JPS6116316B2 - - Google Patents

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JPS6116316B2
JPS6116316B2 JP56066168A JP6616881A JPS6116316B2 JP S6116316 B2 JPS6116316 B2 JP S6116316B2 JP 56066168 A JP56066168 A JP 56066168A JP 6616881 A JP6616881 A JP 6616881A JP S6116316 B2 JPS6116316 B2 JP S6116316B2
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JP
Japan
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detergent composition
cellulase
reducing agent
roughness
main
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JP56066168A
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JPS5723699A (en
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Ue Barubesugaado Pedaa
Uiruherumu Zensen Georugu
Horumu Hooru
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Novo Nordisk AS
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Novo Industri AS
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Publication date
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Publication of JPS5723699A publication Critical patent/JPS5723699A/ja
Publication of JPS6116316B2 publication Critical patent/JPS6116316B2/ja
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/24Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405Glucanases
    • C12N9/2434Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2437Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C11ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11DDETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16Organic compounds
    • C11D3/38Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38645Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing cellulase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y302/00Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01004Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase

Description

【発明の詳細な説明】
本発明は、洗剤組成物用の手粗さ軽減剤、洗剤
組成物及び洗浄方法に関する。 周知の通り、標準条件下において綿を含む布を
洗浄すると一般に、顕著で且つ不快な手粗さを生
ずる(本明細書中で「手粗さ」とは手ざわりのあ
らいことを意味する)。一般に行なわれている洗
濯においては、この手粗さは通常、主洗剤とは別
の工程において、陽イオン性洗剤を含む柔軟剤
(リンスコンデイシヨナー)で布を処理すること
によつて軽減されている。しかしながら、この処
理は、手粗さ軽減効果が一時的なものであるとい
う重大な欠点を有する。次の洗浄後においては、
布をもう一度柔軟剤で処理するのでなければ手粗
さがもどるであろう。布の手粗さを軽減するもつ
と良い方法を見い出すために大金が費やされたと
いう事実にもかかわらず、現在使用されている柔
軟剤は充分な手粗さ軽減効果を及ぼすためには主
洗浄工程とは別の工程において布に添加しなけれ
ばならないという事実が依然として残り、また、
その手粗さ軽減効果は単に一時的なものである。 しかしながら、この問題を解決しようとする
種々の論文上の提案がある。たとえば、英国特許
第1368599号明細書には、セルラーゼにより処理
を含んでなる、綿を含む布の手粗さを軽減するた
めのより有効と言われる方法が記載されている。
この処理は、後に詳述する通り、常に別の工程と
して、たとえば、前洗浄または前浸漬として実施
されることに留意されたい。ただし、この明細書
中においては、セルラーゼで処理された、綿を含
む布が数回の洗浄においてはその柔軟性を保持す
ると主張されている。しかしながら、セルラーゼ
柔軟剤を使用する手法が早く1972年から知られて
いる(英国特許第1368599号明細書に相当するベ
