CN109415421B - α-淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸 - Google Patents
α-淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109415421B CN109415421B CN201780026494.2A CN201780026494A CN109415421B CN 109415421 B CN109415421 B CN 109415421B CN 201780026494 A CN201780026494 A CN 201780026494A CN 109415421 B CN109415421 B CN 109415421B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polypeptide
- alpha
- seq
- asn
- amylase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title claims abstract description 124
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title claims abstract description 120
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title claims abstract description 96
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 62
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims abstract description 62
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 62
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 158
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 156
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 153
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 111
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 42
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 30
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 74
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 72
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 67
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 44
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 43
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 43
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 43
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 38
- 238000004851 dishwashing Methods 0.000 claims description 30
- -1 builders Substances 0.000 claims description 25
- 102200114146 rs61748123 Human genes 0.000 claims description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 19
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 13
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 12
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 12
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 12
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 claims description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 11
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 9
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 9
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 7
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 6
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000002304 perfume Substances 0.000 claims description 3
- 102100032487 Beta-mannosidase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010029182 Pectin lyase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010055059 beta-Mannosidase Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims description 2
- 108010005400 cutinase Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 2
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 claims description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 103
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 81
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 62
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 58
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 55
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 45
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 45
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 39
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 39
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 38
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 35
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 28
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 26
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 26
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 25
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 19
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 17
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 17
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 17
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 17
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 14
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 14
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 14
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 13
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 13
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 13
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 11
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 11
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 11
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 10
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 10
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 9
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 9
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 9
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 9
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 description 9
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 9
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Chemical group OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920000877 Melamine resin Polymers 0.000 description 8
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 8
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 8
- 238000009990 desizing Methods 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- JDSHMPZPIAZGSV-UHFFFAOYSA-N melamine Chemical compound NC1=NC(N)=NC(N)=N1 JDSHMPZPIAZGSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 7
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 6
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 6
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 6
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 6
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N Asp-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 5
- 101000757144 Aspergillus niger Glucoamylase Proteins 0.000 description 5
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 5
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 5
- 102100027612 Kallikrein-11 Human genes 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 5
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 5
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 5
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 5
- 101710152431 Trypsin-like protease Proteins 0.000 description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 5
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 5
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 5
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 5
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 5
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 5
- 101100345345 Arabidopsis thaliana MGD1 gene Proteins 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 4
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 4
- CTJHHEQNUNIYNN-SRVKXCTJSA-N His-His-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CTJHHEQNUNIYNN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- 241000223198 Humicola Species 0.000 description 4
- 241001480714 Humicola insolens Species 0.000 description 4
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 4
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 4
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 4
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 4
- 108010048241 acetamidase Proteins 0.000 description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 4
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 4
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 4
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 4
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 4
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- OHOTVSOGTVKXEL-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-[bis(carboxylatomethyl)amino]propanoate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)C(C)N(CC([O-])=O)CC([O-])=O OHOTVSOGTVKXEL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 235000020985 whole grains Nutrition 0.000 description 4
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AWZKCUCQJNTBAD-SRVKXCTJSA-N Ala-Leu-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN AWZKCUCQJNTBAD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- LSMDIAAALJJLRO-XQXXSGGOSA-N Ala-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LSMDIAAALJJLRO-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 3
- XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N Ala-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 3
- YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N Ala-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N 0.000 description 3
- 108010037870 Anthranilate Synthase Proteins 0.000 description 3
- LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N Arg-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- HAJWYALLJIATCX-FXQIFTODSA-N Asn-Asn-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)CN=C(N)N HAJWYALLJIATCX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- RCFGLXMZDYNRSC-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RCFGLXMZDYNRSC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- RVHGJNGNKGDCPX-KKUMJFAQSA-N Asn-Phe-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N RVHGJNGNKGDCPX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N Asp-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N Asp-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N Asp-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 3
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 3
- 241001328122 Bacillus clausii Species 0.000 description 3
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 3
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 3
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 3
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 3
- 241000567178 Fusarium venenatum Species 0.000 description 3
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 3
- XJKAKYXMFHUIHT-AUTRQRHGSA-N Gln-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N XJKAKYXMFHUIHT-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 3
- LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N Gln-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- SXGMGNZEHFORAV-IUCAKERBSA-N Gln-Lys-Gly Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N SXGMGNZEHFORAV-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- RSUVOPBMWMTVDI-XEGUGMAKSA-N Glu-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 RSUVOPBMWMTVDI-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 3
- UERORLSAFUHDGU-AVGNSLFASA-N Glu-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N UERORLSAFUHDGU-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- FKESCSGWBPUTPN-FOHZUACHSA-N Gly-Thr-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FKESCSGWBPUTPN-FOHZUACHSA-N 0.000 description 3
- DNVDEMWIYLVIQU-RCOVLWMOSA-N Gly-Val-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DNVDEMWIYLVIQU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XKIYNCLILDLGRS-QWRGUYRKSA-N His-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 XKIYNCLILDLGRS-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- RLAOTFTXBFQJDV-KKUMJFAQSA-N His-Phe-Asp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)C1=CN=CN1 RLAOTFTXBFQJDV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- FONIDUOGWNWEAX-XIRDDKMYSA-N His-Trp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FONIDUOGWNWEAX-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 3
- DVRDRICMWUSCBN-UKJIMTQDSA-N Ile-Gln-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N DVRDRICMWUSCBN-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 3
- YKZAMJXNJUWFIK-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N YKZAMJXNJUWFIK-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 3
- ZUWSVOYKBCHLRR-MGHWNKPDSA-N Ile-Tyr-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZUWSVOYKBCHLRR-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 3
- 125000000570 L-alpha-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[C@]([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- DBVWMYGBVFCRBE-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DBVWMYGBVFCRBE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- 108010062166 Lys-Asn-Asp Proteins 0.000 description 3
- ITWQLSZTLBKWJM-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN ITWQLSZTLBKWJM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QMIXOTQHYHOUJP-KKUMJFAQSA-N Met-Gln-Tyr Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N QMIXOTQHYHOUJP-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233654 Oomycetes Species 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- ZZVUXQCQPXSUFH-JBACZVJFSA-N Phe-Glu-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 ZZVUXQCQPXSUFH-JBACZVJFSA-N 0.000 description 3
- MMJJFXWMCMJMQA-STQMWFEESA-N Phe-Pro-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=CC=C1 MMJJFXWMCMJMQA-STQMWFEESA-N 0.000 description 3
- KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- QFBNNYNWKYKVJO-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N QFBNNYNWKYKVJO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N Ser-Asn-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- KNZQGAUEYZJUSQ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KNZQGAUEYZJUSQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- CDVFZMOFNJPUDD-ACZMJKKPSA-N Ser-Gln-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CDVFZMOFNJPUDD-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- HNDMFDBQXYZSRM-IHRRRGAJSA-N Ser-Val-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HNDMFDBQXYZSRM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 3
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 3
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 3
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 3
- 241000223258 Thermomyces lanuginosus Species 0.000 description 3
- JMZKMSTYXHFYAK-VEVYYDQMSA-N Thr-Arg-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O JMZKMSTYXHFYAK-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 3
- KRGDDWVBBDLPSJ-CUJWVEQBSA-N Thr-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KRGDDWVBBDLPSJ-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 3
- WPAKPLPGQNUXGN-OSUNSFLBSA-N Thr-Ile-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WPAKPLPGQNUXGN-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 3
- QNCFWHZVRNXAKW-OEAJRASXSA-N Thr-Lys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QNCFWHZVRNXAKW-OEAJRASXSA-N 0.000 description 3
- KKPOGALELPLJTL-MEYUZBJRSA-N Thr-Lys-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KKPOGALELPLJTL-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 3
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 3
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 3
- CDPXXGFRDZVVGF-OYDLWJJNSA-N Trp-Arg-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O CDPXXGFRDZVVGF-OYDLWJJNSA-N 0.000 description 3
- VKMOGXREKGVZAF-QEJZJMRPSA-N Trp-Asp-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N VKMOGXREKGVZAF-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 3
- RCLOWEZASFJFEX-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 RCLOWEZASFJFEX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N Tyr-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N 0.000 description 3
- AKLNEFNQWLHIGY-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O AKLNEFNQWLHIGY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- NZBSVMQZQMEUHI-WZLNRYEVSA-N Tyr-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N NZBSVMQZQMEUHI-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 3
- IDKGBVZGNTYYCC-QXEWZRGKSA-N Val-Asn-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O IDKGBVZGNTYYCC-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 3
- SVFRYKBZHUGKLP-QXEWZRGKSA-N Val-Met-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N SVFRYKBZHUGKLP-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 3
- WFTKOJGOOUJLJV-VKOGCVSHSA-N Val-Trp-Ile Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])C(C)C)=CNC2=C1 WFTKOJGOOUJLJV-VKOGCVSHSA-N 0.000 description 3
- VBTFUDNTMCHPII-UHFFFAOYSA-N Val-Trp-Tyr Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VBTFUDNTMCHPII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 3
- 108010070783 alanyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 3
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 3
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 3
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 3
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 108010054813 diprotin B Proteins 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000021433 fructose syrup Nutrition 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 108010061330 glucan 1,4-alpha-maltohydrolase Proteins 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Chemical group 0.000 description 3
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 108010045126 glycyl-tyrosyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 108010031424 isoleucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 3
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 3
