレーコーティングすることで実施することができる。この時必要であれば、タルク、酸化チタン、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、軽質無水ケィ酸などを滑沢剤として、グリセリン脂肪酸エステル、硬化ヒマシ油、クェン酸トリエチル、セチルアルコール、ステアリルアルコールなどを可塑剤として添加してもよい。

被膜剤による被膜後、必要に応じてタルクなどの帯電防止剤を混合してもよい。

速放性製剤は、液状（溶液、懸濁液、乳化物など）であっても固形状 (粒子状、丸剤、錠剤など）であってもよい。経口投与剤、注射剤など非経口投与剤が用いられるが、経口投与剤が好ましい。

速放性製剤は、通常、活性成分である薬物に加えて、製剤分野で慣用される担体、添加剤や賦形剤（以下、賦形剤と略称することがある）を含んでいてもよい。用いられる製剤賦形剤は、製剤賦形剤として常用される賦形剤であれば特に限定されない。例えば経口固形製剤用の賦形剤としては、乳糖、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロース（旭化成 (株）製、アビセル P H 1 0 1など）、粉糖、ダラ二ユウ糖、マンニトール、軽質無水ケィ酸、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、 L一システィンなどが挙げられ、好ましくはコーンスターチおよびマンニトールなどが挙げられる。これらの賦形剤は一種または二種以上を組み合わせて使用できる。賦形剤の含有量は速放性製剤全量に対して、例えば約 4 . 5〜約 9 9 . 4 w/w %、好ましくは約 2 0〜約 9 8 . 5 w/w %、さらに好ましくは約 3 0〜約 9 7 w/w %である。

速放性製剤における薬物の含量は、速放性製剤全量に対して、約 0 . 5〜約 9 5 %、好ましくは約 1〜約 6 0 %の範囲から適宜選択することができる。

速放性製剤が経口固型製剤の場合、通常上記成分に加えて、崩壊剤を含有する。このような崩壊剤としては、例えばカルボキシメチルセル口ースカルシウム（五徳薬品製、 E C G— 5 0 5 )、クロスカルメロースナトリウム（例えば、旭化成（株）製、ァクジゾル）、クロスポビドン (例えば、 B A S F社製、コリドン C L )、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（信越化学（株））、カルポキシメチルス夕一チ（松谷化学（株）、カルポキシメチルス夕一チナトリウム（木村産業製、エキスプロタブ）、部分 α化デンプン（旭化成（株）製、 P C S ) などが用い ■ られ、例えば水と接触して吸水、膨潤、あるいは核を構成している有効成分と賦形剤との間にチャネルを作るなどにより顆粒を崩壊させるものを用いることができる。これらの崩壊剤は、一種または二種以上を組み合わせて使用できる。崩壊剤の配合量は、用いる薬物の種類や配合量、放出性の製剤設計などにより適宜選択されるが、速放性製剤全量に対して、例えば約 0 . 0 5〜約 3 0 w /w %、好ましくは約 0 . 5〜約 1 5 w/w %である。

速放性製剤が経口固型製剤である場合、経口固型製剤の場合には上記の組成に加えて、所望により固型製剤において慣用の添加剤をさらに含んでいてもよい。このような添加剤としては、例えば結合剤（例えば、ショ糖、ゼラチン、アラビアゴム末、メチルセルロース、ヒドロキシプ口ピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルポキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、プルラン、デキストリンなど）、滑沢剤（例えば、ポリエチレングリコ一ル、ステアリン酸マグネシゥム、タルク、軽質無水ケィ酸（例えば、ァエロジル（日本ァエロジル））、界面活性剤（例えば、アルキル硫酸ナトリウムなどのァニオン系界面活性剤、ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびポリオキシェチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリォキシエチレンヒマシ油誘導体等の非イオン系界面活性剤など）、着色剤（例えば、タール系色素、力ラメル、ベンガラ、酸化チタン、リボフラビン類）、必要ならば、橋味剤（例えば、甘味剤、香料など）、吸着剤、防腐剤、湿潤剤、帯電防止剤などが用いられる。また、安定化剤として酒石酸、クェン酸、コハク酸、フマル酸などの有機酸を加えてもよい。

上記結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリエチレンダリコールおよびポリピニルピロリドンなどが好ましく用いられる。速放性製剤は、通常の製剤の製造技術に基づき、前記各成分を混合し、必要により、さらに練合し、成型することにより調製することができる。上記混合は、一般に用いられる方法、例えば、混合、練合などにより行われる。具体的には、例えば速放性製剤を粒子状に形成する場合、前記徐放性製剤の核の調製法と同様の手法により、バーチカルグラニュレーター、万能練合機（畑鉄工所製）、流動層造粒機 F D — 5 S (パゥレック社製）等を用いて混合しその後、湿式押し出し造粒法、流動層造粒法などにより造粒することにより調製することができる。

このようにして得られた速放性製剤と徐放性製剤とは、そのままあるいは適宜、製剤賦形剤等と共に常法により別々に製剤化後、同時あるいは任意の投与間隔を挟んで組み合わせて投与する製剤としてもよく、また両者をそのままあるいは適宜、製剤賦形剤等と共に一つの経口投与製剤（例、顆粒剤、細粒剤、錠剤、カプセル等）に製剤化してもよい。両製剤を顆粒あるいは細粒に製して、同一のカプセル等に充填して経口投与用製剤としてもよい。

〔3〕舌下錠、バッカルまたは口腔内速崩壊剤およびその調製

舌下錠、バッカル製剤、口腔内速崩壊剤は錠剤などの固形製剤であつてもよいし、口腔粘膜貼付錠（フィルム）であってもよい。

舌下錠、バッカルまたは口腔内速崩壊剤としては、本発明の化合物または併用薬物と賦形剤とを含有する製剤が好ましい。また、滑沢剤、等張化剤、親水性担体、水分散性ポリマ一、安定化剤などの補助剤を含有していてもよい。また、吸収を容易にし、生体内利用率を高めるために j3—シクロデキストリンまたは /3—シクロデキストリン誘導体（例、ヒドロキシプロピル一 /3—シクロデキストリンなど）などを含有していてもよい。

上記賦形剤としては、乳糖、白糖、 D—マンニトール、デンプン、結晶セルロース、軽質無水ゲイ酸などが挙げられる。滑沢剤としてはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、コロイドシリカなどが挙げられ、特に、ステアリン酸マグネシウムやコロイドシリ力が好ましい。等張化剤としては塩化ナトリウム、グルコース、フルク卜一ス、マンニトール、ソルビトール、ラクト一ス、サッカロース、グリセリン、尿素などが挙げられ、特にマンニトールが好ましい。親水性担体としては結晶セルロース、ェチルセルロース、架橋性ポリビニルピ口リドン、軽質無水珪酸、珪酸、リン酸二カルシウム、炭酸カルシウムなどの膨潤性親水性担体が挙げられ、特に結晶セルロース（例、微結晶セルロースなど）が好ましい。水分散性ポリマーとしてはガム（例、トラガカントガム、アカシアガム、グァ一ガム）、アルギン酸塩（例、ァルギン酸ナトリウム）、セルロース誘導体（例、メチルセルロース、力ルポキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、ゼラチン、水溶性デンプン、ポリアクリル酸（例、力一ポマー）、ポリメ夕クリル酸、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリ力一ボフィル、ァスコルビン酸パルミチン酸塩などが挙げられ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリアクリル酸、ァルギン酸塩、ゼラチン、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールなどが好ましい。特にヒドロキシプロピルメチルセルロースが好ましい。安定化剤としては、システィン、チォソルビトール、酒石酸、クェン酸、炭酸ナトリウム、ァスコルビン酸、グリシン、亜硫酸ナトリウムなどが挙げられ、特に、クェン酸ゃァスコルビン酸が好ましい。

舌下錠、バッカルまたは口腔内速崩壊剤は、本発明の化合物または併用薬物と賦形剤とを自体公知の方法により混合することにより製造することができる。さらに、所望により上記した滑沢剤、等張化剤、親水性担体、水分散性ポリマー、安定化剤、着色剤、甘味剤、防腐剤などの補助剤を混合してもよい。上記成分を同時に若しくは時間差をおいて混合した後、加圧打錠成形することにより舌下錠、バッカル錠または口腔内速崩壊錠が得られる。適度な硬度を得るため、打錠成形の過程の前後において必要に応じ水やアルコールなどの溶媒を用いて加湿'湿潤させ、成形後、乾燥させて製造してもよい。粘膜貼付錠（フィルム）に成型する場合は、本発明の化合物または併用薬物および上記した水分散性ポリマ一（好ましくは、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、賦形剤などを水などの溶媒に溶解させ、得られる溶液を流延させて（c a s t )フィルムとする。さらに、可塑剤、安定剤、酸化防止剤、保存剤、着色剤、緩衝剤、甘味剤などの添加物を加えてもよい。フィルムに適度の弾性を与えるためポリエチレングリコールやプロピレンダリコールなどのダリコ一ル類を含有させたり、口腔の粘膜ライニングへのフィルムの接着を高めるため生物接着性ポリマ一（例、ポリカルボフィル、力ルポポール）を含有させてもよい。流延は、非接着性表面に溶液を注ぎ、ドク夕一ブレ一ドなどの塗布用具で均一な厚さ（好ましくは 1 0〜 1 0 0 0ミクロン程度）にそれを広げ、次いで溶液を乾燥してフィルムを形成することにより達成される。このように形成されたフィルムは室温若しくは加温下乾燥させ、所望の表面積に切新すればよい。

好ましい口腔内速崩壊剤としては、本発明の化合物または併用薬物と、本発明の化合物または併用薬物とは不活性である水溶性若しくは水拡散性キヤリヤーとの網状体からなる固体状の急速拡散投与剤が挙げられる。該網状体は、本発明の化合物または併用薬物を適当な溶媒に溶解した溶液とから構成されている固体状の該組成物から溶媒を昇華することによって得られる。

該口腔内速崩壊剤の組成物中には、本発明の化合物または併用薬物に加えて、マトリックス形成剤と二次成分とを含んでいるのが好ましい。該マトリックス形成剤としてはゼラチン類、デキストリン類ならびに大豆、小麦ならびにォォバコ（psyl l ium)種子夕ンパクなどの動物性夕ンパク類若しくは植物性タンパク類；アラビアゴム、ガーガム、寒天ならびにキサンタンなどのゴム質物質；多糖類；アルギン酸類；カルポキシメチルセルロース類；力ラゲナン類；デキストラン類；ぺクチン類；ポリビニルピロリドンなどの合成ポリマ一類；ゼラチン—アラビアゴムコンプレックスなどから誘導される物質が含まれる。さらに、マンニト一ル、デキストロース、ラクトース、ガラクト一スならびにトレハロースなどの糖類；シクロデキストリンなどの環状糖類；リン酸ナトリゥム、塩化ナトリゥムならびにケィ酸アルミニウムなどの無機塩類；ダリシン、 L—ァラニン、 Lーァスパラギン酸、 L—グルタミン酸、 Lーヒドロシキプロリン、 L一イソロイシン、 L—ロイシンならびに L一フエニルァラニンなどの炭素原子数が 2から 1 2までのアミノ酸などが含まれるマトリックス形成剤は、その 1種若しくはそれ以上を、固形化の前に、溶液または懸濁液中に導入することができる。かかるマトリックス形成剤は、界面活性剤に加えて存在していてもよく、また界面活性剤が排除されて存在していてもよい。マトリックス形成剤はそのマトリックスを形成することに加えて、本発明の化合物または併用薬物の拡散状態をその溶液または懸濁液中に維持する助けをすることができる。

保存剤、酸化防止剤、界面活性剤、増粘剤、着色剤、 P H調整剤、香味料、甘味料若しくは食味マスキング剤などの二次成分を組成物中に含有していてよい。適当な着色剤としては、赤色、黒色ならびに黄色酸化鉄類およびエリス ·アンド 'エベラールド社の F D & Cブル一 2号ならびに F D & Cレッド 4 0号などの F D & C染料が挙げられる。適当な香味料には、ミント、ラスべリー、甘草、オレンジ、レモン、グレープフルーッ、カラメル、バニラ、チェリーならびにグレープフレーバーおよびその組合せたものが含まれる。適当な p H調整剤は、クェン酸、酒石酸、リン酸、塩酸およびマレイン酸が含まれる。適当な甘味料としてはァスパルテーム、アセスルフエーム Kならびにタウマチンなどが含まれる。適当な食味マスキング剤としては、重炭酸ナトリウム、イオン交換樹脂、シクロデキストリン包接化合物、吸着質物質ならびにマイクロカブセル化アポモルフィンが含まれる。

製剤には通常約 0 . 1〜約 5 0重量％、好ましくは約 0 . 1〜約 3 0 重量％の本発明の化合物または併用薬物を含み、約 1分〜約 6 0分の間、好ましくは約 1分〜約 1 5分の間、より好ましくは約 2分〜約 5分の間に（水に）本発明の化合物または併用薬物の 9 0 %以上を溶解させることが可能な製剤（上記、舌下錠、バッカルなど）や、口腔内に入れられて 1〜 6 0秒以内に、好ましくは 1〜 3 0秒以内に、さらに好ましくは 1 ~ 1 0秒以内に崩壊する口腔内速崩壊剤が好ましい。

上記賦形剤の製剤全体に対する含有量は、約 1 0〜約 9 9重量％、好ましくは約 3 0〜約 9 0重量％である。 β—シクロデキストリンまたはーシクロデキス卜リン誘導体の製剤全体に対する含有量は 0〜約 3 0 重量％である。滑沢剤の製剤全体に対する含有量は、約 0. 0 1〜約 1 0重量％、好ましくは約 1〜約 5重量％である。等張化剤の製剤全体に対する含有量は、約 0. 1〜約 9 0重量％、好ましくは、約 1 0〜約 7 0重量％である。親水性担体の製剤全体に対する含有量は約 0. 1〜約 5 0重量％、好ましくは約 1 0〜約 3 0重量％である。水分散性ポリマ —の製剤全体に対する含有量は、約 0. 1〜約 3 0重量％、好ましくは約 1 0〜約 2 5重量％である。安定化剤の製剤全体に対する含有量は約 0. 1〜約 1 0重量％、好ましくは約 1〜約 5重量％である。上記製剤はさらに、着色剤、甘味剤、防腐剤などの添加剤を必要に応じ含有していてもよい。

本発明の併用剤の投与量は、本発明の化合物の種類、年齢、体重、症状、剤形、投与方法、投与期間などにより異なる。

本発明の化合物の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に、癌患者（体重 6 0 k gとして）に対して、一日につき約 0. 1〜； L 0 Omg、好ましくは約 1. 0〜 5 0 mg、より好ましくは約 1. 0〜 2 0mgである。非経口的に投与する場合は、その 1回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常、癌患者（体重 6 0 k gとして）に対して、一日につき約 0. 0 1〜 3 0mg 程度、好ましくは約 0. l〜 2 0 mg程度、より好ましくは約 0. 1〜 1 O mg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。もちろん、前記したように投与量は種々の条件で変動するので、前記投与量より少ない量で十分な場合もあり、また範囲を超えて投与する必要のある場合もある。

併用薬物は、副作用が問題とならない範囲でどのような量を設定することも可能である。併用薬物としての一日投与量は、症状の程度、投与対象の年齢、性別、体重、感受性差、投与の時期、間隔、医薬製剤の性質、調剤、種類、有効成分の種類などによって異なり、特に限定されないが、薬物の量として通常、たとえば経口投与で哺乳動物 1 k g体重あたり約 0. 00 1〜2 0 0 0mg、好ましくは約 0. 0 1〜 500mg、さらに好ましくは、約 0. 1〜 1 0 0mg程度であり、これを通常 1 日 1〜4回に分けて投与する。

本発明の医薬を投与するに際しては、同時期に投与してもよいが、併用薬物を先に投与した後、本発明の化合物を投与してもよいし、本発明の化合物を先に投与し、その後で併用薬物を投与してもよい。時間差をおいて投与する場合、時間差は投与する有効成分、剤形、投与方法により異なるが、例えば、併用薬物を先に投与する場合、併用薬物を投与した後 1分〜 3日以内、好ましくは 1 0分〜 1日以内、より好ましくは 1 5分〜 1時間以内に本発明の化合物を投与する方法が挙げられる。本発明の化合物を先に投与する場合、本発明の化合物を投与した後、 1分〜 1日以内、好ましくは 1 0分〜 6時間以内、より好ましくは 1 5分から 1時間以内に併用薬物を投与する方法が挙げられる。

好ましい投与方法としては、例えば、経口投与製剤に製形された併用薬物約 0. 0 0 1〜 2 0 0mg/k gを経口投与し、約 1 5分後に非経口投与製剤に製形された本発明の化合物約 0. 0 0 5〜0. SmgZk gを 1日量として非経口投与する。

メタスチンとしては、例えば WO 0 0/248 9 0号に記載のヒトメタスチン、 WO 0 1/ 7 5 1 04号に記載のマウスまたはラットメタスチンなどが用いられる。

ヒトメタスチンとしては、具体的には、配列番号： 1で表されるアミノ酸配列において、 N末端から第 47〜 54番目のアミノ酸配列を含有し、 8乃至 54個のアミノ酸残基からなるぺプチドなどがあげられる。

「配列番号： 1で表されるアミノ酸配列において、 N末端から第 47 〜 54番目のァミノ酸配列を含有し、 8乃至 54個のアミノ酸残基からなるペプチド」としては、配列番号： 1で表されるアミノ酸配列において、 N末端から第 47〜54番目のアミノ酸配列を含有し、かつ 8乃至 54個のアミノ酸残基からなるぺプチドであればいかなるものであってもよいが、生理活性（例えば、'受容体結合活性、シグナル情報伝達作用、血糖上昇作用、膦グルカゴン分泌促進作用、尿生成促進作用など）が実質的に同じであることを意味する。具体的には、（ i ) 配列番号： 1 で表されるアミノ酸配列で表されるペプチド、（ i i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列において、 N末端から第 47〜 54番目のァミノ酸配列を C末端に有し、 8乃至 1 5個のアミノ酸残基からなるペプチドなどが用いられる。

より具体的には、ヒトメタスチンとしては、（ i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列からなるペプチド (ヒトメタスチン 54 ( 1 - 54 ) ) 、 ( i i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列の N末端から第 4 0〜 54番目のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトメタスチン 1 5 ( 40 - 54 ) ；配列番号： 1 5) 、 ( i i i ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列の N末端から第 45〜 54番目のアミノ酸配列からなるぺプチド（ヒトメタスチン 1 0 (45— 54) ；配列番号： 1 6) 、 ( i V ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列の N末端から第 46〜 54番目のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトメタスチン 9 (46 - 54 ) ；配列番号： 1 7) 、（V ) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列の N 末端から第 47〜 54番目のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトメ夕スチン 8 ( 47 - 54) ；配列番号： 1 8) などが用いられる。

マウスメタスチン（A) としては、例えば、（ i ) 配列番号： 3で表されるァミノ酸配列の N末端から第 1 34〜 1 41番目のアミノ酸配列を含有し、 8ないし 5 2個のアミノ酸残基からなるぺプチドなどが用いられ、具体的には、（ i ) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列の N末端から第 9 0〜 1 4 1番目のァミノ酸配列からなるぺプチド、（ i i ) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列の N末端から第 1 3 2〜 1 4 1番目のアミノ酸配列からなるぺプチド、（ i i i ) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列の N末端から第 1 2 7〜 1 4 1番目のアミノ酸配列からなるペプチドなどが用いられる。

マウスメタスチン（B) としては、例えば、配列番号： 5で表されるアミノ酸配列の N末端から第 1 3 8〜 1 4 5番目のアミノ酸配列を含有し、 8ないし 5 2個のアミノ酸残基からなるぺプチドなどが用いられ、具体的には、配列番号： 5で表されるアミノ酸配列の N末端から第 9 4 〜 1 4 5番目のァミノ酸配列からなるぺプチドなどが用いられる。

ラットメタスチンとしては、例えば、配列番号： 7で表されるァミノ酸配列の N末端から第 1 1 2〜 1 1 9番目のアミノ酸配列を含有し、 8 ないし 5 2個のアミノ酸残基からなるぺプチドなどが用いられ、具体的には、（ i ) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列の N末端から第 6 8 〜 1 1 9番目のァミノ酸配列からなるペプチド、（ i i ) 配列番号： 7 で表されるアミノ酸配列の N末端から第 1 1 0〜 1 1 9番目のアミノ酸配列からなるペプチド、（ i i i ) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列の N末端から第 1 0 5 ~ 1 1 9番目のアミノ酸配列からなるぺプチドなどが用いられる。

本明細書におけるメタスチンはべプチド標記の慣例に従って左端が N 末端（ァミノ末端）、右端が C末端（力ルポキシル末端）である。配列番号： 1で表されるペプチドの C末端は、カルボキシル基（一 C OOH ) 、カルポキシレート（一 C OO―)、アミド（一 C〇NH₂) またはェステル（― COOR) の何れであってもよい。エステルまたはアルキルアミドの Rとしては、例えばメチル、ェチル、 n—プロピル、イソプロピルもしくは n—ブチルなどの Cェ— ₆アルキル基、シクロペンチル、シクロへキシルなどの C ₃— ₈シクロアルキル基、フエニル、 —ナフチルなどの C ₆— ₂ァリール基、ベンジル、フエネチル、ベンズヒドリルなどのフエ二ルー — ₂アルキル、もしくは a—ナフチルメチルなどの α 一ナフチル— Cェ— ₂アルキルなどの C ₇— ₄ァラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるビバロイルォキシメチル基などがあげられる。

さらに、メタスチンには、 Ν末端のメチォニン残基のァミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、ァセチルなどの C ₂— ₆アルカノィル基などの (：丄— ₆ァシル基など）で保護されているもの、 N端側が生体内で切断され生成したダルタミル基がピロダルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば、 — OH、一 S H、 — C OOH、ァミノ基、イミダゾール基、インドール基、グァニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、ァセチルなどの C ₂— ₆アルカノィル基などの — ₆ァシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。

本発明のメタスチンの塩としては、生理学的に許容される塩基（例えばアルカリ金属など）や酸（有機酸、無機酸）との塩が用いられるが、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては例えば無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、シユウ酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられるメタスチンをコードする DNAとしては、例えば WO 0 0 / 2 4 8 9 0号に記載のヒトメタスチンをコードする DNA、 WO 0 1 / 7 5 1 0 4号に記載のマウスまたはラットメタスチンをコードする D N Aなどが用いられる。

メタスチンをコードする DNAとしては、ゲノム DNA、ゲノム DN Aライブラリー、前記した細胞 ·組織由来の c DNA、前記した細胞 - 組織由来の c D N Aライプラリー、合成 DNAのいずれでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前記した細胞

•組織より total RNAまたは mRNA画分を調製したものを用いて直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain React ion (以下、 RT-P CR法と略称する）によって増幅することもできる。

ヒトメタスチン、マウスメタスチン前駆体（A) 、マウスメタスチン前駆体（B) またはラットメタスチン前駆体をコードする DNAとしては、それぞれ配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6または配列番号： 8で表わされる塩基配列を含有する DNA、または配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6または配列番号： 8で表わされる塩基配列とハイストリンジェン卜な条件下でハイプリダイズする塩基配列を有し、前記したヒトメタスチン、マウスメタスチン (A) 、マウスメタスチン（B) またはラットメタスチンをコードする DN Aを含有する DNA であれば何れのものでもよい。

配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6または配列番号： 8で表わされる塩基配列とハイブリダィズできる DNAとしては、例えば、配列番号： 2、配列番号： 4、配列番号： 6または配列番号： 8で表わされる塩基配列と約 7 0 %以上、好ましくは約 80 %以上、より好ましくは約 9 0 %以上、最も好ましくは約 9 5 %以上の相同性を有する塩基配列を含有する D N Aなどが用いられる。

塩基配列の相同性は、相同性計算アルゴリズム N C B I BLAS T (N a t i o n a l C e n t e r f o r B i o t e c h n o l o g y I n f o rma t i o n B a s i c L o c a l A l i g n me n t S e a r c h T o o l ) を用い、以下の条件（期待値 = 1 0 ；ギャップを許す；フィルタリング =ON；マッチスコア = 1 ；ミスマッチスコア =_ 3) にて計算することができる。

ハイブリダィゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキユラ一 · クローニング（Molecular Cloning) 2nd (J. Sambrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。

該ハイストリンジェン卜な条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約 1 9〜 4 0 mM、好ましくは約 1 9〜 2 0 mMで、温度が約 5 0〜 7 0 °C 、好ましくは約 6 0〜 6 5 °Cの条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約 1 9 mMで温度が約 6 5 °Cの場合が最も好ましい。

具体的には、配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列からなるヒトメタスチンをコードする DNAとしては、配列番号： 2で表わされる塩基配列からなる DNAが用いられる。したがって、前述した各種アミノ酸配列からなるヒトメタスチンをコ一ドする塩基配列としては、配列番号： 1のアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列に対応する塩基配列を配列番号： 2で表わされる塩基配列から選択すればよい。

配列番号： 3で表わされるアミノ酸配列を含有するマウスメタスチン前駆体（A) をコードする DNAとしては、配列番号： 4で表わされる塩基配列からなる DNAが用いられる。したがって、前述した各種アミノ酸配列からなるマウスメタスチン（A) をコードする塩基配列としては、配列番号： 3のアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列に対応する塩基配列を配列番号： 4で表わされる塩基配列から選択すればよい。

配列番号： 5で表わされるアミノ酸配列からなるマウスメタスチン前駆体（B) をコードする DNAとしては、配列番号： 6で表わされる塩基配列からなる DN Aが用いられる。したがって、前述した各種アミノ酸配列からなるマウスメタスチン（B) をコードする塩基配列としては、配列番号： 5のアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列に対応する塩基配列を配列番号： 6で表わされる塩基配列から選択すればよい。

配列番号： 7で表わされるアミノ酸配列からなるラッ卜メタスチン前駆体をコードする DNAとしては、配列番号： 8で表わされる塩基配列からなる DNAが用いられる。したがって、前述した各種アミノ酸配列からなるラットメタスチンをコ一ドする塩基配列としては、配列番号： 7のアミノ酸配列中の部分アミノ酸配列に対応する塩基配列を配列番号： 8で表わされる塩基配列から選択すればよい。

より具体的には、配列番号： 1で表されるアミノ酸配列からなるぺプチド（ヒトメタスチン 5 4 ( 1 - 5 4 ) ) をコードする DNAとしては、例えば、配列番号： 2で表わされる塩基配列を含有する DNAなどが用いられる。

配列番号： 1で表されるアミノ酸配列の N末端から第 4 0 ~ 5 4番目のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトメタスチン 1 5 ( 4 0 - 5 4) ；配列番号： 1 5 ) をコードする DNAとしては、例えば、配列番号： 1 9で表わされる塩基配列を含有する DNAなどが用いられる。

配列番号： 1で表されるアミノ酸配列の N末端から第 4 5〜 5 4番目のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトメタスチン 1 0 (4 5— 5 4) ；配列番号： 1 6 ) をコードする DN Aとしては、例えば、配列番号： 2 0で表わされる塩基配列を含有する DN Aなどが用いられる。

配列番号： 1で表されるアミノ酸配列の N末端から第 4 6〜 5 4番目のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトメタスチン 9 ( 4 6 - 5 4 ) ；配列番号： 1 7 ) をコードする DN Aとしては、例えば、配列番号： 2 1で表わされる塩基配列を含有する DN Aなどが用いられる。

配列番号： 1で表されるアミノ酸配列の N末端から第 4 7〜 5 4番目のアミノ酸配列からなるペプチド（ヒトメタスチン 8 ( 4 7 - 5 4 ) ；配列番号： 1 8 ) をコードする DNAとしては、例えば、配列番号： 2 2で表わされる塩基配列を含有する DN Aなどが用いられる。

メタスチン受容体、その部分ペプチドまたはその塩としては、例えば WO 0 0 / 24 8 9 0号に記載のヒトメタスチン受容体、その部分ぺプチドまたはその塩、 WO 0 1 / 7 5 1 0 4号に記載のマウスまたはラットメタスチン受容体、その部分べプチドまたはその塩などが用いられる具体的には、メタスチン受容体としては、配列番号： 9、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質などが用いられる。

配列番号： 9、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3で表わされるァミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号： 9、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列と約 7 0 %以上、好ましくは約 8 0 %以上、さらに好ましくは約 9 0 % 以上、最も好ましくは約 9 5 %以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。

アミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズム N C B I B LA S T (N a t i o n a l C e n t e r f o r B i o t e c h n o l o g y I n f o r ma t i o n B a s i c L o c a l A 1 i g nme n t S e a r c h T o o l ) を用い、以下の条件（期待値 = 1 0 ；ギヤップを許す；マトリクス = B L O S UM 6 2 ；フィルタリング =O F F) にて計算することができる。

配列番号： 9、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3で表わされるァミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質としては、例えば、配列番号： 9、配列番号： 1 1 または配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号： 9 、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列からなるタンパク質と実質的に同質の活性を有する蛋白質などが好ましい。実質的に同質の活性としては、例えば、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用などが挙げられる。実質的に同質とは、それらの活性が性質的に同質であることを示す。したがって、リガンド結合活性やシグナル情報伝達作用などの活性が同等（例、約 0. 0 1〜 1 0 0倍、好ましくは約 0. 5〜 2 0倍、より好ましくは約 0. 5〜 2倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度や蛋白質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。

リガンド結合活性やシグナル情報伝達作用などの活性の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことができるが、例えば、 WO 00Z24 8 9 0号や WO 0 1 / 7 5 1 04号に記載のリガンドの決定方法ゃスクリ一二ング方法に従って測定することができる。

また、メタスチン受容体としては、（ i ) 配列番号： 9、配列番号：

1 1 または配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列中の 1.または 2個以上（好ましくは、 1〜 3 0個程度、より好ましくは 1〜 1 0個程度、さらに好ましくは数個（ 1または 2個））のアミノ酸が欠失したァミノ酸配列、（ i i ) 配列番号： 9、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3 で表わされるアミノ酸配列に 1または 2個以上（好ましくは、 1〜 3 0 個程度、より好ましくは 1〜 1 0個程度、さらに好ましくは数個（ 1または 2個））のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、（ i i i ) 配列番号

： 9、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列中の 1または 2個以上（好ましくは、 1〜 3 0個程度、より好ましくは

：!〜 1 0個程度、さらに好ましくは数個（ 1または 2個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または（ i v) それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有する蛋白質なども用いられる。

本明細書におけるメタスチン受容体は、ぺプチド標記の慣例に従って左端が N末端（ァミノ末端）、右端が C末端（カルボキシル末端）である。配列番号： 9、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列を含有するメタスチン受容体をはじめとするメタスチン受容体の C末端は、力ルポキシル基（一 C O OH) 、カルボキシレート

(— C O O―)、アミド（一 C ONH₂) またはエステル（一 C O O R) の何れであってもよい。ここでエステルにおける Rとしては、例えば、メチル、ェチル、 n—プロピル、イソプロピルもしくは n—ブチルなどの — ₆アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロへキシルなどの C ₃— ₈シクロアルキル基、例えば、フエニル、 —ナフチルなどの C ₆

- 1 2ァリール基、例えば、ベンジル、フエネチルなどのフエ二ルー C — ₂アルキル基もしくは Q! —ナフチルメチルなどの α—ナフチルー ₂アルキル基などの C ₇_ ₄ァラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロィルォキシメチル基などが用いられる。 .