ルギー国特許第773280号が1972年に公表された)
にもかかわらず、セルラーゼ柔軟剤が市場に現れ
ないことに注目されたい。すなわち、英国特許第
1368599号明細書(またはベルギー国特許773280
号明細書)の教示は、当業界が進んで商業化した
実際的な技術的教示というよりはむしろ理論上の
可能性として処理しなければならない。 細菌のセルラーゼは収率が普通は極めて低いた
めに通常はかなり高価であるが、菌類セルラーゼ
は一般にこれよりかなり高い収率で生産されるの
で商業的見地から最も有望なセルラーゼであるこ
とに留意されたい。たとえば、公布された英国特
許第1368599号明細書の第2頁、第84行乃至第90
行には以下のことが述べられている:「菌類に由
来する多くのタイプのセルラーゼは最適PHが約5
である。PH7以上ではそれらの活性は通常著しく
減少するため、菌類に由来するセルロース分解酵
素は本発明において酸性媒体中で使用しなければ
ならない。」。このことは、通常はアルカリ性のPH
で実施される洗浄操作はセルラーゼ処理と同一工
程では実施できないことを意味する。セルラーゼ
処理は第一の工程において酸前洗浄または前浸漬
として実施され、然る後に主工程が第二の工程に
おいてアルカリ洗浄として実施される。我々の知
る限りでは、実際的な洗浄操作においてセルラー
ゼを使用して単一の工程で洗浄と柔軟化とを実施
しようとする開示はこれまで当業界になかつた。 セルラーゼで処理された洗濯物の酸度を中和す
るための過剰量のアルカリが主洗浄用洗剤中に存
在するかまたはこれに加えられるのでなければ、
主洗浄に先立つて酸性PHでセルラーゼ処理を実施
しなければならない時には、酸性セルラーゼ処理
と主洗浄との中間ですすぎをしなければならない
ことは理解されよう。 最後に、セルラーゼ処理液が洗剤を含む場合に
は、セルラーゼ処理液中の低いPH値においては洗
剤の洗浄力は通常かなり低い。 従つて、主洗浄溶液中に普通に用いられるPHに
おいて高い活性を有する比較的安価なセルラーゼ
を含む主洗浄用洗剤組成物に対して火急の要求が
ある。 しかしながら、この要求を満たすことができた
としたら途方もなく大きい商業上の利益が期待で
きたのにもかかわらず、主洗浄溶液に普通に用い
られるPH値で許容され得る程度に高いセルラーゼ
活性を示す安価なセルラーゼは当業界ではまだ知
られていない。 意外にも、本発明によれば、公布された前記英
国特許第1368559号明細書の第2頁、第84行乃至
第90行に例示されている当業界の通常の知識に基
づいて予期されるものとは異なり、ある種の菌類
セルラーゼ、すなわち、ヒユミコーラ・インソレ
ンス(Humicola insolens)〔ヒユミコーラ・グリ
セア変異株サーモイデイア(Humicola grisea
var.thermoidea)〕から生産される菌類セルラー
ゼが主洗浄溶液に普通に用いられるPH値において
高いセルラーゼ活性を有することが判明した。 従つて、本発明の第一の局面によれば、ヒユミ
コーラ・インソレンス(ヒユミコーラ・グリセア
変異株サーモイデイア)から生産される菌類セル
ラーゼを必須成分とする、主洗浄用洗剤組成物の
ための手粗さ軽減剤である、洗剤組成物用の洗剤
添加剤の形態の手粗さ軽減剤が提供される。 換言すれば、本発明はヒユミコーラ・インソレ
ンスから生産され得る菌類セルラーゼを主洗浄用
洗剤組成物のための手粗さ軽減剤として使用する
ものである。 ヒユミコーラ・インソレンスから生産され得る
菌類セルラーゼはヒユミコーラ・インソレンスの
普通の菌株からもヒユミコーラ・インソレンスの
突然変異体及び変種からも生産できることを理解
されたい。 本発明に係る主洗浄用洗剤組成物のための手粗
さ軽減剤を使用することによつて初めて、前浸漬
または他の前処理をすることなしに、単一の操作
で、すなわち、主洗浄において、かなり安価に洗
浄及び手粗さ軽減プロセスを実施することが可能
になつた。 Agric.Biol.Chem 44 (3),481〜487
(1980)及び44 (8), 1721〜1728(1980)に
は、ヒユミコーラ・インソレンスがセルラーゼ生
産性の好熱性真菌であることが記載されている。
また、ヒユミコーラ・インソレンスによつて生産
されたセルラーゼの最適PHが各々5.3及び5.0であ
ることが記載されており、このため、このセルラ
ーゼは英国特許第1368599号明細書に関連して前
述したセルラーゼのカテゴリーに属するようであ
り、従つて、本発明の目的を完全には満たすこと
ができない。しかしながら、意外にも、本発明に
よれば、本発明の目的を満足させる別のセルラー
ゼを生産することが判明した。 ヒユミコーラ・インソレンスは、分類学上の差
異が極めてはつきりしないヒユミコーラ・インソ
レンスとヒユミコーラ変異株サーモイデイア
(Humicola var.thermoidea)とを含んでなる好
熱性ヒユミコーラ群として分類される。 レギユラーCXセルラーゼ活性は、セルラーゼ
がカルボキシメチルセルロースを還元性糖に加水
分解するという事実に基いて測定する。還元性糖
の還元能はホフマン(Hoffman),W.S.,J.Biol.
Chem.120,51(1937)に従つて、フエリシアン
化物反応によつて比色分析法で測定する。 レギユラーCXセルラーゼ活性は基質カルボキ
シメチルセルロース〔CMC ハーキユルズ
(Hercules),4M6F〕に関して測定する。 標準条件は以下の通りである:PH9.50;緩衝剤
0.1M トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタ
ン(「トリス」);基質4g CMC/(前記緩
衝液);インキユベーシヨン温度50℃;インキユ
ベーシヨン時間20分。 1レギユラーCXセルラーゼ活性単位(以下に
おいて略してレギユラーCX単位と称する)は、
前記標準条件下においてグルコース1μmol/分
に相当する量の還元性糖を形成すセルラーゼの量