- 108010084572 phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 102220087235 rs864622622 Human genes 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 3
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 241001019659 Acremonium <Plectosphaerellaceae> Species 0.000 description 2
- 229920002126 Acrylic acid copolymer Polymers 0.000 description 2
- 102220466243 Acyl-coenzyme A thioesterase MBLAC2_R170A_mutation Human genes 0.000 description 2
- GWFSQQNGMPGBEF-GHCJXIJMSA-N Ala-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N GWFSQQNGMPGBEF-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 2
- FBHOPGDGELNWRH-DRZSPHRISA-N Ala-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FBHOPGDGELNWRH-DRZSPHRISA-N 0.000 description 2
- WMYJZJRILUVVRG-WDSKDSINSA-N Ala-Gly-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O WMYJZJRILUVVRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- MMLHRUJLOUSRJX-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MMLHRUJLOUSRJX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100163849 Arabidopsis thaliana ARS1 gene Proteins 0.000 description 2
- DFCIPNHFKOQAME-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DFCIPNHFKOQAME-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- MAISCYVJLBBRNU-DCAQKATOSA-N Arg-Asn-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N MAISCYVJLBBRNU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- ASQYTJJWAMDISW-BPUTZDHNSA-N Arg-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N ASQYTJJWAMDISW-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- JCAISGGAOQXEHJ-ZPFDUUQYSA-N Arg-Gln-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N JCAISGGAOQXEHJ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- OBFTYSPXDRROQO-SRVKXCTJSA-N Arg-Gln-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OBFTYSPXDRROQO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N Arg-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- JQFJNGVSGOUQDH-XIRDDKMYSA-N Arg-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 JQFJNGVSGOUQDH-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- YYSYDIYQTUPNQQ-SXTJYALSSA-N Asn-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O YYSYDIYQTUPNQQ-SXTJYALSSA-N 0.000 description 2
- RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N Asp-Ala-Val Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- NRIFEOUAFLTMFJ-AAEUAGOBSA-N Asp-Gly-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O NRIFEOUAFLTMFJ-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 2
- WYOSXGYAKZQPGF-SRVKXCTJSA-N Asp-His-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N WYOSXGYAKZQPGF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- WWOYXVBGHAHQBG-FXQIFTODSA-N Asp-Met-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WWOYXVBGHAHQBG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- MVRGBQGZSDJBSM-GMOBBJLQSA-N Asp-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC(=O)O)N MVRGBQGZSDJBSM-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 2
- MRYDJCIIVRXVGG-QEJZJMRPSA-N Asp-Trp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MRYDJCIIVRXVGG-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 2
- 102000004580 Aspartic Acid Proteases Human genes 0.000 description 2
- 108010017640 Aspartic Acid Proteases Proteins 0.000 description 2
- 101000690713 Aspergillus niger Alpha-glucosidase Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 2
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 2
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 2
- 241000193747 Bacillus firmus Species 0.000 description 2
- 241000193422 Bacillus lentus Species 0.000 description 2
- 101000695691 Bacillus licheniformis Beta-lactamase Proteins 0.000 description 2
- 108010029675 Bacillus licheniformis alpha-amylase Proteins 0.000 description 2
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 2
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 2
- 241000193764 Brevibacillus brevis Species 0.000 description 2
- 241000589513 Burkholderia cepacia Species 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 2
- 108010008885 Cellulose 1,4-beta-Cellobiosidase Proteins 0.000 description 2
- 241000146399 Ceriporiopsis Species 0.000 description 2
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 2
- 241000222511 Coprinus Species 0.000 description 2
- 244000251987 Coprinus macrorhizus Species 0.000 description 2
- 235000001673 Coprinus macrorhizus Nutrition 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCLAHGAZPPEVDX-UHFFFAOYSA-N D-panose Natural products OC1C(O)C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC1COC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 ZCLAHGAZPPEVDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 2
- 241000626621 Geobacillus Species 0.000 description 2
- 101100369308 Geobacillus stearothermophilus nprS gene Proteins 0.000 description 2
- 101100080316 Geobacillus stearothermophilus nprT gene Proteins 0.000 description 2
- YXQCLIVLWCKCRS-RYUDHWBXSA-N Gln-Gly-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O YXQCLIVLWCKCRS-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- KSKFIECUYMYWNS-AVGNSLFASA-N Gln-Lys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N KSKFIECUYMYWNS-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- HMIXCETWRYDVMO-GUBZILKMSA-N Gln-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HMIXCETWRYDVMO-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- RQZGFWKQLPJOEQ-YUMQZZPRSA-N Gly-Arg-Gln Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN)CN=C(N)N RQZGFWKQLPJOEQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- JVACNFOPSUPDTK-QWRGUYRKSA-N Gly-Asn-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVACNFOPSUPDTK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- LURCIJSJAKFCRO-QWRGUYRKSA-N Gly-Asn-Tyr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LURCIJSJAKFCRO-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- KMSGYZQRXPUKGI-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O KMSGYZQRXPUKGI-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N Gly-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)CN CUVBTVWFVIIDOC-YEPSODPASA-N 0.000 description 2
- UMBDRSMLCUYIRI-DVJZZOLTSA-N Gly-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)CN)O UMBDRSMLCUYIRI-DVJZZOLTSA-N 0.000 description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 2
- 102220477021 Hexokinase-4_S411F_mutation Human genes 0.000 description 2
- ZZLWLWSUIBSMNP-CIUDSAMLSA-N His-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZZLWLWSUIBSMNP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- NTXIJPDAHXSHNL-ONGXEEELSA-N His-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NTXIJPDAHXSHNL-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- KYFGGRHWLFZXPU-KKUMJFAQSA-N His-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N KYFGGRHWLFZXPU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- IIXDMJNYALIKGP-DJFWLOJKSA-N Ile-Asn-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N IIXDMJNYALIKGP-DJFWLOJKSA-N 0.000 description 2
- BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N Ile-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N 0.000 description 2
- KTNGVMMGIQWIDV-OSUNSFLBSA-N Ile-Pro-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KTNGVMMGIQWIDV-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 2
- YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N Ile-Thr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)O)N YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 2
- 102220468791 Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 2_Y167A_mutation Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N LSM-4015 Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-USLFZFAMSA-N 0.000 description 2
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 2
- SUPVSFFZWVOEOI-CQDKDKBSSA-N Leu-Ala-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 SUPVSFFZWVOEOI-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- SUPVSFFZWVOEOI-UHFFFAOYSA-N Leu-Ala-Tyr Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 SUPVSFFZWVOEOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBJZFCIVFIBNSV-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HBJZFCIVFIBNSV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N Leu-Asp-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- YIRIDPUGZKHMHT-ACRUOGEOSA-N Leu-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O YIRIDPUGZKHMHT-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- YRWCPXOFBKTCFY-NUTKFTJISA-N Lys-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N YRWCPXOFBKTCFY-NUTKFTJISA-N 0.000 description 2
- HGZHSNBZDOLMLH-DCAQKATOSA-N Lys-Asn-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N HGZHSNBZDOLMLH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- WOEDRPCHKPSFDT-MXAVVETBSA-N Lys-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCCCN)N WOEDRPCHKPSFDT-MXAVVETBSA-N 0.000 description 2
- ZUGVARDEGWMMLK-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN ZUGVARDEGWMMLK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- CUHGAUZONORRIC-HJGDQZAQSA-N Lys-Thr-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O CUHGAUZONORRIC-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- KQAREVUPVXMNNP-WDSOQIARSA-N Lys-Trp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O KQAREVUPVXMNNP-WDSOQIARSA-N 0.000 description 2
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 2
- LPNWWHBFXPNHJG-AVGNSLFASA-N Met-Val-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN LPNWWHBFXPNHJG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 241000194109 Paenibacillus lautus Species 0.000 description 2
- SEPNOAFMZLLCEW-UBHSHLNASA-N Phe-Ala-Val Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O SEPNOAFMZLLCEW-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- LGBVMDMZZFYSFW-HJWJTTGWSA-N Phe-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N LGBVMDMZZFYSFW-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 2
- ZWJKVFAYPLPCQB-UNQGMJICSA-N Phe-Arg-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccccc1)C(O)=O ZWJKVFAYPLPCQB-UNQGMJICSA-N 0.000 description 2
- HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N Phe-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Asn Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- BNRFQGLWLQESBG-YESZJQIVSA-N Phe-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O BNRFQGLWLQESBG-YESZJQIVSA-N 0.000 description 2
- GCFNFKNPCMBHNT-IRXDYDNUSA-N Phe-Tyr-Gly Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)NCC(=O)O)N GCFNFKNPCMBHNT-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 2
- XALFIVXGQUEGKV-JSGCOSHPSA-N Phe-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 XALFIVXGQUEGKV-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 2
- 241000222395 Phlebia Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- DRVIASBABBMZTF-GUBZILKMSA-N Pro-Ala-Met Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 DRVIASBABBMZTF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- FUVBEZJCRMHWEM-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FUVBEZJCRMHWEM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N Pro-Glu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N Pro-Ser-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 241000168225 Pseudomonas alcaligenes Species 0.000 description 2
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 101000928111 Scheffersomyces stipitis (strain ATCC 58785 / CBS 6054 / NBRC 10063 / NRRL Y-11545) Alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101100097319 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ala1 gene Proteins 0.000 description 2
- BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N Ser-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- PCMZJFMUYWIERL-ZKWXMUAHSA-N Ser-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PCMZJFMUYWIERL-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 241000264435 Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis Species 0.000 description 2
- 241000194048 Streptococcus equi Species 0.000 description 2
- 241000194054 Streptococcus uberis Species 0.000 description 2
- 241000223257 Thermomyces Species 0.000 description 2
- 241001313536 Thermothelomyces thermophila Species 0.000 description 2
- 241001494489 Thielavia Species 0.000 description 2
- STGXWWBXWXZOER-MBLNEYKQSA-N Thr-Ala-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 STGXWWBXWXZOER-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 2
- UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N Thr-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- SIMKLINEDYOTKL-MBLNEYKQSA-N Thr-His-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O SIMKLINEDYOTKL-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 2
- PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N Thr-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 2
- LCCSEJSPBWKBNT-OSUNSFLBSA-N Thr-Ile-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N LCCSEJSPBWKBNT-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 2
- RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N Thr-Leu-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N)O RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 241000222355 Trametes versicolor Species 0.000 description 2
- XKGZEDNYGPNJAR-XIRDDKMYSA-N Trp-Asn-His Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC3=CN=CN3)C(=O)O)N XKGZEDNYGPNJAR-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- WSGPBCAGEGHKQJ-BBRMVZONSA-N Trp-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N WSGPBCAGEGHKQJ-BBRMVZONSA-N 0.000 description 2
- YPBYQWFZAAQMGW-XIRDDKMYSA-N Trp-Lys-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N YPBYQWFZAAQMGW-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- DDHFMBDACJYSKW-AQZXSJQPSA-N Trp-Thr-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N)O DDHFMBDACJYSKW-AQZXSJQPSA-N 0.000 description 2
- YTHWAWACWGWBLE-MNSWYVGCSA-N Trp-Tyr-Thr Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CC=C(O)C=C1 YTHWAWACWGWBLE-MNSWYVGCSA-N 0.000 description 2
- KSVMDJJCYKIXTK-IGNZVWTISA-N Tyr-Ala-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 KSVMDJJCYKIXTK-IGNZVWTISA-N 0.000 description 2
- YRBHLWWGSSQICE-IHRRRGAJSA-N Tyr-Asp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O YRBHLWWGSSQICE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N Tyr-Asp-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N Tyr-Ser-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- WYOBRXPIZVKNMF-IRXDYDNUSA-N Tyr-Tyr-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WYOBRXPIZVKNMF-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 2
- VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N Val-Arg-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- ZMDCGGKHRKNWKD-LAEOZQHASA-N Val-Asn-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N ZMDCGGKHRKNWKD-LAEOZQHASA-N 0.000 description 2
- OGNMURQZFMHFFD-NHCYSSNCSA-N Val-Asn-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N OGNMURQZFMHFFD-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- CGGVNFJRZJUVAE-BYULHYEWSA-N Val-Asp-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N CGGVNFJRZJUVAE-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- OVLIFGQSBSNGHY-KKHAAJSZSA-N Val-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O OVLIFGQSBSNGHY-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 2
- NHXZRXLFOBFMDM-AVGNSLFASA-N Val-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)C(C)C NHXZRXLFOBFMDM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- PGQUDQYHWICSAB-NAKRPEOUSA-N Val-Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C(C)C)N PGQUDQYHWICSAB-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- PDDJTOSAVNRJRH-UNQGMJICSA-N Val-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O PDDJTOSAVNRJRH-UNQGMJICSA-N 0.000 description 2
- UQJQJMSVQQQSGM-UHFFFAOYSA-M [N+](=O)([O-])[O-].[Co+3].C(C)(=O)[O-] Chemical compound [N+](=O)([O-])[O-].[Co+3].C(C)(=O)[O-] UQJQJMSVQQQSGM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- MLDWGLQSBBCMMO-UHFFFAOYSA-N [Na].[Na].[Na].CNCC(=O)O Chemical compound [Na].[Na].[Na].CNCC(=O)O MLDWGLQSBBCMMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 2
- 108010045350 alanyl-tyrosyl-alanine Proteins 0.000 description 2
- 101150078331 ama-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 description 2
- 229940005348 bacillus firmus Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 235000010338 boric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- VTIIJXUACCWYHX-UHFFFAOYSA-L disodium;carboxylatooxy carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)OOC([O-])=O VTIIJXUACCWYHX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 2
- 238000009837 dry grinding Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- UPCIBFUJJLCOQG-UHFFFAOYSA-L ethyl-[2-[2-[ethyl(dimethyl)azaniumyl]ethyl-methylamino]ethyl]-dimethylazanium;dibromide Chemical compound [Br-].[Br-].CC[N+](C)(C)CCN(C)CC[N+](C)(C)CC UPCIBFUJJLCOQG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 108010038658 exo-1,4-beta-D-xylosidase Proteins 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000002979 fabric softener Substances 0.000 description 2
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 2