メタスチン受容体が C末端以外に力ルポキシル基（またはカルポキシレ一ト）を有している場合、力ルポキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明のレセプター蛋白質に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記した C末端のエステルなどが用いられる, さらに、メタスチン受容体には、上記した蛋白質において、 N末端のメチォニン残基のァミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、ァセチルなどの C ₂ _ ₆アルカノィル基などの C i _ ₆ァシル基など）で保護されているもの、 N端側が生体内で切断され生成したダルタミル基がピロダル夕ミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば、 _ 0 H、 — S H、一 C O O H、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グァニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、ァセチルなどの C ₂ _ ₆アルカノィル基などの C ァシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。

メタスチン受容体の具体例としては、例えば、配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列からなるヒトメタスチン受容体、配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列からなるラットメタスチン受容体、配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列からなるマウスメタスチン受容体などが用いられる。

メタスチン受容体の部分ペプチド（以下、部分ペプチドと略記する場合がある）としては、前記したメタスチン受容体の部分ペプチドであれば何れのものであってもよいが、例えば、メタスチン受容体のタンパク質分子のうち、細胞膜の外に露出している部位であって、リガンド結合活性を有するものなどが用いられる。

具体的には、配列番号： 9、配列番号： 1 1または配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列からなるメタスチン受容体の部分べプチドとしては、疎水性プロット解析において細胞外領域（親水性（Hydrophi l ic ) 部位）であると分析された部分を含むペプチドである。また、疎水性 (Hydrophob ic) 部位を一部に含むぺプチドも同様に用いることができる。個々のドメインを個別に含むペプチドも用い得るが、複数のドメインを同時に含む部分のぺプチドでも良い。 .

部分べプチドのアミノ酸の数は、前記したメタスチン受容体の構成ァミノ酸配列のうち少なくとも 2 0個以上、好ましくは 5 0個以上、より好ましくは 1 0 0個以上のァミノ酸配列を有するぺプチドなどが好ましい。

また、部分ペプチドは、上記アミノ酸配列中の 1または 2個以上（好ましくは、 1〜 1 0個程度、さらに好ましくは数個（ 1または 2個））のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に 1または 2個以上（好ましくは、 1〜 2 0個程度、より好ましくは 1〜 1 0個程度、さらに好ましくは数個（ 1または 2個））のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列中の 1または 2個以上（好ましくは、 1〜 1 0個程度、より好ましくは数個（ 1 または 2個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。

また、部分ペプチドは前記したメタスチン受容体のごとく、 C末端がカルボキシル基（一 C OOH) 、カルボキシレート (_ C OO ) 、ァミド（一 C ONH₂) またはエステル（一 C OO R) の何れであってもよい。

さらに、部分ペプチドには、前記したメタスチン受容体と同様に、 N 末端のメチォニン残基のアミノ基が保護基で保護されているもの、 N端側が生体内で切断され生成した G 1 nがピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖べプチドなどの複合べプチドなども含まれる。

メタスチン受容体またはその部分べプチドの塩としては、生理学的に許容される塩基もしくは酸との塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。

メタスチン受容体またはその部分べプチドをコードする DNAとしては、例えば W 00 0 / 24 8 9 0号に記載のヒトメタスチン受容体またはその部分ペプチドをコードする DNA、 WO 0 1 / 7 5 1 0 4号に記載のマウスまたはラットメタスチン受容体またはその部分ペプチドをコードする D N Aなどが用いられる。

メタスチン受容体またはその部分べプチドをコードする DNAとしては、ゲノム DNA、ゲノム DNAライブラリー、前記した細胞 ·組織由来の c DNA、前記した細胞 ·組織由来の c DNAライブラ ύ一、合成 DNAのいずれでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、パクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいずれであつてもよい。また、前記した細胞 · 組織より totalRNAまたは mRNA 画分を調製したものを用いて直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (以下、 R T - P C R法と略称する）によって増幅することもできる。

具体的には、ヒトメタスチン受容体、マウスメタスチン受容体またはラットメタスチン受容体をコードする DNAとしては、それぞれ配列番号： 1 0、配列番号： 1 2または配列番号： 1 4で表わされる塩基配列を含有する DNA、または配列番号： 1 0、配列番号： 1 2または配列番号： 1 4で表わされる塩基配列とハイストリンジェン卜な条件下でハイブリダィズする塩基配列を含有し、配列番号： 1 0、配列番号： 1 2 または配列番号： 1 4で表わされるアミノ酸配列からなるヒトメタスチン受容体、マウスメタスチン受容体またはラッ卜メタスチン受容体と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用など ) を有する受容体をコードする D N Aであれば何れのものでもよい。配列番号： 1 0、配列番号： 1 2または配列番号： 1 4で表わされる塩基配列とハイブリダィズできる DNAとしては、例えば、 1 0、配列番号： 1 2または配列番号： 1 4で表わされる塩基配列と約 7 0 %以上、好ましくは約 8 0 %以上、より好ましくは約 9 0 %以上、最も好ましくは約 9 5 %以上の相同性を有する塩基配列を含有する DNAなどが用いられる。

塩基配列の相同性は、相同性計算アルゴリズム NC B I B LA S T (N a t i o n a l C e n t e r f o r B i o t e c h n o l o g y I n f o r m a t i o n B a s i c L o c a l A l i g n m e n t S e a r c h T o o l ) を用い、以下の条件（期待値 = 1 0 ；ギャップを許す；フィルタリング =ON ; マッチスコア = 1 ；ミスマッチスコア =ー 3 ) にて計算することができる。

ハイプリダイゼ一ションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー ' クロ一ニング（Molecular Cloning) 2 nd ( J. Sambrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。

該ハイストリンジェン卜な条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約 1 9〜 40 mM、好ましくは約 1 9〜 2 '0 mMで、温度が約 5 0〜 7 0 °C 、好ましくは約 6 0〜 6 5 °Cの条件を示す。特に、ナトリゥム濃度が約 1 9 mMで温度が約 6 5 °Cの場合が最も好ましい。

より具体的には、配列番号： 9で表わされるアミノ酸配列からなるヒトメタスチン受容体をコードする DN Aとしては、配列番号： 1 0で表わされる塩基配列からなる D N Aが用いられる。

配列番号： 1 1で表わされるアミノ酸配列を含有するラットメタスチン受容体をコードする DNAとしては、配列番号： 1 2で表わされる塩基配列からなる DN Aが用いられる。

配列番号： 1 3で表わされるアミノ酸配列からなるマウスメタスチン受容体をコードする DNAとしては、配列番号： 1 4で表わされる塩基配列からなる D N Aが用いられる。

メタスチン受容体、その部分ペプチドまたはその塩、およびメタスチン受容体またはその部分べプチドをコ一ドする D NAは、 WO 0 0 Z 2 4 8 9 0号または W〇 0 1 / 7 5 1 0 4号に記載されている方法で取得 •製造することができる。

ヒトメタスチンまたはその塩、またはヒトメタスチン受容体、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、 W〇 0 0 / 2 4 8 9 0号に記載のものを使用することができる。

マウスまたはラットメタスチンまたはその塩、またはマウスまたはラットメタスチン受容体、その部分べプチドまたはその塩に対する抗体は、 WO 0 1 / 7 5 1 04号に記載のものを使用することができる。

メタスチンまたはメタスチン受容体をコ一ドする DNAに対するアンチセンス · ポリヌクレオリドは、メタスチンまたはメタスチン受容体をコ一ドする DN Aの塩基配列の一部、または該 DN Aと相補的な塩基配列の一部を含有するポリヌクレオチドであり、メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DNAを包含するだけではなく、 R N Aをも包含する意味で用いられる。

メタスチン遺伝子またはメタスチン受容体遺伝子の複製または発現を阻害することのできるアンチセンス · ポリヌクレオチド（核酸）を、クローン化した、あるいは決定されたメタスチンをコードする DNAの塩基配列情報に基づき設計し、合成しうる。そうしたポリヌクレオチド（核酸）は、メタスチン遺伝子またはメタスチン受容体遺伝子の RNAとハイプリダイズすることができ、該 RNAの合成または機能を阻害することができるか、あるいはメタスチン関連 RNAまたはメタスチン受容体関連 RN Aとの相互作用を介してメタスチン遺伝子またはメタスチン受容体遺伝子の発現を調節 · 制御することができる。

メタスチン関連 RNAまたはメタスチン受容体関連 RNAの選択された配列に相補的なポリヌクレオチド、およびメタスチン関連 RN Aまたはメタスチン受容体関連 RN Aと特異的にハイプリダイズすることができるポリヌクレオチドは、生体内および生体外でメタスチン遺伝子またはメタスチン受容体遺伝子の発現を調節 ·制御するのに有用であり、また病気などの治療または診断に有用である。用語「対応する」とは、遺伝子を含めたヌクレオチド、塩基配列または核酸の特定の配列に相同性を有するあるいは相補的であることを意味する。ヌクレオチド、塩基配列または核酸とペプチド（蛋白質）との間で「対応する」とは、ヌクレォチド（核酸）の配列またはその相補体から誘導される指令にあるぺプチド（蛋白質）のアミノ酸を通常指している。

メタスチン遺伝子またはメタスチン受容体遺伝子の 5 '端ヘアピンル —プ、 5 '端 6—べ一スペア · リピート、 5 '端非翻訳領域、ペプチド翻訳開始コドン、蛋白質コード領域、 O R F翻訳終止コドン、 3 '端非翻訳領域、 3 '端パリンドローム領域、および 3 '端ヘアピンループは好ましい対象領域として選択しうるが、メタスチン遺伝子内またはメタスチン受容体遺伝子内の如何なる領域も対象として選択しうる。

目的核酸と、対象領域の少なくとも一部に相補的でハイブリダィズすることができるポリヌクレオチドとの関係は、対象物と「アンチセンス」であるということができる。アンチセンス · ポリヌクレオチドは、 2 ーデォキシー D —リボースを含有しているポリデォキシリボヌクレオチド、 D —リポースを含有しているポリリポヌクレオチド、プリンまたはピリミジン塩基の N—グリコシドであるその他のタイプのポリヌクレオチド、あるいは非ヌクレオチド骨格を有するその他のポリマー（例えば、市販の蛋白質核酸および合成配列特異的な核酸ポリマー）または特殊な結合を含有するその他のポリマー（但し、該ポリマーは D N Aや R N A中に見出されるような塩基のペアリングゃ塩基の付着を許容する配置をもつヌクレオチドを含有する）などが挙げられる。それらは、 2本鎖 D N A、 1本鎖 D N A、 2本鎖 R N A、 1本鎖 R N A、さらに D N A : R N Aハイブリッドであることができ、さらに非修飾ポリヌクレオチド (または非修飾オリゴヌクレオチド）、さらには公知の修飾の付加されたもの、例えば当該分野で知られた標識のあるもの、キャップの付いたもの、メチル化されたもの、 1個以上の天然のヌクレオチドを類縁物で置換したもの、分子内ヌクレオチド修飾のされたもの、例えば非荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、力ルバメートなど）を持つもの、電荷を有する結合または硫黄含有結合（例えば、ホスホ Dチォェ一ト、ホスホロジチォエートなど）を持つもの、例えば蛋白質（ヌクレア一ゼ、ヌクレアーゼ ·インヒビ夕 ―、トキシン、抗体、シグナルペプチド、ポリ— L—リジンなど）や糖 (例えば、モノサッカライドなど）などの側鎖基を有しているもの、ィン夕一カレント化合物（例えば、ァクリジン、プソラレンなど）を持つもの、キレー卜化合物（例えば、金属、放射活性をもつ金属、ホウ素、酸化性の金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾された結合を持つもの（例えば、 αァノマー型の核酸など）であってもよい。ここで「ヌクレオシド」、「ヌクレオチド」および「核酸」とは、プリンおよびピリミジン塩基を含有するのみでなく、修飾されたその他の複素環型塩基をもつようなものを含んでいて良い。こうした修飾物は、メチル化されたプリンおよびピリミジン、アシル化されたプリンおよびピリミジン、あるいはその他の複素環を含むものであってよい。修飾されたヌクレオチドおよび修飾されたヌクレオチドはまた糖部分が修飾されていてよく、例えば、 1個以上の水酸基がハロゲンとか、脂肪族基などで置換されていたり、あるいはェ一テル、ァミンなどの官能基に変換されていてよい。

アンチセンス ·ポリヌクレオチド（核酸）は、 R N A、 D N A、あるいは修飾された核酸（R N A、 D N A ) である。修飾された核酸の具体例としては核酸の硫黄誘導体ゃチォホスフエ一卜誘導体、そしてポリヌクレオシドアミドゃオリゴヌクレオシドアミドの分解に抵抗性のものが挙げられるが、それに限定されるものではない。本発明のアンチセンス核酸は次のような方針で好ましく設計されうる。すなわち、細胞内でのアンチセンス核酸をより安定なものにする、アンチセンス核酸の細胞透過性をより高める、目標とするセンス鎖に対する親和性をより大きなものにする、そしてもし毒性があるならアンチセンス核酸の毒性をより小さなものにする。こうして修飾は当該分野で数多く知られており、例えば J. Kawakami et al. , Pharm Tech Japan, Vol. 8, pp.247, 1992; Vol. 8, pp.395, 1992 ; S. T. Crooke et al. ed. , Ani i sense Research and Applications, C C Press, 1993 などに開示がある。

アンチセンス核酸は、変化せしめられたり、修飾された糖、塩基、結合を含有していて良く、リボゾーム、ミクロスフエアのような特殊な形態で供与されたり、遺伝子治療により適用されたり、付加された形態で与えられることができうる。こうして付加形態で用いられるものとしては、リン酸基骨格の電荷を中和するように働くポリリジンのようなポリカチオン体、細胞膜との相互作用を高めたり、核酸の取込みを増大せしめるような脂質（例えば、ホスホリピド、コレステロールなど）といつた粗水性のものが挙げられる。付加するに好ましい脂質としては、コレステロールやその誘導体（例えば、コレステリルクロ口ホルメート、コール酸など）が挙げられる。こうしたものは、核酸の 3，端あるいは 5，端に付着させることができ、塩基、糖、分子内ヌクレオシド結合を介して付着させることができうる。その他の基としては、核酸の 3 '端あるいは 5'端に特異的に配置されたキャップ用の基で、ェキソヌクレア一ゼ、 RN a s eなどのヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げられる。こうしたキャップ用の'基としては、ポリエチレングリコ一ル、テトラエチレンダリコールなどのグリコールをはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基が挙げられるが、それに限定されるものではない。

アンチセンス核酸の阻害活性は、前記したメタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DN Aを含有する組換えベクターで形質転換された形質転換体、メタスチンまたはメタスチン受容体の生体内や生体外の遺伝子発現系、あるいはメタスチンまたはメタスチン受容体の生体内や生体外の翻訳系を用いて調べることができる。該核酸それ自体公知の各種の方法で細胞に適用できる。

以下に、メタスチンまたはその塩（以下、メタスチンと略記する）、メタスチンをコードする DNA、メタスチンに対する抗体、メタスチンをコードする DNAに対するアンチ DNA、メタスチン受容体、その部分ペプチドまたはその塩（以下、メタスチン受容体と略記する）、メタスチン受容体をコードする DNA、メタスチン受容体に対する抗体、メタスチン受容体をコードする DN Aに対するアンチ DN Aなどの用途について、具体的に説明する。

( 1 ) メタスチン、メタスチンをコードする DNA、メタスチン受容体またはメタスチン受容体をコードする DN Aを含有する医薬

メタスチンは、血糖上昇作用、膝グルカゴン分泌促進作用、尿生成促進作用を有しているので、メタスチン、メタスチンをコードする DNA 、メタスチン受容体またはメタスチン受容体をコードする DN Aは、例えば、血糖上昇剤、滕グルカゴン分泌促進剤、尿生成促進剤として有用である。 ·

さらには、メタスチン、メタスチンをコードする DNA、メタスチン受容体またはメタスチン受容体をコードする DNAは、例えば、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療剤として有用である。

メタスチン、メタスチンをコードする DNA、メタスチン受容体またはメタスチン受容体をコードする DN Aを上述の医薬として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。例えば、必要に応じて糖衣や腸溶性被膜を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロ力プセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、該化合物またはその塩を生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、べヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。

メタスチンをコードする D N Aまたはメタスチン受容体をコードする D N Aは、（ィ）メタスチンをコードする D N Aまたはメタスチン受容体をコードする D N Aを該患者に投与し発現させることによって、あるいは（口）細胞などにメタスチンをコードする D N Aまたはメタスチン受容体をコ一ドする D N Aを挿入し発現させた後に、該細胞を該患者に移植することなどによって、該患者の細胞におけるメタスチンまたはメタスチン受容体の量を増加させ、メタスチンの作用を充分に発揮させることができる。

メタスチンをコードする D N Aまたはメタスチン受容体をコードする D N Aを用いる場合は、該 D N Aを単独またはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスァソシエーテッドウィルスベクターなどの適当なベクタ一に挿入した後、常套手段に従って実施することができる。

錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えばゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、ァカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態が力プセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施にしたがつて処方することができる。

注射用の水性液としては、例えば、'生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、 D —ソルビトール、 D —マンニトール、塩化ナトリウムなど）などがあげられ、適当な溶解補助剤、たとえばァルコール（たとえばェ夕ノ一ル）、ポリアルコール（たとえばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（たとえばポリソルベート 8 0 (TM) 、 HC O— 5 0 ) などと併用してもよい。油性液としてはゴマ油、大豆油などがあげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。

また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニゥム、塩酸プロ力インなど）、安定剤（例えば、ヒ卜血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フエノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当.なアンプルに充填される。このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えばヒトゃ哺乳動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、ゥサギ、ニヮトリ、ヒッジ、ブタ、ゥシ、ネコ、ィヌ、サル、マントヒヒ、チンパンジーなど）に対して投与することができる。

メタスチン、メタスチンをコードする DNA、メタスチン受容体またはメタスチン受容体をコ一ドする DN Aの投与量は、症状などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に成人の肥満患者（体重 6 0 k g として）においては、ー日にっき約 0. 1〜 1 0 0111 、好ましくは約 1. 0〜 5 0 mg、より好ましくは約 1. 0〜 2 0 mgである。非経口的に投与する場合は、その 1回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、たとえば注射剤の形では成人の肥満患者（体重 6 0 k gとして）への投与においては、一日につき約 0. 0 1 〜 3 0 mg程度、好ましくは約 0. l〜 2 0 mg程度、より好ましくは約 0. 1〜 1 Omg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。

( 2 ) メタスチンまたはメタスチン受容体に対する抗体を含有する医薬メタスチンまたはメタスチン受容体の活性を中和する作用を有する抗体は、メタスチンの血糖上昇作用、膝グルカゴン分泌促進作用、尿生成促進作用を抑制することができるので、血糖低下剤、瞵グルカゴン分泌抑制剤、尿生成抑制剤として有用である。

さらには、メタスチンまたはメタスチン受容体の活性を中和する作用を有する抗体は、例えば、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、ァシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤として使用することができる。糖尿病には、インスリン依存型（ I型）糖尿病、インスリン非依存型（I I型）糖尿病などが含まれる。

メタスチンまたはメタスチン受容体に対する抗体（以下、本発明の抗体と略記する）を含有する上記疾患の治療 ·予防剤は、そのまま液剤として、または適当な剤型の医薬組成物として、ヒトまたは哺乳動物（例、ラット、ゥサギ、ヒッジ、ブ夕、ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど）に対して経口的または非経口的に投与することができる。投与量は、投与対象、対象疾患、症状、投与ル一卜などによっても異なるが、例えば、成人に使用する場合には、本発明の抗体を 1回量として、通常 0 . 0 1〜 2 O m g / k g体重程度、好ましくは 0 . 1〜 1 O m g Z k g体重程度、さらに好ましくは 0 . 1〜 5 m g Z k g体重程度を、 1 日 1〜 5回程度、好ましくは 1 日 1〜 3回程度、静脈注射により投与するのが好都合である。他の非経口投与および経口投与の場合もこれに準ずる量を投与することができる。症状が特に重い場合には、その症状に応じて増量してもよい。

本発明の抗体は、それ自体または適当な医薬組成物として投与することができる。上記投与に用いられる医薬組成物は、上記またはその塩と薬理学的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含むものである。かかる組成物ほ、経口または非経口投与に適する剤形として提供される。

すなわち、例えば、経口投与のための組成物としては、固体または液体の剤形、具体的には錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。かかる組成物は自体公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用いられる担体、希釈剤もしくは賦形剤を含有するものである。例えば、錠剤用の担体、賦形剤としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなどが用いられる。

非経口投与のための組成物としては、例えば、注射剤、坐剤などが用いられ、注射剤は静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤などの剤形を包含する。かかる注射剤は、自体公知の方法に従って、例えば、上記抗体またはその塩を通常注射剤に用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁または乳化することによって調製する。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、ァルコール (例、エタノール）、ポリアルコール (例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコ一ル）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベ一ト 8 0、 H C O— 5 0 (polyoxyet ylene ( 5 0 mol) adduct of hydrogenated castor oil) 〕などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどを併用してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに充填される。直腸投与に用いられる坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐薬用基剤に混合することによって調製される。

上記の経口用または非経口用医薬組成物は、活性成分の投与量に適合するような投薬単位の剤形に調製されることが好都合である。かかる投薬単位の剤形としては、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが例示され、それぞれの投薬単位剤形当たり通常 5〜- 5 0 0 mg、とりわけ注射剤では 5〜 1 0 0 m g、その他の剤形では 1 0〜 2 5 0 m gの上記抗体が含有されていることが好ましい。なお前記した各組成物は、上記抗体との配合により好ましくない相互作用を生じない限り他の活性成分を含有してもよい。

( 3 ) 本発明の抗体を含有する診断剤

本発明の抗体は、メタスチンまたはメタスチン受容体を認識することができるので、被検液中のメタスチンまたはメタスチン受容体の定量、特にサンドィツチ免疫測定法による定量などに使用することができる。本発明の抗体を用いるメタスチンの定量法は、 W O 0 0 / 2 4 8 9 0号または W O 0 1 / 7 5 1 0 4号に記載の方法に従って実施することができる。

したがって、本発明の抗体は、メタスチンまたはメタスチン受容体の異常発現（過剰発現、発現低下）に伴う血糖異常、滕グルカゴン分泌異常、尿生成異常を検出することができる。具体的には、本発明の抗体は、ヒトまたは哺乳動物（例、ラット、ゥサギ、ヒッジ、ブタ、ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど）におけるメタスチンまたはメタスチン受容体の異常発現に伴う血糖異常、膝グルカゴン分泌異常、尿生成異常による肥満、高脂血症、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患、脂肪毒性、糖尿病、耐糖能障害、ケ卜一シス、アシドーシス、頻尿、夜尿症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害などの診断剤として使用することができる。

より具体的には、本発明の抗体を用いてメタスチンまたはメタスチン受容体の濃度を定量することによって、メタスチンまたはメタスチン受容体の濃度の減少が検出された場合、例えば、メタスチンまたはメタスチン受容体の機能不全に関連する疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。

また、メタスチンまたはメタスチン受容体の濃度の増加が検出された場合には、例えば、メタスチンまたはメタスチン受容体の過剰発現に起因する疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。 '

メタスチンまたはメタスチン受容体の機能不全に関連する疾患としては、例えば、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ —マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性などが挙げられる。

メタスチンまたはメタスチン受容体の過剰発現に起因する疾患としては、例えば、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害などが挙げられる。糖尿病には、インスリン依存型（ I型）糖尿病、インスリン非依存型（II型）糖尿病などが含まれる

(4) 遺伝子診断剤

メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DNAまたはそれに対するアンチセンス ·ポリヌクレオチドは、例えば、プローブとして使用することにより、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ゥサギ、トリ、ヒッジ、ブ夕、ゥシ、ゥマ、ネコ、ィヌ、サルなど）におけるメタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DN Aまたは mRNAの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、該 DNAまたは mRNAの損傷、突然変異あるいは発現低下や、該 D N Aまたは mRN Aの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤として有用である。

メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DNAまたはそれに対するアンチセンス ·ポリヌクレオチドを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、自体公知のノーザンハイプリダイゼーションゃ P CR— S S C P法（ゲノミックス（Genomics) ，第 5巻， 8 7 4〜 8 7 9頁（ 1 9 8 9年）、プロシージングズ · ォブ ·ザ · ナショナル · アカデミー · ォブ • サイェンシィズ · ォブ · ュ一エスェ一（ Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America) ，第 8 6巻， 2 7 6 6〜 2 7 7 0頁（ 1 9 8 9年））などにより実施することができる。

具体的には、メタスチンまたはメタスチン受容体をコ一ドする D NA またはそれに対するアンチセンス · ポリヌクレオチドは、ヒトまたは哺乳動物におけるメタスチンまたはメタスチン受容体の異常発現に伴う血糖異常、塍グルカゴン分泌異常、尿生成異常による肥満、高脂血症、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患、脂肪毒性、糖尿病、耐糖能障害、ケ卜一シス、アシドーシス、頻尿、夜尿症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害などの診断剤として使用することができる。

例えば、ノーザンハイプリダイゼーシヨンによりメタスチンまたはメタスチン受容体の発現低下が検出された場合は、例えば、メタスチンまたはメタスチン受容体の機能不全に関連する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診靳することができる。

また、ノーザンハイプリダイゼ一ションによりメタスチンまたはメタスチン受容体の発現過多が検出された場合は、例えば、メタスチンまたはメタスチン受容体の過剰発現に起因する疾患である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診断することができる。