である。 本発明に係る手粗さ軽減剤の好ましい一態様に
おいては、菌類セルラーゼはヒユミコーラ属の菌
株DSM1800によつて生産する。この菌株はアル
カリ性のPH値において高いCX活性を有するアル
カリ性セルラーゼを生産することが判明した。ヒ
ユミコーラ属のこの新菌株は英国、キユウのコモ
ンウエルス・マイコロジカル・インステイテユー
トにおいてヒユミコーラ・インソレンスと同定さ
れた。この新菌株は1980年4月14日にドイツ国、
ゲツテインゲンのジヤーマン・コレクシヨン・オ
ブ・ミクロオーガニズムズ(DSM,Deutsche
Sammlung von Mikroorganismen)にDSM寄託
番号1800の下に寄託された。この菌株はまた、工
業技術院微生物工業技術研究所に1981年7月24日
に微工研菌寄第6076号の番号の下に寄託された。 この菌株はまた、工業技術院微生物工業技術研
究所に1981年7月24日に微工研菌寄第6076号の番
号の下に寄託された。 前記のヒユミコーラ新菌株DSM1800の形態学
的及び生理学的記載は次の通りである。 表面:短;最初は白く、後に白い斑点を有する
暗灰色になる菌糸体;直径約2.8μの無色で且つ
平滑な、隔膜のある菌糸。無色の水が数滴存在す
ることもある。 裏面:黄色であつて、経時的に茶色〜暗灰色に
なる。 粉状胞子:平滑;茶色;単一または多細胞分生
胞子柄上に一つずつ頂端に形成される;通常は
12.6〜16.8μの球形または時折7×11.2〜14×
16.8μの亜球形。突頂(apiculus)あり。 厚膜胞子:一つずつまたは鎖状に形成される;
平滑;茶色;11.2〜16.8μ。 梗子分生子(phialcondia):なし。 温度範囲:26℃では生育せず;37〜50℃で良好
な生育。37℃で5日間培養後に直径8cmのコロニ
ー。 以下の組成のYPSS寒天培地上で37℃において
5日間培養後に前記観察を行なつた。 酵母エキス(Difco) 4.0g K2HPO4 1.0g MgSO4・7H2O 0.5g 可溶性澱粉 15.0g 蒸留水 1000ml 寒天 15.0g 意外なことに、ヒユミコーラ・インソレンスに
よつて生産されたセルラーゼ製品は、柔軟作用の
他に、強い汚れ離脱及び再付着防止作用を示すこ
とが判明した。 本発明に係る手粗さ軽減剤の好ましい一態様に
おいては、菌類セルラーゼは6乃至7.5のPHでア
ニオン交換体に結合しないセルラーゼフラクシヨ
ンを高濃度で含む。 後に詳述するように(実施例6参照)、6.5乃至
7.5のPHでアニオン交換体に結合しないセルラー
ゼフラクシヨン(以下において略してACXIフラ
クシヨンと称する)が最も有意な手粗さ軽減力を
示すことが判明した。またACXIフラクシヨンの
温度安定性はヒユミコーラ・インソレンスセルラ
ーゼのその他のフラクシヨンの温度安定性及び前
記英国特許第1368599号明細書に記載された酸性
菌類セルラーゼの温度安定性よりも良いことも判
明した。 ACXIフラクシヨン量を確定できるように、修
正されたCX(セルラーゼ)活性は以下のように
して測定できる。脱イオン水1000ml中に燐酸二水
素ナトリウム二水和物26.52gを含む燐酸塩緩衝
液Aを調整する(Aのモル濃度は0.17である)。
A100mlを約800mlの脱イオン水と混合し、PHを
7.0に調整しそして緩衝液の総容量を1000mlに調
整し、この緩衝液を緩衝液Bと命名する(Bのモ
ル濃度は0.017である)。カラムに陰イオン交換体
DEAE−セフアロースCl−6B〔DEAE−
Sepharose Cl−6B〕1gを充填し、Bで平衡
化する。次いで、酵素をB中に溶解し、そしてこ
うして調製した酵素溶液25mlを前述の平衡化カラ
ムに通す。カラムの下から流れ出す酵素溶液のC
X活性を、レギユラーCXセルラーゼ活性の測定に
関して前述したようにして測定する。このCX
性を修正されたCX活性と称し、若干のCX活性が
特定の条件下で陰イオン交換体に吸着される場合
には修正されたCX活性はレギユラーCX活性より
小さい。 本発明の好ましい態様においては菌類セルラー
ゼは少なくとも0.6、好ましくは少なくとも0.8の
(CX修正/CXレギユラー)比を示す。 このような手粗さ軽減剤は手粗さ軽減能が非常
に良好である程度までACXIフラクシヨンを高濃
度に含むことが判明した。 本発明に係る手粗さ軽減剤の好ましい態様にお
いては、菌類セルラーゼがダスト非形成性粒質物
として提供される。セルラーゼ製剤はダストレベ
ルが低いことが必須である。ダストレベルが高い
と、セルラーゼ製剤を洗剤と混合する工場におい
ても、またセルラーゼ含有洗剤の、後の段階にお
ける取り扱いにおいても複雑な問題が生ずる。粒
状セルラーゼ製剤は多くの異なる方法で、たとえ
ば、明細書第1362365号及び第1361387号に記載の
「マルメライザー(Marumerizer)」によつてまた
はアウフベライトウングス−テクニーク
(Aufbereitungs−Technik)No.5/1970、p.262
〜278に記載の造粒機によつて調製できるし、あ
るいはベルギー特許第760135号に記載されている
ように、プリル化された粒質物であることもでき
る。しかしながら、いずれの場合も、粒質物は低
ダスト形成性でなければならない。「マルメライ
ザー(Marumerizer)」は商標である。 本発明に係る手粗さ軽減剤の好ましい一態様に
おいては、セルラーゼ粒質物には白色化剤、好ま
しくはTiO2をダスト結合剤と組み合わせて被覆
する。このようにして、ダスト形成能が最小の、
好ましいと考えられるセルラーゼ粒質物が提供さ
れる。 本発明に係る手粗さ軽減剤の別の好ましい態様
においては、手粗さ軽減剤は、菌類セルラーゼが
非イオン性界面活性剤中に懸濁せしめられたセル
ラーゼ濃縮物として供給される液体である。この
濃縮物は発酵液に基づいて製造される。前述のよ
うに、セルラーゼ製剤は低ダストレベルを有する
ことが必須である。この態様においては本発明に