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000847 nonoxynol Polymers 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- ZCLAHGAZPPEVDX-MQHGYYCBSA-N panose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O[C@@H]1CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZCLAHGAZPPEVDX-MQHGYYCBSA-N 0.000 description 2
- 239000011087 paperboard Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 2
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 101150054232 pyrG gene Proteins 0.000 description 2
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 102200053231 rs104894354 Human genes 0.000 description 2
- 102220052102 rs35524245 Human genes 0.000 description 2
- 102220026086 rs397518426 Human genes 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229940045872 sodium percarbonate Drugs 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 229940115922 streptococcus uberis Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 108010075550 termamyl Proteins 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- 230000009105 vegetative growth Effects 0.000 description 2
- 238000009941 weaving Methods 0.000 description 2
- 238000001238 wet grinding Methods 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanoic acid;(2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s,3s)-2-amino-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O.CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N 0.000 description 1
- CYNAPIVXKRLDER-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-benzamido-3-(4-hydroxy-3-nitrophenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C([N+]([O-])=O)=C1 CYNAPIVXKRLDER-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- VXWBQOJISHAKKM-UHFFFAOYSA-N (4-formylphenyl)boronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=C(C=O)C=C1 VXWBQOJISHAKKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N (4r,7s,10s,13s,16r)-16-acetamido-13-(1h-imidazol-5-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15-tetraoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14-tetrazacycloheptadecane-4-carboxamide Chemical compound N1C(=O)[C@@H](NC(C)=O)CSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CC1=CN=CN1 FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- IEORSVTYLWZQJQ-UHFFFAOYSA-N 2-(2-nonylphenoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCCCCC1=CC=CC=C1OCCO IEORSVTYLWZQJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- 101150104118 ANS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710146708 Acid alpha-amylase Proteins 0.000 description 1
- 101100510736 Actinidia chinensis var. chinensis LDOX gene Proteins 0.000 description 1
- HUUOZYZWNCXTFK-INTQDDNPSA-N Ala-His-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N HUUOZYZWNCXTFK-INTQDDNPSA-N 0.000 description 1
- DVJSJDDYCYSMFR-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O DVJSJDDYCYSMFR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- GKAZXNDATBWNBI-DCAQKATOSA-N Ala-Met-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N GKAZXNDATBWNBI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N Ala-Tyr-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- XCIGOVDXZULBBV-DCAQKATOSA-N Ala-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O XCIGOVDXZULBBV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 229940122930 Alkalising agent Drugs 0.000 description 1
- 102100034044 All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH1B Human genes 0.000 description 1
- 101710193111 All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH4 Proteins 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- KWKQGHSSNHPGOW-BQBZGAKWSA-N Arg-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O KWKQGHSSNHPGOW-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OCOZPTHLDVSFCZ-BPUTZDHNSA-N Arg-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N OCOZPTHLDVSFCZ-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- MZRBYBIQTIKERR-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O MZRBYBIQTIKERR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PNIGSVZJNVUVJA-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PNIGSVZJNVUVJA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 108010010777 Arg-Gly-Asp-Gly Proteins 0.000 description 1
- YKBHOXLMMPZPHQ-GMOBBJLQSA-N Arg-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YKBHOXLMMPZPHQ-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 1
- RZVVKNIACROXRM-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Asp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N RZVVKNIACROXRM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UGXVKHRDGLYFKR-CIUDSAMLSA-N Asn-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O UGXVKHRDGLYFKR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JREOBWLIZLXRIS-GUBZILKMSA-N Asn-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JREOBWLIZLXRIS-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- RAQMSGVCGSJKCL-FOHZUACHSA-N Asn-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O RAQMSGVCGSJKCL-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- AITGTTNYKAWKDR-CIUDSAMLSA-N Asn-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AITGTTNYKAWKDR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RLHANKIRBONJBK-IHRRRGAJSA-N Asn-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N RLHANKIRBONJBK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- YXVAESUIQFDBHN-SRVKXCTJSA-N Asn-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXVAESUIQFDBHN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N Asn-Ser-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- VBVKSAFJPVXMFJ-CIUDSAMLSA-N Asp-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VBVKSAFJPVXMFJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PZXPWHFYZXTFBI-YUMQZZPRSA-N Asp-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PZXPWHFYZXTFBI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KHGPWGKPYHPOIK-QWRGUYRKSA-N Asp-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O KHGPWGKPYHPOIK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- UBPMOJLRVMGTOQ-GARJFASQSA-N Asp-His-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O UBPMOJLRVMGTOQ-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- TZOZNVLBTAFJRW-UGYAYLCHSA-N Asp-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N TZOZNVLBTAFJRW-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 1
- YTXCCDCOHIYQFC-GUBZILKMSA-N Asp-Met-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O YTXCCDCOHIYQFC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZVGRHIRJLWBWGJ-ACZMJKKPSA-N Asp-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ZVGRHIRJLWBWGJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 101000961203 Aspergillus awamori Glucoamylase Proteins 0.000 description 1
- 101000756530 Aspergillus niger Endo-1,4-beta-xylanase B Proteins 0.000 description 1
- 101900127796 Aspergillus oryzae Glucoamylase Proteins 0.000 description 1
- 241000223651 Aureobasidium Species 0.000 description 1
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 1
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 description 1
- 101000775727 Bacillus amyloliquefaciens Alpha-amylase Proteins 0.000 description 1
- 108010045681 Bacillus stearothermophilus neutral protease Proteins 0.000 description 1
- 101900040182 Bacillus subtilis Levansucrase Proteins 0.000 description 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 102100030981 Beta-alanine-activating enzyme Human genes 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000222490 Bjerkandera Species 0.000 description 1
- 241000222478 Bjerkandera adusta Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100327917 Caenorhabditis elegans chup-1 gene Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102100037633 Centrin-3 Human genes 0.000 description 1
- 241001466517 Ceriporiopsis aneirina Species 0.000 description 1
- 241001646018 Ceriporiopsis gilvescens Species 0.000 description 1
- 241001277875 Ceriporiopsis rivulosa Species 0.000 description 1
- 241000524302 Ceriporiopsis subrufa Species 0.000 description 1
- RKWGIWYCVPQPMF-UHFFFAOYSA-N Chloropropamide Chemical compound CCCNC(=O)NS(=O)(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 RKWGIWYCVPQPMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000123346 Chrysosporium Species 0.000 description 1
- 241001674013 Chrysosporium lucknowense Species 0.000 description 1
- 241001556045 Chrysosporium merdarium Species 0.000 description 1
- 241000080524 Chrysosporium queenslandicum Species 0.000 description 1
- 241000355696 Chrysosporium zonatum Species 0.000 description 1
- 241000233652 Chytridiomycota Species 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000222356 Coriolus Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 241001559589 Cullen Species 0.000 description 1
- 108010025880 Cyclomaltodextrin glucanotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920002245 Dextrose equivalent Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101710132690 Endo-1,4-beta-xylanase A Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000146406 Fusarium heterosporum Species 0.000 description 1
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 description 1
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150108358 GLAA gene Proteins 0.000 description 1
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010001498 Galectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100021736 Galectin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000146398 Gelatoporia subvermispora Species 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 101100001650 Geobacillus stearothermophilus amyM gene Proteins 0.000 description 1
- RRYLMJWPWBJFPZ-ACZMJKKPSA-N Gln-Asn-Asp Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N RRYLMJWPWBJFPZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MWERYIXRDZDXOA-QEWYBTABSA-N Gln-Ile-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MWERYIXRDZDXOA-QEWYBTABSA-N 0.000 description 1
- DQLVHRFFBQOWFL-JYJNAYRXSA-N Gln-Lys-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O DQLVHRFFBQOWFL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- FTMLQFPULNGION-ZVZYQTTQSA-N Gln-Val-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O FTMLQFPULNGION-ZVZYQTTQSA-N 0.000 description 1
- FHPXTPQBODWBIY-CIUDSAMLSA-N Glu-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FHPXTPQBODWBIY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JLCYOCDGIUZMKQ-JBACZVJFSA-N Glu-Trp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N JLCYOCDGIUZMKQ-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- SOYWRINXUSUWEQ-DLOVCJGASA-N Glu-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SOYWRINXUSUWEQ-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N Gly-Ala-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC([O-])=O UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- OCDLPQDYTJPWNG-YUMQZZPRSA-N Gly-Asn-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)CN OCDLPQDYTJPWNG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- FMNHBTKMRFVGRO-FOHZUACHSA-N Gly-Asn-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN FMNHBTKMRFVGRO-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- QGZSAHIZRQHCEQ-QWRGUYRKSA-N Gly-Asp-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QGZSAHIZRQHCEQ-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- ZLCLYFGMKFCDCN-XPUUQOCRSA-N Gly-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)C(O)=O ZLCLYFGMKFCDCN-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- BXDLTKLPPKBVEL-FJXKBIBVSA-N Gly-Thr-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O BXDLTKLPPKBVEL-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- GULGDABMYTYMJZ-STQMWFEESA-N Gly-Trp-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GULGDABMYTYMJZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- PYFIQROSWQERAS-LBPRGKRZSA-N Gly-Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 PYFIQROSWQERAS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- LYZYGGWCBLBDMC-QWHCGFSZSA-N Gly-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)CN)C(=O)O LYZYGGWCBLBDMC-QWHCGFSZSA-N 0.000 description 1
- YGHSQRJSHKYUJY-SCZZXKLOSA-N Gly-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN YGHSQRJSHKYUJY-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- COZMNNJEGNPDED-HOCLYGCPSA-N Gly-Val-Trp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O COZMNNJEGNPDED-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150009006 HIS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100295959 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) arcB gene Proteins 0.000 description 1
- 101100246753 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) pyrF gene Proteins 0.000 description 1
- HXKZJLWGSWQKEA-LSJOCFKGSA-N His-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HXKZJLWGSWQKEA-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- ABCCKUZDWMERKT-AVGNSLFASA-N His-Pro-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O ABCCKUZDWMERKT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WYKXJGWSJUULSL-AVGNSLFASA-N His-Val-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(=O)O WYKXJGWSJUULSL-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 101000773364 Homo sapiens Beta-alanine-activating enzyme Proteins 0.000 description 1
- 101000880522 Homo sapiens Centrin-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000882901 Homo sapiens Claudin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 description 1
- 101001035458 Humicola insolens Endoglucanase-5 Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- YNMQUIVKEFRCPH-QSFUFRPTSA-N Ile-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)O)N YNMQUIVKEFRCPH-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- FFJQAEYLAQMGDL-MGHWNKPDSA-N Ile-Lys-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FFJQAEYLAQMGDL-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- NPAYJTAXWXJKLO-NAKRPEOUSA-N Ile-Met-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N NPAYJTAXWXJKLO-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- MGUTVMBNOMJLKC-VKOGCVSHSA-N Ile-Trp-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N MGUTVMBNOMJLKC-VKOGCVSHSA-N 0.000 description 1
- 235000003332 Ilex aquifolium Nutrition 0.000 description 1
- 241000209027 Ilex aquifolium Species 0.000 description 1
- 241000411968 Ilyobacter Species 0.000 description 1
- 108010028688 Isoamylase Proteins 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 1
- 241000824268 Kuma Species 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical class OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 125000003798 L-tyrosyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- 241000235087 Lachancea kluyveri Species 0.000 description 1
- XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N Leu-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- POJPZSMTTMLSTG-SRVKXCTJSA-N Leu-Asn-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N POJPZSMTTMLSTG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- UCNNZELZXFXXJQ-BZSNNMDCSA-N Leu-Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UCNNZELZXFXXJQ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- LQUIENKUVKPNIC-ULQDDVLXSA-N Leu-Met-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LQUIENKUVKPNIC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- IUWMQCZOTYRXPL-ZPFDUUQYSA-N Lys-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IUWMQCZOTYRXPL-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- HYSVGEAWTGPMOA-IHRRRGAJSA-N Lys-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HYSVGEAWTGPMOA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 101150068888 MET3 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- HOTNHEUETJELDL-BPNCWPANSA-N Met-Tyr-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N HOTNHEUETJELDL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- ALTHVGNGGZZSAC-SRVKXCTJSA-N Met-Val-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N ALTHVGNGGZZSAC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004368 Modified starch Substances 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 241000226677 Myceliophthora Species 0.000 description 1
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GIYXAJPCNFJEHY-UHFFFAOYSA-N N-methyl-3-phenyl-3-[4-(trifluoromethyl)phenoxy]-1-propanamine hydrochloride (1:1) Chemical compound Cl.C=1C=CC=CC=1C(CCNC)OC1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 GIYXAJPCNFJEHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000233892 Neocallimastix Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 1
- 101100062121 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cyc-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100022915 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cys-11 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000913 Nitrate Reductases Proteins 0.000 description 1
- 241001072230 Oceanobacillus Species 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007981 Ornithine carbamoyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 101710113020 Ornithine transcarbamylase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 102100037214 Orotidine 5'-phosphate decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- 108010055012 Orotidine-5'-phosphate decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001236817 Paecilomyces <Clavicipitaceae> Species 0.000 description 1