メタスチンまたはメタスチン受容体の機能不全に関連する疾患としては、例えば、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性などが挙げられる。メタスチンまたはメタスチン受容体の過剰発現に起因する疾患としては、例えば、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害などが挙げられる。糖尿病には、インスリン依存型（ I型）糖尿病、インスリン非依存型（II型）糖尿病などが含まれる

( 5 ) アンチセンス DNAを含有する医薬

メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DN Aに対するアンチセンス DNAは、メタスチンの血糖上昇作用、塍グルカゴン分泌促進作用、尿生成促進作用を抑制することができるので、血糖低下剤、膝グルカゴン分泌抑制剤、尿生成抑制剤として有用である。

さらには、メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DNAに対するアンチセンス DNAは、例えば、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤として使用することができる。糖尿病には、インスリン依存型（ I型）糖尿病、インスリン非依存型（II型）糖尿病などが含まれる。

上記アンチセンス DN Aを上記の治療 ·予防剤として使用する場合は、該アンチセンス DN Aを、メタスチンをコードする DNAと同様にして製剤化することができる。

このようにして得られる製剤は低毒性であり、ヒトまたは哺乳動物（例、ラット、ゥサギ、ヒッジ、ブ夕、ゥシ、ネコ、ィヌ、サルなど）に対して経口的または非経口的に投与することができる。

なお、該アンチセンス DNAは、そのままで、あるいは摂取促進用の補助剤などの生理学的に認められる担体とともに、遺伝子銃ゃ八ィドロゲルカテ一テルのようなカテーテルによって投与することもできる。該アンチセンス DNAの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより異なるが、例えば、糖尿病の治療の目的でアンチセンス DN Aを臓器（例、肝臓、肺、心臓、腎臓など）に局所投与する場合、成人 (体重 6 0 k g) に対して、一日あたり約 0. 1〜： L O Omgである。さらに、メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする RNAの一部とそれに相補的な RNAとを含有する二重鎖 RNA (RNA i ； RN A i n t e r f e r e n c e法）、メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする RN Aの一部を含有するリポザィムなどは、上記アンチセンス DNAと同様に、メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする D N Aの発現を抑制することができ、生体内におけるメタスチンまたはメタスチン受容体、またはメタスチンまたはメタスチン受容体をコ一ドする D N Aの機能を抑制することができる。

したがって、該二重鎖 RNAまたはリポザィムは、メタスチンのの血糖上昇作用、陴グルカゴン分泌促進作用、尿生成促進作用を抑制することができるので、血糖低下剤、腌グルカゴン分泌抑制剤、尿生成抑制剤として有用である。さらには、該二重鎖 RNAまたはリポザィムは、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 ·治療剤として使用することができる。糖尿病には、インスリン依存型（ I型）糖尿病、インスリン非依存型（Π型）糖尿病などが含まれる。

二重鎖 RNAは、公知の方法（例、 Nature, 411巻， 494頁， 2001年）に準じて、本発明の DN Aの配列を基に設計して製造することができるリポザィムは、公知の方法（例、 TRENDS in Molecular Medicine, 7 巻， 22】頁， 2001年）に準じて、メタスチンまたはメタスチン受容体の DNAの配列を基に設計して製造することができる。例えば、メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする RN Aの一部に公知のリポザィムを連結することによって製造することができる。メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする RN Aの一部としては、公知のリボザィムによって切断され得るメタスチンまたはメタスチン受容体の; N A上の切断部位に近接した部分（RNA断片）が挙げられる。

上記の二重鎖 RN Aまたはリポザィムを上記予防 · 治療剤として使用する場合、アンチセンス DNAと同様にして製剤化し、投与することができる。

( 6 ) スクリーニング方法

本発明のスクリーニング方法は、

( 6— 1 ) ( a) メタスチンおよび（または）（b) メタスチン受容体 (以下、部分ペプチドも含む）を用いることを特徴とする血糖調節薬、腌グルカゴン調節薬または尿生成調節薬のスクリーニング方法、および ( 6— 2) (a) メタスチンをコ一ドする DNAを含有する DNAおよび（または）（b) メタスチン受容体をコードする DNAを用いることを特徴とする血糖調節薬、膝グルカゴン調節薬または尿生成調節薬のスクリ一二ング方法である。

血糖調節薬、膝グルカゴン調節薬または尿生成調節薬としては、

( a) メタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質、または

(b) メタスチンおよび（または）メタスチン受容体の発現を調節する物質などが挙げられる。

まず、メタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリ一二ング方法について説明する。

メタスチン受容体を用いるか、または組換え型メタスチン受容体の発現系を構築し、該発現系を用いたレセプター結合アツセィ系を用いることによって、メタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質をスクリーニングすることができる。

このような物質には、メタスチン受容体を介して細胞刺激活性を有する物質（すなわち、メタスチン受容体ァゴニスト）と該細胞刺激活性を有しない物質（すなわち、メタスチン受容体アンタゴニスト）などが含まれる。「メタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる」とは、メタスチンとメタスチン受容体との結合を阻害する場合と、メタスチンとメタスチン受容体との結合を促進する場合の両方を包含するものである。

細胞刺激活性としては、例えば、ァラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内 C a ^{2 +}遊離、細胞内 c A M P生成、細胞内 c G M P生成、イノシ卜一ルリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、 c 一 f o sの活性化、 p Hの低下などを促進する活性または抑制する活性、細胞増殖阻害活性、遊走阻害活性、腫瘍増殖抑制活性、血糖上昇活性、膝グルカゴン分泌促進活性などが挙げられるが、なかでも細胞内 C a ^{2 +}遊離の促進活性、細胞増殖阻害活性、遊走阻害活性、腫瘍増殖抑制活性、血糖上昇活性、滕グルカゴン分泌促進活性が好ましい。

すなわち、本発明は、（ i ) メタスチン受容体にメタスチンを接触させた場合と（i i ) メタスチン受容体にメタスチンおよび試験化合物を接触させた場合との比較を行なうことを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリ一二ング方法を提供する本発明のスクリーニング方法においては、（ i ) メタスチン受容体にメタスチンを接触させた場合と（i i ) メタスチン受容体にメタスチンおよび試験化合物を接触させた場合における、例えばメタスチン受容体に対するメタスチンの結合量、細胞刺激活性などを測定して、比較する。

本発明のスクリーニング方法は、具体的には、

( i ) 標識したメタスチンをメタスチン受容体に接触させた場合と、標識したメタスチンおよび試験化合物をメタスチン受容体に接触させた場合における、標識したメタスチンのメタスチン受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリ一二ング方法、 ( i i ) 標識したメタスチンをメタスチン受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合と、標識したメタスチンおよび試験化合物をメタスチン受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、標識したメタスチンの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリーニング方法、

( i i i ) 標識したメタスチンを、メタスチン受容体をコードする D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメタスチン受容体に接触させた場合と、標識したメタスチンおよび試験化合物をメタスチン受容体をコ一ドする D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメタスチン受容体に接触させた場合における、標識したメタスチンの該メタスチン受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリ一ニング方法、

( i v ) メタスチン受容体を活性化する化合物（例えば、メタスチン、本発明のメタスチン誘導体）をメタスチン受容体を含有する細胞に接触させた場合と、メタスチン受容体を活性化する化合物および試験化合物をメタスチン受容体を含有する細胞に接触させた場合における、メタスチン受容体を介した細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリ一ニング方法、

( V ) メタスチン受容体を活性化する化合物（例えば、メタスチン、本発明のメタスチン誘導体）をメタスチン受容体をコ一ドする D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメタスチン受容体に接触させた場合と、メタスチン受容体を活性化する化合物および試験化合物をメタスチン受容体をコードする D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメタスチン受容体に接触させた場合における、メタスチン受容体を介する細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリ一ニング方法、

( V i ) 試験化合物をメタスチン受容体を含有する細胞に接触させた場合における、メタスチン受容体を介した細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするメタスチン受容体ァゴニス卜のスクリーニング方法、および

( V i i ) 試験化合物をメタスチン受容体をコードする D N Aを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したメタスチン受容体に接触させた場合における、メタスチン受容体を介する細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするメタスチン受容体ァゴニストのスクリーニング方法などである。

本発明のスクリーニング方法においては、リガンドとしては、メタスチンを使用する代わりに、メタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる化合物（例えば、低分子合成化合物、好ましくは低分子合成ァゴニスト）またはその塩を用いることもできる。このメタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる化合物またはその塩は、例えば、リガンドとしてメタスチンを用いて本発明のスクーニング方法を実施することによって得ることができる。具体的には、上記した本発明のメタスチン誘導体またはその塩などを用いることができる。

本発明のスクリーニング方法の具体的な説明を以下にする。

まず、本発明のスクリーニング方法に用いるメタスチン受容体とし t は、前記したメタスチン受容体を含有するものであれば何れのものであつてもよいが、ヒトゃ温血動物の臓器の膜画分などが好適である。しかし、特にヒト由来の臓器は入手が極めて困難なことから、スクリーニングに用いられるものとしては、組換え体を用いて大量発現させたメタスチン受容体などが適している。

本発明のスクリーニング方法において、メタスチン受容体を含有する細胞または該細胞膜画分などを用いる場合、後述の調製法に従えばよいメタスチン受容体を含有する細胞を用いる場合、該細胞をダル夕ルァルデヒド、ホルマリンなどで固定化してもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従って行うことができる。

メタスチン受容体を含有する細胞としては、メタスチン受容体を発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、前述の大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが挙げられる。

膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、 Potter— Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ヮーリングプレンダーゃポリトロン（Kinematka社製）による破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いら 'れる。例えば、細胞破砕液を低速（ 5 0 0 r pm〜 3 0 0 0 r pm) で短時間（通常、約 1分〜 1 0分）遠心し、上清をさらに高速（ 1 5 0 0 O r pm〜 3 0 0 0 0 r pm) で通常 3 0分〜 2時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現したメタスチン受容体と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。

該メタスチン受容体を含有する細胞や膜画分中のメタスチン受容体の量は、 1細胞当たり 1 0³〜 1 0⁸分子であるのが好ましく、 1 0⁵〜 1 0⁷分子であるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当たりのリガンド結合活性（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、同一ロッ卜で大量の試料を測定できるようになる。

メタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質をスクリ一二ングする前記の（ i ) 〜（ i i i ) を実施するためには、適当なメタスチン受容体画分と、標識したメタスチンが用いられる。メタスチン受容体画分としては、天然型のメタスチン受容体画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型メタスチン受容体画分などが望ましい。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活性などを示す。標識したメタスチンとしては、標識したリガンド、標識したリガンドアナログ化合物などが用いられる。例えば〔³H〕、〔¹²⁵ I〕、 C¹⁴ C) 、〔^{3 5} S〕などで標識されたメタスチンなどを利用することができる。

具体的には、メタスチンとメダスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリーニングを行うには、まずメタスチン受容体を含有する細胞または細胞の膜画分を、スクリ一エングに適したバッファーに懸濁することによりレセプタ一標品を調製する。バッファーには、 p H 4〜 l 0 (望ましくは p H 6〜 8 ) のリン酸バッファ一、トリスー塩酸バッファーなどのメタスチンとメタスチン受容体との結合を阻害しないバッファ一であればいずれでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、 C HA P S、 Tw e e n - 8 0™ (花王一アトラス社）、ジギトニン、デォキシコレ一卜などの界面活性剤をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテアーゼによるメタスチン受容体ゃメタスチンの分解を抑える目的で PM S F、ロイぺプチン、 E— 6 4 (ペプチド研究所製）、ぺプス夕チンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。 0. 0 1〜 1 0 m l の該メタスチン受容体溶液に、一定量（ 5 0 0 0 〜 5 0 0 0 0 0 c pm) の標識したメタスチンを添加し、同時に 1 0一 ⁴〜 1 0— ¹ Mの試験化合物を共存させる。非特異的結合量（N S B) を知るために大過剰の未標識のメタスチンを加えた反応チューブも用意する。反応は約 0 °C〜約 5 0 ° (：、望ましくは約 4°C〜約 3 7°Cで約 2 0 分〜約 2 4時間、望ましくは約 3 0分〜約 3時間行う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファ一で洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレ—シヨンカウンタ—または T—力ゥンターで計測する。拮抗する物質がない場合のカウント（B 0 ) から非特異的結合量（N S B) を引いたカウント（B 0.— N S B)' を 1 0 0 %とした時、特異的結合量（B— N S B) が例えば 5 0 %以下になる試験化合物を拮抗阻害能力のある候補物質として選択することができる。

メタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質をスクリ一二ングする前記の（ i V ) 〜（V i i ) の方法を実施するためには、メタスチン受容体を介する細胞刺激活性を公知の方法または市販の測定用キットを用いて測定することができる。具体的には、まず、メタスチン受容体を含有する細胞をマルチウエルプレー卜等に培養する。スクリ —ニングを行うにあたっては前もつて新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、試験化合物などを添加して一定時間インキュベートした後、細胞を抽出あるいは上清液を回収して、生成した産物をそれぞれの方法に従って定量する。細胞刺激活性の指標とする物質（例えば、 C a ^{2 +}、ァラキドン酸、 c A M Pなど）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添加してアツセィを行なってもよい。また、 c A M P産生抑制などの活性については、フオルスコリンなどで細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用として検出することができる。

細胞刺激活性を測定してスクリーニングを行なうには、適当なメタスチン受容体を発現した細胞が必要である。本発明のメタスチン受容体を発現した細胞としては、前述の組換え型メタスチン受容体発現細胞株などが望ましい。

試験化合物としては、例えばペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。

試験化合物は塩を形成していてもよく、試験化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、 .リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。

また、試験化合物としては、メタスチン受容体の活性部位の原子座標およびリガンド結合ポケッ卜の位置に基づいて、リガンド結合ポケッ卜に結合するように設計された化合物が好ましく用いられる。メタスチン受容体の活性部位の原子座標およびリガンド結合ポケットの位置の測定は、公知の方法あるいはそれに準じる方法を用いて行うことができる。メタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる物質のスクリ一二ング用キットは、メタスチン受容体、メタスチン受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分、および（または）メタスチンを含有するものである。

本発明のスクリーニング用キッ卜の例としては、次のものが挙げられる。

1. スクリーニング用試薬

( 1) 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液

Hanks' Balanced Salt Solution (ギブコ社製）に、 0. 0 5 %のゥシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたもの。

孔径 0.45 mのフィルタ一で濾過滅菌し、 4°Cで保存するか、あるいは用時調製しても良い。

( 2 ) メタスチン受容体標品 ' メタスチン受容体を発現—させた CHO細胞を、 1 2穴プレートに 5 X 1 0⁵個穴で継代し、 3 7°C、 5 %C0₂、 9 5 % a i rで 2日間培養したもの。

(3) 標識リガンド

〔³H〕、〔 ^{1 25} I〕、〔 ¹⁴C〕、〔³⁵ S〕などで標識したメ夕スチン

適当な溶媒または緩衝液に溶解したものを 4であるいは一 20 °Cにて保存し、用時に測定用緩衝液にて 1 Mに希釈する。

(4) リガンド標準液

メタスチンを 0. 1 %ゥシ血清アルブミン（シグマ社製）を含む P B Sで 1 mMとなるように溶解し、一 20°Cで保存する。

2. 測定法

( 1 ) 1 2穴組織培養用プレートにて培養したメタスチン受容体を発現させた細胞を、測定用緩衝液 1 m 1で 2回洗浄した後、 490 ^ 1の測定用緩衝液を各穴に加える。

( 2 ) 1 0—³〜 1 0— ^{1 Q}Mの試験化合物溶液を 5 β 1加えた後、標識したメタスチンを 5 H 1加え、室温にて 1時間反応させる。非特異的結合量を知るためには試験化合物のかわりに 1 0— ³ Μのリガンドを 5 】加えておく。

(3) 反応液を除去し、 1 m 1の洗浄用緩衝液で 3回洗浄する。細胞に結合した標識メタスチンを 0. 2 N N aOH- l % SD Sで溶解し、 4m 1の液体シンチレーター A (和光純薬製）と混合する。

(4) 液体シンチレーシヨンカウンタ一（ベックマン社製）を用いて放射活性を測定し、 Percent Maximum Binding (PMB) を次の式で求める。

P M B = [ (B— NS B) / (B 0— NS B) ] X 1 0 0 PMB ： Percent Maximum Binding

B ：検体を加えた時の値

N S B ： Non-specific Binding (非特異的結合量）

B 0 ：最大結合量

本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる物質は、メタスチンとメタスチン受容体との結合を変化させる (結合を阻害または促進する）物質であり、具体的にはメタスチン受容体を介して細胞刺激活性を有する物質（いわゆるメタスチン受容体ァゴ二スト）または該剌激活性を有しない化合物（いわゆるメタスチン受容体アン夕ゴニスト）である。

該物質は、前記した試験化合物から選ばれる化合物またはその塩であり、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であつてもよい。メタスチン受容体ァゴニス卜であるか、アン夕ゴニス卜であるかの具体的な評価方法は以下の（ 1 ) または（ 2 ) に従えばよい。

( 1 ) 前記（ i ) 〜（ i i i ) のスクリ一ニング方法で示されるバインディング · アツセィを行い、メタスチンとメタスチン受容体との結合性を変化させる（特に、結合を阻害する）物質を得た後、該物質が上記したメタスチン受容体を介する細胞刺激活性を有しているか否かを測定する。細胞刺激活性を有する物質はメタスチン受容体ァゴニストであり、該活性を有しない物質はメタスチン受容体アン夕ゴニストである。

( 2 ) (a)試験化合物をメタスチン受容体を含有する細胞に接触させ、上記メタスチン受容体を介した細胞刺激活性を測定する。細胞刺激活性を有する物質はメタスチン受容体ァゴニス卜である。

(b)メタスチン受容体を活性化する化合物（例えば、メタスチンなど）をメタスチン受容体を含有する細胞に接触させた場合と、メタスチン受容体を活性化する化合物および試験化合物をメタスチン受容体を含有する細胞に接触させた場合における、メタスチン受容体を介した細胞刺激活性を測定し、比較する。メタスチン受容体を活性化する化合物による細胞刺激活性を減少させ得る物質はメタスチン受容体アン夕ゴニス卜である。

指標とする細胞刺激活性としては、例えば、細胞内 C a ^{2 +}遊離の促進活性、細胞増殖阻害活性、遊走阻害活性、腫瘍増殖抑制活性、血糖上昇活性、塍グルカゴン分泌促進活性が好ましい。

メタスチン受容体ァゴニストとしては、例えば、前記した本発明のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩のプロドラッグなどが用いられる。メタスチン受容体ァゴニストは、メタスチンが有する生理活性と同様の作用を有しているので、メタスチンと同様に安全で低毒性な医薬として有用である。

逆に、メタスチン受容体アンタゴニストは、メタスチンが有する生理活性を抑制することができるので、メタスチンの活性を抑制する安全で低毒性な医薬として有用である。したがって、メタスチン受容体ァゴニストは、例えば、血糖上昇剤、塍グルカゴン分泌促進剤、尿生成促進剤として有用である。さらには、メタスチン受容体ァゴニス卜は、例えば、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療剤として有用である。

一方、メタスチン受容体アン夕ゴニストは、血糖低下剤、縢グルカゴン分泌抑制剤、尿生成抑制剤として有用である。さらには、メタスチン受容体アン夕ゴニストは、例えば、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、ァシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、髙脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 · 治療剤として使用することができる。

さらに、上記のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる物質から誘導される物質も同様に使用することができる上記のスクリ一ニング方法またはスクリ一ニング用キットを用いて得られる物質は塩を形成していてもよく、例えば、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸など）や塩基（例、アルカリ金属など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。

本発明のスクリ一二ング方法を用いて得られる物質を上述の治療 · 予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。例えば、前記したメタスチンを含有する医薬組成物と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。

このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒ卜または温血動物（例えば、マウス、ラッ卜、ゥサギ、ヒッジ、ブ夕、ゥシ、ゥマ、トリ、ネコ、ィヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。

該物質の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、メタスチン受容体ァゴニストを経口投与する場合、一般的に成人（体重 6 0 k g当たり）においては、一日につき該化合物を約 0. 1〜 1 0 0 mg、好ましくは約 1. 0〜 5 0 mg、より好ましくは約 1. 0〜 2 0 mg投与する。非経口的に投与する場合は、該物質の 1回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、メタスチン受容体ァゴニストを注射剤の形で通常成人（体重 6 0 k g当たり）に投与する場合、一日につき該化合物を約 0. 0 1〜 3 0 mg程度、好ましくは約 0. l〜 2 0 mg程度、より好ましくは約 0. 1〜 1 O mg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。

次に、メタスチンおよび（または）メタスチン受容体の発現を調節する物質のスクリ一二ング方法について説明する。

本発明のスクリーニング方法は、具体的には、

( 1 ) ( i ) メタスチンを発現し得る細胞または組織を、試験化合物の存在下および非存在下で培養した場合における、それぞれのメタスチンの発現量またはメタスチンをコードする mR N A量を測定し、比較することを特徴とするメタスチンの発現を促進または抑制する物質のスクリ一二ング方法、

( 2 ) ( i ) メタスチン受容体を発現し得る細胞または組織を、試験化合物の存在下および非存在下で培養した場合における、それぞれのメタスチン受容体の発現量またはメタスチンをコードする mRNA量を測定し、比較することを特徴とするメタスチン受容体の発現を促進または抑制する物質のスクリ一二ング方法である。

メタスチンまたはメタスチン受容体を発現し得る細胞または組織としては、ヒトゃ温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニヮトリ、ゥサギ、ブタ、ヒッジ、ゥシ、サル等）の細胞（例えば、神経細胞、内分泌細胞、神経内分泌細胞、グリア細胞、塍臓; 8細胞、骨髄細胞、肝細胞、脾細胞、メサンギゥム細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、 T細胞、 B細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球、樹状細胞）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞等）、もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膝臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、唾液腺、末梢血、前立腺、睾丸（精巣）、卵巣、胎盤、子宮、骨、軟骨、関節、骨格筋等を用いても良い。その際、株化細胞、初代培養系を用いてもよい。また、前記したメタスチンまたはメタスチン受容体をコ一ドする D N Aを含有する組換えベクターで形質転換された形質変換体を使用してもよい。

メタスチンまたはメタスチン受容体を発現し得る細胞の培養方法は、前記した形質変換体の培養法と同様である。

試験化合物としては、前記の試験化合物の他、 D N Aライブラリーなどを用いることができる。

メタスチンまたはメタスチン受容体の発現量は抗体などを用いて免疫化学的方法などの公知の方法により測定することもできるし、メタスチンをコードする m R N Aをノーザンハイプリダイゼ一ション法、 R T— P C Rや T a d M a n P C R法を用いて、公知の方法により測定することもできる。

mRN Aの発現量の比較をハイプリダイゼーション法によって行うには、公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー ' クローニング (Molecular Cloning) 2 nd (J. Sambrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に記載の方法等に従って行なうことができる。

具体的には、メタスチンまたはメタスチン受容体をコ一ドする mRN Aの量の測定は、公知の方法に従って細胞から抽出した RNAと、メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DNAもしくはその一部または本発明のアンチセンス · ポリヌクレオチドとを接触させ、メタスチンまたはメタスチン受容体をコ一ドする DNAもしくはその一部または本発明のアンチセンス · ポリヌクレオチドと結合した mR N Aの量を測定することによって行われる。メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DNAもしくはその一部または本発明のアンチセンス · ポリヌクレオチドを、例えば放射性同位元素、色素などで標識することによつて、メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DN Aもしくはその一部または本発明のアンチセンス · ポリヌクレオチドに結合した mR NAの量が容易に測定できる。放射性同位元素としては、例えば³² P、 ³ Hなどが用いられ、色素としては、例えば fluorescein, F AM (PE Biosystems社製）、 J O E (PE Biosystems社製）、 T AM R A (PE Biosystems社製）、 R OX (PE Biosystems社製）、 C y 5 (Amers am 社製）、 C y 3 (Amersham社製）などの蛍光色素が用いられる。

また、 mRNAの量は、細胞から抽出した RN Aを逆転写酵素によつて c DN Aに変換した後、メタスチンまたはメタスチン受容体をコ一ドする DNAもしくはその一部または本発明のアンチセンス ' ポリヌクレォチドをプライマーとして用いる P C Rによって、増幅される c DNA の量を測定することによって行うことができる。

このように、メタスチンまたはメタスチン受容体をコードする mRN Aの量を増加させる試験化合物を、メタスチンまたはメタスチン受容体の発現を促進する活性を有する物質として選択することができ、また、メタスチンまたはメ夕スチン受容体をコードする mRNAの量を減少させる試験化合物を、メタスチンまたはメタスチン受容体の発現を抑制する活性を有する物質として選択することができる。

さらに、本発明は、

(ii) メタスチンまたはメタスチン受容体をコ一ドする遺伝子のプロモ一夕一領域またはェンハンサー領域の下流にレポーター遺伝子を連結した組換え DN Aで形質転換した形質転換体を試験化合物の存在下および非存在下で培養した場合における、それぞれのレポ"夕一活性を測定し、比較することを特徴とする当該プロモーター活性を促進または抑制する物質のスクリーニング方法を提供する。

レポーター遺伝子としては、例えば、 l a c Z (/3—ガラクトシダ一ゼ遺伝子）、クロラムフエニコールァセチルトランスフェラーゼ (CAT ) 、ルシフェラ一ゼ、成長因子、 j8 -ダルク口ニダーゼ、アルカリホスファターゼ、 Green fluorescent protein (GFP)、 /3-ラクタマーゼなどが用いられる。

レポーター遺伝子産物（例、 mRNA、タンパク質）の量を公知の方法を用いて測定することによって、レポーター遺伝子産物の量を増加させる試験化合物を本発明のぺプチドのプロモーターもしくはェンハンサ一の活性を制御（特に促進）する作用を有する化合物、すなわちメタスチンまたはメタスチン受容体の発現を促進する活性を有する物質として選択できる。逆に、レポーター遺伝子産物の量を減少させる試験化合物をメタスチンまたはメタスチン受容体のプロモーターもしくはェンハンサ一の活性を制御（特に抑制）する作用を有する物質、すなわちメタスチンまたはメタスチン受容体の発現を抑制する活性を有する物質として選択することができる。

試験化合物としては、前記と同様のものが使用される。

形質転換体の培養は、前記の形質転換体と同様にして行うことができる。レポ一ター遺伝子のベクター構築やアツセィ法は公知の技術に従うことができる（例えば、 Mo l ecu l ar B i o t echno l ogy 13, 29-43, 1999) 。

メタスチンまたはメタスチン受容体の発現を促進する活性を有する物質は、メタスチンが有する生理活性を促進する作用を有しているので、メタスチンと同様に安全で低毒性な医薬として有用である。

逆に、メタスチンまたはメタスチン受容体の発現を抑制する活性を有する物質は、メタスチンが有する生理活性を抑制することができるので、メタスチンの活性を抑制する安全で低毒性な医薬として有用である。

したがって、メタスチンまたはメタスチン受容体の発現を促進する物質は、例えば、血糖上昇剤、腌グルカゴン分泌促進剤、尿生成促進剤として有用である。さらには、メタスチンまたはメタスチン受容体の発現を促進する物質は、例えば、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギ一、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 -治療剤として有用である。

一方、メタスチンまたはメタスチン受容体の発現を抑制する物質は、血糖低下剤、膝グルカゴン分泌抑制剤、尿生成抑制剤として有用である。さらには、メタスチンまたはメタスチン受容体の発現を抑制する物質は、例えば、糖尿病、耐糖能障害、ケト一シス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 · 治療剤として使用することができる。本発明のスクリーニング方法を用いて得られる物質は、例えば、ぺプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから選ばれた化合物である。該化合物の塩としては、前記したメタスチンの塩と同様のものが用いられる。

さらに、上記のスクリーニング方法またはスクリ一ニング用キットを用いて得られる物質から誘導される物質も同様に使用することができる本発明のスクリーニング方法を用いて得られる物質を上述の治療 · 予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施することができる。例えば、前記したメタスチンを含有する医薬組成物と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることができる。

このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、ゥサギ、ヒッジ、プタ、ゥシ、ゥマ、トリ、ネコ、ィヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することができる。