係る手粗さ軽減剤は液体であるのでそのダストレ
ベルはゼロであり、前述のような障害は完全に回
避される。 手粗さ軽減剤が懸濁液である場合には非イオン
性界面活性剤は増粘剤を含むのが有利である。増
粘剤を含むことにより、セルラーゼの沈降は通常
回避できる。増粘剤としてはたとえば極めて粒度
の小さいヒユームドシリカを用いることができ
る。増粘剤としてヒユームドシリカを用いる場合
には、その量は通常0.5乃至10%(W/W)好ま
しくは1乃至5%(W/W)の範囲である。 本発明に係る手粗さ軽減剤の好ましい態様にお
いては、手粗さ軽減剤は液体であり、菌類セルラ
ーゼは水性媒体中に、好ましくは安定剤の存在下
において溶解せしめられたセルラーゼ濃縮物とし
て供給される。安定剤としては沈降及び酵素活性
の減少に対して安定化させる任意の薬剤を用いる
ことができる。 本発明の第二の局面によれば、ヒユミコーラ・
インソレンス(ヒユミコーラ・グリセア変異株サ
ーモイデイア)から生産される菌類セルラーゼを
必須成分とする洗剤組成物の洗剤添加剤の形態の
手粗さ軽減剤の手粗さ軽減量と洗剤成分とを含ん
でなる主洗浄用洗剤組成物であつて、該主洗浄用
洗剤組成物の添加前においてドイツ硬度が10゜で
ある水1中に該主洗浄用洗剤組成物1g溶解せ
しめた溶液中のPHが7乃至10、好ましくは7.5乃
至9.5にある主洗剤組成物が提供される。 「主洗浄用洗剤組成物」なる用語は通常は(必
ずしもそういうわけでないが)単一の洗浄におい
て用いられ且つその洗浄の前または後には任意の
他の洗濯処理を行なわないような洗剤組成物を包
含するものとする。本発明に係る主洗浄用洗剤組
成物の利点は、本発明に係る主洗浄用洗剤組成物
を、単一の洗浄において用い且つその洗浄の前ま
たは後に任意の他の洗濯処理を行なわない場合に
最も明白である。 本発明に係る主洗浄用洗剤組成物中の洗剤成分
は決定的なものでなく、唯一の制限はこれらの成
分が菌類セルラーゼと混和性でなければならない
ことである。 従つて、使用される洗剤成分及びその割合はた
とえば以下のようなものであることができる。 1 界面活性剤、特にアニオン性及び非イオン性
界面活性剤:総量1乃至100重量%、代表的に
は5乃至45重量%。代表的なアニオン性界面活
性剤は直鎖状アルキルアリールスルホネート
(「LAS」)及びα−オレフインスルホネート
(「AOS」)である。代表的な非イオン性界面活
性剤はアルキルフエニルエトキシレート及び脂
肪族アルコールエトキシレートである。 2 ビルダー、特にアルカリ性ビルダー及び水硬
度低下剤:総量5乃至80重量%、代表的には25
乃至75重量%。代表的なビルダーはトリポリ燐
酸ナトリウム(「STPP」)、珪酸ナトリウムア
ルミニウム(ゼオライト)、珪酸ナトリウム及
び炭酸ナトリウム。 3 漂白剤、特に過酸化物:総量0乃至40重量
%、代表的には0重量%または15乃至30重量
%。代表的な漂白剤は過硼酸ナトリウム及び過
炭酸ナトリウムである。 4 他の成分、主として酵素、螢光増白剤、香
料、染料、気泡調節剤、安定剤、再付着防止剤
(好ましくはCMCでない)〔これらはある程度
はセルラーゼにより分解されるであろう〕:総
量0乃至10重量%、代表的には0.1乃至5重量
%。 5 賦形剤、特に硫酸ナトリウム及び水:洗剤製
剤全量を100%とするような量。 洗剤工業に関する小冊子「ノボ・エンザイムズ
(Novo Enzymes)」中には、セルラーゼ製剤と一
緒に使用できると考えられる洗剤処方の他の一般
的な例、すなわち、特定の化合物または化合物の
カテゴリー及びその割合または割合の範囲を特徴
とする組成物が挙げられている。 1978年12月12日に出願されたデンマーク国特許
出願第5691/78号の第5頁には、セルラーゼ製剤
と共に使用できると考えられるいくつかの特定の
洗剤組成物が列挙されている。 本発明に係る主洗浄用洗剤組成物の好ましい態
様においては、手粗さ軽減剤は主洗浄用洗剤gあ
たり2.5乃至100レギユラーCX単位または主洗浄
用洗剤gあたり1.5乃至60修正CX単位、好ましく
は主洗浄用洗剤gあたり5乃至50レギユラーCX
単位または主洗浄用洗剤gあたり3乃至30修正C
X単位に対応する量で含まれる。このようにし
て、充分な手粗さ軽減効果を得ることができ、過
剰量のセルラーゼ(これは主洗浄用洗剤組成物を
不経済なものとするであろう)を回避できる。 本発明に係る主洗浄用洗剤組成物の好ましい態
様において、主洗浄用洗剤はまた細菌のプロテイ
ナーゼ、好ましくはバチルス・リケニフオルミス
(Bacillus licheniformis)によつて生産されるプ
ロテイナーゼ、特にアルカラーゼ
(ALCALASE)を含む。意外にも、洗剤添加物
であるとプロテイナーゼとが混和性であることな
らびに蛋白質酵素がセルラーゼを消化すると考え
られたとしてもセルラーゼとプロテイナーゼとは
洗浄操作の間のPH値において充分な効果を発揮す
ることが判明した。この組み合わせられた洗剤添
加剤は、洗剤に添加した場合によりよい洗浄効果
及びよりよい柔軟効果を示す。「アルカラーゼ」
は商業的に入手可能なノボ(Novo)酵素製剤の
登録商標である。アルカラーゼとセルラーゼ粒質
物とを用いる場合には、前もつて調製したアルカ
ラーゼ粒質物と前もつて調製したセルラーゼ粒質
物とを混合することによつてまたはアルカラーゼ
濃縮物とセルラーゼ濃縮物とを混合し次いでこの
混合物を造粒装置中に常用の造粒助剤と共に装入
することによつて調製できる。 本発明に係る主洗浄用洗剤組成物の好ましい態
様において、過硼酸塩は洗剤成分の1つである。
ある条件下においては、過硼酸塩は洗剤効率を増
強し、また、意外にも本発明に係る主洗浄用洗剤
組成物中の過硼酸塩とセルラーゼとは混和性であ
ることが判明した。 本発明の第三の局面によれば、本発明の第二の
局面に係る主洗浄用洗剤組成物を洗剤として用い
る主洗浄方法が提供される。 本発明に係る主洗浄方法の好ましい一態様にお
いて、菌類セルラーゼは洗浄溶液あたり10乃至