- 102100026367 Pancreatic alpha-amylase Human genes 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 241000222385 Phanerochaete Species 0.000 description 1
- 241000222393 Phanerochaete chrysosporium Species 0.000 description 1
- CGOMLCQJEMWMCE-STQMWFEESA-N Phe-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 CGOMLCQJEMWMCE-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- FRPVPGRXUKFEQE-YDHLFZDLSA-N Phe-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FRPVPGRXUKFEQE-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- YRHRGNUAXGUPTO-PMVMPFDFSA-N Phe-Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YRHRGNUAXGUPTO-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- YUPRIZTWANWWHK-DZKIICNBSA-N Phe-Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N YUPRIZTWANWWHK-DZKIICNBSA-N 0.000 description 1
- 241000222397 Phlebia radiata Species 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000222350 Pleurotus Species 0.000 description 1
- 244000252132 Pleurotus eryngii Species 0.000 description 1
- 235000001681 Pleurotus eryngii Nutrition 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920002504 Poly(2-vinylpyridine-N-oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- VZKBJNBZMZHKRC-XUXIUFHCSA-N Pro-Ile-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VZKBJNBZMZHKRC-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- FYPGHGXAOZTOBO-IHRRRGAJSA-N Pro-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 FYPGHGXAOZTOBO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- GBUNEGKQPSAMNK-QTKMDUPCSA-N Pro-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2)O GBUNEGKQPSAMNK-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000169446 Promethis Species 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 241000589630 Pseudomonas pseudoalcaligenes Species 0.000 description 1
- 241000589614 Pseudomonas stutzeri Species 0.000 description 1
- 241000231139 Pyricularia Species 0.000 description 1
- 101100394989 Rhodopseudomonas palustris (strain ATCC BAA-98 / CGA009) hisI gene Proteins 0.000 description 1
- 241000219053 Rumex Species 0.000 description 1
- 235000003534 Saccharomyces carlsbergensis Nutrition 0.000 description 1
- 101900354623 Saccharomyces cerevisiae Galactokinase Proteins 0.000 description 1
- 101900084120 Saccharomyces cerevisiae Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 1
- 235000001006 Saccharomyces cerevisiae var diastaticus Nutrition 0.000 description 1
- 244000206963 Saccharomyces cerevisiae var. diastaticus Species 0.000 description 1
- 241000204893 Saccharomyces douglasii Species 0.000 description 1
- 241001407717 Saccharomyces norbensis Species 0.000 description 1
- 241001123227 Saccharomyces pastorianus Species 0.000 description 1
- 241000235343 Saccharomycetales Species 0.000 description 1
- 101000832889 Scheffersomyces stipitis (strain ATCC 58785 / CBS 6054 / NBRC 10063 / NRRL Y-11545) Alcohol dehydrogenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000222480 Schizophyllum Species 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 101100022918 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) sua1 gene Proteins 0.000 description 1
- WTWGOQRNRFHFQD-JBDRJPRFSA-N Ser-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WTWGOQRNRFHFQD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- FPCGZYMRFFIYIH-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FPCGZYMRFFIYIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FBLNYDYPCLFTSP-IXOXFDKPSA-N Ser-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O FBLNYDYPCLFTSP-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 101100309436 Streptococcus mutans serotype c (strain ATCC 700610 / UA159) ftf gene Proteins 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 241000958303 Streptomyces achromogenes Species 0.000 description 1
- 241001468227 Streptomyces avermitilis Species 0.000 description 1
- 241000187432 Streptomyces coelicolor Species 0.000 description 1
- 101100370749 Streptomyces coelicolor (strain ATCC BAA-471 / A3(2) / M145) trpC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000187392 Streptomyces griseus Species 0.000 description 1
- 101100242848 Streptomyces hygroscopicus bar gene Proteins 0.000 description 1
- 241000187398 Streptomyces lividans Species 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000228341 Talaromyces Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 101100157012 Thermoanaerobacterium saccharolyticum (strain DSM 8691 / JW/SL-YS485) xynB gene Proteins 0.000 description 1
- 241000228178 Thermoascus Species 0.000 description 1
- GLQFKOVWXPPFTP-VEVYYDQMSA-N Thr-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GLQFKOVWXPPFTP-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- PQLXHSACXPGWPD-GSSVUCPTSA-N Thr-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PQLXHSACXPGWPD-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- VBPDMBAFBRDZSK-HOUAVDHOSA-N Thr-Asn-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O VBPDMBAFBRDZSK-HOUAVDHOSA-N 0.000 description 1
- GKMYGVQDGVYCPC-IUKAMOBKSA-N Thr-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N GKMYGVQDGVYCPC-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- CQNFRKAKGDSJFR-NUMRIWBASA-N Thr-Glu-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O CQNFRKAKGDSJFR-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N Thr-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- NWECYMJLJGCBOD-UNQGMJICSA-N Thr-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NWECYMJLJGCBOD-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N Thr-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 241001149964 Tolypocladium Species 0.000 description 1
- 241000222354 Trametes Species 0.000 description 1
- 241000222357 Trametes hirsuta Species 0.000 description 1
- 241000217816 Trametes villosa Species 0.000 description 1
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 1
- 241000378866 Trichoderma koningii Species 0.000 description 1
- 241000223262 Trichoderma longibrachiatum Species 0.000 description 1
- 241000223261 Trichoderma viride Species 0.000 description 1
- DVWAIHZOPSYMSJ-ZVZYQTTQSA-N Trp-Glu-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 DVWAIHZOPSYMSJ-ZVZYQTTQSA-N 0.000 description 1
- AZBIIKDSDLVJAK-VHWLVUOQSA-N Trp-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N AZBIIKDSDLVJAK-VHWLVUOQSA-N 0.000 description 1
- DDJHCLVUUBEIIA-BVSLBCMMSA-N Trp-Met-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)CCSC)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 DDJHCLVUUBEIIA-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- QHWMVGCEQAPQDK-UMPQAUOISA-N Trp-Thr-Arg Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N)O QHWMVGCEQAPQDK-UMPQAUOISA-N 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVOGEPLDNYTAHD-CQDKDKBSSA-N Tyr-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 TVOGEPLDNYTAHD-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- DKKHULUSOSWGHS-UWJYBYFXSA-N Tyr-Asn-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N DKKHULUSOSWGHS-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- AYHSJESDFKREAR-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AYHSJESDFKREAR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- FNWGDMZVYBVAGJ-XEGUGMAKSA-N Tyr-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N FNWGDMZVYBVAGJ-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- BSCBBPKDVOZICB-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BSCBBPKDVOZICB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 101150050575 URA3 gene Proteins 0.000 description 1
- YFOCMOVJBQDBCE-NRPADANISA-N Val-Ala-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N YFOCMOVJBQDBCE-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- UDNYEPLJTRDMEJ-RCOVLWMOSA-N Val-Asn-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O)N UDNYEPLJTRDMEJ-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- JTWIMNMUYLQNPI-WPRPVWTQSA-N Val-Gly-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N JTWIMNMUYLQNPI-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- VVIZITNVZUAEMI-DLOVCJGASA-N Val-Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O VVIZITNVZUAEMI-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000409279 Xerochrysium dermatitidis Species 0.000 description 1
- 108700040099 Xylose isomerases Proteins 0.000 description 1
- 241000235013 Yarrowia Species 0.000 description 1
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 description 1
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000758405 Zoopagomycotina Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 125000005227 alkyl sulfonate group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 101150009206 aprE gene Proteins 0.000 description 1
- 101150008194 argB gene Proteins 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 230000009141 biological interaction Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- MMCOUVMKNAHQOY-UHFFFAOYSA-N carbonoperoxoic acid Chemical compound OOC(O)=O MMCOUVMKNAHQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 125000002668 chloroacetyl group Chemical group ClCC(=O)* 0.000 description 1
- 238000011098 chromatofocusing Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- GSPKZYJPUDYKPI-UHFFFAOYSA-N diethoxy sulfate Chemical compound CCOOS(=O)(=O)OOCC GSPKZYJPUDYKPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- MCPLVIGCWWTHFH-UHFFFAOYSA-M disodium;4-[4-[[4-(4-sulfoanilino)phenyl]-[4-(4-sulfonatophenyl)azaniumylidenecyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]anilino]benzenesulfonate Chemical group [Na+].[Na+].C1=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[NH+]C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(NC=3C=CC(=CC=3)S([O-])(=O)=O)=CC=2)C=C1 MCPLVIGCWWTHFH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GMSCBRSQMRDRCD-UHFFFAOYSA-N dodecyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOC(=O)C(C)=C GMSCBRSQMRDRCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010410 dusting Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000002003 electron diffraction Methods 0.000 description 1
- 108010091371 endoglucanase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010091384 endoglucanase 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010092413 endoglucanase V Proteins 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000003778 fat substitute Substances 0.000 description 1
- 235000013341 fat substitute Nutrition 0.000 description 1
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000002657 fibrous material Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 239000010437 gem Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002332 glycine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010090037 glycyl-alanyl-isoleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- PEYVWSJAZONVQK-UHFFFAOYSA-N hydroperoxy(oxo)borane Chemical compound OOB=O PEYVWSJAZONVQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003752 hydrotrope Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 108010002685 hygromycin-B kinase Proteins 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010412 laundry washing Methods 0.000 description 1
- 108010091871 leucylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 239000012978 lignocellulosic material Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 101150039489 lysZ gene Proteins 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 108010020132 microbial serine proteinases Proteins 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 101150095344 niaD gene Proteins 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N nonylphenol Chemical class CCCCCCCCCC1=CC=CC=C1O SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150105920 npr gene Proteins 0.000 description 1
- 101150017837 nprM gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 108090000021 oryzin Proteins 0.000 description 1
- 239000010893 paper waste Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 101150019841 penP gene Proteins 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000004965 peroxy acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N phencyclidine Chemical compound C1CCCCN1C1(C=2C=CC=CC=2)CCCCC1 JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N phenylboronic acid Chemical class OB(O)C1=CC=CC=C1 HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010082527 phosphinothricin N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000005222 photoaffinity labeling Methods 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920002006 poly(N-vinylimidazole) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000196 poly(lauryl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920005646 polycarboxylate Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920005996 polystyrene-poly(ethylene-butylene)-polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011253 protective coating Substances 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 101150108007 prs gene Proteins 0.000 description 1
- 101150086435 prs1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150070305 prsA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 1
- 101150025220 sacB gene Proteins 0.000 description 1
- 238000009991 scouring Methods 0.000 description 1
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 1
- 101150091813 shfl gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- MWNQXXOSWHCCOZ-UHFFFAOYSA-L sodium;oxido carbonate Chemical group [Na+].[O-]OC([O-])=O MWNQXXOSWHCCOZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 description 1
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- FRPJTGXMTIIFIT-UHFFFAOYSA-N tetraacetylethylenediamine Chemical compound CC(=O)C(N)(C(C)=O)C(N)(C(C)=O)C(C)=O FRPJTGXMTIIFIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 230000009974 thixotropic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003587 threonine derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003641 trioses Chemical class 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 101150016309 trpC gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 101150110790 xylB gene Proteins 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
- C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D2111/00—Cleaning compositions characterised by the objects to be cleaned; Cleaning compositions characterised by non-standard cleaning or washing processes
- C11D2111/10—Objects to be cleaned
- C11D2111/14—Hard surfaces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01001—Alpha-amylase (3.2.1.1)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Abstract
本发明涉及具有α‑淀粉酶活性的多肽。本发明还涉及编码这些多肽的多核苷酸;包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞;以及使用这些多肽的方法。
Description
对序列表的引用
本申请包含计算机可读形式的序列表,将其通过引用结合在此。
背景技术
技术领域
本发明涉及α-淀粉酶变体(即,具有α-淀粉酶活性的多肽)、编码该α- 淀粉酶的核酸、生产该α-淀粉酶的方法、包含该α-淀粉酶的组合物以及使用 该α-淀粉酶的方法。
相关技术说明
α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶,E.C.3.2.1.1)由一组酶构成, 这些酶催化淀粉以及其他直链和支链1,4-糖苷寡糖和多糖的水解。
α-淀粉酶在工业上用于若干种已知应用的用途具有悠久历史,这些应用 如洗涤剂、烘焙、酿造、淀粉液化和糖化,例如在高果糖糖浆的制备中或用 作从淀粉生产乙醇的一部分。α-淀粉酶的这些应用和其他应用是已知的并且 利用了衍生自微生物的α-淀粉酶,特别是细菌α-淀粉酶。
芽孢杆菌α-淀粉酶例如特妙(Termamyl)AA560(SEQ ID NO:2;还参 见WO 2000/060060)和SP707(SEQ ID NO:8;还参见Tsukamoto等人,1988,Biochem.Biophys.Res.Comm.[生物化学和生物物理研究通讯]151:25-31)形 成特定的、已经用于洗涤剂中的α-淀粉酶的组。已经对这些淀粉酶进行修饰 以改进其在洗涤剂中的稳定性。例如,WO 96/23873披露了α-淀粉酶SP690、 SP722(SEQ ID NO:5)和SP707(SEQ IDNO:8)的缺失型突变体(还参 见WO 96/23873的SEQ ID NO:1、2和7)以改进这些淀粉酶的稳定性。 WO 96/23873进一步披露了取代型突变体,以针对氧化来稳定淀粉酶。具有 改进的特性的另外的α-淀粉酶突变体披露于WO 2006/002643和WO 01/66712中。
因而,修饰天然存在的淀粉酶来改进某些特性是已知的。
本发明的目的是提供具有α-淀粉酶活性的多肽(α-淀粉酶),该多肽具 有改进的洗涤性能,尤其是用于自动洗涤机和/或餐具洗涤机。
发明内容
本发明涉及对应于衍生自芽孢杆菌属的α-淀粉酶的变体具有α-淀粉酶 活性的多肽。具体而言,本发明的多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或 由其组成,其中这些氨基酸中的一个或多个发生突变(例如,通过取代或缺 失),使得该多肽展现增强的洗涤性能(尤其在自动洗涤机和/或餐具洗涤机 中)。
本发明还涉及编码变体α-淀粉酶多肽的多核苷酸;包含这些多核苷酸的 核酸构建体、载体、和宿主细胞;以及生产这些变体α-淀粉酶多肽的方法。
本发明还涉及包含这些变体α-淀粉酶多肽的洗涤剂组合物,以及这些洗 涤剂组合物在家庭和工业清洗过程(如衣物清洗和餐具洗涤)中的用途。
附图说明
图1示出了SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的比对
定义
α-淀粉酶:术语“α-淀粉酶”(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶,E.C.3.2.1.1) 构成一组酶,这些酶催化淀粉以及其他直链和支链1,4-糖苷寡糖和多糖的水 解。出于本发明的目的,根据实例1中所述的程序测定α-淀粉酶活性。在一 方面,本发明的变体具有SEQ IDNO:1的成熟多肽的α-淀粉酶活性的至少 20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少 90%、至少95%、或至少100%。
氨基酸:如本文使用的,术语“氨基酸”包括标准二十种遗传编码的氨 基酸及其相应的处于“D”型(与天然“L”型进行对比)的立体异构体、ω- 氨基酸、其他天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如α,α-双取代的氨基酸、 N-烷基氨基酸等)和化学衍生的氨基酸。可以通过与功能性侧集团反应来实 现一个或多个氨基酸的化学衍生物。此类衍生的分子包括例如,其中游离氨 基基团已经衍生形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基基团、羧基苯氧基基团、叔丁 氧基羰基基团、氯乙酰基基团或甲酰基基团的那些分子。游离羧基基团可以 被衍生形成盐、甲酯和乙酯或其他类型的酯和酰肼。游离羟基基团可被衍生 化以形成O-酰基或O-烷基衍生物。作为化学衍生物还包括那些含有二十种 标准氨基酸的天然存在的氨基酸衍生物的肽。例如:4-羟脯氨酸可以取代脯 氨酸;5-羟赖氨酸可以取代赖氨酸;3-甲基组氨酸可以取代组氨酸;高丝氨 酸可以取代丝氨酸并且鸟氨酸取代赖氨酸。只要维持必要的活性,衍生物也 包括含有一个或多个添加或缺失的肽。其他包括的修饰是酰胺化、氨基末端酰化(例如乙酰化或巯基乙酸酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如用氨或甲胺)、 和类似的末端修饰。
当明确列举氨基酸,例如“丙氨酸”或“Ala”或“A”时,除非另有明 确说明,否则该术语是指L-丙氨酸和D-丙氨酸。其他非常规氨基酸也可以 是本发明多肽的适合组分,只要所需功能特性由多肽保留即可。对于所示的 肽,适当时,每个编码的氨基酸残基由单字母代号表示,对应于常规氨基酸 的普通名称。在一个实施例中,本发明的多肽包含l-氨基酸或由其组成。
cDNA:术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、 剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺少可以存在于 相应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录物本是mRNA的 前体,其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列步骤进行加工,包 括剪接。