該物質の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、メタスチンの発現を促進する物質を経口投与する場合、一般的に成人（体重 6 0 k g当たり）においては、一日にっき該物質を約 0. 1〜； L 0 0mg、好ましくは約 1. 0〜 5 0 mg 、より好ましくは約 1. 0〜 2 O mg投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の 1回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、メタスチンの発現を促進する物質を注射剤の形で通常成人（体重 6 0 k g当たり）に投与する場合、一日につき該物質を約 0. 0 1〜 3 0 m g程度、好ましくは約 0. 1〜 2 0 m g程度、より好ましくは約 0. 1〜 1 O mg程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。 ( 7 ) DNA転移動物

本発明は、外来性のメタスチンまたはメタスチン受容体をコードする DN A (以下、本発明の外来性 DNAと略記する）またはその変異 DN A (本発明の外来性変異 DNAと略記する場合がある）を有する非ヒト哺乳動物を提供する。すなわち、本発明は、

( i ) 本発明の外来性 DN Aまたはその変異 DN Aを有する非ヒト哺乳動物、

(ii) 非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（ i ) 記載の動物、

(iii) ゲッ歯動物がマウスまたはラットである第（ii) 記載の動物、および

(iv) 本発明の外来性 D N Aまたはその変異 D N Aを含有し、哺乳動物において発現しうる組換えベクターを提供するものである。

本発明の外来性 DN Aまたはその変異 D N Aを有する非ヒト哺乳動物 (以下、本発明の DNA転移動物と略記する）は、未受精卵、受精卵、精子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対して、好ましくは、非ヒト哺乳動物の発生における胚発生の段階（さらに好ましくは、単細胞または受精卵細胞の段階でかつ一般に 8細胞期以前）に、リン酸カルシゥム法、電気パルス法、リポフエクシヨン法、凝集法、マイクロインジェクシヨン法、パーティクルガン法、 D E A E—デキストラン法などにより目的とする DN Aを転移することによって作出することができる。また、該 DNA転移方法により、体細胞、生体の臓器、組織細胞などに目的とする本発明の外来性 DNAを転移し、細胞培養、組織培養などに利用することもでき、さらに、これら細胞を上述の胚芽細胞と自体公知の細胞融合法により融合させることにより本発明の DN A転移動物を作出することもできる。

非ヒト哺乳動物としては、例えば、ゥシ、ブ夕、ヒッジ、ャギ、ゥサギ、ィヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。なかでも、病体動物モデル系の作成の面から個体発生および生物サイクルが比較的短く、また、繁殖が容易なゲッ歯動物、とりわけマウス（例えば、純系として、 C 5 7 B LZ 6系統， D BA 2系統など、交雑系として、 B 6 C 3 Fi系統， BD F,系統， B 6 D 2 F,系統， BA L B / c系統， I C R系統など）またはラット（例えば、 W i s t a r , S Dなど）などが好ましい。哺乳動物において発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」としては、上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげられる。

本発明の外来性 DN Aとは、非ヒト哺乳動物が本来有しているメタスチンまたはメタスチン受容体（以下、本発明の DNAと略記する）ではなく、いったん哺乳動物から単離 ·抽出された本発明の DNAをいう。本発明の変異 DN Aとしては、元の本発明の DN Aの塩基配列に変異 (例えば、突然変異など）が生じたもの、具体的には、塩基の付加、欠損、他の塩基への置換などが生じた DNAなどが用いられ、また、異常 DNAも含まれる。

該異常 DNAとしては、異常なメタスチンまたはメタスチン受容体を発現させる DNAを意味し、例えば、正常なメタスチンまたはメタスチン受容体の機能を抑制するペプチドを発現させる D N Aなどが用いられる。

本発明の外来性 D N Aは、対象とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来のものであってもよい。本発明の D N Aを対象動物に転移させるにあたっては、該 D N Aを動物細胞で発現させうるプロモー夕一の下流に結合した D N Aコンストラクトとして用いるのが一般に有利である。例えば、本発明のヒト DNAを転移させる場合、これと相同性が高い本発明の DNAを有する各種哺乳動物（例えば、ゥサギ、ィヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来の DNA を発現させうる各種プロモ一夕一の下流に、本発明のヒト D N Aを結合した DNAコンストラクト（例、ベクタ一など）を対象哺乳動物の受精卵、例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションすることによつて本発明の D N Aを高発現する D N A転移哺乳動物を作出することができる。

メタスチンまたはメタスチン受容体の発現ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミド、酵母由来のプラスミド、 λファージなどのバクテリオファージ、モロニ一白血病ウィルスなどのレトロウイルス、ワクシニアウイルスまたはパキュロウィルスなどの動物ウィルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由来のプラスミドなどが好ましく用いられる。

上記の D N A発現調節を行なうプロモーターとしては、例えば、ウイルス（例、シミアンウィルス、サイトメガロウィルス、モロニ一白血病ウィルス、 J Cウィルス、乳癌ウィルス、ポリオウイルスなど）に由来する D N Aのプロモー夕一、各種哺乳動物（ヒト、ゥサギ、ィヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のプロモータ一、例えば、アルブミン、インスリン I I、ゥロプラキン I I、エラス夕ーゼ、エリスロポエチン、エンドセリン、筋クレアチンキナーゼ、ダリァ線維性酸性タンパク質、ダル夕チオン S—トランスフェラ一ゼ、血小板由来成長因子 /3、ケラチン K l， 1： 1 0ぉょび；^ 1 4、コラーゲン I 型および I I型、サイクリック AM P依存夕ンパク質キナーゼ i3 Iサブユニット、ジストロフィン、酒石酸抵抗性アルカリフォスファターゼ、心房ナトリウム利尿性因子、内皮レセプターチ口シンキナーゼ（一般に T i e 2と略される）、ナトリウムカリウムアデノシン 3 リン酸化酵素 (N a , K- AT P a s e ) 、ニューロフィラメント軽鎖、メタロチォネイン Iおよび I I A、メタ口プロティナーゼ 1組織インヒビター、 M H Cクラス I抗原（H— 2 L ) 、 H— r a s、レニン、ド一パミン /3 — 水酸化酵素、甲状腺ペルォキシダ一ゼ（T P〇）、ペプチド鎖延長因子 1 a (E F - 1 a) 、 β ァクチン、およびミオシン重鎖、ミオシン軽鎖 1および 2、ミエリン基礎タンパク質、チログロブリン、 T h y— 1、免疫グロブリン、 H鎖可変部（VN P ) 、血清アミロイド Pコンポーネント、ミオグロビン、トロポニン C、平滑筋 αァクチン、プレブ口エンケフアリン A、バソプレシンなどのプロモーターなどが用いられる。なかでも、全身で高発現することが可能なサイトメガロウィルスプロモータ一、ヒトペプチド鎖延長因子 1 ひ (E F - 1 ) のプロモータ一、ヒトおよびニヮトリ 0ァクチンプロモーターなどが好適である。

上記ベクターは、 D N A転移哺乳動物において目的とするメッセンジヤー RNAの転写を終結する配列（一般にターミネータ一と呼ばれる）を有していることが好ましく、例えば、ウィルス由来および各種哺乳動物由来の各 DNAの配列を用いることができ、好ましくは、シミアンゥィルスの S V 4 0ターミネータ一などが用いられる。

その他、目的とする外来性 DNAをさらに高発現させる目的で各 DN Aのスプライシングシグナル、ェンハンサー領域、真核 DNAのイントロンの一部などをプロモーター領域の 5 '上流、プロモーター領域と翻訳領域間あるいは翻訳領域の 3 '下流に連結することも目的により可能である。

正常なメタスチンまたはメタスチン受容体の翻訳領域は、ヒトまたは各種哺乳動物（例えば、ゥサギ、ィヌ、ネコ、モルモット、ハムス夕一、ラット、マウスなど）由来の肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来 D N Aおよび市販の各種ゲノム DNAライブラリーよりゲノム DNA の全てあるいは一部として、または肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来 RNAより公知の方法により調製された相補 DN Aを原料として取得することが出来る。また、外来性の異常 DN Aは、上記の細胞または組織より得られた正常なぺプチドの翻訳領域を点突然変異誘発法により変異した翻訳領域を作製することができる。

該翻訳領域は転移動物において発現しうる DN Aコンストラクトとして、前記のプロモーターの下流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通常の DN A工学的手法により作製することができる。

受精卵細胞段階における本発明の外来性 D N Aの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞のすべてに存在するように確保される。 D N A転移後の作出動物の胚芽細胞において、本発明の外来性 DN Aが存在することは、作出動物の後代がすべて、その胚芽細胞および体細胞のすベてに本発明の外来性 DN Aを保持することを意味する。本発明の外来性 D N Aを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性 DN Aを有する。

本発明の外来性正常 DN Aを転移させた非ヒト哺乳動物は、交配により外来性 D N Aを安定に保持することを確認して、該 D N A保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。

受精卵細胞段階における本発明の外来性 D N Aの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確保される。 D N A転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の外来性 D N Aが過剰に存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性 D N Aを過剰に有することを意味する。本発明の外来性 D N Aを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性 D N Aを過剰に有する。

導入 D N Aを相同染色体の両方に持つホモザィゴー卜動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該 D N Aを過剰に有するように繁殖継代することができる。

本発明の正常 D N Aを有する非ヒ卜哺乳動物は、本発明の正常 D N A が高発現させられており、内在性の正常 D N Aの機能を促進することにより最終的にメタスチンまたはメタスチン受容体の機能亢進症を発症することがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の正常 D N A転移動物を用いて、メタスチンまたはメタスチン受容体の機能亢進症や、メタスチンまたはメタスチン受容体が関連する疾患の病態機序の解明およびこれらの疾患の治療方法の検討を行なうことが可能である。 '

また、本発明の外来性正常 D N Aを転移させた哺乳動物は、遊離したメタスチンまたはメタスチン受容体の増加症状を有することから、メタスチンまたはメタスチン受容体に関連する疾患に対する治療薬のスクリ一二ング試験にも利用可能である。

一方、本発明の外来性異常 D N Aを有する非ヒト哺乳動物は、交配により外来性 D N Aを安定に保持することを確認して該 D N A保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。さらに、目的とする外来 D N Aを前述のプラスミドに組み込んで原料として用いることができる。プロモータ一との D N Aコンストラクトは、通常の D N A工学的手法にょづて作製することができる。受精卵細胞段階における本発明の異常 D N Aの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在するように確保される。 D N A転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の異常 D N Aが存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常 D N Aを有することを意味する。本発明の外来性 D N Aを受け継いだこの種の動物の子孫は、その胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常 D N Aを有する。導入 D N Aを相同染色体の両方に持つホモザィゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該 D N Aを有するように繁殖継代することができる。

本発明の異常 D N Aを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の異常 D N A が高発現させられており、内在性の正常 D N Aの機能を阻害することにより最終的にメタスチンまたはメタスチン受容体の機能不活性型不応症となることがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の異常 D N A転移動物を用いて、本発明のペプチドの機能不活性型不応症の病態機序の解明およびこの疾患を治療方法 (^検討を行なうことが可能である。

また、具体的な利用可能性としては、本発明の異常 D N A高発現動物は、ァォエリンまたはメタスチン受容体の機能不活性型不応症における異常メタスチンまたは異常メタスチン受容体による正常メタスチンまたは正常メタスチン受容体の機能阻害（dominant nega t ive作用）を解明するモデルとなる。

また、本発明の外来異常 D N Aを転移させた哺乳動物は、遊離した本発明のメタスチンまたはメタスチン受容体の増加症状を有することから、メタスチンまたはメタスチン受容体の機能不活性型不応症（例、、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性）に対する治療薬スクリーニング試験にも利用可能である。

また、上記 2種類の本発明の D N A転移動物のその他の利用可能性として、例えば

( 1 ) 組織培養のための細胞源としての使用、

( 2 ) 本発明の D N A転移動物の組織中の D N Aもしくは R N Aを直接分析するか、または D N Aにより発現されたべプチド組織を分析することによる、メタスチンまたはメタスチン受容体により特異的に発現あるいは活性化するべプチドとの関連性についての解析、

( 3 ) D N Aを有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、これらを使用して、一般に培養困難な組織からの細胞の機能の研究、

( 4 ) 上記（ 1 ) 記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高めるような薬剤のスクリーニング、および

( 5 ) 本発明の変異べプチドを単離精製およびその抗体作製などが考えられる。

さらに、本発明の D N A転移動物を用いて、メタスチンまたはメ夕スチン受容体の機能不活性型不応症などを含む、メタスチンまたはメ夕スチン受容体に関連する疾患の臨床症状を調べることができ、また、メタスチンまたはメタスチン受容体に関連する疾患モデルの各臓器におけるより詳細な病理学的所見が得られ、新しい治療方法の開発、さらには、該疾患による二次的疾患の研究および治療に貢献することができる。

また、本発明の D N A転移動物から各臓器を取り出し、細切後、トリプシンなどのタンパク質分解酵素により、遊離した D N A転移細胞の取得、その培養またはその培養細胞の系統化を行なうことが可能である。さらに、メタスチンまたはメタスチン受容体の産生細胞の特定化、アポトーシス、分化あるいは増殖との関連性、またはそれらにおけるシグナル伝達機構を調べ、それらの異常を調べることなどができ、メタスチンまたはメタスチン受容体およびその作用解明のための有効な研究材料となる。

さらに、本発明の D N A転移動物を用いて、メタスチンまたはメタスチン受容体の機能不活性型不応症を含む、メタスチンまたはメタスチン受容体に関連する疾患の治療薬の開発を行なうために、上述の検査法および定量法などを用いて、有効で迅速な該疾患治療薬のスクリ一二ング法を提供することが可能となる。また、本発明の DNA転移動物または本発明の外来性 DNA発現べクタ一を用いて、メタスチンまたはメタスチン受容体が関連する疾患の DN A治療法を検討、開発することが可能である。

( 8 ) ノックアウト動物

本発明は、メダスチンまたはメタスチン受容体をコードする D N A ( 以下、本発明の DNAと略記する）が不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞および本発明の DN A発現不全非ヒ卜哺乳動物を提供する。

すなわち、本発明は、

( i ) 本発明の DNAが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、 (ii) 該 DNAがレポ一夕一遺伝子（例、大腸菌由来の一ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化された第（ i ) 項記載の胚幹細胞、

(iii) ネオマイシン耐性である第（ i ) 項記載の胚幹細胞、

(iv) 非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（ i ) 項記載の胚幹細胞、 ( V ) ゲッ歯動物がマウスである第（iv) 項記載の胚幹細胞、

(vi) 本発明の DNAが不活性化された該 DNA発現不全非ヒト哺乳動物、

(vii) 該 DNAがレポ一夕一遺伝子（例、大腸菌由来の ;3—ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発明の D NAに対するプロモータ一の制御下で発現しうる第（ vi) 項記載の非ヒト哺乳動物、

(viii) 非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（vi) 項記載の非ヒト哺乳動物、

(ix) ゲッ歯動物がマウスである第（viii) 項記載の非ヒト哺乳動物、および

(x) 第（vii) 項記載の動物に、試験化合物を投与し、レポ一夕一遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明の DN Aに対するプロモ —ター活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。

本発明の DNAが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞とは、該非ヒト哺乳動物が有する本発明の D N Aに人為的に変異を加えることにより、 D N Aの発現能を抑制するか、もしくは該 D N Aがコードしている本発明のぺプチドの活性を実質的に喪失させることにより、 D N Aが実質的に本発明のペプチドの発現能を有さない（以下、本発明のノックァゥト DNAと称することがある）非ヒ卜哺乳動物の胚幹細胞（以下、 E S細胞と略記する）をいう。

非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。

本発明の DNAに人為的に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手法により該 D N A配列の一部又は全部の削除、他 DNAを揷入または置換させることによって行なうことができる。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠をずらしたり、プロモーターあるいはェキソンの機能を破壊することにより本発明のノックアウト DNAを作製すればよい。

本発明の DN Aが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞（以下、本発明の DNA不活性化 E S細胞または本発明のノックアウト E S細胞と略記する）の具体例としては、例えば、目的とする非ヒト哺乳動物が有する本発明の D N Aを単離し、そのェキソン部分にネオマイシン耐性遺伝子、八ィグロマイシン耐性遺伝子を代表とする薬剤耐性遺伝子、あるいは 1 a c Z ( /3—ガラクトシダ一ゼ遺伝子）、 c a t (クロラムフエニコ一ルァセチル卜ランスフェラ一ゼ遺伝子）を代表とするレポ一ター遺伝子等を挿入することによりェキソンの機能を破壊するか、あるいはェキソン間のイントロン部分に遺伝子の転写を終結させる DN A配列（例えば、 polyA付加シグナルなど）を挿入し、完全なメッセンジャー R NAを合成できなくすることによって、結果的に遺伝子を破壊するように構築した DNA配列を有する DNA鎖（以下、ターゲッティングべク夕一と略記する）を、例えば相同組換え法により該動物の染色体に導入し、得られた E S細胞について本発明の DN A上あるいはその近傍の D N A配列をプローブとしたサザンハイプリダイゼーション解析あるいは夕—ゲッティングベクタ一上の DNA配列と夕ーゲッティングベクタ一作製に使用した本発明の D N A以外の近傍領域の D N A配列をプライマ一とした P C R法により解析し、本発明のノックアウト E S細胞を選別することにより得ることができる。

また、相同組換え法等により本発明の DNAを不活化させる元の E S 細胞としては、例えば、前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知 Evansと Kaufmaの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。例えば、マウスの E S細胞の場合、現在、一般的には 1 2 9系の E S細胞が使用されているが、免疫学的背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で免疫学的に遺伝的背景が明らかな E S細胞を取得するなどの目的で例えば、 C 5 7 BLZ6マウスや C 57 B L/6の採卵数の少なさを D BA 2との交雑により改善した BD F₁マウス（C 5 7 BL/6と D BA/2との F!) を用いて樹立したものなども良好に用いうる。 BD F!マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が丈夫であるという利点に加えて、 C 57 B L/ 6マウスを背景に持つので、これを用いて得られた E S細胞は病態モデルマウスを作出したとき、 C 57 B L / 6マウスとバッククロスすることでその遺伝的背景を C 57 BL/6 マウスに代えることが可能である点で有利に用い得る。

また、 E S細胞を樹立する場合、一般には受精後 3. 5日目の胚盤胞を使用するが、これ以外に 8細胞期胚を採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより^!率よく多数の初期胚を取得することができる。

また、雌雄いずれの E S細胞を用いてもよいが、通常雄の E S細胞の方が生殖系列キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行なうことが望ましい。

E S細胞の雌雄の判定方法としては、例えば、？ 0 法にょり丫染色体上の性決定領域の遺伝子を増幅、検出する方法が、その 1例としてあげることができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析をするのに約 1 0⁶個の細胞数を要していたのに対して、 1コロニー程度の E S細胞数（約 5 0個）で済むので、培養初期における E S細胞の第一次セレクションを雌雄の判別で行なうことが可能であり、早期に雄細胞の選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減できる。

また、第二次セレクションとしては、例えば、 G—バンデイング法による染色体数の確認等により行うことができる。得られる E S細胞の染色体数は正常数の 1 0 0 %が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、 E S細胞の遺伝子をノックアウトした後、正常細胞 (例えば、マウスでは染色体数が 2 n = 4 0である細胞）に再びクローニングすることが望ましい。

このようにして得られた胚幹細胞株は、通常その増殖性は大変良いが、個体発生できる能力を失いやすいので、注意深く継代培養することが必要である。例えば、 S T 0繊維芽細胞のような適当なフィーダ一細胞上で L I F ( 1〜1 0 0 0 Οϋ/ml) 存在下に炭酸ガス培養器内（好ましくは、 5 %炭酸ガス、 9 5 %空気または 5 %酸素、 5 %炭酸ガス、 9 0 %空気) で約 3 7 °Cで培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、トリプシン ZE D T A溶液（通常 0. 0 0 1〜 0. 5 %トリプシン/ 0. 1'〜 5 mM E D TA、好ましくは約 0. 1 % トリプシン Z l mM ED T A) 処理により単細胞化し、新たに用意したフィーダ一細胞上に播種する方法などがとられる。このような継代は、通常 1〜3 日毎に行なうが、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常な細胞が見受けられた場合はその培養細胞は放棄することが望まれる。

E S細胞は、適当な条件により、高密度に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔M. J. Evans及び M. H. Kaufman, ネイチヤー（Nature) 第 292巻、 154頁、 1981年； G. R. Martin プロシ一ディングス . ォブ · ナショナル . ァカデミ一 ' ォブ ' サイエンス ' ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.) 第 78巻、 7634頁、 1981年； Τ· C. Doetschman ら、ジャーナル · ォブ · ェンブリオロジー ' アンド · ェクスペリメンタル . モルフォロジー、第 87巻、 27頁、 1985年〕、本発明の E S細胞を分化させて得られる本発明の DNA発現不全細胞は、ィンビトロにおける本発明のぺプチドまたは本発明のレセプ夕一蛋白質の細胞生物学的検討において有用である。

本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物は、該動物の mRNA量を公知方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、正常動物と区別することが可能である。

該非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。

本発明の DNA発現不全非ヒト哺乳動物は、例えば、前述のようにして作製したターゲッティングベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入し、導入によりターゲッティングベクタ一の本発明の DNA が不活性化された D N A配列が遺伝子相同組換えにより、マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上の本発明の D N Aと入れ換わる相同組換えをさせることにより、本発明の DNAをノックアウトさせることができる。

本発明の DNAがノックァゥ卜された細胞は、本発明の DNA上またはその近傍の D N A配列をプローブとしたサザンハイプリダイゼーション解析または夕ーゲッティングベクタ一上の DN A配列と、夕一ゲッティングベクターに使用したマウス由来の本発明の D N A以外の近傍領域の D NA配列とをプライマーとした P C R法による解析で判定することができる。非ヒト哺乳動物胚幹細胞を用いた場合は、遺伝子相同組換えにより、本発明の DNAが不活性化された細胞株をクローニングし、その細胞を適当な時期、例えば、 8細胞期の非ヒト哺乳動物胚または胚盤胞に注入し、作製したキメラ胚を偽妊娠させた該非ヒ卜哺乳動物の子宮に移植する。作出された動物は正常な本発明の D N A座をもつ細胞と人為的に変異した本発明の D N A座をもつ細胞との両者から構成されるキメラ動物である。

該キメラ動物の生殖細胞の一部が変異した本発明の D N A座をもつ場合、このようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群より、全ての組織が人為的に変異を加えた本発明の D N A座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コートカラーの判定等により選別することにより得られる。このようにして得られた個体は、通常、本発明のぺプチドのヘテロ発現不全個体であり、本発明のぺプチドのヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔から本発明のペプチドのホモ発現不全個体を得ることができる。

卵細胞を使用する場合は、例えば、. 卵細胞核内にマイクロインジェクション法で D N A溶液を注入することによりターゲッティングベクタ一を染色体内に導入したトランスジエニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、これらのトランスジエニック非ヒト哺乳動物に比べて、遺伝子相同組換えにより本発明の D N A座に変異のあるものを選択することにより得られる。

このようにして本発明の D N Aがノックァゥ卜されている個体は、交配により得られた動物個体も該 D N Aがノックアウトされていることを確認して通常の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。

さらに、生殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。すなわち、該不活化 D N Aの保有する雌雄の動物を交配することにより、該不活化 D N Aを相同染色体の両方に持つホモザィゴ一卜動物を取得しうる。得られたホモザィゴート動物は、母親動物に対して、正常個体 1 ，ホモザィゴート複数になるような状態で飼育することにより効率的に得ることができる。ヘテロザィゴート動物の雌雄を交配することにより、該不活化 D N Aを有するホモザィゴー卜およびへテロザィゴー卜動物を繁殖継代する。

本発明の D N Aが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞は、本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物を作出する上で、非常に有用である。また、本発明の D N A発現不全非ヒ卜哺乳動物は、本発明のペプチドにより誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、本発明のぺプチドの生物活性の不活性化を原因とする疾病のモデルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治療法の検討に有用である。

( 8 a ) 本発明の D N Aの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療 •予防効果を有する物質のスクリーニング方法

本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明の D N Aの欠損や損傷などに起因する疾病（例、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギ一、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性）に対して治療 · 予防効果を有する物質のスクリ一ニングに用いることができる。

すなわち、本発明は、本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の変化を観察 ·測定することを特徴とする、本発明の D N Aの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療 ·予防効果を有する物質のスクリ一二ング方法を提供する。

該スクリ一二ング方法において用いられる本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものがあげられる。

試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。

具体的には、本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物を、試験化合物で処理し、無処理の対照動物と比較し、該動物の各器官、組織、疾病の症状などの変化を指標として試験化合物の治療 · 予防効果を試験することができる。

試験動物を試験化合物で処理する方法としては、例えば、経口投与、静脈注射などが用いられ、試験動物の症状、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。また、試験化合物の投与量は、投与方法、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。該スクリーニング方法において、試験動物に試験化合物を投与した場合、該試験動物の疾患症状が約 1 0 %以上、好ましくは約 3 0 %以上、より好ましくは約 5 0 %以上改善された場合、該試験化合物を上記の疾患に対して治療 ·予防効果を有する物質として選択することができる。具体的には、該試験化合物を例えば、血糖上昇剤、膝グルカゴン分泌促進剤、尿生成促進剤として、さらには、例えば、肥満、高脂血症、 2 型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、ィンスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療剤として使用することができる。

その他、該試験化合物は、血糖上昇機能、塍グルカゴン分泌機能、尿生成機能を調べるための検査薬としても応用できる。

該スクリ一ニング方法を用いて得られる物質は、上記した試験化合物から選ばれた物質であり、メタスチンまたはメタスチン受容体の欠損や損傷などによって引き起こされる疾患に対して治療 ·予防効果を有するので、該疾患に対する安全で低毒性な治療 ·予防剤などの医薬として使用することができる。

さらに、上記スクリーニングで得られた物質から誘導される物質も同様に用いることができる。

上記スクリ一ニング方法で得られた物質は塩を形成していてもよく、該物質の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸など）や塩基（例、アルカリ金属など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。該スクリ一二ング方法で得られた物質を含有する医薬は、前記したメタスチンを含有する医薬と同様にして製造することができる。

このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ゥサギ、ヒッジ、プ夕、ゥシ、ゥマ、ネコ、ィヌ、サルなど）に対して投与することができる。

該物質の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、該物質を経口投与する場合、一般的に成人患者（体重 6 0 k gとして）においては、一日にっき該化合物を約 0. 1〜 1 0 0m g、好ましくは約 1. 0〜 5 0mg、より好ましくは約 1. 0〜 2 O m g投与する。非経口的に投与する場合は、該物質の 1回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、該物質を注射剤の形で通常成人患者（体重 6 O k gとして）に投与する場合、一日につき該物質を約 0. 0 1〜 3 0 m g程度、好ましくは約 0. l〜 2 0 mg程度、より好ましくは約 0. 1〜 1 O m g程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。

( 8 b) 本発明の DNAに対するプロモーターの活性を促進または阻害する物質のスクリーニング方法

本発明は、本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明の DN Aに対するプロモーターの活性を促進または阻害する物質のスクリ一二ング方法を提供する。

上記スクリーニング方法において、本発明の DN A発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記した本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物の中でも、本発明の DN Aがレポ一夕一遺伝子を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発明の D N Aに対するプロモー夕一の制御下で発現しうるものが用いられる。

試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。レポ一夕一遺伝子としては、前記と同様のものが用いられ、 j3—ガラクトシダーゼ遺伝子（ 1 a c Z ) 、可溶性アル力リフォスファターゼ遺伝子またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。

本発明の D N Aをレポーター遺伝子で置換された本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物では、レポーター遺伝子が本発明の D N Aに対するプロモーターの支配下に存在するので、レポ一夕一遺伝子がコードする物質の発現をトレースすることにより、プロモーターの活性を検出することができる。

例えば、本発明のペプチドをコードする D N A領域の一部を大腸菌由来の /3—ガラクトシダーゼ遺伝子（ 1 a c Z ) で置換している場合、本来、本発明のペプチドの発現する組織で、本発明のペプチドの代わりに；3—ガラクトシダーゼが発現する。従って、例えば、 5—プロモー 4— クロ口一 3—インドリル一 ]3—ガラクトピラノシド（X— g a l ) のような /3—ガラクトシダ一ゼの基質となる試薬を用いて染色することにより、簡便に本発明のペプチドの動物生体内における発現状態を観察することができる。具体的には、本発明のペプチド欠損マウスまたはその組織切片をグルタルアルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（P B S ) で洗浄後、 X— g a 1 を含む染色液で、室温または 3 7 付近で、約 3 0分ないし 1時間反応させた後、組織標本を I m M E D T A / P B S溶液で洗浄することによって、 3—ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色を観察すればよい。また、常法に従い、 l a c Zをコードする m R N Aを検出してもよい。