100レギユラーCX単位または洗浄溶液あたり6
乃至60修正CX単位、好ましくは洗浄溶液あた
り20乃至50レギユラーCX単位または洗浄溶液
あたり12乃至30修正CX単位に対応する洗浄溶液
中の濃度で使用される。 本発明の好ましい態様において洗浄溶液中のPH
は7乃至10、好ましくは7.5乃至9.5である。この
PHにおいてセルラーゼは充分な活性を発揮でき
る。 本発明に係る主洗浄方法の好ましい態様におい
て、主洗浄の重要な部分は70℃以下、好ましくは
60℃以下の温度で実施する。 以下の実施例は、本発明に係る手粗さ軽減剤を
製造する発酵(実施例1,6及び8)、ならびに
本発明に係る主洗浄用洗剤組成物及び本発明に係
る主洗浄方法(実施例2乃至8)をさらに説明す
るものである。 実施例 1 菌株DSM1800を以下の組成: 酵母エキス(Difco) 4g K2HPO4 1g MgSO4・7H2O 0.5g グルコース 15g 蒸留水 1000g 寒天 15g を有する寒天基質上で37℃において培養した。 第1群の容量500mlの振盪フラスコを準備し
た;これらの振盪フラスコは以下の組成: コーン・ステイープ・リカー 2.4% グルコース 2.4% CaCO3 0.5% 大豆油 0.5% を有する基質100mlを含んでいた。 CaCO3の添加前に、PH値を4NNaOHで5.5に調
整し、121℃で20分間滅菌を行なつた。 寒天斜面培地上で7日間生育させた後、第1群
の容量500mlの振盪フラスコに胞子を移した。 第2群の容量500mlの振盪フラスコを準備し
た;これらは以下の組成: NH4NO3 0.25% KH2PO4 0.56% K2HPO4 0.44% MgSO4・7H2O 0.075% セルロース 2.0% CaCO3 0.25% プルロニツク(Pluronic) 0.01% を有する基質100mlを含んでいる。 CaCO3を添加する前に4NNaOHによつてPHを
6.8〜7.0に調整し、121℃において20分間オート
クレーブ中で処理することにより滅菌した。 第1群の振盪フラスコ中で37℃において2×24
時間生育させた後、第1群の振盪フラスコから第
2群の振盪フラスコに6%の接種を行なつた。 37℃において140時間第2群の振盪フラスコ中
で発酵させた後、セルラーゼ活性は培養液mlあた
り4.2レギユラーCX単位であつた。次いで、培養
液を以下のようにして精製した:培養液を珪藻土
(Hyflo−super−cell)上で過し、液を限外
過によつて濃縮し、残留物(retentate)を凍
結乾燥した。凍結乾燥粉末Aはgあたり745レギ
ユラーCX単位のCX活性を示した。 前記と同様にして2つの実験を実施した。第2
群の振盪フラスコ中で140時間発酵させた後、こ
れらの2つの実験におけるレギユラーCXセルラ
ーゼ活性は培養液mlあたり各々2.2及び6.0CX単位
であつた。また、これらの2つの実験における凍
結乾燥粉末はgあたり558(粉末B)及び518(粉
末C)CX単位のレギユラーCX活性を示した。 実施例 2 この実施例においては、実施例1からのセルラ
ーゼ製粉末Aを手粗さ軽減剤として用いた。 洗浄実験は「コゲバスク(Kogevask)95℃」
と称する洗浄プログラムに従つて充分に自動的な
ミール(MIELE)ドラム洗濯機を用いて一段階
洗浄として実施した。このプログラムは、ミール
洗濯機421S型のことを述べている小冊子T−
52001中に示されている「ミール(MIELE)」は
登録商標である。「コゲバスク95℃」と称するプ
ログラムは以下のような大体の温度−時間分布を
有する。
【表】 シング
洗浄溶液は以下の組成を有する:次の主成分 (大体の乾燥固形分の組成(W/W)): 界面活性剤21%(LAS 7%,石けん11%及
びノニフエニルエトキシレート3%) ビルダー39%(STPP32%,珪酸ナトリウム
4%及び炭酸ナトリウム3%) 過硼酸ナトリウム 26% 硫酸ナトリウム 13% を含む常用の市販粉末洗剤5g/を含む約20゜
dHの硬度を有する水約16。 この洗浄溶液に溶液あたり0.06アンソン
(Anson)単位に対応する濃度のアルカラーゼの
蛋白質分解酵素製剤を加えた。ノボ・アナリテイ
カル・メソド(Novo Analytical Method) No.AF4.3/5−GBに記載されている修正アン
ソン法〔最初のアンソン法はJ.Gen.Physiol,
22,79−89(1939)に記載されている〕に従つて
酵素製剤の蛋白質分解酵素を測定した。 この洗浄溶液には何も加えないかあるいは溶液
あたり約40レギユラーCX単位に相当する濃度
の実施例1のセルラーゼ製剤を加えた。 これらの2つの平行実験の各々に用いた試験材
料は (1) 42cm×60cmの寸法の白色の綿テリークロス
(Terry cloth)12枚、及び (2) 同寸法の白色の綿インターロツク 12枚であ
つた。 さらに、清浄な綿の洗濯物を前記2種の試験材
料に補充して洗濯物の総量を3Kgとした。試験材
料は使用する前に高温プログラムを用いて過硼酸
塩を含有する従来の洗剤で20回洗浄した。 試験材料の実際の洗浄と同様にして20回繰り返
し洗浄後、試験材料はセルロースを用いるまたは
用いない洗浄実験をいつでも行なえる状態となつ
た。 試験材料は、中間で一夜同等に乾燥しながら6
回洗浄した。最後の洗浄後、全試験片(12×2×
3)を同じ室で同等に状態調整した。 20人からなるパネルによつて評価を行なつた。
種々の試験片の同一性を知らせずに、パネルの最
初の10人に各々、6つの評価(すなわち、白色の
テリークロスについて3つ及び白色の綿インター
ロツクについて3つ)をさせた。この評価に基づ
き次の供述のうち適切な供述を選ぶことができ
た: (1) セルラーゼで処理した布はセルラーゼで処理
しない布より柔軟である, (2) セルラーゼで処理した布はセルラーゼで処理
しない布と同等の柔軟性を有する、そして (3) セルラーゼで処理しない布はセルラーゼで処