编码序列:术语“编码序列”意指多核苷酸,该多核苷酸直接规定了变 体的氨基酸序列。编码序列的边界一般由开放阅读框架决定,该开放阅读框 架从起始密码子(例如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、 TAG或TGA)结束。编码序列可为基因组DNA、cDNA、合成DNA、或其 组合。
对照序列:术语“控制序列”意指为编码本发明的变体的多核苷酸的表 达所需的核酸序列。每个控制序列对于编码该变体的多核苷酸来说可以是天 然的(即,来自相同基因)或外源的(即,来自不同基因),或相对于彼此 是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导子、聚腺苷酸化序列、 前肽序列、启动子、信号肽序列和转录终止子。最少,控制序列包括启动子、 以及转录和翻译终止信号。出于引入促进控制序列与编码变体的多核苷酸的 编码区域连接的特异性限制位点的目的,控制序列可以提供有接头。
对应于:如在此所使用的术语“对应于”是指确定序列的特定氨基酸的 方法,其中参考特定氨基酸序列。例如出于本发明的目的,当参考特定氨基 酸位置时,本领域技术人员能够将另一个氨基酸序列与已经参考的所述氨基 酸序列进行比对,以便在所述另一氨基酸序列中确定哪个特定氨基酸可能是 感兴趣的。已经在本文其他地方描述了另一氨基酸序列与例如SEQ ID NO:1 或2中所示的序列或在此列出的任何其他序列的比对。可使用可替代的比对 方法,并且这些方法为本领域技术人员所熟知。
增强的洗涤性能:术语“增强的洗涤性能”或“改进的洗涤性能”意指 与SEQ IDNO:1的亲本α淀粉酶相比,本发明的多肽在洗涤过程(例如衣 物洗涤或餐具洗涤)中提供清洗效果(例如去除污渍)的能力是改进的。可 以使用本领域熟知的方法来确定洗涤性能,如使用自动机械应力测定 (AMSA)或自动餐具洗涤(ADW)(参见实例2和3)。本领域技术人员将会理解,仅在一些或者可能所有的洗涤条件下(例如在40℃或更高(例如 在40℃和/或在50℃)的洗涤温度下、和/或有或没有漂白剂的存在),可以 实现增强的洗涤性能。
表达:术语“表达”包括涉及变体的产生的任何步骤,包括但不限于转 录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体:术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子,该分子包含 编码变体的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
片段:术语“片段”意指具有在SEQ ID NO:1的成熟多肽的氨基和/或 羧基末端不存在的一个或多个(例如若干个)氨基酸的多肽;其中该片段具 有α-淀粉酶活性。在一方面,片段含有SEQ ID NO:1的至少200个连续的 氨基酸残基,例如SEQ ID NO:1的至少300个连续的氨基酸残基、或至少 350个连续的氨基酸残基、或至少400个连续的氨基酸残基、或至少450个 连续的氨基酸残基。
宿主细胞:术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸 构建体或表达载体转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞” 涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。
分离的:术语“分离的”意指在自然界中不存在的形式或环境中的物质。 分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然发生的物质,(2)包括但不 限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质,该物质至少部 分地从与其本质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除;(3)相对 于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质;或(4)通过相对于与其天 然相关的其他组分,增加该物质的量而修饰的任何物质(例如,编码该物质 的基因的多个拷贝;比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动 子的使用)。分离的物质可以存在于发酵液样品中。
成熟多肽:术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰,例如N- 末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的 多肽。本领域内已知,宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多 种不同的成熟多肽(即,具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。
成熟多肽编码序列:术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有α-淀粉酶 活性的成熟多肽的多核苷酸。
突变:在本发明多肽的上下文中,术语“突变”意指在参考氨基酸序列 (即SEQ IDNO:1)内的一个或多个氨基酸通过用不同的氨基酸取代或通过 缺失而改变。此外,突变可以对应于在参考氨基酸序列内一个或多个额外的 氨基酸的插入。
核酸构建体:术语“核酸构建体”意指单-链或双链的核酸分子,该核酸 分子是从天然存在的基因中分离的,或以本来不存在于自然界中的方式被修 饰成含有核酸的区段,或是合成的,该核酸分子包含一个或多个控制序列。
根据……进行编号:如本文使用的,术语“根据……进行编号”是指编 号本发明多肽中每个氨基酸残基的方式。即技术人员会知道当,例如,根据 SEQ ID NO:2对位置202进行编号时,他将知道通过任何其他多肽与SEQ ID NO:2的比对,他将能够确定其他多肽中的相应氨基酸残基。本文其他地方 已描述了两个或更多个氨基酸序列的比对。
可操作地连接:术语“可操作地连接”意思指这样一种配置,在该配置 中,控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处,这样使得 该控制序列引导编码序列的表达。
亲本或亲本α-淀粉酶:术语“亲本”或“亲本α-淀粉酶”意指SEQ ID NO: 1的α-淀粉酶(通过诺维信公司(Novozymes A/S)在商品名“Plus” 下商品化;参见WO2006/002643)。可替代地,它也可以意指SEQ ID NO:2 的α-淀粉酶(也称为AA560)。
序列同一性:两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过 参数“序列同一性”来描述。
出于本发明的目的,使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件]), Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本 或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman 和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个 氨基酸序列之间的序列同一性。使用的参数可以是缺口开放罚分10、缺口扩 展罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。 使用Needle标记的“最长同一性”的输出(使用-nobrief选项获得)作为同 一性百分比并且计算如下:
(同一的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
可替代地,所使用的参数可以是空位开放罚分10,空位延伸罚分0.5和 EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。使用Needle标 记的“最长同一性”的输出(使用-nobrief选项获得)作为同一性百分比并 且计算如下:
(同一的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
子序列:术语“子序列”意指多核苷酸,该核苷酸具有一个或多个(例 如,若干个)核苷酸从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端的缺失;其中该子 序列编码具有α-淀粉酶活性的片段。
变体:术语“变体”意指相对于SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的“亲 本”α-淀粉酶的位置,在一个或多个(例如,若干个)位置包含突变(即, 取代、插入、和/或缺失)的具有α-淀粉酶活性的多肽。取代意指占据一个 位置的氨基酸由不同的氨基酸代替;缺失意指去除占据一个位置的氨基酸; 并且插入意指在邻接并且紧随占据一个位置的氨基酸之后添加一个氨基酸。 本发明的变体具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少20%, 例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、 至少95%、或至少100%的α-淀粉酶活性。
野生型α-淀粉酶:术语“野生型”α-淀粉酶意指由自然界中发现的天然 存在的微生物(如细菌、酵母或丝状真菌)表达的α-淀粉酶。
变体命名规则
具有α-淀粉酶活性的本发明的多肽对应于衍生自芽孢杆菌属的α-淀粉 酶的变体(如在SEQ ID NO:1中显示)(其由诺维信公司(Novozymes A/S), 在商品名StainzymePlusTM下销售)。
本发明多肽中的变体(即突变的氨基酸)通过参考SEQ ID NO:2(其对 应于枯草芽孢杆菌的成熟蛋白AA560)的氨基酸编号来定义。以下以粗体、 下划线显示了相对于SEQ IDNO:1的氨基酸序列差异。
相应地,SEQ ID NO:2中的氨基酸位置1至182对应于SEQ ID NO:1中 的相同编号,SEQ ID NO:2的氨基酸位置183和184在SEQ ID NO:1中不 存在,并且SEQ ID NO:2的氨基酸位置185至485分别对应于SEQ ID NO:1 的位置183至483。SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的比对可以在图1中看 到。
因此,出于本发明的目的,使用在SEQ ID NO:2中披露的成熟多肽来 确定另一种α-淀粉酶多肽中的对应氨基酸残基。将另一种α-淀粉酶的氨基酸 序列与SEQ ID NO:2中披露的成熟多肽进行比对,并且基于该比对,使用 如在EMBOSS包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件,Rice等人, 2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本) 的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch, 1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定与SEQ ID NO:2 中所披露的成熟多肽中的任何氨基酸残基相对应的氨基酸位置编号。使用的 参数是缺口开放罚分10、缺口扩展罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62 的EMBOSS版本)取代矩阵。
可以通过使用若干计算机程序,使用其对应默认参数比对多个多肽序列 来确定在另一种α-淀粉酶中的对应氨基酸残基的鉴定,所述计算机程序包括 但不限于MUSCLE(通过对数预期的多序列比较;版本3.5或更新版本; Edgar,2004,Nucleic Acids Research[核酸研究]32:1792-1797),MAFFT(版 本6.857或更新版本;Katoh和Kuma,2002,NucleicAcids Research[核酸研 究]30:3059-3066;Katoh等人,2005,Nucleic Acids Research[核酸研究]33: 511-518;Katoh和Toh,2007,Bioinformatics[生物信息学]23:372-374;Katoh 等人,2009,Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]537:39-64;Katoh和Toh,2010,Bioinformatics生物信息学26:1899-1900)以及采用ClustalW (1.83或更新版本;Thompson等人,1994,Nucleic Acids Research[核酸研 究]22:4673-4680)的EMBOSSEMMA。
当其他α-淀粉酶与SEQ ID NO:2的成熟多肽相背离使得传统的基于序 列的比较方法不能检测其相互关系时(Lindahl和Elofsson,2000,J.Mol.Biol. [分子生物学杂志]295:613-615),可以应用其他成对序列比较算法。在基于 序列的搜索中较高的敏感度可使用搜索程序来获得,这些搜索程序采用多肽 家族的概率表现(谱)来搜索数据库。例如,PSI-BLAST程序通过迭代数据 库搜索过程来产生多个谱,并且能够检测远距离同源物(Atschul等人,1997, Nucleic Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402)。如果多肽的家族或超家族具有 在蛋白结构数据库中的一个或多个代表,甚至可以实现更高的敏感度。程序如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]287: 797-815;McGuffin和Jones,2003,Bioinformatics[生物信息学]19:874-881) 利用来自多种来源(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱和溶剂化势) 的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地,Gough等 人,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]313:903-919的方法可以用于比对 未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型。这些比对进而可以 用于产生多肽的同源性模型,并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评 估此类模型的准确度。
对于已知结构的蛋白质,若干工具和资源可用于检索并产生结构比对。 例如,蛋白质的SCOP超家族已经在结构上进行比对,并且那些比对是可访 问且可下载的。可以使用多种算法例如距离比对矩阵(Holm和Sander,1998, Proteins[蛋白质]33:88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne,1998,Protein Engineering[蛋白质工程]11:739-747)比对两种或更多种蛋白质结构,并且 这些算法的实施可以另外用于查询具有感兴趣结构的结构数据库,以便发现 可能的结构同源物(例如,Holm和Park,2000,Bioinformatics[生物信息学]16: 566-567)。
在描述本发明的α-淀粉酶变体中,以下所述的命名法适于引用方便。采 用了已接受的IUPAC单字母和三字母的氨基酸缩写。
取代:对于氨基酸取代,使用以下命名法:原始氨基酸、位置、被取代 的氨基酸。因此,将在位置226处的苏氨酸被丙氨酸取代表示为“Thr226Ala” 或者“T226A”。多个突变由加号(“+”)分开,例如“Gly205Arg+Ser411Phe” 或“G205R+S411F”代表分别在位置205和位置411处甘氨酸(G)被精氨 酸(R)取代,并且丝氨酸(S)被苯丙氨酸(F)取代。
缺失:对于氨基酸缺失,使用以下命名法:原始氨基酸、位置、*。因 此,将在位置195处的甘氨酸的缺失表示为“Gly195*”或“G195*”。多个 缺失由加号(“+”)分开,例如,“Gly195*+Ser411*”或“G195*+S411*”。
插入:对于氨基酸插入,使用以下命名法:原始氨基酸、位置、原始氨 基酸、插入的氨基酸。因此,在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸被表示 为“Gly195GlyLys”或者“G195GK”。多个氨基酸的插入被表示为[原始氨 基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸#1、插入的氨基酸#2;等]。例如, 在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸被表示为“Gly195GlyLysAla”或“G195GKA”。
在此类情况下,通过将小写字母添加至在所插入的氨基酸残基之前的氨 基酸残基的位置编号中来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以 上实例中,该序列因此将是:
<u>亲本:</u> | <u>变体:</u> |
195 | 195 195a 195b |
G | G-K-A |
多种改变:包含多种改变的变体由加号(“+”)分开,例如,“Arg170Tyr +Gly195Glu”或“R170Y+G195E”表示在位置170和位置195处的精氨酸 和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。
不同改变:在可以在某一位置引入不同的改变的情况下,这些不同的改 变由逗号分开,例如“Arg170Tyr,Glu”表示在位置170处的精氨酸被酪氨酸 或谷氨酸取代。因此,“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”指定以下变体:
“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+ Arg170Gly”、和“Tyr167Ala+Arg170Ala”。
具体实施方式
具有α-淀粉酶活性的多肽
本发明涉及变体α-淀粉酶多肽,该变体α-淀粉酶多肽在SEQ ID NO:1 的成熟多肽的氨基酸序列内的一个或多个(例如,若干个)位置处包含突变, 其中与SEQ ID NO:1的多肽相比,该变体展现增强的洗涤性能;所述变体 氨基酸序列包含在氨基酸位置202和/或186处的突变,其中根据SEQ ID NO: 2进行编号;并且与SEQ ID NO:1或2具有至少80%,例如至少85%、至 少90%、或至少95%的序列同一性。
亲本α-淀粉酶的氨基酸序列显示如下:
在一个实施例中,该多肽是SEQ ID NO:1的变体氨基酸序列,其中该 多肽具有α-淀粉酶活性并且与SEQ ID NO:1的亲本多肽相比展现出改进的 洗涤性能,该变体氨基酸序列包含对应于位置202和/或186(其中根据SEQ ID NO:2进行编号)的氨基酸位置的突变,其条件是位置186的突变不是 A186G,并且其中变体与SEQ ID No:1或2具有至少80%的序列同一性。
在一个实施例中,多肽是变体氨基酸序列,其包含在氨基酸位置202处 (其中根据SEQ ID NO:2进行编号)的取代,例如L202M。在一个实施例 中,多肽是由取代L202M组成的变体氨基酸序列,其中根据SEQ ID NO:2 进行编号。在另一个实施例中,多肽变体不包含在位置202但在至少位置186 处的突变,其不是取代A186D,以及潜在地是其他位置,其中根据SEQ ID NO: 2进行编号。
在另一个实施例中,多肽是变体氨基酸序列,其包含在氨基酸位置186 处(其中根据SEQ ID NO:2进行编号)的取代,例如A186D。
本发明的多肽代表SEQ ID NO:1的亲本α淀粉酶的变体,该变体在家 庭和/或工业清洗过程(如衣物清洗和餐具洗涤)中展现增强的洗涤性能。可 以使用本领域熟知的方法来确定洗涤性能,如使用自动餐具洗涤(ADW) (参见实例5)或自动机械应力测定(AMSA)(参见实例6)。
在一个实施例中,多肽在高温洗涤过程中展现增强的洗涤性能,例如其 中温度是至少40℃,例如至少45℃、以及例如至少50℃。
在一个实施例中,使用经淀粉染色的三聚氰胺瓷砖在自动餐具洗涤 (ADW)测定中评估增强的洗涤性能。用于确定本发明多肽的这种改进的 洗涤性能的示例性洗涤条件包括:
(a)ADW洗涤剂,在40℃,以及10min的洗涤循环;和
(b)ADW洗涤剂,在50℃以及20min的洗涤循环;
其中多肽以0.03或0.24mg/L的浓度存在
并且其中该ADW洗涤剂包含漂白催化剂、一种或多种非离子型表面活 性剂、和磺化的聚合物。
除了增强的洗涤性能之外,本领域技术人员将会理解相对于SEQ ID NO: 1的亲本α淀粉酶,本发明的多肽还可以展现一种或多种以下特性的改进:
(i)底物特异性;
(ii)底物结合;
(iii)比活性;
(iv)热稳定性
(v)pH稳定性曲线;
(vi)Ca2+依赖性;
(vii)氧化稳定性;
(viii)增加的/减少的pI;和/或
(ix)对表面活性剂的敏感性。
用于确定蛋白质的以上特性的测定描述于WO 2006/002643、WO 2001/066712和EP2 264 460A中。
本发明的多肽可以比SEQ ID NO:1的亲本α-淀粉酶更长或更短。因此, 该多肽的长度可以是1000个或更少氨基酸,例如900个、800个、700个、 600个、500个、400个、300个、200个、175个、150个、125个、100个 或更少氨基酸。在一个实施例中,该多肽的长度是在400个和600个氨基酸 之间,例如长度在450个和500个之间、在460个和500个之间、或在470 个和490个氨基酸之间。
本发明的变体多肽在相对于SEQ ID NO:1的‘亲本’α-淀粉酶的一个或 多个氨基酸位置处包含突变(即,取代、插入、和/或缺失)。
这些氨基酸改变可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白质的折叠 和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地为1-30个氨基酸的小缺失;小 的氨基-末端或羧基末端延伸,例如氨基末端的甲硫氨酸残基;多至20-25个 残基的小接头肽;或小的延伸,其通过改变净电荷或另一功能(例如聚组氨 酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例是在下组之内:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、 酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏 水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色 氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。 一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和 R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],学术出版社(AcademicPress),纽 约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、 Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
可替代地,这些氨基酸改变具有这样一种性质:使得多肽的物理化学性 质发生改变。例如,氨基酸改变可以提高多肽的热稳定性、改变底物特异性、 改变最适pH等。
可以根据本领域中已知的程序,例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变 (Cunningham和Wells,1989,Science[科学],244:1081-1085)来鉴定多肽中 的必需氨基酸。在后一种技术中,在分子中的每个残基处引入单丙氨酸突变, 并测试所得的突变分子的α-淀粉酶活性以鉴定对分子活性关键的氨基酸残 基。还参见,Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。 酶或其他生物学相互作用的活性位点还可以通过对结构的物理分析来确定, 如通过这样的技术确定:如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记,连 同对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见,例如,de Vos等人,1992,Science [科学]255:306-312;Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224: 899-904;Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309: 59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
在一个实施例中,本发明的多肽是SEQ ID NO:1的α-淀粉酶的变体, 该变体在对应于位置51、186、202、246和334的一个或多个位置处具有突 变(例如取代、缺失、和/或插入),其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸 序列进行编号。因此,本发明的变体在对应于位置202和/或186的至少一个 位置包含突变,其中根据SEQ ID NO:2进行编号并且可以进一步包含在位 置51、246和334中的一个或多个处的突变,并且其中在变体在位置202处 包含突变的情况下,则它还可以在位置186处(以及潜在地还在任何其他位 置)包含突变,反之亦然。即,当变体在位置186处包含突变时,则它还可 以在位置202处(以及还潜在地在任何其他位置)包含突变。应当理解,当 根据本发明的变体在其他位置包含突变时,其不一定在位置202和位置186 处包含突变。
在一个具体实施例中,本发明的多肽具有与SEQ ID NO:1或2的氨基 酸序列至少80%,例如至少85%、例如至少90%、例如至少92%、例如至 少93%、例如至少94%、例如至少95%、例如至少96%、例如至少97%、 例如至少98%、例如至少99%,但低于100%的序列同一性。
因此,相对于SEQ ID NO:2的氨基酸序列,该多肽可以包含以下取代 中的一个或多个:A51T、A186D、L202M、T246(I/L/V)和S334T。
在一个实施例中,当在包含漂白剂的洗涤剂的AMSA中,并且在40℃ 进行10min评估多肽时,该多肽展现对应于至少1.2的改进因子(IF)的增 强的洗涤性能(例如,参见实例6)。合适的多肽可以是SEQ ID NO:1的变 体,该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含突变:51、186、202、 246和334,其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列进行氨基酸位置的 编号。例如,该多肽可以选自下组,该组由以下组成:具有以下突变的SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多肽:A51T、A186D、L202M、T246(I/L/V)和 S334T,及其具有α淀粉酶活性的其片段,其中根据SEQ ID NO:2中所示的 氨基酸序列进行氨基酸位置的编号。
本领域技术人员将会理解,本发明多肽的不同实例将与SEQ ID NO:1的 序列具有不同程度的氨基酸序列同一性。因此,该多肽可以包含氨基酸序列 或由其组成,该氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少85%序列同一性,例 如与SEQ ID NO:1具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少 98%、或至少99%的序列同一性。在一个实施例中,相对于SEQ ID NO:1的 氨基酸序列,在该多肽内的变体的数量是在1个和20个之间,例如,在1 个和10个突变之间或在1个和5个突变之间,如1个、2个、3个、4个、5 个、6个、7个、8个、9个或10个突变。
在本发明的多肽的一个具体的子集中,该多肽由具有选自下组的突变的 SEQ IDNO:1的氨基酸序列、或其具有α淀粉酶活性的片段组成,该组由以 下组成:A51T+A186D、A51T+L202M、A51T+T246I、A51T+S334T、 A186D+L202M、A186D+T246I、A186D+S334T、L202M+T246I、 L202M+S334T、T246I+S334T、A51T+A186D+L202M、A51T+A186D+T246I、 A51T+A186D+S334T、A51T+L202M+T246I、A51T+L202M+S334T、 A51T+T246I+S334T、A186D+L202M+T246I、A186D+L202M+S334T、 A186D+T246I+S334T、L202M+T246I+S334T、A51T+A186D+L202M+T246I、 A51T+A186D+L202M+S334T、A51T+A186D+T246I+S334T、 A51T+L202M+T246I+S334T、A186D+L202M+T246I+S334T、和 A51T+A186D+L202M+T246I+S334T。
例如,该多肽可以包含具有选自下组的突变的SEQ ID NO:1的氨基酸 序列、或由其组成,该组由以下组成:
(a)L202M;
(b)A186D;
(c)L202M+T246I+S334T;
(d)L202M+T246L+S334T;
(e)A51T+L202M+T246I+S334T;
(f)L202M+T246V;和
(g)L202M+T246V+S334T;
其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列进行氨基酸位置的编号。
本发明的一个示例性多肽由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成(其中相 对于SEQ IDNO:1的突变氨基酸标有下划线)。
本发明的多肽的制备
可以使用本领域已知的任何诱变程序来制备本发明的多肽,例如定点诱 变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。
定点诱变是在编码亲本α淀粉酶的多核苷酸中的一个或多个限定位点处 引入一个或多个(例如,若干个)突变的技术。
通过涉及使用含有所希望的突变的寡核苷酸引物的PCR可以体外实现 定点诱变。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变,该盒式诱变涉及由限制 酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处切割并且随后将包含突变 的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常,消化该质粒与该寡核苷酸的限制酶是 相同的,从而允许该质粒的粘性末端以及插入片段彼此连接。参见例如, Scherer和Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]76: 4949-4955;和Barton等人,1990,Nucleic Acids Res.[核酸研究]18:7349-4966。
还可以通过本领域已知的方法在体内实现定点诱变。参见,例如,美国 专利申请公开号2004/0171154;Storici等人,2001,Nature Biotechnol.[自然 生物技术]19:773-776;Kren等人,1998,Nat.Med.[自然医学]4:285-290; 以及Calissano和Macino,1996,Fungal Genet.Newslett.[真菌遗传学通讯]43: 15-16。
任何定点诱变程序可用于本发明。存在许多可以用于制备变体的可商购 的试剂盒。
合成基因构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码感兴趣的多肽。 基因合成可以利用多种技术来进行,例如由Tian等人(2004,Nature[自然] 432:1050-1054)所述的基于多路微芯片的技术、以及在光可编程的微流芯 片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行一个相关的筛选程序可 以做出单一或多种氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试,这些相关的 筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57; Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86: 2152-2156;WO 95/17413;或WO 95/22625。其他可以使用的方法包括易错 PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30: 10832-10837;美国专利号5,223,409;WO 92/06204),以及区域定向诱变 (Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145;Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量自动化筛选方法组合以检测由宿主细胞表 达的克隆的诱变多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然 生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分 子,并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许迅速确定多肽中个体 氨基酸残基的重要性。
通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的 多方面来实现半合成基因的构建。半合成构建典型地是利用合成的多核苷酸 片段的过程结合PCR技术。因此,基因的限定区域可以从头合成,而其他 区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增,然而还有其他区域可以进行易错 PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的多肽的多核苷酸。因此,本发明涉及编码变 体多肽的多核苷酸,该变体多肽包含在氨基酸位置202和/或186处(其中根 据SEQ ID NO:2进行编号)的突变,并且与SEQ ID NO:1或2具有至少80%, 例如至少85%、至少90%的序列同一性。
核酸构建体
本发明还涉及包含编码本发明的变体多肽的、可操作地连接至一个或多 个控制序列上的多核苷酸的核酸构建体,该一个或多个控制序列在与控制序 列相容的条件下指导编码序列在适合的宿主细胞中的表达。因此,本发明涉 及包含编码变体多肽的多核苷酸的核酸构建体,该变体多肽包含在氨基酸位 置202和/或186处的突变,其中根据SEQ IDNO:2进行编号,并且与SEQ ID NO:1或2具有至少80%,例如至少85%、至少90%的序列同一性,该多 核苷酸与一种或多种控制序列可操作地连接,该控制序列在与控制序列相容 的条件下指导编码序列在合适的宿主细胞中的表达。
可以按多种方式来操纵多核苷酸以提供变体的表达。取决于表达载体, 在其插入载体以前操纵多核苷酸可以是令人希望的或必需的。用于利用重组 DNA方法修饰多核苷酸的技术在本领域是众所周知的。
控制序列可以是启动子,即由宿主细胞识别用于表达该多核苷酸的多核 苷酸。启动子包含介导变体的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细 胞中显示出转录活性的任何多核苷酸,包括突变型、截短型和杂合型启动子, 并且可以是从编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获 得。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的合适启动子的 实例是从以下基因中获得的启动子:解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、 地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、 嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖 酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA 基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13: 97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene [基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺 酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学 院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad. Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述在Gilbert等人, 1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Useful proteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”;和在Sambrook等人, 1989,见上文中。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
用于指导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中的转录的合适启 动子的实例是从以下的基因获得的启动子:构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性 α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡糖淀粉酶(glaA)、 米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖镰孢 胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、 镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根 毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉 纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、 里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖 酶IV、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶 II、里氏木霉β-木糖苷酶,以及NA2-tpi启动子(一种修饰的启动子,其来 自曲霉属中性α-淀粉酶基因,其中未翻译的前导子由曲霉属丙糖磷酸异构酶 基因的未翻译的前导子替代;非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基 因的修饰的启动子,其中未翻译的前导子已经被来自构巢曲霉或米曲霉丙糖 磷酸异构酶基因的未翻译的前导子替代);及其突变型、截短型及杂合型启 动子。