上記スクリ一エング方法を用いて得られる物質は、上記した試験化合物から選ばれた物質であり、本発明の D N Aに対するプ口モーター活性を促進または阻害する物質である。

該スクリ一二ング方法で得られた物質は塩を形成していてもよく、該物質の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸な^ ) や塩基 (例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。

本発明の D N Aに対するプロモーター活性を促進する物質は、メ夕スチンまたはメタスチン受容体の発現を促進し、メタスチンの機能を促進することができるので、例えば、血糖上昇剤、塍グルカゴン分泌促進剤、尿生成促進剤として有用である。

さらには、本発明の D N Aに対するプロモー夕一活性を促進する物質は、例えば、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害'、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療剤として有用である。

一方、本発明の D N Aに対するプロモーター活性を阻害する物質は、メタスチンまたはメタスチン受容体の発現を阻害し、メタスチンの機能を阻害することができるので、例えば、血糖低下剤、滕グルカゴン分泌抑制剤、尿生成抑制剤として有用である。

さらには、本発明の D N Aに対するプロモーター活性を阻害する物質は、例えば、糖尿病、耐糖能障害、ケトーシス、アシドーシス、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、頻尿、夜尿症、高脂血症、性機能障害、皮膚疾患、関節症、骨減少症、動脈硬化、血栓性疾患、消化不良または記憶学習障害の予防 · 治療剤として使用することができる。さらに、上記スクリーニングで得られた物質から誘導される物質も同様に用いることができる。

該スクリ一ニング方法で得られた物質を含有する医薬は、前記したメタスチンを含有する医薬と同様にして製造することができる。

このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ゥサギ、ヒッジ、ブ夕、ゥシ、ゥマ、ネコ、ィヌ、サルなど）に対して投与することができる。

該物質の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明の DNAに対するプロモーター活性を促進または阻害する物質を経口投与する場合、一般的に成人患者（体重 6 O k gとして）においては、一日につき該物質を約 0. 1〜 1 0 0 m g、好ましくは約 1. 0〜 5 0mg、より好ましくは約 1. 0〜 2 0 mg投与する。非経口的に投与する場合は、該物質の 1回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明の D N Aに対するプロモーター活性を促進または阻害する物質を注射剤の形で通常成人患者（体重 6 0 k gとして）に投与する場合、一日につき該物質を約 0. 0 1 〜 3 0 mg程度、好ましくは約 0. l〜 2 0mg程度、より好ましくは約 0. 1〜 1 0 m g程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。

このように、本発明の DNA発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明の D N Aに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリ一二ングする上で極めて有用であり、本発明の DN A発現不全に起因する各種疾患の原因究明または予防 ·治療薬の開発に大きく貢献することができる。

また、本発明のぺプチドのプロモータ一領域を含有する D N Aを使つて、その下流に種々のタンパクをコ一ドする遺伝子を連結し、これを動物の卵細胞に注入していわゆるトランスジエニック動物（遺伝子移入動物）を作成すれば、特異的にそのペプチドを合成させ、その生体での作用を検討することも可能となる。さらに上記プロモーター部分に適当な • レポーター遺伝子を結合させ、これが発現するような細胞株を樹立すれば、本発明のぺプチドそのものの体内での産生能力を特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系として使用できる。本発明は、更に以下の実施例、製剤例及び試験例によって詳しく説明されるが、これらの例は単なる実施であって、本発明を限定するものではなく、また本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。

以下の実施例中の「室温」は通常約 1 0 °Cないし約 3 5 °Cを示す。％は、収率は mol/mol%を、クロマトグラフィーで用いられる溶媒は体積％を、その他は重量⁰/。を示す。プロトン NMRスペクトルで、 OH や NHプロトン等ブロードで確認できないものについてはデータに記載していない。

その他の本文中で用いられている略号は下記の意味を示す。

略名和名

10 Ψ , CSNH ： 10位 C末端の - C0NH₂が- CSNH₂に置換されていることを示す。

1Ψ 2, CH₂NH ： 1位と 2位間の- C0NH-結合が - CH₂NH-結合に置換されていることを示す。

2Ψ3, CH₂NH ： 2位と 3位間の - C0NH -結合が - CH₂NH-結合に置換されていることを示す。

3Ψ4, CH₂腿： 3位と 4位間の- C0NH -結合が- CH₂腿-結合に置換されていることを示す。

4Ψ 5, CH₂NH ： 4位と 5位間の- C0NH 結合が - CH₂NH -結合に置換されていることを示す。

6Ψ7, CSNH ： 6位と 7位間の - C0NH-結合が - CS腿-結合に置換されていることを示す。

6 7,NHC0 ： 6位と 7位間の - C0NH-結合が - NHC0-結合に置換されていることを示す。

6Ψ7, CH₂NH ： 6位と 7位間の -C0NH -結合が - CH₂NH -結合に置換されていることを示す。

7Ψ8, CH₂NH ： 7位と 8位間の - C0NH -結合が -CH₂丽 -結合に置換されていることを示す。 8Ψ9, CH₂NH ： 8位と 9位間の- CONH-結合が- CH₂NH -結合に置換されていることを示す。

9 10, CH₂NH ： 9位と 10位間の- CONH-結合が- (¾丽 -結合に置換されていることを示す。

Abu 2 -アミノブ夕ン酸

Ac ：ァセチル

AcOEt 酢酸ェチル

AcOH 酢酸

Ala (2 - Qui) 2-キノリルァラニン

Ala(3-Bzt) 3 -べンゾチェ二ルァラニン

Arg (Ac) Ν^ω -ァセチルアルギニン

Arg (Boc₂, Me) Ν^ω·^ω' -ビス- tert-ブトキシカルポニル- Ν^ω -メチルアルギニン

Arg(Et) Ν^ω -ェチルアルギニン

Arg (Me) Ν^ω -メチルアルギニン

Arg (asyMe₂) 非対称- Ν^ω'^ω -ジメチルアルギニン

Arg (symMe₂) 対称- Ν^ω'^ω' -ジメチルアルギニン

Arg (n-Pr) Ν^ω -プロピルアルギニン

AzaGly ァザグリシン

β -Ala ベ一タァラニン

Boc tert-ブトキシカルボ'ニル

Br-Z 2-ブロモベンジルォキシカルポニル

Bu^l tert-ブチル

Bzl ベンジル

CDI 1， Γ -力ルポ二ルジィミダゾール

Cha シク口へキシルァラニン

CIP 2-クロロ- 1, 3-ジメチルイミダゾリゥムテトラフルォロポレー卜 Cit シトルリン

Clt resin 2 -クロロトリチルレジン

CI- Z 2 -クロロべンジルォキシカルボニル

Dab 1, 4-ジアミノブ夕ン酸

Dap 1, 3 -ジアミノプロピオン酸

Dap (Gly) Ν^β -グリシルジァミノプロピオン酸

Dap (GnGly) Ν⁰- (Ν-グァニジノグリシル）ジァミノプロピオン酸

DCM ジクロロメタン

DEA ジェチルアミン

DIEA Ν, N' -ジィソプロピルェチルアミン

DMF Ν, Ν-ジメチルホルムアミド

EDT エタンジチオール

Fmoc 9 -フルォレニルメトキシカルポニル

Gn ：グァニジノ

Har ：ホモアルギニン

Har (Me) ： Ν^ω -メチルホモアルギニン

HOAt ：卜ヒドロキシ- 7-ァザべンゾトリアゾ一ル

HOBt ： 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール

画 B ： Ν -ヒドロキシ- 5 -ノルボルネン _2， 3 -ジカルポキミド Hp ：ホモフエ二ルァラニン

IndPr ： 3- (インドール- 3-ィル）プロピオエル

Lys (Me₂) Ν^Ε' ^ε -ジメチルリジン

MBHA ： Ρ-メチルベンズヒドリルァミン

MeOH ：メタノール

N((CH₂)₃Gn)Gly Ν- (3-グァニジノプロピル）グリシン

Nal (1) ：卜ナフチルァラニン

Nal (2) ： 2-ナフチルァラニン

Nar ：ノルアルギニン

Nar (Me) ： Ν^ω -メチルノルアルギニン Nle ：ノル口イシン

NMeArg Ν^α-メチルアルギニン

NMeLeu N^a-メチルロイシン

NMePhe N メチルフエ二ルァラノ

NMeSer Ν^α-メチルセリン

Orn オル二チン

Orn (Mtt) Ν^δ- (4-メチルトリチル）オル二チン

PAL ： 5- (4 -（9 -フルォレニルメトキシカルポニル） -ァミノメチル -3 5-ジメトキシフエノキシ）吉草酸

Pbf ： 2, 2, 4, 6, 7 -ペンタメチルジヒドロベンゾフラン- 5 - スルフォニル

Phe (2C1) ： 2-ク口口フエ二ルァラニン

Phe (2F) ： 2-フルオロフェニルァラニン

Phe (3 4C1₂) ： 3, 4-ジクロロフエ二ルァラニン

Phe (3, 4F₂) ： 3 4-ジフルオロフェニルァラニン

Phe (3CF₃) ： 3 -トリフルォロメチルフエ二ルァラニン

Phe (3C1) ： 3-ク口口フエ二ルァラニン

Phe (3F) ： 3-フルオロフェニルァラニン

Phe (4C1) ： 4-クロ口フエ二ルァラニン

Phe (4CN) ： 4-シァノフエ二ルァラニン

Phe (4F) ： 4-フルオロフェニルァラニン

Phe (4Gn) ： 4-グァニジノフエ二ルァラニン

Phe (4匪 ₂) ： 4-ァミノフエ二ルァラニン

Phe (4N0₂) ： 4-二卜口フエ二ルァラニン

Phe (4CN) ： 4-シァノフエ二ルァラニン

Phe (F₅) ：ペン夕フルオロフェニルァラニン

ΡΙιεΨ (CSNH) -ΝΗ₂ ： C末端のフエニルァラニルアミドがフエ二ルァラ二ルチオアミドで置換されていることを示す

P g ：フエニルダリシン P OH フエノ一ル

P SMe チオア二ソール

Pro プロリン

Pya(2) 2-ピリジルァラニン

Pya(3) 3 -ピリジルァラニン

Pya (4) 4-ピリジルァラニン

PyAOP ： (7-ァザべンゾトリァゾール- 1-ィルォキシ）-トリス（ピロリジノ）ホスホニゥムへキサフルオロフォスフェイト

PyBOP ： (ベンゾトリァゾール-卜ィルォキシ） -トリス（ピロリジノ）ホスホニゥムへキサフルオロフォスフェイト

PyBrop ：ブロモ-トリス（ピロリジノ）ホスホニゥムへキサフルオロフォスフェイト

Sar ： N-メチルダリシン

Tie ： tert-ロイシン

Trp (For) N^IN-ホルミルトリブトファン

Tyr (Me) ： 0-メチルチ口シン

ΤΥΓΨ (CH₂NH) Asn ： Tyrと Asnとの間の- C0NH-結合が- C NH_結合に置換されていることを示す,

TFA トリフルォロ酢酸

TFE トリフルォロエタノール本明細書および図面において、塩基やアミノ酸などを略号で表示する ±易合、 I U P A C - I U B Commis ion on Biochemical Nomenclature による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければ L体を示すものとする。

DNA ：デォキシリポ核酸

c D NA ：相補的デォキシリポ核酸

A ：アデニン τ チミン

G グァニン

C シ卜シン

Y チミンまたはシ卜シン

N チミン、シトシン、アデニンまたはグァニン R アデニンまたはグァニン

M シトシンまたはアデニン

W チミンまたはアデニン

S シ卜シンまたはグァニン

R N A リポ核酸

m R N A メッセンジャーリポ核酸

d A T P デォキシアデノシン三リン酸

d T T P デォキシチミジン三リン酸

d G T P デォキシグアノシン三リン酸

d C T P デォキシシチジン三リン酸

A T P アデノシン三リン酸

E D T A エチレンジアミン四酢酸

S D S ドデシル硫酸ナトリゥム

T F A トリフルォロ酢酸

E I A ェンザィムィムノアッセィ

G 1 yまたは G グリシン

A 1 aまたは A ァラニン

V a 1 または V バリン

L e uまたは] L ロイシン

I 1 eまたは I イソロイシン

S e rまたは S セリン

T h rまたは T スレオニン

C y sまたは C システィン

M e tまたは M メチォニン G 1 uまたは E ：ダルタミン酸

A s pまたは D ：ァスパラギン酸

L y s または K ：リジン

A r gまたは R ：アルギニン

H i s または H ：ヒスチジン

P h eまたは F ：フエ二ルァラニン

T y rまたは Y ：チロシン

T r または W ：トリブトファン

P r oまたは P ：プロリン

A s nまたは N ：ァスパラギン

G 1 nまたは Q ：ダルタミン

p G 1 u ：ピロダルタミン酸本明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。

配列番号： 1

ヒト由来メタスう Aン（Metastin) のアミノ酸配列を示す

配列番号： 2

ヒトメタスチンをコ一ドする D N Aの塩基配列を示す。

配列番号： 3

マウスメ夕スチ前駆体（A) のアミノ酸配列を示す。

配列番号： 4.

マウスメタスチン前駆体（A) をコードする DN Aの塩基配列を示す。形質転換体ェシエリヒア · コリ（Escherichia coli) DH 1 0 B/p CMV-mK i S S— 1に保持されるプラスミド p CMV— mK i S S 一 1に含まれる塩基配列である。

配列番号： 5

マウスメタスチン前駆体（B) のアミノ酸配列を示す。

配列番号： 6

マウスメタスチン前駆体（B) をコードする DNAの塩基配列を示す。形質転換体ェシエリヒア ' コリ（Escherichia coli) D H 5 a Z p C R 2. 1— mK i S S— 1. 4 Aに保持されるプラスミド p C R 2. 1 一 mK i S S— 1. 4 Aに含まれる塩基配列である。

配列番号： 7

ラット由来メタスチン前駆体のアミノ酸配列を示す。

配列番号： 8

ラットメタスチン前駆体をコードする DN Aの塩基配列を示す。

配列番号： 9

ヒト OT 7 T 1 7 5 (メタスチン受容体）のアミノ酸配列を示す。配列番号： 1 0

ヒト OT 7 T 1 7 5 (メタスチン受容体）をコードする DNAの塩基配列を示す。

配列番号： 1 1

ラット OT 7 T 1 7 5 (メタスチン受容体）のアミノ酸配列を示す。配列番号： 1 2

ラット OT 7 T 1 7 5 (メタスチン受容体）をコードする DN Aの塩基配列を示す。

配列番号： 1 3

マウス OT 7 T 1 7 5 (メタスチン受容体）のアミノ酸配列を示す。配列番号： 1 4

マウス OT 7 T 1 7 5 (メタスチン受容体）をコードする DNAの塩基配列を示す。

配列番号： 1 5

ヒトメタスチン 1 5 ( 4 0 - 54) のアミノ酸配列を示す。

配列番号： 1 6

ヒトメタスチン 1 0 ( 4 5— 5 4 ) (MS 1 0 ) のアミノ酸配列を示す。

配列番号： 1 7

ヒトメタスチン 9 (4 6 - 54 ) のアミノ酸配列を示す。配列番号： 1 8

ヒトメタスチン 8 (4 7 - 54 ) のアミノ酸配列を示す。

配列番号： 1 9

ヒトメタスチン 1 5 ( 40 - 5 4 ) をコードする DN Aの塩基配列を示す。

配列番号： 2 0

ヒトメタスチン 1 0 (4 5— 5 4) をコードする D N Aの塩基配列を示す。

配列番号： 2 1

ヒトメタスチン 9 (4 6— 54) をコードする DN Aの塩基配列を示す。

配列番号： 2 2

ヒトメタスチン 8 ( 4 7 - 54 ) をコードする DN Aの塩基配列を示す。形質転換体ェシェリヒア ' コリ（Escherichia coli) D H 1 0 B/ p CMV— mK i S S— 1は、平成 1 2 ( 2 0 0 0 ) 年 1月 24·日から茨城県つくば市東 1丁目 1番地 1 中央第 6 (郵便番号 3 0 5— 8 5 6 6 ) の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（旧通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（N I BH) ) に寄託番号 F E RM B P— 7 0 0 3として、平成 1 1 ( 1 9 9 9 ) 年 1 2月 1 6 日から大阪府大阪市淀川区十三本町 2— 1 7— 8 5の財団法人 ·発酵研究所（ I F O) に寄託番号 I F 0 1 6 3 4 8として寄託されている。形質転換体ェシエリヒア · コリ（Escherichia coli) D H 5 a / p C R 2. 1— mK i S S— l . 4Aは、平成 1 2年 3月 6 日から茨城県つくば市東 1丁目 1番地 1 中央第 6 (郵便番号 3 0 5— 8 5 6 6 ) の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（旧通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（N I BH) ) に寄託番号 F E RM B P— 7 0 7 3として、平成 1 2年 2月 1 6 日から財団法人 '発酵研究所（ I F O) に寄託番号 I F O 1 6 3 6 0として寄託されている。本発明において、 Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-P e-NH₂ ( 配列番号： 1 6 ) をメタスチン： L 0 (MetastinlO) 、すなわち MS 10と表記する。

後述する実施例において、 MS10の N末端の Tyrの位置を 1位、 C末端の Pheの位置を 1 0位と数える。

Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH₂

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

例えば、化合物番号 79 (実施例 1 ) の [HphlO]MS10は MS10の C末端（ 1 0位）の Pheが Hphに置換されたペプチドであることを意味する。

例えば、化合物番号 4の des (1)- MS10は N末端（ 1位）の Tyrを欠失させたペプチドであることを意味する。

例えば、化合物番号 53の des (卜 3)- Fmoc- MS10は N末端（ 1〜 3位）の Tyr-Asn-Trpを欠失させ、 4位の Asnのァミノ基に Fmocを修飾したぺプチドであることを意味する。. 実施例

実施例 1 (合成法 A) ： [HphlO]MS10 (化合物番号 79) の製造

市販の PAL res in に Fmoc- Hph を導入することで調製した Fmoc- Hph- PAL resin (sub. 0.39 nimol I g) 51 mg を用い、マルチペプチドシンセサイザ一 ACT- 396 によりペプチド鎖を伸長し、 Tyr (Bu^l) _Asn ( Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu^l) PheGlyLeuArg (Pbf) Hph-PAL resin を得た。うち、 18.2 mg に TFA I PhSMe I m-cresol

I TIS / EDT (85 / 5 / 5 / 2.5 / 2.5) 200 nl を加え 2 時間振盪した。反応溶液にジェチル'エーテルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC D-0DS-5-ST S- 5 120A カラム（20 x 150匪）を用いた分取 HPLCで、 A液： 0.1%TFA-水、 B液： 0. TFA含有ァセトニトリルによる A/B: 73/27〜 63/37への直線型濃度勾配溶出（30分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 2.6mgを得た。

質量分析による（M+H)⁺ 1316.5 (計算値 1316.7)

HPLC溶出時間： 20.6 分

溶出条件

カラム： Wakosi卜 Π 5C18 HG (4.6 x 100mm)

溶離液： A液： 0.1%TFA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルを用い > A/B: 100/0~30/70へ。直線型濃度勾配溶出（35分）。

流速： 1.0ml/分実施例 2 (合成法 B) ： [Trp (For) 10]MS10 (化合物番号 186) の製造法

市販 2-chlorotritylc loride resin (CI t resin, 1.33龍 ol/g) に Fmoc-Arg(Pbf)-0H を導入した Fmoc- Arg (Pbf) _0 - Clt resin (sub. 0.33 醒 ol I g) 379 nig を用い、 ABI 433A を用いペプチド鎖を伸長し、 Boc- Tyr (Bu¹) Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu¹) PheGlyLeuArg (Pbf) -0- Clt resin を 540 mg 得た。うち 270 mg に AcOH I TFE I DCM (1 I 1 / 8) 10 mL を加え、 30 分振盪した。樹脂をろ去後溶媒を濃縮し、 AcOEt に溶解後、 satd NaCl a . で洗浄した。 Na₂S0₄ で乾燥後溶媒を濃縮し、ジェチルエーテル · 石油エーテルを加え、沈殿として Boc- Tyr (Bu¹) Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu¹) PheGlyLeuArg (Pbf) - OHを得た 68 mgo うち 22 mg に HC1 H-Trp (For) -NH₂ (Boc-Trp (For) -NH₂ を 9.7 N HC1 I dioxane, 0 。C、 30 分処理することにより調製） 4 mg、 PyAOP 10 nig、 ΗΟΑί 5 mg、 DIEA 11

Hi を加え、 15 時間撹拌した。溶媒を濃縮し、クロ口ホルム · ジェチルエーテルを加え沈殿とし Boc - Tyr (Bu¹) Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu') PheGlyLeuArg (Pbf) Trp (For 卜 NH₂を得た。これに TFA I PhSMe I m - cresol I TIS I EDT (85 I

5 / 5 / 2.5 / 2.5) 1 mL を加え 2 時間撹拌した。反応溶液にジェチルエーテルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、

YMC D-0DS-5-ST S-5 120A カラム（20 x 150mm)を用いた分取 HPLCで、 A 液： 0.1%TFA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルによる A/B: 73/27〜 63/37への直線型濃度勾配溶出（30分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 2. Offlgを得た。

質量分析による（M+H)+ 1369.3 (計算値 1369.6)

HPLC溶出時間： 19.6 分

溶出条件

カラム： Wakosi卜 II 5C18 HG (4.6 x 100mm)

溶離液： A液： 0.1 FA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルを用い、 A/B: 100/0〜30/70へ。直線型濃度勾配溶出（35分）。

流速： 1. Oml/分実施例 3 (合成法 C) ： [10Ψ, CSNH1MS10 (化合物番号 128) の製造

Boc- Phe-皿₂ 264 mg を THF 20 mL に溶解後、 Lawesson' s reagent 1.62 g を加え 24 時間撹拌した。不溶物をろ去後溶媒を濃縮し、 AcOEt 溶解後 satd NaHC0₃ aQ.、 satd NaCl a . で洗浄した。 Na₂S0₄ で乾燥後溶媒を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。ジェチルェ一テル ' 石油エーテルを加え沈殿として（S) - 2- ter fButoxycar.bonylamino-3-phenylpropaneihioainide (Boc - Phe Ψ (CSNH) -NH₂) を得た 275 mg (収率 98%)。うち 42 mg を 0 °C 下 9.7 N HC1 処理による脱 Boc後、 10% DEA I DMF 処理による脱 Fmoc, PyBOP I HOB 去による縮合を繰り返し Fmoc- LeuArg(Pbi)PlieV (CSNH)-匪 ₂ を得た 66 mg (収率 93%) 。実施例 2 と同様にして調製した Boc- Tyr (Bu¹) Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu¹) PheGly-0H 17 mg に H- LeuArg(Pbf)Phe Ψ (CSNH) -NH₂ (Fmoc-LeuArg (Pbf) Phe Ψ (CSNH) -NH₂ 14 mg を 10% DEA I DMF 処理することにより調製）、 PyBrop 9 mg、 HOAt 3 mg、 DIEA 7 mL を加え、 15 時間撹拌した。溶媒を濃縮し、クロロホルム ' ジェチルエーテルを加え沈殿とした。うち 10 nig に TFA / PhSMe I m— cresol I TIS / EDT (85 / 5 / 5 / 2.5 / 2.5) 100 L を加え 2 時間撹拌した。反応溶液にジェチルエーテルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC D-0DS-5-ST S- 5 120A カラム（20 X 150mm)を用いた分取 HPLCで、 A液： 0.1%TFA-水、 B液： 0. TFA 含有ァセトニトリルによる A/B: 72/28〜62/38への直線型濃度勾配溶出 (30分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 1. Omgを得た。

質量分析による（M+H)⁺ 1318.4 (計算値 1318.6)

HPLC溶出時間： 21.8 分

溶出条件：

カラム： Wakosi卜 II 5C18 HG (4.6 x 100mm)

流速： 1.0ml/分実施例^ (合成法 D) ： [6Ψ7, CH₂NH]MS10 (化合物番号 163) の製造市販の PAL resin に Fmoc- Phe を導入することで調製した Fmoc- Phe - PAL resin 321 mg を用い ABI 433A によりペプチド鎖を伸長し、 Fmoc-LeuArg(Pbf)Phe-PAL

resin を得た。うち半量に Fmoc- Gly を縮合し Fmoc- GlyLeuArg(Pbf)Phe-PAL resin を 190 mg 得た。うち 76 mg を脱 Fmoc 後、 DMF 2 niL、 AcOH 50 βί、 Fmoc - Phe- Η 46 mg、 NaBH₃CN 8 mg を加え、 1 時間振盪した。樹脂を洗浄後 DMF 2 mL、 DIEA 22 ill, Z- Cl 18 ill を加え 3 時間振盪した。樹脂を洗浄後 ABI 433A

を用いペプチド鎖を伸長し、 Boc - Tyr (Bu¹) Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu^l) P e Ψ (CH₂NZ)GlyLeuArg(Pbf)Phe-PAL resin を得た。うち 15 mg に氷冷下、 TMS-Br 46 βί、 PhSMe 42 n L, m-cresol 38 L、 EDT 18 n L, TFA 227 n を加え、 2 時間撹拌した。溶媒を留去後ジェチルエーテルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC D-0DS-5-ST S-5 120A カラム（20 x 150mm)を用いた分取 HPLCで、 A液： 0.1%TFA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルによる A/B: 72/28〜62/38への直線型濃度勾配溶出（30分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 2. Omgを得た。

質量分析による（M+H〉+ 1288.7 (計算値 1288.7)

HPLC溶出時間： 18.2 分

溶出条件：

カラム： WakosU- II 5C18 HG (4.6 x 100mm)

溶離液： A液： 0. ^TFA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルを用い、 A/B: 100/0〜0/70へ。直線型濃度勾配溶出（35分）。

流速： 1.0ml/分実施例 5 (合成法 E) ： [Arg(Me) 9]MS10 (化合物番号 82) の製造

60% NaH in oil 360 mg を dry DMF 20 mL に溶解し、 N, N'-Bis - Boc-l-guanylpyrazole 2793 mg の dry DMF 溶液 10 mL を 0 °C 下加え、 10 分間撹拌した。 methyl iodide 748 ΐ を加え、室温にて 24 時間撹拌した。溶媒を留去後 AcOEt に溶解し satd NaHC0₃ aq.、 satd NaCl a α. で洗浄した。 Na₂S0₄で乾燥後溶媒を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し N- Methy卜 N, N' -bis-Boc-1- guanylpyrazoleを得た 2.96 g (収率 91%)。市販の Rink Amide MBHA resin に Fmoc- Phe を導入することで調製した Fmoc- Phe- Rink Amide MBHA resin 480 mg を用い ABI 433A によりペプチド鎖を伸長し、 Boc-

Tyr (Bu^l) Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu^l) PheGlyLeuOrn (Mtt) Phe - Rink Amide MBHA resin を 1080 mg 得た。うち 540 mg に TFA I TIS / DCM (1 / 5 / 94) 10 mL を加え 50 分間振盪した。樹脂を洗浄後乾燥し 2/5 量に DMF 2 mL、先に調製した N- Metliyl-N, N' -bis- Boc-卜 guanylp razole 49 mg、 DIEA 87 n L を加え 15 時間振盪し Boc - Tyr (Bu^l) _Asil (_{Trt) Trp} (_Boc) _sn (x_rt) Ser (Bu" PheGlyLeuArg (Boc₂, Me) Phe- Rink Amide MBHA resin を 220 mg 得た。うち 50 mg に TFA I PhSMe I m-cresol I TIS

/ EDT (85 / 5 / 5 / 2.5 / 2.5) 1 mL を加え 2 時間撹拌した。反応溶液にジェチルェ一テルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC D-0DS-5-ST S- 5 120A カラム（20 x 150M)を用いた分取 HPLCで、 A液： 0. TFA-水、 B液： 0. 含有ァセトニトリルによる A/B: 74/26〜64/36への直線型濃度勾配溶出（30分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 10.5 mgを得た。

質量分析による（M+H)+ 1316.5 (計算値 1316.7)

HPLC溶出時間： 20.1 分

溶出条件：

カラム： WakosU- Π 5C18 HG (4.6 x 100mm)

溶離液： A液： 0.1%TFA-水、 B液： 0. TFA含有ァセ卜二トリルを用い、 A/B: 100/ (！〜 30/70へ。直線型濃度勾配溶出（35分）。

流速： 1.0ml/分実施例 6 (合成法 F) ： [6Ψ7, CSNH]MS10 (化合物番号 166) の製造

HC1 H-Gly-0Bu^l 503 mg を DMF 10 mL に溶解し、 0 。C 下 Fmoc- Phe 1162 fflg、 ΗΟΒί 608 mg, PyBOP 】874 mg、 DIEA 784 nl を加え、 4 時間撹拌した。溶媒を濃縮し、 AcOEt に溶解後 IN HC1 aQ.、 satd NaHC0₃aQ.、 satd NaCl aQ. で洗浄した。 Na₂S0₄ で乾燥後溶媒を濃縮し、ジェチルエーテル ' 石油エーテルを加え、沈殿として Fmoc- PheGly- 08^を得た 1.48 g (収率 99%)。うち 250 mg を toluene 10 mL に溶解後、 Lawesson s reagent 404 mg を加え 80 °C 下 2 時間撹拌した。溶媒を濃縮し、 AcOEt に溶解後 satd NaHC0₃ aQ.、 satd NaCl a . で洗浄した。 Na₂S0₄ で乾燥後溶媒を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィ一により精製し、ジェチルエーテル ·石油ェ一テルを加え沈殿として Fmoc-Plie^ (CS匪） Gly- 08 を得た 207 mg (収率 80%)。うち 103 ig に TFA I H₂0 (95 I 5) .