理しない布よりも硬い。 セルラーゼで処理した白色の綿テリークロス12
枚から試験材料3枚を選び、セルラーゼで処理し
ない白色の綿テリークロス12枚から試験材料3枚
を選んだ。これらの6枚を3つの対に配列し、パ
ネルの最初の10人の構成員に3対全てを別々に評
価させた。同様な評価を白色の綿インターロツク
を用いて実施した。次いで、パネルの残りの10人
に残りの試験材料を同様に評価させた。 テリークロスについては、パネルの各人は3つ
の評価をした。これは、この試験材料についての
全パネルからの評価の総数60に対応する。 白色の綿インターロツクを同様に評価した。評
価総数はこの場合も60であつた。 前述の評価の結果を第1表に示す。第1表はま
た洗浄の開始、10分後及び20分後(各々、t=
0、t=10、及びt=20)における洗剤溶液のPH
も示す。 実施例 3 実施例2を繰り返した。結果を第1表に示す。 実施例 4 この実施例においては、実施例1からのセルラ
ーゼ製剤粉末Bを手粗さ軽減剤として用いた。 以下の変更を行なう以外は実施例2を繰り返し
た:洗濯機に実施例2の試験材料を入れ、次いで
汚れた綿の洗濯物を補充して洗濯物の総量を3Kg
とした。汚れた洗濯物は陸軍キヤンプからの綿の
下着であつた。結果を第1表に示す。 実施例 5 この実施例においては、実施例1からのセルラ
ーゼ製剤Cを手粗さ軽減剤として用いた。以下の
変更を行なう以外は実施例2に記載の実施を繰り
返した:T−52001小冊子中に記載の「フインバ
スク(Finvask)60℃」と称する洗浄プログラム
を用いた。このプログラムは以下の大体の温度/
時間分布を有する。
【表】 洗浄溶液は約26の容量であつた。洗浄液のPH
はクエン酸で若干調節した。結果を第1表に示
す。
【表】
【表】 実施例 6 菌株DSM1800を実施例1の寒天基質と同様な
組成を有する寒天基質上で37℃において培養し
た。 次の組成: コーン・ステイープ・リカー 2.4% グルコース 2.4% CaCO3 0.5% 大豆油 0.4% を有する接種または前発酵基質(CaCO3を添加
する前にPH値を4N NaOHで5.5に調整した)300
を121℃で45分間滅菌した。 寒天基質上で14日間生育させた後、胞子を滅菌
された300の前発酵基質に移した。こうして調
製した前発酵液に、0.5気圧下300/分の速度で
37℃において49時間、滅菌空気を通じた。 以下の組成: コーン・ステイープ・リカー 10% セルロース 3% CaCO3 0.25% NH4NO3 0.25% KH2PO4 0.56% K2HPO4 0.44% MgSO4 0.08% プルオニツク 0.014% を有する主発酵基質(CaCO3添加前にPH値を4N
NaOHによつて6.8乃至7.0に調節した)350を、
123℃において60分間煮沸することによつて滅菌
した。前発酵液35を、こうして滅菌した主発酵
基質に移した。こうして調製した主発酵液に0.5
気圧下300/分の速度で滅菌空気を通じた。
KH2PO4の添加によりPHを7.0以下に保つた。37℃
において136時間発酵を実施した。発酵の最後に
は活性は29レギユラーCX単位/mlであつた。 培養液を次のようにして精製した: 培養液を珪藻土(Hyflo−super−cell)上で
過した。液を限外過によつて濃縮し、残留物
(以下において便宜上残留物Dと称する)を凍結
乾燥した。 凍結乾燥した粉末Dは1316CX単位/gのレギ
ユラーCX活性及び953CX単位/gの修正CX活性
を示した。 発酵及びそれに引き続く限外過をさらに2
回、前述と同様にして実施した。対応する残留物
を、残留物E及びFと称する。残留物Fを凍結乾
燥した。凍結乾燥粉末Fは743単位/gのレギユ
ラーCX活性及び580単位/gの修正CX活性を示
した。 凍結乾燥粉末Dを以下のようにして陰イオン交
換クロマトグラフイーによつて種々の成分に分離
した:凍結乾燥粉末D100gを4℃において蒸留
水2000ml中に溶解せしめた。そのPHを1M「トリ
ス」によつて7.5に調節した。次いでこの溶液
を、DEAE−セフアデツクスA−50 100gを含む
4000mlイオン交換カラムに適用した。第1図はカ
ラムから溶出したフラクシヨンの280nmにおける
吸光度OD280を示す。カラムに結合した蛋白質は
NaCl勾配によつて溶離させた; NaCl濃度を測定し、これを第1図にフラクシヨ
ンの吸光度と共にプロツトした。 蛋白質含有フラクシヨンを第1図に示すように
プールし、プールしたフラクシヨンに1から5ま
での番号をつけた。次いで、プール1乃至5を
別々に凍結乾燥した。 凍結乾燥したプールは、蛋白質量、蛋白質の組
成及びレギユラーCX活性を特徴としていた(第
2表参照)。蛋白質の等電点をLKB マルテイフ
オア装置(LKB multiphoer apparatus)によつ
て測定した。
【表】 プール1は全アルカリ性成分全て、すなわち、
6.5乃至7.5において陰イオン交換樹脂に結合しな
い蛋白質全てを含んでいる。すなわち、修正CX
セルラーゼ活性の全量がプール1に存在し、プー
ル1はまたpIが6.0以上のセルロース分解活性を
全て含む。 5つのプールのいずれが最も高い柔軟効果を有
するフラクシヨンを含むかを評価するために以下
の実験を実施した。 綿テリークロスを実施例2と同様にして20回予
洗した。この予洗後、10cm×10cm(約4g)のス
ワツチを切断しそして印をつけた。 ここでセルラーゼ処理を次の条件下でターグ−
0−トメーター(Terg−0−Tometer)実験用
洗濯機中で実施した。 洗浄及び用量:セルラーゼ用量を除き実施例
2と同様 初期PH:約9.5 温度 :50℃ 時間 :30分 水の硬度:20゜dH ビーカーあたりの容量:1200ml ビーカーあたりのスワツチ数:10 セルラーゼ用量:以下の表を参照 (いずれの場合も凍結乾燥されたプール100
mg/)
【表】 10人から成るパネルによつて評価を実施した。
この10人に各々3個のスワツチから成る、スワツ
チの異なるセツトを与え、各セツト内のスワツチ
を柔軟さに順に配列させた。各セツトは前記プー
ルの1つで洗浄した2個のスワツチと対照として
のスワツチから成るものであつた。パネル中の10
人のうち9人は、プール1で洗浄したスワツチが
プールを全く加えないもので洗浄したスワツチよ
りも柔軟であることに気づいた。他のプールは全
てスワツチを有意には柔軟化しなかつた。 前述のことから、プール1が柔軟効果を有する
X活性を含むことが結論できる。プール3〜5
のCX活性は、通常柔軟効果を示す用量レベルに
おいては有意な柔軟効果を示さない。 実施例 7 実施例6の残留物Eを噴霧乾燥して、粗製濃縮
物を形成した。 この粗製濃縮物を孔径0.5mmのスクリーンを通
過させることにより、平均直径17.4μmを得た。
この状態における濃縮物のセルラーゼ活性は650
レギユラーCX単位/gであつた。 次の成分: 前記セルラーゼ濃縮物 2.5Kg セルロース粉末 1.0Kg 〔アーボセル(Arbocel)BC200〕 TiO2 0.2Kg NaCl(粒度<0.2mm) 6.1Kg から成る混合物を回転速度120γ/mでミキサー
〔レジツジ(L¨odige)FM50/1MZ)中で混合し
た。こうして調製した混合物にポリビニルピロリ
ドン(PVP K30)の20%水溶液1Kgを加えるこ
とにより、前記回転速度及びナイフスピードを保
持した。水溶液の添加は圧力ノズルにより実施
し、1分間続けた。次いでこの湿潤混合物を混合
速度200γ/m及びナイフ速度3000γ/mのミキ
サー中で3分間処理した。追加量の水を2回、す
なわち、各々200g及び100gの水を加え、いずれ
の場合も添加後ミキサー中で3分間処理した。生
成物の温度は造粒中に25℃から30℃まで上昇する
ことが観測された。この湿潤粒質粉を流動床中で
水分量1.6%となるまで乾燥した。「レジツジ(L
¨odige)」及び「アーボセル(Arbocel)」は登録
商標である。 乾燥粒質粉のレギユラーCX活性: 計算値 164レギユラーCX単位/g 実測値 136レギユラーCX単位/g 活性損失 17%。 この生成物はレンズ型粒子を含む粒状製品であ
つた。便宜上これを粒質物Eと称する。 粒質物Eは以下の粒度分布を示した。 粒度(μm) 粒子(%) >1180 15 >1000 28 > 850 43 > 707 62 > 600 76 > 500 87 > 420 94 > 300 1.8 平均直径=790μm 粒質物Eを次のようにして被覆した。粒質物
E4.0Kgをミキサー(L¨odige,M20E型)中に入
れた。混合物を65℃に加熱し、次いで溶融したポ
リエチレングリコール4000(分子量4000)160g
を加え、この混合物を1分間混合した。その後、
粒質物をTiO2 360g及び珪酸マグネシウム90g
で粉化した。5分間混合した後、この混合物にさ
らにポリエチレン4000を40g注ぎかけ、混合を1
分間続けた。この装填材料を放置して冷却せしめ
た。こうして製造した被覆された粒質物1Kgを流
動床で65℃において1.5分間ダストブロウ(dust
blow)した。 粒質物の活性は以下の分析からわかる。
【表】 前述の被覆した粒質物、被覆及びダストブロウ
した粒質物ならびに粒質物Eは洗浄添加剤の形態
の手粗さ軽減剤の代表的な態様である。 粒質物Eを用いた洗浄実験を、以下の変更をさ
せる以外は実施例6と同様にして実施した。 セルラーゼ用量: 333,667,1000,1333及び1667mg/。 以下の変更をさせる以外は実施例6と同様にし
て評価を行なつた: スワツチの各セツトは2個のスワツチから成る
ものであつた。1個のスワツチは不活性化された
セルラーゼを含む洗剤溶液で洗浄し、1個のスワ
ツチは活性セルラーゼを含む洗剤溶液で洗浄し
た。粒質物E10gを水中で溶解して250mlとした
原液を調製し、この溶液を90℃に加熱しそして同
温度に10〜15分間保持することによつて不活性化
セルラーゼを得た。5セツト全体を評価しそして
評価の結果を第3表に示す。
【表】 実施例 8 この実施例においては、ヒユミコーラ・インソ
レンスの種々の菌株、すなわち、CBS14764
(ATCC22082と同一)、DSM2069及びDSM2068を
比較した。これら3菌株は、1981年7月24日に工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託され、
CBS14764は微工研菌寄第6079号に、DSM2069は
微工研菌第6078号にそしてDSM2068は微工研菌
寄第6077号に各々対応する。これらの菌株を実施
例1と同様にして培養した。ただし、第2群の振
盪フラスコの基質には、実施例1に示した成分以
外に14%のコーン・ステイプ・リカーを含ませ
た。実施例1に示した発酵液から凍結乾燥粉末を
製造した。この凍結乾燥粉末を脱塩し、再溶解せ
しめ、セフアデツクスG25カラム上で脱塩し、そ
して再び凍結乾燥した。これらの凍結乾燥粉末は
各々、1096、480及び690レギユラーCX単位/g
を示した。また、実施例6からの凍結乾燥粉末
(DSM1800)の一部分をまたこの実施例において
用いた。 実施例6からの凍結乾燥されたプール1をさら
にCM−スフアロース CL 6B 上の陽イオン交
換によつて精製した。蛋白質1.7gに相当する、
この凍結乾燥されたプール1の量をPH5.0のクエ
ン酸緩衝液中に溶解せしめそして陽イオン交換体
を含む1000mlのカラムに適用したところ、この陽
イオン交換体に蛋白質が結合した。これをNaCl
勾配によつて溶離させた。250mMのNaCl濃度に
おいて純粋なCMC活性ACXI蛋白質が溶出した。
この蛋白質の分子量はSDSゲル電気泳動によつて
80000であることがわかる。また、この蛋白質を
抗血清(家兎)の製造に用いた。 この抗血清を、免疫学的手法によつて、すなわ
ち、B.ウイーク(Weeke)がScandinavian I.
Immun.,2 Suppl.1,37ページ(1973)に述べ
たロケツト免疫電気泳動(rocket immuno−
electrophoresis)によつてACXI蛋白質量を定量
するために用いた。 ロケツト免疫電気泳動パターンを第2図に示
す。電気泳動はPH7のトリスマレイン酸塩緩衝液
中で1.0ボルト/cmの電位勾配で一夜実施した。 第2図において、aはDSM2069製品(3mg/
ml)に対応し、bはCBS14764製品(2mg/ml)
に対応し、cはDSM2068製品(3mg/ml)に対
応し、そしてdnはDSM1800製品(nmg/ml)に
対応する。 DSM1800、CBS14764、DSM2068及び
DSM2069に由来する前記セルラーゼ製剤を以下
の洗浄実験において用いた: 綿テリークロスを実施例2の場合と同様にして
20回予洗した。この予洗の後、10cm×10cm(約4
g)のスワツチを切断して、印をつけた。 次の条件下においてターグ−0−トメーター実
験用洗濯機中でセルラーゼ処理を実施した: 洗剤及び用量:セルラーゼ用量を除き、 実施例2と同様 初期PH :約9.5 温度 :50℃ 時間 :30分 水の硬度 :20゜dH ビーカーあたりの容量:1200ml ビーカーあたりのスワツチ数:10 セルラーゼ用量:次表参照。
【表】 DSM1800に由来するセルラーゼ製剤は76レギ
ユラーCX単位/の用量で加えた。その他のセ
ルラーゼ製剤は、DSM1800製剤と同様な洗浄溶
液中ACXI蛋白質濃度(この実施例中で前に述べ
たようにして免疫学的に測定)を生ずるような用
量で加えた。セルラーゼ処理は6回繰り返した。
各処理の後、スワツチを水道水中でよくフラツシ
ユした。 評価は10人から成るパネルによつて実施した。
この10人に、各セツト3個のスワツチから成る異
なる4セツトのスワツチを与え、そして各セツト
を柔軟さの順に配列させた。セツト中の最も柔軟
なスワツチを“1”、次に柔軟なスワツチを
“2”というように番号をつけた。評価されたセ
ツトの組成及び評価の結果(%)(あるスワツチ
をある柔軟性カテゴリーに入れるパネルの割合)
を次の第4表に示す。
【表】
【表】 【図面の簡単な説明】
第1図は、本発明に係る手粗さ軽減剤を製造す
るために実施した凍結乾燥粉末Dの陰イオン交換
クロマトグラフイーにより得られた溶出フラクシ
ヨンとその280nmにおける吸光度OD280との関係
を示すグラフであり;第2図は、本発明に係る手
粗さ軽減剤の必須成分であるセルラーゼ製剤の
ACXI蛋白質を定量するために実施したロケツト
免疫電気泳動のパターンを示す図である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 ヒユミコーラ・インソレンス(Humicola
    insolens)〔ヒユミコーラ・グリセア変異株サー
    モイデイア(Humicola grisea var.
    thermoidea)〕から生産される菌類セルラーゼを
    必須成分とする、主洗浄用洗剤組成物のための手
    粗さ軽減剤である、洗剤組成物用の洗剤添加剤の
    形態の手粗さ軽減剤。 2 ヒユミコーラ・インソレンスの菌株が工業技
    術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第6076号
    の番号の下に寄託された菌株(DSM 1800と同
    一)である特許請求の範囲第1項記載の手粗さ軽
    減剤。 3 前記菌類セルラーゼが、6.5乃至7.5のPHにお
    いてアニオン交換体に結合しないセルラーゼフラ
    クシヨンを豊富に含む特許請求の範囲第1項また
    は第2項記載の手粗さ軽減剤。 4 前記菌類セルラーゼが少なくとも0.6、好ま
    しくは少なくとも0.8の(CX修正/CXレギユラ
    ー)比を示す特許請求の範囲第3項記載の手粗さ
    軽減剤。 5 ダスト非形成性粒質物である特許請求の範囲
    第1項ないし第4項のいずれかに記載の手粗さ軽
    減剤。 6 前記のダスト非形成性粒質物に、白色化剤を
    ダスト結合剤と組み合わせて被覆する特許請求の
    範囲第5項記載の手粗さ軽減剤。 7 前記白色化剤がTiO2である特許請求の範囲
    第6項記載の手粗さ軽減剤。 8 非イオン性界面活性剤中に懸濁せしめられた
    セルラーゼ濃縮物として前記菌類セルラーゼが供
    給される、液体の形態の特許請求の範囲第1項な
    いし第4項のいずれかに記載の手粗さ軽減剤。 9 さらに増粘剤を含む特許請求の範囲第8項記
    載の手粗さ軽減剤。 10 水性媒体中に(好ましくは安定剤の存在下
    において)溶解せしめられたセルラーゼ濃縮物と
    して前記菌類セルラーゼが供給される、液体の形
    態の特許請求の範囲第1項ないし第4項のいずれ
    かに記載の手粗さ軽減剤。 11 ヒユミコーラ・インソレンス(Humicola
    insolens)〔ヒユミコーラ・グリセア変異株サー
    モイデイア(Humicola grisea var.
    thermoidea)〕から生産される菌類セルラーゼを
    必須成分とする洗剤組成物用の洗剤添加剤の形態
    の手粗さ軽減剤の手粗さ軽減量と洗剤成分とを含
    んでなる主洗浄洗剤組成物であつて、該主洗浄用
    洗剤組成物の添加前においてドイツ硬度が10゜で
    ある水1中に該主洗浄用洗剤組成物1gを溶解
    せしめた溶液中のPHが7乃至10、好ましくは7.5
    乃至9.5の範囲にある主洗浄用洗剤組成物。 12 主洗浄用洗剤組成物gあたり2.5乃至100レ
    ギユラーCX単位または主洗浄用洗剤組成物gあ
    たり1.5乃至60修正CX単位に対応する量の前記手
    粗さ軽減剤を含む特許請求の範囲第11項記載の
    主洗浄用洗剤組成物。 13 主洗浄用洗剤組成物gあたり5乃至50レギ
    ユラーCX単位または主洗浄用洗剤組成物gあた
    り3乃至30修正CX単位に対応する量の前記手粗
    さ軽減剤を含む特許請求の範囲第12項記載の主
    洗浄用洗剤組成物。 14 細菌のプロテイナーゼをさらに含む特許請
    求の範囲第11項ないし第13項のいずれかに記
    載の主洗浄用洗剤組成物。 15 前記の細菌のプロテイナーゼがバチルス・
    リケニフオルミス(Bacillus licheniformis)に
    よつて製造されたプロテイナーゼである特許請求
    の範囲第14項記載の主洗浄用洗剤組成物。 16 洗剤成分の1つが過硼酸塩である特許請求
    の範囲第11項ないし第15項のいずれかに記載
    の主洗浄用洗剤組成物。
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