在酵母宿主中,有用的启动子从以下的基因获得:酿酒酵母烯醇酶 (ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷 酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵 母金属硫蛋白(CUP1)、以及酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。Romanos等人, 1992,Yeast[酵母]8:423-488描述了酵母宿主细胞的其他有用的启动子。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。终止子序列 被可操作地连接至编码变体的多核苷酸的3’-末端。可以使用在宿主细胞中 具有功能的任何终止子。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得:克劳氏芽孢杆菌碱性蛋 白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
丝状真菌宿主细胞的优选终止子是从以下的基因中获得的:构巢曲霉邻 氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA 淀粉酶以及尖镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得:酿酒酵母烯醇化 酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)、以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。由 Romanos等人,1992(见上文)描述了酵母宿主细胞的其他有用终止子。
控制序列还可为启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区 域,其增加所述基因的表达。
适合的mRNA稳定子区域的实例是从以下获得的:苏云金芽孢杆菌cryIIIABacillus thuringiensis cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌 SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177: 3465-3471)。
该控制序列也可以是前导子,即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非 翻译区域。前导子序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的5'-末端。在 宿主细胞中起作用的任何前导子都可以使用。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列是从米曲霉TAKA淀粉酶和构 巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得的。
用于酵母宿主细胞的合适的前导子从以下的基因获得:酿酒酵母烯醇酶 (ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子、以及酿酒酵母 醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
该控制序列还可以是一种多腺苷酸化序列,即被可操作地连接至该变体 编码序列的3'-末端并且当转录时由宿主细胞识别成将多腺苷酸残基添加到 所转录的mRNA上的信号的序列。可以使用在宿主细胞中起作用的任何多 腺苷酸化序列。
丝状真菌宿主细胞的优选多聚腺苷酸化从针对以下的基因获得:构巢曲 霉邻氨基苯甲酸酯合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉-α葡糖苷酶、米曲霉 TAKA淀粉酶、和尖孢镰刀菌胰蛋白酶样蛋白酶。
对于酵母宿主细胞有用的聚腺苷酸化序列在Guo和Sherman,1995, Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990中得以描述。
控制序列还可以是信号肽编码区,其编码与变体的N-末端连接的信号 肽,并且指导变体进入细胞的分泌通路。多核苷酸的编码序列的5’-端可以 固有地含有信号肽编码序列,该信号肽编码序列在翻译阅读框中与编码变体 的编码序列的区段天然地连接在一起。可替代地,编码序列的5’-端可以含 有对于编码序列是外源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不含有信号肽 编码序列的情况下,可能需要外源信号肽编码序列。可替代地,外源信号肽 编码序列可以简单地替代天然信号肽编码序列,以便增强变体的分泌。然而, 可以使用指导表达的变体进入宿主细胞的分泌通路的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下的基因获得的信号 肽编码序列:芽孢杆菌属NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草 杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热 脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA。另外 的信号肽由Simonen和Palva,1993,MicrobiologicalReviews[微生物评论]57: 109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获 得的信号肽编码序列:黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA 淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉 脂肪酶和米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化 酶的基因获得。Romanos等人(1992,见上文)描述了其他有用的信号肽编 码序列。
所述控制序列还可以是编码位于变体的N-末端的前肽的前肽编码序列。 所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为 酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化 切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下酶的基 因获得:枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、 嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α- 因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下,前肽序列定位成紧邻变 体的N-末端并且信号肽序列定位成紧邻前肽序列的N-末端。
还令人希望的可以是添加相对于宿主细胞的生长来调节变体的表达的 调节序列。调节系统的实例是响应于化学或物理刺激而引起基因的表达开启 或关闭的那些,包括调控化合物的存在。原核系统中的调节系统包括lac、tac 和trp操纵子系统。在酵母中,可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状 真菌中,可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKA α-淀粉酶启动子、 以及米曲霉葡糖淀粉酶启动子。调控序列的其他实例是允许基因扩增的那 些。在真核系统中,这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还 原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下,编码该变体 的多核苷酸将与该调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含编码本发明的变体多肽的多核苷酸、启动子以及转录 和翻译终止信号的重组表达载体。因此,本发明涉及重组表达载体,该重组 表达载体包含编码变体多肽的多核苷酸(该变体多肽在氨基酸位置202和/ 或186处包含突变,其中根据SEQ IDNO:2进行编号,并且与SEQ ID NO: 1或2具有至少80%的序列同一性)、启动子、以及转录和翻译终止信号。
各种核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体,所述重组 表达载体可以包括一个或多个合宜的限制位点以允许在这样的位点处插入 或取代编码变体的多核苷酸。可替代地,可以通过将多核苷酸或包含该多核 苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中来表达该多核苷酸。在产生表 达载体时,编码序列位于载体中,这样使得编码序列与用于表达的适当控制 序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可方便地经受重组DNA程序并且可引起多核苷酸 表达的任何载体(例如,质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与 待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是线状或闭合的环状质粒。
载体可以是自主复制载体,即作为染色体外实体存在的载体,其复制独 立于染色体复制,例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体 可以含有用于确保自我复制的任何装置。可替代地,载体可以是这样的载体, 当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个 染色体一起复制。此外,可使用单一载体或质粒或两个或更多个载体或质粒 (这些载体或质粒一起含有待引入到宿主细胞的基因组中的总DNA)或转 座子。
载体优选地含有允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞 的一个或多个选择性标记。选择性标记是基因,其产物提供了杀生物剂抗性 或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养性等。
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因,或赋 予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素或四 环素抗性)的标记。用于酵母宿主细胞的适合的标记包括但不限于:ADE2、 HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中 使用的选择性标记包括但不限于amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基 转移酶)、bar(草胺膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝 酸还原酶)、pyrG(乳清苷-5’-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)、以及 trpC(邻氨基苯甲酸合酶),连同其等效物。优选在曲霉属细胞中使用的是 构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌bar基因。
载体优选含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独 立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到宿主细胞基因组中,该载体可以依靠编码所述变体的多核苷 酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的载体的任何其他 元件。可替代地,载体可以含有用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基 因组的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置的另外的多核苷酸。为了 增加在精确位置整合的可能性,整合的元件应包含足够数量的核酸,如100 至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对, 其与相应的靶序列具有高度的序列一致性以增强同源重组的可能性。整合元 件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外,整合元件可 以是非编码多核苷酸或编码多核苷酸。另一个方面,载体可以通过非同源重 组整合入宿主细胞的基因组中。
对于自主复制,载体可以进一步包含使载体能够在所讨论的宿主细胞中 自主地进行复制的复制起点。复制起点可为在细胞中有功能的介导自主复制 的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体 能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是容许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、 pACYC177和pACYC184的复制起点,以及容许在芽孢杆菌属中复制的质 粒pUB110、pE194、pTA1060和pAMβ1。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、 ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
用于丝状真菌细胞中的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人, 1991,Gene[基因]98:61-67;Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res[核酸研 究]15:9163-9175;WO 00/24883)。可根据WO 00/24883中披露的方法完成 AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可以将多于一个拷贝的本发明的多核苷酸插入宿主细胞中以增加变体 的产生。可以通过将序列的至少一个另外的拷贝整合入宿主细胞基因组中或 通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因来获得多核苷酸的 增加的拷贝数目,其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择 含有选择性标记基因的经扩增的拷贝的细胞、以及由此该多核苷酸的另外的 拷贝。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领 域的普通技术人员熟知的(参见例如,Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞,这些重组宿主细胞包含编码本发明的变体 多肽的、可操作地连接至一个或多个控制序列的多核苷酸,该一个或多个控 制序列指导本发明的变体多肽的产生。因此,本发明涉及重组宿主细胞,该 重组宿主细胞包含编码变体多肽的多核苷酸,该变体多肽在氨基酸位置202 和/或186处(其中根据SEQ ID NO:2进行编号)包含突变,并且与SEQ ID NO:1或2具有至少80%的序列同一性,该多核苷酸可操作地连接至指导变 体多肽产生的一种或多种控制序列。
将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中,这样使得所述构建体 或载体被维持作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体,如早前所 述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制过程中发生的突变而与亲本细胞不同的 亲本细胞的任何后代。宿主细胞的选择在很大程度上将取决于编码变体的基 因及其来源。
宿主细胞可以是在变体的重组产生中有用的任何细胞,例如原核细胞或 真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细 菌包括但不限于芽孢杆菌属(Bacillus)、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属 (Enterococcus)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、 乳球菌属(Lactococcus)、海洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属 (Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)和链霉菌属(Streptomyces)。 革兰氏阴性细菌包括但不限于:弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌(E. coli)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞 菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、以及脲原体属(Ureaplasma)。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞,包括但不限于嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽 孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆 菌(Bacillusclausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚硬芽孢杆菌 (Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)以及苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis)细胞。
细菌宿主细胞还可为任何链球菌属细胞,包括但不限于:似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链 球菌(Streptococcus uberis)和马链球菌(Streptococcus equi)兽瘟 (Zooepidemicus)亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞,包括但不限于:不产色链霉 菌、除虫链霉菌、天蓝色链霉菌、灰色链霉菌、以及变铅青链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现:原生质体转化(参 见例如,Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168: 111-115)、感受态细胞转化(参见例如,Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol. [细菌学杂志]81:823-829,或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol. [分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如,Shigekawa和Dower,1988, Biotechniques[生物技术]6:742-751)或接合(参见例如,Koehler和Thorne, 1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞 中可以通过以下来实现:原生质体转化(参见例如,Hanahan,1983,J.Mol.Biol. [分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如,Dower等人,1988,Nucleic Acids Res.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中 可以通过以下来实现:原生质体转化、电穿孔(参见例如,Gong等人,2004, Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参 见例如,Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585) 或转导(参见例如,Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家 科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下 来实现:电穿孔(参见例如,Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物 学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如,Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。可通过如下方法实现 将DNA引入到链球菌属细胞:例如天然感受态(natural competence)(参见, 例如,Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、 原生质体转化(参见,例如,Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68: 189-207)、电穿孔(参见,例如,Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol. [应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见,例如,Clewell,1981, Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而,可以使用本领域已知的 将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核生物,如植物、或真菌细胞。
宿主细胞可为真菌细胞。如在此使用的“真菌”包括子囊菌门 (Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)、和 接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌 (如由Hawksworth等人所定义的,在:Ainsworth andBisby's Dictionary of The Fungi[Ainsworth和Bisby的真菌大词典],第8版,1995,国际CAB,University Press[大学出版社],剑桥,英国)。
真菌宿主细胞可为酵母细胞。如在此所用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可能在将来变化,出于本发明 的目的,酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性] (Skinner、Passmore和Davenport编辑,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series[应用细菌学学会专题论文集],1980年第9期)所描述那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属(Candida)细胞、汉逊酵母属 (Hansenula)细胞、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)细胞、毕赤酵母属(Pichia) 细胞、酵母菌属(Saccharomyces)细胞、裂殖酵母(Schizosaccharomyces) 或耶罗维亚酵母属(Yarrowia)细胞、例如乳酸克鲁弗酵母(Kluyveromyces lactis)细胞、卡尔酵母(Saccharomycescarlsbergensis)细胞、酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)细胞、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)细 胞、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)细胞、克鲁弗酵母 (Saccharomyces kluyveri)细胞、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)细胞、卵形酵母(Saccharomyces oviformis)细胞或解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota) 和卵菌门(Oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995, 见上文)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳多糖、 甘露聚糖、以及其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延长, 而碳分解代谢是专性需氧的。相反,酵母(例如酿酒酵母)的营养生长是通 过单细胞菌体的出芽(budding),而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属(Coriolus)、 隐球菌属、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛 霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、 射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属、篮状菌 属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属(Trametes)或木霉属细 胞。
例如,丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、 构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌 (Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟 蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌 (Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌 (Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、 毡金孢子菌、昆士兰金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢 子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、 毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、禾谷镰孢、库威镰孢、大刀镰 孢、禾谷镰孢菌、禾赤镰孢(Fusariumgraminum)、异孢镰孢、合欢木镰孢、 尖孢镰孢菌、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢 菌、硫色镰孢菌、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢平革菌 (Phanerochaetechrysosporium)、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳 (Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色 栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、 或绿色木霉细胞。
真菌细胞可以通过下述过程转化,所述过程涉及原生质体形成、原生质 体的转化、以及以本身已知的方式的细胞壁的再生。用于转化曲霉属和木霉 属宿主细胞的合适程序描述于以下文献中:EP 238023,Yelton等人,1984, Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及 Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化 镰刀菌属物种的适合方法在Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156 和WO 96/00787中描述。可使用由如以下文献描述的程序转化酵母:Becker 和Guarente,于Abelson,J.N.和Simon,M.I.编,Guide to Yeast Genetics and MolecularBiology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology [酶学方法],第194卷,第182-187页,学术出版社有限公司(Academic Press, Inc.),纽约;Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163;以及Hinnen 等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院刊]75:1920。
产生方法
本发明还涉及产生变体多肽的方法,这些方法包括:(a)在适合于变体 多肽的表达的条件下,培养本发明的宿主细胞;和(b)回收该变体多肽。因 此,本发明涉及产生变体多肽的方法,该变体多肽在氨基酸位置202和/或 186处(其中根据SEQ ID NO:2进行编号)包含突变,并且与SEQ ID NO:1 或2具有至少80%的序列同一性,该方法包括(a)在适合于表达变体多肽的 条件下培养本发明的宿主细胞;和(b)回收该变体多肽。
使用本领域已知的方法在适合于产生变体的营养培养基中培养宿主细 胞。例如,可以通过摇瓶培养,或者在适合的培养基中并在允许变体表达和 /或分离的条件下在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连 续发酵、分批发酵、分批给料发酵或固态发酵)来培养细胞。培养是使用本 领域已知的程序,在合适营养培养基中发生,该培养基包含碳和氮来源及无 机盐。适合的培养基可以从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如, 在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果变体被分泌到营养培养基中,则变体可以直接从培养基中回收。 如果变体没有分泌,则它可以从细胞裂解液中回收。
变体可以使用本领域已知的方法检测。适合的检测方法包括但不限于: 特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如,可以使用酶测定 来确定变体的α-淀粉酶活性(参见实例)。
变体可以使用本领域已知的方法回收。例如,可以通过多种常规程序从 营养培养基中回收变体,所述常规程序包括但不限于收集、离心、过滤、提 取、喷雾干燥、蒸发或沉淀。
可以通过本领域已知的多种程序来纯化变体以获得基本上纯的变体,所 述程序包括但不限于色谱法(例如,离子交换色谱、亲和色谱、疏水作用色 谱、色谱聚焦和尺寸排阻色谱)、电泳程序(例如,制备型等电点聚焦)、差 别溶解度(例如,硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见例如,Protein Purification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCHPublishers[VCH出版 社],纽约,1989)。
在可替代的方面,没有回收变体,而是将表达变体的本发明的宿主细胞 用作变体的来源。
组合物
可以将本发明的α-淀粉酶多肽添加至洗涤剂组合物中并且因此使其成 为洗涤剂组合物的组分。因此,本发明涉及包含具有α-淀粉酶活性的并且与 SEQ ID NO:1的亲本多肽相比展现出改进的洗涤性能的多肽的组合物,该变 体多肽在氨基酸位置202和/或186处(其中根据SEQ ID NO:2进行编号) 包含突变并且与SEQ ID No:1或2具有至少80%的序列同一性。
因此,本发明的另外的方面提供洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包含本 发明的多肽和表面活性剂(如阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离 子表面活性剂和/或两性离子表面活性剂)。还提供了用于制备此类洗涤剂组 合物的浓缩物或添加剂,该浓缩物或添加剂包含本发明的多肽以及任选地表 面活性剂。
如以下详细讨论的,该洗涤剂组合物可进一步包含选自下组的一种或多 种另外的组分,该组由以下组成:氧化剂、漂白活化剂、填充剂、助洗剂、 缓冲剂、结构剂、螯合剂、荧光增白剂、消泡剂、酶、香料、抗再沉积剂、 皮肤调理剂、柔软剂、乳化剂、和着色剂。
在一个实施例中,该组合物是液体或粉末衣物洗涤剂组合物。
在另外的实施例中,该组合物是液体或粉末自动餐具洗涤(ADW)洗 涤剂组合物。
例如,可以将本发明的洗涤剂组合物配制成手洗或机洗洗涤剂组合物, 包括适于预处理带有污渍的织物的洗衣用添加剂组合物和漂洗中添加的织 物软化剂组合物,或配制成用于在一般性的家居硬表面的清洁操作中使用的 洗涤剂组合物,或配制成在手或机洗碗操作中使用的洗涤剂组合物。
在具体的方面,本发明提供包含本发明的α-淀粉酶多肽的洗涤剂浓缩物 /添加剂。该洗涤剂浓缩物/添加剂、连同洗涤剂组合物可以包含一种或多种 其他酶,如蛋白酶、脂肪酶、过氧化物酶、另一种淀粉分解酶,例如另一种 α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、CGT酶和/或纤维素酶、甘露聚糖 酶(如MANNAWAYTM,来自诺维信公司(Novozymes),丹麦)、果胶酶、 果胶裂合酶、角质酶和/或漆酶。
一般来说,选定酶的特性应与选择的洗涤剂相容,(即,pH最适,与其 它酶和非酶成份等相容),且该酶应当以有效量存在。
蛋白酶:适合的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的那些。优选的是 微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。该蛋白酶可 以是丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶,优选碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白 酶。碱性蛋白酶的实例为枯草杆菌蛋白酶,特别是衍生自芽孢杆菌属的那些, 例如枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶309、 枯草杆菌蛋白酶147以及枯草杆菌蛋白酶168(在WO 89/06279中描述)。 胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如,猪或牛来源的)以及在WO 89/06270和WO 94/25583中描述的镰孢属蛋白酶。
有用的蛋白酶的实例是如WO 92/19729、WO 98/20115、WO 98/20116 和WO 98/34946所描述的变体,特别是在下述位置中的一个或多个处发生取 代的变体:27、36、57、76、87、97、101、104、120、123、167、170、194、 206、218、222、224、235、以及274。优选的可商购的蛋白酶包括 (SEQ ID NO:3)、和(来自(诺维信公司(Novozymes A/S))、 MAXACAL、PURAFECT (杰能科国际公司(Genencor InternationalInc.))。
脂肪酶:适合的脂肪酶包括细菌或真菌来源的那些脂肪酶。包括化学修 饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用脂肪酶的实例包括来自腐质霉属 (Humicola)(与嗜热丝孢菌属(Thermomyces)同义),例如来自如EP 258 068 和EP 305 216描述的疏棉状腐质霉(H.lanuginosa)(细毛嗜热霉(T. lanuginosus))或来自如WO 96/13580中描述的特异腐质霉(H.insolens)的 脂肪酶;假单胞菌属(Pseudomonas)脂肪酶,例如来自产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218 272)、洋葱 假单胞菌(P.cepacia)(EP 331 376)、施氏假单胞菌(P.stutzeri)(GB 1,372,034)、萤光假单胞菌(P.fluorescens)、假单胞菌属物种株系SD 705 (Pseudomonas sp.strain SD 705)(WO95/06720和WO 96/27002)、威斯康 星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012);芽孢杆菌属(Bacillus)脂 肪酶,例如来自枯草芽孢杆菌(B.subtilis)(Dartois等人,(1993),Biochemica et Biophysica Acta[生物化学与生物物理学报],1131:253-360),嗜热脂肪芽 孢杆菌(B.stearothermophilus)(JP 64/744992)或短小芽孢杆菌(B.pumilus) (WO91/16422)。脂肪酶变体的其他实例例如在WO 92/05249、WO 94/01541、EP 407 225、EP 260105、WO 95/35381、WO 96/00292、WO 95/30744、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/22615、WO 97/04079以及 WO 97/07202中描述的那些。