を加え 1 時間撹拌した。溶媒を濃縮後、ジェチルエーテルを加え沈殿として Ρηιοε-ΡΙΐθΨ (CS皿） Gly- 0Hを得た 82.4 mg (収率 90%)。市販の PAL resin に Fmoc- Phe を導入することで調製した Fmoc- Pile- PAL resin を用い ABI 433A によりペプチド鎖を伸長した Fπloc_LeuArg(Pbf)Plle_ PAL resin 80 mg を脱 Fmoc 後、 Fmoc- PheV (CSNH) Gly-0H 35 mg、 PyBrop 47 mg、 HOAt 14 mg、 DIEA 35 nl を加え 15 時間振盪した。樹脂を洗浄後 ABI 433A を用いペプチド鎖を伸長し、 Boc - Tyr (But) _Asn (_Trt) _Trp (B_oc) Asn (Trt) Ser (Bu') Phe Ψ (CSNH)GlyLeuArg(Pbf)P e-PAL resin を得た。うち 15 mg に TFA / P SMe I m— cresol I TIS / EDT (85 / 5 / 5 / 2.5 / 2.5) 200 n L を加え 2 時間撹拌した。反応溶液にジェチルエーテルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC D-0DS-5-ST S- 5 120A カラム（20 X 150mm)を用いた分取 HPLCで、 A液： 0.1%TFA-水、 B液： 0. 1%TFA 含有ァセトニトリルによる A/B: 77/23〜57/43への直線型濃度勾配溶出 • (60分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 1.0 mgを得た。

質量分析による（M+H)+ 1318.7 (計算値 1318· 6)

HPLC溶出時間： 20.8 分

溶出条件：

カラム： WakosU- II 5C18 HG (4.6 x 100匪）

溶離液： A液： 0.1%TFA-水、 B液： 0. TFA含有ァセトニトリルを用い、 A/B: 100/0〜30/70へ。直線型濃度勾配溶出（35分）。

流速： 1.0ml/分実施例 7 (合成法 G) ： [AzaGly7]MS10 (化合物番号 176) の製造市販の PAL resin に Fmoc- Phe を導入することで調製した Fmoc- Phe- PAL resin 321 mg を用い、 ABI 433A によりペプチド鎖を伸長することで得た Fmoc- LeuArg(Pbf)Phe-PAL resin 80 mg を脱 Fmoc 後、 THF 2 mL、 CDI 16 mg を加え 2 時間振盪した。 Hydrazine monohydrate 6 n を加え 1時間振盪した後樹脂を洗浄した。 Fmoc- Plie 39 mg、 PyBrop 93 mg、 HOAt 27 mg、 DIEA 105 nl を加え 2 時間振盪した。樹脂を洗浄後、 ABI 433A を用いペプチド鎖を伸長し、 Boc - Tyr (Bu') Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu') PheAzaGlyLeuArg (Pbf) Phe - PAL resin を得た。うち 25 mg に TFA I PhSMe I m-cresol I TIS I EDT (85 / 5 / 5 / 2.5 / 2.5) 1 mL を加え 2 時間振盪した。反応溶液にジェチルエーテルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC D-0DS-5-ST S-5 120A カラム（20 x 150M)を用いた分取 HPLC で、 A液： 0.1 FA -水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルによる A/B: 74/26〜64/36への直線型濃度勾配溶出（30分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 5.5 mgを得た。

質量分析による（M+H)+ 1303.3 (計算値 1303.6)

HPLC溶出時間： 9 分

溶出条件：

カラム： Wakosi卜 II 5C18 HG (4.6 x 100mm)

流速： 1.0ml/分実施例 8 (合成法 H) ： [D-Tyrl, AzaGly7,Arg (Me) 9]MS10 (化合物番号 232) の製造

市販 Rink Amide MBHA resin (0.55匪 ol/g) 4gに Fmoc - Phe, Fmoc- Orn (Mt t) を導入することで調製した Fmoc- Orn (Mt t) -P e- Rink Amide MBHA resinに TFA I TIS / DCM (1 / 5 / 94) 50 mL を加え 50 分間振盪した。樹脂を洗浄後 DCM 40 mL、実施例 5で調製した N- Metiiy卜 N, N' - bis-Boc-l-guanylpyrazole 2.27 gを加え、 DIEAを加え溶液の pHを 9に調製し 15 時間振盪し Fmoc- Arg(Boc₂, Me)Phe- Rink Amide MBHA resin 4.74gを得た。別途 Fmoc-題 NH₂ HC1 145 mg を THF 10 mL に懸濁し、氷冷下 CDI 89 mg、 DIEA 87 mL を加え、室温にて 1 時間撹拌した。氷冷下 H- Leu- OBu¹ HC1 224 m の腿 F 5 mL 溶液を加え、室温に戻しながら 18 時間撹拌した。溶媒を留去後 AcOEt に溶解し IN HC1 aQ.、 satd NaHC0₃ aq.、 satd NaCl ad. で洗浄した。 ^^0₄で乾燥後溶媒を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し Fmoc- AzaGly- Leu-OBu' 230 mg (収率 99%) を得た。うち 187 mg に TFA I H₂0 (9 I 1) 10 mL を加え 1 時間撹拌した。溶媒を留去後 AcOEt に溶解し satd NaCl a . で洗浄した。 Na₂S0₄ で乾燥後溶媒を濃縮し、ジェチルエーテルを加え沈殿として Fmoc- AzaGly-Leu- 0H 143 mgを得た（収率 87%)。得られた Fmoc - AzaGly-Leu- OH, Trt-Pheを Fmoc - Arg (Boc₂, Me) Phe - Rink Amide MBHA res inに導入することで調製した Trt- Phe-AzaGly- Leu- Arg(Boc₂, Me)Phe- ink Amide MBHA resin に TFA / TIS / DCM (1 / 5 / 94) 50 mL を加え 50 分間振盪した。樹脂を洗浄、中和後 Fmoc - Ser (Bu^l) 続いて Fmoc- Asn (Trt) を導入した。得られた Fmoc- Asn (Trt) Ser (Bu^l) Phe-AzaGly-LeuArg (Boc₂, Me) Phe-Rink Amide MBHA resin のうち 80.3mg を用いべプチド鎖を伸長し H - _D- Tyr (Bu^l) Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu^l) Phe- AzaGly- LeuArg(Boc₂, Me) Phe-Rink Amide MBHA resin 97.2mgを得た。得られた樹脂に TFA I P SMe / πι-cresol / H₂0 I TIS / EDT (80 / 5 / 5 / 5/ 2.5 / 2.5) 1 mL を加え 90 分撹拌した。反応溶液にジェチルエーテルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC SH-343-5 S-5, 120Aカラム（20 X 250mni)を用いた分取 HPLCで、 A液： 0.1 FA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルによる A/B: 76/24〜66/34への直線型濃度勾配溶出（60分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 11.7mgを得た。

質量分析による（M+H)+ 1317.0 (計算値 1317.6)

HPLC溶出時間： 21.0 分

溶出条件：

カラム： Wakosi卜 II 5C18 HG (4.6 lOOmi)

溶離液： A液： 0.1%TFA-水、 B液： 1 FA含有ァセトニトリルを用い、 A/B: 100/0〜30/70へ。直線型濃度勾配溶出（35分）。

流速： 1. Oml/分実施例 9 ( 合成法 I ) ： des (1- 3) - 3- pyr.idinepropiony卜 [AzaGly7, Arg(Me) 9]MS10 (化合物番号 322) の製造

実施例 8 にて調製した Fmoc- Asn (Trt) Ser (But)Phe - AzaGly- LeuArg (Boc₂, Me) Phe-Rink Amide MBHA res inのうち 48.2mg.を脱 Fmoc後、市販 3-pyridinepropionic acid 15.2mg, DIPCDI 15.9 n L, 0.5M HOAt/DMF溶液で室温 90分処理した。得られた樹脂を洗浄乾燥後、 TFA / PhSMe I m-cresol I H₂0 / TIS / EDT (80 / 5 / 5 / 5/ 2.5 / 2.5) 1 mL を加え 90 分撹拌した。反応溶液にジェチルエーテルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC SH-343-5 S - 5, 120Aカラム（20 X 250ππη)を用いた分取 HPLCで、 M夜： 0.1%TM -水、 B 液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルによる A/B: 80/20- 60/40への直線型濃度勾配溶出（60分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 6. Onigを得た。

質量分析による（M+H)⁺ 987.4 (計算値 987.5)

HPLC溶出時間： 8.1 分

溶出条件：

カラム YMC- AM301 (4.6 x 100mm) 溶離液： A液： 0.1 FA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルを用い、 A/B: 80/20〜30/70へ。直線型濃度勾配溶出（25分）。

■ 流速： 1. Oml/分実施例 1 0 ( 合成法 J ) ： des (l-2)-Afflidino-

[AzaGly7, Arg(Me)9]MS10 (化合物番号 273) の製造

実施例 8 にて調製した

y - LeuArg (Boc₂, Me) Phe-Rink Amide MB HA resin 48.2nigiこ Fmoc一 Trp (Boc)を導入後脱 Fnioc し、 H-Trp (Boc) Asn (Trt) Ser ） Phe-AzaGly- LeuArg (Boc₂, Me) Phe-Rink Amide MBHA res inを得た。得られた樹脂を DMF中 N, N' - bis- Boc-卜 guanylpyrazole29.3mg, DIEA 34.8 Lで室温 14時間処理し、 Amidino-Trp^odAsi^TrUSe Bu Phe-AzaGly- LeuArg (Boc₂, Me) Phe-Rink Amide MBHA res inを得た。得られた樹脂を洗浄乾燥後、 TFA I PhSMe I m-cresol I H₂0 I TIS / EDT (80 / 5 / 5 / 5/ 2.5 / 2.5) 1 mL を加え 90 分撹拌した。反応溶液にジェチルエーテルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行レ残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC SH- 343-5 S-5, 120Aカラム（20 x 250mm) を用いた分取 HPLCで、 A液： 0. TFA-水、 B液: 0.1%TFA含有ァセトニトリルによる A/B: 78/22-58/42 への直線型濃度勾配溶出（60分）を行い、 '目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 0.6mgを得た。

質量分析による（M+H)⁺ 1082.3 (計算値 1082.6)

HPLC溶出時間： 11.4 分

溶出条件：

カラム： YMC- AM301 (4.6 x 100匪）

溶離液： A液： 0.1 FA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルを用い、 A/B: 80/20〜30/70へ。直線型濃度勾配溶出（25分）。

流速： 1.0ml/分実施例 1 1 (合成法 K) ： [6Ψ7, NHCO, D-Tyrl, Arg(Me) 9]MS10 (化合物番号 319) の製造

Z-Phe 5.99 g を MeCN 30 mL に溶解し、 0 °C下 H0NB 3.94 g、 WSCD HCT4.59

g を加え、室温にて 4 時間撹拌した。 0 下 25% NH₃a . 3.4 mL、 DMF 10 mL を加え 4 時間撹拌した。溶媒を留去後 AcOEt に溶解し 1N HClaQ.、 satd. NaHC0₃aa. , satd. NaClaa. で洗浄した。 Na₂S0₄で乾燥後溶媒を濃縮し、ジェチルエーテルを加え、沈殿として Z- Phe_NH₂を得た 1.48 g (収率 99%)。 [Bis rif luoroacetoxy) iodo] benzene 1.94 g を MeCN 20 mL、 H₂0 5 mL に溶解後、 0 °C下先に調製した Z- Phe- NH₂890 mg、 pyridine 972 μΛ を加え、室温にて 15 時間撹拌した。溶媒を濃縮後ジェチルエーテル- IN HClad. で分液し、 IN HClaQ. 層を濃縮後乾燥した。半量を DMF 5 mL に溶解し、 mono- ter t-Butyl malonate 486 x L、 HOBt 540 mg を加えた後、 0 °C下 PyBOP 2.08 g、 DIEA 1394 ill を加え、室温にて 15 時間撹拌した。溶媒を留去後 AcOEt に溶解し IN HC1 ad.、 said NaHC0₃ ad.、 satd NaCl aa. で洗浄した。 Na₂S0₄ で乾燥後溶媒を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製後ジェチルエーテル · 石油エーテルを加え、沈殿として Z - Plie^ (NHCO) Gly- OButを得た 304 mg (収率 33%)。うち 154 mg

を MeOH 20 mL に溶解後 10% Pd-C を加え、水素気流下 2 時間接触還元を行った。触媒をろ去後溶媒を濃縮し、乾燥した。これを MeCN 10 mL に溶解し、 Fmoc - OSu 152 mg, DIEA 78 ΐ を加え 15 時間撹拌した。溶媒を留去後 AcOEt に溶解し IN HClaQ. 、 satd. NaHC0₃a . . satd. NaClaa. で洗浄した。 Na₂S0₄ で乾燥後溶媒を濃縮し、ジェチルェ一テル ·石油エーテルを加え、沈殿として Fmoc- Plie （NHC0) 6 -08^を得た 127 mg (収率 68%) 。実施例 10 にて調製した Fmoc - Arg (Boc₂, Me) Phe-Rink Amide MBHA resin 63 mg lこ Fmoc一 Leuを導入、脱 Fmoc後、 Fmoc- Phe (NHCO) Gly- OH (Fmoc-Phe^ (NHCO) Gly-OBu¹ 25 mg TFA 3 分処理により調製）、 0.5M HOAt 300 n L, PyAOP 78 mg、 DIEA 52 n を加え 6 時間振盪した。樹脂を洗浄後 DMF 2 mL、 DIEA 9 ιιί、 Ac₂0 12 ί を加え 30 分振盪した。樹脂を洗浄後 ΑΒΙ 433Α を' 用いぺプチド鎖を伸長し、 Boc- _D- Tyr (Bu^l) Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu^l) Phe Ψ (NHCO) GlyLeuArg (Boc₂, Me) Phe-Rink Amide MBHA resinを得た。うち 34 mg に TFA I PhSMe I m-cresol I TIS / EDT (85 / 5 / 5 / 2.5 / 2.5) 200 PL を加え 2 時間撹拌した。反応溶液にェ一テルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC D-0DS-5-ST S-5 120A カラム（20 X 150mm)を用いた分取 HPLCで、 A液： 0.1%TFA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルによる A/B: 76/24〜66/34への直線型濃度勾配溶出（60分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 0.7 mgを得た。

質量分析による（M+H)⁺ 1316.3 (計算値 1316.7)

HPLC溶出時間： 18.7 分

溶出条件：

カラム： Wakosi卜 II 5C18 HG (4.6 x lOOmm)

溶離液： A液： 0.1 FA-水、 B液： 0.1 TFA含有ァセトニトリルを用い、 A/B: lGG/0〜(]/7()へ。直線型濃度勾配溶出（35分）。

流速： 1.0ml/分実施例 1 2 (合成法 L) ： [N((CH₂) ₃Gn)Gly9] -MS10 (化合物番号 218 ) の製造

Fmoc-Phe- ink Amide MBHA resin 192 mg を用い ABI 433A によりペプチド鎖を伸長し、 Fmoc- GlyPhe- Rink Amide MBHA resin を得た。うち 1/4 量を脱 Fnioc

し、 DMF 2 mLゝ AcOH 50 μ 、 Boc-/3 -Ala-H 5 mg、 NaBH₃CN 16 mg を加え、 30 分間振盪した。樹脂を洗浄後 Fmoc- Leu 71 mg, CIP 56 mg、 HOAt 27 mg、 DIEA 105 mL を加え 15 時間振盪した。樹脂を洗浄後 ABI 433A を用いペプチド鎖を伸長し、 Z - Tyr (Bzl) Asn (Trt) Trp (Boc) Asn (Trt) Ser (Bu¹) PheGlyLeuN ( (CH₂) ₃NHBoc) Gl yPhe-Rink Amide MBHA resin を得た。これに TFA / PhOH I H₂0 I TIS I EDT (87.5 / 5 / 2.5 / 2.5 / 2.5) 1 nL を加え 2 時間撹拌した。樹脂をろ去後濃縮し、エーテルを加え沈殿とした後、半量を DMF 500 H L に溶解し、 ΙΗ-pyrazole-l-carboxamidine hydrochloride 9 mg、 DIEA 22 mL を加え、 15 時間撹拌した。溶媒を留去後エーテルを加え沈殿とし、氷冷下 PhSMe 60 ill, m - cresol 56 iL、 EDT 26 nl, TFA 337 L、 TMSBr 65 til を加え 2 時間撹拌した。溶媒を留去後ェ一テルを加え沈殿を得、遠心分離後、上清を除く操作を繰り返し洗浄を行い、残渣を酢酸水溶液で抽出、濾過により樹脂を除いた後、 YMC D- 0DS-5-ST S-5 120A カラム（20 150龍）を用いた分取 HPLCで、 A液： 0.1%TFA-水、 B液： 0.1%TFA含有ァセトニトリルによる A/B: 74/26〜 64/36への直線型濃度勾配溶出（60分）を行い、目的物を含む分画を集め凍結乾燥し白色粉末 1.8mgを得た。

質量分析による（M+H)+ 1302.5 (計算値 1302.7)

HPLC溶出時間： 18.6分

溶出条件：

カラム： Wakosi卜 II 5C18 HG (4.6 x 100mm)

流速： 1. Gml/分実施例 1 3 (合成法 M) ： MS10 (化合物番号 3) の製造

市販 p—メチル BHA樹脂（0. 77 m mole/g resin) をペプチド合成機 ABI 430Aの反応曹に入れ、 Boc— Strategy (DCC-HOBt) ペプチド合成方法で Boc— Phe. Boc-Arg (Tos) ， Boc— Leu. Boc-Gly, Boc-P e. Boc - Ser (Bzl) ) ) , Boc— Asn. Boc— Trp (For) , Boc— Asn. Boc- Tyr (Br-Z) を順に導入し目的の保護ペプチド樹脂を得た。 'この樹脂 0. llgを!)ークレゾール lffll、 1， 4一ブタンジチオール 1. 2 mlと共に無水弗化水素 10 ml中、 0°C、 60分攪拌した後、弗化水素を減圧留去し、残留物へジェチルェ一テルを加え沈殿を濾過した。この沈殿に 50%酢酸水を加え抽出し、不溶部分を除き、抽出液を十分に濃縮後、 50%酢酸水で充填したセフアデックス（商品名） G— 25カラム（2.0 X 80cm) に付し、同溶媒で展開、主要画分を集め凍結乾燥し、白色粉末 40mgを得た。半量を LiChroprep (商品名） RP- 18を充填したクロマトカラム（2.6 x 60cm ) に付け 0. 1%TFA水 200mlで洗浄、 G.1%TFA水 300mlと 0.1 % TFA含有 33%ァセトニトリル水 300mlを用いた線型勾配溶出を行い、主要画分を集め凍結乾燥し目的とするぺプチド 2.2mgを得た。

質量分析による（M+H) 1302. 5 (計算値 1302. 6)

HPLC溶出時間： 7分

溶出条件：

カラム： Wakosi卜 II 5C18T 4.6 x 100mm

溶離液： A液：0.1% TFA水、 B液： 0.1 % TFA含有ァセトニトリルを用い A/B： 95/5〜45/55へ直線型濃度勾配溶出（25分）

流速： 1.0 mlZ分実施例 1〜 1 1 と同様にして合成した化合物の構造と物理化学的性質を以下の表 1〜表 1 1に示す。ほ 1 ]

8/.69T0/C00Zdf/X3d

8Z,69T0/C00Zdf/13d lZie90/1"00Z OAV

[ 拏]

91Z

8.69T0/C00Zdf/X3d U 90請 OAV

91Z

8.69T0/C00Zdf/X3d U 90請 OAV

[ s拏]

8ム69蒙 OOZdfAlOd £90請 ΟΛ [ 9拏]

1Z

8.69T0/C00Zdf/X3d U 90請 OAV

61Z

8.69T0/f00Zdf/X3d U 90歸 OAV

urn

OSS

8.69T0/£00Zdf/X3d 90/ 00∑； OAV

I 0 Q-1796 ε 96 _δΐΛ|[6(91Λ1)3-ΐν LZ '、 1

— lAuoqjeo

9UeX3U|0|0八 ο

-(ε- ） ssp

[ 8拏]

zzz

8.69l0/£00Zdf/X3d K 90/tOOZ OAV

8.69T0/C00idf/X3d OAV

ΖΖ

8.69T0/C00Zdf/X3d 90請 OAV

[0 T拏]

9ΖΖ

8.69T0/C00Zdf/X3d 90請 OAV

8.69l0/£00Z<If/X3d U 90/1"00Ζ OAV

のみ M +値を

示す。

製剤例 1 ：

(1)化合物番号 305 L 0. Omg

(2)乳糖 60. Omg

(3)コーンスターチ 35. Omg

(4)ゼラチン 3. Omg

(5)ステアリン酸マグネシウム 2. Omg

化合物番号 305 10. Omgと乳糖 60. Omg及びコーンスターチ 35. Omgの混合物を 10%ゼラチン水溶液 0. 03ml (ゼラチンとして 3. Omg) を用い、 1腿メッシュの篩を通して顆粒化した後、 40°Cで乾燥し再び篩過する。かくして得られる顆粒をステアリン酸マグネシウム 2. Omgと混合し、圧縮する。得られる中心錠を、蔗糖，二酸化チタン，タルク及びアラビアゴムの水懸液による糖衣でコ一ティングする。コーティングが施された錠剤をミツロウで艷出してコート錠を得る。製剤例 2

(1)化合物番号 305 10. Omg

(2)乳糖 70. Omg

(3)コーンスターチ 50. Omg

(4)可溶性デンプン 7. Omg

(5)ステアリン酸マグネシウム 3. Omg

化合物 305 10. Omgとステアリン酸マグネシウム 3. Omgを可溶性デンプンの水溶液 0. 07ml (可溶性デンプンとして 7. Omg) で顆粒ィ匕した後、乾燥し、乳糖 70. 0 mg及びコーンスターチ 50. Omgと混合する。混合物を圧縮して錠剤を得る。製剤例 3

(1)化合物番号 305 5. Omg

(2)食塩 20. Omg (3)蒸留水全量 2 mlとする

化合物番号 305 5. Omg及び食塩 20. Omgを蒸留水に溶解させ、水を加えて全量 2. 0mlとする。溶液をろ過し、無菌条件下に 2 mlのアンプルに充填する。アンプルを滅菌した後、密封し注射用溶液を得る。試験例 1： hOT7T175レセプター結合活性測定

( 1 ) Cy- 5標識 metastin(40- 54)の作製.

Met as tinのアミノ酸配列の 40番目から 54番目のアミノ酸配列を有する合成べプチドに、そのアミノ末端に位置するリジンの ε位のアミノ基を介して Cy- 5を導入し、さらにカルボキシル末端をアミド化したものをァマシャムバイオサイエンス社の有する合成技術により得た。この合成ペプチドを用いて結合阻害実験を行なった。配列：（Cy- 5) - KDLPNYNWNSFGLRF-NH₂

( 2 ) 試験化合物、 Cy - 5標識 metastin (40- 54)および hOT7T175発現 CH0細胞を用いた結合阻害実験

T7T175発現 CH0細胞は 10%透析血清を含む MEM-ひ培地（核酸不含）で培養した。培地を除き、接着している細胞を PBSで洗浄した後、 5mM EDTAを含む PBSを添加し、セルスクレーパーを用いて細胞をフラスコから剥がした。遠心操作の後、細胞を 1. llxl0⁵cells/mlとなるように測定用バッファー UOmM HEPES pH7.4、 140mM NaCK 2.5mM CaCl₂, 3mM MgCl₂、 0.5% BSA、 0.01% NaN₃) に懸濁し、終濃度 lnMの Cy- 5標識 metastin (40-54) を加えた。 96穴黒色クリアボトムプレート（アプライドバイオシステム社）の各 wellに、総結合を調べるために 1%ジメチルスルホキシドを含む測定用バッファーを 10 ^L、非特異的結合を調べるために測定用バッファーで希釈した ΙΟ^Μの非標識ペプチド（標識したものと同じアミノ酸配列）溶液を' 10/iL、試験化合物の結合阻害活性を調ベるために測定用バッファーで希釈した試験化合物を 10^ Lそれぞれ添加し、さらに細胞懸濁液をずつ分注した。 1時間後、 FMAT 8100 HTS system (アプライドバイオシステム社）で細胞に結合した Cy- 5標識 me s tin (40-54)量を測定した。特異的結合は、総結合から非特異的結合を減じた値である。試験化合物の結合阻害活性は、総結合から試験化合物を加えた場合の測定値を減じた値の特異的結合に対する比率で示される。試験化合物のレセプ夕一結合活性を表 1 2〜表 1 7に示す。ほ 1 2 ]

01SIM[6(³IAI)^3JV'Z.^AIO^BZV]

80-39'6 一 1八 xoq-ieo— g—3|opui - (£— ssp 992

Ζ0"36'ε CUSW[HNZH0'8ft ] 19Z

01S1AI[6(⁹1AI)3JV'Z.^AIO^B2V]

Ζ0-32"ε — |Auo!do （|A|opuト ε) - ε -（ε - I ^S9P 092

[ 9 Τ拏]

Ψ2Ζ

L69T /£00ldf/I3d 1 90歸 OAV

試験例 2 ： FLIPRを用いた細胞内 Caイオン濃度上昇活性の測定

特開 2000- 312590記載の方法で FLIPRを用いた細胞内 Caイオン濃度上昇活性の測定を実施した。

hOT7T175安定発現細胞株は動物細胞発現用プラスミド ρΜ- Γ0Τ175を CHO/dhfr細胞に CellPhect Transfection kit ( Amersham Pharmacia Biotecb社）を用いて形質導入することにより取得した。まず、蒸留水 240 Lに溶解したプラスミド DNA 9.6 gに対して Buffer A ( CellPhect Transfection kitに添付） 240 を添加し、撹拝し、 10分間静置後、 Buffer B (CellPhect Transfection kiUこ添付） 480 iを添加し、激しく撹絆し該 DNAを含有するリボソームを形成させた。 4xi0⁵ 個の CHO/dliir—細胞（AKCより入手）を 60 匪シャーレに播き、 10%のゥシ胎児血清（BIO WHITTAKER社）を含む Ham' s F- 12培地（日水製薬株式会社）中で 37°C、 5%炭酸ガス中で 2日間培養した後、該リボソーム 480mlをシャーレの該細胞上に滴下させた。これを、 37°C、 5%炭酸ガス中にて 6時間培養した後、血清を含まない Ham' s F- 12培地で 2回細胞を洗浄し、シャーレの該細胞上に 15%グリセロール 3 mlを添加し 2分間処理した。これを、再度、血清を含まない Ham' s F-12培地で 2回洗浄した後、 10%のゥシ胎児血清を含む Ham' s F_l 2培地中で 37°C、 5%炭酸ガス中で 15時間培養した。該細胞をトリプシン処理により分散させてシヤーレから回収し、 1.25xl0⁴個ずつ 6— well plateに播き、透析済み 10%ゥシ胎児血清（JRH BIOSCIENCES社）を含む Dulbecco' s modified Eagle medium (DMEM) 培地（日水製薬株式会社）中にて 37°C、 5%炭酸ガス中にて培養を開始した. プラスミドの導入された形質転換 CH0細胞は該培地中で生育するが非導入細胞は次第に死滅していくので、培養開始 1日目、および 2日目に培地を交換して死滅細胞を除去した。培養開始 8 - 10 日後に生育してきた形質転換 CH0細胞のコロニーを約 20個単離した。これらのコロニーの細胞からリガンドペプチドであるメタスチンに対して高い反応性を示す細胞（以後 h0T7T175/CH0と略称する）を選別し、以降の実験に用いた。

合成べプチドについて、 h0T7T175/CH0における細胞内 Caイオン濃度上昇活性の測定を FLIPR (Molecular Devices社〉を用いて行った。 , h0T7T175/CH0は 10%透析処理済ゥシ胎児血清（以後 dFBSと略称する）を加えた DMEM (以下 10¾dFBS/DMEMとする）を用いて継代培養し、実験に用いた。 h0T7T175/CH0をそれぞれ 15 X 10 cells/mlとなるように 10% dFBS- DMEMに懸濁し、 FILPR用 96穴プレート（Black Plate clear bottom 、 Coster社）へ、各ゥエルあたり 200 Lずつ蒔き（3. OxlO⁴ cells/200 i L/ゥエル）、 37°C- 5%C0₂ィンキュベ一夕一中で一晩培養した（以後細胞プレートと略称する）。 HANKS/HBSS (HANKS 9.8 g、炭酸水素ナトリウム 0.35 g、 1M HEPES 20 ml、 IN水酸化ナトリウムで pH 7.4に合わせた後、フィルタ一滅菌処理） 21 ml、 250 mM Probenecid 210 1、ゥシ胎児血清（FBS) 210 1 ( HANKS/HBSS- Probenec id- FBS)を混合した。

また、 Fluo3— AM2バイアル（50 g/バイアル）をジメチルスルフォキシド 21 L、 20% Pluronic acid 21 Lに溶解し、これを上記 HANKS/HBSS- Probenec id- FBS 10 mlに加え、混和後、培養液を除いた細胞プレートに各ゥエルあたり IOO Lずつ分注し、 37°C-5%C0₂ィンキュベータ一中で 1時間インキュベートした〈色素口一ディング〉。ぺプチドを 1X10— となるようジメチルスルフォキシドに溶解した。このぺプチド溶液を 2.5 mM Probenecid、 0.2 % BSA、 0.1¾ CHAPSを含む HANKS/HBSS を用いて希釈し、 FLIPR用 96穴プレ一ト（V- Bottomプレート、 Coster社）へ移した（以後、サンプルプレートとする）。細胞プレートの色素ローデイング終了後、 HANKS/HBSSに 2.5 mM Probenec idを加えた洗浄バッファーでプレートウォッシャーを用いて細胞プレートを 4回洗浄し、洗浄後 100 Lの洗浄バッファーを残した。この細胞プレートとサンプルプレートを FLIPRにセットし、 FLIPR装置により自動的にサンプルプレー卜から 0.05 mlのサンプルを細胞プレートへと移して、細胞の応答反応を促した。 180秒間の細胞内カルシウムイオン濃度の変化を継時的に測定した。表 1 8〜表 2 2 に細胞内 Caイオン濃度上昇活性 [Metastin(l-54)に対する比活性で表示]を示す。

[表 1 8 ]

化合物番号比活性

Metastin(1-54) 1

Metastin(45-54) 10

1フ 5

18 1

19 2

24 1

30 10

31 2

32 10

[ 6 τ拏]

62Z

8.69T0/C00Zdf/X3d 9 zzz

9 ozz

03 LIZ

I 91Z

01 QIZ

01 IZ

Z BIZ

Oi ZIZ

01 ΪΙΖ

I OIZ

Z/i 603

Ϊ 803

Z/l LOZ

01 902

01 902 g ^OZ

01 ZQZ

L 10Z

[ 0 s拏]

002 ε

01 861

01

1 1761

100 86 L l Z61

01 061

01 681

Ϊ LSI

Q 28L

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01 I

1. CZ.L

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I OLl z 691 s 99L

I £91 z 991

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8.69T0/f00idf/X3d UU90/t00Z OAV i z

OLZ

ε 693

893 z L9Z z 993 ε 992 l 19Z

9 092 l 693 z 893 z L Z

Ϊ 9 Z

1 993

L

I 092

I 6172

Z

I LVZ

Z

1

I nz

z

l^Z i 892 ε L£Z z

9 Z i ^ZZ l ZZZ ε ZZZ l VZZ

01 0C3 l 6ZZ

9 ZZ l nz i nz z

I Z

8.69T0/C00Zdf/X3d U 90請 OAV

323 1

375 2

385 10

386 7

387 1

397 5 試験例 3 ： hOT7T175発現 CH0細胞における細胞増殖阻害活性の測定

hOT7T175発現 CH0細胞（以後、 hOT7T175とする）を 10% dialyzed FBS を添加した画 EM (以後、 10%dFBS/應 EMとする）を用いて培養し、以下のァッセィに用いた。 tiOT7T175をそれぞれ 10, 000 cells/mlとなるように 10% dFBS/DMEMに懸濁し、 96 well plateに各ゥエルあたり 100 Lずつ播き (1, 000 cells/well)、 37°C-5% C0₂インキュベータ一中で一晩培養した。翌日培地を除き、 0.5% BSAを添加した 10% dFBS/DMEM (以後、 0.5% BSA/10% dFBS/DMEMとする）を 90 L加えた。続いて、各ゥエルに 0.5% BSA/10¾ dFBS/丽 EMに溶解したメタスチンもしくはメタスチン誘導体溶液 10 Lを加え、 37°C-5% (；0₂ィンキュベータ一中で 3 日間培養した。 Cell Counting Kit- 8溶液（同仁化学研究所）を各ゥエルに 10 L加え、 37 - 5% C0₂インキュベータ一中で 4時間培養し、 450nmの吸光度を測定した。

Metasti (1-54) > Metas t in (45- 54)、合成化合物の細胞増殖阻害活性を表 2 3に示す。

[表 2 3']

*卜 54は MetastinU- 54)を、 45- 54は Metastin (45- 54)を示す。試験例 4 ： hOT7T175発現 CH0細胞における遊走阻害活性の測定

hOT7T175発現 CH0細胞（以後、 hOT7T175とする）を 10% dialyzed FBS を添加した應 EM (以後、 10%dFBS/丽 EMとする）を用いて培養しアツセィに用いた。また、 24 - well 6.5mm Transwell (pore size 8.0 m) (COSTAR ) は以下の方法によりフィプロネクチン処理を行いアツセィに用いた。すなわち、 Transwellの上下室に 1 g/mlのゥシフィブロネクチン（ャガィ株式会社） 0.5mlを加え、室温で 10分間静置し、フイブロネクチン溶液を除き、さらに風乾させた。 )Τ7ΤΠ5を DMEMで 3回洗った後、 0.5% BSA を添加した腿 ΕΜ (以後、 0.5% BSA/DMEMとする）に 2.5 X 10⁶ eel ls/ml となるように懸濁した。メタスチンもしくはメタスチン誘導体を 0.5% BSA/DMEMで希釈した。 Transwellの下室に 20% FBSを添加した 0.5% BSA/DMEM (或いは negative controlの場合には 0.5% BSA/DMEM)を 600 /i L 加え、上室に細胞懸濁液 50 L、メタスチンもしくはメタスチン誘導体希釈溶液（或いは positive contorolの場合には 0.5% BSA/DMEM)を 50 L 加えた。 37 - 5% C0₂インキュベ-一夕一中で 7時間培養した後、培養液をのぞき、 Phosphate-buffered sal ineで湿らせた綿棒でフィル夕一上面をぬぐい、フィル夕一上面の細胞を全て除いた。ディフクイック（国際試薬株式会社）でフィルターを固定、染色し、フィルター下面に遊走した細胞数を数えた。遊走阻害活性を図 1に示す。試験例 5 ：腫瘍増殖抑制活性評価

ヒト結腸癌由来細胞株 SW620担癌マウスを用い、 Metastin (1-54) (以下、 Metastinと標記する）および化合物（化合物番号 305， 322)の in vivo での腫瘍増殖抑制作用について評価した。

蒸留水（大塚蒸留水）に溶解した 1 mMの Metastin、 0.1 mMおよび 1 mM の化合物、および vehicleとしての蒸留水をそれぞれ 100 /Lづっ充填した Alza 浸透圧ポンプ（0.25 ^L/hour, 14 days release, Model 1002) をェーテル麻酔下で8 1^ -1111(6週齢、雌、日本チャールズリバ一）マウス背部の皮下に埋め込み 14日間の持続投与を開始した。実験数は、 Met as tin投与群と vehicle投与群は n=10、化合物投与群はいずれも n= 11 とした。翌日にヒト大腸癌由来細胞株 SW620細胞（ATCC) 2 x 10⁶ cells を 200 Lの 0.15M NaClを含む 20 πιΜリン酸緩衝液（ρΗ 7.2) (PBS)に溶解し、上記のマウスの左脇腹に皮下投与した。細胞を投与した日を 0日目として、細胞投与 4日目より 13日目まで 1日または 2日おきに腫瘍を電子ノギスで測定し、腫瘍体積を（短径） ²x 長径 /2で算出した。図 2に示す様に、 Metastin投与群（24 nmol /day/mouse x 14 days)は、投与 6日目に vehicle群に比較して有意な增殖抑制作用を示した。一方、化合物 322投与群は、 Metastinの 1/10の投与量（2.4 nmol/day/mouse x 14 days)で投与 6日目から 8日目まで vehicle群に比較して有意な腫瘍増殖抑制活性を示した。また、 Metastinと同用量の化合物 322投与群（24 nmol/day/mouse x 14 days)は、投与 6日目から 11日目まで vehic le群に比較して有意な腫瘍増殖抑制活性を示し、投与 11日目では Metastin投与群と比較しても有意な腫瘍増殖抑制活性を示した。以上の結果から、 Metastinは in vivo においても腫瘍増殖抑制作用を示し、化合物 322は、 Metastinの 10倍以上の腫瘍増殖抑制作用を有することが明らかとなつた。

同様に化合物 305についての結果を図 3に示す。 Metastin投与群（24 nmol/day/mouse x 14 days)は、投与 5- 7日目に vehicle群に比較して有意な増殖抑制作用を示した。一方、化合物 305投与群は、 Metastinの 1/10の投与量（2.4 nmol/day/mouse x 14 days)で投与 5日目から 11日目まで vehicle群に比較して有意な腫瘍増殖抑制活性を示した。また、 Metastinと同用量の化合物 305投与群（24 nmol/day/mouse x 14 days)は、投与 5日目から 9日目まで vehicle群に比較して有意な腫瘍増殖抑制活性を示し、化合物 305も in vivoにおいて Metastinの 10倍以上の腫瘍増殖抑制作用を示すことが明らかとなった。試験例 6 ：メタスチンの血糖上昇作用

メタスチンの末梢投与による血糖値に及ぼす影響を検討するため、自由行動下採血用の手術を行った。成熟 W i s t ar系雄性ラット（手術時体重 2 10〜 230 g ) をペントバルビタール 50 mg/kgの腹腔内投与にて麻酔した。解剖用パッドの上に背位に固定し、左側の頸静脈を露出させた。ポリエチレンチューブ SP35 (内径 0· 5 mm, 外径 0. 9 mm, 夏目製作所）を約 30 cmの長さに切り、 200単位/ mlのへパリン含有生理食塩水で満たした後、類静脈に約 4. 5 cm挿入し固定した。チューブのもう一端は背側の皮下を通して頸部（背側）より露出させた。

術後一晩待ってから、メタスチン投与前に用量 1 mlのッベルクリン用注射筒と 25ゲージ注射針（いずれもテルモ社）を用いて 300 / 1の血液を採取した。血液凝固を防止するため、注射筒には予め 3 mg/nil EDTAを含む 300 KIU/ml apro t in in溶液を 3 1入れておいた。大塚生理食塩水またはメタスチン（17, 80, 170 nmo l)の 1 m L生理食塩水溶解液をチューブより lmL/Kgで静脈投与した。静脈投与の開始時点から 0、 5、 15、 30、 60分後に頸静脈より 300 /2 1ずつ採血した。採血した血液は微量高速冷却遠心機（MR - 150、トミ一精ェ）を用いて遠心（13, 000 rpm、 5分間）し、上清（血漿）を回収した。血中グルコース濃度は、フジドライケム 3500 ( FUJ IF ILM社）を用いて測定した。図 4に示すごとくメタスチン投与群は対象群に比し、静脈投与 5分後より用量依存的（17- 170 nmo l/kg)に有意な（p<0. 005, n=5) )血中グルコース濃度の上昇作用を示した。血中グルコース値は、メタスチン投与量の増加にしたがい、最大値の上昇とともに上昇時間の延長（最大 30分）が認められた。試験例 7 ：メタスチンの膝グルカゴン分泌促進作用

メタスチンの血中グルコース濃度上昇作用についてそのメカニズムを検討するため、血中グルコース濃度に変動を与えるホルモンとして知られている血中グルカゴン、インスリン、コルチコステロン、甲状腺ホルモン（T3)濃度に対するメタスチンの影響について検討した。成熟 Wi s t ar 系雄性ラット（手術時体重 260〜 3000 g) に対し自由行動下採血用の手術を行った。術後ー晚待ってから、メタスチン投与前に用量 1 mlのッべルクリン用注射筒と 25ゲ一ジ注射針（いずれもテルモ社）を用いて 300 1の血液を採取した。血液凝固を防止するため、注射筒には予め 3 mg/ml EDTAを含む 300 KIU/ml aprot inin溶液を 3 1入れておいた。大塚生理食塩水またはメタスチンの生理食塩水溶解液（80 nmol/mL)をチューブより IfflL/Kgで静脈投与した。静脈投与の開始時点から 1、 3、 5、 15分後に頸静脈より 300/21ずつ採血した。採血した血液は微量高速冷却遠心機（MR - 150、トミ一精ェ）を用いて遠心（13， 000 rpm, 5分間）し、上清（血漿）を回収した。血中グルカゴン濃度はグルカゴンキット「第一」（第一ラジオアイソトープ研究所）、血中インスリン濃度はラットインスリン [1251]、アツセィシステム（Amersham Biosciences) 、血中コルチコステロン濃度はラットコルチコステロンン [1251]、アツセィシステム (Amers am Biosciences) 、血中甲状腺ホルモン（T3)濃度は T一 3 · リアビーズ（ダイナポット（株））、血中グルコース濃度はフジドライケム 3500 (FUJIFILM社）を用いて測定した。図 5に示すごとくメタスチン投与群は対象群に比し、投与 1分後で有意な血中グルカゴン濃度の上昇が認められ、投与 5分後まで有意な上昇は持続した。一方、血中インスリン濃度（図 6 ) 、血中コルチコステロン濃度（図 7)および血中甲状腺ホルモン（Τ3)濃度（図 8 )はメタスチン投与による変動は認められなかった。これらの結果およびメタスチン投与群では、血中グルカゴン濃度の上昇の後に血中グルコース濃度の上昇（図 9 )が見られることから、メタスチン静脈投与による血中グルコース濃度の上昇作用は、メタスチンによるグルカゴン分泌刺激によって引き起こされるものと考えられた。試験例 8 メタスチン誘導体の血糖上昇作用

メタスチン誘導体 IUSS305 (化合物 3 0 5 ) および KiSS322 (化合物 3 2 2) の血中グルコース濃度および血中グルカゴン濃度に及ぼす影響について検討した。成熟 Wistar系雄性ラット（手術時体重 260〜 3000 g ) に対し実験例 1 と同様に自由行動下採血用の手術を行った。術後一晩待つてから、メタスチン投与前に用量 1 mlのッベルクリン用注射筒と 25ゲージ注射針（いずれもテルモ社）を用いて 300 ^ 1の血液を採取した。血液凝固を防止するため、注射筒には予め 3 mg/ml EDTAを含む 300 KIU/ml aprotinin溶液を 3 1入れておいた。大塚生理食塩水またはメタスチンの生理食塩水溶解液（80 nffiol/mL)をチューブより lmL/Kgで静脈投与した。静脈投与の開始時点から 2、 5、 15、 30、 45、 60分後に頸静脈より 300 // 1ずつ採血した。採血した血液は微量高速冷却遠心機（MR - 150、トミ一精ェ）を用いて遠心（13, 000 rpm、 5分間）し、上清（血漿）を回収した。実験例 1 または 2 と同様に、血中グルコース濃度はフジドライケム 3500 (FUJIFILM社）、血中グルカゴン濃度はグルカゴンキット「第一」 (第一ラジオアイソトープ研究所）を用いて測定した。図 1 0に示すごとく両化合物とも血中グルコース濃度の上昇が見られた。また、図 1 1 に示すごとく両化合物とも血中グルカゴン濃度の上昇が見られた。試験例 9 ヒトメタスチンを用いた未成熟ラッ卜での排卵誘発

eauine chorionic gonadotropin (eCG、セロ卜口ピン、大日本製薬）を 100 Ιϋ/mLで生理食塩水（大塚製薬）に溶解し、生後 23日齢の雌性 Wistarラット（日本チャールズリバ一）の背部皮下に、 1個体当たり 10 IUの eCGを、午前 9時 30分から 10時の間に、容量 lmLのッベルクリン用注射筒と 26ゲージ注射針（いずれもテルモ）を用いて投与した。 eCG投与後 47〜48時間後に以下に示す群分けを行い、それぞれの薬剤投与を行つた。

クループ A (ラッ卜 5匹）： human chorionic gonadotropin (hCG、ゴナトロピン、大日本製薬）を 100 IU/mLで生理食塩水に溶解し、 1個体当たり 20 Ιϋを背部皮下に投与した。

グループ Β (ラット 5匹）：ヒトメタスチンを 100nmol/mLで生理食塩水に溶解し、 1個体当たり 20nmolを背部皮下に皮下投与した。

グループ C (ラット 5匹）：ヒトメタスチンを 33.3mnol/mLで生理食塩水に溶解し、 1個体当たり 6. 67nino lを背部皮下に投与した。

グループ D (ラット 6匹）： 1個体当たり 200 Lの生理食塩水を背部皮下に投与した。

上記の薬剤の投与後、さらに 24〜25時間後に断頭し、血液、両側卵管および子宮を回収した。血液回収に際しては、血液凝固を防止するために、回収する遠心チューブにはあらかじめ 3mg/niL EDTAを含む l OKIU/mL のァプロチニン溶液（トラジロール、バイエル）を 90 L入れておいた。血液回収後は、よく混和し、 2, 000Gで 25分間遠心し、上清を回収して血漿サンプルとした。

排卵数の計数は、次のようにして行った。

実体顕微鏡下での卵管の観察により、卵管膨大部における卵の滞留が確認された場合には、同部位を 27ゲージの注射針（テルモ）によって切開して卵を取り出し、トリプシン処理によって卵を取り囲む顆粒膜細胞を除去した後、卵を計数した。実体顕微鏡下での卵管の観察で、卵管膨大部での卵が確認できなかった場合には、先端を研磨した 27ゲージの注射針を卵管口に挿入し、卵管および子宮内を 400 M L以上の生理食塩水で洗浄した後、流出液中の卵の有無を観察した。

得られた排卵数を表 2 4に示す。

[表 2 4 ]

表中、 1〜 5はラッ卜の個体番号を示す。汎用の過排卵処理群であるグループ Aでは、ラット 1匹あたり平均 37.6個の排卵が確認された。メタスチンを投与したグループ B、グループ Cでは、それぞれ平均 31.8個、 27.6個の排卵が確認された。一方、生理食塩水を投与したグループ Dでは、排卵数の平均は 0.6個であり、排卵刺激非存在下での自発的排卵はほとんどなかった。

表 2 2に示すラットから採取した血漿中に含まれるエストラジオール濃度を、ラジオィムノアッセィ（ DPC · エストラジオールキット； Diagnostic Products Corporation) により測定した結果を図 1 2に示す。

これより、グループ A、グループ Bおよびグループ C間で、血漿中に含まれるエストラジオールの濃度差は無く、生理食塩水を投与したダル —プ Dでのみ、エストラジオールの濃度が非常に高かったことがわかる。

血漿中に含まれるプロゲステロン濃度を、ラジオィムノアッセィ（ DPC · プロゲステロン； Diagnostic Products Corporation) により測定した結果を図 1 3に示す。

これより、プロゲステロン濃度はグループ Aが最も高く、グループ B およびグループ Cは、グループ Aの約半分の血中濃度であったことが、また、グループ Dのプロゲステロン濃度は非常に低かったことがわかる一般に、ラット、マウスおよびヒトの卵巣において産生される主なステロイドホルモンは、卵胞の成熟期ではエストロゲンであり、一方、排卵を誘発された後はプロゲステロンである。実際、図 1 2および図 1 3 の結果でも、生理食塩水.を投与したグループ Dでは、排卵が誘発されていないためにエストロゲン産生が高い状態にあり、一方 hCGを投与したグループ Aでは、エストロゲン産生が低下し、プロゲステロンの産生が上昇していることがわかる。メタスチン投与群であるグループ： Bおよびグループ Cでは、血漿中エストロゲン濃度は非常に低く、逆にプロゲステロン濃度が上昇していることから、メタスチンはラット卵巣に対して、正常な過程を経て排卵を誘発していることがわかる。また、グループ Aよりもグループ B、グループ Cのプロゲステロン濃度が低いことから、 hCGと比べてメタスチンは、より穏やかな卵巣刺激作用を有していると考えられる。試験例 1 0 ヒトメタスチンの未成熟ラットでのゴナドトロピン放出作用

生後 25日齢の雌性 Wistarラット（日本チャールズリパー）に対し、午前 9時から 10時の間に、生理食塩水に 33.3 nmol/mLの濃度で溶解したヒトメタスチンを、 1個体当たり 200 L、すなわちヒトメタスチン 6.67nmolを背部皮下に投与した。メタスチンを投与する前、および投与してから 1、 2、 4時間後に断頭し、血液を回収した。血液回収に際しては、血液凝固を防止するために、回収する遠心チューブにはあらかじめ 3 mg/mLの EDTAを含む 10 KIU/mLのァプロチニン溶液（トラジロール、ノィエル）を 90 / L入れておいた。また回収後は、よく混和した後、 2, 000Gで 25分間遠心し、上清を回収して血漿サンプルとした。血漿中に含まれる FSH (卵胞刺激ホルモン）、 LH (黄体刺激ホルモン）、およびプロゲステロン濃度は、ラジオィムノアッセィ（Rat Follicle Stimulating Hormone (rFSH) [1251] Biotrack Assay System with Magnetic Separation、 Rat Luteinizing Hormone (rLH) [¹²⁵I] Biotrack Assay System with Magnetic Separat ion、レずれも： Γマシャムノィ才サイエンス、および DPC · プロゲステロン、 Diagnostic Products Corporation) を用いて測定した。

メタスチン投与による未成熟ラット血中 FSH濃度の変動を測定した結果を、図 1 4に示す。メタスチン投与後 1時間から、血中 FSH濃度は有意に上昇を始め、 2時間後で最も高くなつていた。 4時間後では血中 FSH濃度の低下が認められたが、投与前に比べると高い状態を維持していた。メタスチン投与による未成熟ラット血中 LH濃度の変動を測定した結果を、図 1 5に示す。 FSHの場合と同様に、メタスチン投与後 1時間から、血中 LH濃度は有意に上昇を始め、 2時間後で最も高くなつていた。 4時間後では血中 LH濃度の低下が認められたが、投与前に比べると、高い状態を維持していた。

メタスチン投与による未成熟ラッ卜血中プロゲステロン濃度の変動を測定した結果を、図 1 6に示す。血中 LH濃度の上昇を反映して、血中プ口ゲステロン濃度はメタスチン投与後 1時間から穏やかな上昇を始め、 2 時間後は投与前に比べて有意に高い値を示した。

図 1 4および図 1 5の結果より、メタスチンを末梢投与すると、 FSH 、 LHなどのゴナドトロピンの放出が誘導されることがわかる。試験例 9 で示したメタスチンによる排卵誘発は、このゴナド卜口ピン放出、特に LHの放出を介したものであると推察される。

なお、試験例 9で示した排卵誘発作用は e CGを投与したラットでの作用であるが、本実施例の作用は未処置のラットを用いた結果であり、メタスチンによるゴナドトロピン放出作用には eCGの前処理は必要としない。

図 1 6の結果は、メタスチンの投与によるゴナドトロピンの放出が、卵巣にも生理的な刺激を与え、プロゲステロンの産生を亢進することを意味している。試験例 1 1 ヒトメタスチンによる成熟雄性ラットのゴナドトロピン放出作用

生後 1 1週齢の雄性 Wi s rラット（日本チャールズリバ一）に対し、午前 10時 30分から 1 1時 30分の間に、生理食塩水に 1 75 nmo l /mLの濃度で溶解したヒトメタスチンを、 1個体当たり 200 L、すなわちヒトメタスチン 35 nmo lを背部皮下に投与した。メタスチンを投与する前、および投与してから 1、 2、 4時間後に断頭し、血液を回収した。血液回収に際しては、血液凝固を防止するために、回収する遠心チューブにはあらかじめ 3 mg/mLの EDTAを含む 10 ΚΙϋ/mLのァプロチニン溶液（トラジロール、バイエル）を入れておいた。また回収後は、よく混和した後、 2， 000Gで 25分間遠心し、上清を回収して血漿サンプルとした。血漿中に含まれる FSH (卵胞刺激ホルモン）、 LH (黄体刺激ホルモン）、およびテストステロン濃度は、ラジオィムノアッセィ（Rat Follicle Stimulating Hormone (rFSH) [¹²⁵I] Biotrack Assay System with Magnetic Separat ion. Rat Luteinizing Hormone (rLH) [¹²⁵I] Biotrack Assay System with Magnetic Separation, いずれもアマシャムノィォサイエンス、および DPC * トータルテストステロンキット、 Diagnostic Products Corporation) を用いて測定した。

メタスチン投与によるラット血中 FSH濃度の変動を測定した結果を、図 1 7に示す。メタスチン投与後 1時間から、血中 FSH濃度は有意に上昇を始め、 2時間後で最も高く、 4時間後でも高い状態を維持していた。メタスチン投与によるラット血中 LH濃度の変動を測定した結果を、図 1 8に示す。 FSHの場合と同様に、メタスチン投与後 1時間から、血中 LH 濃度は有意に上昇を始め、 2時間後で最も高くなつていた。 4時間後では血中 LH濃度の低下が認められたが、投与前に比べると、高い状態を維持メタスチン投与によるラット血中テストステロン濃度の変動を測定した結果を、図 1 9に示す。血中テストステロン濃度はメタスチン投与後 1時間に急激な上昇を示し、 2時間後、 4時間後では低下が認められたが、投与前に比べるといずれの時点でも有意に高い値を示した。

図 1 7および図 1 8の結果より、メタスチンを末梢投与すると、雄性ラットにおいて FSH、 LHなどのゴナドトロピンの放出が誘導されることがわかる。試験例 9の結果を考慮すると、メタスチンはゴナドトロピンの放出を促す上で、雌雄いずれにおいても非常に重要な因子であると考えられる。

図 1 9の結果は、メタスチンの投与によるゴナドトロピンの放出が、こも生理的な刺激を与え、テストステロンの産生を亢進することを意味している。

これらの結果から、メタスチンの投与は、ゴナドトロピンの放出を介して精巣を刺激すると考えられる。メタスチンは、精子の成熟やホルモンの分泌など、男性生殖機能にも影響を及ぼしうることが示唆された。試験例 1 2 化合物の血中安定性試験

マウス血清は、 8週齢 Balb/cマウス（）から採血後、 37 、 30分放置し、 13000 rpmにて 10分間遠心分離した上清として取得し、得られた血清は- 80 にて凍結保存した。

安定性試験は血清 45iLに、化合物 5nmol(5iL水溶液）を加え、 37 にて放置することで行った。放置時間は 2、 10、 30分間の 3点とした。放置後のサンプルは 3分間煮沸後氷浴で冷却し、ァセトニトリル/水（3/1) 2001Lを加え、 5分間超音波処理後 5000r_Pmにて 1分間遠心分離した。上清 150iLを蒸留水 250iLで希釈後不溶物を孔径 0.45imのフィルターでろ去し、ろ液 200iLを HPLC 分析（220 nm) して化合物のピーク面積を求めた。同様の条件下、 0分間処理時の面積との比を、それぞれ 4回ずつ行つた平均値の比率として計算し、残存率を求めた。次いで得られた残存率を縦軸に、時間を横軸としてグラフを作成後指数近似し、残存率が 50 %になる時間を半減期として算出した。

分析用 HPLCは島津製作所製 LC- VP seriesを用い、カラムは和光純薬製 Wakosil-II 5C18 HG (4.6mmXl00mm) を使用した。溶離液には A液（ 0.1%TFA含有水）、 B液（0· 1%TFA含有ァセトニトリル）を用い、流速 1.0ml/分にて A/B: 100/0 - 0/50の直線型濃度勾配溶出（25分）により分析を行った。

試験実施化合物とその t_1/2 (min)の値を表 2 5に示す。 [表 2 5 ] 化合物番号 t_1/2 (min)

試験例 1 3 メタスチン誘導体を用いた未成熟ラットでの排卵誘発

e q u i n e c h o r i o n i c g o n a d o t r o i n ( e C G、セロトロピン、大日本製薬）を 1 0 0 I U/m Lで生理食塩水 (大塚製薬）に溶解し、生後 2 3 日齢の雌性 Wistar ラット（日本チヤ一ルズリバー）の背部皮下に、 1個体当たり 1 0 I Uの e CGを、午前 9時から 1 0時の間に、容量 1 m Lのッベルクリン用注射筒と 2 6ゲージ注射針（いずれもテルモ）を用いて投与した。 e C G投与後 4 7— 4 8時間後に以下に示す群分けを行い、それぞれの薬剤投与を行った。

クループ A (り匹) ： h u m a n c n o r i o n i c g o n a d o t r o p i n (h C G、ゴナトロピン、大日本製薬）を 1 0 0 I U /mLで生理食塩水に溶解し、 1個体当たり 2 0 I Uを背部皮下に投与 < グループ B ( 5匹）：化合物番号 3 0 5を 3 3. 3 n m o l ,mLで生理食塩水に溶解し、個体当たり 6. 7 n m o 1 を背部皮下に皮下投与。

グループ C ( 5匹）：化合物番号 3 0 5を 1 0. O n m o l / Lで生理食塩水に溶解し、 1個体当たり 2. 0 n m o 1 を背部皮下に投与。

グループ D ( 5匹）：化合物番号 3 2 2を 3 3. 3 n m o 1 /m Lで生理食塩水に溶解し、 1固体当たり 6. 7 n m o 1 を背部皮下に投与。 , ダル一プ E ( 5匹）：化合物番号 3 2 2を 1 0. O nmo l ZmLで生理食塩水に溶解し、 1個体当たり 2. 0 nmo 1 を背部皮下に投与。

グループ F ( 6匹）： 1個体当たり 2 0 0 Lの生理食塩水を背部皮下に投与。

これら薬剤の投与後さらに 2 4— 2 5時間後に断頭の後、血液、両側卵管および子宮を回収した。血液回収に際しては、血液凝固を防止するために、回収する遠心チューブにはあらかじめ 3 mg /mLの E D T A を含む 1 0 k I U/mLのァプロチニン溶液（トラジロール、バイェル）を 9 0 L入れておき、また回収後は、よく混和したのち、 2， 0 0 0 &で 2 5分間遠心し、上清を回収して血漿サンプルとした。

排卵数の計数は、 E u r . J . E n d o c r i n o l . 1 3 8、 5 9 4 - 6 0 0 ( 1 9 9 8 ) に記載の方法を参考にして行った。すなわち、実体顕微鏡下での卵管の観察により、卵管膨大部における卵の滞留が確認された場合には、同部位を 2 7ゲージの注射針（テルモ）によって切開して卵を取り出し、トリプシン処理によって卵を取り囲む顆粒膜細胞を除去した後、卵を計数した。実体顕微鏡下での卵管の観察で、卵管膨大部での卵が確認できなかった場合には、先端を研磨した 2 7ゲージの注射針を卵管口に挿入し、卵管および子宮内を 4 0 0 i L以上の生理食塩水で洗浄した後、流出液中の卵の有無を観察した。

こうして得られた排卵数を図 2 0に示す。汎用の過排卵処理群であるグループ Aでは、ラット 1匹あたり平均 3 8. 0個の排卵が確認され、グループ B、 C、 Dでの平均排卵数はそれぞれ 3 2. 6個、 2 9. 4個, 2 9. 6個であり、グループ Aと同等の排卵を示した。一方、化合物番号 3 2 2を 2. 0 nm o 1投与したグループ Eでは、排卵したラットは 5匹中 3匹であり、また平均排卵数も 1 1. 6個と、グループ Aと比較して少なかった。また陰性対象群であるグループ Fでは、全く排卵はみられなかった。

図 2 0の結果から、 h C Gと同等の排卵を誘発するためには、化合物番号 3 0 5は 2. 0 nmo 1 /個体以上、化合物番号 3 2 2は 6. 7 n mo 1ノ個体以上を投与しなければならないことが判明した。

血漿中に含まれるエストラジオール濃度を測定した結果を図 2 1に示す。血中エストラジオール濃度は、ラジオィムノアッセィ（D P C - ェストラジオールキット、ャトロン）により測定した。図 2 1に示すように、エストラジオールに関しては、グループ A、 B、 Cおよび Dの間で差は無く、生理食塩水を投与したグループ Fでのみ高値を示した。またグループ Eでは、排卵が誘発されなかったラッ卜で高値を示す傾向にあった。

血漿中に含まれるプロゲステロン濃度を測定した結果を図 2 2に示す, 血中プロゲステロン濃度は、ラジオィムノアッセィ（D P C : プロゲステロン、ャトロン）によって測定した。図 2 2に示すように、血中プロゲステロンの値はグループ Aで最も高く、グループ B、 C, および Dではグループ A の半分弱の値を示した。またグループ E とグループ F は非常に低い値を示した。

図 2 1および図 2 2の結果から、化合物番号 3 0 5では 2. O nmo 1 Z個体以上、化合物番号 3 2 2では 6. 7 nmo 1 個体を投与することによって、エストロゲン産生細胞である顆粒膜細胞から、プロゲステロン産生細胞である黄体細胞への正常な分化が誘導されていることが判明した。また h C G投与時に比べて化合物番号 3 0 5、 K i S S— 3 2 2投与時ではプロゲステロン濃度が低いことから、これら誘導体の卵巣に対する刺激作用は h C Gよりも緩和であることが示唆された。産業上の利用可能性

本発明のメタスチン誘導体またはその塩あるいはそのプロドラッグは、優れた癌転移抑制作用や癌増殖抑制作用に加え、優れた血中安定性を有しており、癌（例えば、肺癌、胃癌、肝癌、滕癌、大腸癌、直腸癌、結腸癌、前立腺癌、卵巣癌、 '子宮頸癌、乳癌等）の予防 ·治療薬とし T 有用である。本発明のメタスチン誘導体またはその塩あるいはそのプロドラッグは、塍臓機能調節作用を有しており、膝臓疾患（例えば、急性または慢性塍炎、膝癌等）の予防 ·治療薬として有用である。本発明のメタスチン誘導体またはその塩あるいはそのプロドラッグは、胎盤機能調節作用を有しており、絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防 ·治療薬として有用である。

また、本発明のメタスチン誘導体またはその塩あるいはそのプロドラッグを含むメタスチン受容体ァゴニストは、血糖上昇作用、膝グルカゴン分泌促進作用、尿生成促進作用を有しており、肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療薬として有用である。

さらに、本発明のメタスチン誘導体またはその塩あるいはそのプロドラッグは、優れた性腺刺激ホルモン分泌促進活性、性ホルモン分泌促進活性、排卵誘発または促進作用等を有し、低毒性で安全な、例えば、性腺機能改善剤、ホルモン依存性癌（例えば、前立腺癌、乳癌等）、不妊症、子宮内膜症、子宮筋腫等の予防 · 治療剤、排卵誘発または促進剤、性腺刺激ホルモン分泌促進剤または性ホルモン分泌促進剤などとして有用である。

Claims

請求の範囲

1. 式

〔式中、 Z ¹ Z ³、 Z ⁵および Z ⁷はそれぞれ水素原子または Cェ— 3ァルキル基を、 Z ²、 Z ⁴、 Z ⁶および Z ⁸はそれぞれ水素原子、 0または Sを、

R ¹は（ 1 ) 水素原子または（ 2 ) 置換されていてもよい力ルバモイル基、置換されていてもよいヒドロキシル基および置換されていてもよい芳香族環基から成る群から選ばれる基で置換されていてもよい Cェ— ₈ァルキル基を、

R ²は（ 1 ) 水素原子または（ 2 ) 環状または鎖状の。ェ—ェ。アルキル基または（ 3 ) 環状アルキル基と鎖状アルキル基からなる。アルキル基を、

： ³は（ 1 ) 置換されていてもよい塩基性基を有し、さらに他の置換基を有していてもよい Cい ₈アルキル基、

( 3 ) 置換されていてもよい塩基性基を有している炭素数 Ί以下の非芳香性環状炭化水素基を有し、さらに他の置換基を有していてもよい Cェ 4アルキル基、または

(4) 置換されていてもよい塩基性基を有している炭素数 7以下の非芳香性複素環基を有し、さらに他の置換基を有していてもよい C i _ ₄アルキル基を、

R⁴は（ 1 ) 置換されていてもよい C ₆__{1 2}芳香族炭化水素基、

( 3 ) 置換されていてもよい C ₈_₁₄芳香族縮合環基、

( 5) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基、および

( 6 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい Cェ— ₄アルキル基を、

Xは式一 NHCH (Q ¹) YQ ² C (= Z ⁹) 一

(式中、 Q ( 1 ) 置換されていてもよい C e—ェ ₂芳香族炭化水素基 (2 ) 置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族複素環基、 . (3 ) 置換されていてもよい C ₈_₁₄芳香族縮合環基、

( 6) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性複素環基、から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい Cェ— ₄アルキル基を、 Q ²は（ 1 ) 力ルバモイル基おょぴヒドロキシル基から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい C i— ₄アルキル基で置換されていてもよい CH₂、（ 2 ) 力ルバモイル基およびヒドロキシル基から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい Cェ— ₄アルキル基で置換されていてもよい NHまたは（ 3 ) 0を、

Yは C i— eアルキル基で置換されていてもよい、式一 C ONH—、 - C

S NH—、 — CH₂NH—、一 NHC O—、一 CH₂〇一、一 CH₂ S— または— CH₂ CH₂—で表わされる基を、

5 Z ⁹は水素原子、〇または Sを示す）で表わされる基を、

Pは（ 1 ) 水素原子、

(2) 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1〜4 8番目のアミノ酸配列の C末端側から任意の連続したまたは不連続に結合したアミノ - 酸残基、

0 ( 3 ) 式 J ¹ 一 J ²— C (J ³) (Q³) Y ¹ C (J ⁴) (Q⁴) Y² C (J ⁵) (Q⁵) Y³ C ( J " (Q⁶) C (= Z ¹ °) 一

(式中、 J ¹は（ a) 水素原子または（b) 置換基を有していてもよい環基を含む置換基で置換されていてもよい、ズ i ) (：ェ— _{1 5}ァシル基、

(ii) ^— _{1 5}アルキル基、（iii) C ₆— _{1 4}ァリール基、（iv) 力ルバ5 モイル基、（V) 力ルポキシル基、（vi) スルフィノ基、（vii) アミジノ基、または（viii) ダリオキシロイル基を、

J ²は（ 1 ) Cい ₆アルキル基で置換されていてもよい NH、（ 2 ) C i— 6アルキル基で置換されていてもよい CH₂、（ 3 ) Oまたは（4 ) Sを、

0 J ³〜 J ⁶はそれぞれ水素原子または C i— ₃アルキル基を、

Q³〜Q⁶はそれぞれ、

( 1 ) 置換されていてもよい C ₆— _{1 2}芳香族炭化水素基、

( 2 ) 置換されていてもよい、 1ないし 7個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからな5 る 5ないし 1 4員芳香族複素環基、

(3 ) 置換されていてもよい C ₈_₁₄芳香族縮合環基、

(4) 置換されていてもよい、 3ないし 1 1個の炭素原子と、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から成る群から選ばれるヘテロ原子とからなる 5ないし 1 4員芳香族縮合複素環基、 ( 5 ) 置換されていてもよい炭素数 7以下の非芳香性環状炭化水素基

( 7 ) 置換されていてもよいアミノ基、

( 8 ) 置換されていてもよいグァニジノ基、

( 9 ) 置換されていてもよいヒドロキシル基、

(1 0) 置換されていてもよい力ルポキシル基、

(1 1) 置換されていてもよい力ルバモイル基、および

(1 2) 置換されていてもよいスルフヒドリル基

から成る群から選ばれる置換基を有していてもよい Cェ— ₄アルキル基又は水素原子を示し、

J ³と Q ³、 J ⁴と Q ⁴、 J ⁵と Q ⁵、 J ⁶と Q ⁶が結合することで、あるいは J ²と Q ³、 Y ¹と Q⁴、 Y ²と Q ⁵、 Y ³と Q ⁶が結合することで環を形成してもよい、

丫丄〜丫 ³はそれぞれ一 CON (J ^{1 3}) —、一 C S N (J ^{1 3})—、 - C ( J ¹ ⁴) N ( J ^{1 3})—または _N (J ^{1 3}) C O— ( J ^{1 3}および J ¹⁴はそれぞれ水素原子または C i _ ₃アルキル基を示す）で示される基を示し、

Z ^{1 Q}は水素原子、 Oまたは Sを示す）で表わされる基、

(4) 式 " _ J ² _ C (J ⁷) (Q⁷) Y² C (J ⁸) (Q⁸) Y³ C ( J ⁹ ) (Q⁹) C O Z ^{1 0}) -

(式中、 J ¹および J ²はそれぞれ前記と同意義を、

J ⁷〜： Γ ⁹は J ³と同意義を、

Q⁷〜Q 9は Q³と同意義を、

Y ²および Y ³は前記と同意義を、

Z ^{1 Q}は前記と同意義を示し、

J ⁷と Q ⁷、 J ⁸と Q ⁸、 J ⁹と Q ⁹が結合することで、あるいは J ²と Q ⁷、 Y²と Q ⁸、 Y³と Q ⁹が結合することで環を形成してもよい。）で表わされる基、

(5) 式 — Π ¹⁰) (Q¹⁰) Y³C ( J ^{X 1}) (Q¹ M C (= z ^{1 0}) -

(式中、 J ¹および J ²は前記と同意義を、

J ¹⁰および J ^{1 1}は J ³と同意義を、

Q ¹⁰および Q ^{1 1}は Q³と同意義を、

Y³は前記と同意義を、 .

Z ^{1 ΰ}は前記と同意義を示し、

J ¹。と Q ^{1 ()}、 J ^{1 1}と Q ^{1 1}が結合することで、あるいは J ²と Q¹⁰、 Y ³と Q ^{1 1}が結合することで環を形成してもよい。）で表わされる基、

( 6 ) 式 "一 J ²— C ( J ^{1 2}) (Q ¹²) C (= Z ¹⁰) - (式中、 J ¹および J ²は前記と同意義を、

J ェ ²は J ³と同意義を、

Q ¹²は Q³と同意義を、

Z ^{1 Q}は前記と同意義を示し、

( 7 ) 式 J エー（ J ¹は前記と同意義を示す）で表わされる基を示す。〕で表わされるメタスチン誘導体（ I ) (ただし、配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1〜 5 4番目、第 2〜 5 4番目、第 3〜 5 4 番目、第 4~ 5 4番目、第 5〜 5 4番目、第 6〜 5 4番目、第 7〜 5 4 番目、第 8 ~ 5 4番目、第 9〜 5 4番目、第 1 0〜 5 4番目、第 1 1〜 5 4番目、第 1 2〜 5 4番目、第 1 3〜 5 4番目、第 1 4〜 5 4番目、第 1 5〜 54番目、第 1 6〜 5 4番目、第 1 7〜 5 4番目、第 1 8〜 5 4番目、第 1 9〜 5 4番目、第 2 0〜 5 4番目、第 2 1〜 54番目、第 2 2〜 5 4番目、第 2 3〜 5 4番目、第 2 4〜 5 4番目、第 2 5〜 5 4 番目、第 2 6〜 54番目、第 2 7〜 5 4番目、第 2 8〜 5 4番目、第 2 9〜 5 4番目、第 3 0〜 5 4番目、第 3 1〜 5 4番目、第 3 2〜 5 4番目、第 3 3 ~ 5 4番目、第 3 4〜 5 4番目、第 3 5〜 5 4番目、第 3 6 〜 5 4番目、第 3 7〜 5 4番目、第 3 8〜 5 4番目、第 3 9〜 54番目、第 4 0〜 5 4番目、第 4 1〜 5 4番目、第 4 2 ~ 5 4番目、第 4 3〜 5 4番目、第 44〜 5 4番目、第 4 5〜 5 4番目、第 4 6〜 54番目、第 47〜 54番目、第 4 8〜 5 4番目または第 4 9〜 5 4番目のァミノ酸配列からなるペプチドを除く）またはその塩。

2 . ( i ) D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ (化合物番号 141) 、

( ii) D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg (Me) -Trp-NH₂ (化合物番号 Π4) 、

( iii ) 3- (3-Indolyl) ropionyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - Phe-匪 ₂ (化合物番号 260) 、

( iv) 3-PhenyIpropionyl-Asn-Ser-Plie-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Ptie-NH₂ ( 化合物番号 269) 、

( v ) 2- (indol-3-yl) ethylcarbamoyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu- Arg (Me) -Phe-NH₂ (化合物番号 279) 、

( vi ) D-Tyr-Asn-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ ( 化合物番号 286) 、

( vii ) D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe Ψ (CSNH) Gly-Leu-Arg (Me) -Phe-NH₂ (化合物番号 296) 、

( viii ) Tyr Ψ (CH₂NH) Asn-D-Trp-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) - P e-NH₂ (化合物番号 300) 、

( x ) D-Tyr-D-Pya (4) -Asn- Ser- Phe- AzaGly- Leu- Arg (Me) -P e-NH₂ (化合物番号 305) 、

(xi) D- Tyr- Asn- Trp- Asn- Ser- Plie - AzaGly- Leu- Arg (Me) -Phe (4F) -NH₂ ( 化合物番号 318) 、

(xii ) D-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe Ψ (NHCO) Gly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ (化合物番号 319) 、

( xiii ) 3-Pyridylpropionyl-Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Phe- NH₂ (化合物番号 322) 、 ( xiv ) 4-Imidazoleacetyl-Asn-Ser-Plie-AzaGly-Leu-Arg (Me) -P e-NH₂ (化合物番号 323) 、

(xv) D-Tyr-D-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Trp-NH₂ (化合物番号 385) 、または

(xvi) D-Tyr-D-Pya (4) -Asn-Ser-Phe-AzaGly-Leu-Arg (Me) -Trp-NH₂ (化合物番号 386) である請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩。

3. 請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩のプロドラッグ。

4. 請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグを含有してなる医薬。

5. 癌転移抑制剤または癌増殖抑制剤である請求項 4記載の医薬。

6. 癌の予防，治療剤である請求項 4記載の医薬。

7. 塍臓機能調節剤である請求項 4記載の医薬。

8. 急性もしくは慢性瞵炎または膝癌の予防 · 治療剤である請求項 4記載の医薬。

9. 胎盤機能調節剤である請求項 4記載の医薬。

1 0. 絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防 ·治療剤である請求項 4記載の医薬。

1 1. 性腺機能改善剤である請求項 4記載の医薬。

1 2. ホルモン依存性癌、不妊症、子宮内膜症または子宮筋腫の予防 - 治療剤である請求項 4記載の医薬。

1 3. 排卵誘発または促進剤である請求項 4記載の医薬。

1 4. 性腺刺激ホルモン分泌促進剤または性ホルモン分泌促進剤である請求項 4記載の医薬。

1 5. アルツハイマー病または軽度認知障害の予防，治療剤である請求項 4記載の医薬。

1 6. 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする癌転移抑制または癌増殖抑制方法。

1 7 . 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする癌の予防 · 治療方法。

1 8 . 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（Ί ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする膝臓機能調節方法。

1 9 . 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする急性もしくは慢性膝炎または滕癌の予防 · 治療方法。

2 0 . 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする胎盤機能調節方法。

2 1 . 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防 · 治療方法。

2 2 . 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする性腺機能改善方法。 '

2 3 . 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とするホルモン依存性癌、不妊症、子宮内膜症または子宮筋腫の予防 · 治療方法。

2 4 . 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とする排卵誘発または促進方法。

2 5 . 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徵とする性腺刺激ホルモン分泌促進方法または性ホルモン分泌促進方法。

2 6. 哺乳動物に対して、請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの有効量を投与することを特徴とするアルツハイマー病または軽度認知障害の予防 · 治療方法。

2 7. 癌転移抑制剤または癌増殖抑制剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

2 8. 癌の予防 ·治療剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

2 9. 滕臓機能調節剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

3 0. 急性もしくは慢性塍炎または膝癌の予防 · 治療剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプ口ドラッグの使用。

3 1. 胎盤機能調節剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

3 2. 絨毛癌、胞状奇胎、侵入奇胎、流産、胎児の発育不全、糖代謝異常、脂質代謝異常または分娩誘発の予防 ·治療剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

3 3. 性腺機能改善剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

3 4. ホルモン依存性癌、不妊症、子宮内膜症または子宮筋腫の予防 · 治療剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

3 5. 排卵誘発または促進剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

3 6. 性腺刺激ホルモン分泌促進剤または性ホルモン分泌促進剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

3 7 . アルツハイマー病または軽度認知障害の予防 ·治療剤を製造するための請求項 1記載のメタスチン誘導体（ I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグの使用。

3 8 . メタスチン受容体ァゴニストを含有してなる膝グルカゴン分泌促進剤。

3 9 . メタスチン受容体ァゴニストを含有してなる尿生成促進剤。

4 0 . メタスチン受容体ァゴニストを含有してなる肥満、高脂血症、 2 型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 · 治療剤。

4 1 . メタスチン受容体ァゴニストが請求項 1記載のメタスチン誘導体 ( I ) またはその塩あるいはそのプロドラッグである請求項 3 8〜4 0 記載の剤。

4 2 . 哺乳動物に対して、メタスチン受容体ァゴニストの有効量を投与することを特徴とする滕グルカゴン分泌促進方法。

4 3 . 哺乳動物に対して、メタスチン受容体ァゴニストの有効量を投与することを特徴とする尿生成促進方法。

4 4 . 哺乳動物に対して、メタスチン受容体ァゴニストの有効量を投与することを特徴とする肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、ィンスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、ィンスリノーマ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 ·治療方法

4 5 . 塍グルカゴン分泌促進剤を製造するためのメタスチン受容体ァゴニス卜の使用。

4 6 . 尿生成促進剤を製造するためのメタスチン受容体ァゴニストの使用。

4 7 . 肥満、高脂血症、 2型糖尿病、低血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、排尿困難症、インスリン抵抗性、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノ一マ、動脈硬化、血栓性疾患または脂肪毒性の予防 · 治療剤を製造するためのメタスチン受容体ァゴニストの使用。

本発明は、血中安定性に優れ、癌転移抑制作用又は癌増殖抑制作用を有するメタスチン誘導体を提供する。具体的には、本発明は

式

〔式中、 Z ¹, Z ³、 Z ⁵及び Z ⁷は H又は C — ₃アルキル基を、 Z ²、 Z ⁴、 Z ⁶及び Z ⁸は H、 O又は Sを、 R ¹は（ 1 ) H、（ 2 ) カルバモィル基、ヒドロキシル基及び芳香族環基から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい C i — 8アルキル基を、 R ²は（ 1 ) H又は（ 2 ) 環状又は鎖状の。アルキル基又は（ 3 ) 環状アルキル基と鎖状アルキル基からなる C i— 。アルキル基を、 R ³は塩基性基を有する C J 一 ₈アルキル基、塩基性基を有するァラルキル基、塩基性基を有する炭素数 7以下の非芳香性炭素環基を有する Cェ— 4アルキル基、又は塩基性基を有している炭素数 7以下の非芳香性複素環基を有する Cェ_₄アルキル基を、 R⁴は C ₆— ₁₂芳香族炭素環基、芳香族複素環基、 C ₈_ ₁₄芳香族縮合環基、芳香族縮合複素環基、非芳香性炭素環基及び炭素数 7以下の非芳香性複素環基から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい Cい ₄アルキル基を、 Xは— NHCH (Q ¹) YQ² C (= Z ⁹) -

(Q ¹は C ₆_₁₂芳香族炭素環基、芳香族複素環基、 C ₈— ₁₄芳香族縮合環基、芳香族縮合複素環基、炭素数 7以下の非芳香性炭素環基及び炭素数 7以下の非芳香性複素環基から成る群から選ばれる置換基で置換されていてもよい Cェ _ ₄アルキル基を、 Q ²は C H ₂、 N H又は Oを、 Yは

C ONH―、一 C S NH—、一 CH₉NH—、 - NH C 0 C H

₂0—、一 CH₂ S—又は C H₂ CH₂—を、 Z ⁹は H、 O又は Sを、 P は（ 1 ) H、（ 2 ) 配列番号： 1で表わされるアミノ酸配列の第 1〜4 8番目のァミノ酸配列の C末端側から任意の連続した又は不連続に結合したアミノ酸残基、（ 3 ) J ¹— J ²— C (J ³) (Q ³) Y ¹ C (J ⁴) (Q " Y² C (") (Q ⁵) Y ³ C ( J ⁶) (Q ⁶) C (= Z ¹ °) 一（ "は

( a) H又は（b) 環基で置換されていてもよい、（ i ) C — _{1 5}ァシル基、（ii) Cい _{1 5}アルキル基、（iii) 力ルバモイル基、（iv) C ₁ _ュ ₅アルキル力ルバモイル基、（V) C — i ₅アルカノィルカルバモイル基、（vi) アミノカルバモイル基、（vii) C i—ェ ₅アルキルアミノカルバモイル基、（viii) ォキシカルボニル基、（ix) ^— _{1 5}アルコキシカルポニル基、（X) スルホエル基、（xi) アミジノ基、（xii) C ₅アルキルアミジノ基、（xiii) Cい ₅ァシルアミジノ基、（xiv) C 丄 _ ₅アルキルスルホニル基又は（XV) ォキザリル基を、 J iNH、 C H₂、 0又は Sを、 J ³〜； I ⁶は H又は C _ ₃アルキル基を、 Q ³〜Q ⁶は C ₆— _{1 2}芳香族炭素環基、芳香族複素環基、 C ₈— ₁₄芳香族縮合環基、芳香族縮合複素環基、炭素数 7以下の非芳香性炭素環基及び炭素数 7 以下の非芳香性複素環基、アミノ基、グァニジノ基、ヒドロキシル基、力ルポキシル基、力ルバモイル基及びスルフヒドリル基から成る群から選ばれる置換基を有していてもよい C — ₄アルキル基又は Hを示し、 J ³と Q ³、 J ⁴と Q ⁴、 J ⁵と Q ⁵、 J ⁶と Q ⁶が結合することで、あるいは J ²と Q ³、 Y ¹と Q ⁴、 Y²と Q ⁵、 Y ³と Q ⁶が結合することで環を形成してもよい、 Y i Y — C ON U ^{1 3})— — C S N (J ^{1 3})—、 - C ( J ^{1 4}) N ( J ^{1 3})—又は N (J ^{1 3}) C O— ( J ^{1 3}及び J ^{1 4}は H又は C ₁_₃アルキル基）で示される基を示し、 Z ^{1 Q}は H、 0又は S ) で表わされる基、（4 ) J ¹ - J ² - C ( J ⁷) (Q ⁷) Y² C ( J ⁸) (Q ⁸) Y ³ C ( J ⁹) (Q ⁹) C (= Z ¹ °) 一（ J ¹及び J ²は前記と同意義、 J ⁷〜 J ⁹は J ³と同意義、 Q ⁷〜Q ⁹は Q ³と同意義、 Y ²及び Y ³は前記と同意義、 Ζ ^{1 0}は前記と同意義、 J ⁷と Q ⁷、 J ⁸と Q ⁸、 J ⁹と Q ⁹が結合することで、あるいは J ²と Q ⁷、 Y²と Q ^s、 Y³と Q ⁹が結合することで環を形成してもよい）で表わされる基、（ 5 ) J ¹ - J ² - C (

J ¹ °) (Q ¹ °) Y ³ C ( J ^{1 1}) (Q ¹ M C (= Z ¹⁰) 一（ J ¹及び J