优选的可商购的脂肪酶包括LIPOLASE<TM>和LIPOLASE ULTRA<TM> (诺维信公司(Novozymes A/S))。
淀粉酶:适合的淀粉酶(α-和/或β-淀粉酶)包含细菌或真菌来源的那些。 包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆 菌属,例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获 得的α-淀粉酶。有用的α-淀粉酶的实例是在WO 94/02597、WO 94/18314、 WO 96/23873、以及WO 97/43424中描述的变体,尤其是在一个或多个以下 位置上具有取代的变体:15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408、 和444。可商购的α-淀粉酶是DURAMYL<TM>、LIQUEZYMETM、 TERMAMYL<TM>、NATALASE<TM>、FUNGAMYL<TM>和BAN<TM>(诺维信公司(Novozymes A/S))、Preferenz S100、Preferenz S110、Preferenz S1000 (SEQ IDNO:11)、Excellenz S110、Excellenz S1000、Excellenz S2000、 RAPIDASE<TM>和PURASTAR<TM>(来自杰能科国际公司(Genencor International Inc.))。
纤维素酶:适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰 的突变体或蛋白质工程化的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、 假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳属、枝顶孢霉属的纤维素酶,例如, 从在US 4,435,307、US 5,648,263、US5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中披露的特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖镰孢产生的真菌纤维素酶。 特别适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维 素酶的实例是在EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、 WO98/08940中描述的纤维素酶。其他实例为纤维素酶变体,例如在WO 94/07998、EP 0 531315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及PCT/DK98/00299中描述的那些。
可商购的纤维素酶包括和(诺维信公 司(Novozymes A/S))、和(杰能科国际 公司(Genencor International Inc.))和KAC-(花王株式会社(Kao Corporation))。
过氧化物酵/氧化酶:适合的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌 来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧 化物酶的实例包括来自鬼伞属(例如来自灰盖鬼伞)的过氧化物酶、及其变 体,如在WO 93/24618、WO 95/10602、以及WO 98/15257中描述的那些。 可商购的过氧化物酶包括(诺维信公司(Novozymes A/S))。
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加包含所有这 些酶的组合添加剂而将洗涤剂酶包括在洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添 加剂(即单独添加剂或组合添加剂)可配制为例如颗粒、液体、浆液等。优 选的洗涤剂添加剂配制品是颗粒,尤其是非尘颗粒;液体,尤其是稳定的液 体;或浆液。
非尘化的颗粒可以例如如在US 4,106,991和4,661,452中所披露而产生, 并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡状包衣材料的实例是具 有平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇,PEG);具 有从16个到50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚;具有从12个至20个碳 原子并且存在15个至80个环氧乙烷单位的乙氧基化脂肪族醇;脂肪醇;脂 肪酸;以及脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯、和甘油三酯。适用于通过流化床 技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例 如通过根据已确立的方法添加多元醇(例如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼 酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238 216中披露的方法制备。
本发明的洗涤剂组合物可以呈任何便利的形式,如棒状、片剂、粉、颗 粒、糊状或液体。液体洗涤剂可以是水性的,典型地包含至多70%的水和 0-30%的有机溶剂,或可以是非水性的。
所述洗涤剂组合物包括一种或多种表面活性剂,表面活性剂可以是非离 子型(包括半极性)和/或阴离子型和/或阳离子型和/或两性离子型。表面活性 剂典型地以按重量计0.1%至60%的水平存在。
当包含在其中时,洗涤剂通常将包含约1%至约40%的阴离子表面活性 剂,例如线性烷基苯磺酸盐、a-烯烃磺酸盐、烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)、 醇乙氧基硫酸盐、仲烷基磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基或烯基琥珀酸或 肥皂。
当包含在所述洗涤剂中时,洗涤剂通常包含从约0.2%到约40%的非离 子型表面活性剂,例如醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多苷、烷基 二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、多羟基 烷基脂肪酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(“葡糖酰胺”)。
该洗涤剂可以包含0-65%的洗涤剂助洗剂或络合剂,如沸石、二磷酸盐、 三磷酸盐、膦酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸、乙二胺四乙酸、二 乙二胺三氨基五乙酸、烷基或烯基琥珀酸、可溶性硅酸盐、或层状硅酸盐(例 如,来自赫斯特(Hoechst)的SKS-6)。
该洗涤剂可以包含一种或多种聚合物。实例为羧甲基纤维素、聚(乙烯 基-吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)、聚(乙 烯基咪唑)、聚羧酸酯(如聚丙烯酸酯)、马来酸/丙烯酸共聚物、以及甲基丙 烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。
洗涤剂可以含有漂白系统,其可以包含H2O2源,例如过硼酸或过碳酸, 其可以与形成过酸的漂白活化剂(例如四乙酰基乙二胺或壬酰氧基苯磺酸 盐)组合。可替代地,漂白系统可以包含过酸,例如酰胺、亚胺或砜类型的 过酸。
可以使用常规稳定剂稳定本发明的洗涤剂组合物的一种或多种酶,这些 常规稳定剂例如是多元醇,例如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼 酸衍生物,例如芳香族硼酸酯,或苯基硼酸衍生物,例如4-甲酰苯基硼酸, 并且可以如在例如WO 92/19709和WO92/19708中所描述配制该组合物。
该洗涤剂还可以包含其他的常规洗涤剂成分,像例如织物调理剂,这些 织物调理剂包括粘土、泡沫促进剂、泡沫抑制剂、防腐蚀剂、污垢悬浮剂、 抗污物再沉淀剂、染料、杀菌剂、光学增亮剂、水溶助长剂、晦暗抑制剂、 或香料。
目前期望在洗涤剂组合物中加入任何酶,特别是本发明的α淀粉酶多肽, 添加量相当于每升洗涤液添加0.01mg-100mg酶蛋白,优选每升洗涤液加 0.05mg-5mg酶蛋白,特别优选每升洗涤液加0.1mg-1mg酶蛋白。
另外,本发明的α淀粉酶多肽可以掺入WO 2006/002643(将其通过引 用结合在此)中所披露的洗涤剂配制品中。
本发明的餐具洗涤剂组合物的实例
可以将本发明的α-淀粉酶多肽用于包括以下的餐具洗涤剂组合物中:
(a)粉末自动餐具洗涤组合物
(b)粉末自动餐具洗涤组合物
(c)粉末自动餐具洗涤组合物
(d)粉末自动餐具洗涤组合物
(e)粉末自动餐具洗涤组合物
(f)具有清洗表面活性剂系统的粉末和液体餐具洗涤组合物
(g)非水性液体自动餐具洗涤组合物
(h)非水性液体餐具洗涤组合物
(i)触变的液体自动餐具洗涤组合物
(j)液体自动餐具洗涤组合物
(k)含有保护的漂白剂颗粒的液体自动餐具洗涤剂组合物
(l)如在(a)、(b)、(c)、(d)、(f)和(j)中描述的自动餐具洗涤组合物, 其中用过碳酸盐替换过硼酸盐。
(m)如在(a)至(f)中描述的自动餐具洗涤组合物,其另外地包含锰催 化剂。锰催化剂可以例如是以下中描述的化合物之一:"Efficient manganese catalysts for low-temperature bleaching[用于低温漂白的高效锰催化剂]", Nature[自然]369,1994,第637-639页。
用途
本发明还针对将本发明的α-淀粉酶多肽用于洗涤剂(特别是衣物洗涤剂 组合物和餐具洗涤剂组合物)中的方法。因此,本发明涉及使用具有α-淀粉 酶活性的并且与SEQID NO:1的亲本多肽相比展现出改进的洗涤性能的多 肽的方法,该多肽在氨基酸位置202和/或186处(其中根据SEQ ID NO:2 进行编号)包含突变并且与SEQ ID NO:1或2具有至少80%的序列同一性。
因此,本发明提供本发明的α-淀粉酶多肽或组合物在家庭或工业清洗过 程中的用途。
在一个实施例中,该用途是织物的清洗,例如衣物洗涤。
在另一个实施例中,该用途是陶瓷、塑料或玻璃材料的清洗,例如餐具 洗涤。
因此,本发明的α-淀粉酶多肽可用作洗涤、餐具洗涤和硬表面清洁洗涤 剂组合物(在家庭或工业环境中)的组分。
本发明的α-淀粉酶变体具有允许各种其他工业应用的宝贵特性。例如, 本发明的α-淀粉酶多肽可以用于淀粉过程,特别是淀粉转化,尤其是淀粉的 液化(参见,例如US 3,912,590、欧洲专利申请号252 730和63 909、WO 99/19467、和WO 96/28567,所有参考文献通过引用结合在此)。还涵盖用于 淀粉转化目的组合物,除了本发明的变体以外,这些组合物还可包含葡糖淀 粉酶、支链淀粉酶以及其他α-淀粉酶。
此外,本发明α-淀粉酶变体也特别适用于从淀粉或全谷粒中生产甜味剂 以及乙醇(参见,例如,美国专利号5,231,017,通过引用结合在此),如燃 料乙醇、饮用乙醇以及工业乙醇。
本发明的α-淀粉酶变体还用于纺织品、织物和服装的退浆(参见,例如 WO 95/21247、美国专利4,643,736、EP 119,920,通过引用结合在此)、啤酒 制造或酿造、纸浆和纸张生产。
淀粉转化
常规的淀粉转化过程(例如液化和糖化过程)例如在美国专利3,912,590 和欧洲专利公开号252,730和63,909中进行了描述,通过引用结合在此。
在一个实施例中,淀粉转化方法将淀粉降解为较低分子量的碳水化合物 成分,如糖或脂肪替代物,该方法包括脱支步骤。
当将淀粉转化为糖时,淀粉被解聚。这类解聚过程可以由例如预处理步 骤以及两个或三个连续过程步骤组成,即,液化过程、糖化过程并且取决于 所需最终产物,任选地异构化过程。
(i)天然淀粉的预处理
天然淀粉由室温下不溶于水的微观颗粒组成。加热水性淀粉浆料时,颗 粒膨胀并且最后破裂,将淀粉分子分散至溶液中。在此“糊化(gelatinization)” 过程中,粘度有显著地增加。由于典型工业方法中的固体水平为30%-40%, 因此不得不稀释或“液化”淀粉以使其能够被操作。如今主要是通过酶降解 而获得粘度的降低。
(ii)液化
在液化步骤中,α-淀粉酶将长链淀粉降解为支链以及直链的较短单元 (麦芽糊精)。液化过程在105℃-110℃进行5至10分钟,随后在95℃进 行1-2小时。pH值在5.5和6.2之间。为了确保在这些条件下最佳的酶稳定 性,添加1mM钙(40ppm游离的钙离子)。在这个处理之后,液化的淀粉 将具有10-15的“右旋糖当量”(DE)。
(iii)糖化
在液化过程之后,通过添加葡糖淀粉酶(例如AMG)和脱支酶(如异 淀粉酶(美国专利号4,335,208)或支链淀粉酶(例如PromozymeTM)美国 专利号4,560,651)将麦芽糖糊精转化为右旋糖。在该步骤之前,将pH降低 至低于4.5的值,维持高温(高于95℃)以使液化α-淀粉酶失活以减少称为 “潘糖前体”的短寡糖的形成,该短寡糖不能被脱支酶适当地水解酶。
将温度降至60℃,并添加葡糖淀粉酶和脱支酶。糖化过程进行24-72小 时。
通常,在液化步骤后使α-淀粉酶变性时,约0.2%-0.5%的糖化产物是不 能被支链淀粉酶降解的支化三糖6<2>-α-葡糖基麦芽糖(潘糖)。如果在糖化 过程中存在来自液化步骤的活性淀粉酶(即未变性),则该水平可以高达 1%-2%,这是高度不希望的,因为它显著降低了糖化产率。
(iv)异构化
当所希望的最终糖产物是例如高果糖糖浆时,右旋糖糖浆可被转化为果 糖。糖化过程之后,将pH值增加至6-8范围内的值,优选地pH 7.5,并且 通过离子交换去除钙。然后,使用例如固定化葡糖异构酶(如Sweetzyme<TM> IT)将右旋糖糖浆转化成高果糖糖浆。
乙醇生产
总体上,从全谷粒来生产醇(乙醇)可分成4个主要步骤
-研磨
-液化
-糖化
-发酵
(i)研磨
谷粒经过研磨以便打开结构并且允许进一步处理。所使用的两个过程是 湿式或干式研磨。在干式研磨中,将完整谷粒研磨并且用于该过程的其余部 分中。湿式研磨可很好地分离胚芽(germ)和粗粉(淀粉颗粒和蛋白质), 除少数情况外湿式研磨在平行生产糖浆时的多个位置使用。
(ii)液化
在液化过程中,淀粉颗粒通过水解来溶解成DP大部分高于4的麦芽糊 精。水解可通过酸处理来执行或由α-淀粉酶来酶法执行。酸水解有限地使用。 原材料可以是研磨的全谷粒或来自淀粉处理的侧流。
酶法液化典型地以三步热浆液方法进行。浆液加热至60℃-95℃(优选 地,80℃-85℃)之间,并且添加一种或多种酶。然后将浆液在95℃-140℃ (优选地,105℃-125℃)之间喷射蒸煮、冷却至60℃-95℃并且添加更多 酶以获得最终水解。液化方法在pH 4.5-6.5、典型地在5与6之间的pH进行。 研磨并且液化的谷粒又称为醪液(mash)。
(iii)糖化
为了生产可被酵母代谢的低分子糖DP1-3,液化过程中的麦芽糖糊精必 须进一步水解。典型地通过葡糖淀粉酶进行酶水解,可替代地,可以使用α- 葡糖苷酶或酸性α-淀粉酶。全糖化步骤可以持续72小时,然而,通常只进 行典型的40-90分钟的预糖化,并且然后在发酵期间完成糖化(SSF)。糖化 典型地在从30℃-65℃、典型地约60℃的温度下并在pH4.5下进行。
(iv)发酵
将典型地来自酵母属的酵母添加至醪液中并且发酵持续24-96小时,如 典型地35-60小时。温度在26℃-34℃之间,典型地在约32℃,并且pH是 从pH 3-6,优选地,约pH 4-5。
请注意,最广泛使用的过程是同步糖化和发酵(SSF)过程,其中没有 糖化的持续阶段,这意味着酵母和酶添加在一起。在进行SSF时,通常在发 酵之前在高于50℃的温度下引入预糖化步骤。
(v)蒸馏
发酵后,将醪液蒸馏以提取乙醇。
根据本发明的方法获得的乙醇可以用作例如燃料乙醇;饮用乙醇,即中 性饮用酒精;或工业乙醇。
(vi)副产品
来自发酵的剩余物是酒糟,它典型地用于液体或干燥形式的动物饲料。
关于如何完成液化、糖化、发酵、蒸馏以及回收乙醇的进一步细节是本 领域技术人员熟知的。
根据本发明的方法,糖化以及发酵可同时或单独地执行。
纸浆以及纸张生产
本发明的碱性α-淀粉酶多肽还可用于从淀粉增强废纸以及纸板来生产 木质纤维素材料如纸浆、纸张以及纸板,尤其当再浆化在高于7的pH下发 生以及当淀粉酶经由增强淀粉的降解来促进废弃材料的分解时。本发明的α- 淀粉酶尤其适用于从淀粉包衣的印刷纸来生产造纸纸浆的过程。该工艺可如 WO 95/14807描述来执行,包括以下步骤:
a)使纸张分解以产生纸浆,
b)在步骤a)之前、期间或之后用淀粉降解酶进行处理,并且
c)在步骤a)和b)之后,从纸浆中分离油墨颗粒。
本发明的α-淀粉酶还可非常适用于对淀粉进行改性,其中酶改性的淀粉 与碱性填充剂如碳酸钙、高岭土以及粘土一起用于造纸。用本发明的碱性α- 淀粉酶有可能在填充剂存在下将淀粉改性,从而允许一种更简单的整合过 程。
纺织品、织物以及服饰的退浆
本发明的α-淀粉酶在纺织品,织物或衣服脱浆中也非常有用。在纺织加 工工业中,传统上使用α-淀粉酶作为脱浆过程中的助剂,以促进在织造过程 中作为纬纱上的保护涂层的含淀粉胶料的去除。织造之后彻底去除胶料涂层 对于确保后续过程(其中所述织物被擦洗、漂白和染色)中的最佳效果是至 关重要的。酶法淀粉分解是优选的,因为它不对纤维材料产生任何有害的作 用。为了减少加工成本并增加研磨机处理量,有时将脱浆过程与擦洗和漂白 步骤结合。在这类情况下,非酶助剂如碱或氧化剂典型用于分解淀粉,因为 传统α-淀粉酶并不与高pH水平以及漂白剂非常相容。由于使用具有相当腐 蚀性的化学品,因此淀粉胶料的非酶分解导致一些纤维损伤。因此,希望使 用本发明的α-淀粉酶,因为它们在碱性溶液中具有改进的性能。在使含纤维 素的织物或纺织品脱浆时,α-淀粉酶可单独或与纤维素酶组合使用。
退浆以及漂白过程在本领域中是熟知的。例如,这类工艺描述于例如 WO 95/21247、美国专利4,643,736、EP 119,920(通过引用结合在此)中。
啤酒制造
本发明的α-淀粉酶在啤酒制造工艺中也可以是非常有用的;在醪液形成(mashing)工艺期间,典型地添加α-淀粉酶。
通过以下实例进一步描述本发明,所述实例不应理解为对本发明的范围 进行限制。
本申请中描述并且要求保护的本发明不限于在此披露的特定方面的范 围,因为这些方面旨在说明本发明的若干方面。任何等同方面意欲在本发明 的范围之内。实际上,除了在此所示和描述的那些之外,对于本领域的技术 人员而言本发明的各种修改将从前述的说明书变得显而易见。这样的修改也 旨在落入所附权利要求书的范围内。在冲突的情况下,以包括定义的本披露 内容为准。
实例
实例1:如SEQ ID NO:1中所示的亲本多肽的构建
具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列(亲本多肽)的多肽的构建已描述 于(WO 2006/002643)中。该多肽是经修饰的α-淀粉酶(EC 3.2.1.1),该α- 淀粉酶属于糖苷水解酶GH13家族,亚家族5。
实例2:根据本发明的变体的产生
已通过定点诱变产生本发明的变体。
使用由在Pel基因座处含有淀粉酶基因的有机体制备的基因组DNA作 为用于产生定点突变体的模板。
使用正向诱变引物和LBei1303 (5'-CAATCCAAGAGAACCCTGATACGGATG-3'-SEQ IDNO:4)反向诱变 引物产生约2.4-3.8kb片段。该片段与LBei1302(gatgtatacgtcttagctcacgacgatgac-SEQ ID NO:5)正向引物一起用作大引物, 得到6.1kb插入盒。为了通过转化时的双交换实现在Pel基因座中的整合, 连同淀粉酶和cat基因,该盒在末端包含上游和下游Pel序列。在含有氯霉 素的LB琼脂上进行选择,并且通过淀粉酶基因的DNA测序确认突变。
产生变体的文库,其中在以下位置进行改变的不同组合:SEQ ID NO:2 的A51、A186、L202、T246、和S334。
产生的变体由具有选自下组的突变的SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成, 该组由以下组成:
(a)L202M;
(b)A186D;
(c)L202M+T246I+S334T;
(d)L202M+T246L+S334T;
(e)A51T+L202M+T246I+S334T;
(f)L202M+T246V;和
(g)L202M+T246V+S334T;
其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列进行氨基酸位置的编号。
为了评估缓冲液中变体的淀粉酶活性,使用(生命技术公司(LifeTechnologies),目录号E33651)在提供的测定缓冲液中进行测定实验。 将表达变体的枯草芽孢杆菌转化体接种于1mL合适的培养基中,并在37℃ 下生长3天。将培养物以1013g离心10min,并分离上清液并储存在-18℃。
使用针对兔中的Stainzyme Plus产生的多克隆抗体(Ab83)归一化变体 酶。将Ab83在硫酸铵中沉淀并以31.57mg/mL重新溶解于PBST缓冲液(10 mM磷酸盐缓冲液pH 7.4、2.7mM KCl、140mM NaCl、0.05%20) +0.02%硫柳汞中。
将Ab83在PBS缓冲液(10mM磷酸盐缓冲液pH 7.4、2.7mM KCl、140 mM NaCl)中稀释约2000倍至大约15μg/ml。MaxiSorp微量滴定板(MTP) (NUNC,目录号44-2404-21)在室温和800rpm下用100μL稀释的抗体溶 液涂覆1h。弃去抗体溶液,并用3x 200μL PBST缓冲液洗涤MTP。将每 种转化体的上清液在PBST缓冲液中稀释10倍,并将100μL一式四份添加 到MTP中。
将Stainzyme Plus用作参考,并遵循与测试的变体相同的程序。
表1
本发明的示例性淀粉酶多肽的淀粉酶活性
淀粉酶 | 相对活性 |
参考(SEQ ID NO:1) | 1.00 |
SEQ ID NO:1+L202M | 1.03 |
SEQ ID NO:1+A186D | 1.02 |
SEQ ID NO:1+L202M+T246I+S334T | 1.09 |
SEQ ID NO:1+L202M+T264L+S334T | 1.14 |
SEQ ID NO:1+A51T+L202M+T246I+S334T | 1.17 |
SEQ ID NO:1+L202M+T246V | 1.09 |
SEQ ID NO:1+L202M+T246V+S334T | 1.02 |
如表1示出的,淀粉酶至少在与亲本多肽相同的水平上清楚地证明了α- 淀粉酶活性。
实例4:α-淀粉酶活性的替代性测定
1.Phadebas测定
通过采用片剂作为底物的方法可以确定α-淀粉酶活性。 Phadebas片剂(淀粉酶测试物(Amylase Test),由法玛 西亚诊断公司(Pharmacia Diagnostic)提供)包含交联的不溶性蓝色淀粉聚 合物,它已与牛血清白蛋白和缓冲物质混合并压片。
对于每一单次测量,将一片悬浮于包含5ml 50mM伯瑞坦-罗宾森 (Britton-Robinson)缓冲液(50mM乙酸,50mM磷酸,50mM硼酸,0.1mM CaCl2,用NaOH调节pH至感兴趣的值)的管中。于感兴趣的温度下在水浴 中进行该测试。在x ml的50mM伯瑞坦-罗宾森缓冲液中稀释待测试的α- 淀粉酶。将1ml此α-淀粉酶溶液添加至5ml 50mM伯瑞坦-罗宾森缓冲液中。 通过α-淀粉酶水解淀粉,从而给出可溶性蓝色片段。在620nm处用分光光 度计测量所得到的蓝色溶液的吸光度,其是α-淀粉活性的函数。
重要的是在10或15分钟的孵育(测试时间)后测量的620nm吸光度 在620nm的0.2-2.0的吸光度单位的范围内。在此吸光度范围内,在活性和 吸光度之间存在线性关系(朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律)。因此,必须 调节酶的稀释以适合该标准。在一组指定的条件(温度、pH、反应时间、缓 冲液条件)下,1mg给定的α-淀粉酶将水解某一量的底物并将产生蓝色。 在620nm测量颜色强度。在给定组的条件下,所测量的吸光度与α-淀粉酶 的比活性(纯的α-淀粉酶蛋白的每毫克活性)成正比。
2.PNP-G7测定
α-淀粉酶活性通过采用PNP-G7底物的方法来确定。PNP-G7是对硝基 苯基-α,D-麦芽庚糖苷的缩写,它是可以由内切淀粉酶切割的嵌段寡糖。切割 之后,试剂盒中所包括的α-葡糖苷酶消化底物以释放自由PNP分子,该分 子具有黄色并且因而可以通过可见分光光度法在λ=405nm(400nm-420 nm)下测量。含有PNP-G7底物和α-葡糖苷酶的试剂盒由勃林格-曼海姆公 司(Bohringer-Mannheim)制造(目录号1054635)。
为了制备试剂溶液,将10ml底物/缓冲溶液添加至由制造商推荐的50ml 酶/缓冲溶液中。通过将20μL样品转移至96孔微量滴定板并在25℃孵育来 进行测定。添加预平衡至25℃的200μL试剂溶液。将溶液混合并预孵育1 分钟,并在ELISA读取器中在OD 405nm处每隔30秒经4分钟测量吸光度。
在一组给定条件下,时间相关吸收曲线的斜率与所讨论的α-淀粉酶的活 性成正比例。
实例5:使用自动餐具洗涤(ADW)评估本发明的α-淀粉酶多肽的洗 涤性能
为了评估本发明的多肽在洗涤剂基础组合物中的洗涤性能,可以使用全 规模自动餐具洗涤(ADW)进行洗涤实验。全规模ADW装备用于测试模拟 常规消费者装备的测试条件下多肽的洗涤性能。
在本研究中,测试条件是使用Miele Dishwasher Miele G4300SCU机器 的常规50℃洗涤程序和短40℃程序。
洗涤性能总体描述。
按照如下说明,将用淀粉玷污的三聚氰胺瓷砖(来自测试材料中心BV (邮箱120,3133KT,弗拉尔丁恩,荷兰)的CS-28)用作测试材料,并使 用7.68°dH的水在40℃和50℃下在设定程序下进行洗涤。机器程序开始后 3分钟,添加15.53g/洗涤的洗涤剂、如下所述的P&G混合洗涤剂、和浓度 为2.55mg酶/洗涤或5.12mg酶/洗涤的本发明的淀粉酶多肽。在流动自来水 下彻底漂洗并在黑暗中干燥后,随后评估污染的瓷砖的光反射值作为洗涤性 能的量度。具有0mg酶蛋白/L的测试用作空白并且对应于来自单独洗涤剂 的贡献。全规模洗涤性能实验在下面指定的实验条件下进行:
表2
实验条件
表3
ADW洗涤剂
组分 | 克活性材料 |
固体成分 | |
碳酸钠 | 4.00 |
MGDA | 6.00 |
过碳酸钠 | 2.00 |
磺化聚合物 | 1.20 |
漂白催化剂 | 0.009 |
杂项 | 平衡至15.53 |
液体成分 | |
Lutensol TO7 | 1.165 |
LF224 | 0.5826 |
杂项 | 平衡至1.8 |
MGDA由BASF提供的三钠甲基甘氨酸二乙酸酯
漂白催化剂五胺乙酸钴(III)硝酸盐
LF224BASF提供的非离子表面活性剂
磺化聚合物陶氏化学公司(Dow Chemicals)提供的Acusol 588
Lutensol TO7BASF提供的非离子表面活性剂
通过将自来水和去离子水混合到测试系统将水硬度调节至7.68°dH。在 洗涤之后,将三聚氰胺瓷砖用自来水洗并干燥。将洗涤性能作为反射差来 测量。使用用于获取光谱和进行反射差和/或色差计算的Color-Eye 7000 (CE7000)进行反射值测量。在460nm处(发光体中没有UV光)测量反 射值。
将本实验的术语“改进的洗涤性能”定义为显示改变,这种改变是指本 发明的变体的洗涤性能相对于具有如SEQ ID NO:1所阐述的氨基酸序列的 多肽的洗涤性能的改变,这种改变可以(例如)被视为增加的污渍去除。如上 所述确定改进的洗涤性能。如果改进因子(IF)在以上列出的一种或多种条 件(即在40℃或50℃)下至少为1.0,优选地至少为1.2,则洗涤性能被认 为得到了改进。
通过全规模洗涤获得的根据本发明的变体的洗涤性能如下;
表4
本发明的示例性多肽的ADW改进因子
*其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列进行编号
*其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列进行编号
实例6:使用自动机械应力测定(AMSA)评估本发明的α-淀粉酶多肽 的洗涤性能
为了评定本发明的变体在洗涤剂基础组合物中的洗涤性能,可以使用自 动机械应力测定(AMSA)进行洗涤实验。使用AMSA测试,可以检查大量 小体积酶洗涤剂溶液的洗涤性能。AMSA盘具有许多用于测试溶液的缝和盖 子,盖子将待洗涤的纺织品小块布样或三聚氰胺瓷砖对所有缝开口强力挤 压。在洗涤时间期间,板、测试溶液、纺织品/三聚氰胺瓷砖和盖子剧烈振动 从而使测试溶液与纺织品/三聚氰胺瓷砖接触并以规则、周期性振荡方式施加 机械应力。关于进一步描述,参见WO 02/42740,尤其是第23-24页的“具 体方法实施例”段落。
洗涤性能总体描述
制备包含水(7.68°dH)、2.88g/L洗涤剂、如上所述的P&G混合洗涤剂、 和本发明的酶的测试溶液,其浓度如表8、9、和10中所列。添加被淀粉玷 污的织物三聚氰胺瓷砖(来自测试材料中心BV的CS-28和DM-277,邮政 信箱120,3133KT,弗拉尔丁恩,荷兰)并且将他们在40℃和50℃洗涤 10或20分钟,如下文说明。在流动自来水下彻底漂洗并且在黑暗中干燥之 后,随后测量带有污渍的织物的光强度值作为洗涤性能的量度。具有0mg 酶蛋白/L的测试用作空白并且对应于来自洗涤剂的贡献。优选地,在洗涤步 骤期间施加机械作用,例如以将洗涤溶液与织物和瓷砖一起振摇、转动或搅 拌的形式施加。AMSA洗涤性能实验在以下详细说明的实验条件下进行:
表5
实验条件
表6
ADW洗涤剂
组分 | 克活性材料 |
固体成分 | |
碳酸钠 | 4.00 |
MGDA | 6.00 |
过碳酸钠 | 2.00 |
磺化聚合物 | 1.20 |
漂白催化剂 | 0.009 |
杂项 | 平衡至15.53 |
液体成分 | |
Lutensol TO7 | 1.165 |
LF224 | 0.5826 |
杂项 | 平衡至1.8 |
MGDA由BASF提供的三钠甲基甘氨酸二乙酸酯
漂白催化剂五胺乙酸钴(III)硝酸盐
LF224BASF提供的非离子表面活性剂
磺化聚合物陶氏化学公司(Dow Chemicals)提供的Acusol 588
Lutensol TO7BASF提供的非离子表面活性剂
通过向测试系统添加CaCl2、MgCl2和NaHCO3(Ca2+:Mg2+:HCO3-= 2:1:4.5),将水硬度调节至7.68°dH。在洗涤之后,将织物和三聚氰胺瓷砖 用自来水冲洗并干燥。
洗涤性能可以被测量为亮度,表达为当用白光照亮时从样品反射的光的 强度。当样品被沾污时,其反射光的强度低于干净样品的反射光强度。因此, 反射光的强度可以用来衡量洗涤性能。
使用专业平板扫描仪(EPSON Expression 10000XL,EPSON)进行颜色 测量,该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。
为了从扫描图像中提取光强度的值,将来自图像的48 24位彩色像素 值转化为红色、绿色和蓝色(RGB)的值。通过将RGB值作为向量进行加 和并且然后取所得向量的长度来计算强度值(Int):
通过AMSA获得的根据本发明的变体的洗涤性能如下;
对于下面的每个条件,该值是用4种不同酶剂量测量的性能改进因子的 平均值。
表7
平均AMSA性能改进因子(IF)
*其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列进行编号
洗涤剂:P&G ADW混合物1
Temp=如所示
CS28:纺织品
DM277:有大米和玉米淀粉的混合物的瓷砖
表8
AMSA数据集I(40℃-10分钟-CS28)
*其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列进行编号
表9
AMSA数据集II(50℃-20分钟-CS28)
*其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列进行编号
表10
AMSA数据集III(40℃-10分钟-DM277)
*其中根据SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列进行编号
序列表
<110> 诺维信公司
<120> α-淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸
<130> 13192-WO-PCT
<160> 5
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 483
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 1
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Lys Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Ala Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Thr Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu
180 185 190
Phe Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Leu Tyr Ala Asp Ile Asp Met Asp His
195 200 205
Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr Thr Asn
210 215 220
Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys
225 230 235 240
Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala Ile Gly
245 250 255
Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala
260 265 270
Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp
275 280 285
Val Pro Leu His Phe Asn Leu Tyr Tyr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Asn
290 295 300
Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His Pro
305 310 315 320
Thr His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Glu Glu
325 330 335
Ser Leu Glu Ser Phe Val Arg Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser Lys Ile
370 375 380
Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Arg Gln Asn
385 390 395 400
Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn
405 410 415
Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Ala
420 425 430
Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly Gln Val
435 440 445
Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Lys Ala Gly Thr Val Thr Ile Asn Ala
450 455 460
Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Trp
465 470 475 480
Val Asn Lys
<210> 2
<211> 485
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 2
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser
370 375 380
Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Arg
385 390 395 400
Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
420 425 430
Gly Ala Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly
435 440 445
Gln Val Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ala Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Asn Lys
485
<210> 3
<211> 483
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 3
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Lys Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Ala Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Thr Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu
180 185 190
Phe Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met Asp His
195 200 205
Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr Thr Asn
210 215 220
Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys
225 230 235 240
Tyr Ser Phe Val Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala Ile Gly
245 250 255
Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala
260 265 270
Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp
275 280 285
Val Pro Leu His Phe Asn Leu Tyr Tyr Ala Ser Lys Ser Gly Gly Asn
290 295 300
Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His Pro
305 310 315 320
Thr His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Glu Glu
325 330 335
Ser Leu Glu Ser Phe Val Arg Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser Lys Ile
370 375 380
Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Arg Gln Asn
385 390 395 400
Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn
405 410 415
Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Ala
420 425 430
Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly Gln Val
435 440 445
Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Lys Ala Gly Thr Val Thr Ile Asn Ala
450 455 460
Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Trp
465 470 475 480
Val Asn Lys
<210> 4
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 人工序列
<400> 4
caatccaaga gaaccctgat acggatg 27
<210> 5
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 人工序列
<400> 5
gatgtatacg tcttagctca cgacgatgac 30
Claims (24)
1.一种由SEQ ID NO:1的变体氨基酸序列组成的多肽,其中该多肽具有α-淀粉酶活性并且与SEQ ID NO:1的亲本多肽相比展现出改进的洗涤性能,在所述变体中进行选自下组的在SEQ ID NO:1中的突变:
(a)A51T+L202M+T246I+S334T
(b)L202M+T246I+S334T
(c)L202M+T246V
(d)L202M+T246V+S334T
(e)L202M+T264L+S334T
(f)L202M
(g)A186D
其中根据SEQ ID NO:2进行编号。
2.根据权利要求1所述的多肽,其中使用自动机械应力测定和/或全规模自动餐具洗涤测定来评估该改进的洗涤性能。
3.根据权利要求2所述的多肽,其中在高温洗涤期间展现改进的洗涤性能,其中所述高温是40℃-50℃范围。
4.根据权利要求3所述的多肽,其中所述高温是40℃。
5.根据权利要求3所述的多肽,其中所述高温是45℃-50℃。
6.根据权利要求3所述的多肽,其中所述高温是50℃。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的多肽,其中所述多肽由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成。
8.一种编码根据权利要求1至7中任一项所述的多肽的多核苷酸。
9.一种包含根据权利要求8所述的多核苷酸的核酸构建体。
10.一种包含根据权利要求8所述的多核苷酸的表达载体。
11.一种包含根据权利要求8所述的多核苷酸的宿主细胞。
12.一种产生α-淀粉酶多肽的方法,该方法包括:
(a)在适合于表达所述多肽的条件下培养根据权利要求11所述的宿主细胞;和
(b)回收所述多肽。
13.一种包含根据权利要求1至7中任一项所述的多肽的组合物。
14.根据权利要求13所述的组合物,其中所述组合物进一步包含一种或多种另外的组分。
15.根据权利要求14所述的组合物,其中所述另外的组分选自下组:氧化剂、漂白活化剂、填充剂、助洗剂、缓冲剂、螯合剂、荧光增白剂、消泡剂、酶、香料、抗再沉积剂、皮肤调理剂、柔软剂、乳化剂、和着色剂。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的组合物,其中所述组合物是洗涤剂组合物。
17.根据权利要求16所述的组合物,其中所述洗涤剂组合物是液体或粉末衣物洗涤剂组合物。
18.根据权利要求16所述的组合物,其中所述洗涤剂组合物是液体或粉末自动餐具洗涤洗涤剂组合物。
19.根据权利要求17至18中任一项所述的组合物,其中所述组合物是手洗或机洗洗涤剂组合物。
20.根据权利要求15所述的组合物,其中所述酶选自下组:蛋白酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、果胶酶、果胶裂合酶、过氧化物酶、和甘露聚糖酶,或其任何混合物。
21.根据权利要求1至7中任一项所述的多肽在清洗过程中的用途。
22.根据权利要求21的用途,其中所述清洗过程为衣物或硬表面清洗的清洗过程。
23.根据权利要求21的用途,其中所述清洗过程为餐具洗涤的清洗过程和工业清洗的清洗过程。
24.一种用于从表面去除污渍的方法,该方法包括使所述表面与包含根据权利要求13至20中任一项所述的多肽的组合物接触。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP16168118.4 | 2016-05-03 | ||
EP16168118 | 2016-05-03 | ||
PCT/EP2017/060473 WO2017191160A1 (en) | 2016-05-03 | 2017-05-03 | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding the same |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109415421A CN109415421A (zh) | 2019-03-01 |
CN109415421B true CN109415421B (zh) | 2023-02-28 |
Family
ID=55910839
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201780026494.2A Active CN109415421B (zh) | 2016-05-03 | 2017-05-03 | α-淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20240218340A1 (zh) |
EP (1) | EP3452497B1 (zh) |
CN (1) | CN109415421B (zh) |
WO (1) | WO2017191160A1 (zh) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MX2020010526A (es) * | 2018-04-09 | 2021-01-08 | Novozymes As | Polipéptidos que tienen actividad alfa-amilasa ypolinucleótidos que los codifican. |
CN113302295A (zh) | 2018-12-03 | 2021-08-24 | 诺维信公司 | 粉末洗涤剂组合物 |
WO2020114965A1 (en) | 2018-12-03 | 2020-06-11 | Novozymes A/S | LOW pH POWDER DETERGENT COMPOSITION |
EP3702452A1 (en) | 2019-03-01 | 2020-09-02 | Novozymes A/S | Detergent compositions comprising two proteases |
EP4022019A1 (en) * | 2019-08-27 | 2022-07-06 | Novozymes A/S | Detergent composition |
EP4158011A1 (en) | 2020-05-26 | 2023-04-05 | Novozymes A/S | Subtilase variants and compositions comprising same |
WO2022043547A1 (en) | 2020-08-28 | 2022-03-03 | Novozymes A/S | Protease variants with improved solubility |
WO2023225459A2 (en) | 2022-05-14 | 2023-11-23 | Novozymes A/S | Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections |
CN115578676B (zh) * | 2022-10-27 | 2023-05-23 | 浙江宇鑫纺织印染有限公司 | 绿色节能智能化染整工艺及其系统 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011080353A1 (en) * | 2010-01-04 | 2011-07-07 | Novozymes A/S | Stabilization of alpha-amylases towards calcium depletion and acidic ph |
WO2013087545A1 (de) * | 2011-12-15 | 2013-06-20 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Lagerstabiles flüssiges wasch- oder reinigungsmittel enthaltend protease und amylase |
CN104884614A (zh) * | 2012-12-21 | 2015-09-02 | 丹尼斯科美国公司 | α-淀粉酶变体 |
WO2015144780A2 (en) * | 2014-03-25 | 2015-10-01 | Novozymes A/S | Dishwashing composition |
Family Cites Families (87)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1296839A (zh) | 1969-05-29 | 1972-11-22 | ||
GB1372034A (en) | 1970-12-31 | 1974-10-30 | Unilever Ltd | Detergent compositions |
US3912590A (en) | 1973-01-03 | 1975-10-14 | Novo Industri As | Procedure for liquefying starch |
GB1483591A (en) | 1973-07-23 | 1977-08-24 | Novo Industri As | Process for coating water soluble or water dispersible particles by means of the fluid bed technique |
GB1590432A (en) | 1976-07-07 | 1981-06-03 | Novo Industri As | Process for the production of an enzyme granulate and the enzyme granuate thus produced |
US4335208A (en) | 1980-03-11 | 1982-06-15 | Novo Industri A/S | Saccharification of starch hydrolysates |
DK187280A (da) | 1980-04-30 | 1981-10-31 | Novo Industri As | Ruhedsreducerende middel til et fuldvaskemiddel fuldvaskemiddel og fuldvaskemetode |
FR2498783B1 (fr) | 1981-01-23 | 1988-03-04 | Decis Mario | Dispositif de controle automatique de presence |
US4560651A (en) | 1981-04-20 | 1985-12-24 | Novo Industri A/S | Debranching enzyme product, preparation and use thereof |
JPS57174089A (en) | 1981-04-20 | 1982-10-26 | Novo Industri As | Chain dividing enzyme product |
FR2543181B1 (fr) | 1983-03-22 | 1985-07-26 | Ugine Kuhlmann | Procede ameliore de desencollage-blanchiment simultane des tissus |
DK263584D0 (da) | 1984-05-29 | 1984-05-29 | Novo Industri As | Enzymholdige granulater anvendt som detergentadditiver |
JPH0697997B2 (ja) | 1985-08-09 | 1994-12-07 | ギスト ブロカデス ナ−ムロ−ゼ フエンノ−トチヤツプ | 新規の酵素的洗浄剤添加物 |
EG18543A (en) | 1986-02-20 | 1993-07-30 | Albright & Wilson | Protected enzyme systems |
DK122686D0 (da) | 1986-03-17 | 1986-03-17 | Novo Industri As | Fremstilling af proteiner |
ES2052565T3 (es) | 1986-07-09 | 1994-07-16 | Novo Nordisk As | Un procedimiento para licuar una suspension de almidon o granos amilaceos. |
US4810414A (en) | 1986-08-29 | 1989-03-07 | Novo Industri A/S | Enzymatic detergent additive |
NZ221627A (en) | 1986-09-09 | 1993-04-28 | Genencor Inc | Preparation of enzymes, modifications, catalytic triads to alter ratios or transesterification/hydrolysis ratios |
ATE125865T1 (de) | 1987-08-28 | 1995-08-15 | Novo Nordisk As | Rekombinante humicola-lipase und verfahren zur herstellung von rekombinanten humicola-lipasen. |
JPS6474992A (en) | 1987-09-16 | 1989-03-20 | Fuji Oil Co Ltd | Dna sequence, plasmid and production of lipase |
EP0394352B1 (en) | 1988-01-07 | 1992-03-11 | Novo Nordisk A/S | Enzymatic detergent |
DK6488D0 (da) | 1988-01-07 | 1988-01-07 | Novo Industri As | Enzymer |
JP3079276B2 (ja) | 1988-02-28 | 2000-08-21 | 天野製薬株式会社 | 組換え体dna、それを含むシュードモナス属菌及びそれを用いたリパーゼの製造法 |
US5776757A (en) | 1988-03-24 | 1998-07-07 | Novo Nordisk A/S | Fungal cellulase composition containing alkaline CMC-endoglucanase and essentially no cellobiohydrolase and method of making thereof |
EP0406314B1 (en) | 1988-03-24 | 1993-12-01 | Novo Nordisk A/S | A cellulase preparation |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
GB8915658D0 (en) | 1989-07-07 | 1989-08-23 | Unilever Plc | Enzymes,their production and use |
EP0528828B2 (de) | 1990-04-14 | 1997-12-03 | Genencor International GmbH | Alkalische bacillus-lipasen, hierfür codierende dna-sequenzen sowie bacilli, die diese lipasen produzieren |
DK115890D0 (da) | 1990-05-09 | 1990-05-09 | Novo Nordisk As | Enzym |
JP3110452B2 (ja) | 1990-05-09 | 2000-11-20 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | エンドグルカナーゼ酵素を含んでなるセルラーゼ調製物 |
JP3469234B2 (ja) | 1990-09-13 | 2003-11-25 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | リパーゼ変異体 |
IL99552A0 (en) | 1990-09-28 | 1992-08-18 | Ixsys Inc | Compositions containing procaryotic cells,a kit for the preparation of vectors useful for the coexpression of two or more dna sequences and methods for the use thereof |
EP0495258A1 (en) | 1991-01-16 | 1992-07-22 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions with high activity cellulase and softening clays |
CZ285148B6 (cs) | 1991-04-30 | 1999-05-12 | The Procter And Gamble Company | Kapalné detergentní směsi s borito-polyolovým komplexem k inhibici proteolytického enzymu |
EP0511456A1 (en) | 1991-04-30 | 1992-11-04 | The Procter & Gamble Company | Liquid detergents with aromatic borate ester to inhibit proteolytic enzyme |
ATE168130T1 (de) | 1991-05-01 | 1998-07-15 | Novo Nordisk As | Stabilisierte enzyme und waschmittelzusammensetzungen |
US5231017A (en) | 1991-05-17 | 1993-07-27 | Solvay Enzymes, Inc. | Process for producing ethanol |
DK72992D0 (da) | 1992-06-01 | 1992-06-01 | Novo Nordisk As | Enzym |
DK88892D0 (da) | 1992-07-06 | 1992-07-06 | Novo Nordisk As | Forbindelse |
EP0651794B1 (en) | 1992-07-23 | 2009-09-30 | Novozymes A/S | MUTANT $g(a)-AMYLASE, DETERGENT AND DISH WASHING AGENT |
WO1994007998A1 (en) | 1992-10-06 | 1994-04-14 | Novo Nordisk A/S | Cellulase variants |
AU682863C (en) | 1993-02-11 | 2003-05-08 | Genencor International, Inc. | Oxidatively stable alpha-amylase |
DE69434242T2 (de) | 1993-04-27 | 2006-01-12 | Genencor International, Inc., Palo Alto | Neuartige Lipasevarianten zur Verwendung in Reinigungsmitteln |
FR2704860B1 (fr) | 1993-05-05 | 1995-07-13 | Pasteur Institut | Sequences de nucleotides du locus cryiiia pour le controle de l'expression de sequences d'adn dans un hote cellulaire. |
DK52393D0 (zh) | 1993-05-05 | 1993-05-05 | Novo Nordisk As | |
JP2859520B2 (ja) | 1993-08-30 | 1999-02-17 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | リパーゼ及びそれを生産する微生物及びリパーゼ製造方法及びリパーゼ含有洗剤組成物 |
EP0724631A1 (en) | 1993-10-13 | 1996-08-07 | Novo Nordisk A/S | H 2?o 2?-stable peroxidase variants |
DK131193D0 (zh) | 1993-11-23 | 1993-11-23 | Novo Nordisk As | |
JPH07143883A (ja) | 1993-11-24 | 1995-06-06 | Showa Denko Kk | リパーゼ遺伝子及び変異体リパーゼ |
DE4343591A1 (de) | 1993-12-21 | 1995-06-22 | Evotec Biosystems Gmbh | Verfahren zum evolutiven Design und Synthese funktionaler Polymere auf der Basis von Formenelementen und Formencodes |
TW268980B (zh) | 1994-02-02 | 1996-01-21 | Novo Nordisk As | |
US5605793A (en) | 1994-02-17 | 1997-02-25 | Affymax Technologies N.V. | Methods for in vitro recombination |
JP3553958B2 (ja) | 1994-02-22 | 2004-08-11 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 脂質分解酵素の変異体の製造方法 |
CA2185101A1 (en) | 1994-03-08 | 1995-09-14 | Martin Schulein | Novel alkaline cellulases |
CA2189441C (en) | 1994-05-04 | 2009-06-30 | Wolfgang Aehle | Lipases with improved surfactant resistance |
BR9507817A (pt) | 1994-06-03 | 1997-09-16 | Novo Nordisk Biotech Inc | Construção de dna enzima vetor recombinante célula hospedeira recombinante lacase de ascomicete ou deuteromicete processos para obter uma enzima de lacase para melhorar o rendimento de enzima recombinante para polimerizar um substrato de lignina ou lignossulfato em soluç o para despolimerizar in situ a pasta kraft para oxidar corantes ou precursores de corantes para pintar cabelo e para polimerizar ou oxidar um composto fenólico ou anilina composição de corante e recipiente contendo a mesma |
AU2884595A (en) | 1994-06-20 | 1996-01-15 | Unilever Plc | Modified pseudomonas lipases and their use |
AU2884695A (en) | 1994-06-23 | 1996-01-19 | Unilever Plc | Modified pseudomonas lipases and their use |
ATE294871T1 (de) | 1994-06-30 | 2005-05-15 | Novozymes Biotech Inc | Nicht-toxisches, nicht-toxigenes, nicht- pathogenes fusarium expressionssystem und darin zu verwendende promotoren und terminatoren |
AU3604595A (en) | 1994-10-06 | 1996-05-02 | Novo Nordisk A/S | An enzyme and enzyme preparation with endoglucanase activity |
BE1008998A3 (fr) | 1994-10-14 | 1996-10-01 | Solvay | Lipase, microorganisme la produisant, procede de preparation de cette lipase et utilisations de celle-ci. |
JPH10507642A (ja) | 1994-10-26 | 1998-07-28 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 脂肪分解活性を有する酵素 |
AR000862A1 (es) | 1995-02-03 | 1997-08-06 | Novozymes As | Variantes de una ó-amilasa madre, un metodo para producir la misma, una estructura de adn y un vector de expresion, una celula transformada por dichaestructura de adn y vector, un aditivo para detergente, composicion detergente, una composicion para lavado de ropa y una composicion para la eliminacion del |
JPH08228778A (ja) | 1995-02-27 | 1996-09-10 | Showa Denko Kk | 新規なリパーゼ遺伝子及びそれを用いたリパーゼの製造方法 |
KR19980702782A (ko) | 1995-03-09 | 1998-08-05 | 혼 마가렛 에이. | 녹말 액화 방법 |
DE815209T1 (de) | 1995-03-17 | 1998-06-25 | Novonordisk As | Neue endoglukanase |
WO1997007202A1 (en) | 1995-08-11 | 1997-02-27 | Novo Nordisk A/S | Novel lipolytic enzymes |
CN1193346A (zh) | 1995-07-14 | 1998-09-16 | 诺沃挪第克公司 | 一种具有脂解活性的修饰酶 |
US5763385A (en) | 1996-05-14 | 1998-06-09 | Genencor International, Inc. | Modified α-amylases having altered calcium binding properties |
WO1998008940A1 (en) | 1996-08-26 | 1998-03-05 | Novo Nordisk A/S | A novel endoglucanase |
EP1726644A1 (en) | 1996-09-17 | 2006-11-29 | Novozymes A/S | Cellulase variants |
CA2265734A1 (en) | 1996-10-08 | 1998-04-16 | Novo Nordisk A/S | Diaminobenzoic acid derivatives as dye precursors |
EP2278001B1 (en) | 1996-11-04 | 2013-10-23 | Novozymes A/S | Protease variants and compositions |
DE69739020D1 (de) | 1996-11-04 | 2008-11-13 | Novozymes As | Subtilase varianten und verbindungen |
US6159731A (en) | 1997-02-12 | 2000-12-12 | Massachusetts Institute Of Technology | Daxx, a Fas-binding protein that activates JNK and apoptosis |
CA2305191C (en) | 1997-10-13 | 2011-09-27 | Novo Nordisk A/S | .alpha.-amylase mutants |
US5955310A (en) | 1998-02-26 | 1999-09-21 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Methods for producing a polypeptide in a bacillus cell |
EP1124949B1 (en) | 1998-10-26 | 2006-07-12 | Novozymes A/S | Constructing and screening a dna library of interest in filamentous fungal cells |
CN1526820B (zh) | 1999-03-22 | 2010-05-26 | 诺沃奇梅兹有限公司 | 用于在真菌细胞中表达基因的启动子 |
EP1173554A2 (en) | 1999-03-31 | 2002-01-23 | Novozymes A/S | Polypeptides having alkaline alpha-amylase activity and nucleic acids encoding same |
EP2302048B1 (en) | 2000-03-08 | 2014-07-09 | Novozymes A/S | Variants with altered properties |
AU2302002A (en) | 2000-11-27 | 2002-06-03 | Novozymes As | Automated mechanical stress assay for screening cleaning ingredients |
DE60222914T2 (de) | 2001-07-27 | 2008-07-24 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Systeme zur stellengerichteten in-vivo-mutagenese mit oligonukleotiden |
AU2005259686B2 (en) * | 2004-07-05 | 2010-12-23 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants with altered properties |
EP1896057A2 (en) * | 2005-06-24 | 2008-03-12 | Novozymes A/S | Amylases for pharmaceutical use |
EP2264460A1 (en) | 2009-06-18 | 2010-12-22 | Nxp B.V. | Device having self-assembled-monolayer |
CN106459847A (zh) * | 2014-04-01 | 2017-02-22 | 诺维信公司 | 洗涤剂组合物 |
-
2017
- 2017-05-03 EP EP17723316.0A patent/EP3452497B1/en active Active
- 2017-05-03 US US16/097,743 patent/US20240218340A1/en active Pending
- 2017-05-03 CN CN201780026494.2A patent/CN109415421B/zh active Active
- 2017-05-03 WO PCT/EP2017/060473 patent/WO2017191160A1/en unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011080353A1 (en) * | 2010-01-04 | 2011-07-07 | Novozymes A/S | Stabilization of alpha-amylases towards calcium depletion and acidic ph |
WO2013087545A1 (de) * | 2011-12-15 | 2013-06-20 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Lagerstabiles flüssiges wasch- oder reinigungsmittel enthaltend protease und amylase |
CN104884614A (zh) * | 2012-12-21 | 2015-09-02 | 丹尼斯科美国公司 | α-淀粉酶变体 |
WO2015144780A2 (en) * | 2014-03-25 | 2015-10-01 | Novozymes A/S | Dishwashing composition |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
多重抗药性突变株中α-淀粉酶高产菌株选育;汪钊等;《无锡轻工业学院学报》;19940330(第1期);全文 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3452497B1 (en) | 2021-02-17 |
CN109415421A (zh) | 2019-03-01 |
US20240218340A1 (en) | 2024-07-04 |
WO2017191160A1 (en) | 2017-11-09 |
EP3452497A1 (en) | 2019-03-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108603185B (zh) | 酶变体以及编码它们的多核苷酸 | |
CN109415421B (zh) | α-淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸 | |
US11248193B2 (en) | Stabilized alpha-amylase variants and use of the same | |
CN103703124B (zh) | 用于筛选α-淀粉酶的方法 | |
CN103649307B (zh) | α-淀粉酶变体 | |
JP2014519834A (ja) | プロテアーゼ活性を有するポリペプチドおよびこれをコードするポリヌクレオチド | |
CN110662837B (zh) | 甘露聚糖酶变体和对其编码的多核苷酸 | |
CN109312319B (zh) | 具有改善的性能的变体多肽及其用途 | |
WO2014202782A1 (en) | Polypeptides having amylase activity and polynucleotides encoding same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |